(57)【要約】ソマトスタチンおよびボンベシンのような生物活性ペプチドの類似体であるペプチド薬剤およびその使用が開示されている。本発明の化合物は、一般式X-Y-Z-Qを有し、Xは、細胞毒性薬剤、治療薬、検出可能標識またはキレート基であり、かつQは、生物活性ペプチドである。本発明のペプチド薬剤において、Yは、選択的に、親水性ポリマーまたはペプチドであり、かつZは、Qのアミノ末端でQに結合した連結ペプチドであり、Qの生物活性を保持しながら、XをQに連結するために選択された2個、3個、4個または5個のアミノ酸残基を有する。疾患の診断および治療におけるこれらのペプチド薬剤を使用する方法もまた、開示されている。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式を有するペプチド薬剤：
X-Y-Z-Q：
Xが、細胞毒性薬剤、治療薬、検出可能標識およびキレート基からなる群より選択されるか、または省かれ；
Yが、該薬剤の親水性生体分布を増加させるペプチド、Xのためのリンカーを含む親水性ポリマーであるか、または省かれ；
Qが、生物活性を有するペプチドであり；ならびに
Zが、N末端でまたはQの適合性側鎖アミノ基でQに結合している場合、Qの生物活性の少なくとも50 %を保つ連結ペプチドであり、Zが、以下の式を有し：
A-B-C-E-F：
Aが、D-Lys、D-Tyr、D-SerもしくはL-Serであるか、または削除され；
Bが、D-LysもしくはD-Tyrであるか、または削除され；
Cが、Lys、Ser、hSer、Thr、Nle、Abu、Nva、(2、3、もしくは4)3-ピリジル-Ala(Pal)、Orn、Dab、Dap、4-NH2-Phe、D-4-OH-Pro、もしくはL-4-OH-Proであるか、または削除され；
Eが、D-Lys、D-Tyr、D-Ser、D-4-OH-Pro、L-4-OH-Pro、3-ヨード-D-Tyr、3-5ジヨード-D-Tyr、3-アスタチン-D-Tyr、3-5アスタチン-D-Tyr、3-ブロモ-D-Tyr、3-5ジブロモ-D-Tyr、D-Asn、L-Asn、D-Asp、L-Asp、D-Glu、L-Glu、D-Gln、またはL-Glnであり；および
Fが、D-Lys、D-Tyr、D-Ser、L-Ser、D-4-OH-Pro、L-4-OH-Pro、3-ヨード-D-Tyr、3-5ジヨード-D-Tyr、3-アスタチン-D-Tyr、3-5アスタチン-D-Tyr、3-ブロモ-D-Tyr、3-5ジブロモ-D-Tyr、D-Asn、L-Asn、D-Asp、L-Asp、D-Glu、L-Glu、D-Gln、またはL-Glnであり；
ただし、A、B、CおよびEがそれぞれ、Tyr、Tyr、LysおよびTyrである場合、Fが、Lysではなく；ならびにA、B、CおよびEがそれぞれ、Lys、Tyr、LysおよびTyrである場合、Eが、TyrまたはLysではなく；ならびにAおよびBが削除されており、かつCおよびEがそれぞれ、LysおよびTyrである場合、Fが、TyrまたはLysではないという条件である。
【請求項２】
以下の式を有するペプチド薬剤：
X-Y-Z-Q：
Xが、細胞毒性薬剤または治療薬であり；
Yが、該薬剤の親水性生体分布を増加させるペプチド、Xのためのリンカーを含む親水性ポリマーであるか、または省かれ；
Qが、生物活性を有するペプチドであり；および
Zが、N末端でまたはQの適合性側鎖アミノ基でQに結合している場合、Qの生物活性の少なくとも50 %を保つ連結ペプチドであり、Zが、以下の式を有し：
A-B-C-E-F：
Aが、D-Lys、D-Tyr、D-SerもしくはL-Serであるか、または削除され；
Bが、D-LysもしくはD-Tyrであるか、または削除され；
Cが、Lys、Ser、hSer、Thr、Nle、Abu、Nva、(2、3、もしくは4)3-ピリジル-Ala(Pal)、Orn、Dab、Dap、4-NH2-Phe、D-4-OH-Pro、もしくはL-4-OH-Proであるか、または削除され；
Eが、D-Lys、D-Tyr、D-Ser、D-4-OH-Pro、L-4-OH-Pro、3-ヨード-D-Tyr、3-5ジヨード-D-Tyr、3-アスタチン-D-Tyr、3-5アスタチン-D-Tyr、3-ブロモ-D-Tyr、3-5ジブロモ-D-Tyr、D-Asn、L-Asn、D-Asp、L-Asp、D-Glu、L-Glu、D-Gln、またはL-Glnであり；および
Fが、D-Lys、D-Tyr、D-Ser、L-Ser、D-4-OH-Pro、L-4-OH-Pro、3-ヨード-D-Tyr、3-5ジヨード-D-Tyr、3-アスタチン-D-Tyr、3-5アスタチン-D-Tyr、3-ブロモ-D-Tyr、3-5ジブロモ-D-Tyr、D-Asn、L-Asn、D-Asp、L-Asp、D-Glu、L-Glu、D-Gln、またはL-Glnであり；
ただし、A、B、CおよびEがそれぞれ、Tyr、Tyr、LysおよびTyrである場合、Fが、Lysではなく；ならびにA、B、CおよびEがそれぞれ、Lys、Tyr、LysおよびTyrである場合、Eが、TyrまたはLysではなく；ならびにAおよびBが削除されており、かつCおよびEがそれぞれ、LysおよびTyrである場合、Fが、TyrまたはLysではないという条件である。
【請求項３】
Yが薬剤の親水性生体分布を増加させるペプチドである、請求項2記載のペプチド薬剤。
【請求項４】
Yが以下の式からなる、請求項3記載のペプチド薬剤：
U(V-V)n：
Uが、D-Pro、L-Pro、D-4-OH-Pro、L-4-OH-Pro、Sar、もしくはm = 2〜10(2と10を含む)の(NH2-(CH2)m-COOH)であるか、または削除され；
各Vが、以下のものからなる群より独立的に選択され：D-Ser、L-Ser、D-Thr、L-Thr、D-Gln、L-Gln、D-Asn、L-Asn、D-4-OH-Pro、およびL-4-OH-Pro；ならびに
nが、1から50まで(1と50を含む)の整数である。
【請求項５】
各Vが独立的にD-SerまたはL-Serである、請求項4記載のペプチド薬剤。
【請求項６】
Yが親水性ポリマーである、請求項2記載のペプチド薬剤。
【請求項７】
Yがポリエチレングリコール、ポリ酢酸ビニル、ポリビニルアルコール、HPMA(N-(2-ヒドロキシプロピル)メタクリルアミド)またはHPMAコポリマー、α, β-ポリ(N-ヒドロキシエチル)-DL-アスパルトアミド(PHEA)、またはα, β-ポリ(N-ヒドロキシプロピル)-DL-アスパルトアミドである、請求項6記載のペプチド薬剤。
【請求項８】
Xが細胞毒性薬剤である、請求項2記載のペプチド薬剤。
【請求項９】
Xが代謝拮抗剤である、請求項8記載のペプチド薬剤。
【請求項１０】
Xがメトトレキセートである、請求項8記載のペプチド薬剤。
【請求項１１】
Xが以下の化合物およびそれらの誘導体からなる群より選択される、請求項8記載のペプチド薬剤：ドキソルビシン、メトトレキセート、カンプトセシン、ホモカンプトセシン、リゾキシン、ドリスタチン、パクリタキソール、およびメイタシノイド。
【請求項１２】
Qがソマトスタチンペプチドである、請求項2記載のペプチド薬剤。
【請求項１３】
Qがボンベシンペプチドである、請求項2記載のペプチド薬剤。
【請求項１４】
ZがD-Ser-Lys-D-Tyr-D-Tyrである、請求項2記載のペプチド薬剤。
【請求項１５】
ZがD-Ser-Lys-D-Tyr-D-Serである、請求項2記載のペプチド薬剤。
【請求項１６】
ZがD-Ser-Ser-D-Lys-D-Serである、請求項2記載のペプチド薬剤。
【請求項１７】
ZがD-Ser-Ser-D-Lys-Serである、請求項2記載のペプチド薬剤。
【請求項１８】
ZがD-Ser-Nle-D-Tyr-D-Serである、請求項2記載のペプチド薬剤。
【請求項１９】
ZがD-Ser-Pal-D-Tyr-D-Serである、請求項2記載のペプチド薬剤。
【請求項２０】
ZがD-Ser-Thr-D-Tyr-D-Serである、請求項2記載のペプチド薬剤。
【請求項２１】
以下の式を有するペプチド薬剤の治療的有効量を疾患に罹っている被験者へ投与することを含む疾患を治療する方法：
X-Y-Z-Q：
Xが、細胞毒性薬剤または治療薬であり；
Yが、該薬剤の親水性生体分布を増加させるペプチド、Xのためのリンカーを含む親水性ポリマーであるか、または省かれ；
Qが、生物活性を有するペプチドであり；および
Zが、N末端でまたはQの適合性側鎖アミノ基でQに結合している場合、Qの生物活性の少なくとも50 %を保つ連結ペプチドであり、Zが、以下の式を有し：
A-B-C-E-F：
Aが、D-Lys、D-Tyr、D-SerもしくはL-Serであるか、または削除され；
Bが、D-LysもしくはD-Tyrであるか、または削除され；
Cが、Lys、Ser、hSer、Thr、Nle、Abu、Nva、(2、3、もしくは4)3-ピリジル-Ala(Pal)、Orn、Dab、Dap、4-NH2-Phe、D-4-OH-Pro、もしくはL-4-OH-Proであるか、または削除され；
Eが、D-Lys、D-Tyr、D-Ser、D-4-OH-Pro、L-4-OH-Pro、3-ヨード-D-Tyr、3-5ジヨード-D-Tyr、3-アスタチン-D-Tyr、3-5アスタチン-D-Tyr、3-ブロモ-D-Tyr、3-5ジブロモ-D-Tyr、D-Asn、L-Asn、D-Asp、L-Asp、D-Glu、L-Glu、D-Gln、またはL-Glnであり；および
Fが、D-Lys、D-Tyr、D-Ser、L-Ser、D-4-OH-Pro、L-4-OH-Pro、3-ヨード-D-Tyr、3-5ジヨード-D-Tyr、3-アスタチン-D-Tyr、3-5アスタチン-D-Tyr、3-ブロモ-D-Tyr、3-5ジブロモ-D-Tyr、D-Asn、L-Asn、D-Asp、L-Asp、D-Glu、L-Glu、D-Gln、またはL-Glnであり；
ただし、A、B、CおよびEがそれぞれ、Tyr、Tyr、LysおよびTyrである場合、Fが、Lysではなく；ならびにA、B、CおよびEがそれぞれ、Lys、Tyr、LysおよびTyrである場合、Eが、TyrまたはLysではなく；ならびにAおよびBが削除されており、かつCおよびEがそれぞれ、LysおよびTyrである場合、Fが、TyrまたはLysではないという条件である。
【請求項２２】
Yが薬剤の親水性生体分布を増加させるペプチドである、請求項21記載の方法。
【請求項２３】
Yが以下の式からなる、請求項21記載の方法：
U(V-V)n：
Uが、D-Pro、L-Pro、D-4-OH-Pro、L-4-OH-Pro、Sar、もしくはm = 2〜10(2と10を含む)の(NH2-(CH2)m-COOH)であるか、または削除され；
各Vが、以下のものからなる群より独立的に選択され：D-Ser、L-Ser、D-Thr、L-Thr、D-Gln、L-Gln、D-Asn、L-Asn、D-4-OH-Pro、およびL-4-OH-Pro；ならびに
nが、1から50まで(1と50を含む)の整数である。
【請求項２４】
各Vが独立的にD-SerまたはL-Serである、請求項23記載の方法。
【請求項２５】
Yが親水性ポリマーである、請求項21記載の方法。
【請求項２６】
Yがポリエチレングリコール、ポリ酢酸ビニル、またはポリビニルアルコールである、請求項25記載の方法。
【請求項２７】
Xが細胞毒性薬剤である、請求項21記載の方法。
【請求項２８】
Xが代謝拮抗剤である、請求項27記載の方法。
【請求項２９】
Xがカンプトセシンである、請求項27記載の方法。
【請求項３０】
Xが以下の化合物およびそれらの誘導体からなる群より選択される、請求項27記載の方法：ドキソルビシン、メトトレキセート、カンプトセシン、ホモカンプトセシン、チオコルヒチン、コルヒチン、コンブレタスタチン、コンブレタスタチンA-4、リゾキシン、リゾキシン-D、ドリスタチン、パクリタキセル、アンサミトシンp3、およびメイタシノイド。
【請求項３１】
Qがソマトスタチンペプチドである、請求項21記載の方法。
【請求項３２】
Qがボンベシンペプチドである、請求項21記載の方法。
【請求項３３】
ZがNle-D-Tyr-D-Serである、請求項21記載の方法。
【請求項３４】
ZがLys-D-Tyr-D-Serである、請求項21記載の方法。
【請求項３５】
ZがPal-D-Lys-D-Serである、請求項21記載の方法。
【請求項３６】
ZがThr-D-Tyr-D-Serである、請求項21記載の方法。
【請求項３７】
疾患が以下のものからなる群より選択される、請求項21記載の方法：肺、乳房、脳、眼、前立腺、または結腸の腫瘍；神経内分泌系源の腫瘍；および血管形成性血管。
【請求項３８】
以下の式を有するペプチド薬剤：
X-Y-Z-Q：
Xが、検出可能標識、キレート基であるか、または省かれ；
Yが、該薬剤の親水性生体分布を増加させるペプチド、Xのためのリンカーを含む親水性ポリマーであるか、または省かれ；
Qが、生物活性を有するペプチドであり；および
Zが、N末端でまたはQの適合性側鎖アミノ基でQに結合している場合、Qの該生物活性の少なくとも50 %を保つ連結ペプチドであり、Zが、以下の式を有し：
C-E-F：
Cが、Lys、Orn、Dab、Dap、4-NH2-Phe、Nle、Ser、hSer、Abu、Nva、D-4-OH-ProもしくはL-4-OH-Proであるか、または削除され；
EおよびFが、それぞれ独立的に、以下のものからなる群より選択され：D-Lys、D-Tyr、D-Ser、D-4-OH-Pro、L-4-OH-Pro、3-ヨード-D-Tyr、3-5ジヨード-D-Tyr、3-ブロモ-D-Tyr、3-5ジブロモ-D-Tyr、D-Asn、D-Asp、L-Asp、D-Glu、およびL-Glu；ならびに、CおよびEがそれぞれLysおよびD-Tyrである場合、FがD-TyrまたはD-Lysではない。
【請求項３９】
ペプチド薬剤が検出可能標識に付着している、請求項38記載のペプチド薬剤。
【請求項４０】
ペプチド薬剤が検出可能標識に間接的に付着している、請求項39記載のペプチド薬剤。
【請求項４１】
ペプチド薬剤が検出可能標識に直接的に付着している、請求項39記載のペプチド薬剤。
【請求項４２】
検出可能標識が放射性である、請求項39記載のペプチド薬剤。
【請求項４３】
検出可能標識がペプチド薬剤のアミノ酸に付着しているヨウ素、アスタチン、または臭素標識である、請求項42記載のペプチド薬剤。
【請求項４４】
Xがキレート基である、請求項38記載のペプチド薬剤。
【請求項４５】
Xが省かれており、かつYが低級にアセチル化、スクシニル化、マレイニル化、またはフマリル化されている、請求項38記載のペプチド薬剤。
【請求項４６】
Yが薬剤の親水性生体分布を増加させるペプチド配列である、請求項38記載のペプチド薬剤。
【請求項４７】
Yが以下の式からなる、請求項46記載のペプチド薬剤：
U(V-V)n：
Uが、D-Pro、L-Pro、D-4-OH-Pro、L-4-OH-Pro、Sar、もしくはm = 2〜10(2と10を含む)の(NH2-(CH2)m-COOH)であるか、または削除され；
各Vが、以下のものからなる群より独立的に選択され：D-Ser、L-Ser、D-Thr、L-Thr、D-Gln、L-Gln、D-Asn、L-Asn、D-4-OH-Pro、およびL-4-OH-Pro；ならびに
nが、1から50まで(1と50を含む)の整数である。
【請求項４８】
各Vが独立的に、D-Ser、L-Ser、またはD-Glnである、請求項47記載のペプチド薬剤。
【請求項４９】
EがD-Tyrであり、かつFがD-Serである、請求項38記載のペプチド薬剤。
【請求項５０】
Yが親水性ポリマーである、請求項38記載のペプチド薬剤。
【請求項５１】
Yがポリエチレングリコール、PHEA、またはポリビニルアルコールである、請求項50記載のペプチド薬剤。
【請求項５２】
Qがソマトスタチンペプチドである、請求項38記載のペプチド薬剤。
【請求項５３】
Qがボンベシンペプチドである、請求項38記載のペプチド薬剤。
【請求項５４】
ZがLys-D-Tyr-D-Serである、請求項38記載のペプチド薬剤。
【請求項５５】
ZがLys-D-Ser-D-Serである、請求項38記載のペプチド薬剤。
【請求項５６】
ZがNle-D-Tyr-D-Serである、請求項38記載のペプチド薬剤。
【請求項５７】
以下の式を有するペプチド薬剤の治療的または診断的有効量を被験者へ投与することを含む疾患を治療または診断する方法：
X-Y-Z-Q：
Xが、検出可能標識、キレート基であるか、または省かれ；
Yが、該薬剤の親水性生体分布を増加させるペプチド、Xのためのリンカーを含む親水性ポリマーであるか、または省かれ；
Qが、生物活性を有するペプチドであり；および
Zが、N末端でまたはQの適合性側鎖アミノ基でQに結合している場合、Qの該生物活性の少なくとも50 %を保つ連結ペプチドであり、Zが、以下の式を有し：
C-E-F：
Cが、Lys、Orn、Dab、Dap、4-NH2-Phe、Nle、Ser、hSer、Abu、Nva、D-4-OH-ProもしくはL-4-OH-Proであるか、または削除され；ならびに
EおよびFが、それぞれ独立的に、以下のものからなる群より選択され：D-Lys、D-Tyr、D-Ser、D-4-OH-Pro、L-4-OH-Pro、3-ヨード-D-Tyr、3-5ジヨード-D-Tyr、D-Asn、D-Asp、L-Asp、D-Glu、およびL-Glu；ならびに、CおよびEがそれぞれLysおよびD-Tyrである場合、FがD-TyrまたはD-Lysではない。
【請求項５８】
ペプチド薬剤が検出可能標識に付着している、請求項57記載の方法。
【請求項５９】
ペプチド薬剤が検出可能標識に間接的に付着している、請求項58記載の方法。
【請求項６０】
ペプチド薬剤が検出可能標識に直接的に付着している、請求項58記載の方法。
【請求項６１】
検出可能標識が放射性である、請求項58記載の方法。
【請求項６２】
検出可能標識がペプチド薬剤のアミノ酸に付着しているヨウ素標識である、請求項61記載の方法。
【請求項６３】
Xがキレート基である、請求項57記載の方法。
【請求項６４】
Xが省かれており、かつYが低級にアセチル化、スクシニル化、マレイニル化、またはフマリル化されている、請求項57記載の方法。
【請求項６５】
Yが薬剤の親水性生体分布を増加させるペプチド配列である、請求項57記載の方法。
【請求項６６】
Yが以下の式からなる、請求項65記載の方法：
U(V-V)n：
Uが、D-Pro、L-Pro、D-4-OH-Pro、L-4-OH-Pro、Sar、もしくはm = 2〜10(2と10を含む)の(NH2-(CH2)m-COOH)であるか、または削除され；
各Vが、以下のものからなる群より独立的に選択され：D-Ser、L-Ser、D-Thr、L-Thr、D-Gln、L-Gln、D-Asn、L-Asn、D-4-OH-Pro、およびL-4-OH-Pro；ならびに
nが、1から50まで(1と50を含む)の整数である。
【請求項６７】
各Vが独立的に、D-Ser、L-Ser、またはD-Glnである、請求項66記載の方法。
【請求項６８】
Yが親水性ポリマーである、請求項57記載の方法。
【請求項６９】
Yがポリエチレングリコール、PHEA、またはポリビニルアルコールである、請求項68記載の方法。
【請求項７０】
Qがソマトスタチンペプチドである、請求項57記載の方法。
【請求項７１】
Qがボンベシンペプチドである、請求項57記載の方法。
【請求項７２】
EがD-Tyrであり、かつFがD-Serである、請求項57記載の方法。
【請求項７３】
ZがLys-D-Tyr-D-Serである、請求項57記載の方法。
【請求項７４】
ZがLys-D-Ser-D-Serである、請求項57記載の方法。
【請求項７５】
ZがNle-D-Tyr-D-Serである、請求項57記載の方法。
【請求項７６】
Qがボンベシンであり、かつZが以下の式を有する、請求項2記載のペプチド薬剤：
E-F：
Eが、D-Lys、D-Tyr、D-Ser、D-4-OH-Pro、L-4-OH-Pro、3-ヨード-D-Tyr、3-5ジヨード-D-Tyr、3-アスタチン-D-Tyr、3-5アスタチン-D-Tyr、3-ブロモ-D-Tyr、3-5ジブロモ-D-Tyr、D-Asn、L-Asn、D-Asp、L-Asp、D-Gln、またはL-Glnであり；および
Fが、D-Lys、D-Tyr、D-Ser、L-Ser、D-4-OH-Pro、L-4-OH-Pro、3-ヨード-D-Tyr、3-5ジヨード-D-Tyr、3-アスタチン-D-Tyr、3-5アスタチン-D-Tyr、3-ブロモ-D-Tyr、3-5ジブロモ-D-Tyr、D-Asn、L-Asn、D-Asp、L-Asp、D-Glu、L-Glu、D-Gln、またはL-Glnである。
【請求項７７】
Qがボンベシンであり、かつZが以下の式を有する、請求項21記載の方法：
E-F：
Eが、D-Lys、D-Tyr、D-Ser、D-4-OH-Pro、L-4-OH-Pro、3-ヨード-D-Tyr、3-5ジヨード-D-Tyr、3-アスタチン-D-Tyr、3-5アスタチン-D-Tyr、3-ブロモ-D-Tyr、3-5ジブロモ-D-Tyr、D-Asn、L-Asn、D-Asp、L-Asp、D-Gln、またはL-Glnであり；および
Fが、D-Lys、D-Tyr、D-Ser、L-Ser、D-4-OH-Pro、L-4-OH-Pro、3-ヨード-D-Tyr、3-5ジヨード-D-Tyr、3-アスタチン-D-Tyr、3-5アスタチン-D-Tyr、3-ブロモ-D-Tyr、3-5ジブロモ-D-Tyr、D-Asn、L-Asn、D-Asp、L-Asp、D-Glu、L-Glu、D-Gln、またはL-Glnである。
【請求項７８】
Qがボンベシンであり、かつZが以下の式を有する、請求項38記載のペプチド薬剤：
E-F：
EおよびFが、それぞれ独立的に、以下のものからなる群より選択される：D-Lys、D-Tyr、D-Ser、D-4-OH-Pro、L-4-OH-Pro、3-ヨード-D-Tyr、3-5ジヨード-D-Tyr、3-ブロモ-D-Tyr、3-5ジブロモ-D-Tyr、D-Asn、D-Asp、L-Asp、D-Glu、およびL-Glu。
【請求項７９】
Qがボンベシンであり、かつZが以下の式を有する、請求項57記載の方法：
E-F：
EおよびFが、それぞれ独立的に、以下のものからなる群より選択される：D-Lys、D-Tyr、D-Ser、D-4-OH-Pro、L-4-OH-Pro、3-ヨード-D-Tyr、3-5ジヨード-D-Tyr、3-ブロモ-D-Tyr、3-5ジブロモ-D-Tyr、D-Asn、D-Asp、L-Asp、D-Glu、およびL-Glu。
【請求項８０】
ZがLys-D-Tyr-D-Serである、請求項2記載のペプチド薬剤。
【請求項８１】
ZがSer-D-Lys-D-Serである、請求項2記載のペプチド薬剤。
【請求項８２】
ZがSer-D-Lys-Serである、請求項2記載のペプチド薬剤。
【請求項８３】
ZがNle-D-Tyr-D-Serである、請求項2記載のペプチド薬剤。
【請求項８４】
ZがPal-D-Lys-D-Serである、請求項2記載のペプチド薬剤。
【請求項８５】
ZがThr-D-Tyr-D-Serである、請求項2記載のペプチド薬剤。
【請求項８６】
ZがD-Ser-Lys-D-Tyr-D-Tyrである、請求項21記載の方法。
【請求項８７】
ZがD-Ser-Lys-D-Tyr-D-Serである、請求項21記載の方法。
【請求項８８】
ZがD-Ser-Ser-D-Lys-D-Serである、請求項21記載の方法。
【請求項８９】
ZがD-Ser-Ser-D-Lys-Serである、請求項21記載の方法。
【請求項９０】
ZがD-Ser-Nle-D-Tyr-D-Serである、請求項21記載の方法。
【請求項９１】
ZがD-Ser-Pal-D-Tyr-D-Serである、請求項21記載の方法。
【請求項９２】
ZがD-Ser-Thr-D-Tyr-D-Serである、請求項21記載の方法。
【請求項９３】
ZがSer-D-Lys-Serである、請求項21記載の方法。
【請求項９４】
ZがSer-D-Lys-D-Serである、請求項21記載の方法。
【請求項９５】
少なくとも1つのVがD-アミノ酸である、請求項4記載のペプチド薬剤。
【請求項９６】
少なくとも1つのVがD-アミノ酸である、請求項23記載の方法。
【請求項９７】
少なくとも1つのVがD-アミノ酸である、請求項47記載のペプチド薬剤。
【請求項９８】
少なくとも1つのVがD-アミノ酸である、請求項66記載の方法。
【請求項９９】
神経内分泌系源の腫瘍がカルチノイド症候群である、請求項37記載の方法。
【請求項１００】
キレート基がLu、In、Y、またはSmの放射性同位元素を含む、請求項44記載のペプチド薬剤。
【請求項１０１】
キレート基がLu、In、Y、またはSmの放射性同位元素を含む、請求項63記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、疾患の検出、診断または治療に有用なターゲティング化合物としてのソマトスタチンおよびボンベシンの類似体ならびにそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
背景
癌についての標準的治療を含む多くの治療の毒性副作用により、患者に投与されうる薬剤の量は、実際上、制限されている。そのうえ、多くの薬剤は、器官特異的毒性を引き起こし、標的組織に送達されうる用量をさらに制限している。例えば、多くのアントラサイクリンファミリーメンバーの心毒性は、この群の化学療法剤に利用できる最大治療量を引き下げている。様々な検出可能または治療用の薬剤の標的化される薬物送達は、特定の組織への濃縮された局在的効果を可能にすることにより、正常な組織における毒性を低下させ、かつ治療の効力を増加させることができる。
【０００３】
ソマトスタチン、ボンベシンまたは他の生物活性ペプチド類似体は、そのペプチドに特異的な受容体を発現していることに関して腫瘍細胞を検出するために用いられてきた(例えば、DenzlerおよびReubi、Cancer 85(1):188-198、1999を参照)。ソマトスタチン、ボンベシンおよび多くの他の生物活性ペプチドアゴニスト類似体は、それらの受容体への結合後、速やかに内部に取り入れられる(Lukiniusら、Acta Onc. 38:383-387、1999; Morel、Biochem. Pharmacol. 47(1):63-76、1994)。このペプチド類似体の内部移行は、結果として、細胞核への移動を生じうる(Chenら、Am. J. Physiol. Renal Physiol. 279:F440-F448、2000; Hornickら、J. Nucl. Med. 41(7):1256-1263、2000; Jansonら、J. Nucl. Med. 41(9):1514-1518、2000)。
【０００４】
ソマトスタチン類似体は、特定の正常なまたは病的組織の表面上に存在している特定のソマトスタチン受容体サブタイプに結合する。ソマトスタチン受容体は、炎症性腸疾患、慢性関節リウマチ、様々な腫瘍型、および多くの腫瘍に供給している血管を含む特定の病的組織において、しばしば、サブタイプ特異的様式で、上方制御される。(DenzlerおよびReubi、Cancer、85:188-198、1999; Plonowskiら、Cancer Res. 60(11):2996-3001、2000; Kahanら、Int. J. Cancer 82(4):592-598、1999; Gulecら、Surg. Res. 97(2):131-137、2001)。同様に、別の生物活性ペプチド、サブスタンスPに特異的な受容体は、様々な疾患において上方制御されうる(Id.)。ソマトスタチン関連ウロテンシンIIペプチド受容体は、多数の神経腫瘍上に発現されていることが見出された(Takahashiら、Peptides 22:1175-1179、2001)。GnRH IIリガンド/類似体に対する受容体は、乳房、前立腺および胃腸管を含む対象となる多くの末梢組織上に位置づけられた(Neillら、Biochem. Biophys. Res. Commun. 282:1012-1019; Millarら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98:963609641、2001)。
【０００５】
少なくとも5つのソマトスタチン受容体サブタイプが特徴づけられ、腫瘍は、様々な受容体サブタイプを発現させうる(Shaerら、Int. J. Cancer 70:530-537、1997)。天然に存在するソマトスタチンおよびそれの類似体は、これらの受容体サブタイプへの差次的結合を示し、特定の病的組織へのペプチド類似体の正確なターゲティングを可能にする。
【０００６】
細胞毒性薬剤のような多くの化合物の物理的および化学的性質は、生物活性ペプチドへのそれらの結合を問題のあるものにさせる。薬剤または薬物は、ペプチド類似体の結合の特異性または生物活性を低下させ、ターゲティング剤としての有効性を制限することができる。そのうえ、治療用細胞毒性薬剤は、溶解度の低下を引き起こして、特定の器官における薬物ペプチド類似体の蓄積を促進し、それに従って、毒性を増加させ、かつ効力を低下させる化学的性質を有する。細胞毒性薬剤をソマトスタチン、ボンベシンまたは別の生物活性ペプチドのようなターゲティング剤に連結するための、および各成分の活性を保持しながら、細胞毒性薬剤の非ターゲットの取り込みを減少させ、それに従って、治療効果を最大限にし、かつ毒性を最小限にするための効果的手段が必要とされている。
【０００７】
さらになお、ヨウ素化（iodinizatio）およびアスタチン化(Vaidyanathanら、Nucl. Med. Biol. 27(4):329-337、2000)は、画像化において、およびおそらく、生物活性ペプチドに特異的な因子の発現増加に関連した疾患の治療を促進するにおいての使用に大きな期待が持てるが、ペプチド類似体の範囲を標識するのに現在有効な方法に関して問題がある。標識生物活性ペプチドの使用は、様々な系において研究されてきた。ヨウ素のような放射性ハロゲンは、腫瘍画像化および細胞毒性薬剤として大きな可能性をもっている。有望な同位元素は、125I(K. S. Sastry、Am. Assoc. Phys. Med. 19:1361-1370、1992; Mariano、J. Nucl. Med. 41(9):1519-1521、2000)、131I(Wheldonら、Radiother. Oncol.、21:91-99、1991)、123I(Blowerら、Eur. J. Nucl. Med. 25:101-108、1998; Jansonら、J. Nuc. Med. 41(9):1514-1518、2000; Marianiら、J. Nuc. Med. 41(9):1519-1521、2000)および124I(Glaserら、J. Labelled Compd. Radiopharm. 44(6):465-480、2001)を含む。放射性ヨウ素原子のペプチドへの付加に関連したいくつかの問題がある(Bakkerら、Eur. J. Nucl. Med. 23(7):775-781、1996)。一つは、特異的脱ヨウ素化酵素によるL-Tyr残基からのヨウ素の急速な喪失である(Kawaiら、Nucl. Med. Biol. 17(4):369-376、1990)。もう一つの問題は、ヨウ素のペプチド薬剤への付加により生じた疎水性の著しい増大であり、それが肝臓における放射能の蓄積の増加に関連して、腫瘍画像化に干渉し、かつ激しい毒性を促す。さらなる問題は、ファルマコフォアのすぐ隣のチロシンがヨウ素化される場合の結合親和性の損失である。有害なインビボでの蓄積なしに、様々な生物活性ペプチドの標識化を促進することができるリンカーが必要とされている。
【発明の開示】
【０００８】
発明の概要
本発明は、ペプチドの生物活性の保持を可能にするリンカーを通じて化合物に結合されたソマトスタチンまたはボンベシンのような生物活性ペプチドを特徴とする。そのようなペプチド薬剤は、ソマトスタチンもしくはボンベシン受容体を発現させている癌細胞のような細胞へ特異的に標的化する治療薬、細胞毒性薬剤、または検出可能標識に有用である。
【０００９】
第一局面において、本発明は、以下の式のペプチド薬剤を特徴とする：
X-Y-Z-Q
Xは、細胞毒性薬剤、治療薬、検出可能標識またはキレート基から任意に選択される；Yは、ペプチド薬剤の生体分布を増加させるペプチド、Xのためのリンカーを含む親水性ポリマーであるか、または省かれ；Qは、ソマトスタチンまたはボンベシンのような生物活性ペプチドであり、かつZは、N末端でまたはQの適合性側鎖アミノ基でQに結合している場合、Qの生物活性の少なくとも50 %を保つ連結ペプチドである。Zは、以下の式を有し：A-B-C-E-F、Aは、D-Lys、D-Tyr、D-Ser、もしくはL-Serであるか、または削除され；Bは、D-LysもしくはD-Tyr、または削除され；Cは、Lys、Ser、hSer、Thr、Nle、Abu、Nva、(2、3もしくは4)3-ピリジル-Ala(Pal)、Orn、Dab、Dap、4-NH2-Phe、D-4-OH-ProもしくはL-4-OH-Pro、または削除され；Eは、D-Lys、D-Tyr、D-Ser、D-4-OH-Pro、L-4-OH-Pro、3-ヨード-D-Tyr、3-5ジヨード-D-Tyr、3-アスタチン-D-Tyr、3-5アスタチン-D-Tyr、3-ブロモ-D-Tyr、3-5ジブロモ-D-Tyr、D-Asn、L-Asn、D-Asp、L-Asp、D-Glu、L-Glu、D-Gln、またはL-Glnであり；かつFは、D-Lys、D-Tyr、D-Ser、L-Ser、D-4-OH-Pro、L-4-OH-Pro、3-ヨード-D-Tyr、3-5ジヨード-D-Tyr、3-アスタチン-D-Tyr、3-5アスタチン-D-Tyr、3-ブロモ-D-Tyr、3-5ジブロモ-D-Tyr、D-Asn、L-Asn、D-Asp、L-Asp、D-Glu、L-Glu、D-Gln、またはL-Glnであり；ただし、A、B、CおよびEがそれぞれ、Tyr、Tyr、LysおよびTyrである場合、FはLysではなく；ならびにA、B、CおよびEがそれぞれ、Lys、Tyr、LysおよびTyrである場合、EはTyrまたはLysではなく；ならびにAおよびBが削除されており、かつCおよびEがそれぞれLysおよびTyrである場合、FはTyrまたはLysではないという条件である。
【００１０】
第二の関連局面において、本発明は、以下の式を有するペプチド薬剤を特徴とする：
X-Y-Z-Q
Xは、細胞毒性薬剤、治療薬であり；Yは、ペプチド薬剤の親水性分布を増加させるペプチド、Xのためのリンカーを含む親水性ポリマーであるか、または省かれ；Qは、生物活性を有するペプチドであり、かつZは、N末端でまたはQの適合性側鎖アミノ基でQに結合している場合、Qの生物活性の少なくとも50 %を保つ連結ペプチドであり、Zは、以下の式を有し：
A-B-C-E-F
Aは、D-Lys、D-Tyr、D-Ser、もしくはL-Serであるか、または削除され；Bは、D-LysもしくはD-Tyr、または削除され；Cは、Lys、Ser、hSer、Thr、Nle、Abu、Nva、(2、3もしくは4)3-ピリジル-Ala(Pal)、Orn、Dab、Dap、4-NH2-Phe、D-4-OH-ProもしくはL-4-OH-Pro、または削除され；Eは、D-Lys、D-Tyr、D-Ser、D-4-OH-Pro、L-4-OH-Pro、3-ヨード-D-Tyr、3-5ジヨード-D-Tyr、3-アスタチン-D-Tyr、3-5アスタチン-D-Tyr、3-ブロモ-D-Tyr、3-5ジブロモ-D-Tyr、D-Asn、L-Asn、D-Asp、L-Asp、D-Glu、L-Glu、D-Gln、またはL-Glnであり；かつFは、D-Lys、D-Tyr、D-Ser、L-Ser、D-4-OH-Pro、L-4-OH-Pro、3-ヨード-D-Tyr、3-5ジヨード-D-Tyr、3-アスタチン-D-Tyr、3-5アスタチン-D-Tyr、3-ブロモ-D-Tyr、3-5ジブロモ-D-Tyr、D-Asn、L-Asn、D-Asp、L-Asp、D-Glu、L-Glu、D-Gln、またはL-Glnであり；ただし、A、B、CおよびEがそれぞれ、Tyr、Tyr、LysおよびTyrである場合、FはLysではなく；ならびにA、B、CおよびEがそれぞれ、Lys、Tyr、LysおよびTyrである場合、EはTyrまたはLysではなく；ならびにAおよびBが削除されており、かつCおよびEがそれぞれLysおよびTyrである場合、FはTyrまたはLysではないという条件である。Zペプチドリンカーは、このように、長さが2個、3個、4個または5個の残基でありうる。
【００１１】
本発明の第一および第二局面の一つの態様において、Xは、細胞毒性薬剤である。好ましくは、Xは、代謝拮抗剤である。細胞毒性薬剤は、以下のものからなる群より選択されうる：ドキソルビシン、メトトレキセート、カンプトセシン、ホモカンプトセシン、リゾキシン、ドリスタチン、パクリタキセル、コンブレタスタチン、およびメイタシノイド、またはその誘導体もしくは類似体。例えば、細胞毒性薬剤メトトレキセートは、リンカーZまたはY-Zを通じてペプチド類似体へ連結され、本発明のペプチド薬剤を形成しうる。好ましい細胞毒性薬剤は、リゾキシン、リゾキシン-D、カンプトセシンおよびそれの活性類似体、ホモカンプトセシン、アンサミトシンP-3、ドリスタチン、エポチロン、コンブレタスタチンおよびコンブレタスタチンA-4である。
【００１２】
他の好ましい態様において、連結ペプチドZは、
2005505580.tif 000002
である。
【００１３】
本発明の第三局面において、ペプチド薬剤は、以下の式を有し：
X-Y-Z-Q、
Xは、キレート基であるか、または省かれ；Yは、ペプチド薬剤の親水性生体分布を増加させるペプチド、Xのためのリンカーを含む親水性ポリマーであるか、または省かれ；Qは、生物活性を有するペプチドであり；Zは、N末端でまたはQの適合性側鎖アミノ基でQに結合している場合、Qの生物活性の少なくとも50 %を保つ連結ペプチドである。本発明のこの局面において、Zは、以下の式を有し：C-E-F、Cは、Lys、Orn、Dab、Dap、4-NH2-Phe、Nle、Ser、hSer、Abu、Nva、D-4-OH-ProもしくはL-4-OH-Pro、または削除され；かつEおよびFは、それぞれ独立的に、以下のものからなる群より選択され：D-Lys、D-Tyr、D-Ser、D-4-OH-Pro、L-4-OH-Pro、3-ヨード-D-Tyr、3-5ジヨード-D-Tyr、3-ブロモ-D-Tyr、3-5ジブロモ-D-Tyr、D-Asn、D-Asp、L-Asp、D-Glu、またはL-Glu；かつCおよびEがそれぞれLysおよびD-Tyrである場合、FはD-TyrまたはD-Lysではない。
【００１４】
第三局面の代替の態様において、本発明のペプチド薬剤は、検出可能標識に直接的または間接的に付着している。検出可能標識は、好ましくは、その薬剤のアミノ酸残基に結合された放射標識されたヨウ素、アスタチン、または臭素のように放射性である。または、Xは、キレート基でありうる、および例えば、Lu、In、YもしくはSmの放射性元素を含みうるか、またはXは省かれうる。Xが省かれる場合には、Yは、低級にアセチル化、スクシニル化、マレイニル化またはフマリル化されうる。
【００１５】
第三局面の複数の態様において、本発明は、ZがLys-D-Tyr-D-Ser、Lys-D-Ser-D-Ser、またはNle-D-Tyr-D-Serであるペプチド薬剤を特徴とする。
【００１６】
本発明の第三局面のもう一つの態様において、Zは、長さが3個のアミノ酸でありうる。Zは、好ましくは、以下の式のペプチド薬剤である：
C-E-F、
Cは、上記のように列挙されたアミノ酸から選択され、EはD-Tyrであり、かつFはD-Serである。または、Zは、Lys-D-Tyr-D-Ser、Lys-D-Ser-D-Ser、またはNle-D-Tyr-D-Serでありうる。
【００１７】
第三局面のもう一つの態様において、本発明は、Zが以下の式を有する組成物を特徴とする：
C-E-F
Cは、Lys、Orn、Dab、Dap、4-NH2-Phe、Nle、Ser、hSer、Abu、Nva、D-4-OH-ProおよびL-4-OH-Proからなる群より選択されるか、または削除され；EはD-Tyrであり；かつFはD-Serである。
【００１８】
本発明の第一、第二および第三局面において、Yは、生物活性ペプチド結合体の親水性生体分布を増加させるペプチド配列でありうる。例えば、好ましい態様において、Yは、式U(V-V)nからなり、Uは、D-Pro、L-Pro、D-4-OH-Pro、L-4-OH-Pro、サルコシン、Lys、Orn、Dab、Dap、4-NH2-Phe、もしくはm = 2〜10(2と10を含む)の(NH2-(CH2)m-COOH)であるか、または削除され；各Vは、以下のものからなる群より独立的に選択される：D-Ser、L-Ser、D-Thr、L-Thr、D-Gln、L-Gln、D-Asn、L-Asn、D-4-OH-Pro、またはL-4ヒドロキシ-Pro；かつn = 1〜50(1と50を含む)。もう一つの好ましい態様において、Vは独立してD-SerまたはL-Serである。さらなる好ましい態様において、少なくとも1つのVは、D-アミノ酸である。
【００１９】
または、Yは、親水性ポリマーでありうる。例えば、Yは、ポリエチレングリコール、ポリ酢酸ビニル、ポリビニルアルコール、HPMA(N-(2-ヒドロキシプロピル)メタクリルアミド)またはHPMAコポリマー、α, β-ポリ(N-ヒドロキシエチル)-DL-アスパルトアミド(PHEA)、またはα, β-ポリ(N-ヒドロキシプロピル)-DL-アスパルトアミドでありうる。
【００２０】
生物活性ペプチドQは、好ましくは、ソマトスタチンペプチドまたはボンベシンペプチドである。
【００２１】
本発明の一つの態様において、Qは、ボンベシンであり、Zは以下の式を有し：
E-F
Eは、D-Lys、D-Tyr、D-Ser、D-4-OH-Pro、L-4-OH-Pro、3-ヨード-D-Tyr、3-5ジヨード-D-Tyr、3-アスタチン-D-Tyr、3-5アスタチン-D-Tyr、3-ブロモ-D-Tyr、3-5ジブロモ-D-Tyr、D-Asn、L-Asn、D-Asp、L-Asp、D-Glu、L-Glu、D-Gln、またはL-Glnであり；かつFは、D-Lys、D-Tyr、D-Ser、L-Ser、D-4-OH-Pro、L-4-OH-Pro、3-ヨード-D-Tyr、3-5ジヨード-D-Tyr、3-アスタチン-D-Tyr、3-5アスタチン-D-Tyr、3-ブロモ-D-Tyr、3-5ジブロモ-D-Tyr、D-Asn、L-Asn、D-Asp、L-Asp、D-Glu、L-Glu、D-Gln、またはL-Glnである。
【００２２】
本発明はまた、疾患に罹っている被験者に本発明のペプチド薬剤の治療的有効量を投与することを含む疾患を治療または診断する方法を提供する。例えば、肺、乳房、脳、眼、前立腺もしくは結腸の腫瘍またはそれらの脈管形成性脈管、その対応する血管形成性血管、または神経内分泌系源の腫瘍、例えばカルチノイド症候群が、ペプチド薬剤で治療されうる。
【００２３】
本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明および特許請求の範囲から明らかであるものと思われる。
【００２４】
定義
本発明に従って、「治療薬」とは、ヒト疾患の検出、診断または治療において用いられる任意の化合物を意味する。そのような化合物は、天然に存在しうる、改変されうるか、または合成でありうる。治療薬は、ヒト疾患経路に関係している任意の生物学的過程を促進または抑制しうる。好ましい疾患ターゲットは、限定されるものではないが、炎症性腸疾患、慢性関節リウマチ、腫瘍性細胞または異常増殖性細胞、カルチノイド症候群、先端巨大症、および腫瘍起因性血管形成を含む。治療薬は、例えば、細胞毒性を含む抗腫瘍性でありうる。抗腫瘍薬は、アルキル化薬、抗生物質、代謝拮抗物質、ホルモン性アゴニストもしくはアンタゴニスト、チューブリン阻害剤、トポイソメラーゼIおよびII阻害剤、または免疫調節剤でありうる。それらは、他の機構的経路を通して作動しうるか、または抗腫瘍薬は、補足的増強剤でありうる。
【００２５】
「細胞毒性薬剤」とは、腫瘍細胞に対して毒性である任意の天然に存在する、改変された、または合成の化合物を意味する。そのような薬剤は、腫瘍、および炎症性疾患、自己免疫疾患の治療において、ならびに細胞増殖もしくは機能亢進性細胞集団を特徴とする他の症候または疾患の治療において有用である。細胞毒性薬剤は、限定されるものではないが、アルキル化薬、抗生物質、代謝拮抗物質、チューブリン阻害剤、トポイソメラーゼIおよびII阻害剤、ホルモン性アゴニストもしくはアンタゴニスト、または免疫調節剤を含む。それらはまた、光または赤外線により活性化される場合に細胞毒性でありうる(フォトフリン(Photofrin)、IR色素；Nat. Biotechnol. 19(4):327-331、2001)。それらは、他の機構的経路を通して作動しうるか、または細胞毒性薬剤は、補足的増強剤でありうる。
【００２６】
「検出可能標識」とは、ペプチド薬剤に付着している場合、その化合物を検出可能にする任意の型の標識を意味する。検出可能標識は、毒性または非毒性でありうる、かつ制限なしに、以下の特性の1つまたは複数を有しうる：蛍光(Kieferら、国際公開公報第9740055号)、色、毒性(例えば、放射能、例えば、γ線放射型放射性核種、オージェ放射型放射性核種、β線放射型放射性核種、α線放射型放射性核種、または陽電子放射型放射性核種)、放射線感受性、または感光性。検出可能標識は、本発明の類似体のアミノ酸残基に直接的に付着しうるが、検出可能標識はまた、例えば、類似体のアミノ酸残基に付着している(例えば、共有結合により連結されているまたは間接的に連結されている)キレート基と錯体化されることにより、間接的に付着しうる。検出可能標識はまた、第二分子により特異的に結合されうる標識の能力により、類似体に間接的に付着しうる。間接的に付着した標識のこの型の一つの例は、第二分子、ストレプトアビジンにより特異的に結合されうるビオチン標識である。第二分子はまた、中性子捕獲を可能にする部分に連結されうる(例として、例えば、Kahlら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:7265-7269、1990に記載されているようなホウ素ケージ)。
【００２７】
検出可能標識はまた、Gd3+、Fe3+、Mn3+、もしくはCr2+のような、重元素由来金属イオンまたは希土類イオンでありうる(例えば、Invest. Radiol. 33(10):752-761、1998を参照)。好ましい放射性検出可能標識は、本発明の類似体において存在している各D-TyrもしくはL-TyrまたはD-4-アミノ-PheもしくはL-4-アミノ-Phe残基に結合することができる放射性ヨウ素標識(例えば、122I、123I、124I、125Iまたは131I)である。好ましい非放射性検出可能標識は、NH2末端アミノ酸残基に結合することができる多くの公知の色素である。
【００２８】
細胞に対して毒性でありうる検出可能標識の好ましい例は、リシン、ジフテリア毒素および放射性検出可能標識(例えば、122I、123I、124I、125I、131I、177Lu、64Cu、67Cu、153Sm、166Ho、186Re、188Re、211At、212Bi、225Ac、67Ga、68Ga、75Br、76Br、77Br、117mSn、47Sc、109Pd、89Sr、159Gd、149Pm、142Pr、111Ag、165Dy、213Bi、111In、114mIn、201Ti、195mPt、193Pt、86Yおよび90Y)。これらの化合物および本明細書に記載される他のものは、生物活性ペプチドまたはそれの類似体に、直接的にまたは間接的に付着しうる。毒性検出可能標識はまた、化学療法剤(例えば、カンプトセシン、ホモカンプトセシン、5-フルオロウラシルまたはアドリアマイシン)でありうるか、または放射線感受性増強剤(例えば、本発明のソマトスタチン類似体が直接的または間接的に、付着しているタキソール、ゲムシタビン、フルオロピリミジン、メトロニトジル、またはデオキシシチジン類似体2',2'ジフルオロ-2'-デオキシシチジン(dFdCyd))でありうる。
【００２９】
「キレート基」とは、金属、光感作性剤などのような検出可能標識と錯体化しうる、ペプチド薬剤と共有結合性に結合した任意の基を意味する。キレート基は、例えば、イミノジカルボキシル基またはポリアミノポリカルボキシル基を含む。キレート基は、Liuら、Bioconjugate Chem. 12(4):653、2001；Alterら、米国特許第5,753,627号；および国際公開公報第91/01144号；(両方は、参照として本明細書に組み入れられている)に一般的に記載されている方法を用いて、本発明のペプチド薬剤に付着しうる。本発明の類似体は、それの付着したキレート剤を通じて、検出可能標識へ複合体化され、それにより、結果として、間接的に標識された類似体を生じうる。同様に、細胞毒性薬剤または治療薬もまた、キレート基を介して本発明のペプチド薬剤へ付着しうる。
【００３０】
「生物活性ペプチド」とは、生物学的過程または機能に関係している任意の天然に存在する、改変された、または合成のペプチドを意味する。生物活性ペプチドの例は、限定されるものではないが、以下のものを含む：ホルモン、成長因子、神経伝達物質、抗原、抗体またはその断片など。「ペプチド」とは、ペプチド結合または改変されたペプチド結合によりお互いに連結された2個またはそれ以上のアミノ酸を含む任意のポリペプチド、ペプチド(環状もしくは分枝状ペプチドを含む)、またはタンパク質を意味する。「ペプチド」は、一般にペプチド、オリゴペプチドまたはオリゴマーと呼ばれる短鎖、および長さが約100残基に及ぶより長い鎖の両方を指す。ペプチドは、20個の遺伝子にコードされたアミノ酸以外のアミノ酸、およびペプチド結合以外の結合を含みうる。「ペプチド」は、自然な過程、または当技術分野においてよく知られている化学修飾技術かのいずれかにより改変されたアミノ酸配列を含む。改変は、ペプチド主鎖、アミノ酸側鎖、およびアミノ末端またはカルボキシル末端を含む、ポリペプチドのどこでも生じうる。
【００３１】
ペプチドアミノ酸残基について本明細書に用いられる表記は、当技術分野において一般に用いられるそれらの略語である。あまり知られていない略語Abu、Ava、β-Ala、hSer、Nle、Nva、Pal、Sar、DabおよびDapは、それぞれ、2-アミノ-酪酸、アミノ吉草酸、β-アミノプロピオン酸、ホモセリン、ノルロイシン、ノルバリン、(2,3または4)3-ピリジル-Ala、1,4-ジアミノ酪酸、サルコシン、および1,3-ジアミノプロピオン酸を表す。本発明のすべての局面において、アミノ酸がD-アミノ酸またはL-アミノ酸のいずれかとして指定されない場合、アミノ酸は、L-アミノ酸であるか、またはD-アミノ酸もしくはL-アミノ酸のどちらかでありうるかのいずれかであることに留意のこと。
【００３２】
「類似体」とは、参照分子と異なるが、構造的、機能的、および/または化学的に関連している分子を意味する。類似体は、参照分子の本質的性質、機能または構造を保持しうる。最も好ましくは、類似体は、参照分子の少なくとも1つの生物学的機能を保持する。一般的に、相違は、参照分子および類似体の構造または配列が全体的に類似しているように制限される。ペプチド類似体およびそれの参照ペプチドは、任意に組み合わせた、1つまたは複数の置換、付加、および/または欠失によりアミノ酸配列において異なりうる。置換されたまたは挿入されたアミノ酸残基は、その遺伝子暗号によりコードされたものである場合もあるし、またはそうでない場合もある。ペプチドまたはポリペプチドの類似体は、対立遺伝子の変異体のように天然に存在しうるか、またはそれは、天然に存在していることが知られていない変異体でありうる。ペプチドの天然に存在しない類似体は、直接的合成、改変、または突然変異誘発技術により作製されうる。
【００３３】
「ソマトスタチンペプチド」とは、天然のソマトスタチンの少なくとも1つの生物活性を有するソマトスタチン類似体を意味し；好ましくは、この活性は、ソマトスタチン受容体を有している細胞上においてソマトスタチン受容体に特異的に結合する能力である。生物活性を有する多くのそのような類似体は、公知であり、例えば、Hornikら、米国特許第5,770,687号；Coyら、米国特許第5,708,135号；Hoegerら、米国特許第5,750,499号；McBrideら、米国特許第5,620,675号；Coyら、米国特許第5,633,263号；Coyら、米国特許第5,597,894号；Taylorら、米国特許第5,073,541号；Coyら、米国特許第4,904,642号；Dean、米国特許第6,017,509号；Hoffmanら、国際公開公報第98/47524号；およびA. E. Bogden、米国特許第5,411,943号に記載されており、それぞれは、参照として本明細書に組み入れられている。
【００３４】
「ボンベシンペプチド」という用語は、天然のボンベシンの少なくとも1つの生物活性を有するボンベシンペプチド類似体を含み；好ましくは、この活性は、ボンベシン受容体を有する細胞上において3つの既知のボンベシン受容体サブタイプの1つまたはすべてに特異的に結合する能力である。ボンベシン類似体は、限定されるものではないが、オクタペプチドG-Trp-H-I-His-J-K-NHV(GはGln、Asn、NleまたはNvaであり；HはAva、Gly、Leu、Val、Ile、NleまたはNvaであり；Iはβ-Ala、4-アミノ酪酸、Gly、Ala、D-Ala、N-Me-Ala、またはN-Me-D-Alaであり；JはPhe、Tyr、4-クロロ-Phe、4-フロオロ-Phe、4-ブロモ-Phe、4-NO2-Phe、Ala、Gly、Leu、Val、Ile、NleまたはNvaであり；KはMet、Phe、Tyr、4-クロロ-Phe、4-フロオロ-Phe、4-ブロモ-Phe、4-NO2-Phe、Ala、Gly、Leu、Val、Ile、NleまたはNvaであり；およびNはアミドまたはN-アルキルアミドを表し、かつVはHまたは低級アルキルアミドである)を含む群より選択されるペプチドを含む。
【００３５】
「アルキル」とは、脂肪族分枝または直鎖炭化水素基を意味する。アルキルは、同じまたは異なりうる1つまたは複数の置換基と選択的に置換される。「低級アルキル」とは、11個未満の炭素原子を有する分枝または直鎖アルキル基を意味し、好ましくは、C1〜C8アルキルである。「低級アルキルアミド」とは、1つまたは複数のアミド含有基と置換された上記のような低級アルキル基を意味する。
【００３６】
「親水性生体分布」とは、本発明のペプチド薬剤を投与された被験者の体液(例えば、血液、髄液、尿または他の体液)に対するペプチド薬剤の親和性を意味し、ペプチド薬剤は被験者の身体中に分布されるが、肝臓、胆嚢、および腎臓近位曲細管のような末梢器官による取り込みを避けながら、腎臓により尿中に速やかに分泌されるようになる。
【００３７】
「親水性ポリマー」とは、天然に存在するまたは合成の水溶性ポリマーを意味し、選択的に、本発明のペプチド薬剤の生体分布を変化させるように改変される。そのようなポリマーの例は、限定されるものではないが、ポリ(エチレングリコール)(PEG)、ポリ(ビニルアルコール)(PVA)、デキストラン、ヒドロキシエチルデンプン、ゼラチン、PVP、PHPMA、ポリα,β[N(2-ヒドロキシエチル)D,Lアスパルトアミド](PHEA)、ポリスクシンアミド(PSI)などを含む。これらのポリマーは、例えば、スクシニル化(負電荷)、PSIの部分的加水分解(カルボキシル基)、またはアミノ含有もしくはカルボキシル含有基を付加する化合物との反応などにより改変されうる。そのような選択的改変は、ポリマーの親水性を増加または変化させうるか、または、本発明のペプチド薬剤のペプチドまたは細胞毒性、治療性、もしくはキレートのセグメントへの結合を可能にしうる。そのようなポリマーおよび改変は、当技術分野において知られており、例えば、参照として、本明細書に組み入れられている、Yamoakaら、J. Pharmacol. Sci. 83:601-606、1994; Rypacekら、Pflugers Arch. 392:211-217、1982; Yamoakaら、J. Pharm. Pharmacol. 47:479-486、1995; Francesco、Bioconjugate Cehmistry 9(4):418-450、1998; DuncanおよびSpreafico、Clin. Pharmacokinet. 27(4):290-306、1994に記載されている。
【００３８】
本発明の他の特徴および利点は、以下のその詳細な説明および特許請求の範囲から明らかであるものと思われる。
【００３９】
詳細な説明
新規の普遍的な連結配列を利用するペプチド薬剤のファミリーが、開発された。連結配列は、ペプチド薬剤のターゲティングセグメントの生物学的能力の実質的損失なしに、生物活性ペプチドへの治療薬、細胞毒性薬剤、キレート基または検出可能標識の結合を可能にする。これらのペプチド薬剤または類似体は、本発明のもう一つの局面において、追加的に、親水性生体分布増強セグメントを含むことができ、類似体を肝臓から離れて腎臓による迅速な排出へと導くことにより治療の効力を増加させる。
【００４０】
本発明のペプチド薬剤は、以下の一般的式からなり：
X-Y-Z-Q(式I)
Xは、細胞毒性薬剤、治療薬、検出可能標識またはキレート基から任意に選択される；Yは、親水性要素であり；Qは、ソマトスタチンまたはボンベシンのような生物活性ペプチドであり、かつZは、N末端においてQに、またはQの適合性側鎖アミノ基に結合される場合、Qの生物活性の少なくとも50 %を保つ連結ペプチドである。Qの置換の例は、GnRHペプチドの6位である。これは、例えば、D-Lysの置換について非常に寛容性であり、D-Lysのεアミノ基は、受容体親和性を保持しながら、記載された細胞毒性または放射性基の付着のために用いられうる。Zは、以下の式を有する：A-B-C-E-F。Aは、D-Lys、D-Tyr、D-Ser、もしくはL-Serであるか、または削除され；Bは、D-LysもしくはD-Tyr、または削除され；Cは、Lys、Ser、hSer、Nle、Abu、Nva、(2、3もしくは4)3-ピリジル-Ala9(Pal)、Orn、Dab、Dap、4-NH2-Phe、D-4-OH-ProもしくはL-4-OH-Pro、または削除され；Eは、D-Lys、D-Tyr、D-Ser、D-OH-Pro、L-4-OH-Pro、D-Asn、L-Asn、D-Asp、L-Asp、D-Glu、L-Glu、D-Gln、またはL-Glnであり；かつFは、D-Lys、D-Tyr、D-Ser、D-OH-Pro、L-4-OH-Pro、3-ヨード-D-Tyr、3-5ジヨード-D-Tyr、3-アスタチン-D-Tyr、3-5アスタチン-D-Tyr、3-ブロモ-D-Tyr、3-5ジブロモ-D-Tyr、D-Asn、L-Asn、D-Asp、L-Asp、D-Glu、L-Glu、D-Gln、またはL-Glnであり；ただし、A、B、CおよびEがそれぞれ、Tyr、Tyr、LysおよびTyrである場合、FはLysではなく；ならびにA、B、CおよびEがそれぞれ、Lys、Tyr、LysおよびTyrである場合、EはTyrまたはLysではなく；ならびにAおよびBが削除されており、かつCおよびEがそれぞれLysおよびTyrである場合、FはTyrまたはLysではないという条件である。Zペプチドリンカーは、このように、長さが2個、3個、4個または5個の残基でありうる。
【００４１】
ここまでに合成されたペプチド薬剤には、以下のものが含まれる：
2005505580.tif 000003
本発明のペプチド薬剤の追加の配列は、表1に見出される。
【００４２】
本発明は、親水性残基を含むZリンカー、および延長された親水性リンカーの選択的な包含の両方の包含により、組織における毒性ペプチド類似体の蓄積を回避する。これらのリンカーは、腎臓を通して、無傷の、結合されていないペプチド薬剤の迅速な排出を促進する。本発明に含まれるポリエチレングリコール(PEG)、α,β-ポリ(N-ヒドロキシエチル)-DL-アスパルトアミド(PHEA)、およびポリビニルアルコール(PVA)基はまた、低い方の可能性がある薬物毒性と一般的に対応している迅速な腎臓分泌の優れた促進剤であることが知られている(Yamoakaら、J. Pharmacol. Sci.、83:601-606、1994; Rypacekら、Pflugers Arch.、392:211-217、1982; Yamoakaら、J. Pharm. Pharmacol.、47:479-486、1995)。これらの基がまた、生物学的利用可能な、内部移行しない結合体から放射する低減された毒性を高めることを本発明者らは提案する。
【００４３】
本発明のペプチド薬剤は、細胞毒性薬剤に結合された場合、ペプチド類似体の完全な生物学的能力を保つように設計された普遍的連結配列を含む。本発明のペプチド類似体は、好ましくは、それが由来するところの親ペプチド類似体より大きいまたは等しい生物学的能力を有し、親ペプチドのターゲット特異性より高い、低いまたは等価であるである特異性をもつ。例えば、ソマトスタチン類似体は、天然に存在するソマトスタチンより多くのソマトスタチン受容体サブタイプに結合しうるか、または特定の受容体サブタイプに結合しうる。本発明のいくつかの類似体は、アミノ酸のD-異性体またはその類似体を含み、ペプチド類似体の高い受容体親和性および生物学的能力を保持しながら、細胞毒性薬剤の安定的結合を促進する。好ましくは、細胞毒性薬剤は、細胞内で遊離型細胞毒性薬剤の放出を促進する可能性が高い結合を介して結合される。
【００４４】
さらに、本発明のソマトスタチン類似体は、様々に親水性であるため、それらは、水溶性であり、かつ、それに伴い、以前の疎水性類似体と比較して、有用性が高まった。本明細書に記載される親水性類似体は、血液、髄液および他の体液中、加えて尿中に可溶性であり、腎臓による排出を促進する。この親水性特徴は、身体のほとんどあらゆる領域への本発明の類似体の送達を促進する。本発明はまた、ペプチド類似体への取り込みについての特定の親水性要素を開示し、類似体の親水性の改変が様々な結合された細胞毒性薬剤の化学的および構造的性質について調整することを可能にする。
【００４５】
ソマトスタチンアゴニストは、それらの受容体への結合後、速やかに内部に取り入れられ(Lukiniusら、Acta Onc.、38:383-387、1999を参照)、従って、伝統的な腫瘍細胞毒性薬剤のような様々な治療薬を標的化するためのベクターとして用いられうる。多くの腫瘍型がソマトスタチン2型受容体を多量に過剰発現しているので、そのような抗腫瘍薬の特異性が激烈に向上されうる可能性がある。この方法において、すべての結合可能細胞毒性薬剤に付随した毒性副作用は、ソマトスタチン受容体に対する非常に高い親和性を保持する強力なハイブリッド分子が設計されうる限り、有用に低下されうることを本発明者らは提案する。
【００４６】
本発明は、式IにおいてZと呼ばれている、連結配列の使用を特徴とし、それは、多くの長いN末端アミノ酸配列および高分子がアゴニスト効力を完全に保持しながらソマトスタチン類似体のN末端に結合されることを可能にすることを、本発明者らは見出した。この連結配列は、その結果として生じる結合体を肝臓から離れて腎臓による迅速な排出へと導くように設計された、より長い、酵素的安定な(D-アミノ酸の使用による)、親水性ペプチド配列(式IのY要素)を加えるために用いられうる。または、親水性ポリマーは、Zリンカーを介してペプチド類似体へ連結されうる。これは、内部移行していない結合体から放射する毒性の低減化を促進する。
【００４７】
ペプチド類似体はまた、細胞毒性基もしくは治療性基、またはキレート基もしくは検出可能標識に結合された特定のペプチド薬剤の生体分布を促進するように最適化されうる、式IにおいてYと表されている要素を含む。Yリンカーは、ペプチド、またはPEGもしくはPVAのようなポリマーでありうる。Yが親水性ペプチドである場合には、Yは、長さが1個〜50個のアミノ酸、またはより好ましくは長さが3個〜15個の残基でありうる。例えば、Yは、長さが3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個、11個、12個、13個、14個、15個、16個、17個、18個、19個または20個のアミノ酸残基でありうる。ペプチドである場合、Yは、天然に存在する、合成のまたは改変された、荷電もしくは非極性アミノ酸、それらの類似体または誘導体を含みうる。
【００４８】
本発明の連結配列は、式IにおいてQと呼ばれている生物活性ペプチドを、式IにおいてXと呼ばれている様々な治療薬または診断薬に結合するために用いられる。式Iの成分Xは、任意の既知の細胞毒性または治療性部分、例えば、アシビシン；アクラルビシン；アコダゾール塩酸塩；アクロニン；アドゼレシン；アドリアマイシン；アルデスロイキン；アルトレタミン；アンボマイシン；A. メタントロンアセテート；アミノグルテチミド；アムサクリン；アナストロゾール；アントラマイシン；アスパラギナーゼ；アスペルリン；アザシチジン；アゼテパ；アゾトマイシン；バチマスタット；ベンゾデパ；ビカルトアミド；ビサントレン塩酸塩；ビスナフィドジメシレート；ビゼレシン；硫酸ブレオマイシン；ブレクイナールナトリウム；ブロピリミン；ブスルファン；カクチノマイシン；カルステロン；カンプトセシン；カラセミド；カルベチマー；カルボプラチン；カルムスチン；カルビシン塩酸塩；カルゼレシン；セデフィンゴール；クロラムブシル；シロレマイシン；シスプラチン；クラドリビン；コンブレテスタチンA-4；クリスナトールメシレート；シクロホスファミド；シタラビン；ダカルバジン；DACA(N-[2-(ジメチル-アミノ)エチル]アクリジン-4-カルボキサミド)；ダクチノマイシン(アクチノマイシンD)；ダウノルビシン塩酸塩；ダウノマイシン；デシタビン；デキソルマプラチン；デザグアニン；デザグアニンメシレート；ジアジクオン；ドセタキセル；ドラサチン；ドキソルビシン；ドキソルビシン塩酸塩；ドロロキシフェン；クエン酸ドロロキシフェン；プロピオン酸ドロモスタノロン；デュアゾマイシン；エダトレキセート；エフロルニチン塩酸塩；エリプチシン；エルサミトルシン；エンロプラチン；エンプロメート；エピプロピジン；エピルビシン塩酸塩；エルブロゾール；エソルビシン塩酸塩；エストラムスチン；エストラムスチンリン酸ナトリウム；エタニダゾール；エチヨード化（Ethiodized）オイルI 131；エトポシド；リン酸エトポシド；エトプリン；ファドロゾール塩酸塩；ファザラビン；フェンレチニド；フロックスウリジン；リン酸フルダラビン；フルオロウラシル；5-FdUMP；フルオロシタビン；フォスクイドン；フォストリエシンナトリウム；ゲムシタビン；ゲムシタビン塩酸塩；金Au 198；ホモカンプトセシン；ヒドロキシ尿素；イダルビシン塩酸塩；イフォスファミド；イルモフォシン；インターフェロンα-2a；インターフェロンα-2b；インターフェロンα-n1；インターフェロンα-n3；インターフェロンβ-Ia；インターフェロンγ-Ib；イプロプラチン；イリノテカン塩酸塩；酢酸ランレオチド；レントロゾール；酢酸ロイプロリド；リアロゾール塩酸塩；ロメトレキソールナトリウム；ロムスチン；ロソキサントロン塩酸塩；マソプロコール；メイタンシン；メクロレタミン塩酸塩；酢酸メゲストロール；酢酸メレンゲストロール；メルファラン；メノガリル；メルカプトプリン；メトトレキセート；メトトレキセートナトリウム；メトプリン；メツレデパ；ミチンドミド；ミトカルシン；ミトクロミン；ミトジリン；ミトマルシン；ミトマイシン；ミトスペル；ミトタン；ミトキサントロン塩酸塩；マイコフェノール酸（Mycophenolic）；ノコダゾール；ノガラマイシン；オルマプラチン；オキシスラン；��クリタキセル；ペガスパルガーゼ；ペリオマイシン；ペンタムスチン；硫酸ペプロイシン；ペルフォスファミド；ピポブロマン；ピポスルファン；ピロキサントロン塩酸塩；プリカマイシン；プロメスタン；ポルフィマーナトリウム；ポルフィロマイシン；プレドニムスチン；プロカルバジン塩酸塩；ピューロマイシン；ピューロマイシン塩酸塩；ピラゾフリン；リゾキシン；リゾキシンD；リボプリン；ログレチミド；サフィンゴール；サフィンゴール塩酸塩；セムスチン；シムトラゼン；スパルフォセートナトリウム；スパルソマイシン；スピロゲルマニウム塩酸塩；スピロムスチン；スピロプラチン；ストレプトニグリン；ストレプトゾシン；塩化ストロンチウムSr 89；スロフェヌール；タリソマイシン；タキサン；タキソイド；テコガランナトリウム；テガファー；テロキサントロン塩酸塩；テモポルフィン；テニポシド；テロキシロン；テストラクトン；チアミプリン；チオグアニン；チオテパ；チミタック；チアゾフリン；チラパザミン；トムデックス；TOP53；トポテカン塩酸塩；クエン酸トレミフェン；酢酸トレストロン；リン酸トリシリビン；トリメトレキセート；グルクロン酸トリメトレキセート；トリプトレリン；ツブロゾール塩酸塩；ウラシルマスタード；ウレデパ；バプレオチド；ベルテポルフィン；ビンブラスチン；硫酸ビンブラスチン；ビンクリスチン；硫酸ビンクリスチン；ビンデシン；硫酸ビンデシン；硫酸ビネピジン；硫酸ビングリシネート；硫酸ビンロイロシン；酒石酸ビノレルビン；硫酸ビンロシジン；硫酸ビンゾリジン；ボロゾール；ゼニプラチン；ジノスタチン；ゾルビシン塩酸塩；2-クロロデオキシアデノシン；2'デオキシホルマイシン；9-アミノカンプトセシン；ラルチトレキシド；N-プロパルジル-5,8-ジデアザ葉酸；2クロロ-2'-アラビノ-フルオロ-2'-デオキシアデノシン；2-クロロ-2'-デオキシアデノシン；アニソマイシン；トリコスタチンA；hPRL-G129R；CEP-751；リノミド；イオウマスタード；窒素マスタード(メクロレタミン)；N-メチル-ニトロソ尿素(MNU)；N,N'-ビス(2-クロロエチル)-N-ニトロソ尿素(BCNU)；N-(2-クロロエチル)-N'シクロヘキシル-N-ニトロソ尿素(CCNU)；N-(2-クロロエチル)-N'-(トランス-4-メチルシクロヘキシル)-N-ニトロソ尿素(MeCCNU)；N-(2-クロロエチル)-N'-(ジエチル)エチルホスホネート-N-ニトロソ尿素(フォテムスチン)；ストレプトゾトシン；ジアカルバジン(DTIC)；ミトゾロミド；テモゾロミド；ミトマイシンC；AZQ；オキサリプラチン；C1-973；DWA 2114R；JM216；JM335；ビス(白金)；6-メルカプトプリン；6-チオグアニン；ハイポキサンチン；テニポシド9-アミノカンプトセシン；トポテカン；CPT-11；エピルビシン；ダルビシン；ミトキサントロン；ロソキサントロン；ピラゾロアクリジン；オール-トランスレチノール；14-ヒドロキシ-レトロ-レチノール；オール-トランスレチン酸；N-(4-ヒドロキシフェニル)レチンアミド；13-シスレチン酸；3-メチルTTNEB；9-シスレチン酸；フルダラビン(2-F-アラ-AMP)；または2-クロロデオキシアデノシン(2-Cda)のような抗腫瘍薬でありうる。
【００４９】
他の抗腫瘍化合物は、限定されるものではないが、20-pi-1,25ジヒドロキシビタミンD3；5-エチニルウラシル；アビラテロン；アクラルビシン；アシルフルベン；アデシルペノール；アドゼレシン；アルデスロイキン；すべてのTKアンタゴニスト；アルトレタミン；アムバムスチン；アミドックス；アミフォスチン；アミノレブリン酸；アムルビシン；アムサクリン；アナグレリド；アナストロゾール；アンドログラフォリド；脈管形成阻害剤；アンタゴニストD；アンタゴニストG；アンタレリックス；抗背側化形態形成タンパク質-1；抗アンドロゲン、前立腺癌；抗エストロゲン；抗新生物薬；アンチセンスオリゴヌクレオチド；グリシン酸アフィドコリン；アポトーシス遺伝子モジュレーター；アポトーシスレギュレーター；アプリン酸；アラ-CDP-DL-PTBA；アルギニンデアミナーゼ；アスラクリン；アタメスタン；アトリムスチン；アキシナスタチン1；アキシナスタチン2；アキシナスタチン3；アザセトロン；アザトキシン；アザチロシン；バカチンIII誘導体；バラノール；バチマスタット；BCR/ABLアンタゴニスト；ベンゾクロリン；ベンゾイルスタウロスポリン；βラクタム誘導体；β-アレチン；ベータクラマイシンB；ベツリン酸（betulinic acid）；bFGF阻害剤；ビカルタミド；ビサントレン；ビサジリジニルスペルミン；ビスナフィド；ビストラテンA；ビゼレシン；ブレフレート；ブレオマイシンA2；ブレオマイシンB2；ブロピリミン；ブドチタン；ブチオニンスルフォキシミン；カルシポトリオール；カルフォスチンC；カンプトセシン誘導体(例えば、10-ヒドロキシ-カンプトセシン)；カナリポックスIL-2；カペシタビン；カルボキサミド-アミノ-トリアゾール；カルボキシアミドトリアゾール；CaレストM3；CARN 700；軟骨由来阻害剤；カルゼレシン；カゼインキナーゼ阻害剤(ICOS)；カスタノスペルミン；セクロピンB；セトロレリックス；クロリン；クロロキノキサリンスルフォンアミド；シカプロスト；シス-ポルフィリン；クラドリビン；クロミフェン類似体；クロトリマゾール；コリスマイシンA；コリスマイシンB；コムブレタスタチンA4；コムブレタスタチン類似体；コナゲニン；クラムベシジン816；クリスナトール；クリプトフィシン8；クリプトフィシンA誘導体；クラシンA；シクロペンタントラキノン；シクロプラタム；シペマイシン；シタラビンオコフォスフェート；細胞溶解因子；シトスタチン；ダクリキシマブ；デシタビン；デヒドロジデムニンB；2'デオキシコホルマイシン(DCF)；デスロレリン；デキシホスファミド；デキスラゾキサン；デキスベラパミル；ジアジクオン；ジデムニンB；ジドックス；ジエチルノルスペルミン；ジヒドロ-5-アザシチジン；ジヒドロタキソール, 9-；ジオキサマイシン；ジフェニルスピロムスチン；ジスコデルモリド；ドコサノール；ドラセトロン；ドキシフルリジン；ドロロキシフェン；ドロナビノール；デュオカルマイシンSA；エベセレン；エコムスチン；エデルフォシン；エドレコロマブ；エフロルニチン；エレメン；エミテファー；エピルビシン；エポチロン(A、R = H；B、R = Me)；エピチロン；エピステリド；エストラムスチン類似体；エストロゲンアゴニスト；エストロゲンアンタゴニスト；エタニダゾール；エトポシド；エトポシド4'-リン酸(エトポフォス)；エキセメスタン；ファドロゾ���ル；ファザラビン；フェンレチニド；フィルグラスチム；フィナステリド；フラボピリドール；フレゼラスチン；フルアステロン；フルダラビン；フルオロダウノルニシン塩酸塩；フォルフェニメックス；フォルメスタン；フォストリエシン；フォテムスチン；ガドリニウムテキサフィリン；硝酸ガリウム；ガロシタビン；ガニレリックス；ゼラチナーゼ阻害剤；ゲムシタビン；グルタチオン阻害剤；ヘプスルファム；ヘレグリン；ヘキサメチレンビスアセトアミド；ホモハリングトニン(HHT)；ヒペリシン；イバンドロン酸；イダルビシン；イドキシフェン；イドラマントン；イルモフォシン；イロマスタット；イミダゾアクリドン；イミクイモド；免疫刺激薬ペプチド；インスリン様成長因子-1受容体阻害剤；インターフェロンアゴニスト；インターフェロン；インターロイキン；ヨーベングアン；ヨードドキソルビシン；イポメアノール, 4-；イリノテカン；イロプラクト；イルソグラジン；イソベンガゾール；イソホモハリコンドリンB；イタセトロン；ジャスプラキノリド；カハラリドF；ラメラリン-Nトリアセテート；ランレオチド；レイナマイシン；レノグラスチム；硫酸レンチナン；レプトルスタチン；レトロゾール；白血病阻害因子；白血球αインターフェロン；ロイプロリド + エストロゲン + プロゲステロン；ロイプロレリン；レバミゾール；リアロゾール；鎖状ポリアミン類似体；脂肪親和性二糖ペプチド；脂肪親和性白金化合物；リソクリナミド7；ロバプラチン；ロムブリシン；ロメトレキソール；ロニダミン；ロソキサントロン；ロバスタチン；ロキソリビン；ルルトテカン；ルテチウムテキサフィリン；リソフィリン；溶解性ペプチド；メイタンシン；マンノスタチンA；マリマスタット；マソプロコール；マスピン；マトリリシン阻害剤；マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤；メノガリル；メルバロン；メテレリン；メチオニナーゼ；メトクロプラミド；MIF阻害剤；イフェプリストン；ミルテフォシン；ミリモスチム；ミスマッチ二重鎖RNA；ミスラシン；ミトグアゾン；ミトラクトール；ミトマイシン類似体；ミトナフィド；ミトトキシン線維芽細胞成長因子-サポリン；ミトキサントロン；モファロテン；モルグラモスチム；モノクローナル抗体、ヒト絨毛性ゴナドトロピン；モノホスホリル脂質A + ミオバクテリウム細胞壁sk；モピダモール；多剤耐性遺伝子阻害剤；多腫瘍抑制因子1に基づく治療；マスタード抗癌剤；ミカペルオキシドB；ミコバクテリアの細胞壁抽出物；ミリアポロン；N-アセチルジナリン；N-置換型ベンズアミド；ナファレリン；ナグレスチップ；ナロキソン + ペンタゾシン；ナパビン；ナフテルピン；ナルトグラスチム；ネダプラチン；ネモルビシン；ネリドロン酸；中性エンドペプチダーゼ；ニルタミド；ニサマイシン；酸化窒素モデュレーター；ニトロキシド抗酸化剤；ニツルリン；06-ベンジルグアニン；オクトレオチド；オキセノン；オリゴヌクレオチド；オナプリストン；オンダンセトロン；オラシン；経口用サイトカインインデューサー；オルマプラチン；オサテロン；オキサリプラチン；オキサウノマイシン；パクリタキセル類似体；パクリタキセル誘導体；パラウアミン；パルミトイルリゾキシン；パミドロン酸；パナキシトリオール；パノミフェン；パラバクチ��；パゼリプチン；ペガスパラガーゼ；ペルデシン；ペントサンポリ硫酸ナトリウム；ペントスタチン；ペントロゾール；ペルフルブロン；ペルフォスファミド；ペリリルアルコール；フェナジノマイシン；フェニルアセテート；ホスファターゼ阻害剤；ピシバニル；ピロカルピン塩酸塩；ピラルビシン；ピリトレキシム；プラセチンA；プラセチンB；プラスミノーゲンアクチベーター阻害剤；白金複合体；白金化合物；白金-トリアミン複合体；ポドフィロトキシン；ポルファイマーナトリウム；ポルフィロマイシン；プロピルビス-アクリドン；プロスタグランジンJ2；プロテアゾーム阻害剤；プロテインAに基づく免疫モデュレーター；プロテインキナーゼC阻害剤；プロテインキナーゼC阻害剤、微小藻類；プロテインチロシンホスファターゼ阻害剤；プリンヌクレオシドホスフォリラーゼ阻害剤；プルプリン；ピラゾロアクリジン；ピリドキシル化ヘモグロビンポリオキシエチレン結合体；rafアンタゴニスト；ラルチトレキシド；ラモセトロン；rasファルネシルプロテイントランスフェラーゼ阻害剤；ras阻害剤；ras-GAP阻害剤；レテリプチン脱メチル化；レニウム Re 186 エチドロネート；リボザイム；RIIレチンアミド；ログレチミド；ロヒツキン；ロムルチド；ロクイニメックス；ルビジノンB 1；ルボキシル；サフィンゴール；セントピン；SarCNU；サルコフィトールA；サルグラモスチム；Sdi 1模倣体；セムスチン；老化由来阻害剤1；センスオリゴヌクレオチド；シグナル伝達阻害剤；シグナル伝達モデュレーター；シグナル鎖抗原結合タンパク質；シゾフィラン；ソブゾキサン；ナトリウムボロカプテート；ナトリウムフェニルアセテート；ソルベロール；ソマトメジン結合タンパク質；ソネルミン；スパルフォス酸（sparfosic acid）；スピカマイシンD；スピロムスチン；スプレノペンチン；スポンジスタチン1；スクアラミン；幹細胞阻害剤；幹細胞分裂阻害剤；スチピアミド；ストロメリシン阻害剤；スルフィノシン；超活性血管作用腸管ペプチドアンタゴニスト；スラジスタ；スラミン；スワインソニン；合成グリコサミノグリカン；タリムスチン；タモキシフェンメチオジド；タウロムスチン；タザロテン；テコガランナトリウム；テガファー；テルラピリリウム；テロメラーゼ阻害剤；テモポルフィン；テモゾロミド；テニポシド；テトラクロロデカオキシド；テトラゾミン；タリブラスチン；タリドミド；チオコラリン；トロンボポイエチン；トロンボポイエチン模倣体；チマルファシン；チモポイエチン受容体アゴニスト；チモトリナン；甲状腺刺激ホルモン；スズエチルエチオプルプリン；チラパザミン；チタノセンジクロライド；トポテカン；トプセンチン；トレミフェン；全能性幹細胞因子；翻訳阻害剤；トレチノイン；トリアセチルウリジン；トリシリビン；トリメトレキセート；トリプトレリン；トロピセトロン；ツロステリド；チロシンキナーゼ阻害剤；チルフォスチン；UBC阻害剤；ウベニメックス；尿生殖洞由来成長抑制因子；ウロキナーゼ受容体アンタゴニスト；バプレオチド；バリオリンB；ベクター系赤血球遺伝子治療；ベラレソール；ベラミン；ベルジン；ベルテポルフィン；ビノレルビン；ビンキサルチン；ビタキシン；ボロゾール；ザノテロン；ゼニプラチン；ジラスコルブ；およびジノスタチ��スチマラマーを含む。
【００５０】
Xはまた、増殖抑制剤、例えば、ピリトレキムイソチオネートでありうる。または、Xは、例えば、シトグルシドのような抗前立腺肥大剤、例えばタムスロシン塩酸塩のような良性前立腺肥厚治療剤、または例えば、ペントモンのような前立腺増殖阻害剤でありうる。
【００５１】
Xはまた、限定されるものではないが、フィブリノーゲン125I；フルデオキシグルコース18F；フルオロドーパ18F；インスリン125I；インスリン131I；ロベングアン123I；ヨージパミドナトリウム131I；ヨードアンチピリン131I；ヨードコレステロール131I；ヨード馬尿酸ナトリウム123I；ヨード馬尿酸ナトリウム125I；ヨード馬尿酸ナトリウム131I；ヨードピラセト125I；ヨードピラセト131I；ロフェタミン塩酸塩123I；イオメシン125I；イオメシン131I；ヨータラム酸ナトリウム125I；ヨータラム酸ナトリウム131I；チロシン131I；リオチロニン125I；リオチロニン131I；メリソプロールアセテート197Hg；メリソプロールアセテート203Hg；メリソプロール197Hg；セレノメチオニン75Se；テクネチウム99mTc三硫化アンチモンコロイド；テクネチウム99mTcビシセート；テクネチウム99mTcジソフェニン；テクネチウム99mTcエチドロネート；テクネチウム99mTcイクサメタジム；テクネチウム99mTcフリフォスミン；テクネチウム99mTcグルセプテート；テクネチウム99mTcリドフェニン；テクネチウム99mTcメブロフェニン；テクネチウム99mTcメドロネート；テクネチウム99mTcメドロネート二ナトリウム；テクネチウム99mTcメルチアチド；テクネチウム99mTcオキシドロネート；テクネチウム99mTcペンテテート；テクネチウム99mTcペンテテートカルシウム三ナトリウム；テクネチウム99mTcセスタミビ；テクネチウム99mTcシボロキシム；テクネチウム99mTcスクシマー；テクネチウム99mTcイオウコロイド；テクネチウム99mTcテボロキシム；テクネチウム99mTcテトロフォスミン；テクネチウム99mTcチアチド；チロキシン125I；チロキシン131I；トルポビドン131I；トリオレイン125I；またはトリオレイン131Iを含む、放射性薬剤でありうる。
【００５２】
治療薬または細胞毒性薬剤は、例えば、限定されるものではないが、三環系抗鬱薬(例えば、イミプラミン、デシプラミン、アミトリプチリン、クロミプラミン、トリミプラミン、ドクサピン、ノルトリプチリン、プロトリプチリン、アモクサピンおよびマプロチリン)；非三環系抗鬱薬(例えば、セルトラリン、トラゾドンおよびシタロプラム)；Ca++アンタゴニスト(例えば、ベラパミル、ニフェジピン、ニトレンジピンおよびカロベリン)；カルモデュリン阻害剤(例えば、プレニルアミン、トリフルオロペラジンおよびクロミプラミン)；アンフォテリシンB；トリパラノール類似体(例えば、タモキシフェン)；抗不整脈薬(例えば、キニジン)；抗高血圧薬(例えば、レセルピン)；チオール涸渇剤(例えば、ブチオニンおよびスルフォキシミン)およびクレマフォールELのような多剤耐性低減剤を含む抗癌補助的増強剤を含みうる。
【００５３】
本発明の化合物はまた、顆粒球コロニー刺激因子のようなサイトカインと共に投与されうる。抗癌カクテル(例えば、本発明の薬剤と組み合わせた)に用いられる好ましい抗癌剤は以下のものを含む(いくつかは括弧に示されるそれらの最大耐量(MTD)を以て)：ゲムシタビン(1000 mg/m2)；メトトレキセート(15 gm/m2 静脈内 + 白血球 <500 mg/m2 静脈内w/o 白血球)；5-FU(500 mg/m2/日 x 5日間)；FUDR(マウスにおいて100 mg/kg x 5、ヒト動脈内において0.6 mg/kg/日)；FdUMP；ヒドロキシ尿素(男性において35 mg/kg/日)；ドセタキセル(60〜100 mg/m2)；ディスコデルモリド；エポチロン；ビンクリスチン(1.4 mg/m2)；ビンブラスチン(段階的増量：3.3〜11.1 mg/m2、またはまれに18.5 mg/m2まで)；ビノレルビン(30 mg/m2/週)；メタ-パック；イリノテカン(患者応答に依存して50〜150 mg/m2、1 x/週)；SN-38(イリノテカンより100倍強力)；10-OHカンプト；トポテカン(ヒトにおいて1.5 mg/m2/日、1 x 静脈内LD10マウス = 75 mg/m2)；エトポシド(ヒトにおいて100 mg/m2)；アドリアマイシン；フラボピリドール；Cis-Pt(ヒトにおいて100 mg/m2)；カルボ-Pt(ヒトにおいて360 mg/m2)；ブレオマイシン(20 mg/m2)；ミトマイシンC(20 mg/m2)；ミトラマイシン(30 sug/kg)；カペシタビン(経口で2.5 g/m2)；シタラビン(100 mg/m2/日)；2-Cl-2'デオキシアデノシン；フルダラビン-P04(25 mg/m2/日、x 5日間)；ミトキサントロン(12〜14 mg/m2)；ミトゾロミド(>400 mg/m2)；ペントスタチン；またはトムデックス。
【００５４】
Xは、好ましくは、メトトレキセートのような代謝拮抗剤でありうる。代謝拮抗物質は、葉酸型代謝拮抗物質、限定されるものではないが、以下の化合物およびそれらの誘導体を含む：アザチオプリン、クラドリビン、シタラビン、ダカルバジン、リン酸フルダラビン、フルオロウラシル、ゲンシタビンクロル水和物、メルカプトプリン、メトトレキセート、ミトブロニトール、ミトタン、プログアニルクロル水和物、ピリメタミン、ラルチトレキシド、グルクロン酸トリメトレキセート、ウレタン、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンクリスチンなど。より好ましくは、Xは、例えば、メトトレキセート、プログアニルクロル水和物、ピリメタミン、トリメトプリム、もしくはグルクロン酸トリメトレキセート、またはこれらの化合物の誘導体を含む薬剤の部類でありうる。
【００５５】
もう一つの態様において、Xは、限定されるものではないが、アクラルビシンクロル水和物、ダウノルビシンクロル水和物、ドキソルビシンクロル水和物、エピルビシンクロル水和物、イダルビシンクロル水和物、ピラルビシンまたはゾルビシンクロル水和物を含む、腫瘍性薬剤のアントラサイクリンファミリーのメンバーでありうる。さらになお、Xは、カンプトセシン、または10,11メチレンジオキシカンプトセシンのようなそれの誘導体もしくは関連化合物でありうる。Xはまた、様々な構造的に関連した化合物を含む、化合物のメイタンシノイドファミリーから選択されうる。例えば、アンサミトシンP3、メイタンシン、2'-N-デメチルメイタンブチン、またはメイタンビシクリノールは、メイタンシノイドである。
【００５６】
本発明のペプチド薬剤は、診断または治療的使用を容易にするために修飾または標識されうる。放射性、蛍光、重金属または他の薬剤のような検出可能標識が、本発明のペプチド薬剤に結合されうる。ペプチド薬剤の単一、二重、または多重標識が、都合の良い場合がある。例えば、アミン含有側または反応性基へのキレート基を介する、例えば90Yの付加的結合と組み合わされた1つまたは複数の残基の放射性ヨウ素化での二重標識は、組み合わせ標識を可能にする。これは、広く分散した小さな腫瘍性細胞塊の同定のような専門の診断上の要求に有用でありうる。
【００５７】
本発明のペプチド類似体はまた、例えば、化合物のチロシン残基のハロゲン化により修飾されうる。ハロゲンは、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、またはアスタチンを含む。そのようなハロゲン化ペプチド薬剤は、例えば、ハロゲンが例えば、18F、75Br、77Br、122I、123I、124I、125I、129I、131I、または211Atのような放射性同位元素である場合には、検出可能に標識されうる。本発明のハロゲン化化合物は、各ペプチド薬剤分子における少なくとも1個のアミノ酸に、および好ましくは、D-Tyr残基に共有結合性に結合されたハロゲンを含む。他の適する検出可能修飾は、類似体、特にリシンを含むリンカーを有する類似体のリシン残基への他の化合物(例えば、フルオレセインのような蛍光色素)の結合を含む。
【００５８】
本発明の生物学的ペプチド薬剤を放射標識するための放射性同位元素は、類似体の残基へ共有結合性に結合されうるいずれの放射性同位元素も含みうる。放射性同位元素は、β線もしくはγ線のいずれかを放射する放射性同位元素から選択されうるか、または、ペプチド薬剤は、例えば、類似体のリシン残基に共有結合性に結合されうる、キレート基を含むように修飾されうる。キレート基は、その後、ガリウム、インジウム、テクネチウム、イッテルビウム、レニウムまたはタリウム(例えば、125I、67Ga、111In、99mTc、169Yb、186Re)のような様々な放射性同位元素のいずれかを含むように改変されうる。
【００５９】
ペプチド薬剤が放射性同位元素の付着により改変される場合、好ましい放射性同位元素は、用いられる薬剤の生物学的半減期に一致するか、またはより長い、放射性半減期を有するものである。より好ましくは、放射性同位元素は、ハロゲン原子の放射性同位元素(例えば、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素およびアスタチンの放射性同位元素)、よりいっそう好ましくは75Br、77Br、76Br、122I、123I、124I、125I、129I、131I、または211Atである。
【００６０】
放射性金属を含む結合体は、放射線撮影の画像化または放射線治療において有用である。好ましい放射性同位元素はまた、99mTc、51Cr、67Ga、68Ga、111In、168Yb、140La、90Y、88Y、153Sm、156Ho、165Dy、64Cu、97Ru、103Ru、186Re、188Re、203Pb、211Bi、212Bi、213Biおよび214Biを含む。金属の選択は、所望の治療的または診断的適用に基づいて決定される。
【００６１】
本発明の金属複合体は、診断薬および/または治療薬として有用である。検出可能な標識は、Gd3+、Fe3+、Mn3+もしくはCr2+のような重元素由来金属イオンまたは希土類イオンでありうる。常磁性または超常磁性金属を含む結合体は、MRI画像化適用における診断薬として有用である。結合体に用いられうる常磁性金属は、限定されるものではないが、クロミウム(III)、マンガン(II)、鉄(II)、鉄(III)、コバルト(II)、ニッケル(II)、銅(II)、プラセオジム(III)、ネオジム(III)、サマリウム(III)、ガドリウム(III)、テルビウム(III)、ジスプロシウム(III)、ホルミウム(III)、エルビウム(III)、およびイッテルビウム(III)を含む。好ましくは、ポリマーは、Zが常磁性金属の濃度である、少なくとも10 mM-1秒-1Z-1、12 mM-1秒-1Z-1、15 mM-1秒-1Z-1、または20 mM-1秒-1Z-1 の緩和性を有する。
【００６２】
キレート基は、検出可能標識または他の分子を本発明のペプチド薬剤に間接的に結合するために用いられうる。キレート基は、二機能性安定キレート剤が1つもしくは複数の末端または内部のアミノ酸反応性基に結合されうるように、ペプチド薬剤を放射性標識と連結させうる。それらは、イソチオシアネートβ-Alaまたはエドマン分解を防ぐ適切な非α-アミノ酸リンカーを介して連結されうる。当技術分野において公知のキレート剤の例は、例えば、イミノカルボキシルおよびポリアミノポリカルボキシル反応性基、DTPA(N,N-ビス[2-[ビス(カルボキシメチル)アミノ]エチル]グリシン)、ならびにDOTA(1,4,7,10-テトラアザシクロドデカン-1,4,7,10-四酢酸)を含む。
【００６３】
本発明の細胞毒性または治療性結合体は、ソマトスタチン受容体を認識する多数の既知のソマトスタチン類似体のいずれか、例えば、上の定義において記載されているもの、を使用することができる。好ましくは、結合体のソマトスタチン類似体部分は、10個と18個の間のアミノ酸を含み、かつコア配列：シクロ[Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys]を含む。好ましくは、類似体のC末端は、Thr-NH2である。本明細書に開示されているボンベシン類似体も、本発明のペプチド薬剤における細胞毒性薬剤または治療薬に結合されうる。
【００６４】
ソマトスタチン類似体は、公知の化学的方法を用いて、細胞毒性薬剤または治療薬に直接的に結合されうるか、またはその2つの部分が間接的結合により結合されうる。例えば、類似体は、細胞毒性薬剤または治療薬に付着されるキレート基に付着されうる。キレート基は、限定されるものではないが、イミノジカルボキシル基またはポリアミノポリカルボキシル基を含む。一般的方法については、例えば、Liuら、Bioconjugate Chem. 12(4):653、2001；Chengら、国際公開公報第89/12631号；Kiefferら、国際公開公報第93/12112号；Albertら、米国特許第5,753,627号；および国際公開公報第91/01144号を参照されたい(それぞれは、参照として本明細書に組み入れられている)。
【００６５】
標識された、治療薬または細胞毒性薬剤の特異的ターゲティングは、生物活性ペプチドに特異的な受容体を発現させている腫瘍の選択的破壊を可能にする。例えば、ソマトスタチン受容体を発現させている腫瘍は、肺、乳房、前立腺、結腸、脳、胃腸管、神経内分泌系軸、肝臓、腎臓などの腫瘍を含む(Schaerら、Int. J. Cancer、70:530-537、1997; Chaveら、Br. J. Cancer 82(1):124-130、2000; Evansら、Br. J. Cancer 75(6):798-803、1997を参照)。細胞毒性ソマトスタチンペプチド類似体もまた、ソマトスタチン受容体を過剰発現させているもののような、腫瘍の脈管構造または血管形成性血管に特異的でありうる(DenzlerおよびReubi、Cancer 85:188-198、1999; Gulecら、J. Surg. Res. 97(2):131-137、2001; Wolteringら、J. Surg. Res. 50:245、1991を参照)。
【００６６】
本発明のペプチド薬剤は、ヒトのような哺乳動物の被験者へ、直接的にまたは当技術分野において公知である任意の薬学的に許容される担体もしくは塩と組み合わせて投与されうる。薬学的に許容される塩は、薬学的工業において一般に使用される非毒性酸付加塩または金属複合体を含みうる。酸付加塩の例は、酢酸、乳酸、パモ酸（pamoic acid）、マレイン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、コハク酸、安息香酸、パルミチン酸、スベリン酸、サリチル酸、酒石酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、またはトリフルオロ酢酸などのような有機酸；タンニン酸、カルボキシメチルセルロースなどのような重合体の酸；および塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸などのような無機酸を含む。金属複合体は、亜鉛、鉄などを含む。一つの典型的な薬学的に許容される担体は、生理的食塩水である。他の生理学的に許容される担体およびそれらの製剤は、当業者に公知であり、例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences、(第18版)、A. Gennaro編、1990、Mack Publishing Company、Easton、PAに記載されている。
【００６７】
本発明のペプチド薬剤またはその薬学的に許容される塩の治療的有効量の薬学的製剤は、投与経路に適合した薬学的に許容される担体と混合して、経口で、非経口で(例えば、筋内、腹腔内、静脈内もしくは皮下の注射、吸入、皮内に、点眼、またはインプラント)、鼻腔内に、膣に、直腸に、舌下に、または局所的に投与されうる。
【００６８】
製剤を作製するための当技術分野においてよく知られた方法は、例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences、(第18版)、A. Gennaro編、1990、Mack Publishing Company、Easton、PAに見出される。経口使用向けの組成物は、薬学的組成物の製造のための当技術分野に公知である任意の方法に従って、固体または液体の形に調製されうる。組成物は、選択的に、より口に合う調製のために、甘味料、調味料、着色料、香料および/または保存料を含みうる。経口投与のための固体剤形は、カプセル、錠剤、ピル、粉末および顆粒を含む。そのような固体形において、活性化合物は、少なくとも1つの不活性の薬学的に許容される担体または賦形剤と混合される。これらは、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、乳糖、ショ糖、デンプン、リン酸カルシウム、リン酸ナトリウムまたはカオリンのような不活性希釈剤を含む。結合剤、緩衝剤および/または潤滑剤(例えば、ステアリン酸マグネシウム)もまた使用されうる。錠剤およびピルは、追加的に、腸溶性コーティングで調製されうる。
【００６９】
経口投与のための液体剤形は、薬学的に許容される乳液、溶液、懸濁液、シロップおよび軟ゼラチンカプセルを含む。これらの剤形は、水または油媒体のような当技術分野において一般に用いられる不活性希釈剤を含む。そのような不活性希釈剤の他に、組成物はまた、湿潤剤、乳化剤および沈殿防止剤のような補助剤を含みうる。
【００７０】
非経口投与のための製剤は、滅菌した水性または非水性溶液、懸濁液または乳濁液を含む。適する溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、ゼラチン、水素付加されたナファレン、およびオレイン酸エチルのような注射可能有機エステルを含む。そのような製剤はまた、保存剤、湿潤剤、乳化剤および分散剤のような補助剤を含む。生体適合性、生分解性ラクチドポリマー、ラクチド/グリコリドコポリマー、またはポリオキシエチレン-ポリオキシプロピレンコポリマーが、化合物の放出を制御するために用いられうる。本発明のポリペプチドのための他の有用である可能性のある非経口送達系は、エチレン-酢酸ビニルコポリマー粒子、浸透性ポンプ、移植可能な注入系、およびリポソームを含む。
【００７１】
液体製剤は、例えば、細菌保持式フィルターを通しての濾過により、組成物へ滅菌剤を組み込むことにより、または組成物を照射もしくは加熱することにより滅菌されうる。または、それらは、使用直前に、滅菌水またはいくつかの他の滅菌注射可能媒体に溶解されうる滅菌した固体組成物の形としても製造されうる。
【００７２】
直腸または膣の投与のための組成物は、好ましくは、活性物質に加えて、コカバターまたは坐剤蝋のような賦形剤を含みうる坐剤である。鼻または舌下の投与のための組成物もまた、当技術分野において公知の標準的賦形剤で調製されうる。吸入のための製剤は、賦形剤、例えば、乳糖を含みうるか、または、例えば、ポリオキシエチレン-9-ラウリルエーテル、グリココール酸塩およびデオキシコール酸を含む水溶液でありうるか、または、滴下式もしくはスプレー式点鼻薬の形をとってのまたはゲルとしての投与のための油性溶液でありうる。
【００７３】
本発明の組成物における活性成分の量は、変わりうる。正確な個々の用量は、投与されることになっているポリペプチド、投与の時期、投与の経路、製剤の性質、排出の速度、被験者の状態の性質、および患者の年齢、体重、健康および性を含む様々な因子に依存して、いくぶんか調整されうることを当業者は認識しているものと思われる。さらに、ソマトスタチンまたはボンベシンのような生物活性ペプチドにより標的化される状態の重症度もまた、用量レベルに影響を及ぼすものと思われる。一般的に、0.1 μg/kg体重〜100 mg/kg体重の間の用量レベルが、1日あたり単一用量として投与されるか、または複数回の用量へと分割される。好ましくは、一般的な用量範囲は、1日あたり250 μg/kg体重〜5.0 mg/kg体重の間である。様々な投与経路の異なる効率から見て、必要とされる用量の幅広い変動は、予想されるべきものである。例えば、経口投与は、一般的に、静脈注射による投与より高い用量レベルを必要とすることが予想されるものと思われる。これらの用量レベルにおける変動は、当技術分野においてよく知られている最適化のための標準の経験的なおきまりの手順を用いて調整されうる。一般的に、正確な治療的有効用量は、上の同定された因子を考慮して、病院所属医師により決定されるものと思われる。
【００７４】
本発明のポリペプチドは、例えば、米国特許第5,672,659号および米国特許第5,595,760号に記載されるもののような徐放性組成物において投与されうる。即時放出性または徐放性組成物の使用は、治療されることになっている状態の型に依存している。状態が急性または超急性の疾患からなる場合には、即時放出型での治療が長時間放出の組成物より好ましいものと思われる。または、予防的もしくは長期間の治療については、徐放性組成物が一般的に好ましいものと思われる。
【００７５】
本発明のポリペプチドは、任意の適した方法で調製されうる。ポリペプチドは、天然に存在する源から単離されうる、組換えで産生されうる、もしくは合成的に作製されうるか、またはこれらの方法の組み合わせにより作製されうる。短いペプチドの合成は、当技術分野においてよく知られている。例えば、Stewartら、Solid Phase Peptide Synthesis(Pierce Chemical Co.、第2版、1984)を参照されたい。本発明のペプチドは、当技術分野において公知の標準的ペプチド合成方法に従って合成され、下の実施例1において例証されうる。
【００７６】
本発明は、以下の実施例により例示されているが、本発明を限定することを意図されるものでは決してない。
【００７７】
実施例1
(+)-アメトプテリン(メトトレキセート)のジセシウム塩の調製
メトトレキセート(0.75 mmole)を重炭酸セシウム(1.5 mmol)を添加された200 mlの水に溶解した。黄色溶液を、減圧下で蒸発させながら、4時間撹拌し、油性残留物をエタノールに溶解した。これを、残留の水を除去するために3回、無水エタノールから蒸発させた。
【００７８】
実施例2
2-ブロモ-アセチル-D-tert-ブチル-Ser-D-tert-ブチル-Ser-D-tert-ブチル-Ser-D-tert-ブチル-Ser-D-tert-ブチル-Ser-ε-tert-ブチルオキシカルボニル-Lys-D-tert-ブチル-Tyr-D-tert-ブチル-Tyr-S-トリチル-Cys-Phe-D-Trp-ε-tert-ブチルオキシカルボニル-Lys-tert-ブチル-Thr-S-トリチル-Cys-tert-ブチル-Thr-Rink（リンク）アミド樹脂の調製
リンクアミドMBHAポリスチレン樹脂(0.25 mmole)[4-(2',4'-ジメトキシフェニル-Fmoc-(アミノメチル)フェノキシアセトアミド-ノルロイシル-メチルベンズヒドリルアミン樹脂、100〜200メッシュ、Novabiochem、San Diego、CA]をCS136自動ペプチド合成機(CS Bio, Inc.、San Carlos、CA)の反応容器へ添加し、およそ1時間、DMF中に膨潤させた。樹脂を濾過し、DMF中の20 % ピペリジンの過剰量を添加し、2分間、混合した。樹脂を濾過し、再び、過剰量の20 % ピペリジンを添加し、樹脂Fmoc基の完全な除去を確実にするために20分間、混合した。脱保護後、樹脂をDMFで4回洗浄し、その後、第一の保護アミノ酸、Fmoc-Thr(tBut)(0.75 mmol)、ジイソプロピルカルボジイミド(DIC)(0.75 mmol)、およびN-ヒドロキシベンゾトリアゾール一水和物(HOBt)(0.75 mmol)をすべてDMFに溶解して、樹脂に添加し、混合し(1時間)、続いて、DMFで4回洗浄した。
【００７９】
Fmoc基を、再び、20 % ピペリジン/DMF溶液での処理により除去し、同じ一般的結合手順に従って、以下のアミノ酸をその増大するペプチド鎖と連続的に反応させた：Fmoc-S-トリチル-L-システイン、Fmoc-O-t-ブチル-L-スレオニン、Nα-Fmoc-Nε-Boc-L-リシン、Nα-Fmoc-Nin-Boc-D-トリプトファン、Fmoc-L-フェニルアラニン、Fmoc-S-トリチル-L-システイン、Fmoc-O-t-ブチル-D-チロシン、Fmoc-O-t-ブチル-D-チロシン、Nα-Fmoc-Nε-Boc-L-リシン、Fmoc-O-t-ブチル-D-セリン、Fmoc-O-t-ブチル-D-セリン、Fmoc-O-t-ブチル-D-セリン、Fmoc-O-t-ブチル-D-セリン、Fmoc-O-t-ブチル-D-セリン。最後のFmoc基の除去後、2-ブロモ酢酸を同じ結合試薬を用いてN末端アミノ基へ結合させた。
【００８０】
実施例3
メトトレキセート-アセチル-D-tert-ブチル-Ser-D-tert-ブチル-Ser-D-tert-ブチル-Ser-D-tert-ブチル-Ser-D-tert-ブチル-Ser-ε-tert-ブチルオキシカルボニル-Lys-D-tert-ブチル-Tyr-D-tert-ブチル-Tyr-S-トリチル-Cys-Phe-D-Trp-ε-tert-ブチルオキシカルボニル-Lys-tert-ブチル-Thr-S-トリチル-Cys-tert-ブチル-Thr-リンクアミド樹脂の調製
実施例1で調製されたメトトレキセートのジセシウム塩(0.75 mmol)を、DMSOに溶解し、丸底フラスコ内で実施例2で調製されたペプチジル樹脂(0.25 mmol)に添加した。懸濁液を水浴で加熱しながら(40℃、18時間)、静かに混合し、濾過し、そして大量のDMF、続いてメタノールで洗浄した。最後の濾過後、誘導化された樹脂を一晩、空気乾燥させた。
【００８１】
実施例4
メトトレキセート-アセチル-D-Ser-D-Ser-D-Ser-D-Ser-D-Ser-Lys-D-Tyr-D-Tyr-シクロ[Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Thr-アミドの調製
実施例3で調製されたメトトレキセート-ペプチド樹脂(0.25 mmol)を丸底フラスコに置き、水(2.5 %)、1,2-エタンジチオール(2.5 %)、およびトリイソプロピルシラン(1 %)を含む15 mlのトリフルオロ酢酸(TFA)溶液を添加した。懸濁液を撹拌し(2時間)、濾過し、TFAで数回、洗浄した。TFAを減圧下で蒸発させ、その結果生じた油にエーテルを添加すると、黄色の粉末を生じ、その後、それを60 % 酢酸(250 ml)に溶解した。メタノール中のヨウ素の濃厚溶液を、不変の褐色の着色が形成されるまで、勢いよく撹拌しながら、滴下方式で添加し、その後、過剰のヨウ素を少量のアスコルビン酸の添加により除去した。
【００８２】
溶液を減圧下で約10 mlの容量まで濃縮し、粗製のメトトレキセートペプチドをC-18結合シリカ(Dynamax 300、8 μm)のカラム(21.4 mm x 250 mm)上での予備的逆相高圧液体クロマトグラフィー(RP-hplc)により精製した。20 mL/分の流速での直線的勾配溶出系を使用し：0.1 % TFAからなる緩衝液A、および80 % MeCN中の0.1 % TFAの緩衝液B；20 % B〜50 % Bを1分あたり1 %で増加させた。分離は、280 nmでモニターされた。分析的hplcにより証明された純粋な生成物を含む画分をプールし、減圧下で濃縮し、凍結乾燥にかけた。ペプチドは、酢酸水溶液からの凍結乾燥により、恒量のふわふわした白色の粉末として得られた。酸加水分解物のアミノ酸分析およびマトリックス支援レーザー脱離質量分析法(matrix assisted laser desorption mass spectrometry)により正しい組成物が実証された。
【００８３】
実施例5
2-ブロモ-アセチル-D-tert-ブチル-Ser-tert-ブチル-Ser-D-tert-ブチル-Ser-tert-ブチル-Ser-D-tert-ブチル-Ser-tert-ブチル-Ser-D-tert-ブチル-Ser-tert-ブチル-Ser-D-tert-ブチル-Tyr-D-tert-ブチル-Ser-Gln-Trp-Ala-Val-β-Ala-tert-ブチルオキシカルボニル-His-Phe-Nle-リンクアミド樹脂の調製
リンクアミドMBHAポリスチレン樹脂(0.25 mmole)[4-2',4'-ジメトキシフェニル-Fmoc-(アミノメチル)フェノキシアセトアミド-ノルロイシル-メチルベンズヒドリルアミン樹脂、100〜200メッシュ、(Novabiochem、San Diego、CA)]をCS136自動ペプチド合成機(CS Bio, Inc.、San Carlos、CA)の反応容器へ添加し、およそ1時間、DMF中に膨潤させた。樹脂を濾過し、DMF中の20 % ピペリジンの過剰量を添加し、2分間、混合した。樹脂を濾過し、再び、過剰量の20 % ピペリジンを添加し、樹脂Fmoc基の完全な除去を確実にするために20分間、混合した。脱保護後、樹脂をDMFで4回洗浄し、その後、第一の保護アミノ酸、Fmoc-Nle(0.75 mmol)、ジイソプロピルカルボジイミド(DIC)(0.75 mmol)、およびN-ヒドロキシベンゾトリアゾール一水和物(HOBt)(0.75 mmol)をすべてDMFに溶解して、樹脂に添加し、混合し(1時間)、続いて、DMFで4回洗浄した。
【００８４】
Fmoc基を、再び、20 % ピペリジン/DMF溶液での処理により除去し、同じ結合試薬を用いて、実施例2に記載されているように、残りのアミノ酸誘導体および2ブロモ酢酸を結合させた。
【００８５】
実施例6
メトトレキセート-アセチル-D-tert-ブチル-Ser-tert-ブチル-Ser-D-tert-ブチル-Ser-tert-ブチル-Ser-D-tert-ブチル-Ser-tert-ブチル-Ser-D-tert-ブチル-Ser-tert-ブチル-Ser-D-tert-ブチル-Tyr-D-tert-ブチル-Ser-Gln-Trp-Ala-Val-β-Ala-tert-ブチルオキシカルボニル-His-Phe-Nle-リンクアミド樹脂の調製
実施例1で調製されたメトトレキセートのジセシウム塩(0.75 mmol)を、DMSOに溶解し、丸底フラスコ内で実施例5で調製されたペプチジル樹脂(0.25 mmol)に添加した。懸濁液を水浴で加熱しながら(40℃、18時間)、静かに混合し、濾過し、そして大量のDMF、続いてメタノールで洗浄した。最後の濾過後、誘導化された樹脂を一晩、空気乾燥させた。
【００８６】
実施例7
2005505580.tif 000004
実施例6で調製されたメトトレキセート-ペプチド樹脂(0.25 mmol)を丸底フラスコに置き、水(2.5 %)、1,2-エタンジチオール(2.5 %)、およびトリイソプロピルシラン(1 %)を含む15 mlのトリフルオロ酢酸(TFA)溶液を添加した。懸濁液を撹拌し(2時間)、濾過し、TFAで数回、洗浄した。TFAを減圧下で蒸発させ、その結果生じた油にエーテルを添加すると、黄色の粉末を生じた。
【００８７】
メトトレキセートペプチドをC-18結合シリカ(Dynamax 300 m、8 μm)のカラム(21.4 mm x 250 mm)上での予備的逆相高圧液体クロマトグラフィー(RP-hplc)により精製した。20 mL/分の流速での直線的勾配溶出系を使用し：0.1 % TFAからなる緩衝液A、および80 % MeCN中の0.1 % TFAの緩衝液B；20 % B〜50 % Bを1 %/分で増加させた。分離は、280 nmでモニターされた。分析的HPLCにより証明された純粋な生成物を含む画分をプールし、減圧下で濃縮し、凍結乾燥にかけた。ペプチドは、酢酸水溶液からの凍結乾燥により、恒量のふわふわした白色の粉末として得られた。酸加水分解物のアミノ酸分析およびマトリックス支援レーザー脱離質量分析法(matrix assisted laser desorption mass spectrometry)により正しい組成物が実証された。
【００８８】
実施例8
細胞毒性薬剤-ペプチド結合体の腫瘍細胞増殖への効果
セルタイター(CellTiter)96細胞増殖キットを記載されたプロトコール(Promega Corporation、Madison、WI)に従って使用した。異なるペプチドの様々な濃度を含む培地(50 μl)を96ウェルキットプレートの各ウェルにそれぞれ添加し、続いて、5,000個の培養されたIMR-32腫瘍細胞を含む50 μlの懸濁液を添加した。プレートを、7日間および7日間までの異なる期間、加湿された5 % CO2雰囲気中で、37℃でインキュベートした。キット染色溶液(15 μl)を各ウェルへ添加し、プレートを加湿された5 % CO2雰囲気中で37℃で4時間、インキュベートした。4時間後、100 μlの可溶化/停止溶液を各ウェルに添加し、ホルマザン結晶の完全な可溶化が起こるまで37℃で1時間またはそれ以上、インキュベーションを続けた。個々のウェルの吸光度は、その後、96ウェルプレートリーダーを用いて570 nm波長で測定された。
【００８９】
実施例9
ソマトスタチン類似体のラット下垂体GH放出へのインビトロでの効果
これは、SRIF類似体の能力を評価するための一次系であり、歴史的にヒトサブタイプ2結合ともよく相関しているソマトスタチンサブタイプ2ラット受容体関連系とみなされうる。
【００９０】
体重が200 g〜250 gで制御された条件下(500時間〜1900時間、点灯)の家をあてがわれた成体雄ラット由来の下垂体前葉を、トリプシン/DNアーゼ方法による無菌技術を用いて分散させた。2.5 % ウシ胎児血清(GIBCO)、3 % ウマ血清(GIBCO)、下垂体ドナー由来の10 % 新鮮なラット血清(たった1時間だけ氷上で保存された)、1 % MEM非必須アミノ酸(GIBCO)、ゲンタマイシン(10 ng/ml; Sigma)、およびナイスタチン(10,000 U/ml; GIBCO)を追加した、無菌濾過されたダルベッコ(Dulbecco)の改変イーグル培地(MEM)(Gibco Laboratories、Grand Island、NY(GIBCO))で、分散した細胞を希釈した。細胞を血球計で数え(下垂体あたりおよそ2,000,000細胞)、ウェルあたり200,000細胞の密度でランダムに培養皿(Co-starクラスター24；Rochester Scientific C.、Rochester、NY)に蒔く。蒔かれた細胞を、加湿された95 % 空気および5 % CO2の雰囲気中、37℃で96時間、上のダルベッコの培地で維持する。
【００９１】
ホルモンの検証のための調製において、細胞を、古い培地および浮遊細胞を除去するために、培地199(GIBCO)で3回洗浄する。分泌促進物質の各用量(シリコーン処理した試験管内で希釈された)を、1 % BSA(画分V；Sigma Chemical Co.、St. Louis、MO)を含む1 ml 培地199の全容量において、4連のウェルで試験した。GH刺激性1 nM GRH(1-29)NH2の存在下において、細胞をSSまたはSS類似体用量でパルスする。空気/二酸化炭素の雰囲気中(95/5 %)における37℃での3時間後、培地を取り出し、ホルモン含有量についてアッセイするまで20℃で保存する。血漿および培地におけるGHを、NIDDKおよび国家ホルモン下垂体プログラム(the National Hormone and Pituitary Program)により供給された成分を用いる標準二重抗体RIAにより測定する。
【００９２】
実施例10
O-ベンジル-D-Ser-O-ベンジル-D-Ser-O-ベンジル-D-Ser-O-ベンジル-D-Ser-O-ベンジル-D-Ser-L-Nle-O-2,6-ジクロロベンジル-D-Tyr-O-ベンジル-D-Ser-S-4-メチルベンジル-L-Cys-L-Phe-D-Trp-Nε-(2-クロロベンジルオキシカルボニル)-L-Lys-O-ベンジル-L-Thr-S-4-メチルベンジル-L-Cys-O-ベンジル-L-Thr-MBHA樹脂の調製
メチルベンズヒドリルアミン(MBHA)ポリスチレン樹脂(Bachem, Inc.、Torrance、CA)(0.25 mmole)をCS136自動ペプチド合成機(CS Bio, Inc.、San Carlos、CA)の反応容器へ添加し、およそ1時間、塩化メチレン(DCM)中に膨潤させた。樹脂を濾過し、10 % ジイソプロピルエチルアミン(DIPEA)の過剰量を添加し、2分間、混合した。樹脂を濾過し、再び、過剰量の10 % DIPEAを添加し、樹脂の完全な中和を確実にするために5分間、混合した。中和後、樹脂をDCMで4回洗浄し、その後、第一の保護アミノ酸、Boc-Thr(Bzl)-OH(0.75 mmol)、ジイソプロピルカルボジイミド(DIC)(0.75 mmol)、およびN-ヒドロキシベンゾトリアゾール一水和物(HOBt)(0.75 mmol)をすべてDMFに溶解して、樹脂に添加し、混合し(1時間)、続いて、DCMで4回洗浄した。
【００９３】
tBoc基を40 % トリフルオロ酢酸(TFA)DCMの過剰量を添加することにより除去し、2分間混合した。樹脂を濾過し、再び、過剰量の40 % TFAを添加し、N末端tBocの完全な除去を確実にするために20分間、混合した。樹脂を濾過し、過剰量の10 % ジイソプロピルエチルアミン(DIPEA)を添加し、2分間、混合した。樹脂を濾過し、再び、過剰量の10 % DIPEAを添加し、樹脂の完全な中和を確実にするために5分間、混合した。中和後、樹脂をDCMで4回洗浄し、その後、同じ一般的結合手順に従って、以下のアミノ酸をその増大するペプチド鎖と連続的に反応させた：Boc-S-4-メチルベンジル-L-システイン、Boc-O-ベンジル-L-スレオニン、Nα-Boc-Nε-(2-クロロベンジルオキシカルボニル)-L-リシン、Boc-D-トリプトファン、Boc-L-フェニルアラニン、Boc-S-4-メチルベンジル-L-システイン、Boc-O-ベンジルD-セリン、Boc-O-2,6-ジクロロベンジル-D-チロシン、Boc-ノルロイシン、Boc-O-ベンジル-D-セリン、Boc-O-ベンジル-D-セリン、Boc-O-ベンジル-D-セリン、Boc-O-ベンジル-D-セリン、Boc-O-ベンジル-D-セリン。最後に、樹脂をメタノールで4回洗浄し、一晩、乾燥させておいた。
【００９４】
実施例11
2005505580.tif 000005
の調製
実施例10からのペプチジル樹脂を5 mLのアニソールと共に、無水フッ化水素操作に適したテフロン器具に置いた。反応容器をアルコール/ドライアイス浴で5分間、冷却し、その後、気体の無水フッ化物(HF)の35 mLを反応容器へ凝縮させた。浴をドライアイスから通例の氷へ換え、1時間混合させておき、その後、HFを窒素流で反応容器から取り除いた。ペプチドを過剰のエチルエーテルで3回沈殿させて濾過した。濾過された粗ペプチドを60〜90パーセント酢酸(250 ml)に溶解した。メタノール中のヨウ素の濃厚溶液を、不変の褐色の着色が形成されるまで、勢いよく撹拌しながら、滴下方式で添加し、その後、過剰のヨウ素を少量のアスコルビン酸の添加により除去した。
【００９５】
溶液を減圧下で約10 mlの容量まで濃縮し、粗ペプチドをC-18結合シリカ(Dynamax 300、8 μm)のカラム(21.4 mm x 250 mm)上での予備的逆相高圧液体クロマトグラフィー(RP-hplc)により精製した。20 mL/分の流速での直線的勾配溶出系を使用し：0.1 % TFAからなる緩衝液A、および80 % MeCN中の0.1 % TFAの緩衝液B；20 % B〜50 % Bを1分あたり1 %で増加させた。分離は、280 nmでモニターされた。分析的hplcにより証明された純粋な生成物を含む画分をプールし、減圧下で濃縮し、凍結乾燥にかけた。ペプチドは、酢酸水溶液からの凍結乾燥により、恒量のふわふわした白色の粉末として得られた。酸加水分解物のアミノ酸分析およびマトリックス支援レーザー脱離質量分析法により正しい組成物が実証された。
【００９６】
実施例12
2005505580.tif 000006
の調製
改変されたクロラミン-T反応を実施例11で調製されたペプチドをヨウ化するために使用した。リン酸緩衝液(0.05 Mの200 μL)を125ヨウ素の20 mCiを含む隔壁封鎖されたバイアルに添加し、これを反応容器として供した。いったん中和されたならば、100 μL リン酸緩衝液に溶解された9.411 x 10-8モルのペプチドを反応バイアルへ注入した。ヨウ化反応を開始するために、4.29 x 10-7モルのクロラミン-Tを50 μLの緩衝液において反応バイアルへ注入した。反応容器を15秒〜20秒間、急速にボルテックスし、その後、50 μl中の4.3 x 10-6モルのメタ亜硫酸水素ナトリウムを注入することにより反応を停止させた。
【００９７】
精製：
C18 セプパックライト（SepPak Lite）カートリッジ(Waters Corp.、Milford、Mass.)を反応物からペプチドを精製するために使用した。セプパックを、10 mLの無水エタノールで1 mL/分の流速で洗浄することにより活性化した。その後、セプパックを10 mLのH2Oで洗浄した。その後、放射性反応混合物をセプパックへ添加し、続いて、5 % エタノールでの反応容器の3 mL洗浄を3回行った。20 % エタノールの10 mLでセプパックを洗浄することにより、反応物の残りからペプチドを分離した。最後に、ペプチドを、0.01 N HCl中の80 % エタノールの溶液を用いて250 μLの一定分量にカラムから溶出し、2 mL 滅菌ねじ蓋式バイアルへ収集した。
【００９８】
実施例13
O-ベンジル-D-Ser-O-ベンジル-D-Ser-O-ベンジル-D-Ser-O-ベンジル-D-Ser-O-ベンジル-D-Ser-O-ベンジル-D-Ser-O-ベンジル-D-Ser-O-ベンジル-D-Ser-O-ベンジル-D-Ser-O-ベンジル-D-Ser-Nε-(2-クロロベンジルオキシカルボニル)-L-Lys-O-2,6-ジクロロベンジル-L-Tyr-O-2,6-ジクロロベンジル-L-Tyr-S-4-メチルベンジル-L-Cys-L-Phe-D-Trp-Nε-(2-クロロベンジルオキシカルボニル)-L-Lys-O-ベンジル-L-Thr-S-4-メチルベンジル-L-Cys-O-ベンジル-L-Thr-MBHA樹脂の調製
メチルベンズヒドリルアミン(MBHA)ポリスチレン樹脂(Bachem, Inc.、Torrance、CA)(0.25 mmole)をCS136自動ペプチド合成機(CS Bio, Inc.、San Carlos、CA)の反応容器へ添加し、およそ1時間、塩化メチレン(DCM)中に膨潤させた。樹脂を濾過し、10 % ジイソプロピルエチルアミン(DIPEA)の過剰量を添加し、2分間、混合した。樹脂を濾過し、再び、過剰量の10 % DIPEAを添加し、樹脂の完全な中和を確実にするために5分間、混合した。中和後、樹脂をDCMで4回洗浄し、その後、第一の保護アミノ酸、Boc-Thr(Bzl)-OH(0.75 mmol)、ジイソプロピルカルボジイミド(DIC)(0.75 mmol)、およびN-ヒドロキシベンゾトリアゾール一水和物(HOBt)(0.75 mmol)をすべてDMFに溶解して、樹脂に添加し、混合し(1時間)、続いて、DCMで4回洗浄した。
【００９９】
tBoc基を40 % トリフルオロ酢酸(TFA)DCMの過剰量を添加することにより除去し、2分間混合した。樹脂を濾過し、再び、過剰量の40 % TFAを添加し、N末端tBocの完全な除去を確実にするために20分間、混合した。樹脂を濾過し、過剰量の10 % ジイソプロピルエチルアミン(DIPEA)を添加し、2分間、混合した。樹脂を濾過し、再び、過剰量の10 % DIPEAを添加し、樹脂の完全な中和を確実にするために5分間、混合した。中和後、樹脂をDCMで4回洗浄し、その後、同じ一般的結合手順に従って、以下のアミノ酸をその増大するペプチド鎖と連続的に反応させた：Boc-S-4-メチルベンジル-L-システイン、Boc-O-ベンジル-L-スレオニン、Nα-Boc-Nε-(2-クロロベンジルオキシカルボニル)-L-リシン、Boc-D-トリプトファン、Boc-L-フェニルアラニン、Boc-S-4-メチルベンジル-L-システイン、Boc-O-2,6-ジクロロベンジル-D-チロシン、Boc-O-2,6-ジクロロベンジル-D-チロシン、Nα-Boc-Nε-(2-クロロベンジルオキシカルボニル)-L-リシン、Boc-O-ベンジル-D-セリン、Boc-O-ベンジル-D-セリン、Boc-O-ベンジル-D-セリン、Boc-O-ベンジル-D-セリン、Boc-O-ベンジル-D-セリン、Boc-O-ベンジル-D-セリン、Boc-O-ベンジル-D-セリン、Boc-O-ベンジル-D-セリン、Boc-O-ベンジル-D-セリン、Boc-O-ベンジル-D-セリン。上と同じ一般的手順を用いて、最後のBoc基を除去し、ペプチドを中和し、洗浄した。
【０１００】
実施例14
DOTA-O-ベンジル-D-Ser-O-ベンジル-D-Ser-O-ベンジル-D-Ser-O-ベンジル-D-Ser-O-ベンジル-D-Ser-O-ベンジル-D-Ser-O-ベンジル-D-Ser-O-ベンジル-D-Ser-O-ベンジル-D-Ser-O-ベンジル-D-Ser-Nε-(2-クロロベンジルオキシカルボニル)-L-Lys-O-2,6-ジクロロベンジル-L-Tyr-O-2,6-ジクロロベンジル-L-Tyr-S-4-メチルベンジル-L-Cys-L-Phe-D-Trp-Nε-(2-クロロベンジルオキシカルボニル)-L-Lys-O-ベンジル-L-Thr-S-4-メチルベンジル-L-Cys-O-ベンジル-L-Thr-MBHA樹脂の調製
DMFおよびDMSOだけを含む有機溶媒に非常に不溶性であるDOTAを増大する鎖の遊離アミノ基へ結合するために、HOBtの予想外の可溶化効果を利用する新規の手順を用いた。まず、5 mmolのHOBTを、50 mL〜75 mLのDMSOを含むビーカーに溶解し、その後、1.25 mmolのDOTAを添加し、DOTAが溶液へ入り込むまで懸濁液を勢いよく混合した。DIC(1.25 mmol)をビーカーに添加し、そして、この混合物をペプチジル樹脂へ添加し、一晩混合し、その後、DMFで4回、およびメタノールで4回、洗浄した。
【０１０１】
実施例15
2005505580.tif 000007
の調製
実施例14に記載される保護されたペプチド樹脂を実施例12に記載されているように、液体HFを用いて側鎖保護基の樹脂からの切断および除去にかけた。その後、遊離ペプチドを環化し、また実施例12に記載されているように、精製した。
【０１０２】
実施例16
D-O-ベンジル-Ser-O-ベンジル-Ser-D-O-ベンジル-Ser-O-ベンジル-Ser-D-O-ベンジル-Ser-O-ベンジル-Ser-D-O-ベンジル-Ser-O-ベンジル-Ser-D-O-ジクロロベンジル-Tyr-D-O-ベンジル-Ser-Gln-Trp-Ala-Val-β-Ala-トシル-His-Phe-Nle-MBHA樹脂の調製
メチルベンズヒドリルアミン(MBHA)ポリスチレン樹脂(Bachem, Inc.、Torrance、CA)(0.25 mmole)をCS136自動ペプチド合成機(CS Bio, Inc.、San Carlos、CA)の反応容器へ添加し、実施例13に記載されているように、アミノ酸誘導体の連続的添加によりペプチドを構築した。
【０１０３】
実施例17
2005505580.tif 000008
実施例16に記載される保護されたペプチド樹脂を実施例12に記載されているように、液体HFを用いて側鎖保護基の樹脂からの切断および除去にかけた。その後、遊離ペプチドをまた実施例12に記載されているように、精製した。
【０１０４】
実施例18
ボンベシンアゴニスト類似体のモルモット膵臓腺房細胞アミラーゼ放出へのインビトロでの効果
1つのモルモット膵臓由来の分散腺房を150 mlの標準インキュベーション溶液に懸濁し、試料(250 ml)を37℃で30分間、インキュベートし、アミラーゼ放出をファデバス(Phadebas)試薬方法により測定した。インキュベーション間に細胞外の培地へと放出されたアミラーゼ放出を、インキュベーションの初めでの腺房におけるアミラーゼ活性のパーセンテージとして計算した。最大半減の刺激値(EC50)を測定するために、様々な濃度のボンベシン標準および類似体を様々な濃度でインキュベートした。
【０１０５】
実施例19
125I標識JF-08-73
2005505580.tif 000009
およびJF-08-53
2005505580.tif 000010
の生体分布
ペプチドを実施例12に記載されているように、放射標識した。放射性ペプチドの最高量を含む第二のねじ蓋式バイアルを、3 %未満のエタノールの最終濃度に達するようにリン酸緩衝食塩水で希釈した。溶液を、2 mLを超えずに3等分にし、各ラットへ腹腔内に注射した。尿および糞を吸着性パッド上に一晩収集した。24時間目に、ラットを殺して、解剖し、下の器官のそれぞれの重さを計り、用量キャリブレータにおいて計算した。結果は、図2に示されている。
【０１０６】
実施例20
チオコルヒチンの調製
コルヒチン(1.25 mmole)を10.0 mLの水に溶解し、ナトリウムメタンチオレート(7.13 mmol)を添加した。黄色の溶液を24時間、撹拌し、その後、ETOH：クロロホルム(1:1)で3回抽出し、その後、所望の化合物を黄色の結晶として得るように蒸発させた。
【０１０７】
実施例21
脱アセチルチオコルヒチンの調製
実施例1からの生成物に、5.0 mLのメタノールおよび5.0 mLの2 N HClを添加し、その溶液をドライ窒素下で18時間、還流した。メタノールを蒸留して飛ばし、残留の溶液をNaOHで再中和し、クロロホルムで3回抽出し、最後に、アセトニトリル/水から黄色の粉末として凍結乾燥した。
【０１０８】
実施例22
脱アセチルチオコルヒチン-3-チオジプロピオニル-Nε-(2-クロロベンジルオキシカルボニル)-L-Lys-O-ベンジル-D-Ser-O-ベンジル-D-Ser-O-ベンジル-D-Ser-O-ベンジル-D-Ser-O-ベンジル-D-Ser-O-ベンジル-D-Ser-O-ベンジル-D-Ser-O-ベンジル-D-Ser-O-ベンジル-D-Ser-O-ベンジル-D-Ser-L-Nle-O-2,6-ジクロロベンジル-D-Tyr-O-ベンジル-D-Ser-S-4-メチルベンジル-L-Cys-L-Phe-D-Trp-Nε-(2-クロロベンジルオキシカルボニル)-L-Lys-O-ベンジル-L-Thr-S-4-メチルベンジル-L-Cys-O-ベンジル-L-Thr-MBHA樹脂の調製
メチルベンズヒドリルアミン(MBHA)ポリスチレン樹脂(Bachem, Inc.、Torrance、CA)(0.25 mmole)をCS136自動ペプチド合成機(CS Bio, Inc.、San Carlos、CA)の反応容器へ添加し、およそ1時間、塩化メチレン(DCM)中に膨潤させた。樹脂を濾過し、10 % ジイソプロピルエチルアミン(DIPEA)の過剰量を添加し、2分間、混合した。樹脂を濾過し、再び、過剰量の10 % DIPEAを添加し、樹脂の完全な中和を確実にするために5分間、混合した。中和後、樹脂をDCMで4回洗浄し、その後、第一の保護アミノ酸、Boc-Thr(Bzl)-OH(0.75 mmol)、ジイソプロピルカルボジイミド(DIC)(0.75 mmol)、およびN-ヒドロキシベンゾトリアゾール一水和物(HOBt)(0.75 mmol)をすべてDMFに溶解して、樹脂に添加し、混合し(1時間)、続いて、DCMで4回洗浄した。
【０１０９】
tBoc基を40 % トリフルオロ酢酸(TFA)DCMの過剰量を添加することにより除去し、2分間混合した。樹脂を濾過し、再び、過剰量の40 % TFAを添加し、N末端tBocの完全な除去を確実にするために20分間、混合した。樹脂を濾過し、過剰量の10 % ジイソプロピルエチルアミン(DIPEA)を添加し、2分間、混合した。樹脂を濾過し、再び、過剰量の10 % DIPEAを添加し、樹脂の完全な中和を確実にするために5分間、混合した。中和後、樹脂をDCMで4回洗浄し、その後、同じ一般的結合手順に従って、以下のアミノ酸をその増大するペプチド鎖と連続的に反応させ：Boc-S-4-メチルベンジル-L-システイン、Boc-O-ベンジル-L-スレオニン、Nα-Boc-Nε-(2-クロロベンジルオキシカルボニル)-L-リシン、Boc-D-トリプトファン、Boc-L-フェニルアラニン、Boc-S-4-メチルベンジル-L-システイン、Boc-O-ベンジル-D-セリン、Boc-O-2,6-ジクロロベンジル-D-チロシン、Boc-ノルロイシン、Boc-O-ベンジル-D-セリン、Boc-O-ベンジル-D-セリン、Boc-O-ベンジル-D-セリン、Boc-O-ベンジル-D-セリン、Boc-O-ベンジル-D-セリン、Boc-O-ベンジル-D-セリン、Boc-O-ベンジル-D-セリン、Boc-O-ベンジル-D-セリン、Boc-O-ベンジル-D-セリン、Boc-O-ベンジル-D-セリン、Nα-Boc-Nε-(2-クロロベンジルオキシカルボニル)-L-リシン、3-チオジプロピオン酸、そして、最後に、tBoc脱保護段階なしに、脱アセチルチオコルヒチンをDCM/Dic中で結合した。最後に、樹脂をメタノールで4回洗浄し、一晩、乾燥させておいた。
【０１１０】
実施例23
脱アセチルチオコルヒチン-3-チオジプロピオニル-D-Ser-D-Ser-D-Ser-D-Ser-D-Ser-D-Ser-D-Ser-D-Ser-D-Ser-D-Ser-L-ノルロイシン-D-Tyr-D-Ser-シクロ[L-Cys-L-Phe-D-Trp-L-Lys-L-Thr-L-Cys]-L-Thr-NH2の調製
実施例10からのペプチジル樹脂を5 mLのアニソールと共に、無水フッ化水素操作に適したテフロン器具に置いた。反応容器をアルコール/ドライアイス浴で5分間、冷却し、その後、気体の無水フッ化物(HF)の35 mLを反応容器へ凝縮させた。浴をドライアイスから通例の氷へ換え、1時間混合させておき、その後、HFを窒素流で反応容器から取り除いた。ペプチドを過剰のエチルエーテルで3回沈殿させて濾過した。濾過された粗ペプチドを60〜90パーセント酢酸(250 ml)に溶解した。メタノール中のヨウ素の濃厚溶液を、不変の褐色の着色が形成されるまで、勢いよく撹拌しながら、滴下方式で添加し、その後、過剰のヨウ素を少量のアスコルビン酸の添加により除去した。
【０１１１】
溶液を減圧下で約10 mlの容量まで濃縮し、粗ペプチドをC-18結合シリカ(Dynamax 300、8 μm)のカラム(21.4 mm x 250 mm)上での予備的逆相高圧液体クロマトグラフィー(RP-hplc)により精製した。20 mL/分の流速での直線的勾配溶出系を使用し：0.1 % TFAからなる緩衝液A、および80 % MeCN中の0.1 % TFAの緩衝液B；20 % B〜50 % Bを1分あたり1 %で増加させた。分離は、280 nmでモニターされた。分析的HPLCにより証明された純粋な生成物を含む画分をプールし、減圧下で濃縮し、凍結乾燥にかけた。ペプチドは、酢酸水溶液からの凍結乾燥により、恒量のふわふわした黄色の粉末として得られた。酸加水分解物のアミノ酸分析およびマトリックス支援レーザー脱離質量分析法により正しい組成物が実証された。
【０１１２】
実施例24
カンプトセシンの塩化アシルの調製
カンプトセシン(0.574 mmole)を100 mL 丸底フラスコ内で30 mL 無水DCMに懸濁した。このスラリーへ、20 mL 無水DCM中に溶解されたDMAP(2,455 mmole)をドライ窒素雰囲気下において0℃で20分間に渡って添加した。ホスゲン(0.965 mmole)をスラリーへ添加し、0℃で30分間、および室温で2時間、混合した。過剰のホスゲンおよび塩化メチレンを蒸発させ、カンプトセシンの塩化アシルを塩化メチレンに溶解した。
【０１１３】
実施例25
カンプトセシン-カルボニル-Sar-D-tert-ブチル-Ser-ノルロイシン-D-tert-ブチル-Tyr-D-tert-ブチル-Ser-S-トリチル-Cys-Phe-D-Trp-ε-tert-ブチルオキシカルボニル-Lys-tert-ブチル-Thr-S-トリチル-Cys-tert-ブチル-Thr-リンクアミド樹脂の調製
リンクアミドMBHAポリスチレン樹脂(0.063 mmole)[4-(2',4'-ジメトキシフェニル-Fmoc-(アミノメチル)フェノキシアセトアミド-ノルロイシル-メチルベンズヒドリルアミン樹脂、100〜200メッシュ、Novabiochem、San Diego、CA]をCS136自動ペプチド合成機(CS Bio, Inc.、San Carlos、CA)の反応容器へ添加し、およそ1時間、DMF中に膨潤させた。樹脂を濾過し、DMF中の20 % ピペリジンの過剰量を添加し、2分間、混合した。樹脂を濾過し、再び、過剰量の20 % ピペリジンを添加し、樹脂Fmoc基の完全な除去を確実にするために20分間、混合した。脱保護後、樹脂をDMFで4回洗浄し、その後、第一の保護アミノ酸、Fmoc-Thr(tBut)(0.188 mmol)、ジイソプロピルカルボジイミド(DIC)(0.188 mmol)、およびN-ヒドロキシベンゾトリアゾール一水和物(HOBt)(0.188 mmol)をすべてDMFに溶解して、樹脂に添加し、混合し(1時間)、続いて、DMFで4回洗浄した。
【０１１４】
Fmoc基を、再び、20 % ピペリジン/DMF溶液での処理により除去し、同じ一般的結合手順に従って、以下のアミノ酸をその増大するペプチド鎖と連続的に反応させた：Fmoc-S-トリチル-L-システイン、Fmoc-O-t-ブチル-L-スレオニン-Nα-Fmoc-Nε-Boc-L-リシン、Nα-Fmoc-Nin-Boc-D-トリプトファン、Fmoc-L-フェニルアラニン、Fmoc-S-トリチル-L-システイン、Fmoc-O-t-ブチル-D-セリン、Fmoc-O-t-ブチル-D-チロシン、Nα-Fmoc-ノルロイシン、Fmoc-O-t-ブチル-D-セリン、Fmoc-サルコシン。最後のFmoc基の除去後、実施例24からのカンプトセシン塩化アシルを樹脂に添加し、一晩混合し、大量のDMF、続いてDCM、その後メタノールで洗浄した。最後の濾過後、誘導体化樹脂を一晩、空気乾燥させた。
【０１１５】
実施例26
カンプトセシン-カルボニル-Sar-D-Ser-Nle-D-Tyr-D-Ser-シクロ[Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Thr-アミドの調製
実施例25で調製されたカンプトセシン-ペプチド樹脂(0.063 mmol)を丸底フラスコに置き、水(2.5 %)、1,2-エタンジチオール(2.5 %)、およびトリイソプロピルシラン(1 %)を含む15 mlのトリフルオロ酢酸(TFA)溶液を添加した。懸濁液を撹拌し(2時間)、濾過し、TFAで数回、洗浄した。TFAを減圧下で蒸発させ、その結果生じた油にエーテルを添加すると、黄色の粉末を生じ、その後、それを60 % 酢酸(250 ml)に溶解した。メタノール中のヨウ素の濃厚溶液を、不変の褐色の着色が形成されるまで、勢いよく撹拌しながら、滴下方式で添加し、その後、過剰のヨウ素を少量のアスコルビン酸の添加により除去した。
【０１１６】
溶液を減圧下で約10 mlの容量まで濃縮し、粗製のカンプトセシンペプチドをC-18結合シリカ(Dynamax 300、8 μm)のカラム(21.4 mm x 250 mm)上での予備的逆相高圧液体クロマトグラフィー(RP-hplc)により精製した。20 mL/分の流速での直線的勾配溶出系を使用し：0.1 % TFAからなる緩衝液A、および80 % MeCN中の0.1 % TFAの緩衝液B；20 % B〜50 % Bを1分あたり1 %で増加させた。分離は、280 nmでモニターされた。分析的hplcにより証明された純粋な生成物を含む画分をプールし、減圧下で濃縮し、凍結乾燥にかけた。ペプチドは、酢酸水溶液からの凍結乾燥により、恒量のふわふわした白色の粉末として得られた。酸加水分解物のアミノ酸分析およびマトリックス支援レーザー脱離質量分析法により正しい組成物が実証された。
【０１１７】
（表１）ラット下垂体細胞の初代培養からのGH放出を抑制しうる様々なソマトスタチン類似体の結合体の能力
比較として、天然ソマトスタチン-14は、0.15 nMのIC50値を有する(ND = 実施されず)。
2005505580.tif 000011
2005505580.tif 000012
2005505580.tif 000013
【０１１８】
他の態様：
本発明は、好ましい態様に関して記載してきたが、当業者は、容易に、それの本質的特徴を確かめることができ、かつ、その真意および範囲から逸脱することなく、それを様々な使用および条件に適合させるために本発明の様々な変化および改変を作成することができる。当業者は、本明細書に記載される本発明の特定の態様に対する多くの等価物を認識するか、またはただ日常的実験だけを用いて確かめることができるものと思われる。そのような等価物は、本発明の範囲に含まれるものとする。
【０１１９】
明細書に言及されているすべての刊行物、特許および出願は、参照として本明細書に組み入れられている。
【図面の簡単な説明】
【０１２０】
（図１）非結合型メトトレキセートおよび非結合型ソマトスタチン類似体セグメントと比較した、典型的メトトレキセート-ソマトスタチン結合体の神経芽細胞腫IMR-32細胞の増殖への抑制効果を示すグラフである。このインビトロ系におけるメトトレキセート-ペプチド結合体とメトトレキセート単独の等価の効力は、容易に明らかである。対照ペプチドJF-08-89は、
2005505580.tif 000014
である。
（図２）本発明の親水性ペプチド薬剤の生体分布を示すグラフである。2つの125I標識された親水性ソマトスタチン類似体が描かれている。肝臓を含む正常組織における放射能の蓄積の欠如、ならびに尿および糞における標識ペプチド薬剤の迅速かつ高効率の排出に注目されたい。ペプチドJF-08-73は、
2005505580.tif 000015
。ペプチドJF-08-53は、
2005505580.tif 000016
である。
【図１】
2005505580.tif 000017
【図２】
2005505580.tif 000018
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2005505580.tif 000105
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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