(57)【要約】構造式Iの化合物は、細菌増殖の治療に有用である。本化合物は、ヒトで細菌感染症の治療に、およびバイオフィルム形成の調節に使用することができる。1個または複数のこのような化合物を含む薬剤組成物はヒトにおける細菌感染症の治療に有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
細菌を構造式Iの化合物に曝露することを含む細菌増殖の制御方法。
【化１】
2005504777.tif 000025
[式中、EはB、P、およびSからなる群から選択され、T1およびT2は、それぞれ独立にO、NR、およびCH2からなる群から選択され、ここでRはH、C1〜C8アルキル、またはC1〜C8オキソアルキルであり、Lは、エチレン、プロピレン、および四員から六員の脂環式環および芳香環からなる群から選択され、ただし構造式IはAI-2-ホウ酸塩を含まない。]
【請求項２】
EがBである、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
T1およびT2がOである、請求項2に記載の方法。
【請求項４】
前記化合物が分子量約750Da未満である、請求項1に記載の方法。
【請求項５】
前記分子量が約500Da未満である、請求項4に記載の方法。
【請求項６】
EがPである、請求項1に記載の方法。
【請求項７】
T1およびT2がOである、請求項6に記載の方法。
【請求項８】
ヒトに治療有効量の化合物を投与することを含む、請求項1に記載の方法。
【請求項９】
細菌をバイオフィルム形成に影響を与える量の化合物に曝露する、請求項1に記載の方法。
【請求項１０】
構造式Iを有する化合物を含む薬剤組成物。
【化２】
2005504777.tif 000026
[式中、EはB、P、およびSからなる群から選択され、T1およびT2は、それぞれ独立にO、NR、およびCH2からなる群から選択され、ここでRはH、C1〜C8アルキル、またはC1〜C8オキソアルキルであり、Lは、エチレン、プロピレン、および四員から六員の脂環式環および芳香環からなる群から選択され、ただし構造式IはAI-2-ホウ酸塩を含まない。]
【請求項１１】
Lが、エチレン、プロピレン、シクロペンチル、シクロヘキシル、ピロリジン、テトラヒドロフラン、ピペリジン、ピラン、ジオキサン、モルホリン、ピロール、フラン、ピリジン、ピリミジン、ピラジン、イミダゾール、チアゾール、オキサゾール、プリン、およびインダゾールからなる群から選択される、請求項10に記載の薬剤組成物。
【請求項１２】
Lが、エチレン、プロピレン、シクロペンチル、シクロヘキシル、ピロリジン、テトラヒドロフラン、ピペリジン、ピラン、ジオキサン、およびモルホリンからなる群から選択される、請求項11に記載の薬剤組成物。
【請求項１３】
Lが、ケト官能基、ヒドロキシ官能基、およびカルボキサミド官能基を有するテトラヒドロフランであり、T1およびT2が酸素であり、かつEがBまたはPである、請求項12に記載の薬剤組成物。
【請求項１４】
前記化合物が以下の構造式を有する請求項13に記載の薬剤組成物。
【化３】
2005504777.tif 000027
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細菌増殖を制御する組成物および方法に関し、より詳しくは抗菌剤、およびその使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
細菌感染症には、依然として公衆衛生上の関心がもたれ、実際、既存の薬物への病原性細菌の耐性の増大のためにその関心は高まっている。現在使用されている薬物は、比較的少数の化学的クラスに属し、比較的少数の機構の1つによって働く。したがって、一薬物に対する耐性の発生は、他の薬物の効力に悪影響を与える恐れがある。さらに、細菌が遺伝情報を変えることもあるので、耐性が1つの種から別の種へ伝播することもあり得る。
【０００３】
したがって、細菌が耐性を持つ可能性が低い、新規な作用機構に基づく新規なクラスの抗菌剤を得ることが望ましい。
【０００４】
さらに、細菌は、その性質上、一般に、バイオフィルムと称する増殖方式で固体表面に付着して増殖する。バイオフィルム内の細菌は、環境ストレス(抗生剤処置など)に対する耐性が増大している点で、液体培養中で増殖した細菌(プランクトン細胞)と生理学的に異なる。臨床環境では、病原性細菌のバイオフィルムは、従来の抗生物質による治療では治癒し難い持続的な慢性感染症を招く。米国立疾病防疫センター(The U.S.Centers for Disease Control)は、細菌感染症の60%は、このようなバイオフィルムが関与すると推定する。産業上、バイオフィルムは、送水管を汚染し詰まらせ、表面にこびりつき、腐食および腐朽の一因となる。しかし、必ずしもバイオフィルム形成の結果がすべて有害という訳ではなく、たとえば、生物生産法では、バイオフィルムは、基質がバイオリアクタを通過する際、安定した細胞集団の維持に役立つ。
【非特許文献１】
X.Chen、S.Schauder、N.Potier、A.Van Dorsselaer、I.Pelczer、B.Bassler、およびF.Hughson、「Structural Identification of a Bacterial Quorum-Sensing Signal Containing Boron」Nature、第415巻、545〜549頁(2002年)
【非特許文献２】
Organic Syntheses、CV2,106
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
したがって、新規なクラスの抗菌剤を得るだけでなく、細菌バイオフィルムの形成および維持を促進、かつ/または阻害する方法を得ることが望ましい。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
好ましい実施形態では、構造式I
【０００７】
【化１】
2005504777.tif 000002
【０００８】
の化合物に細菌を曝露することを含む、細菌増殖の制御方法が提供される。
【０００９】
式中、EはB、P、およびSからなる群から選択され、T1およびT2は、それぞれ独立にO、N
R、およびCH2からなる群から選択され、ここで、RはH、C1〜C8アルキル、またはC1〜C8オキソアルキルであり、Lは、エチレン、プロピレン、および四員〜六員の脂環式環および芳香環からなる群から選択される。ただし、構造式IはAI-2-ホウ酸塩を含まない。Eは、B(ホウ素)またはP(リン)であることが好ましい。T1およびT2はO(酸素)であることが好ましい。化合物は、分子量約750Da未満であることが好ましく、約500Da未満であることがより好ましい。好ましい実施形態では、細菌に感染したヒトに治療有効量の化合物を投与することによって細菌増殖を制御する。
【００１０】
別の好ましい実施形態では、構造式I
【００１１】
【化２】
2005504777.tif 000003
【００１２】
を有する化合物を含む薬剤組成物が提供される。
【００１３】
式中、EはB、P、およびSからなる群から選択され、T1およびT2は、それぞれ独立にO、NR、およびCH2からなる群から選択され、ここでRはH、C1〜C8アルキル、またはC1〜C8オキソアルキルであり、Lは、エチレン、プロピレン、および四員〜六員の脂環式環および芳香環からなる群から選択される。ただし、構造式IはAI-2-ホウ酸塩を含まない。Lは、ケト基、ヒドロキシ基、およびカルボキサミド基の官能基を有するテトラヒドロフラン、T1およびT2は酸素、EはBまたはPであることが好ましい。化合物は、以下の構造式
【００１４】
【化３】
2005504777.tif 000004
【００１５】
を有することがより好ましい。
【００１６】
これらや他の実施形態を以下にさらに詳しく記述する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
好ましい実施形態では、構造式I
【００１８】
【化４】
2005504777.tif 000005
【００１９】
を有する化合物を含む薬剤組成物が提供される。
【００２０】
式中、EはB、P、およびSからなる群から選択され、T1およびT2は、それぞれ独立にO、NR、およびCH2からなる群から選択され、ここでRはH、C1〜C8アルキル、またはC1〜C8オキソアルキルであり、Lは、エチレン、プロピレン、および四員〜六員の脂環式環および芳香環からなる群から選択される。ただし、構造式IはAI-2-ホウ酸塩を含まない。
【００２１】
好ましいL基には、エチレン、プロピレン、シクロペンチル、シクロヘキシル、ピロリジン、テトラヒドロフラン、ピペリジン、ピラン、ジオキサン、モルホリン、ピロール、フラン、ピリジン、ピリミジン、ピラジン、イミダゾール、チアゾール、オキサゾール、プリン、およびインダゾールが含まれる。特に好ましいL基には、エチレン、プロピレン、シクロペンチル、シクロヘキシル、ピロリジン、テトラヒドロフラン、ピペリジン、ピラン、ジオキサン、およびモルホリンが含まれる。最も好ましいL基には、シクロペンチル、シクロ-ヘキシル、ピロリジン、テトラヒドロフラン、ピペリジン、ピラン、ジオキサン、およびモルホリンが含まれる。特に好ましい化合物は、構造式II
【００２２】
【化５】
2005504777.tif 000006
【００２３】
を有し、式中、EはBまたはPである。
【００２４】
好ましい化合物の他の具体例には、[3.3.0]ビシクロオクタン由来の化合物として以下に示す環状の、ホウ酸、硫酸、またはリン酸のエステルおよびアミドが含まれる。
【００２５】
【化６】
2005504777.tif 000007
【００２６】
上記構造式中の非置換五員環には、1個または複数のヘテロ原子が組み込まれていてもよく、OおよびNなどの水素結合ヘテロ原子が特に好ましい。上記の構造式中の非置換五員環は、ヘテロ原子を含む1個または複数の置換基をもつこともでき、同様に、OおよびNなどの水素結合性ヘテロ原子が特に好ましい。
【００２７】
その他の好ましい実施形態には、[3.4.0]ビシクロノナン由来の化合物が含まれる。具体例には、以下のものが含まれる。
【００２８】
【化７】
2005504777.tif 000008
【００２９】
橋かけ(bridgehead)の位置に水素結合置換基を有する化合物も特に好ましく、それはluxP-AI-2共結晶(co-crystal)(以下で論じる)に対する構造式から明らかなように、この位置への強力なH結合のためである。このような化合物の例には、以下のものが含まれ、Rが、OHまたはNH2であることが特に好ましい。
【００３０】
【化８】
2005504777.tif 000009
【００３１】
様々な特定の化合物の製造方法を以下の実施例で説明する。本明細書に記載の他の化合物の製造方法は、当業者には周知の方法で、以下の実施例に記述する合成法を修正することにより行うことができる。
【００３２】
特定の適用例向けの特定の化合物は、当業者には周知のコンピュータ援用薬物設計および/またはコンビナトリアルケミストリー法を用いて選択することが好ましい。コンピュータ援用薬物設計の実施に適したコンピュータ、およびソフトウェアは市販されている。好ましいコンピュータパッケージには、Tripos,Inc.社製Sybyl version 6.8、およびSchrodinger Software社製MacroModel version 8.0が含まれる。ヘテロ原子は、LuxP蛋白質上の水素結合基と相互作用するように、空間的に配置することが好ましい。
【００３３】
本発明の一適用例は、固体表面に付着して増殖する細菌の集合体であるバイオフィルムの発生または維持に影響を与えることにある。バイオフィルム内の細菌は、しばしば、自由に生存している細菌に比べ、抗生物質処置に対する耐性が高く、したがって、一般に、処理し難い持続的な慢性感染症をもたらす。米国立疾病防疫センター(The U.S.Centers for Disease Control)は、細菌感染症の60%は、このようなバイオフィルムが関与すると推測する。産業上、バイオフィルムは、送水管を汚染し詰まらせ、表面にこびりつき、腐食および腐朽の一因となる。しかし、必ずしもバイオフィルム形成の結果がすべて有害という訳ではなく、たとえば、生物生産法では、バイオフィルムは、基質がバイオリアクタを通過する際に安定した細胞集団の維持に役立つ。
【００３４】
生存許容個体数感知能力(Quorum-sensing)は、バイオフィルム形成に影響を及ぼす。したがって生存許容個体数感知能力を促進しまたは妨害する方法も、バイオフィルムの成長を含むバイオフィルム形成を制御する方法を提供する。たとえば、構造式Iの化合物を使用して、バイオフィルムの形成を刺激しまたは妨害することによって、バイオフィルムに影響を与えることができる。バイオフィルム形成を促進しまたは妨害する方法は、細菌を、バイオフィルム形成に影響を与える量の化合物に曝露することによって実施することが好ましい。所与の適用のための特定の量は、一般に当業者には周知の方法で常法の実験法によって決定することができる。
【００３５】
本明細書の特定の化合物についての言及は、化合物自体、およびそのいずれの塩をもさし、逆も同様であることを理解されたい。酸性基または塩基性基を有する化合物は、薬剤として許容される陽イオンまたは陰イオンを保持する、薬剤として許容される塩を形成することができる。薬剤として許容される陽イオンの例には、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、アルカリ金属(たとえば、ナトリウム、リチウム、カリウム)およびアルカリ土類金属(たとえば、カルシウム、バリウム、マグネシウム)、アルミニウム、亜鉛、およびビスマスの陽イオン、アルギニン、リジンなどの塩基性アミノ酸のプロトン化形、およびエタノールアミン、エチレンジアミン、トリエタノールアミン(triethanoleamine)、ベンジルフェネチルアミン、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、ピペリジン、モルホリン、トリス-(2-ヒドロキシエチル)アミン、ピペラジンなどの有機アミンが含まれる。
【００３６】
薬剤として許容される陰イオンの例には、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素(hydriodic)酸、硫酸、リン酸などの無機酸、p-トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、p-ブロモフェニルスルホン酸、炭酸、コハク酸、クエン酸、安息香酸、酢酸などの有機酸、および関連の無機酸および有機酸に由来する陰イオンが含まれる。このような薬剤として許容される塩には、硫酸塩、ピロ硫酸塩、重硫酸塩、亜硫酸塩、重亜硫酸塩、リン酸塩、アンモニウム塩、リン酸一水素塩、リン酸二水素塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、酢酸塩、プロピオン酸塩、デカン酸塩、カプリル酸塩、アクリル酸塩、ギ酸塩、イソ酪酸塩、カプリン酸塩、ヘプタン酸塩、プロピオール酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、馬尿酸塩、ブチン-1,4-二酸水素塩(dioate)、ヘキサン-l,6-ジオスペート(diospate)、クロロ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、フタル酸塩、スルホン酸塩、キシレンスルホン酸塩、フェニル酢酸塩、フェニルプロピオン酸塩、フェニル酪酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、α-ヒドロキシ酪酸塩、グリコール酸、マレイン酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、プロパンスルホン酸、ナフタレン-1-スルホン酸塩、ナフタレン-2-スルホン酸塩、マンデル酸塩が含まれる。上記の塩は、水和物を形成し、または実質上無水の形で存在できることは理解されよう。
【００３７】
本明細書に記載の化合物は、対象に、好ましくはヒトに直接に投与することができ、かつ/または1個または複数の化合物を含む薬剤組成物の形で投与することができる。好ましい化合物の投与の方法は経口である。経口組成物には、不活性希釈剤、および/または食用担体を含めることが好ましい。化合物は、ゼラチンカプセルに封入し、または打錠することができる。経口治療投与の目的で、化合物を賦形剤と混合し、錠剤、トローチ剤、またはカプセル剤の形で使用することができる。薬剤として適合する結合剤、および/またはアジュバント物質を組成物の一部として含んでもよい。その錠剤、丸剤、カプセル剤、トローチ剤などには、以下の成分、または同様の性質の化合物のどんなものを含んでもよい。微結晶セルロース、トラガカントゴム、ゼラチンなどの結合剤;デンプンやラクトースなどの賦形剤、アルギン酸、プリモゲル(Primogel)、コーンスターチなどの崩壊剤:ステアリン酸マグネシウムやステロート(Sterotes)などの滑剤;コロイド二酸化珪素などの流動促進剤(glidant);ショ糖やサッカリンなどの甘味剤;ならびに/あるいはペパーミント、サリチル酸メチル、オレンジ香料などの香味剤。単位剤形がカプセル剤の場合、上記の種類の物質の他に脂肪油などの液体担体を含んでもよい。さらに、単位剤形には、単位剤形の物理的形状を改変する様々な他の物質、たとえば、糖、セラック、または他の腸溶性剤のコーティングを含めてよい。化合物をエリキシル、懸濁液、シロップ、ウェーハ、チューインガムなどの成分として投与することもできる。シロップは、この化合物の他に、甘味剤としてショ糖、保存剤、染料や着色剤、および香味剤を含んでもよい。
【００３８】
本化合物に所望の作用を阻害しない他の活性物質、または抗生物質など、所望の作用を補足する物質を混合することもできる。この目的に好ましい抗生物質には、トブラマイシンなどのアミノグリコシド系、バンコマイシンなどのグリコペプチド系、アモキシシリンなどのβラクタム系、シプロフロキシシン(ciprofloxicin)などのキノロン系、アジスロマイシンなどのマクロライド系、テトラサイクリン系、スルホンアミド系、トリメトプリム-スルファメトキサゾール、またはクロラムフェニコール系が含まれる。非経口、皮内、皮下、または局所使用に利用される溶液または懸濁液は以下の成分を含んでもよい。注射用の水などの滅菌希釈液、生理食塩水、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒;ベンジルアルコールやメチルパラベンなどの抗菌剤;エチレンジアミン四酢酸(EDTA)などのキレート剤;酢酸塩、クエン酸塩、リン酸塩などの緩衝液、および塩化ナトリウムやブドウ糖などの浸透圧調整剤。非経口(parental)調製物は、ガラス製またはプラスチック製のアンプル、使い捨て注射器、または複数回投与バイアルに封入することができる。静脈内投与の場合、好ましい担体は、生理食塩水、またはリン酸緩衝食塩水(PBS)である。
【００３９】
好ましい実施形態では、化合物は、インプラントやマイクロカプセル化送達システムを含めた徐放製剤など、化合物が身体から急速に除去されないように保護する担体と共に調製する。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、ポリ乳酸など、生分解性、生体適合性ポリマーを使用することもできる。このような製剤の調製方法は、当業者には周知である。
【００４０】
薬剤組成物は、細菌感染の治療に治療上有効な量で対象、好ましくはヒトに投与することが好ましい。治療有効量は、当業者なら臨床試験などの方法によって決定することができる。投与は、所望程度の目標細菌調節を実現するために必要なように個々の場合で調整できる。特に、放出される用量の持続および注入が意図される。薬剤組成物は、液形または固形で、たとえば、経口、非経口、静脈内、皮内、皮下、頬側、鼻内、吸入、経膣、経直腸、局所経路など、全身、部分、または局所送達用の適当などんな経路によっても投与することができる。本明細書に記載の化合物の投与方法は、特定の用量によっても、または徐放ビヒクルによってもよい。
【００４１】
薬剤組成物は、一度に投与することも、または異なる時間間隔で投与するために、いくつかの少用量に分けることもできる。さらに、任意の対象に対して、特定の投与レジメンは、個々の必要性、および化合物の投与を行うまたは監督する医師の専門的な判断によって経時的に調整すべきであり、本明細書に記載の濃度範囲は例示にすぎず、特許請求の範囲、または特許請求する方法の実施を制限しないものとすることは理解されよう。
【００４２】
一定の場合には、細菌感染の治療で使用する薬剤組成物の治療有効量は、通常、感染の重症度、および薬物が投与される経路によって異なる。用量、およびおそらく投与の頻度も、個々の患者の年齢、体重、および応答によって異なる。一般に、70kgの人に対する本発明の化合物の総1日量の範囲は、単一または分割用量で約1mg〜約2000mgである。好ましくは、70kgの人の1日量の範囲は、単一または分割用量で約5mg〜約1500mgである。より好ましくは、70kgの人の1日量の範囲は、単一または分割用量で約10mg〜約1000mgである。患者を管理する際には、70kgの人ではおよそ約1mg〜約200mgと低用量で治療を開始し、患者の全体応答に応じて約1000mg以上にまで増やす。さらに、幼児、子供、65歳以上の患者、および腎臓または肝臓機能に障害のある患者には、最初、低用量を施し、個々の応答および血中濃度に基づいて、それらの力価を測定(titrated)することが推奨される。当業者には明らかなように、場合によっては、これらの範囲外の用量を使用する必要が生じるかもしれない。さらに、臨床医、または治療医であれば、個々の患者の応答に合わせて治療をいつ、どのように中断し、調整し、または終止するか分かることに留意されたい。「治療量」および「治療有効量」の用語は、上記投与量および投与頻度スケジュールに包含される。
【００４３】
本発明は、どんな動作理論によっても拘束されない。以下の考察は、当業者の便宜のために提供され、特許請求の範囲を制限しない。
【００４４】
好ましい薬剤組成物は、細菌感染症の治療に特に有用である。細菌は、生存許容個体数感知能力(quorum-sensing)と称する現象によって、その個体群密度を感知する。その現象では、細菌は、低分子量化合物を合成し、周囲の培地へ分泌する。培地中のこれらのシグナル化合物濃度を検出することによって、細菌は、その個体群密度を感知し、それに応答して異なる遺伝子を発現する。
【００４５】
生存許容個体数感知能力は、最初に発見された、生物発光性海洋細菌での発光だけでなく、病原性細菌での外毒素および他の病原性因子の産生をも制御する。多くの場合、現代の薬物設計は、酵素、受容体、および周辺質結合蛋白質(periplasmic binding protein)などの標的細胞成分と相互に作用して、標的と、in vivoで標的が結合している自然に存在する化合物、生存許容個体数感知能力の場合にはシグナル化合物との間の相互作用を遮断し、あるいはその他の方法で改変する化合物の設計を利用している。その結果、多くの戦略では、たとえば、受容体上の結合部位に対してシグナル化合物と競合することにより、この相互作用を撹乱する薬物を設計する方法としてシグナル化合物、およびその受容体の構造を標的としている。
【００４６】
自己誘導物質(autoinducer)-2(AI-2)として知られる特に重要なシグナル化合物の同定を目指した最近の研究が、WO00/32152に記述されている。AI-2は、ビブリオハルベイ(Vibrio harveyi)において生存許容個体数感知能力に関与する、この細菌由来の周辺質結合蛋白質であるLuxP(配列番号1)に相互作用することにより、少なくとも部分的に生存許容個体数感知能力を制御すると考えられている。生物的に産生されるAI-2の存在下で、組換え大腸菌によって発現されたLuxPから生じたluxP-AI-2共結晶についての結晶学的研究によって以下の構造式(以後、「AI-2-ホウ酸塩」と称する)が得られた。この構造式では、AI-2(水和物ではケト基のジェム-ジオール形)は、別の化学種の介在によって少なくとも部分的にLuxPに結合している。
【００４７】
【化９】
2005504777.tif 000010
【００４８】
この介在種は、初め、炭酸塩であると考えられていたが、その後、ホウ酸部分であることが認められ、このホウ酸塩は、実験研究で使用されたホウケイ酸塩ガラスに由来する偶発のホウ酸塩から生じた可能性が高い。X.Chen、S.Schauder、N.Potier、A.Van Dorsselaer、I.Pelczer、B.Bassler、およびF.Hughson、「Structural Identification of a Bacterial Quorum-Sensing Signal Containing Boron」Nature、第415巻、545〜549頁(2002年)を参照のこと。
【００４９】
4,5-ジヒドロキシ-5-メチル-3(2H)-フラノンのホウ酸エステル(その水和形)とLuxP間の相互作用は、ホウ酸エステルの形成が、自己誘導物質-2の機能にとって生物学的に重要である可能性があることを示唆している。ホウ酸エステルの形成は、自己誘導物質-2の生物学的機能の一般的特徴の具体例、すなわち、ホウ酸塩などのオキソアニオンのキレート基である具体例であるが、リン酸塩や硫酸塩などの他のオキソアニオン類も含み得る。自己誘導物質-2は、その性質上、オキソアニオンを自己誘導物質-2受容体に提示するように機能することができ、オキソアニオンは、ホウ素の場合と同様に、環状エステルとして、または他の構造として自己誘導物質-2に結合する。
【００５０】
さらに、受容体にオキソアニオンを提示する方法としての4,5-ジヒドロキシ-5-メチル-3(2H)-フラノンの役割を認めると、少なくとも一部には、官能基の同様の空間的配置を組み込んだ、生存許容個体数感知能力阻害剤の活性を説明することができる。すなわち、たとえば、五員環中に1個または複数のヘテロ原子を有し、したがって、4,5-ジヒドロキシ-5-メチル-3(2H)-フラノンのホウ酸エステルで見られるのと同様の水素結合能力を有する、本明細書に記載した好ましい化合物は、自己誘導物質-2受容体の競合的阻害剤として、したがって細菌性病原体による病原性を制御するための治療薬として有用性がある。
【実施例】
【００５１】
実施例１
ホウ酸エステルの合成法
【００５２】
【化１０】
2005504777.tif 000011
【００５３】
ジオール(1mmol)と、トリメトキシホウ酸塩(1.5mmol)を含むメタノール(5ml)溶液との混合液を、出発物質の完全な消費がTLCで判明するまで加熱還流する。真空で溶媒除去すると、そのメチルエステルとして生成物が得られ、酸性化および加温後、その生成物から対応する酸を単離することができる。
【００５４】
実施例２
ホウ酸エステルの代替合成法
必要に応じて加熱しながら、ジオール(1mmol)を、任意選択で有機共溶媒を含む、4gのホウ砂を15mlの水に溶かした溶液に加える。環状ホウ酸エステルが自然に形成され、溶液の冷却および/または酸性化によってこれを沈殿させ、ろ過することによって生成物を単離することができる。ホウ酸エステルは、Organic Syntheses、CV2,106に従って、ジオールおよびホウ酸を含む混合液から水を留出することによっても調製することができる。
【００５５】
実施例３
リン酸エステルの合成法
【００５６】
【化１１】
2005504777.tif 000012
【００５７】
還流冷却器、液体密封メカニカルスターラー、滴下漏斗、および温度計を備えた2リットルの丸底フラスコに、1.5モルの無水ジオール、3.3モルのピリジン、および275mlの無水ベンゼンを入れる。フラスコを温度が5℃に下がるまで氷と塩の混合物に漬け、5℃の時にオキシ塩化リン(153g、91ml、1モル、b.p.106-107°)を効率よく攪拌しながら、温度が10℃を超えないような速度で滴下する。添加の完了後、反応混合液を還流温度までゆっくりと加熱し、そのまま2時間維持する。混合液を室温に冷まし、400〜500mlの水を加えてピリジン塩酸塩を溶解する。ベンゼン層を分離し、100〜150mlの水で洗浄し、20gの無水硫酸ナトリウムで乾燥する。ベンゼンおよび他の低沸点物質を真空除去すると、環状リン酸エステルが得られる。
【００５８】
実施例４
環状ホスフィン酸塩の合成法
【００５９】
【化１２】
2005504777.tif 000013
【００６０】
1,2-または1,3-関係(たとえば、1,2-ビス(クロロメチル)シクロペンタン)(1mmol)にある2個のハロメチル置換基を含む化合物を、0.5mmolの亜リン酸トリエチルのトルエン(10ml)溶液で処理する。混合液を加熱還流し、溶媒を真空除去すると、粗生成物がジエチルエステルとして単離される。遊離ホスフィン酸およびホスフィン酸ナトリウムは、それぞれ、HCl水溶液中またはNaOH水溶液中で加熱、加水分解することによって調製することができる。
【００６１】
実施例５
環状ホスホンアミド(phosphonamides)の合成法
【００６２】
【化１３】
2005504777.tif 000014
【００６３】
アミノアルコール(15mmol)とEt3N(60mmol)とを溶かした無水CH2Cl2(60ml)の氷冷した溶液を、POCl3(22.7mmol)のCH2Cl2(40ml)溶液に10分間かけて加える。TLCによって出発物質が完全に消失したと判明するまで0℃で攪拌を続ける。次いで混合液を濃縮し、2NのNaOH(10ml)により室温で2〜4時間処理することによって、粗クロロホスホラミダート(chlorophosphoramidate)を加水分解する。得られたホスホンアミドを逆相HPLCによって単離する。
【００６４】
実施例６
環状ホスホロジアミダート(phosphorodiamidate)の合成法
【００６５】
【化１４】
2005504777.tif 000015
【００６６】
ジアミン(10mmol)とトリエチルアミン(40mmol)を溶かしたベンゼン(100ml)の溶液を0℃に冷却し、オキシ塩化リン(POCl3、11mmol)を注射器で滴下して導入する。0〜5℃で2時間攪拌後、混合液を放置して室温にまで暖め、さらに6時間攪拌する。混合液を再度0℃に冷却し、2NのNaOH(20ml)で処理し、次いで50℃で1〜2時間加熱する。水相と有機相を分離し、水溶液を酸性化することによって生成物を単離する。
【００６７】
実施例７
環状尿素の合成法
【００６８】
【化１５】
2005504777.tif 000016
【００６９】
ジアミン(10mmol)とトリエチルアミン(40mmol)を溶かしたCH2Cl2(100ml)溶液を0℃に冷却し、トリホスゲン(11mmol)を攪拌しながら少しずつ導入する。0〜5℃で2〜5時間攪拌後、混合液をメタノール(20mmol)で反応停止(quenched)させ、放置して室温まで暖める。混合液を2NのHCl(20ml)で処理し、水相と有機相を分離する。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し濃縮すると、粗尿素生成物が得られ、これをシリカゲルクロマトグラフィによって、または結晶化させて精製する。
【００７０】
実施例８
環状スルファミドの合成法
【００７１】
【化１６】
2005504777.tif 000017
【００７２】
ジアミン(1mmol)のジメチルスルホキシド(DMSO)10ml溶液を130℃で18〜20時間スルファミド(1.2mmol)と反応させる。混合液を冷却し、氷温の塩化ナトリウム溶液に注ぎ、ジエチルエーテルで抽出する。次いで、混合有機抽出液を無水硫酸マグネシウムで乾燥する。乾燥剤と溶媒を真空留去すると環状スルファミドが得られる。
【００７３】
実施例９
環状スルファミド酸塩の合成法
【００７４】
【化１７】
2005504777.tif 000018
【００７５】
室温のアミノアルコール(2.5mmol)のTHF(15ml)懸濁液にNaH(7.52mmol)を加える。15分後、l,l'-スルホニルジイミダゾール(3.23mmol)のTHF(7ml)溶液を10分間滴下し、混合液を室温で15時間攪拌する。次いで、反応混合液をメタノールで反応停止させ、溶媒を真空留去し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィで精製すると環状スルファミド酸塩が得られる。
【００７６】
実施例１０
環状スルファミダイト(sulfamidite)の合成法
【００７７】
【化１８】
2005504777.tif 000019
【００７８】
不活性雰囲気下でt-ブトキシカルボニル(BOC)誘導体(10mmol)を無水CH2Cl2(100ml)に溶解し、次いで、-78℃に冷却する。その後、この溶液に注射器でトリエチルアミン(200mmol)を加え、得られた混合液を5分間攪拌する。次に、蒸留塩化チオニル(100mmol)を滴下する。反応を-78℃で30分間攪拌した後、-78℃でメタノール(10当量)により反応停止させる。次いで、混合液をCH2Cl2および水の上に移す。次に、有機層をMgSO4で乾燥し、濃縮し、生成物をカラムクロマトグラフィで精製する。この物質を0℃でTFAのCH2Cl2 50%溶液と反応させることによってBOC中間物質の脱保護が達成する。TFAおよび溶媒を真空留去するとスルファミダイトが得られる。
【００７９】
実施例１１
環状亜硫酸塩および硫酸塩の合成法
【００８０】
【化１９】
2005504777.tif 000020
【００８１】
ジオール(15.1mmol)とEt3N(60mmol)を溶かした無水CH2Cl2(60ml)を氷冷し、マグネットで攪拌した溶液を、SOCl2(22.7mmol)のCH2Cl2(40ml)の溶液に10分間かけて加える。TLCによって出発物質が完全に消失したと判明するまで0℃で攪拌を続ける。混合液をCH2Cl2(200ml)で希釈し、水(2×100ml)および塩水(100ml)で洗浄する。有機溶液を乾燥(Na2SO4)し、真空濃縮すると環状亜硫酸塩が得られ、これをシリカゲルのショートカラムで精製する。
【００８２】
環状亜硫酸塩を環状硫酸塩へ酸化:CH3CN/CCl4(100ml)の1:1混合液に環状亜硫酸塩を溶かした溶液に、NaIO4(30.2mmol)を加え、続いて触媒量のRuCl3 3H2O(150mg)および水(50ml)を加える。反応混合液を室温で15分間勢いよく攪拌し、次いで、エーテル(800ml)で希釈する。有機層を水(2×200ml)および塩水(200ml)で洗浄し、乾燥(Na2SO4)し、真空濃縮する。粗生成物をカラムクロマトグラフィによって精製すると環状硫酸塩が得られる。
【００８３】
実施例１２
環状硫酸塩の代替合成法
【００８４】
【化２０】
2005504777.tif 000021
【００８５】
ジオール(15mmol)とEt3N(60mmol)を溶かした無水CH2Cl2(60ml)を氷冷した溶液を、SO2Cl2(22.7mmol)のCH2Cl2(40ml)溶液に10分間かけて加える。TLCによって出発物質が完全に消失したと判明するまで0℃で攪拌を続ける。混合液をCH2Cl2(200ml)で希釈し、水(2×100ml)および塩水(100ml)で洗浄する。有機溶液を乾燥(Na2SO4)し、真空濃縮すると環状硫酸塩が得られ、これをシリカゲルのショートカラムによって精製すると、残留Et3Nの完全な除去を確実にすることができる。
【００８６】
実施例１３
シス-8-チアビシクロ[4.3.0]ノナン8,8-二酸化物の合成法
【００８７】
【化２１】
2005504777.tif 000022
【００８８】
メカニカルスターラー、キャピラリチューブ、マントルヒータ、および冷却器と受フラスコに接続した90°アダプタを取り付けた3リットルの3つ口丸底フラスコに、240g(1.00モル)の再結晶化硫化ナトリウム九水和物、および2リットルのジメチルスルホキシドを装入する。混合液を攪拌しながら、内圧を30mm.まで下げ、300〜350mlの留出物を回収するまで加熱する。40°まで冷ました後、キャピラリおよび取外し式アダプタを、温度計および冷却器に取り替え、95g(0.32モル)のシス-1,2-シクロヘキサンジメタノールジメタンスルホン酸塩を一度に導入する。次いで、混合液を120°で18時間攪拌し、冷まし、1500gの氷を入れた5リットルの分液漏斗に移す。1リットルのヘキサンを加え、この2相混合液をよく振盪した後、水相をヘキサン(500ml)で再抽出する。混合有機層を1リットルの水で4度洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ロータリーエバポレータで濃縮する。硫化物は、0.05〜0.1mm.でのフラスコからフラスコへの(bulb-to-bulb)蒸留によって無色液体(30.8〜31.6g、68.0〜70.5%)として回収される。
【００８９】
酸化:1リットルのエーテルに硫化物(43.0g.、0.303モル)を溶かした溶液を0°に冷却し、マグネットで攪拌し、1.0リットルの0.65Nの揮発性(ethereal)モノペルフタル酸を滴下して処理する。混合液を終夜0°で維持し、沈殿したフタル酸をろ過分離した後、ろ液をロータリーエバポレータで濃縮する。残留油を0.05-0.1mm.でフラスコからフラスコへ(bulb-to-bulb)蒸留すると、スルホンが無色液体(48.5〜50g、92〜95%)として得られる。この生成物をエーテル-ヘキサンから結晶化させると無色固体が得られる。融点は39〜41°である。
【００９０】
実施例１４
環状炭酸塩の合成法
【００９１】
【化２２】
2005504777.tif 000023
【００９２】
窒素を充填した5リットルの3つ口フラスコ中で、110g(1.0モル)の再結晶化カテコールを、88g(2.2モル)の水酸化ナトリウムを含む250mlの脱気水に溶解する。フラスコにガス吸込管、液浸させた温度計、および効率的な、ガスを漏らさないゴムスリップシール付きガラス製メカニカルスターラーを取り付け、氷塩浴に漬ける。水銀に液浸させたT字管を備えた管を通して、吸込管を窒素源に取り付けることにより窒素陽圧を約1cmに維持する。750mlのトルエンに、200〜225g(2.0〜2.3モル)の市販のホスゲンを溶かした0°の溶液を調製する。これは、重量を測った(tared)フラスコのトルエンにこのガスを噴出させて行う。メカニカルスターラーで60〜75分間よく攪拌しながら、この溶液を約50mlづつ前記のフラスコに加える。添加中、汚染や鉄錆のない清潔な砕氷をこの混合液に定期的に加えることによって温度を0〜5°に維持する。ホスゲンのトルエン溶液の添加が完了した後、混合液を0〜5°で1時間攪拌し、次いで、室温になるまで放置する。混合液を吸引ろ過し、固形物を漏斗上に押し付けて可能な限り水分を除去する。ろ液の水溶性部分を分離し、漏斗上の固形物をろ液中のトルエンに加え、加温して溶解させる。暖かいトルエン溶液をろ過し、生成物が結晶化し始めるまで減圧下(ウォーターアスピレーター)で蒸留する。残留物を加温して固形物を再溶解させ、次いで冷却する。o-フェニレン炭酸塩を吸引フィルタ上に回収し、真空デシケータ中で乾燥する。収量は98〜110g、融点は119〜120°である。
【００９３】
ろ液の濃度により不純物を含む2度目の生成物が回収され、これをトルエンから再結晶化させ、次いで119〜120°で溶解する。1度目と2度目の回収物から得られた純白のo-フェニレン炭酸塩の合計収量は、107〜116g(79〜85%)である。
【００９４】
実施例１５
環状ウレタンの合成法
【００９５】
【化２３】
2005504777.tif 000024
【００９６】
250mlの等圧滴下漏斗、およびマグネチックスターラーバーを備えた500mlの単口丸底フラスコに、(0.048mmolの)アミノアルコール、70mlのトルエン、および55ml(0.12mol)の12.5%水酸化カリウム水溶液を装入する。反応フラスコを氷浴で0℃に冷却し、滴下漏斗に50ml(0.095mol)の(トルエン中1.9Mの)トリホスゲン溶液を装入し、勢いよく攪拌しながらトリホスゲン溶液を40分かけて2相の反応混合液にゆっくりと加える。反応終了後、反応混合液を0℃で1時間攪拌し、130mlの酢酸エチルで希釈する。混合液を1リットル分液漏斗に移し、層分離させる。150mlの飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、および150mlの飽和塩化ナトリウム溶液で有機層を順次洗浄する。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、ロータリーエバポレータで濃縮すると粗環状ウレタンが得られる。これは、シリカゲルクロマトグラフィまたは結晶化によって精製することができる。
【００９７】
上記の方法には、本発明の範囲を逸脱することなしに様々な省略、追加、および修正を加えることができることは当業者には理解されよう。そのような修正および変化はすべて、添付の特許請求の範囲によって定義した本発明の範囲に属するものとする。
【国際公開パンフレット】
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2005504777.tif 000048
【国際調査報告】
2005504777.tif 000049
2005504777.tif 000050
2005504777.tif 000051
2005504777.tif 000052
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