(57)【要約】構造式(I)で表される化合物が開示される：環Aは置換または非置換であり、任意にアリール基に融合される。Z1およびZ2は独立して=O、=S、=N-OR12または=NR12であり；R1およびR2が共に-Hではないという条件で、R1およびR2は独立して-H、脂肪族基、置換脂肪族基、非置換非芳香族複素環式基、置換非芳香族複素環式基、アリール基または置換アリール基である。あるいは一緒になった-NR1R2は置換もしくは非置換非芳香族窒素含有複素環式基または置換もしくは非置換窒素含有ヘテロアリール基である。R3は置換もしくは非置換アリール基または置換もしくは非置換脂肪族基である。Xは共有結合、-C(R4R5)-、-N(R4)-、-O-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(=O)-、-C(=O)-N(R4)-、または-N(R4)-C(=O)-である。R4およびR5は独立して-Hまたは置換もしくは非置換脂肪族基である。R12は-Hまたは置換もしくは非置換アルキル基である。
2005504795.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の構造式：
【化１】
2005504795.tif 000061
式中、環Aは置換または非置換であり、任意にアリール基に融合され；
Z1およびZ2は独立して=O、=S、=N-OR12または=NR12であり；
R1およびR2が共に-Hではないという条件で、R1およびR2は独立して-H、脂肪族基、置換脂肪族基、非置換非芳香族複素環式基、置換非芳香族複素環式基、非置換アリール基または置換アリール基であり；あるいは一緒になった-NR1R2は置換もしくは非置換非芳香族窒素含有複素環式基または置換もしくは非置換窒素含有ヘテロアリール基であり；
R3は置換もしくは非置換アリール基または置換もしくは非置換脂肪族基であり；
Xは共有結合、-C(R4R5)-、-N(R4)-、-O-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(=O)-、-C(=O)-N(R4)-、または-N(R4)-C(=O)-であり；
R4およびR5は独立して-Hまたは置換もしくは非置換脂肪族基であり；
R12は-Hまたは置換もしくは非置換アルキル基である
で表される化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
【請求項２】
環Aが置換または非置換であり；Z1およびZ2が共に=Oであり；R1が-Hであり； R2が置換または非置換アルキルまたはアリール基であり；R3が置換または非置換アリール基であり；Xが-C(R4R5)-、-N(R4)-または-O-である、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
R2が
【化２】
2005504795.tif 000062
式中、環D〜Tは置換または非置換である
から選択される構造式で表される請求項２記載の化合物。
【請求項４】
環D〜Tの0個、1個またはそれより多くの環炭素原子が、-OH、-Br、-Cl、-I、-F、-ORa、-O-CORa、-CORa、-CN、-NO2、-COOH、-SO3H、-NH2、-NHRa、-N(RaRb)、-COORa、-CHO、-CONH2、-CONHRa、-CON(RaRb)、-NHCORa、-NRCORa、-NHCONH2、-NHCONRaH、-NHCON(RaRb)、-NRcCONH2、-NRcCONRaH、-NRcCON(RaRb)、-C(=NH)-NH2、-C(=NH)-NHRa、-C(=NH)-N(RaRb)、-C(=NRc)-NH2、-C(=NRc)-NHRa、-C(=NRc)-N(RaRb)、-NH-C(=NH)-NH2、-NH-C(=NH)-NHRa、-NH-C(=NH)-N(RaRb)、-NH-C(=NRc)-NH2、-NH-C(=NRc)-NHRa、-NH-C(=NRc)-N(RaRb)、-NRdH-C(=NH)-NH2、-NRd-C(=NH)-NHRa、-NRd-C(=NH)-N(RaRb)、-NRd-C(=NRc)-NH2、-NRd-C(=NRc)-NHRa、-NRd-C(=NRc)-N(RaRb)、-NHNH2、-NHNHRa、-NHRaRb、-SO2NH2、-SO2NHRa、-SO2NRaRb、-CH=CHRa、-CH=CRaRb、-CRc=CRaRb、-CRc=CHRa、-CRc=CRaRb、-CCRa、-SH、-SRa、-S(O)Ra、-S(O)2Ra、アルキル基、置換アルキル基、非芳香族複素環式基、置換非芳香族複素環式基、ベンジル基、置換ベンジル基、アリール基または置換アリール基から独立して選択される基で置換され、式中、Ra〜Rdはそれぞれ独立してアルキル基、置換アルキル基、ベンジル、置換ベンジル、アリールまたは置換アリール基であるか、あるいは、一緒になった-NRaRdはまた置換または非置換非芳香族複素環式基を形成し得る請求項３記載の化合物。
【請求項５】
環D〜Tの0個、1個またはそれより多くの環炭素原子が、C1〜C4アルキル、C1〜C4ヒドロキシアルキル、N-モルホリノ、ピリミジル、C1〜C4アルキル置換ピリミジル、-N(C1〜C4アルキル)2、-C(O)NH2、-C(O)NH(C1〜C4アルキル)、C(O)N(C1〜C4アルキル)2、-NHC(O)(C1〜C4アルキル)、-NO2、C1〜C4アルコキシ、-C(O)O-CH2CH2-N(C1〜C4アルキル)2、
【化３】
2005504795.tif 000063
-NH-(フェニル)、-NH2、-CH2NH-C(O)-O-(C1〜C4アルキル)、-CH2NH2、-Cl、-F、-C(O)-O-(C1〜C4アルキル)、-C(O)-N-(C1〜C4アルキル)、C3〜C7シクロアルキル、フェニル、-C(O)-N-モルホリノ、-S-(C1〜C4アルキル)、-CN、フリール、-S(O)2-(C1〜C4アルキル)、-S(O)2-NH2、-S(O)2-NH(C1〜C4アルキル)、-S(O)2-N(C1〜C4アルキル)2から選択される基で独立して置換される、請求項３記載の化合物。
【請求項６】
R2が
【化４】
2005504795.tif 000064
から選択される構造式で表され、R6が-Hまたは置換もしくは非置換アルキル基である請求項５記載の化合物。
【請求項７】
R2が
【化５】
2005504795.tif 000065
式中、X3は-CH-または-N-であり；
R7およびR8は独立して-Hまたはアルキル基であるか、あるいは一緒になった-NR7R8は窒素含有非芳香族複素環式基であり；
R9はアルキル基であり；
R10は-Hまたはアルキル基である
から選択される構造式で表される請求項５記載の化合物。
【請求項８】
環Aが-F、-Cl、-Br、-C1〜C4アルキル、C1〜C4アルコキシ、-C1〜C4ハロアルキル、C1〜C4ハロアルコキシ、-NH2または-CNから選択される１つ以上の基で任意に置換されている請求項７記載の化合物。
【請求項９】
環Aが非置換であり；R3が-Br、-Cl、-F、-Re、-ORe、-CN、-COORe、-N(Re)2、-CON(Re)2、-NReCORf、-NHCONH2、-SO2N(Re)2から選択される0個、1個またはそれより多くの置換基で置換されたフェニル基またはピリジル基であり；R7およびR8が共に-Hであり、R9がメチルであり；各ReおよびRfが独立して-H、アルキル基または置換アルキル基である、請求項８記載の化合物。
【請求項１０】
R3が、-Cl、-F、-Re、-ORe、-CN、-NH2、-CONH2または-NHCORfから選択される0個、1個またはそれより多くの置換基で置換されたフェニル環である請求項９記載の化合物。
【請求項１１】
R3が、-CH3、-CH2CH3、-OCH3、-CN、-Fまたは-Clから選択される0個、1個またはそれより多くの置換基で置換されたフェニル環である請求項１０記載の化合物。
【請求項１２】
R3が非置換のまたは-CH2CH3、-OCH3、-CN、-Fもしくは-Clで一置換されたフェニル環であり、ここでフェニル環置換基がパラ位である、請求項１１記載の化合物。
【請求項１３】
R2が以下の構造式：
【化６】
2005504795.tif 000066
で表される請求項４記載の化合物。
【請求項１４】
化合物が以下の構造式：
【化７】
2005504795.tif 000067
式中、環AおよびVは独立して置換または非置換であり；
Xは-CH2-、-CH(CH3)-、-O-、-NH-または-NCH3-であり；
Zは-O-、-S-、-NR-、-C=C-、-C=N-、-N=CH-、-N=N-であり；Rは-HまたはC1〜C4アルキルであり；R10は-H、非置換脂肪族基または置換脂肪族基である
で表される請求項１記載の化合物。
【請求項１５】
環Aが非置換であるか、または-F、-Cl、-Br、-C1〜C4アルキル、C1〜C4アルコキシ、-C1〜C4ハロアルキル、C1〜C4ハロアルコキシ、-NH2もしくは-CNで置換され；環Vが-CH3、-CH2CH3、-F、-Cl、-CN、-OCH3から選択される１つ以上の基で置換され；R10が-H、メチルまたはエチルである、請求項１４記載の化合物。
【請求項１６】
環Aが非置換であり、環Vが１つ以上の基R11で置換され、各R11が独立して-CH3、-CH2CH3、-OCH3、-F、-Clまたは-CNである、請求項１５記載の化合物。
【請求項１７】
以下の構造式：
【化８】
2005504795.tif 000068
式中、環AおよびUは独立して置換または非置換であり、R10は-H、非置換脂肪族基または置換脂肪族基である
で表される化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
【請求項１８】
環Aが非置換であるか、または-F、-Cl、-Br、-C1〜C4アルキル、C1〜C4アルコキシ、-C1〜C4ハロアルキル、C1〜C4ハロアルコキシ、-NH2もしくは-CNで置換され；環Uが-CH3、-CH2CH3、-F、-Cl、-CN、-OCH3から選択される１つ以上の基で置換され；R10が-H、メチルまたはエチルである、請求項１７記載の化合物。
【請求項１９】
環Uが-CH3、-CH2CH3、-F、-Cl、-CNまたは-OCH3で一置換され、環U置換基がパラ位である請求項１８記載の化合物。
【請求項２０】
以下の構造式：
【化９】
2005504795.tif 000069
式中、R11は-CH3、-CH2CH3、-OCH3、-F、-Clまたは-CNである
で表される化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
【請求項２１】
以下の構造式：
【化１０】
2005504795.tif 000070
式中、環Aは置換または非置換であり、任意にアリール基に融合され；
Z1およびZ2は独立して=O、=S、=N-OR12または=NR12であり；
R1およびR2が共に-Hではないという条件で、R1およびR2は独立して-H、脂肪族基、置換脂肪族基、非置換非芳香族複素環式基、置換非芳香族複素環式基、非置換アリール基または置換アリール基であり；あるいは一緒になった-NR1R2は置換もしくは非置換非芳香族窒素含有複素環式基または置換もしくは非置換窒素含有ヘテロアリール基であり；
R3は置換もしくは非置換アリール基または置換もしくは非置換脂肪族基であり；
Xは共有結合、-C(R4R5)-、-N(R4)-、-O-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(=O)-、-C(=O)-N(R4)-、または-N(R4)-C(=O)-であり；
R4およびR5は独立して-Hまたは置換もしくは非置換脂肪族基であり；
R12は-Hまたは置換もしくは非置換アルキル基である
で表される化合物またはその薬学的に許容され得る塩の有効量を癌を有する被験体に投与することを含む、癌を有する被験体を処置する方法。
【請求項２２】
環Aが置換または非置換であり、Z1およびZ2が共に=Oであり；R1が-Hであり；R2が置換または非置換アルキルまたはアリール基であり；R3が置換または非置換アリール基であり；Xが-C(R4R5)-、-N(R4)-または-O-である、請求項２１記載の方法。
【請求項２３】
R2が
【化１１】
2005504795.tif 000071
式中、環D〜Tは置換または非置換である
から選択される構造式で表される、請求項２２記載の方法。
【請求項２４】
環D〜Tの0個、1個またはそれより多くの環炭素原子が、-OH、-Br、-Cl、-I、-F、-ORa、-O-CORa、-CORa、-CN、-NO2、-COOH、-SO3H、-NH2、-NHRa、-N(RaRb)、-COORa、-CHO、-CONH2、-CONHRa、-CON(RaRb)、-NHCORa、-NRCORa、-NHCONH2、-NHCONRaH、-NHCON(RaRb)、-NRcCONH2、-NRcCONRaH、-NRcCON(RaRb)、-C(=NH)-NH2、-C(=NH)-NHRa、-C(=NH)-N(RaRb)、-C(=NRc)-NH2、-C(=NRc)-NHRa、-C(=NRc)-N(RaRb)、-NH-C(=NH)-NH2、-NH-C(=NH)-NHRa、-NH-C(=NH)-N(RaRb)、-NH-C(=NRc)-NH2、-NH-C(=NRc)-NHRa、-NH-C(=NRc)-N(RaRb)、-NRdH-C(=NH)-NH2、-NRd-C(=NH)-NHRa、-NRd-C(=NH)-N(RaRb)、-NRd-C(=NRc)-NH2、-NRd-C(=NRc)-NHRa、-NRd-C(=NRc)-N(RaRb)、-NHNH2、-NHNHRa、-NHRaRb、-SO2NH2、-SO2NHRa、-SO2NRaRb、-CH=CHRa、-CH=CRaRb、-CRc=CRaRb、-CRc=CHRa、-CRc=CRaRb、-CCRa、-SH、-SRa、-S(O)Ra、-S(O)2Ra、アルキル基、置換アルキル基、非芳香族複素環式基、置換非芳香族複素環式基、ベンジル基、置換ベンジル基、アリール基または置換アリール基から独立して選択される基で置換され、式中、Ra〜Rdはそれぞれ独立してアルキル基、置換アルキル基、ベンジル、置換ベンジル、アリールまたは置換アリール基であるか、あるいは、一緒になった-NRaRdはまた置換または非置換非芳香族複素環式基を形成し得る、請求項２３記載の方法。
【請求項２５】
環D〜Tの0個、1個またはそれより多くの環炭素原子が、C1〜C4アルキル、C1〜C4ヒドロキシアルキル、N-モルホリノ、ピリミジル、C1〜C4アルキル置換ピリミジル、-NH(C1〜C4アルキル)、-N(C1〜C4アルキル)2、-C(O)NH2、-C(O)NH(C1〜C4アルキル)、C(O)N(C1〜C4アルキル)2、-NHC(O)(C1〜C4アルキル)、-NO2、C1〜C4アルコキシ、-C(O)O-CH2CH2-NH(C1〜C4アルキル)、-C(O)O-CH2CH2-N(C1〜C4アルキル)2、
【化１２】
2005504795.tif 000072
-NH-(フェニル)、-NH2、-CH2NH-C(O)-O-(C1〜C4アルキル)、-CH2NH2、-Cl、-F、-C(O)-O-(C1〜C4アルキル)、-C(O)-NH-(C1〜C4アルキル)、C3-C7シクロアルキル、フェニル、-C(O)-N-モルホリノ、-S-(C1〜C4アルキル)、-CN、フリール、-S(O)2-(C1〜C4アルキル)、-S(O)2-NH2、-S(O)2-NH(C1〜C4アルキル)、-S(O)2-N(C1〜C4アルキル)2から選択される基で独立して置換される、請求項２３記載の方法。
【請求項２６】
R2が
【化１３】
2005504795.tif 000073
から選択される構造式で表され、R6が-Hまたは置換もしくは非置換アルキル基である請求項２５記載の方法。
【請求項２７】
R2が
【化１４】
2005504795.tif 000074
式中、X3は-CH-または-N-であり；
R7およびR8は独立して-Hまたはアルキル基であるか、あるいは一緒になった-NR7R8は窒素含有非芳香族複素環式基であり；
R9はアルキル基であり；
R10は-Hまたはアルキル基である
から選択される構造式で表される請求項２６記載の方法。
【請求項２８】
環Aが-F、-Cl、-Br、-C1〜C4アルキル、C1〜C4アルコキシ、-C1〜C4ハロアルキル、C1〜C4ハロアルコキシ、-NH2または-CNから選択される１つ以上の基で任意に置換される請求項２７記載の方法。
【請求項２９】
環Aが非置換であり；R3が-Br、-Cl、-F、-Re、-ORe、-CN、-COORe、-N(Re)2、-CON(Re)2、-NReCORf、-NHCONH2、-SO2N(Re)2から選択される１つ以上の置換基で置換されたフェニル基またはピリジル基であり；R7およびR8が共に-Hであり、R9がメチルであり；各ReおよびRfが独立して-H、アルキル基または置換アルキル基である、請求項２８記載の方法。
【請求項３０】
R3が、-Cl、-F、-Re、-ORe、-CN、-NH2、-CONH2または-NHCORfから選択される１つ以上の置換基で置換されたフェニル環である請求項２９記載の方法。
【請求項３１】
R3が、-CH3、-CH2CH3、-OCH3、-CN、-Fまたは-Clから選択される１つ以上の置換基で置換されたフェニル環である請求項３０記載の方法。
【請求項３２】
R3が-CH3、-CH2CH3、-OCH3、-CN、-Fまたは-Clで一置換されたフェニル環であり、ここでフェニル環置換基がパラ位である、請求項３０記載の方法。
【請求項３３】
化合物が以下の構造式：
【化１５】
2005504795.tif 000075
式中、環AおよびVは独立して置換または非置換であり；
Xは-CH2-、-CH(CH3)-、-O-、-NH-または-NCH3-であり；
Zは-O-、-S-、-NR-、-C=C-、-CH=N-、-N=CH-、-N=N-であり；Rは-HまたはC1〜C4アルキルであり；R10は-H、非置換脂肪族基または置換脂肪族基である
で表される請求項２１記載の方法。
【請求項３４】
環Aが非置換であるかまたは-F、-Cl、-Br、-C1〜C4アルキル、C1〜C4アルコキシ、-C1〜C4ハロアルキル、C1〜C4ハロアルコキシ、-NH2もしくは-CNで置換され；環Uが-CH3、-CH2CH3、-F、-Cl、-CN、-OCH3から選択される１つ以上の基で置換され；R10が-H、メチルまたはエチルである、請求項３３記載の方法。
【請求項３５】
環Aが非置換であり、環Vが１つ以上の基R11で置換され、各R11が独立して-CH3、-CH2CH3、-OCH3、-F、-Clまたは-CNである、請求項３４記載の方法。
【請求項３６】
R2が以下の構造式：
【化１６】
2005504795.tif 000076
で表される請求項２３記載の方法。
【請求項３７】
以下の構造式：
【化１７】
2005504795.tif 000077
式中、環AおよびUは独立して置換または非置換であり、R10は-H、非置換脂肪族基または置換脂肪族基である
により表される化合物またはその薬学的に許容され得る塩を癌を有する被験体に投与することを含む、癌を有する被験体を処置する方法。
【請求項３８】
環Aが非置換または-F、-Cl、-Br、-C1〜C4アルキル、C1〜C4アルコキシ、-C1〜C4ハロアルキル、C1〜C4ハロアルコキシ、-NH2もしくは-CNから選択される１つ以上の置換基で置換され；環Uが-CH3、-CH2CH3、-F、-Cl、-CN、-OCH3から選択される１つ以上の基で置換され；R10が-H、メチルまたはエチルである、請求項３７記載の方法。
【請求項３９】
環Uが-CH3、-CH2CH3、-F、-Cl、-CN、-OCH3で一置換され、環U置換基がパラ位である請求項３８記載の方法。
【請求項４０】
以下の構造式：
【化１８】
2005504795.tif 000078
式中、R11は-CH3、-CH2CH3、-OCH3、-F、-Clまたは-CNである
により表される化合物またはその薬学的に許容され得る塩を癌を有する被験体に投与することを含む、癌を有する被験体を処置する方法。
【請求項４１】
癌が多剤耐性である請求項２１記載の方法。
【請求項４２】
癌が多剤耐性である請求項３７記載の方法。
【請求項４３】
癌が多剤耐性である請求項４０記載の方法。
【請求項４４】
以下の構造式：
【化１９】
2005504795.tif 000079
で表される生成物化合物を調製する方法であって、該方法がCuI塩を以下の構造式：
【化２０】
2005504795.tif 000080
式中、環Aは置換または非置換であり、任意にアリール基に融合され；
R3は置換もしくは非置換アリール基または置換もしくは非置換脂肪族基であり；
Xは共有結合、-C(R4R5)-、-N(R4)-、-O-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(=O)-、-C(=O)-N(R4)-、または-N(R4)-C(=O)-であり、Xが-C(R4R5)-である場合は、R3は置換または非置換脂肪族基ではなく；
R4およびR5は独立して-Hまたは置換もしくは非置換脂肪族基である
で表される前駆体化合物と反応させる工程を含む、方法。
【請求項４５】
CuI塩がCuIまたはCuClであり、CuI塩と前駆体化合物が第三級アミンを含有する溶媒中で反応させられる請求項４４記載の方法。
【請求項４６】
R3が置換または置換アリール基であり；Xが-C(R4R5)-、-N(R4)-または-O-である請求項４５記載の方法。
【請求項４７】
R3が以下の構造式：
【化２１】
2005504795.tif 000081
式中、環Vは置換または非置換であり；Zが-O-、-S-、-NR-、-C=C-、-CH=N-、-N=CH-、-N=N-であり；Rは-HまたはC1〜C4アルキルであり；Zは-O-、-S-、-NR-、-C=C-、-CH=N-、-N=CH-、-N=N-であり；Rは-HまたはC1〜C4アルキルである
で表される請求項４６記載の方法。
【請求項４８】
環Aが-F、-Cl、-Br、-C1〜C4アルキル、C1〜C4アルコキシ、-C1〜C4ハロアルキル、C1〜C4ハロアルコキシ、-NH2または-CNから選択される１つ以上の基で任意に置換される請求項４７記載の方法。
【請求項４９】
環Aが非置換であり；R3が-Br、-Cl、-F、-Re、-ORe、-CN、-COORe、-N(Re)2、-CON(Re)2、-NReCORf、-NHCONH2、-SO2N(Re)2から選択される0個、1個またはそれより多くの置換基で置換されたフェニル基またはピリジル基であり；ReおよびRfが独立して-H、アルキル基または置換アルキル基である、請求項４８記載の方法。
【請求項５０】
R3が、-Cl、-F、-Re、-ORe、-CN、-NH2、-CONH2または-NHCORfから選択される0個、１個またはそれより多くの置換基で置換されたフェニル環である請求項４９記載の方法。
【請求項５１】
R3が、-CH3、-CH2CH3、-OCH3、-CN、-Fまたは-Clから選択される0個、１個またはそれより多くの置換基で置換されたフェニル環である請求項５０記載の方法。
【請求項５２】
R3が非置換のまたは-CH2CH3、-OCH3、-CN、-Fもしくは-Clで一置換されるフェニル環であり、ここでフェニル環置換基がパラ位である、請求項５０記載の方法。
【請求項５３】
ａ）生成物化合物を塩化オキサリルと反応させて、以下の構造式：
【化２２】
2005504795.tif 000082
で表される第二の生成物化合物を形成する工程；ならびに
ｂ）該第二の生成物化合物をNHR1R2でアミド化して、以下の構造式：
【化２３】
2005504795.tif 000083
式中、R1およびR2が共に-Hではないという条件で、R1およびR2は独立して-H、脂肪族基、置換脂肪族基、非置換非芳香族複素環式基、置換非芳香族複素環式基、非置換アリール基または置換アリール基であり；あるいは一緒になった-NR1R2は置換もしくは非置換非芳香族窒素含有複素環式基または置換もしくは非置換窒素含有ヘテロアリール基である
で表される第三の生成物化合物を形成する工程
をさらに含む、請求項４５記載の方法。
【請求項５４】
-NR1R2が以下の構造式：
【化２４】
2005504795.tif 000084
で表される請求項５３記載の方法。
【請求項５５】
前駆体化合物が、触媒量のパラジウムII塩およびCuI塩の存在下でピリジン出発化合物およびアルキン出発物質を反応させることにより調製され、ここで、該ピリジン出発化合物が以下の構造式：
【化２５】
2005504795.tif 000085
で表され、該アルキン出発物質が以下の構造式：
【化２６】
2005504795.tif 000086
で表され、R20が-Brまたは-Iである、請求項４５記載の方法。
【請求項５６】
以下の構造式：
【化２７】
2005504795.tif 000087
で表される生成物化合物を調製する方法であって、該方法がCuI塩を以下の構造式：
【化２８】
2005504795.tif 000088
式中、R11は-CH3、-CH2CH3、-OCH3、-F、-Clまたは-CNである
で表される前駆体化合物と反応させる工程を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
関連出願
本出願は、2001年９月13日に出願された米国特許仮出願第60／332,020号の恩典を主張する。上述の出願の全教示は参照により本明細書に取り込まれる。
【０００２】
発明の背景
今や、癌の処置において使用される多くの方法が利用可能である。しかしながら、かなりの進歩にもかかわらず、多くの癌に対する処置は、いくつかの理由により不十分なものである。
【０００３】
現在利用可能な処置に対して単純に応答しないか、または応答が不十分な癌がなお存在する。処置可能な癌を有する患者は、しばしば、ひどい副作用を引き起こす薬物を用いる化学療法を受けなければならない。このような薬物うち、経口使用され得るものはほとんどない。おそらく、癌の化学療法に伴う最も深刻な問題は、多くの腫瘍による多剤耐性の発現である。例えば、サイズの縮小または寛解にすらなることにより最初は抗癌治療に陽性に応答する多くの腫瘍が、しばしば薬物に対して耐性を発現する。１より多くの薬物に耐性を発現した腫瘍を「多剤耐性」という。いったん患者の癌が多剤耐性となると、疾患のさらなる進行を阻止または遅延するためにできることはほとんどない。
【０００４】
したがって、癌の処置において現在使用されている薬物の上述の欠点の１つ以上を解決する新しい薬物の必要性がなお存在する。したがって、新しい抗がん剤の所望の特性としては、現在処置不可能であるか、または十分に処置できない腫瘍に対する有効性、多剤耐性腫瘍に対する有効性、経口生物学的利用能および／または副作用の低減が挙げられる。
【０００５】
発明の概要
1-グリオキシリルアミドインドリジン類(glyoxlylamideindolizines)は、いくつかの異なる組織型由来の癌細胞（多剤耐性癌細胞を含む）に対して細胞障害性であることがここでわかった。例えば多剤耐性ヒト子宮肉腫細胞株MES-SA/DX5およびヒト骨髄性白血病細胞株HL60/TX1000に対する化合物(1)〜(8)のIC50は、0.1μM未満であった(実施例9〜10および12参照)。これらの化合物の構造を実施例２に示す。また、化合物(1)を経口投与した場合(実施例１1)、ヌードマウスにおけるヒト乳癌細胞株MDA435由来の腫瘍の容積は、50%より多く縮小した。
【０００６】
【化１】
2005504795.tif 000003
【０００７】
化合物1で処理したマウスにおいて、体重の変化はほとんどまたは全く観察されず、これは、該化合物が最小限の副作用をもたらしたことを示した。これらの結果に基づき、新規1-グリオキシリルアミドインドリジン類、これらの1-グリオキシリルアミドインドリジン類を含有する医薬組成物、1-グリオキシリルアミドインドリジン類を投与することにより癌を有する患者を処置する方法および1-グリオキシリルアミドインドリジン類の調製方法を本明細書において開示する。
【０００８】
本発明の一態様は、構造式(I):
【０００９】
【化２】
2005504795.tif 000004
【００１０】
により表される化合物である。
【００１１】
環Aは、置換または非置換であり、任意に、アリール基(好ましくは置換または非置換のフェニル)に融合している。
【００１２】
Z1およびZ2は、独立して、=O、=S、=N-OR12または=NR12である。
【００１３】
R1およびR2は、独立して、H、脂肪族基、置換脂肪族基、非置換非芳香族複素環式基、置換非芳香族複素環式基、非置換アリール基または置換アリール基である、ただし、R1およびR2は、両方が-Hでないものとする。あるいはまた、-NR1R2は一緒になって置換もしくは非置換の非芳香族窒素含有複素環式基または置換もしくは非置換の窒素含有ヘテロアリール基である。
【００１４】
R3は、置換もしくは非置換アリール基または置換もしくは非置換の脂肪族基である。
【００１５】
Xは、共有結合、-C(R4R5)-、-N(R4)-、-O-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(=O)-、-C(=O)-N(R4)-、または-N(R4)-C(=O)-である。
【００１６】
R4およびR5は、独立して、-Hまたは置換もしくは非置換の脂肪族基である。
【００１７】
R12は、-Hまたは置換もしくは非置換のアルキル基である。
【００１８】
本発明の別の態様は、薬学的に許容され得る担体または希釈剤および構造式(I)により表される化合物を含有する医薬組成物である。好ましくは、医薬組成物は、有効量の化合物を含有する。医薬組成物は、治療において、例えば、癌を有する被験体を処置するために使用され得る。
【００１９】
本発明の別の態様は、癌を有する被験体の処置用の医薬の製造のための、構造式(I)により表される化合物の使用である。医薬は有効量の化合物を含有する。
【００２０】
別の態様は、癌を有する被験体を処置する方法である。該方法は、構造式(I)により表される化合物の有効量を被験体に投与することを含む。
【００２１】
別の態様は、構造式(I)により表される化合物の合成における中間体の調製方法である。中間体は、構造式(Ia):
【００２２】
【化３】
2005504795.tif 000005
【００２３】
により表される。該方法は、CuI塩を構造式(Ib):
【００２４】
【化４】
2005504795.tif 000006
【００２５】
により表される前駆体化合物と反応させる工程を含む。構造式(Ia)および(Ib)において、環A、X、R3R4およびR5は、構造式(I)で記載したとおりであるが、Xが-C(R4R5)-である場合は、構造式(Ia)および(Ib)中のR3は、置換または非置換の脂肪族基ではない、
【００２６】
開示された1-グリオキシリルアミドインドリジン類は、癌を処置するために使用した場合、多くの利点を有する。最も重要なことは、これらが多くの多剤耐性細胞株に対して細胞障害性であり、したがって、他の従来の癌化学療法が失敗した場合でもこれらを使用できるということである。また、これらは、最小限の副作用を発現し、経口投与した場合でも活性である。
【００２７】
発明の詳細な説明
好ましい態様では、本発明の化合物は構造式(I)により表され、式中、環Aは置換または非置換のアリール基であり; Z1およびZ2はともに=Oであり; R1は-Hであり; R2は置換または非置換のアルキルまたはアリール基であり; R3は置換または非置換のアリール基であり; Xは-C(R4R5)-、-N(R4)-または-O-(好ましくは、Xは-C(R4R5)-であり);およびR4、R5、Z1およびZ2は上述の通りである。より好ましくは、R3は置換または非置換のフェニルまたはピリジル基であり;ならびにR4およびR5はともに-Hである。
【００２８】
上述のように、R1〜R3の値としては、置換および非置換アリール基が挙げられる。R2については、構造式(II)〜(XV):
【００２９】
【化５−１】
2005504795.tif 000007
【００３０】
【化５−２】
2005504795.tif 000008
【００３１】
より表されるアリール基が好ましい。環D〜Tは置換または非置換である。R2についてより好ましいアリール基は構造式(XVI)〜(XXI):
【００３２】
【化６】
2005504795.tif 000009
【００３３】
により表される。
【００３４】
R6は-Hまたは置換もしくは非置換のアルキル基であり、環D、F、G、I、H、MおよびOは上述の通りである。
【００３５】
R2のさらにより好ましいアリール基は、構造式(XXII)〜(XXVII):
【００３６】
【化７−１】
2005504795.tif 000010
【００３７】
【化７−２】
2005504795.tif 000011
【００３８】
により表される。
【００３９】
X3は-CH-または-N-である。
【００４０】
R7およびR8は、独立して、-Hまたはアルキル基である。あるいはまた,-NR7R8は一緒になって、窒素含有非芳香族複素環式基である。
【００４１】
R9はアルキル基である。
【００４２】
R10は-Hまたはアルキル基である。
【００４３】
別の好ましい態様において、本発明の化合物は構造式(XXVIII):
【００４４】
【化８】
2005504795.tif 000012
【００４５】
により表される。
【００４６】
構造式(XXVIII)において、環AおよびVは、独立して、置換または非置換であり; Xは-CH2-、-CH(CH3)-、-O-、-NH-または-NCH3-であり; Zは-O-、-S-、-NR-、-C=C-、-CH=N-、-N=CH-、-N=N-であり; Rは-HまたはC1〜C4アルキルであり;ならびにR10は、-H、非置換脂肪族基または置換脂肪族基である。さらにより好ましくは、環Aは非置換であり、環Vは、R11（式中、各R11は、独立して、-CH3、-CH2CH3、-OCH3、-F、-Clまたは-CNである）により表される１つ以上の基で置換されている。
【００４７】
より好ましい態様において、本発明の化合物は、構造式(XXIX):
【００４８】
【化９】
2005504795.tif 000013
【００４９】
により表される。
【００５０】
構造式(XXIX)において、環AおよびUは、独立して、置換または非置換であり、R10は-H、非置換脂肪族基または置換脂肪族基である。さらにより好ましくは、環Aは非置換であり、環Uは、R11（式中、各R11は、独立して、-CH3、-CH2CH3、-OCH3、-F、-Clまたは-CNである）により表される１つ以上の基で置換されている。好ましくは、R11は、メチレン基に結合した炭素に対してパラ位にある。
【００５１】
用語「アリール基」は、フェニル、ナフチル、およびアントラシルなどの炭素環式芳香族基、ならびにイミダゾリル、イソイミダゾリル、チエニル、フラニル、ピルジル、ピリミジル、ピラニル、ピラゾリル、ピロリル、ピラジニル、チアゾイル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、1,2,3-トリザオリル(trizaolyl)、1,2,4-トリアゾリル、およびテトラゾリルなどのヘテロアリール基をいう。
【００５２】
また、アリール基としては、炭素環式芳香族環またはヘテロアリール環が１つ以上の他のヘテロアリール環に融合した融合多環式芳香族環系が挙げられる。例としては、ベンゾチエニル、ベンゾフラニル、インドリル、キノリニル、ベンゾチアゾリル、ベンゾイソチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、ベンズイミダゾリル、キノリニル、イソキノリニルおよびイソインドリルが挙げられる。
【００５３】
脂肪族基は、完全に飽和しているか、または１つ以上の不飽和単位を含む、直鎖、分枝鎖または環式非芳香族炭化水素である。典型的には、直鎖または分枝鎖の脂肪族基は、1〜約10、好ましくは1〜約4の炭素原子を有し、環式脂肪族基は、3〜約10、好ましくは3〜約8の炭素原子を有する。脂肪族基は、好ましくは、直鎖または分枝鎖アルキル基、例えば、メチル、エチル、n-プロピル、イソ-プロピル、n-ブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、ペンチル、ヘキシル、ペンチルもしくはオクチル、または3〜約8の炭素原子を有するシクロアルキル基である。C1〜C4直鎖もしくは分枝鎖アルキル基またはC3〜C8環式アルキル基もまた、「低級アルキル」基とよぶ。
【００５４】
「アルキレン基」は、-(CH2)n-により表される。nは、1〜10、好ましくは1〜4の整数である。
【００５５】
非芳香族複素環式環は、環内に、窒素、酸素または硫黄などの１つ以上のヘテロ原子を含む非芳香族炭素環式環である。環は、五、六、七または八員であり得る。例としては、オキサゾリニル、チアゾリニル、オキサゾリジニル、チアゾリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒロチオフェニル、モルホリノ、チオモルホリノ、ピロリジニル、ピペラジニル、ピペリジニルおよびチアゾリジニルが挙げられる。
【００５６】
脂肪族基、非芳香族複素環式基、ベンジルまたはアリール基環炭素(炭素環式およびヘテロアリール)に好適な置換基は、開示された化合物の抗癌活性を実質的に妨害しないものである。好適な置換基の例としては、-OH、ハロゲン(-Br、-Cl、-Iおよび-F)、-ORa、-O-CORa、-CORa、-CN、-NO2、-COOH、-SO3H、-NH2、-NHRa、-N(RaRb)、 -COORa、-CHO、-CONH2、-CONHRa、-CON(RaRb)、-NHCORa、-NRCORa、-NHCONH2、-NHCONRaH、-NHCON(RaRb)、-NRcCONH2、-NRcCONRaH、-NRcCON(RaRb)、-C(=NH)-NH2、-C(=NH)-NHRa、-C(=NH)-N(RaRb)、-C(=NRc)-NH2、-C(=NRc)-NHRa、-C(=NRc)-N(RaRb)、-NH-C(=NH)-NH2、-NH-C(=NH)-NHRa、-NH-C(=NH)-N(RaRb)、-NH-C(=NRc)-NH2、-NH-C(=NRc)-NHRa、-NH-C(=NRc)-N(RaRb)、-NRdH-C(=NH)-NH2、-NRd-C(=NH)-NHRa、-NRd-C(=NH)-N(RaRb)、-NRd-C(=NRc)-NH2、-NRd-C(=NRc)-NHRa、-NRd-C(=NRc)-N(RaRb)、-NHNH2、-NHNHRa、-NHRaRb、-SO2NH2、-SO2NHRa、-SO2NRaRb、-CH=CHRa、-CH=CRaRb、-CRc=CRaRb,-CRc=CHRa、-CRc=CRaRb、-CCRa、-SH、-SOkRa(kは0、1または2である)および-NH-C(=NH)-NH2が挙げられる。Ra〜Rdは、各々、独立して脂肪族、置換脂肪族、ベンジル、置換ベンジル、アリールまたは置換アリール基、好ましくはアルキル、ベンジルまたはアリール基である。また、-NRaRdはまた、一緒になって、置換または非置換の非芳香族複素環式基を形成し得る。非芳香族複素環式基、ベンジル基またはアリール基もまた、脂肪族または置換脂肪族基を置換基として有し得る。また、置換脂肪族基は、非芳香族複素環式環、置換非芳香族複素環式環、ベンジル、置換ベンジル、アリールまたは置換アリール基を置換基として有し得る。置換脂肪族、非芳香族複素環式基、置換アリールまたは置換ベンジル基は１つより多くの置換基を有し得る。
【００５７】
他のヘテロアリール環原子への３つの共有結合を有するヘテロアリール環窒素原子に好適な置換基としては、-OHおよび-アルコキシ(好ましくはC1〜C4)が挙げられる。他のヘテロアリール環原子への３つの共有結合を有する置換ヘテロアリール環窒素原子は、正荷電であり、塩化物、臭化物、ギ酸塩、酢酸塩などの対アニオンにより平衡化されている。他の好適な対アニオンの例は、以下の好適な薬理学的に許容され得る塩に関する項に記載する。
【００５８】
他のヘテロアリール環原子への２つの共有結合を有するヘテロアリール環窒素原子に好適な置換基としては、アルキル、置換アルキル (ハロアルキルを含む)、フェニル、置換フェニル、-S(O)2-(アルキル)、-S(O)2-NH(アルキル)および-S(O)2-NH(アルキル)2が挙げられる。
【００５９】
環Aに好ましい置換基としては、-F、-Cl、-Br、-C1〜C4アルキル、C1〜C4アルコキシ、-C1〜C4ハロアルキル、C1〜C4ハロアルコキシ、-CNまたは-NH2が挙げられる。環Aは、０、１またはそれ以上の置換基を有し得る。
【００６０】
環D〜Tに好ましい置換基としては、C1〜C4アルキル、C1〜C4ヒドロキシアルキル、N-モルホリノ、ピリミジル、ピリミジルで置換されたC1〜C4アルキル、-N(C1〜C4アルキル)2、-C(O)NH2、-C(O)NH(C1〜C4アルキル)、C(O)N(C1〜C4アルキル)2、-NHC(O)(C1〜C4アルキル)、-NO2、C1〜C4アルコキシ、-C(O)O-CH2CH2-N(C1〜C4アルキル)2、
【００６１】
【化１０】
2005504795.tif 000014
【００６２】
-NH-(フェニル)、-NH2、-CH2NH-C(O)-O-(C1〜C4アルキル)、-CH2NH2、-Cl、-F、-C(O)-O-(C1〜C4アルキル)、-C(O)-N-(C1〜C4アルキル)、C3〜C7シクロアルキル、フェニル、-C(O)-N-モルホリノ、-S-(C1〜C4アルキル)、-CN、フリル、-S(O)2-(C1〜C4アルキル)、-S(O)2-NH2、-S(O)2-NH(C1〜C4アルキル)または-S(O)2-N(C1〜C4アルキル)2が挙げられる。
【００６３】
環U、環VならびにR3により表されるフェニルおよびピリジル環に好ましい置換基としては、-Br、-Cl、-F、-Re、-ORe、-CN、-COORe、-N(Re)2、-CON(Re)2、-NReCORf、-NHCONH2および-SO2N(Re)2が挙げられる。各ReおよびRfは、独立して、-H、アルキルまたは置換アルキルから選択される。環U、環VならびにR3により表されるフェニル基により好ましい置換基としては、-Cl、-F、-Re、-ORe、-CN、-NH2、-CONH2または-NHCORfが挙げられる。環U、環VならびにR3により表されるフェニル基にさらにより好ましい置換基としては、-CH3、-CH2CH3、-F、-Cl、-CNまたは-OCH3が挙げられる。環U、環VならびにR3により表されるフェニルおよびピリジル環は、０、１またはそれ以上の置換基を有し得るが、好ましくは非置換または一置換である。環U、環VおよびR3が六員芳香族環かつ一置換である場合、置換基は、好ましくは、メチレン基に結合した炭素原子に対してパラ位置である。
【００６４】
本明細書に記載される化合物の薬学的に許容され得る塩もまた、本発明に包含される。本明細書に開示される化合物は、充分な酸性、充分な塩基性または両方の官能基を有し、したがって、多くの有機または無機塩基ならびに無機および有機酸のいずれかと反応して塩を形成し得る。塩基性基を有する化合物から酸付加塩を形成するために一般的に使用される酸は、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、リン酸などの無機酸、およびp-トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、p-ブロモフェニル-スルホン酸、炭酸、コハク酸、クエン酸、安息香酸、酢酸などの有機酸である。かかる塩の例としては、硫酸塩、ピロ硫酸塩、重硫酸塩、亜硫酸塩、重亜硫酸塩、リン酸塩、一水素リン酸塩(monohydrogenphosphate)、二水素リン酸塩(dihydrogenphosphate)、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、酢酸塩、プロピオン酸塩、デカン酸塩、カプリル酸塩、アクリル塩、ギ酸塩、イソ酪酸塩、カプロン酸塩、ヘプタン酸塩、プロピオール酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、セバシン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、ブチン-1,4-二酸塩、ヘキシン-1,6-二酸塩、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、フタル酸塩、スルホン酸塩、キシレンスルホン酸塩、フェニル酢酸塩、フェニルプロピオン酸塩、フェニル酪酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、γ-ヒドロキシ酪酸塩、グリコール酸塩、酒石酸、メタンスルホン酸塩、プロパンスルホン酸塩、ナフタレン-1-スルホン酸塩、ナフタレン-2-スルホン酸塩、マンデル酸塩などが挙げられる。
【００６５】
塩基付加塩としては、アンモニウムまたはアルカリもしくはアルカリ土類金属水酸化物、炭酸塩、重炭酸塩などの無機塩基由来のものが挙げられる。したがって、本発明の塩の調製に有用なかかる塩基としては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、炭酸カリウムなどが挙げられる。
【００６６】
開示された化合物は、多剤耐性癌を含む癌を有する被験体を処置するために使用され得る。癌は、腫瘍が最初に薬物に応答した後、薬物による処置を受けている間に通常の腫瘍成長速度を回復する場合、薬物に対して耐性である。腫瘍は、腫瘍質量の減少または腫瘍成長速度の減少を示す場合、「薬物に応答する」。用語「多剤耐性癌」は、２以上の薬物、典型的には５以上に耐性である癌をいう。
【００６７】
「有効量」は、多剤耐性癌を有する被験体に化合物を投与した場合に有益な臨床結果が達成される化合物の量である。「有益な臨床結果」としては、処置をしない場合と比べたときの腫瘍質量の減少、腫瘍成長速度の減少、転移の減少、癌に関連する症状の重篤度の減少および／または被験体の寿命の延長が挙げられる。被験体に投与される化合物の正確な量は、疾患または状態の種類および重篤度ならびに一般健康状態、年齢、性別、体重および薬物に対する認容性などの被験体の特徴に依存する。また、癌の程度、重篤度および種類にも依存する。当業者であれば、これらおよび他の要因に応じて適切な用量を決定することができよう。開示された化合物の有効量は、典型的には、約1mg/mm2／日〜約10グラム/mm2／日の間、好ましくは10mg/mm2／日〜約5グラム/mm2の間の範囲である。
【００６８】
開示された化合物は、例えば、カプセル、懸濁液もしくは錠剤における経口または非経口投与によるものを含む、任意の適当な経路により投与される。非経口投与には、例えば、筋肉内、静脈内、皮下または腹腔内注射によるものなどの全身投与が含まれ得る。化合物はまた、処置対象の癌の種類に応じて、経口(例えば、食事)、局所、吸入により(例えば、気管支内、鼻腔内、経口吸入または点鼻)または経直腸により投与され得る。経口または非経口投与が好ましい投与様式である。
【００６９】
開示された化合物は、許容され得る医薬用担体と組み合わせて、癌の処置のための医薬組成物の一部として被験体に投与され得る。投与される化合物の製剤化は、選択される投与経路(例えば、溶液、エマルジョン、カプセル)に従って変わる。好適な医薬用担体は、化合物と相互作用しない不活性成分を含み得る。Remington's Pharmaceutical Sciences、Mack Publishing Company、Easton、PAに記載されているものなどの標準的な医薬製剤化技術を用いることができる。非経口投与に好適な医薬用担体としては、例えば、滅菌水、生理食塩水、静菌生理食塩水(約0.9%mg/mlベンジルアルコール含有生理食塩水)、リン酸緩衝生理食塩水、ハンクス溶液、（乳酸加）リンゲル液などが挙げられる。組成物を(例えば、硬質ゼラチンまたはシクロデキストランの皮膜内に)カプセル化するための方法は、当該技術分野において公知である(Bakerら、「(Controlled Release of Biological Active Agents)」、John Wiley and Sons、1986)。
【００７０】
任意に、開示された化合物は、タキソール、ビンクリスチン、アドリアマイシン、エトポシド、ドキソルビシン、ダクチノマイシン、マイトマイシンC、ブレオマイシン、ビンブラスチン、シスプラチンなどの他の抗癌剤と同時投与され得る。好ましくは、開示された化合物は、癌が多剤耐性を発現する前、または癌が多剤耐性を発現しつつあるが、使用している抗癌剤に対して完全に耐性になる前であるときに同時投与される。該方法はまた、手術、放射線療法などの他の癌処置との組み合わせて行なわれ得る。
【００７１】
「被験体」は、哺乳動物、好ましくはヒトであるが、獣医学的処置を必要とする動物、例えば、コンパニオン動物(例えば、イヌ、ネコなど)、農場動物(例えば、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマなど)および実験動物(例えば、ラット、マウス、モルモットなど)でもあり得る。
【００７２】
構造式(Ia)により表される化合物は、開示された1-グリオキシリルインドリジン類の合成における中間体である。この中間体の調製方法の１つを以下にスキーム1に示す:
【００７３】
【化１１】
2005504795.tif 000015
【００７４】
構造式(Ia)により表される中間体は、構造式(Ib)により表される前駆体化合物の環化により調製される。環化反応は、CuI、CuBr、CuCl、Cu(トリフレート(triflate))などのCuI塩の存在下で行われる。CuClは最も一般的に使用されるCuI塩である。典型的には、等モル量のCuI塩および前駆体化合物を使用する。しかしながら、過剰の、例えば、５倍モル過剰まで、より一般的には３倍モル過剰まで、好ましくは50% モル過剰を超えないCuI塩を使用することも一般的である。この反応に好適な溶媒としては、ジメチルアセトアミド(DMA)、ジメチルホルムアミド(DMF)、ジメチルスルホキシド(DMSO)、ヘキサメチルホスホルアミド(HMPA)およびN-メチルピロリジノン(NMO)などの極性非プロトン性溶媒が挙げられる。反応は、典型的には、高温、例えば、70℃〜溶媒の沸点の間、好ましくは100℃〜160℃の間、より好ましくは120℃〜140℃の間で行なわれる。第三級アミンは、補助溶媒として、極性非プロトン性溶媒に対して、典型的には1:20〜4:1 v/vの間、より典型的には、1:10〜1:1 v/vの間の量で反応混合物に典型的に添加される。好適な第三級アミンの例としては、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ジメチルアニリン、ジメチルアミノピリジンなどが挙げられる。トリエチルアミンが最も一般的に使用される。この反応を行なうために使用される条件の具体例を実施例３に提供する。
【００７５】
スキーム1による、開示された1-グリオキシリルインドリジン類の合成の次の工程は、構造式(Ia)により表される中間体の塩化オキサリルまたはその合成等価物(例えば、臭化オキサリル)によるアシル化である。等モル量の中間体およびアシル化剤を使用し得るが、典型的には、アシル化剤を過剰に、例えば、20倍モル過剰まで、好ましくは10倍モル過剰まで、より好ましくは３倍モル過剰まで使用する。エーテル系溶媒(例えば、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、1,4-ジオキサン、グリム(glyme)、ジグリムおよびメチルtert-ブチルエチル)および芳香族溶媒(例えば、ベンゼン、トルエンおよびキシレン)が一般的に使用される。好適な反応温度は、-50℃から溶媒の沸点までの範囲であり、より典型的には、-10℃から室温まで、好ましくは-10℃〜10℃の間の範囲である。この反応を行なうために使用される条件の具体例を実施例３に提供する。
【００７６】
スキーム1による、開示された1-グリオキシリルインドリジン類の合成は、アシル化中間体をアミンHNR1R2(式中、R1およびR2は上述の通りである)と反応させることにより完了する。アシル化中間体およびアミンは、適当な溶媒、例えば、エーテル系溶媒または芳香族溶媒中で混合される。好適な反応温度は、アシル化反応について上述した通りである。一方の反応物を過剰に使用し得るが(例えば、10倍モル過剰まで)、より典型的には、20%モル〜100%モル過剰の間である。２当量未満のアミンHNR1R2を使用する場合、アシル化中間体に対して少なくとも２当量のアミンが反応混合物中に存在するようにトリエチルアミンまたはジメチルアミノピリジンなどの第三級アミンを通常添加する。この反応を行なうために使用される条件の具体例を実施例３に提供する。
【００７７】
以下に示すスキーム２は、構造式(Ia)により表される特定の中間体の調製のための第２の方法を示す。スキーム２において、(100)で示す中間体は、ジメチルホルムアミドおよびジメチル硫酸塩、あるいはまた、ジメチルホルムアミドジ-tert-ブチルアセタールから調製した試薬で環化される。この反応は、2002年９月13日に出願された同時係属中の米国特許仮出願、発明の名称「3-アシル-インドリジン類の調製方法」(代理人整理番号3211.1007-000)にさらに詳細に記載されており、その全教示は参照により本明細書に取り込まれる。この反応を行なうための具体的な条件を実施例６に提供する。
【００７８】
【化１２】
2005504795.tif 000016
【００７９】
スキーム２の反応は、構造式(I)および(Ia)のR3に対応する位置がパラ-シアノフェニルである化合物の調製に関して示されたものであるが、出発物質および条件の適切な選択により、R3について他の変数を有する化合物が調製され得る。
【００８０】
以下に示すスキーム３は、構造式(Ia)により表される特定の化合物の調製のための第３の方法を示す。これらの変換を行なうための具体的な条件を実施例１に提供する。
【００８１】
【化１３】
2005504795.tif 000017
【００８２】
スキーム３において、「p-TSA」はパラ-トルエンスルホン酸をいい;「NaCNBH3」はシアノ水素化ホウ素ナトリウム(sodium cyanoborohydride)をいい;「TMS-Cl」はクロロトリメチルシランをいう。スキーム３の反応は、化合物(1)の調製に関して記載しているが、出発物質および反応条件の適切な選択により、本発明の他のインドリジン化合物を容易に調製し得る。
【００８３】
本発明を、なんら限定することを意図しない以下の実施例により説明する。
【実施例】
【００８４】
実施例１  スキーム３の方法による2-(3-(4-シアノ-ベンジル)-インドリジン-1-イル)-N-(3-メチル-イソチアゾル-5-イル)-2-オキソ-アセトアミドの調製
【００８５】
【化１４】
2005504795.tif 000018
【００８６】
臭化4-シアノフェンアシル(4-cyanophenacyl bromide)(10)(5.02g、22.2mmol)の無水アセトニトリル(300mL)溶液に、ピリジン(3.6mL、45.3mmol)を室温で添加した。混合物を30分間攪拌した。沈殿物を濾過し、アセトニトリル(20mL)で洗浄し、減圧下で乾燥して臭化1-(2-(4-シアノ-フェニル)-2-オキソ-エチル)-ピリジニウム(11)を白色粉末として得た(100%)。1H NMR (DMSO-d6) δ 6.56 (s、2H)、8.21 (m、6H)、8.76 (t、J = 7.8、1H)、9.03 (d、J = 6.6、2H).
【００８７】
臭化1-(2-(4-シアノ-フェニル)-2-オキソ-エチル)-ピリジニウム(11)(4.04グラム、13.2mmol)および炭酸カリウム(2.21グラム、16.0mmol)を含むテトラヒドロフラン(250mL)のスラリーを室温で10分間攪拌した。これに3-ブチン-2-オン(1.4mL、16.0mmol)を添加し、反応混合物を室温で6時間攪拌し続けた。不溶性物質を濾過除去し、濾液を減圧下で濃縮した。3:1ヘキサンおよび酢酸エチル(Rf 0.2)を用い、シリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー精製に残渣を供し、1-アセチル-3-(4-シアノベンゾイル)インドリジン(12)を黄色固体として得た(2.55グラム、72%)。1H NMR (CDCl3) δ 2.56 (s、3H)、7.23 (m、1H)、7.62 (m、2H)、7.90 (m、4H)、8.72 (d、J = 9.0、1H)、10.02 (d、J = 6.6、1H); ESMS計算値(C18H12N2O2): 288.1; 実測値: 289.1 (M+H)+.
【００８８】
1-アセチル-3-(4-シアノベンゾイル)インドリジン(12)(1.56グラム、5.69mmol)、エチレングリコール(1mL)およびp-トルエンスルホン酸(2.16グラム、11.38mmol)を含むベンゼン(150mL)溶液を3時間還流した。反応混合物を室温まで冷却し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で中和し、酢酸エチル(3x50mL)で抽出した。合わせた層を減圧下で濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー(Rf 0.3、酢酸エチル含有ヘキサン)による精製により、3-(4-シアノベンゾイル)インドリジン(13)を淡黄色固体として得た(1.12グラム、80%)。1H NMR (CDCl3) δ 6.56 (d、J  = 4.8、1H)、7.04 (t、J  = 6.9、1H)、7.28 (m、2H)、7.61 (d、J = 9.0、1H)、7.78 (m、2H)、7.89 (m、2H)、9.98 (d、J  = 7.2、1H). ESMS計算値(C16H10N2O2): 246.1; 実測値: 247.1 (M+H)+.
【００８９】
シアノ水素化ホウ素ナトリウム(0.32グラム、5.06mmol)を、氷浴で冷却した3-(4-シアノベンゾイル)インドリジン(13)(0.19グラム、0.84mmol)およびクロロトリメチルシラン(chlorotrimethylsilanen)(0.65mL、5.06mmol)含有アセトニトリル(15mL)溶液に、分割して添加した。反応混合物を室温で4時間攪拌した。次いで、これを炭酸水素ナトリウム水溶液でクエンチし、酢酸エチル(3 x 25mL)で抽出した。合わせた有機層を水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮して油状残渣を得、これを、10%酢酸エチル含有ヘキサン(Rf 0.3)を使用するフラッシュカラムクロマトグラフィーに供し、3-(4-シアノベンジル)インドリジン(14)を得た(0.11グラム、56%収率)。1H NMR (CDCl3) δ 4.09 (s、2H)、6.36 (m、2H)、6.56 (m、2H)、7.15 (d、J = 8.4、2H)、7.32 (d、J  = 9.3、1H)、7.45 (m、3H). ESMS計算値(C16H12N2): 232.1; 実測値: 233.1 (M+H)+.
【００９０】
塩化オキサリル(1.13mL、12.9mmol)を含む40mL無水エチルエーテル溶液を氷浴中で冷却した後、3-(4-シアノベンジル)インドリジン(14)(1.04グラム、4.31mmol)含有エチルエーテル(10mL)を添加した。得られた混合物を０℃で30分間攪拌した。減圧下で溶媒を除去した(温度を25℃未満に維持しながら)。次いで、残渣をTHF(40mL)に溶解し、０℃まで冷却した。5-アミノ-3-メチルイソチアゾール含有THF(10mL)をゆっくりと添加した。混合物を常温で一晩攪拌した。反応混合物を水でクエンチし、酢酸エチルで抽出した。減圧下で濃縮した後、粗生成物を、1:1酢酸エチルおよびジクロロメタン(Rf 0.3)を用いるフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、1.35グラム(78%)の2-(3-(4-シアノベンジル)-インドリジン-1-イル)-N-(3-メチル-イソチアゾル-5-イル)-2-オキソ-アセトアミド(1)を得た。1H NMR (CDCl3) δ 2.47 (s、3H)、4.34 (s、2H)、6.78 (s、1H)、6.98 (m、1H)、7.31 (m 3H)、7.61 (d、J  = 7.2、2H)、7.80 (d、J  = 6.9、1H)、7.85 (s、1H)、8.68 (d、J  = 8.7、1H)、10.36 (s、1H). ESMS計算値(C22H16N4O2S): 400.1; 実測値: 399.1 (M-H)+.
【００９１】
実施例２  スキーム３の方法による他の1-グリオキシルアミド（glyoxlylamide）インドリジンの調製
下記に示す1-グリオキシルインドリジンを実施例１に記載の方法を用いて調製した。各化合物の分析データを提供する。
【００９２】
【化１５】
2005504795.tif 000019
【００９３】
【化１６】
2005504795.tif 000020
【００９４】
【化１７】
2005504795.tif 000021
【００９５】
【化１８】
2005504795.tif 000022
【００９６】
【化１９】
2005504795.tif 000023
【００９７】
【化２０】
2005504795.tif 000024
【００９８】
【化２１】
2005504795.tif 000025
【００９９】
【化２２】
2005504795.tif 000026
【０１００】
【化２３】
2005504795.tif 000027
【０１０１】
【化２４】
2005504795.tif 000028
【０１０２】
【化２５】
2005504795.tif 000029
【０１０３】
【化２６】
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【０１０４】
【化２７】
2005504795.tif 000031
【０１０５】
【化２８】
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【０１０６】
【化２９】
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【０１０７】
【化３０】
2005504795.tif 000034
【０１０８】
【化３１】
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【０１０９】
【化３２】
2005504795.tif 000036
【０１１０】
実施例３  スキーム１に示される方法による4-インドリジン-3-イル)-ベンゾニトリルの調製
【０１１１】
【化３３】
2005504795.tif 000037
【０１１２】
乾燥した1Lの三つ口丸底フラスコにN2を流し込み、N2入口に連結し、温度計を備え付けた。300mLの無水THF（Aldrich）, 62mL (0.44mol)のN,N-ジイソプロピルアミンをフラスコに添加し、-78℃（30分）に冷却した。n-BuLi（122mL, 3.6M, 0.44mol）を10分以内に添加し、内部温度を-65℃に上昇させた。得られた混合物を-78℃でさらに30分間撹拌した。DMPU（53mL, 0.44mol）を上記溶液に一部で添加した。得られた混合物を-78℃で１時間撹拌した。p-トルニトリル（48mL, 0.40mol）を20mLのTHFに希釈し、25分間かけて、-70℃未満の温度でシリンジにより上記混合物に緩徐に添加した。反応混合物を-78℃で40分間撹拌し続けた。反応物は黄ばんだ赤色になった。プロパルギル（propargyl）ブロミド（80％、Aldrich, 22mL, 0.2mol）をシリンジにより20分間かけて添加した。反応混合物は明るい黄色になり、これを-78℃で1.5時間撹拌し続けた。次いで、反応を-40℃まで温めた。100mLの飽和NH4Clを添加し、続いて100mLの水を添加した。室温で10分間撹拌した後、100mLの酢酸エチルを添加し、混合物を分離ロートに移した。有機層を分離し、水層を50mLの酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機層を水（30mL）および鹹水（30mL）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、単純な濾過により明るい黄色の溶液を得、これを減圧下で濃縮し、油残渣を得、これを０℃に冷却した。固体を形成し、濾過し、ヘプタンで洗浄し、28.64g（92％収率）の4-ブト-3-イニル(ynyl)-ベンゾニトリルを得た。1H NMR (CDCl3): δ (ppm) 7.60 (m, 2H); 7.36 (m, 2H), 2.90 (t, J=7.2 Hz, 2H); 2.51 (m, 2H); 1.99 (t, J=2.7 Hz, 1H). ESMS 計算値 (C11H9N): 155.1; 実測値: 156.1 (M+H)+.得られた生成物をさらに精製せずに次の工程に使用した。
【０１１３】
乾燥した1Lの三つ口丸底フラスコにN2を流し込み、N2入口に連結し、温度計およびマグネチックスターラを備え付けた。4-ブト-3-イニル-ベンゾニトリル(49.38g, 0.32mol)を250mLのTHFに溶解させ、続いてトリエチルアミン(TEA)(250mL, 1:1 TEA/THF)、ブロモピリジン(33.3mL, 0.35mol)、Pd (pph3)2Cl2 (4.47g, 6.0mmol)、およびCuI(1.21g, 6.0mmol)を連続的に添加した。反応混合物を65℃に加熱し、その温度で撹拌し続けた。加熱中に、反応混合物は濃褐色に変わった。２時間後、反応を完了し、室温に冷却し、続いて水(200mL)および酢酸エチルを添加した。有機層を分離し、水(30mL)および鹹水(30mL)で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。単純な濾過により全ての触媒残渣および乾燥剤を除去した後、減圧下で濃縮し、オイルを得、これは冷却後すぐに固体になった。次いで、この固体を濾過し、ヘプタンで洗浄して58.74 g (79.6%収率; 純度: 98%)の4-(4-ピリジン-2-イル-ブト-3-イニル)-ベンゾニトリルを得た。1H NMR (CDCl3):δ(ppm) 8.54 (m, 1H); 7.59 (m, 3H); 7.39 (m, 2H); 7.31 (m, 1H); 7.19 (m, 1H); 3.01 (t, J=6.9 Hz, 2H); 2.75 (t, J=6.9 Hz, 2H). ESMS 計算値 (C16H12N2): 232.1; 実測値: 233.1 (M+H)+.
【０１１４】
乾燥した1Lの三つ口丸底フラスコにN2を注ぎ込み、N2入り口に連結し、温度計およびマグネティックスターラを備え付けた。4-(4-ピリジン-2-イル-ブト-3-イニル)-ベンゾニトリル(58.73g, 0.25mol), DMA(490mL)およびTEA(70mL)をフラスコに連続的に添加し、明るい褐色の溶液が得られた。次いで、CuCl(25.05g, 0.25mol)を添加した後、反応物は濃褐色になった。反応混合物を130℃で撹拌し続けた。130℃で３時間の撹拌後、反応を完了し、室温に冷却した。次いで、反応を水(300mL)でクエンチし、酢酸エチル(400mL)を添加した。次いで、得られた濃褐色の混合物を次いで、セライトケークを通して濾過し、透明な２層の混合物を得た。分離、乾燥、および濃縮後、黒ずんだオイルを得た。黒ずんだオイルを250mLの酢酸エチルに溶解させ、15gの脱色性炭素に適用し、20分間撹拌した。セライトケークを通して濾過した後、濾過物を水(100 mL)で２回洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。濃縮により53.89g(89%)の4-インドリジン-3-イルメチル-ベンゾニトリルを得た。1H NMR (CDCl3):δ (ppm) 7.55 (d, J =8.1 Hz, 2H); 7.50 (d, J=9.0 Hz, 1H); 7.39 (d, J=9.0 Hz, 1H); 7.23 (d, J=7.8 Hz, 2H); 6.64 (m, 2H), 6.44 (m, 2H); 4.27 (s, 2H). ESMS 計算値 (C16H12N2): 232.1; 実測値: 233.1 (M+H)+.
【０１１５】
実施例４  スキーム１の方法による1-グリオキシルアミドインドリジンの合成のためのインドリジン中間体の調製
以下の中間体を実施例３に記載の方法により調製し、適切な出発物質を置換した。各化合物の分析データを提供する。
【０１１６】
【化３４】
2005504795.tif 000038
【０１１７】
【化３５】
2005504795.tif 000039
【０１１８】
【化３６】
2005504795.tif 000040
【０１１９】
【化３７】
2005504795.tif 000041
【０１２０】
【化３８】
2005504795.tif 000042
【０１２１】
実施例５  実施例４の方法により調製されたインドリジン中間体からの1-グリオキシルアミドインドリジンの調製
実施例４に記載の方法により調製されたインドリジン中間体を、実施例１に記載の方法により1-グリオキシルアミドインドリジンに変換した。これらの1-グリオキシルアミドインドリジンおよびその分析データを以下に示す。
【０１２２】
【化３９】
2005504795.tif 000043
【０１２３】
【化４０】
2005504795.tif 000044
【０１２４】
【化４１】
2005504795.tif 000045
【０１２５】
【化４２】
2005504795.tif 000046
【０１２６】
【化４３】
2005504795.tif 000047
【０１２７】
【化４４】
2005504795.tif 000048
【０１２８】
実施例６  スキーム２に示される方法による4-インドリジン-3-イル)-ベンゾニトリルの調製
4-アセチルベンゾニトリル(14.5g, 100mmol)EtOAc(150ml)溶液を室温でBr2(5.1ml, 100mmol)に添加した。得られた混合物を0.5時間撹拌し、溶媒を減圧下で蒸発させた。残渣をCH3CN(100 ml)に溶解させ、ピコリン(20ml, 200mmol)を混合物に添加し、次いで室温で30分間、さらに０℃で１時間撹拌した。EtOAc(20 ml)を混合物に添加し、得られた沈殿物を濾過により収集し、EtOAcで洗浄し、純粋な2-メチル-1-(4-シノ(cyno))-フェナシルピリジニウムブロミド（20.3g, 83%）を得た。1H NMR(300MHz, DMSO): 9.05-8.03(m, 8H), 6.78(s, 2H), 2.74(s, 3H).
【０１２９】
DMF-Me2SO4試薬の400ml混合物を、1当量のDMFおよび1eqのMe2SO4の混合物の60℃で３時間の撹拌により得、次いで室温に冷却した。この試薬を2-メチル-1-(4-シノ)-フェンアシルピリジニウムブロミド(50g, 120mmol)DMF(500ml)懸濁溶液に添加した。得られた混合物を室温で15分間撹拌した。次いで、Et3N(700ml)を混合物に添加し、これを、温度を40℃に維持しながら１時間撹拌した。得られた混合物に氷水(1200 ml)を添加した。得られた沈殿物を収集し、水で洗浄し、乾燥させ、4-(インドリジン-3-カルボニル)-ベンゾニトリル(29g、収率76%).1H NMR (300MHz, CDCl3): 9.95 (d, 1H), 7.87-7.75(m, 4H), 7.57(d, 1H), 7.30-7.22(m, 2H), 6.97(m, 1H), 6.55(d, 1H); C16H10N2O ESMS計算値: 246.08; 実測値: 247.1 (M+H)+.
【０１３０】
代替的な手順では、室温でDMF(50ml)中の2-メチル-1-(4-シノ)-フェンアシルピリジニウムブロミド（5g, 12.2mmol）の懸濁物にN,N-ジメチルホルムアミドジ-t-ブチルアセタール(30ml)を添加することにより、4-(インドリジン-3-カルボニル)-ベンゾニトリルを調製した。透明な溶液を130℃で４分間撹拌し、氷水浴で室温に冷却した。水(100ml)を添加し、沈殿物を収集し、水で洗浄し、吸引ラインで乾燥し、91%純度の4-(インドリジン-3-カルボニル)-ベンゾニトリル(3.9g, 90%)を得た。この産物をCH3CN(35ml)(82℃〜0℃)で結晶化し、純粋な2 (3.2 g)を得た。1H NMR (300MHz, CDCl3): 9.95(d, 1H), 7.87-7.75(m, 4H), 7.57(d, 1H), 7.30-7.22(m, 2H), 6.97(m, 1H), 6.55(d, 1H); C16H10N2O ESMS計算値: 246.08; 実測値: 247.1 (M+H)+.
【０１３１】
MeOH(9ml)を含む4-(インドリジン-3-カルボニル)-ベンゾニトリル(24g, 100mmol)CH3CN(600ml)溶液にBH3-THF(1M, 480 ml)を添加した。得られた混合物を50℃で１時間撹拌した。反応を水（200ml）でクエンチし、EtOAc (700 ml)で抽出し、水(300ml x 3)で洗浄した。有機層を減圧下で蒸発させ、残渣をエーテル(またはEtOAc)(400ml)に溶解させ、ヘキサン(100ml)で希釈し、4-インドリジン-3-イルメチル-ベンゾニトリルを得た(15.6g, HPLCにより92%純度)。この生成物を直接次の工程に使用した。δ(ppm) 8.54 (m, 1H); 7.59 (m, 3H); 7.39 (m, 2H); 7.31 (m, 1H); 7.19 (m, 1H); 3.01 (t, J=6.9 Hz, 2H); 2.75 (t, J=6.9 Hz, 2H). ESMS 計算値 (C16H12N2): 232.1; 実測値: 233.1 (M+H)+.
【０１３２】
実施例７  スキーム２の方法による1-グリオキシルアミドインドリジンの合成のための他のインドリジン中間体の調製
下記に示すインドリジン中間体を実施例６に記載の方法により調製した。各化合物の分析データを提供する。
【０１３３】
【化４５】
2005504795.tif 000049
【０１３４】
【化４６】
2005504795.tif 000050
【０１３５】
【化４７】
2005504795.tif 000051
【０１３６】
【化４８】
2005504795.tif 000052
【０１３７】
実施例８  実施例６の方法により調製されたインドリジン中間体からの1-グリオキシルアミドインドリジンの調製
次いで、実施例６に記載の方法により調製されたインドリジン中間体を実施例１に記載の方法により1-グリオキシルアミドインドリジンに変換した。これらの1-グリオキシルアミドインドリジンの構造およびその分析データを下記に示す。
【０１３８】
【化４９】
2005504795.tif 000053
【０１３９】
【化５０】
2005504795.tif 000054
【０１４０】
【化５１】
2005504795.tif 000055
【０１４１】
実施例９  化合物（１）は抗癌活性（インビトロ）を示す
上記化合物のインビトロ活性を以下の７つのヒト癌細胞株において測定した。MDA435（ヒト乳癌）、MIP101（ヒト大腸癌）、HL-60（ヒト骨髄性白血病）、U937（ヒト白血病）、p388（マウス白血病）、DU-145（ヒト前立腺癌）、MES-SA（ヒト子宮肉腫）をATCC（American Type of Culture Collection）から得た。
【０１４２】
細胞株を、10％FCS、100ユニット/mlペニシリン、100ug/mlストレプトマイシン、および２mM L-グルタミンを補充したRPMI1640(GIBCO)中で維持した。細胞を３日毎に分割し、実験の１日前に2 x 105細胞/mlの濃度に維持した。全ての実験を指数関数的に増殖する細胞培養物において行った。細胞密度は、全ての実験において2.5x104細胞/mlであった。
【０１４３】
化合物（１）のストック溶液およびタキソールのストック溶液（陽性対照）を100％DMSOに１mMの濃度で化合物を溶解させることにより調製した。最終濃度を組織培養に直接ストック溶液を希釈することにより得た。細胞を変化する濃度の化合物とともに72時間インキュベートし、IC50をMTS（すなわち、3-(4.5.-ジメチルチアゾール-2-イル)-2.5-ジフェニルテトラゾリウムブロミド）アッセイにより測定した。IC50は、50％の腫瘍細胞増殖を阻害するために必要とされる化合物の濃度を表す。結果を表１に示す。
【０１４４】
【表１】
2005504795.tif 000056
【０１４５】
表１のデータから理解されうるように、化合物（１）は、種々の組織型由来の７つの細胞株に対して有意に高い抗癌活性（IC50：0.01〜0.05uM）を示した。
【０１４６】
実施例１０  化合物（１）はインビトロでの多剤耐性癌細胞に対する抗癌活性を有する
インビトロ活性を２つのMDR（多剤耐性）ヒト癌細胞株において決定した。漸次的高濃度のタキソールにおいてHL-60を継代培養することにより、HL-60/TX1000をインビトロで単離した。HL-60/TX1000細胞は、抗PGP抗体でのウェスタンブロットおよび免疫蛍光標識により決定されるように、mdr-1 mRNAおよびp-糖タンパク質を過剰発現する。細胞は、タキソール、ビンクリスチン、アドリアマイシン、エトポシドおよびドキソルビシンに対して交差耐性である。MES-SA/Dx5は、漸増する濃度のドキソルビシンの存在下で確立された。細胞は、高レベルのmdr-1 mRNAおよびp-糖タンパク質を発現し、タキソール、エトポシド、ミトマイシンＣ、コルチシン、ビンブラスチン、ダクチノマイシン、5-フルオロウラシルおよびメトトレキセートを含む15個より多くの化学療法剤に対して交差耐性を示す。MES-SA/Dx5はATCCから購入した。
【０１４７】
細胞を培養し、癌細胞増殖阻害をアッセイする方法を実施例３に記載した。結果を表２に示す。
【０１４８】
【表２】
2005504795.tif 000057
【０１４９】
タキソールビンクリスチンは、MDR細胞株（MES-SA/DX5, HL-60/TX1000）に対して効果的ではなかった（IC50：１〜５uM）。他方で、化合物１はこれらのMDR癌細胞株に対して高い抗癌活性を示した。
【０１５０】
実施例１１  化合物（１）はヒト胸部腫瘍（MDA435）異種移植片モデル（インビボ）に対する抗癌効力を示す
化合物（１）のインビボ抗癌効力を腫瘍増殖阻害アッセイを用いて腫瘍を有するマウスにおいて評価した。ヒト胸部腫瘍（MDA-435）細胞を、ヌードマウスの側面に腫瘍細胞懸濁物を皮下注射することにより移植した。実験化合物での腫瘍の処置を、腫瘍が確立された後に開始した（容積は約100mm3）。次いで、動物に、化合物が経口投与される複数注射スケジュールを始めた。腫瘍を１週間に２回測定した。このアッセイの課程の間に、体重減少を含む毒性の徴候について動物を毎日モニターした。
【０１５１】
補充培地を、50％ DMEM/ダルベッコ改変イーグル培地（高グルコース）、50％RPMI1640、10％FBS/胎仔ウシ血清（試験したハイブリドーマ；無菌濾過した）、１％L-グルタミン、１％ペニシリン-ストレプトマイシン、１％MEMピルビン酸ナトリウム、１％MEM非必須アミノ酸から調製した。FBSをSigma Chemical Co.から得、他の成分をInvitrogen Life Technologies, USA)から得た。補充培地を37℃に温め、50mlの培地を175cm2組織培養フラスコに添加した。
【０１５２】
アッセイにおいて使用した細胞は、アメリカンタイプカルチャーコレクション由来のMDA435ヒト胸部癌腫であった。液体窒素凍結細胞ストックからMDA-435細胞の１つのバイアルを取り出した。凍結バイアルの細胞をすぐに37℃水浴に置き、解凍するまで穏やかに回転させた。凍結バイアルを70％エタノールで拭き、175cm3補充培地を含む組織培養フラスコにすぐにピペッティングした。細胞を一晩インキュベートし、翌日、培地を新鮮な補充培地に変換した。フラスコが約90％のコンフルエントになるまで、フラスコをインキュベートした。これは典型的には約５〜７日かかった。
【０１５３】
フラスコを10mlの無菌の室温のリン酸緩衝化生理食塩水（PBS）で洗浄した。細胞を、５mlの温めたトリプシン-EDTA（Invitrogen）を細胞のフラスコに添加することによりトリプシン処理した。ついで、細胞を、細胞がフラスコ表面から剥離され始めるまで37℃で２〜３分間インキュベートした。等容量の補充培地（５ml）をフラスコに添加した。全ての細胞を50mlチューブに収集し、1000RPMで20℃にて５分間遠心分離した。上清をアスピレートし、細胞ペレットを10mlの補充培地に再懸濁し、細胞を計数した。１〜３百万の細胞／フラスコを５〜７つの組織培養フラスコ（175m2）に播種した。各フラスコは50mlの補充培地を含んでいた。フラスコを約90％コンフルエントまでインキュベートした。腫瘍移植のために十分な細胞が増殖するまで細胞の継代を繰り返した。
【０１５４】
細胞のトリプシン化および遠心分離のための上記の手順を続けた。上清をアスピレートし、細胞ペレットを10mlの無菌PBSに再懸濁し、細胞を計数した。細胞を遠心分離し、次いで腫瘍移植に必要な正確な数の細胞の注射のための適切な容量の無菌PBSに再懸濁した。MDA-435の場合では、0.1ml／マウスで５百万個の細胞を注射するために、１億個の細胞を2.0mlの無菌PBSで懸濁し、５千万個の細胞／mlの最終濃度に懸濁した。
【０１５５】
マウス（CD-1 nu/nu）をCharles River Laboratoriesから得た：命名：Cr1:CD-1-nuBR, 年齢：６〜８週。マウスを、実験手順で使用する前に１週間、順化させた。
【０１５６】
MDA-435腫瘍細胞懸濁物の移植は、雌CD-1 nu/nuマウスの脂肪パッドに行われた。この脂肪体はマウスの腹側腹内臓(ventral abdominal viscera)に位置する。腫瘍細胞を、寛骨（骨盤骨）および大腿骨（大腿骨）の連結部の腹部の右四分円に位置する脂肪体に皮下移植した。0.1mlの無菌PBS中の５百万個のMDA-435細胞を27G（1/2インチ）針を用いて注射した。MDA-435腫瘍は、移植後２〜３週間に発達した。
【０１５７】
化合物投与のための投薬溶液を、10mlのアセトン（HPLCグレード）中に１ｇの化合物（１）を溶解させることにおり調製し、550 Sonic Dismembratorを用いて５分間超音波処理した。1.2当量の1N HCl水溶液をアセトン溶液に添加し、これを次いで５分間超音波処理した。次いで、全ての溶媒を、Speed Vac Plus SC 250 DDAを使用することにより一晩溶液から蒸発させた。乾燥パウダーを、化合物（１）の投薬溶液を調製するために使用した。１％メチルセルロース（MC）ビヒクルを、100mLのH2O中に1.0ｇのメチルセルロース、400cps, U.S.P.（Spectrum Laboratory Products, カタログ番号ME136）を溶解させることにより調製した。次いで、この混合物を室温で12時間撹拌し、透明な１％MC溶液を生成した。120℃で15分間、溶液を加圧滅菌した後、経口投与化合物を製剤化するために使用する前に、１％MC溶液を室温で３時間放置した。化合物（１）を１％MC中で調製し、皮下注射シリンジに取り付けられた標準栄養チューブによりマウスに経口投与した。この方法は、胃への化合物の直接的な配置を可能にする。マウスの投薬容量は10mL/kgであった。
【０１５８】
化合物（１）の１％MC投薬溶液を以下のプロトコルによりMDA435ヒト胸部腫瘍を有するマウスに経口投与した：
【０１５９】
2005504795.tif 000058
投薬スケジュール：週３回（月曜、水曜、金曜）を３週間；５匹のマウスを各群に使用した
【０１６０】
図１は、化合物（１）の抗腫瘍効力を示す。図１から理解されうるように、化合物（１）は、用量依存様式で25mg/kgおよび50mg/kgでヌードマウスにおいてMDA435の腫瘍増殖を有意に阻害する。図２は、MDA435ヒト胸部腫瘍を有するヌードマウスの体重に対する化合物（１）の効果を示す。図２から理解されうるように、化合物（１）は、マウスの有意な体重減少を有することなく抗癌活性を示す。
【０１６１】
実施例１２  化合物（２）〜（８）は、MES-SA/DX5に対して高い抗癌活性（インビトロ）を示す
実施例９〜10に記載されるプロトコルを使用して、多剤耐性癌細胞株MES-SA/DX（MDR子宮肉腫細胞株である）の増殖に対する化合物（２）〜（８）による阻害をアッセイした。結果を表３に示す。
【０１６２】
【表３】
2005504795.tif 000059
【０１６３】
化合物（２）〜（８）はMES-SA/DX5に対して有意な抗癌活性（IC50: 0.05〜0.1uM）を示し、一方、タキソールはMDR細胞株に対して弱い抗癌活性（IC50: 5uM）を示した。
【０１６４】
実施例１３  化合物（20）（21）（24）および（28）は、MES-SAおよびDU-145に対して高い抗癌活性（インビトロ）を示す
実施例９〜10に記載されるプロトコルを使用して、癌細胞株MES-SA（ヒト子宮肉腫細胞株）およびDU-145（ヒト前立腺癌）の増殖における化合物（20）（21）（24）および（28）による阻害をアッセイした。結果を表４に示す。
【０１６５】
【表４】
2005504795.tif 000060
【０１６６】
化合物（20）（21）（24）および（28）は、MES-SAおよびDU-145に対して有意な抗癌活性（IC50: 0.05〜0.1uM）を示した。
【０１６７】
本発明をその好ましい態様を参照して詳細に示し、記載してきたが、形態および細部における種々の変化が付随する特許請求の範囲により包囲される本発明の範囲を逸脱することなくなされうることを当業者は理解する。
【図面の簡単な説明】
【０１６８】
【図１】図１は、ヒト胸部MDA435腫瘍を有するヌードマウスに経口投与した化合物(1)の抗腫瘍効果を示すグラフである。グラフは、ビヒクル、25mg/kg化合物(1)および50mg/kg化合物(1)の投薬開始後の腫瘍の容積（mm3）を日数単位で経時的に示すものである。
【図２】図２は、ビヒクル、25mg/kg化合物(1)および50mg/kg化合物(1)を投与されたヌードマウスにおける体重変化の割合を日数単位で経時的に示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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