(57)【要約】  ＣｌＣ−２チャンネルオープナーを有効成分として含む、ＣｌＣ−２チャンネルの開口に応答性の状態または疾患の予防的または治療的処置用の医薬組成物が開示される。該組成物は、移植の際移植される組織または臓器の処置にも有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣｌＣ−２チャンネルの開口に応答性の状態または疾患（嚢胞性線維症を除く）の予防的あるいは治療的処置を必要とする対象に対して、有効量のＣｌＣ−２チャンネルオープナーを投与する工程を含む、該状態または疾患の処置方法。
【請求項２】
該疾患が脳機能障害である請求項１記載の方法。
【請求項３】
該疾患が心循環器系障害である請求項１記載の方法。
【請求項４】
該疾患が呼吸器系障害である請求項１記載の方法。
【請求項５】
該疾患が消化器系障害である請求項１記載の方法。
【請求項６】
該疾患が膵疾患である請求項１記載の方法。
【請求項７】
該疾患が液分泌の異常に関連する請求項１記載の方法。
【請求項８】
該疾患が外分泌障害である請求項７記載の方法。
【請求項９】
外分泌障害がドライアイである請求項８記載の方法。
【請求項１０】
該疾患が肝疾患である請求項７記載の方法。
【請求項１１】
該疾患が便秘である請求項７記載の方法。
【請求項１２】
組織または臓器をＣｌＣ−２チャンネルオープナーを有効成分として含む医薬組成物と接触させる工程を含む、移植の際移植される組織または臓器の処置方法。
【請求項１３】
血液再灌流の前に該組成物で組織または臓器をリンスする請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
組織または臓器を該組成物で灌流する請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
組織または臓器を該組成物中で保存する請求項１２に記載の方法。
【請求項１６】
肝移植の処置に使用することを特徴とする請求項１２記載の方法。
【請求項１７】
ＣｌＣ−２チャンネルオープナーを有効成分として含むＣｌＣ−２チャンネルの開口に応答性の状態または疾患（嚢胞性線維症を除く）の予防的あるいは治療的処置のための医薬組成物。
【請求項１８】
該疾患が脳機能障害である請求項１７記載の組成物。
【請求項１９】
該疾患が心循環器系障害である請求項１７記載の組成物。
【請求項２０】
該疾患が呼吸器系障害である請求項１７記載の組成物。
【請求項２１】
該疾患が消化器系障害である請求項１７記載の組成物。
【請求項２２】
該疾患が膵疾患である請求項１７記載の組成物。
【請求項２３】
該疾患が液分泌の異常に関連する請求項１７記載の組成物。
【請求項２４】
該疾患が外分泌障害である請求項２３記載の組成物。
【請求項２５】
外分泌障害がドライアイである請求項２４記載の組成物。
【請求項２６】
該疾患が肝疾患である請求項２３記載の組成物。
【請求項２７】
該疾患が便秘である請求項２３記載の組成物。
【請求項２８】
ＣｌＣ−２チャンネルオープナーを有効成分として含む、移植の際移植される組織または臓器の処置用組成物。
【請求項２９】
血液再灌流の前に組織または臓器をリンスするために使用する請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
組織または臓器を灌流するために使用する請求項２８に記載の組成物。
【請求項３１】
組織または臓器を保存するために使用する請求項２８に記載の組成物。
【請求項３２】
肝移植の処置に使用することを特徴とする請求項２８に記載の組成物。
【請求項３３】
ＣｌＣ−２チャンネルの開口に応答性の状態または疾患（嚢胞性線維症を除く）の予防的あるいは治療的処置のための医薬組成物を製造するためのＣｌＣ−２チャンネルオープナーの使用。
【請求項３４】
該疾患が脳機能障害である請求項３３に記載の使用。
【請求項３５】
該疾患が心循環器系障害である請求項３３に記載の使用。
【請求項３６】
該疾患が呼吸器系障害である請求項３３に記載の使用。
【請求項３７】
該疾患が消化器系障害である請求項３３に記載の使用。
【請求項３８】
該疾患が膵疾患である請求項３３に記載の使用。
【請求項３９】
該疾患が液分泌の異常に関連する請求項３３に記載の使用。
【請求項４０】
該疾患が外分泌障害である請求項３９に記載の使用。
【請求項４１】
外分泌障害がドライアイである請求項４０に記載の使用。
【請求項４２】
該疾患が肝疾患である請求項３９に記載の使用。
【請求項４３】
該疾患が便秘である請求項３９に記載の使用。
【請求項４４】
移植の際移植される組織または臓器の処置用の医薬組成物の製造のためのＣｌＣ−２チャンネルオープナーの使用。
【請求項４５】
該組成物を血液再灌流の前に組織または臓器をリンスするために使用する請求項４４に記載の使用。
【請求項４６】
該組成物を組織または臓器を灌流するために使用する請求項４４に記載の使用。
【請求項４７】
該組成物を組織または臓器を保存するために使用する請求項４４に記載の使用。
【請求項４８】
該組成物を肝移植の処置に使用する請求項４４に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＣｌＣ−２チャンネルオープナーを有効成分として含む医薬組成物に関する。本発明はまた、ＣｌＣ−２チャンネルの開口に応答性の疾患または状態の処置方法にも関する。
【背景技術】
【０００２】
クロライドチャンネルは、クロライドイオン（Ｃｌ−）を輸送するイオントランスポート膜タンパク質であり、様々な種類のクロライドチャンネルが神経、筋、上皮などの細胞膜に存在し、様々な生理機能や細胞防御機構に関与していることが報告されている。
【０００３】
例えば、シビレエイの発電器官によりクローニングされてＣｌＣ−０と名付けられたクロライドチャンネルはその後、大きなファミリー(ＣｌＣファミリー)を形成することが明らかになった。ＣｌＣファミリーの例としては、哺乳類の骨格筋に存在するＣｌＣ−１、様々な臓器の上皮に存在するＣｌＣ−２、海馬、小脳などに分布するＣｌＣ−３、ＣｌＣ−４、肺、腎臓などにあるＣｌＣ−５、脳、精巣、骨格筋、腎臓などにあるＣｌＣ−６、ＣｌＣ−７、また腎臓だけに特異的にみられるＣｌＣＫ−１、ＣｌＣＫ−２などがある。
【０００４】
一般に、各種チャンネルは、多数の疾患に関係していると言われており、これらのチャンネルの機能障害化またはチャンネルを活性化するプロセスの調節欠損症の存在は、そのような疾患および疾病の病原論において重要な役割を果たし得ることが信じられている。結果として、各種チャンネルの開口および細胞の電気生理学的機能化の調節を補助する化合物は、そのような状態の処置および緩和についての重要な治療および予防能力を有し得る。
【０００５】
ＣｌＣ−２チャンネルは、白色人種において最もよく知られた常染色体性劣性の遺伝性疾患である嚢胞性線維症において治療的に重要な役割を有することが推測されている（Cuppoletti et al., American Journal of Physiology. Cell Physiology, 281(1), C46-54, 2001；Joo et al., Biochimica et Biophysica Acta, 1446(3), 431-437, 1999およびSchwiebert et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97(7), 3879-3884, 1998など）。しかしながら、その他の役割の詳細についてはあまり知られていない。
【０００６】
（発明の概要）
本発明者は、ＣｌＣ−２チャンネルをオープンする能力を有する化合物を用いて鋭意検討の結果、ＣｌＣ−２チャンネルオープナーが種々の疾患の処置に有効であることを見出した。
【０００７】
すなわち、本発明は、ＣｌＣ−２チャンネルの開口に応答性の状態または疾患（嚢胞性線維症を除く）の予防的あるいは治療的処置の方法に関し、該方法は、かかる処置を必要とする対象に対して、有効量のＣｌＣ−２チャンネルオープナーを投与することを含む。本発明はさらに、移植の際移植される組織または臓器の処置方法に関し、該方法は、ＣｌＣ−２チャンネルオープナーを有効成分として含む医薬組成物と該組織または臓器とを接触させる工程を含む。
【０００８】
さらに、本発明はまた、ＣｌＣ−２チャンネルオープナーを有効成分として含む、ＣｌＣ−２チャンネルの開口に応答性の状態または疾患（嚢胞性線維症を除く）の予防的あるいは治療的処置のための医薬組成物に関する。本発明はまた、ＣｌＣ−２チャンネルオープナーを有効成分として含む、移植の際移植される組織または臓器の処置用の医薬組成物にも関する。
【０００９】
さらに、本発明は、ＣｌＣ−２チャンネルの開口に応答性の状態または疾患（嚢胞性線維症を除く）の予防的あるいは治療的処置のための医薬組成物を製造するためのＣｌＣ−２チャンネルオープナーの使用に関する。本発明はまた、移植の際移植される組織または臓器の処置用の医薬組成物を製造するためのＣｌＣ−２チャンネルオープナーの使用に関する。
【００１０】
本発明において使用されるＣｌＣ−２チャンネルオープナーとしては、ＣｌＣ−２チャンネルの開口活性を有する化合物である限り特に限定されない。ＣｌＣ−２チャンネルの開口活性は、細胞膜中のＣｌＣ−２チャンネルを介する、その細胞の内側から外側、あるいはその逆方向へのクロライドイオンのフローの増大を測定することによって確認され得る。例えば、パッチクランプ法などの周知のアッセイを使用することにより、ＣｌＣ−２チャンネルの開口活性を有する化合物をスクリーニングすることが可能である。
【００１１】
ＣｌＣ−２チャンネルの開口活性を有する化合物の例としては、シクロオキシゲナーゼ阻害剤、非ステロイド性抗炎症剤（例えばイブプロフェン、エブセレン）、プロテインキナーゼＡ、オレイン酸、エライジン酸、アラキドン酸、細胞成長因子（例えば、ＴＧＦα（形質転換成長因子-α）、ＫＧＦ(ケラチノサイト成長因子)など）、プロスタグランジン化合物、ベンズイミダゾール誘導体などが挙げられる。
【００１２】
本発明において、「ＣｌＣ−２チャンネルの開口に応答性の疾患または状態」とは、標的組織の細胞中のＣｌＣ−２チャンネルの活性化もしくは開口に対して予防的もしくは治療的に応答性または感受性である状態、病的状態、疾患および障害、ならびにＣｌＣ−２チャンネルの挙動に予防的もしくは治療的に関連する状態、病的状態、疾患、および障害を含む。嚢胞性線維症以外の疾患であればＣｌＣ−２チャンネルの開口に応答性の疾患または状態である限り限定されない。該疾患または状態としては例えば、肝疾患（例えば肝炎、肝硬変）、膵疾患（例えば膵炎）、便秘、外分泌障害（例えばドライアイ、ドライマウス）、脳機能障害、心循環器系障害、呼吸器系障害、消化器系障害などが挙げられる。
【００１３】
したがって、「かかる処置を必要とする対象」とは、上記状態または疾患を患う対象、または上記状態または疾患に罹患しやすい対象のことをいう。対象はヒトを含むいかなる哺乳類対象であってもよい。
【００１４】
本発明によると、ＣｌＣ−２チャンネル開口活性を有する化合物を含む医薬組成物は、かかる処置を必要とする患者に投与される。医薬組成物は全身または局所投与に好適な形態とすればよく経口投与、静脈注射（点滴を含む）、皮下投与、直腸内投与、膣内投与、経皮投与、点眼投与などの方法で使用される。本発明において用いられる剤形の例には、経口投与薬、注射薬、点滴薬、外用薬、点眼剤、座薬および膣座薬等が挙げられるがこれらに限定されない。
【００１５】
有効成分の用量は動物またはヒト等のような対象の種類、年令、体重、処置されるべき症状、所望の治療効果、投与経路、処置期間等により変化し、使用する化合物に応じて適宜選択することが可能である。
【００１６】
本発明の医薬組成物は有効成分に加えて生理学的に許容される適当な添加剤を含んでいても良く、この明細書では「添加剤」とは、賦形剤、希釈剤、増量剤、溶剤、滑沢剤、補助剤、結合剤、崩壊剤、被覆剤、カプセル化剤、軟膏基材、座薬用基材、エアゾール剤、乳化剤、分散剤、懸濁剤、増粘剤、等張化剤、緩衝剤、無痛化剤、保存剤、抗酸化剤、矯味剤、香料、着色剤、機能性素材（例えばシクロデキストリン、生体内分解高分子など）などを総称して用いる。これらの添加剤は当該技術分野で周知であり、製剤学に関する一般書籍に記載されているものから適宜選択すればよい。
【００１７】
本発明において、「処置」の語は、予防、治療、症状の軽減、症状の減退、進行停止等、あらゆる管理が含まれる。
【００１８】
本発明によると、ＣｌＣ−２チャンネルオープナーを有効成分として含む医薬組成物はＣｌＣ−２チャンネルの開口に応答性の疾患または状態の処置に有効である。かかる疾患または状態としては、例えば、肝疾患、膵疾患、便秘、外分泌障害、脳機能障害、心循環器系障害、呼吸器系障害、消化器系障害などが挙げられる。特に、該組成物は液分泌を司る臓器におけるクロライドイオンの分泌を促進する能力を有する。クロライドイオンの分泌促進の結果、例えば、肝臓における胆汁分泌促進作用、腸管における腸液分泌促進作用、外分泌系、例えば涙液腺、唾液腺における涙液および唾液分泌促進作用が示される。したがって、本発明の医薬組成物は肝疾患、外分泌障害（ドライアイ、ドライマウスなど）および便秘等の処置に有効である。
【００１９】
本発明の組成物または方法はまた、移植の際移植される組織または臓器の処置にも有効である。本発明の組成物によって組織または臓器を処置することにより、移植の間またはその後に起こる臓器の機能低下およびその合併症が効果的に予防される。
【００２０】
移植の際、組織あるいは臓器の機能は、レシピエントへ移植するまでの一定期間維持することが必要であるばかりでなく、手術後のレシピエントへの組織の生着を良くすることが必要である。本発明の組成物は、組織あるいは臓器のドナーからの摘出時、摘出された組織あるいは臓器の保存および維持、移植時および移植後のレシピエントの組織あるいは臓器の処置に用いることができる。
【００２１】
本発明の医薬組成物を移植に使用する場合、ドナーの生体内に投与する形での使用と、摘出した組織あるいは臓器に直接適用する形での使用が可能である。例えば、該組成物は、摘出時のドナーの生体内灌流に用いる灌流液、摘出後の臓器の生体外での灌流に用いる灌流液、摘出後の臓器の保存液ならびにレシピエントに臓器を移植する時の血液再灌流の前のリンス液としてのいずれの用途にも使用することができる。本発明の組成物は、灌流液、保存液、リンス液のいずれか１つに使用してもよいし、２つまたは全ての溶液に使用しても良い。
【００２２】
本発明においては、１種類の有効成分を単独で組成物に含めることもできるし、また２種類以上の有効成分を併用して含めることもできる。複数の有効成分を併用する場合には、各々の含有量は、それらの治療効果や安全性等を考慮して適宜増減することができる。
【００２３】
更に、本発明の組成物においては、本発明の目的に反しない限り、他の薬理活性成分を適宜含有させることもできる。
【００２４】
以下、本発明を実施例によりさらに詳細に説明するが、これは本発明を限定するものではない。
【実施例１】
【００２５】
（方法）
ＣｌＣ−２チャンネルオープナーである被験物質１：１３，１４−ジヒドロ−１５−ケト−１６，１６−ジフルオロ−プロスタグランジンＥ１を用いた。少なくとも１６時間絶食させたＷｉｓｔａｒ系雄性ラット（６週齢、体重１８０〜２１０ｇ）に、被験物質１の１０あるいは１００μｇ／ｋｇを媒体中５ｍｌ／ｋｇの容量で経口投与した。対照群には、媒体（０．５％エタノール・０．０１％ポリソルベート８０含有蒸留水）を同容量投与した。投与３０分後に動物をエーテル麻酔下で開腹した。十二指腸起始部と回腸末端部をそれぞれ結紮後、腸管を摘出した。各動物の腸液を摘出した腸管から集め容量を測定した。腸液を１０，０００ｘｇ、５分間遠心した後、上清を分取した。腸液上清中のクロライドイオン濃度をクロライドカウンター（ＣＬ−７、平沼産業（株））を用い測定した。対照群と被験物質１各用量投与群間の比較にＤｕｎｎｅｔｔ検定法を用いた。危険率５％未満を統計的有意差ありと判定した。
【００２６】
（結果）
各群の腸液量と腸液中クロライドイオン濃度を表１に示す。
【表１】
2005515186.tif 000002
【００２７】
被験物質１の１０及び１００μｇ／ｋｇの投与により、腸液量ならびに腸液中クロライドイオン濃度は、用量依存的に増加した。また、被験物質１各群の腸液量ならびに腸液中クロライドイオン濃度は対照群と比較して有意に増加した。
【００２８】
以上の結果より、Ｃ１Ｃ−２チャンネルオープナーが腸管におけるクロライドイオンの分泌を積極的に促進することによって、腸液量を増加し、便秘の処置に有効であることが示唆された。
【実施例２】
【００２９】
（方法）
雄性白色家兎に、被験物質１の０．００１％点眼液を、３０μｌ／眼の容量で点眼した。対照群には同容量の点眼液媒体を点眼した。点眼２時間後に、無麻酔下で、シルメル試験紙（昭和薬品化工Ｋ．Ｋ．、ロット番号９０１１Ｎ）を耳側１／３の下眼瞼に掛けるように結膜嚢内に先端を１分間挟み、濾紙上の目盛りから濾紙の濡れの長さを読み取り涙液量を測定した。また、キャピラリーピペットを用い、下眼瞼の結膜嚢内から涙液５μｌを採取し、これを蒸留水で５倍に希釈した後、涙液中クロライドイオン濃度をクロライドカウンター（ＣＬ−７、平沼産業（株））を用いて測定した。対照群と被験物質１投与群間の比較にＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定法およびＷｉｌｃｏｘｏｎ検定法を用いた。危険率５％未満を統計的有意差ありと判定した。
【００３０】
（結果）
各群の涙液量と涙液中クロライドイオン濃度を表２に示す。
【表２】
2005515186.tif 000003
【００３１】
被験物質１投与群の涙液量ならびに涙液中クロライドイオン濃度は、対照群と比較して有意に増加した。
【００３２】
以上の結果より、ＣｌＣ−２チャンネルオープナーが眼におけるクロライドイオンの分泌を積極的に促進することによって、涙液量を増加し、ドライアイの処置に有効であることが示唆された。
【実施例３】
【００３３】
（方法）
ＣｌＣ−２チャンネルオープナーである被験物質２（１３，１４−ジヒドロ−１５−ケト−１６，１６−ジフルオロ−１８（Ｓ）−メチル−プロスタグランジンＥ１）を用いた。Ｗｉｓｔａｒ系雄性ラット（６週齢、体重：１８０〜２１０ｇ）に、被験物質２の１００μｇ／ｋｇを１日３回７日間経口投与した。対照群には、同容量の媒体（０．０１％ポリソルベート８０、０．５％エタノール含有蒸留水）を投与した。投与最終日の翌朝（最終投与の約１７時間後）、エーテル麻酔下でラットの総胆管内にポリエチレンカテーテル（ＰＥ１０、Becton Dickinson and Company）を挿入した。ラットをボールマンケージに収容後１時間放置し麻酔から覚醒させた。カテーテル挿入１〜２時間後の１時間に排出された胆汁を採取後、胆汁量を測定した。また、クロライドイオン濃度をクロライドカウンター（ＣＬ−７、平沼産業（株））を用い測定した。対照群と被験物質２投与群間の比較にＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定法を用いた。危険率５％未満を統計的有意差ありと判定した。
【００３４】
（結果）
各群の胆汁量と胆汁中クロライドイオン濃度を表３に示す。
【表３】
2005515186.tif 000004
【００３５】
被験物質２投与群の胆汁量ならびに胆汁中クロライドイオン濃度は、対照群と比較し有意に増加した。
【００３６】
以上の結果より、ＣｌＣ−２チャンネルオープナーが肝臓におけるクロライドイオンの分泌を積極的に促進することによって、胆汁量を増加し、肝疾患および肝移植の処置に有効であることが示唆された。
【実施例４】
【００３７】
（方法）
Ｗｉｓｔａｒ系雄性ラットを用いた。被験群、対照群ともにペントバルビタールナトリウム麻酔下で胆汁採取用として総胆管内にカテーテルを挿入した。門脈にカテーテルを挿入固定後、９５％Ｏ２と５％ＣＯ２で飽和させたタウロコール酸ナトリウム（３０μｍｏｌ／ｌ）を含むＫｒｅｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ液（ｐＨ７．４，３７℃）を、ペリスタポンプを用い４．０ｍｌ／分／ｇ肝の一定速度で注入し、灌流しながら肝臓を摘出した。被験群にはＫｒｅｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ液中に被験物質２を添加した。被験群、対照群ともに灌流開始３０分後の胆汁量を測定した。また、胆汁中のクロライドイオン濃度を測定した。被験物質２あるいは媒体投与直前の胆汁量に対する被験物質２あるいは媒体投与３０分後の胆汁量を相対値（％）で表した。
【００３８】
（結果）
各群の胆汁量と胆汁中クロライドイオン濃度を表４に示す。
【表４】
2005515186.tif 000005
【００３９】
被験物質２投与群の胆汁量ならびに胆汁中クロライドイオン濃度は、対照群と比較し、有意に増加した。
【００４０】
以上の結果より、ＣｌＣ−２チャンネルオープナーが摘出肝臓におけるクロライドイオンの分泌を積極的に促進することによって、胆汁量を増加し、肝移植を含む臓器移植の処置に有効であることが示唆された。
【実施例５】
【００４１】
（方法）
Ｗｉｓｔａｒ系雄性ラット（体重約２８０ｇ）をペントバルビタールナトリウム（５０ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内注射で麻酔し、腹部正中切開を行い肝門部を露出した。総胆管にカニューレを挿入した後、門脈本幹に三方活栓を装着した１９ゲージのサーフロ（登録商標）針を挿入すると同時に酸素化したＫｒｅｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ緩衝液を４．０ｍｌ／分／ｇ肝で肝臓を灌流し、下大静脈を切開して脱血した。肝臓周囲の組織から切離して肝臓を体外に出し、分離灌流状態にした。肝臓に１５分の前灌流を行い酸素消費を定常状態にした後、４℃の臓器保存液（University of Wisconsin solution;U-W solution）による灌流に切り替えることにより肝臓内の灌流液を置換し、ただちに灌流回路から三方活栓を装着した状態で肝臓を外し、注入口をクランプした後、同じ温度にした保存液（U-W solution）内に保存した。保存時間は１６時間とした。再灌流はＫｒｅｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ緩衝液を用いて行い、再灌流開始３０分後の胆汁流量を測定した。
【００４２】
（１）臓器保存液（U-W solution）に添加した被験物質２の効果
上記の灌流プロトコールで被験物質２を１０μＭ濃度に保存液（U-W solution）内に添加した。
（２）再灌流時の灌流液内に添加した被験物質２の効果
上記の灌流プロトコールで被験物質２を、保存液内には添加せず、再灌流時の灌流液（Ｋｒｅｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ緩衝液）内に１０μＭ濃度に添加した。
【００４３】
（結果）
（１）および（２）の条件下における再灌流３０分後の胆汁流量をそれぞれ表５および表６に示す。
【表５】
2005515186.tif 000006
【表６】
2005515186.tif 000007
【００４４】
保存液および再灌流時の灌流液に被験物質２を添加した群の胆汁流量は対照群と比較し、有意に増加した。
【００４５】
以上の結果より、ＣｌＣ−２チャンネルオープナーは、臓器の保存状態の向上、再灌流時障害の抑制、移植後の生着率の向上に有効であり、ＣｌＣ−２チャンネルオープナーが肝移植を含む臓器移植の処置に有効であることが示唆された。
【実施例６】
【００４６】
（方法）
ｄｄＹ系雄性マウス（５週令、体重２７〜３０ｇ）に０．３ｍｇ／ｋｇの被験物質１を媒体中１０ｍｌ／ｋｇにて皮下投与した。対照群には媒体を投与した。投与３０分後にギロチンによって断頭し、断頭後に発現するガスピング（gasping）の持続時間を測定した。
【００４７】
（結果）
各群の抗アノキシア作用を表７に示す。
【表７】
2005515186.tif 000008
【００４８】
被験物質１投与群のガスピング持続時間は、対照群と比較し有意に増加した。
【００４９】
以上の結果より、ＣｌＣ−２チャンネルオープナーが脳の酸素欠乏症、低酸素症、あるいは無酸素症の処置に有効であることが示唆された。
【実施例７】
【００５０】
（方法）
Ｗｉｓｔａｒ系雄性ラット（７週令、体重２００〜２５０ｇ）に媒体中５ｍｌ／ｋｇにて被験物質１を０．１または０．０１ｍｇ／ｋｇの投与容量で皮下投与した。対照群には同容量の媒体（生理食塩液）を投与した。投与３０分後に硫酸アンモニウム６００ｍｇ／ｍｌを腹腔内投与した。硫酸アンモニウム投与３０分後における生存率を求めた。また、硫酸アンモニウム投与３０分後まで生存した動物は、クロロホルム下で致死させ、肺を摘出し重量を測定した。硫酸アンモニウム投与３０分後までに死亡した動物は死亡後速やかに肺を摘出し重量を測定した。各群の肺重量を硫酸アンモニウム投与をされていない正常群の肺重量と比較した。測定した肺重量の結果から、対照群の肺重量増加に対比して、被験物質１投与群による肺重量増加抑制率を求めた。
【００５１】
（結果）
生存率を表８に、肺重量増加抑制率を表９に示す。
【表８】
2005515186.tif 000009
【表９】
2005515186.tif 000010
【００５２】
以上の結果より、ＣｌＣ−２チャンネルオープナーが肺の障害の処置に有効であることが示唆された。
【実施例８】
【００５３】
（方法）
急性潰瘍に対する作用を水浸拘束ストレス誘導潰瘍モデルおよびインドメタシン誘導潰瘍モデルによって調べた。
【００５４】
２４時間絶食したＷｉｓｔａｒ系雄性ラット（体重１８０〜２１０ｇ）に被験物質１を経口投与し、水浸拘束スレス誘導潰瘍モデルの場合、被験物質１の経口投与１０分後にストレスケージに拘束し、２３℃の水に動物の胸部剣状突起の高さまで浸漬した。浸漬６時間後に動物を頸椎脱臼により致死させた。インドメタシン誘導潰瘍モデルの場合、被験物質１あるいは被験物質２の経口投与直後にインドメタシン１０ｍｇ／ｋｇを経口投与し、５時間後に頸椎脱臼により致死させた。動物から胃を摘出し、１％ホルマリンで固定した後、胃を大湾に沿って切開した。胃内に形成されたそれぞれの潰瘍の長径（ｍｍ）を測定した。各個体毎に潰瘍の長径の合計を求め、潰瘍係数とした。対照群の潰瘍係数および被験物質群の潰瘍係数から潰瘍抑制率を求めた。
【００５５】
（結果）
表１０は抗水浸拘束ストレス潰瘍作用を示し、表１１は抗インドメタシン潰瘍作用を示す。
【表１０】
2005515186.tif 000011
【表１１】
2005515186.tif 000012
【００５６】
以上の結果より、ＣｌＣ−２チャンネルオープナーが胃潰瘍の処置に有効であることが示唆された。
【実施例９】
【００５７】
（方法）
Ｗｉｓｔａｒ系雄性ラット（体重２４５〜２９０ｇ）に塩化第２水銀（ＨｇＣｌ２）４ｍｇ／ｋｇを筋肉内投与し、大腸潰瘍を誘発した。ＨｇＣｌ２投与の３０分前、２時間後および６時間後に被験物質２を皮下投与した。対照群には媒体を投与した。ＨｇＣｌ２投与２４時間後に動物をエーテル麻酔下で放血致死させた。開腹して回盲口上部および肛門上部を結紮後、盲腸から直腸までの大腸部分を摘出した。摘出した大腸を１％ホルマリンで固定後に切開し、実体顕微鏡下でノギスを用い潰瘍の長径および短径を測定した。長径と短径の積を潰瘍面積とした。また、各個体毎に潰瘍面積の和を求め、潰瘍総面積とした。
【００５８】
（結果）
抗大腸潰瘍作用を表１２に示す。
【表１２】
2005515186.tif 000013
【００５９】
以上の結果より、ＣｌＣ−２チャンネルオープナーが腸管の潰瘍の処置に有効であることが示唆された。
【実施例１０】
【００６０】
（方法）
Ｗｉｓｔａｒ系雄性ラット（体重２４０〜２７０ｇ）を一夜絶食後、ペントバルビタールナトリウム麻酔下で開腹後、１０％タウロコール酸３ｍｌと０．３％トリプシン液０．３ｍｌの混合液を、胆管十二指腸開口部から逆行性に注入することにより、膵炎を誘発した。タウロコール酸・トリプシン混合液注入の３０分前、２時間後および４時間後に被験物質２を皮下投与した。対照群には媒体を投与した。タウロコール酸・トリプシン混合液注入の６時間後に採血し、血清アミラーゼ活性を測定した。
【００６１】
（結果）
抗膵炎作用を表１３に示す。
【表１３】
2005515186.tif 000014
【００６２】
以上の結果より、ＣｌＣ−２チャンネルオープナーが膵炎の処置に有効であることが示唆された。
【実施例１１】
【００６３】
（方法）
ビーグル犬（体重８．８〜１０．３ｋｇ）を用い、チオペンタールナトリウムおよびα−クロラロースによる麻酔下で、心拍出量を、大動脈弓部に装着したＦＪ型プローブから矩形波電磁血流計（ＭＦＶ−３１００、日本光電）を介して血流表示ユニットに誘導し、レコーダに記録した。心不全モデルを次の方法により作成した。すなわち、左大腿静脈に挿入したカテーテルよりＤＬ−プロプラノロール（０．０６ｍｇ／ｍｌ）を溶解した乳酸リンゲル液の持続注入（５ｍｌ／体／分）により容量負荷を開始し、３０分後に左前下行枝（ＬＡＤ）を結紮した。ＬＡＤ結紮３０分後にメトキサミン溶液を右大腿静脈より持続注入（５μｇ／ｋｇ／分）し、心拍出量が容量負荷前より２０％以上低下するまで、メトキサミン溶液の注入を５μｇ／ｋｇ／分ずつ増量し、最大２０μｇ／ｋｇ／分まで増加した。心拍出量が容量負荷前より２０％以上低下した時点で、メトミサミンの投与量を５μｇ／ｋｇ／分に、また乳酸リンゲル液の注入量を３ｍｌ／ｋｇ／分に減じ、実験終了までこの用量を持続した。心拍出量が２０％以上低下し、他の血行動態パラメータが安定した６０〜９０分後に、被験物質２を十二指腸内に留置したカニューレを介し投与した。対照群には媒体を投与した。被験物質２あるいは媒体投与直前の心拍出量に対する被験物質２投与３０分後の心拍出量の比を相対値（％）で表した。
【００６４】
（結果）
心拍出量増加作用を表１４に示す。
【表１４】
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【００６５】
以上の結果より、ＣｌＣ−２チャンネルオープナーが心循環器系の障害の処置に有効であることが示唆された。
【国際調査報告】
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