(57)【要約】新規ＩＬ−１７様ポリペプチド及びそれらをコードする核酸分子。本発明はまた、ＩＬ−１７様ポリペプチドを生産するためのベクター、宿主細胞、選択結合剤、及び方法も提供する。ＩＬ−１７様ポリペプチド、そのアゴニスト、又はアンタゴニストに関連する疾患の治療、診断、改善、又は予防のための方法も提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）配列番号１、配列番号３、又は配列番号９に示すヌクレオチド配列；
（ｂ）配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；
（ｃ）コードされるポリペプチドが配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドの活性を有する、中又は高ストリンジェンシー条件下で（ａ）又は（ｂ）の相補物にハイブリダイズするヌクレオチド配列；及び
（ｄ）（ａ）から（ｃ）のいずれかに相補的なヌクレオチド配列
から成る群より選択されるヌクレオチド配列を含む単離核酸分子。
【請求項２】
（ａ）配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドと少なくとも約７０、７５、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、又は９９％同一であるポリペプチドをコードし、そのポリペプチドが配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドの活性を有するヌクレオチド配列；
（ｂ）コードされるポリペプチドが配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドの活性を有する、配列番号１、配列番号３、又は配列番号９に示すヌクレオチド配列の対立遺伝子変異体又はスプライス変異体をコードするヌクレオチド配列；
（ｃ）少なくとも約２５アミノ酸残基のポリペプチドフラグメントをコードし、コードされるポリペプチドが配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドの活性を有する、配列番号１、配列番号３、又は配列番号９、（ａ）又は（ｂ）のヌクレオチド配列；
（ｄ）少なくとも約１６ヌクレオチドのフラグメントを含む、配列番号１、配列番号３、又は配列番号９、又は（ａ）から（ｃ）のヌクレオチド配列；
（ｅ）そのポリペプチドが配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドの活性を有する、中又は高ストリンジェンシー条件下で（ａ）から（ｄ）のいずれかの相補物にハイブリダイズするヌクレオチド配列；及び
（ｆ）（ａ）から（ｃ）のいずれかに相補的なヌクレオチド配列
から成る群より選択されるヌクレオチド配列を含む単離核酸分子。
【請求項３】
（ａ）そのポリペプチドが配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドの活性を有する、少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を含む、配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；
（ｂ）そのポリペプチドが配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドの活性を有する、少なくとも１つのアミノ酸挿入を含む、配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；
（ｃ）そのポリペプチドが配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドの活性を有する、少なくとも１つのアミノ酸欠失を含む、配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；
（ｄ）そのポリペプチドが配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドの活性を有する、Ｃ及び／又はＮ末端トランケーションを含む、配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；
（ｅ）そのポリペプチドが配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドの活性を有する、アミノ酸置換、アミノ酸挿入、アミノ酸欠失、Ｃ末端トランケーション、及びＮ末端トランケーションから成る群より選択される少なくとも１つの修飾を含む、配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；
（ｆ）少なくとも約１６ヌクレオチドのフラグメントを含む（ａ）から（ｅ）のヌクレオチド配列；
（ｇ）そのポリペプチドが配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドの活性を有する、中又は高ストリンジェンシー条件下で（ａ）から（ｆ）のいずれかの相補物にハイブリダイズするヌクレオチド配列；及び
（ｈ）（ａ）から（ｅ）のいずれかに相補的なヌクレオチド配列
から成る群より選択されるヌクレオチド配列を含む単離核酸分子。
【請求項４】
請求項１、２、又は３に記載の核酸分子を含むベクター。
【請求項５】
請求項４に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項６】
真核細胞である、請求項５に記載の宿主細胞。
【請求項７】
原核細胞である、請求項５に記載の宿主細胞。
【請求項８】
ＩＬ−１７様ポリペプチドを発現するために適切な条件下で請求項５に記載の宿主細胞を培養すること、及び場合によりそのポリペプチドを上記培養から単離することを含む、ＩＬ−１７様ポリペプチドを生産する方法。
【請求項９】
請求項８に記載の方法によって生産されるポリペプチド。
【請求項１０】
上記核酸分子が、ＩＬ−１７様ポリペプチドをコードするＤＮＡに作動可能に連結された、天然ＩＬ−１７様ポリペプチドについてのプロモーターＤＮＡ以外のプロモーターＤＮＡを含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
ＧＡＰ、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴＸ、ＢｅｓｔＦｉｔ及びスミス−ウォーターマン（Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ）アルゴリズムから成る群より選択されるコンピュータプログラムを用いてパーセント同一性を決定する、請求項２に記載の単離核酸分子。
【請求項１２】
請求項５、６又は７に記載の宿主細胞を化合物に暴露すること及び上記宿主細胞においてＩＬ−１７様ポリペプチドの活性又は産生を測定することを含む、該化合物がＩＬ−１７様ポリペプチド活性又は産生を阻害するかどうかを判定する方法。
【請求項１３】
配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド。
【請求項１４】
（ａ）コードされるポリペプチドが配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドの活性を有する、配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０のオーソローグについてのアミノ酸配列；
（ｂ）コードされるポリペプチドが配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドの活性を有する、配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも約７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、又は９９％同一であるアミノ酸配列；
（ｃ）コードされるポリペプチドが配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドの活性を有する、少なくとも約２５アミノ酸残基を含む配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すアミノ酸配列のフラグメント；
（ｄ）コードされるポリペプチドが配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドの活性を有する、配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すアミノ酸配列、あるいは（ａ）から（ｃ）の少なくとも１つのいずれかの対立遺伝子変異体又はスプライス変異体についてのアミノ酸配列
から成る群より選択されるアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド。
【請求項１５】
（ａ）コードされるポリペプチドが配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドの活性を有する、少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を含む配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すアミノ酸配列；
（ｂ）そのポリペプチドが配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドの活性を有する、少なくとも１つのアミノ酸挿入を含む配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すアミノ酸配列；
（ｃ）そのポリペプチドが配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドの活性を有する、少なくとも１つのアミノ酸欠失を含む配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すアミノ酸配列；
（ｄ）そのポリペプチドが配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドの活性を有する、Ｃ末端及び／又はＮ末端トランケーションを含む配列番号２に示すアミノ酸配列；及び
（ｅ）そのポリペプチドが配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドの活性を有する、アミノ酸置換、アミノ酸挿入、アミノ酸欠失、Ｃ末端トランケーション、及びＮ末端トランケーションから成る群より選択される少なくとも１つの修飾を含む、配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すアミノ酸配列
から成る群より選択されるアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド。
【請求項１６】
請求項１、２、又は３に記載の核酸分子によってコードされる単離ポリペプチド。
【請求項１７】
ＧＡＰ、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴＸ、ＢｅｓｔＦｉｔ及びスミス−ウォーターマンアルゴリズムから成る群より選択されるコンピュータプログラムを用いてパーセント同一性を決定する、請求項１４に記載の単離ポリペプチド。
【請求項１８】
配列番号２の６７位のアミノ酸がアスパラギン又はグルタミンである、請求項１４又は１５に記載のポリペプチド。
【請求項１９】
配列番号２の６９位のアミノ酸がアルギニン、リシン、グルタミン又はアスパラギンである、請求項１４又は１５に記載のポリペプチド。
【請求項２０】
配列番号２の９４位のアミノ酸がセリン、アラニン又はシステインである、請求項１４又は１５に記載のポリペプチド。
【請求項２１】
配列番号２の９６位のアミノ酸がセリン、アラニン又はシステインである、請求項１４又は１５に記載のポリペプチド。
【請求項２２】
配列番号２の１０１位のアミノ酸がバリン、イソロイシン、ロイシン、フェニルアラニン、アラニン又はノルロイシンである、請求項１４又は１５に記載のポリペプチド。
【請求項２３】
配列番号２の１０４位のアミノ酸がセリン又はトレオニンである、請求項１４又は１５に記載のポリペプチド。
【請求項２４】
配列番号２の１２９位のアミノ酸がセリン、アラニン又はシステインである、請求項１４又は１５に記載のポリペプチド。
【請求項２５】
配列番号２の１４０位のアミノ酸がセリン、アラニン又はシステインである、請求項１４又は１５に記載のポリペプチド。
【請求項２６】
配列番号２の１８６位のアミノ酸がセリン、アラニン又はシステインである、請求項１４又は１５に記載のポリペプチド。
【請求項２７】
配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０のアミノ酸配列を含むペプチドで動物を免疫することによって産生される抗体。
【請求項２８】
請求項１３、１４又は１５に記載のポリペプチドに特異的に結合する抗体又はそのフラグメント。
【請求項２９】
モノクローナル抗体である、請求項２８に記載の抗体。
【請求項３０】
配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０のアミノ酸配列を含むペプチドに結合するモノクローナル抗体を生産するハイブリドーマ。
【請求項３１】
請求項２７、２８又は２９に記載の抗ＩＬ−１７様抗体又はフラグメントを使用してＩＬ−１７様ポリペプチドを検出する又はＩＬ−１７様ポリペプチドの量を定量する方法。
【請求項３２】
（ａ）配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すアミノ酸配列；及び
（ｂ）配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すアミノ酸配列のフラグメント；及び
（ｃ）（ａ）又は（ｂ）の天然に生じる変異体
から成る群より選択されるアミノ酸配列を含む少なくとも１個のポリペプチドに特異的に結合する、選択結合剤又はそのフラグメント。
【請求項３３】
抗体又はそのフラグメントである、請求項３２に記載の選択結合剤。
【請求項３４】
ヒト化抗体である、請求項３２に記載の選択結合剤。
【請求項３５】
ヒト抗体又はそのフラグメントである、請求項３２に記載の選択結合剤。
【請求項３６】
ポリクローナル抗体又はそのフラグメントである、請求項３２に記載の選択結合剤。
【請求項３７】
モノクローナル抗体又はそのフラグメントである、請求項３２に記載の選択結合剤。
【請求項３８】
キメラ抗体又はそのフラグメントである、請求項３２に記載の選択結合剤。
【請求項３９】
ＣＤＲ移植抗体又はそのフラグメントである、請求項３２に記載の選択結合剤。
【請求項４０】
抗イディオタイプ抗体又はそのフラグメントである、請求項３２に記載の選択結合剤。
【請求項４１】
可変領域フラグメントである、請求項３２に記載の選択結合剤。
【請求項４２】
Ｆａｂ又はＦａｂ’フラグメントである、請求項４１に記載の可変領域フラグメント。
【請求項４３】
配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０のアミノ酸配列を有するポリペプチドに対して特異性を有する少なくとも１つの相補性決定領域を含む選択結合剤又はそのフラグメント。
【請求項４４】
検出可能標識に結合された、請求項３２に記載の選択結合剤。
【請求項４５】
ＩＬ−１７様ポリペプチドの生物活性に拮抗する、請求項３２に記載の選択結合剤。
【請求項４６】
ＩＬ−１７様ポリペプチドのＩＬ−１７受容体ＲＢ−２又はＲＢ−３への結合を阻害する、請求項４５に記載の選択結合剤。
【請求項４７】
上記ＩＬ−１７受容体ＲＢ−２又はＲＢ−３が配列番号１８又は配列番号２０のアミノ酸配列を有する、請求項４５に記載の選択結合剤。
【請求項４８】
請求項３２に記載の選択結合剤の有効量を患者に投与することを含む、疾患、状態又は障害を治療する、予防する又は改善するための方法。
【請求項４９】
配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０から成る群より選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドで動物を免疫することによって産生される選択結合剤。
【請求項５０】
請求項１、２又は３に記載のポリペプチドに結合することができる選択結合剤を生産するハイブリドーマ。
【請求項５１】
請求項１３、１４又は１５に記載のポリペプチド及び医薬適合性の製剤物質を含有する組成物。
【請求項５２】
上記の医薬適合性の製剤物質が担体、アジュバント、可溶化剤、安定剤又は抗酸化剤である、請求項５１に記載の組成物。
【請求項５３】
上記ポリペプチドが配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すアミノ酸配列を含む、請求項５１に記載の組成物。
【請求項５４】
請求項１３、１４又は１５に記載のポリペプチドの誘導体を含むポリペプチド。
【請求項５５】
水溶性ポリマーで共有結合修飾された、請求項５４に記載のポリペプチド。
【請求項５６】
上記水溶性ポリマーが、ポリエチレングリコール、モノメトキシポリエチレングリコール、デキストラン、セルロース、ポリ−（Ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール、及びポリビニルアルコールから成る群より選択される、請求項５５に記載のポリペプチド。
【請求項５７】
請求項１、２又は３に記載の核酸分子及び医薬適合性の製剤物質を含有する組成物。
【請求項５８】
上記核酸分子がウイルスベクターの中に含まれている、請求項５７に記載の組成物。
【請求項５９】
請求項１、２又は３に記載の核酸分子を含むウイルスベクター。
【請求項６０】
異種アミノ酸配列に融合した請求項１３、１４又は１５に記載のポリペプチドを含む融合ポリペプチド。
【請求項６１】
上記異種アミノ酸配列がＩｇＧ定常ドメイン又はそのフラグメントである、請求項６０に記載の融合ポリペプチド。
【請求項６２】
請求項１３、１４又は１５に記載のポリペプチドあるいは請求項１、２又は３に記載の核酸によってコードされるポリペプチドを患者に投与することを含む、医学的状態を治療する、予防する又は改善する方法。
【請求項６３】
（ａ）試料中の、請求項１３、１４又は１５に記載のポリペプチドあるいは請求項１、２又は３に記載の核酸分子によってコードされるポリペプチドの存在又は発現の量を測定すること；及び
（ｂ）上記ポリペプチドの存在又は発現の量に基づいて病的状態又は病的状態への感受性を診断すること
を含む、被験対象において病的状態又は病的状態への感受性を診断する方法。
【請求項６４】
（ａ）移植に適する膜；及び
（ｂ）請求項１３、１４又は１５に記載のタンパク質を分泌する細胞であって、上記タンパク質に透過性であり、及び上記細胞に有害な物質に対して不透過性である上記膜の中に被包された細胞
を含む装置。
【請求項６５】
（ａ）請求項１３、１４又は１５に記載のポリペプチドを化合物に接触させること、及び
（ｂ）上記ポリペプチドの上記化合物への結合の程度を判定すること
を含む、ポリペプチドに結合する化合物を特定する方法。
【請求項６６】
請求項１、２又は３に記載の核酸分子を動物に投与することを含む、動物においてポリペプチドのレベルを調節する方法。
【請求項６７】
請求項１、２又は３に記載の核酸分子を含むトランスジェニック非ヒト哺乳類。
【請求項６８】
配列番号１０のアミノ酸配列のヒトオーソローグ。
【請求項６９】
ＩＬ−１７様ポリペプチドに特異的に結合する分子の治療上有効な量を投与することを含む、ＩＬ−１７様ポリペプチドによって仲介される病的状態を治療する、予防する又は改善する方法。
【請求項７０】
上記分子が請求項３２又は３４に記載の選択結合剤である、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
上記病的状態が、免疫系機能不全、炎症又は感染に関連する、請求項６９に記載の方法。
【請求項７２】
ＩＬ−１７様ポリペプチドのＩＬ−１７受容体ＲＢ−２又はＲＢ−３への結合を阻害することができる分子の治療上有効な量を投与することを含む、ＩＬ−１７受容体様ポリペプチドとＩＬ−１７Ｅリガンドの望ましくない相互作用を阻害する方法。
【請求項７３】
上記分子が請求項３２又は３４に記載の選択結合剤である、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
請求項１４又は１５に記載のポリペプチド、あるいはＩＬ−１７様ポリペプチドに特異性を有するＩＬ−１７様ポリペプチド選択結合剤、小分子、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ペプチド又はその誘導体の有効量を投与することを含む、ＩＬ−１７様ポリペプチドの活性に拮抗する方法。
【請求項７５】
体内のＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、Ｇ−ＣＳＦ、エオタキシン又はＩＦＮ−γの少なくとも１つのレベルを低下させるのに有効な量でＩＬ−１７様ポリペプチド拮抗物質（アンタゴニスト）を投与することを含む、病的状態を治療する方法。
【請求項７６】
上記病的状態が炎症に関連する状態である、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
体内のＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、Ｇ−ＣＳＦ、エオタキシン又はＩＦＮ−γの少なくとも１つの産生を上昇させるのに有効な量でＩＬ−１７様ポリペプチド作動物質（アゴニスト）を投与することを含む、病的状態を治療する方法。
【請求項７８】
体内のＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、Ｇ−ＣＳＦ、エオタキシン又はＩＦＮ−γの少なくとも１つの産生を上昇させるのに有効な量で、配列番号２、４又は１０から成る群より選択される少なくとも１つのＩＬ−１７様ポリペプチドを投与することを含む、病的状態を治療する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願）
本出願は、２００１年２月２日出願の米国特許仮出願通し番号第６０／２６６，１５９号及び２００２年６月２２日出願の同第６０／２１３，１２５号の優先権を主張する、２００１年３月１６日出願の米国特許出願第０９／８１０，３８４号の優先権を主張する、２００１年６月２１日出願の米国特許出願第０９／８６８，４０４号の優先権を主張する、２００１年１２月２１日出願の米国特許出願第１０／０３７，５９１号の優先権を主張するものである。上記に特定した出願はすべて、それらの全体が参照してここに組み込まれる。
【０００２】
本発明は、新規ＩＬ−１７様ポリペプチド及びそれらをコードする核酸分子に関する。本発明はまた、ＩＬ−１７様ポリペプチドを生産するためのベクター、宿主細胞、医薬組成物、選択結合剤及び方法に関する。ＩＬ−１７様ポリペプチドに関連する疾患の診断、治療、改善、及び／又は予防のための方法も提供する。
【背景技術】
【０００３】
核酸分子の特定、クローニング、発現及び操作における技術的進歩とヒトゲノムの解読は、新規治療法の発見を大きく加速した。迅速な核酸塩基配列決定手法は、今やかつてないほどの速さで配列情報を創出することができ、またコンピュータ解析と組み合わせて、重複配列の部分及び全体ゲノムへのアッセンブリならびにポリペプチドコード領域の特定を可能にする。予測アミノ酸配列を既知アミノ酸配列のデータベース集積と比較することにより、これまでに特定された配列及び／又は構造指標との相同性の度合を決定することが可能となる。核酸分子のポリペプチドコード領域のクローニング及び発現は、構造及び機能分析のためのポリペプチド生成物を提供する。核酸分子及びコードされるポリペプチドの操作は、治療薬として使用するための生成物に有利な特性を付与しうる。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
過去１０年来のゲノム研究における重要な技術的進歩にも関わらず、ヒトゲノムに基づく新規治療法の開発についての潜在的可能性はまだ大部分が実現されていない。潜在的に有益なポリペプチド治療薬をコードする、又は治療分子のための「標的」として働きうるポリペプチドをコードする多くの遺伝子がまだ同定されていない。
【０００５】
従って、診断又は治療上の利益を有する、新規ポリペプチド及びそれらをコードする核酸分子を同定することが本発明の目的である。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、新規ＩＬ−１７様核酸分子及びコードされるポリペプチドに関する。
【０００７】
本発明は、
（ａ）配列番号１、配列番号３、又は配列番号９に示すヌクレオチド配列；
（ｂ）配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；
（ｃ）コードされるポリペプチドが配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドの活性を有する、中又は高ストリンジェンシー条件下で（ａ）又は（ｂ）の相補物にハイブリダイズするヌクレオチド配列；及び
（ｄ）（ａ）から（ｃ）のいずれかに相補的なヌクレオチド配列
から成る群より選択されるヌクレオチド配列を含む単離核酸分子を提供する。
【０００８】
本発明はまた、
（ａ）配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドと少なくとも約７０、７５、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、又は９９％同一であるポリペプチドをコードし、そのコードされるポリペプチドが配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドの活性を有するヌクレオチド配列；
（ｂ）コードされるポリペプチドが配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドの活性を有する、配列番号１、配列番号３、又は配列番号９に示すヌクレオチド配列の対立遺伝子変異体又はスプライス変異体をコードするヌクレオチド配列；
（ｃ）少なくとも約２５アミノ酸残基のポリペプチドフラグメントをコードし、そのポリペプチドが配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドの活性を有する、配列番号１、配列番号３、又は配列番号９、（ａ）、又は（ｂ）のヌクレオチド配列；
（ｄ）少なくとも約１６ヌクレオチドのフラグメントを含む、配列番号１、配列番号３、又は配列番号９、又は（ａ）から（ｃ）のヌクレオチド配列；
（ｅ）コードされるポリペプチドが配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドの活性を有する、中又は高ストリンジェンシー条件下で（ａ）から（ｄ）のいずれかの相補物にハイブリダイズするヌクレオチド配列；及び
（ｆ）（ａ）から（ｄ）のいずれかに相補的なヌクレオチド配列
から成る群より選択されるヌクレオチド配列を含む単離核酸分子を提供する。
【０００９】
本発明はさらに、
（ａ）コードされるポリペプチドが配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドの活性を有する、少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を含む、配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；
（ｂ）コードされるポリペプチドが配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドの活性を有する、少なくとも１つのアミノ酸挿入を含む、配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；
（ｃ）コードされるポリペプチドが配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドの活性を有する、少なくとも１つのアミノ酸欠失を含む、配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；
（ｄ）コードされるポリペプチドが配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドの活性を有する、Ｃ及び／又はＮ末端トランケーションを含む、配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；
（ｅ）コードされるポリペプチドが配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドの活性を有する、アミノ酸置換、アミノ酸挿入、アミノ酸欠失、Ｃ末端トランケーション、及びＮ末端トランケーションから成る群より選択される少なくとも１つの修飾を含む、配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；
（ｆ）少なくとも約１６ヌクレオチドのフラグメントを含む（ａ）から（ｅ）のヌクレオチド配列；
（ｇ）コードされるポリペプチドが配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドの活性を有する、中又は高ストリンジェンシー条件下で（ａ）から（ｆ）のいずれかの相補物にハイブリダイズするヌクレオチド配列；及び
（ｈ）（ａ）から（ｅ）のいずれかに相補的なヌクレオチド配列
から成る群より選択されるヌクレオチド配列を含む単離核酸分子を提供する。
【００１０】
本発明はまた、
（ａ）配列番号２の中に含まれる成熟ヒトＩＬ−１７様ポリペプチドを含み、及び場合によりアミノ末端メチオニンをさらに含むアミノ酸配列；あるいは配列番号４又は配列番号１０の中に含まれる成熟マウスＩＬ−１７様ポリペプチドを含むアミノ酸配列；
（ｂ）コードされるポリペプチドが配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドの活性を有する、配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０のオーソローグについてのアミノ酸配列；
（ｃ）そのポリペプチドが配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドの活性を有する、配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも約７０、７５、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、又は９９％同一であるアミノ酸配列；
（ｄ）そのポリペプチドが配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドの活性を有する、少なくとも約２５アミノ酸残基を含む配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すアミノ酸配列のフラグメント；
（ｅ）そのポリペプチドが配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドの活性を有する、配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すアミノ酸配列、あるいは（ａ）から（ｃ）の少なくとも１つのいずれかの対立遺伝子変異体又はスプライス変異体についてのアミノ酸配列
から成る群より選択されるアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドを提供する。
【００１１】
本発明はさらに、
（ａ）そのポリペプチドが配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドの活性を有する、少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を含む配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すアミノ酸配列；
（ｂ）そのポリペプチドが配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドの活性を有する、少なくとも１つのアミノ酸挿入を含む配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すアミノ酸配列；
（ｃ）そのポリペプチドが配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドの活性を有する、少なくとも１つのアミノ酸欠失を含む配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すアミノ酸配列；
（ｄ）そのポリペプチドが配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドの活性を有する、Ｃ末端及び／又はＮ末端トランケーションを含む配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すアミノ酸配列；及び
（ｅ）そのポリペプチドが配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドの活性を有する、アミノ酸置換、アミノ酸挿入、アミノ酸欠失、Ｃ末端トランケーション、及びＮ末端トランケーションから成る群より選択される少なくとも１つの修飾を含む、配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すアミノ酸配列
から成る群より選択されるアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドを提供する。
【００１２】
また、上記（ａ）から（ｅ）のアミノ酸配列を含む融合ポリペプチドも提供する。
【００１３】
本発明はまた、ここで述べる単離核酸分子を含む発現ベクター、ここで述べる組換え核酸分子を含む組換え宿主細胞、及び上記宿主細胞を培養すること及び場合によりそのようにして生産されたポリペプチドを単離することを含む、ＩＬ−１７様ポリペプチドを生産する方法を提供する。
【００１４】
ＩＬ−１７様ポリペプチドをコードする核酸分子を含むトランスジェニック非ヒト動物も本発明に包含される。そのＩＬ−１７様核酸分子は、ＩＬ−１７様ポリペプチドの発現及び、高い循環レベルを包含しうる、ＩＬ−１７様ポリペプチドの高いレベルを可能にする方法で動物に導入される。上記トランスジェニック非ヒト動物は好ましくは哺乳類である。
【００１５】
また、本発明のＩＬ−１７様ポリペプチドの誘導体も提供する。
【００１６】
配列番号２のＩＬ−１７様ポリペプチドの保存的及び／又は非保存的アミノ酸置換から生じるＩＬ−１７様ポリペプチドの類似体が、本発明において提供される。そのような類似体は、例えば、配列番号２の６７位のアミノ酸がアスパラギン又はグルタミンである、  配列番号２の６９位のアミノ酸がリシン、グルタミン、アスパラギン又はアルギニンである、配列番号２の９４位のアミノ酸がシステイン、セリン又はアラニンである、配列番号２の９６位のアミノ酸がシステイン、セリン又はアラニンである、配列番号２の１０１位のアミノ酸がイソロイシン、メチオニン、ロイシン、フェニルアラニン、アラニン、ノルロイシン又はバリンである、配列番号２の１０４位のアミノ酸がトレオニン又はセリンである、配列番号２の１２９位のアミノ酸がシステイン、アラニン又はセリンである、配列番号２の１４０位のアミノ酸がシステイン、アラニン又はセリンである、配列番号２の１５２位のアミノ酸がシステイン、アラニン又はセリンである、ＩＬ−１７様ポリペプチドを包含する。
【００１７】
受容体結合活性又はサイトカイン生物活性を保持するＩＬ−１７様ポリペプチドの類似体、フラグメント又は変異体が特に考慮される。受容体に結合するが、シグナルを伝達することができないＩＬ−１７様ポリペプチドの類似体、フラグメント又は変異体も考慮される。
【００１８】
本発明のヌクレオチド、ポリペプチド、ヌクレオチド、ポリペプチド又は選択結合剤及び１以上の医薬適合性の製剤物質を含有する医薬組成物も本発明に包含される。その医薬組成物は、本発明のヌクレオチド又はポリペプチドの治療上有効な量を提供するために使用される。本発明はまた、上記ポリペプチド、核酸分子、及び選択結合剤を使用する方法も対象とする。
【００１９】
本発明のＩＬ−１７様ポリペプチド、その抗体及び誘導体、他の選択結合剤、小分子及び核酸分子（アンチセンス核酸を含む）は、ここで列挙するものを含む疾患及び障害を治療する、予防する、改善する、及び／又は検出するために使用しうる。例えば、ＩＬ−１７様ポリペプチド及びポリヌクレオチドは前炎症作用を有することがあり、それ故炎症に関連する病的状態において役割を果たしうる。ＩＬ−１７様ポリペプチド又はポリヌクレオチドの発現はまた、癌の進行においても役割を担うと考えられる。例えば、ＩＬ−１７様ポリペプチド及びポリヌクレオチドはリンパ腫状態において役割を果たすと考えられ、ＩＬ−１７様ポリペプチド又はポリヌクレオチドの高い発現は前リンパ腫状態の指標でありうる。自己免疫疾患を含む急性又は慢性炎症疾患状態、及びリンパ腫又は前リンパ腫状態を含む癌疾患状態においては、ＩＬ−１７様ポリペプチドのレベル又は活性を低下させることが望ましいと考えられる。反対に、感染のような他の疾患状態ではＩＬ−１７様ポリペプチド活性を上昇させることが望ましい。
【００２０】
本発明はまた、ＩＬ−１７様ポリペプチドに結合する被験分子を特定するために被験分子を検定する方法を提供する。その方法は、ＩＬ−１７様ポリペプチドを被験分子に接触させること、該被験分子の該ポリペプチドへの結合の度合を判定することを含む。その方法はさらに、そのような被験分子がＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストであるかどうかを判定することを含む。本発明はさらに、ＩＬ−１７様ポリペプチドの発現又はＩＬ−１７様ポリペプチドの活性への分子の影響を試験する方法を提供する。
【００２１】
本発明の１つの実施態様は、ＩＬ−１７様ポリペプチドとＩＬ−１７受容体ＲＢ−２又はＲＢ−３ポリペプチドの相互作用の阻害因子を特定する方法を提供する。これらの方法は、被験化合物の存在下及び不在下で、ＩＬ−１７様ポリペプチド（配列番号２に示す成熟タンパク質配列を含むポリペプチド、あるいは受容体結合活性を保持するそのフラグメント、類似体又は変異体など）の、ＩＬ−１７受容体ＲＢ−２又はＲＢ−３ポリペプチド（配列番号１８又は２０の細胞外領域を含むポリペプチド、あるいはリガンド結合活性を保持するそのフラグメント、類似体又は変異体など）への結合を検出すること、及びその被験化合物を、その存在下では結合が低下する場合に候補阻害因子として特定することの段階を含む。適切な被験化合物は、そのライブラリーを既知の高流量スクリーニング手順を用いてスクリーニングすることができる、核酸分子、タンパク質、ペプチド、炭水化物、脂質、有機及び無機化合物を含む。本発明はさらに、ＩＬ−１７様ポリペプチドあるいはＩＬ−１７受容体ＲＢ−２又はＲＢ−３に特異的に結合する分子の治療上有効な量を投与することを含む、ＩＬ−１７様ポリペプチドによって仲介される病的状態を治療する、予防する又は改善する方法を提供する。本発明はまた、ＩＬ−１７様ポリペプチドあるいはＩＬ−１７受容体ＲＢ−２又はＲＢ−３に結合することができる分子の治療上有効な量を投与することを含む、ＩＬ−１７様ポリペプチドとＩＬ−１７受容体ＲＢ−２又はＲＢ−３の望ましくない相互作用を阻害する方法を提供する。
【００２２】
これらの特定された候補阻害因子は、本発明のＩＬ−１７様ポリペプチドの選択結合剤、フラグメント、類似体又は変異体、及びそれらの融合タンパク質を包含する。ＩＬ−１７様ポリペプチドが仲介する病的状態の例はここでさらに詳述する。
【００２３】
本発明はまた、ＩＬ−１７様ポリペプチドあるいはＩＬ−１７受容体ＲＢ−２又はＲＢ−３に結合することができる分子の治療上有効な量を投与することを含む、ＩＬ−１７様ポリペプチドとＩＬ−１７受容体ＲＢ−２又はＲＢ−３の望ましくない相互作用を阻害する方法を提供する。
【００２４】
ＩＬ−１７様ポリペプチドの発現を調節する、及びＩＬ−１７様ポリペプチドのレベルを修飾する（すなわち上昇させるか又は低下させる）方法も本発明に包含される。１つの方法は、ＩＬ−１７様ポリペプチドをコードする核酸分子又はアンチセンス核酸分子（例えばＩＬ−１７様ポリペプチドをコードするＤＮＡ又はＲＮＡ又は調節配列に特異的に結合して、ＩＬ−１７様ポリペプチドの発現を阻害するもの）を動物に投与することを含む。もう１つの方法では、ＩＬ−１７様ポリペプチドの発現を調節する又は修飾するエレメントを含む核酸分子を投与しうる。これらの方法の例は、遺伝子治療、細胞治療、及びここでさらに述べるようなアンチセンス療法を包含する。ＩＬ−１７様ポリペプチドのレベル又は活性を低下させるさらなる他の方法は、ＩＬ−１７様ポリペプチドの作用に拮抗する選択結合剤（ＩＬ−１７様ポリペプチド又はその受容体結合部位に特異的に結合する、キメラ、ヒト化又はヒト抗体又はそのフラグメントを包含する、抗体及びその誘導体など）の投与を含む。天然ＩＬ−１７様ポリペプチドの作用に拮抗する、その融合タンパク質を包含する、ＩＬ−１７の類似体、フラグメント又は変異体の投与も考慮される。
【００２５】
本発明のもう１つの局面では、ＩＬ−１７様ポリペプチドは、その受容体（「ＩＬ−１７様受容体」）を特定するために使用しうる。様々な形態の「発現クローニング」が、タンパク質リガンドに対する受容体をクローン化するために広く使用されてきた。例えば、Ｈ．ＳｉｍｏｎｓｅｎとＨ．Ｆ．Ｌｏｄｉｓｈ，Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｖｏｌ．１５、４３７−４４１（１９９４）、及びＴａｒｔａｇｌｉａら、Ｃｅｌｌ，８３：１２６３−１２７１（１９９５）参照。ＩＬ−１７様受容体の単離は、ＩＬ−１７様ポリペプチドシグナル伝達経路の新規アゴニスト及びアンタゴニストを特定する又は開発するために有用である。そのようなアゴニスト及びアンタゴニストは、可溶性ＩＬ−１７様受容体（例えば、膜貫通及び／又は細胞質領域の全部又は一部を欠くフラグメント、あるいはリガンド結合活性を保持する細胞外領域のフラグメント、その類似体又は変異体、及び免疫グロブリンの定常ドメインあるいは循環中の半減期を延長させる能力を保持するそのフラグメント又は変異体などの異種ポリペプチドへのその融合物）、抗ＩＬ−１７様受容体選択結合剤（ＩＬ−１７受容体様ポリペプチド又はそのリガンド結合部位に特異的に結合する、キメラ、ヒト化又はヒト抗体又はそのフラグメントを包含する、抗体及びその誘導体）、小分子、及びアンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ＩＬ−１７様ポリペプチドをコードするＤＮＡ又はＲＮＡ又は調節配列に特異的に結合して、ＩＬ−１７様ポリペプチドの発現を阻害するもの）を含み、それらのいずれもが、ここで列挙するものを含む疾患又は障害の１つ以上を治療するために使用できる。例えば、ＩＬ−１７様ポリペプチドアンタゴニストは、抗炎症性治療薬として投与しうる、あるいは癌又はリンパ腫状態を治療するために使用しうる。
【００２６】
本発明のＩＬ−１７様ポリペプチドに結合する２つの受容体を実施例８において特定し、ＩＬ−１７  ＲＢ−２及びＩＬ−１７  ＲＢ−３と表示している。それらのヌクレオチド及びアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１７−１８（ＩＬ−１７  ＲＢ−２）及び配列番号１９−２０（ＩＬ−１７  ＲＢ−３）に示している。予測される膜貫通ドメインは、配列番号１８の残基２９３−３１３及び配列番号２０の残基３５１−３７１にわたる。予測シグナルペプチドは、配列番号１８及び２０の１４残基にわたる。それ故、予測細胞外配列は、配列番号１８のアミノ酸１４−２９２及び配列番号２０のアミノ酸１４−３５０にわたる。これらの受容体は、共有の同時提出された米国特許出願通し番号第＿＿＿号（代理人ドケット番号第０１０１７／３６９１７Ａ号）、及び先に提出された、２０００年１１月２７日出願の米国特許出願通し番号第０９／７２３，２３２号、２０００年３月１６日出願の米国特許仮出願通し番号第６０／１８９，９２３号、及び２０００年５月１２日出願の米国特許仮出願通し番号第６０／２０４，２０８号の中でさらに説明され、特性付けられており、それらすべての開示が全体として参照してここに組み込まれる。
【００２７】
一部の実施態様では、ＩＬ−１７様ポリペプチドアゴニスト又はアンタゴニストは、ＩＬ−１７様ポリペプチドと相互作用してその活性を調節する、タンパク質、ペプチド、炭水化物、脂質、又は低分子量分子でありうる。
【００２８】
本発明は、体内のＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、Ｇ−ＣＳＦ、エオタキシン又はＩＦＮ−γの少なくとも１つのレベルを低下させるのに有効な量でＩＬ−１７様ポリペプチドアンタゴニストを投与することを含む、病的状態を治療する方法を提供する。これらの方法は、炎症に関連する状態を治療するためのものを包含する。
【００２９】
本発明はまた、体内のＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、Ｇ−ＣＳＦ、エオタキシン又はＩＦＮ−γの少なくとも１つの産生を上昇させるのに有効な量で、配列番号２、４及び１０のポリペプチドなどの、ＩＬ−１７様アゴニスト又はＩＬ−１７様ポリペプチドを投与することを含む、病的状態を治療する方法を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３０】
ここで使用する章の見出しは構成のみを目的とし、記述する事柄を限定するものと解釈されるべきではない。本明細書において引用するすべての参考文献は明白に参照してここに組み込まれる。
【００３１】
定義
「ＡＧＰ−ＸＸＸＩＬ−１７様遺伝子」又は「ＡＧＰ−ＸＸＸＩＬ−１７様核酸分子」又は「ポリヌクレオチド」の語は、配列番号１、配列番号３、又は配列番号９に示すヌクレオチド配列、配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、及びここで定義する核酸分子を含む又はそれらから成る核酸分子を指す。
【００３２】
「ＩＬ−１７様ポリペプチド」の語は、配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０のアミノ酸配列を含むポリペプチド、及び関連ポリペプチドを指す。関連ポリペプチドは、ＩＬ−１７様ポリペプチド対立遺伝子変異体、ＩＬ−１７様ポリペプチドオーソローグ（ｏｒｔｈｏｌｏｇ）、ＩＬ−１７様ポリペプチドスプライス変異体、ＩＬ−１７様ポリペプチド変異体及びＩＬ−１７様ポリペプチド誘導体を包含する。ＩＬ−１７様ポリペプチドは、ここで定義するような成熟ポリペプチドでありえ、及びそれらを調製する方法に依存して、アミノ末端メチオニン残基を有していてもよく又は有していなくてもよい。
【００３３】
「ＡＧＰ−ＸＸＸＩＬ−１７様ポリペプチド対立遺伝子変異体」の語は、１つの生物又は複数生物の集団の染色体上の所与の遺伝子座を占める遺伝子の、いくつかの可能な天然に生じる選択的形態の１つを指す。
【００３４】
「ＩＬ−１７様ポリペプチド誘導体」の語は、配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチド、ＩＬ−１７様ポリペプチド対立遺伝子変異体、ＩＬ−１７様ポリペプチドオーソローグ、ＩＬ−１７様ポリペプチドスプライス変異体、又は化学修飾された、ここで定義するようなＩＬ−１７様ポリペプチド変異体を指す。
【００３５】
「ＩＬ−１７様ポリペプチドフラグメント」の語は、配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列と比較して、配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチド、ＩＬ−１７様ポリペプチド対立遺伝子変異体、ＩＬ−１７様ポリペプチドオーソローグ、ＩＬ−１７様ポリペプチドスプライス変異体及び／又は１以上のアミノ酸付加又は置換又は内部欠失を有するＩＬ−１７様ポリペプチド変異体（生じるポリペプチドは少なくとも６アミノ酸以上の長さである）の、アミノ末端のトランケーション（リーダー配列を伴う又は伴わない）及び／又はカルボキシ末端のトランケーションを含むポリペプチドを指す。ＩＬ−１７様ポリペプチドフラグメントは、代替的ＲＮＡスプライシングから又はインビボでのプロテアーゼの作用から生じうる。好ましい実施態様では、トランケーションは約１０個のアミノ酸、又は約２０個のアミノ酸、又は約５０個のアミノ酸、又は約７５個のアミノ酸、又は約１００個のアミノ酸、又は約１００個超のアミノ酸を含む。そのようにして生じるポリペプチドフラグメントは、約２５個の連続アミノ酸、又は約５０個のアミノ酸、又は約７５個のアミノ酸、又は約１００個のアミノ酸、又は約１５０個のアミノ酸、又は約２００個のアミノ酸を含む。そのようなＩＬ−１７様ポリペプチドフラグメントは、場合によりアミノ末端メチオニン残基を含みうる。そのようなフラグメントは、例えば、ＩＬ−１７様ポリペプチドに対する抗体を作製するために使用できることは認識される。
【００３６】
「ＡＧＰ−ＸＸＸＩＬ−１７様融合ポリペプチド」の語は、配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列と比較して、配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチド、ＩＬ−１７様ポリペプチド対立遺伝子変異体、ＩＬ−１７様ポリペプチドオーソローグ、ＩＬ−１７様ポリペプチドスプライス変異体、又は１以上のアミノ酸欠失、置換又は内部付加を有するＩＬ−１７様ポリペプチド変異体の、アミノ又はカルボキシ末端における１以上のアミノ酸（異種ペプチド又はポリペプチドなど）の融合を指す。
【００３７】
「ＡＧＰ−ＸＸＸＩＬ−１７様ポリペプチドオーソローグ」の語は、配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列に対応する、別の種からのポリペプチドを指す。例えば、マウスとヒトのＩＬ−１７様ポリペプチドは互いのオーソローグとみなされる。
【００３８】
「ＡＧＰ−ＸＸＸＩＬ−１７様ポリペプチドスプライス変異体」の語は、配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列のＲＮＡ転写産物におけるイントロン配列の代替的プロセシングによって生じる核酸分子、通常はＲＮＡを指す。
【００３９】
「ＩＬ−１７様ポリペプチド変異体」の語は、配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列（リーダー配列を伴う又は伴わない）と比較して、１以上のアミノ酸配列の置換、欠失（内部欠失及び／又はＩＬ−１７様ポリペプチドフラグメントなど）、及び／又は付加（内部付加及び／又はＩＬ−１７様融合ポリペプチドなど）を有するアミノ酸配列を含むＩＬ−１７様ポリペプチドを指す。変異体は、自然に生じうるか（例えばＩＬ−１７様ポリペプチド対立遺伝子変異体、ＩＬ−１７様ポリペプチドオーソローグ及びＩＬ−１７様ポリペプチドスプライス変異体）又は人工的に構築しうる。そのようなＩＬ−１７様ポリペプチド変異体は、それに応じて配列番号１、配列番号３、又は配列番号９に示すＤＮＡ配列とは異なるＤＮＡ配列を有する、対応する核酸分子から調製しうる。好ましい実施態様では、変異体は、１から３、又は１から５、又は１から１０、又は１から１５、又は１から２０、又は１から２５、又は１から５０、又は１から７５、又は１から１００、又は１００超のアミノ酸置換、挿入、付加及び／又は欠失を含み、その置換は保存的、又は非保存的、又はその何らかの組合せでありうる。
【００４０】
「抗原」の語は、抗体などの、選択結合剤によって結合されうる、及び付加的に各々の抗原のエピトープに結合することができる抗体を生産するために動物において使用されうる、分子又は分子の一部を指す。抗原は１以上のエピトープを有しうる。
【００４１】
「生物活性ＩＬ−１７様ポリペプチド」の語は、配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０のアミノ酸配列を含むポリペプチドの少なくとも１つの活性特徴を有するＩＬ−１７様ポリペプチドを指す。
【００４２】
「有効量」又は「治療上有効な量」の語は、各々、ここで述べるようなＩＬ−１７様ポリペプチドの１以上の生物活性の観察可能なレベルを支持するために使用されるＩＬ−１７様ポリペプチド又はＩＬ−１７様核酸分子の量を指す。
【００４３】
「発現ベクター」の語は、宿主細胞における使用に適し、異種核酸配列の発現を指令する及び／又は制御する核酸配列を含むベクターを指す。発現は、転写、翻訳、及び、イントロンが存在する場合は、ＲＮＡスプライシングなどのプロセスを含むが、これらに限定されない。
【００４４】
「宿主細胞」の語は、核酸配列で形質転換された細胞、又は核酸配列で形質転換されてその後対象とする選択遺伝子を発現することができる細胞を指す。この語は、子孫が形態において又は遺伝的構造においてその元の親と同一であるか否かに関わらず、選択遺伝子が存在する限り、親細胞の子孫を包含する。
【００４５】
この技術分野において既知である「同一性」の語は、配列を比較することによって決定される、２個以上のポリペプチド分子あるいは２個以上の核酸分子の配列間の関係を指す。この技術分野では、「同一性」はまた、２個以上のヌクレオチドのストリングあるいは２個以上のアミノ酸配列の間の対合によって決定される、場合に応じて、核酸分子又はポリペプチド間の配列関連性の度合を意味する。「同一性」は、２個以上の配列のより小さいものと特定数学モデル又はコンピュータプログラム（すなわち「アルゴリズム」）によって提示されるギャップアラインメント（もし存在する場合は）との間の同一対合のパーセントを測定する。
【００４６】
「類似性」の語は、関連する概念であるが、「同一性」と異なり、「類似性」は同一対合と保存的置換対合の両方を包含する類似性の測定を指す。２個のポリペプチド配列が、例えば１０／２０の同一アミノ酸を有し、残りがすべて非保存的置換である場合、パーセント同一性及び類似性はいずれも５０％となる。同じ例で、さらに５個の位置で保存的置換が存在する場合、パーセント同一性は５０％のままであるが、パーセント類似性は７５％となる（１５／２０）。それ故、保存的置換が存在する場合は、２個のポリペプチド間のパーセント類似性はそれら２個のポリペプチド間のパーセント同一性よりも高くなる。
【００４７】
「単離核酸分子」の語は、（１）全ＤＮＡをソース細胞から単離するとき天然に認められるタンパク質、脂質、炭水化物又は他の物質の少なくとも約５０％から分離されている、（２）該「単離核酸分子」が本来連結されているポリペプチドの全部又は一部に連結されていない、（３）本来は連結されないポリペプチドに作動可能に連結されている、又は（４）天然ではより大きなポリペプチド配列の一部としては生じない、本発明の核酸分子を指す。好ましくは本発明の単離核酸分子は、ポリペプチド生産におけるその使用、あるいはその治療、診断、予防又は研究用途に干渉する、その天然環境において認められる何らかの他の夾雑核酸分子又は他の夾雑物を実質的に含まない。
【００４８】
「単離ポリペプチド」の語は、（１）ソース細胞から単離したとき天然に認められるポリヌクレオチド、脂質、炭水化物又は他の物質の少なくとも約５０％から分離されている、（２）該「単離ポリペプチド」が本来連結されているポリペプチドの全部又は一部に（共有結合又は非共有結合相互作用によって）連結されていない、（３）本来は連結されないポリペプチドに（共有結合又は非共有結合相互作用によって）作動可能に連結されている、又は（４）天然では生じない、本発明のポリペプチドを指す。好ましくは該単離ポリペプチドは、その治療、診断、予防又は研究用途に干渉する、その天然環境において認められる何らかの他の夾雑ポリペプチド又は他の夾雑物を実質的に含まない。
【００４９】
「成熟ＩＬ−１７様ポリペプチド」の語は、リーダー配列を持たないＩＬ−１７様ポリペプチドを指す。成熟ＩＬ−１７様ポリペプチドはまた、アミノ末端（リーダー配列を伴う又は伴わない）及び／又はカルボキシ末端のタンパク質分解プロセシング、より大きな前駆体からのより小さなポリペプチドの開裂、Ｎ結合及び／又はＯ結合グリコシル化等のような他の修飾も含みうる。成熟ヒトＩＬ−１７様ポリペプチドの例は、配列番号２のアミノ酸配列内に見出すことができる。成熟マウスＩＬ−１７様ポリペプチドの例は、配列番号４及び配列番号１０のアミノ酸配列内に見出すことができる。「核酸配列」又は「核酸分子」の語は、ＤＮＡ又はＲＮＡ配列を指す。この語は、４−４−アセチルシトシン、８−ヒドロキシ−Ｎ６−メチルアデノシン、アジリジニル−シトシン、プソイドイソシトシン、５−（カルボキシヒドロキシルメチル）ウラシル、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、イノシン、Ｎ６−イソペンテニルアデニン、１−メチルアデニン、１−メチルプソイドウラシル、１−メチルグアニン、１−メチルイノシン、２，２−ジメチルグアニン、２−メチルアデニン、２−メチルグアニン、３−メチルシトシン、５−メチルシトシン、Ｎ６−メチルアデニン、７−メチルグアニン、５−メチルアミノメチルウラシル、５−メトキシアミノメチル−２−チオウラシル、β−Ｄ−マンノシルクエオシン、５’−メトキシカルボニルメチルウラシル、５−メトキシウラシル、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデニン、ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル−５−オキシ酢酸、オキシブトキソシン、プソイドウラシル、クエオシン、２−チオシトシン、５−メチル−２−チオウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−メチルウラシル、Ｎ−ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル−５−オキシ酢酸、プソイドウラシル、クエオシン、２−チオシトシン、及び２，６−ジアミノプリンなどの、但しこれらに限定されない、ＤＮＡ及びＲＮＡの既知の塩基類似体のいずれかから形成される分子を包含する。
【００５０】
核酸分子、ポリペプチド、宿主細胞等のような生物学的物質に関して使用するとき「天然に生じる」又は「天然」の語は、天然に認められ、人間によって操作されていない物質を指す。同様に、ここで使用する「非天然に生じる」又は「非天然」は、天然では認められず、人間によって構造的に修飾された又は合成された物質を指す。
【００５１】
「作動可能に連結された」の語は、ここでは、そのような記述される隣接配列がそれらの通常の機能を果たすように立体配置されている又はアッセンブリされている、隣接配列の配置方法を表わすために使用される。従って、コード配列に作動可能に連結された隣接配列は、そのコード配列の複製、転写及び／又は翻訳を生じさせることができる。例えば、コード配列は、プロモーターがそのコード配列の転写を指令することができるとき、そのプロモーターに作動可能に連結されている。隣接配列は、それが正しく機能する限り、コード配列に隣接している必要はない。そこで、例えば、翻訳されないが転写される介在配列がプロモーター配列とコード配列の間に存在することは可能であり、そのプロモーターは、それでもやはりそのコード配列に「作動可能に連結された」とみなすことができる。
【００５２】
ここで使用する「医薬適合性の担体」又は「生理的に許容される担体」の語は、ＩＬ−１７様ポリペプチド、ＩＬ−１７様核酸分子又はＩＬ−１７様選択結合剤の医薬組成物としての送達を実現する又は促進するのに適した１以上の製剤物質を指す。
【００５３】
「選択結合剤」の語は、ＩＬ−１７様ポリペプチドに対して特異性を有する１以上の分子を指す。ここで使用する、「特異的」及び「特異性」の語は、ヒトＩＬ−１７様ポリペプチドに結合し、且つヒト非ＩＬ−１７様ポリペプチドには結合しない選択結合剤の能力を指す。しかし、選択結合剤はまた、配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドのオーソローグ、すなわちマウス及びラットポリペプチドなどの、その種間変形にも結合しうることは認識される。
【００５４】
「形質導入」の語は、通常はファージによる、１つの細菌からもう１つ別の細菌への遺伝子の移入を表わすために使用される。「形質導入」はまた、レトロウイルスによる真核細胞配列の獲得及び移入も表わす。
【００５５】
「トランスフェクション」の語は、細胞による外来又は外因性ＤＮＡの取り込みを表わすために使用され、外来性ＤＮＡが細胞膜の内部に導入されたとき、その細胞は「トランスフェクト」されたことになる。多くのトランスフェクション手法がこの技術分野において周知であり、ここで開示する。例えば、Ｇｒａｈａｍら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，５２：４５６（１９７３）；Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８９）；Ｄａｖｉｓら、Ｂａｓｉｃ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ（１９８６）；及びＣｈｕら、Ｇｅｎｅ，１３：１９７（１９８１）参照。そのような手法は、１以上の外因性ＤＮＡ分子を適切な宿主細胞に導入するために使用できる。
【００５６】
ここで使用する「形質転換」の語は、細胞遺伝的形質の変化を表わし、細胞が新しいＤＮＡを含むように修飾されたとき、その細胞は形質転換されたことになる。例えば、細胞がその自然の状態から遺伝的に修飾される場合、その細胞は形質転換される。トランスフェクション又は形質導入後、形質転換ＤＮＡは、細胞の染色体内に物理的に組み込まれることによってその細胞のＤＮＡと組み換わるか、複製されずにエピソームエレメントとして一過性に保持されるか、又はプラスミドとして独立して複製しうる。該ＤＮＡが細胞の分裂によって複製されるとき、その細胞は安定に形質転換されたとみなされる。
【００５７】
「ベクター」の語は、コード情報を宿主細胞に移入するために使用される何らかの分子（例えば核酸、プラスミド、又はウイルス）を表わすために使用される。
【００５８】
核酸分子及び／又はポリペプチドの関連性
関連核酸分子は、配列番号１、配列番号３、又は配列番号９の核酸分子の対立遺伝子変異体又はスプライス変異体を包含し、及び上記ヌクレオチド配列のいずれかに相補的な配列を包含することは了解されている。関連核酸分子はまた、配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０内のポリペプチドと比較して、１個以上のアミノ酸残基の置換、修飾、付加及び／又は欠失を含むあるいは本質的にそれらから成るポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を包含する。
【００５９】
フラグメントは、配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０のポリペプチドの少なくとも約２５個のアミノ酸残基、又は約５０個、又は約７５個、又は約１００個、又は約１００個超のアミノ酸残基のポリペプチドをコードする分子を包含する。
【００６０】
さらに、関連ＩＬ−１７様核酸分子は、ここで定義する中又は高ストリンジェンシー条件下で、配列番号１、配列番号３又は配列番号９の核酸分子、又は配列番号２、配列番号４又は配列番号１０に示すアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする分子、又はここで定義する核酸フラグメント、又はここで定義するポリペプチドをコードする核酸フラグメントの、完全に相補的な配列とハイブリダイズするヌクレオチド配列を含む分子を包含する。ハイブリダイゼーションプローブは、ｃＤＮＡ、ゲノム又は合成ＤＮＡライブラリーを関連配列に関してスクリーニングするために、ここで提供するＩＬ−１７様配列を使用して作製しうる。既知の配列に有意の同一性を示すＩＬ−１７様ポリペプチドのＤＮＡ及び／又はアミノ酸配列の領域は、ここで述べるような配列アラインメントアルゴリズムを用いて容易に決定され、それらの領域を使用してスクリーニングのためのプローブを設計しうる。
【００６１】
「高ストリンジェンシー条件」の語は、その配列が高度に相補的であるＤＮＡ鎖のハイブリダイゼーションを許容し、有意に不正対合であるＤＮＡのハイブリダイゼーションを排除するように設計された条件を指す。ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーは主として温度、イオン強度、及びホルムアミドなどの変性剤の濃度によって決定される。ハイブリダイゼーション及び洗浄についての「高ストリンジェンシー条件」の例は、６５℃から６８℃で０．０１５Ｍ塩化ナトリウム、０．００１５Ｍクエン酸ナトリウム、あるいは４２℃で０．０１５Ｍ塩化ナトリウム、０．００１５Ｍクエン酸ナトリウム、及び５０％ホルムアミドである。Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｆｒｉｔｓｃｈ  ＆  Ｍａｎｉａｔｉｓ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，第２版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９）及びＡｎｄｅｒｓｏｎら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ：ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ，第４章、ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ  Ｌｉｍｉｔｅｄ，Ｏｘｆｏｒｄ，Ｅｎｇｌａｎｄ（１９９９）参照。
【００６２】
よりストリンジェントな条件（より高い温度、より低いイオン強度、より高いホルムアミド又は他の変性剤など）も使用しうる；しかし、ハイブリダイゼーションの速度が影響を受ける。非特異的及び／又はバックグラウンドハイブリダイゼーションを低減するために他の物質をハイブリダイゼーション及び洗浄緩衝液に含めてもよい。その例は、０．１％ウシ血清アルブミン、０．１％ポリビニルピロリドン、０．１％ピロリン酸ナトリウム、０．１％ドデシル硫酸ナトリウム（ＮａＤｏｄＳＯ４又はＳＤＳ）、フィコール、デンハルト溶液、超音波処理サケ精子ＤＮＡ（又は別の非相補的ＤＮＡ）、及び硫酸デキストランであるが、他の適切な物質も使用しうる。これらの添加物の濃度及び種類は、ハイブリダイゼーション条件のストリンジェンシーに実質的な影響を及ぼさずに変化させうる。ハイブリダイゼーション実験は通常ｐＨ６．８−７．４で実施される；しかし、典型的なイオン強度条件では、ハイブリダイゼーションの速度はｐＨとはほとんど無関係である。Ａｎｄｅｒｓｏｎら、前出参照。
【００６３】
ＤＮＡ二重鎖の安定性に影響を及ぼす因子は、塩基組成、長さ、及び塩基対の不正対合の度合を含む。これらの変数を適応させ、種々の配列関連性のＤＮＡがハイブリッドを形成することを可能にするために、当業者はハイブリダイゼーション条件を調整することができる。完全に対合するＤＮＡ二重鎖の融点は次の方程式によって算定することができる：
Ｔｍ（℃）＝８１．５＋１６．６（ｌｏｇ［Ｎａ＋］）＋０．４１（％Ｇ＋Ｃ）−６００／Ｎ−０．７２（％ホルムアミド）
［式中、Ｎは形成される二重鎖の長さであり、［Ｎａ＋］はハイブリダイゼーション又は洗浄溶液中のナトリウムイオンのモル濃度であり、％Ｇ＋Ｃはハイブリッド中の（グアニン＋シトシン）のパーセンテージである］。不完全対合のハイブリッドに関しては、各々１％の不正対合につき融点が約１℃ずつ低下する。
【００６４】
「中ストリンジェンシー条件」の語は、「高ストリンジェンシー」条件下で起こりうるよりも大きな度合の塩基対不正対合を有するＤＮＡ二重鎖が形成しうる条件を指す。典型的な「中ストリンジェンシー条件」の例は、５０℃から６５℃で０．０１５Ｍ塩化ナトリウム、０．００１５Ｍクエン酸ナトリウム、あるいは３７℃から５０℃で０．０１５Ｍ塩化ナトリウム、０．００１５Ｍクエン酸ナトリウム、及び２０％ホルムアミドである。例として、０．０１５Ｍナトリウムイオン中５０℃の「中ストリンジェンシー条件」は約２１％の不正対合を許容する。
【００６５】
「高」と「中」ストリンジェンシー条件の間に絶対的な区別がないことは当業者には認識される。例えば、０．０１５Ｍナトリウムイオン（ホルムアミドなし）で、完全に対合する長いＤＮＡの融点は約７１℃である。６５℃での洗浄（同じイオン強度で）により、これは約６％の不正対合を許容する。より離れた関連配列を捕獲するためには、当業者は単に温度を低下するか又はイオン強度を上昇させるだけでよい。
【００６６】
約２０ｎｔまでのオリゴヌクレオチドプローブに関する１Ｍ  ＮａＣｌ＊中での融点の良好な算定が、
Ｔｍ＝２℃／Ａ−Ｔ塩基対＋４℃／Ｇ−Ｃ塩基対
によって得られる。
【００６７】
＊６Ｘクエン酸ナトリウム塩（ＳＳＣ）中のナトリウムイオン濃度は１Ｍである。Ｓｕｇｇｓら、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｕｓｉｎｇ  Ｐｕｒｉｆｉｅｄ  Ｇｅｎｅｓ，ｐ．６８３，ＢｒｏｗｎとＦｏｘ（編集）（１９８１）参照。
【００６８】
オリゴヌクレオチドについての高ストリンジェンシー洗浄条件は、通常、６Ｘ  ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中、そのオリゴヌクレオチドのＴｍより０℃から５℃低い温度である。
【００６９】
もう１つの実施態様では、関連核酸分子は、配列番号１、配列番号３、又は配列番号９に示すヌクレオチド配列に約７０％同一であるヌクレオチドを含む又はそれから成るか、あるいは配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドに約７０％同一であるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む又は本質的にそれから成る。好ましい実施態様では、該ヌクレオチド配列は、配列番号１、配列番号３、又は配列番号９に示すヌクレオチド配列に約７５％、又は約８０％、又は約８５％、又は約９０％、又は約９５、９６、９７、９８、又は９９％同一であるか、あるいは該ヌクレオチド配列は、配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチド配列に約７５％、又は約８０％、又は約８５％、又は約９０％、又は約９５、９６、９７、９８、又は９９％同一であるポリペプチドをコードする。
【００７０】
核酸配列の相違は、配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０のアミノ酸配列に対してアミノ酸配列の保存的及び／又は非保存的修飾をもたらしうる。
【００７１】
配列番号２（及び配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０）のアミノ酸配列への保存的修飾（及びそのコードするヌクレオチドへの対応する修飾）は、天然に生じるＩＬ−１７様ポリペプチドのものと類似した機能的及び化学的特徴を有するＩＬ−１７様ポリペプチドを生じる。これに対し、ＩＬ−１７様ポリペプチドの機能的及び／又は化学的特徴の実質的な修飾は、（ａ）例えばシート又はらせんコンフォメーションとしての、置換領域内の分子骨格の構造、（ｂ）標的部位における分子の電荷又は疎水性、あるいは（ｃ）側鎖のバルク、を維持することへの影響が有意に異なる、配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０のアミノ酸配列内の置換を選択することによって実現されうる。
【００７２】
例えば、「保存的アミノ酸置換」は、その位置のアミノ酸残基の極性又は電荷にほとんどあるいは全く影響を及ぼさないような、非天然残基による天然アミノ酸残基の置換を含みうる。さらに、該ポリペプチド内の天然残基はまた、「アラニン走査突然変異誘発」に関してこれまでに記述されているように、アラニンによっても置換されうる。
【００７３】
所望のアミノ酸置換（保存的又は非保存的のいずれか）は、そのような置換を所望する時点で当業者によって決定されうる。例えば、アミノ酸置換は、ＡＧＰ−ＸＸＸポリペプチドの重要な残基を特定するため、あるいはここで述べるＡＧＰ−ＸＸＸポリペプチドの親和性を高める又は低下させるために使用できる。
【００７４】
アミノ酸置換の例を表Ｉに示す。
【００７５】
【表１】
2005525094.tif 000002
【００７６】
保存的アミノ酸置換はまた、典型的には生物系における合成によってではなく化学的ペプチド合成によって組み込まれる、非天然に生じるアミノ酸残基を含む。これらは、ペプチドミメティックス、及びアミノ酸部分の他の逆転形態を含む。
【００７７】
天然に生じる残基は、共通の側鎖特性に基づくクラスに分類しうる：
１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
５）鎖の方向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；及び
６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【００７８】
例えば、非保存的置換は、これらのクラスの１つの成員と別のクラスからの成員との交換を含みうる。そのような置換された残基は、非ヒトＩＬ−１７様ポリペプチドオーソローグと相同なヒトＡＧＰ−ＩＬ−１７様ポリペプチドの領域内、又はその分子の非相同領域内に導入しうる。
【００７９】
そのような変更を行う場合は、アミノ酸の疎水親水指数（ｈｙｄｒｏｐａｔｈｉｃ  ｉｎｄｅｘ）を考慮しうる。各々のアミノ酸は、その疎水性と電荷特性に基づいて疎水親水指数を割り当てられている。それらは次の通りである：イソロイシン（＋４．５）；バリン（＋４．２）；ロイシン（＋３．８）；フェニルアラニン（＋２．８）；システイン／シスチン（＋２．５）；メチオニン（＋１．９）；アラニン（＋１．８）；グリシン（−０．４）；トレオニン（−０．７）；セリン（−０．８）；トリプトファン（−０．９）；チロシン（−１．３）；プロリン（−１．６）；ヒスチジン（−３．２）；グルタミン酸（−３．５）；グルタミン（−３．５）；アスパラギン酸（−３．５）；アスパラギン（−３．５）；リシン（−３．９）；及びアルギニン（−４．５）。
【００８０】
タンパク質に相互作用性生物学的機能を付与する上でのアミノ酸の疎水親水指数の重要性はこの技術分野において了解されている。Ｋｙｔｅら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１５７：１０５−１３１（１９８２）。一部のアミノ酸は類似した疎水親水指数又はスコアを有する他のアミノ酸に置換されて、それでもなお同様の生物活性を保持しうることが知られている。疎水親水指数に基づいて変更を行う場合、疎水親水指数が±２以内であるアミノ酸の置換が好ましく、±１以内であるものが特に好ましく、±０．５以内であるものがさらに一層好ましい。
【００８１】
同様のアミノ酸の置換は、特に本発明の場合のように、それによって創出される生物学的・機能的に等しいタンパク質又はペプチドを免疫学的実施態様において使用することが意図される場合、親水性に基づいて有効に実施されうることもこの技術分野において了解されている。その隣接アミノ酸の親水性によって支配される、他の最大局所平均親水性は、その免疫原性と抗原性、すなわち該タンパク質の生物学的性質と相関する。
【００８２】
下記の親水性値がこれらのアミノ酸残基に割り当てられている：アルギニン（＋３．０）；リシン（＋３．０）；アスパラギン酸（＋３．０±１）；グルタミン酸（＋３．０±１）；セリン（＋０．３）；アスパラギン（＋０．２）；グルタミン酸（＋０．２）；グリシン（０）；トレオニン（−０．４）；プロリン（−０．５±１）；アラニン（−０．５）；ヒスチジン（−０．５）；システイン（−１．０）；メチオニン（−１．３）；バリン（−１．５）；ロイシン（−１．８）；イソロイシン（−１．８）；チロシン（−２．３）；フェニルアラニン（−２．５）；及びトリプトファン（−３．４）。類似の親水性値に基づいて変更を行う場合、その親水性値が±２以内であるアミノ酸の置換が好ましく、±１以内であるものが特に好ましく、±０．５以内であるものがさらに一層好ましい。また、親水性値に基づいて一次アミノ酸配列からエピトープを特定しうる。これらの領域は「エピトープコア領域」とも称される。
【００８３】
所望のアミノ酸置換（保存的又は非保存的のいずれか）は、そのような置換を所望する時点で当業者によって決定されうる。例えば、アミノ酸置換は、ＩＬ−１７様ポリペプチドの重要な残基を特定するため、あるいはここで述べるＩＬ−１７様ポリペプチドの親和性を高める又は低下させるために使用できる。
【００８４】
アミノ酸置換の例を表Ｉに示す。
【００８５】
【表２】
2005525094.tif 000003
【００８６】
当業者は、周知の手法を用いて配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すポリペプチドの適切な変異体を決定することができる。活性を破壊せずに変更しうる分子の適切な領域を特定するために、当業者は、活性にとって重要でないと考えられる領域を標的しうる。例えば、同じ種又は他の種からの類似活性を有する類似ポリペプチドが既知であるとき、当業者はＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列をそのような類似ポリペプチドと比較しうる。そのような比較により、類似ポリペプチド間で保存される該分子の残基及び部分を特定することができる。そのような類似ポリペプチドと比較して保存されないＩＬ−１７様ポリペプチドの領域内の変化は、ＩＬ−１７様ポリペプチドの生物活性及び／又は構造に有害な影響を及ぼす可能性が低いことは認識される。当業者はまた、活性を保持しながら（保存的アミノ酸残基置換）、天然に生じる残基を化学的に類似のアミノ酸で置換しうる。それ故、生物活性又は構造にとって重要でありうる領域でも、生物活性を破壊せずに又はポリペプチド構造に有害な影響を及ぼさずに保存的アミノ酸置換に供しうる。
【００８７】
さらに、当業者は、活性又は構造にとって重要な類似ポリペプチド内の残基を特定する構造−機能試験を検討することができる。そのような比較に鑑みて、類似ポリペプチド内の活性又は構造にとって重要なアミノ酸残基に対応するＩＬ−１７様ポリペプチド内のアミノ酸残基の重要性を予測することができる。当業者は、ＩＬ−１７様ポリペプチドのそのような予測上の重要アミノ酸残基を化学的に類似のアミノ酸で置換することを選択しうる。
【００８８】
当業者はまた、類似ポリペプチドにおける構造に関連付けて三次元構造及びアミノ酸配列を分析することができる。そのような情報に鑑みて、当業者は、その三次元構造に関するＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸残基のアラインメントを予測しうる。当業者は、タンパク質の表面上にあると予測されるアミノ酸残基に根本的な変更を行わないことを選択しうる。そのような残基は他の分子との重要な相互作用に関与すると考えられるからである。さらに、当業者は、各々の所望アミノ酸残基に１個のアミノ酸置換を含む被験変異体を作製しうる。次にそれらの変異体を、当業者に既知の活性検定を使用してスクリーニングすることができる。そのような変異体は、適切な変異体についての情報を収集するために使用できる。例えば、特定アミノ酸残基への変更が活性の破壊、活性の望ましくない低下、又は不適切な活性を生じることを発見した場合、そのような変化を有する変異体は回避される。言い換えると、そのような常用実験から収集した情報に基づいて、当業者は、単独又は他の突然変異と組み合わせたさらなる置換を回避すべきであるアミノ酸を容易に決定することができる。
【００８９】
多くの学術公表文献が二次構造の予測を取り上げてきた。Ｍｏｕｌｔ  Ｊ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．，７（４）：４２２−４２７（１９９６）；Ｃｈｏｕら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１３（２）：２２２−２４５（１９７４）；Ｃｈｏｕら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１１３（２）：２１１−２２２（１９７４）；Ｃｈｏｕら、Ａｄｖ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．Ｒｅｌａｔ．Ａｒｅａｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，４７：４５−１４８（１９７８）；Ｃｈｏｕら、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，４７：２５１−２７６及びＣｈｏｕら、Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．，２６：３６７−３８４（１９７９）参照。さらに、二次構造を予測する助けとなるコンピュータプログラムが現在使用可能である。二次構造を予測する１つの方法は、ホモロジーモデリングに基づく。例えば、３０％以上の配列同一性、又は４０％以上の類似性を有する２個のポリペプチド又はタンパク質は、しばしば類似した構造トポロジーを有する。タンパク質構造データベース（ＰＤＢ）の最近の成長は、ポリペプチド又はタンパク質の構造内の折りたたみの潜在的な数を含む、二次構造の高い予測能力を提供した。Ｈｏｌｍら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．，２７（１）：２４４−２４７（１９９９）参照。所与のポリペプチド又はタンパク質内には限られた数の折りたたみが存在すること、及びひとたび重要な数の構造が解明されれば、構造予測の精度は劇的に上昇することが示唆された（Ｂｒｅｎｎｅｒら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，７（３）：３６９−３７６（１９９７））。
【００９０】
二次構造を予測するさらなる方法は、「スレッディング法（ｔｈｒｅａｄｉｎｇ）」（Ｊｏｎｅｓ，Ｄ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，７（３）：３７７−８７（１９９７）；Ｓｉｐｐｌら、Ｓｔｒｃｔｕｒｅ，４（１）：１５−９（１９９６））、「プロフィール解析（ｐｒｏｆｉｌｅ  ａｎａｌｙｓｉｓ）」（Ｂｏｗｉｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５３：１６４−１７０（１９９１）；Ｇｒｉｂｓｋｏｖら、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍ．，１８３：１４６−１５９（１９９０）；Ｇｒｉｂｓｋｏｖら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，８４（１３）：４３５５−４３５８（１９８７））、及び「進化連鎖（ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ  ｌｉｎｋａｇｅ）」（Ｈｏｌｍ、前出（１９９９）、及びＢｒｅｎｎｅｒ、前出（１９９７）参照）を含む。
【００９１】
本発明のＩＬ−１７様ポリペプチド類似体は、ＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列を関連ファミリーの成員と比較することによって決定できる。ＩＬ−１７様ポリペプチド関連ファミリー成員の例は、ヒトＩＬ−１７（配列番号５）、ヒトＩＬ−２０（配列番号６）、ヒトＩＬ−１７Ｂ（配列番号７）及びヒトＩＬ−１７Ｃ（配列番号８）である。この比較は、パイルアップ（Ｐｉｌｅｕｐ）アラインメント（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  ＧＣＧ  Ｐｒｏｇｒａｍ  Ｐａｃｋａｇｅ）又は保存又は非保存領域内の多数のファミリー成員との等価（重複）比較を用いることによって実施できる。
【００９２】
図５に示すように、ヒトＩＬ−１７様ポリペプチドの予測アミノ酸配列（配列番号２のアミノ酸３７−１６０である）は既知のヒトＩＬ−１７Ｂ（配列番号７）と整列される。他のＩＬ−１７様ポリペプチド類似体は、これら又は当業者に既知の他の方法を用いて決定できる。これらの重複配列は、さらなるＩＬ−１７様類似体を生じる保存的及び非保存的アミノ酸置換についての手引きを提供する。これらのアミノ酸置換が天然に生じる又は非天然に生じるアミノ酸から構成されうることは認識される。例えば、図５に示すように、関連ファミリー成員とのアラインメントは、潜在的ＩＬ−１７様類似体が、Ｇｌｎ残基で置換された配列番号２の６７位（図５の１０１位）のＡｓｎ残基、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ又はＡｓｎ残基で置換された配列番号２の６９位（図５の１０３位）のＡｒｇ残基、及び／又はＳｅｒ又はＡｌａ残基で置換された配列番号２の９４位（図５の１２８位）のＣｙｓ残基を有しうることを示唆する。さらに、潜在的ＩＬ−１７様類似体は、Ａｌａ又はＳｅｒ残基で置換された配列番号２の９６位（図５の１３０位）のＣｙｓ残基、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ａｌａ又はノルロイシン残基で置換された配列番号２の１０１位（図５の１３２位）のＶａｌ残基、Ｓｅｒ残基で置換された配列番号２の１０４位（図５の１３８位）のＴｈｒ残基、Ｓｅｒ又はＡｌａ残基で置換された配列番号２の１２９位（図５の１６３位）のＣｙｓ残基、及び／又はＳｅｒ又はＡｌａ残基で置換された配列番号２の１４０位（図５の１７４位）のＣｙｓ残基を有しうる。
【００９３】
好ましいＩＬ−１７様ポリペプチド変異体は、配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すアミノ酸配列と比較してグリコシル化部位の数及び／又は種類が変化したグリコシル化変異体を含む。１つの実施態様では、ＩＬ−１７様ポリペプチド変異体は、配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すアミノ酸配列よりも多い又は少ない数のＮ結合グリコシル化部位を含む。Ｎ結合グリコシル化部位は、配列：Ａｓｎ−Ｘ−Ｓｅｒ又はＡｓｎ−Ｘ−Ｔｈｒ［式中、Ｘで表わされるアミノ酸残基はプロリン以外のいずれのアミノ酸残基でもよい］を特徴とする。この配列を創造するためのアミノ酸残基の置換は、Ｎ結合糖鎖の付加のための潜在的な新しい部位を提供する。あるいは、この配列を排除する置換は、既存のＮ結合糖鎖を除去する。また、１以上のＮ結合グリコシル化部位（典型的には天然に生じるもの）が排除され、及び１以上の新しいＮ結合部位が創造される、Ｎ結合糖鎖の再編成も提供される。さらなる好ましいＩＬ−１７様変異体は、配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すアミノ酸配列と比較して１個以上のシステイン残基が欠失している又は別のアミノ酸（例えばセリン）に置換されている、システイン変異体を含む。システイン変異体は、不溶性封入体の単離後のように、ＩＬ−１７様ポリペプチドを生物学的に活性なコンフォメーションに再生するときに有用である。システイン変異体は一般に天然タンパク質よりも少ないシステイン残基を有し、典型的には、対合しないシステインから生じる相互作用を最小限に抑えるために同じ数を有する。
【００９４】
さらに、配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０のアミノ酸配列を含むポリペプチド、又はＩＬ−１７様ポリペプチド変異体は、ホモ二量体を形成するために相同ポリペプチドに、又はヘテロ二量体を形成するために非相同ポリペプチドに融合しうる。非相同ペプチド及びポリペプチドは、ＩＬ−１７様融合ポリペプチドの検出及び／又は単離を可能にするエピトープ；細胞外ドメインなどの膜貫通受容体タンパク質又はその部分、又は膜貫通及び細胞内ドメイン；膜貫通受容体タンパク質に結合するリガンド又はその部分；触媒的に活性な酵素又はその部分；ロイシンジッパードメインなどの、オリゴマー化を促進するポリペプチド又はペプチド；免疫グロブリン定常領域などの、安定性を高めるポリペプチド又はペプチド；及び配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すアミノ酸配列を含むポリペプチド、又はＩＬ−１７様ポリペプチド変異体とは異なる治療作用を有するポリペプチドを含むが、これらに限定されない。
【００９５】
融合は、配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０に示すアミノ酸配列を含むポリペプチド、又はＩＬ−１７様ポリペプチド変異体のアミノ末端又はカルボキシ末端のいずれかで実施することができる。融合は、リンカー又はアダプター分子を伴わずに直接であるか、又はリンカー又はアダプター分子を使用して間接的でありうる。リンカー又はアダプター分子は、１個以上のアミノ酸残基、典型的には約２０個から約５０個のアミノ酸残基でありうる。リンカー又はアダプター分子はまた、融合部分の分離を可能にするＤＮＡ制限エンドヌクレアーゼ又はプロテアーゼのための開裂部位を伴って設計しうる。ひとたび構築されれば、ここで述べる方法に従って融合ポリペプチドを誘導体化しうることは認識される。
【００９６】
本発明のさらなる実施態様では、配列番号２のアミノ酸配列を含むポリペプチド又はＩＬ−１７様ポリペプチド変異体を、ヒトＩｇＧのＦｃ領域の１以上のドメインに融合する。抗体は、２つの機能的に独立した部分、すなわち抗原に結合する「Ｆａｂ」として知られる可変ドメインと、補体の活性化及び食細胞による攻撃などのエフェクター機能にかかわる「Ｆｃ」として知られる定常ドメインを含む。Ｆｃは長い血清半減期を有するのに対し、Ｆａｂは短命である。Ｃａｐｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３３７：５２５−３１（１９８９）。治療的タンパク質と共に構築するとき、Ｆｃドメインはより長い半減期を提供することができる、あるいはＦｃ受容体結合、プロテインＡ結合、補体固定、及びおそらくは胎盤輸送などの機能を組み込むことができる。同上。表ＩＩは、この技術分野で既知のいくつかのＦｃ融合の使用を要約している。
【００９７】
【表３】
2005525094.tif 000004
【００９８】
１つの実施例では、ヒトＩｇＧヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３領域の全部又は一部を、当業者に既知の方法を用いてＩＬ−１７様ポリペプチドのＮ末端又はＣ末端のいずれかに融合しうる。生じたＩＬ−１７様融合ポリペプチドを、プロテインＡアフィニティーカラムを使用して精製しうる。Ｆｃ領域に融合したペプチド及びタンパク質は、インビボで非融合対応物よりも実質的に長い半減期を示すことが認められている。また、Ｆｃ領域への融合は融合ポリペプチドの二量体化／多量体化を可能にする。該Ｆｃ領域は、天然に生じるＦｃ領域であってもよく、又は治療上の品質、循環時間などのある種の特性を改善する、凝集を低下させる等のように変化していてもよい。
【００９９】
関連核酸分子及びポリペプチドの同一性及び類似性は、既知の方法によって容易に算定することができる。そのような方法は、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．編集、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８８）；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．編集、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９３）；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ，第１部、Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．とＧｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．編集、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ（１９９４）；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（１９８７）；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ，Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．とＤｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．編集、Ｍ．Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９１）；及びＣａｒｉｌｌｏら、ＳＩＡＭ  Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈ．，４８：１０７３（１９８８）に述べられているものを含むが、これらに限定されない。
【０１００】
同一性及び／又は類似性を決定するための好ましい方法は、検討する配列間に最大の対合を与えるように設計する。同一性及び類似性を決定する方法は、公的に使用可能なコンピュータプログラムに述べられている。２つの配列間の同一性及び類似性を決定するための好ましいコンピュータプログラム法は、ＧＡＰ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．，１２：３８７（１９８４）；Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、及びＦＡＳＴＡ（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５：４０３−４１０（１９９０））を含む、ＧＣＧプログラムパッケージを含むが、これらに限定されない。ＢＬＡＳＴＸプログラムは、ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）及び他のソース（ＢＬＡＳＴ  Ｍａｎｕａｌ，Ａｌｔｓｃｈｕｌら、ＮＣＢ／ＮＬＭ／ＮＩＨ  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ  ２０８９４；Ａｌｔｓｃｈｕｌら、前出）から公的に入手可能である。周知のスミス−ウォーターマンアルゴリズムも同一性を決定するために使用しうる。
【０１０１】
２個のアミノ酸配列を整列するためのある種のアライメント体系は、その２個の配列の短い領域だけのマッチングを生じることがあり、この小さな整列領域は、その２つの完全長配列の間に有意の関係がない場合でも、非常に高い配列同一性を有しうる。従って、好ましい実施態様では、選択するアラインメント方法（ＧＡＰプログラム）は、標的ポリペプチドの少なくとも５０個の連続アミノ酸にわたるアラインメントを生じさせる。
【０１０２】
例えば、コンピュータアルゴリズムＧＡＰ（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を使用して、パーセント配列同一性を決定すべき２個のポリペプチドを、それらのそれぞれのアミノ酸の最適マッチング（アルゴリズムによって決定される、「対合スパン」）のために整列する。ギャップオープンペナルティー（３×平均対角線として算定される；「平均対角線」は、使用する比較マトリックスの対角線の平均である；「対角線」は、個々の比較マトリックスによって各々の完全アミノ酸対合に割り当てられるスコア又は数である）及びギャップ伸長ペナルティー（通常ギャップオープンペナルティーの１／１０）、ならびにＰＡＭ２５０又はＢＬＯＳＵＭ  ６２などの比較マトリックスがこのアルゴリズムと共に使用される。標準比較マトリックス（ＰＡＭ  ２５０比較マトリックスについてはＤａｙｈｏｆｆら、Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，第５巻、補遺３５（３）（１９７８）；ＢＬＯＳＵＭ  ６２比較マトリックスについてはＨｅｎｉｋｏｆｆら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：１０９１５−１０９１９（１９９２）参照）もこのアルゴリズムによって使用される。
【０１０３】
ポリペプチド配列比較のための好ましいパラメータは次のものを含む：
アルゴリズム：Ｎｅｅｄｌｅｍａｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，４８：４４３−４５３（１９７０）；
比較マトリックス：Ｈｅｎｉｋｏｆｆら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：１０９１５−１０９１９、前出（１９９２）からのＢＬＯＳＵＭ  ６２；
ギャップペナルティー：１２
ギャップ長ペナルティー：４
類似性の閾値：０
ＧＡＰプログラムは上記のパラメータに関して有用である。上記のパラメータは、ＧＡＰアルゴリズムを使用したポリペプチド比較のためのデフォールトパラメータ（末端ギャップについてのペナルティーなし）である。
【０１０４】
核酸分子配列比較のための好ましいパラメータは次のものを含む：
アルゴリズム：Ｎｅｅｄｌｅｍａｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，４８：４４３−４５３、前出（１９７０）；
比較マトリックス：対合＝＋１０、不正対合＝０
ギャップペナルティー：５０
ギャップ長ペナルティー：３
ＧＡＰプログラムは上記のパラメータに関して有用である。上記のパラメータは、核酸分子比較のためのデフォールトパラメータである。
【０１０５】
ｔｈｅ  Ｐｒｏｇｒａｍ  Ｍａｎｕａｌ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｐａｃｋａｇｅ，バージョン９、１９９７年９月に示されているものを含む、他の例示的なアルゴリズム、ギャップオープンペナルティー、ギャップ伸長ペナルティー、比較マトリックス、類似性の閾値等も使用しうる。行うべき個々の選択は当業者には明白であり、ＤＮＡ対ＤＮＡ、タンパク質対タンパク質、タンパク質対ＤＮＡなどの行うべき特定の比較、及び付加的に、その配列が所与の配列対の間であるか（この場合はＧＡＰ又はＢｅｓｔＦｉｔが一般に好ましい）、又は１つの配列と配列の大きなデータベースとの間であるか（この場合はＦＡＳＴＡ又はＢＬＡＳＴＡが好ましい）に依存する。
【０１０６】
合成
ここで述べる核酸及びポリペプチド分子が、組換え及び他の手段によって生産されうることは当業者に認識される。
【０１０７】
核酸分子
該核酸分子は、ＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、限定を伴わずに、化学合成、ｃＤＮＡ又はゲノムライブラリースクリーニング、発現ライブラリースクリーニング及び／又はｃＤＮＡのＰＣＲ増幅を含む様々な方法で容易に入手することができる。
【０１０８】
ここで使用する組換えＤＮＡ方法は、一般にＳａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８９）、及び／又はＡｕｓｕｂｅｌら編集、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ  Ｉｎｃ．ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９４）の中に述べられているものである。本発明は、ここで述べる核酸分子及びそのような分子を得るための方法を提供する。
【０１０９】
ＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列をコードする遺伝子が１つの種から特定された場合、その遺伝子の全部又は一部をプローブとして使用して、オーソローグ又は同じ種からの関連遺伝子を特定しうる。それらのプローブ又はプライマーは、ＩＬ−１７様ポリペプチドを発現すると考えられる様々な組織ソースからのｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングするために使用しうる。さらに、配列番号１、配列番号３、又は配列番号９に示す配列を有する核酸分子の一部又は全部を使用して、ＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列をコードする遺伝子を特定し、単離するためにゲノムライブラリーをスクリーニングしうる。典型的には、スクリーニングから得られる偽陽性の数を最小限に抑えるために、スクリーニングには中又は高ストリンジェンシー条件を使用する。
【０１１０】
ＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列をコードする核酸分子はまた、発現されるタンパク質の性質に基づく陽性クローンの検出を用いた発現クローニングによっても特定しうる。典型的には、宿主細胞表面で発現され、展示されるクローン化タンパク質に抗体又は他の結合パートナー（例えば受容体又はリガンド）を結合することによって核酸ライブラリーをスクリーニングする。上記抗体又は結合パートナーは、所望クローンを発現する細胞を特定するために検出可能標識で修飾される。
【０１１１】
下記に述べる説明に従って実施される組換え発現手法は、これらのポリヌクレオチドを生産し、そのコードされるポリペプチドを発現するために使用しうる。例えば、ＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列をコードする核酸配列を適切なベクターに挿入することにより、当業者は大量の所望ヌクレオチド配列を容易に生産できる。次にそれらの配列を使用して検出プローブ又は増幅プライマーを作製することができる。あるいは、ＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを発現ベクターに挿入することができる。その発現ベクターを適切な宿主に導入することにより、コードされるＩＬ−１７様ポリペプチドを大量に生産しうる。
【０１１２】
適切な核酸配列を得るためのもう１つの方法はポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）である。この方法では、逆転写酵素を使用してポリ（Ａ）＋ＲＮＡ又は全ＲＮＡからｃＤＮＡを調製する。次に、典型的にはＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列をコードするｃＤＮＡ（オリゴヌクレオチド）の２つの別々の領域に相補的な２個のプライマーをＴａｑポリメラーゼなどのポリメラーゼと共にｃＤＮＡに付加し、そのポリメラーゼが２個のプライマーの間のｃＤＮＡ領域を増幅する。
【０１１３】
ＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列をコードする核酸分子を作製するもう１つの手段は、Ｅｎｇｅｌｓら、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．，２８：７１６−７３４（１９８９）によって述べられているような、当業者に周知の方法を用いた化学合成である。これらの方法は、中でも特に、核酸合成のためのホスホトリエステル、ホスホルアミダイト、及びＨ−ホスホネート法を含む。そのような化学合成のための好ましい方法は、標準ホスホルアミダイト化学を使用したポリマー支持合成法（ｐｏｌｙｍｅｒ−ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）である。典型的には、ＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列をコードするＤＮＡは数百ヌクレオチドの長さとなる。これらの方法を用いて約１００ヌクレオチドより大きな核酸をいくつかのフラグメントとして合成することができる。次にそれらのフラグメントを連結して、ＩＬ−１７様ポリペプチドの完全長ヌクレオチド配列を形成することができる。通常、ポリペプチドのアミノ末端をコードするＤＮＡフラグメントは、メチオニン残基をコードするＡＴＧを有する。このメチオニンは、宿主細胞において産生されるポリペプチドがその細胞から分泌されるように設計されるかどうかに依存して、成熟形態のＩＬ−１７様ポリペプチド上に存在してもよく又は存在しなくてもよい。当業者に既知の他の方法も使用しうる。
【０１１４】
一部の実施態様では、核酸変異体は、所与の宿主細胞におけるＩＬ−１７様ポリペプチドの最適発現のために変化したコドンを含む。特定のコドンの変化は、発現のために選択されるＩＬ−１７様ポリペプチド及び宿主細胞に依存する。そのような「コドンの最適化」は様々な方法によって、例えば所与の宿主細胞において高度に発現される遺伝子での使用のために好ましいコドンを選択することによって実施できる。高発現細菌遺伝子のコドン選択性についての「Ｅｃｏｈｉｇｈ．ｃｏｄ」のようなコドン出現頻度表を組み込んだコンピュータアルゴリズムが使用でき、ｔｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｐａｃｋａｇｅ  Ｖｅｒｓｉｏｎ  ９．０，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩによって提供される。他の有用なコドン出現頻度表は、「Ｃｅｌｅｇａｎｓ＿ｈｉｇｈ．ｃｏｄ」、「Ｃｅｌｅｇａｎｓ＿ｌｏｗ．ｃｏｄ」、「Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ＿ｈｉｇｈ．ｃｏｄ」、「Ｈｕｍａｎ＿ｈｉｇｈ．ｃｏｄ」、「Ｍａｉｚｅ＿ｈｉｇｈ．ｃｏｄ」、及び「Ｙｅａｓｔ＿ｈｉｇｈ．ｃｏｄ」を含む。
【０１１５】
ベクター及び宿主細胞
ＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列をコードする核酸分子は、標準連結手法を用いて適切な発現ベクターに挿入しうる。該ベクターは、使用する個々の宿主細胞において機能性であるように選択される（すなわち、該ベクターは、遺伝子の増幅及び／又は遺伝子の発現が起こりうるように宿主細胞機構と適合性である）。ＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列をコードする核酸分子は、原核生物、酵母、昆虫（バキュロウイルス系）、及び／又は真核生物宿主細胞において増幅／発現されうる。宿主細胞の選択は、一部には、ＩＬ−１７様ポリペプチドが翻訳後修飾（例えばグリコシル化及び／又はリン酸化）されるかどうかに依存する。翻訳後修飾される場合は、酵母、昆虫、又は哺乳類宿主細胞が好ましい。発現ベクターの総説については、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．，１８５巻、Ｄ．Ｖ．Ｇｏｅｄｄｅｌ編集、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ（１９９０）参照。
【０１１６】
典型的には、上記宿主細胞のいずれかで使用される発現ベクターは、プラスミドの維持のため及び外来性ヌクレオチド配列のクローニングと発現のための配列を含む。一部の実施態様では集合的に「隣接配列（フランキング配列）」と称されるそのような配列は、典型的には次のヌクレオチド配列の１つ以上を含む：プロモーター、１つ以上のエンハンサー配列、複製起点、転写終結配列、供与及び受容スプライス部位を含む完全なイントロン配列、ポリペプチド分泌のためのリーダー配列をコードする配列、リボソーム結合部位、ポリアデニル化配列、発現すべきポリペプチドをコードする核酸を挿入するためのポリリンカー領域、及び選択マーカーエレメント。これらの配列の各々を下記で論じる。
【０１１７】
場合により、該ベクターは「タグ」コード配列、すなわちＩＬ−１７様ポリペプチドコード配列の５’又は３’末端に位置するオリゴヌクレオチド分子を含んでいてもよく、そのオリゴヌクレオチド配列は、ポリＨｉｓ（ヘキサＨｉｓなど）、あるいは市販の抗体が存在するＦＬＡＧ、ＨＡ（赤血球凝集素インフルエンザウイルス）又はｍｙｃなどのもう１つ別の「タグ」をコードする。このタグは、典型的にはポリペプチドの発現のときにそのポリペプチドに融合され、宿主細胞からのＩＬ−１７様ポリペプチドのアフィニティー精製のための手段として使用できる。アフィニティー精製は、例えば、そのタグに対する抗体をアフィニティーマトリックスとして使用するカラムクロマトグラフィーによって実施できる。場合により、該タグはその後、開裂のためにある種のペプチダーゼを使用することなどの様々な手段によって、精製ＩＬ−１７様ポリペプチドから除去することができる。
【０１１８】
隣接配列は、相同（すなわち宿主細胞と同じ種及び／又は菌株から）、異種（すなわち宿主細胞の種又は菌株以外の種から）、ハイブリッド（すなわち２つ以上のソースからの隣接配列の組合せ）又は合成でありうるか、あるいは隣接配列は、通常ＩＬ−１７様ポリペプチド発現を調節するように機能する天然配列でありうる。そこで、隣接配列のソースは、該隣接配列が宿主細胞機能において機能性であり、宿主細胞機構によって活性化されうることを条件として、原核又は真核生物、脊椎又は無脊椎動物、あるいは植物でありうる。
【０１１９】
本発明のベクターにおいて有用な隣接配列は、この技術分野において周知のいくつかの方法のいずれかによって入手しうる。典型的には、ＩＬ−１７様遺伝子隣接配列以外のここで有用な隣接配列をマッピングによって及び／又は制限エンドヌクレアーゼ消化によってあらかじめ特定しておき、その後適切な制限エンドヌクレアーゼによって適切な組織ソースから単離することができる。一部の場合に、隣接配列の完全なヌクレオチド配列がわかっていることがある。この場合は、核酸合成又はクローニングについてここで述べる方法を用いて該隣接配列を合成しうる。
【０１２０】
隣接配列の全部又は一部だけが既知である場合、ＰＣＲを用いて、及び／又は適切なオリゴヌクレオチド及び／又は同じ種又は別の種からの隣接配列フラグメントでゲノムライブラリーをスクリーニングすることによって該隣接配列を入手しうる。隣接配列が既知でない場合は、隣接配列を含むＤＮＡのフラグメントを、例えばコード配列又はさらには別の遺伝子を含みうるＤＮＡのより大きな断片から単離しうる。単離は、適切なＤＮＡフラグメントを生じる制限エンドヌクレアーゼ消化、及びそれに続く、アガロースゲル精製、Ｑｉａｇｅｎ（登録商標）カラムクロマトグラフィー（Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ，ＣＡ）、又は当業者に既知の他の方法を用いた単離によって実施しうる。この目的を達成するための適切な酵素の選択は当業者には容易に明白である。
【０１２１】
複製起点は、典型的には市販のものを購入した原核生物発現ベクターの一部であり、複製起点は宿主細胞におけるベクターの増幅を助ける。一定コピー数までのベクターの増幅は、一部の場合には、ＩＬ−１７様ポリペプチドの最適発現にとって重要である。選択ベクターが複製起点部位を含まない場合は、既知の配列に基づいて合成し、該ベクターに連結しうる。例えば、プラスミドｐＢＲ３２２（製品番号３０３−３ｓ、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）からの複製起点は大部分のグラム陰性菌に適しており、様々な起点（例えばＳＶ４０、ポリオーマ、アデノウイルス、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）あるいはＨＰＶ又はＢＰＶなどのパピローマウイルス）が哺乳類細胞におけるクローニングベクターにとって有用である。一般に、複製起点成分は哺乳類発現ベクターにとって必要ではない（例えば、ＳＶ４０起点はしばしば、初期プロモーターを含むというだけの理由で使用される）。
【０１２２】
転写終結配列は、典型的にはポリペプチドコード領域の末端の３’側に位置し、転写を終結する働きをする。通常、原核細胞における転写終結配列は、Ｇ−Ｃに富むフラグメントとそれに続くポリＴ配列である。その配列はライブラリーから容易にクローニングされるか、さらにはベクターの一部として市販のものを購入しうるが、ここで述べるような核酸合成のための方法を用いて容易に合成することもできる。
【０１２３】
選択マーカー遺伝子エレメントは、選択培地で成長する宿主細胞の生存と増殖のために必要なタンパク質をコードする。典型的な選択マーカー遺伝子は、（ａ）抗生物質又は他の毒素、例えば原核生物宿主細胞についてはアンピシリン、テトラサイクリン、又はカナマイシンに対する耐性を付与する、（ｂ）細胞の栄養要求欠損を補う、又は（ｃ）複合培地からは得られない決定的に重要な栄養素を供給する、タンパク質をコードする。好ましい選択マーカーは、カナマイシン耐性遺伝子、アンピシリン耐性遺伝子、及びテトラサイクリン耐性遺伝子である。ネオマイシン耐性遺伝子も、原核及び真核生物宿主細胞における選択のために使用しうる。
【０１２４】
他の選択遺伝子も、発現される遺伝子を増幅するために使用しうる。増幅は、増殖にとって決定的に重要なタンパク質の産生のためにより必要とされる遺伝子が、組換え細胞の連続する世代の染色体内で縦列反復される過程である。哺乳類細胞の適切な選択マーカーの例は、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）及びチミジンキナーゼを含む。哺乳類細胞形質転換体を、その形質転換体だけがベクター内に存在する選択遺伝子によって独自に適応して生存する選択圧下におく。培地中の選択剤の濃度を連続的に変化させ、それによって選択遺伝子とＩＬ−１７様ポリペプチドをコードするＤＮＡの両方の増幅を導く条件下で形質転換細胞を培養することによって選択圧を課す。その結果として、増幅されたＤＮＡから高い量のＩＬ−１７様ポリペプチドが合成される。
【０１２５】
リボソーム結合部位は、通常ｍＲＮＡの翻訳開始に必要であり、シャイン−ダルガーノ配列（原核生物）又はコザック配列（真核生物）を特徴とする。このエレメントは、典型的には発現されるＩＬ−１７様ポリペプチドのプロモーターの３’側、及びコード配列の５’側に位置する。シャイン−ダルガーノ配列は多様であるが、典型的にはポリプリン（すなわち高いＡ−Ｇ含量を有する）である。多くのシャイン−ダルガーノ配列が特定されており、それらの各々はここで述べる方法を用いて容易に合成でき、原核生物ベクターにおいて使用できる。
【０１２６】
リーダー又はシグナル配列は、ＩＬ−１７様ポリペプチドが宿主細胞から外に出ることを指令するために使用しうる。典型的には、シグナル配列をコードするヌクレオチド配列は、ＩＬ−１７様核酸分子のコード領域内、あるいはＩＬ−１７様ポリペプチドコード領域の５’末端に直接位置する。多くのシグナル配列が特定されており、選択宿主細胞において機能性であるもののいずれかをＩＬ−１７様核酸分子と共に使用しうる。それ故、シグナル配列はＩＬ−１７様遺伝子又はｃＤＮＡに同類（天然に生じる）又は異種でありうる。さらに、シグナル配列はここで述べる方法を用いて化学合成しうる。ほとんどの場合、シグナルペプチドの存在を通しての宿主細胞からのＩＬ−１７様ポリペプチドの分泌は、分泌されたＩＬ−１７様ポリペプチドからのシグナルペプチドの除去をもたらす。シグナル配列はベクターの成分であるか、又はベクター内に挿入されるＩＬ−１７様核酸分子の一部でありうる。
【０１２７】
ＩＬ−１７様ポリペプチドコード領域に連結された天然ＩＬ−１７様ポリペプチドシグナル配列をコードするヌクレオチド配列、あるいはＩＬ−１７様ポリペプチドコード領域に連結された異種シグナル配列をコードするヌクレオチド配列のいずれかの使用は、本発明の範囲内に包含される。選択される異種シグナル配列は、宿主細胞によって認識され、プロセシングされる、すなわちシグナルペプチダーゼによって開裂されるものでなければならない。天然ＩＬ−１７様ポリペプチドシグナル配列を認識せず、プロセシングしない原核生物宿主細胞に関しては、シグナル配列は、例えばアルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、又は熱安定なエンテロトキシンＩＩリーダーの群から選択される原核生物シグナル配列によって置換される。酵母の分泌については、天然ＩＬ−１７様ポリペプチドシグナル配列を、酵母インベルターゼ、α因子、又は酸性ホスファターゼリーダーに置き換えてもよい。哺乳類細胞の発現においては、天然シグナル配列が十分であるが、他の哺乳類シグナル配列も適切でありうる。
【０１２８】
真核生物宿主細胞発現系においてグリコシル化を所望する場合などの一部の場合には、様々なプレ配列をグリコシル化又は収率を改善するように操作しうる。例えば、特定シグナルペプチドのペプチダーゼ開裂部位を変化させるか又はプレ配列を付加してもよく、これらも同じくグリコシル化に影響を及ぼしうる。最終的なタンパク質産物は、−１位に（成熟タンパク質の最初のアミノ酸に対して）、完全には除去されなかったと考えられる、発現に付随した１個以上の付加アミノ酸を有することがある。例えば最終タンパク質産物は、Ｎ末端に結合した、ペプチダーゼ開裂部位に認められる１個又は２個のアミノ酸残基を有しうる。あるいは、一部の酵素開裂部位の使用は、その酵素が成熟ポリペプチド内のそのような領域で切断する場合は、所望ＩＬ−１７様ポリペプチドのわずかにトランケートされた形態を生じることがある。
【０１２９】
多くの場合、核酸分子の転写はベクター内に１個以上のイントロンが存在することによって上昇する；これは特に、ポリペプチドが真核生物宿主細胞、特に哺乳類宿主細胞において生産される場合に当てはまる。使用されるイントロンは、特に使用される遺伝子が完全長ゲノム配列又はそのフラグメントである場合、ＩＬ−１７様遺伝子内で天然に生じうる。イントロンが遺伝子内で天然に生じない場合は（大部分のｃＤＮＡのように）、別のソースからイントロンを入手しうる。イントロンは有効に転写されねばならないので、隣接配列及びＩＬ−１７様遺伝子に対するイントロンの位置は一般に重要である。そこで、ＩＬ−１７様ｃＤＮＡ分子が転写されるとき、イントロンについての好ましい位置は、転写開始部位の３’側、及びポリＡ転写終結配列の５’側である。好ましくは、１個又は複数のイントロンは、コード配列を中断しないようにｃＤＮＡのいずれかの側（すなわち５’側又は３’側）に位置する。ウイルス、原核及び真核（植物又は動物）生物を含むいかなるソースからのいかなるイントロンも、それが挿入される宿主細胞と適合性であることを条件として、本発明を実施するために使用しうる。ここでは合成イントロンも包含される。場合により、２個以上のイントロンもベクター内で使用しうる。
【０１３０】
本発明の発現及びクローニングベクターは、各々典型的には、宿主生物によって認識され、ＩＬ−１７様ポリペプチドをコードする分子に作動可能に連結されたプロモーターを含む。プロモーターは、構造遺伝子（一般に約１００ｂｐから１０００ｂｐ以内）の転写を制御する構造遺伝子の開始コドンの上流（５’側）に位置する非転写配列である。プロモーターは慣例的に、誘導的プロモーター及び構成的プロモーターの２つのクラスのいずれかに分類される。誘導的プロモーターは、栄養素の存在又は不在あるいは温度変化などの培養条件のある種の変化に応答して、それらの制御下でＤＮＡからの高レベルの転写を開始させる。構成的プロモーターは、他方で、連続的な遺伝子産物の生産を開始させる；すなわち、遺伝子発現に対する制御はほとんどあるいは全く存在しない。様々な潜在的宿主細胞によって認識される数多くのプロモーターが周知である。適切なプロモーターは、制限酵素消化によってソースＤＮＡからそのプロモーターを取り出し、所望プロモーター配列をベクター内に挿入することによって、ＩＬ−１７様ポリペプチドをコードするＤＮＡに作動可能に連結される。天然ＩＬ−１７様遺伝子プロモーター配列を使用して、ＩＬ−１７様核酸分子の増幅及び／又は発現を指令しうる。しかし、異種プロモーターが、天然プロモーターと比較して発現されるタンパク質のより大きな転写とより高い収率を可能にし、及び使用のために選択した宿主細胞系と適合性である場合は、異種プロモーターが好ましい。
【０１３１】
原核生物宿主に関する使用に適するプロモーターは、β−ラクタマーゼ及びラクトースプロモーター系；アルカリホスファターゼ、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系；及びｔａｃプロモーターなどのハイブリッドプロモーターを含む。他の既知の細菌プロモーターも適する。それらの配列は公表されており、それによって当業者は、必要に応じて有用な制限部位を供給するためのリンカー又はアダプターを使用して、それらを所望ＤＮＡ配列に連結することができる。
【０１３２】
酵母宿主に関する使用に適するプロモーターもこの技術分野において周知である。酵母エンハンサーは酵母プロモーターと共に好都合に使用される。哺乳類宿主細胞に関する使用のための適切なプロモーターは周知であり、ポリオーマウイルス、鶏ポックスウイルス、アデノウイルス（アデノウイルス２など）、ウシパピローマウイルス、鳥類肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス及び最も好ましくはシミアンウイルス４０（ＳＶ４０）などのウイルスのゲノムから入手されるものを含むが、これらに限定されない。他の適切な哺乳類プロモーターは、異種哺乳類プロモーター、例えば熱ショックプロモーター及びアクチンプロモーターを含む。
【０１３３】
ＩＬ−１７様遺伝子転写を制御する上で興味深いと考えられるさらなるプロモーターは、ＳＶ４０初期プロモーター領域（ＢｅｒｎｏｉｓｔとＣｈａｍｂｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ，２９０：３０４−３１０（１９８１））、ＣＭＶプロモーター、ラウス肉腫ウイルスの３’長末端反復内に含まれるプロモーター（Ｙａｍａｍｏｔｏら、Ｃｅｌｌ，２２：７８７−７９７（１９８０））、ヘルペスチミジンキナーゼプロモーター（Ｗａｇｎｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７８：１４４−１４５（１９８１））、メタロチオネイン遺伝子の調節配列（Ｂｒｉｎｓｔｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，２９６：３９−４２（１９８２））、β−ラクタマーゼプロモーターなどの原核生物発現ベクター（Ｖｉｌｌａ−Ｋａｍａｒｏｆｆら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７８：１４４−１４４５（１９８１））、メタロチオネイン遺伝子の調節配列（Ｂｒｉｎｓｔｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，２９６：３９−４２（１９８２））、β−ラクタマーゼプロモーターなどの原核生物発現ベクター（Ｖｉｌｌａ−Ｋａｍａｒｏｆｆら、７５：３７２７−３７３１（１９７８））、又はｔａｃプロモーター（ＤｅＢｏｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８０：２１−２５（１９８３））を含むが、これらに限定されない。組織特異性を示し、トランスジェニック動物において利用されてきた、次の動物転写制御領域も興味深い：膵小胞体細胞において活性なエラスターゼＩ遺伝子制御領域（Ｓｗｉｆｔら、Ｃｅｌｌ，３８：６３９−６４６（１９８４）；Ｏｒｎｉｔｚら、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｓｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．，５０：３９９−４０９（１９８６）；ＭａｃＤｏｎａｌｄ，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，７：４２５−５１５（１９８７））；膵β細胞において活性なインスリン遺伝子制御領域（Ｈａｎａｈａｎ，Ｎａｔｕｒｅ，３１５：１５−１２２（１９８５））、リンパ系細胞において活性な免疫グロブリン遺伝子制御領域（Ｇｒｏｓｓｃｈｅｄｌら、Ｃｅｌｌ，３８：６４７−６５８（１９８４））、Ａｄａｍｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ，３１８：５３３−５３８（１９８５）；Ａｌｅｘａｎｄｅｒら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，７：１４３６−１４４４（１９８７））、精巣、乳房、リンパ系及びマスト細胞において活性なマウス乳腺癌ウイルス制御領域（Ｌｅｄｅｒら、Ｃｅｌｌ，４５：４８５−４９５（１９８６））、肝において活性なアルブミン遺伝子制御領域（Ｐｉｎｋｅｒｔら、Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌ．，１：２６８−２７６（１９８７））、肝において活性なαフェトプロテイン遺伝子制御領域（Ｋｒｕｍｌａｕｆら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，５：１６３９−１６４８（１９８５）；Ｈａｍｍｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３５：５３−５８（１９８７））、肝において活性なα１−抗トリプシン遺伝子制御領域（Ｋｅｌｓｅｙら、Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌ．，１：１６１−１７１（１９８７））、骨髄性細胞において活性なβグロビン遺伝子制御領域（Ｍｏｇｒａｍら、Ｎａｔｕｒｅ，３１５：３３８−３４０（１９８５）；Ｋｏｌｌｉａｓら、Ｃｅｌｌ，４６：８９−９４（１９８６））、脳内の希突起神経膠細胞にお���て活性なミエリン塩基性タンパク質遺伝子制御領域（Ｒｅａｄｈｅａｄら、Ｃｅｌｌ，４８：７０３−７１２（１９８７））、骨格菌において活性なミオシン軽鎖２遺伝子制御領域（Ｓａｎｉ，Ｎａｔｕｒｅ，３１４：２８３−１８６（１９８５））、及び視床下部において活性な性腺刺激ホルモン放出ホルモン遺伝子制御領域（Ｍａｓｏｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３４：１３７２−１３７８（１９８６））。
【０１３４】
高等真核生物による本発明のＩＬ−１７様ポリペプチドをコードするＤＮＡの転写を高めるために、エンハンサー配列をベクター内に挿入しうる。エンハンサーは、転写を高めるようにプロモーターに作用する、通常約１０ｂｐから３００ｂｐの長さの、ＤＮＡのシス作用性エレメントである。エンハンサーは方向及び位置には比較的無関係である。それらは転写ユニットの５’側と３’側で認められてきた。哺乳類遺伝子から入手可能ないくつかのエンハンサー配列が知られている（例えばグロビン、エラスターゼ、アルブミン、αフェトプロテイン及びインスリン）。典型的には、しかしながら、ウイルスからのエンハンサーが使用される。ＳＶ４０エンハンサー、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、ポリオーマエンハンサー、及びアデノウイルスエンハンサーが真核生物プロモーターの活性化についての例示的な促進エレメントである。エンハンサーはＩＬ−１７様核酸分子の５’側又は３’側の位置でベクター内にスプライシングされうるが、典型的にはプロモーターから５’側の部位に位置する。
【０１３５】
本発明の発現ベクターは、市販のベクターなどの出発ベクターから構築しうる。そのようなベクターは、所望隣接配列のすべてを含んでいてもよく又は必ずしも全部を含んでいなくてもよい。所望隣接配列の１つ以上が既にベクター内に存在する場合は、それらを個々に入手して、ベクターに連結しうる。各々の隣接配列を入手するために使用される方法は当業者に周知である。
【０１３６】
本発明を実施するための好ましいベクターは、細菌、昆虫、及び哺乳類宿主細胞と適合性のものである。そのようなベクターは、中でも特に、ｐＣＲＩＩ、ｐＣＲ３、及びｐｃＤＮＡ３．１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）、ｐＢＳＩＩ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）、ｐＥＴ１５（Ｎｏｖａｇｅｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）、ｐＧＥＸ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）、ｐＥＧＦＰ−Ｎ２（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）、ｐＥＴＬ（ＢｌｕｅＢａｃＩＩ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ｐＤＳＲ−α（ＰＣＴ国際特許出願第９０／１４３６３号）及びｐＦａｓｔＢａｃＤｕａｌ（ＧＩＢＣＯ／ＢＲＬ，Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）を含む。
【０１３７】
さらなる適切なベクターは、コスミド、プラスミド又は改変ウイルスを含むが、これらに限定されず、但し、ベクター系が選択宿主細胞と適合性でなければならないことは認識される。そのようなベクターは、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔプラスミド誘導体（高いコピー数のＣｏｌＥ１ベースのファージミド、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ．，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）などのプラスミド、Ｔａｑ−Ｔａｑ増幅ＰＣＲ産物をクローニングするために設計されたＰＣＲクローニングプラスミド（例えばＴＯＰＯ（商標）  ＴＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｋｉｔ，ＰＣＲ２．１プラスミド誘導体、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）、及びバキュロウイルス発現系（ｐＢａｃＰＡＫプラスミド誘導体、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）などの哺乳類、酵母又はウイルスベクターを含むが、これらに限定されない。
【０１３８】
ベクターを構築し、ＩＬ−１７様ポリペプチドをコードする核酸分子をベクターの適切な部位に挿入した後、完了したベクターを増幅及び／又はポリペプチド発現のために適切な宿主細胞に挿入しうる。選択宿主細胞へのＩＬ−１７様ポリペプチドについての発現ベクターの形質転換は、トランスフェクション、感染、塩化カルシウム法、電気穿孔法、微量注入法、リポフェクション又はＤＥＡＥ−デキストラン法又は他の既知の手法などの周知の方法を含む周知の方法によって実施しうる。選択する方法は、一部には、使用する宿主細胞の種類に依存する。これらの方法や他の適切な方法は当業者に周知であり、例えばＳａｍｂｒｏｏｋら、前出に述べられている。
【０１３９】
宿主細胞は、原核生物宿主細胞（大腸菌など）又は真核生物宿主細胞（酵母細胞、昆虫細胞又は脊椎動物細胞など）でありうる。宿主細胞は、適切な条件下で培養するとき、その後培地から（宿主細胞がＩＬ−１７様ポリペプチドを培地中に分泌する場合）又は直接それを生産する宿主細胞から（ＩＬ−１７様ポリペプチドが分泌されない場合）収集することができるＩＬ−１７様ポリペプチドを合成する。適切な宿主細胞の選択は、所望発現レベル、活性のために望ましい又は必要なポリペプチド修飾（グリコシル化又はリン酸化など）、及び生物活性分子への折りたたみの容易さなどの様々な因子に依存する。
【０１４０】
多くの適切な宿主細胞がこの技術分野において既知であり、多くはｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）、１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ  ２０１１０−２２０９から入手できる。その例は、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ６１）；ＣＨＯ  ＤＨＦＲ細胞（Ｕｒｌａｕｂら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９７：４２１６−４２２０（１９８０））；ヒト胚腎（ＨＥＫ）２９３又は２９３Ｔ細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１５７３）；又は３Ｔ３細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ９２）を含むが、これらに限定されない。形質転換、培養、増幅、スクリーニング、生成物の生産及び精製のための適切な哺乳類宿主細胞及び方法の選択はこの技術分野において既知である。他の適切な哺乳類細胞系統は、サルＣＯＳ−１（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１６５０）及びＣＯＳ−７細胞系統（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１６５１）、及びＣＶ−１細胞系統（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ７０）である。さらなる例示的な哺乳類宿主細胞は、形質転換細胞系統を含む、霊長類細胞系統及びげっ歯類細胞系統を包含する。正常二倍体細胞、一次組織ならびに一次外殖片のインビトロ培養から誘導される細胞株も適切である。候補細胞は、遺伝子型的に選択遺伝子を欠損しているか、又は優性に作用する選択遺伝子を含みうる。他の適切な哺乳類細胞系統は、マウス神経芽細胞腫Ｎ２Ａ細胞、ＨｅＬａ、マウスＬ−Ｌ−９２９細胞、Ｓｗｉｓｓ、Ｂａｌｂ−ｃ又はＮＩＨマウスから誘導される３Ｔ３系統、ＡＴＣＣより入手可能なＢＨＫ又はＨａＫハムスター細胞系統を含むが、これらに限定されない。これらの細胞系統の各々は、タンパク質発現の当業者に既知であり、入手可能である。
【０１４１】
本発明に適する宿主細胞として同様に有用であるのは、細菌細胞である。例えば、大腸菌の様々な菌株（例えばＨＢ１０１（ＡＴＣＣ番号３３６９４）、ＤＨ５α、ＤＨ１０、及びＭＣ１０６１（ＡＴＣＣ番号５３３３８）は、バイオテクノロジーの分野における宿主細胞として周知である。枯草菌、シュードモナス属、他のバチルス属、ストレプトミセス属等の様々な株もこの方法において使用しうる。
【０１４２】
当業者に既知の酵母細胞の多くの菌株も、本発明のポリペプチドの発現のための宿主細胞として使用可能である。好ましい酵母細胞は、例えばＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｉｖｉｓｉａｅ及びＰｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓを含む。
【０１４３】
さらに、所望する場合は、昆虫細胞系が本発明の方法において使用しうる。そのような系は、例えばＫｉｔｔｓら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１４：８１０−８１７（１９９３）；Ｌｕｃｋｌｏｗ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，４：５６４−５７２（１９９３）；及びＬｕｃｋｌｏｗら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，６７：４５６６−４５７９（１９９３）の中に述べられている。好ましい昆虫細胞はＳｆ−９及びＨｉ５（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）である。
【０１４４】
また、グリコシル化ＩＬ−１７様ポリペプチドを発現するためにトランスジェニック動物も使用しうる。例えば、トランスジェニック乳生産動物（例えば雌ウシ又はヤギ）を使用して、動物の乳中で本発明のグリコシル化ポリペプチドを入手しうる。また、ＩＬ−１７様ポリペプチドを生産するために植物も使用しうる；しかし、一般には、植物において起こるグリコシル化は哺乳類細胞において生じるものとは異なり、ヒト治療用途には適切でないグリコシル化産物をもたらしうる。
【０１４５】
ポリペプチド生産
ＩＬ−１７様ポリペプチド発現ベクターを含む宿主細胞は、当業者に周知の標準培地を用いて培養しうる。その培地は通常、細胞の増殖と生存に必要なすべての栄養素を含有する。大腸菌細胞を培養するための適切な培地は、例えば、ルリア肉汁（ＬＢ）及び／又はテリフィック肉汁（ＴＢ）を含む。真核細胞を培養するための適切な培地は、Ｒｏｓｗｅｌｌ  Ｐａｒｋ  Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ培地１６４０（ＲＰＭＩ  １６４０）、最小必須培地（ＭＥＭ）及び／又はダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）を含み、それらはすべて、培養する特定細胞系統によって指示される血清及び／又は成長因子で補足されうる。昆虫培養のための適切な培地は、必要に応じてイーストレート（ｙｅａｓｔｏｌａｔｅ）、ラクトアルブミン加水分解産物及び／又はウシ胎仔血清を補足したグレース培地である。
【０１４６】
典型的には、抗生物質又は形質転換細胞の選択増殖のために有用な他の化合物を補足物として培地に加える。使用すべき化合物は、宿主細胞を形質転換したプラスミド上に存在する選択マーカーエレメントによって指令される。例えば、選択マーカーエレメントがカナマシン耐性である場合、培地に加える化合物はカナマイシンである。選択増殖のための他の化合物は、アンピシリン、テトラサイクリン及びネオマイシンを含む。
【０１４７】
宿主細胞によって生産されるＩＬ−１７様ポリペプチドの量は、この技術分野において既知の標準的方法を用いて評価することができる。そのような方法は、限定を伴わずに、ウエスタンブロット分析、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動、非変性ゲル電気泳動、ＨＰＬＣ分離、免疫沈降法、及び／又はＤＮＡ結合ゲルシフトアッセイなどの活性検定を含む。
【０１４８】
ＩＬ−１７様ポリペプチドが宿主細胞から分泌されるように設計されている場合、ポリペプチドの大部分は細胞培地中に認められうる。しかし、ＩＬ−１７様ポリペプチドが宿主細胞から分泌されない場合、該ポリペプチドは細胞質及び／又は核内（真核生物宿主細胞に関して）、あるいはサイトゾル内（細菌宿主細胞に関して）に存在する。
【０１４９】
宿主細胞の細胞質及び／又は核内（真核生物宿主細胞に関して）、あるいはサイトゾル内（細菌宿主細胞に関して）に位置するＩＬ−１７様ポリペプチドについては、当業者に既知の標準手法を用いて細胞内物質（グラム陰性菌に関する封入体を含む）を宿主細胞から抽出することができる。例えば、宿主細胞を溶解して、フレンチプレス、均質化、及び／又は超音波処理とそれに続く遠心分離によって細胞周辺腔／細胞質の内容物を放出させることができる。
【０１５０】
ＩＬ−１７様ポリペプチドがサイトゾル内で封入体を形成した場合、その封入体はしばしば細胞内膜及び／又は細胞外膜に結合することができ、それ故主として遠心分離後のペレット物質中に認められる。その後ペレット物質を、極端なｐＨで、あるいはアルカリ性ｐＨでのジチオトレイトール又は酸性ｐＨでのトリスカルボキシエチルホスフィンなどの還元剤の存在下に界面活性剤、グアニジン、グアニジン誘導体、尿素、又は尿素誘導体などのカオトロピック試薬で処理して、封入体を放出させ、分解して、可溶化することができる。その今や可溶性となった形態のＩＬ−１７様ポリペプチドを、その後ゲル電気泳動、免疫沈降法等を用いて分析することができる。ＩＬ−１７様ポリペプチドを単離することを所望する場合は、ここで述べるもの及びＭａｒｓｔｏｎら、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．，１８２：２６４−２７５（１９９０）に述べられているもののような標準的方法を用いて単離を実施しうる。
【０１５１】
一部の場合、ＩＬ−１７様ポリペプチドは単離後、生物学的に活性でないことがありうる。「リフォールディング」のため又はポリペプチドをその三次構造へと変換してジスルフィド結合を形成するための様々な方法が、生物活性を回復するために使用できる。そのような方法は、可溶化ポリペプチドを、特定濃度のカオトロピック試薬の存在下に通常は７以上のｐＨに暴露することを含む。カオトロピック試薬の選択は封入体可溶化のために用いられる選択と非常に類似するが、通常このカオトロピック試薬はより低い濃度で使用され、可溶化のために使用されるカオトロピック試薬と必ずしも同じではない。ほとんどの場合、リフォールディング／酸化溶液はまた、還元剤、又は還元剤プラスその酸化形態を、タンパク質のシステイン架橋の形成においてジスルフィドシャフリングが起こることを許容する特定酸化還元電位を生じる特定比率で含む。一般的に使用される酸化還元対の一部は、システイン／シスタミン、グルタチオン（ＧＳＨ）／ジチオビスＧＳＨ、塩化第二銅、ジチオトレイトール（ＤＴＴ）／ジチアンＤＴＴ、及び２−メルカプトエタノール（ｂＭＥ）／ジチオ−ｂ（ＭＥ）を含む。リフォールディングの効率を高めるために共溶媒を使用してもよく、このために使用されるより一般的な試薬は、グリセロール、様々な分子量のポリエチレングリコール、アルギニン等を含む。
【０１５２】
ＩＬ−１７様ポリペプチドの発現時に封入体が有意の度合で形成されない場合は、該ポリペプチドは、細胞ホモジネートの遠心分離後に主として上清中に認められる。ここで述べるような方法を用いて、該ポリペプチドを上清からさらに単離しうる。
【０１５３】
溶液からのＩＬ−１７様ポリペプチドの精製は様々な手法を用いて実施することができる。該ポリペプチドが、そのカルボキシル又はアミノ末端のいずれかにヘキサヒスチジン（ＩＬ−１７ＸＸＸ様ポリペプチド／ヘキサＨｉｓ）あるいはＦＬＡＧ（Ｅａｓｔｍａｎ  Ｋｏｄａｋ  Ｃｏ．，Ｎｅｗ  Ｈａｖｅｎ，ＣＴ）又はｍｙｃ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）のような他の小ペプチドなどのタグを含むように合成されている場合は、カラムマトリックスがそのタグに高い親和性を有するアフィニティーカラムに溶液を通すことによって１段階で精製しうる。
【０１５４】
例えば、ポリヒスチジンは高い親和性と特異性でニッケルと結合し、それ故ＩＬ−１７様ポリペプチド／ポリＨｉｓの精製のためにはニッケルのアフィニティーカラム（Ｑｉａｇｅｎニッケルカラムなど）が使用できる。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら編集、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，第１０．１１．８章、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９３）参照。
【０１５５】
さらに、ＡＧＰ−ＸＸＸ様ＩＬ−１７様ポリペプチドは、ＡＧＰ−ＸＸＸ様ＩＬ−１７様ポリペプチドを特異的に認識してそれに結合することができるモノクローナル抗体の使用を通して精製しうる。
【０１５６】
そこで、精製のための適切な手順は、限定を伴わずに、アフィニティークロマトグラフィー、免疫アフィニティークロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、分子ふるいクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、電気泳動（非変性ゲル電気泳動を含む）とそれに続くゲル溶出、及び分取等電点電気泳動（「Ｉｓｏｐｒｉｍｅ」機器／手法、Ｈｏｅｆｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）を含む。一部の場合には、高い純度を達成するために２つ以上の精製手法を組み合わせてもよい。
【０１５７】
ＩＬ−１７様ポリペプチドはまた、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８５：２１４９（１９６３）、Ｈｏｕｇｈｔｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２：５１３２（１９８５）、及びＳｔｅｗａｒｔとＹｏｕｎｇ，「Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」，Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ（１９８４）によって述べられているもののような、この技術分野で既知の手法を用いた化学合成法（固相ペプチド合成など）によっても調製しうる。そのようなポリペプチドは、アミノ末端のメチオニンを伴って又はメチオニンなしで合成しうる。化学合成ＩＬ−１７様ポリペプチドは、ジスルフィド架橋を形成するためにこれらの参考文献に述べられている方法を用いて酸化しうる。化学合成ＩＬ−１７様ポリペプチドは、組換えによって生産された又は天然ソースから精製された対応するＩＬ−１７様ポリペプチドと同等の生物活性を有すると予想され、それ故組換え又は天然ＩＬ−１７様ポリペプチドと交換可能に使用しうる。
【０１５８】
ＩＬ−１７様ポリペプチドを入手するもう１つの手段は、ＩＬ−１７様ポリペプチドが天然に認められるソース組織及び／又は体液などの生物学的試料からの精製によってである。そのような精製は、ここで述べるタンパク質精製のための方法を用いて実施できる。精製の間のＩＬ−１７様ポリペプチドの存在は、例えば組換え生産ＩＬ−１７様ポリペプチド又はそのペプチドフラグメントに対して作製した抗体を用いて、監視しうる。
【０１５９】
核酸及びポリペプチドを生産するためのいくつもの多くの方法がこの技術分野において既知であり、それらの方法を用いてＩＬ−１７様に特定性を有するポリペプチドを生産することができる。例えば、ｍＲＮＡとそのコードされるペプチドとの間の融合タンパク質の生産を述べる、Ｒｏｂｅｒｔｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９４：１２２９７−１２３０３（１９９７）参照。また、Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｒ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．，３：２６８−２７３（１９９９）も参照のこと。さらに、米国特許第５，８２４，４６９号は、特定の生物学的機能を果たすことができるオリゴヌクレオチドを入手する方法を述べている。その手順は、各々、５’ランダム化配列、中心のあらかじめ選択された配列、及び３’ランダム化配列を有する、オリゴヌクレオチドの不均質プールを作製することを含む。生じた不均質プールを、所望の生物学的機能を示さない細胞集団に導入する。次に細胞の小集団を、あらかじめ定められた生物学的機能を示すものに関してスクリーニングする。その小集団から、所望生物学的機能を果たすことができるオリゴヌクレオチドを単離する。
【０１６０】
米国特許第５，７６３，１９２号、同第５，８１４，４７６号、同第５，７２３，３２３号、及び同第５，８１７，４８３号は、ペプチド又はポリペプチドを生産するための工程を述べている。これは、確率的遺伝子又はそのフラグメントを生産し、これらの遺伝子を、確率的遺伝子によってコードされる１以上のタンパク質を生産する宿主細胞に導入することによって実施される。次にそれらの宿主細胞を、所望活性を有するペプチド又はポリペプチドを生産するクローンを特定するためにスクリーニングする。
【０１６１】
ペプチド又はポリペプチドを生産するためのもう１つの方法は、Ａｔｈｅｒｓｙｓ，Ｉｎｃ．によって出願されたＰＣＴ／ＵＳ９８／２００９４号（国際公開公報第９９／１５６５０号）に述べられている。「遺伝子発見のための遺伝子発現のランダム活性化」（ＲＡＧＥ−ＧＤとして知られるこの工程は、内因性遺伝子発現の活性化又はインサイチュー組換え法による遺伝子の過剰発現を含む。例えば、非相同的又は非正統的組換えによって遺伝子の発現を活性化することができる標的細胞内に調節配列を組み込むことにより、内因性遺伝子の発現を活性化する又は上昇させる。その標的ＤＮＡを最初に放射線に供し、遺伝子プロモーターを挿入する。そのプロモーターは、最終的にその遺伝子の前部に切断点を見出し、遺伝子の転写を開始させる。これが所望ペプチド又はポリペプチドの発現をもたらす。
【０１６２】
これらの方法はまた、包括的なＩＬ−１７様タンパク質発現ライブラリーを作製するためにも使用でき、それらのライブラリーはその後、生化学的アッセイ、細胞アッセイ、及び全生物アッセイ（例えば植物、マウス等）などの様々なアッセイにおける高流量表現型スクリーニングのために使用できる。
【０１６３】
化学的誘導体
ＩＬ−１７様ポリペプチドの化学修飾誘導体は、下記に述べる開示を考慮して、当業者によって調製されうる。ＩＬ−１７様ポリペプチド誘導体は、ポリペプチドに天然に結合している分子の種類又は位置が異なるように修飾される。誘導体は、１個以上の天然結合化学基の欠失によって形成される分子を含みうる。配列番号２、配列番号４、又は配列番号１０のアミノ酸配列を含むポリペプチド、又はＩＬ−１７様ポリペプチド変異体は、１個以上のポリマーの共有結合によって修飾しうる。例えば、選択されるポリマーは、典型的には、それが結合するタンパク質が生理的環境などの水性環境において沈殿しないように水溶性である。ポリマーの混合物は適切なポリマーの範囲内に包含される。好ましくは、最終産物製剤の治療用途のために、該ポリマーは医薬適合性のものである。
【０１６４】
各々のポリマーは、いかなる分子量であってもよく、分枝又は非分枝のいずれでもよい。各々のポリマーは、典型的には約２ｋＤａから約１００ｋＤａ（「約」の語は、水溶性ポリマーの製剤中、一部の分子は言明される分子量より重く、また一部はより軽いことを意味する）の平均分子量を有する。各ポリマーの平均分子量は、好ましくは約５ｋＤａから約５０ｋＤａ、より好ましくは約１２ｋＤａから約４０ｋＤａ、最も好ましくは約２０ｋＤａから約３５ｋＤａである。
【０１６５】
適切な水溶性ポリマー又はそれらの混合物は、Ｎ結合又はＯ結合糖質、糖類、リン酸塩、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）（モノ−（Ｃ１−Ｃ１０）アルコキシ−又はアリールオキシ−ポリエチレングリコールを含む、タンパク質を誘導化するために使用されるＰＥＧの形態を含む）；モノメトキシポリエチレングリコール；デキストラン（例えば約６ｋＤの低分子量デキストラン）、セルロース、又は例えば６ｋＤａの他のデキストラン；セルロース；又は他の糖質ベースのポリマー、ポリ−（Ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えばグリセロール）及びポリビニルアルコールを含むが、これらに限定されない。また、配列番号２のアミノ酸配列を含むポリペプチド又はＩＬ−１７様ポリペプチド変異体の共有結合多量体を調製するために使用しうる二官能性架橋分子も本発明に包含される。
【０１６６】
一般に、化学的誘導体化は、タンパク質を活性化ポリマー分子と反応させるために使用される適切な条件下で実施しうる。ポリペプチドの化学的誘導体を調製するための方法は、一般に、（ａ）該ポリペプチドを、配列番号２、配列番号４又は配列番号１０のアミノ酸配列を含むポリペプチド又はＩＬ−１７様ポリペプチド変異体が１個以上のポリマー分子に結合する条件下で活性化ポリマー分子（ポリマー分子の反応性エステル又はアルデヒド誘導体など）と反応させること、及び（ｂ）反応生成物を得ること、の段階を含む。最適反応条件は、既知のパラメータと所望結果に基づいて決定される。例えば、ポリマー分子：タンパク質の比率が大きいほど、結合ポリマー分子のパーセンテージは大きくなる。１つの実施態様では、ＩＬ−１７様ポリペプチド誘導体は、アミノ末端に単一ポリマー分子部分を有しうる（例えば米国特許第５，２３４，７８４号参照）。
【０１６７】
ポリペプチドのペグ化は、例えば次の参考文献に述べられているような、この技術分野で既知のペグ化反応いずれかによって実施しうる：Ｆｒａｎｃｉｓら、Ｆｏｃｕｓ  ｏｎ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒｓ，３：４−１０（１９９２）；欧州特許第０１５４３１６号；欧州特許第０４０１３８４号及び米国特許第４，１７９，３３７号。例えば、ペグ化は、ここで述べる反応性ポリエチレングリコール分子（又は類縁反応性水溶性ポリマー）とのアシル化反応又はアルキル化反応を通して実施しうる。アシル化反応については、選択するポリマーは１個の反応性エステル基を有していなければならない。還元的アルキル化については、選択するポリマーは１個の反応性アルデヒド基を有していなければならない。反応性アルデヒドは、例えば、水安定なポリエチレングリコールプロピオンアルデヒド、又はそのモノＣ１−Ｃ１０アルコキシ又はアリールオキシ誘導体である（米国特許第５，２５２，７１４号参照）。
【０１６８】
もう１つの実施態様では、ＩＬ−１７様ポリペプチドをビオチンに化学結合し、次に、複合したビオチン／ＩＬ−１７様ポリペプチド分子をアビジンに結合させて、四価アビジン／ビオチン／ＩＬ−１７様ポリペプチド分子を生じさせうる。ＩＬ−１７様ポリペプチドはまた、ジニトロフェノール（ＤＮＰ）又はトリニトロフェノール（ＴＮＰ）に共有結合して、生じた複合体を抗ＤＮＰ又は抗ＴＮＰ−ＩｇＭで沈殿させ、１０の原子価を有する十量体コンジュゲートを形成しうる。
【０１６９】
一般に、本発明のＩＬ−１７様ポリペプチド誘導体の投与によって軽減されうる又は緩和されうる状態は、ＩＬ−１７様ポリペプチドについてここで述べるものを包含する。しかし、ここで開示するＡＧＰ−ＩＬ−１７様ポリペプチド誘導体は、非誘導体化分子と比較して、付加的な活性、高い又は低い生物活性、あるいは長い又は短い半減期などの他の特徴を有しうる。
【０１７０】
さらに、天然ＩＬ−１７様ポリペプチドをコードする１個又は複数の遺伝子が、この遺伝子の発現レベルが有意に低下する又は完全に撤廃されるように破壊された（「ノックアウト」）、マウス、ラット、又は他のげっ歯類、ウサギ、ヤギ、又はヒツジ、あるいは他の家畜などの非ヒト動物は、本発明の範囲内に包含される。そのような動物は、米国特許第５，５５７，０３２号に述べられているような手法及び方法を用いて作製しうる。
【０１７１】
本発明はさらに、その動物についての天然形態のＩＬ−１７様遺伝子又は異種ＩＬ−１７様遺伝子が該動物によって過剰発現され、それによって「トランスジェニック」動物を創造する、マウス、ラット、又は他のげっ歯類、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、又は他の家畜などの非ヒト動物を包含する。そのようなトランスジェニック動物は、米国特許第５，４８９，７４３号及びＰＣＴ国際出願第ＷＯ９４／２８１２２号に述べられているもののような周知の方法を用いて作製しうる。
【０１７２】
本発明はさらに、本発明のＩＬ−１７様ポリペプチドの１個以上についてのプロモーターが、天然ＩＬ−１７様ポリペプチドの１個以上の発現レベルを変化させるように活性化又は不活性化されている（例えば相同的組換え法を用いることによって）非ヒト動物を包含する。
【０１７３】
これらの非ヒト動物は、薬剤候補物質スクリーニングのために使用しうる。そのようなスクリーニングでは、動物への薬剤候補物質の影響を測定しうる。例えば、薬剤候補物質はＩＬ−１７様遺伝子の発現を低下させうる又は上昇させうる。一部の実施態様では、動物を薬剤候補物質に暴露した後、生産されるＩＬ−１７様ポリペプチドの量を測定しうる。さらに、一部の実施態様では、薬剤候補物質の動物への実際の影響を検出しうる。例えば、特定遺伝子の過剰発現は、疾患又は病的状態を生じさせる、あるいは疾患又は病的状態に結びつくことがある。そのような場合は、薬剤候補物質が該遺伝子の発現を低下させる能力あるいは病的状態を予防する又は阻止する能力を試験しうる。他の例では、ポリペプチドのフラグメントなどの特定代謝産物の産生は、疾患又は病的状態を生じさせる、あるいは疾患又は病的状態に結びつくことがある。そのような場合は、薬剤候補物質がそのような代謝産物の産生を低下させる能力あるいは病的状態を予防する又は阻止する能力を試験しうる。
【０１７４】
マイクロアレイ
本発明に従ってＤＮＡマイクロアレイテクノロジーが使用できることは認識される。
ＤＮＡマイクロアレイは、ガラスなどの固体支持体上に位置づけられた小型で高密度の核酸のアレイである。アレイ内の各々の細胞又はエレメントは、そのコグネイトｍＲＮＡについてのハイブリダイゼーションのための標的として働く、単一種のＤＮＡの多数のコピーを有する。ＤＮＡマイクロアレイテクノロジーを使用した発現プロファイリングでは、最初にｍＲＮＡを細胞又は組織試料から抽出し、次に酵素的に蛍光標識ｃＤＮＡに変換する。この物質をマイクロアレイにハイブリダイズし、非結合ｃＤＮＡを洗浄によって除去する。アレイ上に提示される別々の遺伝子の発現を、各々の標的ＤＮＡに特異的に結合する標識ｃＤＮＡの量を定量することによって視覚化する。このようにして、生物学的物質の単一試料から数千の遺伝子の発現を高流量で平行して定量することができる。
【０１７５】
この高流量発現プロファイリングは、治療薬の標的としてのＩＬ−１７様ＸＸＸ疾患関連遺伝子の特定と有効性確認；ＡＧＰ−ＸＸＸ様ＩＬ−１７様分子及びその阻害因子の分子毒性学；集団の層別及び臨床治験のための代理マーカーの創製；及び高流量スクリーニング（ＨＴＳ）において選択化合物の特定を助けることによるＩＬ−１７様関連小分子薬剤発見の促進、を含むがこれらに限定されない、本発明のＡＧＰ−ＸＸＸ様ＩＬ−１７様分子に関する広い範囲の適用を有する。
【０１７６】
選択結合剤
ここで使用するとき、「選択結合剤」の語は、１個以上のＩＬ−１７様ポリペプチドに対して特異性を有する分子を指す。適切な選択結合剤は、抗体及びその誘導体、ポリペプチド、及び小分子を含むが、これらに限定されない。適切な選択結合剤はこの技術分野において既知の方法を用いて調製しうる。例示的な本発明のＩＬ−１７様ポリペプチド選択結合剤は、ＩＬ−１７様ポリペプチドの一定部分に結合することができ、それによってＩＬ−１７様ポリペプチド受容体への該ポリペプチドの結合を阻害することができる。
【０１７７】
ＩＬ−１７様ポリペプチドに結合する抗体及び抗体フラグメントなどの選択結合剤は本発明の範囲内である。上記抗体は、単一特異性ポリクローナルを含むポリクローナル、モノクローナル（ＭＡｂ）、組換え、キメラ、ＣＤＲ移植などのヒト化、ヒト、一本鎖、及び／又は二重特異性、ならびにそのフラグメント、変異体又は誘導体でありうる。抗体フラグメントは、ＩＬ−１７様ポリペプチド上のエピトープに結合する抗体の部分を含む。そのようなフラグメントの例は、完全長抗体の酵素開裂によって生成されるＦａｂ及びＦ（ａｂ’）フラグメントを含む。他の結合フラグメントは、抗体可変領域をコードする核酸配列を含む組換えプラスミドの発現などの、組換えＤＮＡ手法によって生成されるものを含む。
【０１７８】
ＩＬ−１７様ポリペプチドに対するポリクローナル抗体は、一般にＩＬ−１７様ポリペプチド及びアジュバントの多回皮下又は腹腔内注射によって動物（例えばウサギ又はマウス）において産生される。ＩＬ−１７様ポリペプチドを、キーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシサイログロブリン、又はダイズトリプシン阻害因子などの、免疫される種において免疫原性である担体タンパク質に複合することは有用であると考えられる。また、ミョウバンなどの凝集剤が免疫応答を増強するために使用される。免疫後、動物から採血し、その血清を抗ＩＬ−１７様ポリペプチド抗体力価に関して検定する。
【０１７９】
ＩＬ−１７様ポリペプチドに対するモノクローナル抗体は、培養中の連続細胞系統による抗体分子の産生を提供する何らかの方法を用いて生産される。モノクローナル抗体を作製するための適切な方法の例は、Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５−４９７（１９７５）のハイブリドーマ法、及びヒトＢ細胞ハイブリドーマ法、Ｋｏｚｂｏｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）；及びＢｒｏｄｅｕｒら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７）を含む。また、ＩＬ−１７様ポリペプチドと反応性のモノクローナル抗体を生産するハイブリドーマ細胞系も本発明によって提供される。
【０１８０】
本発明のモノクローナル抗体は、治療薬としての使用のために修飾しうる。１つの実施態様は、重鎖及び／又は軽鎖の一部は、特定種から誘導される抗体内の対応配列と同一又は相同であるかあるいは特定の抗体クラス又はサブクラスに属するが、鎖の残りの部分は別の種から誘導される抗体内の対応配列と同一又は相同であるかあるいは別の抗体クラス又はサブクラスに属する、「キメラ」抗体である。また、そのような抗体のフラグメントも、それらが所望生物活性を示す限り、包含される。米国特許第４，８１６，５６７号、同第４，８１６，５６７号及びＭｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５（１９８５）参照。
【０１８１】
もう１つの実施態様では、本発明のモノクローナル抗体は「ヒト化」抗体である。非ヒト抗体をヒト化するための方法はこの技術分野において周知である（米国特許第５，５８５，０８９号及び同第５，６９３，７６２号参照）。一般に、ヒト化抗体は、ヒト以外のソースからその中に導入された１個以上のアミノ酸残基を有する。ヒト化は、例えばこの技術分野で記述されている方法を用いて（Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４−１５３６（１９８８））、ヒト抗体の対応する領域をげっ歯類の相補性決定領域（ＣＤＲ）の少なくとも一部に置き換えることによって実施できる。
【０１８２】
また、ＩＬ−１７様ポリペプチドに結合するヒト抗体も本発明に包含される。内因性免疫グロブリン産生の不在下でヒト抗体のレパートリーを生産することができるトランスジェニック動物（例えばマウス）を使用して、場合により担体に複合した、ＩＬ−１７様抗原（すなわち少なくとも６個の連続アミノ酸を有する）で免疫することによってそのような抗体が作製される。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：２５５１−２５５５（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｎａｔｕｒｅ，３６２：２５５−２５８（１９９３）及びＢｒｕｇｇｅｒｍａｎｎら、Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，７：３３（１９９３）参照。１つの方法では、そのようなトランスジェニック動物は、その中の免疫グロブリン重鎖及び軽鎖をコードする内因性遺伝子座を無効にし、ヒト重鎖及び軽鎖タンパク質をコードする遺伝子座をゲノム内に挿入することによって作製される。部分的に改変された動物、すなわち完全な修飾全体未満を有する動物を交雑して、すべての所望免疫系修飾を有する動物を得る。免疫原を投与したとき、これらのトランスジェニック動物は、これらの抗原に免疫特異性である可変領域を含む、ヒト（例えばマウスではなく）アミノ酸配列を有する抗体を産生する。ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ９６／０５９２８号及びＰＣＴ／ＵＳ９３／０６９２６号参照。付加的な方法が、米国特許第５，５４５，８０７号、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ９１／２４５号、ＰＣＴ／ＧＢ８９／０１２０７号、及び欧州特許第５４６０７３Ｂ１号及び欧州特許第５４６０７３Ａ１号に述べられている。ヒト抗体はまた、宿主細胞における組換えＤＮＡの発現によって又はここ述べるようなハイブリドーマ細胞における発現によっても作製しうる。
【０１８３】
選択的実施態様では、ファージディスプレイライブラリーからヒト抗体を作製することができる（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１（１９９１）及びＭａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１（１９９１））。これらの方法は、繊維状バクテリオファージの表面での抗体レパートリーの展示及びその後の選択抗原への結合によるファージの選択を通して免疫選択を模倣する。１つのそのような手法は、そのようなアプローチを用いた、ＭＰＬ及びｍｓｋ受容体についての高い親和性と機能性のアゴニスト抗体の単離を述べる、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ９８／１７３６４号に記述されている。
【０１８４】
キメラ、ＣＤＲ移植、及びヒト化抗体は、典型的には組換え法によって生産される。ここで述べる材料と方法を使用して上記抗体をコードする核酸を宿主細胞に導入し、発現させる。好ましい実施態様では、該抗体を、ＣＨＯ細胞などの哺乳類宿主細胞において生産する。モノクローナル抗体（例えばヒト）は、宿主細胞における組換えＤＮＡの発現によって又はここで述べるハイブリドーマ細胞における発現によって生産しうる。
【０１８５】
本発明の抗ＩＬ−１７様抗体は、ＩＬ−１７様ポリペプチドの検出及び定量のための、競合結合測定法、直接又は間接サンドイッチ測定法、及び免疫沈降アッセイなどの何らかの既知の検定法において使用しうる（Ｓｏｌａ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，ｐｐ．１４７−１５８（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，１９８７））。該抗体は、使用する検定方法に適切な親和性でＩＬ−１７様ポリペプチドに結合する。
【０１８６】
診断適用に関しては、一部の実施態様では、抗ＩＬ−１７様抗体を検出可能な成分で標識しうる。検出可能成分は、直接又は間接的に、検出可能なシグナルを生成することができるものでありうる。例えば、検出可能成分は、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、又は１２５Ｉなどの放射性同位体；フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、又はルシフェリンなどの蛍光又は化学発光化合物；あるいはアルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、又はホースラディッシュペルオキシダーゼなどの酵素でありうる（Ｂａｙｅｒら、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．，１８４：１３８−１６３（１９９０））。
【０１８７】
競合結合測定法は、標識標準品（例えばＩＬ−１７様ポリペプチド、又はその免疫活性部分）が、限られた量の抗ＡＧＰ−ＸＸＸ抗ＩＬ−１７様抗体との結合に関して被験試料分析物（ＩＬ−１７様ポリペプチド）と競合する能力に基づく。被験試料中のＩＬ−１７様ポリペプチドの量は、抗体に結合する標準品の量に反比例する。結合する標準品の量の測定を容易にするため、抗体に結合する標準品及び分析物が、結合しないままの標準品及び分析物から好都合に分離されうるように、典型的には競合前又は競合後に抗体を不溶化する。
【０１８８】
サンドイッチ測定法は、典型的には、各々が、検出する及び／又は定量するタンパク質の異なる免疫原性部分又はエピトープに結合することができる２つの抗体の使用を含む。サンドイッチ測定法では、被験試料分析物は、典型的には、固体支持体に固定された第一抗体によって結合され、その後第二抗体が分析物に結合して、不溶性の三成分複合体を形成する。例えば米国特許第４，３７６，１１０号参照。第二抗体は、それ自体が検出可能成分で標識されるか（直接サンドイッチ測定法）、又は検出可能成分で標識された抗免疫グロブリン抗体を使用して測定されうる（間接サンドイッチ測定法）。例えば、１つの種類のサンドイッチ測定法は、検出可能成分が酵素である、酵素結合イムノソルベント検定法（ＥＬＩＳＡ）である。
【０１８９】
抗ＩＬ−１７様抗体を含む選択結合剤はまた、インビボでの画像化にも有用である。検出可能成分で標識した抗体を動物に、好ましくは血流中に投与し、宿主における標識抗体の存在及び位置を検定する。抗体は、核磁気共鳴、放射線学、又はこの技術分野で既知の他の検出手段によって、動物において検出可能ないかなる成分によっても標識されうる。
【０１９０】
抗体を含む本発明の選択結合剤は治療薬として使用しうる。これらの治療薬は一般に、それぞれ、ＩＬ−１７様ポリペプチドの前炎症作用を含むＩＬ−１７様ポリペプチドの生物活性の少なくとも１つを高める又は低下させるという点で、アゴニスト又はアンタゴニストである。１つの実施態様では、本発明のアンタゴニスト抗体は、ＩＬ−１７様ポリペプチドに特異的に結合することができ、インビボ又はインビトロでＩＬ−１７様ポリペプチドの機能的活性を阻害する又は排除することができる抗体又はその結合フラグメントである。好ましい実施態様では、該選択結合剤、例えばアンタゴニスト抗体は、ＩＬ−１７様ポリペプチドの機能的活性を少なくとも約５０％、好ましくは少なくとも約８０％阻害する。もう１つの実施態様では、該選択結合剤は、ＩＬ−１７様結合パートナー（リガンド又は受容体）と相互作用することができ、それによってインビトロ又はインビボでＩＬ−１７様活性を阻害する又は排除する抗体でありうる。アゴニスト及びアンタゴニスト抗ＩＬ−１７様抗体を含む選択結合剤は、この技術分野で周知のスクリーニングアッセイによって特定される。
【０１９１】
本発明はまた、ＩＬ−１７様選択結合剤（抗体など）及び生物学的試料においてＩＬ−１７様ポリペプチドレベルを検出するために有用な他の試薬を含むキットに関する。そのような試薬は、検出可能標識、遮断血清、陽性及び陰性対照試料、及び検出試薬を含みうる。
【０１９２】
本発明のＩＬ−１７様ポリペプチドは、発現クローニング戦略を用いて、ＩＬ−１７様受容体をクローニングするために使用できる。放射能標識（１２５Ｉ）ＩＬ−１７様ポリペプチド又は親和性／活性標識ＩＬ−１７様ポリペプチド（Ｆｃ融合又はアルカリホスファターゼ融合など）は、ＩＬ−１７様受容体を発現する細胞型又は細胞系統又は組織を特定するための結合アッセイにおいて使用できる。そのような細胞又は組織から単離したＲＮＡをｃＤＮＡに変換して、哺乳類発現ベクターにクローニングし、哺乳類細胞（ＣＯＳ又は２９３細胞など）にトランスフェクトして、発現ライブラリーを創造することができる。放射能標識又はタグ化ＩＬ−１７様ポリペプチドは、その後、その表面にＩＬ−１７様受容体を発現する細胞のサブセットをこのライブラリーから特定し、単離するための親和性リガンドとして使用できる。ＤＮＡをこれらの細胞から単離し、哺乳類細胞にトランスフェクトして、ＩＬ−１７様受容体を発現する細胞の分画が元のライブラリーにおけるよりも何倍も高い二次発現ライブラリーを創造することができる。この濃縮工程は、ＩＬ−１７様受容体を含む単一組換えクローンが単離されるまで繰り返し実施することができる。ＩＬ−１７様受容体の単離は、ＩＬ−１７様ポリペプチドシグナル伝達経路の新規アゴニスト及びアンタゴニストを特定する又は開発するために有用である。そのようなアゴニスト及びアンタゴニストは、可溶性ＩＬ−１７様受容体、抗ＩＬ−１７様受容体抗体、小分子、タンパク質、ペプチド、糖質、脂質、又はアンチセンスオリゴヌクレオチドを含み、それらは、ここで述べるものを含む１以上の疾患又は障害を治療する、予防する、又は診断するために使用しうる。
【０１９３】
ＩＬ−１７様ポリペプチド活性の他の調節因子に関するアッセイ
一部の状況では、ＩＬ−１７様ポリペプチドの活性の調節因子、すなわちアゴニスト及びアンタゴニストである分子を特定することが望ましいと考えられる。ＩＬ−１７ＸＸＸ様ポリペプチドを調節する天然又は合成分子は、ここで述べるもののような１以上のスクリーニングアッセイを用いて特定しうる。そのような分子は、エクスビボで、あるいは注射又は経口送達、移植装置等によってインビボで投与しうる。
【０１９４】
「被験分子」は、ＩＬ−１７様ポリペプチドの活性を調節する（すなわち上昇させる又は低下させる）能力に関して評価される分子（単数又は複数）を指す。最も一般的には、被験分子はＩＬ−１７様ポリペプチドと直接相互作用する。しかし、ＩＬ−１７様遺伝子発現に影響を及ぼすこと、又はＩＬ−１７様結合パートナー（例えば受容体又はリガンド）に結合することなどによって、間接的にＩＬ−１７様ポリペプチド活性を調節しうる被験分子も考慮される。１つの実施態様では、被験分子は、少なくとも約１０−６Ｍ、好ましくは約１０−８Ｍ、より好ましくは約１０−９Ｍ、さらに一層好ましくは約１０−１０Ｍの親和性定数でＩＬ−１７様ポリペプチドに結合する。
【０１９５】
ＩＬ−１７様ポリペプチドと相互作用する化合物を特定するための方法は本発明に包含される。一部の実施態様では、ＩＬ−１７様ポリペプチドを、被験分子とＩＬ−１７様ポリペプチドの相互作用を許容する条件下で該被験分子と共にインキュベートし、相互作用の程度を測定することができる。被験分子は、実質的に精製された形態で又は粗混合物としてスクリーニングすることができる。
【０１９６】
一部の実施態様では、ＩＬ−１７様ポリペプチドアゴニスト又はアンタゴニストは、ＩＬ−１７様ポリペプチドと相互作用してその活性を調節するタンパク質、ペプチド、炭水化物、脂質、又は小分子でありうる。ＩＬ−１７様ポリペプチド発現を調節する分子は、ＩＬ−１７様ポリペプチドをコードする核酸に相補的であるか、又はＩＬ−１７様ポリペプチドの発現を指令する又は制御する核酸配列の相補的であり、且つ発現のアンチセンス調節因子として働く核酸を含む。
【０１９７】
ひとたび一組の被験分子がＩＬ−１７様ポリペプチドと相互作用すると特定されれば、それらの分子を、ＩＬ−１７様ポリペプチド活性を上昇させる又は低下させる能力に関してさらに評価しうる。被験分子とＩＬ−１７様ポリペプチドの相互作用の測定は、細胞ベースの結合測定法、膜結合測定法、溶液相測定法及び免疫測定法を含むいくつかの様式で実施しうる。一般には、被験分子を一定期間ＩＬ−１７様ポリペプチドとインキュベートし、生物活性を測定するための１以上のアッセイによってＩＬ−１７様ポリペプチド活性を決定する。
【０１９８】
被験分子とＩＬ−１７様ポリペプチドの相互作用はまた、免疫測定法においてポリクローナル又はモノクローナル抗体を使用して直接検定することもできる。あるいは、ここで述べるようなエピトープタグを含む修飾形態のＩＬ−１７様ポリペプチドを免疫測定法において使用しうる。
【０１９９】
ＩＬ−１７様ポリペプチドが結合パートナー（例えば受容体又はリガンド）との相互作用を通して生物活性を発揮する場合は、様々なインビトロアッセイを使用して、対応する結合パートナー（選択結合剤、受容体、又はリガンドなど）へのＩＬ−１７様ポリペプチドの結合を測定しうる。これらのアッセイは、ＩＬ−１７様ポリペプチドがその結合パートナーに結合する速度及び／又は程度を上昇させる又は低下させる能力に関して被験分子をスクリーニングするために使用しうる。１つのアッセイでは、ＩＬ−１７様ポリペプチドをマイクロタイタープレートの穴に固定する。次に、放射能標識ＩＬ−１７様結合パートナー（例えばヨウ素化ＩＬ−１７様結合パートナー）と被験分子を一度に１つずつ（いずれかの順序で）又は同時にその穴に加える。インキュベーション後、穴を洗浄し、（シンチレーション計数器を用いて）放射能を計測し、結合パートナーがＩＬ−１７様ポリペプチドに結合した程度を決定することができる。典型的には、分子を一連の濃度で試験し、結果の評価の正確さを期すために試験アッセイの１以上の要素を欠く一連の対照穴を使用することができる。この方法に代わる方法は、タンパク質の「位置」を逆にすること、すなわちＩＬ−１７様結合パートナーをマイクロタイタープレートの穴に固定し、被験分子及び放射能標識ＩＬ−１７様ポリペプチドと共にインキュベートして、ＩＬ−１７様ポリペプチド結合の程度を決定することを含む。例えば、第１８章、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ａｕｓｕｂｅｌら編集、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ（１９９５）参照。
【０２００】
放射能標識に代わるものとして、ＩＬ−１７様ポリペプチド又はその結合パートナーをビオチンに複合してもよく、その後、比色定量によって又はストレプトアビジンの蛍光標識によって検出することができるホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）又はアルカリホスファターゼ（ＡＰ）などの酵素に結合したストレプトアビジンを使用して、ビオチニル化タンパク質の存在を検出することができる。ビオチンに複合したＩＬ−１７様ポリペプチド又はＩＬ−１７様結合パートナーに対する抗体も使用でき、ＡＰ又はＨＲＰに結合した酵素結合ストレプトアビジンとのインキュベーション後に検出することができる。
【０２０１】
ＩＬ−１７様ポリペプチド又はＩＬ−１７様結合パートナーはまた、アガロースビーズ、アクリルビーズ又は他の種類のそのような不活性固相基質への付着によって固定化することもできる。その基質−タンパク質複合体を、相補的タンパク質と被験化合物を含む溶液中に入れることができる。インキュベーション後、遠心分離によってビーズを沈殿させ、ここで述べる方法を用いてＩＬ−１７様ポリペプチドとその結合パートナーの間の結合の量を評価することができる。あるいは、上記基質−タンパク質複合体をカラムに固定することができ、被験分子と相補的タンパク質をそのカラムに通す。その後、ここで述べる手法のいずれか、すなわち放射能標識、抗体結合等を用いてＩＬ−１７様ポリペプチドとその結合パートナーの間の複合体の形成を評価することができる。
【０２０２】
ＩＬ−１７様ポリペプチドとＩＬ−１７様結合パートナー間の複合体の形成を上昇させる又は低下させる被験分子を特定するために有用なもう１つのインビトロアッセイは、ビアコア（ＢＩＡｃｏｒｅ）アッセイシステム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）などの表面プラズモン共鳴検出器システムである。ビアコアシステムは製造者のプロトコールを用いて実施しうる。このアッセイは基本的に、検出器内に位置するデキストラン被覆したセンサーチップへのＩＬ−１７様ポリペプチド又はＩＬ−１７様結合パートナーの共有結合を含む。次に、被験化合物と他の相補的タンパク質を同時に又は連続的に、センサーチップを含むチェンバー内に注入することができる。結合する相補的タンパク質の量を、センサーチップのデキストラン被覆側に物理的に結合した分子量の変化に基づいて評価することができる；分子量の変化は検出器システムによって測定できる。
【０２０３】
一部の場合には、２以上の被験化合物を一緒に、ＩＬ−１７様ポリペプチドとＩＬ−１７様結合パートナーの間の複合体の形成を上昇させる又は低下させる能力に関して評価することが望ましいと考えられる。これらの場合は、そのような付加被験化合物を第一被験化合物と同時に又は第一被験化合物の後に加えることによって、ここで述べるアッセイを容易に修正することができる。アッセイの残りの段階はここで述べるとおりである。
【０２０４】
ここで述べるようなインビトロアッセイは、多数の化合物を、ＩＬ−１７様ポリペプチドとＩＬ−１７様結合パートナーによる複合体形成への作用に関してスクリーニングするために好都合に使用しうる。アッセイは、ファージディスプレイ、合成ペプチド、及び化学合成ライブラリーにおいて生成される化合物をスクリーニングするように自動化しうる。
【０２０５】
ＩＬ−１７様ポリペプチドとＩＬ−１７様結合パートナーの間の複合体の形成を上昇させる又は低下させる化合物はまた、ＩＬ−１７様ポリペプチド又はＩＬ−１７様結合パートナーのいずれかを発現する細胞及び細胞系統を使用して細胞培養においてスクリーニングしうる。細胞及び細胞系統はいかなる哺乳類からも入手しうるが、好ましくはヒト又は他の霊長類、イヌ、又はげっ歯類ソースからである。その表面にＩＬ−１７様結合パートナーを発現する細胞へのＩＬ−１７様ポリペプチドの結合を被験分子の存在下又は不在下で評価し、結合の度合を、例えばＩＬ−１７様結合パートナーに対するビオチニル化抗体を用いたフローサイトメトリーによって測定することができる。細胞培養アッセイは、ここで述べるタンパク質結合測定法において陽性を示す化合物をさらに評価するために好都合に使用できる。
【０２０６】
細胞培養はまた、薬剤候補物質の影響をスクリーニングするためにも使用できる。例えば、薬剤候補物質はＩＬ−１７様遺伝子の発現を低下又は上昇させうる。一部の実施態様では、細胞培養物を薬剤候補物質に暴露した後、生産されるＩＬ−１７様ポリペプチドの量を測定することができる。一部の実施態様では、細胞培養への薬剤候補物質の実際の影響を検出しうる。例えば、特定遺伝子の過剰発現は細胞培養に特定の影響を及ぼしうる。そのような場合は、該遺伝子の発現又は該遺伝子が細胞培養への特定の影響を予防する又は阻害する能力を上昇させる又は低下させる、薬剤候補物質の能力を試験しうる。他の例では、ポリペプチドのフラグメントなどの特定代謝産物の産生は、疾患又は病的状態をもたらす、あるいは疾患又は病的状態に結びつくことがある。そのような場合は、細胞培養におけるそのような代謝産物の産生を低下させる薬剤候補物質の能力を試験しうる。
【０２０７】
Ｐ−３８阻害因子
細胞外刺激と細胞からのＩＬ−１及び／又はＴＮＦαの分泌との間に介入することを所望する場合、シグナル経路に存在するキナーゼの阻害を通してシグナル伝達を遮断することにより、これを達成することができる。これは、例えば、既知のセリン／トレオニン（ｓｅｒ／ｔｈｒ）キナーゼである「Ｐ−３８」（「ＲＫ」又は「ＳＡＰＫ−２」とも呼ばれる、Ｌｅｅら、Ｎａｔｕｒｅ，３７２：７３９（１９９４））の阻害を通して実施できる。Ｈａｎら、Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ，１２６５：２２４−２２７（１９９５）参照。Ｐ−３８への競合結合測定法、及びＬＰＳ刺激後に単球からのＩＬ−１分泌レベルを低下させる同じ阻害因子の有効性に関して線形の関係が示されている。単球のＬＰＳ刺激後、ＴＮＦαについてのメッセンジャーＲＮＡのレベルは１００倍上昇することが示されたが、ＴＮＦαのタンパク質レベルは１０，０００倍上昇した。従って、ＴＮＦシグナル伝達のかなりの増幅が翻訳レベルで起こる。Ｐ−３８の阻害は翻訳効率を低下させると思われ、ＴＮＦαが翻訳制御下にあることのさらなる証拠が、３’非翻訳ｍＲＮＡのセグメント（３’ＵＴＲ）を除去してＴＮＦαについての高い翻訳効率を生じさせた、Ｂｅｕｔｌｅｒら及びＬｅｅの欠失実験の中に認められる。特に、Ｐ−３８阻害因子は、ＴＮＦα  ｍＲＮＡの適切なセグメントを欠失させたとき、ＴＮＦαのレベル（すなわち翻訳効率）に影響を及ぼさなかった。
【０２０８】
高レベルのＴＮＦα及び／又はＩＬ−１は、次のものを含むがそれらに限定されない多くの疾患状態の発症、病因に寄与しうるか又はそれらを悪化させうることが認められている：慢性関節リウマチ；変形性関節症；リウマチ様脊椎炎；痛風性関節炎；炎症性腸疾患；成人呼吸促進症候群（ＡＲＤＳ）；乾癬；クローン病；アレルギー性鼻炎；潰瘍性大腸炎；アナフィラキシー；接触皮膚炎；喘息；ＴＮＦα阻害に感受性のあるウイルス−ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、ＨＩＶ−３、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、インフルエンザ、アデノウイルス、及びＨＳＶ−１、ＨＳＶ−２及び帯状疱疹を含むヘルペスウイルスを包含する抗ウイルス療法；筋変性；悪液質；ライター症候群；ＩＩ型糖尿病；骨吸収疾患；対宿主性移植片反応；虚血再灌流障害；アテローム性動脈硬化症；脳外傷；アルツハイマー病；多発性硬化症；大脳マラリア；敗血症；敗血症性ショック；トキシックショック症候群；感染による発熱及び筋痛。
【０２０９】
置換イミダゾール、ピロール、ピリジン、ピリミジン等の化合物は、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８及びＴＮＦなどの前炎症性サイトカインの阻害による、サイトカインが仲介する疾患の治療における使用が記述されてきた。サイトカインが仲介する疾患の治療における使用のための置換イミダゾールは、米国特許第５，５９３，９９２号；国際公開公報第９３／１４０８１号；同第９７／１８６２６号；同第９６／２１４５２号；同第９６／２１６５４号；同第９６／４０１４３号；同第９７／０５８７８号；同第９７／０５８７８号に述べられている。
【０２１０】
炎症の治療における使用のための置換イミダゾールは、米国特許第３，９２９，８０７号に述べられている。サイトカインを介する疾患の治療における使用のための置換ピロール化合物は、国際公開公報第９７／０５８７７号；同第９７／０５８７８号；同第９７／１６４２６号；同第９７／１６４４１号；及び同第９７／１６４４２号に述べられている。サイトカインを介する疾患の治療における使用のための置換アリール及びヘテロアリール縮合ピロール化合物は、国際公開公報第９８／２２４５７号に述べられている。サイトカインを介する疾患の治療における使用のための置換ピリジン、ピリミジン、ピリミジノン、及びピリダジン化合物は、国際公開公報第９８／２４７８０号；同第９８／２４７８２号；同第９９／２４４０４号；及び同第９９／３２４４８号に述べられている。
【０２１１】
タンパク質の内在化
ｔａｔタンパク質配列（ＨＩＶより）を使用してタンパク質を細胞に内在化することができる。例えば、Ｆａｌｗｅｌｌら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９１：６６４−６６８（１９９４）参照。例えば、ＨＩＶ  ｔａｔタンパク質の１１アミノ酸配列（ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ；配列番号：１３）（「タンパク質形質導入ドメイン」、又はＴＡＴ  ＰＤＴと称する）は、細胞質膜及び細胞の核膜を横切る送達を仲介すると記述されている。Ｓｃｈｗａｒｚｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２８５：１５６９−１５７２（１９９９）；及びＮａｇａｈａｒａら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，４：１４４９−１４５２（１９９８）参照。これらの手法では、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）分析によって観察される、細胞に結合するＦＩＴＣ構築物（ＦＩＴＣ−ＧＧＧＧＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ；配列番号１４）を作製し、腹腔内投与後、こられの構築物を組織に浸透させる。次に、ｔａｔ−ｂｇａｌ融合タンパク質を構築する。この構築物で処理した細胞はｂ−ｇａｌ活性を示した。注入後、肝臓、腎臓、肺、心臓、及び脳組織を含む多くの組織が、これらの手順を用いて発現を示すことが認められた。これらの構築物は細胞に入り込むためにある程度の変性を受けたと考えられる；そこで、細胞への侵入後にリフォールディングが必要であると考えられる。
【０２１２】
所望タンパク質又はポリペプチドを細胞に内在化させるためにｔａｔタンパク質配列を使用しうることは認識される。例えば、ｔａｔタンパク質配列を使用して、ＩＬ−１７様分子の活性を阻害するためにＩＬ−１７様アンタゴニスト（抗ＩＬ−１７様選択結合剤、小分子、可溶性受容体、又はアンチセンスオリゴヌクレオチドなど）を細胞内に投与することができる。ここで使用するとき、「ＩＬ−１７様分子」の語は、ここで定義するＩＬ−１７様核酸分子とＩＬ−１７様ポリペプチドの両方を指す。所望する場合は、ＩＬ−１７様タンパク質自体もこれらの手順を用いて細胞内に投与しうる。Ｓｔｒａｕｓｓ，Ｅ．，「Ｉｎｔｒｏｄｕｃｉｎｇ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  Ｉｎｔｏ  ｔｈｅ  Ｂｏｄｙ’ｓ  Ｃｅｌｌｓ」，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２８５：１４６６−１４６７（１９９９）も参照のこと。
【０２１３】
治療用途
ヒトＩＬ−１７様ポリペプチドの発現は次の種類の細胞において認められている：精巣、前立腺、乳腺、リンパ節、及び大腿骨。マウスＩＬ−１７様ポリペプチドの発現は次の種類の細胞において認められている：Ｔ細胞、及び胚細胞。
【０２１４】
本発明のＩＬ−１７様核酸、ポリペプチド、及びアゴニスト及びアンタゴニストで治療する、診断する、改善する、又は予防することができる急性及び慢性疾患の非排他的リストは次のものを含む：
免疫系機能不全に関わる疾患の診断及び／又は治療。そのような疾患の例は、慢性関節リウマチ、乾癬性関節炎、炎症性関節炎、変形性関節症、炎症性関節疾患、自己免疫性脈管炎、多発性硬化症、狼瘡、糖尿病（例えばインスリン依存性糖尿病）、炎症性腸疾患、移植拒絶反応、対宿主性移植片病、及び挫傷、捻挫、軟骨損傷、外傷、整形外科手術、乾癬又は他の疾患過程を含むが、これらに限定されない。アレルギーを含むがこれに限定されない、免疫系の機能不全によって影響を受ける他の疾患は、本発明の範囲内に包含される。本発明のＩＬ−１７様核酸、ポリペプチド、及びアゴニスト及びアンタゴニストはまた、Ｔ細胞増殖を阻害するため、Ｔ細胞活性化を阻害するため、及び／又はＢ細胞増殖及び／又は免疫グロブリン分泌を阻害するためにも使用できる。
【０２１５】
感染に関わる疾患の診断及び／又は治療。そのような疾患の例は、らい、肝炎又はＨＩＶなどのウイルス感染、クロストリジウム属（ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）に関連する下痢を含むクロストリジウム属関連疾患、肺結核などの細菌感染、発熱、肝の急性期応答、敗血症、敗血症性ショックなどの細菌又はウイルスによる急性熱性疾病を含むが、これらに限定されない。感染に関わる他の疾患は本発明の範囲内に包含される。
【０２１６】
体重障害に関わる疾患の診断及び／又は治療。そのような疾患の例は、肥満、食欲不振、ＡＩＤＳ誘発の悪液質を含む悪液質、ミオパシー（例えば敗血症に置けるような筋タンパク質代謝）、及び低血糖症を含むが、これらに限定されない。体重障害に関わる他の疾患は本発明の範囲内に包含される。
【０２１７】
神経機能不全に関わる疾患の診断及び／又は治療。そのような疾患の例は、アルツハイマー病、パーキンソン病、神経毒性（例えばＨＩＶによって誘発されるような）、ＡＬＳ、脳損傷、ストレス、うつ病、痛覚及び他の疼痛（癌関連の疼痛を含む）、痛覚過敏、てんかん、学習障害、及び記憶障害、睡眠障害、及び末梢及び中枢神経障害を含むが、これらに限定されない。他の神経障害は本発明の範囲内に包含される。
【０２１８】
肺に関わる疾患の診断及び／又は治療。そのような疾患の例は、間質性肺疾患を含む急性又は慢性肺損傷、急性呼吸疾患症候群、肺高血圧、気腫、嚢胞性線維症、肺線維症、及び喘息を含むが、これらに限定されない。他の肺疾患は本発明の範囲内に包含される。
【０２１９】
皮膚に関わる疾患の診断及び／又は治療。そのような疾患の例は、乾癬、湿疹、及び創傷治癒を含むが、これらに限定されない。皮膚の他の疾患は本発明の範囲内に包含される。
【０２２０】
腎臓に関わる疾患の診断及び／又は治療。そのような疾患の例は、急性及び慢性糸球体腎炎を含むが、これらに限定されない。腎臓の他の疾患は本発明の範囲内に包含される。
【０２２１】
骨に関わる疾患の診断及び／又は治療。そのような疾患の例は、骨粗しょう症、大理石骨病、骨形成不全、パジェット病、歯周病、側頭顎関節疾患、及び高カルシウム血症を含むが、これらに限定されない。骨の他の疾患は本発明の範囲内に包含される。
【０２２２】
血管系に関わる疾患の診断及び／又は治療。そのような疾患の例は、出血又は発作、出血性ショック、心虚血及び脳虚血（例えば、各々が神経変性を導きうる、外傷の結果として脳損傷、てんかん、出血又は発作）を含む虚血、アテローム性動脈硬化症、うっ血性心不全、再狭窄、再灌流障害、及び血管新生を含むが、これらに限定されない。血管系の他の疾患は本発明の範囲内に包含される。
【０２２３】
腫瘍細胞の診断及び／又は治療。そのような疾患の例は、リンパ腫、骨肉腫、骨髄単球性白血病（Ｍ４  ＡＭＬ）を含む慢性及び急性骨髄性白血病（ＡＭＬ及びＣＭＬ）、及び他の白血病、多発性骨髄腫、肺癌、乳癌、腫瘍転移、及び放射線療法からの副作用を含むが、これらに限定されない。腫瘍細胞に関わる他の疾患は本発明の範囲内に包含される。
【０２２４】
生殖障害の診断及び／又は治療。そのような疾患の例は、不妊症、流産、早産及び未熟分娩、及び子宮内膜症を含むが、これらに限定されない。生殖系に関わる他の疾患は本発明の範囲内に包含される。
【０２２５】
眼疾患の診断及び／又は治療。そのような疾患の例は、例えば角膜移植に関連しうるような、炎症性眼疾患、網膜変性、盲、黄斑変性、緑内障、ブドウ膜炎、及び網膜神経障害を含むが、これらに限定されない。眼の他の疾患は本発明の範囲内に包含される。
【０２２６】
炎症に関わる疾患の診断及び／又は治療。そのような疾患の例は、ここで述べるものを含むがそれらに限定されない。
【０２２７】
また、本発明のＩＬ−１７様核酸、ポリペプチド、及びアゴニストは、骨髄及び脾の細胞充実性、好酸球、コロニー形成細胞（ＣＦＣ）、及びリンパ球産生を上昇させうることが認められた。本発明のＩＬ−１７様核酸及びポリペプチドは、それ故、少なくとも１個の顆粒球及び／又は巨核球系列へと運命付けられた少なくとも１個の初期又は多能性前駆細胞の増殖及び／又は分化の刺激を含む、造血細胞増殖を調節する。逆に、ＩＬ−１７様アンタゴニストは、これらの細胞のレベル及び／又は産生を低下させることができる。
【０２２８】
さらに、本発明のＩＬ−１７様核酸、ポリペプチド、及びアゴニストは、前炎症作用を有する。ＩＬ−１７様ポリペプチドは、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β及びＩＬ−６などの前炎症性サイトカインの産生を誘導する。
【０２２９】
加えて、本発明のＩＬ−１７様核酸、ポリペプチド、及びアゴニスト及びアンタゴニストは、造血、及び好中球、顆粒球又は血小板の産生を刺激するために使用でき、それ故化学療法を受けている患者のために有用である。本発明のＩＬ−１７様核酸、ポリペプチド、及びアゴニスト及びアンタゴニストはまた、ウイルス又は細菌感染、免疫関連疾患、貧血、白血病、血小板減少症、尿毒症、フォン・ヴィレブランド病、術後心臓血管機能不全、ＡＩＤＳ（後天性免疫不全症候群）に関連する骨髄機能不全の治療、及び消化器系、関節及び肺の炎症性疾患を治療するためにも使用しうる。
【０２３０】
本発明の範囲内の作用物質を使用して治療しうる他の疾患は、急性膵炎、慢性疲労症候群、線維筋痛、及び川崎病（ＭＬＮＳ）を含む。
【０２３１】
ＩＬ−１、ＩＬ−１ｒａ、本発明のＩＬ−１７様ポリペプチドのリガンド、及び／又は本発明のＩＬ−１７様ポリペプチド自体の１つ以上の望ましくないレベルに関連する他の疾患は、本発明の範囲内に包含される。望ましくないレベルは、ＩＬ−１、ＩＬ−１ｒａ、本発明のＩＬ−１７様ポリペプチドの受容体、及び／又はここで述べるＩＬ−１７様ポリペプチドの過剰及び／又は正常以下のレベルを含む。
【０２３２】
ＩＬ−１阻害因子は、多くの機序から生じうる、ＩＬ−１に対する細胞受容体の活性を特異的に妨げることができる任意のタンパク質を含む。そのような機序は、ＩＬ−１産生の下方調節、遊離ＩＬ−１への結合、ＩＬ−１とその受容体の結合に干渉すること、ＩＬ−１受容体複合体の形成（すなわち、ＩＬ−１受容体とＩＬ−１受容体補助タンパク質の結合）に干渉すること、又はその受容体への結合後のＩＬ−１シグナル伝達の変調に干渉することを含む。インターロイキン−１阻害因子のクラスは次のものを含む：
ここで述べるような、ＩＬ−１ｒａなどのインターロイキン−１受容体アンタゴニスト；
抗ＩＬ−１受容体モノクローナル抗体（例えば欧州特許第６２３６７４号）；
可溶性ＩＬ−１受容体などのＩＬ−１結合タンパク質（例えば米国特許第５，４９２，８８８号、同第、５，４８８，０３２号、及び同第５，４６４，９３７号、同第５，３１９，０７１号、及び同第５，１８０，８１２号）；
抗ＩＬ−１モノクローナル抗体（例えば国際公開公報第９５０１９９７号、同第９４０２６２７号、同第９００６３７１号、米国特許第４，９３５，３４３号、欧州特許第３６４７７８号、同第２６７６１１号及び同第２２００６３号）；
ＩＬ−１受容体補助タンパク質及びそれに対する抗体（例えば国際公開公報第９６／２３０６７号）；
ＩＬ−１βの産生及び分泌を阻害するために使用できる、インターロイキン−１β変換酵素（ＩＣＥ）又はカスパーゼＩの阻害因子；
インターロイキン−１βプロテアーゼ阻害因子；
ＩＬ−１のインビボでの合成又は細胞外放出を阻止する他の化合物及びタンパク質。
【０２３３】
例示的なＩＬ−１阻害因子は次の参考文献の中に開示されている：
米国特許第５７４７４４４号；第５３５９０３２号；第５６０８０３５号；第５８４３９０５号；第５３５９０３２号；第５８６６５７６号；第５８６９６６０号；第５８６９３１５号；第５８７２０９５号；第５９５５４８０号；
国際（ＷＯ）特許出願公開公報第９８／２１９５７号、第９６／０９３２３号、第９１／１７１８４号、第９６／４０９０７号、第９８／３２７３３号、第９８／４２３２５号、第９８／４４９４０号、第９８／４７８９２号、第９８／５６３７７号、第９９／０３８３７号、第９９／０６４２６号、第９９／０６０４２号、第９１／１７２４９号、第９８／３２７３３号、第９８／１７６６１号、第９７／０８１７４号、第９５／３４３２６号、第９９／３６４２６号、及び第９９／３６４１５号；
欧州（ＥＰ）特許出願第５３４９７８号及び第８９４７９５号；及びフランス特許出願第ＦＲ  ２７６２５１４号。
【０２３４】
インターロイキン−１受容体アンタゴニスト（ＩＬ−１ｒａ）は、インターロイキン−１の天然阻害因子として働くヒトタンパク質である。好ましい受容体アンタゴニスト（ＩＬ−１ｒａ及びその変異体と誘導体を含む）、ならびにそれを作製し、使用する方法は、米国特許第５，０７５，２２２号；国際公開公報第９１／０８２８５号；国際公開公報第９１／１７１８４号；ＡＵ  ９１７３６３６号；国際公開公報第９２／１６２２１号；国際公開公報第９３／２１９４６号；国際公開公報第９４／０６４５７号；国際公開公報第９４／２１２７５号；ＦＲ  ２７０６７７２号；国際公開公報第９４／２１２３５号；ＤＥ  ４２１９６２６号；国際公開公報第９４／２０５１７号；国際公開公報第９６／２２７９３号；国際公開公報第９７／２８８２８号；及び国際公開公報第９９／３６５４１号に述べられている。該タンパク質は、グリコシル化ならびに非グリコシル化ＩＬ−１受容体アンタゴニストを包含する。
【０２３５】
特に、ＩＬ−１ｒａの３つの例示的形態及びその変異体が米国特許第５，０７５，２２２号に開示され、記述されている。米国特許第５，０７５，２２２号では「ＩＬ−１ｉ」と呼ばれる、これらのうちの最初のものは、トリス緩衝液ｐＨ７．６中、約５２ｍＭ  ＮａＣｌでＭｏｎｏＱ  ＦＰＬＣカラムから溶出し、およその等電点が４．８、ＳＤＳ−ＰＡＧＥで２２−２３ｋＤの分子量と特徴付けられる。２番目のＩＬ−１ｒａβは、４８ｍＭ  ＮａＣｌでＭｏｎｏＱカラムから溶出する、２２−２３ｋＤタンパク質と特徴付けられる。ＩＬ−１ｒａα及びＩＬ−１ｒａβのいずれもグリコシル化されている。３番目のＩＬ−１ｒａｘは、４８ｍＭ  ＮａＣｌでＭｏｎｏＱカラムから溶出する、２０ｋＤタンパク質として特徴付けられ、グリコシル化されていない。米国特許第５，０７５，２２２号はまた、該阻害因子をコードする役割を担う遺伝子を単離し、その遺伝子を適切なベクター及び細胞型にクローニングして、該阻害因子を生産するようにその遺伝子を発現する方法を開示している。
【０２３６】
当業者は、生じる分子が生物学的に活性である（例えばここで列挙するもののような疾患及び障害の１つ以上に影響を及ぼす能力を有する）ことを条件として、欠失、挿入、及び置換の多くの組合せ（ここでは個別に又は集合的に「変異体」）がＩＬ−１ｒａのアミノ酸配列内で実施できることを認識する。
【０２３７】
本発明によって考慮されるように、ＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニスト（抗ＩＬ−１７様選択結合剤［抗体など］、ＩＬ−１７様ポリペプチド受容体［可溶性ＩＬ−１７様受容体など］、小分子、及びアンチセンスオリゴヌクレオチドを含むが、これらに限定されない）は、他の療法の補助として、及びまた治療する適応症に適した他の医薬組成物と共に投与しうる。ＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニスト、及び／又はＩＬ−１７様受容体自体、及び１以上の付加的な治療法又は医薬製剤のいずれかを、別々に、連続的に、又は同時に投与しうる。
【０２３８】
特定実施態様では、本発明は、ここで列挙する疾患及び障害の治療又は予防のための１以上のＴＮＦ阻害因子のいずれかと組み合わせたＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニスト、及び／又はＩＬ−１７様受容体の使用（前処置、後処置、又は同時処置）を対象とする。
【０２３９】
そのようなＴＮＦ阻害因子は、ＴＮＦのインビボでの合成又は細胞外放出を阻止する化合物及びタンパク質を含む。特定実施態様では、本発明は、次のＴＮＦ阻害因子の１以上のいずれかと組み合わせたＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニスト、及び／又はＩＬ−１７様受容体の使用（前処置、後処置、又は同時処置）を対象とする：ＴＮＦ結合タンパク質（ここで定義する、可溶性ＴＮＦ  Ｉ型受容体及び可溶性ＴＮＦ  ＩＩ型受容体（「ｓＴＮＦＲ」））；抗ＴＮＦ抗体；顆粒球コロニー刺激因子；サリドマイド；ＢＮ  ５０７３０；テニダップ；Ｅ  ５５３１；チアパファント（ｔｉａｐａｆａｎｔ）  ＰＣＡ４２４８；ニメスリド；パナビール；ロリプラム；ＲＰ  ７３４０１；ペプチドＴ；ＭＤＬ  ２０１，４４９Ａ；（１Ｒ，３Ｓ）−シス−１−［９−（２，６−ジアミノプリニル）］−３−ヒドロキシ−４−シクロペンテンヒドロクロリド；（１Ｒ，３Ｒ）−トランス−１−［９−（２，６−ジアミノ）プリン］−３−アセトキシシクロペンタン；（１Ｒ，３Ｒ）−トランス−１−（９−アデニル）−３−アジドシクロペンタンヒドロクロリド及び（１Ｒ，３Ｒ）−トランス−１−（６−ヒドロキシ−プリン−９−イル）−３−アジドシクロペンタン。ＴＮＦ結合タンパク質は、この技術分野において開示されている（欧州特許第３０８  ３７８号、欧州特許第４２２  ３３９号、ＧＢ  ２  ２１８  １０１号、欧州特許第３９３  ４３８号、国際公開公報第９０／１３５７５号、欧州特許第３９８  ３２７号、欧州特許第４１２  ４８６号、国際公開公報第９１／０３５５３号、欧州特許第４１８  ０１４号、ＪＰ  １２７，８００／１９９１号、欧州特許第４３３  ９００号、米国特許第５，１３６，０２１号、ＧＢ  ２  ２４６  ５６９号、欧州特許第４６４  ５３３号、国際公開公報第９２／０１００２号、国際公開公報第９２／１３０９５号、国際公開公報第９２／１６２２１号、欧州特許第５１２  ５２８号、欧州特許第５２６  ９０５号、国際公開公報第９３／０７８６３号、欧州特許第５６８  ９２８号、国際公開公報第９３／２１９４６号、国際公開公報第９３／１９７７７号、欧州特許第４１７  ５６３号、国際公開公報第９４／０６４７６号、及びＰＣＴ国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ９７／１２２４４号）。
【０２４０】
例えば、欧州特許第３９３  ４３８号及び欧州特許第４２２  ３３９号は、集合的に「ｓＴＮＦＲ」と称される、可溶性ＴＮＦ  Ｉ型受容体（「ｓＴＮＦＲ−Ｉ」又は「３０ｋＤａ  ＴＮＦ阻害因子」としても知られる）及び可溶性ＴＮＦ  ＩＩ型受容体（「ｓＴＮＦＲ−ＩＩ」又は「４０ｋＤａ  ＴＮＦ阻害因子」としても知られる）、ならびにその修飾形態（例えばフラグメント、機能性誘導体及び変異体）のアミノ酸及び核酸配列を教示している。欧州特許第３９３  ４３８号及び欧州特許第４２２  ３３９号はまた、該阻害因子をコードする役割を担う遺伝子を単離し、その遺伝子を適切なベクター及び細胞型にクローニングして、該阻害因子を生産するようにその遺伝子を発現する方法を開示している。さらに、ｓＴＮＦＲ−Ｉ及びｓＴＮＦＲ−ＩＩの多価形態（すなわち２個以上の活性部分を含む分子）も開示された。１つの実施態様では、この多価形態を、少なくとも１つのＴＮＦ阻害因子と臨床的に許容されるリンカーを有するもう１つの部分、例えばポリエチレングリコールとの化学的カップリングによって（国際公開公報第９２／１６２２１号及び国際公開公報第９５／３４３２６号）、ペプチドリンカーによって（Ｎｅｖｅら（１９９６）、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ，８（５）：３６５−３７０）、ビオチンへの化学的カップリング及びその後のアビジンへの結合によって（国際公開公報第９１／０３５５３号）、及び最後に、キメラ抗体分子を結合することによって（米国特許第５，１１６，９６４号、国際公開公報第８９／０９６２２号、国際公開公報第９１／１６４３７号及び欧州特許第３１５０６２号）、構築しうる。
【０２４１】
抗ＴＮＦ抗体は、ＭＡＫ  １９５Ｆ  Ｆａｂ抗体（Ｈｏｌｌｅｒら（１９９３）、１ｓｔ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  ｏｎ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ｉｎ  Ｂｏｎｅ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，１４７）；ＣＤＰ  ５７１抗ＴＮＦモノクローナル抗体（Ｒａｎｋｉｎら、（１９９５）、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ，３４：３３４−３４２）；ＢＡＹ  Ｘ１３５１マウス抗腫瘍壊死因子モノクローナル抗体（Ｋｉｅｆｔら（１９９５）、７ｔｈ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｎｇｒｅｓｓ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，ｐ．９）；ＣｅｎＴＮＦ  ｃＡ２抗ＴＮＦモノクローナル抗体（Ｅｌｌｉｏｔｔら（１９９４）、Ｌａｎｃｅｔ，３４４：１１２５−１１２７及びＥｌｌｉｏｔｔら（１９９４）、Ｌａｎｃｅｔ，３４４：１１０５−１１１０）を含む。
【０２４２】
特定実施態様では、本発明は、分泌又は可溶性ヒトｆａｓ抗原又はその組換え型と組み合わせたＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニスト、及び／又はＩＬ−１７様受容体の使用（前処置、後処置、又は同時処置）を対象とする（国際公開公報第９６／２０２０６号及びＭｏｕｎｔｚら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１５５：４８２９−４８３７；及び欧州特許第５１０  ６９１号）。国際公開公報第９６／２０２０６号は、分泌ヒトｆａｓ抗原（天然及びＩｇ融合タンパク質を含む組換え）、可溶性組換えヒトｆａｓ抗原をコードする役割を担う遺伝子を単離する方法、その遺伝子を適切なベクター及び細胞型においてクローニングする方法、及び該阻害因子を生産するようにその遺伝子を発現する方法を開示している。欧州特許第５１０  ６９１号は、可溶性ｆａｓ抗原を含むヒトｆａｓ抗原をコードするＤＮＡ、前記ＤＮＡを発現するベクター及び該ベクターでトランスフェクトした形質転換体を教示している。非経口的に投与するとき、分泌又は可溶性ｆａｓ抗原融合タンパク質の各々の用量は、一般に約１μｇ／ｋｇから約１００μｇ／ｋｇである。
【０２４３】
リウマチ性疾患などの急性及び慢性炎症を含む、ここで列挙する疾患及び障害の現在の治療は、一般に疼痛及び炎症を管理するための第一選択薬の使用を含む；これらの薬剤は非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）と分類される。二次治療は、コルチコステロイド、遅効性抗リウマチ薬（ＳＡＡＲＤ）、又は疾患修飾（ＤＭ）薬を含む。下記の化合物に関する情報は、Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ，第１６版、Ｍｅｒｃｋ，Ｓｈａｒｐ  ＆  Ｄｏｈｍｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ．，Ｒａｈｗａｙ，ＮＪ（１９９２）及びＰｈａｒｍａｐｒｏｊｅｃｔｓ，ＰＪＢ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｌｔｄ．に見出すことができる。
【０２４４】
特定実施態様では、本発明は、リウマチ性疾患及び対宿主性移植片病などの急性及び慢性炎症を含む、ここで列挙する疾患及び障害の治療のための、ＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニスト及び／又はＩＬ−１７様受容体、及び１以上のＮＳＡＩＤのいずれかの使用を対象とする。ＮＳＡＩＤの抗炎症作用は、少なくとも一部には、プロスタグランジン合成の阻害に帰せられる（ＧｏｏｄｍａｎとＧｉｌｍａｎ，「Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ」より、ＭａｃＭｉｌｌａｎ  第７版（１９８５））。ＮＳＡＩＤは少なくとも９つの群に特徴付けられる：（１）サリチル酸誘導体；（２）プロピオン酸誘導体；（３）酢酸誘導体；（４）フェナム酸誘導体；（５）カルボン酸誘導体；（６）酪酸誘導体；（７）オキシカム；（８）ピラゾール、及び（９）ピラゾロン。
【０２４５】
もう１つの実施態様では、本発明は、１以上のサリチル酸誘導体、そのプロドラッグエステル又は医薬適合性の塩のいずれかと組み合わせたＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニスト、及び／又はＩＬ−１７様受容体の使用（前処置、後処置、又は同時処置）を対象とする。そのようなサリチル酸誘導体、そのプロドラッグエステル及び医薬適合性の塩は次のものを含む：アセトアミノサロール、アロキシプリン、アスピリン、ベノリレート、ブロモサリゲニン、アセチルサリチル酸カルシウム、トリサリチル酸コリンマグネシウム、サリチル酸マグネシウム、サリチル酸コリン、ジフルシナル、エーテルサレート、フェンドサル、ゲンチジン酸、サリチル酸グリコール、サリチル酸イミダゾール、アセチルサリチル酸リシン、メサラミン、サリチル酸モルホリン、１−ナフチルサリシレート、オルサラジン、パラサルミド、アセチルサリチル酸フェニル、サリチル酸フェニル、サラセタミド、サリチルアミドＯ−酢酸、サルサレート、サリチル酸ナトリウム及びスルファサラジン。同様の鎮痛及び抗炎症特性を有する構造的に関連するサリチル酸誘導体もこの群に包含されることが意図されている。
【０２４６】
さらなる特定実施態様では、本発明は、１以上のプロピオン酸誘導体、そのプロドラッグエステル又は医薬適合性の塩のいずれかと組み合わせたＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニスト、及び／又はＩＬ−１７様受容体の使用（前処置、後処置、又は同時処置）を対象とする。上記プロピオン酸誘導体、そのプロドラッグエステル、及び医薬適合性の塩は次のものを含む：アルミノプロフェン、ベノキサプロフェン、ｂｕｃｌｏｘｉｃ  ａｃｉｄ、カルプロフェン、デキシンドプロフェン、フェノプロフェン、フルノキサプロフェン、フルプロフェン、フルルビプロフェン、フルクロプロフェン、イブプロフェン、イブプロフェンアルミニウム、イブプロキサム、インドプロフェン、イソプロフェン、ケトプロフェン、ロキソプロフェン、ミロプロフェン、ナプロキセン、ナプロキセンナトリウム、オキサプロジン、ピケトプロフェン、ピメプロフェン、ピルプロフェン、プラノプロフェン、プロチジン酸、ピリドキシプロフェン、スプロフェン、チアプロフェン酸及びチオキサプロフェン。同様の鎮痛及び抗炎症特性を有する構造的に関連するプロピオン酸誘導体もこの群に包含されることが意図されている。
【０２４７】
さらにもう１つの特定実施態様では、本発明は、１以上の酢酸誘導体、そのプロドラッグエステル又は医薬適合性の塩のいずれかと組み合わせたＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニスト、及び／又はＩＬ−１７様受容体の使用（前処置、後処置、又は同時処置）を対象とする。上記酢酸誘導体、そのプロドラッグエステル、及び医薬適合性の塩は次のものを含む：アセメタシン、アルクロフェナク、アンフェナク、ブフェキサマク、シンメタシン、クロピラク、デルメタシン、ジクロフェナクカリウム、ジクロフェナクナトリウム、エトドラク、フェルビナク、フェンクロフェナク、フェンクロラク、フェンクロジン酸（ｆｅｎｃｌｏｚｉｃ  ａｃｉｄ）、フェンチアザク、フロフェナク、グルカメタシン、イブフェナク、インドメタシン、イソフェゾラク、イソキセパク、ロナゾラク、メチアジン酸、オキサメタシン、オクスピナク、ピメタシン、プログルメタシン、スリンダック、タルメタシン、チアラミド、チオピナク、トルメチン、トルメチンナトリウム、ジドメタシン及びゾメピラク。同様の鎮痛及び抗炎症特性を有する構造的に関連する酢酸誘導体もこの群に包含されることが意図されている。
【０２４８】
さらにもう１つの特定実施態様では、本発明は、１以上のフェナム酸誘導体、そのプロドラッグエステル又は医薬適合性の塩のいずれかと組み合わせたＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニスト、及び／又はＩＬ−１７様受容体の使用（前処置、後処置、又は同時処置）を対象とする。上記フェナム酸誘導体、そのプロドラッグエステル、及び医薬適合性の塩は次のものを含む：エンフェナム酸、エトフェナメート、フルフェナム酸、イソニキシン、メクロフェナム酸、メクロフェナートナトリウム、メドフェナム酸、メフェナム酸、ニフルム酸、タルニフルメート、テロフェナメート、トルフェナム酸及びウフェナメート。同様の鎮痛及び抗炎症特性を有する構造的に関連するフェナム酸誘導体もこの群に包含されることが意図されている。
【０２４９】
さらなる特定実施態様では、本発明は、１以上のカルボン酸誘導体、そのプロドラッグエステル又は医薬適合性の塩のいずれかと組み合わせたＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニスト、及び／又はＩＬ−１７様受容体の使用（前処置、後処置、又は同時処置）を対象とする。上記カルボン酸誘導体、そのプロドラッグエステル、及び医薬適合性の塩は次のものを含む：クリダナク、ジフルニサル、フルフェニサル、イノリジン、ケトロラク及びチノリジン。同様の鎮痛及び抗炎症特性を有する構造的に関連するカルボン酸誘導体もこの群に包含されることが意図されている。
【０２５０】
さらにもう１つの特定実施態様では、本発明は、１以上の酪酸誘導体、そのプロドラッグエステル又は医薬適合性の塩のいずれかと組み合わせたＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニスト、及び／又はＩＬ−１７様受容体の使用（前処置、後処置、又は同時処置）を対象とする。上記酪酸誘導体、そのプロドラッグエステル、及び医薬適合性の塩は次のものを含む：ブマジゾン、ブチブフェン、フェンブフェン及びキセンブシン。同様の鎮痛及び抗炎症特性を有する構造的に関連する酪酸誘導体もこの群に包含されることが意図されている。
【０２５１】
もう１つの特定実施態様では、本発明は、１以上のオキシカム、そのプロドラッグエステル又は医薬適合性の塩のいずれかと組み合わせたＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニスト、及び／又はＩＬ−１７様受容体の使用（前処置、後処置、又は同時処置）を対象とする。上記オキシカム、そのプロドラッグエステル、及び医薬適合性の塩は次のものを含む：ドロキシカム、エノリカム、イソキシカム、ピロキシカム、スドキシカム、テノキシカム及び４−ヒドロキシル−１，２−ベンゾチアジン−１，１−ジオキシド−４−（Ｎ−フェニル）−カルボキサミド。同様の鎮痛及び抗炎症特性を有する構造的に関連するオキシカムもこの群に包含されることが意図されている。
【０２５２】
さらにもう１つの特定実施態様では、本発明は、１以上のピラゾール、そのプロドラッグエステル又は医薬適合性の塩のいずれかと組み合わせたＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニスト、及び／又はＩＬ−１７様受容体の使用（前処置、後処置、又は同時処置）を対象とする。使用しうるピラゾール、そのプロドラッグエステル、及び医薬適合性の塩は次のものを含む：ジフェナミゾール及びエピリゾール。同様の鎮痛及び抗炎症特性を有する構造的に関連するピラゾールもこの群に包含されることが意図されている。
【０２５３】
さらなる特定実施態様では、本発明は、１以上のピラゾロン、そのプロドラッグエステル又は医薬適合性の塩のいずれかと組み合わせたＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニスト、及び／又はＩＬ−１７様受容体の使用（前処置、後処置、又は同時処置）を対象とする。使用しうるピラゾロン、そのプロドラッグエステル、及び医薬適合性の塩は次のものを含む：アパゾン、アザプロパゾン、ベンズピペリロン、フェプラゾン、モフェブタゾン、モラゾン、オキシフェンブタゾン、フェニルブタゾン、ピペブゾン、プロピルフェナゾン、ラミフェナゾン、スキシブゾン及びチアゾリノブタゾン。同様の鎮痛及び抗炎症特性を有する構造的に関連するピラゾロンもこの群に包含されることが意図されている。
【０２５４】
もう１つの特定実施態様では、本発明は、次のＮＳＡＩＤの１つ以上のいずれかと組み合わせたＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニスト、及び／又はＩＬ−１７様受容体の使用（前処置、後処置、又は同時処置）を対象とする：ε−アセトアミドカプロン酸、Ｓ−アデノシルメチオニン、３−アミノ−４−ヒドロキシ酪酸、アミキセトリン、アニトラザフェン、アントラフェニン、ベンダザック、ベンダザックリシネート、ベンジダミン、ベプロジン、ブロペラモール、ブコロム、ブフェゾラク、シプロクアゾン、クロキシメート、ダジダミン、デボキサメト、デトミジン、ジフェンピラミド、ジフェンパイラミド、ジフィサラミン、ジタゾール、エモルファゾン、ファネチゾルメシレート、フェンフルミゾール、フロクタフェニン、フルミゾール、フルニキシン、フルプロクアゾン、フォピルトリン、フォスフォサル、グアイメサル、グアイアゾレン、イソニキシルン（ｉｓｏｎｉｘｉｒｎ）、レフェタミンＨＣｌ、レフルノミド、ロフェミゾール、ロチファゾール、リシンクロニキシネート、メセクラゾン、ナブメトン、ニクチンドール、ニメスリド、オルゴテイン、オルパノキシン、オキサセプロル、オキサパドル、パラニリン、ペリソキサル、クエン酸ペリソキサル、ピフォキシム、ピプロキセン、ピラゾラク、ピルフェニドン、プロクアゾン、プロキサゾール、チエラビンＢ、チフラミゾール、チメガジン、トレクチン、トルパドール、トリプタミド、及び４８０１５６Ｓ、ＡＡ８６１、ＡＤ１５９０、ＡＦＰ８０２、ＡＦＰ８６０、ＡＩ７７Ｂ、ＡＰ５０４、ＡＵ８００１、ＢＰＰＣ、ＢＷ５４０Ｃ、ＣＨＩＮＯＩＮ  １２７、ＣＮ１００、ＥＢ３８２、ＥＬ５０８、Ｆ１０４４、ＦＫ−５０６、ＧＶ３６５８、ＩＴＦ１８２、ＫＣＮＴＥＩ６０９０、ＫＭＥ４、ＬＡ２８５１、ＭＲ７１４、ＭＲ８９７、ＭＹ３０９、ＯＮＯ３１４４、ＰＲ８２３、ＰＶ１０２、ＰＶ１０８、Ｒ８３０、ＲＳ２１３１、ＳＣＲ１５２、ＳＨ４４０、ＳＩＲ１３３、ＳＰＡＳ５１０、ＳＱ２７２３９、ＳＴ２８１、ＳＹ６００１、ＴＡ６０、ＴＡＩ−９０１（４−ベンゾイル−１−インダンカルボン酸）、ＴＶＸ２７０６、Ｕ６０２５７、ＵＲ２３０１及びＷＹ４１７７０などの会社コード番号によって示されるもの。上記ＮＳＡＩＤと同様の鎮痛及び抗炎症特性を有する構造的に関連するＮＳＡＩＤも、この群に包含されることが意図されている。
【０２５５】
さらにもう１つの特定実施態様では、本発明は、リウマチ性疾患、対宿主性移植片病及び多発性硬化症などの急性及び慢性炎症を含む、ここで列挙する疾患及び障害の治療のための、１以上のコルチコステロイド、そのプロドラッグエステル又は医薬適合性の塩のいずれかと組み合わせたＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニスト、及び／又はＩＬ−１７様受容体の使用（前処置、後処置、又は同時処置）を対象とする。コルチコステロイド、そのプロドラッグエステル、及び医薬適合性の塩は、ヒドロコルチゾン、及び、２１−アセトキシプレグネノロン、アルクロメラゾン、アルゲストン、アムシノニド、ベクロメタゾン、ベタメタゾン、吉草酸ベタメタゾン、ブデソニド、クロロプレドニゾン、クロベタゾール、プロピオン酸クロベタゾール、クロベタゾン、酪酸クロベタゾン、クロコルトロン、クロプレドノール、コルチコステロン、コルチゾン、コルチバゾール、デフラザコン、デソニド、デスオキシメラゾン、デキサメタゾン、ジフロラゾン、ジフルコルトロン、ジフルプレドネート、エノキソロン、フルアザコート、フルクロロニド、フルメタゾン、ピバル酸フルメタゾン、フルシノロンアセトニド、フルニソリド、フルオシノニド、フルオロシノロンアセトニド、フルオコルチンブチル、フルオコルトロン、ヘキサン酸フルオコルトロン、吉草酸ジフルコルトロン、フルオロメトロン、酢酸フルペロロン、酢酸フルプレドニデン、フルプレドニゾロン、フルランデノリド、ホルモコルタール、ハルシノニド、ハロメタゾン、酢酸ハロプレドン、ヒドロコルタメート、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、酪酸ヒドロコルチゾン、リン酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン２１−コハク酸ナトリウム、ヒドロコルチゾンテブテート、マジプレドン、メドリゾン、メプレドニゾン、メチルプレドニゾロン、モメタゾンフロエート、パラメタゾン、プレドニカルベート、プレドニゾロン、プレドニゾロン２１−ジエドリアミノアセテート、リン酸プレドニゾロンナトリウム、コハク酸プレドニゾロンナトリウム、プレドニゾロンナトリウム２１−ｍ−スルホベンゾエート、プレドニゾロンナトリウム２１−ステアログリコレート、プレドニゾロンテブテート、プレドニゾロン２１−トリメチルアセテート、プレドニゾン、プレドニバル、プレドニリデン、プレドニリデン２１−ジエチルアミノアセテート、チキソコルトール、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、トリアムシノロンベネトニド及びトリアムシノロンヘキサセトニドなどの、ヒドロコルチゾンから誘導される化合物を含む。同様の鎮痛及び抗炎症特性を有する構造的に関連するコルチコステロイドもこの群に包含されることが意図されている。
【０２５６】
もう１つの特定実施態様では、本発明は、リウマチ性疾患、対宿主性移植片病及び多発性硬化症などの急性及び慢性炎症を含む、ここで列挙する疾患及び障害の治療のための、１以上の遅効性抗リウマチ薬（ＳＡＡＲＤ）又は疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤＳ）、それらのプロドラッグエステル又は医薬適合性の塩のいずれかと組み合わせたＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニスト、及び／又はＩＬ−１７様受容体の使用（前処置、後処置、又は同時処置）を対象とする。ＳＡＡＲＤ又はＤＭＡＲＤＳ、それらのプロドラッグエステル及び医薬適合性の塩は次のものを含む：アロクプレイドナトリウム、オラノフィン、オロチオグルコース、オロチオグリカニド、アザチオプリン、ブレキナールナトリウム、ブシラミン、カルシウム３−オロチオ−２−プロパノール−１−スルホネート、クロラムブシル、クロロキン、クロブザリト、クプロキソリン、シクロホスファミド、シクロスポリン、ダプゾン、１５−デオキシスペルグアリン、ジアセレイン、グルコサミン、金塩（例えば、シクロキン金塩、チオリンゴ酸金ナトリウム、チオ硫酸金ナトリウム）、ヒドロキシクロロキン、硫酸ヒドロキシクロロキン、ヒドロキシ尿素、ケブゾン、レバミゾール、ロベンザリット、メリチン、６−メルカプトプリン、メトトレキサート、ミゾリビン、ミコフェノレートモフェチル、ミオラル、ナイトロジェンマスタード、Ｄ−ペニシラミン、ＳＫＮＦ８６００２及びＳＢ２０３５８０などのピリジノールイミダゾール、ラパマイシン、チオール、サイモポイエチン及びビンクリスチン。同様の鎮痛及び抗炎症特性を有する構造的に関連するＳＡＡＲＤ又はＤＭＡＲＤも、この群に包含されることが意図されている。
【０２５７】
もう１つの特定実施態様では、本発明は、急性及び慢性炎症を含む、ここで列挙する疾患及び障害の治療のための、１以上のＣＯＸ２阻害因子、そのプロドラッグエステル又は医薬適合性の塩のいずれかと組み合わせたＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニスト、及び／又はＩＬ−１７様受容体の使用（前処置、後処置、又は同時処置）を対象とする。ＣＯＸ２阻害因子、そのプロドラッグエステル又は医薬適合性の塩の例は、例えばセレコキシブを含む。同様の鎮痛及び抗炎症特性を有する構造的に関連するＣＯＸ２阻害因子も、この群に包含されることが意図されている。
【０２５８】
さらにもう１つの特定実施態様では、本発明は、急性及び慢性炎症を含む、ここで列挙する疾患及び障害の治療のための、１以上の抗菌薬、そのプロドラッグエステル又は医薬適合性の塩のいずれかと組み合わせたＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニスト、及び／又はＩＬ−１７様受容体の使用（前処置、後処置、又は同時処置）を対象とする。抗菌薬は、例えば広いクラスのペニシリン、セファロスポリン及び他のβ−ラクタム、アミノグリコシド、アゾール、キノロン類、マクロライド系抗生物質、リファマイシン、テトラサイクリン、スルホンアミド、リンコサミド及びポリミキシンを含む。ペニシリンは、ペニシリンＧ、ペニシリンＶ、メチシリン、ナフシリン、オキサシリン、クロキサシリン、ジクロキサシリン、フロキサシリン、アンピシリン、アンピシリン／スルバクタム、アモキシシリン、アモキシシリン／クラブラネート、ヘタシリン、シクラシリン、バカンピシリン、カルベニシリン、カルベニシリンインダニル、チカルシリン、チカルシリン／クラブラネート、アズロシリン、メズロシリン、ペペラシリン、及びメシリナムを含むが、これらに限定されない。セファロスポリン及び他のβ−ラクタムは、セファロチン、セファピリン、セファレキシン、セフラジン、セファゾリン、セファドロキシル、セファクロール、セファマンドール、セフォテタン、セフォキシチン、セルロキシム、セフォニシド、セフォラジン、セフィキシム、セフォタキシム、モキサラクタム、セフチゾキシム、セトリアキソン、セフォペラゾン、セフタジジム、イミペネム及びアズトレオナムを含むが、これらに限定されない。アミノグリコシドは、ストレプトマイシン、ゲンタマイシン、トブラマイシン、アミカシン、ネチルマイシン、カナマイシン及びネオマイシンを含むが、これらに限定されない。キノロンは、ナリジクス酸、ノルフロキサシン、エノキサシン、シプロフロキサシン、オフロキサシン、スパルフロキサシン及びテマフロキサシンを含むが、これらに限定されない。マクロライド系抗生物質は、エリスロマイシン、スピラマイシン及びアジスロマイシンを含むが、これらに限定されない。リファマイシンは、リファンピンを含むが、これに限定されない。テトラサイクリンは、スピサイクリン、クロルテトラサイクリン、クロモサイクリン、デメクロサイクリン、デオキシサイクリン、グアメサイクリン、リメサイクリン、メクロサイクリン、メタサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、ペニメピサイクリン、ピパサイクリン、ロリテトラサイクリン、サンサイクリン、セノサイクリン及びテトラサイクリンを含むが、これらに限定されない。スルホンアミドは、スルファニルアミド、スルファメトキサゾール、スルファセタミド、スルファジアジン、スルフィソキサゾール及びコトリモキサゾール（トリメトプリム／スルファメトキサゾール）を含むが、これらに限定されない。リンコサミドは、クリンダマイシン及びリンコマイシンを含むが、これらに限定されない。ポリミキシン（ポリペプチド）は、ポリミキシンＢ及びコリスチンを含むが、これらに限定されない。
【０２５９】
望ましくないレベルのＩＬ−１７様によって引き起こされる又は仲介される他の疾患又は障害は、本発明の一部である治療及び診断用途の中に包含される。例示として、そのような望ましくないレベルは、過度に高いレベル及び正常以下のレベルを含む。
【０２６０】
ＩＬ−１７様組成物及び投与
治療組成物は本発明の範囲内である。そのようなＩＬ−１７様医薬組成物は、投与様式との適合性のために選択される製薬上又は生理的に許容される製剤物質と混合して、治療上有効な量のＩＬ−１７様ポリペプチド又はＩＬ−１７様核酸分子を含有しうる。医薬組成物は、投与様式との適合性のために選択される製薬上又は生理的に許容される製剤物質と混合して、治療上有効な量の１以上のＩＬ−１７様選択結合剤を含有しうる。
【０２６１】
許容される製剤材料は、好ましくは使用する用量及び濃度で受容者に非毒性である。
【０２６２】
該医薬組成物は、例えば組成物のｐＨ、浸透圧、粘度、清澄度、色、等張性、におい、無菌性、安定性、溶解又は放出速度、吸着又は浸透を改変する、維持する又は保存するための製剤材料を含有しうる。適切な製剤材料は、アミノ酸（グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン又はリシンなど）；抗菌薬；抗酸化薬（アスコルビン酸、亜硫酸ナトリウム又は亜硫酸水素ナトリウムなど）；緩衝剤（ホウ酸塩、重炭酸塩、トリス−ＨＣｌ、クエン酸塩、リン酸塩又は他の有機酸など）；容積補充剤（マンニトール又はグリシンなど）；キレート化剤（エチレンジアミン四酢酸など）；錯化剤（カフェイン、ポリビニルピロリドン、β−シクロデキストリン又はヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンなど）；充填剤；単糖類、二糖類、及び他の糖質（グルコース、マンノース、又はデキストリンなど）；タンパク質（血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリンなど）；着色料、着香料及び希釈剤；乳化剤；疎水性ポリマー（ポリビニルピロリドンなど）；低分子量ポリペプチド；塩形成性対イオン（ナトリウムなど）；防腐剤（塩化ベンザルコニウム、安息香酸、サリチル酸、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸又は過酸化水素など）；溶媒（グリセリン、プロピレングリコール又はポリエチレングリコールなど）；糖アルコール（マンニトール又はソルビトールなど）；沈殿防止剤；界面活性剤又は湿潤剤（プルロニック、ＰＥＧ、ソルビタンエステル、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０などのポリソルベート、トリトン、トロメタミン、レシチン、コレステロール、チロキサポールなど）；安定性促進剤（スクロース又はソルビトールなど）；等張性促進剤（アルカリ金属ハロゲン化物（好ましくは塩化ナトリウム又はカリウム）、マンニトール、ソルビトールなど）；送達ビヒクル；希釈剤；賦形剤及び／又は製薬補助剤を含むが、これらに限定されない。（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１８版、Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ編集、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ［１９９０））。
【０２６３】
最適医薬組成物は、例えば意図する投与経路、送達形式、及び所望用量に依存して当業者によって決定される。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，前出参照。そのような組成物は、ＩＬ−１７様分子の物理的状態、安定性、インビボでの放出速度、及びインビボでのクリアランス速度に影響を及ぼしうる。
【０２６４】
医薬組成物中の主要ビヒクル又は担体は水性又は非水性でありうる。例えば、適切なビヒクル又は担体は、おそらくは非経口投与用組成物において一般的に他の材料を補足した、注射用蒸留水、生理食塩水、又は人工脳脊髄液でありうる。中性緩衝食塩水又は血清アルブミンと混合した食塩水はさらなる例示的ビヒクルである。他の例示的医薬組成物は、ソルビトール又はその適切な代用物をさらに含みうる、およそｐＨ７．０−８．５のトリス緩衝液、又はおよそｐＨ４．０−５．５の酢酸緩衝液を含む。本発明の１つの実施態様では、ＩＬ−１７様ポリペプチド組成物は、所望の度合の純度を有する選択組成物を最適製剤物質（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，前出）と混合することにより、凍結乾燥ケーク又は水溶液の形態で保存用に調製しうる。さらに、ＩＬ−１７様ポリペプチド生成物は、スクロースなどの適切な賦形剤を用いて凍結乾燥物として製剤しうる。
【０２６５】
ＩＬ−１７様医薬組成物は非経口送達用に選択されうる。あるいは、該組成物は、吸入用又は経口的送達などの消化管を通しての送達用に選択されうる。そのような医薬適合性の組成物の調整は当該技術の範囲内である。
【０２６６】
製剤成分は、投与部位に許容される濃度で存在する。例えば、該組成物を生理的ｐＨ又はわずかにより低いｐＨ、典型的には約５から約８のｐＨ範囲内に維持するために緩衝液を使用する。
【０２６７】
非経口投与を考慮するとき、本発明において使用するための治療組成物は、医薬適合性のビヒクル中に所望ＩＬ−１７様分子を含む、発熱物質不含の非経口的に許容される水溶液の形態をとりうる。非経口注射のための特に適切なビヒクルは、ＩＬ−１７様分子が適切に防腐された無菌等張溶液としてその中に製剤される無菌蒸留水である。さらにもう１つの製剤は、デポー注射として送達されうる生成物の制御された又は持続性の放出を提供する、注射用ミクロスフェア、生体受食性粒子、ポリマー化合物（ポリ乳酸又はポリグリコール酸など）、あるいはビーズ又はリポソームなどの作用物質を含む所望分子の製剤を包含しうる。ヒアルロン酸も使用でき、これは、循環中の持続的存在期間を延長する作用を有しうる。所望分子の導入のための他の適切な手段は、移植可能な薬剤送達装置を含む。
【０２６８】
１つの実施態様では、医薬組成物を吸入用に製剤しうる。例えば、ＩＬ−１７様分子を吸入用乾燥粉末として製剤しうる。ＩＬ−１７様ポリペプチド又はＩＬ−１７様核酸分子の吸入溶液も、エーロゾル送達のための推進薬と共に製剤しうる。さらにもう１つの実施態様では、溶液を噴霧化しうる。肺投与は、化学修飾したタンパク質の肺送達を記述する、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ９４／００１８７５号の中でさらに説明されている。
【０２６９】
また、一部の製剤は経口的に投与しうる想定される。本発明の１つの実施態様では、この様式で投与されるＩＬ−１７様分子は、錠剤及びカプセルなどの固形投与形態の調合において慣例的に使用される担体と共に又は担体なしで製剤することができる。例えば、カプセルは、バイオアベイラビリティーが最大化し、予備的な全身性分解が最小現に抑えられる胃腸管内の部位で製剤の活性部分を放出するように設計しうる。ＩＬ−１７様分子の吸収を促進するために付加的な作用物質を含めることができる。希釈剤、着香剤、低融点ろう、植物油、潤滑剤、沈殿防止剤、錠剤崩壊剤、及び結合剤も使用しうる。
【０２７０】
もう１つの医薬組成物は、錠剤の製造に適した非毒性賦形剤との混合物中に有効量のＩＬ−１７様分子を含有しうる。錠剤を無菌水又は別の適切なビヒクルに溶解することにより、溶液を単位用量形態で調製することができる。適切な賦形剤は、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム又は重炭酸ナトリウム、ラクトース、又はリン酸カルシウムなどの不活性希釈剤；あるいはデンプン、ゼラチン又はアカシアなどの結合剤；あるいはステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸又は滑石などの潤滑剤を含むが、これらに限定されない。
【０２７１】
持続又は制御送達製剤中にＩＬ−１７様ポリペプチドを含有する製剤を含む、さらなるＩＬ−１７様医薬組成物は当業者には明白である。リポソーム担体、生体受食性微粒子又は多孔性ビーズ及びデポー注射などの、様々な他の持続又は制御送達手段を製剤するための手法も当業者に既知である。例えば、医薬組成物の送達のための多孔性ポリマー微粒子の制御放出を述べている、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ９３／００８２９号参照。持続放出製剤のさらなる例は、成形された製品、例えばフィルム又はマイクロカプセルの形態の半透性ポリマーマトリックスを含む。持続放出マトリックスは、ポリエステル、ヒドロゲル、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号及び欧州特許第５８，４８１号）、Ｌ−グルタミン酸とγエチル−Ｌ−グルタメートのコポリマー（Ｓｉｄｍａｎら、Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ，２２：５４７−５５６（１９８３））、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）（Ｌａｎｇｅｒら、Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．，１５：１６７−２７７（１９８１）及びＬａｎｇｅｒ，Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．，１２：９８−１０５（１９８２））、エチレン酢酸ビニル（Ｌａｎｇｅｒら、前出）又はポリ−Ｄ（−）−３−ヒドロキシ酪酸（欧州特許第１３３，９８８号）を含みうる。持続放出組成物はまた、この技術分野で既知のいくつかの方法のいずれかによって調製できるリポソームを含みうる。例えば、Ｅｐｐｓｔｅｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２：３６８８−３６９２（１９８５）；欧州特許第３６，６７６号；欧州特許第８８，０４６号及び欧州特許第１４３，９４９号参照。
【０２７２】
インビボでの投与のために使用されるＩＬ−１７様医薬組成物は、典型的には無菌でなければならない。これは、無菌ろ過膜を通すろ過によって達成しうる。該組成物を凍結乾燥する場合は、この方法を用いた滅菌は、凍結乾燥及び再形成の前又は後に実施しうる。非経口投与用の組成物は、凍結乾燥形態で又は溶液として保存しうる。さらに、非経口用組成物は一般に、無菌アクセス口を有する容器、例えば皮下注射針によって貫通できる栓を備えた静脈内溶液バッグ又はバイアル内に納められる。
【０２７３】
ひとたび医薬組成物が製剤されれば、溶液、懸濁液、ゲル、乳剤、固体として、あるいは脱水又は凍結乾燥粉末として保存しうる。そのような製剤は、即時使用形態で又は投与の前に再形成を必要とする形態（例えば凍結乾燥形態）で保存しうる。
【０２７４】
特定実施態様では、本発明は、単回用量投与単位を生成するためのキットを対象とする。該キットは各々、乾燥タンパク質が入った第一容器と水性製剤が入った第二容器の両方を含みうる。単一及び多数のチェンバーを有するあらかじめ充填されたシリンジ（例えば液体シリンジ及びリオシリンジ（ｌｙｏｓｙｒｉｎｇｅ））を含むキットも本発明の範囲内に包含される。
【０２７５】
治療的に用いるＩＬ−１７様医薬組成物の有効量は、例えば治療の背景及び目的に依存する。当業者は、治療のための適切な用量レベルが、一部には、送達される分子、ＩＬ−１７様分子を使用する適応症、投与経路、及び患者の大きさ（体重、体表面積又は器官の大きさ）及び状態（年齢及び全般的健康状態）に依存して変化することを認識する。従って、臨床医は、最適治療効果を得るために用量を調節し、投与経路を修正しうる。典型的用量は、上記の因子に依存して、約０．１μｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇまで又はそれ以上の範囲をとりうる。他の実施態様では、用量は０．１μｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇまで、あるいは１μｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇまで、あるいは５μｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇまでの範囲をとりうる。
【０２７６】
投与頻度は、使用する製剤中のＩＬ−１７様分子の薬物動態パラメータに依存する。典型的には、臨床医は、所望効果を実現する用量に達するまで該組成物を投与する。該組成物は、それ故、単回用量として、あるいは経時的な２回又はそれ以上の用量として（同じ量の所望分子を含んでいてもよく又は同じ量を含んでいなくてもよい）、あるいは移植装置又はカテーテルによる持続注入として投与しうる。適切な用量のさらなる改善は当業者によって常套的に行われ、当業者が常套的に実施する作業の範囲内である。適切な用量は、適切な用量−反応データの使用を通して確認されうる。
【０２７７】
該医薬組成物の投与経路は既知の方法に一致し、例えば、経口的、静脈内、腹腔内、大脳内（実質内）、脳室内、筋肉内、眼内、動脈内、門脈内、又は病巣内経路による注射を通して、持続放出システムによって又は移植装置によって実施される。所望する場合は、該組成物は、ボーラス注射によって、又は注入によって持続的に、又は移植装置によって投与しうる。
【０２７８】
あるいは又は付加的に、該組成物は、所望分子が吸収又は被包されている膜、海綿、又は別の適切な材料の移植によって局所的に投与しうる。移植装置を使用する場合は、装置を適切な組織又は器官に移植することができ、拡散、制御放出ボーラス、又は持続投与によって所望分子の送達を実施しうる。
【０２７９】
一部の場合は、エクスビボでＩＬ−１７様医薬組成物を使用することが望ましいと考えられる。そのような場合は、患者から取り出した細胞、組織又は器官をＩＬ−１７様医薬組成物に暴露し、その後それらの細胞、組織及び／又は器官を患者の体内に移植して戻す。
【０２８０】
また別の場合には、ＩＬ−１７様ポリペプチドを発現し、分泌するためのここで述べるような方法を用いて、遺伝子操作したある種の細胞を移植することによってＩＬ−１７様ポリペプチドを送達することができる。そのような細胞は動物又はヒト細胞でありえ、自己、異種、又は外因性でありうる。場合により、細胞を不朽化してもよい。免疫応答の可能性を低下させるために、該細胞を被包して周辺組織の浸潤を回避しうる。被包材料は、典型的には、タンパク質生成物の放出を許容するが、患者の免疫系又は周辺組織からの他の有害因子による細胞の破壊を防ぐ生体適合性の半透性ポリマー封入物又は膜である。
【０２８１】
本発明のさらなる実施態様は、治療用ポリペプチドのインビトロでの生産のため及び遺伝子治療又は細胞治療による治療用ポリペプチドの生産と送達のための細胞及び方法（例えば相同的組換え及び／又は他の組換え生産法）に関する。相同的及び他の組換え法は、通常は転写的に沈黙のＩＬ−１７様遺伝子又は過少発現遺伝子を含む細胞を修飾し、それによって治療上有効な量のＩＬ−１７様ポリペプチドを発現する細胞を生産するために使用しうる。
【０２８２】
相同的組換えは、もともとは転写的に活性な遺伝子において突然変異を誘発する又は矯正するために遺伝子を標的する目的で開発された手法である（Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ，Ｐｒｏｇ．ｉｎ  Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．＆  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，３６：３０１（１９８９））。基本的な手法は，哺乳類ゲノムの特定領域に特定突然変異を導入するため（Ｔｈｏｍａｓら、Ｃｅｌｌ，４４：４１９−４２８（１９８６）；ＴｈｏｍａｓとＣａｐｅｃｃｈｉ，Ｃｅｌｌ，５１：５０３−５１２（１９８７）；Ｄｏｅｔｓｃｈｍａｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，８５：８５８３−８５８７（１９８８））あるいは欠陥遺伝子内の特定突然変異を矯正するため（Ｄｏｅｔｓｃｈｍａｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３３０：５７６−５７８（１９８７））の方法として開発された。例示的な相同的組換え手法は、米国特許第５，２７２，０７１号（欧州特許第９１９３０５１号、欧州特許公開第５０５５００号及びＰＣＴ／ＵＳ９０／０７６４２号、国際公開公報第９１／０９９５５号）に述べられている。
【０２８３】
相同的組換えを通して、ゲノム内に挿入すべきＤＮＡ配列を、ターゲティングＤＮＡに結合することによって対象遺伝子の特定領域に差し向けることができる。ターゲティングＤＮＡは、ゲノムＤＮＡの領域に相補的（相同的）なヌクレオチド配列である。ゲノムの特定領域に相補的なターゲティングＤＮＡの小断片を、ＤＮＡ複製過程の間に親鎖と接触させる。共有する相同的領域を通して内在性ＤＮＡの他の断片とハイブリダイズし、それ故組み換わることは、細胞内に挿入されたＤＮＡの一般的特性である。この相補鎖が突然変異又は異なる配列を含むオリゴヌクレオチド又は付加的なヌクレオチドに結合した場合、それもやはり、組換えの結果として新たに合成された鎖の中に組み込まれる。校正機構の機能の結果として、ＤＮＡの新しい配列が鋳型として働くことが可能である。そこで、移入されたＤＮＡがゲノム内に組み込まれる。
【０２８４】
ターゲティングＤＮＡのこれらの断片に結合するのは、ＩＬ−１７様ポリペプチドと相互作用しうる又はＩＬ−１７様ポリペプチドの発現を制御しうるＤＮＡの領域、例えば隣接配列である。例えば、プロモーター／エンハンサーエレメント、サプレッサー又は外因性転写調節エレメントを、所望ＩＬ−１７様ポリペプチドをコードするＤＮＡの転写に影響を及ぼすのに十分な近位性と方向性で意図する宿主細胞のゲノム内に挿入する。制御エレメントは、宿主細胞ゲノム内に存在するＤＮＡの部分を制御する。従って、所望ＩＬ−１７様ポリペプチドの発現は、ＩＬ−１７様遺伝子自体をコードするＤＮＡのトランスフェクションによってではなく、ＩＬ−１７様遺伝子の転写のための認識可能なシグナルを備えた内在性遺伝子配列を提供するＤＮＡ調節セグメント結合した、ターゲティングＤＮＡ（対象内在性遺伝子と相同な領域を含む）の使用によって達成されうる。
【０２８５】
例示的方法では、細胞内の所望標的遺伝子（例えば所望内在性細胞遺伝子）の発現を、少なくとも調節配列、エクソン及びスプライス供与部位を含むＤＮＡの導入によって、あらかじめ選択された部位における細胞ゲノムへの相同的組換えを通して変化させる。これらの成分を、実際に新しい転写単位（該ＤＮＡ構築物中に存在する調節配列、エクソン及びスプライス供与部位が内在性遺伝子に作動可能に連結されている）の生産をもたらすように、染色体（ゲノム）ＤＮＡに導入する。染色体ＤＮＡへのこれらの成分の導入の結果として、所望内在性遺伝子の発現が変化する。
【０２８６】
ここで述べるような、変化した遺伝子発現は、得られる細胞において通常は沈黙している（発現されない）遺伝子を活性化すること（又は発現を生じさせること）、ならびに得られる細胞において生理的に有意のレベルでは発現されない遺伝子の発現を上昇させることを包含する。その実施態様はさらに、調節又は誘導のパターンを、得られる細胞において起こる調節又は誘導のパターンとは異なるように変化させること、及び得られる細胞において発現される遺伝子の発現を低下させること（排除することを含む）を包含する。
【０２８７】
相同的組換えを使用して、細胞の内在性ＩＬ−１７様遺伝子からのＩＬ−１７様ポリペプチド生産を上昇させる又は生じさせる１つの方法は、最初に、相同的組換えを使用して部位特異的組換え系（例えばＣｒｅ／ｌｏｘＰ、ＦＬＰ／ＦＲＴ）からの組換え配列を（Ｓａｕｅｒ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，５：５２１−５２７（１９９４）及びＳａｕｅｒ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２２５：８９０−９００（１９９３））、細胞の内在性ゲノムＩＬ−１７様ポリペプチドコード領域の上流（すなわち５’側）に置くことを含む。ゲノムＩＬ−１７様ポリペプチドコード領域のすぐ上流に置いた部位に相同な組換え部位を含むプラスミドを、適切な組換え酵素と共に改変細胞系統に導入する。この組換え酵素は、プラスミドの組換え部位を通して、プラスミドを該細胞系統のゲノムＩＬ−１７様ポリペプチドコード領域のすぐ上流に位置する組換え部位に組み込ませる（ＢａｕｂｏｎｉｓとＳａｕｅｒ，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，２１：２０２５−２０２９（１９９３）及びＯ’Ｇｏｒｍａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５１：１３５１−１３５５（１９９１））。転写を上昇させることが知られている隣接配列（例えばエンハンサー／プロモーター、イントロン又は翻訳エンハンサー）は、このプラスミド内に適切に位置づけた場合、細胞の内在性ＩＬ−１７様遺伝子からの新たな又は高いＩＬ−１７様ポリペプチド生産をもたらす新しい又は改変された転写単位を創造するように組み込まれる。
【０２８８】
部位特異的組換え配列が細胞の内在性ゲノムＩＬ−１７様ポリペプチドコード領域のすぐ上流に位置する細胞系統を使用するさらなる方法は、該細胞系統のゲノム内の別の場所に第二の組換え部位を導入するために相同的組換えを使用することである。次に適切な組換え酵素を二組換え部位細胞系統に導入して、細胞の内在性ＩＬ−１７様遺伝子からの新たな又は高いＩＬ−１７様ポリペプチド生産をもたらす新しい又は改変された転写単位を創造する組換え事象（欠失、逆位又は転座）（Ｓａｕｅｒ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，前出（１９９４）及びＳａｕｅｒ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，前出（１９９３））を生じさせる。
【０２８９】
細胞の内在性ＩＬ−１７様遺伝子からのＩＬ−１７様ポリペプチドの発現を上昇させる又は生じさせるためのさらなるアプローチは、細胞の内在性ＩＬ−１７様遺伝子からの新たな又は高いＩＬ−１７様ポリペプチド生産をもたらすように、遺伝子（例えば転写因子）の発現を上昇させる又は生じさせること及び／又は遺伝子（例えば転写リプレッサー）の発現を低下させることを含む。この方法は、非天然に生じるポリペプチド（例えば転写因子ドメインに融合した部位特異的ＤＮＡ結合ドメインを含むポリペプチド）を、細胞の内在性ＩＬ−１７様遺伝子からの新たな又は高いＩＬ−１７様ポリペプチド生産をもたらすように細胞に導入することを含む。
【０２９０】
本発明はさらに、標的遺伝子の発現を変化させる方法において有用なＤＮＡ構築物に関する。一部の実施態様では、例示的なＤＮＡ構築物は、（ａ）１以上の標的配列；（ｂ）調節配列；（ｃ）エクソン；及び（ｄ）非対合スプライス供与部位を含む。ＤＮＡ構築物内の標的配列は、（ｂ）−（ｄ）のエレメントが内在性標的遺伝子の配列に作動可能に連結されるように、（ａ）から（ｄ）のエレメントを細胞内の標的遺伝子に組み込むことを指令する。もう１つの実施態様では、ＤＮＡ構築物は、（ａ）１以上の標的配列、（ｂ）調節配列、（ｃ）エクソン、（ｄ）スプライス供与部位、（ｅ）イントロン、及び（ｆ）スプライス受容部位を含み、上記標的配列は、（ｂ）−（ｆ）のエレメントが内在性遺伝子に作動可能に連結されるように（ａ）から（ｆ）のエレメントの組込みを指令する。該標的配列は、相同的組換えが起こる、細胞染色体ＤＮＡ内のあらかじめ定められた部位に相同である。該構築物において、エクソンは一般に調節配列の３’側であり、スプライス供与部位はエクソンの３’側である。
【０２９１】
ここで提示するＩＬ−１７様ポリペプチドの核酸配列などの、特定遺伝子の配列が既知である場合、該遺伝子の選択領域に相補的なＤＮＡの断片を合成することができる、又はさもなければ、対象領域の境界となる特異的認識部位での天然ＤＮＡの適切な制限などによって入手することができる。この断片は、細胞への挿入の際の標的配列として働き、ゲノム内のその相同領域にハイブリダイズする。このハイブリダイゼーションがＤＮＡ複製の間に起こる場合、このＤＮＡの断片及びそれに結合した付加的な配列は、岡崎フラグメントとして機能し、ＤＮＡの新たに合成された娘鎖に組み込まれる。本発明は、それ故、標的配列として使用しうる、ＩＬ−１７様ポリペプチドをコードするヌクレオチドを含む。
【０２９２】
ＩＬ−１７様ポリペプチド細胞治療、例えばＩＬ−１７様ポリペプチドを生産する細胞の移植も考慮される。この実施態様は、生物学的に活性な形態のＩＬ−１７様ポリペプチドを合成し、分泌することができる細胞を移植することを含む。そのようなＩＬ−１７様ポリペプチド生産細胞は、ＩＬ−１７様ポリペプチドの天然生産者である細胞であるか、又はＩＬ−１７様ポリペプチドを生産する能力が、所望ＩＬ−１７様ポリペプチドをコードする遺伝子又はＩＬ−１７様ポリペプチドの発現を上昇させる遺伝子での形質転換によって高められた組換え細胞でありうる。そのような修飾は、遺伝子を送達することならびにその発現と分泌を促進することに適したベクターによって実現しうる。外来種のポリペプチドの投与によって起こりうるような、ＩＬ−１７様ポリペプチドを投与される患者における潜在的免疫反応を最小限に抑えるために、ＩＬ−１７様ポリペプチドを生産する天然細胞はヒト由来であり、ヒトＩＬ−１７様ポリペプチドを生産することが好ましい。同様に、ＩＬ−１７様ポリペプチドを生産する組換え細胞は、ヒトＩＬ−１７様ポリペプチドをコードする遺伝子を含む発現ベクターで形質転換することが好ましい。
【０２９３】
移植細胞は、周辺組織の浸潤を回避するために被包しうる。ヒト又は非ヒト動物細胞は、ＩＬ−１７様ポリペプチドの放出を許容するが、患者の免疫系又は周辺組織からの他の有害因子による細胞の破壊を防ぐ、生体適合性の半透性ポリマー封入物又は膜の中で患者に移植しうる。あるいは、エクスビボでＩＬ−１７様ポリペプチドを生産するように形質転換した患者自身の細胞を、そのような被包なしで直接患者に移植してもよい。
【０２９４】
生存細胞の被包のための手法はこの技術分野において既知であり、被包細胞の調製及び患者へのそれらの移植は常套的に実施されうる。例えば、Ｂａｅｔｇｅら（国際公開公報第９５／０５４５２号及びＰＣＴ／ＵＳ９４／０９２９９号）は、生物活性分子の有効な送達のための遺伝子操作した細胞を含む膜カプセルを記述している。それらのカプセルは生体適合性であり、容易に回収できる。カプセルは、哺乳類宿主に移植したときインビボで下方調節を受けないプロモーターに作動可能に連結された生物活性分子をコードするＤＮＡ配列を含む組換えＤＮＡ分子でトランスフェクトされた細胞を被包する。その装置は、生存細胞からの分子を受容者内の特定部位に送達することを提供する。さらに、米国特許第４，８９２，５３８号、同第５，０１１，４７２号及び同第５，１０６，６２７号参照。生存細胞を被包するためのシステムは、ＡｅｂｉｓｃｈｅｒらのＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ９１／００１５７号に述べられている。また、ＡｅｂｉｓｃｈｅｒらのＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ９１／００１５５号；Ｗｉｎｎら、Ｅｘｐｅｒ．Ｎｅｕｒｏｌ．，１１３：３２２−３２９（１９９１）；Ａｅｂｉｓｃｈｅｒら、Ｅｘｐｅｒ．Ｎｅｕｒｏｌ．，１１１：２６９−２７５（１９９１）；及びＴｒｅｓｃｏら、ＡＳＡＩＯ、３８：１７−２３（１９９２）も参照のこと。
【０２９５】
インビボ及びインビトロ遺伝子治療でのＩＬ−１７様ポリペプチドの送達も考慮される。遺伝子治療手法の一例は、「遺伝子治療ＤＮＡ構築物」を形成するための構成的又は誘導的プロモーターに作動可能に連結しうるＩＬ−１７様ポリペプチドをコードするＩＬ−１７様遺伝子（ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、及び／又は合成ＤＮＡのいずれか）を使用することである。上記プロモーターは、上記構築物を挿入する細胞又は組織型において活性であることを条件として、内在性ＩＬ−１７様遺伝子に相同又は異種のいずれでもよい。遺伝子治療ＤＮＡ構築物の他の成分は、場合により、部位特異的組込みのための設計されたＤＮＡ分子（例えば相同的組換えのために有用な内在性配列）；組織特異的プロモーター、エンハンサー又はサイレンサー；親細胞に比べて選択的利点を提供することができるＤＮＡ分子；形質転換細胞を特定するための標識として有用なＤＮＡ分子；陰性選択系、細胞特異的系；細胞特異的結合剤（例えば細胞ターゲティングのための）；細胞特異的インターナリゼーション因子；及びベクターによる発現を高めるための転写因子、ならびにベクターの製造を可能にする因子を含む。
【０２９６】
次に、ウイルス又は非ウイルスベクターを使用して遺伝子治療ＤＮＡ構築物を細胞に導入することができる（エクスビボ又はインビボのいずれかで）。遺伝子治療ＤＮＡ構築物を導入するための１つの手段は、ここで述べるようなウイルスベクターによるものである。レトロウイルスベクターなどのある種のベクターはＤＮＡ構築物を細胞の染色体ＤＮＡに送達し、その遺伝子は染色体ＤＮＡに組み込まれる。他のベクターはエピソームとして機能し、遺伝子治療ＤＮＡ構築物は細胞質内にとどまる。
【０２９７】
さらに他の実施態様では、標的細胞におけるＩＬ−１７様遺伝子の制御された発現のために調節エレメントを含めることができる。そのようなエレメントは適切なエフェクターに応答して作動する。このようにして、所望するときに治療用ポリペプチドを発現することができる。１つの慣例的な制御手段は、ＤＮＡ結合タンパク質又は転写活性化タンパク質などの、小分子結合ドメイン及び生物学的過程を開始させることができるドメインを含むキメラタンパク質を二量化するために使用される小分子二量化剤又はラパログ（国際公開公報第９６４１８６５号（ＰＣＴ／ＵＳ９６／０９９４８６号）；国際公開公報第９７３１８９８号（ＰＣＴ／ＵＳ９７／０３１３７号）及び国際公開公報第９７３１８９９号（ＰＣＴ／ＵＳ９５／０３１５７号）に述べられているような）の使用を含む。タンパク質の二量化は、導入遺伝子の転写を開始させるために使用できる。
【０２９８】
選択的調節テクノロジーは、対象遺伝子から発現されたタンパク質を凝集体又はクラスターとして細胞内部に貯蔵する方法を用いる。対象遺伝子を、小胞体における凝集タンパク質の貯留を生じさせる条件凝集ドメインを含む融合タンパク質として発現させる。貯蔵タンパク質は細胞内部で安定であり、不活性である。しかし、条件凝集ドメインを除去し、それによって該タンパク質が細胞から分泌されうるように凝集体又はクラスターを特異的に分解する薬剤（例えば小分子リガンド）を投与することにより、該タンパク質を放出させることができる。Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８７：８１６−８１７及び８２６−８３０（２０００）参照。
【０２９９】
他の適切な制御手段又は遺伝子スイッチは、次の系を含むが、これらに限定されない。ミフェプリストン（ＲＵ４８６）はプロゲステロン拮抗物質として使用される。プロゲステロン拮抗物質への修飾プロゲステロン受容体リガンド結合ドメインの結合は、２個の転写因子の二量体を形成することによって転写を活性化し、その二量体は、その後核内へと通過してＤＮＡに結合する。リガンド結合ドメインは、受容体が天然リガンドに結合する能力を排除するように修飾される。修飾ステロイドホルモン受容体系は、米国特許第５，３６４，７９１号、国際公開公報第９６４０９１１号、及び国際公開公報第９７１０３３７号の中でさらに記述されている。
【０３００】
さらにもう１つの制御系は、エクジソン受容体（細胞質受容体）に結合してそれを活性化するエクジソン（ショウジョウバエステロイドホルモン）を使用する。この受容体はその後核内に転移して特異的ＤＮＡ応答エレメント（エクジソン応答性遺伝子からのプロモーター）に結合する。エクジソン受容体は、転写を開始するためのトランス活性化ドメイン／ＤＮＡ結合ドメイン／リガンド結合ドメインを含む。エクジソン系は、米国特許第５，５１４，５７８号、国際公開公報第９７３８１１７号、国際公開公報第９６３７６０９号及び国際公開公報第９３０３１６２号の中でさらに記述されている。
【０３０１】
もう１つの制御手段は、陽性テトラサイクリン制御可能トランス活性化因子を使用する。この系は、転写を活性化するポリペプチドに結合した、突然変異ｔｅｔリプレッサータンパク質ＤＮＡ結合ドメイン（逆テトラサイクリン調節トランス活性化因子タンパク質を生じさせる突然変異ｔｅｔＲ−５アミノ酸変化、すなわちテトラサイクリンの存在下でｔｅｔオペレーターに結合する）を含む。そのような系は、米国特許第５，４６４，７５８号、同第５，６５０，２９８号及び同第５，６５４，１６８号に述べられている。
【０３０２】
さらなる発現制御系及び核酸構築物は、Ｉｎｎｏｖｉｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．への米国特許第５，７４１，６７９号及び同第５，８３４，１８６号に述べられている。
【０３０３】
インビボでの遺伝子治療は、ＩＬ−１７様核酸分子の局所注入によって又は他の適切なウイルス又は非ウイルス送達ベクターによって、ＩＬ−１７様ポリペプチドをコードする遺伝子を細胞に導入することによって実施しうる（Ｈｅｆｔｉ、Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２５：１４１８−１４３５（１９９４））。例えば、ＩＬ−１７様ポリペプチドをコードする核酸分子を、標的細胞への送達のためのアデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）ベクターの中に閉じ込めることができる（例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ，国際公開公報第９５／３４６７０号及び国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ９５／０７１７８号）。組換えＡＡＶゲノムは、典型的には機能性プロモーターに作動可能に連結されたＩＬ−１７様ポリペプチドをコードするＤＮＡ配列に隣接するＡＡＶ逆方向末端反復配列及びポリアデニル化配列を含む。
【０３０４】
適切な代替的ウイルスベクターは、レトロウイルス、アデノウイルス、単純ヘルペスウイルス、レンチウイルス、肝炎ウイルス、パルボウイルス、パポバウイルス、ポックスウイルス、αウイルス、コロナウイルス、ラブドウイルス、パラミクソウイルス、及び乳頭腫ウイルスベクターを含むが、これらに限定されない。米国特許第５，６７２，３４４号は、組換え神経栄養性ＨＳＶ−１ベクターを含む、インビボでのウイルスを介した遺伝子導入システムを述べている。米国特許第５，３９９，３４６号は、治療タンパク質をコードするＤＮＡセグメントを挿入するようにインビトロで処理したヒト細胞の送達により、患者に治療タンパク質を供給する方法の例を提示している。遺伝子治療手法の実施のためのさらなる方法及び材料は、アデノウイルスベクターに関する米国特許第５，６３１，２３６号；レトロウイルスベクターに関する米国特許第５，６７２，５１０号；及びサイトカインを発現するレトロウイルスベクターに関する米国特許第５，６３５，３９９号に述べられている。
【０３０５】
ウイルス以外の送達方法は、リポソームを介した導入、裸のＤＮＡの送達（直接注入）、受容体を介した導入（リガンド−ＤＮＡ複合体）、電気穿孔、リン酸カルシウム沈殿法、及び微粒子衝撃法（例えば遺伝子ガン）を含むが、これらに限定されない。遺伝子治療の材料及び方法はまた、誘導的プロモーター、組織特異的エンハンサー−プロモーター、部位特異的組込みのために設計されたＤＮＡ配列、親細胞に比べて選択的利点を提供することができるＤＮＡ配列、形質転換細胞を特定するための標識、陰性選択系及び発現制御系（安全対策）、細胞特異的結合剤（細胞ターゲティングのため）、細胞特異的インターナリゼーション因子、及びベクターによる発現ならびにベクターの製造を促進するための転写因子の使用を含みうる。そのような遺伝子治療手法の実施のためのさらなる方法及び材料は、電気穿孔手法に関する米国特許第４，９７０，１５４号；核リガンドに関する国際公開公報第９６／４０９５８号；遺伝子送達のためのリポタンパク質含有系を述べる米国特許第５，６７９，５５９号；リポソーム担体に関する米国特許第５，６７６，９５４号；リン酸カルシウムトランスフェクションのための方法に関する米国特許第５，５９３，８７５号；及び生物学的に活性な粒子を、その粒子が細胞の表面を貫通して細胞の内部に組み込まれる速度で細胞に推進させる、米国特許第４，９４５，０５０号に述べられている。
【０３０６】
また、ＩＬ−１７様遺伝子治療又は細胞治療は、同じか又は異なる細胞内への１個以上の付加的なポリペプチドの送達をさらに含みうることが考慮される。そのような細胞を別々に患者に導入するか、又は上述した被包膜などの単一移植可能装置内に細胞を閉じ込めるか、又はウイルスベクターによって細胞を別々に修飾してもよい。
【０３０７】
遺伝子治療によって細胞における内在性ＩＬ−１７様ポリペプチドの発現を上昇させる手段は、１個以上のエンハンサーエレメントをＩＬ−１７様ポリペプチドプロモーターに挿入することであり、エンハンサーエレメントはそこで、ＩＬ−１７様遺伝子の転写活性を高める働きをすることができる。使用するエンハンサーエレメントは、遺伝子を活性化することを所望する組織に基づいて選択する；その組織においてプロモーターの活性化をもたらすことが知られているエンハンサーエレメントを選択する。例えば、ＩＬ−１７様ポリペプチドをコードする遺伝子をＴ細胞において「スイッチオン」にしようとする場合は、ｌｃｋプロモーターエンハンサーエレメントが使用しうる。ここでは、付加する転写エレメントの機能性部分を、標準クローニング手法を用いてＩＬ−１７様ポリペプチドプロモーターを含むＤＮＡのフラグメントに挿入しうる（及び場合により、ベクター及び／又は５’及び／又は３’隣接配列等に挿入しうる）。「相同的組換え構築物」として知られるこの構築物は、その後、エクスビボ又はインビボのいずれかで所望細胞に導入することができる。
【０３０８】
遺伝子治療はまた、内在性プロモーターのヌクレオチド配列を修飾することによってＩＬ−１７様ポリペプチド発現を低下させるためにも使用できる。そのような修飾は、典型的には相同的組換え法によって実施される。例えば、不活性化のために選択したＩＬ−１７様遺伝子のプロモーターの全部又は一部を含むＤＮＡ分子を、転写を調節するプロモーターの断片を除去する及び／又は置き換えるように操作することができる。例えば、標準分子生物学手法を用いてプロモーターのＴＡＴＡボックス及び／又は転写活性化因子の結合部位を欠失させうる；そのような欠失はプロモーター活性を阻害し、それによって対応するＩＬ−１７様遺伝子の転写を抑制することができる。プロモーター内のＴＡＴＡボックス又は転写活性化因子結合部位の欠失は、ＴＡＴＡボックス及び／又は転写活性化因子結合部位ヌクレオチドの１個以上が、１個以上のヌクレオチドの置換、欠失及び／又は挿入によって突然変異しているＩＬ−１７様ポリペプチドプロモーター（調節するＩＬ−１７様遺伝子と同じ種又は関連種からの）の全部又は関連部分を含むＤＮＡ構築物を作製することによって実現しうる。その結果として、ＴＡＴＡボックス又は活性化因子結合部位は、低い活性を有するか又は完全に不活性となる。上記構築物は、典型的には、修飾されたプロモーターセグメントに隣接する天然（内在性）５’及び３’ＤＮＡ配列に対応する少なくとも約５００塩基のＤＮＡを含む。該構築物は、直接に又はここで述べるウイルスベクターを通して適切な細胞に導入しうる（エクスビボ又はインビボで）。典型的には、細胞のゲノムＤＮＡへの構築物の組込みは相同的組換えによって行われ、その場合、プロモーター構築物内の５’及び３’ＤＮＡ配列は、内在性染色体ＤＮＡへのハイブリダイゼーションによって修飾プロモーター領域を組み込むのを助ける働きをすることができる。
【０３０９】
ＩＬ−１７様核酸及びポリペプチドのさらなる用途
本発明の核酸分子（それ自体は生物学的に活性なポリペプチドをコードしないものを含む）は、染色体上のＩＬ−１７様遺伝子及び関連遺伝子の位置を地図で表わすために使用しうる。地図作成は、ＰＣＲ増幅及びインサイチューハイブリダイゼーションなどのこの技術分野で既知の手法によって実施しうる。
【０３１０】
ＩＬ−１７様核酸分子（それ自体は生物学的に活性なポリペプチドをコードしないものを含む）は、哺乳類組織又は体液試料中のＩＬ−１７様ＤＮＡ又は対応するＲＮＡの存在を定性的又は定量的に調べるための診断アッセイにおけるハイブリダイゼーションプローブとして有用であると考えられる。
【０３１１】
ＩＬ−１７様ポリペプチドは、治療する適応症のために適切であるように、１以上のサイトカイン、成長因子、抗生物質、抗炎症薬、及び／又は化学療法剤と組み合わせて（同時に又は連続的に）使用しうる。
【０３１２】
１以上のＩＬ−１７様ポリペプチドの活性を阻害することが望ましい場合は、他の方法も使用しうる。そのような阻害は、発現制御配列（三重らせん形成）又はＩＬ−１７様ｍＲＮＡに相補的であって、それにハイブリダイズする核酸分子によって実施されうる。例えば、選択ＩＬ−１７様遺伝子の少なくとも一部に相補的である配列を有するアンチセンスＤＮＡ又はＲＮＡ分子を細胞に導入することができる。ここで開示するＩＬ−１７様ポリペプチドの配列を使用し、使用可能な手法によってアンチセンスプローブを設計しうる。典型的には、各々のそのようなアンチセンス分子は、各々の選択ＩＬ−１７様遺伝子の開始部位（５’末端）に相補的である。そのアンチセンス分子が対応するＩＬ−１７様ｍＲＮＡにハイブリダイズするとき、このｍＲＮＡの翻訳が妨げられる又は低下する。アンチセンス阻害因子は、細胞又は生物中のＩＬ−１７様ポリペプチドの低下又は不在に関する情報を提供する。
【０３１３】
あるいは、遺伝子治療は、１以上のＩＬ−１７様ポリペプチドの優性ネガティブ阻害因子を創造するために使用しうる。この状況では、各々の選択ＩＬ−１７様ポリペプチドの突然変異型ポリペプチドをコードするＤＮＡを作製し、ここで述べるようなウイルス又は非ウイルス法を用いて患者の細胞の導入することができる。各々のそのような突然変異体は、典型的には、その生物学的役割に関して内在性ポリペプチドと競合するように設計される。
【０３１４】
さらに、ＩＬ−１７様ポリペプチドは、生物学的に活性であるか否かに関わらず、免疫原として使用しうる、すなわち該ポリペプチドは、それに対する抗体が惹起されうる少なくとも１個のエピトープを含む。ＩＬ−１７様ポリペプチドに結合する選択結合剤（ここで述べるような）は、体液又は細胞試料中のＩＬ−１７様ポリペプチドの存在を検出するための標識形態での使用を含むがこれに限定されない、インビボ及びインビトロ診断目的のために使用しうる。上記抗体はまた、ここで列挙するものを含む多くの疾患及び障害を予防する、治療する、又は診断するために使用しうる。該抗体は、ＩＬ−１７様ポリペプチドの特徴的な活性の少なくとも１つを低減する又は遮断するようにＩＬ−１７様ポリペプチドに結合しうる、又はＩＬ−１７様ポリペプチドの特徴的な活性の少なくとも１つを上昇させるように（ＩＬ−１７様ポリペプチドの薬物動態を上昇させることによる場合を含む）ＩＬ−１７様ポリペプチドに結合しうる。
【０３１５】
下記の実施例は例示のみを目的としており、いかなる意味においても本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。
【実施例１】
【０３１６】
ヒトＩＬ−１７Ｅのクローニング
Ａｍｇｅｎ及びＧｅｎｂａｎｋ  ｄｂＥＳＴデータベースのＩＬ−８ファミリープロフィールの検索を実施し、マウスＥＳＴ、ｚｍｇｂ−ａｉ４３０３３７を特定した。（Ｓｍｉｔｈら（１９９４）、Ｃｅｌｌ，７６：９５９−６２；Ｌｕｅｔｈｙら（１９９４）、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，３：１３９−４６）。ｚｍｇｂ−ａｉ４３０３３７の予想アミノ酸配列とヒトＩＬ−８の間の全体的相同性は低かった；しかし、システイン及び他の鍵となる残基の保存は、ｚｍｇｂ−ａｉ４３０３３７がＩＬ−１７ファミリーの新規成員であることを示唆した。マウスＥＳＴ配列に対応するクローンを、Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎの会社の１つ；Ｈｕｎｔｓｃｉｌｌｅ，ＡＬ）を通してＮＩＨ  Ｉ．Ｍ．Ａ．Ｇ．Ｅ．Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍより入手し、完全に配列決定した。ＢＬＡＳＴ検索は、マウスＥＳＴ配列が、ヒト染色体１４番から誘導されるゲノムＤＮＡ配列であるＧｅｎＢａｎｋ  ＢＡＣクローン配列ＣＮＳ００００Ｂの領域に対応することを明らかにした。さらなるＢＬＡＳＴ検索は、Ｃｅｌｅｒａヒトゲノム配列との対合も明らかにした。ＧｅｎＢａｎｋ及びＣｅｌｅｒａ配列の両方との類似性は、特定された新規マウスＩＬ−１７ファミリー成員のヒト対応物が存在することを示唆した。
【０３１７】
様々なｃＤＮＡライブラリー（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）をＩＬ−１７関連ｃＤＮＡに関してスクリーニングするために、ヒトゲノム配列に基づく２つのＰＣＲプライマーを設計した。２３９２−７３と称する正方向プライマーは、配列ＡＧＡ  ＧＴＣ  ＣＴＧ  ＴＡＧ  ＧＧＣ  ＣＡＧ  ＴＧＡ  ＡＧＡ  ＴＧＧ（配列番号１５）を有する。２３７４−８８と称する逆方向プライマーは、配列ＴＡＣ  ＡＧＣ  ＣＴＧ  ＣＧＣ  ＴＣＣ  ＡＧＧ  ＣＡＧ  ＴＡＧ  ＣＣ（配列番号１６）を有する。このスクリーニングは、スクリーニングしたｃＤＮＡ試料の中でヒト精巣が最も豊富なソースであることを示した。
【０３１８】
完全長ヒトｃＤＮＡクローンを得るために、Ｒａｐｉｄ  Ｓｃｒｅｅｎヒト精巣ｃＤＮＡライブラリー（ＬＴＳ−１００１）をＯｒｉｇｅｎｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）より入手した。すべてのｃＤＮＡライブラリースクリーニングについて標準ＰＣＲ条件を使用した。Ｏｒｉｇｅｎｅの製品仕様書によれば、ライブラリーは、９６穴一次平板に整列された５００，０００クローンを含んだ。一次平板の各々の穴は、それ故、約５，０００クローンを含んだ。一平板の穴３Ｂは陽性であった。一次平板上の陽性穴３Ｂに対応する二次サブ平板をＯｒｉｇｅｎｅより購入した。その後のスクリーニングは、３Ｂ二次サブ平板上の穴番号５５が陽性であることを明らかにした。
【０３１９】
Ｏｒｉｇｅｎｅ二次サブ平板は、もとの５０のクローンから増幅した大腸菌のグリセロール保存株を含んだ。陽性穴番号５５の連続希釈溶液を１：１０、１：１００及び１：１，０００の密度でＬＢ  Ａｍｐ平板に塗布した。ＬＢ  Ａｍｐ平板からのコロニー（９６）を個別に採取し、プライマー２３９２−７３及び２３７４−８８（上述）によるＰＣＲスクリーニングのために使用した。この手順を用いて４つの陽性コロニーを特定した。それらの陽性コロニーをクローン７０、７８、８５及び８９と称した。これらのコロニーに対応するプラスミドＤＮＡを作製し、ベクタープライマーと遺伝子特異的プライマーの組合せを用いて配列決定した。クローン８９は完全に配列決定し、その他のクローンは末端及びコード配列において配列決定した。そのデータは、４つのクローンが同じコード配列を有することを明らかにした。
【０３２０】
ヒトＩＬ−１７様ｃＤＮＡ（クローンＯｒｉｇｅｎｅ−８９）は３９８７ｂｐの長さであり、配列番号１として示している。このｃＤＮＡは、１６アミノ酸の予想シグナルペプチド及び１４５アミノ酸の予想成熟タンパク質（配列番号２）を有する１６１アミノ酸のオープンリーディングフレームをコードする。予想ＩＬ−１７様タンパク質配列に関するＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベースのＦＡＳＴＡ検索は、配列番号２が１６０アミノ酸重複内でＩＬ−１７と２５．０％の同一性、９０アミノ酸重複内でＩＬ−２０と３６．７％の同一性、９０アミノ酸重複内でＩＬ−１７Ｂと３５．６％の同一性及び１７１アミノ酸重複内でＩＬ−１７Ｃと３４．５％の同一性を示すことを明らかにした。他のＩＬ−１７ファミリー成員と同様に、新規ヒトＩＬ−１７様ポリペプチド（ここではＩＬ−１７Ｅとも称する）は分泌タンパク質であると予想され、サイトカインであると予想される。
【実施例２】
【０３２１】
ＩＬ−１７様ポリヌクレオチドを過剰発現するトランスジェニックマウス
Ａ．導入遺伝子の作製。
【０３２２】
開始ＡＴＧのすぐ上流に変化したコザック配列、ＣＣＡＣＣを有するヒトＩＬ−１７様ｃＤＮＡ（配列番号１）のコード領域を肝特異的発現ベクターに連結した。この発現ベクターは、染色体１９番上のヒトアポリポタンパク質（アポ）Ｃ−Ｉ／Ｃ−Ｉ’遺伝子間領域からの肝細胞制御領域（ＨＣＲ）を含む７７４ｂｐ  ＤＮＡフラグメントから成った（Ｓｉｍｏｎｅｔら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６８：８２２１−８２２９，１９９３）。このベクターはまた、ヒトアポＥ遺伝子５’隣接配列、アポＥ遺伝子の第一エクソン、第一イントロン及び第二エクソンの一部から成る１４５０ｂｐのＤＮＡの連続断片を含んだ（Ｓｉｍｏｎｅｔら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，９４：１３１０−１３１９，１９９４）。ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルは、ｃＤＮＡインサート部位の下流に位置した。この技術分野で既知の標準方法を用いた塩基配列決定によってｃＤＮＡの完全性を確認した。
【０３２３】
Ｂ．トランスジェニックマウスの作製と分析。
【０３２４】
生じたプラスミド（ここではＡｐｏＥ−ｈＩＬ−１７と称する）を精製し、導入遺伝子インサートを微量注入のために単離した。ＢＤＦ１×ＢＤＦ１交配マウスからの単細胞胚を、基本的にＢｒｉｎｓｔｅｒら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２：４４３８−４４４２，１９８５）に述べられているように注入した。胚を３７℃及び５％ＣＯ２インキュベーター中で一晩培養した。その後、１５個から２０個の２細胞胚を１３匹の偽妊娠ＣＤ１雌性マウスの卵管に移した。トランスジェニック子孫を、Ｓｉｍｏｎｅｔら（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，９４：１３１０−１３１９，１９９４）に述べられているように耳生検より調製したＤＮＡからのヒトアポＥ第一イントロンの３６８ｂｐフラグメントを増幅するプライマーでのＰＣＲスクリーニングによって特定した。
【実施例３】
【０３２５】
トランスジェニックマウスの剖検分析
８−１０週齢の、１０匹のＩＬ−１７様トランスジェニックマウス及び５匹の非トランスジェニック同腹子を剖検した。剖検時にマウスからの肝試料を液体窒素で瞬間凍結した。Ｐｅｒｆｅｃｔ  ＲＮＡキット（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）を製造者の指示に従って使用して各々の試料からＲＮＡを単離し、ノーザンブロット分析によって分析した。
【０３２６】
１×ＲＮＡ  Ｌｏａｄｉｎｇ  Ｄｙｅ（Ｓｉｇｍａ）中で希釈したＲＮＡ  １０μｇを１％ホルムアルデヒド−アガロースゲル上で泳動させてノーザンブロットを生成した。ゲルを５０ｍＭ  ＮａＯＨ及び１５０及び５５ｍＭ  ＮａＣｌで変性させた。その後、ゲルを０．１Ｍトリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．０）及び１５０ｍＭ  ＮａＣｌ中で中和し、製造者の指示に従って（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）Ｄｕｒａｌｏｎ膜に写し取った。そのノーザンブロットを、Ｒｅｄｉｐｒｉｍｅ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｍｅｒｓｈａｍ）によって生成した３２Ｐ標識ヒトＩＬ−１７様ｃＤＮＡでプローブした。Ｅｘｐｒｅｓｓ  Ｈｙｂ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ中でハイブリダイゼーションを実施し、製造者の指示に従って洗浄した。ハイブリダイズしたブロットを−８０℃で７２時間Ｘ線フィルム（Ｋｏｄａｋ）に露光し、その後現像した。
【０３２７】
ノーザンブロット分析は、トランスジェニック初代マウスが非トランスジェニック同腹子と比較してＩＬ−１７様ＲＮＡの高い発現を有することを示した。試験した１０匹のマウスのうちで、Ｎｏ．２９、５２、５５、６１及び６６と表わされるマウスが最も高いレベルのＩＬ−１７様ＲＮＡ発現を有していた（図７参照）。
【０３２８】
Ｂ．残りの初代マウスに関する発現分析
残りのトランスジェニック初代マウスと対照マウスからの肝臓を部分的肝切除術によって入手した。マウスをイソフルオランによって麻酔し、胸骨の剣状突起の下で小さな横切開を行って肝臓を露出させた。結合点で切除のために選択した肝葉の周囲で縫合を行った。その肝葉を結紮し、結紮糸の下で切断することによって切除して、液体窒素中で瞬間凍結した。次に採血のためにマウスを検査し、皮膚切開を１個から２個のオートクリップ（皮膚用ステープル）で閉じた。ＲＮＡを肝臓から単離し、ノーザンブロット分析を上述したように実施した。ハイブリダイズしたブロットを−８０℃で２４時間Ｘ線フィルム（Ｋｏｄａｋ）に露光し、その後現像した。
【０３２９】
残りの初代マウスに関するノーザンブロット分析は、これらのマウスが非トランスジェニック同腹子と比較して肝臓においてより高いレベルのＩＬ−１７様ＲＮＡを発現することを示した。Ｎｏ．１１、３０、３３、４６及び６８と表わされるマウスが最も高いレベルのＩＬ−１７様ＲＮＡを発現した（図８参照）。
【実施例４】
【０３３０】
ＩＬ−１７様トランスジェニックマウスの病理学的分析
Ａ．剖検
この試験では、７匹の６−８週齢のＩＬ−１７様マウスならびに５匹の６−８週齢の非トランスジェニック同腹子（雄性２匹と雌性３匹）を潜在的ＩＬ−１７様表現型に関して病理学的に分析した。Ｎｏ．２９、５２、６１及び６６のマウスはＩＬ−１７様ｍＲＮＡの肝発現に関して強い陽性であり、一方Ｎｏ．１、１６及び５５のマウスは弱い陽性であった。５匹の非トランスジェニック対照マウス（Ｎｏ．２、１７、２８、５３及び６５）は陰性であった。剖検時に、マウスの体重を測定し、血液学及び血清化学検査のために血液を採取して、肝臓、脾臓、腎臓、心臓及び胸腺を計量した。肝臓、脾臓、肺、脳、心臓、腎臓、副腎、胃、小腸、膵臓、盲腸、結腸、腸間膜リンパ節、皮膚、乳腺、気管、食道、甲状腺、上皮小体、唾液腺、膀胱、卵巣又は精巣、子宮又は精嚢、骨格筋、骨、及び骨髄の切片を組織学的分析のために採取した。
【０３３１】
Ｂ．組織学的検査
ＩＬ−１７様トランスジェニック及び非トランスジェニックマウスからの肝臓、脾臓、肺、脳、心臓、腎臓、副腎、胃、小腸、膵臓、盲腸、結腸、腸間膜リンパ節、皮膚、乳腺、気管、食道、甲状腺、上皮小体、唾液腺、膀胱、卵巣又は精巣、子宮又は精嚢、骨格筋、骨、及び骨髄の切片を、１０％中性緩衝亜鉛ホルマリン（Ａｎａｔｅｃｈ，Ｂａｔｔｌｅ  Ｃｒｅｅｋ，Ｍｉｃｈｉｇａｎ）中に一晩固定し、パラフィン包埋して、３μｍの切片にし、常用組織学的検査のためにヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した。
【０３３２】
Ｃ．免疫組織化学的検査
自動ＤＰＣ  Ｍａｒｋ  ５  Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｔａｉｎｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  Ｃｏｒｐ，Ｒａｎｄｏｌｐｈ，ＮＪ）を用いて、厚さ４μｍのパラフィン包埋切片に関して免疫組織化学的染色を実施した。脱パラフィン化組織切片をＣＡＳ  ＢＬＯＣＫ（Ｚｙｍｅｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）で遮断し、マクロファージに対するラット抗マウスモノクローナル抗体（Ｆ４／８０，Ｓｅｒｏｔｅｃ  Ｉｎｃ．，Ｒａｌｅｉｇｈ，ＮＣ）又はすべての型のＢ細胞に対するラット抗マウスＣＤ４５Ｒ／Ｂ２２０モノクローナル抗体（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）と共にインキュベートした。ビオチニル化ウサギ抗ラット免疫グロブリン二次抗体（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）を用いて一次抗体を検出した。次に切片を３％過酸化水素で反応停止させ、アビジン−ビオチン三元複合体（ｃｏｍｐｌｅｘ  ｔｅｒｔｉａｒｙ）（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）と反応させた。染色反応をジアミノベンジジン（ＤＡＢ、Ｄａｋｏ  Ｃａｒｐｉｎｔｅｒｉａ，ＣＡ）で視覚化し、切片をヘマトキシリンで対比染色した。
【０３３３】
Ｄ．肉眼的病理学所見
４匹の高発現ＩＬ−１７様トランスジェニックマウス（Ｎｏ．２９、５２、６１及び６６）及び低発現マウスの１匹（Ｎｏ．５５）からの腸間膜リンパ節は、著明に大きさが増大していた。同様に、これら５匹のＩＬ−１７様トランスジェニックマウスからの脾臓は腫脹しており、有意の体重増加を示した（１．０８±０．２７ＳＤ％体重対非トランスジェニック対照マウスでの０．３７±０．１２ＳＤ％体重、ｐ＝０．０００７）。他の２匹の低発現トランスジェニックマウス（Ｎｏ．１及び１６）からの腸間膜リンパ節及び脾臓は正常であると思われた。生器官重量データを表１に示し、有意差を表３に要約している。
【０３３４】
【表４】
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【０３３５】
Ｅ．血液学所見
腫脹した腸間膜リンパ節及び脾臓を有する５匹のＩＬ−１７様トランスジェニックマウスのうち４匹（Ｎｏ．２９、５２、５５、６１及び６６のマウスからの血液は凝固し、評価することができなかった）は、総白血球、好中球、リンパ球、好酸球、及び大型非染色細胞（おそらく大型顆粒リンパ球）数の中等度から著明な増加を有していた。これら４匹のＩＬ−１７様トランスジェニックマウスについての平均総白血球数は１１．９３×１０３（±４．４７×１０３ＳＤ）であり、一方非トランスジェニック対照マウスは３．０９×１０３（±０．７９×１０３ＳＤ、ｐ＝０．００３）の平均総白血球数を有していた。これら４匹のＩＬ−１７様トランスジェニックマウスにおける平均好中球数は、非トランスジェニック対照マウスでの０．９２×１０３（±０．５３×１０３ＳＤ）に対し、２．２９×１０３（±０．６７×１０３ＳＤ）であり、ｐ＝０．０３２であった。これら４匹のＩＬ−１７様トランスジェニックマウスは、非トランスジェニック対照マウスでの１．９９×１０３（±０．３８×１０３ＳＤ）に対し、６．７６×１０３（±２．３２×１０３ＳＤ）の平均リンパ球数を有し、ｐ＝０．００２５であり、平均好酸球数は非トランスジェニック対照マウスでの０．０３×１０３（±０．０１×１０３ＳＤ）に対し、１．３５×１０３（±０．９６×１０３ＳＤ）、ｐ＝０．０１７であり、平均大型非染色細胞数は、非トランスジェニック対照マウスでの０．１０×１０３（±０．０５×１０３ＳＤ）に対し、１．４１×１０３（±１．１１×１０３ＳＤ）、ｐ＝０．０３１であった。ＩＬ−１７様トランスジェニックマウスの２匹（Ｎｏ．５５及び６６）はまた、赤血球数、ヘモグロビン、及びヘマトクリットのわずかな低下ならびにわずかに高い血小板数を特徴とする軽度の貧血を有していた。生血液学データを表２に示し、有意差を表３に要約している。
【０３３６】
【表５】
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【０３３７】
【表６】
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【０３３８】
Ｆ．組織病理学所見
７匹のＬ−１７様トランスジェニックマウス及び５匹の非トランスジェニック対照同腹子からの肝臓、脾臓、肺、脳、心臓、腎臓、副腎、胃、小腸、膵臓、盲腸、結腸、腸間膜リンパ節、皮膚、乳腺、気管、食道、甲状腺、上皮小体、唾液腺、膀胱、卵巣又は精巣、子宮又は精嚢、骨格筋、骨、及び骨髄のヘマトキシリン及びエオシン染色切片を検査した。すべてのマウスからのリンパ節及び脾臓のＢ２２０（すべてのＢ細胞に特異的）及びＦ４／８０（マクロファージに特異的）免疫染色切片も検査した。ＩＬ−１７様トランスジェニックマウスの５匹（Ｎｏ．２９、５２、５５、６１及び６６）は、著明な腸間膜リンパ節腫脹、脾リンパ球過形成及び赤色脾髄好酸球性骨髄球過形成、及び骨髄好酸球過形成を特徴とする同様の組織学的所見を有していた。最も顕著な組織学的所見は、正常結節構造の喪失を伴う大きな結節拡大及び多数の好酸球、反応性Ｂ細胞（Ｂ２２０で染色される）及び形質細胞、マクロファージ（Ｆ４／８０で染色させる）及び多核炎症巨細胞を含む炎症細胞の混合集団による髄質拡大を特徴とする、腸間膜リンパ節腫脹であった（図９参照）。これら５匹のＩＬ−１７様トランスジェニックマウスはまた、著明な骨髄好酸球性骨髄球過形成（図１０Ｂ）ならびに中等度から著明な脾Ｂ細胞リンパ球過形成及び赤色脾髄好酸球性骨髄球過形成（図１０Ｆ）を示した。さらに、ＩＬ−１７様トランスジェニックの１匹（Ｎｏ．２９）はまた、１つの腎臓における腎盂拡張を伴う著明な慢性好酸球性及び化膿性腎盂腎炎、及び他方の腎臓における中等度の慢性好酸球性及び化膿性腎盂炎を示し（図１０Ｊ）、もう１匹のＩＬ−１７様トランスジェニックマウス（Ｎｏ．５５）は、軽度の両側性慢性好酸球性及び化膿性腎盂炎を伴う重篤な慢性好酸球性及び化膿性尿性膀胱炎を示した。最後に、ＩＬ−１７様トランスジェニックの４匹（Ｎｏ．２９、５５、６１及び６６）は、極微から軽度の好酸球性及びリンパ形質細胞性大腸炎及び／又は回腸炎を示した。
【０３３９】
Ｇ．ヒトＩＬ−１７様ポリペプチドを過剰発現するトランスジェニックマウスにおける表現型所見の要約
ＩＬ−１７様トランスジェニックマウスの５匹（Ｎｏ．２９、５２、５５、６１及び６６）は、好酸球、リンパ球、及び大型顆粒リンパ球と考えられる大型非染色細胞の著名な上昇を伴う白血球増加、著しい好酸球性成分を伴う著明なリンパ節腫脹、骨髄好酸球性骨髄球過形成、及び脾Ｂ細胞リンパ球過形成及び好酸球性骨髄球過形成を特徴とする、同様の表現型を有していた。ＩＬ−１７様トランスジェニックマウスの２匹（Ｎｏ．５５及び６６）は、軽度の貧血と血小板増加症も示した。さらに、ＩＬ−１７様トランスジェニックマウスＮｏ．５５及び２９は、腎臓及び／又は膀胱の好酸球性及び化膿性炎症を示した。最後に、ＩＬ−１７様トランスジェニックマウスの４匹（Ｎｏ．２９、５５、６１及び６６）は、極微から軽度の好酸球性及びリンパ形質細胞性大腸炎及び／又は回腸炎を有していた。これらの所見すべてが、ＩＬ−１７様タンパク質が炎症及び骨髄造血において、特に好酸球とＢリンパ球の発生、刺激及び／又は集積において役割を果たすことを示唆する。
【実施例５】
【０３４０】
ＩＬ−１７様ポリペプチド過剰発現マウスのトランスジェニック表現型
１０匹のトランスジェニックマウスと５匹の非トランスジェニック同腹子に関して表現型分析を実施した。大腿末梢血（心臓穿刺によって入手）及び脾の縦断半切片を各々のトランスジェニックマウス及びそれらの同腹子対照から入手した。分析したトランスジェニックマウスのうち５匹（Ｎｏ．２９、５２、５５、６１及び６６）は表現型の変化を示した。
【０３４１】
トランスジェニックマウスの表現型を分析するために、活性化Ｔ細胞を含む主要造血細胞群を定量した。さらに、ＩＬ−１７様受容体、ＩＬ−１７ＲＢの組織及び系列特異的発現を、ここで実施例６において述べるように定量した。
【０３４２】
蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）による上記で特定した測定を行うために下記の抗体パネルを設計した。ヘルパーＴ細胞を検出するためにＣＤ４−ＰＥ抗体を使用した。ＣＤ６９は初期活性化マーカーであり、ＣＤ６９−ＦＩＴＣ抗体は活性化細胞を検出するために使用した。ＣＤ３−ＦＩＴＣ抗体はすべてのＴ細胞を検出するために使用した。ＣＤ８−ＰＥ抗体はキラーＴ細胞を検出するために使用した。ＣＤ１４−ＦＩＴＣ抗体は、単球系列の細胞を検出するために使用した。ＣＤ１９−ＰＥ抗体は、Ｂ系列細胞（プレＢから成熟表面免疫グロブリン陽性Ｂ細胞まで）を検出するために使用した。ＧＲ−１−ＦＩＴＣ抗体は顆粒球を検出するために使用した。ＮＫ１．１−ＰＥ抗体はナチュラルキラー細胞を検出するために使用した。ＩＬ−１７様サイトカイン受容体（ＩＬ１７ＲＢ）の発現パターンを組換えＩＬ−１７様Ｆｃ融合タンパク質の結合によって検出し、適切な抗ヒトＦＩＴＣ抗体で展開した。ＣＤ４５Ｒ−ＰＥ抗体はＢ細胞を検出するために使用した。ＣＤ１１−ＰＥ抗体は樹状細胞を検出するために使用した。ＣＤ５抗体は、ＣＤ１９と同時発現されたとき白血病／リンパ腫の可能性指標として使用した。ＣＤ３４抗体も、ＣＤ１９と同時発現されたとき白血病／リンパ腫の可能性指標として使用した（実施例１０で述べるように）。抗体はすべてＢＤ−Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡより入手した。
【０３４３】
トランスジェニックマウス及び非トランスジェニック同腹子を犠牲死させ、大腿骨と脾臓を切除した。大腿骨髄と脾臓からの細胞懸濁液を作製し、２回洗って、ＰＢＳ／０．５％ＢＳＡに再懸濁した。Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｚ１  Ｃｏｕｎｔｅｒで、１００μｍの開口と４μｍの下限閾値設定を用いて各々の細胞懸濁液の細胞数を定量した。各細胞懸濁液の１０μｌアリコートを、Ｚａｐｏｇｌｏｂｉｎ  ３滴（赤血球を溶解するため）を含むＩｓｏｔｏｎ緩衝液１０ｍｌに加えて計数した。細胞懸濁液をＦｃ−ｂｌｏｃｋ（ＣＤ１６／３２）と共に４℃で１５分間インキュベートした。その後、１×１０６細胞（ＰＢＳ／０．５％ＢＳＡに懸濁）を、９６穴平板上の各抗体含有穴に加えた。
【０３４４】
さらに、トランスジェニックマウス及び非トランスジェニック同腹子からの末梢血試料を心臓穿刺によって入手し、ＣＢＣ分析を実施した。その後残りの血液を、９６穴平板上の抗体を含む８つの穴に等しく分配した。
【０３４５】
細胞懸濁液と血液試料を抗体の存在下に室温で３０分間インキュベートした。その後、細胞を２回洗い、赤血球を除去するためにＦＡＣＳ溶解緩衝液（２００μｌ／穴；Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）により室温で１５分間溶解した。溶解後、細胞を洗浄して、ＦＡＣＳ緩衝液４００μｌに再懸濁し、フローサイトメトリーによって分析した。
【０３４６】
１つの表現型を示した５匹のトランスジェニックマウス（Ｎｏ．２９、５２、５５、６１及び６６）では、末梢血中のＣＤ１９＋細胞（Ｂ細胞）の著しい増加が存在した。図１１に示すように、ＣＤ１９＋細胞の絶対数は対照に比べて５倍に増加した。さらに、図１２に示すように脾臓ではＣＤ１９＋細胞の絶対数に２倍から４倍増加が存在した。大腿骨髄では、ＣＤ１９＋細胞のわずかな減少が存在した（図１３）。ＣＤ４５Ｒに関する染色も同様の傾向を示した。トランスジェニックマウスから単離した末梢血及び脾臓はまた、ヘルパーＴ細胞（ＣＤ４＋Ｔリンパ球）の絶対数に２倍から３倍増加を示した（それぞれ図１４及び１５参照）。
【０３４７】
トランスジェニックマウスは、好酸球に類似した光散乱特性を有する細胞の大きな集団（例えば顆粒球３３％）の一貫した出現を有していた（図１６及び１７）。さらに、それらの細胞は顆粒球マーカーを発現しない。また、血液及び骨髄においてＩＬ−１７ＲＢを発現する顆粒球様細胞のより小さいが別個の集団（例えば８％から１７％の顆粒球）の一貫した出現が存在した（図１８及び１９参照）。散布図との相関に基づき、トランスジェニックマウスは次の多系列表現型を有すると思われる：ＣＤ４＋、ＣＤ４５Ｒ＋、ＣＤ１１ｃ＋、及び大型及び顆粒状。
【０３４８】
この分析は、トランスジェニックマウス内で大腿骨髄及び末梢血中に好酸球様細胞群の明らかな出現が存在することを示した。図２０に示すように、これらの細胞の散布プロフィールは、好酸球の前方対側方散布（大きさ対粒状度）の「教科書」例に緊密に類似する。
【０３４９】
また、循環及び脾ＣＤ１９＋Ｂ細胞の絶対数（及び分画パーセンテージ）の重要な増加も存在した。ＣＤ１９＋リンパ球は活性化マーカーＣＤ６９＋に関して陽性ではなかったが、それらの末梢血における絶対数の増加と骨髄におけるわずかな減少は、増殖が起こりつつある末梢組織への移動を示唆する。
【０３５０】
血液及び骨髄における多系列表現型の出現は、リンパ腫様表現型を示唆する。これらの結果を実施例１０の中でさらに説明する。さらに、ＩＬ−１７ＲＢはこれらの細胞で上方調節されると思われるので、この集団はＩＬ−１７様タンパク質の遍在に対して反応性であることを示唆する。これらのマウスにおいて明らかな好酸球増加症が存在するという事実と共に、多系列表現型は急性骨髄単球性白血病（Ｍ４  ＡＭＬ）の説明に密接に適合する（Ｃａｍｐｅｎａ  ＆  Ｂｅｈｍ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．２３４：５９−７５，２０００）。
【実施例６】
【０３５１】
組換えヒトＩＬ−１７様Ｆｃ融合タンパク質
ＩｇＧ１重鎖定常領域（Ｆｃ）にインフレーム融合したヒトＩＬ−１７様（配列番号２）の予想成熟タンパク質にインフレーム融合したＥｐｏｇｅｎシグナルペプチド（ＥｐｏＳＰ）を、組換え成熟ヒトＩＬ−１７様タンパク質を生成するように操作した。アミノ酸配列ＭＧＶＨＥＣＰＡＷＬＷＬＬＬＳＬＬＳＬＰＬＧＬＰＶＬＧ（配列番号１１）をコードするＥｐｏＳＰ  ＤＮＡをｐＣＥＰ４発現ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の５’末端のコンセンサスコザック配列（ＣＣＡＣＣ）と３’末端のＡｓｃＩ部位の間に挿入した。さらに、配列番号１２に示すアミノ酸配列及び配列の５’末端のＮｔｏＩ制限部位をコードするＦｃ  ＤＮＡフラグメントをＥｐｏＳＰ（配列番号１１）の３’末端に挿入した。コードフレームを同じままに保持するためにＮｏｔＩ制限部位のすぐ後にチミジンを挿入した。ｐＣＥＰ４内にＥｐｏＳＰとＦｃを含む生じたベクターを、ｐＣＥＰ４−ＥｐｏＳＰ−Ｆｃベクターと称する。
【０３５２】
５’末端にＡｓｃＩ制限部位及び３’末端にＮｏｔＩ制限部位を含み、終結コドンを伴わない成熟ヒトＩＬ−１７様タンパク質（配列番号２）をコードするＤＮＡフラグメントをＰＣＲによって作製した。成熟ヒトＩＬ−１７様タンパク質は、開始メチオニンをアミノ酸番号１として、アミノ酸番号１７（ａａ１７）から始まる。コードフレームを同じままに保持するために残基１７を含むコドンの直前に、チミジンを含むＡｓｃＩ部位を挿入した。ＡｓｃＩ及びＮｏｔＩ制限部位を使用してｐＣＥＰ４−ＥｐｏＳＰ−Ｆｃ発現ベクターにヒトＩＬ−１７様フラグメントを定方向連結し、ｐＣＥＰ４−ＥｐｏＳＰ−ｈｕＩＬ−１７様Ｆｃと称した。この技術分野で既知の標準方法を使用したＤＮＡ塩基配列決定により、上記ＤＮＡ及び接合部位の完全性を確認した。
【０３５３】
ｐＣＥＰ４−ＥｐｏＳＰ−ｈｕＩＬ−１７様Ｆｃプラスミドを、Ｓｕｐｅｒｆｅｃｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を製造者の指示に従って使用してヒト２９３／ＥＢＮＡ細胞に一過性にトランスフェクトした。無血清順化培地をトランスフェクションの７２時間後に細胞から収集した。成熟タンパク質のアミノ末端に位置するアミノ酸配列ＡＰＳを有すると予想される、組換えヒトＩＬ−１７様Ｆｃ融合タンパク質を、ＨｉＴｒａｐ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｇカラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を用いたアフィニティークロマトグラフィーによって単離した。組換えヒトＩＬ−１７様Ｆｃ融合タンパク質を、次に、Ｓｐｅｃｔｒａ／Ｐｏｒｅ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  ＭＷＣＯ  １０，０００（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を用いて４℃で７２時間、ＰＢＳ緩衝液に透析した。その後、組換えヒトＩＬ−１７様Ｆｃ融合タンパク質を１０％アクリルアミドゲル（Ｎｏｖｅｘ）上で電気泳動し、クマシーブルーで染色した。染色したゲルを濃度計で走査して、対象タンパク質バンドのパーセント表示を決定した。Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｌｏｗｒｙ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙ  Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｉｅｒｃｅ）を使用して、製造者の指示に従って総タンパク質濃度を測定した。次に、ＩＬ−１７様Ｆｃ融合タンパク質のパーセンテージに総タンパク質濃度を乗じてヒトＩＬ−１７様Ｆｃ融合タンパク質の量を算定した。
【実施例７】
【０３５４】
組換えヒトＩＬ−１７受容体Ｂ−Ｆｃ融合タンパク質
ＩＬ−１７受容体−Ｂポリペプチドを、その開示全体が参照してここに組み込まれる、２０００年１１月２７日出願の米国特許出願通し番号第０９／７２３，２３２号に述べられているようにクローン化した。ＩＬ−１７受容体Ｂ−Ｆｃ融合タンパク質（ＩＬ−１７ＲＢ−Ｆｃ）を作製するために、ヒトＩＬ−１７受容体様ポリペプチドの細胞外ドメイン（それぞれ配列番号１８及び２０の、ＩＬ−１７ＲＢ−２についてはアミノ酸Ｎｏ．１−２９２、ＩＬ−１７ＲＢ−３についてはアミノ酸Ｎｏ．１−３５０）をヒトＩｇＧ１重鎖定常領域（Ｆｃ）に融合した。その５’末端のＮｏｔＩ制限部位及びその３’末端のＸｈｏＩ制限部位と共にヒトＦｃ（配列番号１２に示すアミノ酸配列）をコードするＤＮＡフラグメントを、ＮｏｔＩ及びＸｈｏＩ部位を用いてｐＣＥＰ４ベクターに定方向連結した。ｐＣＥＰ４内にＦｃコード配列を含む生じたベクターをｐＣＥＰ４−Ｆｃベクターと称する。それらの５’末端にＨｉｎｄ  ＩＩＩ制限部位及びコザック配列（ＣＣＡＣＣ）及びそれらの３’末端にＮｏｔＩ制限部位を有する、ヒトＩＬ−１７ＲＢ−２又はＩＬ−１７ＲＢ−３（それぞれ配列番号：１８及び２０）の細胞外ドメインをコードするＤＮＡフラグメントをＰＣＲによって作製した。これらのＤＮＡフラグメントを、Ｈｉｎｄ  ＩＩＩ及びＮｏｔＩ制限部位を用いてｐＣＥＰ４−Ｆｃ発現ベクターに定方向連結し、ｐＣＥＰ４−ｈｕＩＬ−１７ＲＢ−２様Ｆｃ又はｐＣＥＰ４−ｈｕＩＬ−１７ＲＢ−３様Ｆｃと称した。この技術分野で既知の標準方法を用いたＤＮＡ塩基配列決定によって上記ＤＮＡ及び接合部位の完全性を確認した。
【０３５５】
ｐＣＥＰ４−ｈｕＩＬ−１７ＲＢ−２様Ｆｃプラスミド又はｐＣＥＰ４−ｈｕＩＬ−１７ＲＢ−３様Ｆｃプラスミド（それぞれＨＩＬ−１７ＲＢ−２−Ｆｃ及びＨＩＬ−１７ＲＢ−３−Ｆｃとも称し、２００１年３月１４日に、それぞれアクセッション番号＿＿及び＿＿の下にｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｌｖｄ．，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ  ２０１１０，Ｕ．Ｓ．Ａ．に寄託した）を、Ｓｕｐｅｒｆｅｃｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を製造者の指示に従って使用してヒト２９３／ＥＢＮＡ細胞に一過性にトランスフェクトした。無血清順化培地をトランスフェクションの７２時間後に細胞から収集した。成熟タンパク質のアミノ末端に位置するアミノ酸配列ＡＰＳを有すると予想される、組換えヒトＩＬ−１７ＲＢ様Ｆｃ融合タンパク質を、ＨｉＴｒａｐ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｇカラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を用いたアフィニティークロマトグラフィーによって単離した。生じた融合タンパク質のアミノ酸配列を配列番号２１及び２２として示す。
【０３５６】
組換えヒトＩＬ−１７ＲＢ様Ｆｃ融合タンパク質を、Ｓｐｅｃｔｒａ／Ｐｏｒｅ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  ＭＷＣＯ  １０，０００（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を用いて４℃で７２時間、ＰＢＳ緩衝液に透析した。その後、組換えヒトＩＬ−１７ＲＢ様Ｆｃ融合タンパク質を１０％アクリルアミドゲル（Ｎｏｖｅｘ）上で電気泳動し、クマシーブルーで染色した。染色したゲルを濃度計で走査して、対象タンパク質バンドのパーセント表示を決定した。Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｌｏｗｒｙ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙ  Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｉｅｒｃｅ）を使用して、製造者の指示に従って総タンパク質濃度を測定した。次に、ＩＬ−１７ＲＢ様Ｆｃ融合タンパク質のパーセンテージに総タンパク質濃度を乗じてヒトＩＬ−１７受容体様Ｆｃ融合タンパク質の量を算定した。
【０３５７】
ＩＬ−１７ＲＢ融合タンパク質はまた、上述したように天然細胞外ドメインに融合する代わりに、予想成熟タンパク質にインフレーム融合したＥｐｏｇｅｎシグナルペプチド（ＭＧＶＨＥＣＰＡＷＬＷＬＬＬＳＬＬＳＬＰＬＧＬＰＶＬＧ）（配列番号１１）によって作製することもできる。
【実施例８】
【０３５８】
ＩＬ−１７様ポリペプチドはＩＬ−１７受容体Ｂに結合する
ＩＬ−１７様ポリペプチドがＩＬ−１７受容体Ｂ（ＩＬ−１７ＲＢ）ポリペプチド（配列番号１８及び２０）についてのリガンドであるかどうかを判定するため、ノーザンブロット及びＲＴ−ＰＣＲ分析によってＩＬ−１７ＲＢを発現することが示されたヒトＢリンパ芽球細胞系ＧＭ３１０４Ａに関して競合結合測定法を実施した。ＩＬ−１７様Ｆｃ融合タンパク質を発現するようにトランスフェクトした２９３Ｅ細胞からの順化培地（実施例６で上述した）を収集し、濃縮して、結合アッセイに使用した。可溶性遮断受容体、ＩＬ−１７ＲＢ−２又はＩＬ−１７ＲＢ−３との競合によってリガンド結合の特異性を判定した。ＩＬ−１７Ｒ−Ｆｃ融合タンパク質（ＩＬ−１７受容体の細胞外部分を含む）を、トランスフェクトした２９３Ｅ細胞より収集した順化培地から精製した。実施例７において上述したようにＩＬ−１７ＲＢ−２−Ｆｃ又はＩＬ−１７ＲＢ−３−Ｆｃでトランスフェクトした２９３Ｅ細胞（それぞれアクセッション番号＿＿及び＿＿の下に２００１年３月１４日にＡＴＣＣに寄託した）からの順化培地をＡｍｉｃｏｎ  ３ＫｄカットオフＣｅｎｔｒａｃｏｎ（Ｎｏ．４２０３）で濃縮し（５ｘ）、やはり遮断のために使用した。
【０３５９】
結合アッセイの前に、順化培地を含む（１ｘ）ＩＬ−１７様Ｆｃ融合タンパク質０．５ｍｌを、各々、ＩＬ−１７ＲＢ−２−Ｆｃ、ＩＬ−１７ＲＢ−３−Ｆｃの５ｘ順化培地０．５ｍｌ、又はＲＰＭＩ  １６４０中に５μｇ／ｍｌのＩＬ−１７Ｒ−Ｆｃタンパク質０．５ｍｌを含むバイアルに加えた。非特異的結合部位を前遮断するために各々のバイアルを氷上で２時間インキュベートした。
【０３６０】
その後、ＧＭ３１０４Ａ細胞（１×１０６細胞／試料）を８％ＦＢＳ／ＰＢＳ  １ｍｌと共に４℃で１時間インキュベートした。次に細胞を０．５％ＢＳＡ／ＰＢＳで洗い、１ｍｌの対照順化培地、ＩＬ−１７様Ｆｃを含む順化培地又は遮断受容体（ＩＬ−１７ＲＢ−２又はＩＬ−１７ＲＢ−３）を補足した順化培地と共に静かに振とうしながら４℃で２時間インキュベートした。インキュベーション後、細胞を氷冷０．５％ＢＳＡ／ＰＢＳ  １ｍｌで３回洗った。
【０３６１】
各々の細胞試料を、０．５％ＢＳＡ／ＰＢＳ中で希釈した２μｇ／１００μｌヤギ抗ヒトＩｇＧ−Ｆｃ−ＦＩＴＣ（Ｃｈｅｍｉｃｏｎ，ＡＰ１１３Ｆ）で染色した。細胞を氷上で１時間インキュベートし、氷冷０．５％ＢＳＡ／ＰＢＳ  １ｍｌで３回洗った。その後、ＦＡＣＳｃａｎ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いた蛍光活性化セルソーター分析によってリガンド結合を検出した。この分析は、ＩＬ−１７様ＦＣ融合タンパク質がＧＭ３１０４Ａ細胞に結合することを示した。この結合は、ＩＬ−１７ＲＢ−２及びＩＬ−１７ＲＢ−３によって阻害されたが、ＩＬ−１７Ｒによっては阻害されなかった。
【実施例９】
【０３６２】
ＩＬ−１７様ポリペプチドは前炎症性サイトカインの発現を誘導する
ＩＬ−１７様Ｆｃ融合タンパク質、ＩＬ−１７Ｂ−Ｆｃ、ＩＬ−１７Ｃ−Ｆｃ又はＩＬ−１７Ｃ−Ｆｃのいずれかを発現する２９３Ｅ細胞からの順化培地を収集して、アッセイにおけるリガンドとして使用した。ＩＬ−１７Ｃ−Ｆｃ、ＩＬ−１７Ｄ−Ｆｃ及びＩＬ−１７様Ｆｃを含む順化培地を、次に、３ＫｄカットオフＣｅｎｔｒａｃｏｎ（Ａｍｉｃｏｎ，Ｎｏ．４０３２）を用いて濃縮し（１５ｘ）、新鮮２０％ＦＢＳ／１６４０培地を加えて１ｘ培地に再構成した。
【０３６３】
ヒトＴリンパ芽球細胞（ＧＭ３１０４Ａ、１×１０６細胞／試料）を、各々のＩＬ−１７リガンド（ＩＬ−１７様ポリペプチド、ＩＬ−１７Ｂ、ＩＬ−１７Ｃ、ＩＬ−１７Ｄ及びヒトＦｃ）を含む再構成した濃縮順化培地中で培養した。３７℃及び５％ＣＯ２で１８時間のインキュベーション後、培地を収集し、培地中に放出されたＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＦＮ−γ、Ｇ−ＣＳＦ、及びＴＮＦ−αの量を、適切なＱｕａｎｔｉｋｉｎｅ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて製造者の指示に従って測定した。その結果を表４に要約する。ＩＬ−１７様ＦＣ融合タンパク質は、試験した他のＩＬ−１７リガンドよりもはるかに大きな度合でＴＮＦ−α、ＩＬ−１α及びＩＬ−６の放出を誘導した。ＩＬ−１β、ＩＦＮ−γ及びＧ−ＣＳＦの誘導はいずれのリガンドに関しても検出されなかった。
【０３６４】
【表７】
2005525094.tif 000008
【実施例１０】
【０３６５】
ＩＬ−１７様ポリペプチド過剰発現トランスジェニックマウスのＦ１世代の免疫表現型分類
ＩＬ−１７様ポリペプチドを過剰発現するトランスジェニックマウスの免疫表現型を、ＦＡＣＳ分析を用いて分析した。非トランスジェニック対照及びトランスジェニックマウスのリンパ節におけるＣＤ１９＋リンパ球上のＣＤ５及びＣＤ１９＋リンパ球上のＣＤ３４の群を測定した。さらに、非トランスジェニック及びトランスジェニックマウスの骨髄における好酸球上のＣＤ４発現も測定した。
【０３６６】
ＩＬ−１７様ポリペプチド過剰発現トランスジェニックマウス（８−１０週齢）及び非トランスジェニック対照より単離した特定リンパ系組織からの細胞上のＣＤ５、ＣＤ３４及びＣＤ４発現のプロフィールのＦＡＣＳ分析を、実施例４で述べたように細胞懸濁液に関して実施した。細胞（１×１０６）を次のマウス表面マーカーに対する複合抗体１μｇ／１０６細胞と共にインキュベートした：ＣＤ５−ＦＩＴＣ、ＣＤ３４−ＦＩＴＣ、ＣＤ１９−ＰＥ、及びＣＤ４−シクロム。すべての抗体をＢＤ−Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）より入手した。染色手順は先に述べたように実施し（実施例４参照）、ＦＡＣＳｃａｎ（Ｂｅｃｋｍａｎ）で読み取った。マーカーの発現レベルを散布図のリンパ球又は好酸球（Ｅｏｓ）ゲートで測定した。（図２１参照）。含まれるパーセンテージは二重陽性集団を表わす。
【０３６７】
ＣＤ５＋／ＣＤ１９＋、ＣＤ３４＋／ＣＤ１９＋、及びＣＤ４＋Ｅｏｓ集団についての細胞の絶対数を表５に示す。リンパ球を測定するために、ＦＡＣＳをリンパ球についてゲートし、そのデータをリンパ球の絶対数のパーセントとして示している。好酸球を測定するために、ＦＡＣＳをすべての細胞型についてゲートし、それ故データは細胞の総数のパーセントとして示している。
【０３６８】
【表８】
2005525094.tif 000009
【０３６９】
上記の表５に示すように、Ｆ１  ＩＬ−１７様ポリペプチド過剰発現トランスジェニックマウスは、数多くの白血病において特定されている造血マーカーを発現するリンパ球及び好酸球集団を明らかにした。具体的には、トランスジェニックマウスからのリンパ節におけるＣＤ１９＋リンパ球は、対照マウスでは発現されないＣＤ５及びＣＤ３４マーカーを発現した。ＣＤ５及びＣＤ３４の発現は対照に比べて約１００倍高い（表５）。ＣＤ５及びＣＤ１９の上方調節がＢ細胞性慢性白血病（Ｂ−ＣＬＬ）において特定されているが、ＣＤ３４の上方調節は急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）に関して報告されている（Ｘｉａら、Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  ４２：１１４−７，２０００；ＣａｌｄｗｅｌｌとＬａｓｃｏｍｂｅ，Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  Ｂｌｏｏｄ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｏｓｉｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．，２０００；Ｎｅｕｂｅｒら、Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ  １９２：１１０−５，１９９６参照）。
【０３７０】
また、ＣＤ４発現は、トランスジェニックマウスの骨髄において好酸球上で対照に比べて１５％の上昇で認められ、これはＣＤ４発現好酸球の絶対数の５０倍上昇をもたらした。好酸球上でのＣＤ４のこの異常発現は、対照群よりも高いＣＤ４＋及びＨＬＡ−ＤＲ＋好酸球と共に、成人Ｔ細胞性白血病患者において報告されている（Ｓａｋａｍｏｔｏら、Ｉｎｔｌ．Ａｒｃｈｉｖｅｓ  ｏｆ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．１１１（補遺１）；２６−８、１９９６）。これらの発現パターンから、ＩＬ−１７様ポリペプチド過剰発現トランスジェニックマウスのＦ１世代のリンパ節は前白血病状態の初期症状を担うと思われる。これらのマウスは加齢と共に健康状態が悪化し、これらのマウスにおいて初期段階にあると考えられるこれらの起こりうる白血病のいずれかを発症すると考えられる。
【０３７１】
これらの結果は、ＩＬ−１７様ポリペプチド及びポリペプチドヌクレオチドが、非ホジキンリンパ腫及びホジキン病を含むリンパ腫；前骨髄性白血病（Ｍ３  ＡＭＬ）、骨髄単球性白血病（Ｍ４  ＡＭＬ）、赤白血病（Ｍ６  ＡＭＬ）及び骨髄巨核球性白血病（Ｍ７  ＡＭＬ）を含む急性骨髄性白血病（ＡＭＬ及びＣＭＬ）；急性リンパ芽球性白血病を含む急性リンパ性白血病；慢性リンパ性白血病；毛様細胞白血病；及び多発性骨髄腫の診断、治療及び予防において有用でありうることを示唆する。
【実施例１１】
【０３７２】
ＩＬ−１７様ポリペプチドの過剰発現は前炎症性サイトカインを上昇させる
ＩＬ−１７様ポリペプチドの過剰発現は、高い数のリンパ球、好酸球及び顆粒球を生じさせた。これらの細胞数増加においてどのような因子が役割を果たすのかを調べるため、ＩＬ−１７過剰発現トランスジェニックマウスの血清において様々なＴｈ１及びＴｈ２前炎症性サイトカインのレベルを測定した。マウスＩＬ−１β、ＩＬ−１α、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ及びエオタキシンレベルを、ＥＬＩＳＡアッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｅｎｄｏｇｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）又はマウスＴＨ１／Ｔｈ２サイトカインビーズアッセイ検出キット（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を製造者の指示に従って使用して測定した。血清は、７匹のＩＬ−１７様ポリペプチド過剰発現トランスジェニックマウス及び２匹の非トランスジェニック対照マウスから採集した。
【０３７３】
これらのサイトカインは、Ｔ及びＢ細胞、好酸球及び様々な他の細胞集団を活性化することが知られている。トランスジェニックマウスの４匹においてＩＬ−５レベルが６０−８０倍上昇した。ＩＬ−５は、好酸球産生の責任を担う主要サイトカインである（Ｍａｃｉａｓら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０７：９４９−５９，２００１）。それ故，ＩＬ−１７様ポリペプチド過剰発現によるＩＬ−５の誘導は、これらのトランスジェニックマウスにおいて好酸球集団を増加させる上で役割を果たすと考えられる。
【０３７４】
ＩＬ−２及びＩＬ−４レベルは、トランスジェニックマウスの３匹においてそれぞれ２０倍から１５０倍及び１８０倍から５００倍のレベルに上昇した。ＩＬ−２及びＩＬ−４はＴ細胞の活性化と増殖において重要な役割を果たし（Ｔａｎｉｇｕｃｈｉら、Ｃｅｌｌ，７３：５−８、１９９３；Ｐａｕｌら、Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．９９：７−１３，１９８６）、それ故、ＩＬ−１７様ポリペプチドの過剰発現によるこれらのサイトカインの誘導はＴ細胞集団の増加を導く可能性が高い。ＩＬ−１β及びＧＭ−ＣＳＦレベルは１匹のトランスジェニックマウスにおいて上昇した。Ｇ−ＣＳＦ血清レベルは陰性対照レベルに比べて２倍から８倍上昇した。好酸球特異的サイトカイン、エオタキシンは、陰性対照に比べて２倍から５倍上昇した。１つのＴｈ１サイトカイン、ＩＮＦ−γのレベルがトランスジェニックマウスにおいて上昇していることが認められた。ＩＮＦ−γは対照レベルよりも４倍から８０００倍の高さに上昇していた。ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ及びＩＦＮ−γはＣＤ１９＋Ｂ細胞集団を増加させることが知られており、それ故ＩＬ−１７様ポリペプチドの過剰発現によるこれらのサイトカインの誘導はＢ細胞数の増加において役割を果たすと考えられる。ＩＬ−１、ＩＬ−６及びＩＬ−１０はＩＬ−１７様ポリペプチドの高い過剰発現によって影響を受けなかった。これらの結果を下記の表６に要約する。
【０３７５】
ＩＬ−１７様ポリペプチドの過剰発現は、前炎症性サイトカイン、主としてＴｈ２サイトカインの血清レベルを上昇させた。それ故、ＩＬ−１７様ポリペプチドの過剰発現によるサイトカイン産生の上昇は、リンパ球、好酸球及び顆粒球のレベルを上昇させた１つの機構である。
【０３７６】
【表９】
2005525094.tif 000010
【実施例１２】
【０３７７】
ＩＬ−１７様ポリペプチドの過剰発現は可溶性免疫グロブリンを増加させる
ＩＬ−１７様ポリペプチド過剰発現トランスジェニックマウスではＢ細胞の数が劇的に増加した。それ故、トランスジェニックマウスの血清中の可溶性免疫グロブリンのレベルを測定した。可溶性血清免疫グロブリンを次の抗体：一次抗体（５μｇ／ｍｌ）ラット抗マウスＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ及びＩｇＧ３（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｏｇｅｎ）；ヤギ抗マウスＩｇＭ（Ｃｈｅｍｉｃｏｎ，Ｔｅｍｅｃｕｌａ，ＣＡ）及び抗ＩｇＧ１（ＢＭＢ）；二次ＨＲＰ結合抗体（０．２５μｇ／ｍｌ；Ｐｈａｒｍｉｎｏｇｅｎ）を製造者の指示に従って使用して、ＥＬＩＳＡによって検出した。
【０３７８】
血清中のＩｇＥ、ＩｇＭ及びＩｇＧの濃度はそれぞれ４０倍から８０倍、１０倍から３０倍及び８倍から２０倍に上昇した（上記表６参照）。試験した他の免疫グロブリンのレベルに変化は検出されなかった。実施例１１で述べた前炎症性サイトカインと同様に、免疫グロブリンはＴＨ２応答を表わす。
【実施例１３】
【０３７９】
抗原投与はＩＬ−１７様ポリペプチド過剰発現マウスにおいてＩｇＥ及びＩｇＡ抗体の産生を上昇させた
ＩＬ−１７様ポリペプチドの過剰発現はＴｈ２型サイトカイン及び免疫グロブリンの産生上昇を生じさせた（実施例１１及び１２参照）。それ故、抗原投与したときのこれらの動物の免疫応答を検討するのは興味深いことであった。８匹の非トランスジェニックマウス及び６匹のＩＬ−１７様過剰発現トランスジェニックマウス（１４−１５週齢）を、０日目に、先にＧｕｏら（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６６：５５７８−５５８４，２００１）が述べたようにフロイントアジュバント中の皮下注射ＫＬＨ（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）１００μｇで免疫した。７、１４及び２１日目に血清抗体ＫＬＨ免疫グロブリンＥＬＩＳＡ分析のために血液を採取した。免疫グロブリンのすべてのアイソタイプ及びアイソフォームを試験した。
【０３８０】
総抗ＫＬＨ  ＩｇＧレベルは低下し、対照と比べて２１日目までに最大で２分の１になった。（図２２参照）。これに対し、抗ＫＬＨ  ＩｇＥ及びＩｇＡ産生は、トランスジェニックマウスでは対照のＩｇ産生と比べてそれぞれ６倍及び２倍に有意に上昇した。ＩｇＭレベルは同じように上昇した。これらの結果は、高濃度のＩＬ−１７様ポリペプチドの存在下で、抗原投与は、おそらくそれぞれＢ細胞の産生及び／又はＩｇＧからＩｇＥ及びＩｇＡ細胞へのより大きなＩｇ切り換えによる高いＩｇＡ及びＩｇＥ産生によって、ＩｇＥ及びＩｇＡ抗体の産生を刺激したことを示唆している。
【実施例１４】
【０３８１】
ＩＬ−１７様ポリペプチドの過剰発現はＩＬ−１７ＲＢ発現を上昇させた
ＩＬ−１７受容体ファミリー成員の発現レベルをインサイチューハイブリダイゼーションによって検討した。この分析のために、マウスゲノムＤＮＡを鋳型として使用し、次のプライマー：センスプライマー（５’−ＧＴＡ  ＣＡＧ  ＴＧＧ  ＣＴＧ  ＡＣＣ  ＡＣＴ  ＣＡＧ  ＡＡＧ−３’；配列番号：２３）及びアンチセンスプライマー（５’−ＧＧＴ  ＧＧＡ  ＣＴＡ  ＣＡＡ  ＧＧＧ  ＴＧＡ  ＡＣＡ  ＧＣ−３’；配列番号：２４）を用いたＰＣＲによってＩＬ−１７ＲＢの３８０ｂｐフラグメントを増幅した。ＰＣＲ条件は次の通りであった：９４℃で１５秒間、６５℃で３０秒間、及び７２℃で３０秒間の３５サイクル。この３８０ｂｐフラグメントをｐＧＥＭＴベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｉｎｃ．，Ｍａｄｉｓｏｎ  Ｗｉｓ）にサブクローニングした。すべてのプラスミドをＮｃｏＩ制限酵素で線状化し、アンチセンス３３Ｐ標識ＲＮＡプローブをＳｐ６  ＲＮＡポリメラーゼで合成した。
【０３８２】
２匹のＩＬ−１７様ポリペプチド発現トランスジェニックマウスと１匹の非発現同腹子からの５μｍの組織切片を液浸固定し、スライドガラス上でパラフィン包埋した。６０℃で一晩のハイブリダイゼーション、次いで５５℃で３０分間のＲＮアーゼ消化と０．１ＸＳＳＣ中での高ストリンジェンシー洗浄を含む、標準インサイチューハイブリダイゼーションプロトコールに従った。スライドガラスを乳剤に浸し、３週間暴露した。
【０３８３】
肝臓、肺、脾臓及びリンパ節を含む、検査したすべての組織において、トランスジェニック組織ではＩＬ−１７ＲＢ発現が著しく高かった。（図２３参照）。最も強い発現はリンパ節及び肺において、特に炎症性浸潤の領域においてであった。（図２３Ａ）。高い発現はリンパ節のＴ周辺帯で起こると思われる。肺では、気道上皮の周囲にＩＬ−１７ＲＢ陽性細胞の強いクラスターが存在する。検査した正常組織のすべてにおいて、ごくわずかな受容体発現が認められ、高レベルのＩＬ−１７様ポリペプチドは高い受容体発現を生じさせることを示唆した。ＩＬ−１７様ポリペプチド過剰発現トランスジェニックマウスの肝臓及び脾臓ではＩＬ−１７ＲＢ発現の中等度の上昇が認められた。（図２３Ａ）。
【０３８４】
ＩＬ−１７ＲＢインサイチューハイブリダイゼーションと隣接肺切片のＢ２２０（Ｂ細胞特異的抗体）の免疫染色の比較は、ＩＬ−１７ＲＢ陽性細胞集団がＢ２２０陽性細胞と相関しないことを示した。（図２３Ｂ）。さらに、トランスジェニックリンパ節、肺及び卵巣は高い好酸球含量を明らかにしたが、ＩＬ−１７ＲＢ発現はこれらの細胞に同時局在せず、好酸球がＩｌ−１７ＲＢ受容体を発現しないであろうことを示唆した（図２３Ｃ）。それ故、これらの炎症組織では、ＩＬ−１７様ポリペプチドは、下流シグナルを通してＢ細胞及び好酸球の増殖を誘導する及び／又はこれらの炎症領域へと標的される、異なるセットの細胞を通して作用すると考えられる。
【実施例１５】
【０３８５】
ヒト組織におけるＩＬ−１７様ポリペプチド発現
ＩＬ−１７様転写産物の発現を様々なヒト組織においてＲＴ−ＰＣＲによって検出した。最も強い発現はヒト精巣で検出され、ヒト大腿骨、乳腺、前立腺、肺腫瘍、結腸腫瘍、卵巣腫瘍及びマウスＴ細胞においてより弱い発現が検出された。リンパ節、大動脈、膵臓、及び腸、脳、脾臓、胸腺及び肝臓を含む胎児組織においても発現が検出された。
【０３８６】
さらに、Ｔａｑｍａｎ定量的ＲＴ−ＰＣＲをヒト組織に関して実施し、正常ＩＬ−１７様転写産物発現を測定した。ＩＬ−１７様ｃＤＮＡ配列に対する蛍光プローブ及びＰＣＲプライマーを用いたリアルタイム定量的Ｔａｑｍａｎ  ＰＣＲを実施した。ヒト組織ｃＤＮＡを、Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ  ＩＩ（ＧＩＢＣＯ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いた第一鎖ｃＤＮＡ合成によってヒト全ＲＮＡ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｍａｓｔｅｒ  Ｐａｎｅｌ  Ｋｉｔ）２μｇから作製した。Ｔａｑｍａｎ  ＰＣＲ反応は、標準プロトコールを用いてＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ  ７７００装置で実施し、そのデータをＳｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍソフトウエア（ＰＥ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）によって解析した。ＩＬ−１７様転写産物の組織発現レベルを、ハウスキーピング遺伝子、シクロフィリンのレベルに基準化した。この解析は、精巣における非常に高い発現、及び前立腺と脾臓における中等度の発現を明らかにした。小脳、心臓、肝臓、胎盤、唾液腺、骨格筋、胸腺、甲状腺、及び気管において低い発現が認められた。
【図面の簡単な説明】
【０３８７】
【図１】図１は、ヒトＩＬ−１７様ポリペプチドをコードする核酸配列（配列番号１）を示す。ヒトＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号２）も示している。この図では、予測シグナルペプチドに下線を付している；アミノ酸１−１６はリーダー配列を含むと考えられる。
【図２Ａ】図２Ａ−２Ｃは、マウスＩＬ−１７様ポリペプチドをコードする核酸配列（配列番号３）を示す。マウスＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号４）も示している。この図では、予測シグナルペプチドに下線を付している；アミノ酸１−１８はリーダー配列を含むと考えられる。図２Ｂ−２Ｃは、非分泌形態のマウスＩＬ−１７様ｃＤＮＡの核酸配列（配列番号９）、及びその対応するアミノ酸配列（配列番号１０）も示している。
【図２Ｂ】図２Ａ−２Ｃは、マウスＩＬ−１７様ポリペプチドをコードする核酸配列（配列番号３）を示す。マウスＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号４）も示している。この図では、予測シグナルペプチドに下線を付している；アミノ酸１−１８はリーダー配列を含むと考えられる。図２Ｂ−２Ｃは、非分泌形態のマウスＩＬ−１７様ｃＤＮＡの核酸配列（配列番号９）、及びその対応するアミノ酸配列（配列番号１０）も示している。
【図２Ｃ】図２Ａ−２Ｃは、マウスＩＬ−１７様ポリペプチドをコードする核酸配列（配列番号３）を示す。マウスＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号４）も示している。この図では、予測シグナルペプチドに下線を付している；アミノ酸１−１８はリーダー配列を含むと考えられる。図２Ｂ−２Ｃは、非分泌形態のマウスＩＬ−１７様ｃＤＮＡの核酸配列（配列番号９）、及びその対応するアミノ酸配列（配列番号１０）も示している。
【図３Ａ】図３Ａ−３Ｂは、ＩＬ−１７様アミノ酸配列、ｈＩＬ−１７Ｌ（配列番号２）と、既知のヒトＩＬ−１７ファミリー成員、ｈＩＬ−１７のアミノ酸配列（配列番号５）のパイルアップ（ｐｉｌｅ−ｕｐ）を示す。
【図３Ｂ】図３Ａ−３Ｂは、ＩＬ−１７様アミノ酸配列、ｈＩＬ−１７Ｌ（配列番号２）と、既知のヒトＩＬ−１７ファミリー成員、ｈＩＬ−１７のアミノ酸配列（配列番号５）のパイルアップ（ｐｉｌｅ−ｕｐ）を示す。
【図４】図４は、ＩＬ−１７様アミノ酸配列、ｈＩＬ−１７Ｌ（配列番号２）と、既知のヒトＩＬ−２０ファミリー成員、ｈＩＬ−２０のアミノ酸配列（配列番号６）のパイルアップを示す。
【図５】図５は、ＩＬ−１７様アミノ酸配列、ｈＩＬ−１７Ｌ（配列番号２）と、既知のヒトＩＬ−１７ファミリー成員、ｈＩＬ−１７ｂのアミノ酸配列（配列番号７）のパイルアップを示す。
【図６Ａ】図６Ａ−６Ｂは、ＩＬ−１７様アミノ酸配列、ｈＩＬ−１７Ｌ（配列番号２）と、既知のヒトＩＬ−１７ファミリー成員、ｈＩＬ−１７ｃのアミノ酸配列（配列番号８）のパイルアップを示す。
【図６Ｂ】図６Ａ−６Ｂは、ＩＬ−１７様アミノ酸配列、ｈＩＬ−１７Ｌ（配列番号２）と、既知のヒトＩＬ−１７ファミリー成員、ｈＩＬ−１７ｃのアミノ酸配列（配列番号８）のパイルアップを示す。
【図７】図７は、剖検トランスジェニック初代（ｆｏｕｎｄｅｒ）マウス（Ｎｏ．１、１６、２７、２９、５５、６１、２０、５２、及び６６）におけるＩＬ−１７様過剰発現導入遺伝子の発現を検出するノーザンブロットを示す。対照マウス（Ｎｏ．２、１７、５３、及び６５）は非トランスジェニック同腹子である。「ｂｌ」と表示されたレーンはブランクレーンであり、陽性対照（＋）はＩＬ−１７様ｃＤＮＡであった。０．５４ｋｂバンドの存在は導入遺伝子発現の指標である。
【図８】図８は、肝切除したトランスジェニック初代マウス（Ｎｏ．１０、１１、３０、３１、３３、３７、４６、６７、及び６８）におけるＩＬ−１７様過剰発現導入遺伝子の発現を検出するノーザンブロットを示す。対照マウス（Ｎｏ．３２、３５、３６、及び４５）は非トランスジェニック同腹子である。「ＭＩ」と表示されたレーンは、陽性対照として充填された微量注入フラグメントを示す。０．５４ｋｂバンドの存在は導入遺伝子発現の指標である。
【図９】図９は、ＩＬ−１７様トランスジェニックマウス（Ｂ、Ｄ、Ｆ、Ｈ）又は非トランスジェニック対照マウス（Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｇ）からのリンパ節（Ａ−Ｈ）又は骨髄（Ｉ、Ｊ）のヘマトキシリン及びエオシン（Ａ、Ｂ、Ｇ−Ｊ）、Ｂ２２０（Ｃ、Ｄ）及びＦ４／８０（Ｅ、Ｆ）染色切片を示す。パネルＡ−Ｆは、ＩＬ−１７様トランスジェニックリンパ節が著しく腫脹しており、その正常構造が、多数のＢ２２０陽性Ｂリンパ球細胞（パネルＤ）といくつかのＦ４／８０染色マクロファージを含む著明な細胞浸潤物（パネルＢの中の星印）によって分断されていることを示す。パネルＨは、この細胞浸潤物が数多くの好酸球（矢じり）ならびに多核性炎症巨細胞（矢印）も含むことを示している。
【図１０】図１０は、ＩＬ−１７様トランスジェニックマウス（Ｂ、Ｄ、Ｆ、Ｈ）又は非トランスジェニック対照マウス（Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｇ、Ｉ）からのリンパ骨髄（Ａ、Ｂ）、脾臓（Ｃ−Ｆ）及び腎臓（Ｇ−Ｊ）のヘマトキシリン及びエオシン（Ａ、Ｂ、Ｅ−Ｉ）、Ｂ２２０（Ｃ、Ｄ）染色切片を示す。パネルＡは、著明な好酸球性骨髄過形成を示す。パネルＤは、ＩＬ−１７様トランスジェニックマウス脾臓における、主としてＢ２２０陽性Ｂ細胞（矢印）を含むリンパ球過形成を示し、パネルＦは、非トランスジェニック赤色脾髄（Ｅ）と比較したＩＬ−１７様トランスジェニック赤色脾髄における好酸球性脊髄過形成を示す。パネルＨ及びＪは、腎盂における著明な好酸球性炎症性浸潤（腎盂腎炎、パネルＪ）を伴った腎盂拡張（Ｈの中の矢印）を示す。
【図１１】図１１は、非トランスジェニック同腹子対照と比較した、ＩＬ−１７様トランスジェニックマウス９匹のうち４匹の末梢血におけるＣＤ１９＋Ｂリンパ球の絶対数の有意の増加を示す棒グラフヒストグラムである。
【図１２】図１２は、非トランスジェニック同腹子対照と比較した、ＩＬ−１７様トランスジェニックマウス１０匹のうち５匹の脾臓におけるＣＤ１９＋Ｂリンパ球の絶対数の有意の増加を示す棒グラフヒストグラムである。
【図１３】図１３は、非トランスジェニック同腹子対照と比較した、ＩＬ−１７様トランスジェニックマウスの骨髄におけるＣＤ１９＋Ｂリンパ球の絶対数のわずかな減少を示す棒グラフヒストグラムである。
【図１４】図１４は、非トランスジェニック同腹子対照と比較した、ＩＬ−１７様トランスジェニックマウス９匹のうち４匹の末梢血におけるＣＤ４＋Ｔリンパ球の絶対数の増加を示す棒グラフヒストグラムである。
【図１５】図１５は、非トランスジェニック同腹子対照と比較した、ＩＬ−１７様トランスジェニックマウスの脾臓におけるＣＤ４＋Ｔリンパ球の絶対数の増加を示す棒グラフヒストグラムである。
【図１６】図１６は、ＩＬ−１７様トランスジェニックマウス対それらの非トランスジェニック同腹子対照において起こる変化を表わす散布図である。「Ａ」と表示した上部の２つの散布図は、ＣＤ４５Ｒ＋及びＩＬ−１７様Ｆｃ標識がそれぞれの軸上に描かれた２色フローサイトメトリードットプロットである。対照プロット「Ａ」は領域Ｒ１内にＣＤ４５Ｒ＋／ＩＬ−１７様Ｆｃ＋細胞が存在しないことを示し、一方トランスジェニックプロット「Ａ」では、この集団が領域Ｒ１内に存在し、総顆粒球集団の８％を占めた。対応する前方（Ｆｏｒｗａｒｄ）対側方（Ｓｉｄｅ）散布図（「Ｂ」及び「Ｃ」）では、これらの細胞を桃色のドットで描いている。この集団は対照プロット「Ｂ」では存在しなかった。
【図１７】図１７は、ＩＬ−１７様トランスジェニックマウス対それらの非トランスジェニック同腹子対照において起こる変化を表わす散布図である。「Ａ」と表示した上部の２つの散布図は、ＣＤ４及びＩＬ−１７様Ｆｃ標識がそれぞれの軸上に描かれた２色フローサイトメトリードットプロットである。対照プロット「Ａ」は領域Ｒ１内にＣＤ４＋／ＩＬ−１７様Ｆｃ＋細胞が存在しないことを示し、一方トランスジェニックプロット「Ａ」では、この集団が領域Ｒ１内に存在し、総顆粒球集団の１４％を占めた。対応する前方対側方散布図（大きさ対粒状度）、ＩＬ−１７様トランスジェニックマウス（Ｂ）では、これらの細胞は、顆粒球が典型的に認められる領域（赤色ドット）のすぐ上部に位置する。これらの細胞は対照プロット「Ｂ」では存在しない。さらに、トランスジェニックマウス（Ａ）に関しては、ＣＤ４＋又はＩＬ−１７様Ｆｃ＋のいずれでもない（領域Ｒ２）が、前方対側方散布図「Ｂ」（緑色ドット）において顆粒球の左側に局在する、好酸球の散布特性を有する細胞集団の出現が存在する。この集団は対照プロット「Ｂ」では存在しなかった。
【図１８】図１８は、非トランスジェニック同腹子対照と比較した、ＩＬ−１７様トランスジェニックマウス１０匹のうち５匹の骨髄におけるｒｈＩＬ−１７様Ｆｃ＋／ＣＤ４５Ｒ＋顆粒球様細胞の絶対数の増加を示す棒グラフヒストグラムである。
【図１９】図１９は、非トランスジェニック同腹子対照と比較した、ＩＬ−１７様トランスジェニックマウスの骨髄におけるｒｈＩＬ−１７様Ｆｃ＋／ＣＤ４＋顆粒球様細胞の絶対数の増加を示す棒グラフヒストグラムである。
【図２０】図２０は、典型的な前方対側方散布図（大きさ対粒状度）の一例を示す。ゲート内の細胞を分取して精製集団を得ることができる。
【図２１Ａ】図２１Ａ−２１Ｂは、記載されたリンパ組織からの細胞でのＣＤ５、ＣＤ３４及びＣＤ４発現についてのＩＬ−１７様ポリペプチド過剰発現トランスジェニックマウス及び非トランスジェニック対照のＦＡＣＳプロフィールを示す。含まれるパーセンテージは二重陽性集団を表わす。ＣＤ５＋ＣＤ１９＋、ＣＤ３４＋ＣＤ１９＋、及びＣＤ４＋好酸球集団についての細胞の絶対数を、パーセント集団（リンパ球に関して）及び細胞の絶対数（好酸球）として表わしている。
【図２１Ｂ】図２１Ａ−２１Ｂは、記載されたリンパ組織からの細胞でのＣＤ５、ＣＤ３４及びＣＤ４発現についてのＩＬ−１７様ポリペプチド過剰発現トランスジェニックマウス及び非トランスジェニック対照のＦＡＣＳプロフィールを示す。含まれるパーセンテージは二重陽性集団を表わす。ＣＤ５＋ＣＤ１９＋、ＣＤ３４＋ＣＤ１９＋、及びＣＤ４＋好酸球集団についての細胞の絶対数を、パーセント集団（リンパ球に関して）及び細胞の絶対数（好酸球）として表わしている。
【図２２】図２２は、ＫＬＨ  １００μｇによる免疫後のＩＬ−１７様ポリペプチド過剰発現トランスジェニックマウス及び非トランスジェニック同腹子対照における抗原投与時の増大した免疫グロブリン産生を示す。
【図２３】図２３Ａ−２３Ｃは、ＩＬ−１７過剰発現トランスジェニックマウスからの組織においてＩＬ−１７ＲＢを検出するインサイチューハイブリダイゼーションを示す。
【配列表】
2005525094.tif 000011
2005525094.tif 000012
2005525094.tif 000013
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2005525094.tif 000031
2005525094.tif 000032
2005525094.tif 000033
【図１】
2005525094.tif 000034
【図２Ａ】
2005525094.tif 000035
【図２Ｂ】
2005525094.tif 000036
【図２Ｃ】
2005525094.tif 000037
【図３Ａ】
2005525094.tif 000038
【図３Ｂ】
2005525094.tif 000039
【図４】
2005525094.tif 000040
【図５】
2005525094.tif 000041
【図６Ａ】
2005525094.tif 000042
【図６Ｂ】
2005525094.tif 000043
【図７】
2005525094.tif 000044
【図８】
2005525094.tif 000045
【図９】
2005525094.tif 000046
【図１０】
2005525094.tif 000047
【図１１】
2005525094.tif 000048
【図１２】
2005525094.tif 000049
【図１３】
2005525094.tif 000050
【図１４】
2005525094.tif 000051
【図１５】
2005525094.tif 000052
【図１６】
2005525094.tif 000053
【図１７】
2005525094.tif 000054
【図１８】
2005525094.tif 000055
【図１９】
2005525094.tif 000056
【図２０】
2005525094.tif 000057
【図２１Ａ】
2005525094.tif 000058
【図２１Ｂ】
2005525094.tif 000059
【図２２】
2005525094.tif 000060
【図２３】
2005525094.tif 000061
【国際調査報告】
2005525094.tif 000062
2005525094.tif 000063
2005525094.tif 000064
2005525094.tif 000065