(57)【要約】第１の局面によれば、遊離アミノ酸及び短いペプチドを含む蛋白質不含産物の製造方法が挙げられ、ここでは所望の産物を得るために、生の蛋白質材料が圧搾され、内因性酵素で加水分解され、異なる分離プロセス（蛋白質残留物の凝固を含む）に通される。本発明はさらに得られる産物及びその使用を含む。第２の局面によれば、遊離アミノ酸及び短いペプチドに富む蛋白質産物が製造され、ここでは生の蛋白質材料がすり潰され、内因性酵素で加水分解され、そして加水分解物が種々の分離プロセスを受ける。得られる産物は、蛋白質、短い及び長いペプチド、遊離アミノ酸並びにミネラルを含み、低脂肪含量及び塩含量を有する。第３の局面によれば、蛋白質を含有する生材料の加水分解及びアミノ酸／ペプチドの分離が行われ、ここでは加水分解は、蛋白質を含有する生材料の内因性酵素の使用によりもたらされる。加水分解物は膜フィルターに通され、ペプチド／アミノ酸は透過物ストリームにのり、その間に、活性酵素が膜表面に沈着した任意の蛋白質残留物を連続的に破壊する。酵素は保持物と共に加水分解に戻される。さらに、アミノ酸及びペプチド産物並びに油状物が記載され、その使用が開示される。
2005534340.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１以上の蛋白質を含有する生材料からのペプチド／アミノ酸及び油／脂肪の回収方法であって、以下の工程を含むことにより特徴付けられる方法：
ａ．生材料をすり潰す工程；
ｂ．４０〜６２℃、好ましくは４５〜５８℃の範囲の温度に、すり潰された生材料を加熱する工程；
ｃ．必要に応じて、加熱工程の前及び／又は後に、第１の油状物を得るために生材料から油／脂肪を分離する工程；
ｄ．水を添加する工程であって、水が生材料とほぼ同じ又は同じ温度を有し、且つ水のｐＨがカルシウムの添加により調節されている、工程；
ｅ．加水分解物を調製するために生材料を内因性酵素で加水分解する工程；
ｆ．必要に応じて、加水分解工程の間に、加水分解物を所望のｐＨ値に維持するためにｐＨ調節剤を添加する工程；
ｇ．７５〜１００℃、好ましくは８５〜９５℃に加水分解物を加熱する工程；
ｈ．加水分解に戻され得る非加水分解蛋白質を含む加水分解物から大粒子を除去する工程；
ｉ．必要に応じて、第２の油状物を得るために油／脂肪を分離して取り出す工程；
ｊ．蛋白質を凝固させる工程；
ｋ．凝固した蛋白質を除去する工程；
ｌ．必要に応じて、第３の油状物を得るために油／脂肪を分離して取り出す工程；
ｍ．必要に応じて、残留するアミノ酸及び短いペプチドを濃縮する工程；並びに
ｎ．必要に応じて、乾燥した短いペプチド及びアミノ酸を得るために濃縮物を乾燥させる工程。
【請求項２】
工程ｄで添加される水が、反応混合物全体の１０〜４０％、好ましくは２０〜３０％の水を含むことを特徴とする、請求項１記載の方法。
【請求項３】
閉鎖系プロセスとして行われることを特徴とする、請求項１記載の方法。
【請求項４】
工程ｆにおけるｐＨ調節剤が、窒素ガス、カルシウム又は骨粉であることを特徴とする、請求項１記載の方法。
【請求項５】
工程ｈからの大粒子を、ヒドロキシアパタイト製造用の骨部分、加水分解に戻され得る蛋白質残留物、及び他の固形粒子に分別する工程をさらに含むことを特徴とする、請求項１記載の方法。
【請求項６】
ペプチド及びアミノ酸産物が、＜０．１％の脂肪含量、＜１％の塩含量を有することを特徴とする、請求項１記載の方法。
【請求項７】
医薬品を製造するためである、請求項１記載の方法のいずれかの使用。
【請求項８】
食品を製造するためである、請求項１記載の方法のいずれかの使用。
【請求項９】
飼料品を製造するためである、請求項１記載の方法のいずれかの使用。
【請求項１０】
生物工学品を製造するためである、請求項１記載の方法のいずれかの使用。
【請求項１１】
ヒドロキシアパタイトを製造するためである、請求項１記載の方法の使用。
【請求項１２】
アレルゲン及び微量ＤＮＡを含有せず、且つ脂肪含量が＜０．１％であり、＜０．５重量％の塩含量を有することを特徴とする、請求項１記載の方法により調製されるアミノ酸／ペプチド。
【請求項１３】
アレルゲン及び微量ＤＮＡを含有しないことを特徴とする、請求項５記載の方法により製造されるヒドロキシアパタイト。
【請求項１４】
請求項１記載の方法により製造される第１の油状物であり、冷却圧搾されており、且つ食用品質であることにより特徴付けられる、油。
【請求項１５】
１以上の蛋白質を含有する生の産物からのペプチド／アミノ酸の回収方法であって、以下の工程を含むことにより特徴付けられる方法：
ａ．生材料をすり潰す工程；
ｂ．４０〜６２℃、好ましくは４５〜５８℃の範囲の温度に、すり潰された生材料を加熱する工程；
ｃ．必要に応じて、加熱工程の前及び／又は後に、第１の油状物を得るために生材料から油／脂肪を分離する工程；
ｄ．水を添加する工程であって、水が生材料とほぼ同じ又は同じ温度を有し、且つ水のｐＨがカルシウムの添加により調節されている、工程；
ｅ．加水分解物を調製するために生材料を内因性酵素で加水分解する工程；
ｆ．必要に応じて、加水分解工程の間に、加水分解物を所望のｐＨ値に維持するためにｐＨ調節剤を添加する工程；
ｇ．７５〜１００℃、好ましくは８５〜９５℃に加水分解物を加熱する工程；
ｈ．非加水分解蛋白質を含む加水分解物から大粒子を除去する工程；
ｉ．必要に応じて、第２の油状物を得るために油／脂肪を分離して取り出す工程；
ｊ．蛋白質及び長いペプチドを除去する工程；
ｋ．残留するアミノ酸及びペプチドを濃縮する工程；
ｌ．蛋白質産物を得るために蛋白質及び長いペプチドを濃縮物に戻す工程；並びに
ｍ．必要に応じて、蛋白質、遊離アミノ酸並びに短いおよび長いペプチドを含有する乾燥品を得るために蛋白質産物を乾燥させる工程。
【請求項１６】
工程ｄで添加される水が、反応混合物全体の１０〜４０％、好ましくは２０〜３０％の水を含むことを特徴とする、請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
閉鎖系プロセスとして行われることを特徴とする、請求項１５記載の方法。
【請求項１８】
工程ｆにおけるｐＨ調節剤が、窒素ガス、カルシウム又は骨粉であることを特徴とする、請求項１５記載の方法。
【請求項１９】
工程ｈからの大粒子を、ヒドロキシアパタイト製造用の骨部分、蛋白質残留物、及び他の固形粒子に分別する工程をさらに含むことを特徴とする、請求項１５記載の方法。
【請求項２０】
蛋白質産物が、５〜９５重量％、好ましくは３０〜６０重量％の遊離アミノ酸を含むことを特徴とする、請求項１５〜１９のいずれか１項記載の方法。
【請求項２１】
蛋白質産物が０．５重量％未満の脂肪を含有することを特徴とする、請求項１５〜２０のいずれか１項記載の方法。
【請求項２２】
蛋白質産物が１重量％未満の塩を含有することを特徴とする、請求項１５〜２１のいずれか１項記載の方法。
【請求項２３】
獣医学用薬品を製造するためである、請求項１５記載の方法のいずれかの使用。
【請求項２４】
食品を製造するためである、請求項１５記載の方法のいずれかの使用。
【請求項２５】
飼料品を製造するためである、請求項１５記載の方法のいずれかの使用。
【請求項２６】
請求項１５記載の方法により製造される第１の油状物であり、冷却圧搾されており、且つ食用品質であることにより特徴付けられる、油。
【請求項２７】
蛋白質を含有する生材料からのペプチド／アミノ酸及び油／脂肪の回収方法であって、以下の工程を含むことにより特徴付けられる方法：
ａ．生材料をすり潰す工程；
ｂ．４０〜６２℃、好ましくは４５〜５８℃の範囲の温度に、すり潰された生材料を加熱する工程；
ｃ．必要に応じて、加熱工程の前及び／又は後に、第１の油状物を得るために生材料から油／脂肪を分離する工程；
ｄ．水を添加する工程であって、水が生材料とほぼ同じ又は同じ温度を有し、且つ水のｐＨがカルシウムの添加により調節されている、工程；
ｅ．加水分解物を調製するために生材料を内因性酵素で加水分解する工程；
ｆ．必要に応じて、加水分解工程の間に、加水分解物を所望のｐＨ値に維持するためにｐＨ調節剤を添加する工程；
ｇ．固形粒子及び加水分解に戻され得る非加水分解蛋白質を加水分解物から除去する工程；
ｈ．第２の油状物を得るために油／脂肪を定期的又は連続的に分離して取り出す工程；
ｉ．必要に応じて、微生物の増殖を防ぐために加水分解物を好ましくはＵＶ処理により処理する工程
ｊ．所望のペプチド／アミノ酸の分子量画分を、膜ろ過、好ましくはクロスフロー型により分離して取り出す工程；
ｋ．ｊの時点において膜フィルターを通過しない加水分解物部分を、工程ｅにおける加水分解に戻す工程；
ｌ．ペプチド／アミノ酸を得るために透過物を濃縮し、必要に応じて乾燥させる工程；並びに
ｍ．濃縮物からの蒸留物を膜フィルターの透過物側に全体的又は部分的に戻す工程。
【請求項２８】
閉鎖系プロセスとして行われることを特徴とする、請求項２７記載の方法。
【請求項２９】
工程ｆにおけるｐＨ調節剤が、窒素ガス又は骨粉であることを特徴とする、請求項２７記載の方法。
【請求項３０】
工程ｇからの固形粒子を、ヒドロキシアパタイト、蛋白質残留物、及び他の固形粒子に分別する工程をさらに含むことを特徴とする、請求項２７記載の方法。
【請求項３１】
工程ｈで回収される第２の油状物をフィルターに通し、且つ冷却圧搾された蛋白質不含無菌油を得るために、任意の重部分（例えば、ステアリン酸）を除去することを特徴とする、請求項２７記載の方法。
【請求項３２】
１以上の蛋白質を含有する生材料を加水分解し、且つアミノ酸／ペプチドを分離するための方法であって、
加水分解が、蛋白質を含有する生材料の内因性酵素を使用して行われ；且つ
加水分解物が膜様フィルターに通され、ここでペプチド／アミノ酸が透過物ストリームにのり、その間に、活性酵素が膜表面上に沈着した任意の蛋白質残留物を連続的に破壊し、且つ酵素が保持物と共に加水分解に戻されることにより特徴付けられる、方法。
【請求項３３】
加水分解混合物からのペプチド及びアミノ酸の除去方法であって、活性酵素、アミノ酸、ペプチド及び非変換蛋白質を含有する加水分解混合物を膜フィルターに通し、アミノ酸及び任意のペプチドがフィルターにより取り出され、存在する活性酵素が膜フィルター上に沈着した蛋白質を破壊するように作用させることにより特徴付けられる、方法。
【請求項３４】
医薬品を製造するためである、請求項２７、３２又は３３記載の方法のいずれかの使用。
【請求項３５】
生物工学品を製造するためである、請求項２７、３２又は３３記載の方法のいずれかの使用。
【請求項３６】
食品を製造するためである、請求項２７、３２又は３３記載の方法のいずれかの使用。
【請求項３７】
飼料品を製造するためである、請求項２７、３２又は３３記載の方法のいずれかの使用。
【請求項３８】
ヒドロキシアパタイトを製造するためである、請求項３０記載の方法の使用。
【請求項３９】
アレルゲン及び微量ＤＮＡを含有せず、脂肪を実質的に含有せず、且つ＜０．５重量％の塩含量を有することを特徴とする、請求項２７記載の方法により製造されるアミノ酸／ペプチド。
【請求項４０】
アレルゲン又は微量ＤＮＡを含有しないことを特徴とする、請求項３１記載の方法により製造される油。
【請求項４１】
アレルゲン又は微量ＤＮＡを含有しないことを特徴とする、請求項３０記載の方法により製造されるヒドロキシアパタイト。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、以下の局面に関する：
ａ）生の動物性又は水産材料からのペプチド、遊離アミノ酸及びミネラルを含有する蛋白質不含（protein-free）産物の製造方法、並びにその産物、並びに動物用飼料としての、及び／又は生物工学、医薬及び食品加工産業のための産物におけるそれらの使用。上述の方法の結果物である油状物もまた記載される。
ｂ）遊離アミノ酸及び短いペプチドに富む蛋白質産物の製造方法、得られる産物、並びに動物用飼料としての、及び／又は獣医学での使用のための産物における、及び食品加工産業におけるその使用。上述の方法の結果物である油状物もまた記載される。
ｃ）生の動物性又は水産材料からのペプチド、遊離アミノ酸及びミネラルの回収方法。
【発明の開示】
【０００２】
産業では、酸加水分解により、並びに生物工学及び／又は化学／技術、天然及び合成の双方の濃縮された酵素を使用して、ペプチド及びアミノ酸を製造することが知られている。本発明は、医薬用品質、生物工学品質、食用品質又は獣医学用品質の産物を生ずる産業処理において、生の動物性又は水産材料に由来する天然に存在する分解酵素を使用する方法である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００３】
用語「医薬用品質」とは、産物が、静脈内使用のための産物、並びにヒト及び動物用の医薬又は天然医薬として分類されることを意味する。
【０００４】
用語「生物工学用品質」とは、産物が、例えば、培養培地又は細胞、細菌、菌類及び藻類の培養における触媒として使用され得ることを意味する。
【０００５】
用語「食用品質」とは、産物が、添加剤として又は独立した産物としてのいずれかでヒトでの消費に使用されることを意味する。
【０００６】
用語「獣医学用品質」とは、産物が動物用医薬として分類されることを意味する。
【０００７】
本発明は、必要に応じて、添加剤の形態における又は独立した産物としての飼料品を製造するために使用されてもよい。
【０００８】
アミノ酸及びペプチドは、医薬、天然薬品及び獣医学産業において、産物の成分（例えば、静脈内食物及び所定のトラウマを和らげる特別な食物）として周知である。現在までに、これは、血漿、及び本領域で使用されているブタ及び仔ウシ由来の膵酵素を使用して製造される蛋白質加水分解物から主に抽出されている。本発明は、医薬産業界に、これまでに知られていない品質のアミノ酸及びペプチドの供給を与える可能性を提供する。
【０００９】
アミノ酸及び非常に短いペプチドもまた、生物工学プロセス（例えば、非常に強力な培養培地を製造すべきである場合）に使用される。単細胞生物又は高等生物由来の細胞基質を培養する全ての産業は、適切な品質の培養培地の供給という点で制限されている。欠陥又は高額な価格が律速因子なのである。さらに、生物工学方法により産生されるアミノ酸又はペプチドは、一般的に、本発明の方法により製造される産物を使用することにより回避され得る増殖阻害物質を含有する。記載されるプロセスにより製造される天然アミノ酸及び生物学的微量栄養素／ミネラルの範囲の組合せは、生物工学産業用培養培地を調製するためのユニークな産物を生じる。さらに、本技術は、多くのタイプの培養物由来の蛋白質を、次いで再使用され得るアミノ酸及びペプチドにリサイクルできる。
【００１０】
ペプチド／アミノ酸は、結合剤、乳化剤、芳香用添加剤などとして食品加工産業で使用されている。その用途は多く、また増加中である。食品加工産業で最も使用されるペプチド及びアミノ酸は、ダイズ及びミルクに由来する。ダイズ及びミルク由来のアミノ酸及びペプチドは特に、アレルギー反応を引き起こすことが知られている。アレルギー反応は、これらの供給源に由来しない別のペプチド／アミノ酸組成物、あるいはこれらの反応を生じないように十分に改変されたダイズ又はミルク由来のペプチド／アミノ酸組成物を使用して回避され得るのみである。従って、ダイズ及び／又はミルクにまた由来するが、アレルギー反応を引き起こさないアミノ酸及びペプチドの組成物を提供する方法が大いに必要とされている。ほとんどの動物供給源由来の産物は、同程度の利用性を達成できない。なぜなら、所望されない品質劣化成分（例えば、塩及び脂肪）を除去しつつ、産物の機能性を維持する抽出技術が存在しないからである。
【００１１】
異なる供給源由来の蛋白質、ペプチド及びアミノ酸の多くの異なる組成物は、動物飼料の製造に使用されている。ペプチド、アミノ酸及び蛋白質の組成物はまた、飼料の製造に非常に重要である。なぜなら、動物の成長能は、バランスのとれた飼料摂取に依存するからである。従って、本領域においてもまた、動物に最適な成長条件を提供する任意の所望される組成物を製造する方法が大いに必要とされている。
【００１２】
以下では、用語「内因性」酵素は、伝統的加水分解の間に生の蛋白質材料に添加される外来性酵素である「外因性」酵素とは対照的に、蛋白質産物内を起源とする酵素についての用語として使用される。「外因性酵素」の一例は、Bacillus alcalophilusの醗酵の制御により調製され、且つ多くの業者から購入され得る細菌性プロテアーゼ（E.C.3.4.21）である「Deterzyme APY」である。用語「内因性」酵素はまた、他の同様な天然酵素材料又は生材料（raw material）から、好ましくは冷血動物から抽出される酵素を意味するものとして使用される。
【００１３】
用語「加水分解物」は、以下の本文では、処理されている生材料を示すものとして使用され、即ち、加温且つｐＨ調節された生材料及び水の混合物が加水分解物を構成する。これは特に、本発明のａ）及びｂ）の局面に適用される。
【００１４】
本発明の分野には多くの特許が存在する。例えば、RU2103360は、真核細胞を培養するための栄養培地、及び蛋白質分解性加水分解により調製される加水分解物を魚の内臓から調製するための方法を記載している。本加水分解プロセスは、水酸化ナトリウムにより調節された高いｐＨにて、温度不活性化を使用し、ろ過及び乾燥させることにより行われ、ここで魚のくず肉（offal）は蒸留水と１：１の比率で混合される。加水分解は、５．５〜６．５％のアミノ窒素重量百分率及び５０〜６０％の遊離アミノ酸重量百分率が得られるまで＋４０°〜＋４２℃の温度にて行われる。
【００１５】
SU1755417もまた、醗酵器において生の魚材料から加水分解物を製造するための方法を開示している。醗酵器に醗酵調製物が添加され、続いて製造された加水分解物がろ過及び乾燥される。押し潰されてない生材料が使用され、醗酵器中に定期的に供給されている。
【００１６】
RU1559466は、加水分解物を製造するための方法を記載している。これは、その処理工程由来の魚の産物又はくずを押し潰し、水と混合し、混合物を加熱し、蛋白質分解性醗酵調製物を添加し、醗酵させ、ろ過及び乾燥することを必要とする。ここでは、生材料及び水が、２：１〜１：１の比率で混合され、そして＋４０°〜＋４５℃の温度に加熱される。その間、醗酵は、外因性酵素プロトサブチリン（protosubtilin）Ｇ３ｘを使用して０．５〜２．５時間にわたって行われる。
【００１７】
参照はまた、FR2168259に対してなされる。これは、水を添加せずに新鮮な魚を微細なペーストに押し潰すことにより行われる魚蛋白質の酵素加水分解を記載している。外因性酵素が添加され、ペーストは、所望の溶解度に応じて約１５時間加水分解される。産物は、＋９０°〜＋１００℃で５〜２０分間安定であり、ろ過、低温殺菌及び遠心分離される。この処理は、高い栄養価の産物を生じる。
【００１８】
先に示した通り、食品製造に適切な蛋白質、ペプチド及びアミノ酸を魚から放出させるための異なる技術が知られている。さらに、植物及び動物の双方の供給源由来の生材料から油／脂肪を調製することもまた知られている。
【００１９】
局面ａ）によれば、本発明の目的は、任意の非天然物質を添加することなく、天然酵素の使用に基づいて、蛋白質不含蛋白質加水分解物を製造するための方法を提供することである。これは、多くの異なる供給源由来（例えば、細菌培養物などの由来）の酵素を使用する他の方法とは対照的である。
【００２０】
目的はまた、プロセスが蛋白質及びＤＮＡ並びに他のアレルギー性物質を全く含有しない産物を提供すべきであること、並びにこれが生材料の利用性に不利に影響することなくなされることである。本方法はまた、生の魚材料を使用する短所を排除するような低レベルまで最終（end）産物中の脂肪を減少させることを意図する。既知の方法により製造される産物の使用がそれらの脂肪含量のために制限されているか、又は不可能とされている多くの異なる領域において使用され得る産物を製造することが意図される。
【００２１】
目的はまた、生材料を利用して、製造に伴う環境負荷を最小にすることを満たし且つ保証することである。
【００２２】
従って、本発明の局面ａ）によれば、以下の工程を含むことにより特徴付けられる、蛋白質を含有する生材料からペプチド／アミノ酸及び油／脂肪を回収する方法を提供する：
ａ．生材料をすり潰す工程；
ｂ．４０〜６２℃、好ましくは４５〜５８℃の範囲の温度に、すり潰された生材料を加熱する工程；
ｃ．必要に応じて、加熱工程の前及び／又は後に、第１の油状物を得るために生材料から油／脂肪を分離する工程；
ｄ．水を添加する工程であって、水が生材料とほぼ同じ又は同じ温度を有し、且つ水のｐＨがカルシウムの添加により調節されている、工程；
ｅ．加水分解物を調製するために生材料を内因性酵素で加水分解する工程；
ｆ．必要に応じて、加水分解工程の間に、加水分解物を所望のｐＨ値に維持するためにｐＨ調節剤を添加する工程；
ｇ．７５〜１００℃、好ましくは８５〜９５℃に加水分解物を加熱する工程；
ｈ．加水分解工程に戻され得る非加水分解蛋白質を含む加水分解物から大粒子を除去する工程；
ｉ．必要に応じて、第２の油状物を得るために油／脂肪を分離して取り出す（separate off）工程；
ｊ．蛋白質を凝固させる工程；
ｋ．凝固した蛋白質を除去する工程；
ｌ．必要に応じて、第３の油状物を得るために油／脂肪を分離して取り出す工程；
ｍ．必要に応じて、残留するアミノ酸及び短いペプチドを濃縮する工程；並びに
ｎ．必要に応じて、乾燥した短いペプチド及びアミノ酸を得るために濃縮物を乾燥させる工程。
【００２３】
本発明の局面ａ）の方法の好ましい実施形態は、従属する請求項２〜６に示される。
【００２４】
本発明の方法は、低い、好ましくは０．１％未満の脂肪含量を有するペプチド及びアミノ酸産物の製造を容易にする。さらに、製造された産物は、生物起源の天然ミネラルを含有する。産物の塩含量は１％未満である。
【００２５】
本発明はまた、各請求項７〜１０に開示される通り、生物工学品、医薬品、食品、及び飼料品を製造するための本発明の方法のいずれかの使用を含む。
【００２６】
本発明はまた、請求項１１に開示される通り、ヒドロキシアパタイトを製造するための本発明の方法の使用を含む。
【００２７】
本発明はまた、本発明の方法により調製され、且つ請求項１２に開示される通り特徴付けられるアミノ酸／ペプチドの製造を可能とする。
【００２８】
請求項１３に開示される通り、本発明の方法により製造され、且つアレルゲン及び微量ＤＮＡを全く含有しないことにより特徴付けられるヒドロキシアパタイトもまた提供される。
【００２９】
さらに、請求項１４に開示される通り、本発明の方法により製造され、且つアレルゲン及び微量ＤＮＡを全く含有しないことにより特徴付けられる油もまた提供される。
【００３０】
一方、本発明は、例えば、食品のためのそれらの使用から、医薬の要件を満たすべきである産物におけるそれらの使用まで多岐にわたる広範な品質範囲を備える産物を製造するという問題を解決する。
【００３１】
一方、本発明は、生材料の内因性酵素を使用し、且つ製造条件をこれらの酵素に適合させることによりこの問題を解決する。
【００３２】
本プロセスは、
−所望されない細菌増殖の防止のために任意の添加剤（例えば、クロロホルム）を用いずに；
−水酸化ナトリウムを添加することなく；
−油/脂肪の熱及び冷回収を可能とするように；
−プロセス用の生材料の選択に際して、特定の生材料を選ぶことにより最終産物中の遊離アミノ酸及びペプチドの範囲の制御を可能とするように；
−適用されるプロセスパラメータ（例えば、温度及びｐＨ）により、アミノ酸及びペプチド組成に関してプロセスの結果の制御を可能とするように；
−加水分解プロセスの間に酸を添加することなく；
−異なる生材料の柔軟な組合せを用いて；
−産物の画分を分離して取り出すように適合した濃縮工程を使用することにより；
行われ得るか、又は行われるという点で、並びに
−十分に加水分解されていない蛋白質及び大きなペプチドを、凝固を介して除去することによる；
−凝固した蛋白質をろ過及び分離して取り出すことによる；
−適合された濃縮技術の使用を介する；並びに
−より短い時間の加水分解の使用による、
という点で、先行技術の加水分解プロセスとは本質的に異なり、生物起源のミネラル及び微量栄養素を含有する産物を生じる。
【００３３】
局面ｂ）によれば、本発明の目的は、任意の非天然物質を添加することなく、天然酵素の使用に基づいて、遊離アミノ酸並びに短い及び長いペプチドを含有する蛋白質産物を製造するための方法を提供することである。これは、多くの異なる供給源由来（例えば、細菌培養物などの由来）の酵素を使用する他の方法とは対照的である。
【００３４】
さらに、本方法はまた、生の魚材料の使用の短所を排除するような低レベルにまで最終産物中の脂肪を減少させることを意図する。既知の方法により製造される産物の使用がそれらの脂肪含量のために制限されているか、又は不可能とされている多くの異なる領域において使用され得る産物を提供することが意図される。
【００３５】
さらに、生材料を利用して、製造に伴う環境負荷を最小にすることを満たし、且つ保証することを目的とする。
【００３６】
従って、請求項１５に開示される通り、以下の工程を含むことにより特徴付けられる、１以上の蛋白質を含有する生の産物からペプチド及び遊離アミノ酸を含有する蛋白質産物を回収するための方法を提供する：
ａ．生材料をすり潰す工程；
ｂ．４０〜６２℃、好ましくは４５〜５８℃の範囲の温度に、すり潰された生材料を加熱する工程；
ｃ．必要に応じて、加熱工程の前及び／又は後に、第１の油状物を得るために生材料から油／脂肪を分離する工程；
ｄ．水を添加する工程であって、水が生材料とほぼ同じ又は同じ温度を有し、且つ水のｐＨ値がカルシウムの添加により調節されている、工程；
ｅ．加水分解物を調製するために生材料を内因性酵素で加水分解する工程；
ｆ．必要に応じて、加水分解工程の間に、加水分解物を所望のｐＨ値に維持するためにｐＨ調節剤（例えば、カルシウム、窒素又は骨粉）を添加する工程。腐食性溶液はｐＨ調節に使用されない；
ｇ．７５〜１００℃、好ましくは８５〜９５℃に加水分解物を加熱する工程；
ｈ．非加水分解蛋白質を含む加水分解物から大粒子を除去する工程；
ｉ．必要に応じて、第２の油状物を得るために油／脂肪を分離して取り出す工程；
ｊ．蛋白質及び長いペプチドを除去する工程；
ｋ．残留するアミノ酸及びペプチドを濃縮する工程；
ｌ．蛋白質産物を得るために蛋白質及び長いペプチドを濃縮物に戻す工程；並びに
ｍ．必要に応じて、蛋白質、遊離アミノ酸並びに短いおよび長いペプチドを含有する乾燥品を得るために蛋白質産物を乾燥させる工程。
【００３７】
本発明の局面ｂ）の方法の好ましい実施形態は、添付する下位の請求項１６〜２２に示される。
【００３８】
本発明の方法により製造される蛋白質産物は、５〜９５重量％、好ましくは３０〜６０重量％の遊離アミノ酸を含有することにより特徴付けられるが、残りの９５〜５％は、蛋白質及びミネラル（ミネラルは生物起源の天然ミネラルである）を含む。
【００３９】
さらに、蛋白質産物は、０．５重量％未満の脂肪含量、及び低い、典型的には１重量％未満の塩含量を有する。
【００４０】
本発明はまた、各請求項２３、２４及び２５に開示される通り、獣医学用品、食品及び飼料品を製造するための本発明の方法の使用を含む。
【００４１】
請求項２６に開示される通り、本発明の方法により製造される第１の油状物であり、且つ食用品質であることにより特徴付けられる油もまた提供される。
【００４２】
一方、局面ｂ）の本発明はとりわけ、食品のためのそれらの使用から医薬用品質の産物の使用までの多岐にわたる広範な品質範囲を有する産物を提供するという問題を解決する。
【００４３】
一方、局面ｂ）によれば、本発明は、魚の内因性酵素を使用し、且つ製造条件をこれらの酵素に適合させることによりこの問題を解決する。
【００４４】
本プロセスは、
−所望されない細菌増殖の防止のために添加剤（例えば、クロロホルム）を用いずに；
−水酸化ナトリウムを添加することなく；
−油/脂肪の熱及び冷回収を可能とするように；
−プロセス用の生材料の選択に際して、特定の生材料を選ぶことにより最終産物中の遊離アミノ酸及びペプチドの範囲の制御を可能とするように；
−適用されるプロセスパラメータ（例えば、温度及びｐＨ）により、アミノ酸及びペプチド組成に関してプロセスの結果の制御を可能とするように；
−加水分解プロセスの間に酸を添加することなく；
−異なる生材料の柔軟な組合せを用いて；
−産物の画分を分離して取り出すように適合した濃縮工程を使用することにより；
行われ得るか、又は行われるという点で、並びに
−適合された濃縮技術の使用を介する；及び
−より短い時間の加水分解の使用による、
という点で、従来既知の加水分解プロセスとは本質的に異なり、生物起源のミネラル及び微量栄養素を含有する産物を生じる。
【００４５】
記載される局面ａ）及びｂ）の方法は、短いペプチド及び遊離アミノ酸の異なる組成を有する乾燥した最終産物を得ることを目的とする蛋白質の自然な加水分解である。このプロセスは、必要に応じて蛋白質及び長いペプチドを伴わない、５％〜１００％の遊離アミノ酸を含有する完成（finished）産物を生じる（局面Ａ）。さらに、本方法は、油／脂肪の回収を記載する。
【００４６】
本発明の局面ｃ）によれば、目的は、如何なる非天然物質も添加することなく、天然酵素の使用に基づいて、蛋白質加水分解物を製造するための方法を提供することである。これは、多くの異なる供給源由来（例えば、細菌培養物などの由来）の酵素を使用する他の方法とは対照的である。
【００４７】
さらに、目的は、局面ｃ）のプロセスが蛋白質及びＤＮＡ並びに他のアレルギー性物質を全く含有しない産物を提供すべきであること、並びにこれが生材料の利用性に不利に影響することなくなされることである。本方法はまた、生の魚材料を使用する短所を排除するような低レベルまで最終産物中の脂肪を減少させることを意図する。既知の方法により製造される産物の使用がそれらの脂肪含量のために制限されているか、又は不可能とされている多くの異なる領域において使用され得る産物を製造することが意図される。
【００４８】
目的はまた、生材料を利用して、製造に伴う環境負荷を最小にすることを満たし且つ保証することである。
【００４９】
従って、本発明の局面ｃ）によれば、請求項２７に開示される通り、以下の工程を含むことにより特徴付けられる、蛋白質を含有する生材料からペプチド／遊離アミノ酸及び油／脂肪を回収するための方法を提供する：
ａ．生材料をすり潰す工程；
ｂ．４０〜６２℃、好ましくは４５〜５８℃の範囲の温度に、すり潰された生材料を加熱する工程；
ｃ．必要に応じて、前及び／又は後に、第１の油状物を得るために生材料から油／脂肪を分離する工程；
ｄ．生材料とほぼ同じ又は同じ温度を有する水を添加する工程であって、水のｐＨがカルシウムの添加により調節されている、工程；
ｅ．加水分解物を調製するために、内因性酵素又は同じ生材料由来（好ましくは冷血種由来）の酵素で生材料を加水分解する工程；
ｆ．必要に応じて、加水分解工程の間に、加水分解物を所望のｐＨ値に維持するためにｐＨ調節剤を添加する工程；
ｇ．固形粒子及び加水分解に戻され得る非加水分解蛋白質を加水分解物から除去する工程；
ｈ．第２の油状物を得るために油／脂肪を定期的又は連続的に分離して取り出す工程；
ｉ．必要に応じて、微生物の増殖を防ぐために加水分解物を好ましくはＵＶ処理により処理する工程
ｊ．所望のペプチド／アミノ酸の分子量画分を、膜ろ過、好ましくはクロスフロー型により分離して取り出す工程；
ｋ．ｊの時点において膜フィルターを通過しない加水分解物部分を、工程ｅにおける加水分解に戻す工程；
ｌ．ペプチド／アミノ酸を得るために透過物を濃縮し、必要に応じて乾燥させる工程；並びに
ｍ．濃縮工程からの蒸留物を膜フィルターの透過物側に全体的又は部分的に戻す工程。
【００５０】
本発明の好ましい実施形態は、添付した下位の請求項２８〜３１に示される。
【００５１】
用語「膜フィルター」は、本文脈では、膜様フィルター（例えば、膜フィルター、浸透フィルター、限外フィルター、静電フィルター、クロスフローフィルターなど）を意味するものとして使用される。これらは、好ましくは、１０，０００ダルトン未満の又はそれに等しいカットオフ値により特徴付けられるべきである。
【００５２】
さらに、請求項３２に開示される通り、１以上の蛋白質を含有する生材料を加水分解し、且つアミノ酸／ペプチドを分離するための方法が提供される。本方法は、蛋白質を含有する生材料（単数又は複数）の内因性酵素を使用して加水分解が行われること、並びに加水分解物が膜フィルターに通され、ここでペプチド／アミノ酸が透過物ストリームにのり、その間に、活性酵素が膜表面上に沈着した任意の蛋白質残留物を連続的に破壊し、且つ酵素が保持物（retenate）と共に加水分解に戻されることにより特徴付けられる。
【００５３】
本発明の別の特徴は、請求項３３に開示される通り、加水分解混合物からのペプチド及びアミノ酸の分離方法である。本方法は、活性酵素、アミノ酸、ペプチド及び非変換蛋白質を含有する加水分解混合物を膜フィルターに通し、アミノ酸及び任意のペプチドがフィルターにより取り出され（filter off）、且つ存在する活性酵素が膜フィルター上に沈着した蛋白質の破壊を確保することにより特徴付けられる。
【００５４】
本発明はまた、各請求項３４〜３７に開示される通り、医薬品、生物工学品、食品及び飼料品を製造するための本発明の方法のいずれかの使用を含む。
【００５５】
本発明はまた、請求項３８に開示される通り、ヒドロキシアパタイトを製造するための本発明の方法の使用を含む。
【００５６】
さらに、請求項３９に開示される通り、本発明の方法により製造され、且つアレルゲン及び微量ＤＮＡを含有しないことにより特徴付けられるアミノ酸／ペプチドが提供される。
【００５７】
請求項４０に開示される通り、本発明の方法により製造され、且つアレルゲン及び微量ＤＮＡを含有しないことにより特徴付けられる油もまた提供される。
【００５８】
最後に、請求項４１に開示される通り、本発明の方法により製造され、且つアレルゲン及び微量ＤＮＡを含有しないことにより特徴付けられるヒドロキシアパタイトが提供される。
【００５９】
一方、局面ｃ）の本発明は、例えば、食品製造のためのそれらの使用から、医薬などの要件を満たすべきである産物におけるそれらの使用まで多岐にわたる広範な品質範囲を有する産物を製造するという問題を解決する。
【００６０】
一方、本発明は、生材料の内因性酵素を使用し、且つ製造条件をこれらの酵素に適合させることによりこの問題を解決する。
【００６１】
本発明の本局面ｃ）は、単純アミノ酸からわずかに１０，０００ダルトン未満の大きなペプチドまでの特定のサイズが決定された分子を回収するための技術と、内因性酵素の使用を組合せる。
【００６２】
本発明は、醗酵プロセスにおける酵素の保持（その間、放出されるアミノ酸及びペプチドが分離して取り出される）を含む。
【００６３】
本発明はまた、プロセスの間に生材料をさらに添加しながら、加水分解プロセスが連続的に実行され得ることを意味する。
【００６４】
本プロセスは、
−所望されない細菌増殖の防止のために添加剤（例えば、クロロホルム）を用いずに；
−水酸化ナトリウムを添加することなく；
−蛋白質不含の無菌海産（marine）油/脂肪の熱及び冷回収を可能とするように；
−プロセス用の生材料の選択に際して、特定の生材料を選ぶことにより最終産物中の遊離アミノ酸及びペプチドの範囲の制御を可能とするように；
−適用されるプロセスパラメータ（例えば、温度及びｐＨ）により、アミノ酸及びペプチド組成に関してプロセスの結果の制御を可能とするように；
−酸を添加することなく；
−異なる生材料の柔軟な組合せを用いて；
−産物の画分を分離して取り出すように適合した濃縮工程を使用することにより；
行われ得るか、又は行われるという点で、並びに
−連続的な酵素分解プロセスを使用することによる；
−酸又は塩基を使用する場合に蛋白質及び／又はペプチドを凝固させることがない；及び
−製造されるペプチドのサイズを分類することによる、
という点で、先行技術の酵素処理プロセスとは本質的に異なり、生物起源のミネラル及び微量栄養素を含有する産物を生じる。
【００６５】
従って、好ましくは水性起源の蛋白質材料からのペプチド／アミノ酸、ミネラル及び油／脂肪の回収方法が提供される。
【００６６】
先行技術は、ペプチド及びアミノ酸を含有する異なる画分中にもまた見出される、魚蛋白質を調製するための基本的に異なる方法により本発明とは異なる。その製造条件もまた本技術とは本質的に異なり、本発明では外因性酵素の使用が回避される。さらに、既に言及した引用物でも教示した通り、高品質の海産油／脂肪が、先行技術中に記載されてない異なる特定の方法の開発による本発明によって製造される。
【００６７】
記載される本方法は、異なる組成のペプチド及び遊離アミノ酸を含有する乾燥した最終産物又は液状物を得るという目的による蛋白質の自然な酵素処理である。本プロセスは、５％〜１００％の遊離アミノ酸を含有していてもよい完成産物を生じる。この産物はアレルゲン及び微量ＤＮＡを含有しない。非常に少量、典型的には０．１％未満の脂肪、及び生物微量栄養素しか存在しない。本発明の方法は、全てのタイプの培養物（高等生物由来の細胞を含む）に対する培養培地として十分に有用である産物を与える。
【００６８】
本発明は、産業規模でのアミノ酸及びペプチドの製造で問題となることがあった水酸化ナトリウムを使用することのない方法を可能とする。さらに、水の比率を先行技術での比率よりもより広い範囲で変化させることができ、遊離アミノ酸の重量百分率もまたより大きな範囲にある。
【００６９】
本技術との比較において、押し潰された及び押し潰されていない双方の出発材料が本発明では使用され、そして醗酵調製物は添加されないが、生材料中に既に存在する天然酵素が使用される。従って、生の蛋白質材料の内因性酵素が使用され、これは、より単純、より安定且つより安価に加水分解を行う方法となる。さらに、その条件は内因性酵素の活性条件に直接適合されていなければならない。これはまた先行技術とは異なる。
【００７０】
本産業で見出される別の問題は、外因性酵素が高価であり、且つ品質に差があるかもしれないということである。本発明は、内因性酵素のリサイクルによりこの問題を回避する。
【００７１】
さらに、活性酵素は特定の清浄機能を有する。それらはフィルターに保持されるので、これら酵素は、ろ過されない蛋白質及びペプチドとして振舞う。酵素はこれらの材料の破壊を引き起こし、従って、フィルターはこれまでに知られていた加水分解プロセスで使用される伝統的ろ過プロセスと比較して、より長い寿命を有する。これは、フィルターの費用、寿命及び効率、産物の品質、並びにシステム又はプロセスの利用性のレベルに関して大いなる利点である。
【００７２】
さらに、本方法は、油／脂肪及び固体の回収を記載する。本発明の方法により得られ得る固体の一つは、ヒドロキシアパタイトである。ヒドロキシアパタイトは、例えば、バイオクロマトグラフィー及び他の生物学的分離プロセスにおいて、ＮＭＲ及び他の検出プロセスにおいて使用され、従って、商業的に興味深いプロセス副産物である。
【００７３】
技術及びプロセスパラメータの選択は、得られる最終産物の種類を決定する。この様式では、顧客の要望に産物を適合させることが可能である。
【００７４】
本発明の局面ａ）及びｂ）の方法の実施形態はそれぞれ、図１及び２をそれぞれ参照して以下でより詳細に説明される。
【００７５】
生材料が、タンク１０１；２０１からグリンディング（grinding）システム１０２；２０２へとポンプで汲み上げられる。これは、生材料の所望の連絡を与える。
生材料由来の油／脂肪は、酵素プロセスの開始前に回収され得る。ここで、例えば、油の冷回収が使用され得る。酵素処理前に油を除去しないこともまた可能である。その場合、生材料はバイパスストリームＤ１；Ｄ２において熱交換器１０５；２０５へとポンプで直接汲み上げられる。
【００７６】
油の冷回収は、以下により行われ得る：
１．生材料を遠心分離し、液体及び固形粒子を２つの異なる画分に（例えば、デカンター遠心分離器１０３：２０３中に）分離する工程；
２．液相ストリームＡ１；Ａ２からの油を、例えば分離器１０４；２０４を使用して分離する工程；
３．分離からの固相ストリームＢ１；Ｂ２及び重相（heavy phase）を混合し、ストリームＣ１；Ｃ２を醗酵器にポンプで汲み上げる工程；
４．分離ストリームＤ１；Ｄ２からの油相を滅菌フィルター１０９；２０９を介してタンク１１０；２１０へとポンプで汲み上げることができるので、食用品質を達成するためにさらなる純化を必要としない。
【００７７】
材料は、「インライン（in-line）」連続熱交換器１０５；２０５又はバッチ作動性熱交換器のいずれかを介して醗酵タンク１０６；２０６へとポンプで汲み上げられ得る。醗酵タンクはまた、材料がポンプで汲み上げられる前に熱交換器中で加熱されていない場合、加熱のために使用され得る。生材料に、加温且つｐＨ調節された水ストリームＥ１；Ｅ２が添加される。水ストリームは、熱交換器１０８；２０８を介して、醗酵が生じる付近の温度に加熱される。ｐＨの調節は、好ましくは、カルシウムを放出するフィルター媒体１０７；２０７に水を通すことによりなされる。
【００７８】
温度及びｐＨは、プロセスの間、醗酵器において、センサ１１１、１１１’；２１１、２１１’により、又は別の様式でモニターされる。所望のｐＨへの調節は、プロセスの間に、好ましくは貯蔵タンク１１２、２１２から添加される骨粉又はカルシウムを使用してもたらされる。窒素１１３、２１３もまた、プロセスの間にｐＨを調節するために使用してもよい。
【００７９】
酵素処理が完了した場合、加水分解物は、好ましくは熱交換器１１４；２１４を介して加熱され、それにより酵素が不活化される。
【００８０】
加水分解物が骨又は他の固形粒子を含有する場合、これらは、好ましくはスクリーンデバイス１１５；２１５を使用して除去される。固形粒子（ストリームＦ１；Ｆ２）は、浮遊（flotation）１１６；２１６により２以上の画分に分離され得る。重（heavy）画分１１７；２１７は、ｐＨ調節前に乾燥及び／又は使用され得る骨（ヒドロキシアパタイト）からなる（ストリームＨ１；Ｈ２参照）。軽（light）画分（ストリームＧ１；Ｇ２）は主として、加水分解されない蛋白質である。
【００８１】
これらの軽画分Ｇ１は、図１に示される通り、グラインダー（grinder）１０２に戻され得、新たな加水分解プロセスのための生材料として使用されるか、又は副産物として除去される。
【００８２】
図２に示される通り、本発明の局面ｂ）の軽画分Ｇ２は、別々に通され、そして濃縮器２２２からの濃縮物と混合され得る。あるいは、それらは別々の産物として乾燥され得る。
【００８３】
第１の脂肪分離後に残留する脂肪は、例えば、三相分離器１１８；２１８を使用して分離して取り出される。油／脂肪ストリームＩ１；Ｉ２は、フィルター１１９；２１９でろ過され、必要に応じて続くさらなるプロセシングなどのためにタンク１２０；２２０に移され得る。
【００８４】
図１に示される通り、加水分解物（ストリームＪ１）は、混合タンク１２１に通され、その中で、酸１２２（好ましくはリン酸）がｐＨ＜５まで添加される。次いで、カルシウム１２３が、長いペプチド及び蛋白質を凝集させるために添加される。蛋白質及びカルシウム／リン酸カルシウムは、遠心分離器１２４を使用して分離して取り出され、タンク１２５に通される。この副産物は、全ての蛋白質残留物が焼滅するように高温で乾燥され得る。
【００８５】
蛋白質不含加水分解物ストリームＫ１は、好ましくは真空エバポレータ１２６中で濃縮される。凝縮物（ストリームＬ１）は、添加水（ストリームＥ１）として使用され得る。濃縮物（ストリームＭ１）は、スプレードライヤ１２７（好ましくはFiltermate（登録商標）型）で乾燥され得る。あるいは、濃縮物は、液状物ストリームＮ１として抽出され得る。
【００８６】
図２に示される通り、加水分解物（ストリームＪ２）は、遠心分離器２２１を使用して処理され、それにより蛋白質及び長ペプチド（ストリームＮ２）が分離して取り出される。これらは、濃縮器２２２からの遊離アミノ酸及び短いペプチドの濃縮物（ストリームＭ２）と混合される。凝縮物（ストリームＬ２）は、添加水（ストリームＥ２）として使用され得る。蛋白質及び長いペプチドの混合物を有する濃縮物（ストリームＭ２）は、スプレードライヤ２２３（好ましくはFiltermate（登録商標）型）で乾燥され得る。
【００８７】
異なるものとして示さない限り、本明細書中の全ての百分率の開示は、重量百分率と理解される。
【００８８】
本プロセスは、以下により詳細に記載される。
【００８９】
１）生材料：
プロセス用の生材料は、蛋白質材料、好ましくは魚、魚産物、貝、甲殻動物、軟体動物、及び魚／魚業からの副産物（例えば、魚のくず肉）、並びに淡水及び海水からの他の海洋生物からなるものであり得る。異なる生材料が、単独で又は「酵素材料」及び「蛋白質材料」を含有する産物との組合せにより使用され得る。「酵素材料」は、申し分のない量及び申し分のない品質の内因性酵素を含有する生材料である。「蛋白質材料」とは、申し分のない量及び申し分のない品質の内因性酵素を含有しない生材料を記載するものであり、従って、これは、酵素処理を行い得るために酵素産物を補充されなければならない。幾つかの場合では、酵素材料は蛋白質材料と同一であり得る。従来既知のプロセスは、くず肉と蛋白質材料を１：１の比率で組合せることを記載している。ここに記載される方法は、最終産物において所望の結果を得るためにこの比率を変化させることを可能とする。
【００９０】
生材料は、食物製造用の出発産物に関する法定要件を満たす。従来、生材料は、法律及び規定によりくずに分類されていた。優れた物流管理（logistics）及びプロセス慣用性により、この場合、生材料は食料として認可されることが可能である。これは、産業規模での製造、並びに食物及び／又は医薬産業における産物の使用を可能とする。
【００９１】
２）生材料の前処理
生材料は、タンクからグリンディングシステム（これは、材料に所望される連絡を与える）を介してポンプで汲み上げられる。グリンディングは、酵素が作用するより大きな表面を与え、生材料の酵素をより迅速に放出する。生の素材由来の油／脂肪は、酵素プロセスの開始前に回収され得る。ここで、例えば、油の冷回収が使用され得る。
【００９２】
油の冷回収は、以下により行われ得る：
１．生材料を遠心分離し、液体及び固形粒子を２つの異なる画分に分離する工程；
２．液相から油を分離する工程；
３．分離工程からの固相及び重相を混合し、それらを醗酵器にポンプで汲み上げる工程；
４．分離からの油相をさらにプロセシングし、食用品質を達成するためにさらなる純化を必要としない、顧客に特化した完成産物を提供する工程。
【００９３】
材料は、「インライン（in-line）」連続熱交換器又はバッチ作動性熱交換器のいずれかを介して醗酵タンクへとポンプで汲み上げられ得る。醗酵タンクはまた、材料がポンプで汲み上げられる前に熱交換器中で加熱されていない場合、加熱のために使用され得る。異なるタイプの生材料を所定の比率で混合することが所望される場合、これらの産物はポンプで汲み上げられ、同時に混合され得る。異なる生材料の量は、フローメーター及び／又は醗酵器中のレベル制御により制御され得る。
【００９４】
さらに、既知の量の生材料Ａを混合タンクにポンプで汲み上げ、次いで既知の量の生材料Ｂを同じタンクにポンプで汲み上げることで、生材料をすり潰さないこと、又は生材料の同時混合を回避し得ることが可能である。
【００９５】
生材料は、加水分解プロセスにおいて最大活性に必要とされる、酵素に好適な温度に加熱されるべきであることが望ましい。この温度の範囲は４０〜６２℃に及ぶ。ほとんどの場合における最適な範囲は４５〜５８℃である。異なる温度の使用は、異なる酵素の効果が得られることを可能とし、アミノ酸組成の制御を許容する。
【００９６】
本発明は、低い脂肪含量の最終産物を得るために、プロセスの間、加水分解後に、脂肪の回収／分離の機会を提供する。
【００９７】
脂肪分離は、蛋白質の凝固の前及び／又は後になされ得る。最終産物の典型的な脂肪含量は、乾燥したペプチド／アミノ酸産物において０．１％未満である。
【００９８】
周知技術（例えば、デカンテーション、分離及び／又は化学的方法）が、脂肪分離のために使用され得る。
【００９９】
３）加水分解プロセス
加熱した生材料の混合物は、加水分解容器又はタンクにポンプで汲み上げられる。醗酵が生じる温度付近を有する加温且つｐＨ調節された水は、この混合物に添加される。水量は、生材料及び所望の結果に従って変化させることができる。先行技術では、総量の５０％の量（即ち、５０％の生材料及び５０％の水）が使用された。本発明の方法では、利用可能な酵素及び蛋白質材料、並びに温度及びｐＨの最適化のために、より少ない水が使用される。本方法は、１０％〜４０％の量の添加水を使用する。最適には、添加される水は２０と３０％の間である。より少ない水を添加するということは、加水分解後の加水分解物中の短いペプチド及び遊離アミノ酸の濃度がより高くなることを意味し、このことはプロセス及びエネルギー価格の節約を意味する。
【０１００】
加水分解物は、一定の攪拌及びポンプ汲上げ下で醗酵タンクで維持される。この目的は、加水分解プロセスを改善することである。プロセスの間に加水分解物の攪拌／ポンプ汲上げを失敗すると、結果として、ｐＨ、温度及びプロセス自体が十分に制御されないこととなり得る。加水分解は、加水分解物の一部で異なるように進行し得、幾らかの酵素は消失し得る。
【０１０１】
加水分解の進行の程度を調べるために、アミノ結合窒素が解析される。この解析は、自動化装置により直接的に醗酵器中で、あるいは周知の技術（例えば、ホルマリン滴定など）を使用する製造実験室でなされ得る。プロセスの使用時間は、１〜４時間に変化させることができる。加水分解プロセスは、加水分解物中の遊離アミノ酸の百分率がもはや増加しない場合に停止される。これは、生材料の利用性のレベルの減少を生じる所望されないアンモニアの形成を回避するためである。
【０１０２】
プロセスに不可欠なことは、アルカリ性酵素が機能することである。従って、加水分解の間にｐＨ＞７．００であることが必須である。ｐＨ範囲は７．００と８．５０の間である。最適な加水分解プロセスは、７．６０〜８．２０のｐＨにて得られる。プロセス全体の間にｐＨが＞８．１であるが＜８．４である場合、遊離トリプトファンがアミノ酸範囲から除かれる。反対に、プロセス全体の間にｐＨが＜７．６であるが＞７．４である場合、トリプトファンは、回収可能な総量まで最大となり、この総量は生材料により決定される。プロセス全体の間、温度が＜４６℃であるが＞４４℃であり、且つｐＨが＜７．８であるが＞７．７である場合、コラーゲンはそれ程溶解しないが、固形粒子の形態で得られる。
【０１０３】
加水分解物のｐＨ調節については、異なる塩基（例えば、従来回収されていた魚の骨からの骨粉、カルシウム及び窒素／窒素ガス）が使用され得るが、局面ａ）では水酸化ナトリウムは使用され得ない。
【０１０４】
ＨＣｌは本発明ではプロセスに添加されない。この理由は、所望されない塩が形成されるためである。また、製造費用もより高くなる。先行技術はまた、細菌増殖を防ぐための添加剤としてクロロホルムを記載している。これは、加水分解時間の短さのため、本発明のプロセスでは使用されない。産業規模でのクロロホルムの使用は、望まれないが可能である。
【０１０５】
温度の上昇（好ましくは７０℃を超える）が、加水分解の停止に使用される。この温度の増加は、好ましくは、「インライン」熱交換器を使用してもたらされる。
【０１０６】
残留蛋白質の凝固は、低ｐＨを使用してもたらされる。次いで、リン酸が、所望のレベル（好ましくはｐＨ３．２と５．５との間）にｐＨを下げる添加剤として使用され得る。リン酸の添加後、必要に応じて加熱／冷却と組合せて、加水分解物から蛋白質及びペプチドを除去することが可能である。当然、蛋白質及びペプチドを変性させるための他の方法もまた使用されてもよい。例えば、電気的変性が使用され得る。
【０１０７】
既知のろ過技術が、変性蛋白質及び長いペプチドから遊離アミノ酸及び短いペプチド内容物を分けるために使用され得る。画分の異なる重量及び異なる化学的特性もまた、分離の間にそれらを分離するために使用され得る。これを容易にするために、リン酸カルシウム、水酸化カルシウム及び塩化カルシウムが使用されてもよい。これは、蛋白質及びペプチドが「くっつく」ことを引き起こす。従って、それらは、それらの密度の増加のために、より容易に分離して取り出されるようになる。添加される化学物の量は、蛋白質及びペプチドの内容物、並びに溶液中の他の緩衝剤の内容物の双方に応じて変化する。
【０１０８】
４）濃縮：
次いで、完成した加水分解物を濃縮することが所望される。これは、乾燥プロセス前に水を除去するためになされ、それにより乾燥工程の能力が最大限に利用される。７０％までの乾燥物（ＤＭ）の、乾燥前の前濃縮が、結晶化の設定前に可能である。
真空留去型の蒸留プロセスがこの目的に十分に適しているが、任意の他の形態の濃縮デバイスが使用され得る。真空エバポレータは低温にて液体を濃縮し、それによりペプチド又はアミノ酸が損なわれないことを保障する。
【０１０９】
留去は５０〜８５℃の温度範囲で行われ得る。最適には、この範囲は６５〜７０℃である。さらに、加水分解物は、濃縮工程に通されることなく、乾燥工程（項目５を参照）に直接通され得るか、あるいは濃縮は、煮沸又は真空留去以外の様式で行われ得る。異なるタイプのろ過／膜／浸透プラントもまた、この工程を行い得る。
【０１１０】
５）乾燥／顆粒化：
濃縮後、産物は、そのように所望される場合には乾燥され得るが、産物はまた、液状形態にて又は乾燥と液状形態との間の任意の状態にて存在してもよい。乾燥は産物をより安定に保存し、物流管理及び取扱いをより簡単にする。産物を乾燥させる様式は最終結果に重要である。調製されるペプチド／アミノ酸産物は非常に吸湿性であり、従って、この目的に関しては挑戦的である。産物の取扱いをより容易にするため、顆粒状産物を有することが所望される。
【０１１１】
このプロセスの１実施形態では、乾燥及び顆粒化が２つの異なる段階で行われるが、１段階のプロセスも当然可能である。第１の段階は、スプレードライヤ又はそれと同様のものでの粉末への乾燥（冷却工程を伴う）、次いで液状加水分解物の添加による顆粒化を含む。
【０１１２】
顆粒化は、産物に流動床（fluid bed）様特性を付与する機械回転刃を使用して粉末／産物を激しく動かした状態で維持することにより顆粒が「構築」されるというようにもたらされる。次いで、濃縮物／加水分解物がこの塊にスプレーされる。これは、顆粒物が徐々に構築されることを可能とする。これは全て連続したプロセスとして行われる。顆粒化プロセスの終了時に、乾燥した冷気が顆粒物に吹き付けられる。顆粒物はスクリーニングされ、必要な画分が抽出される。残留する細粒子（fine）がさらなる顆粒化のために再循環される。過剰に大きな顆粒物はすり潰され、再度スクリーニングされる。新たに形成された如何なる細粒子も顆粒化工程に戻される。
【０１１３】
先に言及した通り、上記で概略した乾燥及び顆粒化プロセスは、本発明の方法の産物を乾燥及び顆粒化するために使用され得る実施形態のうちの１つに過ぎず、当業者は、任意の他の適切な方法が同様の結果を得るために使用され得ることを理解する。
【０１１４】
勿論、種々の添加剤を産物に、好ましくは顆粒化工程で添加することもまた可能である。
【０１１５】
その局面ｃ）の本発明の実行は、ここにより詳細に記載される。
【０１１６】
図３の参照用番号は、プラントの以下の部品を表す：
３０１＝醗酵器
３０２＝固形粒子除去用分離ユニット（好ましくはスクリーン）
３０３＝分離ユニット（好ましくはデカンター型遠心分離器）
３０４＝蛋白質及びヒドロキシアパタイト分離用浮遊タンク
３０５＝油分離取出用分離ユニット（好ましくは遠心分離器）
３０６＝滅菌ろ過用フィルターユニット
３０７＝油／脂肪用タンク
３０８＝微生物減少ユニット
３０９＝膜フィルターユニット
３１０＝濃縮ユニット
３１１＝乾燥ユニット
３１２＝すり潰し装置
３１３＝遠心分離（好ましくはデカンター型）
３１４＝油フィルター
３１５＝加水分解工程前に回収される油用タンク
３１６＝生材料加熱用熱交換器
３１７＝カルシウム投下ユニット
３１８＝水加熱用熱交換器
３１９＝骨粉供給用デバイス
３２０＝窒素添加用デバイス
３２１＝回収された骨画分用容器
【０１１７】
さらに、図３は、プラントの記載と共に、局面ｃ）の本発明のプロセスの実施形態を示す。ここで、名称は以下のストリームを示す：
Ａ３＝蛋白質、酵素、油／脂肪、ペプチド及び遊離アミノ酸を含むストリーム。微生物減少ユニット３０８の後に、ストリームは如何なる固形粒子も含有せず、分離ユニット３０２及び３０２が使用された場合に、かなり減少した割合の非加水分解蛋白質及び脂肪を有する。
Ａ３１＝分離ユニット３０２が使用される場合のストリーム；ユニット３０２の後、ストリームはもはや固形粒子を含有しない；
Ａ３２＝分離ユニット３０３が使用されない場合のストリーム；
Ｂ３１＝スクリーンを使用して除去された固体を含むストリーム；
Ｂ３２＝遠心分離器を使用して分離された固体を含むストリーム；
Ｃ３＝油／脂肪を含むストリーム；
Ｄ３＝膜フィルター３０９からの透過物の放出のための蒸留物などのストリーム；
Ｅ３＝濃縮されたペプチド−アミノ酸溶液の乾燥ユニットへのストリーム；
Ｅ３１＝濃縮されたペプチド−アミノ酸溶液の液状物としてのパッキングへのストリーム；
Ｆ３＝生材料の醗酵器３０１へのストリーム；
Ｆ３１＝油分離が加水分解前に行われない場合の生材料のストリーム；
Ｇ３＝ストリームＡ３に戻る非加水分解蛋白質のストリーム；
Ｈ３＝添加水のストリーム；
Ｉ３＝加水分解工程前に回収された油のストリーム。
【０１１８】
他に示さない限り、全ての百分率の開示は、重量百分率と理解される。
【０１１９】
プロセスは、以下により詳細に記載される。
【０１２０】
１）生材料：
プロセス用の生材料は、蛋白質材料、好ましくは魚、魚産物、貝、甲殻動物、軟体動物、及び魚／魚業からの副産物（例えば、魚のくず肉）、並びに淡水及び海水からの他の海洋生物からなるものであり得る。種々の生材料が、単独で又は「酵素材料」及び「蛋白質材料」を含有する産物との組合せにより使用され得る。「酵素材料」は、申し分のない量及び申し分のない品質の内因性酵素を含有する生材料である。「蛋白質材料」とは、申し分のない量及び申し分のない品質の内因性酵素を含有しない生材料を記載するものであり、従って、これは、酵素処理を行い得るために酵素材料を補充されなければならない。幾つかの場合では、酵素材料は蛋白質材料と同一であり得る。先行技術のプロセスは、くず肉と蛋白質材料を１：１の比率で組合せることを記載している。ここに記載される方法は、最終産物において所望の結果を得るためにこの比率を変化させることを可能とする。
【０１２１】
生材料は、食物製造用の出発産物に関する法定要件を満たす。従来、生材料は、法律及び規定によりくずに分類されていた。優れた物流管理及びプロセス慣用性により、この場合、生材料は食料として認可されることが可能である。これは、産業規模での製造、並びに食品加工及び／又は医薬産業における産物の使用を可能とする。
【０１２２】
２）生材料の前プロセシング
生材料は、タンクからグリンディングシステム３１２（これは、材料に所望される連絡を与える）を介してポンプで汲み上げられる。グリンディングは、酵素が作用するより大きな表面を与え、生材料の酵素を放出する。
【０１２３】
生材料由来の油／脂肪は、酵素プロセスの開始前に回収され得る。ここで、例えば、油の冷回収が使用され得る。
【０１２４】
油の冷回収は、以下により行われ得る：
１．生材料を遠心分離し（３１３）、液体及び固形粒子を２つの異なる画分に分離する工程；
２．液相から油を分離する工程（３１４及び３１５を参照）；
３．分離工程からの固相及び重相を混合し、それらを醗酵器３０１にポンプで汲み上げる工程；
４．分離工程からの油相をさらにプロセシングし、食用品質を達成するためにさらなる純化を必要としない、顧客に特化した完成産物を提供する工程。
【０１２５】
醗酵器３０１に添加される生材料は、グリンディングの後に１以上の緩衝液タンクに貯蔵され得る。異なるタンクが、蛋白質材料及び酵素材料に使用され得る。
【０１２６】
材料は、熱交換器３１６を介して醗酵タンク３０１へとポンプで汲み上げられ得る。醗酵タンク３０１はまた、材料がポンプで汲み上げられる前に加熱が熱交換器でなされてない場合、加熱のために使用され得る。
【０１２７】
醗酵器３０１中の条件のモニタリングは、自動的又は手動のいずれかで連続的になされる。種々の添加剤の添加は、製造されるべき産物に最適である範囲内に酵素処理の条件をできる限り一定に維持するようになされる。
【０１２８】
３）酵素処理プロセス：
蛋白質材料及び酵素材料の形態における加熱した生材料又は加熱していない生材料は、１以上の酵素処理タンクへとポンプで汲み上げられる。醗酵が生じる付近の温度を有する加温及びｐＨ調節した水が、この混合物に添加される。水量は、利用可能な酵素および蛋白質材料の最適化に依存して、生材料及び所望の結果に従って変化させることができる。ｐＨは、例えば窒素ガス又は骨粉の添加により調節される。
【０１２９】
加温及びｐＨ調節した生材料Ｆ３及び水Ｈ３の混合物は、本明細書中以降、「加水分解物」と呼ばれる。加水分解物は醗酵タンク３０１中で、必要に応じて一定且つ激しい攪拌下で維持される。この目的は、酵素処理プロセスを増強するためである。加水分解物は、所望のアミノ酸及びペプチドの除去のため、システムを通じて連続的にポンプで汲み上げられる。
【０１３０】
醗酵タンク３０１における酵素処理用条件を一定に維持するために、アミノ結合窒素、総蛋白質含量及びｐＨが定期的に調べられる。
【０１３１】
蛋白質材料及び酵素材料は、プロセスの所望の期間にわたって必要とされる場合に添加される。
【０１３２】
プロセスに不可欠なことは、アルカリ性酵素が機能することである。従って、酵素処理の間にｐＨ＞７．００であることが必須である。ｐＨ範囲は７．００と８．５０の間である。最適な酵素処理プロセスは、７．６０〜８．２０のｐＨにて得られる。プロセス全体の間にｐＨが＞８．１であるが＜８．４である場合、遊離トリプトファンがアミノ酸範囲から除かれる。反対に、プロセス全体の間にｐＨが＜７．６であるが＞７．４である場合、トリプトファンは、回収可能な総量まで最大となり、この総量は生材料により決定される。プロセス全体の間、温度が＜４６℃であるが＞４４℃であり、且つｐＨが＜７．８であるが＞７．７である場合、コラーゲンはそれ程溶解しないが、固形粒子の形態で得られる。
【０１３３】
異なる塩基（例えば、初期製造からの骨粉、カルシウム及び窒素）（３１９及び３２０を参照）は、加水分解物のｐＨ調節のために使用され得る。
【０１３４】
その局面ｃ）の本発明により、最適なレベルに条件を維持するために、異なるパラメータを使用することにより、酵素処理プロセスを連続的に制御することが可能である。
【０１３５】
プロセス終了時、酵素活性は、アンモニア化成を防止するために、温度不活性化により又は幾つかの他の様式で終了されなければならない。
【０１３６】
４）微生物増殖の制御
先行技術は、微生物の増殖を防止するための添加剤としてクロロホルムを記載しているが、それは好ましくは本プロセスでは使用されない。本発明の方法では、ＵＶ又は酵素を凝固させない別の適切な方法は、細菌及び菌類を殺滅するために使用される。これは、微生物が新たな蛋白質の形成により解放された短いペプチド及び遊離アミノ酸を消費し、実質的に増殖することを防止するためになされる。さらに、産業規模でのクロロホルムは好ましくない。
【０１３７】
５）固形粒子の除去
本発明は、所定のサイズを超える固形粒子がスクリーンシステム／フィルターにより連続的又は定期的のいずれかで加水分解物から除去され得ることを含む。スクリーンシステム３０２は、次の製造段階におけるデカンターシステム３０３が固相全体の除去を取り扱う場合、即ち、本発明の状況でプロセスされている産物Ａ３がスクリーニングに適切な固形粒子を含有しない場合、システムから省略され得るか、又はそれをバイパスし得る。
【０１３８】
除去された粒子Ｂ３２は次いで、浮遊プロセス３０４を介して密度に従って分離され得、それにより蛋白質残留物Ｇ３が醗酵タンク３０１にフィードバックされ得る。蛋白質は浮上し、機械的又は手動のいずれかで採取され得る。より重い材料は浮遊タンクの底にある。
【０１３９】
６）加水分解物のデカンテーション
デカンター３０３は、油分離器３０５及び膜フィルター３０９の前にシステムで使用され得る。これは、例えば三相分離器の加水分解物からの脂肪の分離を簡単にするためになされ、それによりその後の膜フィルターの負担が軽減される。
【０１４０】
分離器は、固形粒子の含量が高すぎる（これは、堆積物相が大きいことを意味する）と最適に機能しない。デカンターは、液体よりも大きな密度の固形粒子（固形粒子は液体の一部である）を分離するように構成される機器である。本発明では、それは主に分離される蛋白質であり、それ故、さらなる酵素処理のためにそれらを醗酵タンクに戻すことが所望される。分離された固形材料は、スクリーニングシステムで使用される原理と同じものに従って浮遊し得る。所望される場合、同じ浮遊デバイスが使用され得る。デカンター３０３は、既に言及したスクリーンデバイスが所望の分離を取り扱う場合、即ち、処理される産物がデカンターを使用して除去され得る蛋白質残留物を与えない場合、システムから省略又は切り離され得る。
【０１４１】
７）分離：
加水分解物は、三相分離器３０５、又は加水分解物からより軽い脂肪画分を分離するために適切である他の適切な遠心分離法を使用して分離される。脂肪の分離は、プロセスされている生材料中の脂肪量に依存して連続的又は定期的のいずれかで行われる。本発明の特に重要な特徴は、分離がプロセスを通して連続的になされ得、それによりリポ蛋白質が加水分解により分解される場合に放出される脂肪が必要以上に酸化に供されないため、非常に純粋且つ高品質な脂肪画分が回収され得るということである。加水分解がアルカリ条件下で行われることもまた、特に窒素がｐＨ調節に使用される場合、脂肪を高品質に維持するのに役立つ。
【０１４２】
８）膜ろ過：
本発明は、所定のサイズの分子（好ましくは１０，０００ダルトン未満）が膜を通過するのを可能とする様式で機能する膜フィルター３０９を好ましくは備えるデバイスを介して、加水分解物をポンプにより汲み上げることを含む。ろ過は、加水分解物が複数の管状膜を介してポンプで汲み上げられるか、又は複数の平面状膜を通されるかのいずれかであるようになされる。
【０１４３】
浸透の原理が膜を介する輸送のため使用される。ろ過されていない遊離アミノ酸及びペプチドの濃縮は、副産物として蒸留水を生じ、この一部は、膜の反対側の加水分解物とほぼ同じ圧力でフィルターにフィードバックされる。膜の透過物側でアミノ酸及びペプチドの濃度をより低く維持することにより、それらを介する浸透に駆動される透過が維持される。膜に沿う加水分解物のフローは、蛋白質残留物及び膜を通過し得るペプチドよりも大きなペプチドの沈着物を機械的に清浄化する。
【０１４４】
９）濃縮：
完成した加水分解物のろ過物は次いで濃縮されなければならない。これは、乾燥プロセス前に水を除去するためになされ、それにより、乾燥工程の能力が最大限に利用されるか、又は液状物中に入るアミノ酸及びペプチドの所望される濃縮レベルが得られる。
【０１４５】
真空留去型の蒸留プロセスは、この目的に十分に適切であるが、任意の他の形態の濃縮デバイスが、所望のペプチド及びアミノ酸を、それらが膜ろ過の間に溶解する液体から除去するために使用され得る。真空エバポレータ３１０は液体を低温で濃縮し、それによりペプチド／アミノ酸が損なわれない。より初期段階での膜ろ過機能が最適であるために不可欠なことは、濃縮デバイス３１０ができる限り純粋な蒸留物を戻し得ることである。従って、膜を介する浸透が最適である。留去は＋５０〜＋８５℃の温度範囲で行われ得る。最適には、この範囲は＋６５〜＋７０℃である。凝縮物が、フィルター又は醗酵タンクに戻されるには高すぎる温度を有するリスクがあるかもしれない。その場合には、所望のレベルに温度を減少させる熱交換器が使用されなければならない。
【０１４６】
１０）乾燥：
濃縮後、産物は、そのように所望される場合には乾燥され得るが、それはまた液状物又はそれらの間の任意の形態であってもよい。乾燥（３１１を参照）は、保存に際して産物をより安定にし、物流管理及び取り扱いを簡単にする。産物の乾燥様式は最終結果に重要である。調製されたペプチド／アミノ酸産物は、非常に吸湿性であり得、従って、このプロセスに関しては挑戦的である。乾燥プロセスにおいて高温であることはまた、産物がより吸湿性となることを引き起こす。
【０１４７】
乾燥／顆粒化は２段階で行われる。第１に、産物は、スプレードライヤなどで粉末に乾燥され（冷却工程を伴う）、次いで産物が顆粒化される。顆粒化は、機械的流動化により粉末／産物を激しく動かした状態で維持することにより顆粒物が「構築」されるというようにもたらされる。次いで、濃縮物／加水分解物がこの塊にスプレーされ、顆粒物が徐々に作られる。この全ては連続したプロセスで行われる。顆粒化プロセスの終了時に、乾燥した冷気が顆粒物に吹き付けられる。これは、それをより硬く且つより容易に溶解するようにする。顆粒物は次いでスクリーニングされ、所望の画分が抽出される。非常に小さい細粒子である粒子はさらなる顆粒化のために戻され、その間に、「特大の（oversize）」粒子はすり潰され、再度スクリーニングされる。新たに形成された如何なる細粒子も再顆粒化に戻される。
【０１４８】
通常慣例のスプレー乾燥もまた使用されるが、これは、大きな表面を有する微細な粉末を与える。このことは産物が非常に吸湿性を示し、従って大きなパッケージ、保存などという点で取扱いを困難にすることを意味する。
【０１４９】
種々の添加剤が、顆粒化プロセスの間に産物に添加され得る。乾燥されないが所望のレベルに単に濃縮された産物が製造され得ると同様に、顆粒化されない産物もまた製造され得る。
【０１５０】
膜フィルターの機能の詳細な記載：
フィルター３０９は、平面状又は管状フィルター要素から構成され得る。フィルターシステムは、固形粒子及び脂肪が除去されているが、酵素複合体を含む醗酵器からの蛋白質加水分解物からなるろ過物が膜（クロスフローフィルターろ過）の保持物側を通って自由に循環し得るように構成される。従って、フローは膜表面に沿って発生し、膜上に沈着した保持物のブロッキングフィルター塊形成のリスクを機械的に最小にする。フィルター膜の保持物側を循環するろ過物は、膜上及び膜内に詰まるが透過物側へと膜を通過するには大き過ぎる蛋白質及び大きなペプチドを破壊する酵素を含有する。透過物の最大分子サイズが９，８００ダルトンであるように膜の選択がなされる場合、酵素の膜通過は妨げられる。従って、非分解蛋白質がブロックされ、蛋白質不含無菌産物が得られる。
【０１５１】
より小さな分子をブロックする膜の選択は、より小さなペプチド及びより高い百分率の遊離アミノ酸を有する産物を生じる。
【０１５２】
透過物側では、好ましくは水のストリームは、透過物側上のそれに対応して、膜に沿って通される。圧力は膜の両側で等しいものであり得、浸透が膜を介して透過物を駆動する。溶解は、透過物側上を循環する液体中で行われる。
【０１５３】
浸透が機能する要件は、アミノ酸及びペプチドの濃度が膜の保持物側でより高いことである。これは、濃縮プラントからの蒸留物が、膜の透過物側上を循環させられる液体であることにより達成される。原則として、これは、純水添加剤が使用される透過物側上にある場合に逆ダイアフィルトレーション（diafiltration）として記載され得る。
【０１５４】
透過物の濃縮は、逆浸透（ＲＯ）にアレンジされた別の膜フィルターを使用してなされ得る。膜フィルターの機能は同じである。
【０１５５】
一連のフィルターは、最大ペプチドサイズに関して、異なる画分を分離するために使用され得るが、続くフィルターでは、酵素複合体は、フィルター膜の保持物側上にフィルター塊がないように維持するのに役立たない。ブロッキングを防止するために１段階でフィルターすることは有利かもしれない。
【実施例】
【０１５６】
製造業者Spectrum Laboratoriesにより製造される医療領域で使用される標準的なホース形状型の透析膜を使用して実験室試験で得られている値：
試験では、分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）又は６，０００〜８，０００ダルトン（６ｋ〜８ｋＭＷＣＯ）を有するSpectra/Por 1再生セルロース（ＲＣ）が使用された。保持物側上のＤＭ（乾燥物）合計１４．７％、温度４８．７℃及びｐＨ７．８５でのこれらの膜を介する流量は、開始時に３．７ｍｌ／ｃｍ２/ｈであった。１２時間後、それは３．８ｍｌ／ｃｍ２/ｈであり、２４時間後、それは３．８ｍｌ／ｃｍ２／ｈであった。ブロッキングは、６０時間の作動時間でさえも記録され得なかった。合計６０時間の間に製造された３６％ＤＭを有する合計２３リットルの液体の濃縮の前及び後のペプチドサイズ解析では、９，０００ダルトンを超える如何なる分子も透過物中に同定できなかった。スペクトログラムでの最大ピークは４１０〜１３５０ダルトンであり、補正なしに４２％のスペクトログラム面積を与えた。
【図面の簡単な説明】
【０１５７】
【図１】図１は、本発明の局面ａ）の加水分解プロセスが使用されるプラントの第１の実施形態を示す。
【０１５８】
【図２】図２は、本発明の局面ｂ）の加水分解プロセスが使用されるプラントの第２の実施形態を示す。
【０１５９】
【図３】図３は、本発明の局面ｃ）の加水分解プロセスが使用されるプラントの第３の実施形態を示す。
【図１】
2005534340.tif 000003
【図２】
2005534340.tif 000004
【図３】
2005534340.tif 000005
【国際調査報告】
2005534340.tif 000006
2005534340.tif 000007
2005534340.tif 000008
2005534340.tif 000009