(57)【要約】式(Ｉ)(ただし、Ｒ、Ｒ１、ＣＯＯＲ２、Ｒ３−Ｒ７、ａｌｋおよびＸは、定義された意味を有する)で示され、アンギオテンシン変換酵素および中性エンドペプチダーゼの二重阻害剤、並びにエンドセリン変換酵素の阻害剤として有用である化合物。好ましい実施態様では、ＲおよびＲ５は水素を表し、Ｒ１はベンジルを表し、Ｒ３は水素、アセチルまたはメトキシアセチルを表し、Ｒ４はイソプロピルまたはｔｅｒｔ−ブチルを表し、Ｒ６およびＲ７はメチルを表し、Ｘは−Ｏ−を表し、ａｌｋはメチレンを表し、そしてＣＯＯＲ２はカルボキシルまたはエトキシカルボニルを表す。
2005504011.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式
【化１】
2005504011.tif 000057
［式中、
Ｒは、水素、低級アルキル、炭素環または複素環アリール−低級アルキルまたはシクロアルキル−低級アルキルを表し、
Ｒ１は、低級アルキル、シクロアルキル、炭素環または複素環アリール、またはビアリールを表すか、またはＲ１は、(シクロアルキル、炭素環アリール、複素環アリールまたはビアリール)−低級アルキルを表し、
ａｌｋは、低級アルキレンを表し、
Ｒ３は、水素またはアシルを表し、
Ｒ４は、水素、所望により置換されていてもよい低級アルキル、炭素環または複素環アリール、(炭素環または複素環アリール)−低級アルキル、シクロアルキル、シクロアルキル−低級アルキル、ビアリール、ビアリール−低級アルキル、オキサシクロアルキル、チアシクロアルキル、アザシクロアルキル、または(オキサシクロアルキル、チアシクロアルキルまたはアザシクロアルキル)−低級アルキルを表し、
Ｒ５は、水素または低級アルキルを表すか、または
Ｒ４およびＲ５は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、シクロアルキリデン、ベンゾ縮合シクロアルキリデン、または５または６員(オキサシクロアルキリデン、チアシクロアルキリデンまたはアザシクロアルキリデン)を表し、各々所望により低級アルキルまたはアリール−低級アルキルにより置換されていてもよく、
Ｒ６は、低級アルキル、炭素環または複素環アリール、(炭素環または複素環アリール)−低級アルキル、シクロアルキル、シクロアルキル−低級アルキル、ビアリールまたはビアリール低級アルキルを表し、
Ｒ７は、低級アルキル、(炭素環または複素環アリール)−低級アルキル、シクロアルキル−低級アルキルまたはビアリール−低級アルキルを表すか、または
Ｒ６およびＲ７は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、低級アルキルまたはアリール‐低級アルキルにより置換され得るかまたは飽和または不飽和炭素環５〜７員環に縮合され得る３〜１０員シクロアルキリデン、または各々所望により低級アルキルまたはアリール‐低級アルキルにより置換されていてもよい、５または６員(オキサシクロアルキリデン、チアシクロアルキリデンまたはアザシクロアルキリデン)、または２,２−ノルボニリデンを表し、
Ｘは、−Ｏ−、−Ｓ(Ｏ)ｎ−、−ＮＨＳＯ２−または−ＮＨＣＯ−を表し、
ｎは、０、１または２であり、そして
ＣＯＯＲ２は、カルボキシルまたは医薬上許容されるエステル形態で誘導体化されたカルボキシルを表す］
で示される化合物またはその化合物(ただし、Ｒ３は水素である)から誘導されたジスルフィド誘導体、またはその医薬上許容される塩。
【請求項２】
式
【化２】
2005504011.tif 000058
で示される請求項１記載の化合物またはその化合物(ただし、Ｒ３は水素である)から誘導されたジスルフィド誘導体、またはその医薬上許容される塩。
【請求項３】
ＲおよびＲ５が水素を表し、Ｒ１が低級アルキル、Ｃ５またはＣ６−シクロアルキル、炭素環または複素環アリール、または(炭素環または複素環アリール)‐低級アルキルを表し、ａｌｋが低級アルキレンを表し、Ｘが−Ｏ−または−Ｓ(Ｏ)ｎ(式中、ｎは０または２を表す)を表し、Ｒ３が水素またはアシルを表し、Ｒ４が、水素、所望により置換されていてもよい低級アルキル、オキサシクロアルキル、オキサシクロアルキル−低級アルキルまたは(炭素環または複素環アリール)−低級アルキルを表し、Ｒ５が水素を表すか、またはＲ４およびＲ５が、それらが結合している炭素原子と合わさってＣ５またはＣ６−シクロアルキリデンを表し、Ｒ６およびＲ７が低級アルキルを表すか、またはＲ６およびＲ７が、それらが結合している炭素原子と一緒になって、５または６員シクロアルキリデンを表し、ＣＯＯＲ２がカルボキシルまたは医薬上許容されるエステル形態で誘導体化されたカルボキシルを表す、請求項１記載の化合物、またはその化合物(ただし、Ｒ３は水素である)から誘導されたジスルフィド誘導体、またはその医薬上許容される塩。
【請求項４】
ＲおよびＲ５が水素を表し、Ｒ１が低級アルキル、Ｃ５またはＣ６−シクロアルキル、炭素環または複素環アリール、または(炭素環または複素環アリール)‐低級アルキルを表し、ａｌｋが低級アルキレンを表し、Ｘが−Ｏ−または−Ｓ(Ｏ)ｎ(式中、ｎは０または２を表す)を表し、Ｒ３が水素またはアシルを表し、Ｒ４が、水素、所望により置換されていてもよい低級アルキル、オキサシクロアルキル、オキサシクロアルキル−低級アルキルまたは(炭素環または複素環アリール)−低級アルキルを表し、Ｒ５が水素を表すか、またはＲ４およびＲ５が、それらが結合している炭素原子と合わさってＣ５またはＣ６−シクロアルキリデンを表し、Ｒ６およびＲ７が低級アルキルを表すか、またはＲ６およびＲ７が、それらが結合している炭素原子と一緒になって、５または６員シクロアルキリデンを表し、ＣＯＯＲ２がカルボキシルまたは医薬上許容されるエステル形態で誘導体化されたカルボキシルを表す、請求項２記載の化合物、またはその化合物(ただし、Ｒ３は水素である)から誘導されたジスルフィド誘導体、またはその医薬上許容される塩。
【請求項５】
ＲおよびＲ５が水素を表し、Ｒ１が、炭素環または複素環アリールまたは(炭素環または複素環アリール)‐低級アルキルを表し、Ｒ３が水素または所望により置換されていてもよい低級アルカノイルを表し、Ｒ４が、低級アルキル、シクロアルキル、テトラヒドロピラニルまたはＣ１‐Ｃ４−低級アルコキシ−低級アルキルを表し、Ｒ６およびＲ７が両方ともＣ１‐Ｃ４−アルキルを表し、かつ同一であり、Ｘが−Ｏ−または−Ｓ−を表し、ａｌｋがメチレンを表し、ＣＯＯＲ２が、カルボキシル、低級アルコキシ−カルボニル、(ジ−低級アルキルアミノカルボニル)−低級アルコキシカルボニルまたは(モルホリノカルボニル、ピペリジノカルボニルまたはピロリジノカルボニル)−低級アルコキシカルボニルを表す、請求項１記載の化合物またはその医薬上許容される塩。
【請求項６】
ＲおよびＲ５が水素を表し、Ｒ１が、炭素環または複素環アリールまたは(炭素環または複素環アリール)‐低級アルキルを表し、Ｒ３が水素または所望により置換されていてもよい低級アルカノイルを表し、Ｒ４が、低級アルキル、シクロアルキル、テトラヒドロピラニルまたはＣ１‐Ｃ４−低級アルコキシ−低級アルキルを表し、Ｒ６およびＲ７が両方ともＣ１‐Ｃ４−アルキルを表し、かつ同一であり、Ｘが−Ｏ−または−Ｓ−を表し、ａｌｋがメチレンを表し、ＣＯＯＲ２が、カルボキシル、低級アルコキシ−カルボニル、(ジ−低級アルキルアミノカルボニル)−低級アルコキシカルボニルまたは(モルホリノカルボニル、ピペリジノカルボニルまたはピロリジノカルボニル)−低級アルコキシカルボニルを表す、請求項２記載の化合物またはその医薬上許容される塩。
【請求項７】
ＲおよびＲ５が水素を表し、Ｒ１が、炭素環アリールまたは炭素環アリール‐低級アルキル(ただし、炭素環アリールは、フェニルまたは１個または２個のヒドロキシ、低級アルカノイルオキシ、低級アルキル、低級アルコキシ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシまたはハロにより置換されたフェニルを表す)を表し、Ｒ３が水素または低級アルカノイルを表し、Ｒ４が、低級アルキル、４−テトラヒドロピラニルまたはＣ１‐Ｃ４−低級アルコキシ−Ｃ１‐Ｃ４−低級アルキルを表し、Ｒ６およびＲ７がメチルを表し、Ｘが−Ｏ−を表し、ａｌｋがメチレンまたはエチレンを表し、ＣＯＯＲ２が、カルボキシルまたは低級アルコキシカルボニルを表す、請求項１記載の化合物またはその医薬上許容される塩。
【請求項８】
ＲおよびＲ５が水素を表し、Ｒ１が、炭素環アリールまたは炭素環アリール‐低級アルキル(ただし、炭素環アリールは、フェニルまたは１個または２個のヒドロキシ、低級アルカノイルオキシ、低級アルキル、低級アルコキシ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシまたはハロにより置換されたフェニルを表す)を表し、Ｒ３が水素または低級アルカノイルを表し、Ｒ４が、低級アルキル、４−テトラヒドロピラニルまたはＣ１‐Ｃ４−低級アルコキシ−Ｃ１‐Ｃ４−低級アルキルを表し、Ｒ６およびＲ７がメチルを表し、Ｘが−Ｏ−を表し、ａｌｋがメチレンまたはエチレンを表し、ＣＯＯＲ２が、カルボキシルまたは低級アルコキシカルボニルを表す、請求項２記載の化合物またはその医薬上許容される塩。
【請求項９】
ＲおよびＲ５が水素を表し、Ｒ１が、フェニル、フルオロフェニル、ベンジルまたはフルオロベンジルを表し、Ｒ３が、水素、低級アルカノイルまたは低級アルコキシにより置換された低級アルカノイルを表し、Ｒ４が、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、１−メトキシエチルまたは４−テトラヒドロピラニルを表し、Ｒ６およびＲ７がメチルを表し、Ｘが−Ｏ−を表し、ａｌｋがメチレンを表し、そしてＣＯＯＲ２がカルボキシルまたは低級アルコキシカルボニルを表す、請求項１記載の化合物またはその医薬上許容される塩。
【請求項１０】
ＲおよびＲ５が水素を表し、Ｒ１が、フェニル、フルオロフェニル、ベンジルまたはフルオロベンジルを表し、Ｒ３が、水素、低級アルカノイルまたは低級アルコキシにより置換された低級アルカノイルを表し、Ｒ４が、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、１−メトキシエチルまたは４−テトラヒドロピラニルを表し、Ｒ６およびＲ７がメチルを表し、Ｘが−Ｏ−を表し、ａｌｋがメチレンを表し、そしてＣＯＯＲ２がカルボキシルまたは低級アルコキシカルボニルを表す、請求項２記載の化合物またはその医薬上許容される塩。
【請求項１１】
ＲおよびＲ５が水素を表し、Ｒ１がベンジルを表し、Ｒ３が、水素、アセチルまたはメトキシアセチルを表し、Ｒ４がイソプロピルまたはｔｅｒｔ−ブチルを表し、Ｒ６およびＲ７がメチルを表し、Ｘが−Ｏ−を表し、ａｌｋがメチレンを表し、そしてＣＯＯＲ２が、カルボキシルまたはエトキシカルボニルを表す、請求項１０記載の化合物またはその医薬上許容される塩。
【請求項１２】
哺乳類におけるアンギオテンシン変換酵素および中性エンドペプチダーゼの両方を阻害する方法であって、阻害を必要とする哺乳類に請求項１記載の化合物の有効量を投与することを含む方法。
【請求項１３】
哺乳類における心臓血管疾患の予防または処置方法であって、それを必要とする哺乳類に請求項１記載の化合物の有効量を投与することを含む方法。
【請求項１４】
高血圧、浮腫、塩貯留またはうっ血性心不全の処置に関するものである、請求項１２記載の方法。
【請求項１５】
１種またはそれ以上の医薬上許容される担体と組合わせて請求項１記載の化合物の有効量を含む医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の要約
本発明は、アンギオテンシン変換酵素(ＡＣＥ)および中性エンドペプチダーゼ(ＮＥＰ、ＥＣ３.４.２４.１１)の両方の二重阻害剤として有用である下記新規バソペプチダーゼ阻害剤に関するものである。本発明化合物は、ＡＣＥおよびＮＥＰ阻害に応答性のある状態、特に心臓血管疾患、例えば高血圧、収縮期高血圧、腎不全(浮腫および塩貯留を含む)、肺浮腫、左心室肥大、心不全(うっ血性心不全を含む)およびアテローム性動脈硬化症の処置および／または予防について特に有用である。本発明化合物はまた、哺乳類における高コレステロール血漿レベルを下げるのに有用である。さらに、それらはまた、エンドセリン変換酵素(ＥＣＥ)を阻害し、ＥＣＥ阻害に応答性のある状態の処置および／または予防に有用である。
【０００２】
中性エンドペプチダーゼを阻害することから、本発明化合物はまた、疼痛、うつ病、ある種の精神病状態、および認知疾患の処置に有用であり得る。他の潜在的適応症としては、アンギナ、月経前症候群、メニエール病、高アルドステロン症、高カルシウム尿症、腹水症、緑内障、喘息および胃腸疾患、例えば下痢、過敏性腸症候群および胃酸過多症の処置が含まれる。
【０００３】
ＥＣＥを阻害することから、本発明化合物はまた、エンドセリン従属的状態および疾患、例えば脳虚血(卒中)、くも膜下出血、外傷性脳損傷、脳血管痙攣、動脈肥大、再狭窄、レイノー病、心筋梗塞、肥満、前立腺肥大、片頭痛、真性糖尿病(糖尿病性ネフロパシー)、子かん前症、緑内障、および大動脈または固体臓器移植における移植拒絶、並びに勃起不全の処置および／または予防に有用であり得る。
【０００４】
発明の詳細な記載
本発明は、式(Ｉ)
【化１】
2005504011.tif 000003
［式中、
Ｒは、水素、低級アルキル、炭素環または複素環アリール−低級アルキルまたはシクロアルキル−低級アルキルを表し、
Ｒ１は、低級アルキル、シクロアルキル、炭素環または複素環アリール、またはビアリールを表すか、またはＲ１は、(シクロアルキル、炭素環アリール、複素環アリールまたはビアリール)−低級アルキルを表し、
ａｌｋは、低級アルキレンを表し、
Ｒ３は、水素またはアシルを表し、
Ｒ４は、水素、所望により置換されていてもよい低級アルキル、炭素環または複素環アリール、(炭素環または複素環アリール)−低級アルキル、シクロアルキル、シクロアルキル−低級アルキル、ビアリール、ビアリール−低級アルキル、オキサシクロアルキル、チアシクロアルキル、アザシクロアルキル、または(オキサシクロアルキル、チアシクロアルキルまたはアザシクロアルキル)−低級アルキルを表し、
Ｒ５は、水素または低級アルキルを表すか、または
Ｒ４およびＲ５は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、シクロアルキリデン、ベンゾ縮合シクロアルキリデン、または５または６員(オキサシクロアルキリデン、チアシクロアルキリデンまたはアザシクロアルキリデン)を表し、各々所望により低級アルキルまたはアリール−低級アルキルにより置換されていてもよく、
Ｒ６は、低級アルキル、炭素環または複素環アリール、(炭素環または複素環アリール)−低級アルキル、シクロアルキル、シクロアルキル−低級アルキル、ビアリールまたはビアリール低級アルキルを表し、
Ｒ７は、低級アルキル、(炭素環または複素環アリール)−低級アルキル、シクロアルキル−低級アルキルまたはビアリール−低級アルキルを表すか、または
Ｒ６およびＲ７は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、低級アルキルまたはアリール‐低級アルキルにより置換され得るかまたは飽和または不飽和炭素環５〜７員環に縮合され得る３〜１０員シクロアルキリデン、または各々所望により低級アルキルまたはアリール‐低級アルキルにより置換されていてもよい、５または６員(オキサシクロアルキリデン、チアシクロアルキリデンまたはアザシクロアルキリデン)、または２,２−ノルボニリデンを表し、
Ｘは、−Ｏ−、−Ｓ(Ｏ)ｎ−、−ＮＨＳＯ２−または−ＮＨＣＯ−を表し、
ｎは、０、１または２であり、そして
ＣＯＯＲ２は、カルボキシルまたは医薬上許容されるエステル形態で誘導体化されたカルボキシルを表す］
で示される化合物またはその化合物(ただし、Ｒ３は水素である)から誘導されたジスルフィド誘導体、またはその医薬上許容される塩類に関するものである。
【０００５】
本発明はまた、上記化合物を含む医薬組成物、上記化合物の製造方法、中間体、および処置を必要とする哺乳類に上記化合物を投与することによる、ＡＣＥおよびＮＥＰ阻害に応答性を示す哺乳類における疾患の処置方法に関するものである。
【０００６】
また本発明には、遊離カルボキシル、スルフヒドリルまたはヒドロキシ基を有する本発明化合物のプロドラッグ誘導体も包含され、上記プロドラッグ誘導体は、ソルボリシスにより、または生理学的条件下で遊離カルボキシル、スルフヒドリルおよび／またはヒドロキシ化合物に変換され得るものとする。プロドラッグ誘導体は、例えば、チオール、アルコールまたはフェノールの遊離カルボン酸およびＳ−アシルおよびＯ−アシル誘導体(ここで、アシルは本明細書記載の意味である)のエステル類である。
【０００７】
医薬上許容されるエステル類は、好ましくはプロドラッグエステル誘導体であり、それらはソルボリシスにより、または生理学的条件下で式(Ｉ)の遊離カルボン酸に変換され得る。
【０００８】
医薬上許容されるプロドラッグエステル類は、好ましくは例えば低級アルキルエステル類、アリール低級アルキルエステル類、α−(低級アルカノイルオキシ)−低級アルキルエステル類、例えばピバロイルオキシメチルエステル、およびα−(低級アルコキシカルボニル、モルホリノカルボニル、ピペリジノカルボニル、ピロリジノカルボニルまたはジ低級アルキルアミノカルボニル)−低級アルキルエステル類である。
【０００９】
医薬上許容される塩類は、本発明の酸性化合物、例えばＣＯＯＲ２がカルボキシルを表す場合のものについての医薬上許容される塩基から誘導された塩類である。それらは、例えばアルカリ金属塩類(例、ナトリウム、カリウム塩類)、アルカリ土類金属塩類(例、マグネシウム、カルシウム塩類)、アミン塩類(例、トロメタミン塩類)である。
【００１０】
式(Ｉ)の化合物は、置換基の性質により、２個またはそれ以上の不斉炭素原子を有する。生成したジアステレオマーおよび光学対掌体も本発明に包含される。好ましい立体配置を式(Ｉａ)に示す。
【化２】
2005504011.tif 000004
(式中、置換基−ａｌｋ−Ｘ−Ｒ１およびＲ４をもつ不斉炭素は、典型的にはＳ−立体配置を有する)
【００１１】
好ましいのは、ＲおよびＲ５が水素を表し、Ｒ１が低級アルキル、Ｃ５またはＣ６−シクロアルキル、炭素環または複素環アリール、または(炭素環または複素環アリール)‐低級アルキルを表し、ａｌｋが低級アルキレンを表し、Ｘが−Ｏ−または−Ｓ(Ｏ)ｎ(式中、ｎは０または２を表す)を表し、Ｒ３が水素またはアシルを表し、Ｒ４が、所望により置換されていてもよい低級アルキル、オキサシクロアルキル、オキサシクロアルキル−低級アルキルまたは(炭素環または複素環アリール)−低級アルキルを表し、Ｒ５が水素を表すか、またはＲ４およびＲ５が、それらが結合している炭素原子と合わさってＣ５またはＣ６−シクロアルキリデンを表し、Ｒ６およびＲ７が低級アルキルを表すか、またはＲ６およびＲ７が、それらが結合している炭素原子と一緒になって、５または６員シクロアルキリデンを表し、ＣＯＯＲ２がカルボキシルまたは医薬上許容されるエステル形態で誘導体化されたカルボキシルを表す式(Ｉ)および(Ｉａ)の化合物、上記化合物(ただし、Ｒ３は水素である)から誘導されるジスルフィド誘導体、およびそれらの医薬上許容される塩類である。
【００１２】
さらに好ましいのは、ＲおよびＲ５が水素を表し、Ｒ１が、炭素環または複素環アリールまたは(炭素環または複素環アリール)‐低級アルキルを表し、Ｒ３が水素または所望により置換されていてもよい低級アルカノイルを表し、Ｒ４が、低級アルキル、シクロアルキル、テトラヒドロピラニルまたはＣ１‐Ｃ４−低級アルコキシ−低級アルキルを表し、Ｒ６およびＲ７が両方ともＣ１‐Ｃ４−アルキルを表し、かつ同一であり、Ｘが−Ｏ−または−Ｓ−を表し、ａｌｋがメチレンを表し、ＣＯＯＲ２が、カルボキシル、低級アルコキシカルボニル、(ジ−低級アルキルアミノカルボニル)−低級アルコキシカルボニルまたは(モルホリノカルボニル、ピペリジノカルボニルまたはピロリジノカルボニル)−低級アルコキシカルボニルを表す、式(Ｉ)および(Ｉａ)の化合物、およびそれらの医薬上許容される塩類である。
【００１３】
特に好ましいのは、ＲおよびＲ５が水素を表し、Ｒ１が、炭素環アリールまたは炭素環アリール‐低級アルキル(ただし、炭素環アリールは、フェニルまたは１個または２個のヒドロキシ、低級アルカノイルオキシ、低級アルキル、低級アルコキシ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシまたはハロにより置換されたフェニルを表す)を表し、Ｒ３が、水素、低級アルカノイルまたは低級アルコキシにより置換された低級アルカノイルを表し、Ｒ４が、低級アルキル、４−テトラヒドロピラニルまたはＣ１‐Ｃ４−低級アルコキシ−Ｃ１‐Ｃ４−低級アルキルを表し、Ｒ６およびＲ７がメチルを表し、Ｘが−Ｏ−を表し、ａｌｋがメチレンまたはエチレンを表し、ＣＯＯＲ２が、カルボキシルまたは低級アルコキシカルボニルを表す式(Ｉ)または(Ｉａ)の化合物、およびその医薬上許容される塩類である。その具体例は、Ｒ３が水素または低級アルカノイルを表す場合の化合物に関するものである。
【００１４】
さらに好ましいのは、ＲおよびＲ５が水素を表し、Ｒ１が、フェニル、フルオロフェニル、ベンジルまたはフルオロベンジルを表し、Ｒ３が、水素、低級アルカノイルまたは低級アルコキシにより置換された低級アルカノイルを表し、Ｒ４が、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、１−メトキシエチルまたは４−テトラヒドロピラニルを表し、Ｒ６およびＲ７がメチルを表し、Ｘが−Ｏ−を表し、ａｌｋがメチレンを表し、そしてＣＯＯＲ２が、カルボキシルまたは低級アルコキシカルボニルを表す上記式(Ｉ)または(Ｉａ)の化合物、およびその医薬上許容される塩類である。その具体例は、Ｒ３が水素または低級アルカノイルを表す場合の化合物に関するものである。
【００１５】
特に好ましい具体例は、ＲおよびＲ５が水素を表し、Ｒ１がベンジルを表し、Ｒ３が、水素、アセチルまたはメトキシアセチルを表し、Ｒ４がイソプロピルまたはｔｅｒｔ−ブチルを表し、Ｒ６およびＲ７がメチルを表し、Ｘが−Ｏ−を表し、ａｌｋがメチレンを表し、そしてＣＯＯＲ２がカルボキシルまたはエトキシカルボニルを表す上記式(Ｉ)または(Ｉａ)の化合物、またはその医薬上許容される塩に関するものである。
【００１６】
本明細書で使用されている定義それ自体またはそれらの組合わせは、特記しない場合、本発明の範囲内では以下の意味を有する。
アリールは、単環式または二環式の、炭素環または複素環アリールを表す。
【００１７】
単環式炭素環アリールは、所望により置換されていてもよいフェニルを表し、好ましくは、フェニルまたは１〜３個の置換基により置換されたフェニル(ただし、置換基は、有利には低級アルキル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、アシルオキシ、ハロゲン、シアノ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アミノ、低級アルカノイルアミノ、低級アルキル‐(チオ、スフィニルまたはスルホニル)、低級アルコキシカルボニル、モノ‐またはジ‐低級アルキルカルバモイル、またはモノ‐またはジ‐低級アルキルアミノである)、または低級アルキレンジオキシにより置換されたフェニルである。
【００１８】
二環式炭素環アリールは、１−または２−ナフチルまたは好ましくは低級アルキル、低級アルコキシまたはハロゲンにより置換された１−または２−ナフチルを表す。
【００１９】
単環式複素環アリールは、好ましくは、所望により置換されていてもよいチアゾリル、ピリミジル、トリアゾリル、チエニル、フラニルまたはピリジルを表す。
【００２０】
所望により置換されていてもよいフラニルは、２−または３−フラニルまたは好ましくは低級アルキルにより置換された２−または３−フラニルを表す。
【００２１】
所望により置換されていてもよいピリジルは、２−、３−または４−ピリジルまたは好ましくは低級アルキル、ハロゲンまたはシアノにより置換された２−、３−または４−ピリジルを表す。
【００２２】
所望により置換されていてもよいチエニルは、２−または３−チエニルまたは好ましくは低級アルキルにより置換された２−または３−チエニルを表す。
【００２３】
所望により置換されていてもよいピリミジルは、例えば２−ピリミジルまたは低級アルキルにより置換された２−ピリミジルを表す。
【００２４】
所望により置換されていてもよいチアゾリルは、例えば‐２−チアゾリルまたは低級アルキルにより置換された２−チアゾリルを表す。
【００２５】
所望により置換されていてもよいトリアゾリルは、例えば１,２,４−トリアゾリルまたは好ましくは低級アルキルにより置換された１,２,４−トリアゾリルを表す。
【００２６】
二環式複素環アリールは、好ましくは、所望によりヒドロキシ、低級アルキル、低級アルコキシまたはハロゲンにより置換されていてもよいインドリル、ベンゾチアゾリル、キノリニルまたはイソキノリニル、有利には３−インドリル、２−ベンゾチアゾリルまたは２−または４−キノリニルを表す。
【００２７】
アリール‐低級アルキルにおけるアリールは、好ましくは、フェニルまたは１個または２個の低級アルキル、低級アルコキシ、ヒドロキシ、低級アルカノイルオキシ、ハロゲン、トリフルオロメチル、シアノ、低級アルカノイルアミノまたは低級アルコキシカルボニルにより置換されたフェニル、そして所望により置換されていてもよいナフチルである。
【００２８】
アリール‐低級アルキルは、有利には、所望によりフェニルが１個または２個の低級アルキル、低級アルコキシ、ヒドロキシ、低級アルカノイルオキシ、ハロゲンまたはトリフルオロメチルにより置換されていてもよいベンジルまたは１−または２−フェネチルである。
【００２９】
有機基または化合物に関して本明細書で使用されている「低級」の語は、それぞれ７を含めてそれ以下、好ましくは４を含めてそれ以下、有利には１個または２個の炭素原子を有するものをいう。それらは直鎖または分枝状であり得る。
【００３０】
所望により置換されていてもよい低級アルキルは、低級アルキルまたは例えばハロ、ヒドロキシ、低級アルコキシ、アミノ、(モノ‐またはジ‐低級アルキル)アミノ、アシルアミノ、１−低級アルキル−ピペラジノ、モルホリノ、ピペリジノ、ピロリジノなどにより置換された低級アルキルをいう。
【００３１】
低級アルキレンは、好ましくは１〜４個の炭素原子を有する、例えば低級アルコキシにより置換されていてもよい直鎖または分枝状炭素鎖、例えば−ＣＨ２−、−ＣＨ(ＣＨ３)−、−ＣＨ２ＣＨ２−などをいう。
【００３２】
低級アルキル基は、好ましくは、直鎖または分枝状であり得る１〜４個の炭素原子を含み、例えばエチル、プロピル、ブチルまたは有利にはメチルを表す。
【００３３】
低級アルコキシ基は、好ましくは、直鎖または分枝状であり得る１〜４個の炭素原子を含み、例えばメトキシ、プロポキシ、イソプロポキシまたは有利にはエトキシを表す。
【００３４】
シクロアルキルは、好ましくは５〜７−環炭素を含む飽和環状炭化水素基、好ましくはシクロペンチルまたはシクロヘキシルを表す。
【００３５】
オキサシクロアルキルは、好ましくは５〜７員オキサシクロアルキル、例えばテトラヒドロピラニル、例えば４−テトラヒドロピラニルを表す。
【００３６】
チアシクロアルキルは、好ましくは５〜７員チアシクロアルキル、例えばテトラヒドロチオピラニル、例えば４−テトラヒドロチオピラニルを表す。
【００３７】
アザシクロアルキルは、好ましくは５〜７員アザシクロアルキル、例えばピロリジニルまたはピペリジニルを表し、その場合窒素は低級アルキルまたはアリール低級アルキルにより置換されていてもよい。
【００３８】
シクロアルキル‐低級アルキルの語は、好ましくは(シクロペンチルまたはシクロヘキシル)メチル、１−または２−(シクロペンチルまたはシクロヘキシル)エチル、１−、２−または３−(シクロペンチルまたはシクロヘキシル)プロピル、または１−、２−、３−または４−(シクロペンチルまたはシクロヘキシル)−ブチルを表す。また同様に(オキサシクリル、チアシクロアルキルまたはアザシクロアルキル)−低級アルキルを表す。
【００３９】
低級アルコキシカルボニル基は、好ましくは、アルコキシ部分に１〜４個の炭素原子を含み、例えばメトキシカルボニル、プロポキシカルボニル、イソプロポキシカルボニルまたは有利にはエトキシカルボニルを表す。
【００４０】
シクロアルキリデンは、３〜１０員、好ましくは５または６員であり、結合した２個の基がシクロアルカン環の同じ炭素に結合されているシクロアルカン結合基を表す。
【００４１】
５または６員オキサシクロアルキリデンは、テトラヒドロフランまたはテトラヒドロピラン結合基、すなわちテトラヒドロフラニリデンまたはテトラヒドロピラニリデンを表し、その場合、２個の結合された基は、各環の例えばその３または４位にある同じ炭素原子に結合されている。
【００４２】
５または６員チアシクロアルキリデンは、テトラヒドロチオフェンまたはテトラヒドロチオピラン結合基を表し、その場合、２個の結合された基は、各環の例えばその３または４位にある同じ炭素原子に結合されている。
【００４３】
５または６員アザシクロアルキリデンは、ピロリジンまたはピペリジン結合基を表し、その場合２個の結合された基は、各環の例えばその３または４位にある同じ炭素原子に結合されており、窒素は低級アルキル、例えばメチルにより、またはアリール低級アルキル、例えばベンジルにより置換され得る。
【００４４】
ベンゾ縮合シクロアルキリデンは、例えば１,１−または２,２−テトラリニリデンまたは１,１−または２,２−インダニリデンを表す。
【００４５】
ハロゲン(ハロ)は、好ましくはフルオロまたはクロロを表すが、ブロモまたはヨードでもあり得る。
【００４６】
アシルは、カルボン酸から誘導され、好ましくは所望により置換されていてもよい低級アルカノイル、炭素環アリール‐低級アルカノイル、アロイル、低級アルコキシカルボニルまたはアリール−低級アルコキシカルボニル、有利には所望により置換されていてもよい低級アルカノイル、またはアロイルを表す。
【００４７】
低級アルカノイルは、好ましくはアセチル、プロピオニル、ブチリルまたはピバロイルである。
【００４８】
所望により置換されていてもよい低級アルカノイルは、例えば、低級アルカノイルまたは、例えば低級アルコキシカルボニル、低級アルカノイルオキシ、低級アルカノイルチオ、低級アルコキシ、低級アルキルチオ、ヒドロキシ、ジ‐低級アルキルアミノ、低級アルカノイルアミノ、モルホリノ、ピペリジノ、ピロリジノ、１−低級アルキルピペラジノ、アリールまたはヘテロアリールにより置換された低級アルカノイルを表す。
【００４９】
アロイルは、炭素環または複素環アロイル、好ましくは単環式炭素環または単環式複素環アロイルである。
【００５０】
単環式炭素環アロイルは、好ましくはベンゾイル、または低級アルキル、低級アルコキシ、ハロゲンまたはトリフルオロメチルにより置換されたベンゾイルである。
【００５１】
単環式複素環アロイルは、好ましくはピリジルカルボニルまたはチエニルカルボニルである。
【００５２】
アシルオキシは、好ましくは所望により置換されていてもよい低級アルカノイルオキシ、低級アルコキシカルボニルオキシ、単環式炭素環アロイルオキシまたは単環式複素環アロイルオキシである。
【００５３】
アリール‐低級アルコキシカルボニルは、好ましくは単環式炭素環‐低級アルコキシカルボニル、有利にはベンジルオキシカルボニルである。
【００５４】
ビアリールは、単環式炭素環または単環式複素環アリールにより置換された単炭素環アリールを表し、そして好ましくは、ビフェニリル、有利には所望により一方または両方のベンゼン環が低級アルキル、低級アルコキシ、ハロゲンまたはトリフルオロメチルにより置換されていてもよい４−ビフェニリルを表す。
【００５５】
ビアリール‐低級アルキルは、好ましくは４−ビフェニリル‐低級アルキル、有利には４−ビフェニリルメチルである。
【００５６】
本発明の新規化合物は、アンギオテンシンＩから、昇圧物質アンギオテンシンIIへの変換を阻害するＡＣＥ阻害剤であるため、哺乳類において血圧を低下させる。さらに、本発明化合物は、ＮＥＰの阻害を示すため、心房性ナトリウム利尿因子(ＡＮＦ)の心臓血管性(例、利尿性およびナトリウム排泄増加性)効果を強化する。効果が合わさると、哺乳類での心臓血管疾患、特に、高血圧、心臓の病状、例えばうっ血性心不全、および腎不全の処置に有益である。上記心臓血管疾患の処置における本発明化合物のさらに有益な効果は、ＥＣＥの阻害である。
【００５７】
上記で挙げた特性は、有利には哺乳類、例えばマウス、ラット、イヌ、サル、または摘出臓器、組織およびその調製物を用いたインビトロおよびインビボ試験で立証され得る。上記化合物は、溶液、例えば、好ましくは水溶液の形態でインビトロ適用され得、そしてインビボで経腸的、非経口的、有利には経口的(p.o.)または静脈内(i.v.)経路で、例えば懸濁液としてまたは水溶液中で適用され得る。インビトロ用量は、約１０−６〜モルと１０−９モルの間の濃度範囲であり得る。インビボ用量は、投与経路により、約０.０１と５０ｍｇ／ｋｇの間、有利には約０.１と２５ｍｇ／ｋｇの間の範囲であり得る。
【００５８】
インビトロ試験は、本発明の遊離カルボン酸にとって最も適切である。試験化合物をジメチルスルホキシド、エタノールまたは０.２５Ｍ重炭酸ナトリウム溶液に溶かし、溶液を緩衝液で所望の濃度に希釈する。
【００５９】
本発明化合物によるＡＣＥのインビトロ阻害は、Biochem.Pharmacol.、第２０巻、１６３７頁(１９７１)で与えられた方法と同様にして立証され得る。ＡＣＥ検定用緩衝液は、３００ｍＭのＮａＣｌ、１００ｍＭのＫＨ２ＰＯ４(ｐＨ８.３)である。１５０μＬの容量で酵素および薬剤を含む管に１００μＬのヒプリル−ヒスチジル−ロイシン(２ｍｇ／ｍＬ)を加えることにより反応を開始させ、管を３７℃で３０分間インキュベーションする。０.６ＮのＮａＯＨ０.７５ｍＬを加えることにより、反応を終結させる。新たに調製したＯ−フタルデヒド溶液(メタノール中２ｍｇ／ｍＬ)１００μＬを管に加え、内容物を混合し、室温で放置する。１０分後、６ＮのＨＣｌ、１００μＬを加える。管を遠心分離し、上清光学密度を３６０ｎＭで読み取る。結果を薬剤濃度に対してプロットすることにより、ＩＣ５０、すなわち薬剤不含有対照試料の半活性を与える薬剤濃度を測定する。
【００６０】
典型的には、本発明化合物は、ＡＣＥ阻害について約０.１〜５０ｎＭの範囲でＩＣ５０を示す。
【００６１】
本発明の実例となる、実施例６(ａ)の化合物は、ＡＣＥインビトロ検定法において約２
０ｎＭのＩＣ５０を示す。
【００６２】
ＡＣＥの阻害は、正常血圧ラットにおいてアンギオテンシンＩ誘導昇圧応答の阻害を測定することにより、経口または静脈内投与についてインビボで立証され得る。
【００６３】
意識のある雄の正常血圧ラットにより、静脈内投与された化合物についてのインビボ試験を実施する。アンギオテンシンＩの静脈内投与およびこの発明の化合物の静脈内または経口投与時に直接血圧測定を行うため、大腿動脈および大腿静脈にそれぞれカニューレを挿入する。基底血圧を安定化させた後、１５分間隔で、３００ｎｇ／ｋｇ(i.v.)のアンギオテンシンＩの３または４攻撃に対する昇圧応答を得る。上記昇圧応答を、通常再び１５、３０、６０および９０分目に、次いで試験すべき化合物の静脈内または経口投与後６時間まで１時間毎に得、初回応答と比べる。昇圧応答の減少が観察されたということは、ＡＣＥ阻害の指標となる。
【００６４】
本発明の実例となる、実施例６(ａ)の化合物は、１０ｍｇ／ｋｇの静脈内用量で３時間アンギオテンシンＩ誘導昇圧応答を阻害する。同様に、実施例１(ａ)の化合物は、１１.８ｍｇ／ｋｇの経口用量で６時間アンギオテンシンＩ誘導昇圧応答を阻害する。
【００６５】
ＮＥＰ(ＥＣ３.４.２４.１１)のインビトロ阻害は、以下の要領で測定され得る：
OrlowskiおよびWilk(１９８１)の修正手順を用いた基質グルタリル−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−２−ナフチルアミド(ＧＡＡＰ)の加水分解により、ＮＥＰ３.４.２４.１１活性を測定する。インキュベーション混合物(総量１２５μＬ)は、４.２μＬのタンパク質(Maeda et al.、１９８３の方法により製造されたラット腎皮質膜)、２５℃の５０ｍＭのトリス緩衝液、ｐＨ７.４、５００μＭ基質(最終濃度)、およびロイシンアミノペプチダーゼＭ(２.５μｇ)を含む。混合物を２５℃で１０分間インキュベーションし、１００μＬのファーストガーネット(１Ｍ酢酸ナトリウム、ｐＨ４.２中１０％トウィーン２０の２５０μｇファーストガーネット／ｍＬ)を加える。酵素活性を５４０ｎｍでの分光測光法により測定する。１単位のＮＥＰ２４.１１活性を、ｐＨ７.４、２５℃で１分当たりに放出される１ｎｍｏｌの２−ナフチルアミンとして定義する。ＩＣ５０、すなわち２−ナフチルアミン放出の５０％阻害に必要とされる試験化合物の濃度を測定する。
【００６６】
ＮＥＰ活性はまた基質としてＡＮＦを用いることにより測定され得る。３分−逆相ＨＰＬＣ分離を用いてラット‐ＡＮＦ(ｒ−ＡＮＦ)の消失を測定することにより、ＡＮＦ分解活性を測定する。５０ｍＭのトリスＨＣｌ緩衝液、ｐＨ７.４中の酵素のアリコートを、２分間３７℃でプレインキュベーションし、総量５０μＬ中の４ｎｍｏｌのｒ−ＡＮＦを加えることにより、反応を開始させる。３０μＬの０.２７％トリフルオロ酢酸(ＴＦＡ)を加えることにより、反応を４分後に終結させる。１単位の活性を、ｐＨ７.４、３７℃で１分間当たりの１ｎｍｏｌのｒ−ＡＮＦの加水分解として定義する。ＩＣ５０、すなわちＡＮＦの加水分解の５０％阻害に必要とされる試験化合物の濃度を測定する。
【００６７】
典型的には、本発明化合物は、ＮＥＰ阻害について約０.１〜５０ｎＭの範囲でＩＣ５０を示す。
【００６８】
本発明の実例となる、実施例６(ａ)の化合物は、ＧＡＡＰインビトロ検定法において約５ｎＭのＩＣ５０を示す。
【００６９】
ラット血漿ＡＮＦ濃度に対する本発明化合物の効果は、以下の要領で測定され得る：
雄スプラーグ‐ドーリーラット(２７５〜３９０ｇ)にケタミン(１５０ｍｇ／ｋｇ)／アセプロマジン(１０％)で麻酔をかけ、大腿動脈および静脈にカテーテルを挿入して、それぞれ血液試料を得、ＡＮＦを注入する。ラットをスイベルシステムでつなぎ、２４時間回復させた後、意識のある非抑制状態で試験する。
【００７０】
この検定法では、血漿ＡＮＦレベルをＮＥＰ阻害の存在および非存在下で測定する。試験当日、全５時間の実験の間、全ラットに４５０ｎｇ／ｋｇ／分でＡＮＦを連続注入する。注入開始の６０分後、基線ＡＮＦ測定用血液試料を得(０時点)、次いでラットを、試験化合物または賦形剤で処理した群に無作為に分ける。追加血液試料を、試験化合物投与の３０、６０、１２０、１８０および２４０分後に採取する。
【００７１】
血漿ＡＮＦ濃度を特異的ラジオイムノアッセイにより測定する。５０ｍＭのトリス(ｐＨ６.８)、１５４ｍＭのＮａＣｌ、０.３％ウシ血清アルブミン、０.０１％ＥＤＴＡを含む緩衝液で、血漿を希釈(×１２.５、×２５および×５０)する。１００マイクロリットルの標準液[ｒＡＮＦ(９９−１２６)]または試料を、１００μＬのウサギ抗ｒＡＮＦ血清に加え、４℃で１６時間インキュベーションする。次いで、１００００ｃｐｍの[１２５Ｉ]ｒＡＮＦを反応混合物に加え、４℃で１６時間インキュベーションする。次いで、１００００ｃｐｍの[１２５Ｉ]ｒＡＮＦを反応混合物に加え、４℃でさらに２４時間インキュベーションする。常磁性粒子にカップリングさせたヤギ抗ウサギＩｇＧ血清を反応混合物に加え、混合物を誘引性磁気ラックに暴露することにより、結合した[１２５Ｉ]ｒＡＮＦを沈降させる。上清を傾瀉し、ペレットをガンマ計数管で計数する。測定は全てデュプリケイトで実施する。血漿ＡＮＦレベルを、ＡＮＦのみを投与(４５０ｎｇ／ｋｇ／分、静脈内)した賦形剤処理動物で測定されたレベルのパーセントとして表す。
【００７２】
本発明の実例となる、実施例１(ａ)の化合物は、１１.８ｍｇ／ｋｇの経口用量で約７０％血漿ＡＮＦレベルを増加させる。
【００７３】
抗高血圧活性は、例えば自然発症高血圧ラット(ＳＨＲ)およびＤＯＣＡ−塩高血圧ラットにおいて、それぞれ例えばBazil et al.、J.Cardiovasc.Pharmacol.、第２２巻、８９７−９０５頁(１９９３)およびTrapani et al.、J.Cardiovasc.Pharmacol.、第１４巻、４１９−４２４頁にしたがって測定され得る。
【００７４】
本発明の実例となる、実施例１(ａ)の化合物は、１１.８ｍｇ／ｋｇの１日１回経口投与で意識のあるＳＨＲにおける平均動脈圧を低下させる。
【００７５】
抗高血圧効果は、以下の要領にしたがってデスオキシ‐コルチコステロン酢酸(ＤＯＣＡ)塩高血圧ラットで測定され得る。
【００７６】
ＤＯＣＡ塩高血圧ラット(２８０−３８０ｇ)を標準方法により製造する。ラットに片側腎摘出を施し、１週間後１００ｍｇ／ｋｇのＤＯＣＡを含むシラスティックペレットを内植する。持続的高血圧が確立されるまで、ラットを３〜５週間１％のＮａＣｌ／０.２％ＫＣｌ飲用水で維持する。抗高血圧活性をこの時点で評価する。
【００７７】
実験２日前、ラットにメトキシフルランで麻酔をかけ、大腿動脈にカテーテルを挿入して動脈圧を測定する。４８時間後、基線動脈圧および心拍数を１時間記録する。次いで、試験化合物または賦形剤を投与し、同じ心臓血管パラメーターをさらに５時間モニターする。
【００７８】
利尿(塩排泄)活性は、標準利尿スクリーンで、例えば“New Anti-hypertensive Drugs”、スペクトラム・パブリケーションズ、３０７−３２１頁の記載にしたがって、またはラットにおけるＡＮＦ誘導ナトリウム排泄増加および利尿作用の強化を測定することにより測定され得る。
【００７９】
ＡＮＦのナトリウム排泄増加作用の強化は、以下の要領で測定され得る：
雄スプラーグ‐ドーリーラット(２８０−３６０ｇ)にイナクチン(１００ｍｇ／ｋｇ腹腔内)で麻酔をかけ、大腿動脈、大腿静脈および膀胱にカテーテルを挿入して、それぞれ動脈圧を測定し、ＡＮＦを投与し、尿を採取する。規定食塩水(３３μＬ／分)の連続注入を、実験中終始維持することにより、利尿およびナトリウム排泄を促進する。実験プロトコルは、初回１５分採集期間(前コントロール(規制)とも称す)、次いで３回の追加採集期間により構成される。前コントロール期間完了の直後、試験化合物または賦形剤を投与し、次の４５分間は何もしない。次いで、第二採集期間(コントロールと称す、１５分)における血圧および腎臓測定値を得る。この期間の終結時、ＡＮＦを全動物に投与し(１μｇ／ｋｇ静脈内、ボーラス)、２連続の１５分採集期間中に動脈圧および腎臓パラメーターを測定する。平均動脈圧、尿流量および尿中ナトリウム排泄を全採集期間について測定する。Gouldのｐ５０圧力変換器により血圧を測定し、尿流量を重量測定法により測定し、ナトリウム濃度を炎光光度測定法により測定し、尿流量および尿ナトリウム濃度の積として、尿中ナトリウム排泄を計算する。
【００８０】
ＥＣＥのインビトロ阻害は、以下の要領で測定され得る：
ＤＥ５２アニオン交換カラムクロマトグラフィーによりブタ一次大動脈内皮細胞からＥＣＥを部分精製し、その活性を、Anal.Biochem.、第２１２巻、４３４−４３６頁(１９９３)で報告されたラジオイムノアッセイ(ＲＩＡ)により定量する。別法として、天然酵素は、例えばCell、第７８巻、４７３−４８５頁(１９９４)に記載された、ＥＣＥの組換え形態により置き換えられ得る。ヒトＥＣＥ−１は、幾つかのグループ(Schmidt et al. FEBS Letters、３５６巻、２３８−２４３頁(１９９４)；Kaw et al.、エンドセリンに関する第４回国際会議；４月２３〜２５日、ロンドン(イギリス国)(１９９５)Ｃ６；Valdenaire et al.、J.Biol.Chem.、第２７０巻、２９７９４−２９７９８頁(１９９５)；Shimada et al.、Biochem.Biophys.Res.Commun.、第２０７巻、８０７−８１２頁(１９９５))により報告されている。ＥＣＥ阻害を、ＲＩＡによって、Biochem.Mol.Biol.Int.、第３１巻、第５号、８６１−８６７頁(１９９３)に報告された要領で測定することにより、ビッグＥＴ−１から形成されたＥＴ−１が測定され得る。
【００８１】
別法として、組換え体ヒトＥＣＥ−１(ｒｈＥＣＥ−１)は以下の要領で使用され得る：
ｒｈＥＣＥ−１(Kaw et al.、エンドセリンに関する第４回国際会議；４月２３〜２５日、ロンドン(イギリス国)(１９９５)Ｃ６)を発現するチャイニーズハムスター卵巣細胞を、１０％胎児ウシ血清および１×抗生物質‐抗真菌薬を含むＤＭＥＭ／Ｆ１２培地で培養する。細胞を削り取ることにより採取し、遠心分離により沈降させ、細胞１ｍＬにつき緩衝液２ｍＬの割合で、５ｍＭのＭｇＣｌ２、１μＭのペプスタチンＡ、１００μＭのロイペプチン、１ｍＭのＰＭＳＦ、および２０ｍＭのトリス(ｐＨ７.０)を含む緩衝液中、４℃でホモジネートする。細胞屑を短い遠心分離により除去し、上清を再び３０分間１０００００×ｇの遠心分離にかける。生じたペレットを、２００ｍＭのＮａＣｌおよび５０ｍＭのＴｅｓ(ｐＨ７.０)を含む緩衝液に約１５ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度で再懸濁し、−８０℃でアリコートに分けて貯蔵する。
【００８２】
ＥＣＥ−１活性に対する阻害剤の効果を評価するため、１０μｇのタンパク質を、１０μＬの容量における５０ｍＭのＴＥＳ、ｐＨ７.０、および０.００５％のトリトンＸ−１００中、室温で２０分間、所望の濃度で化合物とプレインキュベーションする。次いで、ヒトビッグＥＴ−１(５μＬ)を加えて０.２μＭの最終濃度にし、反応混合物を３７℃で２時間さらにインキュベーションする。リン酸緩衝食塩水に０.１％のトリトンＸ−１００、０.２％のウシ血清アルブミン、および０.０２％のＮａＮ３を含む５００μＬのＲＩＡ緩衝液を加えることにより、反応を停止させる。
【００８３】
上記酵素検定法から得た希釈試料(２００μＬ)を、一晩４℃で、[125Ｉ]ＥＴ−１(１００００ｃｐｍ／管)およびＥＴ−1のカルボキシル末端トリプトファン特異的に認識する１：２００００倍希釈ウサギ抗体、各々２５μＬとインキュベーションする。次いで、磁気ビーズにカップリングさせたヤギ抗ウサギ抗体(７０μｇ)を各管に加え、反応混合物をさらに室温で３０分間インキュベーションする。磁気ラックを用いてビーズを沈降させる。上清を傾瀉し、ペレットの放射能をガンマ計数管で計数する。合計および非特異的結合を非放射性ＥＴ−１および抗ＥＴ抗体の非存在下でそれぞれ測定する。これらの条件下、ＥＴ−１およびビッグＥＴ−１は、抗体に結合している[125Ｉ]ＥＴ−１をそれぞれ２１±２および２６００００±６６０００ｆｍｏｌ(平均±ＳＥＭ、ｎ＝３〜５)のＩＣ５０値で置き換える。
【００８４】
阻害剤のＩＣ５０値を測定するため、各阻害剤の濃度応答曲線を決定する。ＡＬＬＦＩＴプログラムのＩＢＭ互換機バージョンを用いて、一サイトモデルにデータをフィットさせる。
【００８５】
ＥＣＥ阻害はまた、下記要領で、麻酔をかけたかまたは意識のあるラットにおけるビッグＥＴ−１誘導昇圧応答の阻害を測定することによりインビボで測定され得る。ビッグＥＴ−１攻撃から生じる昇圧応答に対する阻害剤の効果は、Biochem.Mol.Biol.Int.、第３１巻、第５号、８６１−８６７頁(１９９３)に報告された通りスプラーグ‐ドーリーラットにおいて測定される。結果を、賦形剤の場合と比べたビッグＥＴ−１誘導昇圧応答の阻害パーセントとして表す。
【００８６】
雄スプラーグ‐ドーリーラットにイナクチン(１００ｍｇ／ｋｇ腹腔内)で麻酔をかけ、大腿動脈および静脈にカテーテルを挿入して、平均動脈圧(ＭＡＰ)を記録し、それぞれ化合物を投与する。気管開口術を行い、気管にカニューレを挿入して、気道開通性を確保する。動物の体温を電気毛布により３７±１℃に維持する。術後、ＭＡＰを安定化させた後、クロリソンダミン(３ｍｇ／ｋｇ静脈内)で自律神経の神経伝達を中断させる。次いで、ラットを試験化合物(１０ｍｇ／ｋｇ静脈内)または賦形剤で処理し、１５および９０分後ビッグＥＴ−１(１ｎｍｏｌ／ｋｇ静脈内)で攻撃する。一般的に、試験化合物または賦形剤で処理した動物においてビッグＥＴ−１によりもたらされたＭＡＰの最大増加としてデータを記録する。
【００８７】
雄スプラーグ‐ドーリーラットにメトヘキシタールナトリウム(７５ｍｇ／ｋｇ腹腔内)で麻酔をかけ、大腿動脈および静脈にカテーテルを挿入して、ＭＡＰを測定し、それぞれ薬剤を投与する。意識を取り戻した後、ラットが自由に動き回れるようにするスイベルシステムにカテーテルを通す。ラットを２４時間この手順から回復させた後、試験を開始する。翌日、ＭＡＰを大腿動脈カテーテルから記録し、試験化合物または賦形剤を大腿静脈から投与する。動物を投与後様々な時点で１ｎｍｏｌ／ｋｇ(静脈内)のビッグＥＴ−１により攻撃する。用量および規制法によって異なる、十分な洗浄期間後、動物は、別の用量の試験化合物または賦形剤で再試験され得る。一般的に、賦形剤の場合と比べて試験化合物処理動物において２分間隔でビッグＥＴ−１によりもたらされたＭＡＰの変化としてデータを記録する。
【００８８】
ＥＣＥ阻害はまた、例えばBiochem.Biophys.Res.Commun.、第２０４巻、４０７−４１２頁(１９９４)に報告されている通り、意識のあるＳＨＲにおいてビッグＥＴ−１誘導昇圧応答の阻害を測定することによりインビボで測定され得る。
【００８９】
皮下内植した浸透圧ミニポンプを介して、雄ＳＨＲ(１６〜１８週令)に試験化合物または賦形剤(１ＭのＮａＨＣＯ３)を投与する。５日目、大腿動脈および静脈カテーテルを麻酔下のラットに挿入して、それぞれＭＡＰを測定し、試験化合物を投与する。４８時間回復期間後、圧力変換器に連結した動脈カテーテルを通してＭＡＰを記録する(７日目)。血圧および心拍数を３０分間安定させた後、クロリソンダミン(１０ｍｇ／ｋｇ静脈内)を用いて神経節遮断を実施する。約１５分後、ボーラス用量のビッグＥＴ−１(０.２５ｎｍｏｌ／ｋｇ静脈内)を、賦形剤および試験化合物処理ラットの両方に投与する。次いで、ビッグＥＴ−１に対する血圧応答の変化を、２群のラット間で比較する。
【００９０】
脳血管痙攣の阻害は、ウサギにおける基部脳動脈の実験的に誘導した収縮の阻害を測定することにより立証される(Caner et al.、J.Neurosurg.、第８５巻、９１７−９２２頁(１９９６))。
【００９１】
本発明化合物の望ましくない免疫刺激潜在性の程度または欠如は、Toxicology Letters、１１２／１１３巻、４５３−４５９頁(２０００)に記載されたネズミ膝窩リンパ節検定法により測定され得る。
【００９２】
本発明化合物は、例えば、
ａ)式(II)
【化３】
2005504011.tif 000005
(式中、記号ａｌｋ、Ｘ、Ｒ、Ｒ１、Ｒ６およびＲ７は、前記の意味を有し、ＣＯＯＲ２はエステル化カルボキシルを表す)
の化合物を、式(III)
【化４】
2005504011.tif 000006
のカルボン酸またはその反応性誘導体(式中、Ｒ４およびＲ５は前記の意味を有し、Ｒ３'は水素または不安定Ｓ−保護基、例えばアシル、ｔ−ブチルまたは所望により置換されていてもよいベンジルを表す)と縮合するか、または
ｂ)式(IV)
【化５】
2005504011.tif 000007
またはその反応性誘導体(式中、記号Ｒ３'、Ｒ４−Ｒ５およびＲ６−Ｒ７は前記の意味を有する)を、式(Ｖ)
【化６】
2005504011.tif 000008
(式中、記号ａｌｋ、Ｘ、ＲおよびＲ１は前記の意味を有し、ＣＯＯＲ２はエステル化カルボキシルを表す)
のアミノ酸エステルと縮合するか、または
ｃ)式(VI)
【化７】
2005504011.tif 000009
(式中、記号Ｒ、Ｒ１、ＣＯＯＲ２、Ｒ４−Ｒ７、ａｌｋおよびＸは、前記の意味を有し、Ｙは、脱離基として反応性エステル化ヒドロキシル基(例、クロロまたはブロモ)を表す)
の化合物を、塩基性条件下、式
【化８】
2005504011.tif 000010
の化合物またはその塩(式中、Ｒ３'は不安定Ｓ−保護基、例えばアシル、ｔ−ブチルまたは所望により置換されていてもよいベンジルを表す)と縮合し、そして得られた生成物を式(Ｉ)(ただし、Ｒ３は水素である)の化合物に変換することにより製造され得、そして、上記方法において、干渉性(interfering)反応基(複数も可)を一時的に保護している場合、上記保護基(複数も可)を除去し、次いで生じた本発明化合物を単離し、そして所望ならば、生じた本発明化合物を別の本発明化合物に変換し、および／または所望ならば、遊離カルボン酸官能基を医薬上許容されるエステル誘導体に変換するか、または得られたエステルを遊離酸または別のエステル誘導体に変換し、および／または所望ならば、得られた遊離化合物を塩に、または得られた塩を遊離化合物または別の塩に変換し、および／または所望ならば、異性体またはラセミ体の混合物を分離し、および／または所望ならば、得られたラセミ体を光学対掌体に分割する。
【００９３】
本明細書記載の方法で本発明化合物に変換される出発化合物および中間体において、存在する官能基、例えばチオール、カルボキシル、アミノおよびヒドロキシ基は、所望により調製的有機化学では一般的である慣用的保護基によって保護されていてもよい。保護チオール、カルボキシル、アミノおよびヒドロキシ基は、緩やかな条件下、他の望ましくない副反応が行なわれることなく遊離チオール、カルボキシル、アミノおよびヒドロキシ基に変換され得るものである。
【００９４】
保護基を導入する目的は、所望の化学変換を実施させるに使用される条件下で反応成分との望ましくない反応から官能基を保護することである。特定反応についての保護基の必要性および選択は、当業者には公知であり、保護される官能基(チオール、カルボキシル、アミノ基など)の性質、置換基がその一部である分子の構造および安定性、および反応条件により異なる。
【００９５】
これらの条件を満たす公知保護基およびそれらの導入および除去は、例えば、J.F.W.McOmie、“Protective Groups in Organic Chemistry”、プレナム・プレス、ロンドン、ニューヨーク(１９７３)、T.W.GreeneおよびP.G.M.Wuts、“Protective Groups in Organic Synthesis”、ワイリー、ニューヨーク、第３版(１９９９)、および同じく“The Peptides”、第１巻、SchroederおよびLuebke、アカデミック・プレス、ロンドン、ニューヨーク(１９６５)に記載されている。
【００９６】
式(II)のアミンと式(III)の酸またはその官能性反応性誘導体との縮合を含む工程(ａ)による本発明化合物の製造は、ペプチド合成についてよく知られた方法により実施される。
【００９７】
式(II)のアミノエステルと式(III)の遊離カルボン酸の工程(ａ)による縮合は、有利には、縮合剤、例えばジシクロヘキシルカルボジイミドまたはＮ−(３−ジメチルアミノプロピル)−Ｎ’−エチルカルボジイミドおよびヒドロキシベンゾトリアゾール、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール、クロロジメトキシトリアジン、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス(ジメチルアミノ)ホスホニウムヘキサフルオロリン酸(ＢＯＰ試薬)、またはＯ−(７−アザベンゾトリアゾール−１−イル)−Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸(ＨＡＴＵ)、およびトリエチルアミンまたはＮ−メチルモルホリンの存在下、不活性極性溶媒、例えばジメチルホルムアミドまたはメチレンクロリド中、好ましくは室温で実施される。
【００９８】
式(II)のアミノエステルと式(III)で示される酸の反応性官能性誘導体の酸ハライド形態、有利には酸塩化物、または混合無水物形態との縮合は、不活性溶媒、例えばトルエンまたはメチレンクロリド中、有利には塩基、例えば無機塩基、例えば炭酸カリウムまたは有機塩基、例えばトリエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリンまたはピリジンの存在下、好ましくは室温で実施される。
【００９９】
式(III)で示されるカルボン酸の反応性官能性誘導体は、好ましくは酸ハライド(例、酸塩化物)および混合無水物、例えばピバロイルまたはイソブチルオキシカルボニル無水物、または活性化エステル、例えばベンゾトリアゾール、７−アザベンゾトリアゾールまたはヘキサフルオロフェニルエステルである。
【０１００】
式(II)の出発物質は、本明細書記載の方法にしたがって製造され、実施例で説明され得る。
【０１０１】
式(II)の出発物質の製造は、式(VIII)
【化９】
2005504011.tif 000011
[式中、ａｌｋ、Ｘ、ＲおよびＲ１は前記の意味を有し、ＣＯＯＲ２はエステル化カルボキシル(例、Ｒ２は低級アルキルまたはベンジルである場合)を表す]のエステルの、式(IX)
【化１０】
2005504011.tif 000012
(式中、Ｒ６およびＲ７は前記の意味を有し、Ｒ８は不安定アミノ保護基、例えばｔ−ブトキシカルボニルである)
で示される適切なＮ−保護アミノ酸(または反応性官能性誘導体)によるアシル化により、式(II)で示される対応するＮ−保護化合物を生成させる工程を含む。
【０１０２】
式(VIII)の化合物と式(IX)の化合物との縮合は、ペプチド合成でよく知られている方法により、例えば式(II)の化合物と式(III)の化合物との縮合についての上記要領にしたがって実施される。Ｎ−保護基は当業界で公知の方法にしたがって除去され、例えばｔ−ブトキシカルボニルは、無水酸、例えばトリフルオロ酢酸またはＨＣｌにより除去される。
【０１０３】
それぞれ式(VIII)および(IX)で示される化合物の出発アミノエステルおよび酸は、当業界では公知であるか、または新規ならば、当業界で公知の方法、例えば本明細書で説明されている方法にしたがって製造され得る。式(VIII)のアミノ酸エステルは、好ましくはＳ−鏡像体である。
【０１０４】
式(III)の出発物質は公知であるか、または新規ならば、慣用的方法にしたがって製造され得る。出発物質は、例えば対応するラセミ体または光学活性αアミノ酸から、それをα−ブロモ誘導体に変換した後、塩基性条件下、式(VII)の適切なチオール誘導体を用いて立体配置の逆位によりそれを置換することにより、例えば１９９３年１月２７日公開の欧州特許出願第５２４５５３号に説明された方法で製造される。得られた最終生成物のＳ−脱ベンジル化は、例えばエタノール中のラネーニッケルによる還元的開裂により実施される。Ｓ−脱アシル化は、例えば、希水酸化ナトリウム水溶液での塩基触媒加水分解により実施される。式(III)の環状出発物質は、強塩基、例えばリチウムジエチルアミドの存在下、環状カルボン酸(例、シクロペンタンカルボン酸)を硫黄で処理することにより製造され得る。
【０１０５】
式(IV)の酸と式(Ｖ)のアミノ酸エステルとの縮合を含む工程(ｂ)による本発明化合物の製造は、工程(ａ)と同様の要領で実施される。同様に、式(IV)の出発物質は、上記と類似した条件下、式(III)の酸と式(IX)(ただし、Ｒ８は現時点では水素である)のｇｅｍジ置換アミノ酸に対応するエステルとを縮合した後、カルボキシル保護基を除去することにより製造される。
【０１０６】
式(VI)の化合物における脱離基Ｙをチオール誘導体Ｒ３'−ＳＨによりその塩として置換する工程(ｃ)による本発明化合物の製造は、当業界で公知の方法にしたがって実施される。
【０１０７】
Ｙにより表される反応性エステル化ヒドロキシル基は、強無機または有機酸によりエステル化されたヒドロキシル基である。対応するＹ基は、特にハロ、例えばクロロ、ブロモまたはヨード、またはスルホニルオキシ基、例えば低級アルキル‐またはアリールするホニルオキシ基、例えば(メタン‐、エタン‐、ベンゼン‐またはトルエン‐)スルホニルオキシ基、またはトリフルオロメチルするホニルオキシ基である。
【０１０８】
置換は、不活性溶媒、例えばジメチルホルムアミドまたはメチレンクロリド中、塩基、例えば炭酸カリウム、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリンなどの存在下、室温または高温でで実施される。Ｒ３'−ＳＨの塩(例、チオ酢酸カリウム)を用いると、反応は、不活性溶媒、例えばテトラヒドロフランまたはジメチルホルムアミド中、塩基の非存在下で実施される。
【０１０９】
同様に、式(VI)の出発物質は、工程(ａ)について記載した条件下、式(II)のジペプチド誘導体を式
【化１１】
2005504011.tif 000013
(式中、Ｒ４およびＲ５およびＹは前記の意味を有する)
の酸と反応させることにより製造され得る。
【０１１０】
式(Ｘ)(ただし、Ｙはハロである)の化合物、例えばα‐ブロモカルボン酸は公知であり、例えば１９９９年１１月４日公開の国際出願ＷＯ９９／５５７２６に記載された方法で製造される。
【０１１１】
側鎖ａｌｋ−Ｘ−Ｒ１を有する本発明化合物および中間体、例えば式(II)、(Ｖ)および(VI)で示されるものは、本明細書で説明されている当業界で公知の方法にしたがってａｌｋ−Ｘ'(ただし、Ｘ'はアミノ、ヒドロキシ、チオールまたは適切な脱離基を表す)側鎖を有する対応する化合物から製造される。例えば、式(Ｖ)の酸およびエステルは、セリン、ホモセリン、トレオニン、システインなどから出発して好ましくは光学活性形態で得られる。
【０１１２】
ある種の本発明化合物および中間体は、当業界でよく知られている一般的反応にしたがって互いに変換され得る。
【０１１３】
遊離メルカプタンは、好ましくは不活性溶媒、例えばアセトニトリルまたはメチレンクロリド中、塩基、例えばトリエチルアミンの存在下、カルボン酸の反応性誘導体(式(Ｉ)においてＲ３がアシルである場合に対応する)、例えば酸無水物または酸塩化物との反応によりＳ−アシル誘導体に変換され得る。
【０１１４】
遊離アルコールおよびフェノールは、例えば塩基、例えばトリエチルアミンの存在下、対応する酸塩化物との反応により、対応するアシル誘導体に変換され得る。
【０１１５】
Ｒ３が水素を表す場合の遊離メルカプタンは、例えば空気酸化または弱い酸化剤、例えばヨウ素のアルコール性溶液の使用により、対応するジスルフィドに酸化され得る。逆に、ジスルフィドは、例えば還元剤、例えば水素化ホウ素ナトリウム、亜鉛および酢酸またはトリブチルホスフィンにより、対応するメルカプタンに還元され得る。
【０１１６】
カルボン酸エステルは、当業界で公知の方法にしたがって、カルボン酸から、例えば、塩基の存在下Ｒ２−ＯＨに対応するハライドと、または酸触媒の存在下過剰のアルコールとの縮合により製造され得る。
【０１１７】
カルボン酸エステルおよびＳ−アシル誘導体は、例えばアルカリ、例えばアルカリ金属炭酸塩または水酸化物の水溶液により加水分解され得る。Ｓ−アシルおよびエステル基は、本明細書で説明されている方法で選択的に除去され得る。
【０１１８】
好ましくは、そして可能な場合は常に、式(Ｉａ)で示される本発明の好ましい異性体は、純粋な鏡像体から製造される。
【０１１９】
立体異性体(例、ジアステレオマー)の混合物が得られる場合、これらは公知手順、例えば分画結晶化およびクロマトグラフィー(例、薄層、カラム、フラッシュクロマトグラフィー)により分離され得る。ラセミ遊離酸は、ｄ−またはｌ−(α−メチルベンジルアミン、シンコニジン、シンコニン、キニン、キニジン、デヒドロアビエチルアミン、ブルシンまたはストリキニーネ)塩類などの分画結晶化により光学対掌体に分割され得る。ラセミ生成物は、ジアステレオマーではない場合、まず光学活性試薬(例えば、エステルを形成させる光学活性アルコール)によりジアステレオマーに変換され得、次いで上記要領で分離され、そして例えば個々の鏡像体に加水分解され得る。ラセミ生成物はまた、キラルクロマトグラフィー、例えばキラル吸収剤を用いる高速液体クロマトグラフィーにより、また例えばアルカラーゼでのエステルの酵素的分割により分割され得る。
【０１２０】
上述の反応は、標準的方法にしたがって、希釈剤、好ましくは例えば試薬に対して不活性であり、その溶媒であるもの、触媒、アルカリ性または酸性縮合剤または他の上記薬剤(および／または試薬に不活性でその溶媒であるもの、触媒、アルカリ性または酸性縮合または上記の他の薬剤)のそれぞれ存在または非存在下、および／または不活性雰囲気、低温、室温または高温、好ましくは使用溶媒の沸点前後、大気圧または大気圧より高圧で実施される。
【０１２１】
さらに本発明は、上記プロセスの変形、すなわちプロセスのいずれかの段階で得られる中間生成物を出発物質として使用して、残りの工程を実施するか、またはプロセスをそのいずれかの段階で中断する場合、または出発物質を反応条件下で形成させる場合、または反応成分をそれらの塩類または純粋な光学対掌体の形態で使用する場合を包含する。主に出発物質は当然上記反応で使用され、上記で好ましいものとして示されている化合物の形成を誘導する。
【０１２２】
本発明は、ＡＣＥおよびＮＥＰの両方の阻害、および例えば心臓血管疾患、例えば高血圧、浮腫、塩貯留およびうっ血性心不全の予防または処置を目的とし、単独または上記疾患の処置に有用な１種またはそれ以上の薬剤と組合わせた、医薬としての本発明化合物およびそれらの医薬上許容される非毒性酸付加塩類、またはその医薬組成物の哺乳類における使用に関するものである。上記薬剤は、抗高血圧剤、抗アテローム性動脈硬化剤、強心剤、利尿剤、抗糖尿病薬、コレステロール降下剤などであり得る。他の治療剤と組合わせて使用するとき、それらは別々または一定の組合わせで投与され得る。
【０１２３】
組合わせて使用され得る治療剤の例は、アンギオテンシンII受容体拮抗薬、例えばバルサルタン、ロサルタン、カンデサルタン、エプロサルタン、イルベサルタンおよびテルミサルタン、β‐遮断薬、例えばビソプロロール、プロパノロール、アテノロール、ソタロールおよびメトプロロール、レニン阻害剤、カルシウムチャンネル遮断薬、例えばアムロジピン、ベラパミル、ジルチアゼム、ベプリジル、フェロジピン、イスラジピン、ニカルジピン、ニフェジピン、ニモジピンおよびニソルジピン、アルドステロンシンターゼ阻害剤／アルドステロン拮抗薬、例えばエプレレノン、(＋)−ファドロゾール(ＷＯ０１／７６５７４)、スピロノラクトンおよびカンレノン、利尿剤、例えばフロセミド、ヒドロクロロチアジド、インダパミド、メタゾロン、アミロリドおよびトリアムテレン、バソプレシン受容体拮抗薬、例えばＯＰＣ２１２６８、ＳＲ４９０５９、ＳＲ１２１４６３Ａ、ＳＲ４９０５９、ＶＰＡ９８５、ＯＰＣ３１２６０およびＹＭ０８７、強心剤、例えばエノキシモンおよびレボシメンダン、エンドセリン拮抗薬およびＥＣＥ阻害剤、例えばボセンタン、ＢＭＳ１９３８８４、ＴＢＣ３７１１およびＷＯ９９／５５７２６に開示された化合物、抗アテローム性動脈硬化剤、特にコレステロール降下剤、例えば胆汁酸抑制剤(例、コレスチラミンおよびコレスチポール)、コレステロール吸収阻害剤、例えばエゼチミブ、フィブラート系薬剤、例えばフェノフィブラートおよびゲムフィブロジル、スタチンＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、例えばアトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、プラバスタチン、シムバスタチンおよびピタバスタチン、およびニコチン酸誘導体、甲状腺ホルモン様薬剤、例えば米国特許第５５６９６７４号およびＷＯ００／５８２７９に開示されたもの、また抗糖尿病薬、例えばレパグリニド、ナテグリニド、メトホルミン、ロシグリタゾン、ピオグリタゾン、グリブリド、グリピジド、グリメピリド、ＤＰＰ７２８、ＬＡＦ２３７、ＮＨ６２２およびＤＲＦ４１５８である。
【０１２４】
本発明はまた、医薬組成物、特にＡＣＥおよびＮＥＰ阻害活性および例えば抗高血圧活性を有する医薬組成物の製造についての本発明化合物の使用に関するものである。
【０１２５】
本発明医薬組成物は、心臓血管疾患、例えば高血圧の処置を目的として、ヒトを含む哺乳類への経腸的、例えば経口または直腸、経皮および非経口投与に適切なものであり、本発明の薬理学的活性化合物またはその医薬上許容される塩の有効量を、単独または１種またはそれ以上の医薬上許容される担体と組合わせて、および同じく上記で示されている、心臓血管疾患の処置に有用な他の治療剤と組合わせて含む。
【０１２６】
本発明の薬理学的活性化合物は、その有効量を経腸または非経口適用に適切な賦形剤または担体と連係的または混合した形で含む医薬組成物の製造において有用である。好ましいのは、ａ)希釈剤、例えば乳糖、デキストロース、しょ糖、マンニトール、ソルビトール、セルロースおよび／またはグリシン、ｂ)滑沢剤、例えばシリカ、タルク、ステアリン酸、そのマグネシウムまたはカルシウム塩類および／またはポリエチレングリコール、錠剤用にｃ)結合剤、例えば珪酸アルミニウムマグネシウム、澱粉ペースト、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムおよび／またはポリビニルピロリドン、所望ならば、ｄ)崩壊剤、例えば澱粉、寒天、アルギン酸またはそのナトリウム塩、または起沸性混合物、および所望ならば、吸収剤、着色剤、風味剤および甘味料と一緒に有効成分を含む錠剤およびゼラチンカプセルである。注射可能組成物は、好ましくは等張性水溶液または懸濁液であり、坐剤は、有利には脂肪エマルジョンまたは懸濁液から製造される。上記組成物は、滅菌され、および／またはアジュバント、例えば保存剤、安定剤、湿潤剤または乳化剤、溶解促進剤、浸透圧調節用塩類および／または緩衝液を含み得る。さらに、組成物はまた、他の治療上貴重な物質を含み得る。上記組成物は、慣用的混合、造粒またはコーティング方法にしたがってそれぞれ製造され、約０.１〜７５％、好ましくは約１〜５０％の割合で有効成分を含む。
【０１２７】
経皮適用に適切な処方物は、本発明化合物の有効量を担体と共に含む。有利な担体は、宿主の皮膚への浸透を促す吸収されやすい薬理学的に許容される溶媒を含む。特徴として、経皮ディバイスは、包帯形態をとり、裏当て部材、所望による担体と共に化合物を含むレザーバー、予め定められた制御速度で長期間にわたって宿主の皮膚へ化合物を送達させる所望による速度制御バリアー、およびディバイスを皮膚に固定する手段を含む。
【０１２８】
約５０〜７０ｋｇの哺乳類についての単位用量は、約１０〜２００ｍｇの有効成分を含み得る。活性化合物の用量は、温血動物(哺乳類)の種類、体重、年齢および個々の状態、および投与形態により異なる。
【０１２９】
以下の実施例は、本発明の説明を意図したものであり、限定するものとして見なすべきではない。温度は摂氏で与えられている。他に述べない場合、蒸発は全て減圧下、好ましくは約１５〜１００ｍｍＨｇで行なわれる。旋光性(度で表す)は、室温において５８９ｎＭ(ナトリウムのＤ線)または実施例に特記されている他の波長で測定されている。化合物の構造は、標準分析方法、例えばマススペクトル、元素分析、ＮＭＲ、ＩＲ分光法などにより確認される。
【０１３０】
接頭辞ＲおよびＳは、各不斉中心における絶対立体配置を示すのに使用されている。
【０１３１】
実施例１
(ａ)Ｎ−[２−[(Ｓ)−２−アセチルチオ−３−メチルブタノイルアミノ]−２−メチルプロピオニル]−Ｏ−ベンジル−Ｌ−セリンエチルエステル
【化１２】
2005504011.tif 000014
Ｎ−[２−[(Ｒ)−３−ブロモ−３−メチルブタノイルアミノ]−２−メチルプロピオニル−Ｏ−ベンジル−Ｌ−セリンエチルエステル(４.９６ｇ、１０.５ｍｍｏｌ)を、テトラヒドロフラン(１００ｍＬ)に溶かし、チオ酢酸カリウム(６.００ｇ、５２.５ｍｍｏｌ)を加える。混合物を室温で４時間攪拌し、次いで酢酸エチル(５００ｍＬ)で希釈し、水(１００ｍＬ)、重炭酸ナトリウム溶液(２×１００ｍＬ)、水(２×１００ｍＬ)、次いでブライン(５０ｍＬ)で洗浄する。溶液を硫酸ナトリウムで乾燥し、真空下濃縮する。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、３：２ヘキサン／酢酸エチル)により精製して、標記化合物を得る。m.p.55〜57℃; [α]20D - 63.5° (c = 0.99, CH3OH); MS(M + H):467。
【０１３２】
出発物質は以下の手順で製造する：
エタノール(２００ｍＬ)中のＯ−ベンジル−Ｌ−セリン(９.７５ｇ、５０ｍｍｏｌ)の溶液を、８分間ＨＣｌ気体で飽和させる。混合物を室温で一晩攪拌し、次いで真空下濃縮する。固体をジエチルエーテルで洗浄し、濾過により集め、白色固体としてＯ−ベンジル−Ｌ−セリンエチルエステル塩酸塩を得る。
【０１３３】
メチレンクロリド(１５０ｍＬ)中のＢＯＣ−α−メチルアラニン(３.０５ｇ、１５ｍｍｏｌ)、Ｏ−ベンジル−Ｌ−セリンエチルエステル塩酸塩(３.８９ｇ、１５ｍｍｏｌ)、１−エチル−３−(３−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド(ＥＤＣｌ、２.８８ｇ、１５ｍｍｏｌ)および１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール(ＨＯＡＴ、２.０４、１５ｍｍｏｌ)の溶液に、トリエチルアミン(１.５２ｇ、１５ｍｍｏｌ)を加える。混合物を一晩攪拌し、次いで真空下濃縮する。残さを酢酸エチルに再溶解し、水、１ＮのＨＣｌ、水およびブラインで洗浄する。溶液を硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して、式
【化１３】
2005504011.tif 000015
で示されるＮ−[２−(ＢＯＣ−アミノ)−２−メチルプロピオニル]−Ｏ−ベンジル−Ｌ−セリンエチルエステルを得る。
【０１３４】
上記カルバミン酸エステル(６.１２ｇ、１５ｍｍｏｌ)をメチレンクロリド(２００ｍＬ)に溶かし、氷浴中で冷蔵する。溶液を１０分間ＨＣｌ気体で飽和させ、次いで一晩室温で攪拌する。残さを濃縮する。メチレンクロリドを加え、残さを再濃縮し、泡沫としてＮ−(２−アミノ−２−メチルプロピオニル)−Ｏ−ベンジル−Ｌ−セリンエチルエステル塩酸塩を得る、ＭＳ(Ｍ＋Ｈ)：３０９。
【０１３５】
メチレンクロリド(１５０ｍＬ)中の上記アミン塩酸塩(４.９０ｇ、１４ｍｍｏｌ)の溶液に、(Ｒ)−２−ブロモ−３−メチルブタン酸ジイソプロピルアミン塩(４.０３ｇ、１４ｍｍｏｌ)、１−エチル−３−(３−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩(ＥＤＣｌ、２.７０ｇ、１４ｍｍｏｌ)および１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール(ＨＯＡＴ、１.９０ｇ、１４ｍｍｏｌ)を加える。混合物を一晩室温で攪拌し、次いで真空下濃縮する。残さを酢酸エチルに溶かし、水、希重炭酸ナトリウム溶液、水、１ＮのＨＣｌ、次いでブラインにより洗浄する。溶液を硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して固体を得る。固体をフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、２：１ヘキサン／酢酸エチル)により精製して、式
【化１４】
2005504011.tif 000016
で示されるＮ−[２−(Ｒ)−２−ブロモ−３−メチルブタノイルアミノ]−２−メチルプロピオニル]−Ｏ−ベンジル−Ｌ−セリンエチルエステルを得る。
【０１３６】
同様に以下のものも製造される：
(ｂ)Ｎ−[２−[(Ｓ)−２−アセチルチオ−３,３−ジメチルブタノイルアミノ]−２−メチルプロピオニル]−Ｏ−ベンジル−Ｌ−セリンエチルエステル
【化１５】
2005504011.tif 000017
(ｃ)N-[2-[(S)-2-アセチルチオ-3-メチルブタノイルアミノ]-2-メチルプロピオニル]-O-ベンジル-L-トレオニンエチルエステル; m.p. 121-122℃。
【化１６】
2005504011.tif 000018
(ｄ)N-[2-[(S)-2-アセチルチオ-3-メトキシブタノイルアミノ]-2-メチルプロピオニル]-O-ベンジル-L-セリンエチルエステル; [α]D20 + 14.9° (c = 1.04, DMSO)
【化１７】
2005504011.tif 000019
(ｅ) N-[2-[(S)]-2-アセチルチオ-3-メチルペンタノイルアミノ]-2-メチルプロピオニル]-O-ベンジル-L-セリンエチルエステル; [α]D20 - 6.93° (c = 1.09, CH3OH)
【化１８】
2005504011.tif 000020
(ｆ)Ｎ-[2-[(S)-2-アセチルチオ-3-メチルブタノイルアミノ]-2-メチルプロピオニル]-O-(3-トリフルオロメチルベンジル)-L-セリンエチルエステル
【化１９】
2005504011.tif 000021
【０１３７】
出発Ｏ−(３−トリフルオロメチルベンジル)−Ｌ−セリンエチルエステル塩酸塩は、以下の手順で製造する：
０℃のＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド(６０ｍＬ)中の水素化ナトリウム(油中６０％、３.０４ｇ、７６ｍｍｏｌ)の懸濁液に、ＢＯＣ−Ｌ−セリン(７.８０ｇ、３８ｍｍｏｌ)を加える。混合物を１時間攪拌し、次いで、ｍ−トリフルオロメチルベンジルクロリド(７.３９ｇ、３８ｍｍｏｌ)を加える。混合物をそのまま室温に温め、一晩攪拌する。混合物を水でクエンチングする。酢酸エチルを加え、混合物をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮して黄色油状物を得、フラッシュクロマトグラフィー(ＳｉＯ２；ヘキサン／酢酸エチル)により精製して、澄明油状物を得る。残さをエタノール(１２０ｍＬ)に溶かし、溶液を０℃に冷却し、５分間ＨＣｌ気体で飽和させる。混合物をそのまま室温に温め、一晩攪拌する。混合物を濃縮して、Ｏ−(４−トリフルオロメチルベンジル)−Ｌ−セリンエチルエステル塩酸塩を得る。
【０１３８】
(ｇ)油状物としてＮ-[2-[(S)-2-アセチルチオ-3-メチルブタノイルアミノ]-2-メチルプロピオニル]-O-(４-フルオロベンジル)-L-セリンエチルエステル。
【化２０】
2005504011.tif 000022
【０１３９】
(ｈ)油状物としてＮ-[2-[(S)-2-アセチルチオ-3-メチルブタノイルアミノ]-2-メチルプロピオニル]-O-(４-フルオロフェニル)-L-ホモセリンエチルエステル。
【化２１】
2005504011.tif 000023
【０１４０】
出発Ｏ−(４−フルオロフェニル)−Ｌ−ホモセリンエチルエステル塩酸塩を以下の要領で製造する：
テトラヒドロフラン中のＢＯＣ−Ｌ−ホモセリンｔ−ブチルエステル(３.２ｇ、１１.６ｍｍｏｌ)の溶液に、トリフェニルホスフィン(７.５９ｇ、２９ｍｍｏｌ)、ｐ−フルオロフェノール(２.０８ｇ、１８.６ｍｍｏｌ)および１,１'−アゾビス(Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド)(３.２ｇ、１８.６ｍｍｏｌ)を加える。混合物を一晩攪拌し、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、溶媒を除去してオレンジ色油状物を得る。油状物をフラッシュクロマトグラフィー(ＳｉＯ２；８５％ヘキサン／１５％酢酸エチル)により精製して澄明油状物を得、これをエタノール(１００ｍＬ)に溶かし、溶液をＨＣｌ気体で飽和させ、次いで一晩攪拌する。混合物を濃縮して、Ｏ−(４−フルオロフェニル)−Ｌ−ホモセリンエチルエステル塩酸塩を白色固体として得る。
【０１４１】
(ｉ)Ｎ-[2-[(S)-2-アセチルチオ-3-メチル‐ブタノイルアミノ]-2-メチルプロピオニル]-O-(３-フルオロフェニル)-L-ホモセリンエチルエステル
【化２２】
2005504011.tif 000024
【０１４２】
(ｊ)Ｎ-[2-[(S)-2-アセチルチオ-3-メチルブタノイルアミノ]-2-メチルプロピオニル]-O-ベンジル-Ｌ−セリンモルホリノカルボニルメチルエステル、ヘキサン、酢酸エチル、メタノール(２０：７０：１０)でのシリカゲルクロマトグラフィーにより精製、白色固体として得る。
【化２３】
2005504011.tif 000025
【０１４３】
出発物質を以下の要領で製造する：
Ｏ−ベンジル−Ｌ−セリン(１０.０ｇ、５１.３ｍｍｏｌ)、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ジカーボネート(１１.２ｇ、５１.４ｍｍｏｌ)および１Ｎの水酸化ナトリウム(１０３ｍＬ、１０３ｍｍｏｌ)を、室温で１６時間１００ｍＬのジオキサン中で一緒に攪拌する。混合物を真空下濃縮し、水中に取り、６ＮのＨＣｌでｐＨ１に酸性化し、酢酸エチルで抽出する。有機層を水、次いでブラインで洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥する。混合物を濾過し、真空下濃縮し、油状物としてＢＯＣ−Ｏ−ベンジル−Ｌ−セリンを得る。４−(２−クロロアセチル)モルホリン(１.２２ｇ、７.４８ｍｍｏｌ)を、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド５ｍＬ中のＢＯＣ−Ｏ−ベンジル−Ｌ−セリン(２.２０ｇ、７.４６ｍｍｏｌ)、トリエチルアミン(０.７５ｇ、７.４３ｍｍｏｌ)およびヨウ化ナトリウム(０.１１ｇ、０.７３ｍｍｏｌ)の溶液に加え、混合物を室温で２時間攪拌する。混合物を酢酸エチルで希釈し、水、次いでブラインにより洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥する。混合物を濾過し、真空下濃縮して黄色油状物を得る。油状物をヘキサン：酢酸エチル：メタノール(３５：６０：５)でのシリカゲルクロマトグラフィーにかけ、無色油状物としてＢＯＣ−Ｏ−ベンジル−Ｌ−セリンモルホリノカルボニルメチルエステルを得る。５分間メチレンクロリド(５０ｍＬ)中のカルバミン酸エステル(１.７２ｇ、４.０８ｍｍｏｌ)の溶液にＨＣｌ気体を吹き込み、混合物を室温で３時間攪拌する。生成した混合物を真空下濃縮し、泡沫としてＯ−ベンジル−Ｌ−セリンモルホリノカルボニルメチルエステルを得る。
【０１４４】
(ｋ)Ｎ-[2-[(S)-2-アセチルチオ-3-メチルブタノイルアミノ]-2-メチルプロピオニル]-O-ベンジル-Ｌ−セリンジメチルアミノカルボニルメチルエステル、実施例１(ｊ)の化合物について記載した手順で製造および精製：
【化２４】
2005504011.tif 000026
【０１４５】
(ｌ)Ｎ-[2-[(S)-2-アセチルチオ-3-メチルブタノイルアミノ]-2-メチルプロピオニル]-O-ベンジル-Ｌ−セリンジエチルアミノカルボニルメチルエステル、実施例１(ｊ)の化合物について記載した手順で製造およびヘキサン、酢酸エチル、メタノール(３５：６０：５)でのシリカゲルクロマトグラフィーにより精製。
【化２５】
2005504011.tif 000027
【０１４６】
(ｍ)Ｎ-[2-[(S)-2-[(メトキシアセチル)チオ]-3-メチルブタノイルアミノ]-2-メチルプロピオニル]-O-ベンジル-Ｌ−セリンエチルエステル；[α]D - 55.27°;(c = 1.084,CH3OH)
【化２６】
2005504011.tif 000028
【０１４７】
(ｎ)Ｎ-[2-[(S)-2-[(モルホリノアセチル)チオ]-3-メチルブタノイルアミノ]-2-メチルプロピオニル]-O-ベンジル-Ｌ−セリンエチルエステル；[α]D -４８.６１°;(c = 1.098,CH3OH)
【化２７】
2005504011.tif 000029
【０１４８】
(ｏ)Ｎ-[2-[(S)-2-アセチルチオ-２-(4−テトラヒドロピラニル)アセチルアミノ]-2-メチルプロピオニル]-O-ベンジル-Ｌ−セリンエチルエステル；[α]D20 - 55.4° (c = 0.83, DMSO)
【化２８】
2005504011.tif 000030
【０１４９】
出発(Ｄ)−α−ブロモ−α−(４−テトラヒドロピラニル)−酢酸は、以下の要領で製造され得る：
３５ｍＬの水中の亜硝酸ナトリウム(４.７１ｇ、６８.３ｍｍｏｌ)の溶液を、３５ｍＬの水中の(Ｄ)−α−ブロモ−α−(４−テトラヒドロピラニル)−グリシン(J.Am.Chem.Soc.、第１１７巻、９３７５−９３７６頁(１９９５))(７.０５ｇ、４４.３ｍｍｏｌ)および４８％ＨＢｒ(水性)(７０ｍＬ)の冷却(０℃)溶液に滴下する。滴下完了後、混合物を室温にそのまま温め、３時間室温で攪拌する。混合物を酢酸エチルで抽出し、有機層を水、５％チオ硫酸ナトリウム水溶液およびブラインで連続洗浄し、次いで無水硫酸マグネシウムで乾燥する。混合物を濾過し、真空下濃縮し、固体として(Ｄ)−α−ブロモ−α−(４−テトラヒドロピラニル)−酢酸を得る。
【０１５０】
(ｐ)Ｎ-[2-[(S)-2-[(１−(１,２,４)−トリアゾリル)アセチルチオ]-3-メチルブタノイルアミノ]-2-メチルプロピオニル]-O-ベンジル-Ｌ−セリンエチルエステル；ｍ.ｐ.１０６−１０７°[α]D -６１.４６°;(c = 1.09,CH3OH)
【化２９】
2005504011.tif 000031
【０１５１】
(ｑ)Ｎ-[2-[(S)-2-[(４−メチルピペラジノ)アセチルチオ]-3-メチルブタノイルアミノ]-2-メチルプロピオニル]-O-ベンジル-Ｌ−セリンエチルエステル；ｍ.ｐ.９５−９６°[α]D -４８.５°;(c = 0.935,CH3OH)
【化３０】
2005504011.tif 000032
【０１５２】
(ｒ)Ｎ-[2-[(S)-2-アセチルチオ-3-メチルブタノイルアミノ]-2-エチルブタノイル]-O-ベンジル-Ｌ−セリンエチルエステル；[α]D -８３.６°;(c = 1.07,CH3OH)
【化３１】
2005504011.tif 000033
【０１５３】
(ｓ)Ｎ-[2-[(S)-2-(モルホリノアセチルチオ)-3,3-ジメチルブタノイルアミノ]-2-メチルプロピオニル]-O-ベンジル-Ｌ−セリンエチルエステル；[α]D -５５.５°;(c = 1.008,ＤＭＳＯ)
【化３２】
2005504011.tif 000034
【０１５４】
(ｔ)Ｎ-[2-[(S)-2-[(メトキシアセチル)チオ]-3,3-ジメチルブタノイルアミノ]-2-メチルプロピオニル]-O-ベンジル-Ｌ−セリンエチルエステル；[α]D -６１.６７°;(c = 1.024,ＤＭＳＯ)
【化３３】
2005504011.tif 000035
【０１５５】
(ｕ)Ｎ-[2-[(S)-2-(アセチルチオ)ペンタノイルアミノ]-2-メチルプロピオニル]-O-ベンジル-Ｌ−セリンエチルエステル
【化３４】
2005504011.tif 000036
【０１５６】
(ｖ)Ｎ-[2-[(S)-2-アセチルチオ-3-メチルブタノイルアミノ]-2-メチルプロピオニル]-O-(４−ビフェニリルメチル)-Ｌ−セリンエチルエステル
【化３５】
2005504011.tif 000037
【０１５７】
実施例２
Ｎ-[2-[(S)-2-アセチルチオ-3-メチルブタノイルアミノ]-2-メチルプロピオニル]-Ｓ-ベンジル−Ｌ−システインエチルエステル
【化３６】
2005504011.tif 000038
標記化合物を実施例１と同様にして製造し、メチルｔ−ブチルエーテル／へキサンから再結晶化する、m.p.６９〜７１℃。
【０１５８】
出発物質を以下の要領で製造する：
エタノール(２００ｍＬ)中のＢＯＣ−Ｓ−ベンジル−Ｌ−システイン(９.３３ｇ、３０ｍｍｏｌ)の溶液中に１５分間ＨＣｌ(気体)を吹き込む。容器に栓をし、室温で一晩攪拌する。溶媒を真空下蒸発させ、残さをジエチルエーテル(１５０ｍＬ)中で１.５時間攪拌し、固体としてＳ−ベンジル−Ｌ−システインエチルエステル塩酸塩を得る。
【０１５９】
メチレンクロリド(２００ｍＬ)中Ｓ−ベンジル−Ｌ−システインエチルエステル塩酸塩(７.９８ｇ、２９ｍｍｏｌ)、ＢＯＣ−α−メチルアラニン(５.８９ｇ、２９ｍｍｏｌ)、トリエチルアミン(２.９３ｇ、２９ｍｍｏｌ)、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール(ＨＯＢＴ、３.９２ｇ、２９ｍｍｏｌ)およびＥＤＣｌ(５.５７ｇ、２９ｍｍｏｌ)から成る混合物を、室温、アルゴン雰囲気下で一晩攪拌する。反応混合物を蒸発乾固し、残さを酢酸エチル(２００ｍＬ)に溶かす。溶液を水(５０ｍＬ)、１ＮのＨＣｌ(５０ｍＬ)、水(５０ｍＬ)、５％重炭酸ナトリウム(５０ｍＬ)、水(５０ｍＬ)および最後にブライン(２５ｍＬ)で洗浄する。次いで、溶液を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮乾固して、Ｎ−[２−(ＢＯＣ−アミノ)−２−メチルプロピオニル]−Ｓ−ベンジル−Ｌ−システインエチルエステルを得る。
【０１６０】
実施例３
Ｎ-[2-[(S)-2-アセチルチオ-3-メチルブタノイルアミノ]-2-メチルプロピオニル]-(Ｓ)-２−アミノ−３−(ベンジルスルホニル)−プロピオン酸エチルエステル
【化３７】
2005504011.tif 000039
実施例１と同様にして上記化合物を製造する。
【０１６１】
以下の要領で出発物質を製造する：
アルゴン雰囲気下メチレンクロリド(２５０ｍＬ)中のＮ−[２−(ＢＯＣ−アミノ)−２−メチルプロピオニル]−Ｓ−ベンジル−Ｌ−システインエチルエステル(７.２１ｇ、１７ｍｍｏｌ)の溶液に、ｍ−クロロ−過安息香酸(８.７７ｇ、５１ｍｍｏｌ)を加え、混合物を室温で一晩攪拌する。混合物を蒸発乾固し、残さを酢酸エチル(３００ｍＬ)に溶かす。溶液を５％重炭酸ナトリウム(３×５０ｍＬ)、水(５０ｍＬ)およびブライン(２５ｍＬ)で洗浄する。溶液を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、真空下濃縮して、Ｎ−[２−(ＢＯＣ−アミノ)−２−メチルプロピオニル]−(Ｓ)２−アミノ−３−(ベンジルスルホニル)−プロピオン酸エチルエステルを得る。
【０１６２】
実施例４
(ａ)Ｎ２-[2-[(S)-2-アセチルチオ-3-メチルブタノイルアミノ]-2-メチルプロピオニル]-(Ｓ)-２−アミノ−３−(ベンジルアミノ)−プロピオン酸メチルエステル
【化３８】
2005504011.tif 000040
メチレンクロリド(１０ｍＬ)中ベンゾイルクロリド(０.０８５ｍＬ、０.７３ｍｍｏｌ)、Ｎ２-[2-[(S)-2-アセチルチオ-3-メチルブタノイルアミノ]-2-メチルプロピオニル]-(Ｓ)-２,３−ジアミノプロピオン酸メチルエステル塩酸塩(０.２９ｇ、０.７３ｍｍｏｌ)およびトリエチルアミン(０.１５ｍＬ、１.４９ｍｍｏｌ)から成る混合物を室温で１６時間攪拌する。反応混合物を真空下濃縮乾固し、残さを酢酸エチルに溶かし、溶液を水、次いで飽和重炭酸ナトリウム溶液およびブラインで洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮乾固して油状物を得る。油状物を、ヘキサン、酢酸エチル(５０：５０)でのシリカゲルクロマトグラフィーにかけ、白色泡沫として標記化合物を得る、m.p.４８−５４℃。
【０１６３】
(ｂ)Ｎ２-[2[(S)-2-アセチルチオ-3-メチルブタノイルアミノ]-2-メチルプロピオニル]-(Ｓ)-２−アミノ−３−(ベンゼンスルホンアミド)プロピオン酸メチルエステルを同様にして製造する、m.p.47〜51℃; [α]D20 - 41.72 (c = 1.03, CH3OH)。
【０１６４】
出発物質を以下の要領で製造する：
メチレンクロリド(５０ｍL)中(Ｓ)−２−アミノ−３−(ＢＯＣ−アミノ)−プロピオン酸メチルエステル塩酸塩(４.６ｇ、２.１ｍｍｏｌ)、Ｎ−ＣＢＺ−α−メチルアラニン(５.０ｇ、２.１ｍｍｏｌ)、ＨＯＡＴ(２.８７ｇ、２.１ｍｍｏｌ)、ＥＤＣｌ(４.０２ｇ、２.１ｍｍｏｌ)およびトリエチルアミン(２.９３ｇ、２.１ｍｍｏｌ)から成る混合物を室温で１６時間攪拌する。反応混合物をブラインで洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、真空下濃縮する。生成した油状物をヘキサンおよび酢酸エチル(１：１)でのシリカゲルクロマトグラフィーにかけ、白色泡沫としてＮ２-[2-(ＣＢＺ−アミノ)-2-メチルプロピオニル]-(Ｓ)-２−アミノ−３−(ＢＯＣ−アミノ)−プロピオン酸メチルエステルを得る、m.p.１００〜１０１℃。
【０１６５】
エタノール(５０ｍＬ)中上記生成物(２.１４ｇ、４.９０ｍｍｏｌ)および１０％パラジウム・炭素(０.２７ｇ)から成る混合物を、４時間パーボトル中４５ｐｓｉ圧力下で水素化する。混合物をセライトパッドに通して濾過し、真空下濃縮し、油状物としてＮ２-[2-−アミノ-2-メチルプロピオニル]-(Ｓ)-２−アミノ−３−(ＢＯＣ−アミノ)−プロピオン酸メチルエステル塩酸塩を得る。
【０１６６】
メチレンクロリド(７５ｍＬ)中の上記生成物(２.２８ｇ、８.０９ｍｍｏｌ)、(Ｒ)−２−ブロモ−３−メチルブタン酸ジイソプロピルアミン塩(２.１６ｇ、７.１３ｍｍｏｌ)、ＥＤＣｌ(１.４３ｇ、７.４９ｍｍｏｌ)およびＨＯＡＴ(１.１５ｇ、８.５２ｍｍｏｌ)の溶液を室温で１６時間攪拌する。反応混合物を真空下濃縮乾固し、残さを酢酸エチル中にとる。酢酸エチル溶液を水、飽和重炭酸ナトリウム溶液およびブラインで洗浄し、次いで無水硫酸ナトリウムで乾燥し、真空下濃縮する。生成した油状物を、ヘキサンおよび酢酸エチル(４０：６０)でのシリカゲルクロマトグラフィーにかけ、白色泡沫としてＮ２-[2-[(Ｒ)-2-ブロモ-3-メチルブタノイルアミノ]-2-メチルプロピオニル]-(Ｓ)-２−アミノ−３−(ＢＯＣ−アミノ)−プロピオン酸メチルエステルを得る。
【０１６７】
テトラヒドロフラン(５０ｍＬ)中上記生成物(１.３１ｇ、２.８２ｍｍｏｌ)およびチオ酢酸カリウム(１.２８ｇ、１１.２ｍｍｏｌ)から成る混合物を室温で４時間攪拌し、酢酸エチルで希釈する。混合物を水、飽和重炭酸ナトリウム溶液、ブラインで洗浄し、次いで硫酸マグネシウムで乾燥する。反応混合物を真空下濃縮乾固し、生成した油状物をヘキサンおよび酢酸エチル(４０：６０)でのシリカゲルクロマトグラフィーにかけて、Ｎ-[2-[(Ｓ)-2-アセチルチオ-3-メチルブタノイルアミノ]-2-メチルプロピオニル]-(Ｓ)-２−アミノ−３−(ＢＯＣ−アミノ)−プロピオン酸メチルエステルを得る。
【０１６８】
約５分間５０ｍＬのメチレンクロリド中の上記化合物(１.０１ｇ、２.１９ｍｍｏｌ)の溶液中に塩化水素気体を吹き込み、混合物を室温で３時間攪拌し、次いで真空下濃縮して、Ｎ２-[2-[(Ｓ)-2-アセチルチオ-3-メチルブタノイルアミノ]-2-メチルプロピオニル]-(Ｓ)-２,３−ジアミノプロピオン酸メチルエステル塩酸塩を得る。
【０１６９】
実施例５
メチレンクロリド中の１−[(Ｒ)−２−ブロモ−３−メチルブタノイルアミノ]シクロペンタンカルボン酸(１ｇ、３.４２ｍｍｏｌ)、Ｏ−ベンジル−Ｌ−セリンエチルエステル塩酸塩(０.８９ｇ、３.４２ｍｍｏｌ)、ジシクロヘキシルカルボジイミド(０.７ｇ、３.４２ｍｍｏｌ)および１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール(０.４７ｇ、３.４２ｍｍｏｌ)の溶液に、トリエチルアミン(０.４８ｍＬ、３.４２ｍｍｏｌ)を加える。混合物を２４時間攪拌し、次いでブラインで洗浄し、真空下濃縮して、明黄色油状物を得る。残さをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、へキサン／酢酸エチル)により精製して、式
【化３９】
2005504011.tif 000041
のＮ−[１−(Ｒ)−２−ブロモ−３−メチルブタノイルアミノ]−シクロペンタンカルボニル]−Ｏ−ベンジル−Ｌ−セリンエチルエステルを得る。
【０１７０】
ブロモ化合物(０.７ｇ、１.４１ｍｍｏｌ)を、テトラヒドロフラン(５０ｍＬ)に溶かし、チオ酢酸カリウム(０.１９ｇ、１.６９ｍｍｏｌ)を加える。混合物を室温で１８時間攪拌し、次いで酢酸エチルで希釈し、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、真空下濃縮して、黄色油状物を得る。粗物質を、フラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、ヘキサン／酢酸エチル)により精製して半固体を得、ヘキサンで磨砕して、式
【化４０】
2005504011.tif 000042
のＮ−[１−[(Ｓ)−２−アセチルチオ−３−メチルブタノイルアミノ]−シクロペンタンカルボニル]−Ｏ−ベンジル−Ｌ−セリンエチルエステルを得る。
【０１７１】
(Ｒ)−２−ブロモ−３−メチルブタン酸ジイソプロピルアミン塩(Ｌ−バリンから製造)とシクロロイシンメチルエステル塩酸塩の縮合による、本質的にＷＯ９９／５５７２６に記載された方法により１−[(Ｒ)−２−ブロモ−３−メチルブタノイルアミノ]シクロペンタンカルボン酸出発物質を製造する。
【０１７２】
実施例６
(ａ)Ｎ−[２−[(Ｓ)−２−メルカプト−３−メチルブタノイルアミノ]−２−メチルプロピオニル]―Ｏ−ベンジル−Ｌ−セリン
【化４１】
2005504011.tif 000043
メタノール(１０ｍＬ)中の実施例１のＳ−アセチルエチルエステル(０.４７ｇ、１ｍｍｏｌ)の溶液に、１Ｎ水酸化ナトリウム(５.０ｍＬ、５ｍｍｏｌ)を加える。混合物を室温で４時間攪拌し、１ＮのＨＣｌによりｐＨ１に酸性化し、次いで真空下濃縮する。残さに酢酸エチルを加える。混合物を１ＮのＮａＯＨで洗浄する。次いで水相を合わせて酸性化し、酢酸エチルで抽出する。有機相をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、次いで真空下濃縮する。ヘキサンで磨砕して、白色泡沫を得る、m.p. 57-70℃; [α]D20 - 16.8° (c = 1.032, DMSO); MS(M + H):397。
【０１７３】
以下のものも同様にして製造する：
(ｂ)Ｎ−[１−[(Ｓ)−２−メルカプト−３−メチルブタノイルアミノ]−シクロペンタンカルボニル]―Ｏ−ベンジル−Ｌ−セリン、m.p.１３２−１３６℃(ヘキサン／ｔ−ブチルメチルエーテルから結晶化)
【化４２】
2005504011.tif 000044
【０１７４】
(ｃ)Ｎ−[２−[(Ｓ)−２−メルカプト−３−メチルブタノイルアミノ]−２−メチルプロピオニル]―Ｓ−ベンジル−Ｌ−システイン、m.p. 81-87℃; [α]D20 - 37.87 (c = 0.545, DMSO)
【化４３】
2005504011.tif 000045
【０１７５】
(ｄ)Ｎ−[２−[(Ｓ)−２−メルカプト−３−メチルブタノイルアミノ]−２−メチルプロピオニル]―Ｏ−ベンジル−Ｌ−トレオニン；m.p.６１−６４℃
【化４４】
2005504011.tif 000046
【０１７６】
(ｅ)Ｎ−[２−[(Ｓ)−２−メルカプト−３,３−ジメチルブタノイルアミノ]−２−メチルプロピオニル]―Ｏ−ベンジル−Ｌ−セリン；m.p. 128-130℃; [α]D - 2.46 (c = 1.06, DMSO)
【化４５】
2005504011.tif 000047
【０１７７】
(ｆ)Ｎ−[２−[(Ｓ)−２−メルカプト−３−メチルブタノイルアミノ]−２−メチルプロピオニル]―Ｏ−(４−フルオロベンジル)−Ｌ−セリン；m.p.５０−５４℃
【化４６】
2005504011.tif 000048
【０１７８】
(ｇ)Ｎ−[２−[(Ｓ)−２−メルカプト−３−メチルブタノイルアミノ]−２−メチルプロピオニル]―Ｏ−(４−フルオロフェニル)−Ｌ−ホモセリン；m.p.１２７−１２８℃
【化４７】
2005504011.tif 000049
【０１７９】
(ｈ)Ｎ−[２−[(Ｓ)−２−メルカプト−３−メチルブタノイルアミノ]−２−メチルプロピオニル]―Ｏ−(３−フルオロフェニル)−Ｌ−ホモセリン；m.p.５０−５６℃
【化４８】
2005504011.tif 000050
【０１８０】
(ｉ)Ｎ−[２−[(Ｓ)−２−メルカプト−３−メトキシブタノイルアミノ]−２−メチルプロピオニル]―Ｏ−ベンジル−Ｌ−セリン；[α]D20 + 18.85 (c = 0.997, DMSO)
【化４９】
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【０１８１】
(ｊ)Ｎ−[２−[(Ｓ)−２−メルカプト−２−(４−テトラヒドロピラニル)アセチルアミノ]−２−メチルプロピオニル]―Ｏ−ベンジル−Ｌ−セリン；m.p. 184-189℃; [α]D20 - 24.94 (c = 1.013, DMSO)
【化５０】
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【０１８２】
実施例７
(ａ)Ｎ−[２−[(Ｓ)−２−メルカプト−３−メチルブタノイルアミノ]−２−メチルプロピオニル]−Ｓ−ベンジル−Ｌ−システインエチルエステル
【化５１】
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アルゴン雰囲気下、実施例２のチオアセチル化合物(０.４８ｇ、１.０ｍｍｏｌ)を無水ＥｔＯＨ(５ｍＬ)に溶かし、１ＮのＮａＯＨ(１.０ｍＬ、１.０ｍｍｏｌ)で処理する。混合物を室温で４時間攪拌した後、１ＮのＨＣｌでｐＨ３になるまで処理する。混合物を濃縮してＥｔＯＨの大部分を除去し、水性残さをＥｔＯＡｃ(２×１０ｍＬ)で抽出する。抽出物を合わせ、Ｈ２Ｏ(５ｍＬ)、次いでブライン溶液(５ｍＬ)により洗浄する。溶液をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空下濃縮する。ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル／へキサンから生成物を凝固させて生成物を得る；m.p.８７−９１℃。
【０１８３】
(ｂ)同様にして、Ｎ−[２−[(Ｓ)−２−メルカプト−２−(４−テトラヒドロピラニル)アセチルアミノ]−２−メチルプロピオニル]−Ｏ−ベンジル−Ｌ−セリンエチルエステルを製造する；m.p. 85-93℃; [α]D - 37.21° (c = 1.012, DMSO)
【化５２】
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【０１８４】
(ｃ)同様にして、Ｎ−[２−[(Ｓ)−２−メルカプト−３,３−ジメチルブタノイルアミノ]−２−メチルプロピオニル]−Ｏ−ベンジル−Ｌ−セリンエチルエステルを製造する；油状物；[α]D - 20.9° (c = 1.025, DMSO)
【化５３】
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【０１８５】
(ｄ) 同様にして、Ｎ−[２−[(Ｓ)−２−メルカプト−３−メチルブタノイルアミノ]−２−エチルブタノイル]−Ｏ−ベンジル−Ｌ−セリンエチルエステルを製造する；[α]D - 31.48° (c = 0.955, CH3OH)
【化５４】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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