(57)【要約】ＭＴＳＰ−関連の、ウロキナーゼタイププラスミノーゲン活性化因子(ｕＰＡ)のもしくはエンドセリアーゼ−関連の疾患を含む、細胞表面プロテアーゼ関連の疾患の一つもしくはそれ以上の症状の処置、予防、もしくは改善のための結合体、組成物および方法が、提供される。組成物および方法に使用される結合体は、細胞毒剤を含む、治療薬を含むところのペプチド性結合体である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療薬およびそれにリンカーを介して任意に結合したペプチド性基質を含む、結合体であって、そこではペプチド性基質は細胞表面プロテアーゼまたはその可溶性の、脱落したもしくは放出された型によりタンパク質分解的に切断されて、治療薬を遊離し、そこでは結合体はプラスミンもしくは前立腺特異的抗原(ＰＳＡ)により実質的に切断されない、結合体。
【請求項２】
遊離された治療薬が活性である、請求項１に記載の結合体。
【請求項３】
切断が活性化のために更なる加工を必要とする形態で治療薬を遊離する、請求項１に記載の結合体。
【請求項４】
請求項１に記載の結合体であって、成分：(ペプチド性基質)Ｓ、(リンカー)ｑおよび(標的とされた薬剤)ｔ；
[そこでは少なくとも一つのペプチド性基質部分は少なくとも一つの治療薬にリンカーと共にもしくは無しで結合しており、ｓは１〜６であり、ｑは０〜ｔであり、ｔは１〜６である]を含み、そこではペプチド性基質(複数を含む)を切断する細胞表面プロテアーゼは治療薬の細胞への伝達をもたらす、結合体。
【請求項５】
請求項１に記載の結合体であって、そこではペプチド性基質は一つのアミノ酸もしくはそれ以上を含み、そこでは、結合体のタンパク質分解的な切断で、得られた治療薬は活性であるかもしくは、さらなる加工で、活性である形態にある、結合体。
【請求項６】
細胞表面プロテアーゼがセリンプロテアーゼである、請求項１に記載の結合体。
【請求項７】
細胞表面プロテアーゼがＩＩ型膜貫通セリンプロテアーゼ(ＭＴＳＰ)もしくはエンドセリアーゼである、請求項１に記載の結合体。
【請求項８】
請求項１に記載の結合体であって、そこでは細胞表面プロテアーゼがエンドセリアーゼ１、エンドセリアーゼ２、ＭＴＳＰ１、ＭＴＳＰ３、ＭＴＳＰ４、ＭＴＳＰ６、ＭＴＳＰ７、ＭＴＳＰ９、ＭＴＳＰ１０、ＭＴＳＰ１２、ＭＴＳＰ２０、ＭＴＳＰ２２、ＭＴＳＰ２５、コリン、エンテロキナーゼ、ヒト気道トリプシン様プロテアーゼ(ＨＡＴ)、ＴＭＰＲＳＳ２、ヘプシン、およびＴＭＰＲＳＳ４から選択される、結合体。
【請求項９】
請求項１に記載の結合体であって、そこでは細胞表面プロテアーゼが、
配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、２７０、２７２、２７４および２７６のいずれかに示すアミノ酸の配列を含むポリペプチド；
配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、２６９、２７３および２７５のいずれかに示すヌクレオチドの配列に高度の厳密度の条件下でハイブリダイズする、ヌクレオチドの配列によりコード化されるポリペプチド；
配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、２７０、２７２、２７４および２７６のいずれかに示すアミノ酸の配列と少なくとも約４０％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む、ポリペプチド；ならびに
配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、２７０、２７２、２７４および２７６のいずれかに示すヌクレオチドの配列のスプライス変異体によりコード化されるポリペプチド
からなる群から選択されるポリペプチドを含む、結合体。
【請求項１０】
請求項１に記載の結合体であって、そこでは治療薬が毒素、小有機分子、核酸、タンパク質治療薬、サイトカインもしくは成長因子である、結合体。
【請求項１１】
治療薬が抗がん剤である、請求項１に記載の結合体。
【請求項１２】
治療薬が抗血管形成剤である、請求項１に記載の結合体。
【請求項１３】
請求項１に記載の結合体であって、そこでは治療薬がアブリン、リシンＡ、緑膿菌外毒素志賀毒素、ジフテリア毒素、腫瘍壊死因子、α−インターフェロン、γ−インターフェロン、神経成長因子、組織因子および組織因子変異体、ＦＡＳ−リガンド血小板由来成長因子、組織プラスミノーゲン活性化因子、インターロイキン−１(ＩＬ−１)、インターロイキン−２(ＩＬ−２)、インターロイキン−６(ＩＬ−６)、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(ＧＭＣＳＦ)、顆粒球コロニー刺激因子(Ｇ−ＣＳＦ)、エリスロポエチン(ＥＰＯ)、神経成長因子、繊維芽細胞成長因子(ＦＧＦ)、および表皮成長因子から選択される、結合体。
【請求項１４】
請求項１に記載の結合体であって、そこでは治療薬がアルキル化剤、毒素、抗増殖剤、プロ−アポトーシス剤、プロ−凝固剤、細胞毒性ヌクレオシドおよびチュービリン結合剤から選択される、結合体。
【請求項１５】
請求項１に記載の結合体であって、そこでは治療薬が以下のクラスの薬物：
ａ)アントラサイクリンファミリーの薬物、
ｂ)ビンカアルカロイド薬物、
ｃ)マイトマイシン、
ｄ)ブレオマイシン、
ｅ)細胞毒性ヌクレオシド、
ｆ)プテリジンファミリーの薬物、
ｇ)ジイネン、
ｈ)エストラムスチン、
ｉ)シクロホスファミド、
ｊ)タキサン、
ｋ)ポドフィロトキシン、
ｌ)メイタンシノイド、
ｍ)エポチロン、ならびに
ｎ)コンブレタスタチンおよび類似体
もしくはそれらの薬学的に許容される誘導体
から選択される、結合体。
【請求項１６】
請求項１に記載の結合体であって、そこでは治療薬が以下のクラスの薬物：
ａ)ドキソルビシン、
ｂ)カルミノマイシン、
ｃ)ダウノルビシン、
ｄ)アミノプテリン、
ｅ)メトトレキセート、
ｆ)メトプテリン、
ｇ)ジクロロメトトレキセート、
ｈ)マイトマイシンＣ、
ｉ)ポルフィロマイシン、
ｊ)５−フルオロウラシル、
ｋ)６−メルカプトプリン、
ｌ)シトシンアラビノシド、
ｍ)ポドフィロトキシン、
ｎ)エトポシド
ｏ)リン酸エトポシド
ｐ)メルファラン、
ｑ)ビンブラスチン、
ｒ）ビンクリスチン、
ｓ）ロイロシジン、
ｔ)ビンデシン、
ｕ)エストラムスチン、
ｖ)シスプラチン、
ｗ)シクロホスファミド
ｘ)タキソール、
ｙ)ロイロシン、
ｚ)４−デスアセチルビンブラスチン、
ａａ)エポチロンＢ、
ｂｂ)タキソテール、
ｃｃ)メイタンシノール、
ｄｄ)エポチロンＡ、ならびに
ｅｅ)コンブレタスタチンおよび類似体、
もしくはそれらの薬学的に許容される誘導体
から選択される、結合体。
【請求項１７】
治療薬およびペプチド性基質の間にリンカーをさらに含む、請求項１に記載の結合体。
【請求項１８】
リンカーが炭水化物、ペプチド、および／もしくは炭化水素核を含む、請求項１７に記載の結合体。
【請求項１９】
請求項１７に記載の結合体であって、そこではリンカーは：
治療薬上のアミン部分がリンカー単位と連結されてアミド結合を形成しそしてペプチド性基質のアミノ末端がリンカー単位の他方の末端と連結されてアミド結合をまた形成する、ビスカルボニルアルキルジラジカル；もしくは
治療薬上のカルボニル部分がリンカー部分のアミンの一つに共役結合的に結合されて一方ではリンカー単位の他のアミンはペプチド性基質のＣ−末端に共有結合的に結合されている、ジアミノアルキルジラジカルリンカー単位；または
以下の式：
【化１】
2005518332.tif 000359
[式中、ＡはＮＨもしくはＯであり；ＤはＮ(Ｈもしくはアルキル)またはＯであり；Ｒ２５はＨ、アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、例えば、１〜３個のような１個またはそれ以上のハロ、ハロアルキルおよびアルキルから選択される置換基で任意に置換されるヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキル、１〜２個の二重結合を含むアルケニル、１〜２個の三重結合を含むアルキニル、アルク(エン)(イン)イル基、ハロ、擬似ハロ、シアノ、ヒドロキシ、例えば、ハロ低級アルキル、特にトリフルオロメチル、のようなハロアルキルおよびポリハロアルキル、ホルミル、アルキルカルボニル、例えば１〜３個のような１個もしくはそれ以上の、例えば、ハロ、ハロアルキルおよびアルキルから選択される置換基で任意に置換されるところのアリールカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、カルボキシ、アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、アミノイミノ、アルコキシカルボニルアミノ、アリールオキシカルボニルアミノ、アミノカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニル、アリールアミノカルボニル、ジアリールアミノカルボニル、アラルキルアミノカルボニル、アルコキシ、アリールオキシ、パーフルオロアルコキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アリールアルコキシ、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アリールアミノアルキル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、アルキルアリールアミノ、アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、アジド、ニトロ、メルカプト、アルキルチオ、アリールチオ、パーフルオロアルキルチオ、チオシアノ、イソチオシアノ、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、アリールスルフィニル、アリールスルホニル、アミノスルホニル、アルキルアミノスルホニル、ジアルキルアミノフルホニルおよびアリールアミノスルホニル、であり；ならびにｙは、１〜３の整数である]
の自己除去するリンカー：
を含む、結合体。
【請求項２０】
リンカーが環状アルキレン部分を含むジアミンである、請求項１７に記載の結合体。
【請求項２１】
ジアミンがビシクロアルキレン部分を含有する、請求項１７に記載の結合体。
【請求項２２】
請求項１７に記載の結合体であって、そこではリンカーは１,４−ビス(アミノメチル)シクロヘキサン、１,４−ビス(アミノメチル)シクロヘプタン、１,３−ビス(アミノメチル)シクロペンタン、１−アミノ−４−(アミノメチル)シクロヘキサン、１,４−ジアミノシクロヘキサンおよび１,４−ビス(アミノメチル)ビシクロ[２.２.２]オクタンから選択される、結合体。
【請求項２３】
リンカーが１,ω−ジアミノアルカンである、請求項１７に記載の結合体。
【請求項２４】
リンカーが１,３−ジアミノプロパンである、請求項１７に記載の結合体。
【請求項２５】
リンカーが１,ω−ジカルボニルアルカンである、請求項１７に記載の結合体。
【請求項２６】
リンカーがシュウ酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸およびピバリン酸から選択される、請求項２５に記載の結合体。
【請求項２７】
ペプチド性基質が任意のアミノ酸であるＰ１を含む、請求項１に記載の結合体。
【請求項２８】
Ｐ１が天然に存在するアミノ酸である、請求項２７に記載の結合体。
【請求項２９】
Ｐ１が芳香族の、枝分れした、もしくは枝分れした芳香族の側鎖を持つアミノ酸である、請求項２７に記載の結合体。
【請求項３０】
請求項１に記載の結合体であって、そこではペプチド性基質が、Ｐ１はＡｒｇ、Ｌｙｓ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ａｌａ、Ｖａｌ、ＩｌｅおよびＴｈｒから選択される、Ｐ１を含む、結合体。
【請求項３１】
請求項１に記載の結合体であって、そこでは：
ペプチド性基質がＰ１−Ｐ１'結合を含み；
Ｐ１−Ｐ１'結合は細胞表面プロテアーゼによる切断の部位であり；
Ｐ１はＡｒｇ、Ｌｙｓ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ａｌａ、Ｖａｌ、ＩｌｅおよびＴｈｒから選択され；そして
Ｐ１'はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｄ−Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔもしくは６−アミノヘキサノイルである、
結合体。
【請求項３２】
請求項１に記載の結合体であって、そこではペプチド性基質が、Ｐ１はＡｒｇ、ＬｙｓもしくはＡｒｇ代理体である、Ｐ１を含む、結合体。
【請求項３３】
Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、ＧｌｙおよびＡｌａから選択されるＰ２残基をさらに含む、請求項１に記載の結合体。
【請求項３４】
Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、ＱｕａｔおよびＡｒｇ代理体から選択されるＰ３残基をさらに含む、請求項１に記載の結合体。
【請求項３５】
Ｐｒｏ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、ｎＬｅｕ、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ｇｌｕ、ＰｈｅおよびＶａｌから選択されるＰ４残基をさらに含む、請求項１に記載の結合体。
【請求項３６】
ＡｒｇおよびＡｒｇ代理体から選択されるＰ５残基をさらに含む、請求項１に記載の結合体。
【請求項３７】
Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、およびＶａｌから選択されるＰ６残基をさらに含む、請求項１に記載の結合体。
【請求項３８】
Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｄ−Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔおよび６−アミノヘキサノイルから選択されるＰ２'残基をさらに含む、請求項１に記載の結合体。
【請求項３９】
Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔおよび６−アミノヘキサノイルから選択されるＰ３'残基をさらに含む、請求項１に記載の結合体。
【請求項４０】
請求項１に記載の結合体であって、そこでは：
ペプチド性基質が式：
Ｐ４−Ｐ３−Ｐ２−Ｐ１−Ｐ１'[式中：
Ｐ１はＡｒｇ、Ｌｙｓ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ａｌａ、Ｖａｌ、ＩｌｅおよびＴｈｒから選択され；
Ｐ２はＰｈｅ、Ｓｅｒ、ＧｌｙおよびＡｌａから選択され；
Ｐ３はＡｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、ＱｕａｔおよびＡｒｇ代理体から選択され；
Ｐ４はＰｒｏ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、ｎＬｅｕ、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ｇｌｕ、ＰｈｅおよびＶａｌから選択され；そして
Ｐ１'はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｄ−Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔもしくは６−アミノヘキサノイルである]
を有する５−マーを含む、結合体。
【請求項４１】
請求項４０に記載の結合体であって、そこでは：
ペプチド性基質が一つもしくはそれ以上のＰ５もしくはＰ２'アミノ酸残基[そこでは：
Ｐ５はＡｒｇもしくはＡｒｇ代理体であり；そして
Ｐ２'はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｄ−Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔおよび６−アミノヘキサノイルから選択される]を任意にさらに含む、結合体。
【請求項４２】
請求項４１に記載の結合体であって、そこでは：
もしペプチド性基質がＰ５アミノ酸残基を含むならば、ペプチド性基質はＬｅｕ、Ｉｌｅ、およびＶａｌから選択されるＰ６アミノ酸残基を任意にさらに含み；そして
もしペプチド性基質がＰ２'アミノ酸残基を含むならば、ペプチド性基質はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｄ−Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔおよび６−アミノヘキサノイルから選択されるＰ３'アミノ酸残基を任意にさらに含む、結合体。
【請求項４３】
請求項１に記載の結合体であって、そこでは治療薬がペプチド性基質のＣ−末端に直接にもしくはリンカーを介して結合する、結合体。
【請求項４４】
請求項１に記載の結合体であって、そこでは；
ペプチド性基質がＮ−末端においてキャップを含む、結合体。
【請求項４５】
キャップが親水性の保護基である、請求項１に記載の結合体。
【請求項４６】
キャップがアシル、スルホニルもしくはカルバモイル誘導体である、請求項１に記載の結合体。
【請求項４７】
請求項４５に記載の結合体であって、そこでは保護基が水酸化アルカノイル、多水酸化アルカノイル、ポリエチレングリコール、グリコシレート、糖類およびクラウンエーテルから選択される、結合体。
【請求項４８】
式Ｉ：
Ｘｎ−(Ｐ６)ｍ−(Ｐ５)ｐ−(Ｐ４)ｉ−(Ｐ３)ｊ−(Ｐ２)ｌ−Ｐ１−(Ｐ１’)ｕ−(Ｐ２’)ｋ−(Ｐ３’)ｒ−(Ｌ)ｎ−Ｚ
もしくはその誘導体を有する請求項４３に記載の結合体であって、そこでは：
Ｚは治療薬であり；
Ｌはリンカーであり；
ｌ、ｊ、ｉ、ｐおよびｍは次のように選択される：
ｌは０もしくは１であり；ｌが０のときは、ｊ、ｉ、ｐおよびｍは０であり；ｌが１のときは、ｊは０もしくは１であり；ｊが０のときは、ｉ、ｐおよびｍは０であり；ｊが１のときは、ｉは０もしくは１であり；ｉが０のときは、ｐおよびｍは０であり；ｉが１のときは、ｐは０もしくは１であり；ｐが０のときは、ｍは０であり；ｐが１のときは、ｍは０もしくは１であり；
ｕ、ｋおよびｒは次のように選択される：
ｕは０もしくは１であり；ｕが０のときは、ｋおよびｒは０であり；ｕが１のときは、ｋは０もしくは１であり；ｋが０のときは、ｒは０であり；ｋが１のときは、ｒは０もしくは１であり；
ｎは０もしくは１であり；
Ｘｎは水素、またはアシル、スルホニルもしくはカルバモイルキャップであり；
Ｐ１はＡｒｇ、Ｌｙｓ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ａｌａ、Ｖａｌ、ＩｌｅおよびＴｈｒの中から選択され；
Ｐ１'はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｄ−Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔもしくは６−アミノヘキサノイルであり；
Ｐ２はＰｈｅ、Ｓｅｒ、ＧｌｙおよびＡｌａから選択され；
Ｐ３はＡｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、ＱｕａｔおよびＡｒｇ代理体から選択され；
Ｐ４はＰｒｏ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、ｎＬｅｕ、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ｇｌｕ、ＰｈｅおよびＶａｌから選択され；
Ｐ５はＡｒｇおよびＡｒｇ代理体から選択され；
Ｐ６はＬｅｕ、Ｉｌｅ、およびＶａｌから選択され；
Ｐ２'はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｄ−Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔおよび６−アミノヘキサノイルから選択され；そして
Ｐ３'はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔおよび６−アミノヘキサノイルから選択される、
結合体。
【請求項４９】
Ｐ１がＡｒｇ、ＬｙｓもしくはＡｒｇ代理体である、請求項４８に記載の結合体。
【請求項５０】
請求項１に記載の結合体であって、そこでは治療薬がペプチド性基質のＮ−末端に直接にもしくはリンカーを介して結合する、結合体。
【請求項５１】
請求項５０に記載の結合体であって、そこでは；
ペプチド性基質のＣ−末端がカルボン酸もしくはカルボキサミド誘導体である、結合体。
【請求項５２】
式ＩＩ：
Ｚ−(Ｌ)ｎ−(Ｐ６)ｍ−(Ｐ５)ｐ−(Ｐ４)ｉ−(Ｐ３)ｊ−(Ｐ２)ｌ−Ｐ１−(Ｐ１')ｕ−(Ｐ２')ｋ−(Ｐ３')ｒ−Ｘｃ
もしくはその誘導体を有する請求項５０に記載の結合体であって、そこでは：
Ｚは治療薬であり；
Ｌはリンカーであり；
l、ｊ、ｉ、ｐおよびｍは次のように選択される：
ｌは０もしくは１であり；ｌが０のときは、ｊ、ｉ、ｐおよびｍは０であり；ｌが１のときは、ｊは０もしくは１であり；ｊが０のときは、ｉ、ｐおよびｍは０であり；ｊが１のときは、ｉは０もしくは１であり；ｉが０のときは、ｐおよびｍは０であり；ｉが１のときは、ｐは０もしくは１であり；ｐが０のときは、ｍは０であり；ｐが１のときは、ｍは０もしくは１であり； 
ｕ、ｋおよびｒは次のように選択される：
ｕは０もしくは１であり；ｕが０のときは、ｋおよびｒは０であり；ｕが１のときは、ｋは０もしくは１であり；ｋが０のときは、ｒは０であり；ｋが１のときは、ｒは０もしくは１であり；
ｎは０もしくは１であり；
Ｘｃはそれが付着しているアミノ酸残基のカルボニル基と一緒に、カルボン酸もしくはカルボキサミド基を形成し；
Ｐ１はＡｒｇ、Ｌｙｓ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ａｌａ、Ｖａｌ、ＩｌｅおよびＴｈｒの中から選択され；
Ｐ１'はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｄ−Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔもしくは６−アミノヘキサノイルであり；
Ｐ２はＰｈｅ、Ｓｅｒ、ＧｌｙおよびＡｌａから選択され；
Ｐ３はＡｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、ＱｕａｔおよびＡｒｇ代理体から選択され；
Ｐ４はＰｒｏ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、ｎＬｅｕ、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ｇｌｕ、ＰｈｅおよびＶａｌから選択され；
Ｐ５はＡｒｇおよびＡｒｇ代理体から選択され；
Ｐ６はＬｅｕ、Ｉｌｅ、およびＶａｌから選択され；
Ｐ２'はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｄ−Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔおよび６−アミノヘキサノイルから選択され；そして
Ｐ３'はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔおよび６−アミノヘキサノイルから選択される、
結合体。
【請求項５３】
Ｐ１がＡｒｇ、ＬｙｓもしくはＡｒｇ代理体である、請求項５２に記載の結合体。
【請求項５４】
請求項１に記載の結合体であって、そこでは第一の治療薬が、ペプチド性基質のＮ−末端に、任意にリンカーを介して、付着し；そして
第一の治療薬と同じかもしくは異なる、第二の治療薬が、ペプチド性基質のＣ−末端に、第一のリンカーと同じかもしくは異なる、第二のリンカーを介して任意に、付着する、結合体。
【請求項５５】
式ＩＩＩ：
Ｚ１−(Ｌ１)ｎ−(Ｐ６)ｍ−(Ｐ５)ｐ−(Ｐ４)ｉ−(Ｐ３)ｊ−(Ｐ２)ｌ−Ｐ１−(Ｐ１’)ｕ−(Ｐ２’)ｋ−(Ｐ３’)ｒ−(Ｌ２)ｖ−Ｚ２
もしくはその誘導体を有する請求項５４に記載の結合体であって、そこでは：
Ｚ１およびＺ２はそれぞれ治療薬であって、同一もしくは異なっていて；
Ｌ１およびＬ２はそれぞれリンカーであって、同一もしくは異なっていて；
l、ｊ、ｉ、ｐおよびｍは次のように選択される：
ｌは０もしくは１であり；ｌが０のときは、ｊ、ｉ、ｐおよびｍは０であり；ｌが１のときは、ｊは０もしくは１であり；ｊが０のときは、ｉ、ｐおよびｍは０であり；ｊが１のときは、ｉは０もしくは１であり；ｉが０のときは、ｐおよびｍは０であり；ｉが１のときは、ｐは０もしくは１であり；ｐが０のときは、ｍは０であり；ｐが１のときは、ｍは０もしくは１であり；
ｕ、ｋおよびｒは次のように選択される：
ｕは０もしくは１であり；ｕが０のときは、ｋおよびｒは０であり；ｕが１のときは、ｋは０もしくは１であり；ｋが０のときは、ｒは０であり；ｋが１のときは、ｒは０もしくは１であり；
ｎおよびｖはそれぞれ独立に０もしくは１であり；
Ｐ１はＡｒｇ、Ｌｙｓ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ａｌａ、Ｖａｌ、ＩｌｅおよびＴｈｒの中から選択され；
Ｐ１'はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｄ−Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔもしくは６−アミノヘキサノイルであり；
Ｐ２はＰｈｅ、Ｓｅｒ、ＧｌｙおよびＡｌａから選択され；
Ｐ３はＡｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、ＱｕａｔおよびＡｒｇ代理体から選択され；
Ｐ４はＰｒｏ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、ｎＬｅｕ、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ｇｌｕ、ＰｈｅおよびＶａｌから選択され；
Ｐ５はＡｒｇおよびＡｒｇ代理体から選択され；
Ｐ６はＬｅｕ、Ｉｌｅ、およびＶａｌから選択され；
Ｐ２'はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｄ−Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔおよび６−アミノヘキサノイルから選択され；そして
Ｐ３'はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔおよび６−アミノヘキサノイルから選択される、
結合体。
【請求項５６】
Ｐ１がＡｒｇ、ＬｙｓもしくはＡｒｇ代理体である、請求項５５に記載の結合体。
【請求項５７】
請求項１〜５７のいずれかに記載の結合体であって、
Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Gly-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 46);
Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Ala-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 47);
Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Gly-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 48);
Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Ala-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 49);
Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ile-Ile-(治療薬) (配列番号: 50);
Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ile-Ile-(治療薬) (配列番号: 51);
Ac-Pro-Arg-Phe-Lys-Ile-Ile-(治療薬) (配列番号: 52);
Ac-Leu-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 53);
Ac-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 54);
Ac-Ser-Lys-Ser-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 55);
Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ile-Ile-(治療薬) (配列番号: 56);
Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ile-Ile-(治療薬) (配列番号:57);
Ac-Pro-Arg-Phe-Arg-Ile-Ile-(治療薬) (配列番号: 58);
Ac-Leu-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 59);
Ac-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 60);
Ac-Ser-Arg-Ser-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 61);
Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Gly-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 62); 
Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Ala-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 63); 
Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Gly-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 64); 
Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Ala-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 65); 
Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ile-Ile-(治療薬) (配列番号: 66);
Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ile-Ile-(治療薬) (配列番号: 67);
Ac-Pro-Arg-Phe-Lys-Ile-Ile-(治療薬) (配列番号: 68);
Ac-Leu-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 69);
Ac-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 70);
Ac-Ser-Lys-Ser-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 71); 
Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ile-Ile-(治療薬) (配列番号: 72);
Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ile-Ile-(治療薬) (配列番号: 73);
Ac-Pro-Arg-Phe-Arg-Ile-Ile-(治療薬) (配列番号: 74);
Ac-Leu-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 75);
Ac-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 76); および
Ac-Ser-Arg-Ser-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 77)
ピロGlu-Pro-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 78);
CH3SO2-D-HHT-Gly-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 79);
N-p-トシル-Gly-Pro-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 80);
ベンゾイル-Val-Gly-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 81);
CH3SO2-D-HHT-Gly-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 82);
N-α-Z-D-Arg-Gly-Arg-Ala-Ala-(治療薬) ここでZはベンジルオキシカルボニルである (配列番号: 83);
ピロGlu-Gly-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 84);
H-D-Ile-Pro-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 85);
Cbo-L-(γ)Glu(α-t-BuO)-Gly-Arg-Ala-Ala-(治療薬)ここでCboがカルボベンズオキシ (配列番号: 86)である;
H-D-Pro-Phe-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 87);
H-D-Val-Leu-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 88);
Bz-Ile-Glu(γ-OH)-Gly-Arg-Ala-Ala-(治療薬) ここでBzはベンゾイルである (配列番号: 89);
Bz-Ile-Glu(γ-OMe)-Gly-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 90);
Bz-Pro-Phe-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 91);
H-D-Phe-Pip-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 92);
H-D-Val-Leu-Lys-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 93);
H-D-Nle-HHT-Lys-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 94);
Pyr-Arg-Thr-Lys-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 95);
H-Arg-Gln-Arg-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 96);
Boc-Gln-Gly-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 97);
Z-Arg-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 98);
H-D-HHT-Ala-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 99);
H-D-CHT-Gly-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 100);
MeSO2-dPhe-Pro-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 101); 
δ-Z-D-Lys-Pro-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 102);
CH3SO2-D-CHA-But-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 103);
Ac-Arg-Gln-Ser-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 104);
Ac-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 105);
Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 106);
Ac-Arg-Gln-Ser-Arg-Ala-(治療薬) (配列番号: 107);
Ac-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ala-(治療薬) (配列番号: 108);
Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Gly-Gly-(治療薬) (配列番号: 109);
Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ala-(治療薬) (配列番号: 110);
Ac-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ile-(治療薬) (配列番号: 111);
Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ala-Ile-(治療薬) (配列番号: 112);
Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Gly-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 113);
Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Ala-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 114);
Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Gly-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 115);
Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Ala-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 116);
Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 117);
Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 118);
Ac-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 119);
Ac-Leu-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 120);
Ac-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 121);
Ac-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 122);
Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 123);
Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 124);
Ac-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 125);
Ac-Leu-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 126);
Ac-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 127);
Ac-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 128);
Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Gly-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 129);
Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Ala-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 130);
Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Gly-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 131);
Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Ala-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 132);
Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 133);
Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 134);
Ac-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 135);
Ac-Leu-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 136);
Ac-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 137);
Ac-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 138);
Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 139);
Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 140);
Ac-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 141);
Ac-Leu-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 142);
Ac-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 143);
Ac-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 144);
ピロGlu-Pro-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 145);
CH3SO2-D-HHT-Gly-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 146);
N-p-トシル-Gly-Pro-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 147);
ベンゾイル-Val-Gly-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 148);
CH3SO2-D-HHT-Gly-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 149);
N-α-Z-D-Arg-Gly-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 150) (Z = ベンジルオキシカルボニル);
ピロGlu-Gly-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 151);
H-D-Ile-Pro-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 152);
Cbo-L-(γ)Glu(α-t-BuO)-Gly-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 153) (Cbo = カルボベンズオキシ);
H-D-Pro-Phe-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 154);
H-D-Val-Leu-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 155);
Bz-Ile-Glu(γ-OH)-Gly-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 156) (Bz = ベンゾイル);
Bz-Ile-Glu(γ-OMe)-Gly-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 157);
ベンゾイル-Pro-Phe-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 158);
H-D-Phe-Pip-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 159);
H-D-Val-Leu-Lys-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 160);
H-D-Nle-HHT-Lys-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 161);
Pyr-Arg-Thr-Lys-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 162);
H-Arg-Gln-Arg-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 163);
Boc-Gln-Gly-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 164);
Z-Arg-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 165);
H-D-HHT-Ala-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 166);
H-D-CHT-Gly-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 167);
MeSO2-dPhe-Pro-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 168); 
δ-Z-D-Lys-Pro-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 169);
CH3SO2-D-CHA-But-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 170);
Ac-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 171);
Ac-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 172);
Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 173);
Ac-Arg-Gln-Ser-Arg-Leu-(治療薬) (配列番号: 174);
Ac-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Leu-(治療薬) (配列番号: 175);
Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 176);
Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Leu-(治療薬) (配列番号: 177);
Ac-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Leu-(治療薬) (配列番号: 178);
Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 179);
Ac-Arg-Gln-Gly-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 180);
Ac-Arg-Gln-Ala-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 181);
Ac-Arg-Gln-Phe-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 182);
Ac-Arg-Ser-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 183);
Ac-Arg-Gly-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 184);
Ac-Arg-Ala-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 185);
Ac-Arg-Phe-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 186);
Ac-Gln-Ser-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 187);
Ac-Gln-Gly-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 188);
Ac-Gln-Ala-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 189); 
Ac-Gln-Phe-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 190).
Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 191);
Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Ala-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 192);
Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 193);
Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Ala-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 194);
Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 195);
Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 196);
Ac-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 197);
Ac-Leu-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 198);
Ac-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 199);
Ac-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 200);
Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 201);
Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 202);
Ac-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 203);
Ac-Leu-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 204);
Ac-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 205);
Ac-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 206);
Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 207);
Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Ala-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 208);
Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 209);
Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Ala-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 210);
Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 211);
Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 212);
Ac-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 213);
Ac-Leu-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 214);
Ac-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 215);
Ac-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 216);
Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 217);
Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 218);
Ac-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 219);
Ac-Leu-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 220);
Ac-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 221);
Ac-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 222);
ピロGlu-Pro-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 223);
CH3SO2-D-HHT-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 224);
N-p-トシル-Gly-Pro-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 225);
ベンゾイル-Val-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 226);
CH3SO2-D-HHT-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 227);
N-α-Z-D-Arg-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 228) (Z = ベンジルオキシカルボニル);
ピロGlu-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 229);
H-D-Ile-Pro-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 230);
Cbo-L-(γ)Glu(α-t-BuO)-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 231) (Cbo = カルボベンズオキシ);
H-D-Pro-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 232);
H-D-Val-Leu-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 233);
Bz-Ile-Glu(γ-OH)-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 234) (Bz = ベンゾイル);
Bz-Ile-Glu(γ-OMe)-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 235);
ベンゾイル-Pro-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 236);
H-D-Phe-Pip-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 237);
H-D-Val-Leu-Lys-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 238);
H-D-Nle-HHT-Lys-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 239);
Pyr-Arg-Thr-Lys-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 240);
H-Arg-Gln-Arg-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 241);
Boc-Gln-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 242);
Z-Arg-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 243);
H-D-HHT-Ala-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 244);
H-D-CHT-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 245);
MeSO2-dPhe-Pro-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 246); 
δ-Z-D-Lys-Pro-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 247);
CH3SO2-D-CHA-But-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 248);
Ac-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 249);
Ac-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 250);
Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 251);
Ac-Arg-Gln-Ser-Arg-Leu-(治療薬) (配列番号: 252);
Ac-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Leu-(治療薬) (配列番号: 253);
Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 254);
Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 255);
Ac-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 256);
Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 257);
Ac-Arg-Gln-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 258);
Ac-Arg-Gln-Ala-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 259);
Ac-Arg-Gln-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 260);
Ac-Arg-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 261);
Ac-Arg-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 262);
Ac-Arg-Ala-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 263);
Ac-Arg-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 264);
Ac-Gln-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 265);
Ac-Gln-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 266);
Ac-Gln-Ala-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 267); および
Ac-Gln-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 268)
から選択される、結合体。
【請求項５８】
Ｐ４がＰｒｏ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、ｎＬｅｕ、ＰｈｅおよびＶａｌから選択される、請求項３５に記載の結合体。
【請求項５９】
請求項３５に記載の結合体であって、そこでは：
Ｐ２、Ｐ３および／もしくはＰ４がＰｒｏ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、ｎＬｅｕ、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ｇｌｕ、ＰｈｅおよびＶａｌから選択される、結合体。
【請求項６０】
請求項３５に記載の結合体であって、そこでは：
Ｐ２、Ｐ３および／もしくはＰ４がＰｒｏ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、ｎＬｅｕ、Ｔｙｒ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、ＰｈｅおよびＶａｌから選択され；そして
Ｐ１は任意のアミノ酸である、結合体。
【請求項６１】
Ｐ１が天然に存在するアミノ酸である、請求項６０に記載の結合体。
【請求項６２】
Ｐ１が芳香族の、枝分れした、もしくは枝分れした芳香族の側鎖を持つアミノ酸である、請求項６０に記載の結合体。
【請求項６３】
Ｐ１がＡｒｇ、Ｌｙｓ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ａｌａ、Ｖａｌ、ＩｌｅおよびＴｈｒから選択される、請求項６０に記載の結合体。
【請求項６４】
Ｐ１がＡｒｇ、ＬｙｓもしくはＡｒｇ代理体である、請求項６０に記載の結合体。
【請求項６５】
請求項１に記載の結合体であって、そこではプロテアーゼがその受容体との特異的結合相互作用のお蔭で細胞表面に局在する、結合体。
【請求項６６】
請求項６５に記載の結合体であって、そこでは細胞表面プロテアーゼがウロキナーゼプラスミノゲンアクチベーター受容体(ｕ−ＰＡＲ)に結合したウロキナーゼプラスミノゲンアクチベーター(ｕ−ＰＡ)である、結合体。
【請求項６７】
請求項１に記載の結合体であって、式Ｐ６−Ｐ５−Ｐ４−Ｐ３−Ｐ２−Ｐ１−Ｐ１'−Ｐ２'−Ｐ３'[式中、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６、Ｐ１'およびＰ２'のそれぞれは図１および２に示す残渣から選択され、そしてＰ６、Ｐ５、Ｐ４、Ｐ２'およびＰ３'は任意である]のペプチド性基質を含む、結合体。
【請求項６８】
請求項６５に記載の結合体であって、そこでは：
Ｐ６は任意であってＬ、Ｖ、Ｒから選択され；
Ｐ５は任意であってＲ、Ｉ、Ｌから選択され；
Ｐ４は任意であってＧ、Ｃ、Ｖから選択され；
Ｐ３はＳ、ｄＳ、Ｐ、ＡもしくはＧから選択され；
Ｐ２はＡもしくはＧから選択され；
Ｐ１はＲであり；
Ｐ１'はＳ、Ｖ、ＭもしくはｎＬであり；
Ｐ２'は任意であってＳ、Ｌ、ＡもしくはＶから選択され；そして
Ｐ３'は任意であってＬである、
結合体。
【請求項６９】
治療薬のドキソルビシン(Ｄｏｘ)もしくはタキソール(Ｔａｘ)が任意の治療薬で任意に置き換えられる、図１〜５に示すものの中から選択される、結合体。
【請求項７０】
請求項６５に記載の結合体であって、そこでは治療薬が毒素、小有機分子、核酸、タンパク質治療薬、サイトカインもしくは成長因子である、結合体。
【請求項７１】
治療薬が抗がん剤である、請求項６５に記載の結合体。
【請求項７２】
治療薬が抗血管形成剤である、請求項６５に記載の結合体。
【請求項７３】
請求項６５に記載の結合体であって、そこでは治療薬がアブリン、リシンＡ、緑膿菌外毒素志賀毒素、ジフテリア毒素、腫瘍壊死因子、α−インターフェロン、γ−インターフェロン、神経成長因子、組織因子および組織因子変異体、ＦＡＳ−リガンド血小板由来成長因子、組織プラスミノーゲン活性化因子、インターロイキン−１(ＩＬ−１)、インターロイキン−２(ＩＬ−２)、インターロイキン−６(ＩＬ−６)、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(ＧＭＣＳＦ)、顆粒球コロニー刺激因子(Ｇ−ＣＳＦ)、エリスロポエチン(ＥＰＯ)、神経成長因子、繊維芽細胞成長因子(ＦＧＦ)、および表皮成長因子から選択される、結合体。
【請求項７４】
請求項６５に記載の結合体であって、そこでは治療薬がアルキル化剤、毒素、抗増殖剤、プロ−アポトーシス剤、プロ−凝固剤、細胞毒性ヌクレオシドおよびチュービリン結合剤から選択される、結合体。
【請求項７５】
請求項６５に記載の結合体であって、そこでは治療薬が以下のクラスの薬物：
ａ)アントラサイクリンファミリーの薬物、
ｂ)ビンカアルカロイド薬物、
ｃ)マイトマイシン、
ｄ)ブレオマイシン、
ｅ)細胞毒性ヌクレオシド、
ｆ)プテリジンファミリーの薬物、
ｇ)ジイネン、
ｈ)エストラムスチン、
ｉ)シクロホスファミド、
ｊ)タキサン、
ｋ)ポドフィロトキシン、
ｌ)メイタンシノイド、
ｍ)エポチロン、ならびに
ｎ)コンブレタスタチンおよび類似体
もしくはそれらの薬学的に許容される誘導体
から選択される、結合体。
【請求項７６】
請求項６５に記載の結合体であって、そこでは治療薬が以下のクラスの薬物：
ａ)ドキソルビシン、
ｂ)カルミノマイシン、
ｃ)ダウノルビシン、
ｄ)アミノプテリン、
ｅ)メトトレキセート、
ｆ)メトプテリン、
ｇ)ジクロロメトトレキセート、
ｈ)マイトマイシンＣ、
ｉ)ポルフィロマイシン、
ｊ)５−フルオロウラシル、
ｋ)６−メルカプトプリン、
ｌ)シトシンアラビノシド、
ｍ)ポドフィロトキシン、
ｎ)エトポシド
ｏ)リン酸エトポシド
ｐ)メルファラン、
ｑ)ビンブラスチン、
ｒ）ビンクリスチン、
ｓ）ロイロシジン、
ｔ)ビンデシン、
ｕ)エストラムスチン、
ｖ)シスプラチン、
ｗ)シクロホスファミド
ｘ)タキソール、
ｙ)ロイロシン、
ｚ)４−デスアセチルビンブラスチン、
ａａ)エポチロンＢ、
ｂｂ)タキソテール、
ｃｃ)メイタンシノール、
ｄｄ)エポチロンＡ、ならびに
ｅｅ)コンブレタスタチンおよび類似体、
もしくはそれらの薬学的に許容される誘導体
から選択される、結合体。
【請求項７７】
治療薬およびペプチド性基質の間にリンカーをさらに含む、請求項６５に記載の結合体。
【請求項７８】
リンカーが炭水化物、ペプチド、および／もしくは炭化水素核を含む、請求項６５に記載の結合体。
【請求項７９】
請求項７７に記載の結合体であって、そこではリンカーは：
治療薬上のアミン部分がリンカー単位と連結されてアミド結合を形成しそしてペプチド性基質のアミノ末端がリンカー単位の他方の末端と連結されてアミド結合をまた形成する、ビスカルボニルアルキルジラジカル；もしくは
治療薬上のカルボニル部分がリンカー部分のアミンの一つに共役結合的に結合されて一方ではリンカー単位の他のアミンはペプチド性基質のＣ−末端に共有結合的に結合されている、ジアミノアルキルジラジカルリンカー単位；または
以下の式：
【化２】
2005518332.tif 000360
[式中、ＡはＮＨもしくはＯであり；ＤはＮ(Ｈもしくはアルキル)またはＯであり；Ｒ２５はＨ、アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、例えば、１〜３個のような１個またはそれ以上のハロ、ハロアルキルおよびアルキルから選択される置換基で任意に置換されるヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキル、１〜２個の二重結合を含むアルケニル、１〜２個の三重結合を含むアルキニル、アルク(エン)(イン)イル基、ハロ、擬似ハロ、シアノ、ヒドロキシ、例えば、ハロ低級アルキル、特にトリフルオロメチル、のようなハロアルキルおよびポリハロアルキル、ホルミル、アルキルカルボニル、例えば１〜３個のような１個もしくはそれ以上の、例えば、ハロ、ハロアルキルおよびアルキルから選択される置換基で任意に置換されるところのアリールカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、カルボキシ、アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、アミノイミノ、アルコキシカルボニルアミノ、アリールオキシカルボニルアミノ、アミノカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニル、アリールアミノカルボニル、ジアリールアミノカルボニル、アラルキルアミノカルボニル、アルコキシ、アリールオキシ、パーフルオロアルコキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アリールアルコキシ、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アリールアミノアルキル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、アルキルアリールアミノ、アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、アジド、ニトロ、メルカプト、アルキルチオ、アリールチオ、パーフルオロアルキルチオ、チオシアノ、イソチオシアノ、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、アリールスルフィニル、アリールスルホニル、アミノスルホニル、アルキルアミノスルホニル、ジアルキルアミノフルホニルおよびアリールアミノスルホニル、であり；ならびにｙは、１〜３の整数である]
の自己除去するリンカー：
を含む、結合体。
【請求項８０】
リンカーが環状アルキレン部分を含むジアミンである、請求項７７に記載の結合体。
【請求項８１】
ジアミンがビシクロアルキレン部分を含有する、請求項７７に記載の結合体。
【請求項８２】
請求項７７に記載の結合体であって、そこではリンカーは１,４−ビス(アミノメチル)シクロヘキサン、１,４−ビス(アミノメチル)シクロヘプタン、１,３−ビス(アミノメチル)シクロペンタン、１−アミノ−４−(アミノメチル)シクロヘキサン、１,４−ジアミノシクロヘキサンおよび１,４−ビス(アミノメチル)ビシクロ[２.２.２]オクタンから選択される、結合体。
【請求項８３】
リンカーが１,ω−ジアミノアルカンである、請求項７７に記載の結合体。
【請求項８４】
リンカーが１,３−ジアミノプロパンである、請求項７７に記載の結合体。
【請求項８５】
リンカーが１,ω−ジカルボニルアルカンである、請求項７７に記載の結合体。
【請求項８６】
リンカーがシュウ酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸およびピバリン酸から選択される、請求項７７に記載の結合体。
【請求項８７】
請求項１〜３０のいずれかに記載の結合体であって、そこでは：
ペプチド性基質がＰ１−Ｐ１'結合を含み；
Ｐ１−Ｐ１'結合は細胞表面プロテアーゼによる切断の部位であり；
Ｐ１はＡｒｇ、Ｌｙｓ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ａｌａ、Ｖａｌ、ＩｌｅおよびＴｈｒから選択され；そして
Ｐ１'はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｄ−Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔもしくは６−アミノヘキサノイルである、
結合体。
【請求項８８】
請求項１〜３２のいずれかに記載の結合体であって、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ(ＯＭｅ)、ｈＳｅｒ、１−メチルＨｉｓ、３−メチルＨｉｓ、Ｈｉｓ、ｎＶａｌ、ｎＬｅｕ、Ａｂｕ、(ｈＳ)Ｇｌｙ、Ｔｈｒ、Ａｉｂ、ＣＨＡおよびＴｙｒから選択されるＰ２残基をさらに含む、結合体。
【請求項８９】
請求項１〜３３のいずれかに記載の結合体であって、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ｑｕａｔ、Ａｒｇ代理体、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ｈＳｅｒ、ｄＳｅｒ、Ｐｒｏ、(ｈＳ)Ｇｌｙ、Ｔｙｒ、４,４−ジメチルＴｈｒ、Ａｓｎ、Ｍｅｔ(Ｏ２)、Ｑｕａｔ２、Ｑｕａｔ３、Ｑｕａｔ４およびＱｕａｔ５から選択されるＰ３残基をさらに含む、結合体。
【請求項９０】
請求項１〜３４のいずれかに記載の結合体であって、Ｐｒｏ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、ｎＬｅｕ、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、Ｖａｌ、Ｎ,Ｎ−ジメチルＧｌｙ、β−Ａｌａ、Ｃｙｓ(Ｍｅ)、Ｇｌｎ、ｔ−ブチルＧｌｙおよびｎＶａｌから選択されるＰ４残基をさらに含む、結合体。
【請求項９１】
請求項１〜３５のいずれかに記載の結合体であって、Ｉｌｅ、ＡｒｇもしくはＡｒｇ代理体から選択されるＰ５を任意にさらに含む、結合体。
をさらに含む、結合体。
【請求項９２】
請求項１〜３６のいずれかに記載の結合体であって、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、およびＶａｌから選択されるＰ６残基をさらに含む、結合体。
【請求項９３】
請求項１〜３７のいずれかに記載の結合体であって、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｄ−Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔ、６−アミノヘキサノイル、ｈＣＨＡ、ＣＨＡ、ヘキシルＧｌｙ、アリルＧｌｙおよびＰｈｅから選択されるＰ２'残基をさらに含む、結合体。
【請求項９４】
請求項１〜３８のいずれかに記載の結合体であって、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔ、６−アミノヘキサノイル、ＣＨＡおよびアリルＧｌｙから選択されるＰ３'残基をさらに含む、結合体。
【請求項９５】
請求項１〜３９のいずれかに記載の結合体であって、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔ、６−アミノヘキサノイル、ＣＨＡおよびアリルＧｌｙから選択されるＰ４'残基をさらに含む、結合体。
【請求項９６】
請求項１〜３９のいずれかに記載の結合体であって、Ｐ４'がＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔおよび６−アミノヘキサノイルである、結合体。
【請求項９７】
Ｐ４'がＬｅｕである、請求項１〜３９のいずれかに記載の結合体。
【請求項９８】
請求項１〜３９のいずれかに記載の結合体であって、そこでは：
ペプチド性基質が式：
Ｐ４−Ｐ３−Ｐ２−Ｐ１−Ｐ１'[式中：
Ｐ１はＡｒｇ、Ｌｙｓ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ａｌａ、Ｖａｌ、ＩｌｅおよびＴｈｒから選択され；
Ｐ２はＰｈｅ、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ(ＯＭｅ)、ｈＳｅｒ、１−メチルＨｉｓ、３−メチルＨｉｓ、Ｈｉｓ、ｎＶａｌ、ｎＬｅｕ、Ａｂｕ、(ｈＳ)Ｇｌｙ、Ｔｈｒ、Ａｉｂ、ＣＨＡおよびＴｙｒから選択され；
Ｐ３はＡｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ｑｕａｔ、Ａｒｇ代理体、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ｈＳｅｒ、ｄＳｅｒ、Ｐｒｏ、(ｈＳ)Ｇｌｙ、Ｔｙｒ、４,４−ジメチルＴｈｒ、Ａｓｎ、Ｍｅｔ(Ｏ２)、Ｑｕａｔ２、Ｑｕａｔ３、Ｑｕａｔ４およびＱｕａｔ５から選択さ；
Ｐ４はＰｒｏ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、ｎＬｅｕ、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、Ｖａｌ、Ｎ,Ｎ−ジメチルＧｌｙ、β−Ａｌａ、Ｃｙｓ(Ｍｅ)、Ｇｌｎ、ｔ−ブチルＧｌｙおよびｎＶａｌから選択され；そして
Ｐ１'はＧｌｙ、Ｓｅｒ、ｈＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｄ−Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔもしくは６−アミノヘキサノイルである]
を有する５−マーを含む、
結合体。
【請求項９９】
請求項４０に記載の結合体であって、そこでは：
ペプチド性基質が一つもしくはそれ以上のＰ５もしくはＰ２'アミノ酸残基[そこでは：
Ｐ５はＩｌｅ、ＡｒｇもしくはＡｒｇ代理体であり；そして
Ｐ２'はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｄ−Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔ、６−アミノヘキサノイル、ｈＣＨＡ、ＣＨＡ、ヘキシルＧｌｙ、アリルＧｌｙおよびＰｈｅから選択される]を任意にさらに含む、
結合体。
【請求項１００】
請求項４１に記載の結合体であって、そこでは：
もしペプチド性基質がＰ５アミノ酸残基を含むならば、ペプチド性基質はＡｒｇ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、およびＶａｌから選択されるＰ６アミノ酸残基を任意にさらに含み；そして
もしペプチド性基質がＰ２'アミノ酸残基を含むならば、ペプチド性基質はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔ、６−アミノヘキサノイル、ＣＨＡおよびアリルＧｌｙから選択されるＰ３' アミノ酸残基をさらに含み；そして
もしペプチド性基質がＰ３'アミノ酸残基を含むならば、ペプチド性基質はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔ、６−アミノヘキサノイル、ＣＨＡおよびアリルＧｌｙから選択されるＰ４' アミノ酸残基をさらに含む、
結合体。
【請求項１０１】
式ＩＶ：
Ｘｎ−(Ｐ６)ｍ−(Ｐ５)ｐ−(Ｐ４)ｉ−(Ｐ３)ｊ−(Ｐ２)ｌ−Ｐ１−(Ｐ１')ｕ−(Ｐ２')ｋ−(Ｐ３')ｒ−(Ｐ４')ｓ−(Ｌ)ｎ−Ｚ
もしくはその誘導体を有する請求項４３〜４７のいずれかに記載の結合体であって、そこでは：
Ｚは治療薬であり；
Ｌはリンカーであり；
ｌ、ｊ、ｉ、ｐおよびｍは次のように選択される：
ｌは０もしくは１であり；ｌが０のときは、ｊ、ｉ、ｐおよびｍは０であり；ｌが１のときは、ｊは０もしくは１であり；ｊが０のときは、ｉ、ｐおよびｍは０であり；ｊが１のときは、ｉは０もしくは１であり；ｉが０のときは、ｐおよびｍは０であり；ｉが１のときは、ｐは０もしくは１であり；ｐが０のときは、ｍは０であり；ｐが１のときは、ｍは０もしくは１であり；
ｕ、ｋおよびｒは次のように選択される：
ｕは０もしくは１であり；ｕが０のときは、ｋ、ｒおよびｓは０であり；ｕが１のときは、ｋは０もしくは１であり；ｋが０のときは、ｒおよびｓは０であり；ｋが１のときは、ｒは０もしくは１であり；ｒが０のときは、ｓは０であり；ｒが１のときは、ｓは０もしくは１であり；
ｎは０もしくは１であり；
Ｘｎは水素、またはアシル、スルホニルもしくはカルバモイルキャップであり；
Ｐ１はＡｒｇ、Ｌｙｓ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ａｌａ、Ｖａｌ、ＩｌｅおよびＴｈｒの中から選択され；
Ｐ１'はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｄ−Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔもしくは６−アミノヘキサノイルであり；
Ｐ２はＰｈｅ、Ｓｅｒ、ＧｌｙおよびＡｌａから選択され；
Ｐ３はＡｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、ＱｕａｔおよびＡｒｇ代理体から選択され；
Ｐ４はＰｒｏ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、ｎＬｅｕ、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ｇｌｕ、ＰｈｅおよびＶａｌから選択され；
Ｐ５はＡｒｇおよびＡｒｇ代理体から選択され；
Ｐ６はＬｅｕ、Ｉｌｅ、およびＶａｌから選択され；
Ｐ２'はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｄ−Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔおよび６−アミノヘキサノイルから選択され； 
Ｐ３'はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔおよび６−アミノヘキサノイルから選択され；そして
Ｐ４'はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔおよび６−アミノヘキサノイルから選択される、
結合体。
【請求項１０２】
式Ｖ：
Ｚ−(Ｌ)ｎ−(Ｐ６)ｍ−(Ｐ５)ｐ−(Ｐ４)ｉ−(Ｐ３)ｊ−(Ｐ２)ｌ−Ｐ１−(Ｐ１')ｕ−(Ｐ２')ｋ−(Ｐ３')ｒ−(Ｐ４')ｓ−Ｘｃ
もしくはその誘導体を有する請求項５０もしくは請求項５１に記載の結合体であって、そこでは：
Ｚは治療薬であり；
Ｌはリンカーであり；
ｌ、ｊ、ｉ、ｐおよびｍは次のように選択される：
ｌは０もしくは１であり；ｌが０のときは、ｊ、ｉ、ｐおよびｍは０であり；ｌが１のときは、ｊは０もしくは１であり；ｊが０のときは、ｉ、ｐおよびｍは０であり；ｊが１のときは、ｉは０もしくは１であり；ｉが０のときは、ｐおよびｍは０であり；ｉが１のときは、ｐは０もしくは１であり；ｐが０のときは、ｍは０であり；ｐが１のときは、ｍは０もしくは１であり；
ｕ、ｋおよびｒは次のように選択される：
ｕは０もしくは１であり；ｕが０のときは、ｋ、ｒおよびｓは０であり；ｕが１のときは、ｋは０もしくは１であり；ｋが０のときは、ｒおよびｓは０であり；ｋが１のときは、ｒは０もしくは１であり；ｒが０のときは、ｓは０であり；ｒが１のときは、ｓは０もしくは１であり；
ｎは０もしくは１であり；
Ｘｃはそれが付着しているアミノ酸残基のカルボニル基と一緒に、カルボン酸もしくはカルボキサミド基を形成し；
Ｐ１はＡｒｇ、Ｌｙｓ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ａｌａ、Ｖａｌ、ＩｌｅおよびＴｈｒの中から選択され；
Ｐ１'はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｄ−Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔもしくは６−アミノヘキサノイルであり；
Ｐ２はＰｈｅ、Ｓｅｒ、ＧｌｙおよびＡｌａから選択され；
Ｐ３はＡｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、ＱｕａｔおよびＡｒｇ代理体から選択され；
Ｐ４はＰｒｏ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、ｎＬｅｕ、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ｇｌｕ、ＰｈｅおよびＶａｌから選択され；
Ｐ５はＡｒｇおよびＡｒｇ代理体から選択され；
Ｐ６はＬｅｕ、Ｉｌｅ、およびＶａｌから選択され；
Ｐ２'はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｄ−Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔおよび６−アミノヘキサノイルから選択され； 
Ｐ３'はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔおよび６−アミノヘキサノイルから選択され；そして
Ｐ４'はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔおよび６−アミノヘキサノイルから選択される、
結合体。
【請求項１０３】
式ＶＩ：
Ｚ１−(Ｌ１)ｎ−(Ｐ６)ｍ−(Ｐ５)ｐ−(Ｐ４)ｉ−(Ｐ３)ｊ−(Ｐ２)ｌ−Ｐ１−(Ｐ１')ｕ−(Ｐ２')ｋ−(Ｐ３')ｒ−(Ｐ４')ｓ−(Ｌ２)ｖ−Ｚ２
もしくはその誘導体を有する請求項５４に記載の結合体であって、そこでは：
Ｚ１およびＺ２はそれぞれ治療薬であって、同一もしくは異なっていて；
Ｌ１およびＬ２はそれぞれリンカーであって、同一もしくは異なっていて；
l、ｊ、ｉ、ｐおよびｍは次のように選択される：
ｌは０もしくは１であり；ｌが０のときは、ｊ、ｉ、ｐおよびｍは０であり；ｌが１のときは、ｊは０もしくは１であり；ｊが０のときは、ｉ、ｐおよびｍは０であり；ｊが１のときは、ｉは０もしくは１であり；ｉが０のときは、ｐおよびｍは０であり；ｉが１のときは、ｐは０もしくは１であり；ｐが０のときは、ｍは０であり；ｐが１のときは、ｍは０もしくは１であり；
ｕ、ｋおよびｒは次のように選択される：
ｕは０もしくは１であり；ｕが０のときは、ｋ、ｒおよびｓは０であり；ｕが１のときは、ｋは０もしくは１であり；ｋが０のときは、ｒおよびｓは０であり；ｋが１のときは、ｒは０もしくは１であり；ｒが０のときは、ｓは０であり；ｒが１のときは、ｓは０もしくは１であり；
ｎおよびｖはそれぞれ独立に０もしくは１であり；
Ｐ１はＡｒｇ、Ｌｙｓ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ａｌａ、Ｖａｌ、ＩｌｅおよびＴｈｒの中から選択され；
Ｐ１'はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｄ−Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔもしくは６−アミノヘキサノイルであり；
Ｐ２はＰｈｅ、Ｓｅｒ、ＧｌｙおよびＡｌａから選択され；
Ｐ３はＡｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、ＱｕａｔおよびＡｒｇ代理体から選択され；
Ｐ４はＰｒｏ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、ｎＬｅｕ、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ｇｌｕ、ＰｈｅおよびＶａｌから選択され；
Ｐ５はＡｒｇおよびＡｒｇ代理体から選択され；
Ｐ６はＬｅｕ、Ｉｌｅ、およびＶａｌから選択され；
Ｐ２'はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｄ−Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔおよび６−アミノヘキサノイルから選択され； 
Ｐ３'はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔおよび６−アミノヘキサノイルから選択され；そして
Ｐ４'はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔおよび６−アミノヘキサノイルから選択される、
結合体。
【請求項１０４】
請求項１〜４９のいずれかに記載の結合体であって、
Ac-R-Q-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 491);
Ac-R-Q-G-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 492);
Ac-R-Q-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 493);
Ac-R-Q-G-R-S-nV-(治療薬) (配列番号: 494);
Ac-R-Q-G-R-S-F-(治療薬) (配列番号: 495);
Ac-R-Q-G-R-A-L-(治療薬) (配列番号: 496);
Ac-R-Q-G-R-A-L-(治療薬) (配列番号: 497);
Ac-R-Q-G-R-A-nL-(治療薬) (配列番号: 498);
Ac-R-Q-G-R-A-nL-(治療薬) (配列番号: 499);
Ac-R-Q-G-R-A-nV-(治療薬) (配列番号: 500);
Ac-R-Q-G-R-A-Cha-(治療薬) (配列番号: 501);
Ac-R-Q-G-R-A-F-(治療薬) (配列番号: 502);
Ac-R-N-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 503);
Ac-R-N-G-R-A-nL-(治療薬) (配列番号: 504);
Ac-R-Q-A-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 505);
Ac-R-Q-A-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 506);
Ac-R-Q-A-R-S-nV-(治療薬) (配列番号: 507);
Ac-R-Q-A-A-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 508);
Ac-R-Q-A-R-S-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 509);
Ac-R-Q-A-R-T-nL-(治療薬) (配列番号: 510);
Ac-R-Q-A-R-A-L-(治療薬) (配列番号: 511);
Ac-R-Q-A-R-A-nL-(治療薬) (配列番号: 512);
Ac-R-Q-A-R-A-nV-(治療薬) (配列番号: 513);
Ac-R-Q-A-R-A-Cha-(治療薬) (配列番号: 514);
Ac-R-Q-S-R-A-A-(治療薬) (配列番号: 515);
Ac-R-Q-S-R-A-(治療薬) (配列番号: 516);
Ac-R-Q-S-R-A-nL-(治療薬) (配列番号: 517);
Ac-R-Q-S-R-A-L-(治療薬) (配列番号: 518);
Ac-R-Q-S-R-A-nV-(治療薬) (配列番号: 519);
Ac-R-Q-S-R-A-Cha-(治療薬) (配列番号: 520);
Ac-R-Q-S-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 521);
Ac-R-Q-S-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 522);
Ac-R-Q-S-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 523);
Ac-R-Q-S-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 524);
Ac-R-Q-S-R-S-nV-(治療薬) (配列番号: 525);
Ac-R-Q-S-R-S-アリルG-(治療薬) (配列番号: 526);
Ac-R-Q-S-R-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 527);
Ac-R-Q-S-R-T-nL-(治療薬) (配列番号: 528);
Ac-R-Q-T-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 529);
Ac-R-Q-T-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 530);
Ac-R-N-S-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 531);
Ac-R-Q-F-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 532);
Ac-R-Q-F-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 534);
Ac-R-Q-F-R-S-nV-(治療薬) (配列番号: 535);
Ac-R-Q-F-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 536);
Ac-R-Q-F-R-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 537);
Ac-R-Q-F-R-A-L-(治療薬) (配列番号: 538);
Ac-R-Q-F-R-A-nL-(治療薬) (配列番号: 539);
Ac-R-Q-F-R-A-nV-(治療薬) (配列番号: 540);
Ac-R-Q-F-R-A-Cha-(治療薬) (配列番号: 541);
Ac-Q-S-R-S-S-nL-(治療薬) (配列番号: 542);
MeOCO-Quat2-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 483);
MeOCO-Quat3-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 484);
MeOCO-Quat-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 485);
MeOCO-Quat4-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 486);
MeOCO-Quat5-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 487);
MeOCO-Quat2-G-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 488);
MeOCO-Quat4-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 489);
MeOCO-Quat2-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 490);
Ac-Q-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 445);
Ac-Q-G-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 446);
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Ac-N-G-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 448);
Ac-Q-G-R-S-S-nL-(治療薬) (配列番号: 449);
Ac-Q-G-R-S-S-nV-(治療薬) (配列番号: 450);
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Ac-Q-G-R-S-S-アリルG-(治療薬) (配列番号: 453);
Ac-Q-A-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 454);
Ac-Q-A-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 455);
Ac-Q-S-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 456);
Ac-Q-S-R-S-S-nV-(治療薬) (配列番号: 457);
Ac-Q-S-R-S-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 458);
Ac-Q-S-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 459);
Ac-Q-T-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 460);
Ac-Q-Aib-R-S-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 461);
Ac-Q-Aib -R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 462);
Ac-Q-Abu-R-S-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 463);
Ac-Q-Abu-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 464);
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Ac-Q-F-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 466);
Ac-Q-F-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 467);
Ac-Q-Y-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 468);
Ac-R-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 469);
Ac-R-G-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 470);
Ac-R-G-R-S-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 471);
Ac-R-G-R-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 472);
Ac-R-A-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 473);
Ac-R-A-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 474);
Ac-R-S-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 475);
Ac-R-S-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 476);
Ac-R-S-R-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 477);
Ac-R-S-R-S-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 478);
Ac-R-F-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 479);
Ac-R-F-R-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 480);
Ac-Y-G-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 481);
Ac-M(O2)-S-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 482);
Ac-R-R-Q-S-R-A-A-(治療薬) (配列番号: 105);
Ac-R-R-Q-S-R-I-(治療薬) (配列番号: 610);
Ac-R-R-Q-S-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 543);
Ac-R-R-Q-S-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 544);
Ac-R-G-S-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 545);
Ac-R-G-S-G-R--S-nL-(治療薬) (配列番号: 546);
Ac-R-G-S-G-R-A-nL-(治療薬) (配列番号: 547);
Ac-R-G-S-G-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 548);
Ac-I-V-S-G-R-A-S-L-(治療薬) (配列番号: 549);
Ac-R-R-Q-S-R-A-(治療薬) (配列番号: 108);
Ac-R-R-Q-S-R-I-(治療薬) (配列番号: 111);
Ac-L-R-R-Q-S-R-A-A-(治療薬) (配列番号: 106);
Ac-L-R-R-Q-S-R-G-G-(治療薬) (配列番号: 109);
Ac-L-R-R-Q-S-R-A-(治療薬) (配列番号: 110);
Ac-L-R-R-Q-S-R-A-I-(治療薬) (配列番号: 112);
Ac-L-R-R-Q-S-R-A-I-(治療薬) (配列番号: 611);
Ac-L-R-R-Q-S-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 550);
Ac-L-R-R-Q-S-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 551);
Ac-S-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 362);
Ac-S-G-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 363);
Ac-S-G-R-S-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 364);
Ac-S-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 365);
Ac-S-G-R-S-nV-(治療薬) (配列番号: 366); 異性体 1
Ac-S-G-R-S-nV-(治療薬) (配列番号: 367); 異性体 2
Ac-S-G-R-S-G(hex)-(治療薬) (配列番号: 368);
Ac-S-G-R-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 369);
Ac-S-G-R-S-hCha-(治療薬) (配列番号: 370);
Ac-S-A-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 371);
Ac-S-A-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 372);
Ac-S-S-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 373);
Ac-T-G-R-S-Abu-(治療薬) (配列番号: 374);
Ac-T-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 375);
Ac-T-G-R-S-nV-(治療薬) (配列番号: 376);
Ac-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 377);
Ac-T-G-R-S-G(hex)-(治療薬) (配列番号: 378);
Ac-T-G-R-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 379);
Ac-T-G-R-S-hCha-(治療薬) (配列番号: 380);
Ac-T-G-R-T-Abu-(治療薬) (配列番号: 381);
Ac-T-G-R-hS-nL-(治療薬) (配列番号: 382);
Ac-T-G-R-Abu-nL-(治療薬) (配列番号: 383);
Ac-T-G-R-Abu-nV-(治療薬) (配列番号: 384);
Ac-T-G-F(Gn)-S-nL-(治療薬) (配列番号: 385);
Ac-T-G-F(Gn)-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 386);
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Ac-T-G-K(alloc)-S-nL-(治療薬) (配列番号: 388);
Ac-T-G-K-S-nL-(治療薬) (配列番号: 389);
Ac-T-G-hR-S-nL-(治療薬) (配列番号: 390);
Ac-(hS)G-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 391);
MeOCO-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 392);
PhSO2-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 393);
MeOEtCO-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 394);
MeO(EtO)2Ac-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 395);
4-オキソ-ペンタノイル-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 396);
3,4-メチルジオキシPhAc-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 397);
2-ピリジルAc-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 398);
PhOAc-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 399);
L-3-Phラクチル-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 400);
MeOAc-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 401);
PhAc-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 402);
MeOEtOCO-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 403);
MeOEtOAc-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 404);
HOOCButa-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 405);
Z-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 406);
EtOCO-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 407);
βΑ-Τ-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 408);
ペンタ-4-イノイル-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 409);
NapAc-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 410);
iBoc-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 411);
HOAc-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 412);
MeSucc-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 413);
N,N-ジMeGly-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 414);
Succ-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 415);
HCO-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 416);
Ac-T-A-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 417);
Ac-T-A-F(Gn)-S-nL-(治療薬) (配列番号: 418);
Ac-T-A-R-Abu-nV-(治療薬) (配列番号: 419);
Ac-T-A-R-S-Abu-(治療薬) (配列番号: 420);
Ac-T-A-R-T-Abu-(治療薬) (配列番号: 421);
Ac-T-S(O-Me)-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 422);
Ac-T-hS-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 423);
Ac-T-(1-Me)H-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 424);
Ac-T-(3-Me)H-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 425);
Ac-T-H-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 426);
Ac-T-Sar-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 427);
Ac-T-nV-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 428);
Ac-T-nL-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 429);
Ac-T-A-R-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 430);
Ac-T-Abu-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 431);
Ac-4,4ジMeThr-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 432);
Ac-hS-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 433);
Ac-hS-G-R-hS-Cha-(治療薬) (配列番号: 434);
Ac-hS-G-R-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 435);
Ac-hS-G-R-T-Cha-(治療薬) (配列番号: 436);
Ac-hS-A-R-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 437);
Ac-N-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 438);
Ac-Y-G-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 439);
Ac-Y-G-R-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 440);
Ac-Q-G-R-S-S-nL-(治療薬) (配列番号: 441);
Ac-Q-G-R-S-S-nV-(治療薬) (配列番号: 442);
Ac-L-R-G-S-G-R-S-A-(治療薬) (配列番号: 573);
Ac-L-R-G-S-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 342);
Ac-L-R-G-S-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 343);
Ac-L-R-G-S-G-R-S-S-nL-(治療薬) (配列番号: 344);
Ac-L-R-G-S-G-R-S-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 345);
Ac-L-R-G-dS-A-R-S-A-(治療薬) (配列番号: 574);
Ac-L-R-G-S-A-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号:346 );
Ac-L-R-G-S-A-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 347);
Ac-L-R-G-S-A-R-S-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 348);
Ac-L-R-G-S-A-R-S-S-nV-(治療薬) (配列番号: 349);
Ac-L-R-G-S-A-R-S-S-nL-(治療薬) (配列番号: 350);
Ac-V-I-V-S-G-R-A-L-(治療薬) (配列番号: 351);
Ac-V-I-V-S-A-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 352);
Ac-V-I-V-S-G-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 353);
Ac-V-I-V-S-A-R-M-A-(治療薬) (配列番号: 354);
Ac-V-I-V-S-A-R-nL-A-(治療薬) (配列番号: 355);
Ac-V-I-V-S-A-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 356);
Ac-V-I-V-S-A-R-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 357);
Ac-V-I-V-S-A-R-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 358);
Ac-V-I-V-S-A-R-S-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 359);
Ac-R-R-(Me)C-P-G-R-V-V-(治療薬) (配列番号: 360);
Ac-R-R-nV-P-A-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 361);
Ac-R-G-dS-A-R-S-A-(治療薬) (配列番号: 309);
Ac-R-G-S-G-R-S-A-(治療薬) (配列番号: 310);
Ac-R-G-S-G-R-A-L-(治療薬) (配列番号: 311);
Ac-R-G-S-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 312);
Ac-R-G-S-G-R--S-nL-(治療薬) (配列番号: 313);
Ac-R-G-S-G-R-A-nL-(治療薬) (配列番号: 314);
Ac-R-G-S-G-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 315);
Ac-R-G-S-G-R-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 316);
Ac-R-G-S-G-R-S-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 317);
Ac-R-G-S-A-R-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 318);
Ac-R-G-S-A-R-S-S-(治療薬) (配列番号: 319);
Ac-R-G-S-A-R-S-nV-(治療薬) (配列番号: 320);
Ac-R-G-S-A-R-S-S-nV -(治療薬) (配列番号: 321);
Ac-R-G-S-A-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 322);
Ac-R-(Me)C-P-G-R-V-V-(治療薬) (配列番号: 323);
Ac-R-(Me)C-P-G-R-V-V-(治療薬) (配列番号: 324);
Ac-R-C(Me)-P-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 325);
Ac-R-L-P-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 326);
Ac-R-V-P-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 327);
Ac-R-V-P-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 328);
Ac-R-nL-P-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 329);
Ac-R-G(tBu)-P-A-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 330);
Ac-R-L-P-A-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 331);
Ac-R-V-P-A-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 332);
Ac-R-nL-P-A-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 333);
Ac-I-V-S-G-R-A-L-(治療薬) (配列番号: 334);
Ac-I-V-S-G-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 335);
Ac-I-V-S-G-R-A-S-L-(治療薬) (配列番号: 336);
Ac-I-V-S-A-R-M-A-(治療薬) (配列番号: 337);
Ac-I-V-S-A-R-nL-A-(治療薬) (配列番号: 338);
Ac-I-V-S-A-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 339);
Ac-I-V-S-A-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 340);
Ac-I-V-S-A-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 341);
Ac-G-S-G-R-S-A-(治療薬) (配列番号: 585);
Ac-G-S-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 277);
Ac-G-S-G-R-A-L-(治療薬) (配列番号: 278);
Ac-G-S-G-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 279);
Ac-G-S-G-R-L-(治療薬) (配列番号: 280);
Ac-G-S-G-(4-guan)Phg-S-L-(治療薬) (配列番号: 281);
Ac-G-S-G-R-S-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 282);
Ac-G-S-G-R-A-S-L-(治療薬) (配列番号: 283);
Ac-G-S-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 284);
Ac-G-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 285);
Succ-bA-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 286);
Ac-G-T-G-R-S-hCha-(治療薬) (配列番号: 287);
Ac-G-hS-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 288);
Ac-G-dS-A-R-S-A-(治療薬) (配列番号: 289);
Ac-G-S-A-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 290);
Ac-G-S-A-R-S-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 291);
Ac-G-S-A-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 292);
Ac-G-S-A-R-A-S-L-(治療薬) (配列番号: 293);
Ac-V-S-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 294);
Ac-V-S-G-R-A-L-(治療薬) (配列番号: 295);
Ac-V-S-G-R-A-S-L-(治療薬) (配列番号: 296);
Ac-V-S-G-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 297);
Ac-V-S-A-R-M-A-(治療薬) (配列番号: 298);
Ac-V-S-A-R-nL-A-(治療薬) (配列番号: 299);
Ac-V-S-A-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 300);
Ac-V-S-A-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 301);
Ac-(Me)C-P-G-R-V-V-(治療薬) (配列番号: 302);
Ac-(Me)C-P-G-R-V-V-(治療薬) (配列番号: 303);
Ac-C(Me)-P-G-R-A-L-(治療薬) (配列番号: 304);
Ac-C(Me)-P-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 305);
Ac-C(Me)-P-A-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 306);
Ac-C(Me)-P-A-R-A-S-L-(治療薬) (配列番号: 307);
Ac-G(tBu)-P-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 308);
Ac-Q-S-R-A-A-(治療薬) (配列番号: 552);
Ac-Q-S-R-S-A-(治療薬) (配列番号: 553);
Ac-Q-S-R-S-G-(治療薬) (配列番号: 554);
Ac-R-S-R-A-A-(治療薬) (配列番号: 555);
Ac-R-Q-S-R-A-A-(治療薬) (配列番号: 556);
Ac-R-Q-S-R-S-A-(治療薬) (配列番号: 557);
Ac-R-Q-S-R-S-A-A-(治療薬) (配列番号: 558);
Ac-R-G-S-G-R-S-A-(治療薬) (配列番号: 559);
Ac-S-G-R-A-A-(治療薬) (配列番号: 560);
Ac-S-G-R-S-A-(治療薬) (配列番号: 561);
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Ac-S-G-R-S-G-(治療薬) (配列番号: 564);
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Ac-G-T-G-R-S-G-G-(治療薬) (配列番号: 568);
Ac-G-S-G-R-S-G-G-(治療薬) (配列番号: 243)
Ac-L-R-R-Q-S-R-A-A-(治療薬) (配列番号: 597);
MeSO2-dA(Chx)-Abu-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 598);
Ac-R-A-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 599);
Ac-dA(Chx)-Abu-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 600);
Ac-dA(Chx)-Abu-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 601);
Ac-Q-G-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 602);
MeOCO-dhF-P(OH)-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 603);
MeOCO-Quat4-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 604);
Ac-dCha-P(OH)-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 605);
Ac-dCha-Abu-R-S-S-A-(治療薬) (配列番号: 606);
MeOCO-Quat2-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 607);
MeOCO-Quat3-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 608); および
MeOCO-Quat-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 609)
から選択される、結合体。
【請求項１０５】
請求項３５〜５６のいずれかに記載の結合体であって、そこではＰ４はＰｒｏ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、ｎＬｅｕ、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、Ｖａｌ、Ｎ,Ｎ−ジメチルＧｌｙ、β−Ａｌａ、Ｃｙｓ(Ｍｅ)、Ｇｌｎ、ｔ−ブチルＧｌｙおよびｎＶａｌから選択される、結合体。
【請求項１０６】
請求項１もしくは６６に記載の結合体であって、式Ｐ６−Ｐ５−Ｐ４−Ｐ３−Ｐ２−Ｐ１−Ｐ１'−Ｐ２'−Ｐ３'−Ｐ４'[式中、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６、Ｐ１'およびＰ２'のそれぞれは図１および２に示す残渣から選択され、そしてＰ６、Ｐ５、Ｐ４、Ｐ２'、 Ｐ３'およびＰ４'は任意である]のペプチド性基質を含む、結合体。
【請求項１０７】
請求項６７に記載の結合体であって、そこでは：
Ｐ６は任意であってＬ、Ｖ、Ｒから選択され；
Ｐ５は任意であってＲ、Ｉ、Ｌから選択され；
Ｐ４は任意であってＧ、Ｃ、Ｖから選択され；
Ｐ３はＳ、ｄＳ、Ｐ、ＡもしくはＧから選択され；
Ｐ２はＡもしくはＧから選択され；
Ｐ１はＲであり；
Ｐ１'はＳ、Ｖ、ＭもしくはｎＬであり；
Ｐ２'は任意であってＳ、Ｌ、ＡもしくはＶから選択され；
Ｐ３'は任意であってＬであり；そして
Ｐ４'は任意であってＬである、
結合体。
【請求項１０８】
治療薬およびそれにペプチド性リンカーを介して結合した核酸基質を含む、結合体であって、そこではペプチド性リンカーは細胞表面プロテアーゼまたはその可溶性の、脱落したもしくは放出された型によりタンパク質分解的に切断されて、治療薬を遊離し、そこでは結合体はプラスミンもしくは前立腺特異的抗原(ＰＳＡ)により実質的に切断されない、結合体。
【請求項１０９】
核酸がＤＮＡである、請求項１０８に記載の結合体。
【請求項１１０】
核酸がＲＮＡである、請求項１０８に記載の結合体。
【請求項１１１】
核酸が二重鎖ＲＮＡである、請求項１０８に記載の結合体。
【請求項１１２】
請求項６７に記載の結合体であって、そこでは：
Ｐ６は任意であってＬ、Ｖ、Ｒから選択され；
Ｐ５は任意であってＲ、Ｉ、Ｌから選択され；
Ｐ４は任意であってＧ、Ｃ、Ｖから選択され；
Ｐ３はＳ、ｄＳ、Ｐ、ＡもしくはＧから選択され；
Ｐ２はＡもしくはＧから選択され；
Ｐ１はＲであり；
Ｐ１'はＴ、Ａｂｕ、ｈＳ、ｎＶもしくはＡであり；
Ｐ２'は任意であってＳ、Ｌ、ＡもしくはＶから選択され；
Ｐ３'は任意であってＬ、ｎＬ、ｎＶ、Ｇ(ヘキシル)、Ｇ(アリル)、ＣＨＡ、ｈＣＨＡもしくはＡｂｕであり；そして
Ｐ４'は任意であってＬ、ｎＬ、ｎＶ、Ｇ(ヘキシル)、Ｇ(アリル)、ＣＨＡ、ｈＣＨＡもしくはＡｂｕである、
結合体。
【請求項１１３】
請求項６７に記載の結合体であって、そこでは：
Ｐ６は任意であってＬ、Ｖ、Ｒから選択され；
Ｐ５は任意であってＲ、Ｉ、Ｌから選択され；
Ｐ４は任意であってＧ、Ｃ、Ｖから選択され；
Ｐ３はＳ、ｄＳ、Ｐ、ＡもしくはＧから選択され；
Ｐ２はＡもしくはＧから選択され；
Ｐ１はＲであり；
Ｐ１'はＳ、ＧもしくはＡであり；
Ｐ２'は任意であってＧもしくはＡから選択され；
Ｐ３'は任意であってＬ、ｎＬ、ｎＶ、Ｇ(ヘキシル)、Ｇ(アリル)、ＣＨＡ、ｈＣＨＡもしくはＡｂｕであり；そして
Ｐ４'は任意であってＬ、ｎＬ、ｎＶ、Ｇ(ヘキシル)、Ｇ(アリル)、ＣＨＡ、ｈＣＨＡもしくはＡｂｕである、
結合体。
【請求項１１４】
治療薬がタキソールである、請求項１〜１１３のいずれかに記載の結合体。
【請求項１１５】
治療薬がドキソルビシンである、請求項１〜１１３のいずれかに記載の結合体。
【請求項１１６】
疾患を処置する方法であって、疾患が細胞表面プロテアーゼ関連疾患である、対象に請求項１〜１１３のいずれかに記載の結合体を投与することを含む、方法。
【請求項１１７】
請求項１１６に記載の方法であって、そこでは疾患が自己免疫疾患、炎症性疾患、感染性疾患および内分泌性疾患からなる群から選択される、方法。
【請求項１１８】
疾患が増殖性疾患である、請求項１１６に記載の方法。
【請求項１１９】
細胞表面プロテアーゼ関連疾患を処置する方法であって、治療薬およびそれにリンカーを介して任意に結合したペプチド性基質を含み、そこではペプチド性基質は細胞表面プロテアーゼまたはその可溶性の、放出されたもしくは脱落した型によりタンパク質分解的に切断されて、治療薬を遊離する、結合体を、細胞表面プロテアーゼ関連障害の症状を示す対象に投与することを含む、方法。
【請求項１２０】
請求項１１９に記載の方法であって、そこでは疾患が自己免疫疾患、炎症性疾患、感染性疾患および内分泌性疾患からなる群から選択される、方法。
【請求項１２１】
疾患が増殖性疾患である、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２２】
対象が哺乳動物である、請求項１１４〜１１９のいずれかに記載の方法。
【請求項１２３】
哺乳動物がヒトである、請求項１２０に記載の方法。
【請求項１２４】
疾患ががんである、請求項１１８もしくは１２１に記載の方法。
【請求項１２５】
請求項１１８もしくは１２１に記載の方法であって、そこでは疾患が眼疾患、心臓血管性疾患、慢性炎症性疾患、創傷、循環系疾患、皮膚科疾患およびがんから選択される、方法。
【請求項１２６】
請求項１１８もしくは１２１に記載の方法であって、そこでは疾患が関節リウマチ、乾癬、糖尿病性網膜症、翼状片の再発、エキシマーレーザー手術からの瘢痕、緑内障の濾過手術からの瘢痕、黄斑変性前眼、CREST症候群、固形新生物形成および血管性腫瘍から選択される、方法。
【請求項１２７】
請求項１１８もしくは１２１に記載の方法であって、そこでは疾患が肺がん、結腸がん、膵臓がん、食道がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、黒色腫およびカポジ肉腫から選択される、方法。
【請求項１２８】
治療薬がタキソールである、請求項１１６〜１２７のいずれかに記載の方法。
【請求項１２９】
治療薬がドキソルビシンである、請求項１１６〜１２７のいずれかに記載の方法。
【請求項１３０】
医薬組成物であって、請求項１〜１１３のいずれかに記載の結合体もしくはその薬学的に許容されるその誘導体を、薬学的に許容される担体の中に含む、医薬組成物。
【請求項１３１】
単一投与量投与のために処方される、請求項１３０に記載の医薬組成物。
【請求項１３２】
製造品であって、包装資材、細胞表面プロテアーゼ関連疾患もしくは障害と関連する一つまたはそれ以上の症状の処置、防止もしくは改善のために用いられるところの、包装資材内に含有される、請求項１〜１１３のいずれかに記載の結合体またはその薬学的に許容される誘導体、ならびに結合体もしくはその薬学的に許容される誘導体が細胞表面プロテアーゼ関連疾患もしくは障害と関連する一つまたはそれ以上の症状の処置、防止もしくは改善のために用いられることを示すところのラベル、を含む、製造品。
【請求項１３３】
細胞表面プロテアーゼ関連疾患の処置のために使用されるときの、請求項１〜１１３のいずれかに記載の結合体。
【請求項１３４】
疾患が増殖性疾患である、請求項１３３に記載の結合体。
【請求項１３５】
増殖性疾患ががんである、請求項１３４に記載の結合体。
【請求項１３６】
請求項１３４に記載の結合体であって、そこでは増殖性疾患が眼疾患、心臓血管性疾患、慢性炎症性疾患、創傷、循環系疾患、皮膚科疾患およびがんから選択される、結合体。
【請求項１３７】
請求項１３４に記載の結合体であって、そこでは増殖性疾患が関節リウマチ、乾癬、糖尿病性網膜症、翼状片の再発、エキシマーレーザー手術からの瘢痕、緑内障の濾過手術からの瘢痕、黄斑変性前眼、CREST症候群、固形新生物形成および血管性腫瘍から選択される、結合体。
【請求項１３８】
請求項１３４に記載の結合体であって、そこでは増殖性疾患が肺がん、結腸がん、膵臓がん、食道がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、黒色腫およびカポジ肉腫から選択される、結合体。
【請求項１３９】
表面プロテアーゼ関連疾患の処置に使用するための医薬品の調製のために請求項１〜１１３のいずれかに記載の結合体の使用。
【請求項１４０】
疾患が増殖性疾患である、請求項１３９に記載の使用。
【請求項１４１】
増殖性疾患ががんである、請求項１４０に記載の使用。
【請求項１４２】
請求項１４０に記載の使用であって、そこでは増殖性疾患が眼疾患、心臓血管性疾患、慢性炎症性疾患、創傷、循環系疾患、皮膚科疾患およびがんから選択される、使用。
【請求項１４３】
請求項１４０に記載の使用であって、そこでは増殖性疾患が関節リウマチ、乾癬、糖尿病性網膜症、翼状片の再発、エキシマーレーザー手術からの瘢痕、緑内障の濾過手術からの瘢痕、黄斑変性前眼、CREST症候群、固形新生物形成および血管性腫瘍から選択される、使用。
【請求項１４４】
請求項１４０に記載の使用であって、そこでは増殖性疾患が肺がん、結腸がん、膵臓がん、食道がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、黒色腫およびカポジ肉腫から選択される、使用。
【請求項１４５】
請求項１〜１１３のいずれかに記載の結合体を作成する方法であって、
ａ)ペプチド性基質を合成すること；
ｂ)ペプチド性基質をＮ−末端もしくはＣ−末端のどちらかの上で任意にキャッピングすること；
ｃ)ペプチド性基質のキャッピングされていない末端をリンカーに任意に結合すること；
ｄ)任意にリンカーを介して、ペプチド性基質を治療薬にカップリングさせて、結合体を形成すること；および
ｅ)もし保護されていれば、結合体を任意に脱保護すること：
を含む、方法。
【請求項１４６】
請求項１４５に記載の方法であって、そこでは、工程ａ)に先立って、方法がプロテアーゼに対するペプチド性基質を同定する工程を含む、方法
【請求項１４７】
方法であって、
ａ)疾患を選択すること；
ｂ)疾患過程に関与する細胞もしくは疾患過程に関与する細胞の近傍にある細胞を同定すること；および
ｃ)細胞上の細胞表面プロテアーゼを同定し、それにより疾患を処置するための標的結合体に対するプロテアーゼを同定すること：
を含む、方法。
【請求項１４８】
プロテアーゼをターゲッティングする結合体を作成することをさらに含む、請求項１４７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
関連出願
２００１年５月２３日に出願した米国仮出願番号第６０／２９３,２６７号、Edwin L. Madison,  Joseph Edward SempleおよびGeorge P. Vlasuk、表題「細胞表面のプロテアーゼにより活性化される結合体およびその治療的使用」の優先権の特典を主張する。主張が認可された場合には、この出願の内容は、全体的な出典明示により本明細書における一部とする。
【０００２】
技術分野
増殖性疾患、自己免疫疾患、感染性疾患および炎症性疾患のような種々の障害を処置するための結合体、組成物および治療薬の局所送達のための方法が提供される。プロドラッグとして作用する結合体は、治療薬および細胞表面のプロテアーゼにより切断されて、標的とされた細胞の近傍において治療薬を放出するところのペプチド基質を含有する。
【０００３】
背景技術
がんおよび他の増殖性疾患の有効な処置は、化学療法剤の投与、典型的には、全身投与を伴う。典型的には、化学療法剤は、増殖もしくは他の過程を阻害することによって作用する、細胞毒性剤であり、そのために活動的に増殖および成長している細胞が薬剤の標的になるであろう。しかしながら、そのようなターゲティングは高度に特異的ではなく、そして副作用はしばしば破壊的である。
【０００４】
かくして、薬理学における目的は標的とされた細胞もしくは組織に高い特異的活性で作用する特異的薬剤のデザインである。この目的は、例えば、毒性用量と治療用量との比が一般的に１に近く、投与量を制限しなければならない、新生物形成性疾患を含む増殖性疾患、およびウイルス起源の疾患のような疾患の処置のための薬剤のデザインにおいて特に重要である。この目的を達成するための夥しい数のアプローチが開発されてきている。これらの中には、抗体および／もしくは増殖因子のようなターゲティング薬剤ならびに特定の細胞に作用する治療薬を含有する結合体の使用；特定の遺伝子および／もしくはタンパク質を標的とされたアンチセンス技術の使用；例えば、欠失遺伝子もしくは薬学的に活性な化合物の正しいコピーを提供する遺伝子治療の使用、ならびに細胞内に送達されなければ比較的無毒である毒物の使用がある。これまでのところ成功は限定的である。潜在的なターゲティング薬剤のごく限られた数とタイプがあり、そしてそのような薬剤の特異性は最適である。
【０００５】
したがって、標的とされた細胞および組織に治療薬を送達するための手段を開発する必要性が存在する。それ故に、治療薬の標的とされた送達のための方法および化合物を提供することが、なかんずく本明細書における目的である。
【０００６】
発明の概要
治療薬の標的とされた送達のための化合物および方法が、本明細書において提供される。化合物は、細胞表面プロテアーゼまたはその可溶性の、脱落したもしくは放出された型に対するペプチド性基質、およびプロテアーゼによる切断で治療薬となる、または標的とされた細胞もしくは組織により活性化され得る型に、またはそのローカルターにある薬剤を含有する結合体である。薬剤は、細胞毒性剤、薬物、治療用核酸分子のような治療薬、ならびに標識成分および造影剤のような診断薬を含む。細胞表面プロテアーゼは、細胞表面に局在するプロテアーゼであり、例えば、ＭＴＳＰおよびエンドセリアーゼと呼称されるプロテアーゼを含む、膜結合セリンプロテアーゼ(ＳＰ)のような膜結合プロテアーゼが挙げられるが、これらに限定されない。また、その受容体との特異的結合相互作用のお蔭で細胞表面に局在するプロテアーゼが意図される。そのようなプロテアーゼの中には、ウロキナーゼプラスミノゲンアクチベーター受容体(ｕ−ＰＡＲ)に結合したウロキナーゼプラスミノゲンアクチベーター(ｕ−ＰＡ；例えば、Hung (1984) Adv. Exp. Med. Biol.172:281-293; Cheng et al. (1989) Gene 69:357-363、を参照)が含まれる。結合体は、直接にもしくはリンカーを介するかのどちらかで、細胞毒性剤のような治療薬を含む標的とされた薬剤に結合した、一つもしくは複数の細胞表面プロテアーゼに対する一つもしくはそれ以上の基質を含有する。
【０００７】
本明細書において提供される結合体は次のような成分を含有する：(ペプチド性基質)s、(リンカー)ｑおよび(標的とされた薬剤)ｔ、ここにおいて：少なくとも１個のペプチド性基質部分は少なくとも一つの治療薬にリンカー(Ｌ)と共にもしくは無しで結合しており、ｓは１以上であり、そしてそれぞれの基質は同一かもしくは異なっており、典型的には、１〜６であり、一般的には１,２もしくは３であり；ｑは０もしくは、細胞表面プロテアーゼ(複数を含む)がペプチド性基質(複数を含む)を切断して活性治療薬を放出するか、または細胞、組織もしくは周囲の環境により活性型に変換される型で薬剤を放出する限り１以上であり、ｑは０〜ｔであり、一般的に１〜４であり；ｔは１以上、一般的に１もしくは２であり、そしてそれぞれの標的とされた薬剤は同一もしくは異なっており；リンカーは任意のリンカーを指し；そして標的とされた薬剤は任意の薬剤であり、典型的には、細胞毒性剤のような治療薬、核酸、造影剤もしくは標識成分のような診断薬、または抗腫瘍、抗がん、抗血管形成、プロ−アポトーシス、および抗細胞分裂の薬剤または処置剤が挙げられるが、それらに限定されない。
【０００８】
治療薬は任意の生物学的に活性な分子を含む。これらの薬剤は毒素、サイトカインおよびリンホカイン、増殖因子、アンチセンス核酸のような、核酸分子、ｄｓＲＮＡならびにＤＮＡ分子を含む。治療薬は、細胞毒のように細胞内で活性であるか、もしくは細胞外受容体の活性のモジュレーターのように細胞外で活性であるものを含む。結合体の中にあるときは、治療薬は実質的に不活性であり、そして切断されるときに、活性型でかまたは標的とされた細胞もしくは組織またはその環境により活性化され得る型で放出される。
【０００９】
例示的な実施態様において、本明細書において提供される方法および組成における使用のための結合体は、式：
(ペプチドｉ)Ｓ−(リンカー)ｑ−(治療薬)ｔ、
もしくはその誘導体[式中、ペプチドｉは細胞表面プロテアーゼに対するペプチド性基質であり；ｓは０に等しいかそれ以上、または１〜６、または１もしくは２、または１であり；リンカーは任意のリンカーであり；ｑは０に等しいかそれ以上であり、または０〜４であり、または０もしくは１でり；治療薬は、例えば、抗腫瘍、抗血管形成、抗がん、プロ−アポトーシス、および抗細胞分裂の薬剤が挙げられるが、それらに限定されない、細胞毒性剤であり；そしてｔは１もしくはそれ以上、または１もしくは２である]により表され得る。このような結合体において、治療薬は、ペプチド性基質のＣ末端もしくはＮ末端に、任意にリンカーＬを介して共有結合で付着している。
【００１０】
特定の実施態様において、ペプチドｉは細胞表面プロテアーゼの基質であり、それにより、プロテアーゼの作用で、実質的に不活性である結合体がペプチド基質鎖上の点で切断されて、インビトロおよび／もしくはインビボで治療活性を示すところの、式：
(ペプチドａ)Ｓ−(リンカー)ｑ−(治療薬)ｔ
の化合物もしくはその誘導体を放出する。これらの結合体において、治療薬は、例えば、細胞毒性剤であり、ペプチドａはＰ１−Ｐ１’結合での切断により得られるペプチドｉの先端を切った型である。
【００１１】
結合体は、特定の細胞に標的化するためにかつ標的とされた薬剤を送達するために使用され得て、したがって、細胞と関連しかつ細胞に局在するプロテアーゼを含む、細胞表面プロテアーゼを発現する細胞もしくは組織と関連する、任意の疾患の処置に使用されることができる。そのようなプロテアーゼがその上もしくは近傍に発現している細胞は、必ずしも疾患もしくは疾患過程に関与していないが、存在して、標的とされた結合体を切断するプロテアーゼを提示するのに役立ち得る。
【００１２】
細胞と関連しかつ細胞に局在するプロテアーゼを含む、細胞表面プロテアーゼを発現している細胞もしくは組織に関連する疾患の処置のための方法が提供される。疾患としては、増殖性疾患、自己免疫疾患、感染性疾患および炎症性疾患が挙げられるが、それらに限定されない。例えば、疾患としては、関節リウマチ、ループス、多発性硬化症、乾癬、糖尿病性網膜症、翼状片の再発、瘢痕のエキシマーレーザー手術および緑内障の濾過手術、前眼の種々の疾患を含む他の眼疾患、心臓血管性疾患、再狭窄、慢性炎症性疾患、創傷、循環系疾患、CREST症候群、細菌感染症、ＡＩＤＳを含むウイルス性疾患、皮膚科疾患、ならびに固形新生物形成および肺がん、結腸がん、食道がん、乳がん、卵巣がんおよび前立腺がんを含むが、それらに限定されない、血管性腫瘍が挙げられるが、それらに限定されない。
【００１３】
また、疾患の処置のために結合体を標的化するプロテアーゼを同定するための方法が提供される。方法は、疾患過程に関与する細胞、もしくは疾患過程に関与する細胞の近傍の細胞を同定することにより、細胞表面プロテアーゼ関連疾患を同定すること；そして細胞上の細胞表面プロテアーゼを同定することを伴う。次いで、本明細書において提供するようなプロテアーゼを標的化する、結合体を作成することができる。
図面の簡単な説明
図１〜５は、本明細書において提供される例示的結合体に対するインビトロのＣＴ５０(５０％切断までの時間)を提供し、ここで：Ａ＝０．１〜２５分；Ｂ＝２５〜１００分；Ｃ＝１００〜２５０分；Ｄ≧２５０分である。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１Ａ】図１Ａは、本明細書において提供される例示的ドキソルビシン結合体およびＭＴＳＰ１による結合体の切断に対するインビトロＣＴ５０(分)を示す。
【図１Ｂ】図１Ｂは、本明細書において提供される例示的ドキソルビシン結合体およびＭＴＳＰ１による結合体の切断に対するインビトロＣＴ５０(分)を示す。
【図１Ｃ】図１Ｃは、本明細書において提供される例示的ドキソルビシン結合体およびＭＴＳＰ１による結合体の切断に対するインビトロＣＴ５０(分)を示す。
【図１Ｄ】図１Ｄは、本明細書において提供される例示的ドキソルビシン結合体およびＭＴＳＰ１による結合体の切断に対するインビトロＣＴ５０(分)を示す。
【図１Ｅ】図１Ｅは、本明細書において提供される例示的ドキソルビシン結合体およびＭＴＳＰ１による結合体の切断に対するインビトロＣＴ５０(分)を示す。
【図２Ａ】図２Ａは、本明細書において提供される例示的ドキソルビシン結合体およびｕ−ＰＡによる結合体の切断に対するインビトロＣＴ５０(分)を示す。
【図２Ｂ】図２Ｂは、本明細書において提供される例示的ドキソルビシン結合体およびｕ−ＰＡによる結合体の切断に対するインビトロＣＴ５０(分)を示す。
【図２Ｃ】図２Ｃは、本明細書において提供される例示的ドキソルビシン結合体およびｕ−ＰＡによる結合体の切断に対するインビトロＣＴ５０(分)を示す。
【図２Ｄ】図２Ｄは、本明細書において提供される例示的ドキソルビシン結合体およびｕ−ＰＡによる結合体の切断に対するインビトロＣＴ５０(分)を示す。
【図２Ｅ】図２Ｅは、本明細書において提供される例示的ドキソルビシン結合体およびｕ−ＰＡによる結合体の切断に対するインビトロＣＴ５０(分)を示す。
【図２Ｆ】図２Ｆは、本明細書において提供される例示的ドキソルビシン結合体およびｕ−ＰＡによる結合体の切断に対するインビトロＣＴ５０(分)を示す。
【図２Ｇ】図２Ｇは、本明細書において提供される例示的ドキソルビシン結合体およびｕ−ＰＡによる結合体の切断に対するインビトロＣＴ５０(分)を示す。
【図２Ｈ】図２Ｈは、本明細書において提供される例示的ドキソルビシン結合体およびｕ−ＰＡによる結合体の切断に対するインビトロＣＴ５０(分)を示す。
【図３】図３は、本明細書において提供される例示的タキソール結合体およびＭＴＳＰ１による結合体の切断に対するインビトロＣＴ５０(分)を示す。
【図４】図４は、本明細書において提供される例示的タキソール結合体およびｕ−ＰＡによる結合体の切断に対するインビトロＣＴ５０(分)を示す。
【図５】図５は、本明細書において提供される例示的ドキソルビシンおよびタキソール結合体ならびにＥＴ１(エンドセリアーゼ１)による結合体の切断に対するインビトロＣＴ５０(分)を示す。
【００１５】
(実施態様の詳細な説明)
Ａ．定義
別に定義されない限りでは、本明細書において使用される全ての技術的および科学的用語は、本発明が属する当業者に共通して理解されるのと同じ意味を有する。本明細書における全体的な開示を通して参照する全ての特許、特許出願、公開出願および刊行物、Genbankの配列、ウエブサイトおよび他の資料は、別に記載のない限り、その全体的な出典明示により本明細書の一部とする。本明細書において用語について複数の定義がある場合には、本項の定義が優先する。ＵＲＬもしくは他のそのような識別子もしくはアドレスに参照がなされた場合には、そのような識別子は変化し得て、そしてインターネット上の特定の情報は掲載されたり掲載されなくなったりするが、インターネットを検索することにより同等の情報を見出すことができることが理解される。それに対する参照は、そのような情報の入手可能性および公けにおける普及を立証する。
【００１６】
本明細書において使用されるように、標的とされた薬剤は、標的とされた送達を意図する任意の薬剤であり、標的とされた送達を意図する治療薬および診断薬ならびに任意の他の薬剤を含む。
【００１７】
本明細書において使用されるように、標的とされた送達とは、標的とされた薬剤を放出するプロテアーゼを発現する、選択された細胞もしくは組織への送達を意味する。そのような送達は、そのような選択された細胞もしくは組織への専用なものである必要はないが、それを含まねばならず、そして一般的にさらに高用量をそのような選択された細胞もしくは組織に送達する。送達は、細胞もしくは組織の中への導入、もしくは細胞もしくは組織への結合または細胞もしくは組織の近傍での放出を含む。例えば、或る場合において、腫瘍は、プロテアーゼ、受容体、補助因子もしくは間質と関連した基質の生産を誘導する；かくして送達は、浸潤細胞もしくは標的化された腫瘍中の細胞中のプロテアーゼ、受容体および／または酵素の補助因子のような、そのような誘導された間質の活性をターゲッティングするすることを含む。
本明細書において使用されるように、治療係数とは、ＬＤ５０／ＥＤ５０の比である。
【００１８】
本明細書において使用されるように、治療薬とは、腫瘍細胞および増殖的な、典型的には、望ましくない応答に関与する細胞を含む、増殖細胞のような、標的とされた細胞もしくは組織への送達を意図する任意の薬物もしくは他の薬剤である。治療薬としては、抗がん剤、抗血管形成剤、プロ−アポトーシス剤、抗細胞分裂成長因子、腫瘍壊死因子およびインターロイキンのようなサイトカイン、ならびに細胞毒性剤および本明細書において説明されて当業者に周知のそのような薬剤が挙げられるが、それらに限定されない。治療薬は、内部移行で活性であるもの、およびまた細胞外で作用するもの、細胞外シグナルを形質導入するＧタンパク質のような特定の細胞表面受容体の活性のそのようなモジュレーターを含む。
【００１９】
本明細書において使用されるように、不活性な治療薬とは、ペプチドに結合し、それによって配座の変化もしくはサイズまたは立体障害のような他の要因のいずれかのお蔭で、全く活性を示さないかまたは放出された活性な治療薬と比較して実質的に減少した活性を示す、治療薬である。例えば、結合したドキソルビシンは、細胞に入ることができる型で結合体から放出されるまで細胞に対して毒性でない。結合体からの薬剤の切断で、それは活性型にあるか、または細胞の中もしくは上で酵素的または化学的を含む一つもしくは複数のステップによりさらに活性型に加工される型にある。
【００２０】
本明細書において使用されるように、活性な治療薬とは、結合体のペプチド性基質部分の切断により結合体から放出されている治療薬である。活性な治療薬は、切断のお蔭で意図した活性を、典型的には、細胞に入ることにより示すことができる。結合された場合、治療薬は治療薬としての減少した活性を持つかもしくは全く活性を持たないで、切断で細胞の近傍で放出される。
【００２１】
本明細書において使用されるように、抗がん剤(“抗腫瘍もしくは抗新生物形成薬剤”と互換的に使用される)とは、がんの処置に使用される任意の薬剤を指す。これらは、単独もしくは他の化合物との組合せで使用したときに、新生物形成、腫瘍もしくはがんと関連する臨床症状または診断マーカーを軽減、減少、改善、予防し、または寛解の状態に置くかもしくは維持することのできる、任意の薬剤をも含み、そして本明細書に提供される方法、組合せおよび組成物で使用されることができる。抗新生物形成薬剤の限定されない例としては、抗血管形成剤、アルキル化剤、代謝拮抗剤、特定の天然生産物、プラチナ配位結合錯体、アントラセンジオン、尿素置換体、メチルヒドラジン誘導体、副腎皮質抑制剤、特定のホルモン、拮抗剤および抗がん多糖類が挙げられる。
【００２２】
本明細書において使用されるように、結合した治療薬に参照して実質的に不活性とは、インビトロもしくはインビボアッセイのような、薬剤の治療活性を評価する標準的なまたは当分野において認められているアッセイにおいて、結合していない治療薬と比較して少なくとも１％、一般的には１０、２０、３０、５０、６０、７０、８０もしくは９０または１００％不活性であることを意味する。
【００２３】
本明細書において使用されるように、標的とされた細胞もしくは組織とは、結合体を切断する細胞表面プロテアーゼを含む、細胞もしくは組織を指す。細胞もしくは組織は疾患に関与することができて、または疾患の一つもしくは複数の座位に、疾患過程における関与のお蔭でもしくは単に偶然により存在し得る。
【００２４】
本明細書において使用されるように、血管形成は新しい血管系の確立および維持(新血管形成)に直接にもしくは間接に関与する全体の過程を広く包含するものとし、腫瘍に関連する新血管形成を含むが、これに限定されない。
【００２５】
本明細書において使用されるように、抗血管形成的処置もしくは薬剤は、単独もしくは他の化合物との組合せで使用するときに、望ましくない、そして／もしくは制御されない血管形成に関連する一つもしくはそれ以上の臨床症状または診断マーカーを軽減、減少、改善、予防し、もしくは寛解の状態に置くかまたは維持することのできる任意の治療レジメンおよび化合物を指す。かくして、本明細書における目的のためには、抗血管形成剤は、血管系の確立もしくは維持を阻害する薬剤を指す。そのような薬剤としては、抗腫瘍剤、ならびに糖尿病性網膜症、過剰増殖性障害および他のような望ましくない血管形成に関連する他の障害の処置のための薬剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２６】
本明細書において使用されるように、非抗血管形成性抗腫瘍剤とは、主として血管形成を阻害することにより作用しない、抗腫瘍剤を指す。抗腫瘍剤が主として血管形成を阻害することにより作用するか否かは、本明細書において提供されるアッセイを用いることにより、もしくは当業者に周知の他のアッセイを用いることにより決定することができる。
【００２７】
本明細書において使用されるように、望ましくないそして／もしくは制御されない血管形成とは、血管形成促進剤の影響が血管形成阻害剤の影響に優っている、病的血管形成を指す。本明細書において使用されるように、欠乏性の血管形成とは、異常血管形成もしくは血管形成の不在もしくは実質的減少をもたらす正常な血管形成の欠陥がある、障害に関連する病的血管形成を指す。
【００２８】
本明細書において使用されるように、細胞表面プロテアーゼは、細胞表面の上でもしくはにおいて局在する任意のプロテアーゼ、そして／またはそれに対する受容体との特異的な結合相互作用のお蔭で細胞表面に局在するかまたは細胞表面においてもしくは近くに局在するか、または細胞表面に関連しているところのプロテアーゼである。その受容体との特異的結合相互作用のお蔭で細胞表面に局在する例示的プロテアーゼは、ウロキナーゼプラスミノゲンアクチベーター受容体(ｕ−ＰＡＲ)に結合したウロキナーゼプラスミノゲンアクチベーター(ｕ−ＰＡ)である。したがって、本明細書において意図される細胞表面プロテアーゼは、細胞表面関連プロテアーゼを含む。それはまた、細胞を循環するかもしくは内にあり得るそのすべての型を含む。細胞表面プロテアーゼとして分類されるためには、その周期の或る時点で細胞の表面上に局在する(即ち、膜貫通プロテアーゼのように表面に、もしくはそれに対する受容体に結合する)ところのその少なくとも一つの型がなければならない。細胞表面プロテアーゼとしては、膜貫通セリンプロテアーゼ(ＭＴＳＰ)ならびにエンドセリアーゼおよびウロキナーゼのようであるが、それらに限定されない、セリンプロテアーゼが挙げられる。
【００２９】
本明細書において使用されるように、セリンプロテアーゼ(ＳＰ)とは、セリン残基がタンパク質もしくはペプチドの加水分解に関与するプロテアーゼの多様なファミリーを指す。セリン残基は、触媒作用におけるセリン、ヒスチジンおよびアスパラギン酸を含む、触媒三つ組メカニズムの部分か、または触媒作用におけるセリンおよびリジンを含むヒドロキシル／ε−アミンもしくはヒドロキシル／α−アミン触媒二つ組メカニズムの部分であることができる。特に興味深いのは、ヒトを含む哺乳動物由来のＳＰである。当業者は、一般的にポリペプチドの非必須領域中の単一のアミノ酸置換は生物活性を実質的に変えないことを認識する(例えば、Watson et al. (1987) 「遺伝子の分子生物学、第４版」、The Bejacmin/Cummings Pub. co., p.224、を参照)。
【００３０】
本明細書において使用されるように、可溶性および放出された型の細胞表面プロテアーゼが意図される。そのような型としては、例えば、膜結合プロテアーゼの細胞外部分のタンパク質分解もしくは他の除去により血清中に見出される型、および膜貫通ドメインを含まないスプライス変異体が挙げられる。
【００３１】
本明細書において示されるように、細胞表面プロテアーゼおよび細胞に関連しているプロテアーゼのプロテアーゼ活性は、そのような酵素による切断で活性化される結合体を提供することにより、細胞毒性剤のような治療薬をそのような細胞の近くに濃縮する手段を提供するために利用されることができる。そのような結合体は、細胞表面プロテアーゼもしくは細胞関連プロテアーゼの作用で、細胞毒性剤のような治療薬、もしくは作用部位で局所的に治療薬に変換され得るところのその誘導体を放出する。上述のように、基質は、疾患に関与するか、または疾患の部位(複数を含む)または一つもしくは複数の座位に存在する、腫瘍細胞または内皮細胞のような細胞の表面上に発現されるかまたは活性であるところの標的とされたプロテアーゼの基質になるようにデザインされる。そのようなプロテアーゼの特異的発現、局在もしくは活性化、またはその受容体、基質もしくは酵素の補助因子の存在のお蔭で、本明細書において提供される結合体の投与はそのような細胞への治療薬のターゲティングを可能にする。プロテアーゼとの接触で、活性な治療薬が標的とされた細胞の極く近傍に放出される。例えば、いくつかのＭＴＳＰの特異的なプロフィールは以下の通りである。
０
【００３２】
本明細書において使用する限りでは、“膜貫通セリンプロテアーゼ(ＭＴＳＰ)”とは、本明細書において説明するように共通の構造的特徴を共有する膜貫通セリンプロテアーゼのファミリーを指す(Hooper et al. (2001) J. Biol. Chem.276:857-860をまた参照)。かくして、例えば、“ＭＴＳＰ”への参照は、ＭＴＳＰ１、ＭＴＳＰ３、ＭＴＳＰ４、ＭＴＳＰ６、ＭＴＳＰ７、ＭＴＳＰ９、ＭＴＳＰ１０、ＭＴＳＰ１２、ＭＴＳＰ２０、ＭＴＳＰ２２およびＭＴＳＰ２５を含むが、それらに限定されない、ＭＴＳＰ遺伝子によりコード化される全てのタンパク質、または任意の他の供給源から得られたかもしくは合成的に作成されたかまたは同じ活性を示す、同等の分子を包含する。他のＭＴＳＰとしては、コリン、エンテロペプチダーゼ、ヒト気道トリプシン様プロテアーゼ(ＨＡＴ)、ＴＭＰＲＳＳ２およびＴＭＰＲＳＳ４が挙げられるが、それらに限定されない。本明細書において説明されるＭＴＳＰを使用して、他のＭＴＳＰを同定することができる。完全長分子およびスプライス変異体、ならびにウシ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ウマ、チンパンジーおよびゴリラを含む霊長類、げっ歯類、イヌ、ネコ、および家畜、農耕用ならびに動物園の動物の興味ある他の動物種のような動物種からのＭＴＳＰをコード化する核酸分子を含む、他のＭＴＳＰをコード化する核酸を単離する方法は当業者に周知であり、そして本明細書において概述される。配列番号に示されるものを含む、本明細書において説明される核酸を使用して、核酸分子またはそれに基づいて選択されたプライマーもしくはプローブを用いて適切なライブラリーをスクリーニングするように、ヒトの供給源からまたは他の動物からの完全長ＭＴＳＰポリペプチドをコード化する核酸分子を得ることができる。
【００３３】
核酸分子をコード化する配列ならびに例示的ＭＴＳＰおよび／もしくはそのドメインのコード化されたアミノ酸配列は、配列番号１〜４５、２６９〜２７０および２７２〜２７６に示される。この用語はまた、それぞれのメンバーの活性を実質的に変化させないアミノ酸置換を持つＭＴＳＰを包含し、そしてまたそのスプライス変異体によりコード化されるポリペプチドを包含する。したがって、得られたポリペプチドが未変化ポリペプチドのタンパク質分解活性の少なくとも１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％を保持しているように、アミノ酸置換を持つＭＴＳＰが包含され、そしてまたそのスプライス変異体によりコード化されるＭＴＳＰおよび単一ヌクレオチド多型(ＳＮＰ)のような対立遺伝子変異体によりコード化されるＭＴＳＰを包含する。必ずしもではないが、アミノ酸の保存的な置換を含む適当な置換は当業者に公知であり、得られる分子の触媒活性のような生物活性を除去することなく行うことができる。ＭＴＳＰは、ヒトを含む哺乳動物起源のような動物のものを含む。
１
【００３４】
本明細書において使用する限りでは、“ＭＴＳＰのプロテアーゼドメイン”とは、タンパク質分解活性を示して、キモトリプシン／トリプシンファミリーのプロテアーゼドメインと相同性および構造的特徴を共有する、ＭＴＳＰの細胞外プロテアーゼドメインを指す。したがって、それは、標準的なインビトロアッセイにより評価されるようなタンパク質分解活性を示すところのドメインの少なくとも最小の部分である。本明細書においては、そのようなプロテアーゼドメインおよびその触媒的に活性な部分が意図される。
【００３５】
プロテアーゼドメインを示した例示的なＭＴＳＰポリペプチドは、配列番号１〜４５、２６９〜２７０および２７２〜２７６に示され、そしてプロテアーゼ活性を保持するかもしくは示すそのさらに小さな部分を含む。プロテアーゼドメインは、表面ループの中の挿入および欠失を含み、サイズおよび構成を異にする。それらは、活性部位三つ組、主要特異性ポケット、オキシアニオンホールおよび／もしくはプロテアーゼのセリンプロテアーゼドメインの他の特徴の少なくとも一つを含む、保存された構造を保持する。かくして、本明細書における目的のためには、プロテアーゼドメインは、本明細書において規定するＭＴＳＰの一部であって、他のＭＴＳＰのドメインに相同である。ＭＴＳＰとしては、ＭＴＳＰ１、ＭＴＳＰ３、ＭＴＳＰ４、ＭＴＳＰ６、ＭＴＳＰ７、ＭＴＳＰ９、ＭＴＳＰ１０、ＭＴＳＰ１２、ＭＴＳＰ２０、ＭＴＳＰ２２およびＭＴＳＰ２５(配列番号１〜１９、４２〜４５、２６９〜２７０および２７２−２７６、を参照；また国際ＰＣＴ出願第ＷＯ  ０２／００８６０号、を参照(ＭＴＳＰ１２の変異体を提供するその中の配列番号３８および９７、を参照)；コリン(配列番号２８および２９)、エンテロペプチダーゼ(配列番号３０および３１)、ヒト気道トリプシン様プロテアーゼ(ＨＡＴ)(配列番号３２および３３)、ヘプシン(配列番号３４および３５)、ＴＭＰＲＳＳ２(配列番号３６および３７)ならびにＴＭＰＲＳＳ４(配列番号３８および３９)が挙げられる。キモトリプシン(Ｓ１)折り畳みを有するさらに大きなクラスの酵素(例えば、インターネットでアクセス可能なＭＥＲＯＰＳデータベース、を参照)と同様に、ＭＴＳＰのプロテアーゼドメインは、高度のアミノ酸配列同一性を共有している。活性に必要なＨｉｓ、ＡｓｐおよびＳｅｒ残基は保存されたモチーフ中に存在する。切断により活性化されるもののうち、２本鎖型の中の第２鎖のＮ末端をもたらす活性化部位は、保存されたモチーフを有していて、容易に同定することができる(例えば、配列番号２９のアミノ酸８０１〜８０６、配列番号３１のアミノ酸４０６〜４１０；配列番号３３のアミノ酸１８６〜１９０；配列番号３５のアミノ酸１６１〜１６６；配列番号３７のアミノ酸２５５〜２５９；配列番号３９のアミノ酸１９０〜１９４ならびに当業者におよび当分野において公知のならびに／もしくは本明細書に説明されるような他のもの、を参照)。
【００３６】
例えば、ＭＴＳＰ１０(配列番号４４および４５、を参照)に関しては次のようなジスルフィド結合がある：Ｃ４８８−Ｃ５０４、Ｃ５８７−Ｃ６５３；Ｃ６１９−Ｃ６３２；Ｃ６４３−Ｃ６７３(配列番号４４および４５、を参照)(キモトリプシンの番号で４２〜５８；１３６〜２０１；１６８〜１８２および１９１〜２２０)。Ｃ５７３−Ｃ２９６のＣｙｓ残基間でジスルフィド結合が形成して、プロテアーゼドメインをもう一つのドメインに連結し、そのために活性化切断(配列番号４５のＲ４６２およびＩ４６３残基の間で)で得られたポリペプチドは２本鎖分子である。Ｃ５７３(配列番号４５)は単鎖型のプロテアーゼドメインの中の遊離Ｃｙｓである。記述のように、プロテアーゼはまた、２本鎖分子として提供され得る。単鎖および２本鎖型はタンパク質分解的に活性である。２本鎖型は、典型的には、Ｃ５７３およびＣｙｓ２９６のようなプロテアーゼドメイン外のＣｙｓとの間の結合により生成される。活性化切断でジスルフィド結合は残り、２本鎖ポリペプチドをもたらす。“Ａ”鎖のサイズは、Ｒ４６２およびＩ４６３の間の活性化切断以前のポリペプチドの出発の長さの関数である。プロテアーゼドメイン(配列番号４５の残基４６３〜６９２)を含む任意の長さのポリペプチドもしくはその触媒的に活性なフラグメントが、本明細書において意図される。２本鎖型は、Ｃ２９６からＣ５７３まででかつそれを含むポリペプチドの少なくともプロテアーゼドメインを含む。
【００３７】
本明細書において使用されるように、２本鎖型のプロテアーゼドメインとは、プロテアーゼドメインを残りのポリペプチドである“Ａ”鎖に連結する、例えば、Ｃｙｓ５７３(ＭＴＳＰについての配列番号４５)のような、例えば、プロテアーゼドメインの外側のＣｙｓ、との間にＣｙｓが対を形成する、単鎖型のプロテアーゼから形成されるところの２本鎖型を指す。２本鎖プロテアーゼドメインとは、その中で“残りのポリペプチド”、即ち“Ａ”鎖が短くされ、プロテアーゼドメインの外側からのＣｙｓを含むところの任意の型を指す。
【００３８】
本明細書において使用されるように、ＭＴＳＰの触媒的に活性なドメインとは、プロテアーゼドメインを指す。ＭＴＳＰのプロテアーゼドメインへの参照は、一般的に単鎖型のタンパク質を指す。もし２本鎖型もしくは両方の型を意図する場合は、そのように特定される。それぞれのタンパク質のチモーゲン型は単鎖であり、それは、活性化切断によって活性な２本鎖もしくは多本鎖型に変換される。活性型とは、インビボもしくはインビトロにおいて活性な型を意味する。
【００３９】
本明細書において使用されるように、活性化切断とは、プロテアーゼドメインのＮ末端におけるプロテアーゼの切断(一般的に完全長タンパク質中のＲおよびＩもしくはＶとの間で)を指す。プロテアーゼドメイン外のＣｙｓおよびプロテアーゼドメイン内のＣｙｓ(例えば、配列番号４５のＣｙｓ５７３、を参照)との間のＣｙｓ−Ｃｙｓ対形成のお蔭で、切断で得られるポリペプチドは２本鎖を有する(“Ａ”鎖およびＭＴＳＰのプロテアーゼドメインである、“Ｂ”鎖)。切断はもう一つのプロテアーゼによりもしくは自動触媒的に行われ得る。本明細書において提供される結合体は、活性な細胞表面プロテアーゼ(もしくは細胞関連プロテアーゼ)により認識される部位を好都合に含有して、そしてそれにより切断されて、治療薬の活性な型もしくは不活性なプロドラッグ型を放出する。
【００４０】
本明細書において使用されるように、ＭＴＳＰ１は、本明細書において参照される場合は常に、
配列番号１もしくは４０に示すヌクレオチド配列によりコード化されるポリペプチド；
配列番号１もしくは４０に示すヌクレオチドの配列に低度の、中度の、または高度の厳密度の条件下でハイブリダイズする、ヌクレオチドの配列によりコード化されるポリペプチド；
配列番号２もしくは４１に示すアミノ酸の配列を含む、ポリペプチド；
配列番号２もしくは４１に示すアミノ酸の配列と少なくとも約４０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む、ポリペプチド；ならびに／または
配列番号１もしくは４０に示すＭＴＳＰ１のスプライス変異体によりコード化されるポリペプチド：
の組合せの少なくとも一つまたは全部もしくは任意を含む。
【００４１】
ＭＴＳＰ１は任意の動物、特に哺乳動物由来であり得て、そしてヒト、げっ歯類、鳥類、反芻動物および他の動物を含むが、それらに限定されない。完全長のチモーゲンもしくは２本鎖の活性化型、または２本鎖活性化型であり得る、プロテアーゼドメインを含むその任意のドメイン、または単鎖型が意図される。ＭＴＳＰ１はまた、ＴＡＤＧ−１５およびマトリプターゼと呼称される。以下に説明するように、当初マトリプターゼと呼称されたタンパク質は、ＭＴＳＰ１のスプライス変異体もしくは加工産物であると思われる。
【００４２】
本明細書において使用されるように、ＭＴＳＰ３は、本明細書において参照される場合は常に、
配列番号３に示すヌクレオチド配列によりコード化されるポリペプチド；
配列番号３に示されるヌクレオチドの配列に低度の、中度の、もしくは高度の厳密度の条件下でハイブリダイズする、ヌクレオチドの配列によりコード化されるポリペプチド；
配列番号４のアミノ酸２０５〜４３７として示すアミノ酸の配列を含む、ポリペプチド；
配列番号４に示すアミノ酸の配列と少なくとも約４０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む、ポリペプチド；ならびに／または
配列番号３および４に示すＭＴＳＰ３のスプライス変異体によりコード化されるポリペプチド：
の組合せの少なくとも一つまたは全部もしくは任意を含む。
【００４３】
ＭＴＳＰ３は任意の動物、特に哺乳動物由来であり得て、そしてヒト、げっ歯類、鳥類、反芻動物および他の動物を含むが、それらに限定されない。完全長のチモーゲンもしくは２本鎖の活性化型、または２本鎖活性化型であり得る、プロテアーゼドメインを含むその任意のドメイン、または単鎖型が意図される。
【００４４】
本明細書において使用されるように、ＭＴＳＰ４は、本明細書において参照される場合は常に、
配列番号５、７もしくは９に示すヌクレオチド配列によりコード化されるポリペプチド；
配列番号５、７もしくは９に示されるヌクレオチドの配列に低度の、中度の、もしくは高度の厳密度の条件下でハイブリダイズする、ヌクレオチドの配列によりコード化されるポリペプチド；
配列番号６、８もしくは１０のいずれかに示すアミノ酸の配列を含む、ポリペプチド；；
配列番号６、８もしくは１０に示すアミノ酸の配列と少なくとも約４０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む、ポリペプチド；ならびに／または
配列番号７〜１０に示すＭＴＳＰ４のスプライス変異体によりコード化されるポリペプチド：
の組合せの少なくとも一つまたは全部もしくは任意を含む。
【００４５】
ＭＴＳＰ４は任意の動物、特に哺乳動物由来であり得て、そしてヒト、げっ歯類、鳥類、反芻動物および他の動物を含むが、それらに限定されない。完全長のチモーゲンもしくは２本鎖の活性化型、または２本鎖活性化型であり得る、プロテアーゼドメインを含むその任意のドメイン、または単鎖型が意図される。
【００４６】
本明細書において使用されるように、ＭＴＳＰ６は、本明細書において参照される場合は常に、
配列番号１１に示すヌクレオチド配列によりコード化されるポリペプチド；
配列番号１１に示されるヌクレオチドの配列に低度の、中度の、もしくは高度の厳密度の条件下でハイブリダイズする、ヌクレオチドの配列によりコード化されるポリペプチド；
配列番号１２のいずれに示すアミノ酸の配列を含む、ポリペプチド；；
配列番号１２に示すアミノ酸の配列と少なくとも約４０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む、ポリペプチド；ならびに／または：
配列番号１２に示すＭＴＳＰ６のスプライス変異体によりコード化されるポリペプチド：
の組合せの少なくとも一つまたは全部もしくは任意を含む。
【００４７】
ＭＴＳＰ６は任意の動物、特に哺乳動物由来であり得て、そしてヒト、げっ歯類、鳥類、反芻動物および他の動物を含むが、それらに限定されない。完全長のチモーゲンもしくは２本鎖の活性化型、または２本鎖活性化型であり得る、プロテアーゼドメインを含むその任意のドメイン、または単鎖型が意図される。本明細書において特に興味深いのは配列番号１２のＭＴＳＰ６である。
【００４８】
本明細書において使用されるように、ＭＴＳＰ７は、本明細書において参照される場合は常に、
配列番号１３に示すヌクレオチド配列によりコード化されるポリペプチド；
配列番号１３に示されるヌクレオチドの配列に低度の、中度の、もしくは高度の厳密度の条件下でハイブリダイズする、ヌクレオチドの配列によりコード化されるポリペプチド；
配列番号１３に示すアミノ酸の配列を含む、ポリペプチド；
配列番号１４に示すアミノ酸の配列と少なくとも約４０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む、ポリペプチド；ならびに／または
配列番号１３に示すＭＴＳＰ７のスプライス変異体によりコード化されるポリペプチド：
の組合せの少なくとも一つまたは全部もしくは任意を含む。
【００４９】
ＭＴＳＰ７は任意の動物、特に哺乳動物由来であり得て、そしてヒト、げっ歯類、鳥類、反芻動物および他の動物を含むが、それらに限定されない。完全長のチモーゲンもしくは２本鎖の活性化型、または２本鎖活性化型であり得る、プロテアーゼドメインを含むその任意のドメイン、または単鎖型が意図される。
【００５０】
本明細書において使用されるように、ＭＴＳＰ９は、本明細書において参照される場合は常に、
配列番号１７もしくは配列番号４２に示すヌクレオチド配列によりコード化されるポリペプチド；
配列番号１７もしくは４２に示されるヌクレオチドの配列に低度の、中度の、もしくは高度の厳密度の条件下でハイブリダイズする、ヌクレオチドの配列によりコード化されるポリペプチド；
配列番号１８もしくは４３に示すアミノ酸の配列を含む、ポリペプチド；；
配列番号１８もしくは２７０に示すアミノ酸の配列と少なくとも約４０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む、ポリペプチド；ならびに／または
配列番号１７に示すＭＴＳＰ９のスプライス変異体によりコード化されるポリペプチド：
の組合せの少なくとも一つまたは全部もしくは任意を含む。
【００５１】
ＭＴＳＰ９は任意の動物、特に哺乳動物由来であり得て、そしてヒト、げっ歯類、鳥類、反芻動物および他の動物を含むが、それらに限定されない。完全長のチモーゲンもしくは２本鎖の活性化型、または２本鎖活性化型であり得る、プロテアーゼドメインを含むその任意のドメイン、または単鎖型が意図される。
【００５２】
本明細書において使用されるように、ＭＴＳＰ１０は、本明細書において参照される場合は常に、
配列番号４４に示すヌクレオチド配列によりコード化されるポリペプチド；
配列番号４４に示されるヌクレオチドの配列に低度の、中度の、もしくは高度の厳密度の条件下でハイブリダイズする、ヌクレオチドの配列によりコード化されるポリペプチド；
配列番号４５に示すアミノ酸の配列を含む、ポリペプチド；；
配列番号４５に示すアミノ酸の配列と少なくとも約４０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む、ポリペプチド；ならびに／または
配列番号４４に示すＭＴＳＰ１０のスプライス変異体によりコード化されるポリペプチド：
の組合せの少なくとも一つまたは全部もしくは任意を含む。
【００５３】
ＭＴＳＰ１０は任意の動物、特に哺乳動物由来であり得て、そしてヒト、げっ歯類、鳥類、反芻動物および他の動物を含むが、それらに限定されない。完全長のチモーゲンもしくは２本鎖の活性化型、または２本鎖活性化型であり得る、プロテアーゼドメインを含むその任意のドメイン、または単鎖型が意図される。
【００５４】
そのスプライス変異体を含むが、それに限定されない、ＭＴＳＰ１０ポリペプチド、およびＭＴＳＰをコード化する核酸、ならびにそのドメイン、誘導体およびアナログが、本明細書において提供される。チモーゲン型のＭＴＳＰ１０の活性化により生成するものと機能的に同等のＮ末端を有する、単鎖プロテアーゼドメインがまた、提供される。ＭＴＳＰ１０のプロテアーゼドメインに対する切断部位は、アミノ酸Ｒおよびアミノ酸Ｉの間(Ｒ↓ＩＩＧＧＴ)(配列番号４５の残基４６２〜４６７)である。
【００５５】
本明細書において使用する限りでは、ＭＴＳＰ１２は、本明細書において参照される場合は常に
配列１９および２０
配列番号１９に示すヌクレオチド配列により、もしくは配列番号２０に示されるアミノ酸の配列をコード化するヌクレオチドを含むヌクレオチドの配列によりコード化されるポリペプチド；
配列番号１９として示されるヌクレオチドの配列に低度の、中度の、もしくは高度の厳密度の条件下でハイブリダイズする、ヌクレオチドの配列によりコード化されるポリペプチド；
配列番号２０に示すアミノ酸の配列、もしくはその触媒的に活性な部分を含む、ポリペプチド；
配列番号２０に示すアミノ酸の配列と少なくとも約４０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む、ポリペプチド；ならびに／または
配列番号２０に示すアミノ酸の配列を含むＭＴＳＰ１２のスプライス変異体によりコード化されるポリペプチド：
の組合せの少なくとも一つまたは全部もしくは任意を含む。
【００５６】
特に、配列番号１９および２０に示されるようなプロテアーゼドメインを持つ、ＭＴＳＰ１２ポリペプチドが提供される。ポリペプチドは単鎖もしくは多本鎖ポリペプチドである。ＭＴＳＰ１２のプロテアーゼドメインは、本明細書において参照される場合は常に、配列番号２０に示すアミノ酸の配列、もしくはその触媒的に活性な部分を含むが、配列番号２７１に示すアミノ酸の配列を含まない、ポリペプチド；
配列番号２７２に示すアミノ酸の配列もしくはその触媒的に活性なフラグメントを含む、ポリペプチド；
配列番号６のアミノ酸２３７〜４５６を含有するポリペプチド、配列番号２０のアミノ酸５３８〜７６５を含有するポリペプチド、および配列番号２０のアミノ酸８６１〜１０８７を含有するポリペプチドを含むが、しかし配列番号２７１に示すアミノ酸の配列を含まない、ポリペプチド； 
ａ)〜ｃ)のポリペプチドのいずれかをコード化するヌクレオチドの配列に低度の、中度の、もしくは高度の厳密度の条件下でハイブリダイズする、ヌクレオチドの配列によりコード化されるポリペプチド；
配列番号２０に示すヌクレオチドの配列に低度の、中度の、もしくは高度の厳密度の条件下でハイブリダイズするが、配列番号２７１に示すアミノ酸の配列をコード化しないヌクレオチドの配列によりコード化されるポリペプチド；
配列番号２０に示すアミノ酸の配列と少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む、ポリペプチド；
ａ)〜ｅ)のポリペプチドのアミノ酸の配列と少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む、ポリヌクレオチド；
上記の任意のＭＴＳＰ１２をコード化するヌクレオチドの配列のスプライス変異体によりコード化されるポリペプチド：
の組合せの少なくとも一つまたは全部もしくは任意のまたは触媒的に活性な部分を含む。
【００５７】
プロテアーゼ活性を保持するそのさらに小さな部分がまた、提供される。ＭＴＳＰ１２は任意の動物、特に哺乳動物由来であり得て、そしてヒト、げっ歯類、鳥類、反芻動物および他の動物を含むが、それらに限定されない。完全長のチモーゲンもしくは２本鎖の活性化型、または２本鎖活性化型であり得る、プロテアーゼドメインを含むその任意のドメイン、または単鎖型が意図される。ＭＴＳＰ１２はまた、国際ＰＣＴ出願第ＷＯ  ０２／００８６０号に記載される変異体を含む(その中の配列番号３８および９７、を参照)。
【００５８】
本明細書において使用されるように、ＭＴＳＰ２０は、本明細書において参照される場合は常に、
配列番号２７３に示すヌクレオチド配列によりコード化されるポリペプチド；
配列番号２７３に示されるヌクレオチドの配列に低度の、中度の、もしくは高度の厳密度の条件下でハイブリダイズする、ヌクレオチドの配列によりコード化されるポリペプチド；
配列番号２７３に示すアミノ酸の配列を含む、ポリペプチド；
配列番号２７４に示すアミノ酸の配列と少なくとも約４０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む、ポリペプチド；ならびに／または
配列番号２７３に示す配列を含むヌクレオチドの配列によりコード化されるＭＴＳＰ２０のスプライス変異体によりコード化されるポリペプチド：
の組合せの少なくとも一つまたは全部もしくは任意を含む。
【００５９】
ＭＴＳＰ２０は任意の動物、特に哺乳動物由来であり得て、そしてヒト、げっ歯類、鳥類、反芻動物および他の動物を含むが、それらに限定されない。完全長のチモーゲンもしくは２本鎖の活性化型、または２本鎖活性化型であり得る、プロテアーゼドメインを含むその任意のドメイン、または単鎖型が意図される。
【００６０】
本明細書において使用されるように、ＭＴＳＰ２２は、本明細書において参照される場合は常に、
配列番号２７５に示すヌクレオチド配列によりコード化されるポリペプチド；
配列番号２７５に示されるヌクレオチドの配列に低度の、中度の、もしくは高度の厳密度の条件下でハイブリダイズする、ヌクレオチドの配列によりコード化されるポリペプチド；
配列番号２７６に示すアミノ酸の配列を含む、ポリペプチド；；
配列番号２７６に示すアミノ酸の配列と少なくとも約４０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む、ポリペプチド；ならびに／または
配列番号２７５に示すＭＴＳＰ２２のスプライス変異体によりコード化されるポリペプチド：
の組合せの少なくとも一つまたは全部もしくは任意を含む。
【００６１】
ＭＴＳＰ２２は任意の動物、特に哺乳動物由来であり得て、そしてヒト、げっ歯類、鳥類、反芻動物および他の動物を含むが、それらに限定されない。完全長のチモーゲンもしくは２本鎖の活性化型、または２本鎖活性化型であり得る、プロテアーゼドメインを含むその任意のドメイン、または単鎖型が意図される。
【００６２】
本明細書において使用されるように、ＭＴＳＰ２５は、本明細書において参照される場合は常に、
配列番号２６９に示すヌクレオチド配列によりコード化されるポリペプチド；
配列番号２６９に示されるヌクレオチドの配列に低度の、中度の、もしくは高度の厳密度の条件下でハイブリダイズする、ヌクレオチドの配列によりコード化されるポリペプチド；
配列番号２７０に示すアミノ酸の配列を含む、ポリペプチド；；
配列番号２７０に示すアミノ酸の配列と少なくとも約４０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む、ポリペプチド；ならびに／または
配列番号２６９に示すＭＴＳＰ２５のスプライス変異体によりコード化されるポリペプチド：
の組合せの少なくとも一つまたは全部もしくは任意を含む。
【００６３】
ＭＴＳＰ２５は任意の動物、特に哺乳動物由来であり得て、そしてヒト、げっ歯類、鳥類、反芻動物および他の動物を含むが、それらに限定されない。完全長のチモーゲンもしくは２本鎖の活性化型、または２本鎖活性化型であり得る、プロテアーゼドメインを含むその任意のドメイン、または単鎖型が意図される。
本明細書において使用されるように、ヒトタンパク質は、ヒトのゲノム中に存在する核酸によりコード化されるものであり、全ての対立遺伝子変異体および保存的変異を、それらが他の哺乳動物に見出される変異体でない限り、含む。
【００６４】
本明細書において使用されるように、プラスミンもしくは前立腺特異的抗原(ＰＳＡ)(または他の非細胞表面関連性プロテアーゼ)により実質的に切断されないとは、その中で標的とされた細胞表面の膜プロテアーゼ、または前立腺特異的抗原(ＰＳＡ)もしくはプラスミンのプロテアーゼドメインの触媒的に活性な部分(もしくはその触媒的に活性な型)の結合体の切断に対する活性が比較されるところの比較できるインビトロアッセイにおいて(それぞれの酵素について至適条件下で)、相対的活性が少なくとも２：１、３：１、４：１、５：１、１０：１もしくは１００：１より大であることを意味する。
本明細書において使用されるように、活性とは、Ｋｃａｔ／Ｋｍ比を指し、そこではＫｃａｔは特定の酵素についての触媒的回転の速度であり、Ｋｍは基質の結合についてのミカエリス定数である。
【００６５】
本明細書において使用されるように、“ＭＴＳＰのプロテアーゼドメインもしくは触媒的に活性な部分をコード化する核酸”は、先述した単鎖プロテアーゼドメインもしくはその活性部分のみをコード化して、ＭＴＳＰの他の隣接する部分を連続した配列としてコード化しない核酸を指すものとする。
【００６６】
本明細書において使用されるように、ＣＵＢドメインとは、補体成分Ｃ１ｒ／Ｃ１ｓにおけるタンパク質−タンパク質相互作用を仲介するモチーフであって、発生過程に関与する種々のタンパク質において同定されている。
【００６７】
本明細書において使用されるように、チモーゲンは、自己活性化によるものを含め活性化因子の作用によりタンパク質分解酵素に変換されるところの酵素的に不活性なタンパク質(即ち、必ずしもそうとは限らないが、典型的には、活性型の１％未満)である。不活性とは、当業者が酵素の活性型であると考える型よりも低い活性を意味する。活性化型に対するチモーゲンの活性の比率は、酵素から酵素により異なる。
【００６８】
本明細書において使用されるように、“疾患もしくは障害”とは、例えば、感染もしくは遺伝的欠陥の結果生じる生物における病態を指し、特定可能な症状を特徴とする。本明細書において処置のために意図される疾患は、細胞に局在しているかもしくは細胞に関連しているプロテアーゼを含む細胞表面プロテアーゼが、疾患もしくは疾患の過程に関与する標的とされた細胞または組織と関連している任意の疾患である。そのような関連は、プロテアーゼが疾患に関与しているためであるか、もしくは疾患に関与している細胞と偶然関連しているためであり得る。本明細書においては、このような疾患を細胞表面プロテアーゼ関連疾患と呼称する。したがって、疾患を処置するためには、例えば、炎症性疾患の処置のためには免疫細胞、そしてウイルス性疾患の処置のためにはウイルス感染細胞のような疾患に関連した細胞上に発現されるところの細胞表面プロテアーゼが同定される。本明細書に説明されるように、結合体は選択されたプロテアーゼにより切断されるようにデザインされる。
【００６９】
本明細書において使用されるように、新生物形成(腫瘍形成)は異常な新たな成長を指し、かくして、良性もしくは悪性であり得る腫瘍と同じ意味である。過形成とは異なり、新生物形成性増殖は、元の刺激の不在下でも持続する。
本明細書において使用されるように、新生物形成性疾患は、腫瘍発生、成長、転移および進行を含む、がんを伴う任意の障害を指す。
【００７０】
本明細書において使用されるように、がんとは、任意のタイプの悪性腫瘍により引き起こされる疾患の一般的用語を指す。
本明細書において使用されるように、腫瘍に適用される悪性とは、成長制御および位置制御を消失した転移能を有する原発腫瘍を指す。
【００７１】
本明細書において使用されるように、エンドセリアーゼとは、膜貫通ドメインを有して、内皮細胞の表面上で発現されるかもしくは活性であり、そしてプロテアーゼドメイン、特に細胞外プロテアーゼドメインを含み、そして一般的にセリンプロテアーゼであるところのヒトタンパク質を含む哺乳動物のタンパク質を指す(米国特許申請一連番号第０９／７１７,４７３および国際ＰＣＴ申請第ＷＯ  ０１／３６６０４号、をまた参照)。かくして、例えば、エンドセリアーゼへの参照は、エンドセリアーゼ遺伝子ファミリーによりコード化される全ての分子、または任意の他の供給源より得られたか、もしくは合成により作成されたか、または同一の活性を示す同等の分子を包含する。エンドセリアーゼ遺伝子ファミリーは、内皮細胞中で発現されるかもしくは活性である膜貫通プロテアーゼである。これらのプロテアーゼはセリンプロテアーゼを含む。これらは、これらの特徴を有し、そしてまたエンドセリアーゼ１および２に配列相同性を示す、プロテアーゼドメインを含有するところのタンパク質を含む。エンドセリン１および２は、例えば、約４０％もしくは４５％の同一性を示す。配列相同性とは、同等性を最大化するように整列させたときに、残基の少なくとも約２５％、４０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％もしくはそれより多い数値の、その長さに沿った配列同一性を意味する。
【００７２】
配列相同性はまた、核酸のコード化配列が本明細書において提供される核酸分子にもしくは同じタンパク質をコード化するが遺伝子コードの縮重のお蔭で配列が異なる核酸分子に、少なくとも中度、もしくはより密接に関連したタンパク質については高度の厳密度でハイブリダイズするか否かを測定することにより評価される。加えて、“エンドセリアーゼ”は表１に示すものを含むアミノ酸置換を持ち、得られたポリペプチドが、非変換ポリペプチドのタンパク質分解酵素活性の少なくとも１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％を保持するようなエンドセリアーゼを包含する。アミノ酸の適当な置換は当業者に公知であって、一般的には、得られた分子の生物活性を変えることなく行われることができる。記述のように、当業者は、一般的にポリペプチドの非必須領域の単一のアミノ酸の置換は、実質的に生物活性を変えないことを認識する(例えば、Watson et al. “遺伝子の分子生物学、第４版”、1987, The Bejacmin/Cummings Pub. Co., p.224、を参照)。また、エンドセリアーゼの触媒的に活性なフラグメントもしくは脱落した型は“エンドセリアーゼ”の定義の中に含まれる。
【００７３】
本明細書において使用されるように、エンドセリアーゼ１は、本明細書において参照される場合は常に、
配列番号２１に示すヌクレオチド配列によりコード化されるポリペプチド；
配列番号２１に示されるヌクレオチドの配列に低度の、中度の、もしくは高度の厳密度の条件下でハイブリダイズする、ヌクレオチドの配列によりコード化されるポリペプチド；
配列番号２２に示すアミノ酸の配列を含む、ポリペプチド；
配列番号２２に示すアミノ酸の配列と少なくとも約４０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む、ポリペプチド；ならびに／または
配列番号２２に示すポリペプチドを含有するタンパク質をコード化する核酸分子のスプライス変異体によりコード化されるポリペプチド：
の少なくとも一つもしくは全部もしくは任意の組合せを含む。
【００７４】
エンドセリアーゼ１は、任意の動物、特に哺乳動物由来であり得て、そしてヒト、げっ歯類、鳥類、反芻動物および他の動物を含むが、それらに限定されない。完全長のチモーゲンもしくは２本鎖の活性化型、または２本鎖活性化型であり得る、プロテアーゼドメインを含むその任意のドメイン、または単鎖型が意図される。
【００７５】
本明細書において使用されるように、エンドセリアーゼ２は、本明細書において参照される場合は常に、
配列番号２３もしくは２５に示すヌクレオチド配列によりコード化されるポリペプチド；
配列番号２３もしくは２５に示されるヌクレオチドの配列に低度の、中度の、もしくは高度の厳密度の条件下でハイブリダイズする、ヌクレオチドの配列によりコード化されるポリペプチド；
配列番号２４もしくは２６に示すアミノ酸の配列を含む、ポリペプチド；  
配列番号２４もしくは２６に示すアミノ酸の配列と少なくとも約４０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む、ポリペプチド；ならびに／または
配列番号２３もしくは２５に示す核酸のスプライス変異体によりコード化されるポリペプチド：
の少なくとも一つもしくは全部もしくは任意の組合せを含む。
【００７６】
エンドセリアーゼ２は、任意の動物、特に哺乳動物由来であり得て、そしてヒト、げっ歯類、鳥類、反芻動物および他の動物を含むが、それらに限定されない。完全長のチモーゲンもしくは２本鎖の活性化型、または２本鎖活性化型であり得る、プロテアーゼドメインを含むその任意のドメイン、または単鎖型が意図される。
【００７７】
本明細書において使用されるように、エンドセリアーゼのプロテアーゼドメインとは、プロテアーゼ活性を示す細胞外部分である、エンドセリアーゼのポリペプチド部分を指す。プロテアーゼドメインは、プロテアーゼ活性に必要とされる少なくとも最小限の数の、一般的には５０もしくは１００より多い、アミノ酸を含むところのポリペプチドである。プロテアーゼ活性は、ポリペプチドをプロテアーゼとして作用するその活性について試験することによるように、経験的に評価されることができる。実施例に説明するようなアッセイは、試験化合物の代わりに既知のエンドセリアーゼが使用されることを除いて、プロテアーゼ活性を評価するために使用されることができる。さらに、プロテアーゼ、特にセリンプロテアーゼは、特色的な構造および配列もしくはモチーフを有しているので、プロテアーゼドメインは、そのような構造および配列もしくはモチーフにより容易に同定される。
【００７８】
本明細書において使用されるように、エンドセリアーゼのプロテアーゼドメインの一部とは、エンドセリアーゼ内に局在するかもしくはエンドセリアーゼの細胞外ドメインであって、セリンプロテアーゼ活性を示すところのエンドセリアーゼのプロテアーゼドメインの部分を指す。したがって、それは、標準アッセイにより評価されるようにタンパク質分解酵素活性を示す細胞外ドメインの少なくとも最小限の部分である。エンドセリアーゼの例示的プロテアーゼドメインを配列番号２２に、そして配列番号２４および２６のアミノ酸３２１〜６８８および３２１〜５６２としてそれぞれ示す。プロテアーゼ活性を保持する、そのさらに小さな部分が意図される。プロテアーゼドメインは、表面ループ中の挿入および欠失を含んでサイズおよび構成を異にする。そのようなドメインは、活性部位三つ組、主要特異性ポケット、オキシアニオンホールおよび／もしくはプロテアーゼのセリンプロテアーゼドメインの他の構造上の特徴のような、少なくとも一つの構造上の特徴を含む、保存された構造を示す。かくして、本明細書における目的のためには、プロテアーゼドメインは、本明細書において定義するように、エンドセリアーゼの一部であるが、構造上の特徴および類似性もしくは相同性の配列の保持において、キモトリプシンもしくはトリプシンのプロテアーゼドメインと相同である。
【００７９】
本明細書において使用されるように、相同性とは、約２５％、４０％、６０％、８０％、９０％、９５％、９８％もしくはより大きな配列同一性を意味する。配列同一性とは、標準的アライメントアルゴリズムプログラムにより、各供給業者により確立されたデフォルトのギャップペナルティーを用いて測定される保存されたアミノ酸の数を意味する。また、相同性は、少なくとも低い厳密度条件下でハイブリダイズして、ドメインをコード化する、いずれのものを含むところの保存された核酸配列によって評価されることもできる。同様に、核酸配列アライメントプログラムは市販されている(DNAStar“MegAlign”プログラム (Madison, WI) およびウイスコンシン大学遺伝学コンピューターグループ(ＵＷＧ)“Gap”プログラム(Madison, WI))。実質的に相同な核酸分子は典型的には、中度もしくは高度の厳密度で興味のある核酸の全長に沿って全てハイブリダイズするであろう。また、ハイブリダイズする核酸分子中のコドンの代わりに縮重したコドンを含有する核酸分子が意図される。
【００８０】
本明細書において使用されるように、ポリペプチドが本質的にプロテアーゼドメインより成るとの記述は、ポリペプチドのエンドセリアーゼ部分のみがプロテアーゼドメインもしくはその触媒的に活性な部分であることを意味する。ポリペプチドは任意にさらに別な非エンドセリアーゼ由来のアミノ酸配列を含むことができる。
本明細書において使用されるように、ドメインとは、分子の他の部分と構造的におよび／もしくは機能的に別個である分子、例えば、タンパク質または核酸、の一部分を指す。
【００８１】
本明細書において使用されるように、プロテアーゼの活性型とは、タンパク質もしくはペプチドの加水分解を触媒する酵素を指す。プロテアーゼへの参照は活性型およびチモーゲンもしくは他のさらに活性の低い型を含む。
本明細書において使用されるように、核酸としては、ペプチド核酸(ＰＮＡ)およびその混合体を含む、ＤＮＡ、ＲＮＡならびにそのアナログが挙げられる。核酸は単鎖もしくは２本鎖であり得る。プローブもしくはプライマーに指すときには、蛍光もしくは放射能標識のような検出可能な標識で任意に標識された単鎖分子が意図される。そのような分子は典型的には、それらの標的がライブラリーをプロービングもしくはプライミングのために統計的にユニークであるか、もしくは低いコピー数(典型的には、５個未満、一般的には３個未満)を持つような長さを持つ。一般的に、プローブまたはプライマーは、興味のある遺伝子と相補的なもしくは同一の少なくとも１４、１６または３０個の連続した配列を含有する。プローブおよびプライマーは、１０、２０、３０、５０、１００もしくはそれ以上の核酸長であり得る。
【００８２】
本明細書において使用されるように、エンドセリアーゼのフラグメントもしくは部分をコード化する核酸とは、エンドセリアーゼタンパク質の記述されたフラグメントもしくは一部のみをコード化して、エンドセリアーゼの他の連続した部分を連続配列としてコード化しない核酸を意味する。
【００８３】
本明細書において使用されるように、異種の核酸は、もしそれがＤＮＡならばＲＮＡをコード化し、または、、もしそれがＲＮＡならば、それが発現される細胞により一般にインビボで通常生産されないか、または転写、翻訳もしくは他の制御可能な生化学的過程に影響を及ぼすことによりＤＮＡのような内在性核酸の発現の変化を仲介するか、またはそのようなメディエーターをコード化するかもしくはその正常の座位とは異なる座位に局在するところのタンパク質を、コード化する核酸である。異種の核酸は一般的に、それが導入される細胞にとって内在性でないが、他の細胞から得られたかもしくは合成的に作成されたものである。一般的に、必ずしも必要ではないが、そのような核酸は、それが現在発現されている細胞によっては通常は生産されないＲＮＡもしくはタンパク質をコード化する。
【００８４】
ＤＮＡのような異種の核酸はまた、ＤＮＡのような外来性核酸とも呼称される。発現している細胞にとって異種のもしくは外来性であると当業者が認識しもしくは考える、ＤＮＡのような任意の核酸は、本明細書においては異種の核酸により包含される；異種の核酸は、内在的にまた発現される外から添加した核酸を含む。異種の核酸の例としては、薬剤抵抗性を付与するタンパク質のような追跡可能なマーカータンパク質をコードする核酸、抗がん剤、酵素およびホルモンのような治療上有効な物質をコード化する核酸、ならびに抗体のような他のタイプのタンパク質、ＲＮＡ干渉(ＲＮＡｉ)もしくは他の２本鎖ＲＮＡ、ならびにアンチセンスＲＮＡのようなＲＮＡが、挙げられるが、それらに限定されない。異種の核酸によりコード化される抗体は、分泌させるかもしくはその中に異種の核酸が導入されているところの細胞の表面上に発現させることができる。
【００８５】
例えば、核酸は、結合体中の治療薬もしくは診断薬のような標的とされた薬剤であり得る。核酸は、機能喪失の作成により標的とされた遺伝子の発現を阻害するために使用するＲＮＡ干渉(ＲＮＡｉ)(例えば、Chuang et al. (2000) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 97:4985、を参照)のためのｄｓＲＮＡの使用を含む。哺乳動物、C. elegans、ショウジョウバエおよび植物、ならびにヒトを含む生物において遺伝子を沈黙させるためのＲＮＡｉの使用に関する方法は既知である(例えば、Fire et al. (1998) Nature 391:806-811 Fire (1999) Trends Genet. 15:358-363; Sharp (2001) Genes Dev. 15:485-490; Hammond, et al. (2001) Nature Rev. Genet.2:110-1119; Tuschl (2001) Chem. Biochem. 2:239-245; Hamilton et al. (1999) Science 286:950-952; Hammond et al. (2000) Nature 404:293-296; Zamore et al. (2000) Cell 101:25-33; Bernstein et al. (2001) Nature 409: 363-366; Elbashir et al. (2001) Genes Dev. 15:188-200; Elbashir et al. (2001) Nature 411:494-498; 国際ＰＣＴ出願第ＷＯ  ０１／２９０５８号; 国際ＰＣＴ出願第ＷＯ  ９９／３２６１９号、を参照)。適切な配列を選択することにより、ｄｓＲＮＡの発現は標的とされた遺伝子産物をコード化する内在性ｍＲＮＡの蓄積を妨害することができる。少なくとも約２１個のヌクレオチドを含み、標的とされた遺伝子産物をコード化する核酸に対して選択的である(即ち、その標的がユニークである)ところの領域が、ＲＮＡｉを作成するために使用される。
【００８６】
本明細書において使用されるように、遺伝子治療は、そのような治療が求められている障害もしくは異常を持つ哺乳動物、特にヒトの特定細胞、標的細胞の中へのＤＮＡのような異種の核酸の導入を伴う。核酸分子は、細胞表面タンパク質の切断部位を介して結合された結合体の中に含まれる。ＤＮＡのような核酸を、ＤＮＡのような異種の核酸が発現されて、それによりコード化される治療用産物が生産されるような様式で、選択された標的細胞中に導入する。これに代えて、ＤＮＡのような異種の核酸は、何らかの様式により、治療用産物をコード化するＤＮＡの発現を仲介することができるか、またはそれは、治療用産物の発現を何らかの様式で直接もしくは間接的に仲介するペプチドまたはＲＮＡのような生産物をコード化することができる。
【００８７】
また、遺伝子治療を使用して、欠陥遺伝子に置き換わるかまたはそれが導入される哺乳動物もしくは細胞により生産される遺伝子産物を補充する、遺伝子産物をコード化する核酸を送達することができる。導入された核酸は、哺乳動物宿主において通常は生産されないかまたは治療上有効な量もしくは治療上有用な時間に生産されないところのその成長因子阻害剤のような治療用化合物、または腫瘍壊死因子もしくはそれに対する受容体のようなその阻害剤をコード化することができる。治療用産物をコード化する、ＤＮＡのような、異種の核酸は、生産物もしくはその発現を促進するもしくはそうでなければ変更するために、罹患した宿主の細胞の中に導入する前に修飾されることができる。遺伝子治療はまた、ｄｓＲＮＡまたはアンチセンスもしくは他の核酸分子のような遺伝子発現の阻害剤またはリプレッサーもしくは他のモジュレーターの送達を伴う。本明細書における結合体を使用して、遺伝子治療のために核酸のような生産物を送達することができる。
【００８８】
本明細書において使用されるように、遺伝子治療のための治療上有効な生産物は、宿主への核酸の導入で、遺伝性もしくは獲得性疾患の症状、発現を改善するかまたは除去させるかまたは疾患を治癒するところの生産物が発現される、異種の核酸、典型的には、ＤＮＡによりコード化される生産物である。また、ＲＮＡｉおよびアンチセンスのような生物学的に活性な核酸分子が含まれる。
【００８９】
本明細書において使用されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドに関してＲＮＡの少なくとも一部分に相補的な配列とは、一般的に中度もしくは高度の厳密度の条件下でＲＮＡとハイブリダイズし、安定な２重らせんを形成することができるために十分な相補性を有する配列を意味する；２重鎖ＳＰアンチセンス核酸の場合では、かくして、２重らせんＤＮＡ(即ちｄｓＲＮＡ)の単鎖を試験することができるか、もしくは３重らせん形成をアッセイすることができる。ハイブリダイズする能力は、アンチセンス核酸の相補性の程度および長さに依存する。一般的に、ハイブリダイズする核酸が長いほど、より多くの塩基がＳＰをコード化するＲＮＡとミスマッチして、それは安定な２重らせん(もしくは場合によっては３重らせん)を含有ししかもなお形成することができる。当業者は、ハイブリッドした複合体の融点を測定するための標準的な手順の使用により、ミスマッチの耐容度を確認することができる。
【００９０】
アミノ酸の置換は、任意のＳＰもしくはそのプロテアーゼ中に行うかもしくは起こさせることができる。アミノ酸の置換は、タンパク質分解活性を除去させないところの、表１に示すもののような保存的置換を含む。本明細書において説明するように、切断部位および他のそのような部位の除去のような、タンパク質の性質を変える置換がまた、意図される；そのような置換は一般的に非保存的であるが、当業者により容易に達成されることができる。
【００９１】
アミノ酸の適当な保存的置換は当業者に公知であって、得られる分子の、例えば、酵素活性のような生物活性を一般的に変えることなく行うことができる。また、ＳＰの触媒的に活性なフラグメント、特に単鎖プロテアーゼ部分、が定義内に含まれる。
保存的アミノ酸置換は、例えば、以下の表１に示すものにしたがって行われる。
【００９２】
【表１】
2005518332.tif 000002
【００９３】
他の置換がまた、許容されて、経験的にもしくは既知の保存的置換にしたがって決定されることができる。例えば、配列内の一つもしくは以上のアミノ酸残基を機能的に同等物として働く類似の極性のもう一つのアミノ酸により置換することができて、サイレントな変化をもたらす。配列内のアミノ酸に対する置換体を、アミノ酸が所属するクラスの他のメンバーから選択することができる。例えば、非極性(疎水性)アミノ酸としては、アラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファンおよびメチオニンが挙げられる。極性の中性アミノ酸としては、グリシン、セリン、トレオニン、システィン、チロシン、アスパラギン、およびグルタミンが挙げられる。正に荷電した(塩基性)アミノ酸としては、アルギニン、リジンおよびヒスチジンが挙げられる。負に荷電した(酸性)アミノ酸としては、アスパラギン酸およびグルタミン酸が挙げられる。
【００９４】
本明細書において使用されるように、本明細書において現れる種々のアミノ酸配列中に存在するアミノ酸は、周知の３文字もしくは１文字省略記号にしたがって特定される。種々のＤＮＡフラグメント中に存在するヌクレオチドは、当分野において日常的に使用される標準的な１文字名称を用いて呼称される。他の省略記号としては以下のものがが挙げられる：即ちホモアルギニンについてはｈＲもしくはｈＡｒｇ；ホモチロシンについてはｈＹもしくはｈＴｙｒ；シクロヘキシルアラニンについてはＣｈａ；４−アミノメチルフェニルアラニンについてはＡｍｆ；２−(４,６−ジメチルピリミジニル)リジンについてはＤＰＬ；Ｎ’−(２−イミダゾリル)リジンについては(イミダゾリル)Ｋ；Ｏ−ジメチルホスホチロシンについてはＭｅ２ＯＰ３−Ｙ；Ｏ−メチルチロシンについてはＯ−Ｍｅ−Ｙ；テトラヒドロ３−イソキノリンカルボン酸についてはＭｅＬ；１,３−ジアミノプロパンについてはＤＡＰ；トリフルオロ酢酸についてはＴＦＡ；酢酸についてはＡＡである。
【００９５】
本明細書において使用されるように、スプライス変異体とは、２つ以上のタイプのｍＲＮＡをもたらす、ゲノムＤＮＡの一次転写物の差別的プロセッシングにより生産される変異体を指す。
本明細書において使用されるように、本明細書において開示されるヌクレオチド配列に基づくプローブまたはプライマーは、少なくとも１０、１４個、一般的に少なくとも１６もしくは３０個または１００個の連続するヌクレオチド配列を含む。
【００９６】
本明細書において使用されるように、アンチセンスポリヌクレオチドとは、ｍＲＮＡもしくは２重鎖ＤＮＡのセンス鎖に相補的なヌクレオチド塩基の合成配列を指す。適切な条件下におけるセンスおよびアンチセンスポリヌクレオチドの混合は、２つの分子の結合、即ち、ハイブリダイゼーションへ導く。これらのポリヌクレオチドがｍＲＮＡに結合(とハイブリダイズ)するときには、タンパク質合成(翻訳)の阻害が起こる。これらのポリヌクレオチドが２重鎖ＤＮＡに結合するときには、ＲＮＡ合成(転写)の阻害が起こる。翻訳および／もしくは転写の得られた阻害は、センス鎖によりコード化されているタンパク質の合成の阻害に導く。アンチセンス核酸分子は典型的には、標的核酸に特異的に結合するのに十分な数のヌクレオチド、一般的に少なくとも５個の連続したヌクレオチド、しばしば少なくとも１４もしくは１６個または３０個の連続したヌクレオチド、または興味のある遺伝子をコード化する核酸分子、例えば、ＳＰの短鎖プロテアーゼドメインをコード化する核酸、のコード化領域に相補的な修飾ヌクレオチドを含有する。
【００９７】
本明細書において使用されるように、アレイとは、三つもしくはそれ以上のメンバーを含有する、抗体のような要素の集合を指す。アドレス可能なアレイは、典型的には固相支持体上の位置により、アレイのメンバーが同定可能であるものである。したがって一般的に、アレイのメンバーは、固相表面上の別々の同定可能な座位に固定化される。
【００９８】
本明細書において使用されるように、抗体とは、天然もしくは部分的にもしくは完全に合成的に作成されたものであるかを問わず、イムノグロブリンを指し、抗体の特異的結合能を保持するその任意の誘導体も含む。したがって抗体は、イムノグロブリンの結合ドメインと相同なもしくは実質的に相同な結合ドメインを有する任意のタンパク質を含む。抗体としては、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥを含む任意のイムノグロブリンクラスのメンバーが挙げられる。
【００９９】
本明細書において使用されるように、抗体フラグメントとは、完全長の抗体の特異的結合能の少なくとも一部を保持して、完全長より短い、抗体の任意の誘導体を指す。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ(ａｂ)２、単鎖Ｆｖ(ｓｃＦＶ)、ＦＶ、ｄｓＦＶディアボディーおよびＦｄフラグメントが挙げられるが、それらに限定されない。フラグメントは、ジスルフィド架橋のようなに、互いに結合した複数の鎖を含むことができる。抗体フラグメントは一般的に、少なくとも約５０個のアミノ酸および典型的には、少なくとも２００個のアミノ酸を含有する。
本明細書において使用されるように、Ｆｖ抗体フラグメントは、非共有結合的相互作用で結合した一つの可変重鎖ドメイン(ＶＨ)および一つの可変軽鎖ドメインより成る。
本明細書において使用されるように、ｄｓＦＶとは、ＶＨ−ＶＬ対を安定化させる、工学的に操作された分子間ジスルフィド結合を持つＦｖを指す。
【０１００】
本明細書において使用されるように、Ｆ(ａｂ)２フラグメントは、イムノグロブリンをペプシンによりｐＨ４．０〜４．５で消化した結果得られる抗体フラグメントである；それを組換え的に発現させて、同等のフラグメントを生産することができる。
本明細書において使用されるように、Ｆａｂフラグメントは、イムノグロブリンをパパインで消化した結果得られる抗体フラグメントである；それらを組換え的に発現させて、同等のフラグメントを生産することができる。
【０１０１】
本明細書において使用されるように、ｓｃＦＶとは、ポリペプチドリンカーにより任意の順序に連結された可変軽鎖(ＶＬ)および可変重鎖(ＶＨ)を含有する、抗体フラグメントを指す。リンカーは、２個の可変ドメインが実質的な妨害なしに架橋されるような長さを持つ。例示的リンカーとしては、例えば、可溶性を増すために、全体に亘って幾らかのＧｌｕもしくはＬｙｓ残基を分散して含むことができる(Ｇｌｙ−Ｓｅｒ)ｎ残基が挙げられるが、それらに限定されない。
【０１０２】
本明細書において使用されるように、ヒト化抗体とは、ヒトへの投与が免疫応答を惹起しないようにアミノ酸のヒト配列を含むように修飾される、抗体を指す。そのような抗体の生産方法は既知である。例えば、そのような抗体を生産するためには、モノクローナル抗体を発現するハイブリドーマまたはＥ．ｃｏｌｉもしくはＣＨＯ細胞のような他の原核または真核細胞中でコード化する核酸を組換えＤＮＡテクニックにより変えて、その中で非可変領域のアミノ酸組成がヒト抗体に基づくところの抗体を発現させる。そのような非可変領域を同定するためのコンピュータープログラムがデザインされている。
本明細書において使用されるように、ディアボディーは２量体のｓｃＦＶである；ディアボディーは典型的には、ｓｃＦｖより短いペプチドリンカーを有して、それらは一般的に２量体化する。
【０１０３】
本明細書において使用されるように、組換えＤＮＡ方法を用いる組換え手段による生産とは、クローン化ＤＮＡによりコード化されるタンパク質を発現するための周知の分子生物学の方法の使用を意味する。
本明細書において使用されるように、用語の評価は、試料中に存在するＳＰもしくはそのドメインの活性の絶対値を得るという意味において、または活性レベルを示し得る指標、比率、パーセンテージ、視覚的もしくは他の値を得るという意味において、定量的なおよび定性的な測定を含むこととする。評価は直接的でもしくは間接的であり得て、実際に検出される化学種は、勿論タンパク質分解産物そのものである必要はないが、例えば、その誘導体もしくは何らかのさらなる物質であり得る。
【０１０４】
本明細書において使用されるように、生物活性とは、化合物のインビボ活性、即ち、化合物、組成物もしくは他の混合物のインビボ投与の結果として得られる生理学的応答を指す。かくして、生物活性は、そのような化合物、組成物および混合物の治療効果および薬学的活性を包含する。生物活性は、そのような活性を試験しもしくは使用するようにデザインされたインビトロシステムにおいて観察されることができる。
本明細書において使用されるように、組合せとは二つの間のもしくはそれ以上の品目の間の任意の集合を指す。
【０１０５】
本明細書において使用されるように、流動体とは、流れることのできる任意の組成物を指す。かくして、流動体は、半固体、ペースト、溶液、水性混合物、ゲル、ローション、クリームの形状である組成物、および他のそのような組成物を包含する。
本明細書において使用されるように、特定の疾患を処置するための化合物の有効量は、疾患に関連する症状を改善させるかもしくは何らかの様式で軽減するのに十分な量である。そのような量を、有効であるならば、単回投与量として投与するかもしくはレジメンにしたがって投与することができる。その量は疾患を治癒し得るが、典型的には、疾患の症状を改善させるために投与される。疾病の所望の改善を達成するために、反復投与が必要とされることもあり得る。
【０１０６】
本明細書において使用されるように、同等とは、核酸の２つの配列を指すときには、問題の２つの配列が同じアミノ酸配列もしくは同等なタンパク質をコード化することを意味する。２つのタンパク質もしくはペプチドを指す際に同等が用いられるときには、それは２つのタンパク質もしくはペプチドが、タンパク質もしくはペプチドの活性もしくは機能を実質的に変化させない(即ち活性の少なくとも１％を保持している)アミノ酸置換(例えば、上述の表１、を参照)を持つ実質的に同じ配列を有することを意味する。性質について同等を指すときには、性質は同程度に存在する必要はない(例えば、２つのペプチドは同じタイプの酵素活性の異なる速度を示し得る)が、活性は一般的には実質的に同じである。相補性は、２つのヌクレオチド配列を指すときには、２つのヌクレオチドの配列が、２つの相対するヌクレオチド間に典型的には、２５％未満、しばしば１５％未満、もしくはさらに低く５％または全く無いミスマッチを持って、ハイブリダイズする能力があることを意味する。一般的には、２つの分子は高い厳密度の条件下でハイブリダイズする。
【０１０７】
本明細書において使用されるように、好ましくないおよび／もしくは制御されない血管形成と関連する疾患または障害を処置するかまたは予防するための方法とは、好ましくないおよび／もしくは制御されない血管形成と関連する疾患または障害が、軽減され、減少され、改善され、予防されるかまたは寛解の状態に置かれるかもしくは維持されることを意味する。それはまた、病的血管形成の特徴が処置によって除去され、減少され、予防されることを意味する。病的血管形成の特徴の非限定的な例としては、内皮細胞の基底膜および近位細胞外マトリックスの制御されない分解、新たな機能性毛細管の生成への内皮細胞の移動、分裂および組織化、ならびにそのような機能性毛細管の存続が、挙げられる。
【０１０８】
本明細書において使用されるように、機能的に結合したもしくは機能し得るように関連したとは、プロモーター、エンハンサー、転写および翻訳停止部位、および他のシグナル配列のようなヌクレオチドの調節ならびにエフェクター配列とのＤＮＡの機能的関係を指す。例えば、プロモーターへのＤＮＡの機能的結合とは、そのようなＤＮＡの転写がＤＮＡを特異的に認識し、結合し、転写するところのＲＮＡポリメラーゼによりプロモーターから開始されるように、ＤＮＡおよびプロモーターとの間の物理的なならびに機能的な関係を指す。発現および／もしくはインビトロ転写を至適化するために、クローンの５’非翻訳部分を除去し、付加しもしくは変化させて、転写もしくは翻訳のレベルのどちらかで発現を妨害しまたは減少させ得る、余分な潜在的に不適切なさらに別な翻訳イニシエーション(即ち開始)コドンまたは他の配列を除去する必要があり得る。これに代えて、コンセンサスリボゾーム結合部位(例えば、Kozak J. Biol. Chem. 266:19867-19870 (1991)、を参照)を開始コドンの５’側直近に挿入して、発現を促進することができる。そのような修飾の望ましさ(もしくは必要性)は、経験的に決定されることができる。
【０１０９】
本明細書において使用されるように、プロモーター領域もしくはプロモーター要素とは、それが機能し得るように結合されたＤＮＡもしくはＲＮＡの転写を制御するＤＮＡまたはＲＮＡのセグメントを指す。プロモーター領域は、ＲＮＡポリメラーゼの認識、結合および転写開始に十分である、特定の配列を含む。プロモーター領域のこの部分をプロモーターと呼称する。加えて、プロモーター領域は、ＲＮＡポリメラーゼのこの認識、結合および転写開始活性を調整する配列を含む。これらの配列は、シスに作用するかもしくはトランスに作用する因子に応答することができる。プロモーターは、調節の性質に依存して、構成的もしくは調節性であり得る。原核生物での使用のために意図される例示的なプロモーターとしては、バクテリオファージのＴ７およびＴ３プロモーターが挙げられる。
【０１１０】
本明細書において使用されるように、試料とは、アナライトのアッセイが望まれているアナライトを含有し得るいずれかのものを指す。試料は、生物学的流動体もしくは生物学的組織のような生物学的試料であり得る。生物学的流動体の例としては、尿、血液、血漿、血清、唾液、精液、糞、痰、脳脊髄液、涙、粘液、羊水等が挙げられる。生物学的組織は、通常は、結合、上皮、筋肉および神経の組織を含む、ヒト、動物、植物、細菌、真菌、もしくはウイルスの構造の構造物質の一つを形成する、それらの細胞間物質と一緒になった特定の種類の細胞の凝集物である。生物学的組織の例としてはまた、器官、腫瘍、リンパ節、動脈および個別の細胞が挙げられる。
【０１１１】
本明細書において使用されるように、特定の厳密度の条件下でハイブリダイズすることは、２個の単鎖ＤＮＡフラグメント間に形成したハイブリッドの安定性を記述するために使用されて、そして洗浄段階よりも低いかもしくは同等な厳密度の条件下におけるアニーリングに続いてそのようなハイブリッドが洗浄される際のイオン強度および温度の条件を指す。典型的には、高度、中度および低度の厳密度は以下のような条件もしくはそれと同等の条件を包含する。
１)高度の厳密度：０.１×ＳＳＰＥもしくはＳＳＣ、０.１％ＳＤＳ、６５℃
２)中度の厳密度：０.２×ＳＳＰＥもしくはＳＳＣ、０.１％ＳＤＳ、５０℃
３)低度の厳密度：１.０×ＳＳＰＥもしくはＳＳＣ、０.１％ＳＤＳ、５０℃
【０１１２】
同等な条件とは、得られたハイブリッド中に実質的に同じパーセンテージのミスマッチを選択する、条件を指す。ホルムアミド、FicollおよびDenhardt溶液のような成分の添加は、ハイブリダイゼーションを実施するべき温度のようなパラメーターおよび反応速度に影響を与える。かくして、２０％ホルムアミド中で５×ＳＳＣ中における４２℃でのハイブリダイゼーションは、上に記載した低度の厳密度の条件下のハイブリダイゼーションの条件と実質的に同じである。ＳＳＰＥ、ＳＳＣおよびDenhardt溶液のレシピおよび脱イオンホルムアミドの調製は、例えば、Sambrook et al. (1989)「分子クローニング：実験室マニュアル」、Cold Spring Harbor Laboratory Press、第８章、を参照; Sambrook et al., vol. 3, p. B.13、を参照、また一般的に使用される実験室用溶液を記載している多数のカタログ、を参照)。同等の厳密度はさらに別な緩衝液、塩および温度を用いることによって達成できることが理解される。
【０１１３】
実質的と同一もしくは類似しているという用語は、当業者に理解されるように文脈により異なり、そして一般的には、少なくとも４０、６０、８０、９０、９５もしくは９８％を意味する。
本明細書において使用されるように、生産物と実質的に同一であるとは、実質的に同一な生産物が、生産物の代わりに使うことができるように、興味のある性質が十分に未変化であるように十分に類似していることを意味する。
本明細書において使用されるように、標的細胞とは、細胞表面プロテアーゼを発現する細胞を指す。
【０１１４】
本明細書において使用されるように、本明細書において提供される化合物を含む、試験物質とは、細胞表面タンパク質もしくは細胞表面関連タンパク質、またはそのドメインに対するその影響もしくは相互作用が本明細書における方法で測定される、化学的に定義された化合物(例えば、有機分子、無機分子、有機／無機分子、タンパク質、ペプチド、核酸、オリゴヌクレオチド、脂質、多糖類、糖類、もしくは糖タンパク質のようなこれらの分子の間でのハイブリッド等)または化合物の混合物(例えば、試験化合物のライブラリー、天然抽出物、もしくは培養上清等)を指す。
【０１１５】
本明細書において使用されるように、治療薬、治療レジメン、放射線防護剤および化学療法剤とは、当業者に周知である、ワクチンを含む従来の薬物および薬物療法を意味する。放射線治療薬は当分野において周知である。
【０１１６】
本明細書において使用されるように、ベクター(もしくはプラスミド)とは、異種のＤＮＡをその発現もしくは複製のために細胞内に導入するために使用される個別的な要素を指す。ベクターは典型的には、エピゾームとして留まるが、ゲノムの染色体内に遺伝子もしくはその一部を組み込ませるようにデザインされることができる。また、酵母の人工染色体および哺乳動物の人工染色体のような人工染色体である、ベクターが意図される。そのようなビークルの選択および使用は当業者に周知である。発現ベクターは、そのようなＤＮＡフラグメントの発現を効果的にする能力のある、プロモーター領域のような調節配列に、機能し得るように結合された、ＤＮＡを発現する能力のあるベクターを含む。かくして、発現ベクターとは、適切な宿主細胞内への導入でクローン化ＤＮＡの発現をもたらすところのプラスミド、ファージ、組換えウイルスもしくは他のベクターのような組換えＤＮＡまたはＲＮＡ構築物を指す。適切な発現ベクターは当業者に周知であり、真核細胞および／もしくは原核細胞において複製可能なもの、ならびにエピゾームとして留まるもの、または宿主細胞のゲノム内に組み込まれるものを含む。
【０１１７】
本明細書において使用されるように、化学的に安定であるとは、化合物が医薬的な使用のために処方されるように十分安定であることを意味する。そのような化学的安定性は当業者に周知であって、よく知られた日常的方法により測定されることができる。与えられた化合物が医薬的な使用のために処方されるように十分安定であるか否かは、製剤のタイプおよび所望の投与経路、処置すべき疾患、および医薬製剤の調製方法を含むが、それらに限定されない、多数の要因に依存する。
【０１１８】
本明細書において使用されるように、アミノ酸の側鎖の“機能的同等物”とは、天然に存在する側鎖と実質的に同じ方式で機能して、実質的に同一の結果を達成する基もしくは部分(例えば、細胞表面プロテアーゼの基質)である。例えば、アルギニンの側鎖の機能的同等物としては、ホモアルギニン、グアニジノアミノプロピル、グアニジノアミノエチル、(Ｍｅ)２−アルギニン側鎖、(Ｅｔ)２−アルギニン側鎖、(４−アミノメチル)フェニルメチル、４−アミジノフェニルメチル、４−グアニジノフェニルメチル、または
【化１】
2005518332.tif 000003
[式中、Ｘが０もしくは１である]のように配座的に制約されたアルギニン側鎖(例えば、Webb et al. (1991) J. Org. Chem. 56:3009、を参照)、または
【化２】
2005518332.tif 000004
[式中、ｄが０〜５、もしくは１〜３の整数であり；そしてＷがＮもしくはＣＨであるかまたは上記グループの１もしくは２置換Ｎ−アルキル誘導体[そこではアルキルが、特定の実施態様では、メチルのような低級アルキルである]である]ように配座的に制約されたアルギニン側鎖が挙げられるがそれらに限定されない。
【０１１９】
本明細書において使用されるように、化合物の薬学的に許容される誘導体としては、その塩、エステル、エノールエーテル、エノールエステル、酸、塩基、溶媒和物、水和物もしくはプロドラッグが挙げられる。そのような誘導体は、そのような誘導体化のための公知の方法を用いて当業者によって容易に作成され得る。作成された化合物は実質的な毒性作用なしに動物もしくはヒトに投与することができて、薬学的に活性であるかプロドラッグであるかのどちらかである。薬学的に許容される塩としては、Ｎ,Ｎ'−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、アンモニア、ジエチルエタノールアミンおよび他のヒドロキシアルキルアミン、エチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、プロカイン、Ｎ−ベンジルフェネチルアミン、１−パラ−クロロベンジル−２−ピロリジン−１'−イルメチル−ベンズイミダゾール、ジエチルアミンおよび他のアルキルアミン、ピペラジンならびにトリス(ヒドロキシメチル)アミノメタンのようであるが、それらに限定されない、アミン塩；リチウム、カリウムおよびナトリウムのようであるが、それらに限定されない、アルカリ金属塩；バリウム、カルシウムおよびマグネシウムのようであるが、それらに限定されない、アルカリ土金属塩；亜鉛のようであるが、それに限定されない、遷移金属塩；ならびにリン酸水素ナトリウムおよびリン酸二ナトリウムのようであるが、それらに限定されない、他の金属塩が挙げられるが、それらに限定されない；そしてまた、塩酸塩および硫酸塩のようであるが、それらに限定されない、鉱酸の塩；ならびに酢酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、アスコルビン酸塩、琥珀酸塩、酪酸塩、吉草酸塩およびフマル酸塩のようであるが、それらに限定されない、有機酸の塩が挙げられるが、それらに限定されない。薬学的に許容されるエステルとしては、カルボン酸、リン酸、ホスフィン酸、スルホン酸、スルフィン酸および、ボロン酸を含むが、それらに限定されない、酸性基のアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキル、シクロアルキルおよび複素環式のエステルが挙げられるが、それらに限定されない。薬学的に許容されるエノールエステルとしては、式Ｃ＝Ｃ(ＯＲ)[式中、Ｒが水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキル、シクロアルキルもしくは複素環式である]の誘導体が挙げられるが、それらに限定されない。薬学的に許容されるエノールエステルとしては、式Ｃ＝Ｃ(ＯＣ(Ｏ)Ｒ)[式中、Ｒが水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキル、シクロアルキルもしくは複素環式である]の誘導体が挙げられるが、それらに限定されない。薬学的に許容される溶媒和物および水和物としては、一つもしくはそれ以上の溶媒または水分子、一般的に１〜約１００個、典型的には、１〜約２、３もしくは４個のような、１〜約１０個の溶媒または水分子との化合物の複合体である。
【０１２０】
本明細書において使用されるように、処置とは、異常、障害もしくは疾患の一つもしくはそれ以上の症状が軽減されるかまたはそうでなければ有益なように変化される任意の様式を意味する。処置はまた、がんの処置のための使用のような、本明細書における組成物の任意の薬学的使用を包含する。
【０１２１】
本明細書において使用されるように、特定の医薬組成物の投与による特定の障害の症状の軽減は、永続的もしくは一時的、持続的もしくは一過性であれ、組成物の投与に帰するかまたは関連することのできる、任意の緩和を指す。
【０１２２】
本明細書において使用されるように、プロドラッグは、インビボでの投与で化合物の生物学的に、薬学的に、もしくは治療的に活性な型に代謝されるかまたはそうでなければ変換される化合物である。プロドラッグを生産するためには、活性な化合物が代謝的な過程により再生されるように、薬学的に活性な化合物が修飾される。プロドラッグは、薬物の代謝安定性もしくは輸送特性を変化させるように、副作用もしくは毒性をマスクするように、薬剤の風味を改善するように、または薬物の他の特色もしくは性質を変更するようにデザインされることができる。インビボでの薬物動態学的過程および薬物代謝の知識のお蔭で、当業者は一旦薬学的に活性な化合物が知られれば、化合物のプロドラッグをデザインすることができる(例えば、Nogrady (1985)、「メディシナルケミストリー生化学的アプローチ」、Oxford University Press, New York, pages 388-392、を参照)。
【０１２３】
本明細書において提供される結合体はキラル中心を含有し得ることが理解されるべきである。そのようなキラル中心は、(Ｒ)もしくは(Ｓ)の立体配置のどちらかを持つか、またはその混合物であり得る。かくして、本明細書において提供される化合物は、鏡像異性的に純粋な、または立体異性的なもしくはジアステレオマー的な混合物であり得る。アミノ酸残基の場合には、そのような残基は、ＬもしくはＤ型のいずれかを持ち得る。天然に存在するアミノ酸残基の立体配置は一般的にＬである。特定しないときには、残基はＬ型である。本明細書において提供される化合物のキラル中心が、インビボでエピマー化を受け得ることは理解されるべきである。それ自体では、化合物のその(Ｒ)型での投与は、インビボでエピマー化を受ける化合物にとっては、その(Ｓ)型での化合物の投与と同等であることを当業者は認識するであろう。
【０１２４】
本明細書において提供される結合体は、それらが、標的とされた細胞もしくは組織でまたはその環境において活性型に最終的に変換される、不活性型の治療薬を含むために、プロドラッグである。標的とされたプロテアーゼへの曝露で、生物学的、薬学的もしくは治療学的に活性な型の化合物、または生物学的、薬学的もしくは治療学的に活性な型の化合物へとさらに代謝され得る誘導体のどちらかが放出される。
【０１２５】
本明細書において使用されるように、実質的に純粋とは、そのような純度の評価に当業者が使用する薄層クロマトグラフィー(ＴＬＣ)、ゲル電気泳動、高速液体クロマトグラフィー(ＨＰＬＣ)および質量分析法のような標準的な分析法による測定で容易に検出可能な不純物を含まないように見えるほど十分に均一であること、もしくはさらなる精製が物質の酵素的なおよび生物学的な活性のような物理的ならびに化学的性質を意図する目的に対して変化させないと思われるように十分純粋であること、を意味する。実質的に化学的に純粋な化合物を生産するための化合物の精製方法は、当業者に周知である。しかしながら、実質的に化学的に純粋な化合物は、立体異性体の混合物であり得る。そのような場合には、さらなる精製は化合物の比活性を増加させるであろう。
本明細書において使用されるように、ペプチド性基質は、ペプチドおよびペプチドミメティックのような分子およびペプチド結合代理体を含むペプチドを含む。
【０１２６】
本明細書において使用されるように、プロテアーゼ基質の特定のサブサイト：Ｐｎ・・・Ｐ３−Ｐ２−Ｐ１↓Ｐ１’−Ｐ２’−Ｐ３’・・・Ｐｎ’の参照には、従来の用語法(Schecter et al. (1967) Biochem. Biophys. Res. Commun. 27:157-162)が使用される。基質の被切断結合(即ち切断部位)は矢印で示される。その結合のＮ末端側の部位は、プライム記号を付さない位置として参照される。次いで、サブサイトは、被切断結合からのそれらの距離に基づいて数値が割り当てられる。被切断結合を形成するアミノ酸(もしくはアミノ酸代理体)には番号１が、隣接残基には番号２が、等々と被切断結合から数えて割り当てられる。それ故に、基質のそれぞれの特定のサブサイトは、数字およびプライムを付けるかもしくはつけない記号により一意的に特定される。
【０１２７】
本明細書において使用されるように、ペプチド結合の代理体は、−Ｃ(Ｏ)ＮＨ−と類似の立体的そして／もしくは電子的特性を所有する、２価の基である。ペプチド結合の代理体としては、アルケン同配体(−ＣＲ＝ＣＲ−)、特に式−ＣＨ＝ＣＨ−の(Ｅ)−アルケン同配体、ヒドロキシエチレン同配体(−ＣＨ(ＯＨ)ＣＨ２−)、エナミン同配体(−Ｃ(＝ＣＲＲ)ＮＨ−)、アミノアルコール同配体(−ＣＨ(ＯＨ)ＣＨ２ＮＨ−)、ジフルオロケトン同配体(−Ｃ(Ｏ)ＣＦ２−)、逆方向性化合物(−ＮＨＣ(Ｏ)−)、２価複素環式のもしくはヘテロアリール基、および
【化３】
2005518332.tif 000005
のようなシクロプロピル同配体が挙げられるが、それらに限定されない。
【０１２８】
本明細書において使用されるように、アルキル、アルケニルおよびアルキニル炭素鎖は、特定されないならば、１〜２０個、一般的に１〜１６個の炭素を含有して、直鎖もしくは枝分かれしている。２〜２０個の炭素のアルケニル炭素鎖は典型的には、１〜８個の二重結合を含有し、そして２〜１６個の炭素のアルケニル炭素鎖は典型的には、１〜５個の二重結合を含有する。２〜２０個の炭素のアルキニル炭素鎖は典型的には、１〜８個の三重結合を含有し、そして２〜１６個の炭素のアルキニル炭素鎖は一般的に１〜５個の三重結合を含有する。本明細書における例示的なアルキル、アルケニルおよびアルキニル基としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、イソブチル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｔｅｒｔ−ペンチル、およびイソヘキシルが挙げられるが、それらに限定されない。アルキル、アルケニルおよびアルキニル基は、別に規定のない限り、一つもしくはそれ以上の基、一般的に同一もしくは異なるアルキル基置換基で任意に置換されることができる。本明細書において使用されるように、低級アルキル、低級アルケニル、および低級アルキニルとは、約６個未満の炭素を有する炭素鎖を指す。本明細書において使用されるように、“アル(ケ)(キ)ニル”とは、少なくとも１個の二重結合および少なくとも１個の三重結合を含有するアルキル基を指す。
【０１２９】
本明細書において使用されるように、“シクロアルキル”とは、典型的には、例えば、３〜６個の炭素原子のような、３〜１０個の炭素原子の飽和の単環式もしくは多環式環システムを指す；シクロルケニルおよびシクロアルキニルとは、それぞれ少なくとも１個の二重結合および少なくとも１個の三重結合を含有する単環式もしくは多環式環システムを指す。シクロアルケニルおよびシクロアルキニル基は、例えば、３〜１０個の炭素原子を含有し、シクロアルケニル基は一般的に４〜７個の炭素原子を含有し、そしてシクロアルキニル基は例えば、８〜１０個の炭素原子を含有する。シクロアルキル、シクロアルケニルおよびシクロアルキニル基の環システムは、１個の環もしくは融合、架橋もしくはスピロ結合された様式で結合させ得る２個もしくはそれ以上の環より成り得て、そして任意に一つもしくはそれ以上のアルキル基置換基で置換し得る。“シクロアル(ケ)(キ)ニル”とは、少なくとも１個の二重結合および少なくとも１個の三重結合を含有するシクロアルキル基を指す。
【０１３０】
本明細書において使用されるように、“置換アルキル”、“置換アルケニル”、“置換アルキニル”、“置換シクロアルキル”、“置換シクロアルケニル”、および“置換シクロアルキニル”とは、アルキル、ハロ、ハロ低級アルキルのようなハロアルキル、擬似ハロ、アリール、アミノ、ジアルキルアミノ、ニトロ、シアノ、アジド、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、アルキルカルボニルアミノ、アルコキシカルボニルアミノ、アミノイミノ、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、アルキルオキシ、アルキルチオ、アリールチオ、アラルキルオキシ、アラルキルチオ、カルボキシ、アルキルカルボニル、アルコキシカルボニル、オキソおよびシクロアルキルから独立に選択される、それぞれ、１個もしくはそれ以上の置換基、特定の実施態様においては１〜３個の置換基で置換されたアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニルおよびシクロアルキニル基を指す。
【０１３１】
本明細書において使用されるように、“アリール”とは、６〜１９個の炭素原子を含有する環状の基を指す。アリール基としては、フルオレニル、置換フルオレニル、フェニル、置換フェニル、ナフチルおよび置換ナフチルのような基が挙げられるが、それらに限定されない。本明細書において使用されるように、“アリール”はまた、アリールオキシ、アリールチオ、アリールカルボニルおよびアリールアミノ基を含むが、それらに限定されない、アリール含有基を指す。
【０１３２】
本明細書において使用されるように、“ヘテロアリール”とは、環システムの中で１〜３個の原子のように、１個もしくはそれ以上がヘテロ原子である、即ち、炭素以外の元素、例えば、窒素、酸素および硫黄原子である、一般的に約５〜約１５員の単環式もしくは多環式芳香環システムを指す。ヘテロアリール基は、任意にベンゼン環と融合することができる。例示的なヘテロアリール基としては、例えば、フリル、イミダゾリル、ピロリジニル、ピリミジニル、テトラゾリル、チエニル、ピリジル、ピロリル、Ｎ−メチルピロリル、キノリニルおよびイオキノリニルが挙げられ、ピリジニル、チエニルおよびキノリニルがその例として挙げられる。
本明細書において使用されるように、“ヘテロアリール”とはまた、ヘテロアリ−ルオキシ、ヘテロアリールチオ、ヘテロアリールカルボニルおよびヘテロアリールアミノを含むが、それらに限定されない、ヘテロアリール含有基を指す。
【０１３３】
本明細書において使用されるように、“複素環式の”とは、環状システムの中の１〜３の原子のように、一つもしくはそれ以上がヘテロ原子である、即ち炭素原子以外の元素、例えば、窒素、酸素および／もしくは硫黄原子である、３〜１０員、例えば、４〜７員もしくは５〜６員のシステムのように、単環式のもしくは多環式の非芳香環システムを指す。
【０１３４】
本明細書において使用されるように、“置換アリール”、“置換ヘテロアリール”および“置換複素環式”とは、それぞれ、ハロ、ハロアルキルおよびアルキル、アラルキル、ヘテロアラルキル、１〜２個の二重結合を有するアルケニル、１〜２個の三重結合を有するアルキニル、アル(ケ)(キ)ニル基、ハロ、擬似ハロ、シアノ、ヒドロキシル、ハロ低級アルキル、特にトリフルオロメチルのようなハロアルキルおよびポリハロアルキル、ホルミル、アルキルカルボニル、ハロ、ハロアルキルおよびアルキル、ヘテロアリールカルボニル、カルボキシ、アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、アミノイミノ、アルコキシカウボニルアミノ、アリールオキシカルボニルアミノ、アミノカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニル、アリールアミノカルボニル、ジアリールアミノカルボニル、アラルキルアミノカルボニル、アルコキシ、アリールオキシ、パーフルオロアルコキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アリールアルコキシ、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アリールアミノアルキル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、アルキルアリールアミノ、アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、アジド、ニトロ、メルカプト、アルキルチオ、アリールチオ、パーフルオロアルキルチオ、チオシアノ、イソチオシアノ、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、アリールスルフィニル、アリールスルホニル、アミノスルホニル、アルキルアミノスルホニル、ジアルキルアミノスルホニルおよびアリールアミノスルホニルから選択された、１〜３個のように、１個もしくはそれ以上の置換基で任意に置換されたアリールカルボニルから選択された、１〜３個のように、１個もしくはそれ以上の置換基で任意に置換されたアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、ヘテロアリールから独立に選択された一つもしくはそれ以上の置換基、特定の実施態様においては１〜３個の置換基で置換されたところのアリール、ヘテロアリールおよび複素環式の基を指す。
【０１３５】
本明細書において使用されるように、“アラルキル”とは、その中でアルキルの水素原子の一つがアリール基で置換されたところのアルキル基を指す。
本明細書において使用されるように、“ヘテロアラルキル”とは、その中でアルキルの水素原子の一つがヘテロアリール基で置換された、アルキル基を指す。
【０１３６】
本明細書において使用されるように、アルキル、アルコキシ、カルボニル等の命名法は、当業者により一般的に理解されているように使用される。例えば、本明細書において使用されるように、アルキルは１個もしくはそれ以上の炭素を含有する飽和炭素鎖を指す；鎖は直鎖状もしくは分枝状であり得るかまたは環状部分を含むかもしくは環状であり得る。
【０１３７】
任意の与えられた置換基の数が特定されていない場合には(例えば、ハロアルキル)、１個もしくはそれ以上の置換基が存在し得る。例えば、“ハロアルキル”は同じもしくは異なるハロゲンの１個もしくはそれ以上を含み得る。もう一つの例としては、“Ｃ１−３アルコキシフェニル”は、１、２もしくは３個の炭素を含有する同じまたは異なるアルコキシ基を含むことができる。
本明細書において使用されるように、“ハロ”、“ハロゲン”もしくは“ハライド”とは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒもしくはＩを指す。
【０１３８】
本明細書において使用されるように、擬似ハライドは、ハライドと実質的に同様に挙動する化合物である。そのような化合物はハライド(Ｘ−、ここでＸはＣｌもしくはＢｒのようなハロゲンである)と同じ様式で使用され同じ様式で処理されることができる。擬似ハライドとしては、シアナイド、シアネート、チオシアネート、セレノシアネート、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシ、ジクロロメトキシおよびアジドが挙げられるが、それらに限定されない。
【０１３９】
本明細書において使用されるように、“ハロアルキル”とは、その中で水素原子の一つもしくはそれ以上がハロゲンで置換されたところの低級アルキル基を指す。そのような基としては、クロロメチル、トリフルオロメチル、１−クロロ−２−フルオロエチル等が挙げられるが、それらに限定されない。
本明細書において使用されるように、“ハロアルコキシ”とは、その中でＲがハルアルキル基であるところのＲＯ−を指す。
【０１４０】
本明細書において使用されるように、“スルフィニル”もしくは“チオニル”とは−Ｓ(Ｏ)−を指す。本明細書において使用されるように、“スルホ”とは−Ｓ(Ｏ)２Ｏ−を指す。本明細書において使用されるように、“スルホニル”もしくは“スルフリル”とは−Ｓ(Ｏ)２−を指す。
本明細書において使用されるように、“カルボキシ”とは２価の基、Ｃ(Ｏ)Ｏ−、を指す。
【０１４１】
本明細書において使用されるように、“アミノカルボニル”とは、−Ｃ(Ｏ)ＮＨ２を指す。
本明細書において使用されるように、“アルキルアミノカルボニル”とは、その中でＲが水素もしくは、例えば、低級アルキルのようなアルキルであるところの−Ｃ(Ｏ)ＮＨＲを指す。
【０１４２】
本明細書において使用されるように、“ジアルキルアミノカルボニル”とは、その中でＲ’およびＲが水素もしくは例えば、低級アルキルのようなアルキルから独立に選択されるところの−Ｃ(Ｏ)ＮＲ'Ｒを指す；“カルボキサミド”とは、式−ＮＲ'ＣＯＲの基を指す。
本明細書において使用されるように、“ジアリールアミノカルボニル”とは、その中でＲおよびＲ'が低級アリール、例えば、フェニル、のようなアリールから独立に選択される、−Ｃ(Ｏ)ＮＲＲ'を指す。
本明細書において使用されるように、“アラルキルアミノカルボニル”とは、その中でＲおよびＲ'の一つが低級アリール、例えば、フェニル、のようなアリールであり、そしてＲおよびＲ'の他の一つが例えば、低級アルキルのようなアルキルである、−Ｃ(Ｏ)ＮＲＲ'を指す。
【０１４３】
本明細書において使用されるように、“アリールアミノカルボニル”とは、その中でＲが低級アリール、例えば、フェニル、のようなアリールであるところの−Ｃ(Ｏ)ＮＨＲを指す。
本明細書において使用されるように、“ヒドロキシカルボニル”とは、−ＣＯＯＨを指す。
本明細書において使用されるように、“アルコキシカルボニル”とは、その中でＲが低級アルキルのようなアルキルであるところの−Ｃ(Ｏ)ＯＲを指す。
【０１４４】
本明細書において使用されるように、“アリールオキシカルボニル”とは、その中でＲが低級アリール、例えば、フェニル、のようなアリールであるところの−Ｃ(Ｏ)ＯＲを指す。
本明細書において使用されるように、“アルコキシ”および“アルキルチオ”とは、その中でＲが、例えば、低級アルキルのようなアルキルであるところのＲＯ−およびＲＳ−を指す。
本明細書において使用されるように、“アリールオキシ”および“アリールチオ”とは、その中でＲが低級アリール、例えば、フェニルのようなアリールであるところのＲＯ−およびＲＳ−を指す。
【０１４５】
本明細書において使用されるように、“アルキレン”とは、例えば、１〜１２個の炭素のような１〜約２０個の炭素原子を有する直鎖状の、分岐のもしくは環状の、例えば、直鎖状のまたは分岐のような、２価の脂肪族炭化水素基を指し、そして例えば、低級アルキレンである。アルキレン基に沿って１個もしくはそれ以上の酸素、硫黄、または置換されたかもしくは置換されていない窒素原子を任意に挿入することができて、ここでは窒素置換基は前述のようにアルキルである。例示的アルキレン基としては、メチレン(−ＣＨ２−)、エチレン(−ＣＨ２ＣＨ２−)、プロピレン(−(ＣＨ２)３―)、シクロヘキシレン(Ｃ６Ｈ１０−)、メチレンジオキシ(−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−)およびエチレンジオキシ(−Ｏ−(ＣＨ２)２−Ｏ−)が挙げられる。用語“低級アルキレン”とは、１〜６個の炭素を有するアルキレン基を指す。例示的アルキレン基は、例えば、１〜３個の炭素原子のアルキレンのような低級アルキレンである。
【０１４６】
本明細書において使用されるように、“アルケニレン”とは、例えば、２〜約２０個の炭素原子および少なくとも１個の二重結合、一般的には１〜１２個の炭素を有するような直鎖状の、分岐の、もしくは環状の、典型的には、直鎖状のまたは分岐の、２価の脂肪族炭化水素基であり、そして例えば、低級アルケニレンである。アルケニレン基に沿って１個もしくはそれ以上の酸素、硫黄、または置換されたもしくは置換されていない窒素原子を任意に挿入することができて、ここでは窒素置換基は前述のようにアルキルである。例示的アルケニレン基としては、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−および−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−が挙げられる。用語“低級アルケニレン”とは、２〜６個の炭素を有するアルケニレン基を指す。例示的アルケニレン基は、例えば、３〜４個の炭素原子のアルケニレンのような低級アルケニレンである。
【０１４７】
本明細書において使用されるように、“アルキニレン”とは、２〜約２０個の炭素原子および少なくとも１個の三重結合、一般的には例えば、低級アルキニレンのような１〜１２個の炭素を有するものような直鎖状の、分岐した、もしくは環状の、典型的には、直鎖状または分岐した、２価の脂肪族炭化水素基である。アルキニレン基に沿って１個もしくはそれ以上の酸素、硫黄、または置換されたもしくは置換されていない窒素原子を任意に挿入することができて、ここでは窒素置換基は前述のようにアルキルである。例示的アルキニレン基としては、−Ｃ≡Ｃ−Ｃ≡Ｃ−、−Ｃ≡Ｃ−および−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ２−が挙げられる。用語“低級アルキニレン”とは、２〜６個の炭素を有するアルキニレン基を指す。例示的アルキニレン基は、例えば、３〜４個の炭素原子のアルキニレンのような低級アルキニレンである。
【０１４８】
本明細書において使用されるように、“アル(ケ)(キ)ニレン”とは、例えば、２〜約２０個の炭素原子および少なくとも１個の三重結合を有する、および少なくとも１個の二重結合；典型的には、例えば、低級アル(ケ)(キ)ニレンのような１〜１２個の炭素を有する、直鎖状の、分岐した、もしくは環状の、一般的には直鎖状または環状の２価の脂肪族炭化水素基を指す。アルキニレン基に沿って１個もしくはそれ以上の酸素、硫黄、または置換されたもしくは置換されていない窒素原子を任意に挿入することができて、ここでは窒素置換基は前述のようにアルキルである。例示的アル(ケ)(キ)ニレンとしては、−Ｃ＝Ｃ−(ＣＨ２)ｎ−Ｃ≡Ｃ−[ここではｎは１もしくは２である]が挙げられる。用語“低級アル(ケ)(キ)ニレン”とは、６個までの炭素を有するアル(ケ)(キ)ニレン基を指す。例示的アル(ケ)(キ)ニレン基は、例えば、４個の炭素原子のアル(ケ)(キ)ニレンのような低級アル(ケ)(キ)ニレンである。
【０１４９】
本明細書において使用されるように、“シクロアルキレン”とは３〜６炭素原子のような、一般的に３〜１０炭素原子の、２価の飽和単環式のもしくは多環式のシステムを指す；シクロアルケニレンおよびシクロアルキニレンとは、少なくとも１個の二重結合および少なくとも１個の三重結合をそれぞれ含有する、単環式のもしくは多環式のシステムを指す。シクロアルケニレンおよびシクロアルキニレン基は３〜１０個の炭素原子を含有することができて、例えば、シクロアルケニレン基は４〜７個の炭素原子を含有し、そしてシクロアルキニレン基は８〜１０個の炭素原子を含有する。シクロアルキレン、シクロアルケニレンおよびシクロアルキニレンの環システムは、１個の環または融合の、架橋のもしくはスピロ結合の様式で一緒に結合させ得る２個以上の環より成り得る。“シクロアル(ケ)(キ)ニレン”とは、少なくとも１個の二重結合および少なくとも１個の三重結合を含有するシクロアルキレン基を指す。
【０１５０】
本明細書において使用されるように、“置換アルキレン”、“置換アルケニレン”、“置換アルキニレン”、“置換シクロアルキレン”、“置換シクロアルケニレン”および“置換シクロアルキニレン”とは、それぞれ、ハロ、例えば、ハロ低級アルキルのようなハロアルキル、アリール、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、アルキルオキシ、アルキルチオ、アリールチオ、アラルキルオキシ、アラルキルチオ、カルボキシアルコキシカルボニル、オキソおよびシクロアルキルから独立に選択された１個もしくはそれ以上の置換基、特定の実施態様では１から３個の置換基、で置換された、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、シクロアルキレン、シクロアルケニレンおよびシクロアルキニレン基を指す。
【０１５１】
本明細書において使用されるように、“アリーレン”とは、例えば、５〜約２０個の炭素原子および、５〜１２個の炭素のような、少なくとも１個の芳香環を有する、単環式のような単環式のもしくは多環式の２価の芳香族基を指し、そして、例えば、低級アリーレンである。アリーレン基の周囲に１個もしくはそれ以上の酸素、硫黄、または置換されたもしくは置換されていない窒素原子を任意に挿入することができて、そこでは窒素置換基は前述のようにアルキルである。例示的アリーレン基としては、１,２−,  １,３−および１,４−フェニレンが挙げられる。用語“低級アリーレン”とは、５もしくは６個の炭素を有するアリーレン基を指す。例示的アリーレン基は低級アリーレンである。
【０１５２】
本明細書において使用されるように、“ヘテロアリーレン”とは、環状システムの中の１個もしくはそれ以上、典型的には、例えば、１〜３個の原子がヘテロ原子、即ち炭素以外の元素、例えば、窒素、酸素および／もしくは硫黄原子(複数を含む)である、約２〜約１５員のような、２価の単環式のもしくは多環式の芳香環システムを指す。
【０１５３】
本明細書において使用されるように、“ヘテロサイクリレン”とは、環状システムの中の１個もしくはそれ以上、例えば、１〜３個の原子がヘテロ原子、即ち炭素以外の元素、例えば、窒素、酸素および／もしくは硫黄原子(複数を含む)である、例えば、４〜７員もしくは５〜６員のような、一般的には３〜１０員の、２価の単環式のもしくは多環式の芳香環システムを指す。
【０１５４】
本明細書において使用されるように、“置換アリーレン”、“置換ヘテロアリーレン”および“置換ヘテロサイクリレン”とは、それぞれ、ハロ、ハロアルキルおよびアルキル、アラルキル、ヘテロアラルキル、１から２個の二重結合を有するアルケニル、１から２個の三重結合を有するアルキニル、アル(ケ)(キ)ニル基、ハロ、擬似ハロ、シアノ、ヒドロキシ、ハロ低級アルキル、例えば、トリフルオロメチルのようなハロアルキルおよびポリハロアルキル、ホルミル、アルキルカルボニル、例えば、ハロ、ハロアルキルおよびアルキル、ヘテロアリールカルボニル、カルボキシ、アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、アミノカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニル、アリールアミノカルボニル、ジアリールアミノカルボニル、アラルキルアミノカルボニル、アルコキシ、アリールオキシ、パーフルオロアルコキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アリールアルコキシ、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アリールアミノアルキル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、アルキルアリールアミノ、アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、アジド、ニトロ、メルカプト、アルキルチオ、アリールチオ、パーフルオロアルキルチオ、チオシアノ、イソチオシアノ、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、アリールスルフィニル、アリールスルホニル、アミノスルホニル、アルキルアミノスルホニル、ジアルキルアミノスルホニルおよびアリールアミノスルホニルから選択された、１〜３個のような１個もしくはそれ以上の置換基で任意に置換されたアリールカルボニルから選択された、１〜３個のような１個もしくはそれ以上の置換基で任意に置換されたアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、ヘテロアリールから独立に選択された一つもしくはそれ以上の置換基、特定の実施態様においては１〜３個の置換基で置換されたところのアリーレン、ヘテロアリーレンおよびヘテロサイクリレン基を指す。
【０１５５】
本明細書において使用されるように、“アルキリデン”とは、もう一つの基の一つの原子と付着して二重結合を形成している、＝ＣＲ’Ｒ”のような２価の基を指す。例示的アルキリデン基はメチリデン(＝ＣＨ２)およびエチリデン(＝ＣＨＣＨ３)である。本明細書において使用されるように、“アラルキリデン”とは、その中でＲ'もしくはＲ''のどちらかがアリール基であるところのアルキリデン基を指す。“シクロアルキリデン”基は、R'およびR''が結合してカルボサイクリック環を形成したものである。“ヘテロサイクリリデン”基は、Ｒ'およびＲ''の少なくとも一つが鎖の中にヘテロ原子を含有し、R'およびR''が結合して、複素環を形成する、ものである。
【０１５６】
本明細書において使用されるように、“アミド”とは、２価の基−Ｃ(Ｏ)ＮＨ−を指す。“チオアミド”とは、２価の基−Ｃ(Ｓ)ＮＨ−を指す。“オキシアミド”とは、２価の基−ＯＣ(Ｏ)ＮＨ−を指す。“チアアミド”とは、２価の基−ＳＣ(Ｏ)ＮＨ−を指す。“ジチアアミド”とは、２価の基−ＳＣ(Ｓ)ＮＨ−を指す。“ウレイド”とは、２価の基−ＨＮＣ(Ｏ)ＮＨ−を指す。“チオウレイド”とは、２価の基−ＨＮＣ(Ｓ)ＮＨ−を指す。
【０１５７】
本明細書において使用されるように、“セミカルバジド”とは、−ＮＨＣ(Ｏ)ＮＨＮＨ−を指す。“カルバゼート”とは、２価の基−ＯＣ(Ｏ)ＮＨＮＨ−を指す。“イソチオカルバゼート”とは、２価の基−ＳＣ(Ｏ)ＮＨＮＨ−を指す。“チオカルバゼート”とは、２価の基−ＯＣ(Ｓ)ＮＨＮＨ−を指す。“スルホニルヒドラジド”とは、−SO2ＮＨＮＨ−基を指す。“ヒドラジド”とは、２価の基−Ｃ(Ｏ)ＮＨＮＨ−を指す。“アゾ”とは、２価の基−Ｎ＝Ｎ−を指す。“ヒドラジニル”とは、２価の基−ＮＨ−ＮＨ−を指す。
【０１５８】
本明細書において使用されるように、“アミノ酸”とは、ラセミ体の、もしくはＤ−もしくはＬ−立体配置のどちらかのα−アミノ酸を指す。アミノ酸の名称の前にくる名称“ｄ”(例えば、ｄＡｌａ、ｄＳｅｒ、ｄＶａｌ等)は、アミノ酸のＤ−異性体を指す。アミノ酸の名称の前にくる名称“ｄｌ”(例えば、ｄｌＰｉｐ)は、アミノ酸のＬ−およびＤ−異性体の混合体を指す。
【０１５９】
本明細書において使用されるように、フェニルもしくはピリジルのような任意の特定の基が特定されるときには、これはその基が置換をされていないかもしくは置換されていることを意味する。特定されない、例示的な置換基は、ハロ、ハロ低級アルキル、および低級アルキルである。
【０１６０】
本明細書において使用されるように、任意の保護基、アミノ酸および他の化合物の略号は、別に指示が無いかぎり、それらの共通の使用法、認められている略号、もしくは生化学的命名法に関するＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ委員会((1972) Biochem. 11:942-944、を参照)に準拠している。
【０１６１】
本明細書において使用されるように、ＨＨＴおよびＣＨＴとは、ヘキサヒドロチロシル(シクロヘキサチロシルもしくはｐ−ヒドロキシシクロヘキシルアラニルとしても知られている)を指して、ＣＨＡはシクロヘキシルアラニルであり、ＰｙｒおよびｐｙｒｏＧｌｕはピログルタミン酸を指し、Ｐｉｐはピペコリン酸であり、Ｓａｒはサルコシンであり、ｎＬｅｕおよびＮｌｅはノルロイシンであり、ｎＶａｌはノルバリンであり、Ａｉｂは２−アミノイソ酪酸であり、Ｑｕａｔは(Ｒ)−Ｇｌｕ(α−(３−アミジノベンジル))であり、そしてＡｂｕおよびＢｕｔは２−アミノ酪酸である。
【０１６２】
本明細書において使用されるように、ＰＥＧは、指定された数のエチレンオキシサブユニットを有する置換基を含有するポリエチレングリコールを表す。かくして、用語ＰＥＧ(２)は：
【化４】
2005518332.tif 000006
を表し、そして用語ＰＥＧ(６)は：
【化５】
2005518332.tif 000007
を表す。
【０１６３】
Ｒ１およびＲ２が結合して、−(ＣＨ２)ｎ−を形成するときには、そのように定義された環状部分およびヘテロ原子を含有する環状部分としては：
【化６】
2005518332.tif 000008
が挙げられるが、それらに限定されない。
【０１６４】
本明細書において使用されるように、用語“ヒドロキシル化された”は、ヒドロキシ部分によりそのように記述される環状システムの置換可能な炭素上の置換を表す。本明細書において使用されるように、用語“ポリヒドロキシル化された”とは、２、３もしくは4個のヒドロキシ部分によりそのように記述される環状システムの２個もしくはそれ以上の置換可能な炭素上の置換を表す。
【０１６５】
本明細書において使用されるように、用語“(ｄ)(２,３−ジヒドロキシプロピオニル)”は、次の構造を表す：
【化７】
2005518332.tif 000009
【０１６６】
本明細書において使用されるように、用語“(２Ｒ,３Ｓ)−２,３,４−トリヒドロキシブタノイル”は、次の構造を表す：
【化８】
2005518332.tif 000010
【０１６７】
本明細書において使用されるように、用語“キニル”は、次の構造：
【化９】
2005518332.tif 000011
もしくはそのジアステレオマーを表す。
【０１６８】
本明細書において使用されるように、用語“グロニル”は、次の構造：
【化１０】
2005518332.tif 000012
もしくはそのジアステレオマーを表す。
【０１６９】
本明細書において使用されるように、用語“コチニニル”は、次の構造：
【化１１】
2005518332.tif 000013
もしくはそのジアステレオマーを表す。
【０１７０】
本明細書において使用されるように、用語“ガリル”は、次の構造を表す：
【化１２】
2005518332.tif 000014
【０１７１】
本明細書において使用されるように、用語“４−エトキシスクアリール”は、次の構造を表す：
【化１３】
2005518332.tif 000015
【０１７２】
本明細書において使用されるように、１−methylHisもしくは(１Ｍｅ)Ｈは、次の構造を指す：
【化１４】
2005518332.tif 000016
【０１７３】
本明細書において使用されるように、３−methylHisもしくは(３Ｍｅ)Ｈは、次の構造を指す：
【化１５】
2005518332.tif 000017
【０１７４】
本明細書において使用されるように、Ｑｕａｔ２は、
【化１６】
2005518332.tif 000018
を指す。
【０１７５】
Ｑｕａｔ３は、
【化１７】
2005518332.tif 000019
を指す。
【０１７６】
Ｑｕａｔ４は、
【化１８】
2005518332.tif 000020
を指す。
【０１７７】
Ｑｕａｔ５は、
【化１９】
2005518332.tif 000021
を指す。
【表２】
2005518332.tif 000022
【０１７８】
Ｂ．プロテアーゼ標的
本明細書における結合体は、細胞、特に腫瘍細胞および腫瘍原性過程および血管形成および他の増殖過程に関与する細胞の表面上に局在する、プロテアーゼを標的化するようにデザインされる。以下に詳しく説明する結合体は、結合体中にあるときには実質的に不活性である、治療薬、特に細胞毒性剤に、直接的にもしくはリンカーを介するかのどちらかで、結合されている、選択されて標的とされた細胞表面プロテアーゼに対するペプチド性基質を含有する。治療薬は、活性であるかまたはそれが送達されるところの標的とされた細胞もしくは組織の近傍で活性化され得る型で放出される。
【０１７９】
標的とされたプロテアーゼは、疾患過程に関与する(もしくは関連する)、または疾患もしくは疾患過程に関与する細胞もしくは組織の現場にたまたま存在する細胞もしくは組織上に局在し、そして一般的に、全てではなくとも多くの他の細胞もしくは組織上には全く局在しないかもしくは存在しない、または低レベルで、一般的に実質的に低レベルで、活性であるあるか、または変化した活性もしくは特異性を示すところのプロテアーゼを同定することにより選択される。活性なプロテアーゼを発現する、非−標的とされた細胞もしくは組織の種類および数は、特定のプロテアーゼおよび処置を意図する疾患について異なる。当業者は、疾患、標的とされた薬剤および副作用の耐容し得るかもしくは受容し得るレベルに基づいて標的を選択するであろう。目標は、標的とされた薬剤それ自身の投与と比較して増大した治療係数を達成することである。
【０１８０】
標的とされたプロテアーゼは疾患過程に関与し得るかもしくはし得ないで、その発現は偶然であり得る；本明細書における目的のためには、その特定の役割もしくはその欠如は重要ではない；標的とされた組織もしくは細胞の現場でそれが活性であるという事実が重要である。例えば、本明細書における興味のある細胞表面プロテアーゼの多くは、腫瘍細胞もしくは腫瘍原性過程に関与する細胞上で発現するかもしくは活性である。組織もしくは細胞の発現プロフィールを測定するかまたは検出するための当業者に公知の任意の方法を使用することができる。例えば、種々の組織からのＲＮＡより成るＲＮＡブロット(例えば、CLONTECH, Palo Alto, CAから入手可能な多重組織発現(ＭＴＥ)アレイ)を、興味のあるプロテアーゼの核酸配列に基づいたプローブでスクリーニングして、プロテアーゼを発現する細胞を同定することができる。また、発現を試験するためにブロットのノザン分析を使用することができる。
【０１８１】
標的とされたプロテアーゼに含まれるのは、ＩＩ型膜結合セリンプロテアーゼと呼称されるもの(ＭＴＳＰ; 例えば、米国出願一連番号第０９／７７６,１９１号、２００１年２月２日出願、および国際ＰＣＴ出願第ＷＯ  ０１／５７１９４号として公開された国際ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ０１／０３４７１号、を参照;国際ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ０２／０７９０３号、を参照;また米国仮出願一連番号第６０／２７５,５９２号、第６０／２７８,１６６号、第６０／２７９,２２８号、第６０／２９１,００１号、第６０／２９１,５０１号、第６０／３１６,８１８号、第６０／３０２,９３９号、第６０／３１６,８１８号、第６０／３２８,５２９号、第６０／３２８,５３０号、第６０／３３２,０１５号、第６０／３２８,９３９号、ならびに代理人登録番号第２４７４５−Ｐ１６２４号の２００２年５月２０日出願の仮出願;代理人登録番号第２４７４５−１６１６号の２００２年５月１４日出願の出願である米国出願一連番号第１０／０９９,７００号、第１０／１０４,２７１号、第１０／１１２,２２１号、を参照)ならびに内皮細胞上に見出されエンドセリアーゼと呼称されるもの(２０００年１１月２０日出願の米国出願一連番号第０９／７１７,４７３号および国際ＰＣＴ出願第ＷＯ  ０１／３６６０４号として公開された国際ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ００／３１８０３号、を参照)である；配列番号３〜２６、２６９〜２７０および２７２〜２７６をまた、参照されたい。
【０１８２】
また、細胞表面タンパク質との特異的相互作用のお蔭で細胞表面に局在する、プロテアーゼが意図される。ウロキナーゼプラスミノーゲン活性化因子受容体(ｕ−ＰＡＲ)に結合したウロキナーゼプラスミノーゲン活性化因子(ｕ−ＰＡ)は、そのようなプロテアーゼの例示である。例示的ＭＴＳＰおよびエンドセリアーゼの核酸配列情報ならびに発現プロフィールは、以下の通りである(実施例６をまた、参照)。
【０１８３】
１．ＭＴＳＰ
細胞表面のタンパク質分解は、様々な細胞機能を仲介する、生物活性タンパク質の生成のためのメカニズムである。これらの膜に固定されたタンパク質としては、ディスインテグリン様およびメタロプロテイナーゼ(ＡＤＡＭ)ならびに膜型マトリックスメタロプロテイナーゼ(ＭＴ−ＭＭＰ)が挙げられる。ＭＭＰに加えて、セリンプロテアーゼが新生物形成性疾患の進行に関連するとされている。分泌酵素であるかもしくは細胞質の貯蔵小器官に隔離される、殆どのセリン酵素は、血液凝固、創傷治癒、消化、免疫応答ならびに腫瘍浸潤および転移に役割を有する。
【０１８４】
膜貫通セリンプロテアーゼ(ＭＴＳＰ)は、腫瘍の病因および病理発生に関与すると思われる。これらの酵素は、特定のがん性のおよび腫瘍の細胞の中で、ならびに他の増殖性障害および炎症細胞のような他の疾患状態に関与する他の細胞の中で発現して、そして組織もしくは器官に特異的であり得る。哺乳動物では、ファミリーの２１以上のメンバーが知られている(Hooper et al. (2001) J. Biol. Chem. 276:857-860、を参照、また２００１年２月２日出願の米国出願一連番号第０９／７７６,１９１号および国際ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ０１／０３４７１号、を参照; また米国仮出願一連番号第６０／２７５,５９２号および第６０／２７８,１６６号、を参照;ならびに配列番号１〜３７、を参照)。
【０１８５】
これらとしては、コリン(受付け番号第ＡＦ１３３８４５号および第ＡＢ０１３８７４号; Yan et al. (1999) J. Biol. Chem. 274:14926-14938; Tomia et al. (1998) J. Biochem. 124:784-789; Uan et al. (2000) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 97:8525-8529、を参照); エンテロペプチダーゼ(エンテロキナーゼとも呼称；ヒトタンパク質については受付け番号第Ｕ０９８６０号; Kitamoto et al. (1995) Biochem. 27: 4562-4568; Yahagi et al. (1996) Biochem. Biophys. Res. Commun. 219:806-812; Kitamoto et al. (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 91:7588-7592; Matsushima et al. (1994) J. Biol. Chem. 269:19976-19982、を参照);ヒト気道トリプシン様プロテアーゼ(ＨＡＴ；受付け番号第ＡＢ００２１３４号;Yamaoka et al.  J. Biol. Chem. 273:11894-11901、を参照); ＭＴＳＰ１(ＴＡＤＧ−１５およびマトリプターゼとも呼称、配列番号１および２、を参照；受付け番号第ＡＦ１３３０８６／ＡＦ１１８２２４号、第ＡＦ０４２８００２２号；Takeuchi et al. (1999) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96:11054-1161; Lin et al. (1999) J. Biol. Chem. 274:18231-18236; Takeuchi et al. (2000) J. Biol. Chem. 275:26333-26342; and Kim et al. (1999) Immunogenetics 49:420-429)；ヘプシン(受付け番号第Ｍ１８９３０号、第ＡＦ０３００６５号、第Ｘ７０９００号; Leytus et al. (1988)  Biochem. 27: 11895-11901; Vu et al. (1997) J. Biol. Chem. 272:31315-31320; and Farley et al. (1993) Biochem. Biophys. Acta 1173:350-352、を参照;および米国特許第５,９７２,６１６号、を参照)；ＴＭＰＲＳ２(受付け番号第Ｕ７５３２９号および第ＡＦ１１３５９６号; Paoloni-Giacobino et al. (1997) Genomics 44:309-320；ならびにJacquinet et al. (2000) FEBS Lett. 468: 93-100、を参照)；ならびにＴＭＰＲＳＳ４ (受付け番号第ＮＭ  ０１６４２５号；Wallrapp et al. (2000) Cancer 60:2602-2606、を参照)が挙げられる。
【０１８６】
また、ＭＴＳＰ３、ＭＴＳＰ４、ＭＴＳＰ６、ＭＴＳＰ７、ＭＴＳＰ９、ＭＴＳＰ１０、ＭＴＳＰ１２、ＭＴＳＰ２０、ＭＴＳＰ２２およびＭＴＳＰ２５(配列番号３〜２６、２６９〜２７０および２７２〜２７６、を参照；また２００１年２月２日出願の米国出願一連番号第０９／７７６,１９１号および国際ＰＣＴ出願第ＷＯ  ０１／５７１９４号として公開された国際ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ０１／０３４７１号、を参照；国際ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ０２／０７９０３号、を参照;また米国仮出願一連番号第６０／２７５,５９２号、第６０／２７８,１６６号、第６０／２７９,２２８号、第６０／２９１,００１号、第６０／２９１,５０１号、第６０／３１６,８１８号、第６０／３０２,９３９号、第６０／３１６,８１８号、第６０／３２８,５２９号、第６０／３２８,５３０号、第６０／３３２,０１５号、第６０／３２８,９３９号および代理人登録番号第２４７４５−Ｐ１６２４号で２００２年５月２０日出願の仮出願;代理人登録番号第２４７４５−１６１６号で２００年５月１４日出願の、米国出願一連番号第１０／０９９,７００号、第１０／１０４,２７１号、第１０／１１２,２２１号、を参照)、が知られている。
【０１８７】
膜貫通セリンプロテアーゼを含むセリンプロテアーゼは、新生物形成性発生および進行に関与する過程に関与すると考えられてきている。これらのプロテアーゼの正確な役割は明らかにされていないが、セリンプロテアーゼおよびその阻害因子は、がん細胞浸潤、転移による拡散、および腫瘍進行に関与する、腫瘍の血管形成を含む、多くの細胞内外の生理的過程に関与する。プロテアーゼは、細胞外マトリックス(ＥＣＭ)の分解に関与し、組織のリモデリングに寄与しそしてがん浸潤および転移に必要であることが信じられている。或るプロテアーゼの活性および／もしくは発現は、腫瘍の進行および発生と相関すると示されており、そしてまた特定の細胞のタイプで活性であるとが示される。
【０１８８】
例えば、上皮がんおよび正常組織に発現している(Takeucuhi et al. (1999) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 96:11054-61)ところの膜型セリンプロテアーゼＭＴＳＰ１(別名マトリプターゼ；米国特許第５,９７２,６１６号からの配列番号１および２;ならびにGenBank受付け番号第ＡＦ１１８２２４号; (1999) J. Biol. Chem. 274:18231-18236;米国特許第５,７９２,６１６号、を参照；またTakeuchi (1999) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96:11054-1161を、参照)が同定されている。それは乳がんの転移に役割を演じていると提唱されている。その主要な切断特異性は、Ａｒｇ−Ｌｙｓ残基である。マトリプターゼはまた、ヒト消化管および前立腺において種々の上皮組織の中で高いレベルの活性および／もしくは発現で発現される。
【０１８９】
肝細胞腫中に同定された細胞表面セリンプロテアーゼであるヘプシンは、卵巣がん中で過剰発現される(Tanimoto et al. (1997) Cancer Res., 57:2884-7)。ヘプシンの転写物は、がん腫組織中に大量に存在しているようであり、そして正常卵巣を含む、正常成人組織では殆ど全く発現されない。ヘプシンは、卵巣腫瘍でしばしば過剰発現して、それ故に、卵巣腫瘍細胞の浸潤過程および増殖能におけるプロテアーゼの候補であり得ることが示唆されている。
【０１９０】
正常上皮細胞特異的１(ＮＥＳ１)と呼称されるセリンプロテアーゼ様遺伝子(Liu et al. (1996) Cancer Res. 56:3371-9)が同定されている。ＮＥＳ１のｍＲＮＡの発現は、全ての正常および不死化非腫瘍性上皮細胞株で観察されるけれども、大部分のヒト乳がん細胞株は、その発現の劇的な減少もしくは完全な欠如を示す。成長因子活性を調節することが知られているポリペプチドに対するＮＥＳ１の構造的類似およびＮＥＳ１発現の乳がん発生との負の相関は、腫瘍発生の抑制におけるこのプロテアーゼ様遺伝子産物の直接的なもしくは間接的な役割を示唆する。
【０１９１】
例示的ＭＴＳＰ
それぞれのＭＴＳＰは特色的な組織発現プロフィールを有している；特にＭＴＳＰは、専ら腫瘍に限って発現もしくは活性化されるわけではないが、特色的な腫瘍組織での発現または活性化プロフィールを示す。或る場合には、ＭＴＳＰは、基質もしくはそれに対する補助因子もしくはＭＴＳＰの機能活性を変化させるであろう他の因子の変化のお蔭で、腫瘍細胞中では非腫瘍組織とは異なる活性を持つことができる。したがって、新生物形成性疾患を有しない単数もしくは複数の対象と比較して、新生物形成性疾患を持つ対象(例えば哺乳動物、特にヒト)における、活性および／もしくは発現のレベルまたは機能のお蔭で、それぞれが特定の腫瘍に対する診断マーカーとして役立つことができる。加えて、特定の組織における活性(および／もしくは発現)の検出は、新生物形成性疾患を示すものとなり得る。また、それぞれの活性および／もしくは発現プロフィールのお蔭で、それらは、その活性のモジュレーターの投与により、もしくはＭＴＳＰの一つにより特異的に活性化されるプロドラッグの投与により、治療標的として役立つことができる。それぞれのもしくは任意のＭＴＳＰは、腫瘍細胞において正常細胞におけるレベルとは異なるところの活性もしくは発現レベルまたは基質特異性を示すことができる。そのような腫瘍細胞としては、結腸、肺、前立腺、乳房、食道、膵臓、子宮、子宮内膜および他の固形腫瘍ならびに血液およびリンパ腫瘍が挙げられるが、それらに限定されない。したがって、本明細書において提供される結合体は、そのような腫瘍および新生物形成性異常の任意の処置のために基質特異性の選択によってデザインすることができる。
【０１９２】
組織発現プロフィール
以下は、或る例示的ＭＴＳＰの例示的な組織および遺伝子(実施例８をまた参照)プロフィールである。これらのプロフィールは、これらのＭＴＳＰの発現もしくは活性化の全ての範囲を規定することを意図しないが、ＭＴＳＰが腫瘍で発現され、そして、したがって腫瘍細胞の表面上におけるそれらの発現もしくは活性化または基質特異性が本明細書における方法において利用されることができて、そして本明細書における方法に従ってデザインされかつ本明細書において例示されるようであり、これらのＭＴＳＰの１つもしくはそれ以上により切断されるところの結合体を調製し、そして新生物形成性もしくは他の疾患または異常の処置に、またはそれらの表面上にこれらのタンパク質を発現する細胞をターゲティングするために使用することができることを立証する。
【０１９３】
ＭＴＳＰ１(マトリプターゼ)
ＭＴＳＰ１(またマトリプターゼと呼称される)は、広いスペクトルの切断活性および二つの潜在的調節モジュールを持つトリプシン様セリンプロテアーゼである。それは、細胞外マトリックスを分解する活性およびそのトリプシン様活性に基づいて“マトリプターゼ”と命名された。乳がん細胞(もしくはＴ−４７細胞の馴化培地)から単離されたときには、ＭＴＳＰ１は主として非複合体型であるとして報告されている。ＭＴＳＰ１は人乳から単離されている；人乳から単離されたときには、それは二つの複合型、９５ｋＤａ(優先的な型)および１１０ｋＤａの一つであると報告された。非複合体型のＭＴＳＰ１は検出されなかった(Liu, et al. (1999) J. Biol. Chem. 274:18237-18242)。ＭＴＳＰ１は、活性状態にあるときには、は非複合体型プロテアーゼとして存在することが提唱されている。乳房の乳では、それはトリプシン様セリンプロテアーゼに対して活性を有するＫｕｎｉｔｚ型セリンプロテアーゼ阻害剤である幹細胞成長因子阻害剤−１(ＨＡＩ−１)のフラグメントとの複合体で存在すると報告されている。
【０１９４】
マトリプターゼと呼称されるタンパク質をコード化する核酸がヒト乳がん細胞Ｔ−４７Ｄの馴化培地からクローン化された(Lin et al.  (1999) J. Biol. Chem. 274:18231-18236)。ｃＤＮＡの分析で、完全長プロテアーゼは６８３個のアミノ酸を持ち、３個の主要な構造領域：即ちカルボキシル末端領域近辺のセリンプロテアーゼドメイン、４個の縦列した低密度リポタンパク質受容体ドメイン、および２個の縦列した補体サブコンポーネントＣ１ｒおよびＣ１ｓ、を含有することが決定された(配列番号１を参照)。がん細胞によリ作られたさらに別のセリンプロテアーゼを同定するための研究は、ＰＣ−３細胞を用いて行われた。膜貫通型プロテアーゼとして報告され、著者等により“ＭＴ−ＳＰ１”と命名されたセリンプロテアーゼが、クローン化された(Takeuchi et al. (1999)  Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96:11054-11061)。最初に同定されたマトリプターゼの配列が、ＭＴＳＰ１をコード化するｃＤＮＡの翻訳された配列中に含まれることが、その後見出された。最初にマトリプターゼと呼称されたタンパク質をコード化する核酸は、コード化ヌクレオチドの５１６を欠失する部分的なＭＴＳＰ１クローンである(Takeuchi, et al., J. Biol. Chem 275:26333-26342 (2000).)。報告されたマトリプターゼをコード化するｃＤＮＡ配列は、可能な開始メチオニンをコード化したので、代わりのスプライシングがＭＴＳＰ１のＮ末端領域を欠失したタンパク質を生じることができたことが提唱された。したがって、本明細書におけるマトリプターゼはＭＴＳＰ１の変異体型である。
【０１９５】
ＭＴＳＰ１はトリプシン様プロテアーゼ活性を示し、そして細胞外プロテアーゼドメインを持つＩＩ型膜貫通タンパク質である。ＭＴＳＰ１の基質特異性の研究は、プロテアーゼ活性化受容体２(ＰＡＲ２)、プロ−肝細胞成長因子(ｐｒｏ−ＨＧＦ)および単鎖ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子(ｓｃ−ｕＰＡ)は、ＭＴＳＰ１の高分子基質であることを明らかにする。ＰＡＲ２は、炎症、細胞保護および／もしくは細胞接着において機能し、一方でｓｃ−ｕＰＡは、腫瘍細胞浸潤および転移において機能する。ＨＧＦは成長およびプロ−血管形成因子として働く。
【０１９６】
ヒトＭＴＳＰ１をコード化する例示的ヌクレオチド配列を配列番号１および２に示す。先に記したように、配列番号１は、ＭＴＳＰ１をコード化する核酸配列を示す。この配列はより長い変形であり、両変異体に共通なプロテアーゼドメインを含む。
ＭＴＳＰ１は、乳房、前立腺および結腸直腸の腫瘍で発現される。したがって、それに対する基質との結合体は、そのような腫瘍の治療に使用されることができる。
【０１９７】
ＭＴＳＰ３
ＭＴＳＰ３転写物は、肺がん腫(ＬＸ−１)、結腸腺がん(ＣＸ−１)、結腸腺がん(ＧＩ−１１２)および卵巣がん腫(ＧＩ−１０２)中に検出された。もう一つの形の肺がん腫(ＧＩ−１１７)、乳がん腫(ＧＩ−１０１),膵臓腺がん(ＧＩ−１０３)および前立腺腺がん(ＰＣ３)中には明らかなシグナルは検出されなかった。
【０１９８】
ＭＴＳＰ４
ＭＴＳＰ４転写物、即ちＬＤＬ受容体ドメインの一部およびプロテアーゼドメインをコード化するＤＮＡフラグメント、を用いて、７６の異なるヒト組織(カタログ番号７７７５−１；ヒト多重組織発現(ＭＴＥ)アレイ；CLONTECH)より成るＲＮＡブロットを精査した。ゲルブロットのノザン分析におけるように、非常に強いシグナルが肝臓で観察された。他の組織でシグナルが(シグナルレベルの低下する順に)観察された：即ち胎児肝臓＞心臓＝腎臓＝副腎＝精巣＝胎児心臓および腎臓＝骨格筋＝膀胱＝胎盤＞脳＝脊髄＝結腸＝胃＝脾臓＝リンパ節＝骨髄＝気管＝子宮＝膵臓＝唾液腺＝乳腺＝肺である。ＭＴＳＰ４はまた、ＨｅＬａ  Ｓ３＝白血病Ｋ−５６２＝バーキットリンパ腫(RajiおよびDaudi)＝結腸直腸腺がん(ＳＷ４８０)＞肺がん腫(Ａ５４９)＝白血病ＭＯＬＴ４＝白血病ＨＬ−６０を含むいくつかの腫瘍細胞により少なく発現される。ヌードマウスに異種移植されたいくつかのヒト原発腫瘍から作られたｃＤＮＡライブラリー(ヒト腫瘍多重組織ｃＤＮＡパネル、カタログ番号Ｋ１５２２−１、CLONTECH)からのＭＴＳＰ４転写物のＰＣＲを、ＭＴＳＰ４特異的プライマーを用いて実施した。ＭＴＳＰ４転写物は、乳がん腫(ＧＩ−１０１)、肺がん腫(ＬＸ−１)、結腸腺がん(ＧＩ−１１２)および膵臓腺がん(ＧＩ−１０３)中に検出された。もう一つの型の肺がん腫(ＧＩ−１１７)、結腸腺がん(ＣＸ−１)、卵巣がん腫(ＧＩ−１０２)および前立腺腺がん(ＰＣ３)中には明らかなシグナルは検出されなかった。ＭＴＳＰ４転写物はまた、ＬＮＣａＰおよびＰＣ−３前立腺腺がん細胞株ならびにヒト線維肉腫細胞株ＨＴ−１０８０中に検出された。
【０１９９】
ＭＴＳＰ６
ＭＴＳＰ６は結腸において高レベルで発現される。それはまた、胃、気管、乳腺、甲状腺、唾液腺、脳下垂体および膵臓においても発現される。それは、他の組織においてさらに低いレベルで発現される(実施例６を参照)。
【０２００】
ＭＳＴＰ６はまた、ＨｅＬａ  Ｓ３＞結腸直腸腺がん(ＳＷ４８０)＞白血病ＭＯＬＴ−４＞白血病Ｋ−５６２を含むいくつかの腫瘍細胞株において発現される。マウス異種移植モデルにおいて、ＭＴＳＰ６転写物は、肺がん腫(ＬＸ−１)中に強く検出され、膵臓腺がん(ＧＩ−１０３)中に中度に検出され、卵巣がん腫(ＧＩ−１０２)中に弱く検出され；そして結腸腺がん(ＧＩ−１１２およびＣＸ−１)、乳がん腫(ＧＩ−１０１)、肺がん腫(ＧＩ−１１７)および前立腺腺がん(ＰＣ３)中に弱く検出された。ＭＴＳＰ６はまた、乳がん細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、前立腺腺がん細胞株ＰＣ−３中に検出されたが、ヒト線維肉腫細胞株ＨＴ−１０８０中には検出されなかった。ＭＴＳＰ６はまた、乳腺がん腫ｃＤＮＡ(Clontech)において発現される。ＭＴＳＰ６はまた、卵巣腫瘍細胞において過剰発現される。
【０２０１】
ＭＴＳＰ７
ＭＴＳＰ７転写物は、肺がん腫(Ａ５４９細胞株)、白血病(Ｋ−５６２細胞株)および頚部がん腫(ＨｅＬａＳ３細胞株)中に検出された。ＭＴＳＰ７は、肺、結腸、前立腺、乳腺、子宮頚部および他の腫瘍において発現されると信じられる。
【０２０２】
ＭＴＳＰ９
ＭＴＳＰ９は、例えば、食道腫瘍組織中に、肺がん腫中に、結腸直腸がん腫、リンパ腫、頚部がん腫(ＨｅＬａＳ３)および白血病細胞株中に、ならびに特定の正常細胞および組織中において発現される。ＭＴＳＰ９はまた、乳がん、前立腺がん、頚部がんおよび結腸がんのマーカーとなり得る。
ＭＴＳＰ９は、食道において高度に発現し、そして多くの他の組織において低レベルで発現される。ＭＴＳＰ９転写物は、腎臓(成人および胎児)、脾臓(成人および胎児)、胎盤、肝臓(成人および胎児)、胸腺、末梢血白血球、肺(成人および胎児)膵臓、リンパ節、骨髄、気管、子宮、前立腺、精巣、卵巣および腺器官(乳腺、副腎、甲状腺、脳下垂体および唾液腺)において見出される。ＭＴＳＰ９はまた、食道腫瘍組織中、肺がん腫中、および低レベルで結腸直腸がん腫、リンパ腫、頚部がん腫(ＨｅＬａＳ３)および白血病細胞株中で発現される。
【０２０３】
ＭＴＳＰ１０
ＭＴＳＰ１０は、例えば、食道腫瘍組織中に、肺がん腫、前立腺がん、膵臓および乳がん中に、ならびに細胞株中にならびに特定の正常細胞および組織中に発現される(例えば、組織特異的発現プロフィールについては実施例を参照)。活性化ＭＴＳＰ１０のレベルは、前立腺、子宮、肺、食道、もしくは結腸のがんまたは白血病もしくは他のがんの診断用となり得る。対象中の細胞上もしくはその近傍または体液中におけるＭＴＳＰ１０の発現および／または活性化は、乳がん、前立腺がん、肺がん、結腸がん、食道がんおよび他のがんのマーカーとなり得る。
【０２０４】
ＭＴＳＰ１０転写物は、膵臓、肺および腎臓中に検出された。ＭＴＳＰ１０転写物はまた、小腸のMarathon−Ready  ｃＤＮＡ(Clontech)中に検出された。ＭＴＳＰ１０転写物は乳がん腫(ＧＩ−１０１)、肺がん腫(ＬＸ−１およびＧＩ−１１７)、卵巣がん腫(ＧＩ−１０２)、および膵臓腺がん(ＧＩ−１０３)中に検出された。ＭＴＳＰ１０転写物は前立腺腺がん(ＰＣ３)中に弱く検出された。ＭＴＳＰ１０転写物はまた、ヌードマウス中で成長させた前立腺腫瘍ＣＷＲ２２Ｒ中に検出された。二つの型の結腸腺がん(ＧＩ−１１２およびＣＸ−１)中には明らかなシグナルは検出されなかった。
【０２０５】
ＭＴＳＰ１２
ＭＴＳＰ１２転写物は膵臓、肺および腎臓中に検出された。ＭＴＳＰ１２転写物はまた、小腸のMarathon−Ready  ｃＤＮＡ(Clontech)中に検出された。ＭＴＳＰ１２転写物は、乳がん腫(ＧＩ−１０１)、肺がん腫(ＬＸ−１およびＧＩ−１１７)、卵巣がん腫(ＧＩ−１０２)、肺がん腫(ＬＸ−１およびＧＩ−１１７)、卵巣がん腫(ＧＩ−１０２)、および膵臓腺がん(ＧＩ−１０３)中に検出された。ＭＴＳＰ１２転写物はまた、ヌードマウス上に成長させたＣＷＲ２２Ｒ前立腺腫瘍中に検出された。２つの型の結腸腺がん(ＧＩ−１１２およびＣＸ−１)中には明らかなシグナルは検出されなかった。
【０２０６】
ＭＴＳＰ２０
ＭＴＳＰ２０は肺、結腸、頚部の腫瘍中におよび白血病細胞中に発現される。それはまた、乳房、卵巣、膵臓、前立腺および他の腫瘍中に発現され得る。ＭＴＳＰ２０転写物は、肝臓、リンパ節、小脳、膵臓、前立腺、子宮、精巣、腺(副腎、甲状腺および唾液腺)、胸腺、腎臓および脾臓中に検出された。さらに低い転写レベルは、肺、胎盤、膀胱、卵巣、消化器系、循環系、および脳の他の部分の中に見出された。ＭＴＳＰ２０はまた、肺がん腫(Ａ５１９)、結腸直腸がん腫(ＳＷ４８０)、リンパ腫(RajiおよびDaudi)、頚部がん腫(ＨｅＬａＳ３)ならびに白血病(ＨＬ−６０、Ｋ−５６２およびＭＯＬＴ−４)細胞株を含む特定の腫瘍細胞中に発現される。
【０２０７】
ＭＴＳＰ２２
ＭＴＳＰ２２は、子宮組織、胸腺、脂肪組織およびリンパ節中に発現される。それはまた、肺、胃、子宮、乳房、卵巣、前立腺もしくは他の腫瘍中にも発現され得る。ＭＴＳＰ２２転写物は、或る子宮組織試料中に検出されたが、それらのマッチド腫瘍試料中には検出されなかった。４２個の子宮試料の１つの中で、ＭＴＳＰ２２は、腫瘍およびその転移組織中に発現されるが、対応する正常組織中には発現されない。ＭＴＳＰ２２はまた、或る胃の腫瘍および肺の腫瘍中に発現されるが、それらの対応する正常組織中には発現されない。ＭＴＳＰ２２はまた、膵臓のマッチドｃＤＮＡ対の正常な組織中に発現される。ＭＴＳＰ２２をコード化するｃＤＮＡは、胸腺、脂肪組織、およびリンパ節中で検出された。
【０２０８】
ＭＴＳＰ２５
ＭＴＳＰ２５は、乳腺、結腸、子宮、卵巣、腎臓、前立腺、精巣のがん組織中に発現される。それはまた、肺、胃、前立腺および他の腫瘍中で発現され得る。ＭＴＳＰ２５転写物は、リンパ節中に弱く発現される。がんプロファイリングアレイ分析において、ＭＴＳＰ２５は、前立腺試料(正常およびがん試料)中に高度に発現される。ＭＴＳＰ２５は腎臓腫瘍試料中に高度に発現されたが、その対応する正常組織中には発現されなかった。ＭＴＳＰ２５はまた、乳がん試料中に発現されたが、その対応する正常組織中には発現されなかった。ＭＴＳＰ２５は、正常な子宮試料中に発現されたが、それらの対応する腫瘍中には発現されなかった。ＭＴＳＰ２５発現はまた、卵巣がん試料中に検出された。これら３つの試料の中で、ＭＴＳＰ２５の発現はまた、対応するマッチド正常組織の１つの中で検出された。ＭＴＳＰ２５発現はまた、結腸ｃＤＮＡ対中の腫瘍試料中に検出された。
ＰＣＲ分析は、ＭＴＳＰ２５  ｃＤＮＡが精巣および乳腺の線がん中で強く検出されて、脳、胎盤、肺、脾臓、前立腺、小腸、結腸、および白血球中に弱く検出されて、そして心臓、肝臓および膵臓に非常に弱く検出された。
【０２０９】
２．エンドセリアーゼ
エンドセリアーゼは、細胞、特に内皮細胞、特にそれらの増殖中の内皮細胞、の上に発現される細胞表面プロテアーゼのクラスであり、それらは、腫瘍成長および転移、ならびに再狭窄、瘢痕、糖尿病性網膜症、前眼部の疾患および障害のような他の過剰増殖性障害に関連する望ましくない血管形成を含む、種々の増殖過程に関与している(２０００年１１月２０日出願の米国出願一連番号第０９／７１７,４７３号、および国際ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ００／３１８０３号を参照)。
【０２１０】
増殖性疾患
エンドセリアーゼは、異常な血管形成を含む任意の障害の処置のための治療薬の送達のために特に有用な標的である。内皮細胞は、親の微小血管からの新しい血管の生成であるところの血管形成において重要な役割を果たしている。血管形成は、がんの転移および種々の他の障害の病変において主要な役割を演じている。
【０２１１】
制御されたおよび制御されない血管形成は類似の方法で進行する。基質膜に囲まれた、内皮細胞および周細胞は、毛細血管を形成する。血管形成は、内皮細胞および白血球により放出される酵素による基質膜の侵食で始まる。血管の内腔を内張りしている内皮細胞は、次いで基質膜から突き出る。血管形成刺激剤は、内皮細胞が侵食された基質膜を抜けて移動するのを誘導する。移動する細胞は親の血管から“出芽”を形成し、そこで内皮細胞は細胞分裂と増殖を受ける。内皮細胞の出芽はお互いに合流して、毛細ループを形成し、新しい血管を創成する。
【０２１２】
血管形成、モジュレーターおよび関連疾患
血管形成は、血管形成刺激剤および阻害剤のシステムにより高度に調節される。血管形成刺激剤の既知の例としては、特定の成長因子、サイトカイン、タンパク質、ペプチド、炭水化物および脂質が挙げられる(Norrby (1997) APMIS 105:417-437); Polverini (1995) Crit. Rev. Oral. Biol. Med. 6:230-247)。種々の内在性および外来性血管形成阻害剤が当分野で公知である(Jackson et al. (1997) FASEB 11:457-465; Norrby (1997) APMIS 105:417-437); and O'Reilly (1997) Investigational New Drugs, 15:5-13)。
【０２１３】
血管形成は、正常な胎盤、胚、胎児および生後の発生および成長に必須であるが、非常に特定の限定された状況を除いて成人では生理的には殆ど決して起こらない。例えば、血管形成は、創傷治癒、胎児および胚の発生ならびに黄体、子宮内膜および胎盤の形成において通常観察される。成人における血管形成はしばしば疾患状態と関連している。
【０２１４】
持続性の調節されない血管形成が、多数の疾患状態、腫瘍転移、および内皮細胞による異常成長において起こり、これらの異常において見られる病理学的損傷を支持する。調節されない血管形成が存在する多様な病的疾患状態は、血管形成依存性もしくは血管形成関連疾患として一緒にグループ分けされている。
【０２１５】
血管形成の制御は、特定の疾患状態で変化し、多くの場合には、疾患に関連する病理学的損傷は、制御されない血管形成に関連する(一般的には、Norrby (1997) APMIS 105:417-437); and O'Reilly (1997) Investigational New Drugs 15:5-13を参照)。かくして、血管形成は、種々の疾患、例えば、関節リウマチ、乾癬、糖尿病性網膜炎のような種々の炎症性疾患、翼状片の再発、エキシマーレーザー手術および緑内障の濾過手術からの瘢痕、前眼部の種々の障害を含む、特定の眼疾患、心臓血管系障害、慢性炎症性疾患、創傷修復、循環系障害、ＣＲＥＳＴ症候群、皮膚疾患(例えば、米国特許第５,５９３,９９０号,第５,６２９,３２７号および第５,７１２,２９１号を参照)ならびにとりわけ固形新生物形成および血管腫瘍を含むがんの発現もしくは進行に関与している。血管形成は、固形腫瘍の成長および存続ならびにそれらの転移に必須である。この活性の抑制、除去もしくは調整は、これらの疾患の病因に影響し、そして治療的介入のポイントとして役立つに違いない。疾患状態において、血管形成の阻止は、新しい微小血管系の浸潤により引き起こされる損傷を避けることができるであろう。血管形成過程の制御を目指した治療は、これらの疾患の抑止もしくは緩和に導くことができるであろう。したがって、血管形成をターゲティングし、異常もしくは制御されない血管形成を調整する、特に阻害する、治療剤を開発する必要がある。
【０２１６】
したがって、エンドセリアーゼ基質を含有する結合体を用いて、関節リウマチ、乾癬、糖尿病性網膜症、翼状片の再発、エキシマーレーザー手術および緑内障の濾過手術からの瘢痕、前眼部の種々の障害を含む他の眼疾患、心臓血管系疾患、自己免疫疾患、慢性炎症性疾患、創傷、循環系障害、ＣＲＥＳＴ症候群、乾癬および他の皮膚疾患(例えば米国特許第５,５９３,９９０号、第５,６２９,３２７号および第５,７１２,２９１号を参照)、ならびにとりわけ固形新生物形成および血管腫瘍を含むがんを含むが、それらに限定されない、疾患の処置のための治療薬を送達することができる。
【０２１７】
エンドセリアーゼ１および２
エンドセリアーゼの例示は、エンドセリアーゼ１およびエンドセリアーゼ２と呼称される２つの異なるエンドセリアーゼおよびそれらの変異型(配列番号２１〜２７を参照)である。ファミリーの他のメンバーは、本明細書において同定されたエンドセリアーゼのプロテアーゼドメインと配列同一性、特に少なくとも４０％、６０％、８０％、９０％、９５％、９８％もしくはそれより大きい配列同一性を有するか、または本明細書において提供されるエンドセリアーゼのプロテアーゼドメインをコード化する核酸の完全長と高い厳密度の条件下でハイブリダイズし、そして内皮細胞上に発現される遺伝子について遺伝子を精査することにより、またはライブラリーを検索することにより同定されることができる。
【０２１８】
これに代えて、そしてさらに低い配列同一性を有し得るエンドセリアーゼを同定する方式として、エンドセリアーゼは、プロテアーゼと類似の配列を有するＥＳＴもしくは他の核酸フラグメントを同定することおよび、次いでそのようなフラグメントをプローブとして用いることにより、完全長プロテアーゼもしくはそれらのプロテアーゼドメインをコード化するｃＤＮＡクローンを同定しかつ選択し、膜貫通タンパク質の特色を有するものを同定し、そして次いで遺伝子発現プロフィールを測定して、内皮細胞上に発現されるものを同定するような方法によって同定されることができる。膜貫通ドメインおよび細胞外ドメインを含み、そして内皮細胞中に発現されるプロテアーゼ活性を有するところのコード化されたタンパク質が、エンドセリアーゼである。内皮細胞上に発現される膜貫通プロテアーゼをコード化するタンパク質をコード化する遺伝子(もしくはタンパク質)を同定する任意の方法が、本明細書において意図される。
【０２１９】
エンドセリアーゼ１
エンドセリアーゼの例示はエンドセリアーゼ１およびエンドセリアーゼ２である。これらは内皮細胞上に発現される。完全長エンドセリアーゼ１の例示は、配列番号４２に示すアミノ酸の配列を含むものである(扁平上皮がんおよび前立腺腫瘍中に発現される、ＤＥＳＣ１と呼称する遺伝子を記述する、国際ＰＣＴ出願第ＷＯ  ００／５００６号、を参照)。記述のように、エンドセリアーゼは内皮細胞上に発現される。そのプロテアーゼドメインは配列番号２２に示される。
【０２２０】
エンドセリアーゼ１の発現プロフィール
エンドセリアーゼ１の組織分布に関する情報を得るために、クローンＨ１１７のＤＮＡ挿入断片を用いて、７６の異なるヒト組織よりなるＲＮＡブロット(カタログ番号７７７５−１；ヒト多重組織発現(ＭＴＥ)アレイ；CLONTECH, Palo Alto, CA)を精査した。食道中に有意な発現が観察され、胃、唾液腺、膵臓、前立腺、膀胱、気管、および子宮に軽度の発現レベルがあった。ＲＮＡブロット(カタログ番号７７６５−１および７７８２−１；ヒト筋肉および消化器多重組織ノザン(ＭＴＮ)ブロット；CLONTECH)を用いるノザン分析は、発現が食道に限定されたことを確認した。２つの転写物(およそ１.７および２ｋｂ)が食道で検出された。エンドセリアーゼ１はまた、臍帯静脈の内皮細胞、ＰＣ３およびＬｎＣＡＰ細胞、の中に発現される。
【０２２１】
エンドセリアーゼ２およびエンドセリアーゼ２をコード化する核酸
エンドセリアーゼ２−Ｓおよびエンドセリアーゼ２−Ｌと呼称されるエンドセリアーゼ２の二つのスプライス変異体が、本明細書において例示される(配列番号２３〜２６を参照)。エンドセリアーゼ２−Ｓをコード化するオープンリーディングフレーム(配列番号２３)は１,６８９ｂｐより成り、５６２個のアミノ酸のタンパク質(配列番号２４)に翻訳し、一方でエンドセリアーゼ２−ＬのＯＲＦは２,０６７ｂｐより成り(配列番号２５)、６８８個のアミノ鎖のタンパク質(配列番号２６)に翻訳する。
【０２２２】
エンドセリアーゼ２−Ｓのプロテアーゼドメインをコード化する核酸は、２４２個のアミノ酸のタンパク質(配列番号２３および２４のアミノ酸３２１〜５６２)に翻訳する７２９ｂｐより成り、一方でエンドセリアーゼ２−Ｌのそれは、３６８個のアミノ酸のタンパク質(配列番号２５および２６のアミノ酸３２１〜６８８)に翻訳する１０７ｂｐより成る。
【０２２３】
エンドセリアーゼ２タンパク質
配列番号２２、２４、２６および２７のアミノ酸配列を含むかもしくは上述のような条件下でそれとハイブリダイズする核酸によりコード化されるような、上記のエンドセリアーゼおよび／またはそのプロテアーゼドメインの任意のならびに全てが、本明細書における方法での使用のために意図される。また、上の表１に示すそれらのようなアミノ酸配列変化を含み、プロテアーゼ活性を保持するタンパク質が、本明細書において意図される。
【０２２４】
正常および腫瘍の組織中のエンドセリアーゼ２の遺伝子発現プロフィールおよび転写サイズ
内皮細胞中での発現に加えて、エンドセリアーゼ２は胎盤、膵臓、甲状腺、肝臓および肺の組織中で発現される。それはまた、乳腺、唾液腺、腎臓、気管、食道、虫垂、心臓および胎児肺中でさらに低いレベルで発現される。エンドセリアーゼ２はまた、いくつかの腫瘍細胞株中に、およびしたがって、肺および結腸を含み、乳がん腫、肺がん腫、結腸腺がん、膵臓腺がん(ＧＩ−１０３)、および卵巣がん腫を含む特定の腫瘍中に発現される。それはまた、前立腺および線維肉腫細胞株中に検出される。
【０２２５】
Ｃ．結合体
細胞の表面上のプロテアーゼ、特にタイプＩＩ膜結合セリンプロテアーゼおよびエンドセリアーゼを含むセリンプロテアーゼ、に対する基質である結合体が提供される。細胞に関連するかもしくは局在するプロテアーゼを含む、任意の細胞表面プロテアーゼが、本明細書において意図される。一般的には、必須組織で活性な形で高レベルで発現されるプロテアーゼは、理想的な標的候補ではない。プロテアーゼとしては、比較的限られた数の細胞上で発現されるか、もしくは腫瘍細胞ならびに内皮細胞ならびに免疫細胞のような細胞に高レベルで発現されるもの、疾患状態に関与しているか、もしくは疾患状態において疾患状態に関与している細胞の現場で疾患状態に存在するものが挙げられる。例えば、内皮細胞は、血管形成におけるそれらの役目のお蔭で、多数の増殖性障害に関与する；免疫細胞はがんおよび疾患ならびに炎症性障害を含む多くの疾患過程に関与する。他の細胞表面プロテアーゼは、正常細胞中よりも特定の腫瘍中により高レベルで発現される。そのようなプロテアーゼが障害に役割を持つか否かに拘わりなく、疾患状態に関与する細胞中におけるそれらのより高い発現は、本明細書において提供される結合体中の治療薬をターゲティングするための使用に十分である。
【０２２６】
細胞毒剤のような治療薬を含有する結合体は、細胞関連性もしくは細胞局在性プロテアーゼを含む、細胞表面プロテアーゼによる切断で活性化される。そのようなプロテアーゼの例は、ＭＴＳＰ１、ＭＴＳＰ３、ＭＴｓＰ４、ＭＴＳＰ６、ＭＴＳＰ７、ＭＴＳＰ９、ＭＴＳＰ１０、ＭＴＳＰ１２、ＭＴＳＰ２０、ＭＴＳＰ２２、ＭＴＳＰ２５のようであるが、それらに限定されない、ＭＴＳＰ類、ウロキナーゼおよびエンドセリアーゼである。したがって、そのようなプロテアーゼに標的とされた結合体は、投与時には治療薬が不活性で、標的とされた細胞もしくは組織の近傍で最終的に活性化されることにおいてプロドラッグである。膜貫通プロテアーゼのような細胞表面プロテアーゼが意図される標的であるが、プロテアーゼおよび他の任意の分泌された、脱落した、もしくは可溶性の形もターゲティングされ得る。
【０２２７】
かくして、細胞毒剤のような治療薬を含有する結合体は、細胞表面プロテアーゼ、即ち、標的とされた細胞表面プロテアーゼに対する基質であるペプチド部分(即ち、ペプチド性基質)、および任意にリンカーによる作用以前には実質的に不活性である。結合体中の治療薬は、細胞表面プロテアーゼによる結合体のペプチド性基質の切断により活性化される。細胞毒剤のような治療薬は、遊離の薬剤として放出されるか、もしくはこれに代えて、薬剤が結合体中で任意にリンカーを介して結合しているペプチド性基質(Ｐ１−Ｐ２−Ｐ３−等(即ち、Ｎ末端)もしくはＰ１’−Ｐ２’−等(即ち、Ｃ末端))の一部と結合したままで放出される。これらの形の細胞毒剤は、プロテアーゼを発現する細胞の近傍に放出される。特定の実施態様においては、細胞表面プロテアーゼの作用の結果、細胞毒剤のような治療薬が細胞膜を通過し、もしくはそうでなければ細胞もしくは組織と相互作用することができて、治療活性を示すので、活性化が達成される。他の実施態様においては、任意の残存するペプチド性部分もしくはアミノ酸が、治療薬から切断されて、それを活性とすることができる。治療薬は結合しているときには実質的に不活性であるので、結合体はプロドラッグとして作用する。標的とされたプロテアーゼによる切断で、治療薬は活性型でか、もしくは標的とされた細胞、組織もしくは周囲の環境により活性化される形でかのどちらかで放出される。
【０２２８】
一つの例示的実施態様において、標的とされた薬剤は細胞毒剤であって、本明細書において提供される方法および組成物における使用のための結合体は、式：
(ペプチドｉ)Ｓ−(リンカー)ｑ−(細胞毒剤)ｔ
もしくはその誘導体を有し、そこでは、ペプチドｉは、細胞表面プロテアーゼ、または放出された、脱落した、もしくはそうでなければ、ＭＴＳＰのような、結合から離れた膜プロテアーゼであり；ｓは、１より大きいかもしくは等しく、または１〜６、または１もしくは２、または１であり；リンカーは、任意のリンカーであり；ｑは、０より大きいかもしくは等しく、または０〜４、または０もしくは１であり；細胞毒剤は、抗腫瘍、抗がんもしくは抗-抗血管形成剤を含む抗−細胞分裂剤であり；ｔは１もしくはそれ以上、または１もしくは２である。これらの結合体において、細胞毒剤は、任意にリンカーを介して、ペプチド性基質のＣ末端かもしくはＮ末端かのどちらかに共有結合で付着される。細胞毒剤のような治療薬がペプチド性基質のＣ末端に付着される、実施態様においては、Ｎ末端は任意にキャッピングされる。本明細書においての使用のためのＮ末端のキャップは、アシル、スルホニルおよびカルバモイル基を含むが、それらに限定されない。治療薬がペプチド性基質のＮ末端に付着される、実施態様においては、Ｃ末端はカルボキサミド誘導体である。
【０２２９】
特定の実施態様においては、ペプチドｉは細胞表面プロテアーゼもしくは可溶性ＭＴＳＰに対するペプチド性基質であり、それにより、プロテアーゼの作用で、実質的に不活性である結合体が、Ｐ１−Ｐ１’結合において切断されて、インビトロおよびインビボで細胞毒活性のような治療活性を発現するところの式：
(ペプチドａ)Ｓ−(リンカー)ｑ−(細胞毒剤)ｔ
の化合物もしくはその誘導体を放出する。これらの化合物において、ペプチドａは、Ｐ１−Ｐ１’結合における切断からもたらされるペプチドｉの切断型である。
【０２３０】
もう一つの実施態様において、本明細書において提供される方法および組成物における使用のための結合体は、細胞表面プロテアーゼもしくは可溶性ＭＴＳＰに対するペプチド性基質のそれぞれＣ末端およびＮ末端に、任意にリンカーであるリンカー１およびリンカー２を介して結合した、同一もしくは異なるところの、細胞毒剤のような、二つの治療薬を所有する。この実施態様において、結合体は式：
(治療薬１)ｘ−(リンカー１)ｗ−(ペプチドｉ)ｓ−(リンカー２)ｑ−(治療薬２)ｔ
もしくはその誘導体を有し、そこでは、ペプチドｉは、細胞表面プロテアーゼもしくは可溶性ＭＴＳＰに対するペプチド性基質であり；ｓは、１より大きいか等しく、または１〜６、または１もしくは２、または１であり；リンカー１およびリンカー２は、それぞれ独立の任意のリンカーであって、同一もしくは異なっていて；ｑおよびｗは、それぞれ独立に０より大きいかもしくは等しく、または０〜４、または０もしくは１であり；同一もしくは異なる治療薬は、抗腫瘍、抗がんもしくは抗−細胞分裂剤であり；ｔおよびｘは、それぞれ独立に１もしくはそれ以上、または１もしくは２である。
【０２３１】
これらの実施態様において、ペプチドｉは、細胞表面プロテアーゼもしくは可溶性ＭＴＳＰに対するペプチド性基質であり、それにより、プロテアーゼの作用で、実質的に不活性である結合体は、ペプチド鎖上の点において切断されて、式：
(治療薬１)ｘ−(リンカー１)ｗ−(ペプチドａ１)ｓ；および
(ペプチドａ２)ｓ−(リンカー２)ｑ−(治療薬２)ｔ
の二つの化合物もしくはそれらの誘導体を放出する。放出された治療薬は活性であるか、または細胞、組織もしくは周囲の環境によりさらに活性化される。これらの化合物において、ペプチドａ１およびペプチドａ２は、Ｐ１−Ｐ’結合における切断からもたらされるペプチドｉの、それぞれ、Ｎ末端およびＣ末端の切断部分である。
【０２３２】
一つの実施態様において、本明細書において提供される組成物および方法における使用のための結合体は式１：
Ｘｎ−(Ｐ６)ｍ−(Ｐ５)ｐ−(Ｐ４)ｉ−(Ｐ３)ｊ−(Ｐ２)ｌ−Ｐ１−(Ｐ１’)ｕ−(Ｐ２’)ｋ−(Ｐ３’)ｒ−(Ｌ)ｎ−Ｚ
もしくはその誘導体を有し、そこでは、Ｚは、治療薬であり；Ｌは、リンカーであり；ｌ、ｊ、ｉ、ｐおよびｍは、次のように選択される：
ｌは０もしくは１であり；ｌが０のときは、ｊ、ｉ、ｐおよびｍは、０であり；ｌが１のときは、ｊは、０もしくは１であり；ｊが０のときは、ｉ、ｐおよびｍは、０であり；ｊが１のときは、ｉは、０もしくは１であり；ｉが０のときは、ｐおよびｍは、０であり；ｉが１のときは、ｐは、０もしくは１であり；ｐが０のときは、ｍは、０であり；ｐが１のときは、ｍは、０もしくは１であり；
ｕ、ｋおよびｒは、次のように選択される：
ｕは、０もしくは１であり；ｕが０のときは、ｋおよびｒは、０であり；ｕが１のときは、ｋは、０もしくは１であり；ｋが０のときは、ｒは、０であり；ｋが１のときは、ｒは、０もしくは１であり；
ｎは、０もしくは１であり；Ｘｎは、水素、またはアシル、スルホニルもしくはカルバモイルキャップであり；そしてＰ６〜Ｐ３’は、以下に定義されるようなアミノ酸残基である。この実施態様において、Ｐ６〜Ｐ３’残基は、ペプチド結合もしくはペプチド結合代理体によって結合される。かくして、結合体のＰ６〜Ｐ３’の部分は本明細書において定義されるような、ペプチド性基質である。
【０２３３】
もう一つの実施態様において、本明細書において提供される組成物および方法における使用のための結合体は式ＩＩ：
Ｚ−(Ｌ)ｎ−(Ｐ６)ｍ−(Ｐ５)ｐ−(Ｐ４)ｉ−(Ｐ３)ｊ−(Ｐ２)ｌ−Ｐ１−(Ｐ１')ｕ−(Ｐ２')ｋ−(Ｐ３')ｒ−Ｘｃ
もしくはその誘導体を有し、そこにおいて、Ｚは、治療薬であり；Ｌは、リンカーであり；l、ｊ、ｉ、ｐおよびｍは、次のように選択される：
ｌは、０もしくは１であり；ｌが０のときは、ｊ、ｉ、ｐおよびｍは、０であり；ｌが１のときは、ｊは、０もしくは１であり；ｊが０のときは、ｉ、ｐおよびｍは、０であり；ｊが１のときは、ｉは０もしくは１であり；ｉが０のときは、ｐおよびｍは０であり；ｉが１のときは、ｐは、０もしくは１であり；ｐが０のときは、ｍは、０であり；ｐが１のときは、ｍは、０もしくは１であり； 
ｕ、ｋおよびｒは、次のように選択される：
ｕは、０もしくは１であり；ｕが０のときは、ｋおよびｒは、０であり；ｕが１のときは、ｋは、０もしくは１であり；ｋが０のときは、ｒは、０であり；ｋが１のときは、ｒは、０もしくは１であり；
ｎは、０もしくは１であり；Ｘｃは、それが付着しているアミノ酸残基のカルボニル基と一緒に、カルボン酸もしくはカルボキサミド基を形成し；そしてＰ６〜Ｐ３’は以下に定義されるような、アミノ酸残基である。この実施態様において、Ｐ６〜Ｐ３’残基は、ペプチド結合もしくはペプチド結合代理体によって結合される。かくして、結合体のＰ６〜Ｐ３’の部分は、本明細書において定義されるような、ペプチド性基質である。
【０２３４】
さらなる実施態様において、本明細書において提供される組成物および方法における使用のための結合体は式ＩＩＩ：
Ｚ１−(Ｌ１)ｎ−(Ｐ６)ｍ−(Ｐ５)ｐ−(Ｐ４)ｉ−(Ｐ３)ｊ−(Ｐ２)ｌ−Ｐ１−(Ｐ１’)ｕ−(Ｐ２’)ｋ−(Ｐ３’)ｒ−(Ｌ２)ｖ−Ｚ２
もしくはその誘導体を有し、そこでは、Ｚ１およびＺ２は、それぞれ治療薬であって、同一もしくは異なっていて；Ｌ１およびＬ２は、それぞれリンカーであって、同一もしくは異なっていて；l、ｊ、ｉ、ｐおよびｍは、次のように選択される：
ｌは、０もしくは１であり；ｌが０のときは、ｊ、ｉ、ｐおよびｍは、０であり；ｌが１のときは、ｊは、０もしくは１であり；ｊが０のときは、ｉ、ｐおよびｍは、０であり；ｊが１のときは、ｉは、０もしくは１であり；ｉが０のときは、ｐおよびｍは、０であり；ｉが１のときは、ｐは、０もしくは１であり；ｐが０のときは、ｍは、０であり；ｐが１のときは、ｍは、０もしくは１であり；
ｕ、ｋおよびｒは次のように選択される：
ｕは、０もしくは１であり；ｕが０のときは、ｋおよびｒは、０であり；ｕが１のときは、ｋは、０もしくは１であり；ｋが０のときは、ｒは、０であり；ｋが１のときは、ｒは、０もしくは１であり；
ｎおよびｖは、それぞれ独立に０もしくは１であり；そしてＰ６〜Ｐ３’は、以下に定義されるようなアミノ酸残基である。この実施態様において、Ｐ６〜Ｐ３’残基は、ペプチド結合もしくはペプチド結合代理体によって結合される。かくして、結合体のＰ６〜Ｐ３’の部分は、本明細書において定義されるような、ペプチド性基質である。
【０２３５】
もう一つの実施態様において、本明細書において提供される組成物および方法における使用のための結合体は式ＩＶ：
Ｘｎ−(Ｐ６)ｍ−(Ｐ５)ｐ−(Ｐ４)ｉ−(Ｐ３)ｊ−(Ｐ２)ｌ−Ｐ１−(Ｐ１')ｕ−(Ｐ２')ｋ−(Ｐ３')ｒ−(Ｐ４')ｓ−(Ｌ)ｎ−Ｚ
もしくはその誘導体を有し、そこでは、Ｚは、治療薬であり；Ｌは、リンカーであり；l、ｊ、ｉ、ｐおよびｍは、次のように選択される：
ｌは、０もしくは１であり；ｌが０のときは、ｊ、ｉ、ｐおよびｍは、０であり；ｌが１のときは、ｊは、０もしくは１であり；ｊが０のときは、ｉ、ｐおよびｍは、０であり；ｊが１のときは、ｉは０もしくは１であり；ｉが０のときは、ｐおよびｍは０であり；ｉが１のときは、ｐは、０もしくは１であり；ｐが０のときは、ｍは、０であり；ｐが１のときは、ｍは、０もしくは１であり；
ｕ、ｋ、ｒおよびｓは、次のように選択される：
ｕは、０もしくは１であり；ｕが０のときは、ｋ、ｒおよびｓは、０であり；ｕが１のときは、ｋは、０もしくは１であり；ｋが０のときは、ｒおよびｓは、０であり；ｋが１のときは、ｒは０もしくは１であり；ｒが０のときは、ｓは０であり；ｒが１のときは、ｓは、０もしくは１であり；
ｎは、０もしくは１であり；Ｘｎは、水素、またはアシル、スルホニルもしくはカルバモイルキャップであり；そしてＰ６〜Ｐ４’は、以下に定義されるようなアミノ酸残基である。この実施態様において、Ｐ６〜Ｐ４’残基は、ペプチド結合もしくはペプチド結合代理体によって結合される。かくして、結合体のＰ６〜Ｐ４’の部分は、本明細書において定義されるような、ペプチド性基質である。
【０２３６】
もう一つの実施態様において、本明細書において提供される組成物および方法における使用のための結合体は式Ｖ：
Ｚ−(Ｌ)ｎ−(Ｐ６)ｍ−(Ｐ５)ｐ−(Ｐ４)ｉ−(Ｐ３)ｊ−(Ｐ２)ｌ−Ｐ１−(Ｐ１')ｕ−(Ｐ２')ｋ−(Ｐ３')ｒ−(Ｐ４')ｓ−Ｘｃ
もしくはその誘導体を有し、そこでは、Ｚは、治療薬であり；Ｌは、リンカーであり；l、ｊ、ｉ、ｐおよびｍは、次のように選択される：
ｌは、０もしくは１であり；ｌが０のときは、ｊ、ｉ、ｐおよびｍは、０であり；ｌが１のときは、ｊは、０もしくは１であり；ｊが０のときは、ｉ、ｐおよびｍは、０であり；ｊが１のときは、ｉは、０もしくは１であり；ｉが０のときは、ｐおよびｍは、０であり；ｉが１のときは、ｐは、０もしくは１であり；ｐが０のときは、ｍは、０であり；ｐが１のときは、ｍは、０もしくは１であり；
ｕ、ｋ、ｒおよびｓは次のように選択される：
ｕは、０もしくは１であり；ｕが０のときは、ｋ、ｒおよびｓは、０であり；ｕが１のときは、ｋは、０もしくは１であり；ｋが０のときは、ｒおよびｓは、０であり；ｋが１のときは、ｒは、０もしくは１であり；ｒが０のときは、ｓは、０であり；ｒが１のときは、ｓは、０もしくは１であり；
ｎは、０もしくは１であり；ＸＣは、それが付着しているアミノ酸残基のカルボニル基と一緒に、カルボン酸もしくはカルボキサミド基を形成し；そしてＰ６〜Ｐ４’は、以下に定義されるようなアミノ酸残基である。この実施態様において、Ｐ６〜Ｐ４’残基は、ペプチド結合もしくはペプチド結合代理体によって結合される。かくして、結合体のＰ６〜Ｐ４’の部分は、本明細書において定義されるような、ペプチド性基質である。
【０２３７】
さらなる実施態様において、本明細書において提供される組成物および方法における使用のための結合体は式ＶＩ：
Ｚ１−(Ｌ１)ｎ−(Ｐ６)ｍ−(Ｐ５)ｐ−(Ｐ４)ｉ−(Ｐ３)ｊ−(Ｐ２)ｌ−Ｐ１−(Ｐ１')ｕ−(Ｐ２')ｋ−(Ｐ３')ｒ−(Ｐ４')ｓ−(Ｌ２)ｖ−Ｚ２
もしくはその誘導体を有し、そこでは、Ｚ１およびＺ２は、それぞれ独立に治療薬であって、同一であるか異なっていて；Ｌ１およびＬ２は、それぞれリンカーであって、同一もしくは異なっていて；l、ｊ、ｉ、ｐおよびｍは、次のように選択される：
ｌは、０もしくは１であり；ｌが０のときは、ｊ、ｉ、ｐおよびｍは、０であり；ｌが１のときは、ｊは、０もしくは１であり；ｊが０のときは、ｉ、ｐおよびｍは、０であり；ｊが１のときは、ｉは、０もしくは１であり；ｉが０のときは、ｐおよびｍは、０であり；ｉが１のときは、ｐは、０もしくは１であり；ｐが０のときは、ｍは、０であり；ｐが１のときは、ｍは、０もしくは１であり；
ｕ、ｋ、ｒおよびｓは、次のように選択される：
ｕは、０もしくは１であり；ｕが０のときは、ｋ、ｒおよびｓは、０であり；ｕが１のときは、ｋは、０もしくは１であり；ｋが０のときは、ｒおよびｓは、０であり；ｋが１のときは、ｒは、０もしくは１であり；ｒが０のときは、ｓは、０であり；ｒが１のときは、ｓは、０もしくは１であり；
ｎおよびｖは、それぞれ独立に０もしくは１であり；そしてＰ６〜Ｐ４’は、以下に定義されるようなアミノ酸残基である。この実施態様において、Ｐ６〜Ｐ４’残基は、ペプチド結合もしくはペプチド結合代理体によって結合される。かくして、結合体のＰ６〜Ｐ４’の部分は、本明細書において定義されるような、ペプチド性基質である。
【０２３８】
例示的ペプチド性基質、治療薬、リンカー、および式Ｉ〜ＶＩの例示的結合体を以下にさらに詳細に記述する。本明細書において、式Ｉ〜ＶＩの変数について以下に記載するグループの全ての組み合わせおよび／もしくは並べ替えにより生じる結合体は、本開示内に包含されるものとする。
【０２３９】
１．ペプチド性基質
結合体における使用のために意図されるペプチド性基質は、標的とされた細胞表面プロテアーゼまたはその可溶性の、離脱した、もしくは放出された形に対する基質であり、結合体中の任意の治療薬を実質的に不活性な結合体にするに充分な数のアミノ酸残基を含有する。治療薬が、例えば、ドキソルビシンである、例示的実施態様において、結合した治療薬が細胞膜を通過することができないお蔭で結合体は、実質的に不活性である。特定の実施態様において、ペプチド性基質は、少なくとも１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸残基を含有し、９もしくは１０残基まで含有することができる。さらに長いペプチド性基質は、切断で、得られた治療薬または治療薬−アミノ酸もしくは−ペプチド部分の結合体が、インビボおよびインビトロで所望の治療効果を示す限り、結合体中に使用することができる。
【０２４０】
したがって、本明細書において提供される結合体における使用のための例示的ペプチド性基質は、少なくとも１個のアミノ酸(Ｐ１)、２個のアミノ酸(Ｐ１−Ｐ１’)、３個のアミノ酸(Ｐ２−Ｐ１−Ｐ１’)を所有し、そして典型的に４、５もしくは６個のアミノ酸残基(Ｐ３−Ｐ２−Ｐ１−Ｐ１’、Ｐ４−Ｐ３−Ｐ２−Ｐ１−Ｐ１’、Ｐ４−Ｐ３−Ｐ２−Ｐ１−Ｐ１’−Ｐ２’)を含有し、そこでは、Ｐ１−Ｐ１’結合は、例えば、その受容体に結合したｕＰＡ、ＭＴＳＰｓおよびエンドセリアーゼを含むが、それらに限定されない、セリンプロテアーゼのような細胞表面プロテアーゼを含むが、それらに限定されない、細胞表面プロテアーゼまたはその可溶性の、脱落した、もしくは放出された形の切断部位である。ペプチド性基質は任意にさらに、Ｐ５、Ｐ６もしくはＰ３’アミノ酸残基を所有し、そして特定の実施態様において、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ４’、Ｐ５’、Ｐ６’残基を所有する。かくして、本明細書において提供される結合体における使用のためのペプチド性基質は、ペンタ−、ヘキサ−、ヘプタ−、オクタ−、およびノナ−ペプチド性基質であって、プロテアーゼによる結合体の切断で、得られた治療薬または治療薬−アミノ酸もしくは−ペプチド部分の結合体はインビボおよびインビトロで所望の治療効果を示す限り、１０、１１、１２、１３、１４、１５もしくはそれ以上の残基を含有することができる。
【０２４１】
ペプチド性基質は、Ｃ末端残基(即ち、Ｐ１’、Ｐ２’もしくはＰ３’)またはＮ末端残基(即ち、Ｐ６、Ｐ５もしくはＰ４)、または任意に内部の残基を介して、治療薬に(もしくは治療薬が結合しているリンカーに)結合される。ペプチド性基質は、例えば、直鎖である得るが、環状であるかもしくは環状部分を含むことができる。
【０２４２】
結合がペプチド性基質のＣ末端を介する、実施態様において、ペプチド性基質は、任意にアシルもしくはカルバモイルキャップのようなキャップをＮ末端に所有する。結合がペプチド性基質のＮ末端を介する、実施態様において、ペプチド性基質はさらに、カルボキサミド基のような末端基をＣ末端に所有する。
【０２４３】
結合体は、複数のペプチド性基質および複数の治療薬を含有することができる。例えば、同一もしくは異なる２個の治療薬を含有する結合体において、治療薬(複数を含む)もしくはそれに結合したリンカーへの結合は、ペプチド性基質のＣ末端およびＮ末端残基を介することができる。
【０２４４】
基質の選択に関して上に説明した方法を用いて、適当な基質をデザインすることができる。加えて、基質を、他のプロテアーゼの既知の特異性に基づいてデザインすることができる。例えば、トリプシン様およびトリプシンファミリーのメンバーの特異性は可能な基質のデザインにおいて助けとなり得る。以下に特定のセリンプロテアーゼに対する基質の優先度を要約する(例えば、Harris et al. (2000) PNAS 97(14):7754-7759を参照)。
【０２４５】
【表３】
2005518332.tif 000023
【０２４６】
結合体の調製のための典型的なプロトコールは：１)標的とされたプロテアーゼの同定；２)発現およびアッセイの開発；３)例えば、色素産生性もしくは蛍光発生性基質を試験して、選択された標的プロテアーゼにより切断されるものを同定することにより、基質ファージディスプレーを使用して、標的とされたプロテアーゼにより切断されるペプチド性基質を同定することにより、天然タンパク質もしくはペプチド基質またはプロテアーゼの天然の阻害剤を使用して、そしてコンビナトリアルライブラリーを使用して、標的とされた基質によって切断される基質を同定することによるような基質の選択；４)同定された基質を含有する結合体の合成；ならびに５)インビトロアッセイ、細胞培養アッセイ、生物学的アッセイ、およびインビボ動物モデルを含むが、それらに限定されない、その生物学的評価、のステップを含むことができる(例えば実施例１０を参照)。
【０２４７】
結合体を、当業者に公知の任意の方法によりデザインすることができる。以下は、例示的プロトコールを提供する。第一に、一連の市販で入手可能な色素産生性および蛍光発生性のペプチド性基質を興味のあるプロテアーゼによる切断について試験することができる(例示的色素産生性および蛍光発生性基質および表については以下の実施例を参照)。これらの基質のペプチド性部分は、プロテアーゼのプライミングされていない結合部位を占有し、一方でレポーター基は、切断可能結合のプライミングされた側に位置する。次いで、有効な結合体を、プロテアーゼにより効率的に切断される基質の構造に基づいてデザインすることができる。
【０２４８】
これらの効率的に切断される基質のペプチド性部分を、結合体のプライミングされない領域として使用することができて、細胞毒剤(例えばドキソルビシン)のようなＳｅｒ‐治療薬、Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−治療薬もしくはＳｅｒ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−治療薬を、結合体のプライミングされた領域として使用することができる。これらの結合体プロドラッグの切断は、Ｓｅｒ−治療薬、Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−治療薬もしくはＳｅｒ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−治療薬化合物のいずれかを遊離する。もう一つの実施態様において、遊離したＳｅｒ−治療薬中のＳｅｒは、Ａｌａ、ｈＳｅｒ、Ａｂｕ、Ｔｈｒ、Ｍｅｔ、ｎＬｅｕおよびＶａｌを含むが、それらに限定されない、他のアミノ酸残基で置換されてもよい。治療薬がドオキソルビシンであるときのような、もう一つの実施態様において、治療薬に結合されたアミノ酸残基は、疎水性側鎖を所有する。そのようなアミノ酸残基としては、Ｌｅｕ、Ａｂｕ、ｎＬｅｕ、ｎＶａｌ、ＣＨＡ、ｈＣＨＡ、(ヘキシル)Ｇｌｙ、(アリル)Ｇｌｙ、(プロパルギル)Ｇｌｙおよび(シクロプロピル)Ａｌａが挙げられるが、それらに限定されない。治療薬がタキソールであるときのような、もう一つの実施態様において、治療薬に結合されたアミノ酸残基は、立体的に嵩高くない側鎖を所有する。そのようなアミノ酸残基としては、ＧｌｙおよびＡｌａが挙げられるが、それらに限定されない。得られたＰ１’−治療薬、Ｐ１’−Ｐ２’−治療薬、もしくはＰ１’−Ｐ２’−Ｐ３’−治療薬化合物は、活性な治療薬へとさらにインビボで加工されることができる。
【０２４９】
プロテアーゼ基質のための結合体プロドラッグをデザインするもう一つのアプローチは、基質ファージディスプレイを用いて、プロテアーゼのための至適なサブサイト占有を解明することである。次いで、得られた情報を用いて、結合体のペプチド性の、プライミングされない部分をデザインすることができる。上で説明したように、結合体のプライミングされた領域は、Ｓｅｒ−治療薬、Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−治療薬、もしくはＳｅｒ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−治療薬として固定されることができる。
【０２５０】
有効なプロドラッグ結合体をデザインする第３のアプローチは、プロテアーゼ基質のプライミングされていない領域のための至適な残基を決定するために、コンビナトリアル蛍光発生性基質ライブラリーの使用を伴う。次いで、これらの選択された配列は、結合体プロドラッグのプライミングされていない部分として使用されることができて、そしてＳｅｒ−治療薬(例えばドキソルビシン)、Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−治療薬、もしくはＳｅｒ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ治療薬は、結合体のプライミングされた領域として使用されることができる。
【０２５１】
これらの方法は、本明細書において提供される結合体のペプチド性基質部分のデザインに使用されてきた。例えば、ＧＳＧＲ(およびＴＧＲ、ＳＧＲ、伸長された変異体および本明細書における他のものような関連配列)を含む配列は、ｕ−ＰＡを標的プロテアーゼとして用いる基質ファージディスプレイ実験に基づくかもしくはそれから誘導された。(Ｒ/Ｋ)−Ｘ−Ｓ−ＲおよびＸ−(Ｒ/Ｋ)−Ｓ−Ｒのような、多くのマトリプターゼ結合体ならびに本明細書において提供される関連配列は、コンビナトリアルライブラリーからのデータに基づいた。他の実施態様においては、ＶＳＡＲ、ＰＧＲ(プラスミノーゲンのＰ３−Ｐ１から)および関連配列を含む、ｕＰＡのようなプロテアーゼ標的の天然基質もしくは天然阻害剤が、ｕ−ＰＡが標的とされた結合体のデザインに使用された。他の実施態様においては、Ｄ-ＨＨＴ−Ｇｌｙ−Ａｒｇのような色素産生性基質由来の配列および関連配列が、ＥＴ−１が標的とされた結合体のデザインに使用された。
【０２５２】
色素産生性／蛍光発生性基質
【表４】
2005518332.tif 000024
ａ  カップルアッセイ、Spec ＰＬ存在下でのプラスミノーゲンの活性化
【０２５３】
略述すれば、カップルアッセイについては、プラスミノーゲンもしくはトリプシノーゲンのような、酵素を活性化するプロテアーゼの活性を試験する。これらのアッセイを実施するために、プロテアーゼを、ｌｙｓ−プラスミノーゲンもしくはSpec ＰＬ(プラスミノーゲン用)のような、チモーゲンに対する標識された既知の基質の存在下に、プラスミノーゲンもしくはトリプシノーゲンのような、チモーゲンとインキュベートする。もしプロテアーゼがチモーゲンを活性化すれば、プラスミンおよびトリプシンのような、活性化された酵素が、基質を分解して、それによって基質のスペクトル性質を変化させる。
【０２５４】
例示的ペプチド性基質
以下の記述は、ＭＴＳＰ１(即ちマトリプターゼ)、エンドセリアーゼ１およびウロキナーゼのような、プロテアーゼによる切断のための例示的ペプチド性基質、ならびに残基の性質の一般的考察を提供する。同様に、他の細胞表面プロテアーゼ、またはその可溶性な、脱落した、もしくは遊離された形による切断のためのペプチド性基質は、選択されたプロテアーゼに対するペプチド性基質を同定し、次いでそのようなペプチド性基質を含有する結合体を作製することによって同様にデザインされることができる。
【０２５５】
ａ．Ｐ１残基
本明細書において提供される結合体の中で使用するためのペプチド性基質のＰ１位で用いるアミノ酸残基としては、Ａｒｇ、Ａｒｇ代理体およびＬｙｓが挙げられる。Ａｒｇ代理体としては、アルギニンの天然起源の側鎖と実質的に同様な様式で機能し、実質的に同様な結果を達成する(例えば、ＭＴＳＰ１、ウロキナーゼもしくはエンドセリアーゼに対する基質中でＰ１残基として働く)基もしくは部分を保有するところの非天然アミノ酸が、挙げられる。Ａｒｇ代理体としては、以下：ホモアルギニンの側鎖；グアニジノアミノプロピル；グアニジノアミノエチル；(Ｍｅ)２アルギニン側鎖；(Ｅｔ)２アルギニン側鎖；(４−アミノメチル)フェニルメチル；４−アミジノフェニルメチル；４−グアニジノフェニルメチル、の任意を側鎖として保有するところのα−アミノ酸が挙げられるが、それらに限定されない；またはＡｒｇ代理体は：
式：
【化２０】
2005518332.tif 000025
[式中、ｚが０もしくは１](例えば、Webb et al. (1991) J. Org. Chem. 56: 3009、を参照)のような配座的に制約されたアルギニン類似体である；または側鎖が：
式：
【化２１】
2005518332.tif 000026
[式中、ｄは、０〜５、もしくは１〜３の整数であり；そしてＷは、ＮもしくはＣＨである]；または上の基のモノ−もしくはジ−置換Ｎ−アルキル誘導体[そこでは、アルキル基は、特定の実施態様では、例えばメチルのような低級アルキルである]のような、配座的に制約されたアルギニン側鎖類似体である。
本明細書における特定の実施態様では、Ｐ１残基は、Ａｒｇである。
【０２５６】
ｂ．Ｐ２残基
本明細書において提供される結合体の中では、Ｐ２残基は、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ(ＯＭｅ)、ｈＳｅｒ、１−メチルＨｉｓ、３−メチルＨｉｓ、Ｈｉｓ、ｎＶａｌ、ｎＬｅｕ、Ａｂｕ、(ｈＳ)Ｇｌｙ、Ｔｈｒ、Ａｉｂ、ＣＨＡおよびＴｙｒから選択される。もう一つの実施態様では、Ｐ２残基は、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、ＧｌｙおよびＡｌａから選択される。本明細書における特定の実施態様では、Ｐ２残基は、ＳｅｒもしくはＡｌａである。もう一つの実施態様では、Ｐ２残基は、ＧｌｙもしくはＡｌａである。
【０２５７】
ｃ．Ｐ３残基
本明細書において提供される結合体のＰ３位で使用するためのアミノ酸残基としては、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ｑｕａｔ、Ａｒｇ代理体、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ｈＳｅｒ、ｄＳｅｒ、Ｐｒｏ、(ｈＳ)Ｇｌｙ、Ｔｙｒ、４,４−ジメチルＴｈｒ、Ａｓｎ、Ｍｅｔ(Ｏ２)、Ｑｕａｔ２、Ｑｕａｔ３、Ｑｕａｔ４およびＱｕａｔ５が挙げられる。もう一つの実施態様では、Ｐ３残基は、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、ＱｕａｔおよびＡｒｇ代理体から選択される。Ａｒｇ代理体としては、Ｐ１残基について上で説明されたものが挙げられる。
特定の実施態様では、Ｐ３残基は、ＧｌｎもしくはＳｅｒである。
【０２５８】
ｄ．Ｐ４残基
本明細書において提供される組成物および方法において使用するために提供される結合体では、Ｐ４残基は、Ｐｒｏ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、ｎＬｅｕ、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、Ｖａｌ、Ｎ,Ｎ−ジメチルＧｌｙ、β−Ａｌａ、Ｃｙｓ(Ｍｅ)、Ｇｌｎ、ｔ−ブチルＧｌｙおよびｎＶａｌから選択される。もう一つの実施態様では、Ｐ４残基は、Ｐｒｏ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、ｎＬｅｕ、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ｇｌｕ、ＰｈｅおよびＶａｌから選択される。さらなる実施態様では、Ｐ４残基は、Ｐｒｏ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、ｎＬｅｕ、ＰｈｅもしくはＶａｌから選択される。本明細書における特定の実施態様では、Ｐ４残基は、ＡｒｇもしくはＧｌｙである。
【０２５９】
ｅ．Ｐ５およびＰ６残基
本明細書における特定の実施態様では、結合体の中で使用されるペプチド性基質は、Ｐ５および、任意に、Ｐ６残基を含む。Ｐ５残基としては、Ｉｌｅ、ＡｒｇおよびＡｒｇ代理体が挙げられる。もう一つの実施態様では、Ｐ５残基としては、ＡｒｇおよびＡｒｇ代理体が挙げられる。Ａｒｇ代理体としては、Ｐ１残基について上で説明されたものが挙げられる。Ｐ６残基としては、例えば、Ｌｅｕ、ＶａｌおよびＡｒｇが挙げられる。もう一つの実施態様では、Ｐ６残基としては、例えば、Ｌｅｕが挙げられる。
【０２６０】
ｆ．Ｐ１´残基
本明細書において提供される結合体のＰ１´残基は、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｄ−Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔ、６−アミノヘキサノイル、ＴｈｒもしくはｈＳｅｒである。もう一つの実施態様では、本明細書において提供される結合体のＰ１´残基は、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｄ−Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔもしくは６−アミノヘキサノイルである。もう一つの実施態様では、Ｐ１´残基は、Ｓｅｒ、Ａｌａ、ｈＳｅｒ、Ａｂｕ、Ｔｈｒ、Ｍｅｔ、ｎＬｅｕもしくはＶａｌである。もう一つの実施態様では、Ｐ１´残基は、ＧｌｙもしくはＡｌａである。もう一つの実施態様では、Ｐ１´残基は、Ｓｅｒ、ＡｌａもしくはＧｌｙである。もう一つの実施態様では、Ｐ１´残基は、Ｌｅｕ、Ａｂｕ、ｎＬｅｕ、ｎＶａｌ、ＣＨＡ、ｈＣＨＡ、(ヘキシル)Ｇｌｙ、(アリル)Ｇｌｙ、(プロパギル)Ｇｌｙもしくは(シクロプロピル)Ａｌａである。本明細書における特定の実施態様では、Ｐ１´残基は、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｉｌｅもしくはｄ−Ｉｌｅである。
【０２６１】
ｇ．Ｐ２´残基
本明細書における特定の実施態様では、本明細書において提供される結合体は、Ｐ２´残基を保有する。本明細書において使用するためのＰ２´残基としては、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｄ−Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔ、６−アミノヘキサノイル、ｈＣＨＡ、ＣＨＡ、ヘキシルＧｌｙ、アリルＧｌｙおよびＰｈｅが挙げられるが、それらに限定されない。もう一つの実施態様では、本明細書において使用するためのＰ２´残基としては、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｄ−Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔおよび６−アミノヘキサノイルが挙げられるが、それらに限定されない。もう一つの実施態様では、Ｐ２´残基は、Ｓｅｒ、ｈＳｅｒ、Ａｂｕ、ｎＬｅｕ、ｎＶａｌ、ＣＨＡ、ｈＣＨＡ、アリルＧｌｙもしくはヘキシルＧｌｙである。もう一つの実施態様では、Ｐ２´残基は、ＧｌｙもしくはＡｌａである。もう一つの実施態様では、Ｐ２´残基は、Ｌｅｕ、Ａｂｕ、ｎＬｅｕ、ｎＶａｌ、ＣＨＡ、ｈＣＨＡ、(ヘキシル)Ｇｌｙ、(アリル)Ｇｌｙ、(プロパギル)Ｇｌｙもしくは(シクロプロピル)Ａｌａである。さらなる実施態様では、Ｐ２´残基は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｉｌｅもしくはｄ−Ｉｌｅである。
【０２６２】
ｈ．Ｐ３´残基
本明細書における他の実施態様では、本明細書において提供される結合体において使用されるペプチド性基質は、Ｐ３´残基を含む。本明細書において使用するためのＰ３´残基としては、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔ、６−アミノヘキサノイル、ＣＨＡおよびアリルＧｌｙが挙げられるが、それらに限定されない。もう一つの実施態様では、Ｐ２´残基は、Ｓｅｒ、ｈＳｅｒ、Ａｂｕ、ｎＬｅｕ、ｎＶａｌ、ＣＨＡ、ｈＣＨＡ、(アリル)Ｇｌｙもしくは(ヘキシル)Ｇｌｙである。もう一つの実施態様では、本明細書において使用するためのＰ３´残基としては、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔおよび６−アミノヘキサノイルが挙げられるが、それらに限定されない。もう一つの実施態様では、Ｐ３´残基は、ＧｌｙもしくはＡｌａである。もう一つの実施態様では、Ｐ３´残基は、Ｌｅｕ、Ａｂｕ、ｎＬｅｕ、ｎＶａｌ、ＣＨＡ、ｈＣＨＡ、(ヘキシル)Ｇｌｙ、(アリル)Ｇｌｙ、(プロパギル)Ｇｌｙもしくは(シクロプロピル)Ａｌａである。
【０２６３】
ｉ．Ｐ４´残基
本明細書における他の実施態様では、本明細書において提供される結合体において使用されるペプチド性基質は、Ｐ４´残基を含む。本明細書において使用するためのＰ４´残基としては、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔ、６−アミノヘキサノイル、ＣＨＡおよびアリルＧｌｙが挙げられるが、それらに限定されない。もう一つの実施態様では、本明細書において使用するためのＰ４´残基としては、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｎＬｅｕ、Ｖａｌ、ｎＶａｌ、Ａｉｂ、Ａｂｕ、Ｍｅｔおよび６−アミノヘキサノイルが挙げられるが、それらに限定されない。もう一つの実施態様では、Ｐ４´残基は、ＧｌｙもしくはＡｌａである。もう一つの実施態様では、Ｐ４´残基は、Ｌｅｕ、Ａｂｕ、ｎＬｅｕ、ｎＶａｌ、ＣＨＡ、ｈＣＨＡ、(ヘキシル)Ｇｌｙ、(アリル)Ｇｌｙ、(プロパギル)Ｇｌｙもしくは(シクロプロピル)Ａｌａである。もう一つの実施態様では、Ｐ４´残基は、Ｌｅｕである。
【０２６４】
ｊ．キャップ
１)Ｘｎ(Ｎ−末端キャップ)
治療薬がペプチド性基質(即ち、結合体が式Ｉを有する)のＣ−末端に結合されている、本明細書における実施態様では、ペプチド性基質のＮ−末端は、任意にアシル、スルホニルもしくはカルバモイル誘導体でキャップされる。特定の実施態様では、キャップを選択して、結合体の親水性を増加させる。ペプチド性基質−治療薬結合体が十分に親水性であって、さらなる親水性を必要としないところの実施態様では、アセチル基のような非親水性Ｎ−末端キャップを使用し得る。親水性の増大が所望される、実施態様では、Ｎ−末端アミノ酸は、親水性の保護基で修飾される。そのような保護基は、親水性官能基の存在に基づいて選択される。末端アミノ基のそのような保護はまた、温血動物の血漿中に存在する外因性アミノペプチダーゼの作用によるそのようなペプチド性治療薬の酵素的分解を、減少するかもしくは除去することができる。
【０２６５】
結合体の親水性を増大し、そしてそれ故に結合体の水溶性を増大するところのＮ−末端保護基としては、水酸化アルカノイル、多水酸化アルカノイル、ポリエチレングリコール、グリコシレート、糖類およびクラウンエーテルが挙げられるが、それらに限定されない。
【０２６６】
本明細書における特定の実施態様では、Ｎ−末端保護基は、以下のうちの一つである：
【化２２】
2005518332.tif 000027
式中、Ｒ１およびＲ２は、以下のような(i)もしくは(ii)から選択される：
(i)Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立に：
ａ)水素；
ｂ)未置換もしくは置換アリール、未置換もしくは置換ヘテロサイクリル、Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ６パーフルオロアルキル、Ｒ４Ｏ−、Ｒ３Ｃ(Ｏ)ＮＲ３−、(Ｒ３)２ＮＣ(Ｏ)−、(Ｒ３)２Ｎ−Ｃ(ＮＲ３)−、Ｒ４Ｓ(Ｏ)ｅＮＨ−、−ＣＮ、−ＮＯ２、Ｒ３Ｃ(Ｏ)−、−Ｎ３、−Ｎ(Ｒ３)２もしくはＲ４ＯＣ(Ｏ)ＮＲ３−；
ｃ)未置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル；
ｄ)置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、[そこでは置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル上の置換基が未置換もしくは置換アリール、未置換もしくは置換へテロサイクリル、Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、Ｒ３Ｏ−、Ｒ４Ｓ(Ｏ)ｅＮＨ−、Ｒ３Ｃ(Ｏ)ＮＲ３−、(Ｒ３)２ＮＣ(Ｏ)−、(Ｒ３)２Ｎ−Ｃ (ＮＲ３)−、−ＣＮ、Ｒ３Ｃ(Ｏ)−、−Ｎ３、−Ｎ(Ｒ３)２およびＲ４ＯＣ(Ｏ)−ＮＲ３−から選択される]であるか；または
(ii)Ｒ１およびＲ２は、結合して−(ＣＨ２)ｆ[そこでは一つの炭素原子が：−Ｏ−、−Ｓ(Ｏ)ｅ−、−ＮＣ(Ｏ)−、−ＮＨ−および−Ｎ(ＣＯＲ４)−から選択される部分によって任意に置換され；
Ｒ３は：水素、未置換もしくは置換アリール、未置換もしくは置換ヘテロサイクリル、Ｃ１〜Ｃ６アルキルおよびＣ３〜Ｃ１０シクロアルキル、から選択される；
Ｒ４は：未置換もしくは置換アリール、未置換もしくは置換ヘテロサイクリル、Ｃ１〜Ｃ６アルキルおよびＣ３〜Ｃ１０シクロアルキル、から選択され；
ｅは、０、１もしくは２であり；
ａは、１、２、３もしくは４であり；
ｂは、ゼロもしくは１〜１００の整数であり；および
ｃは、もしｂがゼロであるならば、ｃは１〜１０であるという条件で、０〜１０であり；ならびに
ｆは、３、４もしくは５である]を形成する。
【０２６７】
特定の実施態様では、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立に、水素、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６アラルキルもしくはアリールである。これらの実施態様では、ａは、１、２、３もしくは４であり；ｂは、０もしくは１〜１００の整数であり；ｃは、もしｂがゼロであるならば、ｃは１〜１０であるいう条件で、０〜１０である。
【０２６８】
もう一つの実施態様では、Ｎ−末端キャップ(Ｘｎ)は、水素、もしくは以下のような(i)、(ii)、(iii)もしくは(iv)である：
(i)
【化２３】
2005518332.tif 000028
または(ii)
【化２４】
2005518332.tif 000029
または(iii)
【化２５】
2005518332.tif 000030
または(iv)
【化２６】
2005518332.tif 000031
式中、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキルおよびアリールであり；ａは、１、２、３もしくは４であり；ａ´は、０、１、２もしくは３であり；ｂは、０もしくは１〜１４の整数であり；ｃは、もしｂが０であるならば、ｃは１であるという条件で、０もしくは１である。
【０２６９】
もう一つの実施態様では、Ｘｎは、Ｒ３０Ｏ−Ｃ(Ｏ)−、Ｒ３１Ｒ３２Ｎ−Ｃ(Ｏ)−、Ｒ３３(ＣＨ２)ｋＣ(Ｏ)−もしくはＨ−Ｃ(Ｏ)−である；[式中、ｋは、１〜４の整数、または１もしくは２であり；Ｒ３０は、アルキル、アリール、ヘテロアリール、アラルキルもしくはヘテロアラルキルであり；Ｒ３１およびＲ３２は、それぞれ独立に、水素、アルキル、アリール、ヘテロアリール、アラルキルもしくはヘテロアラルキルであり；ならびにＲ３３は、水素、ヒドロキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、アラルキル、アラルコキシ、ヘテロアラルキルもしくはヘテロアラルコキシである]。
【０２７０】
本明細書における特定の実施態様では、Ｘｎは、水素、アセチル、ヒドロキシアセチル、２,３−ジヒドロキシプロピオニル、２,３,４−トリヒドロキシブタノイル、ＰＥＧ(１)、ＰＥＧ(２)、ＰＥＧ(４)、ＰＥＧ(６)、ＰＥＧ(１４)、ＰＥＧ(１５)、ＰＥＧ(１６)、ＰＥＧ(１７)、ＰＥＧ(１８)もしくはＰＥＧ(１９)である。本明細書における他の実施態様では、Ｘｎは、水素、アセチル、ヒドロキシアセチル、スクシニル、キニル、ガリル、４−イミダゾリルアセチル、コチニニル、３−ホスホニルプロピオニル、グロニル、４−ホスホニルブチリル、グルタリル、エトキシスクアリルもしくはＰＥＧ(２)である。さらなる実施態様では、Ｘｎは、水素、アセチル、−Ｃ(Ｏ)ＮＨ２、ＨＯＣＨ２ＣＨ２Ｃ(Ｏ)−、ジアミノプロパノイルもしくはＮＨ２−(ＣＨ２)５−Ｃ(Ｏ)−である。もう一つの実施態様では、Ｘｎは、水素、アセチル、スクシニル、グルタリル、ＰＥＧ(２)もしくはマロニルである。もう一つの実施態様では、Ｘｎは、水素、アセチル、スクシニル、グルタリル、ＰＥＧ(２)、マロニル、メトキシカルボニル、フェニルスルホニル、３−メトキシプロパノイル、エトキシカルボニル、イソブトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、４−オキソペンタノイル、２−(２−メトキシエトキシ)エトキシ)アセチル、３,４−メチレンジオキシフェニルアセチル、２−ピリジルアセチル、フェノキシアセチル、フェニルアセチル、メトキシアセチル、２−メトキシエトキシカルボニル、２−メトキシエトキシアセチル、３−フェニル−２−ヒドロキシプロパノイル、ペント−４−イノイル、１−ナフチルアセチル、ヒドロキシアセチル、３−メトキシカルボニルプロパノイルもしくはホルミルである。
【０２７１】
本明細書における特定の実施態様では、Ｎ−末端キャップ(Ｘｎ)は、アセチル、グルタリル、または関連するアシル、スルホニルもしくはカルバモイル誘導体である。キャッピング基としては、結合体の全体的な物理化学的性質に影響を与えるところのさらに大きなフラグメントを通した単純なＮ−アセチル残基が挙げられるが、それに限定されない。キャッピング基の適切な選択は、比較的親水性もしくは疎水性分子のどちらかを標的部位へ送達することを可能にする。一つの実施態様では、Ｘｎはアセチルである。
【０２７２】
２)Ｘｃ(Ｃ−末端キャップ)
治療薬がペプチド性基質(即ち、結合体が式ＩＩを有する)のＮ−末端に結合される、本明細書における実施態様では、ペプチド性基質のＣ−末端は、カルボン酸もしくはカルボキサミド誘導体である。キャッピング基の適切な選択は、比較的親水性もしくは疎水性分子のどちらかを標的部位へ送達することを可能にする。
【０２７３】
一つの実施態様では、Ｘｃは、それが付着されるところのカルボニル基と一緒に、式−Ｃ(Ｏ)ＮＲｄＲｅ[式中、ＲｄおよびＲｅは、以下のように(i)もしくは(ii)から選択される：
(i)ＲｄおよびＲｅは、それぞれ独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−ＯＨ、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−ジ−ＯＨ、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−トリ−ＯＨならびに、ＲｄおよびＲｅの少なくとも一つが水素もしくはＣ１〜Ｃ６アルキルでないという条件で、
【化２７】
2005518332.tif 000032
であるか；または、
(ii)ＲｄおよびＲｅは、一緒に−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２−ジラジカル；
[ｂは０もしくは１〜１００の整数であり；
ｃは、もしｂが０であるならば、ｃは１であるという条件で、０もしくは１である]を形成する。
一つの実施態様では、Ｒｄは、水素であり、Ｒｅは、２−ヒドロキシエチルである。
【０２７４】
２．リンカー
結合体は、ペプチド性基質を治療薬に共役結合的に結合させるところのリンカー(即ち、式Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩのＬ、Ｌ１もしくはＬ２)を任意に含有する。リンカーは、その中でペプチド性部分が細胞表面プロテアーゼに対する基質であり、そして治療薬は結合体中にあるときは実質的には不活性であって、活性な形態でまたは標的とされた組織の細胞、組織もしくは環境によって以後に活性化される形態で放出されるところの結合体をもたらす、任意のものである。
【０２７５】
例えば、リンカーは、炭水化物、ペプチド、ジアミン、アリールアミンおよび／もしくは炭化水素核構造を含み得る。リンカーは、望ましくは合成的に入手可能であり、保存に安定な生成物を提供し、そして結合体活性を妨害するところのいかなる固有の生物活性を保有しない。それらは、溶解度を増加させるかもしくは細胞中で切断された治療薬の輸送の援助に役立つような所望の性質を付加し得る。特定の実施態様では、有るリンカーは、インビトロおよびインビボで酵素的に切断され、そして断片になって、活性な治療薬もしくは活性化可能な治療薬を放出するであろう。治療薬がドキソルビシンである、実施態様では、リンカーは、例えば、アミノ糖ダウノサミンのような、糖および／もしくはペプチドである。
【０２７６】
一つの実施態様では、本明細書において使用するためのリンカーとしては、治療薬上のアミン部分がリンカー単位と連結されてアミド結合を形成し、そしてペプチド性基質のアミノ末端がリンカー単位の他方の末端と連結されてアミド結合をまた形成する、ビスカルボニルアルキルジラジカルが挙げられるが、それに限定されない。逆に、細胞毒性剤上のカルボニル部分がリンカー部分のアミンの一つに共役結合的に付着され、他方ではリンカー単位の他のアミンは、ペプチド性基質のＣ−末端に共有結合的に付着されている、ジアミノアルキルジラジカルリンカー単位もまた、有用であり得る。細胞表面プロテアーゼが存在しないときには、生理的な環境に対して安定であるが、細胞表面プロテアーゼタンパク分解性の切断部位の切断で切断可能であるところの他のそのようなリンカーが、本明細書においての使用のために意図される。さらに、細胞表面プロテアーゼタンパク分解性の切断部位の切断においては、治療薬に付着したままであるが、非修飾の治療薬と比較するとき、そのような切断後の治療薬誘導体の治療的活性は有意に低減しないところのリンカー単位が、利用され得る。
【０２７７】
他の実施態様では、リンカーは、環状アルキル部分を含むジアミンであり、そして特定の実施態様では、ジアミンは、ビシクロアルキレン部分を含む。そのようなジアミンリンカーの例としては、１,４−ビス(アミノメチル)シクロヘキサン、１,４−ビス(アミノメチル)シクロヘプタン、１,３−ビス(アミノメチル)シクロペンタン、１−アミノ−４−(アミノメチル)シクロヘキサン、１,４−ジアミノシクロヘキサンおよび１,４−ビス(アミノメチル)ビシクロ[２.２.２]オクタンが挙げられるが、それらに限定されない。
【０２７８】
他のリンカーとしては、１,３−ジアミノプロパンを含むが、それらに限定されない、１,ω−ジアミノアルカンならびに、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸およびピバリン酸を含むが、それらに限定されない、１,ω−ジカルボニルアルカンが、挙げられる。
【０２７９】
本明細書において提供される結合体において使用するためのさらなるリンカーとしては、以下の式：
【化２８】
2005518332.tif 000033
[式中、ＡはＮＨもしくはＯであり；ＤはＮ(Ｈもしくはアルキル)またはＯであり；Ｒ２５はＨ、アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、例えば、１〜３個のような１個またはそれ以上のハロ、ハロアルキルおよびアルキルから選択される置換基で任意に置換されたヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキル、１〜２個の二重結合を含むアルケニル、１〜２個の三重結合を含むアルキニル、アルケ(エン)(イン)イル基、ハロ、擬似ハロ、シアノ、ヒドロキシ、例えば、ハロ低級アルキル、特にトリフルオロメチル、のようなハロアルキルおよびポリハロアルキル、ホルミル、アルキルカルボニル、例えば１〜３個のような１個もしくはそれ以上の、例えば、ハロ、ハロアルキルおよびアルキルから選択される置換基で任意に置換されたところのアリールカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、カルボキシ、アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、アミノイミノ、アルコキシカルボニルアミノ、アリールオキシカルボニルアミノ、アミノカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニル、アリールアミノカルボニル、ジアリールアミノカルボニル、アラルキルアミノカルボニル、アルコキシ、アリールオキシ、パーフルオロアルコキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アリールアルコキシ、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アリールアミノアルキル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、アルキルアリールアミノ、アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、アジド、ニトロ、メルカプト、アルキルチオ、アリールチオ、パーフルオロアルキルチオ、チオシアノ、イソチオシアノ、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、アリールスルフィニル、アリールスルホニル、アミノスルホニル、アルキルアミノスルホニル、ジアルキルアミノフルホニルおよびアリールアミノスルホニル、であり；ならびにｙは、１〜３の整数である]のもののような自己除去するリンカーが挙げられる。
【０２８０】
３．治療薬
結合体は、種々の生物応答を修飾することを意図される。したがって、治療薬は、所望の生物活性を保有するかもしくは強化するところのタンパク質およびポリペプチド、小分子ならびに他の分子を含む、任意の薬剤である。そのような分子としては、アブリン、リシンＡ、緑膿菌外毒素、志賀毒素、ジフテリア毒素および他のそのような毒素、のような毒素だが、それらに限定されない、細胞毒性剤ならびにそれらの毒性部分および／もしくはサブユニットもしくは鎖；腫瘍壊死因子、α−インターフェロン、γ−インターフェロン、神経成長因子、血小板由来成長因子、組織プラスミノーゲン活性化因子のようだが、それらに限定されない、タンパク質；または、例えば、リンフォカイン、インターロイキン−１(ＩＬ−１)、インターロイキン−２(ＩＬ−２)、インターロイキン−６(ＩＬ−６)、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(ＧＭＣＳＦ)、顆粒球コロニー刺激因子(Ｇ−ＣＳＦ)、エリスロポエチン(ＥＰＯ)、組織因子および組織因子変異体のようなプロ−凝固因子、ＦＡＳ−リガンドのようなプロ−アポトーシス剤、繊維芽細胞成長因子(ＦＧＦ)、神経成長因子および他の成長因子、のような生物応答修飾剤、が挙げられる。それぞれは、細胞に入り得るかもしくは、そうでなければ、その近傍にいるときに、治療効果を表し得るところの形態でなければならない。
【０２８１】
かくして、治療薬としては、抗腫瘍剤、抗血管形成剤、プロ−アポトーシス剤、抗がん剤および抗細胞分裂剤が挙げられるが、それらに限定されない。これらは、任意にリンカーを介して、プロテアーゼに対する基質であるところのペプチド性基質のような基質に結合される。
【０２８２】
治療薬の中には、一般的には、アルキル化剤、毒素、抗増殖剤およびチュービリン結合剤を含むが、それらに限定されないところの、細胞毒性剤がある。本明細書において使用するための細胞毒性剤のクラスとしては、例えば、アントラサイクリンファミリーの薬物、ビンカ薬物、マイトマイシン、ブレオマイシン、細胞毒性ヌクレオシド、プテリジンファミリーの薬物、ジイネン、メイタンシノイド、エポチロン、タキサンおよびポドフィロトキシンが、挙げられる。
【０２８３】
これらのクラスの例示的なメンバーとしては、例えば、ドキソルビシン、カルミノマイシン、ダウノルビシン、アミノプテリン、メトトレキセート、メトプテリン、ジクロロメトトレキセート、マイトマイシンＣ、ポルフィロマイシン、５−フルオロウラシル、６−メルカプトプリン、シトシンアラビノシド、ポドフィロトキシン、またはエトポシドもしくはリン酸エトポシドのようなポドフィロトキシン誘導体、メルファラン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ロイロシジン、ビンデシン、ロイロシン、メイタンシノール、エポチロンＡもしくはＢ、タキソテール、タキソール等が、挙げられる。他のそのような治療薬としては、エストラムスチン、シスプラチン、コンブレタスタチンおよび類似体、ならびにシクロホスファミドが、挙げられる。当業者は、結合体を作成するという目的にその化合物の反応をさらに便利にするために、所望の治療薬への化学的修飾を行うことができる。
【０２８４】
特定の治療薬としては、以下の薬物が挙げられる。当業者は、これらの構造式が単に例示的なものであり、そしてそのような化合物またはそれらの誘導体もしくは類似体が、当分野において異なる一般名もしくは慣用名を得ていることを理解する。
【０２８５】
ａ．式(１)のメトトレキセート群：
【化２９】
2005518332.tif 000034
式中、
Ｒ１２は、アミノもしくはヒドロキシであり；
Ｒ７は、水素もしくはメチルであり；
Ｒ８は、水素、フルオロ、クロロ、ブロモもしくはヨードであり；
Ｒ９は、ヒドロキシもしくはカルボン酸の塩を完成するところの部分である。
【０２８６】
ｂ．式(２)のマイトマイシン群：
【化３０】
2005518332.tif 000035
式中、Ｒ１０は水素もしくはメチルである。
【０２８７】
ｃ．式(３)のブレオマイシン群：
【化３１】
2005518332.tif 000036
式中、Ｒ１１は、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ３アルキルアミノ、ジ(Ｃ１〜Ｃ３アルキル)アミノ、Ｃ４〜Ｃ６ポリメチレンアミノ、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−Ｃ(ＮＨ)ＮＨ２もしくは−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｓ＋(ＣＨ３)２である。
【０２８８】
ｄ．式(４)のメルファラン：
【化３２】
2005518332.tif 000037
【０２８９】
ｅ．式(５)のメルカプトプリン：
【化３３】
2005518332.tif 000038
【０２９０】
ｆ．式(６)のシトシンアラビノシド：
【化３４】
2005518332.tif 000039
【０２９１】
ｇ．式(７)のポドフィロトキシン：
【化３５】
2005518332.tif 000040
式中、
Ｒ１３は水素もしくはメチルであり；および
Ｒ１４はメチルもしくはチエニルまたはそのリン酸塩である。
【０２９２】
ｈ．式(８)のビンカアルカロイドの薬剤群：
【化３６】
2005518332.tif 000041
式中、
Ｒ１７およびＲ１８が単一に用いられるときには、Ｒ１５はＨ、ＣＨ３もしくはＣＨＯであり：そしてＲ１８はＨであり、そしてＲ１６およびＲ１７の一つはエチルであり、他はＨもしくはＯＨであり；
Ｒ１７およびＲ１８が、それらが付着されるところの炭素と一緒に用いられるときには、それらは、Ｒ１６がエチルである場合にはオキシラン環を形成し；ならびに、
Ｒ１９は、水素、(Ｃ１〜Ｃ３アルキル)−ＣＯもしくはクロロ置換された(Ｃ１〜Ｃ３アルキル)−ＣＯである。
【０２９３】
治療薬がビンカアルカロイドビンブラスチンである、本明細書において提供される結合体としては、式：
【化３７】
2005518332.tif 000042
[式中、ペプチド性基質は、式ＩおよびＩＩに対する上記の通りであり；Ｌは、−ＮＨ−(ＣＨ２)ｕ−Ｔ−(ＣＨ２)ｕ−ＮＨ−のようなリンカーであり；Ｘｎは、
ａ)水素、
ｂ)−(Ｃ＝Ｏ)Ｒ１ａ、
ｃ)
【化３８】
2005518332.tif 000043
ｄ)
【化３９】
2005518332.tif 000044
ｅ)
【化４０】
2005518332.tif 000045
ｆ)エトキシスクアリン酸エステル；ならびに
ｇ)コチニニル、であり；
Ｒ１およびＲ２は、独立に、水素、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６アラルキルおよびアリールであり；
Ｒ１ａは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、水酸化Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、多水酸化Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、水酸化アリール、多水酸化アリールもしくはアリールであり、
Ｒ１９は、水素、(Ｃ１〜Ｃ３アルキル)−ＣＯもしくはクロロ置換された(Ｃ１〜Ｃ３アルキル)−ＣＯであり；
Ｔは、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルもしくはビシクロ[２.２.２]オクタニルから選択され； 
ａは、１、２、３もしくは４であり；
ｂは、ゼロもしくは１〜１００の整数であり；
ｃは、もしｂが０であるならばｃは１であることを条件として、０もしくは１であり；
ｇは、１、２もしくは３であり；
ｕは、０、１、２もしくは３である；]のもの
または、それらの薬学的に許容される誘導体、が挙げられる。
【０２９４】
ｉ．式(９)のジフルオロヌクレオシド：
【化４１】
2005518332.tif 000046
式中、Ｒ２１は式：
【化４２】
2005518332.tif 000047
[式中、Ｒ２２は、水素、メチル、ブロモ、フルオロ、クロロもしくはヨードであり；
Ｒ２３は、ＯＨもしくは−ＮＨ２であり；
Ｒ２４は、水素、ブロモ、クロロもしくはヨードである]の一つの塩基である。
【０２９５】
ｊ．エストラムスチン(１０)：
【化４３】
2005518332.tif 000048
【０２９６】
ｋ．シクロホスファミド(１１)：
【化４４】
2005518332.tif 000049
【０２９７】
ｌ．式(１２)のアントラサイクリン抗生物質：
【化４５】
2005518332.tif 000050
式中、
Ｒａは、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＣＯ(ＣＨ２)３ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＣＯＣＨ(ＯＣ２Ｈ５)２であり；
Ｒｂは、−ＯＣＨ３、−ＯＨもしくは−Ｈであり；
Ｒｃは、−ＮＨ２、−ＮＨＣＯＣＦ３、４−モルホリニル、３−シアノ−４−モルホリニル、１−ピペリジニル、４−メトキシ−１−ピペリジニル、ベンジルアミン、ジベンジルアミン、シアノメチルアミンもしくは１−シアノ−２−メトキシエチルアミンであり；
Ｒ５は、−ＯＨ、−ＯＴＨＰもしくは−Ｈであり；および
Ｒ６は、Ｒ５が−ＯＨもしくは−ＯＴＨＰであるときには、Ｒ６は−ＯＨではないことを条件として、−ＯＨもしくは−Ｈである。
【０２９８】
以下の表２は、多数のアントラサイクリン薬剤およびそれらの一般名もしくは通称名を提供する：
【化４６】
2005518332.tif 000051
【０２９９】
【表５】
2005518332.tif 000052
ａダウノルビシンは、ダウノマイシンに対する別名である。
ｂドキソビシンは、アドリアマイシンに対する別名である。
【０３００】
一つの実施態様では、治療薬がドキソルビシンであるときには、それはドキソルビシンのアミノグリコシド部分のアミノ基を介してペプチド性基質に結合される。
【０３０１】
ｍ．メイタンシノール：
【化４７】
2005518332.tif 000053
【０３０２】
ｎ．エポチロンＡもしくはＢ：
【化４８】
2005518332.tif 000054
【０３０３】
ｏ．タキソール：
【化４９】
2005518332.tif 000055
式中、ＲはＰｈＣ(Ｏ)もしくはｔ−ＢｕＯＣ(Ｏ)である。
【０３０４】
一つの実施態様では、治療薬がタキソール(Ｒ＝Ｃ(Ｏ)Ｐｈ)であるときには、ペプチド性基質は、タキソールのシクロヘキサン部分の二級ヒドロキシル基に結合される。
【０３０５】
ｐ．リボソーム−不活性化タンパク質
リシン、アブリンおよびサポリンを含む、リボソーム−不活性化タンパク質(ＲＩＰ)は、真核生物リボソームを触媒的に不活性化する、植物タンパク質である。ＲＩＰは、タンパク合成のタンパク質伸長段階を妨害することによってリボソームを不活性化する。例えば、ＲＩＰサポリン(以後また、ＳＡＰという)は、ラット２８ＳリボソームＲＮＡ(ｒＲＮＡ)中の４３２４位にあるアデニンのｎ−グリコシド結合の切断によって、６０Ｓリボソームを酵素的に不活性化すると示されている。毒素アブリンおよびリシンのような或るＲＩＰは、二本の構成鎖：細胞表面受容体への結合および分子の内部移行を仲介するところの細胞結合鎖；ならびにタンパク合成阻害活性に責任のある酵素的活性鎖、を含有する。そのようなＲＩＰは、ＩＩ型ＲＩＰである。サポリンのような他のＲＩＰは単鎖であって、Ｉ型ＲＩＰと呼称される。そのようなＲＩＰは、細胞結合鎖を欠如しているので、それらは、二本鎖を有するＲＩＰより細胞全体に対してより低毒性である。一本鎖が、結合および内部移行を仲介する、成長因子のような薬剤にさらに結合されない限り、本明細書においては結合のためには二本鎖ＲＩＰが一般的に使用される。
【０３０６】
幾つかの構造的に関連したＲＩＰが、植物Saponaria officinalis(シャボンソウ)の種子および葉から単離されている。これらの中では、ＳＡＰ−６が最も活性でかつ豊富にあり、種子タンパク質全体の７％を表す。サポリンは非常に安定であり、高い等電点を有し、炭水化物を含有しないで、そして硫酸ドデシル(ＳＤＳ)のような変性剤および種々のプロテアーゼに抵抗性である。種子からの幾つかのサポリン−６イソフォームのアミノ酸配列は、公知であって、２〜３のアミノ酸残基において相違するサポリンＲＩＰのファミリーがあるように見える。サポリンはＩ型ＲＩＰであるので、それは細胞結合鎖を保有しない。結果的に、細胞全体に対するその毒性は、リシンおよびアブリンのような他の毒素よりも大幅に低い。しかしながら、真核細胞によって内部移行されるときには、その細胞毒性は、リシンＡ鎖よりも１００〜１０００倍より強力である。
【０３０７】
４．例示的結合体
本明細書において提供される結合体は、標的とされた細胞表面のプロテアーゼに対する適当なペプチド性基質またはその可溶性の、脱落したもしくは放出された型を同定することおよびペプチド性基質(複数を含む)の治療薬(複数を含む)との結合体を形成することにより、作成される。例えば、ＭＴＳＰ１、エンドセリアーゼおよびウロキナーゼによる切断に対してデザインされたペプチド性基質を含有する例示的が結合体を説明される。興味のある疾患もしくは他の異常に関与する細胞、または興味のある疾患もしくは他の異常に関与するかもしくは関連する細胞または組織の近傍に存在する細胞、の中にもしくは関連する、細胞関連性および細胞局在性プロテアーゼまたはその可溶性の、脱落したもしくは放出された型を含む、細胞表面プロテアーゼを同定すると、それに対する適当なペプチド性基質が経験的にデザインされ得て、次いで本明細書において例示されるように治療薬に結合され得ることが理解される。
【０３０８】
特定の実施態様においては、本明細書において提供される組成物および方法において使用するための結合体としては以下のものが挙げられる：
Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Gly-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 46);
Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Ala-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 47);
Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Gly-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 48);
Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Ala-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 49);
Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ile-Ile-(治療薬) (配列番号: 50);
Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ile-Ile-(治療薬) (配列番号: 51);
Ac-Pro-Arg-Phe-Lys-Ile-Ile-(治療薬) (配列番号: 52);
Ac-Leu-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 53);
Ac-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 54);
Ac-Ser-Lys-Ser-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 55);
Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ile-Ile-(治療薬) (配列番号: 56);
Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ile-Ile-(治療薬) (配列番号: 57);
Ac-Pro-Arg-Phe-Arg-Ile-Ile-(治療薬) (配列番号: 58);
Ac-Leu-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 59);
Ac-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 60); および
Ac-Ser-Arg-Ser-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 61).
【０３０９】
ここでのさらなる実施態様では、結合体は以下のとおりである：Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Gly-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 62); Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Ala-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 63); Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Gly-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 64); および Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Ala-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 65).
他の実施態様では、結合体は以下のとおりである：
Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ile-Ile-(治療薬) (配列番号: 66);
Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ile-Ile-(治療薬) (配列番号: 67);
Ac-Pro-Arg-Phe-Lys-Ile-Ile-(治療薬) (配列番号: 68);
Ac-Leu-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 69);
Ac-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 70);
Ac-Ser-Lys-Ser-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 71);
Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ile-Ile-(治療薬) (配列番号: 72);
Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ile-Ile-(治療薬) (配列番号: 73);
Ac-Pro-Arg-Phe-Arg-Ile-Ile-(治療薬) (配列番号: 74);
Ac-Leu-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 75);
Ac-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 76); および
Ac-Ser-Arg-Ser-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 77).
【０３１０】
他の実施態様では、ここでの使用のための結合鯛は、以下を含む：
ピロGlu-Pro-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 78);
CH3SO2-D-HHT-Gly-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 79);
N-p-トシル-Gly-Pro-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 80);
ベンゾイル-Val-Gly-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 81);
CH3SO2-D-HHT-Gly-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 82);
N-α-Z-D-Arg-Gly-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 83) (Z = ベンジルオキシカルボニル);
ピロGlu-Gly-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 84);
H-D-Ile-Pro-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 85);
Cbo-L-(γ)Glu(α-t-BuO)-Gly-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 86) (Cbo = カルボベンズオキシ);
H-D-Pro-Phe-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 87);
H-D-Val-Leu-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 88);
Bz-Ile-Glu(γ-OH)-Gly-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 89) (Bz = ベンゾイル);
Bz-Ile-Glu(γ-OMe)-Gly-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 90);
ベンゾイル-Pro-Phe-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 91);
H-D-Phe-Pip-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 92);
H-D-Val-Leu-Lys-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 93);
H-D-Nle-HHT-Lys-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 94);
Pyr-Arg-Thr-Lys-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 95);
H-Arg-Gln-Arg-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 96);
Boc-Gln-Gly-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 97);
Z-Arg-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 98);
H-D-HHT-Ala-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 99);
H-D-CHT-Gly-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 100);
MeSO2-dPhe-Pro-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 101); 
δ-Z-D-Lys-Pro-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 102); および
CH3SO2-D-CHA-But-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 103).
【０３１１】
他の実施態様では、ここに提供する組成物および方法での使用のための結合体は以下を含む:
Ac-Arg-Gln-Ser-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 104);
Ac-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 105);
Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ala-Ala-(治療薬) (配列番号: 106);
Ac-Arg-Gln-Ser-Arg-Ala-(治療薬) (配列番号: 107);
Ac-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ala-(治療薬) (配列番号: 108);
Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Gly-Gly-(治療薬) (配列番号: 109);
Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ala-(治療薬) (配列番号: 110);
Ac-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ile-(治療薬) (配列番号: 111); および
Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ala-Ile-(治療薬) (配列番号: 112).
【０３１２】
ある種の実施態様では、ここに提供する方法および組成物での使用のための結合体は以下を含む:
Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Gly-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 113);
Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Ala-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 114);
Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Gly-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 115);
Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Ala-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 116);
Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 117);
Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 118);
Ac-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 119);
Ac-Leu-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 120);
Ac-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 121);
Ac-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 122);
Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 123);
Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 124);
Ac-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 125);
Ac-Leu-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 126);
Ac-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 127); および
Ac-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 128).
【０３１３】
ここでのさらなる実施態様では、結合体は以下のとおりである： Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Gly-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 129); Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Ala-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 130); Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Gly-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 131); および Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Ala-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 132).
ここでの他の実施態様では、結合体は以下のとおりである：Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 133);
Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 134);
Ac-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 135);
Ac-Leu-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 136);
Ac-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 137);
Ac-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 138);
Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 139);
Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 140);
Ac-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 141);
Ac-Leu-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 142);
Ac-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 143); および
Ac-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 144).
【０３１４】
他の実施態様では、ここでの使用のための結合体は、以下を含む：
ピロGlu-Pro-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 145);
CH3SO2-D-HHT-Gly-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 146);
N-p-トシル-Gly-Pro-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 147);
ベンゾイル-Val-Gly-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 148);
CH3SO2-D-HHT-Gly-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 149);
N-α-Z-D-Arg-Gly-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 150) (Z = ベンジルオキシカルボニル);
ピロGlu-Gly-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 151);
H-D-Ile-Pro-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 152);
Cbo-L-(γ)Glu(α-t-BuO)-Gly-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 153) (Cbo = カルボベンズオキシ);
H-D-Pro-Phe-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 154);
H-D-Val-Leu-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 155);
Bz-Ile-Glu(γ-OH)-Gly-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 156) (Bz = ベンゾイル);
Bz-Ile-Glu(γ-OMe)-Gly-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 157);
ベンゾイル-Pro-Phe-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 158);
H-D-Phe-Pip-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 159);
H-D-Val-Leu-Lys-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 160);
H-D-Nle-HHT-Lys-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 161);
Pyr-Arg-Thr-Lys-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 162);
H-Arg-Gln-Arg-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 163);
Boc-Gln-Gly-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 164);
Z-Arg-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 165);
H-D-HHT-Ala-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 166);
H-D-CHT-Gly-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 167);
MeSO2-dPhe-Pro-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 168); 
δ-Z-D-Lys-Pro-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 169); および
CH3SO2-D-CHA-But-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 170).
【０３１５】
他の実施態様では、ここで提供する組成物および方法での使用ための結合体は以下を含む：
Ac-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 171);
Ac-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 172);
Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 173);
Ac-Arg-Gln-Ser-Arg-Leu-(治療薬) (配列番号: 174);
Ac-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Leu-(治療薬) (配列番号: 175);
Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 176);
Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Leu-(治療薬) (配列番号: 177);
Ac-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Leu-(治療薬) (配列番号: 178); および
Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 179).
他の実施態様では、ここに提供する結合体は以下を含む:
Ac-Arg-Gln-Gly-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 180);
Ac-Arg-Gln-Ala-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 181);
Ac-Arg-Gln-Phe-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 182);
Ac-Arg-Ser-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 183);
Ac-Arg-Gly-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 184);
Ac-Arg-Ala-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 185);
Ac-Arg-Phe-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 186);
Ac-Gln-Ser-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 187);
Ac-Gln-Gly-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 188);
Ac-Gln-Ala-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 189); および
Ac-Gln-Phe-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 190).
【０３１６】
さらなる実施態様では、ここで提供する組成物および方法での使用のための結合体は以下を含む:
Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 191);
Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Ala-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 192);
Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 193);
Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Ala-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 194);
Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 195);
Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 196);
Ac-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 197);
Ac-Leu-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 198);
Ac-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 199);
Ac-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 200);
Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 201);
Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 202);
Ac-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 203);
Ac-Leu-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 204);
Ac-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 205); および
Ac-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 206).
【０３１７】
ここでのさらなる実施態様では、結合体は以下のとおりである：Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 207); Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Ala-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 208); Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 209); および Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Ala-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 210).
【０３１８】
他の実施態様では、結合体は以下のとおりである：
Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 211);
Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 212);
Ac-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 213);
Ac-Leu-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 214);
Ac-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 215);
Ac-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 216);
Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 217);
Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 218);
Ac-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 219);
Ac-Leu-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 220);
Ac-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 221); および
Ac-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 222).
【０３１９】
他の実施態様では、ここでの使用のための結合体は以下を含む：:
ピロGlu-Pro-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 223);
CH3SO2-D-HHT-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 224);
N-p-トシル-Gly-Pro-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 225);
ベンゾイル-Val-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 226);
CH3SO2-D-HHT-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 227);
N-α-Z-D-Arg-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 228) (Z = ベンジルオキシカルボニル);
ピロGlu-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 229);
H-D-Ile-Pro-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 230);
Cbo-L-(γ)Glu(α-t-BuO)-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 231) (Cbo = カルボベンズオキシ);
H-D-Pro-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 232);
H-D-Val-Leu-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 233);
Bz-Ile-Glu(γ-OH)-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 234) (Bz = ベンゾイル);
Bz-Ile-Glu(γ-OMe)-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 235);
ベンゾイル-Pro-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 236);
H-D-Phe-Pip-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 237);
H-D-Val-Leu-Lys-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 238);
H-D-Nle-HHT-Lys-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 239);
Pyr-Arg-Thr-Lys-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 240);
H-Arg-Gln-Arg-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 241);
Boc-Gln-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 242);
Z-Arg-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 243);
H-D-HHT-Ala-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 244);
H-D-CHT-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 245);
MeSO2-dPhe-Pro-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 246); 
δ-Z-D-Lys-Pro-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 247); および
CH3SO2-D-CHA-But-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 248).
【０３２０】
他の実施態様では、ここで提供する組成物および方法での使用のための結合体は以下を含む：:
Ac-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 249);
Ac-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 250);
Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 251);
Ac-Arg-Gln-Ser-Arg-Leu-(治療薬) (配列番号: 252);
Ac-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Leu-(治療薬) (配列番号: 253);
Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 254);
Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 255);
Ac-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 256); および
Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 257).
【０３２１】
他の実施態様では、ここで提供する結合体は以下を含む：
Ac-Arg-Gln-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 258);
Ac-Arg-Gln-Ala-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 259);
Ac-Arg-Gln-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 260);
Ac-Arg-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 261);
Ac-Arg-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 262);
Ac-Arg-Ala-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 263);
Ac-Arg-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 264);
Ac-Gln-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 265);
Ac-Gln-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 266);
Ac-Gln-Ala-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 267); および
Ac-Gln-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 268).
【０３２２】
他の実施態様では、ここで提供する結合体は以下を含む：:
Ac-Gly-dSer-Ala-Arg-Ser-Ala-(治療薬) (配列番号: 569);
Ac-Arg-Gly-dSer-Ala-Arg-Ser-Ala-(治療薬) (配列番号: 570);
Ac-Gly-Ser-Gly-Arg-Ser-Ala-(治療薬) (配列番号: 571);
Ac-Arg-Gly-Ser-Gly-Arg-Ser-Ala-(治療薬) (配列番号: 572);
Ac-Leu-Arg-Gly-Ser-Gly-Arg-Ser-Ala-(治療薬) (配列番号: 573);
Ac-Leu-Arg-Gly-dSer-Ala-Arg-Ser-Ala-(治療薬) (配列番号: 574);
Ac-Cys(Me)-Pro-Gly-Arg-Val-Val-(治療薬) (配列番号: 575);
Ac-Arg-Cys(Me)-Pro-Gly-Arg-Val-Val-(治療薬) (配列番号: 577);
Ac-Arg-Arg-Cys(Me)-Pro-Gly-Arg-Val-Val-(治療薬) (配列番号: 578);
Ac-Val-Ser-Ala-Arg-Met-Ala-(治療薬) (配列番号: 579);
Ac-Ile-Val-Ser-Ala-Arg-Met-Ala-(治療薬) (配列番号: 580);
Ac-Val-Ile-Val-Ser-Ala-Arg-Met-Ala-(治療薬) (配列番号: 581);
Ac-Val-Ile-Val-Ser-Ala-Arg-nLeu-Ala-(治療薬) (配列番号: 582);
Ac-Val-Ser-Ala-Arg-nLeu-Ala-(治療薬) (配列番号: 583);
Ac-Ile-Val-Ser-Ala-Arg-nLeu-Ala-(治療薬) (配列番号: 584);
Ac-Gly-Ser-Gly-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 585);
Ac-Gly-Ser-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 586);
Ac-Gly-Ser-Ala-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 587);
Ac-Ser-Gly-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 588);
Ac-Ser-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 589);
Ac-Ser-Ala-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 590);
Ac-Arg-Gly-Ser-Gly-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 591);
Ac-Arg-Gly-Ser-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 592);
Ac-Arg-Gly-Ser-Ala-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 593);
Ac-Leu-Arg-Gly-Ser-Gly-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 594);
Ac-Leu-Arg-Gly-Ser-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 595); および
Ac-Leu-Arg-Gly-Ser-Ala-Arg-Ser-Leu-(治療薬) (配列番号: 596).
【０３２３】
他の実施態様では、ここで提供する結合体は、以下を含む:
Ac-R-Q-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 491);
Ac-R-Q-G-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 492);
Ac-R-Q-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 493);
Ac-R-Q-G-R-S-nV-(治療薬) (配列番号: 494);
Ac-R-Q-G-R-S-F-(治療薬) (配列番号: 495);
Ac-R-Q-G-R-A-L-(治療薬) (配列番号: 496);
Ac-R-Q-G-R-A-L-(治療薬) (配列番号: 497);
Ac-R-Q-G-R-A-nL-(治療薬) (配列番号: 498);
Ac-R-Q-G-R-A-nL-(治療薬) (配列番号: 499);
Ac-R-Q-G-R-A-nV-(治療薬) (配列番号: 500);
Ac-R-Q-G-R-A-Cha-(治療薬) (配列番号: 501);
Ac-R-Q-G-R-A-F-(治療薬) (配列番号: 502);
Ac-R-N-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 503);
Ac-R-N-G-R-A-nL-(治療薬) (配列番号: 504);
Ac-R-Q-A-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 505);
Ac-R-Q-A-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 506);
Ac-R-Q-A-R-S-nV-(治療薬) (配列番号: 507);
Ac-R-Q-A-A-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 508);
Ac-R-Q-A-R-S-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 509);
Ac-R-Q-A-R-T-nL-(治療薬) (配列番号: 510);
Ac-R-Q-A-R-A-L-(治療薬) (配列番号: 511);
Ac-R-Q-A-R-A-nL-(治療薬) (配列番号: 512);
Ac-R-Q-A-R-A-nV-(治療薬) (配列番号: 513);
Ac-R-Q-A-R-A-Cha-(治療薬) (配列番号: 514);
Ac-R-Q-S-R-A-A-(治療薬) (配列番号: 515);
Ac-R-Q-S-R-A-(治療薬) (配列番号: 516);
Ac-R-Q-S-R-A-nL-(治療薬) (配列番号: 517);
Ac-R-Q-S-R-A-L-(治療薬) (配列番号: 518);
Ac-R-Q-S-R-A-nV-(治療薬) (配列番号: 519);
Ac-R-Q-S-R-A-Cha-(治療薬) (配列番号: 520);
Ac-R-Q-S-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 521);
Ac-R-Q-S-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 522);
Ac-R-Q-S-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 523);
Ac-R-Q-S-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 524);
Ac-R-Q-S-R-S-nV-(治療薬) (配列番号: 525);
Ac-R-Q-S-R-S-アリルG-(治療薬) (配列番号: 526);
Ac-R-Q-S-R-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 527);
Ac-R-Q-S-R-T-nL-(治療薬) (配列番号: 528);
Ac-R-Q-T-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 529);
Ac-R-Q-T-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 530);
Ac-R-N-S-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 531);
Ac-R-Q-F-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 532);
Ac-R-Q-F-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 534);
Ac-R-Q-F-R-S-nV-(治療薬) (配列番号: 535);
Ac-R-Q-F-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 536);
Ac-R-Q-F-R-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 537);
Ac-R-Q-F-R-A-L-(治療薬) (配列番号: 538);
Ac-R-Q-F-R-A-nL-(治療薬) (配列番号: 539);
Ac-R-Q-F-R-A-nV-(治療薬) (配列番号: 540);
Ac-R-Q-F-R-A-Cha-(治療薬) (配列番号: 541);
Ac-Q-S-R-S-S-nL-(治療薬) (配列番号: 542);
MeOCO-Quat2-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 483);
MeOCO-Quat3-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 484);
MeOCO-Quat-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 485);
MeOCO-Quat4-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 486);
MeOCO-Quat5-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 487);
MeOCO-Quat2-G-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 488);
MeOCO-Quat4-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 489);
MeOCO-Quat2-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 490);
Ac-Q-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 445);
Ac-Q-G-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 446);
Ac-Q-G-R-A-S-L-(治療薬) (配列番号: 447);
Ac-N-G-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 448);
Ac-Q-G-R-S-S-nL-(治療薬) (配列番号: 449);
Ac-Q-G-R-S-S-nV-(治療薬) (配列番号: 450);
Ac-Q-G-R-S-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 451);
Ac-Q-G-R-S-S-アリルG-(治療薬) (配列番号: 452);
Ac-Q-G-R-S-S-アリルG-(治療薬) (配列番号: 453);
Ac-Q-A-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 454);
Ac-Q-A-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 455);
Ac-Q-S-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 456);
Ac-Q-S-R-S-S-nV-(治療薬) (配列番号: 457);
Ac-Q-S-R-S-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 458);
Ac-Q-S-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 459);
Ac-Q-T-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 460);
Ac-Q-Aib-R-S-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 461);
Ac-Q-Aib -R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 462);
Ac-Q-Abu-R-S-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 463);
Ac-Q-Abu-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 464);
Ac-Q-Cha-R-S-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 465);
Ac-Q-F-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 466);
Ac-Q-F-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 467);
Ac-Q-Y-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 468);
Ac-R-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 469);
Ac-R-G-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 470);
Ac-R-G-R-S-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 471);
Ac-R-G-R-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 472);
Ac-R-A-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 473);
Ac-R-A-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 474);
Ac-R-S-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 475);
Ac-R-S-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 476);
Ac-R-S-R-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 477);
Ac-R-S-R-S-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 478);
Ac-R-F-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 479);
Ac-R-F-R-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 480);
Ac-Y-G-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 481);
Ac-M(O2)-S-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 482);
Ac-R-R-Q-S-R-A-A-(治療薬) (配列番号: 105);
Ac-R-R-Q-S-R-I-(治療薬) (配列番号: 610);
Ac-R-R-Q-S-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 543);
Ac-R-R-Q-S-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 544);
Ac-R-G-S-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 545);
【０３２４】
Ac-R-G-S-G-R--S-nL-(治療薬) (配列番号: 546);
Ac-R-G-S-G-R-A-nL-(治療薬) (配列番号: 547);
Ac-R-G-S-G-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 548);
Ac-I-V-S-G-R-A-S-L-(治療薬) (配列番号: 549);
Ac-R-R-Q-S-R-A-(治療薬) (配列番号: 108);
Ac-R-R-Q-S-R-I-(治療薬) (配列番号: 111);
Ac-L-R-R-Q-S-R-A-A-(治療薬) (配列番号: 106);
Ac-L-R-R-Q-S-R-G-G-(治療薬) (配列番号: 109);
Ac-L-R-R-Q-S-R-A-(治療薬) (配列番号: 110);
Ac-L-R-R-Q-S-R-A-I-(治療薬) (配列番号: 112);
Ac-L-R-R-Q-S-R-A-I-(治療薬) (配列番号: 611);
Ac-L-R-R-Q-S-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 550); および
Ac-L-R-R-Q-S-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 551);
他の実施態様では、ここに提供する結合体は以下から選択される：
Ac-S-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 362);
Ac-S-G-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 363);
Ac-S-G-R-S-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 364);
Ac-S-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 365);
Ac-S-G-R-S-nV-(治療薬) (配列番号: 366); 異性体 1
Ac-S-G-R-S-nV-(治療薬) (配列番号: 367); 異性体 2
Ac-S-G-R-S-G(hex)-(治療薬) (配列番号: 368);
Ac-S-G-R-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 369);
Ac-S-G-R-S-hCha-(治療薬) (配列番号: 370);
Ac-S-A-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 371);
Ac-S-A-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 372);
Ac-S-S-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 373);
Ac-T-G-R-S-Abu-(治療薬) (配列番号: 374);
Ac-T-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 375);
Ac-T-G-R-S-nV-(治療薬) (配列番号: 376);
Ac-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 377);
Ac-T-G-R-S-G(hex)-(治療薬) (配列番号: 378);
Ac-T-G-R-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 379);
Ac-T-G-R-S-hCha-(治療薬) (配列番号: 380);
Ac-T-G-R-T-Abu-(治療薬) (配列番号: 381);
Ac-T-G-R-hS-nL-(治療薬) (配列番号: 382);
Ac-T-G-R-Abu-nL-(治療薬) (配列番号: 383);
Ac-T-G-R-Abu-nV-(治療薬) (配列番号: 384);
Ac-T-G-F(Gn)-S-nL-(治療薬) (配列番号: 385);
Ac-T-G-F(Gn)-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 386);
Ac-T-G-F(Gn)-Abu-nV-(治療薬) (配列番号: 387);
Ac-T-G-K(alloc)-S-nL-(治療薬) (配列番号: 388);
Ac-T-G-K-S-nL-(治療薬) (配列番号: 389);
Ac-T-G-hR-S-nL-(治療薬) (配列番号: 390);
Ac-(hS)G-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 391);
MeOCO-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 392);
【０３２５】
PhSO2-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 393);
MeOEtCO-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 394);
MeO(EtO)2Ac-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 395);
4-オキソ-ペンタノイル-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 396);
3,4-メチルジオキシPhAc-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 397);
2-ピリジルAc-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 398);
PhOAc-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 399);
L-3-Phラクチル-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 400);
MeOAc-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 401);
PhAc-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 402);
MeOEtOCO-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 403);
MeOEtOAc-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 404);
HOOCButa-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 405);
Z-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 406);
EtOCO-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 407);
βΑ-Τ-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 408);
Pent-4-ynoyl-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 409);
NapAc-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 410);
iBoc-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 411);
HOAc-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 412);
MeSucc-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 413);
N,N-ジMeGly-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 414);
Succ-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 415);
HCO-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 416);
Ac-T-A-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 417);
Ac-T-A-F(Gn)-S-nL-(治療薬) (配列番号: 418);
Ac-T-A-R-Abu-nV-(治療薬) (配列番号: 419);
Ac-T-A-R-S-Abu-(治療薬) (配列番号: 420);
Ac-T-A-R-T-Abu-(治療薬) (配列番号: 421);
Ac-T-S(O-Me)-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 422);
Ac-T-hS-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 423);
Ac-T-(1-Me)H-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 424);
Ac-T-(3-Me)H-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 425);
【０３２６】
Ac-T-H-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 426);
Ac-T-Sar-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 427);
Ac-T-nV-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 428);
Ac-T-nL-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 429);
Ac-T-A-R-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 430);
Ac-T-Abu-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 431);
Ac-4,4ジMeThr-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 432);
Ac-hS-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 433);
Ac-hS-G-R-hS-Cha-(治療薬) (配列番号: 434);
Ac-hS-G-R-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 435);
Ac-hS-G-R-T-Cha-(治療薬) (配列番号: 436);
Ac-hS-A-R-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 437);
Ac-N-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 438);
Ac-Y-G-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 439);
Ac-Y-G-R-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 440);
Ac-Q-G-R-S-S-nL-(治療薬) (配列番号: 441);
Ac-Q-G-R-S-S-nV-(治療薬) (配列番号: 442);
Ac-L-R-G-S-G-R-S-A-(治療薬) (配列番号: 573);
Ac-L-R-G-S-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 342);
Ac-L-R-G-S-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 343);
Ac-L-R-G-S-G-R-S-S-nL-(治療薬) (配列番号: 344);
Ac-L-R-G-S-G-R-S-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 345);
Ac-L-R-G-dS-A-R-S-A-(治療薬) (配列番号: 574);
Ac-L-R-G-S-A-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号:346 );
Ac-L-R-G-S-A-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 347);
Ac-L-R-G-S-A-R-S-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 348);
Ac-L-R-G-S-A-R-S-S-nV-(治療薬) (配列番号: 349);
Ac-L-R-G-S-A-R-S-S-nL-(治療薬) (配列番号: 350);
Ac-V-I-V-S-G-R-A-L-(治療薬) (配列番号: 351);
Ac-V-I-V-S-A-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 352);
Ac-V-I-V-S-G-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 353);
Ac-V-I-V-S-A-R-M-A-(治療薬) (配列番号: 354);
Ac-V-I-V-S-A-R-nL-A-(治療薬) (配列番号: 355);
Ac-V-I-V-S-A-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 356);
Ac-V-I-V-S-A-R-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 357);
Ac-V-I-V-S-A-R-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 358);
【０３２７】
Ac-V-I-V-S-A-R-S-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 359);
Ac-R-R-(Me)C-P-G-R-V-V-(治療薬) (配列番号: 360);
Ac-R-R-nV-P-A-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 361);
Ac-R-G-dS-A-R-S-A-(治療薬) (配列番号: 309);
Ac-R-G-S-G-R-S-A-(治療薬) (配列番号: 310);
Ac-R-G-S-G-R-A-L-(治療薬) (配列番号: 311);
Ac-R-G-S-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 312);
Ac-R-G-S-G-R--S-nL-(治療薬) (配列番号: 313);
Ac-R-G-S-G-R-A-nL-(治療薬) (配列番号: 314);
Ac-R-G-S-G-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 315);
Ac-R-G-S-G-R-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 316);
Ac-R-G-S-G-R-S-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 317);
Ac-R-G-S-A-R-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 318);
Ac-R-G-S-A-R-S-S-(治療薬) (配列番号: 319);
Ac-R-G-S-A-R-S-nV-(治療薬) (配列番号: 320);
Ac-R-G-S-A-R-S-S-nV -(治療薬) (配列番号: 321);
Ac-R-G-S-A-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 322);
Ac-R-(Me)C-P-G-R-V-V-(治療薬) (配列番号: 323);
Ac-R-(Me)C-P-G-R-V-V-(治療薬) (配列番号: 324);
Ac-R-C(Me)-P-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 325);
Ac-R-L-P-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 326);
Ac-R-V-P-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 327);
Ac-R-V-P-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 328);
Ac-R-nL-P-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 329);
Ac-R-G(tBu)-P-A-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 330);
Ac-R-L-P-A-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 331);
Ac-R-V-P-A-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 332);
Ac-R-nL-P-A-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 333);
Ac-I-V-S-G-R-A-L-(治療薬) (配列番号: 334);
Ac-I-V-S-G-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 335);
Ac-I-V-S-G-R-A-S-L-(治療薬) (配列番号: 336);
Ac-I-V-S-A-R-M-A-(治療薬) (配列番号: 337);
Ac-I-V-S-A-R-nL-A-(治療薬) (配列番号: 338);
Ac-I-V-S-A-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 339);
Ac-I-V-S-A-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 340);
Ac-I-V-S-A-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 341);
Ac-G-S-G-R-S-A-(治療薬) (配列番号: 585);
Ac-G-S-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 277);
Ac-G-S-G-R-A-L-(治療薬) (配列番号: 278);
Ac-G-S-G-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 279);
Ac-G-S-G-R-L-(治療薬) (配列番号: 280);
Ac-G-S-G-(4-guan)Phg-S-L-(治療薬) (配列番号: 281);
Ac-G-S-G-R-S-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 282);
Ac-G-S-G-R-A-S-L-(治療薬) (配列番号: 283);
Ac-G-S-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 284);
Ac-G-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 285);
【０３２８】
Succ-bA-T-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 286);
Ac-G-T-G-R-S-hCha-(治療薬) (配列番号: 287);
Ac-G-hS-G-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 288);
Ac-G-dS-A-R-S-A-(治療薬) (配列番号: 289);
Ac-G-S-A-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 290);
Ac-G-S-A-R-S-S-Cha-(治療薬) (配列番号: 291);
Ac-G-S-A-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 292);
Ac-G-S-A-R-A-S-L-(治療薬) (配列番号: 293);
Ac-V-S-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 294);
Ac-V-S-G-R-A-L-(治療薬) (配列番号: 295);
Ac-V-S-G-R-A-S-L-(治療薬) (配列番号: 296);
Ac-V-S-G-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 297);
Ac-V-S-A-R-M-A-(治療薬) (配列番号: 298);
Ac-V-S-A-R-nL-A-(治療薬) (配列番号: 299);
Ac-V-S-A-R-S-nL-(治療薬) (配列番号: 300);
Ac-V-S-A-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 301);
Ac-(Me)C-P-G-R-V-V-(治療薬) (配列番号: 302);
Ac-(Me)C-P-G-R-V-V-(治療薬) (配列番号: 303);
Ac-C(Me)-P-G-R-A-L-(治療薬) (配列番号: 304);
Ac-C(Me)-P-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 305);
Ac-C(Me)-P-A-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 306);
Ac-C(Me)-P-A-R-A-S-L-(治療薬) (配列番号: 307);および
Ac-G(tBu)-P-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 308);
【０３２９】
他の実施態様では、ここに提供する結合体は以下から選択される：
Ac-Q-S-R-A-A-(治療薬) (配列番号: 552);
Ac-Q-S-R-S-A-(治療薬) (配列番号: 553);
Ac-Q-S-R-S-G-(治療薬) (配列番号: 554);
Ac-R-S-R-A-A-(治療薬) (配列番号: 555);
Ac-R-Q-S-R-A-A-(治療薬) (配列番号: 556);
Ac-R-Q-S-R-S-A-(治療薬) (配列番号: 557); および
Ac-R-Q-S-R-S-A-A-(治療薬) (配列番号: 558);
【０３３０】
他の実施態様では、ここに提供する結合体は以下から選択される：
Ac-R-G-S-G-R-S-A-(治療薬) (配列番号: 559);
Ac-S-G-R-A-A-(治療薬) (配列番号: 560);
Ac-S-G-R-S-A-(治療薬) (配列番号: 561);
Ac-S-G-R-S-S-A-(治療薬) (配列番号: 562);
Ac-S-G-R-A-S-A-(治療薬) (配列番号: 563);
Ac-S-G-R-S-G-(治療薬) (配列番号: 564);
Ac-S-G-R-S-S-G-(治療薬) (配列番号: 565);
Ac-S-G-R-S-G-A-(治療薬) (配列番号: 566);
Ac-S-G-R-S-G-G-(治療薬) (配列番号: 567); および
Ac-G-T-G-R-S-G-G-(治療薬) (配列番号: 568);
【０３３１】
他の実施態様では、ここに提供する結合体は以下から選択される：
Ac-L-R-R-Q-S-R-A-A-(治療薬) (配列番号: 597);
MeSO2-dA(Chx)-Abu-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 598);
Ac-R-A-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 599);
Ac-dA(Chx)-Abu-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 600);
Ac-dA(Chx)-Abu-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 601);
Ac-Q-G-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 602);
MeOCO-dhF-P(OH)-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 603);
MeOCO-Quat4-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 604);
Ac-dCha-P(OH)-R-S-S-L-(治療薬) (配列番号: 605);
Ac-dCha-Abu-R-S-S-A-(治療薬) (配列番号: 606);
MeOCO-Quat2-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 607);
MeOCO-Quat3-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 608); および
MeOCO-Quat-G-R-S-L-(治療薬) (配列番号: 609).
【０３３２】
また、上のペプチド性基質部分を含有する結合体は、Ａｃの代わりに他のキャッピング基(例えば、キャッピング基Ｘｎについての本明細書における説明を参照)によって作成され得ることが理解される。上の結合体において使用するための治療薬としては、例えば、アブリン、リシンＡ、緑膿菌外毒素志賀毒素、ジフテリア毒素および他のそのような毒素のような毒素であるようだが、それらに限定されない、細胞毒性剤ならびにそれらの毒性部分；腫瘍壊死因子、α−インターフェロン、ガンマ−インターフェロンのようなインターフェロン、組織因子および組織因子変異体のようなプロ−血液凝固剤、ＦＡＳ−リガンドのようなプロ−アポトーシス剤、神経成長因子、血小板由来成長因子、組織プラスミノーゲン活性化因子、のようなタンパク質；例えば、リンフォカイン、インターロイキン−１(ＩＬ−１)、インターロイキン−２(ＩＬ−２)、インターロイキン−６(ＩＬ−６)、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(ＧＭＣＳＦ)、顆粒球コロニー刺激因子(Ｇ−ＣＳＦ)、繊維芽細胞成長因子(ＦＧＦ)および他の成長因子のような生物学的応答修飾剤、メトトレキセート薬物群、アントラサイクリンファミリー薬物、ビンカアルカロイド薬物、マイトマイシン、ブレオマイシン、シトシンアラビノサイドおよびジフルオロヌクレオシドを含む細胞毒性性ヌクレオチド、プテリジンファミリー薬物、ジインエン、タキサンならびにポドフィロトキシン、が挙げられる。すべてのそのような結合体は、本開示の範囲内にあり、そして本明細書において開示されるように作成されかつ使用され得る。
【０３３３】
かくして、本明細書において提供される結合体としては、治療薬が、例えば、ドキソルビシン、カルミノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、イダルビシン、エピルビシン、エソルビシン、ＴＨＰ、ＡＤ−３２、アミノプテリン、メトトレキセート、メトプテリン、ジクロロメトトレキセート、マイトマイシンＣ、ポルフィロマイシン、５−フルオロウラシル、６−メルカプトプリン、シトシンアラビノシド、ポドフィロトキシン、またはエトポシドもしくはリン酸エトポシドのようなポドフィロトキシン誘導体、メルファラン、ビンブタスチン、ビンクリスチン、ロイロシジン、ビンデシン、ロイロシン、タキソール、エストラムスチン、シスプラチン、コンブレタスタチンおよび類似体、ならびにシクロホスファミド、である、本明細書において開示されるものが、挙げられるが、それらに限定されない。一つの実施態様では、治療薬はドキソルビシンである。もう一つの実施態様では、治療薬はタキソールである。
【０３３４】
上の結合体に対応する任意の結合体またはＰ１'および／もしくはＰ２'がＡｌａの代わりにＩｌｅである、本明細書において開示される任意の結合体は、本開示の範囲内にあり、そして本明細書において開示されるように作成されかつ使用され得る。
Ｐ基の上の定義で示されたものからのアミノ酸の順列および選択により形成される任意のペプチド性基質が、意図される。
【０３３５】
Ｄ．結合体の作成
本明細書において提供される結合体のペプチド性基質は、固相技術によるような従来のペプチド合成技法により、それらの構成アミノ酸から合成される。次いで、ペプチド性基質は逆層高速液体クロマトグラフィー(ＨＰＬＣ)によって精製される。
【０３３６】
ペプチド酸は、その構成Ｆｍｏｃ−アミノ酸から作成され得る。ペプチド合成の標準的な方法は、例えば、以下の著作の中で開示される：Synthesis Notes Section, NovaBiochem Catalog 2002/3, Schroeder et al.、「ペプチド」、 Vol. 1, Academic Press 1965; Bodansky et al.、「ペプチド合成」、Interscience Publishers, 1966; McOmie (ed.)、「有機化学における保護基」、Plenum Press, 1973, Barany et al.、「ペプチド：分析、合成、生物学」、2, Chapter 1, Academic Press, 1990, and Stewart et al.、「固相ペプチド合成、第二版」、Pierce Chemical Company, 1994。これらの参照文献の開示を、出典明示により本明細書の一部とする。
【０３３７】
本明細書において提供される結合体の薬学的に許容される塩としては、例えば、非毒性の無機もしくは有機の酸から形成されるような、結合体の従来の非毒性塩が挙げられる。例えば、そのような従来の非毒性塩としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸等のような無機酸から誘導されるもの：ならびに酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パモ酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル−酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニール酸、２−アセトキシ安息香酸、フマール酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イセチオン酸、トリフルオロ酢酸等の有機酸から作成される塩、が挙げられる。
【０３３８】
細胞表面プロテアーゼ切断部位を含むペプチド性部分および治療薬を含むところの、本明細書において提供される結合体を、当業者に公知の技法によって、同様に合成することができる。例えば、治療薬上の遊離のアミン部分を、アミド結合が形成されるようにカルボキシ末端でペプチド性基質に共役結合的に付着することができる。同様に、アミド結合を、ペプチド性基質のアミン部分と治療薬のカルボキシル部分を共役結合的にカップリングさせることにより形成することができる。これらの目的のためには、２−(１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル)−１,３,３−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート(ＨＢＴＵとして公知)および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物(ＨＯＢＴとして公知)、ジシクロヘキシル−カルボジイミド(ＤＣＣ)、Ｎ−エチル−Ｎ−(３−ジメチルアミノプロピル)−カルボジイミド(ＥＤＣ)、ジフェニルホスホリルアジド(ＤＰＰＡ)、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−(ジメチルアミノ)−ホスホニウム  ヘキサフルオロホスフェート(ＢＯＰ)等のような試薬を、組合せでもしくは単独で用いて、利用することができる。
【０３３９】
さらに、本結合体を、細胞表面プロテアーゼ切断部位と治療薬との間の非ペプチド性結合によって形成することができる。例えば、治療薬を、治療薬上の水酸基部分を介してペプチド性基質のカルボキシ末端に共役結合的に付着させて、それによりエステル結合を形成することができる。この目的のためには、ＨＢＴＵとＨＯＢＴの組合せ、ＢＯＰとイミダゾールの組合せ、ＤＣＣとＤＭＡＰとの組合せ等、のような試薬を利用することができる。カルボン酸をまた、ニトロフェニルエステル等を形成することによって活性化して、ＤＢＵ(１,８−ジアザビシクロ[５,４,０]ウンデス−７−エン)の存在下で反応させることができる。
【０３４０】
また、リンカー単位を介してペプチド性基質を治療薬に付着させることによって、本結合体を形成することができる。そのようなリンカー単位としては、例えば、それによって治療薬上のアミン部分がリンカー単位に連結されてアミド結合を形成し、そしてペプチド性基質のアミノ末端はリンカー単位の他の末端と連結されてアミド結合をまた形成する、ビスカルボニルアルキルジラジカルが挙げられる。逆に、それによって細胞毒性剤上のカルボニル部分がリンカー単位の一つのアミンに共役結合的に結合される一方で、リンカー単位の他のアミンがペプチド性基質のＣ−末端に共役結合的に結合される、ジアミノアルキルジラジカルのリンカー単位がまた、有用である。細胞表面プロテアーゼまたはその可溶性の、脱落したもしくは放出された型が存在しないときには、生理的な環境に対して安定であるが、細胞表面プロテアーゼタンパク分解性部位またはその可溶性の、脱落したもしくは放出された型の切断で切断可能となるところの、他のそのようなリンカー単位がまた、想定される。さらに、細胞表面プロテアーゼタンパク分解性部位の切断で、治療薬に付着されたまま残るが、非修飾の治療薬と比較されるとき、そのような切断後の治療薬の治療活性を顕著に減少しないところのリンカー単位を利用することができる。
【０３４１】
当業者は、本明細書において提供される結合体の合成において、所望の反応が分子の他の部分で行われる間に、出発化合物もしくは中間体上の種々の反応性官能基を保護する必要があり得ることを理解する。所望の反応が完結後、もしくは所望の任意時に、通常そのような保護基は、例えば加水分解もしくは水素化分解の手段によって除去されるであろう。そのような保護および脱保護は、有機化学においては従来のものである。当業者は、本明細書において提供される結合体の作成において有用であり得るところの保護基の教材としては、「有機化学における保護基」、McOmie, ed., Plenum Press, NY, NY (1973); および、「有機合成における保護基」、Greene, ed., John Wiley & Sons, NY, NY (1991)を参照する。
【０３４２】
単なる例として、有用なアミノ−保護基としては、例えば、ホルミル、アセチル、ジクロロアセチル、プロピオニル、ヘキサノイル、３,３−ジエチルヘキサノイル、γ−クロロブチリル等のようなＣ１〜Ｃ１０アルカノイル基；ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル。アリルオキシカルボニル、４−ニトロベンジルオキシカルボニル、フルオレニルメチルオキシカルボニルおよびシンナモイルオキシカルボニルのようなＣ１〜Ｃ１０アルコキシカルボニルおよびＣ５〜Ｃ１５アリールオキシカルボニル基；２,２,２−トリクロロエトキシカルボニルのようなハロ(Ｃ１〜Ｃ１０)−アルコキシカルボニル；ならびにベンジル、フェネチル、アリル、トリチル等のようなＣ１〜Ｃ１５アリールアルキルおよびアルケニル基、が挙げられ得る。他の一般的に用いられるアミノ保護基は、アセト酢酸メチルもしくはエチルのようなβ−ケト−エステルにより作成されるエナミンの形態のものである。
【０３４３】
有用なカルボキシ−保護基としては、例えば、メチル、ｔｅｒｔ−ブチル、デシルのようなＣ１〜Ｃ１０アルキル基；２,２,２−トリクロロエチルおよび２−ヨードエチルのようなハロＣ１〜Ｃ１０アルキル；ベンジル、４−メトキシベンジル、４−ニトロベンジル、トリフェニルメチル、ジフェニル−メチルのようなＣ５〜Ｃ１５アリールアルキル；アセトキシ−メチル、プロピオンオキシメチル等のようなＣ１〜Ｃ１０アルカノイルオキシメチル；ならびにフェナシル、４−ハロフェナシル、アリル、ジメチルアリル、トリメチルシリルのようなトリ−(Ｃ１〜Ｃ３アルキル)シリル、β−ｐ−トルエンスルホニルエチル、β−ｐ−ニトロフェニル−チオエチル、２,４,６−トリメチルベンジル、β−メチルチオエチル、フタルイミドメチル、２,４−ジニトロ−フェニルスルフェニル、２−ニトロベンズヒドリルおよび関連する基が、挙げられ得る。
【０３４４】
同様に、有用なヒドロキシ保護基としては、例えば、ホルミル基、クロロアセチル基、ベンジル基、ベンズヒドリル基、トリチル基、４−ニトロベンジル基、トリメチルシリル基、フェナシル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、メトキシメチル基、テトラヒドロピラニル基、ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチルシリル基等が、挙げられ得る。
【０３４５】
アントラサイクリン抗生物質のドキソルビシンと結合されるペプチド性基質の実施態様に関しては、次の反応式が、本明細書において提供される結合体の合成を図示する。
【０３４６】
反応式Ｉ：
【化５０】
2005518332.tif 000056
【０３４７】
反応式ＩＩ：
【化５１】
2005518332.tif 000057
【０３４８】
反応式ＩＩＩ：
【化５２】
2005518332.tif 000058
【０３４９】
反応式ＩＶ：
【化５３】
2005518332.tif 000059
【０３５０】
反応式Ｖ：
【化５４】
2005518332.tif 000060
【０３５１】
反応式ＶＩ、ビンブラスチンの付着は、ペプチド性基質のＣ−末端にある、本明細書において提供されるペプチド性基質とビンカアルカロイド細胞毒性剤ビンブラスチンの結合体の作成を図示する。１,３−ジアミノプロパンリンカーの使用は単に例示的である；ビンブラスチンのカルボニルとペプチド性基質のＣ−末端の間の他のリンカー単位がまた、想定される(例えば、(ＣＨ２)ｕ−Ｔ−(ＣＨ２)ｕ)。アシルアジド出発物質は、ビンブラスチンからヒドラジンとの反応(６０〜６５℃、ＭｅＯＨ)に引き続いてＨＣｌ／ＤＭＦ／亜硝酸イソアミルとの反応によって作成される。
【０３５２】
さらに、反応式ＶＩ、Ｃ４−ヒドロキシ部分がリンカー単位の付加の後に再アセチル化される、結合体の合成を図示する。脱アセチルビンブラスチン結合体がまた有効であって、反応式ＶＩの中で示されるリンカーの一級アミンを保護する工程を除外すること、そしてその中間体を無水酢酸と反応させ、続いてアミンの脱保護をする(例えば、国際特許出願公開第ＷＯ  ９８／１０６５１号を参照)ことによって、作成され得ることが公知である。他の位置におけるペプチド性基質およびビンブラスチンの官能基の結合は、普通の当業者によって容易に達成されて、細胞表面プロテアーゼまたはその可溶性の、脱落したもしくは放出された型に対する基質であるところの結合体を提供するとまた、期待される。
【０３５３】
反応式ＶＩ：
【化５５】
2005518332.tif 000061
【０３５４】
反応式ＶＩＩは、ペプチド性基質はビンカアルカロイド細胞毒性剤ビンブラスチンと組合わされる、本明細書において提供される組成物および方法において利用される特定の結合体の作成を図示する。ペプチド性基質のＮ−末端のビンブラスチンへの付着が図示される(S.P. Kandukuri et al. (1985) J. Med. Chem. 28: 1079-1088)。
【０３５５】
また、本明細書において提供される組成物および方法において利用されるペプチド性基質のＮ−末端が、ビンブラスチンのような細胞毒性剤のような一つの治療薬と組合わされる一方で、Ｃ−末端は、同時に同じかもしくはドキソルビシンのような異なる細胞毒性剤であるところの他の細胞毒性剤に結合される、結合体が作成され得ることが理解される。反応式ＶＩＩＩは、そのような多重細胞毒性剤結合体の合成を図示する。そのような多重細胞毒性結合体は、唯一つの細胞毒性剤を含む結合体を越える利点を提供し得る。
【０３５６】
反応式ＶＩＩ：
【化５６】
2005518332.tif 000062
【０３５７】
反応式ＶＩＩ(続き)：
【化５７】
2005518332.tif 000063
【０３５８】
反応式ＶＩＩＩ：
【化５８】
2005518332.tif 000064
【０３５９】
反応式ＶＩＩＩ(続き)：
【化５９】
2005518332.tif 000065
【０３６０】
デスアセチルビンブラスチンと組合わされるペプチド性基質の実施態様に関しては、以下の反応式ＩＸおよびＸが、本明細書において提供される結合体の合成を図示する。
【０３６１】
反応式ＩＸは、４−デスアセチルビンブラスチンの酸素の結合が、ペプチド性基質のＣ−末端にある、本明細書において提供されるペプチド性基質およびビンカアルカロイド細胞毒性剤のビンブラスチンを含有する本明細書において提供される結合体の作成を図示する。そのような結合体の形成において他の反応系列が有用であり得る一方で、４−酸素への単一アミノ酸の初期付着と残存するペプチド性基質配列のそのアミノ酸への後続する付着が、例示的な方法であることは公知である(国際特許出願公開第ＷＯ  ９９／２８３４５を参照)。また、３,４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ−１,２,３−ベンゾトリアジン(ＯＤＨＢＴ)を最終カップリング工程でＨＯＡｃの代わりに使用し得ることが公知である。
【０３６２】
反応式Ｘは、ヒドロキシアルカノイル酸がビンカ薬物とペプチド性基質の間のリンカーとして使用される、本明細書において提供されるペプチド性基質の結合体の作成を図示する。
【０３６３】
反応式ＩＸ：
【化６０】
2005518332.tif 000066
【０３６４】
反応式ＩＸ(続き)：
【化６１】
2005518332.tif 000067
【０３６５】
反応式Ｘ：
【化６２】
2005518332.tif 000068
【０３６６】
反応式Ｘ(続き)：
【化６３】
2005518332.tif 000069
【０３６７】
本明細書において提供されるタキソール結合体は、以下に提供される一般的な方法によって作成され得る。７−Ａｌａ−タキソールおよび７−Ｇｌｙ−タキソールの作成は、Mathew et al. (1992) J. Med. Chem. 35: 145-151によって開示されている。
【０３６８】
【化６４】
2005518332.tif 000070
【０３６９】
Ｅ．医薬組成物の処方および投与
本明細書において提供される結合体および組成物は、その表面上に他の細胞またはその可溶性の、脱落したもしくは放出された型と比較してより高レベルで細胞表面プロテアーゼ、特にセリンプロテアーゼ、を発現する細胞もしくは組織のターゲッティングによって処置され得るところの任意の疾患または障害の一つもしくはそれ以上の症状を、処置する、防止するかもしくは改善するために、使用される。これらとしては、がんのような増殖性疾患、異所性もしくは過度の血管形成に関連する任意の疾患、自己免疫障害、炎症性疾患、ならびに細胞関連のおよび細胞局在のプロテアーゼを含む適切な細胞表面プロテアーゼが同定され得るところの他の任意の疾患が挙げられるが、それらに限定されない。
【０３７０】
本明細書において提供される医薬組成物は、望ましくないおよび／もしくは制御されない血管形成もしくは新血管形成と関連する疾患または障害の一つもしくはそれ以上の症状の防止、処置、または改善において有用であるところの本明細書において提供される一つもしくはそれ以上の結合体の治療的に有効な量を、含有する。そのような疾患もしくは障害としては、肺、結腸、食道、乳房、卵巣および前立腺のがんを含む、固体新生物形成；血管繊維腫、血管脂肪腫、アテローム性動脈硬化、再狭窄／再灌流障害、動静脈性奇形、血管腫症および血管接着、血腫を伴う軟骨形成不全、遺伝性出血性毛細血管拡張症およびVon Hipple Lindau症候群を含むが、それらに限定されない、血管性奇形および心血管性障害；糖尿病、血友病性関節、炎症性腸疾患、非治癒性骨折、急速進行性歯周病、若年性歯周病、乾癬、慢性関節リウマチ、静脈うっ滞潰瘍、肉芽熱傷、肥厚性傷跡、肝硬変、骨放射線壊死、術後癒着、化膿性肉芽腫および全身性硬化症を含むが、それらに限定されない、慢性炎症性疾患および接着性創傷修復；Raynaud現象を含むが、それらに限定されない、循環障害；石灰沈着症、食道性、両運動性、強指症およびteangiectasisを含むが、それらに限定されない、crest症候群；全身性血管炎、強皮症、壊疽性膿皮症、血管症、静脈性、動脈性潰瘍、Sturge-Weber症候群、ブドウ酒様しみ、青色ゴムまり様母斑症候群、Klippel−Trenaunay−Weber症候群およびOsler−Weber−Rendu症候群を含むが、それらに限定されない、皮膚障害；ならびに眼新血管形成疾患、角膜移植片新血管形成、目における黄斑変性、新血管形成性緑内障、トラコーマ、糖尿病性網膜症、近視性変性、未熟児の網膜症、後水晶体繊維増殖症および角膜新血管形成を含むが、それらに限定されない、眼障害、が挙げられるが、それらに限定されない。
【０３７１】
組成物は、本明細書において提供される一つもしくはそれ以上の結合体を含有する。結合体は、例えば、経口投与のための、溶液、懸濁液、錠剤、分散性錠剤、丸剤、カプセル、散剤、徐放製剤もしくはエリキシル剤、または非経口投与のための無菌溶液もしくは懸濁液、ならびに経皮パッチ製剤および乾燥散剤吸入器、のような適当な医薬製剤へと処方され得る。典型的には、上で説明された結合体は、当分野において周知の技法および手順(例えば、Ansel (1985)、「医薬製剤入門、第四版」、p. 126を参照)を用いて、医薬組成物へと処方される。有効濃度は、動物モデル、インビトロモデル、もしくは試験対象を用いて経験的に決定され得る。
【０３７２】
組成物では、有効濃度の一つもしくは以上の結合体もしくは薬学的に許容されるその誘導体が、適当な薬学的担体もしくはビークルと混合される。結合体は、上で説明されたように、調合に先立って、対応する塩、エステル、エノールエーテルもしくはエステル、酸、塩基、溶媒和物もしくは水和物、として誘導化され得る。組成物中の結合体の濃度は、投与において、望ましくないおよび／もしくは制御されない血管形成または新血管形成と関連する疾患または障害の一つもしくはそれ以上の症状を処置する、防止する、または改善するところの量を送達するために有効である。
【０３７３】
そのような疾患もしくは障害としては、固体新生物形成；血管繊維腫、血管脂肪腫、アテローム性動脈硬化、再狭窄／再灌流傷害、動静脈性奇形、血管腫症および血管接着、血腫を伴う軟骨形成不全、遺伝性出血性毛細血管拡張症およびVon Hipple Lindau症候群を含むが、それらに限定されない、血管性奇形および心血管性障害；糖尿病、血友病性関節、炎症性腸疾患、非治癒性骨折、急速進行性歯周病、若年性歯周病、乾癬、慢性関節リウマチ、静脈うっ滞潰瘍、肉芽熱傷、肥厚性傷跡、肝硬変、骨放射線壊死、術後癒着、化膿性肉芽腫および全身性硬化症を含むが、それらに限定されない、慢性炎症性疾患および接着性創傷修復；Raynaud現象を含むが、それらに限定されない、循環障害；石灰沈着症、食道性、両運動性、強指症およびteangiectasisを含むが、それらに限定されない、crest症候群；全身性血管炎、強皮症、壊疽性膿皮症、血管症、静脈性、動脈性潰瘍、Sturge-Weber症候群、ブドウ酒様しみ、青色ゴムまり様母斑症候群、Klippel−Trenaunay−Weber症候群およびOsler−Weber−Rendu症候群を含むが、それらに限定されない、皮膚障害；ならびに眼新血管形成疾患、角膜移植片新血管形成、目における黄斑変性、新血管形成性緑内障、トラコーマ、糖尿病性網膜症、近視性変性、未熟児の網膜症、後水晶体繊維増殖症および角膜新血管形成を含むが、それらに限定されない、眼障害が、挙げられるが、それらに限定されない。
【０３７４】
本明細書における結合体は、局所的、局部的、静脈内および全身性適用に適当な医薬組成物へと処方され得る。有効濃度の一つもしくはそれ以上の結合体が、適当な薬学的担体もしくはビークルと混合される。有効である結合体の濃度もしくは量は、投与において、症状を改善するかもしくは疾患を処置するところの量の送達を必要とする。典型的には、組成物は、単一投与量投与のために処方される。治療的に有効な濃度および量は、結合体を本明細書において説明されるもののような公知のインビトロおよびインビボシステムで試験することにより、経験的に決定され得る；次いで、ヒトもしくは他の動物に対する投与量が、それから外挿され得る。
【０３７５】
結合体のビークルとの混合もしくは添加においては、生じる混合物は、溶液、懸濁液、乳濁液もしくは他のそのような組成物であり得る。生じる混合物の形態は、意図される投与様式および選択される担体もしくはビークル中における結合体の溶解度を含む、多数の因子に依存する。有効濃度は、処置される疾患、障害もしくは異常の症状を改善するために十分なものであって、腫瘍に対するマウス異種移植片モデルまたはウサギ眼モデルからのデータのような、インビトロおよび／またはインビボのデータに基づいて経験的に決定され得る。必要ならば、結合体の薬学的に許容される塩もしくは他の誘導体を、作成することができる。
【０３７６】
本明細書において提供される結合体の投与のために適当な薬学的担体もしくはビークルとしては、特定の様式の投与にたいして適当であることが当業者にとって公知である任意のそのような担体が挙げられる。加えて、結合体は、組成物中の単一の医薬活性成分として処方されるかもしくは他の活性成分と組合わされ得る。
【０３７７】
結合体は、任意の適切な経路によって、例えば、経口的に、非経口的に、静脈内的に、皮内的に、皮下的に、もしくは局所的に、液体、半−液体または固体の形態で、投与され得て、それぞれの投与経路に適当な様式で処方される。例示的な投与様式は、処置される適用に依存する。皮膚科的および眼科的適用は典型的には、局部的に処置されるであろう；他方、腫瘍および血管増殖性障害は典型的には、全身的、皮内的もしくは筋肉内的な投与様式によって処置されるであろう。
【０３７８】
結合体は、処置される患者に有害な副作用の不在下で治療的に有用な効果を示すために十分な量で、薬学的に許容される担体中に含められる。副作用の数および程度は、結合体がそれに対して投与されるところの異常に依存することが理解される。例えば、さらに軽い予後の障害を処置するときには許容されないであろうところの、特定の有害かつ望ましくない副作用が、腫瘍のような、致命的な病気を処置するときには、許容される。
【０３７９】
組成物中の結合体の濃度は、その吸収、不活性化および排出速度、投与計画および投与される量ならびに当業者に公知の他の因子に依存するであろう。
【０３８０】
典型的には、治療的に有効な投与量は、約０.１ｎｇ／ｍｌから約５０〜１００μｇ／ｍｌまでの活性成分の血清濃度を生成すべきである。医薬組成物は、体表面積および／もしくは体重に対して調整されるように選択される結合体に依存して、典型的には、約０.０１ｍｇから約１００〜２０００ｍｇまでの結合体の投与量を提供すべきである。典型的には、静脈内もしくは全身的処置に対しては、約０.０５〜０.５ｍｇ／ｋｇの一日投与量で十分なはずである。眼科的な障害に対する局所的適用は、単一投与量投与当たり、約１ｎｇ〜１００μｇを、一般的には約１μｇ〜約１０μｇを提供すべきである。投与すべき量は、選択される結合体、処置される適用、および恐らくは許容されるであろう副作用の関数であることが理解される。投与量は、それぞれの障害に対して認知されたモデルを用いて、経験的に決定され得る。
【０３８１】
典型的には、組成物は単一投与量投与用に処方される。組成物を処方するためには、重量分の結合体を、処置する異常を軽減するもしくは改善するような有効な濃度で、選択したビークル中に溶解する、懸濁する、分散するかそうでなければ混合する。本明細書において提供される結合体を投与するための適当な薬学的担体もしくはビークルとしては、特定の投与様式に対して適当であることが当業者にとって公知である任意のそのような担体が挙げられる。
【０３８２】
加えて、結合体は、組成物中の単一成分として処方されるかもしくは他の活性成分と組合わされ得る。組織に標的とされた、特に腫瘍に標的とされた、リポソームを含む、リポソーム懸濁液はまた、薬学的に許容される担体として適当であり得る。これらは、当業者にとって公知である方法にしたがって調製される。例えば、リポソーム製剤は、米国特許第４,５２２,８１１号で説明されるように調製され得る。簡潔に言えば、多層性小胞(ＭＬＶ)のようなリポソームは、卵ホスファチジルコリンおよび脳ホスファチジルセリン(７：３モル比)をフラスコの内側に乾燥させることにより形成され得る。本明細書において提供される結合体の、二価陽イオンを欠如するリン酸緩衝生理食塩水(ＰＢＳ)中の溶液を加えて、脂質膜が分散するまでフラスコを振り混ぜる。得られた小胞を洗浄して、カプセル化されていない結合体を除去し、遠心分離によりペレット化して、次いで、ＰＢＳに再懸濁する。
【０３８３】
結合体は、処置される患者に望ましくない副作用が不在下に治療的に有用な効果を示すために十分な量で、薬学的に許容される担体中に含まれる。治療的に有効な濃度は、結合体を本明細書において説明されるインビトロおよびインビボシステム(例えば、実施例３および４を参照)において試験することにより経験的に決定されて、次いで、それからヒトの投与量に外挿される。
【０３８４】
医薬組成物中の結合体の濃度は、結合体の吸収、不活性化および排出速度、結合体の物理化学的特性、投与計画および投与される量ならびに当業者に公知の他の因子に依存するであろう。例えば、送達される量は、本明細書において説明されるように、望ましくないおよび／もしくは制御されない血管形成または新血管形成に関連する疾患または障害の一つもしくはそれ以上の症状を改善するために十分である。
【０３８５】
典型的には、治療的に有効な投与量は、約０.１ｎｇ／ｍｌから約５０〜１００μｇ／ｍｌまでの活性成分の血清濃度を生成すべきである。典型的には、医薬組成物は、１日当たり体重キログラムにつき約０.００１ｍｇ〜約２０００ｍｇの投与量を提供すべきである。医薬単位剤型は、単位剤型当たりの必須活性成分もしくは必須成分の組合せの約１ｍｇ〜約１０００ｍｇを、一般的には約１０〜５００ｍｇを提供するように調製される。
【０３８６】
結合体は一度に投与され得るかもしくは時間間隔をおいて投与するために多数のより小さな投与量に分割され得る。正確な投与量および処置期間は、処置すべき疾患の関数であって、公知の試験プロトコルを用いるか、またはインビボもしくはインビトロ試験データからの外挿によって、経験的に決定され得ることが理解される。濃度および投与量値はまた、軽減すべき異常の重症性とともに変化し得ることを注目すべきである。任意の特定の対象に対しては、特異的な投与レジメンが、個別の必要性および組成物を投与するかもしくは投与することを管理するヒトの専門的判断にしたがって経時的に調整されるべきであること、ならびに本明細書において示される濃度範囲は単に例示的なものであって、クレームされる組成物の範囲もしくは実施を限定することを意図するものではないことを、さらに理解すべきである。
【０３８７】
例示的な薬学的に許容される誘導体としては、酸、塩基、エノールエーテルおよびエステル、塩、エステル、水和物、溶媒和物ならびに結合体の形態が挙げられる。誘導体は、その薬物動態学的性質が対応する中性の結合体に勝るように選択される。
【０３８８】
かくして、本明細書に説明される結合体もしくはその薬学的に許容される誘導体の一つまたはそれ以上の有効的な濃度または量は、全身的、局所的もしくは局部的投与に適当な薬学的担体またはビークルと混合されて、医薬組成物を形成する。結合体は、本明細書において説明されるように、望ましくないおよび／もしくは制御されない血管形成もしくは新血管形成と関連する疾患または障害の一つもしくはそれ以上の症状を改善するか、またはそれを処置するかもしくは防止するために有効な量で含まれる。組成物中の結合体の濃度は、結合体の吸収、不活性化および排出速度、投与計画および投与される量、特定の処方、ならびに当業者に公知の他の因子に依存するであろう。
【０３８９】
組成物は、経口的、非経口的、経直腸的、局所的および局部的を含む適当な経路によって投与されるように意図される。経口的投与のためには、カプセルおよび錠剤が一般的に用いられる。組成物は、液体、半−液体もしくは固体の形態であって、それぞれの投与経路に適当な様式で処方される。例示的な投与様式としては、非経口的および経口的投与様式が挙げられる。
【０３９０】
非経口的、皮内的、皮下的、もしくは局所的適用のために用いられる溶液もしくは懸濁液は、任意の以下の成分：注射用水、生理食塩溶液、脂肪油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールもしくは他の合成溶媒のような無菌希釈剤；ベンジルアルコールおよびメチルパラベンのような抗菌剤；アスコルビン酸および亜硫酸水素ナトリウムのような抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸(ＥＤＴＡ)のようなキレート化剤；酢酸塩、クエン酸塩、リン酸塩のような緩衝剤；ならびに塩化ナトリウムもしくはデキストロースのような等張度調整剤、を含み得る。非経口的製剤は、アンプル、使い捨て注射器またはガラス、プラスチックもしくは他の適当な物質で作製の単回もしくは多回用量のバイアル中に封入され得る。
【０３９１】
結合体が不十分な溶解度を示す例では、結合体を溶解させるための方法を使用することができる。そのような方法は、当業者にとっては公知であって、ジメチルスルホキシド(ＤＭＳＯ)のような共溶媒の使用、TWEEN[登録商標]のような界面活性剤の使用、もしく炭酸水素ナトリウム水溶液への溶解、が挙げられるが、それらに限定されない。結合体の誘導体はまた、有効な医薬組成物を処方するのに使用され得る。
【０３９２】
結合体(複数を含む)の混合もしくは添加においては、得られた混合物は、溶液、懸濁液、乳濁液等であり得る。得られた混合物の形態は、意図する投与様式および選択された担体もしくはビークル中における結合体の溶解度を含む、多数の因子に依存する。有効濃度は、処置される疾患、障害もしくは異常の症状を改善するために十分であって、経験的に決定され得る。
【０３９３】
医薬組成物は、ヒトおよび動物に投与するために、適当な量の結合体もしくはその薬学的に許容される誘導体を含有する錠剤、カプセル、丸剤、散剤、顆粒剤、無菌非経口的溶液もしくは懸濁液および経口的溶液もしくは懸濁液、ならびに油−水乳濁液のような、単回剤型で提供される。結合体およびその誘導体は典型的には、単回剤型もしくは多回剤型で処方されて、投与される。
【０３９４】
本明細書において用いられる限りでは単回剤型とは、ヒトおよび動物に適当でかつ当分野で公知であるように個別に包装される物理的に別個な単位をいう。それぞれの単回容量は、必要とされる薬学的担体、ビークルもしくは希釈剤に関連して、所望の効果を生成するために十分な予め決定された量の結合体を含有する。単回剤型の例としては、アンプルおよび注射剤ならびに個別に包装された錠剤もしくはカプセルが挙げられる。単回剤型は、そのフラクションもしくは複数で投与され得る。多回剤型は、区分けされた単回剤型で投与するために単一容器中に包装された複数の同一の単回剤型である。多回剤型の例としては、バイアル、錠剤もしくはカプセルの瓶、またはパイントもしくはガロンの瓶が挙げられる。したがって、多回用量は、包装において区分されていないところの複数の単回容量である。
【０３９５】
組成物は、結合体とともに：乳糖、蔗糖、リン酸ニ−カルシウムもしくはカルボキシメチルセルロースのような希釈剤；ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウムおよびタルクのような滑沢剤；デンプン、アカシアガム−ゼラチンのような天然ゴム、グルコース、糖蜜、ポリビニルピロリジン、セルロースおよびその誘導体、ポビドン、クロスポビドンのような結合剤ならびに当業者に公知なそのような他の結合剤、を含有し得る。医薬的に投与可能な液体組成物は、例えば、上に定義された結合体および任意の薬学的補助剤を、例えば、水、生理食塩水、デキストロース水溶液、グリセロール、グリコール、エタノール等のような担体中に、溶解する、分散する、もしくはそうでなければ混合して、それにより溶液または懸濁液を形成することによって調製され得る。
【０３９６】
所望により、投与されるべき医薬組成物は、湿潤剤、乳化剤、もしくは溶解剤、ｐＨ緩衝剤等、例えば酢酸塩、クエン酸ナトリウム、シクロデキストリン誘導体、モノラウリン酸ソルビタン、酢酸トリエタノールアミンナトリウム、オレイン酸トリエタノールアミンおよび他のそのような薬剤のような、少量の無毒性補助物質をまた、含有し得る。そのような製剤を調製する実際の方法は、当業者には公知であるかもしくは明白であろう；例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pa., 15th Edition, 1975を参照されたい。投与されるべき組成物もしくは製剤は、いずれにしても、処置される対象の症状を軽減するために十分な量で結合体の量を含有するであろう。
【０３９７】
無毒性担体から作成されたバランスと共に０.００５％〜１００％までの範囲で活性成分を含有する製剤もしくは組成物が調製され得る。経口投与のためには、薬学的に許容される無毒性組成物は、例えば製剤的品質のマンニトール、乳糖、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、タルク、セルロース誘導体、クロスカルメロースナトリウム、ブドウ糖、蔗糖、炭酸マグネシウムもしくはサッカリンナトリウムのような通常使用される任意の添加物を組み入れることにより、形成される。そのような組成物としては、溶液、懸濁液、錠剤、カプセル、散剤および埋め込み剤や微小カプセル化された送達システムのようなものであるが、それらに限定されない、徐放性製剤、ならびにコラーゲン、酢酸エチレンビニール、ポリ無水物、ポリグリコール酸、ポリオルトエステル、ポリ酢酸および他のもののような生分解性、生体適合性ポリマー、が挙げられる。これらの組成物を調製する方法は、当業者にとっては公知である。意図される組成物は、０.１〜８５％、例えば７５％〜９５％、のような０.００１％〜１００％の活性成分を含有し得る。
【０３９８】
結合体もしくは薬学的に許容される誘導体を、徐放製剤もしくはコーティング剤のような、生体からの迅速な排出に対抗して結合体を保護するところの担体と共に調製し得る。組成物は、所望の性質の組合せを獲得するために他の結合体を含み得る。本明細書において提供される結合体もしくは本明細書において説明されるその薬学的に許容される誘導体はまた、望ましくないおよび／もしくは制御されない血管形成もしくは新血管形成と関連した疾患もしくは障害のような上の本明細書において言及された疾患もしくは医学的異常の一つまたはそれ以上を処置することにおいて有用であると一般的な分野で公知である他の薬剤と一緒に、治療的もしくは予防的目的のために有利に投与され得る。そのような併用療法は、本明細書において提供される組成物および処置方法のさらなる態様を構成することが理解されるべきである。
【０３９９】
１．経口投与のための組成物
経口投与剤型は、固体、ゲルもしくは液体のいずれかである。固体剤型は、錠剤、カプセル、顆粒剤およびバルク粉末である。経口的錠剤のタイプとしては、腸溶性にコーティングされるか、糖でコーティングされるかもしくはフィルムでコーティングされ得るところの、打錠された咀しゃく性トローチ剤および錠剤が、挙げられる。カプセルは硬質もしくは軟質ゼラチンカプセルであり得る一方で、顆粒剤および散剤は、当業者にとって公知の他の成分と組合せて、非−発泡性もしくは発泡性の形態で提供され得る。
【０４００】
特定の実施態様では、製剤は、例えばカプセルもしくは錠剤のような固体剤型の形態である。錠剤、丸剤、カプセル、トローチおよび他の剤型は、例えば任意の以下の成分、もしくは類似の性質の化合物を含有し得る：結合剤；希釈剤；崩壊剤；滑沢剤；滑り剤；甘味剤；ならびに着香剤。
【０４０１】
結合剤の例としては、微結晶セルロース、トラガラントゴム、ブドウ糖溶液、アラビアゴム漿、ゼラチン溶液、蔗糖およびデンプンペーストが挙げられる。滑沢剤としては、タルク、ステアリン酸マグネシウムもしくはカルシウム、セキショウシおよびステアリン酸が挙げられる。希釈剤としては、例えば、乳糖、蔗糖、デンプン、カオリン、食塩、マンニトールおよびリン酸ニ−カルシウムが挙げられる。滑り剤としては、コロイド性二酸化ケイ素が挙げられるが、それに限定されない。崩壊剤としては、クロスカルメロースナトリウム、グリコール酸ナトリウムデンプン、アルギン酸、トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、ベントナイト、メチルセルロース、寒天およびカルボキシメチルセルロースが挙げられる。
【０４０２】
着色剤としては、例えば、任意の承認された保証済み水溶性ＦＤおよびＣ顔料、それらの混合物；ならびにアルミナ水和物上に懸濁された水に不溶性のＦＤおよびＣ顔料、が挙げられる。甘味剤としては、蔗糖、乳糖、マンニトールおよびサッカリンのような人工甘味剤、ならびに任意の数のスプレー乾燥されたフレーバーが挙げられる。着香剤としては、果物のような植物から抽出された天然フレーバーならびにペパーミントおよびサリチル酸メチルのようだが、それらに限定されない、快適な感覚を生成する結合体の合成的なブレンドが、挙げられる。湿潤化剤としては、モノステアリン酸プロピレングリコール、モノオレイン酸ソルビタン、モノラウリン酸ジエチレングリコールおよびポリオキシエチレンラウリルエーテルが挙げられる。催吐性のコーティング剤としては、脂肪酸、脂肪、ろう、セラック、アンモニア化されたセラックおよび酢酸フタル酸セルロースが挙げられる。フィルムコーティング剤としては、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリエチレングリコール４０００および酢酸フタル酸セルロースが挙げられる。
【０４０３】
もし経口投与が所望されるならば、結合体は、胃の中の酸性環境からそれを保護するところの組成物中で提供される。例えば組成物は、胃の中でその完全性を保持しかつ腸で結合体を放出するところの腸溶コーティングで処方され得る。組成物はまた、制酸薬もしくは他のそのような成分と組合わせて処方され得る。
【０４０４】
単回剤型がカプセルであるときには、上のタイプの物質に加えて、それは脂肪油のような液体担体を含有し得る。加えて、単回剤型は、投与量単位の物理的形態を修飾するところの種々の他の物質、例えば糖および他の腸溶化薬剤のコーティング剤、を含有し得る。結合体はまた、エリキシル剤、懸濁液、シロップ剤、ウェハー剤、スプリンクル剤、チューインガム等の成分として投与され得る。シロップ剤は、結合体に加えて、甘味剤として蔗糖ならびに特定の防腐剤、顔料および着色剤ならびにフレーバーを含有し得る。
【０４０５】
結合体はまた、所望の作用を損なわない他の活性物質と共に、もしくは制酸剤、Ｈ２遮断剤および利尿剤のような、所望の作用を補助する物質と共に混合され得る。結合体の重量にして約９８％までの高濃度を含むことができる。
【０４０６】
錠剤中に含まれる薬学的に許容される担体は、結合剤、滑沢剤、希釈剤、崩壊剤、着色剤、着香剤および湿潤化剤である。腸溶性−コーティング錠は、腸溶性−コーティングの故に、胃酸の作用に抵抗し、中性もしくはアルカリ性の腸内で溶解もしくは崩壊する。糖コーティング錠は、薬学的に許容される物質の異なる層が適用される打錠錠剤である。フィルム−コーティング錠剤は、ポリマーもしくは他の適当なコーティング剤でコーティングされている打錠錠剤である。多回打錠錠剤は、先に述べた薬学的に許容される物質を利用する二つ以上の打錠サイクルによって作られる打錠錠剤である。着色剤はまた、上の剤型で使用され得る。打錠錠剤、糖−コーティング錠剤、多回打錠錠剤で用いられる。着香剤および甘味剤は、咀しゃく錠剤およびトローチ剤の形成において特に有用である。
【０４０７】
液体の経口剤型としては、水溶液、乳濁液、懸濁液、非−発泡性顆粒剤から再構成される溶液および／もしくは懸濁液ならびに発泡性顆粒剤から再構成される発泡性製剤が挙げられる。水溶液としては、例えば、エリキシル剤およびシロップ剤が挙げられる。乳濁液は、水中油滴もしくは油中水滴のどちらかである。
【０４０８】
エリキシル剤は、澄明で、甘味付けされた水性アルコール製剤である。エリキシル剤で用いられる薬学的に許容される担体としては、溶媒が挙げられる。シロップ剤は、糖、例えば蔗糖、の濃縮水溶液であって、防腐剤を含有し得る。乳濁液は、その中の一つの液体が他の液体全体に微小球体の形態で分散されている二相系である。乳濁液で用いられる薬学的に許容される担体は、非水性液体、乳化剤および防腐剤である。懸濁液は、薬学的に許容される懸濁剤および防腐剤を使用する。非−発泡性顆粒剤で、液体経口剤型へ再構成されるために用いられる薬学的に許容される物質としては、希釈剤、甘味剤および湿潤化剤が挙げられる。発泡性顆粒剤で、液体経口剤型へ再構成されるために用いられる薬学的に許容される物質としては、有機酸および二酸化炭素の供給源が挙げられる。着色剤および着香剤は、上の剤型のすべてにおいて用いられる。
【０４０９】
溶媒としては、グリセリン、ソルビトール、エチルアルコールおよびシロップが挙げられる。防腐剤の例としては、グリセリン、メチルおよびプロピルパラベン、安息香酸、安息香酸ナトリウムおよびアルコールが挙げられる。乳濁液で利用される非水性液体の例としては、鉱油および綿実油が挙げられる。乳化剤の例としては、ゼラチン、アカシア、トラガカント、ベントナイト、およびモノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタンのような界面活性剤が挙げられる。懸濁剤としては、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ペクチン、トラガカント、Veegumおよびアカシアが挙げられる。希釈剤としては、乳糖および蔗糖が挙げられる。甘味剤としては、蔗糖、シロップ、グリセリンおよびサッカリンのような甘味剤が挙げられる。湿潤化剤としては、モノステアリン酸プロピレングリコール、モノオレイン酸ソルビタン、モノラウリン酸ジエチレングリコールおよびポリオキシエチレンラウリルエーテルが挙げられる。有機酸としては、クエン酸および酒石酸が挙げられる。二酸化炭素の供給源としては、炭酸水素ナトリウムおよび炭酸ナトリウムが挙げられる。着色剤としては、任意の承認された保証つき水溶性ＦＤおよびＣ顔料、それらの混合物が挙げられる。着香剤としては、果物のような植物から抽出された天然フレーバー、および快適な味覚感覚を生み出すところの結合体の合成的なブレンドが挙げられる。
【０４１０】
固体剤型については、例えば、プロピレンカーボネート、植物油もしくはトリグリセリド中の溶液もしくは懸濁液、例えば、その製剤を、ゼラチンカプセル中にカプセル化することができる。そのような溶液ならびに調製およびそのカプセル化は、米国特許第４,３２８,２４５号；第４,４０９,２３９号；および第４,４１０,５４５号に開示されている。液体剤型については、例えば、例えば、ポリエチレングリコール中での溶液は、十分な量の薬学的に許容される液体担体、例えば水、で希釈されて、投与のために容易に計量され得る。
【０４１１】
これに代えて、液体もしくは半−固体経口製剤は、結合体もしくはその誘導体を植物油、グリコール、トリグリセリド、プロピレングリコールエステル(例えばプロピレンカーボネート)および他のそのような担体中に溶解するかまたは分散し、これらの溶液もしくは懸濁液を硬質または軟質ゼラチンカプセル殻の中にカプセル化することによって調製され得る。他の有用な製剤としては、米国特許第Ｒｅ２８,８１９号および第４,３５８,６０３号に示されたものが挙げられる。簡潔に言えば、そのような製剤としては、本明細書において提供される結合体、１,２−ジメトキシメタン、ジグライム、トリグライム、テトラグライム、ポリエチレングリコール−３５０−ジメチルエーテル、ポリエチレングリコール−５５０−ジメチルエーテル、ポリエチレングリコール−７５０−ジメチルエーテル[式中、３５０、５５０および７５０は、ポリエチレングリコールのおおよその平均分子量を指す]を含むが、それらに限定されない、ジアルキル化モノ−もしくはポリ−アルキレングリコール、ならびにブチル化ヒドロキシトルエン(ＢＨＴ)、ブチル化ヒドロキシアニソール(ＢＨＡ)、没食子酸プロピル、ビタミンＥ、ハイドロキノン、ヒドロキシクマリン、エタノールアミン、レシチン、セファリン、アスコルビン酸、リンゴ酸、ソルビトール、リン酸、チオジプロピオン酸およびそのエステル、ならびにジチオカルバメートのような一つもしくはそれ以上の抗酸化剤、を含有するものが挙げられるが、それらに限定されない。
【０４１２】
他の製剤としては、薬学的に許容されるアセタールを含む水性アルコール溶液が挙げられるが、それらに限定されない。これらの製剤で用いられるアルコールは、プロピレングリコールおよびエタノールを含むが、それらに限定されない、一つもしくはそれ以上のヒドロキシ基を有する任意の薬学的に許容される水混和性溶媒である。アセタールとしては、アセトアルデヒドジエチルアセタールのような低級アルキルアルデヒドのジ(低級アルキル)アセタールが挙げられるが、それらに限定されない。
【０４１３】
すべての実施態様において、錠剤およびカプセル製剤は、結合体の溶出を修飾するかもしくは持続させるために当業者に公知のようにコーティングされ得る。かくして、例えば、それらは、サリチル酸フェニル、ろうおよび酢酸フタル酸セルロースのような従来の腸消化性コーティング剤によってコーティングされ得る。
【０４１４】
２．注射剤、溶液および乳濁液
皮下的、筋肉内的もしくは静脈内的にのいずれかの注射を一般的に特徴とするる非経口的投与がまた、本明細書において意図される。注射剤は、液体溶液もしくは懸濁液、注射前に液体中で溶液もしくは懸濁液にするのに適した固体形態として、または乳濁液のいずれかとして、従来の形態で調製され得る。適当な添加剤は、例えば、水、生理食塩水、デキストロース、グリセロールもしくはエタノールである。加えて、所望により、投与されるべき医薬組成物はまた、例えば、酢酸ナトリウム、モノラウリン酸ソルビタン、オレイン酸トリエタノールアミンおよびシクロデキストリンのような、湿潤化もしくは乳化剤、ｐＨ緩衝剤、安定化剤、溶解度増強剤、ならびに、例えば、他のそのような薬剤のような無毒性補助物質の少量を含有し得る。一定の投与量レベルが保持されるような、遅速−放出もしくは徐放性システムの注入(例えば、米国特許第３,７１０,７９５号を参照)がまた、本明細書において意図される。
【０４１５】
簡潔に言えば、本明細書において提供される結合体は、固体の内部マトリックス、例えば、メタアクリル酸ポリメチル、メタアクリル酸ポリブチル、可塑化されたもしくは可塑化されていない塩化ポリビニル、可塑化されたナイロン、可塑化されたポリエチレンテレフタレート、天然ゴム、ポリイソプレン、ポリイソブチレン、ポリブタジエン、ポリエチレン、エチレン−酢酸ビニル共重合体、シリコンゴム、ポリジメチルシロキサン、炭酸珪素共重合体、アクリル酸およびメタアクリル酸エステルのヒドロゲルのような親水性ポリマー、コラーゲン、交差結合したポリビニルアルコールおよび交差結合した部分的に加水分解されたポリ酢酸ビニル、等の中に分散されて、それは体液中に不溶であるところのポリマー性外膜、例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン、エチレン／プロピレン共重合体、エチレン／アクリル酸エチル共重合体、エチレン／酢酸ビニル共重合体、シリコンゴム、ポリジメチルシロキサン、ネオプレンゴム、塩素化されたポリエチレン、ポリ塩化ビニル、塩化ビニルの酢酸ビニル、塩化ビニリデン、エチレンおよびプロピレンとの共重合体、イオノマーポリエチレンテレフタレート、ブチルゴム、エピクロルヒドリンゴム、エチレン／ビニルアルコール共重合体、エチレン／酢酸ビニル／ビニルアルコール三元共重合体、ならびにエチレン／ビニルオキシエタノール共重合体、によって取り巻かれている。結合体は、放出の律速段階においてポリマー性外膜を通して拡散する。そのような非経口的組成物中に含有される結合体の百分率は、その特異的な性質ならびに結合体の活性および対象の必要性に高度に依存する。
【０４１６】
組成物の非経口的投与としては、静脈内、皮下および筋肉内投与が挙げられる。非経口的投与のための製剤としては、注射にすぐ使える無菌溶液、皮下注射用錠剤を含む、使用直前に溶媒とすぐ配合される、凍結乾燥された散剤のような無菌乾燥可溶性生成物、注射にすぐ使える無菌懸濁液、使用直前にビークルとすぐ配合される無菌乾燥不溶性生成物ならびに無菌乳濁液、が挙げられる。溶液は、水性もしくは非水性のどちらかでありえる。
【０４１７】
もし静脈内に投与されるならば、適当な担体としては、生理食塩水もしくはリン酸緩衝生理食塩水(ＰＢＳ)、ならびに、ブドウ糖、ポリエチレングリコールおよびポリプロピレングリコールならびにそれらの混合物のような、粘稠化剤ならびに溶解剤を含有する溶液が挙げられる。
【０４１８】
非経口的製剤で用いられる薬学的に許容される担体としては、水性ビークル、非水性ビークル、抗菌剤、等張化剤、緩衝剤、抗酸化剤、局所麻酔剤、懸濁および分散剤、乳化剤、金属イオン封鎖もしくはキレート化剤ならびに他の薬学的に許容される物質が挙げられる。
【０４１９】
水性ビークルの例としては、塩化ナトリウム注射液、リンガー注射液、等張性デキストロース注射液、無菌水注射液、デキストロースおよび乳酸加リンゲル注射液が挙げられる。非水性非経口的ビークルとしては、野菜起源の脂肪油、綿実油、トウモロコシ油、ゴマ油およびピーナツ油が挙げられる。静菌もしくは静真菌濃度における抗菌剤が、フェノール、もしくはクレゾール、水銀剤、ベンジルアルコール、クロロブタノール、P−ヒドロキシ安息香酸メチルおよびプロピル、チメロサール、塩化ベンザルコニウムおよび塩化ベンゼトニウムを含むところの多回−用量容器中に包装された非経口的製剤に添加されなければならない。等張化剤としては、塩化ナトリウムおよびデキストロースが挙げられる。緩衝剤としては、リン酸塩およびクエン酸塩が挙げられる。抗酸化剤としては、亜硫酸ナトリウムが挙げられる。局所麻酔剤としては、プロカイン塩酸塩が挙げられる。懸濁および分散剤としては、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよびポリビニルピロリドンが挙げられる。乳化剤としては、ポリソルベート８０(TWEEN[登録商標]80)が挙げられる。金属イオンの封鎖もしくはキレート化剤としては、ＥＤＴＡが挙げられる。薬学的担体としてはまた、水混和性ビークル用にエチルアルコール、ポリエチレングリコールおよびプロピレングリコールが、ならびにｐＨ調整用に水酸化ナトリウム、塩酸、クエン酸もしくは乳酸が挙げられる。
【０４２０】
結合体の濃度は、注射剤が所望の薬理効果を生み出すために十分な量を提供するように調整される。正確な投与量は、当分野で公知であるように、患者もしくは動物の年齢、体重および状態に依存する。
単回容量非経口性製剤は、アンプル、バイアル、もしくは注射針付の注射器の中で包装される。非経口投与のためのすべての製剤は、当分野で公知でありかつ実行されるように、無菌でなければならない。
【０４２１】
例示的には、結合体を含有する無菌水溶液の静脈内もしくは動脈内注入は、有効な投与様式である。もう一つの実施態様は、所望の薬理的効果を生成するために必要なだけ注射される結合体を含有する無菌の水性もしくは油性の溶液または懸濁液である。
【０４２２】
注射剤は、局所的および全身的な投与のためにデザインされる。典型的には、治療的に有効な投与量っが、少なくとも約０.１％ｗ／ｗから約９０％ｗ／ｗもしくはそれ以上にまで、一般的には処置する組織(複数を含む)に対して２％ｗ／ｗ以上、の結合体の濃度を含有するように処方される。結合体は、一度に投与され得るか、もしくは時間間隔をおいて投与するための多数のさらに少ない用量に分割され得る。正確な投与量および処置期間は、処置すべき組織の関数であって、公知の試験プロトコルを用いるかまたはインビボもしくはインビトロの試験データからの外挿によって、経験的に決定され得る。濃度および投与量値はまた、処置される個人の年齢とともに変化し得ることが注目されるべきである。さらに、任意の特定の対象に対しては、特異的な服用レジメンを、個人の必要性および組成物を投与するかもしくは投与することを管理するヒトの専門的な判断にしたがって経時的に調整すべきこと、ならびに本明細書において示される濃度範囲は単に例示的なものであって、クレームされた製剤の範囲もしくは実施を限定することを意図するものではないことが、理解されるべきである。
【０４２３】
結合体は、超微細粉砕されたかもしくは他の適当な形態で懸濁されるか、またはより可溶性な生成物を作成するために誘導化され得る。得られる混合物の形態は、意図される投与様式および選択される担体もしくはビークル中の結合体の溶解度を含む、多数の因子に依存する。有効濃度は、異常の症状を改善するために十分であって、経験的に決定され得る。
【０４２４】
３．凍結乾燥された散剤
本明細書において興味あるものはまた、溶液、乳濁液および他の混合液として投与するために再構成され得るところの、凍結乾燥された散剤である。それらはまた、固形剤もしくはゲル剤として再構成されて、製剤化され得る。
【０４２５】
無菌の、凍結乾燥された散剤は、本明細書において提供される結合体もしくはその薬学的に許容される誘導体を、適当な溶媒に溶解することによって調製される。溶媒は、安定性を改善するところの添加物もしくは散剤の他の薬理的成分またはその散剤から調製される再構成された溶液を含有し得る。使用し得るところの添加物としては、デキストロース、ソルビタール、果糖、トウモロコシシロップ、キシリトール、グリセリン、ブドウ糖、蔗糖もしくは他の適当な薬剤が挙げられるが、それらに限定されない。溶媒はまた、クエン酸塩、リン酸ナトリウムもしくはカリウムまたは典型的には約中性のｐＨの、当業者に公知の他のそのような緩衝剤を含有し得る。次の溶液の無菌ろ過に続いて当業者公知の標準的な条件下で凍結乾燥は、所望の製剤を提供する。一般的には、得られた溶液は、凍結乾燥用のバイアルに配分されるであろう。それぞれのバイアルは、結合体の単回投与量(１０〜１０００ｍｇ、例えば、１００〜５００ｍｇのような)もしくは多回投与量を含むであろう。凍結乾燥された散剤は、約４℃〜室温におけるような、適当な条件下で保存され得る。
【０４２６】
この凍結乾燥された散剤の注射用水での再構成は、非経口投与で使用するための製剤を提供する。再構成のためには、一般的には、５〜３５ｍｇもしくは約９〜３０ｍｇのような、約１〜５０ｍｇの凍結乾燥された散剤を、無菌水もしくは他の適当な担体の１ｍｌ当たりに加える。正確な量は、選択される結合体、意図される対象、および他の経験的に決定され得るパラメーターに依存する。したがって、量は経験的に決定され得る。
【０４２７】
４．局所投与
局所的な混合物は、局所的および全身的投与について説明されたように調製される。得られた混合物は、溶液、懸濁液、乳剤等であり得て、そしてクリーム剤、ゲル剤、軟膏剤、乳剤、液剤、エリキシル剤、ローション剤、懸濁剤、チンキ剤、パスタ剤、泡沫剤、エアゾール剤、灌注剤、噴霧剤、坐剤、包帯剤、皮膚貼付剤もしくは任意の他の局所投与に適する製剤として処方され得る。
【０４２８】
結合体もしくはそれらの薬学的に許容される誘導体は、吸入(例えば、炎症性疾患、特に喘息、の処置に有用なステロイドの送達のためのエアゾール剤を記述する、米国特許第４,０４４,１２６号、第４,４１４,２０９号および第４,３６４,９２３号を参照)によるような、局所的適用のためのエアゾール剤として処方され得る。呼吸管へ投与するためのこれらの製剤は、噴霧器用のエアゾール剤もしくは溶液の形態で、または、単独もしくは乳糖のような不活性担体と組合せて吸入用の超微細粉末として、あり得る。そのような場合には、製剤の粒子は、典型的には５０ミクロン以下、一般的には１０ミクロン以下の直径を有するであろう。
【０４２９】
結合体は、皮膚および眼中におけるような粘膜への局所的適用のためのような、局部的もしくは局所的適用のために、ならびに眼への適用のためまたは脳槽内的もしくは経皮的適用のために、ゲル剤、クリーム剤、およびローション剤の形態で処方され得る。局所的投与は、経皮的送達およびまた眼もしくは粘膜への投与、または吸入治療を意図する。結合体の単独もしくは他の薬学的に許容される添加剤と組合せた鼻の液剤がまた、投与され得る。
これらの液剤、特に眼科的用途に意図されるものは、適切な塩とともに、０.０１％〜１０％等張液剤、ｐＨ５〜７、として処方され得る。
【０４３０】
５．他の投与経路のための組成物
局所的適用、経皮的貼付剤、および直腸投与のような他の投与経路もまた、本明細書において意図される。
【０４３１】
例えば、直腸投与のための医薬剤型は、全身的効果のための直腸の坐剤、カプセルおよび錠剤である。本明細書において用いられる直腸坐剤は、体温において溶解するかもしくは軟化して、一つまたはそれ以上の結合体を放出するところの、直腸へ挿入するための固形物体を意味する。直腸坐剤で利用される薬学的に許容される物質は、融点を上げるための基剤もしくはビークルおよび薬剤である。基剤の例としては、ココアバター(テオブロミン油)、グリセリン−ゼラチン、カルボワックス(ポリオキシエチレングリコール)ならびに脂肪酸のモノ−、ジ−およびトリグリセリドの適切な混合物が挙げられる。種々の基剤の組合せが使用され得る。坐剤の融点を上げるための薬剤としては、鯨ろうおよびろうが挙げられる。直腸坐剤は、圧縮法によるかもしくは鋳造によるかのどちらかで調製され得る。直腸坐剤の典型的な重量は、約２〜３ｇｍである。
【０４３２】
直腸投与のための錠剤もしくはカプセルは、経口投与のための製剤の場合と同じ薬学的に許容される物質を用いて、同じ方法により製造される。
【０４３３】
６．製造品
結合体もしくは薬学的に許容される誘導体は、包装資材、増殖性疾患もしくは障害と関連する一つまたはそれ以上の症状の処置、防止もしくは改善のために用いられるところの、本明細書において提供される結合体またはその薬学的に許容される誘導体、ならびに結合体もしくはその薬学的に許容される誘導体が増殖性疾患もしくは障害と関連する一つまたはそれ以上の症状の処置、防止もしくは改善のために用いられることを示すところのラベル、を含有する製造品として包装され得る。
【０４３４】
本明細書において提供される製造品は、包装資材を含む。医薬製品の包装で用いるための包装資材は、当業者には周知である。例えば、米国特許第５,３２３,９０７号、第５,０５２,５５８号および第５,０３３,２５２号、を参照されたい。医薬包装資材の例としては、ブリスター包装、瓶、管、吸入器、ポンプ、袋、バイアル、容器、注射器、瓶、ならびに選択される製剤ならびに投与および処置の意図される様式に適する任意の包装資材が挙げられるが、それらに限定されない。本明細書において提供される結合体および組成物の広い系列の製剤は、そこで細胞表面プロテアーゼまたはその可溶性の、脱落したもしくは放出された型が示唆されている、任意の障害に対する種々の処置であるとして意図される。
【０４３５】
Ｆ．結合体の活性の評価
標準的な生理学的、薬理学的および生化学的手順が、結合体を試験して、細胞表面プロテアーゼまたはその可溶性の、脱落したもしくは放出された型の作用で治療的活性を保有するものを同定するために、利用可能である。結合体の、細胞毒性のような、治療的活性を評価するために用い得るインビトロおよびインビボアッセイは、試験される治療薬に依存するであろう。
【０４３６】
例示的なアッセイが、細胞毒性結合体を参照して、以下に簡潔に議論される(実施例をまた参照)。アッセイされる特定の活性は結合される治療薬に依存することが理解される。
【０４３７】
１．インビトロアッセイ
本明細書において提供される結合体の、細胞毒性のような、治療的活性は、結合されていない治療薬の、細胞毒性のような、治療活性を評価するために通常使用される任意のアッセイにより評価され得る。多数のそのようなアッセイが公知であり、例えば、アッセイは標的とされた細胞表面プロテアーゼを発現する細胞を使用することができて、そして治療薬の治療的活性が評価される。例えば、細胞毒性は、標識されたヌクレオチドもしくは他のそのような標識の組み込みによるような、細胞の生存率を測定することかまたは細胞増殖を測定することによって、評価され得る。一般的には活性は、標的とされたプロテアーゼを発現しない細胞と比較される。
【０４３８】
例えば、細胞は、標的とされたＭＴＳＰもしくはエンドセリアーゼを発現する任意のものであろう。そのような細胞は、上で議論されたように、組織発現プロフィールの測定によるように、細胞表面プロテアーゼを発現することが公知である細胞を選択することにより、または種々の抗体を持つ細胞株を標的とされたプロテアーゼに対して、または標的とされたプロテアーゼの公知の阻害剤の存在下もしくは不在下でプロテアーゼのための色素産生のように標識された基質の存在下でプロテアーゼ活性に対して、スクリーニングすることにより、取得することができる。
【０４３９】
これに代えて、プロテアーゼを発現しない細胞株中にプロテアーゼをコード化する核酸を導入し、そしてそこで発現させて、興味のあるプロテアーゼを発現する細胞株を作成することができる。得られた組換え細胞を細胞毒性アッセイで使用することができる。
【０４４０】
２．インビボアッセイ
治療活性を評価するための多数の動物モデルが公知である。任意の適当なインビボモデルを使用することができる。マウスの異種移植片モデルおよびニワトリ胚モデルが、例示的である。
【０４４１】
ニワトリ胚モデル
ＣＡＭモデル(ヒヨコ胚体外膜モデル；Ossowski (1988) J. Cell Biol. 107: 2437-2445)は、試験化合物の阻害活性を評価するためのもう一つの方法を提供する。ＣＡＭモデルでは、腫瘍細胞が、ＣＡＭ(幾つかのセリンプロテアーゼ阻害剤の存在下における腫瘍細胞では、膜を通した腫瘍細胞のさらに少ないかもしくはまったく無い侵入をもたらす)を含む胚体外膜を通して侵入する。かくして、ＣＡＭアッセイは、種々の濃度の試験化合物の存在および不在下でＣＡＭおよび腫瘍細胞により実施される。腫瘍細胞の侵入度をそのような条件下で測定して、化合物の阻害活性の指標を提供する。阻害活性を有する化合物は、より少ない腫瘍侵入と相関する。
【０４４２】
かくして、ＣＡＭアッセイは、ＣＡＭおよび腫瘍細胞により、種々の濃度の試験化合物の存在および不在下で実施される。活性を有する化合物は、腫瘍侵入および／もしくは腫瘍成長の変化と相関する。
【０４４３】
例えば、細胞表面プロテアーゼが細胞毒性剤のような治療薬を遊離させる能力もしくは結合剤の活性は、このモデルを用いて評価され得る。もし治療薬が化合物から放出されてそしてそれが阻害剤であるならば、より少ない腫瘍侵入もしくは腫瘍サイズの減少があるであろう。もし治療薬が結合剤の中で不活性であるならば、腫瘍侵入における効果は全く無いであろう。
【０４４４】
ＣＡＭモデルはまた、血管形成(即ち、新らしい血管の形成に対する効果の標準的アッセイ(Brooks et al. (1991) Methods in Molecular Biology 129: 257-269))においても用いられる。このモデルにしたがって、塩基性繊維芽細胞成長因子(ｂＦＧＦ)のような血管形成誘導剤を含有するろ過ディスクを、ＣＡＭ上に置く。ＣＡＭの中へのサイトカインの拡散は局部的な血管形成を誘導し、それをろ過ディスクの真下のＣＡＭ内の血管分岐点の数を計数することによるような幾つかの仕方で測定することができる。同定された化合物のサイトカイン−誘導血管形成を阻害する能力を、このモデルを用いて試験することができる。試験化合物は、血管形成誘導剤を含有するろ過ディスクに添加されるか、膜の上に直接置かれるか、もしくは全身的に投与されるのいずれかであり得る。試験化合物の存在下および／もしくは不在下における新らしい血管形成の程度を、このモデルを用いて比較することができる。試験化合物の存在下におけるより少ない新らしい血管の形成が、抗−血管形成活性の指標となるであろう。
【０４４５】
これは、本明細書において１)結合体中の治療薬の活性を査定するため；２)特定の細胞表面プロテアーゼが結合体から治療薬を開放する能力を査定するために、結合体との使用のために適合され得る。
【０４４６】
マウス異種移植片モデル
インビボ活性は、抗腫瘍活性のための周知のマウス異種移植片モデルのような、認知された動物モデルを用いて査定され得る(例えば、Beitz et al. (1992) Cancer Research 52: 227-230; Houghton et al. (1982) Cancer Res. 42: 535-539; Bogden et al. (1981) Cancer (Philadelphia) 48: 10-20; Hoogenhout et al. (1983) Int. J. Radiat. Oncol., Biol. Phys. 9: 871-879; Stastny et al. (1993) Cancer Res. 53: 5740-5744、を参照)。インビボのマウス固形腫瘍異種移植片モデルは、腫瘍細胞増殖および／もしくは自然転移を阻害する薬剤の能力を試験することのアッセイで、使用される。
【０４４７】
例えば、結合体は、マウス腫瘍異種移植片モデルで、標的とされた細胞表面プロテアーゼを発現する任意の腫瘍サブタイプ、例えば卵巣腫瘍、に対する抗腫瘍活性について評価される。ヌードマウスには、結合体の４回静脈注射のような、一回もしくはそれ以上が与えられる。投与物質は、試験物質を適切な容量の、例えば、ＰＢＳ／０.１％ＢＳＡと所望の投与量を達成するように混合することにより調製される。尾静脈へのマウスＩＶ注射(２５０〜３００μｌ)は、例えば、腫瘍細胞がマウスに注射される日を１日目と呼んで５日目、１２日目、１９日目、２６日目のような、実験期間中に、マウスに注射される。用量は、体重差に対し固定化もしくは標準化される。腫瘍体積を、毎週２回、選択された期間中測定する。
【０４４８】
雌性Balb／ｃ  ｎｕ／ｎｕ無胸腺マウス(Roger Williams Hospital Animal Facility, Providence, RI)、８〜１２週齢が、適当なマウスである。それらを、無菌環境中で維持し、体重が投与前日に約２５〜３０グラムの範囲であるように選択すべきである。動物を隔離した室で維持し、無菌条件で取り扱う。食餌および水は、自由に供給される。適切な腫瘍細胞を、例えば、the American Type Culture Collection (Rockville, MD)から取得し、１０％胎仔ウシ血清を補充した改変Eagle培地で成長させ得る。試験物質の注射前５日間のような選択された日数で、マウスは、右後方側腹部において腫瘍細胞の皮下注射を受ける。
【０４４９】
それぞれの腫瘍の寸法を測定するためには、ノギスが用いられる。最大および最小幅の測定(ｍｍ)は、試験物質の注射前および実験期間中、二週間毎のような選択された間隔で実施される。腫瘍体積(ｍｍ３)は、例えば、式：
体積＝[(幅)２(長さ)２]／２
を用いて、計算される。
【０４５０】
Ｇ．標的にすべきプロテアーゼを同定するための方法
また、疾患の処置用の結合体をターゲッティングすべきプロテアーゼを同定する方法が、提供される。方法は、疾患過程に関与する細胞もしくは疾患過程に関与する細胞の近傍にある細胞を同定することによって、細胞−表面プロテアーゼ−関連疾患を同定することを伴う。例えば、もし疾患が特定の腫瘍を伴うならば、その特定の腫瘍上にもしくはその近傍に位置する細胞上に局在するプロテアーゼが同定される。次いで、タ−ゲッティングのための細胞上の細胞表面プロテアーゼおよびそれのための基質が同定される。次いで、本明細書において提供されるようなプロテアーゼを標的とする結合体が、作成され得る。
【０４５１】
以下の実施例は、単なる例示的目的のためにのみ含まれて、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
【実施例１】
【０４５２】
ペプチド−ドキソルビシン結合体を作成するための一般的手順
工程Ａ：Wang樹脂上でのペプチドの合成
前負荷されたWang樹脂(０.２５ｍｍｏｌ)上でPerseptive BiosystemsからのＡＢＩ ４３１Ａペプチド合成機を用いて、ペプチドを自動的に作成した。ＡＢＩ ４３１Ａは、ＨＯＢＴ、ＨＢＴＵ、ＤＩＥＡ活性化を用いる。Ｎ−アセチル(もしくは他のアミド)でキャップされたペプチドの合成は、ＡＢＩ ４３１Ａ上での最終カップリング工程中にＡｃＯＨ(もしくは他のそれぞれのカルボン酸)の使用を伴った。他のＮ−末端キャップは以下の試薬を用いて手動で結合された：カルバミン酸エステルおよびスルホンアミドについては、ペプチドは、ＤＭＦ(３ｍＬ)中でＲＯＣＯＣｌもしくはＲＳＯ２ＣｌおよびＤＩＥＡ(それぞれ４当量、１時間)によりキャップされた。
【０４５３】
工程Ｂ：Wang樹脂からのペプチドの切断
Wang樹脂からのペプチドの切断は、樹脂をＴＦＡ／Ｈ２Ｏ(９５：５)２ｍＬで４５分間振盪することを伴った。ろ過により樹脂を除去し、ろ液をさらに１時間放置した。溶液を濃縮し残渣にした。粗製ペプチドを分析ＨＰＬＣ(システムＡ)で分析した。粗製ペプチドの典型的な純度は、８０％〜９５％にわたった。適当なグラジェント(典型的には１０〜３０％)を用いて分取ＨＰＬＣ(システムＢ)によりペプチドを精製した。次いで、純粋なフラクションを凍結乾燥すると、所望のペプチドを白色固体として与えた。典型的な収率は、２０〜５０％であり、９６〜９９％の純度であった。
【０４５４】
分析ＨＰＬＣ条件(システムＡ)
カラム：EM scienceからのChromolith RP-18e  ４.６ｍｍ×１００ｍｍ
グラジェント：６分間でＡ中の５〜５０％Ｂ
流速：４ｍＬ／分
溶媒Ａ：水中０.１％ＴＦＡ
溶媒Ｂ：アセトニトリル中０.１％ＴＦＡ
波長：２１０ｎｍ、２８０ｎｍ
【０４５５】
分取ＨＰＬＣ条件(システムＢ)
カラム：Peeke ScienceからのUltro 120 5 C18Q  １５０×２０ｍｍ
グラジェント：４０分間でＡ中の０〜２０％もしくは１０〜３０％もしくは２０〜４０％Ｂ
流速：１８ｍＬ／分
溶媒Ａ：水中０.１％ＴＦＡ
溶媒Ｂ：アセトニトリル
波長：２１４ｎｍ
【０４５６】
工程Ｃ：ペプチド酸のドキソルビシンへのカップリング
ペプチド酸(０.０５２ｍｍｏｌ、１.２当量)、ドキソルビシン塩酸塩(０.０４３ｍｍｏｌ、２５ｍｇ)およびＨＡＴＵ(０.０６０４ｍｍｏｌ、２２.９ｍｇ、１.４当量)の混合物にＤＭＦ(１ｍＬ)、次いで、２,６−ルチジン(０.１７ｍｍｏｌ、２０μL、４当量)を加えた。混合物を均一な溶液が得られるまで混合した。４〜２４時間後に(ＨＰＬＣシステムＡによってモニターする)反応液を水(９ｍＬ)で希釈し、分取ＨＰＬＣ(システムＤ)で直接精製した。次いで、純粋なフラクションを凍結乾燥すると、所望のペプチドのドキソルビシン結合体をふわふわした赤色固体として与えた。最終的な結合体の品質を、分析ＨＰＬＣ(システムＣ)および質量分析で検定した。典型的な収率は、９５〜９９％純度でもって１０〜３０％であった。(注：ペプチド酸がヒスチジン残基を含むとき、塩基としてＤＩＥＡに取り替えて、反応時間を１時間に短縮した)。
【０４５７】
ペプチドドキソルビシン結合体のフルオレニルメチルエステルの脱保護：遊離カルボン酸が結合体中に存在する場合には、フルオレニルメチルエステルを用いて、ペプチド酸のＣ−末端のドキソルビシンへのカップリングの間カルボン酸を保護し、続いてＤＭＦ中の１０％モルホリンにより１時間でフルオレニル基を除去した。
【０４５８】
分析ＨＰＬＣ条件(システムＣ)
カラム：EM scienceからのChromolith RP-18e  ４.６ｍｍ×１００ｍｍ
グラジェント：６分間でＡ中の５〜５０％Ｂ
流速：４ｍＬ／分
溶媒Ａ：水中０.１％ＴＦＡ
溶媒Ｂ：アセトニトリル中０.１％ＴＦＡ
波長：２１０ｎｍ、２８０ｎｍ
保持時間(分)の例
ドキソルビシン                                                    ４.０５
Ａｃ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−ｎＬｅｕ−Ｄｏｘ    ４.３４
ＭｅＯＣＯ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−ｎＬｅｕ−Ｄｏｘ      ４.３９
ＰｈＳＯ２−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−ｎＬｅｕ−Ｄｏｘ      ４.８３
Ｎ,Ｎ−ジメチルグリシン−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−ｎＬｅｕ−Ｄｏｘ                                                                      ４.２７
Ａｃ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−ｎＬｅｕ−Ｄｏｘ            ４.３２
【０４５９】
分取ＨＰＬＣ条件(システムＤ)
カラム：Peeke ScienceからのUltro 120 5 C18Q  １５０×２０ｍｍ
グラジェント：４０分間でＡ中の１０〜３０％Ｂ
流速：１８ｍＬ／分
溶媒Ａ：水中０.１％酢酸
溶媒Ｂ：アセトニトリル
波長：２１４ｎｍ
【実施例２】
【０４６０】
Ａｃ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−ｎＬｅｕ−Ｄｏｘの作成
工程Ａ：Ａｃ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ(ｔＢｕ)−Ｇｌｙ−Ａｒｇ(Ｐｂｆ)−Ｓｅｒ(ｔＢｕ)−ｎＬｅｕ−Wang樹脂の手動合成
窒素撹拌および真空支援式排流器を装備した２５０ｍＬフリット化ペプチド合成容器中で、Ｆｍｏｃ−ｎＬ−Wang樹脂(nova-biochem、３.３グラム、０.９ｍｍｏｌ／ｇ、３ｍｍｏｌ)を、ＤＭＦを用いて３０分間、前−膨潤させた。次いで、下の４工程手順を、以下のＦｍｏｃアミノ酸について合計５回繰り返すことにより、ペプチドを伸長した：Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Gly-OH。
【０４６１】
反復カップリング手順
１．樹脂をＤＭＦ(１００ｍＬ)中の２０％ピペリジンと５分間混合し、次いで、排液した(３回繰り返す)。
２．樹脂をＤＭＦ(１００ｍＬ)と３０秒間攪拌し、次いで、排液した(３回繰り返す)。
３．Ｆｍｏｃ−アミノ酸(１２ｍｍｏｌ)、ＨＯＢＴ(１２ｍｍｏｌ、４当量、１.６２２ｇ)、ＴＢＴＵ(１１.７ｍｍｏｌ、３.９当量、３.７５７ｇ)、ＤＭＦ(１０ｍＬ)およびＮＭＰ(９０ｍＬ)の混合物に、ＤＩＥＡ(１２ｍｍｏｌ、４当量、２.１０ｍＬ)を加えた。５分間撹拌して、前活性化させた後、溶液を合成容器に加えた。ニンヒドリン試験により反応の完結を検査し、次いで、排液した。(もしニンヒドリン試験が青色であったならば、二重のカップリング(工程３を繰り返す)を実施した。)
４．樹脂をＤＭＦ(１００ｍＬ)と３０秒間攪拌し、次いで、排液した(３回繰り返す)。
【０４６２】
伸長された樹脂(Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ(ｔＢｕ)−Ｇｌｙ−Ａｒｇ(Ｐｂｆ)−Ｓｅｒ(ｔＢｕ)−ｎＬｅｕ−Wang樹脂)を上の工程１および２で処理して、Ｆｍｏｃを除去した。無水酢酸(１５ｍｍｏｌ、５当量、１.４２ｍＬ)、ＤＩＥＡ(１５ｍｍｏｌ、５当量、２.６２ｍＬ)、ＤＭＦ(１０ｍＬ)およびＮＭＰ(９０ｍＬ)の溶液を反応容器に加えた。１時間後、樹脂を、ＤＭＦ(１００ｍＬ、３回)、ＣＨ２Ｃｌ２(１００ｍＬ、３回)およびＭｅＯＨ(１００ｍＬ、３回)で洗浄した。樹脂を、真空下で１５時間乾燥した。
【０４６３】
工程Ｂ：Ａｃ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−ｎＬｅｕ−ＯＨの作成
Ａｃ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ(ｔＢｕ)−Ｇｌｙ−Ａｒｇ(Ｐｂｆ)−Ｓｅｒ(ｔＢｕ)−ｎＬｅｕ−Wang樹脂(３ｍｍｏｌ)を含有する上の合成容器にＴＦＡ／Ｈ２Ｏ(９５：５、５０ｍＬ)を加えた。４５分間穏かに攪拌後、切断溶液を収集し、ろ液をさらに９０分間放置した。溶液を濃縮し残渣にした。粗製ペプチドを分析ＨＰＬＣで分析した(システムＡ、ＲＴ＝１.７３、純度＝９０％)。残渣を水(５０ｍＬ)およびヘキサン(１０ｍＬ)中に溶解して、混合した。ヘキサン層を除去し、水層に窒素を吹き込んで、いかなる残存するヘキサンを蒸発させた。粗製ペプチドを分取ＨＰＬＣ(システムＥ)で精製した。次いで、純粋なフラクションを凍結乾燥すると、Ａｃ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−ｎＬｅｕ−ＯＨ(１.０４ｇ、１.６８ｍｍｏｌ、５６％)を白色固体として与えた。純度を分析ＨＰＬＣにより(システムＡ、ＲＴ＝１.７３分、９７％純度)そして構造を質量分析により(６１７.９に観察されたイオン)評価した。
【０４６４】
分取ＨＰＬＣ条件(システムＥ)
カラム：Waters Delta-Pak 遠心圧縮カラム  １５μｍ、１００Ａ
グラジェント：４０分間でＡ中の５〜１５％Ｂ
流速：８０ｍＬ／分
溶媒Ａ：水中０.１％酢酸
溶媒Ｂ：アセトニトリル
波長：２１４ｎｍ
【０４６５】
工程Ｃ：Ａｃ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−ｎＬｅｕ−Ｄｏｘの作成
Ａｃ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−ｎＬｅｕ−ＯＨ(１.６８ｍｍｏｌ、１.０４ｇ、１.１当量)、ドキソルビシン塩酸塩(１.５３ｍｍｏｌ、８８７.８ｍｇ)およびＨＡＴＵ(１.７６ｍｍｏｌ，６６９.６ｍｇ、１.１５当量)の混合物にＤＭＦ(４０ｍＬ)、次いで、２,６−ルチジン(６.１２ｍｍｏｌ、７０９μＬ、４当量)を加えた。溶液を１８時間撹拌した。反応液を水(１００ｍＬ)で希釈し、酢酸(４００μＬ)で酸性にし、３バッチにして分取ＨＰＬＣ(システムＥ)で直ぐに精製した。それぞれの赤色のフラクションを分析ＨＰＬＣ(システムＦ)で分析した。次いで、９５％純度以上のフラクションを合併した。アセトニトリルを真空下で除去し、残存溶液を凍結乾燥すると、Ａｃ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−ｎＬｅｕ−Ｄｏｘ(０.６８２ｍｍｏｌ、７８０ｍｇ、４５％)をふわふわした赤色固体として与えた。純度を分析ＨＰＬＣにより(システムＦ、ＲＴ＝３.５１分、９５％純度)そして構造を質量分析によって(１１４３.５に観察されたイオン)評価した。
【０４６６】
分析ＨＰＬＣ条件(システムＦ)
カラム：EM scienceからのChromolith RP-18e  ４.６ｍｍ×１００ｍｍ
グラジェント：６分間でＡ中の２０〜４０％Ｂ
流速：４ｍＬ／分
溶媒Ａ：水中０.１％ＴＦＡ
溶媒Ｂ：アセトニトリル中０.１％ＴＦＡ
波長：２１０ｎｍ、２８０ｎｍ
【０４６７】
分取ＨＰＬＣ条件(システムＥ)
カラム：Waters Delta-Pak 遠心圧縮カラム  １５μｍ、１００Ａ
グラジェント：４０分間でＡ中の１５〜２５％Ｂ
流速：８０ｍＬ／分
溶媒Ａ：水中０.１％酢酸
溶媒Ｂ：アセトニトリル
波長：２１４ｎｍ
【実施例３】
【０４６８】
ペプチド−タキソール結合体を作成するための一般的方法
工程Ａ：Wang樹脂上でのペプチドの合成
実施例１、工程Ａを参照されたい
工程Ｂ：Wang樹脂からのペプチドの切断
実施例１、工程Ｂを参照されたい
【０４６９】
工程Ｃ：ペプチド酸の７−Ｇｌｙ−Ｔａｘｏｌもしくは７−Ａｌａ−Ｔａｘｏｌへのカップリング
ペプチド酸(０.０１２１ｍｍｏｌ、１.１当量)、７−Ｇｌｙ−Ｔａｘｏｌもしくは７−Ａｌａ−Ｔａｘｏｌ(０.０１１ｍｍｏｌ)およびＨＡＴＵ(０.０１５４ｍｍｏｌ、５.９ｍｇ、１.４当量)の混合物にＤＭＦ(０.３ｍＬ)、次いで、２,６−ルチジン(０.０４４ｍｍｏｌ、５.１μL、４当量)を加えた。混合物を、均一な溶液が得られるまで混合した。４時間〜２４時間後に(ＨＰＬＣシステムＨによってモニターする)、反応液を水(９ｍＬ)で希釈し、分取ＨＰＬＣ(システムＩ)で直接精製した。次いで、純粋なフラクションを凍結乾燥すると、所望のペプチドタキソール結合体をふわふわした白色固体として与えた。最終的な結合体の品質を、分析ＨＰＬＣ(システムＨ)および質量分析で検定した。典型的な収率は、９６〜９９％純度でもって３０〜５０％であった。
【０４７０】
分析ＨＰＬＣ条件(システムＨ)
カラム：EM scienceからのChromolith RP-18e  ４.６ｍｍ×１００ｍｍ
グラジェント：６分間でＡ中の５〜９０％Ｂ
流速：４ｍＬ／分
溶媒Ａ：水中０.１％ＴＦＡ
溶媒Ｂ：アセトニトリル中０.１％ＴＦＡ
波長：２１０ｎｍ、２８０ｎｍ
【０４７１】
保持時間(分)の例
Ａｃ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｔａｘｏｌ          ２.８６
Ａｃ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｔａｘｏｌ  ２.７９
Ａｃ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｔａｘｏｌ  ２.８７
Ａｃ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｔａｘｏｌ          ２.８０
Ａｃ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｔａｘｏｌ  ２.８１
【０４７２】
分取ＨＰＬＣ条件(システムＩ)
カラム：Peeke ScientificからのUltro 120 5 C18Q  １５０×２０ｍｍ
グラジェント：４０分間でＡ中の２０〜４５％Ｂ
流速：１８ｍＬ／分
溶媒Ａ：水中０.１％ＴＦＡ
溶媒Ｂ：アセトニトリル
波長：２１４ｎｍ
〜１９６
【実施例４】
【０４７３】
Ｎ−Ａｃ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ａｌａ−ＤＯＸの作成
【化６５】
2005518332.tif 000071
【０４７４】
工程Ａ：Ｎ−Ａｃ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ａｌａ−ＯＨ
以下の一般的手順を用いて、Ｎ−アセチルペプチド基質のＮ−Ａｃ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ａｌａ−ＯＨを、ペプチド合成フラスコ中で合成した。市販のＦｍｏｃ−Ａｌａ−Wang樹脂(０.３５ｇ、０.８４ｍｍｏｌ、Ｎｏｖａ)で開始して、２０％ピペリジンによる標準的なＦｍｏｃ−脱保護に続いて逐次的反復カップリング−Ｆｍｏｃ脱保護戦略を行った。それぞれのカップリングでは、３倍過剰(２.５２ｍｍｏｌ)のＦｍｏｃ−Ａｌａ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ(Ｂｏｃ)２、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ(ｔＢｕ)、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)およびＦｍｏｃ−Ａｒｇ(Ｂｏｃ)２をそれぞれ使用した。カップリングを、ＤＭＦ溶媒中でＰｙＢＯＰ(２.５２ｍｍｏｌ)およびＤＩＥＡ(２.５２ｍｍｏｌ)を用いて達成した。それぞれのカップリングサイクルの間に、Ｆｍｏｃ保護基を、ＤＭＦ中で２０％ピペリジンを用いて除去した。
【０４７５】
Ｎ−末端Ｆｍｏｃ基の除去後、無水酢酸(１.４３ｍｍｏｌ、１.７当量)、ＤＭＡＰ(０.２５ｍｍｏｌ、０.３当量)およびＤＩＥＡ(１.２６ｍｍｏｌ、１.５当量)によるキャッピングは、樹脂に結合したＮ−アセチル中間体を与えた。保護されたペプチド樹脂を塩化メチレン中の５０％ＴＦＡで３０分間処理して、Wang-樹脂、次いで、Ｂｏｃを切断し、塩化メチレン中の７０％ＴＦＡでＴｒｔおよびｔ−Ｂｕ保護基を除去した。溶媒および他の揮発性副生成物を減圧下留去し、そして粗生成物を水に溶解して、凍結乾燥すると、表題化合物をほぼ無色の、無定型の固体として与えた。質量分析は、所望の分子量を確認した。ＨＰＬＣ分析は、生成物がおよそ９５％純度であることを示した。このペプチドカルボン酸中間体は、所望により、溶媒中で粉砕化するかもしくは分取ＨＰＬＣによりさらに精製され得る。
【０４７６】
工程Ｂ：Ｎ−Ａｃ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ａｌａ−ＤＯＸ
工程Ａからの中間体(２０ｍｇ、０.０２７ｍｍｏｌ)を乾燥ＤＭＦ(０.８ｍＬ)に溶解し、窒素雰囲気下、室温で撹拌した。この溶液に、ドキソルビシン塩酸塩(１５.６ｍｇ、０.０２７ｍｍｏｌ)、ＥＤＣ(６.８ｍｇ、０.０３５ｍｍｏｌ)、ＨＯＡｔ(４.８ｍｇ、０.０３５ｍｍｏｌ)および２,６−ルチジン(７.３μL、０.０６ｍｍｏｌ)を加えた。カップリンの終了まで、分析ＨＰＬＣ(システムＪ、以下参照)によってモニターしながら、撹拌を継続した。溶液をろ過し、粗生成物を、Ｃ１８  ＲＰ−ＨＰＬＣ(Ａ＝０.１％ＡｃＯＨ／Ｈ２Ｏ；Ｂ＝ＣＨ３ＣＮ、６０分間でグラジェント溶出１００％から６０％Ａまで)によって精製した。均一生成物フラクション(ＨＰＬＣ、システムＪにより評価した)を溜めて、凍結乾燥すると表題化合物を淡赤色固体として与えた。
【０４７７】
ＨＰＬＣ条件(システムＪ)
カラム：Phenomenex １５ｃｍ  ＃００Ｆ−３０３３−Ｅ０、Ｃ１８
溶出液：２０分間で９５：５(Ａ：Ｂ)から２５：７５(Ａ：Ｂ)へのグラジェント
Ａ＝０.１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、Ｂ＝０.１％ＴＦＡ／アセトニトリル
流速：１ｍＬ／分
波長：２１０ｎｍ、２８０ｎｍ
保持時間：ドキソルビシン＝８.８９分
Ｎ−Ａｃ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ａｌａ−ＤＯＸ＝８.４分
【０４７８】
物理的性質：
分子式：Ｃ５５Ｈ７８Ｎ１４Ｏ２０
分子量：１２５５.３
低分解能質量分析：６２８.２(Ｍ＋２／２)
【０４７９】
表２に、追加的なペプチド性基質−ドキソルビシン結合体についてのデータを表示する。これらの結合体は、実施例４に説明された一般的な手順によって作成されたところの適切なアミノ酸前駆体から作成された。
【０４８０】
表２
【表６】
2005518332.tif 000072
【実施例５】
【０４８１】
ドキソルビシン／ペプチド性基質結合体のＭＴＳＰ１の組換えプロテアーゼドメインによる５０％切断への時間の測定
１ミリモル原液を、二回蒸留した水中にてそれぞれのペプチド性基質結合体に対して作成した。次いで、２９.２ｍＭ  Tris、ｐＨ８.４、２９.２ｍＭイミダゾール、２１７ｍＭ  ＮａＣｌ中で、結合体１００μＭを、ＭＴＳＰ１の組換え的に生産された活性な一本鎖プロテアーゼドメイン(配列番号１のヌクレオチド１８６５〜２５８２によってコード化される配列番号２における残基６１５〜８５５)１もしくは１０ｎＭと混合するところの切断反応を、実施した。最終反応容積は、２００μＬであった。これらの反応液を、水浴中３７℃にてインキュベートした。２〜１２８分にわたる時刻において、試料２０μＬを取り出し、０.３３％になるまでトリフルオロ酢酸を加えて、酵素活性を停止させた。それぞれの試料中における加水分解の量を、逆層ＨＰＬＣで測定した。次いで、生成物ピークの面積を基質および生成物ピークの面積の和で除して、加水分解百分率を計算した。未加水分解基質の百分率を反応時間の対数に対してプロットし、プロットをGraphpad Inc. (San Diego, CA)のPrism softwareを用いてＳ字状曲線に合わせて、それぞれの基質の５０％が切断されるところの時間を測定した。
【０４８２】
本明細書において提供される特定の結合体の結果を、図１(条件：１２ｍＭトリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン、ｐＨ８.０、２５ｍＭ  ＮａＣｌ、０.５ｍＭ  ＣａＣｌ２中、３７℃で１００μＭ結合体について１ｎＭ  ＭＴＳＰ１；反応を０.３３％トリフルオロ酢酸で停止した)に示す。
【実施例６】
【０４８３】
結合体の細胞毒性のインビトロアッセイ
また、結合体の細胞毒性を試験して、結合体がプロドラッグとして働くことを確認することができる。結合体は、Alamar Blueアッセイを用いて、未修飾の細胞毒性剤により死滅することが公知であるところの細胞株に対して試験される。ＭＴＳＰ１もしくはエンドペプチダーゼのような、細胞表面プロテアーゼを発現するところのＬＮＣａＰ細胞(The American Type Culture Collection (Rockville, Maryland))のような細胞を、１×１０４細胞／穴(０.１ｍＬ／穴)の密度で９６穴プレート中に播種する。培地のみを含むプレートを対照として用いる。細胞を、３７℃で３日間インキュベートして、Alamar Blue２０μＬをアッセイ穴に添加する。７時間のインキュベーションの後、５７０および６００ｎｍでEL-310プレート読み取り器を用いて細胞の死亡を測定する。細胞の死亡値を培地対照に対する細胞数の減少百分率として表す。
【実施例７】
【０４８４】
結合体のインビボ有効性
腫瘍細胞をトリプシン消化し、増殖培地に再懸濁し、６分間２００×ｇで遠心分離する。細胞を無血清α−ＭＥＭに再懸濁して、計数する。次いで、所望の数の細胞を含有する適切な容積のこの溶液を、コニカル遠心管に移し、先のように遠心分離し、適切な容量のα−ＭＥＭ−Matrigelの１：１冷混合物に再懸濁する。懸濁液を、動物に接種するまで氷上で保つ。
【０４８５】
１０週齢の雄性ヌードマウスを使用する。マウスを、個別に秤量し、それぞれの群内で個別のマウス間で２グラム以下の体重差で群分け(群当たりｎ＝１０)する。１日目に、マウスに、皮下的に腫瘍細胞株を接種する。それぞれのマウスを、氷冷Matrigelおよびａ−ＭＥＭの６０％溶液中で、例えば、０.５×１０６〜１０８の腫瘍細胞／ｍＬ  ０.５ｍＬを接種する。次いで、２４時間後に、結合体投与を開始した。ビークル処置マウスに、水中の５％デキストロースを注射する。１８日から２ヶ月もしくはそれ以上までのような、予め決められた時間の終わりに、マウスを屠殺して、腫瘍サイズおよび量もしくは他のパラメーターを測定する。結合体で処置したマウスに対する腫瘍サイズおよび量もしくは他のパラメーターを、ビークル処置マウスと比較して、結合体の有効性を測定する。
【０４８６】
腫瘍細胞を接種後、マウスは三つのプロトコルの一つの下で処置する：
プロトコルＡ
細胞接種１日後に、動物に、試験結合体、非修飾細胞毒性剤もしくはビークル対照(無菌水)の７.２もしくは１７.９μｇ／ｋｇを含む、１〜１００、もしくは３〜５０、もしくは７〜２２μｇ／ｋｇを投与する。結合体および細胞毒性剤の投与量は、最初は最大非致死量であるが、引き続いてさらに低く滴定し得る。同一用量を２４時間間隔で５日間投与する。５.５週間もしくは他の適当な期間の終末に、マウスを屠殺し、存在するいかなる腫瘍の重量を測定する。アッセイの開始および終末において動物の体重を測定する。
【０４８７】
プロトコルＢ
細胞接種後１４〜１５日に、動物に、試験結合体、非修飾細胞毒性剤もしくはビークル対照(無菌水)の７.２もしくは１７.９μｇ／ｋｇを含む、１〜１００、もしくは３〜５０、もしくは７〜２２μｇ／ｋｇを、投与する。結合体および細胞毒性剤の投与量は、最初は最大非致死量であるが、引き続いてさらに低く滴定し得る。同一投与量を２４時間間隔で５日間投与する。５.５週間もしくは他の適当な期間の終末に、マウスを屠殺し、存在するいかなる腫瘍の重量を測定する。アッセイの開始および終了時において動物の体重を測定する。
【０４８８】
プロトコルＣ
細胞接種１日後に、動物に、試験結合体、非修飾細胞毒性剤もしくはビークル対照(無菌水)の７.２もしくは１７.９μｇ／ｋｇを含む、１〜１００、もしくは３〜５０、もしくは７〜２２μｇ／ｋｇを腹腔内投与により投与する。結合体および細胞毒性剤の投与量は、最初は最大非致死量であるが、引き続いてさらに低く滴定し得る。同一投与量を７日間隔で５週間投与する。５.５週間もしくは他の適当な期間の終末に、マウスを屠殺し、存在するいかなる腫瘍の重量を測定する。アッセイの開始および終了時において動物の体重を測定する。
【実施例８】
【０４８９】
例示的なＭＴＳＰの遺伝子発現プロフィールおよびドメインの組織化
正常な組織、がん細胞およびがん組織中におけるＭＴＳＰ１の遺伝子発現プロフィール
ＭＴＳＰ１の組織分布および遺伝子発現レベルに関する情報を得るために、コード化核酸を含む、Pichia pastoris発現ベクター、ｐＰＩＣ９Ｋ−ＭＴＳＰ１、からのＤＮＡ挿入断片を用いて、７６の異なるヒト組織(カタログ番号７７７５−１；ヒト多重組織発現(ＭＴＥ)アレー；CLONTECH, Palo Alto, CA)からのＲＮＡを含有するブロットを精査した。結腸(上行、横行および下行)、直腸、気管、食道および十二指腸では、顕著な発現が観察された。空腸、回腸、回盲部、胃、前立腺、脳下垂体、虫垂、腎臓、肺、胎盤、膵臓、甲状腺、唾液腺、乳腺、胎児腎および胎児肺では、中度の発現レベルが観察された。脾臓、胸腺、末梢血管白血球、リンパ節、骨髄、膀胱、子宮、肝臓、副腎、胎児心臓、胎児肝臓、胎児脾臓および胎児胸腺では、より低い発現レベルが観察された。
【０４９０】
顕著な量のＭＴＳＰ１転写物がまた、結腸直腸性腺がん細胞株(ＳＷ４８０)、バーキットリンパ腫細胞株(Daudi)および白血病細胞株(HL-60)で検出された。無胸腺ヌードマウス中に異種移植された幾つかのヒト原発腫瘍におけるＭＴＳＰ１転写物のＲＴ−ＰＣＲを、遺伝子特異的プライマーを用いて実施した。高レベルのＭＴＳＰ１転写物が、結腸腺がん(ＣＸ−１)および膵臓腺がん(ＧＩ−１０３)で検出された。他の結腸腺がん(ＧＩ−１１２)、卵巣がん腫(ＧＩ−１０２)、肺がん腫(ＬＸ−１)および乳がん腫(ＧＩ−１０１)では、中度ののレベルが観察された。もう一つの肺がん腫(ＧＩ−１１７)は、低レベルのＭＴＳＰ１転写物を発現した。類似のＲＴ−ＰＣＲを実施して、ＰＣ−３およびＬＮＣａＰ細胞株におけるＭＴＳＰ１転写物の存在を検出した。両方の細胞株は、顕著な量のＭＴＳＰ１転写物を発現した。ＭＴＳＰ１はまた、卵巣がんに対するマーカーである。
【０４９１】
正常なおよび腫瘍の組織におけるセリンプロテアーゼＭＴＳＰ３の遺伝子発現プロフィール
ＭＴＳＰ３転写物の組織分布に関する情報を得るために、ＭＴＳＰ３プロテアーゼドメインをコード化するＤＮＡ挿入断片を用いて、７６の異なるヒト組織(カタログ番号７７７５−１；ヒト多重組織発現(ＭＴＥ)アレー；CLONTECH, Palo Alto, CA)から成るＲＮＡブロットを精査した。観察された発現パターンは、シグナルレベルの減少順に、気管＝結腸(下行)＝食道＞結腸(上行)＞結腸(横行)＝直腸＞回腸＞十二指腸＞空腸＞胆嚢＞回盲部＞胃＞腎臓＞虫垂であった。それはまた、胎児腎臓中ならびに二つの腫瘍細胞株、ＨｅｌａＳ３および白血病細胞株Ｋ−５６２中では、より低い量で発現される。ＲＮＡブロット(カタログ番号７７８０−１、７７６５−１および７７８２−１；ヒト１２−レーン、ヒト筋肉およびヒト消化システム多重組織ノーザン(ＭＴＮ)ブロット；CLONTECH)を用いるノーザン分析は、発現が結腸で最も多量に、食道、小腸、胆嚢および腎臓では中度に、ならびに胃および直腸ではより低い量で検出されることを確認した。約２ｋｂの単一転写物が検出された。
【０４９２】
マウスに異種移植された幾つかのヒト原発腫瘍におけるＭＴＳＰ３転写物の増幅を、遺伝子特異的プライマーを用いて実施した。ＭＴＳＰ３転写物は、肺がん腫(ＬＸ−１)、結腸腺がん(ＣＸ−１)、結腸腺がん(ＧＩ−１１２)および卵巣がん腫(ＧＩ−１０２)で検出された。もう一つの形態の肺がん腫(ＧＩ−１１７)、乳がん腫(ＧＩ−１０１)、膵臓腺がん(ＧＩ−１０３)および前立腺腺がん(ＰＣ３)では、明白なシグナルは検出されなかった。
【０４９３】
正常なおよび腫瘍の組織におけるＭＴＳＰ４の遺伝子発現プロフィール
ＭＴＳＰ４転写物の遺伝子発現プロフィールに関する情報を得るために、ＬＤＬ受容体ドメインおよびプロテアーゼドメインの部分をコード化するＤＮＡフラグメントを用いて、７６の異なるヒト組織(カタログ番号７７７５−１；ヒト多重組織発現(ＭＴＥ)アレー；CLONTECH)から成るＲＮＡブロットを精査した。ゲルブロットのノーザン分析におけるように、肝臓において非常に強いシグナルが観察された。他の組織におけるシグナルは(シグナルレベルの減少順に)：胎児肝臓＞心臓＝腎臓＝副腎＝精巣＝胎児心臓および腎臓＝骨格筋＝胆嚢＝胎盤＞脳＝脊髄＝結腸＝胃＝脾臓＝リンパ節＝骨髄＝気管＝子宮＝膵臓＝唾液腺＝乳腺＝肺、で観察された。ＭＴＳＰ４はまた、ＨｅＬａＳ３＝白血病Ｋ−５６２＝バーキットリンパ腫(RajiおよびDaudi)＝結腸腺がん(ＳＷ４８０)＞肺がん腫(Ａ５４９)＝白血病ＭＯＬＴ−４＝白血病ＨＬ−６０、を含む幾つかの腫瘍細胞株において、より低い量で発現される。
【０４９４】
ヌードマウスで異種移植された幾つかのヒト原発腫瘍から作られたｃＤＮＡライブラリー(ヒト腫瘍多重組織ｃＤＮＡパネル、カタログ番号Ｋ１５２２−１、CLONTECH)からのＭＴＳＰ４転写物のＰＣＲを、ＭＴＳＰ４−特異的プライマーを用いて実施した。乳がん腫(ＧＩ−１０１)、肺がん腫(ＬＸ−１)、結腸腺がん(ＧＩ−１１２)および膵臓腺がん(ＧＩ−１０３)で、ＭＴＳＰ４転写物が検出された。明白なシグナルは、もう一つの形態の肺がん腫(ＧＩ−１１７)、結腸腺がん(ＣＸ−１)、卵巣がん腫(ＧＩ−１０２)および前立腺腺がん(ＰＣ３)では、検出されなかった。ＭＴＳＰ４転写物はまた、ＬＮＣａＰおよびＰＣ−３前立腺がん細胞株においてならびにＨＴ−１０８０ヒト線維肉腫細胞株において検出された。
【０４９５】
正常なおよび腫瘍の組織におけるＭＴＳＰ６の遺伝子発現プロフィール
ＭＴＳＰ６転写物の遺伝子発現プロフィールに関する情報を得るために、プライマーＣｈ１７−ＮＳＰ−３およびＮＳＰ−４ＡＳによるＰＣＲ反応から得られた４９５ｂｐＤＮＡフラグメントを用いて、７６の異なるヒト組織(カタログ番号７７７５−１；ヒト多重組織発現(ＭＴＥ)アレー；CLONTECH)から成るＲＮＡブロットを精査した。十二指腸で最強のシグナルを観察した。他の組織におけるシグナルは、(シグナルレベルの減少順に)：胃＞気管＝乳腺＝甲状腺＝唾液腺＝脳下垂体＝膵臓＞腎臓＞肺＞空腸＝回腸＝回盲部＝虫垂＝胎児腎臓＞胎児肺で観察された。極めて弱いシグナルをまた、幾つかの他の組織で検出することができる。ＭＴＳＰ６はまた、ＨｅＬａＳ３＞結腸腺がん(ＳＷ４８０)＞白血病ＭＯＬＴ−４＞白血病Ｋ−５６２を含む幾つかの腫瘍細胞株において発現される。
【０４９６】
ヌードマウスで異種移植された幾つかのヒト原発腫瘍から作られたｃＤＮＡライブラリー(ヒト腫瘍多重組織ｃＤＮＡパネル、カタログ番号Ｋ１５２２−１、CLONTECH)からのＭＴＳＰ６転写物のＰＣＲ分析を、ＭＴＳＰ６−特異的プライマー(Ｃｈ１７−ＮＳＰ−３およびＣｈ１７−ＮＳＰ２ＡＳ)を用いて実施した。ＭＴＳＰ６転写物は、肺がん腫(ＬＸ−１)で強く、膵臓腺がん(ＧＩ−１０３)で中度に、卵巣がん腫(ＧＩ−１０２)で弱く検出され；ならびに結腸腺がん(ＧＩ−１１２およびＣＸ−１)、乳がん腫(ＧＩ−１０１)、肺がん腫(ＧＩ−１１７)および前立腺腺がん(ＰＣ３)で極めて弱く検出された。ＭＴＳＰ６転写物はまた、乳がん細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、前立腺がん細胞株ＰＣ−３、で検出されたが、ＨＴ−１８０ヒト線維肉腫細胞株では検出されなかった。ＭＴＳＰ６はまた、乳腺がん腫ｃＤＮＡ(Clontech)で発現される。
【０４９７】
正常な、腫瘍の組織および細胞株におけるＭＴＳＰ９の遺伝子発現プロフィール
ＭＴＳＰ９転写物の遺伝子発現プロフィールを得るために、ヒト膵臓から得られるＭＴＳＰ９  ｃＤＮＡフラグメントを用いて、７６の異なるヒト組織(ヒト多重組織発現(ＭＴＥ)アレー；Clontech, Palo Alto；カタログ番号７７７５−１)から抽出されたＲＮＡから成る点ブロットを精査した。この分析結果は、ＭＴＳＰ９が気管で高度に発現され、多くの他の組織では低レベルで発現されることを示す。ＭＴＳＰ９転写物は、腎臓(成人および胎児)、脾臓(成人および胎児)、胎盤、肝臓(成人および胎児)、胸腺、末梢血白血球、肺(成人および胎児)、膵臓、リンパ節、骨髄、気管、子宮、前立腺、食道、精巣、卵巣および腺器官(乳線、副腎、甲状腺、脳下垂体および唾液線)で見出される。ＭＴＳＰ９はまた、腫瘍食道組織で、肺がん腫(Ａ５４９細胞株)で、ならびに、低レベルでは、結腸直腸がん腫(ＳＷ４８０)、リンパ腫(RajiおよびDaudi)、頚部がん腫(ＨｅｌａＳ３)ならびに白血病(ＨＬ−６０、Ｋ−５６２およびＭＯＬＴ−４)で、発現される。
【０４９８】
正常なおよび腫瘍の組織におけるＭＴＳＰ１０の遺伝子発現プロフィール
ＭＴＳＰ１０転写物の遺伝子発現に関する情報を得るために、ＭＴＳＰ１０−特異的プライマーを用いて、幾つかのヒト成人組織(Clontech、Cat.＃Ｋ１４２０−１)ｃＤＮＡパネルから作られるｃＤＮＡパネルについて、ＰＣＲ分析を行った。ＭＴＳＰ１０転写物は、膵臓、肺および腎臓で検出された。ＭＴＳＰ１０転写物はまた、小腸Marathon-Ready  ｃＤＮＡ(Clontech)で検出された。ヌードマウスで異種移植された幾つかのヒト原発腫瘍から作られたｃＤＮＡライブラリー(ヒト腫瘍多重組織ｃＤＮＡパネル、カタログ番号Ｋ１５２２−１、CLONTECH)からのＭＴＳＰ１０転写物のＰＣＲをまた、実施した。
【０４９９】
ＭＴＳＰ１０転写物は、乳がん腫(ＧＩ−１０１)、肺がん腫(ＬＸ−１およびＧＩ−１１７)、卵巣がん腫(ＧＩ−１０２)および膵臓腺がん(ＧＩ−１０３)で検出された。ＭＴＳＰ１０転写物はまた、前立腺がん (ＰＣ−３)で弱く検出され得る。二つの形態の結腸腺がん(ＧＩ−１１２およびＣＸ−１)では明白なシグナルは検出されなかった。ＭＴＳＰ１０転写物はまた、ヌードマウス上で成長させたＣＷＲ２２Ｒ前立腺腫瘍において検出された。
【０５００】
ＭＴＳＰ１２の正常なおよび腫瘍の組織におけるドメインの組織化および遺伝子発現プロフィール
ＭＴＳＰ１２ＰＤ１、−ＰＤ２および−ＰＤ３のドメインの組織化ならびに他のセリンプロテアーゼに対する相同性
翻訳されたＭＴＳＰ１２−ＰＤ１、−ＰＤ２および−ＰＤ３ヌクレオチド配列の配列およびタンパク質ドメインの分析は、これら三つのセリンプロテアーゼが近接していることを示す。配列順序は以下の通りである：ＭＴＳＰ１２−ＰＤ１に続いてＭＴＳＰ１２−ＰＤ２は、Ｎ末端で見られ、そしてＭＴＳＰ１２−ＰＤ３はＣ末端で見られる。ＭＴＳＰ１２−ＰＤ１および−ＰＤ２は、プロテアーゼ活性化切断部位(ＭＴＳＰ１２−ＰＤ１および−ＰＤ２に対してそれぞれ・・・Ｒ２３６↓Ｉ２３７ＶＧＧＭＥＡＳ・・・および・・・Ｒ５３７↓Ｖ５３８ＶＧＧＦＧＡＡ・・・[式中↓はプロテアーゼ活性化切断部位を示す])およびその触媒ドメインの３つの高度に保持された領域における触媒性三つ組残基(ＭＴＳＰ１２−ＰＤ１ではＨｉｓ２７７、ＡｓおよびＳｅｒ４２１；ＭＴＳＰ１２−ＰＤ２ではＨｉｓ５７８、ＡｓおよびＳｅｒ７２１)の存在を特徴とするトリプシン−様セリンプロテアーゼドメイン(ＭＴＳＰ１２−ＰＤ１および−ＰＤ２に対してそれぞれ、ａａ２３６〜ａａ４６５およびａａ５３７〜ａａ７６５)を含有する。ＭＴＳＰ１２−ＰＤ３は、セリンプロテアーゼドメイン(ａａ８６１〜ａａ１０８７)を含有する；それはプロテアーゼ活性化切断部位(・・・Ｒ８６０↓Ｉ８６１ＶＧＧＳＡＡＧ・・・)を有し、そして触媒性Ｈｉｓ９０２およびＡｓを有するが、それはセリンプロテアーゼにおいて見い出される保存された触媒性セリンの代わりにＡｌａ１０４３を有する。
【０５０１】
幾つかのドメインが、ＭＴＳＰ１２−ＰＤ１セリンプロテアーゼドメインの上流に見い出されて、これらは膜貫通ドメイン(ａａ２８〜ａａ５０)、ＳＥＡ[海ウニ精液タンパク質(sea urchin sperm protein)−エンテロキナーゼ(enterokinase)−アグリン(agrin)]ドメイン(ａａ５１〜ａａ１７０)およびＬＤＬａ[低密度リポタンパク質受容体クラスａ(low density lipoprotein receptor class a)]ドメイン(ａａ１８７〜ａａ２２５)を含む。５個の可能なＮ−結合したグリコシル化部位(Ｎ１１６ＳＳ、Ｎ５８１ＨＴ、Ｎ６７２ＡＴ、Ｎ６９７ＦＳおよびＮ８２０ＳＴ)がある。ＭＴＳＰ１２−ＰＤ１のプロテアーゼドメインにおいては、一本鎖形態のプロテアーゼドメイン中に一つの不対のシステイン(Ｃ３４６)があり、そして以下のＣｙｓ対形成が認められる：Ｃ２６２−Ｃ２７８；Ｃ３６０−Ｃ４２７；Ｃ４１７−Ｃ４４６；Ｃ３９２−Ｃ４０６。ＭＴＳＰ１２−ＰＤ２のプロテアーゼドメインにおいては、一本鎖形態のプロテアーゼドメイン中に一つの不対のシステイン(Ｃ６４６)があり、そして以下のＣｙｓ対形成が認められる：Ｃ５６３−Ｃ５７９；Ｃ６６０−Ｃ７２７；Ｃ６９２−Ｃ７０６；Ｃ７１７−Ｃ７４６。ＭＴＳＰ１２−ＰＤ３のプロテアーゼドメインにおいては、一本鎖形態のプロテアーゼドメイン中に一つの不対のシステイン(Ｃ９６９)があり、そして以下のＣｙｓ対形成が認められる：Ｃ８８７−Ｃ９０３；Ｃ９８３−Ｃ１０４９；Ｃ１０１４−Ｃ１０２８；Ｃ１０３９−Ｃ１０６８。
【０５０２】
公共的データベースに寄託された公知のセリンプロテアーゼに対するそれぞれのＭＴＳＰ１２−ＰＤ１、ＭＴＳＰ１２−ＰＤ２およびＭＴＳＰ１２−ＰＤ３のタンパク質配列のアラインメント(blastp; http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST)は、マトリプターゼに対しては４５％、４５％および４８％の同一性、ＤＥＳＣ１／エンドセリアーゼ１に対しては４４％、４３％および４１％の同一性、プロスタミン(ＡＢ０３００３６)に対しては４４％、４３％および４８％の同一性、スピネシン(ＴＭＰＲＳＳ５；ＮＭ＿０３０７７０)に対しては４３％、３９％および３９％の同一性、ならびにマラプシン(ＮＭ＿０３１９４８)に対しては４０％、３８％および３８％の同一性、を示した。クローンは、国際ＰＣＴ出願第ＷＯ  ０２／００８６０号(そこでの配列番号３８および９７を参照)において記載されて提供されたクローンおよびコード化されたものに対してヌクレオチドおよびコード化されたタンパク質レベルで約９３％の相同性を有する。ＰＣＴ出願において記載されるコード化されたタンパク質は、しかしながら、配列番号２７１で示される配列を配列番号２０のアミノ酸Ｌｅｕ３７３およびＶａｌ３７４の間に、ならびにさらに別の伸長したアミノ酸配列を配列番号２０のアミノ酸Ａｌａ４８およびＰｈｅ４９の間に含み、そして配列番号２０のアミノ酸９１〜１２４を欠損する。国際ＰＣＴ出願第ＷＯ０２／００８６０号において提供されるタンパク質を、本明細書において提供される方法において使用することができる。
【０５０３】
ＭＴＳＰ１２の遺伝子および組織発現プロフィール
ＭＴＳＰ１２ＰＤ１、−ＰＤ２および−ＰＤ３転写物の組織分布プロフィールに関する情報を得るために、３つのｃＤＮＡプローブを作成した。データは、ＭＴＳＰ１２ＰＤ１、−ＰＤ２および−ＰＤ３転写物は、７６の組織および細胞株の大部分においては低レベルで、しかしリンパ節および精巣ではより高レベルで発現されることを示す。
【０５０４】
正常なヒトおよびマッチド腫瘍組織の範囲においてＭＴＳＰ１２ＰＤ１、−ＰＤ２および−ＰＤ３の発現プロフィールを比較するために、個別の患者からの６８個の対ｃＤＮＡ試料から成るマッチド腫瘍／正常な発現アレー(カタログ番号７４８０−１；http://www.clontech.com)を用いた。結果は、ＭＴＳＰ１２ＰＤ１、−ＰＤ２および−ＰＤ３転写物が、乳房、子宮、結腸、卵巣、肺、腎臓および直腸を含む多数の正常な組織において低レベルで発現されるが、マッチド腫瘍のいずれにおいても示差的に発現されないことを示す。それはまた、低レベルで、Ｈｅｌａ(頚部がん腫)、Daudi(バーキットリンパ腫)、Ｋ５６２(慢性骨髄性白血病)、ＨＬ−６０(前骨髄性白血病)、Ｇ３６１(悪性黒色腫)、Ａ５４９(肺がん腫)、ＭＯＬＴ−４(リンパ芽球性白血病)、ＳＷ４８０(結腸直腸腺がん)およびRaji(バーキットリンパ腫)を含む幾つかの腫瘍細胞株で発現される。
【０５０５】
ＭＴＳＰ１２ＰＤ１、−ＰＤ２および−ＰＤ３転写物の存在に対して、正常な乳房、正常な精巣、正常な前立腺、前立腺がん細胞株および乳がん細胞株から作成された幾つかのＳＭＡＲＴ[登録商標]５´−ＲＡＣＥｃＤＮＡライブラリー(カタログ番号Ｋ１８１１−１：http://www.clontech.com)を、二組の遺伝子特異的なプライマーを用いるＲＴ−ＰＣＲにより分析した。ＭＴＳＰ１２−ＰＤ２および−ＰＤ３転写物は、正常な前立腺、ＰＣ−３、ＬＮＣａＰ、正常な乳房、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ＭＤＡ−ＭＢ−３６１、ＭＤＡ−ＭＢ−４５３およびＤＵ４４７５において検出されたが、正常な乳房およびＭＤＡ−ＭＢ−２３１ではより高いレベルが観測された。ＭＴＳＰ１２−ＰＤ１転写物は、正常な乳房、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１およびＤＵ４４７５でより高レベルが観測された以外には、同じ組織および細胞株で検出された。
【０５０６】
正常な、腫瘍の組織および細胞株におけるＭＴＳＰ２０の遺伝子発現プロフィール
ＭＴＳＰ２０転写物の遺伝子発現に関する情報を得るために、ヒト肺組織から得られるＭＴＳＰ２０ｃＤＮＡフラグメントを用いて、７６の異なるヒト組織(ヒト多重組織発現(ＭＴＥ)アレー；Clontech, Palo Alto, CA；カタログ番号７７７５−１)から抽出されたＲＮＡから成る点ブロットを精査した。結果は、ＭＴＳＰ２０をコード化するＲＮＡが種々の組織において発現されることを示す。ＭＴＳＰ２０転写物は、肝臓、リンパ節、頚部、膵臓、前立腺、子宮、精巣、腺(副腎、甲状腺および唾液腺)、胸腺、腎臓および脾臓において見出される。より低い転写物レベルは、肺、胎盤、胆嚢、卵巣、消化器システム、循環器システムおよび脳の他の部分で見出され得る。ＭＴＳＰ２０転写物はまた、肺がん腫(Ａ５１９)、結腸直腸がん腫(ＳＷ４８０)、リンパ腫(RajiおよびDaudi)、頚部がん腫(ＨｅＬａＳ３)および白血病(ＨＬ−６０、Ｋ５６２およびＭＯＬＴ−４)を含む特定の腫瘍細胞株で発現される。
【０５０７】
正常な、腫瘍の組織および細胞株におけるＭＴＳＰ２２の遺伝子発現プロフィール
ＭＴＳＰ２２は、子宮組織、胸腺、脂肪組織およびリンパ節に発現される。それはまた、肺、胃、子宮、乳房、卵巣、前立腺および他の腫瘍中に発現される。ＭＴＳＰ２２転写物の遺伝子発現プロフィールに関する情報を得るために、セリンプロテアーゼドメイン全体をコード化するｃＤＮＡフラグメントを用いて、７２の異なるヒト組織(ヒト多重組織発現(ＭＴＥ)アレー；Clontech, Palo Alto, CA；カタログ番号７７７６−１)から抽出されたＲＮＡから成る点ブロット、ならびに２４１の腫瘍および個別の患者からの対応する正常な組織(がんプロフィーリングアレー、Clontech, カタログ番号７８７４−１)からの規格化されたｃＤＮＡから成る点ブロット、を精査した。ＭＴＥ分析の結果は、ＭＴＳＰ２２転写物は、主として食道に発現されることを示した。腫瘍プロフィーリングアレー分析では、ＭＴＳＰ２２は、４２個の正常な子宮組織試料のうち３個において高度に発現されるが、それらのマッチド腫瘍試料では発現されない。
【０５０８】
４２個の子宮試料のうちの一つで、ＭＴＳＰ２２は、腫瘍およびその転移組織において発現されるが、正常な組織対応物では発現されない。ＭＴＳＰ２２はまた、１７個の胃腫瘍のうち２個および２１個の肺腫瘍のうちの２個に発現されるが、それらの正常な組織対応物では発現されない。ＭＴＳＰ２２はまた、膵臓のマッチドｃＤＮＡ対のみの正常な組織において発現される。ＰＣＲ分析をまた、幾つかのヒト成人組織(Clontech、カタログ＃Ｋ１４２０−１およびＫ１４２０−２)および原発腫瘍(Clontechカタログ＃Ｋ１５２２−１)からの市販で入手可能なｃＤＮＡパネルならびに幾つかのMarathon-Ready  ｃＤＮＡ(Clontech)を用いて実施した。
ＭＴＳＰ２２のｃＤＮＡは、胸腺、脂肪組織、およびリンパ節で検出された。ＭＴＳＰ２２のセリンプロテアーゼドメインおよび他のプロテアーゼに対する相同性
【０５０９】
翻訳されたＭＴＳＰ２２プロテアーゼドメイン配列の配列分析は、ＭＴＳＰ２２が、ドメインのアミノ末端でのプロテアーゼ活性化切断部位および三つの高度に保存された領域における触媒性三つ組残基(ヒスチジン、アスパルテ−トおよびセリン)の存在を特徴とするトリプシン−様セリンプロテアーゼドメインを含有することを明らかにした。エンドセリナーゼ１(セリンプロテアーゼＤＥＳＣ１タンパク質と同じ；GenBank受入れ番号ＡＦ０６４８１９)の配列とのタンパク質配列のアラインメントは、二つのタンパク質がそれらのプロテアーゼドメインにおいて５０％配列同一性を共有することを示した。
【０５１０】
正常な、腫瘍の組織および細胞株におけるＭＴＳＰ２５の遺伝子発現プロフィール
ＭＴＳＰ２５は、乳房、結腸、子宮、卵巣、腎臓、前立腺、精巣のがん組織に発現される。それはまた、肺、胃、前立腺および他の腫瘍中に発現され得る。ＭＴＳＰ２５転写物の遺伝子発現プロフィールに関する情報を得るために、ＭＴＳＰ２５プロテアーゼドメイン配列を含む３６９ｂｐのＤＮＡフラグメント(ＰＣＲ反応から得られた)を用いて、７２の異なるヒト組織(ヒト多重組織発現(ＭＴＥ)アレー；Clontech, Palo Alto, CA；カタログ番号７７７６−１)から抽出されたＲＮＡから成る点ブロット、ならびに２４１の腫瘍および個別の患者からの対応する正常な組織(がんプロフィーリングアレー、Clontech, カタログ番号７８７４−１)からの規格化されたｃＤＮＡから成る点ブロット、を精査した。ＭＴＥ分析の結果は、ＭＴＳＰ２５転写物は、食道リンパ節に弱く発現されることを示す。がんプロフィーリングアレー分析では、ＭＴＳＰ２５は、４個全ての前立腺試料(正常なおよびがん試料で)高度に発現される。２０個の腎臓ｃＤＮＡ対のうちの一つで、ＭＴＳＰ２５は腫瘍試料で高度に発現されるが、その正常な組織対応物では発現されない。ＭＴＳＰ２５はまた、５０個の乳がん試料のうちの１個で発現されるが、その正常な組織対応物では発現されない。
【０５１１】
ＭＴＳＰ２５はまた、４２個の正常な子宮試料のうちの３個で発現されるが、それらの腫瘍対応物では発現されない。ＭＴＳＰ２５はまた、１４個の卵巣がん試料のうち３個で検出される。これらの三つの試料の中では、ＭＴＳＰ２５の発現はまた、マッチド正常な組織対応物の一つで検出された。ＭＴＳＰ２５の発現はまた、３４個の結腸ｃＤＮＡ対中で５個の腫瘍試料で検出された。
【０５１２】
ＰＣＲ分析をまた、幾つかのヒト成人組織からの市販で入手可能なｃＤＮＡパネル(Clontechカタログ＃Ｋ１４２０−１およびＫ１４２０−２)ならびに幾つかのMarathon-Ready  ｃＤＮＡ(Clontech)を用いて実施した。ＭＴＳＰ２５のｃＤＮＡは、精巣および乳腺腺がんで強く検出され、脳、胎盤、肺、脾臓、前立腺、小腸、結腸および白血球で弱く検出され、そして心臓、肝臓および膵臓で極めて弱く検出された。
【実施例９】
【０５１３】
異なるＦｍｏｃ−アミノ酸構築ブロックを用いるような手順の日常的なおよび僅かの修飾による実施例１〜４の手順にしたがって作成されたところの結合体としては、以下のとおりである：
Ac-R-Q-G-R-S-L-(Dox) (配列番号: 491);
Ac-R-Q-G-R-S-S-L-(Dox) (配列番号: 492);
Ac-R-Q-G-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 493);
Ac-R-Q-G-R-S-nV-(Dox) (配列番号: 494);
Ac-R-Q-G-R-S-F-(Dox) (配列番号: 495);
Ac-R-Q-G-R-A-L-(Dox) (配列番号: 496);
Ac-R-Q-G-R-A-L-(Dox) (配列番号: 497);
Ac-R-Q-G-R-A-nL-(Dox) (配列番号: 498);
Ac-R-Q-G-R-A-nL-(Dox) (配列番号: 499);
Ac-R-Q-G-R-A-nV-(Dox) (配列番号: 500);
Ac-R-Q-G-R-A-Cha-(Dox) (配列番号: 501);
Ac-R-Q-G-R-A-F-(Dox) (配列番号: 502);
Ac-R-N-G-R-S-L-(Dox) (配列番号: 503);
Ac-R-N-G-R-A-nL-(Dox) (配列番号: 504);
Ac-R-Q-A-R-S-L-(Dox) (配列番号: 505);
【０５１４】
Ac-R-Q-A-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 506);
Ac-R-Q-A-R-S-nV-(Dox) (配列番号: 507);
Ac-R-Q-A-A-S-Cha-(Dox) (配列番号: 508);
Ac-R-Q-A-R-S-S-Cha-(Dox) (配列番号: 509);
Ac-R-Q-A-R-T-nL-(Dox) (配列番号: 510);
Ac-R-Q-A-R-A-L-(Dox) (配列番号: 511);
Ac-R-Q-A-R-A-nL-(Dox) (配列番号: 513);
Ac-R-Q-A-R-A-nV-(Dox) (配列番号: 514);
Ac-R-Q-A-R-A-Cha-(Dox) (配列番号: 515);
Ac-R-Q-S-R-A-A-(Dox) (配列番号: 516);
Ac-R-Q-S-R-A-(Dox) (配列番号: 517);
Ac-R-Q-S-R-A-nL-(Dox) (配列番号: 518);
Ac-R-Q-S-R-A-L-(Dox) (配列番号: 519);
Ac-R-Q-S-R-A-nV-(Dox) (配列番号: 520);
Ac-R-Q-S-R-A-Cha-(Dox) (配列番号: 521);
Ac-R-Q-S-R-S-S-L-(Dox) (配列番号: 522);
Ac-R-Q-S-R-S-L-(Dox) (配列番号: 523);
Ac-R-Q-S-R-S-dnL-(Dox) (配列番号: 524);
Ac-R-Q-S-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 525);
Ac-R-Q-S-R-S-nV-(Dox) (配列番号: 526);
Ac-R-Q-S-R-S-アリルG-(Dox) (配列番号: 527);
Ac-R-Q-S-R-S-Cha-(Dox) (配列番号: 528);
Ac-R-Q-S-R-T-nL-(Dox) (配列番号: 529);
Ac-R-Q-T-R-S-S-L-(Dox) (配列番号: 530);
Ac-R-Q-T-R-S-L-(Dox) (配列番号: 531);
【０５１５】
Ac-R-N-S-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 532);
Ac-R-Q-F-R-S-L-(Dox) (配列番号: 533);
Ac-R-Q-F-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 534);
Ac-R-Q-F-R-S-nV-(Dox) (配列番号: 535);
Ac-R-Q-F-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 536);
Ac-R-Q-F-R-S-Cha-(Dox) (配列番号: 537);
Ac-R-Q-F-R-A-L-(Dox) (配列番号: 538);
Ac-R-Q-F-R-A-nL-(Dox) (配列番号: 539);
Ac-R-Q-F-R-A-nV-(Dox) (配列番号: 540);
Ac-R-Q-F-R-A-Cha-(Dox) (配列番号: 541);
Ac-Q-S-R-S-S-nL-(Dox) (配列番号: 542);
MeOCO-Quat2-G-R-S-L-NH2 (配列番号: 483);
MeOCO-Quat3-G-R-S-L-NH2 (配列番号: 484);
MeOCO-Quat-G-R-S-L-NH2 (配列番号: 485);
MeOCO-Quat4-G-R-S-L-NH2 (配列番号: 486);
MeOCO-Quat5-G-R-S-L-NH2 (配列番号: 487);
MeOCO-Quat2-G-R-S-S-L-NH2 (配列番号: 488);
MeOCO-Quat4-G-R-S-L-(Dox) (配列番号: 489);
MeOCO-Quat2-G-R-S-L-(Dox) (配列番号: 490);
Ac-Q-G-R-S-L-(Dox) (配列番号: 445);
Ac-Q-G-R-S-S-L-(Dox) (配列番号: 446);
Ac-Q-G-R-A-S-L-(Dox) (配列番号: 447);
Ac-N-G-R-S-S-L-(Dox) (配列番号: 448);
Ac-Q-G-R-S-S-nL-(Dox) (配列番号: 449);
Ac-Q-G-R-S-S-nV-(Dox) (配列番号: 450);
【０５１６】
Ac-Q-G-R-S-S-Cha-(Dox) (配列番号: 451);
Ac-Q-G-R-S-S-アリルG-(Dox) (配列番号: 452);
Ac-Q-G-R-S-S-アリルG-(Dox) (配列番号: 453);
Ac-Q-A-R-S-L-(Dox) (配列番号: 454);
Ac-Q-A-R-S-S-L-(Dox) (配列番号: 455);
Ac-Q-S-R-S-L-(Dox) (配列番号: 456);
Ac-Q-S-R-S-S-nV-(Dox) (配列番号: 457);
Ac-Q-S-R-S-S-Cha-(Dox) (配列番号: 458);
Ac-Q-S-R-S-S-L-(Dox) (配列番号: 459);
Ac-Q-T-R-S-S-L-(Dox) (配列番号: 460);
Ac-Q-Aib-R-S-S-Cha-(Dox) (配列番号: 461);
Ac-Q-Aib -R-S-S-L-(Dox) (配列番号: 462);
Ac-Q-Abu-R-S-S-Cha-(Dox) (配列番号: 463);
Ac-Q-Abu-R-S-S-L-(Dox) (配列番号: 464);
Ac-Q-Cha-R-S-S-Cha-(Dox) (配列番号: 465);
Ac-Q-F-R-S-L-(Dox) (配列番号: 466);
Ac-Q-F-R-S-S-L-(Dox) (配列番号: 467);
Ac-Q-Y-R-S-S-L-(Dox) (配列番号: 468);
Ac-R-G-R-S-L-(Dox) (配列番号: 469);
【０５１７】
Ac-R-G-R-S-S-L-(Dox) (配列番号: 470);
Ac-R-G-R-S-S-Cha-(Dox) (配列番号: 471);
Ac-R-G-R-S-Cha-(Dox) (配列番号: 472);
Ac-R-A-R-S-L-(Dox) (配列番号: 473);
Ac-R-A-R-S-S-L-(Dox) (配列番号: 474);
Ac-R-S-R-S-L-(Dox) (配列番号: 475);
Ac-R-S-R-S-S-L-(Dox) (配列番号: 476);
Ac-R-S-R-S-Cha-(Dox) (配列番号: 477);
Ac-R-S-R-S-S-Cha-(Dox) (配列番号: 478);
Ac-R-F-R-S-L-(Dox) (配列番号: 479);
Ac-R-F-R-S-Cha-(Dox) (配列番号: 480);
Ac-Y-G-R-S-S-L-(Dox) (配列番号: 481);
Ac-M(O2)-S-R-S-L-(Dox) (配列番号: 482);
Ac-R-R-Q-S-R-A-A-(Dox) (配列番号: 105);
Ac-R-R-Q-S-R-I-(Dox) (配列番号: 610);
Ac-R-R-Q-S-R-S-S-L-(Dox) (配列番号: 543);
Ac-R-R-Q-S-R-S-L-(Dox) (配列番号: 544);
Ac-R-G-S-G-R-S-L-(Dox) (配列番号: 545);
Ac-R-G-S-G-R--S-nL-(Dox) (配列番号: 546);
【０５１８】
Ac-R-G-S-G-R-A-nL-(Dox) (配列番号: 547);
Ac-R-G-S-G-R-S-S-L-(Dox) (配列番号: 548);
Ac-I-V-S-G-R-A-S-L-(Dox) (配列番号: 549);
Ac-R-R-Q-S-R-A-(Dox) (配列番号: 108);
Ac-R-R-Q-S-R-I-(Dox) (配列番号: 111);
Ac-L-R-R-Q-S-R-A-A-(Dox) (配列番号: 106);
Ac-L-R-R-Q-S-R-G-G-(Dox) (配列番号: 109);
Ac-L-R-R-Q-S-R-A-(Dox) (配列番号: 110);
Ac-L-R-R-Q-S-R-A-I-(Dox) (配列番号: 112);
Ac-L-R-R-Q-S-R-A-I-(Dox) (配列番号: 611);
Ac-L-R-R-Q-S-R-S-S-L-(Dox) (配列番号: 550);
Ac-L-R-R-Q-S-R-S-L-(Dox) (配列番号: 551);
Ac-S-G-R-S-L-(Dox) (配列番号: 362);
Ac-S-G-R-S-S-L-(Dox) (配列番号: 363);
Ac-S-G-R-S-S-S-L-(Dox) (配列番号: 364);
Ac-S-G-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 365);
Ac-S-G-R-S-nV-(Dox) (配列番号: 366); 異性体 1
Ac-S-G-R-S-nV-(Dox) (配列番号: 367); 異性体 2
Ac-S-G-R-S-G(hex)-(Dox) (配列番号: 368);
Ac-S-G-R-S-Cha-(Dox) (配列番号: 369);
Ac-S-G-R-S-hCha-(Dox) (配列番号: 370);
Ac-S-A-R-S-L-(Dox) (配列番号: 371);
Ac-S-A-R-S-S-L-(Dox) (配列番号: 372);
Ac-S-S-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 373);
Ac-T-G-R-S-Abu-(Dox) (配列番号: 374);
Ac-T-G-R-S-L-(Dox) (配列番号: 375);
【０５１９】
Ac-T-G-R-S-nV-(Dox) (配列番号: 376);
Ac-T-G-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 377);
Ac-T-G-R-S-G(hex)-(Dox) (配列番号: 378);
Ac-T-G-R-S-Cha-(Dox) (配列番号: 379);
Ac-T-G-R-S-hCha-(Dox) (配列番号: 380);
Ac-T-G-R-T-Abu-(Dox) (配列番号: 381);
Ac-T-G-R-hS-nL-(Dox) (配列番号: 382);
Ac-T-G-R-Abu-nL-(Dox) (配列番号: 383);
Ac-T-G-R-Abu-nV-(Dox) (配列番号: 384);
Ac-T-G-F(Gn)-S-nL-(Dox) (配列番号: 385);
Ac-T-G-F(Gn)-S-Cha-(Dox) (配列番号: 386);
Ac-T-G-F(Gn)-Abu-nV-(Dox) (配列番号: 387);
Ac-T-G-K(alloc)-S-nL-(Dox) (配列番号: 388);
Ac-T-G-K-S-nL-(Dox) (配列番号: 389);
Ac-T-G-hR-S-nL-(Dox) (配列番号: 390);
Ac-(hS)G-G-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 391);
MeOCO-T-G-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 392);
PhSO2-T-G-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 393);
MeOEtCO-T-G-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 394);
MeO(EtO)2Ac-T-G-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 395);
4-オキソ-ペンタノイル-T-G-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 396);
3,4-メチルジオキシPhAc-T-G-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 397);
2-ピリジルAc-T-G-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 398);
PhOAc-T-G-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 399);
L-3-Phラクチル-T-G-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 400);
MeOAc-T-G-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 401);
PhAc-T-G-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 402);
【０５２０】
MeOEtOCO-T-G-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 403);
MeOEtOAc-T-G-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 404);
HOOCButa-T-G-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 405);
Z-T-G-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 406);
EtOCO-T-G-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 407);
βΑ-Τ-G-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 408);
Pent-4-ynoyl-T-G-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 409);
NapAc-T-G-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 410);
iBoc-T-G-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 411);
HOAc-T-G-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 412);
MeSucc-T-G-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 413);
N,N-ジMeGly-T-G-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 414);
Succ-T-G-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 415);
HCO-T-G-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 416);
Ac-T-A-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 417);
Ac-T-A-F(Gn)-S-nL-(Dox) (配列番号: 418);
Ac-T-A-R-Abu-nV-(Dox) (配列番号: 419);
Ac-T-A-R-S-Abu-(Dox) (配列番号: 420);
Ac-T-A-R-T-Abu-(Dox) (配列番号: 421);
Ac-T-S(O-Me)-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 422);
Ac-T-hS-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 423);
Ac-T-(1-Me)H-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 424);
Ac-T-(3-Me)H-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 425);
Ac-T-H-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 426);
Ac-T-Sar-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 427);
Ac-T-nV-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 428);
Ac-T-nL-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 429);
Ac-T-A-R-S-Cha-(Dox) (配列番号: 430);
Ac-T-Abu-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 431);
Ac-4,4ジMeThr-G-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 432);
Ac-hS-G-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 433);
Ac-hS-G-R-hS-Cha-(Dox) (配列番号: 434);
【０５２１】
Ac-hS-G-R-S-Cha-(Dox) (配列番号: 435);
Ac-hS-G-R-T-Cha-(Dox) (配列番号: 436);
Ac-hS-A-R-S-Cha-(Dox) (配列番号: 437);
Ac-N-G-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 438);
Ac-Y-G-R-S-S-L-(Dox) (配列番号: 439);
Ac-Y-G-R-S-Cha-(Dox) (配列番号: 440);
Ac-Q-G-R-S-S-nL-(Dox) (配列番号: 441);
Ac-Q-G-R-S-S-nV-(Dox) (配列番号: 442);
Ac-L-R-G-S-G-R-S-A-(Dox) (配列番号: 573);
Ac-L-R-G-S-G-R-S-L-(Dox) (配列番号: 342);
Ac-L-R-G-S-G-R-S-L-(Dox) (配列番号: 343);
Ac-L-R-G-S-G-R-S-S-nL-(Dox) (配列番号: 344);
Ac-L-R-G-S-G-R-S-S-Cha-(Dox) (配列番号: 345);
Ac-L-R-G-dS-A-R-S-A-(Dox) (配列番号: 574);
Ac-L-R-G-S-A-R-S-S-L-(Dox) (配列番号: 346);
Ac-L-R-G-S-A-R-S-L-(Dox) (配列番号: 347);
Ac-L-R-G-S-A-R-S-S-Cha-(Dox) (配列番号: 348);
Ac-L-R-G-S-A-R-S-S-nV-(Dox) (配列番号: 349);
Ac-L-R-G-S-A-R-S-S-nL-(Dox) (配列番号: 350);
Ac-V-I-V-S-G-R-A-L-(Dox) (配列番号: 351);
Ac-V-I-V-S-A-R-S-L-(Dox) (配列番号: 352);
Ac-V-I-V-S-G-R-S-S-L-(Dox) (配列番号: 353);
Ac-V-I-V-S-A-R-M-A-(Dox) (配列番号: 354);
Ac-V-I-V-S-A-R-nL-A-(Dox) (配列番号: 355);
Ac-V-I-V-S-A-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 356);
Ac-V-I-V-S-A-R-S-Cha-(Dox) (配列番号: 357);
【０５２２】
Ac-V-I-V-S-A-R-S-Cha-(Dox) (配列番号: 358);
Ac-V-I-V-S-A-R-S-S-Cha-(Dox) (配列番号: 359);
Ac-R-R-(Me)C-P-G-R-V-V-(Dox) (配列番号: 360);
Ac-R-R-nV-P-A-R-S-L-(Dox) (配列番号: 361);
Ac-R-G-dS-A-R-S-A-(Dox) (配列番号: 309);
Ac-R-G-S-G-R-S-A-(Dox) (配列番号: 310);
Ac-R-G-S-G-R-A-L-(Dox) (配列番号: 311);
Ac-R-G-S-G-R-S-L-(Dox) (配列番号: 312);
Ac-R-G-S-G-R--S-nL-(Dox) (配列番号: 313);
Ac-R-G-S-G-R-A-nL-(Dox) (配列番号: 314);
Ac-R-G-S-G-R-S-S-L-(Dox) (配列番号: 315);
Ac-R-G-S-G-R-S-Cha-(Dox) (配列番号: 316);
Ac-R-G-S-G-R-S-S-Cha-(Dox) (配列番号: 317);
Ac-R-G-S-A-R-S-Cha-(Dox) (配列番号: 318);
Ac-R-G-S-A-R-S-S-(Dox) (配列番号: 319);
Ac-R-G-S-A-R-S-nV-(Dox) (配列番号: 320);
Ac-R-G-S-A-R-S-S-nV -(Dox) (配列番号: 321);
Ac-R-G-S-A-R-S-L-(Dox) (配列番号: 322);
Ac-R-(Me)C-P-G-R-V-V-(Dox) (配列番号: 323);
Ac-R-(Me)C-P-G-R-V-V-(Dox) (配列番号: 324);
Ac-R-C(Me)-P-G-R-S-L-(Dox) (配列番号: 325);
Ac-R-L-P-G-R-S-L-(Dox) (配列番号: 326);
Ac-R-V-P-G-R-S-L-(Dox) (配列番号: 327);
Ac-R-V-P-G-R-S-L-(Dox) (配列番号: 328);
Ac-R-nL-P-G-R-S-L-(Dox) (配列番号: 329);
Ac-R-G(tBu)-P-A-R-S-L-(Dox) (配列番号: 330);
Ac-R-L-P-A-R-S-L-(Dox) (配列番号: 331);
Ac-R-V-P-A-R-S-L-(Dox) (配列番号: 332);
Ac-R-nL-P-A-R-S-L-(Dox) (配列番号: 333);
Ac-I-V-S-G-R-A-L-(Dox) (配列番号: 334);
Ac-I-V-S-G-R-S-S-L-(Dox) (配列番号: 335);
Ac-I-V-S-G-R-A-S-L-(Dox) (配列番号: 336);
【０５２３】
Ac-I-V-S-A-R-M-A-(Dox) (配列番号: 337);
Ac-I-V-S-A-R-nL-A-(Dox) (配列番号: 338);
Ac-I-V-S-A-R-S-L-(Dox) (配列番号: 339);
Ac-I-V-S-A-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 340);
Ac-I-V-S-A-R-S-S-L-(Dox) (配列番号: 341);
Ac-G-S-G-R-S-A-(Dox) (配列番号: 585);
Ac-G-S-G-R-S-L-(Dox) (配列番号: 277);
Ac-G-S-G-R-A-L-(Dox) (配列番号: 278);
Ac-G-S-G-R-S-S-L-(Dox) (配列番号: 279);
Ac-G-S-G-R-L-(Dox) (配列番号: 280);
Ac-G-S-G-(4-guan)Phg-S-L-NH2 (配列番号: 281);
Ac-G-S-G-R-S-S-Cha-(Dox) (配列番号: 282);
Ac-G-S-G-R-A-S-L-(Dox) (配列番号: 283);
Ac-G-S-G-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 284);
Ac-G-T-G-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 285);
Succ-bA-T-G-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 286);
Ac-G-T-G-R-S-hCha-(Dox) (配列番号: 287);
Ac-G-hS-G-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 288);
Ac-G-dS-A-R-S-A-(Dox) (配列番号: 289);
Ac-G-S-A-R-S-L-(Dox) (配列番号: 290);
Ac-G-S-A-R-S-S-Cha-(Dox) (配列番号: 291);
Ac-G-S-A-R-S-S-L-(Dox) (配列番号: 292);
Ac-G-S-A-R-A-S-L-(Dox) (配列番号: 293);
Ac-V-S-G-R-S-L-(Dox) (配列番号: 294);
Ac-V-S-G-R-A-L-(Dox) (配列番号: 295);
Ac-V-S-G-R-A-S-L-(Dox) (配列番号: 296);
Ac-V-S-G-R-S-S-L-(Dox) (配列番号: 297);
Ac-V-S-A-R-M-A-(Dox) (配列番号: 298);
Ac-V-S-A-R-nL-A-(Dox) (配列番号: 299);
Ac-V-S-A-R-S-nL-(Dox) (配列番号: 300);
Ac-V-S-A-R-S-L-(Dox) (配列番号: 301);
Ac-(Me)C-P-G-R-V-V-(Dox) (配列番号: 302);
Ac-(Me)C-P-G-R-V-V-(Dox) (配列番号: 303);
Ac-C(Me)-P-G-R-A-L-(Dox) (配列番号: 304);
Ac-C(Me)-P-G-R-S-L-(Dox) (配列番号: 305);
Ac-C(Me)-P-A-R-S-L-(Dox) (配列番号: 306);
Ac-C(Me)-P-A-R-A-S-L-(Dox) (配列番号: 307);
Ac-G(tBu)-P-G-R-S-L-(Dox) (配列番号: 308);
【０５２４】
Ac-Q-S-R-A-A-(taxol) (配列番号: 552);
Ac-Q-S-R-S-A-(taxol) (配列番号: 553);
Ac-Q-S-R-S-G-(taxol) (配列番号: 554);
Ac-R-S-R-A-A-(taxol) (配列番号: 555);
Ac-R-Q-S-R-A-A-(taxol) (配列番号: 556);
Ac-R-Q-S-R-S-A-(taxol) (配列番号: 557);
Ac-R-Q-S-R-S-A-A-(taxol) (配列番号: 558);
Ac-R-G-S-G-R-S-A-(taxol) (配列番号: 559);
Ac-S-G-R-A-A-(taxol) (配列番号: 560);
Ac-S-G-R-S-A-(taxol) (配列番号: 561);
Ac-S-G-R-S-S-A-(taxol) (配列番号: 562);
Ac-S-G-R-A-S-A-(taxol) (配列番号: 563);
Ac-S-G-R-S-G-(taxol) (配列番号: 564);
Ac-S-G-R-S-S-G-(taxol) (配列番号: 565);
Ac-S-G-R-S-G-A-(taxol) (配列番号: 566);
Ac-S-G-R-S-G-G-(taxol) (配列番号:567);
Ac-G-T-G-R-S-G-G-(taxol) (配列番号: 568);
Ac-L-R-R-Q-S-R-A-A-(Dox) (配列番号: 597);
MeSO2-dA(Chx)-Abu-R-S-L-(Dox) (配列番号: 598);
Ac-R-A-R-S-L-(Dox) (配列番号: 599);
Ac-dA(Chx)-Abu-R-S-L-(Dox) (配列番号: 600);
Ac-dA(Chx)-Abu-R-S-S-L-(Dox) (配列番号: 601);
Ac-Q-G-R-S-S-L-(Dox) (配列番号: 602);
MeOCO-dhF-P(OH)-R-S-S-L-(Dox) (配列番号: 603);
MeOCO-Quat4-G-R-S-L-(Dox) (配列番号: 604);
As-dCha-P(OH)-R-S-S-L-(Dox) (配列番号: 605);
Ac-dCha-Abu-R-S-S-A-(taxol) (配列番号: 606);
MeOCO-Quat2-G-R-S-L-NH2 (配列番号: 607);
MeOCO-Quat3-G-R-S-L-NH2 (配列番号: 608); および
MeOCO-Quat-G-R-S-L-NH2 (配列番号: 609)
が挙げられる。
【実施例１０】
【０５２５】
結合体ならびにドキソルビシンおよびロイシン−ドキソルビシンへ代謝される用量のフラクションの未処置のおよび腫瘍を保有するマウスにおける薬物動態試験
試験結合体の薬物動態試験のために、未処置のもしくは腫瘍を保有する８〜１２週齢ヌードマウスを用いた。移植用の腫瘍細胞を以下の三つのプロトコルのうちの一つで作成した。
【０５２６】
プロトコルＡ  組織培養から収集される腫瘍細胞
腫瘍細胞をトリプシン消化し、増殖培地中に再懸濁し、６分間２００×ｇで遠心分離する。細胞を無血清培地中に再懸濁し、計数する。所望数の細胞を含有する適切な容量の溶液を、次いでコニカル遠心分離管に移し、先のように遠心分離し、無フェノール培地中の細胞：マトリゲルの１：１冷混合物の適切な容量中に再懸濁する。それぞれのマウスに、１×１０６〜１×１０７個の腫瘍細胞を含有する０.２〜０.５ｍＬを、皮下的もしくは同所的に接種する。
【０５２７】
プロトコルＢ  腫瘍細胞懸濁液
確立された腫瘍(２００〜１０００ｍｍ３)を、マウスから切除し、秤量して、腫瘍細胞増殖培地中ですすぎ洗う。腫瘍を、スチール製細胞解離篩いを通過させる。細胞を増殖培地で篩いを通してすすぎ洗う。細胞を、６分間２００×ｇで遠心分離し、細胞：マトリゲルの１：１冷混合物の適切な容量中に再懸濁する。それぞれのマウスに、０.２〜０.５ｍＬの腫瘍細胞を、皮下的もしくは同所的に接種する。
【０５２８】
プロトコルＣ  腫瘍フラグメント
これに代えて、およそ８００ｍｍ３分量の腫瘍をマウスから切除し、腫瘍細胞増殖培地中ですすぎ洗って、１〜２ｍｍ３のフラグメントに切断する。それぞれのフラグメントを、套管針を用いて皮下的もしくは同所的に接種する。
【０５２９】
薬物動態試験
未処置のもしくは腫瘍を保有するマウスを、個別に秤量し、グループ分けする。マウスに、試験結合体の３０μモル／ｋｇ、２５μモル／ｋｇもしくは２１.５μモル／ｋｇを含む、１〜１００μモル／ｋｇを、腹腔内もしくは静脈内に投与する。化合物の投与後５分〜２４時間の与えられた時点で、マウスを屠殺する。血液を、ＥＤＴＡ、ＡＥＢＳＦ、アプロチニン、ロイペプチン、ベスタチン、ペプスタニンＡもしくはＥ６４のようなプロテアーゼ阻害剤を含有する注射器に収集し、ヘパリン化された血液収集管に移す。血漿を遠心分離により作成する。腫瘍を収集し、液体窒素中で粉砕する。得られた腫瘍粉末を−８０℃で保存する。腫瘍粉末および血漿を抽出し、親試験結合体ならびにそのロイシン−ドキソルビシン(もしくはノルロイシン−ドキソルビシン等)およびドキソルビシンを含むその生成物を分析する。
【０５３０】
毒素の腫瘍細胞への送達をみること、ならびに血漿中で親結合体および毒素(ｄｏｘおよびｎｏｒ−Ｌｅｕ ｄｏｘ)のレベルをまたみること
【０５３１】
結果
例えば、試験結合体(Ａｃ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−ｎＬｅｕ−Ｄｏｘの２１.５μモル／ｋｇ(実施例２を参照))を、腹腔内的(ＩＰ)にもしくは静脈内的(ＩＶ)に未処置のおよび腫瘍を保有する(ＴＢ)マウスに投与した。投与後１時間に、血漿および腫瘍組織をマウスから収集した。試験結合体およびその生成物の濃度を比較した。結果は、結合体が腫瘍中に入らないことを示し、毒素(単回(ＩＰおよびＩＶともに)注射後１時間での腫瘍中のｎｏｒｌｅｕ ｄｏｘおよびｄｏｘ−μＭ濃度。腫瘍におけるよりも血漿において、より低レベルのｄｏｘおよびｎｏｒ−ｌｅｕ  ｄｏｘがあった。
【０５３２】
抽出、クロマトグラフィーＬＣ／ＭＳ条件
血漿：血漿試料を、アセトニトリルタンパク質沈殿を用いて作成する。標準化合物の５〜２０μＬ容量の氷上で血漿０.１ｍＬもしくは０.０５ｍＬ容量への添加から、標準曲線を構築した。標準曲線は、標準化合物の１０ｎｇ／ｍＬ〜１μｇ／ｍＬもしくは１００ｎｇ〜４μｇ／ｍＬの範囲である。標準添加後直ぐにに、アセトニトリルを加えて、タンパク質を沈殿させる。凍結血漿試料を氷上で解凍して、試験血漿試料を作成した。アリコートをアセトニトリルに直接加えた。試料作成後、ボルテックス混合を用いて試料を混合する。沈殿を、遠心分離を用いてペレット化した。
【０５３３】
上澄みを、真空遠心分離を用いて乾燥した。試料を、３０％アセトニトリル−７０％(０.１％ギ酸と共に０.０１Ｍ酢酸アンモニウム)で再構成した。ＬＣ−ＭＳ分析には、試料０.０１ｍＬを注入した。ＨＰＬＣ条件は、３０×２.１ｍｍ  ZorbaxＳＢ  Ｃ１８  ＨＰＬＣカラムで、０.３ｍＬ／分にて１分での２０％アセトニトリル〜８０％(１０ｍＭ酢酸アンモニウム−０.１％ギ酸)から５０％アセトニトリル〜５０％(１０ｍＭ酢酸アンモニウム−０.１％ギ酸)までの線形グラジェントであった。検出は、電気スプレーイオン化付き三重４倍質量分析計によりなされた。ドキソルビシンを、ｍ／ｚ遷移５４４.１〜３９６.８を用いてモニターした。ロイシン−ドキソルビシンを、６５７.２〜２４２.８を用いてモニターした。例示的な親結合体を、１５５５.９〜１５５５.９を用いてモニターした。走査ＬＣ−ＭＳおよび蛍光検出を用いて血漿中のドキソルビシンもしくはロイシン−ドキソルビシン(またはノルロイシン−ドキソルビシン等)以外の切断生成物を同定した。
【０５３４】
腫瘍：マウスから切除後直ぐに、分析用の腫瘍を秤量し、液体窒素を含有する乳鉢に入れる。乳鉢をドライアイス床の上に置き、解凍を避けるために追加の液体窒素を必要に応じて加えながら、腫瘍を微細な粉末に砕く。均一な腫瘍粉末が達成されると、残った液体窒素を留去させる。予め冷却され、ドライアイス上に置かれている１５ｍｌコニカル管に、腫瘍粉末を定量的に移す。試料を分析まで−７０℃で保存する。腫瘍粉末を氷上で解凍し、１グラム腫瘍／ｍＬ酢酸アンモニウム溶液濃度で０.０１Ｍ酢酸アンモニウムとボルテックス混合して、スラリーを形成する。腫瘍スラリーの０.１ｍＬアリコートをアセトニトリル０.５ｍＬにより沈殿させる。上澄みを沈殿した固体から分離し、次いで、真空遠心分離を用いて蒸発させる。ドキソルビシン、ロイシン−ドキソルビシン(もしくはノルロイシン−ドキソルビシン等)の定量化を、測定された量の標準化合物(ドキソルビシン、ロイシン−ドキソルビシン等)を対照腫瘍スラリーに加えることから構築された標準曲線を参照することによって、達成する。
【０５３５】
典型的な標準曲線は、腫瘍スラリーのアリコート当たり化合物１ｎｇ〜２００ｎｇの範囲にわたる。未知試料および標準を加工して、乾燥した後、残渣を３０％アセトニトリル−７０％(０.０１Ｍ酢酸アンモニウム＋０.１％ギ酸)０.１５ｍＬ中に再構成する。溶液１０μＬを液体クロマトグラフィー−質量分析システムに注入する。ＨＰＬＣ条件は、３０×２.１ｍｍ  ZorbaxＳＢ  Ｃ１８  ＨＰＬＣカラムで、０.３ｍＬ／分にて１分での２０％アセトニトリル−８０％(１０ｍＭ酢酸アンモニウム−.１％ギ酸)から５０％アセトニトリル−５０％(１０ｍＭ酢酸アンモニウム−.１％ギ酸)までの線形グラジェントであった。検出は、電気スプレーイオン化付き三重４倍質量分析計によりなされた。ドキソルビシンを、ｍ／ｚ遷移５４４.１〜３９６.８を用いてモニターした。ロイシン−ドキソルビシンを、６５７.２〜２４２.８を用いてモニターした。
【０５３６】
変形例は当業者にとって明白であるので、本発明は添付される請求項の範囲によってのみ限定されることが、意図される。
【配列表】
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【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図１Ｅ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図２Ｅ】
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【図２Ｆ】
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【図２Ｇ】
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【図２Ｈ】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【手続補正書】
【提出日】平成16年1月20日(2004.1.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
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