(57)【要約】本発明は、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）−βシグナル伝達経路、特に、ＴＧＦ−β Ｉ型またはアクチビン様キナーゼ（ＡＬＫ）−５受容体によるｓｍａｄ２またはｓｍａｄ３のリン酸化の阻害剤であるベンゾオキサジンおよびベンゾオキサジノン置換トリアゾール、その製法および医薬におけるその使用、詳細には、該経路によって媒介される疾患の治療および予防におけるその使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2005530800.tif 000050
［式中、ＺはＣＨ２またはＣ＝Ｏであり；
ＹはＮまたはＣＨであり；
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、−（ＣＨ２）ｐ−ＮＲ４Ｒ５、−（ＣＨ２）ｐ−ＯＲ４、（ＣＨ２）ｐ−ＣＮ、−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＮＲ４Ｒ５、−（ＣＨ２）ｐ−ＮＨＣＯＲ４、−（ＣＨ２）ｐ−ＮＨＳＯ２Ｒ４および−（ＣＨ２）ｐ−ｈｅｔから選択され、ここに、ｈｅｔ基は、Ｃ１−６アルキルによって置換されていてもよく；またはＺがＣＨ２であるとき、Ｒ１はさらに、−ＣＯ−Ｃ１−６アルキル、−ＣＯ−（ＣＨ２）ｑ−ＯＲ４、−ＣＯ−（ＣＨ２）ｑ−ＮＲ４Ｒ５および−ＣＯ−（ＣＨ２）ｑ−ｈｅｔから選択されてもよく、ここに、ｈｅｔ基はＣ１−６アルキルによって置換されていてもよく；
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、ハロ、ＣＮまたはペルフルオロＣ１−６アルキルから選択され；
Ｒ３は、Ｈまたはハロから選択され；
Ｒ４およびＲ５は独立して、ＨまたはＣ１−６アルキルから選択され；またはＲ４およびＲ５はそれらが結合している原子と一緒になって、Ｎ、ＳまたはＯから選択される１以上のヘテロ原子を含有していてもよい３、４、５、６または７員の飽和または不飽和環を形成し、ここに、該環はさらに、ハロ（例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ）、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＯＨ、−ＯＣＦ３、Ｃ１−４アルキルおよびＣ１−４アルコキシから選択される１以上の置換基によって置換されていてもよく；
Ｘ１、Ｘ２およびＸ３のうち２つはＮであり、他の１つはＮＲ６であり、ここに、Ｒ６は水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、−（ＣＨ２）ｐ−ＣＮ、−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯ２Ｈ、−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＮＲ７Ｒ８、−（ＣＨ２）ｐＣＯＲ７、−（ＣＨ２）ｑ（ＯＲ９）２、−（ＣＨ２）ｐＯＲ７、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＮ、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯ２Ｈ、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯＮＲ７Ｒ８、−（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯＲ１０または−（ＣＨ２）ｐＮＲ１１Ｒ１２であり；
Ｒ７およびＲ８は独立して、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、アリールまたはｈｅｔであり；
Ｒ９はＣ１−６アルキルであり；
Ｒ１０はＣ１−７アルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールＣ１−６アルキルまたはヘテロアリールＣ１−６アルキルであり；
Ｒ１１およびＲ１２は独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、アリールおよびアリールＣ１−６アルキルから選択され、またはＲ１１およびＲ１２はそれらが結合している原子と一緒になって、Ｎ、ＳまたはＯから選択される１以上のヘテロ原子を含有していてもよい３、４、５、６または７員の飽和または不飽和環を形成し、ここに、該環はさらに、ハロ（例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ）、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＯＨ、−ＯＣＦ３、Ｃ１−４アルキルおよびＣ１−４アルコキシから選択される１以上の置換基によって置換されていてもよく；
ｐは２−４であり；
ｑは１−４である］
で示される化合物またはその医薬上許容される誘導体。
【請求項２】
ＹがＮである、請求項１記載の化合物またはその医薬上許容される誘導体。
【請求項３】
Ｒ１がＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、−（ＣＨ２）２−Ｈｅｔ、−（ＣＨ２）２−ＯＲ４、−（ＣＨ２）２−ＮＲ４Ｒ５または−（ＣＨ２）２−ＣＮである請求項１または２記載の化合物またはその医薬上許容される誘導体。
【請求項４】
Ｒ１がＨ、Ｃ１−６アルキルまたはＣ２−６アルケニルである請求項３記載の化合物またはその医薬上許容される誘導体。
【請求項５】
Ｒ２がＨ、Ｃ１−６アルキルまたはハロである上記請求項のいずれか１項記載の化合物またはその医薬上許容される誘導体。
【請求項６】
ＹがＮである場合、Ｒ２がＹに対してオルト位にあるメチルである請求項５記載の化合物またはその医薬上許容される誘導体。
【請求項７】
Ｒ３がＨまたはハロである上記請求項のいずれか１項記載の化合物またはその医薬上許容される誘導体。
【請求項８】
ＹがＮであって、Ｒ２がＹに対してオルト位にあるメチルである場合、Ｒ３がＨである請求項７記載の化合物またはその医薬上許容される誘導体。
【請求項９】
Ｒ６がＨである上記請求項のいずれか１項記載の化合物またはその医薬上許容される誘導体。
【請求項１０】
６−［５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン（実施例１）；
６−（５−ピリジン−２−イル−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル）−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン（実施例２）；
６−［５−（３−クロロ−フェニル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン（実施例３）；
４−メチル−６−［５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン（実施例４）；
４−エチル−６−［５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン（実施例５）；
４−プロピル−６−［５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン（実施例６）；
４−（プロペン−２−イル）−６−［５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン（実施例７）；
４−（２−メトキシ−エチル）−６−［５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン（実施例８）；
３−｛６−［５−（−６−メチル−ピリジン−３−イル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−３−オキソ−２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］オキサジン−４−イル｝−プロピオニトリル（実施例９）；
６−［５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−４−（２−モルホリン−４−イル−エチル）−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン（実施例１０）；
４−（２−ジメチルアミノ−エチル）−６−［５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−４−（２−モルホリン−４−イル−エチル）−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン（実施例１１）；
６−［５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−４−イル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［１，４］−オキサジン（実施例１５）；
４−メチル−６−［５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−４−イル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［１，４］−オキサジン（実施例１３）；
４−アセチル−６−［５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−４−イル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［１，４］−オキサジン（実施例１４）；
４−エチル−６−［５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−４−イル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［１，４］−オキサジン（実施例１２）；
４−（プロペン−２−イル）−６−［５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−４−イル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［１，４］−オキサジン（実施例１６）；および
４−［（４−メチル−１−ピペラジニル）アセチル］−６−（６−メチル−ピリジン−２−イル−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−４−イル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［１，４］−オキサジン（実施例１７）ならびにその医薬上許容される誘導体から選択される請求項１記載の化合物。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか１項記載の化合物またはその医薬上許容される誘導体、および医薬上許容される担体または希釈剤を含んでなる医薬組成物。
【請求項１２】
腎線維症の治療または予防のための医薬の製造における請求項１〜１０のいずれか１項記載の化合物またはその医薬上許容される誘導体の使用。
【請求項１３】
医薬としての使用のための請求項１〜１０のいずれか１項記載の化合物またはその医薬上許容される誘導体。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）−βシグナル伝達経路、特に、ＴＧＦ−β Ｉ型またはアクチビン様キナーゼ（ＡＬＫ）−５受容体によるｓｍａｄ２またはｓｍａｄ３のリン酸化の阻害剤であるベンゾオキサジンおよびベンゾオキサジノン置換トリアゾール、その製法および医薬におけるその使用、詳細には、該経路によって媒介される疾患の治療および予防におけるその使用に関する。
【０００２】
ＴＧＦ−β１は、一回膜貫通型セリン／スレオニンキナーゼ受容体のファミリーを介してシグナルを送る、ＴＧＦ−β、アクチビン、インヒビン、骨形成タンパク質およびミュラー管抑制物質を包含するサイトカインのファミリーの原型メンバーである。これらの受容体は、Ｉ型またはアクチビン様キナーゼ（ＡＬＫ）受容体およびＩＩ型受容体の２つのクラスに分けることができる。ＡＬＫ受容体は、（ａ）セリン／スレオニンが豊富な細胞内尾部を欠くこと、（ｂ）Ｉ型受容体間で非常に相同性のあるセリン／スレオニンキナーゼドメインを有すること、および（ｃ）グリシンおよびセリン残基が豊富な領域からなるＧＳドメインと呼ばれる共通モチーフを有することにおいて、ＩＩ型受容体と区別される。ＧＳドメインは、細胞内キナーゼドメインのアミノ末端にあり、ＩＩ型受容体による活性化に不可欠である。いくつかの研究は、ＴＧＦ−βシグナル伝達がＡＬＫおよびＩＩ型受容体の両方を必要とすることを示した。詳細には、ＩＩ型受容体は、ＴＧＦ−βの存在下で、ＴＧＦ−βのＩ型受容体、ＡＬＫ５のＧＳドメインをリン酸化する。ＡＬＫ５は、次に、細胞質タンパク質ｓｍａｄ２およびｓｍａｄ３を２つのカルボキシ末端セリンにてリン酸化する。リン酸化されたｓｍａｄタンパク質は核内に移動し、細胞外マトリックスの産生に寄与する遺伝子を活性化する。したがって、本発明の好ましい化合物は、それらがＩ型受容体を阻害し、かくしてマトリックス産生を阻害することにおいて選択的である。
【０００３】
ＴＧＦ−β１軸の活性化および細胞外マトリックスの拡大は、慢性腎疾患および管疾患の発病および進行に対する初期および持続性の誘因である（Border W.A., et al, N. Engl. J. Med., 1994; 331(19), 1286-92）。さらに、ＴＧＦ−β１は、ＴＧＦ−β受容体ＡＬＫ５によるｓｍａｄ３リン酸化の作用によって、硬化沈着物の成分であるフィブロネクチンおよびプラスミノーゲンアクチベーター阻害剤−１の形成において役割を果たす（Zhang Y., et al, Nature, 1998; 394(6696), 909-13; Usui T., et al, Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 1998; 39(11), 1981-9）。
【０００４】
腎臓および心血管系における進行性線維症は、苦痛および死の主要な原因であり、健康管理のコストの重要な一因である。ＴＧＦ−β１は、多くの腎線維形成障害に関与している（Border W.A., et al, N. Engl. J. Med., 1994; 331(19), 1286-92）。ＴＧＦ−β１は、急性および慢性糸球体腎炎（Yoshioka K., et al, Lab. Invest., 1993; 68(2), 154-63）、糖尿病性腎障害（Yamamoto, T., et al, 1993, PNAS 90, 1814-1818）、同種移植片拒絶、ＨＩＶ腎障害およびアンギオテンシン−誘導性腎障害（Border W.A., et al, N. Engl. J. Med., 1994; 331(19), 1286-92）において上昇する。これらの疾患において、ＴＧＦ−β１発現のレベルは、細胞外マトリックスの産生と一致する。３つの道筋の証拠がＴＧＦ−β１とマトリックス産生との間の因果関係を示唆する。第一に、外因性ＴＧＦ−β１によりイン・ビトロで、正常な糸球体、メサンギウム細胞および非腎細胞を、細胞外マトリックスタンパク質を生産し、プロテアーゼ活性を阻害するように誘導することができる。第二に、ＴＧＦ−β１に対する中和抗体は、腎炎ラットにおいて細胞外マトリックスの蓄積を予防することができる。第三に、ＴＧＦ−β１トランスジェニックマウスまたは正常なラット腎臓へのＴＧＦ−β１遺伝子のイン・ビボでのトランスフェクションが、糸球体硬化症の迅速な発現をもたらした（Kopp J.B., et al, Lab. Invest., 1996; 74(6), 991-1003）。かくして、ＴＧＦ−β１活性の阻害は、慢性腎疾患における治療的介入として必要とされる。
【０００５】
ＴＧＦ−β１およびその受容体は、損傷した血管において増加し、バルーン血管形成後の新脈管内膜形成において示される（Saltis J., et al, Clin. Exp. Pharmacol. Physiol., 1996; 23(3), 193-200）。さらに、ＴＧＦ−β１は、イン・ビトロでの平滑筋細胞（ＳＭＣ）移動の強力な刺激因子であり、動脈壁におけるＳＭＣの移動は、アテローム性動脈硬化症および再狭窄の病因に寄与する因子である。さらに、全コレステロールに対する内皮細胞産物の多変量解析において、ＴＧＦ−β受容体ＡＬＫ５は全コレステロールに相関した（Ｐ＜０．００１）（Blann A.D., et al,  Atherosclerosis, 1996; 120(1-2), 221-6）。さらに、ヒトアテローム性動脈硬化症病変由来のＳＭＣは、ＡＬＫ５／ＴＧＦ−βＩＩ型受容体比が増加した。線維増殖性管病変においてＴＧＦ−β１が過剰発現するので、細胞外マトリックス成分が過剰生成される間、受容体−変異細胞は、ゆっくりとではあるが制御されずに増殖するであろう（McCaffrey T.A., et al, Jr., J. Clin. Invest., 1995; 96(6), 2667-75）。ＴＧＦ−β１は、活性マトリックス合成が起こるアテローム性動脈硬化症病変における非泡沫状マクロファージに対して免疫局在した。このことは、非泡沫状マクロファージがＴＧＦ−β依存性メカニズムを介して、アテローム性動脈硬化リモデリングにおけるマトリックス遺伝子発現の調節に関係しうることを示唆する。したがって、ＡＬＫ５に対するＴＧＦ−β１の作用を阻害するはまた、アテローム性動脈硬化症および再狭窄においても必要とされる。
【０００６】
ＴＧＦ−βは、創傷修復においても示される。ＴＧＦ−β１シグナル伝達の阻害が治癒過程における過度な瘢痕形成を制限することによって創傷後の機能回復に有益であることを明らかにするために、ＴＧＦ−β１に対する中和抗体が多くのモデルにおいて使用されている。例えば、ＴＧＦ−β１およびＴＧＦ−β２に対する中和抗体は、ラットにおいて単核細胞およびマクロファージの数を減少し、同様に、皮膚フィブロネクチンおよびコラーゲン沈着を減少することによって、瘢痕形成を減少し、新真皮の細胞構造を改善した（Shah M., J. Cell. Sci., 1995, 108, 985-1002）。さらに、ＴＧＦ−β抗体はまた、ウサギにおいて角膜創傷の治癒を改善し（Moller-Pedersen T., Curr. Eye Res., 1998, 17, 736-747）、ラットにおいて胃潰瘍の創傷治癒を促進する（Ernst H., Gut, 1996, 39, 172-175）。これらのデータは、ＴＧＦ−βの活性を制限することが多くの組織において有益であることを強く示唆し、ＴＧＦ−βの慢性的な上昇を伴ういずれの疾患も、ｓｍａｄ２およびｓｍａｄ３シグナル伝達経路を阻害することによって利益を得ることを示唆する。
【０００７】
ＴＧＦ−βはまた、腹膜癒着に関係する（Saed G.M., et al, Wound Repair Regeneration, 1999 Nov-Dec, 7(6), 504-510）。したがって、ＡＬＫ５の阻害剤は、外科的手法後の腹膜および皮下線維癒着の予防に有益であろう。
【０００８】
驚くべきことに、この度、一連のベンゾオキサジンおよびベンゾオキサジノン置換トリアゾール化合物が、ＡＬＫ５キナーゼの強力かつ選択的な非ペプチド阻害剤として機能し、したがって、ＡＬＫ５キナーゼメカニズムによって媒介される種々の疾患、例えば、慢性腎疾患、急性腎疾患、創傷治癒、関節炎、骨粗鬆症、腎臓病、鬱血性心不全、潰瘍、視覚障害、角膜創傷、糖尿病性腎障害、神経機能障害、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化症、腹膜および皮下癒着、限定するものではないが、肺線維症および肝線維症を包含する線維形成が主要な成分であるいずれかの疾患、例えば、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、アルコール誘導性肝炎、血色素症および原発性胆汁性肝硬変、および再狭窄の治療および予防に有用であることが見出された。
【０００９】
第一の態様によると、本発明は、式（Ｉ）：
【化１】
2005530800.tif 000002
【００１０】
［式中、ＺはＣＨ２またはＣ＝Ｏであり；
ＹはＮまたはＣＨであり；
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、−（ＣＨ２）ｐ−ＮＲ４Ｒ５、−（ＣＨ２）ｐ−ＯＲ４、（ＣＨ２）ｐ−ＣＮ、−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＮＲ４Ｒ５、−（ＣＨ２）ｐ−ＮＨＣＯＲ４、−（ＣＨ２）ｐ−ＮＨＳＯ２Ｒ４および−（ＣＨ２）ｐ−ｈｅｔから選択され、ここに、ｈｅｔ基は、Ｃ１−６アルキルによって置換されていてもよく；またはＺがＣＨ２であるとき、Ｒ１はさらに、−ＣＯ−Ｃ１−６アルキル、−ＣＯ−（ＣＨ２）ｑ−ＯＲ４、−ＣＯ−（ＣＨ２）ｑ−ＮＲ４Ｒ５および−ＣＯ−（ＣＨ２）ｑ−ｈｅｔから選択されてもよく、ここに、ｈｅｔ基はＣ１−６アルキルによって置換されていてもよく；
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、ハロ、ＣＮまたはペルフルオロＣ１−６アルキルから選択され；
Ｒ３は、Ｈまたはハロから選択され；
Ｒ４およびＲ５は独立して、ＨまたはＣ１−６アルキルから選択され；またはＲ４およびＲ５はそれらが結合している原子と一緒になって、Ｎ、ＳまたはＯから選択される１以上のヘテロ原子を含有していてもよい３、４、５、６または７員の飽和または不飽和環を形成し、ここに、該環はさらに、ハロ（例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ）、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＯＨ、−ＯＣＦ３、Ｃ１−４アルキルおよびＣ１−４アルコキシから選択される１以上の置換基によって置換されていてもよく；
Ｘ１、Ｘ２およびＸ３のうち２つはＮであり、他の１つはＮＲ６であり、ここに、Ｒ６は水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、−（ＣＨ２）ｐ−ＣＮ、−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯ２Ｈ、−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＮＲ７Ｒ８、−（ＣＨ２）ｐＣＯＲ７、−（ＣＨ２）ｑ（ＯＲ９）２、−（ＣＨ２）ｐＯＲ７、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＮ、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯ２Ｈ、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯＮＲ７Ｒ８、−（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯＲ１０または−（ＣＨ２）ｐＮＲ１１Ｒ１２であり；
Ｒ７およびＲ８は独立して、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、アリールまたはｈｅｔであり；
Ｒ９はＣ１−６アルキルであり；
Ｒ１０はＣ１−７アルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールＣ１−６アルキルまたはヘテロアリールＣ１−６アルキルであり；
Ｒ１１およびＲ１２は独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、アリールおよびアリールＣ１−６アルキルから選択され、またはＲ１１およびＲ１２はそれらが結合している原子と一緒になって、Ｎ、ＳまたはＯから選択される１以上のヘテロ原子を含有していてもよい３、４、５、６または７員の飽和または不飽和環を形成し、ここに、該環はさらに、ハロ（例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ）、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＯＨ、−ＯＣＦ３、Ｃ１−４アルキルおよびＣ１−４アルコキシから選択される１以上の置換基によって置換されていてもよく；
ｐは２−４であり；
ｑは１−４である］
で示される化合物またはその医薬上許容される誘導体を提供する。
【００１１】
式（Ｉ）の化合物のトリアゾール環において、２つの非置換窒素間に二重結合があることは明らかであろう。
好ましくは、ＹはＮである。
好ましくは、Ｒ１はＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、−（ＣＨ２）２−Ｈｅｔ、−（ＣＨ２）２−ＯＲ４、−（ＣＨ２）２−ＮＲ４Ｒ５または−（ＣＨ２）２−ＣＮである。より好ましくは、Ｒ１はＨ、Ｃ１−６アルキルまたはＣ２−６アルケニルである。
好ましくは、Ｒ２はＨ、Ｃ１−６アルキルまたはハロである。より好ましくは、Ｒ２はＨ、メチル、クロロまたはフルオロである。好ましくは、ＹはＮであるとき、Ｒ２はＹに対してオルト位にあるメチルである。
【００１２】
好ましくは、Ｒ３はＨまたはハロである。より好ましくは、Ｒ３はＨまたはフルオロである。より好ましくは、ＹはＮであって、Ｒ２はＹに対してオルト位にあるメチルであるとき、Ｒ３はＨである。
好ましくは、Ｒ４およびＲ５は独立して、Ｈまたはメチルであるか、またはＲ４およびＲ５はそれらが結合している原子と一緒になって、Ｎ、ＳまたはＯから選択される１以上のヘテロ原子を含有していてもよい３、４、５、６または７員の飽和または不飽和環を形成し、ここに、該環はさらに、ハロ（例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ）、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＯＨ、−ＯＣＦ３、Ｃ１−４アルキルおよびＣ１−４アルコキシから選択される１以上の置換基で置換されていてもよい。適当には、Ｒ４およびＲ５はそれらが結合している原子と一緒になって、モルホリン、ピペリジン、ピロリジン、ピペラジンまたはＮ−メチルピペラジン環を形成する。
【００１３】
好ましくは、Ｒ６はＨである。
本発明は、下記に列挙される好ましい基のいずれかの組み合わせを有する化合物を包含することが意図される。
ＴＧＦ−βの過剰発現によって特徴づけられる障害の治療または予防において有用な薬剤として特別重要な式（Ｉ）の化合物は：
６−［５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン（実施例１）；
６−（５−ピリジン−２−イル−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル）−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン（実施例２）；
６−［５−（３−クロロ−フェニル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン（実施例３）；
４−メチル−６−［５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン（実施例４）；
４−エチル−６−［５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン（実施例５）；
４−プロピル−６−［５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン（実施例６）；
４−（プロペン−２−イル）−６−［５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン（実施例７）；
４−（２−メトキシ−エチル）−６−［５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン（実施例８）；
３−｛６−［５−（−６−メチル−ピリジン−３−イル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−３−オキソ−２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］オキサジン−４−イル｝−プロピオニトリル（実施例９）；
６−［５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−４−（２−モルホリン−４−イル−エチル）−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン（実施例１０）；
４−（２−ジメチルアミノ−エチル）−６−［５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−４−（２−モルホリン−４−イル−エチル）−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン（実施例１１）；
６−［５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−４−イル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［１，４］−オキサジン（実施例１５）；
４−メチル−６−［５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−４−イル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［１，４］−オキサジン（実施例１３）；
４−アセチル−６−［５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−４−イル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［１，４］−オキサジン（実施例１４）；
４−エチル−６−［５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−４−イル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［１，４］−オキサジン（実施例１２）；
４−（プロペン−２−イル）−６−［５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−４−イル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［１，４］−オキサジン（実施例１６）；および
４−［（４−メチル−１−ピペラジニル）アセチル］−６−（６−メチル−ピリジン−２−イル−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−４−イル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［１，４］−オキサジン（実施例１７）またはその医薬上許容される誘導体である。
【００１４】
さらなる態様によると、本発明は、式（Ｉ）：
【化２】
2005530800.tif 000003
【００１５】
［式中、
ＺはＣＨ２またはＣ＝Ｏであり；
ＹはＮまたはＣＨであり；
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルケニル、−（ＣＨ２）ｐ−ＮＲ４Ｒ５、−（ＣＨ２）ｐ−ＯＲ４、−（ＣＨ２）ｐ−ＣＮ、−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＮＲ４Ｒ５、−（ＣＨ２）ｐ−ＮＨＣＯＲ４、−（ＣＨ２）ｐ−ＮＨＳＯ２Ｒ４、−（ＣＨ２）ｐ−Ｈｅｔであるか；または、ＺがＣＨ２であるとき、Ｒ１はさらに、−ＣＯ−Ｃ１−６アルキル、−ＣＯ−（ＣＨ２）ｑ−ＯＲ４、−ＣＯ−（ＣＨ２）ｑ−ＮＲ４Ｒ５、−ＣＯ−（ＣＨ２）ｑ−Ｈｅｔから選択されてもよく；
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、ハロ、ＣＮまたはペルフルオロＣ１−６アルキルから選択され；
Ｒ３は、Ｈまたはハロから選択され；
Ｒ４およびＲ５は独立して、ＨまたはＣ１−６アルキルから選択されるか；またはＲ４Ｒ５はそれらが結合している原子と一緒になって、Ｎ、ＳまたはＯから選択される１以上のヘテロ原子を含有していてもよい３、４、５、６または７員の飽和または不飽和環を形成し、ここに、該環はさらに、ハロ（例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ）、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＯＨ、−ＯＣＦ３、Ｃ１−４アルキルおよびＣ１−４アルコキシから選択される１以上の置換基によって置換されていてもよく；
Ｘ１、Ｘ２およびＸ３のうち２つはＮであり、他の１つはＮＲ６であり、ここにＲ６は水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、−（ＣＨ２）ｐ−ＣＮ、−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯ２Ｈ、−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＮＨＲ７Ｒ８、−（ＣＨ２）ｐＣＯＲ７、−（ＣＨ２）ｑ（ＯＲ９）２、−（ＣＨ２）ｐＯＲ７、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＮ、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯ２Ｈ、−（ＣＨ２）ｑ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯＮＨＲ７Ｒ８、−（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯＲ１０または−（ＣＨ２）ｐＮＲ１１Ｒ１２であり；
Ｒ７およびＲ８は独立して、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、アリールまたはｈｅｔであり；
Ｒ９はＣ１−６アルキルであり；
Ｒ１０はＣ１−７アルキルであるか、または置換されていてもよいアリール、ヘテロアリール、アリールＣ１−６アルキルもしくはヘテロアリールＣ１−６アルキルであり；
Ｒ１１およびＲ１２は独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、アリールおよびアリールＣ１−６アルキルから選択されるか、またはＲ１１Ｒ１２はそれらが結合している原子と一緒になって、Ｎ、ＳまたはＯから選択される１以上のヘテロ原子を含有していてもよい３、４、５、６または７員の飽和または不飽和環を形成し、ここに、該環はさらに、ハロ（例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ）、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＯＨ、−ＯＣＦ３、Ｃ１−４アルキルおよびＣ１−４アルコキシから選択される１以上置換基で置換されていてもよく；
ｐは２−４であり；および
ｑは１−４である］
で示される化合物またはその医薬上許容される誘導体を提供する。
【００１６】
ある特定の式（Ｉ）の化合物は、光学異性体、例えば、ジアステレオマーおよびあらゆる比率の異性体混合物、例えば、ラセミ混合物の形態で存在していてもよい。本発明は、かかる形態の全て、特に、純粋な異性形態を包含する。異なる異性形態は、常法によって１を他から分離または分割してもよく、またはいずれか所定の異性体を従来の合成法または立体特異的もしくは不斉合成によって得てもよい。
【００１７】
式（Ｉ）の化合物は医薬組成物における使用を意図されるので、それらは各々、好ましくは、実質的に純粋な形態、例えば、少なくとも６０％純粋、より適当には少なくとも７５％純粋、好ましくは少なくとも８５％純粋、特に少なくとも９８％純粋な形態（％は重量に対する重量に基づく）で提供されることが容易に理解されるであろう。該化合物の不純な調製物は、医薬組成物において使用されるより純粋な形態を調製するために使用してもよく；該化合物のこれらのより純度の低い調製物は、少なくとも１％、より適当には少なくとも５％、好ましくは１０〜５９％式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される誘導体を含有するべきである。
【００１８】
本明細書で使用される場合、「Ｃ１−６アルキル」および「Ｃ１−７アルキル」なる語は、それ自体または基の一部として、鎖長が限定されないかぎり、各々、１〜６個の炭素原子からなる直鎖または分枝鎖飽和脂肪族炭化水素基をいい、限定するものではないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチルおよびヘキシルを包含する。
「アルケニル」なる語は、基または基の一部として、明記された数の炭素原子を含有する直鎖または分枝鎖モノまたはポリ不飽和脂肪族炭化水素基をいう。「アルケニル」基に対する言及は、Ｅ−またはＺ−形またはその混合物であってもよい基を包含する。
「アルコキシ」なる語は、基または基の一部として、アルキルエーテル基をいい、ここに、「アルキル」なる語は上記のとおりである。かかるアルコキシ基は、特に、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、ｉｓｏ−プロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｉｓｏ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシおよびｔｅｒｔ−ブトキシを包含する。
【００１９】
「アリール」なる語は、基または基の一部として、明記された数の炭素原子、好ましくは５〜１４個の炭素原子、より好ましくは５〜１０個の炭素原子を含有する炭素環式芳香族基をいい、ハロ（例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ）、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＯＨ、−ＯＣＦ３、Ｃ１−４アルキルおよびＣ１−４アルコキシから選択される同一または異なっていてもよい１以上の置換基で置換されていてもよい二環および三環系を包含しうる。かかるアリール基は、シクロペンタジエニル、フェニルまたはナフチルを包含する。
「シクロアルキル」なる語は、基または基の一部として、ハロ（例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ）、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＯＨ、−ＯＣＦ３、Ｃ１−４アルキルおよびＣ１−４アルコキシから選択される同一または異なっていてもよい１以上の置換基で置換されていてもよい明記された数の炭素原子、好ましくは３〜１４個の炭素原子、より好ましくは３〜１０個の炭素原子を含有する飽和炭素環式基をいう。かかる基は、特に、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルを包含する。
【００２０】
「ｈｅｔ」または「ヘテロアリール」なる語は、基または基の一部として、ハロ（例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ）、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＯＨ、−ＯＣＦ３、Ｃ１−４アルキルおよびＣ１−４アルコキシから選択される同一または異なっていてもよい１以上の置換基で置換されていてもよい、窒素、酸素および硫黄から独立して選択される１以上のヘテロ原子を含有する安定な複素環式芳香族６〜１４員の単環式環をいう。適当には、６〜１４員の複素環式基は、フラン、ジオキソラン、チオフェン、ピロール、イミダゾール、ピロリジン、ピラン、ピリジン、ピリミジン、モルホリン、ピペリジン、オキサゾール、イソキサゾール、オキサゾリン、オキサゾリジン、チアゾール、イソチアゾール、チアジアゾール、ベンゾフラン、インドール、イソインドール、キナゾリン、キノリン、イソキノリンおよびケタールから選択される。
本明細書で使用される場合、「ペルフルオロアルキル」なる語は、トリフルオロメチルのような化合物を包含する。
【００２１】
「ハロ」または「ハロゲン」なる語は、本明細書において、塩素、フッ素、ヨウ素および臭素元素由来の基を意味するために、交換可能に使用される。
本明細書で使用される場合、「医薬上許容される誘導体」なる語は、式（Ｉ）の化合物のいずれかの医薬上許容される塩、溶媒和物、エステルまたはアミド、かかるエステルまたはアミドの塩または溶媒和物、あるいはレシピエントへの投与時に、式（Ｉ）の化合物またはその活性な代謝物もしくは残基を提供する（直接または間接的に）ことのできるいずれか他の化合物、例えば、プロドラッグを意味する。本発明の好ましい医薬上許容される誘導体は、いずれかの医薬上許容される塩、溶媒和物またはプロドラッグである。
【００２２】
式（Ｉ）の化合物の適当な医薬上許容される塩は、酸性塩、例えば、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムおよびテトラアルキルアンモニウムなど、あるいは適当な酸、例えば、酢酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、イセチオン酸、ラクトビオン酸およびコハク酸などの有機カルボン酸；メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸およびｐ−トルエンスルホン酸などの有機スルホン酸ならびに塩酸、硫酸、リン酸およびスルファミン酸などの無機酸とのモノ−またはジ−塩基性塩を包含する。
本発明の化合物のいくつかは、水性および有機性溶媒などの溶媒から結晶化または再結晶化されうる。かかる場合、溶媒和物が形成されてもよい。本発明は、その範囲内に、水和物を包含する化学量論的溶媒和物ならびに凍結乾燥などの処理によって生産されうる種々の量の水を含有する化合物を包含する。
「ＡＬＫ５阻害剤」なる語は、ｐ３８またはＩＩ型受容体よりも優先的にＡＬＫ５受容体を選択的に阻害する、阻害性ｓｍａｄ、例えば、ｓｍａｄ６およびｓｍａｄ７以外の化合物を意味するために、本明細書において使用される。
【００２３】
「ＡＬＫ５媒介性疾患」なる語は、ＡＬＫ５によって媒介される（または調節される）いずれかの疾患、例えば、ＴＧＦ−１βシグナル伝達経路におけるｓｍａｄ２／３のリン酸化の阻害によって調節される疾患を意味するために、本明細書において使用される。
「潰瘍」なる語は、限定するものではないが、糖尿病性潰瘍、慢性潰瘍、胃潰瘍、および十二指腸潰瘍を包含するために、本明細書において使用される。
式（Ｉ）の化合物は、当該分野で認識される手法によって、既知または市販の出発物質から調製できる。出発物質が商業的供給源から入手できない場合、その合成は本明細書に記載されているか、または当該分野で既知の手法によって調製できる。
詳細には、式（Ｉ）の化合物はスキーム１〜４に示されるように調製されうる。
【００２４】
より詳細には、ＺがＣ＝Ｏである場合、式（Ｉ）の化合物は、スキーム１に概説される手法にしたがって合成されうる。６−ブロモ−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン（ＩＩ）（Mazharuddin,N.; Thyagarajan,G.; Indian J.Chem.; 7; 1969; 658-661）を、ヨウ化銅（Ｉ）の存在下、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４などのパラジウム触媒を用いて、トリメチルシリルアセチレンとカップリングする。他の触媒をＰｄ（ＰＰｈ３）４の代わりに用いてもよいことは、当業者に明らかであろう。かかる触媒の例は、限定するものではないが、ＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）２を包含する。次いで、トリメチルシリル基を塩基性条件下、例えば、炭酸カリウムの存在下で除去し、マスクしていない末端アセチレン誘導体（ＩＶ）を、（ＩＩＩ）の調製と同条件を用いて、パラジウム触媒を介して置換臭化アリールにカップリングする。得られたベンゾオキサジノン誘導体（Ｖ）は、炭酸カリウムなどの塩基の存在下で、適当なアルキル化剤Ｌ−Ｒ１（ここに、Ｌは脱離基、例えば、ＩまたはＢｒまたはＣｌであり、Ｒ１は上記の通りである）を用いてアルキル化してＮ−アルキル化誘導体（ＶＩ）を形成させてもよい。二置換アセチレン（Ｖ）または（ＶＩ）をトリメチルシリルアジドで処理して、トリアゾール（ＶＩＩ）または（ＶＩＩＩ）を得、それを炭酸カリウムなどの塩基の存在下で、適当なアルキル化剤Ｌ−Ｒ６（ここに、Ｌは脱離基、例えば、Ｉであり、Ｒ６は上記の通りである）を用いてアルキル化してもよい。得られた異性体は、クロマトグラフィー法によって分離できる。
【００２５】
スキーム１
【化３】
2005530800.tif 000004
【００２６】
ＺがＣＨ２であって、Ｒ６がＨである式（Ｉ）の化合物は、スキーム２において示される一般的な方法にしたがって調製されうる。臭化４−アセチル−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１，４］オキサジン−６−イル（ＩＸ）（J.Med. Chem. 1997, 40, 1465-1474において記載されるように調製される）を、ヨウ化銅（Ｉ）の存在下、パラジウム触媒、例えば、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４を用いて、トリメチルシリルアセチレンとカップリングして、シリル誘導体（Ｘ）を形成する。次いで、塩基性条件下、例えば、炭酸カリウムの存在下、室温にてトリメチルシリル基を除去し、マスクしていない末端アセチレン（ＸＩ）を（Ｘ）の調製と同条件下、パラジウム触媒を介して、置換臭化アリールにカップリングする。アセチル基は、塩基性条件下、水酸化カリウムを用いて除去する。得られたベンゾオキサジン誘導体（ＸＩＩＩ）は、炭酸カリウムまたはトリエチルアミンなどの塩基の存在下、適当な薬剤、例えば、Ｌ−Ｒ１（ここに、Ｌは脱離基、例えば、ＩまたはＢｒまたはＣｌであり、Ｒ１は上記の通りである）を用いてアルキル化またはアシル化して、Ｎ−アルキルまたはＮ−アシル誘導体（ＸＩＶ）を形成させてもよい。別法では、ベンゾオキサジン誘導体（ＸＩＩＩ）をＮａＢＨ３ＣＮの存在下で、Ｒ１−ＣＨＯでの還元的アミノ化によってアルキル化してもよい。得られた二置換アセチレンをトリメチルシリルアジドで処理して、トリアゾールを得る。
【００２７】
スキーム２
【化４】
2005530800.tif 000005
【００２８】
Ｒ１が−ＣＯ−ＣＨ２−ＮＲ４Ｒ５であって、Ｒ６がＨである式（Ｉ）の化合物は、スキーム３に示されるように調製されうる。
【００２９】
スキーム３
【化５】
2005530800.tif 000006
【００３０】
Ｒ１がＣ１−６アルキル、−（ＣＨ２）２−Ｈｅｔまたは（ＣＨ２）２−ＯＲ４である式（ＸＩＶ）のベンゾオキサジン化合物は、反応スキーム４に示されるように、式（ＶＩ）のベンゾオキサジノン化合物の還元から調製されうる。
【００３１】
スキーム４
【化６】
2005530800.tif 000007
【００３２】
式（Ｉ）の化合物の調製に関するさらなる詳細は、実施例に示される。
式（Ｉ）の化合物は、単一に、または少なくとも２個、例えば５〜１，０００個、より好ましくは１０〜１００個の式（Ｉ）の化合物を含む化合物ライブラリーとして調製されうる。式（Ｉ）の化合物のライブラリーは、コンビナトリアル「スプリットおよびミックス」手法によって、または溶液相もしくは固相化学のいずれかを用いるマルチプル・パラレル合成によって、当業者に既知の手法によって調製されうる。
かくして、本発明のさらなる態様によると、少なくとも２個の式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される塩を含む化合物ライブラリーが提供される。
本発明の化合物は、ＴＧＦ−βＩ型（ＡＬＫ５）受容体の阻害によってＳｍａｄ−２またはＳｍａｄ−３タンパク質のリン酸化を阻害することが見出された。
【００３３】
したがって、本発明の化合物は、本明細書に記載されるアッセイにおいて試験され、ＴＧＦ−βの過剰発現によって特徴づけられる障害の治療および予防において治療的に有益である可能性があることが見出された。
かくして、ヒトまたは獣医学における医薬として、特に、ＴＧＦ−βの過剰発現によって特徴づけられる障害の治療または予防において有用な式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される塩、溶媒和物もしくは誘導体が提供される。
本明細書における治療に対する言及は予防ならびに確立された症状の治療にまでおよぶことは明らかであろう。さらに、本明細書におけるＴＧＦ−βの過剰発現によって特徴づけられる障害の治療または予防に対する言及は、ＴＧＦ−β関連疾患、例えば、線維症、特に肝および腎線維症、癌発現、異常な骨機能および炎症性障害および瘢痕の治療または予防を包含することは明らかであろう。
【００３４】
本発明にしたがって治療されうる他の病理学上の症状は、本明細書に上記される序文において論説されている。本発明の化合物は、特に、線維症および関連の症状の治療に適する。
本発明の化合物は、他の治療剤、例えば、肝臓病のための抗ウイルス剤と組み合わせて、あるいは腎臓病のためのＡＣＥ阻害剤またはアンギオテンシンＩＩ受容体アンタゴニストと組み合わせて投与してもよい。
本発明のさらなる態様によると、哺乳動物におけるＡＬＫ５受容体によって媒介される疾患の治療のための医薬の製造における式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される塩の使用が提供される。
【００３５】
ＡＬＫ５−媒介性疾患は、限定するものではないが、慢性腎疾患、急性腎疾患、創傷治癒、関節炎、骨粗鬆症、腎臓病、鬱血性心不全、潰瘍、視覚障害、角膜創傷、糖尿病性腎障害、神経学的機能障害、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化症、腹膜および皮下癒着、限定するものではないが、肺線維症、腎線維症、肝線維症、後腹膜線維症、腸間膜線維症を包含する線維形成が主要な成分であるいずれかの疾患、子宮内膜症、ケロイドおよび再狭窄を包含する。
本発明のさらなる態様によると、哺乳動物においてＴＧＦ−βシグナル伝達経路を阻害する方法、例えば、Ｉ型またはアクチビン様キナーゼＡＬＫ５受容体によるｓｍａｄ２またはｓｍａｄ３のリン酸化を阻害する方法が提供される。
本発明のさらなる態様によると、ＴＧＦ−βシグナル伝達経路を阻害することによって、例えば、Ｉ型またはアクチビン様キナーゼＡＬＫ５受容体によるｓｍａｄ２またはｓｍａｄ３のリン酸化を阻害することによって、哺乳動物におけるマトリックス形成を阻害する方法が提供される。
【００３６】
式（Ｉ）の医薬上有効な化合物およびその医薬上許容される塩は、式（Ｉ）の化合物と標準的な医薬担体または希釈剤を組み合わせることによって、当該分野でよく知られた常法にしたがって調製される通常の投薬形態において投与されうる。これらの手法は、所望の調製物によって適宜、材料を混合、造粒および圧縮または溶解することを含みうる。
本発明のさらなる態様によると、式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される塩および医薬上許容される担体または希釈剤を含んでなる医薬組成物が提供される。
本発明の医薬組成物は、いずれかの経路による投与のために処方されてもよく、ヒトを包含する哺乳動物への経口、局所または非経口投与に適した形態におけるものを包含する。
【００３７】
該組成物は、いずれかの経路による投与のために処方されうる。該組成物は、錠剤、カプセル、粉末、顆粒、ロゼンジ、クリームまたは液体製剤、例えば、経口または滅菌非経口溶液または懸濁液の形態であってもよい。
本発明の局所処方は、例えば、軟膏、クリームまたはローション、眼用軟膏および点眼剤または点耳剤、含浸した包帯およびエーロゾルとして提供されてもよく、適当な通常の添加剤、例えば、保存料、薬物浸透を助けるための溶媒ならびに軟膏およびクリームにおける皮膚軟化剤を含有していてもよい。
該処方は、また、相溶性の通常の担体、例えば、クリームまたは軟膏基剤およびローション用のエタノールまたはオレイルアルコールを含有していてもよい。かかる担体は、処方の約１％から約９８％まで配合されていてもよい。より普通には、それらは処方の約８０％まで配合されるであろう。
【００３８】
経口投与用の錠剤およびカプセルは、単位投与形態であってもよく、結合剤、例えば、シロップ、アラビアゴム、ゼラチン、ソルビトール、トラガカントまたはポリビニルピロリドン；充填剤、例えば、ラクトース、砂糖、トウモロコシデンプン、リン酸カルシウム、ソルビトールまたはグリシン；錠剤成形滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコールまたはシリカ；崩壊剤、例えば、ジャガイモデンプン；または許容される湿潤剤、例えば、ラウリル硫酸ナトリウムなどの通常の賦形剤を含有していてもよい。錠剤は、通常の製薬実施においてよく知られた方法に従って被覆されていてもよい。経口液体製剤は、例えば、水性または油性懸濁液、溶液、エマルジョン、シロップまたはエリキシルの形態であってもよく、または水もしくは他の適当なビヒクルで使用前に復元するための乾燥品として提供されてもよい。かかる液体製剤は、懸濁化剤、例えば、ソルビトール、メチルセルロース、グルコースシロップ、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲルまたは水素添加食用脂、乳化剤、例えば、レシチン、ソルビタンモノオレエートまたはアラビアゴム；非水性ビヒクル（食用油を包含しうる）、例えば、アーモンド油、油性エステル、例えば、グリセリン、プロピレングリコールまたはエチルアルコール；保存料、例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルもしくはプロピルまたはソルビン酸、および所望により、通常のフレーバーまたは着色料などの通常の添加剤を含有していてもよい。
【００３９】
座剤は、通常の座剤基剤、例えば、ココア脂または他のグリセリドを含有するであろう。
非経口投与の場合、流体単位投与形態は、該化合物および滅菌ビヒクル（水が好ましい）を用いて調製される。使用されるビヒクルおよび濃度にもよるが、該化合物は、ビヒクル中に懸濁または溶解されることができる。溶液の調製において、該化合物を注射用水に溶解し、フィルター滅菌した後、適当なバイアルまたはアンプル中に充填し、密封することができる。
有利には、局所麻酔薬、保存料および緩衝化剤などの薬剤をビヒクルに溶解することができる。安定性を増加するために、該組成物をバイアルに充填後に冷凍し、水を真空下で除去することができる。次いで、該凍結乾燥粉末をバイアル中に密封し、使用前に該液体を復元するために、注射用水の添付バイアルを提供してもよい。非経口懸濁液は、該化合物を溶解する代わりにビヒクル中に懸濁し、ろ過によって滅菌できないことを除き、実質的に同じ方法で調製される。該化合物は、滅菌ビヒクル中に懸濁する前に、エチレンオキシドに曝露することによって滅菌できる。有利には、化合物の均一な分布を容易にするために、界面活性剤または湿潤剤が該組成物に含まれる。
【００４０】
該組成物は、投与方法にもよるが、０．１重量％、好ましくは１０−６０重量％の活性材料を含有しうる。該組成物が投薬単位からなる場合、各単位は、好ましくは、５０−５００ｍｇの活性成分を含有するであろう。成人の治療に用いられる投与量は、投与の経路および頻度にもよるが、好ましくは、１日に１００−３０００ｍｇ、例えば、１日に１５００ｍｇであろう。かかる投与量は、１日に１．５〜５０ｍｇ／ｋｇに相当する。適当には、該投与量は、１日に５〜２０ｍｇ／ｋｇである。
式（Ｉ）の化合物の最適な量および個々の投与の間隔は、治療されている症状の性質および程度、投与の形態、経路および部位、および治療されている特定の哺乳動物によって決定され、かかる最適条件は、通常の技術によって決定することができることは、当業者に理解されるであろう。また、最適な治療クール、すなわち、所定の日数の間の式（Ｉ）の化合物の１日当たりの投与回数は、通常の治療クール決定試験を用いて確かめることができることは、当業者に明らかであろう。
【００４１】
式（Ｉ）の化合物を上記の投与範囲で投与する場合、非毒物学的効果が予想される。
限定するものではないが、本明細書に引用される特許および特許出願を包含する全ての出版物は、本明細書において、あたかも個々の出版物が、出典明示により完全に示されているかの如く本明細書の一部とされることが特別かつ個々に示されているかの如く、出典明示により本明細書の一部とされる。
【００４２】
本発明が、下記のさらなる態様を包含し、ここに、別記しない限り、式（Ｉ）の化合物は第一の態様において定義されるとおりであることは明らかであろう。第一の態様に関して記載される好ましい具体例は、これらのさらなる態様：
ｉ）式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される誘導体および医薬上許容される担体または希釈剤を含んでなる医薬組成物；
ｉｉ）ＴＧＦ−βの過剰発現によって特徴付けられる障害の治療または予防のための医薬の製造における式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される誘導体の使用；
ｉｉｉ）哺乳動物におけるＡＬＫ５受容体によって媒介される障害の治療または予防のための医薬の製造における式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される誘導体の使用；
【００４３】
ｉｖ）慢性腎疾患、急性腎疾患、創傷治癒、関節炎、骨粗鬆症、腎臓病、鬱血性心不全、潰瘍、視覚障害、角膜創傷、糖尿病性腎障害、神経学的機能障害、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化症、腹膜および皮下癒着、限定するものではないが、肺線維症、腎線維症、肝線維症（例えば、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ））、アルコール誘導性肝炎、後腹膜線維症、腸間膜線維症、血色素症および原発性胆汁肝硬変を包含する線維形成が主要な成分であるいずれかの疾患、子宮内膜症、ケロイドおよび再狭窄から選択される障害の治療または予防のための医薬の製造における式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される誘導体の使用；
ｖ）腎線維症の治療または予防のための医薬の製造における式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される誘導体の使用；
【００４４】
ｖｉ）医薬として使用するための式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される誘導体；
ｖｉｉ）哺乳動物における、慢性腎疾患、急性腎疾患、創傷治癒、関節炎、骨粗鬆症、腎臓病、鬱血性心不全、潰瘍、視覚障害、角膜創傷、糖尿病性腎障害、神経学的機能障害、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化症、腹膜および皮下癒着、限定するものではないが、肺線維症、腎線維症、肝線維症（例えば、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ））、アルコール誘導性肝炎、後腹膜線維症、腸間膜線維症、血色素症および原発性胆汁肝硬変を包含する線維形成が主要な成分であるいずれかの疾患、子宮内膜症、ケロイドおよび再狭窄から選択される障害の治療または予防方法であって、かかる治療を必要とする哺乳動物に、有効量の式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される誘導体を投与することを特徴とする方法；
ｖｉｉｉ）ＡＣＥ阻害剤またはアンギオテンシンＩＩ受容体アンタゴニストと、式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される誘導体の組み合わせ；および
【００４５】
ｉｘ）Ｘ１、Ｘ２およびＸ３のうち２つがＮであって、他の１つがＮＨである式（Ｉ）の化合物の製法であって、式（ＸＶＩＩＩ）：
【化７】
2005530800.tif 000008
で示される化合物とアジドの供給源（好ましくは、トリメチルシリルアジド）とを適当な溶媒中、室温より高温で反応させることを特徴とする方法に及ぶ。
【００４６】
式（Ｉ）の医薬上有効な化合物およびその医薬上許容される塩は、式（Ｉ）の化合物と標準的な医薬担体または希釈剤を当該分野でよく知られた通常の手法にしたがって組み合わせることによって調製される通常の投与形態において投与すればよい。これらの手法は、所望の調製物によって適宜、材料を混合、造粒および圧縮または溶解することを含みうる。
【００４７】
下記の非限定的な実施例は本発明を説明するものである。
【００４８】
中間体１：（４−ブロモ−２−ニトロフェノキシ）酢酸エチルエステル
【化８】
2005530800.tif 000009
４−ブロモ−２−ニトロフェノール（１０ｇ、４５．８７ｍｍｏｌ、１．０当量）のＤＭＦ（１６０ｍｌ）中攪拌溶液に室温にて、固形Ｋ２ＣＯ３（１２．６８ｇ、９１．７４ｍｍｏｌ、２．０当量）を加えた。該混合物を５０℃で一晩加熱し、次いで、室温に冷却し、ＥｔＯＡｃと水の間に分配した。有機相を１Ｎ  ＮａＯＨおよび水で抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を減圧下で蒸発させて茶色油（５．０１ｇ、９７％）を得、それはさらに精製する必要がなかった。
1H NMR (350 MHz; CDCl3)δ: 7.85 (1H, d), 7.45 (1H, dd), 6.75 (1H, d), 4.55 (H, s), 4.05(2H, q), 1.10 (3H, t)
【００４９】
中間体２：６−ブロモ−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン
【化９】
2005530800.tif 000010
中間体１（１３．４８ｇ、４４．３３ｍｍｏｌ）の氷酢酸（２００ｍｌ）中攪拌溶液に室温にて鉄粉（１０当量、２４．６ｇ、０．４４ｍｏｌ）を加え、該混合物を６０℃で２日間加熱した。該混合物をセライトのパッドでろ過し、ＥｔＯＡｃで洗浄した。ろ液を減圧下で蒸発させ、残渣をＮａＨＣＯ３の飽和溶液中に注ぎ入れ、酢酸エチルで抽出した。有機層を水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過した。溶媒を減圧下で蒸発させて、標題化合物を白色固体として得た（８．２ｇ、８１％）。ｍ．ｐ．２２０℃。
1H NMR (350 MHz; CDCl3)δ: 10.79 (1H, br.s), 7.09-7.01 (2H, m), 6.91 (1H, d), 4.59 (2H, s)
【００５０】
中間体３：６−トリメチルシラニルエチニル−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン
【化１０】
2005530800.tif 000011
中間体２（２．０２ｇ、８．８６ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（２４ｍｌ）中溶液に窒素下で、ＴＭＥＤＡ（２４ｍｌ）およびＴＭＳ−アセチレン（６ｍｌ、過剰）を加えた。得られた混合物を窒素を用いて脱気し、次いで、テトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（５％ｍｏｌ、５１２ｍｇ）およびＣｕＩ（１０％ｍｏｌ、１６６ｍｇ）を加えた。得られた混合物を６０℃で２４時間加熱した。反応混合物を塩化アンモニウムの飽和溶液中に注ぎ入れ、酢酸エチルで抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過した。真空下での溶媒の蒸発により、粗生成物を得、それをシリカゲル上のクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ  ９５：５、次いで９０：１０）によって精製した。これにより、標題化合物を黄色固体として得た（１．２ｇ、５５％）。ｍ．ｐ．１４２℃。
1H NMR (350 MHz; CDCl3)δ: 8.67 (1H, br.s), 7.12 (1H, dd), 6.93-6.85 (1H, m), 4.66 (2H, s), 0.26 (9H, s)
【００５１】
中間体４：６−エチニル−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン
【化１１】
2005530800.tif 000012
中間体３（１ｇ、４．０７ｍｍｏｌ）のメタノール（３０ｍｌ）中溶液に、炭酸カリウム（３当量、１２．２３ｍｍｏｌ、１．６９ｇ）を加えた。次いで、反応混合物を室温で１時間攪拌し、得られた懸濁液をろ過した。ろ液の濃縮後、残渣をＥｔＯＡｃに溶解し、水で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過し、溶媒を減圧下で蒸発させて、標題化合物を白色固体として得た（７９５ｍｇ、定量的収量）。
1H NMR (350 MHz; CDCl3)δ: 8.05 (1H, br.s), 6.97 (2H, dd), 6.78-6.75 (2H, m), 4.49(2H, s), 2.87 (1H, s)
【００５２】
中間体５：６−（６−メチル−ピリジン−２−イルエチニル）−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン
【化１２】
2005530800.tif 000013
中間体４（７０５ｍｇ、４．０７ｍｍｏｌ、１当量）および２−ブロモ−６−メチルピリジン（８４２ｍｇ、４．８８ｍｍｏｌ、１．２当量）を中間体３に関して記載したようにカップリングおよび処理して、シリカゲル上のクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２、次いでＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ９９：１）後に、標題化合物を黄色固体として得た（９３０ｍｇ、８６．５％）。
1H NMR (300 MHz; CDCl3)δ: 8.21 (1H, br.s), 7.42 (1H, t), 7.17 (1H, d), 7.07 (1H, dd), 6.96 (1H, d), 6.92 (1H, d), 6.79 (1H, d), 4.50(2H, s), 2.44 (3H, s); [MS APCI]  m/z 265 (MH+)
【００５３】
中間体６：６−（ピリジン−２−イルエチニル）−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン
【化１３】
2005530800.tif 000014
中間体４（７０５ｍｇ、４．０７ｍｍｏｌ、１当量）および２−ブロモ−ピリジン（７７１ｍｇ、４．８８ｍｍｏｌ、１．２当量）を中間体３に関して記載したようにカップリングおよび処理して、シリカゲル上のクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２、次いでＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ９８：２）後に、標題化合物を白色固体として得た（５７０ｍｇ、５６％）。ｍ．ｐ．２１０℃。
[MS APCI] m/z 251 (MH+)
【００５４】
中間体７：６−（３−クロロ−フェニルエチニル）−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン
【化１４】
2005530800.tif 000015
中間体４（６ｇ、３４．６ｍｍｏｌ）および１−クロロ−３−ヨードベンゼン（５．１５ｍＬ、４１．５２ｍｍｏｌ、１．２当量）を中間体３に関して記載したようにカップリングおよび処理して、シリカゲル上のクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２、次いでＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ９０：１０）後に、標題化合物を黄色固体として得た（５．８４ｇ、６０％）。
[MS APCI]  m/z 282 (MH-); 1H NMR (300 MHz; DMSO- d6)δ: 10.88 (1H, br.s), 7.64-7.61 (1H, m), 7.54-7.40 (3H, m), 7.14 (1H, dd), 7.03-6.98 (2H, m), 4.65 (2H, s)
【００５５】
中間体８：４−メチル−６−（６−メチル−ピリジン−２−イルエチニル）−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン
【化１５】
2005530800.tif 000016
中間体５（４６０ｍｇ、１．７４ｍｍｏｌ、１当量）のＤＭＦ（４０ｍｌ）中溶液に、Ｋ２ＣＯ３（３６０ｍｇ、２．６１ｍｍｏｌ）およびヨードメタン（３７０ｍｇ、２．６１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間攪拌し、得られた懸濁液を水中に注ぎ入れ、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過した。溶媒を減圧下で除去して標題化合物を赤色固体として得（０．４ｇ、８２．６％）、それを精製することなく次工程に用いた。
[MS APCI]  m/z 279 (MH+)
【００５６】
中間体９：４−エチル−６−（６−メチル−ピリジン−２−イルエチニル）−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン
【化１６】
2005530800.tif 000017
中間体５（２６４ｍｇ、１ｍｍｏｌ）およびヨードエタン（３１２ｍｇ、２当量）を中間体８に関して記載したようにカップリングおよび処理して標題化合物を油として得た（２９２ｍｇ、１００％）。
[MS APCI]  m/z 293 (MH+)
【００５７】
中間体１０：４−プロピル−６−（６−メチル−ピリジン−２−イルエチニル）−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン
【化１７】
2005530800.tif 000018
中間体５（７００ｍｇ、２．６５ｍｍｏｌ）およびヨードプロパン（２８４μＬ、１．１当量）を中間体８に関して記載したようにカップリングおよび処理して、シリカゲル上のクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ  ７０：３０、次いで５０／５０）後に、標題化合物を黄色油として得た（３７７ｍｇ、４６．４％）。
[MS APCI]  m/z 307 (MH+)
【００５８】
中間体１１：４−（プロペン−２−イル）−６−（６−メチル−ピリジン−２−イルエチニル）−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン
【化１８】
2005530800.tif 000019
中間体５（７８６ｍｇ、２．９７ｍｍｏｌ）および臭化アリル（２８３μＬ、１．１当量）を中間体８に関して記載したようにカップリングおよび処理して、シリカゲル上のクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ  ９０：１０）後に、標題化合物を油として得た（５６５ｍｇ、６２．５％）。
[MS APCI]  m/z 305 (MH+)
【００５９】
中間体１２：４−（２−メトキシ−エチル）−６−（６−メチル−ピリジン−２−イルエチニル）−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン
【化１９】
2005530800.tif 000020
中間体５（５２８ｍｇ、２ｍｍｏｌ）および２−ブロモエチルメチルエーテル（４１７ｍｇ、１．５当量）を中間体８に関して記載したようにカップリングおよび処理して標題化合物を黄色油として得た（６００ｍｇ、９３％）。
[MS APCI] m/z 323 (MH+)
【００６０】
中間体１３：３−［６−（−６−メチル−ピリジン−２−イルエチニル）−３−オキソ−２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］オキサジン−４−イル］−プロピオニトリル
【化２０】
2005530800.tif 000021
中間体５（７００ｍｇ、２．６５ｍｍｏｌ）および３−ブロモ−プロピオニトリル（２４２μＬ、１．１当量）を中間体８に関して記載したようにカップリングおよび処理して、シリカゲル上のクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ  ７０：３０、次いで５０／５０）後に、標題化合物をベージュ色固体として得た（５０１ｍｇ、５９．６％）。
[MS APCI] m/z 318 (MH+)
【００６１】
中間体１４：６−（６−メチル−ピリジン−２−イルエチニル）−４−（２−モルホリン−４−イル−エチル）−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン
【化２１】
2005530800.tif 000022
中間体５（５２８ｍｇ、２ｍｍｏｌ）およびＮ−（２−クロロエチル）モルホリン塩酸塩（５５８ｍｇ、１．５当量）を中間体８に関して記載したようにカップリングおよび処理して標題化合物を油として得た（７００ｍｇ、９２％）。
[MS APCI]  m/z 378 (MH+)
【００６２】
中間体１５：４−（２−ジメチルアミノ−エチル）−６−（６−メチル−ピリジン−２−イルエチニル）−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン
【化２２】
2005530800.tif 000023
中間体５（７００ｍｇ、２．６５ｍｍｏｌ）および塩化２−ジメチルアミノエチル塩酸塩（３８２ｍｇ、１．１当量）を中間体８に関して記載したようにカップリングおよび処理して、シリカゲル上のクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ  ７０：３０、次いで５０／５０）後に、標題化合物を黄色油として得た（４０１ｍｇ、４５％）。
[MS APCI]  m/z 336 (MH+)
【００６３】
中間体１６：４−エチル−６−（６−メチル−ピリジン−２−イルエチニル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン
【化２３】
2005530800.tif 000024
中間体９（６７５ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（１００ｍｌ）中溶液に窒素下で、０．５Ｍ  ９−ＢＢＮのＴＨＦ（１０．１５ｍＬ、９．４当量）中溶液を加えた。反応混合物を６０℃で一晩攪拌した。該反応物を湿ったＮａ２ＳＯ４で加水分解した。該混合物をろ過し、溶媒を減圧下で蒸発させた。粗生成物を１Ｎ  ＨＣｌで処理し、ジエチルエーテルで洗浄し、トリエチルアミンで塩基性化した。水相をＥｔＯＡｃで抽出し、有機相を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒の蒸発により、黄色油を得た（２６３ｍｇ、４１％）。
1H NMR (300 MHz; CDCl3)δ: 7.45 (1H, t), 7.25 (1H, d), 7.00 (1H, d), 6.85 (1H, s), 6.80 (1H, d), 6.65 (1H, d), 4.25-4.15 (2H, m), 3.32-3.02 (4H, m), 2.45 (3H, s), 1.05 (3H, t), トリアゾールＮＨは観察されない；[MS APCI] m/z 279 (MH+)
【００６４】
中間体１７：４−メチル−６−（６−メチル−ピリジン−２−イルエチニル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン
【化２４】
2005530800.tif 000025
中間体８を中間体１５に関して記載したように９−ＢＢＮで処理して標題化合物を黄色油として得た（１．２８ｇ、７６．２６％）。
1H NMR (300 MHz; CDCl3)δ: 7.39 (1H, t), 7.17 (1H, d), 7.00 (1H, d), 6.92 (1H, d), 6.80-6.74 (2H, m), 6.57 (1H, d), 4.16-4.14 (2H, m), 3.14-3.08 (2H, m), 2.73 (3H, s), 2.42 (3H, s)，トリアゾールＮＨは観察されない；[MS APCI]  m/z 265 (MH+)
【００６５】
中間体１８：１−［６−トリメチルシラニルエチニル−２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］オキサジン−４−イル］エタノン
【化２５】
2005530800.tif 000026
中間体３に関して記載した手法にしたがって、臭化４−アセチル−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１，４］オキサジン−６−イル（５ｇ、１９．５２ｍｍｏｌ、１当量）から標題化合物を赤色油として得た（４．５４ｇ，８５％）。
1H NMR (300 MHz; CDCl3)δ: 7.22 (1H, d), 6.84 (1H, d), 4.33-4.30 (2H, s), 3.94 (2H, m), 2.36 (3H,s), 0.25 (9H, s)
【００６６】
中間体１９：１−［６−エチニル−２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］オキサジン−４−イル］エタノン
【化２６】
2005530800.tif 000027
中間体４に関して記載した手法にしたがって、中間体１８（４．５ｇ、１６．４６ｍｍｏｌ、１当量）から標題化合物（１．５４ｇ、４９．４％）を茶色油として、６−エチニル−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン（１．１ｇ、４２％）との混合物において得た。
1H NMR (300 MHz; CDCl3)δ: 7.23 (1H, d), 6.87 (1H, d), 4.32 (2H, t), 4.00-3.90 (2H, m), 3.02 (1H,s), 2.35 (3H, s)
【００６７】
中間体２０：４−アセチル−６−（６−メチル−ピリジン−２−イルエチニル）−２，３−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［１，４］−オキサジン
【化２７】
2005530800.tif 000028
中間体１９（１．５４ｇ、８．１４ｍｍｏｌ、１当量）および２−ブロモ−６−メチルピリジン（１．６８ｇ、９．７７ｍｍｏｌ、１．２当量）を中間体３に関して記載したようにカップリングおよび処理して、シリカゲル上のクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２、次いでＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ９９：１）後に、標題化合物を黄色固体として得た（１．８０ｇ、７５．６％）。
1H NMR (300 MHz; CDCl3)δ: 7.61-7.56 (1H, m), 7.34 (2H, d), 7.12 (1H, d), 6.90 (1H, d), 4.33 (2H, t), 4.00-3.94 (2H, m), 2.59 (3H,s), 2.36(3H, s); [MS APCI]  m/z 293 (MH+)
【００６８】
中間体２１：６−（６−メチル−ピリジン−２−イルエチニル）−２，３−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［１，４］−オキサジン
【化２８】
2005530800.tif 000029
中間体２０（０．６１２ｇ、２．０９ｍｍｏｌ、１当量）のメタノール（２０ｍｌ）中溶液に、固形Ｋ２ＣＯ３（１．１６ｇ、８．３６ｍｍｏｌ、４当量）を加えた。該混合物を５０℃で１時間加熱した。反応を完了するために、さらに４当量のＫ２ＣＯ３（１．１６ｇ）を加え、反応混合物を６５℃で３時間加熱した。該混合物を減圧下で濃縮し、ＥｔＯＡｃと水の間に分配した。有機相をＮａＣｌの飽和溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を減圧下で蒸発させて無色油を得（０．４７６ｇ、９１％）、それはさらに精製する必要はなかった。
[MS APCI]  m/z 251 (MH+)
【００６９】
中間体２２：４−（２−プロペニル）−６−（６−メチル−ピリジン−２−イルエチニル）−２，３−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［１，４］−オキサジン
【化２９】
2005530800.tif 000030
中間体２１（４３８ｍｇ、０．９５ｍｍｏｌ、１当量）のＤＭＦ（２０ｍｌ）中溶液に、Ｋ２ＣＯ３（２６３ｍｇ、２．６１ｍｍｏｌ、２当量）および臭化アリル（９９μｌ、１．１４ｍｍｏｌ、１．２当量）を加えた。反応混合物を６０℃で４時間攪拌した。さらにＫ２ＣＯ３（１当量）および臭化アリル（２当量）を加え、反応混合物を６０℃で４８時間攪拌した。溶媒を蒸発乾固させ、得られた固体を水とＥｔＯＡｃの間に分配した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過した。溶媒を減圧下で除去して標題化合物を黄色油として得（４３０ｍｇ、定量的）、それをさらに精製することなく次工程に用いた。
[MS APCI]  m/z 291 (MH+)
【００７０】
中間体２３：４−（クロロアセチル）−６−（６−メチル−ピリジン−２−イルエチニル）−２，３−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［１，４］−オキサジン
【化３０】
2005530800.tif 000031
中間体２１（２．７ｇ、１０．８ｍｍｏｌ、１当量）のジクロロメタン（４０ｍｌ）中溶液に、トリエチルアミン（１．４１ｇ、１４ｍｍｏｌ、１．３当量）および塩化クロロアセチル（１．５８ｇ、１４ｍｍｏｌ、１．３当量）を加えた。反応混合物を室温で一晩攪拌した。反応混合物を水中に注ぎ入れ、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過した。溶媒を減圧下で除去して標題化合物を茶色油として得（３ｇ、８５％）、それをさらに精製することなく次工程に用いた。
[MS APCI]  m/z 327 (MH+)
【００７１】
中間体２４：４−［（４−メチル−１−ピペラジニル）アセチル］−６−（６−メチル−ピリジン−２−イルエチニル）−２，３−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［１，４］−オキサジン
【化３１】
2005530800.tif 000032
中間体２３（３２６ｍｇ、１ｍｍｏｌ、１当量）のアセトン（２０ｍｌ）中溶液に、Ｋ２ＣＯ３（４１４ｍｇ、３ｍｍｏｌ、３当量）および１−メチルピペラジン（５０３ｍｇ、５ｍｍｏｌ、５当量）を加えた。混合物を一晩、熱還流した。反応混合物をろ過し、蒸発乾固させた。残渣を水中に懸濁し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過した。溶媒を減圧下で除去して標題化合物を茶色油として得（２５０ｍｇ、６４％）、それを精製することなく次工程に用いた。
[MS APCI] m/z 391 (MH+)
【００７２】
実施例１：６−［５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン
【化３２】
2005530800.tif 000033
中間体５（５００ｍｇ、１．８９ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（８ｍｌ）中溶液に、アジドトリメチルシラン（４当量、７．５６ｍｍｏｌ、８７０ｍｇ）を加えた。次いで、反応混合物を１００℃で２日間攪拌した。反応混合物を冷却し、溶媒を減圧下での蒸留によって除去した。残渣を水とＥｔＯＡｃの間に分配し、層を分離した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過した。真空下における溶媒の蒸発により粗生成物を得、それをシリカゲル上のクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ９５：５＋０．１％Ｅｔ３Ｎ）により精製して、ＥｔＯＨ／石油エーテル中における再結晶化後に、標題化合物をオフホワイト色の固体として得た（２００ｍｇ、３４．４％）。ｍｐ．２２４℃。
[MS APCI]  m/z 308.2 (MH+); 1H NMR (300 MHz; DMSO-d6)δ: 10.58 (1H, br.s), 7.56 (1H, t), 7.36-7.05 (4H, br.m), 6.76 (1H, br.d), 4.41 (2H, s), 2.28 (3H, s),トリアゾールＮＨは観察されない。
【００７３】
実施例２：６−（５−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン
【化３３】
2005530800.tif 000034
中間体６およびアジドトリメチルシランを実施例１に関して記載したように反応させて、標題化合物を白色固体として得た（２３０ｍｇ、３５％）。ｍ．ｐ．２５６℃。
[MS APCI]  m/z 294 (MH+); 1H NMR (300 MHz; DMSO-d6)δ: 10.72 (1H, s),  8.53 (1H, d), 7.82 (1H, td), 7.69 (1H, d), 7.35-7.26 (2H, m), 7.16 (1H, dd), 6.89 (1H, d), 4.54 (2H, s),トリアゾールＮＨは観察されない。
【００７４】
実施例３：６−［５−（３−クロロ−フェニル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン
【化３４】
2005530800.tif 000035
中間体７およびアジドトリメチルシランを実施例１に関して記載したように反応させて、標題化合物を白色固体として得た（１４２ｍｇ、１７．６％）。ｍ．ｐ．２２０℃。
1H NMR (300 MHz; DMSO-d6)δ: 10.76 (1H, br.s),  7.55-7.35 (4H, m), 7.13-6.87 (3H,m), 4.58 (2H, s),トリアゾールＮＨは観察されない；ＴＯＦ  ＭＳ  ＥＳ＋  Ｃ１６Ｈ１１ＣｌＮ４Ｏ２に関して計算された正確な質量（ＭＨ＋）：３２７．０６４９  実測値：３２７．０６６７
【００７５】
実施例４：４−メチル−６−［５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン
【化３５】
2005530800.tif 000036
中間体８およびアジドトリメチルシランを実施例１に関して記載したように反応させて、標題化合物をベージュ色固体として得た（２９０ｍｇ、６４．５％）。
1H NMR (300 MHz; DMSO-d6)δ: 7.88 (1H, t), 7.72-7.66 (2H, m), 7.53 (1H, dd), 7.38 (1H, d), 7.15 (1H,d), 4.80 (2H, s), 3.35(3H, s), 2.58 (3H, s)，トリアゾールＮＨは観察されない；ＴＯＦ  ＭＳ  ＥＳ＋  Ｃ１７Ｈ１５Ｎ５Ｏ２に関して計算された正確な質量（ＭＨ＋）：３２２．１３０４  実測値：３２２．１３０６
【００７６】
実施例５：４−エチル−６−［５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン
【化３６】
2005530800.tif 000037
中間体９およびアジドトリメチルシランを実施例１に関して記載したように反応させて、標題化合物を白色固体として得た（１５５ｍｇ，４６％）。ｍ．ｐ．１８７℃。
1H NMR (300 MHz; CDCl3)δ: 7.64 (1H, t), 7.46 (1H, d), 7.39-7.30 (2H, m), 7.20 (1H, d), 7.04 (1H, d), 4.87 (2H, s), 3.97 (2H, q), 2.63 (3H, s), 1.21 (3H, t)，トリアゾールＮＨは観察されない；ＴＯＦ  ＭＳ  ＥＳ＋  Ｃ１８Ｈ１７Ｎ５Ｏ２に関して計算された正確な質量（ＭＨ＋）：３３６．１４６０  実測値：３３６．１４３１
【００７７】
実施例６：４−プロピル−６−［５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン
【化３７】
2005530800.tif 000038
中間体１０およびアジドトリメチルシランを実施例１に関して記載したように反応させて、標題化合物を黄色固体として得た（２４０ｍｇ、  ％）。１００℃でゴム状。
1H NMR (300 MHz; DMSO-d6)δ: 7.59 (1H, t), 7.40-6.99 (4H, m), 6.87 (1H, d), 4.48 (2H, s), 3.59-3.50 (2H, m), 2.26 (3H, s), 1.30-1.17 (2H, m), 0.55 (3H, t)，トリアゾールＮＨは観察されない；ＴＯＦ  ＭＳ  ＥＳ＋  Ｃ１９Ｈ１９Ｎ５Ｏ２に関して計算された正確な質量（ＭＨ＋）：３５０．１６１７  実測値：３５０．１６０２
【００７８】
実施例７：４−（プロペン−２−イル）−６−［５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン
【化３８】
2005530800.tif 000039
中間体１１およびアジドトリメチルシランを実施例１に関して記載したように反応させて、標題化合物をベージュ色固体として得た（４３５ｍｇ、６７％）。１２０℃でゴム状。
1H NMR (300 MHz; DMSO-d6)δ: 7.94 (1H, t), 7.73-7.41 (4H, m), 7.23 (1H, d), 5.98-5.83 (1H, m), 5.25-5.09 (2H, m), 4.92 (2H, s), 4.59 (1H, br s), 2.64 (3H, s)，トリアゾールＮＨは観察されない；ＴＯＦ  ＭＳ  ＥＳ＋  Ｃ１９Ｈ１７Ｎ５Ｏ２に関して計算された正確な質量（ＭＨ＋）：３４８．１４６０  実測値：３４８．１４４５
【００７９】
実施例８：４−（２−メトキシ−エチル）−６−［５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン
【化３９】
2005530800.tif 000040
中間体１２およびアジドトリメチルシランを実施例１に関して記載したように反応させて、標題化合物を黄色固体として得た（２９４ｍｇ、４４％）。
1H NMR (300 MHz; CDCl3)δ: 7.61 (1H, t), 7.53 (1H, s), 7.43 (1H, d), 7.32 (1H, d), 7.16 (1H, d), 7.00 (1H, d), 4.65 (2H, s), 4.09 (2H, t), 3.58 (2H, t), 3.27 (3H, s), 2.60 (3H, s)，トリアゾールＮＨは観察されない；ＴＯＦ  ＭＳ  ＥＳ＋  Ｃ１９Ｈ１９Ｎ５Ｏ３に関して計算された正確な質量（ＭＨ＋）：３６６．１５６６  実測値：３６６．１５５２
【００８０】
実施例９：３−｛６−［５−（−６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−３−オキソ−２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］オキサジン−４−イル｝−プロピオニトリル
【化４０】
2005530800.tif 000041
中間体１３およびアジドトリメチルシランを実施例１に関して記載したように反応させて、標題化合物をオレンジ色粉末として得た（３１０ｍｇ、５４．４％）。
1H NMR (300 MHz; DMSO-d6)δ: 7.98 (1H, t), 7.83-7.61 (3H, m), 7.47 (1H,d), 7.30 (1H,d), 4.94 (2H, s), 4.38 (2H, br t), 3.06-2.96 (2H, m), 2.67 (3H,s)，トリアゾールＮＨは観察されない；ＴＯＦ  ＭＳ  ＥＳ＋  Ｃ１９Ｈ１６Ｎ６Ｏ２に関して計算された正確な質量（ＭＨ＋）：３６１．１４１３  実測値：３６１．１４３１
【００８１】
実施例１０：６−［５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−４−（２−モルホリン−４−イル−エチル）−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン
【化４１】
2005530800.tif 000042
中間体１４およびアジドトリメチルシランを実施例１に関して記載したように反応させて、標題化合物を黄色固体として得た（３４０ｍｇ、４５％）。ｍ．ｐ．１５０℃。
1H NMR (300 MHz; CDCl3)δ: 7.56 (1H, t), 7.43-7.33 (2H, m), 7.24 (1H, dd), 7.10(1H, d), 6.90 (1H, d), 4.56 (2H, s), 4.04 (2H, br t), 3.67-3.57 (4H, m), 2.57-2.40 (9H, m)，トリアゾールＮＨは観察されない；ＴＯＦ  ＭＳ  ＥＳ＋  Ｃ２２Ｈ２４Ｎ６Ｏ３に関して計算された正確な質量（ＭＨ＋）：４２１．１９８８  実測値：４２１．２００２
【００８２】
実施例１１：４−（２−ジメチルアミノエチル）−６−［５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−４Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン−３−オン
【化４２】
2005530800.tif 000043
中間体１５およびアジドトリメチルシランを実施例１に関して記載したように反応させて、標題化合物をオフホワイト色粉末として得た（１３３ｍｇ、２９．３％）。１００℃でゴム状。
1H NMR (300 MHz; DMSO-d6)δ: 7.80 (1H, t), 7.62-7.42 (3H, m), 7.32 (1H, d), 7.11 (1H, d),  4.73 (2H, s), 3.96 (2H, br t), 2.51 (3H, s), 2.33 (2H, br t)，トリアゾールＮＨは観察されない；ＴＯＦ  ＭＳ  ＥＳ＋  Ｃ２０Ｈ２２Ｎ６Ｏ２に関して計算された正確な質量（ＭＨ＋）：３７９．１８８２  実測値（Ｈ．Ｒ．Ｍ．Ｓ）：３７９．１８８６
【００８３】
実施例１２：４−エチル−６−［５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン
【化４３】
2005530800.tif 000044
中間体１６およびアジドトリメチルシランを実施例１に関して記載したように反応させて、標題化合物をベージュ色固体として得た（１０ｍｇ、３．３％）。
1H NMR (300 MHz; CDCl3)δ: 7.50 (1H, t), 7.38 (1H, d), 7.05 (1H, d), 6.90 (1H, s), 6.80 (1H, d), 6.70 (1H, d), 4.25-4.18 (2H, m), 3.30-3.15 (4H, m), 2.50 (3H, s), 1.00 (3H, t)，トリアゾールＮＨは観察されない；ＴＯＦ  ＭＳ  ＥＳ＋  Ｃ１８Ｈ１９Ｎ５Ｏに関して計算された正確な質量（ＭＨ＋）：３２２．１６６８  実測値：３２２．１６６６
【００８４】
実施例１３：４−メチル−６−［５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［１，４］オキサジン
【化４４】
2005530800.tif 000045
中間体１７およびアジドトリメチルシランを実施例１に関して記載したように反応させて、標題化合物を薄黄色粉末として得た（２２０ｍｇ、１６．８％）。
1H NMR (300 MHz; CDCl3)δ: 7.52-7.37 (2H, m), 7.05 (1H, d), 6.95 (1H, d), 6.84 (1H, dd), 6.72 (1H, d), 4.29-4.26 (2H, m), 3.23-3.21 (2H, m), 2.78 (3H, s), 2.52 (3H, s)，トリアゾールＮＨは観察されない；ＴＯＦ  ＭＳ  ＥＳ＋  Ｃ１７Ｈ１７Ｎ５Ｏに関して計算された正確な質量（ＭＨ＋）：３０８．１５１１  実測値：３０８．１５１１
【００８５】
実施例１４：４−アセチル−６−［５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−４−イル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［１，４］−オキサジン
【化４５】
2005530800.tif 000046
中間体２０およびアジドトリメチルシランを実施例１に関して記載したように反応させて、標題化合物をオフホワイト色粉末として得た（６９０ｍｇ、３３．６％）。
1H NMR (300 MHz; DMSO-d6)δ: 7.88 (1H, t), 7.67 (1H, d), 7.56 (1H, d), 7.37 (1H, d), 7.06 (1H, d), 4.44-4.41 (2H, m), 4.01-3.98(2H, m), 2.58 (3H, s), 2.30 (3H, s)，トリアゾールＮＨは観察されない；ＴＯＦ  ＭＳ  ＥＳ＋  Ｃ１８Ｈ１７Ｎ５Ｏ２に関して計算された正確な質量（ＭＨ＋）：３３６．１４６０  実測値：３３６．１４５８
【００８６】
実施例１５：６−［５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−４−イル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［１，４］−オキサジン
【化４６】
2005530800.tif 000047
実施例１４（３３５ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ（５ｍｌ）および水（３ｍｌ）の混合物中溶液に、ＫＯＨ（３６０ｍｇ、６．４１ｍｍｏｌ、４当量）を加えた。該混合物を６０℃で１８時間加熱した。混合物を減圧下で濃縮した。残渣を水で希釈し、１Ｎ  ＨＣｌで中和し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗生成物をシリカゲル上のクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ９９：１、次いで９５：５）によって精製して油を得、それをペンタン中で組織化して標題化合物を黄色粉末として得た（１２０ｍｇ、４１％）。
1H NMR (300 MHz; CDCl3)δ: 7.54-7.35 (2H, m), 7.05 (1H, d), 6.93-6.69 (3H, m),  4.26-4.20 (2H, m), 3.41-3.35 (2H, m), 2.53 (3H, s)，トリアゾールＮＨは観察されない；ＴＯＦ  ＭＳ  ＥＳ＋  Ｃ１６Ｈ１５Ｎ５Ｏに関して計算された正確な質量（ＭＨ＋）：２９４．１３５５  実測値：２９４．１３８７
【００８７】
実施例１６：４−（プロペン−２−イル）−６−［５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−４−イル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［１，４］−オキサジン
【化４７】
2005530800.tif 000048
中間体２２およびアジドトリメチルシランを実施例１に関して記載したように反応させて、標題化合物をオレンジ色固体として得た（３９ｍｇ、８％）。１２０℃でゴム状。
1H NMR (300 MHz; CDCl3)δ: 7.68-7.50 (2H, m), 7.20 (1H, d), 7.09-6.86 (3H, m), 5.93-5.78 (1H, m), 5.31-5.16 (2H, m), 4.42-4.34 (2H, m), 3.93-3.86 (2H, br d), 3.46-3.39 (2H, m), 2.68 (3H, s)，トリアゾールＮＨは観察されない；ＴＯＦ  ＭＳ  ＥＳ＋  Ｃ１９Ｈ１９Ｎ５Ｏに関して計算された正確な質量（ＭＨ＋）：３３４．１６６８  実測値：３３４．１１６４３
【００８８】
実施例１７：４−［（４−メチル−１−ピペラジニル）アセチル］−６−（６−メチル−ピリジン−２−イル−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−４−イル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［１，４］−オキサジン
【化４８】
2005530800.tif 000049
中間体２４およびアジドトリメチルシランを実施例１に関して記載したように反応させて、標題化合物をオフホワイト色固体として得た（２４ｍｇ、８．７％）。ｍ．ｐ．１３２℃。ＴＯＦ  ＭＳ  ＥＳ＋  Ｃ２３Ｈ２７Ｎ７Ｏ２に関して計算された正確な質量（ＭＨ＋）：４３４．２３０４  実測値：４３４．２３１５
【００８９】
生物学
本発明の化合物の生物学的活性は、下記のアッセイを用いて評価してもよい。
【００９０】
アッセイ１（細胞転写アッセイ）
本発明の化合物がＴＧＦ−βシグナル伝達を阻害する可能性は、例えば、下記のイン・ビトロアッセイを用いて明らかにすることができる。
該アッセイは、ルシフェラーゼ（ホタル）レポーター遺伝子に連結したＰＡＩ−１プロモーター（強力なＴＧＦ−β応答プロモーターとして知られている）で安定にトランスフェクトされたＨｅｐＧ２細胞において行った。化合物は、ＴＧＦ−βに曝露された細胞におけるそのルシフェラーゼ活性阻害能について選択された。さらに、細胞を、ＴＧＦ−β応答プロモーターによって駆動されず、毒性対照として使用される第２のルシフェラーゼ（ウミシイタケ（Renilla））遺伝子でトランスフェクトした。
マルチドロップ装置を用いて、安定にトランスフェクトされた細胞系統を２００μｌの血清含有培地中１ウェルあたり３５０００細胞の濃度で９６ウェルマイクロプレートに播種した。これらのプレートを細胞インキュベーター中に置いた。
【００９１】
１８〜２４時間後（２日目）、細胞インキュベーション法を始めた。細胞を、ＴＧＦ−βおよび５０ｎＭ〜１０μＭ（ＤＭＳＯ１％の最終濃度）の濃度範囲の候補化合物と共にインキュベートした。該試験に使用したＴＧＦ−β（ｒｈＴＧＦβ−１）の最終濃度は１ｎｇ／ｍＬであった。細胞を候補化合物と共に１５−３０分インキュベートした後、ＴＧＦ−βを添加した。試験反応物の最終容量は１５０μｌであった。各ウェルは、たった１つの候補化合物を含有し、ＰＡＩ−１プロモーターに対するその効果をモニターした。
カラム１１および１２を対照として用いた。カラム１１は８ウェルを含み、その中で細胞をＴＧＦ−βの存在下、候補化合物を用いないでインキュベートした。カラム１１は、「参照ＴＧＦ−β誘導性ホタルルシフェラーゼ値」を決定するために用いられ、該値と試験ウェル（阻害活性を定量するための）における測定値を比較した。ウェルＡ１２〜Ｄ１２中において、細胞をＴＧＦ−β不含培地で培養した。これらの位置から得られたホタルルシフェラーゼ値は、「基底ホタルルシフェラーゼ活性」を表す。ウェルＥ１２〜Ｈ１２中において、細胞をＴＧＦ−βおよび５００μＭの細胞毒性化合物ＣＰＯ（シクロペンテノン，Sigma）の存在下で培養した。毒性は、減少したホタルおよびウミシイタケルシフェラーゼ活性（カラム１１において得られた活性の約５０％）によって示された。
【００９２】
１２〜１８時間後（３日目）、ルシフェラーゼ定量法を始めた。デュアル・ルシフェラーゼ・アッセイ・キット（Dual Luciferase Assay Kit）（Promega）から得られた試薬を用いて、下記の反応を行った。細胞を洗浄し、１０μｌのｐａｓｓｉｖｅ  ｌｙｓｉｓバッファー（Promega）で溶解した。振盪（１５〜３０分）後、プレートのルシフェラーゼ活性をデュアル−インジェクター・ルミノメーター（BMG lumistar）において読み取った。この目的のため、５０μｌのルシフェラーゼアッセイ試薬および５０μｌの「Ｓｔｏｐ ＆ Ｇｌｏ」バッファーを連続的に注入して、両方のルシフェラーゼ活性を定量した。適当なソフトウェアを用いて、該測定から得られたデータを処理および分析した。ウェルＡ１１〜Ｈ１１（カラム１１、ＴＧＦ−βのみ）において得られた平均ルシフェラーゼ活性値は１００％を示すとみなし、ウェルＡ１２〜Ｄ１２（培地のみにおける細胞）において得られた値は基底レベル（０％）を与えた。試験した化合物の各々につき、濃度応答曲線を構築し、それからＩＣ５０値をグラフを用いて決定した。
【００９３】
アッセイ２（Ａｌｋ５蛍光偏光アッセイ）
フルオロフォアに結合したキナーゼ阻害化合物を蛍光リガンドとして用いて、他の化合物の所定のキナーゼへのＡＴＰ競合的結合をモニターすることができる。該結合リガンドの溶液中への放出によって引き起こされる平面偏光の偏光解消の増加が偏光／異方性値として測定される。該プロトコールは、組み換え型ＧＳＴ−ＡＬＫ５（残基１９８−５０３）を用いるアッセイのためのローダミングリーン標識リガンドの使用を詳述する。
アッセイバッファー成分：６２．５ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ  ｐＨ７．５（Sigma H-4034），１ｍＭ  ＤＴＴ（Sigma D-0632），１２．５ｍＭ  ＭｇＣｌ２（Sigma M-9272），１．２５ｍＭ  ＣＨＡＰＳ（Sigma C-3023）
プロトコール：固形化合物ストックを１００％ＤＭＳＯ中に１ｍＭ濃度まで溶解し、Ｕ底の９６ウェルポリプロピレンプレート（Costar #3365）のカラム１、Ａ−Ｈ列に移して化合物プレートを作成した。該プレートのカラム１１まで化合物を連続希釈（１００％ＤＭＳＯ中３倍）して、各試験化合物につき１１段階の濃度を得た。カラム１２はＤＭＳＯのみを含有した。ＲａｐｉｄｐｌａｔｅＴＭ（登録商標）−９６を用いて、各ウェルから１μｌの試料をＵ底の黒色９６ウェル非処理プレート（Costar #3792）中に移して、アッセイプレートを作成した。
【００９４】
最終ＡＬＫ５濃度が該酵素の活性部位滴定に基づいて１０ｎＭになるように、ＡＬＫ５を上記成分および１ｎＭのローダミングリーン標識リガンドを含有するアッセイバッファーに加えた。該酵素／リガンド試薬（３９μｌ）を予め調製したアッセイプレートの各ウェルに添加した。低対照値のために、対照化合物（１μｌ）をカラム１２のＥ−Ｈ列に添加した。直ちに該プレートを、各々、４８５ｎｍ、５３０ｎｍおよび５０５ｎｍの励起、発光およびダイクロイック・フィルターを有するＬＪＬ  Ａｃｑｕｅｓｔ蛍光リーダー（Molecular Devices, serial number AQ1048）上で読み取った。各ウェルの蛍光偏光をＡｃｑｕｅｓｔリーダーによって算出し、次いで、濃度応答曲線の構築のための曲線適合ソフトウェア中に取り込んだ。標準化した応答は、高対照（カラム１２、Ａ−Ｄ列中における１μｌ  ＤＭＳＯ）および低対照（カラム１２、Ｅ−Ｈ列中における１μｌ対照化合物）に相対的に決定された。次いで、ＩＣ５０値を各化合物につき算出した。
本発明の化合物は、一般に、１〜１００ｎＭ範囲のＩＣ５０値を有するＡＬＫ５受容体モジュレーター活性および０．００１〜１０μＭ範囲のＩＣ５０値を有するＴＧＦ−β細胞活性を示す。
【００９５】
該記載および特許請求の範囲からなる本出願は、その後のいずれかの出願に関して優先権の基礎として使用されてもよい。かかるその後の出願の特許請求の範囲は、いずれか新規な特徴または本明細書に記載する特徴の組み合わせに向けられていてもよい。それらは、生産物、組成物、製法または使用クレームの形態を取ってもよく、また、限定するものではないが、例示として、添付の特許請求の範囲を包含していてもよい。
【国際調査報告】
2005530800.tif 000051
2005530800.tif 000052
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