(57)【要約】３種の精製されたＨ．ｐｙｌｏｒｉ抗原（ＣａｇＡ、ＶａｃＡおよびＮＡＰ）の無菌的な免疫原性調製物は、ａｌｕｍでアジュバント化され、筋内注射のために等張緩衝液中にある。これらの抗原は、抗生物質および／または抗分泌剤と組み合わせて投与され得る。ウレアーゼ呼吸試験、便中抗原試験、および／または免疫学的分析は、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ感染に対する相関現象として使用され得る。尿素は、ＶａｃＡ溶解性を向上するために使用され得る。
2005506322.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
単位投与形態の組成物であって、（ａ）Ｈ．ｐｙｌｏｒｉのＣａｇＡタンパク質、ＶａｃＡタンパク質、およびＮＡＰタンパク質；（ｂ）アルミニウム塩アジュバント；ならびに（ｃ）緩衝溶液を含有し、ここで該ＣａｇＡ、ＶａｃＡ、およびＮＡＰは、各々、１０μｇ／用量と５０μｇ／用量との間の濃度で存在する、組成物。
【請求項２】
組成物であって、（ａ）Ｈ．ｐｙｌｏｒｉのＣａｇＡタンパク質、ＶａｃＡタンパク質、およびＮＡＰタンパク質；（ｂ）アルミニウム塩アジュバント；（ｃ）緩衝溶液；ならびに（ｄ）尿素を含有する、組成物。
【請求項３】
請求項１に記載の組成物であって、前記ＣａｇＡ、ＶａｃＡ、およびＮＡＰが、各々、１０μｇ／用量の濃度で存在する、組成物。
【請求項４】
請求項２に記載の組成物であって、前記ＣａｇＡ、ＶａｃＡ、およびＮＡＰが、各々、２０μｇ／ｍｌの濃度で存在する、組成物。
【請求項５】
請求項１に記載の組成物であって、前記ＣａｇＡ、ＶａｃＡ、およびＮＡＰが、各々、２５μｇ／用量の濃度で存在する、組成物。
【請求項６】
請求項２に記載の組成物であって、前記ＣａｇＡ、ＶａｃＡ、およびＮＡＰが、各々、５０μｇ／ｍｌの濃度で存在する、組成物。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物であって、前記アルミニウム塩（ａｌｕｍ  ｓａｌｔ）は水酸化アルミニウムである、組成物。
【請求項８】
請求項７に記載の組成物であって、前記水酸化アルミニウムは１ｍｇ／ｍｌの濃度を有する、組成物。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の組成物であって、前記緩衝溶液はリン酸緩衝溶液である、組成物。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の組成物であって、ｐＨが６と８の間に緩衝化されている、組成物。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の組成物であって、該組成物は等張である、組成物。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の組成物であって、該組成物は無菌である、組成物。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の組成物であって、筋内投与に適合された、組成物。
【請求項１４】
請求項１３に記載の組成物であって、注射可能物としての投与に適合された、組成物。
【請求項１５】
請求項２〜１４のいずれか１項に記載の組成物であって、前記尿素が、ＶａｃＡが可溶性のままであることを確実にするのに十分な量で存在する、組成物。
【請求項１６】
請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物であって、さらに、以下：
−Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ由来のタンパク質抗原；
−Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ由来の細菌外膜小胞（ＯＭＶ）調製物；
−Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ由来の糖類抗原；
−Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の糖類抗原；
−Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、および／またはＣ型肝炎ウイルス由来の抗原；
−Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ由来の抗原；
−ジフテリア抗原；
−破傷風抗原；
−Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ由来のタンパク質抗原；
−Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ由来の糖類抗原；
−Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ由来の抗原；
−Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の抗原；
−Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ由来の抗原；
−Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ由来の抗原；
−ポリオ抗原；
−狂犬病抗原；
−はしか抗原、耳下腺炎抗原、および／または風疹抗原；
−インフルエンザ抗原；
−Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ由来の抗原；
−Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ由来の抗原；
−Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ由来の抗原；ならびに、
−Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ由来の抗原、
から成る群から選択された抗原を含有する、組成物。
【請求項１７】
請求項１〜１６のいずれか１項に記載の組成物であって、該組成物は免疫原性の組成物である、組成物。
【請求項１８】
請求項１〜１７のいずれか１項に記載の組成物であって、該組成物はワクチン組成物である、組成物。
【請求項１９】
請求項１〜１８のいずれか１項に記載の組成物であって、さらに、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉに対して有効な抗分泌性の薬剤および／または抗生物質を含有する、組成物。
【請求項２０】
請求項１９に記載の組成物であって、前記抗分泌性の薬剤は、プロトンポンプインヒビター、Ｈ２レセプターアンタゴニスト、ビスマス塩またはプロスタグランジンアナログである、組成物。
【請求項２１】
キットであって、シリンジ、注射針、および請求項１〜２０のいずれか１項に記載の組成物を備える、キット。
【請求項２２】
請求項２１に記載のキットであって、前記組成物は前記シリンジの内部に存在する、キット。
【請求項２３】
請求項２１または請求項２２に記載のキットであって、さらに、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉに対して有効な抗分泌性の薬剤および／または抗生物質を備える、キット。
【請求項２４】
請求項２３に記載のキットであって、前記抗分泌性の薬剤は、プロトンポンプインヒビター、Ｈ２レセプターアンタゴニスト、ビスマス塩またはプロスタグランジンアナログである、キット。
【請求項２５】
請求項１〜２０のいずれか１項に記載の組成物を生成するためのプロセスであって、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉのＣａｇＡタンパク質、ＶａｃＡタンパク質およびＮＡＰタンパク質、アルミニウム塩、ならびに緩衝溶液を混合する工程を包含する、プロセス。
【請求項２６】
（ａ）請求項１〜１８のいずれか１項に記載の組成物、および（ｂ）Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉに対して有効な抗分泌性の薬剤および／または抗生物質の使用であって、哺乳動物においてＣａｇＡ、ＶａｃＡ、およびＮＡＰに対する免疫応答を惹起するための医薬の製造における、使用。
【請求項２７】
請求項２６の使用であって、前記医薬は、あらゆる年齢におけるＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉに起因する感染および／または疾患の、予防および／または処置を目的とする、使用。
【請求項２８】
請求項１〜２０のいずれか１項に記載の組成物の効果をモニタリングするプロセスであって、以下に記載の試験：ウレアーゼ呼吸試験、便中抗原排出、および／または免疫学的な（例えば、血清学的な）分析、
のうち一つまたはそれ以上が、該組成物を投与された患者に対して行われる、プロセス。
【請求項２９】
請求項２８のプロセスであって、該プロセスは、予防効果をモニタリングする、プロセス。
【請求項３０】
請求項２８のプロセスであって、該プロセスは、治療効果をモニタリングする、プロセス。
【請求項３１】
前記ウレアーゼ呼吸試験、便中抗原排出、および／または免疫学的な（血清学的な）分析の使用であって、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ感染に対する防御に相関するものとしての、使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本明細書中で引用される全ての文献は、その全体が参考として援用される。
【０００２】
本発明は、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉに対するワクチン接種の分野における発明である。
【背景技術】
【０００３】
Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ（ＨＰ）は、グラム陰性のらせん状細菌であり、ヒトの胃に感染する。世界人口の５０％を超える人がこの細菌を保有していると考えられている。
【０００４】
このＨＰ感染の高い有病率とその小児期における獲得に起因して、ＨＰに起因する疾患の世界的な根絶は、専らワクチン接種の普及によって成し得るのみである。所定の個体が受けたＨＰ感染の予防により、個体が引き続いて胃十二指腸潰瘍疾患または胃癌を発症する見込みを低下することが期待できる。
【０００５】
ＨＰにおいて種々の抗原性のタンパク質が同定されており〔例えば、参考文献１〜５〕、それらとしては、ウレアーゼ、ＶａｃＡ、ＣａｇＡ、ＮＡＰ、鞭毛タンパク質、粘着因子などが挙げられ、これらの多くはワクチンにおける使用について提案されている。２つの完全なＨＰゲノム配列も入手可能である〔６、７〕。
【０００６】
小動物および大動物の両モデルにおいて、ＨＰ感染に対する予防的ワクチン接種が実施可能であることが実証されている。感染のマウスモデル〔８〕は、消化性潰瘍疾患の患者から新たに単離されたＨＰ株がマウスに対し感染能を有することに基づいて、開発された。３種の組換えＨＰ抗原（ＶａｃＡ、ＣａｇＡ、およびＮＡＰ）を単独または組み合わせて、粘膜アジュバント（例えば、野生型Ｅ．ｃｏｌｉ、または非毒素性のＫ６３変異株由来のエンテロトキシンＬＴ）と一緒に用いてマウスの経口免疫を行うと、その後のＨＰでのチャレンジに対して防御効果を示すことが報告されている〔９、１０〕。さらに、ＶａｃＡ（ネイティブおよび組換えｐ９５）は、Ｉ型（ＶａｃＡ＋）ＨＰ株のチャレンジに対して防御効果を示したが、ＩＩ型（ＶａｃＡ−）ＨＰ株に対しては示さないことが報告されている。したがって、防御効果は抗原特異的であるようである。
【０００７】
本発明の目的は、ヒトにおける臨床的な使用のためのＨＰワクチンを提供することである。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明のワクチンは、３種の精製されたＨＰ抗原の滅菌調製物であり、アルミニウム塩（ａｌｕｍ）でアジュバント化（ｓｄｊｕｖａｎｔｅｄ）され、筋肉内投与のために等張性の緩衝溶液中にある。この処方物中の３種の抗原は、ＣａｇＡ、ＶａｃＡ、およびＮＡＰである。これらの抗原は、それぞれ、感染の病因性に関与し、前臨床試験においてその免疫原性および予防効果が実証されている。
【０００９】
したがって、本発明は、（ａ）Ｈ．ｐｙｌｏｒｉのＣａｇＡタンパク質、ＶａｃＡタンパク質、およびＮＡＰタンパク質；（ｂ）アルミニウム塩アジュバント；ならびに（ｃ）緩衝溶液を含有している組成物を提供している。
【００１０】
本発明はまた、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉのＣａｇＡタンパク質、ＶａｃＡタンパク質、およびＮＡＰタンパク質、アルミニウム塩アジュバント、ならびに緩衝溶液を混合する工程を含有する組成物を生産するためのプロセスをも提供する。これら５種の構成成分は、いかなる順序でも混合され得る；タンパク質の好ましい混合順序は、ＮＡＰにＣａｇＡを添加し、次いで、このＣａｇＡ／ＮＡＰ混合物にＶａｃＡを添加する順序である。
【００１１】
（タンパク質）
ＣａｇＡタンパク質、ＶａｃＡタンパク質およびＮＡＰタンパク質は、任意の適切な様式で生成され得る。これらのタンパク質は、ＨＰから精製されるが、より代表的には、組換え発現系から精製され得る。
【００１２】
組換え発現は、好ましくは細菌を利用し、最も好ましくはＥ．ｃｏｌｉを利用する。この細菌は一般にプラスミドを保有し、このプラスミドは本発明のタンパク質をコードする。同一細菌においてこれらのタンパク質が同時発現するよりも、むしろこのタンパク質が別々に発現することが好ましい。別個のタンパク質の精製後、次いで、これらのタンパク質は、本発明の組成物の調製時に混合され得る。従って、好ましくは、このタンパク質は、同一細菌において発現するよりも、むしろ異なる細菌において発現する（例えば、各々がこれら３種の抗原のうち１種の発現を指示している異なる細菌におけるプラスミドを使用することによって）。
【００１３】
ＣａｇＡタンパク質、ＶａｃＡタンパク質およびＮＡＰタンパク質は、好ましくは、本発明の組成物を形成するために混合される前にそれぞれが精製された形態で調製される。混合前の各々の抗原の純度は、各抗原について、好ましくは９０％以上（ｗ／ｗ）である。すなわち、ＣａｇＡ、ＶａｃＡまたはＮＡＰの量は、総タンパク質重量の少なくとも９０重量％である。さらに好ましくは、この純度は、少なくとも９１％である（例えば、≧９２％、≧９３％、≧９４％、≧９５％、≧９６％、≧９７％、≧９８％、≧９９％）。
【００１４】
これらのタンパク質は、もちろん、多様な手段（例えば、ネイティブの発現、組換え発現、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ培養物からの精製、化学合成など）によって調製することができ、また、多様な形態（例えば、ネイティブ、融合体など）で調製することができる。これらのタンパク質は、好ましくは実質的に純粋な形態で調製される（すなわち、他の細菌または宿主細胞タンパク質を実質的に含有しない）。これらのタンパク質は、混合される前に、それぞれ、溶液中か乾燥形体（例えば、凍結乾燥）で存在し得るが、好ましくは、これらは溶液中に存在する。溶液中のこれらのタンパク質の濃度を評価し、次いで、最終混合物中の各タンパク質の所望の濃度を得るために、各タンパク質溶液の適切な容量を用いる。
【００１５】
（ＣａｇＡ抗原）
ＣａｇＡ（細胞傷害性関連抗原）は、インビボのＨＰ感染の間に、活発に上皮細胞に注入されるタンパク質である。チロシンリン酸化および宿主タンパク質への結合後、ＣａｇＡはシグナル伝達カスケード、アクチンリモデリング、ＩＬ−８生成および他の応答を活性化する［１１］。ＣａｇＡは、免疫優性の抗原として同定され、ＨＰ株の大多数に存在する［１２、１３、１４］。ＣａｇＡ＋株に感染しているほとんどの個体は、この抗原に対する抗体反応を起こす。さらに、感染している個体の胃粘膜に侵入しているＣＤ４＋Ｔリンパ球のほとんどは、ＣａｇＡに対して特異的である。ＣａｇＡの理論上の質量は、約１２８ｋＤａであり、サイズの多様性は、抗原性の多様性を生じることなく、抗原中に既に存在している配列を生じる内部複製を経て獲得される［１３］。このタンパク質は、他の点では、配列の多様性において比較的保存されている［６、７］。
【００１６】
適切な任意のＣａｇＡ、例えば、対立遺伝子および多型形の形態［例えば、１５］、形態の改変体、変異体、免疫原性フラグメントなどが、本発明に従って使用され得る。任意の所定のＨＰ株中のＣａｇＡ遺伝子の同定は、入手可能なＨＰゲノム配列の点で簡単である［例えば、６および７を参照］。
【００１７】
ＣａｇＡの好ましい形態は、参考文献１３に示された配列を有する１１４７残基のタンパク質であるが、３８２位のスレオニンはアラニンに置換されている。このタンパク質は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ解析により示したように、約１００ｋＤａの主要なタンパク質バンドを有する。
【００１８】
（ＶａｃＡ抗原）
ＶａｃＡ（空胞形成毒素）は、インビボにおいて、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉから高分子量のホモオリゴマーとして放出される。各々のモノマーは９５ｋＤａのポリペプチドからなり、このポリペプチドは、タンパク質分解のプロセッシングを受け、２つのフラグメント：一方のフラグメント（ｐ３７）は酵素活性を含み、もう一方のフラグメント（ｐ５８）は胃上皮細胞レセプターに結合する領域を含む［９、１６］、を生成する。このタンパク質は、６量体または７量体の“花の様な”高分子量を有する構造を形成して構築される。ＶａｃＡ細胞毒のアミノ酸配列は、“中間領域”または“ｍ”と呼ばれるｐ５８の一部を除いてよく保存されており、そのｐ５８の一部は、対立遺伝子のバリエーションを発現する［６、７、１７］。
【００１９】
適切な任意の形態のＶａｃＡ、例えば、対立遺伝子および多型の形態［例えば、１５］、改変体、変異体、免疫原性フラグメントなどが、本発明に従って使用され得る。任意の所定のＨＰ株中のＶａｃＡ遺伝子の同定は、特に入手可能なＨＰゲノム配列の点で簡単である［例えば、６および７を参照］。
【００２０】
野生型ＶａｃＡは胃粘膜の空胞化に関連するが、本発明の組成物に使用したＶａｃＡは、好ましくは、いかなる空胞化活性も有さない形態である。これは、たとえば、折り畳み間違い［１８］、または、一部または完全な変性によると考えられる（例えば、ホルムアルデヒド処理によって［１９］）。
【００２１】
ＶａｃＡの好ましい形態は、アミノ末端がＮＨ２−Ｍｅｔ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−のアミノ酸配列で開始し、参考文献１６に示された配列の３４残基から１００１残基までを有する９８０アミノ酸の分子である。この６つのＸａａ残基のそれぞれは、互いに同じかまたは異なり得、またそれぞれは任意のアミノ酸であり得る（例えば、Ｇｌｕ、ＡｒｇまたはＨｉｓ）。この抗原は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ解析により示したように、９５ｋＤａと１００ｋＤａとの間に主要なタンパク質バンドを有する。
【００２２】
（ＮＡＰ抗原）
ＮＡＰ（好中球活性化タンパク質）は、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉの全ての株において高度に保存された抗原である［６、７、２０、２１、２２］。これは、感染の部位において、ＨＰ病原作用にとって重要な毒力因子であり、ワクチン開発のための候補抗原である。ＮＡＰタンパク質は、ヒトの好中球および単球を活性化し、その走化性を促進する。ＨＰに感染した患者の大多数は、ＮＡＰ特異的抗体を生成し、このことは、免疫におけるこの因子の重要な役割を示唆している。この活性は、ＴＮＦ−αやＩＦＮ−γによって増強され、百日咳毒素によって阻害され（ＮＡＰ活性がＧタンパク質を通じて発揮されることを示唆している）、ワルトマニン（ｗａｒｔｍａｎｎｉｎ）感受性である（ＮＡＰ活性がＰＩ３−キナーゼを通じて発揮されることを示唆している）。また、ＮＡＰ抗原でのマウスのワクチン接種が、ＨＰのチャレンジに対する防御を誘導することも示されている［１０］。ＮＡＰは、１７ｋＤａのモノマーであり、αへリックスに富み（構造の８０％）、会合してドデカン構造を形成しており、モノマー当たり４０原子に及ぶ鉄を結合している［２３］。
【００２３】
ＮＡＰの適切な任意の形態、例えば、対立遺伝子形態および多型の形態、改変体、変異体、免疫原性フラグメントなどが、本発明に従って使用され得る。任意の所定のＨＰ株中のＮＡＰ遺伝子の同定は、特に入手可能なＨＰゲノム配列の点で簡単である［例えば、６および７を参照］。ＮＡＰは、好ましくは、多量体形態で含まれる。
【００２４】
ＮＡＰの好ましい形態は、参考文献２０に示された配列を有する１４４アミノ酸のタンパク質であるが、８位のリジンはアルギニンに置換され、５８位のロイシンはイソロイシンに置換され、そして、８０位のアスパラギン酸はグルタミン酸に置換されている［２４］。この抗原は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ解析により示したように、約１５ｋＤａの主要なタンパク質バンドを有する。
【００２５】
（ａｌｕｍアジュバント）
ａｌｕｍアジュバントの選択は、感染した動物およびヒトが顕著なＴｈ１型の免疫応答を示すという観察に基づいており、一方、Ｔｈ２型の免疫応答は緩慢なＨＰ感染した個体においてより頻繁に遭遇する［２５］。ａｌｕｍは、動物およびヒトの両方において、Ｔｈ２型応答の強力なインデューサーであると認識されている。したがって、安全性およびアジュバント作用は、最小の副作用で得られる最大の免疫刺激との間でバランスがとれているべきである。アルミニウム塩は、水酸化アルミニウム（ａｌｕｍ）を含み、現時点でＦＤＡによってヒトにおいて使用することが承認されている唯一のアジュバントである。無数の投与が小児や幼児に施行されており、その安全性が広い臨床上の使用で実証されている。副作用としては、紅斑、接触過敏症、皮下小結節および肉芽腫性炎症が挙げられるが、通常、全身性の毒性はほとんどまたは全く見られていない［２６］。
【００２６】
本発明の組成物は、アジュバントとしてアルミニウム塩を含有する。適切なアルミニウム塩には、水酸化物、リン酸塩、ヒドロキシリン酸塩、酸化水酸化物、オルトリン酸塩、硫酸塩など（例えば、参考文献２７の８章と９章参照）が挙げられる。異なったアルミニウム塩の混合物もまた使用され得る。この塩は、任意の適切な形態をとり得る（例えば、ゲル、結晶、非結晶など）。
【００２７】
アルミニウム塩の好ましい量は、用量当たり約０．５ｍｇである。
【００２８】
水酸化アルミニウムは、本発明にしたがって使用するのに好ましい塩である。
【００２９】
ＣａｇＡ、ＶａｃＡおよびＮＡＰは、好ましくはアルミニウム塩に吸着される。
【００３０】
（処方物）
本発明の組成物は、単位投薬形態で処方され得る。
【００３１】
ＶａｃＡ、ＣａｇＡ、およびＮＡＰは、好ましくは、患者へ投与される単回用量が、この３種のタンパク質の各々１０μｇと５０μｇとの間を含有するような濃度で存在する。用量あたりの各々のタンパク量は、同じかまたは異なり得、そのため、この３種のタンパク質の総量は、該して３０μｇと１５０μｇとの間で変化し得る。
【００３２】
好ましい組成物は、用量当たり、各タンパク質を１０μｇずつ含有する（すなわち、合計３０μｇ）。別の好ましい組成物は、用量当たり、各タンパク質を２５μｇずつ含有する（すなわち、合計７５μｇ）。
【００３３】
本組成物の単回用量は、典型的には約５００μｌの用量を有する。
【００３４】
本発明の組成物は、緩衝溶液を含有している。この組成物は、好ましくはｐＨ６と８との間に緩衝化され、さらに好ましくはｐＨ６．５と７．５との間に緩衝化され、最も好ましくは約ｐＨ７に緩衝化される。これは、典型的にはリン酸緩衝溶液を用いて達成され得るが、他の緩衝溶液（例えば、ヒスチジン緩衝溶液）もまた用いられ得る。
【００３５】
本発明の組成物は、タンパク質の溶解性を高める成分（例えば、尿素またはグアンジン塩酸塩のような変性剤）も含有する。これらは、ＶａｃＡが可溶性のままであることを確実にするために特に効果的である（すなわち、その量はＶａｃＡが可溶性のままであることを確実にするのに十分なければならない）。従って、本発明の好ましい組成物は、例えば、２．９ｍｇ／用量と４．１ｍｇ／用量との間の低濃度の尿素を含む。これらの濃度は、安全性に関して考慮されるのではなく、尿素は通常血中において６０−２００ｍｇ／ｌで存在し、高浸透圧症を引き起こす臨床的ないくつかの設定で投与されている。また、ウサギにおいて、３．７５ｍｇ／用量および７．５ｍｇ／用量を使用した有望な安全性データも得られている。尿素は、この組成物に別々の成分として添加され得る；しかしながら、典型的には尿素は、ＶａｃＡと共に添加される。なぜなら、尿素は、純粋なＶａｃＡ組成物中に既に存在するためである。
【００３６】
本発明はまた、ＶａｃＡおよび尿素を含有する組成物も提供する。
【００３７】
本発明の組成物はまた、低濃度のフェノキシエタノールのような保存剤も含有し得る（例えば、約０．５％）。
【００３８】
本発明の組成物はまた、僅少量のクロラムフェニコールのような抗生物質も含有し得る。
【００３９】
本発明の組成物は、好ましくはヒト組織に関して等張である。
【００４０】
本発明の組成物は、好ましくは無菌である。これは、任意の簡便な手段（例えば、混合する前の成分のろ過滅菌）によって達成され得る。
【００４１】
本組成物は、本明細書中で明記された成物に加えて、成分を含有し得る。例えば、この組成物は、（ａ）、（ｂ）および（ｃ）に加えて成分を含有し得るが、組成物は、（ａ）、（ｂ）および（ｃ）からなり得る（または、本質的に成分（ａ）、（ｂ）および（ｃ）からなり得る）。
【００４２】
（投与の経路および方法）
処方されると、本発明の組成物は患者に施行され得る。処置を受ける患者は動物であり得る；特に、ヒト被験体が処置され得る。
【００４３】
異なる経路（胃内、筋内および鼻腔内）によるワクチンの相対的な免疫原性と予防の効力は、ＨＰの細胞全体溶解物またはＣａｇＡ、ＶａｃＡおよびＮＡＰの組み合わせのいずれかを用いて、ビーグル（Ｂｅａｇｌｅ）モデルにおいて試験された［２８］。ａｌｕｍアジュバントは各場合において用いられた。抗原の用量は、抗原当たり１０μｇ〜２５０μｇの範囲であった。免疫の筋内の経路は、胃内の経路および鼻腔内の経路より優れている。
【００４４】
それゆえ、本発明の組成物は、筋内経路の投与に適合されることが好ましい。この組成物の直接の送達のための他の可能な非経口の投与経路には、皮下注射および静脈注射が挙げられる。この組成物はまた、病巣内への投与、または、経口および肺投与、坐剤、経皮的（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ）または経皮的塗布（ｔｒａｎｓｃｕｔａｎｅｏｕｓ）［例えば、参考文献２９］、およびハイポスプレーによって投与され得る。
【００４５】
この組成物は、好ましくは、注射可能物として調製され、液体溶液または懸濁溶液として、あるいは、注射の前に、液体のビヒクル中の溶液または懸濁液に適合した形態の固体としてのいずれかで調製される。この組成物中のどの物質も、好ましくは筋内注射に適合性があるべきである。投与は典型的には、針、例えば、１〜３／２インチ（２．５〜４ｃｍ；２１〜２５ゲージ）の針を用いた注射が必要である。この組成物は、好ましくはシリンジ中に存在する。
【００４６】
代替として。この組成物は針を用いない方法によって投与され得る［例えば、参照文献３０］。
【００４７】
投与処置は、単回投与スケジュールまたは複数回投与スケジュールであり得、ブースター投与を含み得る。この組成物は、好ましくは患者に１コースの処置中に３回筋内投与され、必要に応じ、４回目の（ブースター）投与が続く。投与は、好ましくは上腕（三角筋）に行う。処置が一回より多い投与を含む場合、左右の腕の交互が便利である。
【００４８】
この組成物は、好ましくは、患者に投与する前に冷蔵庫（例えば、２℃と８℃との間）に保存される。
（免疫原性の組成物および医薬）
本発明の組成物は、好ましくは免疫原性の組成物であり、さらに好ましくはワクチン組成物である。
本発明に関わるワクチンは、予防薬（すなわち、感染の防御）または治療薬（すなわち、感染の処置）のいずれかであり得、典型的には予防薬である。
【００４９】
本発明はまた、本発明の組成物を医薬として使用するために提供する。この医薬は、好ましくは、哺乳動物においてＣａｇＡ、ＶａｃＡおよびＮＡＰに対する免疫応答を高めることが可能であり（すなわち、免疫原性の組成物である）、さらに好ましくは、ワクチンである。
【００５０】
本発明はまた、哺乳動物においてＣａｇＡ、ＶａｃＡおよびＮＡＰに対する免疫応答を高めるための医薬の製造において、本発明の組成物の使用を提供する。その医薬は、好ましくはワクチンである。
【００５１】
本発明はまた、哺乳動物において免疫応答を高めるための方法を提供し、その方法は、有効量の本発明の組成物を投与する工程を包含する。この免疫応答は、好ましくは防御性である。本方法は、ブースター応答を高め得る。
【００５２】
哺乳動物は、好ましくはヒトである。ワクチンの目的が予防的な使用にある場合、ヒトは好ましくは小児（例えば、幼児または乳児）である；ワクチンの目的が治療的な使用にある場合、ヒトは好ましくは成人である。小児を意図するワクチンはまた、例えば、安全性、投薬量決定、免疫原性などを評価するために、成人にも投与し得る。
【００５３】
これらの使用および方法は、好ましくは、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉが原因の疾患（例えば、慢性の胃炎、十二指腸潰瘍および胃潰瘍、胃腺癌）の予防および／または治療のためである。
【００５４】
（ワクチン効力の評価）
免疫原生の組成物またはワクチンとしての効力を評価するために、本発明の組成物は、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ感染の動物モデルにおいて試験され得る［例えば、参考文献１の５３０−５３３頁を参照のこと］。Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ感染の存在または不在は、一つまたはそれ以上の侵襲性のアプローチ（例えば、生検での内視鏡検査、培養、ウレアーゼ試験）および／または非侵襲性のアプローチ（例えば、ウレアーゼ呼吸試験、便中抗原）を用いて評価され得る。
【００５５】
ヒト被験者における予防的な効力を評価するために、以下の非侵襲性の方法のうち、１、２、または全てを使用するのが好ましい：ウレアーゼ呼吸試験（ＵＢＴ）、便中抗原排出、および／または免疫応答の分析。便中におけるＨ．ｐｙｌｏｒｉ抗原の存在は、ＵＢＴの陽性結果と同じく、活発な感染を示す。抗−Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ抗体の出現は、本発明の組成物が免疫応答を惹起していることを示す。予防的な効力は、従って、便中抗原またはＵＢＴ分析の継続的な陰性結果によって評価され、また免疫原性は、任意の生物学的な流体中における陽性の免疫応答（抗体または細胞性の）の発生によって評価され得る。これらの方法は、好ましくは、防御との相関を得るために、単独でまたは組み合わせで用いられ、必要に応じて生検のような侵襲性の方法と組み合わせる。
【００５６】
ＵＢＴは、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ感染の検出および／または診断に広く用いられる［例えば、参考文献３１と３２を参照のこと］。典型的には、アイソトープ的に標識された尿素の経口投与に続いて、標識化ＣＯ２の測定を伴う。ＵＢＴは、抗生物質治療によるＨ．ｐｙｌｏｒｉの根絶のモニターに使われているが、予防的効力のモニターには、これまで使われていない。
【００５７】
便中におけるＨ．ｐｙｌｏｒｉ抗原の存在はまた、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ治療のモニターに使われているが［例えば、参考文献３３を参照のこと］、この試験は、予防的効力または治療免疫の効力のモニターには使われていない。この試験は、通常、ポリクローナルの血清を用いて抗原を測定するので、任意の特定のＨ．ｐｙｌｏｒｉ抗原に特異的ではない。しかしながら、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉに特異的な特定の抗原（例えば、ＣａｇＡ、ＶａｃＡ）を測定することもまた可能である。
【００５８】
免疫学的な試験は、感染とワクチンの免疫原性の両方のモニタリングのために広く使用されている。血清学的な試験は典型的な例である。本発明の組成物のために、組成物中の抗原に対する（すなわち、ＣａｇＡ、ＶａｃＡおよび／またはＮＡＰに対する）抗体の存在は、免疫応答を首尾よく惹起していることを示す。これらの抗体は、任意のタイプ（例えば、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭなど）であり得、任意の生物学的な流体中において測定され得るが、血清中におけるＩｇＧの試験が好ましい。この試験は、好ましくは半定量的または定量的であり、定量的ＥＬＩＳＡは血清額的な応答を評価するための最も好ましい方法である。
【００５９】
同じ試験は、効力は異なって測定されるにも関わらず、本発明の組成物の治療の効力をモニターするのに使用され得る。例えば、むしろ陽性のＵＢＴ応答の不全が現れるのをモニタリングするよりは、陽性応答の喪失がモニターされる。
【００６０】
（本発明の組成物）
本発明は、以下を含有する組成物を提供する：（ａ）Ｈ．ｐｙｌｏｒｉのＣａｇＡタンパク質、ＶａｃＡタンパク質およびＮＡＰタンパク質；（ｂ）アルミニウム塩アジュバント；および（ｃ）緩衝溶液。ここで、ＣａｇＡ、ＶａｃＡおよびＮＡＰは、それぞれ、２０μｇ／ｍｌと１００μｇ／ｍｌとの間の濃度で存在する。
【００６１】
本発明はまた、以下を含有する組成物を提供する：（ａ）Ｈ．ｐｙｌｏｒｉのＣａｇＡタンパク質、ＶａｃＡタンパク質およびＮＡＰタンパク質；（ｂ）アルミニウム塩アジュバント；（ｃ）緩衝溶液；および（ｄ）尿素。
【００６２】
本発明はまた、以下を含有する単位投与形態の組成物を提供する：（ａ）Ｈ．ｐｙｌｏｒｉのＣａｇＡタンパク質、ＶａｃＡタンパク質およびＮＡＰタンパク質；（ｂ）アルミニウム塩アジュバント；および（ｃ）緩衝溶液。ここで、ＣａｇＡ、ＶａｃＡおよびＮＡＰは、それぞれ、１０μｇ／用量と５０μｇ／用量との間の濃度で存在する。
【００６３】
本発明はまた、本発明の組成物ならびに抗分泌性の薬剤および／またはＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉに対して有効な抗生物質を含有するキットを提供する。
【００６４】
本発明の２つの好ましい組成物は、本質的に、以下の用量当たり（例えば、０．５ｍｌ用量当たり）の組成物からなり、ｐＨ７．０からｐＨ８．０の範囲のｐＨを有する：
【００６５】
【表１】
2005506322.tif 000003
（本組成物のさらなる成分）
本発明の組成物は、典型的にでは、上記組成物に加え、一つまたはそれ以上の「薬剤的に受容可能なキャリア」を含有し、この組成物を受容した個体に対し、それ自身は有害な抗体の生成を誘導しない任意のキャリアを含む。適切なキャリアは、典型的には、大きく、緩慢に代謝された巨大分子であり、例えば、タンパク質、ポリサッカライド、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、多量体アミノ酸、アミノ酸コポリマー、トレハロース（ＷＯ００／５６３６５）および脂質集合体（油滴またはリポソームのような）である。そのようなキャリアは、当業者に周知である。本ワクチンはまた、水、生理食塩水、グリセロール、などのような希釈剤も含有し得る。さらに、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝化物質などのような補助物質も存在し得る。薬剤的に受容可能な賦形剤の徹底的な議論は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓから入手可能である。
ワクチンとして用いられる免疫原性の組成物は、必要に応じて、免疫学的有効量の抗原、および上記成分の他の任意の成分を含有する。「免疫学的有効量」によって、単回投与かまたはシリーズの一部としてかのいずれかで個体へこの量を投与することが、処置または予防のために有効であることを意味する。この量は、処置を受ける個体の健康状態および体調、年齢、処置を受ける個体の分類学的な群（例えば、非ヒト霊長類、霊長類など）、抗体合成のための個体の免疫系の能力、要求される防御の度合い、ワクチンの調剤、処置する医者の医学的立場の評価、ならびにその他の関連性のある要因に依存して変化する。その量は、慣用的な試験によって決定され得る相対的に広い範囲にあることが期待される。投薬処置は、単回投与スケジュールまたは複数回投与スケジュール（例えば、ブースター投与を含む）であり得る。ワクチンは、他の免疫調節薬剤と共に投与され得る。
【００６６】
ワクチンは、他の免疫調節薬剤と共に投与され得る。
【００６７】
本組成物は、アルミニウム塩に加えて（または代わりに）、他のアジュバントを含み得る。組成物の効果を高めるために好ましいアジュバントには以下のものが挙げられるが、それだけに限らない：（１）Ｏ／Ｗエマルジョンの処方物（ムラミルペプチド（以下参照）または細菌の細胞壁成分のような他の特定の免疫刺激性の薬剤を伴うまたは伴わない）、例えば、（ａ）マイクロフルイダイザーを用いてミクロン以下の微粒子にして処方されたＭＦ５９ＴＭ（ＷＯ９０／１４８３７；参考文献２７の１０章を参照のこと）であって、５％スクワレン、０．５％Ｔｗｅｅｎ８０および０．５％Ｓｐａｎ８５（必要に応じてＭＴＰ−ＰＥを含む）を含むＭＦ５９ＴＭ、（ｂ）ミクロン以下のエマルジョンにマイクロフルイダイズされたか、または、より大きな微粒子サイズのエマルジョンを生成するために攪拌されたかいずれかのＳＡＦであって、１０％スクワレン、０．４％Ｔｗｅｅｎ８０、５％ｐｌｕｒｏｎｉｃ−ｂｌｏｃｋｅｄ  ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｌ１２１、およびｔｈｒ−ＭＤＰを含むＳＡＦ、ならびに（ｃ）ＲｉｂｉＴＭアジュバントシステム（ＲＡＳ）（Ｒｉｂｉ  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ、Ｈａｍｉｌｔｏｎ、ＭＴ）であって、２％スクワレン、０．２％Ｔｗｅｅｎ８０およびモノホスホリルＡ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコレート（ＴＭＤ）および細胞壁骨格（ＣＷＳ）からなる群由来の一つまたはそれ以上の細菌細胞壁成分（好ましくは、ＭＰＬ＋ＣＷＳ（ＤｅｔｅｘＴＭ））を含む、ＲｉｂｉＴＭアジュバントシステム（ＲＡＳ）；（２）ＱＳ２１またはＳｔｉｍｕｌｏｎＴＭ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒ、ＭＡ）のようなサポニンアジュバントを用い得、またはＩＳＣＯＭ（免疫刺激複合体）のようなそれらから生成する微粒子であり、そのＩＳＣＯＭは、例えばＷＯ００／０７６２１のような付加洗浄剤を欠き得る；（３）完全なＦｒｅｕｎｄのアジュバント（ＣＦＡ）および不完全なＦｒｅｕｎｄのアジュバント（ＩＦＡ）；（４）サイトカインであり、例えば、インターロイキン（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２（ＷＯ９９／４４６３６）など）、インターフェロン（例えば、ガンマインターフェロン）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＦＳ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）などのような、サイトカイン；（５）モノホスホリルＡ（ＭＰＬ）または３−Ｏ−脱アシル化ＭＰＬ（３ｄＭＰＬ）例えばＧＢ−２２２０２２１、ＥＰ−Ａ−０６８９４５４；（６）３ｄＭＰＬと、例えば、ＱＳ２１および／またはＯ／Ｗエマルジョン、例えばＥＰ−Ａ−０８３５３１８、ＥＰ−Ａ−０７３５８９８、ＥＰ−Ａ−０７６１２３１、との組み合わせ；（７）オリゴヌクレオチドであって、ＣｐＧモチーフを含むオリゴヌクレオチド［Ｋｒｉｅｇ  Ｖａｃｃｉｎｅ  ２０００、１９、６１８−６２２；Ｋｒｉｅｇ  Ｃｕｒｒ  ｏｐｉｎ  Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ  ２００１  ３：１５−２４；Ｒｏｍａｎら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．、１９９７、３、８４９−８５４；Ｗｅｉｎｅｒら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ、１９９７、９４、１０８３３−１０８３７；Ｄａｖｉｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９８、１６０、８７０−８７６；Ｃｈｕら、���．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、１９９７、１８６、１６２３−１６３１；Ｌｉｐｆｏｒｄら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９７、２７、２３４０−２３４４；Ｍｏｌｄｏｖｅａｎｕら、Ｖａｃｃｉｎｅ、１９８８、１６、１２１６−１２２４、Ｋｒｉｅｇら、Ｎａｔｕｒｅ、１９９５、３７４、５４６−５４９；Ｋｌｉｎｍａｎら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ、１９９６、９３、２８７９−２８８３；Ｂａｌｌａｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９６、１５７、１８４０−１８４５；Ｃｏｗｄｅｒｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９６、１５６、４５７０−４５７５；Ｈａｌｐｅｒｎら、Ｃｅｌｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９６、１６７、７２−７８；Ｙａｍａｍｏｔｏら、Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃｈａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、１９８８、７９、８６６−８７３；Ｓｔａｃｅｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９６、１５７、２１１６−２１２２；Ｍｅｓｓｉｎａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９１、１４７、１７５９−１７６４；Ｙｉら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９６、１５７、４９１８−４９２５；Ｙｉら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９６、１５７、５３９４−５４０２；Ｙｉら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９８、１６０、４７５５−４７６１；およびＹｉら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９８、１６０、５８９８−５９０６；国際特許出願  ＷＯ９６／０２５５５、ＷＯ９８／１６２４７、ＷＯ９８／１８８１０、ＷＯ９８／４０１００、ＷＯ９８／５５４９５、ＷＯ９８／３７９１９およびＷＯ９８／５２５８１］を含有する、すなわち、少なくとも一つのＣＧジヌクレオチドを含み、シトシンの代わりに必要に応じて５−メチルシトシンが使用されるオリゴヌクレオチド；（８）ポリオキシエチレンエーテルまたはポリオキシエチレンエステル（例えば、ＷＯ９９／５２５４９）；（９）オクトキシノールと組み合わせた、ポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤（例えば、ＷＯ０１／２１２０７）あるいはオクトキシノールのような追加の非イオン系界面活性剤の少なくとも一つと組み合わせたポリオキシエチレンアルキルエーテルまたはポリオキシエチレンアルキルエステルの界面活性剤（例えば、ＷＯ０１／２１１５２）；（１０）免疫刺激性のオリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）およびサポニン（例えばＷＯ００／６２８００）；（１１）免疫刺激物および金属塩の粒子、例えばＷＯ００／２３１０５；（１２）サポニンおよびＯ／Ｗエマルジョン、例えばＷＯ９９／１１２４１；（１３）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋３ｄＭＰＬ＋ＩＬ−１２（必要に応じて＋ステロール）、例えばＷＯ９８／５７６５９；（１４）本組成物の効果を高める免疫刺激する薬剤として作用するその他の物質。
【００６８】
ムラミンペプチドとしては、Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−スレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン（ｎｏｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミル−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミン  ＭＴＰ−ＰＥ）、などが挙げられる。
【００６９】
（さらなる抗原）
本発明の組成物に含まれ得るさらなる抗原としては、以下が挙げられる：
−Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ由来のさらなる抗原、例えばＨｏｐＸ［例えば、３４］、ＨｏｐＹ［例えば、３４］および／またはウレアーゼ。
−参考文献３５〜４１におけるような、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｂ由来のタンパク質抗原であり、タンパク質「２８７」（以下参照）および誘導体（例えば「ΔＧ２８７」）が特に好ましい。
−参考文献４２、４３、４４、４５などにおいて開示されるような、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｂ由来の膜外小胞（ＯＭＶ）調製物。
−Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５および／またはＹ由来のサッカライド抗原、例えば、参考文献４６において開示された血清群Ｃ由来のオリゴサッカライド［参考文献４７も参照のこと］。
−Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来のサッカライド抗原［例えば、４８、４９、５０］。
−不活性ウイルスのような、Ａ型肝炎ウイルス由来の抗原［例えば、５１、５２］。
−表面および／またはコアの抗原のような、Ｂ型肝炎ウイルス由来の抗原［例えば、５２、５３］。
−Ｃ型肝炎ウイルス由来の抗原［例えば、５４］。
−Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ由来の抗原であり、例えば、百日咳ホロトキシン（ＰＴ）およびＢ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ由来の線維状血球凝集素（ＦＨＡ）であり、また、ペルタクチンならびに／または凝集原２および凝集原３との随意な組み合わせ［例えば、参考文献５５および５６］。
−ジフテリアトキソイド［例えば、参考文献５７の３章］のようなジフテリア抗原、例えばＣＲＭ１９７変異体［例えば、５８］。
−破傷風トキソイド［例えば、参考文献５７の４章］のような破傷風抗原。
−Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ  Ｂ由来のサッカライド抗原［例えば、４７］。
−Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ由来の抗原［例えば、３５、３６、３７］。
−Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の抗原［例えば、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５］。
−Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ由来の抗原［例えば、６６］。
−Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ由来の抗原［例えば、６７］。
−ＩＰＶまたはＯＰＶのような、ポリオ抗原［例えば、６８、６９］。
−凍結乾燥した非活性ウイルス［例えば、７１、ＲａｂＡｖｅｒｔＴＭ］のような狂犬病抗原［例えば、７０］。
−はしか、おたふくかぜおよび／または風疹抗原［例えば、参考文献５７の９章、１０章および１１章］。
−血球凝集素および／またはノイラミニダーゼ表面タンパク質のような、インフルエンザ抗原［例えば、参考文献５７の１９章］。
−Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ由来の抗原［例えば、７２］。
−Ｓｔｒｅｐｔｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ（ｓｔｒｅｐｔｃｏｃｃｕｓ  Ｂ群）由来の抗原［例えば、７３、７４］。
−Ｓｔｒｅｐｔｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ（ｓｔｒｅｐｔｃｏｃｃｕｓ  Ａ群）由来の抗原［例えば、７４、７５、７６］。
−Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ由来の抗原［例えば、７７］。
【００７０】
組成物は、一つ以上のこれらのさらなる抗原を含有し得る。
【００７１】
サッカライドまたは糖質抗原が使用される場合、これは、好ましくは、免疫原性を高めるためにキャリアタンパク質に結合体化される［例えば、参考文献７８〜８７］。好ましいキャリアタンパク質は、ジフテリアトキソイドまたは破傷風トキソイドのような、細菌の毒素またはトキソイドである。ＣＲＭ１９７ジフテリアトキソイドは、特に好ましい。その他の適切なキャリアタンパクとしては、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ外膜タンパク質［例えば、参考文献８８］、合成ペプチド［例えば、８９、９０］、熱ショックタンパク質［例えば、９１］、百日咳タンパク質［例えば、９２、９３］、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ由来タンパク質Ｄ［例えば、９４］、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ由来の毒素ＡまたはＢ［例えば、９５］、などが挙げられる。混合物が血清群ＡおよびＣの両方由来の夾膜サッカライドを含有する場合、ＭｅｎＡサッカライド：ＭｅｎＣサッカライドの比率（ｗ／ｗ）が１よりも大きい（例えば、２：１、３：１、４：１、５：１、１０：１またはさらに高い）ことが好ましい。Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの異なる血清群由来のサッカライドは、同種または異種のキャリアタンパク質に結合され得る。
【００７２】
任意の適切な結合反応が使用され得、必要な場合は任意の適切なリンカーが用いられる。
【００７３】
毒性のタンパク質抗原は、必要な場合は無毒化され得る（例えば、化学的手段および／または遺伝学的手段による百日咳毒素の無毒化［５６］）。
【００７４】
ジフテリア抗原が組成物内に含まれる場合、破傷風抗原および百日咳抗原を含むことも好ましい。同様に、破傷風抗原が含まれる場合、ジフテリア抗原および百日咳抗原を含むことも好ましい。同様に、百日咳抗原が含まれる場合、ジフテリア抗原および破傷風抗原を含むことも好ましい。
【００７５】
抗原は、好ましくは、アルミニウム塩に吸着している。
【００７６】
本組成物中の抗原は、典型的には、少なくとも各１μｇ／ｍｌの濃度で存在する。一般的に、任意の所定の抗原の濃度は、その抗原に対する免疫応答を惹起するに充分である。
【００７７】
尿素が本発明の組成物に含まれる場合は、抗原として活性なウレアーゼを含まないことが好ましい。
【００７８】
本発明の組成物中のタンパク質抗原の使用に代わるものとして、その抗原をコードしている核酸が使用され得る［例えば、参考文献９６〜１０４］。本発明の組成物のタンパク質成分は、従って、そのタンパク質をコードしている核酸（好ましくは、（例えばプラスミドの形態の）ＤＮＡ）によって置換され得る。
【００７９】
（さらなる抗ヘリコバクター薬剤）
本発明の組成物は、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉに対して効果的な、抗分泌性剤および／または抗生物質と共に投与され得る。これらの成分は、存在する任意のＨ．ｐｙｌｏｒｉ感染からの迅速な軽減を提供し、それによって、免疫治療のより長いタイムスケールを補完する。
【００８０】
これらは、タンパク質抗原と同じ組成物中で投与され得るが、典型的には、別個に投与される。それらは、タンパク質抗原と同時に投与され得るが、一般的には別個の投与プロトコル（例えば毎日）に従う。それらは、タンパク質抗原と同じ経路によって投与され得るが、一般的には経口的に投与される。それらは、タンパク質抗原と同じタイムスケールにわたって投与され得るが、一般的にはタンパク質抗原の最初の投与の少し前（例えば、５日〜１４日前まで）からタンパク質抗原の最後の投与の少し後（例えば、５日〜１４日後まで）まで投与される。
【００８１】
好ましい抗分泌剤は、プロトンポンプインヒビター（ＰＰＩ）、Ｈ２レセプターアンタゴニスト、ビスマス塩およびプロスタグランジンアナログである。
【００８２】
好ましいＰＰＩは、オメプラゾール（Ｓ型およびＢ型、Ｎａ塩およびＭｇ塩など［例えば、１０５、１０６］を含む）、ランソプラゾール、パントプラゾール、エソメプラゾール（ｅｓｏｍｅｐｒａｚｏｌｅ）、ラベプラゾール（ｒａｂｅｐｒａｚｏｌｅ）、参考文献１０７において開示された複素環式化合物、参考文献１０８のイミダゾピリジン誘導体、参考文献１０９の縮合したジハイドロピラン、参考文献１１０のピロリジン誘導体、参考文献１１１のベンズアミド誘導体、参考文献１１２のアルカリ性ジアミン誘導体などである。
【００８３】
好ましいＨ２レセプターアンタゴニストは、ラニチジン、シメチジン、ファモチジン、ニザチジンおよびロキサチジンである。
【００８４】
好ましいビスマス塩は、サリチル酸ビスマス塩およびクエン酸ビスマス塩（ｓｕｂｃｉｔｒａｔｅ）、ならびにまたモエノマイシン（ｍｏｅｎｏｍｙｃｉｎ）群の抗生物質のビスマス塩である［１１３］。
【００８５】
好ましいプロスタグランジンアナログは、ミソプロストールおよびエンプロスチルである。
【００８６】
好ましい抗生物質は、テトラサイクリン、メトロニダゾル、クラリスロマイシンおよびアモキシリンである。
【００８７】
その他の適切な抗Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ剤は、例えば、参考文献１１４において開示されている。
（定義）
用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」および「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」を意味し、例えば、「Ｘを含む」組成物とは、Ｘのみからなってもよく、またはＸ＋Ｙのように追加の何かを含んでもよい。
数値ｘに関係する用語「約」は、例えば、ｘ±１０％を意味する。
【００８８】
（発明を実施するための形態）
（ＨＰ３組成物）
安定性の研究のために、３種の組成物を作製した：
【００８９】
【表２】
2005506322.tif 000004
（安定性）
ＨＰ３ロットの安定性を、４℃および３７℃の両方において、３ヶ月間までモニターした。
【００９０】
物理化学的な安定性を、ｐＨの測定によって評価した。４℃でも３７℃でもいずれにおいても、試験期間を通して、ｐＨの有意な変化は無かった。
【００９１】
物理化学的な安定性をまた、ウエスタンブロットによる抗原のアッセイによって評価した。４℃でも３７℃でもいずれにおいても、試験期間を通して、抗原の正体の有意な変化は無かった。
【００９２】
免疫学的な安定性を、保存したワクチンを免疫に使用することによって評価した。マウスの群を、腹腔内に１度免疫し、血清試料を２８日目に採取し、ＶａｃＡ特異的抗体、ＣａｇＡ特異的抗体およびＮＡＰ特異的抗体の力価測定のためにＥＬＩＳＡによって試験した。得られたデータは、４℃で３ヶ月間まで、３種の抗原の免疫原性が満足のいくものであることを示している。３７℃で５週間保存後、ＣａｇＡの免疫原性は、４℃で保存された組成物と同程度であったが、ＶａｃＡおよびＮＡＰの免疫原性は、僅かに低下した（しかし、なお効果的であった）。
【００９３】
ストレス条件（３７℃）下で得られた結果に基づき、ＨＰ３組成物は安定であるとみなされ得る。
【００９４】
（実験的研究−免疫原性）
ＨＰ３を、単回の筋内用量として、または６週間にわたって毎週投与される６回用量としてのいずれかで、ウサギに処置した。ウサギは、単回の免疫の１５日後、３種全ての抗原に対して検出可能な低いＩｇＧ力価を一貫して有した。１５日目に開始して、複数用量研究において、徐々に高くなるレベルのＩｇＧが検出された。レベルは２９日目まで増大し、剖検および回復を通して持続した（それぞれ、３８日目および５０日目）。未処置のコントロール動物は、抗原応答を起こさなかった。
【００９５】
マウスにおいて同様の研究を行ったところ、ＨＰ３は、マウスでもまた、単回の免疫後、試験した全ての用量（１用量あたり２５μｇ以下の各抗原）で一貫して免疫原性であることが見出された。
【００９６】
（実験的研究−予防的効力）
粘膜アジュバントを伴った組換えＨＰ抗原またはネイティブなＨＰ抗原（ＶａｃＡ、ＣａｇＡ、ＮＡＰなど）によるマウスの経口免疫は、消化性潰瘍疾患の患者から新鮮に単離したＨ．ｐｙｌｏｒｉによるその後のチャレンジに対する防御を与えた［本明細書中の図１；参考文献９および１０］。観察された予防的効力の基礎となる免疫学的なメカニズムは、ＭＨＣクラスＩＩ拘束ＣＤ４＋細胞応答と関わりがあると思われるが、Ｂ細胞応答とは関わりがないと思われる［１１５］。
【００９７】
（ＨＰ感染後に症候を示さないままの）マウスとは異なり、ビーグル犬はＨＰによる症候性感染を現し、従って、感染の後、臨床学的かつ組織学的に評価され得る［２８、１１６］。このイヌモデルを使用して、細胞全体溶解物（水酸化アルミニウムアジュバントを伴う）の免疫原性は、この溶解物が鼻腔内および胃内投与されたときと比較して、筋内に投与されたときの方が大きいことを決定した。この筋内免疫はまた、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉによるチャレンジに対する防御も付与した（図２）。
【００９８】
水酸化アルミニウムアジュバントを伴うＶａｃＡ抗原、ＣａｇＡ抗原およびＮＡＰ抗原（各抗原は１０、５０または２５０μｇ／用量）の筋内注射は、同様に免疫原性であり、その後の感染からの防御を付与した（図３）。これらの実験において、各抗原を１０μｇまたは５０μｇ受けたいずれの動物にも（８頭中０頭）、組織学的感染徴候も免疫組織学的感染徴候もなかった。
【００９９】
（実験的研究−治療効力）
粘膜アジュバントと共に、組換えＶａｃＡおよび組換えＣａｇＡを胃内に与えたマウスにおいて、慢性のＨ．ｐｙｌｏｒｉ感染が根絶された［１１７］。少なくとも３ヶ月の間、感染の再発は無く、それらのマウスは、その後、ＨＰを用いたチャレンジによる感染に対して抵抗性であった。このことは、これらの組換え抗原を用いたワクチン接種が、確立した感染の根絶を引き起こしたことに加えて、特異的免疫記憶を誘導したことを示唆している。
【０１００】
ＨＰに感染させ、その後、ＶａｃＡ＋ＣａｇＡ＋ＮＡＰ（水酸化アルミニウムアジュバントを伴う）の組み合わせを１０μｇまたは５０μｇ用いて免疫したビーグル犬は、用量依存的な抗原特異的抗体応答を開始した（図４）。それらのビーグル犬は、免疫後７週目および１１週目では、粘膜ウレアーゼ試験によれば感染の根絶を示さなかった。しかしながら、１７週目には、いずれかの投薬量によって処置した４頭の動物のうち２頭は、粘膜ウレアーゼ試験陰性であり、それに対し、コントロール動物の４頭全てにおける試験は強く陽性のままであった。さらに、胃の炎症性スコアは、抗原で処置した動物において炎症の減退を示し、アジュバントのみを受けたコントロールにおいて炎症の変化が無いことを示した。
【０１０１】
他の実験においては、ビーグル犬をＨＰによって感染させ、その後、１０、５０および２５０μｇの抗原または細菌溶解物で筋内処置した。
【０１０２】
（実験的研究−プロトンポンプインヒビターとの組み合わせでの治療効力）
１４頭のビーグル犬を、胃内投与によって、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ  ＳＰＭ３２６に実験的に感染させた。３頭のコントロールのイヌは、細菌の代わりに生理食塩水を用いたこと以外、同じ処置を受けた。
【０１０３】
これらの１７頭のイヌを、次の実験群に分けた：
【０１０４】
【表３】
2005506322.tif 000005
免疫を、１ヶ月間隔で、筋内に３回与えた。オメプラゾールを、毎日、経口的に投与し、この投与は、ワクチンの最初の用量の２日前に開始し、ワクチンの最後の用量の２週間後に終了した。
【０１０５】
試験期間を通して、有害な臨床上の徴候も、体重変化も体温変化も認めなかった。
【０１０６】
効力を、生検試料に関する免疫組織化学と組織病理学によって評価した。
【０１０７】
予備的な結果を、最後のワクチン用量の投与３週間後に摂取した生検を用いて得た。
【０１０８】
免疫した両群（＃１および＃２）において、４頭中３頭のイヌが免疫組織化学によってＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ陰性になり、またそれらの炎症スコアは、ワクチン接種前の生検において観察されたスコアと比較して、低減した。２群の間に有意な違いは認められなかった。
【０１０９】
逆に、感染した両方のコントロール群（＃３および＃４）において、３頭中３頭のイヌが免疫組織化学によってＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ陽性のままでありそれらの炎症スコアは、ワクチン接種した群のスコアよりも高かった。
【０１１０】
（前臨床的な研究−毒素学）
１週間当たり１回の頻度で、ＨＰ３の６用量までの投与を立証するために、４回の毒素学的研究を行った。３回目と４回目の研究は、適正ラボラトリー基準（ＧＬＰ）に適合させるために設計した。ＧＬＰ実施における局部的（注射の部位）および全身性の毒性は、以下に基づいて評価した：臨床的な徴候、身体検査、皮膚スコア、体重および体温、食物消費、検眼鏡検査、臨床の病理学（血清化学、血液学、フィブリノーゲンを含む凝固）ならびに、最大限の肉眼的な死後の試験および組織病理学的な試験。
【０１１１】
この毒素学的調査に加え、その他の２つの種において行った効力調査から、適切な安全性の情報が引き出され得る。ＨＰ３抗原を持つマウスおよびビーグル犬において、免疫原性およびチャレンジの研究を行った。マウスにおいては、ＨＰ３処方に帰する死は無く、またいかなる臨床の徴候に基づいた明白な毒性も無かった。イヌにおいては、ＨＰ３処置に関係する死、臨床の徴候、体重の変化もしくは臨床の病理学的発見は無かった。
【０１１２】
（刺激研究）
雄のＮＺＷウサギにおいて、単回投与筋内刺激研究（コード３３９１．２４）を実施した。この研究の目的は、ウサギにおいて、尿素を含む、３種の抗原、ａｌｕｍおよび調剤賦形剤の局所的な刺激作用の可能性を評価することである。一日目に、１２頭のウサギは、脊椎傍筋に０．５ｍｌの試験品およびコントロール品の３回の筋内注射を以下のように受けた：
【０１１３】
【表４】
2005506322.tif 000006
臨床の徴候、体重、皮膚の刺激、血液学、凝固、および血清化学を評価した。３日目および１５日目に、群あたり３頭の動物を剖検した。肉眼的な死後の試験を行い、注射部位、胃、十二指腸および肉眼的な病変を組織病理学的に試験した。
【０１１４】
死もしくは処置に関連した体重、血液学、凝固、または血清化学における作用は無かった。ＨＰ３を与えた２頭の動物において非常にかすかな紅斑が見られた（群２、部位１）。ａｌｕｍコントロールを与えた１頭の動物において明確な紅斑が見られ（群２、部位２）、それは減少し、５日目までに完全に解消した。いずれの他の動物にも皮膚の所見は無かった。２頭の動物において、試験部位での明白な傷は紅斑と相互関係を示した。
【０１１５】
３日目に剖検した動物における注射部位の組織病理学は、針での外傷に帰する急性の炎症／病巣の壊死からなるものであった。１５日目に安楽死させた動物において、注射部位の外傷は、小さな病巣の固まりかまたはマクロファージの蓄積からなるものであった。これらは、２週間前に見られた急性の炎症および病巣の壊死の後の典型的な後遺症であった。群間または注射部分間の炎症性成分のサイズまたは特性における違いは、組織学的な試験において検出され得なかった。
【０１１６】
結論：研究条件下において、ａｌｕｍでアジュバント化され、低い尿素（３．７５ｍｇ／用量）または高い尿素（７．５ｍｇ／用量）を含むＨ．ｐｙｌｏｒｉ抗原（ＨＰ３）は、単回の筋内注射としてウサギに投与した場合、充分に耐性であった。皮膚における所見（紅斑）および筋肉における所見（擦り傷／炎症／壊死）は群および部位にわたって比較し得た。ＨＰ３抗原を伴うかまたは伴わない局所的な処方物の応答原性（ｒｅａｃｔｏｇｅｎｉｃｉｔｙ）は低い桁であり、生理食塩水中のａｌｕｍかまたはＨＰ３プラシーボ処方物（抗原なし）のいずれかと類似していた。
【０１１７】
（耐性研究）
耐性研究（コード７７９５）は、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉに感染したビーグル犬を用いて行った。
【０１１８】
イヌは、１日おきに３回の経口投与（各１０９  ｃｆｕ）を用いてＨ．ｐｙｌｏｒｉに感染させた［１１７］。感染の後、２動物／性別／群に、ＣａｇＡ＋ＶａｃＡ＋ＮＡＰ（各抗原１０μｇまたは５０μｇ／用量）またはａｌｕｍコントロールのいずれかの筋内注射を与えた。４番目の群は  抗生物質およびプロトンポンプインヒビター（クラリスロマイシン２５０ｍｇ、メトロニダゾール２５０ｍｇ、ビスマスクエン酸塩６０ｍｇ、オメプラゾール２０ｍｇ）を含む通常の投薬レジメンで処置した。血清学的評価および内視鏡的評価を、最初の投与後、７週目、１１週目、１７週目、および２７週目に行った：
【０１１９】
【表５】
2005506322.tif 000007
２群および３群の動物は、３種類の各抗原に対する抗体反応を示した。用量−応答は、ＮＡＰ成分に最も顕著であった（図４）。どちらの抗原用量でのワクチン接種も、臨床的徴候、体重、注射部位反応、体温、血液学、または血清化学の見地から、コントロール群と比較して、いかなる有害な作用も引き起こさなかった。
【０１２０】
ワクチン接種後７週目および１１週目における迅速な尿素試験による胃の生検の評価は、アジュバントまたは抗原を与えた全ての動物におけるＨ．ｐｙｌｏｒｉ感染の残存を示した。普通の抗生物質処置を与えた動物において、７週目および１１週目において、それぞれ、４頭中１頭および４頭中２頭が感染陽性であった。
抗ＶａｃＡ特異的なモノクローナル抗体を用いた免疫組織化学による胃の生検の評価は、両時点における全てのコントロール動物の感染を確実にした。処置群において、免疫組織化学の結果は多様であり、各群中の２頭または３頭の動物は陰性として記録された。結果は図５に要約する。
【０１２１】
１７週目には、群１の４頭中４頭、群２の４頭中２頭、群３の４頭中２頭、および群４の４頭中２頭において、迅速なウレアーゼ試験によってＨ．ｐｙｌｏｒｉ感染を検出した。７週目および１１週目の評価とは対照的に、免疫組織化学の研究は迅速な尿素試験の結果を確実にした。
【０１２２】
結論：これらの研究の結果は、筋内に与えたＶａｃＡ、ＣａｇＡおよびＮＡＰの混合物は、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ感染の部分的な根絶を誘導し、感染後の胃炎の組織学的重篤度に有益な効果を及ぼすことを示唆している。さらに、抗原によって引き出された免疫応答の増進は、胃腸または全身の任意の有害な作用に関与しているという証拠は無かった。
【０１２３】
（ＧＬＰの安全性および耐性の研究（単回用量））
単回用量の安全性および耐性の研究（コードＵＢＡＷ−１５４）をウサギにおいて実施した。本研究の目的は、ＮＺＷウサギに対するＨＰ３の筋内投与の単回用量の安全性および耐性を評価することであった。２番目の免疫原性の評価もまた、研究パラメータとして含めた。本研究は、４頭／性別／群の３群から成った。各動物は、ａｌｕｍ／生理食塩水の混合物（群１）、ａｌｕｍ／ＨＰ３プラシーボ処方物（群２）、またはＨＰ３（群３）のいずれかを受けた。単回の筋内用量（０．５ｍｌ）を本研究の１日目に左四頭筋に注射した。２頭の動物／性別／群を、３日目および１５日目に、包括的な肉眼的剖検および組織収集のために安楽死させた。
【０１２４】
【表６】
2005506322.tif 000008
潜在的な毒性を、臨床の観察および注射部位の観察、体重、身体検査（体温、呼吸数、心拍数、および毛管補充時間）、眼に関する試験、食物消費、臨床病理学（血液学パラメータ、凝固パラメータ、および血清化学パラメータ）、末梢器官重量、ならびに選択された組織の肉眼的評価および顕微鏡的評価に基づき、評価した。血清を、ＨＰ３に対する抗体の力価分析のために全ての動物から収集した。
死、あらゆる生前の研究パラメータにおける処置に関わる有害な作用、および末梢器官重量における関連性のある変化は、無かった。皮膚の観察のみは、雄番号５（群２）に関して、投与後２４時間で「非常にかすかな」紅斑スコアを有し、４８時間の観察までに解消した。注射部位の肉眼的な死後の所見は、群１の雌２頭中１頭および群３の雄２頭中１頭において、紫のしみからなった。注射部位を除外すると、処置に帰し得る顕微鏡的な変化は無かった。特記した任意の異常（小さな炎症または変性性の変化）は、このウサギの系および年齢におけるバックグラウンドとみなされた、タイプ／発生数／重篤度の異常であった［１１８］。顕微鏡的な注射部位の所見は、最小から中程度であり、次のように表した：
【０１２５】
【表７】
2005506322.tif 000009
処置に関わらない組織病理学的類似性に基づき、ＨＰ３の単回筋内注射は、雄および雌のウサギにおいて耐性をよく誘導した。３日目における任意の観察は１５日まで続き、回復および可逆性を示した。
【０１２６】
抗−ＮＡＰ抗体、抗−ＣａｇＡ抗体、および抗−ＶａｃＡ抗体の１５日目の血清サンプルの分析により、３種の抗原全てに対する低いが測定可能なレベルのＩｇＧが群３の４頭のウサギ全てにおいて見出されたことを示した（上記を参照）。コントロールウサギは抗体に対して陰性であった。
【０１２７】
結論：本研究の条件下において、ＨＰ３の０．５ｍｌの単回筋内投与は、雄および雌のＮＺＷウサギにおける耐性および免疫原性をよく誘導した。局所的なＨＰ３の応答原性（ｒｅａｃｔｏｇｅｎｉｃｉｔｙ）の桁は低く、ａｌｕｍコントロールかまたはプラシーボのいずれかと類似していた。
（ＧＬＰ安全性および耐性研究（複数回用量））
単回投与の安全性および耐性の研究（コードＵＢＡＷ−１５５）をウサギにおいて実施した。本研究の目的は、ＮＺＷウサギに対する筋内注射によって、ＨＰ３の複数回（６回）用量（毎週で６週間）の安全性と耐性を評価することであった。二次免疫原性の評価もまた、研究パラメータとして含めた。本研究は、６頭／性別／群の３群で構成した。各動物は、ａｌｕｍコントロール、プラシーボ、またはＨＰ３のいずれかを受けた。投与容量は０．５ｍｌであり、研究１日目、８日目、１５日目、２２日目、２９日目および３６日目に、左右の四頭筋に交互に注射された。３頭／性別／群を、包括的な肉眼的壊死のために安楽死させ、３８日目および５０日目の組織収集は次のようである：
【０１２８】
【表８】
2005506322.tif 000010
潜在的な毒性を、以下のパラメータ：毎日の臨床的徴候、皮膚の注射部位の観察（各投与の２４時間後および４８時間後）、体重、身体検査（体温、呼吸数、心拍数、および毛管補充時間）、眼に関する試験、食物消費、臨床病理学（血液学パラメータ、凝固パラメータ、および血清化学パラメータ）、末梢器官重量、最大限の肉眼的な死後の試験、および顕微鏡的評価に基づいて、次の選択した組織において評価した：
【０１２９】
【表９】
2005506322.tif 000011
投与後２４時間で観察された「非常にかすかな」皮膚の紅斑は、４８時間の観察までに散発し、解消した。３群間において、皮膚観察の発生率および重篤度に顕著な相違は無かった。
【０１３０】
死、および処置に関わるあらゆる生前の研究パラメータ（体温を含む）への有害な作用は無かった。いくつかの血液学パラメータ、血清化学パラメータおよび凝固パラメータにおいて、統計的に有意ないくらかの群間の相違はあったが、全ての値は、この年齢および株のウサギにとって正常な範囲内であり、変動の程度は小さく、用量の持続との一貫した関連性は無かった。
注射部位における肉眼的な死後の所見は、群１および群３の少数の雄および雌において、四頭筋の変色（赤／紫／黄褐色）からなった。これらの変色部位は、いくつかの組織学的所見と一致しており、次の表に要約した：
【０１３１】
【表１０】
2005506322.tif 000012
２頭の動物、すなわち群１の１頭および群３の１頭は、注射部位に壊死を示す白色の変色を有したが、対応する顕微鏡的な病変は無かった。
注射部位の顕微鏡的な試験により、ａｌｕｍコントロール（群１）およびＨＰ３プラシーボコントロール（群２）において見られた任意の炎症は、ＨＰ３ワクチン注射部位に類似していることを示した。軽度な肉芽腫性の炎症が、群２の１頭の雄に現れた。マクロファージ細胞質は、顆粒状の両染性の物質、推定的にはａｌｕｍで膨張した。アルミニウムを基礎としたアジュバントの筋内投薬に関連した肉芽腫性の炎症は、いくつかの種において報告されている［１１９、１２０］。
ＨＰ３に関係した顕微鏡的な変化は、３８日目および５０日目ともに群３の全ての動物の脾臓において示された。群１または群２と比較すると、小胞の過形成（Ｂ細胞依存的な動脈周囲の部位）が、高い出現率および重篤度で起こった。５０日目と比較して、３８日目において、両性別でリンパ系の過形成の平均重篤度にわずかな増加が示された。このような発見は、ＨＰ３ワクチンに対するウサギの免疫応答に関係し得る。
注射部位および脾臓を除くと、処置に起因し得る顕微鏡的な変化は見られなかった。示されたその他の任意の異常は、このウサギの種および年齢においてバックグラウンドであるとみなされるタイプ／重篤度／出現率の異常であった［１１８］。
ＨＰ３に対する抗体力価の分析のために、全ての動物から血清を採取した。ＨＰ３で免疫した１２頭の全てのウサギは、１５日目までに、３種の抗原各々に対する検出可能な抗体力価を有していた。群３の全てのウサギにおけるＩｇＧ抗体力価は、２９日目でさらに高く、３８日目および５０日目において同じレベルを持続した（上記参照）。全てのコントロールウサギは陰性結果を与えた。
結論：本研究条件下において、１週間あたり１回のスケジュールで６回のＨＰ３の０．５ｍｌの筋内注射の施行は、雄および雌のＮＺＷウサギにおいて十分耐性であり、かつ免疫原性であった。局所的なＨＰ３の応答原性（ｒｅａｃｔｏｇｅｎｉｃｉｔｙ）の桁は低く、生理食塩水中のａｌｕｍかまたはプラシーボ処方薬のいずれかと類似していた。
（ヒトへの施行）
典型的なヒトへの免疫は、ａｌｕｍアジュバントを伴う各２５μｇのＮＡＰ抗原、ＣａｇＡ抗原、およびＶａｃＡ抗原の３回の筋内注射を用いる。動物の毒素学的研究は、約４ｋｇまでの重量があるウサギにおいて高いヒト用量のＨＰ３を用いた。６０ｋｇという成人体重は、控えめな見積もりとして使用され得る。従って、体重を基準にすると、これらのウサギに与えた各用量は、ヒト成人におけるよりも少なくとも１５倍高い。また、３回のヒトの投薬プログラムは、ウサギの複数回用量の研究において３回の用量分超過した。
これらの毒性および免疫原性の結果に基づき、以下の事を予期し得た：１０μｇ／用量または２５μｇ／用量のＣａｇＡ、ＶａｃＡおよびＮＡＰの筋内注射の免疫治療的な臨床の投薬プログラム（毎週で３週間）または予防的な臨床の投薬プログラム（毎月で３ヶ月）は、ヒトにおいて免疫原性であり、十分耐性である。任意の局所的な作用は、ａｌｕｍアジュバントによって見られた作用と類似するはずであり、全身性の作用は、他のａｌｕｍでアジュバント化されたタンパク質抗原の筋内投薬と一致するはずである。
ヒトへの利用について、典型的なワクチンは、精製されたＣａｇＡ、ＶａｃＡおよびＮＡＰの無菌的調製物であり、水酸化アルミニウムアジュバントを含み、筋内注射のために等張緩衝液中にある、調製物である。Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ抗原は、遺伝子操作されたＥ．ｃｏｌｉ細胞において、プラスミドベクター発現システムを利用して発現される。ＶａｃＡ抗原の相対的な不溶性のため、本ワクチンは、２．９〜４．１ｍｇ／用量の尿素を含む。本ワクチンは、抗原およびアジュバントを含むシリンジ中で予め混合した形式で提供される。これらのシリンジは、投与の準備が整うまで、２〜８℃の間で冷蔵保存すべきである。本ワクチンは、使用前に振盪すべきである。ワクチン接種の部位は、皮膚消毒剤（例えば、７０％アルコール）で消毒すべきである。ワクチン接種の前に、皮膚は再度乾燥しなければならない。シリンジ中で予め混合した単回用量ワクチンの内容（０．５ｍｌ）は、１〜３／２インチ針を用いて上腕（三角筋）のどちらか一方に筋内投与する。
ヒトへの使用のために２種の代替のワクチン組成物は、０．５ｍｌの単回用量において次の成分を含有し、６．５〜７．５の範囲のｐＨを有する：
【０１３２】
【表１１】
2005506322.tif 000013
極微量のクロラムフェニコールも存在し得る。
【０１３３】
（ヒトにおける試験−安全性および免疫原性）
これらの２種の組成物（および抗原を除いたプラシーボ）は、健康な成人における安全性および免疫原性を評価する目的で、無作為に、管理下において、単回盲目的に（ｓｉｎｇｌｅ−ｂｌｉｎｄ）、用量変動的に、およびスケジュール最適化の研究において、ヒトに試験した。２つの試験集団を用いた：１つはＨ．ｐｙｌｏｒｉ感染陰性の集団（５７人の患者）であり、他の１つは、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ感染陽性の集団（５６人の患者）である。組成物は、予め満たされたシリンジから０．５ｍｌ用量として投与した。
【０１３４】
５７人のＨＰ陰性ボランティアは７群に分かれ、２つの異なる投与スケジュールで、高用量（Ｈ；各抗原２５μｇずつ）または低用量（Ｌ；各抗原１０μｇずつ）のワクチンもしくはプラシーボ（Ｐ；抗原なし）を受けた。第１回の投与は時間ゼロにあたえた。群１から群５には、その後３回の投与を１ヶ月目、２ヶ月目および４ヶ月目に与えた（「毎月」群）。群６および群７には、その後２回の投与を１週目および２週目に与えた（「毎週」群）。
【０１３５】
【表１２】
2005506322.tif 000014
ボランティア５７人の人口統計学のデータは、以下の通りであった：
【０１３６】
【表１３】
2005506322.tif 000015
（安全性）
以下の安全性パラメータをモニターした：
−局部の反応および全身の反応（注射後６日目まで）。
−有害な結果および重大な結果（全研究期間中）。
−標準的なラボパラメータ、すなわち、血清化学および腎機能（Ｎａ、Ｋ、Ｃｌ、ＨＣＯ３、尿素、クレアチニン）、全血球数（ＷＢＣおよび差異、Ｈｂ、ヘマトクリット、血小板）、肝機能（ＡＬＴ、ＡＳＴ、アルカリホスファターゼ、ビリルビン、プロトロンビン時間、総タンパク質、アルブミン）。
【０１３７】
紅斑、硬化、不快感、筋痛、頭痛、関節痛、疲労感および熱についてのデータが、順に、図６から図１３に示される。図６および図７は局部の反応を示し、一方、図８から図１３は全身の反応を示す。プラシーボ被験者の７８％と比較して非プラシーボ被験者の約８９％によって、短時間継続性の痛みが報告された。痛みは主として穏やかであり、注射後に消滅した。全身の反応原性（ｒｅａｃｔｏｇｅｎｉｃｉｔｙ）の結果は、以下の表に要約した：
【０１３８】
【表１４】
2005506322.tif 000016
局部の反応および全身の反応の頻度および重篤度は、本集団において、予期したとおりであった。有害な現象は、本質的に穏やかで、一時的（数時間から平均２日までの持続）であり、水酸化アルミニウムアジュバントを用いた臨床的な研究における先の観察とよく一致した。本組成物の投与に関係のある重大な有害現象は、これらのボランティアにおいて全く起こらなかった。局部の反応は、全ての群における注射部位の局部的な痛みを除くと、頻繁ではなかった。硬化および紅斑は、「毎週」群において、より頻繁に起こった。全ての群間で最も頻繁に報告のあった誘導された（ｓｏｌｉｃｉｔｅｄ）任意の重篤度の全身の反応は、疲労感、頭痛および不快感であった。局部および全身の免疫後の反応は、たいてい穏やかであり、２４時間〜７２時間以内に消滅した。本組成物の投与は、実験室パラメータを有意には変えなかった。本発明の組成物は、従って、ヒトへの投与にとって安全である。
（免疫原性）
以下の免疫原性パラメータをモニターした：
−ＣａｇＡ、ＶａｃＡおよびＮＡＰに特異的な血清ＩｇＧ。
【０１３９】
−ＣａｇＡ、ＶａｃＡおよびＮＡＰによって推進された過形成応答。
【０１４０】
免疫応答を図１４から図１９に示す。これらのデータは、全てのワクチン接種群において、本組成物が抗体レベルおよび細胞レベルの両方で免疫原性であることを示している。被験者の８５％以上が、３回目の免疫後、ＣａｇＡ、ＶａｃＡおよびＮＡＰに対する抗体応答を有意に増した。被験者の大多数は、３回目の投与後数ヶ月、３種の抗原全てに対するカットオフ限界を超える抗体力価を維持した。被験者の大多数は、有意な抗原特異的な細胞性の過形成応答（特に、ＣａｇＡおよびＶａｃＡ）を示した。本組成物は、抗原特異的な記憶を誘導し、抗体応答はブースト可能であり、そして少なくとも２つの抗原に対する有意に増大した応答は、３回目の免疫後、３ヶ月まで検出可能であった。
【０１４１】
本発明は、例証としてのみ記述され、本発明の範囲および意図に包含される限り、改良が成され得ると理解される。
【０１４２】
【表１５】
2005506322.tif 000017
【０１４３】
【表１６】
2005506322.tif 000018
【０１４４】
【表１７】
2005506322.tif 000019
【図面の簡単な説明】
【０１４５】
【図１】図１は、ＬＴＫ６３をアジュバントとして使用し、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ抗原［９、１０］を用いた予防薬の経口免疫の効力を示す。防御は、示された処置を受けたマウス由来の胃をプレーティングした後のコロニーの不存在として評価される。データは異なる実験に由来する。
【図２】図２は、異なる経路による細胞全体溶解物を用いた免疫後の、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ感染に対する通常のビーグル犬の防御を示す。図２Ａは、このイヌにおける免疫原性を示す（各グラフの４本のバーは、左から右へ以下である：コントロール、胃内、鼻腔内、筋内）。図２Ｂは、防御の結果を要約している。防御を、迅速尿素試験、組織学、免疫組織化学、ならびに胃の肉眼的研究および顕微鏡研究）によって検出可能な細菌の不存在として評価した。
【図３】図３は、精製されたＶａｃＡ抗原、ＣａｇＡ抗原またはＮＡＰ抗原あるいは細胞全体溶解物での筋内免疫によって付与された免疫原性（３Ａ；１群当たりの平均力価）および防御（３Ｂ）を示す。防御を、図２について記述されたように評価した。
【図４】図４は、ビーグルにおけるＣａｇＡ、ＶａｃＡおよびＮＡＰの混合物の免疫原性を示す。動物を、ａｌｕｍをアジュバントとして各抗原１０μｇ（四角）かまたは５０μｇ（丸）のどちらかで免疫した。矢印は免疫日を示す。
【図５】図５は、ビーグルにおける耐性研究による胃の生検の結果を示す。
【図６】図６は、１日目から６日目までを通しての、ヒトへの投与についての安全性データを示す：紅斑。軽度の反応（一過性から軽度の不快感）を、白抜きのバーとして示す；中程度の反応（普通の日常の活動が制限されない）を灰色のバーとして示す；重篤な反応（普通の日常の活動を行うことが出来ない）を黒色のバーとして示す。横軸はパーセンテージを示す。
【図７】図７は、１日目から６日目までを通しての、ヒトへの投与についての安全性データを示す：硬化。軽度の反応（一過性から軽度の不快感）を、白抜きのバーとして示す；中程度の反応（普通の日常の活動が制限されない）を灰色のバーとして示す；重篤な反応（普通の日常の活動を行うことが出来ない）を黒色のバーとして示す。横軸はパーセンテージを示す。
【図８】図８は、１日目から６日目までを通しての、ヒトへの投与についての安全性データを示す：倦怠感。軽度の反応（一過性から軽度の不快感）を、白抜きのバーとして示す；中程度の反応（普通の日常の活動が制限されない）を灰色のバーとして示す；重篤な反応（普通の日常の活動を行うことが出来ない）を黒色のバーとして示す。横軸はパーセンテージを示す。
【図９】図９は、１日目から６日目までを通しての、ヒトへの投与についての安全性データを示す：筋肉痛。軽度の反応（一過性から軽度の不快感）を、白抜きのバーとして示す；中程度の反応（普通の日常の活動が制限されない）を灰色のバーとして示す；重篤な反応（普通の日常の活動を行うことが出来ない）を黒色のバーとして示す。横軸はパーセンテージを示す。
【図１０】図１０は、１日目から６日目までを通しての、ヒトへの投与についての安全性データを示す：頭痛。軽度の反応（一過性から軽度の不快感）を、白抜きのバーとして示す；中程度の反応（普通の日常の活動が制限されない）を灰色のバーとして示す；重篤な反応（普通の日常の活動を行うことが出来ない）を黒色のバーとして示す。横軸はパーセンテージを示す。
【図１１】図１１は、１日目から６日目までを通しての、ヒトへの投与についての安全性データを示す：関節痛。軽度の反応（一過性から軽度の不快感）を、白抜きのバーとして示す；中程度の反応（普通の日常の活動が制限されない）を灰色のバーとして示す；重篤な反応（普通の日常の活動を行うことが出来ない）を黒色のバーとして示す。横軸はパーセンテージを示す。
【図１２】図１２は、１日目から６日目までを通しての、ヒトへの投与についての安全性データを示す：疲労感。軽度の反応（一過性から軽度の不快感）を、白抜きのバーとして示す；中程度の反応（普通の日常の活動が制限されない）を灰色のバーとして示す；重篤な反応（普通の日常の活動を行うことが出来ない）を黒色のバーとして示す。横軸はパーセンテージを示す。
【図１３】図１３は、１日目から６日目までを通しての、ヒトへの投与についての安全性データを示す：発熱。軽度の反応（一過性から軽度の不快感）を、白抜きのバーとして示す；中程度の反応（普通の日常の活動が制限されない）を灰色のバーとして示す；重篤な反応（普通の日常の活動を行うことが出来ない）を黒色のバーとして示す。横軸はパーセンテージを示す。
【図１４】図１４は、ヒトへの投与のための免疫原性のデータを示す。図１４は、毎月の群における抗体応答（血清ＩｇＧ抗体ＧＭＴ）を示す。横軸は最初の免疫の後の月数を示す。
【図１５】図１５は、ヒトへの投与のための免疫原性のデータを示す。図１５は、毎週の群における抗体応答（血清ＩｇＧ抗体ＧＭＴ）を示す。横軸は最初の免疫の後の月数を示す。
【図１６】図１６は、ヒトへの投与のための免疫原性のデータを示す。図１６は、毎月の群において、組成物中の３種の全ての抗原に対する抗体を有する被験体のパーセンテージを示す。横軸は最初の免疫の後の月数を示す。
【図１７】図１７は、ヒトへの投与のための免疫原性のデータを示す。図１７は、毎週の群において、組成物中の３種の全ての抗原に対する抗体を有する被験体のパーセンテージを示す。横軸は最初の免疫の後の月数を示す。
【図１８】図１８は、ヒトへの投与のための免疫原性のデータを示す。図１８は、毎月の群において、３種の抗原に対する細胞の増殖応答を示す。横軸は最初の免疫の後の月数を示す。
【図１９】図１９は、ヒトへの投与のための免疫原性のデータを示す。図１９は、毎週の群において、３種の抗原に対する細胞の増殖応答を示す。横軸は最初の免疫の後の月数を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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