(57)【要約】エクスビボ拡大培養された幹細胞を組織内およびインビボで分化させる方法が提供される。また、エクスビボ拡大培養された幹細胞を使用する細胞の置換治療または組織の置換治療を必要とする障害に罹患している個体を治療する方法も提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
幹細胞を目的組織の細胞にインビボで分化させる方法であって、
（ａ）ドナー組織に由来する、エクスビボ拡大培養された幹細胞の集団を得ること、および
（ｂ）前記幹細胞を目的組織に投与して、目的組織を特徴づける１つ以上の細胞タイプへの幹細胞の分化を誘導するようにすること
を含む方法。
【請求項２】
前記ドナー組織は、目的組織の表現型特徴および機能的特徴と同一の表現型特徴および機能的特徴を有する請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記ドナー組織は、目的組織の表現型特徴および機能的特徴とは異なる表現型特徴および機能的特徴を有する請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記ドナー組織に由来する前記幹細胞は、胚性幹細胞ならびに新生児幹細胞および／または成体幹細胞からなる群から選択される請求項１記載の方法。
【請求項５】
前記胚性幹細胞は胚性幹細胞および胚生殖細胞からなる群から選択される請求項４記載の方法。
【請求項６】
前記新生児幹細胞および／または成体幹細胞は、造血幹細胞および非造血幹細胞からなる群から選択される請求項４記載の方法。
【請求項７】
前記造血幹細胞は、骨髄細胞、新生児臍帯血細胞および末梢血細胞からなる群から選択される請求項６記載の方法。
【請求項８】
前記ドナー組織に由来する前記造血幹細胞がＣＤ３４＋豊富化細胞である請求項７記載の方法。
【請求項９】
前記ドナー組織に由来する前記造血幹細胞がＡＣ１３３＋豊富化細胞である請求項７記載の方法。
【請求項１０】
前記エクスビボ拡大培養された幹細胞は、ＣＤ３８、ＣＤ３、ＣＤ６１、ＣＤ１９、ＣＤ３３、ＣＤ１４、ＣＤ１５および／またはＣＤ４の細胞表面抗原のダウンレギュレーションされた発現によって特徴づけられる請求項８記載の方法。
【請求項１１】
前記非造血幹細胞は、ニューロン幹細胞、ニューロン始原細胞、稀突起神経膠細胞始原細胞、間葉性幹細胞、肝細胞幹細胞、肝臓幹細胞、表皮幹細胞、心臓幹細胞からなる群から選択される請求項６記載の方法。
【請求項１２】
ドナー組織に由来する前記幹細胞が細胞系譜的に拘束された細胞と混合される請求項１記載の方法。
【請求項１３】
ドナー組織に由来する前記幹細胞が、前記目的組織を有する対象に関して同一遺伝子型、同種および／または異種であるドナーから得られる請求項１記載の方法。
【請求項１４】
前記目的組織が、内胚葉細胞、外胚葉細胞および／または中胚葉細胞を含む請求項１記載の方法。
【請求項１５】
内胚葉細胞を含む前記目的組織は、咽頭、食道、胃、腸、肝臓、膵臓、気管および肺からなる群から選択される請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
外胚葉細胞を含む前記目的組織は、脳、副腎、網膜および表皮からなる群から選択される請求項１４記載の方法。
【請求項１７】
中胚葉細胞を含む前記目的組織は、結合組織、間葉、骨、軟骨、筋肉、繊維組織、真皮、心臓、骨髄、および泌尿生殖系の細管からなる群から選択される請求項１４記載の方法。
【請求項１８】
ドナー組織に由来する前記幹細胞が、内胚葉起源、外胚葉起源および／または中胚葉起源である請求項１記載の方法。
【請求項１９】
前記エクスビボ拡大培養された幹細胞の前記集団を得ることが、細胞増殖を誘導しかつ細胞分化を抑制するために好適な条件のもとで幹細胞を培養することによって行われる請求項１記載の方法。
【請求項２０】
前記細胞増殖を誘導しかつ前記細胞分化を抑制するために好適な前記条件が、前記幹細胞におけるＣＤ３８の発現および／または活性を低下させるために選択される請求項１９記載の方法。
【請求項２１】
前記条件が栄養分およびサイトカインをさらに含む請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
前記サイトカインが初期作用サイトカインである請求項２１記載の方法。
【請求項２３】
前記初期作用サイトカインは、幹細胞因子、ＦＬＴ３リガンド、インターロイキン−１、インターロイキン−２、インターロイキン−３、インターロイキン−６、インターロイキン−１０、インターロイキン−１２、腫瘍壊死因子−αおよびトロンボポエチンからなる群から選択される請求項２２記載の方法。
【請求項２４】
前記サイトカインが後期作用サイトカインである請求項２１記載の方法。
【請求項２５】
前記後期作用サイトカインは、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子、エリスロポエチン、ＦＧＦ、ＥＧＦ、ＮＧＦ、ＶＥＧＦ、ＬＩＦ、肝細胞増殖因子およびマクロファージコロニー刺激因子からなる群から選択される請求項２４記載の方法。
【請求項２６】
細胞に遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートを与えることが前記条件に含まれる請求項１９記載の方法。
【請求項２７】
前記遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートは、ポリアミンキレート化剤、エチレンジアミン、ジエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、トリエチレンジアミン、テトラエチレンペンタミン、アミノエチルエタノールアミン、アミノエチルピペラジン、ペンタエチレンヘキサミン、トリエチレンテトラミン塩酸塩、テトラエチレンペンタミン塩酸塩、ペンタエチレンヘキサミン塩酸塩、テトラエチルペンタミン、カプトプリル、ペニシラミン、Ｎ，Ｎ’−ビス（３−アミノプロピル）−１，３−プロパンジアミン、Ｎ，Ｎ，ビス（２−アミノエチル）−１，３−プロパンジアミン、１，７−ジオキサ−４，１０−ジアザシクロドデカン、１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン−５，７−ジオン、１，４，７−トリアザシクロノナン三塩酸塩、１−オキサ−４，７，１０−トリアザシクロドデカン、１，４，８，１２−テトラアザシクロペンタデカン、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカンからなる群から選択される請求項２６記載の方法。
【請求項２８】
前記幹細胞におけるＣＤ３８の前記発現および／または活性の低下が可能な選択された前記条件は、ＣＤ３８の発現をダウンレギュレーションする薬剤を含む請求項２０記載の方法。
【請求項２９】
ＣＤ３８の発現をダウンレギュレーションする前記薬剤が遷移金属キレーターである請求項２８記載の方法。
【請求項３０】
前記遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートは、ポリアミンキレート化剤、エチレンジアミン、ジエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、トリエチレンジアミン、テトラエチレンペンタミン、アミノエチルエタノールアミン、アミノエチルピペラジン、ペンタエチレンヘキサミン、トリエチレンテトラミン塩酸塩、テトラエチレンペンタミン塩酸塩、ペンタエチレンヘキサミン塩酸塩、テトラエチルペンタミン、カプトプリル、ペニシラミン、Ｎ，Ｎ’−ビス（３−アミノプロピル）−１，３−プロパンジアミン、Ｎ，Ｎ，ビス（２−アミノエチル）−１，３−プロパンジアミン、１，７−ジオキサ−４，１０−ジアザシクロドデカン、１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン−５，７−ジオン、１，４，７−トリアザシクロノナン三塩酸塩、１−オキサ−４，７，１０−トリアザシクロドデカン、１，４，８，１２−テトラアザシクロペンタデカン、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカンからなる群から選択される請求項２９記載の方法。
【請求項３１】
ＣＤ３８の発現をダウンレギュレーションする前記薬剤は、レチノイン酸受容体アンタゴニスト、レチノイドＸ受容体アンタゴニストおよびビタミンＤ受容体アンタゴニストからなる群から選択される請求項２８記載の方法。
【請求項３２】
前記レチノイン酸受容体アンタゴニストは、ＡＧＮ１９４３１０；ＡＧＮ１９３１０９；３−（４−メトキシ−フェニルスルファニル）−３−メチル酪酸；６−メトキシ−２，２−ジメチルチオクロマン−４−オン、２，２−ジメチル−４−オキソ−チオクロマン−６−イルトリフルオロメタンスルホネート；４−（（２，２−ジメチル−４−オキソ−チオクロマン−６−イル）エチニル）安息香酸エチル；４−（（２，２−ジメチル  １−４−トリフルオロメタンスルホニルオキシ−２（Ｈ）−チオクロメン−６−イル）エチニル）安息香酸エチル（４１）；チオクロメン−６−イル］エチニル］ベンゾエート（イル）；（ｐ−［（Ｅ）−２−［３’４’−ジヒドロ−４，４’−ジメチル−７’−（ヘプチルオキシ）−２’Ｈ−１−ベンゾチオピラン−６’イル］プロペニル］安息香酸１’１’−ジオキシド；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ブトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−プロポキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ペントキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ヘキソキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ヘプトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−オクトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−［３−ｔ−ブチル−５−（１−フェニルビニル）−フェニル］−３−メチル）−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４｛［４，５−３Ｈ２］−ｎ−ペントキシ｝フェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸エチルエステル：（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸；（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブチルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；４−（５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレンカルボキサミド）安息香酸；（２Ｅ，４Ｅ）−３−メチル−５−［（１Ｒ，２Ｓ）−２−（５，５，８，８−テトラメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−ナフタレン−２−イル）シクロ���ロピル］ペンタ−２，４−ジエン酸；ｐ−［（Ｅ）−２−［３’，４’−ジヒドロ−４’，４’−ジメチル−７’−（ヘプチルオキシ）−２’Ｈ−１−ベンゾチオピラン−６’−イル］プロペニル］安息香酸；１’，１’−ジオキシド，４−（７，７，１０，１０−テトラメチル−１−ピリジン−３−イルメチル−４，５，７，８，９，１０−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ナフト［２，３−ｇ］インドール−３−イル）安息香酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−メトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ヘキシルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−オクチルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；および（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３−ｎ−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、および４−（５Ｈ−２，３（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−ｎ−プロピルジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、４−（５Ｈ−２，３−（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−メチル−８−ニトロジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、４−｛［４−（４−エチルフェニル）２，２−ジメチル−（２Ｈ）−チオクロメン−６−イル］エチニル｝安息香酸、４−［４−２メチル−１，２−ジカルバ−クロソ（ｃｌｏｓｏ）−ドデカボラン−１−イル−フェニルカルバモイル］安息香酸、４−［４，５，７，８，９，１０−ヘキサヒドロ−７，７，１０，１０−テトラメチル−１−（３−ピリジルメチル）アントラ［１，２−ｂ］ピロール−３−イル］安息香酸、（３−ピリジルメチル）−）５−チアアントラ［２，１−ｂ］ピロール−３−イル）安息香酸、および（３−ピリジルメチル）アントラ［２ｍ１−ｄ］ピラゾール−３−イル）安息香酸からなる群から選択される請求項３１記載の方法。
【請求項３３】
前記レチノイドＸ受容体アンタゴニストは、ＬＧＮ１００５７２、ＬＧＮ１００５７４、１−（３−ヒドロキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）エタノン、１−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）エタノン、３−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）ブタ−２−エンニトリル、３−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）ブタ−２−エナール、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−３［−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレン−２−イル］−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、４−［３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル］カルボニル］安息香酸、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］安息香酸、４−［１（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］安息香酸、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ベンゼンテトラゾール、２−［１−（５，５，８，８−テトラメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エチル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸エチル、５−［１−３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル］エテニル］ピリジン−２−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸メチル、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］−Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）ベンズアミド、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸ブチルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸プロピルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸シアノイミン、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸アリルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸４−（３−メチルブタ−２−エン酸）オキシム、および４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸１−アミノエチルオキシム、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３−ｎ−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、４−（５Ｈ−２，３（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−ｎ−プロピルジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、および４−（５Ｈ−２，３−（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５メチル−８−ニトロジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸からなる群から選択される請求項３１記載の方法。
【請求項３４】
前記ビタミンＤ受容体アンタゴニストは、１α，２５−（ＯＨ）−Ｄ３−２６，２３−ラクトン；１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ（３）；その２５−カルボン酸エステルＺＫ１５９２２２；（２３Ｓ）−２５−デヒドロ−１α−ＯＨ−Ｄ（３）；（２３Ｒ）−２５−デヒドロ−１α−ＯＨ−Ｄ（３）；１β，２５（ＯＨ）２Ｄ３；１β，２５（ＯＨ）２−３−ｅｐｉ−Ｄ３；（２３Ｓ）２５−デヒドロ−１α（ＯＨ）Ｄ３−２６，２３−ラクトン；（２３Ｒ）２５−デヒドロ−１α（ＯＨ）Ｄ３−２６，２３−ラクトン、および（５Ｚ，７Ｅ，２２Ｅ−（１Ｓ，７Ｅ，２２Ｅ−（１Ｓ，３Ｒ，２４Ｒ）−１，３，２４−トリヒドロキシ−２６，２７−シクロ−９，１０−セココレスタ−５，７，１０（１９），２２−テトラエン−２５−カルボン酸）ブチルからなる群から選択される請求項３１記載の方法。
【請求項３５】
ＣＤ３８の発現をダウンレギュレーションする前記薬剤が、レチノイン酸、レチノイドおよび／またはビタミンＤに応答する前記幹細胞の能力を低下させるためのアンタゴニストである請求項２８記載の方法。
【請求項３６】
ＣＤ３８の発現をダウンレギュレーションする前記薬剤がポリヌクレオチドである請求項２８記載の方法。
【請求項３７】
前記ポリヌクレオチドが、抗ＣＤ３８細胞内抗体、抗レチノイン酸受容体細胞内抗体、抗レチノイドＸ受容体細胞内抗体または抗ビタミンＤ受容体細胞内抗体をコードする請求項３６記載の方法。
【請求項３８】
前記ポリヌクレオチドが、抗ＣＤ３８抗体、抗レチノイン酸受容体抗体、抗レチノイドＸ受容体抗体または抗ビタミンＤ受容体抗体をコードする請求項３６記載の方法。
【請求項３９】
前記ポリヌクレオチドが、ＣＤ３８、レチノイン酸受容体、レチノイドＸ受容体またはビタミンＤ受容体の細胞内のｍＲＮＡ分解または遺伝子分解を生じさせる小さい干渉性ポリヌクレオチド分子である請求項３６記載の方法。
【請求項４０】
前記小さい干渉性ポリヌクレオチド分子は、ＲＮＡｉ分子、アンチセンス分子、リボザイム分子およびＤＮＡザイム分子からなる群から選択される請求項３９記載の方法。
【請求項４１】
ＣＤ３８の発現をダウンレギュレーションする前記薬剤はＰＩ３−キナーゼの活性阻害剤または発現阻害剤である請求項２８記載の方法。
【請求項４２】
前記ＰＩ３−キナーゼの発現阻害剤がポリヌクレオチドである請求項４１記載の方法。
【請求項４３】
前記ポリヌクレオチドがＰＩ３−キナーゼ細胞内抗体をコードする請求項４２記載の方法。
【請求項４４】
前記ポリヌクレオチドがＰＩ３−キナーゼ抗体をコードする請求項４２記載の方法。
【請求項４５】
前記ポリヌクレオチドが、ＰＩ３−キナーゼの細胞内のｍＲＮＡ分解または遺伝子分解を生じさせる小さい干渉性ポリヌクレオチド分子である請求項４２記載の方法。
【請求項４６】
前記小さい干渉性ポリヌクレオチド分子は、ＲＮＡｉ分子、アンチセンス分子、リボザイム分子およびＤＮＡザイム分子からなる群から選択される請求項４５記載の方法。
【請求項４７】
前記ポリヌクレオチドが優性ネガティブなＰＩ３−キナーゼ構築物を含有するＤＮＡベクターである請求項４２記載の方法。
【請求項４８】
前記ＰＩ３−キナーゼの活性阻害剤は、ウォルトマンニンおよびＬＹ２９４００２からなる群から選択される請求項４１記載の方法。
【請求項４９】
前記幹細胞におけるＣＤ３８の前記発現および／または活性を低下させることができる選択された前記条件には、ＣＤ３８の活性を阻害する前記薬剤が含まれる請求項２０記載の方法。
【請求項５０】
ＣＤ３８の活性を阻害する前記薬剤が、ニコチンアミド、ニコチンアミドアナログ、ニコチンアミドもしくはニコチンアミドアナログの誘導体、またはニコチンアミドもしくはニコチンアミドアナログの代謝物である請求項４９記載の方法。
【請求項５１】
前記ニコチンアミドアナログは、ベンズアミド、ニコチンチオアミド、ニコチン酸およびα−アミノ−３−インドールプロピオン酸からなる群から選択される請求項５０記載の方法。
【請求項５２】
前記細胞増殖を誘導しかつ前記細胞分化を抑制するために好適な前記条件が、レチノイン酸に応答する前記幹細胞の能力を低下させるために選択される請求項１９記載の方法。
【請求項５３】
前記レチノイン酸に応答する前記幹細胞の前記能力を低下させることが可逆的な様式で行われる請求項５２記載の方法。
【請求項５４】
前記条件が細胞に栄養分およびサイトカインを与えることをさらに含む請求項５２記載の方法。
【請求項５５】
前記サイトカインが初期作用サイトカインである請求項５４記載の方法。
【請求項５６】
前記初期作用サイトカインは、幹細胞因子、ＦＬＴ３リガンド、インターロイキン−１、インターロイキン−２、インターロイキン−３、インターロイキン−６、インターロイキン−１０、インターロイキン−１２、腫瘍壊死因子−αおよびトロンボポエチンからなる群から選択される請求項５５記載の方法。
【請求項５７】
前記サイトカインが後期作用サイトカインである請求項５４記載の方法。
【請求項５８】
前記後期作用サイトカインは、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子、エリスロポエチン、ＦＧＦ、ＥＧＦ、ＮＧＦ、ＶＥＧＦ、ＬＩＦ、肝細胞増殖因子およびマクロファージコロニー刺激因子からなる群から選択される請求項５７記載の方法。
【請求項５９】
細胞に遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートを与えることが前記条件にさらに含まれる請求項５２記載の方法。
【請求項６０】
前記遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートは、ポリアミンキレート化剤、エチレンジアミン、ジエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、トリエチレンジアミン、テトラエチレンペンタミン、アミノエチルエタノールアミン、アミノエチルピペラジン、ペンタエチレンヘキサミン、トリエチレンテトラミン塩酸塩、テトラエチレンペンタミン塩酸塩、ペンタエチレンヘキサミン塩酸塩、テトラエチルペンタミン、カプトプリル、ペニシラミン、Ｎ，Ｎ’−ビス（３−アミノプロピル）−１，３−プロパンジアミン、Ｎ，Ｎ，ビス（２−アミノエチル）−１，３−プロパンジアミン、１，７−ジオキサ−４，１０−ジアザシクロドデカン、１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン−５，７−ジオン、１，４，７−トリアザシクロノナン三塩酸塩、１−オキサ−４，７，１０−トリアザシクロドデカン、１，４，８，１２−テトラアザシクロペンタデカン、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカンからなる群から選択される請求項５９記載の方法。
【請求項６１】
レチノイン酸に応答する前記幹細胞の前記能力の低下が可能な選択された前記条件は、１つ以上のレチノイン酸受容体アンタゴニスト、１つ以上のレチノイドＸ受容体アンタゴニストおよび／または１つ以上のビタミンＤ受容体アンタゴニストの有効量の存在を含む請求項５２記載の方法。
【請求項６２】
１つ以上のレチノイン酸受容体アンタゴニスト、１つ以上のレチノイドＸ受容体アンタゴニストおよび／または１つ以上のビタミンＤ受容体アンタゴニストの前記有効量の前記存在は、前記幹細胞の全エクスビボ培養期間の０．１％〜５０％の期間に行われる請求項６１記載の方法。
【請求項６３】
前記１つ以上のレチノイン酸受容体アンタゴニストは、ＡＧＮ１９４３１０；ＡＧＮ１９３１０９；３−（４−メトキシ−フェニルスルファニル）−３−メチル酪酸；６−メトキシ−２，２−ジメチルチオクロマン−４−オン、２，２−ジメチル−４−オキソ−チオクロマン−６−イルトリフルオロメタンスルホネート；４−（（２，２−ジメチル−４−オキソ−チオクロマン−６−イル）エチニル）安息香酸エチル；４−（（２，２−ジメチル  １−４−トリフルオロメタンスルホニルオキシ−２（Ｈ）−チオクロメン−６−イル）エチニル）安息香酸エチル（４１）；チオクロメン−６−イル］エチニル］ベンゾエート（イル）；（ｐ−［（Ｅ）−２−［３’４’−ジヒドロ−４，４’−ジメチル−７’−（ヘプチルオキシ）−２’Ｈ−１−ベンゾチオピラン−６’イル］プロペニル］安息香酸１’１’−ジオキシド；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ブトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−プロポキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ペントキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ヘキソキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ヘプトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−オクトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−［３−ｔ−ブチル−５−（１−フェニルビニル）−フェニル］−３−メチル）−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４｛［４，５−３Ｈ２］−ｎ−ペントキシ｝フェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸エチルエステル：（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸；（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブチルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；４−（５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレンカルボキサミド）安息香酸；（２Ｅ，４Ｅ）−３−メチル−５−［（１Ｒ，２Ｓ）−２−（５，５，８，８−テトラメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−ナフタレン−２−イ���）シクロプロピル］ペンタ−２，４−ジエン酸；ｐ−［（Ｅ）−２−［３’，４’−ジヒドロ−４’，４’−ジメチル−７’−（ヘプチルオキシ）−２’Ｈ−１−ベンゾチオピラン−６’−イル］プロペニル］安息香酸；１’，１’−ジオキシド，４−（７，７，１０，１０−テトラメチル−１−ピリジン−３−イルメチル−４，５，７，８，９，１０−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ナフト［２，３−ｇ］インドール−３−イル）安息香酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−メトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ヘキシルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−オクチルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；および（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３−ｎ−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、および４−（５Ｈ−２，３（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−ｎ−プロピルジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、４−（５Ｈ−２，３−（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−メチル−８−ニトロジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、４−｛［４−（４−エチルフェニル）２，２−ジメチル−（２Ｈ）−チオクロメン−６−イル］エチニル｝安息香酸、４−［４−２メチル−１，２−ジカルバ−クロソ（ｃｌｏｓｏ）−ドデカボラン−１−イル−フェニルカルバモイル］安息香酸、４−［４，５，７，８，９，１０−ヘキサヒドロ−７，７，１０，１０−テトラメチル−１−（３−ピリジルメチル）アントラ［１，２−ｂ］ピロール−３−イル］安息香酸、（３−ピリジルメチル）−）５−チアアントラ［２，１−ｂ］ピロール−３−イル）安息香酸、および（３−ピリジルメチル）アントラ［２ｍ１−ｄ］ピラゾール−３−イル）安息香酸からなる群から選択される請求項６１記載の方法。
【請求項６４】
前記１つ以上のレチノイドＸ受容体アンタゴニストは、ＬＧＮ１００５７２、ＬＧＮ１００５７４、１−（３−ヒドロキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）エタノン、１−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）エタノン、３−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）ブタ−２−エンニトリル、３−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）ブタ−２−エナール、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−３［−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレン−２−イル］−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、４−［３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル］カルボニル］安息香酸、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］安息香酸、４−［１（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］安息香酸、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ベンゼンテトラゾール、２−［１−（５，５，８，８−テトラメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エチル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸エチル、５−［１−３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル］エテニル］ピリジン−２−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸メチル、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］−Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）ベンズアミド、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸ブチルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸プロピルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸シアノイミン、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸アリルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸４−（３−メチルブタ−２−エン酸）オキシム、および４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸１−アミノエチルオキシム、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３−ｎ−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、４−（５Ｈ−２，３（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−ｎ−プロピルジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、および４−（５Ｈ−２，３−（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５メチル−８−ニトロジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸からなる群から選択される請求項６１記載の方法。
【請求項６５】
前記１つ以上のビタミンＤ受容体アンタゴニストは、１α，２５−（ＯＨ）−Ｄ３−２６，２３−ラクトン；１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ（３）；その２５−カルボン酸エステルＺＫ１５９２２２；（２３Ｓ）−２５−デヒドロ−１α−ＯＨ−Ｄ（３）；（２３Ｒ）−２５−デヒドロ−１α−ＯＨ−Ｄ（３）；１β，２５（ＯＨ）２Ｄ３；１β，２５（ＯＨ）２−３−ｅｐｉ−Ｄ３；（２３Ｓ）２５−デヒドロ−１α（ＯＨ）Ｄ３−２６，２３−ラクトン；（２３Ｒ）２５−デヒドロ−１α（ＯＨ）Ｄ３−２６，２３−ラクトン、および（５Ｚ，７Ｅ，２２Ｅ−（１Ｓ，７Ｅ，２２Ｅ−（１Ｓ，３Ｒ，２４Ｒ）−１，３，２４−トリヒドロキシ−２６，２７−シクロ−９，１０−セココレスタ−５，７，１０（１９），２２−テトラエン−２５−カルボン酸）ブチルからなる群から選択される請求項６１記載の方法。
【請求項６６】
レチノイン酸に応答する前記幹細胞の前記能力の低下が可能な選択された前記条件は、レチノイン酸受容体、レチノイドＸ受容体および／またはビタミンＤ受容体をダウンレギュレーションするポリヌクレオチドを含む請求項５２記載の方法。
【請求項６７】
前記ポリヌクレオチドが、抗レチノイン酸受容体細胞内抗体、抗レチノイドＸ受容体細胞内抗体および／または抗ビタミンＤ受容体細胞内抗体をコードする請求項６６記載の方法。
【請求項６８】
前記ポリヌクレオチドが、抗レチノイン酸受容体抗体、抗レチノイドＸ受容体抗体および／または抗ビタミンＤ受容体抗体をコードする請求項６６記載の方法。
【請求項６９】
前記ポリヌクレオチドが、レチノイン酸受容体、レチノイドＸ受容体またはビタミンＤ受容体の細胞内のｍＲＮＡ分解または遺伝子分解を生じさせる小さい干渉性ポリヌクレオチド分子である請求項６６記載の方法。
【請求項７０】
前記小さい干渉性ポリヌクレオチド分子は、ＲＮＡｉ分子、アンチセンス分子、リボザイム分子およびＤＮＡザイム分子からなる群から選択される請求項６９記載の方法。
【請求項７１】
レチノイン酸に応答する前記幹細胞の前記能力の低下が可能な選択された前記条件は、１つ以上のＰＩ３−キナーゼの発現阻害剤または活性阻害剤の有効量を含む請求項５２記載の方法。
【請求項７２】
前記１つ以上のＰＩ３−キナーゼの活性阻害剤は、ウォルトマンニンおよびＬＹ２９４００２からなる群から選択される請求項７１記載の方法。
【請求項７３】
前記１つ以上のＰＩ３−キナーゼの発現阻害剤がポリヌクレオチドである請求項７１記載の方法。
【請求項７４】
前記ポリヌクレオチドがＰＩ３−キナーゼ細胞内抗体をコードする請求項７３記載の方法。
【請求項７５】
前記ポリヌクレオチドがＰＩ３−キナーゼ抗体をコードする請求項７３記載の方法。
【請求項７６】
前記ポリヌクレオチドが優性ネガティブなＰＩ３−キナーゼ構築物を含有するＤＮＡベクターである請求項７３記載の方法。
【請求項７７】
前記ポリヌクレオチドが、ＰＩ３−キナーゼの細胞内のｍＲＮＡ分解または遺伝子分解を生じさせる小さい干渉性ポリヌクレオチド分子である請求項７３記載の方法。
【請求項７８】
前記小さい干渉性ポリヌクレオチド分子は、ＲＮＡｉ分子、アンチセンス分子、リボザイム分子およびＤＮＡザイム分子からなる群から選択される請求項７７記載の方法。
【請求項７９】
前記細胞増殖を誘導しかつ前記細胞分化を抑制するために好適な前記条件が、ニコチンアミド、ニコチンアミドアナログ、ニコチンアミドもしくはニコチンアミドアナログの誘導体、またはニコチンアミドもしくはニコチンアミドアナログの代謝物の存在下における細胞の培養を含む請求項１９記載の方法。
【請求項８０】
前記条件が細胞に栄養分およびサイトカインを与えることをさらに含む請求項７９記載の方法。
【請求項８１】
前記サイトカインが初期作用サイトカインである請求項８０記載の方法。
【請求項８２】
前記初期作用サイトカインは、幹細胞因子、ＦＬＴ３リガンド、インターロイキン−１、インターロイキン−２、インターロイキン−３、インターロイキン−６、インターロイキン−１０、インターロイキン−１２、腫瘍壊死因子−αおよびトロンボポエチンからなる群から選択される請求項８１記載の方法。
【請求項８３】
前記サイトカインが後期作用サイトカインである請求項８０記載の方法。
【請求項８４】
前記後期作用サイトカインは、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子、エリスロポエチン、ＦＧＦ、ＥＧＦ、ＮＧＦ、ＶＥＧＦ、ＬＩＦ、肝細胞増殖因子およびマクロファージコロニー刺激因子からなる群から選択される請求項８３記載の方法。
【請求項８５】
細胞に遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートを与えることが前記条件にさらに含まれる請求項７９記載の方法。
【請求項８６】
前記遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートは、ポリアミンキレート化剤、エチレンジアミン、ジエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、トリエチレンジアミン、テトラエチレンペンタミン、アミノエチルエタノールアミン、アミノエチルピペラジン、ペンタエチレンヘキサミン、トリエチレンテトラミン塩酸塩、テトラエチレンペンタミン塩酸塩、ペンタエチレンヘキサミン塩酸塩、テトラエチルペンタミン、カプトプリル、ペニシラミン、Ｎ，Ｎ’−ビス（３−アミノプロピル）−１，３−プロパンジアミン、Ｎ，Ｎ，ビス（２−アミノエチル）−１，３−プロパンジアミン、１，７−ジオキサ−４，１０−ジアザシクロドデカン、１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン−５，７−ジオン、１，４，７−トリアザシクロノナン三塩酸塩、１−オキサ−４，７，１０−トリアザシクロドデカン、１，４，８，１２−テトラアザシクロペンタデカン、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカンからなる群から選択される請求項８５記載の方法。
【請求項８７】
前記ニコチンアミドアナログは、ベンズアミド、ニコチンチオアミド、ニコチン酸およびα−アミノ−３−インドールプロピオン酸からなる群から選択される請求項７９記載の方法。
【請求項８８】
前記細胞増殖を誘導しかつ前記細胞分化を抑制するために好適な前記条件が、ＰＩ３−キナーゼの活性阻害剤または発現阻害剤を用いた細胞の培養を含む請求項１９記載の方法。
【請求項８９】
前記ＰＩ３−キナーゼの発現阻害剤がポリヌクレオチドである請求項８８記載の方法。
【請求項９０】
前記ポリヌクレオチドがＰＩ３−キナーゼ細胞内抗体をコードする請求項８９記載の方法。
【請求項９１】
前記ポリヌクレオチドがＰＩ３−キナーゼ抗体をコードする請求項８９記載の方法。
【請求項９２】
前記ポリヌクレオチドが、ＰＩ３−キナーゼの細胞内のｍＲＮＡ分解または遺伝子分解を生じさせる小さい干渉性ポリヌクレオチド分子である請求項８９記載の方法。
【請求項９３】
前記小さい干渉性ポリヌクレオチド分子は、ＲＮＡｉ分子、アンチセンス分子、リボザイム分子およびＤＮＡザイム分子からなる群から選択される請求項９２記載の方法。
【請求項９４】
前記ポリヌクレオチドが優性ネガティブなＰＩ３−キナーゼ構築物を含有するＤＮＡベクターである請求項８９記載の方法。
【請求項９５】
前記ＰＩ３−キナーゼの活性阻害剤は、ウォルトマンニンおよびＬＹ２９４００２からなる群から選択される請求項８８記載の方法。
【請求項９６】
前記条件が細胞に栄養分およびサイトカインを与えることをさらに含む請求項８８記載の方法。
【請求項９７】
前記サイトカインが初期作用サイトカインである請求項９６記載の方法。
【請求項９８】
前記初期作用サイトカインは、幹細胞因子、ＦＬＴ３リガンド、インターロイキン−１、インターロイキン−２、インターロイキン−３、インターロイキン−６、インターロイキン−１０、インターロイキン−１２、腫瘍壊死因子−αおよびトロンボポエチンからなる群から選択される請求項９７記載の方法。
【請求項９９】
前記サイトカインが後期作用サイトカインである請求項９６記載の方法。
【請求項１００】
前記後期作用サイトカインは、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子、エリスロポエチン、ＦＧＦ、ＥＧＦ、ＮＧＦ、ＶＥＧＦ、ＬＩＦ、肝細胞増殖因子およびマクロファージコロニー刺激因子からなる群から選択される請求項９９記載の方法。
【請求項１０１】
細胞に遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートを与えることが前記条件にさらに含まれる請求項８８記載の方法。
【請求項１０２】
前記遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートは、ポリアミンキレート化剤、エチレンジアミン、ジエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、トリエチレンジアミン、テトラエチレンペンタミン、アミノエチルエタノールアミン、アミノエチルピペラジン、ペンタエチレンヘキサミン、トリエチレンテトラミン塩酸塩、テトラエチレンペンタミン塩酸塩、ペンタエチレンヘキサミン塩酸塩、テトラエチルペンタミン、カプトプリル、ペニシラミン、Ｎ，Ｎ’−ビス（３−アミノプロピル）−１，３−プロパンジアミン、Ｎ，Ｎ，ビス（２−アミノエチル）−１，３−プロパンジアミン、１，７−ジオキサ−４，１０−ジアザシクロドデカン、１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン−５，７−ジオン、１，４，７−トリアザシクロノナン三塩酸塩、１−オキサ−４，７，１０−トリアザシクロドデカン、１，４，８，１２−テトラアザシクロペンタデカン、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカンからなる群から選択される請求項１０１記載の方法。
【請求項１０３】
前記細胞増殖を誘導しかつ前記細胞分化を抑制するために好適な前記条件が、レチノイドに応答する前記幹細胞の能力を低下させることができるように選択される請求項１９記載の方法。
【請求項１０４】
前記レチノイドに応答する前記幹細胞の前記能力を低下させることが可逆的な様式で行われる請求項１０３記載の方法。
【請求項１０５】
前記条件が細胞に栄養分およびサイトカインを与えることをさらに含む請求項１０３記載の方法。
【請求項１０６】
前記サイトカインが初期作用サイトカインである請求項１０５記載の方法。
【請求項１０７】
前記初期作用サイトカインは、幹細胞因子、ＦＬＴ３リガンド、インターロイキン−１、インターロイキン−２、インターロイキン−３、インターロイキン−６、インターロイキン−１０、インターロイキン−１２、腫瘍壊死因子−αおよびトロンボポエチンからなる群から選択される請求項１０６記載の方法。
【請求項１０８】
前記サイトカインが後期作用サイトカインである請求項１０５記載の方法。
【請求項１０９】
前記後期作用サイトカインは、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子、エリスロポエチン、ＦＧＦ、ＥＧＦ、ＮＧＦ、ＶＥＧＦ、ＬＩＦ、肝細胞増殖因子およびマクロファージコロニー刺激因子からなる群から選択される請求項１０８記載の方法。
【請求項１１０】
細胞に遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートを与えることが前記条件にさらに含まれる請求項１０３記載の方法。
【請求項１１１】
前記遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートは、ポリアミンキレート化剤、エチレンジアミン、ジエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、トリエチレンジアミン、テトラエチレンペンタミン、アミノエチルエタノールアミン、アミノエチルピペラジン、ペンタエチレンヘキサミン、トリエチレンテトラミン塩酸塩、テトラエチレンペンタミン塩酸塩、ペンタエチレンヘキサミン塩酸塩、テトラエチルペンタミン、カプトプリル、ペニシラミン、Ｎ，Ｎ’−ビス（３−アミノプロピル）−１，３−プロパンジアミン、Ｎ，Ｎ，ビス（２−アミノエチル）−１，３−プロパンジアミン、１，７−ジオキサ−４，１０−ジアザシクロドデカン、１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン−５，７−ジオン、１，４，７−トリアザシクロノナン三塩酸塩、１−オキサ−４，７，１０−トリアザシクロドデカン、１，４，８，１２−テトラアザシクロペンタデカン、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカンからなる群から選択される請求項１１０記載の方法。
【請求項１１２】
レチノイドに応答する前記幹細胞の前記能力の低下が可能な選択された前記条件は、１つ以上のレチノイン酸受容体アンタゴニスト、１つ以上のレチノイドＸ受容体アンタゴニストおよび／または１つ以上のビタミンＤ受容体アンタゴニストの有効量の存在を含む請求項１０３記載の方法。
【請求項１１３】
１つ以上のレチノイン酸受容体アンタゴニスト、１つ以上のレチノイドＸ受容体アンタゴニストおよび／または１つ以上のビタミンＤ受容体アンタゴニストの前記有効量の前記存在は、前記幹細胞の全エクスビボ培養期間の０．１％〜５０％の期間に行われる請求項１１２記載の方法。
【請求項１１４】
前記１つ以上のレチノイン酸受容体アンタゴニストは、ＡＧＮ１９４３１０；ＡＧＮ１９３１０９；３−（４−メトキシ−フェニルスルファニル）−３−メチル酪酸；６−メトキシ−２，２−ジメチルチオクロマン−４−オン、２，２−ジメチル−４−オキソ−チオクロマン−６−イルトリフルオロメタンスルホネート；４−（（２，２−ジメチル−４−オキソ−チオクロマン−６−イル）エチニル）安息香酸エチル；４−（（２，２−ジメチル  １−４−トリフルオロメタンスルホニルオキシ−２（Ｈ）−チオクロメン−６−イル）エチニル）安息香酸エチル（４１）；チオクロメン−６−イル］エチニル］ベンゾエート（イル）；（ｐ−［（Ｅ）−２−［３’４’−ジヒドロ−４，４’−ジメチル−７’−（ヘプチルオキシ）−２’Ｈ−１−ベンゾチオピラン−６’イル］プロペニル］安息香酸１’１’−ジオキシド；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ブトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−プロポキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ペントキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ヘキソキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ヘプトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−オクトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−［３−ｔ−ブチル−５−（１−フェニルビニル）−フェニル］−３−メチル）−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４｛［４，５−３Ｈ２］−ｎ−ペントキシ｝フェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸エチルエステル：（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸；（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブチルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；４−（５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレンカルボキサミド）安息香酸；（２Ｅ，４Ｅ）−３−メチル−５−［（１Ｒ，２Ｓ）−２−（５，５，８，８−テトラメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−ナフタレン−２−イ���）シクロプロピル］ペンタ−２，４−ジエン酸；ｐ−［（Ｅ）−２−［３’，４’−ジヒドロ−４’，４’−ジメチル−７’−（ヘプチルオキシ）−２’Ｈ−１−ベンゾチオピラン−６’−イル］プロペニル］安息香酸；１’，１’−ジオキシド，４−（７，７，１０，１０−テトラメチル−１−ピリジン−３−イルメチル−４，５，７，８，９，１０−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ナフト［２，３−ｇ］インドール−３−イル）安息香酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−メトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ヘキシルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−オクチルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；および（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３−ｎ−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、および４−（５Ｈ−２，３（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−ｎ−プロピルジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、４−（５Ｈ−２，３−（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−メチル−８−ニトロジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、４−｛［４−（４−エチルフェニル）２，２−ジメチル−（２Ｈ）−チオクロメン−６−イル］エチニル｝安息香酸、４−［４−２メチル−１，２−ジカルバ−クロソ（ｃｌｏｓｏ）−ドデカボラン−１−イル−フェニルカルバモイル］安息香酸、４−［４，５，７，８，９，１０−ヘキサヒドロ−７，７，１０，１０−テトラメチル−１−（３−ピリジルメチル）アントラ［１，２−ｂ］ピロール−３−イル］安息香酸、（３−ピリジルメチル）−）５−チアアントラ［２，１−ｂ］ピロール−３−イル）安息香酸、および（３−ピリジルメチル）アントラ［２ｍ１−ｄ］ピラゾール−３−イル）安息香酸からなる群から選択される請求項１１２記載の方法。
【請求項１１５】
前記１つ以上のレチノイドＸ受容体アンタゴニストは、ＬＧＮ１００５７２、ＬＧＮ１００５７４、１−（３−ヒドロキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）エタノン、１−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）エタノン、３−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）ブタ−２−エンニトリル、３−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）ブタ−２−エナール、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−３［−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレン−２−イル］−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、４−［３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル］カルボニル］安息香酸、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］安息香酸、４−［１（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］安息香酸、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ベンゼンテトラゾール、２−［１−（５，５，８，８−テトラメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エチル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸エチル、５−［１−３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル］エテニル］ピリジン−２−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸メチル、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］−Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）ベンズアミド、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸ブチルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸プロピルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸シアノイミン、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸アリルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸４−（３−メチルブタ−２−エン酸）オキシム、および４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸１−アミノエチルオキシム、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３−ｎ−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、４−（５Ｈ−２，３（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−ｎ−プロピルジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、および４−（５Ｈ−２，３−（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５メチル−８−ニトロジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸からなる群から選択される請求項１１２記載の方法。
【請求項１１６】
前記１つ以上のビタミンＤ受容体アンタゴニストは、１α，２５−（ＯＨ）−Ｄ３−２６，２３−ラクトン；１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ（３）；その２５−カルボン酸エステルＺＫ１５９２２２；（２３Ｓ）−２５−デヒドロ−１α−ＯＨ−Ｄ（３）；（２３Ｒ）−２５−デヒドロ−１α−ＯＨ−Ｄ（３）；１β，２５（ＯＨ）２Ｄ３；１β，２５（ＯＨ）２−３−ｅｐｉ−Ｄ３；（２３Ｓ）２５−デヒドロ−１α（ＯＨ）Ｄ３−２６，２３−ラクトン；（２３Ｒ）２５−デヒドロ−１α（ＯＨ）Ｄ３−２６，２３−ラクトン、および（５Ｚ，７Ｅ，２２Ｅ−（１Ｓ，７Ｅ，２２Ｅ−（１Ｓ，３Ｒ，２４Ｒ）−１，３，２４−トリヒドロキシ−２６，２７−シクロ−９，１０−セココレスタ−５，７，１０（１９），２２−テトラエン−２５−カルボン酸）ブチルからなる群から選択される請求項１１２記載の方法。
【請求項１１７】
レチノイドに応答する前記幹細胞の前記能力の低下が可能な選択された前記条件は、レチノイン酸受容体、レチノイドＸ受容体および／またはビタミンＤ受容体をダウンレギュレーションするポリヌクレオチドを含む請求項１０３記載の方法。
【請求項１１８】
前記ポリヌクレオチドが、抗レチノイン酸受容体細胞内抗体、抗レチノイドＸ受容体細胞内抗体および／または抗ビタミンＤ受容体細胞内抗体をコードする請求項１１７記載の方法。
【請求項１１９】
前記ポリヌクレオチドが、抗レチノイン酸受容体抗体、抗レチノイドＸ受容体抗体および／または抗ビタミンＤ受容体抗体をコードする請求項１１７記載の方法。
【請求項１２０】
前記ポリヌクレオチドが、レチノイン酸受容体、レチノイドＸ受容体またはビタミンＤ受容体の細胞内のｍＲＮＡ分解または遺伝子分解を生じさせる小さい干渉性ポリヌクレオチド分子である請求項１１７記載の方法。
【請求項１２１】
前記小さい干渉性ポリヌクレオチド分子は、ＲＮＡｉ分子、アンチセンス分子、リボザイム分子およびＤＮＡザイム分子からなる群から選択される請求項１２０記載の方法。
【請求項１２２】
レチノイドに応答する前記幹細胞の前記能力の低下が可能な選択された前記条件は、１つ以上のＰＩ３−キナーゼの発現阻害剤または活性阻害剤の有効量を含む請求項１０３記載の方法。
【請求項１２３】
前記１つ以上のＰＩ３−キナーゼの活性阻害剤は、ウォルトマンニンおよびＬＹ２９４００２からなる群から選択される請求項１２２記載の方法。
【請求項１２４】
前記１つ以上のＰＩ３−キナーゼの発現阻害剤がポリヌクレオチドである請求項１２２記載の方法。
【請求項１２５】
前記ポリヌクレオチドがＰＩ３−キナーゼ細胞内抗体をコードする請求項１２４記載の方法。
【請求項１２６】
前記ポリヌクレオチドがＰＩ３−キナーゼ抗体をコードする請求項１２４記載の方法。
【請求項１２７】
前記ポリヌクレオチドが優性ネガティブなＰＩ３−キナーゼ構築物を含有するＤＮＡベクターである請求項１２４記載の方法。
【請求項１２８】
前記ポリヌクレオチドが、ＰＩ３−キナーゼの細胞内のｍＲＮＡ分解または遺伝子分解を生じさせる小さい干渉性ポリヌクレオチド分子である請求項１２４記載の方法。
【請求項１２９】
前記小さい干渉性ポリヌクレオチド分子は、ＲＮＡｉ分子、アンチセンス分子、リボザイム分子およびＤＮＡザイム分子からなる群から選択される請求項１２８記載の方法。
【請求項１３０】
前記細胞増殖を誘導しかつ前記細胞分化を抑制するために好適な前記条件が、ビタミンＤに応答する前記幹細胞の能力を低下させることができるように選択される請求項１９記載の方法。
【請求項１３１】
前記ビタミンＤに応答する前記幹細胞の前記能力を低下させることが可逆的な様式で行われる請求項１３０記載の方法。
【請求項１３２】
前記条件が細胞に栄養分およびサイトカインを与えることをさらに含む請求項１３０記載の方法。
【請求項１３３】
前記サイトカインが初期作用サイトカインである請求項１３２記載の方法。
【請求項１３４】
前記初期作用サイトカインは、幹細胞因子、ＦＬＴ３リガンド、インターロイキン−１、インターロイキン−２、インターロイキン−３、インターロイキン−６、インターロイキン−１０、インターロイキン−１２、腫瘍壊死因子−αおよびトロンボポエチンからなる群から選択される請求項１３３記載の方法。
【請求項１３５】
前記サイトカインが後期作用サイトカインである請求項１３２記載の方法。
【請求項１３６】
前記後期作用サイトカインは、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子、エリスロポエチン、ＦＧＦ、ＥＧＦ、ＮＧＦ、ＶＥＧＦ、ＬＩＦ、肝細胞増殖因子およびマクロファージコロニー刺激因子からなる群から選択される請求項１３５記載の方法。
【請求項１３７】
細胞に遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートを与えることが前記条件にさらに含まれる請求項１３０記載の方法。
【請求項１３８】
前記遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートは、ポリアミンキレート化剤、エチレンジアミン、ジエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、トリエチレンジアミン、テトラエチレンペンタミン、アミノエチルエタノールアミン、アミノエチルピペラジン、ペンタエチレンヘキサミン、トリエチレンテトラミン塩酸塩、テトラエチレンペンタミン塩酸塩、ペンタエチレンヘキサミン塩酸塩、テトラエチルペンタミン、カプトプリル、ペニシラミン、Ｎ，Ｎ’−ビス（３−アミノプロピル）−１，３−プロパンジアミン、Ｎ，Ｎ，ビス（２−アミノエチル）−１，３−プロパンジアミン、１，７−ジオキサ−４，１０−ジアザシクロドデカン、１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン−５，７−ジオン、１，４，７−トリアザシクロノナン三塩酸塩、１−オキサ−４，７，１０−トリアザシクロドデカン、１，４，８，１２−テトラアザシクロペンタデカン、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカンからなる群から選択される請求項１３７記載の方法。
【請求項１３９】
ビタミンＤに応答する前記幹細胞の前記能力の低下が可能な選択された前記条件は、１つ以上のレチノイン酸受容体アンタゴニスト、１つ以上のレチノイドＸ受容体アンタゴニストおよび／または１つ以上のビタミンＤ受容体アンタゴニストの有効量の存在を含む請求項１３０記載の方法。
【請求項１４０】
１つ以上のレチノイン酸受容体アンタゴニスト、１つ以上のレチノイドＸ受容体アンタゴニストおよび／または１つ以上のビタミンＤ受容体アンタゴニストの前記有効量の前記存在は、前記幹細胞の全エクスビボ培養期間の０．１％〜５０％の期間に行われる請求項１３９記載の方法。
【請求項１４１】
前記レチノイン酸受容体アンタゴニストは、ＡＧＮ１９４３１０；ＡＧＮ１９３１０９；３−（４−メトキシ−フェニルスルファニル）−３−メチル酪酸；６−メトキシ−２，２−ジメチルチオクロマン−４−オン、２，２−ジメチル−４−オキソ−チオクロマン−６−イルトリフルオロメタンスルホネート；４−（（２，２−ジメチル−４−オキソ−チオクロマン−６−イル）エチニル）安息香酸エチル；４−（（２，２−ジメチル  １−４−トリフルオロメタンスルホニルオキシ−２（Ｈ）−チオクロメン−６−イル）エチニル）安息香酸エチル（４１）；チオクロメン−６−イル］エチニル］ベンゾエート（イル）；（ｐ−［（Ｅ）−２−［３’４’−ジヒドロ−４，４’−ジメチル−７’−（ヘプチルオキシ）−２’Ｈ−１−ベンゾチオピラン−６’イル］プロペニル］安息香酸１’１’−ジオキシド；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ブトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−プロポキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ペントキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ヘキソキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ヘプトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−オクトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−［３−ｔ−ブチル−５−（１−フェニルビニル）−フェニル］−３−メチル）−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４｛［４，５−３Ｈ２］−ｎ−ペントキシ｝フェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸エチルエステル：（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸；（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブチルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；４−（５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレンカルボキサミド）安息香酸；（２Ｅ，４Ｅ）−３−メチル−５−［（１Ｒ，２Ｓ）−２−（５，５，８，８−テトラメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−ナフタレン−２−イル）シクロ���ロピル］ペンタ−２，４−ジエン酸；ｐ−［（Ｅ）−２−［３’，４’−ジヒドロ−４’，４’−ジメチル−７’−（ヘプチルオキシ）−２’Ｈ−１−ベンゾチオピラン−６’−イル］プロペニル］安息香酸；１’，１’−ジオキシド，４−（７，７，１０，１０−テトラメチル−１−ピリジン−３−イルメチル−４，５，７，８，９，１０−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ナフト［２，３−ｇ］インドール−３−イル）安息香酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−メトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ヘキシルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−オクチルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；および（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３−ｎ−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、および４−（５Ｈ−２，３（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−ｎ−プロピルジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、４−（５Ｈ−２，３−（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−メチル−８−ニトロジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、４−｛［４−（４−エチルフェニル）２，２−ジメチル−（２Ｈ）−チオクロメン−６−イル］エチニル｝安息香酸、４−［４−２メチル−１，２−ジカルバ−クロソ（ｃｌｏｓｏ）−ドデカボラン−１−イル−フェニルカルバモイル］安息香酸、４−［４，５，７，８，９，１０−ヘキサヒドロ−７，７，１０，１０−テトラメチル−１−（３−ピリジルメチル）アントラ［１，２−ｂ］ピロール−３−イル］安息香酸、（３−ピリジルメチル）−）５−チアアントラ［２，１−ｂ］ピロール−３−イル）安息香酸、および（３−ピリジルメチル）アントラ［２ｍ１−ｄ］ピラゾール−３−イル）安息香酸からなる群から選択される請求項１３９記載の方法。
【請求項１４２】
前記レチノイドＸ受容体アンタゴニストは、ＬＧＮ１００５７２、ＬＧＮ１００５７４、１−（３−ヒドロキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）エタノン、１−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）エタノン、３−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）ブタ−２−エンニトリル、３−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）ブタ−２−エナール、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−３［−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレン−２−イル］−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、４−［３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル］カルボニル］安息香酸、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］安息香酸、４−［１（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］安息香酸、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ベンゼンテトラゾール、２−［１−（５，５，８，８−テトラメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エチル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸エチル、５−［１−３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル］エテニル］ピリジン−２−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸メチル、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］−Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）ベンズアミド、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸ブチルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸プロピルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸シアノイミン、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸アリルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸４−（３−メチルブタ−２−エン酸）オキシム、および４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸１−アミノエチルオキシム、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３−ｎ−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、４−（５Ｈ−２，３（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−ｎ−プロピルジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、および４−（５Ｈ−２，３−（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５メチル−８−ニトロジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸からなる群から選択される請求項１３９記載の方法。
【請求項１４３】
前記ビタミンＤ受容体アンタゴニストは、１α，２５−（ＯＨ）−Ｄ３−２６，２３−ラクトン；１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ（３）；その２５−カルボン酸エステルＺＫ１５９２２２；（２３Ｓ）−２５−デヒドロ−１α−ＯＨ−Ｄ（３）；（２３Ｒ）−２５−デヒドロ−１α−ＯＨ−Ｄ（３）；１β，２５（ＯＨ）２Ｄ３；１β，２５（ＯＨ）２−３−ｅｐｉ−Ｄ３；（２３Ｓ）２５−デヒドロ−１α（ＯＨ）Ｄ３−２６，２３−ラクトン；（２３Ｒ）２５−デヒドロ−１α（ＯＨ）Ｄ３−２６，２３−ラクトン、および（５Ｚ，７Ｅ，２２Ｅ−（１Ｓ，７Ｅ，２２Ｅ−（１Ｓ，３Ｒ，２４Ｒ）−１，３，２４−トリヒドロキシ−２６，２７−シクロ−９，１０−セココレスタ−５，７，１０（１９），２２−テトラエン−２５−カルボン酸）ブチルからなる群から選択される請求項１３９記載の方法。
【請求項１４４】
ビタミンＤに応答する前記幹細胞の前記能力の低下が可能な選択された前記条件は、レチノイン酸受容体、レチノイドＸ受容体および／またはビタミンＤ受容体をダウンレギュレーションするポリヌクレオチドを含む請求項１３０記載の方法。
【請求項１４５】
前記ポリヌクレオチドが、抗レチノイン酸受容体細胞内抗体、抗レチノイドＸ受容体細胞内抗体および／または抗ビタミンＤ受容体細胞内抗体をコードする請求項１４４記載の方法。
【請求項１４６】
前記ポリヌクレオチドが、抗レチノイン酸受容体抗体、抗レチノイドＸ受容体抗体および／または抗ビタミンＤ受容体抗体をコードする請求項１４４記載の方法。
【請求項１４７】
前記ポリヌクレオチドが、レチノイン酸受容体、レチノイドＸ受容体またはビタミンＤ受容体の細胞内のｍＲＮＡ分解または遺伝子分解を生じさせる小さい干渉性ポリヌクレオチド分子である請求項１４４記載の方法。
【請求項１４８】
前記小さい干渉性ポリヌクレオチド分子は、ＲＮＡｉ分子、アンチセンス分子、リボザイム分子およびＤＮＡザイム分子からなる群から選択される請求項１４７記載の方法。
【請求項１４９】
ビタミンＤに応答する前記幹細胞の前記能力の低下が可能な選択された前記条件は、１つ以上のＰＩ３−キナーゼの発現阻害剤または活性阻害剤の有効量を含む請求項１３０記載の方法。
【請求項１５０】
前記１つ以上のＰＩ３−キナーゼの活性阻害剤は、ウォルトマンニンおよびＬＹ２９４００２からなる群から選択される請求項１４９記載の方法。
【請求項１５１】
前記１つ以上のＰＩ３−キナーゼの発現阻害剤がポリヌクレオチドである請求項１４９記載の方法。
【請求項１５２】
前記ポリヌクレオチドがＰＩ３−キナーゼ細胞内抗体をコードする請求項１５１記載の方法。
【請求項１５３】
前記ポリヌクレオチドがＰＩ３−キナーゼ抗体をコードする請求項１５１記載の方法。
【請求項１５４】
前記ポリヌクレオチドが優性ネガティブなＰＩ３−キナーゼ構築物を含有するＤＮＡベクターである請求項１５１記載の方法。
【請求項１５５】
前記ポリヌクレオチドが、ＰＩ３−キナーゼの細胞内のｍＲＮＡ分解または遺伝子分解を生じさせる小さい干渉性ポリヌクレオチド分子である請求項１５１記載の方法。
【請求項１５６】
前記小さい干渉性ポリヌクレオチド分子は、ＲＮＡｉ分子、アンチセンス分子、リボザイム分子およびＤＮＡザイム分子からなる群から選択される請求項１５５記載の方法。
【請求項１５７】
前記細胞増殖を誘導しかつ前記細胞分化を抑制するために好適な前記条件が、レチノイン酸受容体を伴うシグナル伝達経路に応答する前記幹細胞の能力を低下させることができるように選択される請求項１９記載の方法。
【請求項１５８】
レチノイン酸受容体を伴うシグナル伝達経路に応答する前記幹細胞の前記能力を低下させることが可逆的な様式で行われる請求項１５７記載の方法。
【請求項１５９】
前記条件が細胞に栄養分およびサイトカインを与えることをさらに含む請求項１５７記載の方法。
【請求項１６０】
前記サイトカインが初期作用サイトカインである請求項１５９記載の方法。
【請求項１６１】
前記初期作用サイトカインは、幹細胞因子、ＦＬＴ３リガンド、インターロイキン−１、インターロイキン−２、インターロイキン−３、インターロイキン−６、インターロイキン−１０、インターロイキン−１２、腫瘍壊死因子−αおよびトロンボポエチンからなる群から選択される請求項１６０記載の方法。
【請求項１６２】
前記サイトカインが後期作用サイトカインである請求項１５９記載の方法。
【請求項１６３】
前記後期作用サイトカインは、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子、エリスロポエチン、ＦＧＦ、ＥＧＦ、ＮＧＦ、ＶＥＧＦ、ＬＩＦ、肝細胞増殖因子およびマクロファージコロニー刺激因子からなる群から選択される請求項１６２記載の方法。
【請求項１６４】
細胞に遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートを与えることが前記条件にさらに含まれる請求項１５７記載の方法。
【請求項１６５】
前記遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートは、ポリアミンキレート化剤、エチレンジアミン、ジエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、トリエチレンジアミン、テトラエチレンペンタミン、アミノエチルエタノールアミン、アミノエチルピペラジン、ペンタエチレンヘキサミン、トリエチレンテトラミン塩酸塩、テトラエチレンペンタミン塩酸塩、ペンタエチレンヘキサミン塩酸塩、テトラエチルペンタミン、カプトプリル、ペニシラミン、Ｎ，Ｎ’−ビス（３−アミノプロピル）−１，３−プロパンジアミン、Ｎ，Ｎ，ビス（２−アミノエチル）−１，３−プロパンジアミン、１，７−ジオキサ−４，１０−ジアザシクロドデカン、１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン−５，７−ジオン、１，４，７−トリアザシクロノナン三塩酸塩、１−オキサ−４，７，１０−トリアザシクロドデカン、１，４，８，１２−テトラアザシクロペンタデカン、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカンからなる群から選択される請求項１６４記載の方法。
【請求項１６６】
レチノイン酸受容体を伴うシグナル伝達経路に応答する前記幹細胞の前記能力の低下が可能な選択された前記条件は、１つ以上のレチノイン酸受容体アンタゴニスト、１つ以上のレチノイドＸ受容体アンタゴニストおよび／または１つ以上のビタミンＤ受容体アンタゴニストの有効量の存在を含む請求項１５７記載の方法。
【請求項１６７】
１つ以上のレチノイン酸受容体アンタゴニスト、１つ以上のレチノイドＸ受容体アンタゴニストおよび／または１つ以上のビタミンＤ受容体アンタゴニストの前記有効量の前記存在は、前記幹細胞の全エクスビボ培養期間の０．１％〜５０％の期間に行われる請求項１６６記載の方法。
【請求項１６８】
前記レチノイン酸受容体アンタゴニストは、ＡＧＮ１９４３１０；ＡＧＮ１９３１０９；３−（４−メトキシ−フェニルスルファニル）−３−メチル酪酸；６−メトキシ−２，２−ジメチルチオクロマン−４−オン、２，２−ジメチル−４−オキソ−チオクロマン−６−イルトリフルオロメタンスルホネート；４−（（２，２−ジメチル−４−オキソ−チオクロマン−６−イル）エチニル）安息香酸エチル；４−（（２，２−ジメチル  １−４−トリフルオロメタンスルホニルオキシ−２（Ｈ）−チオクロメン−６−イル）エチニル）安息香酸エチル（４１）；チオクロメン−６−イル］エチニル］ベンゾエート（イル）；（ｐ−［（Ｅ）−２−［３’４’−ジヒドロ−４，４’−ジメチル−７’−（ヘプチルオキシ）−２’Ｈ−１−ベンゾチオピラン−６’イル］プロペニル］安息香酸１’１’−ジオキシド；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ブトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−プロポキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ペントキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ヘキソキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ヘプトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−オクトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−［３−ｔ−ブチル−５−（１−フェニルビニル）−フェニル］−３−メチル）−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４｛［４，５−３Ｈ２］−ｎ−ペントキシ｝フェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸エチルエステル：（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸；（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブチルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；４−（５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレンカルボキサミド）安息香酸；（２Ｅ，４Ｅ）−３−メチル−５−［（１Ｒ，２Ｓ）−２−（５，５，８，８−テトラメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−ナフタレン−２−イル）シクロ���ロピル］ペンタ−２，４−ジエン酸；ｐ−［（Ｅ）−２−［３’，４’−ジヒドロ−４’，４’−ジメチル−７’−（ヘプチルオキシ）−２’Ｈ−１−ベンゾチオピラン−６’−イル］プロペニル］安息香酸；１’，１’−ジオキシド，４−（７，７，１０，１０−テトラメチル−１−ピリジン−３−イルメチル−４，５，７，８，９，１０−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ナフト［２，３−ｇ］インドール−３−イル）安息香酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−メトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ヘキシルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−オクチルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；および（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３−ｎ−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、および４−（５Ｈ−２，３（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−ｎ−プロピルジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、４−（５Ｈ−２，３−（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−メチル−８−ニトロジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、４−｛［４−（４−エチルフェニル）２，２−ジメチル−（２Ｈ）−チオクロメン−６−イル］エチニル｝安息香酸、４−［４−２メチル−１，２−ジカルバ−クロソ（ｃｌｏｓｏ）−ドデカボラン−１−イル−フェニルカルバモイル］安息香酸、４−［４，５，７，８，９，１０−ヘキサヒドロ−７，７，１０，１０−テトラメチル−１−（３−ピリジルメチル）アントラ［１，２−ｂ］ピロール−３−イル］安息香酸、（３−ピリジルメチル）−）５−チアアントラ［２，１−ｂ］ピロール−３−イル）安息香酸、および（３−ピリジルメチル）アントラ［２ｍ１−ｄ］ピラゾール−３−イル）安息香酸からなる群から選択される請求項１６６記載の方法。
【請求項１６９】
前記レチノイドＸ受容体アンタゴニストは、ＬＧＮ１００５７２、ＬＧＮ１００５７４、１−（３−ヒドロキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）エタノン、１−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）エタノン、３−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）ブタ−２−エンニトリル、３−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）ブタ−２−エナール、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−３［−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレン−２−イル］−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、４−［３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル］カルボニル］安息香酸、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］安息香酸、４−［１（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］安息香酸、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ベンゼンテトラゾール、２−［１−（５，５，８，８−テトラメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エチル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸エチル、５−［１−３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル］エテニル］ピリジン−２−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸メチル、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］−Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）ベンズアミド、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸ブチルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸プロピルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸シアノイミン、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸アリルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸４−（３−メチルブタ−２−エン酸）オキシム、および４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸１−アミノエチルオキシム、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３−ｎ−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、４−（５Ｈ−２，３（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−ｎ−プロピルジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、および４−（５Ｈ−２，３−（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５メチル−８−ニトロジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸からなる群から選択される請求項１６６記載の方法。
【請求項１７０】
前記ビタミンＤ受容体アンタゴニストは、１α，２５−（ＯＨ）−Ｄ３−２６，２３−ラクトン；１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ（３）；その２５−カルボン酸エステルＺＫ１５９２２２；（２３Ｓ）−２５−デヒドロ−１α−ＯＨ−Ｄ（３）；（２３Ｒ）−２５−デヒドロ−１α−ＯＨ−Ｄ（３）；１β，２５（ＯＨ）２Ｄ３；１β，２５（ＯＨ）２−３−ｅｐｉ−Ｄ３；（２３Ｓ）２５−デヒドロ−１α（ＯＨ）Ｄ３−２６，２３−ラクトン；（２３Ｒ）２５−デヒドロ−１α（ＯＨ）Ｄ３−２６，２３−ラクトン、および（５Ｚ，７Ｅ，２２Ｅ−（１Ｓ，７Ｅ，２２Ｅ−（１Ｓ，３Ｒ，２４Ｒ）−１，３，２４−トリヒドロキシ−２６，２７−シクロ−９，１０−セココレスタ−５，７，１０（１９），２２−テトラエン−２５−カルボン酸）ブチルからなる群から選択される請求項１６６記載の方法。
【請求項１７１】
レチノイン酸を伴うシグナル伝達経路に応答する前記幹細胞の前記能力の低下が可能な選択された前記条件は、レチノイン酸受容体、レチノイドＸ受容体および／またはビタミンＤ受容体をダウンレギュレーションするポリヌクレオチドを含む請求項１５７記載の方法。
【請求項１７２】
前記ポリヌクレオチドが、抗レチノイン酸受容体細胞内抗体、抗レチノイドＸ受容体細胞内抗体および／または抗ビタミンＤ受容体細胞内抗体をコードする請求項１７１記載の方法。
【請求項１７３】
前記ポリヌクレオチドが、抗レチノイン酸受容体抗体、抗レチノイドＸ受容体抗体および／または抗ビタミンＤ受容体抗体をコードする請求項１７１記載の方法。
【請求項１７４】
前記ポリヌクレオチドが、レチノイン酸受容体、レチノイドＸ受容体またはビタミンＤ受容体の細胞内のｍＲＮＡ分解または遺伝子分解を生じさせる小さい干渉性ポリヌクレオチド分子である請求項１７１記載の方法。
【請求項１７５】
前記小さい干渉性ポリヌクレオチド分子は、ＲＮＡｉ分子、アンチセンス分子、リボザイム分子およびＤＮＡザイム分子からなる群から選択される請求項１７４記載の方法。
【請求項１７６】
レチノイン酸を伴うシグナル伝達経路に応答する前記幹細胞の前記能力の低下が可能な選択された前記条件は、１つ以上のＰＩ３−キナーゼの発現阻害剤または活性阻害剤の有効量を含む請求項１５７記載の方法。
【請求項１７７】
前記１つ以上のＰＩ３−キナーゼの活性阻害剤は、ウォルトマンニンおよびＬＹ２９４００２からなる群から選択される請求項１７６記載の方法。
【請求項１７８】
前記１つ以上のＰＩ３−キナーゼの発現阻害剤がポリヌクレオチドである請求項１７６記載の方法。
【請求項１７９】
前記ポリヌクレオチドがＰＩ３−キナーゼ細胞内抗体をコードする請求項１７８記載の方法。
【請求項１８０】
前記ポリヌクレオチドがＰＩ３−キナーゼ抗体をコードする請求項１７８記載の方法。
【請求項１８１】
前記ポリヌクレオチドが優性ネガティブなＰＩ３−キナーゼ構築物を含有するＤＮＡベクターである請求項１７８記載の方法。
【請求項１８２】
前記ポリヌクレオチドが、ＰＩ３−キナーゼの細胞内のｍＲＮＡ分解または遺伝子分解を生じさせる小さい干渉性ポリヌクレオチド分子である請求項１７８記載の方法。
【請求項１８３】
前記小さい干渉性ポリヌクレオチド分子は、ＲＮＡｉ分子、アンチセンス分子、リボザイム分子およびＤＮＡザイム分子からなる群から選択される請求項１８２記載の方法。
【請求項１８４】
前記細胞増殖を誘導しかつ前記細胞分化を抑制するために好適な前記条件が、レチノイドＸ受容体を伴うシグナル伝達経路に応答する前記幹細胞の能力を低下させることができるように選択される請求項１９記載の方法。
【請求項１８５】
レチノイドＸ受容体を伴うシグナル伝達経路に応答する前記幹細胞の前記能力を低下させることが可逆的な様式で行われる請求項１８４記載の方法。
【請求項１８６】
前記条件が細胞に栄養分およびサイトカインを与えることをさらに含む請求項１８４記載の方法。
【請求項１８７】
前記サイトカインが初期作用サイトカインである請求項１８６記載の方法。
【請求項１８８】
前記初期作用サイトカインは、幹細胞因子、ＦＬＴ３リガンド、インターロイキン−１、インターロイキン−２、インターロイキン−３、インターロイキン−６、インターロイキン−１０、インターロイキン−１２、腫瘍壊死因子−αおよびトロンボポエチンからなる群から選択される請求項１８７記載の方法。
【請求項１８９】
前記サイトカインが後期作用サイトカインである請求項１８６記載の方法。
【請求項１９０】
前記後期作用サイトカインは、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子、エリスロポエチン、ＦＧＦ、ＥＧＦ、ＮＧＦ、ＶＥＧＦ、ＬＩＦ、肝細胞増殖因子およびマクロファージコロニー刺激因子からなる群から選択される請求項１８９記載の方法。
【請求項１９１】
細胞に遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートを与えることが前記条件にさらに含まれる請求項１８４記載の方法。
【請求項１９２】
前記遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートは、ポリアミンキレート化剤、エチレンジアミン、ジエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、トリエチレンジアミン、テトラエチレンペンタミン、アミノエチルエタノールアミン、アミノエチルピペラジン、ペンタエチレンヘキサミン、トリエチレンテトラミン塩酸塩、テトラエチレンペンタミン塩酸塩、ペンタエチレンヘキサミン塩酸塩、テトラエチルペンタミン、カプトプリル、ペニシラミン、Ｎ，Ｎ’−ビス（３−アミノプロピル）−１，３−プロパンジアミン、Ｎ，Ｎ，ビス（２−アミノエチル）−１，３−プロパンジアミン、１，７−ジオキサ−４，１０−ジアザシクロドデカン、１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン−５，７−ジオン、１，４，７−トリアザシクロノナン三塩酸塩、１−オキサ−４，７，１０−トリアザシクロドデカン、１，４，８，１２−テトラアザシクロペンタデカン、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカンからなる群から選択される請求項１９１記載の方法。
【請求項１９３】
レチノイドＸ受容体を伴うシグナル伝達経路に応答する前記幹細胞の前記能力の低下が可能な選択された前記条件は、１つ以上のレチノイン酸受容体アンタゴニスト、１つ以上のレチノイドＸ受容体アンタゴニストおよび／または１つ以上のビタミンＤ受容体アンタゴニストの有効量の存在を含む請求項１８４記載の方法。
【請求項１９４】
１つ以上のレチノイン酸受容体アンタゴニスト、１つ以上のレチノイドＸ受容体アンタゴニストおよび／または１つ以上のビタミンＤ受容体アンタゴニストの前記有効量の前記存在は、前記幹細胞の全エクスビボ培養期間の０．１％〜５０％の期間に行われる請求項１９３記載の方法。
【請求項１９５】
前記レチノイン酸受容体アンタゴニストは、ＡＧＮ１９４３１０；ＡＧＮ１９３１０９；３−（４−メトキシ−フェニルスルファニル）−３−メチル酪酸；６−メトキシ−２，２−ジメチルチオクロマン−４−オン、２，２−ジメチル−４−オキソ−チオクロマン−６−イルトリフルオロメタンスルホネート；４−（（２，２−ジメチル−４−オキソ−チオクロマン−６−イル）エチニル）安息香酸エチル；４−（（２，２−ジメチル  １−４−トリフルオロメタンスルホニルオキシ−２（Ｈ）−チオクロメン−６−イル）エチニル）安息香酸エチル（４１）；チオクロメン−６−イル］エチニル］ベンゾエート（イル）；（ｐ−［（Ｅ）−２−［３’４’−ジヒドロ−４，４’−ジメチル−７’−（ヘプチルオキシ）−２’Ｈ−１−ベンゾチオピラン−６’イル］プロペニル］安息香酸１’１’−ジオキシド；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ブトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−プロポキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ペントキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ヘキソキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ヘプトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−オクトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−［３−ｔ−ブチル−５−（１−フェニルビニル）−フェニル］−３−メチル）−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４｛［４，５−３Ｈ２］−ｎ−ペントキシ｝フェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸エチルエステル：（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸；（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブチルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；４−（５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレンカルボキサミド）安息香酸；（２Ｅ，４Ｅ）−３−メチル−５−［（１Ｒ，２Ｓ）−２−（５，５，８，８−テトラメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−ナフタレン−２−イル）シクロ���ロピル］ペンタ−２，４−ジエン酸；ｐ−［（Ｅ）−２−［３’，４’−ジヒドロ−４’，４’−ジメチル−７’−（ヘプチルオキシ）−２’Ｈ−１−ベンゾチオピラン−６’−イル］プロペニル］安息香酸；１’，１’−ジオキシド，４−（７，７，１０，１０−テトラメチル−１−ピリジン−３−イルメチル−４，５，７，８，９，１０−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ナフト［２，３−ｇ］インドール−３−イル）安息香酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−メトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ヘキシルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−オクチルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；および（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３−ｎ−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、および４−（５Ｈ−２，３（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−ｎ−プロピルジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、４−（５Ｈ−２，３−（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−メチル−８−ニトロジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、４−｛［４−（４−エチルフェニル）２，２−ジメチル−（２Ｈ）−チオクロメン−６−イル］エチニル｝安息香酸、４−［４−２メチル−１，２−ジカルバ−クロソ（ｃｌｏｓｏ）−ドデカボラン−１−イル−フェニルカルバモイル］安息香酸、４−［４，５，７，８，９，１０−ヘキサヒドロ−７，７，１０，１０−テトラメチル−１−（３−ピリジルメチル）アントラ［１，２−ｂ］ピロール−３−イル］安息香酸、（３−ピリジルメチル）−）５−チアアントラ［２，１−ｂ］ピロール−３−イル）安息香酸、および（３−ピリジルメチル）アントラ［２ｍ１−ｄ］ピラゾール−３−イル）安息香酸からなる群から選択される請求項１９３記載の方法。
【請求項１９６】
前記レチノイドＸ受容体アンタゴニストは、ＬＧＮ１００５７２、ＬＧＮ１００５７４、１−（３−ヒドロキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）エタノン、１−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）エタノン、３−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）ブタ−２−エンニトリル、３−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）ブタ−２−エナール、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−３［−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレン−２−イル］−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、４−［３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル］カルボニル］安息香酸、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］安息香酸、４−［１（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］安息香酸、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ベンゼンテトラゾール、２−［１−（５，５，８，８−テトラメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エチル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸エチル、５−［１−３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル］エテニル］ピリジン−２−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸メチル、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］−Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）ベンズアミド、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸ブチルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸プロピルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸シアノイミン、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸アリルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸４−（３−メチルブタ−２−エン酸）オキシム、および４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸１−アミノエチルオキシム、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３−ｎ−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、４−（５Ｈ−２，３（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−ｎ−プロピルジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、および４−（５Ｈ−２，３−（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５メチル−８−ニトロジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸からなる群から選択される請求項１９３記載の方法。
【請求項１９７】
前記ビタミンＤ受容体アンタゴニストは、１α，２５−（ＯＨ）−Ｄ３−２６，２３−ラクトン；１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ（３）；その２５−カルボン酸エステルＺＫ１５９２２２；（２３Ｓ）−２５−デヒドロ−１α−ＯＨ−Ｄ（３）；（２３Ｒ）−２５−デヒドロ−１α−ＯＨ−Ｄ（３）；１β，２５（ＯＨ）２Ｄ３；１β，２５（ＯＨ）２−３−ｅｐｉ−Ｄ３；（２３Ｓ）２５−デヒドロ−１α（ＯＨ）Ｄ３−２６，２３−ラクトン；（２３Ｒ）２５−デヒドロ−１α（ＯＨ）Ｄ３−２６，２３−ラクトン、および（５Ｚ，７Ｅ，２２Ｅ−（１Ｓ，７Ｅ，２２Ｅ−（１Ｓ，３Ｒ，２４Ｒ）−１，３，２４−トリヒドロキシ−２６，２７−シクロ−９，１０−セココレスタ−５，７，１０（１９），２２−テトラエン−２５−カルボン酸）ブチルからなる群から選択される請求項１９３記載の方法。
【請求項１９８】
レチノイドＸ受容体を伴うシグナル伝達経路に応答する前記幹細胞の前記能力の低下が可能な選択された前記条件は、レチノイン酸受容体、レチノイドＸ受容体および／またはビタミンＤ受容体をダウンレギュレーションするポリヌクレオチドを含む請求項１８４記載の方法。
【請求項１９９】
前記ポリヌクレオチドが、抗レチノイン酸受容体細胞内抗体、抗レチノイドＸ受容体細胞内抗体および／または抗ビタミンＤ受容体細胞内抗体をコードする請求項１９８記載の方法。
【請求項２００】
前記ポリヌクレオチドが、抗レチノイン酸受容体抗体、抗レチノイドＸ受容体抗体および／または抗ビタミンＤ受容体抗体をコードする請求項１９８記載の方法。
【請求項２０１】
前記ポリヌクレオチドが、レチノイン酸受容体、レチノイドＸ受容体またはビタミンＤ受容体の細胞内のｍＲＮＡ分解または遺伝子分解を生じさせる小さい干渉性ポリヌクレオチド分子である請求項１９８記載の方法。
【請求項２０２】
前記小さい干渉性ポリヌクレオチド分子は、ＲＮＡｉ分子、アンチセンス分子、リボザイム分子およびＤＮＡザイム分子からなる群から選択される請求項２０１記載の方法。
【請求項２０３】
レチノイドを伴うシグナル伝達経路に応答する前記幹細胞の前記能力の低下が可能な選択された前記条件は、１つ以上のＰＩ３−キナーゼの発現阻害剤または活性阻害剤の有効量を含む請求項１８４記載の方法。
【請求項２０４】
前記１つ以上のＰＩ３−キナーゼの活性阻害剤は、ウォルトマンニンおよびＬＹ２９４００２からなる群から選択される請求項２０３記載の方法。
【請求項２０５】
前記１つ以上のＰＩ３−キナーゼの発現阻害剤がポリヌクレオチドである請求項２０３記載の方法。
【請求項２０６】
前記ポリヌクレオチドがＰＩ３−キナーゼ細胞内抗体をコードする請求項２０５記載の方法。
【請求項２０７】
前記ポリヌクレオチドがＰＩ３−キナーゼ抗体をコードする請求項２０５記載の方法。
【請求項２０８】
前記ポリヌクレオチドが優性ネガティブなＰＩ３−キナーゼ構築物を含有するＤＮＡベクターである請求項２０５記載の方法。
【請求項２０９】
前記ポリヌクレオチドが、ＰＩ３−キナーゼの細胞内のｍＲＮＡ分解または遺伝子分解を生じさせる小さい干渉性ポリヌクレオチド分子である請求項２０５記載の方法。
【請求項２１０】
前記小さい干渉性ポリヌクレオチド分子は、ＲＮＡｉ分子、アンチセンス分子、リボザイム分子およびＤＮＡザイム分子からなる群から選択される請求項２０９記載の方法。
【請求項２１１】
前記細胞増殖を誘導しかつ前記細胞分化を抑制するために好適な前記条件が、ビタミンＤ受容体を伴うシグナル伝達経路に応答する前記幹細胞の能力を低下させることができるように選択される請求項１９記載の方法。
【請求項２１２】
ビタミンＤ受容体を伴うシグナル伝達経路に応答する前記幹細胞の前記能力を低下させることが可逆的な様式で行われる請求項２１１記載の方法。
【請求項２１３】
前記条件が細胞に栄養分およびサイトカインを与えることをさらに含む請求項２１１記載の方法。
【請求項２１４】
前記サイトカインが初期作用サイトカインである請求項２１３記載の方法。
【請求項２１５】
前記初期作用サイトカインは、幹細胞因子、ＦＬＴ３リガンド、インターロイキン−１、インターロイキン−２、インターロイキン−３、インターロイキン−６、インターロイキン−１０、インターロイキン−１２、腫瘍壊死因子−αおよびトロンボポエチンからなる群から選択される請求項２１４記載の方法。
【請求項２１６】
前記サイトカインが後期作用サイトカインである請求項２１３記載の方法。
【請求項２１７】
前記後期作用サイトカインは、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子、エリスロポエチン、ＦＧＦ、ＥＧＦ、ＮＧＦ、ＶＥＧＦ、ＬＩＦ、肝細胞増殖因子およびマクロファージコロニー刺激因子からなる群から選択される請求項２１６記載の方法。
【請求項２１８】
細胞に遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートを与えることが前記条件にさらに含まれる請求項２１１記載の方法。
【請求項２１９】
前記遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートは、ポリアミンキレート化剤、エチレンジアミン、ジエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、トリエチレンジアミン、テトラエチレンペンタミン、アミノエチルエタノールアミン、アミノエチルピペラジン、ペンタエチレンヘキサミン、トリエチレンテトラミン塩酸塩、テトラエチレンペンタミン塩酸塩、ペンタエチレンヘキサミン塩酸塩、テトラエチルペンタミン、カプトプリル、ペニシラミン、Ｎ，Ｎ’−ビス（３−アミノプロピル）−１，３−プロパンジアミン、Ｎ，Ｎ，ビス（２−アミノエチル）−１，３−プロパンジアミン、１，７−ジオキサ−４，１０−ジアザシクロドデカン、１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン−５，７−ジオン、１，４，７−トリアザシクロノナン三塩酸塩、１−オキサ−４，７，１０−トリアザシクロドデカン、１，４，８，１２−テトラアザシクロペンタデカン、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカンからなる群から選択される請求項２１８記載の方法。
【請求項２２０】
ビタミンＤ受容体を伴うシグナル伝達経路に応答する前記幹細胞の前記能力の低下が可能な選択された前記条件は、１つ以上のレチノイン酸受容体アンタゴニスト、１つ以上のレチノイドＸ受容体アンタゴニストおよび／または１つ以上のビタミンＤ受容体アンタゴニストの有効量の存在を含む請求項２１１記載の方法。
【請求項２２１】
１つ以上のレチノイン酸受容体アンタゴニスト、１つ以上のレチノイドＸ受容体アンタゴニストおよび／または１つ以上のビタミンＤ受容体アンタゴニストの前記有効量の前記存在は、前記幹細胞の全エクスビボ培養期間の０．１％〜５０％の期間に行われる請求項２２０記載の方法。
【請求項２２２】
前記レチノイン酸受容体アンタゴニストは、ＡＧＮ１９４３１０；ＡＧＮ１９３１０９；３−（４−メトキシ−フェニルスルファニル）−３−メチル酪酸；６−メトキシ−２，２−ジメチルチオクロマン−４−オン、２，２−ジメチル−４−オキソ−チオクロマン−６−イルトリフルオロメタンスルホネート；４−（（２，２−ジメチル−４−オキソ−チオクロマン−６−イル）エチニル）安息香酸エチル；４−（（２，２−ジメチル  １−４−トリフルオロメタンスルホニルオキシ−２（Ｈ）−チオクロメン−６−イル）エチニル）安息香酸エチル（４１）；チオクロメン−６−イル］エチニル］ベンゾエート（イル）；（ｐ−［（Ｅ）−２−［３’４’−ジヒドロ−４，４’−ジメチル−７’−（ヘプチルオキシ）−２’Ｈ−１−ベンゾチオピラン−６’イル］プロペニル］安息香酸１’１’−ジオキシド；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ブトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−プロポキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ペントキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ヘキソキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ヘプトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−オクトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−［３−ｔ−ブチル−５−（１−フェニルビニル）−フェニル］−３−メチル）−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４｛［４，５−３Ｈ２］−ｎ−ペントキシ｝フェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸エチルエステル：（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸；（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブチルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；４−（５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレンカルボキサミド）安息香酸；（２Ｅ，４Ｅ）−３−メチル−５−［（１Ｒ，２Ｓ）−２−（５，５，８，８−テトラメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−ナフタレン−２−イル）シクロ���ロピル］ペンタ−２，４−ジエン酸；ｐ−［（Ｅ）−２−［３’，４’−ジヒドロ−４’，４’−ジメチル−７’−（ヘプチルオキシ）−２’Ｈ−１−ベンゾチオピラン−６’−イル］プロペニル］安息香酸；１’，１’−ジオキシド，４−（７，７，１０，１０−テトラメチル−１−ピリジン−３−イルメチル−４，５，７，８，９，１０−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ナフト［２，３−ｇ］インドール−３−イル）安息香酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−メトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ヘキシルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−オクチルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；および（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３−ｎ−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、および４−（５Ｈ−２，３（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−ｎ−プロピルジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、４−（５Ｈ−２，３−（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−メチル−８−ニトロジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、４−｛［４−（４−エチルフェニル）２，２−ジメチル−（２Ｈ）−チオクロメン−６−イル］エチニル｝安息香酸、４−［４−２メチル−１，２−ジカルバ−クロソ（ｃｌｏｓｏ）−ドデカボラン−１−イル−フェニルカルバモイル］安息香酸、４−［４，５，７，８，９，１０−ヘキサヒドロ−７，７，１０，１０−テトラメチル−１−（３−ピリジルメチル）アントラ［１，２−ｂ］ピロール−３−イル］安息香酸、（３−ピリジルメチル）−）５−チアアントラ［２，１−ｂ］ピロール−３−イル）安息香酸、および（３−ピリジルメチル）アントラ［２ｍ１−ｄ］ピラゾール−３−イル）安息香酸からなる群から選択される請求項２２０記載の方法。
【請求項２２３】
前記レチノイドＸ受容体アンタゴニストは、ＬＧＮ１００５７２、ＬＧＮ１００５７４、１−（３−ヒドロキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）エタノン、１−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）エタノン、３−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）ブタ−２−エンニトリル、３−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）ブタ−２−エナール、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−３［−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレン−２−イル］−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、４−［３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル］カルボニル］安息香酸、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］安息香酸、４−［１（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］安息香酸、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ベンゼンテトラゾール、２−［１−（５，５，８，８−テトラメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エチル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸エチル、５−［１−３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル］エテニル］ピリジン−２−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸メチル、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］−Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）ベンズアミド、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸ブチルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸プロピルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸シアノイミン、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸アリルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸４−（３−メチルブタ−２−エン酸）オキシム、および４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸１−アミノエチルオキシム、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３−ｎ−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、４−（５Ｈ−２，３（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−ｎ−プロピルジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、および４−（５Ｈ−２，３−（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５メチル−８−ニトロジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸からなる群から選択される請求項２２０記載の方法。
【請求項２２４】
前記ビタミンＤ受容体アンタゴニストは、１α，２５−（ＯＨ）−Ｄ３−２６，２３−ラクトン；１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ（３）；その２５−カルボン酸エステルＺＫ１５９２２２；（２３Ｓ）−２５−デヒドロ−１α−ＯＨ−Ｄ（３）；（２３Ｒ）−２５−デヒドロ−１α−ＯＨ−Ｄ（３）；１β，２５（ＯＨ）２Ｄ３；１β，２５（ＯＨ）２−３−ｅｐｉ−Ｄ３；（２３Ｓ）２５−デヒドロ−１α（ＯＨ）Ｄ３−２６，２３−ラクトン；（２３Ｒ）２５−デヒドロ−１α（ＯＨ）Ｄ３−２６，２３−ラクトン、および（５Ｚ，７Ｅ，２２Ｅ−（１Ｓ，７Ｅ，２２Ｅ−（１Ｓ，３Ｒ，２４Ｒ）−１，３，２４−トリヒドロキシ−２６，２７−シクロ−９，１０−セココレスタ−５，７，１０（１９），２２−テトラエン−２５−カルボン酸）ブチルからなる群から選択される請求項２２０記載の方法。
【請求項２２５】
ビタミンＤ受容体を伴うシグナル伝達経路に応答する前記幹細胞の前記能力の低下が可能な選択された前記条件は、レチノイン酸受容体、レチノイドＸ受容体および／またはビタミンＤ受容体をダウンレギュレーションするポリヌクレオチドを含む請求項２１１記載の方法。
【請求項２２６】
前記ポリヌクレオチドが、抗レチノイン酸受容体細胞内抗体、抗レチノイドＸ受容体細胞内抗体および／または抗ビタミンＤ受容体細胞内抗体をコードする請求項２２５記載の方法。
【請求項２２７】
前記ポリヌクレオチドが、抗レチノイン酸受容体抗体、抗レチノイドＸ受容体抗体および／または抗ビタミンＤ受容体抗体をコードする請求項２２５記載の方法。
【請求項２２８】
前記ポリヌクレオチドが、レチノイン酸受容体、レチノイドＸ受容体またはビタミンＤ受容体の細胞内のｍＲＮＡ分解または遺伝子分解を生じさせる小さい干渉性ポリヌクレオチド分子である請求項２２５記載の方法。
【請求項２２９】
前記小さい干渉性ポリヌクレオチド分子は、ＲＮＡｉ分子、アンチセンス分子、リボザイム分子およびＤＮＡザイム分子からなる群から選択される請求項２２８記載の方法。
【請求項２３０】
ビタミンＤ受容体を伴うシグナル伝達経路に応答する前記幹細胞の前記能力の低下が可能な選択された前記条件は、１つ以上のＰＩ３−キナーゼの発現阻害剤または活性阻害剤の有効量を含む請求項２１１記載の方法。
【請求項２３１】
前記１つ以上のＰＩ３−キナーゼの活性阻害剤は、ウォルトマンニンおよびＬＹ２９４００２からなる群から選択される請求項２３０記載の方法。
【請求項２３２】
前記１つ以上のＰＩ３−キナーゼの発現阻害剤がポリヌクレオチドである請求項２３０記載の方法。
【請求項２３３】
前記ポリヌクレオチドがＰＩ３−キナーゼ細胞内抗体をコードする請求項２３２記載の方法。
【請求項２３４】
前記ポリヌクレオチドがＰＩ３−キナーゼ抗体をコードする請求項２３２記載の方法。
【請求項２３５】
前記ポリヌクレオチドが優性ネガティブなＰＩ３−キナーゼ構築物を含有するＤＮＡベクターである請求項２３２記載の方法。
【請求項２３６】
前記ポリヌクレオチドが、ＰＩ３−キナーゼの細胞内のｍＲＮＡ分解または遺伝子分解を生じさせる小さい干渉性ポリヌクレオチド分子である請求項２３２記載の方法。
【請求項２３７】
前記小さい干渉性ポリヌクレオチド分子は、ＲＮＡｉ分子、アンチセンス分子、リボザイム分子およびＤＮＡザイム分子からなる群から選択される請求項２３６記載の方法。
【請求項２３８】
前記細胞増殖を誘導しかつ前記細胞分化を抑制するために好適な前記条件が、細胞に栄養分およびサイトカインを与えることを含む請求項１９記載の方法。
【請求項２３９】
前記サイトカインが初期作用サイトカインである請求項２３８記載の方法。
【請求項２４０】
前記初期作用サイトカインは、幹細胞因子、ＦＬＴ３リガンド、インターロイキン−１、インターロイキン−２、インターロイキン−３、インターロイキン−６、インターロイキン−１０、インターロイキン−１２、腫瘍壊死因子−αおよびトロンボポエチンからなる群から選択される請求項２３９記載の方法。
【請求項２４１】
前記サイトカインが後期作用サイトカインである請求項２３８記載の方法。
【請求項２４２】
前記後期作用サイトカインは、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子、エリスロポエチン、ＦＧＦ、ＥＧＦ、ＮＧＦ、ＶＥＧＦ、ＬＩＦ、肝細胞増殖因子およびマクロファージコロニー刺激因子からなる群から選択される請求項２４１記載の方法。
【請求項２４３】
細胞に遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートを与えることが前記条件にさらに含まれる請求項２３８記載の方法。
【請求項２４４】
前記遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートは、ポリアミンキレート化剤、エチレンジアミン、ジエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、トリエチレンジアミン、テトラエチレンペンタミン、アミノエチルエタノールアミン、アミノエチルピペラジン、ペンタエチレンヘキサミン、トリエチレンテトラミン塩酸塩、テトラエチレンペンタミン塩酸塩、ペンタエチレンヘキサミン塩酸塩、テトラエチルペンタミン、カプトプリル、ペニシラミン、Ｎ，Ｎ’−ビス（３−アミノプロピル）−１，３−プロパンジアミン、Ｎ，Ｎ，ビス（２−アミノエチル）−１，３−プロパンジアミン、１，７−ジオキサ−４，１０−ジアザシクロドデカン、１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン−５，７−ジオン、１，４，７−トリアザシクロノナン三塩酸塩、１−オキサ−４，７，１０−トリアザシクロドデカン、１，４，８，１２−テトラアザシクロペンタデカン、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカンからなる群から選択される請求項２４３記載の方法。
【請求項２４５】
前記細胞増殖を誘導しかつ前記細胞分化を抑制するために好適な前記条件が、細胞に遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートを与えることを含む請求項１９記載の方法。
【請求項２４６】
前記遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートは、ポリアミンキレート化剤、エチレンジアミン、ジエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、トリエチレンジアミン、テトラエチレンペンタミン、アミノエチルエタノールアミン、アミノエチルピペラジン、ペンタエチレンヘキサミン、トリエチレンテトラミン塩酸塩、テトラエチレンペンタミン塩酸塩、ペンタエチレンヘキサミン塩酸塩、テトラエチルペンタミン、カプトプリル、ペニシラミン、Ｎ，Ｎ’−ビス（３−アミノプロピル）−１，３−プロパンジアミン、Ｎ，Ｎ，ビス（２−アミノエチル）−１，３−プロパンジアミン、１，７−ジオキサ−４，１０−ジアザシクロドデカン、１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン−５，７−ジオン、１，４，７−トリアザシクロノナン三塩酸塩、１−オキサ−４，７，１０−トリアザシクロドデカン、１，４，８，１２−テトラアザシクロペンタデカン、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカンからなる群から選択される請求項２４５記載の方法。
【請求項２４７】
細胞または組織の置換を必要とする障害に罹患している個体を治療する方法であって、
（ａ）幹細胞を、細胞増殖を誘導しかつ細胞分化を抑制するために好適な選択された培養条件に供し、それにより、拡大培養された幹細胞の集団を得ること；および
（ｂ）前記拡大培養された幹細胞の集団を、障害に関連する個体の組織に導入し、それにより、前記組織を特徴づける細胞への前記拡大培養された幹細胞集団の細胞分化を誘導し、それにより細胞または組織の置換を必要とする障害に罹患している個体を治療すること
を含む方法。
【請求項２４８】
前記細胞増殖を誘導しかつ前記細胞分化を抑制するために好適な前記条件が、細胞に遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートを与えることを含む請求項２４７記載の方法。
【請求項２４９】
前記遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートは、ポリアミンキレート化剤、エチレンジアミン、ジエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、トリエチレンジアミン、テトラエチレンペンタミン、アミノエチルエタノールアミン、アミノエチルピペラジン、ペンタエチレンヘキサミン、トリエチレンテトラミン塩酸塩、テトラエチレンペンタミン塩酸塩、ペンタエチレンヘキサミン塩酸塩、テトラエチルペンタミン、カプトプリル、ペニシラミン、Ｎ，Ｎ’−ビス（３−アミノプロピル）−１，３−プロパンジアミン、Ｎ，Ｎ，ビス（２−アミノエチル）−１，３−プロパンジアミン、１，７−ジオキサ−４，１０−ジアザシクロドデカン、１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン−５，７−ジオン、１，４，７−トリアザシクロノナン三塩酸塩、１−オキサ−４，７，１０−トリアザシクロドデカン、１，４，８，１２−テトラアザシクロペンタデカン、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカンからなる群から選択される請求項２４８記載の方法。
【請求項２５０】
前記単離された幹細胞が造血幹細胞である請求項２４７記載の方法。
【請求項２５１】
前記造血幹細胞は、骨髄細胞、新生児臍帯血細胞および末梢血細胞からなる群から選択される請求項２５０記載の方法。
【請求項２５２】
前記造血幹細胞がＣＤ３４＋豊富化細胞である請求項２５０記載の方法。
【請求項２５３】
前記造血幹細胞がＡＣ１３３＋豊富化細胞である請求項２５０記載の方法。
【請求項２５４】
前記拡大培養された幹細胞集団は、ＣＤ３８、ＣＤ３、ＣＤ６１、ＣＤ１９、ＣＤ３３、ＣＤ１４、ＣＤ１５および／またはＣＤ４の細胞表面抗原のダウンレギュレーションされた発現によって特徴づけられる請求項２４７記載の方法。
【請求項２５５】
前記単離された幹細胞が細胞系譜的に拘束された細胞と混合される請求項２４７記載の方法。
【請求項２５６】
前記単離された幹細胞が、前記障害に関連する前記個体の前記組織に関して同一遺伝子型、同種および／または異種であるドナーから得られる請求項２４７記載の方法。
【請求項２５７】
障害に関連する前記個体の前記組織が、内胚葉細胞、外胚葉細胞および／または中胚葉細胞を含む請求項２４７記載の方法。
【請求項２５８】
内胚葉細胞を含む前記組織は、咽頭、食道、胃、腸、肝臓、膵臓、気管および肺からなる群から選択される請求項２５７記載の方法。
【請求項２５９】
外胚葉細胞を含む前記目的組織は、脳、副腎、網膜および表皮からなる群から選択される請求項２５７記載の方法。
【請求項２６０】
中胚葉細胞を含む前記目的組織は、結合組織、間葉、骨、軟骨、筋肉、繊維組織、真皮、心臓、骨髄、および泌尿生殖系の細管からなる群から選択される請求項２５７記載の方法。
【請求項２６１】
前記障害は、神経学的障害、筋肉障害、心臓血管障害、血液学的障害、皮膚障害、肝臓障害および膵臓障害からなる群から選択される請求項２４７記載の方法。
【請求項２６２】
前記培養条件は、前記幹細胞におけるＣＤ３８の発現および／または活性を低下させることができるように選択される請求項２４７記載の方法。
【請求項２６３】
前記条件が栄養分およびサイトカインをさらに含む請求項２６２記載の方法。
【請求項２６４】
前記サイトカインが初期作用サイトカインである請求項２６３記載の方法。
【請求項２６５】
前記初期作用サイトカインは、幹細胞因子、ＦＬＴ３リガンド、インターロイキン−１、インターロイキン−２、インターロイキン−３、インターロイキン−６、インターロイキン−１０、インターロイキン−１２、腫瘍壊死因子−αおよびトロンボポエチンからなる群から選択される請求項２６４記載の方法。
【請求項２６６】
前記サイトカインが後期作用サイトカインである請求項２６３記載の方法。
【請求項２６７】
前記後期作用サイトカインは、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子、エリスロポエチン、ＦＧＦ、ＥＧＦ、ＮＧＦ、ＶＥＧＦ、ＬＩＦ、肝細胞増殖因子およびマクロファージコロニー刺激因子からなる群から選択される請求項２６６記載の方法。
【請求項２６８】
細胞に遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートを与えることが前記条件にさらに含まれる請求項２６２記載の方法。
【請求項２６９】
前記遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートは、ポリアミンキレート化剤、エチレンジアミン、ジエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、トリエチレンジアミン、テトラエチレンペンタミン、アミノエチルエタノールアミン、アミノエチルピペラジン、ペンタエチレンヘキサミン、トリエチレンテトラミン塩酸塩、テトラエチレンペンタミン塩酸塩、ペンタエチレンヘキサミン塩酸塩、テトラエチルペンタミン、カプトプリル、ペニシラミン、Ｎ，Ｎ’−ビス（３−アミノプロピル）−１，３−プロパンジアミン、Ｎ，Ｎ，ビス（２−アミノエチル）−１，３−プロパンジアミン、１，７−ジオキサ−４，１０−ジアザシクロドデカン、１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン−５，７−ジオン、１，４，７−トリアザシクロノナン三塩酸塩、１−オキサ−４，７，１０−トリアザシクロドデカン、１，４，８，１２−テトラアザシクロペンタデカン、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカンからなる群から選択される請求項２６８記載の方法。
【請求項２７０】
前記幹細胞におけるＣＤ３８の前記発現および／または活性の低下が可能な選択された前記条件は、ＣＤ３８の発現をダウンレギュレーションする薬剤を含む請求項２６２記載の方法。
【請求項２７１】
ＣＤ３８の発現をダウンレギュレーションする前記薬剤は、レチノイン酸受容体アンタゴニスト、レチノイドＸ受容体アンタゴニストおよびビタミンＤ受容体アンタゴニストからなる群から選択される請求項２７０記載の方法。
【請求項２７２】
前記レチノイン酸受容体アンタゴニストは、ＡＧＮ１９４３１０；ＡＧＮ１９３１０９；３−（４−メトキシ−フェニルスルファニル）−３−メチル酪酸；６−メトキシ−２，２−ジメチルチオクロマン−４−オン、２，２−ジメチル−４−オキソ−チオクロマン−６−イルトリフルオロメタンスルホネート；４−（（２，２−ジメチル−４−オキソ−チオクロマン−６−イル）エチニル）安息香酸エチル；４−（（２，２−ジメチル  １−４−トリフルオロメタンスルホニルオキシ−２（Ｈ）−チオクロメン−６−イル）エチニル）安息香酸エチル（４１）；チオクロメン−６−イル］エチニル］ベンゾエート（イル）；（ｐ−［（Ｅ）−２−［３’４’−ジヒドロ−４，４’−ジメチル−７’−（ヘプチルオキシ）−２’Ｈ−１−ベンゾチオピラン−６’イル］プロペニル］安息香酸１’１’−ジオキシド；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ブトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−プロポキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ペントキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ヘキソキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ヘプトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−オクトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−［３−ｔ−ブチル−５−（１−フェニルビニル）−フェニル］−３−メチル）−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４｛［４，５−３Ｈ２］−ｎ−ペントキシ｝フェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸エチルエステル：（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸；（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブチルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；４−（５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレンカルボキサミド）安息香酸；（２Ｅ，４Ｅ）−３−メチル−５−［（１Ｒ，２Ｓ）−２−（５，５，８，８−テトラメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−ナフタレン−２−イル）シクロ���ロピル］ペンタ−２，４−ジエン酸；ｐ−［（Ｅ）−２−［３’，４’−ジヒドロ−４’，４’−ジメチル−７’−（ヘプチルオキシ）−２’Ｈ−１−ベンゾチオピラン−６’−イル］プロペニル］安息香酸；１’，１’−ジオキシド，４−（７，７，１０，１０−テトラメチル−１−ピリジン−３−イルメチル−４，５，７，８，９，１０−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ナフト［２，３−ｇ］インドール−３−イル）安息香酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−メトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ヘキシルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−オクチルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；および（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３−ｎ−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、および４−（５Ｈ−２，３（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−ｎ−プロピルジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、４−（５Ｈ−２，３−（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−メチル−８−ニトロジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、４−｛［４−（４−エチルフェニル）２，２−ジメチル−（２Ｈ）−チオクロメン−６−イル］エチニル｝安息香酸、４−［４−２メチル−１，２−ジカルバ−クロソ（ｃｌｏｓｏ）−ドデカボラン−１−イル−フェニルカルバモイル］安息香酸、４−［４，５，７，８，９，１０−ヘキサヒドロ−７，７，１０，１０−テトラメチル−１−（３−ピリジルメチル）アントラ［１，２−ｂ］ピロール−３−イル］安息香酸、（３−ピリジルメチル）−）５−チアアントラ［２，１−ｂ］ピロール−３−イル）安息香酸、および（３−ピリジルメチル）アントラ［２ｍ１−ｄ］ピラゾール−３−イル）安息香酸からなる群から選択される請求項２７１記載の方法。
【請求項２７３】
前記レチノイドＸ受容体アンタゴニストは、ＬＧＮ１００５７２、ＬＧＮ１００５７４、１−（３−ヒドロキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）エタノン、１−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）エタノン、３−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）ブタ−２−エンニトリル、３−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）ブタ−２−エナール、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−３［−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレン−２−イル］−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、４−［３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル］カルボニル］安息香酸、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］安息香酸、４−［１（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］安息香酸、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ベンゼンテトラゾール、２−［１−（５，５，８，８−テトラメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エチル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸エチル、５−［１−３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル］エテニル］ピリジン−２−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸メチル、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］−Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）ベンズアミド、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸ブチルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸プロピルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸シアノイミン、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸アリルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸４−（３−メチルブタ−２−エン酸）オキシム、および４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸１−アミノエチルオキシム、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３−ｎ−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、４−（５Ｈ−２，３（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−ｎ−プロピルジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、および４−（５Ｈ−２，３−（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５メチル−８−ニトロジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸からなる群から選択される請求項２７１記載の方法。
【請求項２７４】
前記ビタミンＤ受容体アンタゴニストは、１α，２５−（ＯＨ）−Ｄ３−２６，２３−ラクトン；１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ（３）；その２５−カルボン酸エステルＺＫ１５９２２２；（２３Ｓ）−２５−デヒドロ−１α−ＯＨ−Ｄ（３）；（２３Ｒ）−２５−デヒドロ−１α−ＯＨ−Ｄ（３）；１β，２５（ＯＨ）２Ｄ３；１β，２５（ＯＨ）２−３−ｅｐｉ−Ｄ３；（２３Ｓ）２５−デヒドロ−１α（ＯＨ）Ｄ３−２６，２３−ラクトン；（２３Ｒ）２５−デヒドロ−１α（ＯＨ）Ｄ３−２６，２３−ラクトン、および（５Ｚ，７Ｅ，２２Ｅ−（１Ｓ，７Ｅ，２２Ｅ−（１Ｓ，３Ｒ，２４Ｒ）−１，３，２４−トリヒドロキシ−２６，２７−シクロ−９，１０−セココレスタ−５，７，１０（１９），２２−テトラエン−２５−カルボン酸）ブチルからなる群から選択される請求項２７１記載の方法。
【請求項２７５】
ＣＤ３８の発現をダウンレギュレーションする前記薬剤が、レチノイン酸、レチノイドおよび／またはビタミンＤに応答する前記幹細胞の能力を低下させるためのアンタゴニストである請求項２７０記載の方法。
【請求項２７６】
ＣＤ３８の発現をダウンレギュレーションする前記薬剤がポリヌクレオチドである請求項２７０記載の方法。
【請求項２７７】
前記ポリヌクレオチドが、抗ＣＤ３８細胞内抗体、抗レチノイン酸受容体細胞内抗体、抗レチノイドＸ受容体細胞内抗体または抗ビタミンＤ受容体細胞内抗体をコードする請求項２７６記載の方法。
【請求項２７８】
前記ポリヌクレオチドが、抗ＣＤ３８抗体、抗レチノイン酸受容体抗体、抗レチノイドＸ受容体抗体または抗ビタミンＤ受容体抗体をコードする請求項２７６記載の方法。
【請求項２７９】
前記ポリヌクレオチドが、ＣＤ３８、レチノイン酸受容体、レチノイドＸ受容体またはビタミンＤ受容体の細胞内のｍＲＮＡ分解または遺伝子分解を生じさせる小さい干渉性ポリヌクレオチド分子である請求項２７６記載の方法。
【請求項２８０】
前記小さい干渉性ポリヌクレオチド分子は、ＲＮＡｉ分子、アンチセンス分子、リボザイム分子およびＤＮＡザイム分子からなる群から選択される請求項２７９記載の方法。
【請求項２８１】
ＣＤ３８の発現をダウンレギュレーションする前記薬剤はＰＩ３−キナーゼの活性阻害剤または発現阻害剤である請求項２７０記載の方法。
【請求項２８２】
前記ＰＩ３−キナーゼの発現阻害剤がポリヌクレオチドである請求項２８１記載の方法。
【請求項２８３】
前記ポリヌクレオチドがＰＩ３−キナーゼ細胞内抗体をコードする請求項２８２記載の方法。
【請求項２８４】
前記ポリヌクレオチドがＰＩ３−キナーゼ抗体をコードする請求項２８２記載の方法。
【請求項２８５】
前記ポリヌクレオチドが、ＰＩ３−キナーゼの細胞内のｍＲＮＡ分解または遺伝子分解を生じさせる小さい干渉性ポリヌクレオチド分子である請求項２８２記載の方法。
【請求項２８６】
前記小さい干渉性ポリヌクレオチド分子は、ＲＮＡｉ分子、アンチセンス分子、リボザイム分子およびＤＮＡザイム分子からなる群から選択される請求項２８５記載の方法。
【請求項２８７】
前記ポリヌクレオチドが優性ネガティブなＰＩ３−キナーゼ構築物を含有するＤＮＡベクターである請求項２８２記載の方法。
【請求項２８８】
前記ＰＩ３−キナーゼの活性阻害剤は、ウォルトマンニンおよびＬＹ２９４００２からなる群から選択される請求項２８１記載の方法。
【請求項２８９】
前記幹細胞におけるＣＤ３８の前記発現および／または活性を低下させることができる選択された前記条件には、ＣＤ３８の活性を阻害する前記薬剤が含まれる請求項２６２記載の方法。
【請求項２９０】
ＣＤ３８の活性を阻害する前記薬剤が、ニコチンアミド、ニコチンアミドアナログ、ニコチンアミドもしくはニコチンアミドアナログの誘導体、またはニコチンアミドもしくはニコチンアミドアナログの代謝物である請求項２８９記載の方法。
【請求項２９１】
前記ニコチンアミドアナログは、ベンズアミド、ニコチンチオアミド、ニコチン酸およびα−アミノ−３−インドールプロピオン酸からなる群から選択される請求項２９０記載の方法。
【請求項２９２】
前記条件は、レチノイン酸に応答する前記幹細胞の能力を低下させることができるように選択される請求項２４７記載の方法。
【請求項２９３】
レチノイン酸に応答する前記幹細胞の前記能力を低下させることが可逆的な様式で行われる請求項２９２記載の方法。
【請求項２９４】
前記条件が細胞に栄養分およびサイトカインを与えることをさらに含む請求項２９２記載の方法。
【請求項２９５】
前記サイトカインが初期作用サイトカインである請求項２９４記載の方法。
【請求項２９６】
前記初期作用サイトカインは、幹細胞因子、ＦＬＴ３リガンド、インターロイキン−１、インターロイキン−２、インターロイキン−３、インターロイキン−６、インターロイキン−１０、インターロイキン−１２、腫瘍壊死因子−αおよびトロンボポエチンからなる群から選択される請求項２９５記載の方法。
【請求項２９７】
前記サイトカインが後期作用サイトカインである請求項２９４記載の方法。
【請求項２９８】
前記後期作用サイトカインは、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子、エリスロポエチン、ＦＧＦ、ＥＧＦ、ＮＧＦ、ＶＥＧＦ、ＬＩＦ、肝細胞増殖因子およびマクロファージコロニー刺激因子からなる群から選択される請求項２９７記載の方法。
【請求項２９９】
細胞に遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートを与えることが前記条件にさらに含まれる請求項２９２記載の方法。
【請求項３００】
前記遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートは、ポリアミンキレート化剤、エチレンジアミン、ジエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、トリエチレンジアミン、テトラエチレンペンタミン、アミノエチルエタノールアミン、アミノエチルピペラジン、ペンタエチレンヘキサミン、トリエチレンテトラミン塩酸塩、テトラエチレンペンタミン塩酸塩、ペンタエチレンヘキサミン塩酸塩、テトラエチルペンタミン、カプトプリル、ペニシラミン、Ｎ，Ｎ’−ビス（３−アミノプロピル）−１，３−プロパンジアミン、Ｎ，Ｎ，ビス（２−アミノエチル）−１，３−プロパンジアミン、１，７−ジオキサ−４，１０−ジアザシクロドデカン、１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン−５，７−ジオン、１，４，７−トリアザシクロノナン三塩酸塩、１−オキサ−４，７，１０−トリアザシクロドデカン、１，４，８，１２−テトラアザシクロペンタデカン、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカンからなる群から選択される請求項２９９記載の方法。
【請求項３０１】
レチノイン酸に応答する前記幹細胞の前記能力の低下が可能な選択された前記条件は、１つ以上のレチノイン酸受容体アンタゴニスト、１つ以上のレチノイドＸ受容体アンタゴニストおよび／または１つ以上のビタミンＤ受容体アンタゴニストの有効量の存在を含む請求項２９２記載の方法。
【請求項３０２】
１つ以上のレチノイン酸受容体アンタゴニスト、１つ以上のレチノイドＸ受容体アンタゴニストおよび／または１つ以上のビタミンＤ受容体アンタゴニストの前記有効量の前記存在は、前記幹細胞の全エクスビボ培養期間の０．１％〜５０％の期間に行われる請求項３０１記載の方法。
【請求項３０３】
前記１つ以上のレチノイン酸受容体アンタゴニストは、ＡＧＮ１９４３１０；ＡＧＮ１９３１０９；３−（４−メトキシ−フェニルスルファニル）−３−メチル酪酸；６−メトキシ−２，２−ジメチルチオクロマン−４−オン、２，２−ジメチル−４−オキソ−チオクロマン−６−イルトリフルオロメタンスルホネート；４−（（２，２−ジメチル−４−オキソ−チオクロマン−６−イル）エチニル）安息香酸エチル；４−（（２，２−ジメチル  １−４−トリフルオロメタンスルホニルオキシ−２（Ｈ）−チオクロメン−６−イル）エチニル）安息香酸エチル（４１）；チオクロメン−６−イル］エチニル］ベンゾエート（イル）；（ｐ−［（Ｅ）−２−［３’４’−ジヒドロ−４，４’−ジメチル−７’−（ヘプチルオキシ）−２’Ｈ−１−ベンゾチオピラン−６’イル］プロペニル］安息香酸１’１’−ジオキシド；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ブトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−プロポキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ペントキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ヘキソキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ヘプトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−オクトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−［３−ｔ−ブチル−５−（１−フェニルビニル）−フェニル］−３−メチル）−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４｛［４，５−３Ｈ２］−ｎ−ペントキシ｝フェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸エチルエステル：（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸；（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブチルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；４−（５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレンカルボキサミド）安息香酸；（２Ｅ，４Ｅ）−３−メチル−５−［（１Ｒ，２Ｓ）−２−（５，５，８，８−テトラメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−ナフタレン−２−イ���）シクロプロピル］ペンタ−２，４−ジエン酸；ｐ−［（Ｅ）−２−［３’，４’−ジヒドロ−４’，４’−ジメチル−７’−（ヘプチルオキシ）−２’Ｈ−１−ベンゾチオピラン−６’−イル］プロペニル］安息香酸；１’，１’−ジオキシド，４−（７，７，１０，１０−テトラメチル−１−ピリジン−３−イルメチル−４，５，７，８，９，１０−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ナフト［２，３−ｇ］インドール−３−イル）安息香酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−メトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ヘキシルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−オクチルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；および（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３−ｎ−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、および４−（５Ｈ−２，３（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−ｎ−プロピルジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、４−（５Ｈ−２，３−（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−メチル−８−ニトロジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、４−｛［４−（４−エチルフェニル）２，２−ジメチル−（２Ｈ）−チオクロメン−６−イル］エチニル｝安息香酸、４−［４−２メチル−１，２−ジカルバ−クロソ（ｃｌｏｓｏ）−ドデカボラン−１−イル−フェニルカルバモイル］安息香酸、４−［４，５，７，８，９，１０−ヘキサヒドロ−７，７，１０，１０−テトラメチル−１−（３−ピリジルメチル）アントラ［１，２−ｂ］ピロール−３−イル］安息香酸、（３−ピリジルメチル）−）５−チアアントラ［２，１−ｂ］ピロール−３−イル）安息香酸、および（３−ピリジルメチル）アントラ［２ｍ１−ｄ］ピラゾール−３−イル）安息香酸からなる群から選択される請求項３０１記載の方法。
【請求項３０４】
前記１つ以上のレチノイドＸ受容体アンタゴニストは、ＬＧＮ１００５７２、ＬＧＮ１００５７４、１−（３−ヒドロキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）エタノン、１−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）エタノン、３−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）ブタ−２−エンニトリル、３−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）ブタ−２−エナール、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−３［−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレン−２−イル］−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、４−［３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル］カルボニル］安息香酸、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］安息香酸、４−［１（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］安息香酸、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ベンゼンテトラゾール、２−［１−（５，５，８，８−テトラメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エチル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸エチル、５−［１−３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル］エテニル］ピリジン−２−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸メチル、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］−Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）ベンズアミド、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸ブチルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸プロピルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸シアノイミン、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸アリルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸４−（３−メチルブタ−２−エン酸）オキシム、および４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸１−アミノエチルオキシム、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３−ｎ−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、４−（５Ｈ−２，３（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−ｎ−プロピルジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、および４−（５Ｈ−２，３−（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５メチル−８−ニトロジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸からなる群から選択される請求項３０１記載の方法。
【請求項３０５】
前記１つ以上のビタミンＤ受容体アンタゴニストは、１α，２５−（ＯＨ）−Ｄ３−２６，２３−ラクトン；１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ（３）；その２５−カルボン酸エステルＺＫ１５９２２２；（２３Ｓ）−２５−デヒドロ−１α−ＯＨ−Ｄ（３）；（２３Ｒ）−２５−デヒドロ−１α−ＯＨ−Ｄ（３）；１β，２５（ＯＨ）２Ｄ３；１β，２５（ＯＨ）２−３−ｅｐｉ−Ｄ３；（２３Ｓ）２５−デヒドロ−１α（ＯＨ）Ｄ３−２６，２３−ラクトン；（２３Ｒ）２５−デヒドロ−１α（ＯＨ）Ｄ３−２６，２３−ラクトン、および（５Ｚ，７Ｅ，２２Ｅ−（１Ｓ，７Ｅ，２２Ｅ−（１Ｓ，３Ｒ，２４Ｒ）−１，３，２４−トリヒドロキシ−２６，２７−シクロ−９，１０−セココレスタ−５，７，１０（１９），２２−テトラエン−２５−カルボン酸）ブチルからなる群から選択される請求項３０１記載の方法。
【請求項３０６】
レチノイン酸に応答する前記幹細胞の前記能力の低下が可能な選択された前記条件は、レチノイン酸受容体、レチノイドＸ受容体および／またはビタミンＤ受容体をダウンレギュレーションするポリヌクレオチドを含む請求項２９２記載の方法。
【請求項３０７】
前記ポリヌクレオチドが、抗レチノイン酸受容体細胞内抗体、抗レチノイドＸ受容体細胞内抗体および／または抗ビタミンＤ受容体細胞内抗体をコードする請求項３０６記載の方法。
【請求項３０８】
前記ポリヌクレオチドが、抗レチノイン酸受容体抗体、抗レチノイドＸ受容体抗体および／または抗ビタミンＤ受容体抗体をコードする請求項３０６記載の方法。
【請求項３０９】
前記ポリヌクレオチドが、レチノイン酸受容体、レチノイドＸ受容体またはビタミンＤ受容体の細胞内のｍＲＮＡ分解または遺伝子分解を生じさせる小さい干渉性ポリヌクレオチド分子である請求項３０６記載の方法。
【請求項３１０】
前記小さい干渉性ポリヌクレオチド分子は、ＲＮＡｉ分子、アンチセンス分子、リボザイム分子およびＤＮＡザイム分子からなる群から選択される請求項３０９記載の方法。
【請求項３１１】
レチノイン酸に応答する前記幹細胞の前記能力の低下が可能な選択された前記条件は、１つ以上のＰＩ３−キナーゼの発現阻害剤または活性阻害剤の有効量を含む請求項２９２記載の方法。
【請求項３１２】
前記１つ以上のＰＩ３−キナーゼの活性阻害剤は、ウォルトマンニンおよびＬＹ２９４００２からなる群から選択される請求項３１１記載の方法。
【請求項３１３】
前記１つ以上のＰＩ３−キナーゼの発現阻害剤がポリヌクレオチドである請求項３１１記載の方法。
【請求項３１４】
前記ポリヌクレオチドがＰＩ３−キナーゼ細胞内抗体をコードする請求項３１３記載の方法。
【請求項３１５】
前記ポリヌクレオチドがＰＩ３−キナーゼ抗体をコードする請求項３１３記載の方法。
【請求項３１６】
前記ポリヌクレオチドが優性ネガティブなＰＩ３−キナーゼ構築物を含有するＤＮＡベクターである請求項３１３記載の方法。
【請求項３１７】
前記ポリヌクレオチドが、ＰＩ３−キナーゼの細胞内のｍＲＮＡ分解または遺伝子分解を生じさせる小さい干渉性ポリヌクレオチド分子である請求項３１３記載の方法。
【請求項３１８】
前記小さい干渉性ポリヌクレオチド分子は、ＲＮＡｉ分子、アンチセンス分子、リボザイム分子およびＤＮＡザイム分子からなる群から選択される請求項３１７記載の方法。
【請求項３１９】
前記条件が、ニコチンアミド、ニコチンアミドアナログ、ニコチンアミドもしくはニコチンアミドアナログの誘導体、またはニコチンアミドもしくはニコチンアミドアナログの代謝物を含む請求項２４７記載の方法。
【請求項３２０】
前記条件が細胞に栄養分およびサイトカインを与えることをさらに含む請求項３１９記載の方法。
【請求項３２１】
前記サイトカインが初期作用サイトカインである請求項３２０記載の方法。
【請求項３２２】
前記初期作用サイトカインは、幹細胞因子、ＦＬＴ３リガンド、インターロイキン−１、インターロイキン−２、インターロイキン−３、インターロイキン−６、インターロイキン−１０、インターロイキン−１２、腫瘍壊死因子−αおよびトロンボポエチンからなる群から選択される請求項３２１記載の方法。
【請求項３２３】
前記サイトカインが後期作用サイトカインである請求項３２０記載の方法。
【請求項３２４】
前記後期作用サイトカインは、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子、エリスロポエチン、ＦＧＦ、ＥＧＦ、ＮＧＦ、ＶＥＧＦ、ＬＩＦ、肝細胞増殖因子およびマクロファージコロニー刺激因子からなる群から選択される請求項３２３記載の方法。
【請求項３２５】
細胞に遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートを与えることが前記条件にさらに含まれる請求項３１９記載の方法。
【請求項３２６】
前記遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートは、ポリアミンキレート化剤、エチレンジアミン、ジエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、トリエチレンジアミン、テトラエチレンペンタミン、アミノエチルエタノールアミン、アミノエチルピペラジン、ペンタエチレンヘキサミン、トリエチレンテトラミン塩酸塩、テトラエチレンペンタミン塩酸塩、ペンタエチレンヘキサミン塩酸塩、テトラエチルペンタミン、カプトプリル、ペニシラミン、Ｎ，Ｎ’−ビス（３−アミノプロピル）−１，３−プロパンジアミン、Ｎ，Ｎ，ビス（２−アミノエチル）−１，３−プロパンジアミン、１，７−ジオキサ−４，１０−ジアザシクロドデカン、１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン−５，７−ジオン、１，４，７−トリアザシクロノナン三塩酸塩、１−オキサ−４，７，１０−トリアザシクロドデカン、１，４，８，１２−テトラアザシクロペンタデカン、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカンからなる群から選択される請求項３２５記載の方法。
【請求項３２７】
前記ニコチンアミドアナログは、ベンズアミド、ニコチンチオアミド、ニコチン酸およびα−アミノ−３−インドールプロピオン酸からなる群から選択される請求項３１９記載の方法。
【請求項３２８】
前記条件がＰＩ３−キナーゼの活性阻害剤または発現阻害剤を含む請求項２４７記載の方法。
【請求項３２９】
前記ＰＩ３−キナーゼの発現阻害剤がポリヌクレオチドである請求項３２８記載の方法。
【請求項３３０】
前記ポリヌクレオチドがＰＩ３−キナーゼ細胞内抗体をコードする請求項３２９記載の方法。
【請求項３３１】
前記ポリヌクレオチドがＰＩ３−キナーゼ抗体をコードする請求項３２９記載の方法。
【請求項３３２】
前記ポリヌクレオチドが、ＰＩ３−キナーゼの細胞内のｍＲＮＡ分解または遺伝子分解を生じさせる小さい干渉性ポリヌクレオチド分子である請求項３２９記載の方法。
【請求項３３３】
前記小さい干渉性ポリヌクレオチド分子は、ＲＮＡｉ分子、アンチセンス分子、リボザイム分子およびＤＮＡザイム分子からなる群から選択される請求項３３２記載の方法。
【請求項３３４】
前記ポリヌクレオチドが優性ネガティブなＰＩ３−キナーゼ構築物を含有するＤＮＡベクターである請求項３２９記載の方法。
【請求項３３５】
前記ＰＩ３−キナーゼの活性阻害剤は、ウォルトマンニンおよびＬＹ２９４００２からなる群から選択される請求項３２８記載の方法。
【請求項３３６】
前記条件が細胞に栄養分およびサイトカインを与えることをさらに含む請求項３２８記載の方法。
【請求項３３７】
前記サイトカインが初期作用サイトカインである請求項３３６記載の方法。
【請求項３３８】
前記初期作用サイトカインは、幹細胞因子、ＦＬＴ３リガンド、インターロイキン−１、インターロイキン−２、インターロイキン−３、インターロイキン−６、インターロイキン−１０、インターロイキン−１２、腫瘍壊死因子−αおよびトロンボポエチンからなる群から選択される請求項３３７記載の方法。
【請求項３３９】
前記サイトカインが後期作用サイトカインである請求項３３６記載の方法。
【請求項３４０】
前記後期作用サイトカインは、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子、エリスロポエチン、ＦＧＦ、ＥＧＦ、ＮＧＦ、ＶＥＧＦ、ＬＩＦ、肝細胞増殖因子およびマクロファージコロニー刺激因子からなる群から選択される請求項３３９記載の方法。
【請求項３４１】
細胞に遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートを与えることが前記条件にさらに含まれる請求項３２８記載の方法。
【請求項３４２】
前記遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートは、ポリアミンキレート化剤、エチレンジアミン、ジエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、トリエチレンジアミン、テトラエチレンペンタミン、アミノエチルエタノールアミン、アミノエチルピペラジン、ペンタエチレンヘキサミン、トリエチレンテトラミン塩酸塩、テトラエチレンペンタミン塩酸塩、ペンタエチレンヘキサミン塩酸塩、テトラエチルペンタミン、カプトプリル、ペニシラミン、Ｎ，Ｎ’−ビス（３−アミノプロピル）−１，３−プロパンジアミン、Ｎ，Ｎ，ビス（２−アミノエチル）−１，３−プロパンジアミン、１，７−ジオキサ−４，１０−ジアザシクロドデカン、１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン−５，７−ジオン、１，４，７−トリアザシクロノナン三塩酸塩、１−オキサ−４，７，１０−トリアザシクロドデカン、１，４，８，１２−テトラアザシクロペンタデカン、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカンからなる群から選択される請求項３４１記載の方法。
【請求項３４３】
前記条件は、レチノイドに応答する前記幹細胞の能力を低下させることができるように選択される請求項２４７記載の方法。
【請求項３４４】
前記レチノイドに応答する前記幹細胞の前記能力を低下させることが可逆的な様式で行われる請求項３４３記載の方法。
【請求項３４５】
前記条件が細胞に栄養分およびサイトカインを与えることをさらに含む請求項３４３記載の方法。
【請求項３４６】
前記サイトカインが初期作用サイトカインである請求項３４５記載の方法。
【請求項３４７】
前記初期作用サイトカインは、幹細胞因子、ＦＬＴ３リガンド、インターロイキン−１、インターロイキン−２、インターロイキン−３、インターロイキン−６、インターロイキン−１０、インターロイキン−１２、腫瘍壊死因子−αおよびトロンボポエチンからなる群から選択される請求項３４６記載の方法。
【請求項３４８】
前記サイトカインが後期作用サイトカインである請求項３４５記載の方法。
【請求項３４９】
前記後期作用サイトカインは、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子、エリスロポエチン、ＦＧＦ、ＥＧＦ、ＮＧＦ、ＶＥＧＦ、ＬＩＦ、肝細胞増殖因子およびマクロファージコロニー刺激因子からなる群から選択される請求項３４８記載の方法。
【請求項３５０】
細胞に遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートを与えることが前記条件にさらに含まれる請求項３４３記載の方法。
【請求項３５１】
前記遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートは、ポリアミンキレート化剤、エチレンジアミン、ジエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、トリエチレンジアミン、テトラエチレンペンタミン、アミノエチルエタノールアミン、アミノエチルピペラジン、ペンタエチレンヘキサミン、トリエチレンテトラミン塩酸塩、テトラエチレンペンタミン塩酸塩、ペンタエチレンヘキサミン塩酸塩、テトラエチルペンタミン、カプトプリル、ペニシラミン、Ｎ，Ｎ’−ビス（３−アミノプロピル）−１，３−プロパンジアミン、Ｎ，Ｎ，ビス（２−アミノエチル）−１，３−プロパンジアミン、１，７−ジオキサ−４，１０−ジアザシクロドデカン、１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン−５，７−ジオン、１，４，７−トリアザシクロノナン三塩酸塩、１−オキサ−４，７，１０−トリアザシクロドデカン、１，４，８，１２−テトラアザシクロペンタデカン、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカンからなる群から選択される請求項３５０記載の方法。
【請求項３５２】
レチノイドに応答する前記幹細胞の前記能力の低下が可能な選択された前記条件は、１つ以上のレチノイン酸受容体アンタゴニスト、１つ以上のレチノイドＸ受容体アンタゴニストおよび／または１つ以上のビタミンＤ受容体アンタゴニストの有効量の存在を含む請求項３４３記載の方法。
【請求項３５３】
１つ以上のレチノイン酸受容体アンタゴニスト、１つ以上のレチノイドＸ受容体アンタゴニストおよび／または１つ以上のビタミンＤ受容体アンタゴニストの前記有効量の前記存在は、前記幹細胞の全エクスビボ培養期間の０．１％〜５０％の期間に行われる請求項３５２記載の方法。
【請求項３５４】
前記１つ以上のレチノイン酸受容体アンタゴニストは、ＡＧＮ１９４３１０；ＡＧＮ１９３１０９；３−（４−メトキシ−フェニルスルファニル）−３−メチル酪酸；６−メトキシ−２，２−ジメチルチオクロマン−４−オン、２，２−ジメチル−４−オキソ−チオクロマン−６−イルトリフルオロメタンスルホネート；４−（（２，２−ジメチル−４−オキソ−チオクロマン−６−イル）エチニル）安息香酸エチル；４−（（２，２−ジメチル  １−４−トリフルオロメタンスルホニルオキシ−２（Ｈ）−チオクロメン−６−イル）エチニル）安息香酸エチル（４１）；チオクロメン−６−イル］エチニル］ベンゾエート（イル）；（ｐ−［（Ｅ）−２−［３’４’−ジヒドロ−４，４’−ジメチル−７’−（ヘプチルオキシ）−２’Ｈ−１−ベンゾチオピラン−６’イル］プロペニル］安息香酸１’１’−ジオキシド；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ブトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−プロポキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ペントキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ヘキソキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ヘプトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−オクトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−［３−ｔ−ブチル−５−（１−フェニルビニル）−フェニル］−３−メチル）−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４｛［４，５−３Ｈ２］−ｎ−ペントキシ｝フェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸エチルエステル：（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸；（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブチルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；４−（５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレンカルボキサミド）安息香酸；（２Ｅ，４Ｅ）−３−メチル−５−［（１Ｒ，２Ｓ）−２−（５，５，８，８−テトラメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−ナフタレン−２−イ���）シクロプロピル］ペンタ−２，４−ジエン酸；ｐ−［（Ｅ）−２−［３’，４’−ジヒドロ−４’，４’−ジメチル−７’−（ヘプチルオキシ）−２’Ｈ−１−ベンゾチオピラン−６’−イル］プロペニル］安息香酸；１’，１’−ジオキシド，４−（７，７，１０，１０−テトラメチル−１−ピリジン−３−イルメチル−４，５，７，８，９，１０−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ナフト［２，３−ｇ］インドール−３−イル）安息香酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−メトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ヘキシルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−オクチルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；および（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３−ｎ−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、および４−（５Ｈ−２，３（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−ｎ−プロピルジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、４−（５Ｈ−２，３−（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−メチル−８−ニトロジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、４−｛［４−（４−エチルフェニル）２，２−ジメチル−（２Ｈ）−チオクロメン−６−イル］エチニル｝安息香酸、４−［４−２メチル−１，２−ジカルバ−クロソ（ｃｌｏｓｏ）−ドデカボラン−１−イル−フェニルカルバモイル］安息香酸、４−［４，５，７，８，９，１０−ヘキサヒドロ−７，７，１０，１０−テトラメチル−１−（３−ピリジルメチル）アントラ［１，２−ｂ］ピロール−３−イル］安息香酸、（３−ピリジルメチル）−）５−チアアントラ［２，１−ｂ］ピロール−３−イル）安息香酸、および（３−ピリジルメチル）アントラ［２ｍ１−ｄ］ピラゾール−３−イル）安息香酸からなる群から選択される請求項３５２記載の方法。
【請求項３５５】
前記１つ以上のレチノイドＸ受容体アンタゴニストは、ＬＧＮ１００５７２、ＬＧＮ１００５７４、１−（３−ヒドロキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）エタノン、１−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）エタノン、３−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）ブタ−２−エンニトリル、３−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）ブタ−２−エナール、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−３［−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレン−２−イル］−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、４−［３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル］カルボニル］安息香酸、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］安息香酸、４−［１（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］安息香酸、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ベンゼンテトラゾール、２−［１−（５，５，８，８−テトラメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エチル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸エチル、５−［１−３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル］エテニル］ピリジン−２−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸メチル、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］−Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）ベンズアミド、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸ブチルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸プロピルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸シアノイミン、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸アリルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸４−（３−メチルブタ−２−エン酸）オキシム、および４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸１−アミノエチルオキシム、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３−ｎ−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、４−（５Ｈ−２，３（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−ｎ−プロピルジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、および４−（５Ｈ−２，３−（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５メチル−８−ニトロジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸からなる群から選択される請求項３５２記載の方法。
【請求項３５６】
前記１つ以上のビタミンＤ受容体アンタゴニストは、１α，２５−（ＯＨ）−Ｄ３−２６，２３−ラクトン；１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ（３）；その２５−カルボン酸エステルＺＫ１５９２２２；（２３Ｓ）−２５−デヒドロ−１α−ＯＨ−Ｄ（３）；（２３Ｒ）−２５−デヒドロ−１α−ＯＨ−Ｄ（３）；１β，２５（ＯＨ）２Ｄ３；１β，２５（ＯＨ）２−３−ｅｐｉ−Ｄ３；（２３Ｓ）２５−デヒドロ−１α（ＯＨ）Ｄ３−２６，２３−ラクトン；（２３Ｒ）２５−デヒドロ−１α（ＯＨ）Ｄ３−２６，２３−ラクトン、および（５Ｚ，７Ｅ，２２Ｅ−（１Ｓ，７Ｅ，２２Ｅ−（１Ｓ，３Ｒ，２４Ｒ）−１，３，２４−トリヒドロキシ−２６，２７−シクロ−９，１０−セココレスタ−５，７，１０（１９），２２−テトラエン−２５−カルボン酸）ブチルからなる群から選択される請求項３５２記載の方法。
【請求項３５７】
レチノイドに応答する前記幹細胞の前記能力の低下が可能な選択された前記条件は、レチノイン酸受容体、レチノイドＸ受容体および／またはビタミンＤ受容体をダウンレギュレーションするポリヌクレオチドを含む請求項３４３記載の方法。
【請求項３５８】
前記ポリヌクレオチドが、抗レチノイン酸受容体細胞内抗体、抗レチノイドＸ受容体細胞内抗体および／または抗ビタミンＤ受容体細胞内抗体をコードする請求項３５７記載の方法。
【請求項３５９】
前記ポリヌクレオチドが、抗レチノイン酸受容体抗体、抗レチノイドＸ受容体抗体および／または抗ビタミンＤ受容体抗体をコードする請求項３５７記載の方法。
【請求項３６０】
前記ポリヌクレオチドが、レチノイン酸受容体、レチノイドＸ受容体またはビタミンＤ受容体の細胞内のｍＲＮＡ分解または遺伝子分解を生じさせる小さい干渉性ポリヌクレオチド分子である請求項３５７記載の方法。
【請求項３６１】
前記小さい干渉性ポリヌクレオチド分子は、ＲＮＡｉ分子、アンチセンス分子、リボザイム分子およびＤＮＡザイム分子からなる群から選択される請求項３６０記載の方法。
【請求項３６２】
レチノイドに応答する前記幹細胞の前記能力の低下が可能な選択された前記条件は、１つ以上のＰＩ３−キナーゼの発現阻害剤または活性阻害剤の有効量を含む請求項３４３記載の方法。
【請求項３６３】
前記１つ以上のＰＩ３−キナーゼの活性阻害剤は、ウォルトマンニンおよびＬＹ２９４００２からなる群から選択される請求項３６２記載の方法。
【請求項３６４】
前記１つ以上のＰＩ３−キナーゼの発現阻害剤がポリヌクレオチドである請求項３６２記載の方法。
【請求項３６５】
前記ポリヌクレオチドがＰＩ３−キナーゼ細胞内抗体をコードする請求項３６４記載の方法。
【請求項３６６】
前記ポリヌクレオチドがＰＩ３−キナーゼ抗体をコードする請求項３６４記載の方法。
【請求項３６７】
前記ポリヌクレオチドが優性ネガティブなＰＩ３−キナーゼ構築物を含有するＤＮＡベクターである請求項３６４記載の方法。
【請求項３６８】
前記ポリヌクレオチドが、ＰＩ３−キナーゼの細胞内のｍＲＮＡ分解または遺伝子分解を生じさせる小さい干渉性ポリヌクレオチド分子である請求項３６４記載の方法。
【請求項３６９】
前記小さい干渉性ポリヌクレオチド分子は、ＲＮＡｉ分子、アンチセンス分子、リボザイム分子およびＤＮＡザイム分子からなる群から選択される請求項３６８記載の方法。
【請求項３７０】
前記条件は、ビタミンＤに応答する前記幹細胞の能力を低下させることができるように選択される請求項２４７記載の方法。
【請求項３７１】
前記ビタミンＤに応答する前記幹細胞の前記能力を低下させることが可逆的な様式で行われる請求項３７０記載の方法。
【請求項３７２】
前記条件が細胞に栄養分およびサイトカインを与えることをさらに含む請求項３７０記載の方法。
【請求項３７３】
前記サイトカインが初期作用サイトカインである請求項３７２記載の方法。
【請求項３７４】
前記初期作用サイトカインは、幹細胞因子、ＦＬＴ３リガンド、インターロイキン−１、インターロイキン−２、インターロイキン−３、インターロイキン−６、インターロイキン−１０、インターロイキン−１２、腫瘍壊死因子−αおよびトロンボポエチンからなる群から選択される請求項３７３記載の方法。
【請求項３７５】
前記サイトカインが後期作用サイトカインである請求項３７２記載の方法。
【請求項３７６】
前記後期作用サイトカインは、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子、エリスロポエチン、ＦＧＦ、ＥＧＦ、ＮＧＦ、ＶＥＧＦ、ＬＩＦ、肝細胞増殖因子およびマクロファージコロニー刺激因子からなる群から選択される請求項３７５記載の方法。
【請求項３７７】
細胞に遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートを与えることが前記条件にさらに含まれる請求項３７０記載の方法。
【請求項３７８】
前記遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートは、ポリアミンキレート化剤、エチレンジアミン、ジエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、トリエチレンジアミン、テトラエチレンペンタミン、アミノエチルエタノールアミン、アミノエチルピペラジン、ペンタエチレンヘキサミン、トリエチレンテトラミン塩酸塩、テトラエチレンペンタミン塩酸塩、ペンタエチレンヘキサミン塩酸塩、テトラエチルペンタミン、カプトプリル、ペニシラミン、Ｎ，Ｎ’−ビス（３−アミノプロピル）−１，３−プロパンジアミン、Ｎ，Ｎ，ビス（２−アミノエチル）−１，３−プロパンジアミン、１，７−ジオキサ−４，１０−ジアザシクロドデカン、１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン−５，７−ジオン、１，４，７−トリアザシクロノナン三塩酸塩、１−オキサ−４，７，１０−トリアザシクロドデカン、１，４，８，１２−テトラアザシクロペンタデカン、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカンからなる群から選択される請求項３７７記載の方法。
【請求項３７９】
ビタミンＤに応答する前記幹細胞の前記能力の低下が可能な選択された前記条件は、１つ以上のレチノイン酸受容体アンタゴニスト、１つ以上のレチノイドＸ受容体アンタゴニストおよび／または１つ以上のビタミンＤ受容体アンタゴニストの有効量の存在を含む請求項３７０記載の方法。
【請求項３８０】
１つ以上のレチノイン酸受容体アンタゴニスト、１つ以上のレチノイドＸ受容体アンタゴニストおよび／または１つ以上のビタミンＤ受容体アンタゴニストの前記有効量の前記存在は、前記幹細胞の全エクスビボ培養期間の０．１％〜５０％の期間に行われる請求項３７９記載の方法。
【請求項３８１】
前記レチノイン酸受容体アンタゴニストは、ＡＧＮ１９４３１０；ＡＧＮ１９３１０９；３−（４−メトキシ−フェニルスルファニル）−３−メチル酪酸；６−メトキシ−２，２−ジメチルチオクロマン−４−オン、２，２−ジメチル−４−オキソ−チオクロマン−６−イルトリフルオロメタンスルホネート；４−（（２，２−ジメチル−４−オキソ−チオクロマン−６−イル）エチニル）安息香酸エチル；４−（（２，２−ジメチル  １−４−トリフルオロメタンスルホニルオキシ−２（Ｈ）−チオクロメン−６−イル）エチニル）安息香酸エチル（４１）；チオクロメン−６−イル］エチニル］ベンゾエート（イル）；（ｐ−［（Ｅ）−２−［３’４’−ジヒドロ−４，４’−ジメチル−７’−（ヘプチルオキシ）−２’Ｈ−１−ベンゾチオピラン−６’イル］プロペニル］安息香酸１’１’−ジオキシド；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ブトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−プロポキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ペントキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ヘキソキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ヘプトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−オクトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−［３−ｔ−ブチル−５−（１−フェニルビニル）−フェニル］−３−メチル）−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４｛［４，５−３Ｈ２］−ｎ−ペントキシ｝フェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸エチルエステル：（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸；（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブチルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；４−（５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレンカルボキサミド）安息香酸；（２Ｅ，４Ｅ）−３−メチル−５−［（１Ｒ，２Ｓ）−２−（５，５，８，８−テトラメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−ナフタレン−２−イル）シクロ���ロピル］ペンタ−２，４−ジエン酸；ｐ−［（Ｅ）−２−［３’，４’−ジヒドロ−４’，４’−ジメチル−７’−（ヘプチルオキシ）−２’Ｈ−１−ベンゾチオピラン−６’−イル］プロペニル］安息香酸；１’，１’−ジオキシド，４−（７，７，１０，１０−テトラメチル−１−ピリジン−３−イルメチル−４，５，７，８，９，１０−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ナフト［２，３−ｇ］インドール−３−イル）安息香酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−メトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ヘキシルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−オクチルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；および（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３−ｎ−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、および４−（５Ｈ−２，３（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−ｎ−プロピルジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、４−（５Ｈ−２，３−（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−メチル−８−ニトロジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、４−｛［４−（４−エチルフェニル）２，２−ジメチル−（２Ｈ）−チオクロメン−６−イル］エチニル｝安息香酸、４−［４−２メチル−１，２−ジカルバ−クロソ（ｃｌｏｓｏ）−ドデカボラン−１−イル−フェニルカルバモイル］安息香酸、４−［４，５，７，８，９，１０−ヘキサヒドロ−７，７，１０，１０−テトラメチル−１−（３−ピリジルメチル）アントラ［１，２−ｂ］ピロール−３−イル］安息香酸、（３−ピリジルメチル）−）５−チアアントラ［２，１−ｂ］ピロール−３−イル）安息香酸、および（３−ピリジルメチル）アントラ［２ｍ１−ｄ］ピラゾール−３−イル）安息香酸からなる群から選択される請求項３７９記載の方法。
【請求項３８２】
前記レチノイドＸ受容体アンタゴニストは、ＬＧＮ１００５７２、ＬＧＮ１００５７４、１−（３−ヒドロキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）エタノン、１−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）エタノン、３−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）ブタ−２−エンニトリル、３−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）ブタ−２−エナール、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−３［−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレン−２−イル］−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、４−［３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル］カルボニル］安息香酸、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］安息香酸、４−［１（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］安息香酸、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ベンゼンテトラゾール、２−［１−（５，５，８，８−テトラメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エチル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸エチル、５−［１−３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル］エテニル］ピリジン−２−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸メチル、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］−Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）ベンズアミド、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸ブチルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸プロピルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸シアノイミン、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸アリルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸４−（３−メチルブタ−２−エン酸）オキシム、および４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸１−アミノエチルオキシム、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３−ｎ−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、４−（５Ｈ−２，３（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−ｎ−プロピルジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、および４−（５Ｈ−２，３−（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５メチル−８−ニトロジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸からなる群から選択される請求項３７９記載の方法。
【請求項３８３】
前記ビタミンＤ受容体アンタゴニストは、１α，２５−（ＯＨ）−Ｄ３−２６，２３−ラクトン；１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ（３）；その２５−カルボン酸エステルＺＫ１５９２２２；（２３Ｓ）−２５−デヒドロ−１α−ＯＨ−Ｄ（３）；（２３Ｒ）−２５−デヒドロ−１α−ＯＨ−Ｄ（３）；１β，２５（ＯＨ）２Ｄ３；１β，２５（ＯＨ）２−３−ｅｐｉ−Ｄ３；（２３Ｓ）２５−デヒドロ−１α（ＯＨ）Ｄ３−２６，２３−ラクトン；（２３Ｒ）２５−デヒドロ−１α（ＯＨ）Ｄ３−２６，２３−ラクトン、および（５Ｚ，７Ｅ，２２Ｅ−（１Ｓ，７Ｅ，２２Ｅ−（１Ｓ，３Ｒ，２４Ｒ）−１，３，２４−トリヒドロキシ−２６，２７−シクロ−９，１０−セココレスタ−５，７，１０（１９），２２−テトラエン−２５−カルボン酸）ブチルからなる群から選択される請求項３７９記載の方法。
【請求項３８４】
ビタミンＤに応答する前記幹細胞の前記能力の低下が可能な選択された前記条件は、レチノイン酸受容体、レチノイドＸ受容体および／またはビタミンＤ受容体をダウンレギュレーションするポリヌクレオチドを含む請求項３７０記載の方法。
【請求項３８５】
前記ポリヌクレオチドが、抗レチノイン酸受容体細胞内抗体、抗レチノイドＸ受容体細胞内抗体および／または抗ビタミンＤ受容体細胞内抗体をコードする請求項３８４記載の方法。
【請求項３８６】
前記ポリヌクレオチドが、抗レチノイン酸受容体抗体、抗レチノイドＸ受容体抗体および／または抗ビタミンＤ受容体抗体をコードする請求項３８４記載の方法。
【請求項３８７】
前記ポリヌクレオチドが、レチノイン酸受容体、レチノイドＸ受容体またはビタミンＤ受容体の細胞内のｍＲＮＡ分解または遺伝子分解を生じさせる小さい干渉性ポリヌクレオチド分子である請求項３８４記載の方法。
【請求項３８８】
前記小さい干渉性ポリヌクレオチド分子は、ＲＮＡｉ分子、アンチセンス分子、リボザイム分子およびＤＮＡザイム分子からなる群から選択される請求項３８７記載の方法。
【請求項３８９】
ビタミンＤに応答する前記幹細胞の前記能力の低下が可能な選択された前記条件は、１つ以上のＰＩ３−キナーゼの発現阻害剤または活性阻害剤の有効量を含む請求項３７０記載の方法。
【請求項３９０】
前記１つ以上のＰＩ３−キナーゼの活性阻害剤は、ウォルトマンニンおよびＬＹ２９４００２からなる群から選択される請求項３８９記載の方法。
【請求項３９１】
前記１つ以上のＰＩ３−キナーゼの発現阻害剤がポリヌクレオチドである請求項３８９記載の方法。
【請求項３９２】
前記ポリヌクレオチドがＰＩ３−キナーゼ細胞内抗体をコードする請求項３９１記載の方法。
【請求項３９３】
前記ポリヌクレオチドがＰＩ３−キナーゼ抗体をコードする請求項３９１記載の方法。
【請求項３９４】
前記ポリヌクレオチドが優性ネガティブなＰＩ３−キナーゼ構築物を含有するＤＮＡベクターである請求項３９１記載の方法。
【請求項３９５】
前記ポリヌクレオチドが、ＰＩ３−キナーゼの細胞内のｍＲＮＡ分解または遺伝子分解を生じさせる小さい干渉性ポリヌクレオチド分子である請求項３９１記載の方法。
【請求項３９６】
前記小さい干渉性ポリヌクレオチド分子は、ＲＮＡｉ分子、アンチセンス分子、リボザイム分子およびＤＮＡザイム分子からなる群から選択される請求項３９５記載の方法。
【請求項３９７】
前記条件は、レチノイン酸受容体を伴うシグナル伝達経路に応答する前記幹細胞の能力を低下させることができるように選択される請求項２４７記載の方法。
【請求項３９８】
レチノイン酸受容体を伴うシグナル伝達経路に応答する前記幹細胞の前記能力を低下させることが可逆的な様式で行われる請求項３９７記載の方法。
【請求項３９９】
前記条件が細胞に栄養分およびサイトカインを与えることをさらに含む請求項３９７記載の方法。
【請求項４００】
前記サイトカインが初期作用サイトカインである請求項３９９記載の方法。
【請求項４０１】
前記初期作用サイトカインは、幹細胞因子、ＦＬＴ３リガンド、インターロイキン−１、インターロイキン−２、インターロイキン−３、インターロイキン−６、インターロイキン−１０、インターロイキン−１２、腫瘍壊死因子−αおよびトロンボポエチンからなる群から選択される請求項４００記載の方法。
【請求項４０２】
前記サイトカインが後期作用サイトカインである請求項３９９記載の方法。
【請求項４０３】
前記後期作用サイトカインは、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子、エリスロポエチン、ＦＧＦ、ＥＧＦ、ＮＧＦ、ＶＥＧＦ、ＬＩＦ、肝細胞増殖因子およびマクロファージコロニー刺激因子からなる群から選択される請求項４０２記載の方法。
【請求項４０４】
細胞に遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートを与えることが前記条件にさらに含まれる請求項３９７記載の方法。
【請求項４０５】
前記遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートは、ポリアミンキレート化剤、エチレンジアミン、ジエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、トリエチレンジアミン、テトラエチレンペンタミン、アミノエチルエタノールアミン、アミノエチルピペラジン、ペンタエチレンヘキサミン、トリエチレンテトラミン塩酸塩、テトラエチレンペンタミン塩酸塩、ペンタエチレンヘキサミン塩酸塩、テトラエチルペンタミン、カプトプリル、ペニシラミン、Ｎ，Ｎ’−ビス（３−アミノプロピル）−１，３−プロパンジアミン、Ｎ，Ｎ，ビス（２−アミノエチル）−１，３−プロパンジアミン、１，７−ジオキサ−４，１０−ジアザシクロドデカン、１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン−５，７−ジオン、１，４，７−トリアザシクロノナン三塩酸塩、１−オキサ−４，７，１０−トリアザシクロドデカン、１，４，８，１２−テトラアザシクロペンタデカン、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカンからなる群から選択される請求項４０４記載の方法。
【請求項４０６】
レチノイン酸受容体を伴うシグナル伝達経路に応答する前記幹細胞の前記能力の低下が可能な選択された前記条件は、１つ以上のレチノイン酸受容体アンタゴニスト、１つ以上のレチノイドＸ受容体アンタゴニストおよび／または１つ以上のビタミンＤ受容体アンタゴニストの有効量の存在を含む請求項３９７記載の方法。
【請求項４０７】
１つ以上のレチノイン酸受容体アンタゴニスト、１つ以上のレチノイドＸ受容体アンタゴニストおよび／または１つ以上のビタミンＤ受容体アンタゴニストの前記有効量の前記存在は、前記幹細胞の全エクスビボ培養期間の０．１％〜５０％の期間に行われる請求項４０６記載の方法。
【請求項４０８】
前記レチノイン酸受容体アンタゴニストは、ＡＧＮ１９４３１０；ＡＧＮ１９３１０９；３−（４−メトキシ−フェニルスルファニル）−３−メチル酪酸；６−メトキシ−２，２−ジメチルチオクロマン−４−オン、２，２−ジメチル−４−オキソ−チオクロマン−６−イルトリフルオロメタンスルホネート；４−（（２，２−ジメチル−４−オキソ−チオクロマン−６−イル）エチニル）安息香酸エチル；４−（（２，２−ジメチル  １−４−トリフルオロメタンスルホニルオキシ−２（Ｈ）−チオクロメン−６−イル）エチニル）安息香酸エチル（４１）；チオクロメン−６−イル］エチニル］ベンゾエート（イル）；（ｐ−［（Ｅ）−２−［３’４’−ジヒドロ−４，４’−ジメチル−７’−（ヘプチルオキシ）−２’Ｈ−１−ベンゾチオピラン−６’イル］プロペニル］安息香酸１’１’−ジオキシド；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ブトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−プロポキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ペントキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ヘキソキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ヘプトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−オクトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−［３−ｔ−ブチル−５−（１−フェニルビニル）−フェニル］−３−メチル）−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４｛［４，５−３Ｈ２］−ｎ−ペントキシ｝フェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸エチルエステル：（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸；（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブチルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；４−（５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレンカルボキサミド）安息香酸；（２Ｅ，４Ｅ）−３−メチル−５−［（１Ｒ，２Ｓ）−２−（５，５，８，８−テトラメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−ナフタレン−２−イル）シクロ���ロピル］ペンタ−２，４−ジエン酸；ｐ−［（Ｅ）−２−［３’，４’−ジヒドロ−４’，４’−ジメチル−７’−（ヘプチルオキシ）−２’Ｈ−１−ベンゾチオピラン−６’−イル］プロペニル］安息香酸；１’，１’−ジオキシド，４−（７，７，１０，１０−テトラメチル−１−ピリジン−３−イルメチル−４，５，７，８，９，１０−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ナフト［２，３−ｇ］インドール−３−イル）安息香酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−メトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ヘキシルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−オクチルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；および（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２Ｓ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３−ｎ−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、および４−（５Ｈ−２，３（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−ｎ−プロピルジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、４−（５Ｈ−２，３−（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−メチル−８−ニトロジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、４−｛［４−（４−エチルフェニル）２，２−ジメチル−（２Ｈ）−チオクロメン−６−イル］エチニル｝安息香酸、４−［４−２メチル−１，２−ジカルバ−クロソ（ｃｌｏｓｏ）−ドデカボラン−１−イル−フェニルカルバモイル］安息香酸、４−［４，５，７，８，９，１０−ヘキサヒドロ−７，７，１０，１０−テトラメチル−１−（３−ピリジルメチル）アントラ［１，２−ｂ］ピロール−３−イル］安息香酸、（３−ピリジルメチル）−）５−チアアントラ［２，１−ｂ］ピロール−３−イル）安息香酸、および（３−ピリジルメチル）アントラ［２ｍ１−ｄ］ピラゾール−３−イル）安息香酸からなる群から選択される請求項４０６記載の方法。
【請求項４０９】
前記レチノイドＸ受容体アンタゴニストは、ＬＧＮ１００５７２、ＬＧＮ１００５７４、１−（３−ヒドロキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）エタノン、１−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）エタノン、３−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）ブタ−２−エンニトリル、３−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）ブタ−２−エナール、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−３［−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレン−２−イル］−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、４−［３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル］カルボニル］安息香酸、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］安息香酸、４−［１（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］安息香酸、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ベンゼンテトラゾール、２−［１−（５，５，８，８−テトラメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エチル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸エチル、５−［１−３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル］エテニル］ピリジン−２−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸メチル、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］−Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）ベンズアミド、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸ブチルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸プロピルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸シアノイミン、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸アリルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸４−（３−メチルブタ−２−エン酸）オキシム、および４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸１−アミノエチルオキシム、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３−ｎ−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、４−（５Ｈ−２，３（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−ｎ−プロピルジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、および４−（５Ｈ−２，３−（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５メチル−８−ニトロジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸からなる群から選択される請求項４０６記載の方法。
【請求項４１０】
前記ビタミンＤ受容体アンタゴニストは、１α，２５−（ＯＨ）−Ｄ３−２６，２３−ラクトン；１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ（３）；その２５−カルボン酸エステルＺＫ１５９２２２；（２３Ｓ）−２５−デヒドロ−１α−ＯＨ−Ｄ（３）；（２３Ｒ）−２５−デヒドロ−１α−ＯＨ−Ｄ（３）；１β，２５（ＯＨ）２Ｄ３；１β，２５（ＯＨ）２−３−ｅｐｉ−Ｄ３；（２３Ｓ）２５−デヒドロ−１α（ＯＨ）Ｄ３−２６，２３−ラクトン；（２３Ｒ）２５−デヒドロ−１α（ＯＨ）Ｄ３−２６，２３−ラクトン、および（５Ｚ，７Ｅ，２２Ｅ−（１Ｓ，７Ｅ，２２Ｅ−（１Ｓ，３Ｒ，２４Ｒ）−１，３，２４−トリヒドロキシ−２６，２７−シクロ−９，１０−セココレスタ−５，７，１０（１９），２２−テトラエン−２５−カルボン酸）ブチルからなる群から選択される請求項４０６記載の方法。
【請求項４１１】
レチノイン酸を伴うシグナル伝達経路に応答する前記幹細胞の前記能力の低下が可能な選択された前記条件は、レチノイン酸受容体、レチノイドＸ受容体および／またはビタミンＤ受容体をダウンレギュレーションするポリヌクレオチドを含む請求項３９７記載の方法。
【請求項４１２】
前記ポリヌクレオチドが、抗レチノイン酸受容体細胞内抗体、抗レチノイドＸ受容体細胞内抗体および／または抗ビタミンＤ受容体細胞内抗体をコードする請求項４１１記載の方法。
【請求項４１３】
前記ポリヌクレオチドが、抗レチノイン酸受容体抗体、抗レチノイドＸ受容体抗体および／または抗ビタミンＤ受容体抗体をコードする請求項４１１記載の方法。
【請求項４１４】
前記ポリヌクレオチドが、レチノイン酸受容体、レチノイドＸ受容体またはビタミンＤ受容体の細胞内のｍＲＮＡ分解または遺伝子分解を生じさせる小さい干渉性ポリヌクレオチド分子である請求項４１１記載の方法。
【請求項４１５】
前記小さい干渉性ポリヌクレオチド分子は、ＲＮＡｉ分子、アンチセンス分子、リボザイム分子およびＤＮＡザイム分子からなる群から選択される請求項４１４記載の方法。
【請求項４１６】
レチノイン酸を伴うシグナル伝達経路に応答する前記幹細胞の前記能力の低下が可能な選択された前記条件は、１つ以上のＰＩ３−キナーゼの発現阻害剤または活性阻害剤の有効量を含む請求項３９７記載の方法。
【請求項４１７】
前記１つ以上のＰＩ３−キナーゼの活性阻害剤は、ウォルトマンニンおよびＬＹ２９４００２からなる群から選択される請求項４１６記載の方法。
【請求項４１８】
前記１つ以上のＰＩ３−キナーゼの発現阻害剤がポリヌクレオチドである請求項４１６記載の方法。
【請求項４１９】
前記ポリヌクレオチドがＰＩ３−キナーゼ細胞内抗体をコードする請求項４１８記載の方法。
【請求項４２０】
前記ポリヌクレオチドがＰＩ３−キナーゼ抗体をコードする請求項４１８記載の方法。
【請求項４２１】
前記ポリヌクレオチドが優性ネガティブなＰＩ３−キナーゼ構築物を含有するＤＮＡベクターである請求項４１８記載の方法。
【請求項４２２】
前記ポリヌクレオチドが、ＰＩ３−キナーゼの細胞内のｍＲＮＡ分解または遺伝子分解を生じさせる小さい干渉性ポリヌクレオチド分子である請求項４１８記載の方法。
【請求項４２３】
前記小さい干渉性ポリヌクレオチド分子は、ＲＮＡｉ分子、アンチセンス分子、リボザイム分子およびＤＮＡザイム分子からなる群から選択される請求項４２２記載の方法。
【請求項４２４】
前記条件は、レチノイドＸ受容体を伴うシグナル伝達経路に応答する前記幹細胞の能力を低下させることができるように選択される請求項２４７記載の方法。
【請求項４２５】
レチノイドＸ受容体を伴う前記シグナル伝達経路に応答する前記幹細胞の前記能力を低下させることが可逆的な様式で行われる請求項４２４記載の方法。
【請求項４２６】
前記条件が細胞に栄養分およびサイトカインを与えることをさらに含む請求項４２４記載の方法。
【請求項４２７】
前記サイトカインが初期作用サイトカインである請求項４２６記載の方法。
【請求項４２８】
前記初期作用サイトカインは、幹細胞因子、ＦＬＴ３リガンド、インターロイキン−１、インターロイキン−２、インターロイキン−３、インターロイキン−６、インターロイキン−１０、インターロイキン−１２、腫瘍壊死因子−αおよびトロンボポエチンからなる群から選択される請求項４２７記載の方法。
【請求項４２９】
前記サイトカインが後期作用サイトカインである請求項４２６記載の方法。
【請求項４３０】
前記後期作用サイトカインは、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子、エリスロポエチン、ＦＧＦ、ＥＧＦ、ＮＧＦ、ＶＥＧＦ、ＬＩＦ、肝細胞増殖因子およびマクロファージコロニー刺激因子からなる群から選択される請求項４２９記載の方法。
【請求項４３１】
細胞に遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートを与えることが前記条件にさらに含まれる請求項４２４記載の方法。
【請求項４３２】
前記遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートは、ポリアミンキレート化剤、エチレンジアミン、ジエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、トリエチレンジアミン、テトラエチレンペンタミン、アミノエチルエタノールアミン、アミノエチルピペラジン、ペンタエチレンヘキサミン、トリエチレンテトラミン塩酸塩、テトラエチレンペンタミン塩酸塩、ペンタエチレンヘキサミン塩酸塩、テトラエチルペンタミン、カプトプリル、ペニシラミン、Ｎ，Ｎ’−ビス（３−アミノプロピル）−１，３−プロパンジアミン、Ｎ，Ｎ，ビス（２−アミノエチル）−１，３−プロパンジアミン、１，７−ジオキサ−４，１０−ジアザシクロドデカン、１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン−５，７−ジオン、１，４，７−トリアザシクロノナン三塩酸塩、１−オキサ−４，７，１０−トリアザシクロドデカン、１，４，８，１２−テトラアザシクロペンタデカン、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカンからなる群から選択される請求項４３１記載の方法。
【請求項４３３】
レチノイドＸ受容体を伴うシグナル伝達経路に応答する前記幹細胞の前記能力の低下が可能な選択された前記条件は、１つ以上のレチノイン酸受容体アンタゴニスト、１つ以上のレチノイドＸ受容体アンタゴニストおよび／または１つ以上のビタミンＤ受容体アンタゴニストの有効量の存在を含む請求項４２４記載の方法。
【請求項４３４】
１つ以上のレチノイン酸受容体アンタゴニスト、１つ以上のレチノイドＸ受容体アンタゴニストおよび／または１つ以上のビタミンＤ受容体アンタゴニストの前記有効量の前記存在は、前記幹細胞の全エクスビボ培養期間の０．１％〜５０％の期間に行われる請求項４３３記載の方法。
【請求項４３５】
前記レチノイン酸受容体アンタゴニストは、ＡＧＮ１９４３１０；ＡＧＮ１９３１０９；３−（４−メトキシ−フェニルスルファニル）−３−メチル酪酸；６−メトキシ−２，２−ジメチルチオクロマン−４−オン、２，２−ジメチル−４−オキソ−チオクロマン−６−イルトリフルオロメタンスルホネート；４−（（２，２−ジメチル−４−オキソ−チオクロマン−６−イル）エチニル）安息香酸エチル；４−（（２，２−ジメチル  １−４−トリフルオロメタンスルホニルオキシ−２（Ｈ）−チオクロメン−６−イル）エチニル）安息香酸エチル（４１）；チオクロメン−６−イル］エチニル］ベンゾエート（イル）；（ｐ−［（Ｅ）−２−［３’４’−ジヒドロ−４，４’−ジメチル−７’−（ヘプチルオキシ）−２’Ｈ−１−ベンゾチオピラン−６’イル］プロペニル］安息香酸１’１’−ジオキシド；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ブトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−プロポキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ペントキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ヘキソキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ヘプトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−オクトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−［３−ｔ−ブチル−５−（１−フェニルビニル）−フェニル］−３−メチル）−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４｛［４，５−３Ｈ２］−ｎ−ペントキシ｝フェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸エチルエステル：（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸；（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブチルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；４−（５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレンカルボキサミド）安息香酸；（２Ｅ，４Ｅ）−３−メチル−５−［（１Ｒ，２Ｓ）−２−（５，５，８，８−テトラメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−ナフタレン−２−イル）シクロ���ロピル］ペンタ−２，４−ジエン酸；ｐ−［（Ｅ）−２−［３’，４’−ジヒドロ−４’，４’−ジメチル−７’−（ヘプチルオキシ）−２’Ｈ−１−ベンゾチオピラン−６’−イル］プロペニル］安息香酸；１’，１’−ジオキシド，４−（７，７，１０，１０−テトラメチル−１−ピリジン−３−イルメチル−４，５，７，８，９，１０−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ナフト［２，３−ｇ］インドール−３−イル）安息香酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−メトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ヘキシルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−オクチルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；および（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３−ｎ−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、および４−（５Ｈ−２，３（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−ｎ−プロピルジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、４−（５Ｈ−２，３−（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−メチル−８−ニトロジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、４−｛［４−（４−エチルフェニル）２，２−ジメチル−（２Ｈ）−チオクロメン−６−イル］エチニル｝安息香酸、４−［４−２メチル−１，２−ジカルバ−クロソ（ｃｌｏｓｏ）−ドデカボラン−１−イル−フェニルカルバモイル］安息香酸、４−［４，５，７，８，９，１０−ヘキサヒドロ−７，７，１０，１０−テトラメチル−１−（３−ピリジルメチル）アントラ［１，２−ｂ］ピロール−３−イル］安息香酸、（３−ピリジルメチル）−）５−チアアントラ［２，１−ｂ］ピロール−３−イル）安息香酸、および（３−ピリジルメチル）アントラ［２ｍ１−ｄ］ピラゾール−３−イル）安息香酸からなる群から選択される請求項４３３記載の方法。
【請求項４３６】
前記レチノイドＸ受容体アンタゴニストは、ＬＧＮ１００５７２、ＬＧＮ１００５７４、１−（３−ヒドロキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）エタノン、１−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）エタノン、３−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）ブタ−２−エンニトリル、３−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）ブタ−２−エナール、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−３［−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレン−２−イル］−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、４−［３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル］カルボニル］安息香酸、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］安息香酸、４−［１（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］安息香酸、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ベンゼンテトラゾール、２−［１−（５，５，８，８−テトラメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エチル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸エチル、５−［１−３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル］エテニル］ピリジン−２−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸メチル、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］−Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）ベンズアミド、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸ブチルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸プロピルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸シアノイミン、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸アリルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸４−（３−メチルブタ−２−エン酸）オキシム、および４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸１−アミノエチルオキシム、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３−ｎ−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、４−（５Ｈ−２，３（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−ｎ−プロピルジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、および４−（５Ｈ−２，３−（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５メチル−８−ニトロジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸からなる群から選択される請求項４３３記載の方法。
【請求項４３７】
前記ビタミンＤ受容体アンタゴニストは、１α，２５−（ＯＨ）−Ｄ３−２６，２３−ラクトン；１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ（３）；その２５−カルボン酸エステルＺＫ１５９２２２；（２３Ｓ）−２５−デヒドロ−１α−ＯＨ−Ｄ（３）；（２３Ｒ）−２５−デヒドロ−１α−ＯＨ−Ｄ（３）；１β，２５（ＯＨ）２Ｄ３；１β，２５（ＯＨ）２−３−ｅｐｉ−Ｄ３；（２３Ｓ）２５−デヒドロ−１α（ＯＨ）Ｄ３−２６，２３−ラクトン；（２３Ｒ）２５−デヒドロ−１α（ＯＨ）Ｄ３−２６，２３−ラクトン、および（５Ｚ，７Ｅ，２２Ｅ−（１Ｓ，７Ｅ，２２Ｅ−（１Ｓ，３Ｒ，２４Ｒ）−１，３，２４−トリヒドロキシ−２６，２７−シクロ−９，１０−セココレスタ−５，７，１０（１９），２２−テトラエン−２５−カルボン酸）ブチルからなる群から選択される請求項４３３記載の方法。
【請求項４３８】
レチノイドＸ受容体を伴うシグナル伝達経路に応答する前記幹細胞の前記能力の低下が可能な選択された前記条件は、レチノイン酸受容体、レチノイドＸ受容体および／またはビタミンＤ受容体をダウンレギュレーションするポリヌクレオチドを含む請求項４２４記載の方法。
【請求項４３９】
前記ポリヌクレオチドが、抗レチノイン酸受容体細胞内抗体、抗レチノイドＸ受容体細胞内抗体および／または抗ビタミンＤ受容体細胞内抗体をコードする請求項４３８記載の方法。
【請求項４４０】
前記ポリヌクレオチドが、抗レチノイン酸受容体抗体、抗レチノイドＸ受容体抗体および／または抗ビタミンＤ受容体抗体をコードする請求項４３８記載の方法。
【請求項４４１】
前記ポリヌクレオチドが、レチノイン酸受容体、レチノイドＸ受容体またはビタミンＤ受容体の細胞内のｍＲＮＡ分解または遺伝子分解を生じさせる小さい干渉性ポリヌクレオチド分子である請求項４３８記載の方法。
【請求項４４２】
前記小さい干渉性ポリヌクレオチド分子は、ＲＮＡｉ分子、アンチセンス分子、リボザイム分子およびＤＮＡザイム分子からなる群から選択される請求項４４１記載の方法。
【請求項４４３】
レチノイドを伴うシグナル伝達経路に応答する前記幹細胞の前記能力の低下が可能な選択された前記条件は、１つ以上のＰＩ３−キナーゼの発現阻害剤または活性阻害剤の有効量を含む請求項４２４記載の方法。
【請求項４４４】
前記１つ以上のＰＩ３−キナーゼの活性阻害剤は、ウォルトマンニンおよびＬＹ２９４００２からなる群から選択される請求項４４３記載の方法。
【請求項４４５】
前記１つ以上のＰＩ３−キナーゼの発現阻害剤がポリヌクレオチドである請求項４４３記載の方法。
【請求項４４６】
前記ポリヌクレオチドがＰＩ３−キナーゼ細胞内抗体をコードする請求項４４５記載の方法。
【請求項４４７】
前記ポリヌクレオチドがＰＩ３−キナーゼ抗体をコードする請求項４４５記載の方法。
【請求項４４８】
前記ポリヌクレオチドが優性ネガティブなＰＩ３−キナーゼ構築物を含有するＤＮＡベクターである請求項４４５記載の方法。
【請求項４４９】
前記ポリヌクレオチドが、ＰＩ３−キナーゼの細胞内のｍＲＮＡ分解または遺伝子分解を生じさせる小さい干渉性ポリヌクレオチド分子である請求項４４５記載の方法。
【請求項４５０】
前記小さい干渉性ポリヌクレオチド分子は、ＲＮＡｉ分子、アンチセンス分子、リボザイム分子およびＤＮＡザイム分子からなる群から選択される請求項４４９記載の方法。
【請求項４５１】
前記条件は、ビタミンＤ受容体を伴うシグナル伝達経路に応答する前記幹細胞の能力を低下させることができるように選択される請求項２４７記載の方法。
【請求項４５２】
ビタミンＤ受容体を伴うシグナル伝達経路に応答する前記幹細胞の前記能力を低下させることが可逆的な様式で行われる請求項４５１記載の方法。
【請求項４５３】
前記条件が細胞に栄養分およびサイトカインを与えることをさらに含む請求項４５１記載の方法。
【請求項４５４】
前記サイトカインが初期作用サイトカインである請求項４５３記載の方法。
【請求項４５５】
前記初期作用サイトカインは、幹細胞因子、ＦＬＴ３リガンド、インターロイキン−１、インターロイキン−２、インターロイキン−３、インターロイキン−６、インターロイキン−１０、インターロイキン−１２、腫瘍壊死因子−αおよびトロンボポエチンからなる群から選択される請求項４５４記載の方法。
【請求項４５６】
前記サイトカインが後期作用サイトカインである請求項４５３記載の方法。
【請求項４５７】
前記後期作用サイトカインは、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子、エリスロポエチン、ＦＧＦ、ＥＧＦ、ＮＧＦ、ＶＥＧＦ、ＬＩＦ、肝細胞増殖因子およびマクロファージコロニー刺激因子からなる群から選択される請求項４５６記載の方法。
【請求項４５８】
細胞に遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートを与えることが前記条件にさらに含まれる請求項４５１記載の方法。
【請求項４５９】
前記遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートは、ポリアミンキレート化剤、エチレンジアミン、ジエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、トリエチレンジアミン、テトラエチレンペンタミン、アミノエチルエタノールアミン、アミノエチルピペラジン、ペンタエチレンヘキサミン、トリエチレンテトラミン塩酸塩、テトラエチレンペンタミン塩酸塩、ペンタエチレンヘキサミン塩酸塩、テトラエチルペンタミン、カプトプリル、ペニシラミン、Ｎ，Ｎ’−ビス（３−アミノプロピル）−１，３−プロパンジアミン、Ｎ，Ｎ，ビス（２−アミノエチル）−１，３−プロパンジアミン、１，７−ジオキサ−４，１０−ジアザシクロドデカン、１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン−５，７−ジオン、１，４，７−トリアザシクロノナン三塩酸塩、１−オキサ−４，７，１０−トリアザシクロドデカン、１，４，８，１２−テトラアザシクロペンタデカン、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカンからなる群から選択される請求項４５８記載の方法。
【請求項４６０】
ビタミンＤ受容体を伴うシグナル伝達経路に応答する前記幹細胞の前記能力の低下が可能な選択された前記条件は、１つ以上のレチノイン酸受容体アンタゴニスト、１つ以上のレチノイドＸ受容体アンタゴニストおよび／または１つ以上のビタミンＤ受容体アンタゴニストの有効量の存在を含む請求項４５１記載の方法。
【請求項４６１】
１つ以上のレチノイン酸受容体アンタゴニスト、１つ以上のレチノイドＸ受容体アンタゴニストおよび／または１つ以上のビタミンＤ受容体アンタゴニストの前記有効量の前記存在は、前記幹細胞の全エクスビボ培養期間の０．１％〜５０％の期間に行われる請求項４６０記載の方法。
【請求項４６２】
前記レチノイン酸受容体アンタゴニストは、ＡＧＮ１９４３１０；ＡＧＮ１９３１０９；３−（４−メトキシ−フェニルスルファニル）−３−メチル酪酸；６−メトキシ−２，２−ジメチルチオクロマン−４−オン、２，２−ジメチル−４−オキソ−チオクロマン−６−イルトリフルオロメタンスルホネート；４−（（２，２−ジメチル−４−オキソ−チオクロマン−６−イル）エチニル）安息香酸エチル；４−（（２，２−ジメチル  １−４−トリフルオロメタンスルホニルオキシ−２（Ｈ）−チオクロメン−６−イル）エチニル）安息香酸エチル（４１）；チオクロメン−６−イル］エチニル］ベンゾエート（イル）；（ｐ−［（Ｅ）−２−［３’４’−ジヒドロ−４，４’−ジメチル−７’−（ヘプチルオキシ）−２’Ｈ−１−ベンゾチオピラン−６’イル］プロペニル］安息香酸１’１’−ジオキシド；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ブトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−プロポキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ペントキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ヘキソキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ヘプトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−オクトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−［３−ｔ−ブチル−５−（１−フェニルビニル）−フェニル］−３−メチル）−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４｛［４，５−３Ｈ２］−ｎ−ペントキシ｝フェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸エチルエステル：（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸；（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブチルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；４−（５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレンカルボキサミド）安息香酸；（２Ｅ，４Ｅ）−３−メチル−５−［（１Ｒ，２Ｓ）−２−（５，５，８，８−テトラメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−ナフタレン−２−イル）シクロ���ロピル］ペンタ−２，４−ジエン酸；ｐ−［（Ｅ）−２−［３’，４’−ジヒドロ−４’，４’−ジメチル−７’−（ヘプチルオキシ）−２’Ｈ−１−ベンゾチオピラン−６’−イル］プロペニル］安息香酸；１’，１’−ジオキシド，４−（７，７，１０，１０−テトラメチル−１−ピリジン−３−イルメチル−４，５，７，８，９，１０−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ナフト［２，３−ｇ］インドール−３−イル）安息香酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−メトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ヘキシルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−オクチルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；および（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３−ｎ−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、および４−（５Ｈ−２，３（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−ｎ−プロピルジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、４−（５Ｈ−２，３−（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−メチル−８−ニトロジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、４−｛［４−（４−エチルフェニル）２，２−ジメチル−（２Ｈ）−チオクロメン−６−イル］エチニル｝安息香酸、４−［４−２メチル−１，２−ジカルバ−クロソ（ｃｌｏｓｏ）−ドデカボラン−１−イル−フェニルカルバモイル］安息香酸、４−［４，５，７，８，９，１０−ヘキサヒドロ−７，７，１０，１０−テトラメチル−１−（３−ピリジルメチル）アントラ［１，２−ｂ］ピロール−３−イル］安息香酸、（３−ピリジルメチル）−）５−チアアントラ［２，１−ｂ］ピロール−３−イル）安息香酸、および（３−ピリジルメチル）アントラ［２ｍ１−ｄ］ピラゾール−３−イル）安息香酸からなる群から選択される請求項４６０記載の方法。
【請求項４６３】
前記レチノイドＸ受容体アンタゴニストは、ＬＧＮ１００５７２、ＬＧＮ１００５７４、１−（３−ヒドロキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）エタノン、１−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）エタノン、３−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）ブタ−２−エンニトリル、３−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）ブタ−２−エナール、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−３［−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレン−２−イル］−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、４−［３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル］カルボニル］安息香酸、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］安息香酸、４−［１（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］安息香酸、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ベンゼンテトラゾール、２−［１−（５，５，８，８−テトラメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エチル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸エチル、５−［１−３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル］エテニル］ピリジン−２−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸メチル、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］−Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）ベンズアミド、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸ブチルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸プロピルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸シアノイミン、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸アリルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸４−（３−メチルブタ−２−エン酸）オキシム、および４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸１−アミノエチルオキシム、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３−ｎ−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、４−（５Ｈ−２，３（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−ｎ−プロピルジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、および４−（５Ｈ−２，３−（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５メチル−８−ニトロジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸からなる群から選択される請求項４６０記載の方法。
【請求項４６４】
前記ビタミンＤ受容体アンタゴニストは、１α，２５−（ＯＨ）−Ｄ３−２６，２３−ラクトン；１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ（３）；その２５−カルボン酸エステルＺＫ１５９２２２；（２３Ｓ）−２５−デヒドロ−１α−ＯＨ−Ｄ（３）；（２３Ｒ）−２５−デヒドロ−１α−ＯＨ−Ｄ（３）；１β，２５（ＯＨ）２Ｄ３；１β，２５（ＯＨ）２−３−ｅｐｉ−Ｄ３；（２３Ｓ）２５−デヒドロ−１α（ＯＨ）Ｄ３−２６，２３−ラクトン；（２３Ｒ）２５−デヒドロ−１α（ＯＨ）Ｄ３−２６，２３−ラクトン、および（５Ｚ，７Ｅ，２２Ｅ−（１Ｓ，７Ｅ，２２Ｅ−（１Ｓ，３Ｒ，２４Ｒ）−１，３，２４−トリヒドロキシ−２６，２７−シクロ−９，１０−セココレスタ−５，７，１０（１９），２２−テトラエン−２５−カルボン酸）ブチルからなる群から選択される請求項４６０記載の方法。
【請求項４６５】
ビタミンＤ受容体を伴うシグナル伝達経路に応答する前記幹細胞の前記能力の低下が可能な選択された前記条件は、レチノイン酸受容体、レチノイドＸ受容体および／またはビタミンＤ受容体をダウンレギュレーションするポリヌクレオチドを含む請求項４５１記載の方法。
【請求項４６６】
前記ポリヌクレオチドが、抗レチノイン酸受容体細胞内抗体、抗レチノイドＸ受容体細胞内抗体および／または抗ビタミンＤ受容体細胞内抗体をコードする請求項４６５記載の方法。
【請求項４６７】
前記ポリヌクレオチドが、抗レチノイン酸受容体抗体、抗レチノイドＸ受容体抗体および／または抗ビタミンＤ受容体抗体をコードする請求項４６５記載の方法。
【請求項４６８】
前記ポリヌクレオチドが、レチノイン酸受容体、レチノイドＸ受容体またはビタミンＤ受容体の細胞内のｍＲＮＡ分解または遺伝子分解を生じさせる小さい干渉性ポリヌクレオチド分子である請求項４６５記載の方法。
【請求項４６９】
前記小さい干渉性ポリヌクレオチド分子は、ＲＮＡｉ分子、アンチセンス分子、リボザイム分子およびＤＮＡザイム分子からなる群から選択される請求項４６８記載の方法。
【請求項４７０】
ビタミンＤ受容体を伴うシグナル伝達経路に応答する前記幹細胞の前記能力の低下が可能な選択された前記条件は、１つ以上のＰＩ３−キナーゼの発現阻害剤または活性阻害剤の有効量を含む請求項４５１記載の方法。
【請求項４７１】
前記１つ以上のＰＩ３−キナーゼの活性阻害剤は、ウォルトマンニンおよびＬＹ２９４００２からなる群から選択される請求項４７０記載の方法。
【請求項４７２】
前記１つ以上のＰＩ３−キナーゼの発現阻害剤がポリヌクレオチドである請求項４７０記載の方法。
【請求項４７３】
前記ポリヌクレオチドがＰＩ３−キナーゼ細胞内抗体をコードする請求項４７２記載の方法。
【請求項４７４】
前記ポリヌクレオチドがＰＩ３−キナーゼ抗体をコードする請求項４７２記載の方法。
【請求項４７５】
前記ポリヌクレオチドが優性ネガティブなＰＩ３−キナーゼ構築物を含有するＤＮＡベクターである請求項４７２記載の方法。
【請求項４７６】
前記ポリヌクレオチドが、ＰＩ３−キナーゼの細胞内のｍＲＮＡ分解または遺伝子分解を生じさせる小さい干渉性ポリヌクレオチド分子である請求項４７２記載の方法。
【請求項４７７】
前記小さい干渉性ポリヌクレオチド分子は、ＲＮＡｉ分子、アンチセンス分子、リボザイム分子およびＤＮＡザイム分子からなる群から選択される請求項４７６記載の方法。
【請求項４７８】
前記条件が栄養分およびサイトカインを含む請求項２４７記載の方法。
【請求項４７９】
前記サイトカインが初期作用サイトカインである請求項４７８記載の方法。
【請求項４８０】
前記初期作用サイトカインは、幹細胞因子、ＦＬＴ３リガンド、インターロイキン−１、インターロイキン−２、インターロイキン−３、インターロイキン−６、インターロイキン−１０、インターロイキン−１２、腫瘍壊死因子−αおよびトロンボポエチンからなる群から選択される請求項４７９記載の方法。
【請求項４８１】
前記サイトカインが後期作用サイトカインである請求項４７８記載の方法。
【請求項４８２】
前記後期作用サイトカインは、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子、エリスロポエチン、ＦＧＦ、ＥＧＦ、ＮＧＦ、ＶＥＧＦ、ＬＩＦ、肝細胞増殖因子およびマクロファージコロニー刺激因子からなる群から選択される請求項４８１記載の方法。
【請求項４８３】
細胞に遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートを与えることが前記条件にさらに含まれる請求項４７８記載の方法。
【請求項４８４】
前記遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートは、ポリアミンキレート化剤、エチレンジアミン、ジエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、トリエチレンジアミン、テトラエチレンペンタミン、アミノエチルエタノールアミン、アミノエチルピペラジン、ペンタエチレンヘキサミン、トリエチレンテトラミン塩酸塩、テトラエチレンペンタミン塩酸塩、ペンタエチレンヘキサミン塩酸塩、テトラエチルペンタミン、カプトプリル、ペニシラミン、Ｎ，Ｎ’−ビス（３−アミノプロピル）−１，３−プロパンジアミン、Ｎ，Ｎ，ビス（２−アミノエチル）−１，３−プロパンジアミン、１，７−ジオキサ−４，１０−ジアザシクロドデカン、１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン−５，７−ジオン、１，４，７−トリアザシクロノナン三塩酸塩、１−オキサ−４，７，１０−トリアザシクロドデカン、１，４，８，１２−テトラアザシクロペンタデカン、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカンからなる群から選択される請求項４８３記載の方法。
【請求項４８５】
成体幹細胞を事前に決定されたタイプの細胞に組織内で分化させる方法であって、
（ａ）ドナー組織から得られた成体幹細胞を、細胞増殖を誘導しかつ細胞分化を抑制するために好適に選択された条件のもとで培養し、それにより、拡大培養された幹細胞の集団を得ること；および
（ｂ）前記拡大培養された成体幹細胞の集団を、事前に決定されたタイプの目的組織に導入し、それにより、前記拡大培養された幹細胞の集団を前記目的組織を特徴づける細胞へ分化させること
を含む方法。
【請求項４８６】
前記ドナー組織は、前記目的組織の表現型特徴および機能的特徴と同一の表現型特徴および機能的特徴を有する請求項４８５記載の方法。
【請求項４８７】
前記ドナー組織は、前記目的組織の表現型特徴および機能的特徴とは異なる表現型特徴および機能的特徴を有する請求項４８５記載の方法。
【請求項４８８】
前記ドナー組織から得られた成体幹細胞が、前記目的組織を特徴づける前記細胞に関して同一遺伝子型、同種および／または異種である請求項４８５記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、エクスビボ拡大培養された幹細胞における分化を誘導する方法に関し、より詳細には、１つの実施形態において、心臓および肺などの損傷した組織を再生させるためのエクスビボ拡大培養された造血幹細胞の使用、従って、様々な障害を治療する際のそのような細胞の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
幹細胞およびその治療的可能性
幹細胞は、他の細胞タイプ（例えば、脳、筋肉、肝臓および血液細胞）に成熟する能力を有する原始細胞である。幹細胞は、典型的には、幹細胞が得られる組織の供給源に依存して、胚性幹細胞または成体由来幹細胞のいずれかとして分類される。
【０００３】
多能性のヒト幹細胞により、生化学的研究には、新しい方法が、薬物開発および試験のために、そして、器官の修復および置換のために提供される。
【０００４】
外科的介入に依拠するか、または生理学的活性を調節する薬物に依拠する現在の治療のすべてとは異なり、幹細胞は、機能不全組織または変性組織に対する代替物を提供する。幹細胞を使用することにより、置換療法は、治療できない多くの疾患の予後を劇的に変化させることができる。
【０００５】
例えば、多くの神経学的疾患、例えば、脳、脊髄、末梢神経および筋肉の様々な障害などは、脳細胞または筋肉細胞の突然の死または徐々の死によって特徴づけられる。発作、頭部および脊髄の外傷、アルツハイマー病、パーキンソン病、多発性硬化症、筋萎縮側索硬化症（ＡＬＳ）、遺伝的な酵素欠損症、筋ジストロフィーなどを含むこれらの疾患は、潜在的には、幹細胞置換療法を使用して治療することができる。
【０００６】
造血幹細胞が非造血性組織を生じさせることができるという最近の発見は、これらの細胞が、以前に考えられていたよりも大きい分化能を有し、かつ、その治療的適用のために新しい領域を開拓し得ることを示唆している［Ｐｅｔｅｒｓｅｎ，Ｂ．Ｅ．他、肝臓卵円形細胞の潜在的供給源としての骨髄、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２８４、１１６８〜１１７０（１９９９）；Ｂｒａｚｅｌｔｏｎ、Ｔ．Ｒ．他（２０００）、骨髄から脳まで：成体マウスにおけるニューロン表現型の発現、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２９０、１７７５〜１７７９；Ｍｅｚｅｙ，Ｅ．他（２０００）、血液を脳に変える：骨髄からインビボで生じたニューロン抗原を有する細胞、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２９０、１７７９〜１７８２；Ｌａｇａｓｓｅ，Ｅ．他（２０００）、精製された造血幹細胞はインビボで肝細胞に分化することができる、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．、６、１２２９〜１２３４；Ｋｒａｕｓｅ、Ｄ．Ｓ．他（２００１）、１個の骨髄由来幹細胞による多臓器多系譜生着、Ｃｅｌｌ、１０５、３６９〜３７７］。
【０００７】
様々な研究により、臍帯血由来の幹細胞は、脳傷害および脳卒中により引き起こされる神経学的損傷を修復することができること［Ｌｕ  Ｄ他（２００２）、ヒト臍帯血の静脈内投与は外傷性脳傷害後のラットにおける神経学的欠損を減少させる、Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．、１１：２７５〜８１］、そして、動物の心臓組織への機能的および形態学的な取り込みが可能であること［Ｏｒｌｉｃ，Ｄ．他、動態化された骨髄細胞は梗塞した心臓を修復し、機能および生存を改善する、（２００１）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９８：１０３４４〜９；Ｏｒｌｉｃ，Ｄ．他、移植された成体骨髄細胞はマウスにおける心筋梗塞を修復する、（２００１）、Ａｎｎ．Ｎ  Ｙ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、９３８：２２１〜９、考察：２２９〜３０；Ｏｒｌｉｃ，Ｄ．他、骨髄細胞は梗塞した心筋を再生する、（２００１）、Ｎａｔｕｒｅ、４１０：７０１〜５］が示されている。
【０００８】
造血幹細胞
血液細胞の正常な産生（造血）および他の細胞タイプの正常な産生は増殖および分化のプロセスを伴う。ほとんどの造血細胞では、分裂後、娘細胞は、増殖能を大部分が失っている完全に分化した（成熟した）機能的な血液細胞となる一連の進行性の変化を受ける。従って、分化プロセスは細胞分裂を制限し、最終的には細胞分裂を停止させる。造血細胞のほんの小さい亜集団のみにおいて、これは幹細胞として知られているが、細胞分裂により、その親細胞と類似または同一である子孫を生じさせることができる。このタイプの細胞分裂（これは自己複製として知られている）は、幹細胞の固有な性質であり、幹細胞の小さいプールをそのほとんど分化していない状態で維持することを助けている。一部の幹細胞はその自己複製能を失い、細胞分裂後、最終的には成熟細胞を生じさせる、様々なタイプの系譜的に拘束された始原細胞に分化する。後者は血液細胞系の機能的能力を提供する一方で、残った幹細胞は、より分化した細胞のアポトーシス（プログラム化された細胞死）による連続した喪失、および／または老化しつつある成熟細胞の細網内皮系による積極的な除去にもかかわらず、生涯を通して造血を維持することを担っている。
【０００９】
本明細書中上記で議論されたように、造血幹細胞および始原細胞の自己複製は、インビボおよびインビトロの両方で、細胞分化によって制限されている。造血系での分化は、中でも、表面抗原の変化した発現を伴う［Ｓｉｅｆｆ  Ｃ、Ｂｉｃｋｎｅｌｌ  Ｄ、Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  Ｊ、Ｌａｍ  Ｇ、Ｇｒｅａｖｅｓ  ＭＦ（１９８２）、造血系細胞の分化時の細胞表面抗原発現の変化、Ｂｌｏｏｄ、６０：７０３］。正常な組織では、造血系の多能性幹細胞および系譜的に拘束された始原細胞のほとんどがＣＤ３４＋である。大多数の細胞がＣＤ３４＋ＣＤ３８＋であり、少数の細胞（１０％未満）がＣＤ３４＋ＣＤ３８−である。ＣＤ３４＋ＣＤ３８−の表現型は、自己複製および多系譜の分化が可能である最も未成熟な造血細胞を特徴とする。ＣＤ３４＋ＣＤ３８−の細胞画分は、ＣＤ３４＋ＣＤ３８＋の細胞と比較したとき、長期間の培養開始細胞（ＬＴＣ−ＩＣ）のプレＣＦＵをより多く含有し、その表現型のより長期間の維持、およびサイトカインに対する遅れた増殖応答を示す。ＣＤ３４＋ＣＤ３８−の表現型を示す細胞は、インビトロでリンパ系細胞および骨髄細胞を生じさせることができ、免疫不全マウスを再生息させるまで高まった能力を有し得る［Ｂｈａｔｉａ  Ｍ、Ｗａｎｇ  ＪＣＹ、Ｋａｐｐ  Ｕ、Ｂｏｎｎｅｔ  Ｄ、Ｄｉｃｋ  ＪＥ（１９９７）、免疫不全マウスの再生息を可能にする原始ヒト造血細胞の精製、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９４：５３２０］。そのうえ、自家血液細胞移植を受けた患者では、輸血されたＣＤ３４＋ＣＤ３８−細胞の数が造血回復の速度と正の相関を有する。その機能と一致して、ＣＤ３４＋ＣＤ３８−細胞は、検出可能なレベルのテロメラーゼ（細胞増殖、およびアポトーシスを生じさせるＤＮＡ損傷の防止に関連する酵素）を有することが示されている。
【００１０】
造血幹細胞のエクスビボ拡大培養
その大きな治療的可能性にもかかわらず、造血幹細胞は細胞置換療法および組織再生療法では広く使用されてない。これは、部分的には、一般的なエクスビボ培養方法における拡大培養に関するその低い利用性およびその限られた能力のためである。
【００１１】
サイトカインの存在下でのエクスビボ拡大培養
様々なプロトコルが、幹細胞集団を豊富化するために提案され、試験されている。用いられている主な実験的方法には、ＣＤ３４＋の選択下または非選択下での単核細胞のインキュベーション（Ｓａｎｄｓｔｒｏｍ  ＣＥ他、末梢血単核細胞のエクスビボ拡大培養に対するＣＤ３４＋細胞選択および潅流の効果、Ｂｌｏｏｄ、８６：９５８、１９９５）；早期増殖因子および後期増殖因子の種々のカクテルを用いた単核細胞のインキュベーション［Ｐｅｔｚｅｒ  ＡＬ、Ｚａｎｄｓｔｒａ  ＰＷ、Ｐｉｒｅｔ  ＪＭ、Ｅａｖｅｓ  ＣＪ、原始（ＣＤ３４＋ＣＤ３８−）ヒト造血細胞に対する示差的なサイトカイン作用：ＦＬＴ３リガンドおよびトロンボポエチンに対する新規な応答、Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ、１８３：２５５１、１９９６］；血清の存在下または非存在下での単核細胞のインキュベーション（Ｌｅｂｋｏｗｓｋｉ  ＪＳ他、ヒトＣＤ３４＋細胞の迅速な単離および無血清拡大培養、Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｌｌｓ、２０：４０４、１９９４）；定常培養、すなわち、迅速な培地交換培養での単核細胞のインキュベーション（Ｓｃｈｗａｒｔｚ  ＲＭ他、迅速な培地交換および造血増殖因子補充により刺激されたインビトロ骨髄造血、Ｂｌｏｏｄ、７８：３１５５、１９９１）、または連続潅流（バイオリアクター）下での単核細胞のインキュベーション（Ｋｏｌｌｅｒ  ＭＲ、Ｅｍｅｒｓｏｎ  ＳＧ、Ｐａｌｓｓｏｎ  ＢＯ、連続潅流培養における骨髄単核細胞からのヒト幹細胞および始原細胞の大規模拡大培養、Ｂｌｏｏｄ、８２：３７８、１９９３）；および、確立された間質細胞層の存在下または非存在下での単核細胞のインキュベーション（Ｖｅｒｆａｉｌｌｉｅ  ＣＭ、ヒト造血幹細胞はインビボで培養することができるか？Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ、１２：４６６、１９９４）が含まれる。
【００１２】
中間始原細胞および後期始原細胞の著しい拡大培養は、多くの場合、７日〜１４日間のエクスビボ培養の期間に得られたが、大きい増殖能を有する初期の造血（ＣＤ３４＋ＣＤ３８−）幹細胞の集団は、通常、得られなかった［Ｋｏｌｌｅｒ  ＭＲ、Ｅｍｅｒｓｏｎ  ＳＧ、Ｐａｌｓｓｏｎ  ＢＯ、連続潅流培養における骨髄単核細胞からのヒト幹細胞および始原細胞の大規模拡大培養、（１９９３）、Ｂｌｏｏｄ、８２：３７８；Ｈａｙｌｏｃｋ  ＤＮ他、末梢血ＣＤ３４＋細胞の骨髄系譜へのエクスビボ拡大培養および成熟化、（１９９２）、Ｂｌｏｏｄ、８０：１４０５；Ｂｒｕｇｇｅｒ  Ｗ他、幹細胞因子（インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）、ＩＬ−６、ＩＬ−３、インターフェロン−γおよびエリスロポエチン）による豊富化末梢血ＣＤ３４＋始原細胞のエクスビボ拡大培養、（１９９３）、Ｂｌｏｏｄ、８１：２５７９；Ｓａｔｏ  Ｎ他、ヒト末梢血ＣＤ３４＋細胞のインビトロ拡大培養、（１９９３）、Ｂｌｏｏｄ、８２：３６００］。
【００１３】
細胞置換療法および組織再生では大量の幹細胞が要求されるので、改善されたエクスビボ拡大培養方法が、最近、幹細胞のために開発されている。
【００１４】
幹細胞の最大限のエクスビボ拡大培養を達成するためには、分化を可逆的に阻害し、または遅らせること、および、幹細胞の自己複製を最大限に長くすることが重要である。
【００１５】
遷移金属キレーターの存在下での幹細胞の拡大培養
幹細胞をエクスビボ拡大培養するために銅キレーターを使用することは、銅欠乏と血液学的異常（例えば、貧血、好中球減少症および血小板減少症など）との間における関連性に基づいている。
【００１６】
銅欠乏が好中球減少症を生じさせる機構は不明である。考えられる原因の中には、単独または組合せのいずれかで、（ｉ）ＢＭにおける始原細胞の初期の死；（ｉｉ）ＢＭにおける始原細胞からの好中球の損なわれた形成；（ｉｉｉ）ＢＭにおける細胞成熟化速度の低下；（ｉｖ）ＢＭから循環への好中球の損なわれた放出；（ｖ）循環している好中球の高まった排出速度がある。
【００１７】
好中球減少性銅欠乏患者のＢＭを調べることにより、成熟細胞が存在しないこと（「成熟化停止」）が明らかにされる。そのようなＢＭに由来する細胞は、銅欠乏血清を含有する半固体培地でコロニーを形成しないが、銅含有血清における正常なコロニー成長に対する能力を保持していたことが示されている。これらの結果は、無傷な始原細胞が患者のＢＭに存在していることを示しており、発達における阻止が、始原細胞段階が完了した後で生じていることを示唆している［Ｚｉｄａｒ  ＢＬ他、ヒト銅欠乏の貧血および好中球減少症に対する観察、（１９７７）、Ａｍ．Ｊ．Ｈｅｍａｔｏｌ．、３：１７７；Ｈｉｒａｓｅ  Ｎ他、銅欠乏の場合における貧血および好中球減少症：正常な造血における銅の役割、（１９９２）、Ａｃｔａ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．、８７：１９５］。
【００１８】
国際特許出願ＰＣＴ／ＩＬ９９／００４４４および同ＰＣＴ／ＵＳ９９／０２６６４、米国特許出願第０９／９８６８９７号、同第０９／９８８１２７号、およびＰｅｌｅｄ他（Ｂｒｉｔ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．、１１６：６５５、２００２）には、ある種の微量元素キレーター（特に、銅キレーター）は幹細胞および始原細胞の分化を阻害することができ、それによりエクスビボでの細胞増殖および拡大培養を延ばすことができることが教示されている。細胞の銅含有量の上昇は幹細胞または始原細胞の分化を促進させることがさらに開示されている。そのため、細胞内の銅が、幹細胞または始原細胞の自己複製、増殖および分化の調節に関与することが提案された。すなわち、細胞の銅含有量を増大させると、幹細胞または始原細胞の分化が促進され、その一方で、細胞の銅含有量を低下させると、幹細胞または始原細胞の分化が阻害される。実際、銅キレーター（テトラエチルペンタミン、ＴＥＰＡ）および高用量または低用量の初期作用サイトカイン［例えば、幹細胞因子（ＳＣＦ）、ＦＬＴ３、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）］、あるいは初期作用サイトカインおよび後期作用サイトカインの組合せ（例えば、Ｇ−ＣＳＦおよびＧＭ−ＣＳＦ）の存在下でのＣＤ３４＋細胞のエクスビボ拡大培養は、ＣＤ３４＋細胞の細胞クローン性とその割合の著しい増大をもたらしていた（米国特許出願第０９／９８６８９７号）。そのうえ、長期培養物（３週間〜５週間）へのＴＥＰＡの添加は、初期作用サイトカイン、または初期作用サイトカインおよび後期作用サイトカインの両方が補充された培養物のいずれかより効率的なクローン性をもたらしていた（米国特許出願第０９／９８６８９７号）。類似した作用が他の遷移金属キレーター（例えば、カプトプリル（ＣＡＰ）またはペニシラミン（ＰＥＮ）など）および他のポリアミン（例えば、ＥＤＡ、ＰＥＨＡおよびＴＥＴＡなど）に関して観測されていた。
【００１９】
さらに、ＴＥＰＡ処理された培養物に銅が補充されたとき、ＴＥＰＡ活性は逆転した。しかしながら、ＴＥＰＡ処理された培養物に鉄およびセレンなど他の金属イオンが補充されたとき、ＴＥＰＡの作用は逆転しなかった。さらに、細胞は、遷移金属の代謝を妨害することが知られている亜鉛にＴＥＰＡと一緒にさらされたとき、幹細胞の拡大培養およびクローン性に対するＴＥＰＡの作用がさらにより顕著であった（米国特許出願第０９／９８６８９７号）。
【００２０】
レチノイン酸受容体アンタゴニストおよびニコチンアミドを使用する幹細胞の拡大培養
本明細書中上記に記載されているように、自己複製および多系譜の分化が可能である造血系多能性幹細胞はほとんどがＣＤ３４＋ＣＤ３８−である。
【００２１】
ＣＤ３８は、基質がニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）（自然界に至るところで分布する補酵素）であるサイトゾル酵素および膜結合酵素の新たに明らかにされたファミリーのメンバーである。ヒトでは、ＣＤ３８は４５ｋＤａのＩＩ型膜貫通糖タンパク質である。最近、ＣＤ３８が、ＮＡＤ＋グリコヒドロラーゼ活性およびＡＤＰ−リボシルシクラーゼ活性の両方を発揮し、従って、ニコチンアミド、ＡＤＰ−リボース（ＡＤＰＲ）、環状ＡＤＰＲ（ｃＡＤＰＲ）およびニコチン酸アデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＡＤＰ）のその基質からの産生を触媒することができる多機能酵素であることが明らかにされている［Ｈｏｗａｒｄ他（１９９３）、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２５２：１０５６〜１０５９；Ｌｅｅ他（１９９９）、Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、３８０：７８５〜７９３］。ヒトＣＤ３８の可溶性ドメインは、共通する共有結合中間体を介してＮＡＤ＋を環状ＡＤＰ−リボースおよびＡＤＰ−リボースに変換することを触媒する［Ｓａｕｖｅ，Ａ．他（２０００）、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、１２２：７８５５〜７８５９］。
【００２２】
いくつかの白血病細胞株を利用した実験では、レチノイン酸受容体（ＲＡＲ）により媒介されるシグナル伝達が分化マーカーのＣＤ３８細胞表面抗原の発現を誘導し、これに対して、ＲＡＲに対するアンタゴニストはＣＤ３８抗原のアップレギュレーションを無効にすることが解明されていた［Ｋａｐｉｌ  Ｍ．他、ＣＤ３８細胞表面抗原の誘導におけるレチノイン酸受容体が媒介するシグナル伝達経路の関与、Ｂｌｏｏｄ（１９９７）、８９：３６０７〜３６１４；Ｕｅｎｏ  Ｈ他、新規なレチノイン酸受容体（ＲＡＲ）選択的アンタゴニストはＨＬ−６０細胞の分化およびアポトーシスを阻害する：骨髄性白血病細胞におけるＲＡＲα媒介シグナルの意味合い、Ｌｅｕｋ  Ｒｅｓ．（１９９８）、２２：５１７〜２５］。さらに、ＣＤ３８阻害剤（ニコチンアミド）によるＣＤ３８の阻害、またはアンチセンスオリゴヌクレオチドを使用してＣＤ３８のｍＲＮＡを標的化することによるＣＤ３８の阻害は、ｃＡＤＰＲのシグナル伝達経路に影響を及ぼし、分化を阻害することが見出されていた［Ｍｕｎｓｈｉ  ＣＢ他（２００２）、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７７：４９４５３〜８］。
【００２３】
ニコチンアミド（ＮＡ）はビタミンＢの水溶性誘導体であり、その生理学的に活性な形態がニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ）およびニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰ＋／ＮＡＤＰＨ）である。ＮＡの生理学的に活性な形態は重要な代謝反応における補酵素として様々に役立っている。
【００２４】
レチノイン酸（ＲＡ）、すなわち、ビタミンＡ（レチノール）の天然の酸性誘導体は、胚発達の重要な調節因子であり、広範囲の様々な成体細胞タイプの成長および分化にも影響を与えている。ＲＡの生物学的作用は、一般には、特異的なリガンドにより活性化された核転写因子、その同族ＲＡ受容体（ＲＡＲ）との相互作用によって媒介される。レチノイン酸ファミリーの受容体は、種々のＲＡＲ、ＲＸＲ、ビタミンＤ受容体（ＶＤＲ）、甲状腺ホルモン受容体（ＴＨＲ）などから構成される。特異的なリガンドによって活性化されたとき、これらの受容体は転写因子として働き、胚発達時および成体発達時における遺伝子発現を制御する。
【００２５】
国際特許出願ＰＣＴ／ＩＬ０３／０００６４に開示されるように、ニコチンアミド、すなわち、ＣＤ３８阻害剤は、幹細胞の分化プロセスを抑制し、そして、エクスビボでの活性な細胞増殖および拡大培養の段階を刺激し、そのような段階を延ばす。さらに、ＲＡＲ、ＲＡＸおよびＶＤＲのアンタゴニストなどの一連の化学剤もまた、幹細胞の分化プロセスを阻害し、そして、エクスビボでの活性な細胞増殖および拡大培養の段階を刺激し、そのような段階を１６週間〜１８週間までの間にわたって延ばす。
【００２６】
国際特許出願ＰＣＴ／ＩＬ０３／０００６４でさらに開示されているように、ＲＡＲスーパーファミリーおよびＲＸＲスーパーファミリーのレチノイン酸受容体アンタゴニストなどの薬剤とともにインキュベーションされた初代肝細胞培養物では、α−フェトプロテインを産生する細胞の割合の増大が明らかにされた。このことは、初期肝細胞集団の増殖が誘導されたことを示している。サイトカインの非存在下で成長させたアンタゴニスト処理の肝細胞培養物は、３週間以上にわたって培養状態を持続した。これは、初代肝細胞を培養状態で長期間にわたって成長させることは、特にサイトカインの非存在下では実際には不可能であることを例示した以前のデータとは明らかに対照的な発見である［Ｗｉｃｋ  Ｍ他、ＡＬＴＥＸ、（１９９７）、１４：５１〜５６；Ｈｉｎｏ  Ｈ他、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ、（１９９２）、２５６：１８４〜９１；Ｔａｔｅｎｏ  ＣおよびＹｏｓｈｉｚａｔｏ  Ｋ、Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ、（１９９６）、１４８：３８３〜９２］。増殖因子の補充だけでは、肝細胞の増殖を刺激するためには不十分であり、肝細胞培養物のＲＡＲアンタゴニスト処理のみが初期肝細胞集団の増殖を生じさせ、培養状態でそれを持続させただけであった。これは一代および二代の継代の後でさえ明らかであった。
【００２７】
従って、国際特許出願ＰＣＴ／ＩＬ０３／０００６４の教示によれば、造血系起源および他の起源の幹細胞のエクスビボ拡大培養は、ＣＤ３８の発現および／または活性を妨害し、それにより幹細胞集団のエクスビボおよび／またはインビボでの拡大培養を誘導する分子を使用して達成することができる。この方法による幹細胞集団の拡大培養は、例えば、ＣＤ３４＋／ＣＤ３８−細胞と同様に、多数の未分化ＣＤ３４＋／Ｌｉｎ−（ＣＤ３３、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１４など）細胞、特に、ＣＤ３４＋ｄｉｍ／Ｌｉｎ−細胞を作製するために、造血幹細胞とともに使用することができる。
【００２８】
ＰＩ−３キナーゼ阻害剤の存在下での幹細胞の拡大培養
ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３−キナーゼ）は、Ｓｒｃ相同性２ドメイン含有調節サブユニット（ｐ８５）および１１０ｋＤａの触媒作用サブユニット（ｐ１１０）から構成される脂質キナーゼである。ＰＩ３−キナーゼは、ＰＩＰＩ３−キナーゼのＤ３位でリン酸化されたイノシトールリン脂質の形成を触媒する。ＰＩ３−キナーゼ阻害剤のウォルトマンニン（ｗｏｒｔｍａｎｎｉｎ）およびＬＹ２９４００２は、ＣＤ１５７（レチノイン酸にさらされたＨＬ−６０細胞および正常な骨髄ＣＤ３４＋細胞の表面におけるＣＤ３８関連抗原）の発現を妨げるだけでなく、増大したＣＤ３８ｍＲＮＡ発現および膜ＣＤ３８抗原の過剰発現を妨げることが示されていた［Ｌｅｗａｎｄｏｗｓｋｉ，Ｄ．他（２００２）、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼはヒト造血細胞表面におけるＣＤ３８抗原のａｌｌ−ｔｒａｎｓ−レチノイン酸誘導によるアップレギュレーションに関与する、Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．、１１８：５３５〜４４］。
【００２９】
種々のＲＡＲ、ＲＸＲ、ＶＤＲおよびＴＨＲなどの核受容体により負わされている下流のシグナル伝達もまた、適切な受容体シグナル伝達のための必須因子であるＰＩ３−キナーゼの阻害によって阻害され得る。ＶＤＲなどの核受容体の活性化におけるＰＩ３−キナーゼの非常に重要な機能がＴＨＰ−１細胞で明らかにされていた。１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３（Ｄ３）を用いたＴＨＰ−１細胞の処理は、ＰＩ３−キナーゼ活性の迅速かつ一時的な増大、ならびに、骨髄細胞の成熟化、そしてＣＤ１４およびＣＤ１１ｂ（細胞分化マーカー）の表面発現と関連していた。Ｄ３に応答したＣＤ１４およびＣＤ１１ｂの発現の誘導は、（ａ）ＰＩ３−キナーゼ阻害剤のＬＹ２９４００２およびウォルトマンニンによって、（ｂ）ＰＩ３−キナーゼのｐ１１０触媒作用サブユニットについてのｍＲＮＡに対するアンチセンスオリゴヌクレオチドによって、そして、（ｃ）ＰＩ３−キナーゼの優性ネガティブ変異体によって逆転した。同様に、ＬＹ２９４００２およびウォルトマンニンは末梢血単球におけるＣＤ１４およびＣＤ１１ｂの両方のＤ３誘導による発現を阻害した。ＶＤＲの免疫沈殿物に対して行われたウエスタンブロットおよびインビトロキナーゼアッセイは、Ｄ３処理が、ＰＩ３−キナーゼおよびＶＤＲの両方を含有する複合体を形成させることを示していた。これらの発見により、単球の分化を調節するホルモン作用の新しい非ゲノム機構が解明されている：この機構では、ビタミンＤ３により、ＶＤＲおよびＰＩ３−キナーゼに依存したシグナル伝達経路が活性化される［Ｈｍａｍａ，Ｚ．他（１９９９）、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３により誘導される骨髄細胞の分化はビタミンＤ受容体−ホスファチジルイノシトール３−キナーゼのシグナル伝達複合体によって調節される、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、１９０：１５８３〜１５９４］。
【００３０】
白血病細胞の分化の誘導に関与する細胞経路における下流の必須因子としてのＰＩ３−キナーゼの機能性もまた、ａｌｌ−ｔｒａｎｓ−レチノイン酸により顆粒球分化に誘導されるＨＬ−６０細胞で明らかにされていた。共焦点顕微鏡による免疫化学分析および免疫組織化学分析により、核レベルでは特に明らかであるＰＩ３−キナーゼの量の増大が明らかにされた。ナノモル濃度のウォルトマンニンによるＰＩ３−キナーゼ活性の阻害、およびｐ８５αのアンチセンスフラグメントを用いたトランスフェクションによるその発現の阻害は分化プロセスを妨げた。得られたデータは、ＰＩ３−キナーゼ活性が、顆粒球分化を促進する際に不可欠な役割を果たしていることを示している［Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｏ，Ｖ．他（１９９９）、ホスホイノシチド３−キナーゼ活性はＨＬ−６０細胞のａｌｌ−ｔｒａｎｓ−レチノイン酸誘導による顆粒球分化には不可欠である、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、５９：５４２〜５４６］。
【００３１】
細胞分化調節経路におけるＰＩ−３キナーゼの関与は非造血細胞でもまた明らかにされていた。平滑筋細胞（ＳＭＣ）の分化が、培養におけるインスリン様増殖因子Ｉ（ＩＧＦ−Ｉ）（分化した表現型の誘導因子）の存在下でさえも、血小板由来増殖因子−ＢＢ（ＰＤＧＦ−ＢＢ）、塩基性繊維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）および上皮増殖因子（ＥＧＦ）によって誘導される。このことにより、明らかに異なるシグナル伝達経路がＳＭＣの表現型を調節していることが明らかにされた。ＰＤＧＦ−ＢＢ、ｂＦＧＦおよびＥＧＦにより開始されるＥＲＫ経路およびｐ３８ＭＡＰＫ経路の両方は、ＳＭＣの分化を誘導する際に不可欠な役割を果たしていることが見出され、これに対して、ＰＩ３−キナーゼ／プロテインキナーゼＢ（Ａｋｔ）経路は、分化状態を維持する際に重要であった。砂嚢ＳＭＣの表現型決定に関わる同じシグナル伝達経路が血管ＳＭＣにおいて認められた。従って、ＰＩ３−キナーゼ／プロテインキナーゼＢ（Ａｋｔ）経路とＥＲＫ経路およびｐ３８ＭＡＰＫ経路との間におけるバランスの変化により、内臓ＳＭＣおよび血管ＳＭＣの表現型が決定され得る［Ｋｅｎ’ｉｃｈｉｒｏ  Ｈａｙａｓｈｉ他、ホスホイノシチド３−キナーゼ／プロテインキナーゼＢ（Ａｋｔ）と分裂促進因子により活性化されるプロテインキナーゼ（ＥＲＫ／ｐ３８ＭＡＰＫ）とのバランスの変化は内臓平滑筋細胞および血管平滑筋細胞の表現型を決定する、Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．（１９９９）、第１４５巻：７２７〜７４０］。
【００３２】
従って、いくつかの分化誘導剤はＰＩ３−キナーゼを活性化することができ、ＰＩ−３Ｋ／ｐ７０Ｓ６Ｋ経路の阻害はこれらの細胞株における分化プロセスを阻止する［Ｍａｒｃｉｎｋｏｗｓｋａ  Ｅ（１９９９）、万能的な「分化のシグナル伝達経路」は存在するか？  １，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３に対する応答における種々の細胞分化実験モデルとＨＬ−６０細胞の分化との比較、Ｐｏｓｔｅｐｙ．Ｈｉｇ．Ｍｅｄ．Ｄｏｓｗ．、５３：３０５〜１３］。
【００３３】
さらに、細胞ＰＩ３−キナーゼ活性が、Ｃｕ＋＋にさらされた後、強く高まることが報告されていた［Ｏｓｔｒａｋｈｏｖｉｔｃｈ  ＥＡ他（２００２）、銅イオンは、反応性酸素化学種の生成とは独立したホスホイノシチド３−キナーゼ／Ａｋｔ経路を強く活性化する、Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．、３９７：２３２〜９］。
【００３４】
これらの発見に基づいて、そして、銅キレーターが様々な供給源に由来する複製可能な幹細胞の拡大培養を誘導することを例示する国際特許出願公開ＷＯ９９／４０７８３および同ＷＯ００／１８８８５の教示に基づいて、本発明者らは、遷移金属キレーター、レチノイン酸受容体アンタゴニストおよびニコチンアミド、ならびに／またはＰＩ３キナーゼ阻害剤の存在下でエクスビボ拡大培養された細胞が組織再生療法において好適であることを試験するように設計している。
【００３５】
本発明を実施に移しているとき、また、下記の実施例の節に例示されているように、本発明者らは、エクスビボ拡大培養された幹細胞が組織再生のために非常に好適であることを発見した。具体的には、本発明らは、造血系または非造血系の供給源に由来する幹細胞が、遷移金属キレーター、レチノイン酸受容体アンタゴニスト、ニコチンアミドおよび／またはＰＩ３キナーゼ阻害剤が補充されたエクスビボでの長期間にわたる培養で拡大培養され得ること、および、レシピエントの器官の組織を特徴づける他の細胞タイプに幹細胞が最終的にはトランス分化する、レシピエントの器官にさらに移植され得ることを示している。
【発明の開示】
【００３６】
発明の概要
本発明の１つの局面によれば、幹細胞を目的組織にインビボで分化させる方法が提供され、この場合、この方法は、（ａ）ドナー組織に由来する、エクスビボ拡大培養された（ｅｘ  ｖｉｖｏ  ｅｘｐａｎｄｅｄ）幹細胞の集団を得ること、および（ｂ）前記幹細胞を目的組織に投与して、目的組織を特徴づける１つ以上の細胞タイプへの幹細胞の分化を誘導するようにすることを含む。
【００３７】
本発明の別の局面によれば、細胞または組織の置換を必要とする障害に罹患している個体を治療する方法が提供され、この場合、この方法は、（ａ）単離された幹細胞を、細胞増殖を誘導しかつ細胞分化を抑制するために好適な選択された培養条件に供し、それにより、拡大培養された幹細胞の集団を得ること；および（ｂ）拡大培養された幹細胞の集団を、障害に関連する個体の組織に導入し、それにより、組織を特徴づける細胞への拡大培養された幹細胞集団の細胞分化を誘導し、それにより細胞または組織の置換を必要とする障害に罹患している個体を治療することを含む。
【００３８】
本発明のさらに別の局面によれば、成体幹細胞を事前に決定されたタイプの細胞に組織内で分化させる方法が提供され、この場合、この方法は、（ａ）ドナー組織から得られた成体幹細胞を、細胞増殖を誘導し、かつ細胞分化を抑制するために好適に選択された条件のもとで培養し、それにより、拡大培養された幹細胞の集団を得ること；および（ｂ）拡大培養された成体幹細胞の集団を、事前に決定されたタイプの目的組織に導入し、それにより、拡大培養された幹細胞を目的の組織を特徴づける細胞へ分化させることを含む。
【００３９】
下記に記載される本発明の好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、ドナー組織は、目的組織の表現型特徴および機能的特徴と同一の表現型特徴および機能的特徴を有する。
【００４０】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、ドナー組織は、目的組織の表現型特徴および機能的特徴とは異なる表現型特徴および機能的特徴を有する。
【００４１】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、ドナー組織に由来する幹細胞は、胚性幹細胞ならびに新生児幹細胞および／または成体幹細胞からなる群から選択される。
【００４２】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、胚性幹細胞は、胚性幹細胞および胚生殖細胞からなる群から選択される。
【００４３】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、新生児幹細胞および／または成体幹細胞は、造血幹細胞および非造血幹細胞からなる群から選択される。
【００４４】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、造血幹細胞は、骨髄細胞、新生児臍帯血細胞および末梢血細胞からなる群から選択される。
【００４５】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、ドナー組織に由来する造血幹細胞はＣＤ３４＋豊富化細胞である。
【００４６】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、ドナー組織に由来する造血幹細胞はＡＣ１３３＋豊富化細胞である。
【００４７】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、エクスビボ拡大培養された幹細胞は、ＣＤ３８、ＣＤ３、ＣＤ６１、ＣＤ１９、ＣＤ３３、ＣＤ１４、ＣＤ１５および／またはＣＤ４の細胞表面抗原のダウンレギュレーションされた発現によって特徴づけられる。
【００４８】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、非造血幹細胞は、ニューロン幹細胞、ニューロン始原細胞、稀突起神経膠細胞始原細胞、間葉性幹細胞、肝細胞幹細胞、肝臓幹細胞、表皮幹細胞、心臓幹細胞からなる群から選択される。
【００４９】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、ドナー組織に由来する幹細胞は、細胞系譜的に拘束された細胞と混合される。
【００５０】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、ドナー組織に由来する幹細胞は、目的組織を有する対象に関して同一遺伝子型（ｓｙｎｇｅｎｅｉｃ）、同種および／または異種であるドナーから得られる。
【００５１】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、目的組織は、内胚葉細胞、外胚葉細胞および／または中胚葉細胞を含む。
【００５２】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、前記内胚葉細胞を含む前記目的組織は、咽頭、食道、胃、腸、肝臓、膵臓、気管および肺からなる群から選択される。
【００５３】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、前記外胚葉細胞を含む前記目的組織は、脳、副腎、網膜および表皮からなる群から選択される。
【００５４】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、中胚葉細胞を含む目的組織は、結合組織、間葉、骨、軟骨、筋肉、繊維組織、真皮、心臓、骨髄、および泌尿生殖系の細管からなる群から選択される。
【００５５】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、ドナー組織に由来する幹細胞は、内胚葉起源、外胚葉起源および／または中胚葉起源である。
【００５６】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、障害は、神経学的障害、筋肉障害、心臓血管障害、血液学的障害、皮膚障害、肝臓障害および膵臓障害からなる群から選択される。
【００５７】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、エクスビボ拡大培養された幹細胞の集団を得ることは、細胞増殖を誘導しかつ細胞分化を抑制するために好適な条件のもとで幹細胞を培養することによって行われる。
【００５８】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、幹細胞におけるＣＤ３８の発現および／または活性を低下させることができる前記条件が選択される。
【００５９】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、条件は、細胞に栄養分およびサイトカインを与えることも含む。
【００６０】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、サイトカインは初期作用サイトカインである。
【００６１】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、初期作用サイトカインは、幹細胞因子、ＦＬＴ３リガンド、インターロイキン−１、インターロイキン−２、インターロイキン−３、インターロイキン−６、インターロイキン−１０、インターロイキン−１２、腫瘍壊死因子−αおよびトロンボポエチンからなる群から選択される。
【００６２】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、サイトカインは後期作用サイトカインである。
【００６３】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、後期作用サイトカインは、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子、エリスロポエチン、ＦＧＦ、ＥＧＦ、ＮＧＦ、ＶＥＧＦ、ＬＩＦ、肝細胞増殖因子およびマクロファージコロニー刺激因子からなる群から選択される。
【００６４】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、細胞に遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートを与えることが条件に含まれる。
【００６５】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、遷移金属キレーターまたは遷移金属キレートは、ポリアミンキレート化剤、エチレンジアミン、ジエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、トリエチレンジアミン、テトラエチレンペンタミン、アミノエチルエタノールアミン、アミノエチルピペラジン、ペンタエチレンヘキサミン、トリエチレンテトラミン塩酸塩、テトラエチレンペンタミン塩酸塩、ペンタエチレンヘキサミン塩酸塩、テトラエチルペンタミン、カプトプリル、ペニシラミン、Ｎ，Ｎ’−ビス（３−アミノプロピル）−１，３−プロパンジアミン、Ｎ，Ｎ，ビス（２−アミノエチル）−１，３−プロパンジアミン、１，７−ジオキサ−４，１０−ジアザシクロドデカン、１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン−５，７−ジオン、１，４，７−トリアザシクロノナン三塩酸塩、１−オキサ−４，７，１０−トリアザシクロドデカン、１，４，８，１２−テトラアザシクロペンタデカン、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカンからなる群から選択される。
【００６６】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、幹細胞におけるＣＤ３８の発現および／または活性の低下が可能な選択された条件には、ＣＤ３８の発現をダウンレギュレーションする薬剤を含まれる。
【００６７】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、ＣＤ３８の発現をダウンレギュレーションする薬剤は、レチノイン酸受容体アンタゴニスト、レチノイドＸ受容体アンタゴニストおよびビタミンＤ受容体アンタゴニストからなる群から選択される。
【００６８】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、レチノイン酸受容体アンタゴニストは、ＡＧＮ１９４３１０；ＡＧＮ１９３１０９；３−（４−メトキシ−フェニルスルファニル）−３−メチル酪酸；６−メトキシ−２，２−ジメチルチオクロマン−４−オン、２，２−ジメチル−４−オキソ−チオクロマン−６−イルトリフルオロメタンスルホネート；４−（（２，２−ジメチル−４−オキソ−チオクロマン−６−イル）エチニル）安息香酸エチル；４−（（２，２−ジメチル  １−４−トリフルオロメタンスルホニルオキシ−２（Ｈ）−チオクロメン−６−イル）エチニル）安息香酸エチル（４１）；チオクロメン−６−イル］エチニル］ベンゾエート（イル）；（ｐ−［（Ｅ）−２−［３’４’−ジヒドロ−４，４’−ジメチル−７’−（ヘプチルオキシ）−２’Ｈ−１−ベンゾチオピラン−６’イル］プロペニル］安息香酸１’１’−ジオキシド；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ブトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−プロポキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ペントキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ヘキソキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ヘプトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−オクトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−［３−ｔ−ブチル−５−（１−フェニルビニル）−フェニル］−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４｛［４，５−３Ｈ２］−ｎ−ペントキシ｝フェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸エチルエステル：（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸；（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブチルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；４−（５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレンカルボキサミド）安息香酸；（２Ｅ，４Ｅ）−３−メチル−５−［（１Ｒ，２Ｓ）−２−（５，５，８，８−テトラメチル−５���６，７，８−テトラヒドロ−ナフタレン−２−イル）シクロプロピル］ペンタ−２，４−ジエン酸；ｐ−［（Ｅ）−２−［３’，４’−ジヒドロ−４’，４’−ジメチル−７’−（ヘプチルオキシ）−２’Ｈ−１−ベンゾチオピラン−６’−イル］プロペニル］安息香酸；１’，１’−ジオキシド，４−（７，７，１０，１０−テトラメチル−１−ピリジン−３−イルメチル−４，５，７，８，９，１０−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ナフト［２，３−ｇ］インドール−３−イル）安息香酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−メトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ヘキシルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−オクチルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；および（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３−ｎ−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、および４−（５Ｈ−２，３（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−ｎ−プロピルジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、４−（５Ｈ−２，３−（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−メチル−８−ニトロジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、４−｛［４−（４−エチルフェニル）２，２−ジメチル−（２Ｈ）−チオクロメン−６−イル｝エチニル）安息香酸、４−［４−２メチル−１，２−ジカルバ−クロソ（ｃｌｏｓｏ）−ドデカボラン−１−イル−フェニルカルバモイル］安息香酸、４−［４，５，７，８，９，１０−ヘキサヒドロ−７，７，１０，１０−テトラメチル−１−（３−ピリジルメチル）アントラ［１，２−ｂ］ピロール−３−イル］安息香酸、（３−ピリジルメチル）−］５−チアアントラ［２，１−ｂ］ピロール−３−イル）安息香酸、および（３−ピリジルメチル）アントラ［２ｍ１−ｄ］ピラゾール−３−イル］安息香酸からなる群から選択される。
【００６９】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、レチノイドＸ受容体アンタゴニストは、ＬＧＮ１００５７２、ＬＧＮ１００５７４、１−（３−ヒドロキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）エタノン、１−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）エタノン、３−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）ブタ−２−エンニトリル、３−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）ブタ−２−エナール、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−３［−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレン−２−イル］−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、４−［３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル］カルボニル］安息香酸、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］安息香酸、４−［１（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］安息香酸、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ベンゼンテトラゾール、２−［１−（５，５，８，８−テトラメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エチル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸エチル、５−［１−３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−２−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸メチル、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］−Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）ベンズアミド、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸ブチルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸プロピルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸シアノイミン、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸アリルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸４−（３−メチルブタ−２−エン酸）オキシム、および４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸１−アミノエチルオキシム、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３−ｎ−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、４−（５Ｈ−２，３（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−ｎ−プロピルジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、および４−（５Ｈ−２，３−（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５メチル−８−ニトロジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸からなる群から選択される。
【００７０】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、ビタミンＤ受容体アンタゴニストは、１α，２５−（ＯＨ）−Ｄ３−２６，２３−ラクトン；１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ（３）；その２５−カルボン酸エステルＺＫ１５９２２２；（２３Ｓ）−２５−デヒドロ−１α−ＯＨ−Ｄ（３）；（２３Ｒ）−２５−デヒドロ−１α−ＯＨ−Ｄ（３）；１β，２５（ＯＨ）２Ｄ３；１β，２５（ＯＨ）２−３−ｅｐｉ−Ｄ３；（２３Ｓ）２５−デヒドロ−１α（ＯＨ）Ｄ３−２６，２３−ラクトン；（２３Ｒ）２５−デヒドロ−１α（ＯＨ）Ｄ３−２６，２３−ラクトン、および（５Ｚ，７Ｅ，２２Ｅ−（１Ｓ，７Ｅ，２２Ｅ−（１Ｓ，３Ｒ，２４Ｒ）−１，３，２４−トリヒドロキシ−２６，２７−シクロ−９，１０−セココレスタ−５，７，１０（１９），２２−テトラエン−２５−カルボン酸）ブチルからなる群から選択される。
【００７１】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、ＣＤ３８の発現をダウンレギュレーションする薬剤は、レチノイン酸、レチノイドおよび／またはビタミンＤに応答する幹細胞の能力を低下させるためのアンタゴニストである。
【００７２】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、ＣＤ３８の発現をダウンレギュレーションする薬剤はポリヌクレオチドである。
【００７３】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、ポリヌクレオチドは、抗ＣＤ３８細胞内抗体、抗レチノイン酸受容体細胞内抗体、抗レチノイドＸ受容体細胞内抗体または抗ビタミンＤ受容体細胞内抗体をコードする。
【００７４】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、ポリヌクレオチドは、抗ＣＤ３８抗体、抗レチノイン酸受容体抗体、抗レチノイドＸ受容体抗体または抗ビタミンＤ受容体抗体をコードする。
【００７５】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、ポリヌクレオチドは、ＣＤ３８、レチノイン酸受容体、レチノイドＸ受容体またはビタミンＤ受容体の細胞内のｍＲＮＡ分解または遺伝子分解を生じさせる小さい干渉性ポリヌクレオチド分子である。
【００７６】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、小さい干渉性ポリヌクレオチド分子は、ＲＮＡｉ分子、アンチセンス分子、リボザイム分子およびＤＮＡザイム分子からなる群から選択される。
【００７７】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、ＣＤ３８の発現をダウンレギュレーションする薬剤はＰＩ３−キナーゼの活性阻害剤または発現阻害剤である。
【００７８】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、ＰＩ３−キナーゼの発現阻害剤はポリヌクレオチドである。
【００７９】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、ポリヌクレオチドはＰＩ３−キナーゼ細胞内抗体をコードする。
【００８０】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、ポリヌクレオチドはＰＩ３−キナーゼ抗体をコードする。
【００８１】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、ポリヌクレオチドは、ＰＩ３−キナーゼの細胞内のｍＲＮＡ分解または遺伝子分解を生じさせる小さい干渉性ポリヌクレオチド分子である。
【００８２】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、小さい干渉性ポリヌクレオチド分子は、ＲＮＡｉ分子、アンチセンス分子、リボザイム分子およびＤＮＡザイム分子からなる群から選択される。
【００８３】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、ポリヌクレオチドは、優性ネガティブなＰＩ３−キナーゼ構築物を含有するＤＮＡベクターである。
【００８４】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、ＰＩ３−キナーゼの活性阻害剤は、ウォルトマンニンおよびＬＹ２９４００２からなる群から選択される。
【００８５】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、幹細胞におけるＣＤ３８の発現および／または活性を低下させることができる選択された条件には、ＣＤ３８の活性を阻害する薬剤が含まれる。
【００８６】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、ＣＤ３８の活性を阻害する薬剤は、ニコチンアミド、ニコチンアミドアナログ、ニコチンアミドもしくはニコチンアミドアナログの誘導体、またはニコチンアミドもしくはニコチンアミドアナログの代謝物である。
【００８７】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、ニコチンアミドアナログは、ベンズアミド、ニコチンチオアミド、ニコチン酸およびα−アミノ−３−インドールプロピオン酸からなる群から選択される。
【００８８】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、レチノイン酸に応答する幹細胞の能力を低下させることができる前記条件が選択される。
【００８９】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、ニコチンアミド、ニコチンアミドアナログ、ニコチンアミドもしくはニコチンアミドアナログの誘導体、またはニコチンアミドもしくはニコチンアミドアナログの代謝物が条件に含まれる。
【００９０】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、条件にはＰＩ３−キナーゼの活性阻害剤または発現阻害剤が含まれる。
【００９１】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、レチノイドに応答する幹細胞の能力を低下させることができる前記条件が選択される。
【００９２】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、ビタミンＤに応答する幹細胞の能力を低下させることができる前記条件が選択される。
【００９３】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、レチノイン酸受容体を伴うシグナル伝達経路に応答する幹細胞の能力を低下させることができる前記条件が選択される。
【００９４】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、レチノイドＸ受容体を伴うシグナル伝達経路に応答する幹細胞の能力を低下させることができる前記条件が選択される。
【００９５】
記載された好ましい実施形態におけるより一層強い特徴によれば、ビタミンＤ受容体を伴うシグナル伝達経路に応答する幹細胞の能力を低下させることができる前記条件が選択される。
【００９６】
本発明は、エクスビボ拡大培養された幹細胞を組織内およびインビボで分化させる方法、そして、エクスビボ拡大培養された幹細胞を使用して障害を治療する方法を提供することによって、現在知られている形態の様々な欠点に対処することに成功している。
【００９７】
別途に定義されない限り、本明細書中で使用されるすべての技術的用語および科学的用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されているものと同じ意味を有する。本明細書中に記載される方法および材料と類似または同等な方法および材料を本発明の実施または試験において使用することができるが、好適な方法および材料は、下記に記載される。矛盾する場合には、本特許明細書（定義を含む）が優先する。さらに、材料、方法および例は例示にすぎず、限定することを意図しない。
【００９８】
図面の簡単な説明
本明細書では一例として添付の図面を参照しながら本発明を説明する。図面に示す詳細は一例であって、本発明の好ましい態様の具体例を挙げる目的しかなく、本発明の原理および概念的特徴を最も有効かつ理解しやすいと考えられる形で説明するために記載するものである。この点に関して、本発明の構成上の詳細は、本発明の基本的理解に必要な程度にしか詳しく説明していないが、本明細書と図面を合わせて検討することにより、当業者には、本発明のいくつかの形態を実際に具体化する方法が明らかになるだろう。
図１は左心室（ＬＶ）腔注入によりＣＤ３４＋細胞が移植されたラットのヘマトキシリン−エオシン染色した凍結ラット心臓切片の顕微鏡写真である（図１ａ〜図１ｂ）。心筋梗塞（ＭＩ）瘢痕位置（矢印で印が付けられる）の近くに存在する、移植されたＣＤ３４＋細胞に起源を発する非定型な細胞を有する領域に留意すること。倍率は２００倍（図１ａ）および４００倍（図１ｂ）である。
図２はヒトのＸ染色体およびＹ染色体に特異的なプローブを使用したＦＩＳＨ分析の顕微鏡写真である（図２ａ〜図２ｃ）。男児および女児の新生児臍帯血サンプルのプールに由来するエクスビボ拡大培養されたＣＤ３４＋細胞のサイトスピン（ｃｙｔｏｓｐｉｎ）サンプルのＦＩＳＨ分析（図２ａ、倍率は１０００倍である）、ならびにヒトＣＤ３４＋細胞が移植されたラットに由来するラット心臓切片のＦＩＳＨ分析（図２ｂおよび図２ｃ、倍率は１０００倍である）が示される。緑色およびオレンジ色のハイブリダイゼーションシグナルは、それぞれ、ヒトのＸ染色体およびＹ染色体に対応する。核がＤＡＰＩで染色されている。移植されたヒト幹細胞に由来するラット心臓細胞が緑色およびオレンジ色のハイブリダイゼーションシグナルで標識されている（図２ｂ、赤色の矢印が付けられた細胞）が、内因性のラット心臓細胞は標識されていないことに留意すること（図２ｂ、黄色の矢印が付けられた細胞）。
図３はＡＣ１３３＋移植ラットにおけるヒト由来のラット心臓細胞を例示する（図３ａ〜図３ｂ）。移植後３週間目に、凍結ラット心臓切片は、ヒトのＸ染色体およびＹ染色体に特異的な蛍光プローブを使用したＦＩＳＨ分析に供された。緑色およびオレンジ色のハイブリダイゼーションシグナルが、ラット心臓細胞（図３ａ）および血管の周りに局在化した細胞（図３ｂ）において、Ｘ染色体およびＹ染色体にそれぞれ対応することに留意すること。核がＤＡＰＩで染色されている。倍率は１０００倍である。
図４はヒトのＸ染色体およびＹ染色体に特異的なプローブを使用したＦＩＳＨ分析が続く、抗フォンウィルブラント因子抗体を使用した免疫蛍光分析を例示する。細胞質において内皮フォンウィルブラント因子マーカーを発現するＣＤ３４＋生着臍帯血細胞（緑色の標識、矢印が付けられる）、ならびに、核におけるＸ染色体およびＹ染色体のハイブリダイゼーションシグナルを有する凍結ラット心臓切片が示される。倍率は１０００倍である。
図５は抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体を使用した、ＣＤ３４＋のエクスビボ拡大培養された臍帯血細胞のサイトスピンサンプルの免疫組織化学分析における顕微鏡写真である。ＨＬＡ−ＤＲ陽性細胞が暗い褐色の染色により標識されている。倍率は４００倍である。
図６は抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体を使用したラット骨髄細胞を免疫組織化学染色した顕微鏡写真である。（ＩＶ注入された）ヒトＡＣ１３３＋移植細胞に由来するラット骨髄細胞が、ＨＬＡ−ＤＲの発現に対応する褐色の染色により標識されている。倍率は４００倍である。
図７は抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体を使用した凍結ラット心臓切片の免疫組織化学染色の顕微鏡写真である（図７ａ〜図７ｂ）。ヒトＡＣ１３３＋移植細胞に由来する細胞におけるＨＬＡ−ＤＲの発現に対応する褐色の標識に留意すること。倍率は２００倍（図７ａ）および４００倍（図７ｂ）である。
図８は凍結肺実質組織切片を免疫組織化学染色した顕微鏡写真である（図８ａ〜図８ｂ）。ヒトＡＣ１３３＋移植細胞に由来する細胞におけるＨＬＡ−ＤＲの発現に対応する褐色の標識に留意すること。
【発明を実施するための最良の形態】
【００９９】
本発明は、（ｉ）エクスビボ拡大培養された幹細胞を組織内およびインビボで分化させる方法、ならびに、（ｉｉ）エクスビボ拡大培養された幹細胞を使用する細胞置換療法または組織置換療法によって、障害に罹患している個体を治療する方法に関する。
【０１００】
本発明による方法の原理および操作は、付随する説明および実施例を参照してより良く理解することができる。
【０１０１】
本発明の１つ以上の実施形態を詳しく説明する前に、本発明は、その適用において、下記の説明に示す細部に限定されないことまたは実施例により例示されることを理解しなければならない。本発明は、他の実施形態が可能であり、または様々な方法で実施することができ、または様々な方法で実施される。また、本明細書中で用いられる表現および用語は説明のためであり、限定的であると見なすべきでないことを理解しなければならない。
【０１０２】
多能性のヒト幹細胞により、生物医学研究には、薬物の開発および試験のための新しい方法が提供され、また、そのような細胞は機能不全組織または変性組織の置換のために使用することができるので器官の修復および置換のための新しい方法が提供される。
【０１０３】
組織の置換では、胚組織、胎児組織または成体組織に由来する幹細胞を使用することができる。
【０１０４】
造血幹細胞が非造血系組織（例えば、ニューロン組織および心臓組織など）を生じさせることができるという最近の発見は、これらの細胞が、以前に考えられていたよりも大きい分化能を有し得ることを示唆しており、従って、そのような細胞を使用する治療的適用のために新しい領域を開拓する［Ｌｕ  Ｄ他（２００２）、ヒト臍帯血の静脈内投与は外傷性脳傷害後のラットにおける神経学的欠損を減少させる、Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．、１１：２７５〜８１］。
【０１０５】
しかしながら、造血幹細胞の拡大培養は数多くの課題をもたらしており、従って、比較的多数のそのような細胞が必要である適用（例えば、組織修復および細胞置換など）におけるそのような細胞の使用を制限している。今日までに実施されている造血幹細胞培養プロトコルの大半においては、限られた期間にわたって幹細胞の増殖を可能にし、その後、幹細胞を分化段階に進行させ、異なる造血細胞系譜に拘束する初期作用サイトカインおよび後期作用サイトカインの様々な組合せが使用されている［Ｋｏｌｌｅｒ  ＭＲ他、連続潅流培養における骨髄単核細胞からのヒト幹細胞および始原細胞の大規模拡大培養、（１９９３）、Ｂｌｏｏｄ、８２：３７８；Ｈａｙｌｏｃｋ  ＤＮ他、末梢血ＣＤ３４＋細胞の骨髄系譜へのエクスビボ拡大培養および成熟化、（１９９２）、Ｂｌｏｏｄ、８０：１４０５；Ｂｒｕｇｇｅｒ  Ｗ他、幹細胞因子（インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）、ＩＬ−６、ＩＬ−３、インターフェロン−γおよびエリスロポエチン）による豊富化末梢血ＣＤ３４＋始原細胞のエクスビボ拡大培養、（１９９３）、Ｂｌｏｏｄ、８１：２５７９；Ｓａｔｏ  Ｎ他、ヒト末梢血ＣＤ３４＋細胞のインビトロ拡大培養、（１９９３）、Ｂｌｏｏｄ、８２：３６００］。
【０１０６】
現在実施されている幹細胞培養方法は、非常に多くの多能性幹細胞を産生させるには十分ではない。そのような方法では、集められた幹細胞を増殖性の未分化状態で長期間にわたって保持することができないからである。そうするためには、幹細胞の分化を可逆的に阻害するか、または遅らせなければならず、かつ、幹細胞の自己複製を延ばさなければならない。
【０１０７】
このことは、典型的には少量で回収され、非分化での、それにもかかわらず増殖性の状態で維持することが困難である成体幹細胞の場合には特に重要である。
【０１０８】
そのような細胞は、胚性幹細胞の使用および作製について現在置かれている様々な制限の中で、商業的用途および研究用途の両方で重要である。
【０１０９】
さらに、先行技術の方法論は、事前に決定された細胞タイプへの幹細胞の分化（特に、成体幹細胞の分化）を誘導する方法を十分に教示することには成功していない。
【０１１０】
本発明を実施に移してゆく過程で、本発明者らは、エクスビボ拡大培養された幹細胞、特に、エクスビボ拡大培養された成体幹細胞が、投与後、インビボで分化し得ることを発見した。本発明者らはまた、そのような細胞が、傷害に応答して非常に様々な組織の中に取り込まれることを発見した。
【０１１１】
従って、本発明の１つの局面によれば、エクスビボ拡大培養された幹細胞のインビボ分化を誘導する方法が提供される。この方法は、エクスビボ拡大培養された幹細胞の集団を最初に得ること（これは本明細書中下記に詳しく記載される）、次に、拡大培養された幹細胞の集団を組織内に投与して、その組織を特徴づける少なくとも１つの細胞タイプに幹細胞を分化させることを誘導するようにすることによって行われる。
【０１１２】
本明細書中上記にさらに記載されているように、本発明の幹細胞は、胚性幹細胞ならびに新生児（胎性）幹細胞および／または成体幹細胞を含む任意のタイプであり得る。後者には、造血系起源（例えば、骨髄細胞、新生児臍帯血細胞および末梢血細胞）および非造血系起源（例えば、ニューロン幹細胞、ニューロン始原細胞、稀突起神経膠細胞始原細胞、間葉性幹細胞、肝細胞幹細胞、肝臓幹細胞、表皮幹細胞、心臓幹細胞）の両方に由来する幹細胞が含まれる。
【０１１３】
好ましくは、幹細胞は、第１の組織（これはまた本明細書中では「ドナー組織」として示される）に由来し、第２の組織（これはまた本明細書中では「目的組織」として示される）に投与される。第１の組織および第２の組織は、好ましくは、異なるタイプであり、そのような場合、分化は本明細書中では「トランス分化」と呼ばれる。しかしながら、第１の組織および第２の組織が同じタイプであり得ることにも留意しなければならず、そのような場合、分化は本明細書中では「シス分化」と呼ばれる。
【０１１４】
本明細書中下記に、また、下記の実施例の節に記載されているように、組織内に投与される拡大培養された幹細胞の集団は、好ましくは、ＣＤ３８、ＣＤ３、ＣＤ６１、ＣＤ１９、ＣＤ３３、ＣＤ１４、ＣＤ１５およびＣＤ４などの細胞表面抗原のダウンレギュレーションされた発現によって特徴づけられる。
【０１１５】
様々な方法を、上記に記載された細胞表面抗原のいくつか、または好ましくは、それらのすべてのダウンレギュレーションされた発現によって特徴づけられる拡大培養された幹細胞の集団を作製するために利用することができる。下記の節には、好適な方法論の例が示される。
【０１１６】
遷移金属キレーターの存在下での幹細胞のエクスビボ拡大培養
本明細書中上記の背景の節において記載されたように、遷移金属キレーター、特に、銅キレーターは、幹細胞および始原細胞の分化を阻害し、それにより、エクスビボでの細胞の増殖および拡大培養を延ばすことができる。米国特許出願第０９／９８６８９７号でさらに記載されるように、銅キレーター（テトラエチレンペンタミン、ＴＥＰＡ）、ならびに高用量および低用量の初期作用サイトカイン、または初期作用サイトカインおよび後期作用サイトカインの組合せの存在下でのＣＤ３４＋細胞のエクスビボ拡大培養は、ＣＤ３４＋細胞の細胞クローニンング効率および割合の著しい増大をもたらしていた。
【０１１７】
従って、本発明の１つの好ましい実施形態によれば、幹細胞のエクスビボ拡大培養は、栄養分、サイトカインおよび遷移金属キレーターの存在下で行われる。
【０１１８】
本発明のサイトカインは初期作用サイトカインまたは後期作用サイトカインであり得るし、これらは、Ｐｅｐｒｏ  Ｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．（Ｒｏｃｋｙ  Ｈｉｌｌ、ＮＪ）などの任意のサイトカイン供給者から購入することができ、また、Ｒ＆Ｄ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）から得られるサイトカインであり得る。初期作用サイトカインの例には、幹細胞因子、ＦＬＴ３リガンド、インターロイキン−１、インターロイキン−２、インターロイキン−３、インターロイキン−６、インターロイキン−１０、インターロイキン−１２、腫瘍壊死因子−αおよびトロンボポエチンが含まれるが、これらに限定されない。
【０１１９】
後期作用サイトカインの例には、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子、エリスロポエチン、ＦＧＦ、ＥＧＦ、ＮＧＦ、ＶＥＧＦ、ＬＩＦ、肝細胞増殖因子およびマクロファージコロニー刺激因子が含まれるが、これらに限定されない。
【０１２０】
本明細書中で使用される表現「遷移金属キレーター」は、環を形成するように示された金属と配位結合することができる少なくとも２つの原子を有する遷移金属配位子を示す。示された遷移金属の遷移金属キレーターは、示された遷移金属のイオンを有しておらず、すなわち、示された遷移金属のイオンと錯体を形成していない。従って、例えば、表現「銅キレーター」は、銅イオンを有しておらず、すなわち、銅イオンと錯体を形成していない銅のキレーターを示す。
【０１２１】
そのようなキレーターは、例えば、ポリアミンキレート化剤、エチレンジアミン、ジエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、トリエチレンジアミン、テトラエチレンペンタミン、アミノエチルエタノールアミン、アミノエチルピペラジン、ペンタエチレンヘキサミン、トリエチレンテトラミン塩酸塩、テトラエチレンペンタミン塩酸塩、ペンタエチレンヘキサミン塩酸塩、テトラエチルペンタミン、カプトプリル、ペニシラミン、Ｎ，Ｎ’−ビス（３−アミノプロピル）−１，３−プロパンジアミン、Ｎ，Ｎ，ビス（２−アミノエチル）−１，３−プロパンジアミン、１，７−ジオキサ−４，１０−ジアザシクロドデカン、１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン−５，７−ジオン、１，４，７−トリアザシクロノナン三塩酸塩、１−オキサ−４，７，１０−トリアザシクロドデカン、１，４，８，１２−テトラアザシクロペンタデカン、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカンであり得る。これらの遷移金属キレーターはＮｏｖａｓｅｐ（フランス）から市販されている。
【０１２２】
国際特許出願ＰＣＴ／ＩＬ／０３／０００６２に記載されているように、幹細胞のエクスビボ拡大培養はまた、遷移金属キレートの存在下でも達成されていた。
【０１２３】
本明細書中で使用される表現「遷移金属キレート」は、示された遷移金属のイオンと錯体を形成している遷移金属のキレーターを示す。従って、例えば、「銅キレート」は、銅イオンと錯体を形成している銅のキレーターを示す。
【０１２４】
ＣＤ３８の活性または発現をダウンレギュレーションしながらの幹細胞のエクスビボ拡大培養
【０１２５】
ＣＤ３８の調節は、幹細胞の発達における非常に重要な事象であると見なされており、自己複製または分化をもたらす段階を制御している。異なる細胞標的において活性である種々の試薬を組み合わせた実験では、付加的効果または相乗的効果のいずれも明らかにされていなかった。これらの結果は、幹細胞の自己複製の調節における原因因子としてのＣＤ３８タンパク質の役割を裏付けていた。
【０１２６】
本明細書中上記の背景の節に記載されているように、自己複製および多系譜の分化が可能である造血系の多能性幹細胞はほとんどがＣＤ３４＋／ＣＤ３８−である。
【０１２７】
本明細書中上記の背景の節にさらに記載されているように、レチノイン酸受容体（ＲＡＲ）により媒介されるシグナル伝達は分化マーカーのＣＤ３８細胞表面抗原の発現の誘導をもたらし、これに対して、ＲＡＲに対するアンタゴニストはＣＤ３８の発現をダウンレギュレーションしている。
【０１２８】
そのうえ、国際特許出願ＰＣＴ／ＩＬ０３／０００６４に開示されているように、ニコチンアミド（これはＣＤ３８阻害剤である）は幹細胞の分化プロセスを抑制し、そして、エクスビボでの活性な細胞増殖および拡大培養の段階を刺激し、そのような段階を延ばしている。さらに、ＲＡＲ、ＲＸＲおよびＶＤＲのアンタゴニストなどの化学剤もまた、幹細胞の分化プロセスを抑制し、そして、エクスビボでの活性な細胞増殖および拡大培養の段階を刺激し、そのような段階を１６週間〜１８週間までの期間にわたり延ばしている。
【０１２９】
国際特許出願ＰＣＴ／ＩＬ０３／０００６４にはまた、ＲＡＲスーパーファミリーおよびＲＸＲスーパーファミリーのレチノイン酸受容体アンタゴニストなどの薬剤とともにインキュベーションされた初代肝細胞培養物は、α−フェトプロテインを産生する細胞の増大した割合によって特徴づけられることが開示されている。
【０１３０】
まとめると、これらのデータは、造血系起源および他の起源の幹細胞のエクスビボ拡大培養が、ＣＤ３８の発現および／または活性を妨害することにより幹細胞集団のエクスビボおよび／またはインビボでの拡大培養を誘導する様々な薬剤を使用して達成され得ることを示唆している。従って、そのような薬剤を、例えば、造血幹細胞に適用することにより、ＣＤ３４＋／ＣＤ３８−の細胞と同様に、非常に多数の未分化なＣＤ３４＋／Ｌｉｎ−（ＣＤ３３、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１４など）の細胞、特に、ＣＤ３４＋ｄｉｍ／Ｌｉｎ−の細胞がもたらされる。
【０１３１】
本明細書中上記の背景の節にさらに記載されているように、ＰＩ３−キナーゼもまた、ＣＤ３８のｍＲＮＡ発現を防止またはダウンレギュレーションすることができる。
【０１３２】
そのうえ、種々のＲＡＲ、ＲＸＲ、ＶＤＲおよびＴＨＲなどの核受容体により負わされている下流のシグナル伝達もまた、適切な受容体シグナル伝達のための必須因子であるＰＩ３−キナーゼの阻害によって阻止され得る。
【０１３３】
さらに、本明細書中上記の背景の節にさらに記載されているように、細胞のＰＩ−３キナーゼ活性は、Ｃｕ＋＋にさらされた後、強く高められる［Ｏｓｔｒａｋｈｏｖｉｔｃｈ  ＥＡ他（２００２）、銅イオンは、反応性酸素化学種の生成とは独立したホスホイノシチド３−キナーゼ／Ａｋｔ経路を強く活性化する、Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．、３９７：２３２〜９］。
【０１３４】
上記データを考慮すると、核受容体のヘテロ二量体による下流のシグナル伝達はＰＩ−３キナーゼ依存性であるようであるので、ＲＡおよびビタミンＤは、活性化後、ＰＩ−３キナーゼを呼び寄せる核受容体の二量体化、すなわち、それぞれ、ＲＡＲおよびＲＸＲならびにＲＸＲおよびＶＤＲの二量体化を誘導することを介して細胞の分化を高めると仮定することができる。ＰＩ３−キナーゼの活性な形態の存在下でのみ、これらの受容体は遺伝子発現をさらに制御し、その結果として、細胞の分化を誘導し、かつ活性化する。従って、ＰＩ３−キナーゼの酵素活性を、例えば、部位特異的なＰＩ３−キナーゼ阻害剤によって阻害することにより、ＲＡまたはビタミンＤのいずれかにより誘導される白血病細胞分化の阻止によって明らかにされるように、ＣＤ３８の発現がダウンレギュレーションされる。
【０１３５】
白血病細胞の分化の後期段階においてＲＡおよびビタミンＤの誘導を特異的に阻害し、そして同様にＣＤ３８の発現をダウンレギュレーションする化合物、すなわち、ＲＡＲアンタゴニスト、ＲＸＲアンタゴニストおよびＶＤＲアンタゴニストはまた、幹細胞／初期始原細胞の分化におけるサイトカイン誘導を阻害する。従って、部位特異的な阻害剤によるＰＩ３−キナーゼの活性および／または発現の阻害は、ＲＡＲアンタゴニストおよび／またはニコチンアミドによって示される阻害と類似するか、またはそのような阻害よりも良好な、ＣＤ３４＋細胞の分化の阻害をもたらす。
【０１３６】
ＰＩ３−キナーゼの提案された活性はまた、幹細胞の増殖または分化に対する銅イオン濃度の作用と相関する。このことは、銅が、ＣＤ３８遺伝子発現および細胞分化のアップレギュレーションにおける必須因子であるＰＩ３−キナーゼの活性化（細胞内銅含有量が大きい場合）または脱活性化（細胞内銅含有量が低い場合）を介して細胞の増殖および分化を調節していることを示唆している。
【０１３７】
低い銅含有量（これはテトラエチレンペンタミン（ＴＥＰＡ）などの銅キレーターを培養培地に補充することによって負わされる）のもとでは、ＰＩ３−キナーゼはあまり活性ではなく、細胞分化の遅れをもたらす。これに反して、細胞銅含有量が大きい場合、ＰＩ３−キナーゼは強く活性化され、細胞分化の促進をもたらす。
【０１３８】
従って、上記の引用された参考文献において明瞭に例示されているように、部位特異的な試薬、例えば、ＲＡＲアンタゴニスト（これはＣＤ３８の遺伝子発現をダウンレギュレーションする）、ニコチンアミド（これはＣＤ３８の酵素活性を阻害する）、ならびに、（直接的に、あるいは、レチノイド受容体を介するシグナル伝達の低下または阻止をもたらす細胞銅含有量の低下によって）ＰＩ３−キナーゼの酵素活性を低下させることができる薬剤は、ＣＤ３４＋細胞の分化を阻害することができ、従って、幹細胞培養物の拡大培養において利用することができる。
【０１３９】
上記に記載されたシグナル変換経路に応答する幹細胞の能力を低下させることは可逆的であることに留意しなければならない。経路阻害剤にさらされた細胞は、培養での１６週間〜１８週間の期間の後、拡大することを停止し、分化を開始することが以前に示されている。従って、このことは、本明細書中上記に記載された方法を使用して拡大培養された細胞は、他の細胞系統に転換せず、むしろ、いくつかの事前に決定された細胞系譜の１つに分化するその能力を保持していることを示している。
【０１４０】
本発明とともに利用され得るシグナル伝達経路阻害剤の例には、レチノイド受容体アンタゴニスト、例えば、ＡＧＮ１９４３１０；ＡＧＮ１９３１０９；３−（４−メトキシ−フェニルスルファニル）−３−メチル酪酸；６−メトキシ−２，２−ジメチルチオクロマン−４−オン、２，２−ジメチル−４−オキソ−チオクロマン−６−イルトリフルオロメタンスルホネート；４−（（２，２−ジメチル−４−オキソ−チオクロマン−６−イル）エチニル）安息香酸エチル；４−（（２，２−ジメチル  １−４−トリフルオロメタンスルホニルオキシ−２（Ｈ）−チオクロメン−６−イル）エチニル）安息香酸エチル（４１）；チオクロメン−６−イル］エチニル］ベンゾエート（イル）；（ｐ−［（Ｅ）−２−［３’４’−ジヒドロ−４，４’−ジメチル−７’−（ヘプチルオキシ）−２’Ｈ−１−ベンゾチオピラン−６’イル］プロペニル］安息香酸１’１’−ジオキシド；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ブトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−プロポキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ペントキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ヘキソキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−ヘプトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ｎ−オクトキシフェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−［３−ｔ−ブチル−５−（１−フェニルビニル）−フェニル］−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−［７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４｛［４，５−３Ｈ２］−ｎ−ペントキシ｝フェニル）−３−メチル］−オクタ２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸エチルエステル：（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸；（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブチルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；４−（５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレンカルボキサミド）安息香酸；（２Ｅ，４Ｅ）−３−メチル−５−［（１Ｒ，２Ｓ）−２−（５，５，８，８−テトラメチル−���，６，７，８−テトラヒドロ−ナフタレン−２−イル）シクロプロピル］ペンタ−２，４−ジエン酸；ｐ−［（Ｅ）−２−［３’，４’−ジヒドロ−４’，４’−ジメチル−７’−（ヘプチルオキシ）−２’Ｈ−１−ベンゾチオピラン−６’−イル］プロペニル］安息香酸；１’，１’−ジオキシド，４−（７，７，１０，１０−テトラメチル−１−ピリジン−３−イルメチル−４，５，７，８，９，１０−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ナフト［２，３−ｇ］インドール−３−イル）安息香酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−メトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−エトキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ヘキシルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−［３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−オクチルオキシフェニル］−３−メチル−２，４，６−オクタトリエン酸；および（２Ｅ，４Ｅ）−（１ＲＳ，２ＲＳ）−５−［２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ．ブチル−２−ブトキシフェニル）シクロプロピル］−３−メチル−ペンタ−２，４−ジエン酸、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３−ｎ−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、および４−（５Ｈ−２，３（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−ｎ−プロピルジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、４−（５Ｈ−２，３−（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−メチル−８−ニトロジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、４−｛［４−（４−エチルフェニル）２，２−ジメチル−（２Ｈ）−チオクロメン−６−イル｝エチニル）安息香酸、４−［４−２メチル−１，２−ジカルバ−クロソ（ｃｌｏｓｏ）−ドデカボラン−１−イル−フェニルカルバモイル］安息香酸、４−［４，５，７，８，９，１０−ヘキサヒドロ−７，７，１０，１０−テトラメチル−１−（３−ピリジルメチル）アントラ［１，２−ｂ］ピロール−３−イル］安息香酸、（３−ピリジルメチル）−］５−チアアントラ［２，１−ｂ］ピロール−３−イル）安息香酸、および（３−ピリジルメチル）アントラ［２ｍ１−ｄ］ピラゾール−３−イル］安息香酸などが含まれるが、これらに限定されない。
【０１４１】
本発明のレチノイドＸ受容体アンタゴニストには、ＬＧＮ１００５７２、ＬＧＮ１００５７４、１−（３−ヒドロキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）エタノン、１−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）エタノン、３−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）ブタ−２−エンニトリル、３−（３−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）ブタ−２−エナール、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−３［−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレン−２−イル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、４−［３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル］エテニル］安息香酸、４−［１（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］安息香酸、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ベンゼンテトラゾール、２−［１−（５，５，８，８−テトラメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エチル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸エチル、５−［１−３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−２−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸メチル、４−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］−Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）ベンズアミド、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）エテニル］ピリジン−５−カルボン酸、２−［１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）シクロプロピル］ピリジン−５−カルボン酸、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸ブチルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸プロピルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸シアノイミン、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸アリルオキシム、４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸４−（３−メチルブタ−２−エン酸）オキシム、および４−［（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル）カルボニル］安息香酸１−アミノエチルオキシム、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３−ｎ−プロポキシ−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチルナフタレン−２−イル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸、４−（５Ｈ−２，３（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５−ｎ−プロピルジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸、および４−（５Ｈ−２，３−（２，５−ジメチル−２，５−ヘキサノ）−５メチル−８−ニトロジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）安息香酸が含まれるが、これらに限定されない。
【０１４２】
本発明のビタミンＤ受容体アンタゴニストには、１α，２５−（ＯＨ）−Ｄ３−２６，２３−ラクトン；１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ（３）；その２５−カルボン酸エステルＺＫ１５９２２２；（２３Ｓ）−２５−デヒドロ−１α−ＯＨ−Ｄ（３）；（２３Ｒ）−２５−デヒドロ−１α−ＯＨ−Ｄ（３）；１β，２５（ＯＨ）２Ｄ３；１β，２５（ＯＨ）２−３−ｅｐｉ−Ｄ３；（２３Ｓ）２５−デヒドロ−１α（ＯＨ）Ｄ３−２６，２３−ラクトン；（２３Ｒ）２５−デヒドロ−１α（ＯＨ）Ｄ３−２６，２３−ラクトン、および（５Ｚ，７Ｅ，２２Ｅ−（１Ｓ，７Ｅ，２２Ｅ−（１Ｓ，３Ｒ，２４Ｒ）−１，３，２４−トリヒドロキシ−２６，２７−シクロ−９，１０−セココレスタ−５，７，１０（１９），２２−テトラエン−２５−カルボン酸）ブチルが含まれるが、これらに限定されない。
【０１４３】
上記に列記されたアンタゴニストは、それらの同族受容体各々に対するその大きい親和性について知られており、そのため、低い濃度で利用することができる。上記に加えて、抗ＰＩ３−キナーゼ、抗レチノイン酸受容体、抗レチノイドＸ受容体および／または抗ビタミンＤ受容体の抗体もしくは抗体フラグメントもまた、これらの受容体の活性を特異的に阻害するために使用することができ、一方で、そのような受容体をコードする配列に向けられたアンチセンス分子またはｓｉＲＮＡ分子を、その発現を阻害するために利用できることに留意しなければならない。これらの方法は本明細書中下記においてさらに説明される。
【０１４４】
ＣＤ３８の活性または発現の直接的な阻害剤はまた、幹細胞分化の強力な阻害剤として利用できることが理解される。ＣＤ３８の酵素活性の阻害を、抗体または特異的な阻止剤（例えば、基質アナログ）を使用して達成することができ、その一方で、ＣＤ３８の転写または翻訳を、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡを使用してダウンレギュレーションすることができる。これらの方法は本明細書中下記においてさらに説明される。これらの方法はどれも、すべてがＣＤ３４＋細胞の分化の阻害、および初期始原細胞のエクスビボ拡大培養での増大をもたらす。
【０１４５】
抗体
本発明において使用される用語「抗体」は、完全な分子ならびにその機能的なフラグメント、例えば、マクロファージに結合することができるＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖなどを包含する。
【０１４６】
これらの機能的な抗体フラグメントは下記のように定義される。
【０１４７】
Ｆａｂは、抗体分子の一価の抗原結合性フラグメントを含有するフラグメントであり、完全な分子を酵素パパインで消化して、無傷の軽鎖と、一方の重鎖の一部とを生じさせることによって作製することができる。Ｆａｂ’は、完全な抗体をペプシンで処理し、その後、還元して、無傷の軽鎖と、重鎖の一部とを生じさせることによって得ることができる抗体分子のフラグメントである。２つのＦａｂフラグメントが１つの抗体分子あたり得られる。（Ｆａｂ’）２は、その後の還元を行うことなく、完全な分子を酵素ペプシンで処理することによって得ることができる抗体のフラグメントである。Ｆ（ａｂ’）２は、２つのジスルフィド結合によって一緒にされた２つのＦａｂ’フラグメントのダイマーである。
【０１４８】
Ｆｖは、２つの鎖として発現された軽鎖の可変領域および重鎖の可変領域を含有する遺伝子操作されたフラグメントとして定義される。単鎖抗体（「ＳＣＡ」）は、遺伝子的に融合された単一鎖分子として好適なポリペプチドリンカーによって連結されて、軽鎖の可変領域および重鎖の可変領域を含有する遺伝子操作された分子である。
【０１４９】
そのような抗体フラグメントを製造する様々な方法がこの技術においては知られている（例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８８）を参照のこと：これは参照により本明細書中に組み込まれる）。
【０１５０】
本発明による抗体フラグメントは、フラグメントをコードするＤＮＡを大腸菌または哺乳動物細胞（例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞培養物または他のタンパク質発現システム）において発現させることによって調製することができる。
【０１５１】
抗体フラグメントは、従来の方法による完全な抗体のペプシン消化またはパパイン消化によって得ることができる。例えば、抗体フラグメントを、抗体をペプシンで酵素切断して、Ｆ（ａｂ’）２として示される５Ｓフラグメントを得ることによって製造することができる。このフラグメントは、３．５ＳのＦａｂ’一価フラグメントを製造するために、チオール還元剤、および場合により、ジスルフィド連結の切断から生じるスルフヒドリル基に対する保護基を使用してさらに切断することができる。あるいは、ペプシンを使用する酵素切断により、２つの一価Ｆａｂ’フラグメントおよびＦｃフラグメントが直接的に得られる。これらの方法は、例えば、Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇの米国特許第４０３６９４５号および同第４３３１６４７号、ならびにそれらに含まれる参考文献に記載されている（それらの特許は本明細書によりその全体が参照により組み込まれる）。また、Ｐｏｒｔｅｒ，Ｒ．Ｒ．、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．、７３：１１９〜１２６、１９５６も参照のこと。抗体を切断する他の方法、例えば、一価の軽鎖−重鎖フラグメントを形成させるための重鎖の分離、フラグメントのさらなる切断、または他の酵素的、化学的もしくは遺伝学的な技術などもまた、フラグメントが、無傷の抗体によって認識される抗原に結合する限り、使用することができる。
【０１５２】
ＦｖフラグメントはＶＨ鎖およびＶＬ鎖の会合を含む。この会合は、Ｉｎｂａｒ他、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、６９：２６５９〜６２、１９７２に記載されているように非共有結合性であり得る。あるいは、可変鎖を、分子間ジスルフィド結合によって連結することができ、または、グルタルアルデヒドなどの化学剤によって架橋することができる。好ましくは、Ｆｖフラグメントは、ペプチドリンカーによってつながれたＶＨ鎖およびＶＬ鎖を含む。これらの単鎖抗原結合タンパク質（ｓＦｖ）は、オリゴヌクレオチドによりつながれたＶＨドメインおよびＶＬドメインをコードするＤＮＡ配列を含む構造遺伝子を構築することによって調製される。この構造遺伝子は発現ベクターに導入され、続いて、発現ベクターは大腸菌などの宿主細胞に導入される。組換え宿主細胞により、２つのＶドメインを架橋するリンカーペプチドを有する単一ポリペプチド鎖が合成される。ｓＦｖを製造するための様々な方法が、例えば、ＷｈｉｔｌｏｗおよびＦｉｌｐｕｌａ、Ｍｅｔｈｏｄｓ、２：９７〜１０５、１９９１；Ｂｉｒｄ他、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４２：４２３〜４２６、１９８８；Ｐａｃｋ他、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１１：１２７１〜７７、１９９３；Ｌａｄｎｅｒ他、米国特許第４９４６７７８号（これは本明細書によりその全体が参照により組み込まれる）によって記載されている。
【０１５３】
抗体フラグメントの別の形態が、１つだけの相補性決定領域（ＣＤＲ）をコードするペプチドである。ＣＤＲペプチド（「最小認識ユニット」）は、目的とする抗体のＣＤＲをコードする遺伝子を構築することによって得ることができる。そのような遺伝子は、例えば、抗体産生細胞のＲＮＡから可変領域を合成するためにポリメラーゼ連鎖反応を使用することによって調製される。例えば、ＬａｒｒｉｃｋおよびＦｒｙ、Ｍｅｔｈｏｄｓ、２：１０６〜１０、１９９１を参照のこと。
【０１５４】
非ヒト（例えば、ネズミ）抗体のヒト化形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有する、免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖またはそのフラグメント（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、または抗体の他の抗原結合性の部分配列など）のキメラ分子である。ヒト化抗体には、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）に由来する残基が、所望する特異性、親和性および能力を有する、マウス、ラットまたはウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲに由来する残基によって置換されているヒト免疫グロブリンレシピエント抗体が含まれる。場合により、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基が、対応する非ヒト残基によって置換される。ヒト化抗体はまた、レシピエント抗体においても、あるいは取り込まれたＣＤＲ配列またはフレームワーク配列においても、そのいずれにも見出されない残基を含むことができる。一般に、ヒト化抗体は、実質的にはすべての可変ドメインまたは１つ以上の（典型的には２つ）可変ドメインを含み、この場合、ＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべてが非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ領域に対応し、ＦＲ領域のすべてまたは実質的にすべてがヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のＦＲ領域である。ヒト化抗体はまた、最適には、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の一部を、典型的には、ヒト免疫グロブリンの定常領域の一部を少なくとも含む［Ｊｏｎｅｓ他、Ｎａｔｕｒｅ、３２１：５２２〜５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ他、Ｎａｔｕｒｅ、３３２：３２３〜３２９（１９８８）；Ｐｒｅｓｔａ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．、２：５９３〜５９６（１９９２）］。
【０１５５】
非ヒト抗体をヒト化するための様々な方法がこの技術においては広く知られている。一般に、ヒト化抗体は、非ヒトである供給源から導入された１つ以上のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基は、多くの場合、輸入残基と呼ばれており、この輸入残基は、典型的には、輸入可変ドメインに由来する。ヒト化は、齧歯類のＣＤＲまたはＣＤＲ配列をヒト抗体の対応する配列の代わりに使用することによって、Ｗｉｎｔｅｒおよび共同研究者の方法に従って本質的には行うことができる［Ｊｏｎｅｓ他、Ｎａｔｕｒｅ、３２１：５２２〜５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ他、Ｎａｔｕｒｅ、３３２：３２３〜３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ他、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３９：１５３４〜１５３６（１９８８）］。従って、そのようなヒト化抗体は、実質的に完全でないヒト可変ドメインが非ヒト種由来の対応する配列によって置換されているキメラ抗体である（米国特許第４８１６５６７号）。実際、ヒト化抗体は典型的にはヒト抗体であり、この場合、一部のＣＤＲ残基およびおそらくは一部のＦＲ残基が、齧歯類抗体における類似部位に由来する残基によって置換される。
【０１５６】
ヒト抗体はまた、ファージディスプレーライブラリー［ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍおよびＷｉｎｔｅｒ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２７：３８１（１９９１）；Ｍａｒｋｓ他、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２２：５８１（１９９１）］を含む、この分野で知られている様々な技術を使用して製造することができる。Ｃｏｌｅ他およびＢｏｅｒｎｅｒ他の技術もまた、ヒトモノクローナル抗体を調製するために利用することができる［Ｃｏｌｅ他、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ、７７頁（１９８５）；Ｂｏｅｒｎｅｒ他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４７（１）：８６〜９５（１９９１）］。同様に、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を、内因性免疫グロブリン遺伝子が部分的または完全に不活性化されている遺伝子組換え動物（例えば、マウス）に導入することによって作製することができる。抗原投与したとき、ヒト抗体の産生が認められ、この場合、その産生は、遺伝子再配置、組み立ておよび抗体レパートリーを含むすべての点に関してヒトにおいて見られる産生と非常に似ている。この方法は、例えば、米国特許第５５４５８０７号、同第５５４５８０６号、同第５５６９８２５号、同第５６２５１２６号、同第５６３３４２５号、同第５６６１０１６号、および下記の科学的刊行物：Ｍａｒｋｓ他、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０、７７９〜７８３（１９９２）；Ｌｏｎｂｅｒｇ他、Ｎａｔｕｒｅ、３６８：８５６〜８５９（１９９４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ、３６８：８１２〜１３（１９９４）；Ｆｉｓｈｗｉｌｄ他、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１４：８４５〜５１（１９９６）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１４：８２６（１９９６）；ＬｏｎｂｅｒｇおよびＨｕｓｚａｒ、Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３：６５〜９３（１９９５）に記載されている。
【０１５７】
組換え抗体
抗ＣＤ３８抗体、抗ＲＡＲ抗体、抗ＲＸＲ抗体、抗ＶＤＲ抗体または抗ＰＩ３−キナーゼ抗体をコードするポリヌクレオチドを、原核生物発現システムまたは真核生物発現システムを使用して発現させることができる。
【０１５８】
そのような発現ベクターを作製するために、細胞外分泌シグナルペプチド配列を有していない抗ＣＤ３８抗体、抗ＲＡＲ抗体、抗ＲＸＲ抗体、抗ＶＤＲ抗体または抗ＰＩ３−キナーゼ抗体をコードするポリヌクレオチドセグメントが、例えば、哺乳動物細胞を形質転換するために、そして、形質転換された細胞における抗体の発現を行わせるために好適な市販の発現ベクターシステムに連結される。そのような市販のベクターシステムは、存在するプロモーター配列またはエンハンサー配列を置換し、もしくは重複化し、もしくは変異させ、かつ／または、例えば、さらなる選択マーカーをコードする配列、もしくはレポーターポリペプチドをコードする配列などの任意のさらなるポリヌクレオチド配列を導入するために、一般に使用されている組換え技術によって容易に改変され得ることが理解される。
【０１５９】
本発明とともに使用される好適な哺乳動物発現ベクターには、ｐｃＤＮＡ３、ｐｃＤＮＡ３．１（＋／−）、ｐＺｅｏＳＶ２（＋／−）、ｐＳｅｃＴａｇ２、ｐＤｉｓｐｌａｙ、ｐＥＦ／ｍｙｃ／ｃｙｔｏ、ｐＣＭＶ／ｍｙｃ／ｃｙｔｏ、ｐＣＲ３．１（これらはＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎから入手することができる）、ｐＣＩ（これはＰｒｏｍｅｇａから入手することができる）、ｐＢＫ−ＲＳＶおよびｐＢＫ−ＣＭＶ（これらはＳｔｒａｔｅｇｅｎｅから入手することができる）、ｐＴＲＥＳ（これはＣｌｏｎｔｅｃｈから入手することができる）、ならびにそれらの誘導体が含まれるが、これらに限定されない。
【０１６０】
ウイルス発現ベクターは、抗ＣＤ３８抗体、抗ＲＡＲ抗体、抗ＲＸＲ抗体、抗ＶＤＲ抗体または抗ＰＩ３−キナーゼ抗体のポリヌクレオチドを細胞に導入するために特に有用であり得る（例えば、米国特許第５３９９３４６号を参照のこと）。ウイルスベクターは、比較的大きい効率で宿主細胞に感染することができ、かつ特定の細胞タイプに感染することができるという利点を提供する。
【０１６１】
上記に記載された発現ベクターは、様々な送達方法を使用して宿主細胞に送達することができる。そのような方法には、顕微注入、エレクトロポレーション、リポソーム、表皮パッチ、イオン導入法、または受容体により媒介されるエンドサイトーシスが含まれるが、これらに限定されない。特定の方法の選択は、例えば、ポリヌクレオチドが導入されることになる細胞、ならびに、細胞が培養で単離されているか、または培養もしくはその場での組織もしくは器官に存在するかに依存する。
【０１６２】
アンチセンスポリヌクレオチド
上記に記載された受容体の発現を阻害するためのアンチセンス分子を、目的の幹細胞において発現させることができ、または、好ましくは、（例えば、培養培地に対する添加物として）目的の幹細胞に直接与えることができる。いずれの場合でも、受容体の発現を効率的に阻害するために使用され得るアンチセンス分子の設計は、配列特異性、および、細胞に直接与えられるオリゴヌクレオチドの場合には様々な送達方法を考慮に入れなければならない。
【０１６３】
先行技術では、オリゴヌクレオチドを広範囲の様々な細胞タイプに効率的に送達するために使用することができる多数の送達方法が教示されている（例えば、Ｌｕｆｔ（１９９８）、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ、７６（２）：７５〜６；Ｋｒｏｎｅｎｗｅｔｔ他（１９９８）、Ｂｌｏｏｄ、９１（３）：８５２〜６２；Ｒａｊｕｒ他（１９９７）、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ、８（６）：９３５〜４０；Ｌａｖｉｇｎｅ他（１９９７）、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ、２３７（３）：５６６〜７１；Ａｏｋｉ他（１９９７）、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ、２３１（３）：５４０〜５を参照のこと）。
【０１６４】
さらに、標的ｍＲＮＡおよびオリゴヌクレオチドの両方における構造的変化のエネルギー論を説明する熱力学的サイクルに基づいて、その標的ｍＲＮＡに対して予想される最も高い結合親和性を有するそのような配列を同定するためのアルゴリズムもまた利用することができる［例えば、Ｗａｌｔｏｎ他（１９９９）、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ、６５（１）：１〜９を参照のこと］。
【０１６５】
そのようなアルゴリズムは、細胞におけるアンチセンス法の実施において首尾良く使用されている。例えば、Ｗａｌｔｏｎ他によって開発されたアルゴリズムにより、科学者は、ウサギβ−グロビン（ＲＢＧ）およびマウス腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）の転写物に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドを首尾良く設計することができた。その同じ研究グループは、より近年には、細胞培養における３つのモデル標的ｍＲＮＡ（ヒト乳酸デヒドロゲナーゼＡおよびＢならびにラットｇｐ１３０）に対する合理的に選択されたオリゴヌクレオチドのアンチセンス活性が、動的なＰＣＲ技術によって評価されたとき、ホスホジエステルオリゴヌクレオチドおよびホスホロチオエートオリゴヌクレオチドを化学的に用いた２つの細胞タイプにおける３つの異なる標的に対する試験を含めて、ほとんどすべての場合において効果的であったことを報告している。
【０１６６】
さらに、特異的なオリゴヌクレオチドを設計し、インビトロシステムを使用してその効率を予測するための方法もまたいくつか発表されていた（Ｍａｔｖｅｅｖａ他（１９９８）、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１６、１３７４〜１３７５）。
【０１６７】
従って、現在の一致した意見は、アンチセンス技術の分野における近年の発達が、上記に記載されているように、非常に正確なアンチセンス設計アルゴリズムの作製および広範囲の様々なオリゴヌクレオチド送達システムをもたらし、当業者が、過度な試行錯誤的な実験に頼る必要もなく、知られている配列の発現をダウンレギュレーションするために好適なアンチセンス法を設計し、かつ実行することを可能にしているということである。
【０１６８】
効率的な阻害を確実にするためには、オリゴヌクレオチドアナログは好適な様式で考案される必要がある。
【０１６９】
例えば、一方の鎖におけるポリプリンの配列が認識され、「スィッチバックすること」により、反対側の鎖におけるホモプリン配列が認識され得る巧妙な「スィッチバック」化学的連結により、三重らせんの形成による二本鎖ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）認識に関連して生じる問題が、少なくなっている。また、良好ならせん形成が、人工的な塩基を使用し、それによりイオン強度およびｐＨに関して結合条件を改善することによって得られている。
【０１７０】
さらに、半減期ならびに膜透過を改善するために、ポリヌクレオチド骨格における非常に多数の変化が行われている。
【０１７１】
オリゴヌクレオチドは、塩基成分、糖成分またはリン酸成分のいずれかにおいて改変することができる。これらの改変には、例えば、メチルホスホネート、モノチオホスフェート、ジチオホスフェート、ホスホルアミデート、ホスフェートエステル、架橋ホスホロチオエート、架橋ホスホルアミデート、架橋メチレンホスホネート、シロキサン架橋を有するデホスホ型のヌクレオチド間アナログ、カルボネート架橋、カルボキシルメチルエステル架橋、カルボネート架橋、カルボキシメチルエステル架橋、アセトアミド架橋、カルバメート架橋、チオエーテル架橋、スルホキシ架橋、スルホノ架橋、様々な「可塑的」ＤＮＡ、アノマー架橋、およびボラン架橋誘導体が含まれる（Ｃｏｏｋ、１９９１、Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ、６：５８５）。
【０１７２】
国際特許出願公開ＷＯ８９／１２０６０には、様々な組立て構成単位が、オリゴヌクレオチドアナログ、ならびに、規定された配列でそのような組立て構成単位を連結することによって形成されるオリゴヌクレオチドアナログを合成するために開示されている。そのような組立て構成単位は、「強固」（すなわち、環構造を含有する）または「柔軟」（すなわち、環構造を有しない）のいずれかであり得る。両方の場合において、組立て構成単位はヒドロキシ基およびメルカプト基を含有しており、組立て構成単位は、それらの基を介して、オリゴヌクレオチドアナログを形成する場合に連結すると言われている。オリゴヌクレオチドアナログにおける連結成分は、スルフィド（−Ｓ−）、スルホキシド（−ＳＯ−）およびスルホン（−ＳＯ２−）からなる群から選択される。
【０１７３】
国際特許出願公開ＷＯ９２／２０７０２には、選択された化学的な核塩基またはアナログが並べられるペプチド骨格を含み、かつ、そのような核塩基またはアナログが、天然のＤＮＡまたはＲＮＡにおけるコード文字として役立つようにコード文字として役立つ任意の非環状オリゴヌクレオチドが記載されている。これらの新しい化合物は、ペプチド核酸（ＰＮＡ）として知られているが、細胞内においてその天然の対応体よりも安定であるだけでなく、天然の核酸が相互に結合するよりも５０倍〜１００倍強固に天然のＤＮＡおよびＲＮＡと結合する。ＰＮＡオリゴマーは、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ固相ペプチド合成によって、チミン、シトシン、アデニンおよびグアニンを含有する４つの保護されたモノマーから合成することができる。水溶性を増大させるために、そして凝集を防止するために、リシンアミド基がＣ末端領域に置かれる。
【０１７４】
典型的には、アンチセンスにより媒介される阻害はｍＲＮＡを標的としているが、遺伝子発現を転写のレベルで中断させるための第２の選択肢では、二本鎖ＤＮＡとハイブリダイゼーションすることができる合成オリゴヌクレオチドが使用される。三重らせんが形成される。そのようなオリゴヌクレオチドは、転写因子が遺伝子のプロモーターに結合することを妨げることができ、従って、転写を阻害することができる。あるいは、そのようなオリゴヌクレオチドは、二重鎖の巻き戻し、従って、三重らせん構造内の遺伝子の転写をさまたげることができる。
【０１７５】
ｓｉＲＮＡ
転写レベルで酵素をダウンレギュレーションするための別の機構が、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）、すなわち、標的ｍＲＮＡに対して相同的であり、その分解をもたらす小さい干渉性ｄｓＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）分子を利用する方法である［Ｃａｒｔｈｅｗ、２００１、Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ、１３（２）：２４４〜８］。ＲＮＡｉは、相同的な遺伝子の配列特異的なサイレンシングによって二本鎖ＲＮＡに応答する漸進的に保存された監視機構である（Ｆｉｒｅ他、１９９８、Ｎａｔｕｒｅ、３９１、８０６〜８１１；Ｚａｍｏｒｅ他、２０００、Ｃｅｌｌ、１０１、２５〜３３）。ＲＮＡｉは、小さい干渉性ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）と呼ばれる長さが２１ヌクレオチド〜２５ヌクレオチドの間である二本鎖フラグメントへのｄｓＲＮＡの切断を促進するｄｓＲＮＡ特異的エンドヌクレアーゼのダイサー（ｄｉｃｅｒ）によって開始される（Ｚａｍｏｒｅ他、２０００、Ｃｅｌｌ、１０１、２５〜３３；Ｅｌｂａｓｈｉｒ他、２００１、Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．、１５、１８８〜２００；Ｈａｍｍｏｎｄ他、２０００、Ｎａｔｕｒｅ、４０４、２９３〜２９６；Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ他、２００１、Ｎａｔｕｒｅ、４０９、３６３〜３６６）。ｓｉＲＮＡが、標的ｍＲＮＡを認識および切断するタンパク質複合体に取り込まれる（Ｎｙｋａｎｅｎ他、２００１、Ｃｅｌｌ、１０７、３０９〜３２１）。
【０１７６】
ＲＮＡｉは、遺伝子発現の配列特異的な阻害するためにその使用は増加している。任意の特異的な標的ＲＮＡと干渉することができることにより、ＲＮＡｉは基礎研究および治療的適用の両面で有益な手段となっている。ＲＮＡｉは、最初、線虫における遺伝子サイレンシングのために使用された（Ｆｉｒｅ他、１９９８、Ｎａｔｕｒｅ、３９１、８０６〜８１１）。
【０１７７】
最近の科学的刊行物では、標的ｍＲＮＡの発現を阻害におけるそのような短い二本鎖ＲＮＡ分子の効力の有効性が評価されており、従って、そのような分子の阻害能が明確に明らかにされている。例えば、ＲＮＡｉを利用して、Ｃ型肝炎（ＭｃＣａｆｆｒｅｙ他、２００２、Ｎａｔｕｒｅ、４１８、３８〜３９）、ＨＩＶ−１（Ｊａｃｑｕｅ他、２００２、Ｎａｔｕｒｅ、４１８、４３５〜４３８）、頸部ガン細胞（ＪｉａｎｇおよびＭｉｌｎｅｒ、２００２、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、２１、６０４１〜８）、および白血病細胞（Ｗｉｌｄａ他、２００２、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、２１、５７１６〜２４）の発現が阻害されている。
【０１７８】
哺乳動物細胞において発現を阻害するためにＲＮＡｉを設計するときには、様々なパラメーターを考慮に入れなければならない。ｄｓＲＮＡの哺乳動物細胞への導入はｓｉＲＮＡの効率的なダイサー媒介による生成をもたらさない（Ｃａｐｌｅｎ他、２０００、Ｇｅｎｅ、２５２、９５〜１０５；Ｕｉ−Ｔｅｉ他、２０００、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．、４７９、７９〜８２）ので、典型的には２１塩基対〜２５塩基対の短いｓｉＲＮＡ二重鎖が、標的の切断を開始させるために利用される。
【０１７９】
そのようなｓｉＲＮＡ分子は、２１ヌクレオチド〜２５ヌクレオチドのｓｉＲＮＡ二重鎖として化学合成することができる（Ｅｌｂａｓｈｉｒ他、２００１、Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．、１５、１８８〜２００；ＭｃＣａｆｆｒｅｙ他、２００２、Ｎａｔｕｒｅ、４１８、３８〜３９）。合成ｓｉＲＮＡオリゴヌクレオチド二重鎖は、リボヌクレオチドの３’突出部またはデオキシリボヌクレオチドの３’突出部のいずれかを伴って調製することができる（Ｈｏｈｊｏｈ、２００２、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．、５２１、１９５〜９）。合成ｓｉＲＮＡオリゴヌクレオチド二重鎖はまた、センス鎖ＤＮＡ／アンチセンス鎖ＲＮＡのハイブリッドとして、またはその逆のハイブリッドとして調製することができる。
【０１８０】
本発明によって使用されるｓｉＲＮＡはまた、インビトロでプラスミドから転写することができ、そして幹細胞に投与することができる。ループ領域を形成させるためにアニーリングさせられた２つの自己相補的なｓｉＲＮＡを含む転写物は、一本鎖リボヌクレアーゼおよび／または他のタンパク質によって機能的な二重鎖ｓｉＲＮＡ分子にさらにプロセシングされ得る（ＬｅｉｒｄａｌおよびＳｉｏｕｄ、２００２、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ、２９５、７４４〜８）。ｓｉＲＮＡはまた、エンドリボヌクレアーゼにより調製されたｓｉＲＮＡ（ｅｓｉＲＮＡ）への大腸菌ＲＮａｓｅＩＩＩによる切断によってｄｓＲＮＡから調製することができる。
【０１８１】
リボザイム
リボザイムは、目的とするタンパク質をコードするｍＲＮＡの切断による遺伝子発現の配列特異的な阻害のためにその使用が増加している。任意の特異的な標的ＲＮＡを切断するために様々なリボザイムを設計することができることにより、リボザイムは基礎研究および治療的適用の両方で有益な手段となっている。新規なリボザイムを、知られているリボザイムのランダム変化体またはランダム配列のＲＮＡのいずれかを開始点として使用して、知られている基質を切断するために設計することができる（Ｐａｎ，Ｔ．およびＵｈｌｅｎｂｅｃｋ，Ｏ．Ｃ．、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１９９６、３１：３８８７；Ｔｓａｎｇ，Ｊ．およびＪｏｙｃｅ，Ｇ．Ｆ．、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１９９４、３３：５９６６；Ｂｒｅａｋｅｒ，Ｒ．Ｒ．およびＪｏｙｃｅ，Ｇ．、Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、１９９４、１：２２３）。しかしながら、リボザイムは細胞内での加水分解を受けやすい場合があり、このことにより、その阻害適用が場合により制限されている。
【０１８２】
ＤＮＡザイム
最近、「ＤＮＡザイム」と呼ばれる新しい種類の触媒作用分子が作製された（Ｂｒｅａｋｅｒ，Ｒ．Ｒ．およびＪｏｙｃｅ，Ｇ．、Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、１９９５、２：６５５；Ｓａｎｔｏｒｏ、Ｓ．Ｗ．＆Ｊｏｙｃｅ，Ｇ．Ｆ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１９９７、９４３：４２６２）。ＤＮＡザイムは、標的ｍＲＮＡ分子を特異的に切断する一本鎖分子である。ＤＮＡザイムに対する一般的なモデル（“１０−２３”モデル）が提案されている。“１０−２３”ＤＮＡザイムは、１５個のデオキシリボヌクレオチドからなる触媒作用ドメインを有し、触媒作用ドメインには、それぞれが７個〜９個のデオキシリボヌクレオチドからなる２つの基質認識ドメインが隣接する。このタイプのＤＮＡザイムはその基質ＲＮＡをプリン：ピリミジンの接合部で効率的に切断することができる（Ｓａｎｔｏｒｏ，Ｓ．Ｗ．＆Ｊｏｙｃｅ，Ｇ．Ｆ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１９９；ＤＮＡザイムの総説については、Ｋｈａｃｈｉｇｉａｎ，ＬＭ、Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ、２００２、４：１１９〜２１を参照のこと）。
【０１８３】
一本鎖および二本鎖の標的切断部位を認識する合成され、操作されたＤＮＡザイムの構築および増幅の様々な例が米国特許第６３２６１７４号（Ｊｏｙｃｅ他）に開示されている。ヒトウロキナーゼ受容体に対する類似した設計のＤＮＡザイムにより、ウロキナーゼ受容体の発現が阻害され、かつ、結腸ガン細胞の転移がインビボで首尾良く阻害されたことが、最近、観測されていた（Ｉｔｏｈ他、２０００２、アブストラクト４０９、Ａｎｎ．Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｇｅｎ．Ｔｈｅｒ．、ｗｗｗ．ａｓｇｔ．ｏｒｇ）。別の適用では、ｂｃｒ−ａｂｌガン遺伝子に対して相補的なＤＮＡザイムは、白血病細胞におけるガン遺伝子の発現を阻害し、そして、ＣＭＬおよびＡＬＬの場合における自家骨髄移植での再発率を減少させることに成功していた。
【０１８４】
上記に記載された方法は、幹細胞を増殖性の非分化状態で長期間にわたって維持することができ、従って、多量の多能性細胞を集めることを可能にするが、そのような幹細胞拡大培養法の作用は可逆的であり、従って、その移植後、拡大培養された幹細胞集団の組織内での分化を可能にする。
【０１８５】
従って、エクスビボ拡大培養の後、本発明の幹細胞は組織内に投与される。そのような投与は、好ましくは、インビボで行われているが、特に幹細胞の発達を研究目的とするためにモニターされることになる場合にはまた外植片内への細胞のエクスビボ投与も、本明細書中において考えられる。後者の場合、利用される組織外植片は、好ましくは、外植片の組織学および生理学を保持するために好適な条件のもとで培養される。
【０１８６】
本明細書中で使用される用語「組織」は、特異的な組織構造および場合により機能的に組織化されている１つ以上の特異的な細胞タイプから構成される細胞集塊を示す。本明細書中上記で述べられたように、本発明の組織は単離され得る（外植片であり得る）か、または対象（哺乳動物）の一部を形成し得る。
【０１８７】
下記の実施例の節においてさらに記載されているように、エクスビボ拡大培養された新生児臍帯血幹細胞がＳＣＩＤヌードマウスの心筋梗塞（ＭＩ）部にインビボで投与された。幹細胞移植後３週間目には、投与された細胞は、骨髄細胞、心筋細胞、血管細胞および肺実質細胞にインビボで分化していた。
【０１８８】
拡大培養された幹細胞は、目的組織の供給源に関して同一遺伝子型、同種および／または異種であるドナーに由来し得る。
【０１８９】
下記の実施例の節においてさらに記載されているように、本発明者らは、エクスビボ拡大培養された幹細胞が、インビボ投与後、心臓、肺、骨髄および血管細胞を含む様々な細胞タイプに分化することを偶然に発見した。
【０１９０】
供給元の幹細胞および目的の器官に依存して、分化はシス分化またはトランス分化または両方の組合せのいずれかであり得る。
【０１９１】
本明細書中上記で述べられたように、「シス分化」は、幹細胞が得られた組織と同一である組織に幹細胞が分化することを示す。例えば、異なる系譜的に拘束された／成熟した血液細胞にＣＤ３４＋造血細胞が分化することは、シス分化を構成する。
【０１９２】
本明細書中上記で述べられたように、「トランス分化」は、幹細胞が得られた組織とは別個の組織に幹細胞が分化することを示す。例えば、異なる組織起源の細胞（例えば、心筋細胞）にＣＤ３４＋造血細胞が分化することは、トランス分化を構成する。
【０１９３】
本明細書中上記で述べられたように、拡大培養された幹細胞の投与は、インビトロまたはインビボのいずれかによって行われる。幹細胞のインビボ投与は、任意の好適な経路を使用して、組織内に細胞を直接投与することによって、または目的組織に栄養を供給する血管（好ましくは、酸素を有する血液を運ぶ血管）の中に細胞を間接的に投与することによって行われる。好ましい投与経路には、組織内注射、注入、輸液、潅流などが含まれるが、これらに限定されない。１つの好ましい投与方法のさらなる説明については実施例の節を参照のこと。
【０１９４】
本発明の拡大培養された幹細胞は様々な特異的な細胞タイプにインビボで分化することができ、そして、分化は供給源および目的組織の組合せに従って事前に決定され得るので、本発明の方法は細胞置換療法において利用することができる。
【０１９５】
本明細書中に提供されている結果は、本明細書中で上記に記載された方法を使用して拡大培養および投与した場合、損傷組織を再生させる幹細胞の潜在的可能性、および細胞置換療法において使用される幹細胞の潜在的可能性を明らかにしている。下記の実施例の節においてさらに記載されているように、ＭＩラットへの臍帯血幹細胞の移植は、細胞の分化、およびＭＩ瘢痕および傷ついた肺実質組織の位置への分化細胞のホーミングをもたらしていた。
【０１９６】
従って、本発明の方法論は、細胞置換または組織置換を必要とする障害の治療において使用することができる。
【０１９７】
そのような障害は、神経学的障害、筋肉障害、心臓血管障害、血液学的障害、皮膚障害、肝臓障害などであり得る。
【０１９８】
ミエリン障害は、今日でも難治性の疾患であり、ヒトの神経学的疾患の重要な一群を形成している。動物モデルにおける進歩、特に、稀突起神経膠細胞系譜の細胞を移植することにおける進歩は、有意に限局的なミエリン再形成、および機能回復の生理学的証拠をもたらしている（ミエリン疾患の修復：動物モデルにおける方法および進歩、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｔｏｄａｙ、１９９７、５５４頁〜５６１頁）。将来の治療法は移植および内因性修復の促進の両方を伴うことができ、そして、これらの２つの方法はドナー組織のエクスビボ操作と組み合わせることができる。
【０１９９】
軟骨および骨における欠損もまた、本発明の教示を使用して治療することができる。そのような障害を治療するために幹細胞を利用する方法が米国特許第４６２１２０号に提供されている。
【０２００】
動物またはヒトにおける創傷部または火傷部の皮膚再生もまた、本発明の教示を使用して治療することができる。そのような障害を治療するために幹細胞を利用する方法が米国特許第５６５４１８６号および米国特許第５７１６４１１号に提供されている。
【０２０１】
本明細書中で使用される用語「治療する」は、疾患、障害もしくは状態に罹患している個体、または、疾患、障害もしくは状態と診断された個体において、疾患、障害もしくは状態の発達を阻害するか、もしくは停止させること、および／または、疾患、障害もしくは状態の軽減、寛解もしくは退行を生じさせることを示す。当技術におけるこれらのスキルでは、疾患、障害または状態の発達を評価するために使用することができる様々な方法論およびアッセイを認識しており、そして同様に、疾患、障害または状態の軽減、寛解または退行を評価するために使用することができる様々な方法論およびアッセイを認識したものである。
【０２０２】
上記に記載された適用に加えて、本発明の教示はまた、いくつかの治療的適用において利用することができる。
【０２０３】
造血細胞の移植は、様々な遺伝的疾患または悪性疾患に対する優れた治療になってきている。初期の移植手法では、完全な骨髄（ＢＭ）集団が利用されていたが、最近では、幹細胞（ＣＤ３４＋の細胞）について豊富化されたより規定された集団が使用されている（Ｖａｎ  Ｅｐｐｓ  ＤＥ他、ヒト骨髄細胞、末梢血および臍帯血からのＣＤ３４＋細胞の回収、特徴づけおよび培養、Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｌｌｓ、２０：４１１、１９９４）。骨髄に加えて、そのような細胞はまた、末梢血（ＰＢ）および新生児臍帯血（ＣＢ）などの他の供給源に由来し得る（Ｅｍｅｒｓｏｎ  ＳＧ、造血系の前駆細胞、始原細胞および幹細胞のエクスビボ拡大培養：次世代の細胞治療薬、Ｂｌｏｏｄ、８７：３０８２、１９９６）。ＢＭと比較したとき、ＰＢ細胞を用いた移植は、汎血球減少症の期間を短縮し、感染および出血の危険性を低下させている（Ｂｒｕｇｇｅｒ  Ｗ他、インビボで作製された自家始原細胞による高用量化学療法の後における造血の再構成、Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ、３３３：２８３、１９９５；Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＳＦ他、乳ガンに対する自家幹細胞移植における末梢血ＣＤ３４＋細胞の選択および拡大培養、Ｂｌｏｏｄ、８７：１６８７、１９９６；Ｚｉｍｍｅｒｍａｎ  ＲＭ他、臨床的適用のためのＣＤ３４＋末梢血始原細胞の大規模選択および好中球前駆細胞の拡大培養、Ｊ．Ｈｅｍａｔｏｔｈｅｒａｐｙ、５：２４７、１９９６）。
【０２０４】
ＰＢを移植のために使用することのさらなる利点はその入手しやすさである。だが、今日まで、回収のために利用できる循環している多能性幹細胞／始原細胞の数が少ないことからＰＢ移植における制限要因が生じている。
【０２０５】
十分なＰＢ由来幹細胞を移植のために得るために、これらの細胞は、化学療法およびサイトカインを用いた治療により骨髄から循環内に動態化した後の繰り返されるロイコフォレシス（ｌｅｕｃｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）によって「回収」される。そのような治療は、正常なドナーに対しては明らかに適していない。
【０２０６】
従って、エクスビボ拡大培養された幹細胞を移植のために使用することにより、利点がいくつか提供される：（ｉ）そのような使用は、成体の造血系を再構成するために要求される血液量を減少させ、動態化およびロイコフォレシスに対する必要性を不要にし得る；（ｉｉ）そのような使用は、潜在的な将来の使用のために少量のＰＢ幹細胞またはＣＢ幹細胞の貯蔵を可能にする；そして（ｉｉｉ）そのような使用は、悪性腫瘍を有するレシピエントの自家移植に伴うことが多い混入の制約をもたらさない。そのような場合、自家注入において混入する腫瘍細胞が、多くの場合には疾患の再発の一因となっており、ＣＤ３４＋細胞を選択し、拡大培養することは、最終的な移植片における腫瘍細胞の負荷量を減少させる。
【０２０７】
さらに、拡大培養された幹細胞の培養物では、Ｔリンパ球が激減しており、従って、Ｔ細胞が移植片対宿主病の一因である同種移植片には好都合である（Ｋｏｌｌｅｒ  ＭＲ、Ｅｍｅｒｓｏｎ  ＳＧ、Ｐａｌａｓｓｏｎ  ＢＯ、連続潅流培養における骨髄単核細胞からのヒト幹細胞および始原細胞の大規模拡大培養、Ｂｌｏｏｄ、８２：３７８、１９９３；Ｌｅｂｋｏｗｓｋｉ  ＪＳ他、ヒトＣＤ３４＋細胞の迅速な単離および無血清拡大培養、Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｌｌｓ、２０：４０４、１９９４）。
【０２０８】
臨床研究では、少数のＰＢ  ＣＤ３４＋細胞に由来するエクスビボ拡大培養された細胞の移植は、高用量の化学療法で治療されているレシピエントにおいて造血を回復させることが可能なことが示されている。だが、その結果は、未だ、これらの培養された細胞の長期のインビボでの造血能について確固たる結論を可能にしていない。
【０２０９】
移植を成功させるためには、サイトカイン期の持続期間を短縮することが、長期間の生着と同様に、非常に重要である。中間始原細胞および後期始原細胞を移植片に含めることにより、ドナー由来の成熟細胞の産生を促進させることができ、それにより、血小板減少期を短縮することができる。
【０２１０】
従って、短期間の回収および造血の長期間にわたり効果的な回復をもたらすために、エクスビボ拡大培養された細胞が、幹細胞に加えて、より分化した始原細胞を含むことが、そのような適用では重要である。中間始原細胞および後期始原細胞（特に、好中球系譜および巨核球系譜に拘束された始原細胞）の拡大培養は、幹細胞の拡大培養に付随している場合、この目的を満足させるはずである（Ｓａｎｄｓｔｒｏｍ  ＣＥ他、末梢血単核細胞のエクスビボ拡大培養に対するＣＤ３４＋細胞の選択および潅流の効果、Ｂｌｏｏｄ、８６：９５８、１９９５）。
【０２１１】
そのような培養物は、骨髄が完全に除去されたレシピエントにおける造血を回復させる上で、ならびに、従来の放射線療法または化学療法の後でのレシピエントの骨髄回復を短縮させるための支持手段を提供する点で有用であり得る。
【０２１２】
上記に加えて、本発明の教示はまた、肝臓再生、筋肉再生、および骨粗鬆症において骨成長を刺激するために適用することができる。
【０２１３】
本発明の教示はまた、高まった免疫応答、または不完全な機能の置換を必要とする場合にも適用することができ、例えば、様々な悪性腫瘍、免疫不全症、ウイルス疾患および遺伝的疾患の免疫療法を含む養子免疫療法に適用することができる［Ｆｒｅｅｄｍａｎ  ＡＲ他、骨髄ＣＤ３４＋細胞からのＴリンパ球のインビトロでの生成、（１９９６）、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、２：４６；Ｈｅｓｌｏｐ  ＨＥ他、遺伝子操作されたウイルス特異的Ｔリンパ球の養子移入による、エプスタイン・バールウイルス感染に対する免疫性の長期間の回復、（１９９６）、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、２：５５１；Ｐｒｏｔｔｉ  ＭＰ他、粒子状の天然にプロセシングされたペプチドはヒトメラノーマに対する細胞傷害性応答をインビトロで開始させる、（１９９６）、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、５６：１２１０］。
【０２１４】
本発明の教示はまた、遺伝子治療においても使用することができる。安定的に組み込まれた導入遺伝子を発現する遺伝子操作およびエクスビボ拡大培養された幹細胞は、様々な遺伝子治療適用において利用することができる。そのような拡大培養中の幹細胞集団は、ウイルスに基づく形質転換を非常に受けやすく、従って、治療タンパク質の発現があらゆる適用において優れた基盤を提供し得る。
【０２１５】
本発明のさらなる目的、利点、および新規の特徴は、制限を意図しない以下の実施例の実験によって当業者に自明である。さらに、上記の本発明および以下の特許請求の範囲に記載の各々の種々の実施形態および態様は、以下の実施例の実験により支持される。
【実施例】
【０２１６】
ここでは、上記説明と共に以下の実施例を参照して、非限定的様式で本発明を例示する。
【０２１７】
一般に、本明細書中で使用した用語および本発明で使用した実験手順には、分子、生化学、微生物学、および組換えＤＮＡの技術が含まれる。このような技術は、文献で完全に説明されている。例えば、“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ”、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９；“Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ”、第Ｉ〜ＩＩＩ巻、Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｒ．Ｍ．編１９９４；Ａｕｓｕｂｅｌら、“Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ”、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、Ｍａｒｙｌａｎｄ、１９８９；Ｐｅｒｂａｌ，“Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ”、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８８；Ｗａｔｓｏｎら、“Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＤＮＡ”、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｂｏｏｋｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｂｉｒｒｅｎら編、“Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  Ｓｅｒｉｅｓ”、第１〜４巻、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９８；米国特許第４６６６８２８号、同第４６８３２０２号、同第４８０１５３１号、同第５１９２６５９号、および同第５２７２０５７号に記載の方法；“Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ”、第Ｉ〜ＩＩＩ巻、Ｃｅｌｌｉｓ，Ｊ．Ｅ．編、１９９４；“Ｃｕｌｔｕｒｅ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌｓ−Ａ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｂａｓｉｃ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ”、Ｆｒｅｓｈｎｅｙ、Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ、Ｎ．  Ｙ．、１９９４、第３版；“Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”、第Ｉ〜ＩＩＩ巻、Ｃｏｌｉｇａｎ  Ｊ．Ｅ．編、１９９４；Ｓｔｉｔｅｓら編、“Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”、第８版、Ａｐｐｌｅｔｏｎ＆Ｌａｎｇｅ、Ｎｏｒｗａｌｋ，ＣＴ、１９９４；Ｍｉｓｈｅｌｌ  ａｎｄ  Ｓｈｉｉｇｉ編、“Ｓｅｌｅｃｔｅｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８０を参照のこと；利用可能な免疫アッセイは、特許および化学論文に広く記載されており、例えば、米国特許第３７９１９３２号、同第３８３９１５３号、同第３８５０７５２号、同第３８５０５７８号、同第３８５３９８７号、同第３８６７５１７号、同第３８７９２６２号、同第３９０１６５４号、同第３９３５０７４号、同第３９８４５３３号、同第３９９６３４５号、同第４０３４０７４号、同第４０９８８７６号、同第４８７９２１９号、同第５０１１７７１号、および同第５２８１５２１号；“Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”、Ｇａｉｔ，Ｍ．Ｊ．編、１９８４；“Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ”、Ｈａｍｅｓ，Ｂ．Ｄ．ａｎｄ  Ｈｉｇｇｉｎｓ  Ｓ．Ｊ．編、１９８５；“Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ”、Ｈａｍｅｓ，Ｂ．Ｄ．ａｎｄ  Ｈｉｇｇｉｎｓ  Ｓ．Ｊ．編、１９８４；“Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ”、Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ｒ．Ｉ．編、１９８６；“Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  Ｅｎｚｙｍｅｓ”、ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ、１９８６；“Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ”、Ｐｅｒｂａｌ，Ｂ．、１９８４および“Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ”、第１〜３１７巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、“ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：  Ａ  Ｇｕｉｄｅ  Ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ、１９９０；Ｍａｒｓｈａｋら、“Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ−Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｃｏｕｒｓｅ  Ｍａｎｕａｌ”、ＣＳＨＬ  Ｐｒｅｓｓ、１９９６（その全てが本明細書中に完全に記載されているかのように参照として援用される）を参照のこと。他の一般的引例を、本明細書中に記載する。引例中の手順は当該分野で周知であると考えられ、読者の都合のために記載する。引例中に含まれる全ての情報は、本明細書中で参考として援用される。
【０２１８】
（実施例１）
ＣＤ３４＋細胞およびＡＣ１３３＋細胞のラット心筋へのトランス分化
レシピエント組織においてトランス分化するエクスビボ拡大培養されたＣＤ３４＋幹細胞および／またはＡＣ１３３＋幹細胞の能力を試験するために、臍帯血由来の幹細胞を銅キレーターおよびサイトカインの存在下で拡大培養して、ヌードマウスに移植した。
【０２１９】
材料および実験方法
サンプル収集および処理−  サンプルをヒト臍帯血から得て、１２時間以内に処理した。血液細胞を３％ゼラチン（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）と混合し、ほとんどの赤血球を除くために３０分間沈降させた。白血球濃縮画分を集め、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅカラム（密度、１．０７７グラム／ｍｌ：Ｓｉｇｍａ）に重層し、室温において４００ｘｇで３０分間遠心分離した。その後、境界層における単核細胞を集めて、リン酸塩緩衝化生理的食塩水（ＰＢＳ；Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、Ｂｅｔｈ  Ｈａ’Ｅｍｅｋ、イスラエル）で３回洗浄し、０．５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ、フラクションＶ；Ｓｉｇｍａ）を含有するＰＢＳに再懸濁した。
【０２２０】
ＣＤ３４＋細胞の豊富化−  ＣＤ３４＋細胞を、ｍｉｎｉＭＡＣＳまたはＣｌｉｎｉｍａｘ（登録商標）のＣＤ３４＋始原細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ−Ｂｉｏｔｅｃ、Ａｕｂｕｒｎ、ＣＡ）を製造者の推奨法に従って使用する２回の免疫磁気分離を使用して単核細胞画分から精製した。得られたＣＤ３４＋細胞の純度は、フローサイトメトリー評価（ＦＡＣＳｔａｒｐｌｕｓフローサイトメーター、Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｏｍｅｔｒｙ  ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ、ＣＡ）に基づいて９５％〜９８％の間の範囲であった。
【０２２１】
ＡＣ１３３＋細胞の豊富化−  ＡＣ１３３＋細胞を、ＭｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）ダイレクトＣＤ１３３細胞単離キット、ヒトまたはＣｌｉｎｉｍａｘ（登録商標）１３３ミクロビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ−Ｂｉｏｔｅｃ、Ａｕｂｕｒｎ、ＣＡ）を製造者の推奨法に従って２回の免疫磁気分離を使用して単核細胞画分から精製した。得られたＡＣ１３３＋細胞の純度は、フローサイトメトリー評価（ＦＡＣＳｔａｒｐｌｕｓフローサイトメーター）に基づく場合９５％〜９８％の間の範囲であった。
【０２２２】
ＣＤ３４＋細胞のエクスビボ拡大培養−  豊富化されたＣＤ３４＋細胞画分は、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ、Ｂｉｏｌｏｇｉｂａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ）が補充されたα最小必須培地を用いて約１０４細胞／ｍｌ培地でＴｅｒｕｆｌｅｘＴ−１５０輸血バッグ（Ｔｅｒｕｍｏ  Ｃｏｒｐ．、日本）において培養された。培地は、銅キレーター（ＴＥＰＡ．５  ＨＣｌ、Ｎｏｖａｓｅｐ、フランス）の存在下または非存在下で、下記のヒト組換えサイトカイン（すべてがＰｅｐｒｏ  Ｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．（Ｒｏｃｋｙ  Ｈｉｌｌ、ＮＪ）から得られた）がさらに補充された：トロンボポエチン（ＴＰＯ）、５０ｎｇ／ｍｌ；インターロイキン−６（ＩＬ−６）、５０ｎｇ／ｍｌ；ＦＬＴ−３リガンド、５０ｎｇ／ｍｌ；ＳＣＦ、５０ｎｇ／ｍｌ。培地は毎週交換された。細胞培養物は、過湿空気中、５％ＣＯ２の大気下、３７℃でインキュベーションされた。
【０２２３】
ＡＣ１３３＋細胞のエクスビボ拡大培養−  豊富化されたＡＣ１３３＋細胞画分は、１０％ウシ胎児血清（Ｂｉｏｌｏｇｉｂａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ）が補充されたα最少必須培地を用いて約１０４細胞／ｍｌ培地でＴｅｒｕｆｌｅｘＴ−１５０輸血バッグ（Ｔｅｒｕｍｏ  Ｃｏｒｐ．、日本）において培養された。培地は、銅キレーター（ＴＥＰＡ．５  ＨＣｌ、Ｎｏｖａｓｅｐ、フランス）の存在下または非存在下で、下記のヒト組換えサイトカイン（すべてが、Ｒ＆Ｄ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）からのサイトカインから、またはＰｅｐｒｏ  Ｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．（Ｒｏｃｋｙ  Ｈｉｌｌ、ＮＪ）から得られた）がさらに補充された：トロンボポエチン（ＴＰＯ）、５０ｎｇ／ｍｌ；インターロイキン−６（ＩＬ−６）、５０ｎｇ／ｍｌ；ＦＬＴ−３リガンド、ＳＣＦ、５０ｎｇ／ｍｌ。培地は毎週交換された。細胞培養物は、過湿空気中、５％ＣＯ２の大気下、３７℃でインキュベーションされた。
【０２２４】
３週間の培養後、ＣＤ３４＋細胞および／またはＡＣ１３３＋細胞は、それぞれの磁石ビーズを使用して再び選択され、さらに移植のために使用された。
【０２２５】
心筋梗塞（ＭＩ）ラットモデル−  Ｒｏｗｅｔｔ（ｒｎｕ／ｒｎｕ）無胸腺ヌードラット（Ｈａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｌｔｄ、イスラエル）の左前下行冠状動脈を結紮または無傷（擬似治療）のままかのいずれかにしておいた。
【０２２６】
心筋梗塞ラットへのＣＤ３４＋細胞の移入−  ＣＤ３４＋細胞を、下記の２つの方法のいずれか一方を使用して、心筋梗塞後７日目にラット心筋に移した：（１）ラットに麻酔して、胸部を無菌条件下で開いた。ＣＤ３４＋細胞（９ｘ１０６個）または培養培地だけを、表面の瘢痕および壁運動の無運動によって視覚化された梗塞領域内に、２７ゲージのニードルを使用して注射した。注射後、手術による切開部を縫合して閉じた。（２）ラットに麻酔して、ラットを仰向けに置いた。ＣＤ３４＋細胞（９ｘ１０６個）を頭皮静脈セット（Ｖａｓｕｆｌｏ（登録商標））に吸入し、左心室（ＬＶ）腔注入を、１２．５ＭＨｚフェイズドアレイ変換器を備えた超音波心臓造影法システム（Ｓｏｎｏｓ５５００、Ｈｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ、米国）の誘導のもとで行った。変換器は胸部の左側上方に置き、細胞が、頭皮静脈セットの２３ゲージのニードルを使用して３０秒以内に注入され、第４胸骨肋間腔を介してＬＶ内に慎重に導入された。
【０２２７】
ラット静脈へのＡＣ１３３＋細胞移入−  ＡＣ１３３＋細胞を、Ｈａｙａｍｉｚｕ  Ｋ他（１９９８）（単球に由来する樹状細胞前駆細胞は全身リンパ組織放射線照射後の心臓同種移植片に対する忍容性を高める、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ、６６：１２８５〜９１）およびＬｕ  Ｄ他（２００２）（ヒト臍帯血の静脈内投与は外傷性脳傷害後のラットにおける神経学的欠損を減少させる、Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．、１１：２７５〜８１）に従って静脈内（ＩＶ）に移入した。
【０２２８】
経胸郭超音波心臓造影法−  この方法は１２．５ＭＨｚフェイズドアレイ変換器を備えた市販の超音波心臓造影法システム（Ｈｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ、米国）を使用して、熟練技術者によって盲験実験として行われた。基準の心エコー図をＭＩ後５日目に測定し、移植後の１週間目〜３週間目に測定された心エコー図と比較した。すべての測定は、３回の連続した心臓周期について平均化された。
【０２２９】
蛍光インシトゥハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）−  臍帯血サイトスピンスライド標本または凍結心臓切片が、本質的には他のところ［Ｔａｎｅｊａ  ＫＬ他（２００１）、ヒト細胞における特定の染色体を列挙するためのペプチド核酸プローブを用いた多色蛍光インシトゥハイブリダイゼーション、Ｇｅｎｅｓ  Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ  Ｃａｎｃｅｒ、３０：５７〜６３；Ｈｅｎｇ  ＨＨ、Ｔｓｕｉ  ＬＣ（１９９４）、ＤＡＰＩバンド化染色体に対するＦＩＳＨ検出、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ、３３：３５〜４９；Ｂａｎｅｒｊｅｅ  ＳＫ他（１９９８）、クィックＦＩＳＨ：分子細胞遺伝学分析のための迅速な蛍光インシトゥハイブリダイゼーション技術、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、２４：８２６〜３０；Ｆｉｓｃｈｅｒ  Ｋ他（１９９７）、蛍光インシトゥハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）：方法および適用、Ｍｅｄ．Ｋｌｉｎ．、９２：２７９〜８３］に記載されるように、ヒトのＸ染色体およびＹ染色体に特異的なプローブを使用する２色蛍光インシトゥハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）に供された。スライド標本はさらに、４’，６−ジアミノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ、Ｓｉｇｍａ、米国）を製造者の説明書に従って使用する核染色に供された。
【０２３０】
トランス分化したラット心臓の免疫組織化学（ＩＨＣ）分析および形態学的分析−  ラット心臓を移植後の１週間目〜３週間目に集め、凍結切片を染色のために調製した。形態学的分析のために、スライド標本は、製造者の説明書に従ってヘマトキシリン−エオシン（Ｓｉｇｍａ、米国）で染色された。ＩＨＣは、抗フォンウィルブラント因子抗体（Ｓｅｒｏｔｅｃ、英国）または抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体（Ｓｅｒｏｔｅｃ、英国）を製造者の説明書に従って使用して行われた。
【０２３１】
実験結果
損傷ラット心臓へのエクスビボ生成幹細胞の移植−  ＣＤ３４＋またはＡＣ１３３＋は、エクスビボ拡大培養された幹細胞の培養物から再び選択され、ヌードマウスに移植された。１つのラット群には、ＣＤ３４＋細胞が、心筋梗塞を発生させた瘢痕部内（ｎ＝２）または正常な心筋組織内（ｎ＝２）へ直接注射によって移植された。別のラット群には、ＣＤ３４＋細胞が、ＭＩ治療ラット（ｎ＝１）または正常な擬似治療ラット（ｎ＝１）へのＬＶ腔輸液によって移植された。ＡＣ１３３＋細胞は静脈内（ＩＶ）注入（ｎ＝２）によってラットに移植された。１匹のＭＩ治療ラットは、対照として使用され、これには生理的食塩水が注射された。
【０２３２】
治療ラットの心臓に定着したドナー幹細胞−  幹細胞移植後３週間目に、ラット心臓切片が調製された。６匹のＣＤ３４＋移植ラットのうちの５匹において、心臓には、ドナー幹細胞が定着していた。ＬＶ治療ラットでは、ドナー細胞が瘢痕部位に集まり、瘢痕の近くに存在する場所を占有する細胞のクラスターを生じさせていた（図１ａ、図１ｂ、矢印）。
【０２３３】
ヒトのＸ染色体およびＹ染色体に特異的なプローブを使用するＦＩＳＨ分析では、エクスビボ拡大培養されたＣＤ３４＋臍帯血細胞の男性起源および女性起源が明らかにされた（図２ａ）。幹細胞移植後３週間目に、ラット心臓切片のＦＩＳＨ分析により、ヒト起源の細胞がＣＤ３４＋移植ラット心臓（図２ｂ、図２ｃ、矢印）またはＡＣ１３３＋移植ラット心臓（図３ａ、図３ｂ、蛍光性細胞）に存在することがさらに確認された。
【０２３４】
血管細胞への幹細胞のトランス分化−  レシピエントラットにおいてトランス分化する移植された幹細胞の能力を評価するために、ラット心臓切片は、内皮細胞マーカーのフォンウィルブラント因子を使用する蛍光免疫組織化学分析に供され、その後、Ｘ染色体およびＹ染色に特異的なヒトプローブを使用するＦＩＳＨ分析に供された。図４（矢印）に示されるように、フォンウィルブラント因子がヒト由来の移植されたラット心臓細胞で発現していた。このことは、生着した幹細胞が血管細胞にトランス分化していることを明らかにしている。
【０２３５】
ラット骨髄におけるＡＣ１３３＋細胞のホーミング−  ヒトＨＬＡ−ＤＲタンパク質は内皮細胞のマーカーとしての役割を果たし、図５にさらに示されるように、ヒト臍帯血細胞で発現している（暗褐色の染色された細胞）。レシピエントラットの骨髄内へのホーミングを行う移植された幹細胞の能力を評価するために、ＡＣ１３３＋を静脈注射したラットの骨髄細胞がＨＬＡ−ＤＲ免疫組織化学分析に供された。図６における強い暗褐色の染色によって示されるように、ヒトの移植された幹細胞はレシピエントの骨髄細胞にホーミングしている。
【０２３６】
虚血心臓および損傷した肺の実質組織に現れたトランス分化した細胞−  移植された幹細胞のホーミング能をさらに追跡するために、ラットの心臓切片および肺切片がＨＬＡ−ＤＲ免疫組織化学分析に供された。ＨＬＡ−ＤＲ陽性細胞が、ＡＣ１３３＋移植ラットの心臓血管の周り（図７ａ、褐色の染色）および心筋細胞（図７ｂ、褐色の染色）の周りに観測された。さらに、心筋梗塞を生じさせるプロセスにおいて、肺の損傷は１匹のラットにおいて持続した。このラットでは、陽性のＨＬＡ−ＤＲ染色が肺組織において観測された（図８ａ、図８ｂ、褐色の染色）。従って、ＡＣ１３３＋幹細胞は、虚血心臓および損傷肺実質組織にホーミングすることができる。
【０２３７】
まとめると、これらの知見は、本発明の教示に従って銅キレーターの存在下でエクスビボ拡大培養された臍帯血幹細胞はインビボでトランス分化することができ、そして、損傷に対して応答して様々な組織にホーミングすることができることを明らかにしている。従って、銅キレーターにより媒介されたエクスビボ拡大培養された幹細胞は、広範囲の組織ホーミング能およびトランス分化能を有する細胞を必要とする細胞置換療法および組織再生療法のために非常に好適である。
【０２３８】
わかりやすいように個別の態様として説明した本発明のいくつかの特徴を１つの態様に組み合わせて提供できることは理解されるだろう。逆に、簡潔に説明するために１つの態様として説明した本発明の様々な特徴を個別に提供するか、一部を適当に組み合わせて提供することもできる。
【０２３９】
本発明をその特定態様に関して説明したが、多くの代替、変更および変形態様が当業者にとって明白であることは明らかである。したがって、特許請求の範囲の精神およびその広い範囲に包含されるそれらの代替、変更および変形態様は、全て本発明に包含されるものとする。本明細書で言及した刊行物、特許および特許出願は全て、具体的かつ個別的な表示の有無にかかわらず、参照により完全な形で本明細書に組み込まれるものとする。また、本願で行う参考文献の引用および記載は、当該参考文献を本発明に対する先行技術として利用できるとの自認ではないと解釈されるものとする。
【図面の簡単な説明】
【０２４０】
【図１ａ】左心室（ＬＶ）腔注入によりＣＤ３４＋細胞が移植されたラットのヘマトキシリン−エオシン染色した凍結ラット心臓切片の顕微鏡写真である。
【図１ｂ】左心室（ＬＶ）腔注入によりＣＤ３４＋細胞が移植されたラットのヘマトキシリン−エオシン染色した凍結ラット心臓切片の顕微鏡写真である。
【図２ａ】ヒトのＸ染色体およびＹ染色体に特異的なプローブを使用したＦＩＳＨ分析の顕微鏡写真である。
【図２ｂ】ヒトのＸ染色体およびＹ染色体に特異的なプローブを使用したＦＩＳＨ分析の顕微鏡写真である。
【図２ｃ】ヒトのＸ染色体およびＹ染色体に特異的なプローブを使用したＦＩＳＨ分析の顕微鏡写真である。
【図３ａ】ＡＣ１３３＋移植ラットにおけるヒト由来のラット心臓細胞を例示する。
【図３ｂ】ＡＣ１３３＋移植ラットにおけるヒト由来のラット心臓細胞を例示する。
【図４】ヒトのＸ染色体およびＹ染色体に特異的なプローブを使用したＦＩＳＨ分析が続く、抗フォンウィルブラント因子抗体を使用した免疫蛍光分析を例示する。
【図５】抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体を使用した、ＣＤ３４＋のエクスビボ拡大培養された臍帯血細胞のサイトスピンサンプルの免疫組織化学分析における顕微鏡写真である。
【図６】抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体を使用したラット骨髄細胞を免疫組織化学染色した顕微鏡写真である。
【図７ａ】抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体を使用した凍結ラット心臓切片の免疫組織化学染色の顕微鏡写真である。
【図７ｂ】抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体を使用した凍結ラット心臓切片の免疫組織化学染色の顕微鏡写真である。
【図８ａ】凍結肺実質組織切片を免疫組織化学染色した顕微鏡写真である。
【図８ｂ】凍結肺実質組織切片を免疫組織化学染色した顕微鏡写真である。
【図１ａ】
2005520511.tif 000002
【図１ｂ】
2005520511.tif 000003
【図２ａ】
2005520511.tif 000004
【図２ｂ】
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【図２ｃ】
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【図３ａ】
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【図３ｂ】
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【図４】
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【図５】
2005520511.tif 000010
【図６】
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【図７ａ】
2005520511.tif 000012
【図７ｂ】
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【図８ａ】
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【図８ｂ】
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【国際調査報告】
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