(57)【要約】本発明は、式（I）【化１】2005517016.tif 000018（式中、Ｒは水素原子、ヒドロキシル基またはカルバモイル基、ｎは１または２を表す）で示される化合物またはその薬理学的に許容される塩を提供するものである。
2005517016.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2005517016.tif 000011
（式中、Ｒは水素原子、ヒドロキシル基またはカルバモイル基、ｎは１または２を表す）
で示される化合物、またはその薬理学的に許容される塩。
【請求項２】
Ｒが水素原子である、請求項１記載の化合物、またはその薬理学的に許容される塩。
【請求項３】
Ｒがヒドロキシル基である、請求項１記載の化合物、またはその薬理学的に許容される塩。
【請求項４】
Ｒがカルバモイル基である、請求項１記載の化合物、またはその薬理学的に許容される塩。
【請求項５】
ｎが１である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬理学的に許容される塩。
【請求項６】
ｎが２である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬理学的に許容される塩。
【請求項７】
Ｒが水素原子でありｎが１である、請求項１記載の化合物、またはその薬理学的に許容される塩。
【請求項８】
Ｒがヒドロキシル基でありｎが１である、請求項１記載の化合物、またはその薬理学的に許容される塩。
【請求項９】
Ｒがカルバモイル基でありｎが２である、請求項１記載の化合物、またはその薬理学的に許容される塩。
【請求項１０】
化合物が、（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−アセチルアミノ−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン、
（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−［（２−ヒドロキシアセチル）アミノ］−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン、および
（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−［（３−カルバモイルプロピオニル）アミノ］−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオンから選択される、請求項１記載の化合物、またはその薬理学的に許容される塩。
【請求項１１】
式（ＩＩ）：
【化２】
2005517016.tif 000012
で示される化合物またはその塩を、式（ＩＩＩ−ａ）:
Ｈ−（ＣＨ2）n−ＣＯＯＨ          （ＩＩＩ−ａ）
（式中、ｎは１または２を表す）
で示される化合物、その塩またはその反応性誘導体と縮合させ、必要に応じて得られた化合物を薬理学的に許容される塩に変換することを特徴とする、式（Ｉ−ａ）：
【化３】
2005517016.tif 000013
（式中、ｎは前記と同一意味を有する）
で示される化合物またはその薬理学的に許容される塩の製法。
【請求項１２】
式（ＩＩ）：
【化４】
2005517016.tif 000014
で示される化合物またはその塩を、式（ＩＩＩ−ｂ）：
Ｒ１Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ        （ＩＩＩ−ｂ）
（式中、Ｒ１Ｏはヒドロキシル基または保護されたヒドロキシル基を表し、ｎは前記と同一意味を有する）
で示される化合物、その塩またはその反応性誘導体と縮合させ、保護基を除去し、必要に応じて得られた化合物を薬理学的に許容される塩に変換することを特徴とする、式（Ｉ−ｂ）：
【化５】
2005517016.tif 000015
（式中、ｎは前記と同一意味を有する）
で示される化合物またはその薬理学的に許容される塩の製法。
【請求項１３】
式（ＩＩ）：
【化６】
2005517016.tif 000016
で示される化合物またはその塩を、式（ＩＩＩ−ｃ）：
Ｈ２ＮＣ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ            （ＩＩＩ−ｃ）
（式中、ｎは前記と同一意味を有する）
で示される化合物、その塩またはその反応性誘導体と縮合させ、必要に応じて得られた化合物を薬理学的に許容される塩に変換することを特徴とする、式（Ｉ−ｃ）：
【化７】
2005517016.tif 000017
（式中、ｎは前記と同一意味を有する）
またはその薬理学的に許容される塩の製法。
【請求項１４】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物またはその薬理学的に許容される塩を治療的に許容される担体または希釈剤と共に含有する医薬組成物。
【請求項１５】
治療有効量の請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物またはその薬理学的に許容される塩を投与することを特徴とする、ＬＦＡ−１介在病態の治療または予防法。
【請求項１６】
病態が炎症性疾患、自己免疫疾患およびアレルギー性疾患から選択される、請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
治療有効量の請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物またはその薬理学的に許容される塩を投与することを特徴とする、サブスタンスＰにより引き起こされる、または介在される病態の治療または予防法。
【請求項１８】
病態が炎症性疾患である、請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
治療有効量の請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物またはその薬理学的に許容される塩を投与することを特徴とする、リウマチ様関節炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患、アレルギー疾患、成人呼吸窮迫症候群、ＡＩＤＳ、心血管疾病、血栓症、有害な血小板凝集、血栓溶解後の再閉塞、再潅流障害、皮膚炎症疾患、骨粗鬆症、変形性関節症、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、新生物疾患、外傷、網膜剥離、Ｉ型糖尿病、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、眼炎症状態、炎症性腸疾患、膀胱炎、胃障害、限局性回腸炎、シェーグレン症候群および臓器移植後の拒絶反応から選択される病態の治療または予防法。
【請求項２０】
病態が、乾癬、リウマチ様関節炎、炎症性腸疾患、全身性エリテマトーデス、アトピー性皮膚炎、シェーグレン症候群および臓器移植後の拒絶反応から選択される、請求項１９記載の方法。
【請求項２１】
病態が、リウマチ様関節炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患、乾癬、多発性硬化症および臓器移植後の拒絶反応から選択される、請求項１９記載の方法。
【請求項２２】
病態が、喘息、炎症性腸疾患、膀胱炎および胃障害から選択される、請求項１９記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、αLβ2インテグリン介在炎症性状態の治療に有用な、優れたαLβ2インテグリン介在細胞接着阻害剤である新規化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
白血球インテグリンおよび細胞間接着分子（ＩＣＡＭ）は、標的細胞および細胞外マトリックスへの白血球接着に中心的な役割を果たす。β2インテグリン（ＣＤ１８）サブファミリーは、４個の構成員、つまり、αLβ2インテグリン（ＬＦＡ−１、ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、αMβ2インテグリン（Ｍａｃ−１、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８）、αXβ2インテグリン（ｐ１５０／９５、ＣＤ１１ｃ／ＣＤ１８）およびαDβ2インテグリン（ＣＤ１１ｄ／ＣＤ１８）から成り、これらはＣＤ１８と、互いに関連しているが別個のα鎖との非共有結合により構成される[ボクナー（Bochner）編、Adhesion Molecules in Allergic Disease, Marcel Dekker, Inc. pp 1-24 （1997）]。とりわけ、ＬＦＡ−１は、Ｔ細胞、好酸球および他の白血球の細胞接着と血管外炎症組織への浸潤の主要因子であることが示されている[ガームベルグ（Garmberg）、Curr. Opin. Cell Biology, 9, 643-650 （1997）; ペインズ（Panes）ら、Br. J. Pharmacology, 126, 537-550 （1999）]。ＬＦＡ−１は、血管内皮細胞、樹状突起神経細胞、上皮細胞、マクロファージおよびＴリンパ芽球などの多くの細胞型に見られるＩＣＡＭファミリー（ＩＣＡＭ−１、２、３、４、５）に結合する[ダスティン（Dustin）ら、J. Immunology, 137, 245-254 （1986）]。さらに、ＬＦＡ−１／ＩＣＡＭ−１およびＬＦＡ−１／ＩＣＡＭ−３の相互作用はＴ細胞活性化に必要とされる副刺激シグナル（co-stimulatory signal）として機能し得る[ウィングレン（Wingren）ら、Crit. Rev. in Immunology, 15, 235-253 （1995）。
【０００３】
細胞浸潤およびＴ細胞活性化は多数の炎症性疾患病態において重要な過程である。いくつかの異なる炎症疾患の動物モデルにおいて、ＬＦＡ−１やＩＣＡＭ−１に対する抗体が炎症を抑制していることから、炎症にＬＦＡ−１が重要な役割を有することが示されている[ロースレインら（Rothlein）、Kidney International, 41, 617 （1992）; イーゴ（Iigo）ら、J. Immunology, 147, 4167 （1991）; ベネット（Bennet）ら、J. Pharmacol. and Exp. Therapeutics, 280, 988 （1997）]。さらに、ＣＤ１１ａ（ＬＦＡ−１のα鎖）に対するヒト化モノクロナル抗体は、乾癬を有する患者において効力を示している[ゴットリーブ（Gottlieb）ら、J. Am. Acad. Dermatology, 42, 428-35 （2000））。
【０００４】
さらに、ＬＦＡ−１に対する抗体が臓器移植後の拒絶反応を抑制することが知られている[ポストン（Poston）ら、Transplantation 69, 2005-2013 （2000）; ナカクラ（Nakakura）ら、Transplantation 62, 547-552 （1996））]。また、αLβ2インテグリンに対するモノクロナル抗体の移植への使用も開示されている（国際公開第９４／０４１８８号明細書）。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、式（Ｉ）：
【化１】
2005517016.tif 000003
（式中、Ｒは水素原子、ヒドロキシル基またはカルバモイル基、ｎは１または２を表す）
で示される新規な化合物、またはその薬理学的に許容される塩に関する。
【０００６】
本発明の目的化合物はその不斉炭素に基づく光学異性体として存在することがあり、本発明はこれらの異性体およびその混合物も包含する。
【０００７】
本発明の実施態様において、結合の立体配置は固定される必要はない。本発明の化合物は単一配置のもの、あるいはいくつかの異なる配置のものの混合物であってもよい。
【０００８】
化合物（Ｉ）の好ましい実施態様において、Ｒは水素原子である。
化合物（Ｉ）の他の好ましい実施態様において、Ｒはヒドロキシル基である。
化合物（Ｉ）の他の好ましい実施態様において、Ｒはカルバモイル基である。
化合物（Ｉ）の他の好ましい実施態様において、ｎは１である。
化合物（Ｉ）の他の好ましい実施態様において、ｎは２である。
化合物（Ｉ）のより好ましい実施態様において、Ｒは水素原子であり、ｎは１である。
化合物（Ｉ）のより好ましい実施態様において、Ｒはヒドロキシル基であり、ｎは１である。
化合物（Ｉ）のより好ましい実施態様において、Ｒはカルバモイル基であり、ｎは２である。
【０００９】
本発明の特に好ましい化合物は、以下の群から選ばれる化合物である。
（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−アセチルアミノ−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン、
（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−［（２−ヒドロキシアセチル）アミノ］−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン、および
（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−［（３−カルバモイルプロピオニル）アミノ］−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン。
【００１０】
本発明化合物の特徴は、１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン骨格の７位にアシルアミノ基、５位に４−シアノベンジル基が結合している点にあり、そのような特徴を有する化合物を記載した文献はこれまで見当たらない。
【００１１】
本発明化合物は、ＬＦＡ−１介在細胞接着と、ＬＦＡ−１介在Ｔ細胞同時活性化の両者に対して強力な阻害活性を有する。本発明の有効成分はまた、（ａ）血漿タンパク結合、（ｂ）水溶性、および（ｃ）親油性において全体的に改善されており、このため経口投与で優れたバイオアベイラビリティを示す。したがって、本発明化合物はＬＦＡ−１介在細胞接着が関与する疾患に対し、インビボで優れた効果を示す。
【００１２】
さらに、本発明化合物はサブスタンスＰの受容体（すなわち、ニューロキニン１（NK1）受容体）に対しても強力な拮抗活性を有している。サブスタンスＰ受容体拮抗薬は炎症性疾患、例えば、喘息、リウマチ様関節炎、炎症性腸疾患、膀胱炎および他の胃障害の治療に有用である[クレインベルド（Kraneveld）ら、Int. Immunopharmacology, 1, 1629-1650 （2001）; スウェイン（Swain）ら、Ann. Rep. Med. Chem., 34, 51-60 （1999）; オーンマハト Jr.（Ohnmacht Jr.）ら、Ann.Rep.Med.Chem.,33,71-80（1998）]。したがって、本発明化合物は、サブスタンスＰにより引き起こされる、またはサブスタンスＰが介在する疾患に対して優れた治療効果を奏する。また、本発明化合物は、ＬＦＡ−１介在細胞接着阻害およびサブスタンスＰ受容体拮抗作用の２つの活性に基き、炎症性疾患の治療または予防に優れた効果を示しうる。
【００１３】
さらに、本発明化合物（I）は従来技術に記載された化合物と比較して、細胞毒性が低くかつシトクロムＰ４５０阻害活性も低いので、副作用の恐れが低い。
【００１４】
本発明化合物は遊離形態または薬理学的に許容される塩の形態のいずれでも臨床的に使用できる。薬理学的に許容される塩としては、無機酸あるいは有機酸との酸付加塩、および無機塩基、有機塩基、あるいはアミノ酸との塩が挙げられる。また、薬理学的に許容される塩にはこれらの分子内塩、溶媒和物あるいは水和物も含まれる。
【００１５】
本発明合物は上記の化合物の治療有効量、および薬理学的に許容される担体あるいは希釈剤からなる医薬組成物として製剤化される。薬理学的に許容される担体または希釈剤としては、例えば、結合剤（シロップ、アラビアゴム、ゼラチン、ソルビット、トラガント、ポリビニルピロリドン）、賦形剤（乳糖、ショ糖、コーンスターチ、リン酸カリウム、ソルビット、グリシン）、滑沢剤（ステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコール、シリカ）、崩壊剤（バレイショデンプン）および湿潤剤（ラウリル硫酸ナトリウム）等を挙げることができる。
【００１６】
本発明の目的化合物またはその薬理学的に許容できる塩は、経口的または非経口的に投与でき、適当な医薬製剤として用いることが出来る。経口的に投与する場合の適当な医薬製剤として、例えば、錠剤、顆粒剤、カプセル剤、粉剤などの固体製剤、または溶液製剤、懸濁製剤、乳化製剤などの液体製剤が挙げられる。非経口的に投与する場合の適当な医薬製剤としては、坐剤の形、あるいは注射用蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液等を用いた注射製剤または静脈内点滴製剤、および常法による吸入剤が挙げられる。
【００１７】
本発明の目的化合物の投与量は投与方法、患者の年齢、性別、体重、病状により変わるが、一般的には、一日あたりの投与量は好ましくは約０.１〜１００ｍｇ／ｋｇ、特に好ましくは１〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲である。
【００１８】
本発明の化合物は、対象、例えばヒト患者における、ＬＦＡ−１介在細胞接着に関連した病態の治療または予防に用いることができる。また、本発明の化合物は、ＬＦＡ−１介在細胞接着に関連した病態に罹患した、または罹患しやすい患者の治療剤として用いることができる。ＬＦＡ−１介在細胞接着に関連した病態の例としては、炎症性疾患、自己免疫疾患およびアレルギー性疾患が挙げられる。
【００１９】
本発明の化合物はまた、患者におけるサブスタンスＰにより引き起こされる、またはサブスタンスＰ介在性の病態の治療または予防剤として、並びにそのような病態に罹患したまたは罹患しやすい患者の治療に用いることができる。そのような病態の例として、炎症性疾患が挙げられる。
【００２０】
本発明の化合物はリウマチ関節炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患、アレルギー疾患、成人呼吸窮迫症候群、ＡＩＤＳ、心血管疾病、血栓症、有害な血小板凝集、血栓溶解後の再閉塞、再潅流障害、皮膚炎症疾患（例えば乾癬、湿疹、接触皮膚炎、アトピー性皮膚炎）、骨粗鬆症、変形性関節症、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症（移植後の移植片動脈硬化症も含む）、新生物疾患（新生物あるいは癌性成長の転移を含む）、外傷、網膜剥離、Ｉ型糖尿病、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、眼炎症状態、炎症性腸疾患（クローン病、潰瘍性大腸炎）、膀胱炎、胃障害、限局性回腸炎、シェーグレン症候群、および他の自己免疫疾患などの、疾患の治療または予防に有用である。
【００２１】
本発明の化合物はまた、臓器移植等の移植後の拒絶反応（すなわち、慢性拒絶および急性拒絶）、および同種移植片拒絶（宿主対移植片疾患）および移植片対宿主疾患を含む、移植にも用いることができる。
【００２２】
本発明の化合物は、好ましくは乾癬、リウマチ関節炎（または慢性関節リウマチ）、炎症性腸疾患（クローン病、潰瘍性大腸炎）、全身性エリテマトーデス、アトピー性皮膚炎、シェーグレン症候群、移植後の拒絶反応（同種移植片拒絶および移植片対宿主疾患）の治療および予防に用いることができる。
【００２３】
本発明の化合物はまた、喘息、炎症性腸疾患、膀胱炎および他の胃障害のような炎症性疾患の治療または予防にも好適に用いることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２４】
本発明によれば、本発明の目的化合物（Ｉ）は下記の製法により製造することができる。
製法Ａ
本発明の化合物のうち、式（Ｉ−ａ）：
【化２】
2005517016.tif 000004
（式中、ｎは前記と同一意味を有する）
で示される化合物またはその薬理学的に許容される塩は、式（ＩＩ）：
【化３】
2005517016.tif 000005
で示される化合物またはその塩を、式（ＩＩＩ−ａ）:
Ｈ−（ＣＨ2）n−ＣＯＯＨ          （ＩＩＩ−ａ）
（式中、ｎは前記と同一意味を有する）
で示される化合物、またはその塩またはその反応性誘導体と縮合させ、次いで、必要に応じて得られた化合物を薬理学的に許容される塩に変換することにより製造することができる。
【００２５】
化合物（ＩＩ）および化合物（ＩＩＩ−ａ）の塩は、例えば、無機酸あるいは有機酸との塩（トリフルオロ酢酸塩、塩酸塩、硫酸塩等）、および無機塩基との塩（ナトリウム塩またはカリウム塩等のアルカリ金属との塩、バリウム塩またはカルシウム塩等のアルカリ土類金属との塩等）であってよい。
【００２６】
化合物（ＩＩ）またはその塩と化合物（ＩＩＩ−ａ）またはその塩との縮合反応は、塩基の存在下または非存在下、適当な溶媒中、縮合剤を用いて行うことができる。
【００２７】
縮合剤は、ペプチド合成に用いうる通常の縮合剤から選択することができ、ＢＯＰ−Ｃｌ、ＢＯＰ試薬、ＤＣＣ、ＥＤＣ、またはＣＤＩ等が例示できる。縮合剤は、活性化剤（例えば、ＨＯＢＴ）の存在下で使用することが好ましい。
【００２８】
塩基は、アルキルアミン（例えば、ＤＩＥＡ、Ｅｔ3Ｎ）、環状アミン（例えば、ＤＢＵ、ＤＢＮ、４−メチルモルホリン）およびピリジン類（例えば、ピリジン、ＤＭＡＰ）等の通常の有機塩基；およびアルカリ金属炭酸塩（例えば、Ｎａ2ＣＯ3、Ｋ2ＣＯ3）、アルカリ金属炭酸水素塩（例えば、ＮａＨＣＯ3、ＫＨＣＯ3）、アルカリ金属水酸化物（例えば、ＮａＯＨ、ＫＯＨ）等の通常の無機塩基等から選択することができる。
【００２９】
溶媒は縮合反応を阻害しないものであればよく、例えば、エステル（例えば、酢酸メチル、酢酸エチル）、ハロゲン化アルカン（例えば、ＣＨＣｌ３、ＣＨ2Ｃｌ2）、エーテル（例えば、ジエチルエーテル、ＴＨＦ、ＤＭＥ、ジオキサン）、アミド（例えば、ＤＭＦ、Ｎ−メチルピロリドン）、ケトン（例えば、アセトン、メチルエチルケトン）、ＣＨ３ＣＮ、ＤＭＳＯ、Ｈ２Ｏ、またはこれらの混合溶媒が挙げられる。反応は−５０℃〜５０℃、好ましくは０℃〜室温の範囲の温度で行われる。
【００３０】
化合物（ＩＩ）またはその塩と化合物（ＩＩＩ−ａ）の反応性誘導体との縮合反応は、塩基の存在下または非存在下、適当な溶媒中で、または無溶媒で行う。
【００３１】
化合物（ＩＩＩ−ａ）の反応性誘導体の例として、酸ハライド（例えば、酸クロリド）、反応性エステル（例えば、パラニトロフェノールとのエステル）、その無水物、他のカルボン酸との混合酸無水物（例えば、イソ酪酸との混合酸無水物）等が挙げられる。
【００３２】
塩基は、アルキルアミン（例えば、ＤＩＥＡ、Ｅｔ3Ｎ）、環状アミン（例えば、ＤＢＵ、ＤＢＮ、４−メチルモルホリン）およびピリジン類（例えば、ピリジン、ＤＭＡＰ）等の通常の有機塩基；およびアルカリ金属炭酸塩（例えば、Ｎａ2ＣＯ3、Ｋ2ＣＯ3）、アルカリ金属炭酸水素塩（例えば、ＮａＨＣＯ3、ＫＨＣＯ3）、アルカリ金属水酸化物（例えば、ＮａＯＨ、ＫＯＨ）等の通常の無機塩基等から選択することができる。
【００３３】
溶媒は縮合反応を阻害しないものであればよく、例えば、エステル（例えば、酢酸メチル、酢酸エチル）、ハロゲン化アルカン（例えば、ＣＨＣｌ３、ＣＨ2Ｃｌ2）、エーテル（例えば、ジエチルエーテル、ＴＨＦ、ＤＭＥ、ジオキサン）、アミド（例えば、ＤＭＦ、Ｎ−メチルピロリドン）、ケトン（例えば、アセトン、メチルエチルケトン）、ＣＨ３ＣＮ、ＤＭＳＯおよびＨ２Ｏ、およびこれらの混合溶媒から選択される。
縮合反応は−３０℃〜室温の範囲の温度で行うことができる。
【００３４】
製法Ｂ
本発明の化合物の内、式（Ｉ−ｂ）：
【化４】
2005517016.tif 000006
（式中、ｎは前記と同一意味を有する）
で示される化合物またはその薬理学的に許容される塩は、式（ＩＩ）で示される化合物またはその塩を、式（ＩＩＩ−ｂ）：
Ｒ1Ｏ−（ＣＨ2）n−ＣＯＯＨ        （ＩＩＩ−ｂ）
（式中、Ｒ1Ｏは保護された、または保護されていないヒドロキシル基を表し、ｎは前記と同一意味を有する）
で示される化合物、その塩、またはその反応性誘導体と縮合させた後、保護基を除去し、次いで、必要に応じて、得られた化合物を薬理学的に許容される塩に変換することにより製造することができる。
【００３５】
化合物（ＩＩＩ−ｂ）の塩は、例えば無機塩基との塩（例えば、ナトリウム塩またはカリウム塩等のアルカリ金属との塩、バリウム塩またはカルシウム塩等のアルカリ土類金属との塩）であってよい。
【００３６】
ヒドロキシル基の保護基は、常法に従って容易に除去しうる、ヒドロキシル基に対する通常の保護基から選択できる。そのような保護基の例としてトリアルキルシリル基（例えば、トリメチルシリル基、トリエチルシリル基、ｔ−ブチルジメチルシリル基）、ベンジル基、メチル基およびテトラヒドロピラニル基を挙げることができる。
【００３７】
化合物（ＩＩ）またはその塩と、Ｒ１Ｏが保護されたヒドロキシル基である化合物（ＩＩＩ−ｂ）、その塩、またはその反応性誘導体との縮合反応は、上記製法Ａに記載の方法と同様にして行うことができる。
【００３８】
脱保護は、除去すべき保護基の種類に従い、例えば、加水分解、酸処理、ＢＢｒ3処理、および接触還元等の常法により行うことができる。
【００３９】
加水分解は、アルカリ金属水酸化物（例えば、ＬｉＯＨ、ＮａＯＨおよびＫＯＨ）等の無機塩を用い、エーテル（例えば、ジエチルエーテル、ジオキサンおよびＴＨＦ）、アルコール（例えば、ＭｅＯＨ、ＥｔＯＨ）、ＣＨ３ＣＮ、ＤＭＳＯ、Ｈ２Ｏ等の適当な溶媒中、室温〜加熱下で行うことができる。
【００４０】
酸処理は塩酸、臭化水素酸、酢酸、ｐ−トルエンスルホン酸、およびトリフルオロ酢酸等の無機または有機酸を用い、エーテル（例えばジエチルエーテル、ジオキサン、ＴＨＦ）、ハロゲン化アルカン（例えば、ＣＨＣｌ３、ＣＨ２Ｃｌ２）、アルコール（例えば、ＭｅＯＨ、ＥｔＯＨ）、ＣＨ３ＣＮ、ＤＭＳＯ、Ｈ２Ｏ等の適当な溶媒中、室温〜加熱下で行うことができる。
【００４１】
接触還元は、水素雰囲気下、パラジウム−活性炭およびラネイニッケルのような適当な触媒を用い、エーテル（例えばジエチルエーテル、ジオキサン、ＴＨＦ）、エステル（例えば、酢酸メチル、酢酸エチル）、アルコール（例えば、ＭｅＯＨ、ＥｔＯＨ）、ＣＨ３ＣＮ、ＡｃＯＨ、Ｈ２Ｏ等の適当な溶媒中、室温〜加熱下で行うことができる。
【００４２】
ＢＢｒ3処理による脱メチル化は適当な溶媒（例えば、ＴＨＦ、ＣＨ２Ｃｌ２、ＡｃＯＨ）中、−７８℃〜５０℃の温度で行うことができる。
【００４３】
Ｒ１Ｏがヒドロキシル基である化合物（ＩＩＩ−ｂ）を縮合反応に用いる場合、縮合反応の前に化合物（ＩＩＩ−ｂ）のヒドロキシル基を反応系内で保護すべきである。
【００４４】
ヒドロキシル基の保護は、適当な溶媒中、塩基の存在下、化合物（ＩＩＩ−ｂ）をトリアルキルシリルハライドと反応させることにより行うことができる。トリアルキルシリルハライドとしては、例えば、トリメチルシリルクロリド、トリエチルシリルクロリド、ｔ−ブチルジメチルシリルクロリド等が挙げられる。塩基は、トリエチルアミン、イミダゾールおよびピリジン等のヒドロキシル基の保護に使用される通常の塩基から選択することができる。溶媒は反応を阻害しないものであればよく、例えば、エステル（例えば、酢酸メチル、酢酸エチル）、芳香族炭化水素（例えば、ベンゼン、トルエン）、ハロゲン化アルカン（例えば、ＣＨＣｌ３、ＣＨ2Ｃｌ2）、エーテル（例えば、ジエチルエーテル、ＴＨＦ、ＤＭＥ、ジオキサン）、アミド（例えば、ＤＭＦ、Ｎ−メチルピロリドン）、ケトン（例えば、アセトン、メチルエチルケトン）、ＣＨ３ＣＮ、ＤＭＳＯ、およびこれらの混合溶媒から選択することができる。反応は−５０℃〜５０℃、好ましくは０℃〜室温の範囲の温度で行われる。要すれば、保護された化合物を通常の方法に従って単離することができる。
【００４５】
製法Ｃ
本発明化合物の内、式（Ｉ−ｃ）：
【化５】
2005517016.tif 000007
（式中、ｎは前記と同一意味を有する）
で示される化合物またはその薬理学的に許容される塩は、化合物（ＩＩ）を、式（ＩＩＩ−ｃ）：
Ｈ2ＮＣ（＝Ｏ）−（ＣＨ2）n−ＣＯＯＨ            （ＩＩＩ−ｃ）
（式中、ｎは前記と同一意味を有する）
で示される化合物、その塩またはその反応性誘導体と縮合させ、次いで、必要に応じて得られた化合物を薬理学的に許容される塩に変換することにより製造することができる。
【００４６】
化合物（ＩＩＩ−ｃ）の塩は、例えば、無機塩基との塩（例えば、ナトリウム塩またはカリウム塩等のアルカリ金属との塩、バリウム塩またはカルシウム塩等のアルカリ土類金属との塩）であってよい。
【００４７】
化合物（ＩＩ）またはその塩と化合物（ＩＩＩ−ｃ）またはその塩との縮合反応は、製法Ａに記載の方法と同様にして行うことができる。
【００４８】
出発物質である式（ＩＩ）の化合物はＷＯ０１／３０７８１記載の方法、または下記の反応工程式に従って製造することができる。
【００４９】
反応工程式１
【化６】
2005517016.tif 000008
（式中、ＸはＣ１−６アルキル基またはベンジル基を表し、ｔＢＤＭＳＯはｔert−ブチルジメチルシリルオキシ基を表す。）
【００５０】
工程（ａ）：
化合物（ＩＶ）は、４−ヒドロキシプロリンのＣ１−６アルキルまたはベンジルエステルと、３，５−ジクロロフェニルイソシアナートとを塩基の存在下、適当な溶媒中で反応させることにより製造することができる。
【００５１】
塩基は、アルキルアミン（例えば、Ｅｔ3Ｎ、ＤＩＥＡ）およびピリジン等の通常の有機塩基、およびアルカリ金属炭酸水素塩（例えば、ＮａＨＣＯ3、ＫＨＣＯ3）やアルカリ金属炭酸塩（例えば、Ｎａ2ＣＯ3、Ｋ2ＣＯ3）等の通常の無機塩基等から選択することができる。
【００５２】
溶媒は縮合反応を阻害しないものであればよく、例えば、ＣＨＣｌ３、ＤＭＥ、ＴＨＦ、ＤＭＦ、ＨＭＰＡまたはこれらの混合溶媒から選択される。反応は−７８℃〜室温の範囲の温度で行うことができる。
【００５３】
工程（ｂ）：
化合物（Ｖ）は、化合物（ＩＶ）のヒドロキシル基を保護することにより製造することができる。保護は、通常の方法で行うことができ、例えば、化合物（ＩＶ）をｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリドと、イミダゾールの存在下、ＣＨ３ＣＮ等の適当な溶媒中で反応させることにより製造することができる。反応は０℃〜溶媒の沸点、好ましくは室温で行うことができる。
【００５４】
工程（ｃ）：
化合物（ＶＩ）は、化合物（Ｖ）を環化することにより製造することができる。環化は、塩基の存在下または非存在下、適当な溶媒中で行うことができる。
【００５５】
塩基は、アルカリ金属アルコキシド（例えば、ＮａＯＥｔ、ＮａＯＭe）、アルカリ金属炭酸塩（例えば、Ｎａ2ＣＯ3、Ｋ2ＣＯ3）およびアルカリ金属炭酸水素塩（例えば、ＮａＨＣＯ3）等の通常の無機塩基、およびピリジン、ＤＭＡＰ、Ｅｔ3ＮおよびＤＩＥＡ等の通常の有機塩基から選択することができる。
【００５６】
溶媒は環化反応を阻害しないものであればよく、例えば、トルエン、ＤＭＥ、ＣＨ２Ｃｌ２、ＴＨＦ、ＣＨ３ＣＮ、ＤＭＦ、アルコール類（例えば、ＭｅＯＨ、ＥｔＯＨ）またはこれらの混合溶媒から選択される。反応は０℃〜溶媒の沸点、好ましくは５０℃〜１００℃の範囲の温度で行うことができる。
【００５７】
工程（ｄ）：
化合物（ＶＩＩ）は、化合物（ＶＩ）を、式（ＸＩ）：
【化７】
2005517016.tif 000009
（式中、Ｙは脱離基を表す）
で示される化合物と縮合させることにより製造することができる。
【００５８】
脱離基はハロゲン原子（例えば、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子）、ｐ−トルエンスルホニルオキシ基、およびメタンスルホニルオキシ基から選択される。
縮合反応は塩基の存在下適当な溶媒中で行うことができる。
【００５９】
塩基は、アルカリ金属アミド（例えば、ＬｉＣｌの存在または非存在下、ＬＤＡ、ＫＨＭＤＳ）等の通常の塩基から選択することができる。
【００６０】
溶媒は縮合反応を阻害しないものであればよく、例えば、ジエチルエーテル、ＤＭＥ、ＴＨＦ、ＤＭＦ、ＨＭＰＡ、またはこれらの混合溶媒から選択される。反応は−７８℃〜室温の範囲の温度で行うことができる。
【００６１】
工程（ｅ）：
化合物（ＶＩＩＩ）は、化合物（ＶＩＩ）を脱保護することにより製造することができる。脱保護は常法に従って行うことができ、例えば、化合物を適当な溶媒中または無溶媒で、ＨＦ／ピリジン、ｎ−Ｂｕ４ＮＦ、または酸（例えば、ＨＣｌ、ＡｃＯＨ、ＴＦＡ、ｐ−ＴｓＯＨ）により処理することにより行う。
【００６２】
溶媒は縮合反応を阻害しないものであればよく、例えば、ＣＨ３ＣＮ、ＴＨＦ、ＤＭＦ、アルコール類（例えば、ＭｅＯＨ、ＥｔＯＨ）またはこれらの混合溶媒から選択される。反応は−７８℃〜室温の範囲の温度で行うことができる。
【００６３】
工程（ｆ）：
化合物（ＩＸ）は、化合物（ＶＩＩＩ）を適当な溶媒中、塩基の存在下でメタンスルホニルクロリドと反応させることにより製造することができる。
【００６４】
塩基は、Ｅｔ3Ｎ、ＤＩＥＡ、ピリジン、ＮａＨＣＯ3、ＫＨＣＯ3、Ｎａ2ＣＯ3、Ｋ2ＣＯ3、およびＫＨＣＯ3等の通常の塩基から選択される。
【００６５】
溶媒は反応を阻害しないものであればよく、例えばＣＨ２Ｃｌ２、ＴＨＦ、ＤＭＦ、ＣＨ３ＣＮおよびトルエンから選択される。反応は−２０℃〜５０℃の範囲の温度で行うことができる。
【００６６】
工程（ｇ）：
化合物（Ｘ）は、化合物（ＩＸ）をアルカリ金属のアジ化物（例えば、ＮａＮ３）と反応させることにより製造することができる。
置換反応は有機溶媒中、０℃〜１００℃の範囲の温度で行うことができる。
溶媒は反応を阻害しないものであればよく、例えばＣＨ２Ｃｌ２、ＴＨＦ、ＤＭＦ、ＣＨ３ＣＮ、トルエンから選択される。
工程（ｈ）：
化合物（ＩＩ）は、化合物（Ｘ）を還元することにより製造することができる。還元は接触還元条件下で行うことができ、例えば、ＰｄまたはＰｔ触媒（例えば、Ｐｄ−Ｃ、ＰｔＯ２）の存在下、適当な溶媒中で、Ｈ２雰囲気下、室温で行うことができる。
溶媒は、反応を阻害しないものであればよく、例えば、ＥｔＯＡｃ、ＭｅＯＨおよびＥｔＯＨから選択される。
【００６７】
本明細書および特許請求の範囲中、Ｃ1-6アルキルは１〜６個の炭素原子を持つ直鎖または分岐鎖アルキル基を意味し、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基等が挙げられ、好ましくは１〜４個の炭素原子を持つものである
【００６８】
略語：
ＡｃＯＥｔ：酢酸エチル（＝ＥｔＯＡｃ）
ＡｃＯＨ：酢酸
ＢＯＰ−Ｃｌ：ビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィン酸クロリド
ＢＯＰ試薬：ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート
ＢＳＡ：ウシ血清アルブミン
ＣＤＩ：カルボニルジイミダゾ−ル
ＤＢＮ：１，５−ジアザビシクロ[4.3.0]ノナ−５−エン
ＤＢＵ：１，８−ジアザビシクロ[5.4.0]ウンデカ−７−エン
ＤＣＣ：１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＤＩＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡＰ：４−ジメチルアミノピリジン
ＤＭＥ：ジメトキシエタン
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＥＤＣ：１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩
Ｅｔ：エチル
ＥｔＯＨ：エタノール
ＨＢＳＳ：ハンク平衡塩溶液
ＨＭＰＡ：ヘキサメチルホスホラミド
ＨＯＢＴ：１−ヒドロキシベンゾトリアゾール  水和物
ＨＳＡ：ヒト血清アルブミン
ＫＨＭＤＳ：ヘキサメチルジシラジドカリウム（＝ビス（トリメチルシリル）アミドカリウム）
ＬＤＡ：ジイソプロピルアミドリチウム
Ｍｅ：メチル
ＭｅＯＨ：メタノール
ｎ−Ｂｕ：ｎ−ブチル
ｔＢＤＭＳ：ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ｐ−ＴｓＯＨ：ｐ−トルエンスルホン酸
【００６９】
実施例１：（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−アセチルアミノ−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン
（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−アミノ−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン（７８．５ｍｇ）のＴＨＦ（５ｍＬ）溶液に、無水酢酸（１．０ｍＬ）を加えた。反応混合物を４５℃で２時間攪拌し、混合物を濃縮し、分取薄層クロマトグラフィー（シリカゲル；ＣＨ2Ｃｌ2）により精製して標記化合物を得た（８４ｍｇ）。ＭＳ（ｍ／ｚ）４７８．８（ＭＮａ+）。
【００７０】
実施例２：（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−［（３−カルバモイルプロピオニル）アミノ］−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン
（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−アミノ−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン（８２．７ｍｇ）、スクシンアミド酸（４５．８６ｍｇ）、ＥＤＣ（９３．１２ｍｇ）、ＨＯＢＴ（６１．２４ｍｇ）およびＤＩＥＡ（１０４．７９μＬ）およびＴＨＦ（５ｍＬ）の混合物を室温で一晩攪拌した。反応混合物を濃縮し、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（Ｂｅｃｋｍａｎ  ５μ  Ｃ１８カラム；勾配溶離：Ｈ2Ｏ／ＭｅＣＮ＝１０〜１００％／０．１％ＴＦＡ）により精製して標記化合物７２ｍｇを得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）５３６（ＭＮａ+）。
【００７１】
実施例３：（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−［（２−カルバモイルアセチル）アミノ］−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン
（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−アミノ−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン（２００ｍｇ）、マロンアミド酸（５９．５ｍｇ）、ＥＤＣ（１１２ｍｇ）、ＨＯＢＴ（９７．５ｍｇ）およびＤＩＥＡ（１６８μＬ）のＴＨＦ（５ｍＬ）溶液を室温で一晩攪拌した。反応混合物を濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃに溶解し、得られた溶液を水、飽和ＮａＨＣＯ3水溶液、食塩水で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、濃縮して標記化合物を得た（２１２ｍｇ）。ＭＳ（ｍ／ｚ）５００（ＭＨ+）。
【００７２】
実施例４：（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−［（３−ヒドロキシプロピオニル）アミノ］−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン
工程１：（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−アミノ−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン（０．３００ｇ）、３−メトキシプロピオン酸（０．２０９μＬ）、ＥＤＣ（０．２２４ｇ）、ＨＯＢＴ（０．２２１ｇ）およびＤＩＥＡ（０．３８μＬ）のＴＨＦ（１５ｍＬ）溶液を室温で一晩攪拌した。反応混合物を濃縮した。残渣をＨＰＬＣ［Ｂｅｃｋｍａｎ  ５μＣ１８カラム；勾配溶離：Ｈ2Ｏ／ＭｅＣＮ（１０〜１００％）／０．１％ＡｃＯＨ］により精製して泡状体を得た。これをＥｔＯＡｃに溶解し、得られた溶液を水、飽和ＮａＨＣＯ3水溶液、食塩水で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、濃縮して（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−［（３−メトキシプロピオニル）アミノ］−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオンを得た（０．２５９ｇ）。ＭＳ（ｍ／ｚ）５０１（ＭＨ+）。
【００７３】
工程２：三臭化ホウ素（ＢＢｒ3）（１Ｍ  ＣＨ2Ｃｌ2溶液、３ｍＬ）を、（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−［（３−メトキシプロピオニル）アミノ］−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン（０．１６ｇ）のＣＨ2Ｃｌ（１５ｍＬ）溶液に−７８℃で加え、混合物を８時間、−７８℃で攪拌した。混合物を濃縮し、残渣をＨＰＬＣ［Ｂｅｃｋｍａｎ  ５μＣ１８カラム；勾配溶離：Ｈ2Ｏ／ＭｅＣＮ（１０〜１００％）／０．１％ＡｃＯＨ）］により精製して泡状体を得た。これをＥｔＯＡｃに溶解し、得られた溶液を水、飽和ＮａＨＣＯ3水溶液、食塩水で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、濃縮して標記化合物を得た（０．１１９ｇ）。ＭＳ（ｍ／ｚ）４８７（ＭＨ+）。
【００７４】
実施例５：（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−［（２−ヒドロキシアセチル）アミノ］−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン
工程１：（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−アミノ−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン（１５０ｍｇ）およびＤＩＥＡ（１８９μＬ）のＴＨＦ（４ｍＬ）溶液に、塩化ベンジルオキシアセチル（５７μＬ）のＴＨＦ（２ｍＬ）溶液を加え、混合物を室温で一晩攪拌した。反応混合物を濃縮し、残渣をＥｔＯＡｃ中に採取した。得られた溶液を食塩水で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、ろ過し、濃縮した。残渣をＨＰＬＣ［Ｂｅｃｋｍａｎ  ５μＣ１８カラム；勾配溶離：Ｈ2Ｏ／ＭｅＣＮ（１０〜１００％）／０．１％ＡｃＯＨ］により精製して泡状体を得た。これをＥｔＯＡｃに溶解し、得られた溶液を水、飽和ＮａＨＣＯ3水溶液、食塩水で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、濃縮して（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−［（２−ベンジルオキシアセチル）アミノ］−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオンを得た（０．１３５ｇ）。ＭＳ（ｍ／ｚ）５６３．４［ＭＨ+］。
【００７５】
工程２：工程１で得た（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−［（２−ベンジルオキシアセチル）アミノ］−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン（０．１２５ｇ）、５％Ｐｄ／Ｃ（１５ｍｇ）およびＥｔＯＨ（１０ｍＬ）の混合物に水素をバブリングし、得られた混合物を一晩、Ｈ2雰囲気下で攪拌した。混合物に５％Ｐｄ／Ｃ（１０ｍｇ）を追加し、一晩Ｈ2雰囲気下で攪拌した。反応混合物をセライトろ過し、ろ液を濃縮した。残渣をＨＰＬＣ（Ｂｅｃｋｍａｎ  ５μＣ１８カラム；勾配溶離：Ｈ2Ｏ／ＭｅＣＮ（１０〜１００％）／０．１％ＴＦＡ）により精製して標記化合物を得た（０．０２３ｇ）。ＭＳ（ｍ／ｚ）４７３［ＭＨ+］および４９５［ＭＮａ+］。
【００７６】
参考例１：（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−アミノ−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン
標記化合物を、以下の反応工程式に従って製造した。
反応工程式２
【化８】
2005517016.tif 000010
（上記の反応工程式において、ｔＢＤＭＳＯはｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ基であり、ＭｓＯはメタンスルホニルオキシ基である。）
【００７７】
工程−１：ｐ−トルエンスルホン酸（５０．６ｇ）を、Ｌ−４−トランス−ヒドロキシプロリン（２５．２５ｇ）のベンジルアルコール（１００ｍＬ）とベンゼン（２５０ｍＬ）の混合物中の懸濁液に加え、ディーン・スターク（Ｄｅａｎ Ｓｔａｒｋ）トラップを使用しながら混合物を２４時間加熱した。反応混合物を濃縮し、ジエチルエーテルを加えて固形物を析出させた。固形物をろ過し、追加のジエチルエーテルで洗浄し、乾燥してＬ−４−トランス−ヒドロキシプロリンベンジルエステルを得た（７５ｇ）。
【００７８】
工程−２：工程１で得たＬ−４−トランス−ヒドロキシプロリンベンジルエステル ｐ−トルエンスルホン酸塩（４０．４３ｇ）の、ＴＨＦ（５００ｍＬ）およびＤＩＥＡ（５１．３ｍＬ）中懸濁液に、３，５−ジクロロフェニルイソシアネート（２２．１ｇ）を加えた。一晩攪拌後、反応混合物を濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃに溶解し、０．５Ｎ  ＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ3水溶液、食塩水で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、ろ過し、濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：１）中で粉砕し、白色固形物をろ過し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝２：１）により精製して（２Ｓ，４Ｒ）−２−［（３，５−ジクロロフェニル）カルバモイル］−４−ヒドロキシプロリンベンジルエステルを得た（３３．０７ｇ）。
【００７９】
工程−３：（２Ｓ，４Ｒ）−２−［（３，５−ジクロロフェニル）カルバモイル］−４−ヒドロキシプロリンベンジルエステル（３３．０７ｇ）のＣＨ3ＣＮ（８００ｍＬ）中の懸濁液に、イミダゾール（１１ｇ）およびｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（１３．６４ｇ）を加えた。４８時間攪拌した後、反応混合物を濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃに溶解し、０．５Ｎ  ＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ3水溶液、食塩水で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、ろ過し、濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝２：１）により精製して（２Ｓ，４Ｒ）−２−［（３，５−ジクロロフェニル）カルバモイル］−４−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）プロリンベンジルエステルを得た（４４．４５ｇ）。
【００８０】
工程−４：（２Ｓ，４Ｒ）−２−［（３，５−ジクロロフェニル）カルバモイル］−４−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）プロリンベンジルエステル（２３．４９ｇ）のＣＨ3ＣＮ（５００ｍＬ）溶液に、ＤＩＥＡ（３４．４４ｍＬ）を加え、混合物を加熱還流した。２４時間還流した後、反応混合物を濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ヘキサン〜ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝１：１）により精製して、３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオンの２つのジアステレオマーを分離した。
ジアステレオマーＡ：７．４６ｇ，ＭＳ：ｍ／ｚ  ４１５（Ｍ+）、および
ジアステレオマーＢ：１０．６６ｇ，ＭＳ：ｍ／ｚ  ４１５（Ｍ+）。
【００８１】
工程−５：工程４で得た化合物（ジアステレオマーＡまたはＢ：１２．７３ｇ）を以下のようにしてベンジル化した。Ｎ2雰囲気下、ジイソプロピルアミン（６．５ｍＬ）のＴＨＦ（１００ｍＬ）溶液に、攪拌しながらｎ−ブチルリチウム（１．６Ｍヘキサン溶液、３０ｍＬ）を−７８℃で加えた。混合物を−７８℃にさらに３０分間維持した。Ｎ2雰囲気下、３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン（１２．７３ｇ）の乾燥ＴＨＦ（１００ｍＬ）溶液に、カニューレを用いて混合物を−７８℃で加えた。−７８℃で３０分間攪拌した後、ＴＨＦ（１００ｍＬ）中４−シアノ−α−ブロモトルエン（９．０８ｇ）を加えた。反応混合物を−７８℃で２．５時間、攪拌し、次いで、ゆっくりと室温まで昇温させ、室温で０．５時間、放置した。反応混合物を濃縮し、残渣をＥｔＯＡｃに溶解した。ＥｔＯＡｃ溶液を０．５Ｎ  ＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ3水溶液、食塩水で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、ろ過し、濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝２４：１〜３：１）により精製して（５Ｓ，７Ｒ）−および（５Ｒ，７Ｒ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオンを得た。
（５Ｓ，７Ｒ）異性体：７．６ｇ，ＭＳ：ｍ／ｚ  ５３０（Ｍ+）および
（５Ｒ，７Ｒ）異性体：１．８ｇ，ＭＳ：ｍ／ｚ  ５３０（Ｍ+）。
【００８２】
工程−６：（５Ｓ，７Ｒ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン（１．０ｇ）のＴＨＦ（１ｍＬ）溶液を７０％ＨＦ／ピリジン（２５ｍＬ）に加えた。反応混合物を24時間攪拌した後、濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃに溶解し、得られた溶液を水、飽和ＮａＨＣＯ3水溶液、食塩水で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2＝２〜７％）により精製して（５Ｓ，７Ｒ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−ヒドロキシ−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン（０．５２ｇ）を得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）４１６［ＭＨ+］。
【００８３】
工程−７：工程６で得た（５Ｓ，７Ｒ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−ヒドロキシ−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン（０．５２ｇ）のＣＨ2Ｃｌ2（８ｍＬ）溶液に、０℃でＤＩＥＡ（０．４５ｍＬ）、次いでメタンスルホニルクロリド（０．１５ｍＬ）を添加し、混合物を１．５時間攪拌した。反応混合物をＣＨ2Ｃｌ2で希釈し、得られた混合物を飽和ＮａＨＣＯ3水溶液、続いて食塩水で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、ろ過し、濃縮して（５Ｓ，７Ｒ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−メタンスルホニルオキシ−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオンを得た（０．７６ｇ）。この化合物をそのままで、次の工程に使用した。ＭＳ（ｍ／ｚ）５０１［ＭＨ+］。
【００８４】
工程−８：工程７で得た（５Ｓ，７Ｒ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−メタンスルホニルオキシ−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン（０．７６ｇ）のＤＭＦ（５ｍＬ）溶液にＮａＮ3を添加し、混合物を２４時間攪拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃと水の間で分配した。有機溶液を食塩水で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、ろ過し、濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＣＨ2Ｃｌ2）により精製して（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−アジド−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン（０．４６ｇ）を得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）４４１［ＭＨ+］。
【００８５】
工程−９：工程８で得た（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−アジド−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン（０．４２ｇ）、５％Ｐｄ／Ｃ（１５ｍｇ）およびＥｔＯＨ（１５ｍＬ）の混合物に、水素をバブリングし、反応混合物を一晩Ｈ2雰囲気下で攪拌した。反応混合物をセライトろ過し、ろ液を濃縮した。残渣をＨＰＬＣ（Ｂｅｃｋｍａｎ５μＣ１８カラム；勾配溶離、Ｈ2Ｏ／ＭｅＣＮ（１０〜１００％）／０．１％ＴＦＡ）により精製して（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−アミノ−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン（０．２１ｇ）を得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）４１５［ＭＨ+］。
【００８６】
参考例２：（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−アミノ−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン
工程−１：Ｌ−４−ｔｒａｎｓ−ヒドロキシプロリンベンジルエステルｐ−トルエンスルホン酸塩の代わりにＬ−４−ｔｒａｎｓ−ヒドロキシプロリンメチルエステル  塩酸塩を用、参考例１の工程１〜４に記載の方法と同様の方法で３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオンを製造した。
【００８７】
工程−２：工程１で得た３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオンを参考例１の工程５〜９に記載の方法と同様の方法で処理し、表題の化合物を得た。
【００８８】
細胞接着プロトコル
細胞接着
組換えタンパクＩＣＡＭ−１・Ｆｃを、ヒトＩＣＡＭ−１の５個の細胞外ドメインとヒトＩｇＧの定常領域との融合により構築した。ＩＣＡＭ−１・ＦｃはプロテインＡアフィニティクロマトグラフィーで精製し、一定分量ずつ−２０℃で貯蔵した。タンパクをＰＢＳ（ｐＨ７．５）で希釈し、ファルコンプロバインド（Ｆａｌｃｏｎ  Ｐｒｏｂｉｎｄ） ＩＩＩプレートに１００μｌ／ウェルずつ移し、４℃で一晩インキュベーションして固定することにより、固定化ＩＣＡＭ−１・Ｆｃを調製した。非特異的バックグランド接着の基準として、ＢＳＡで被膜されたウェルを使用した。洗浄したプレートを卵白アルブミンの０．２５％ＰＢＳ溶液で３７℃下１時間ブロッキングした。ＨＢＳＳ洗浄ジャルカット（Ｊｕｒｋａｔ）細胞を最終濃度２．５×１０6／ｍＬになるようにＴＢＳｇ接着緩衝液（２４ｍＭ  Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．４、０．１４Ｍ塩化ナトリウム、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭグルコース、０．１％ＨＳＡ）に懸濁した。この懸濁液（１００μｌ）を、プレート緩衝液（ＴＢＳｇ緩衝液、１０ｍＭ塩化マグネシウム、２％ジメチルスルホキシド含有）１００μｌを含有したＩＣＡＭ−１被覆プレートに加えた。接着は３７℃で１時間行った。非接着細胞をＥＬ４０４プレートウォッシャー（バイオテック・インスツルメント；ハイランド・パーク、バーモント）を用いて除いた。接着した細胞数を、酵素基質としてｐ−ニトロフェノール−Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコ−スアミニド（ＰＮＡＧ）を用いて、内因性Ｎ−アセチル−ヘキソサミニダーゼの酵素活性を測定することにより定量した。遊離したｐ−ニトロフェノールの量を、垂直経路分光光度計で４０５ｎｍでの光学密度を読むことにより計測し（ＶＭＡＸ  カイネティック・マイクロプレート・リーダー、ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＤＥＶＩＣＥＳ、メンロ・パーク、カルフォルニア）、細胞接着を定量した。
競合実験のために、１００％ＤＭＳＯストック溶液中の化合物をプレート緩衝液で必要な試験濃度の２倍に希釈した後、ＩＣＡＭ−１被覆プレートに移し段階希釈した。
【手続補正書】
【提出日】平成16年8月4日(2004.8.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式(Ｉ)：
【化１】
2005517016.tif 000019
（式中、Ｒは水素原子、ヒドロキシル基またはカルバモイル基、ｎは１または２を表す）
で示される化合物、またはその薬理学的に許容される塩。
【請求項２】
Ｒが水素原子である、請求項１記載の化合物、またはその薬理学的に許容される塩。
【請求項３】
Ｒがヒドロキシル基である、請求項１記載の化合物、またはその薬理学的に許容される塩。
【請求項４】
Ｒがカルバモイル基である、請求項１記載の化合物、またはその薬理学的に許容される塩。
【請求項５】
ｎが１である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬理学的に許容される塩。
【請求項６】
ｎが２である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬理学的に許容される塩。
【請求項７】
Ｒが水素原子でありｎが１である、請求項１記載の化合物、またはその薬理学的に許容される塩。
【請求項８】
Ｒがヒドロキシル基でありｎが１である、請求項１記載の化合物、またはその薬理学的に許容される塩。
【請求項９】
Ｒがカルバモイル基でありｎが２である、請求項１記載の化合物、またはその薬理学的に許容される塩。
【請求項１０】
化合物が、（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−アセチルアミノ−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン、
（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−［（２−ヒドロキシアセチル）アミノ］−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン、および
（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−［（３−カルバモイルプロピオニル）アミノ］−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオンから選択される、請求項１記載の化合物、またはその薬理学的に許容される塩。
【請求項１１】
式（ＩＩ）：
【化２】
2005517016.tif 000020
で示される化合物またはその塩を、式(ＩＩＩ−ａ):
Ｈ−（ＣＨ2)n−ＣＯＯＨ          （ＩＩＩ−ａ）
（式中、ｎは１または２を表す）
で示される化合物、その塩またはその反応性誘導体と縮合させ、必要に応じて得られた化合物を薬理学的に許容される塩に変換することを特徴とする、式（Ｉ−ａ）：
【化３】
2005517016.tif 000021
（式中、ｎは前記と同一意味を有する）
で示される化合物またはその薬理学的に許容される塩の製法。
【請求項１２】
式（ＩＩ）：
【化４】
2005517016.tif 000022
で示される化合物またはその塩を、式（ＩＩＩ−ｂ）：
Ｒ１Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ        (ＩＩＩ−ｂ)
（式中、Ｒ１Ｏはヒドロキシル基または保護されたヒドロキシル基を表し、ｎは前記と同一意味を有する）
で示される化合物、その塩またはその反応性誘導体と縮合させ、保護基を除去し、必要に応じて得られた化合物を薬理学的に許容される塩に変換することを特徴とする、式（Ｉ−ｂ）：
【化５】
2005517016.tif 000023
（式中、ｎは前記と同一意味を有する）
で示される化合物またはその薬理学的に許容される塩の製法。
【請求項１３】
式（ＩＩ）：
【化６】
2005517016.tif 000024
で示される化合物またはその塩を、式（ＩＩＩ−ｃ）：
Ｈ２ＮＣ(＝Ｏ)−(ＣＨ２)ｎ−ＣＯＯＨ            (ＩＩＩ−ｃ)
（式中、ｎは前記と同一意味を有する）
で示される化合物、その塩またはその反応性誘導体と縮合させ、必要に応じて得られた化合物を薬理学的に許容される塩に変換することを特徴とする、式（Ｉ−ｃ）：
【化７】
2005517016.tif 000025
（式中、ｎは前記と同一意味を有する）
またはその薬理学的に許容される塩の製法。
【国際調査報告】
2005517016.tif 000026
2005517016.tif 000027
2005517016.tif 000028