(57)【要約】４−置換フェニルアラニンエステル誘導体の調製方法を記載する。このタイプの化合物は、混合ＡＣＥ−ＮＥＰ阻害活性を有する化合物の調製において有用であることが知られている。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（ＩＡ）： 
【化１】
2005517703.tif 000022
［式中：
Ｒ１は、水素、Ｃ１−４アルキルもしくはベンジルであり；
Ｒ２は、水素または保護基−ＣＯＨもしくは−ＣＯＣ１−４アルキルであり；および
Ｒ６は、窒素、酸素および硫黄からなる群より選択される１つもしくは２つのヘテロ原子を有する５または６員の芳香族複素環である］
の化合物またはその塩を、式（ＩＩ）： 
【化２】
2005517703.tif 000023
［式中：
Ｒ１は、水素、Ｃ１−４アルキルもしくはベンジルであり；
Ｒ２は、水素または保護基−ＣＯＨもしくは−ＣＯＣ１−４アルキルであり；および
Ｒ７は、−ＣＮまたは−ＮＨ−ＮＨ3＋である］
の化合物またはその塩から、複素環の形成によって、次いで、必要に応じて保護基の除去によって、調製する方法。
【請求項２】
Ｒ６がチアゾリルまたはピラゾリルである、請求項１で請求される方法。
【請求項３】
Ｒ2が水素、−ＣＯＨもしくは−ＣＯＣＨ３である、請求項１または請求項２で請求される方法。
【請求項４】
Ｒ６がチアゾール、およびＲ７がＣＮである、請求項１〜３のいずれかで請求される式（ＩＡ）の化合物またはその塩の調製方法であって、以下の：
（ｉ）強双極性非プロトン溶媒中にて、
（ａ）ＮＨ４Ｃｌおよび
（ｂ）ＮａＳＨ．２Ｈ２Ｏ、もしくは硫化水素および有機もしくは無機塩基
と、式（ＩＩ）の化合物の反応によるチオアミドの形成；
（ｉｉ）酸の存在もしくは非存在下で、高温にて、ブロモアセトアルデヒドのアセタールとの反応によるチアゾールの形成；次いで、必要に応じて
（ｉｉｉ）標準条件下での保護基の除去；
を含む方法。
【請求項５】
Ｒ６がピラゾールであり、Ｒ７が−ＮＨ−ＮＨ３＋である、請求項１〜３のいずれかで請求される式（ＩＡ）の化合物の調製方法であって、以下の：
（ｉ）マロンジアルデヒド ビス（ジメチルアセタール）との反応による、式（ＩＩ）の化合物のピラゾール形成；次いで、必要に応じて
（ｉｉ）標準条件下での保護基の除去；
を含む方法。
【請求項６】
Ｒ７が−ＣＮである式（ＩＩ）の化合物が、式（ＩＩＩ）：
【化３】
2005517703.tif 000024
［式中：
Ｒ１は、水素、Ｃ１−４アルキルまたはベンジルであり；および
Ｒ２は、−ＣＯＨまたは−ＣＯＣ１−４アルキルである］
の化合物より、（ｉ）適当な溶媒中で、室温より低温にて、亜硝酸イオンの供給源の存在下、強無機酸で処理すること、次いで（ｉｉ）炭酸水素カリウムもしくは炭酸水素ナトリウムの存在もしくは非存在下にて、銅＋１の供給源および遊離シアン化物イオンの供給源で処理することによって調製される、請求項４で請求される方法。
【請求項７】
Ｒ７が−ＮＨ−ＮＨ３＋である式（ＩＩ）の化合物が、式（ＩＩＩ）：
【化４】
2005517703.tif 000025
［式中：
Ｒ１は、水素、Ｃ１−４アルキルまたはベンジルであり；および
Ｒ２は、−ＣＯＨまたは−ＣＯＣ１−４アルキルである］
の化合物より、（ｉ）適当な溶媒中で、室温より低温にて、亜硝酸イオンの供給源で処理すること、次いで、（ｉｉ）還元剤で処理することによって調製される、請求項５で請求される方法。
【請求項８】
式（ＩＩＩ）の化合物が、式（ＩＶ）： 
【化５】
2005517703.tif 000026
［式中：
Ｒ１は、水素、Ｃ１−４アルキルまたはベンジルであり；および
Ｒ２は、−ＣＯＨまたは−ＣＯＣ１−４アルキルである］
の化合物より、ニトロ基の還元によって調製される請求項６または請求項７で請求される方法。
【請求項９】
混合ＡＣＥ−ＮＥＰ阻害剤の調製における、請求項１〜８のいずれかで請求される方法の使用。
【請求項１０】
式（Ｉ）
【化６】
2005517703.tif 000027
［式中：
Ｒ3は、直鎖または分岐のＣ２−Ｃ４アルキル基またはアリールまたは、アルキル部分に１つないし６つの炭素原子を有するアリールアルキル基であって、該アリールは、フェニル、もしくは窒素、酸素および硫黄からなる群より選択される１つもしくは２つのヘテロ原子を有する５または６員の芳香族複素環であり、ヒドロキシ基、アルキル部分に１つないし６つの炭素原子を有するアルコキシ、アルキル、アルキルチオ、アルキルスルホニルもしくはアルコキシカルボニル基、１つもしくはそれ以上のフッ素原子を含むＣ１−Ｃ３アルキル基、カルボキシ基、またはアミノカルボニル基、アシルアミノ基、アミノスルホニル基、アルキル部分に１つないし６つの炭素原子を有するモノ−もしくはジ−アルキルアミノまたはモノ−もしくはジ−アルキルアミノカルボニル基から選択される、同じもしくは異なる１つもしくはそれ以上の置換基によって置換されていてもよい；
Ｒ4は、メルカプトメチル基に変換可能なＲ５ＣＯＳＣＨ２基であり；
Ｒ5は、直鎖または分岐のＣ１−Ｃ４アルキルもしくはフェニル基であり；
Ｒ6は、窒素、酸素および硫黄からなる群より選択される１つもしくは２つのヘテロ原子を有する５または６員の芳香族複素環である］
の化合物またはその医薬上許容される誘導体の調製における、請求項９で請求される方法の使用。
【請求項１１】
混合ＡＣＥ−ＮＥＰ阻害剤がＮ−［（Ｓ）−２−（メルカプトメチル）−１−オキソ−３−フェニルプロピル］−４−（２−チアゾリル）−Ｌ−フェニルアラニン、もしくはＮ−［（Ｓ）−２−（メルカプトメチル）−３−メチルブタノイル］−４−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−Ｌ−フェニルアラニン、またはそれらの医薬上許容される誘導体である、請求項９または請求項１０で請求される方法の使用。
【請求項１２】
Ｒ２が基（Ａ）：
【化７】
2005517703.tif 000028
で示される、請求項１で請求される方法。
【請求項１３】
Ｒ６がチアゾールである、請求項１２で請求される式（Ｉ）の化合物の調製方法であって、以下の：
（ｉ）高温でチオ酢酸と反応させることによるチオアミドの形成；
（ｉｉ）酸の存在下または非存在下で、高温にて、ブロモアセトアルデヒドのアセタールと反応させることによるチアゾールの形成； 
を含む方法。
【請求項１４】
式（ＩＩ）：
【化８】
2005517703.tif 000029
［式中：
Ｒ１は、水素、Ｃ１−４アルキルまたはベンジルであり；および
Ｒ２は、−ＣＯＨまたはＣＯＣ１−４アルキルである］
の化合物。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、４−置換フェニルアラニンエステル誘導体の調製方法に関する。このタイプの化合物は、混合ＡＣＥ−ＮＥＰ阻害活性を有する化合物の調製において有用であることが知られている。
【０００２】
（発明の背景）
アンジオテンシン変換酵素および中性エンドペプチダーゼ（ＮＥＰ）は、様々な調節ペプチドの代謝、特に血圧と体液の恒常性の調節に関与する２つの亜鉛メタロプロテアーゼである(Fournie−Zaluski et al. (1994) J. Med. Chem. 37:1070-1083)。ACEは、含亜鉛カルボキシジペプチダーゼであり、不活性な前駆体であるアンジオテンシンＩを、アンジオテンシンＩＩ、すなわち、血管収縮とナトリウム保持を促進し、血圧を上昇させるペプチドに変換する。アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害活性を有する化合物は、高血圧、心不全、および梗塞後の治療に有用である。ＮＥＰ（「エンケファリナーゼ」とも呼ばれる）は、腎臓の刷子縁領域内で高濃度に見られる含亜鉛エンドペプチダーゼである。ＮＥＰは、心房性ナトリウム利尿因子（ＡＮＦ）を不活化する。ＡＮＦは、心臓より分泌されるホルモンであり、血管を拡張させ、腎臓レベルでは利尿およびナトリウム利尿を増加させる。中性エンドペプチダーゼ（ＮＥＰ）酵素の阻害活性を有する化合物は、血管拡張薬として有用である。ＡＣＥとＮＥＰはいずれも、内皮および外皮の作用部位において、それぞれ、血管弛緩性ペプチドであるブラジキニンの分解に関与する。従って、ＡＣＥおよびＮＥＰは、異なる作用機構で循環系に作用することから、一般的に、高血圧、腎不全、鬱血性心不全、および虚血性心疾患の治療において、混合ＡＣＥ−ＮＥＰ阻害活性を有する化合物を、単独または組み合わせて使用する。WO97/24342には、混合ＡＣＥ−ＮＥＰ阻害活性を有し、循環器疾患、例えば、高血圧および鬱血性心不全の治療に有用である、あるＮ−メルカプトアシルフェニルアラニン誘導体が記載されている。
【０００３】
Ｎ−メルカプトアシルフェニルアラニン誘導体の調製方法は、WO97/24342に記載されている。Ｎ−メルカプトアシルフェニルアラニン誘導体の調製において重要な中間体は、４−置換フェニルアラニンエステル誘導体、例えば、４−（２−チアゾリル）フェニルアラニンメチルエステルおよび４−（1−ピラゾリル）フェニルアラニンメチルエステルである。
【０００４】
本発明が解決すべき課題は、４−置換フェニルアラニンエステル誘導体の別の調製方法の提供である。特に、ヨウ素化反応を使用しない方法が望まれた。
【０００５】
（発明の要約）
従って、本発明は、式（ＩＡ）： 
【化１】
2005517703.tif 000002
（IA）
［式中：
Ｒ１は、水素、Ｃ１−４アルキルまたはベンジルであり；
Ｒ２は、水素または保護基−ＣＯＨもしくは−ＣＯＣ１−４アルキルであり；および
Ｒ６は、窒素、酸素および硫黄からなる群より選択される１つもしくは２つのヘテロ原子を有する５または６員の芳香族複素環である］
の化合物またはその塩を、式（ＩＩ）：
【化２】
2005517703.tif 000003
［式中：
Ｒ１は、水素、Ｃ１−４アルキルまたはベンジルであり；
Ｒ２は、水素または保護基−ＣＯＨもしくは−ＣＯＣ１−４アルキルであり；および
Ｒ７は、−ＣＮまたは−ＮＨ−ＮＨ３＋である］
の化合物より、複素環の形成によって、次いで、必要に応じて保護基の除去によって、調製するための方法（経路Ａ）を提供する。
【０００６】
本発明のさらなる態様は、混合ＡＣＥ−ＮＥＰ阻害剤またはその医薬上許容される誘導体の調製における、本発明の方法の使用である。
【０００７】
（発明の詳細な記載）
本明細書で使用される、「アルキル」という語は、直鎖と分岐鎖の両方の飽和炭化水素基を意味する。アルキル基の例は、メチル、エチル、プロピルおよびブチル基を含む。
【０００８】
本明細書で使用される、「複素環」という語は、窒素、硫黄および酸素原子より選択される１つもしくはそれ以上のヘテロ原子を含む、置換されていてもよい環を意味する。複素環は、芳香族、すなわち、不飽和である。５員の基の例は、チエニル、フラニル、ピラゾリル、ピロリジニル、チアゾリル、オキサゾリルおよびイミダゾリルを含む。６員の基の例は、ピリジルおよびピリミジニルを含む。
【０００９】
本明細書で使用される、「混合ＡＣＥ−ＮＥＰ阻害剤」という語は、ＡＣＥとＮＥＰの両方の阻害活性を有する化合物を意味する。「２重の（dual）」という語は、論文でより一般的に使用されている。この特許出願の目的のためには、混合と２重という語は同義であるとされる。
【００１０】
本明細書で使用される、「医薬上許容される」とは、医薬の用途に適した化合物を意味する。
【００１１】
本明細書で使用される、「医薬上許容される誘導体」とは、あらゆる医薬上許容される塩、溶媒和物、またはプロドラッグ、例えば、エステルもしくはカルバミン酸塩、または式（Ｉ）の化合物のプロドラッグの塩もしくは溶媒和物であり、レシピエントに投与すると、式（Ｉ）の化合物、またはその活性代謝物もしくは残基を（直接もしくは間接的に）生じうるものである。好ましい医薬上許容される誘導体は、塩、溶媒和物およびエステルである。特に好ましい医薬上許容される誘導体は、塩と溶媒和物である。
【００１２】
式（Ｉ）の化合物の塩の例は、アルカリまたはアルカリ土類金属を有する塩、または医薬上許容される有機塩基を有する塩である。式（ＩＡ）の化合物の塩の例は、塩酸または臭素酸のごとき無機酸塩、特に塩酸塩である。
【００１３】
好ましくは、Ｒ１は、Ｃ１−４アルキル、より好ましくはメチルである。
【００１４】
好ましくは、Ｒ２は、水素、−ＣＯＨまたは−ＣＯＣＨ３である。
【００１５】
好ましくは、Ｒ6は、５員の芳香族複素環、より好ましくは、チアゾリルまたはピラゾリルである。
【００１６】
もう１つの態様において、本発明は、式（ＩＢ）： 
【化３】
2005517703.tif 000004
［式中：
Ｒ１は、水素、Ｃ１−４アルキルまたはベンジルであり；および
Ｒ２は、水素または保護基−ＣＯＨである］
を有する式（ＩＡ）の化合物またはその塩を、式（ＩＩＢ）：:
【化４】
2005517703.tif 000005
［式中：
Ｒ１は、水素、Ｃ１−４アルキルまたはベンジルであり；および
Ｒ２は、水素または保護基−ＣＯＨである］
を有する式（ＩＩ）の化合物から、チオアミドの形成、次いで、チアゾールの形成によって、次いで、必要に応じて保護基の除去によって、調製するための方法を提供する。
【００１７】
もう１つの態様において、本発明は、式（ＩＣ）： 
【化５】
2005517703.tif 000006
［式中：
Ｒ１は、水素、Ｃ１−４アルキルまたはベンジルであり；および
Ｒ２は、水素または保護基−ＣＯＣＨ3である］
を有する式（ＩＡ）の化合物またはその塩を、式（ＩＩＣ）：
【化６】
2005517703.tif 000007
［式中：
Ｒ１は、水素、Ｃ１−４アルキルまたはベンジルであり；および
Ｒ２は、水素または保護基−ＣＯＣＨ3である］
を有する式（ＩＩ）の化合物から、ピラゾールの形成によって、次いで、必要に応じて保護基の除去によって、調製するための方法を提供する。
【００１８】
好ましい態様において、本発明は、上記された式（ＩＩＢ）の化合物より、式（ＩＢ）の化合物を調製する方法であって、以下の： 
（ｉ）強い双極性非プロトン溶媒、例えば、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ）、ＤＭＦおよび／またはＤＭＳＯ、好ましくはＤＭＡＣの存在下で、
（ａ）ＮＨ４Ｃｌと、
（ｂ）ＮａＳＨ．２Ｈ２Ｏ、もしくは硫化水素および有機もしくは無機塩基（例えば、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、炭酸ナトリウム、硫化ナトリウム）
との反応によるチオアミドの形成；
（ｉｉ）酸、例えば、ｐ−トルエンスルホン酸（p-tosic acid）の存在もしくは非存在下で、高温、適当には６０〜１００℃にて、ブロモアセトアルデヒド、例えば、ブロモアセトアルデヒドジメチルアセタールまたはブロモアセトアルデヒドジエチルアセタールのアセタールとの反応による、チアゾールの形成；次いで、必要に応じて、
（ｉｉｉ）標準条件下、例えば、強酸、例えば、ＨＣｌ（例えば、塩化アセチル、塩化チオニル、ＨＣｌガス、好ましくは塩化アセチル）を用いて、アルカノール、例えば、ＭｅＯＨの存在下で、アルコールの還流温度以下、好ましくは１０℃以下にて、保護基の除去；
を含む方法を提供する。
【００１９】
もう１つの好ましい態様において、本発明は、前に定義された式（ＩＩＣ）の化合物より、式（ＩＣ）の化合物を調製するための方法であって、以下の：
（ｉ）還流下、高温にて、マロンジアルデヒド ビス（ジメチルアセタール）との反応による、ピラゾール形成；次いで、必要に応じて
（ｉｉ）標準条件下、例えば、強酸、例えば、ＨＣｌ（例えば、塩化アセチル、塩化チオニル、ＨＣｌガス、好ましくは塩化アセチル）を用いて、アルカノール、例えば、ＭｅＯＨの存在下で、アルコールの還流温度以下の温度で、好ましくは１０℃以下にて、保護基の除去；
を含む方法を提供する。
【００２０】
以下の記載において、置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ6およびＲ７は、特に記載のない限り上記したとおりである。
【００２１】
式（ＩＩ）の化合物を、式（ＩＩＩ）： 
【化７】
2005517703.tif 000008
の化合物より調製してもよい。
【００２２】
式（ＩＩＢ）の化合物を、式（ＩＩＩ）の化合物から、（ｉ）亜硝酸イオンの供給源、例えば、亜硝酸ナトリウム（ＮａＮＯ２）の存在下で、室温より低温、好ましくは、２０℃以下で、より好ましくは０〜２０℃の範囲にて、適当な溶媒、例えば、水性アセトニトリル中にて、強無機酸、例えば、ＨＣｌで処理すること；次いで、（ｉｉ）適当な溶媒、例えば、水、アセトニトリル、および／またはＤＭＦ中にて、炭酸水素カリウムまたは炭酸水素ナトリウム、好ましくは炭酸水素カリウムの存在下または非存在下で、好ましくは２０〜４０℃の温度で、銅＋１の供給源、例えば、ＣｕＣｌまたはＣｕＣＮ、および遊離シアン化物の供給源、例えば、ＫＣＮまたはＮａＣＮで、好ましくはシアン化銅カリウム（Ｋ２Ｃｕ（ＣＮ）３）を銅＋１およびシアン化物の供給源として用いて処理することによって調製してもよい。
【００２３】
式（ＩＩＣ）の化合物を、式（ＩＩＩ）の化合物より、以下の：
（Ｉ）亜硝酸イオンの供給源、例えば、亜硝酸ナトリウム（ＮａＮＯ２）の存在下で、室温より低温、好ましくは２０℃以下、より好ましくは０〜２０℃の範囲で、適当な溶媒、例えば、水性アセトニトリル中で、強無機酸、例えば、ＨＣｌで処理すること：次いで、
（ＩＩ）室温より低温、好ましくは２０℃以下、より好ましくは０〜２０℃の範囲で、還元剤、例えば、亜硫酸ナトリウム（Ｎａ２ＳＯ３）で処理すること：次いで、
（ＩＩＩ）強無機酸、例えば、ＨＣｌで、５０〜１００℃、好ましくは約６０℃に加熱して処理すること；
によって調製してもよい。
【００２４】
式（ＩＩＩ）の化合物を、式（ＩＶ）： 
【化８】
2005517703.tif 000009
の化合物から、例えば、水素下で、水、ＤＣＭ、酢酸エチル、ＭｅＯＨおよび／またはＥｔＯＨ、好ましくは水、酢酸エチルまたはＤＣＭのごとき適当な溶媒中にて、好ましくは２０〜３０℃の範囲の温度で、炭素上パラジウムのごとき適当な触媒を用いた標準方法を用いて、ニトロ基を還元することにより調製してもよい。
【００２５】
式（ＩＶ）の化合物を、式（Ｖ）： 
【化９】
2005517703.tif 000010
の化合物より、C２−5酸無水物、好ましくは無水酢酸（Ac2O）の存在下で、好ましくは１０〜３０℃の範囲の温度にて、適当な酸、例えば、ギ酸（ＨＣＯＯＨ）または酢酸（ＣＨ３ＣＯＯＨ）で処理することによって調製してもよい。
【００２６】
本発明の方法を、当業者に知られたあらゆる方法、例えば、WO97/24342に記載された方法、および実施例に示された方法による、混合ＡＣＥ−ＮＥＰ阻害剤の調製において使用することができる。従って、本発明のさらなる態様は、Ｎ−メルカプトアシルフェニルアラニン誘導体のごとき混合ＡＣＥ−ＮＥＰ阻害剤の調製における本発明の方法の使用である。言い換えれば、Ｎ−メルカプトアシルフェニルアラニン誘導体のごとき混合ＡＣＥ−ＮＥＰ阻害剤を、本発明の方法を含む方法を用いて調製してもよい。例えば、式（ＩＡ）の化合物またはその塩を、式（Ｉ）： 
【化１０】
2005517703.tif 000011
［式中：
Ｒ3は、直鎖または分岐のＣ２−Ｃ４アルキル基またはアリールまたは、アルキル部分に１つないし６つの炭素原子を有するアリールアルキル基であって、該アリールは、フェニル、もしくは窒素、酸素および硫黄からなる群より選択される１つもしくは２つのヘテロ原子を有する５または６員の芳香族複素環であり、ヒドロキシ基、アルキル部分に１つないし６つの炭素原子を有するアルコキシ、アルキル、アルキルチオ、アルキルスルホニルもしくはアルコキシカルボニル基、１つもしくはそれ以上のフッ素原子を含むＣ１−Ｃ３アルキル基、カルボキシ基、またはアミノカルボニル基、アシルアミノ基、アミノスルホニル基、アルキル部分に１つないし６つの炭素原子を有するモノ−もしくはジ−アルキルアミノまたはモノ−もしくはジ−アルキルアミノカルボニル基からなる群より選択される、１つもしくはそれ以上の、同一または異なる置換基によって置換されていてもよい；
Ｒ4は、メルカプトメチル基に変換可能なＲ５ＣＯＳＣＨ２基であり；
Ｒ5は、直鎖または分岐のＣ１−Ｃ４アルキルもしくはフェニル基であり；
Ｒ6は、窒素、酸素および硫黄からなる群より選択される１つもしくは２つのヘテロ原子を有する５または６員の芳香族複素環である］
の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物の調製において使用してもよい。
【００２７】
好ましくは、混合ＡＣＥ−ＮＥＰ阻害剤は、Ｎ−［（Ｓ）−２−（メルカプトメチル）−１−オキソ−３−フェニルプロピル］−４−（２−チアゾリル）−Ｌ−フェニルアラニンまたはＮ−［（Ｓ）−２−（メルカプトメチル）−３−メチルブタノイル］−４−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−Ｌ−フェニルアラニンまたはそれらの医薬上許容される誘導体である。
【００２８】
式（Ｉ）の化合物を、式（ＩＡ）の化合物またはその塩より、以下の：
（ｉ）式（ＶＩ）：
【化１１】
2005517703.tif 000012
［式中： 
Ｒ3は、直鎖または分岐のＣ２−Ｃ４アルキル基またはアリールまたは、アルキル部分に１つないし６つの炭素原子を有するアリールアルキル基であって、該アリールは、フェニル、もしくは窒素、酸素および硫黄からなる群より選択される１つもしくは２つのヘテロ原子を有する５または６員の芳香族複素環であり、ヒドロキシ基、アルキル部分に１つないし６つの炭素原子を有するアルコキシ、アルキル、アルキルチオ、アルキルスルホニルもしくはアルコキシカルボニル基、１つもしくはそれ以上のフッ素原子を含むＣ１−Ｃ３アルキル基、カルボキシ基、またはアミノカルボニル基、アシルアミノ基、アミノスルホニル基、アルキル部分に１つないし６つの炭素原子を有するモノ−もしくはジ−アルキルアミノまたはモノ−もしくはジ−アルキルアミノカルボニル基からなる群より選択される、１つもしくはそれ以上の、同一または異なる置換基によって置換されていてもよい；
Ｒ4は、メルカプトメチル基に変換可能なＲ５ＣＯＳＣＨ２基であり；
Ｒ5は、直鎖または分岐のＣ１−Ｃ４アルキルもしくはフェニル基である］
の化合物と反応させること；および
（ｉｉ）窒素下で、適当な溶媒、例えば、エタノールもしくはメタノール水溶液中にて、適当な塩基、例えば、水酸化ナトリウムで処理すること；
を含む方法によって調製してもよい。
【００２９】
式（Ｉ）の化合物は、キラル（不斉）中心を含む。個々の立体異性体（エナンチオマーおよびジアステレオイソマー）およびこれらの混合物は、本発明の範囲内である。
【００３０】
式（ＩＩ）の化合物を反応させ、式（ＩＡ）の化合物またはその塩を形成することを含む工程は、別個に、または系内にて行ってもよい。好ましくは、反応を系内で行う。
【００３１】
本発明のさらなる態様（経路Ｂ）において、基Ｒ２は、式（ＶＩ）の化合物、例えば、側鎖（Ａ）： 
【化１２】
2005517703.tif 000013
である。従って、Ｒ２が（Ａ）である式（ＩＡ）の化合物またはその塩を、Ｒ２が（Ａ）である式（ＩＩ）の化合物より、前記の方法による複素環形成によって調製することができる。例えば、Ｒ6がチアゾールである場合、チオアミドの形成、次いで、チアゾール形成によって、複素環形成を実施してもよい。好ましくは、反応は、以下の：
（ａ）高温、好ましくは５０〜９０℃、より好ましくは６０〜８０℃にて、チオ酢酸との反応によるチオアミド形成；および、
（ｂ）酸、例えば、ｐ−トルエンスルホン酸または臭化水素酸の存在もしくは非存在下で、高温、適当には６０〜１００℃にて、ブロモアセトアルデヒド、例えば、ブロモアセトアルデヒドジメチルアセタールまたはブロモアセトアルデヒドジエチルアセタールのアセタールとの反応によるチアゾール形成；
を含む。
【００３２】
Ｒ２が（Ａ）である式（ＩＩ）の化合物を、Ｒ２が（Ａ）である式（ＩＩＩ）の化合物より、前記の方法によって調製してもよい。Ｒ２が（Ａ）である式（ＩＩＩ）の化合物を、Ｒ２が（Ａ）である式（ＩＶ）の化合物より、前記の方法によって調製してもよい。
【００３３】
Ｒ２が（Ａ）である式（ＩＶ）の化合物を、式（ＶＩＩ）：
【化１３】
2005517703.tif 000014
の化合物を式（Ｖ）の化合物と、適当な塩基、例えば、炭酸ナトリウム、好ましくはカリウム水溶液、または炭酸水素ナトリウム、好ましくはカリウム水溶液、またはトリエチルアミンまたはトリブチルアミンの存在下で、適当な溶媒、例えば、ＤＣＭまたはＥｔＯＡｃ中で、低温、好ましくは０〜２０℃にて反応させることによって調製してもよい。
【００３４】
式（ＶＩＩ）の化合物を、式（ＶＩＩＩ）： 
【化１４】
2005517703.tif 000015
の化合物より、不活性溶媒、好ましくはＤＣＭ中にて、塩化オキサリルまたは塩化チオニルのごとき塩素化剤と反応させることによって調製してもよい。
【００３５】
式（Ｖ）、（ＶＩ）および（ＶＩＩＩ）の化合物は既知の化合物であり、当該分野でよく知られた方法によって調製されうる。一般的なアミノ化学は、典he Practice of Peptide Synthesis  M Bodanszky and A Bodanszky Springer-Verlag 1984 ISBN 3-540-13471-9およびISBN 0-387-13471-9  pp 33-34)に記載されている。
【００３６】
式（ＩＩ）の化合物は新規の化合物であり、よって、本発明のさらなる態様を形成する。
【００３７】
当業者であれば、式（Ｉ）の化合物またはその溶媒和物の調製において、不必要な副反応を防ぐために分子中の１つもしくはそれ以上の反応性に富む基を保護することが必要である、および／または望ましいことを理解するであろう。式（Ｉ）の化合物の調製において使用される保護基は、従来の方法で使用されるものであってもよい。例えば、Protective Groups in Organic Chemistry, Ed. J.F.W. McOmie, Plenum Press, London (1973) or Protective Groups in Organic Synthesis, Theodora Green, John Wiley and Sons, New York (1981)を参照。適当なアミノ保護基の例は、アシル型保護基（例えば、ホルミル、トリフルオロホルミル、アセチル）、芳香族ウレタン型保護基（例えば、ベンジロキシカルボニル（Cbz）および置換Cbz）、脂肪族ウレタン保護基（例えば、９−フルオレニルメトキシカルボニル（Fmoc）、ｔ−ブチロキシカルボニル（Boc）、イソプロピロキシカルボニル、シクロヘキシロキシカルボニル）、およびアルキル型保護基（例えば、ベンジル、トリチル、クロロトリチル）を含む。適当な酸素保護基の例は、例えば、トリメチルシリルまたはtert−ブチルジメチルシリルのごときアルキルシリル基；テトラヒドロピラニルまたはtert−ブチルのごときアルキルエステル；もしくは酢酸塩のごときエステルを含んでもよい。
【００３８】
以下の実施例は、本発明の態様を示すものであるが、本発明の範囲を限定するものとして解釈すべきものではない。
【実施例】
【００３９】
一般化スキーム：
【表１】
2005517703.tif 000016
【００４０】
実施例１：Ｎ−［（Ｓ）−２−（メルカプトメチル）−１−オキソ−３−フェニルプロピル］−４−（２−チアゾリル）−Ｌ−フェニルアラニンの調製
【表２】
2005517703.tif 000017
【００４１】
段階ごとの条件
１：  HCOOH、Ac2O
２：  （ａ）H2、Pd/C（ｂ）HCl、NaNO2、K2Cu(CN)3
３：  （ａ）NaSH、NH4Cl、DMAC（ｂ）BrCH2CH(OMe)2（ｃ）MeOH、AcCl
４：  （Ｓ）−ATPA、DCM、SOCl2、および、４−（２−チアゾリル）フェニルアラニンメチルエステルジヒドロクロリド、K2CO3
５：  NaOH、水、IMS、および、HCl
【００４２】
段階１：（Ｓ）−４−ニトロ−Ｎ−ホルミルフェニルアラニンメチルエステルの調製
無水酢酸（200ml, 2.75当量）を１０℃以下の温度に保持したギ酸（200ml, 7当量）に加え、次いで、少なくとも１５分間１８〜２０℃に加温した。混合物を１８〜２０℃で少なくとも２５分間撹拌した。DCM（100ml）を混合無水物に加え、混合物を１０〜１５℃に冷却した。次いで、ギ酸ナトリウム（57.4g, 1.1当量）を加え、混合物を５〜１０分間撹拌した。１０〜１５℃を保持しながら、（Ｓ）−４−ニトロ−フェニルアラニンメチルエステル塩酸塩（200g）を加えた。反応物を２０〜３０分かけて１８〜２０℃に加温した。水（4倍容量）を加え、５〜１０分かけて高粘度のスラリーにした。スラリーを１時間かけて１０℃に冷却し、この温度でさらに１時間置いた。固体を濾過によって回収し、水（2 x 200ml）で洗浄し、４０℃の真空中で乾燥させ、表題化合物を白色の結晶性固体182g（理論収率９４％）として得た。
【００４３】
MS: 253 (MH+, 30%), 225 (40%), 193 (80%), 165 (100%).
【００４４】
回転異性体は、NMRスペクトルにおいて、主要な回転異性体について引用されるデータを示すようである：
1H NMR (250MHz, CDCl3) δ: 8.21 (s, 1H), 8.17 (d, J = 9, 2H), 7.30 (d, J = 9, 2H), 6.12 (br d, J = 8, 1H), 5.02 (dt, J = 7, 6, 1H), 3.78 (s, 3H), 3.35, 3.22 (ABXのAB部分, J = 6, 14, 2H).
【００４５】
13C NMR (100MHz, CDCl3) δ: 36.66, 51.74, 52.50, 123.59, 130.89, 145.67, 146.79, 161.45, 171.52.
【００４６】
段階２：（Ｓ）−４−シアノ−Ｎ−ホルミルフェニルアラニンメチルエステルの調製
（Ｓ）−４−ニトロ−Ｎ−ホルミルフェニルアラニンメチルエステル（20.2g）を水（80ml）に懸濁し、パラジウム−炭素触媒（5%Pd、50% 水湿潤物, 2g）を加えた。得られたスラリーを４０〜４５℃に加熱し、水素の取り込みが終わるまで水素化した。温かな（35℃）の懸濁物を、グラスファイバー紙で濾過し、さらにフラスコとフィルターを水（20ml）で洗浄し、（Ｓ）−４−アミノ−Ｎ−ホルミルフェニルアラニンメチルエステル溶液を得た。
【００４７】
MS: 223 (MH+, 50%）, 178 (80%）, 163 (100%）.
【００４８】
回転異性体は、NMRスペクトルにおいて、主要な回転異性体について引用されるデータを示すようである：
1H NMR (250MHz, CDCl3) δ: 8.15 (s, 1H), 6.88 (d, J = 8, 2H), 6.60 (d, J = 8, 2H), 6.10 (br d, J = 7, 1H), 4.89 (dt, J = 8, 6, 1H), 3.74 (s, 3H), 3.44 (v br s, 2H), 3.03 (d, J = 6, 2H).
【００４９】
13C NMR (100MHz, CDCl3) δ: 37.32, 52.42, 52.80, 115.74, 125.49, 130.51, 145.98, 161.10, 172.22.
【００５０】
アニリン溶液を２０℃以下に冷却し、濃ＨＣｌ（2.2当量, 15.3ml）で処理し、次いで、溶液をさらにアイスバス上で冷却し、残りの固体が溶解するまで撹拌した。温度を５℃以下に保持しながら、亜硝酸ナトリウム（1.2当量, 6.58g）、水（18ml）中を加えた。
【００５１】
別のフラスコで、シアン化銅カリウム（1.0当量, 17.8g）および炭酸水素カリウム（1.0当量, 8g）を、２０℃にて水（90ml）に溶解し、次いで、約２０〜３０分かけて、急速に撹拌しながら、ジアゾニウム溶液で滴下して処理した。混合物を、２０℃で３０〜４０分間撹拌し、次いで、５℃以下に冷却し、この温度でさらに１時間置いた。固体を濾過によって回収し、塊を冷水（2 x 35ml）で洗浄し、吸引乾燥させた。ケーキを、DCM（90ml）に溶解し、MgSO4上で乾燥させた。固体を濾過によって除去し、DCM（2 x 35ml）で洗浄した。次いで、合した濾液を濃縮し、褐色の固体を得た。
【００５２】
褐色の固体を、３０℃に加熱することによってDCM（60ml）に溶解し、バッチ温度を３０℃に保持しながら、撹拌した溶液をシクロヘキサン（60ml）の滴下により処理した。３０℃で２０分間保持した後、溶液に種をまき、この温度でさらに１時間保持した。バッチを１．５時間かけてゆっくり５℃に冷却し、この温度で一晩（16時間）置いた。固体を濾過によって回収し、あらかじめ約１０℃に冷却した1:1 DCM：シクロヘキサン（２倍容量, 30ml）で、ケーキを洗浄した。該ケーキを、フィルター上で吸引乾燥し、次いで、さらに真空中で乾燥し、表題化合物を淡褐色の固体12.7g（理論収率60.2%）として得た。
【００５３】
MS: 233 (MH+, 10%), 205 (20%), 173 (60%), 145 (100%).
【００５４】
回転異性体は、NMRスペクトルにおいて、主要な回転異性体について引用されるデータを示すようである：
1H NMR (250MHz, CDCl3) δ: 8.20 (s, 1H), 7.60 (d, J = 8, 2H), 7.22 (d, J = 8, 2H), 6.19 (br d, J = 7, 1H), 4.99 (dt, J = 7, 6, 1H), 3.77 (s, 3H), 3.29, 3.17 (ABXのAB部分, J = 6, 14, 2H).
【００５５】
13C NMR (100MHz, CDCl3) δ: 38.32, 51.98, 53.13, 111.58, 119.02, 130.60, 132.72, 141.80, 161.01, 171.45.
【００５６】
段階３：（Ｓ）−４−（２−チアゾリル）フェニルアラニンメチルエステルジヒドロクロリドの調製
（Ｓ）−４−シアノ−Ｎ−ホルミルフェニルアラニンメチルエステル（2.0g）をＤＭＡＣ（8ml）に溶解し、橙色の溶液を得た。次いで、NH4Cl（1.1g）を加え、さらにNaSH.2H2O（0.97g）を加えた。反応混合物を３時間撹拌し、9:1 H2O:AcOH（10ml）を５分かけてゆっくり加えた。次いで、混合物をDCM（3 x 10ml）で抽出し、合した有機抽出物を、減圧下で蒸発させた。生じた黄／橙色のオイルを、トルエンと共沸乾燥させ、黄色のオイルとして４−チオカルボキサミドフェニルアラニンメチルエステルを得た（約8ml ＤＭＡＣ中の溶液）。
【００５７】
特性決定のために精製したサンプルをクロマトグラフィーによって調製したが、それでも混合物であった（チオアミド:ＤＭＡＣ 45:55モル%）：
【００５８】
MS: 267 (MH+, 100%), 250 (30%).
【００５９】
回転異性体は、NMRスペクトルにおいて、主要な回転異性体について引用されるデータを示すようである：
1H NMR (250MHz, CDCl3) δ: 8.18 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.82 (d, J = 8, 2H), 7.61 (br s, 1H), 7.16 (d, J = 8, 2H), 6.11 (br s, 1H), 5.00 (dt, J = 7, 6, 1H), 3.78 (s, 3H), 3.27, 3.16 (ABXのAB部分, J = 6, 14, 2H).
【００６０】
13C NMR (100MHz, CDCl3) δ: 21.63 (DMAC), 35.16 (DMAC), 37.39, 38.13 (DMAC), 52.02, 52.38, 127.82, 128.99, 138.11, 140.28, 161.49, 170.70 (DMAC), 171.52, 201.67.
【００６１】
溶液をp−トルエンスルホン酸（0.2g）およびブロモアセトアルデヒドジメチルアセタール（1.3ml）で処理し、次いで、８０℃で４時間加熱した。
【００６２】
Phe−チアゾールのホルミル化によって調製されたＮ−ホルミル Phe−チアゾールについてのデータ：
【００６３】
MS: 291 (MH+, 100%), 231 (40%).
【００６４】
回転異性体は、NMRスペクトルにおいて、主要な回転異性体について引用されるデータを示すようである：
1H NMR (250MHz, CDCl3) δ: 8.17 (s, 1H), 7.88 (d, J = 8, 2H), 7.84 (d, J = 3, 1H), 7.32 (d, J = 3, 1H), 7.19 (d, J = 8, 2H), 6.47 (br d, J = 7, 1H), 4.99 (dt, J = 8, 7, 1H), 3.75 (s, 3H), 3.23, 3.14 (ABXのAB部分, J = 6, 14, 2H).
【００６５】
13C NMR (100MHz, CDCl3) δ: 36.08, 50.24, 51.05, 117.38, 125.27, 128.39, 131.09, 136.21, 142.17, 159.13, 166.41, 169.89.
【００６６】
反応物を０℃に冷却し、温度を１０℃以下に保持しながら、MeOH（20ml）を加え、次いで塩化アセチル（1.8ml）を加えた。反応混合物を、３時間、５０℃に加熱し、次いで、８０℃に加熱し、蒸留によってMeOHおよびMeOAc（15ml）を除去して、濃縮した。スラリーをトルエン（20ml）で希釈し、１時間０℃に冷却した。固体を濾過によって回収し、2:1のトルエン：ＤＭＡＣ（2 x 4ml）で洗浄し、次いで、６０℃の真空中にて乾燥させ、表題化合物をオフホワイトの固体2.1g（理論収率73%）として得た。
【００６７】
MS: 263 (MH+, 80%), 203 (100%).
【００６８】
1H NMR (250MHz, DMSO−d6) δ: 8.97 (br d, J = 3, 3H), 7.98 (d, J = 3, 1H), 7.95 (d, J = 8, 2H), 7.85 (d, J = 3, 1H), 7.43 (d, J = 8, 2H), 4.30 (q, J = 5, 1H), 3.69 (s, 3H), 3.34, 3.22 (ABXのAB部分, J = 6, 7, 14, 2H).
【００６９】
13C NMR (100MHz, DMSO−d6) δ: 35.81, 52.96, 53.41, 121.10, 126.84, 130.74, 132.02, 137.68, 143.67, 167.37, 169.54.
【００７０】
段階４：Ｎ−［（Ｓ）−２−（アセチルチオメチル）−１−オキソ−３−フェニルプロピル］−４−（２−チアゾリル）−Ｌ−フェニルアラニンメチルエステルの調製
DCM（22ml）中の（Ｓ）−２−（アセチルチオメチル）−３−フェニルプロパン酸（10.86g）の溶液を、塩化チオニル（3.66ml, 1.1当量）で処理し、４時間加熱還流した。溶液を冷却し、溶媒を蒸発させ、（Ｓ）−２−（アセチルチオメチル）−３−フェニルプロパン酸クロリドを黄色のオイル11.66g（理論収率99.7%）として得た。
【００７１】
４−（２−チアゾリル）フェニルアラニンメチルエステル ジヒドロクロリド（13.8g）、炭酸カリウム（11.4g, 2当量）およびDCM（100ml）の懸濁物を、撹拌し、１℃に冷却した。水（50ml）を加え、混合物を２０分間撹拌した。DCM（15ml）中（Ｓ）−２−（アセチルチオメチル）−３−フェニルプロパン酸クロリド（10.6g, 1.0当量）の溶液を、５分かけて滴下して加え、DCM（15ml）でリンスした。混合物を１℃で２時間撹拌し、次いで２２℃に加温し、DCM（30ml）で希釈した。相を分離し、DCM溶液を2M HCl（45ml）、次いで、水（45ml）で洗浄した。DCM溶液を、常圧にて蒸留し、80mlに濃縮し、次いで、イソプロパノール（100ml）で希釈し、ほとんどのDCMを除去するためにさらに蒸留を続けた後、スラリーを得た。該スラリーを、２０℃に冷却し、固体を濾過によって回収し、次いで、イソプロパノール（2 x 45ml）で洗浄し、５０℃の真空下で乾燥し、表題化合物を、オフホワイトの固体15.9g（理論収率80.0%）として得た。
【００７２】
MS: 483 (MH+, 98%), 441 (100%).
【００７３】
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 7.85 (d, J = 8, 2H), 7.84 (d, J = 3, 1H), 7.31 (d, J = 3, 1H), 7.27−7.12 (m, 7H), 5.82 (d, J = 7, 1H), 4.78 (dt, J = 8, 6, 1H), 3.62 (s, 3H), 3.17−3.02 (m, 4H), 2.91, 2.84 (ABXのAB部分, J = 6, 9, 14, 2H), 2.61−2.54 (m, 1H), 2.32 (s, 3H).
【００７４】
13C NMR (100MHz, CDCl3) δ: 30.61, 31.16, 37.84, 38.53, 49.53, 52.30, 53.01, 118.76, 126.58, 126.67, 128.50, 128.85, 130.00, 132.46, 138.00, 138.36, 143.69, 168.01, 171.13, 172.48, 195.71.
【００７５】
段階５：Ｎ−［（Ｓ）−２−（メルカプトメチル）−１−オキソ−３−フェニルプロピル］−４−（２−チアゾリル）−Ｌ−フェニルアラニンの調製
窒素下で、水酸化ナトリウム（10M, 17ml, 3.3当量）水溶液を、冷却し（0〜5℃）、撹拌した、変性エタノール（IMS 125ml）および水（75ml）の混合物中、Ｎ−［（Ｓ）−２−（アセチルチオメチル）−１−オキソ−３−フェニルプロピル］−４−（２−チアゾリル）−Ｌ−フェニルアラニンメチルエステル （25g）の懸濁液に、０ないし５℃に温度を保持しながら加えた。生じた懸濁液を、０〜５℃で２４時間撹拌し、０〜５℃で温度を保持しながら濃塩酸（6ml）を滴下し、pH=7〜7.5に酸性化した。トリブチルホスフィン（0.6ml）を加え、濁った溶液を、濾紙を通して減圧濾過によって清澄した。次いで、溶液を１５〜２０℃に加温し、この温度で４５〜６０分間、窒素下にて撹拌した。１５〜２０℃に保持しながら塩酸（4.5ml）を滴下することによって、溶液をpH=5に酸性化した。次いで、窒素下、１５〜２０℃で２０〜３０分間溶液を撹拌し、結晶化を開始させた。温度を１５〜２０℃に保持しながら、濃塩酸（4.0ml）をさらに滴下することによって、懸濁液をpH=2に酸性化した。次いで、窒素下で懸濁液を０〜１０℃に冷却し、この温度で６０〜９０分間撹拌した。固体を濾過によって回収し、IMS/水（1:1, 2 x 50ml）で洗浄し、４０℃の真空下で乾燥し、表題化合物を白色固体19.8g（理論収率90%）として得た。
【００７６】
MS: 427 (MH+, 100%).
【００７７】
1H NMR (400MHz, DMSO−d6) δ: 12.75 (br s, 1H), 8.35 (d, J = 8, 1H), 7.90 (d, J = 3, 1H), 7.84 (d, J = 8, 2H), 7.75 (d, J = 3, 1H), 7.35 (d, J = 8, 2H), 7.24 (t, J = 7, 2H), 7.18−7.13 (m, 3H), 4.54 (m, 1H), 3.15, 2.94 (ABXのAB部分, J = 4, 10, 14, 2H), 2.84 (m, 1H), 2.71−2.50 (m, 3H, DMSOによって部分的に不明瞭), 2.30 (m, 1H), 1.84 (t, J = 8, 1H).
【００７８】
13C NMR (100MHz, DMSO−d6) δ: 25.83, 36.95, 37.54, 50.88, 53.41, 120.51, 126.41, 126.43, 128.55, 129.24, 130.43, 131.79, 139.50, 140.39, 144.13, 167.45, 172.90, 173.10.
【００７９】
実施例２：Ｎ−［（Ｓ）−２−（メルカプトメチル）−１−オキソ−３−フェニルプロピル］−４−（２−チアゾリル）−Ｌ−フェニルアラニンの調製
【表３】
2005517703.tif 000018
段階１：Ｎ−［（Ｓ）−２−（アセチルチオメチル）−１−オキソ−３−フェニルプロピル］−４−ニトロ−Ｌ−フェニルアラニンメチルエステルの調製
DCM（22ml）中、（ＲＳ）−２−（アセチルチオメチル）−３−フェニルプロパン酸（10.86g）の溶液を、塩化チオニル（3.66ml, 1.1当量）で処理し、４時間加熱還流した。溶液を冷却し、溶媒を蒸発させ、（ＲＳ）−２−（アセチルチオメチル）−３−フェニルプロパン酸クロリドを、黄色のオイル11.66g（理論収率99.7%）として得た。
【００８０】
４−ニトロ−Ｌ−フェニルアラニンメチルエステル塩酸塩（5.86g, 22.5mmol）、炭酸ナトリウム水溶液（1M, 45ml, 45mmol, 2当量）およびDCM（90ml）の溶液を撹拌し、１℃に冷却した。DCM（12ml）中、（ＲＳ）−２−（アセチルチオメチル）−３−フェニルプロパン酸クロリド（5.77g, 22.5mmol, 1.0当量）の溶液を６分かけて滴下して加え、DCM（12ml）でリンスした。混合物を１℃で１０分間撹拌し、次いで、２２℃に加温し、水（18ml）で希釈して全ての固体を溶解させた。相を分離し、水相をDCM（12ml）で抽出した。混合DCM溶液を、2M HCl（24ml）、次いで、水（24ml）で洗浄した。DCM溶液を、常圧にて蒸留し、50mlに濃縮し、次いで、イソプロパノール（70ml）で希釈し、表題化合物でシードした。懸濁液を、１℃に冷却し、１時間撹拌し、固体を濾過によって回収し、次いで、イソプロパノール（24ml、次いで12ml）で洗浄し、５０℃の真空下で乾燥し、表題化合物を、オフホワイトの固体4.28g、9.64mmolとして、42.8%の理論収率にて得た。
【００８１】
MS: 445 (MH+, 100%）.
【００８２】
元素分析：C22H24N2O6Sとして、計算値（％） C 59.45, H 5.44, N 6.30, S 7.21；測定値：C 59.43, H 6.29, N 5.93, S 7.10.
【００８３】
1H NMR (250MHz, CDCl3) δ: 8.11 (d, J = 9, 2H), 7.29−7.11 (m, 7H), 5.77 (d, J = 7, 1H), 4.75 (dt, J = 7, 6, 1H), 3.63 (s, 3H), 3.25, 3.09 (部分的に不明瞭なABXのAB部分, J = 6, 6, 14, 2H), 3.06 (d, J = 7, 2H), 2.88 (d, J = 7, 2H), 2.55 (五重線, J = 7, 1H), 2.35 (s, 3H).
【００８４】
13C NMR (100MHz, DMSO−d6) δ: 30.38, 30.60, 36.59, 38.12, 46.91, 52.36, 52.86, 123.58, 126.56, 128.53, 129.22, 130.94, 138.93, 146.01, 146.67, 171.66, 172.77, 195.12
【００８５】
段階２：Ｎ−［（Ｓ）−２−（アセチルチオメチル）−１−オキソ−３−フェニルプロピル］−４−シアノ−Ｌ−フェニルアラニンメチルエステルの調製
Ｎ−［（Ｓ）−２−（アセチルチオメチル）−１−オキソ−３−フェニルプロピル］−４−ニトロ−Ｌ−フェニルアラニンメチルエステル（5.22g, 11.7mmol）、10% 乾燥Pd/C（1.0g, 0.2wt）およびDCM（50ml）を、２０℃、水素雰囲気下で、理論量を消費するまで混合した。ガラスマイクロファイバー濾紙を通して濾過することによって触媒を除去し、DCM（2 x 10ml）で洗浄し、濾過物を高粘性のオイルに濃縮した。これを、１５〜２０℃にて、アセトニトリル（25ml）および水（25ml）の混合物に溶解し、11.6M塩酸（2.22ml, 25.8mmol； 2.2当量）を加えた。水（5ml）に溶解した亜硝酸ナトリウム（0.97g, 14.1mmol, 1.2当量）を、１５〜２０℃で、５分間以上かけて溶液に加えた。
【００８６】
シアン化銅カリウム（3.88g, 17.6mmol, 1.5当量）および炭酸水素カリウム（2.58g, 25.8mmol； 2.2当量）を、１５〜２０℃にて、水（20ml）；アセトニトリル（5ml）およびDMF（5ml）の混合物に溶解し、２０〜２５℃にて、１．５時間かけてジアゾニウム溶液で処理した。生じた淡褐色のスラリーを、３０〜６０分間、２０〜２５℃で置き、０〜５℃に冷却したのち、３０〜６０分間置いた。該スラリーを、濾過によって回収し、アセトニトリル/水（1:1）（2 x 10ml）、次いで、水（2 x 15ml）で洗浄し、５０℃で、１８時間、真空オーブン中で乾燥し、表題化合物を、淡褐色の固体4.29g、10.1mmol（収率6%）として得た。
【００８７】
MS: 425 (MH+, 100%), 383 (60%).
【００８８】
元素分析：C23H24N2O4Sとして、計算値（％）C 65.07, H 5.70, N 6.60, S 7.55；測定値： C 65.64, H 5.65, N 6.26, S 7.56.
【００８９】
1H NMR (400MHz, DMSO−d6) δ: 8.48 (d, J = 8, 1H), 7.75 (d, J = 8, 2H), 7.41 (d, J = 8, 2H), 7.29−7.14 (m, 5H), 4.6２−4.56 (m, 1H), 3.59 (s, 3H), 3.16, 2.93 (ABXのAB部分, J = 5, 10, 14, 2H), 2.85−2.59 (m, 5H), 2.24 (s, 3H).
【００９０】
13C NMR (100MHz, DMSO−d6) δ: 30.35, 30.74, 36.83, 38.13, 46.89, 52.33, 52.90, 109.72, 119.32, 126.57, 128.54, 129.22, 130.69, 132.43, 138.94, 143.67, 171.73, 172.76, 195.17.
【００９１】
段階３：Ｎ−［（Ｓ）−２−（アセチルチオメチル）−１−オキソ−３−フェニルプロピル］−４−（２−チアゾリル）−Ｌ−フェニルアラニンメチルエステルの調製
チオ酢酸（0.5ml）中のＮ−［（Ｓ）−２−（アセチルチオメチル）−１−オキソ−３−フェニルプロピル］−４−シアノ−Ｌ−フェニルアラニンメチルエステル（101mg）の懸濁物を８０℃で3時間加熱した。次いで、反応混合物を室温に冷却し、減圧下で濃縮し、橙色のオイルを得、シリカゲル上クロマトグラフィーによって精製し、イソオクタン／酢酸エチル 1:2で溶出し、チオアミドを橙色の固体76mgとして得た。HPLCおよびNMRは、チオアミドおよびＳ−アセチルチオアミド生成物：各々77.0%領域および17.7%領域の混合物であることを示した。
【００９２】
チオアミドおよびS−アセチル生成物（74mg）の混合物を酢酸（1ml）に溶解し、ブロモアセトアルデヒドジエチルアセタール（32μl, 41mg, 1.3当量）およびp−トルエンスルホン酸（4mg）で処理し、６０℃で2時間加熱した。溶媒を蒸留し、残りを飽和炭酸水素ナトリウム（5ml）水溶液と酢酸エチル（5ml）の間に分配した。酢酸エチル溶液を乾燥させ（MgSO4）、濃縮したところ、表題化合物を褐色の固体83mgとして、全理論収率71%にて得た。
【００９３】
段階４：Ｎ−［（Ｓ）−２−（メルカプトメチル）−１−オキソ−３−フェニルプロピル］−４−（２−チアゾリル）−Ｌ−フェニルアラニンの調製
水酸化ナトリウム（10M, 17ml, 3.3当量）水溶液を、窒素下で、冷却し（０〜５℃）かつ撹拌した変性エタノール（IMS 125ml）および水（75ml）の混合物中のＮ−［（Ｓ）−２−（アセチルチオメチル）−１−オキソ−３−フェニルプロピル］−４−（２−チアゾリル）−Ｌ−フェニルアラニンメチルエステル（25g）に、温度を０〜５℃の間で保持しながら加えた。生じたスラリーを０〜５℃で２４時間撹拌し、温度を０〜５℃に保持しながら濃塩酸（6ml）を滴下して加えることによりpH=7〜7.5に酸性化した。トリブチルホスフィン（0.6ml）を加え、濁った溶液を濾紙を通した吸引濾過によって清澄化した。次いで、溶液を１５〜２０℃に加温し、窒素下、この温度にて、４５〜６０分間撹拌した。温度を１５〜２０℃に保持しながら、濃塩酸（4.5ml）を滴下して、pH=5に酸性化した。次いで、溶液を、窒素下、１５〜２０℃にて２０〜３０分間撹拌し、結晶化を開始させた。温度を１５〜２０℃に保持しながら、溶液を、さらに濃塩酸（4.0ml）を滴下しすることによってpH=2に酸性化した。次いで、スラリーを、窒素下で、０〜１０℃に冷却し、この温度で６０〜９０分間撹拌した。固体を濾過によって回収し、IMS/水（1:1, 2 x 50ml）で洗浄し、４０℃の真空中で乾燥し、表題化合物を白色の固体19.8g（理論収率90%）として得た。
【００９４】
MS: 427 (MH+, 100%).
【００９５】
1H NMR (400MHz, DMSO−d6) δ: 12.75 (br s, 1H), 8.35 (d, J = 8, 1H), 7.90 (d, J = 3, 1H), 7.84 (d, J = 8, 2H), 7.75 (d, J = 3, 1H), 7.35 (d, J = 8, 2H), 7.24 (t, J = 7, 2H), 7.18−7.13 (m, 3H), 4.54 (m, 1H), 3.15, 2.94 (ABXのAB部分, J = 4, 10, 14, 2H), 2.84 (m, 1H), 2.71−2.50 (m, 3H, DMSOによって部分的に不明瞭), 2.30 (m, 1H), 1.84 (t, J = 8, 1H).
【００９６】
13C NMR (100MHz, DMSO−d6) δ: 25.83, 36.95, 37.54, 50.88, 53.41, 120.51, 126.41, 126.43, 128.55, 129.24, 130.43, 131.79, 139.50, 140.39, 144.13, 167.45, 172.90, 173.10.
【００９７】
実施例３：Ｎ−［（Ｓ）−２−（メルカプトメチル）−３−メチルブタノイル−４−（1−H−ピラゾール−１−イル）−Ｌ−フェニルアラニンの調製
【表４】
2005517703.tif 000019
【００９８】
段階１：（Ｓ）−Ｎ−アセチル−４−ニトロフェニルアラニンメチルエステルの調製
（Ｓ）−４−ニトロフェニルアラニンメチルエステル塩酸塩（5.89g, 22.6mmol）および酢酸ナトリウム（1.1当量, 2.04g, 24.9mmol）を酢酸中（４倍容量, 24ml）に懸濁し、２５℃にて、無水酢酸（1.5当量, 3.2ml, 33.9mmol）で処理した。スラリーを１時間撹拌し、次いで、水（１０倍容量, 59ml）で希釈し、溶液を得た。生成物は、数分以内に結晶化した。生じたスラリーを１時間撹拌し、固体を濾過によって回収し、水（2 x 12ml）で洗浄し、50℃の真空オーブン中で乾燥し、表題化合物を白色の結晶性固体3.77gとして、62.7%の収率にて得た。さらなる収量の結晶を、濾液より得た：0.61g、収率10.1%。合計収率72.8%.
LCMS 3.60min, m/z 267 MH+.
【００９９】
段階２：（Ｓ）−Ｎ−アセチル−４−アミノフェニルアラニンメチルエステルの調製
（Ｓ）−Ｎ−アセチル−４−ニトロフェニルアラニンメチルエステル（3.73g, 14.0mmol）および10% w/w Pd/C（0.05wt, 0.18g）を、酢酸エチル（10倍容量、37ml）と混合し、水素雰囲気下で２時間撹拌した。触媒を濾過によって除去し、溶液を濃縮し、表題化合物を粘性オイル4.20gとして得た。NMRは、残った酢酸エチルが約19%w/wであることを示した。修正収率103%。
LCMS 1.37min, m/z 237 MH+.
【０１００】
段階３：（Ｓ）−Ｎ−アセチル−４−（1−ピラゾリル）−フェニルアラニンメチルエステルの調製
（Ｓ）−Ｎ−アセチル−４−アミノフェニルアラニンメチルエステル（517mg, 2.19mmol 溶媒について修正せずに）を水（5倍容量、2.5ml）に溶解し、5℃に冷却し、濃HCl（2.6当量, 0.5ml, 5.7mmol）、次いで、水（2倍容量、1ml）中の亜硝酸ナトリウム（1.05当量, 159mg, 2.30mmol）で処理した。極めて淡い黄色の溶液を０〜５℃で１５分間撹拌し、次いで、水（10倍容量、5ml）中の亜硫酸ナトリウム（3当量, 830mg, 6.6mmol）の冷却溶液をゆっくり加えた。溶液はすぐに鮮やかな黄色となり、次いで、橙色になった。ジアゾニウム塩の溶液を水（1ml）で洗浄し、次いで、橙色の溶液を６０℃に加熱した。溶液が約６０℃に達したら、濃HCl（4当量, 0.8ml, 8.8mmol）で処理し、約６時間撹拌した。
【０１０１】
水溶液を真空下で濃縮乾固した。生じた黄色の固体をMeOH（100倍容量、50ml）に懸濁し、加熱還流した。マロンジアルデヒドビス（ジメチルアセタール）（1当量, 0.36ml, 2.2mmol）を加え、混合物を１７時間、還流にて撹拌した。懸濁物を２０℃に冷却し、濾過し、固体を濃縮した。固体を水（50ml）および酢酸エチル（50ml）で分離し、次いで、2M 炭酸カリウムでpH 12-13に塩基性化した。層を分離し、水層を酢酸エチル（50ml）で抽出した。合した酢酸エチル溶液を真空下で濃縮し、表題化合物を、橙色の固体490mg（収率78.0%）として得た。
LCMS 3.54min, m/z 288 MH+.
【０１０２】
段階４：（Ｓ）−４−（1−ピラゾリル）−フェニルアラニンメチルエステル塩酸塩の調製
（Ｓ）−Ｎ−アセチル−４−（1−ピラゾリル）−フェニルアラニンメチルエステル（480mg, 1.67mmol）をメタノール（100倍容量、50ml）に溶解し、塩化アセチル（10当量, 1.22ml, 17mmol）で処理したのち、２０℃で９日間放置した。溶液を還流にて２３時間加熱し、次いで、冷却し、さらなる塩化アセチル（10当量, 1.22ml, 17mmol）で処理した。溶液を５５℃で３日間加熱し、次いで、冷却し、濃縮乾固した。油性の固体を還流にてメタノール（4倍容量、2ml）に溶解し、テトラヒドロフラン（16倍容量、8ml）で希釈した。懸濁液を冷却し、真空下で濃縮したところ、表題化合物を褐色固体462mg（収率98.0%）として得た。
LCMS 2.82min, m/z 246 MH+.
【０１０３】
段階５：Ｎ−［（２Ｓ）−２−（アセチルチオメチル）−３−メチルブタノイル］−４−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−Ｌ−フェニルアラニンメチルエステルの調製
酸クロリドの調製
イソオクタン（10ml）中の（Ｓ）−２−アセチルチオメチル−３−メチルブタン酸（3.75g）の溶液を塩化チオニル（1.6ml）で処理し、３時間、４０℃に加温した。混合物を、サンプリングした（１滴をMeOH（1ml）に溶解し、２０分間置き、HPLC（2分）により分析した：保持時間: 1.33分, 酸、1.61分, メチルエステル）。酸クロリド溶液を２０〜２５℃に冷却し、次の工程に直接使用した。
【０１０４】
アミドカップリング：
４−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−Ｌ−フェニルアラニンメチルエステル塩酸塩（5.0g）を酢酸エチル（75ml）に懸濁し、2M K2CO3（33ml）で処理し、２０〜２５℃で、すべての固体が溶解するまで撹拌した。急速に撹拌した２相性溶液を、酸クロリド溶液（前で調製した）で、温度を２５℃以下に保持しながら、２０分かけて処理した。溶液を３０分間急速に撹拌し、相を分離した。上側の有機層を1M HCl（33ml）および水（33ml）で洗浄し、次いで、常圧蒸留によって約35mlに濃縮した。溶液を７５〜８０℃に保持し、２，２，４−トリメチルペンタン（TMP, イソオクタン, 85ml）で約３０分かけてゆっくり希釈し、７０〜８０℃で１５分間保持し、結晶を成長させた。薄いスラリーを、少なくとも２時間かけて０〜５℃に冷却した。固体を濾過によって回収し、冷（5℃）酢酸エチル/TMP（1:4, 25ml）、次いで、冷TMP（30ml）で洗浄し、５５℃の真空オーブン中で乾燥し、表題化合物をオフホワイトの固体6.4gとして、87%の収率にて得た。
HPLC（2分法） RT 1.64分
【０１０５】
段階６：Ｎ−［（２Ｓ）−２−（メルカプトメチル）−３−メチルブタノイル］−４−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−Ｌ−フェニルアラニンの調製
Ｎ−［（２Ｓ）−２−（アセチルチオメチル）−３−メチルブタノイル］−４−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−Ｌ−フェニルアラニンメチルエステル（33.5g）を容器に入れ、３回の真空／窒素サイクルによって脱酸素化した。固体を、水（3倍容量、100ml）およびMeOH（8倍容量、270ml）の混合物に懸濁し、窒素下、２０℃にて撹拌した。32%w/w（10.8M） NaOH（3.5当量, 0.78倍容量、26ml）を１０分かけて加え、混合物を２０℃で６０分間撹拌した。全ての出発材料が消費されたら、トリブチルホスフィン（0.02当量, 0.012倍容量、0.4ml）を加え、溶液を６０分間撹拌した。溶液をラインフィルターに付して、新しい反応容器に入れ、水（3倍容量、100ml）でライン洗浄した。清澄な溶液を、36%w/w（11.6M） HCl（2.7当量, 0.57倍容量、19ml）を１５分かけて加えることによってpH 4.9に酸性化し、１０分間置いて、結晶を成長させた。スラリーを、36%w/w（11.6M） HCl（1.9当量, 0.39倍容量、13ml）を加えることによってpH 1.2に酸性化した。スラリーを０〜５℃に冷却し、３０分間置き、次いで、固体を濾過によって回収し、冷（０〜５℃） 1:1 MeOH/水（2 x 3倍容量、100ml）で洗浄し、５０℃の真空オーブン中で乾燥し、表題化合物を淡黄色〜褐色の粉末として得た。28.04g、収率96.7%。
LCMS RT 2.98min., MH+ 362
【０１０６】
一般的なHPLC法
移動相Ａ：トリフルオロ酢酸（TFA）の水中0.05%v/v溶液。典型的には1000mlの水に0.5mlのTFAを加える。
【０１０７】
移動相Ｂ：: トリフルオロ酢酸（TFA）のアセトニトリル中0.05%v/v溶液。典型的には1000mlの水に0.5mlのアセトニトリルを加える。
【０１０８】
この方法を、HP（アジレント（Agilent）としても知られている） 1100 HPLC systemで実施した。
【０１０９】
LCMSによっても使用される８分の方法
【表５】
2005517703.tif 000020
【０１１０】
２分の方法
【表６】
2005517703.tif 000021
【国際調査報告】
2005517703.tif 000030
2005517703.tif 000031
2005517703.tif 000032