(57)【要約】本発明は、移植レシピエントによるドナー器官の慢性同種移植拒絶の原因を妨げるかまたは改善するための組成物および方法を提供する。この方法は、治療有効量のシクロスポリンおよび２−クロロデオキシアデノシンの移植レシピエントへの併用投与を有する。この組成物は、この方法の実施に適切な治療有効量におけるシクロスポリンおよび２−クロロデオキシアデノシンの組み合わせを含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物において慢性同種移植拒絶を治療するための治療有効量におけるシクロスポリンおよび２−クロロデオキシアデノシン、ならびに薬学的に受容可能な希釈剤、補助薬またはキャリアを含む組成物。
【請求項２】
シクロスポリンが、２−クロロデオキシアデノシンの重量のおよそ７倍とおよそ２２４倍との間の重量で前記組成物中に存在することを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記シクロスポリンの治療有効量が、日用量につき１キログラム当たりおよそ１ミリグラムとおよそ１６ミリグラムとの間であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記２−クロロデオキシアデノシンの治療有効量が、１週間の用量につき１キログラム当たりおよそ０．５ミリグラムとおよそ３ミリグラムとの間であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記２−クロロデオキシアデノシンの治療有効量が、１週間の用量につき１キログラム当たりおよそ１ミリグラムであることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記組成物が、皮下投与、経口投与または静脈内投与されることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
哺乳動物の同種移植レシピエントにおいて慢性同種移植拒絶を妨げる方法であって、該レシピエントに前記請求項１に記載の組成物を投与するステップを含む方法。
【請求項８】
哺乳動物の同種移植レシピエントにおいて慢性同種移植拒絶を改善する方法であって、該レシピエントに前記請求項１に記載の組成物を投与するステップを含む方法。
【請求項９】
動脈アテローム硬化を妨げる方法であって、前記請求項１に記載の組成物を治療を必要とする哺乳動物に投与するステップを含む方法。
【請求項１０】
前記動脈アテローム硬化が、哺乳動物の同種移植レシピエントにおける慢性同種移植拒絶に関連することを特徴とする請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
哺乳動物の同種移植レシピエントにおいて慢性同種移植拒絶を妨げる方法であって、該同種移植片に対する該レシピエントのＢ細胞媒介性応答を抑制するに十分なシクロスポリン量および２−クロロデオキシアデノシン量を該レシピエントに投与するステップを含む方法。
【請求項１２】
前記移植された器官が心臓であることと、前記Ｂ細胞媒介性応答が、心筋層における単核細胞浸潤、心筋線維症および平滑筋細胞の内膜増殖のうちの１または組み合わせであることと、を特徴とする請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
哺乳動物における慢性同種移植拒絶の治療のための薬剤の製造についてシクロスポリンおよび２−クロロデオキシアデノシンを含む組成物の使用。
【請求項１４】
シクロスポリンが、２−クロロデオキシアデノシンの重量のおよそ７倍とおよそ２２４倍との間の重量で前記組成物中に存在することを特徴とする請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
前記薬剤が、１用量につき１キログラム当たりおよそ１ミリグラムとおよそ１６ミリグラムとの間のシクロスポリンを提供するように処方されることを特徴とする請求項１３に記載の使用。
【請求項１６】
前記薬剤が、１日につき１キログラム当たり一回およそ１ミリグラムとおよそ１６ミリグラムとの間のシクロスポリンの用量で投与されるようにパッケージされることを特徴とする請求項１３に記載の使用。
【請求項１７】
前記薬剤が、１週間につき１キログラム当たり一回およそ７ミリグラムとおよそ１１２ミリグラムとの間のシクロスポリンの用量で投与されるようにパッケージされることを特徴とする請求項１３に記載の使用。
【請求項１８】
前記薬剤が、２週間の間１日につき１キログラム当たりおよそ５ミリグラムのシクロスポリン、その後１週間につきおよそ３回の１キログラム当たりおよそ５ミリグラムのシクロスポリンを提供して投与されるようにパッケージされることを特徴とする請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
前記薬剤が、２つの等しい日用量に分割される前記日用量を提供して投与されるようにパッケージされることを特徴とする請求項１７に記載の使用。
【請求項２０】
前記薬剤が、１週間につき１キログラム当たりおよそ０．５ミリグラムとおよそ３ミリグラムとの間の２−クロロデオキシアデノシンを提供するように処方されることを特徴とする請求項１３に記載の使用。
【請求項２１】
前記薬剤が、１週間につき１キログラム当たりおよそ１ミリグラムの２−クロロデオキシアデノシンを提供するように処方されることを特徴とする請求項２０に記載の使用。
【請求項２２】
前記薬剤が、１週間につき１キログラム当たりおよそ１ミリグラムの２−クロロデオキシアデノシンを提供して投与されるようにパッケージされることを特徴とする請求項２０に記載の使用。
【請求項２３】
前記薬剤が、１週間につき１キログラム当たりおよそ０．５ミリグラムの２−クロロデオキシアデノシンを提供して投与されるようにパッケージされることを特徴とする請求項２０に記載の使用。
【請求項２４】
前記薬剤が、皮下投与、経口投与または静脈内投与されるようにパッケージされることを特徴とする請求項１３に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、２００１年１２月５日に出願された同時係属中の米国特許出願第１０／００６，５６２号の継続である。
【０００２】
（発明の背景）
今日の器官移植における重大な問題は、移植後１〜２年を超えた腎臓移植、心臓移植、肺移植および膵臓移植における拒絶の危険性を著しく減少させるための現行の免疫抑制ストラテジーの不首尾である。結果として、移植された器官の１〜２年の生存率においてこの１０年間にわたってなされた多大な進歩は、移植患者（特に死体のドナー器官を受け取る患者）の大半が移植器官の機能を失った場合に、一般に移植後５〜１０年で失われる。
【０００３】
（同種移植拒絶の病理学）
同種移植拒絶の３つの一般的段階が存在する（超急性、急性および慢性）。一般に、超急性拒絶は、移植後最初の数時間以内に生じる。急性拒絶は、一般に移植後最初の６〜１２ヶ月において生じ、そして慢性拒絶は、一般により遅く、通常は移植後１〜２年を超えて生じる。
【０００４】
同種移植拒絶の各々の段階は、特徴的な組織病理学を有する。超急性拒絶は、新しい器官と反応する器官レシピエントの血流における抗体に起因することが公知である。超急性拒絶は、移植のほぼ直後に器官不全をもたらす。
【０００５】
急性拒絶は、同種異系抗体に対する強力なＴ細胞ベースの免疫応答によって開始される炎症によって特徴付けられる。このＴ細胞ベースの免疫応答は、直接的（同種異系主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子との交差反応による）または間接的（抗原提示細胞または同種異系標的細胞に対する宿主ＭＨＣ分子に結合した同種異系ペプチドフラグメントとのより普通の経路の反応による）のいずれかで生じ得る。Ｔ細胞は、免疫応答を開始するだけでなく、抗原特異的エフェクター応答も媒介する。さらにＴ細胞は、可溶性因子を分泌して、他の白血球の活性を調節する。例えば、活性化Ｔヘルパー細胞は、インターロイキン、γインターフェロンおよびロイコトリエンを産生する。この免疫レギュレーターのカスケードは、同種移植片に対する細胞傷害性Ｔリンパ球の攻撃を刺激する。同種移植片に対して致命的な不可逆拒絶において、これらの細胞傷害性リンパ系細胞は、最終的には多くの単核食細胞および血小板にとって代わられる。同種移植片の脈管内皮細胞への血小板の結合の最終結果は、血流の減少、微小血管の血栓症および壊死である。Ｈａｅｙｒｙ，Ｐ．ら、Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ  ７０：７８０〜９０（１９９２）。
【０００６】
急性拒絶の内部脈管病理学とは対照的に、慢性拒絶は、その最も顕著な特徴として持続性の脈管周囲の炎症である。しばしばこの脈管周囲の炎症は、比較的低レベルのリンパ系活性および同種移植片の動脈硬化を伴う。しかし通常の動脈硬化（これは通常病巣および遠心性の内膜肥厚によって規定される）と比較して、同種移植片動脈硬化の一般的な形態は、求心性および全身性の内膜肥厚であり、ここで脈管内膜における平滑筋細胞は、いくつかの炎症性Ｔ細胞およびマクロファージと混じりあう。Ｈａｅｙｒｙ，Ｐ．ら、Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ  ７０：７８０〜９０（１９９２）。慢性拒絶の同種移植片動脈硬化は、すべての壁内動脈を細動脈のレベルまで冒す。慢性拒絶の他の一般的な特徴は、脈管中膜の薄層化および内弾性板における病巣切断である。
【０００７】
サイトカイン産生の研究からの事実はまた、脈管周囲の炎症によって特徴付けられる慢性拒絶が、低レベルの免疫応答の結果であり、順に同種移植片の脈管内皮に対して持続的な最低限の損傷を誘導するという仮説を支持する。同種移植片の脈管に対するこの損傷に応答して、内皮細胞は、増殖因子（例えば血小板由来増殖因子、上皮増殖因子、塩基性線維芽細胞増殖因子およびトランスフォーミング増殖因子β）を分泌する。これらの増殖因子は、平滑筋細胞の増殖および中膜から内膜への筋細胞の移動を刺激し、それによって動脈硬化病巣を形成する。Ｈａｅｙｒｙ，Ｐ．ら、Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ  ７０：７８０〜９０（１９９２）。
【０００８】
（同種移植拒絶の薬学的治療）
多くの免疫抑制剤が公知であり、そして同種移植拒絶の治療について使用されている。これらとしては例えば、シクロスポリン、アザチオプリン、ＦＫ−５０６、メチルプレドニゾロン、デオキシペルグアリン（ｄｅｏｘｙｐｅｒｇｕａｌｉｎ）、ラパマイシンおよびミコフェニラートが挙げられる。今日、シクロスポリン（ＣＳＡ）は、大半の免疫抑制プロトコルの基礎を形成する。しかしＣＳＡの有効性は、その周知の毒性の副作用（例えば腎毒性および肝毒性）によって限定される。
【０００９】
このような毒性の副作用を減少させるために、ＣＳＡは、ＣＳＡの投薬量を非毒性レベルまで減少させるために他の免疫抑制剤と通常組み合わされる。この目的について、ＣＳＡは、第一にステロイド（例えばメチルプレドニゾロン）と組み合わされ、そしてその後ステロイドおよびアザチオプリンと組み合わされ、これは三重薬物療法として公知になった。しかしなおより強力なより新しい免疫抑制剤（例えばＦＫ−５０６）が、ＣＳＡと類似の毒性の副作用と関連している。Ｓｃｈｍｉｄ，Ｔ．ら、Ｅｕｒ  Ｓｕｒｇ  Ｒｅｓ  ３０：６１〜６８（１９９８）。
【００１０】
比較的新しい薬物であるプリンヌクレオシドアナログ、２−クロロデオキシアデノシン（２−ＣＤＡ）が、毛様細胞性白血病ならびに自己免疫疾患（例えば自己免疫溶血性貧血および多発性硬化症）の治療についての細胞傷害性薬物としてすでに使用されている。リンパ球および単球に対するその細胞傷害性のために、２−ＣＤＡはまた、免疫抑制性質を有する。２−ＣＤＡ単独では同種移植拒絶に対する効果を有さないが、急性拒絶の治療について組み合わせて使用される場合に、ＣＳＡと相乗して作用してＣＳＡの免疫抑制効果を増強することが公知である。Ｓｃｈｍｉｄ，Ｔ．ら、Ｅｕｒ  Ｓｕｒｇ  Ｒｅｓ  ３０：６１〜６８（１９９８）。
【００１１】
多くの研究が、ＣＳＡと組み合わせた２−ＣＤＡの使用が、短期の同種移植片の生存を改善し得ることを示している。ある研究は、ＣＳＡと組み合わせた２−クロロデオキシアデノシンが、ラットにおいて同種異系の小腸移植後の拒絶を減少したことを示した。ここで小腸移植を受けた器官レシピエントラットを、移植後１０日で屠殺し、そしてこの移植片を組織学的に試験した。２−ＣＤＡおよびＣＳＡの組み合わせで治療されたラットは、移植拒絶の徴候を示さないか、または好酸球および時折リンパ球の粘膜浸潤および粘膜下浸潤によって特徴付けられる中程度の拒絶の徴候のみを示すかのいずれかであった。しかしＣＳＡまたは２−ＣＤＡのいずれか単独で治療された器官レシピエントラットは、筋層のリンパ球浸潤および多形核顆粒球の浸潤、ならびにこの移植片の漿膜下脂肪を有する中程度から重篤な拒絶を示した。Ｓｃｈｍｉｄ，Ｔ．ら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ、２６：１６１４（１９９４）。
【００１２】
類似の結果は、心臓移植を受けたラットを伴う第二の研究において得られた。移植後１０日で試験された心臓同種移植片は、拒絶の徴候がないことまたは軽い拒絶の徴候のみのいずれかを明らかにした。この軽い拒絶は、筋細胞の壊死を伴わない広範な脈管周囲の浸潤または間質性リンパ球性浸潤の少なくとも２つの病巣、あるいは筋細胞の変形を有する浸潤の１つの大きな病巣によって特徴付けられた。ＣＳＡ単独で治療された器官レシピエントラットは、同レベルの軽い拒絶または中程度の拒絶のいずれかを示し、これは、筋細胞構造の変形および／または筋細胞の壊死に関連した複数の大きなリンパ球性浸潤によって特徴付けられた。２−ＣＤＡ単独で治療された宿主ラットは、重篤な拒絶を示し、これは、かなりの数の顆粒球および間隙浮腫を有する中程度の拒絶におけるような広範な浸潤によって特徴付けられた。Ｓｃｈｍｉｄ，Ｔ．ら、Ｅｕｒ  Ｓｕｒｇ  Ｒｅｓ  ３０：６１〜６８（１９９８）。
【００１３】
別の研究は、ラットにおける移植片生存が、２−ＣＤＡとともにＣＳＡを投与することによって延長され得ることを報告した。Ｎａｗｒｏｃｋｉ，Ｇ．ら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ、２８：３５３８〜３９（１９９６）。しかしすべての動物は、移植後３３日までに死亡し、そして移植拒絶に関連した病理学の研究は行われなかった。
【００１４】
別の研究は、２−ＣＤＡおよびＣＳＡで治療された器官レシピエントラットは、移植後９０日で、ＣＳＡ単独で治療されたラットよりも移植拒絶に関連した病理学の表示が少ないことを報告した。Ｃｒａｍｅｒ，Ｄ．Ｖ．ら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ、２９：６１６（１９９７）。ここで組織病理学的発見（脈管内膜の増殖、脈管周囲の線維症、心筋層炎症および心筋層の線維症を有する）を得点づけした。２−ＣＤＡと組み合わせたＣＳＡで治療された同種移植レシピエントは、治療を受けない動物またはＣＳＡ単独で治療された動物と比較して、脈管内膜の増殖の発生および重篤度の減少が見られた。
【００１５】
これらの研究のすべてが、ＣＳＡと一緒の２−ＣＤＡの投与が、急性同種移植拒絶を限定し得、従って短期の移植片生存率の改善に有益であり得ることを示唆するが、どの研究も、慢性同種移植拒絶の有効な治療を開示も示唆もしていない。
【００１６】
従って、慢性同種移植拒絶を妨げるかまたは改善する改良方法が必要とされ、これは、ヒトおよび動物の同種移植片の移植レシピエントにおいて関連する動脈硬化を減少させる方法を含む。同種移植レシピエントにおいて慢性同種移植拒絶を妨げるかまたは減少させるに適切な改良された薬学的組成物がまた必要とされる。
【００１７】
（発明の要旨）
本発明は、哺乳動物の同種移植レシピエントにおいて慢性同種移植拒絶を改善するかまたは妨げるための組成物および方法を提供する。好ましい実施態様において、本発明は、哺乳動物において慢性同種移植拒絶を治療するための治療有効量におけるシクロスポリンおよび２−クロロデオキシアデノシン、ならびに薬学的に受容可能な希釈剤、補助薬またはキャリアを含む組成物を提供する。好ましい実施態様において、シクロスポリンは、２−クロロデオキシアデノシンの重量のおよそ７倍とおよそ２２４倍との間の重量で組成物中に存在する。一実施態様において、シクロスポリンの治療有効量は、日用量につき１キログラム当たりおよそ１ミリグラムとおよそ１６ミリグラムとの間である。一実施態様において、２−クロロデオキシアデノシンの治療有効量は、１週間の用量につき１キログラム当たりおよそ０．５ミリグラムとおよそ３ミリグラムとの間であり、好ましくは１週間の用量につき１キログラム当たりおよそ０．５ミリグラムまたはおよそ１ミリグラムである。好ましくはこの組成物は、皮下投与、経口投与または静脈内投与される。
【００１８】
他の実施態様において、本発明は、同種移植レシピエントに治療有効量の２−クロロデオキシアデノシンと組み合わせた治療有効量のシクロスポリンを投与するステップを含む方法を提供する。好ましい実施態様において、有利に投与を容易にするために、シクロスポリンおよび２−クロロ−デオキシアデノシンは、１つの組成物において少なくとも１つの薬学的に受容可能な賦形剤と組み合わされる。特定の実施態様において、この組成物は、皮下投与、経口投与または静脈内投与される。
【００１９】
他の実施態様において、本発明は、動脈アテローム硬化を妨げる方法を提供し、この方法は、治療を必要とする哺乳動物にシクロスポリンおよび２−クロロデオキシアデノシンを含む組成物を投与するステップを含む。好ましい実施態様において、動脈アテローム硬化は、哺乳動物の同種移植レシピエントにおける慢性同種移植拒絶に関連する。他の実施態様において、本発明は、哺乳動物の同種移植レシピエントにおいて慢性同種移植拒絶を妨げるかまたは改善する方法を提供し、この方法は、同種移植片に対するレシピエントのＢ細胞媒介性応答を抑制するに十分なシクロスポリン量および２−クロロデオキシアデノシン量を同種移植レシピエントに投与するステップを含む。好ましい実施態様において、移植器官は心臓であり、そしてこのＢ細胞媒介性応答は、心筋層における単核細胞浸潤、心筋線維症および平滑筋細胞の内膜増殖のうちの１以上である。
【００２０】
本発明はまた、哺乳動物における慢性同種移植拒絶の治療のための薬剤の製造について、シクロスポリンおよび２−クロロデオキシアデノシンを含む組成物の使用を提供する。好ましい実施態様において、本発明はまた、シクロスポリンが２−クロロデオキシアデノシンの重量のおよそ７倍とおよそ２２４倍との間の重量で組成物中に存在する組成物の使用を提供する。好ましくはこのような薬剤は、１用量につき１キログラム当たりおよそ１ミリグラムとおよそ１６ミリグラムとの間のシクロスポリンを提供するように処方される。好ましい実施態様において、このような薬剤は、１日につき１キログラム当たりおよそ１ミリグラムとおよそ１６ミリグラムとの間のシクロスポリンの用量、または１週間につき１キログラム当たりおよそ７ミリグラムとおよそ１１２ミリグラムとの間のシクロスポリンの用量で投与されるようにパッケージされる。特定の好ましい実施態様において、この薬剤は、１日につき１キログラム当たりおよそ５ミリグラムのシクロスポリンを２週間、その後１キログラム当たりおよそ５ミリグラムのシクロスポリンを１週間につきおよそ３回提供して投与されるようにパッケージされる。この薬剤は、複数の等しい用量または等しくない用量に分割された日用量、好ましくは２つの等しい用量に分割された日用量を提供して投与されるように適切にパッケージされる。この薬剤は、１週間につき１キログラム当たりおよそ０．５ミリグラムとおよそ３ミリグラムとの間の２−クロロデオキシアデノシン、好ましくは１週間につき１キログラム当たりおよそ１ミリグラムの２−クロロデオキシアデノシンを提供するように適切に処方される。他の実施態様において、この薬剤は、１週間につき１キログラム当たりおよそ１ミリグラムの２−クロロデオキシアデノシンを提供して投与されるようにパッケージされる。好ましい実施態様において、この薬剤は、皮下投与、経口投与または静脈内投与されるようにパッケージされる。
【００２１】
本発明はさらに、同種移植片に対するＢ細胞媒介性応答を抑制するに十分に有効な量でシクロスポリンおよび２−クロロデオキシアデノシンを含む組成物を投与することによって、慢性同種移植拒絶を妨げるかまたは改善する方法を提供する。一実施態様において、この同種移植器官は心臓であり、そしてこのＢ細胞媒介性応答は、心筋層における単核細胞浸潤、心筋線維症および平滑筋細胞の内膜増殖のうちの１以上である。
【００２２】
（好ましい実施態様の詳細な説明）
一実施態様は、同種移植レシピエントに治療有効量の２−クロロデオキシアデノシンと組み合わせた治療有効量のシクロスポリンを投与するステップを含む方法を提供する。実施態様において、有利に投与を容易にするために、シクロスポリンおよび２−クロロ−デオキシアデノシンは、１つの薬学的組成物において少なくとも１つの薬学的に受容可能な賦形剤と組み合わされる。
【００２３】
本発明の方法において利用される薬学的組成物は、ヒトおよび他の被験体に経口投与、直腸投与、非経口投与（すなわち静脈内投与、筋肉内投与または皮下投与）、槽内投与、膣内投与、腹腔内投与、局所投与（粉末、軟膏またはドロップによるような）、頬内（ｂｕｃａｌｌｙ）投与、あるいは経口スプレーまたは鼻スプレーとして投与され得る。特定の実施態様において、この組成物は、皮下投与、経口投与または静脈内投与される。「被験体」は、哺乳動物および非哺乳動物を意味する。「哺乳動物」は、以下を含むがこれらに限定されない哺乳綱の任意のメンバーを意味する：ヒト、非ヒト霊長目（例えばチンパンジーおよび他の類人猿ならびにサル種）；農業用家畜（例えばウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギおよびブタ）；家畜（例えばウサギ、イヌおよびネコ）；げっ歯類（例えばラット、マウスおよびモルモット）を含む実験動物など。非哺乳動物の例としては、鳥類などが挙げられるがこれらに限定されない。用語「被験体」は、特定の年齢または性別を指示しない。
【００２４】
非経口注入についての本発明の方法における使用のための薬学的組成物は、薬学的に受容可能な滅菌水溶液または滅菌非水溶液、分散液、懸濁液あるいはエマルジョン、ならびに使用の直前における滅菌注入可能溶液または分散液への再構成のための滅菌粉末を含む。適切な水性キャリアおよび非水性キャリア、希釈剤、溶剤またはビヒクルの例としては、水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）およびそれらの適切な混合物、植物油（例えばオリーブ油）ならびに注入可能な有機エステル（例えばオレイン酸エチル）が挙げられる。適切な流動度は、例えばコーティング材料（例えばレシチン）の使用によって、分散液の場合においては必要とされる粒子サイズの維持によって、そして界面活性剤の使用によって維持され得る。
【００２５】
これらの組成物はまた、補助薬（例えば防腐剤）、湿潤剤、乳化剤および分散剤を含み得る。微生物の活動の阻止は、種々の抗菌剤および抗真菌剤（例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸など）の包含によって確実にされ得る。等張剤（例えば糖、塩化ナトリウムなど）を有することがまた望ましくあり得る。注入可能な薬学的形態の吸収の持効性は、吸収を遅延する因子（例えばモノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン）の包含によって果たされ得る。
【００２６】
所望であれば、そしてより有効な分布のために、化合物は、持続性の送達系または標的化送達系（例えばポリマーマトリックス、リポソームおよびミクロスフェア）に組み込まれ得る。
【００２７】
この注入可能な処方物は、例えば細菌保持フィルターを通じた濾過によって、あるいは使用の直前に滅菌水または他の滅菌注入可能媒体へ溶解または分散され得る滅菌固形組成物の形態で滅菌剤を組み込むことによって滅菌され得る。
【００２８】
経口投与のための固形投薬形態は、カプセル、錠剤、丸剤、粉末および顆粒を有する。このような固形投薬形態において、活性化合物は、少なくとも１つの不活性な薬学的に受容可能な賦形剤またはキャリア（例えばクエン酸ナトリウムもしくはリン酸二カルシウム）、ならびに／あるいはａ）フィラーまたは増量剤（例えばデンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトールおよびケイ酸）、ｂ）結合剤（例えばカルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロースおよびアカシアのような）、ｃ）湿潤剤（例えばグリセロール）、ｄ）崩壊剤（例えば寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモデンプンもしくはタピオカデンプン、アルギン酸、ある種のケイ酸塩および炭酸ナトリウム）、ｅ）溶液遅延剤（例えばパラフィン）、ｆ）吸収促進剤（例えば第四アンモニウム化合物）、ｇ）湿潤剤（例えばセチルアルコールおよびモノステアリン酸グリセロールのような）、ｈ）吸収剤（例えばカオリンおよびベントナイトクレー）およびｉ）潤滑剤（例えばタルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム）ならびにそれらの混合物と混合される。カプセル、錠剤および丸剤の場合において、投薬形態はまた緩衝剤を含み得る。
【００２９】
類似の型の固形組成物はまた、ラクトースすなわち乳糖ならびに高分子量ポリエチレングリコールなどのような賦形剤を用いて、軟らかく充填されたゼラチンカプセルおよび硬く充填されたゼラチンカプセルにおけるフィラーとして利用され得る。
【００３０】
錠剤、糖剤、カプセル、丸剤および顆粒の固形投薬形態は、コーティングおよびシェル（例えば腸溶性コーティングおよび薬学処方分野で周知の他のコーティング）とともに調製され得る。これらは、必要に応じて乳白剤を含み得、そしてまた活性成分を単独でまたは優先的に腸管の特定の部分で、必要に応じて遅延様式で解放する組成物であり得る。使用され得る組成物を埋め込む例は、ポリマー材料およびろうを有する。
【００３１】
活性化合物は、適切であれば１以上の上記の賦形剤と一緒のマイクロカプセル化形態にあり得る。
【００３２】
経口投与のための液体投薬形態は、薬学的に受容可能なエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップおよびエリキシルを有する。活性化合物に加えて、この液体投薬形態は、当該分野で一般的に使用される不活性希釈剤（例えば水または他の溶剤のような）、可溶化剤および乳化剤（例えばエチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に綿実油、アメリカホドイモ油、トウモロコシ油、胚種油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油）グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタンの脂肪酸エステル）ならびにそれらの混合物を含み得る。
【００３３】
不活性希釈剤に加えて、この経口組成物はまた、補助薬（例えば湿潤剤、乳化剤および懸濁剤、甘味剤、香味剤ならびに芳香剤）を有し得る。
【００３４】
活性化合物に加えて懸濁液は、懸濁剤（例えばエトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶性セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天ならびにトラガカントゴム）ならびにそれらの混合物を含み得る。
【００３５】
本発明の薬学的組成物における活性成分の実際の投薬レベルは、特定の患者、組成物および投与の様式について所望の治療応答を達成するに有効な活性化合物の量を得るために変化され得る。この選択される投薬レベルは、特定の化合物の活性、投与の経路、治療されている状態の重篤度、ならびに治療されている患者の状態および以前の病歴に依存する。しかし、所望の治療効果を達成するために必要とされるよりも低いレベルでの化合物の用量から開始し、そして所望の効果が達成されるまで投薬量を徐々に増大することが当該分野の技術範囲である。
【００３６】
一実施態様において、１日につき体重１キログラム当たりおよそ０．１ｍｇ〜およそ２００ｍｇの活性化合物の投薬レベルが、哺乳動物患者に経口投与される。別の実施態様において、１日につき体重１キログラム当たりおよそ０．５ｍｇ〜およそ１５０ｍｇの活性化合物の投薬レベルが、哺乳動物患者に経口投与される。さらなる実施態様において、１日につき体重１キログラム当たりおよそ１ｍｇ〜およそ１２５ｍｇの活性化合物の投薬レベルが、哺乳動物患者に経口投与される。所望であれば、この有効な日用量は、投与の目的について複数の用量（例えば１日につき２〜４の個々の用量）に分割され得る。
【００３７】
一般に、投与されるシクロスポリンの量は、投与される２−クロロデオキシアデノシンの重量のおよそ２倍〜およそ２２４倍である。適切には投与されるシクロスポリンの量は、１週間につき同種移植患者の体重１キログラム当たりおよそ７ｍｇ〜およそ１１２ｍｇである。２−クロロデオキシアデノシンの投薬量は、適切には１週間につき同種移植患者の体重１キログラム当たりおよそ０．５ｍｇ〜およそ３．０ｍｇである。別の実施態様において、２−クロロデオキシアデノシンの投薬量は、１日につき同種移植レシピエントの体重１キログラム当たりおよそ１ｍｇ〜およそ１６ｍｇである。例示的な実施態様において、シクロスポリンは、１週間につきレシピエントの体重１キログラム当たりおよそ７ｍｇ〜およそ１１２ｍｇの用量で投与される。
【００３８】
一実施態様において、２−クロロデオキシアデノシンの治療有効量は、１週間につきレシピエントの体重１キログラム当たりおよそ０．５ｍｇとおよそ３ｍｇとの間である。適切には、２−クロロデオキシアデノシンの用量は、１週間につきレシピエントの体重１キログラム当たりおよそ１ｍｇであり、１週間につき１以上の用量に分割される。別の実施態様において、同種移植レシピエントの体重１キログラム当たりおよそ１．５ｍｇの２−クロロデオキシアデノシンが、１以上の用量においておよそ３週間毎に投与される。別の実施態様において、同種移植レシピエントの体重１キログラム当たりおよそ３ｍｇの２−クロロデオキシアデノシンが、１以上の用量においておよそ３週間毎に投与される。
【００３９】
一実施態様において、シクロスポリンは、およそ２週間の間１日につきレシピエントの体重１キログラム当たりおよそ５ｍｇ、その後１週間につきおよそ３回のレシピエントの体重１キログラム当たりおよそ５ｍｇの投薬計画において投与される。このような投薬計画において、日用量は、少なくとも２つの等しい日用量に適切に分割され得る。
【００４０】
（実施例１：白血球集団に対する治療の効果）
本発明者らは、Ｆ３４４ラットモデルへのＬｅｗｉｓラットの移植される心臓の外観の組織学的発見を手短に要約した（本明細書中においてその全体において援用されるＣｒａｍｅｒ，Ｄ．Ｖ．ら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ、２９：６１６（１９９７））。以下に記載されるさらなる研究は、Ｔ細胞の循環数に対するＣＳＡおよび２−ＣＤＡの併用治療の効果を試験した。
【００４１】
表１〜５は、未治療のＬｅｗｉｓラット（コントロール）、ならびに治療を受けたＦ３４４ラット（種々の組み合わせのＣＳＡおよび２−ＣＤＡでの治療の１４日後および９０日後に移植されるＬｅｗｉｓラットの心臓を受け取った）におけるＴ細胞数、ならびにＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞の部分集合数に関するデータを示した。治療群１のラットを、２．５ｍｇ／ｋｇ／日  ＣＳＡおよび０．１ｍｇ／ｋｇ／日  ２−ＣＤＡの組み合わせで治療した。治療群２のラットを、５ｍｇ／ｋｇ／日  ＣＳＡおよび０．１ｍｇ／ｋｇ／日  ２−ＣＤＡの組み合わせで治療した。治療群３のラットを、５ｍｇ／ｋｇ／日  ＣＳＡおよび１ｍｇ／ｋｇ／日  ２−ＣＤＡの組み合わせで治療した。
【表１】
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【００４２】
測定されたパラメータに対する治療の投薬計画の効果の有意性を、ｔ検定を用いて評価し、分析結果を、以下の表６に示した。群３に対して投与された治療の投薬計画（上記の符号を参照のこと）は、未治療のコントロール動物と比較して、リンパ細胞数、ＣＤ４＋細胞数およびＴ細胞数において１４日および９０日の両方で有意な減少を生じた。ＣＤ４＋細胞の有意な減少はまた、群２で１４日に見られた。群２で９０日のＣＤ４＋細胞の減少、および群１で９０日のＣＤ４＋細胞の減少は、Ｐ＝０．０５レベル（それぞれ０．０６５および０．０６７）に到達せず、これはおそらくより少ないサンプルサイズに起因した。
【００４３】
この動物移植モデルを使用した以前の研究は、ヒトにおける免疫抑制療法の有効性を予示していた（例えばＣＳＡ、ミコフェノール酸モフェチル、ラパマイシン、ＣＴＬＡ−４）。従って、長期の２ＣＤＡ投与を含むＣＳＡベースの免疫抑制は、ヒトにおいて移植片の生存を延長することが期待された。この治療は、免疫抑制の全体レベルを安定に増強することによって、すなわち現行の治療よりも有効に傷害のマクロファージおよび抗体／Ｂ細胞媒介性機構を特に標的することによって、進行中の低グレードの拒絶における免疫抑制の有効性を増大した。
【表２】
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【表３】
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【表４】
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【表５】
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【表６】
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【表７】
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【００４４】
（実施例２）
ＡＣＩ−ＬＥＷラットの心臓移植モデルを使用して、２−ＣＤＡが同種移植慢性拒絶を抑制する能力を試験した。
【００４５】
動物を、以下の通りに５つの治療群に配分した。
【００４６】
群    治療の投薬計画
Ａ    ＣＳＡ投薬量発見群
Ｂ    ５ｍｇ／ｋｇ／日  ＣＳＡ；１〜１４日、次いで１週間につき３回を９０日間
Ｃ    １ｍｇ／ｋｇ／週  ２−ＣＤＡを９０日間、および５ｍｇ／ｋｇ／日  ＣＳＡ
Ｄ    移植後３日目、４日目、５日目、２３日目、２４日目、２５日目、４３日目、４４日目、４５日目、６３日目、６４日目、６５日目、８３日目、８４日目および８５日目に１ｍｇ／ｋｇ  ２−ＣＤＡ、ならびに５ｍｇ／ｋｇ／日  ＣＳＡ
Ｅ    移植後３日目、４日目、５日目、２３日目、２４日目、２５日目、４３日目、４４日目、４５日目、６３日目、６４日目、６５日目、８３日目、８４日目および８５日目に０．５ｍｇ／ｋｇ  ２−ＣＤＡ、ならびに５ｍｇ／ｋｇ／日  ＣＳＡ
動物を、移植後９０日に屠殺した。心臓移植片を、慢性同種移植拒絶に代表的に関連する以下の病理学が、同種移植モデルに存在する程度の定量化を含んだ評価に供した：心筋浸潤（ＭＩ）、心筋線維症（ＭＦ）および内膜増殖（ＩＰ）。
【００４７】
これらの病理学の各々は、移植片動脈硬化の脈管疾患に関連した。以下の表７および表８は、この発見を要約した。
【表８】
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【表９】
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【００４８】
図１および図２は、ＣＳＡ単独で治療された動物が、重篤な慢性拒絶（心筋層における集約的な単核細胞浸潤、および移植片動脈硬化の顕著な脈管病変を含む）と一致した組織学的像を表示したことを示した群Ｂにおける動物のうち１つの心筋層の顕微鏡写真を示した。
【００４９】
比較すると、図３、図４、図５、図６、図７および図８は、５ｍｇ／ｋｇ／日  ＣＳＡを２週間、およびその後の１週間につき５ｍｇ／ｋｇを３回、ならびに１ｍｇ／ｋｇ／週  ２−ＣＤＡで治療されていた群Ｃ由来の３匹の動物の心筋層の顕微鏡写真を示し、心筋層における軽いリンパ球浸潤、および移植片動脈硬化の極めて限定された発達のみを表した。群Ｃにおける１匹の動物は、心臓移植片において中程度から重篤な慢性拒絶を示した。移植された心臓の状態は、移植後６０日で悪化した。
【００５０】
群Ｄおよび群Ｅにおいて得られた結果は、毎週の単回用量と比較して、間隔用量スケジュールによる２−ＣＤＡ投与の比較上の有効性を示した。
【００５１】
これらの研究は、血管化器官移植後の慢性脈管拒絶を妨げるための長期の２−ＣＤＡ投与を含むＣＳＡベースの免疫抑制の併用使用について本発明の有効性の証拠を提供した。この試験動物は、死亡することもなく明らかな合併症も生じずにこの治療に耐えた。
【００５２】
これらの結果は、ＣＳＡの有効量が、２週間の間１日につき同種移植レシピエントの体重１キログラム当たりおよそ５ｍｇ、次いでその後１週間につき３回のレシピエントの体重１キログラム当たりおよそ５ｍｇであることを示した。
【００５３】
一般に、本発明の薬学的組成物における活性成分の実際の投薬レベルは、特定の患者、組成物および投与の様式について所望の治療応答を達成するに有効な活性化合物の量を得るために変化され得た。この選択される投薬レベルは、特定の化合物の活性、投与の経路、治療されている状態の重篤度、ならびに治療されている患者の状態および以前の病歴に依存した。しかし、所望の治療効果を達成するために必要とされるよりも低いレベルでの化合物の用量から開始し、そして所望の効果が達成されるまで投薬量を徐々に増大することが当該分野の技術範囲であった。一般に、ＣＳＡの比較可能なヒト投薬に対する最初の開始点は、米国移植センターの１９９４年の調査から得られ得た（腎臓移植患者については９±３ｍｇ／ｋｇ／日（平均±Ｓ．Ｄ．）、肝臓移植患者については８±４ｍｇ／ｋｇ／日、および心臓移植患者については７±３ｍｇ／ｋｇ／日）。Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ、第５２版、１８８２〜１８９０頁、１８８７頁（１９９８）。従ってヒトについて、開始のおおよそのＣＳＡ投薬範囲は、１日につきレシピエントの体重１キログラム当たりおよそ１ｍｇ〜およそ１６ｍｇであった。週基準では、この投薬量は、１週につきおよそ７ｍｇ／ｋｇ〜およそ１１２ｍｇ／ｋｇの範囲内であった。所望であれば、この有効な日用量は、投与の目的について複数の用量（例えば１日につき２〜４の個々の用量）に分割され得た。
【００５４】
本研究は、２−ＣＤＡの大半の有効用量が、１週につきレシピエントの体重１キログラム当たり１ｍｇであることを見出した。他の有効用量は、移植後（「ＰＴＸ」）３〜５日、２３〜２５日、４３〜４５日、６３〜６５日および８３〜８５日での０．５ｍｇ／ｋｇおよび１．０ｍｇ／ｋｇを含んだ。これらの用量は、３週間毎にレシピエントの体重１ｋｇ当たりおよそ１．５ｍｇ〜３ｍｇの範囲内、またはおよそ０．５〜１．０ｍｇ／ｋｇ／週であった。従って、ＣＳＡの有効投薬量は、２−ＣＤＡ量のおよそ２倍〜およそ２２４倍の範囲であり得ることが示され得た。上記のように、当業者は、所望の治療効果を得るためにヒト患者のＣＳＡ投薬量に関して容易に２−ＣＤＡ投薬量を調整し得た。
【００５５】
（実施例３）
ヒト腎臓を移植された患者における２−ＣＤＡと組み合わせたＣＳＡを使用するヒト試験は、１５０人の患者の無作為に選ばれた有望なブラインドではない研究を含んだ。２年間に渡って、１００人の患者が、ＣＳＡと組み合わせた２−ＣＤＡを受け、一方５０人の患者が他の免疫抑制コントロールを受けた。２−ＣＤＡを、多発性硬化症および慢性関節リウマチの治療についての２−ＣＤＡを伴う臨床試験に基づいた投薬量で毎週投与した。投薬は、皮下投与または経口投与され得た。シクロスポリンとの併用免疫抑制を施した。コントロール患者を、公知のプロトコルに基づいて各々の患者に対する最適条件として決定された用量で、シクロスポリンおよびプレドニゾン治療に供するかまたは維持した。
【００５６】
移植片喪失および終点を含む腎機能の変化を、２年に渡って測定した。３ヶ月毎の連続した血清クレアチンレベルおよびｍｇ／ｄｌ／月としてのクレアチンの傾きを測定した。クレアチンクリアランスおよびタンパク質排出についての連続した２４時間の尿収集物を、６ヶ月毎に測定した。最初の生検および最後の生検を試験し、そして間隙の線維症、細動脈変化および糸球体硬化症についてＢａｎｆｆ  １９９７  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  Ｓｃｈｅｍｅによって格付けした。さらなる測定は、血球算定およびＴ細胞プロフィール（ＣＤ４／ＣＤ８）を含んだ。
【００５７】
上述の事項は、本発明の説明であることが意図されるが、この範囲は添付の特許請求の範囲によって規定される。非常に多くの変化および改変が、本発明の真の趣旨および範囲を逸脱することなく達成され得る。
【図面の簡単な説明】
【００５８】
【図１】図１は、ＡＣＩ系統のラットドナーからＬＥＷ（「Ｌｅｗｉｓ」）系統のラット宿主へ移植された移植後９０日の心臓の心筋層の断面の４０倍の顕微鏡写真を示す。レシピエントは、１日につき体重１キログラム当たり５ｍｇのＣＳＡを２週間受け、そして移植後９０日で屠殺されるまで１ｋｇ当たり５ｍｇのＣＳＡを１週間につき３回受けた。
【図２】図２は、図１に示された心筋層の異なる視野の断面の１００倍の顕微鏡写真を示す。
【図３】図３は、移植後９０日のＡＣＩラットからＬＥＷラットへの心臓移植片の心筋層の断面の１００倍の顕微鏡写真を示す。レシピエントは、１日につき体重１キログラム当たり５ｍｇのＣＳＡを２週間受け、その後１ｋｇ当たり５ｍｇのＣＳＡを１週間につき３回受け、そして移植後９０日で屠殺されるまで１週間につき１ｋｇ当たり１ｍｇで２−ＣＤＡを受けた。
【図４】図４は、図５に示された心筋層の異なる視野の断面の４０倍の顕微鏡写真を示す。
【図５】図５は、移植後９０日のＡＣＩラットからＬＥＷラットへの心臓移植片の心筋層の断面の１００倍の顕微鏡写真を示す。レシピエントは、１日につき体重１キログラム当たり５ｍｇのＣＳＡを２週間受け、その後１ｋｇ当たり５ｍｇのＣＳＡを１週間につき３回受け、そして移植後９０日で屠殺されるまで１週間につき１ｋｇ当たり１ｍｇで２−ＣＤＡを受けた。
【図６】図６は、図５に示された心筋層の異なる視野の断面の１００倍の顕微鏡写真を示す。
【図７】図７は、移植後９０日のＡＣＩラットからＬＥＷラットへの心臓移植片の心筋層の断面の１００倍の顕微鏡写真を示す。レシピエントは、１日につき体重１キログラム当たり５ｍｇのＣＳＡを２週間受け、その後１ｋｇ当たり５ｍｇのＣＳＡを１週間につき３回受け、そして移植後９０日で屠殺されるまで１週間につき１ｋｇ当たり１ｍｇで２−ＣＤＡを受けた。
【図８】図８は、図７に示された心筋層の異なる視野の断面の４０倍の顕微鏡写真を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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