(57)【要約】Ａ）Ｎ−アシル−ホスファチジル−エタノールアミン類（ＮＡＰＥｓ）を含有するリン脂質混合物類及び／又はＢ）Ｎ−アシル−エタノールアミン類（ＮＡＥｓ）と共にホスファチジン酸類（ＰＡｓ）及び／又はリゾホスファチジン酸類（ＬＰＡｓ）を含むリン脂質混合物類（但し、前記Ｎ−アシル−ホスファチジル−エタノールアミン類（ＮＡＰＥｓ）はＮ−オレオイル−ホスファチジル−エタノールアミンを含まない）で構成される薬、化粧品及び栄養剤組成物及び機能性食品、並びに、ＮＡＰＥ又はＮＡＥと１種以上のビオフラボノイドとの新規なビオフラボノイド錯体が開示されている。【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ａ）Ｎ−アシル−ホスファチジル−エタノールアミン類（ＮＡＰＥｓ）を含有するリン脂質混合物類、及び／又は、
Ｂ）Ｎ−アシル−エタノールアミン類（ＮＡＥｓ）と共にホスファチジン酸類（ＰＡｓ）及び／又はリゾホスファチジン酸類（ＬＰＡｓ）を含むリン脂質混合物類
（但し、前記Ｎ−アシル−ホスファチジル−エタノールアミン類（ＮＡＰＥｓ）がＮ−オレオイル−ホスファチジル−エタノールアミンを含まない）
で構成される薬、化粧品及び栄養剤組成物及び機能性食品。
【請求項２】
リン脂質混合物が、ＮＡＰＥ又はＮＡＥ＋ＰＡ及び／又はＬＰＡと一つ以上のビオフラボン類との錯体で構成されている請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
さらに両親媒性界面活性剤を含む請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
請求項１〜３に記載の組成物を含む機能性食品。
【請求項５】
食欲減退活性を有する薬又は老化、肥満及び体重超過；糖尿病；アルツハイマー症、パーキンソン病、及び老人性痴呆のような脳−退化性障害；ストレス、うつ病；腫瘍；更年期障害、骨粗しょう症；前立腺肥大；肌の老化；皮下脂肪組織炎（小胞炎）及び脱毛の治療のための薬品又は食品の製造のための、
（Ａ）Ｎ−アシル−ホスファチジル−エタノールアミン類（ＮＡＰＥｓ）、及び／又は、
（Ｂ）Ｎ−アシル−エタノールアミン類（ＮＡＥｓ）と共にホスファチジン酸類（ＰＡｓ）及び／又はリゾホスファチジン酸類（ＬＰＡｓ）を含むリン脂質混合物類
を含むリン脂質混合物の使用。
【請求項６】
ビオフラボン類と、Ｎ−アシル−ホスファチジル−エタノールアミン類（ＮＡＰＥｓ）、及び／又はＮ−アシル−エタノールアミン類（ＮＡＥｓ）＋ホスファチジン酸類（ＰＡｓ）及び／又はＮ−アシル−エタノールアミン類＋リゾホスファチジン酸類（ＬＰＡｓ）から選ばれたリン脂質活性成分とのホスホビオフラボン錯体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は下記で構成される薬、化粧品及び栄養剤組成物及び機能性食品に関する。
Ａ）Ｎ−アシル−ホスファチジル−エタノールアミン類（ＮＡＰＥｓ）を含有するリン脂質混合物類、及び／又は、
Ｂ）Ｎ−アシル−エタノールアミン類（ＮＡＥｓ）と共にホスファチジン酸類（ＰＡｓ）及び／又はリゾホスファチジン酸類（ＬＰＡｓ）を含むリン脂質混合物類、
但し、前記Ｎ−アシル−ホスファチジル−エタノールアミン類（ＮＡＰＥｓ）はＮ−オレオイル−ホスファチジル−エタノールアミンを含まない。
【０００２】
また、ＮＡＰＥ又はＮＡＥ＋ＰＡ及び／又はＬＰＡと一つ以上のビオフラボノイドとの新規なホスホビオフラボノイド錯体を開示する。
【背景技術】
【０００３】
Ｎ−アシル−エタノールアミン類（ＮＡＥｓ）及びＮ−アシル−ホスファチジル−エタノールアミン類（ＮＡＰＥｓ）は多くの動物や野菜原料の食物中に存在することが知られ（非特許文献１）、特に、大豆、卵、チョコレートのような食品中に豊富に含まれている(非特許文献２、非特許文献３)。
【０００４】
ＮＡＥｓは生体内でＮＡＰＥ分子のＮＡＥとホスファチジン酸（ＰＡ）の混合物を与える加水分解によって作られ、ＰＡは、次いで、次のスキーム１によってリゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）に加水分解される。
【０００５】
【化１】
2005525335.tif 000002
【０００６】
特許文献１には、Ｎ−オレオイル−ホスファチジル−エタノールアミン（ＮＯＰＥ）の抗脂血活性や抗動脈硬化活性が開示されているが、他のＮ−アシル誘導体の顕著な活性については取り上げられていない。
【０００７】
ＮＡＥｓはまたある時には興味ある薬理学的性質が知られている：Ｎ−アラキドノイル−エタノールアミンはカンナビノイド受容体作用薬になることが試験管内試験で示されている（非特許文献４）；Ｎ−パルミトイル−エタノールアミンは、ラットに腹膜内に投与した時に、抗炎症性と抗アナフィラキシー活性を有する(非特許文献５)；Ｎ−パルミトイル−エタノールアミン及びＮ−ステアロイル−エタノールアミンは肥満細胞の脱顆粒から起こる炎症性障害の薬理的な治療に有用性が示されている（特許文献２）；これ等はまた、試験管内試験でミトコンドリア膜の過酸化を阻止する(非特許文献６)；Ｎ−オレオイル−エタノルアミンは腹膜内の経路によって投与した時ラットにおいて顕著な食欲減退性を持つ (非特許文献７)。ＮＡＥｓは容易にフリーの脂肪酸とエタノールアミンに胃腸内で加水分解されることが知られているので、その活性は経口経路では期待できない。
【特許文献１】英国特許２０５１０６９
【特許文献２】ヨーロッパ特許−Ａ−０５５０００６
【非特許文献１】Ｈ．Ｈ．Ｓｃｈｍｉｄら、１９９０、Ｐｒｏｇ．Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．、２９、１−４３
【非特許文献２】Ｋ．Ｄ．Ｃｈａｐｍａｎら、１９９３、Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ、３０１、２１−２３
【非特許文献３】Ｅ．Ｄｉ  Ｔｏｍａｓｏら、１９９６、Ｎａｔｕｒｅ、３８２、６７７−６８７
【非特許文献４】Ｌ．Ｈａｎｕｓ、１９９３、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、３６、３０３２−３０３４
【非特許文献５】Ｌ．Ｆａｃｃｉら、１９９５、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９２、３３７６−３３８０
【非特許文献６】Ｎ．Ｍ．Ｇｕｌａｙａら、１９９８、Ｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓ．Ｌｉｐｉｄｓ、９７、４９−５４
【非特許文献７】Ｆ．Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ  ｄｅ  Ｆｏｎｓｅｃａら、２００１、Ｎａｔｕｒｅ、４１４、２０９−２１２
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、
Ａ）Ｎ−アシル−ホスファチジル−エタノールアミン類（ＮＡＰＥｓ）を含有するリン脂質混合物類、及び／又は、
Ｂ）Ｎ−アシル−エタノールアミン類（ＮＡＥｓ）と共にホスファチジン酸類（ＰＡｓ）及び／又はリゾホスファチジン酸類（ＬＰＡｓ）を含むリン脂質混合物類
但し、前記Ｎ−アシル−ホスファチジル−エタノールアミン類（ＮＡＰＥｓ）がＮ−オレオイル−ホスファチジル−エタノールアミンを含まない
で構成される薬、栄養剤組成物及び機能性食品に関する。
【０００９】
ＮＡＥ、ＰＡ及びＬＰＡの構造式はスキーム２で示され、ここでＲ1、Ｒ2及びＲ4は、特に、パルミチン酸、ステアン酸、オレイン酸、リノール酸、共役リノール酸、リノレン酸、γ−リノレン酸、エイコサペンタエン酸及びドコサヘキサン酸等のような長鎖脂肪酸のアシル残基である。
【００１０】
リン脂質混合物は発明の組成物においてはこれらのビオフラボノイドとの錯体の形で存在しても良い。今後「ホスホビオフラボン錯体」と呼ぶ、該錯体は本発明のさらなる目的物である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
レシチン類、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン及びホスファチジルセリンのようなリン脂質の多数の植物抽出物との錯体が開示されている（ＵＳ４９６３５２７、ＵＳ４８９５８３９、ＥＰ２８３７１３）。該錯体は植物抽出物の生物学的利用能を増加することが報告されている。本発明のホスホビオフラボン錯体において、ＮＡＰＥ、ＮＡＥ＋ＰＡ及び／又はＬＰＡは考えられる使用に予期せぬ相乗効果を与え、ビオフラボンの単なる運び屋として働いているものではない。
【００１２】
リン脂質活性成分（ＮＡＰＥ及び／又はＮＡＥ＋ＰＡ及び／又はＮＡＥ＋ＬＰＡ）の一つ以上タイプのビオフラボノイドとの集合により構成される、該錯体は、好ましくは温度４０〜６５℃で、酸性ｐＨ（好ましくはｐＨ３〜５）に緩衝させた、好ましくは一つ以上のタイプのビオフラボノイド類を水性アルコール溶液の０．５〜１５質量％を含む、水性アルコール溶液（好ましくはアルコール７０〜９０％）中、乾燥リン脂質分を強撹拌下に数分間懸濁することで得られる。攪拌を中止して、得られたエマルションから減圧で部分的にエタノールを蒸発し、スプレイ乾燥によって脱水して、ホスホビオフラボン錯体の乾燥粒状の残渣を製造する。
【００１３】
これらのホスホビオフラボン錯体を製造するために使用されるビオフラボノイドの例は以下のようである：
ａ）桂皮酸、クマリン酸、カフェイン酸及びフェルラ酸のような単純なポリフェノール類；
ｂ）ヘスペリジン、ナリンゲニン及びタキシフォリンのようなフラボン類；
ｃ）ケンプフェロールグリコサイド、ケルセチン、クエルセチングリコサイド、ミリセチン及びミリセチングリコサイドのようなフラボノール類；
ｄ）ゲニスティン及びダイゼインのようなイソフラボン類；
ｅ）プロシアニジンＢ１、プロシアニジンＢ２、プロシアニジンＢ３及びプロシアニジンＣ１のようなプロアンソシアニジン類；
ｆ）ペラルゴニジン、デルフィニジン、マルビジン及びペツニジンのようなアントシアニジン類；
ｇ）エピカテキン、エピカテキンガラート、エピガロカテキン、カテキン類及びガロカテキン類のようなカテキン類；
ｈ）タンニン類。
【００１４】
記載したように、ＮＡＰＥ、ＮＡＥ、ＰＡ及びＬＰＡは、人間の食物に通常使用されている多くの食品の脂質成分中に自然に存在し（大豆レシチン、卵類、ココア、肉、種々の種子の油性抽出物等）、及び通常の方法で種々の純度で容易に抽出、分離される。あるいは、ＮＡＰＥとＮＡＥは以前から知られた化学プロセスによっても得られる。
【００１５】
ＮＡＥはエタノールアミンと対応する脂肪酸から、例えば以下に記載された方法によって製造される：
・Ｒｏｃ  Ｅ．Ｔ．ら、（１９５２）、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、７４、３４４２
・Ｃｈａｎｄｒａｋｕｍａｒ  Ｎ．Ｓ．ら、（１９８２）、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ、７１１、３５７。
【００１６】
ＮＡＰＥはホスファチジルエタノールアミンと対応する脂肪酸塩化物又は無水物から、以下に記載された方法によって製造される：
・Ｓｃｈｍｉｄ  Ｐ．Ｃ．ら、（１９８８）、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２８８（６）、９８０２
・Ｅｐｐｓ  Ｄ．Ｅ．ら、（１９８０）、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ、６１８、４２０
・イギリス特許２０５１０６９Ｂ。
【００１７】
ホスホリパーゼＤ酵素によりＮＡＰＥを製造する他の方法はＵＳ４７８３４０２に記載され、次のスキームで示される：
【００１８】
【化２】
2005525335.tif 000003
【００１９】
ここで、Ｒ1、Ｒ2及びＲ4は炭素数１２−２２の飽和、モノ又は多不飽和の脂肪酸のアルキル鎖を表し；
Ｒ3はコリン、エタノールアミン、イノシトール、グリセロール、セリンの残基を表す。
【００２０】
ＮＡＰＥ及び／又はＮＡＥ＋ＰＡ及び／又はＬＰＡに基づく製剤では治療上の有効量は変わる：
ａ）ＮＡＰＥの場合は、体重１ｋｇ当り、０．５〜５０ｍｇ／日、好ましくは１〜１０ｍｇ／日；
ｂ）ＮＡＥ＋ＰＡ及び／又はＬＰＡの場合は、体重１ｋｇ当り、０．５〜１００ｍｇ／日、好ましくは２〜１０ｍｇ／日。このＮＡＥ＋ＰＡ及び／又はＬＰＡの混合物の場合、ＮＡＥの割合は、混合脂質の合計の１〜７０％、好ましくは２５〜５０％の間で変える。
【００２１】
本発明の組成物はＮＡＰＥ及び／又はＮＡＥ＋ＰＡ及び／又はＬＰＡの治療上の性質と効果をさらに充足する他の栄養成分を含んでもよい。これらの成分の例は以下である：
ａ）ビタミンＥ、ビタミンＣ、β―カロチン類、ビタミンＡ、リポ酸及びＣｏＱのようなビタミン類とビタミン様要素；
ｂ）モノ及びジテルペン類、サポニン類及びフィトステロール類を基本とする野菜又は薬用植物の抽出物類；
ｃ）グルタチオン、カルノシン、アルギニン、グルタミン、カルニチン、クレアチン、タウリン等のタンパク質類、ペプチド類又はアミノ酸類及びこれらの誘導体類；
ｄ）Ｃａ、Ｍｇ、Ｃｒ、Ｓｅ、Ｖａ、Ｚｎ及びＣｕのような微量元素類又は無機塩類；
ｅ）ＮＡＰＥ及び／又はＮＡＥ＋ＰＡ及び／又はＬＰＡの混合物と組み合わせて種々のタイプの脂質エマルジョン中生体内で吸収や生物学的利用能を助けることができる、リン脂質類及びリゾホスホリピド類；糖脂質類；両親媒性タンパク質類；モノ−及びジグリセライド類；胆汁酸類又はその塩類のような天然両親媒性洗剤混合物。
【００２２】
脱水顆粒又は粉末として貯蔵された活性成分類は、そのままで、あるいはゼラチンカプセル、錠剤、糖衣錠、小袋、発泡性又は非発泡性カプセル、チューインガム等のような種々の生薬を作るための水性又は油性溶液として使用できる。
【００２３】
乾燥顆粒又は粉末の形で該活性成分は種々の機能食品を作るためにも使用することができる：
ａ）種々のドレッシング類、ソース類、クリーム類、マヨネーズ等を作るために油と混合される；
ｂ）パン、パスタ、クラッカー、ビスケット及び他の焼いた製品を作るために小麦粉と混合される；
ｃ）フルーツジュース類及びスカッシュ類、ミネラルウオーター類、ソフトドリンクや他の飲料に添加される；
ｄ）ミルク及びその誘導体（ヨーグルト、フラン、リコッタ及びチーズ）に添加される。
【００２４】
本発明の薬品又は栄養組成物は以下示すような驚くべき活性を与える：
ａ）超過体重の調節と結果としての超過体重や肥満に関係した危険性の低減；
ｂ）ミトコンドリアの機能と細胞エネルギーの産出の増進；
ｃ）種々の組織の酸化防止能の増進；
ｄ）細胞膜の「流動性」の向上と結果としての膜タンパク質の機能（酵素、受容体、必須養分や微量成分の運搬体等）の向上。
【００２５】
本発明の製剤は、それ故、老化とそれに関係した多くの代謝の障害（肥満及び体重超過；糖尿病；アルツハイマー症、パーキンソン病及び老人性痴呆のような脳−退化性障害；ストレス、うつ病；腫瘍；更年期障害；骨粗しょう症；前立腺肥大；皮膚の老化；パニキュロパシー（蜂巣炎）；及び脱毛）を治療する補助剤として、たぶん既知の薬品又は栄養補助剤と組み合わせて、使用できる。
【００２６】
本発明は、食欲減退活性を有する薬剤又は老化、肥満及び体重超過；糖尿病；アルツハイマー症、パーキンソン病及び老人性痴呆のような脳−退化性障害；ストレス、うつ病；腫瘍；更年期障害；骨粗しょう症；前立腺肥大；皮膚の老化；パニキュロパシー（蜂巣炎）及び脱毛の治療のための薬品又は食品の製造に、
Ａ）Ｎ−アシル−ホスファチジル−エタノールアミン類（ＮＡＰＥｓ）、及び／又は、
Ｂ）Ｎ−アシル−エタノールアミン類（ＮＡＥｓ）と共にホスファチジン酸類（ＰＡｓ）及び／又はリソホスファチジン酸類（ＬＰＡｓ）を含むリン脂質混合物類
を含むリン脂質混合物類を使用することにも関する。
【実施例】
【００２７】
発明はより詳細に以下の実施例によって説明される。
【００２８】
実施例１
Ｎ−リノレオイル−ホスファチジルエタノールアミン  ９８ｇ
＋
α−トコフェノール                                  １ｇ
＋
リポ酸                                              １ｇ
種々の化合物は１０倍容量のクロロフォルム：メタノール（２：１、容量／容量）に溶解され、混合される。溶媒は減圧で蒸発され、得られる乾燥物は生理的ｐＨに緩衝されている水溶液に再懸濁され、活性成分（Ｎ−リノレオイル−ホスファチジル−エタノールアミン）を含むリン脂質エマルジョンの水性混合物を生成する。水性混合物は凍結され、脱水されて、リン脂質活性成分の乾燥残渣が得られる。
【００２９】
実施例２
Ｎ−エイコサペンタエノイル−エタノールアミン  ２０ｇ
＋
ホスファチジン酸                              ６０ｇ
＋
大豆ホスファチジルコリン                      ８０ｇ
＋
α−トコフェノール                              １ｇ
＋
リポ酸                                          １ｇ
種々の化合物はクロロフォルム：メタノールに溶解され、実施例１に記載されているように処理されて活性成分（Ｎ−エイコサペンタエノイル−エタノールアミン及びホスファチジン酸）を含むリン脂質エマルジョンの水性混合物が得られる。水性混合物は凍結され、脱水されて、実施例１で記載したようにリン脂質活性成分の乾燥残渣が得られる。
【００３０】
実施例３
Ｎ−リノレノイル−エタノールアミン  ２０ｇ
＋
リゾホスファチジン酸                ４０ｇ
＋
α−トコフェノール                    １ｇ
＋
リポ酸                                １ｇ
種々の化合物はクロロフォルム：メタノールに溶解され、実施例１に記載されているように処理されて活性成分（Ｎ−リノレノイル−エタノールアミンとリゾホスファチジン酸）を含むリン脂質エマルジョンの水性混合物が得られる。水性混合物は凍結され、脱水されて、実施例１で記載したようにリン脂質活性成分の乾燥残渣が得られる。
【００３１】
実施例４
Ｎ−γ−リノレノイル−ホスファチジル−エタノールアミン      ２０ｇ
＋
リゾホスホリピド類混合物（４５％リゾホスファチジルコリン＋３５％リゾホスファチジルエタノールアミン＋２０％リゾホスファチジルイノシトール）  ８０ｇ
＋
ｄ−α−トコフェノール                                        １ｇ
＋
リポ酸                                                        １ｇ
種々の化合物はクロロフォルム：メタノールに溶解され、実施例１に記載されているように処理されて活性成分（Ｎ−γ−リノレノイル−ホスファチジル−エタノールアミン）を含むリン脂質エマルジョンの水性混合物が得られる。水性混合物は凍結され、脱水されて、実施例１で記載したようにリン脂質活性成分の乾燥残渣が得られる。
【００３２】
実施例５
上記実施例１〜４に記載されたようにして得られた乾燥リン脂質残渣    ２０ｇ
＋
油溶液（オリーブ油、大豆油、トウモロコシ油、ヒマワリ油、ルリジサ油、クロフサスグリ油、魚油、海草油、又はこれ等の混合物）                        ２００ｇ
乾燥リン脂質残渣２０ｇはゆっくりかつ連続的に攪拌されている油溶液２００ｇにゆっくり溶解される。乾燥残渣のリン脂質は油溶液中で再構成され、活性成分を含む油分散ミセル組織体が形成される。
【００３３】
実施例６
実施例１記載のようにして得られたＮ−ドコサヘキサノイルホスファチジル−エタノールアミンの乾燥リン脂質残渣１００ｇが、ｐＨが４．５に緩衝され、５質量％の緑茶カテキンとエピカテキンを含む水性アルコール溶液（７５％アルコール）９００ｍｌに４５℃で、５分間強攪拌で再懸濁される。得られるエマルジョンはその後室温に冷却され、噴霧乾燥で乾燥され、Ｎ−ドコサヘキサノイル−ホスファチジル−エタノールアミンと緑茶カテキンのホスホビオフラボノイド錯体の顆粒状残渣が形成される。
【００３４】
実施例７
Ｎ−リノレノイル−エタノールアミン５０ｇ及びリゾホスファチジン酸（ＣＬＰＡ）５０ｇが、ｐＨが４．０に緩衝されている１０質量％のカテキンとエピカテキンとブドウの種から抽出されたプロアントシアニジンの混合物を含む水性アルコール溶液（８５％アルコール）９００ｍｌに強攪拌下６０℃で加えられ、１０分間でエマルジョン化される。攪拌を止めて、得られたエマルジョンは室温に冷却され、噴霧乾燥で乾燥され、Ｎ−リノレノイル−エタノールアミンとブドウ種ビオフラボノイドとのホスホビオフラボノイド錯体の顆粒状残渣が形成される。
【００３５】
［薬理及び／又は食事試験］
本発明の組成物の薬理及び／又は食事特性の研究のため、一連のラットへの実験的試験及び人間に対する臨床試験が行なわれた。
【００３６】
実験的試験において、ラットには高カロリー、高トリグリセライド、高コレステロール餌が与えられた。次のパラメータは２０日間の処理で評価された：
１）血漿、肝臓、脳及び心臓中のリポ過酸化物レベルへの組成物の効果；
２）体重の変化への組成物の効果；
３）ゴースト赤血球及び血漿血小板の膜流動性の変化への組成物の効果；
４）ａ）酸素消費量、ｂ）グルタチオンの減少、ｃ）ミトコンドリア膜電位の測定評価による肝臓のミトコンドリアの機能への組成物の影響；
５）総コレステロールとＨＤＬ−コレステロールの血漿レベルへの組成物の効果；
６）総トリグリセライドの血漿レベルへの組成物の効果。
【００３７】
各体重１５０−２００ｇの雄ラット８０匹が用いられた。動物は１０匹づつの８グループに分けられた。
【００３８】
第１グループ：対照（Ｃ）；１０匹の動物（時間０での対照標準）がそのまま用いられ、１０匹には、カゼイン２０％；微量成分と鉱物塩の混合物３．５％；ビタミン混合物０．１％；酒石酸水素コリン０．２％；セルロース２％；コレステロール０．５％；胆汁酸ナトリウム０．２５％；蔗糖５８．４４％；ラード１０．０％及びオリーブオイル４．９％よりなる標準の高カロリー、高脂肪、高コレステロール餌が与えられた。
【００３９】
第２グループ：Ｎ−オレオイル−エタノールアミンそのままの投与（ＮＯＥ）；動物には５０ｍｇのＮＯＥに同量のオリーブオイルを取り替えた以外は対照におけると同様の餌（オリーブオイル４．８５％使用）が２０日間与えられた。
【００４０】
第３グループ：実施例１に記載されたようにして作られたＮ−オレオイル−ホスファチジルエタノールアミンの投与（ＮＯＰＥ）；動物には５０ｍｇのＮＯＰＥに同量のオリーブオイルを取り替えた以外は対照におけると同様の餌（オリーブオイル４．８５％使用）が２０日間与えられた。
【００４１】
第４グループ：実施例２に記載されたようにして作られたＮ−オレオイル−エタノールアミン＋ホスファチジン酸の投与（ＮＯＥ＋ＰＡ）；動物には４００ｍｇの実施例２の生成物（約５０ｍｇのＮＥＯと１５０ｍｇのＰＡ含有）に同量のオリーブオイルを取り替えた以外は対照におけると同様の餌（オリーブオイル４．５％使用）が２０日間与えられた。
【００４２】
第５グループ：実施例３に記載されたようにして作られたＮ−オレオイル−エタノールアミン＋リゾホスファチジン酸の投与（ＮＯＥ＋ＬＰＡ）；動物には１５０ｍｇの実施例３の生成物（〜５０ｍｇのＮＯＥと１００ｍｇのＬＰＡ含有）に同量のオリーブオイルを取り替えた以外は対照におけると同様の餌（オリーブオイル４．７５％使用）が２０日間与えられた。
【００４３】
第６グループ：実施例６に記載されたようにして作られたＮ−オレオイル−ホスファチジル−エタノールアミンと緑茶ビオフラボン（Ｂ．Ｆ．）の“ホスホビオフラボン錯体”の投与（ＮＯＰＥ＋Ｂ．Ｆ．）；動物には５０ｍｇのＮＯＰＥと２５ｍｇのＢ．Ｆ．（約７５ｍｇの実施例６記載の生成物に対応）に同量のオリーブオイルを取り替えた以外は対照におけると同様の餌（オリーブオイル４．８２５％使用）が２０日間与えられた。
【００４４】
第７グループ：緑茶ビオフラボンの投与（Ｂ．Ｆ）；動物には２５ｍｇのＢ．Ｆに同量のオリーブオイルを取り替えた以外は対照におけると同様の餌（オリーブオイル４．８７５％使用）が２０日間与えられた。
【００４５】
【表１】
2005525335.tif 000004
【００４６】
【表２】
2005525335.tif 000005
【００４７】
【表３】
2005525335.tif 000006
【００４８】
【表４】
2005525335.tif 000007
【００４９】
ゴースト赤血球と血漿血小板の膜流動性が測定されるとき、Ｃａｉｍｉ  Ｆ．ら、１９９９、Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈｏｅｍｏｓｔ．、８２ｐｐ．１４９に記載された方法に従って、ＴＭＡ−ＤＰＨが蛍光プローブとして用いられる。
【００５０】
マロニルジアルデヒドは、Ｋ．Ｙａｇｉら、“生物学と医薬における脂肪過酸化物”、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、９９．  ３２４−３４０に記載された方法によって検定される。
【００５１】
肝細胞の酸素消費、ミトコンドリア膜電位及びグルタチオンの含量の減少は、Ｔ．Ｍ．Ｈａｇｅｎら，１９９９，ＦＡＳＥＢ  Ｊ．，１３，９９．４１１に記載の方法によって検定される。
【００５２】
表Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ及びＩＶに示されたデータは、活性成分（ＮＯＰＥ；ＮＯＥ＋ＰＡ；ＮＯＥ＋ＬＰＡ；ＮＯＰＥ＋Ｂ．Ｆ．）を含む組成物の投与が以下であることを示す：
１）ゴースト及び血小板の膜流動性を回復する；
２）血漿、肝臓、脳及び心臓の抗酸化性を高める；
３）体重の過剰な増加を制限する；
４）血漿中のコレステロールとトリグリセライドの水準の過剰な上昇を制限する；
５）ミトコンドリアの機能を改善する。
【００５３】
本発明に従って製造された薬剤（ＮＯＰＥ；ＮＯＥ＋ＰＡ；ＮＯＥ＋ＬＰＡ；ＮＯＰＥ＋Ｂ．Ｆ．）の経口投与によって得られるこれらの効果は、常に統計的に有意である。Ｎ−オレオイル−エタノールアミンそのままを同等量経口投与しても統計的に有意な恩恵が得られないことに注目するのは重要である。上記に述べられたデータは、ＮＡＰＥ及び／又はＮＡＥ＋ＰＡと種々のビオフラボノイド分子間で観察された驚くべき共同作用を示している；ＮＡＰＥのホスホビオフラボン錯体（表Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ及びＩＶに示されているデータ参照）及びＮＡＥ＋ＰＡ及び／又はＬＰＡの投与により得られる治療効果は、常に同等量のＮＡＰＥ（又はＮＡＥ）及びビオフラボノイドを個別単独の投与で得ることのできる恩恵の和よりも常に遥かに高い。
【００５４】
人間に対する全ての食事療法試験において、本発明で請求されている経口的処方（ＮＡＰＥ；ＮＡＥ＋ＰＡ；ＮＡＥ＋ＬＰＡ；ＮＡＰＥ＋Ｂ．Ｆ．及びＮＡＥ＋ＰＡ及び／又はＬＰＡ＋Ｂ．Ｆ）によって得られる効果は、老化の生物学的な兆候を防ぐこと（ミトコンドリア活性の改善、膜流動性の向上、血漿の抗酸化性の防御の改善、体重増加の抑制）及び老化、及びそれに関係のある代謝疾患に関係して調べられる臨床上のパラメータを改善することの両方において、常に高い顕著な成績と有利さを持らした。人間においても、Ｎ−オレオイル−エタノールアミンだけを同様に経口投与するのでは取るに足らない恩恵しかえられないことは注目すべきである。
【国際調査報告】
2005525335.tif 000008
2005525335.tif 000009
2005525335.tif 000010