(57)【要約】脳虚血性損傷の予防または阻止のための方法および組成物が、提供される。この方法は、グリコーゲンシンターゼキナーゼ３（ＧＳＫ３）活性のインヒビターを単独で投与することによるか、またはグリコーゲンシンターゼキナーゼ３（ＧＳＫ３）活性のインヒビターを、虚血性発作の処置のための少なくとも１種のさらなる薬剤と組み合わせて投与することによる。本出願はまた、ヒト被験体または動物被験体の処置のための方法を提供し、この方法は、虚血性発作事象の発症の２４時間以内に、その被験体に、その被験体における虚血性損傷を減少または予防するために有効な量のグリコーゲンシンターゼキナーゼ３（ＧＳＫ３）インヒビターを投与する工程、を包含する。
2005525362.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト被験体または動物被験体の処置のための方法であって、
虚血性発作事象の発症の２４時間以内に、該被験体に、該被験体における虚血性損傷を減少または予防するために有効な量のグリコーゲンシンターゼキナーゼ３（ＧＳＫ３）インヒビターを投与する工程、
を包含する、方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法であって、前記ＧＳＫ３インヒビターが、前記虚血性発作事象の発症の８時間以内に前記被験体に投与される、方法。
【請求項３】
請求項１に記載の方法であって、前記ＧＳＫ３インヒビターが、前記虚血性発作事象の発症の２時間以内に前記被験体に投与される、方法。
【請求項４】
請求項１に記載の方法であって、前記ＧＳＫ３インヒビターが、少なくとも２４時間、前記被験体に断続的にかまたは連続的に投与される、方法。
【請求項５】
請求項１に記載の方法であって、前記ＧＳＫ３インヒビターが、約８００未満の分子量を有する、方法。
【請求項６】
請求項１に記載の方法であって、前記ＧＳＫ３インヒビターが、約５００未満の分子量を有する、方法。
【請求項７】
請求項１に記載の方法であって、前記ＧＳＫ３インヒビターが、約４００未満の分子量を有する、方法。
【請求項８】
請求項１に記載の方法であって、前記ＧＳＫ３インヒビターが、約０〜８の範囲内のｌｏｇＰを有する、方法。
【請求項９】
請求項１に記載の方法であって、前記ＧＳＫ３インヒビターが、約１〜６の範囲内のｌｏｇＰを有する、方法。
【請求項１０】
請求項１に記載の方法であって、前記ＧＳＫ３インヒビターが、約２〜５の範囲内のｌｏｇＰを有する、方法。
【請求項１１】
請求項１に記載の方法であって、前記ＧＳＫ３インヒビターが、虚血性発作の処置のための少なくとも１種のさらなる薬剤と組み合わせて、前記被験体に投与される、方法。
【請求項１２】
請求項１１に記載の方法であって、前記虚血性発作の処置のためのさらなる薬剤が、血栓溶解剤、フィブリン溶解剤、神経保護剤、抗凝固剤、および抗血小板物質からなる群より選択される、方法。
【請求項１３】
請求項１１に記載の方法であって、前記虚血性発作の処置のためのさらなる薬剤が、アルテプラーゼ、アニストレプラーゼ、レテプラーゼ、ウロキナーゼ、およびストレプトキナーゼからなる群より選択される、血栓溶解剤である、方法。
【請求項１４】
請求項１１に記載の方法であって、前記虚血性発作の処置のためのさらなる薬剤が、カスパーゼインヒビター、グルタメートアンタゴニスト、カルシウムアンタゴニスト、アヘン剤アンタゴニスト、ＧＡＢＡ−Ａアゴニスト、カルパインインヒビター、ＮＭＤＡレセプターアンタゴニスト、Ｋ＋チャネルモジュレーター、ＰＤＨキナーゼインヒビター、および抗酸化剤からなる群より選択される、神経保護剤である、方法。
【請求項１５】
請求項１１に記載の方法であって、前記虚血性発作の処置のためのさらなる薬剤が、ヘパリン、ワルファリン、ダルテパリン、ダナパロイド、エノキサパリン、チンザパリン、４−ヒドロキシクマリン、ジクマロール、フェンプロクモン、アセノクマロール、アニシンドン、レピルジン、およびインダン−１，３−ジオンからなる群より選択される、抗凝固剤である、方法。
【請求項１６】
請求項１１に記載の方法であって、前記虚血性発作の処置のためのさらなる薬剤が、アスピリン、クロピドグレル、チクロピジン、アブシキシマブ、エプチフィバチド、チロフィバン、およびジピリダモールからなる群より選択される、抗血小板物質である、方法。
【請求項１７】
脳血管虚血性障害の処置を必要とするヒト被験体または動物被験体において、脳血管虚血性障害を処置するための方法であって、
該被験体における虚血性損傷を減少または予防するために有効な量のグリコーゲンシンターゼキナーゼ３（ＧＳＫ３）インヒビターを、虚血性発作の処置のための少なくとも１種のさらなる薬剤と組み合わせて該被験体に投与する工程、
を包含する、方法。
【請求項１８】
請求項１７に記載の方法であって、前記グリコーゲンシンターゼキナーゼ３（ＧＳＫ３）インヒビターが、前記少なくとも１種のさらなる薬剤の投与前に、前記被験体に投与される、方法。
【請求項１９】
請求項１７に記載の方法であって、前記グリコーゲンシンターゼキナーゼ３（ＧＳＫ３）インヒビターが、前記少なくとも１種のさらなる薬剤の投与と同時に、前記被験体に投与される、方法。
【請求項２０】
請求項１７に記載の方法であって、前記グリコーゲンシンターゼキナーゼ３（ＧＳＫ３）インヒビターが、前記少なくとも１種のさらなる薬剤の投与前および該投与と同時に、前記被験体に投与される、方法。
【請求項２１】
請求項１７に記載の方法であって、前記ＧＳＫ３インヒビターが、前記被験体における虚血性発作事象の発症の２４時間以内に該被験体に投与される、方法。
【請求項２２】
請求項１７に記載の方法であって、前記ＧＳＫ３インヒビターが、前記被験体における虚血性発作事象の発症の８時間以内に該被験体に投与される、方法。
【請求項２３】
請求項１７に記載の方法であって、前記ＧＳＫ３インヒビターが、前記被験体における虚血性発作事象の発症の２時間以内に該被験体に投与される、方法。
【請求項２４】
請求項１７に記載の方法であって、前記ＧＳＫ３インヒビターが、少なくとも２４時間、前記被験体に断続的にかまたは連続的に投与される、方法。
【請求項２５】
請求項１７に記載の方法であって、前記ＧＳＫ３インヒビターが、約８００未満の分子量を有する、方法。
【請求項２６】
請求項１７に記載の方法であって、前記ＧＳＫ３インヒビターが、約５００未満の分子量を有する、方法。
【請求項２７】
請求項１７に記載の方法であって、前記ＧＳＫ３インヒビターが、約４００未満の分子量を有する、方法。
【請求項２８】
請求項１７に記載の方法であって、前記ＧＳＫ３インヒビターが、約０〜８の範囲内のｌｏｇＰを有する、方法。
【請求項２９】
請求項１７に記載の方法であって、前記ＧＳＫ３インヒビターが、約１〜６の範囲内のｌｏｇＰを有する、方法。
【請求項３０】
請求項１７に記載の方法であって、前記ＧＳＫ３インヒビターが、約２〜５の範囲内のｌｏｇＰを有する、方法。
【請求項３１】
請求項１７に記載の方法であって、前記虚血性発作の処置のためのさらなる薬剤が、血栓溶解剤、フィブリン溶解剤、神経保護剤、抗凝固剤、および抗血小板物質からなる群より選択される、方法。
【請求項３２】
請求項３１に記載の方法であって、前記虚血性発作の処置のためのさらなる薬剤が、アルテプラーゼ、アニストレプラーゼ、レテプラーゼ、ウロキナーゼ、およびストレプトキナーゼからなる群より選択される、血栓溶解剤である、方法。
【請求項３３】
請求項３１に記載の方法であって、前記虚血性発作の処置のためのさらなる薬剤が、カスパーゼインヒビター、グルタメートアンタゴニスト、カルシウムアンタゴニスト、アヘン剤アンタゴニスト、ＧＡＢＡ−Ａアゴニスト、カルパインインヒビター、ＮＭＤＡレセプターアンタゴニスト、Ｋ＋チャネルモジュレーター、ＰＤＨキナーゼインヒビター、および抗酸化剤からなる群より選択される、神経保護剤である、方法。
【請求項３４】
請求項３１に記載の方法であって、前記虚血性発作の処置のためのさらなる薬剤が、ヘパリン、ワルファリン、ダルテパリン、ダナパロイド、エノキサパリン、チンザパリン、４−ヒドロキシクマリン、ジクマロール、フェンプロクモン、アセノクマロール、アニシンドン、レピルジン、およびインダン−１，３−ジオンからなる群より選択される、抗凝固剤である、方法。
【請求項３５】
請求項３１に記載の方法であって、前記虚血性発作の処置のためのさらなる薬剤が、アスピリン、クロピドグレル、チクロピジン、アブシキシマブ、エプチフィバチド、チロフィバン、およびジピリダモールからなる群より選択される、抗血小板物質である、方法。
【請求項３６】
ＧＳＫ３インヒビターと、虚血性発作の処置のための少なくとも１種のさらなる薬剤とを含む、組成物。
【請求項３７】
請求項３６に記載の組成物であって、前記ＧＳＫ３インヒビターが、約８００未満の分子量を有する、組成物。
【請求項３８】
請求項３６に記載の組成物であって、前記ＧＳＫ３インヒビターが、約５００未満の分子量を有する、組成物。
【請求項３９】
請求項３６に記載の組成物であって、前記ＧＳＫ３インヒビターが、約４００未満の分子量を有する、組成物。
【請求項４０】
請求項３６に記載の組成物であって、前記ＧＳＫ３インヒビターが、約０〜８の範囲内のｌｏｇＰを有する、方法。
【請求項４１】
請求項３６に記載の組成物であって、前記ＧＳＫ３インヒビターが、約１〜６の範囲内のｌｏｇＰを有する、組成物。
【請求項４２】
請求項３６に記載の組成物であって、前記ＧＳＫ３インヒビターが、約２〜５の範囲内のｌｏｇＰを有する、組成物。
【請求項４３】
請求項３６に記載の組成物であって、前記虚血性発作の処置のためのさらなる薬剤が、血栓溶解剤、フィブリン溶解剤、神経保護剤、抗凝固剤、および抗血小板物質からなる群より選択される、組成物。
【請求項４４】
請求項３６に記載の組成物であって、前記虚血性発作の処置のためのさらなる薬剤が、アルテプラーゼ、アニストレプラーゼ、レテプラーゼ、ウロキナーゼ、およびストレプトキナーゼからなる群より選択される、血栓溶解剤である、組成物。
【請求項４５】
請求項４４に記載の組成物であって、前記虚血性発作の処置のためのさらなる薬剤が、カスパーゼインヒビター、グルタメートアンタゴニスト、カルシウムアンタゴニスト、アヘン剤アンタゴニスト、ＧＡＢＡ−Ａアゴニスト、カルパインインヒビター、ＮＭＤＡレセプターアンタゴニスト、Ｋ＋チャネルモジュレーター、ＰＤＨキナーゼインヒビター、および抗酸化剤からなる群より選択される、神経保護剤である、組成物。
【請求項４６】
請求項４４に記載の組成物であって、前記虚血性発作の処置のためのさらなる薬剤が、ヘパリン、ワルファリン、ダルテパリン、ダナパロイド、エノキサパリン、チンザパリン、４−ヒドロキシクマリン、ジクマロール、フェンプロクモン、アセノクマロール、アニシンドン、レピルジン、およびインダン−１，３−ジオンからなる群より選択される、抗凝固剤である、組成物。
【請求項４７】
請求項４４に記載の組成物であって、前記虚血性発作の処置のためのさらなる薬剤が、アスピリン、クロピドグレル、チクロピジン、アブシキシマブ、エプチフィバチド、チロフィバン、およびジピリダモールからなる群より選択される、抗血小板物質である、組成物。
【請求項４８】
脳血管虚血性障害の処置のための医薬の製造における、ＧＳＫ３インヒビターの使用。
【請求項４９】
請求項１に記載の方法であって、前記ＧＳＫ３インヒビターが、経口投与経路、皮下投与経路、経皮投与経路、経粘膜投与経路、イオン導入投与経路、脳内投与経路、静脈内投与経路、動脈内投与経路、筋肉内投与経路、腹腔内投与経路、鼻内投与経路、髄腔内投与、硬膜下投与、および直腸投与経路からなる群より選択される経路によって投与される、方法。
【請求項５０】
請求項４９に記載の方法であって、前記ＧＳＫ３インヒビターが、全身投与される、方法。
【請求項５１】
請求項４９に記載の方法であって、前記ＧＳＫ３インヒビターが、脳内投与される、方法。
【請求項５２】
請求項４９に記載の方法であって、前記ＧＳＫ３インヒビターが、髄腔内投与される、方法。
【請求項５３】
請求項１７に記載の方法であって、前記ＧＳＫ３インヒビターが、経口投与経路、皮下投与経路、経皮投与経路、経粘膜投与経路、イオン導入投与経路、脳内投与経路、静脈内投与経路、動脈内投与経路、筋肉内投与経路、腹腔内投与経路、鼻内投与経路、髄腔内投与、硬膜下投与、および直腸投与経路からなる群より選択される経路によって投与される、方法。
【請求項５４】
請求項５３に記載の方法であって、前記ＧＳＫ３インヒビターが、全身投与される、方法。
【請求項５５】
請求項５３に記載の方法であって、前記ＧＳＫ３インヒビターが、脳内投与される、方法。
【請求項５６】
請求項５３に記載の方法であって、前記ＧＳＫ３インヒビターが、髄腔内投与される、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、虚血（特に脳虚血）の処置方法に関し、この方法は、外傷事象（例えば、発作）の場合、処置する必要があるヒト被験体または動物被験体に、その被験体に対する虚血性損傷を減少するために有効な量のグリコーゲンシンターゼキナーゼ３（ＧＳＫ３）インヒビターを投与することによる。本発明は、虚血性損傷の予防または阻害のための組成物にさらに関し、その組成物は、グリコーゲンシンターゼキナーゼ３（ＧＳＫ３）インヒビターと、虚血性損傷の処置のための少なくとも１種のさらなる因子とを含む。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
発作は、米国における障害の主原因であり、そして主要な死亡原因である。実験室レベルおよび臨床レベルの両方で多くの研究が進行中であるにも関わらず、今日まで、このひどい疾患について証明された処置は、ほとんどない。神経変性の領域における最近の研究は、β−カテニン（タンパク質間相互作用に関与するタンパク質）は、Ｗｎｔ経路を介するシグナル伝達の後に、転写調節に関与することが、示された（Ｔ．Ｃ．Ｄａｌｅ「Ｓｉｇｎａｌ  ｔｒａｎｓｕｄｕｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ｔｈｅ  Ｗｎｔ  ｆａｍｉｌｙ  ｏｆ  ｌｉｇａｎｄｓ」Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ，３２９：２０９〜２３（１９９８）。β−カテニンは、ＤＮＡ結合タンパク質であるＴＣＦ（Ｔ細胞因子）に結合し、種々の標的遺伝子の転写を生じる。これらの経路は、細胞増殖において重要であると考えられる。β−カテニンは、グリコーゲンシンターゼキナーゼ−３β（ＧＳＫ−３）を介するリン酸化によって、阻害される。さらに、ＧＳＫ−３はまた、変異体プレセニリン１に結合した場合に、ｔａｕタンパク質をリン酸化し得（Ａ．Ｔａｋａｓｈｉｍａら「Ｐｒｅｓｅｎｉｌｉｎ  １  ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ｗｉｔｈ  ｇｌｙｃｏｇｅｎ  ｓｙｎｔｈａｓｅ  ｋｉｎａｓｅ−３ｂｅｔａ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  ｔａｕ」Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  ９５：９６３７〜４１（１９９８））、β−カテニンを不安定化してアポトーシスをもたらす（Ｚ．Ｚｈａｎｇら「Ｄｅｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｂｅｔａ−ｃａｔｅｎｉｎ  ｂｙ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｐｒｅｓｅｎｉｌｉｎ−１  ｐｏｔｅｎｔｉａｔｅｓ  ｎｅｕｒｏｎａｌ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ」Ｎａｔｕｒｅ  ３９５：６９８〜７０２（１９９８））。ＧＳＫ−３の過剰発現は、Ｒａｔ−１細胞およびＰＣ１２細胞の両方のアポトーシスを誘導した（Ｍ．Ｐａｐら「Ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｇｌｙｃｏｇｅｎ  ｓｙｎｔｈａｓｅ  ｋｉｎａｓｅ−３  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ  ３−Ｋｉｎａｓｅ／Ａｋｔ  ｃｅｌｌ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｐａｔｈｗａｙ」Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２７３：１９９２９〜３２（１９９８））。脳虚血の後、アポトーシス（プログラムされた細胞死）が、特定の程度まで生じること、およびこのプロセスの適切な生化学的変化または遺伝的変化は、神経保護をもたらすことが、現在公知である。例えば、抗アポトーシスタンパク質であるＢｃｌ−２の過剰発現は、線条体ニューロンを一過性の病巣虚血から保護したことが、示された（Ｍ．Ｓ．Ｌａｗｒｅｎｃｅら「Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｃｌ−２  ｗｉｔｈ  ｈｅｒｐｅｓ  ｓｉｍｐｌｅｘ  ｖｉｒｕｓ  ｖｅｃｔｏｒｓ  ｐｒｏｔｅｃｔｓ  ＣＮＳ  ｎｅｕｒｏｎｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｓｕｌｔｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ」Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  １６：４８６〜９６（１９９６）；Ｍ．Ａ．Ｙｅｎａｒｉら「Ｈｅｒｐｅｓ  ｓｉｍｐｌｅｘ  ｖｉｒａｌ  ｖｅｃｔｏｒｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  Ｂｃｌ−２  ａｒ���  ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ａｇａｉｎｓｔ  ｆｏｃａｌ  ｃｅｒｅｂｒａｌ  ｉｓｃｈｅｍｉａ」Ｊ．Ｋｒｉｅｇｌｓｔｅｉｎ編、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｃｅｒｅｂｒａｌ  Ｉｓｃｈｅｍｉａ、Ｗｉｓｓｅｎｓｃｈａｆｔｌｉｃｈｅ  Ｖｅｒｌａｇｓｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ  ｍｂＨ，Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ，１９９６，ｐｐ．５３７〜５４３）。これは、Ｂｃｌ−２過剰発現は、虚血発症後に適用された後でさえ生じた（Ｍ．Ｓ．Ｌａｗｒｅｎｃｅら「Ｈｅｒｐｅｓ  ｓｉｍｐｌｅｘ  ｖｉｒａｌ  ｖｅｃｔｏｒｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  Ｂｃｌ−２  ａｒｅ  ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｗｈｅｎ  ｄｅｌｉｖｅｒｅｄ  ａｆｔｅｒ  ａ  ｓｔｒｏｋｅ」Ｊ  Ｃｅｒｅｂ  Ｂｌｏｏｄ  Ｆｌｏｗ  Ｍｅｔａｂ  １７：７４０〜４（１９９７）；Ｍ．Ａ．Ｙｅｎａｒｉら「Ｈｅｒｐｅｓ  ｓｉｍｐｌｅｘ  ｖｉｒａｌ  ｖｅｃｔｏｒｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  Ｂｃｌ−２  ａｒｅ  ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ａｇａｉｎｓｔ  ｆｏｃａｌ  ｃｅｒｅｂｒａｌ  ｉｓｃｈｅｍｉａ」Ｊ．Ｋｒｉｅｇｌｓｔｅｉｎ編、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｃｅｒｅｂｒａｌ  Ｉｓｃｈｅｍｉａ、Ｗｉｓｓｅｎｓｃｈａｆｔｌｉｃｈｅ  Ｖｅｒｌａｇｓｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ  ｍｂＨ，Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ，１９９６，ｐｐ．５３７〜５４３）。カスパーゼインヒビターを用いる薬理学的阻害もまた、実験性発作に対して神経保護的であることが示された（Ｆ．Ｊ．Ｇｏｔｔｏｎら「Ｃａｓｐａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙ  ｒｅｄｕｃｅｓ  ｔｈｅ  ａｐｏｐｔｏｔｉｃ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  ｏｆ  ｏｘｙｇｅｎ−ｇｌｕｃｏｓｅ  ｄｅｐｒｉｖａｔｉｏｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｃｏｒｔｉｃａｌ  ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ」Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ９：１５９〜６９（１９９７）；Ｔ．Ｈｉｍｉら「Ａ  ｃａｓｐａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｂｌｏｃｋｓ  ｉｓｃｈａｅｍｉａ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｄｅｌａｙｅｄ  ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｄｅａｔｈ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｇｅｒｂｉｌ」Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  １０：７７７〜８１（１９９８）；Ｓ．Ｎａｍｕｒａら「Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｌｅａｖａｇｅ  ｏｆ  ｃａｓｐａｓｅ−３  ｉｎ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｃｅｒｅｂｒａｌ  ｉｓｃｈｅｍｉａ」Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  １８：３６５９〜６８（１９９８））。さらに、カスパーゼベースのインヒビターは、再灌流後に投与された場合に、保護的であり得ることが示された（Ｍｏｕｗら「Ｃａｓｐａｓｅ−９  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ａｆｔｅｒ  ｆｏｃａｌ  ｃｅｒｅｂｒａｌ  ｉｓｃｈｅｍｉａ  ｉｍｐｒｏｖｅｓ  ｏｕｔｃｏｍｅ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  ｆｏｃａｌ  ｉｓｃｈｅｍｉａ」Ｍｅｔａｂ  Ｂｒａｉｎ  Ｄｉｓ  １７（３）１４３〜５１（２００２））。
【０００３】
グリコーゲンシンターゼキナーゼ３（ＧＳＫ３）は、２つのアイソフォーム（αおよびβ）が同定されている、セリン／スレオニンキナーゼである。Ｗｏｏｄｇｅｔｔ，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．１６：１７７〜８１（１９９１）。両方のＧＳＫ３アイソフォームは、休止細胞において構成的に活性である。ＧＳＫ３は、直接的リン酸化によってグリコーゲンシンターゼを阻害するキナーゼとして、元々同定された。インスリン活性化の際に、ＧＳＫ３が不活化され、それによって、グリコーゲンシンターゼの活性化、そしておそらくは他のインスリン依存性事情（例えば、グルコース輸送）の活性化が可能になる。その後、ＧＳＫ３活性はまた、インスリン同様に、レセプターチロシンキナーゼ（ＲＴＫ）を介してシグナル伝達する、他の増殖因子によって不活化されることが、示された。そのようなシグナル伝達分子の例としては、ＩＧＦ−１およびＥＧＦが挙げられる。Ｓａｉｔｏら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３０３：２７〜３１（１９９４）；Ｗｅｌｓｈら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２９４：６２５〜２９（１９９３）；およびＣｒｏｓｓら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３０３：２１〜２６（１９９４）。
【０００４】
ＧＳＫ３活性を阻害する因子は、ＧＳＫ活性により媒介される障害の処置において有用である。さらに、ＧＳＫ３の阻害は、増殖因子シグナル伝達経路の活性を模倣する。結果として、ＧＳＫ３インヒビターは、そのような経路が不十分にしか活性でない疾患の処置において、有用である。ＧＳＫ３インヒビターを用いて処置され得る疾患の例は、下記に記載される。
【０００５】
（糖尿病）
２型糖尿病は、ますます流行している加齢疾患である。２型糖尿病は、最初、インスリンに対する感受性の減少と、循環中のインスリン濃度の補償的増加とによって特徴付けられる。後者は、正常な血中グルコースレベルを維持するために必要である。インスリンレベルの増加は、膵臓β細胞からの分泌の増加によって引き起こされ、生じる高インスリン血症は、糖尿病の心血管合併症に関連する。インスリン耐性が悪化すると、膵臓β細胞の需要が着々と増加し、これは、膵臓が、十分なインスリンレベルをもはや提供し得なくなるまで続き、血中グルコースレベルの増加をもたらす。最終的に、明白な高インスリン血症および高脂血症が生じ、糖尿病に関連する長期のひどい合併症（心血管疾患、腎不全および失明を含む）をもたらす。２型糖尿病を引き起こす正確な機構は、未知であるが、骨格筋へのグルコース輸送の減損および肝臓グルコース産生の増加、および不十分なインスリン応答を生じる。食餌の変更は、しばしば、有効ではない。従って、患者の大多数は、この疾患の合併症を予防するため、および／またはこの疾患の合併症の進行を遅くするために、最終的には、薬学的介入を必要とする。多くの患者は、インスリン分泌を増加するために利用可能な多くの経口抗糖尿病剤（スルホニル尿素が挙げられる）のうちの１種以上を用いて処置され得る。スルホニル尿素薬物の例としては、肝臓グルコース産生の抑制のためのメトホルミン、およびトログリタゾン（インスリン感作剤）が挙げられる。これらの薬剤の有用性にも関わらず、糖尿病患者のうちの３０〜４０％は、これらの医薬を使用して十分には制御されず、その患者には、皮下インスリン注射が必要である。さらに、これらの治療の各々は、副作用を伴う。例えば、スルホニル尿素は、低血糖症を引き起こし得、そしてトログリタゾンは、重篤な肝毒性を引き起こし得る。現在、糖尿病前患者および糖尿病患者の処置のために、新規でかつ改良された薬剤に関する必要性が存在する。
【０００６】
上記のように、ＧＳＫ３阻害は、インスリン依存性プロセスを刺激し、結果として、２型糖尿病の処置において有用である。リチウム塩を使用して得られた最近のデータは、この概念についての証拠を提供する。リチウムイオンは、最近、ＧＳＫ３活性を阻害すると報告されている。Ｋｌｅｉｎら、ＰＮＡＳ  ９３：８４５５〜９（１９９６）。１９２４年以来、リチウムは、抗糖尿病性効果（血漿グルコースレベルを減少する能力、グリコーゲン取込みを増加する能力、インスリンを増強する能力、グルコースシンターゼ活性をアップレギュレートする能力、および皮膚細胞、筋肉細胞、および脂肪細胞におけるグリコーゲン合成を刺激する能力を含む）を有することが報告されている。しかし、リチウムは、ＧＳＫ活性の阻害における使用のために広範には受け入れられていない。これは、おそらく、ＧＳＫ３以外の分子標的に対する、文書に記載されたリチウムの影響に起因する。プリンアナログである５−ヨードツベルシジンもまた、ＧＳＫ３インヒビターであり、これも同様に、ラット肝臓細胞において、グリコーゲン合成を刺激し、そしてグルカゴンおよびバソプレシンによるグリコーゲンシンターゼの不活化をアンタゴナイズする。Ｆｌｕｃｋｉｇｅｒ−Ｉｓｌｅｒら、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ  ２９２：８５〜９１（１９９３）；およびＭａｓｓｉｌｌｏｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ  ２９９：１２３〜８（１９９４）。しかし、この化合物はまた、他のセリン／スレオニンキナーゼおよびチロシンキナーゼを阻害することが示されている。Ｍａｓｓｉｌｌｏｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ  ２９９：１２３〜８（１９９４）。
【０００７】
（アルツハイマー病）
ＧＳＫ３はまた、アルツハイマー病（ＡＤ）に関連する生物学的経路に関与する。ＡＤの特徴的な病理学的特徴は、異常にプロセシングされた形態のアミロイド前駆タンパク質（ＡＰＰ）（いわゆる、β−アミロイドペプチド（β−ＡＰ））の細胞外プラークであり、そして過剰リン酸化ｔａｕタンパク質から主になる対合らせんフィラメント（ＰＨＦ）を含む細胞内神経線維のもつれの発生である。ＧＳＫ３は、ＰＨＦ  ｔａｕの特徴である異常な部位において、インビトロでｔａｕタンパク質をリン酸化することが見出されていた多数のキナーゼの１つであり、そしてこれは、生細胞および動物においてこれを行うことが示されている唯一のキナーゼである。Ｌｏｖｅｓｔｏｎｅら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ４：１０７７〜８６（１９９４）；およびＢｒｏｗｎｌｅｅｓら、Ｎｅｕｒｏｒｅｐｏｒｔ  ８：３２５１〜３２５５（１９９７）。さらに、このＧＳＫ３キナーゼインヒビター（ＬｉＣｌ）は、細胞におけるｔａｕ過剰リン酸化をブロックする。Ｓｔａｍｂｏｌｉｃら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ６：１６６４〜８（１９９６）。従って、ＧＳＫ３活性は、神経線維のもつれの生成、および結果的には疾患進行に、寄与し得る。最近、ＧＳＫ３βは、ＡＤの病因における別の重要なタンパク質のプレセニリン１（ＰＳ１）と会合することが、示された。Ｔａｋａｓｈｉｍａら、ＰＮＡＳ  ９５：９６３７〜９６４１（１９９８）。ＰＳ１遺伝子の変異は、β−ＡＰの生成の増加をもたらすが、著者らはまた、変異体ＰＳ１タンパク質が、ＧＳＫ３βにより緊密に結合し、ｔａｕ（ＰＳ１の同じ領域に結合している）のリン酸化を増強することを示した。
【０００８】
興味深いことに、別のＧＳＫ３基質であるβ−カテニンが、ＰＳ１に結合することもまた、示された。Ｚｈｏｎｇら、Ｎａｔｕｒｅ  ３９５：６９８〜７０２（１９９８）。細胞質ゾルβ−カテニンは、ＧＳＫ３によってリン酸化された際に分解するように標的付けられており、β−カテニン活性の減少は、β−ＡＰ誘導性ニューロンアポトーシスに対するニューロン細胞の感受性増加に関連する。結果として、ＧＳＫ３βと変異体ＰＳ１との会合の増加は、ＰＳ−１変異ＡＤ患者の脳において観察されているβ−カテニンレベルの減少およびニューロン細胞死におけるこの疾患に関連しての増加を説明し得る。これらの知見と一致して、ＧＳＫ３アンチセンス（ＧＳＫ３センスではない）の注射は、インビトロでニューロンに対するβ−ＡＰの病理学的影響をブロックして、細胞死の発症の２４時間遅延を生じ、そして１時間目での細胞生存を１２％から３５％へと増加することが、示された。Ｔａｋａｓｈｉｍａら、ＰＮＡＳ  ９０：７７８９〜９３（１９９３）。後者のこれらの研究において、細胞死に対する影響は、細胞内ＧＳＫ３活性の倍化の後（β−ＡＰ投与の３〜６時間以内）に生じる。このことは、ＧＳＫ３とその基質との近接を増加する遺伝的機構に加えて、β−ＡＰが、ＧＳＫ３活性を実際に増加し得ることを、示唆する。ＡＤにおけるＧＳＫ３の役割に関するさらなる証拠が、ＧＳＫ３のタンパク質発現レベル（しかし、この場合は、比活性ではない）が、正常脳組織に対して、ＡＤのシナプトソーム後上清において５０％増加されるという知見によって、提供される。Ｐｅｉら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ  Ｅｘｐ  ５６：７０〜７８（１９９７）。従って、ＧＳＫ３の特異的インヒビターは、アルツハイマー病の進行を遅くするように作用すると、考えられる。
【０００９】
（他の中枢神経障害）
上記のリチウムの効果に加えて、双極性障害（躁鬱症候群）を処置するためにリチウムを使用している長い歴史が存在する。リチウムに対するこの臨床的応答は、双極性障害の病因にＧＳＫ３活性が関与することを反映し得、この場合、ＧＳＫ３インヒビターは、その適応症にとって適切であり得る。この概念を支持して、双極性障害の処置において一般的に使用される別の薬物であるバルプロエート（ｖａｌｐｒｏａｔｅ）もまた、ＧＳＫ３インヒビターであることが、最近示された。Ｃｈｅｎら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ７２：１３２７〜１３３０（１９９９）。リチウムおよび他のＧＳＫ３インヒビターが双極性障害を処置するように作用し得る一機構は、神経伝達物質であるグルタメート（ｇｌｕｔａｍａｔｅ）によって誘導される異常に高い興奮レベルに供されたニューロンの生存を増加することである。Ｎｏｎａｋａら、ＰＮＡＳ  ９５：２６４２〜２６４７（１９９８）。グルタメート誘導性ニューロン興奮毒性はまた、急性損傷に関連する神経変性（例えば、脳虚血、外傷性脳損傷、および細菌感染）の主要原因であると考えられる。さらに、過度のグルタメートシグナル伝達は、アルツハイマー病、ハンティングトン病、パーキンソン病、ＡＩＤＳ関連痴呆、筋萎縮性側索硬化症（ＡＭＬ）および多発性硬化症（ＭＳ）のような疾患において観察される、慢性ニューロン損傷における要因であると、考えられる。Ｔｈｏｍａｓ，Ｊ．Ａｍ．Ｇｅｒｉａｔｒ．Ｓｏｃ．４３：１２７９〜８９（１９９５）。結果的に、ＧＳＫ３インヒビターは、これらの神経変性障害および他の神経変性障害における有用な処置であると、考えられる。
【００１０】
（免疫増強）
ＧＳＫ３は、転写因子ＮＦ−ＡＴをリン酸化し、そして核からのこの転写因子ＮＦ−ＡＴの輸送を促進する。これは、カルシニューリンの効果とは反対である（Ｂｅａｌｓら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７５：１９３０〜３３（１９９７））。従って、ＧＳＫ３は、ＮＦ−ＡＴを介する初期免疫応答遺伝子活性化をブロックし、そしてＧＳＫ３インヒビターは、免疫応答の活性化を許容するかまたは延長する傾向があり得る。従って、ＣＳＫ３インヒビターは、特定のサイトカインの免疫刺激効果を延長しそして増強すると考えられ、そのような効果は、腫瘍免疫療法のため、または実際は一般の免疫療法のための、サイトカインの能力を増強し得る。
【００１１】
（他の障害）
リチウムはまた、他の生物学的効果を有する。インビトロおよびインビボの両方での、造血の強力な刺激因子である（Ｈａｍｍｏｎｄら、Ｂｌｏｏｄ  ５５：２６〜２８（１９８０））。イヌにおいて、炭酸リチウムは、再発性好中球減少を排除し、そして他の血球数を正常化した（Ｄｏｕｋａｓら、Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ  １４：２１５〜２２１（１９８６））。リチウムのこれらの効果が、ＧＳＫ３の阻害を介して媒介される場合、ＧＳＫ３インヒビターは、さらに広範な適用を有し得る。
【００１２】
（ＧＳＫ３インヒビター）
種々のＧＳＫ３阻害化合物ならびにその合成方法および使用方法は、米国特許出願公開番号および国際特許出願公開番号２００２０１５６０８７、ＷＯ０２２０４９５およびＷＯ９９６５８９７（ピリミジンベースの化合物およびピリジンベースの化合物）；２００３０００８８６６、２００１００４４４３６およびＷＯ０１４４２４６（二環式ベースの化合物）；２００１００３４０５１（ピラジンベースの化合物）；ならびにＷＯ９８１６５２８（プリンベースの化合物）において開示される。さらに、本発明の状況において有用なさらなるＧＳＫ３阻害化合物としては、ＷＯ０２２２５９８において開示される化合物（キノリノンベースの化合物）が挙げられる。これらの米国公開および国際公開の開示全体が、参考として本明細書中で援用される。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１３】
ＧＳＫ−３βは、虚血性損傷を増強することに関与すること、およびＧＳＫ３インヒビター（例えば、上記の参考国際特許出願において開示されるＧＳＫ３インヒビター）によるＧＳＫ−３βの阻害は、虚血性損傷（例えば、発作から生じる虚血性損傷）を減少し得ることが、ここで発見された。
【００１４】
（発明の要旨）
本発明に従って、処置する必要があるヒト被験体または動物被験体における虚血性損傷の予防または阻害および／または心血管虚血障害の処置のための方法が、提供され、この方法は、虚血性発作事象の発症の２４時間以内に、その被験体に、その被験体における虚血性損傷を減少または予防するために有効な量のグリコーゲンシンターゼキナーゼ３（ＧＳＫ３）活性のインヒビターを投与することによる。本発明の１局面において、その被験体は、心血管虚血障害に罹患している、ヒト被験体または動物被験体である。
【００１５】
他の局面において、本発明は、心血管虚血障害を処置する必要があるヒト被験体または動物被験体において心血管虚血障害を処置するための方法を提供し、この方法は、この被験体において虚血性損傷を減少または予防するために有効な量のグリコーゲンシンターゼキナーゼ３（ＧＳＫ３）インヒビターを、虚血性発作の処置のための少なくとも１種のさらなる薬剤と組み合わせて。その被験体に投与する工程、を包含する。
【００１６】
なお他の局面において、本発明は、少なくとも１種のＧＳＫ３インヒビター化合物を、発作治療において一般的に使用されるように、虚血性発作の処置のための１種以上のさらなる薬剤と組み合わせて含む治療組成物を提供する。
【００１７】
（好ましい実施形態の詳細な説明）
本発明に従って、虚血性損傷を処置する必要があるヒト被験体または動物被験体の予防または阻害のための方法が、提供される。この方法は、インビトロまたはインビボのいずれかで、グリコーゲンシンターゼキナーゼ３（ＧＳＫ３）活性のインヒビターを、その被験体に投与することによる。
【００１８】
本発明の１局面において、その被験体は、心血管虚血障害に罹患しているヒト被験体または動物被験体である。心血管虚血障害は、一般には、不十分な脳循環によって引き起こされる。心血管虚血障害は、一過性虚血発作（ＴＩＡ）および虚血性発作を包含する。先天性異常およびアテローム性動脈硬化症は、頭蓋内動脈血流または頭蓋外動脈血流を中断し得、そして副行流を損ない得、それによって、脳虚血を引き起こし、結果として、神経学的機能不全の症状を引き起こす。血液供給が速やかに回復された場合、脳組織は、回復し得、そして症状は消滅し得るが、虚血が１時間よりも長く続いた場合、梗塞および永続的神経損傷が、一般に生じる。アテローム性動脈硬化症または他の障害（例えば、動脈炎、リウマチ性心疾患）に起因する血栓または塞栓は、一般的に、虚血性動脈閉塞を引き起こす。ほとんどの血栓の基礎となるアテロームは、どの主要な脳動脈にも影響し得る。大きなアテロームは、通常は、総頸動脈および椎骨動脈に、それらの起点において影響するが、総頸動脈の頸部分岐は、発作を引き起こす側線を生じる一般的部位である。頭蓋内塞栓症が、脳底においてその大きな動脈のうちの１つにおいて、深部貫通動脈において、または小皮質枝において、生じ得るが、中脳動脈の主要幹およびその分枝が、最も一般的な部位である。虚血および／または梗塞が生じるかどうかは、副行循環の効率に依存する。例えば、両方の椎骨動脈の同時狭窄は、副行循環を損ない得、そして頸動脈病変の影響を強め得る。
【００１９】
ほとんどのＴＩＡは、首の頸動脈または椎骨動脈における潰瘍性アテローム動脈硬化症性プラークからの脳塞栓によってか、または疾患心臓における壁性血栓からの脳塞栓によって、引き起こされる。いくつかのＴＩＡは、狭窄した動脈を通る血流の短期減少によって、引き起こされる。ＴＩＡは、代表的に突然始まり、２〜３０分間以上続き、その後、永続的神経異常を伴わずに停止する。ＴＩＡが数時間継続した場合、患者は、永続的な神経異常を伴わない場合でさえ、梗塞を経験し得る。症状は、発作と同じであり得るが、一過性である。錯乱、眩暈、両眼の失明、複視、および末端の片側性（よりしばしば、両側性）の衰弱または感覚異常が、存在し得る。不明瞭言語（構語障害）が、頸動脈または椎骨基部（ｖｅｒｔｅｂｒｏｂａｓｉｌａｒ）が関与して、生じ得る。ＴＩＡの患者は、顕著に増加した発作リスクがある。
【００２０】
虚血性発作は初めに、２４〜４８時間にわたって悪化する神経学的なパフォーマンスにおける不全により表された進行性発作として、または安定した神経学的損傷により表された完全発作もしくは脳梗塞として生じ得る。代表的に、発作は、動脈硬化症もしくは高血圧狭窄症、血栓症、または塞栓症の結果である。発作の発症は、一般的に急速である。進展性発作では、神経学的機能不全（しばしば片腕において始まり、次いで次第に広がる）は、一般的に数時間から一日または二日にわたって痛み無く広がる。進行は、段階的な様式（安定期に中断される）で生じるかもしれないし、または連続しているかもしれない。急性の完全発作において、症状は急速に進展し、代表的には２〜３分内で最大になる。進展性発作は、完全発作になり得る。進展性発作、または大きい完全発作の最初の４８時間〜７２時間の間、神経学的なパフォーマンスにおける不全が悪化し得、脳水腫のために意識が混濁され得る。
【００２１】
虚血性発作の最初の日の間、進行も結果も予想し得ない。約２０％の患者が、病院で死亡する；死亡率は、年齢と共に増加する。神経学的回復の程度は、患者の年齢および全身の健康状態ならびに梗塞の部位およびサイズに依存する。意識障害、精神衰退、失語症、または重篤な脳幹の徴候が、代表的に予後不良を示唆する。完全な回復はまれであるが、改善が早いほど、患者における転帰はより良くなる。中程度または重篤な片麻痺を有する約５０％の患者、およびより軽度の欠損を有するほとんどの患者は、退院時までに機能的に回復し、最終的に彼らの基本的なニーズを介護し得、明瞭な感覚器を有し、そして十分に歩行し得る（冒された手足の使用は制限されるが）。６ヶ月後に残っている任意の欠損は、永久的なものである可能性が高いが、いくらかの患者は、ゆっくりと改善し続ける。脳梗塞は、比較的頻繁に再発し、そして各々の再発は、神経学的障害を付与する可能性が高い。
【００２２】
従って、１つの局面において、本発明は、被験体における虚血性損傷を軽減するかまたは予防するために、有効量のグリコーゲンシンターゼキナーゼ３（ＧＳＫ３）阻害剤を被験体に投与する工程を包含するような処置を必要とするヒト被験体または動物被験体に脳血管性虚血性障害を処置するための方法を提供する。虚血性損傷の予防の減少は、例えば、神経学的パフォーマンスにおける不全、意識障害、精神衰退、錯乱、眩暈、両眼失明、複視（二重視）、失語症（言葉を使用または理解する能力の喪失または損傷）、構語障害（不明瞭発語）、片麻痺（体の片側の全体的または部分的麻痺）、ならびに／または運動機能制御の減少のような虚血性脳障害と慣習的に関連する、予期される症状の軽減または欠如により決定され得る。虚血性発作による虚血性障害の進展する性質により、本発明に従う患者の処置の開始は、好ましくは、虚血性発作事象の開始の２４時間以内、より好ましくは８時間以内、最も好ましくは２時間以内に開始される。一旦開始されると、本発明に従う患者の処置は、潜在的虚血性損傷に帰する症状が和らぐまで、少なくとも８時間の間、より好ましくは少なくとも２４時間の間、そして最も好ましくは４８時間の間またはそれより長い間、断続的にまたは連続的に続けられ得る。
【００２３】
別の局面において、本発明は、虚血性発作の処置のための少なくとも１つのさらなる薬剤と組み合わせて、被験体における虚血性損傷を軽減または予防するのに、有効量のグリコーゲンシンターゼキナーゼ３（ＧＳＫ３）阻害剤を前記被験体に投与する工程を包含するような処置を必要とするヒト被験体または動物被験体中に、脳血管性虚血性障害を処置するための方法を提供する。さらなる有用な薬剤としては、例えば、血流を妨害する凝塊を溶解する（ｄｉｓｓｏｌｖｅ）（溶解する（ｌｙｓｅ））ことにより脳循環を回復させるのを助ける血栓溶解剤および／またはフィブリン溶解剤、虚血性カスケード、抗凝固剤ならびに抗血小板剤の効果を最小化するように作用する神経保護剤のような発作治療と一緒に、一般的にまたは経験的に使用される薬剤が挙げられる。代表的な血栓溶解剤としては、例えば、アルテプラーゼ（組織プラスミノーゲン活性化剤（ｔ−ＰＡ））（凝血塊を溶かすために、プラスミノーゲンを酵素プラスミンに変換させ、または活性化させる体内で天然に見出された酵素）；アニストレプラーゼ；レテプラーゼ（ｒｅｔｅｐｌａｓｅ）；ウロキナーゼ；およびストレプトキナーゼが挙げられる。代表的な神経保護剤としては、例えば、酸素−グルコース欠如−誘導性皮質性ニューロン細胞死のアポトーシス構成要素を選択的に減少させるカスパーゼ阻害剤、ニューロンへのグルタミン酸の進行を妨げるグルタメートアンタゴニスト、電気的に操作されるチャネルを介してカルシウムの細胞内蓄積を阻害するカルシウムアンタゴニスト、細胞死の間に生じる化学的カスケードにより、過度な刺激を与えられたアヘンレセプター上で作用することにより虚血性カスケードを妨げるアヘンアンタゴニスト、ＧＡＢＡ−Ａレセプターを活性化し、それにより特定のグルタメートレセプターの電気的活性を打ち消すＣｌｏｍｅｔｈｉａｚｏｌｅ（Ａｓｔｒａ）のようなＧＡＢＡ−Ａアンタゴニスト、カルパイン阻害剤、Ｃ−１０１，６０６（Ｐｆｉｚｅｒ）のようなＮＭＤＡレセプターアンタゴニスト、ＢＭＳ−２０４３５２（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）のようなＫ＋チャネル調節因子、ＰＤＨキナーゼ阻害剤および虚血性カスケードによって産生される遊離ラジカルを捕捉する酸化防止剤が挙げられる。さらに、本発明の方法および化合物は、酸化フッ化炭素栄養エマルジョン（ＯＦＮＥ）治療および／または酸素に富んだ血液が虚血性発作からの障害を減少させるために、脳を介して別のルートで送られる、神経灌流と組み合わされて使用され得る。代表的な抗凝固剤としては、例えば、ヘパリン、ワルファリン、ダルテパリン（ｄａｌｔｅｐａｒｉｎ）、ダナパロイド（ｄａｎａｐａｒｏｉｄ）、エノキサパリン、チンザパリン（ｔｉｎｚａｐａｒｉｎ）、４−ヒドロキシクマリン、ジクマロール、フェンプロクモン、アセノクマロール、アニシンドン、レピルジン（ｌｅｐｉｒｕｄｉｎ）およびインダン−１，３−ジオンが挙げられる。代表的な抗血小板剤としては、例えば、アスピリン、クロピドグレル、チクロピジン、アブシキシマブ、エプチフィバチド（ｅｐｔｉｆｉｂａｔｉｄｅ）、チロフィバン（ｔｉｒｏｆｉｂａｎ）、およびジピリダモールが挙げられる。
【００２４】
本発明のこの局面において、少なくとも１つの追加薬剤の投与前および／または同時に、グリコーゲンシンターゼキナーゼ３（ＧＳＫ３）阻害剤が、好ましくは、被験体に投与される。少なくとも１つの追加薬剤の投与前および／または同時に、グリコーゲンシンターゼキナーゼ３（ＧＳＫ３）阻害剤の投与が、虚血性細胞障害を増強させる再灌流から患者を保護するために、追加薬剤が血栓溶解剤および／またはフィブリン溶解剤である場合、特に好まれる。従って、虚血性細胞障害からの最適な保護を得ることを所望され得る場合、グリコーゲンシンターゼキナーゼ３（ＧＳＫ３）阻害剤は、追加薬剤の前、追加薬剤と同時に、または追加薬剤の合間に投与され得る。
【００２５】
本発明の実施に有用なＧＳＫ３活性の阻害剤とは、ＧＳＫ３阻害活性を示すことが知られている化合物を含む。脳虚血の場合、ＧＳＫ３阻害剤は、脳の虚血損傷部位に有効なレベルの阻害剤の蓄積を許容するために、血液／脳関門に入りこむ能力を、好ましくは選択される。脳への薬物送達は、当惑させる問題であり続ける。血液／脳関門（ＢＢＢ）が血管系から神経系組織へほとんどの化合物の移行を除くので、全身投与は、たいてい効果的でない。ＢＢＢが多くの可能性のある治療分子の侵入を制限するために、種々の戦略が、脳薬物送達のために考案されてきた。脳へ薬物を標的化する１つの直接の手段は、埋込ポンプ、生分解性ポリマーまたは遺伝子操作された細胞を使用して局所的に薬物を送達することである。これらのアプローチ各々がいくらかの利点を有する一方、これらの技術の組み合わせは、脳標的化について最大のチャンスをもたらす可能性がある。発生生物学、ヒトゲノム科学、組織および器官再構成、薬物送達および材料工学における集中的な進歩が、著しく洗練されたレベルに全て進歩した。これらの学問の共通部分は、局所的な脳薬物送達における革命に導く可能性がある。侵襲性の神経外科的手段に依存しない他のアプローチとしては、ＢＢＢの脳内皮細胞上に恒常的に発現される刺激的な内因性レセプターに基づくＢＢＢの薬理学的調節；および天然に存在し、分子を脳中に運ぶのに役立つレセプターシステムを利用する、ＢＢＢを横切るレセプター媒介輸送が挙げられる。
【００２６】
種々の特性は、血液／脳障壁に入りこむＧＳＫ３阻害剤の能力に適用可能である（例えば、低分子量、比較的高い親油性、および比較的低い極性表面領域を含む）。
【００２７】
従って、現在本発明に従う虚血性損傷の予防または処置において有効な好ましいＧＳＫ３阻害剤化合物は、比較的低分子量を有する低分子ＧＳＫ３阻害剤化合物を含む。１つの局面において、本発明の実施において使用されるＧＳＫ３阻害剤化合物は、約８００未満の分子量、より好ましくは約５００未満の分子量、そしてさらにより好ましくは４００未満の分子量を有する。
【００２８】
別の局面において、本発明の実施において使用されるＧＳＫ３阻害剤化合物は、実施例３において詳細に記載されるようなソフトウェアプログラムＰｒｏｌｏｇＰ５．１（ＣｏｍｐｕＤｒｕｇ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．７０５  Ｇｒａｎｄｖｉｅｗ  Ｄｒｉｖｅ，Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ  ９４０８０  ＵＳＡ）により決定されるように、好ましくは約０〜８の範囲、より好ましくは約１〜６の範囲、さらにより好ましくは約２〜５の範囲のｌｏｇＰを示す。ｌｏｇＰは、オクタノールと水との間の化合物の中性形態の分配形数の対数であり、そして低分子の生理学的膜への吸着との相互関連を有する物理化学的パラメータである。
【００２９】
本発明のなお他の局面において、高度に膜に結合した化合物は、しばしば脳毛細管内皮にて捕捉され得る。従って、本発明の実施において使用されるＧＳＫ−３阻害剤化合物が、コリン、疎水性側鎖、またはリン酸のような永続的な静電荷を有さないことが、現在好ましい。当該発明のさらに好ましい実施形態としては、約９０〜約２００Å２の範囲の極性表面領域および５以下のＨ結合基を有するＧＳＫ−３阻害剤化合物が挙げられる。血液脳関門に入りこむことが可能な化合物の特徴の考察について、以下の文献が引用され、本明細書中に含まれるように、完全に参考として援用される：１）Ｍｅｒｔｓｃｈら、「Ｂｌｏｏｄ−ｂｒａｉｎ  ｂａｒｒｉｅｒ  ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｒｕｇ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｆｒｏｍ  ａｎ  ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  ｐｏｉｎｔ  ｏｆ  ｖｉｅｗ」Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｃｅｎｔｒａｌ  Ｎｅｒｖｏｕｓ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ａｇｅｎｔｓ  ２（３）：１８７−２０１（２００２）；２）Ｆｉｌｍｏｒｅ,「Ｂｒｅｅｃｈｉｎｇ  ｔｈｅ  ｂｌｏｏｄ：ｒｅｓｅａｒｃｈｅｒｓ  ａｒｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ  ｔａｃｔｉｃｓ  ｔｏ  ｄｅｌｉｖｅｒ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｗｅｌｌ−ｇｕａｒｄｅｄ［ｒｕｌｅｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｏｒｇａｎｓ」Ｍｏｄｅｒｎ  Ｄｒｕｇｓ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ５（６）：２２−２４，２７（２００２）；３）Ｅｍｅｒｉｃｈ，「Ｒｅｃｅｎｔ  ｅｆｆｏｒｔｓ  ｔｏ  ｏｖｅｒｃｏｍｅ  ｔｈｅ  ｂｌｏｏｄ−ｂｒａｉｎ  ｂａｒｒｉｅｒ  ｆｏｒ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ」Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｏｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  １０（３）：２７９−２８７（２０００）；Ｃｌａｒｋら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．８８：８１５ｅｔ  ｓｅｑ．（１９９９）。
【００３０】
血液脳関門を通過するＧＳＫ３阻害剤は、全身投与が好ましいが、くも膜下腔内または脳内に投与される場合全身吸収後に血液−脳関門を容易に通過しないＧＳＫ３阻害剤が、虚血の処置のために有用である。
【００３１】
いくつかの実施形態において、本発明の実施に有用な代表的なＧＳＫ３阻害剤化合物としては、血液脳関門を通過し得る化合物、ならびに以下の式（Ｉ）の構造：
【００３２】
【化１】
2005525362.tif 000003
を有し得る化合物、および、その薬学的に受容可能な塩を含む：
ここで：
Ｗは、必要に応じて置換される炭素または窒素である；
ＸおよびＹは、窒素、酸素、および必要に応じて置換される炭素からなる群より独立して選択される；
Ａは、必要に応じて置換されるアリールまたはヘテロアリールである；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、水素、ヒドロキシルならびに必要に応じて置換される低級アルキル、低級シクロアルキル、アルキルアミノアルキル、低級アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アラルキルカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、ヘテロアラルキルカルボニル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から独立して選択され、そしてＲ’１、Ｒ’２、Ｒ’３およびＲ’４は、水素および必要に応じて置換される低級アルキルからなる群より独立して選択される；
Ｒ５およびＲ７は、水素、ハロ、ならびに必要に応じて置換される低級アルキル、シクロアルキル、アルコキシ、アミノ、アミノアルコキシ、アルキルアミノ、アラルキルアミノ、ヘテロアラルキルアミノ、アリールアミノ、ヘテロアリールアミノシクロイミド、ヘテロシクロイミド、アミジノ、シクロアミジノ、ヘテロシクロアミジノ、グアニジニル、アリール、ビアリール、ヘテロアリール、ヘテロビアリール、ヘテロシクロアルキル、およびアリールスルホンアミドからなる群から独立して選択される；
Ｒ６は、水素、ヒドロキシ、ハロ、カルボキシル、ニトロ、アミノ、アミド、アミジノ、イミド、シアノ、ならびに置換されたまたは置換されていない低級アルキル、低級アルコキシ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アラルキルカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、ヘテロアラルキルカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アラルキルカルボニルオキシ、アルキルアミノカルボニルオキシ、アリールアミノカルボニルオキシ、ホルミル、低級アルキルカルボニル、低級アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アミノアリール、アルキルスルホニル、スルホンアミド、アミノアルコキシ、アルキルアミノ、ヘテロアリールアミノ、アルキルカルボニルアミノ、アルキルアミノカルボニルアミノ、アリールアミノカルボニルアミノ、アラルキルカルボニルアミノ、ヘテロアラルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、ヘテロアリールカルボニルアミノシクロアミド、シクロチオアミド、シクロアミジノ、ヘテロシクロアミジノ、シクロイミド、ヘテロシクロイミド、グアニジニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、アリールスルホニルおよびアリールスルホンアミドからなる群より選択される。
【００３３】
式（Ｉ）の化合物の合成およびＧＳＫ３阻害活性が、国際特許出願番号ＷＯ９９６５８９７（１９９９年１２月２３日に公開された）において開示され、その開示が本明細書中で参考として援用される。
【００３４】
本発明のいくつかの実施形態において、式（Ｉ）のＸおよびＹの少なくとも１つが、窒素である。この群の代表的な化合物としては、ＸおよびＹの１つが窒素であり、ＸおよびＹのもう一方が、酸素または必要に応じて置換される炭素である化合物を含む。好ましくは、ＸおよびＹの両方が、窒素である。
【００３５】
式（Ｉ）の構成要素Ａは、３〜１０個の炭素環原子および必要に応じて１つ以上の環へテロ原子を有する芳香環であり得る。従って、一つの実施形態において、Ａは、必要に応じて置換される炭素環アリールであり得る。あるいは、Ａは、少なくとも１個かつ３個以下の置換基で置換され得る、必要に応じて置換されるヘテロアリール（例えば、置換されたまたは置換されていないピリジル、ピリミジニル、チアゾリル、インドリル、イミダゾリル、オキサジアゾリル、テトラゾリル、ピラジニル、トリアゾリル、チオフェニル、フラニル、キノリニル、プリニル、ナフチル、ベンゾチアゾリル、ベンゾピリジルおよびベンズイミダゾリルのような）である。代表的な置換基は、例えば、以下からなる群から独立して選択され得る：ニトロ、アミノ、シアノ、ハロ、チオアミド、アミジノ、オキサミジノ、アルコキシアミジノ、イミジノ、グアニジノ、スルホンアミド、カルボキシル、ホルミル、低級アルキル、ハロ低級アルキル、低級アルコキシ、ハロ低級アルコキシ、低級アルコキシアルキル、低級アルキルアミノ低級アルコキシ、低級アルキルカルボニル、低級アラルキルカルボニル、低級ヘテロアラルキルカルボニル、アルキルチオ、アミノアルキルおよびシアノアルキル。
【００３６】
本発明のいくつかの実施形態において、Ａは、以下の式：
【００３７】
【化２】
2005525362.tif 000004
を有し、ここでＲ８およびＲ９は、以下からなる群から独立して選択される：水素、ニトロ、アミノ、シアノ、ハロ、チオアミド、アミジノ、オキサミジノ、アルコキシアミジノ、イミジノ、グアニジニル、スルホンアミド、カルボキシル、ホルミル、低級アルキル、ハロ低級アルキル、低級アルコキシ、ハロ低級アルコキシ、低級アルコキシアルキル、低級アルキルアミノ低級アルコキシ、低級アルキルカルボニル、低級アラルキルカルボニル、低級ヘテロアラルキルカルボニル、アルキルチオ、アリールおよびアラルキル。最も好ましくは、Ａは、以下からなる群から選択される：ニトロピリジル、アミノニトロピリジル、シアノピリジル、シアノチアゾリル、アミノシアノピリジル、トリフルオロメチルピリジル、メトキシピリジル、メトキシニトロピリジル、メトキシシアノピリジルおよびニトロチアゾリル。
【００３８】
本発明の他の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４の少なくとも１つが、水素または、以下からなる群より選択される置換されていないもしくは置換された低級アルキルであり得る：ハロ低級アルキル、ヘテロシクロアミノアルキルおよび低級アルキルアミノ低級アルキル；または低級アルキルアミノ低級アルキル。現在本発明の好ましい実施形態としては、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３が水素であり、Ｒ４が、水素、メチル、エチル、アミノエチル、ジメチルアミノエチル、ピリジルエチル、ピペリジニル、ピロリジニルエチル、ピペラジニルエチルおよびモルホリニルエチルからなる群より選択される化合物を含む。
【００３９】
本発明の他の実施形態としては、Ｒ５およびＲ７の少なくとも１つが、置換されたおよび置換されていないアリール、ヘテロアリールおよびビアリールからなる群より選択される式（Ｉ）の化合物を含む。いくつかの実施形態において、Ｒ５およびＲ７の少なくとも１つは、以下の式：
【００４０】
【化３】
2005525362.tif 000005
の置換された部分または置換されていない部分であり、ここでＲ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３およびＲ１４は、以下からなる群から独立して選択される：水素、ニトロ、アミノ、シアノ、ハロ、チオアミド、カルボキシル、ヒドロキシ、ならびに必要に応じて置換される低級アルキル、低級アルコキシ、低級アルコキシアルキル、ハロ低級アルキル、ハロ低級アルコキシ、アミノアルキル、アルキルアミノ、アルキルチオ、アルキルカルボニルアミノ、アラルキルカルボニルアミノ、ヘテロアラルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、ヘテロアリールカルボニルアミノ、アミノカルボニル、低級アルキルアミノカルボニル、アミノアラルキル、低級アルキルアミノアルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロへテロアルキル、アラルキル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アラルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシアルキル、アルキルカルボニルオキシアルキル、ヘテロアリールカルボニルオキシアルキル、アラルキルカルボニルオキシアルキル、およびヘテロアラルキルカルボニルオキシアルキル（ｈｅｔｅｒｏａｒａｌｋｃａｒｂｏｎｙｌｏｘｙａｌｋｙｌ）。現在特に好ましい化合物が得られ、ここでＲ１０、Ｒ１１、Ｒ１３およびＲ１４は水素であり、そしてＲ１２はハロ、低級アルキル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、ハロ低級アルキル、アミノカルボニル、アルキルアミノカルボニルおよびシアノからなる群より選択される；Ｒ１１、Ｒ１３およびＲ１４は水素であり、Ｒ１０およびＲ１２はハロ、低級アルキル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、ハロ低級アルキル、およびシアノからなる群から独立して選択される；Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１３およびＲ１４は水素であり、そしてＲ１２はヘテロアリールである；Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１３およびＲ１４は水素であり、そしてＲ１２は、ヘテロシクリルである。そして、ここでＲ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３およびＲ１４の少なくとも１つはハロであり、そしてＲ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３およびＲ１４の残りは水素である。好ましくは、Ｒ５およびＲ７の少なくとも１つが、以下からなる群から選択される：ジクロロフェニル、ジフルオロフェニル、トリフルオロメチルフェニル、クロロフルオロフェニル、ブロモクロロフェニル、エチルフェニル、メチルクロロフェニル、イミダゾリルフェニル、シアノフェニル、モルホリノフェニルおよびシアノクロロフェニル。
【００４１】
本発明の他の代表的な実施形態において、式（Ｉ）のＲ６は、以下であり得る：置換アルキル（例えば、アラルキル、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、アミノアラルキル、カルボニルアミノアルキル、アルキルカルボニルアミノアルキル、アリールカルボニルアミノアルキル、アラルキルカルボニルアミノアルキル、アミノアルコキシアルキルおよびアリールアミノアルキル）；置換アミノ（例えば、アルキルアミノアルキルカルボニルアミノ、アルコキシカルボニルアミノ、アリールアルキルアミノ、アリールカルボニルアミノアルキルチオカルボニルアミノ、アリールスルホニルアミノ、ヘテロアリールアミノアルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、ヘテロアリールカルボニルアミノ、アラルキル−カルボニルアミノ、およびヘテロアラルキルカルボニルアミノ）；または置換カルボニル（例えば、置換または非置換のアミノカルボニル、アルキルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、アラルキルオキシカルボニルおよびアルキルアミノアルキルオキシカルボニル）。他の実施形態において、Ｒ６は、アミジノ、グアニジノ、シクロイミド、ヘテロシクロイミド、シクロアミド、ヘテロシクロアミド、シクロチオアミドおよびヘテロシクロ低級アルキルからなる群より選択され得る。他の実施形態において、Ｒ６は、アリールまたはヘテロアリール（例えば、置換または非置換のピリジル、ピリミジニル、チアゾリル、インドリル、イミダゾリル、オキサジアゾリル、テトラゾリル、ピラジニル、トリアゾリル、チエニル、フラニル、キノリニル、ピロロピリジル（ｐｙｒｒｏｌｙｏｐｙｒｉｄｙｌ）、ベンゾチアゾリル、ベンゾピリジル、ベンゾトリアゾリル、およびベンズイミダゾリル）であり得る。
【００４２】
本明細書中で使用される場合、代表的なヘテロシクロ基としては、例えば、以下に示される基が挙げられる（ここで、置換基および以下に示される他の置換基の結合点は、左上の結合を介する）。本明細書中の開示と関連して、有機化学および医化学の分野における当業者にとって明らかであるように、これらのヘテロシクロ基はさらに置換され得、そして種々の位置で結合され得る。
【００４３】
【化４】
2005525362.tif 000006
代表的なヘテロアリール基としては、例えば、以下に示される基が挙げられる。本明細書中の開示と関連して、有機化学および医化学の分野における当業者にとって明らかであるように、これらのテロアリール基はさらに置換され得、そして種々の位置で結合され得る。
【００４４】
【化５】
2005525362.tif 000007
代表的なシクロイミド基およびヘテロシクロイミド基としては、例えば、以下に示される基が挙げられる。本明細書中の開示と関連して、有機化学および医化学の分野における当業者にとって明らかであるように、これらのシクロイミドおよびヘテロシクロイミドはさらに置換され得、そして種々の位置で結合され得る。
【００４５】
【化６】
2005525362.tif 000008
【００４６】
【化７】
2005525362.tif 000009
代表的な置換アミジノ基およびヘテロシクロアミジノ基としては、例えば、以下に示される基が挙げられる。本明細書中の開示と関連して、有機化学および医化学の分野における当業者にとって明らかであるように、これらのアミジノ基およびヘテロシクロアミジノ基はさらに置換され得る。
【００４７】
【化８】
2005525362.tif 000010
代表的な置換したアルキルカルボニルアミノ基、アルキルオキシカルボニルアミノ基、アミノアルキルオキシカルボニルアミノ基、およびアリールカルボニルアミノ基としては、例えば、以下に示される基が挙げられる。本明細書中の開示と関連して、有機化学および医化学の分野における当業者にとって明らかであるように、これらの基はさらに置換され得る。
【００４８】
【化９】
2005525362.tif 000011
代表的な置換されたアミノカルボニル基としては、例えば、以下に示される基が挙げられる。本明細書中の開示と関連して、有機化学および医化学の分野における当業者にとって明らかであるように、これらのヘテロシクロ基はさらに置換され得る。
【００４９】
【化１０】
2005525362.tif 000012
代表的な置換したアルコキシカルボニル基としては、例えば、以下に示される基が挙げられる。本明細書中の開示と関連して、有機化学および医化学の分野における当業者にとって明らかであるように、これらのアルコキシカルボニル基はさらに置換され得る。
【００５０】
【化１１】
2005525362.tif 000013
本発明のいくつかの実施形態において、ＧＳＫ３インヒビター化合物としては、以下の構造：
【００５１】
【化１２】
2005525362.tif 000014
を有する化合物およびそれらの薬学的に受容可能な塩が挙げられ、ここで、Ｘ、Ｒ１−Ｒ６、およびＲ８−Ｒ１４は、上に記載された意味を有する。本発明の好ましい、この基の代表的な基としては、例えば、以下が挙げられる：［４−（４−イミダゾリルフェニル）ピリミジン−２−イル］｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミン、４−［５−イミダゾリル−２−（｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝−アミノ）ピリミジン−４−イル］ベンゼンカルボニトリル、４−［２−（｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］−エチル｝アミノ）−５−イミダゾリルピリミジン−４−イル］ベンゼンカルボニトリル、［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−イミダゾリルピリミジン−２−イル］｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミン、４−［２−（｛２−（（５−ニトロ−２−ピリジル）アミノ］エチル｝アミノ）−７ａ−ヒドロ−１，２，４−トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］ベンゼン−カルボニトリル、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−イミダゾリルピリミジン−２−イル］アミン、［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−イミダゾール−２−イルピリミジン−２−イル］｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミン、６−［（２−｛［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−イミダゾリルピリミジン−２−イル］アミノ｝エチル）アミノ］ピリジン−３−カルボニトリル、［５−ベンゾトリアゾリル−４−（２，４−ジクロロフェニル）ピリミジン−２−イル］｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミン、［２−（｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミノ）４−（２，４−ジクロロフェニル）ピリミジン−５−イル］−メタン−１−オール、［４，｛２，４−ジクロロフェニル）−２−（｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミノ）−ピリミジン−５−イル］メタン−１−オール、２−［２−（｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミノ）−４−（２，４−ジクロロフェニル）ピリミジン−５−イル］イソインドリン（ｉｓｏｉｎｄｏｌｉｎｅ）−１，３−ジオン、［５−アミノ−４−（２，４−ジクロロ−フェニル）ピリミジン−２−イル］｛２−｛（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミン、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−モルホリン−４−イル−ピリミジン−２−イル］アミン、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝｛４−｛２，４−ジクロロ−フェニル）−５−［５−（トリフルオロメチル）（１，２，３，４−テトラゾリル）］ピリミジン−２−イル｝アミン、１−［２−（｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミノ）−４−（２，４−ジクロロフェニル）ピリミジン−５−イル］−ピロリジン−２，５−ジオン、（４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−ピラゾリルピリミジン−２−イル］｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル）アミン、（４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（４−メチルイミダゾリル）ピリミジン−２−イル］｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミン、（４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（２，４−ジメチル−イミダゾリル）ピリミジン−２−イル］｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル）アミン、６−［（２−｛［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−イミダゾール−２−イルピリミジン−２−イル］アミノ｝エチル）アミノ］ピリジン−３−カルボニトリル、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（モルホリン−４−イルメチル）ピリミジン−２−イル］アミン、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］−エチル｝［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−ピペラジニルピリミジン−２−イル］アミン、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝［４−（４−エチルフェニル）−５−イミダゾリルピリミジン−２−イル］アミン、１−［４−（２，４−ジクロロフェニル）−２−（｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミノ）ピリミジン−５−イル］ヒドロピリジン−２−オン、［５−ベンズイミダゾリル−４−（２，４−ジクロロフェニル）ピリミジン−２−イル］｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミン、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ）エチル｝［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−イミダゾリルピリミジン−２−イル］メチルアミン、｛２−（（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（４−ピリジル）ピリミジン−２−イル］アミン、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（４−メチルピペラジニル）−ピリミジン−２−イル］アミン、［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（２−メチルイミダゾリル）ピリミジン−２−イル］｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミン、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］−エチル）（４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（２−メチルイミダゾリル）ピペリジン−２−イル］アミン、｛２−（（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝（４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（４−フェニルイミダゾリル）−ピリミジン−２−イル］アミン、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル）［４−（２，４−ジクロロ−フェニル）−５−（２，４−ジメチルイミダゾリル）ピリミジン−２−イル］アミン、［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５．イミダゾール−２−イルピリミジン−２−イル］（２−｛［５−トリフルオロメチル）（２−ピリジル）］アミノ｝エチル）アミン、［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−ピペラジニルピリミジン−２−イル］｛２［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝−アミン、［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−イミダゾリルピリミジン−２−イル］［２−（ジメチルアミノ）エチル］｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミン、１−（２−（｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］−エチル）アミノ）４−（２，４−ジクロロフェニル）ピリミジン−５−イル］−４−メチルピペラジン−２，６−ジオン、［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（１−メチルイミダゾール−２−イル）ピリミジン−２−イル］｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル）アミン、１−［２−（｛２−｛（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミノ）−４−（２，４−ジクロロフェニル）ピリミジン−５−イル］−３−モルホリン−４−イルピロリジン−２，５−ジオン、１−［４−（２，４−ジクロロフェニル）−２−（｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル）アミノ）ピリミジン−５−イル］−４−メチルピペラジン−２，６−ジオン、１−［２−（｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル）アミノ）−４−（２，４−ジクロロフェニル）ピリミジン−５−イル］−３−（ジメチルアミノ）ピロリジン−２，５−ジオン、｛５−イミダゾール−２−イル−４−［４−（トリフルオロメチル）フェニル］ピリミジン−２−イル｝｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］−エチル｝アミン、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−｛１−メチルイミダゾール−２−イル）ピリミジン−２−イル］アミン、［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（４−メチル−ピペラジニル）ピリミジン−２−イル］｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミン、［４−（２，４−ジクロロ−フェニル）−５−（モルホリン−４−イルメチル）ピリミジン−２−イル］｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミン、［４−２，４−ジクロロフェニル）−５−（４−メチルイミダゾール−２−イル）ピリミジン−２−イル］｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノエチル｝アミン、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル）［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（４−メチルイミダゾール−２−イル）ピリミジン−２−イル］アミン、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝［４−（２−クロロフェニル）−５−イミダゾール−２−イルピリミジン−２−イル］アミン、［４−（２−クロロ−４−フルオロフェニル）−５−イミダゾール−２−イルピリミジン−２−イル］｛２−［（５−ニトロ（２−７ピリジル））−アミノ］エチル）アミン、［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−イミダゾリルピリミジン−２−イル］｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝（２−ピロリジニルエチル）アミン、［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−イミダゾリル−ピリミジン−２−イル］（２−モルホリン−４−イルエチル）｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミン、６−［（２−｛［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（４−メチルイミダゾール−２−イル）ピリミジン−２−イル］アミノ｝エチル）アミノ］−ピリジン−３−カルボニトリル、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝［４−（２−クロロ−４−フルオロフェニル）−５−イミダゾール−２−イルピリミジン−２−イル］アミン、［４−（４−エチルフェニル）−５−イミダゾール−２−イルピリミジン−２−イル］｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミン、［５−（（１Ｅ）−１−アザ−２−モルホリン−４−イルプロプ−１−エニル）−４−（２，４−ジクロロフェニル）ピリミジン−２−イル］｛２−｛（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミン、Ｎ−［４−（２，４−ジクロロフェニル）−２−（｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミノ）ピリミジン−５−イル］アセトアミド、［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−イミダゾール−２−イルピリミジン−２−イル］｛２−｛（６−メトキシ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミン、６−［（２−｛［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−イミダゾリルピリミジン−２−イル］メチルアミノ｝エチル）アミノ］−ピリジン−３−カルボニトリル、６−｛（２−｛（４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−イミダゾール−２−イルピリミジン−２−イル］メチルアミノ｝エチル）アミノ］ピリジン−３−カルボニトリル、（４−｛２，４−ジクロロフェニル）−５−イミダゾール−２−イルピリミジン−２−イル］メチル｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミン、６−［（２−｛［４−（２−クロロ−４−フルオロフェニル）−５−イミダゾール−２−イルピリミジン−２−イル］アミノ｝エチル）アミノ］−ピリジン−３−カルボニトリル、［４−（４−クロロフェニル）−５−イミダゾール−２−イルピリミジン−２−イル］｛２−［（５−ニトロ−（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミン、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル）［４−（４−クロロ−２−メチルフェニル）−５−イミダゾール−２−イルピリミジン−２−イル］アミン、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝［４−（４−ブロモ−２−クロロフェニル）−５−イミダゾール−２−イルピリミジン−２−イル］−アミ
ン、６−［（２−｛［４−（４−ブロモ−２−クロロフェニル）−５−イミダゾール−２−イルピリミジン−２−イル］アミノ｝エチル）−アミノ］ピリジン−３−カルボニトリル、６−［２−（｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝−アミノ）−４−（２，４−ジクロロフェニル）ピリミジン−５−イル］−３−ピロロリノ［３，４−ｂ］ピリジン−５，７−ジオン、Ｎ−［２−（｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミノ）−４−（２，４−ジクロロフェニル）−ピリミジン−５−イル］−２−（メチルアミノ）アセトアミド、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］−エチル｝［４−（４−ブロモ−２−クロロフェニル）−５−（４−メチルイミダゾール−２−イル）ピリミジン−２−イル］アミン、６−［（２−｛［４−（４−ブロモ−２−クロロフェニル）−５−（４−メチルイミダゾール−２−イル）ピリミジン−２−イル］アミノ｝−エチル）アミノ］ピリジン−３−カルボニトリル、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝［４−（２−クロロ−４−フルオロフェニル）−５−（４−メチルイミダゾール−２−イル）ピリミジン−２−イル）アミン、および６−［（２−｛［４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（５−クロロ−２−オキソヒドロピリジル）ピリミジン−２−イル］アミノ｝エチル）−アミノ］ピリジン−３−カルボニトリル。
【００５２】
現在、特に好ましい本発明の他の化合物としては、以下の構造：
【００５３】
【化１３】
2005525362.tif 000015
を有する化合物が挙げられ、ここで、Ｘ、Ｒ１〜Ｒ６、およびＲ８〜Ｒ１４は、上記の意味を有し、そしてＲ１５は、水素、ニトロ、シアノ、アミノ、アルキル、ハロ、ハロ低級アルキル、アルキルオキシカルボニル、アミノカルボニル、アルキルスルホニル、およびアリールスルホニル、ならびにこれらの薬学的に受容可能な塩からなる群から選択される。現在、好ましいこの群の代表的な化合物としては、例えば、以下が挙げられる：［６−（２，４−ジクロロフェニル）−５−イミダゾリル（２−ピリジル）］｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミン、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝［６−（２，４−ジクロロフェニル）−５−イミダゾリル（２−ピリジル）］アミン、６−［（２−｛［６−（２，４−ジクロロフェニル）−５−イミダゾリル−２−ピリジル］アミノ｝エチル）アミノ］ピリジン−３−カルボニトリル、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝［６−（２，４−ジクロロフェニル）−５−ニトロ（２−ピリジル）］アミン、｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝［６−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（４−メチルイミダゾリル）（２−ピリジル）］アミン、６−［（２−｛［６−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（４−メチルイミダゾリル）−２−ピリジル］−アミノ｝エチル）アミノ］ピリジン−３−カルボニトリル、および［４−（４−ブロモ−２−クロロフェニル）−５−イミダゾール−２−イルピリミジン−２−イル］｛２−［（５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミン。
【００５４】
他の実施形態において、本発明の実施において使用されるＧＳＫ３インヒビター化合物としては、以下の米国特許出願および国際特許出願に開示されるようなＧＳＫ３インヒビター化合物が挙げられる：公開番号２００２０１５６０８７、ＷＯ０２２０４９５およびＷＯ９９６５８９７（ピリミジンおよびピリジンベースの化合物）；２００３０００８８６６、２００１００４４４３６およびＷＯ０１４４２６（二環式ベースの化合物）；２００１００３４０５１（ピラジンベースの化合物）；ならびにＷＯ９８１６５２８（プリンベースの化合物）。さらに、本発明の文脈において有用なさらなるＧＳＫ３阻害性化合物としては、ＷＯ０２２２５９８（キノリノンベースの化合物）に開示される化合物が挙げられる。これらの国際公開公報の全体の開示は、本明細書で参考として援用される。
【００５５】
別の局面において、本発明は、虚血性発作の処置のための１つ以上のさらなる薬剤と組み合わせて、少なくとも１つのＧＳＫ３インヒビター化合物を含む治療組成物を提供し、これらは、一般的に、発作治療に使用される。有用なさらなる薬剤としては、例えば、血流を妨害する凝血塊を溶解（ｄｉｓｓｏｌｖｅ）（溶解（ｌｙｓｅ））することによって大脳循環を再確立するのに役立つ血栓溶解性薬剤および／またはフィブリン溶解性薬剤、虚血カスケードの影響を最小限にするように作用する神経保護剤、抗凝固剤および抗血小板剤が挙げられる。代表的な血栓溶解剤としては、例えば、以下が挙げられる：アルテプラーゼ（ａｌｔｅｐｌａｓｅ）（組織プラスミノーゲンアクチベーター（ｔ−ＰＡ））（これは、プラスミノーゲンを酵素プラスミンに変換または活性化して凝血塊を溶解する、身体に天然に存在する酵素である）；アニストレプラーゼ（ａｎｉｓｔｒｅｐｌａｓｅ）；レテプラーゼ（ｒｅｔｅｐｌａｓｅ）；ウロキナーゼ；およびストレプトキナーゼ。代表的な神経保護剤としては、例えば、以下が挙げられる：グルタミン酸の神経への進行に干渉するグルタメートアンタゴニスト、電気的に操作されるチャネルを介してカルシウムの細胞内構築をブロックするカルシウムアンタゴニスト、アヘン剤レセプター（これは、細胞死の間に生じる虚血カスケードによって過剰刺激される）に対して作用することによって虚血カスケードに干渉するアヘン剤アンタゴニスト、ＧＡＢＡ−Ａアゴニスト（例えば、Ｃｌｏｍｅｔｈｉａｚｏｌｅ（Ａｓｔｒａ）であり、これは、ＧＡＢＡ−Ａレセプターを活性化し、それにより、特定のグルタメートレセプターの電気的活性を打ち消す）、カルパインインヒビター、ＮＭＤＡレセプターアンタゴニスト（例えば、Ｃ−１０１，６０６（Ｐｆｉｚｅｒ））、Ｋ＋チャネルモジュレーター（例えば、ＢＭＳ−２０４３５２（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ））、ＰＤＨキナーゼインヒビター、および虚血カスケードによって生成される遊離ラジカルを捕集する抗酸化剤。さらに、本発明の方法および化合物は、酸素添加フルオロカーボン栄養エマルジョン（ＯＦＮＥ）治療および／または神経再灌流と組み合わせて使用され得、ここで、酸素が豊富な血液が、脳を通って別ルートで送られ、虚血性発作からの損傷を低減する。代表的な抗凝固剤としては、例えば、以下が挙げられる：ヘパリン、ワーファリン、ダルテパリン（ｄａｌｔｅｐａｒｉｎ）、ダナパロイド（ｄａｎａｐａｒｏｉｄ）、エノキサパリン（ｅｎｏｘａｐａｒｉｎ）、チンザパリン（ｔｉｎｚａｐａｒｉｎ）、４−ヒドロキシクマリン、ジクマロール、フェンプロクモン、アセノクマロール、アニシンダン（ａｎｉｓｉｎｄｏｎｅ）、レピルジン（ｌｅｐｉｒｕｄｉｎ）およびインダン−１，３−ジオン。代表的な抗血小板剤としては、例えば、以下が挙げられる：アスピリン、クロピドグレル（ｃｌｏｐｉｄｏｇｒｅｌ）、チクロピジン、アブシキマブ、エプチフィバチド（ｅｐｔｉｆｉｂａｔｉｄｅ）、チロフィバン（ｔｉｒｏｆｉｂａｎ）およびジピリダモール（ｄｉｐｙｒｉｄａｍｏｌ）。
【００５６】
上記および本明細書の他の場所で使用される場合、以下の用語は、下記に定義される意味を有する：
「グリコーゲンシンターキナーゼ３」および「ＧＳＫ３」は、本明細書で交換可能に使用され、ヒトＧＳＫ３βアミノ酸配列（Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号Ｌ３３８０１）の５６位と３４０位との間のアミノ酸と６０％より高い配列相同性を有する任意のタンパク質をいう。２つのアミノ酸配列または２つの核酸の％相同性を決定するために、これらの配列は、最適な比較目的のために整列される（例えば、一方のポリペプチド配列または核酸配列との最適な整列のために、他方のポリペプチドまたは核酸にギャップが導入され得る）。次いで、対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置におけるアミノ酸残基またはヌクレオチドが、比較される。一方の配列における位置が、他方の配列における対応する位置のように同じアミノ酸残基またはヌクレオチドによって占められる場合、従って、これらの分子は、その位置で相同性である（すなわち、本明細書で使用される場合、アミノ酸または核酸の「相同性」は、アミノ酸または核酸の「同一性」と等価である）。２つの配列間の％相同性は、配列によって共有される同一の位置の数の関数である（すなわち、％相同性＝同一位置の数／位置の合計数×１００）。ＧＳＫ３は、元々、Ｗｏｏｄｇｅｔｔら，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．，１６：１７７−８１（１９９１）（本明細書で参考として援用される）に記載されるように、グリコーゲンシンターゼのリン酸化によって同定された。ＧＳＫ３キナーゼ活性を阻害することによって、ＧＳＫ３活性の下流の活性が、阻害され得るか、あるいは、刺激され得る。例えば、ＧＳＫ３活性が阻害される場合、グリコーゲンシンターゼは活性化され得、その結果、グリコーゲン生成が増加する。ＧＳＫ３はまた、種々の他の状況においてキナーゼとして作用することも知られており、この作用としては、例えば、ｃ−ｊｕｎ、β−カテニン、およびｔａｕタンパク質のリン酸化が挙げられる。ＧＳＫ３キナーゼ活性の阻害は、種々の生物学的状況における種々の効果をもたらし得ることが理解される。しかし、本発明は、本発明がいかに作用するかに関して、いかなる機構の理論にも限定されない。
【００５７】
「ＧＳＫ３インヒビター」は、本明細書において以下に一般的に記載されるＧＳＫ３阻害活性についての無細胞アッセイにおいて測定されるように、ＧＳＫ３に対して約１００μＭ以下、より代表的には約５０μＭ以下のＩＣ５０を呈する化合物を称するように本明細書中で使用される。「ＩＣ５０」は、酵素（例えば、ＧＳＫ３）の活性を最大レベルの半分まで低下させるインヒビターの濃度である。本発明の代表的な化合物は、ＧＳＫ３に対して阻害活性を呈することが発見されている。本発明の化合物は、好ましくは、無細胞ＧＳＫ３キナーゼ活性において測定されるように、ＧＳＫ３に対して約１０μＭ以下、より好ましくは、約５μＭ以下、さらに好ましくは、約１μＭ以下、そして最も好ましくは約２００ｎＭのＩＣ５０を呈する。
【００５８】
「必要に応じて置換された」とは、一価ラジカルまたは二価ラジカルによる水素の置換をいう。適切な置換基としては、例えば、以下が挙げられる：ヒドロキシル、ニトロ、アミノ、イミノ、シアノ、ハロ、チオ、チオアミド、アミジノ、イミジノ、オキソ、オキサミジノ、メトキサミジノ、イミジノ、グアニジノ、スルホアミド、カルボキシル、ホルミル、低級アルキル、ハロ低級アルキル、低級アルコキシ、ハロ低級アルコキシ、低級アルコキシアルキル、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アラルキルカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、ヘテロアラルキルカルボニル、アルキルチオ、アミノアルキル、シアノアルキルなど。
【００５９】
置換基は、それ自体置換され得る。置換基上に置換される基は、カルボニル、ハロ、ニトロ、アミノ、シアノ、ヒドロキシル、低級アルキル、低級アルコキシ、アミノカルボニル、−ＳＲ、チオアミド、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２Ｒまたはシクロアルキルであり得、ここで、Ｒは、代表的に、水素、ヒドロキシルまたは低級アルキルである。
【００６０】
置換された置換基が直鎖基を含む場合、置換は、鎖中（例えば、２−ヒドロキシプロピル、２−アミノブチルなど）または鎖の末端（例えば、２−ヒドロキシエチル、３−シアノプロピルなど）のいずれかで生じ得る。置換された置換基は、共有結合された炭素またはヘテロ原子の直鎖、分枝鎖または環状配置であり得る。
【００６１】
「低級アルキル」は、本明細書中で使用される場合、分枝鎖または直鎖のアルキル基をいい、置換されていないか、または、例えば、１つ以上のハロゲン、ヒドロキシルまたは他の基（例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、ネオペンチル、トリフルオロメチル、ペンタフルオロメチルなどが挙げられる）により置換されている１〜１０個の炭素原子を含む。
【００６２】
「アルキレニル」とは、１〜２０個の炭素原子を有する二価の直鎖または分枝鎖の飽和脂肪族ラジカルをいう。本発明の化合物において使用される代表的なアルキレニル基は、骨格に１個〜約６個の炭素原子を有する低級アルキレニル基である。「アルケニル」とは、本明細書において、１つ以上の二重結合を有し、かつ２〜２０個の炭素原子を有する直鎖、分枝鎖、または環状ラジカルをいう。「アルキニル」とは、本明細書において、１つ以上の三重結合を有し、かつ２〜２０個の炭素原子を有する直鎖、分枝鎖、または環状ラジカルをいう。
【００６３】
「低級アルコキシ」とは、本明細書中で使用される場合、ＲＯ−をいい、ここで、Ｒは低級アルキルである。低級アルコキシ基の代表的な例としては、メトキシ、エトキシ、ｔ−ブトキシ、トリフルオロメトキシなどが挙げられる。
【００６４】
「シクロアルキル」とは、単環式または多環式、ヘテロ環式または炭素環式アルキル置換基をいう。代表的なシクロアルキル置換基は、３〜８個の骨格（すなわち、環）原子を有し、ここで、各骨格原子は、炭素またはヘテロ原子のいずれかである。用語「ヘテロシクロアルキル」とは、本明細書において、１〜５個、そしてより代表的には１〜４個のへテロ原子をその環構造に有するシクロアルキル置換基をいう。本発明の化合物において使用される適切なヘテロ原子は、窒素、酸素および硫黄である。代表的なヘテロシクロアルキル部分としては、例えば、モルホリノ、ピペラジニル（ｐｉｐｅｒａｚｉｎｙｌ）、ピペラジニル（ｐｉｐｅｒａｄｉｎｙｌ）などが挙げられる。カルボシクロアルキル基は、全ての環原子が炭素であるシクロアルキル基である。シクロアルキル置換基と組み合わせて使用される場合、用語「多環式」とは、本明細書において、融合および非融合のアルキル環構造をいう。
【００６５】
「ハロ」とは、本明細書において、ハロゲンラジカル（例えば、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素）をいう。「ハロアルキル」とは、１つ以上のハロゲン原子によって置換されたアルキルラジカルをいう。用語「ハロ低級アルキル」とは、１つ以上のハロゲン原子によって置換された低級アルキルラジカルをいう。用語「ハロアルコキシ」とは、１つ以上のハロゲン原子によって置換されたアルコキシラジカルをいう。用語「ハロ低級アルコキシ」とは、１つ以上のハロゲン原子によって置換された低級アルコキシラジカルをいう。
【００６６】
「アリール」とは、３〜１４個の骨格炭素またはヘテロ原子を有する単環式および多環式の芳香族基をいい、炭素環アリール基およびヘテロ環アリール基の両方を含む。炭素環アリール基は、芳香族環の全ての環原子が炭素であるアリール基をいう。用語「ヘテロアリール」とは、本明細書において、芳香族環の環原子として１〜４個のへテロ原子を有するアリール基をいい、残りの環原子は、炭素得原子である。アリール置換基と組み合わせて使用される場合、用語「多環式」とは、本明細書において、少なくとも１つの環構造が、例えば、ベンゾジオキソゾロ（これは、フェニル基に融合されたヘテロ環構造、すなわち
【００６７】
【化１４】
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、ナフチルなどを有する）のような芳香族である融合および非融合環構造をいう。本発明の化合物における置換基として使用される例示的なアリール部分としては、以下が挙げられる：フェニル、ピリジル、ピリミジル、チアゾリル、インドリル、イミダゾリル、オキサジアゾリル、テトラゾリル、ピラジニル、トリアゾリル、チオフェニル、フラニル、キノリニル、プリニル、ナフチル、ベンゾチアゾリル、ベンゾピリジル、およびベンゾイミダゾリルなど。
【００６８】
「アラルキル」とは、１つのアリール基によって置換されたアルキル基をいう。代表的に、本発明の化合物において使用されるアラルキル基は、アラルキル基のアルキル部分に組み込まれた１〜６個の炭素原子を有する。本発明の化合物において使用される適切なアラルキル基としては、例えば、ベンジル、ピコリルなどが挙げられる。
【００６９】
「アミノ」とは、本明細書において、基−ＮＨ２をいう。用語「アルキルアミノ」とは、本明細書において、基−ＮＲＲ’をいい、ここで、ＲおよびＲ’は、各々独立して、水素または低級アルキルから選択される。用語「アリールアミノ」とは、本明細書において、基−ＮＲＲ’をいい、ここで、Ｒはアリールであり、Ｒ’は水素、低級アルキル、またはアリールである。用語「アラルキルアミノ」とは、本明細書において、基−ＮＲＲ’をいい、ここで、Ｒは低級アルキル、Ｒ’は水素、低級アルキル、アリールまたは低級アラルキルである。
【００７０】
用語「アリールシクロアルキルアミノ］とは、本明細書中において、基アリール−シクロアルキル−ＮＨ−をいい、ここで、シクロアルキルは、二価のシクロアルキル基である。代表的に、シクロアルキルは、３〜６個の骨格原子を有し、このうち、必要に応じて、１〜約４個がヘテロ原子である。用語「アミノアルキル」とは、アミノ基で末端が置換されたアルキル基をいう。
【００７１】
用語「アルコキシアルキル」とは、基−ａｌｋ１−Ｏ−ａｌｋ２をいい、ここで、ａｌｋ１は、アルキレニルまたはアルケニルであり、そしてａｌｋ２はアルキルまたはアルケニルである。用語「低級アルコキシアルキル」とは、ａｌｋ１が低級アルキレニルまたは低級アルケニルであり、そしてａｌｋ２が低級アルキルまたは低級アルケニルであるアルコキシアルキルをいう。用語「アリールオキシアルキル」とは、基−アルケニル−Ｏ−アリールをいう。用語「アラルコキシアルキル」とは、基−アルケニル−Ｏ−アラルキルをいい、ここで、アラルキルは、低級アラルキルである。
【００７２】
用語「アルコキシアルキルアミノ」とは、本明細書中において、基−ＮＲ−（アルコキシアルキル）をいい、ここで、Ｒは、代表的に、水素、低級アラルキル、または低級アルキルである。用語「アミノ低級アルコキシアルキル」とは、本明細書中において、アルコキシアルキルが低級アルコキシアルキルであるアミノアルコキシアルキルをいう。
【００７３】
用語「アミノカルボニル」とは、本明細書中において、基−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ２をいう。「置換アミノカルボニル」とは、本明細書中において、基−Ｃ（Ｏ）−ＮＲＲ’をいい、ここで、Ｒは、低級アルキルであり、そしてＲ’は、水素または低級アルキルである。用語「アリールアミノカルボニル」とは、本明細書中において、基−Ｃ（Ｏ）−ＮＲＲ’をいい、ここで、Ｒは、アリールであり、そしてＲ’は、水素、低級アルキル、またはアリールである。「アラルキルアミノカルボニル」とは、本明細書中において、基−Ｃ（Ｏ）−ＮＲＲ’をいい、ここで、Ｒは、低級アラルキルであり、そしてＲ’は、水素、低級アルキル、アリール、または低級アラルキルである。
【００７４】
「アミノスルホニル」とは、本明細書中において、基−Ｓ（Ｏ）２−ＮＨ２をいう。「置換アミノスルホニル」とは、本明細書中において、基−Ｓ（Ｏ）２−ＮＲＲ’をいい、ここで、Ｒは、低級アルキルであり、そしてＲ’は、水素または低級アルキルである。用語「アラルキルアミノスルホニルアリール」とは、本明細書中において、基−アリール−Ｓ（Ｏ）２−ＮＨ−アラルキルをいい、ここで、アラルキルは、低級アラルキルである。
【００７５】
「カルボニル」とは、二価基−Ｃ（Ｏ）−をいう。
【００７６】
「カルボニルオキシ」とは、一般的に、基−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−をいう。このような基としては、エステル、−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ（ここで、Ｒは、低級アルキル、シクロアルキル、アリール、または低級アラルキルである）が挙げられる。用語「カルボニルオキシシクロアルキル」とは、一般的に、本明細書中において、「カルボニルオキシカルボシクロアルキル」および「カルボニルオキシヘテロシクロアルキル」の両方をいう（すなわち、Ｒは、それぞれ、カルボシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルである）。用語「アリールカルボニルオキシ」とは、本明細書中において、基−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−アリールをいい、ここで、アリールは、単環式または多環式の、カルボシクロアリールまたはヘテロシクロアリールである。用語「アラルキルカルボニルオキシ」とは、本明細書中において、基−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−アラルキルをいい、ここで、このアラルキルは、低級アラルキルでる。
【００７７】
用語「スルホニル」とは、本明細書中において、基−ＳＯ２−をいう。「アルキルスルホニル」とは、構造−ＳＯ２Ｒの置換スルホニルをいい、ここで、Ｒは、アルキルである。本発明の化合物において使用されるアルキルスルホニル基は、代表的に、その骨格構造に１〜６個の炭素原子を有する低級アルキルスルホニル基である。従って、本発明の化合物で使用される代表的なアルキルスルホニル基としては、例えば、メチルスルホニル（すなわち、Ｒは、メチルである）、エチルスルホニル（すなわち、Ｒは、エチルである）、プロピルスルホニル（すなわち、Ｒは、プロピルである）などが挙げられる。用語「アリールスルホニル」とは、本明細書中において、基−ＳＯ２−アリールをいう。用語「アラルキルスルホニル」とは、基−ＳＯ２−アラルキルをいい、ここで、このアラルキルは、低級アラルキルである。用語「スルホニルアミド」とは、本明細書中において、−ＳＯ２ＮＨ２をいう。
【００７８】
本明細書中において、使用される場合、用語「カルボニルアミノ」とは、二価基−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−をいい、ここで、このカルボニルアミノ基のアミド窒素の水素原子は、低級アルキル基、アリール基、または低級アラルキル基で置換され得る。このような基としては、カルバメートエステル（−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ）およびアミド−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＯＲのような部分が挙げられ、ここで、Ｒは、直鎖または分枝鎖の低級アルキル、シクロアルキル、またはアリールもしくは低級アラルキルである。用語「低級アルキルカルボニルアミノ」とは、アルキルカルボニルアミノをいい、ここで、Ｒは、その骨格構造に１〜６個の炭素原子を有する低級アルキルである。用語「アリールカルボニルアミノ」とは、基−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｒをいい、ここで、Ｒは、アリールである。同様に、用語「アラルキルカルボニルアミノ」とは、Ｒが低級アラルキルであるカルボニルアミノをいう。
【００７９】
本明細書中で使用される場合、用語「グアニジノ」または「グアニジル」とは、グアニジン、Ｈ２Ｎ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ２由来の部分をいう。このような部分としては、形式的に二重結合を有する窒素原子において結合された部分（グアニジンの「２」位（例えば、ジアミノメチレンアミノ、（Ｈ２Ｎ）２Ｃ＝ＮＨ−））ならびに形式的に単結合を有する窒素原子のいずれかで結合された部分（グアニジンの「１」位および／または「３」位（例えば、Ｈ２Ｎ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ−））が挙げられる。窒素のいずれかの水素原子は、低級アルキル、アリール、または低級アラルキルのような適切な置換基で置換され得る。
【００８０】
本明細書中で使用される場合、用語「アミジノ」とは、部分Ｒ−Ｃ（＝Ｎ）−ＮＲ’（ラジカルが「Ｎ１」窒素にある）およびＲ（ＮＲ’）Ｃ＝Ｎ−（ラジカルが、「Ｎ２」窒素にある）をいい、ここで、ＲおよびＲ’は、水素、低級アルキル、アリール、または低級アラルキルであり得る。
【００８１】
本発明の化合物は、本明細書中に記載される方法、または他の方法（当該分野において周知である）を使用して容易に合成され得る。例えば、上記式（Ｉ）のピリミジンおよびピリミジンベースの化合物の合成は、１９９９年１２月２３日に公開された国際特許出願公開番号ＷＯ９９−６５８９７（本明細書中において参考として援用される）に記載されるように容易に合成され得る。
【００８２】
本発明の化合物は、好ましくは、少なくとも１つの他の型のキナーゼと比較して、ＧＳＫ３に対して、比較的実質的に選択的である阻害活性を示す。本明細書中で使用される場合、用語「選択的」とは、ＧＳＫ３に対する阻害について、少なくとも１つの他の型のキナーゼと比較して、比較的より大きな効力をいう。好ましくは、本発明のＧＳＫ３インヒビターは、ＧＳＫ３に関して、少なくとも２つの他の型のキナーゼと比較して、選択的である。ＧＳＫ３以外のキナーゼについてのキナーゼ活性のアッセイは、一般的に公知である。例えば、Ｈａｖｌｉｃｅｋら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４０：４０８−１２（１９９７）（本明細書中において参考として援用される）を参照のこと。ＧＳＫ選択性は、以下に従って定量化され得る：ＧＳＫ３選択性＝ＩＣ５０（他のキナーゼ）÷ＩＣ５０（ＧＳＫ３）（ここで、ＧＳＫ３インヒビターは、ＩＣ５０（他のキナーゼ）＞ＩＣ５０（ＧＳＫ３）である場合、ＧＳＫ３について選択的である）。従って、ＧＳＫ３に対して選択的であるインヒビターは、ＧＳＫ３以外のキナーゼの阻害に関して、１倍より大きいＧＳＫ３選択性を示す。本明細書中で使用される場合、用語「他のキナーゼ」とは、ＧＳＫ３以外のキナーゼをいう。このような選択性は、一般的に、以下の無細胞アッセイで測定される。
【００８３】
代表的に、本発明のＧＳＫ３インヒビターは、ＧＳＫ３について、別のキナーゼと比較して、少なくとも約２倍の選択性（すなわち、ＩＣ５０（他のキナーゼ）÷ＩＣ５０（ＧＳＫ３））を示し、より代表的には、これらは、少なくとも約５倍の選択性を示す。通常、本発明のＧＳＫ３インヒビターは、ＧＳＫ３について、少なくとも１つの他のキナーゼと比較して、少なくとも約１０倍、望ましくは、少なくとも約１００倍、より好ましくは、少なくとも約１０００倍の選択性を示す。
【００８４】
ＧＳＫ３阻害活性は、本明細書中に記載されるアッセイ、ならびに当業者に一般的に公知のアッセイを使用して容易に検出され得る。ＧＳＫ３の特異的なインヒビターを同定するための例示的な方法としては、無細胞アッセイおよび細胞ベースのＧＳＫ３キナーゼアッセイの両方が挙げられる。無細胞ＧＳＫキナーゼアッセイは、ポリペプチドＧＳＫ３と直接的に相互作用することによって作用するインヒビターを検出し、一方、細胞ベースのＧＳＫ３キナーゼアッセイは、ＧＳＫ３自体との直接的な相互作用によって、またはＧＳＫ３発現もしくは成熟活性ＧＳＫ３を産生するために必要とされる翻訳後プロセシングとの相互作用によってのいずれかで機能するインヒビターを同定し得る。
【００８５】
一般的に、無細胞ＧＳＫ３キナーゼアッセイは、以下により容易に実施され得る：（１）ＧＳＫ３をペプチド基質、放射標識ＡＴＰ（例えば、γ３３Ｐ−ＡＴＰまたはγ３２Ｐ−ＡＴＰ、両方ともＡｍｅｒｓｈａｍ、Ａｒｌｉｎｇｔｏｎ  Ｈｅｉｇｈｔｓ、Ｉｌｌｉｎｏｉｓから入手可能）、マグネシウムイオン、および必要に応じて１つ以上の候補阻害剤とともにインキュベーションすること；（２）この混合物を、ＧＳＫ３活性によって放射標識ホスフェートをペプチド基質に組み込むことを可能にする期間の間インキュベートすること；（３）酵素反応混合物の全てまたは一部を別の容器（代表的には、ペプチド基質上のアンカーリガンドに結合し得る均一な量の捕捉リガンドを含むマイクロタイターウェル）に移すこと；（４）未反応の放射標識ＡＴＰを除去するために洗浄すること；次いで（５）各ウェルに残る３３Ｐまたは３２Ｐの量を定量すること。この量は、ペプチド基質内に組み込まれる放射標識ホスフェートの量を表す。阻害は、ペプチド基質内への放射標識ホスフェートの組み込みの減少として観察される。
【００８６】
無細胞アッセイにおける使用のための適切なペプチド基質は、適切な量のＡＴＰの存在下で、ＧＳＫ３によりリン酸化され得る任意のペプチド、ポリペプチド、または合成ペプチド誘導体であり得る。適切なペプチド基質は、ＧＳＫ３の種々の天然のタンパク質基質の配列の一部に基づき得、そしてまた、Ｎ−末端改変またはＣ−末端改変、あるいは伸長（スペーサー配列およびアンカーリガンドを含む）を含み得る。従って、ペプチド基質は、より大きなポリペプチド内に存在し得るか、またはＧＳＫ３によるリン酸化のために設計された単離されたペプチドであり得る。
【００８７】
例えば、ペプチド基質は、ＤＮＡ結合タンパク質ＣＲＥＢの部分配列（例えば、Ｗａｎｇら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２２０：３９７−４０２（１９９４）（本明細書中において参考として援用される）に記載されるＣＲＥＢ  ＤＮＡ結合タンパク質内のＳＧＳＧ連結ＣＲＥＢペプチド配列）に基づいて設計され得る。Ｗａｎｇらによって報告されるアッセイにおいて、ＣＲＥＢペプチドのＳＸＸＸＳモチーフにおけるＣ末端セリンは、ｃＡＭＰ依存性プロテインキナーゼ（ＰＫＡ）によって酵素的に予めリン酸化され、この工程は、モチーフにおいて、ＧＳＫ３によってリン酸化可能なＮ末端セリンを提供することを必要とする。代替として、同じＳＸＸＸＳモチーフを有し、そしてまたＮ末端アンカーリガンドを含むが、予めリン酸化されたそのＣ末端セリンを用いて合成される改変ＣＲＥＢペプチド基質が使用され得る（このような基質は、Ｃｈｉｒｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ＰＴＹ  Ｌｔｄ．，Ｃｌａｙｔｏｎ，Ａｕｓｔｒａｌｉａから市販される）。ペプチド合成の間のＳＸＸＸＳモチーフの第２のセリンのリン酸化は、別の工程としてその残基を、ＰＫＡを用いて酵素的にリン酸化する必要性を排除し、そしてアンカーリガンドの組み込みは、ＧＳＫ３との反応後のペプチド基質の捕捉を促進する。
【００８８】
一般的に、キナーゼ活性アッセイのために使用されるペプチド基質は、ＧＳＫ３によりリン酸化可能である１つ以上の部位、および他のキナーゼによってリン酸化可能であるがＧＳＫ３によってはリン酸化可能ではない１つ以上の他の部位を含み得る。従って、これらの他の部位は、ＧＳＫ３によってリン酸化可能であるモチーフを作製するために予めリン酸化され得る。用語「予めリン酸化される」とは、本明細書中において、基質ペプチドを使用するキナーゼアッセイを実行する前に、非放射標識ホスフェートを用いる基質ペプチドのリン酸化をいう。このようなリン酸化は、ペプチド基質の合成の間、簡便に実施され得る。
【００８９】
ＳＧＳＧ連結ＣＲＥＢペプチドは、アンカーリガンド（例えば、ビオチン）に連結され得、ここで、ＰとＹとの間のＣ末端近くのセリンが予めリン酸化される。本明細書中で使用される場合、用語「アンカーリガンド」とは、捕捉リガンド上のペプチド基質の捕捉を容易にするためにペプチド基質に結合され得、そして洗浄工程の間、ペプチド基質を適所に保持するように機能し、なお未反応の放射標識ＡＴＰの除去を可能にするリガンドをいう。例示的なアンカーリガンドは、ビオチンである。用語「捕捉リガンド」とは、本明細書中において、高い親和性でアンカーリガンドに結合し得、そして固体構造に結合する分子をいう。結合捕捉リガンドの例としては、例えば、アビジンまたはストレプトアビジンでコーティングされたマイクロタイターウェルまたはアガロースビーズが挙げられる。捕捉リガンドを有するビーズは、さらに、捕捉された放射標識基質ペプチドを検出するための手段を提供するためのシンチラントと組み合わされ得るか、またはシンチラントは、後の工程において捕捉されたペプチドに添加され得る。
【００９０】
捕捉された放射標識ペプチド基質は、公知の方法を使用してシンチレーションカウンターで定量され得る。シンチレーションカウンターにおいて検出されるシグナルは、酵素反応が、ペプチド基質の限定された部分（２０％未満）のみがリン酸化される条件下で実施された場合に、ＧＳＫ３活性に比例する。インヒビターが反応の間に存在する場合、ＧＳＫ３活性は、減少し、従って、より少ない量の放射標識ホスフェートが、ペプチド基質に組み込まれる。従って、より少ないシンチレーションシグナルが検出される。結果として、ＧＳＫ３阻害活性は、反応の間、インヒビターが存在しないネガティブコントロールで観察される場合と比較して、シンチレーションシグナルの減少として検出される。
【００９１】
細胞ベースのＧＳＫ３キナーゼアッセイは、代表的に、ＧＳＫ３およびＧＳＫ３基質の両方を発現し得る細胞（例えば、ＧＳＫ３およびその基質をコードする遺伝子（遺伝子の発現のための調節制御配列を含む）を用いて形質転換された細胞）を利用する。細胞ベースのアッセイを実施する際に、遺伝子を発現し得る細胞を、本発明の化合物の存在下でインキュベートする。細胞を溶解し、そしてリン酸化形態の基質の割合を、例えば、ＳＤＳ  ＰＡＧＥでの非リン酸化形態に対するその移動度を観察することによってまたは基質のリン酸化形態に特異的な抗体によって認識される基質の量を決定することによって、決定される。基質のリン酸化の量は、化合物の阻害性活性の指標であり、すなわち、阻害は、インヒビター無しで実施されるアッセイと比較してリン酸化の減少として検出される。細胞ベースのアッセイで検出されるＧＳＫ阻害活性は、例えば、ＧＳＫ３の発現の阻害に起因し得るか、またはＧＳＫ３のキナーゼ活性の阻害によってであり得る。
【００９２】
従って、細胞ベースのアッセイはまた、ＧＳＫ３阻害によって関係する活性（例えば、ｔａｕタンパク質リン酸化の阻害、インシュリンシグナル伝達の増強など）を特異的にアッセイするために使用され得る。例えば、微小管関連タンパク質ｔａｕのアルツハイマー様リン酸化を阻害するＧＳＫ３インヒビターの能力を評価するために、細胞を、ヒトＧＳＫ３βおよびヒトｔａｕタンパク質を用いて同時トランスフェクトし得、次いで、１つ以上の候補インヒビターとともにインキュベートし得る。種々の哺乳動物細胞株および発現ベクターは、このタイプのアッセイのために使用され得る。例えば、ＣＯＳ細胞は、Ｓｔａｍｂｏｌｉｃら、１９９６、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ６：１６６４−６８（これは、本明細書中において、参考として援用される）に記載されるプロトコルに従うヒトＧＳＫ３β発現プラスミドと初期ＳＶ４０プロモーターの下でヒトｔａｕタンパク質コード配列を含むｐＳＧ５のような発現プラスミドとの両方によりトランスフェクトされ得る。Ｇｏｅｄｅｒｔら、ＥＭＢＯ  Ｊ．，８：３９３−３９９（１９８９）（本明細書中において参考として援用される）もまた参照のこと。ｔａｕのアルツハイマー様リン酸化は、細胞を溶解した後に、Ｐｏｌｙｍｅｒｄｃｏ  Ｉｎｃ．（Ｃｏｒｔｌａｎｄｔ  Ｍａｎｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）から入手可能な、例えばＡＴ８のような特異的抗体を用いて容易に検出され得る。このアッセイは、本明細書中以後の実施例にさらに詳細に記載される。
【００９３】
同様に、グリコーゲンシンターゼを活性化することによって、ＧＳＫ３インヒビター化合物がインシュリンシグナル伝達を増強する能力は、細胞ベースのグリコーゲンシンターゼ活性アッセイを使用して容易に確認され得る。このアッセイは、野生型インシュリンレセプターを過剰発現する（約１００，０００結合部位／細胞）ＣＨＯ−ＨＩＲＣ細胞株のようなグリコーゲンシンターゼ活性を増加することによって、インシュリン刺激に応答する細胞を使用する。ＣＨＯ−ＨＩＲＣ細胞株は、Ｍｏｌｌｅｒら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６５：１４９７９−１４９８５（１９９０）およびＭｏｌｌｅｒら、Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．，４：１１８３−１１９１（１９９０）（これらの両方が、本明細書中において参考として援用される）に記載されるように作製され得る。アッセイは、血清枯渇ＣＨＯ−ＨＩＲＣ細胞を種々の濃度の本発明の化合物の存在下で、培地中でインキュベートし、続いて、インキュベーション期間の最後に、細胞溶解をすることによって実施され得る。グリコーゲンシンターゼ活性は、Ｔｈｏｍａｓら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２５：４８６−４９９（１９６８）に記載されるように溶解物において検出され得る。グリコーゲンシンターゼ活性は、Ｔｈｏｍａｓら、上記に記載されるように、最大グリコーゲンシンターゼ活性の割合として各サンプルについて計算され、そして候補ＧＳＫ３インヒビター濃度の関数としてプロットされる。最大レベルの半分までグリコーゲンシンターゼ活性を増加するＧＳＫインヒビターの濃度（すなわち、ＥＣ５０）を、当業者に周知の慣用的なカーブフィッティング法を使用して、４つのパラメータＳ字状曲線に当てはめることによって計算され得る。これは、本明細書中以後に記載される実施例１にさらに詳細に記載される。
【００９４】
ＧＳＫ３インヒビターは、例えば、当業者に周知の方法を使用して、インビボ活性について容易にスクリーニングされ得る。例えば、２型糖尿病の処置において潜在的な治療活性を有する候補化合物は、２型糖尿病の動物モデルにおけるグルコース耐性を改善する能力を検出することによって容易に同定され得る。詳細には、候補化合物は、糖尿病マウス（例えば、ＫＫ、ｄｂ／ｄｂ、ｏｂ／ｏｂ）または糖尿病ラット（Ｚｕｃｋｅｒ  Ｆａ／ＦａまたはＧＫ）のいずれかにおいてグルコースのボーラスを投与する前にいくつかの経路のいずれかを使用して投薬され得る。候補化合物およびグルコースの投与に続いて、血液サンプルを、予め選択された時間間隔で取り出し、そして血清グルコースおよびインシュリンレベルを評価する。内因性インシュリンの上昇した分泌レベル非存在下での改善されたグルコース処分（ｄｉｓｐｏｓａｌ）は、インシュリン感作としてみなされ得、そして化合物の効力の指標であり得る。このアッセイの詳細な説明は、本明細書中以下の実施例に提供される。
【００９５】
本発明の化合物は、無機酸または有機酸由来の塩の形態で使用され得る。これらの塩としては、限定されないが、以下が挙げられる：酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、クエン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、ショウノウ酸塩、ショウノウスルホン酸塩、ジグルコン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩（ｈｅｍｉｓｕｌｆａｔｅ）、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、フマル酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、２−ナフト−アレンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パモエート（ｐａｍｏａｔｅ）、ペクチン酸塩、硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアアン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩およびウンデカン酸塩。また、塩基性窒素含有基は、以下のような薬剤で４級化され得る：低級アルキルハライド（例えば、塩化、臭化およびヨウ化メチル、エチル、プロピルおよびブチル）；硫酸ジアルキル（例えば、硫酸ジメチル、硫酸ジエチル、硫酸ジブチル、および硫酸ジアミル）、長鎖ハライド（例えば、塩化、臭化およびヨウ化デシル、ラウリル、ミリスチルおよびステアリル）、アラルキルハライド（例えば、臭化ベンジルおよび臭化フェネチル）など。水溶性または油溶性あるいは分散性の産物がこれによって得られる。
【００９６】
薬学的に受容可能な酸付加塩を形成するために使用され得る酸の例としては、塩酸、硫酸およびリン酸のような無機酸、ならびにシュウ酸、マレイン酸、コハク酸およびクエン酸のような有機酸が挙げられる。塩基性付加塩は、式（Ｉ）の化合物の最終の単離および精製の間、インサイチュで調製され得るか、またはカルボン酸部分と適切な塩基（例えば、薬学的に受容可能な金属カチオンの水酸化物、炭酸塩または重炭酸塩、あるいは、アンモニア、または有機第１級アミン、第２級アミンもしくは第３級アミン）と反応させることによって別々に調製され得る。薬学的に受容可能な塩としては、アルカリ金属およびアルカリ土類金属（例えば、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アルミニウムの塩など）ならびに非毒性アンモニウム、第４級アンモニウム、およびアミンカチオン（アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチルアミンなど）が挙げられるが、これらに限定されない。塩基付加塩の形成のために有用である他の代表的な有機アミンしては、ジエチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジンなどが挙げられる。
【００９７】
本発明の化合物は、種々の方法（腸内経路、非経口経路、吸入経路および局所経路の投与を含む）で投与され得る。例えば、投与の適切な様式としては、経口、皮下、経皮、経粘膜、イオン泳動、脳内、静脈内、動脈内、筋肉内、腹腔内、鼻腔内、髄腔内、硬膜下、直腸などが挙げられる。
【００９８】
本発明の他の実施形態に従って、薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤とともに、本発明のＧＳＫ３インヒビターを含む組成物が提供される。
【００９９】
適切な薬学的に受容可能な賦形剤としては、プロセシング剤および薬物送達改変剤およびエンハンサー（例えば、リン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、滑石、単糖、二糖、デンプン、ゼラチン、セルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、デキストロース、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、ポリビニルピロリジノン、低融点ワックス、イオン交換樹脂など）、ならびにこれらの２つ以上の組合せが挙げられる。他の適切な薬学的に受容可能な賦形剤は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂ．Ｃｏ．，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ（１９９１）（本明細書中において参考として援用される）に記載される。
【０１００】
本発明のＧＳＫ−３インヒビター化合物を含む薬学的組成物は、意図した投与方法に適する任意の形態であり得、このような形態としては例えば、以下が挙げられる：溶液、懸濁液またはエマルジョン。液体キャリアは、代表的に溶液、懸濁液およびエマルジョンを調製する際に使用される。本発明の実施において使用されることを意図される液体キャリアとしては、例えば、水、生理食塩水、薬学的に受容可能な有機溶媒、薬学的に受容可能な油または脂肪など、ならびにこれらの２つ以上の混合物が挙げられる。液体キャリアは、他の適切な薬学的に受容可能な添加物（例えば、溶解剤、乳化剤、栄養物、緩衝剤、保存料、懸濁剤、濃化剤、粘性調節剤、安定化剤など）を含み得る。適切な有機溶剤としては、例えば、一価アルコール（例えば、エタノール）および多価アルコール（グリコール）が挙げられる。適切な油としては、例えば、ダイズ油、ココナッツ油、オリーブ油、べニバナ油、綿花油などが挙げられる。非経口投与について、キャリアはまた、油性エステル（例えば、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピルなど）であり得る。本発明の組成物はまた、微粒子、マイクロカプセル、リポソームカプセル化物など、ならびにこれらのうちの任意の２つ以上の組み合わせの形式であり得る。
【０１０１】
本発明の化合物は、経口的に、非経口的に、舌下に、吸入スプレーによって、直腸にまたは所望される場合は従来の無毒性の薬学的に受容可能なキャリア、アジュバントおよびビヒクルを含む単位投薬処方物の状態で投与され得る。局所投与はまた、経皮パッチまたはイオン泳動デバイスのような経皮投与の使用を含み得る。本明細書中で使用される場合、用語「非経口的」は、皮下注射、静脈内、筋肉内、胸骨内の注射または注入技術を含む。
【０１０２】
注射可能な調製物（例えば、滅菌注射用水性懸濁物または滅菌注射用油性懸濁物）は、適切な分散剤または湿潤剤と懸濁剤とを用いて、公知の技術に従って処方され得る。滅菌注射用調製物はまた、無毒性の非経口的に受容可能な希釈剤および溶媒中の滅菌注射用溶液または滅菌注射用懸濁液（例えば、１，３−プロパンジオール中の溶液）であり得る。受容可能なビヒクルおよび溶剤の中でもとりわけ使用され得るのは、水、リンガー溶液および等張食塩水である。さらに、滅菌した不揮発性油が、溶剤または懸濁媒体として従来用いられている。この目的のために、任意の刺激性がない不揮発性油（合成モノグリセリドまたは合成ジグリセリドを含む）が使用され得る。さらに、オレイン酸のような脂肪酸は、注射可能物質の調製において用途を見出す。
【０１０３】
薬物の直腸投与のための座剤は、常温で個体であるが直腸の温度では液体であって、薬物を適切な非刺激性の賦形剤（例えば、カカオ脂およびポリエチレングリコール）と混合することによって調製され得、従って直腸において溶けて、薬物を放出する。
【０１０４】
経口投与のための固体投薬形態としては、カプセル、錠剤、ピル、散剤および顆粒が挙げられ得る。このような固体投薬形態において、活性な化合物は、少なくとも１つの不活性の希釈剤（例えば、スクロース、ラクトースまたはデンプン）と混合され得る。このような投薬形態はまた、通常の実施の場合、不活性な希釈剤以外のさらなる物質（例えば、ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤）を含み得る。カプセル、錠剤およびピルの場合は、投薬形態はまた、緩衝剤を含み得る。錠剤およびピルは、さらに腸溶性コーティングによって調製され得る。
【０１０５】
経口投与のための液体の投薬形態としては、水のような当該分野において一般に使われる不活性の希釈剤を含む、薬学的に受容可能なエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップおよびエリキシル剤が挙げられ得る。このような組成物はまた、アジュバント（例えば、湿潤剤、乳化剤および懸濁剤、シクロデキストリンおよび甘味料、矯味矯臭剤および香料）を含み得る。
【０１０６】
なお他の実施形態に従って、本発明は、ヒトまたは動物の被験体においてＧＳＫ３活性による虚血性傷害または損傷を阻害する方法を提供し、この方法は、被験体においてＧＳＫ３活性を抑制するのに有効量の、構造（Ｉ）（ＩＶ）または（Ｖ）を有するＧＳＫ３インヒビター化合物（または、このような化合物を含む組成物）を、被験体に投与する工程を包含する。他の実施形態は、ヒトまたは動物の被験体において、細胞または虚血性損傷または虚血性傷害を処置する方法を提供し、この方法は、細胞の殺傷もしくは傷害または被験体においてＧＳＫ３活性を阻害するのに有効量の本発明の化合物または組成物をこのヒト被験体または動物被験体に投与する工程を包含する。好ましくは、被験体は、ヒト被験体または非ヒト動物被験体である。ＧＳＫ３活性の阻害は、コントロールと比較したか、または予測されたＧＳＫ３活性と比較したかのいずれかの場合の、ＧＳＫ３活性の検出可能な抑制を含む。
【０１０７】
本発明の化合物の有効量は、一般に、本明細書中に記載されるアッセイのいずれかによって、当業者に公知の他のＧＳＫ３キナーゼ活性アッセイによって、または、虚血により生じる障害（例えば、発作）を罹患している被験体における虚血性傷害または損傷の阻害または緩和を検出することによって、ＧＳＫ３活性を検出可能に阻害するのに十分な任意の量を含む。
【０１０８】
単一の投薬形態を作製するためのキャリア物質と合わされ得る活性成分の量は、処置される宿主および特定の投与様式に応じて変化する。しかし、任意の特定の患者に対する特定の用量レベルは、種々の因子（使用される特定の化合物の活性、年齢、体重、身体全体の健康、性別、食事、投与の時間、投与経路、排泄速度、併用薬物および治療を受ける特定の疾患の重篤度を含む）に依存することが理解される。ある状況のための治療有効量は、慣用的な実験によって容易に決定され得、そして、普通の臨床医の技術および判断の範囲内である。
【０１０９】
本発明の目的のために、本発明のＧＳＫ３インヒビター化合物の治療的有効量は、一般に約０．１ｍｇ／ｋｇ／日〜約１００ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは約１ｍｇ／ｋｇ／日〜約２０ｍｇ／ｋｇ／日、そして、最も好ましくは約２ｍｇ／ｋｇ／日〜約１０ｍｇ／ｋｇ／日のであり、これは、単回または複数回投与され得る。
【０１１０】
本発明の化合物はまた、リポソームの形態でも投与され得る。当該分野において公知であるように、リポソームは、一般にリン脂質または他の脂質物質由来である。リポソームは、水性媒体に分散された単層状または多層状の水和した液晶によって形成される。リポソームを形成することが可能な、生理学的に受容可能かつ代謝可能な無毒性の、任意の脂質が使用され得る。リポソーム形態の本発明の組成物は、本発明の化合物に加えて、安定化剤、防腐剤、賦形剤などを含み得る。好ましい脂質は、天然および合成の両方の、リン脂質およびホスファチジルコリン（レシチン）である。リポソームを形成する方法は、当該分野において公知である。例えば、Ｐｒｅｓｃｏｔｔ編、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，第ＸＩＶ巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｗ．，ｐ３３以下参照（１９７６）を参照のこと。
【０１１１】
別の局面において、本発明の方法およびＧＳＫ３インヒビター化合物は、単独で使用され得るか、または発作の治療において通常使用されるような、虚血性発作の処置のための１種以上の追加の薬剤と組合せて使用され得る。例えば、有用な追加の薬剤としては、血流を閉塞させる塊を分解（溶解）させることによって脳循環を回復するのを助ける、血栓溶解剤および／または繊維素溶解剤、虚血性カスケードの影響を最小限にするために機能する神経保護剤、抗凝固剤、ならびに抗血小板剤が挙げられる。代表的な血栓溶解剤としては、例えば、アルテプラーゼ（組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔ−ＰＡ）（プラスミノーゲンを酵素プラスミンに変換または活性化して血塊を溶解する、体内で自然に見出される酵素））；アニストレプラーゼ（ａｎｉｓｔｒｅｐｌａｓｅ）；レテプラーゼ（ｒｅｔｅｐｌａｓｅ）；ウロキナーゼ；およびストレプトキナーゼが挙げられる。代表的な神経保護剤としては、例えば、グルタメートアンタゴニスト（ニューロンへのグルタミン酸の進行に干渉する）、カルシウムアンタゴニスト（電動チャネルを介するカルシウムの細胞内取りこみをブロックする）、アヘン剤アンタゴニスト（細胞死の間に生じる化学カスケードによって過剰刺激されているアヘン剤レセプターに作用することによって虚血カスケードに干渉する）、ＧＡＢＡ−Ａアゴニスト（例えば、Ｃｌｏｍｅｔｈｉａｚｏｌｅ（Ａｓｔｒａ））（ＧＡＢＡ−Ａレセプターを活性化し、それによって特定のグルタメートレセプターの電気活性と反作用する）、カルパイン阻害物質、ＮＭＤＡレセプターアンタゴニスト（例えば、Ｃ−１０１，６０（Ｐｆｉｚｅｒ））、Ｋ＋チャネルモジュレーター（例えば、ＢＭＳ−２０４３５２（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ））、ＰＤＨキナーゼインヒビター、および虚血カスケードによって発生したフリーラジカルを取り除く酸化防止剤が挙げられる。さらに、本発明の方法および化合物は、虚血性発作からの損傷を減少させるために、酸素リッチな血液が脳を通って再び通過する酸素処理したフッ化炭素栄養エマルジョン（ＯＦＮＥ）療法、および／または神経潅流と組合せて使用され得る。代表的な抗凝固剤としては、例えば、ヘパリン、ワルファリン、ダルテパリン、ダナパロイド、エノキサパリン、チンザパリン、４−ヒドロキシクマリン、ジクマロール、フェンプロクモン（ｐｈｅｎｐｒｏｃｏｕｍｏｎ）、アセノクマロール、アミシンドン、レピルジンおよびインダン−１，３−ジオンが挙げられる。代表的な抗血小板剤としては、例えば、アスピリン、クロピドグレル（ｃｌｏｐｉｄｏｇｒｅｌ）、チクロピジン、アブシキシマブ、エプチフィバチド（ｅｐｔｉｆｉｂａｔｉｄｅ）、チロフィバン（ｔｉｒｏｆｉｂａｎ）およびジピリダモールが挙げられる。追加の活性薬剤が本発明の化合物と組合せて使用される場合、追加の活性薬剤は、一般に、ＰＨＹＳＩＣＩＡＮＳ’ＲＥＦＥＲＥＮＣＥ（ＰＤＲ）第５３版（１９９９）（本明細書中に参考として援用される）に示される治療量、または当業者に公知であるような、治療上有効量で使用され得る。
【０１１２】
本発明の化合物発明および他の治療上活性な薬剤は、推奨された最大の臨床投薬量またはそれより低い服用量で投与され得る。本発明の組成物における活性化合物の投薬レベルは、所望の治療応答を得るために、投与経路、疾患の重篤度および患者の反応に応じて、変化し得る。この組合せは、別々の組成物として、または両方の薬剤を含む単一の投薬形態として、投与され得る。組合せとして投与される場合、この治療剤は、同時にかもしくは別の時間に与えられる別々の組成物として処方され得るか、またはこの治療剤は、単一の組物成として与えられ得る。
【実施例】
【０１１３】
本発明の前述の局面および他の側面は、以下の代表的な実施例と組合せて、よりよく理解され得る。
【０１１４】
（実施例１）
（細胞ベースのグリコーゲンシンターゼアッセイを用いるＧＳＫ３の阻害活性についてのスクリーニング）
ＣＨＯ−ＨＩＲＣ細胞を、ＨａｍのＦ１２培地／１０％透析されたウシ胎仔血清中にて、１０ｃｍの組織培養プレートに維持する。コンフルエントな１０ｃｍプレートからの細胞を回収し、６ウェル組織培養プレートの６つのウェルに分け、２ｍｌの最終容量まで培地を加える。これらの細胞を、３７℃で２４時間増殖させる。これらの細胞を、次いで、ウシ胎仔血清を含まないＨａｍのＦ１２培地で３回洗浄し、そして、最終的に、これらの細胞を、２ｍｌの無血清培地中で３７℃にて２４時間さらにそのままにする。
【０１１５】
この時間の終了時点で、ＤＭＳＯに溶解した２０μｌの化合物を各ウェルに添加し、そして、３７℃でインキュベートする。２０分後に、培地を取り除き、細胞を一度室温のＰＢＳで洗浄し、次いで、液体窒素中にて急速に凍結する。次いで、細胞を、１ウェルあたり１４０μｌの溶解緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ７．８；１ｍＭ  ＥＤＴＡ、１００ｍＭ  ＮａＦ、２５μｇ／ｍｌ  ロイペプチン、１ｍＭ  ＤＴＴ、１ｍＭ  ＰＭＳＦ）の存在下で、氷上で、解凍する。細胞を、プレートからこすり取り、そして、ドライアイス上のエッペンドルフチューブ中で凍結する。次いで、溶解物を、解凍し、ドライアイス上で再凍結する。
【０１１６】
再解凍した後、溶解物を１４，０００ｇで１５分間遠心する。次いで、上清を取り除き、氷上に保管する。各上清（４５μｌ）を４５μｌの反応緩衝液（６５ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ７．８；２６ｍＭ  ＥＤＴＡ、３２．５ｍＭ  ＫＦ、９．３ｍＭウリジン二リン酸グルコース；１１ｍｇ／ｍｌグリコーゲン；５００  ｎＣｉ／ｍｌ  １４Ｃ−ＵＤＰ−グルコース）に添加し、さらに４５μｌを、４５μｌの反応緩衝液／２０ｍＭ  グルコース−６−リン酸に添加する。反応物を３０℃で３０分間インキュベートし、次いで、２ｃｍ四方の３１ＥＴクロマトグラフ紙（Ｗｈａｔｍａｎ）上にスポットする。ろ紙を、６６％エタノール中にて２０分間、２回洗浄し、アセトンで簡単にリンスし、室温で１時間乾燥させる。
【０１１７】
濾液を、５ｍｌの液体シンチラント（ｓｃｉｎｔｉｌｌａｎｔ）に添加し、液体シンチレーションカウンターで計数する。任意の溶解物において活性な総グリコーゲンシンターゼのパーセンテージを、１００×（ｃｐｍ  −  グルコース−６−リン酸）／（ｃｐｍ  ＋  グルコース−６−リン酸）として表す。このような値は、５つの異なる濃度の化合物について、およびＤＭＳＯのみについて、二連で決定する。次いで、濃度の対数に対してその値をプロットする。グリコーゲンシンターゼ活性を最高のレベルの５０％まで刺激する化合物の濃度を、プロットしたデータにシグモイド曲線をフィットさせて決定する。最高レベルを、試験化合の濃度が実質的にＥＣ５０を越えて増加するにつれて、グリコーゲンシンターゼ活性が漸近する傾向にあるレベルとして定義する。本発明の実施において有用な、代表的なＧＳＫ−３インヒビター化合物を、以下の表１に示す：
（表１）
ＧＳＫ３インヒビターＥＣ５０値
【０１１８】
【表１−１】
2005525362.tif 000017
【０１１９】
【表１−２】
2005525362.tif 000018
【０１２０】
【表１−３】
2005525362.tif 000019
（実施例２：グルタミン酸誘導性損傷からのラット海馬細胞のＧＳＫ３インヒビター保護）
海馬を、胚日数（ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ  ｄａｙ）１８〜１９のラットから切除した。組織を、ＨｉｂｅｒｎａｔｅＴＭ培地（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ）中に回収し、１ｍｍ片に挽いた。その組織を、Ｐａｐａｉｎ  Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を用いて解離させた。単離後に、その細胞を、ＮｅｕｒｏｂａｓａｌＴＭ（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ）、２％  Ｂ２７補充物（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ）、Ｌ−グルタミンおよび抗生物質から構成される無血清培地中に懸濁した。細胞を、７．５×１０４細胞／ウェルの濃度で、ポリ−Ｌ−リジンでコーティングした１２ウェルプレート組織培養ディッシュ中に入れた。３７℃で５％ＣＯ２中１０〜１４日間後、以下に示されるＧＳＫ３インヒビター化合物を添加した。化合物を添加して４〜８時間後、その馴化培地を、細胞から取り除き、培養物を３７℃で保存した。その培養物を、１０μＭ  グリシン含有ＨＥＰＥＳ緩衝化平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）で２回すすいだ（ＧｒａｂｂおよびＣｈｏｉ，１９９９）。ついで、その培養物を、同じＨＢＳＳ中で２００μＭ  グルタミン酸に、室温で５分間曝すか、またはコントロールとしてグルタミン酸に曝さなかったかのいずれかであった。曝した後、培養物を、その緩衝液で３回すすぎ、ついで、ＧＳＫ３インヒビター化合物を含むそれらの元の馴化培地に戻した。グルタミン酸に曝してから２０〜２４時間後、培養物を、ＨＢＳＳ中ですすぎ、トリパンブルーに１０分間曝した。この色素は、死細胞によって取り込まれる。この培養物をすすぎ、ついで、４％  パラホルムアルデヒド中で３０分間固定した。生きている大きなニューロンおよび死んでいる（青色）大きなニューロンを、位相差顕微鏡により計数し（各ウェルから少なくとも２００の細胞）、写真を撮り、生細胞の割合を決定した。前述の手順を、ＧＳＫ３インヒビター化合物（Ａ）なし、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ，Ｂ）、およびＩＧＦ１をコントロールとして使用して、ＧＳＫ３インヒビター化合物Ｄ−Ｙ（表１）を用いて追試した。この結果を、１〜４つの複製の平均として、以下の表２に示す。
【０１２１】
（表２；Ｇ３Ｋインヒビターで増強した細胞生存）
【０１２２】
【表２】
2005525362.tif 000020
ＣＨＯ細胞ＥＣ５０値（表１）に対する生存の割合のプロットを、図１に示す。この図は、ＧＳＫ３インヒビター化合物のＥＣ５０値と、細胞生存との間の直接的関係を反映する。
【０１２３】
（実施例３：代表的ＧＳＫ３インヒビターの分配係数）
ｌｏｇＰは、オクタノールと水との間の、化合物の中性形態の分配係数の対数である。これは、物理化学的パラメーターであり、このパラメーターは、低分子の生理学的膜への吸収と相関関係がある。代表的なＧＳＫ３インヒビター化合物Ｄ−Ｙ（表１）のｌｏｇＰを、ｌｏｇ  Ｐ推定プログラムＰｒｏｌｏｇＰ  ５．１（ＣｏｍｐｕＤｒｕｇ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．７０５  Ｇｒａｎｄｖｉｅｗ  Ｄｒｉｖｅ，Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ  ９４０８０  ＵＳＡ）を用いて決定した。ＰｒｏｌｏｇＰは、ＰＡＬＬＡＳシステムのアド−オンモジュールであり、このシステムは、化合物の物理化学的特徴を推定するモジュールのフレームとして働く。このＰｒｏｌｏｇＰ  ５．１コンピュータープログラムは、その化合物の構造式に基づいて、そのｌｏｇＰ値を推定する。このプログラムは、推定するために３つの異なるシステムを使用する。これらのシステムは、化合物を断片に分解し、そのｌｏｇＰ値を対応する断片定数の重ね合わせとして表す（Ｂｒｏｔｏら，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．−Ｃｈｉｍ．Ｔｅｒ．１９：７１（１９８４）；Ｇｈｏｓｅら，Ｊ．Ｃｏｍｐｕｔａｔ．Ｃｈｅｍ．７：５６５（１９８６））。このプログラムは、約１５０の原子断片を利用する（Ｖｉｓｗａｎａｄｈｎら，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｆ．Ｃｏｍｐｕｔ．Ｓｃｉ．，２９：１６３−１７２（１９８９））。これらの方法の推定される結果は、予測誤差を最小にするために組み合わせられる。代表的なＧＳＫ３インヒビター化合物Ｄ−Ｙ（表１）のｌｏｇＰ値を、以下の表３に示す。
【０１２４】
（表３；ＧＳＫ３インヒビターの分配係数）
【０１２５】
【表３】
2005525362.tif 000021
（実施例４：ＧＳＫ３インヒビターの血液脳関門侵入）
ＧＳＫ３インヒビターの血液脳関門侵入は、一般に、１５％  カプチソール（ｃａｐｔｉｓｏｌ）／２０ｍＭ  クエン酸ナトリウム中に最終用量１０ｍｇ／ｋｇまで処方されたＧＳＫ３インヒビター化合物を、２５０ｇのＣＤラットに頚静脈カテーテルを通じて静脈内投与することにより測定され得る。投与して１５０分後、ラットの脳を単離して、直ちに凍結した。単離された材料のＧＳＫ３インヒビター血漿レベルを、標準的な技術を使用して確立した。化合物ＧおよびＩ（表１）についての結果を、以下の表４に示す。
【０１２６】
（表４；ＧＳＫ３インヒビターの脳濃度）
【０１２７】
【表４】
2005525362.tif 000022
（実施例５：ＳＤラットにおける一過性（９０分）の中大脳動脈閉塞（ＭＣＡＯ））
（１．一過性の限局性大脳虚血）
一過性中大脳動脈（ＭＣＡ）閉塞のげっ歯類モデルを使用して、本発明の代表的なＧＳＫ３インヒビター化合物である６−［（２−｛［６−（２，４−ジクロロフェニル）−５−イミダゾリル−２−ピリジル］アミノ｝エチル）アミノピリジン−３−カルボニトリル（ＣＴ９９０２５）の、発作に起因する虚血損傷の阻害における効果を決定した。虚血は、管腔内縫合モデル（Ｍ．Ａ．Ｙｅｎａｒｉら、「Ｔｉｍｅ−ｃｏｕｒｓｅ  ａｎｄ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｗｉｔｈ  ＳＮＸ−１１１，ａｎ  Ｎ−ｔｙｐｅ  ｃａｌｃｉｕｍ  ｃｈａｎｎｅｌ  ｂｌｏｃｋｅｒ，ｉｎ  ａ  ｒｏｄｅｎｔ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｆｏｃａｌ  ｃｅｒｅｂｒａｌ  ｉｓｃｈｅｍｉａ  ｕｓｉｎｇ  ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ−ｗｅｉｇｈｔｅｄ  ＭＲＩ」Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ  ７３９：３６−４５（１９９６））を使用して誘導した。動物を、顔面マスクを介して３％ハロタン（１〜２％で維持）で麻酔した。麻酔の深さを、つま先をつまんでチェックすることによって１５分ごとにモニターし、ハロタンの維持レベルを、それに応じて調節した。外側頸を切開して、総頚動脈、内頚動脈、外頚動脈を同定した。炎で先端を丸くした３−０モノフィラメント縫合糸を、総頚動脈（ＣＣＡ）に挿入し、目視下で内頚動脈（ＩＣＡ）の中へと１８〜２０ｍｍ進めた。閉塞縫合糸を９０分その場所に維持し、ついで、再灌流させるために取り除いた。手術手順の間、以下のパラメーターをモニターし、通常の生理学的範囲に維持した：平均動脈血圧（ＭＡＢＰ、大腿動脈カテーテルを介して測定）、呼吸数、直腸温度、心拍数、動脈血中ガス、血中グルコース、およびヘマトクリット。動物を回復させ、ついで、術後モニタリングのために、動物施設にある集中治療ユニットに移した。実験の終了時（３日）に、動物をハロタンまたはバルビツレートの過剰用量で安楽死させ、ついで、３％パラホルムアルデヒドで心臓を介して灌流した。脳を取り出し、ついで、２０％スクロースを含有する類似の溶液中、４℃で、２４〜４８時間固定した。脳切片を、組織学的分析のために調製した。
【０１２８】
（２．処置）
動脈閉塞を開始した直後、ビヒクル（１５％  カプチソール）または２５ｍｇ／ｋｇのＣＴ  ９９０２５の静脈内ボーラスを、ラットに与えた。閉塞の終了時（９０分）に、ラットに、ビヒクルまたは５０ｍｇ／ｋｇのＣＴ  ９９０２５の皮下注射を与えた。別の皮下注射を、８時間後、その後６０時間の間に１２時間ごとに与えた。
【０１２９】
（３．組織学的方法）
標準的免疫組織科学的方法を使用した。梗塞の領域を示すために、脳切片を、クレシルバイオレットで染色した。染色なしの領域を、コンピューター補助画像分析プログラム（ＭＣＩＤ，Ｓｔ．Ｃａｔｈｅｒｉｎｅ’ｓ，Ｏｔｔａｗａ）を用いて示し、同側半球の傷害％として表した。隣接する切片を、後に組織化学染色を行うために、−７０℃で保存した。
【０１３０】
図２に示されるように、ＧＳＫ３インヒビターである６−［（２−｛［６−（２，４−ジクロロフェニル）−５−イミダゾリル−２−ピリジル］アミノ｝エチル）−アミノ］ピリジン−３−カルボニトリル（ＣＴ  ９９０２５として図２に示される）で処置した群におけるラットの虚血領域は、コントロール群（ビヒクル）より、実質的に減少している。
【０１３１】
本明の好ましい実施形態が例示および記載されてきたが、種々の変更が、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなくなされ得ることが理解される。
【図面の簡単な説明】
【０１３２】
本発明の上記の局面および付随する利点のうちの多くは、添付の図面と組み合わせた場合に、上記の詳細な説明を参照することによって、本発明がより良く理解されるにつれて、より容易に認識される。
【図１】図１は、実施例２に記載されるような、代表的ＧＳＫ３インヒビター化合物のＣＨＯ細胞ＥＣ５０値に対する、ラット海馬細胞生存の割合を示すグラフ表示である。
【図２】図２は、実施例５に記載されるような、一過性中脳動脈閉塞（ＭＣＡＯ）の齧歯類モデルにおいてコントロールと比較した、ＧＳＫ３インヒビターであるＣＴ９９０２５により処置された場合のラット脳組織中の虚血領域の減少を示すグラフ表示である。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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