(57)【要約】少なくとも一つの細胞情報伝達化学物質（ＣＳＣ）を汚水基質に加え、その汚水基質中の少なくとも一種の微生物群の活性を該ＣＳＣの少なくとも一つが制御することよりなる、汚水の処理方法。特に、汚水処理施設における臭気を減少させ、汚水処理施設の腐敗を阻止し、微生物による消化を増進させて、汚水処理施設におけるメタンガス産生を抑制し、汚水汚泥の消化を増進し、汚水基質中の休眠状態の微生物または飢餓状態若しくは静止状態にある微生物を蘇生させ、汚水基質中の窒素化合物の酸化または還元の役割を負っている微生物を制御する方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも一つの細胞情報伝達化学物質（ＣＳＣ）を汚水基質に加え、その汚水基質中の少なくとも一種の微生物群の活性を該ＣＳＣの少なくとも一つが制御することよりなる、汚水の処理方法。
【請求項２】
少なくとも一つのＣＳＣが細菌フェロモン、真核生物ホルモンまたは拡散性情報伝達分子である、請求項１の方法。
【請求項３】
細菌フェロモンがＮ−アシルホモセリンラクトン（ＡＨＬ）、フェロモンペプチド、Ｎ−アシル化Ｃ−アミド化Ｄ−アミノ酸ヘキサペプチド、Ｄ−イソロイシンおよび／又はＤ−チロシンを含むＤ−アミノ酸ペプチド、環状ジペプチド、疎水性トリアミン、リポペプチド生物系界面活性剤、脂肪酸誘導体、抗菌ペプチドおよびフラノンからなる群より選択される、請求項２の方法。
【請求項４】
真核生物ホルモンがオーキシン、サイトカイニン、サイトカイン、エチレンガス、ジベレリンおよびアブシジン酸からなる群より選択される、請求項２の方法。
【請求項５】
少なくとも一つのＣＳＣがロードミン１２３および／又は３−ヒドロキシパルミチン酸である、請求項１の方法。
【請求項６】
汚水基質が汚水集水ネットワークまたは汚水処理施設内にある、請求項１の方法。
【請求項７】
活性の制御が微生物細胞内の遺伝子発現又は微生物細胞間若しくは微生物細胞群間の情報伝達シグナルによって調節される、請求項１の方法。
【請求項８】
活性の制御が、細胞と細胞の情報伝達、菌体数の感知、群移動、菌の運動性、多細胞生命体の共生集団化、細胞代謝速度、代謝産物の産生、細胞分裂と結合、細胞蘇生、バイオフィルム共同体の形成、静止若しくは休止状態への移行、細胞密度に呼応した個別多様な代謝過程、抗生物質産生および生物発光よりなる群から選択される、請求項１の方法。
【請求項９】
微生物群がグラム陽性菌、グラム陰性菌、ラン藻、独立栄養細菌、従属栄養細菌および窒素固定化細菌よりなる群から選択される、請求項１の方法。
【請求項１０】
微生物群が好気性菌、通性嫌気性細菌および嫌気性菌よりなる群から選択される、請求項１の方法。
【請求項１１】
微生物群が硫黄還元細菌、硫酸産生細菌、アンモニア産生細菌、亜硝酸産生細菌、硝酸産生細菌およびメタン産生細菌よりなる群から選択される、請求項１の方法。
【請求項１２】
微生物群の活性が少なくとも一つのＣＳＣの添加により上方制御され、開始され又は維持される、請求項１の方法。
【請求項１３】
少なくとも一つのＣＳＣが、Ｎ−アシルホモセリンラクトン、ヒスチジンプロテインキナーゼフェロモン、Ｎ−アシル化Ｃ−アミド化Ｄ−アミノ酸ヘキサペプチド、Ｄ−イソロイシンおよび／又はＤ−チロシンを含むＤ−アミノ酸ペプチド、環状ジペプチド、疎水性トリアミン、リポペプチド生物系界面活性剤、脂肪酸誘導体、抗菌ペプチドフラノン、ロードミン１２３および３−ヒドロキシパルミチン酸である、請求項１２の方法。
【請求項１４】
ＣＳＣがＮ−アシルホモセリンラクトンである、請求項１３の方法。
【請求項１５】
微生物群の活性が、少なくとも一つのＣＳＣの添加又はそのシグナル強度の減少により下方制御される、請求項１の方法。
【請求項１６】
少なくとも一つのＣＳＣが、Ｎ−アシルホモセリンラクトン、ヒスチジンプロテインキナーゼフェロモン、Ｎ−アシル化Ｃ−アミド化Ｄ−アミノ酸ヘキサペプチド、Ｄ−イソロイシンおよび／又はＤ−チロシンを含むＤ−アミノ酸ペプチド、環状ジペプチド、疎水性トリアミン、リポペプチド生物系界面活性剤、脂肪酸誘導体、抗菌ペプチド、ハロゲン化、ヒドロキシル化若しくはアルキル化フラノン、フラノン、ロードミン１２３および３−ヒドロキシパルミチン酸より選択される群から選択される、請求項１４の方法。
【請求項１７】
ＣＳＣがハロゲン化、ヒドロキシル化若しくはアルキル化フラノンである、請求項１６の方法。
【請求項１８】
少なくとも一つのＣＳＣが微生物の遺伝子発現を制御するために加えられる、請求項１の方法。
【請求項１９】
微生物遺伝子の発現が発光又は毒素、抗生物質、酵素、多糖類および界面活性剤の産生のためのものである、請求項１８の方法。
【請求項２０】
嫌気性および好気性微生物群の活性が上方制御され、少なくとも一つのＣＳＣがＮ−（３−オキソヘキサノイル）−Ｌ−ホモセリンラクトン、３−オキシドデカノイルホモセリンラクトン、Ｎ−ブタノイル−Ｌ−ホモセリンラクトン、ゼアチン、６−（γγ−ジメチルアリルアミノ）プリン、６−ベンジルアミノ−プリン、３−ヒドロキシパルミチン酸メチルエステル、紅藻Delisea pulchraの抽出物、カイネチン、インドール酢酸、ロードミン１２３およびこれらの混合物よりなる群より選択される、請求項１の方法。
【請求項２１】
硫黄還元細菌の活性が下方制御され、少なくとも一つのＣＳＣがＮ−（３−オキソヘキサノイル）−Ｌ−ホモセリンラクトン、３−オキシドデカノイルホモセリンラクトン、Ｎ−ブタノイル−Ｌ−ホモセリンラクトン、ゼアチン、６−（γγ−ジメチルアリルアミノ）プリン、６−ベンジルアミノ−プリン、３−ヒドロキシパルミチン酸メチルエステル、紅藻Delisea pulchraの抽出物、カイネチン、インドール酢酸、ロードミン１２３、３−オキソドデカノイルホモセリンラクトン、ブチリルホモセリンラクトンおよびこれらの混合物よりなる群より選択される、請求項１の方法。
【請求項２２】
少なくとも一つのＣＳＣがハロゲン化フラノン、ヒドロキシル化フラノン、アルキルフラノン又はこれらの混合物よりなる群から選択される、請求項２１の方法。
【請求項２３】
少なくとも一つのＣＳＣがボーラスで加えられる、請求項１の方法。
【請求項２４】
少なくとも一つのＣＳＣが連続的にまたは間をおいて加えられる、請求項１の方法。
【請求項２５】
少なくとも一つのＣＳＣが下水集水ネットワークの汚水基質に加えられる、請求項１の方法。
【請求項２６】
少なくとも一つのＣＳＣが汚水処理施設の汚水基質に加えられる、請求項１の方法。
【請求項２７】
少なくとも一つの細胞情報伝達化学物質（ＣＳＣ）を汚水処理施設に加え、その少なくとも一つのＣＳＣが臭気を産生する微生物の活性を阻害し、またはその汚水処理施設の他の微生物群の活性を高めてその他の微生物群が食物源が同じである臭気産生細菌と競合させることよりなる、下水処理施設の臭気を減少させる方法。
【請求項２８】
臭気産生微生物が、硫黄若しくは硫酸還元細菌またはアンモニア産生細菌である、請求項２７の方法。
【請求項２９】
少なくとも一つのＣＳＣが細菌フェロモン、真核生物ホルモンおよび拡散性情報伝達分子よりなる群から選択される、請求項２７の方法。
【請求項３０】
少なくとも一つのＣＳＣがＮ−（３−オキソヘキサノイル）−Ｌ−ホモセリンラクトン、３−オキシドデカノイルホモセリンラクトン、Ｎ−ブタノイル−Ｌ−ホモセリンラクトン、ゼアチン、６−（γγ−ジメチルアリルアミノ）プリン、６−ベンジルアミノ−プリン、３−ヒドロキシパルミチン酸メチルエステル、紅藻Delisea pulchraの抽出物、カイネチン、インドール酢酸、ロードミン１２３、３−オキソドデカノイルホモセリンラクトン、ブチリルホモセリンラクトンおよびこれらの混合物よりなる群より選択される、請求項２７の方法。
【請求項３１】
少なくとも一つのＣＳＣがハロゲン化フラノン、ヒドロキシル化フラノン、アルキルフラノン又はこれらの混合物よりなる群から選択される、請求項３０の方法。
【請求項３２】
少なくとも一つの細胞情報伝達化学物質（ＣＳＣ）を下水処理施設に加え、その少なくともひとつのＣＳＣがスルフィドを硫酸に変換する微生物の活性を阻害することよりなる、下水処理設備の腐食を阻止し又は減少させる方法。
【請求項３３】
少なくとも一つの細胞情報伝達化学物質（ＣＳＣ）を下水集水ネットワークに加え、その少なくともひとつのＣＳＣが、菌体数の感知、群移動または微生物群におけるバイオフィルムの接着を阻止することよりなる、下水集水ネットワークのバイオフィルムの維持又は形成を阻止する方法。
【請求項３４】
少なくとも一つのＣＳＣが細菌フェロモン、真核生物ホルモンおよび拡散性情報伝達分子よりなる群から選択される、請求項３３の方法。
【請求項３５】
少なくとも一つのＣＳＣがＮ−アシルホモセリンラクトン（ＡＨＬ）、フェロモンペプチド、Ｎ−アシル化Ｃ−アミド化Ｄ−アミノ酸ヘキサペプチド、Ｄ−イソロイシンおよび／又はＤ−チロシンを含むＤ−アミノ酸ペプチド、環状ジペプチド、疎水性トリアミン、リポペプチド生物系界面活性剤、脂肪酸誘導体、抗菌ペプチドおよびフラノンからなる群より選択される、請求項３３の方法。
【請求項３６】
少なくとも一つのＣＳＣがハロゲン化、ヒドロキシル化またはアルキル化フラノンより選択される、請求項３０の方法。
【請求項３７】
少なくとも一つのＣＳＣが３−オキソ−デカノイルホモセリンラクトン、ブチリルホモセリンラクトン、紅藻Delisea pulchraの抽出物およびこれらの混合物より選択される、請求項３３の方法。
【請求項３８】
ＣＳＣが微生物共同体におけるリポタンパク質生物系界面活性剤の産生を下方制御する請求項３３の方法。
【請求項３９】
ＣＳＣが微生物共同体における多糖類の産生を下方制御する、請求項３３の方法。
【請求項４０】
少なくとも一つの細胞情報伝達化学物質（ＣＳＣ）を汚水処理施設または汚水集水ネットワークの汚水基質に加え、その少なくともひとつのＣＳＣが好気性菌および通性嫌気性菌の活性を増強させることよりなる、微生物による汚水処理施設の汚水の消化を増強する方法。
【請求項４１】
少なくとも一つのＣＳＣがＮ−アシルホモセリンラクトン（ＡＨＬ）、フェロモンペプチド、Ｎ−アシル化Ｃ−アミド化Ｄ−アミノ酸ヘキサペプチド、Ｄ−イソロイシンおよび／又はＤ−チロシンを含むＤ−アミノ酸ペプチド、環状ジペプチド、疎水性トリアミン、リポペプチド生物系界面活性剤、脂肪酸誘導体、抗菌ペプチドおよびフラノンからなる群より選択される、請求項４０の方法。
【請求項４２】
ＣＳＣがＮ−アシルホモセリンラクトン（ＡＨＬ）、Ｎ−アシル化Ｃ−アミド化Ｄ−アミノ酸ヘキサペプチドまたはこれらの混合物である、請求項４０の方法。
【請求項４３】
少なくとも一つの細胞情報伝達化学物質（ＣＳＣ）を汚水処理施設または汚水集水ネットワークの汚水基質に加え、その少なくともひとつのＣＳＣが嫌気性メタン産生菌の活性を阻害し又は増強することよりなる、汚水処理施設におけるメタンガスの生産を管理する方法。
【請求項４４】
少なくとも一つの細胞情報伝達化学物質（ＣＳＣ）を汚水基質に加え、その少なくともひとつのＣＳＣが好気性菌又は嫌気性菌の活性を増強することよりなる、汚水汚泥の消化を増強する方法。
【請求項４５】
少なくとも一つのＣＳＣがＮ−アシルホモセリンラクトン、ゼアチン、６−（γγ−ジメチルアリルアミノ）プリン、６−ベンジルアミノ−プリン、３−ヒドロキシパルミチン酸メチルエステル、紅藻Delisea pulchraの抽出物、カイネチン、インドール酢酸、ロードミン１２３よりなる群より選択される、請求項４４の方法。
【請求項４６】
少なくとも一つの細胞情報伝達化学物質（ＣＳＣ）を汚水基質に加え、その少なくともひとつのＣＳＣが休眠状態、飢餓状態若しくは静止状態にある微生物の活性を刺激して、汚水基質中で飢餓状態若しくは静止状態にある微生物、又は休眠状態の微生物を蘇生させる方法。
【請求項４７】
ＣＳＣがＡＨＬ、ペプチドフェロモン又はこれらの混合物を用いるクロストークに関与するフラノンである、請求項４６の方法。
【請求項４８】
少なくとも一つの細胞情報伝達化学物質（ＣＳＣ）を汚水基質に加え、その少なくともひとつのＣＳＣがアンモニア産生細菌、亜硝酸産生細菌、亜酸化窒素産生細菌、硝酸産生細菌又は脱窒細菌の活性を制御することよりなる、汚水基質中の窒素化合物の還元又は酸化の役割を負っている細菌を制御する方法。
【請求項４９】
少なくとも一つのＣＳＣがハロゲン化フラノン、ヒドロキシル化フラノン、アルキルフラノン、Ｎ−アシルホモセリンラクトン、ペプチドフェロモンおよびこれらの混合物よりなる群から選択される、請求項４８の方法。
【請求項５０】
少なくとも一つのＣＳＣが３−オキソ−デカノイルホモセリンラクトン、ブチリルホモセリンラクトンおよびこれらの混合物より選択される、請求項４８の方法。
【請求項５１】
少なくとも一つのＣＳＣおよび担体若しくはアジュバントよりなる組成物。
【請求項５２】
更に、成長促進培地を含む、請求項５１の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、少なくともひとつの細胞情報伝達化学物質を加えることにより、細胞レベルにおいて汚水中で微生物群の活性を調節する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
汚水の分解は地球規模で重要な問題である。都市化現象の増加傾向は、局地的な汚水の集中の要因となっている。
汚水処理施設は一般には人口の中心地から離れたところにある。都市化の拡大に伴い、下水集水システムにおいて、汚水処理施設に届くまでの行程の距離と汚水の保持時間が増加しつつある。そして下水集水システムにおける長い保持時間と高温が汚水の腐敗という大きな問題を生み出している。腐敗した汚水は悪臭がひどく汚水処理施設（ＳＴＰ）での処理が困難である。その原因の一部はスルフィド濃度が高いので汚水分解に関連する通常の微生物活性が阻害されるためである。その結果、十分に消化されず従って有機画分を多く含む排水量が増加する。このような排水は健康と環境汚染の危険性を含んでいる。
【０００３】
腐敗した汚水は硫化水素ガス（腐敗卵ガス）およびその他の悪臭の強いガス様物質に関連する刺激臭を産生する。これらの悪臭は刺激的であると同時に固有の濃度において毒性がある。高濃度のスルフィド（例えばＨＳ又はＨ２Ｓ）が溶解した汚水がＳＴＰに到達すると、酸化に必要なエネルギーを増加させてこれらをサルフェート（例えばＳＯ４又はＨ２ＳＯ４）にまで酸化しなければならない。高濃度に溶解したスルフィドはまた、好気性菌および嫌気性メタン産生菌による汚水の消化を阻害し、従って汚水分解の重要な部分が阻害されて多くのヘドロが生じるかもしれない。
下水集水システムのような環境下では、硫黄還元菌の微生物作用の結果として硫化水素が生成する〔式(1)および式(2)〕。
【０００４】
【数１】
2005505419.tif 000002
そして、該スルフィドは別の群の細菌によって硫酸塩へと変換され、これにより硫酸が生成するかもしれない〔式(3)〕。
【０００５】
【数２】
2005505419.tif 000003
硫酸の生成が下水集水ネットワークおよび汚水処理施設における腐食問題の主たる原因を引き起こす〔式(4)〕。
【０００６】
【数３】
2005505419.tif 000004
硫酸による腐食が基幹施設の故障およびこれらネットワークや施設の劣化の主たる原因である。
【０００７】
下水システムの腐食と悪臭を抑えるために化学物質を使用することができる。下水の処理を改良するために別の化学物質を使用することもできる。そのような化学物質としては、ｐＨ制御のための酸若しくはアルカリ、消毒剤、殺生剤、抗生物質、界面活性剤、脱臭剤、芳香剤、キレート剤、酸化剤および酸素ガス等が含まれる。
悪臭、腐食又は微生物活性を抑制するために起こる化学反応に依存する化学処理がある一方、細菌若しくは特定の細菌を殺すために用いる化学物質もある。或いは、望ましくない細菌を打ち負かすため特定の細菌群の環境を改善する目的で栄養剤を加えてもよい。化学緩衝剤を用いて下水処理を改善してもよいし、脱臭剤で臭気を反応させ、吸着させ又はマスクしてもよい。
【０００８】
一般に、臭気および／または腐食を抑制するためには大量の化学物質を必要とし、その多くは汚水排水中の塩濃度を増加させる。酸素や酸化剤は好気性菌、通性嫌気性菌およびその他の好気性微生物を刺激して同じ食物源を有する硫黄還元菌を打ち負かすのに用いられる。
上記に概説した問題を阻止し減ずるための簡単で効果的な汚水処理方法が求められている。
個々の微生物の挙動又はひとつの群の中で他の微生物との情報伝達を規制する多数の天然の化学物質が知られている。これらの化学物質は細胞情報伝達化学物質（ＣＳＣ）と呼ばれている。ＣＳＣは拡散性の情報分子で微生物細胞表面又は細胞内受容体を介して遺伝子の発現を調節する。ＣＳＣは殺菌剤でもなければ抗生物質でもなく、溶菌を起こすものでもない。同様にＣＳＣは微生物数を規制する栄養欠乏を克服するために添加することのある栄養的な添加物でもない。
【０００９】
固有の濃度のＣＳＣが原核細胞において一定の範囲の応答、例えば自己調節、遅延成長型若しくは休眠微生物に対する刺激、菌体数感知、病原性、群移動、バイオフィルム生成、繁殖の増減、代謝活性の増減等を引き起こすことが知られている。微生物制御に使用される他の化学物質とＣＳＣとの基本的な相違点は、ＣＳＣが細胞レベルにおいて伝達される情報を介して微生物の応答を操ることである。これらのＣＳＣは特定のシグナル強度で、特定の遺伝子発現のスイッチのオン・オフを担っている。ＣＳＣは細菌を殺さないし、特定微生物の応答を減少若しくは増強する必須栄養分を与えるわけでもない。ＣＳＣは細菌間の情報伝達を上方制御（高速化）または下方制御（低速化）し、減少させ混乱させる。この下方制御は細菌を生物膜の状態からプランクトン様（単一細胞又は自由な浮遊表現型）の状態へ復帰させ得る。逆にＣＳＣは微生物の情報伝達シグナルを上方制御（強化）し得る。このシグナル強度の増加はプランクトン様の細菌の繁殖を増加させ代謝速度を速め、そして利用できる食物源を消費させる。増加した細胞シグナル強度はまた、プランクトン様の細菌を増殖させ表面に付着させ微小コロニーを形成させ、菌体数を感知させ、成熟したバイオフィルムを形成させる。
【００１０】
固有のＣＳＣおよびそのシグナル強度に対する特定の種の細菌の応答は、その固有のシグナルおよび強度が維持されないと一過性である。シグナル強度とその型が、固有の遺伝子発現を維持する上で重要である。もし固有のシグナルとその強度が維持されないと、刺激を受けた遺伝子は、ある時間のうちに非刺激状態に戻る。そして、その時間は多様であって、一般には分から時間にまで幅がある。ＣＳＣは環境下で急速に分解されるので、特異的な細菌の応答を発現させるためには固有のシグナル濃度で生成し続けなければならない。
【００１１】
異なる微生物は、異なる細胞情報伝達化学物質に対し異なるシグナル強度で応答する。例えば、グラム陰性菌はＮ−アシルホモセリンラクトンに応答するが、グラム陽性菌は固有のペプチドホルモン、一般には二成分シグナル変換系を介してヒスチジンキナーゼに応答する。ＣＳＣの役割は以前から研究室の実験の範囲内で観察されており、海の環境でバイオフィルム形成を抑制するために用いられて来た。そのような実験と用途は以下に記載がある；
【００１２】
Kleerebezem M, Quandri LEN, Kuipers OP abd deVos WM. 「ペプチドホルモンによる菌体数感知とグラム陽性菌における二成分シグナル変換系」Molecular Microbiology, 1997, Vol 24 No.5, pp 895-904；
de Nys R, Rice S, Manefield M, Kjelleberg S, et al.「細菌の細胞外シグナルにおけるクロストーク」Microbial Biosystems: New Frontiers. Proceedings of the 5th International Symposium on Microbial Ecology. Bell CR,Brylinsky, Johnson-Green P (ed)., Atlantic Canada Society for Microbial Ecology, Halifax, Canada 1999；
Lazazzera BA, Grossman AD 「ペプチドシグナルの出入」Trends Microbiol., 1998 Jul: 6(7):288-94；
Salmond GP, Bycroft BW, Stewart GS, Williams P「細菌のエニグマ；細胞間情報伝達の暗号解明」Mol Microbiol., 1996 Feb; 19(3):649;
Buchenauer H. 「リゾバクテリアによる土壌病の生物学的制御」Zeitschrift-fuer-Pfanzenkrankheiten und Pflanzenschultz, July, 1998; 105 (4) 329-384;
Kazlauskas R, Murphy P T, Quinn R J, Wells R J「紅藻、タマイタダキ（Delisea fimbriata）カギノリ目（Bonnemaisoniaceae）由来ハロゲン化ラクトンの新しいクラス」(1977) Tet. Lett. 1: 37-40;
「汚れ止め剤」, Steinberg et al 米国特許6,060,046号, 2000年5月9日．
【発明の開示】
【００１３】
本発明は汚水、下水集水環境又はＳＴＰ中にいる細菌群間又は種間の情報伝達シグナルを規制し、仲介し又は操るＣＳＣの用途に関する。この発明は細菌が互いに情報伝達する通常の方法を混乱させ又は増強する。この技術を利用して、群移動、菌体数感知およびバイオフィルム形成を引き起こす細胞シグナルを混乱させ得る。この混乱によって細菌をプランクトン様形態に戻し、実質的にその活性を低下させることができる。或いは、他のシグナル又はシグナル強度を、蘇生、群移動、増加した代謝活性、繁殖速度、菌体数感知、バイオフィルムの生成等を引き起こす細胞シグナルを開始又は強調するために用いることができる。有利なことには、ＣＳＣは極めて少量で所望の応答を発現させることができる。
【００１４】
一つの態様として、本発明は、少なくとも一つの細胞情報伝達化学物質を被処理汚水に加えることよりなる方法であって、該汚水中の少なくとも一つの微生物群においてその少なくとも一つの細胞情報伝達化学物質が活性を規制している、汚水の処理方法を提供する。
【００１５】
微生物群の活性は、細胞内若しくは細胞間の情報伝達薬濃度を制御して群中の単一の微生物を操作することにより調節又は規制することが可能である。或いは、媒体中の細胞間の情報伝達薬濃度を制御して微生物のコロニー若しくは群を操作することにより微生物群の活性を調節又は規制することが可能である。ＣＳＣにより操作できる固有の微生物活性としては、細胞と細胞の情報伝達、菌体数の感知、群移動、菌の運動性、多細胞生命体の共生集団化、細胞代謝速度、代謝産物の産生、細胞分裂と結合、細胞蘇生、バイオフィルム共同体の形成、静止若しくは休止状態への移行、細胞密度に呼応した個別多様な代謝過程、生物発光、抗生物質、界面活性剤および酵素の産生等が含まれる。
【００１６】
「細胞情報伝達化学物質」（ＣＳＣ）の語は、原核細胞内若しくは間の細胞内若しくは細胞外シグナルを通じて、特定の微生物群の行動を操作することのできる化学物質をいう。特定のＣＳＣ強度において、特定の種の微生物が遺伝子発現を通じて細胞内レベルのシグナルに対し応答する。これらのシグナルは一般に特定の種の微生物が資源を最大限利用することを支援するのに用いられる。異なるＣＳＣはまた、特定の微生物間若しくは微生物群の間の情報伝達シグナルを模倣し、阻止し、阻害し又は干渉し得る。例えば、その細胞情報伝達化学物質は細胞表面の受容体に結合して、他のＣＳＣを阻止し又は阻害し、群中の微生物間の情報伝達を変更するかもしれない。一般に、このタイプのＣＳＣは特定の微生物若しくはその群の応答を減少させ、資源を利用する能力を減少させる。ＣＳＣはまた、微生物間のクロストークを媒介して微生物活性を規制する責任を負っている。クロストークは、飢餓と静止状態の応答を緩和し、休止若しくは静止状態の細菌を蘇生させるのに重要と思われる。
【００１７】
本明細書で「上方制御」の語は、少なくとも一種の微生物の微生物活性を急増させ（細菌の代謝および増殖速度のいずれか一方又はその両方）、個々の微生物機能を調整し、その結果表面上に接着層を形成し、微生物コロニーを形成し、菌体数を感知して成熟したバイオフィルムを形成させるため、少なくともひとつのＣＳＣを十分なシグナル強度で使用することをいう。
【００１８】
本明細書で「下方制御」の語は、微生物活性を減少させ（細菌の代謝および増殖速度のいずれか一方又はその両方）るために、少なくともひとつのＣＳＣを十分なシグナル強度で使用することをいう。これにより、表面上に微生物接着層を形成した細菌の崩壊と分散；微生物コロニーを形成した、少なくともいくつかの細菌の崩壊と分散；少なくともいくつかの細菌による菌体数感知の減少；そしてバイオフィルムを形成した細菌の減少が少なくとも可能である。多くの場合、下方制御はバイオフィルム複合体の崩壊を意味し、個々の細菌又は細菌種は生存能力と被培養可能性を維持しつつプランクトン様の状態に戻る。下方制御は、シグナル強度の減少、シグナル若しくは既存のシグナルの干渉又は細菌のシグナル受容体側の競合によりもたらされ得る。
【００１９】
本明細書で「クロストーク」の語は、ＣＳＣシグナルおよび／又はシグナル強度の範囲に対する微生物反応を誘導することをいう。異なるフェロモンおよびフラノンシグナルおよび／またはシグナル強度が、細菌群（同種）又は細菌共同体（異種）における個々の菌に信号を送り又は混乱を生じさせるのに用いられる。競合する細菌の情報伝達ネットワークに干渉し又は強化するためにクロストークは重要である。クロストークは細菌の上方若しくは下方制御を減少させ若しくは増強し、そして微生物群若しくは細菌共同体の資源利用能力を強化し又は減少させる。クロストークはまた、細菌の飢餓または静止状態への移行阻止および蘇生においても重要である。
【００２０】
汚水処理の過程において、有機廃液を分解する微生物を刺激し、またスルフィドのような毒性と悪臭を有するガス、メタンのような温室効果の高いガス、硫酸のような腐食性の副生成物を産生する微生物活性を阻害し若しくは下方制御して微生物群の活性を調節することは特に有用である。また、例えば下水集水管のような特定の場所でバイオフィルムを生成し硫黄還元細菌を支援する微生物群を阻害することも有用である。
【００２１】
特定のＣＳＣ、制御フェロモン、例えば、フラノンおよび抗微生物ペプチド等が下水集水地で特定の濃度で適用されると、細菌の群移動を制御し、細菌細胞の溶解を引き起こす殺生剤のような導入製品を使用することなくバイオフィルムの生成を抑えることができる。フラノンや抗微生物ペプチドを用いて、細菌を離散させ、脱皮させ又はプランクトン様状態（単一細胞）に留まらせることができる。このことは硫黄還元菌や他の臭気産生菌による悪臭の制御において得に重要である。プランクトン様状態における硫黄還元菌はバイオフィルム状態で産生する量のおよそ千分の一のスルフィドしか産生することができない。
【００２２】
高濃度の溶解スルフィドがＳＴＰに達すると汚水処理を妨害する。ＣＳＣを用いて下水集水のスルフィド産生を最小化することは極めて低濃度のスルフィドのみがＳＴＰに到達することを意味し、汚水処理工程において重要な逆の影響を与えない。集水池のスルフィドが低濃度なら、通常臭気のある汚水と関連する高度の腐食を最小化することができる。
特異的なＣＳＣ、刺激性フェロモン、例えば、Ｎ−アシルホモセリンラクトンペプチドおよび特異的ヒスチジンプロテインキナーゼフェロモンは特に汚水の処理に有用である。これらは、好気性菌および嫌気性菌の両方の増殖および代謝速度を上方制御し、刺激し、それにより汚水の分解を促進するために、なかんずく特異的な投与率で用いられる。微生物群の制御によって、好気的および嫌気的分解の程度のような因子、更にはメタンガス（温室効果ガス）の産生の程度までもが制御できる。
【００２３】
ＣＳＣとしては典型的には、細菌フェロモン、真核細胞ホルモンおよび拡散性情報伝達分子若しくはその誘導体が含まれる。ＣＳＣは天然に存在するものでもよいし合成物でもよい。細菌フェロモンとしては、Ｎ−アシルホモセリンラクトン（ＡＨＬ）、ヒスチジンプロテインキナーゼを含むフェロモンペプチド、Ｎ−アシル化Ｃ−アミド化Ｄ−アミノ酸ヘキサペプチド、Ｄ−イソロイシン若しくはＤ−チロシンを含むＤ−アミノ酸、環状ジペプチド、疎水性トリアミン、リポペプチド生物系界面活性剤、脂肪酸誘導体、抗微生物ペプチドおよび、例えばハロゲン化、ヒドロキシ化若しくはアルキル化フラノンのようなフラノンが含まれる。ＣＳＣはまた、真核細胞ホルモン、例えばオーキシン（例えばインドール-3-酢酸）、サイトカイニン、またはサイトカイニン活性を有するサイトカイン（例えば、6(γγ-ジメチルアリルアミン)プリン、ゼアチン、6-ベンジルアミノプリン等）、エチレンガス、ジベレリン、アブシジン酸等を含む。拡散性情報伝達分子は植物、動物、藻類若しくは微生物起源であって細胞情報伝達機能を有するものであり、それらの合成誘導体も含まれる。他の有用なＣＳＣとしてはロードミン123および3-ヒドロキシパルミチン酸メチルがある。
【００２４】
本発明で有用なフラノンとしては、
4-アセトキシ-2,5-ジメチル-3(2H)-フラノン、4-ヒドロキシ-5-メチル-3(2H)-フラノン、4-ヒドロキシ-2,5-ジメチル-3(2H)-フラノン、4-ヒドロキシ-2-エチル-5-メチル-3(2H)-フラノン、4-ヒドロキシ-5-エチル-2-メチル-3(2H)-フラノン、4-ヒドロキシ-5-メチル-3(2H)-フラノン、4-メトキシ-2,5-ジメチル-3(2H)-フラノン、4-エトキシ-2,5-ジメチル-3(2H)-フラノン、4-ブチロキシ-2,5-ジメチル-3(2H)-フラノン、4-ヒドロキシ-2,5-ジメチル-3(2H)-フラノン、(S)-(+)-5-ヒドロキシメチル-2(5H)-フラノン、(R)-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2(3H)-フラノン、(S)-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2(3H)-フラノン、(R)-ジヒドロ-4-ヒドロキシ-2(3H)-フラノン、(R)-ジヒドロ-5-(ヒドロキシメチル)-2(3H)-フラノン、3-クロロ-4-(ブロモクロロメチル)-5-ヒドロキシ-2(5H)-フラノン、3-クロロ-4-(ジブロモメチル)-5-ヒドロキシ-2(5H)-フラノン、3-ブロモ-4-(ジブロモメチル)-5-ヒドロキシ-2(5H)-フラノン、3-クロロ-4-(ジクロロメチル)-5-ヒドロキシ-2(5H)-フラノンおよび3-クロロ-4-(ジクロロメチル)-2(5H)-フラノン等が含まれる。アセチルホモセリンラクトン（ＡＨＬ）としては、N-(3-オキソヘキサノイル)-L-ホモセリンラクトン(OHHL)、N-ブタノイル-L-ホモセリンラクトン(BHL)、N-ヘキサノイル-L-ホモセリンラクトン(HHL)、ブチリル-ホモセリンラクトン、ヒドロキシブチリル-ホモセリンラクトン、オクタノイル-ホモセリンラクトン、3-オキソオクタノイル-ホモセリンラクトン、3R-ヒドロキシ-7-cis-テトラデセノイル-ホモセリンラクトンおよび3-オキソドデカノイル-ホモセリンラクトンを含む。適切なヒスチジンプロテインキナーゼとしては、グループHPK 1a、HPK 1ai、HPK 1b、HPK 1c、HPK 2a、HPK 2b、HPK 2c、HPK 3a、HPK 3b、HPK 3c、HPK 3d、HPK 3e、HPK 3f、HPK 3g、HPK 3h、HPK 3i、HPK 4、HPK 5、HPK 6、HPK 7、HPK 8、HPK 9、HPK 10およびHPK 11が含まれる。
【００２５】
フェロモンは一つの個体の原核細胞より分泌され、同種の第二の個体により受け取られて特定行為の信号を送る小分子である。特定のシグナル強度（化学濃度）において細菌は群移動や菌体数感知を行い、バイオフィルムを形成する。逆に、シグナル強度が減少すると細菌は解離してバイオフィルムから剥がれ落ちプランクトン様状態に戻る。フェロモンは微生物応答を上方若しくは下方制御する陽性信号である。
【００２６】
フラノンは、反対に信号を遮断する。即ち、同じ信号受容部位でフェロモンと競合し、又はその他の方法で信号を遮断する物質である。特定のシグナル強度で、フラノンは少なくとも一種の細菌のコロニー形成を妨げ、又は細菌間の通常のフェロモン伝達を遮断することによりコロニーを崩壊させる。
多くのフェロモンおよびフラノンシグナルが存在し、細菌間のクロストークは広く行き渡っているようである。特定の強度の特定のフェロモンシグナルがその種の細菌に対して特定の応答を引き出し、環境の適所をめぐって別の種類の細菌と競うことを可能化し、フェロモンはテリトリー形成に重要と思われる。フラノンは低いシグナル強度で、おそらく、細菌を飢餓と静止状態へ移行させるフェロモンシグナルを遮断することにより、飢餓と静止状態を軽減する役割を有すると思われる
【００２７】
本発明の方法により操作される微生物群としては、グラム陽性菌、グラム陰性菌、ラン藻、独立栄養細菌（光合成および化学合成栄養）、従属栄養細菌、窒素固定細菌等が含まれる。本発明はまた、好気性菌、通性嫌気性菌、嫌気性菌を操作する場合にも有用である；特に、硫化水素ガス（硫黄および硫酸還元菌により産生される）を含む悪臭の気体を産生する微生物やスルフィドを硫酸に変換する微生物の操作に有用である。本発明はまた、アンモニア産生菌、亜硝酸塩産生菌、硝酸塩産生菌、脱窒菌およびメタン産生菌群を操作する場合にも有用である。
【００２８】
本発明のひとつの態様は、少なくとも一つのＣＳＣを加えてグラム陰性菌の活動を増強し又は阻止することである。少なくとも一つのＣＳＣ、例えばＮ−アシルホモセリンラクトンを特定の用量比で処理対象の汚水に加えることにより、菌体数感知、群移動およびバイオフィルム形成を含む微生物活性の特定の機能を規制し、増強し、開始しおよび／又は維持する。反対に、少なくとも一つの他のＣＳＣ、例えばハロゲン化フラノンを特定の用量比で処理対象の汚水に加えることにより、群移動やバイオフィルム接着のような機能を下方制御する。種間の情報伝達に対する干渉のためには特定のフラノンが特定の用量比で用いられ、これにより、バイオフィルムの散在、脱皮、および細菌のプランクトン様状態の維持等を引き起こす。
【００２９】
本発明の他の態様は、少なくとも一つのＣＳＣを加えてグラム陽性菌の活動を増強し又は阻止することである。この態様では、少なくとも一つの特異的なＣＳＣは二成分シグナル伝達系のヒスチジンプロテインキナーゼを活性化するペプチドホルモンである。少なくとも一つのＣＳＣを特定の用量比で用いることにより、菌体数感知、群移動およびバイオフィルム形成を含む微生物活性の特定の機能を上方若しくは下方制御し、増強し、開始しおよび／又は維持する。他のＣＳＣ、例えば、ヒスチジンプロテインキナーゼ応答の調節を疎外し、二成分シグナル伝達系経路を阻害する抗微生物ペプチドおよびフラノンを特定の用量比で用いることにより、フェロモンペプチドシグナルを混乱させ、群移動やバイオフィルム接着の影響を下方制御する。そのようなペプチドとしては、Ｎ−アシル化Ｄ−アミノ酸ヘキサペプチドが含まれる。特定のフラノンを特定の用量比で用いると種間の情報伝達に干渉し、これによりバイオフィルムの散在、脱皮、および細菌のプランクトン様状態の維持等を引き起こす。
【００３０】
本発明の別の観点は、少なくとも一つのＣＳＣによって、ヒスチジンキナーゼタンパク質受容体（シグナル受容体）又は調節領域のリン酸化若しくは脱リン酸化を制御する応答調節タンパク質の領域が影響され得る。リン酸化の応答は特定の遺伝子の転写を抑制し又は刺激する。しかしながら、応答調節タンパク質が多様な時間の幅、例えば数秒から数時間の間で、非刺激状態に戻るリン酸化の応答は一時的である。望む状態を維持するためには、少なくとも一つのＣＳＣを十分なシグナル強度で維持し、望みのシグナル応答を得ることが重要である。
【００３１】
本発明の別の観点は、少なくとも一つのＣＳＣによって、swrA遺伝子を下方制御し群移動に要するリポタンパク生物学的界面活性剤の産生を減少させる。
本発明の別の観点は、少なくとも一つのＣＳＣが細菌の結合部位においてアシル化ホモセリンラクトン（ＡＨＬ）と競合することによりＡＨＬと干渉し得る環状ジペプチドである。
更に別の観点は、少なくとも一つのＣＳＣが非成長阻止濃度において用いられるフラノンであり、これはストレスに対する抵抗、老化、炭素欠乏による培養可能性の欠如に対する影響を最小化し又は除くであろう。その少なくとも一つのＣＳＣには、フラノンと組み合わせ、ストレスや炭素欠乏による培養可能性の欠如から保護するために用いられる上澄もまた含まれ得る。
【００３２】
他の観点においては、混合細菌群の群移動で種間の情報伝達に干渉するため少なくとも一つのフラノン（ＣＳＣ）を加えてもよい。これは、分化した遊走細胞の表面転位において必須のセラウェチンＷ２の産生を減少させるであろう。
他の観点においては、その少なくとも一つのＣＳＣは、外酵素の産生および／又はハルピンＥＣＣ産生を制御し、転写後の規制を担う遺伝子を制御して、表現型若しくは表現型の発現における変化を制御する。
【００３３】
本発明の更に別の観点は、その少なくとも一つのＣＳＣが特定の微生物遺伝子発現に用いられることである。異なる遺伝子発現の配列があって、特定のＣＳＣ又はシグナル強度の使用により増強されたり縮小されたりする。これには、発光や毒素、抗生物質、酵素および界面活性剤の産生等が含まれるがこれらに限定されない。微生物が産生した酵素や界面活性剤、またはこれらの産生物を欠くことは汚水の輸送や消化において重要な役割を果たす。毒素や抗生物質は領域標識以上のものであって、固有種の微生物支配においてまた重要な役割を果たす。このように、少なくとも一つのＣＳＣの使用を通じて遺伝子発現を制御することにより、微生物支配を変えることができ、同様にその支配種による産生物を変えて汚水の消化速度を変更することができる。
【００３４】
他の観点においては、その少なくとも一つのＣＳＣは、3-オキシドデカノイルＨＳＬおよび／またはブチリルＨＳＬのシグナル強度および／または産生を担っている遺伝子と干渉させるために用いることができる。少なくともいくつかの種による3-オキシドデカノイルＨＳＬの産生はポリサッカライドの産生を制御するために重要である。そして、このポリサッカライドはバイオフィルムを少なくとも何かの表面に接着させるのに必要なものである。ブチリルＨＳＬは少なくともいくつかの微生物においてはポリサッカライド産生を担っていると思われ、これはバイオフィルム形成に必要なものである。
【００３５】
従って、3-オキシドデカノイルＨＳＬおよび／またはブチリルＨＳＬは少なくともある種の微生物においてはバイオフィルムの接着および／または形成に重要であると思われる。これらシグナルまたはシグナル強度への干渉はバイオフィルムの接着および／または形成を最小限にすることにおいて重要である。
【００３６】
他の観点においては、その少なくとも一つのＣＳＣは、細菌フェロモンの模倣物、あるいは細菌フェロモンにより開始される遺伝子応答を開始させるものでもよい。すなわち、その模倣物は特定の濃度で媒体中に適用されると、細菌フェロモンによるものと同じ応答を引き起こす細胞外シグナルを与えるであろう。
他の観点においては、その少なくとも一つのＣＳＣは、細菌フェロモンの模倣物であってもよい。その模倣物は特定の濃度で汚水中に適用されると、汚水中の細菌性フラノンと同じ応答を引き起こす細胞外シグナルを与えるであろう。
【００３７】
他の観点においては、その少なくとも一つのＣＳＣ（シグナル強度）は、特定の遺伝子発現を開始する特定の受容体タンパク活性化の決定的な因子である。
汚水は炭素系および窒素系老廃物の両方を含む。炭素系老廃物には、炭素原子および水素原子を含む化合物が含まれるほか、酸素、窒素、硫黄、リンのような他の原子が含まれることもある。窒素系老廃物には、窒素原子のほか水素、炭素、酸素のような他の原子を含む化合物が含まれる。窒素系老廃物には尿素、尿酸、アンモニア、硝酸塩、亜硝酸塩が含まれる。汚水中には多くの異なる微生物群が含まれ、好気性菌、通性嫌気性菌や嫌気性菌が含まれる。
【００３８】
汚水の組成は下水集水ネットワークに排出される物質に依存して多様である。更には、その下水集水ネットワーク中の汚水の流速は絶えず変化し、これが下水集水ネットワーク中の汚水の保持時間を決定する。例えば、夜間は該ネットワークに流れ込む汚水の量は少なく流速は遅くなる傾向がある。しかし昼間はより多くの汚水が該ネットワークに流れ込み、人的廃物と同様工業廃水が排出されることもあってその組成は変化する。更には、大量の廃水が該ネットワークに放流され汚水の流速が増加する。
【００３９】
ＣＳＣの必要な用量レベルは基質である汚水の量、流速、生物化学的酸素要求量（BOD）／化学的酸素要求量（COD）、細菌の組成等に依存する。基質である汚水の細菌の組成は菌の種類とタイプを標準平板菌数を用いて決定される。ＣＳＣの必要な用量レベルは、細菌の組成、量、流速を評価して決定され、従って、用量レベルは処理時間、例えば２４時間ごとに変化し得る。
典型的には、ＣＳＣは基質である汚水に対し１ng／（汚水１kgまたは１L）から1g／（汚水１kgまたは１L）の用量レベルで添加することができる。フラノンは2.5μg／m２から2.5g／m２の範囲で下水集水パイプ中のバイオフィルムの生成や接着を妨げるのに効果的である。
【００４０】
ひとつまたはそれ以上のＣＳＣを基質である汚水に加えてもよい。単一のＣＳＣが特定のシグナル強度もしくは濃度で基質である汚水中の微生物の単一の群（表現型の発現）の挙動を変化させるかもしれないし、基質である汚水中の微生物のひとつより多い群の挙動を独立して変化させるかもしれない。あるいは、基質である汚水中にＣＳＣの混合物を加え、これらが一緒になって単一の微生物群の挙動を変えるかもしれないし、ひとつより多い群の挙動を独立して変化させ得るかもしれない。第二のＣＳＣにより最初のＣＳＣを補足しまたは補完するために、ＣＳＣ混合物を加えてもよい。例えば、応答を増強したり、そうでないと最初のＣＳＣに対する微生物細胞の活性を鈍らせてしまうようなフィードバック阻害を妨げる目的で用いられる。
【００４１】
あるいは、集水設備中での群移動やバイオフィルムによる表面の着色化を抑えるためにフラノンおよび抗微生物ペプチド（ＣＳＣ）を汚水に加えてもよい。これらのＣＳＣは、細菌のプランクトン様状態を維持させるための適用において、一般的または特異的かもしれない。更に、特定のＣＳＣを特定の濃度（シグナル強度）において汚水に追加し、飢餓と静止状態を媒介することもできる。この種々の細菌シグナル（ＣＳＣの）とＣＳＣシグナル強度との間のクロストークは、下水集水パイプ中の汚水の通過段階中は維持することができる。汚水がＳＴＰにまで到達すると、ＳＴＰにおける設計上の要求に依存して、好気性もしくは嫌気性の汚水消化（分解）を速やかに加速させるような方法で、異なるシグナルまたはシグナル強度を用いて微生物群を変更することができる。
【００４２】
有利なことには、その少なくとも一つのＣＳＣは基質である汚水に対して、所望の微生物の成長を支援し向上させる成長促進培地よりなる組成物として加えることができ、これにより基質である汚水の分解速度を増加させることができる。そのような成長促進培地には炭水化物、タンパク質性物質、アミノ酸、脂肪、油脂、ビタミン、ミネラル等が含まれる。しかしながら、微生物活性を主として調節するのはＣＳＣであることを認識しなければならない。成長培地の栄養補助剤は成長制限因子である欠乏を取り除くにすぎない。
【００４３】
ＣＳＣを含む組成物はまた、分解過程で生じる望ましくない副生成物や毒物と反応して、これらを無毒化し、更により好ましくはＣＳＣの効果を補足し若しくは補完する化学薬品を含んでいてもよい。例えば、脂肪酸や他の有害な化合物の効果を仲介し、またはpHを調節し細菌の特別な種若しくはコロニーに多少とも適切な培地にする化合物を加えることができる。あるいは、ＣＳＣを酸素若しくは他の酸化剤と一緒に汚水に加えることもできる。ＣＳＣは好気性細菌の代謝速度および成長を刺激し、一方、供与された酸素が成長制限因子としての酸素欠乏を取り除く。
【００４４】
少なくとも一つのＣＳＣまたは少なくとも一つのＣＳＣを含む組成物を、基質である汚水を単離してから加えてもよい。あるいは、下水集水ネットワーク若しくは汚水処理施設のいくつかの特定のポイントで加えてもよいし、または汚水の流水に加えてもよい。その少なくとも一つのＣＳＣまたは少なくとも一つのＣＳＣを含む組成物はボーラスで加えてもよいし、簡単な滴下供給若しくはポンプシステムを用いて連続的に若しくは間欠的に加えてもよい。その少なくとも一つのＣＳＣまたは少なくとも一つのＣＳＣを含む組成物は、噴霧剤または滴下剤の剤形でもよく、汚水表面に噴霧または滴下することにより汚水中に加えることができる。その少なくとも一つのＣＳＣまたは少なくとも一つのＣＳＣを含む組成物を加える地点において、その少なくとも一つのＣＳＣがに分散するのを助けるためにＣＳＣを基質とよく混合させる手段を設けてもよい。また、有機廃水基質に加えられたＣＳＣ濃度を監視するための手段を設けて、濃度が目標レベル以下であれば更にＣＳＣを添加し、目標レベル以上であればＣＳＣの添加を停止して目標のＣＳＣ濃度維持を確かなものとすることもできる。当業者であれば、基質に加えるべきＣＳＣ若しくはこれを含む組成物の量およびその手段を容易に決定できるであろう。
【００４５】
少なくとも一つのＣＳＣまたは少なくとも一つのＣＳＣを含む組成物は、液体、溶液、粉末、顆粒、ペレットまたは気体状態にすることができる。少なくとも一つのＣＳＣを含む組成物はまた他の適切な担体若しくはアジュバントを含んでもよい。組成物はまた、分散剤、結合剤、保湿剤その他の界面活性剤のような組成物、充填剤またはその他ＣＳＣ活性を補足し若しくは補完するような組成物を含んでもよい。有利には、ＣＳＣは一般に蠕動ポンプの手段により集水ネットワークに加えてもよいが、ＣＳＣが時間をかけて基質中に放出されるよう、徐放性のペレット若しくは顆粒の形態で加えてもよい。あるいは、気体状態若しくは液体に溶解して加えることもできる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４６】
本発明の好ましい観点は、少なくとも一つの細胞情報伝達化学物質（ＣＳＣ）を加えて、その少なくとも一つのＣＳＣが該汚水中の好気性菌、嫌気性菌若しくは通性嫌気性菌の細菌群の活性を強化することよりなる汚水の処理方法を提供することである。
【００４７】
本発明のこの観点は、微生物活性を上方制御し汚水処理施設における汚水の分解速度を増加させる点において特に有用である。また、休眠状態で非成長若しくは低成長微生物の蘇生を促進させ、汚水分解の手助けをさせるためにも利用できる。この過程は、成長促進培地を含む組成物として細胞情報伝達化学物質を加えることにより更に強化することができる。その成長促進培地が、ＣＳＣの効果を制限することにより、特定の微生物群に影響を及ぼすおそれのある栄養の不均衡を是正するからである。
【００４８】
本発明のより好ましい別の観点は、汚水集水ネットワークにおいて、少なくとも一つの細胞情報伝達化学物質（ＣＳＣ）を該ネットワークに加えて、その少なくとも一つのＣＳＣが中に存在する好気性菌、嫌気性菌若しくは通性嫌気性菌の活性を下方制御することよりなる微生物活性を低下させる方法を提供することである。
この観点は汚水集水ネットワークにおいて汚水の分解を抑え、汚水処理施設に未処理の汚水を運ぶような場合には特に有用である。汚水処理施設に到達した汚水は、該汚水処理施設の技術的設計基準に従って汚水の好気性分解の最適化を可能とする。
【００４９】
本発明の好ましい別の観点は、少なくとも一つの細胞情報伝達化学物質（ＣＳＣ）を汚水処理システムに加えて、その少なくとも一つの細胞情報伝達化学物質が悪臭を産生する微生物の活性を阻害し（下方制御）、または該システム中の他の微生物の活性を増強し（上方制御）同一食物源の悪臭産生菌と徹底して競合させることよりなる悪臭低下方法を提供することである。
本明細書において「汚水処理システム」の語は、汚水集水ネットワークおよび汚水処理施設の両方をいう。
【００５０】
本発明のこの観点は、分解汚水中の悪臭のひどいスルフィドガス、特に硫黄若しくは硫酸還元菌により産生される硫化水素ガスを減少させるのに有用である。これらの気体は汚水集水ネットワークまたは汚水処理施設において産生されるかもしれない。他の微生物群の活性を増強し、これにより同一食物源の硫黄還元菌と競合させることができる。
少なくとも一つのＣＳＣを汚水集水ネットワークに加えて硫黄還元菌群の活動を下方制御しバイオフィルムから解離させるか、あるいはバイオフィルムから解離させてプランクトン様状態に戻し群移動や菌体数感知を妨げて、その繁殖を阻止しおよび／または代謝速度を減少させることができる。プランクトン様状態において硫黄若しくは硫酸還元菌が産生するスルフィドの量はバイオフィルム状態で産生する量の千分の一程度である。あるいは、その少なくとも一つのＣＳＣが望ましい微生物の行動を上方制御して群移動や菌体数感知を刺激し、繁殖および／または代謝速度を増加させて該微生物を同一食物源の硫黄還元菌と競合させることができる。
【００５１】
本発明のより好ましい別の観点は、汚水処理システムにおいて、少なくとも一つの細胞情報伝達化学物質を該システムに加え、その少なくとも一つの細胞情報伝達化学物質が、硫化水素を硫酸水素塩（硫酸）に変換する微生物の活性を阻害することよりなる、腐食作用を低下若しくは阻止する方法を提供することである。
ＣＳＣは溶解したスルフィドおよび硫化水素ガスの産生を抑制し、その微生物の食物源を除去することができる。あるいは、硫酸還元菌間の情報伝達シグナルを混乱させて該細菌を下方制御しこれにより産生される硫酸の量を減少させる。
【００５２】
本発明のこの観点は下水集水ネットワークおよび汚水処理施設の双方における腐食を抑制するのに特に有用である。
更に、本発明におけるより好ましい観点は、下水集水ネットワークにおいて、少なくとも一つの細胞情報伝達化学物質を該下水集水ネットワークに加え、その少なくとも一つの細胞情報伝達化学物質で微生物群の群移動および菌体数感知を阻害することにより、バイオフィルムの維持および形成を阻止する方法を提供することである。
【００５３】
本明細書において「菌体数感知」の語は情報伝達の程度であって、細菌がプランクトン様状態に止まるのか、群移動やコロニー、バイオフィルムを形成するのかを決定する細菌間のシグナル型若しくはシグナル強度である。より具体的には、一定数に達すると、単細胞状態からコロニーや多細胞状態へ変化するように細菌の表現型が変化する。多数の細菌が細胞間で情報伝達を行い、細胞密度に呼応して多くの標的遺伝子の転写を規制して、菌体数感知が起こる。自然の条件下では菌体数感知は一つ以上のフェロモンの産生を通じて媒介され、シグナル強度は、一定数の細菌が存在し、媒介された遺伝子表現を通じて細胞がプランクトン様挙動からコロニー状態への挙動に変化するのかを決定する重要な因子である。
【００５４】
本明細書において「バイオフィルム」の語は、一般には物体の表面上に形成された粘液であって細菌のコロニー形成がなされている。特に関心があるのは以下のものである；
バルキング汚泥を生じるバイオフィルム
下水集水パイプ壁で形成されるバイオフィルムおよび該下水集水パイプ内の沈殿／堆積物上で形成されるバイオフィルム。
【００５５】
糸状のバルキング汚泥を形成するバイオフィルム複合体は、活性化された汚泥処理能力および沈降能力を低下させる。本発明のこの観点は、糸状バルキング汚泥の生成を妨げ／減少させ、汚水処理と汚泥消化を改善するのに有用である。ＣＳＣはバルキング汚泥の原因となっている糸状菌群の維持および／または形成を制御するために用いることができる。
【００５６】
バイオフィルムの産生および／または物体表面へのその接着を妨げるためにＣＳＣをに加えることができる。ＣＳＣは細菌が接着層を形成しバイオフィルムを形成する能力を混乱させ、またはバイオフィルム形成に必要なポリサッカライドの生成を阻害するからである。バイオフィルムの形成に必要なポリサッカライドの産生および／または接着を阻止するから、フラノンを使用して3-オキソデカノイルホモセリンラクトンやブチリルホモセリンラクトンのようなＮ−アシルホモセリンラクトンまたはその混合物を阻止することは本発明の特に有用な観点である。
【００５７】
表面上で形成されるバイオフィルムは、その複雑な構造の一部として硫黄還元菌を含み得る。下水集水ネットワークにおいて悪臭のひどい気体、例えば硫化水素ガスその他の悪臭ガス生成を阻止するので、ＣＳＣを用いてバイオフィルムを除去しまたはバイオフィルムから硫黄還元菌を除去することは、本発明の重要な観点である。
バイオフィルムを形成するとき、微生物は洗練された細胞間情報伝達シグナル（ＣＳＣ）を使用する。細胞間情報伝達シグナル（ＣＳＣ）を混乱させると情報伝達シグナル若しくはシグナル強度が維持されないのでバイオフィルムの形成を阻止し、あるいはバイオフィルムを分散させる。有機廃液下水集水において嫌気性硫黄還元菌を含む固有のバイオフィルムの阻止若しくは分散は、硫黄還元菌の制御を助け、下水集水および汚水処理施設の臭気の制御を支援する。汚水処理施設に流れ込む汚水の溶解したスルフィドの濃度を低下させることは、汚水処理施設における汚水の処理作用を強化する。
【００５８】
更に、本発明におけるより好ましい観点は、少なくとも一つの細胞情報伝達化学物質を汚水処理施設若しくは下水集水ネットワークにおいてに加え、その少なくとも一つの細胞情報伝達化学物質で好気性菌および通性嫌気性菌の活性を強化することにより、汚水処理施設における汚水の微生物消化を強化する方法を提供することである。
【００５９】
本発明のこの観点は、汚水が汚水処理施設に到着したときに汚水処理を行う際には特に有用である。有利には、好気性菌および通性嫌気性菌の活性、繁殖および／または代謝速度の増加は汚水の微生物消化を助け、汚水の流水性を改善し汚泥の量を減少させる。本発明のこの観点で特に有用なものは、ＡＨＬ、フェロモンペプチド、Ｎ−アシル化Ｃ−アミド化Ｄ−アミノ酸ヘキサペプチド、Ｄ−イソロイシンおよび／またはＤ−チロシンよりなるＤ−アミノ酸、環状ジペプチド、疎水性トリアミン、リポペプチド生物系界面活性剤、脂肪酸誘導体、抗微生物ペプチドおよびフラノンである。特に好ましいＣＳＣはＡＨＬである。
【００６０】
更に、本発明におけるより好ましい観点は、少なくとも一つの細胞情報伝達化学物質を汚水処理施設若しくは下水集水ネットワークにおいてに加え、その少なくとも一つの細胞情報伝達化学物質で嫌気性メタン産生菌の活性を強化しまたは阻害することにより、汚水処理施設におけるメタンガス産生を管理する方法を提供することである。
本発明のこの観点は、メタンガス産生の管理において特に有用である。メタンガスは「温室効果ガス」であるからその産生の管理は望ましい。メタンガス産生のよりよい管理とはこれを集めて燃焼させることにより二酸化炭素と水に変換することである。
【００６１】
本発明における別のより好ましい観点は、少なくとも一つの細胞情報伝達化学物質を汚水基質に加え、その少なくとも一つの細胞情報伝達化学物質でアンモニア産生菌、亜硝酸産生菌、硝酸産生菌または脱窒菌の活性を規制することにより、汚水基質中の窒素化合物の酸化還元を担う細菌を制御する方法を提供することである。
特異的なＣＳＣ、またはＣＳＣおよび／若しくは特異的なＣＳＣシグナル強度との組み合わせを用いて汚水のアンモニア化、硝酸化および脱窒化を担う細菌を上方若しくは下方制御することができる。本発明のこの観点は、空気中および水中の環境汚染物質の範囲を制御するのに特に有用である。本発明のこの観点において、3-オキソデカノイルホモセリンラクトンやブチリルホモセリンラクトンのようなＮ−アシルホモセリンラクトンまたはその混合物は上方制御に特に有用であり、ハロゲン化フラノンやヒドロキシ化フラノン、アルキルフラノンは下方制御に特に有用である。
【００６２】
本発明における別のより好ましい観点は、少なくとも一つの細胞情報伝達化学物質を汚水基質に加え、その少なくとも一つの細胞情報伝達化学物質で好気性菌または嫌気性菌の活性を強化することにより、汚水汚泥の消化を助ける方法を提供することである。
本発明のこの観点は、好気性または嫌気性の非硫黄還元菌による汚水汚泥の消化速度を増加させ、それにより汚泥の量と臭気を減少させるのに特に有用である。
【００６３】
本発明の更に別の観点は、少なくとも一つの細胞情報伝達化学物質を汚水基質に加え、その少なくとも一つの細胞情報伝達化学物質で休眠状態、飢餓状態若しくは静止状態にある微生物の活性を刺激することにより、汚水基質中の静止状態若しくは飢餓状態にある微生物または休眠状態の微生物を蘇生させる方法を提供することである。
本発明のこの観点は、汚水中に存在するが活性ではない微生物の望ましいものを蘇生させることを可能にする。汚水はしばしば微生物にとって毒性があり危険な環境である。毒性のある家庭用および工業用化学薬品が多数下水管に流される。これら毒性のある化学薬品はしばしば微生物に不都合な影響を与え、胞子形成をさせ、または単に下方制御して休眠若しくは静止状態に陥らせる。汚水処理の改善において、ＣＳＣを用いて有益な微生物を蘇生させ、上方制御できることはしばしば重要である。
【００６４】
汚水を長距離にわたって輸送すると汚水中の炭素欠乏を引き起こし、微生物を再び下方制御して休眠若しくは静止状態に陥らせまたは胞子形成をさせる。ＣＳＣ使用が炭素欠乏を軽減させる時に重要となることがある。下水集水若しくは汚水処理施設において、ある局面では細菌を下方制御しておき、それから別の局面でＣＳＣを用いて細菌を上方制御および／または蘇生させることができるからである。本発明のこの観点は、炭素欠乏のストレスおよび貧弱な汚水処理の効果を軽減するのに重要である。本発明のこの観点で特に好ましく有用なのはフラノンである。
【００６５】
本明細書においては、特に文脈が要求しない限り、「よりなる（comprise）」の語は、その活用変化（comprises、comprising）を含め、記載された整数若しくは行程、または整数若しくは行程の群を含むが、他の整数若しくは行程、または整数若しくは行程の群を排除しないことを意味すると解すべきである。
【実施例１】
【００６６】
種々のＣＳＣの用量比の効果を試験する手順。
この手順は、標準平板（従属栄養）微生物数を求めるための明確なNATA認定済み手順（オーストラリア国、英国および米国の標準）に準拠している。対象の平板菌数は、
好気性菌
通性嫌気性菌を包含する嫌気性菌、および
硫黄還元菌である。
採取手順は、所定の汚水試料採取に依存する。採取後、汚水試料は800mlの小試料に分割する。一つの小試料は対照として保存し、一方、他の同じ小試料には試験するＣＳＣを特定量（一般には、ng／mlからmg／ml）加える。
それぞれの800mlの小試料は添加したＣＳＣと汚水をよく混ぜるために徹底的に振盪する。対照の汚水も同じ方法で同時間振盪して各小試料の同一性を確かにする。
【００６７】
汚水の各小試料は、傾斜により４つの同じ試料200mlずつ（それぞれA、B、C、Dとする）に分割する。
各複製の試料Aは、NATA認定済み手順に従い標準平板菌数を測定する。
好気性菌の応答を試験する場合は、試料B、C、Dは空気ポンプを用いて通気し、小さいが一定の空気の流れを試料の底に送り込んで４時間ごとに２分間汚水混合物中にバブルさせる。
嫌気性応答を試験する場合は、200mlの試料B、C、Dは気密性の蓋でしっかり栓をしてそれ以上空気が流入しないようにする。
24時間後、各複製の試料Bにつき、試料Aの場合と同様にNATA認定済み手順に従って標準平板菌数を測定する。
48時間後、各複製の試料Cにつき、試料Aの場合と同様にNATA認定済み手順に従って標準平板菌数を測定する。
72時間後、各複製の試料Dにつき、試料Aの場合と同様にNATA認定済み手順に従って標準平板菌数を測定する。
【実施例２】
【００６８】
実施例１に概説した手順を用いてＣＳＣ混合物（バイオゾル１または２）を汚水試料に加えた。バイオゾル１またはバイオゾル２と呼ばれる組成物は、小さな汚水処理施設のほとりで採取された比較的新鮮な汚水試料について達成できることの目安を与える。結果はFigure 1からFigure 3に示す。
【００６９】
バイオゾル１の組成は；
N-(3-オキソヘキサノイル)-L-ホモセリンラクトン  0.05mg/L
3-オキシドデカノイル-ホモセリンラクトン  0.05mg/L
N-ブタノイル-L-ホモセリンラクトン  0.005mg/L
ゼアチン  0.01mg/L
6-(γγ-ジメチルアリルアミノ)プリン  0.08mg/L
6-ベンジルアミノプリン  0.08mg/L
3-ヒドロキシパルミチン酸メチルエステル  0.08mg/L
紅藻Delisea pulchra（公知のフラノン源）の抽出物  0.1mg/L
総合ビタミン剤1000mg１カプセルの半分の内容物
酵母抽出物  1g
海藻粉末（ミネラル補給）（Durvillea potatorun）である。
【００７０】
脱イオン水１リットルを用いて該混合物を調製した。この混合物を汚水１リットルあたり4mgの比率で加えた。
バイオゾル２の組成は；
ロードミン  0.005mg
紅藻Delisea pulchra（公知のフラノン源）の抽出物  0.2mg/L
N-ブタノイル-L-ホモセリンラクトン  0.005mg/L
総合ビタミン剤1000mg１カプセルの半分の内容物
酵母抽出物  1g
海藻粉末（ミネラル補給）（Durvillea potatorun）である。
脱イオン水１リットルを用いて該混合物を調製した。この混合物を汚水１リットルあたり4mgの比率で加えた。
【００７１】
Figure 1はＣＳＣ混合物（バイオゾル１）がコロニー形成単位数により示されるように、実質的な微生物数増加に先だって、最初好気性微生物活性を抑えることを示す。対照は最初微生物活性の早い応答を示すが、その後利用可能な食物源に対応しなくなる。
Figure 2はＣＳＣ混合物（バイオゾル１）が未処理の汚水中で嫌気性微生物群を急速に増加させることを示す。
Figure 3はバイオゾル２のＣＳＣ混合物が硫黄還元菌のコロニー形成単位を減少させることを示す。対照は最初硫黄還元菌が減少するが、インキュベーション２８時間後には硫黄還元菌の数が増加することを示した。
【実施例３】
【００７２】
実施例１に概説した手順を用いて、特定のＣＳＣを特定の比率で試験管中の汚水試料に加えた。表１にその概略を示した異なるＣＳＣを含む試料をそれぞれ三つの小試料に分割した。第一の小試料は、好気性、嫌気性および硫黄還元菌について標準平板菌数分析するためにプレート上に蒔いて４時間以内で培養した。第二および第三の小試料は４時間ごとに通気し、それぞれ２４時間後および７２時間後における小試料１として分析した。好気性、嫌気性および硫黄還元菌の各個体群密度を、分析した各汚水試料から計測されるコロニー形成単位の数で決定した。
結果をFigure 4-6に示す。結果は、異なるＣＳＣを異なる用量比で汚水試料に適用することにより対照に比べて微生物群の成長比が大きく変わったことを示している。
【００７３】
表１
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【実施例４】
【００７４】
実施例３の試験を繰り返したが試料を通気しなかった。結果をFigure 7からFigure 9に示す。
【実施例５】
【００７５】
バイオゾル２の形のＣＳＣを4ppmの比率で汚水集水の成分に加えた。硫化水素の測定値は２４時間以内に半減し、汚水中に溶解したスルフィドは同時間内に４８％減少した。
【実施例６】
【００７６】
腐敗した有機物を扱う小さな汚水処理施設の集水池に、バイオゾル１を4ppmの比率で加えた。好気性槽中に溶解した酸素レベルは1ppm以下から7ppmあたりにまでなった。また、汚泥体積は５２％、流体中の懸濁固体は８０％減少した。
実施例５および６の結果は、in vitroの実験結果と一致した。
【実施例７】
【００７７】
バイオフィルム・マトリックスが定着した小さな重量汚水管中を流れる汚水に対して、蒸留水中のハロゲン化フラノン混合物（1g／L）を蠕動ポンプを用いて約0.5mg／Lの比率で加えた。一ヶ月後、管壁面のバイオフィルムの減少が顕著であり斑点状の裸の管壁面が明らかであった。ハロゲン化フラノン混合物がバイオフィルムの汚水管壁面からの剥離を引き起こしその生成に影響したものと思われた。
【実施例８】
【００７８】
ハロゲン化フラノン、ヒドロキシル化フラノンおよびアルキル化フラノンの等量混合物（1g／L）およびＡＨＬ（1g／L）を蒸留水中で混合し、バイオフィルム・マトリックスが定着した小さな重量汚水管中を流れる汚水に対して、該混合物をおよそ4ml／Lの比率で蠕動ポンプを用いて加えた。一ヶ月後、管壁面のバイオフィルムの減少が顕著であり斑点状の裸の管壁面が明らかであった。フラノン混合物がＡＨＬシグナルを混乱させ、バイオフィルムの汚水管壁面からの剥離を引き起こしその生成に影響したものと思われた。
【実施例９】
【００７９】
紅藻Delisea pulchra（ニューサウスウェールズ州バンクス岬で収集し２４時間以内に冷却し凍結乾燥したもの）からの抽出物を、該Delisea pulchraのＣＳＣをジクロロメタンを用いて抽出しビタミン付与することにより調製した。抽出物と粗繊維を前もって減圧下で分解した。水１リットルあたり１０ｇの繊維と抽出物を加え、十分なアスコルビン酸で混合物のｐＨを３．５に低下させて２０分間ビタミン付与を行った。液体を２時間安定化させてその上澄みを集めて使用した。この抽出物はフラノン源として知られており、パイプ中を流れる汚水に対しておよそ４ml/lの比率で４週間にわたり、汚水パイプラインに加えた。４週間後、抽出物は汚水パイプからバイオフィルムを剥離させバイオフィルム形成に影響したと思われた。
【００８０】
実施例７、８および９は溶解したスルフィド産生に対する影響の測定にも用いた。最初、溶解したスルフィドは増加したが、その後汚水中の溶解したスルフィドは減少した。最初の溶解スルフィドの増加は剥離したバイオフィルム中に高濃度に含まれる溶解スルフィドによるものであった。その後の溶解スルフィドの現象はバイオフィルムの減少とバイオフィルム中の微生物マトリックスの変化による。
【００８１】
表２
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【実施例１０】
【００８２】
紅藻Delisea pulchra抽出物１リットル毎にハロゲン化フラノン混合物（１g/L）を加えた。この混合物を約４ｍｇ／リットルの比率でポンプ場から低圧下水管本管中を流れる汚水中に加えた。この圧力本管は定着したバイオフィルム・マトリックスを含んでいた。圧力本管から出てきた汚水は嫌気性であって重力本管へ移る時には臭気が強くなった。気体は主に硫化水素と思われたが、メルカプタン、インドール、スカトール等のその他の悪臭のある気体も存在した。上記混合物を加える前、圧力本管の終点で硫化水素ガス濃度の平均は１８０ppmであった。上記混合物を混入してから１週間後、硫化水素ガス濃度は平均４７ppmに減少した。混合物を混入してから１ヶ月後には、硫化水素濃度は平均４ppmにまで減少した。具体的に試験していないが、メルカプタン、インドール、スカトールタイプの臭気がないことが明らかであった。
「OdaLog」（０−１０００ppm Ｈ２Ｓ）気体自動記録装置を圧力本管終点のマンホール内に設置した。Ｈ２Ｓガス濃度の平均減少をその記録から計算した。
【実施例１１】
【００８３】
紅藻Delisea pulchra抽出物１リットル毎にハロゲン化フラノン混合物（１g/L）を加えた。この混合物を約４ｍｇ／リットルの比率で、定着したバイオフィルム・マトリックスを含む下水管内を流れる汚水中に加えた。該下水管は腐敗性の汚水を含むが、汚水が湿ったポンプ井戸に落ち込む時に空気が含まれた。下水管終点においてポンプ井戸室内に放出された亜酸化窒素を、ＮＯ２ガスデータ自動記録装置により５：４０amから９：００amまで４日間記録した。ＮＯ２ガス濃度は予想されたとおり変化したが、上記混合物を汚水試料に加えると該ガス濃度の平均減少は約７０％であった。
【００８４】
表３
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【実施例１２】
【００８５】
上記実施例１１で用いた同じ混合物を臭気のある男性小便器およびその周辺に吹きかけた。１時間以内に臭気は除かれた。このことは、尿素が、古い小便器周辺の主な臭気源であるアンモニアに変換されているのではないことを示した。
【図面の簡単な説明】
【００８６】
【図１】Figure 1は、バイオゾル１ＣＳＣ混合物に対する汚水試料中の好気性微生物の応答を図示する。菌体数は標準平板菌数で測定した。
【図２】Figure 2は、バイオゾル１ＣＳＣ混合物に対する汚水試料中の嫌気性微生物の応答を図示する。菌体数は標準平板菌数で測定した。
【図３】Figure 3は、バイオゾル２ＣＳＣ混合物に対する汚水試料中の硫黄還元菌の応答を図示する。菌体数は標準平板菌数で測定した。
【００８７】
【図４】Figure 4は、表１に提示した異なるＣＳＣに対する汚水試料中の好気性微生物の応答を図示する。試料は通気した。
【図５】Figure 5は、表１に提示した異なるＣＳＣに対する汚水試料中の嫌気性微生物の応答を図示する。試料は通気した。
【図６】Figure 6は、表１に提示した異なるＣＳＣに対する汚水試料中の硫黄還元菌の応答を図示する。試料は通気した。
【００８８】
【図７】Figure 7は、表１に提示した異なるＣＳＣに対する汚水試料中の好気性微生物の応答を図示する。試料は通気しなかった。
【図８】Figure 8は、表１に提示した異なるＣＳＣに対する汚水試料中の嫌気性微生物の応答を図示する。試料は通気しなかった。
【図９】Figure 9は、表１に提示した異なるＣＳＣに対する汚水試料中の硫黄還元菌の応答を図示する。試料は通気しなかった。
【図１０】Figure10は、バイオフィルムの剥離と縮小が観測される期間内の汚水試料中に溶解したスルフィドの平均量を図示する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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