(57)【要約】本発明は、細菌およびウイルス病のためのワクチンのごとき抗原と共に投与した場合に免疫学的アジュバントとして機能する新規な化合物、少なくとも１つの本発明のアジュバント化合物を含む新規なアジュバント処方物、抗原および少なくとも１つの本発明のアジュバント化合物を含む新規な免疫刺激性組成物、およびそれに対して動物を免疫化すべき抗原と共に本発明の化合物を共投与することによって動物を免疫化する方法に指向される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩの化合物：
【化１】
2005504749.tif 000192
【化２】
2005504749.tif 000193
【化３】
2005504749.tif 000194
［式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩの各々につき：
Ｒ1は、
（ａ）Ｃ（Ｏ）；
（ｂ）Ｃ（Ｏ）‐Ｃ1‐14アルキル‐Ｃ（Ｏ）、ここに、該Ｃ1‐14アルキルは、所望により、ヒドロキシ、Ｃ1‐5アルコキシ、Ｃ1‐5アルキレンジオキシ、Ｃ1‐5アルキルアミノ、またはＣ1‐5‐アルキル‐アリールで置換されていてもよく、ここに、該Ｃ1‐15‐アルキル‐アリールの該アリール部位は、所望により、Ｃ1‐5アルコキシ、Ｃ1‐5アルキルアミノ、Ｃ1‐5アルコキシ‐アミノ、Ｃ1‐5アルキルアミノ‐Ｃ1‐5アルコキ、‐Ｏ‐Ｃ1‐5アルキルアミノ‐Ｃ1‐5アルコキシ、‐Ｏ‐Ｃ1‐5アルキルアミノ‐Ｃ（Ｏ）‐Ｃ1‐5アルキルＣ（Ｏ）ＯＨ、‐Ｏ‐Ｃ1‐5アルキルアミノ‐Ｃ（Ｏ）‐Ｃ1-5アルキル‐Ｃ（Ｏ）‐Ｃ1‐5アルキルで置換されていてもよく；
（ｃ）所望によりヒドロキシまたはアルコキシで置換されていてもよいＣ2ないしＣ15の直鎖または分岐鎖アルキル；および
（ｄ）当該アリーレンが所望によりヒドロキシ、ハロゲン、ニトロまたはアミノで置換されていてもよい‐Ｃ（Ｏ）‐Ｃ6‐12アリーレン‐Ｃ（Ｏ）‐；
よりなる群から選択され；
ａおよびｂは独立して０、１、２、３または４であり；
ｄ、ｄ’、ｄ”、ｅ、ｅ’およびｅ”は独立して０ないし４の整数であり；
Ｘ1、Ｘ2、Ｙ1およびＹ2は、独立して、無し、酸素、ＮＨおよびＮ（Ｃ（Ｏ）Ｃ1‐4アルキル）、およびＮ（Ｃ1‐4アルキル）2よりなる群から選択され；
Ｗ1およびＷ2は、独立して、カルボニル、メチレン、スルホンおよびスルホキシドよりなる群から選択され；
Ｒ2およびＲ5は独立して：
（ａ）所望によりオキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで置換されていてもよいＣ2ないしＣ20の直鎖または分岐鎖アルキル、
（ｂ）所望によりオキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで置換されていてもよいＣ2ないしＣ20の直鎖または分岐鎖アルケニルまたはジアルケニル；
（ｃ）所望によりオキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで置換されていてもよいＣ2ないしＣ20の直鎖または分岐鎖アルコキシ；
（ｄ）‐ＮＨ‐Ｃ2ないしＣ20直鎖または分岐鎖アルキル、ここに、該アルキル基は所望によりオキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで置換されていてもよく；および
（ｅ）
【化４】
2005504749.tif 000195
（式中、ＺはＯおよびＮＨよりなる群から選択され、ＭおよびＮは独立してＣ2ないしＣ20の直鎖または分岐鎖のアルキル、アルケニル、アルコキシ、アシルオキシ、アルキルアミノおよびアシルアミノよりなる群から選択される）
よりなる群から選択され；
Ｒ1およびＲ6は、独立して、所望によりオキソまたはフルオロで置換されていてもよいＣ2ないしＣ20の直鎖または分岐鎖のアルキルまたはアルケニルよりなる群から選択され；
Ｒ4およびＲ7は、独立して、Ｃ（Ｏ）Ｃ2ないしＣ20直鎖または分岐鎖アルキルまたはアルケニル；Ｃ2ないしＣ20直鎖または分岐鎖アルキル；Ｃ2ないしＣ20直鎖または分岐鎖アルコキシ；Ｃ2ないしＣ20直鎖または分岐鎖アルケニルよりなる群から選択され；ここに、該アルキル、アルケニルまたはアルコキシ基は、独立して、かつ所望によりヒドロキシ、フルオロまたはＣ1ないしＣ5アルコキで置換されていてもよい；
Ｇ1、Ｇ2、Ｇ3およびＧ4は、独立して、酸素、メチレン、アミノ、チオール、‐ＮＨＣ（Ｏ）‐、‐Ｃ（Ｏ）ＮＨ‐、‐Ｃ（Ｏ）Ｏ‐、‐ＯＣ（Ｏ）‐および‐Ｎ（Ｃ（Ｏ）Ｃ1‐4アルキル）‐よりなる群から選択され；
またはＧ2Ｒ4またはＧ4Ｒ7は一緒になって水素原子またはヒドロキシルとなることができ；
またはその医薬上許容される塩；
式ＩＩについては、
ａ’およびｂ’は独立して２、３、４、５、６、７または８、好ましくは２であり；
Ｚ1は‐ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）2、‐Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）2、Ｒ8がＣ１‐Ｃ４アルキル鎖である‐ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ8）（ＯＨ）、‐ＯＳ（Ｏ）2ＯＨ、‐Ｓ（Ｏ）2ＯＨ‐、‐ＣＯ2Ｈ、‐ＯＢ（ＯＨ）2、‐ＯＨ、‐ＣＨ3、‐ＮＨ2、Ｒ9がＣ１‐Ｃ４アルキル鎖であるＮＲ93よりなる群から選択され；
Ｚ2は‐ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）2、‐Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）2、Ｒ10がＣ１‐Ｃ４アルキル鎖である‐ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ10）（ＯＨ）、‐ＯＳ（Ｏ）2ＯＨ、‐Ｓ（Ｏ）2ＯＨ、ＣＯ2Ｈ、‐ＯＢ（ＯＨ）2、‐ＯＨ、ＣＨ3、‐ＮＨ2、Ｒ11がＣ１‐Ｃ４アルキル鎖である‐ＮＲ11であり；
式ＩＩＩについては、
Ｒ12はＨおよびＣ１‐Ｃ４アルキル鎖から選択され；
またはその医薬上許容される塩、
但し、式ＩＩまたはＩＩＩの化合物は、
【化５】
2005504749.tif 000196
【化６】
2005504749.tif 000197
の化合物ではない］
の化合物。
【請求項２】
Ｒ1がＣ（Ｏ）およびＣ（Ｏ）‐Ｃ1‐14アルキル‐Ｃ（Ｏ）よりなる群から選択される請求項１記載の化合物。
【請求項３】
ａおよびｂの各々が２である請求項１記載の化合物。
【請求項４】
ａ’およびｂ’が２である請求項１記載の化合物。
【請求項５】
Ｘ1およびＹ1が共にＮＨである請求項１記載の化合物。
【請求項６】
ｄおよびｅが１である請求項１記載の化合物。
【請求項７】
Ｇ2Ｒ4およびＧ4Ｒ7が共にヒドロキシである請求項１記載の化合物。
【請求項８】
請求項１ないし７いずれかに記載された化合物を含む免疫学的アジュバント処方物。
【請求項９】
抗原および請求項１ないし７いずれかのアジュバント化合物を含むワクチン処方物。
【請求項１０】
該アジュバントおよび抗原が該アジュバントのアミノ、カルボニル、ヒドロキシルまたはホスフェート部位を介して共有結合している請求項９記載の処方物。
【請求項１１】
Ｒ1がＣ（Ｏ）またはＣ（Ｏ）‐Ｃ3‐14アルキル‐Ｃ（Ｏ）であり、ここに、該アジュバントおよび抗原が該Ｃ（Ｏ）またはＣ（Ｏ）‐Ｃ3‐14アルキル‐Ｃ（Ｏ）の該Ｃ１カルボニルのカルボニル部位に共有結合している請求項９記載の処方物。
【請求項１２】
有効量の抗原および該抗原に対する免疫応答を刺激するのに有効な量の請求項１ないし７いずれか記載のアジュバント化合物を投与することを特徴とする抗原に対する免疫応答を刺激する方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
ワクチンは、感染症の予防のための成功したかなり許容できる方法であることが判明している。それはコストが妥当であり、宿主に存在する病原体を標的とし、または通常の微生物叢に影響する抗生物質抵抗性を誘導しない。抗‐ウイルス免疫性を誘導する場合のごとき多くの場合において、ワクチンは、強力な治癒的または軽減的治療が利用できない病気を予防することができる。
【０００２】
ワクチンは、非感染性または非病原性形態で身体に導入される剤、または抗原、典型的には感染性生物またはその部分に対してする応答を開始するよう免疫系をトリガーすることによって機能する。一旦、免疫系が「始動」するか、または生物に対して感作されれば、感染性病原体としてのこの生物に対して免疫系が遅れて作用を受けた後の暴露の結果、迅速かつ強烈な免疫応答が生じ、これは、病原体が増殖し、宿主細胞中の充分な細胞に感染して病気兆候を引き起こし得る前に病原体を破壊する。
【０００３】
免疫系を始動させるのに用いられる剤、または抗原は、弱毒化生物として知られている感染性の低い状態の生物全体、またはある場合には、生物の種々の構造的成分を表わす炭水化物、蛋白質またはペプチドのごとき生物の成分であり得る。
【０００４】
多くの場合、ワクチンに存在する抗原に対する免疫応答を増強させて、免疫系を、ワクチンを効果的とする、すなわち、免疫性を付与するのに充分な程度まで刺激する必要がある。単独で投与された多くの蛋白質およびほとんどのペプチドおよび炭水化物抗原は、免疫性を付与するのに充分な抗体応答を誘導しない。そのような抗原は、それが外来性として認識され、免疫応答を誘導するように、免疫系に対して提示されなければならない。この目的で、添加剤（アジュバント）が工夫されており、これは、抗原を動かなくし、免疫応答を刺激する。
【０００５】
最良の公知のアジュバントであるフロイントの完全アジュバントは油／水型エマルジョン中のマイコバクテリアの混合物よりなる。フロイントのアジュバントは２つの方法：まず、細胞性および液性‐媒介免疫性を増強することによって、第２に、抗原攻撃の迅速な四散をブロックすることによって（「デポ効果」）働く。しかしながら、この物質に対する頻繁な毒性生理学的および免疫学的反応のため、フロイントのアジュバントはヒトでは用いることができない。
【０００６】
免疫刺激性またはアジュバント活性を有することが示されているもう１つの分子は、リポ多糖（ＬＰＳ）としても知られているエンドトキシンである。ＬＰＳは、「先天性」免疫応答‐生物が以前に暴露されている必要性なくして生物がエンドトキシン（およびそれが成分である侵入細菌）を認識できるように進化してきた応答をトリガーすることによって免疫系を刺激する。ＬＰＳは過度にも毒性で活力のあるアジュバントにはならないが、モノホルフォリル脂質Ａ（「ＭＰＬ」）などのエンドトキシンに構造的に関連する分子が臨床試験でアジュバントとしてテストされつつある。しかしながら、現在、ヒトで用いるのに唯一ＦＤＡが認可したアジュバントはアルミニウム塩（ミョウバン）であり、これは、抗原の沈殿によって抗原を「貯蔵する」のに用いられる。また、ミョウバンは抗原に対する免疫応答を刺激する。
【０００７】
かくして、抗原と共に投与して、免疫系を刺激し、もし抗原が単独で注射されるか、またはミョウバンと共に注射されれば観察されるであろう抗原に対するより強烈な抗体応答を生じさせることができる化合物に対して当該分野において認識された要望が存在する。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
１つの態様において、本発明は、細菌およびウイルス病用のワクチンなどの抗原と共に投与した場合に免疫学的アジュバントとして機能する新規な化合物に指向される。
【０００９】
第２の態様において、本発明は、本発明のアジュバント化合物の少なくとも１つを含む新規なアジュバント処方物に指向される。
【００１０】
第３の態様において、本発明は抗原、および本発明のアジュバント化合物の少なくとも１つを含む新規な免疫刺激性組成物に指向される。
【００１１】
もう１つの態様において、本発明は、動物がそれに対して免疫化されるべき抗原と本発明の化合物との共投与によって動物を免疫化する方法に指向される。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
好ましい具体例の詳細な記載
本発明は、式Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩの新規な化合物；式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩの化合物を含む突然変異用の免疫学的アジュバント；および少なくとも１つの更なる成分；式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩの化合物を用いる方法；および式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩの化合物および少なくとも１つの更なる成分を含む免疫学的処方物を用いる方法に部分的には指向される。
【００１３】
【化１】
2005504749.tif 000002
【００１４】
【化２】
2005504749.tif 000003
【００１５】
【化３】
2005504749.tif 000004
［式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩの各々につき：
Ｒ1は、
（ａ）Ｃ（Ｏ）；
（ｂ）Ｃ（Ｏ）‐Ｃ1‐14アルキル‐Ｃ（Ｏ）、ここに、該Ｃ1‐14アルキルは、所望により、ヒドロキシ、Ｃ1‐5アルコキシ、Ｃ1‐5アルキレンジオキシ、Ｃ1‐5アルキルアミノ、またはＣ1‐5‐アルキル‐アリールで置換されていてもよく、ここに、該Ｃ1‐15‐アルキル‐アリールの該アリール部位は、所望により、Ｃ1‐5アルコキシ、Ｃ1‐5アルキルアミノ、Ｃ1‐5アルコキシ‐アミノ、Ｃ1‐5アルキルアミノ‐Ｃ1‐5アルコキシ、‐Ｏ‐Ｃ1‐5アルキルアミノ‐Ｃ1‐5アルコキシ、‐Ｏ‐Ｃ1‐5アルキルアミノ‐Ｃ（Ｏ）‐Ｃ1‐5アルキルＣ（Ｏ）ＯＨ、‐Ｏ‐Ｃ1‐5アルキルアミノ‐Ｃ（Ｏ）‐Ｃ1-5アルキル‐Ｃ（Ｏ）‐Ｃ1‐5アルキルで置換されていてもよく；
（ｃ）所望によりヒドロキシまたはアルコキシで置換されていてもよいＣ2ないしＣ15の直鎖または分岐鎖アルキル；および
（ｄ）当該アリーレンが所望によりヒドロキシ、ハロゲン、ニトロまたはアミノで置換されていてもよい‐Ｃ（Ｏ）‐Ｃ6‐12アリーレン‐Ｃ（Ｏ）‐；
よりなる群から選択され；
ａおよびｂは独立して０、１、２、３または４であり；
ｄ、ｄ’、ｄ”、ｅ、ｅ’およびｅ”は独立して０ないし４の整数であり；
Ｘ1、Ｘ2、Ｙ1およびＹ2は、独立して、無し、酸素、ＮＨおよびＮ（Ｃ（Ｏ）Ｃ1‐4アルキル）、およびＮ（Ｃ1‐4アルキル）2よりなる群から選択され；
Ｗ1およびＷ2は、独立して、カルボニル、メチレン、スルホンおよびスルホキシドよりなる群から選択され；
Ｒ2およびＲ5は独立して：
（ａ）所望によりオキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで置換されていてもよいＣ2ないしＣ20の直鎖または分岐鎖アルキル、
（ｂ）所望によりオキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで置換されていてもよいＣ2ないしＣ20の直鎖または分岐鎖アルケニルまたはジアルケニル；
（ｃ）所望によりオキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで置換されていてもよいＣ2ないしＣ20の直鎖または分岐鎖アルコキシ；
（ｄ）‐ＮＨ‐Ｃ2ないしＣ20直鎖または分岐鎖アルキル、ここに、該アルキル基は所望によりオキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで置換されていてもよく；および
（ｅ）
【００１６】
【化４】
2005504749.tif 000005
（式中、ＺはＯおよびＮＨよりなる群から選択され、ＭおよびＮは独立してＣ2ないしＣ20の直鎖または分岐鎖のアルキル、アルケニル、アルコキシ、アシルオキシ、アルキルアミノおよびアシルアミノよりなる群から選択される）
よりなる群から選択され；
Ｒ1およびＲ6は、独立して、所望によりオキソまたはフルオロで置換されていてもよいＣ2ないしＣ20の直鎖または分岐鎖のアルキルまたはアルケニルよりなる群から選択され；
Ｒ4およびＲ7は、独立して、Ｃ（Ｏ）Ｃ2ないしＣ20直鎖または分岐鎖アルキルまたはアルケニル；Ｃ2ないしＣ20直鎖または分岐鎖アルキル；Ｃ2ないしＣ20直鎖または分岐鎖アルコキシ；Ｃ2ないしＣ20直鎖または分岐鎖アルケニルよりなる群から選択され；ここに、該アルキル、アルケニルまたはアルコキシ基は、独立して、かつ所望によりヒドロキシ、フルオロまたはＣ1ないしＣ5アルコキで置換されていてもよい；
Ｇ1、Ｇ2、Ｇ3およびＧ4は、独立して、酸素、メチレン、アミノ、チオール、‐ＮＨＣ（Ｏ）‐、‐Ｃ（Ｏ）ＮＨ‐、‐Ｃ（Ｏ）Ｏ‐、‐ＯＣ（Ｏ）‐および‐Ｎ（Ｃ（Ｏ）Ｃ1‐4アルキル）‐よりなる群から選択され；
またはＧ2Ｒ4またはＧ4Ｒ7は一緒になって水素原子またはヒドロキシルとなることができ；
またはその医薬上許容される塩；
式ＩＩについては、
ａ’およびｂ’は独立して２、３、４、５、６、７または８、好ましくは２であり；
Ｚ1は‐ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）2、‐Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）2、Ｒ8がＣ１‐Ｃ４アルキル鎖である‐ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ8）（ＯＨ）、‐ＯＳ（Ｏ）2ＯＨ、‐Ｓ（Ｏ）2ＯＨ‐、‐ＣＯ2Ｈ、‐ＯＢ（ＯＨ2）、‐ＯＨ、‐ＣＨ3、‐ＮＨ2、Ｒ9がＣ１‐Ｃ４アルキル鎖であるＮＲ93よりなる群から選択され；
Ｚ2は‐ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）2、‐Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）2、Ｒ10がＣ１‐Ｃ４アルキル鎖である‐ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ10）（ＯＨ）、‐ＯＳ（Ｏ）2ＯＨ、‐Ｓ（Ｏ）2ＯＨ、ＣＯ2Ｈ、‐ＯＢ（ＯＨ）2、‐ＯＨ、ＣＨ3、‐ＮＨ2、Ｒ11がＣ１‐Ｃ４アルキル鎖である‐ＮＲ11であり；
式ＩＩＩについては、
Ｒ12はＨおよびＣ１‐Ｃ４アルキル鎖から選択され；
またはその医薬上許容される塩、
但し、式ＩＩまたはＩＩＩの化合物は、
【００１７】
【化５】
2005504749.tif 000006
【００１８】
【化６】
2005504749.tif 000007
の化合物ではない］
本発明の好ましい具体例において、以下の１以上が存在する：ａおよびｂの各々は２であり；Ｘ1およびＹ1の各々はＮＨであり；Ｒ1はＣ（Ｏ）またはＣ（Ｏ）‐Ｃ1‐14アルキル‐Ｃ（Ｏ）である；ｄ’およびｅ’の各々は１であり；ｄ”およびｅ”の各々は１であり；ＸはＯまたはＮＨ、より好ましくはＮＨであり；およびＷはＣ（Ｏ）であり；あるいはｄ’およびｅ’の各々は２である。
【００１９】
更なる好ましい具体例において、Ｒ’はＣ（Ｏ）Ｃ1‐14アルキル‐Ｃ（Ｏ）であり、ここに、該1‐14アルキルは、例えば、Ｃ1‐5アルコキシ基で置換されている。
【００２０】
最も好ましい具体例において、本発明は、化合物ＥＲ８０３０２２、ＥＲ８０３０５８、ＥＲ８０３７３２、ＥＲ８０４０５３、ＥＲ８０４０５７、ＥＲ８０４０５８、ＥＲ８０４０５９、ＥＲ８０４４４２、ＥＲ８０４６８０およびＥＲ８０４７６４、およびこれらの化合物を含有する組成物に指向される。
【００２１】
また、本発明は、抗原および前記開示の本発明の免疫学的アジュバント処方物を含む新規な免疫刺激性組成物に指向される。
【００２２】
また、それに対して動物が免疫化されるべき抗原と共に、本発明の化合物または本発明のアジュバント処方物を共投与することによって動物を免疫化する方法が提供される。
【００２３】
定義
本明細書中で用いられるカルボニルは（Ｃ＝Ｏ）部位である。
【００２４】
本明細書中で用いるジカルボニルは構造（Ｃ＝Ｏ）‐アルキル‐（Ｃ＝Ｏ）または（Ｃ＝Ｏ）‐アリール‐（Ｃ＝Ｏ）を持つ部位であり、これは、末端カルボニル部位の双方の炭素原子を介して分子に結合する。
【００２５】
本明細書中で用いるオキソは＝Ｏ基である。
【００２６】
本明細書中で用いるアルキルエステルは、構造Ｏ‐（Ｃ＝Ｏ）‐アルキルを持つ部位であり、これは、エステル基の非‐二重結合酸素を介して分子に結合する。
【００２７】
本明細書中で用いるアルケニルエステルは、炭素鎖が炭素−炭素二重結合を含む場合、エステル基の非−二重結合酸素を介して分子に結合する構造Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−炭素鎖を持つ部位である。
【００２８】
用語「アルキレン」は、二価の直鎖または分岐鎖アルキル炭化水素基を意味する。
【００２９】
用語「アルキレン」は、単一の炭素−炭素二重結合を有する二価の直鎖または分岐鎖炭化水素基を意味する。
【００３０】
用語「ジアルキレン」は、２つの炭素−炭素二重結合を有する二価の不飽和直鎖または分岐鎖炭化水素基を意味する。
【００３１】
用語「アリーレン」とは、二価の芳香族基をいう。
【００３２】
本明細書中で用いる略語「Ｂｏｃ」はｔ−ブチルオキシカルボニルを意味する。
【００３３】
本発明の化合物および組成物に言及して本明細書中で用いるごとく、用語「タイプ１」は、ａおよびｂの値が同一であり；ｄおよびｅの値が同一であり；ｄ’およびｅ’の値が同一であり；ｄ”およびｅ”の値が同一であり；Ｘ1およびＹ1が同一であり；Ｘ2およびＹ2が同一であり；Ｗ1およびＷ2が同一であり；Ｒ2およびＲ5が同一であり；Ｇ1およびＧ3が同一であり；Ｒ3およびＲ6が同一であり；Ｇ2およびＧ4が同一であり；およびＲ4およびＲ7が同一である前記式Ｉに対応する本発明の化合物をいう。本明細書中で用いる「タイプ２」は、以下のいずれかの１以上が適用される式Ｉに対応する化合物または組成物をいう：ａおよびｂの値が異なり、ｄおよびｅの値が同一であり、ｄ’およびｅ’の値が異なり；ｄ”およびｅ”の値が同一であり；Ｘ1およびＹ1が異なり；Ｘ2およびＹ2が異なり；Ｗ1およびＷ2が異なり；Ｒ2およびＲ5が異なり；Ｇ1およびＧ3が異なり；Ｒ3およびＲ6が異なり；Ｇ2およびＧ4が異なり；またはＲ4およびＲ7が異なる。
【００３４】
ここに言及する全ての特許、特許出願および刊行物は出典明示してその全体を本明細書の一部とみなす。用語において差異がある場合、本明細書を基準とする。
一般的な合成方法
１．ジアミド化合物の合成
一般に、アジ化トリフルオロメタンスルホニルと反応させ、続いて、容易な操作のために過酢酸として保護することによって、２−アミノ−１，３−ジヒドロキシプロパンまたは（±）セリノールを２−アジド化合物に変換する。得られた化合物を脱アセチル化し、続いて、ジオール部位の適当に活性化された第一級アルコールと反応させる。次いで、例えば、ＴＢＤＰＳＣＬを用いることによって、この反応の生成物の第一級アルコール部位を保護し、続いて、ホスゲン、次いで、アリルアルコールと反応させて、充分に保護されたジオールを得る。次いで、保護されたジオールを処理して、第一級アルコールから保護基を切断する。未保護アルコールを、実施例に示すごとく、式（１１）を持つ適切に機能性化されたリン酸化試薬と反応させて、リン酸エステル化合物を形成する。生成物のアジド部位を還元し、次いで、活性化されたアシル酸と反応させてアミドを形成させる。機能性化されたリン酸塩上の保護末端アミンを脱保護し、引き続いて、ＥＤＣのごとき脱水剤の存在下で、ホスゲンまたはジカルボン酸と反応させる。次いで、得られた化合物のリン酸塩を脱保護し、ラセミ体アミドが得られる。
【００３５】
２．タイプ１のキラルジアミド化合物の合成
一般に、所望の構造を持つキラルアミノ酸エステルをベンズイミデートエステルで保護する。保護された化合物を還元剤、例えば、ＤＩＢＡＬ等と反応させて、アミノ酸の酸部位をアルコールまで還元する。得られたアルコール化合物を適切に活性化されたジオール部位の第一級アルコールと反応させ、続いて、ベンズイミデート保護基を切断し、アミノ−ジオールを得る。次いで、ジオールを適当な酸塩化物と反応させてジオール−アミドを得る。
【００３６】
次いで、ジオール−アミドを、遊離第一級ヒドロキシル基において、適切に機能性化されたリン酸化試薬と反応させる。得られた化合物を第二級アルコール基において適当なアシル部位でエステル化する。次いで、Ｎ−ＢＯＣ基を、リン酸化試薬（１１）によって生じたアミノ基から切断し、遊離第一級アミンを持つリン酸エステル化合物を得る。次いで、脱水剤の存在下で、この生成物をホスゲンまたはジカルボン酸と反応させて、ジアミド生成物を得る。次いで、ジアミド生成物の保護されたリン酸塩を、典型的には、パラジウム（０）およびフェニルシランで脱保護する。
【００３７】
３．タイプ２のキラルジアミド化合物の合成
タイプ２のキラルジアミド化合物は、リン酸エステル化合物の第一級アミン基からの保護基の丁度切断後の時点まで、タイプ１のキラルジアミド化合物について実質的に記載されているごとく合成する。この時点で、保護された酸部位の１つを有するジカルボン酸を第一級アミン基と反応させて、モノアミドを得る。次いで、他のカルボン酸の保護基を切断し、遊離カルボン酸が得られ、次いで、これを、脱水剤の存在下で、別の適切に置換されたリン酸塩系からの第一級アミンと反応させて、タイプ２のジアミドを得ることができ、次いで、これを処理して、リン酸塩基または複数リン酸塩基を脱保護し、本発明の所望の化合物が得られる。
【００３８】
本発明のタイプ２のキラル尿素化合物の特別な場合、リン酸エステルのＮ−ＢＯＣアミノ基の第一級アミノ基を脱保護し、次いで、クロロギ酸トリクロロメチル等と反応させて、イソシアネート化合物を形成させる。次いで、該イソシアネートとを、別の適切に置換されたリン酸塩系からの第一級アミンと反応させて、タイプ２の尿素生成物を得る。次いで、この生成物を処理して、リン酸塩基または複数リン酸塩基を脱保護することができる。
【００３９】
４．グリセロールジアミドアナログ
本発明のこれらの化合物は、アミド部位の代わりに、ホスフェート基に対してベータである、炭素に結合したエステル部位を有する。
【００４０】
一般に、これらの化合物は、ジオール部位の活性化された第一級アルコールでの保護されたキラルグリセロールのエーテル化、続いての、第二級アルコール部位のエステル化、および引き続いてのグリセロール部位の脱保護により調製して、新しいジオールを得る。次いで、該ジオールの第一級ヒドロキシル基を保護し、第二級ヒドロキシル基をアシル部位と縮合させて、ジエステルを得る。第一級ヒドロキシルを脱保護し、続いてリン酸化剤でエステル化し、そのうち以下の化合物（１１）を例示する。リン酸化剤によって導入されたアミン基の脱保護に続き、ＥＤＣのごとき脱水剤を用い、生成物をホスゲンまたはジカルボン酸と反応させる。ホスフェート基の引き続いての脱保護により、本発明の化合物を得る。
【００４１】
一般的に前記した合成において、本発明の化合物のＲ1における置換基は、種々のジカルボン酸化合物によって容易に変化させることができる。そのような酸は、ＥＤＣのごとき脱水剤を用いるか、あるいは例えば対応する二酸塩化物を合成することによりジカルボン酸を活性化することによって、前記で概説した反応スキームのリン酸エステル中間体のアミン基にカップリングさせることができる。
【００４２】
前記式Ｉにおける変数Ｒ2およびＲ5によって表わされる置換基は、式ＩにおいてＨまたはＹによって表わされるヘテロ原子のアミド化またはエステル化反応において、適当な活性化された酸または酸塩化物を利用することによって容易に変化させることができる。
【００４３】
式Ｉの変数Ｒ3およびＲ6によって表わされる置換基は、アジドジオール、アミノアルコール、またはグリセロール出発物質と反応することができる活性化された炭素機能性、例えば、ハロゲンまたはスルホネート（ＯＳＯ2ＣＨ3、ＯＳＯ2ＣＦ3、ＯＳＯ2ＣＨ2Ｃ6Ｈ4−ｐ−ＣＨ3）も含む所望の数の炭素原子を含有する中間体を用いることによって変化させることができる。
【００４４】
前記式Ｉにおける変数Ｒ4およびＲ7によって表わされる置換基は、前記にて概説した反応スキームで用いた第二級ヒドロキシル基のエステル化で適切に保護された酸または酸塩化物を用いることによって変化させることができる。
【００４５】
後記適当な化合物（１１）を用いることによって、式Ｉの化合物におけるａおよびｂの値を変化させることができる。適当な２−アミノジオールまたは２−ヒドロキシジオール出発物質を用いることによって、式Ｉの化合物における変数ｄおよびｅの値を修飾することができる。
【００４６】
アジュバントおよびワクチン処方物および投与
また、本発明は、本発明のアジュバント化合物を含むアジュバント処方物、ならびに本発明のアジュバント化合物を含むワクチンおよび他の免疫刺激性処方物にも指向される。特定の抗原に対する免疫応答を刺激する方法も本発明の範囲内のものである。
【００４７】
本発明のアジュバントおよびアジュバント−含有ワクチン処方物が首尾よく投与される宿主動物は、ヒトならびに非−ヒト哺乳動物、魚類、爬虫類等を含む。
【００４８】
典型的には、抗原は、本発明のアジュバント化合物との混合物にて使用する。本発明のアジュバントの他の処方物において、いくつかの適用において、本発明のアジュバント化合物のアミノ、カルボキシル、ヒドロキシルおよび／またはリン酸部位に共有結合した抗原を使用するのが有用であろう。本発明の治療上有効な組成物の具体的処方は、かくして、アジュバントを、処方物を投与する対象において生物学的に利用可能、安全かつ効果的とするであろういずれかの適当な方法で実行することができる。
【００４９】
本発明では、例えば、（ｉ）少なくとも１つの治療上有効な抗原またはワクチン；および（ｉｉ）本発明による少なくとも１つのアジュバント化合物を含むことができる治療アジュバント処方物が広く考えられる。
【００５０】
そのような治療組成物は、例えば、
（Ａ）生きた、加熱により殺した、または化学的に弱毒化したウイルス、細菌、マイコプラズマ、真菌および原生動物；
（Ｂ）（Ａ）の断片、抽出物、サブユニット、代謝産物および組換え構築体；
（Ｃ）哺乳動物蛋白質および糖蛋白質の断片、サブユニット、代謝産物および組換え構築体；
（Ｄ）腫瘍−特異的抗原；および
（Ｅ）核酸ワクチン；
よりなる群から選択される少なくとも１つの抗原性剤を含むことができる。
【００５１】
従って、治療組成物は、本発明のアジュバント化合物と組み合わせたいずれかの適当な抗原またはワクチン成分、例えば、本発明のアジュバント化合物と組み合わせた病原性および非−病原性生物、ウイルスおよび真菌からの抗原よりなる群から選択される抗原性剤を利用することができる。
【００５２】
さらなる例として、そのような治療組成物は、適当には、天然痘、黄熱、ジステンパー、コレラ、家禽痘、猩紅熱、ジフテリア、破傷風、百日咳、インフルエンザ、狂犬病、おたふく風邪、麻疹、足および口の病気、およびポリオなどの病気状態および疾患で薬理学的に活性な蛋白質、ペプチド、抗原およびワクチンを含むことができる。（ｉ）抗原、および（ｉｉ）本発明の少なくとも１つのアジュバント化合物を含む得られたワクチン処方物において、抗原およびアジュバント化合物は、各々、処方物をそれでワクチン接種した宿主動物、胚および卵子に投与する場合に免疫応答を誘導するのに効果的な量で存在させる。
【００５３】
さらなる具体例において、本発明の化合物は、例えば、アミノ、カルボニル、ヒドロキシルまたはリン酸塩部位を介してワクチン抗原に共有結合させることができる。本発明のアジュバント組成物をワクチン抗原に連結させる方法は、本開示に鑑みて、当業者によって理解される。アジュバント組成物は、ここに出典明示して全てその全体を本明細書の一部とみなす、Ｐ．Ｈｏｆｆｉｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．Ｈｏｐｐｅ−Ｓａｙｌｅｒ，１９８９，３７０：５７５−５８２；Ｋ−Ｈ．Ｗｉｅｓｍｕｌｌｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｖａｃｃｉｎｅ，１９８９，７：２９−３３；Ｋ−Ｈ  Ｗｉｅｓｍｕｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．，１９９２，４０：２５５−２６０；Ｊ．−Ｐ．Ｄｅｆｏｕｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１９９２，８９：３８７９−３８８３；Ｔ．Ｔｏｈｏｋｕｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９９４，１１６：３９５−３９６；Ｆ．Ｒｅｉｃｈｅｌ，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１９９７，２０８７−２０８８；Ｈ．Ｋａｍｉｔａｋａｈａｒａ，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．１９９８，３７：１５２４−１５２８；Ｗ．Ｄｕｌｌｅｎｋｏｐｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｅｕｒ．Ｊ．，１９９９，５：２４３２−２４３８；に記載された方法のいずれかによってワクチンに連結させることができる。
【００５４】
（ｉ）抗原、および（ｉｉ）アジュバント化合物を含む得られたワクチン処方物は、動物において抗体応答を生じさせるのに充分な量にてそのような動物にワクチン処方物を投与することによって、動物において免疫学的応答を誘導するのに有用に使用される。
【００５５】
投与の態様は、いずれかの適当な手段および／またはアジュバント、アジュバント−含有ワクチン、またはアジュバントおよび／または抗原を、そこでアジュバントおよび関連抗原が免疫刺激的に効果的である宿主細胞の１以上の体部位に送達する方法の使用を含むことができる。送達態様は、限定されるものではないが、皮下（ＳＣ）注射、経皮、鼻腔内（ＩＮ）、眼、経皮、筋肉内（ＩＭ）、皮内（ＩＤ）、腹腔内（ＩＰ）、膣内、肺および直腸投与のごとき非−経口投与方法、ならびに非−非経口、例えば、経口投与を含むことができる。
【００５６】
本発明のアジュバントおよびワクチン組成物のための容量率および適当な投与形態は、慣用的な抗体力価測定技術および慣用的生物効率／生物適合性プロトコルの使用によって、およびアジュバントと共に使用する特定の抗原または治療剤、所望の治療効果、および生物活性の所望の時間スパンに応じて、過度の実験なくして当業者が容易に決定することができる。
【００５７】
本発明のアジュバントは、いずれかの他の適当な薬理学的にまたは生理学的に活性な剤、例えば、抗原性および／または他の生物学的に活性な物質と共に宿主動物に有用に投与することができる。
【００５８】
本発明の処方物は、生理食塩水、油、スクワレン、油−水分散物、リポソーム、ＱＳ−２１のごとき他のアジュバント、ムラミルペプチド、フロイントの不完全アジュバント等のようなさらなる成分を含むことができる。
【００５９】
合成実施例
以下に記載する合成方法における全ての反応生成物は、満足できるＮＭＲスペクトルおよびシリカゲルでの薄層クロマトグラフィープロフィールを与えた。全てのクロマトグラフィーはシリカゲルで行い、溶出は薄層クロマトグラフィーによってモニターした。全ての完了した反応は薄層クロマトグラフィー分析によって測定した。全ての反応は、特に断りのない限り、室温にて窒素下で行った。特に断りのない限り、全ての反応溶媒は無水であった。後記する化学反応についての典型的な仕上げ処理は、水性洗浄、無水硫酸ナトリウムでの乾燥、および減圧下での溶媒の除去を含む。
【００６０】
実施例１：スクシネート−１
【００６１】
【化７】
2005504749.tif 000008
２５０ｍＬの水中のアジ化ナトリウム（１０７．６７ｇ）の溶液に、３００ｍＬの塩化メチレンを添加した。混合物を０℃まで冷却し、トリフルオロメタンスルホン酸無水物（５７ｍＬ）を０．３２ｍＬ／分の速度で滴下した。混合物を０℃にてさらに６時間攪拌し、−２０℃にて７２時間保存した。混合物を１０℃まで加温し、続いて、ＴｅｆｌｏｎR、分離漏斗にて塩化メチレンで抽出した。合わせた有機層を乾燥した（硫酸マグネシウム）。前記懸濁物を、１０℃にて、メタノール（２００ｍＬ）および４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ，５４ｇ）中の（±）−２−アミノ−１，３−ジヒドロキシプロパン（１）（９．８９ｇ）の攪拌溶液にゆっくりと濾過した。得られた反応混合物を室温にて１７時間攪拌した。
【００６２】
溶媒を減圧下で除去し、残渣をピリジン（２００ｍＬ）に溶解させ、０℃まで冷却した。無水酢酸（５０ｍＬ）を滴下し、混合物を室温にて２０時間攪拌した。さらなる無水酢酸（２０ｍＬ）を添加し、４時間後、混合物を氷に注ぎ、常法にて仕上げ処理した。クロマトグラフィーにより１６ｇのジアセテート（２）を油として得た。
【００６３】
【化８】
2005504749.tif 000009
該ジアセテート（２）（１６ｇ）をメタノール（１５０ｍＬ）に溶解させ、ナトリウム金属（２．０ｇ）をゆっくりと添加した。混合物を９０分間攪拌し、ＤｏｗｅｘR  ５０−８樹脂をｐＨが７以下になるまで添加した。混合物を濾過し、続いて、濾液を濃縮し、クロマトグラフィーに付して６．７３ｇのジオール（３）を得た。
【００６４】
【化９】
2005504749.tif 000010
ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、２００ｍＬ）中の水素化ナトリウムの懸濁液（ヘキサンで３回洗浄し、窒素下で乾燥した１．２４ｇの６０％油分散油分散液）に、ＴＨＦ（１００ｍＬ）中のアジド−ジオール（３）（６．７３ｇ）を滴下し、続いて、ＴＨＦ（１００ｍＬ）中の３−Ｒ−ヒドロキシ−１−Ｏ−トシル−１−デカノール（４）（トシレート、９．４４ｇ）を滴下した。混合物を１６時間攪拌し、メタノール（２００ｍＬ）で希釈し、ＡｍｂｅｒｌｉｔｅR２５Ｈ+と共に２５分間攪拌し、濃縮乾固した。クロマトグラフィーにより４．３７ｇの（５）を得た。
【００６５】
【化１０】
2005504749.tif 000011
塩化メチレン（３０ｍＬ）中のジオール（５）（５．３２ｇ）の溶液に、トリエチルアミン（ＴＥＡ、６ｍＬ）およびＤＭＡＰ（痕跡量）、続いて塩化ｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳＣｌ、５ｍＬ）を添加し、混合物を一晩攪拌した。混合物を常法により仕上げ処理した。クロマトグラフィーにより３．６ｇの第二級アルコール（６）を油として得た。
【００６６】
【化１１】
2005504749.tif 000012
トルエン（３０ｍＬ）中の第二級アルコール（６）（２．９５ｇ）の溶液に、０℃にて、ピリジン（１．８ｍＬ）を添加し、続いて、ホスゲン（トルエン中の１．９３Ｍ溶液の４．５ｍＬ）をゆっくりと添加した。０℃にて２０分間攪拌した後、アリルアルコール（３．１ｍＬ）を滴下した。室温にて６０分間さらに攪拌した後、反応を常法により仕上げ処理した。クロマトグラフィーにより３．２４ｇの保護されたアルコール（７）を油として得た。
【００６７】
【化１２】
2005504749.tif 000013
塩化メチレン（３ｍＬ）中の保護されたアルコール（７）（１．２９ｇ）の溶液に、アセトニトリル（１２ｍＬ）中のフッ化水素酸（ＨＦ、４ｍＬ）を添加した。混合物を一晩攪拌し、常法により仕上げ処理した。クロマトグラフィーにより、１５０ｍｇのアルコール（８）を油として得た。
【００６８】
【化１３】
2005504749.tif 000014
塩化メチレン（０．６ｍＬ）中のアルコール（８）（１５０ｍｇ）の溶液に、テトラゾール（７４ｍｇ）およびリン酸化試薬（１１）（１７５ｍｇ）を添加した。３０分後、冷却したＴＨＦ（０．５ｍＬ）−水（０．５ｍＬ）溶液中のオキソン（３２３ｍｇ）を冷却した反応混合物に添加した。３時間後、反応を常法により仕上げ処理した。クロマトグラフィーにより、２４２ｍｇの（９）を油として得た。
【００６９】
【化１４】
2005504749.tif 000015
リン酸化試薬１１を作成するために、塩化メチレン中の蒸留したジイソプロピルアミン（９．０ｍＬ）の溶液に、室温にてテトラゾール（４．５１ｇ）を添加し、続いて１．５時間攪拌した。アリルホスホロジアミダイト（１０）（２０．５ｍＬ）を６．５ｍＬ／時間速度にて滴下し、続いて、さらに３時間攪拌した。塩化メチレン（５０ｍＬ）中のＮ−Ｂｏｃ−２−アミノエタノール（１０．３６ｇ）を８．４ｍＬ／時間の速度にて前記反応混合物に敵下し、続いて、さらに１８時間攪拌した。白色懸濁液を、塩化メチレンを含む２回分の２０ｍＬの洗浄液にてＣｅｌｉｔｅ５４５を通して濾過した。濾液を濃縮し、続いて懸濁させ、残渣をヘキサン（２００ｍＬ）で濾過した。得られたヘキサン濾液を濃縮乾固し、２．１０ｍＬ分のトルエンで共沸させて、粗生成物（１１）（２１．５４ｇ）を油として得た。
【００７０】
【化１５】
2005504749.tif 000016
塩化メチレン（７．８ｍＬ）中のジチオフェノールスズ（１．３ｇ）の懸濁液に、チオフェノール（４００μＬ）、続いてＴＥＡ（５４３μＬ）を添加した。反応混合物を室温にて１５分間攪拌し、続いて、攪拌を停止し、残渣をフラスコの底まで沈降させた。１．０ｍＬの前記溶液を塩化メチレン（０．５ｍＬ）中のアジド（９）（２４２ｍｇ）の溶液に添加し、３０分間攪拌した。０．１ＮのＮａＯＨでクエンチし、続いて、常法により仕上げ処理して１９３．１ｍｇのアミン（１２）を油として得た。
【００７１】
【化１６】
2005504749.tif 000017
塩化メチレン中のアミン（１２）（１９３ｍｇ）および（Ｃｈｒｉｓｔらの米国特許第５，５３０，１１３号に従って製造することができる）アシル酸（１３２ｍｇ）の乾燥した溶液に、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ、９３ｍｇ）を添加した。室温にて９０分間攪拌した後、その反応物を急令し、常法により処理して、２３２ｍｇの保護リン酸塩（１３）を油として得た。
【００７２】
【化１７】
2005504749.tif 000018
塩化メチレン（１ｍＬ）中の保護リン酸塩（１３）（２３２ｍｇ）の溶液に、トリエチルシラン（ＴＥＳ、１２０μＬ）およびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ、１．２ｍＬ）を添加し、続いて、３０分間攪拌した。減圧下でＴＦＡを除去し、続いて、３．５−ｍＬ分のトルエンと共沸させた。２０ｍＬの塩化メチレンを添加し、混合物を常法により仕上げ処理して、１７４ｍｇの遊離アミン（１４）を油として得た。
【００７３】
【化１８】
2005504749.tif 000019
塩化メチレン（０．５ｍＬ）中の遊離アミン（１４）（１７４ｍｇ）の乾燥した溶液に、コハク酸（１２．１ｍｇ）およびＥＤＣ（５９ｍｇ）を添加した。１時間後、その反応物を常法により仕上げ処理した。クロマトグラフィーにより、１４３．１ｍｇのブロックされた二リン酸塩（１５）を油として得た。
【００７４】
【化１９】
2005504749.tif 000020
ドライボックスの中で脱気したクロロホルム（１．７ｍＬ）中のブロックされたリン酸塩（１５）（１７７．９ｍｇ）の溶液に、まずフェニルシラン（ＰｈＳｉＨ3、５０μＬ）、次いでテトラキス−ポリフェニルホスフィンパラジウム（０）（Ｐｄ（ＰＰＨ3）4、７０ｍｇ）を添加した。１時間後、その反応物をボックスから取り出し、クロロホルム：メタノール：水（２：３：１）を添加し、混合物を１時間攪拌した。それをジエチルアミノ−エチルセルロース（ＤＥＡＥ）クロマトグラフィーカラムに注いだ。クロロホルム：メタノール：水（２：３：１）中の０．０Ｍないし０．１Ｍの酢酸アンモニウムの直線グラジエントでのカラムの溶出、等容量のクロロホルムでの所望の画分の抽出、濃縮乾固および０．１ＮのＮａＯＨ（１７５μＬ）の添加、続いての、凍結乾燥により、１３６．２ｍｇの（１６）を白色固体として得た。
【００７５】
実施例２：キラルマロネート−タイプ１
【００７６】
【化２０】
2005504749.tif 000021
水（５７５ｍＬ）中の炭酸カリウム（１６５ｇ）の冷却された溶液に、塩化メチレン（２００ｍＬ）、続いてエチルベンズイミデート塩酸塩（１７）（１００ｇ）を添加し、しかる後、混合物を８分間攪拌した。層を分離し、水性層を塩化メチレンで抽出した。有機層を合わせ、乾燥し、減圧下で溶媒を除去して、８３ｇの（１８）を得た。
【００７７】
【化２１】
2005504749.tif 000022
１，２−ジクロロエタン（４５０ｍＬ）中のＬ−セリンメチルエステル塩酸塩（１９）（４１．６ｇ）の溶液に、エチルベンズイミデート（１１）（３６ｇ）を添加した。混合物を２０時間加熱還流し、冷却し、珪藻土を通して濾過し、濃縮乾固して、５６ｇのエチルエステル（２１）を白色固体として得た。
【００７８】
【化２２】
2005504749.tif 000023
ＴＨＦ（５００ｍＬ）中のエチルエステル（２１）（５６ｇ）の氷冷溶液に、水素化ジイソブチルアルミニウム（ＤＩＢＡＬ、ヘキサン中の１Ｍ溶液の５４５ｍＬ）を滴下した。混合物を室温にて一晩加温し、次いで、ロッシェル塩の水溶液（１．０Ｌ水中油型エマルジョン５００ｇ）に注意深く注いだ。混合物を１時間攪拌し、常法により仕上げ処理した。クロマトグラフィーにより、２５．５ｇのアルコール（２２）を白色固体として得た。
【００７９】
【化２３】
2005504749.tif 000024
ＤＭＦ（２００ｍＬ）中の洗浄した水素化ナトリウム（６０％油分散液の５．３ｇ）の懸濁液に、２５０ｍＬのＴＨＦ中の該アルコール（２２）（２４ｇ）を添加した。３０分後、トシレート（４）を２５０ｍＬのＴＨＦに２．５時間にわたって添加し、一晩攪拌した。混合物を氷中で冷却し、メタノールを添加し、減圧下で溶媒を除去し、クロマトグラフィーに付して、４．３２ｇのアルコール（２４）を油として得た。
【００８０】
【化２４】
2005504749.tif 000025
該アルコール（２４）（４．３ｇ）を４Ｎ塩酸に溶解させ、２０分間加熱還流した。混合物を冷却し、濾過し、エーテルで抽出し、水酸化ナトリウムで塩基性とし、クロロホルムで２回抽出した。合わせたクロロホルム層を乾燥し、溶媒を除去して、２．８８ｇのジオール（２５）を油として得た。
【００８１】
【化２５】
2005504749.tif 000026
該ジオール（２５）（２．８８ｇ）を飽和水性重炭酸ナトリウム（４５ｍＬ）およびＴＨＦ（２５ｍＬ）に溶解させ、５分間攪拌した。塩化ミリストイル（３．４ｍＬ）を２５分間にわたって滴下し、しかる後、反応混合物をさらに１時間攪拌した。反応を常法により仕上げ処理し、クロマトグラフィーに付して、３．０７ｇのアルコール（２６）を油として得た。
【００８２】
【化２６】
2005504749.tif 000027
塩化メチレン（１４０ｍＬ）中の該アルコール（２６）（１．７８ｇ）の溶液に、テトラゾール（６８３ｍｇ）、続いてリン酸化試薬（１１）（１．６ｍＬ）を添加した。３０分後、混合物を氷中で冷却し、ＴＨＦ（１０５ｍＬ）を添加し、続いて、オキソン溶液（９０ｍＬの水中油型エマルジョン３ｇ）を添加した。５分後、氷浴を取り除き、混合物を３０分間攪拌した。反応物を常法により仕上げ処理し、クロマトグラフィーに付して、２．９９ｇのアルコール（２７）を油として得た。
【００８３】
【化２７】
2005504749.tif 000028
塩化メチレン（１２６ｍＬ）中の該アルコール（２７）（３．９ｇ）の溶液に、ＥＤＣ（１０．８ｇ）、ＤＭＡＰ（６６ｍｇ）およびドデシル酸（１．６２ｇ）を添加し、一晩攪拌した。さらなる酸（１．６ｇ）、ＥＤＣ（１ｇ）およびＤＭＡＰ（０．５ｇ）を添加した。３時間後、反応を常法により仕上げ処理し、クロマトグラフィーに付して、２．０７ｇのＮ−ＢＯＣ−保護アミン（２８）を得た。
【００８４】
【化２８】
2005504749.tif 000029
塩化メチレン（１．５ｍＬ）中のＮ−ＢＯＣ−保護アミン（２８）（１８７．３ｍｇ）の溶液に、ＴＥＳ（２４０μＬ）およびＴＦＡ（３００μＬ）を添加し、混合物を４５分間攪拌した。トルエンを添加し、溶媒を減圧下で除去した。残渣を塩化メチレンに溶解させ、常法により仕上げ処理して、１５４ｍｇのアミン（２９）を油として得た。
【００８５】
【化２９】
2005504749.tif 000030
塩化メチレン（０．５ｍＬ）中の該アミン（２９）（７５．６ｍｇ）およびマロン酸（４．８ｍｇ）の氷冷溶液に、ＥＤＣ（２７ｍｇ）を添加し、続いて、冷却浴を取り除いた。１時間後、微量のＤＭＡＰを添加した。２．５時間後、混合物を直接クロマトグラフィーに付して、５４．１ｍｇのダイマー生成物（３０）を得た。
【００８６】
【化３０】
2005504749.tif 000031
脱気したクロロホルム（２ｍＬ）中の該ダイマー（３０）（５４ｍｇ）の溶液に、ＰｈＳｉＨ3（１４μＬ）およびＰｄ（ＰＰｈ3）4（１８ｍｇ）を添加し、続いて、冷却浴を取り除いた。１時間後、反応物をクロロホルム：メタノール：水（２：３：１）で急令し、ＤＥＡＥセルロースクロマトグラフィーカラムに注ぎ、クロマトグラフィーに付して、半固体を得た。該固体を滅菌水に溶解させ、０．１Ｎの水酸化ナトリウム水溶液（３０６μＬ）を添加し、混合物を凍結乾燥して、白色固体（３１）（２５ｍｇ）を得た。
【００８７】
実施例３：キラルマロネート−タイプ２
【００８８】
【化３１】
2005504749.tif 000032
ジクロロエタン（２７０ｍＬ）中のＤ−セリンメチルエステル塩酸塩（３２）（２５ｇ）の溶液に、エチルべンズイミデート（２０）（２４ｇ）を添加した。還流の２０時間後、混合物を室温まで冷却し、珪藻土を通して濾過し、溶媒を減圧下で除去して、３４ｇのメチルエステル（３３）を白色固体として得た。
【００８９】
【化３２】
2005504749.tif 000033
ＴＨＦ（３００ｍＬ）中のメチルエステル（３３）（３４ｇ）の氷冷溶液に、ヘキサン中のＤＩＢＡＬの溶液（１．０Ｍ、３２２ｍＬ）を滴下した。混合物を室温まで一晩で加温し、次いで、ロッシェル塩の水溶液に注意深く注いだ。次いで、混合物を１時間攪拌し、仕上げ処理した。クロマトグラフィーにより、１８．６ｇのアルコール（３６）を白色固体として得た。
【００９０】
【化３３】
2005504749.tif 000034
ＤＭＦ（１００ｍＬ）中の洗浄した水素化ナトリウム（６０％油懸濁液の４ｇ）の懸濁液に、ＴＨＦ（４０ｍＬ）中の該アルコール（３６）（８．６ｇ）の溶液を添加した。混合物を１時間攪拌し、ＴＨＦ（４０ｍＬ）中のトシレート（２３）（１７．５ｇ）の溶液を添加した。混合物を一晩攪拌し、次いで、さらにトシレート（２３）を添加し（５ｇ）、さらに４時間攪拌した。メタノールを冷却した反応混合物に添加し、溶媒を減圧下で除去し、残渣をクロマトグラフィーに付して、１．０３ｇのアルコール（３７ｇ）を固体として得た。
【００９１】
【化３４】
2005504749.tif 000035
該アルコール（３７）（１．０３）を４Ｎの塩酸（２５ｍＬ）に溶解させ、混合物を２０時間で１００℃まで加熱した。さらに塩酸（５ｍＬ）を添加し、還流を６時間継続した。混合物を冷却し、エーテルで洗浄し、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液で塩基性とし、クロロホルムで抽出した（３×）。合わせたクロロホルム層を乾燥し、溶媒を減圧下で除去して、５５３ｍｇのアミノ−ジオール（３９）を得た。
【００９２】
【化３５】
2005504749.tif 000036
ＴＨＦ（３ｍＬ）中のアミノ−ジオール（３９）（５５３ｍｇ）の溶液に、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（６ｍＬ）、続いて塩化ミリストイル（６２８μＬ）を添加した。５０分後、反応を常法により仕上げ処理した。クロマトグラフィーにより、３８９ｍｇのアミド−ジオール（４１）を油として得た。
【００９３】
【化３６】
2005504749.tif 000037
塩化メチレン（４０ｍＬ）中の該アミド−ジオール（４１）（５３１ｍｇ）の溶液に、テトラゾール（２０３ｍｇ）を添加し、混合物を５分間攪拌した。次いで、リン酸化試薬（１１）（４８２ｍｇ）を添加した。２０分後、さらにリン酸化試薬（１１）（１００ｍｇ）を添加し、さらに２０分後、１００ｍｇをさらに添加した。さらに２０分後、２０ｍｇをさらに添加した。２０分後、混合物をＴＨＦ（３０ｍＬ）／オキソン（１．０７ｇ）／水（３０ｍＬ）の冷溶液に注いだ。混合物を０℃にて５分間攪拌し、次いで、室温にて２０分間攪拌し、しかる後、反応を常法により仕上げ処理した。クロマトグラフィーにより、８５２ｍｇのアルコールリン酸塩（４２）を油として得た。
【００９４】
【化３７】
2005504749.tif 000038
塩化メチレン（１２６ｍＬ）中の該アルコールリン酸塩（４２）（３．９ｇ）の溶液に、ＥＤＣ（１０．８ｇ）、ＤＭＡＰ（６６ｍｇ）およびドデシル酸（１．６２ｇ）を添加した。反応混合物を一晩攪拌した。さらに酸（１．６ｇ）、ＥＤＣ（１ｇ）およびＤＭＡＰ（０．５ｇ）を添加した。３時間後、反応物を常法により仕上げ処理し、クロマトグラフィーに付して、２．０７ｇの保護アミン（４３）を得た。
【００９５】
【化３８】
2005504749.tif 000039
塩化メチレン（１．５ｍＬ）中の保護されたアミン（４３）（１９４ｍｇ）の溶液に、ＴＥＳ（２４０μＬ）およびＴＦＡ（３００μＬ）を添加した。混合物を２０分間攪拌し、さらにＴＥＳ（５０μＬ）およびＴＦＡ（５０μＬ）を添加した。１時間後、トルエンを添加し、溶媒を減圧下で除去し、次いで、混合物を常法により仕上げ処理した。粗製遊離アミン生成物（４４）を次の反応で直ちに用いた。
【００９６】
【化３９】
2005504749.tif 000040
塩化メチレン（２５０μＬ）中の該遊離アミン（２９）（４３．５ｍｇ）の氷冷溶液に、マロン酸モノ−ｔ−ブチル（８．３μＬ）、ＥＤＣ（１２．４ｍｇ）および微量のＤＭＡＰを添加した。氷浴を取り除き、２時間後、反応物を常法により仕上げ処理した。クロマトグラフィーにより、４４ｍｇのアミド（４５）を得た。
【００９７】
【化４０】
2005504749.tif 000041
塩化メチレン（０．５ｍＬ）中の該アミド（４５）（４４ｍｇ）の溶液に、ＴＥＳ（９０μＬおよびＴＦＡ（１００μＬ）を添加した。２時間後、トルエンを添加し、溶媒を減圧下で除去した。混合物を常法により仕上げ処理して、４４．２ｍｇの遊離酸（４６）を得た。
【００９８】
【化４１】
2005504749.tif 000042
塩化メチレン（５００μＬ）中の該遊離酸（４６）（４１ｍｇ）および該遊離アミン（４４）（２６．３ｍｇ）の氷冷溶液に、ＥＤＣ（１３ｍｇ）を添加し、混合物を３０分間攪拌した。さらにＥＤＣ（５ｍｇ）およびＤＭＡＰ（２ｍｇ）を添加し、１時間後、反応物を常法により仕上げ処理した。クロマトグラフィーにより、３２．７ｍｇのカップリングした化合物４７を油として得た。
【００９９】
【化４２】
2005504749.tif 000043
ドライボックスの中で脱気したクロロホルム（１．５ｍＬ）中のカップリングした化合物（４７）（３２．７ｍｇ）の溶液に、ＰｈＳｉＨ3（８．５μＬ）およびＰｄ（ＰＰＨ3）4（１１ｍｇ）を添加した。混合物をボックスから取り出し、氷中で冷却した。５分後、氷浴を取り除き、１時間後、クロロホルム：メタノール：水（２：３：１）を添加し、混合物を１５分間攪拌し、フリーザー中で一晩貯蔵した。次いで、混合物をＤＥＡＥクロマトグラフィーカラムに注いだ。０．１ＮのＮａＯＨ処理、続いての凍結乾燥の後に、クロマトグラフィーにより、１３．９ｍｇの化合物（４８）を白色粉末として得た。
【０１００】
実施例４：キラル尿素−タイプ１
【０１０１】
【化４３】
2005504749.tif 000044
トルエン中のアミン（４４）（４６．１ｍｇ）の溶液に、飽和重炭酸ナトリウム（０．５ｍＬ）、続いてホスゲン（トルエン中の１．９３Ｍ溶液の１５μＬ）を添加した。３０分後、さらにホスゲン（１０μＬ）を添加した。２時間後、さらにホスゲン（５μＬ）を添加した。反応物を重炭酸ナトリウム水溶液で急令し、常法により仕上げ処理して、保護リン酸塩を持つ２９．６ｍｇの尿素（４９）を得た。
【０１０２】
【化４４】
2005504749.tif 000045
ドライボックスの中で脱気したクロロホルム（１．５ｍＬ）中の保護リン酸塩を持つ尿素（４９）（２９．６ｍｇ）の溶液に、ＰｈＳｉＨ3（８μＬ）を添加した。反応容器をドライボックスから取り出し、氷の上に置いた。Ｐｄ（ＰＰｈ3）4（１０ｍｇ）を添加し、５分後、氷浴を取り除いた。１時間後、クロロホルム：メタノール：水の添加によって反応物を急令した。混合物を１５分間攪拌し、フリーザー中で一晩貯蔵した。それをＤＥＡＥでのクロマトグラフィーに付して、０．１ＮのＮａＯＨ処理、続いての凍結乾燥の後に、２４．１ｍｇの（５０）を白色粉末として得た。
【０１０３】
実施例５：キラル尿素−タイプ２
【０１０４】
【化４５】
2005504749.tif 000046
塩化メチレン（２００μＬ）中のクロロギ酸トリクロロメチル（２．６μＬ）の氷冷溶液に、塩化メチレン（２００μＬ）中の遊離アミン（２９）（３５ｍｇ）および１，８−ビス−（ジメチルアミノ）−ナフタレンの溶液を添加した。５分後、氷浴を取り除いた。１５分後、さらに塩化メチレンを添加し、混合物を常法により仕上げ処理した。クロマトグラフィーにより、９．４ｍｇのイソシアネート（５１）を油として得た。
【０１０５】
【化４６】
2005504749.tif 000047
塩化メチレン（０．２ｍＬ）中の該イソシアネート（５１）（９．４ｍｇ）の溶液に、塩化メチレン中の該アミン（４４）（１０．３ｍｇ）の溶液を添加した。１５分後、反応を常法により仕上げ処理した。クロマトグラフィーにより、５．５ｍｇのカップリングした化合物（６１）を油として得た。
【０１０６】
【化４７】
2005504749.tif 000048
ドライボックスの中で脱気したクロロホルム（０．５ｍＬ）中のカップリングした化合物（６１）（２５．２ｍｇ）の溶液に、ＰｈＳｉＨ3（６．６μＬ）およびＰｂ（ＰＰＨ3）4（８．８ｍｇ）を添加した。混合物をボックスから取り出し、氷中で冷却した。５分後、氷浴を取り除き、１時間後、クロロホルム：メタノール：水（２：３：１）を添加し、混合物を１５分間攪拌し、フリーザー中で一晩貯蔵した。次いで、混合物をＤＥＡＥクロマトグラフィーカラムに注いだ。０．１ＮのＮａＯＨ処理、続いての凍結乾燥の後に、クロマトグラフィーにより７．５ｍｇの（６２）を白色粉末として得た。
【０１０７】
実施例６：タイプ１のキラルグリセロールアナログ
【０１０８】
【化４８】
2005504749.tif 000049
ＤＭＦ（１２ｍＬ）中の水素化ナトリウム（ヘキサンで洗浄した６０％油分散液の１４５．５ｍｇ）の攪拌懸濁液に、８ｍＬのＴＨＦを１時間にわたって滴下した。混合物をさらに３０分間攪拌し、続いて、１０ｍＬのＴＨＦ中のトシレート（４）（０．７８９ｇ）を１０分間にわたって滴下した。得られた反応混合物を一晩攪拌した。通常の仕上げ処理により、０．５６ｍｇの所望のアダクト（６５）を得た。
【０１０９】
【化４９】
2005504749.tif 000050
４ｍＬの塩化メチレン中のラウリン酸（１．４０ｇ）、ＥＤＣ（１．３５ｇ）、ＤＭＡＰ（０．０４ｇ）およびアルコールアダクト（６５）（０．５６４ｇ）の溶液を室温にて１５時間攪拌した。ブラインおよび飽和重炭酸ナトリウム水溶液（１：１）を添加し、混合物を塩化メチレンで抽出した。混合物を常法により仕上げ処理し、クロマトグラフィーに付した。所望の画分を２０ｍＬの４：１酢酸：水に溶解させ、１５時間攪拌した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をクロマトグラフィーに付して、０．７７ｇの半固体ジオール（６６）を得た。
【０１１０】
【化５０】
2005504749.tif 000051
該ジオール（６６）（０．２２ｇ）、ＤＭＡＰ（６．３ｍｇ）、ＴＥＡ（１００μＬ）およびＴＢＤＰＳＣＩ（１６４μＬ）の溶液を室温にて２４時間攪拌した。メタノール（２ｍＬ）および痕跡量の塩酸を添加し、続いて、塩化メチレンで抽出した。混合物を常法により仕上げ処理した。残渣をクロマトグラフィーに付して、０．３ｇのアルコール（６７）を油として得た。
【０１１１】
【化５１】
2005504749.tif 000052
塩化メチレン（４ｍＬ）中の該アルコール（６７）（０．３ｇ）、ＤＭＡＰ（５．５ｍｇ）、ＥＤＣ（２５８ｍｇ）、ミリスチン酸（３０８ｍｇ）の溶液を室温にて１８時間攪拌し、続いて、ブラインおよび飽和重炭酸ナトリウムを添加した。混合物を常法により仕上げ処理し、クロマトグラフィーに付して、０．４ｇのシリル保護エーテル生成物（６８）を得た。
【０１１２】
【化５２】
2005504749.tif 000053
アセトニトリル（２．７ｍＬ）中の該シリル保護エーテル（６８）（１９５ｍｇ）の溶液に、４８％フッ酸（０．７５６ｍｌ）を添加した。３０分後、飽和重炭酸ナトリウムを添加し、混合物を常法により仕上げ処理した。クロマトグラフィーにより、９４．７ｍｇの遊離アルコール（６９）を得た。
【０１１３】
【化５３】
2005504749.tif 000054
塩化メチレン（０．５ｍＬ）中の遊離アルコール（６９）（５７ｍｇ）の溶液に、室温にて、テトラゾール（１５．６ｍｇ）およびリン酸化試薬（１１）（４０ｍｇ）を添加した。４時間後、混合物を０℃まで冷却し、ＴＨＦ（０．５ｍＬ）：水（０．６ｍＬ）中のオキソン（８２ｍｇ）を添加した。混合物を室温まで加温し、８０分間攪拌した。最終反応混合物を常法により仕上げ処理した。クロマトグラフィーにより、７２ｍｇの保護リン酸塩（７０）を得た。
【０１１４】
【化５４】
2005504749.tif 000055
塩化メチレン（１ｍＬ）中の保護リン酸塩（７０）（７２ｍｇ）の溶液に、ＴＥＳ（１２０μＬ）およびトリフルオロ酢酸（０．６ｍＬ）を添加し、続いて１時間攪拌した。ＴＦＡを減圧下で除去し、続いて、１０ｍＬのトルエンと共沸させた。２０ｍＬの塩化メチレンを添加し、混合物を常法により仕上げ処理して、０．５２ｇの油を得た。
【０１１５】
粗製アミンを塩化メチレン（０．７ｍＬ）に溶解させ、続いて、マロン酸（４．５ｍｇ）およびＥＤＣ（２５．６ｍｇ）を添加した。混合物と一晩攪拌し、常法により仕上げ処理して、３２．５ｍｇのダイマー生成物（７１）を得た。
【０１１６】
【化５５】
2005504749.tif 000056
これまでの反応からの保護ダイマー（７１）（３２．５ｍｇ）を脱気したクロロホルム（２ｍＬ）に溶解させ、ＰｈＳｉＨ3（８．６μＬ）をドライボックス中で添加した。混合物を、ドライボックスから取り出し、ドライボックス中で秤量したＰｄ（ＰＰｈ3）4（２２．６ｍｇ）を添加した。２時間後、混合物をＤＥＡＥでのクロマトグラフィーに付して、１Ｎ水酸化ナトリウム（３４．２μＬ）の添加、続いての凍結乾燥の後に、２７．９ｍｇの白色固体（７２）を得た。
【０１１７】
ＥＲ−８０４２５３の調製
【０１１８】
【化５６】
2005504749.tif 000057
該アルコール（５５８ｍｇ）を、０℃まで冷却した塩化メチレン（５ｍＬ）に溶解させ、トリエチルアミン（０．４６６ｍＬ）を窒素雰囲気下で添加した。５分間攪拌した後、塩化メタンスルホニル（０．１４２ｍＬ）を滴下した。混合物を０℃にてさらに５分間攪拌し、次いで、室温まで加温した。さらに１時間攪拌した後、混合物を飽和重炭酸ナトリウムで仕上げ処理し、酢酸エチルで抽出し、抽出物を水、希塩酸、水、ブラインで洗浄し、乾燥し、溶媒を除去して６３０ｍｇを得た。
【０１１９】
【化５７】
2005504749.tif 000058
メシレート（６３０ｍｇ）およびアジ化ナトリウム（２９９ｍｇ）をＤＭＳＯ（６ｍＬ）に溶解させ、９０分間で６０℃まで加熱した。室温まで冷却した後、反応混合物を塩化メチレンで希釈し、水およびブラインで洗浄した。水性洗浄液を抽出した後、合わせた有機物を乾燥し、濃縮し、４：１比のヘキサン：酢酸エチルを用いてシリカゲル上で精製し、乾燥した生成物画分から４２０ｍｇを得た。
【０１２０】
【化５８】
2005504749.tif 000059
該アジド（２９５ｍｇ）をエタノール（５ｍＬ）に溶解させ、リンドラー触媒（２００ｍｇ）を添加した。大気圧において水素ガスの雰囲気下で攪拌した後、濾過した溶液を乾燥して２７４ｍｇを得た。
【０１２１】
【化５９】
2005504749.tif 000060
該アミン（９３０ｍｇ）をＴＨＦ（１０ｍＬ）および飽和重炭酸ナトリウム（２２ｍＬ）に溶解させた。５分間攪拌した後、塩化ラウロイル（０．７１２ｍＬ）を２０分間にわたって滴下した。最終混合物をクロロホルムで抽出し、乾燥して１．４５ｇを得た。
【０１２２】
【化６０】
2005504749.tif 000061
該アミド（１．１１ｇ）をメタノール（１４ｍＬ）に溶解させ、４Ｎ塩酸（８ｍＬ）を添加した。混合物を５０℃にて１時間攪拌し、次いで、濃縮した。メタノール（１６ｍＬ）および４０％水酸化ナトリウム（８ｍＬ）を添加し、混合物を１時間還流した。それを冷却し、塩化メチレンで抽出し、抽出物を水で洗浄し、乾燥し、溶媒を除去して９３０ｍｇを得た。
【０１２３】
【化６１】
2005504749.tif 000062
該アミノアルコールをＴＨＦ（６ｍＬ）に溶解させ、飽和重炭酸ナトリウムを添加した（１３ｍＬ）。５分後、混合物を０℃まで冷却し、塩化ミリストイル（３００μＬ）を添加した。３０分後、混合物を常法により仕上げ処理して、４３０ｍｇを得た。
【０１２４】
【化６２】
2005504749.tif 000063
該アルコール（１０１．７ｍｇ）を氷冷塩化メチレンに溶解させ、リン酸化試薬１１（９０μＬ）を添加し、混合物を３０分間攪拌した。氷冷オキソン（１６６．３ｍｇ）を添加し、混合物を３０分間攪拌した。反応をチオスルフェートで急令した。混合物を常法により仕上げ処理し、クロマトグラフィーに付して、１７４ｍｇ（精製せず）を得た。
【０１２５】
【化６３】
2005504749.tif 000064
前記反応からの保護されたアミンを氷冷塩化メチレン（１ｍＬ）に溶解させ、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）を添加し、混合物を１時間攪拌した。ＴＦＡを除去し、混合物を精製して、１０６．７ｍｇを得た。
【０１２６】
【化６４】
2005504749.tif 000065
該アミンを塩化メチレン（３ｍＬ）に溶解させ、飽和重炭酸ナトリウム溶液（３ｍＬ）を添加した。混合物を氷中で冷却し、トルエン中のホスゲン（０．５５当量）を滴下した。混合物を２０分間攪拌し、仕上げ処理して、１１２．３ｍｇを得た。
【０１２７】
【化６５】
2005504749.tif 000066
氷冷クロロホルム（２．６ｍＬ）中のブロックされたリン酸塩（４０．５ｍｇ）の溶液に、フェニルシラン（１０．７ｍｇ）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム［０］（２８．７ｍｇ）を添加し、混合物を１時間攪拌した。混合物をＤＥＡＥカラムでのクロマトグラフィーに付して、２７．７ｍｇのＥＲ−８０４２５３を得た。
【０１２８】
ＥＲ−８０４１３０の調製
【０１２９】
【化６６】
2005504749.tif 000067
−７８℃のＴＨＦ（６５ｍＬ）中の該アミド（３ｇ）の溶液に、同等のブチルリチウム、続いて、ＴＨＦ（６ｍＬ）中の塩化ノナノイルの溶液を添加した。塩化アンモニウム水溶液を添加し、混合物を常法にて仕上げ処理して、５．３５ｇを得た。
【０１３０】
【化６７】
2005504749.tif 000068
氷冷塩化メチレン（１００ｍＬ）中の該アルコール（５ｇ）の溶液に、トリエチルアミン（４．１ｍＬ）および塩化メシル（２．１ｍＬ）を添加した。混合物を４時間攪拌し、常法により仕上げ処理して、６．９９ｇを得た。
【０１３１】
【化６８】
2005504749.tif 000069
氷冷ＤＭＦ（１００ｍＬ）中の該メシレート（６．９９ｇ）の溶液に、臭化カリウムを添加した。混合物を室温まで加温し、５時間攪拌した。それを常法により仕上げ処理して、４．６３ｇの透明な油を得た。
【０１３２】
【化６９】
2005504749.tif 000070
ＴＨＦ（１５ｍＬ）中の該アミド（２．８ｇ）の溶液を、ＴＨＦ（１５ｍＬ）中のナトリウムビス−トリメチルシリルアミドの−７８℃溶液に添加した。１時間後、該臭化物を添加し、混合物を室温まで加温し、常法により仕上げ処理して、１．０２ｇを得た。
【０１３３】
【化７０】
2005504749.tif 000071
ＥｔＯＡｃ中の該オレフィン（１．０２ｇ）の溶液に、炭素上のパラジウム（１２６ｍｇ）を添加し、混合物を水素下に置いた。４時間後、混合物を常法により仕上げ処理して、１．０ｇを得た。
【０１３４】
【化７１】
2005504749.tif 000072
氷冷ＴＨＦ（２０ｍＬ）中の該アミド（１．０ｇ）の溶液に、水過酸化水素および水酸化リチウムを添加した。翌日、混合物を常法により仕上げ処理して、５９０ｍｇの酸を得た。
【０１３５】
【化７２】
2005504749.tif 000073
氷冷ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の該酸の溶液に、ジボラン：ＴＨＦ錯体を添加し、混合物をゆっくりと加温させた。７時間後、希塩酸を注意深く添加し、混合物を常法により仕上げ処理した。粗製物質を氷冷エーテルに溶解させ、ＬＡＨ溶液（１Ｍの２ｍＬ）を添加した。５分後、混合物を常法により仕上げ処理して、５５６ｍｇのアルコールを得た。
【０１３６】
【化７３】
2005504749.tif 000074
塩化メチレン（１０ｍＬ）中の塩化オキサリル（２．２ｍｌ）の−７８℃溶液にＤＭＳＯ（１．１ｍＬ）を添加し、２分後、アルコール（５５６ｍｇ）を塩化メチレン（５ｍＬ）に添加した。２０分後、トリエチルアミン（１ｍＬ）を添加し、混合物を０℃まで加温した。混合物をエーテルで希釈し、常法に従って仕上げ処理して、５６７ｍｇを得た。
【０１３７】
【化７４】
2005504749.tif 000075
ウィティッヒ試薬（６７９ｍｇ）をＴＨＦ（１０ｍＬ）に懸濁させ、ＫＨＭＤＳ溶液（０．５Ｍの４ｍＬ）を添加した。２０分後、混合物を−７８℃まで冷却し、ＴＨＦ（５ｍＬ）中のアルデヒド（５６７ｍｇ）を添加した。１５分後、混合物を常法により仕上げ処理して、３４２ｍｇを得た。
【０１３８】
【化７５】
2005504749.tif 000076
アセトニトリル（３．５ｍＬ）および水（０．１５ｍＬ）中の該エノールエーテル（３４２ｍｇ）の溶液にヨウ化水素酸を添加した。４時間後、混合物を常法により仕上げ処理して、３２５ｍｇを得た。
【０１３９】
【化７６】
2005504749.tif 000077
メタノール（１０ｍＬ）中の該アルデヒド（３２５ｍｇ）の溶液にホウ水素化ナトリウム（３８ｍｇ）を添加した。３時間後、反応物を常法により仕上げ処理して、３０３ｍｇのアルコールを得た。
【０１４０】
【化７７】
2005504749.tif 000078
塩化メチレン（１０ｍＬ）中の該アルコール（３０３ｍｇ）の氷冷溶液にトリエチルアミン（１５０μＬ）および塩化メシル（７６μＬ）を添加した。４時間後、反応を常法により仕上げ処理して、３５２ｍｇを得た。
【０１４１】
【化７８】
2005504749.tif 000079
氷冷ＴＨＦ（５ｍＬ）中の該オキサゾリン（１ｍＬ）の溶液にカリウムｔ−ブトキシド溶液（１Ｍの２．２ｍＬ）を添加した。３０分後、メシレートをＴＨＦ（５ｍＬ）に添加し、混合物を８時間攪拌した。常法仕上げ処理により３１８．５ｍｇを得た。
【０１４２】
【化７９】
2005504749.tif 000080
メタノール（８ｍＬ）および塩酸（４Ｍの４ｍＬ）中のオキサゾールの溶液を９０分間で５０℃まで加温した。さらにメタノールを添加し、溶媒を除去した。残渣をメタノール（８ｍＬ）および水酸化ナトリウム溶液（４ｍＬ）に溶解させ、軽く５０℃まで加温した。混合物を冷却し、クロロホルムで抽出した。常法仕上げ処理により１１４ｍｇを得た。
【０１４３】
【化８０】
2005504749.tif 000081
ＴＨＦ（２ｍＬ）および飽和重炭酸ナトリウム水溶液（２ｍＬ）中の該アミン（１１４ｍｇ）の溶液に酸塩化物を添加した。３０分後、さらに酸塩化物を添加した。３０分後、反応を常法により仕上げ処理して１４６ｍｇを得た。
【０１４４】
【化８１】
2005504749.tif 000082
氷冷塩化メチレン（２ｍＬ）中のテトラゾール（４８ｍｇ）の溶液に、リン酸化試薬（１２２ｍｇ）の溶液に該アルコール（１４６ｍｇ）を添加した。水（１ｍＬ）およびＴＨＦ（２ｍＬ）中のオキソン（２３０ｍｇ）を添加した。９０分後、チオスルフェートを用いて反応をクエンチした。標準的な仕上げ処理により１４０ｍｇを得た。
【０１４５】
【化８２】
2005504749.tif 000083
氷冷塩化メチレン中の該基質の溶液にトリエチルシラン（３７０μＬ）およびトリフルオロ酢酸（１１０μＬ）を添加した。５分後、揮発物を除去して１４８ｍｇを得た。
【０１４６】
【化８３】
2005504749.tif 000084
氷冷塩化メチレン（０．８ｍＬ）中の該アミン（６６．９ｍｇ）の溶液に飽和重炭酸ナトリウム水溶液（０．８ｍＬ）およびホスゲン溶液（１．９３Ｍの２０μＬ）を添加した。１時間後、さらにホスゲン（１０μＬ）を添加した。３０分後、常法仕上げ処理により４７．７ｍｇを得た。
【０１４７】
【化８４】
2005504749.tif 000085
不活性雰囲気下で、氷冷クロロホルム中のフェニルシラン（１５μＬ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）、パラジウム［０］（２４．８ｍｇ）の溶液に該基質を添加した。５分後、混合物をＤＥＡＥカラムに適用し、クロマトグラフィーに付し、３１ｍｇのＥＲ‐８０４１３０を得た。
【０１４８】
ＥＲ‐８０４５５８の調製
【０１４９】
【化８５】
2005504749.tif 000086
塩化メチレン中の該アミン（３２５ｍｇ）の溶液にトリエチルアミン（３２１μＬ）および塩化１‐ドデカンスルホニルを添加した。３時間後、通常の仕上げ処理により３８４ｍｇを得た。
【０１５０】
【化８６】
2005504749.tif 000087
ＴＨＦ（４ｍＬ）中の保護されたアルコール（３８４ｍｇ）の溶液にフッ化テトラブチルアンモニウム（１２３ｍｇ）および酢酸（２９μＬ）を添加した。２時間後、通常の仕上げ処理により１８０ｍｇを得た。
【０１５１】
合成の残りは、本発明の他の化合物について前記で概説したごとく完了した。すなわち、リン酸化、脱ブロッキング、ホスゲンとのカップリング、およびフェニルシランおよびパラジウムでの脱保護。
【０１５２】
ＥＲ‐８０４４４２の調製
該ジオールアミンは前記で概説したそのｔ‐ブチル‐ジフェニルシリルエーテルとしてモノ‐保護した。
【０１５３】
【化８７】
2005504749.tif 000088
該アミン（２．６ｇ）およびベンゾフェノンイミン（１．１ｍＬ）を混合し、４日間で４０℃まで加熱し、クロマトグラフィーの後に３．３ｇを得た。
【０１５４】
【化８８】
2005504749.tif 000089
氷冷塩化メチレン中の該アミン（３．３ｇ）の溶液にラウリン酸（１．５ｇ）、ＥＤＣ（１．７ｇ）およびＤＭＡＰ（１５５ｍｇ）を添加した。翌日、反応物を常法により仕上げ処理して３．１５ｇを得た。
【０１５５】
【化８９】
2005504749.tif 000090
エーテル中の該イミン（３．１４ｇ）の溶液に１Ｎ塩酸を添加した。翌日、反応物を常法により仕上げ処理して２．８１ｇを得た。
【０１５６】
【化９０】
2005504749.tif 000091
氷冷塩化メチレン（２５０μＬ）中のクロロギ酸トリクロロメチル（１２μＬ）の溶液にドデシルアミン（１８μＬ）およびジイソプロピルエチルアミン（２７μＬ）を添加した。３０分後、溶媒を除去した。残渣を氷冷塩化メチレンに溶解させ、それに該アミン（５５．６ｍｇ）およびさらにジイソプロピルエチルアミン（１３μＬ）を添加した。２時間後、常法仕上げ処理によりクロマトグラフィーの後に、６０．９ｍｇを得た。
【０１５７】
この生成物をフッ化物で脱保護し、リン酸化し、ＴＦＡで脱保護し、ホスゲンで二量体化し、前記で概説したごとくフェニルシランおよびパラジウムで脱ブロックして、ＥＲ‐８０４４４２を得た。
【０１５８】
ＥＲ‐８０４２２１の調製
【０１５９】
【化９１】
2005504749.tif 000092
水酸化ナトリウム水溶液（６０ｍＬの４．４ｇ）中のグリシン（８．２６ｇ）の氷冷溶液に塩化ラウロイル（２１．８ｇ）を添加した。１時間後、酸を添加し、混合物を常法により仕上げ処理した。酢酸エチルからの再結晶により９．７ｇを得た。
【０１６０】
【化９２】
2005504749.tif 000093
メタノール中の該アミン（１．４ｇ）の氷冷溶液にトリフリックアジド（２０ｍｇ）を添加した。翌日、さらにアジドを添加した。２時間後、反応物を常法により仕上げ処理して、クロマトグラフィーの後に、１．１４ｇを得た。
【０１６１】
【化９３】
2005504749.tif 000094
塩化メチレン中の該アルコール（１．１４ｇ）の溶液に塩化ｔ‐ブチル‐ジフェニルシリル（１．０９ｍＬ）、トリエチルアミン（１．８ｍＬ）およびＤＭＡＰ（５０ｍｇ）を添加した。３時間後、常法仕上げ処理により１．４ｇを得た。
【０１６２】
【化９４】
2005504749.tif 000095
氷冷塩化メチレン中の該アルコール（１．４ｇ）の溶液にラウリン酸（８２６ｍｇ）、ＥＤＣ（１．０５ｇ）およびＤＭＡＰ（３３ｍｇ）を添加した。翌日、常法仕上げ処理により、クロマトグラフィーの後に、７７８ｍｇを得た。
【０１６３】
【化９５】
2005504749.tif 000096
ＴＨＦ中の該アジド（７７８ｍｇ）の溶液に酢酸（７７μＬ）およびＴＢＡＦ（３２３ｍｇ）を添加した。翌日、常法仕上げ処理により、クロマトグラフィーの後に、４２８ｍｇを得た。
【０１６４】
【化９６】
2005504749.tif 000097
塩化メチレン中の該アジド（４６０ｍｇ）の溶液にテトラゾール（１６５ｍｇ）、リン酸化試薬（３９０ｍｇ）を添加し、３０分後、水中のオキソン（３ｍＬ中の７２２ｍｇ）を添加した。反応物をチオスルフェートで急令した。常法仕上げ処理により、クロマトグラフィーの後に、３９２ｍｇを得た。
【０１６５】
【化９７】
2005504749.tif 000098
保護されたアミン（４６０ｍｇ）を塩化メチレン、トリフルオロ酢酸（３９４μＬ）およびトルエチルシラン（３０８μＬ）に溶解させた。１．５時間後、常法仕上げ処理により３９２ｍｇを得た。
【０１６６】
【化９８】
2005504749.tif 000099
塩化メチレン（５．５ｍＬ）中の該アミンの氷冷溶液に飽和重炭酸ナトリウム（５．５ｍＬ）、およびホスゲン（トルエン中の１．９３Ｍ溶液の１６４μＬ）を添加した。１５分後、常法仕上げ処理により、クロマトグラフィーの後に、３４２ｍｇを得た。
【０１６７】
【化９９】
2005504749.tif 000100
塩化メチレン中の該アジド（１８７ｍｇ）の氷冷溶液に、ここに出典明示して本明細書の一部とみなす米国特許第５，７５６，７１８号に概説されているごとく調製したスズ試薬（１．５ｍＬ）を添加した。３０分後、混合物をクロマトグラフィーに付して１８７ｍｇを得た。
【０１６８】
【化１００】
2005504749.tif 000101
塩化メチレン中の該尿素（５５ｍｇ）の氷冷溶液に（前記したごとく調製した）該酸（５９ｍｇ）およびＥＤＣ（４４ｍｇ）を添加した。翌日、さらにＥＤＣ（５ｍｇ）および酸（５ｍｇ）を添加した。２時間後、通常の仕上げ処理により４５．７ｍｇを得た。保護基をフェニルシランおよびパラジウムで常法により除去して、ＥＲ‐８０４２２１を得た。
ＥＲ‐８０４２２２は、塩化ラウリルおよびグリシンの間の縮合生成物である１５‐メチルミリスチン酸を用いた以外は同様に調製した。
【０１６９】
ＥＲ‐８０４２８１の調製
【０１７０】
【化１０１】
2005504749.tif 000102
アセトニトリル：水中の該保護アルコール（８．３ｇ）の氷冷溶液にＣＡＮ（４１．４ｇ）を添加した。１時間後、常法仕上げ処理により５．７ｇを得た。
【０１７１】
【化１０２】
2005504749.tif 000103
４ＮのＨＣｌ溶液中の該アルコール（５．６３ｇ）の溶液を１時間加熱還流し、冷却し、水酸化ナトリウムで中和し、常法により仕上げ処理して２．１ｇを得た。
【０１７２】
【化１０３】
2005504749.tif 000104
塩化メチレン中の該アルコール（２．２ｇ）の氷冷溶液に１５ｍＬの塩化メチレン中のイミダゾール（０．７ｇ）、塩化ｔ‐ブチル‐ジフェニルシリルを添加した。翌日、常法仕上げ処理により１．５４ｇを得た。
【０１７３】
【化１０４】
2005504749.tif 000105
塩化メチレン（４０ｍＬ）中の該アルコール（１．９３ｇ）の溶液にベンゾフェノンイミン（０．８ｍＬ）を添加した。１日後、混合物を一晩加熱還流した。常法仕上げ処理により１．６７ｇを得た。
【０１７４】
【化１０５】
2005504749.tif 000106
塩化メチレン中の該アルコール（１．６７ｇ）の氷冷溶液にＤＭＡＰ（１５９ｍｇ）、ＥＤＣ（０．９９ｇ）およびラウリン酸（１．０４ｇ）を添加した。１日後、常法仕上げ処理により７４％収率が得られた。
【０１７５】
【化１０６】
2005504749.tif 000107
エーテル（５０ｍＬ）中の該イミン（２．９ｇ）の氷冷溶液に１ＮのＨＣｌ（５０ｍＬ）を添加した。翌日、常法仕上げ処理により２．０９ｇを得た。
【０１７６】
【化１０７】
2005504749.tif 000108
ジクロロエタン中の該アミン（１．２４ｇ）の溶液にシアノホウ水素化ナトリウム（１７８ｍｇ）およびテトラデカナール（４１１ｍｇ）を添加した。翌日、常法仕上げ処理により１．５ｇを得た。
【０１７７】
【化１０８】
2005504749.tif 000109
ジオキサン中の該アミン（２２１ｍｇ）の氷冷溶液にクロロギ酸アリル（４０ｍｇ）および３０８μＬの１Ｎ  ＮａＯＨ溶液を添加した。２時間後、常法仕上げ処理により２００ｍｇを得た。
【０１７８】
【化１０９】
2005504749.tif 000110
ＴＨＦ中の該保護アルコール（３６５ｍｇ）の氷冷溶液にＴＢＡＦ（１９２４μＬ）および酢酸（１２２μＬ）を添加した。翌日、常法仕上げ処理により２７１ｍｇを得た。
【０１７９】
この物質を、前記したごとく、リン酸化し、ＴＦＡで脱ブロックし、ホスゲンで二量体化し、フェニルシランおよびパラジウムでアリール保護基を除去して、ＥＲ‐８０４２８１を得た。
【０１８０】
ＥＲ‐８０４３３９の調製
ＥＲ‐８０４２８１→ＥＲ‐８０４３３９
塩化メチレン中のＥＲ‐８０４２８１（７ｍｇ）の氷冷溶液イントリエチルアミン（５μＬ）、ＤＭＡＰ（０．６ｍｇ）および塩化アセチル（１．８μＬ）を添加した。４日後、常法仕上げ処理により１．１ｍｇを得た。
【０１８１】
ＥＲ‐８０４６７４の調製
ＥＲ‐８０４２８１→ＥＲ‐８０４６７４
ＴＨＦ（１．０ｍＬ）中のＥＲ‐８０４２８１（１２．７ｍｇ）の溶液にヨウ化メチル（９．２ｍｇ）および重炭酸ナトリウム（６．８ｍｇ）を添加した。混合物を５日間攪拌し、重炭酸ナトリウム（１４ｍｇ）およびさらにヨウ化メチル（８ｍＬ）を添加した。さらに３日後、さらに重炭酸塩（２８ｍｇ）およびＭｅｉ（１６μＬ）を添加した。さらに６日後、混合物を仕上げ処理して９．１ｍｇの生成物を得た。
【０１８２】
ＥＲ‐８０４５９６の調製
【０１８３】
【化１１０】
2005504749.tif 000111
塩化メチレン（２ｍＬ）中の該アルコール（３９３ｍｇ）の溶液にジイソプロピルアミン（２１０μＬ）、テトラゾール（１０５ｍｇ）および（前記したごとき）リン酸化試薬（４８８ｍｇ）を添加した。２と１／５時間後、常法仕上げ処理により所望の生成物を得た。
【０１８４】
【化１１１】
2005504749.tif 000112
アセトニトリル中の該ジオール（７３ｍｇ）の溶液にテトラゾール（１７５ｍｇ）、アジド（１当量）を添加した。３時間後、混合物を冷却し、オゾン（１２２９ｍｇ）を添加した。翌日、常法仕上げ処理により所望の生成物を得た。
【０１８５】
【化１１２】
2005504749.tif 000113
アセトニトリル：水（６ｍＬ：１．５ｍＬ）中の該保護されたアルコール（９２．９ｍｇ）の氷冷溶液にＣＡＮ（３５８ｍｇ）を添加した。１時間後、常法仕上げ処理により６８．５ｍｇを得た。
【０１８６】
【化１１３】
2005504749.tif 000114
塩化メチレン中の該ジオール（６８．５ｍｇ）の氷冷溶液にラウリン酸（７６．５ｍｇ）、ＤＭＡＰ（４．７ｍｇ）およびＥＤＣ（７３ｍｇ）を添加した。翌日、常法仕上げ処理により７６．５ｍｇを得た。
【０１８７】
該アジドを前記した該スズ試薬を用いて還元した。該ジアミンを塩化ドデカノイルでアシル化し、保護基を前記したごとくフェニルシランおよびパラジウムで除去して、ＥＲ‐８０４５９６を得た。
【０１８８】
ＥＲ‐８０４７３２の調製
【０１８９】
【化１１４】
2005504749.tif 000115
該アルコール（７．０４ｇ）をトリエチルアミン（１１．１３ｍＬ）を含む塩化メチレン（３００ｍＬ）に溶解させ、次いで、窒素雰囲気下で０℃まで冷却した。塩化メタンスルホニル（３．６９ｍＬ）を滴下し、しかる後、反応物を室温にて１時間攪拌した。常法仕上げ処理により５．５５１ｇを得た。
【０１９０】
【化１１５】
2005504749.tif 000116
該メシレート（１．１１４ｇ）をＤＭＦ（３０ｍＬ）に溶解させ、続いてアジ化ナトリウム（０．９３３７ｇ）を溶解させた。反応混合物を５７℃まで加温し、１６時間攪拌し、次いで、１０４℃までさらに３時間加温した。室温まで冷却した後、混合物を常法により仕上げ処理して、０．４６６ｇを得た。
【０１９１】
【化１１６】
2005504749.tif 000117
４Ｎ  ＨＣｌ（１５ｍＬ）を用い、該保護アミノアルコール（０．４６６ｇ）を１０７℃にて加水分解した。室温まで冷却した後、反応混合物を濾過し、エチルエーテルで抽出し、乾燥し、濃縮し、次の反応で用いた。
【０１９２】
【化１１７】
2005504749.tif 000118
粗製アミノアルコールを、飽和重炭酸ナトリウム（６ｍＬ）を含むＴＨＦ（５ｍＬ）に溶解させ、０℃まで冷却した。塩化ミリストイル（０．７９ｍＬ）を滴下し、しかる後反応を室温まで加温し、２時間攪拌した。反応混合物を常法を用いて仕上げ処理し、０．７５１ｇを得た。
【０１９３】
【化１１８】
2005504749.tif 000119
該アルコール（０．１８５ｇ）を、イミダゾール（０．０７７ｇ）および塩化ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル（０．１９７ｍＬ）を含むＤＭＦ（３．０ｍＬ）に溶解させた。反応混合物を室温にて１６時間攪拌し、しかる後、常法仕上げ処理により０．３２０ｇを得た。
【０１９４】
【化１１９】
2005504749.tif 000120
該アジド（０．９７５ｇ）を、炭素上の１０％パラジウム（０．１８０ｇ）を含むメタノール（２０ｍＬ）に溶解させた。大気圧下、混合物を水素ガスの雰囲気下で２時間攪拌し、しかる後、ガスを引き、混合物をＣｅｌｉｔｅ５４５で濾過し、濃縮した。常法を用いる精製により、０．８７３ｇを得た。
【０１９５】
【化１２０】
2005504749.tif 000121
７８℃にて、ＤＭＳＯ（１．５ｍＬ）を塩化メチレン（３０ｍＬ）中の塩化オキサリル（０．９２ｍＬ）に滴下した。１５分間攪拌した後、塩化メチレン（３０ｍＬ）中の該アルコール（１．７２７ｇ）を滴下し、さらに３０分間攪拌した。トリエチルアミン（４．９０ｍＬ）を滴下し、反応物を０℃まで加温し、飽和塩化アンモニウムを用いて急令した。ヘキサン中の２０％酢酸エチルでのシリカゲルクロマトグラフィーを用いる粗生成物の精製により、１．６５３ｇを得た。
【０１９６】
【化１２１】
2005504749.tif 000122
該第一級アミン（０．１３５ｇ）およびアルデヒド（０．０７７ｇ）を１，２‐ジクロロエタン（５ｍＬ）に溶解させ、続いてシアノホウ水素化ナトリウム（０．０３２ｇ）を添加した。反応物を２０時間攪拌し、しかる後、酢酸（０．０２ｍＬ）を添加し、反応物を常法により仕上げ処理して０．１０３ｇを得た。
【０１９７】
【化１２２】
2005504749.tif 000123
該第二級アミンを１，４‐ジオキサン（１５ｍＬ）に溶解させ、０℃まで冷却し、続いて、１Ｍ水酸化ナトリウム（３．０ｍＬ）をゆっくりと添加した。１０分間攪拌した後、クロロギ酸アリル（０．２３６ｍＬ）を滴下し、しかる後、反応物を室温まで加温し、１６時間攪拌した。常法により仕上げ処理して０．６１３ｇを得た。
【０１９８】
【化１２３】
2005504749.tif 000124
パラ‐メトキシベンジルエーテル（０．６１３ｇ）を４：１の比率のアセトニトリル：水（１５ｍＬ）に溶解させ、０℃まで冷却し、次いで、ＣＡＮ（１．５２５ｇ）を添加した。反応混合物を０℃にて２時間攪拌し、次いで、常法により仕上げ処理して０．３５７ｇを得た。
【０１９９】
【化１２４】
2005504749.tif 000125
該アルコール（０．３５７ｇ）をラウリン酸（０．１８４ｇ）、ＥＤＣ（０．１７５ｇ）を含む塩化メチレン（５ｍＬ）に溶解させ、０℃まで冷却した。４‐ジメチルアミノピリジン（０．０１２ｇ）を添加し、得られた混合物を室温にて２時間攪拌した。常法により仕上げ処理して０．４３６ｇを得た。
【０２００】
【化１２５】
2005504749.tif 000126
該シリル保護アルコール（０．２１１ｇ）を、酢酸（０．０３ｍＬ）を含むＴＨＦ（５ｍＬ）に溶解させた。フッ化テトラブチルアンモニウム（０．１１５ｇ）を一度に添加し、反応混合物を室温にて１６時間攪拌した。常法仕上げ処理により０．１５０ｇを得た。
【０２０１】
この物質を、前記したごとく、リン酸化し、ＴＦＡで脱ブロックし、ホスゲンで二量体化し、フェニルシランおよびパラジウムでアリル保護基を除去して、ＥＲ‐８０４７３２を得た。
【０２０２】
ＥＲ‐８０４６８０の調製
【０２０３】
【化１２６】
2005504749.tif 000127
該アルデヒド（１．５４ｇ）をＴＨＦ（２８ｍＬ）に溶解させ、０℃まで冷却し、しかる後、２‐メチル‐２‐ブテン（１４ｍＬ）およびｔｅｒｔ−ブチルアルコール（２８ｍＬ）を添加した。水（４２．７ｍＬ）中の塩化ナトリウム（３．７０ｇ）およびリン酸三水素ナトリウム（４．０９ｇ）の攪拌懸濁液を前記混合物に添加し、０℃にて１．５時間攪拌した。完了した反応を酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈し、１０％重亜硫酸ナトリウム、ブラインで洗浄し、乾燥し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーに付して、１．５５ｇを得た。
【０２０４】
【化１２７】
2005504749.tif 000128
該アミン（０．５５３ｇ）および酸（０．３８１ｇ）を塩化メチレン（８ｍＬ）中で混合し、０℃まで冷却し、しかる後、ＥＤＣ（０．２３０ｇ）を添加し、反応混合物を室温にて７２時間攪拌した。常法仕上げ処理により０．５６７ｇを得た。
【０２０５】
【化１２８】
2005504749.tif 000129
該メトキシベンジルエーテル（０．５６７ｇ）を１：１比率のアセトニトリル：水（１６ｍＬ（塩化メチレン（８ｍＬ）を含む））に溶解させ、０℃まで冷却した。ＣＡＮ（１．５３ｇ）を添加し、反応混合物を１時間攪拌し、しかる後、それを常法により仕上げ処理して、粗製アルコールを得た。
【０２０６】
【化１２９】
2005504749.tif 000130
前記からの粗製アルコールを、ラウリン酸（０．２８０ｇ）および４‐ジメチルアミノピリジン（０．０１７ｇ）を含む塩化メチレン（１５ｍＬ）に溶解させた。反応混合物を０℃まで冷却し、ＥＤＣ（０．２６７ｇ）を一度に添加し、しかる後、反応混合物を室温まで加温し、１６時間攪拌した。常法仕上げ処理手法により０．６２２ｇを得た。
【０２０７】
【化１３０】
2005504749.tif 000131
該シリルエーテル（０．５６３ｇ）を、酢酸（０．０８７ｍＬ）を含むＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解させた。フッ化ｔｅｒｔ‐ブチルアンモニウム（０．３３０ｇ）を添加し、反応物を室温にて１６時間攪拌した。常法仕上げ処理により０．３８４ｇを得た。
【０２０８】
この物質を、前記したごとく、リン酸化し、ＴＦＡで脱ブロックし、ホスゲンで二量体化し、アリル保護基をフェニルシランおよびパラジウムで除去して、ＥＲ‐８０４７８０を得た。
【０２０９】
ＥＲ‐８０４６７９の調製
【０２１０】
【化１３１】
2005504749.tif 000132
該保護された第二級アミン（０．０７１ｇ）を、フェニルシラン（０．０１７ｍＬ）および無水酢酸（０．０１４ｍＬ）を含む脱気したクロロホルム（３ｍＬ）に溶解させた。反応混合物を０℃まで冷却し、続いて、テトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（０）（０．００２ｇ）を添加した。反応混合物を室温まで加温し、３０分間攪拌した。完了した反応を塩化メチレンで希釈し、水で洗浄し、乾燥し、濃縮し、クロマトグラフィーに付して０．０６８ｇを得た。
【０２１１】
【化１３２】
2005504749.tif 000133
該シリルエーテルを、フッ化ｔｅｒｔ−ブチルアンモニウム（０．０９２ｇ）を添加した酢酸（０．０２５ｍＬ）を含むＴＨＦ（５ｍＬ）中で脱保護した。室温にて１６時間攪拌した後、反応物を常法にて仕上げ処理して、０．１２０ｇを得た。
【０２１２】
この物質を、前記したごとく、リン酸化し、ＴＦＡで脱ブロックし、ホスゲンで二量体化し、アリル保護基をフェニルシランおよびパラジウムで除去し、ＥＲ‐８０４６７９を得た。
【０２１３】
ＥＲ‐８０４７６４の調製
【０２１４】
【化１３３】
2005504749.tif 000134
７８℃にて、ＤＭＳＯ（０．３３ｍＬ）を塩化メチレン（１０ｍＬ）中の塩化オキサリル（０．２０３ｍＬ）に滴下した。１５分間攪拌した後、塩化メチレン（３ｍＬ）中の該アルコール（０．９９３ｇ）を滴下し、さらに３０分間攪拌した。トリエチルアミン（１．０８ｍＬ）を滴下し、反応物を０℃まで加温して、飽和塩化アンモニウムを用いて急令した。ヘキサン中の２０％酢酸エチルでのシリカゲルクロマトグラフィーを用いる粗生成物の精製により、０．７４３ｇを得た。
【０２１５】
【化１３４】
2005504749.tif 000135
ヘキサン（１．５ｍＬ）中の１．６Ｍのｎ−ブチルリチウムを、０℃にて、ＴＨＦ（１０ｍＬ）中のホスホニウム塩（０．７９７ｇ）に滴下した。３０分間攪拌した後、ＴＨＦ（１５ｍＬ）中の該アルデヒド（０．７３４ｇ）を滴下した。室温にて１時間攪拌した後、反応を常法により仕上げ処理して、０．１９３ｇを得た。
【０２１６】
【化１３５】
2005504749.tif 000136
該エノールエーテル（０．１９３ｇ）をアセトニトリル（２ｍＬ）中の５７％ヨウ化水素（０．１１４Ｌ）で加水分解した。室温にて２時間攪拌した後、反応物を飽和重炭酸ナトリウムで急令し、塩化メチレンで抽出し、乾燥して、０．２１１ｇの粗製アルデヒドを得た。
【０２１７】
【化１３６】
2005504749.tif 000137
該粗製アルデヒド（０．２１１ｇ）をメタノール（３ｍＬ）に溶解させ、ホウ水素化ナトリウム（０．０３３ｇ）を０℃にて添加した。３０分間攪拌した後、反応物を水で希釈し、塩化メチレンで抽出し、乾燥し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、０．１４８ｇを得た。
【０２１８】
この物質を、前記したごとく、リン酸化し、ＴＦＡで脱ブロックし、ホスゲンで二量体化し、アリル保護基をフェニルシランおよびパラジウムで除去して、ＥＲ‐８０４７６４を得た。
【０２１９】
ＥＲ‐８０４７７２の調製
【０２２０】
【化１３７】
2005504749.tif 000138
商業的に入手可能なジオール（１．４８６ｇ）をＤＭＦ（１０ｍＬ）中の該アセタール（１．８６４ｇ）およびパラ‐トルエンスルホン酸（０．１９５ｇ）と混合した。窒素雰囲気下で室温にて２０時間攪拌した後、反応物を飽和重炭酸ナトリウムで急令し、塩化メチレンで抽出し、乾燥し、高真空で濃縮した。ヘキサン中の１０％酢酸エチルを用いる得られた粗生成物のシリカゲルクロマトグラフィーにより、２．０８４ｇを得た。
【０２２１】
【化１３８】
2005504749.tif 000139
塩化メチレン（３０ｍＬ）中、窒素雰囲気下で、該アセタール（２．０８４ｇ）を７８℃まで冷却し、続いて、ヘキサン（１４．３ｍＬ）中の１．０ＭのＤＩＢＡＬを滴下した。さらにＤＩＢＡＬ（１４ｍＬ）を添加した後、反応混合物を１時間攪拌し、室温まで加温し、酒石酸ナトリウム、カリウムでクエンチした。常法仕上げ処理により２．１ｇを得た。
【０２２２】
【化１３９】
2005504749.tif 000140
該アルコール（１．２８６ｇ）を塩化メチレン（１５ｍＬ）中のトリエチルアミン（０．８８３ｇ）と混合し、０℃まで冷却した。塩化メタンスルホニル（０．５７５ｇ）を滴下し、続いて、０℃にて２０分間、次いで、室温にて２時間攪拌した。常法仕上げ処理により１．４９６ｇを得た。
【０２２３】
【化１４０】
2005504749.tif 000141
ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の該アルコール（１．４９５ｇ）を、０℃にて、ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の洗浄した６０％水素化ナトリウム（０．２５７ｇ）の攪拌懸濁液に滴下した。３時間攪拌した後、ＤＭＦ（１０ｍＬ）中のメシレート（０．９２５ｇ）を滴下した。さらに３日間攪拌した後、反応物を急令し、常法により仕上げ処理して０．９０５ｇを得た。
【０２２４】
前記で供した実施例に関しては、パラ‐メトキシベンジル保護基はＣＡＮで加水分解し、保護アミノアルコールは、塩酸、次いでＫＯＨを用いて加水分解し、塩化テトラデカノイルで該アミンをアシル化し、ＴＢＤＰＳで第一級アルコールをシリル化し、塩化ドデカノイルで第二級アルコールをアシル化し、ＴＢＡＦを用いてシリル保護基を加水分解して、第一級アルコールを得た。この物質を、前記したごとく、リン酸化し、ＴＦＡで脱ブロックし、ホスゲンで二量体化し、アリル保護基をフェニルシランおよびパラジウムｄで除去して、ＥＲ‐８０４７７２を得た。
【０２２５】
ＥＲ‐８０４９４７の調製
【０２２６】
【化１４１】
2005504749.tif 000142
室温にて、窒素雰囲気下でＴＨＦ（５ｍＬ）中の該アルコール（０．２６３ｇ）をＤＭＦ（２．０ｍＬ）中の洗浄した６０％水素化ナトリウム（０．２１６ｇ）に滴下した。反応混合物を３０時間攪拌し、しかる後、触媒量（０．０５ｇ）のヨウ化テトラブチルアンモニウムを含む臭化ベンジル（０．２７２ｍＬ）を添加した。最終反応混合物をさらに１時間攪拌し、しかる後、混合物を急令し、常法により仕上げ処理して０．３６５ｇを得た。
【０２２７】
【化１４２】
2005504749.tif 000143
該保護されたアミノアルコール（０．１８９ｇ）を４Ｎ塩酸（２．５ｍＬ）、続いて４０％水酸化ナトリウム（２．５ｍＬ）を用いて前記したごとく加水分解して、０．１２１ｇを得た。
【０２２８】
【化１４３】
2005504749.tif 000144
該アミノアルコール（０．１２１ｇ）を飽和重炭酸ナトリウム（２ｍＬ）を含む塩化メチレン（２ｍＬ）に溶解させた。０℃まで冷却した後、塩化ミリストイル（０．１９９ｍＬ）を滴下した。２時間攪拌を継続した後、混合物を常法により仕上げ処理して、０．１８１ｇを得た。
【０２２９】
【化１４４】
2005504749.tif 000145
該アルコール（０．１８１ｇ）を、該酸（０．１８０ｇ）および１‐［３‐（ジメチルアミノ）プロピル］‐３‐エチルカルボジイミド（ＥＤＣ、０．１３３ｇ）を含む塩化メチレン（５ｍＬ）に溶解させた。混合物を０℃まで冷却し、４‐ジメチルアミノピリジンを添加し、続いて、室温にて１６時間攪拌した。常法仕上げ処理により０．３１０ｇを得た。
【０２３０】
【化１４５】
2005504749.tif 000146
該パラ‐メトキシベンジルエーテル（０．３０５ｇ）を水（２ｍＬ）を含むアセトニトリル（８ｍＬ）に溶解させ、０℃まで冷却した。硝酸アンモニウムセリウム（１．１１０ｇ）を添加し、反応混合物を２時間攪拌し、しかる後、常法仕上げ処理により粗製アルコールを得た。
【０２３１】
【化１４６】
2005504749.tif 000147
該粗製アルコールをラウリン酸（０．１２６ｇ）および４‐ジメチルアミノピリジン（０．０１１ｇ）を含む塩化メチレン（８ｍＬ）に溶解させた。０℃まで冷却した後、ＥＤＣ（０．１１９ｇ）を添加し、混合物を室温にて１６時間攪拌した。常法仕上げ処理により０．３５５ｇを得た。
【０２３２】
【化１４７】
2005504749.tif 000148
該ベンジルエーテル（０．３５５ｇ）を、水酸化パラジウム（０．０４８ｇ）および酢酸（０．２５ｍＬ）を含む酢酸エチル（５０ｍＬ）に溶解させた。反応混合物を５０ｐｓｉの水素雰囲気下に置き、１０時間震盪した。常法仕上げ処理により０．２５５ｇを得た。この物質を、前記したごとく、リン酸化し、ＴＦＡで脱ブロックし、ホスゲンで二量体化し、アリル保護基をフェニルシランおよびパラジウムで除去して、ＥＲ‐８０４９４７を得た。
【０２３３】
ＥＲ  ８０５７１８の調製
【０２３４】
【化１４８】
2005504749.tif 000149
室温にて、塩化メチレン（１００ｍＬ）中のジオール（６．９０ｇ）の攪拌溶液にトリエチルアミン（６．６３ｍＬ）およびＤＭＡＰ（０．５０ｇ）を添加し、続いて、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルクロロシラン（１０．３８ｍＬ）を滴下した。１８時間攪拌した後、反応物を常法により仕上げ処理し、続いて、シリカゲル精製により、１１．７０ｇの所望のシリルエーテルを得た。
【０２３５】
【化１４９】
2005504749.tif 000150
室温にて、塩化メチレン（６０ｍＬ）中のシリルエーテル（１１．７０ｇ）の攪拌溶液にラウリン酸（８．６０ｇ）を添加した。混合物が透明な溶液になった後、反応混合物を０℃まで冷却し、ＥＤＣ（８．３ｇ）およびＤＭＡＰ（０．３５ｇ）を添加した。１６時間攪拌した後、反応物を常法により仕上げ処理し、シリカゲルクロマトグラフィーを用いて精製して、１６．４３ｇの所望のエステルを得た。
【０２３６】
【化１５０】
2005504749.tif 000151
室温にて、ＴＨＦ（１００ｍＬ）中のエステル（１６．４０ｇ）の攪拌溶液に酢酸（２．２０ｍＬ）を添加し、続いて、ＴＨＦ（３３ｍＬ）中の１Ｍ  ＴＢＡＦを滴下した。１６時間攪拌した後、反応物を常法により仕上げ処理し、シリカゲルクロマトグラフィーを用いて精製して、１０．３２ｇの所望のアルコールを得た。
【０２３７】
【化１５１】
2005504749.tif 000152
０℃にて、ＴＨＦ（１２ｍＬ）中のアルコール（１．０３ｇ）の攪拌溶液にトリフェニルホスフィン（１．５０ｇ）およびアジ化ジフェニルホスホリル（１．２４ｍＬ）を添加し、続いて、ＤＥＡＤ（１．１ｍＬ）を滴下した。１．５時間攪拌した後、反応を常法により仕上げ処理し、シリカゲルクロマトグラフィーを用いて精製して、０．９５ｇの所望のアジドを得た。
【０２３８】
【化１５２】
2005504749.tif 000153
室温にて、アルゴン雰囲気下で、メタノール（１０ｍＬ）中のアジド（０．４７３ｇ）の攪拌溶液に炭素上の１０％パラジウム（０．２０ｇ）を添加し、続いて、反応容器に水素ガスを充填した。大気圧にて２時間攪拌した後、反応を常法により仕上げ処理して、０．３９０ｇの所望のアミンを得た。
【０２３９】
【化１５３】
2005504749.tif 000154
０℃にて、塩化メチレン（２ｍＬ）中のアミン（０．１８８ｇ）および保護Ｌ‐セリン（０．１５０ｇ）の攪拌溶液にＥＤＣ（０．１５２ｇ）、続いてＤＭＡＰ（０．００６ｇ）を添加した。１６時間攪拌した後、反応物を常法により仕上げ処理し、シリカゲルクロマトグラフィーを用いて精製して、０．２９２ｇの所望のアミドを得た。
【０２４０】
【化１５４】
2005504749.tif 000155
室温にて、メタノール（７ｍＬ）中のアミド（０．２９２ｇ）の攪拌溶液にパラ‐トルエンスルホン酸（０．７０ｇ）を添加した。４時間攪拌した後、飽和重炭酸ナトリウムを用いて反応を仕上げ処理し、続いて、常法により抽出し、濃縮した。室温にて、塩化メチレン（７ｍＬ）中の粗製中間体の攪拌溶液にトリエチルシラン（１．２ｍＬ）を添加し、続いて、トリフルオロ酢酸（２．１ｍＬ）を添加した。１時間攪拌した後、反応混合物を常法により仕上げ処理し、シリカゲルクロマトグラフィーを用いて精製して、０．１７０ｇの所望のアミノアルコールを得た。
【０２４１】
【化１５５】
2005504749.tif 000156
室温にて、ＴＨＦ（４ｍＬ）中のアミノアルコール（０．１７０ｇ）の攪拌溶液に飽和重炭酸ナトリウム（４ｍＬ）、続いて塩化ミリストイル（０．１１４ｍＬ）を添加した。３時間攪拌した後、反応混合物を常法により仕上げ処理し、シリカゲルクロマトグラフィーを用いて精製して、０．２４４ｇの所望のアルコールを得た。
【０２４２】
【化１５６】
2005504749.tif 000157
室温にて、塩化メチレン（４ｍＬ）中のアルコール（０．２５６ｇ）の攪拌溶液にテトラゾール（０．０６９ｇ）、続いて、リン酸化試薬（０．１６３ｇ）を添加した。３０分間攪拌した後、テトラゾール（０．０６５ｇ）およびリン酸化試薬（０．１６５ｇ）を添加した。反応混合物をさらに１時間攪拌し、次いで、反応混合物を、０℃にて、ＴＨＦ（４ｍＬ）および水（４ｍＬ）中のオキソン（０．６０１ｇ）の攪拌懸濁液に注いだ。室温にてさらに１６時間攪拌した後、反応物を常法により仕上げ処理し、シリカゲルクロマトグラフィーを用いて精製して、０．４０ｇの所望の保護アミノリン酸塩を得た。
【０２４３】
【化１５７】
2005504749.tif 000158
室温にて、塩化メチレン（４ｍＬ）中の保護アミノリン酸塩（０．４００ｇ）の攪拌溶液にトリエチルシラン（０．２１ｍＬ）、続いて、トリフルオロ酢酸（０．３４ｍＬ）を添加した。２時間攪拌した後、反応混合物を常法にて仕上げ処理して、所望の粗製アミンを得た。
【０２４４】
【化１５８】
2005504749.tif 000159
室温にて、ＴＨＦ（３ｍＬ）中の該粗製アミンの攪拌溶液に飽和重炭酸ナトリウム（３ｍＬ）を添加し、続いて、トルエン（０．１１５ｍＬ）中の２０％ホスゲンを滴下した。室温にて１６時間攪拌した後、反応物を常法にて仕上げ処理し、シリカゲルクロマトグラフィーを用いて精製して、０．０８１ｇの所望の尿素を得た。
【０２４５】
【化１５９】
2005504749.tif 000160
０℃にて、脱気したクロロホルム（２ｍＬ）中の該尿素（０．０８１ｇ）の攪拌溶液にフェニルシラン（０．０４４ｍＬ）、続いて、テトラキス（トルフェニルホスフィン）パラジウム（０）（０．１１５ｍＬ）を添加した。１時間攪拌した後、反応物を常法により仕上げ処理し、ＤＥＡＥセルロースイオン交換クロマトグラフィー、次いで、シリカゲルクロマトグラフィー、続いて、ＳＰセファデックスカチオン交換を用いて精製して、０．０５４ｇのＥＲ‐８０５７１８を得た。
【０２４６】
リン酸塩トリエステルアナログ（式ＩＩ）についての反応スキーム
当業者であれば、リストされた新しい構造を取り込むリン酸化試薬１１を変化させることによって、式ＩＩに描かれたリン酸塩トリエステルアナログの調製を容易に思い浮かべることができる。後記スキームに例示するごとく、アリル−保護基を適当に機能性化された置換基で置き換えると、通常の合成プロセスによって所望の構造が供される。一般に、ピリジンの存在下でＮ−Ｂｏｃ−１−アミノ−２−エタノールを三塩化リンに添加することによって、改変されたリン酸化試薬が段階的に調製される。ジクロロホスホリルモノエステルを活性化されたビス（ジイソプロピルアミド）に変換した後、テトラゾール存在下において適切に機能性化されたアルコールを添加して、所望の保護された機能性またはその前駆体が供される。次いで、改変されたリン酸化試薬を、一般的な実験で記載した元のリン酸化試薬１１の代わりに用いる。典型的な合成経路で用いるアリル基の脱保護の代わりに、構造に一体化された新しい機能性を、当業者に利用可能な方法によって脱保護して、リストした別の所望の生成物が得られる。
【０２４７】
【化１６０】
2005504749.tif 000161
第四級アミンアナログ（式ＩＩＩ）についての反応スキーム
当業者であれば、第四級アミン化合物の調製を容易に思い描くことができる。以下のスキームに例示されるごとく、アルコールのアルデヒドへの酸化、適当に機能性化されたアミンでの還元的アミノ化、続いての、Ｆｍｏｃのごとき保護基での結果としての第二級アミンの保護により、所望の保護された中間体が供される。第一級アミン上のＢｏｃ−基の選択的脱保護、続いての、ホスゲンのごとき適当なリンカーとの縮合により、保護されたダイマーが供される。最終の所望の生成物は、第二級アミンの脱保護、続いての、ヨウ化メチルのごとき単純なハロゲン化アルキルの存在下におけるアミンのジアルキル化によって生じさせることができる。該生成物は、先の実験で記載したごとく、溶離対イオンのごとき希塩酸を用いるＣＭ−セファデックスを使用するカチオン交換クロマトグラフィー、続いての、シリカゲルクロマトグラフィー、次いで、同様の溶出溶媒を用いる適切なアニオン対イオンを含むＳＰ−セファデックスでのアニオン交換によって精製される。
【０２４８】
【化１６１】
2005504749.tif 000162
生物学的実施例
実施例７：サイトカインの誘導（インビトロ）
Ａ．ヒト全血におけるアッセイ
単球／マクロファージに対する化合物の活性をテストするための最も容易に利用できるヒト系は全血におけるものである。本発明の種々の濃度の化合物を５０μｌのＣａ++、Ｍｇ＋＋遊離ハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）中の１０×ストックとして加え、続いて、５００μｌ／ウェル（全血の最終濃度は８０％であった）の合計容量にて、正常なボランティア（１８ないし５１歳；１１０−２３０ポンド）から得られた４００μｌのヘパリン処理全血に入れた５０μｌのＨＢＳＳをプラスチックアッセイプレートのウェルに加えた。５％ＣＯ2雰囲気中で３７℃にて軽く震盪しつつの３時間のインキュベーションの後に、アッセイプレートを４℃にて１０分間、１０００×ｇにおいて遠心し、血漿を吸出し、−８０℃にて凍結した。血漿試料をＴＮＦ−α、ＩＬ−１０、およびＩＬ−１２につきＥＬＩＳＡ（Ｇｅｎｚｙｍｅ  Ｃｏｒｐ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）によって分析した。各アッセイ点は三連でテストした。
【０２４９】
図１に示すごとく、１００、１８４および１８６などの化合物は血液で生じた細胞を刺激して、ＴＮＦ−αを放出させる。この刺激活性は、同一アッセイにおいて同様のインキュベーションで存在させる１０ｎｇ／ｍｌエンドトキシン（またはＬＰＳ）のそれと比較することができる。表１に示すごとく、（１０μＭでテストした）化合物の活性は、（化合物１１０のような）不活性から、ＬＰＳ標準よりも大きな活性を示す化合物までの範囲である。
【０２５０】
Ｂ．培養されたヒト細胞系
本発明の化合物を細胞−培養モデルでテストすると、同様の結果を得ることができる。このアッセイでは、本発明の化合物は、Ｇｏｔｏら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ４９；８６０−８７３（１９９６）に詳細に記載されているごとく、ＴＮＦ−αプロモーターの制御下で分泌されたアルカリ性ホスファターゼについての遺伝子でトランスフェクトされたＴＨＰ−1細胞からのアルカリ性ホスファターゼの分泌を刺激するそれらの能力についてテストする。しかしながら、このアッセイでは、血清を除去する効果1−皮下環境を最も模倣するような条件−を評価することができる。図２に示し、表１に記載するごとく、これらのアッセイからの結果は、本発明の化合物が、血清の不存在ならびに存在下で細胞に加えた場合に、ＴＮＦ−αプロモーターの制御下で遺伝子の誘導を刺激することを示す。
【０２５１】
1これは、リポ多糖結合蛋白質のごとき血清成分が薬物活性に必要であるかを決定するのに重要である。
【０２５２】
【表１】
2005504749.tif 000163
2005504749.tif 000164
2005504749.tif 000165
2005504749.tif 000166
2005504749.tif 000167
2005504749.tif 000168
2005504749.tif 000169
2005504749.tif 000170
2005504749.tif 000171
（１）各アッセイにおける応答は、典型的には、基礎よりはＴＮＦ−αＰＬＡＰ発現の２ないし３倍増加を誘導した１０μＭ化合物１００内部標準と比較した。
（２）５．８μＭにおいてテストした。
Ｃ．ネズミ脾臓細胞
脾臓細胞からのサイトカイン放出を刺激する化合物の能力は、マウスモデルで評価することができる。Ｃ５７ＢＬ／６マウスから収穫した脾臓細胞を、５％ＦＢＳ、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、２ｍＭのＬ−グルタミン、１００Ｕ／ｍｌペニシリン／ストレプトマイシンおよび５０μＭβ−メルカプトエタノール、種々の濃度のテスト化合物を含有するＲＰＭＩ１６４０細胞培養基中で２４時間培養し、しかる後、細胞培養上澄みをサイトカインの存在につきテストする。
【０２５３】
マウスから収穫した脾臓細胞をテスト化合物と共に２４時間培養し、上澄みをサイトカインの放出につきテストした。図３および４に示すごとく、脾臓細胞からのＩＬ−１０およびインターフェロン−ガンマのごときサイトカインの放出は１０４、１０６、１２４、１６０および１６２などの化合物によって刺激される。
【０２５４】
これらのアッセイは、脾臓に由来する細胞の不均一集団を利用した。これは、細胞に対するテスト化合物の直接的効果によって、かつ１つのタイプの細胞によるサイトカインの放出が同一培地に存在する他の細胞における他のサイトカインの放出を誘導することができるサイトカイン「カスケード」のより間接的な刺激を介してサイトカイン誘導を引き起こすことができるのを可能とする。このサイトカイン「環境」は、この健全な免疫応答の一部を担う可能性がある。
実施例８：抗体応答のインビボ誘導
アジュバント活性の最も臨界的なテストは、抗原調製物への化合物の添加が、生きた動物に投与された場合にその抗原に対して生じた抗体のレベルを上昇させることによって免疫応答を増加させるかの判断である。
初期実験は、本発明の化合物＋キーホールリンペットヘモシアニンのような担体に結合したペプチドでのマウス（Ｂａｌｂ／ｃ）注射を含むものであった。これらの実験のために選択されたペプチドは、ＨＩＶ  ＩＩＩＢ  ｇｐ１２０蛋白質のＶ３ループのアミノ酸３０８−３２２に対応するペプチド（Ｐ１８）である。ＨＩＶ  ＩＩＩＢ  ｇｐ１２０蛋白質のＶ３ループのアミノ酸３０８−３２２に対応するＰ１８  ２１ａａペプチドは免疫原生であると報告されている。グリシン／アラニン／グリシンスペーサー残基＋アミノ末端システイン残基を持つこのペプチドはＧｅｎｏｓｙｓ（Ｗｏｏｄｌａｎｄｓ  ＴＸ）によって合成された。該ペプチドの配列は以下の通りである：ＣＧＡＧＩＲＩＱＲＧＰＧＲＡＦＶＴＩＧＫＧ、下線を施したアミノ酸は天然配列を示す。該ペプチドは供給業者によってＨＰＬＣを用いて＞８０％純度まで単離された。このペプチドは、マレイミド活性化コンジュゲーション（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ；カタログ番号７７１０７）を用いて、システイン残基を介して、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）およびキーホールリンペッドヘモシアニン（ＫＬＨ）にカップリングされた。該ＫＬＨコンジュゲーテッドペプチドは、免疫原として用い、ＢＳＡコンジュゲートはＰＩ  １特異的抗体についてのスクリーニング標的抗原として用いた。示された量のＫＬＨ−Ｐ１８コンジュゲートを３００μｇのテスト化合物と共にルーチン的に用い、ミョウバンまたはＰＢＳを（示すごとく）２ないし３週間間隔で、ほぼ６ないし８週齢（１８ないし２５ｇ）の雄Ｂａｌｂ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）に注射した。全ての注射は、ＰＢＳ中の抗原＋アジュバントの２００μｌの混合物を用いて、首の裏側の皮下になすもので、合計して３つの注射につき２週間毎に投与した（多糖またはインフルエンザにつき３週間）。第２および第３の注射から１または２週間後にマウスから血液を採取した。試料採血はいつ採取したかに関して命名される（すなわち、二次採血は第２の蛋白質注射から１週間後または第２の多糖注射から２週間後であり、三次採血は抗原／アジュバントの第３の注射後である）。血液は尾静脈に刻みを入れた後に収集し、Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎブランドのマイクロテイナ血清セパレーターチューブに血液液滴を収集した。血清はミクロ遠心によって赤血球から分離し、ＥＬＩＳＡによって抗原特異的ＩｇＧレベルにつきテストした。
【０２５５】
該ペプチドに対する免疫応答は、ウシ血清アルブミン（Ｐ１８−ＢＳＡ）のごときもう１つの非−交差反応性蛋白質に結合され、ＥＬＩＳＡプレートにコートされたＰ１８ペプチドに結合する血清抗体のレベルを定量することができる酵素結合イムノソルベント検定法（ＥＬＩＳＡ）によってテストすることができる。
【０２５６】
図５および表２および３に示すごとく、ＫＬＨ−Ｐ１８抗原と共に種々の化合物を注射したマウスは、Ｐ１８−ＫＬＨペプチドコンジュゲート単独を注射したものよりも大きな応答（抗体のより高いレベル）を示した。
【０２５７】
【表２】
2005504749.tif 000172
1三次採血においてアッセイしたＩｇＧの濃度
方法セクションに記載したごとく、３００μｇ化合物および５μｇＫＬＨ−Ｐ１８コンジュゲート抗原を注射した５匹のマウスからの血清についての平均ＩｇＧ。抗原特異的ＥＬＩＳＡは、ＰＢＳ中の５μｇ／ｍｌ  ＢＳＡ−Ｐ１８をコートしたＣｏｓｔａｒ  ＥＩＡ／ＲＩＡプレートを用いて方法セクションに記載したように行った。
【０２５８】
【表３】
2005504749.tif 000173
1三次採血においてアッセイしたＩｇＧの濃度。方法セクションに記載したように、３００μｇ化合物および抗原（後記）を注射した５匹のマウスからの血清についての平均ＩｇＧ。抗原特異的ＥＬＩＳＡは、ＰＢＳ中の５０μｌの５μｇ／ｍｌ  ＢＳＡ−Ｐ１８コンジュゲートをコートしたＣｏｓｔａｒ  ＥＩＡ／ＲＩＡプレートを用いて、方法セクションに記載したごとく行った。比較として、ミョウバンの添加は、ＩｇＧレベルをＰＢＳ／抗原単独よりも７．４倍増加させた。用いた抗原：一次：１μｇＫＬＨ−コンジュゲーテッドＰ１８ペプチド。２°および３°ブースト：０．５μｇＫＬＨ−コンジュゲーテッドＰ１８ペプチド、＊ＰＢＳ＋抗原群と比較したスチューデントの両側ｔ−検定（非同等偏差）によりｐ＜０．０５。
【０２５９】
また、他の抗原でテストした場合に、アジュバント活性が本発明の化合物でも得られた。１００、１１６、１２６、１６０、１８４および１８６などの化合物は、インフルエンザＸ−３１抗原に対して、２６．８倍まで（表４）、抗原−特異的抗体生産を刺激することができる。破傷風トキソイド（図６）および髄膜症菌Ｃ多糖（表５）を攻撃抗原として用いた場合にも、応答の増加が見られる。該アッセイにおいては、１μｇの髄膜症菌Ｃ  ＰＳまたは１．５μｇの破傷風トキソイドまたは５μｇのインフルエンザＸ３１（ＳＰＡＦＡＳ研究所）を用いた。Ａｃｃｕｒａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ（カタログ番号ｓｓｔｅｔｔｏｘ）からの破傷風トキソイドを攻撃抗原として用い、他方、Ｌｉｓｔ．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ（カタログ番号１９１）からの精製されたトキソイドをＥＬＩＳＡアッセイについての標的抗原として用いた。
【０２６０】
【表４】
2005504749.tif 000174
2005504749.tif 000175
1三次採血においてアッセイしたＩｇＧの濃度
方法セクションにおいて記載したように、３００μｇ化合物および５μｇ抗原を注射した５匹のマウスからの血清についての平均ＩｇＧ。抗原特異的ＥＬＩＳＡは、０．５Ｍ炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９．６）中で、５０μｌの１０μｇ／ｍｌインフルエンザＸ−３１抗原をコートしたＣｏｓｔａｒ  ＥＩＡ／ＲＩＡプレートを用い、方法セクションに記載したように実行した。比較として、ミョウバンの添加はＰＢＳ／抗原単独よりもＩｇＧレベルを３．５倍増加させた。
【０２６１】
【表５】
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1二次採血においてアッセイしたＩｇＧの濃度
方法セクションにおいて記載したように、３００μｇ化合物および１μｇ抗原を注射した５匹のマウスからの血清についての平均ＩｇＧ。抗原特異的ＥＬＩＳＡは、Ｇｈｅｅｓｌｉｎｇら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３２；１４７５−８２（１９９４）に記載されるようにＰＢＳ＋メチル化したヒトの血清アルブミン中で、５０μｌの５μｇ／ｍｌ髄膜炎菌ＰＳをコートしたＣｏｓｔａｒ  ＥＩＡ／ＲＩＡプレートを用い、方法セクションに記載したように実行した。比較として、ミョウバンの添加はＰＢＳ／抗原単独よりもＩｇＧレベルを２．３倍増加させた。
インフルエンザウイルスＸ−３１はＳＰＡＦＡＳ（Ｓｔｏｒｒｓ，ＣＴ）から購入し、供給業者によって、不活化され、不活性であることが確認されている［Ｐａｙｎｅら，Ｖａｃｃｉｎｅ  １６；９２−９８（１９９８）］。髄膜症菌Ｃ多糖（ＰＳ）はＰａｓｔｅｕｒ  Ｍｅｒｉｅｕｘ  Ｃｏｎｎａｕｇｈｔ  （Ｓｗｉｆｔｗａｔｅｒ  ＰＡ）によって供給された。メチル化ヒトアルブミンは、Ｇｈｅｅｓｌｉｎｇら，Ｊ．Ｃｌｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３２；１４７５−８２（１９９４）によって記載されている方法に従って得ることができる。
【０２６２】
抗原／アジュバント混合物の調製では、凍結乾燥されたテスト化合物をリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ；カタログ番号Ｐ−３８１３；Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ，Ｓｔ  Ｌｏｕｉｓ  ＭＯ）で２ｍｇ／ｍｌまで復元し、冷却した水浴中で２分間音波処理した。モノホスホリル脂質Ａ、ＭＰＬ（Ｒｉｂｉ  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ）は注射用滅菌水で２ｍｇ／ｍｌまで復元し、５０℃にて１５分間インキュベートし、次いで、前記したごとく音波処理した。Ｐｉｅｒｃｅ  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌから購入したＩｍｊｅｃｔRミョウバンは製造業者のガイドラインに従って用い、それは、注射容量のほぼ２０ないし３０％を構成した。ＰＢＳに希釈した示した量の抗原を、化合物またはＭＰＬの最終濃度が２００μｌ注射容量中で（特に断りのない限り）３００μｇとなるように化合物、ＭＰＬまたはミョウバンと混合した。注射に先立ち、混合物は、連続的に震盪しつつ、室温にて４０分間インキュベートした。
【０２６３】
抗原特異的ＩｇＧレベルは、抗原を９６ウェルＣｏｓｔａｒ  ＥＩＡ／ＲＩＡプレートに受動的にコートした直接的ＥＬＩＳＡによってモニターした。プレートは示した抗原の５０μｌ／ウェルでコートし、４℃にて一晩（ＯＮ）インキュベートし、自動プレート洗浄器中でＰＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（ＰＢＳ−ｔ）で３回洗浄した。次いで、室温（ＲＴ）にて、プレートをＰＢＳ中の２０μｌ／ウェルの０．５％ゼラチンで１時間ブロックし、ＰＢＳ−ｔで３回洗浄した。マウス血清をＰＢＳ−ｔ＋０．３％ＢＳＡ中で希釈し、１００μｌの種々の希釈物を、二連にて、抗原をコートしたウェル（または対照としてのＢＳＡコートウェル）に添加し、ＲＴにて１時間インキュベートし、再度、ＰＢＳ−ｔで３回洗浄した。ビオチニル化ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  Ｉｎｃ．，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ  ＡＬ，カタログ番号１０３１−０８）をＰＢＳ−ｔ中で１：５０００希釈し、１００μｌ／ウェルを適用し、ＲＴにて１時間インキュベートし、ＰＢＳ−ｔで３回洗浄し、続いて、ＲＴにて３０分間で、ＰＢＳ−ｔ中の１：１０，０００ストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼコンジュゲート（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  Ｉｎｃ．）を添加し、再度、ＰＢＳ−ｔで３回洗浄した。次いで、ウェルを１００μＬのＴＭＢ基質（Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ  ａｎｄ  Ｐｅｒｒｙ  Ｌａｂｓ）中で５分間インキュベートした。等容量の１Ｍリン酸の添加によって発色を停止させ、Ｄｅｌｔａｓｏｆｔソフトウェア分析パッケージを備えたＴｉｔｅｒｔｅｋ  Ｍｕｌｔｉｓｃａｎプレートリーダーにて吸光度を４５０ｎｍで読み取った。
【０２６４】
抗原特異的ＩｇＧレベルの相対的定量では、固定量の抗体により生じた色を得るのに必要な希釈を決定することによって、曲線を相互に比較した。いくつかの場合には、ＩｇＧ標準曲線として既知量の精製されたＩｇＧ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．から購入）を捕獲するために抗ＦＡｂ特異的試薬を用いる全ＩｇＧアッセイを、ＢＳＡ−Ｐ１８コンジュゲートでの直接的ＥＬＩＳＡと組み合わせて行った。抗ＦＡｂ試薬は、抗体がどのようにしてＦＡｂ領域を通じて抗原に結合するかと同様に精製されたＩｇＧを方向付ける。これは、抗体の抗原特異的捕獲を測定するのに用いられる同一試薬による結合抗体の検出を可能とする。ＢＳＡ−Ｐ１８コンジュゲート、すなわちビオチニル化抗ＩｇＧ（Ｆｃ特異的）、続いてのＨＲＰストレプトアビジンに結合した抗体の検出で用いる同一試薬溶液は、抗ＦＡｂ全ＩｇＧ定量アッセイおよび抗原特異的アッセイに同時に適用した。よって、精製されたＩｇＧ標準曲線の結合からのシグナルは、抗標的抗原アッセイで結合した同等量のＩｇＧに対して生じたのと同等である。次いで、血清中の抗体の量は、４パラメーター曲線フィット（ＤｅｌｔａＳｏｆｔ３ソフトウェアパッケージ）を用いて、精製されたＩｇＧ標準から内挿した。
【０２６５】
【表６】
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以下の表７は、対応するＥＲ数に対する本明細書中で言及した化合物番号を示す。
【０２６６】
【表７】
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【図面の簡単な説明】
【０２６７】
【図１】図１は、本発明の化合物１００、１８４または１８６によるＴＮＦ−αサイトカイン放出の誘導についてのイン・ビトロアッセイの結果を示すグラフである。
【図２】図２は、１０％血清の不存在下および存在下における、化合物１０６および１２６による、ＴＨＰ−１細胞での、ＴＮＦプロモーター（ＴＮＦ−ＰＬＡＰ）を持つ誘導性レポーター構築体からのアルカリ性ホスファターゼ発現の刺激を示すグラフである。
【図３】図３は、本発明の化合物１０４、１０６、１２４、１２６、１６０および１６２による正常マウス脾臓細胞からのＩＬ−１０放出の刺激を示すグラフである。
【図４】図４は、本発明の化合物１０４、１０６、１２４、１２６、１６０および１６２による正常マウス脾臓細胞からのインターフェロン−ガンマ放出の刺激を示すグラフである。
【図５】図５は、本発明の化合物１００、１２４および１２６の不存在下および存在下における、キーホールリンペットヘモシアニンに応答して生産された抗体の量を測定するための血清滴定分析の結果を示すグラフである。
【図６】図６は、本発明の化合物１００、１１６、１２６、１６０および１８４の不存在下および存在下における、破傷風トキソイドに応答して生産された抗体の量を測定するための血清滴定分析の結果を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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