(57)【要約】本発明は、透明な有機フィルムで被覆された基体と、その製造方法と、更にその使用に関する。フィルム被覆された基体は、前記フィルムが少なくとも１つの波長範囲内で透明な電気絶縁体有機ポリマーであること、及び前記フィルムが少なくとも前記波長範囲内で発光するマーカーと組み合わせられることを特徴とする。本発明は特に、対象の品質管理方法、遠心分離方法、及び認識方法における、化学種の検出のための手段、例えばバイオチップ等において応用可能である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
フィルムで被覆された基体であって、前記フィルムが少なくとも１つの波長範囲内で透明な電気絶縁体有機ポリマーであり、且つ前記フィルムが少なくとも前記波長範囲内で発光する標識と混合されることを特徴とする基板。
【請求項２】
前記フィルムが、ビニルポリマーから選択される絶縁体ポリマーを含む、請求項１に記載のフィルムで被覆された基体。
【請求項３】
前記フィルムが、アクリロニトリル、メタクリロニトリル、メチルメタクリレート、エチルメタクリレート、プロピルメタクリレート、ブチルメタクリレート、ヒドロキシエチルメタクリレート、ヒドロキシプロピルメタクリレート、シアノアクリレート、アクリル酸、メタクリル酸、スチレン、パラ-クロロスチレン、N-ビニルピロリドン、及びハロゲン化ビニルの架橋または非架橋ポリマーから選択される絶縁体ポリマーを含む、請求項１に記載のフィルムで被覆された基体。
【請求項４】
前記フィルムが、ポリアクリルアミド、イソプレンの、エチレンの、プロピレンの、エチレンオキシド及び歪んだ環を含む分子の、乳酸もしくはそのオリゴマーの、ラクトンの、ε-カプロラクトンの、グリコール酸の、またはアスパラギン酸のポリマー、ポリアミド、ポリウレタン、パリレン及び置換パリレンに基づくポリマー、オリゴペプチド及びタンパク質、並びにこれらのポリマーに基づくプレポリマー、マクロマー、またはテレケリック、並びにこれらのポリマーのモノマーもしくはこれらのポリマー自身から形成可能なコポリマー及び／またはブレンドから選択される、架橋または非架橋絶縁体ポリマーを含む、請求項１に記載のフィルムで被覆された基体。
【請求項５】
前記フィルムが、下式（I）：
【化１】
2005505782.tif 000009
[式中、
R1、R2、R3、及びR4は、個別に、水素原子、または有機基、例えばアルカン、アルケン、またはアルキンから選択される炭化水素；アミド、アルデヒド、ケトン、カルボン酸、エステル、酸ハロゲン化物、酸無水物、ニトリル、アミン、チオールまたはホスフェート、エーテル、ホモ-またはヘテロ環芳香族、あるいはこれらの官能基を含むあらゆる環基、並びにこれらの官能基の幾つかを担持するあらゆる基を表す]
のモノマーの、または前記式（I）に相当する異なるモノマーの混合物の、重合によって得られるビニルポリマーである、請求項１に記載のフィルムで被覆された基体。
【請求項６】
前記フィルムが、ポリメタクリロニトリルの、またはポリ（メチルメタクリレート）のものである、請求項１に記載のフィルムで被覆された基体。
【請求項７】
前記標識が、蛍光標識、燐光標識、または化学発光標識から選択される、請求項１に記載のフィルムで被覆された基体。
【請求項８】
化学体の検出方法における、少なくとも１つの波長範囲内で発光する標識と混合した、前記波長範囲内で透明な電気絶縁体有機ポリマーのフィルムの使用。
【請求項９】
絶縁体有機ポリマーのフィルムが、化学体のための認識分子で官能化されている、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
前記化学体が、ＤＮＡである、請求項８に記載の使用。
【請求項１１】
化学体の検出のための手段における、少なくとも１つの波長範囲内で発光する標識と混合した、前記波長範囲内で透明な電気絶縁体有機ポリマーのフィルムの使用。
【請求項１２】
前記検出手段が、バイオチップである、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
物質の品質管理方法、遠心分離方法、または識別方法から選択される方法における、少なくとも１つの波長範囲内で発光する標識と混合した、前記波長範囲内で透明な電気絶縁体有機ポリマーのフィルムの使用。
【請求項１４】
前記フィルムが、下式（I）：
【化２】
2005505782.tif 000010
[式中、
R1、R2、R3、及びR4は、個別に、水素原子、または有機基、例えばアルカン、アルケン、またはアルキンから選択される炭化水素；アミド、アルデヒド、ケトン、カルボン酸、エステル、酸ハロゲン化物、酸無水物、ニトリル、アミン、チオールまたはホスフェート、エーテル、ホモ-またはヘテロ環芳香族、あるいはこれらの官能基を含むあらゆる環基、並びにこれらの官能基の幾つかを担持するあらゆる基を表す]
のモノマーの、または前記式（I）に相当する異なるモノマーの混合物の、重合によって得られるビニルポリマーである、請求項８乃至１３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１５】
前記フィルムが、ポリメタクリロニトリルの、またはポリ（メチルメタクリレート）のものである、請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
前記標識が、蛍光標識、燐光標識、または化学発光標識から選択される、請求項１４に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、透明な有機フィルムで被覆された基体と、透明な有機フィルムで被覆された、この基体の製造方法と、更にその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
「透明なフィルム」なる語は、電磁気スペクトルの少なくとも１つの領域に亘る透明性の著しい特性（光学的吸収が無い、消光が無い等）、特に透明性について考慮される前記波長領域内で低い光学吸光度もしくは「係数ｋ」を有するフィルムを意味する。光学吸光度係数は、例えば、偏光解析スペクトルによって、または分光測光法を使用して測定される。
【０００３】
前記基体は、電気について絶縁性、導電性、または半導電性の基体であってよい。これは、透明な有機フィルムにとっての支持体を構成し、またこれは、本発明による透明な有機フィルムで被覆された基体の使用または目的によって選択される。
【０００４】
本発明は、例えば、薄い透明フィルムで被覆された基体の品質管理、遠心分離、または識別の分野に応用を有する。
【０００５】
これは、本発明の有機フィルムで被覆された基体の製造及び／または成り立ちを証明することが可能になるためであり、前記基体中または基体上には、既知の蛍光、燐光、または化学発光標識を、非常に少量で計画的に導入することが可能になる。本発明のこうした応用においては、基体はあらゆる物体である。
【０００６】
これはまた、例えば、例えばＤＮＡチップなどの化学もしくは生化学分析チップの蛍光による検出方法における、蛍光、燐光、または化学発光標識による、予め官能化された化学、生化学、または生物体の、透明な有機フィルム上または該フィルム中での化学吸収または物理吸収の検出の分野において、応用を有する。このタイプの応用においては、前記基体は、検出手段の支持体を構成する。
【０００７】
例えば、バイオチップの場合には、前記基体は例えば、シリカから、金もしくは複合物、例えばAu/Si、Au/SiO2、またはより一般的な金属／基体から形成可能であり、透明な有機フィルムは、基体の所定部分に生物学的プローブを付着させるための一片の手段の一つであって良い。
【０００８】
バイオチップを、分析しようとするサンプルの溶液と接触させると、サンプルのＤＮＡと基体に付着しているものとの間に対形成が起こる。この結合は、例えば、蛍光、燐光、または化学発光標識で予めサンプルのＤＮＡを標識しておくことによって検出可能である。本発明によれば、前記フィルムは、この標識によって放出されるフォトンの吸収をなるべく少量にするため、基体表面にてこれを非常に低濃度でも検出可能にするため、及び測定との干渉を最小にするために、使用する蛍光、燐光、または化学発光標識の発光波長において透明であるように選択される。シグナル／ノイズ比及びバイオチップ上での対形成の検出下限が、これによって改善されることがわかる。
【０００９】
以下の説明において、括弧内の参照番号は、添付の参考文献のリストを示す。
【００１０】
バイオチップの応用に関しては、文献FR-A-2787581(1998)、FR-A-2787582(1998)、及びUS5810989(1998)には、導電性ポリマーの前駆体モノマー、例えばピロールの、認識分子によって官能化されたモノマー、特にオリゴヌクレオチドとの、シリカ基体上での電気共重合が開示されている。この技術は、バイオチップの区画への認識分子の局所的な結合のために現在最も広く使用されている技術の一つである。
【００１１】
この技術においては、基体への導電性ポリピロールフィルムの接着が、認識分子のここへの結合を実行するために利用される。
【００１２】
上述の文献中、及び文献FR-A-2784188(1998)及びFR-A-2784189(1998)に開示されているように、こうして官能化されたチップを、支持体の認識分子とカップリングすることのできる標的分子を含む、分析しようとするサンプルの溶液と接触させる。
【００１３】
認識分子と標的分子との間のカップリングが存在する区画を選択的に検出するために、有利には、標的分子を、蛍光分子、例えば543nmにて吸光を580nmにて発光を示す、フルオレセインもしくはフィコエリトリンで「標識」することができ、その存在は、後に適切な光学装置を使用して検出可能である。
【００１４】
残念ながら、ポリピロールは、使用される蛍光標識の発光波長領域において、無視できない吸収を有する。この欠点は、懸かる技術に関連する文献に広く記載されている。
【００１５】
とりわけ、Arwinらは、参考文献[1]において、金の上の22nmの厚さを持つポリピロールフィルム上において、屈折率n＝1.45については吸光係数ｋ=0.3を測定しており；Kimらは、参考文献[2]において、47nmの厚さを持つポリピロールフィルムについて、λ＝632.8nmでの吸光係数ｋ＝0.3及び屈折率n=1.6を測定しており；Kimらは、参考文献[3]において、酸化状態では54nmの厚さを持つポリピロールフィルム上で、吸光係数ｋ＝0.28について屈折率n=1.45を、還元状態では47nmの厚さを持つフィルム上で、吸光係数ｋ＝0.21について屈折率n=1.6を測定しており；Guedonらは、参考文献[4]において、金の上のポリピロールフィルム上において、該フィルムの厚さ7.5乃至20nmについて、吸光係数ｋ＝0.3について屈折率n＝1.7を測定している。
【００１６】
然るに、認識分子を結合するために使用したポリピロールは、カップリングした標的分子の蛍光シグナルの大部分を吸収する。これは、従って、検出方法の妨げとなる。
【００１７】
さらに、標的分子及びこれらの標識がポリピロール中に含まれているので、特に認識分子が共重合によって結合しているという事実のために、この妨害吸収は、この方法によって達成可能な検出下限の値を増大させる。
【００１８】
例えば、診断の分野においては、バイオチップの利点は全て、とりわけ標的分子が低濃度であること、すなわち蛍光標識の表面濃度が低いことにあるため、この欠点は大いに問題である。
【特許文献１】
FR-A-2787581
【特許文献１】
FR-A-2787582
【特許文献１】
US5810989
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１９】
本発明の目的は、特に、薄い透明フィルムで被覆された基体及び、このフィルムで被覆された基体の製造方法を提供することであり、これは、第一にバイオチップに関する従来技術において提示された技術的問題に対応し、第２にあらゆる物質の品質管理、遠心分離、及び識別の分野において、新規で強力な道具を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００２０】
本発明のフィルムで被覆された基体は、前記フィルムが少なくとも１つの波長範囲内で透明な電気絶縁体有機ポリマーであること、及び前記フィルムが少なくとも前記波長範囲内で発光する標識と組み合わせられることを特徴とする。
【００２１】
これは、発明者等が、予期せぬことに、電気伝導性の性質と高い光学吸光度とが関係していることを示したためである。
【００２２】
従って、本発明によれば、「透明」なる語は、本発明によって使用される標識の検出波長において透明であることを意味する。
【００２３】
本発明の第一の実施態様によれば、絶縁体ポリマーが本発明による透明でなければならない波長範囲は、例えば上記応用において使用される標識によって決定される。
【００２４】
特に、いったん標識が、即ち標識の発光波長が選択されると、所望の波長での所定のポリマーの吸光の値を、例えば偏光解析スペクトルによって、または分光測光法を使用して決定すること、及び本発明によってこれが使用可能であるか試験することは容易である。
【００２５】
本発明の第一の実施態様によれば、前記標識の関数として選択されるのは、然るに絶縁体ポリマーである。
【００２６】
本発明の第２の実施態様によれば、絶縁体ポリマーを選択した後では、これが透明である波長範囲が決定され、そして、この波長範囲にしたがって、該ポリマーが透明な前記範囲内で発光する標識が選択される。
【００２７】
本発明のこの第２の実施態様によれば、前記ポリマーの関数として選択されるのは、然るに標識である。
【００２８】
本発明によれば、したがって、少なくとも１つの波長範囲に亘って透明なフィルムとして、あらゆる絶縁体ポリマーが使用可能である。
【００２９】
これらの中では、非制限的な例示として、ビニルポリマー、ビニルコポリマー、及びこれらのブレンドであって架橋していてもしていなくてもよいもの、特にアクリロニトリル、メタクリロニトリル、メチルメタクリレート、エチルメタクリレート、プロピルメタクリレート、ブチルメタクリレート、ヒドロキシエチルメタクリレート、ヒドロキシプロピルメタクリレート、シアノアクリレート、アクリル酸、メタクリル酸、スチレン、パラ-クロロスチレン、N-ビニルピロリドン、ハロゲン化ビニル、塩化アクリロイル、または塩化メタクリロイルの、架橋していてもしていなくてもよいポリマー、コポリマー、及びこれらのブレンドを挙げて良い。
【００３０】
非制限的な例としては、ポリアクリルアミド、イソプレンの、エチレンの、プロピレンの、エチレンオキシド及び歪んだ環を含む分子の、乳酸もしくはそのオリゴマーの、ラクトンの、ε-カプロラクトンの、グリコール酸の、またはアスパラギン酸のポリマー、ポリアミド、ポリウレタン、パリレン及び置換パリレンに基づくポリマー、オリゴペプチド及びタンパク質、並びにこれらのポリマーに基づくプレポリマー、マクロマー、またはテレケリック、並びにこれらのポリマーのモノマーもしくはこれらのポリマー自身から形成可能なコポリマー及び／またはブレンドから選択される、架橋または非架橋絶縁体ポリマーも挙げて良い。
【００３１】
例えば上述の絶縁体ポリマーの中からの、懸かる応用のために使用しようとする絶縁体ポリマーの選択は、物質の光学特性に厳密に関連したもの以外の検討により、続いて決定可能である。
【００３２】
したがって、本発明によれば、該ポリマーは、本発明により使用可能なポリマーの範囲内で、例えば基体に接着しうるポリマー、官能化されうるポリマー、熱弾性特性を有するポリマーなどから選択可能である。
【００３３】
上記絶縁体ポリマーの中でも、本発明者らは、特にビニルポリマーに注意を向けてきた。なぜなら、これらは様々なタイプの反応、例えばイオン性またはラジカル反応によって、特に薄いフィルムとして容易に製造可能であるため、及びこれらはまた電気化学的経路によって得ることができ、また電気に関して伝導体もしくは半導体である表面に電着させることができるためである。
【００３４】
ビニルポリマーは、以下の一般式（I）：
【化１】
2005505782.tif 000002
[式中、
R1、R2、R3、及びR4は、個別に、水素原子、または有機基、例えばアルカン、アルケン、またはアルキンから選択される炭化水素；アミド、アルデヒド、ケトン、カルボン酸、エステル、酸ハロゲン化物、酸無水物、ニトリル、アミン、チオールまたはホスフェート、エーテル、ホモ-またはヘテロ環芳香族、あるいはこれらの官能基を含むあらゆる環基、並びにこれらの官能基の幾つかを担持するあらゆる基を表す]
のモノマーの重合によって、または上記式（I）に相当する異なるモノマーの混合物の重合によって得られる。
【００３５】
以下に記す本発明の実施の非限定的実施例において、ポリメタクリロニトリル（PMAN）（R1＝R2＝H、R3＝CH3及びR4＝CNのもの）及びポリ（メチルメタクリレート）（PMMA）（R1＝R2＝H、R3＝CH3及びR4＝C(=O)OCH3のもの）の光学特性を試験した。これら２つのモノマーは、非プロトン性有機媒質中における電解還元によって、導電性表面に電着した絶縁体ポリマーを生じうる。
【００３６】
本発明によれば、特定の応用においては、任意に選択的且つ局所的な方法で、ビニルモノマーを電気グラフト化することにより基体の導電性もしくは半導電性表面にビニルポリマーをグラフト化させることができ、このことは、前記ビニルポリマーに、バイオチップ応用におけるポリピロールの代替物としての利点を与える。
【００３７】
これらポリマーは、薄いポリマーフィルムを付着させるための、当業者に既知の様々な方法、例えばスピンコーティング；浸液；超高圧下での気化；ＣＶＤ；表面化学重合（例えば特許US4421569、US5043226、またはUS5785791に開示されている通り）；表面へのポリマーの光化学グラフト化（例えば特許出願WO-A-9908717及びWO-A-9916907に開示されている通り）；粒子または光子の放射下におけるポリマーのグラフト化；酸化物または別のポリマーの表面への、直接的または化学カップリング剤（例えば、チオール、シラン等）を介する化学グラフト化；開始剤、特にラジカル開始剤によって起こる重合に続く付着（該付着は電気化学により原位置で得られる）等の技術によって、本発明の応用に従うあらゆるタイプの表面上に付着させることができる。
【００３８】
本発明の特定の実施態様によれば、例えば特にラジカル経路によって重合させることが可能なジアゾニウム塩及びモノマーを含む、溶液またはゲル中において導電性または半導電性表面を分極させることによって、透明なポリマーの付着を薄層として得ることが可能である。
【００３９】
有利な実施態様によれば、こうしたポリマーフィルムは、特に薄いフィルムとして、すなわち１ミクロメートル未満、例えば1乃至100nmの厚さを有するものとして、基体表面にグラフト化される。
【００４０】
添付のクレームに定義される通り、本発明の範疇における別の厚さも可能である。
【００４１】
フィルムとしては、予め形成され、一つ以上の段階において、例えば化学的、電気化学的、または光化学的経路によって表面にグラフト化されたポリマーフィルム、または例えば化学的、電気化学的、または光化学的経路によって開始され、前駆体モノマーから表面上に直接構成されるフィルムのいずれもが可能である。
【００４２】
本発明を利用する方法の物理化学的特徴によれば、このグラフト化は、電気に関して絶縁性、伝導性、または半伝導性である表面上で実行可能である。
【００４３】
好ましい実施態様によれば、透明なポリマーの超薄フィルムは、例えば特許出願EP-A-038244に開示されるようにビニルモノマーの電気グラフト化によって、電気に関して絶縁性、伝導性、または半伝導性である表面上に得ることができる。
【００４４】
本発明によれば、標識は、本発明に従う電気絶縁体有機ポリマーと組み合わせ可能である限りにおいてあらゆる標識であって良く、前記ポリマーは、少なくとも前記標識の発光波長において透明でなければならない。
【００４５】
例えば、前記標識は、蛍光、燐光、または化学発光標識であって良い。
【００４６】
これは、例えば、フルオレセインもしくは置換フルオレセイン、例えばフルオレセインジアセテート、5-及び6-カルボキシフルオレセイン、5-および6-カルボキシフルオレセインジアセテート、5-及び6-カルボキシフルオレセインのスクシンイミジルエステル等；ローダミン及び置換ローダミン；コエレンテラジン及び置換コエレンテラジン；エクオリン；ルシフェリン及び置換ルシフェリン；ブロモクロロインドキシルホスフェート（BCIP）；ルミノール；ノニルアクリジンオレンジ（NAO）；5,5',6,6'-テトラクロロ-1,1',3,3'-テトラエチルベンズイミダゾリル-カルボシアニンクロライド；4-（4-ジテトラデシルアミノスチリル）-N-メチルピリジニウムヨーダイド；1,1'-ジオクタデシル-3,3,3',3'-テトラメチルインドカルボシアニンペルクロレート；3,3'-ジヘキサデシルオキサカルボシアニンヒドロキシエタンスルホネート；ビス-(1,3-ジバルビツール酸）-トリメチンオクサノール；テトラゾリウム塩；カルシウム錯体、カリウム錯体；アントラキノン；アントラセン；ピレン；ドキソルビシン；フィコエリトリン；ポルフィリン；フタロシアニン、及びより一般的な有機金属錯体；蛍光タンパク質、特にGFP類、緑色蛍光タンパク質（K. F. Sullivan, S. A. Kay, "Methods in Cell Biology: Volume 58: Green Fluorescent Proteins", Academic Press, 1999)；蛍光鉱物の塩（特にウラン塩）；及び蛍光体基を有するあらゆる分子から選択される標識であって良い。化学発光標識は、別の分子の存在下におかれた場合に蛍光放射する標識である。これらの標識は、当業者には既知であり、例えば、分子生物学において通常使用されるビオチン−アビジン対であってよい。
【００４７】
標識の量は、組み合わされる電気絶縁体有機ポリマーの選択に鑑みて非常に少量でも良い。例えば、標識は、ナノモルからミクロモルのオーダーの濃度、例えば1nM乃至10μMであってよい。
【００４８】
本発明によれば、「組み合わされた標識」なる語は、絶縁体有機ポリマーフィルムと混合された、またはモノマー、例えば予め官能化され、ポリマーフィルムの製造に使用されるモノマーと結合させた、またはフィルムの表面に直接的もしくは間接的に結合させた、または表面上でのポリマーフィルムの製造の間に前記ポリマーフィルム中に捕捉された、あるいはまた標識の溶液を使用して単にフィルム上に付着させた、標識を意味する。
【００４９】
例えば、品質管理、遠心分離、または識別の応用に於いて、標識は、絶縁体有機ポリマーと混合させる、またはポリマーの付着の後に、標識を含むポリマーを膨潤させる溶媒溶液中に浸すことにより挿入する、または合成媒質中の標識の存在下で重合を行うことによって合成の間に挿入する、または化学的に官能化されたモノマーもしくはコモノマーと標識との重合を実行することにより合成の間に挿入する、または標識の溶液を使用してポリマー上に付着させることが可能である。
【００５０】
例えば、バイオチップに関連する応用においては、標識は、フィルム上に直接グラフト化させること、または絶縁体有機ポリマーフィルムにグラフト化した認識分子上に間接的にグラフト化させることによって、組み合わせ可能である。
【００５１】
従って、本発明は、例えば、バイオチップに関連する上述の従来技術の問題を、従来使用されているポリピロールを本発明による絶縁体ポリマー、例えばビニルポリマーで置き換えることによって解決することを可能にする。これは、以下に本発明の実施例に示されるように、これらの絶縁体ポリマーは、ポリピロール等の導電性ポリマーに比べて10分の１乃至100分の１の吸光度を有し、このことが、チップ、例えばバイオチップを使用する検出方法における標識による干渉を大幅に低減するためである。
【００５２】
したがって、本発明は、例えばピロールまたは別の導電性ポリマーを使用するチップに対して、検出下限を低下させることによって、従来技術のものよりもずっと感度の高い検出チップの製造を可能にする。
【００５３】
これらの検出チップは、基体上に付着させた導電性フィルムが本発明により選択された絶縁体フィルムによって置き換えられていなければならないこと以外は、あらゆる既知の手段によって製造可能である。
【００５４】
本発明は、こうした薄い透明有機フィルムの使用にも関する。
【００５５】
一般的に、こうした被覆は、その透明な範囲に対応する電磁気スペクトルの領域内で選択される標識、例えば蛍光、燐光、または化学発光標識を収容することができ、且つ、この標識が有機フィルム中または有機フィルム上に、特に非常に低濃度で存在している場合でさえもこの標識の検出を可能にすることができる。これは、選択される絶縁体有機ポリマーフィルムの光学透明性特性によるものである。
【００５６】
したがって、本発明は、化学体の検出のための方法における、少なくとも１つの波長範囲において透明である電気絶縁体有機ポリマーのフィルムの、少なくとも前記波長範囲内で発光する標識と組み合わせた使用に関する。
【００５７】
これは、本発明の絶縁体有機ポリマーのフィルムを、化学体、例えば核酸、タンパク質、抗原、抗体、合成有機分子等に対しての認識分子で官能化することができるためである。例えば、バイオチップによる検出方法において、前記化学体は、ＤＮＡであってよい。
【００５８】
本発明の絶縁体有機ポリマーのフィルムは、分子、例えば生物活性分子、例えばその分子構造がこれらの分子に蛍光性を持たせるものであるような、ドキソルビシン等の分子をカプセル封入するために使用することもできる。この応用においては、該分子は、これのみに属する２つの特性：その生物活性に関する特性及びその蛍光性の性質に関する特性を有する。
【００５９】
より一般的には、本発明は、化学体の検出のための手段における、少なくとも１つの波長範囲内で透明な本発明の電気絶縁体有機ポリマーのフィルムの、少なくとも前記波長範囲内で発光する標識と組み合わせた使用に関する。
【００６０】
上述のように、前記検出手段はバイオチップ、例えばＤＮＡチップ、タンパク質チップ、化学プローブなどであってよい。
【００６１】
本発明は、対象の品質管理方法、遠心分離方法、または識別方法から選択される方法における、少なくとも１つの波長範囲内で透明な本発明の電気絶縁体有機ポリマーのフィルムの、少なくとも前記波長範囲内で発光する標識と組み合わせた使用にも関する。
【００６２】
薄い絶縁体ポリマーフィルムの付着のための工業的方法の品質管理においては、例えば、被覆の厚さを特徴付けできることが必須である。薄いフィルムについては、特にこれらのフィルムが100nm未満の厚さを有する場合、厚さの確かな測定を行うためには、例えば表面解析（profilometry）または偏光解析などの高価且つ時間のかかる技術に頼る必要がある。さらに、高速の測定装置はしばしば、１ミクロンより大なる検出下限を有する。さらにまた、調べようとするサンプルが複雑な形状（ミクロビーズ、メッシュ、パウダー等）である場合には、例えば表面解析または偏光解析による測定は困難である。
【００６３】
本発明によれば、ポリマーフィルムと標識、例えば蛍光、燐光、または化学発光標識とを組み合わせることによって、非常に簡便な方法で、放射される蛍光の強度を測定することによるフィルムの厚さの間接的な測定を行うことが可能である。
【００６４】
これは、例えば、その上に本発明による標識と組み合わせたポリマーフィルムを付着させてある対象を、そのスペクトルが少なくとも蛍光体の吸収波長を含む光源による照射に曝露することによって、更に蛍光体の発光波長に亘って放出される蛍光強度を測定することによって、実行可能である。
【００６５】
このためには、予め検量線、または標準曲線を準備すれば十分である。その上には、蛍光標識と組み合わせたフィルムの蛍光強度が、懸案の工業的付着方法によるポリマーフィルムで被覆した様々な平坦なサンプルについて、表面解析または偏光解析によって測定された、フィルムの厚さの関数としてプロットされる。前記標識は、全サンプルについて別個に選択された濃度でフィルムと組み合わせられる。
【００６６】
この標準曲線から、懸案の工業的方法により製造され、上述のサンプルと同一の選択された濃度で標識を含む、個別のポリマーフィルムによって発光される蛍光の強度を測定すれば、前記対象の領域の知識から、フィルムが必要とされる厚さを示すかどうか、即ち厚さに関しての特定に見合うか見合わないかを決定するためには十分である。
【００６７】
この領域が未知であるならば、同一のプロトコルが、少なくとも、ポリマーフィルムの付着のための工業的方法の、再現性のイン・ラインモニターのための手段を提供する。
【００６８】
本発明によるフィルムの厚さのモニターは、非常に短時間で標準曲線から行われなければならない。
【００６９】
この品質管理応用に於いて、本発明は、蛍光体の関与による被覆の活性特性を利用する。
【００７０】
本発明はまた、対象の遠心分離または認識においても使用可能である。このためには、前記対象の上に、本発明による少なくとも１つの波長範囲内で透明な電気絶縁体有機ポリマーのフィルムを、少なくとも前記波長範囲中で発光する標識と組み合わせて付着させれば十分である。
【００７１】
したがって、単純な蛍光の測定により、前記対象が基準対象、即ち標識と組み合わされたフィルムを含むものであるか、あるいは前記対象の複製であるかを決定することが可能である。
【００７２】
多くの方法は、処理する成分に関して、ポリマーフィルムと未処理成分の表面との間に構成される境界面の性質に関しての両方において異なっているため、侵害の立証はしばしば困難である。この境界面が、付着させたフィルムの下に埋まっているため、付着させたフィルムを通してこれを分析することが、特に該フィルムの厚さが10nmより大なる場合には困難になる。この場合、薄いフィルムの付着のための方法に関する知的財産権の所有者は、自ら製造したフィルムを、本発明により、その検出のために必要と上述されるような測定装置について、十分に低い濃度の標識、例えば蛍光、燐光、または化学発光標識で有利にラベルすることができる。
【００７３】
上述の応用は、単に例示のためのものと見なされるべきであり、これらの応用も、フィルムを構成する絶縁体ポリマーが基体の表面上に付着させられる手順も、本発明の応用に制限を加えるべきではない。
【００７４】
これは、当業者であれば、他の応用に対して、一つの波長範囲における低い光学吸光度を有する、一つ以上の電気絶縁体ポリマーの、一つ以上の有機被覆と、前記範囲内で発光する標識とを組み合わせることによる本発明の有効性を、どのように試すかが分かるであろうからである。
【００７５】
本発明の別の利点及び特徴は、非制限的な例示のために与えられる下記の実施例を、添付の図面を参照して読むことにより、当業者にはより明らかになるであろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００７６】
図１は、本発明による絶縁体ポリマーのフィルムの厚さを測定するために使用される回転偏光子偏光解析（rotating polarizer ellipsometry）の原理を示す図である。
【００７７】
図２及び３は、様々な入射の角度（°）についての、基体としての金の偏光解析測定スペクトルである：tan(Ψ)＝f(λ(nm))（図２）及びcos(Δ)＝f(λ(nm))（図３）（λ＝波長（nm))。
【００７８】
図４は、金単独の基体（G）上で、及び有機フィルムで被覆された基体上で、300乃至800nmの全波長について75°の角度で測定して行われた、率（I）及び（N）と、光学吸光係数（E）及び（K）との測定を組み合わせたグラフである。
【００７９】
図５及び６は、5nm毎に300乃至800nmに広がるスペクトル範囲に亘って実行した測定で得られた、有機フィルム無しの白金基体の偏光解析スペクトルである：入射角75°にてtan(Ψ)＝f(λ(nm))（図５）及び入射角75°にてcos(Δ)＝f(λ(nm))（図６）。
【００８０】
図７は、有機フィルム無しの白金基体上で、300乃至800nmの全波長について75°の角度で測定して行われた、率（I）及び（N）と、光学吸光係数（E）及び（K）との測定を組み合わせたグラフであり、値は、"Handbook of Optical Constants of Solids"E.D.Palik編により与えられる。
【００８１】
図8a)、9a)、10a)、及び11a)は、5nm毎に300乃至800nmに広がるスペクトル範囲で、5°毎に55乃至75°で実行した測定で得られた、PMANフィルムで被覆した白金基体の偏光解析スペクトルを表す：それぞれサンプルAuMAN7、AuMAN24、Au2401、及びAu2301について、tan(Ψ)＝f(λ(nm))。
【００８２】
図8b)、9b)、10b)、及び11b)は、5nm毎に300乃至800nmに広がるスペクトル範囲で、5°毎に50乃至75°で実行した測定で得られた、PMANフィルムで被覆した白金基体の偏光解析スペクトルを表す：それぞれサンプルAuMAN7、AuMAN24、Au2401、及びAu2301について、入射角75°にて（図5）、cos(Δ)＝f(λ(nm))。
【００８３】
図１２は、本発明による様々な透明な電気絶縁性有機ポリマーフィルムで被覆した金基体を用いたサンプルの反射（%）の、波長（nm）の関数としての測定の図示である。
【００８４】
図13a)及び13b)は、5°毎に50乃至75°で、5nm毎に300乃至800nmに広がるスペクトル範囲で、ジアゾニウム塩ベースの導電性有機ポリマーのフィルムで被覆した白金基体（サンプル01010Pt6）上で、様々な入射の角度（°）について行われた偏光解析測定のスペクトルである：tan(Ψ)多数の角＝f(λ(nm))（図13a）及びcos(Δ)多数の角＝f(λ(nm)（図13b）)。
【００８５】
図14a)及びb)は、5°毎に50乃至75°で、5nm毎に300乃至800nmに広がるスペクトル範囲で、ジアゾニウム塩ベースの導電性有機ポリマーのフィルムで被覆した白金基体（サンプル01010Pt14）上で、様々な入射の角度（°）について行われた偏光解析測定のスペクトルである：tan(Ψ)多数の角＝f(λ(nm))（図14a）及びcos(Δ)多数の角＝f(λ(nm)（図14b）)。
【００８６】
図15は、ジアゾニウム塩ベースの導電性有機フィルムで被覆した白金のサンプル（サンプル0101Pt6及び01010Pt14）の反射を測定することを企図する、基準波長を560nmとする400乃至800nmの範囲に亘る分光光度測定の結果を表す。
【００８７】
図16は、ジアゾニウム塩ベースの導電性有機フィルムで被覆した白金のサンプル（サンプル0101Pt6及び01010Pt14）の損失を測定することを企図する、基準波長を560nmとする400乃至800nmの範囲に亘る分光光度測定の結果を表す。
【００８８】
図17は、表面蛍光体の双極子モデル化のための図である：これは、双極子モーメントｍが表面ｘの上方に位置することを表している。３つの媒介物が特徴付けられている：双極子の周囲、率n1の領域１（この場合にはスーパーストレート（superstrate）である）；薄い層の重なり、率n2の領域２；及び基体、率n3の領域３。
【００８９】
図18a)及び18b)は、有機フィルムの表面に対して平行（‖）（図18a）及び垂直（┴）（図18b）の二方向に向かって該表面に位置する蛍光体双極子の蛍光シグナルのモデル化（シグナル(ua)＝ｆ（ポリマーの厚さ）（nm））を表す。これらの図では、ケース１：n=1.5及びk=0.02；ケース２：n=1.5及びk=0.003；ケース３：n=1.5及びk=0.0(極値)；ケース４はジアゾニウム塩から得られるもの等の典型的な導電性有機フィルムを成す：n=1.5及びk=0.4。これらの図では、横座標の軸はポリマーフィルムの厚さ「t」を表し、縦座標の軸はシグナル「s」を表す。
【００９０】
図19a)及び19b)は、一方では従来技術によりポリピロールのフィルムで被覆した（図19a）、他方では本発明により絶縁体有機ポリマーフィルムで被覆した（図19b）、金の基体を表す図である。
【００９１】
図20a)は、金基体上に付着させたAmersham社製のCydctp（登録商標）発光体の液滴（１μ,溶液を0.5μl）の蛍光の、金領域のネガ（50倍の対物レンズ；露出時間200ms）である。
【００９２】
図20b)は、金基体上に付着させたポリピロールのフィルム上に付着させたAmersham社製のCydctp（登録商標）発光体の液滴（１μ,溶液を0.5μl）の蛍光の、ポリピロールに相当する領域のネガ（50倍の対物レンズ；露出時間200ms）である。
【００９３】
図20c)は、金基体上に付着させたポリメタクリロニトリル（MAN）のフィルム上に付着させたAmersham社製のCydctp（登録商標）発光体の液滴（１μ,溶液を0.5μl）の蛍光の、MANの付着物に相当する領域のネガ（50倍の対物レンズ；露出時間200ms）である。
【実施例】
【００９４】
（実施例１：サンプルの光学特性の測定及びモデル化の技術）
吸光測定を、分光偏光解析によって行う。これは、光の偏光に際して、率及び厚さの決定によって、物質が生み出す変化を用いて物質の薄い付着物を特徴付けすることを可能にする非破壊的光学技術である。
【００９５】
光線がサンプルの表面で反射される場合、その偏光の状態は変化する。これは斜め入射にて光波の電場が、一方は入射の平面に対して垂直であり（波S）、他方はこの平面に対して平行（P）である、２つの特定の方向に散らされるためである。これらの２つの波は、別様にサンプルの表面と相互作用し、SまたはP波に関連するかによって振幅反射率rs及びrpを示す。
【００９６】
S及びP波の振幅作用及び位相作用における相違から生じる偏光の状態の変化は、下記の等式１に従ってρによって特徴付けることができる。
【数１】
2005505782.tif 000003
tan(Ψ)は、振幅比を表し、ΔはS及びP偏光の間の位相差を表す。
【００９７】
使用される偏光測定器は、SOPRA社製のGESP5（登録商標）である。これは、パラメータtan(Ψ)及びcos(Δ)を波長の関数として（「分光偏光解析」なる語の所以）、及び／または分析光線の入射角θの関数として、測定することを可能にする。使用される回転偏光子偏光解析器の操作原理を、図１に示す。
【００９８】
この図において、Sは、光源を表し、s及びpは入射光の偏光ベクトルを表し、P及びAは回転偏光子を表し、Dは検出器を表す。
【００９９】
サンプルをモデル化によって、偏光解析器によって与えられる測定値に回帰アルゴリズムを用いて、前記サンプルの特徴を算出することができる。
【０１００】
サンプル、厚さt、率n、及び吸光ｋを、複素平面における非線形回帰による補整ソフトウェアを使用し、非分散則で、その後ローレンツ振動子モデルで、偏光解析測定を回帰することによって特徴付けた。
結果に矛盾のないことを、分光測光測定で確認した。
【０１０１】
（実施例２：試験したサンプル）
前記測定は、８つの異なるサンプルで行った。これらの特徴を表１にまとめる。
３つの異なる系統のサンプルを分析した。
【０１０２】
・金に電着されたPMANフィルムの系統、厚さは9乃至150nmに亘る。これらのフィルムは、補助電極としての0.05Mテトラエチルアンモニウムペルクロレート（TEAP）の存在下で、無水アセトニトリル中のメタクリロニトリルの2.5M溶液の電解還元によって金電極上に得られる。前記電解還元は、表面積の大きな白金対向電極を備えた非分割区画中、100mV/sにて、-0.3乃至-2.6V/(Ag+/Ag)の電解条件下で起こる。電解走査の数を変化させることによって、様々な厚さが得られる。
【０１０３】
・一方は100nm厚さで、他方は厚い（厚さ＞0.5μm）、金に電着させた２つのPMMAフィルム。これらのフィルムは、PMANフィルムについてと同様の条件下でのメチルメタクリレート溶液の電解還元によって得られる。
【０１０４】
・補助電極として5×10-2MのTEAPの存在下での、無水アセトニトリル中のパラニトロフェニルジアゾニウム（PNPD）テトラフルオロボレートの10-3M溶液の電解還元によって、白金電極上に得られる２つのフィルム。電位走査を、-200mV/sで+0.3V/(Ag+/Ag)乃至-2.9V/(Ag+/Ag)に行う。それぞれ厚さ3nm及び30nmの２つのフィルムが、このプロトコルによって得られる。
【０１０５】
最後の系統のサンプルは、PNPDの電着によって得られた有機フィルムは電気伝導性であるため、初め２つの系統のフィルムとの対照として選択した。さらに、偏光解析測定値も、導電性ポリマーとしてのポリピロールフィルムで得られたものと比較する。
【０１０６】
下記の表Ｉに挙げた様々なフィルムの厚さを、表面解析によって測定する。２つのチップ距離にしたがい、表面解析によって測定された算術粗さ（arithmetic roughness）、500μm及び2mmもまた、この表に列挙する。
【０１０７】
【表１】
2005505782.tif 000004
【０１０８】
この表において、ポリメタクリロニトリルまたはポリ（メチルメタクリレート）フィルムは絶縁性であり、ニトロベンゾエートフィルムは導電性である。
【０１０９】
基体上での偏光解析測定
金層（基体）の特徴
様々な入射の角度について、金の偏光解析スペクトルを測定する。こうして、5°毎に50°乃至75°の、これら様々な値について得られた結果の関数として、最終結果の品質を評価することが可能である。測定スペクトルは、5nm毎の測定で300乃至800nmに亘る。これらは、添付の図2及び3に表される。
【０１１０】
金の測定を、MANAu11サンプルで、反応混合物中に浸されていない部分であって、有機フィルムが付着していない部分で行った。
【０１１１】
目的は、この金層の率及び吸光の値を見出すことであり、ミクロンよりも大なるその厚さのため、これを基体として（偏光解析で）同一のカテゴリーに入れることが可能である。その後、金のn及びk係数を導き出すために、データの反転、等式解析が行われる。この操作は、各測定角度について行われる。75°の入射の角度で測定した率を、300乃至800nmの全波長について、添付の図4にまとめた。
【０１１２】
比較のため、グラフト化有機フィルムを備えたサンプルとは別個に、金単独の基体上で行った測定もまとめた。これにより、測定の安定性をモニターすることが可能になる。
【０１１３】
白金層（基体）の特徴
白金の偏光解析スペクトルを、金についてと同一条件下で測定する：測定角は5°毎に50°乃至75°であり、スペクトル範囲は、5nm毎に300乃至800nmに亘る。
【０１１４】
白金の測定を、0101Pt6サンプルで、反応混合物中に浸されていない部分であって、有機フィルムが付着していない部分で行った。
【０１１５】
図5（tan(Ψ)＝f(λ(nm))、入射角75°）及び6（cos(Δ)＝f(λ(nm))、入射角75°）は、これらの測定に対して得られた結果の図示である。
【０１１６】
目的は、この白金層の率及び吸光の値を見出すことであり：1ミクロンよりも大なるその厚さのため、これは、偏光解析の観点から、基体として同一のカテゴリーに入れることが可能である。その後、これよりn（率）及びk（吸光係数）を導き出すために、75°での測定のデータの反転が行われる。こうして得られた率（I）及び吸光（E）の結果を、図7にまとめる。"Handbook of Optical Constants of Solids"E.D.Palik編により与えられた値もまた、このグラフに表した。
【０１１７】
サンプルの特徴については、偏光解析測定により与えられた結果を、白金についての基準値として採用する。
【０１１８】
サンプルの偏光解析測定
測定を、300乃至800nmのスペクトル範囲に亘って、θ＝60°にて行った。
【０１１９】
金基体上のサンプルの偏光分析結果
結果に関してより正確を期するために、AuMAN7、MANAu24、Au2301、及びAu2401サンプルを様々な角度について測定した。
【０１２０】
行った測定により、AuMAN7については図8a)及びb)に、AuMAN24については図9a)及びb)に、Au2401については図10a)及びb)に、及びAu2301については図11a)及びb)に表したスペクトルをまとめることができた。a)図はtan(Ψ)多数角測定に相当し、b)図はcos(Δ)多数角測定に相当する。
【０１２１】
金基体上のサンプルの分光測光結果
基準波長を560nmとして400乃至800nmの波長範囲に亘って、サンプルそれぞれの反射、透過、及び損失を決定するために、サンプルを、手動の「Lambda9m」（登録商標）分光測光器で測定した。
【０１２２】
金上の全サンプルが、560nmにて72.5%<R<84.2%、T≒0、及び157%<L<27.5%である同様のスペクトルを有することがわかる。これらの結果を、下記の表2に加える。
【０１２３】
【表２】
2005505782.tif 000005
【０１２４】
添付の図12は、本発明による透明で且つ電気絶縁性の様々な有機ポリマーフィルムで被覆した金基体を含むこれらのサンプルで行った、波長（nm）の関数としての反射（%）の測定の図示である。
【０１２５】
金上の全サンプルが、560nmにて72.5%<R<84.2%、T≒0、及び15.7%<L<27.5%である同様のスペクトルを有することがわかる。特にこれら絶縁体フィルムが、広い波長範囲に亘ってほとんど損失を有しないことがわかる。この観察結果は、導電性のPNPDフィルムで得られた結果と比較するとより明確になるであろう。
【０１２６】
白金基体上のサンプルの偏光解析結果
図13a)及び13b)は、5°毎に50乃至75°で、5nm毎に300乃至800nmに広がるスペクトル範囲で、サンプル01010Pt6上で、入射の様々な角度（°）について記録した偏光解析測定のスペクトルを表す：tan(Ψ)多数角＝f(λ(nm))（図13a）及びcos(Δ)多数角＝f(λ(nm) )（図13b）。
【０１２７】
図14a)及び14b)は、5°毎に50乃至75°で、5nm毎に300乃至800nmに広がるスペクトル範囲で、サンプル01010Pt14上で、入射の様々な角度（°）について記録した偏光解析測定のスペクトルを表す：tan(Ψ)多数角＝f(λ(nm))（図14a）及びcos(Δ)多数角＝f(λ(nm) )（図14b）。
【０１２８】
白金基体上のサンプルの分光測光結果
基準波長を560nmとして400乃至800nmの波長範囲に亘って、サンプルそれぞれの反射、透過、及び損失を決定するために、サンプルを、手動の「Lambda9m」（登録商標）分光測光器で測定した。
【０１２９】
白金上のサンプルが、非常に様々なスペクトルを有することがわかる。反射、透過、及び損失を、以下の表3にまとめる。PNPD（PNPDは導電性ポリマー）フィルムにおける損失は、金基体上に形成される絶縁体フィルムの場合よりもずっと顕著であることが観察される。
【０１３０】
【表３】
2005505782.tif 000006
【０１３１】
図15は、基準波長を560nmとして400乃至800nmの範囲に亘る、導電性ポリマーで被覆した白金サンプル0101Pt6及び01010Pt14の反射を表し、図16はこれらの損失を表す。
【０１３２】
サンプルの特徴づけ
サンプル（t、n、及びk）を特徴付けるために、SporX(登録商標)ソフトウェアを使用し、非分散則で、その後ローレンツ振動子で、偏光解析測定値に回帰を行った。一方では2つのモデルの間で、他方では分光測光測定値と、矛盾のない結果が得られた。
【０１３３】
これらの特徴の評価を、表4にまとめる。
【０１３４】
絶縁性ビニルフィルムについては非常に低い吸光係数（k<0.02）が測定され、一方では導電性PNPDは少なくとも10倍高い吸光を示した。
【０１３５】
比較のため、測定したサンプルと同様の厚さ（20nm）のポリピロールフィルムは、同一条件下で測定したところ、0.3乃至0.5の吸光係数を有する。
【０１３６】
【表４】
2005505782.tif 000007
【０１３７】
ここでの目的は、フィルムの表面に吸着された蛍光体によって放出されるシグナルの特徴づけをすることである。
【０１３８】
まず第一に、吸光度が低いという事実の予期される利点が提示され、次に、簡単な試験で、同一厚さのポリピロールフィルムでよりも、金上のPMANフィルムでの方が、蛍光収率がより有効に良好であることが示される。
【０１３９】
発光体は、図17に表されるように電気双極子、すなわち、電磁気理論の意味合いにおいて予想しうる小さな源としてモデル化される。問題とするグリーン関数は算出可能であり、より複雑ないかなる電磁気源、例えば塩基双極子の重ね合わせ等は再構築可能であるため、この工程は、扱う問題の一般的な応用にとって、全く有害ではない。さらにまた、電磁場は量子化されないと考えられる。レーザー共振器において蛍光及び発光をモデル化するための理論モデルの比較は、観点が従来のものであっても、量子的であっても、ほぼ同様の結果を示した。
【０１４０】
表4の結果に基づき、以下のケースをシミュレーションする：ケース1：n=1.5/k=0.02；ケース2：n=1.5/k=0.003；ケース3：n=1.5/k=0（極値）；最後のケースは、例えばジアゾニウム塩から得られるフィルム（サンプル0101Pt6及び0101Pt14）もの等の典型的な導電性有機フィルムを形成する；ケース4：n=1.5及びk=0.4。
【０１４１】
使用した蛍光体は、フィコエリトリンであって、吸収＝543nm及び放出＝580nmであり、表面に対するその高さは10nmである。前記蛍光体は、液体環境中に浸される。
【０１４２】
双極子については2つの異なる方向が考慮されるが、表面に対して一方は並行であり、他方は垂直である。ポリマーの厚さを変化させ、発光体を囲む媒介物中に放出されるシグナルが算出される（蛍光の分析のための非常にオープンな顕微鏡の場合）。
【０１４３】
図17は、表面での蛍光体の双極子モデル化の図である：これは、双極子モーメントｍが表面ｘの上方に位置することを表している。３つの媒介物が特徴付けられている：双極子の周囲、領域1（この場合にはスーパーストレート（superstrate）である）；薄い層の重なり、領域2；及び基体、領域3。n1、ε1；n2、ε2；及びn3、ε3は、それぞれ、前記領域1、2、及び3の率及び誘電率である；ｄは双極子からポリマーの表面への距離を表し、ｔはポリマーの厚さを表す。
【０１４４】
図18a)及び18b)は、有機フィルムの表面に対して平行（図18a）及び垂直（図18b）の二方向に向かって該表面に位置する蛍光体双極子の蛍光シグナルのモデル化（シグナル(ua)＝ｆ（ポリマーの厚さ）（nm））を表す。これらの図では、ケース１：n=1.5及びk=0.02；ケース２：n=1.5及びk=0.003；ケース３：n=1.5及びk=0.0(極値)；ケース４はジアゾニウム塩から得られるもの（）サンプル0101Pt6及び0101Pt14）等の典型的な導電性有機フィルムを成す：n=1.5及びk=0.4。
【０１４５】
添付の図18a)及び18b)中に表された結果に照らすと、光選択の現象のため最もありそうな、発光体が平行方向である”MAN”フィルムを使用した本発明では、前記シグナルに関しておよそ25の増加が観察され、垂直方向についてはおよそ100の増加が観察される。
【０１４６】
このモデルの予測を、ここに、金基体上に付着させたPMANのフィルム（サンプルAuMAN11）上の蛍光標識の液滴の蛍光シグナルを検査することによって、及び金基体上に付着させた同一厚さのポリピロールフィルムに関する同一シグナルと比較することによって、単純な方法で試験する。使用した蛍光体は、１μMのCy3dctp（登録商標）（Amersham）である。液滴の体積は、0.5μlである。
【０１４７】
図19a)及び19b)は、一方ではポリピロールのフィルムで被覆した（図19a）、他方では本発明による絶縁体有機ポリマーフィルムで被覆した（ManAu11）（図19b）、金の基体の図示である。
【０１４８】
図20a)、b)、及びc)は、この実施例で得られる、金の領域（20a)）、ポリピロールのフィルム（20b)）、及びポリメタクリロニトリル(MAN)のフィルム上の蛍光のネガ（50倍の対物レンズ；露出時間200ms）である。
【０１４９】
３枚の写真上で高度に明るい点は、蛍光体の凝集あるいは蛍光塵のいずれかである。これらの点は、バイオチップではよくあることだが、表面に近い、すなわち表面から数nmの蛍光体には相当せず、数十乃至数百nmのボールに相当する。したがって、比較はこれらの光点に関してではなく、これらの点の周囲の「連続的背景」について行われねばならない。
【０１５０】
別個の露出時間で、同一感度の写真レセプター、同一光学で達成される同一倍率、及び、AuMAN11サンプルの場合には（ネガc））、標識が非常に低濃度（1μm）であるにも関わらず、表面と「直接」接触する蛍光体が「消光」しないことが観察され、一方でこれらは金の領域上（ネガa））及び導電性有機被覆の領域上（ネガb））では消光することが観察される。従って、この点において、これらの図20に示されるように、導電性フィルムに対するPMANの絶縁体フィルムの透明性の優れた特性が直接観察される。
【０１５１】
（実施例３：ジアゾニウム塩の存在下での電気開始（electroinitiation）によるポリメタクリロニトリルフィルムの付着物の製造）
ポリメタクリロニトリルフィルムの付着物を、実施例１のものと同様の金基体上に、ジアゾニウム塩から出発する電気開始によって製造する。これらのフィルムは、補助電極としての0.05Mテトラエチルアンモニウムペルクロレート（TEAP）及び10-3Mの4-ニトロフェニルジアゾニウムテトラフルオロボレートの存在下で、無水アセトニトリル中のメタクリロニトリルの2.5M溶液の電解還元によって金電極上に得られる。電解還元は、表面積の大きな白金対向電極を備えた非分割区画中、100mV/sにて、+0.3乃至-1.5V/(Ag+/Ag)の電解条件下で起こる。100nmのオーダーの厚さを有するフィルムが得られるように、走査数を調節する。
【０１５２】
直接電気グラフト化することにより得られるポリメタクリロニトリルフィルムで観察されるように、光学測定によって係数k<0.02が示される。
【０１５３】
（実施例４：再現性をモニターするための操作）
フィコエリトリンを振りかけた様々な厚さのポリメタクリロニトリルフィルムを、完全に別個の金ストリップ上に製造する。このためには、金ストリップを、表面積の大きな白金対向電極を備えた非分割区画中、無水アセトニトリル中2.5Mのメタクリロニトリル、補助電極としての0.05Mテトラエチルアンモニウムペルクロレート（TEAP）、10-3Mの4-ニトロフェニルジアゾニウムテトラフルオロボレート、及び１μMのフィコエリトリンを含む溶液中、100mV/sにて、+0.3乃至-1.0V/(Ag+/Ag)の電解条件下で分極させる。得られたフィルムの厚さを偏光解析により測定したところ、50±5nm、すなわち10%の精度である。
【０１５４】
その後、各ストリップを543nmにて照射し、得られる蛍光強度を580nmで測定する。蛍光の個別強度を、15%未満の測定のばらつきをもって全ストリップ上で測定する。
【０１５５】
（実施例５：品質管理操作）
PMAN（ポリメタクリロニトリル）フィルムを、1cm2の金ストリップ上に実施例４の操作に従い、厚さを増大させて付着させる。5乃至150nmの様々な厚さが、電解走査の数を変化させることによって得られる。
【０１５６】
得られる被覆上での蛍光測定により、強度/cm2の関数としての厚さを示す検量線をプロットすることが可能になる。
【０１５７】
厚さ84nm（偏光解析による測定）を有するPMAN付着物を、その後5cm2の金表面に製造する。蛍光測定により、検量線から、75nmの厚さが示され、これによって直接厚さを測定することなく適当な制御を確認することが可能になる。
（参考文献）
2005505782.tif 000008
【図面の簡単な説明】
【０１５８】
【図１】図１は、本発明による絶縁体ポリマーのフィルムの厚さを測定するために使用される回転偏光子偏光解析の原理を示す図である。
【図２】図２は、様々な入射の角度（°）についての、基体としての金の偏光解析測定スペクトルである。
【図３】図３は、様々な入射の角度（°）についての、基体としての金の偏光解析測定スペクトルである。
【図４】図４は、金単独の基体（G）上で、及び有機フィルムで被覆された基体上で、300乃至800nmの全波長について75°の角度で測定して行われた、率（I）及び（N）と、光学吸光係数（E）及び（K）との測定を組み合わせたグラフである。
【図５】図５は、5nm毎に300乃至800nmに広がるスペクトル範囲に亘って実行した測定で得られた、有機フィルム無しの白金基体の偏光解析スペクトルである。
【図６】図６は、5nm毎に300乃至800nmに広がるスペクトル範囲に亘って実行した測定で得られた、有機フィルム無しの白金基体の偏光解析スペクトルである。
【図７】図７は、有機フィルム無しの白金基体上で、300乃至800nmの全波長について75°の角度で測定して行われた、率（I）及び（N）と、光学吸光係数（E）及び（K）との測定を組み合わせたグラフである。
【図８ａ】図8aは、5nm毎に300乃至800nmに広がるスペクトル範囲で、5°毎に55乃至75°で実行した測定で得られた、PMANフィルムで被覆した白金基体の偏光解析スペクトルを表す（サンプルAuMAN7）。
【図８ｂ】図8b)は、5nm毎に300乃至800nmに広がるスペクトル範囲で、5°毎に50乃至75°で実行した測定で得られた、PMANフィルムで被覆した白金基体の偏光解析スペクトルを表す（サンプルAuMAN7）。
【図９ａ】図9a)は、5nm毎に300乃至800nmに広がるスペクトル範囲で、5°毎に55乃至75°で実行した測定で得られた、PMANフィルムで被覆した白金基体の偏光解析スペクトルを表す（サンプルAuMAN24）。
【図９ｂ】図9b)は、5nm毎に300乃至800nmに広がるスペクトル範囲で、5°毎に50乃至75°で実行した測定で得られた、PMANフィルムで被覆した白金基体の偏光解析スペクトルを表す（サンプルAuMAN24）。
【図１０ａ】図10a)は、5nm毎に300乃至800nmに広がるスペクトル範囲で、5°毎に55乃至75°で実行した測定で得られた、PMANフィルムで被覆した白金基体の偏光解析スペクトルを表す（サンプルAu2401）。
【図１０ｂ】図10b)は、5nm毎に300乃至800nmに広がるスペクトル範囲で、5°毎に50乃至75°で実行した測定で得られた、PMANフィルムで被覆した白金基体の偏光解析スペクトルを表す（サンプルAu2401）。
【図１１ａ】図11a)は、5nm毎に300乃至800nmに広がるスペクトル範囲で、5°毎に55乃至75°で実行した測定で得られた、PMANフィルムで被覆した白金基体の偏光解析スペクトルを表す（サンプルAu2301）。
【図１１ｂ】図11b)は、5nm毎に300乃至800nmに広がるスペクトル範囲で、5°毎に50乃至75°で実行した測定で得られた、PMANフィルムで被覆した白金基体の偏光解析スペクトルを表す（サンプルAu2301）。
【図１２】図12は、本発明による様々な透明な電気絶縁性有機ポリマーフィルムで被覆した金基体を用いたサンプルの反射（%）の、波長（nm）の関数としての測定の図示である。
【図１３ａ】図13b)は、5°毎に50乃至75°で、5nm毎に300乃至800nmに広がるスペクトル範囲で、ジアゾニウム塩ベースの導電性有機ポリマーのフィルムで被覆した白金基体（サンプル01010Pt6）上で、様々な入射の角度（°）について行われた偏光解析測定のスペクトルである。
【図１３ｂ】図13b)は、5°毎に50乃至75°で、5nm毎に300乃至800nmに広がるスペクトル範囲で、ジアゾニウム塩ベースの導電性有機ポリマーのフィルムで被覆した白金基体（サンプル01010Pt6）上で、様々な入射の角度（°）について行われた偏光解析測定のスペクトルである。
【図１４ａ】図14a)は、5°毎に50乃至75°で、5nm毎に300乃至800nmに広がるスペクトル範囲で、ジアゾニウム塩ベースの導電性有機ポリマーのフィルムで被覆した白金基体（サンプル01010Pt14）上で、様々な入射の角度（°）について行われた偏光解析測定のスペクトルである。
【図１４ｂ】図14b)は、5°毎に50乃至75°で、5nm毎に300乃至800nmに広がるスペクトル範囲で、ジアゾニウム塩ベースの導電性有機ポリマーのフィルムで被覆した白金基体（サンプル01010Pt14）上で、様々な入射の角度（°）について行われた偏光解析測定のスペクトルである。
【図１５】図15は、ジアゾニウム塩ベースの導電性有機フィルムで被覆した白金のサンプル（サンプル0101Pt6及び01010Pt14）の反射を測定することを企図する、基準波長を560nmとする400乃至800nmの範囲に亘る分光光度測定の結果を表す。
【図１６】図16は、ジアゾニウム塩ベースの導電性有機フィルムで被覆した白金のサンプル（サンプル0101Pt6及び01010Pt14）の損失を測定することを企図する、基準波長を560nmとする400乃至800nmの範囲に亘る分光光度測定の結果を表す。
【図１７】図17は、表面蛍光体の双極子モデル化のための図である。
【図１８ａ】図18a)は、有機フィルムの表面に対して平行方向に向かって該表面に位置する蛍光体双極子の蛍光シグナルのモデル化（シグナル(ua)＝ｆ（ポリマーの厚さ）（nm））を表す。
【図１８ｂ】図18b)は、有機フィルムの表面に対して垂直方向に向かって該表面に位置する蛍光体双極子の蛍光シグナルのモデル化（シグナル(ua)＝ｆ（ポリマーの厚さ）（nm））を表す。
【図１９ａ】図19a)は、従来技術によりポリピロールのフィルムで被覆した金の基体を表す図である。
【図１９ｂ】図19b)は、本発明により絶縁体有機ポリマーフィルムで被覆した金の基体を表す図である。
【図２０ａ】図20a)は、金基体上に付着させた発光体の液滴（１μ,溶液を0.5μl）の蛍光の、金領域のネガ（50倍の対物レンズ；露出時間200ms）である。
【図２０ｂ】図20b)は、金基体上に付着させたポリピロールのフィルム上に付着させた発光体の液滴（１μ,溶液を0.5μl）の蛍光の、ポリピロールに相当する領域のネガ（50倍の対物レンズ；露出時間200ms）である。
【図２０ｃ】図20c)は、金基体上に付着させたポリメタクリロニトリル（MAN）のフィルム上に付着させた発光体の液滴（１μ,溶液を0.5μl）の蛍光の、MANの付着物に相当する領域のネガ（50倍の対物レンズ；露出時間200ms）である。
【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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