(57)【要約】ドライアイ症候群に関連し得るような眼の変性は、サイモシンβ４、サイモシンβ４のアイソホーム、または酸化サイモシンβ４等のアクチン重合抑制ペプチドを投与することによって、抑制または反転される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
眼の変性の反転を促進するか、または眼の変性を抑制するための治療方法であって、
このような治療を必要とする被験体に対して、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴまたは、その、眼の変性を抑制する活性を有する保存的な変異型を含む、眼の変性を抑制するポリペプチドを含有する有効な量の組成物を投与するステップを含む、方法。
【請求項２】
前記眼の変性は、ドライアイ症候群に関連する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ポリペプチドは、サイモシンβ４（Ｔβ４）、Ｔβ４のアイソホーム、または酸化Ｔβ４を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記組成物は、全身投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記組成物は、局所的に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記組成物は、溶液、ゲル、クリーム、泥膏、ローション、スプレー、懸濁液、分散液、軟膏、ヒドロゲル、または軟膏剤の製剤の形である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記ポリペプチドは、組換えまたは合成である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記ポリペプチドは、抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記抗体は、多クローン性またはモノクローナルである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
眼の変性の反転を促進するか、または眼の変性を抑制するための治療方法であって、
このような治療を必要とする被験体に対して、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴまたは、その、眼の変性を抑制する活性を有する保存的な変異型を含む、眼の変性を抑制するポリペプチドの生成を刺激する製剤を含有する有効な量の組成物を投与するステップを含む、方法。
【請求項１１】
前記眼の変性は、ドライアイ症候群に関連する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記ポリペプチドは、サイモシンβ４である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記製剤は、サイモシンβ４のアンタゴニストである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
眼の変性の反転を促進するか、または眼の変性を抑制するための組成物であって、
アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴまたは、その、眼の変性を抑制する活性を有する保存的な変異型を含む、眼の変性を抑制するポリペプチドを含有する有効な量の組成物を含む、組成物。
【請求項１５】
前記眼の変性は、ドライアイ症候群に関連する、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記ポリペプチドは、Ｔβ４、Ｔβ４のアイソホーム、または酸化Ｔβ４を含む、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１７】
溶液、ゲル、クリーム、泥膏、ローション、スプレー、懸濁液、分散液、軟膏、ヒドロゲル、または軟膏剤の製剤を含む、請求項１４に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の背景
関連出願の相互参照
本出願は、２００１年３月１５日に提出された米国仮出願第６０／２７５，６４５号の利益を主張する。
１．発明の分野
この発明は、「ドライアイ症候群」等の眼の疾患の治療分野に関する。
【背景技術】
【０００２】
２．背景技術の説明
「ドライアイ症候群」と呼ばれる現象は、加齢に伴なう眼の腺の通常の老化のみにより起こるわけではなく、他の変性変化および環境的な要因によっても起こる可能性があり、すべての年齢で起こるおそれがある。ドライアイ症候群は、眼の生理学的特性、生化学的特性、および免疫学的特性の悪化により結果として生じる。
【０００３】
ある患者は、涙の質または量の低下によって引き起こされる眼の炎症のために、絶え間ない痛みを経験する。このような患者は、ざらざらするような、または砂が入ったような感覚を経験し、これを放置しておくと、角膜の傷または潰瘍化につながるおそれがあり、したがって、視力を失うことにもなり得る。多くの場合、ドライアイは、通常の涙液を生成するためにともに働くさまざまな腺の疾患により、結果として生じる。涙液自体は、眼の上の３つの層を形成する物質の複雑な組合せである。非常に薄い外側の層は、眼瞼の中のマイボーム腺からの脂質を含み、蒸発を減らす。涙腺によって、涙液の塩分および酸性度を適切なレベルに保つ、真中の水を多く含んだ層が作られる。この真中の層はまた、抗体および他の免疫防御物質を含んで眼を感染から守る。内側の粘液層は、涙液膜が角膜に「くっつき」、そのままとどまることの助けとなる。
【０００４】
ドライアイ症候群には、多くの原因が存在し得る。涙腺の通常の老化、特定の病気、および疾患が、生成される涙液の量および状態を変化させ得る。たとえば、シェーグレン症候群は、口、眼、および他の粘膜の炎症および乾燥によって特徴づけられる免疫系疾患であり、涙腺を損傷し、この損傷が涙液の生成に影響を及ぼす。角膜感度の劣化も、不十分な涙液生成につながり得る。この感度の劣化は、「神経栄養性角膜炎」として公知の疾病およびある種のコンタクトレンズの装着によって引き起こされ得る。涙液が過度に蒸発することも、ドライアイ症候群を引き起こし得る。このような蒸発は、眼瞼内のマイボーム腺の感染および炎症から結果として生じる「マイボーム腺炎」によって引き起こされ得る。非常に大きな眼のヒトおよび甲状腺疾患に罹患したヒトも、過剰な蒸発によって引き起こされるドライアイ症候群を経験するおそれがある。ドライアイはまた、独特な顔面の解剖学的構造または角膜内の凹凸から結果として生じるおそれがあり、結果として、眼が不均一または不適切に涙液で覆われることになる。粘膜を乾燥させるおそれのある抗生物質、抗ヒスタミン剤、利尿薬、および下痢止め薬等の薬物処理の結果としてドライアイに罹患する患者も存在する。更年期および加齢に関連し得るようなホルモンの変化も、涙腺からのＴβ４の分泌に影響を及ぼすおそれがあり、結果として、ドライアイおよび眼の炎症を引き起こし得る。
【０００５】
このような眼の疾患を遅らせ、および／または、緩和するためのいくつかのアプローチが報告されてきた。ドライアイは、通例、人工の涙および軟膏剤を適用することによって治療される。これらによって一時的には緩和されるが、これらは、通例、眼に対するダメージを阻止または反転させることはない。涙液の電解質バランスの回復および角膜の治癒の促進を目標とした点眼液が、開発されつつある。ホルモン療法または抗体によってドライアイが治療され得るという証拠も存在する。加えて、眼から涙液を排出する管に小さな栓をすることから利益を得るドライアイも存在する。重症のドライアイに対しては、「湿室眼鏡」と呼ばれる特別な保護眼鏡が装着され得る。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
ドライアイ疾患の治療のための改善された方法および組成物が、現在の技術では必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
発明の概要
この発明によると、ドライアイ症候群に関連し得るような眼の変性の反転を促進するか、またはドライアイ症候群に関連し得るような眼の変性を抑制するための治療方法は、このような治療を必要とする被験体に対して、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴまたは、その、眼の変性を抑制する活性を有する保存的な変異型を含む、眼の変性を抑制するポリペプチドを含有する有効な量の組成物を投与するステップを含む。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
発明の詳細な説明
この発明は、サイモシンβ４（Ｔβ４）等のアクチン重合抑制ペプチドと、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴまたはその保存的な変異型を含む他のアクチン重合抑制ペプチドとによって、ドライアイ症候群に関連し得るような、またはドライアイ症候群から結果として生じ得るような眼の変性の反転が促進され、または眼の変性が抑制されるという発見に基づく。可能性のある臨床上の適用例は、炎症状態による疾患、たとえば、ドライアイ、ブドウ膜炎、虹彩炎、術後白内障手術、ＬＡＳＩＫまたはＰＲＫ、慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、モーレン潰瘍、シェーグレン症候群等による角膜融解を含み得る。他の適用例は、細菌性病原体、ウィルス性病原体、マイコバクテリア病原体、または真菌性病原体による角膜炎であり得る。さらなる他の適用例は、糖尿病によって引き起こされるような眼の代謝性疾患（角膜症および網膜症）によるものか、または、化学的傷害、損傷、および酸蝕症の結果として生じるものであり得る。
【０００９】
サイモシンβ４は、内皮細胞の遊走およびインビトロでの分化の最中にアップレギュレートされるタンパク質として、当初は確認された。サイモシンβ４は、元々、胸腺から単離されており、４３アミノ酸であり、さまざまな組織内で確認される４．９ｋＤａの遍在的なポリペプチドである。内皮細胞分化および遊走、Ｔ細胞分化、アクチン重合抑制、および血管新生の役割を含む、いくつかの役割は、このタンパク質によるものとされた。
【００１０】
１つの実施形態に従うと、この発明は、ドライアイ症候群の反転を促進するか、またはドライアイ症候群を抑制するための治療方法であって、この治療方法は、このような治療を必要とする被験体に対して、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴまたは、その、眼の変性を抑制する活性を有する保存的な変異型を含む、眼の変性を抑制するポリペプチド、好ましくは、サイモシンβ４、サイモシンβ４のアイソホーム、酸化サイモシンβ４、またはサイモシンβ４のアンタゴニストの生成を刺激する製剤を含有する有効な量の組成物を投与するステップを含む。
【００１１】
この発明は、眼および周辺組織の炎症性疾患、変性疾患、免疫疾患、および他の疾患の治癒および反転を促す。
【００１２】
この発明に従って用いられ得る組成物は、サイモシンβ４（Ｔβ４）と、Ｔβ４アイソホームと、酸化Ｔβ４と、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴまたは、その、眼の変性を抑制する活性を有する保存的な変異型を含むポリペプチドとを含む。ここで引用により援用される国際出願ＰＣＴ／ＵＳ９９／１７２８２号は、この発明に従うと有用であり得るＴβ４のアイソホーム、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴ、および、その、眼の変性を抑制する活性を有する保存的な変異型を開示しており、これらは、この発明において用いられ得る。ここで引用により援用される国際出願ＰＣＴ／ＧＢ９９／００８３３（ＷＯ  ９９／４９８８３）号は、この発明に従って用いられ得る酸化サイモシンβ４を開示している。この発明は主に、Ｔβ４およびＴβ４アイソホームに関して以下で説明されているが、以下の説明は、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴ、その、眼の変性を抑制する活性を有する保存的な変異型、および酸化サイモシンβ４にも同様に適用可能であることが意図されることが理解されるべきである。
【００１３】
１つの実施形態では、この発明は、ドライアイ症候群に関連し得るような眼の変性の反転を促進するか、または眼の変性を抑制するための治療方法を提供し、この治療方法は、このような治療を必要とする被験体に対して、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴまたは、その、眼の変性を抑制する活性を有する保存的な変異型を含む、眼の変性を抑制するポリペプチドを含有する有効な量の組成物を投与するステップを含む。接触は、局所的であり得るか、または全身にわたり得る。局所的投与の実施例は、たとえば、Ｔβ４を含有する溶液、ローション、軟膏、ゲル、クリーム、泥膏、スプレー、懸濁液、分散液、ヒドロゲル、軟膏剤、または油剤に眼を接触させることを含む。全身投与は、たとえば、Ｔβ４またはＴβ４アイソホームを含有する組成物の静脈内注射、腹腔内注射、筋肉内注射を含む。被験体は、いずれかの哺乳類、好ましくは、ヒトであり得る。
【００１４】
この発明に従った組成物は、毎日、１日おきなどに投与され、投与日につき１回しか使用されなくてもよく、または複数回使用されてもよく、たとえば、投与日につき２回、３回、４回、またはそれよりも多く使用され得る。
【００１５】
Ｔβ４アイソホームは、公知のＴβ４のアミノ酸配列に対して約７０％、または約７５％、または約８０％、またはそれを超える相同性を有することが確認された。このようなアイソホームは、たとえば、Ｔβ４a1a、Ｔβ９、Ｔβ１０、Ｔβ１１、Ｔβ１２、Ｔβ１３、Ｔβ１４、およびＴβ１５を含む。Ｔβ４と同様に、Ｔβ１０およびＴβ１５アイソホームは、アクチンを重合抑制することが明らかにされた。Ｔβ４、Ｔβ１０、Ｔβ１５、およびこれらの他のアイソホームは、アクチン重合抑制または結合の媒介にかかわっていると思われるアミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴを共有する。特定のいずれかの理論に結び付けられることが望まれるわけではないが、Ｔβ４アイソホームの活性は、ある程度は、アクチンを重合する能力によるものであり得る。たとえば、Ｔβ４は、眼の中のアクチンの重合を調節し得る（たとえば、β−サイモシンが、遊離Ｇ−アクチンを重合抑制することによって、Ｆ−アクチンを脱重合させると思われる）。したがって、アクチンの重合を調節するＴβ４の能力は、完全に、またはある程度までは、ＬＫＫＴＥＴ配列を介してアクチンに結合する、またはアクチンを重合抑制するというその能力によるものであり得る。したがって、Ｔβ４のように、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴを有するＴβ４アイソホームを含む、アクチンを結合または重合抑制する、またはアクチン重合を調節する他のタンパク質が、ここで説明されるように、単独で、またはＴβ４と組合されて、ドライアイ症候群を緩和できる可能性がある。
【００１６】
したがって、Ｔβ４a1a、Ｔβ９、Ｔβ１０、Ｔβ１１、Ｔβ１２、Ｔβ１３、Ｔβ１４、およびＴβ１５等の公知のＴβ４アイソホーム、ならびに、まだ確認されていないＴβ４が、この発明の方法において有用であることが特に企図される。このようなＴβ４アイソホームが、被験体において実施される方法を含む、この発明の方法において有用である。したがって、この発明はさらに、Ｔβ４、および、Ｔβ４アイソホーム、Ｔβ４a1a、Ｔβ９、Ｔβ１０、Ｔβ１１、Ｔβ１２、Ｔβ１３、Ｔβ１４、およびＴβ１５を含む医薬組成物、および医薬的に許容し得る担体を提供する。
【００１７】
加えて、適切な重合抑制、結合、可動化、または重合検定で示されるような、または、たとえば、ＬＫＫＴＥＴ等の、アクチン結合を媒介するアミノ酸配列の存在によって確認されるような、アクチン重合抑制または結合能力を有し、またはアクチンを移動させるか、またはアクチン重合を調節できる他のタンパク質が、この発明の方法で同様に用いられ得る。このようなタンパク質は、たとえば、ゲルソリン、ビタミンＤ結合タンパク質（ＤＢＰ）、プロフィリン、コフィリン、デパクチン、ＤｎアーゼI、ビリン、フラグミン、セベリン、キャッピングタンパク質、β−アクチニン、アクトビンジン、およびアクメンチンを含む。このような方法は、被験体に実施される方法を含むため、この発明はさらに、ここで述べられるようなゲルソリン、ビタミンＤ結合タンパク質（ＤＢＰ）、プロフィリン、コフィリン、デパクチン、ＤｎアーゼI、ビリン、フラグミン、セベリン、キャッピングタンパク質、β−アクチニン、アクトビンジン、およびアクメンチンを含む医薬組成物を提供する。したがって、この発明は、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴおよびその保存的な変異型を含む、ドライアイ症候群を緩和するポリペプチドの使用を含む。
【００１８】
ここで用いられるような用語「保存的な変異型」またはその文法的な変形は、アミノ酸残基を別の生物学的に同様の残基に置換することを意味する。保存的な変異例は、イソロイシン、バリン、ロイシン、またはメチオニン等の疎水性残基を別のものに置換すること、極性残基を別のものに置換すること、たとえば、アルギニンをリシンに、グルタミン酸をアスパラギン酸に、またはグルタミンをアスパラギンに置換すること等を含む。
【００１９】
Ｔβ４は、いくつかの組織および細胞タイプに局在したため、Ｔβ４の生成を刺激する製剤は、組織および／または細胞からのＴβ４の生成を引き起す組成物に加えられ得るか、または組織および／または細胞からのＴβ４の生成を引き起す組成物を含み得る。このような製剤は、インスリン様成長因子（ＩＧＦ−１）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、表皮成長因子（ＥＧＦ）、β型トランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ−β）、基本的な線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）、サイモシンα１（Ｔα１）、および血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）等の成長因子のファミリーのメンバーを含む。より好ましくは、製剤は、β型トランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ−β）またはＴＧＦ−βスーパーファミリーの他のメンバーである。この発明のＴβ４組成物は、細胞外基質沈着、細胞遊走、および炎症性サイトカインのダウンレギュレーションを通して結合組織の成長を実現することによって、ドライアイ症候群を緩和し得る。
【００２０】
加えて、ドライアイ症候群の緩和の助けとなるか、またはドライアイ症候群の緩和を促す製剤が、Ｔβ４またはＴβ４アイソホームとともに、組成物に加えられ得る。このような製剤は、脈管形成剤、成長因子、細胞の分化を促す製剤、細胞の遊走を促進する製剤、および眼の中の細胞外基質材料の提供を促す製剤を含む。たとえば、限定ではないが、Ｔβ４またはＴβ４アイソホームが単独で、または組合わさって、以下の製剤のうちのいずれか１つ以上と組合わせて加えられ得る。以下の製剤とは、すなわち、有効な量のＶＥＧＦ、ＫＧＦ、ＦＧＦ、ＰＤＧＦ、ＴＧＦβ、ＩＧＦ−１、ＩＧＦ−２、ＩＬ−１、プロサイモシンα、およびサイモシンα１である。
【００２１】
この発明は、医薬的に許容し得る担体中に治療上有効な量のＴβ４またはＴβ４アイソホームを含有する医薬組成物も含む。このような担体は、非経口投与に関して上に列挙されたものを含む。
【００２２】
ドライアイ症候群を抑制する、またはドライアイ症候群の反転を促進する、実際の用量または試薬、製剤または組成物は、被験体の大きさおよび健康状態を含む多くの要因に左右され得る。しかしながら、当業者は、上述のＰＣＴ／ＵＳ９９／１７２８２号およびそこで引用される参考文献で開示されているような、臨床的な用量を決定するための方法および技術を説明する教示を用いて、使用されるべき適切な用量を決定することができる。Ｔβ４またはその類似体、アイソホームまたは誘導体は、ドライアイまたは同様の疾患の治療に有効である、いずれかの好適な量で投与され得る。たとえば、Ｔβ４は、約０．１−５０マイクログラムのＴβ４の範囲内の用量で、より好ましくは、約１−２５マイクログラムのＴβ４の量で、投与され得る。Ｔβ４は、１回の治療として投与されてもよく、または、所望の結果が得られるまで、毎日、１日に２回、１日に３回など、または１日おきなどに、投与されてもよい。
【００２３】
好適な局所的製剤は、約０．００１−１０重量％の範囲内の濃度の、より好ましくは、約０．０１−０．１重量％の範囲内の濃度の、最も好ましくは、約０．０５重量％の濃度のＴβ４またはＴβ４アイソホームを含む。
【００２４】
ここで説明される治療的なアプローチは、この発明のＴβ４または他の化合物を含有する試薬または組成物の投与または送達のためのさまざまなやり方を含み、これらは、被験体に対する従来のいずれかの投与技術（たとえば、これらに限定されているわけではないが、局所的投与、局部的投与、または全身投与）を含む。この発明のＴβ４または他の化合物を用いる、または含有する、方法および組成物は、医薬的に許容し得る非毒性賦形剤または担体との混合によって、調合されて医薬組成物になり得る。
【００２５】
この発明は、Ｔβ４ペプチドまたはその機能フラグメントと相互作用する抗体の使用を含む。異なるエピトープの特異性を備える、貯留されたモノクローナル抗体から本質的に構成される抗体および別のモノクローナル抗体製剤が提供される。モノクローナル抗体は、上述のＰＣＴ／ＵＳ９９／１７２８２号に開示されているような、当業者には周知の方法によって、タンパク質フラグメントを含む抗原から形成される。この発明で用いられるような用語「抗体」は、モノクローナル抗体および多クローン性抗体を含むことを意味する。
【００２６】
さらなる別の実施形態では、この発明は、Ｔβ４遺伝子発現を調節する有効な量の製剤を投与することによって、被験体を治療するための方法を提供する。用語「調節」は、Ｔβ４が過度に発現している場合のＴβ４発現の抑制または抑圧、および、Ｔβ４が十分に発現していない場合の発現の誘導を意味する。用語「有効な量」は、Ｔβ４遺伝子発現を調節して、結果として、Ｔβ４関連のドライアイ症候群の症状を緩和するのに有効なＴβ４製剤の量を意味する。Ｔβ４またはＴβ４アイソホーム遺伝子発現を調節する製剤は、たとえば、ポリヌクレオチドであり得る。ポリヌクレオチドは、アンチセンス、三重らせん物質、またはリボザイムであり得る。たとえば、構造遺伝子領域またはＴβ４のプロモータ領域に向けられたアンチセンスが用いられ得る。
【００２７】
別の実施形態では、この発明は、Ｔβ４活性を調節する化合物を用いるための方法を提供する。Ｔβ４活性に影響を与える化合物（たとえば、アンタゴニストおよびアゴニスト）は、ペプチド、ペプチドミメティック、ポリペプチド、化学的化合物、亜鉛等の鉱物、および生物学的製剤を含む。
【００２８】
特定のいずれかの理論に結び付けられるわけではないが、この発明は、ターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（鋳型非依存性ＤＮＡポリメラーゼ）を誘導して、１つ以上の炎症性サイトカインのレベルを減じ、内皮細胞のための走化性因子として作用することによって、ドライアイ症候群に関連した眼の変性の反転を促進し、または眼の変性を抑制することができ、したがって、加齢または他の変性要因もしくは環境的要因によって引起された眼の変性変化を抑制し、または眼の変性変化の反転を促進すると考えられる。
【実施例１】
【００２９】
年齢４０歳未満の健康で若い人々の涙液および年齢４０歳以上のより高齢の人々の涙液が、Ｔβ４のレベルについて検査された。Ｔβ４は、健康で若い人々の涙液中に最も高いレベルで存在し、涙液中のＴβ４は、加齢および更年期に伴って著しく減少することが確認された。したがって、ドライアイ症候群および眼の炎症は、涙液中のＴβ４の欠乏によるものであり得る。したがって、Ｔβ４の投与は、涙液の生成を担当する眼の腺を治癒させることによって、炎症を緩和し、炎症を起こした眼および粘膜の治癒を促進し、涙液の生成を促し得る。
【実施例２】
【００３０】
ワットマン（Whatman）（登録商標）濾紙のディスク（サイズ５０）が、２ｍｍ直径のトレフィンで切断された。ディスクは、１．０Ｎ  ＮａＯＨ中に浸漬され、イソフルランによって麻酔をかけられたマウスの中央角膜に３０秒間適用された。次に、眼は、１０ｍｌのＰＢＳで洗浄され、後に、局所的に、毎日２回、７日間、Ｔβ４（５ｍｇ−５ｍｌ）または（対象として）同様の量のＰＢＳのいずれかを用いて処置された。７日後、ＰＢＳで処置された眼と、Ｔβ４で処置された眼との間には、著しい違いが認められた。ＰＢＳで処置された眼は、明らかな浮腫状および炎症性の角膜を示し、前房は、著しい前房出血および強度の炎症細胞浸潤を含んだ。対照的に、Ｔβ４で処置された角膜は、間質浮腫の減少およびより規則正しく構成された間質層を示した。ＰＢＳで処置された眼と比較して、Ｔβ４で処置された眼の前眼部の全体的な解剖学的完全性は、外観上は、明らかにより正常であった。
【００３１】
ＰＢＳおよびＴβ４を用いた処置の７日後に、透過型電子顕微鏡による分析も行なわれた。Ｔβ４で処置された角膜は、より規則正しい上皮細胞間結合配列、および細胞層間の空胞化の減少を示した。同様に、ＰＢＳで処置された角膜は、間質性消化および浮腫の部分において著しい炎症浸潤を示し、一方、Ｔβ４で処置された角膜の間質は、より規則正しく間隔をあけられたコラーゲン層を備えたまま、無傷に見えた。
【国際公開パンフレット】
2005506293.tif 000002
2005506293.tif 000003
2005506293.tif 000004
2005506293.tif 000005
2005506293.tif 000006
2005506293.tif 000007
2005506293.tif 000008
2005506293.tif 000009
2005506293.tif 000010
2005506293.tif 000011
2005506293.tif 000012
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2005506293.tif 000013
【国際調査報告】
2005506293.tif 000014
2005506293.tif 000015