(57)【要約】本発明は、呼吸器系の病原体、例えば、黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus)による感染の処置のための薬学組成物に関し、更に特に、本発明は、Ｎ−アセチル−システインを、あるいはチアンフェニコールと相まって含有する当該組成物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
薬学組成物の製造方法であって、黄色ブドウ球菌によって及び他の呼吸器系の病原体によって生産される生物膜の予防的な処置又は破壊的な処置のためにＮ−アセチル−システインを含有させることを特徴とする方法。
【請求項２】
薬学組成物の製造方法であって、黄色ブドウ球菌によって及び他の呼吸器系の病原体によって生産される生物膜の抑制又は破壊においてＮ−アセチル−システインの活性を増大させるのに有用なチアンフェニコールを含有させることを特徴とする方法。
【請求項３】
Ｎ−アセチル−システイン及びチアンフェニコールを含有する薬学組成物及び黄色ブドウ球菌によって及び他の呼吸器系の病原体によって生産される生物膜の抑制又は破壊におけるその使用。
【請求項４】
薬学組成物の製造方法であって、黄色ブドウ球菌によって及び他の呼吸器系の病原体によって生産される生物膜の抑制又は破壊に有用なチアンフェニコールグリシンアセチルシステイン酸塩を含有させることを特徴とする方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、呼吸器系の病原体による感染の処置のための薬学組成物に関し、更に特に、本発明は、Ｎ−アセチル−システインを、あるいはチアンフェニコールと相まって含有する当該組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｎ−アセチル−システイン（以下、NAC）は、粘液溶解活性及び抗酸化活性を有する既知の薬物であり、それは、例えば、イタリア国においてザンボン社イタリア国S. r. l.の商標FLUIMUCILを有して販売されている。
【０００３】
チアンフェニコール（以下、TAPh）は、既知の抗生剤であり、それは、イタリア国において、グリシン塩酸塩(glycinate hydrochloride)としてザンボン社イタリア国S. r. l.の商標GLITISOLを有して販売されている。
【０００４】
同一の会社は、現在、薬物FLUIMUCIL ANTIBIOTICを市販しており、これは、前述の有効成分(active principles)の双方を含有し、チアンフェニコールグリシンアセチルシステイン酸塩(thiamphenicol glycinate acetylcysteinate)からなる。
【０００５】
呼吸器系の種々の病原体、例えば、黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus)は大量の細胞外ムコ多糖物質を産生することができ、それは、細菌の接着性及び生物膜（バイオフィルム）の生産を促進する。
【０００６】
生物膜は補綴（プロステーシス）又はカテーテルのような外面に細菌のコロニーを形成させることが多い。
生物膜において、細菌は免疫反応に対して及び抗生物質に対しての双方で保護された環境で増殖することができる。
このため、生物膜は、抗生剤治療において重大な問題を表し、及び反回性感染の原因であることが多い。
したがって、明らかに、生物膜を抑制するか、又は現存の生物膜を破壊することができる物質についての要求がある。
【０００７】
NACは、緑膿菌(P. aeruginosa)の生物膜を破壊し（例えば、非特許文献１参照）、及び表在性ブドウ球菌(S. epidermidis)によるそれらの形成を抑制する（例えば、非特許文献２参照）能力を有することが認識されている。
【非特許文献１】Antimicrob. Agents Chemother., 35, 1258, (1991)
【非特許文献２】J. Ant. Chem., 39, 643, (1997)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明者等は、今回、NACが、呼吸器系の病原体、及び特に、黄色ブドウ球菌(S. aureus) による生物膜の形成の抑制、及び既にそれらが形成された場合には破壊の双方を可能にすることを見出した。
【０００９】
これからの本発明者等の議論は、黄色ブドウ球菌に焦点を当てるが、ここに記載することは、また、生物膜を生産することができる他の呼吸器系の病原体にも適用されることが理解されるであろう。
【００１０】
加えて、本発明者等は、TAPhが、黄色ブドウ球菌の生物膜の形成の抑制又はそれらの破壊においてNACの活性を高めることができることを見出した。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
したがって、本発明の第１の目的は、薬学組成物の製造方法であり、黄色ブドウ球菌によってか又は他の呼吸器系の病原体によって生産される生物膜の予防的な処置又は破壊的な処置のためにＮ−アセチル−システインを含有させる方法である。
【００１２】
本発明の第２の目的は、薬学組成物の製造方法であって、黄色ブドウ球菌によって及び他の呼吸器系の病原体によって生産される生物膜の抑制又は破壊においてＮ−アセチル−システインの活性を増大させるのに有用なチアンフェニコールを含有させる方法である。
【００１３】
本発明の第３の目的は、Ｎ−アセチル−システイン及びチアンフェニコールを含有する薬学組成物であり、及び黄色ブドウ球菌によって及び他の呼吸器系の病原体によって生産される生物膜の抑制又は破壊におけるそのものの使用である。
【００１４】
最後に、本発明の第４の目的は、薬学組成物の製造方法であって、黄色ブドウ球菌によって及び他の呼吸器系の病原体によって生産される生物膜の抑制又は破壊に有用なチアンフェニコールグリシンアセチルシステイン酸塩を含有させる方法である。
【００１５】
当該組成物は、黄色ブドウ球菌の好結果の攻撃を、それが生物膜によって保護されている場合でさえ可能にする。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
本発明の組成物は添加剤を使用して伝統的な方法に従って調製され、添加剤は、既知であり、及び医薬品部門において用いられている。
【００１７】
選定した投与経路に応じて、それらは、煙霧剤用バイアル、注射剤用バイアル及び経口使用のためのカプセル剤、錠剤及び発泡錠剤のような固体組成物の形態であることができる。
【００１８】
我々が肺において黄色ブドウ球菌の感染の処置を望む場合、好ましい投与経路は煙霧剤であり、従って、好ましい組成物は気道に投与することができる溶液である。
【００１９】
これらの組成物は、黄色ブドウ球菌の感染が疑われるか、又は実証され、我々がこの細菌により生成され、その結果として通常の抗生剤処置で攻撃するのが困難になる生物膜の生成を防止するのを希望する場合、その双方で予防的な処置に用いることができる。
【００２０】
これらの組成物は、また、通常の抗生剤処置において、これが、微生物上の生物膜の保護作用に原因して、不十分な効果しか示さない場合、補助剤(co-adjuvant)として用いることもできる。
【００２１】
NACの有効量は200mg/日及び1800mg/日の間であり、１回又はそれより多い用量が採用される。気道の処置は10％の濃度の煙霧剤溶液を用いることができる。
【００２２】
TAPhは、概して、注入剤によってか又は煙霧剤として投与され；後者の場合において、2mLの５％溶液が１日に１又はそれより多い回数用いられる。
【００２３】
チアンフェニコールグリシンアセチルシステイン酸塩も、好ましくは、500mgのTAPhに相当する濃度を用いて、注射剤溶液としてか、又は煙霧剤を用いて投与される。
【００２４】
もちろん、上述の用量は、既に市販している製品に言及するものであり、好ましいものであるが、医業は、それらの投与量及び回数を、本発明の精神から逸脱することなく変えることができる。
【実施例】
【００２５】
本発明をより良く例示するために、本発明を制限するものではないが、次に、以下の例を提供する。
【００２６】
黄色ブドウ球菌によって産生される生物膜へのNAC及びTAPhの影響を、1393、1876、1880及び1890と命名された微生物の４種の株において評価した。
【００２７】
例１
生物膜の形成及び定量化
生物膜の形成を、分光光度的に、Ｕ穴形状(U-well geometry)を有するポリスチレンミクロプレート〔Corning Incorporated(コーニング社), NY（ニューヨーク州）〕において定量化した。
【００２８】
更に詳細には、生物膜形成へのNACの影響を次のようにして評価した：グルコース（0.25％）を添加したトリプシンダイズ培養液(tryptic soy broth, TSB)(TSBG)中の１昼夜のブロス培養物をTSBG中で1：100に希釈した。それぞれ、8mg/mLから0.007mg/mLまで変えた濃度のNACの適切な希釈物を懸濁液（各100μL）に添加した。37℃で24時間の温置後、ミクロプレートを３回10mMリン酸緩衝液pH7.4(PBS)で洗浄し、Bouin（ボウイン）固定液で処置し、及び次いでクリスタルバイオレット(0.01％)で染色した。
【００２９】
ミクロプレートの穴に接着する生物膜をPBSで洗浄し、10％のsarcosyl（サーコシル）中に懸濁させ、及び492nmで分光光度的に測定した。
【００３０】
同様の技術を、NAC単独及びTAPhとの組合せを用いる黄色ブドウ球菌における処置後の生物膜の残量を算出するために使った。この目的のため、２種の異なる成熟度の程度の生物膜：初期のもの（５時間）及び十分に圧密化した(consolidated)もの(48時間)を、適切な濃度のNAC(8mg/mLから0.007mg/mLまで)にインビボの呼吸樹(pulmonary tree)において到達し得る濃度のTAPhを加えたものに暴露した。
【００３１】
同時に、このように処置した生物膜を、なお接着している細胞を分散させるために超音波処理にかけ、及びこれらを、種々の処置で生き残る重要な要素の算出のために、適切に希釈した後、富栄養培地上に播種した。
【００３２】
例２
生物膜の形成及び破壊への及び細菌生存度へのNACの影響
黄色ブドウ球菌の場合、NACは、最大濃度の使用（8mg／mL）でも、細菌増殖における明らかな変化を起こさなかった。しかし、NACは、すべての株において糖衣の生産を抑制した。8mg／mLの濃度で、２種の株（黄色ブドウ球菌1393及び1890）に、50％より高い生物膜の縮小（68.2及び56.3％）が観察された。他の２種の株、黄色ブドウ球菌1876及び1880において、それぞれ30.3％及び41.1％の生物膜生産が減少した。
【００３３】
最大濃度の使用で、NACは、細菌増殖の５時間後(初期の成熟)に形成される生物膜を、３種の株(1393、1880及び1890)において、50％より高く(61.1％、57.3％、58.6％)破壊する。黄色ブドウ球菌1876について、算出された縮小は32.5％であった。NACは、成熟で十分に圧密化した生物膜のムコ多糖物質の量を、アッセイしたすべての４種の株において５０％より高く(62％、60.5％、58.1％及び65.5％)縮小させた。
【００３４】
最大濃度の使用で、初期の成熟での生物膜の細胞への及び圧密化した成熟での生物膜のものへのの双方で、NACは、最も若い生物膜に属する細胞についての33.7％から91％まで及び成熟した生物膜についての33.7％から70.6％まで変化するmL当たりのコロニー形成単位(CFU／mL)に縮小を生じさせた。
【００３５】
例３
生物膜破壊への及び細菌生存度へのチアンフェニコールと相まったNACの影響
初期段階における生物膜における、TAPhと相まったNACの影響は、２種の分子の濃度が高いほど大きかった。
【００３６】
最大濃度の使用(32mg／mLのTAPh)で、組合せは、63％(黄色ブドウ球菌1876)から78.5％(黄色ブドウ球菌1890)まで変化する初期生物膜の破壊を起こした。
【００３７】
十分に圧密化した生物膜の破壊割合は、59.7％(黄色ブドウ球菌1876)から67.5％(黄色ブドウ球菌1393)まで変化した。これらの縮小値は、NACを用いてそれ自体において得られたものより高かった(32.5〜65.5％及び58.1〜62％)。
【００３８】
極めて似た結果がNACとTAPhとの16及び8mg／Lでの組合せにおいて得られた。
【００３９】
生物膜の重要な要素での、組み合わせた２種の分子の影響は、最大濃度の使用で、アッセイしたすべての株において１又は２の対数のCFU／ｍL値の減少を生じさせた。
【国際調査報告】
2005530833.tif 000002
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2005530833.tif 000004