(57)【要約】本発明は、濃縮抗体調製物を生成するための方法を提供し、この方法は、（ａ）抗体水溶液および約２ｍＭ〜約４８ｍＭの範囲の濃度のヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液である、最初の抗体調製物を得る工程；ならびに（ｂ）抗体調製物から水および緩衝液は取り除くが、抗体は取り除かないような膜濾過に抗体調製物を供し、それによって、最初の抗体調製物よりも高い濃度の抗体を有する抗体調製物を生成する工程を包含する。この方法によって生成された濃縮抗体調製物は、他の処方物より低い粘度を有し、より安定である。本発明は、この方法により生成された濃縮抗体調製物、このような調製物を用いて作製された薬学的組成物、および、このような薬学的組成物が疾患を処置するために投与される治療方法を、さらに包含する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗体水溶液および約２ｍＭ〜約４８ｍＭの範囲の濃度のヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液から本質的になる、濃縮抗体組成物。
【請求項２】
前記ヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液の濃度が、約３ｍＭ〜約４８ｍＭの範囲である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液の濃度が、約４ｍＭ〜約４５ｍＭの範囲である、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記ヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液の濃度が、約５ｍＭ〜約４０ｍＭの範囲である、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記ヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液の濃度が、２０ｍＭ〜２５ｍＭの範囲である、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
ｐＨが約４．０〜約７．５の範囲である、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
ｐＨが４．５〜７．０の範囲である、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
ｐＨが５．０〜６．５の範囲である、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
５．５〜６．０の範囲のｐＨを有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
前記抗体が、１種の可変領域と、別の種の定常領域とを含むキメラ抗体である、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記抗体が、非ヒト種の可変領域と、ヒトの定常領域とを含むキメラ抗体である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記抗体が、旧世界ザルの可変領域と、ヒトの定常領域とを含むキメラ抗体である、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記抗体が、非ヒト種の超可変領域と、ヒトの定常領域とを含むヒト化抗体である、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１５】
前記抗体が、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥから選択される１種以上のアイソタイプである抗体である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１６】
前記抗体がＩｇＧ抗体である、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記抗体がＩｇＧ１抗体またはＩｇＧ４抗体である、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記抗体の濃度が少なくとも５０ｍｇ／ｍｌである、請求項１に記載の組成物。
【請求項１９】
前記抗体の濃度が少なくとも１００ｍｇ／ｍｌである、請求項１に記載の組成物。
【請求項２０】
前記抗体が、抗ＣＤ８０抗体、抗ｇｐ３９抗体、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ２３抗体、および抗ＣＤ２０抗体からなる群から選択されるモノクローナル抗体を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項２１】
前記抗体が、抗ＣＤ８０抗体ＩＤＥＣ−１１４、抗ｇｐ３９抗体ＩＤＥＣ−１３１、抗ＣＤ４抗体ＩＤＥＣ−１５１、抗ＣＤ２３抗体ＩＤＥＣ−１５２および抗ＣＤ２０抗体ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）からなる群から選択される少なくとも１種のモノクローナル抗体を含む、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
濃縮抗体調製物を生成するための方法であって、該方法は、
ａ）抗体水溶液および約２ｍＭ〜約４８ｍＭの範囲の濃度のヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液から本質的になる、最初の抗体調製物を提供する工程；ならびに
ｂ）該最初の抗体調製物を、該抗体調製物から水および緩衝液は取り除くが、抗体は取り除かない膜濾過に供し、それによって、該最初の抗体調製物よりも高い濃度の抗体を有する抗体調製物を生成する工程
を包含する、方法。
【請求項２３】
前記最初の抗体調製物における前記ヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液の濃度が、約３ｍＭ〜約４８ｍＭの範囲である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記最初の抗体調製物における前記ヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液の濃度が、約４ｍＭ〜約４５ｍＭの範囲である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
前記最初の抗体調製物における前記ヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液の濃度が、約５ｍＭ〜約４０ｍＭの範囲である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
前記最初に抗体調製物における前記ヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液の濃度が、２０ｍＭ〜２５ｍＭの範囲である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２７】
前記最初の抗体調製物のｐＨが約４．０〜７．５の範囲である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２８】
前記最初の抗体調製物のｐＨが４．５〜７．０の範囲である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２９】
前記最初の抗体調製物のｐＨが５．０〜６．５の範囲である、請求項２２に記載の方法。
【請求項３０】
前記最初の抗体調製物のｐＨが５．５〜６．０の範囲である、請求項２２に記載の方法。
【請求項３１】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項２２に記載の方法。
【請求項３２】
前記抗体が、非ヒト種の可変領域と、ヒトの定常領域とを含むキメラ抗体である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記抗体が、旧世界ザルの可変領域と、ヒトの定常領域とを含むキメラ抗体である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記抗体が、非ヒト種の超可変領域と、少なくとも１つのヒトフレームワーク領域と、ヒトの定常領域とを含む、ヒト化抗体である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
前記抗体が、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥから選択される１種以上のアイソタイプである抗体である、請求項２２に記載の方法。
【請求項３６】
前記抗体がＩｇＧ抗体である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記抗体がＩｇＧ１抗体またはＩｇＧ４抗体である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記工程ｂ）により生成された抗体調製物における前記抗体の濃度が、少なくとも５０ｍｇ／ｍｌである、請求項２２に記載の方法。
【請求項３９】
前記工程ｂ）により生成された抗体調製物における前記抗体の濃度が、少なくとも１００ｍｇ／ｍｌである、請求項２２に記載の方法。
【請求項４０】
前記抗体が、抗ＣＤ８０抗体、抗ｇｐ３９抗体、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ２３抗体、および抗ＣＤ２０抗体からなる群から選択されるモノクローナル抗体を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項４１】
前記抗体が、抗ＣＤ８０抗体ＩＤＥＣ−１１４、抗ｇｐ３９抗体ＩＤＥＣ−１３１、抗ＣＤ４抗体ＩＤＥＣ−１５１、抗ＣＤ２３抗体ＩＤＥＣ−１５２および抗ＣＤ２０抗体リツキシマブからなる群から選択される少なくとも１種のモノクローナル抗体を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項４２】
濃縮抗体調製物を生成するための改善された方法であって、該方法は
ａ）抗体水溶液および緩衝液から本質的になる最初の抗体調製物を提供する工程；ならびに
ｂ）該抗体調製物から、水および緩衝液は取り除くが、該抗体は取り除かない膜濾過に、該最初の抗体調製物を供し、それによって、該最初の抗体調製物よりも高い濃度の抗体を有する抗体調製物を生成する工程；
を包含する方法であって、ここで、該改善が、約２ｍＭ〜約４８ｍＭの範囲の濃度のヒスチジンまたは酢酸から選択される緩衝液を使用する工程からなる、方法。
【請求項４３】
前記最初の抗体調製物における前記ヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液の濃度が、約３ｍＭ〜約４８ｍＭの範囲である、請求項４２に記載の改善された方法。
【請求項４４】
前記最初の抗体調製物における前記ヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液の濃度が、約４ｍＭ〜約４５ｍＭの範囲である、請求項４２に記載の改善された方法。
【請求項４５】
前記最初の抗体調製物における前記ヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液の濃度が、約５ｍＭ〜約４０ｍＭの範囲である、請求項４２に記載の改善された方法。
【請求項４６】
前記最初の抗体調製物における前記ヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液の濃度が、２０ｍＭ〜２５ｍＭの範囲である、請求項４２に記載の改善された方法。
【請求項４７】
前記最初の抗体調製物のｐＨが約４．０〜７．５の範囲である、請求項４２に記載の改善された方法。
【請求項４８】
前記最初の抗体調製物のｐＨが４．５〜７．０の範囲である、請求項４２に記載の改善された方法。
【請求項４９】
前記最初の抗体調製物のｐＨが５．０〜６．５の範囲である、請求項４２に記載の改善された方法。
【請求項５０】
前記最初の抗体調製物のｐＨが５．５〜６．０の範囲である、請求項４２に記載の改善された方法。
【請求項５１】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項４２に記載の改善された方法。
【請求項５２】
前記抗体が、非ヒト種の可変領域と、ヒトの定常領域とを含むキメラ抗体である、請求項５１に記載の改善された方法。
【請求項５３】
前記抗体が、旧世界ザルの可変領域と、ヒトの定常領域とを含むキメラ抗体である、請求項５２に記載の改善された方法。
【請求項５４】
前記抗体が、非ヒト種の超可変領域と、少なくとも１つのヒトフレームワーク領域と、ヒトの定常領域とを含むヒト化抗体である、請求項５１に記載の改善された方法。
【請求項５５】
前記抗体が、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥから選択される１種以上のアイソタイプである抗体である、請求項４２に記載の改善された方法。
【請求項５６】
前記抗体がＩｇＧ抗体である、請求項５５に記載の改善された方法。
【請求項５７】
前記抗体がＩｇＧ１抗体またはＩｇＧ４抗体である、請求項５６に記載の改善された方法。
【請求項５８】
前記工程ｂ）により生成された抗体調製物における前記抗体の濃度が、少なくとも５０ｍｇ／ｍｌである、請求項４２に記載の改善された方法。
【請求項５９】
前記工程ｂ）により生成された抗体調製物における前記抗体の濃度が、少なくとも１００ｍｇ／ｍｌである、請求項４２に記載の改善された方法。
【請求項６０】
前記抗体が、抗ＣＤ８０抗体、抗ｇｐ３９抗体、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ２３抗体、および抗ＣＤ２０抗体からなる群から選択されるモノクローナル抗体を含む、請求項４２に記載の改善された方法。
【請求項６１】
前記抗体が、抗ＣＤ８０抗体ＩＤＥＣ−１１４、抗ｇｐ３９抗体ＩＤＥＣ−１３１、抗ＣＤ４抗体ＩＤＥＣ−１５１、抗ＣＤ２３抗体ＩＤＥＣ−１５２および抗ＣＤ２０抗体リツキシマブからなる群から選択される少なくとも１種のモノクローナル抗体を含む、請求項４２に記載の改善された方法。
【請求項６２】
活性成分として抗体を含む薬学的組成物を生成するための方法であって、該方法は、
ａ）抗体水溶液、および約２ｍＭ〜約４８ｍＭの範囲の濃度のヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液から本質的になる、最初の抗体調製物を提供する工程；ならびに
ｂ）該抗体調製物から、水および緩衝液は取り除くが、抗体は取り除かない膜濾過に、該最初の抗体調製物を供し、それによって、該最初の抗体調製物よりも高い濃度の抗体を有する抗体調製物を生成する工程；ならびに
ｃ）工程ｂ）の該濃縮抗体調製物を、１種以上の薬学的に受容可能なキャリアと合わせて、薬学的組成物を生成する工程
を包含する、方法。
【請求項６３】
前記最初の抗体調製物における前記ヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液の濃度が、約３ｍＭ〜約４８ｍＭの範囲である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
前記最初の抗体調製物における前記ヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液の濃度が、約４ｍＭ〜約４５ｍＭの範囲である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６５】
前記最初の抗体調製物における前記ヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液の濃度が、約５ｍＭ〜約４０ｍＭの範囲である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６６】
前記最初の抗体調製物における前記ヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液の濃度が、２０ｍＭ〜２５ｍＭの範囲である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６７】
前記最初の抗体調製物のｐＨが約４．０〜７．５の範囲である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６８】
前記最初の抗体調製物のｐＨが４．５〜７．０の範囲である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６９】
前記最初の抗体調製物のｐＨが５．０〜６．５の範囲である、請求項６２に記載の方法。
【請求項７０】
前記最初の抗体調製物のｐＨが５．５〜６．０の範囲である、請求項６２に記載の方法。
【請求項７１】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項６２に記載の方法。
【請求項７２】
前記抗体が、非ヒト種の可変領域と、ヒトの定常領域とを含むキメラ抗体である、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
前記抗体が、旧世界ザルの可変領域と、ヒトの定常領域とを含むキメラ抗体である、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
前記抗体が、非ヒト種の超可変領域と、少なくとも１つのヒトフレームワーク領域と、ヒトの定常領域とを含むヒト化抗体である、請求項７１に記載の方法。
【請求項７５】
前記抗体が、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥから選択される１種以上のアイソタイプである抗体である、請求項６２に記載の方法。
【請求項７６】
前記抗体がＩｇＧ抗体である、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
前記抗体がＩｇＧ１抗体またはＩｇＧ４抗体である、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
前記工程ｂ）により生成された抗体調製物における前記抗体の濃度が、少なくとも５０ｍｇ／ｍｌである、請求項６２に記載の方法。
【請求項７９】
前記工程ｂ）により生成された抗体調製物における前記抗体の濃度が、少なくとも１００ｍｇ／ｍｌである、請求項６２に記載の方法。
【請求項８０】
前記抗体が、抗ＣＤ８０抗体、抗ｇｐ３９抗体、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ２３抗体、および抗ＣＤ２０抗体からなる群から選択されるモノクローナル抗体を含む、請求項６２に記載の方法。
【請求項８１】
前記抗体が、抗ＣＤ８０抗体ＩＤＥＣ−１１４、抗ｇｐ３９抗体ＩＤＥＣ−１３１、抗ＣＤ４抗体ＩＤＥＣ−１５１、抗ＣＤ２３抗体ＩＤＥＣ−１５２および抗ＣＤ２０抗体リツキシマブからなる群から選択される少なくとも１種のモノクローナル抗体を含む、請求項６２に記載の方法。
【請求項８２】
抗体を含む薬学的組成物の投与を包含する、改善された治療方法であって、該改善は、薬学的組成物を生成するために、
ａ）少なくとも１種の治療有効量の抗体を含む水溶液、および膜濾過により濃縮された、約２ｍＭ〜約４８ｍＭの範囲の濃度のヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液から本質的になる抗体調製物；ならびに
ｂ）１種以上の薬学的に受容可能なキャリア；
を合わせることにより作製される薬学的組成物を投与する工程を包含する、改善された方法。
【請求項８３】
前記工程ａ）の抗体調製物における前記ヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液の濃度が、約３ｍＭ〜約４８ｍＭの範囲である、請求項８２に記載の改善された方法。
【請求項８４】
前記工程ａ）の抗体調製物における前記ヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液の濃度が、約４ｍＭ〜約４５ｍＭの範囲である、請求項８２に記載の改善された方法。
【請求項８５】
前記工程ａ）の抗体調製物における前記ヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液の濃度が、約５ｍＭ〜約４０ｍＭの範囲である、請求項８２に記載の改善された方法。
【請求項８６】
前記工程ａ）の抗体調製物における前記ヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液の濃度が、２０ｍＭ〜２５ｍＭの範囲である、請求項８２に記載の改善された方法。
【請求項８７】
前記工程ａ）の抗体調製物のｐＨが、約４．０〜７．５の範囲である、請求項８２に記載の改善された方法。
【請求項８８】
前記工程ａ）の抗体調製物のｐＨが、４．５〜７．０の範囲である、請求項８２に記載の改善された方法。
【請求項８９】
前記工程ａ）の抗体調製物のｐＨが、５．０〜６．５の範囲である、請求項８２に記載の改善された方法。
【請求項９０】
前記工程ａ）の抗体調製物のｐＨが、５．５〜６．０の範囲である、請求項８２に記載の改善された方法。
【請求項９１】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項８２に記載の改善された方法。
【請求項９２】
前記抗体がキメラ抗体である、請求項９１に記載の改善された方法。
【請求項９３】
前記抗体がヒト化抗体である、請求項９１に記載の改善された方法。
【請求項９４】
前記抗体が、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥから選択される１種以上のアイソタイプである抗体を含む、請求項８２に記載の改善された方法。
【請求項９５】
前記抗体がＩｇＧ抗体である、請求項９４に記載の改善された方法。
【請求項９６】
前記抗体がＩｇＧ１抗体またはＩｇＧ４抗体である、請求項９５に記載の改善された方法。
【請求項９７】
前記工程ａ）の抗体調製物における前記抗体の濃度が、少なくとも５０ｍｇ／ｍｌである、請求項８２に記載の改善された方法。
【請求項９８】
前記工程ａ）の抗体調製物における前記抗体の濃度が、少なくとも１００ｍｇ／ｍｌである、請求項８２に記載の改善された方法。
【請求項９９】
前記抗体が、抗ＣＤ８０抗体、抗ｇｐ３９抗体、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ２３抗体、および抗ＣＤ２０抗体からなる群から選択されるモノクローナル抗体を含む、請求項８２に記載の改善された方法。
【請求項１００】
前記抗体が、抗ＣＤ８０抗体ＩＤＥＣ−１１４、抗ｇｐ３９抗体ＩＤＥＣ−１３１、抗ＣＤ４抗体ＩＤＥＣ−１５１、抗ＣＤ２３抗体ＩＤＥＣ−１５２および抗ＣＤ２０抗体リツキシマブからなる群から選択される少なくとも１種のモノクローナル抗体を含む、請求項８２に記載の改善された方法。
【請求項１０１】
治療有効用量の治療抗体を、癌、アレルギー性障害、自己免疫疾患およびリンパ腫からなる群から選択される疾患を罹患している患者に投与する工程を包含する、請求項８２に記載の改善された方法。
【請求項１０２】
障害に罹患しているか、または、障害にかかりやすい哺乳動物の処置に有用なキットであって、該キットは、
ａ）少なくとも１種の治療有効用量の抗体を含む水溶液、および、膜濾過により濃縮された、約２ｍＭ〜約４８ｍＭの範囲の濃度のヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液から本質的になる、抗体調製物、ならびに
ｂ）１種以上の薬学的に受容可能なキャリア
を組み合せた製品である、薬学的組成物を含む少なくとも１つの容器を備え、そしてさらに、該薬学的組成物が該障害を処置するために使用され得ることを表示するラベルまたは挿入物を備える、キット。
【請求項１０３】
前記工程ａ）の抗体調製物における前記ヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液の濃度が、約３ｍＭ〜約４８ｍＭの範囲である、請求項１０２に記載のキット。
【請求項１０４】
前記工程ａ）の抗体調製物における前記ヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液の濃度が、約４ｍＭ〜約４５ｍＭの範囲である、請求項１０２に記載のキット。
【請求項１０５】
前記工程ａ）の抗体調製物における前記ヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液の濃度が、約５ｍＭ〜約４０ｍＭの範囲である、請求項１０２に記載のキット。
【請求項１０６】
前記工程ａ）の抗体調製物における前記ヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液の濃度が、２０ｍＭ〜２５ｍＭの範囲である、請求項１０２に記載のキット。
【請求項１０７】
前記工程ａ）の抗体調製物のｐＨが、約４．０〜７．５の範囲である、請求項１０２に記載のキット。
【請求項１０８】
前記工程ａ）の抗体調製物のｐＨが、４．５〜７．０の範囲である、請求項１０２に記載のキット。
【請求項１０９】
前記工程ａ）の抗体調製物のｐＨが、５．０〜６．５の範囲である、請求項１０２に記載のキット。
【請求項１１０】
前記工程ａ）の抗体調製物のｐＨが、５．５〜６．０の範囲である、請求項１０２に記載のキット。
【請求項１１１】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項１０２に記載のキット。
【請求項１１２】
前記抗体がキメラ抗体である、請求項１１１に記載のキット。
【請求項１１３】
前記抗体がヒト化抗体である、請求項１１１に記載のキット。
【請求項１１４】
前記工程ａ）の抗体調製物が、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥから選択される１種以上のアイソタイプである抗体を含む、請求項１０２に記載のキット。
【請求項１１５】
前記抗体がＩｇＧ抗体である、請求項１１４に記載のキット。
【請求項１１６】
前記抗体がＩｇＧ１抗体またはＩｇＧ４抗体である、請求項１１５に記載のキット。
【請求項１１７】
前記工程ａ）の濃縮抗体調製物における前記抗体の濃度が、少なくとも５０ｍｇ／ｍｌである、請求項１０２に記載のキット。
【請求項１１８】
前記工程ａ）の濃縮抗体調製物における前記抗体の濃度が、少なくとも１００ｍｇ／ｍｌである、請求項１０２に記載のキット。
【請求項１１９】
前記抗体が、抗ＣＤ８０抗体、抗ｇｐ３９抗体、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ２３抗体、および抗ＣＤ２０抗体からなる群から選択されるモノクローナル抗体を含む、請求項１０２に記載のキット。
【請求項１２０】
前記抗体が、抗ＣＤ８０抗体ＩＤＥＣ−１１４、抗ｇｐ３９抗体ＩＤＥＣ−１３１、抗ＣＤ４抗体ＩＤＥＣ−１５１、抗ＣＤ２３抗体ＩＤＥＣ−１５２および抗ＣＤ２０抗体リツキシマブからなる群から選択される少なくとも１種のモノクローナル抗体を含む、請求項１０２に記載のキット。
【請求項１２１】
癌、アレルギー性障害、自己免疫疾患およびリンパ腫からなる群から選択される障害を処置するのに有用な、請求項１０２に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願）
本出願は、米国仮特許出願番号６０／３９０，１９１（２００２年６月２１日出願、発明の名称「Ｂｕｆｆｅｒｅｄ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ  Ｆｏｒ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」、その内容は、その全体が本明細書中に参考として援用される）に関連し、この出願の優先権を主張する。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、膜濾過プロセスにより効率的に濃縮され得る緩衝化抗体調製物；抗体を濃縮するためのプロセスであって、ここで、このような調製物が膜濾過プロセスに供される、プロセス；このプロセスにより生成された濃縮抗体調製物；およびこのプロセスにより生成された濃縮抗体調製物を用いて、ヒト治療に有用な薬学的抗体処方物を調製する方法、に関する。
【背景技術】
【０００３】
（背景）
１９４０年代から、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）調製物が、ヒト治療において使用するために精製されている。現在では、ヒト治療用免疫グロブリン製品が、例えば、Ａ型肝炎の予防のための、筋肉内投与用の１６％（ｗ／ｖ）（１６０ｍｇ／ｍｌ）溶液として、そして、例えば、原発性免疫不全、感染および自己免疫疾患の処置のための、静脈内投与用の５％（ｗ／ｖ）（５０ｍｇ／ｍｌ）溶液として、市販されている。米国特許第６，２５２，０５５号（その内容は、全体が本明細書中で援用される）の第１欄を参照のこと。
【０００４】
疾患の原因となる抗原に対して標的化した治療用モノクローナル抗体（ＭＡｂ）を開発する努力が、１９９０年代後半に成功を収めた。１９９７年に、ＦＤＡは、非ホジキンリンパ腫の処置のための、ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐ．およびＧｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．製のキメラ抗ＣＤ２０抗体である、ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）（また、リツキシマブとも呼ばれる）を認可した。これは、ＦＤＡにより認可された最初のＭＡｂであった。それ以降、種々の適応症のための他の治療用抗体（例えば、乳癌の処置のためのＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）、小児におけるＲＳウイルス感染の処置のためのＳｙｎａｇｉｓ（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ，Ｉｎｃ．）およびクローン病の処置のためのＲｅｍｉｃａｄｅ（Ｃｅｎｔｏｃｏｒ，Ｉｎｃ．））がＦＤＡにより認可されている（Ｈ．Ｉｙｅｒら、ＢｉｏＰｈａｒｍ，Ｊａｎｕａｒｙ，２００２，１４頁を参照のこと）。
【０００５】
多くの治療用ＭＡｂが現在、ＦＤＡの認可のために臨床試験を行っている。１つの例は、米国特許第６，１１３，８９８号（その内容は、全体が本明細書中に援用される）に記載される、自己免疫疾患を処置し、臓器移植拒絶を予防するための抗ＣＤ８０  ＭＡｂである、ＩＤＥＣ−１１４である。別の例は、米国特許第６，００１，３５８号（その内容は、全体が本明細書中に援用される）に記載されるような、また自己免疫疾患を処置するために有用な抗ｇｐ３９  ＭＡｂである、ＩＤＥＣ−１３１である。第３の例は、米国特許第６，１３６，３１０号（その内容は、全体が本明細書中に援用される）に記載されるような、例えば、免疫抑制を提供するための、Ｔ細胞欠乏療法に有用な抗ＣＤ４  ＭＡｂである、ＩＤＥＣ−１５１である。治療用途について評価されている別の治療用ＭＡｂは、米国特許第６，０１１，１３８号（その内容は、全体が本明細書中に援用される）に記載されるような、Ｂ細胞によるＩＬ−４誘導性のＩｇＥ産生を阻害する抗ＣＤ２３抗体であり、ＩｇＥ媒介性の病態（例えば、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎および喘息）の処置に有用である、ＩＤＥＣ−１５２である。
【０００６】
治療用ＭＡｂでの効果的な処置は、代表的には、１００ｍｇ／ｍｌ以上まで濃縮されるＭＡｂの治療用調製物の用量の反復投与を必要とする。治療用ＭＡｂは、通常、静脈内、筋肉内または腹腔内送達によって、非経口的に投与される。投与されなければならない大量のＭＡｂ溶液に起因して、そして、処置に対する患者の応答の観察を可能にするために、患者は、投与の間頻繁に入院する。必要とされる投薬量を含む溶液の容量を減らし、従って、投与に必要とされる注入時間を減らすために、高度に濃縮された治療用ＭＡｂ調製物を調製するための効率のよい方法を開発することに、かなりの関心がある。
【０００７】
また、自分で投与し得るという利点を有する、皮下投与に適する高度に濃縮された治療用ＭＡｂ調製物を調製するための効率のよい方法を開発することにもかなりの関心がある。皮下経路により投与され得る容量は比較的小さい（約１ｍｌ）ため、皮下経路により効率的に投与される治療用ＭＡｂ調製物におけるＭＡｂの濃度は、１００ｍｇ／ｍｌ〜２００ｍｇ／ｍｌの範囲であるべきである。一般に、治療用ＭＡｂ調製物におけるＭＡｂの濃度は、１００ｍｇ／ｍｌと３００ｍｇ／ｍｌとの間であることが望ましい（米国特許第６，２５２，０５５号の第４欄を参照のこと）。
【０００８】
高度に濃縮されたＭＡｂ溶液は、抗体を凍結乾燥して、次いで、所望の濃度まで水中に溶解させることによって調製され得る。米国特許第５，６０８，０３８号（その内容は、全体が本明細書中に援用される）を参照のこと。あるいは、高度に濃縮されたＭＡｂ溶液は、限外濾過により生成され得、この技術において、ＭＡｂ溶液は、抗体溶液を圧力下にて、ＭＡｂを保持する一方で、溶媒および低分子の溶質を通過させる孔を有する膜フィルターで濾過することによって濃縮される。限外濾過に一般に用いられる方法は以下に記載される。
【０００９】
薬学的処方物のための高度に濃縮された抗体調製物の調製において、濾過速度を増加させるため、（チューブ、プラスチック容器（ｐｌａｓｔｉｃｗａｒｅ）などへの物質の固着を減らすことによって）回収を最大にするため、そして、操作の容易さおよび濃度決定の精度を改善するために、抗体調製物の粘度を減らすことが望ましい。減少した粘度を有する薬学的処方物がまた望ましい。なぜならば、これは、小児のような狭い血管を有する人へより迅速に投与され得るためである。米国特許第５，６０８，０３８号（第２欄）を参照のこと。調製の間の抗体凝集体の形成、および治療用抗体の濃縮を阻害すること、そして、薬学的処方物を調製するのに用いられる、液体中に形成される任意の凝集した抗体を取り除くことがまた望ましい。なぜならば、抗体凝集体は、生物学的に活性な抗体の収量を減らし、そして、患者に投与される薬学的処方物中に抗体凝集体が存在する場合に、多数の有害な副作用を生じ得るためである。
【００１０】
限外濾過により高度に濃縮されたＭＡｂ溶液を生成する際に、凝集および生物学的活性の損失を阻害するために、代表的には、安定化添加剤（例えば、ポリオール）および／または粘性減少剤（例えば、塩）または界面活性剤が、抗体含有組成物に添加される（米国特許第６，１７１，５８６号および米国特許出願番号２００２／００４５５７１（この両方の内容は、本明細書中に参考として援用される）を参照のこと）。例えば、米国特許出願番号２００２／００４５５７１は、濾過の間に、抗体溶液の粘度を低下させるために、少なくとも５０ｍＭの量の塩および／または緩衝液を添加する工程を記載する。米国特許第５，６０８，０３８号（その内容は、全体が本明細書中に参考として援用される）は、所望の浸透圧を得、抗体を安定化させるために、３０〜５０ｍｇ／ｍｌの範囲の濃度で、糖類（例えば、グルコースまたはスクロース）を抗体調製物中に添加する工程を記載する（第２欄を参照のこと）。グリシンおよび／またはマルトースがまた、高度に濃縮された抗体溶液において抗体を安定化させるのに使用される（米国特許第６，２５２，０５５号（その内容は、全体が本明細書中に参考として援用される）を参照のこと）。
【００１１】
凝集体は、精密濾過によって濃縮抗体溶液から効率的に取り除かれ、この手順はまた、抗体溶液を滅菌する。このような方法により得られる高度に濃縮した抗体調製物は、次いで、患者への投与に適した薬学的調製物へと処方され得る。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
以前にどんな内容が記載されているかに関わらず、低い粘度を有し、凝集体が減少し、かつ添加剤を比較的含まず、薬学的処方物における使用に適した、高度に濃縮した抗体調製物を調製するための改善された方法に対する必要性が、当該分野において依然として存在する。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
（発明の要旨および目的）
本発明は、緩衝化抗体調製物に関し、この抗体調製物は、この抗体のさらなる濃縮のための膜濾過プロセス；このような調製物を膜濾過に供する工程を包含する、抗体を濃縮するためのプロセス；このような膜濾過プロセスにより得られた濃縮抗体調製物；および、このプロセスによって得られた濃縮抗体調製物の、治療に有用な薬学的抗体処方物を調製する際の使用に供されることに特に適する。
【００１４】
抗体水溶液、および、約２ｍＭ〜約４８ｍＭの範囲の濃度のヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液から本質的になる抗体組成物を提供することが、本発明の目的である。本発明はまた、抗体水溶液、および、約３ｍＭ〜約４８ｍＭの範囲、または、約４ｍＭ〜約４５ｍＭの範囲、または、約５ｍＭ〜約４０ｍＭの範囲の濃度のヒスチジンン緩衝液または酢酸緩衝液から本質的になる抗体組成物を提供する。本発明は、抗体水溶液、および、２０ｍＭ〜２５ｍＭの範囲の濃度のヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液から本質的になる抗体の組成物をさらに提供する。本発明により提供される抗体組成物は、膜濾過によるさらなる濃縮に供するのに適するものであり得る。本発明により提供される抗体組成物はまた、膜濾過により濃縮された抗体調製物を含むものであり得る。本発明により提供される両方の型の組成物が、抗体水溶液、および、上記の範囲と同じ濃度のヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液から本質的になる。
【００１５】
本発明の別の目的は、抗体水溶液、および、約２ｍＭ〜約４８ｍＭの範囲の濃度のヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液から本質的になる、上記の抗体組成物を提供することであり、この組成物は、約４．０〜約７．５の範囲のｐＨを有する。本出願において用いられる場合、ｐＨに関しての用語「約」とは、示されるｐＨ±０．２ｐＨ単位を意味する。例えば、本発明により提供される抗体組成物は、４．５〜７．０の範囲、または、５．０〜６．５の範囲、または５．５〜６．０の範囲のｐＨを有し得る。
【００１６】
抗体水溶液、および、約２ｍＭ〜約４８ｍＭの範囲の濃度のヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液から本質的になる、上記の抗体組成物であって、ここで、この抗体がモノクローナル抗体である抗体組成物を提供することがまた、本発明の目的である。本発明の抗体組成物は、非ヒト種の可変領域とヒトの定常領域とを含むキメラモノクローナル抗体（例えば、旧世界ザルの可変領域とヒトの定常領域とを含むＰＲＩＭＡＴＩＺＥＤ（登録商標）抗体）を含み得る。本発明の抗体組成物はまた、非ヒト種の超可変領域と、ヒトの定常領域とを含むヒト化モノクローナル抗体を含み得る。
【００１７】
本発明のさらなる目的は、抗体水溶液、および、約２ｍＭ〜約４８ｍＭの範囲の濃度のヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液から本質的になる、上記の抗体組成物であって、ここで、この抗体が、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥから選択される１つ以上のアイソタイプである、抗体組成物を提供することである。例えば、この組成物は、ＩｇＧ抗体である抗体（例えば、ＩｇＧ１抗体またはＩｇＧ４抗体）を含み得る。
【００１８】
本発明の別の目的は、抗体水溶液、および、約２ｍＭ〜約４８ｍＭの範囲の濃度のヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液から本質的になる、上記の抗体組成物であって、ここで、抗体の濃度が、少なくとも５０ｍｇ／ｍｌであるか、または、少なくとも１００ｍｇ／ｍｌである、抗体組成物を提供することである。
【００１９】
本発明のさらなる目的は、抗体水溶液、および、約２ｍＭ〜約４８ｍＭの範囲の濃度のヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液から本質的になる、上記の抗体組成物であって、抗ＣＤ８０抗体、抗ｇｐ３９抗体、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ２３抗体および抗ＣＤ２０抗体からなる群から選択されるモノクローナル抗体を含む、抗体組成物を提供することである。
【００２０】
本発明のさらなる目的は、抗体水溶液、および、約２ｍＭ〜約４８ｍＭの範囲の濃度のヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液から本質的になる、上記の抗体組成物であって、ここで、この抗体が、ＣＤ８０抗体ＩＤＥＣ−１１４、抗ｇｐ３９抗体ＩＤＥＣ−１３１、抗ＣＤ４抗体ＩＤＥＣ−１５１、抗ＣＤ２３抗体ＩＤＥＣ−１５２および抗ＣＤ２０抗体ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）（リツキシマブ）からなる群から選択される少なくとも１種のモノクローナル抗体を含む、抗体組成物を提供することである。
【００２１】
濃縮抗体調製物を生成するための方法であって、ａ）抗体水溶液および約２ｍＭ〜約４８ｍＭの範囲の濃度のヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液から本質的になる、最初の抗体調製物を提供する工程；ならびにｂ）この最初の抗体調製物を、抗体調製物から水および緩衝液は取り除くが、抗体は取り除かない膜濾過に供し、それによって、この最初の抗体調製物よりも高い濃度の抗体を有する抗体調製物を生成する工程、を包含する方法を提供することが、本発明の別の目的である。
【００２２】
濃縮抗体調製物を生成するための改善された方法であって、ａ）抗体水溶液および緩衝液から本質的になる最初の抗体調製物を提供する工程；ならびにｂ）この抗体調製物から、水および緩衝液は取り除くが、抗体は取り除かない膜濾過に、この最初の抗体調製物を供し、それによって、この最初の抗体調製物よりも高い濃度の抗体を有する抗体調製物を生成する工程；を包含する方法であって、ここで、改善が、約２ｍＭ〜約４８ｍＭの範囲の濃度のヒスチジンまたは酢酸から選択される緩衝液を使用する工程からなる、方法を提供することが、本発明のさらなる目的である。
【００２３】
本発明に従う膜濾過によって、抗体を濃縮するための好ましい方法は、接線方向の流動濾過による限外濾過である。抗体調製物から溶媒および低分子の水は取り除くが、抗体は取り除かない膜濾過のプロセスに供することによって、抗体調製物において抗体を濃縮するために、種々の方法が開発されている。このような方法は、垂直な流動濾過および接線方向の流動濾過の両方を用いて実施される。本発明は、膜濾過によって抗体の緩衝化溶液を濃縮するための以前に記載された方法に対する改善を提供し、この改善は、膜濾過に供される抗体調製物が、抗体水溶液、および、約２ｍＭ〜約４８ｍＭの範囲の濃度のヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液から本質的になるものである、というものである。
【００２４】
活性成分として抗体を含む薬学的組成物を生成するための方法であって、ａ）抗体水溶液、および約２ｍＭ〜約４８ｍＭの範囲の濃度のヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液から実質的になる、最初の抗体調製物を提供する工程；ならびにｂ）抗体調製物から、水および緩衝液は取り除くが、抗体は取り除かない膜濾過に、この最初の抗体調製物を供し、それによって、この最初の抗体調製物よりも高い濃度の抗体を有する抗体調製物を生成する工程；ならびにｃ）工程ｂ）の濃縮抗体調製物の抗体を、１種以上の薬学的に受容可能なキャリアと合わせて、薬学的組成物を生成する工程、を包含する方法を提供することが、本発明の別の目的である。
【００２５】
抗体を含む薬学的組成物の投与を包含する、改善された治療方法であって、改善が、ａ）少なくとも１種の治療有効用量の抗体を含む水溶液、および約２ｍＭ〜約４８ｍＭの範囲の濃度のヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液から本質的になる、膜濾過により濃縮された抗体調製物；ならびにｂ）１種以上の薬学的に受容可能なキャリアを合わせて、薬学的組成物を生成することにより作製される薬学的組成物を投与する工程を包含する、改善された方法を提供することがまた、本発明の目的である。
【００２６】
障害に罹患しているか、または、障害にかかりやすい哺乳動物の処置に有用なキットであって、ａ）少なくとも１種の治療有効用量の抗体を含む水溶液、および、約２ｍＭ〜約４８ｍＭの範囲の濃度のヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液から本質的になる、膜濾過により濃縮された抗体調製物、ならびにｂ）１種以上の薬学的に受容可能なキャリア、を組み合せた製品である、薬学的組成物を含む少なくとも１つの容器を含み、そしてさらに、上記薬学的組成物が上記障害を処置するために使用され得ることを表示するラベルまたは挿入物を含む、キットを提供することが、本発明のさらなる目的である。
【００２７】
本発明の上記の方法およびキットの各々に関して、濃縮抗体調製物は、抗体水溶液、および、約２ｍＭ〜約４８ｍＭの範囲（例えば、約３ｍＭ〜約４８ｍＭの範囲、または、約４ｍＭ〜約４５ｍＭの範囲、約５ｍＭ〜約４０ｍＭの範囲、または２０ｍＭ〜２５ｍＭの範囲）の濃度のヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液から本質的になる。膜濾過によるさらなる濃縮に供される抗体組成物についても、同じことが当てはまり得る。いずれの抗体調製物もまた、抗体水溶液、および、約２ｍＭ〜約４８ｍＭの範囲の濃度のヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液から本質的になり得、この組成物は、約４．０〜約７．５の範囲のｐＨを有する。例えば、いずれかの抗体組成物は、４．５〜７．０の範囲、または、５．０〜６．５の範囲、または、５．５〜６．０の範囲のｐＨを有し得る。上記の方法およびキットの各抗体は、非ヒト種の可変領域とヒトの定常領域とを含むキメラモノクローナル抗体（例えば、旧世界ザルの可変領域とヒトの定常領域とを含むＰＲＩＭＡＴＩＺＥＤ（登録商標）抗体）であり得る。抗体組成物はまた、非ヒト種の超可変領域と、ヒトの定常領域とを含むヒト化モノクローナル抗体を含み得、さらに、上記の方法およびキットの各抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥから選択される１種以上のアイソタイプであり得る。例えば、これらは、ＩｇＧ１抗体またはＩｇＧ４抗体のようなＩｇＧ抗体であり得る。上記の方法およびキットの各々の濃縮抗体調製物における抗体の濃度は、少なくとも５０ｍｇ／ｍｌまたは少なくとも１００ｍｇ／ｍｌであり得る。抗体組成物は、抗ＣＤ８０抗体、抗ｇｐ３９抗体、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ２３抗体および抗ＣＤ２０抗体からなる群から選択されるモノクローナル抗体を含み得る。例えば、抗体組成物は、抗ＣＤ８０抗体ＩＤＥＣ−１１４、抗ｇｐ３９抗体ＩＤＥＣ−１３１、抗ＣＤ４抗体ＩＤＥＣ−１５１、抗ＣＤ２３抗体ＩＤＥＣ−１５２、および抗ＣＤ２０抗体ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）（リツキシマブ）からなる群から選択される少なくとも１種のモノクローナル抗体を含み得る。上記の方法およびキットの抗体組成物は、治療有効用量の治療用抗体を、癌、アレルギー性障害、自己免疫疾患およびリンパ腫からなる群から選択される疾患を罹患している患者に投与する工程を包含する、改善された治療方法において使用され得る。
【００２８】
（発明の詳細な説明）
抗体療法は、多数の癌関連の症状および免疫系関連の症状を処置するために、首尾よく使用され得るが、薬物が治療的に有効である場合には、抗体薬物の多い投薬量が、しばしば必要とされる。治療有効投薬量の抗体を、静脈内経路または皮下経路によって患者に送達するために、抗体調製物の濃度は、通常、高い必要があり、この必要性は、しばしば、薬物の調製と、安定な形態への薬物の維持の両方において困難さを生じる。
【００２９】
本発明は、生成物、本質的に凝集体を含まず、薬学的処方物における使用に適する、比較的低粘度の高度に濃縮された安定な抗体調製物の生成を可能にする、組成物および方法を提供することに関する。
【００３０】
１つの実施形態において、本発明は、濃縮抗体調製物を生成するための方法を提供する。この方法の工程は、以下を包含する：
（ａ）抗体水溶液および約２ｍＭ〜約４８ｍＭの範囲の濃度のヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液から本質的になる最初の抗体調製物を提供する工程；ならびに
（ｂ）抗体調製物から水および緩衝液は取り除くが、抗体は取り除かない膜濾過に、最初の抗体調製物を供し、それによって、最初の抗体調製物よりも高い濃度の抗体を有する抗体調製物を生成する工程。
【００３１】
本願において使用される場合、ヒスチジンまたは酢酸の濃度に関しての用語「約」は、示される濃度の±３％を意味する。本発明の抗体組成物は、抗体水溶液および約２ｍＭ〜約４８ｍＭの範囲の任意の濃度におけるヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液から本質的になる。例えば、ヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液の濃度は、約３ｍＭ〜約４８ｍＭの範囲、約４ｍＭ〜約４５ｍＭの範囲、または約５ｍＭ〜約４０ｍＭの範囲であり得る。抗体組成物におけるヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液の濃度はまた、２０ｍＭ〜２５ｍＭの範囲であり得る。
【００３２】
本発明の抗体組成物は、膜濾過によるさらなる濃縮に供するのに適した、最初の抗体調製物を含み、これらはまた、膜濾過により濃縮された抗体調製物を含む。抗体組成物が、最初の抗体調製物であるか、または、膜濾過により濃縮された抗体調製物であるかに関わらず、本発明により提供される抗体組成物は、抗体水溶液、および、約２ｍＭ〜約４８ｍＭの範囲の濃度のヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液から本質的になる。
【００３３】
本発明は、上記の方法を実施することにより調製される濃縮抗体の組成物、ならびに、本発明の方法により生成された濃縮抗体を用いて作製される濃縮抗体調製物を含有する薬学的処方物を提供し、これらを含む。
【００３４】
本発明は、低濃度の酢酸緩衝液またはヒスチジン緩衝液（約２ｍＭ〜約４８ｍＭ）が、当該分野で記載されている、他のより複雑な処方物を用いて達成されている安定化作用と同等かまたはそれを上回る程度に、膜濾過による濃縮の間に抗体調製物を安定化し得、抗体溶液の粘度を低下し得、そして、凝集を抑制し得るという予期せぬ観察に起因する。本発明は、限外濾過を用いて、比較的低レベルの凝集体を含む、高度に濃縮された安定な抗体調製物を生成する方法を提供する。得られた濃縮抗体調製物は、抗体水溶液、および、約２ｍＭ〜約４８ｍＭの範囲の濃度のヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液から本質的になり、濃縮抗体調製物を安定化し、その粘度を減らすために当該分野で現在用いられている添加物（例えば、ポリオール、糖類、グリセリン、塩および高い緩衝液濃度（５０ｍＭを超える））を含まない。
【００３５】
本明細書中で使用される場合、「安定な」抗体調製物は、その中のタンパク質が、保存の際に、その物理的安定性および／または化学的安定性および／または生物学的活性を本質的に保持するものである。タンパク質の安定性を測定するための種々の分析技術は、当該分野で利用可能であり、例えば、Ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，２４７−３０１，Ｖｉｎｃｅｎｔ  Ｌｅｅ編、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，Ｐｕｂｓ．（１９９１）およびＪｏｎｅｓ，Ａ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．１０：２９−９０（１９９３）に総説される。安定性は、選択された温度において、選択された時間、測定され得る。かなり安定な抗体調製物は、室温（約３０℃）または４０℃において、少なくとも１ヶ月安定であるか、および／または約２〜８℃において少なくとも１年間、そして、その後の処方物の凍結（例えば、−７０℃まで）および解凍に安定であるものである。色および／または透明度の視覚的試験において、または、ＵＶ光散乱もしくはサイズ排除クロマトグラフィーによって測定される場合に、凝集、沈殿および／または変性の徴候を示さない場合、タンパク質は、薬学的処方物において「その物理的安定性を保持する」。示される時間における化学的安定性が、タンパク質が、以下に規定されるような、その生物学的活性をなお保持すると考えられるようなものである場合、タンパク質は、薬学的処方物において「その化学的安定性を保持する」。化学的安定性は、タンパク質の化学的に変更された形態を検出および定量することによって評価され得る。化学的変更は、例えば、サイズ排除クロマトグラフィー、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび／またはマトリクス支援レーザー脱離イオン化／飛行時間質量分析（ＭＡＬＤＩ／ＴＯＦ  ＭＳ）を用いて評価され得る、サイズの改変（例えば、クリッピング（ｃｌｉｐｐｉｎｇ））を含み得る。他の型の化学的変更としては、例えば、イオン交換クロマトグラフィーにより評価され得る、電荷の変更（例えば、アミド分解の結果として生じる）が挙げられる。薬学的処方物が調製されたときに示される、有意な量（例えば、約９０％）の生物学的活性の抗体を有する場合、抗体は、薬学的処方物において「その生物学的活性を保持する」。例えば、生物学的活性は、抗原結合アッセイにおいて決定され得る。米国特許第６，１７１，５８６号を参照のこと。任意の特定の抗体について関連する「生物学的活性」アッセイの型は、一般に、抗体により標的化される特定の分子の生物学的役割、および、その標的に対する抗体の結合の生物学的な重要性に依存する。当業者は、多くのこのようなアッセイに一般に精通している。
【００３６】
本発明の方法により生成される、抗体水溶液および約３ｍＭ〜約４８ｍＭの範囲の濃度のヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液から本質的になる抗体調製物は、一般に、約４．０〜約７．５の範囲のｐＨを有する。例えば、この抗体調製物は、４．５〜７．０の範囲、または、５．０〜６．５の範囲、または、５．５〜６．０の範囲のｐＨを有し得る。このような溶液は、当業者に周知の一般的な方法によって作製され得る。好ましくは、酢酸緩衝液は、Ｎａ−アセテートであり、ヒスチジン緩衝液はヒスチジンＨＣｌであるが、本発明はまた、ｐＨが上記の値に調整される場合、ヒスチジンまたは酢酸が、Ｎａ＋およびＣｌ−以外の対イオン／酸−塩基成分と結合体化されている、任意の利用可能な緩衝液を用いることによっても、首尾よく実施され得る。
【００３７】
本発明の抗体は、任意のアイソタイプであり得る。例えば、本発明の抗体は、主要なアイソタイプのクラス（ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥおよびＩｇＤ）のいずれかであり得る。各アイソタイプの種々のサブクラスの抗体は、本発明により効率的に濃縮される。例えば、ＩｇＧアイソタイプのサブクラス（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４）の活性な、凝集していない抗体の高度に濃縮された調製物が、本発明により生成され得る。本発明を用いて首尾よく濃縮され得る抗体調製物は、単一の型の抗体を含み得るか、または、２つ以上の異なる型の抗体を含み得る。
【００３８】
本明細書中で使用される場合、用語「抗体」は、目的の特異的な結合活性を有する抗体フラグメントを含むことが意図される。本発明は、任意の抗体アイソタイプのこのようなフラグメント（Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｖフラグメント、ならびにＦｃフラグメントまたはｐＦｃ’フラグメントのような抗体フラグメントを含む）を濃縮するために用いられ得る。抗体は、フラグメント化され得、当該分野で公知の従来技術を用いて、目的の特異的な結合活性を有するフラグメントを同定するために、これらのフラグメントがスクリーニングされ得る。例えば、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、抗体をペプシンで処理することによって作製され、このＦ（ａｂ’）２フラグメントのジスルフィド架橋の還元によりＦａｂフラグメントが生じる。
【００３９】
活性な、凝集していない二特異性または多特異性の抗体の高度に濃縮された調製物がまた、本発明を用いて生成され得る。二特異性抗体および多特異性抗体は、少なくとも２つの異なるエピトープに対する結合特異性を有し、ここで、このエピトープは、通常、別の抗原由来である。このような分子が、通常、２つの別のエピトープに結合するのみ（すなわち、二特性抗体）である一方、本発明はまた、さらなる特異性を有する抗体（例えば、三特異性抗体）を用いても実施され得る。本発明での使用に適した治療用多特異性抗体の例は、例えば、米国特許第６，１７１，５８６号に記載される。
【００４０】
本発明は、２５〜３５０ｍｇ／ｍｌの範囲の抗体濃度を有する、活性な凝集していないモノクローナル抗体の濃縮調製物を効率的に生成する。例えば、５０〜１５０ｍｇ／ｍｌの範囲の抗体濃度を有する（例えば、５０ｍｇ／ｍｌ、６０ｍｇ／ｍｌ、７０ｍｇ／ｍｌ、８０ｍｇ／ｍｌ、９０ｍｇ／ｍｌ、１００ｍｇ／ｍｌ、１１０ｍｇ／ｍｌ、１２０ｍｇ／ｍｌ、１３０ｍｇ／ｍｌ、１４０ｍｇ／ｍｌまたは１５０ｍｇ／ｍｌの抗体濃度を有する）モノクローナル抗体の濃縮調製物が、本発明により効率的に生成される。５０〜２５０ｍｇ／ｍｌの範囲の抗体濃度を有する（例えば、５０ｍｇ／ｍｌ、７５ｍｇ／ｍｌ、１００ｍｇ／ｍｌ、１２５ｍｇ／ｍｌ、１５０ｍｇ／ｍｌ、１７５ｍｇ／ｍｌ、２００ｍｇ／ｍｌ、２２５ｍｇ／ｍｌまたは２５０ｍｇ／ｍｌの抗体濃度を有する）モノクローナル抗体の濃縮調製物がまた、本発明により効率的に生成される。
【００４１】
本発明はまた、組換え抗体（特に、キメラ抗体および、キメラ抗体の特別な型であるヒト化抗体）の高度に濃縮された調製物を生成するために使用され得る。一般に、キメラ抗体は、１種の動物種の軽鎖可変領域と重鎖可変領域、および、別の種の定常領域を有する抗体である。例えば、ヒトにおいて免疫原性をほとんど有さないか、全く有さないキメラ抗体は、ヒト抗体の軽鎖可変領域および重鎖可変領域を、非ヒト霊長類（例えば、旧世界ザル）の可変領域と置き換えることによって得られ得る。このような抗体は、「ＰＲＩＭＡＴＩＺＥＤ（登録商標）」抗体と呼ばれ、米国特許第６，１３６，３１０号および米国特許第５，６５８，５７０号（その内容は、全体が本明細書中に援用される）に記載される。
【００４２】
非ヒト抗体の「ヒト化」形態は、非ヒトの免疫グロブリン由来の最小限のポリペプチド配列を含むキメラ抗体である。抗原に対する特異性を保持するのに必要とされる非ヒト免疫グロブリンの最小限のポリペプチド配列は、代表的には、超可変領域（すなわち、相補性決定領域、ＣＤＲ１〜３）であり、ヒト化抗体は、レシピエントのヒト免疫グロブリンの３つの超可変領域の残基を、非ヒト哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類）の（ドナー）抗体由来の、所望の特異性、親和性および能力を有する超可変領域由来の残基で置き換えることによって作製され得る。いくつかの例において、ヒト免疫グロブリンの１種以上のフレームワーク残基のいくらかまたは全てが、対応する非ヒトの残基で置き換えられる。ヒト化抗体はまた、レシピエントの抗体またはドナーの抗体においては見出されない残基を含み得る；このような改変は、通常、抗体の性能をさらに洗練または最適化するためになされる。ヒト化抗体は、少なくとも１種、代表的には２種の可変ドメインの実質的全てを含み得、ここで、非ヒト免疫グロブリンの可変ドメインに対応する超可変領域の全てまたは実質的に全て、および、フレームワーク領域の全てまたは実質的に全ては、ヒト免疫グロブリン配列のものである。Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９（１９８８）；およびＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６（１９９２）（これらの内容は、その全体が本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。
【００４３】
本発明の有用な実施形態において、膜濾過により濃縮されるモノクローナル抗体組成物は、抗ＣＤ８０抗体、抗ｇｐ３９抗体、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ２３抗体および抗ＣＤ２０抗体からなる群から選択されるモノクローナル抗体を含む。このような抗体は、科学文献に記載されており、慣用的な方法により調製され得る。例えば、膜濾過により濃縮されるモノクローナル抗体組成物は、ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）、ＩＤＥＣ−１１４抗体、ＩＤＥＣ−１３１抗体、ＩＤＥＣ−１５１抗体およびＩＤＥＣ−１５２抗体からなる群から選択される１種以上の治療用モノクローナル抗体の少なくとも１回の治療有効量を含み得る。
【００４４】
ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）（「リツキシマブ」とも呼ばれる）は、ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐ．およびＧｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．製の、非ホジキンリンパ腫の処置のための、キメラ抗ＣＤ２０抗体であり、米国特許第６，３９９，０６１号（その内容は、全体が本明細書中に援用される）に記載される。
【００４５】
ＩＤＥＣ−１１４は、自己免疫疾患の処置および、臓器移植拒絶の予防のための抗ＣＤ８０  ＭＡｂであり、米国特許第６，１１３，８９８号に記載される。ＩＤＥＣ−１３１がまた、米国特許第６，００１，３５８号に記載されるように、自己免疫疾患を処置するのに有用な抗ｇｐ３９  ＭＡｂである。
【００４６】
ＩＤＥＣ−１５１は、米国特許第６，１３６，３１０号に記載されるように、Ｔ細胞欠乏の処置に有用な抗ＣＤ４  ＭＡｂである。
【００４７】
ＩＤＥＣ−１５２は、米国特許第６，０１１，１３８号に記載されるように、Ｂ細胞によるＩＬ−４誘導性のＩｇＥ産生を阻害し、ＩｇＥ媒介性の病態（例えば、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎および喘息）の処置に有用な、抗ＣＤ２３抗体である。これらの治療用ＭＡｂの作製および使用を記載する米国特許の内容は、その全体が、本明細書中に参考として援用される。
【００４８】
（膜限外濾過による濃縮）
本発明は、膜限外濾過による濃縮に供される抗体調製物の安定性および粘度が、調製物中に存在する緩衝液の型に感受性であり、特定の緩衝液（特に、ヒスチジン緩衝液および酢酸緩衝液）が、予期せず、抗体調製物の粘度を低下させ、抗体の凝集を減らし、そして、膜濾過による抗体調製物の濃縮速度を増加させるという発見に端を発する。結果として、抗体、および、約３ｍＭ〜約４８ｍＭの範囲の濃度のヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液から本質的になる調製物が、安定化添加剤または粘度減少添加剤（例えば、界面活性剤、ポリオール、糖類、塩、高い緩衝液濃度（５０ｍＭを上回る））の非存在下においてでさえも、生物学的活性を保持し、比較的凝集が少ないままで、限外濾過によって効率的に高濃度まで濃縮され得る。本発明は、抗体が前もって凍結乾燥された場合、また、抗体が凍結乾燥されたことがない場合に、効率的に機能する。
【００４９】
治療用ＭＡｂを調製および精製するための多様な方法が開発されているが、これらは、代表的には、共通して、最終生成物（投与される薬学的調製物）の処方に先行して、限外濾過による濃縮の最終工程を有する。ＭＡｂの限外濾過は、一般に、圧力下で、抗体溶液を、５０〜２００ｋＤａのポリペプチドを保持する一方で、低分子を通過させる孔を有する膜フィルターを通して、濾過することによって実施される。３０〜５０ｋＤａのポリペプチドを保持する孔を有する膜フィルターを用いて、限外濾過によりＭＡｂを濃縮して、良好な結果を得る；そして、抗体フラグメントが濃縮される場合は、１０ｋＤａ程度のポリペプチドを保持する孔を有する膜がまた、使用され得る。限外濾過操作の効率は、溶液の粘度、溶解度、およびタンパク質の凝集体の量により影響され得る。
【００５０】
ダイアフィルトレーションは、低分子を膜を通して洗浄し、目的の大きな分子を保持液（膜の他の側に保持される溶液）中に残す、画分プロセスである。
【００５１】
限外濾過には、一般に、２つの膜濾過法が使用される。直接流動濾過（ＤＦＦ）において、図１に示されるように、供給（濾過される溶液）は、直接膜に向けて強制的に通される。結果として、図２に示されるように、孔よりも大きい分子は、膜表面で凝集し、孔を通る低分子の流れをブロックするゲルを形成し、その結果、濾過が進むにつれて、流速が急速に減少する。ＤＦＦはまた、「通常流動濾過」とも呼ばれる。これは、流体の流れが、膜表面に対して通常の方向で生じるためである。保持されたタンパク質が凝集して、膜の孔をブロックしないように保つために、タンパク質溶液は、ＤＦＦの間頻繁に攪拌される。驚くべきことに、条件（例えば、圧力および流速）に依存して、ＴＦＦシステム（以下に説明する）を通して保持液を循環させることによって生じるせん断力は、ＤＦＦの間にタンパク質溶液を攪拌することによって生じる凝集および沈殿をより多く生じ得る（米国特許第６，２５２，０５５号、実施例３、第１０〜１１欄を参照のこと）。
【００５２】
他の主要な限外濾過プロセスは、接線方向の流動濾過（ＴＦＦ）であり、ここでは、図３に示されるように、サンプルは、溶液に対する圧力が、溶液中の低分子を膜の孔を通して外側に押し出すように、サンプルが膜表面を通って流れる。ＴＦＦの間に膜を通る溶液の流れは、孔をブロックし、低分子がそこを通過するのを妨げる、凝集した低分子のゲルが膜の表面上に形成されるのを防ぐのに役立つ。結果として、図４に示されるように、ＴＦＦに対する流速は、濾過が進むにつれて、ＤＦＦの間に生じるよりも、かなりゆっくりと減少する。
【００５３】
本発明は、抗体の高度に濃縮された溶液を調製するための任意の膜限外濾過法と共に機能する。例えば、本発明は、薬学的なＭＡｂ調製物の処方において有用な、ＭＡｂの高度に濃縮された溶液を調製するために、ＴＦＦの使用と組み合せて、効率的に機能する。ＭＡｂ溶液の限外濾過を実施するためのＴＦＦシステムは、例えば、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏｒｐ．（Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）、Ｐａｌｌ  Ｃｏｒｐ．（Ｅａｓｔ  Ｈｉｌｌｓ，ＮＹ）またはＭａｒｃｏｎ  Ｗｉｎｅｓ  ａｎｄ  Ｆｉｌｔｅｒｓ（Ｏａｋｖｉｌｌｅ，Ｏｎｔａｒｉｏ）から市販される。濃縮抗体溶液を調製するためのＴＦＦの使用はまた、米国特許第６，２５２，０５５号（その内容は、全体が本明細書中に参考として援用される）に記載される。
【００５４】
濃縮することに加えて、ＴＦＦシステムを用いて、調製の際に、緩衝液を交換するか、または、所望でない種の濃度を（例えば、塩を低濃度まで）減らすことができる。このことは、圧力下で濾過して、フィルターによって保持されない最初の溶媒および他の低分子を取り除く間に、新しい緩衝液を導入することによってなされる。溶液をその半分の体積まで濃縮し、新しい緩衝液を４回添加することによって、調製物の９６％を超える塩を取り除くことが可能である。溶液中の最初の緩衝液の９９％以上が、連続的なダイアフィルトレーションの間に７容量の新しい緩衝液まで添加することによって、置き換えられ得る。
【００５５】
本発明は、ＴＦＦによる限外濾過を用いて実施されるのに、十分に適している。最初の抗体調製物すなわち「供給（ｆｅｅｄ）」は、抗体水溶液、および、約２ｍＭ〜約４８ｍＭの範囲の濃度のヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液から本質的になる抗体組成物であり得る。「供給」はまた、本発明の効率的な操作を干渉することなく、抗体およびヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液に加えて、塩または他の低分子の溶質を含み得る。これは、このような低分子成分が、膜を通過し、ダイアフィルトレーションにより取り除かれ得るためである。従って、最終的に精製される濃縮抗体調製物は、供給が、このような組成物を有さない場合でさえも、抗体水溶液、および、約２ｍＭ〜約４８ｍＭの範囲の濃度のヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液から本質的になる。
【００５６】
（薬学的処方物）
本明細書中で使用される場合、用語「薬学的処方物」および「薬学的組成物」は、活性成分の生物学的活性が、はっきりと有効にし、治療効果が毒性効果を上回るような形態の調製物をいう。「薬学的に受容可能な」キャリア（ビヒクル、添加物）は、被験体の哺乳動物に合理的に投与されて、使用される活性成分の有効量を提供し得るものである。
【００５７】
本発明に従って調製された濃縮抗体調製物を用いて薬学的処方物を調製し、開示された本発明に従って生成された抗体水溶液、および、約２ｍＭ〜約４８ｍＭの範囲の濃度のヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液から本質的になる濃縮抗体調製物を、１種以上の薬学的に受容可能なキャリアと合わせることによって、薬学的組成物を生成し得る。
【００５８】
このような薬学的組成物は、必要に応じて、１種以上のさらなる治療成分を含むように調製され得る。このキャリアは、処方物の他の成分と適合性であり、そのレシピエントに対して有害でないという意味で、「受容可能」でなければならない。
【００５９】
本発明の抗体および薬学的組成物は、非経口投与（すなわち、皮下、筋肉内または静脈内）に特に有用である。非経口投与用の組成物は、一般に、本発明の抗体もしくはそのフラグメントの溶液、または受容可能なキャリア（好ましくは、水溶性キャリア）に溶解されたそのカクテルを含む。種々の水溶性キャリア（例えば、水、緩衝化水、０．４％  生理食塩水、０．３％  グリシン、エタノールなど）が用いられ得る。これらの溶液は、滅菌されており、一般に、粒子状物質を含まない。これらの溶液は、従来の周知の滅菌技術（例えば、精密濾過）によって滅菌され得る。この組成物は、生理学的条件に近づけるのに必要とされる、薬学的に受容可能な補助物質（例えば、ｐＨ調整剤および緩衝化剤など）を含み得る。このような薬学的処方物における本発明の抗体またはそのフラグメントの濃度は、広範に変化し得（すなわち、約０．５重量％未満から、通常は、少なくとも約１重量％、１５重量％または２０重量％まで）、かつ、選択される特定の投与様式に従って、流体の体積、粘度などに主に基づいて選択される。
【００６０】
従って、筋肉内注射用の本発明の薬学的組成物は、１ｍｌ  滅菌緩衝化水と５０ｍｇの本発明の抗体またはそのフラグメントとを含むように調製され得る。同様に、静脈内注入用の本発明の薬学的組成物は、２５０ｍｌの滅菌リンガー溶液と、１５０ｍｇの本発明の抗体またはそのフラグメントを含むように作製され得る。
【００６１】
非経口投与可能な組成物を調製するための実際の方法は、周知であるか、または、当業者に明らかであり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，第１５版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．（本明細書中に参考として援用される）により詳細に記載される。
【００６２】
（治療用途）
本発明は、抗体を含む薬学的組成物の投与を包含する治療方法に対する改善を提供する。この改善は、ａ）少なくとも１種の治療有効量の抗体を含む水溶液および約２ｍＭ〜約４８ｍＭの範囲の濃度のヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液から本質的になり、膜濾過により濃縮された、抗体調製物と、ｂ）１種以上の薬学的に受容可能なキャリアとを合わせることによって作製される薬学的組成物を投与する工程を包含する。本明細書中に開示されるように、本発明に従うヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液を含む濃縮抗体調製物は、薬学的組成物における使用に適し、一般に、他の調製物により提供される粘度および安定性と比べて好ましい粘度および安定性を有する。上記のように、濃縮抗体調製物のｐＨは、一般に、４．５〜７．０の範囲である。
【００６３】
改善された治療法のために用いられる濃縮抗体調製物は、治療有効量の治療用キメラモノクローナル抗体（ＰＲＩＭＡＴＩＺＥＤ（登録商標）または他のヒト化抗体である、抗体を含む）を含み得る。５ｍＭ〜４０ｍＭの範囲の濃度でヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液を含む濃縮抗体調製物を含む、開示される薬学的組成物は、治療有効量の先行技術の治療用抗体を含む薬学的組成物と同じ様式で用いられて投与される。
【００６４】
ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）（リツキシマブ）、ＩＤＥＣ−１１４抗体、ＩＤＥＣ−１３１抗体、ＩＤＥＣ−１５１抗体、およびＩＤＥＣ−１５２抗体からなる群から選択される治療用モノクローナル抗体を投与することによる疾患の処置がまた有用である。
【００６５】
上記の改善された治療法は、例えば、癌、アレルギー性障害および自己免疫疾患からなる群から選択される疾患に罹患している患者に、治療有効量の治療用抗体を投与する工程を包含する。例えば、抗ＣＤ８０抗体、抗ｇｐ３９抗体、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ２３抗体および抗ＣＤ２０抗体からなる群から選択されるモノクローナル抗体の投与は、このような投与を必要とする患者に治療的な恩恵を提供することが知られている。
【００６６】
本発明の有用な実施形態は、疾患を処置するため、すなわち、疾患を抑制もしくは予防することによってか、または、疾患の病理学的症状を緩和することによって、治療的な恩恵を提供するために、癌、アレルギー性障害、自己免疫疾患およびリンパ腫からなる群から選択される疾患に罹患している患者に、治療有効量の治療用抗体を含む薬学的組成物を投与する工程を包含する。
【００６７】
（治療用抗体の濃縮調製物を含む「キット」）
本発明は、障害に罹患しているか、または障害の素因のある哺乳動物の処置に有用なキットをさらに提供する。本明細書中で使用される「処置」は、進行中の疾患に罹患している患者に治療的な恩恵を提供すること、および、予防的な（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ｏｒ  ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）処置の両方をいう。キットの内側には、（ａ）少なくとも１種の治療有効量の抗体を含む水溶液および約２ｍＭ〜約４８ｍＭの範囲の濃度のヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液から本質的になる、膜濾過によって濃縮された抗体調製物と、（ｂ）少なくとも１種の薬学的に受容可能なキャリアとを合わせた生成物である、薬学的組成物を含む少なくとも１つの容器がある。このキットは、この薬学的組成物が障害を処置するために使用され得ることを示すラベルまたは挿入物をさらに含む。このキットは、治療用のモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体の治療有効量を含み得る。１つの有用な実施形態において、治療用抗体は、ＩｇＧ抗体である。別の有用な実施形態において、治療用抗体はモノクローナル抗体（例えば、霊長類化（ｐｒｉｍａｔｉｚｅｄ）モノクローナル抗体）である。
【００６８】
特に好ましい実施形態において、キットは、癌、アレルギー性障害、自己免疫疾患およびリンパ腫からなる群から選択される障害を処置するのに有用な、治療有効量の治療用抗体を含む。好ましい実施形態において、治療用抗体は、抗ＣＤ８０抗体、抗ｇｐ３９抗体、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ２３抗体および抗ＣＤ２０抗体からなる群から選択される。特に好ましい実施形態において、治療用抗体は、Ｒｉｔｕｘａｎ、ＩＤＥＣ−１１４抗体、ＩＤＥＣ−１３１抗体、ＩＤＥＣ−１５１抗体およびＩＤＥＣ−１５２抗体からなる群から選択される。
【実施例】
【００６９】
接線方向の流動濾過は、タンパク質を濃縮して、物質を最終処方物にダイアフィルトレーションするための処理抗体において、最も一般的に使用される技術の１つである。その作動の成功は、生成物の収率および安定性にかなり影響を及ぼし得る。従って、このことは、この操作の効率を改善し得る因子を探索するために重要である。この目的のために、以前の研究において、本発明者らは、接線方向の流動濾過の性能に対する緩衝液の種類およびｐＨの影響、ならびに、生成物の安定性に対するその影響を調べる。この実施例は、比較的低い濃度の酢酸緩衝液またはヒスチジン緩衝液（５〜４０ｍＭ）で処方されたＭＡｂ調製物が、異なる他の緩衝液（例えば、クエン酸緩衝液）で処方された同じＭＡｂの調製物により得られた結果と比較して、低い粘度および低い凝集を有することを示す。
【００７０】
接線方向の流動濾過（ＴＦＦ）は、一般に、薬学的処方物としての使用に適した、高度に濃縮されたＭＡｂ水溶液を調製する最終工程における、ＭＡｂ調製物のダイアフィルトレーションおよび濃縮のために、一般に用いられる。ＴＦＦの性能は、溶液の粘度、タンパク質の溶解度、および、この溶液中の、タンパク質が形成する凝集体の程度により影響を受け得る。
【００７１】
（材料および方法）
１０ｍＭ  クエン酸（ｐＨ６．５）および１５０ｍＭ  ＮａＣｌ中、または、２５ｍＭ  酢酸ナトリウム（ｐＨ６．０）および２２０ｍＭ  グリシン中、１０ｍｇ／ｍｌの濃度にてＩＤＥＣ−１１４  ＭＡｂのストック溶液（無菌的に２〜８℃にて保存）を得た。ＩＤＥＣ−１１４  ＭＡｂは、霊長類化抗体−ＣＤ８０に結合し、ヒトの定常領域と、マカクザルの可変領域とを有する、キメラ組換えＩｇＧ１  ＭＡｂである。ＩＤＥＣ−１１４  ＭＡｂのストック溶液を、Ｐｅｌｌｉｃｏｎ  ＸＬ（ＰＬＣＴＫ  ３０）膜カセット（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏｒｐ．，Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）を備える、ＬａｂＳｃａｌｅ  Ｔａｎｇｅｎｔｉａｌ  Ｆｌｏｗ  Ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ（ＴＦＦ）Ｓｙｓｔｅｍを用いて、室温でのダイアフィルトレーションにより、２５ｍｇ／ｍｌまで濃縮した。２５ｍｇ／ｍｌのＩＤＥＣ−１１４  ＭＡｂと、所望のｐＨの選択された緩衝液から本質的になる６水溶液を、ついで、以下の試験緩衝液の各々の８容量につき１容量の抗体緩衝液でエクスハング（ｅｘｈａｎｇ）することによって、室温でダイアフィルトレーションすることによって調製した：２０ｍＭ  酢酸ナトリウム、ｐＨ５．５および６．０；２０  ｍＭ  クエン酸ナトリウム、ｐＨ５．５および６．０；ならびに２０  ｍＭ  ヒスチジン／ＨＣｌ、ｐＨ５．５および６．０。緩衝溶液を調製するのに用いた化学物質は以下の通りであった：酢酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ，Ｓ１３０４）；クエン酸ナトリウム（Ｆｉｓｈｅｒ，Ｓ２７９−５００）およびヒスチジン（ＪＴ  Ｂａｋｅｒ，製品＃２０８０．０６）。
【００７２】
次いで、サンプルを、浸透する流速が１ｍｌ／分に達するまで、Ｌａｂｓｃａｌｅ  ＴＦＦ  Ｓｙｓｔｅｍでさらに濃縮し、その時点で、抗体溶液を１５０ｍｇ／ｍｌを上回るまで濃縮した。１５０ｍｇ／ｍｌの濃度を達成するのに要した時間を記録した。全ての操作の均一性を維持するために、全工程の間、システムの流速を、最適な保持圧下、８０ｍｌ／分に固定した。
【００７３】
ＴＦＦによる濃縮の間に、定期的に、少量のＭＡｂ溶液を、タンパク質濃度の測定、ならびに粘度および濁度の測定にかけ、この時点で、浸透する流速をまた記録した。ＴＦＦの後、サンプルをシステムから取り除き、Ａｃｒｏｄｉｓｃ  ＰＦ  Ｓｙｒｉｎｇｅ  Ｆｉｌｔｅｒ  ０．８／０．２μｍ  Ｓｕｐｏｒ膜（Ｇｅｌｍａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）を通して可溶性の凝集体を取り除いた。
【００７４】
（ＴＦＦの作動効率に対する緩衝液の種類およびｐＨの影響）
ＴＦＦの全工程にわたるＵＶ分光光度スキャンによりタンパク質濃度を決定した。サンプルを、濃度により、水中に正確に１００×または２００×で希釈し、２８０ｎｍにおける吸光度を、ブランクとして水に対して、Ｓｈｉｍａｄｚｕ  Ｍｕｌｔｉｓｐｅｃ  １５０１光ダイオードアレイ分光光度計を用いて測定した。図５は、ＴＦＦプロセスの間に、別の濃度の抗体における浸透流速を示す。ここから、浸透流速が以下の傾向：ヒスチジン＞酢酸＞クエン酸に従ったことがはっきりと分かる。流速に対する、ｐＨの影響に関しては、傾向がなかった。８０ｍｇ／ｍｌより上の濃度において、浸透流速は減少し、本発明者らは、ヒスチジンで処方したサンプルと酢酸で処方したサンプルの流速の間に有意差を認めなかったが、これらの両方についての浸透流速は、試験した２つのｐＨ値における、クエン酸で処方した物質についての流速よりも有意に高かった。２５ｍｇ／ｍｌのＩＤＥＣ−１１４  ２４０ｍｌを１５０ｍｇ／ｍｌまで濃縮するのに要した時間を表Ｉに列挙する。平均して、クエン酸で処方した抗体溶液は、濃縮するのに、酢酸で処方したものよりも約３０％長い時間がかかり、ヒスチジンで処方したものよりも約５０％長い時間がかかった。
【００７５】
（表Ｉ）
【００７６】
【表１】
2005530845.tif 000002
【００７７】
（濁度）
ＴＦＦの作動中、抗体分子を、多数のサイクルにわたってシステムを通して連続的にポンピングし、これを、凝集を生じ、溶液の濁度を増加させる可能性がある、強力なせん断力に供する。図６は、濃縮プロセスの全工程にわたって、ＯＤ３２０で測定した、処方した抗体の濁度プロフィールを示す。両方のｐＨ値において、クエン酸で処方したＭＡｂ溶液が、酢酸およびヒスチジンで処方した溶液よりもはるかに高い濁度を有したことが明らかである。ｐＨ６．０の酢酸処方物を除いて、後者の２つの緩衝液は非常に類似したプロフィールを有した。この結果は、ヒスチジン緩衝液および酢酸緩衝液が、クエン酸緩衝液と比べて、抗体分子の凝集に対して、有意に良好な保護を提供することを示唆する。
【００７８】
（撹拌アッセイ）
濃縮ＭＡｂの安定性をさらに測定するために、加速凝集研究を行った。ＴＦＦプロセスからの各濾過処方物３ｍｌを、滅菌の５ｃｃＩ型ガラスバイアルに入れた。このガラスバイアルを、テフロン（登録商標）で表面加工した、灰色のブチルラバーストッパーで栓をし、圧着シールでキャップした。次いで、このバイアルを、７００ｒｐｍに設定したシェーカーに置き、室温にて７２時間撹拌した。各濃縮抗体処方物を０．２μ膜を通して濾過し、その濃度を、１５０ｍｇ／ｍｌに調整した。撹拌の前後のＯＤ３２０およびＯＤ５８０の読みを表ＩＩに示す。最初のＯＤ３２０の読みは、全て比較的低く、互いに非常に類似していたが、撹拌後は、両方のクエン酸で処方した抗体が最も高い濁度を有し、ヒスチジンおよび酢酸がこれに続いた。同様の傾向が、ＯＤ５８０の測定においても反映される。本発明者らは、濁度についての任意の特定のｐＨの傾向を見出さなかったが、同じ緩衝液内において、異なるｐＨ値は、異なるレベルの凝集を生じた。
【００７９】
（表ＩＩ）
【００８０】
【表２】
2005530845.tif 000003
【００８１】
（別のＩＤＥＣ−１１４処方物の粘度）
１５０ｍｇ／ｍｌまで濃縮されたサンプルの運動力学的粘度を、較正したサイズ２のＣｒｏｓｓ  Ａｒｍ  Ｖｉｓｃｏｍｅｔｅｒ（ＶＷＲ）により測定した。全ての測定を、３ｍｌの溶液を用いて、室温（２３±３℃）にて行った。図７は、測定された、ＩＤＥＣ−１１４の６つの異なる処方物の動粘度を示す棒グラフである。予想された通りに、クエン酸で処方した溶液が最も高い粘度を有し、酢酸溶液がこれに続き、ヒスチジン緩衝化溶液は最も低い粘度を有した。再度、同じ緩衝液種内において、ｐＨは粘度に影響を有するようであるが、緩衝液種を越えて、特定のｐＨ傾向は見出され得なかった。
【図面の簡単な説明】
【００８２】
【図１】図１は、直接流動濾過（ＤＦＦ）を模式的に図示する。図１に示されるように、供給（すなわち、濾過される溶液）を、直接膜に向けて強制的に通す。低分子は、濾液として孔を通過するが、一方で、大きな抗体は、膜により保持される。孔よりも大きい分子は、膜表面で凝集し、ゲルを形成することが示される。
【図２】図２は、ＤＦＦの間の流速が、濾過が進むにつれ急速に減少することを示すグラフである。これは、抗体が、膜表面で凝集して、孔を通る低分子の流れをブロックするゲルを形成するためである。
【図３】図３は、接線方向の流動濾過（ＴＦＦ）を模式的に図示する。一旦供給がシステム内に導入されると、溶液が循環することによって、溶液の圧が、溶液中の低分子を濾液として膜の孔を通す間に、サンプルが膜表面を通って流れる。膜の間で保持する溶液および抗体分子は、保持液（ｒｅｔｅｎｔａｔｅ）を形成する。
【図４】図４は、ＴＦＦの間の流速が、濾過が進むにつれて次第に減少することを示すグラフである。
【図５】図５は、ｐＨ５．５およびｐＨ６．０における３つの異なる緩衝液を含む溶液についての、抗体濃度に対する濾液の流速の相関関係を示すグラフである。グラフにプロットされるデータから、広範囲の抗体濃度における濾液の流速が、クエン酸緩衝液よりも、ヒスチジン緩衝液および酢酸緩衝液で顕著に大きいことが分かる。ｐＨ５．５とｐＨ６．０において達成された流速の間には、有意差は見られない。
【図６】図６は、ｐＨ５．５およびｐＨ６．０における３つの異なる緩衝液を含む溶液についての、ＴＦＦの工程にわたっての抗体濃度の増加を伴う、ＯＤ３２０（濁度の指標）の変化を示すグラフである。クエン酸緩衝液を含有する処方物が最も高い濁度を有し、酢酸含有処方物において中間の濁度が存在し、そして、ヒスチジンを含有する処方物が最も低い濁度を有したことがグラフから分かる。
【図７】図７は、ｐＨ５．５およびｐＨ６．０における異なる緩衝液を用いて、１３５ｍｇ／ｍｌにて処方されたＩＤＥＣ１１４溶液の運動力学的粘度を表す棒グラフである。クエン酸含有処方物は、他のものより有意に高い粘度を有した。ｐＨ６．０における処方物の粘度はまた、ｐＨ５．５における粘度よりもかなり高い。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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