(57)【要約】式（Ｉ）：【化１】2005518352.tif 000035［式中、Ｒ１は、ハロ、−Ｏ−Ｃ１−６アルキル、−Ｓ−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ、−Ｓ−（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ、シアノ、フェニルおよびＣＯ２Ｒから選択される１以上の置換基で置換されていてもよいナフチルまたはフェニルであり、ここに、Ｒは水素またはＣ１−６アルキルであり、ｎは０、１、２または３であり；またはＲ１は、５−７員の芳香族または非芳香族環と縮合したフェニルまたはピリジルであり、ここに、該環は、Ｎ、ＯおよびＳから独立して選択される３つまでのヘテロ原子を含有していてもよく、Ｎはさらに、Ｃ１−６アルキルで置換されていてもよく、ここに、該環は＝Ｏによって置換されていてもよく；  Ｒ２およびＲ３は独立して、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、フェニル、ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ、ＮＨ−Ｃ１−６アルキル、ハロ、アルコキシ、ＣＮ、ＮＯ２、ＣＯＮＨＲおよびＳＯ２ＮＨＲから選択され；  Ｘ１、Ｘ２およびＸ３のうち２つはＮであり、他の１つはＮＲ４であり、ここに、Ｒ４は水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、−（ＣＨ２）ｐ−ＣＮ、−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯ２Ｈ、−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＮＨＲ５Ｒ６、−（ＣＨ２）ｐＣＯＲ５、−（ＣＨ２）ｑ（ＯＲ７）２、−（ＣＨ２）ｐＯＲ５、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＮ、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯ２Ｈ、−（ＣＨ２）ｐ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯＮＨＲ５Ｒ６、−（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯＲ８または−（ＣＨ２）ｐＮＲ９Ｒ１０であり；  Ｒ５およびＲ６は独立して、水素またはＣ１−６アルキルであり；  Ｒ７はＣ１−６アルキルであり；  Ｒ８はＣ１−７アルキル、または置換されていてもよいアリール、ヘテロアリール、アリールＣ１−６アルキルまたはヘテロアリールＣ１−６アルキルであり；  Ｒ９およびＲ１０は独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、アリールおよびアリールＣ１−６アルキルから選択され；  ｐは０−４であり；および  ｑは１−４である］で示されるフェニル置換トリアゾール類、ならびにその医薬上許容される塩および溶媒和物が開示され、同様に、それらの製法、それらを含む医薬組成物および医薬におけるそれらの使用が開示される。
2005518352.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2005518352.tif 000034
［式中、Ｒ１は、ハロ、−Ｏ−Ｃ１−６アルキル、−Ｓ−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ、−Ｓ−（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ、シアノ、フェニルおよびＣＯ２Ｒから選択される１以上の置換基で置換されていてもよいナフチルまたはフェニルであり、ここに、Ｒは水素またはＣ１−６アルキルであり、ｎは０、１、２または３であり；またはＲ１は、５−７員の芳香族または非芳香族環と縮合したフェニルまたはピリジルであり、ここに、該環は、Ｎ、ＯおよびＳから独立して選択される３つまでのヘテロ原子を含有していてもよく、Ｎはさらに、Ｃ１−６アルキルで置換されていてもよく、ここに、該環は＝Ｏによって置換されていてもよく；
Ｒ２およびＲ３は独立して、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、フェニル、ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ、ＮＨ−Ｃ１−６アルキル、ハロ、アルコキシ、ＣＮ、ＮＯ２、ＣＯＮＨＲおよびＳＯ２ＮＨＲから選択され；
Ｘ１、Ｘ２およびＸ３のうち２つはＮであり、他の１つはＮＲ４であり、ここに、Ｒ４は水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、−（ＣＨ２）ｐ−ＣＮ、−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯ２Ｈ、−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＮＨＲ５Ｒ６、−（ＣＨ２）ｐＣＯＲ５、−（ＣＨ２）ｑ（ＯＲ７）２、−（ＣＨ２）ｐＯＲ５、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＮ、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯ２Ｈ、−（ＣＨ２）ｐ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯＮＨＲ５Ｒ６、−（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯＲ８または−（ＣＨ２）ｐＮＲ９Ｒ１０であり；
Ｒ５およびＲ６は独立して、水素またはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ７はＣ１−６アルキルであり；
Ｒ８はＣ１−７アルキル、または置換されていてもよいアリール、ヘテロアリール、アリールＣ１−６アルキルまたはヘテロアリールＣ１−６アルキルであり；
Ｒ９およびＲ１０は独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、アリールおよびアリールＣ１−６アルキルから選択され；
ｐは０−４であり；および
ｑは１−４である］
で示される化合物、またはその医薬上許容される塩。
【請求項２】
Ｒ１がハロで置換されていてもよいフェニルであるか、またはＲ１が５−ないし７−員の芳香族または非芳香族環と縮合したフェニルまたはピリジルであり、ここに、該環は、Ｎ、ＯおよびＳから独立して選択される３個までのヘテロ原子を含有していてもよく、Ｎはさらに、Ｃ１−６アルキルで置換されていてもよく、ここに、該環は＝Ｏによって置換されていてもよい、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１が４−メトキシフェニル、３−フルオロ−４−メトキシフェニル、３−クロロフェニル、３−フルオロ−４−メトキシフェニルまたは３−クロロ−４−メトキシフェニルであるか、またはＲ１がベンゾ［１，２，５］チアジアゾリル、［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジル、ジヒドロベンゾフラニル、２，３−ジヒドロベンゾ［１，４］ジオキシニル、ベンゾイミダゾリル、Ｃ１−６アルキルベンゾイミダゾリル、ベンゾ［１，４］オキサジニル−３−オンまたはベンゾ［１，４］オキサジニルである、請求項２記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ２がトリアゾール結合点に対してメタ位に位置する、上記請求項のいずれか１項記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ２がハロ、Ｃ１−６アルキルまたはＮＯ２である、上記請求項のいずれか１項記載の化合物。
【請求項６】
実施例１〜２０のいずれか１つに記載の式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される塩。
【請求項７】
上記請求項のいずれか１項記載の化合物またはその医薬上許容される塩および医薬上許容される担体または希釈剤を含んでなる医薬組成物。
【請求項８】
治療に使用するための請求項１〜６のいずれか１項記載の式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物。
【請求項９】
哺乳動物におけるＡＬＫ５受容体によって媒介される疾患の治療のための医薬の製造における請求項１〜６のいずれか１項記載の式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される塩の使用。
【請求項１０】
治療上有効量の請求項１〜６のいずれか１項記載の化合物またはその医薬上許容される塩を治療の必要な哺乳動物に投与することを特徴とする、哺乳動物においてＴＧＦ−βシグナル伝達経路を阻害する方法。
【請求項１１】
治療上有効量の請求項１〜６のいずれか１項記載の化合物またはその医薬上許容される塩を治療の必要な哺乳動物に投与することを特徴とする、慢性腎疾患、急性腎疾患、創傷治癒、関節炎、骨粗鬆症、腎臓病、鬱血性心不全、潰瘍、視覚障害、角膜創傷、糖尿病性腎症、神経機能障害、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化症、腹膜および皮下癒着、限定するものではないが、肺線維症および肝線維症を包含する線維症が主要成分であるいずれかの疾患、例えば、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、アルコール誘導性肝炎、ヘモクロマトーシスおよび原発性胆汁性肝硬変、および再狭窄から選択される疾患の治療法。
【請求項１２】
治療上有効量の請求項１〜６のいずれか１項記載の化合物またはその医薬上許容される塩を哺乳動物に投与することを特徴とする、哺乳動物においてマトリックス形成を阻害する方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、トランスフォーミング成長因子（”ＴＧＦ”）−βシグナル伝達経路、特に、Ｉ型またはアクチビン様キナーゼ（”ＡＬＫ”）−５受容体によるｓｍａｄ２またはｓｍａｄ３のリン酸化の阻害剤であるフェニル置換トリアゾール、その製法および医学におけるその使用に関する。
【０００２】
ＴＧＦ−β１は、単一の膜貫通型セリン／スレオニンキナーゼ受容体のファミリーを介してシグナルを送るＴＧＦ−β、アクチビン、インヒビン、骨形成タンパク質およびミュラー管抑制物質を包含するサイトカインのファミリーの原型メンバーである。これらの受容体は、Ｉ型またはアクチビン様キナーゼ（ＡＬＫ）受容体およびＩＩ型受容体の２つのクラスに分けることができる。ＡＬＫ受容体は、ＡＬＫ受容体が（ａ）セリン／スレオニンの豊富な細胞内尾部を欠くこと、（ｂ）Ｉ型受容体間で非常に相同性のあるセリン／スレオニンキナーゼドメインを有すること、および（ｃ）ＧＳドメインと呼ばれる、グリシンおよびセリン残基が豊富な領域よりなる共通配列モチーフを有することにおいて、ＩＩ型受容体と区別される。ＧＳドメインは、細胞内キナーゼドメインのアミノ末端にあり、ＩＩ型受容体による活性化に不可欠である。いくつかの研究は、ＴＧＦ−βシグナル伝達がＡＬＫおよびＩＩ型受容体の両方を必要とすることを明らかにした。詳細には、ＩＩ型受容体がＴＧＦ−βの存在下で、ＴＧＦ−βに対するＩ型受容体、ＡＬＫ５のＧＳドメインをリン酸化する。次いで、ＡＬＫ５が細胞質タンパク質ｓｍａｄ２およびｓｍａｄ３を２つのカルボキシ末端セリンにてリン酸化する。一般に、多くの種において、ＩＩ型受容体が細胞増殖を調節し、Ｉ型受容体がマトリックス産生を調節すると考えられている。したがって、本発明の好ましい化合物は、それらがＩ型受容体を阻害し、それによりマトリックス産生を阻害することにおいて選択的であり、ＩＩ型受容体媒介性増殖を阻害しない。
【０００３】
ＴＧＦ−β１軸の活性化および細胞外マトリックスの拡大は、慢性腎疾患および血管疾患の発症および進行に対する初期および持続性の誘因である（Border W.A., Noble N.A., N. Engl. J. Med., Nov. 10, 1994; 331(19):1286-92）。さらに、ＴＧＦ−β１は、ＴＧＦ−β１受容体ＡＬＫ５によるｓｍａｄ３リン酸化の作用を介して、硬化沈殿物の成分であるフィブロネクチンおよびプラスミノーゲンアクチベーター阻害剤−１の形成において役割を果たす（Zhang Y., Feng X.H., Derynck R., Nature, Aug. 27, 1998; 394(6696):909-13; Usui T., Takase M., Kaji Y., Suzuki K., Ishida K., Tsuru T., Miyata K., Kawabata M., Yamashita H., Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., Oct. 1998; 39(11):1981-9）。
【０００４】
腎臓および心血管系における進行性線維症は、苦痛および死の主要原因であり、健康管理コストの重要な一因である。ＴＧＦ−β１は多くの腎線維形成障害に関係する（Border W.A., Noble N.A., N. Engl. J. Med., Nov 10, 1994; 331(19):1286-92）。ＴＧＦ−β１は、急性および慢性糸球体腎炎（Yoshioka K., Takemura T., Murakami K., Okada M., Hino S., Miyamoto H., Maki S., Lab. Invest., Feb. 1993; 68(2):154-63）、糖尿病性腎障害（Yamamoto, T., Nakamura, T., Noble, N.A., Ruoslahti, E., Border, W.A., (1993) PNAS  90:1814-1818）、同種移植片拒絶、ＨＩＶ腎障害およびアンギオテンシン−誘導性腎障害（Border W.A., Noble N.A., N. Engl. J. Med., Nov. 10, 1994; 331(19):1286-92）において上昇する。これらの疾患において、ＴＧＦ−β１発現のレベルは、細胞外マトリックスの産生と符合する。３つの道筋の証拠が、ＴＧＦ−β１とマトリックス産生との間の因果関係を示唆する。第１に、外来性ＴＧＦ−β１によりイン・ビトロで、正常な糸球体、メサンギウム細胞および非腎細胞を、細胞外マトリックスタンパク質を生産し、プロテアーゼ活性を阻害するように誘導することができる。第２に、ＴＧＦ−β１に対する中和抗体は、腎炎ラットにおいて細胞外マトリックスの蓄積を防ぐことができる。第３に、ＴＧＦ−β１トランスジェニックマウスまたはＴＧＦ−β１遺伝子の正常なラット腎臓へのイン・ビボでのトランスフェクションが糸球体硬化症の迅速な発症をもたらした（Kopp J.B., Factor V.M., Mozes M., Nagy P., Sanderson N., Bottinger E.P., Klotman P.E., Thorgeirsson S.S., Lab Invest, June 1996; 74(6):991-1003）。したがって、ＴＧＦ−β１活性の阻害は慢性腎疾患における治療的介入として示される。
【０００５】
ＴＧＦ−β１およびその受容体は、傷ついた血管において増加し、バルーン血管形成後の新内膜形成において示される（Saltis J., Agrotis A., Bobik A., Clin Exp Pharmacol Physiol, Mar. 1996; 23(3):193-200）。さらに、ＴＧＦ−β１は、イン・ビトロでの平滑筋細胞（ＳＭＣ）移動の強力な刺激因子であり、動脈壁におけるＳＭＣの移動は、アテローム性動脈硬化症および再狭窄の病因に寄与する因子である。さらに、全コレステロールに対する内皮細胞産物の多変量解析において、ＴＧＦ−β受容体ＡＬＫ５は全コレステロールと相関した（Ｐ＜０．００１）（Blann A.D., Wang J.M., Wilson P.B., Kumar S., Atherosclerosis, Feb. 1996; 120(1-2):221-6）。さらに、ヒトアテローム性動脈硬化病変由来のＳＭＣは、増加したＡＬＫ５／ＴＧＦ−βＩＩ型受容体比を有する。ＴＧＦ−β１は繊維増殖性の管病変において過剰発現するので、細胞外マトリックス成分が過剰生産される間、受容体−変異細胞は、ゆっくりとではあるが制御されずに増殖するであろう（McCaffrey T.A., Consigli S., Du B., Falcone D.J., Sanborn T.A., Spokojny A.M., Bush H.L., Jr., J Clin Invest, Dec. 1995; 96(6):2667-75）。ＴＧＦ−β１は、活性なマトリックス合成が起こるアテローム性動脈硬化病変における非泡沫マクロファージに免疫局在した。このことは、非泡沫マクロファージが、ＴＧＦ−β依存性機構を介してアテローム性動脈硬化リモデリングにおけるマトリックス遺伝子発現の調節に関係し得ることを示唆する。したがって、ＡＬＫ５におけるＴＧＦ−β１の作用の阻害もまた、アテローム性動脈硬化症および再狭窄において必要とされる。
【０００６】
ＴＧＦ−βはまた、創傷修復においても示される。ＴＧＦ−β１シグナル伝達の阻害が治癒過程の間に過度な瘢痕形成を制限することにって創傷後の機能復帰に有益であることを明らかにするために、ＴＧＦ−β１に対する中和抗体が多くのモデルにおいて使用された。例えば、ＴＧＦ−β１およびＴＧＦ−β２に対する中和抗体は、ラットにおいて単核細胞およびマクロファージの数を減少し、同様に、皮膚フィブロネクチンおよびコラーゲン沈殿を減少することによって、瘢痕形成を減少し、新真皮の細胞構造を改善した（Shah M., J. Cell. Sci., 1995, 108, 985-1002）。さらに、ＴＧＦ−β抗体はまた、ウサギにおいて角膜創傷の治癒を改善し（Moller-Pedersen T., Curr. Eye Res., 1998, 17, 736-747）、ラットにおいて胃潰瘍の創傷治癒を促進する（Ernst H., Gut, 1996, 39, 172-175）。これらのデータは、ＴＧＦ−βの活性を制限することが、多くの組織において有益であることを強く示唆し、ＴＧＦ−βの慢性的な上昇を伴ういずれの疾患も、ｓｍａｄ２およびｓｍａｄ３シグナル伝達経路の阻害によって利益を得るであろうことを示唆する。
【０００７】
ＴＧＦ−βはまた、腹膜癒着に関係する（Saed G.M.ら, Wound Repair Regeneration, 1999 Nov-Dec, 7(6), 504-510）。したがって、ＡＬＫ５の阻害剤は、外科手術後の腹膜および皮下繊維癒着の防止に有益であろう。
【０００８】
ＴＧＦβ１−抗体は、抗血管形成機構であると考えられているものを介してヌードマウスにおいて移植された腎腫瘍成長を防止する（Ananth Sら、Journal Of The American Society Of Nephrology Abstracts, 9: 433A (Abstract)）。該腫瘍自体はＴＧＦ−βに応答しないが、その周囲の組織が応答性であり、ＴＧＦ−β分泌性腫瘍の新血管新生によって腫瘍成長を支持する。かくして、ＴＧＦ−β経路の拮抗は、転移成長を防止し、癌の心配を軽減するであろう。
【０００９】
驚くべきことに、今回、一連のフェニル置換トリアゾール類が、ＡＬＫ５キナーゼの強力且つ選択的な非ペプチド阻害剤として機能し、それにより、ＡＬＫ５キナーゼ機構によって媒介される種々の病態、例えば、慢性腎疾患、急性腎疾患、創傷治癒、関節炎、骨粗鬆症、腎臓病、鬱血性心不全、潰瘍、視覚障害、角膜創傷、糖尿病性腎障害、神経機能障害、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化症、腹膜および皮下癒着、限定するものではないが、肺線維症および肝線維症を包含する線維症が主要成分であるいずれかの疾患、および再狭窄の治療および予防に有益であることが見出された。
【００１０】
線維症が主要成分である疾患の例には、限定するものではないが、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、アルコール誘導性肝炎、ヘモクロマトーシスおよび原発性胆汁性肝硬変などがある。
【００１１】
本発明によると、式（Ｉ）：
【化１】
2005518352.tif 000003
［式中、Ｒ１は、ハロ、−Ｏ−Ｃ１−６アルキル、−Ｓ−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ、−Ｓ−（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ、シアノ、フェニルおよびＣＯ２Ｒから選択される１以上の置換基で置換されていてもよいナフチルまたはフェニルであり、ここに、Ｒは水素またはＣ１−６アルキルであり、ｎは０、１、２または３であり；またはＲ１は、５−７員の芳香族または非芳香族環と縮合したフェニルまたはピリジルであり、ここに、該環は、Ｎ、ＯおよびＳから独立して選択される３つまでのヘテロ原子を含有していてもよく、Ｎはさらに、Ｃ１−６アルキルで置換されていてもよく、ここに、該環は＝Ｏによって置換されていてもよく；
Ｒ２およびＲ３は独立して、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、フェニル、ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ、ＮＨ−Ｃ１−６アルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＣＯＮＨＲおよびＳＯ２ＮＨＲから選択され；
Ｘ１、Ｘ２およびＸ３のうち２つはＮであり、他の１つはＮＲ４であり、ここに、Ｒ４は水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、−（ＣＨ２）ｐ−ＣＮ、−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯ２Ｈ、−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＮＨＲ５Ｒ６、−（ＣＨ２）ｐＣＯＲ５、−（ＣＨ２）ｑ（ＯＲ７）２、−（ＣＨ２）ｐＯＲ５、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＮ、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯ２Ｈ、−（ＣＨ２）ｐ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯＮＨＲ５Ｒ６、−（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯＲ８または−（ＣＨ２）ｐＮＲ９Ｒ１０であり；
Ｒ５およびＲ６は独立して、水素またはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ７はＣ１−６アルキルであり；
Ｒ８はＣ１−７アルキル、または置換されていてもよいアリール、ヘテロアリール、アリールＣ１−６アルキルまたはヘテロアリールＣ１−６アルキルであり；
Ｒ９およびＲ１０は独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、アリールおよびアリールＣ１−６アルキルから選択され；
ｐは０−４であり；および
ｑは１−４である］
で示される化合物、またはその医薬上許容される塩が提供される。
【００１２】
式（Ｉ）の化合物のトリアゾール環において、二重結合が２つの非置換窒素に対して存在することは明らかであろう。
【００１３】
Ｒ１が５−７員の芳香族または非芳香族環と縮合したピリジルである場合、ピリジル環の窒素は縮合点にあってもよい。好ましくは、Ｒ１は置換されていてもよいナフチルまたはフェニルである。より好ましくは、Ｒ１は、ハロ、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルチオおよびフェニルから選択される１以上の置換基で置換されていてもよいフェニルであり；またはＲ１は、５−７員の芳香族または非芳香族環と縮合したフェニルまたはピリジルであり、ここに、該環は、Ｎ、ＯおよびＳから独立して選択される３個までのヘテロ原子を含有していてもよく、ＮはさらにＣ１−６アルキルで置換されていてもよく、ここに、該環は＝Ｏで置換されていてもよく；例えば、Ｒ１は、ベンゾ［１，３］ジオキソリル、２，３−ジヒドロベンゾ［１，４］ジオキシニル、ベンゾキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾ［１，２，５］オキサジアゾリル、ベンゾ［１，２，５］チアジアゾリル、キノキサリニル、ジヒドロベンゾフラニル、ベンゾイミダゾリル、Ｃ１−６アルキルベンゾイミダゾリル、［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジル、ベンゾ［１，４］オキサジニル−３−オン、ベンゾキサゾリル−２−オンまたはベンゾ［１，４］オキサジニルである。もっとも好ましくは、Ｒ１は、４−メトキシフェニル、３−フルオロ−４−メトキシフェニル、３−クロロフェニル、３−フルオロ−４−メトキシフェニルまたは３−クロロ−４−メトキシフェニルであるか、またはＲ１は、ベンゾ［１，２，５］チアジアゾリル、［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジル、ジヒドロベンゾフラニル、２，３−ジヒドロベンゾ［１，４］ジオキシニル、ベンゾイミダゾリル、Ｃ１−６アルキルベンゾイミダゾリル、ベンゾ［１，４］オキサジニル−３−オンまたはベンゾ［１，４］オキサジニルである。
【００１４】
好ましくは、Ｒ２は、チアゾールとの結合点に対してメタ位に位置し、Ｒ２は好ましくは、ハロ、例えば、クロロ、Ｃ１−６アルキルまたはＮＯ２である。より好ましくは、Ｒ２はハロである。
Ｒ３は好ましくは、水素またはハロである。
【００１５】
本発明の方法において使用するための化合物は、好ましくは、分子量８００未満、より好ましくは６００未満である。
例示してもよい本発明の特別の化合物は、下記の化合物およびその医薬上許容される塩を包含する：
６−［５−（３−クロロフェニル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン；
６−［５−（３−フルオロフェニル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン；
６−［５−（３−ニトロフェニル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン；
６−［５−（３−メチルフェニル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン；
６−［５−（４−クロロフェニル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン；
６−［５−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン；
６−［５−（４−メチルフェニル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン；
６−［５−（３，４−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン；
６−［５−（２−クロロフェニル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン；
６−［５−（３−クロロフェニル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン；
５−［５−（３−クロロフェニル）−２Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−４−イル］−ベンゾ［１，２，５］チアジアゾール；
５−［５−（３−フルオロフェニル）−２Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−４−イル］−ベンゾ［１，２，５］チアジアゾール；
５−［５−（３−ブロモフェニル）−２Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−４−イル］−ベンゾ［１，２，５］チアジアゾール；
４−（３−クロロフェニル）−５−（４−メトキシフェニル）−２Ｈ−［１，２，３］トリアゾール；
４−（３−フルオロフェニル）−５−（４−メトキシフェニル）−２Ｈ−［１，２，３］トリアゾール；
４−（３−クロロフェニル）−５−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−２Ｈ−［１，２，３］トリアゾール；
４−（３−フルオロフェニル）−５−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−２Ｈ−［１，２，３］トリアゾール；
６−［５−（３−クロロフェニル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−１−メチル１Ｈ−ベンゾイミダゾール；
４−（３−クロロフェニル）−５−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）−２Ｈ−［１，２，３］トリアゾール；および
４−（３−フルオロフェニル）−５−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）−２Ｈ−［１，２，３］トリアゾール
【００１６】
式（Ｉ）の化合物の適当な医薬上許容される塩は、限定するものではないが、無機酸との塩、例えば、塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩、二リン酸塩、臭化水素酸塩および硝酸塩、または有機酸との塩、例えば、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、パルミチン酸塩、サリチル酸塩およびステアリン酸塩を包含する。
【００１７】
本発明の化合物のいくつかは、結晶化されていてもよく、または水性および有機溶媒などの溶媒から再結晶化されていてもよい。かかる場合、溶媒和物が形成されうる。本発明はその範囲内に、水和物を包含する化学量論的溶媒和物ならびに凍結乾燥などの工程によって生産されうる可変量の水を含有する化合物を包含する。
【００１８】
いくつかの式（Ｉ）の化合物は、光学異性体、例えば、ジアステレオ異性体および種々の比率での異性体の混合物、例えば、ラセミ混合物の形態で存在しうる。本発明は、かかる形態の全て、特に純粋な異性形態を包含する。異なる異性形態は、常法によって他から分離または分割されることができ、あるいはいずれかの所定の異性体は、従来の合成法または立体特異的合成もしくは不斉合成によって得ることができる。
【００１９】
式（Ｉ）の化合物は医薬組成物における用途が意図されるので、それらが各々、実質的に純粋な形態、例えば、少なくとも６０％純粋、より適当には少なくとも７５％純粋および好ましくは少なくとも８５％、特別には少なくとも９８％純粋（％は重量／重量に基づいている）な形態で提供されることは、容易に理解されよう。該化合物の不純な調製物は、医薬組成物において使用されるより純粋な形態を調製するために使用されうる。これらのあまり純粋でない化合物調製物は、式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される誘導体を少なくとも１％、より適当には少なくとも５％、好ましくは少なくとも１０％含有するべきである。
【００２０】
「Ｃ１−６アルキル」なる用語は、本明細書で使用される場合、それ自体またはより大きな基、例えば、Ｃ１−６アルコキシの一部として、鎖長が限定されないかぎり、１〜６個の炭素原子よりなる直鎖または分枝鎖基を意味し、限定するものではないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチルおよびｔｅｒｔ−ブチルを包含する。
Ｃ１−６ハロアルキル基は、１以上のハロ原子を含有していてもよく、例示されうる特定のＣ１−６ハロアルキル基はＣＦ３である。
【００２１】
「ハロ」または「ハロゲン」なる用語は、本明細書において交換可能に使用され、塩素、フッ素、ヨウ素および臭素から誘導される基を意味する。
「シクロアルキル」なる用語は、本明細書中で使用される場合、好ましくは３〜７個の炭素よりなる環状基を意味し、限定するものではないが、シクロプロピル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルを包含する。
「ＡＬＫ５阻害剤」なる用語は、本明細書において使用される場合、ｐ３８またはＩＩ型受容体より優先的にＡＬＫ５受容体を選択的に阻害する、抑制型ｓｍａｄ、例えば、ｓｍａｄ６およびｓｍａｄ７以外の化合物を意味する。
【００２２】
「ＡＬＫ５により媒介された病態」なる用語は、本明細書において使用される場合、ＡＬＫ５によって媒介（または調節）されるいずれかの病態、例えば、ＴＧＦ−β１シグナル伝達経路においてｓｍａｄ２／３のリン酸化の阻害によって調節される疾患を意味する。
「潰瘍」なる用語は、本明細書において使用される場合、限定するものではないが、糖尿病性潰瘍、慢性潰瘍、胃潰瘍および十二指腸潰瘍を包含する。
【００２３】
式（Ｉ）の化合物は、当該分野で認識される手法によって、既知または市販の出発材料から調製できる。出発材料が市販の供給源から入手不可能な場合、それらの合成は本明細書に記載されるか、またはそれらは当該分野で既知の手法によって調製できる。
【００２４】
詳細には、式（Ｉ）の化合物はスキーム１に説明されるように調製されうる。
ヨウ化銅（Ｉ）の存在下、パラジウム触媒を用いて、臭化アリール（Ｉ）をトリメチルシリルアセチレンとカップリングする。次いで、トリメチルシリル基を塩基性条件下で炭酸カリウムを用いて除去し、パラジウム触媒作用を介して、マスクしていない末端アセチレン（ＩＩ）を置換ブロモベンゼン（ＩＩＩ）にカップリングさせる。二置換アセチレン（ＩＶ）をトリメチルシリルアジドで処理してトリアゾール（Ｖ）を得、それを適当なアルキル化剤、Ｌ−Ｒ３（ここに、Ｌは脱離基、例えば、Ｉである）を用いて炭酸カリウムの存在下にアルキル化する。得られた異性体は、クロマトグラフィー法によって分離することができる。
【００２５】
スキーム１
【化２】
2005518352.tif 000004
【００２６】
さらに、式（Ｉ）の化合物の製法の詳細を実施例に示す。
【００２７】
式（Ｉ）の化合物の合成の間に、中間体化合物における不安定な官能基、例えば、ヒドロキシ、カルボキシおよびアミノ基を保護してもよい。種々の不安定な官能基を保護しうる方法および得られる保護誘導体を解離する方法の包括的な議論は、例えば、Protective Groups in Organic Chemistry, T.W. GreeneおよびP.G.M. Wuts, (Wiley-Interscience, New York, 第２版, 1991)に示される。
【００２８】
式（Ｉ）の化合物は、単独で調製してもよく、または少なくとも２つ、例えば５〜１，０００個の式（Ｉ）の化合物、より好ましくは１０〜１００個の式（Ｉ）の化合物を含む化合物ライブラリーとして調製してもよい。式（Ｉ）の化合物のライブラリーは、コンビナトリアル「スプリット（split）」および「ミックス（mix）」法によって、または溶液相もしくは固相化学のいずれかを用いるマルチプル・パラレル合成によって、当業者に既知の手法によって調製されうる。
したがって、本発明のさらなる態様によると、少なくとも２個の式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される塩を含む化合物ライブラリーが提供される。
【００２９】
本発明のさらなる態様によると、治療の必要な哺乳動物に有効量の式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される塩を投与することを特徴とする、哺乳動物においてＡＬＫ５受容体によって媒介される疾患を治療する方法が提供される。
【００３０】
本発明のさらなる態様において、式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物の治療における使用が提供される。
本発明のさらなる態様によると、式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される塩の、哺乳動物においてＡＬＫ５受容体によって媒介される疾患の治療のための医薬の製造における使用が提供される。
【００３１】
ＡＬＫ５に媒介される病態は、限定するものではないが、慢性腎疾患、急性腎疾患、創傷治癒、関節炎、骨粗鬆症、腎臓病、鬱血性心不全、潰瘍、視覚障害、角膜創傷、糖尿病性腎障害、神経機能障害、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化症、腹膜および皮下剥離、限定するものではないが、肺線維症および肝線維症を包含する線維症が主要成分であるいずれかの疾患、例えば、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、アルコール誘導性肝炎、ヘモクロマトーシスおよび原発性胆汁性肝硬変、および再狭窄を包含する。
【００３２】
「治療」なる用語により、予防または治療のいずれかが意味される。
本発明のさらなる態様によると、哺乳動物においてＴＧＦ−βシグナル伝達経路を阻害する方法、例えば、Ｉ型またはアクチビン様キナーゼＡＬＫ５受容体にるｓｍａｄ２またはｓｍａｄ３のリン酸化を阻害する方法であって、かかる治療の必要な哺乳動物に、有効量の式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される塩を投与することを特徴とする方法が提供される。
【００３３】
本発明のさらなる態様によると、ＴＧＦ−βシグナル伝達経路を阻害することによって、例えば、Ｉ型またはアクチビン様キナーゼＡＬＫ５受容体によるｓｍａｄ２またはｓｍａｄ３のリン酸化を阻害することによって哺乳動物におけるマトリックス形成を阻害する方法であって、かかる治療の必要な哺乳動物に、有効量の式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される塩を投与することを特徴とする方法が提供される。
【００３４】
式（Ｉ）の化合物およびその医薬上許容される塩は、当該分野でよく知られた常法にしたがって式（Ｉ）の化合物を標準的な医薬担体または希釈剤と組み合わせることによって調製される通常の投薬形態において投与してもよい。これらの手法は、材料を所望の調製物に適するように、混合、造粒および圧縮または溶解することを含みうる。
【００３５】
本発明のさらなる態様によると、式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される塩、および医薬上許容される担体または希釈剤を含む医薬組成物が提供される。
本発明の医薬組成物は、いずれの経路による投与のために処方されてもよく、ヒトを包含する哺乳動物への経口、局所または非経口投与に適した形態のものを包含する。
組成物は、錠剤、カプセル、粉末、顆粒、ロゼンジ、クリームまたは液体調製物、例えば、経口または滅菌非経口溶液または懸濁液の形態であってもよい。
【００３６】
本発明の局所処方は、例えば、軟膏、クリームまたはローション、眼用の軟膏および点眼剤または点耳剤、含浸した外傷用医薬材料およびエーロゾルとして提供されてもよく、保存料、薬物浸透を補助するための溶媒ならびに軟膏およびクリーム中の皮膚軟化剤のような適当な従来の添加剤を含有していてもよい。
該処方は、また、相溶性の通常の担体、例えば、クリームまたは軟膏基剤およびローション用のエタノールまたはオレイルアルコールを含有していてもよい。かかる担体を処方の約１％から約９８％まで配合していてもよい。より通常には、それらは処方の約８０％までを形成するであろう。
【００３７】
経口投与用錠剤およびカプセルは、単位投与量授与形態であってもよく、結合剤、例えば、シロップ、アラビアゴム、ゼラチン、ソルビトール、トラガカントゴムまたはポリビニルピロリドン；充填剤、例えば、ラクトース、砂糖、トウモロコシデンプン、リン酸カルシウム、ソルビトールまたはグリシン；錠剤成形滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコールまたはシリカ；崩壊剤、例えば、ジャガイモデンプン；または許容される湿潤剤、例えば、ラウリル硫酸ナトリウムなどの通常の賦形剤を含有していてもよい。錠剤は、よく知られた方法にしたがって、通常の製薬手法において被覆されていてもよい。経口液体調製物は、例えば、水性または油性懸濁液、溶液、エマルジョン、シロップまたはエリキシルの形態であってもよく、あるいは使用前に水または他の適当なビヒクルで復元するための乾燥製品として提供されてもよい。かかる液体調製物は、懸濁化剤、例えば、ソルビトール、メチルセルロース、グルコースシロップ、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲルまたは硬化食用脂、乳化剤、例えば、レシチン、モノオレイン酸ソルビタンまたはアラビアゴム；非水性ビヒクル（食用油を包含しうる）、例えば、アーモンド油、グリセリンなどの油性エステル、プロピレングリコールまたはエチルアルコール；保存料、例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルまたはプロピルあるいはソルビン酸、および所望により、通常のフレーバーまたは着色料などの通常の添加剤を含有していてもよい。
【００３８】
座剤は、通常の座剤基剤、例えば、ココアバターまたは他のグリセリドを含有するであろう。
非経口投与の場合、流体単位投与形態は、化合物と滅菌ビヒクル（水が好ましい）を用いて調製される。化合物は、使用されるビヒクルおよび濃度によるが、ビヒクル中に懸濁または溶解できる。溶液の調製において、化合物を注射用水に溶解し、フィルター滅菌した後、適当なバイアルまたはアンプル中に充填し、密封することができる。
【００３９】
有利には、局所麻酔薬、保存料および緩衝化剤のような薬剤をビヒクル中に溶解することができる。安定性を高めるために、組成物をバイアル中に充填した後に冷凍し、真空下で水を除去することができる。次いで、凍結乾燥粉末をバイアル中に密封し、使用前に液体を復元するために、注射用水の添付バイアルを提供してもよい。非経口懸濁液は、化合物をビヒクル中に溶解する代わりに懸濁し、ろ過による滅菌ができないことを除き、実質的に同様に調製される。化合物は、滅菌ビヒクル中に懸濁する前にエチレンオキシドに曝露することによって滅菌できる。有利には、化合物の均一な分布を容易にするために、界面活性剤または湿潤剤が組成物中に含まれる。
【００４０】
組成物は、投与方法によるが、０．１重量％、好ましくは１０−６０重量％の活性材料を含有していてもよい。組成物が投与量単位よりなる場合、各単位は好ましくは、５０−５００ｍｇの活性材料を含有するであろう。成人の治療に用いる場合、投与量は、投与経路および頻度によるが、好ましくは、１日に１００〜３０００ｍｇの範囲、例えば、１日に１５００ｍｇであろう。かかる投与量は１日に１．５〜５０ｍｇ／ｋｇに相当する。適当には、投与量は１日に５〜２０ｍｇ／ｋｇである。
【００４１】
式（Ｉ）の化合物の個々の投薬の最適量および間隔が、治療されるべき病態の性質および程度、投与の形態、経路および部位、および治療されるべき特定の哺乳動物によって決定されるであろうこと、およびかかる最適量が従来技術によって決定できることは、当業者に理解されるであろう。また、最適な治療クール、すなわち、所定の日数の間に１日に与えられる式（Ｉ）の化合物の投与回数が、治療決定試験の通常のクールを用いて当業者によって確かめられることができることは、当業者に明らかであろう。
【００４２】
式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される誘導体を上記の投与量範囲で投与する場合、毒物学的影響は示されない。
【００４３】
限定するものではないが、本明細書中で引用した特許および特許出願を包含する全ての出版物は、あたかも個々の出版物が特別および個別に本明細書中での出典明示により完全に示されるかのごとく本明細書の一部とされることを示されたかのように、出典明示により本明細書の一部とされる。
【００４４】
下記の実施例は、単なる例示として解釈されるべきであり、いかなる方法においても本発明の範囲を制限するものではない。実施例において、マススペクトルは、化学イオン化技術（ＣＩ）を用いるＨｉｔａｃｈｉ  Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  ＲＭＵ−６Ｅを用いて、またはエレクトロスプレー（ＥＳ）イオン化技術を用いるＭｉｃｒｏｍａｓｓ  Ｐｌａｔｆｏｒｍ  ＩＩ機器を用いて行われた。
【００４５】
略語
ＣｕＩ−ヨウ化銅
ＤＭＦ−ジメチルホルムアミド
ＥｔＯＡｃ−酢酸エチル
ＭｇＳＯ４−硫酸マグネシウム
ＮａＨＣＯ３−炭酸水素ナトリウム
Ｎａ２ＳＯ４−硫酸ナトリウム
Ｐｄ（ＰＰｈ３）４−テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）
ＴＨＦ−テトラヒドロフラン
ＴＭＥＤＡ−テトラメチルエチレンジアミン
【実施例】
【００４６】
調製例１：Ｎ’−（５−ブロモ−２−アミノピリジン）−Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミジン
【化３】
2005518352.tif 000005
５−ブロモ−２−アミノピリジン（９．８ｇ，５６．６ミリモル，１当量）をアルゴン下で乾燥ＤＭＦ（２０ｍｌ）および乾燥ジメチルホルムアミドジメチルアセタール（２０ｍｌ）中に溶解した。該溶液を１３０℃で１６時間還流し、冷却し、溶媒を除去した。得られた残渣を精製することなく次工程に用いた。ｍ／ｚ［ＡＰＣＩＭＳ］：２２８．０／２３０．０［Ｍ＋Ｈ］＋
【００４７】
調製例２：６−ブロモ−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン
【化４】
2005518352.tif 000006
Ｎ’−（５−ブロモ−２−アミノピリジン）−Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミジン（１６．２ｇ，〜５６．６ミリモル，１当量）をアルゴン下でメタノール（９０ｍｌ）およびピリジン（１０ｍｌ）中に溶解し、０℃に冷却した。これに、攪拌しながら、ヒドロキシルアミン−Ｏ−スルホン酸（７．３ｇ，７５．２ミリモル，１．３当量）を加えて、紫色の懸濁を形成させた。これを室温にし、１６時間攪拌した。溶媒除去後、残渣を炭酸水素ナトリウム水溶液（２００ｍｌ）中に懸濁し、酢酸エチル（２ｘ２００ｍｌ）で抽出した。次いで、有機層を水およびブライン（各１００ｍｌ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、溶媒を除去した。最初の２：１  ４０−６０℃石油エーテル：酢酸エチルから１：１  ４０−６０℃石油エーテル：酢酸エチルまでの勾配溶媒系を用いて溶出するシリカ上のフラッシュクロマトグラフィーにより、薄黄色固体として生成物を得た（５ｇ，４４．６％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）δ：８．７７（１Ｈ，ｓ），８．３４（１Ｈ，ｓ），７．６９（１Ｈ，ｄ），７．６５（１Ｈ，ｄ）；ｍ／ｚ［ＡＰＣＩＭＳ］：１９８．０／２００．０［Ｍ＋Ｈ］＋
【００４８】
調製例３：６−トリメチルシラニルエチニル−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン
【化５】
2005518352.tif 000007
６−ブロモ−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン（５ｇ，２５．２６ミリモル，１当量）をＴＨＦ（５０ｍｌ）に溶解し、該溶液に５分間、アルゴンをバブルした。これに、ヨウ化銅（０．４６ｇ，２．５３ミリモル，０．１当量）、ジクロロビストリフェニルホスフィン（０．３６ｇ，０．５１ミリモル，０．０２当量）およびトリメチルシリルアセチレン（７．１４ｍｌ，４．９６ｇ，５０．５２ミリモル，２当量）を加えた。ジイソプロピルアミン（６．７８ｍｌ，５．１ｇ，５０．５２ミリモル，２当量）を該溶液に滴下し、得られた深い赤色の懸濁をアルゴン下で２４時間攪拌した。次いで、これをセライトで濾過し、過剰量の酢酸エチルで洗浄し、溶媒を除去した。次いで、残渣を水（２００ｍｌ）に懸濁し、酢酸エチル（２ｘ２００ｍｌ）で抽出し、有機層を合わせ、水およびブライン（各１００ｍｌ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、溶媒を除去した。３：１  ４０−６０℃石油エーテル：酢酸エチルを用いて溶出するシリカ上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、生成物を薄黄色固体として得た（２．９ｇ，５３．３％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）δ：８．７２（１Ｈ，ｓ），８．３６（１Ｈ，ｓ），７．６９（１Ｈ，ｄ），７．５４，（１Ｈ，ｄ），０．２８（９Ｈ，ｓ）；ｍ／ｚ［ＡＰＣＩＭＳ］：２１６［Ｍ＋Ｈ］＋
【００４９】
調製例４：６−エチニル−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン
【化６】
2005518352.tif 000008
６−トリメチルシラニルエチニル−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン（２．９ｇ，１３．４７ミリモル，１当量）をメタノール中に溶解し、これに炭酸カリウム（５．６ｇ，４０．４ミリモル，３当量）を加えた。該懸濁を２時間攪拌し、溶媒を除去した。残渣を水（１００ｍｌ）に懸濁し、酢酸エチル（２ｘ１００ｍｌ）で抽出した。次いで、有機層を合わし、水およびブライン（各５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、溶媒を除去して薄オレンジ色の固体を得（１．８ｇ，９５％）、それをさらに精製することなく次反応に用いた。ｍ／ｚ［ＡＰＣＩＭＳ］：１４４．１［Ｍ＋Ｈ］＋
【００５０】
調製例５：６−（３−クロロフェニルエチニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン
【化７】
2005518352.tif 000009
６−エチニル−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン（６９３ｍｇ，４．８４６ミリモル）のＴＭＥＤＡ（１５ｍｌ）およびＴＨＦ（１５ｍｌ）中攪拌溶液をアルゴンを用いて脱気した。Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（０．２５３ｍｇ，０．２１９ミリモル，０．０５当量）、ＣｕＩ（１００ｍｇ，０．５２４ミリモル，０．１当量）および３−クロロヨードベンゼン（２．３１１ｇ，９．６９ミリモル，２当量）を加え、該溶液をアルゴン下、５０℃で１６時間加熱した。溶媒を真空下で除去し、残渣を酢酸エチル（３ｘ７０ｍｌ）と飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（７０ｍｌ）との間に分配した。酢酸エチル層を合わし、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、真空下で濃縮乾固させた。酢酸エチル／石油スピリット（４：６）を用いて溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより、生成物を黄色固体として得た（８２４ｍｇ，６７％）。ＣＩＭＳ：２５４．１［Ｍ＋Ｈ］＋
【００５１】
調製例６：５−ブロモベンゾ［１，２，５］チアジアゾール
【化８】
2005518352.tif 000010
４−ブロモベンゼン−１，２−ジアミン（１７ｇ，９１ミリモル）に、塩化チオニル（２００ｍｌ）を加えた。一滴のＤＭＦを反応混合物に加えた。該反応混合物をアルゴン下８０℃で一晩、熱還流した。反応混合物を室温に冷却し、大きなビーカー中の氷に何回かに分けて加え、固形重炭酸ナトリウムで中和した。該混合物を酢酸エチルと水の間に分配した。酢酸エチル層を収集し、乾燥させた（ＭｇＳＯ４）。溶媒を減圧除去した。標題化合物を、９０％酢酸エチル／１０％メタノールを用いて溶出するシリカゲル上のカラムクロマトグラフィーによって単離した。（１２ｇ，６２％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：７．６１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９，２Ｈｚ），７．８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ），８．１６（１Ｈ，ｓ）
【００５２】
調製例７：（４−ブロモ−２−ニトロフェノキシ）酢酸エチルエステル
【化９】
2005518352.tif 000011
４−ブロモ−２−ニトロフェノール（３．７１ｇ，１７．０ミリモル，１．０当量）のＤＭＦ（８０ｍｌ）中攪拌溶液に、室温にて、固形Ｋ２ＣＯ３（４．７０ｇ，３４．０ミリモル，２．０当量）を加える。該混合物を４０℃で３時間加熱し、次いで、室温に冷却し、ＥｔＯＡｃと水の間に分配した。水層をさらにＥｔＯＡｃで抽出し、合わせた有機相を水、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。濃縮により、黄色固体を得（５．０１ｇ，９７％）、それはさらに精製する必要がなかった。
１Ｈ  ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）δ８．００（１Ｈ，ｄ），７．６２（１Ｈ，ｄｄ），６．９０（１Ｈ，ｄ），４．７６（Ｈ，ｓ），４．２６（２Ｈ，ｑ），１．２９（３Ｈ，ｔ）
【００５３】
調製例８：６−ブロモ−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン
【化１０】
2005518352.tif 000012
（４−ブロモ−２−ニトロフェノキシ）酢酸エチルエステル（４．０１ｇ，１３．２ミリモル，１．０当量）の氷酢酸（７０ｍｌ）中攪拌溶液に、室温にて、鉄粉（１４．７０ｇ，２６４．０ミリモル，２０．０当量）を加えた。混合物を６０℃で４時間、勢いよく攪拌し、次いで、室温に冷却した。混合物を珪藻土パッドによって濾過し、ＥｔＯＡｃで洗浄し、溶液を蒸発乾固させた。残渣を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液とＥｔＯＡｃの間に分配した。水層をＥｔＯＡｃで抽出し、合わせた有機相を水、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。濃縮により、標題化合物を白色固体として得（２．９０ｇ，９７％）、それは精製する必要がなかった。
１Ｈ  ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）δ：１０．７９（１Ｈ，ｂｒ．ｓ）７．０９−７．０１（２Ｈ，ｍ），６．９１（１Ｈ，ｄ），４．５９（２Ｈ，ｓ）
【００５４】
実施例１：６−［５−（３−クロロフェニル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン
【化１１】
2005518352.tif 000013
６−（３−クロロフェニルエチニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン（調製例５）（２０５ｍｇ，０．８０７ミリモル）のＤＭＦ（１．１ｍｌ）中攪拌溶液をアルゴン下で、アジドトリメチルシラン（０．３２ｍｌ，２．４２ミリモル）で処理し、１３０℃で１９時間加熱した。ＤＭＦを真空下で除去し、混合物を酢酸エチルとブラインの間に分配した。酢酸エチル層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、真空下で濃縮乾固させた。残渣を、石油スピリット／酢酸エチル  ２：１〜１００％酢酸エチルを用いて溶出するシリカクロマトグラフィーにより精製して、オフホワイト色の固体を得た（８３ｍｇ，３５％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）δ：８．９７（１Ｈ，ｓ），８．４２（１Ｈ，ｓ），７．８４（１Ｈ，ｄ），７．７４（１Ｈ，ｄｄ），７．６２（１Ｈ，ｄ），７．４６（３Ｈ，ｍ）；ＮＨ観察されず；ｍ／ｚ［ＥＳＭＳ］：２９７［Ｍ＋Ｈ］＋
【００５５】
実施例２：６−［５−（３−フルオロフェニル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン
【化１２】
2005518352.tif 000014
標題化合物を６−（３−フルオロフェニルエチニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン（１７１ｍｇ，０．７２２ミリモル）から、実施例１と同様の手法を用いて調製した。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ；ｄ６−ＤＭＳＯ，遊離塩基）δ：１５．４９（ＮＨ，ｂｒ．ｓ），９．０３（１Ｈ，ｓ），８．５７（１Ｈ，ｓ），７．９３（１Ｈ，ｄ），７．７０（１Ｈ，ｄ），７．４８−７．２７（４Ｈ，ｍ）；ｍ／ｚ［ＥＳＭＳ］：２８１［Ｍ＋Ｈ］＋
【００５６】
実施例３：６−［５−（３−ニトロフェニル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン
【化１３】
2005518352.tif 000015
標題化合物を６−（３−ニトロフェニルエチニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン（２１３ｍｇ，０．８０７ミリモル）から、実施例１と同様の手法を用いて調製した。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ；ｄ６−ＤＭＳＯ，遊離塩基）δ：１５．７４（ＮＨ，ｂｒ．ｓ），９．１５（１Ｈ，ｓ），８．５９（１Ｈ，ｓ），８．４０（１Ｈ，ｓ），８．２７（１Ｈ，ｄ），７．９５（２Ｈ，ｂｒ．ｓ），７．７３（２Ｈ，ｂｒ．ｓ）；ｍ／ｚ［ＥＳＭＳ］：３０８［Ｍ＋Ｈ］＋
【００５７】
実施例４：６−［５−（３−メチルフェニル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン
【化１４】
2005518352.tif 000016
標題化合物を６−（３−メチルフェニルエチニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン（１８８ｍｇ，０．８０５ミリモル）から、実施例１と同様の手法を用いて調製した。
１Ｈ  ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，遊離塩基）δ：９．１６（１Ｈ，ｓ），８．４３（１Ｈ，ｓ），７．７９（２Ｈ，ｄ），７．４１−７．２８（４Ｈ，ｍ），２．３８（３Ｈ，ｓ）；ＮＨ観察されず；ｍ／ｚ［ＥＳＭＳ］：２７７［Ｍ＋Ｈ］＋
【００５８】
実施例５：６−［５−（４−クロロフェニル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン
【化１５】
2005518352.tif 000017
標題化合物を６−（４−クロロフェニルエチニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン（１０２ｍｇ，０．４０ミリモル）から、実施例１と同様の手法を用いて調製した。
１Ｈ  ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ；ＣＤ３ＯＤ，遊離塩基）δ：８．８３（１Ｈ，ｓ），８．３５（１Ｈ，ｓ），７．７３（１Ｈ，ｄ），７．６９（１Ｈ，ｄ），７．４５（２Ｈ，ｄ），７．３６（２Ｈ，ｄ），ＮＨ観察されず；［ＥＳＭＳ］：２９７［Ｍ＋Ｈ］＋
【００５９】
実施例６：６−［５−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン
【化１６】
2005518352.tif 000018
標題化合物を６−（４−フルオロフェニルエチニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン（１９５ｍｇ，０．８２１ミリモル）から、実施例１と同様の手法を用いて調製した。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３，遊離塩基）δ：１３．４５（ＮＨ，ｂｒ．ｓ），９．１２（１Ｈ，ｓ），８．４４（１Ｈ，ｓ），７．８３（１Ｈ，ｄ），７．７４（１Ｈ，ｄ），７．５７−７．５１（２Ｈ，ｍ）７．１７−７．１０（２Ｈ，ｍ）；ｍ／ｚ［ＥＳＭＳ］：２８１［Ｍ＋Ｈ］＋
【００６０】
実施例７：６−［５−（４−メチルフェニル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン
【化１７】
2005518352.tif 000019
標題化合物を６−（４−メチルフェニルエチニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン（１８０ｍｇ，０．７７３ミリモル）から、実施例１と同様の手法を用いて調製した。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ；ＤＭＳＯ，遊離塩基）δ：１５．３３（ＮＨ，ｂｒ．ｓ），８．９７（１Ｈ，ｓ），８．５４（１Ｈ，ｓ），７．９１（１Ｈ，ｄ），７．７０（１Ｈ，ｄ），７．４４（２Ｈ，ｄ）７．２７（２Ｈ，ｂｒ．ｓ），２．４５（３Ｈ，ｓ）；ｍ／ｚ［ＥＳＭＳ］：２７７［Ｍ＋Ｈ］＋
【００６１】
実施例８：６−［５−（３，４−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン
【化１８】
2005518352.tif 000020
標題化合物を６−（３，４−ジフルオロフェニルエチニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン（１３９ｍｇ，０．５４５ミリモル）から、実施例１と同様の手法を用いて調製した。
１Ｈ  ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３，遊離塩基）δ：９．０１（１Ｈ，ｓ），８．４３（１Ｈ，ｓ），７．８３（１Ｈ，ｄ），７．７０（１Ｈ，ｄ），７．４９−７．４０（１Ｈ，ｍ），７．１９−７．３０（２Ｈ，ｍ），ＮＨ観察されず；ｍ／ｚ［ＥＳＭＳ］：２９９［Ｍ＋Ｈ］＋．
【００６２】
実施例９：６−［５−（２−クロロフェニル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン
【化１９】
2005518352.tif 000021
標題化合物を６−（２−クロロフェニルエチニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン（１８９ｍｇ，０．７４６ミリモル）から、実施例１と同様の手法を用いて調製した。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ；ｄ６−ＤＭＳＯ，遊離塩基）δ：１５．６３（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），８．７４（１Ｈ，ｓ），８．５１（１Ｈ，ｓ），７．９１（１Ｈ，ｄ），７．６８−７．５２（５Ｈ，ｍ），ｍ／ｚ［ＥＳＭＳ］：２９７［Ｍ＋Ｈ］＋
【００６３】
実施例１０：６−［５−（３−クロロフェニル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン
【化２０】
2005518352.tif 000022
６−（３−クロロフェニルエチニル）−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン（０．３１１ｇ，１．１５ミリモル，１．０当量）の乾燥ＤＭＦ（１．５ｍｌ）中攪拌懸濁液に、（トリメチルシリル）アジド（０．３９７ｇ，３．４５ミリモル，３．０当量）を加えた。該混合物をアルゴンを用いて５分間脱気し、次いで、密閉チューブ中、１１０℃で全７２時間加熱した。さらに（トリメチルシリル）アジド（０．３９７ｇ，３．４５ミリモル，３．０当量）を２４時間後に加えた。混合物を冷却し、次いで、水とＥｔＯＡｃの間に分配した。水層をさらにＥｔＯＡｃで抽出し、合わせた有機相を水、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。濃縮により固体を得、それを、５０％ＥｔＯＡｃ−石油−ＥｔＯＡｃを用いて溶出するシリカ上のフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。生成物を黄色固体として得た（０．０６３ｇ，１７％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）（ＮＭＲ室温にて非常に幅広い）δ：１０．８０（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），７．５５−７．３５（４Ｈ，ｍ），７．２０−６．９０（３Ｈ，ｍ），４．６３（２Ｈ，ｓ），トリアゾールＮＨ観察されず；ｍ／ｚ［ＥＳＭＳ］：３２７．２［Ｍ＋Ｈ］＋
【００６４】
実施例１１：５−［５−（３−クロロフェニル−２Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−４−イル］−ベンゾ［１，２，５］チアジアゾール
【化２１】
2005518352.tif 000023
５−（３−クロロフェニルエチニル）−ベンゾ［１，２，５］チアジアゾールから、実施例１０と同様の手法を用いて調製した。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：８．２２（１Ｈ，ｓ），８．０１（１Ｈ，ｄ），７．８０（１Ｈ，ｄ），７．３７（３Ｈ，ｍ），７．１７（１Ｈ，ｔ），ＮＨ観察されなかった
【００６５】
実施例１２：５−［５−（３−フルオロフェニル−２Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−４−イル］−ベンゾ［１，２，５］チアジアゾール
【化２２】
2005518352.tif 000024
５−（３−フルオロフェニルエチニル）−ベンゾ［１，２，５］チアジアゾールから、実施例１０と同様の手法を用いて調製した。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：８．２４（１Ｈ，ｓ），８．０４（１Ｈ，ｄ），７．８４（１Ｈ，ｄ），７．３５（３Ｈ，ｍ），７．１５（１Ｈ，ｔ），ＮＨ観察されず
【００６６】
実施例１３：５−［５−（３−ブロモフェニル−２Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−４−イル］−ベンゾ［１，２，５］チアジアゾール
【化２３】
2005518352.tif 000025
５−（３−ブロモフェニルエチニル）−ベンゾ［１，２，５］チアジアゾールから、実施例１０と同様の手法を用いて調製した。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：８．２４（１Ｈ，ｓ），８．０２（１Ｈ，ｄ），７．８０（１Ｈ，ｓ），７．５６（１Ｈ，ｄ），７．４５（１Ｈ，ｄ），７．２６（１Ｈ，ｔ），ＮＨ観察されず；ｍ／ｚ［ＡＰＣＩＭＳ］：３５８／３６０［Ｍ＋Ｈ＋］
【００６７】
実施例１４：４−（３−クロロフェニル）−５−（４−メトキシフェニル）−２Ｈ−［１，２，３］トリアゾール
【化２４】
2005518352.tif 000026
３−（４−メトキシフェニルエチニル）クロロベンゼンから、実施例１０と同様の手法を用いて調製した。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：７．６１（１Ｈ，ｍ），７．４６（３Ｈ，ｍ），７．３０（２Ｈ，ｍ），６．９３（２Ｈ，ｍ），３．８４（３Ｈ，ｓ），ＮＨ観察されず；ｍ／ｚ［ＡＰＣＩＭＳ］：２８６．２［Ｍ＋Ｈ＋］
【００６８】
実施例１５：４−（３−フルオロフェニル）−５−（４−メトキシフェニル）−２Ｈ−［１，２，３］トリアゾール
【化２５】
2005518352.tif 000027
３−（４−メトキシフェニルエチニル）フルオロベンゼンから、実施例１０と同様の手法を用いて調製した。
１Ｈ  ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：７．４７（２Ｈ，ｄ），７．３５（３Ｈ，ｍ），６．９５（１Ｈ，ｍ），６．９２（２Ｈ，ｄ），３．８５（３Ｈ，ｓ），ＮＨ観察されなかった；ｍ／ｚ［ＡＰＣＩＭＳ］：２７０．２［Ｍ＋Ｈ＋］
【００６９】
実施例１６：４−（３−クロロフェニル）−５−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−２Ｈ−［１，２，３］トリアゾール
【化２６】
2005518352.tif 000028
３−（３−フルオロ−４−メトキシフェニルエチニル）フルオロベンゼンから、実施例１０と同様の手法を用いて調製した。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：７．６０（１Ｈ，ｓ），７．３７（５Ｈ，ｍ），６．９７（１Ｈ，ｔ），３．９２（３Ｈ，ｓ），ＮＨ観察されず；ｍ／ｚ［ＡＰＣＩＭＳ］：３０４．１［Ｍ＋Ｈ＋］
【００７０】
実施例１７：４−（３−フルオロフェニル）−５−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−２Ｈ−［１，２，３］トリアゾール
【化２７】
2005518352.tif 000029
３−（３−フルオロ−４−メトキシフェニルエチニル）−フルオロベンゼンから、実施例１０と同様の手法を用いて調製した。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：７．３３（５Ｈ，ｍ），７．０９（１Ｈ，ｍ），６．９７（１Ｈ，ｔ），３．９３（３Ｈ，ｓ），ＮＨ観察されず；ｍ／ｚ［ＡＰＣＩＭＳ］：２８８．２［Ｍ＋Ｈ＋］
【００７１】
実施例１８：６−［５−（３−クロロフェニル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−１−メチル１Ｈ−ベンゾイミダゾール
【化２８】
2005518352.tif 000030
６−（３−クロロフェニルエチニル）−１−メチル−１Ｈ−ベンゾミダゾールから、実施例１０と同様の手法を用いて調製した。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＨＣｌ塩，４００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ）δ：９．４５（１Ｈ，ｓ），８．１３（１Ｈ，ｓ），７．８９（１Ｈ，ｄ），７．７６（１Ｈ，ｄ），７．５５（１Ｈ，ｓ），７．４４−７．３７（３Ｈ，ｍ），４．１２（３Ｈ，ｓ），ＮＨ観察されず；ｍ／ｚ［ＡＰＣＩＭＳ］：２６７［Ｍ＋Ｈ＋］
【００７２】
実施例１９：４−（３−クロロフェニル）−５−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）−２Ｈ−［１，２，３］トリアゾール
【化２９】
2005518352.tif 000031
３−（３−クロロ−４−メトキシフェニルエチニル）クロロベンゼンから、実施例１０と同様の手法を用いて調製した。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：７．６０（１Ｈ，ｄ），７．５０（１Ｈ，ｄ），７．３４（４Ｈ，ｍ），６．９３（１Ｈ，ｔ），３．９２（３Ｈ，ｓ），ＮＨ観察されず
【００７３】
実施例２０：４−（３−フルオロフェニル）−５−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）−２Ｈ−［１，２，３］トリアゾール
【化３０】
2005518352.tif 000032
３−（３−クロロ−４−メトキシフェニルエチニル）フルオロベンゼン（５００ｍｇ，１．９２ミリモル，１当量）から、実施例１０と同様の手法を用いて調製した。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：７．５７（１Ｈ，ｄ），７．４６（１Ｈ，ｄｄ），７．２５（３Ｈ，ｍ），７．１（１Ｈ，ｔ），６．９４（１Ｈ，ｄ），３．９３（３Ｈ，ｓ），ＮＨ観察されず
【００７４】
生物学的データ
本発明の化合物の生物学的活性は、下記のアッセイを用いて評価されうる。
【００７５】
ｓｍａｄ３のＡＬＫ５キナーゼリン酸化を評価する方法
ベーシック・フラッシュ−プレート（Basic Flash-Plates (NEN Life Sciences)）を、１００μｌの被覆バッファーあたり１５０ｎｇの融合タンパク質グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ−ｓｍａｄ３を含有する０．１Ｍ重炭酸ナトリウム（ｐＨ７．６）１００μｌをピペットで移すことによって被覆した。プレートに蓋をし、室温で１０−２４時間インキュベートした。次いで、プレートを２００μｌの被覆バッファー（０．１Ｍ重炭酸ナトリウム）で２回洗浄し、２−４時間風乾させた。
リン酸化反応のために、各ウェルに５０ｍＭ ＨＥＰＥＳバッファー（ｐＨ７．４）；５ｍＭ ＭｇＣｌ２；１ｍＭ ＣａＣｌ２；１ｍＭジチオトレイトール；１００μＭグアノシン３リン酸；０．５μＣｉ／ウェルのガンマ３３Ｐ−アデノシン３リン酸（NEN Life Sciences）および４００ｎｇのＡＬＫ５のキナーゼドメインのＮ末端でのグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼの融合タンパク質（ＧＳＴ−ＡＬＫ５）を含有する９０μｌを入れた。バックグラウンドカウントを、いずれのＧＳＴ−ＡＬＫ５も加えないことによって測定した。ＡＬＫ５の阻害剤は、種々の化合物の存在下での酵素活性を測定することによって評価した。プレートを３０℃で３時間インキュベートした。インキュベーション後、アッセイバッファーを吸引除去し、ウェルを２００μｌのリン酸緩衝化セーライン中における冷１０ｍＭピロリン酸ナトリウムで３回洗浄した。最終洗浄液を吸引し、ブロット状にプレート乾燥した。次いで、プレートをＰａｃｋａｒｄ ＴｏｐＣｏｕｎｔ上でカウントした。
【００７６】
蛍光異方性キナーゼ結合アッセイ
キナーゼ酵素、蛍光リガンドおよび種々の濃度の試験化合物を一緒に、試験化合物の不在下で蛍光リガンドが有意に（＞５０％）酵素結合し、十分な濃度（＞１０ｘ Ｋｉ）の強力な阻害剤の存在下で非結合蛍光リガンドの異方性がはっきりと結合値とは異なるような条件下で、熱力学平衡到達までインキュベートする。
キナーゼ酵素の濃度は好ましくは、＞１ｘＫｆである。必要な蛍光リガンドの濃度は、使用される機器ならびに蛍光および物理化学特性に依存するであろう。使用される濃度は、キナーゼ酵素の濃度より低くなければならず、好ましくは、キナーゼ酵素濃度の半分より小さい。典型的なプロトコールは下記の通りである。
全成分を、最終組成５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ，ｐＨ７．５、１ｍＭ ＣＨＡＰＳ、１ｍＭ ＤＴＴ、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、２．５％ＤＭＳＯのバッファー中に溶解する。
ＡＬＫ５酵素濃度：４ｎＭ
蛍光リガンド濃度：１ｎＭ
試験化合物濃度：０．１ｎＭ−１００μＭ
平衡に達するまで（５−３０分）、成分を、ＬＪＬ ＨＥ３８４ Ｂ型黒色マイクロタイタープレート中１０μｌ最終容量でインキュベートする。
蛍光異方性をＬＪＬ取得物において読む。
定義：
Ｋｉ＝阻害剤結合に関する解離定数
Ｋｆ＝蛍光リガンド結合に関する解離定数
【００７７】
蛍光リガンドは、５−［２−（４−アミノメチルフェニル）−５−ピリジン−４−イル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル］−２−クロロフェノールとローダミングリーンから由来する下記の化合物である：
【化３１】
2005518352.tif 000033
【００７８】
マトリックスマーカーの阻害：ノーザンブロットプロトコール
酵素アッセイにおける活性を確認するデータは下記のように得られた。
Ａ４９８腎臓上皮癌腫細胞系統をＡＴＣＣから入手し、１０％胎仔ウシ血清、ペニシリン（５単位／ｍｌ）およびストレプトマイシン（５ｎｇ／ｍｌ）を補足したＥＭＥＭ培地中で生育させた。Ａ４９８細胞を１００ｍｍ皿中でほぼコンフルエンス（confluence）になるまで培養し、２４時間血清欠乏にし、化合物で４時間予備処理し、次いで、ＴＧＦ−ベータ（R&D Systems, Inc., Minneapolis MN）を１０ｎｇ／ｍｌ添加した。細胞をＴＧＦ−ベータに２４時間暴露した。細胞性ＲＮＡを酸フェノール／クロロホルム抽出により抽出した（Chomczynski and Sacchi, 1987）。全ＲＮＡ１０μｇをアガロースゲル電気泳動によって分離し、ナイロン膜（GeneScreen, NEN Life Sciences, Boston MA）上に転移させた。膜を、フィブロネクチンｍＲＮＡに対して３２Ｐ−標識化ｃＤＮＡプローブ（Stratagene, La Jolla, CA）でプローブした。膜をホスホルイメージング（phosphorimaging）プレートに暴露し、バンドを可視化し、ＩｍａｇｅＱｕａｎｔソフトウェア（Molecular Dynamics, Sunnyvale, CA）で定量した。
【００７９】
マトリックスマーカーの阻害：ウェステンブロットプロトコール
酵素アッセイにおける活性を確認するデータは下記のように得られた。
細胞をフラスコ中でほぼコンフルエンスになるまで培養し、一晩飢餓にし、ＴＧＦ−βおよび化合物で処理した。処理後２４または４８時間目に、細胞を氷冷したリン酸緩衝化セーラインで洗浄し、次いで、５００μｌの２Ｘローディングバッファーをプレートに加え、細胞をこすり取り、微量遠心管に集めた。（２Ｘローディングバッファー：１００ｍＭ Ｔｒｉｓ−Ｃｌ、ｐＨ６．８、４％ドデシル硫酸ナトリウム、０．２％ブロモフェノールブルー、２０％グリセロール、５％ベータ−メルカプト−エタノール）。細胞を遠心管中で溶解し、ボルテックスした。試料を１０分間沸騰させた。２０μｌの試料を７．５％ポリアクリルアミドゲル（BioRad）上に負荷し、電気泳動した。
ゲル中でサイズ分画されたタンパク質をセミドライブロッティングによってニトロセルロース膜上に移した。リン酸緩衝化セーライン（ＰＢＳ）中における５％粉乳および０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０を用いて４℃にて、膜を一晩ブロックした。ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎで３回洗浄後、膜を１次抗体と一緒に室温で４時間インキュベートした。ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎで３回洗浄後、膜を２次抗体と一緒に室温で１時間インキュベートした。最後に、AmershamのＥＣＬ検出キットを用いて、シグナルを可視化した。
本発明の化合物は一般的に、０．０００１〜１０μＭの範囲のＩＣ５０値を有するＡＬＫ５受容体調節活性を示す。
【国際調査報告】
2005518352.tif 000036
2005518352.tif 000037
2005518352.tif 000038
2005518352.tif 000039