(57)【要約】  代謝性グルクロニド化に対するそれぞれの試験されたスタチンの感受性を判定するためにスタチンをその開環酸形態でスクリーニングするための方法が提供される。その開環酸形態で代謝性グルクロニド化に対して感受性であるスタチンと同時に投与された非スタチン薬学的薬物がスタチンのグルクロニド化を阻害し、それにより、有害な薬物相互作用の危険性を増大させるかどうかを判定するための方法もまた提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
スタチンがＵＧＴイソ酵素によるヒト代謝性グルクロニド化に対して感受性であり、
（ａ）スタチンをＵＧＴ特異的なグルクロニド化アッセイにおいて試験して、１つまたは複数のＵＧＴイソ酵素のどれがスタチンのグルクロニド化に関わっているかを特定すること、および
（ｂ）（ｉ）非スタチンをグルクロニド化アッセイにおいて試験することによって判定して、非スタチンが代謝的にグルクロニド化されない場合、または
（ｉｉ）非スタチンをＵＧＴ特異的なグルクロニド化アッセイにおいて試験することによって判定して、非スタチンが工程（ａ）で特定された１つまたは複数のＵＧＴイソ酵素のいずれかによって代謝的にグルクロニド化されない場合、
この非スタチンをスタチンとの同時投与のために適するとして選択すること
を含む、
同時投与薬物処置を必要としている患者に対する同時投与のためにスタチンおよび非スタチン薬物を適切に選択するための方法。
【請求項２】
スタチンが、それらのラクトン化形態およびジヒドロキシ開環酸形態におけるならびに医薬適合性の塩の、ロバスタチン、シンバスタチン、フルバスタチン、アトルバスタチン、ピタバスタチンおよびロスバスタチンから選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
非スタチンが、ＰＰＡＲα、ＰＰＡＲδおよびＰＰＡＲγからなる群から選択される少なくとも１つの受容体のアゴニストである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
非スタチンが、ＰＰＡＲαアゴニスト、ＰＰＡＲδアゴニストおよび二重ＰＰＡＲα／γアゴニストからなる群から選択される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
スタチンが、少なくとも１つのＵＧＴイソ酵素によるヒト代謝性グルクロニド化に対して感受性であり、
（ａ）非スタチンをグルクロニド化阻害アッセイにおいて試験して、この非スタチンがスタチンの代謝性グルクロニド化を阻害するかどうかを判定すること、および
（ｂ）非スタチンがスタチンの代謝性グルクロニド化を阻害しない場合、この非スタチン薬物を同時投与のために適するとして選択すること
を含む、同時投与薬物の処置を必要としている患者に対する同時投与のために、１つまたは複数のヒトＵＧＴイソ酵素に結合しないスタチンおよび非スタチン薬物を適切に選択するための方法。
【請求項６】
スタチンおよび非スタチンがさらに、ＣＹＰ３Ａ４、ＣＹＰ２Ｃ８およびＣＹＰ２Ｃ９からなる群から選択されるイソ酵素に競合的に結合しない、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
スタチンおよび非スタチン薬物が、同じヒトＵＧＴイソ酵素の１つまたは複数に競合的に結合せず、、工程（ａ）において、非スタチンが、スタチンの代謝性グルクロニド化を競合的に阻害するかどうかを判定するために試験される、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
スタチンが、前記グルクロニド化に対して感受性であり、および同時投与薬物処置を必要としている患者にそのラクトン形態または開環酸形態で投与され、
非スタチン薬物の一日治療用量の後に得られる最大血漿濃度の５倍以上である、グルクロニド化阻害アッセイにおけるスタチンに関するＩＣ５０値を有する非スタチン薬物を同時に投与することを含む、同時に投与された非スタチン薬物による開環酸スタチンのヒト代謝性グルクロニド化の阻害を回避または最小化するための方法。
【請求項９】
非スタチン薬物が、４００μＭより大きい、グルクロニド化阻害アッセイにおけるスタチンに関するＩＣ５０を有する、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
スタチンが、少なくとも１つのヒトＵＧＴイソ酵素によって代謝され、および同時投与薬物の処置を必要としている患者にラクトン形態または開環酸形態で投与され、
非スタチン薬物の一日治療用量の後に得られる最大血漿濃度の５倍以上である、グルクロニド化阻害アッセイにおけるスタチンに関するＩＣ５０値を有する非スタチン薬物を同時に投与することを含む、同時に投与された非スタチン薬物による開環酸スタチンの血漿レベルの増大を回避または最小化するための方法。
【請求項１１】
非スタチン薬物が、４００μＭより大きい、グルクロニド化阻害アッセイにおけるスタチンに関するＩＣ５０を有する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
スタチンが、少なくとも１つのヒトＵＧＴイソ酵素によって代謝され、および同時投与薬物の処置を必要としているヒトにそのラクトン形態または開環酸形態で投与され、
スタチンが代謝される同じ少なくとも１つのＵＧＴイソ酵素を阻害しない非スタチン薬物を同時に投与することを含む、
同時に投与された非スタチン薬物による開環酸スタチンの血漿レベルの増大を回避または最小化するための方法。
【請求項１３】
少なくとも１つのＵＧＴイソ酵素が、ＵＧＴ１Ａ１、ＵＧＴ１Ａ３、ＵＧＴ１Ａ１０およびそれらの組合せから選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
スタチンが、それらのラクトン化形態およびジヒドロキシ開環酸形態におけるならびに医薬適合性の塩の、ロバスタチン、シンバスタチン、フルバスタチン、アトルバスタチン、ピタバスタチンおよびロスバスタチンから選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
非スタチンが、ＰＰＡＲα、ＰＰＡＲδおよびＰＰＡＲγからなる群から選択される少なくとも１つの受容体のアゴニストである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１６】
スタチンが、少なくとも１つのヒトＵＧＴイソ酵素および少なくとも１つのＣＹＰイソ酵素によって代謝され、非スタチン薬物が、スタチンが代謝されるのと同じ少なくとも１つのＣＹＰイソ酵素によって代謝されない、請求項１０に記載の方法。
【請求項１７】
スタチンが、少なくとも１つのヒトＵＧＴイソ酵素および少なくとも１つのＣＹＰイソ酵素によって代謝され、非スタチン薬物が、スタチンが代謝される同じ少なくとも１つのＣＹＰイソ酵素を阻害しない、請求項１０に記載の方法。
【請求項１８】
非スタチン薬物が、４００μＭより大きい、グルクロニド化阻害アッセイにおけるスタチンに関するＩＣ５０を有する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
非スタチン薬物が、１００μＭより大きい、グルクロニド化阻害アッセイにおけるスタチンに関するＩＣ５０を有する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
スタチンが少なくとも１つのヒトＵＧＴイソ酵素によって代謝され、
非スタチン薬物の一日治療用量の後に得られる最大血漿濃度の５倍以上である、グルクロニド化阻害アッセイにおけるスタチンに関するＩＣ５０値を有する非スタチン薬物を同時に投与することを含む、
同時投与を必要としている患者においてスタチンを非スタチン薬物と同時に投与することから生じる有害な薬物相互作用に対する危険性を低下させるための方法。
【請求項２１】
非スタチン薬物が、４００μＭより大きい、グルクロニド化阻害アッセイにおけるスタチンに関するＩＣ５０を有する、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
スタチンが、少なくとも１つのヒトＣＹＰイソ酵素によってさらに代謝され、
（ａ）スタチンが代謝される同じ少なくとも１つのＣＹＰイソ酵素によって代謝されないか、または
（ｂ）スタチンが代謝される同じ少なくとも１つのＣＹＰイソ酵素を阻害しない、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
少なくとも１つのＣＹＰイソ酵素が、ＣＹＰ３Ａ４、ＣＹＰ２Ｃ８、ＣＹＰ２Ｃ９およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
スタチンをグルクロニド化アッセイにおいて試験して、スタチンが代謝的にグルクロニド化されるかどうかを判定することを含む、代謝的にグルクロニド化される非スタチン薬物が同時に投与される患者における有害な薬物動態学的薬物相互作用に対してスタチンが潜在的に感受性であるかどうかを判定するためにスタチンをスクリーニングするための方法。
【請求項２５】
（ａ）スタチンをグルクロニド化アッセイにおいて試験して、スタチンが代謝的にグルクロニド化されるかどうかを判定すること、および、そうである場合には、
（ｂ）グルクロニド化阻害アッセイにおけるスタチンに関する非スタチンのＩＣ５０を測定するために非スタチンを試験すること、および
（ｃ）非スタチン薬物が、非スタチン薬物の一日治療用量の後に得られる最大血漿濃度の５倍以上である、グルクロニド化阻害アッセイにおけるスタチンに関するＩＣ５０値を有する場合、スタチンが非スタチンとの有害な薬物動態学的薬物相互作用に対して感受性でないと判定すること
を含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
非スタチン薬物が、４００μＭより大きい、グルクロニド化阻害アッセイにおけるスタチンに関するＩＣ５０を有する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
ヒト組換え型のＵＧＴ１Ａ１、ＵＧＴ１Ａ３およびＵＧＴ１Ａ１０を用いるＵＧＴ特異的なグルクロニド化アッセイにおいてスタチンを試験して、スタチンが該ＵＧＴイソ酵素のいずれかによって代謝的にグルクロニド化されるかどうかを判定することを含む、スタチンのヒト代謝性グルクロニド化が、ＵＧＴ１Ａ１、ＵＧＴ１Ａ３およびＵＧＴ１Ａ１０からなる群から選択されるＵＧＴイソ酵素によって代謝的にグルクロニド化される同時投与の非スタチン薬物による阻害に対して感受性であるかどうかを判定するためにスタチンをスクリーニングするための方法。
【請求項２８】
スタチンの治療効果的な量と、フィブリン酸誘導体の一日治療用量の後に得られるフィブリン酸誘導体の最大血漿濃度の５倍以上である、グルクロニド化阻害アッセイにおけるスタチンに関するＩＣ５０値を有するフィブリン酸誘導体の治療効果的な量とを、処置を必要としている患者に同時に投与することを含む、シンバスタチン、開環酸型シンバスタチンおよびその医薬適合性の塩から選択されるスタチンが、フィブリン酸誘導体およびＰＰＡＲ受容体アンタゴニストから選択される非スタチン薬物と同時に投与されたときの、開環酸型シンバスタチンのヒト血漿レベルの増大を回避または最小化するための方法。
【請求項２９】
非スタチン薬物が、４００μＭより大きい、グルクロニド化阻害アッセイにおけるスタチンに関するＩＣ５０を有する、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
非スタチン薬物がスタチンのグルクロニド化を阻害しない、請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
非スタチン薬物が、ＵＧＴ１Ａ１、ＵＧＴ１Ａ３、ＵＧＴ１Ａ１０およびそれらの組合せから選択されるＵＧＴイソ酵素によって代謝されない、請求項２８に記載の方法。
【請求項３２】
非スタチン薬物がＣＹＰ３Ａ４によって代謝されない、請求項２８に記載の方法。
【請求項３３】
非スタチン薬物がスタチンのＣＹＰ３Ａ４媒介による代謝を阻害しない、請求項２８に記載の方法。
【請求項３４】
スタチンが、前記酸化に対して感受性であり、およびそのラクトン形態または開環酸形態で投与され、
同時投与薬物が、その酸化代謝産物のすべてについて、１００μＭより大きい、酸化阻害アッセイにおけるスタチンに関するＩＣ５０を有する場合にだけ、スタチンおよび同時投与薬物を投与することを含む、
同時に投与された非スタチン薬物によるスタチンの代謝性酸化の阻害を回避または最小化するための方法。
【請求項３５】
スタチンが、代謝性酸化に対して感受性であり、および少なくとも１つのヒトＵＧＴイソ酵素によって代謝され、
（ａ）非スタチン薬物の一日治療用量の後に得られる最大血漿濃度の５倍以上である、グルクロニド化阻害アッセイにおける前記スタチンに関するＩＣ５０値、および
（ｂ）１００μＭより大きい、酸化阻害アッセイにおける前記スタチンに関するＩＣ５０値、
を有する非スタチン薬物を同時に投与することを含む、請求項３４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
【背景技術】
【０００２】
上昇した血中コレステロールが冠状動脈性心疾患（ＣＨＤ）に対する大きな危険因子であることが数十年前から明かであり、多くの研究により、ＣＨＤ事象の危険性は脂質低下治療によって低下し得ることが示されている。１９８７年以前では、脂質を低下させる医療技術は、飽和脂肪およびコレステロールが低い食事、胆汁酸封鎖剤（コレスチラミンおよびコレスチポール）、ニコチン酸（ナイアシン）、フィブラート系化合物およびプロブコ−ルに不可避的に限られていた。残念ながら、これらの処置はすべて、効力または許容性またはそれらの両方が限られている。ロバスタチン（ＭＥＶＡＣＯＲ（登録商標）；米国特許第４，２３１，９３８号を参照のこと）、すなわち、１９８７年に規定処方として入手できるようになった最初のＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤が導入されたことにより、初めて、医師は、非常に少ない有害作用で血漿コレステロールの比較的大きい低下を得ることが可能になった。
【０００３】
天然産物のロバスタチンに加えて、いくつかの半合成ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤および全合成ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤が処方使用のために承認されており、これらには、シンバスタチン（ＺＯＣＯＲ（登録商標）；米国特許第４，４４４，７８４号を参照のこと）、プラバスタチンナトリウム塩（ＰＲＡＶＡＣＨＯＬ（登録商標）；米国特許第４，３４６，２２７号を参照のこと）、フラバスタチンナトリウム塩（ＬＥＳＣＯＬ（登録商標）；米国特許第５，３５４，７７２号を参照のこと）、アトルバスタチンカルシウム塩（ＬＩＰＩＴＯＲ（登録商標）；米国特許第５，２７３，９９５号を参照のこと）およびセリバスタチンナトリウム塩（ＢＡＹＣＯＬ（登録商標）；米国特許第５，１７７，０８０号を参照のこと）が含まれる。さらに他のＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤が開発中であることが知られており、例えば、ＮＫ−１０４としても示されるピタバスタチン（ＰＣＴ国際特許出願公開ＷＯ９７／２３２００を参照のこと）；ＺＤ−４５２２としても知られているロスバスタチン（ＣＲＥＳＴＯＲ（登録商標）；米国特許第５，２６０，４４０号、および、Ｄｒｕｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｆｕｔｕｒｅ、１９９９、２４（５）、５１１頁〜５１３頁を参照のこと）がある。これらのＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤およびさらなるＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤の構造式がＭ．Ｙａｌｐａｎｉ、「コレステロール低下薬物」（Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ＆Ｉｎｄｕｓｔｒｙ、８５頁〜８９頁（１９９６年２月５日））の８７頁に記載されている。上記に記載されているＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤は、３−ヒドロキシラクトン環またはその対応する開環したジヒドロキシ開環酸のいずれかとして存在し得る成分を含有する化合物の構造クラスに属し、「スタチン」として示されることが多い。スタチンのラクトン部分およびその対応する開環酸形態の例示を下に示す。
【０００４】
【化１】
2005512516.tif 000002
【０００５】
ジヒドロキシ開環酸の塩を調製することができ、実際には、上記に示されたように、上市されているスタチンのいくつかはそのジヒドロキシ開環酸の塩形態として投与される。ロバスタチンおよびシンバスタチンはそのラクトン化形態で世界中で販売されている。ロバスタチンは下記の構造式Ｉとして示され、シンバスタチンは下記の構造式ＩＩとして示される。
【０００６】
【化２】
2005512516.tif 000003
【０００７】
スタチンのラクトン化形態はＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼの活性な阻害剤ではなく、そのジヒドロキシ開環酸形態が活性な阻害剤である。スタチンのジヒドロキシ開環酸形態からその対応するラクトン化形態への縮合が、ｐＨが約４以下である酸性条件下で生じることが知られている。従って、胃の低い胃ｐＨのため、そのラクトン形態で経口服用することによる慣用方法により投与されたスタチンは、胃において大部分がそのラクトン形態のままである。この薬物の大部分は、ラクトンの場合、経口服用の後、腸から吸収されるときには依然としてラクトン形態にある。吸収後、ラクトンは肝臓に入る。ラクトンがその活性な開環酸形態に代謝され得るのは肝細胞においてであり、これは、２つの（１つがシトゾル画分に存在し、もう１つがミクロソーム画分に存在する）肝臓エステラーゼまたは「ラクトナーゼ」によって触媒される反応である。血液中には、ラクトンを開環酸に同様に加水分解し得るさらなる血漿エステラーゼが存在する。何らかの最低限の化学作用、すなわち、血液中または肝臓で生じる非酵素的な加水分解が存在し得る。しかし、血液中および肝臓内のｐＨでは、ラクトン化、すなわち、開環酸がラクトンに戻る変換は生じ得ない。
【０００８】
利用できるようになって以来、数百万回のシンバスタチンが投薬されているが、これらの薬物は優れた安全性成績をもたらしている。実際、シンバスタチンは、この１１年間で世界中で２千万人を越える患者に投与されており、著しく安全であることが実証されている。しかし、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（ＰＤＲ）に記されるように、筋障害の散発的な事例が、シンバスタチンを含むすべてのスタチンの使用に伴っており、これらは、著しく上昇したクレアチンキナーゼを伴う筋肉痛または衰弱として現れ、より希にではあるが、血流に進入する筋肉細胞の分解を特徴とする横紋筋融解の事例が報告されている。スタチンに関連した筋障害に関する機構は現在十分には理解されていない。筋障害の危険性は、血漿中の高レベルのＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤活性によって増大し得る。シンバスタチンなどのいくつかのスタチンを含む多くの薬物は、シトクロームＰ４５０イソ型３Ａ４（ＣＹＰ３Ａ４）酵素系によって肝臓および腸において代謝されることが知られている。筋障害の非常に低い危険性は、ＣＹＰ３Ａ４により代謝されるスタチンが、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害活性の血漿レベルを上昇させ得る、この代謝経路の強力な阻害剤との組合せで使用されたときに、増大し得る。そのような強力な阻害剤には、シクロスポリン、アゾール系抗真菌剤（イトラコナゾールおよびケトコナゾール）、マクロライド系抗生物質（エリスロマイシンおよびクラリスロマイシン）、ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤、抗うつ剤（ネファゾドン）、および大量のグレープフルーツ果汁（１日あたり１クォートより多い）が含まれる。
【０００９】
シンバスタチンおよびゲムフィブロジル（インビトロでのＣＹＰ３Ａ４の機能的活性の最小限の阻害のみを示すフィブリン酸誘導体（フィブラート）クラスのメンバー）を用いる同時薬物療法が、筋障害に対する危険性を増大させることも知られている。［Ｂａｃｋｍａｎら、活性なシンバスタチン酸の血漿濃度はゲムフィブロジルにより増大する、Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ＆Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、第６８巻：２、１２２〜１２９（２０００年８月）］に記載されている、シンバスタチンおよびゲムフィブロジルを用いた混合処置を伴う研究において、ゲムフィブロジルが、元のシンバスタチンの血漿ＡＵＣ（曲線下面積）の最小限の増大のみを伴って、開環酸型シンバスタチンの血漿濃度を相当増大させたことが報告された。この論文ではまた、ゲムフィブロジルは、ヒト肝臓ミクロソームにおいて、すなわち、肝臓ＣＹＰ３Ａ４活性を測定するインビトロアッセイにおいて、ＣＹＰ３Ａ４媒介によるミダゾラム１’−ヒドロキシル化に対する認められるほどの阻害作用を示さないことが述べられた。従って、ゲムフィブロジルは、インビトロではＣＹＰ３Ａ４の阻害剤ではないが、それでもやはり、シンバスタチンと同時に投与されたときには開環酸型シンバスタチンの血漿ＡＵＣを増大させるので、これら２つの薬物の間における薬物動態学的相互作用は、ＣＹＰ３Ａ４経路とは異なる別の経路による可能性が極めて高い。
【００１０】
筋障害の発生率はほとんどのスタチンについて極めて低いが、ＢＡＹＣＯＬ（登録商標）の商標で米国で販売されたセリバスタチンが、近年、それ以外の利用可能なスタチンよりも横紋筋融解の著しくより致命的な事例に関係づけられて世界中の市場から回収された。この副作用は、ＢＡＹＣＯＬ（登録商標）が高用量で投与されたとき、またはＢＡＹＣＯＬ（登録商標）がコレステロール薬剤のゲムフィブロジルとともに投与されたときに生じた可能性が最も大きかった。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
シンバスタチンに対する経口安全性成績は非常に優れているが、スタチンが１つ以上のさらなる活性な薬剤と同時に投与されたとき、有害な薬物相互作用に対する潜在的可能性を減少させることによって、シンバスタチンならびに一般の様々なスタチンの安全な利用をさらに最適化することは望ましい。ほとんどのスタチンの使用に伴う筋障害および横紋筋融解の既に低い発生率をさらに低下させることもまた望ましい。さらに、スタチンに関連した筋障害に対する機構をより良く理解するために、この点で、セリバスタチンが他のスタチンと薬物動態学的にどのように異なるかを知ることは有用である。スタチンは、世界で最も広く使用されている薬物であり、従って、それらの安全性プロフィルの何らかのさらなる最適化の利益は大きいであろう。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
シンバスタチン、アトルバスタチン、ロスバスタチンおよびセリバスタチンを含むある種のスタチンの代謝およびクリアランスの経路は、ＵＤＰ−グルクロニルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）酵素経路（Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．、２０００、４０：５８１〜６１６（これは参照して組み込まれる）を参照のこと）を介するスタチンの開環酸形態のグルクロニド化が関係していることが、今発見された。グルクロニド化酵素に競合的に結合する別の活性な薬剤による開環酸スタチンのグルクロニド化の阻害は、活性な開環酸スタチンの血漿ＡＵＣ（曲線下面積）の増大を生じさせ得る。様々なスタチンがグルクロニド化のレベルでの薬物相互作用に対して示差的な感受性を示すことがさらに発見されている。そのうえ、ゲムフィブロジル、フェノフィブラートおよびベザフィブラートなどの様々なフィブラートは、様々なスタチンのグルクロニド化に対して差別的作用を示す。
【００１３】
また、シンバスタチンおよびアトルバスタチンとは異なり、セリバスタチンの酸化代謝がゲムフィブロジルによって著しく阻害されたことが、今発見された。従って、セリバスタチングルクロニドおよびセリバスタチンの酸化代謝産物の形成の両方がゲムフィブロジルによって著しく阻害された。このように、酸化酵素に競合的に結合する別の活性な薬剤による開環酸スタチンの酸化代謝産物の形成の阻害もまた、活性な開環酸スタチンの血漿ＡＵＣを増大させる一因であり得る。
【００１４】
従って、本発明の１つの目的は、代謝性グルクロニド化に対するそれぞれの被験スタチンの感受性を判定するための、特に、どのＵＧＴイソ酵素を介してグルクロニド化が進行するかを判定するための、スタチンをスクリーニングするための方法を提供することである。より詳細には、本発明は、ＣＹＰイソ酵素を介する代謝性酸化に対する感受性に加えて、代謝性グルクロニド化に対するそれぞれの被験スタチンの感受性を判定するための、スタチンをスクリーニングするための方法を提供する。
【００１５】
別の目的は、代謝性グルクロニド化に対して感受性であるスタチンと共にそれを必要としている患者に同時に投与された非スタチン薬学的薬物が、スタチンのグルクロニド化を阻害し、それにより、有害な薬物動態学的薬物相互作用の危険性を増大させるかどうかを判定するための方法を提供することである。特に、非スタチンは、フィブリン酸誘導体（フィブラート）およびＰＰＡＲ受容体アゴニストから選択される。
【００１６】
別の目的は、代謝性酸化に対して感受性であるスタチンと共にそれを必要としている患者に同時に投与された非スタチン薬学的薬物が、スタチンの酸化を阻害し、それにより、有害な薬物動態学的薬物相互作用の危険性を増大させるかどうかを判定するための方法を提供することである。
【００１７】
別の目的は、同時投与薬物処置を必要としている患者に対する同時投与のために、特に、スタチンが、ＵＧＴ１Ａ１、ＵＧＴ１Ａ３およびＵＧＴ１Ａ１０の１つまたは複数を介して代謝される場合に、同じＵＧＴイソ酵素（１つまたは複数）に競合的に結合しないスタチンおよび非スタチン薬学的薬物を適切に選択するための方法を提供することである。
【００１８】
別の目的は、同時投与薬物処置を必要としている患者に対する同時投与のために、特に、スタチンが、ＵＧＴ１Ａ１、ＵＧＴ１Ａ３およびＵＧＴ１Ａ１０の１つまたは複数を介して代謝される場合に、同じＵＧＴイソ酵素（１つまたは複数）に競合的に結合しない、さらには、特に、スタチンが、ＣＹＰ３Ａ４および／またはＣＹＰ２Ｃ９を介して代謝される場合に、より詳細には、スタチンが、ＣＹＰ３Ａ４、ＣＹＰ２Ｃ９およびＣＹＰ２Ｃ８の１つまたは複数を介して代謝される場合に、同じＣＹＰイソ酵素に競合的に結合しないスタチンおよび非スタチン薬学的薬物を適切に選択するための方法を提供することである。
【００１９】
別の目的は、同時投与の非スタチン薬学的薬物（特に、フィブリン酸誘導体またはＰＰＡＲ受容体アゴニスト）によるスタチンの代謝性グルクロニド化の阻害を回避または最小化するための方法であって、スタチンが、前記グルクロニド化に対して感受性であり、かつそのラクトン形態または開環酸形態で投与され、および同時投与薬物が、非スタチン薬物の一日治療用量の後に得られる最大血漿濃度の５倍以上である、「グルクロニド化阻害アッセイ」におけるスタチンに関するＩＣ５０値を有するか、またはより詳細には、「グルクロニド化阻害アッセイ」において４００μＭより大きいＩＣ５０を有する場合にだけ、スタチンおよび同時投与薬物を投与することを含む、前記方法を提供することである。
【００２０】
別の目的は、当該同時投与を必要としている患者においてスタチンを非スタチン薬学的薬物と同時に投与することから生じる有害な薬物相互作用事象（特に、筋障害および横紋筋融解）に対する危険性を低下させるための方法、ならびに、本明細書中にさらに記載される方法を利用して前記同時投与を必要としている患者における同時投与の非スタチン薬学的薬物による開環酸スタチンの血漿レベルの増大を回避または最小化するための方法を提供することである。さらなる目的が下記の詳細な説明から明らかになる。
【００２１】
（発明の詳細な説明）
フィブラートおよびスタチンはともに、希にではあるが、単独療法として投与されたときに筋障害を生じさせ得るので、これらの薬剤が同時に投与されたときの、横紋筋融解を含む筋障害の観測される増大した危険性は、主として、薬物動態学的な薬物−薬物相互作用のためであることが一般に受け入れられている。臨床的な薬物動態体学的研究により、シンバスタチンおよびロバスタチンの単回経口服用の血漿薬物動態に対するゲムフィブロジルの多回経口服用のあまり大きくない作用が明らかにされている（Ｂａｃｋｍａｎら、Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ、２０００：６８：１２２〜１２９；Ｋｙｒｋｌｕｎｄら、Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ、２００１：６９：３４０〜５）。特に、ゲムフィブロジルは、これらの２つのスタチンのβ−ヒドロキシ酸代謝産物の血漿レベルに対して不均衡な作用（シンバスタチン酸の１８５％増大したＡＵＣおよびロバスタチン酸の２８０％増大したＡＵＣ）をもたらしたが、シンバスタチンラクトンの血漿レベルに対しては最小限の作用（３５％の増大）を有し、ロバスタチンラクトンの血漿レベルに対しては著しい作用を有していなかった。これらの薬物動態学的作用は、積極的ではないが、ロバスタチンおよびシンバスタチンがゲムフィブロジルと同時に投与されたときにおける筋障害の危険性の実質的な増大は、薬物動力学的相互作用のためであることを示唆するものである。しかしながら、観測された薬物動態学的相互作用の寄与を排除することはできない。
【００２２】
ゲムフィブロジルは、シンバスタチンおよびロバスタチンの両方の代謝が主に行われる経路であるシトクロームＰ４５０イソ型３Ａ４（ＣＹＰ３Ａ４）を阻害しないことが示されている。従って、シンバスタチンおよびロバスタチンの血漿薬物動態学に対するゲムフィブロジルの作用は、ＣＹＰ３Ａ４の阻害とは別の機構によって媒介されるに違いない。
【００２３】
本発明者らは、今、下記の構造ＩＩＩとして示されるシンバスタチン酸グルクロニドを動物（インビボおよびインビトロ）およびヒト（インビトロおよびインビボ）の両方におけるシンバスタチン酸の新規な代謝産物として特定した。
【００２４】
【化３】
2005512516.tif 000004
【００２５】
本発明者らの様々な研究により、シンバスタチンの血漿レベルに対するゲムフィブロジルの観測された臨床作用が、少なくとも部分的には、シンバスタチン酸のグルクロニド化を阻害するその能力によって媒介され得ることを示唆する証拠が得られた。そのうえ、これらの研究はまた、セリバスタチンが、ゲムフィブロジルによるグルクロニド化の阻害に対して他と比較にならないほど感受性であること、そしてゲムフィブロジルが、フェノフィブラートよりも強力な、スタチン酸グルクロニド化の阻害剤であることを明らかにしている。
【００２６】
また、セリバスタチンの酸化が、これはＣＹＰ３Ａ４およびＣＹＰ２Ｃ８により媒介されることが示されている（Ｂｏｂｅｒｇら、Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂ  Ｄｉｓｐｏｓ．、１９９７Ｍａｒ、２５（３）：３２１〜３１；Ｍｕｃｋ  Ｗ．、Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ．、２０００Ａｕｇ、３９（２）：９９〜１１６を参照のこと）が、ヒト肝臓ミクロソームにおいてゲムフィブロジルによって著しく阻害されることが見出された。ゲムフィブロジルはＣＹＰ３Ａ４の強力な阻害剤ではないので、セリバスタチンの酸化的代謝の観測された阻害は、ゲムフィブロジルによるＣＹＰ２Ｃ８の活性の阻害によると考えられる。
【００２７】
これらの前臨床研究は、ゲムフィブロジルまたはフェノフィブラートのいずれかによる、シンバスタチン酸、アトルバスタチンおよびセリバスタチンのグルクロニド化阻害のレベルで媒介される薬物相互作用に集中していた。これらの研究の結果は、様々なスタチンがグルクロニド化のレベルでの薬物相互作用に対して異なる感受性を示すことを示している。そのうえ、ゲムフィブロジルおよびフェノフィブラートは、様々なスタチンのグルクロニド化に対して差別的な作用を示す。
【００２８】
ゲムフィブロジル（７５ｍｇ／ｋｇ（経口）、２回／日で５日間）で前処理されたイヌにシンバスタチン（４ｍｇ／ｋｇ（経口）、単回服用）を経口投与すると、シンバスタチンではなく、シンバスタチン酸のＡＵＣ値およびＣｍａｘ値がともに、それぞれ、およそ３．５倍および２．６倍増大した。これらの結果は、ゲムフィブロジル（６００ｍｇ錠剤、２回／日で３日間）およびシンバスタチン（４０ｍｇ錠剤、単回経口服用）が与えられたヒトにおける臨床的薬物動態学的研究で報告された結果（Ｂａｃｋｍａｎら、上記参照）と類似していた。さらなる実験により、ゲムフィブロジルはイヌ血漿におけるエクスビボでのシンバスタチンの加水分解に影響しないことが明らかにされた。しかし、ゲムフィブロジルはイヌ肝臓ミクロソームにおいてシンバスタチン酸グルクロニド化の著しい阻害（ＩＣ５０＝１９５μＭ）を生じさせた。これに対して、ゲムフィブロジルはシンバスタチン酸の酸化に対しては最小限の作用（ＩＣ５０＝約１０００μＭ）を有していた。インビボ実験により、ゲムフィブロジルがイヌにおけるシンバスタチン酸の血漿クリアランスおよびシンバスタチン−グルクロニドの胆汁排出の著しい低下（約２分の１）を生じさせることが確認された。まとめると、これらの結果は、シンバスタチンをイヌに投与した後におけるシンバスタチン酸ＡＵＣのゲムフィブロジル媒介による上昇は、少なくとも部分的には、シンバスタチン酸のグルクロニド化に対するゲムフィブロジルの阻害活性のためであることを示唆していた。
【００２９】
さらなる研究により、シンバスタチン酸はまた、ヒト肝臓ミクロソームにおいて、そして放射能標識されたシンバスタチン酸が投与された後のヒトでのインビボにおいて、グルクロニド化を受けることが明らかにされた。ヒトにおけるシンバスタチン酸のグルクロニド化の程度は、インビボおよびインビトロの両方で、イヌで観測された程度よりも小さかった。また、ゲムフィブロジルは、イヌの場合と類似して、ＣＹＰ３Ａにより媒介される酸化経路（ＩＣ５０＞８００μＭ）よりも著しいシンバスタチン酸のグルクロニド化阻害（ＩＣ５０＝３５４μＭ）を生じさせることが見出された。ゲムフィブロジルおよびシンバスタチン酸のグルクロニド化は、少なくとも２つの共通するヒトＵＧＴイソ酵素（ＵＧＴ１Ａ１およびＵＧＴ１Ａ３）によって触媒され、シンバスタチン酸のグルクロニド化に対するゲムフィブロジルの競合的阻害がヒト肝臓ミクロソームにおいて観測された。これらの結果およびイヌにおける上記の発見に基づいて、シンバスタチンをヒトに経口投与した後におけるシンバスタチン酸ＡＵＣのゲムフィブロジル媒介による上昇は、少なくとも部分的には、シンバスタチン酸のグルクロニド化に対するゲムフィブロジルの阻害活性のためであることが結論される。
【００３０】
その後の研究では、グルクロニド化のレベルでの代謝的相互作用における潜在的な差異および類似性が、インビトロ方法を使用して、様々なスタチンとゲムフィブロジルとの間で評価された。ヒト肝臓ミクロソームにおいて、セリバスタチンおよびアトルバスタチンは、シンバスタチン酸と類似しているが、アシルグルクロニドコンジュゲートを形成した。ヒト肝臓ミクロソームにおけるスタチングルクロニド化の速度論的研究により、セリバスタチンおよびアトルバスタチンは、シンバスタチン酸が受けるよりもはるかに速いグルクロニド化を受けることが示された。シンバスタチン酸、アトルバスタチンおよびセリバスタチンのグルクロニド化の固有クリアランスは、それぞれ、０．４μｌ／分／ｍｇ、４．０μｌ／分／ｍｇおよび２．９μｌ／分／ｍｇであった。さらなる研究により、セリバスタチンのグルクロニド化は、シンバスタチン酸またはアトルバスタチンのグルクロニド化が有するよりも大きい、ゲムフィブロジルによる阻害に対する感受性を有することが明らかにされた。すなわち、ＩＣ５０値は、セリバスタチン、アトルバスタチンおよびシンバスタチン酸について、それぞれ、８２μＭ、３１６μＭおよび３５４μＭであった。これらのインビトロデータは、セリバスタチンは、ヒトにおけるグルクロニド化のレベルにおいて、ゲムフィブロジルとの相互作用に対してシンバスタチン酸またはアトルバスタチンよりもより感受性であろうことを示唆している。
【００３１】
様々な研究がまた、インビトロでのスタチンのグルクロニド化に対するフィブラートの阻害能における差異または類似性を調べるために行われた。ヒト肝臓ミクロソームにおいて、ゲムフィブロジルは、シンバスタチン酸およびセリバスタチンの両方のグルクロニド化の阻害剤として、フェノフィブラートよりも強力であった。すなわち、シンバスタチンおよびセリバスタチンについてグルクロニド化の阻害についてのＩＣ５０値は、それぞれ、ゲムフィブロジルの場合には３５４μＭおよび８２μＭであり、フェノフィブラートの場合には６８２μＭおよび４３３μＭであった。イヌ肝臓ミクロソームにおいて、ゲムフィブロジルはまた、フェノフィブリン酸（ＩＣ５０＝２８３μＭ）よりも強力な、シンバスタチン酸のグルクロニド化阻害剤（ＩＣ５０＝１９５μＭ）であった。このことと一致して、フェノフィブラートは、シンバスタチン酸をイヌに静脈内投与した後におけるシンバスタチン酸の血漿クリアランスに対する最小限の作用を有したが、これはゲムフィブロジルとは対照的であった。ヒトにおけるゲムフィブロジルに対する暴露が、フェノフィブラート／フェノフィブリン酸に対する暴露よりも、それらのそれぞれの治療的用量では＞２倍大きいことを考慮すると、これらの結果は、ヒトでは、ゲムフィブロジルは、グルクロニド化のレベルで、セリバスタチン、シンバスタチン酸およびアトルバスタチンと相互作用することがフェノフィブラートよりも大きいと考えられることを示唆している。
【００３２】
まとめると、本発明者らの最近の前臨床研究では、下記のことが明らかにされた：
１）シンバスタチンをヒトに投与した後におけるシンバスタチン酸ＡＵＣのゲムフィブロジル媒介による上昇は、少なくとも部分的には、シンバスタチン酸のグルクロニド化に対するゲムフィブロジルの阻害活性のためであり得る；
２）セリバスタチンは、ヒトにおけるグルクロニド化のレベルで、ゲムフィブロジルとの相互作用に対する感受性がシンバスタチン酸またはアトルバスタチンよりも大きいと考えられる；かつ
３）ゲムフィブロジルは、グルクロニド化のレベルで、セリバスタチン、シンバスタチン酸および／またはアトルバスタチンと、フェノフィブラートよりもより大きく相互作用すると考えられる。
【００３３】
従って、本発明の１つの実施形態において、同時投与薬物処置を必要としている患者に対する同時投与のためにスタチンおよび非スタチン薬物を適切に選択するための方法であって、スタチンがＵＧＴイソ酵素によるヒト代謝性グルクロニド化に対して感受性であり、
（ａ）スタチンをＵＧＴ特異的なグルクロニド化アッセイにおいて試験して、１つまたは複数のＵＧＴイソ酵素のどれがスタチンのグルクロニド化に関わっているかを特定すること、および
（ｂ）（ｉ）非スタチンをグルクロニド化アッセイにおいて試験することによって判定して、非スタチンが代謝的にグルクロニド化されない場合、または
（ｉｉ）非スタチンをＵＧＴ特異的なグルクロニド化アッセイにおいて試験することによって判定して、非スタチンが工程（ａ）で特定される１つまたは複数のＵＧＴイソ酵素のいずれかによって代謝的にグルクロニド化されない場合、
この非スタチンをスタチンとの同時投与のために適するとして選択すること
を含む、前記方法を提供する。
【００３４】
この実施形態の別の局面において、同時投与薬物の処置を必要としている患者に対する同時投与のために、同じヒトＵＧＴイソ酵素の１つまたは複数に競合的または非競合的のいずれかでも結合しないスタチンおよび非スタチン薬物を適切に選択するための方法であって、スタチンが少なくとも１つのＵＧＴイソ酵素によるヒト代謝性グルクロニド化に対して感受性であり、
（ａ）非スタチンをグルクロニド化阻害アッセイにおいて試験して、この非スタチンがスタチンの代謝性グルクロニド化を競合的または非競合的のいずれかで阻害しないかどうかを判定すること；および
（ｂ）非スタチンがスタチンの代謝性グルクロニド化を阻害しない場合、この非スタチン薬物を同時投与のために適するとして選択すること
を含む、前記方法を提供する。
【００３５】
特に、スタチンおよび非スタチン薬物は、同じヒトＵＧＴイソ酵素の１つまたは複数に競合的に結合せず、また、工程（ａ）において、非スタチンは、スタチンの代謝性グルクロニド化を競合的に阻害するかどうかを判定するために試験される。
【００３６】
本発明の第２の実施形態において、同時に投与された非スタチン薬物によるスタチンの代謝性グルクロニド化の阻害を回避または最小化するための方法であって、非スタチン薬物が、非スタチン薬物の一日治療用量の後に得られる最大血漿濃度の５倍以上である、グルクロニド化阻害アッセイにおけるスタチンに関するＩＣ５０値を有する場合に、スタチンおよび非スタチン薬物を投与することを含む前記方法が提供される。例えば、非スタチン薬学的薬物が、一日用量の投与の後約１０μＭのヒトにおけるピーク血漿濃度を有するならば、その非スタチンについて５倍を越えるＩＣ５０値（所与スタチンに関して）は約５０μＭのＩＣ５０である。従って、スタチンの代謝性グルクロニド化の阻害を回避または最小化するために、ならびに開環酸スタチンの血漿レベルの増大を回避または最小化し、有害な薬物相互作用に対する危険性を低下させ、それを必要としている患者への投与のためにスタチンおよび非スタチン薬物を適切に選択するために、非スタチンは、そのＩＣ５０が、グルクロニド化阻害アッセイにスタチンに関して約５０μＭまたはそれ以上である場合にのみ、患者への同時投与のために選択される。
【００３７】
本発明の第３の実施形態において、患者には、同時投与薬物が、非スタチン薬物の一日治療用量の後に得られる最大血漿濃度の５倍以上である、グルクロニド化阻害アッセイにおけるスタチンに関するＩＣ５０値を有する場合にだけ、スタチンおよび同時投与非スタチン薬物が投与される。
【００３８】
第３の実施形態の１つの局面において、同時に投与された非スタチン薬物による開環酸スタチンの血漿レベルの増大を回避または最小化するための方法であって、スタチンが、少なくとも１つのヒトＵＧＴイソ酵素によって代謝され、および同時投与薬物の処置を必要としている患者にそのラクトン形態または開環酸形態で投与され、かつスタチンが代謝される同じ少なくとも１つのＵＧＴイソ酵素を阻害しない非スタチン薬物を同時に投与することを含む、前記方法が提供される。
【００３９】
第３の実施形態の別の局面において、同時に投与された非スタチン薬物による開環酸スタチンの血漿レベルの増大を回避または最小化するための方法であって、スタチンが、少なくとも１つのヒトＵＧＴイソ酵素および少なくとも１つのＣＹＰイソ酵素によって代謝され、および同時投与薬物処置を必要としているヒトにそのラクトン形態または開環酸形態で投与され、
（ａ）非スタチン薬物の一日治療用量の後に得られる最大血漿濃度の５倍以上である、グルクロニド化阻害アッセイにおけるスタチンに関するＩＣ５０値を有し、および
（ｂ）スタチンが代謝されるのと同じ少なくとも１つのＣＹＰイソ酵素によって代謝されないか、または
（ｃ）スタチンを代謝する同じ少なくとも１つのＣＹＰイソ酵素を阻害しない
非スタチン薬物を同時に投与すること
を含む、前記方法が提供される。
【００４０】
この実施形態の別の局面において、同時に投与された非スタチン薬物による開環酸スタチンの血漿レベルの増大を回避または最小化するための方法であって、スタチンが、少なくとも１つのヒトＵＧＴイソ酵素および少なくとも１つのＣＹＰイソ酵素によって代謝され、および同時投与薬物処置を必要としているヒトにそのラクトン形態または開環酸形態で投与され、
（ａ）スタチンが代謝される同じ少なくとも１つのＵＧＴイソ酵素を阻害せず、かつ
（ｂ）スタチンが代謝される同じ少なくとも１つのＣＹＰイソ酵素を阻害しない
非スタチン薬物を同時に投与すること
を含む、前記方法が提供される。
【００４１】
本発明の第４の実施形態において、当該同時投与を必要としている患者においてスタチンを非スタチン薬学的薬物と同時に投与することから生じる有害な薬物相互作用に対する危険性を低下させるための方法であって、スタチンが少なくとも１つのヒトＵＧＴイソ酵素によって代謝され、非スタチン薬物の一日治療用量の後に得られる最大血漿濃度の５倍以上である、グルクロニド化阻害アッセイにおけるスタチンに対するＩＣ５０値を有する非スタチン薬物を同時に投与することを含む、前記方法が提供される。
【００４２】
第４の実施形態の１つの局面において、スタチンは、少なくとも１つのヒトＣＹＰイソ酵素によって代謝され、
（ａ）スタチンが代謝される同じ少なくとも１つのＣＹＰイソ酵素によって代謝されないか、または
（ｂ）スタチンが代謝される同じ少なくとも１つのＣＹＰイソ酵素を阻害しない。
【００４３】
本発明の第５の実施形態において、代謝的にグルクロニド化される非スタチン薬物が同時に投与された患者における有害な薬物動態学的薬物相互作用に対する潜在的な感受性をスタチンが有するかどうかを判定するためにスタチンをスクリーニングするための方法であって、スタチンをグルクロニド化アッセイにおいて試験して、スタチンが代謝的にグルクロニド化されるかどうかを判定することを含む、前記方法が提供される。
【００４４】
この実施形態の１つの局面において、スタチンが、代謝的にグルクロニド化される非スタチン薬物が同時に投与されたヒトにおける有害な薬物動態学的薬物相互作用に対する感受性を有するかどうかを判定するためにスタチンをスクリーニングするための方法であって、
（ａ）スタチンをグルクロニド化アッセイにおいて試験して、スタチンが代謝的にグルクロニド化されるかどうかを明らかにすること、およびそうである場合には、
（ｂ）グルクロニド化阻害アッセイにおけるスタチンに関する非スタチンのＩＣ５０を測定するために非スタチンを試験すること、および
（ｃ）非スタチン薬物が、非スタチン薬物の一日治療用量の後に得られる最大血漿濃度の５倍以上である、グルクロニド化阻害アッセイにおけるスタチンに関するＩＣ５０値を有する場合、スタチンが、非スタチンとの有害な薬物動態学的薬物相互作用に対して感受性でないと判定すること
を含む、前記方法が提供される。
【００４５】
第５の実施形態の別の局面において、スタチンのヒト代謝性グルクロニド化が、ＵＧＴ１Ａ１によって代謝的にグルクロニド化される同時投与の非スタチン薬物による阻害に対して感受性であるかどうかを判定するためにスタチンをスクリーニングするための方法であって、ヒト組換えＵＧＴ１Ａ１を用いるＵＧＴ特異的なグルクロニド化アッセイにおいてスタチンを試験して、スタチンがＵＧＴ１Ａ１によって代謝的にグルクロニド化されるかどうかを判定することを含む、前記方法が提供される。
【００４６】
第５の実施形態の別の局面において、スタチンのヒト代謝性グルクロニド化が、ＵＧＴ１Ａ３によって代謝的にグルクロニド化される同時投与非スタチン薬物による阻害に対して感受性であるかどうかを明らかにするためにスタチンをスクリーニングするための方法であって、ヒト組換えＵＧＴ１Ａ３を用いるＵＧＴ特異的なグルクロニド化アッセイにおいてスタチンを試験して、スタチンがＵＧＴ１Ａ３によって代謝的にグルクロニド化されるかどうかを判定することを含む、前記方法が提供される。
【００４７】
第５の実施形態の別の局面において、スタチンのヒト代謝性グルクロニド化が、ＵＧＴ１Ａ１０によって代謝的にグルクロニド化される同時投与の非スタチン薬物による阻害に対して感受性であるかどうかを判定するためにスタチンをスクリーニングするための方法であって、ヒト組換えＵＧＴ１Ａ１０を用いるＵＧＴ特異的なグルクロニド化アッセイにおいてスタチンを試験して、スタチンがＵＧＴ１Ａ１０によって代謝的にグルクロニド化されるかどうかを判定することを含む、前記方法が提供される。
【００４８】
本発明の第６の実施形態において、同時に投与された非スタチン薬学的薬物によるスタチンの代謝性酸化の阻害を回避または最小化するための方法であって、スタチンが、前記酸化に対して感受性であり、およびそのラクトン形態または開環酸形態で投与され、同時投与の薬物が、その酸化代謝産物のすべてについて１００μＭより大きい、「酸化阻害アッセイ」におけるスタチンに関するＩＣ５０を有する場合にだけ、スタチンおよび同時投与薬物を投与することを含む、前記方法が提供される。
【００４９】
この実施形態の別の局面において、本発明は、前記同時投与を必要としている患者においてスタチンを非スタチンと同時に投与することから生じる有害な薬物相互作用に対する危険性を低下させるための方法であって、スタチンが、少なくとも１つのヒトＵＧＴイソ酵素によって代謝され、および代謝性酸化に対しても感受性であり、
（ａ）非スタチン薬物の一日治療用量の後に得られる最大血漿濃度の５倍以上である、グルクロニド化阻害アッセイにおけるスタチンに関するＩＣ５０値、および
（ｂ）１００μＭより大きい、酸化阻害アッセイにおける前記スタチンに関してＩＣ５０値、
を有する非スタチン薬物を同時に投与すること
を含む、前記方法を提供する。
【００５０】
本明細書に記載されるすべての実施形態およびその局面に含まれるさらなる例として、非スタチン薬物は、４００μＭ以上の、グルクロニド化阻害アッセイにおけるスタチンに関するＩＣ５０を有する。
【００５１】
本明細書に記載されるすべての実施形態およびその局面に含まれるさらなる例として、ＵＧＴイソ酵素は、ＵＧＴ１Ａ１、ＵＧＴ１Ａ３およびＵＧＴ１Ａ１０から選択される。
【００５２】
本明細書に記載されるすべての実施形態およびその局面に含まれるさらなる例として、ＣＹＰイソ酵素は、ＣＹＰ３Ａ４、ＣＹＰ２Ｃ９およびＣＹＰ２Ｃ８から選択される。より詳細には、ＣＹＰイソ酵素はＣＹＰ３Ａ４である。
【００５３】
本明細書に記載されるすべての実施形態およびその局面に含まれるさらなる例として、スタチンは、シンバスタチン、開環酸型シンバスタチンおよびその医薬適合性の塩から選択される。本明細書に記載されるすべての実施形態およびその局面に含まれるさらなる一例として、非スタチン薬物はＰＰＡＲ受容体アゴニストであり、特に、ＰＰＡＲγアゴニスト、フィブリン酸誘導体などのＰＰＡＲαアゴニスト、またはＰＰＡＲ二重α／γアゴニストである。
【００５４】
本明細書中で使用される用語「グルクロニド化アッセイ」、用語「ＵＧＴ特異的なグルクロニド化アッセイ」、用語「グルクロニド化阻害アッセイ」、および用語「酸化阻害アッセイ」は、下記の実施例において規定されるような特異的なアッセイを示す。
【００５５】
スタチンクラスの様々なＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤が本発明により使用される。ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼに対して阻害活性を有する化合物は、この分野で広く知られているアッセイを使用して容易に特定することができる。例えば、米国特許第４，２３１，９３８号（第６欄）および国際特許出願公開ＷＯ８４／０２１３１（３０頁〜３３頁）（これらは参照して本明細書中に組み込まれる）に記載または引用されているアッセイを参照のこと。
【００５６】
一般に、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤は、３−ヒドロキシラクトン環または対応する３，５−ジヒドロキシ開環酸のいずれかとして存在し得る成分を含有する化合物の構造クラスに属し、一般に「スタチン」として示される。
【００５７】
用語「ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤」および用語「スタチン」は、本明細書中では交換可能に使用され、別途示されない限り、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤のラクトン形態および開環した３，５−ジヒドロキシ開環酸形態ならびにその医薬適合性の塩およびそのエステルのすべてを含むことが意図される。従って、そのようなラクトン形態および開環した３，５−ジヒドロキシ酸形態ならびにその塩およびエステルの使用は本発明の範囲に含まれる。本明細書中で使用される用語「開環スタチン」は、特に、スタチンの３，５−ジヒドロキシ開環酸形態を示す。本明細書中で使用される用語「ロバスタチン酸」（またはＬＶＡ）および用語「シンバスタチン酸」（またはＳＶＡ）はこれらのスタチンの開環酸形態を示す。
【００５８】
本発明の範囲内において使用され得るＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤の例には、下記スタチンのラクトン化形態およびジヒドロキシ開環酸形態ならびにその医薬適合性の塩およびそのエステルが含まれる（これらに限定されない）：ロバスタチン（ＭＥＶＡＣＯＲ（登録商標）、米国特許第４，３４２，７６７号を参照のこと）；シンバスタチン（ＺＯＣＯＲ（登録商標）、米国特許第４，４４４，７８４号を参照のこと）；プラバスタチン、特にそのナトリウム塩（ＰＲＡＶＡＣＨＯＬ（登録商標）、米国特許第４，３４６，２２７号を参照のこと）；フラバスタチン、特にそのナトリウム塩（ＬＥＳＣＯＬ（登録商標）、米国特許第５，３５４，７７２号を参照のこと）；アトルバスタチン、特にそのカルシウム塩（ＬＩＰＩＴＯＲ（登録商標）、米国特許第５，２７３，９９５号を参照のこと）；ＮＫ−１０４としても示されるピタバスタチン（ＰＣＴ国際特許出願公開ＷＯ９７／２３２００を参照のこと）；およびＺＤ−４５２２としても知られているロスバスタチン（ＣＲＥＳＴＯＲ（登録商標）、米国特許第５，２６０，４４０号、および、Ｄｒｕｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｆｕｔｕｒｅ、１９９９、２４（５）、５１１頁〜５１３頁を参照のこと）。世界中で回収されたため、セリバスタチンは、スクリーニング、試験およびその他のために本発明の範囲内において使用することができ、しかし、ヒトへの投与に関しては承認された使用のみに制限されなければならない。これらのスタチンのいくつかおよびさらなるＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤の構造式がＭ．Ｙａｌｐａｎｉ、「コレステロール低下薬物」（Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ＆Ｉｎｄｕｓｔｒｙ、８５頁〜８９頁（１９９６年２月５日））の８７頁に記載されている。販売されているスタチンの記載はまた、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅの現行版に見出される。さらに、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤であることが明らかにされた上記化合物以外の化合物を本発明のスクリーニング方法および他の方法において用いることができる。特に、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤は、ロバスタチンおよびシンバスタチン（これらはラクトン化スタチンである）、ならびにそれらの対応するジヒドロキシ開環酸形態およびその医薬適合性の塩から選択される。より詳細には、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤は、シンバスタチン、開環酸型シンバスタチンおよびその医薬適合性の塩から選択される。
【００５９】
ＣＹＰ３Ａ４の阻害剤である化合物は、Ｂａｃｋｍａｎら、活性なシンバスタチン酸の血漿濃度はゲムフィブロジルにより増大する、Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ＆Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、第６８巻２、１２２〜１２９（２０００年８月）（これは参照して本明細書中に組み込まれる）に記載されているミダゾラム１’−ヒドロキシル化のインビトロアッセイを使用して特定することができる。
【００６０】
本明細書中において、用語「医薬適合性の塩」は、遊離酸を好適な有機塩基または無機塩基と反応することによって一般には調製される本発明において用いられる化合物の非毒性の塩、特に、ナトリウム、カリウム、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、亜鉛およびテトラメチルアンモニウムなどのカチオンから形成される塩、ならびにアンモニア、エチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、リシン、アルギニン、オルニチン、コリン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、ジエタノールアミン、プロカイン、Ｎ−ベンジルフェネチルアミン、１−ｐ−クロロベンジル−２−ピロリジン−１’−イルメチルベンゾイミダゾール、ジエチルアミン、ピペラジン、モルホリン、２，４，４，−トリメチル−２−ペンタミンおよびトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンなどのアミンから形成されるそのような塩を意味するものとする。カルボン酸基における医薬適合性のエステルは、ジヒドロキシ開環酸スタチンをアルコールで処理することによって作製することができる。ジヒドロキシ開環酸スタチンの医薬適合性のエステルには、−Ｃ１〜４アルキル、ならびにフェニル−、ジメチルアミノ−およびアセチルアミノ−で置換された−Ｃ１〜４アルキルが含まれるが、これらに限定されない。本明細書中における「Ｃ１〜４アルキル」は、１個〜４個の炭素原子を含有する直鎖状脂肪族鎖または分枝状脂肪族鎖が含まれ、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉｓｏ−ブチル、ｓｅｃ−ブチルおよびｔｅｒｔ−ブチルが含まれる。
【００６１】
用語「治療効果的な量」は、研究者、獣医師、医師または他の臨床家によって求められている、組織、系、動物またはヒトの生物学的応答または医学的応答を誘発する薬物または治療薬剤のそのような量を意味することが意図される。特に、スタチンに関しては、患者に施される投薬量は、所望されるＬＤＬ（低密度リポタンパク質）コレステロール低下量を達成するように選択することができる。患者に施される投薬量はまた、目標のＬＤＬレベルに到達するために経時的に測定することができる。スタチンを利用する投薬方法、またはスタチンおよび非スタチンから構成される薬物組み合わせを利用する投薬方法は、患者のタイプ、種、年齢、体重、性別および医学的状態；処置される状態の重篤度；投与するために選ばれた化合物の効力；投与経路；ならびに患者の腎機能および肝機能を含む様々な要因に従って選択される。これらの要因を考慮することは、状態の進行を防止し、または阻止し、または停止させるために必要とされる治療効果的な投薬量または予防効果的な投薬量を決定するために、通常の技術を有する臨床家の範囲に十分に含まれる。
【００６２】
本明細書中で使用される用語「患者」は、哺乳動物、特にヒトを含む。薬物を患者に投与することには、自己投与、および他者による患者への投与の両方が含まれる。患者は、現在の疾患状態または医学的状態に対する処置を必要としている状態であり得るか、または予防的処置を所望し得る。
【００６３】
スタチンの経口投薬量は約１ｍｇ／日から２００ｍｇ／日であり、より好ましくは約５ｍｇ／日から約４０ｍｇ／日である。しかし、一日投薬量は、特定の化合物の効力を含む、上記に記されるような要因に依存して変化し、サブミリグラム量であり得る。スタチンは、分割された用量で、例えば、１日に１回〜４回で投与することができるが、薬物の１日１回の服用が好ましい。例として、一日投薬量は、５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、８０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、１６０ｍｇおよび２００ｍｇ（これらに限定されない）から選択することができる。
【００６４】
本明細書中で使用される用語「非スタチン」は、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤以外の任意の薬学的に活性な薬物を意味することが意図される。非スタチン薬物は、様々な治療的処置を必要とする患者にスタチンと同時に投与されることが多い。
【００６５】
本明細書中で使用される「同時投与（同時に投与すること）」には、スタチンおよび非スタチン薬物の両方を含有する単一薬学的投薬配合物の投与、ならびにそれぞれの薬物をそれ自身の別個の薬学的投薬配合物で投与することが含まれる。別個の投薬配合物が使用される場合、スタチンおよび非スタチン薬物は、本質的に同時に、すなわち、併用して、または間隔を置いてずらした時間で、すなわち、順次的に投与することができ、本発明はこれらの方法のすべてを包含する。
【００６６】
非スタチン薬物は、患者に対して潜在的にはスタチンと同時に投与され得る薬学的薬物であり、これには、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤の阻害剤でない脂質改変剤、脂質に関連しない他の薬学的活性を有する薬物、または脂質低下作用および他の薬学的活性の両方を有する薬物が含まれる。用いることができるさらなる活性な薬剤の例には、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼシンターゼ阻害剤；スクアレンエポキシダーゼ阻害剤；スクアレンシンテターゼ阻害剤（これはまたスクアレンシンターゼ阻害剤として知られている）；アシル−補酵素Ａ：コレステロールアシルトランスフェラーゼ（ＡＣＡＴ）阻害剤、これには、ＡＣＡＴ−１またはＡＣＡＴ−２の選択的阻害剤、ならびにＡＣＡＴ−１およびＡＣＡＴ−２の二重阻害剤が含まれる；ミクロソームトリグリセリド転移タンパク質（ＭＴＰ）阻害剤；プロブコール；ナイアシン；コレステロール吸収阻害剤、例えば、米国特許第５，７６７，１１５号および同第５，８４６，９６６号に記載されるエゼチミブ（これはまたＳＣＨ−５８２３５として知られている）など；胆汁酸封鎖剤；ＬＤＬ（低密度リポタンパク質）受容体誘導剤；血小板凝集阻害剤、例えば、糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａフィブリノーゲン受容体アンタゴニストおよびアスピリン；ヒトペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ）アゴニスト、これには、グリタゾン系化合物として一般には示される化合物（例えば、ピオグリタゾンおよびロシグリタゾン）が含まれ、チアゾリジンジオン系化合物として知られている構造クラスに含まれるそのような化合物、ならびにチアゾリジンジオン構造クラスに含まれないそのようなＰＰＡＲγアゴニストが含まれる；ＰＰＡＲαアゴニスト、例えば、フィブリン酸の誘導体など、これには、ベザフィブラート、クロフィブラート、フェノフィブラート（微細化フェノフィブラートを含む）、およびゲムフィブロジルが含まれる；ＰＰＡＲ二重α／γアゴニスト；ＰＰＡＲδアゴニスト、ビタミンＢ６（これはまたピリドキシンとして知られている）およびその医薬適合性の塩（ＨＣｌ塩など）；ビタミンＢ１２（これはまたシアノコバラミンとして知られている）；葉酸またはその医薬適合性の塩もしくはエステル、例えば、ナトリウム塩およびメチルグルカミン塩など；抗酸化性ビタミン、例えば、ビタミンＣおよびビタミンＥおよびβ−カロテンなど；β−遮断剤；アンギオテンシンＩＩアンタゴニスト、例えば、ロサルタンなど；アンギオテンシン変換酵素阻害剤、例えば、エナラプリルおよびカプトプリルなど；カルシウムチャンネル遮断剤、例えば、ニフェジピンおよびジルチアザムなど；エンドセリンアンタゴニスト；ＡＢＣ１遺伝子発現を増強する薬剤；ＦＸＲリガンドおよびＬＸＲリガンド、これらには、阻害剤およびアゴニストの両方が含まれる；ビスホスホナート化合物、例えば、アレンドロナートナトリウムなど；ならびにシクロオキシゲナーゼ−２阻害剤、例えば、ロフェコキシブおよびセレコキシブなどが含まれるが、これらに限定されない。
【００６７】
特に、本発明の実施において使用される非スタチン薬学的薬物は、１つのＰＰＡＲ受容体サブタイプに対して選択的であるアゴニスト、ならびに２つ以上の受容体サブタイプに対して活性であるアゴニストを含むＰＰＡＲ受容体アゴニストのいずれかである。より詳細には、非スタチン薬学的薬物は、フィブリン酸誘導体などのＰＰＡＲαアゴニスト；ＰＰＡＲγアゴニスト；および二重ＰＰＡＲα／γアゴニスト、すなわち、α受容体およびγ受容体の両方のサブタイプに対する二重の活性を有するアゴニストである。
【００６８】
スタチンおよび非スタチンが、酵素または酵素イソ型（すなわち、イソ酵素）に競合的に結合するとして示されるとき、スタチンおよび非スタチンの両方が同じ酵素またはイソ酵素に結合することが意味される。有害な薬物動態学的薬物相互作用は、スタチンが単独で投与された場合、すなわち、同時投与の非スタチンが存在しない場合のレベルを超えて活性な開環酸スタチンの血漿レベルを上昇させる、哺乳動物（特にヒト）におけるスタチンと同時投与非スタチン薬学的薬物との間でのインビボ相互作用を意味することが意図される。
【実施例１】
【００６９】
スタチンのグルクロニド化に関する研究
本明細書中で使用される用語「グルクロニド化アッセイ」は、ヒト肝臓ミクロソームを用いて行われるとき、下記のアッセイを示す。
【００７０】
典型的なインキュベーション混合物は、０．３ｍｌの最終体積において、０．４５ｍｇの肝臓ミクロソーム（これは０．０４５ｍｇのＢｒｉｊ５８（または０．０２２５ｍｇのアラメチシン）と１５分間プレインキュベーションされる）、２０ｍＭのＭｇＣｌ２、５ｍＭのＵＤＰＧＡおよび０．０５ＭのＴｒｉｓ緩衝液（ｐＨ７．０）を含有した。速度論的研究は、０．２μＭから２００μＭのスタチンをヒトまたは動物から得られる肝臓ミクロソーム調節物において使用して行われた。別途示されない限り、反応は、３７℃で、３分のプレインキュベーションの後にスタチンを添加することによって開始され、反応液は４５分間から６０分間インキュベーションされた。コントロール実験には、ミクロソームまたはＵＤＰＧＡのいずれかを除いたインキュベーション混合物が含まれた。反応は、０．８ｍｌのアセトニトリル（ＡＣＮ）の添加によって、適当な時間間隔で停止させた。ＡＣＮ抽出液を蒸発乾固し、ＵＶ検出および／またはＭＳ検出を用いた高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）法による分析のために再構成した。
【００７１】
グルクロニド化を受けるスタチンの能力を、スタチングルクロニドおよびスタチンラクトンの形成によって測定し、固有クリアランス（Ｃｌｉｎｔ）に換算して表した。ＣＬｉｎｔは、Ｖｍａｘを見かけのＫｍで除することによって見積もられた。Ｋｍ値およびＶｍａｘ値は、下記のミカエリス−メンテン式に基づく非線形回帰プログラムを使用して見積もられた。
【００７２】
Ｖ＝Ｖｍａｘ  ｘ  Ｃ／（Ｋｍ＋Ｃ）
式中、Ｖ＝スタチングルクロニド＋ラクトンの形成速度、Ｃ＝基質濃度。
【実施例２】
【００７３】
本明細書中で使用される用語「ＵＧＴ特異的なグルクロニド化アッセイ」は、特異的なヒト組換えＵＧＴイソ型（イソ酵素）を用いて行われるような下記のアッセイを示す。
【００７４】
スタチンのグルクロニド化に関わるＵＧＴイソ型を調べるために、様々なヒト組換えＵＧＴイソ型とのインキュベーションを、混合物が０．３ｍｇのＵＧＴを含有し、６０分間までインキュベーションされたことを除いて、実施例１においてヒト肝臓ミクロソームについて本明細書中に記載されるのと同じ条件を使用して行った。ベクターを含有するが、ｃＤＮＡ挿入体を有しない同じ細胞株から単離されたミクロソームを使用するコントロールのインキュベーションもまた含められた。
【実施例３】
【００７５】
グルクロニド化の様々な阻害剤による阻害に対するスタチンの感受性を評価するための研究
本明細書中で使用される用語「グルクロニド化阻害アッセイ」は、ヒト肝臓ミクロソームを用いて行われたとき、下記のアッセイを示す。
【００７６】
典型的なインキュベーション混合物は、０．３ｍｌの最終体積において、０．４５ｍｇのヒト肝臓ミクロソームまたは動物肝臓ミクロソーム（これは０．０４５ｍｇのＢｒｉｊ５８（または０．０２２５ｍｇのアラメチシン）と１５分間プレインキュベーションされた）、２０ｍＭのＭｇＣｌ２、５ｍＭのＵＤＰＧＡおよび０．０５ＭのＴｒｉｓ緩衝液（ｐＨ７．０）を含有した。阻害剤（これは５０％アセトニトリル／水において様々な濃度で調製され、指定された最終濃度のために５μｌが使用された）または５０％アセトニトリル／水（５μｌ、コントロール）を、基質（水中５０％アセトニトリル中に調製され、１０μＭから２０μＭの最終濃度のために、（または、各スタチンについてそれぞれのＫｍ値よりも低いか、もしくはＫｍ値に匹敵する濃度で）５μｌが使用される開環酸スタチン）と同時にインキュベーションした。インキュベーションは３７℃で行われ、０．８ｍｌのアセトニトリルの添加によって４５分後〜６０分後に終了した。アセトニトリル抽出液を蒸発乾固し、ＵＶ検出および／またはＭＳ検出を用いた高速液体クロマトグラフィー法による分析のために再構成した。
【００７７】
スタチンの代謝に対する阻害剤の作用を、同じ日に阻害剤の非存在下（コントロール）で得られた対応する値に対する、阻害剤の存在下で形成された代謝産物（スタチンのグルクロニド体およびラクトン体）の割合（％）として表した。スタチンの代謝において５０％の低下をもたらす阻害剤の濃度（ＩＣ５０）を、下記の関係に基づいて非線形回帰分析を使用して求めた。
【００７８】
Ｅ＝Ｅｍａｘ  ｘ  ［１−（Ｃ／Ｃ＋ＩＣ５０）］
【実施例４】
【００７９】
ヒトで観測されるように、ゲムフィブロジルは、ＳＶが投薬されたイヌにおいて、ＳＶではなく、ＳＶＡのＡＵＣおよびＣｍａｘを増大させた。従って、イヌが、ＳＶ−ゲムフィブロジルのＰＫ相互作用に関する研究のための適当な動物モデルであることが決定された。表１を参照のこと。
【００８０】
【表１】
2005512516.tif 000005
【実施例５】
【００８１】
イヌにおいて、ゲムフィブロジルは、以下を生じさせた。
【００８２】
・エクスビボでのシンバスタチン加水分解に対する最小限の作用（表１参照）。
【００８３】
・ＳＶＡの酸化とは対照的に、インビボにおけるＳＶＡのグルクロニド化の際だった阻害（表２参照）。
【００８４】
・インビボにおけるＳＶＡのクリアランスおよびＳＶＡ−グルクロニドの胆汁排出の著しい減少（表３参照）。
【００８５】
結論：イヌでは、ＳＶ投与後におけるＳＶＡのＡＵＣのゲムフィブロジル媒介による上昇は、少なくとも部分的には、ＳＶＡのグルクロニド化に対するゲムフィブロジルの阻害活性のためである。
【実施例６】
【００８６】
ヒトにおいて、
・ＳＶＡのグルクロニド化がインビトロおよびインンビボで観測されたが、イヌでの場合よりも小さい程度であった（表４参照）。
【００８７】
・インビトロでは、ゲムフィブロジルは、イヌでの場合と類似して、ＣＹＰ３Ａにより媒介される酸化経路よりも著しい、ＳＶＡのグルクロニド化の阻害を生じさせた（表５参照）。
【００８８】
・ゲムフィブロジルおよびＳＶＡのグルクロニド化は少なくとも２つの共通するヒトＵＧＴイソ酵素（ＵＧＴ１Ａ１およびＵＧＴ１Ａ３、表６参照）によって触媒される（競合的阻害がインビトロで示された。）。ＳＶＡのグルクロニド化はまた、ＵＧＴ１Ａ１０によって触媒される。
【００８９】
結論：ヒトでは、ＳＶ投与後におけるＳＶＡのＡＵＣのゲムフィブロジル媒介による上昇は、少なくとも部分的には、ＳＶＡのグルクロニド化に対するゲムフィブロジルの阻害活性のためである。
【実施例７】
【００９０】
スタチンのインビトロでのグルクロニド化
ヒト肝臓ミクロソームにおいて、
・セリバスタチン（ＣＶＡ）およびアトルバスタチン（ＡＶＡ）はアシルグルクロニドコンジュゲートを形成した（表２参照）。
【００９１】
・代謝全体に対するグルクロニド化経路の相対的な寄与は、ＡＶＡまたはＳＶＡに対するよりもＣＶＡに対する方がかなり大きかった（表２参照）。
【００９２】
・ＣＶＡのグルクロニド化は、ゲムフィブロジルによる阻害に対し、ＳＶＡまたはＡＶＡのグルクロニド化の場合よりもより感受性であった（表７参照）。
【００９３】
・これらのスタチンのグルクロニド化は少なくとも２つの共通するヒトＵＧＴイソ酵素（ＵＧＴ１Ａ１およびＵＧＴ１Ａ３）によって触媒される。
【００９４】
【表２】
2005512516.tif 000006
【実施例８】
【００９５】
ゲムフィブロジル対フェノフィブラート
・イヌ肝臓ミクロソームでは、ゲムフィブロジルは、ＳＶＡグルクロニド化の阻害剤として、フェノフィブラートよりも強力であった（表３参照）。
【００９６】
・インビトロでのデータと一致して、ＳＶを経口投与した後のイヌにおけるＳＶＡのＰＫに対するゲムフィブロジルの作用は、フェノフィブラートの作用よりも大きく、異なる機構によって生じているようであった（表３参照）。
【００９７】
【表３】
2005512516.tif 000007
【実施例９】
【００９８】
ゲムフィブロジル対フェノフィブラート：インビトロ研究
・ヒト肝臓ミクロソームでは、ゲムフィブロジルは、スタチングルクロニド化の阻害剤として、フェノフィブラートよりも強力である（表４参照）。
【００９９】
・ヒトでは、ゲムフィブロジルに対する暴露は、フェノフィブラート／フェノフィブリン酸に対する暴露よりも、それらのそれぞれの治療的用量で大きい。
【０１００】
・ゲムフィブロジルに関する状況とは異なり、フェノフィブラートのグルクロニド化は、主に、ＵＧＴ１Ａ９と、ＵＧＴ２Ｂサブファミリーのイソ型とによって触媒されるようであった（表８参照）。
【０１０１】
【表４】
2005512516.tif 000008
【実施例１０】
【０１０２】
肝臓ミクロソームにおけるＵＧＴイソ型による、シンバスタチン（ＳＶＡ）、アトルバスタチン（ＡＶＡ）、セリバスタチン（ＣＶＡ）およびロスバスタチン（ＲＶＡ）に対するグルクロニド形成速度を表５に示す。
【０１０３】
【表５】
2005512516.tif 000009
インキュベーションは、２５０μＭの基質濃度で、ヒト肝臓ミクロソーム（ｎ＝１０からプールされたもの）または各ＵＧＴについて三連で行われた。値は平均値±ＳＤである（ｎ＝３から５）。
【実施例１１】
【０１０４】
インビトロ酸化代謝研究
本明細書中で使用される用語「酸化阻害アッセイ」は、ヒト肝臓ミクロソームタンパク質を用いて行われるとき、下記のアッセイを示す。
【０１０５】
酸化代謝研究の場合、典型的なインキュベーション混合物は、０．５ｍＬの最終体積において、０．１ｍｇから０．２５ｍｇの肝臓ミクロソームタンパク質、０．１Ｍのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．４）、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、および１ｍＭのＮＡＤＰＨを含有した。ゲムフィブロジル（ＧＦＺ）（これは水中５０％アセトニトリル中において様々な濃度で調製される）または水中５０％アセトニトリル（コントロール）を基質（１０μＭから２０μＭの最終濃度のために水中５０％アセトニトリルにおいて調製されたスタチン、この濃度は各スタチンについてそれぞれのＫｍ値よりも低いか、もしくはＫｍ値に匹敵した）と同時にインキュベーションした。インキュベーションは３７℃で行われ、ＡＣＮ（アセトニトリル）の添加により（ＮＡＤＰＨとともに）１０分後〜２０分後に終了した。ＡＣＮ抽出液を蒸発乾固し、ＵＶ検出を用いたＨＰＬＣによる分析のために再構成した。
【０１０６】
スタチンおよび酸化代謝産物に対する分析手順
ＳＶＡ、ＣＶＡおよびＡＶＡ、ならびにインビトロでのインキュベーションから生じるそれらの酸化代謝産物のレベルの定量を、Ｐｒｕｅｋｓａｒｉｔａｎｏｎｔ，Ｔ．、Ｍａ，Ｂ．、Ｔａｎｇ，Ｍｅｎｇ，Ｙ．、Ａｓｓａｎｇ，Ｃ．、Ｌｕ，Ｐ．、Ｒｅｉｄｅｒ，Ｐ．Ｊ．、Ｌｉｎ，Ｊ．Ｈ．およびＢａｉｌｌｉｅ，Ｔ．Ａ．、ミベフラジルとＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤との代謝相互作用：ヒト肝臓調製物を用いたインビトロ研究、Ｂｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、４７：２９１〜２９８（１９９９）（これは参照して本明細書中に組み込まれる）において以前に記載されたようにＨＰＬＣ法を使用して行った。簡単に記載すると、５℃で設定されたオートサンプラーに保たれたサンプルを、１０ｍＭまたは２５ｍＭの酢酸アンモニウム（ｐＨ４．５）におけるアセトニトリルの直線グラジエントを用いて、Ｃ１８ガードカラムを取り付けたＢｅｔａｓｉｌ  Ｃ１８（２５０ｘ４．６ｍｍ、５μｍ）カラムまたはＺｏｒｂａｘ  Ｃ１８（Ｗａｔｅｒｓ、１５０ｘ４．６ｍｍ、５μｍ）カラムのいずれかでクロマトグラフィー処理した。溶出液を、λ＝２４０ｎｍ（ＳＶＡおよびＡＶＡ）もしくはλ＝２７２ｎｍ（ＣＶＡ）で設定されたＵＶ吸収によって、かつ／またはオンラインＩＮ／ＵＳ  β−ＲＡＭ放射能検出器（ＩＮ／ＵＳ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｔａｍｐａ、ＦＬ）によってモニターした。スタチンの酸化代謝産物に対する確実な標準品が入手できないために、インビトロでのインキュベーション混合物におけるこれらの代謝産物の定量は、元の薬物とその対応する代謝産物との間において抽出回収率および吸光係数が同一であることを仮定し、それらのそれぞれのスタチンに対する標準曲線を使用して行った。
【０１０７】
スタチン代謝産物の特定は、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ技術（ＨＰ−１０５０グラジエントシステム、Ｈｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ、Ｓａｎ  Ｆｅｒｎａｎｄｏ、ＣＡ；Ｆｉｎｎｉｇａｎ  ＭＡＴ  ＬＣＱイオン捕捉質量分析計、Ｆｉｎｎｉｇａｎ−ＭＡＴ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ）を使用して達成された。質量スペクトル分析を、エレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）を負イオンモード（スタチンのグルクロニドコンジュゲート体および酸化代謝産物について）または正イオンモード（スタチンのラクトン体について）で使用して行った。ＥＳＩ電圧は４ｋＶで設定され、加熱されたキャピラリー温度は２３０℃に保たれた。
【実施例１２】
【０１０８】
ＡＶＡおよびＣＶＡの場合、それぞれのスタチンの２つの主要な代謝産物が、ＮＡＤＰＨが補充された肝臓ミクロソームにおいて観測された。以前の報告（Ｂｏｂｅｒｇら、Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂ  Ｄｉｓｐｏｓ．、１９９７  Ｍａｒ、２５（３）：３２１〜３１；Ｐｒｕｅｋｓａｒｉｔａｎｏｎｔら、Ｂｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、４７：２９１〜２９８（１９９９）、同上）に基づき、これらの代謝産物は、ＡＶＡの２つのヒドロキシル化生成物、ならびにＣＶＡのヒドロキシル化代謝産物（Ｍ１）およびＯ−脱メチル化代謝産物（Ｍ２）であると考えられる。ＳＶＡに関して記されたように、ＡＶＡの２つの酸化代謝産物の形成は、このスタチンのグルクロニドコンジュゲートより、ＧＦＺによる阻害に対し、より低い感受性を有していた（図９Ａ）。すなわちＩＣ５０値は、酸化反応およびグルクロニド化反応について、それぞれ、＞７５０μＭおよび３１４μＭであった（表６）。対照的に、ＣＶＡ酸化代謝産物およびＣＶＡのグルクロニド代謝産物の両方の形成はＧＦＺによって著しく阻害された（図９Ｂ）。実際、酸化代謝産物Ｍ１に対するＧＦＺの阻害能（ＩＣ５０＝８７μＭ）は、ＣＶＡグルクロニド形成の生成に対する阻害能（ＩＣ５０＝８２μＭ）と匹敵した（表６）。ＣＶＡのグルクロニド化および酸化（Ｍ１およびＭ２の両方）に対するこれらのＩＣ５０値は、ＳＶＡおよびＡＶＡの対応する代謝経路に対する値よりもはるかに低かった（表６）。このインビトロインキュベーション条件のもと、ＡＶＡの両方の酸化代謝産物は、強力なＣＹＰ３Ａ阻害剤であるケトコナゾール（１μＭ）によって著しく阻害された（＞９０％）。対照的に、ケトコナゾールは、１μＭで、ＣＶＡの酸化代謝産物の形成を約５０％以下で阻害した（表６）。
【０１０９】
ヒト肝臓ミクロソームにおける、シンバスタチン（ＳＶＡ）、アトルバスタチン（ＡＶＡ）、セリバスタチン（ＣＶＡ）およびロスバスタチン（ＲＶＡ）のグルクロニド化および酸化に対するゲムフィブロジル（ＧＦＺ）（ＩＣ５０、μＭ）およびケトコナゾール（１μＭの濃度での阻害率）の阻害作用を表６に示す。
【０１１０】
【表６】
2005512516.tif 000010
インキュベーションは阻害剤の各濃度について三連で行われ、ＮＡＤＰＨ（酸化）またはＵＤＰＧＡ（グルクロニド化）の存在下でＧＦＺまたはケトコナゾール（１μＭ）をスタチン（１０μＭから２０μＭ）と同時にインキュベーションすることを伴った。
【０１１１】
本発明は、そのいくつかの特定の実施形態を参照して記載および例示されているが、当業者は、様々な変化および改変および置き換えが、本発明の精神および範囲から逸脱することなく本発明において行われ得ることを理解する。例えば、本明細書中上記に示されるような特定の投薬量とは異なる効果的な投薬量が、上記に示されるような本発明において使用される活性な薬剤に対する適応のいずれかのために処置されている哺乳動物の応答性における変動の結果として適用可能である場合がある。同様に、観測された特異的な薬理学的応答は、選択された特定の化合物、または薬学的キャリアが存在するかどうか、ならびに用いられる配合のタイプに従って、そしてそれらに依存して変化することがあり、従って、結果におけるそのような予想される変動または差異は本発明の目的および実施に従って考えられる。従って、本発明は下記の請求項の範囲によって規定されること、およびそのような請求項は、不当にならないほど広く解釈されることが意図される。
【図面の簡単な説明】
【０１１２】
【図１】イヌにおけるゲムフィブロジルによるシンバスタチン（ＳＶ）のエクスビボ加水分解を経時的に示す。
【図２】イヌ肝臓ミクロソームにおけるゲムフィブロジルによるシンバスタチン酸のグルクロニド化および酸化の阻害を示す。
【図３】イヌおけるインビボでのシンバスタチン酸−グルクロニドおよびシンバスタチンの胆汁排出を示す。
【図４】ヒト肝臓ミクロソームにおけるシンバスタチン酸（ＳＶＡ）のグルクロニド化を示す。
【図５】ヒト肝臓ミクロソームにおけるゲムフィブロジルによるＳＶＡ代謝（グルクロニド化および酸化）のインビトロ阻害割合を示す。
【図６】様々なＵＧＴイソ酵素によるゲムフィブロジルおよびＳＶＡのグルクロニド形成速度を示す。
【図７】ヒト肝臓ミクロソームにおけるＳＶＡ−グルクロニドおよびアトルバスタチン−グルクロニドおよびセリバスタチン−グルクロニドのインビトロ形成に対するゲムフィブロジルの阻害作用を示す。
【図８】様々なＵＧＴイソ酵素によるゲムフィブロジルおよびフェノフィブリン酸のグルクロニド形成速度を示す。
【図９Ａ】ヒト肝臓ミクロソームにおけるアトルバスタチン（ＡＶＡ）のグルクロニド化および酸化に対するゲムフィブロジル（ＧＦＺ）の影響（図９Ａ）ならびにセリバスタチン（ＣＶＡ）のグルクロニド化および酸化に対するゲムフィブロジル（ＧＦＺ）の影響（図９Ｂ）を示す。
【図９Ｂ】ヒト肝臓ミクロソームにおけるアトルバスタチン（ＡＶＡ）のグルクロニド化および酸化に対するゲムフィブロジル（ＧＦＺ）の影響（図９Ａ）ならびにセリバスタチン（ＣＶＡ）のグルクロニド化および酸化に対するゲムフィブロジル（ＧＦＺ）の影響（図９Ｂ）を示す。
【図１０】（Ａ）シンバスタチン、（Ｂ）セリバスタチン、（Ｃ）アトルバスタチンおよび（Ｄ）ロスバスタチンのヒドロキシ開環酸形態および対応するアシルグルクロニドコンジュゲートの化学構造を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０】
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【国際調査報告】
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