(57)【要約】本発明は、抗がん療法の有効性を改善する組成物および方法を提供する。本発明の組成物は、キナゾリノン、特にハロフジノンを含む。現在の好適な実施態様では、本発明の組成物および方法は、放射線療法および化学療法の有効性を改善し、付随的に放射線療法によって惹起される障害を緩和または予防する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗がん療法の有効性を改善する方法であって、前記方法を必要とする対象に対し有効成分として、一般式Ｉ：
2005520806.tif 000015
（式中：ｎ＝１〜２であり；
Ｒ1は各発生時に水素、ハロゲン、ニトロ、ベンゾ、低級アルキル、フェニルおよび低級アルコキシから成る群から独立して選択され；
Ｒ2はヒドロキシ、アセトキシおよび低級アルコキシから成る群の一構成要素であり；
Ｒ3は水素および低級アルケンオキシ−カルボニルから成る群の一構成要素である）を有するキナゾリノン誘導体化合物またはその医薬上許容される塩を含む医薬組成物と、少なくとも１つの追加の抗がん療法と、を併用するステップを含む方法。
【請求項２】
前記対象は、ヒトである請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記キナゾリノン組成物の投与は、少なくとも１つの追加の抗がん療法の実施に先立って行われる請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記キナゾリノン組成物の投与は、少なくとも１つの追加の抗がん療法の実施と実質的に同時に行われる請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記併用は、単一の医薬組成物で行われる請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記併用は、別々の医薬組成物で行われる請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記抗がん療法は、放射線療法である請求項１から請求項４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記抗がん療法は、化学療法である請求項１から請求項６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記抗がん療法は、免疫療法、ホルモン療法および遺伝子療法から成る群から選択される請求項１から請求項６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記有効性の改善は、抗がん療法に対する細胞の感受性の増強によって達成される請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記一般式Ｉの化合物は、ハロフジノン、またはその医薬上許容される塩、溶剤もしくは水和物である請求項１から請求項１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
化学療法に使用される前記追加の薬剤は、トポイソメラーゼ阻害剤、スピンドル阻害剤のビンカアルカロイド：ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン（タキソール）、パクリタキセル、ドセタキセル；  アルキル化剤：メクロレタミン、クロラムブシル、シクロホスファミド、メルファラン、イホスファミド；メトトレキセート；６−メルカプトプリン；５−フルオロウラシル、シタラビン、ゲムシタビン；  ポドフィロトキシン：エトポシド、イリノテカン、トポテカン、ダカルバジン；  抗生物質：ドキソルビシン（アドリアマイシン）、ブレオマイシン、マイトマイシン；ニトロソウレアーゼ：カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン、エピルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン；  無機イオン：シスプラチン、カルボプラチン；インターフェロン、アスパラギナーゼ；ホルモン剤：タモキシフェン、ロイプロリド、フルタミド、酢酸メゲストロールから成る群から選択される請求項８に記載の方法。
【請求項１３】
一般式Ｉ：
2005520806.tif 000016
（式中：ｎ＝１〜２であり；
Ｒ1は各発生時に水素、ハロゲン、ニトロ、ベンゾ、低級アルキル、フェニルおよび低級アルコキシから成る群から独立して選択され；
Ｒ2はヒドロキシ、アセトキシおよび低級アルコキシから成る群の一構成要素であり；
Ｒ3は水素および低級アルケンオキシ−カルボニルから成る群の一構成要素である）を有するキナゾリノン誘導体化合物；またはその医薬上許容される塩を有効成分として含み；さらに少なくとも１つの追加の抗がん剤を含む医薬組成物。
【請求項１４】
前記一般式Ｉの化合物は、ハロフジノン、またはその医薬上許容される塩、溶剤もしくは水和物である請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記抗がん剤は、化学療法薬剤である請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記化学療法薬剤は、トポイソメラーゼ阻害剤、スピンドル阻害剤のビンカアルカロイド：ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン（タキソール）、パクリタキセル、ドセタキセル；  アルキル化剤：メクロレタミン、クロラムブシル、シクロホスファミド、メルファラン、イホスファミド；メトトレキセート；６−メルカプトプリン；５−フルオロウラシル、シタラビン、ゲムシタビン；  ポドフィロトキシン：エトポシド、イリノテカン、トポテカン、ダカルバジン；  抗生物質：ドキソルビシン（アドリアマイシン）、ブレオマイシン、マイトマイシン；ニトロソウレアーゼ：カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン、エピルビシン、イダルビシン；ダウノルビシン；  無機イオン：シスプラチン、カルボプラチン；インターフェロン、アスパラギナーゼ；ホルモン剤：タモキシフェン、ロイプロリド、フルタミド、酢酸メゲストロールから成る群から選択される請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
少なくとも１つの追加の抗がん療法との併用療法で腫瘍を治療するための薬剤の調製において、それにより抗がん療法の有効性を改善するための、一般式Ｉ：
2005520806.tif 000017
（式中：ｎ＝１〜２であり；
Ｒ1は各発生時に水素、ハロゲン、ニトロ、ベンゾ、低級アルキル、フェニルおよび低級アルコキシから成る群から独立して選択され；
Ｒ2はヒドロキシ、アセトキシおよび低級アルコキシから成る群の一構成要素であり；
Ｒ3は水素および低級アルケンオキシ−カルボニルから成る群の一構成要素である）を有するキナゾリノン誘導体化合物；またはその医薬上許容される塩の使用。
【請求項１８】
前記追加の抗がん療法は、放射線療法である請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
前記追加の抗がん療法は、化学療法である請求項１７に記載の使用。
【請求項２０】
前記追加の抗がん療法は、免疫療法、ホルモン療法および遺伝子療法から成る群から選択される請求項１７に記載の使用。
【請求項２１】
前記改善は、抗がん療法に対する細胞の感受性の増強によって達成される請求項１７に記載の使用。
【請求項２２】
前記一般式Ｉの化合物は、ハロフジノンまたはその医薬上許容される塩、溶剤もしくは水和物である請求項１７に記載の使用。
【請求項２３】
前記化学療法薬剤は、トポイソメラーゼ阻害剤、スピンドル阻害剤のビンカアルカロイド：ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン（タキソール）、パクリタキセル、ドセタキセル；  アルキル化剤：メクロレタミン、クロラムブシル、シクロホスファミド、メルファラン、イホスファミド；メトトレキセート；６−メルカプトプリン；５−フルオロウラシル、シタラビン、ゲムシタビン；  ポドフィロトキシン：エトポシド、イリノテカン、トポテカン、ダカルバジン；  抗生物質：ドキソルビシン（アドリアマイシン）、ブレオマイシン、マイトマイシン；ニトロソウレアーゼ：カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン、エピルビシン、イダルビシン；ダウノルビシン；  無機イオン：シスプラチン、カルボプラチン；インターフェロン、アスパラギナーゼ；ホルモン剤：タモキシフェン、ロイプロリド、フルタミド、酢酸メゲストロールから成る群から選択される請求項１９に記載の使用。
【請求項２４】
前記組成物を経口投与または非経口投与するために適切な製剤に調製された、請求項１３から請求項１６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
前記非経口投与用調製物は、静脈内注射、静脈内注入；皮膚内、病変内、筋肉内、および皮下注射もしくはデポー剤；注射以外の手段によって、腹腔鏡視下で小胞内もしくは病変内へ非経口投与するために適切な製剤から選択される請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
前記経口投与用に散剤、顆粒剤、水性もしくは非水性溶媒中の懸濁剤または液剤、サシェ剤、カプセル剤もしくは錠剤から選択された製剤に調製された、請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
放射線療法によって惹起された障害を緩和または予防するための方法であって、放射線療法を受ける対象に対し、一般式Ｉ：
2005520806.tif 000018
（式中：ｎ＝１〜２であり；
Ｒ1は各発生時に独立して水素、ハロゲン、ニトロ、ベンゾ、低級アルキル、フェニルおよび低級アルコキシから成る群の一構成要素であり；
Ｒ2はヒドロキシ、アセトキシおよび低級アルコキシから成る群の一構成要素である；
Ｒ3は水素および低級アルケンオキシ−カルボニルから成る群の一構成要素である）を有するキナゾリノン誘導体化合物またはその医薬上許容される塩を有効成分として含み、さらに医薬上許容される担体を含む医薬組成物を投与するステップを含む方法。
【請求項２８】
前記一般式Ｉに記載の化合物は、ハロフジノン、またはその医薬上許容される塩、溶剤もしくは水和物である請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記投与は、放射線療法の実施に先行する請求項２７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、がん治療の分野、特に追加の抗がん療法と併用して、キナゾリノン誘導体、詳細にはハロフジノンを投与することにより得られる相乗効果に関する。
【背景技術】
【０００２】
線維症
原発性または続発性線維症に結び付いた臨床症状および障害は、正常な組織構造および機能の破壊を生じさせる結合組織の過剰産生を特徴とする。線維症は、熱傷、手術、感染症、アルコール中毒および毒素への曝露を含む様々な外傷性障害の結果として発生する。
急性線維症は、放射線療法および化学療法を含むがん治療に関連する一般的な有害な作用でもある。
放射線と線維症
放射線性線維症は、様々ながん性状態の治療に使用される電離放射線の極めて重篤な有害作用である。線維症は、必要な放射線療法および治療に関連する偶発的な過剰曝露の後遺症として発症することがある。現在、放射線性線維症に対して利用できる予防療法または治癒的治療法はない。
放射線曝露後の線維症障害は、皮膚、肺、心臓、肝臓および腎臓を含むほぼすべての組織について報告されており、急性合併症（腸閉塞、重篤な肺傷害等）を惹起することが証明されている。
放射線性線維症の結果として発生するこのような急性合併症を克服するために使用される内科療法には、有益な効果がないことが証明されている。最も一般的に使用される方法は手術であるが、これは成功することがまれであり、一般的には反復的に手術を必要とし、回復不良が伴う。
放射線性線維症に関連した臨床症状および障害は、正常な組織構造および機能の破壊を生じさせる結合組織の過剰産生を特徴とする。
【０００３】
放射線性線維症については、組織病理学的研究において長年にわたり報告されているが、その開始および慢性的伸展のメカニズムについては依然として解明されていない。線維症は、実際には、持続性のリモデリングおよび長期間の線維形成細胞活性化を特徴とする機能的プロセスである。正常な創傷治癒では、線維形成細胞が一過性で筋線維形成細胞へ活性化されて増殖し、コラーゲンマトリックスを沈着させる。次に、フィードバックメカニズムが発生して細胞活動を抑制し、筋線維形成細胞が最終分化し、アポプトーシスのために最終的には消失すると提言されている。これとは対照的に、線維症では、フィードバック調節が観察されず、慢性的な長期間の筋線維形成細胞活性化が持続する。慢性的細胞活性化について考えられる一つの原因は、サイトカインおよび成長因子等の刺激因子の異常産生である。
最近、照射直後に開始されるサイトカインのカスケードが長期間にわたり持続して遅発性障害の発生を導くことを示唆した、放射線障害の開始に関する新しい概念が提案された。
化学療法と線維症
化学療法に一般的に使用される数種の細胞毒性薬は、様々な器官で線維症を惹起することが知られている。最も広範囲に報告されている薬剤の一つは、肺線維症を惹起することが知られているブレオマイシンである。高度の線維症発生率と関連のあるその他の薬剤には、ブスルファン、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、およびマイトマイシン−Ｃが含まれる。
ブレオマイシンは、治療された患者のおよそ１０％から３０％において肺線維症を惹起すると報告されており、肺線維症に関連する患者の死亡率は１％から２％である（Wesselius L.(ウェッセリウス エル．), J. Comp. Ther., 1999: 25(5):272-277）。
腹腔内線維症および後腹膜線維症は、カルボプラチン、ミトキサントロンおよび５−フルオロウラシルとシスプラチンの併用を含む数種の化学療法薬の腹膜内（ＩＰ）投与に続発性があると記載されている（Fata et. al.(ファタら), Cancer 2000, Jun 1: 88(11):2447-51）。
【０００４】
従来型処方またはリポソーム処方のいずれかで投与されたアドリアマイシンは、腫瘍の線維性カプセル化を惹起し、腫瘍内の薬剤濃度を低下させ、化学療法の有効性低下を引き起こすことが知られている。
ハロフジノン
米国特許第3,320,124号は、キナゾリノン誘導体を用いてコクシジウム症を治療する方法を開示かつ権利を主張した。ハロフジノンは、別に７−ブロモ−６−クロロ−３−［３−（３−ヒドロキシ−２−ピペリジニル）−２−オキソプロピル］−４（３Ｈ）−キナゾリノン（キナゾリノン誘導体の一つ）としても知られており、American Cyanamid社の上記特許で最初に開示かつ権利主張され、上記特許により教示された好適な化合物であり、上記特許で記載され権利主張された誘導体の中から市販された一つであった。その後の米国特許第4,824,847号；第4,855,299号；第4,861,758号および第5,215,993号は、すべてが、ハロフジノンのコクシジウム症に対する特性に関するものである。
ごく最近、本発明（パインズら(Pines et. al)への米国特許第5,449,678号）の発明者らの一部は、これらのキナゾリノン誘導体が線維症性疾患を治療するために予想外に有用であることを開示した。その開示は、一般式：
2005520806.tif 000002
（式中：ｎ＝１〜２であり；
Ｒ1は各発生時に水素、ハロゲン、ニトロ、ベンゾ、低級アルキル、フェニルおよび低級アルコキシから成る群の一構成要素から成る群から独立して選択され；
Ｒ2はヒドロキシ、アセトキシおよび低級アルコキシから成る群の一構成要素であり；
Ｒ3は水素および低級アルケンオキシ−カルボニルから成る群の一構成要素である）を有する治療有効量の化合物またはその医薬上許容される塩を含む特異的阻害剤の組成物を提供する。
【０００５】
第‘678号特許は、これらの化合物が皮膚硬化症および移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）等の線維症性疾患の治療に有効であることを開示している。これらの化合物群中、ハロフジノンは、特に有効であることが見いだされている。
本発明の発明者らの一部は、さらにナグラーら(Nagler et al.)への米国特許第5,891,879号において、これらの化合物が再狭窄症の治療に有効であることを開示している。両疾患、すなわち線維症および再狭窄症には過度のコラーゲン沈着が結び付いているが、これはハロフジノンによって阻害できる。再狭窄症は、血管傷害に反応して罹患血管の管腔内での平滑筋増殖および細胞外マトリックス蓄積を特徴とする（Choi et al.(チョイら), Arch. Surg., 1995, 130:257-261）。このような平滑筋細胞増殖の特徴の一つは、正常収縮性表現型から合成表現型への表現型の変化である。Ｉ型コラーゲンは、このような表現型の変化を助長することが証明されているが、これはハロフジノンによって遮断することができる（Choi et al., Arch. Surg., 130:257-261, 1995;米国特許第5,449,678号）。
注目すべきことに、ハロフジノンは、in vitro（生体外）では線維形成細胞によるコラーゲン合成を阻害するが、in vivo（生体内）では創傷治癒を促進する（ナグラーら(Nagler et. al)への国際公開公報第01/17531号）。そこで、in vivoでのハロフジノンの正確な作用を必ずしもin vitro研究から正確に予測できるとは限らない。
さらに、ハロフジノンを含めたキナゾリノンを含む医薬組成物は、悪性腫瘍の治療（パインズら(Pines et. al)への米国特許第6,028,075号）ならびに血管新生の予防（ナグラーら(Nagler et. al)への米国特許第6,090,814号）のために有効であると開示され、かつ権利主張されてきた。
ハロフジノン、またはその他の関連キナゾリノン誘導体が既知の抗がん療法、特に放射線療法または化学療法の有効性を増強する能力については、背景技術においては全く教示も示唆もなされていなかった。そのような増強は、抗がん療法に成功するために必要な医薬品の用量を低下させることができ、線維症を含む望ましくない有害作用の減少をもたらす可能性がある。
【特許文献１】米国特許第3,320,124号
【特許文献２】米国特許第4,824,847号
【特許文献３】米国特許第4,855,299号
【特許文献４】米国特許第4,861,758号
【特許文献５】米国特許第5,215,993号
【特許文献６】米国特許第5,449,678号
【特許文献７】米国特許第5,891,879号
【特許文献８】WO01/17531
【特許文献９】米国特許第6,420,371号
【特許文献１０】米国特許出願第09/762715号
【特許文献１１】米国特許第6,028,075号
【特許文献１２】米国特許第6,090,814号
【非特許文献１】Wesselius L., J. Comp. Ther., 1999: 25(5):272-277
【非特許文献２】Fata et. al., Cancer 2000, Jun 1: 88(11):2447-51
【非特許文献３】Choi et al., Arch. Surg., 1995, 130:257-261
【非特許文献４】Nagler et. al. Kidney Int. Vol. 52(1997), pp. 1561-1569
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
そこで、本明細書では、キナゾリノン誘導体、詳細にはハロフジノンを含む医薬組成物が予想外に放射線療法および化学療法等の抗がん療法の有効性を改善できることが開示されている。本発明は、さらに電離放射線または化学療法に対する腫瘍細胞の感受性を増加させることによって、キナゾリノンの相乗効果が達成されることを提示する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の一態様によると、本発明は、抗がん療法の有効性を増加させる方法を提供するが、この方法は、その方法を必要とする対象に対し、一般式Ｉ：
2005520806.tif 000003
（式中：ｎ＝１〜２であり；
Ｒ1は各発生時に独立して水素、ハロゲン、ニトロ、ベンゾ、低級アルキル、フェニルおよび低級アルコキシから成る群の一構成要素であり；
Ｒ2はヒドロキシ、アセトキシおよび低級アルコキシから成る群の一構成要素であり；
Ｒ3は水素および低級アルケンオキシ−カルボニルから成る群の一構成要素である）を有するキナゾリノン誘導体化合物またはその医薬上許容される塩を有効成分として含む医薬組成物と、少なくとも１つの追加の抗がん療法と、を併用するステップを含む。
現在の好適な一実施態様によると、キナゾリノン誘導体はハロフジノンである。
一実施態様によると、本発明のキナゾリノン組成物と併用して実施される少なくとも１つの追加の抗がん療法は、放射線療法、化学療法、免疫療法、ホルモン療法および遺伝子療法から成る群から選択される。
現在の好適な一実施態様によると、抗がん療法は、放射線療法または化学療法から成る群から選択される。
【０００８】
一実施態様によると、化学療法薬剤は、トポイソメラーゼ阻害剤、スピンドル阻害剤のビンカアルカロイド：ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン（タキソール）、パクリタキセル、ドセタキセル；  アルキル化剤：メクロレタミン、クロラムブシル、シクロホスファミド、メルファラン、イホスファミド；メトトレキセート；６−メルカプトプリン；５−フルオロウラシル、シタラビン、ゲムシタビン；  ポドフィロトキシン：エトポシド、イリノテカン、トポテカン、ダカルバジン；  抗生物質：ドキソルビシン（アドリアマイシン）、ブレオマイシン、マイトマイシン；ニトロソウレアーゼ：カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン、エピルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン；  無機イオン：シスプラチン、カルボプラチン；インターフェロン、アスパラギナーゼ；ホルモン剤：タモキシフェン、ロイプロリド、フルタミド、酢酸メゲストロールから成る群から選択される。
一実施態様によると、本発明の併用療法は、各治療の個別の実施、すなわちキナゾリノン組成物の投与および少なくとも１つの追加の抗がん療法の適用によって実施される。
また別の実施態様によると、キナゾリノン組成物の投与は、追加の抗がん療法の実施と本質的に同時に行われる。
また、別の実施態様によると、追加の抗がん療法が化学療法である場合、単一の複合組成物であろうと別個の組成物中であろうと、２種の薬剤の併用もまた相乗的に作用することが証明されている。
また、別の実施態様によると、本発明は、一般式Ｉ：
2005520806.tif 000004
（式中：ｎ＝１〜２であり；
Ｒ1は各発生時に独立して水素、ハロゲン、ニトロ、ベンゾ、低級アルキル、フェニルおよび低級アルコキシから成る群の一構成要素であり；
Ｒ2はヒドロキシ、アセトキシおよび低級アルコキシから成る群の一構成要素であり；
Ｒ3は水素および低級アルケンオキシ−カルボニルから成る群の一構成要素である）を有するキナゾリノン誘導体化合物またはその医薬上許容される塩を前投与し、その後に少なくとも１つの追加の抗がん療法を実施することによって追加の抗がん療法の有効性を増加させる方法を提供する。
【０００９】
本発明によるキナゾリノンを用いた治療は、追加の抗ガン化学療法薬剤の投与または放射線療法による治療に先立って実施すると、特に有効かつ有益である。この利点は、細胞を同期化し、それによりその後の抗がん療法へより高度に感受性を高めるためのハロフジノンの使用により達成される。
また、別の態様によると、本発明は、一般式Ｉ：
2005520806.tif 000005
（式中：ｎ＝１〜２であり；
Ｒ1は各発生時に独立して水素、ハロゲン、ニトロ、ベンゾ、低級アルキル、フェニルおよび低級アルコキシから成る群の一構成要素であり；
Ｒ2はヒドロキシ、アセトキシおよび低級アルコキシから成る群の一構成要素であり；
Ｒ3は水素および低級アルケンオキシ−カルボニルから成る群の一構成要素である）を有するキナゾリノン誘導体化合物またはその医薬上許容される塩と、さらに少なくとも１つの追加の抗腫瘍薬とを含む、既知の抗がん療法の有効性を増加させるための複合組成物を提供する。
現在の好適な一実施態様によると、複合組成物は、ハロフジノンを含む。
【００１０】
また別の実施態様によると、本発明の組成物中にキナゾリノンと結び付けて存在する少なくとも１つの追加の抗がん療法薬は、トポイソメラーゼ阻害剤、スピンドル阻害剤のビンカアルカロイド：ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン（タキソール）、パクリタキセル、ドセタキセル；  アルキル化剤：メクロレタミン、クロラムブシル、シクロホスファミド、メルファラン、イホスファミド；メトトレキセート；６−メルカプトプリン；５−フルオロウラシル、シタラビン、ゲムシタビン；  ポドフィロトキシン：エトポシド、イリノテカン、トポテカン、ダカルバジン；  抗生物質：ドキソルビシン（アドリアマイシン）、ブレオマイシン、マイトマイシン；ニトロソウレアーゼ：カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン、エピルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン；  無機イオン：シスプラチン、カルボプラチン；インターフェロン、アスパラギナーゼ；ホルモン剤：タモキシフェン、ロイプロリド、フルタミド、酢酸メゲストロールから成る群から選択される。
さらにまた、別の態様によると、本発明は、少なくとも１つの追加の抗がん療法との併用療法で腫瘍を治療するための薬剤の調製において、一般式Ｉ：
2005520806.tif 000006
（式中：ｎ＝１〜２であり；
Ｒ1は各発生時に独立して水素、ハロゲン、ニトロ、ベンゾ、低級アルキル、フェニルおよび低級アルコキシから成る群の一構成要素であり；
Ｒ2はヒドロキシ、アセトキシおよび低級アルコキシから成る群の一構成要素であり；および
Ｒ3は水素および低級アルケンオキシ−カルボニルから成る群の一構成要素である）を有するキナゾリノン誘導体化合物またはその医薬上許容される塩を含み、それにより抗がん療法の有効性を改善するための複合製剤を提供する。
【００１１】
現在の好適な一実施態様によると、併用療法に使用されるキナゾリノン誘導体は、ハロフジノンである。
現在の好適な一実施態様によると、併用療法は、放射線療法、化学療法、免疫療法、ホルモン療法および遺伝子療法から成る群から選択される一つの追加の既知の抗がん療法を含む。
現在の好適な一実施態様によると、併用療法は、放射線療法または化学療法から成る群から選択される一つの追加の抗がん療法を含む。
また、別の実施態様によると、化学療法薬剤は、トポイソメラーゼ阻害剤、スピンドル阻害剤のビンカアルカロイド：ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン（タキソール）、パクリタキセル、ドセタキセル；  アルキル化剤：メクロレタミン、クロラムブシル、シクロホスファミド、メルファラン、イホスファミド；メトトレキセート；６−メルカプトプリン；５−フルオロウラシル、シタラビン、ゲムシタビン；  ポドフィロトキシン：エトポシド、イリノテカン、トポテカン、ダカルバジン；  抗生物質：ドキソルビシン（アドリアマイシン）、ブレオマイシン、マイトマイシン；ニトロソウレアーゼ：カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン、エピルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン；  無機イオン：シスプラチン、カルボプラチン；インターフェロン、アスパラギナーゼ；ホルモン剤：タモキシフェン、ロイプロリド、フルタミド、酢酸メゲストロールから成る群から選択される。
【００１２】
また別の実施態様によると、本発明は、放射線療法によって惹起される障害を緩和または予防するための方法であって、放射線療法を受ける対象に対し、一般式Ｉ：
2005520806.tif 000007
（式中：ｎ＝１〜２であり；
Ｒ1は各発生時に独立して水素、ハロゲン、ニトロ、ベンゾ、低級アルキル、フェニルおよび低級アルコキシから成る群の一構成要素であり；
Ｒ2はヒドロキシ、アセトキシおよび低級アルコキシから成る群の一構成要素であり；
Ｒ3は水素および低級アルケンオキシ−カルボニルから成る群の一構成要素である）を有する治療有効量のキナゾリノン誘導体化合物またはその医薬上許容される塩を投与するステップを含む方法を提供する。
現在の好適な一実施態様によると、放射線障害を予防する方法で使用されるキナゾリノン誘導体は、ハロフジノンである。
また別の、現在の好適な実施態様によると、本発明のキナゾリノン組成物の投与は、放射線療法の実施に先立って行われる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本発明については、下記に説明、図面および特許請求の範囲において、より詳細に説明する。
がん治療において種々の作用様式の治療法を併用することは、現在大きな関心を集めつつある。種々の作用様式および種々の有害作用を有する様々な治療様式または特殊な薬剤でさえ、併用することにより、より優れた有効性とより少ない副作用が可能になる。
本明細書では、好ましくはハロフジノンであるキナゾリノン誘導体は、抗がん療法の作用効果を高めること、または、その治療法に関連する有害作用の減少のいずれかで、他の抗腫瘍薬もしくは抗がん療法の作用効果を向上させることが開示されている。
予想外なことに、本明細書において下記で詳細に例示するように、好ましくはハロフジノンであるキナゾリノン誘導体を含む医薬組成物は、放射線療法および化学療法を含むが、それらに限定されない既知の抗がん療法の有効性を相乗的に増強できることが確認されている。
以下、用語「抗がん療法」とは、対象に対して使用することが承認されたあらゆる抗がん療法を意味する。用語「放射線療法」とは、当技術分野において周知のように、電離放射線によるがんの治療法を意味する。用語「化学療法」とは、異常な細胞増殖を特徴とする疾患に対する化学薬品または薬物を用いた治療法を意味する。用語「免疫療法」とは、疾患に対する免疫系および／または免疫応答の調節による治療法を意味する。用語「ホルモン療法」とは、異常な細胞増殖を特徴とする疾患に対する種々のホルモン剤もしくはそれらの阻害剤を用いた治療法を意味する。用語「遺伝子療法」とは、異常な細胞増殖を特徴とする疾患に対するアンチセンス療法を含む、種々の遺伝子もしくは遺伝子産物を含有する組成物を用いた治療法を意味する。用語「対象」とは、ハロフジノンが投与されるヒトまたは動物を意味する。
一態様によると、本発明は、追加の既知の抗がん療法の有効性を向上させる方法を提供するが、この方法は、その方法を必要とする対象に対し、一般式Ｉ：
2005520806.tif 000008
（式中：ｎ＝１〜２であり；
Ｒ1は各発生時に独立して水素、ハロゲン、ニトロ、ベンゾ、低級アルキル、フェニルおよび低級アルコキシから成る群の一構成要素であり；
Ｒ2はヒドロキシ、アセトキシおよび低級アルコキシから成る群の一構成要素であり；
Ｒ3は水素および低級アルケンオキシ−カルボニルから成る群の一構成要素である）を有するキナゾリノン誘導体化合物またはその医薬上許容される塩を有効成分として含む医薬組成物と、および少なくとも１つの追加の既知の抗がん療法とを併用するステップを含む。
現在の好適な一実施態様によると、キナゾリノン誘導体は、ハロフジノンである。
【００１４】
以下では、用語「ハロフジノン」は、式：
2005520806.tif 000009
を有する化合物およびその医薬上許容される塩であると定義する。
ハロフジノンを含む組成物は、好ましくは、さらにその化合物のための医薬上許容される担体を含む。
一実施態様によると、本発明のキナゾリノン組成物と併用して適用される既知の抗がん療法は、放射線療法、化学療法、免疫療法、ホルモン療法および遺伝子療法から成る群から選択される。
現在の好適な一実施態様によると、抗がん療法は、放射線療法または化学療法から成る群から選択される。
本発明の発明者のうちの一部は、ハロフジノンがin vivoでの腫瘍の進行を単剤で阻害することを以前に開示している（パインズら(Pines et al)への米国特許第6,420,371号）。腫瘍の進行を阻害する際のハロフジノンの作用様式は、血管形成を阻害すること、細胞外マトリックス成分の沈着を実質的に阻害すること、または両方の組み合わせ、のいずれかによる可能性があると示唆された。
【００１５】
ハロフジノンが腫瘍細胞の治療の際、化学療法または放射線療法の有効性を高めるメカニズムは不明である。特定のメカニズムと結び付けようとしなくても、ハロフジノンは、電離放射線または化学療法薬の毒性作用に対する腫瘍細胞の感受性を増加させることによって作用できるが、他のメカニズムが関係する可能性もある。
限定されないが、タキソール、ゲマセタビン、ビンカアルカロイドおよび多数の他の薬剤を含む最も有効で一般に使用される化学療法薬の一部は、細胞周期の特定段階でがん細胞に影響を及ぼすことが知られている。従って、これらの薬剤は、「細胞周期特異的薬剤」であると説明できる。細胞周期とは、細胞が増殖するにつれて進行する一連の段階である。この細胞周期の段階は、Ｇ１期、Ｓ期、Ｇ２期およびＭ期と表示され、Ｇ１期は、ＤＮＡ合成に先行するギャップ期であり、Ｓ期は、その間に細胞がＤＮＡを合成する段階であり、Ｇ２期は、Ｓ期と細胞分裂期もしくは有糸細胞分裂期（Ｍ）とのギャップ期である。増殖していない細胞は、Ｇ0期と呼ばれる段階で増殖を停止する可能性がある。
本発明の発明者らの１人によって、ハロフジノンは、Ｇ0／Ｇ1期に細胞増殖を可逆的に停止させることが証明された。ハロフジノンが取り除かれると、細胞は、Ｓ期に進行することができ、循環し続けることができる（Nagler et. al.(ナグラーら) Kidney Int. Vol. 52(1997), pp. 1561-1569）。このため、同期化剤としてのハロフジノンの併用投与は、上記で定義したように、細胞周期特効薬剤に対して腫瘍細胞を敏感にさせると考えられる。ハロフジノンに曝露すると、細胞周期は停止されるが、ハロフジノンが取り除かれると、がん細胞はそれらの正常循環を回復する。事実上、これは細胞を同期化し、その結果、より大きな細胞集団を細胞周期の特定段階へ持ち込むことに役立ち、その段階では、細胞集団が化学療法薬の作用に敏感となる。
【００１６】
本発明の一実施態様によると、既知の抗がん療法の有効性の向上は、一般式Ｉのキナゾリノン、好ましくはハロフジノンを用いた前治療によって得られる。これは、追加の抗がん療法が放射線療法および化学療法から成る群から選択される場合に特に有効である。
本発明のさらに別の実施態様によると、既知の抗がん療法の有効性の向上は、追加の既知の抗がん療法を用いた治療と実質的に同時に行われる一般式Ｉのキナゾリノン、好ましくはハロフジノンを用いた治療によって得られる。薬剤の投与は、単一組成物または各薬剤の最適調製物のために適切な別個の組成物で行われる。
また別の態様によると、本発明は、一般式Ｉ：
2005520806.tif 000010
（式中：ｎ＝１〜２であり；
Ｒ1は各発生時に独立して水素、ハロゲン、ニトロ、ベンゾ、低級アルキル、フェニルおよび低級アルコキシから成る群の一構成要素であり；
Ｒ2はヒドロキシ、アセトキシおよび低級アルコキシから成る群の一構成要素であり；
Ｒ3は水素および低級アルケンオキシ−カルボニルから成る群の一構成要素である）を有するキナゾリノン誘導体化合物またはその医薬上許容される塩と、さらに少なくとも１種の追加の抗腫瘍薬とを含む既知の抗がん療法の有効性を向上させるための複合組成物を提供する。
本発明の現在の好適な一実施態様によると、複合組成物は、ハロフジノンを含む。
【００１７】
本発明によるキナゾリノン誘導体とともに有益に投与される化学療法薬の特定の非限定的な実施例には、ドキソルビシン、ダウノルビシン、イダルビシン、エピルビシン、メルファラン、ダカルバジン、シスプラチン、カルボプラチンおよびマイトマイシンが含まれるが、それらに限定されない。
本発明の組成物および方法と併用するために適切な追加のがん化学療法薬は、以下のカテゴリーから選択できる：トポイソメラーゼ阻害剤、スピンドル阻害剤のビンカアルカロイド：ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン（タキソール）、パクリタキセル、ドセタキセル；  アルキル化剤：メクロレタミン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イホスファミド；メトトレキセート；６−メルカプトプリン；５−フルオロウラシル、シタラビン、ゲムシタビン；  ポドフィロトキシン：エトポシド、イリノテカン、トポテカン、ダカルバジン；  抗生物質：ブレオマイシン：ニトロソウレアーゼ：カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン；  無機イオン：シスプラチン、カルボプラチン；インターフェロン、アスパラギナーゼ；ホルモン剤：タモキシフェン、ロイプロリド、フルタミド、酢酸メゲストロール。
さらにまた別の実施態様によると、本発明は、抗がん療法の有効性を改善するために、少なくとも１つの追加の既知の抗がん療法との併用療法で腫瘍を治療するための薬剤の調製において、一般式Ｉ：
2005520806.tif 000011
（式中：ｎ＝１〜２であり；
Ｒ1は各発生時に独立して水素、ハロゲン、ニトロ、ベンゾ、低級アルキル、フェニルおよび低級アルコキシから成る群の一構成要素であり；
Ｒ2はヒドロキシ、アセトキシおよび低級アルコキシから成る群の一構成要素であり；および
Ｒ3は水素および低級アルケンオキシ−カルボニルから成る群の一構成要素である）を有するキナゾリノン誘導体またはその医薬上許容される塩の使用を提供する。
【００１８】
好適な一実施態様によると、併用療法に使用されるキナゾリノン誘導体は、ハロフジノンである。
現在の好適な一実施態様によると、併用療法は、放射線療法、化学療法、免疫療法、ホルモン療法および遺伝子療法から成る群から選択される一つの追加の既知の抗がん療法を含む。
現在の好適な一実施態様によると、併用療法は、放射線療法または化学療法から成る群から選択される一つの追加の既知の抗がん療法を含む。
また別の実施態様によると、化学療法薬剤は、トポイソメラーゼ阻害剤、スピンドル阻害剤のビンカアルカロイド：ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン（タキソール）、パクリタキセル、ドセタキセル；  アルキル化剤：メクロレタミン、クロラムブシル、シクロホスファミド、メルファラン、イホスファミド；メトトレキセート；６−メルカプトプリン；５−フルオロウラシル、シタラビン、ゲムシタビン；  ポドフィロトキシン：エトポシド、イリノテカン、トポテカン、ダカルバジン；  抗生物質：ドキソルビシン（アドリアマイシン）、ブレオマイシン、マイトマイシン；ニトロソウレアーゼ：カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン、エピルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン；  無機イオン：シスプラチン、カルボプラチン；インターフェロン、アスパラギナーゼ；ホルモン剤：タモキシフェン、ロイプロリド、フルタミド、酢酸メゲストロールから成る群から選択される。
また別の実施態様によると、本発明は、放射線療法によって惹起される障害を緩和または予防するための方法であって、放射線療法を受ける対象に対し、一般式Ｉ：
2005520806.tif 000012
（式中：ｎ＝１〜２であり；
Ｒ1は各発生時に独立して水素、ハロゲン、ニトロ、ベンゾ、低級アルキル、フェニルおよび低級アルコキシから成る群の一構成要素であり；
Ｒ2はヒドロキシ、アセトキシおよび低級アルコキシから成る群の一構成要素であり；
Ｒ3は水素および低級アルケンオキシ−カルボニルから成る群の一構成要素である）を有する治療有効量のキナゾリノン誘導体化合物またはその医薬上許容される塩を投与するステップを含む方法を提供する。
現在の好適な一実施態様によると、キナゾリノン化合物は、ハロフジノンである。
【００１９】
また別の現在の好適な実施態様によると、本発明のキナゾリノン組成物の投与は、放射線療法に先立って行われる。
一実施態様によると、本発明の組成物は、経口投与または非経口投与することができる。
経口投与用の医薬組成物は、水性製剤または固形製剤として調製される。
一実施態様によると、経口投与用の医薬組成物は、無菌液剤、無菌懸濁剤、使用直前にビヒクルと結合させて復元できる可溶性の無菌凍結乾燥粉末、無菌乳剤、マイクロエマルジョン、分散剤、リポソーム製剤、ならびにコレステロール誘導体とリン脂質を含むような脂質複合体から成る群から選択される水性製剤に調製される。
一実施態様によると、液剤およびビヒクルは、水溶液または非水溶液から成る群から選択される。
一実施態様によると、水性経口ビヒクルは、さらにエチルアルコール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールおよびそれらの混合物等の補助溶剤を含むことができる。
一実施態様によると、無菌調製物は、水性ビヒクルによって復元する準備ができている凍結乾燥粉末を含むことができる。
任意で、保存剤、酸化防止剤および浸透圧調節剤から成る群から選択された少なくとも１つの追加の成分を使用できる。
一実施態様によると、保存剤は、ベンジルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、メチルパラベンのナトリウム塩から成る群から選択される。
一実施態様によると、浸透圧調節剤は、塩化ナトリウム、マンニトール、デキストロース、グルコース、ラクトースおよびスクロースから成る群から選択される。
さらに別の実施態様によると、経口投与用の医薬組成物は、錠剤、カプセル剤、サシェ剤、散剤、顆粒剤およびトローチ剤から成る群から選択される固形製剤に調製される。
【００２０】
一実施態様によると、本発明は、有効化合物に加えて、限定されないが、デンプン、アラビアゴム、ケイ酸カルシウム、微結晶セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ、およびメチルセルロースを含む適切な成形剤を含有する錠剤として調製された固形製剤に関する。調製物は、追加して例えばタルク、ステアリン酸マグネシウムおよび鉱油等の潤滑剤；湿潤剤、乳化剤および懸濁化剤；メチルヒドロキシ安息香酸およびプロピルヒドロキシ安息香酸等の保存剤；甘味剤；または調味剤を含むことができる。ポリオール、緩衝剤、および不活性充填剤もまた使用できる。ポリオールの例には、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、スクロース、マルトース、グルコース、ラクトース、デキストロース等が含まれるが、それらに限定されない。適切な緩衝剤には、リン酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩等が含まれるが、それらに限定されない。使用できるその他の不活性充填剤は、当技術分野において知られていて、様々な製剤の製造において有用な充填剤を含むことができる。所望があれば、固形製剤は、増量剤および／または造粒剤等の他の成分を含むことができる。本発明の組成物は、当技術分野において周知の手法を使用することにより、患者への投与後に有効成分の迅速放出、持続性放出、または遅延性放出を提供するように調製できる。
【００２１】
非経口投与用の医薬組成物は、静脈内注射、静脈内注入、皮膚内、病変内、筋肉内、および皮下注射もしくはデポー用に調製される；またはそれらは注射以外の手段によって非経口的に投与することができ、例えば腹腔鏡視下で、小胞内へ、または消化管と関連しないいずれかの開口部を通して導入することもできる。
一実施態様によると、非経口投与用の医薬組成物は、好ましくは、注射用無菌液剤、注射用無菌懸濁剤、使用直前にビヒクルと結合して復元できる可溶性の無菌凍結乾燥粉末、無菌乳剤、マイクロエマルジョン、分散剤、リポソーム製剤、ならびにコレステロール誘導体およびリン脂質を含むような脂質複合体から成る群から選択される調製物である。
一実施態様によると、液剤およびビヒクルは、水溶液または非水溶液から成る群から選択される。好適な一実施態様では、水性非経口液剤およびビヒクルは、注射用無菌水、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、等浸透圧性デキストロース注射液、デキストロースおよび乳酸塩リンゲル注射液から成る群から選択される。
一実施態様によると、水性非経口ビヒクルは、さらにエチルアルコール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールおよびそれらの混合物等の水溶性混合溶剤とも呼ばれる補助溶剤を含むことができる。
一実施形態によると、無菌注射液は、水性ビヒクルによって復元する準備ができている凍結乾燥粉末を含んでいてもよい。そのような凍結乾燥粉末は、キナゾリノン誘導体および固形の医薬上許容される緩衝剤もしくは水溶性有機酸を含んでいる。本組成物において使用される緩衝剤もしくは有機酸は、非経口使用のために承認された非毒性緩衝剤または有機酸であってもよい。
任意で、保存剤、酸化防止剤および浸透圧調節剤から成る群から選択された少なくとも１つの追加の成分を使用できる。
【００２２】
一実施態様によると、保存剤は、ベンジルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、メチルパラベンのナトリウム塩から成る群から選択される。
一実施態様によると、浸透圧調節剤は、塩化ナトリウム、マンニトール、デキストロース、グルコース、ラクトースおよびスクロースから成る群から選択される。
本明細書を通して特定キナゾリノン誘導体「ハロフジノン」について言及しているが、その代わりに他のキナゾリノン誘導体も使用できると理解されなければならず、これらの誘導体は、一般式Ｉ：
2005520806.tif 000013
（式中：ｎ＝１〜２であり；
Ｒ1は各発生時に独立して水素、ハロゲン、ニトロ、ベンゾ、低級アルキル、フェニルおよび低級アルコキシから成る群の一構成要素であり；
Ｒ2はヒドロキシ、アセトキシおよび低級アルコキシから成る群の一構成要素であり；
Ｒ3は水素および低級アルケンオキシ−カルボニルから成る群の一構成要素である）またはその医薬上許容される塩を有する。
本発明の発明者らによって以前に開示されたように（パインズら(Pines et. al)への米国特許第6,420,371号；パインズらへの米国特許出願第09/762715号）、in vivoでのハロフジノン活性は、必ずしもin vitroでの活性から予測できるとは限らない。このため、以下の実施例において極めて詳細に説明するように、ハロフジノンがin vivoモデルにおける既知の抗がん療法の有効性を高める適性を試験する必要がある。
本発明の態様をより完全に理解かつ認識できるように、本発明を以下の図面および実施例において一定の好適な実施態様と結び付けて説明するが、本発明をこれらの特定の実施態様に限定することは意図されていない。これとは反対に、すべての代替物、変形物および同等物を包含することは、添付の特許請求の範囲によって規定された本発明の範囲内に含まれることが意図されている。そこで、好適な実施態様を含む以下の図面および実施例は、本発明の実施を具体的に示すために役立ち、図示した詳細は、一例として本発明の好適な実施態様を具体的に考察するためであり、調製手法ならびに本発明の原理および概念上の態様を最も有用かつ容易に理解するための説明になると考えられるために提示する。
【実施例１】
【００２３】
ハロフジノンおよび１，３−ビス（２−クロロエチル）−ｌ−ニトロソウレアーゼ（ＢＣＮＵ）の併用療法の作用効果
ハロフジノンについて皮下または頭蓋内に移植したヒトＴ９８Ｇ神経膠芽細胞腫の異種移植片中で試験した。マウス大腿部の皮下または頭蓋内に、ヒトＴ９８Ｇ神経膠芽細胞腫の腫瘍細胞を移植した。
ハロフジノンは、腫瘍移植後第４日から３４日にわたり、０．１、０．２、および０．５ｍｇ／ｋｇ／日の用量レベルでチューブを通して１日１回経口投与した。各群は、マウス５匹を含んでいた。
皮下腫瘍のエンドポイントは、腫瘍増殖の遅延であり、頭蓋内腫瘍のエンドポイントは、寿命（生存期間）の延長であった。
ハロフジノンが動物の体重へ及ぼす影響は、みられなかった。
【００２４】
【表１】
2005520806.tif 000014
ハロフジノンとＢＣＮＵとの併用は、腫瘍増殖の遅延を３．８日間から１２日間へ劇的に増加させた。
頭蓋内モデルでは、ＢＣＮＵとハロフジノンの併用は、ＢＣＮＵ単独と比較してマウスの寿命を著しく延長させた。０．２ｍｇ／ｋｇ（体重）の薬理学的最適用量は、試験範囲を超えて生存期間を延長させた（動物は１５０日後に良好な健康状態で致死させた）。
どちらの作用も用量依存性であった。
【実施例２】
【００２５】
ハロフジノンは、ウサギ大動脈平滑筋細胞（ＳＭＣ）における細胞周期停止を誘発する。
ハロフジノンにより処置されたＳＭＣが停止した細胞周期の特定段階を決定するために実験を実施した。
［3Ｈ］−チミジン取り込みによって決定されるように、生育が停止した不活発なＳＭＣへの１０％ＦＢＳの添加は、１６時間のＧ1期の後のＳ期への細胞の進行を促進する。最高ＤＮＡ合成は、血清刺激２０時間後に所見された（図１）。
ハロフジノン（１０-7Ｍ）を１０％ＦＢＳとともに添加した場合は、低レベルの［3Ｈ］−チミジン取り込みしか観察されなかった（図１）。次に、ハロフジノンが細胞周期における特定段階で増殖を停止させるかどうかを決定した。これらの実験のために、不活発なＳＭＣｓを１０％ＦＢＳ＋１０-7Ｍハロフジノン中で２４時間維持した。次に培養を洗浄し、［3Ｈ］−チミジンを含みハロフジノンを含まない１０％ＦＢＳ中に入れた。ハロフジノン除去後の様々な経過時間後に、細胞を採取し、チミジン取り込みを決定した。ハロフジノン処置細胞が生育停止期から開放されると、１０時間後までにピークを迎えるＤＮＡ合成の開始前に４時間から６時間の遅延が生じた（図１）。
Ｇ0期で停止した不活発なＳＭＣｓは、Ｇ0を通過するために最小約１６時間を必要とするので、１０％ＦＢＳ＋ハロフジノンを用いた前処置により、細胞周期は、Ｓ期から約４時間から６時間の時点まで進行することができた。そこで、ハロフジノンの継続的存在下では、ＳＭＣはＧ1期へ進行するが、Ｇ1後期において逆に停止する。
【実施例３】
【００２６】
ハロフジノンはＧ0／Ｇ1期においてラットのメサンジァル細胞（ＲＭＣ）の増殖を停止させる。
さらに、ハロフジノンが細胞周期の特定段階でメサンジァル細胞の増殖を停止させるかどうかを決定するために、また別の実験を実施した。
このために、低融合性のＲＭＣを１５０ｎｇ／ｍｌのハロフジノンの不存在下または存在下の１０％ＦＢＳ中で２４時間にわたり維持した。次に細胞を採取し、ヨウ化プロピジウムを用いて染色し、ＦＡＣＳｃａｎにより分析した。Ｇ2／Ｍ期へ進行する細胞のパーセンテージは、ハロフジノンによって２０％から７％へ低下した。Ｇ0／Ｇ1期にある細胞のパーセンテージは、ハロフジノンの不存在下では３８％であったが、ハロフジノンの存在下では６５％へ増加した。この結果は、ハロフジノンの存在下では大きな比率のメサンジァル細胞がＧ0／Ｇ1期に増殖を停止することを表示している。
【実施例４】
【００２７】
多数の骨髄腫細胞に対するハロフジノンおよびメルファランの併用処置材料および方法
複数の骨髄腫（ＭＭ）細胞系Ｕ２６６Ｂ１は、ＡＴＣＣ（ＴＩＢ−１９６）から購入した。
ＷＳＴ−１試薬（Ｒｏｃｈｅ  １  ６４４  ８０７）
メルファラン−ＳＩＧＭＡ  Ｍ２０１１
１．ＷＳＴ−生存率試験
細胞は、２０％ＦＣＳを補給したＲＰＭＩ中で生育させた。細胞は、様々な濃度のハロフジノンまたはメルファランを含む９６ウェルプレート（３０Ｋ  細胞／ウェル）内に播種した。培養期間後、ウェルにＷＳＴ試薬を添加し、細胞を３７℃、５％ＣＯ2で約２時間から４時間培養した。走査型マルチウェル式分光光度計（ＥＬＩＳＡリーダー）を使用して４４０ｎｍで吸光度を測定した。
２．細胞周期の分析
細胞（１０6）は、種々の濃度のハロフジノンを用いて４８時間培養した。細胞は、３０分間にわたり４℃でＰＢＳ中に溶解させた７０％エタノールを用いて透過化し、その後３０分間にわたり２０Ｕ／ｍｌのＲｎａｓｅ  Ａを含有する５０μｇ／ｍｌのヨウ化プロピジウム溶液０．５ｍｌ中で培養した。細胞は、フローサイトメトリーにより分析した。
結果
図２に示したように、Ｕ２６６細胞のハロフジノンによる処置は、Ｇ１期で停止される細胞数の上昇を引き起こした。
第２ステップとして、既知の抗がん療法薬であるメルファランに対するＭＭ細胞の感受性にハロフジノンを用いた前処置が及ぼす作用を試験した。
細胞（３０Ｋ）は、４８時間にわたり６０ｎＭハロフジノンを用いて処理し、引き続き様々な濃度で７２時間にわたりメルファランを用いて処理した。培養の終了時に、ＷＳＴ生存率試験により細胞の生存率を測定した。ハロフジノンおよびメルファランの連続的処理は、メルファラン単独による処理（図３）よりはるかに効果的であったので、ハロフジノンおよびメルファラン処理間の相乗効果が証明された。細胞周期のＧ１前期における細胞の同期化は、細胞をメルファラン処理へより高感受性にさせることが示唆された。
【実施例５】
【００２８】
ハロフジノンは放射線誘発性線維症を減少させた。
マウスに４ヵ月間にわたり１μｇから５μｇ／マウスのハロフジノンを１日１回腹膜内に注射した。
各動物の右脚にだけ３５Ｇｙまたは４５Ｇｙの放射線を照射した。対照群では、マウスにハロフジノンを投与せず、右脚に３５Ｇｙまたは４５Ｇｙの放射線を照射した。脚の収縮を図４に示した通りに測定した。測定は、照射後２ヵ月間から４ヵ月間の期間内に実施した。
図５に示されるように、ハロフジノン処置動物では、右脚と左脚との「脚長差」における劇的な低下が観察された。ハロフジノンの作用は、３５Ｇｙおよび４５Ｇｙの放射線を照射して、使用した全ハロフジノン濃度（１μｇから５μｇ／マウス）で、照射２ヵ月後および４ヵ月後に観察できる。
一般に、ハロフジノンを投与しなかったマウスと比較して、ハロフジノンを投与したマウスの照射された脚は、明確に剛性が小さく、皮膚の乾燥は、より少なかったので、ハロフジノンは、このin vivoモデルにおいて放射線の作用を低下させるという結論に達することができる。
【実施例６】
【００２９】
ハロフジノンは放射線感知剤として機能する。
２種の膵臓がん細胞系：３６０２Ｘｒｔおよび３６０２Ｚｙｒｄ／Ｘｒｔを２５０ｎＭハロフジノンの存在下または不存在下で２４時間にわたり培養し、その後０Ｇｙから８Ｇｙで照射し、細胞の生存率を決定した。図６に示したように、ハロフジノンは、およそ５０％の生存率の低下を引き起こした。これらの結果は、ハロフジノンが放射線の抗発がん性治療に対する腫瘍細胞の感受性を増加させるという観察所見を確証している。
特定の実施態様についての上記の説明は、不要な実験を行わずに、一般的概念から逸脱することなく、現在の知識を適用することによって第三者がそのような特定の実施態様を修飾および／または様々な用途に適切に適合させることができる本発明の一般的性質を十分に解明している。従って、それらの適合および修飾は、本明細書に開示した実施態様の意味および同等物の範囲内に包含されることは、言うまでもない。本明細書で使用した文章または用語は、限定のためではなく発明を説明するためのものであると理解されなければならない。様々な開示された化学構造および機能を実行するための手段、材料およびステップは、本発明から逸脱することなく、また別の様々な態様を取ることができる。そこで上記の本明細書および／または特許請求の範囲に見いだされるようなその後に機能についての記述が続く「〜するための手段」および「〜のための手段」またはあらゆる方法のステップにおける記述は、言及した機能を実施する現在または将来存在するどのような化学構造であっても、或いは他のいかなる機能であっても、上記の本明細書に開示した一つ以上の実施態様と正確に同等であっても無くても、すなわち同一機能を実施するために使用できるその他の手段またはステップを定義かつ含有することが意図されている；および、そのような表現には、それらの最も広範な解釈が与えられることが意図されている。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】ウサギ大動脈平滑筋細胞（ＳＭＣ）の細胞周期にハロフジノンが及ぼす作用を示した図である。
【図２】Ｕ２６６細胞の細胞周期にハロフジノンが及ぼす作用を示した図である。
【図３】Ｕ２６６細胞の生存性にハロフジノン（ＨＦ）＋メルファラン併用療法が及ぼす作用を示した図である。
【図４】放射線誘発性線維症のモデルとしてのマウスの脚の収縮を示した図である。
【図５】照射されたマウスの脚の収縮にハロフジノン（μｇ／マウス）が及ぼす作用を示した図である。
【図６】ハロフジノンを用いて前処置した２種のヒト膵臓がん細胞系についての放射線生存曲線の図である。
【図１】
2005520806.tif 000019
【図２】
2005520806.tif 000020
【図３】
2005520806.tif 000021
【図４】
2005520806.tif 000022
【図５】
2005520806.tif 000023
【図６】
2005520806.tif 000024
【国際調査報告】
2005520806.tif 000025