(57)【要約】  本発明は、式Ｉの化合物ならびにそれの製薬上許容される塩および水和物を包含する。その化合物は、骨髄、臓器および組織移植片拒絶などの免疫介在疾患および状態を治療する上で有用である。医薬組成物および使用方法が含まれる。
2005515259.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式Ｉによって表される化合物または該化合物の製薬上許容される塩もしくは水和物。
【化１】
2005515259.tif 000042
［式中、
Ａｒはフェニルまたはナフチルであり；
ｍ＝０または１であり；
ｎ＝０または１であり；
Ａは、−ＣＯ２Ｈ、−ＰＯ３Ｈ２、−ＰＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＰＯ（Ｃ１−３アルキル）ＯＨおよび１Ｈ−テトラゾール−５−イルからなる群から選択され；
Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立に、水素、ハロ、ヒドロキシ、−ＣＯ２Ｈおよび１〜最大数の置換可能な位置でハロによって置換されていても良いＣ１−４アルキルからなる群から選択され；
Ｒ３は、水素および１〜最大数の置換可能な位置でハロおよびヒドロキシからなる群から独立に選択される置換基で置換されていても良いＣ１−４アルキルからなる群から選択され；
各Ｒ４は独立に、ハロ、Ｃ１−４アルキルおよびＣ１−３アルコキシからなる群から選択され；そのＣ１−４アルキルおよびアルコキシは、１〜最大数の置換可能な位置でハロで置換されていても良く；
Ｃは、
（１）Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ１−６アルキルまたは−ＣＨＯＨ−Ｃ１−６アルキル（前記Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ１−６アルキルおよび−ＣＨＯＨ−Ｃ１−６アルキルは、フェニルで置換されていても良い）、および
（２）フェニルまたはＨＥＴ（それぞれ、独立にハロ、フェニル、Ｃ１−４アルキルおよびＣ１−４アルコキシからなる群から選択される１〜３個の置換基で置換されていても良く；前記Ｃ１−４アルキル基およびＣ１−４アルコキシ基は、１〜最大数の置換可能な位置で、独立にハロおよびヒドロキシから選択される置換基で置換されていても良く；前記フェニルは、独立にハロおよび１〜３個のハロ基で置換されていても良いＣ１−４アルキルからなる群から選択される１〜５個の基で置換されていても良い）
からなる群から選択され；あるいは
Ｃは非存在であり；
Ｃが非存在である場合、Ｂはフェニル、Ｃ５−１６アルキル、Ｃ５−１６アルケニル、Ｃ５−１６アルキニル、−ＣＨＯＨ−Ｃ４−１５アルキル、−ＣＨＯＨ−Ｃ４−１５アルケニル、−ＣＨＯＨ−Ｃ４−１５アルキニル、Ｃ４−１５アルコキシ、−Ｏ−Ｃ４−１５アルケニル、−Ｏ−Ｃ４−１５アルキニル、Ｃ４−１５アルキルチオ、−Ｓ−Ｃ４−１５アルケニル、−Ｓ−Ｃ４−１５アルキニル、−ＣＨ２−Ｃ３−１４アルコキシ、−ＣＨ２−Ｏ−Ｃ３−１４アルケニル、−ＣＨ２−Ｏ−Ｃ３−１４アルキニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ４−１５アルキル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ４−１５アルケニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ４−１５アルキニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ３−１４アルキル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ３−１４アルケニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ３−１４アルキニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ６）（Ｒ７）−Ｃ３−１４アルキル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ６）（Ｒ７）−Ｃ３−１４アルケニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ６）（Ｒ７）−Ｃ３−１４アルキニル、−Ｎ（Ｒ６）（Ｒ７）−Ｃ３−１４アルキル、−Ｎ（Ｒ６）（Ｒ７）−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ３−１４アルケニルおよび−Ｎ（Ｒ６）（Ｒ７）−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ３−１４アルキニルからなる群から選択され；
ＣがフェニルまたはＨＥＴである場合、ＢはＣ１−６アルキル、Ｃ１−５アルコキシ、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ１−５アルキル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ１−４アルキル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ６）（Ｒ７）−Ｃ１−４アルキル、
【化２】
2005515259.tif 000043
、フェニルおよびＨＥＴからなる群から選択され；
ＣがＣ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ１−６アルキルまたは−ＣＨＯＨ−Ｃ１−６アルキルである場合、Ｂはフェニルであり；
Ｒ６およびＲ７は独立に、水素、Ｃ１−９アルキルおよび（ＣＨ２）ｐ−フェニルからなる群から選択され；ｐは１〜５であり；フェニルは、独立にそれぞれ１〜３個のハロ基で置換されていても良いＣ１−３アルキルおよびＣ１−３アルコキシからなる群から選択される１〜３個の置換基で置換されていても良い。］
【請求項２】
Ａｒがフェニルであり；
基−Ｂ−Ｃが３位もしくは４位で前記フェニル環に結合しており；
ＣがフェニルまたはＨＥＴであり；それぞれが独立にハロ、フェニル、Ｃ１−４アルキルおよびＣ１−４アルコキシからなる群から選択される１〜３個の置換基で置換されていても良く；前記Ｃ１−４アルキル基およびＣ１−４アルコキシ基が１〜最大数の置換可能な位置で独立にハロおよびヒドロキシから選択される置換基で置換されていても良く；前記フェニルが、独立にハロおよび１〜３個のハロ基で置換されていても良いＣ１−４アルキルからなる群から選択される１〜５個の基で置換されていても良く；
あるいはＣは非存在であり；
Ｃが非存在である場合、ＢがＣ７−１２アルキル、Ｃ７−１２アルケニル、Ｃ７−１２アルキニル、Ｃ６−１１アルコキシ、−Ｏ−Ｃ６−１１アルケニル、−Ｏ−Ｃ６−１１アルキニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ６−１１アルキル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ６−１１アルケニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ６−１１アルキニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ５−１０アルキル、（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ５−１９アルケニルおよび−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ５−１０アルキニルからなる群から選択され；そしてＣは非存在であり；
ＣがフェニルまたはＨＥＴである場合、ＢはＣ１−５アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ１−４アルキル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ１−３アルキル、フェニルおよびＨＥＴからなる群から選択される請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ＨＥＴが下記のものからなる群から選択される請求項１に記載の化合物。
【化３】
2005515259.tif 000044
【請求項４】
ｍが０である請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
ｍが１である請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
ｎが０である請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
ｎが１である請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
ＢがＣ７−１２アルキル、Ｃ７−１２アルケニル、Ｃ７−１２アルキニル、Ｃ６−１１アルコキシ、−Ｏ−Ｃ６−１１アルケニル、−Ｏ−Ｃ６−１１アルキニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ６−１１アルキル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ６−１１アルケニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ６−１１アルキニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ５−１０アルキル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ５−１９アルケニルおよび−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ５−１０アルキニルからなる群から選択され；Ｃが非存在である請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
Ｂがメトキシであり；Ｃが、フェニルおよびＣ１−４アルキルで置換されたＨＥＴであり；前記Ｃ１−４アルキルが、１〜最大数の置換可能位置でハロによって置換されていても良く；前記フェニルが、ハロおよび１〜３個のハロ基で置換されていても良いＣ１−４アルキルからなる群から独立に選択される１〜５個の置換基で置換されていても良い請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｃが下記のものからなる群から選択される請求項８に記載の化合物。
【化４】
2005515259.tif 000045
【請求項１１】
Ｃがチオフェンまたはフランである請求項９に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｂがメトキシであり、ＣがＨＥＴである請求項１に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｃが下記のものからなる群から選択される請求項１２に記載の化合物。
【化５】
2005515259.tif 000046
【請求項１４】
Ｃがベンゾチオフェンまたはベンゾフランである請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｂがメトキシであり；Ｃが２個のＣ１−４アルキル基で置換されたフェニルであり；前記Ｃ１−４アルキルが、１〜最大数の置換可能な位置でハロで置換されていても良い請求項１に記載の化合物。
【請求項１６】
ＢがＨＥＴであり；ＣがフェニルおよびＣ１−４アルキルで置換されたＨＥＴであり；前記Ｃ１−４アルキルが１〜最大数の置換可能な位置でハロで置換されていても良く；前記フェニルが、独立にハロ、１〜３個のハロ基で置換されていても良いＣ１−４アルキルからなる群から選択される１〜５個の置換基で置換されていても良い請求項１に記載の化合物。
【請求項１７】
Ｂが１，２，４−オキサジアゾールである請求項１６に記載の化合物。
【請求項１８】
Ｃが下記のものからなる群から選択される請求項１７に記載の化合物。
【化６】
2005515259.tif 000047
【請求項１９】
Ｃがチオフェンまたはフランである請求項１８に記載の化合物。
【請求項２０】
ｍ＝０であり、Ａが−ＣＯ２Ｈである請求項１に記載の化合物。
【請求項２１】
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３が水素である請求項２０に記載の化合物。
【請求項２２】
前記基−Ｂ−Ｃが４位で前記フェニル環に結合している請求項２に記載の化合物。
【請求項２３】
下記の表から選択される請求項１に記載の化合物。
【表１】
2005515259.tif 000048
2005515259.tif 000049
2005515259.tif 000050
2005515259.tif 000051
2005515259.tif 000052
2005515259.tif 000053
2005515259.tif 000054
【請求項２４】
下記式ＩＩによって表される化合物または該化合物の製薬上許容される塩もしくは水和物。
【化７】
2005515259.tif 000055
［式中、
ｎ＝０または１であり；
Ｒ３は、水素および１〜最大数の置換可能な位置で、独立にハロおよびヒドロキシからなる群から選択される置換基で置換されていても良いＣ１−４アルキルからなる群から選択され；
各Ｒ４は独立に、ハロ、Ｃ１−４アルキルおよびＣ１−３アルコキシからなる群から選択され；前記Ｃ１−４アルキルおよびＣ１−３アルコキシは、１〜最大数の置換可能な位置でハロで置換されていても良い。］
【請求項２５】
ｎが０である請求項２４に記載の化合物。
【請求項２６】
ｎが１である請求項２４に記載の化合物。
【請求項２７】
Ｒ３が水素である請求項２４に記載の化合物。
【請求項２８】
下記の表から選択される請求項２４に記載の化合物。
【表２】
2005515259.tif 000056
2005515259.tif 000057
【請求項２９】
下記式ＩＩＩによって表される化合物または該化合物の製薬上許容される塩もしくは水和物。
【化８】
2005515259.tif 000058
［式中、
ｎ＝０または１であり；
Ｒ３は、水素および１〜最大数の置換可能な位置で独立にハロおよびヒドロキシからなる群から選択される置換基で置換されていても良いＣ１−４アルキルからなる群から選択され；
各Ｒ４は独立に、ハロ、Ｃ１−４アルキルおよびＣ１−３アルコキシからなる群から選択され；前記Ｃ１−４アルキルおよびＣ１−３アルコキシは、１〜最大数の置換可能な位置でハロで置換されていても良い。］
【請求項３０】
ｎが０である請求項２９に記載の化合物。
【請求項３１】
ｎが１である請求項２９に記載の化合物。
【請求項３２】
Ｒ３が水素である請求項２９に記載の化合物。
【請求項３３】
下記の表から選択される請求項２９に記載の化合物。
【表３】
2005515259.tif 000059
【請求項３４】
処置を必要とする哺乳動物患者における免疫調節異常の治療方法において、前記患者に対して、前記免疫調節異常を治療する上で有効な量で請求項１に記載の化合物を投与する段階を有する方法。
【請求項３５】
前記免疫調節異常が、全身紅斑性狼瘡、慢性関節リウマチ、Ｉ型糖尿病、炎症性腸疾患、胆汁性肝硬変、ブドウ膜炎、多発性硬化症、クローン病、潰瘍性大腸炎、類天疱瘡、サルコイドーシス、乾癬、自己免疫筋肉炎、ヴェグナー肉芽腫、魚鱗癬、グレーブス眼症および喘息からなる群から選択される自己免疫疾患または慢性炎症性疾患である請求項３４に記載の化合物。
【請求項３６】
前記免疫調節異常が、骨髄もしくは臓器の移植片拒絶または移植片対宿主病である請求項３４に記載の化合物。
【請求項３７】
前記免疫調節異常が、臓器もしくは組織の移植、移植によって生じる移植片対宿主病、関節リウマチなどの自己免疫症候群、全身紅斑性狼瘡、橋本甲状腺炎、多発性硬化症、重症筋無力症、Ｉ型糖尿病、ブドウ膜炎、後部ブドウ膜炎、アレルギー性脳脊髄炎、糸球体腎炎、リウマチ熱および感染後糸球体腎炎などの感染後自己免疫疾患、炎症性および高増殖性皮膚疾患、乾癬、アトピー性皮膚炎、接触皮膚炎、湿疹性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、扁平苔癬、天疱瘡、類天疱瘡、表皮水疱症、蕁麻疹、血管浮腫、脈管炎、紅斑、皮膚好酸球増加症、紅斑性狼瘡、アクネ、円形脱毛症、角結膜炎、春季結膜炎、ベーチェット病に関連するブドウ膜炎、角膜炎、疱疹性角膜炎、円錐角膜、角膜上皮異栄養症、角膜白斑、眼天疱瘡、モーレン潰瘍、強膜炎、グレーブス眼症、フォークト−小柳−原田症候群、サルコイドーシス、花粉アレルギー、可逆的閉塞性気道疾患、気管支喘息、アレルギー性喘息、内因性喘息、外因性喘息、塵埃喘息、慢性もしくは難治性喘息、遅発性喘息および気道過敏症、気管支炎、胃潰瘍、虚血性疾患および血栓症によって生じる血管損傷、虚血性腸疾患、炎症性腸疾患、壊死性小腸大腸炎、熱傷に関連する腸病変、腹腔疾患、直腸炎、好酸球性胃腸炎、肥満細胞症、クローン病、潰瘍性大腸炎、片頭痛、鼻炎、湿疹、間質性腎炎、グッドパスチャー症候群、溶血尿毒症症候群、糖尿病性腎症、多発性筋炎、ギランバレー症候群、メニエール病、多発性神経炎、多発性神経炎、単発神経炎、神経根症、甲状腺機能亢進、バセドー病、純赤血球無形成症、無形成性貧血、形成不全性貧血、特発性血小板減少性紫斑病、自己免疫性溶血性貧血、無顆粒球症、悪性貧血、巨大赤芽球性貧血、赤血球形成不全、骨粗鬆症、サルコイドーシス、肺線維症、特発性間質性肺炎、皮膚筋炎、尋常性白斑、尋常魚鱗癬、光アレルギー性過敏、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、動脈硬化、アテローム性動脈硬化、大動脈炎症候群、結節性多発動脈炎、心筋症、強皮症、ヴェグナー肉芽腫、シェーグレン症候群、脂肪過多症、好酸球増加症性筋膜炎、歯肉，歯周組織，歯槽骨，歯のセメント質の病変、糸球体腎炎、脱毛防止もしくは毛髪萌芽の提供および／または毛髪発生および毛髪成長の促進による男性型脱毛症もしくは老人性脱毛、筋ジストロフィー、膿皮症およびセザール症候群、アジソン氏病、防腐、移植もしくは虚血疾患時に起こる臓器の虚血−再潅流損傷、内毒素ショック、偽膜性大腸炎、薬剤もしくは放射線照射によって生じる大腸炎、虚血性急性腎機能不全、慢性腎機能不全、肺−酸素もしくは薬剤によって生じる中毒症、肺癌、肺気腫、白内障、鉄沈着症、色素性網膜炎、老年斑点性変性、ガラス体瘢痕化、角膜アルカリやけど、多形紅斑性皮膚炎、線状ＩｇＡ水疱症およびセメント皮膚炎、歯肉炎、歯周炎、敗血症、膵炎、環境汚染，加齢，癌発生，癌の転移および高山病によって生じる疾患、ヒスタミンもしくはロイコトリエン−Ｃ４放出によって生じる疾患、ベーチェット病、自己免疫肝炎、原発性胆汁性肝硬変、硬化性胆管炎、部分肝臓切除術、急性肝臓壊死、毒物，ウィルス性肝炎，ショックもしくは無酸素によって生じる壊死、Ｂ型ウィルス肝炎、非Ａ非Ｂ肝炎、肝硬変、アルコール性肝硬変、肝不全、激症肝不全、遅発性肝不全、「慢性急性化」肝不全、化学療法効果の増強、サイトメガロウイルス感染、ＨＣＭＶ感染、ＡＩＤＳ、癌、老人性痴呆、外傷ならびに慢性細菌感染からなる群から選択される請求項３４に記載の方法。
【請求項３８】
前記免疫調節異常が多発性硬化症である請求項３４に記載の方法。
【請求項３９】
前記免疫調節異常が関節リウマチである請求項３４に記載の方法。
【請求項４０】
前記免疫調節異常が全身紅斑性狼瘡である請求項３４に記載の方法。
【請求項４１】
前記免疫調節異常が乾癬である請求項３４に記載の方法。
【請求項４２】
前記免疫調節異常が移植臓器もしくは組織の拒絶である請求項３４に記載の方法。
【請求項４３】
前記免疫調節異常が炎症性腸疾患である請求項３４に記載の方法。
【請求項４４】
前記免疫調節異常がリンパ起源の悪性腫瘍である請求項３３に記載の方法。
【請求項４５】
前記免疫調節異常が急性および慢性のリンパ球性白血病およびリンパ腫である請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
免疫抑制を必要とする哺乳動物患者での免疫系の抑制方法において、その患者に対して免疫抑制上有効量の請求項１に記載の化合物を投与する段階を有する方法。
【請求項４７】
製薬上許容される担体との組み合わせで請求項１に記載の化合物からなる医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｓ１Ｐ１／Ｅｄｇ１受容体作動薬であることから、二次リンパ組織においてリンパ球隔離を生じることによって免疫抑制活性を有する化合物に関する。本発明はまた、そのような化合物を含む医薬組成物および治療もしくは予防方法に関するものでもある。
【背景技術】
【０００２】
免疫抑制剤は、非常に多様な自己免疫および慢性炎症疾患において有用であることが明らかになっており、それには全身性紅斑性狼瘡、慢性関節リウマチ、Ｉ型糖尿病、炎症性腸疾患、胆汁性肝硬変、ブドウ膜炎、多発性硬化症ならびにクローン疾患、潰瘍性大腸炎、類天疱瘡、サルコイドーシス、乾癬、自己免疫性筋肉炎、ヴェグナー肉芽腫症、魚鱗癬、グレーブス眼症、アトピー性皮膚炎および喘息などの他の障害などがある。それらはまた、癌、リンパ腫および白血病用の化学療法投与法の一部として有用であることも明らかになっている。
【０００３】
それら各状態の基礎となる病因はかなり異なっている可能性があるが、それらには共通して、各種の自己抗体および／または自己反応性リンパ球の出現がある。そのような自己反応性は一部には、正常な免疫系が働く恒常性制御の喪失が原因である場合がある。同様に、骨髄移植または臓器移植後に、宿主リンパ球が外来組織抗原を認識し、抗体、サイトカインおよび細胞傷害性リンパ球などの細胞応答および体液応答の両方を生じ始めることで、移植片拒絶反応に至る。
【０００４】
自己免疫または拒絶プロセスの一つの最終結果は、炎症細胞およびそれらが放出する介在物質によって生じる組織破壊である。ＮＳＡＩＤ類などの抗炎症剤は主として、それらの介在物質の効果または分泌を遮断することで作用するが、疾患の免疫的基礎を変えることはない。他方、シクロホスファミドなどの細胞傷害剤は、正常な応答および自己免疫応答の両方を停止させるという非特異的な形で作用する。実際、そのような非特異的免疫抑制剤を投与した患者は、自己免疫疾患に対してと同様に、感染に負ける可能性がある。
【０００５】
シクロスポリンＡは、移植臓器の拒絶を予防するのに使用される。ＦＫ−５０６は、移植臓器拒絶、特に肝臓移植について承認された別の薬剤である。シクロスポリンＡおよびＦＫ−５０６は、身体の免疫系が自然の保護剤の膨大な兵器庫を動員して移植片の外来タンパク質を拒絶するのを阻害することで作用する。シクロスポリンＡは重度の乾癬の治療用に承認されており、アトピー性皮膚炎の治療について欧州の規制当局による承認を受けている。
【０００６】
移植片拒絶を遅延または抑制する上で有効であるが、シクロスポリンＡおよびＦＫ−５０６は、腎毒性、神経毒性および消化管の不快感などのいくつかの望ましくない副作用を引き起こすことが知られている。従って、これらの副作用がない免疫抑制剤が現在も開発すべきものとして残っており、非常に望ましいものであると考えられる。
【０００７】
免疫抑制化合物ＦＴＹ７２０は、現在臨床試験中のリンパ球隔離剤である。ＦＴＹ７２０は哺乳動物において代謝されて、スフィンゴシン１−リン酸受容体の強力な作動薬である化合物になる。スフィンゴシン１−リン酸受容体の作動は、リンパ球減少を起こすことなく、リンパ節およびパイエル板でのリンパ球（Ｔ細胞およびＢ細胞）の隔離を誘発する。そのような免疫抑制は、臓器移植後および自己免疫傷害の治療において拒絶を予防する上で望ましい。
【０００８】
スフィンゴシン１−リン酸は、造血細胞によって分泌され、保存され、活性化された血小板から放出される生理活性スフィンゴ脂質代謝物である（Yatomi, Y., T. Ohmori, G. Rile, F. Kazama, H. Okamoto, T. Sano, K. Satoh, S. Kume, G. Tigyi, Y. Igarashi, and Y. Ozaki. 2000. Blood. 96: 3431-8）。それは、Ｇ蛋白結合受容体のファミリーに対して作動薬として働いて、細胞の増殖、分化、生存および運動性を調節する（Fukushima, N., I. Ishii, J. J. A. Contos, J. A. Weiner, and J. Chun. 2001. Lysophospholipid receptors. Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 41: 507-34; Hla, T. , M. -J. Lee, N. Ancellin, J. H. Paik, and M. J. Kluk. 2001. Lysophospholipids-Receptor revelations. Science. 294: 1875-1878; Spiegel, S., and S. Milstien. 2000. Functions of a new family of sphingosine-1-phosphate receptors. Biochim. Biophys. Acta. 1484: 107-16; Pyne, S., and N. Pyne. 2000. Sphingosine 1-phosphate signalling via the endothelial differentiation gene family of G-protein coupled receptors. Pharm. & Therapeutics. 88: 115-131）。５種類のスフィンゴシン１−リン酸受容体が確認されており（Ｓ１Ｐ１、Ｓ１Ｐ２、Ｓ１Ｐ３、Ｓ１Ｐ４およびＳ１Ｐ５、内皮分化遺伝子Ｅｄｇ１、Ｅｄｇ５、Ｅｄｇ３、Ｅｄｇ６、Ｅｄｇ８とも称される）、それらは広い細胞および組織分布を有し、ヒトおよび齧歯類で良好に保存されている（表を参照）。Ｓ１Ｐ受容体への結合は、Ｇｑ−、Ｇｉ／ｏ、Ｇ１２−、Ｇ１３−およびＲｈｏ−依存性の経路による信号変換を誘発する。Ｓ１Ｐ１およびＳ１Ｐ３のリガンド誘発活性化が、血管形成、走化性およびＲａｃ−およびＲｈｏ−による接着結合組立を促進することが明らかになっているが（Lee, M. -J., S. Thangada, K. P. Claffey, N. Ancellin, C. H. Liu, M. Kluk, M. Volpi, R. I. Sha′afi, and T. Hla. 1999. Cell. 99: 301-12参照）、Ｓ１Ｐ２の作動作用が神経突起収縮を促進し（Van Brocklyn, J. R., Z. Tu, L. C. Edsall, R. R. Schmidt, and S. Spiegel. 1999. J. Biol. Chem. 274: 4626-4632参照）、Ｒａｃ活性化を遮断することで走化性を阻害する（Okamoto, H., N. Takuwa, T. Yokomizo, N. Sugimoto, S. Sakurada, H. Shigematsu, and Y. Takuwa. 2000. Mol. Cell. Biol. 20: 9247-9261参照）。Ｓ１Ｐ４は、造血細胞および組織に局在しているが（Graeler, M. H., G. Bernhardt, and M. Lipp. 1999. Curr. Top. Microbiol. Immunol. 246: 131-6）、Ｓ１Ｐ５は主としてリンパ組織である程度発現されるニューロン受容体である（Im, D. S. , C. E. Heise, N. Ancellin, B. F. O′Dowd, G. J. Shei, R. P. Heavens, M. R. Rigby, T. Hla, S. Mandala, G. McAllister, S. R. George, and K. R. Lynch. 2000. J. Biol. Cheer. 275: 14281-6参照）。スフィンゴシン１−リン酸の動物への投与は、末梢血リンパ球の二次リンパ組織への全身的隔離を誘発し、ＦＧＦ介在血管成長および分化を刺激するが（Ｌee, et al., supra参照）、治療薬としてのスフィンゴシン１−リン酸の用途を限定する心血管効果も有する（Sugiyama, A., N. N. Aye, Y. Yatomi, Y. Ozaki, and K. Hashimoto. 2000. Jpn. J. Pharmacol. 82: 338-342参照）。スフィンゴシン１−リン酸を用いて測定される心拍数および血圧の低下は、全てのＳ１Ｐ受容体に対するそれの非選択的で強力な作動薬活性に関連している。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、Ｓ１Ｐ３／Ｅｄｇ３受容体と比較して選択性を有するＳ１Ｐ１／Ｅｄｇ１受容体の作動薬である化合物を含む。Ｓ１Ｐ１／Ｅｄｇ１受容体選択的作動薬は、現行の治療法にまさる長所を有し、リンパ球隔離剤の治療の幅を広げ、比較的高い用量でより良好な耐容性を可能とすることから、単独療法としての効力を高めるものである。
【００１０】
免疫抑制剤の主要な用途は、骨髄、臓器および組織移植片拒絶を治療する点にあるが、そのような化合物の他の用途には、関節炎、特には関節リウマチ、インシュリンおよび非インシュリン依存型糖尿病、多発性硬化症、乾癬、炎症性腸疾患、クローン疾患、紅斑性狼瘡などの治療等がある。
【００１１】
そこで本発明は、先行技術の化合物より安全かつ有効な免疫抑制化合物を提供することに関するものである。上記および他の目的は、本明細書の記載から当業者には明らかであろう。
【００１２】
【表１】
2005515259.tif 000003
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明は、下記式Ｉの化合物ならびにその化合物の製薬上許容される塩および水和物を包含する。
【００１４】
【化１】
2005515259.tif 000004
【００１５】
前記化合物は、骨髄、臓器および組織移植片拒絶などの免疫が介在する疾患および状態を治療する上で有用である。医薬組成物および使用方法も含まれる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
本発明は、下記式Ｉによって表される化合物またはその化合物の製薬上許容される塩もしくは水和物を包含する。
【００１７】
【化２】
2005515259.tif 000005
式中、
Ａｒはフェニルまたはナフチルであり；
ｍ＝０または１であり；
ｎ＝０または１であり；
Ａは、−ＣＯ２Ｈ、−ＰＯ３Ｈ２、−ＰＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＰＯ（Ｃ１−３アルキル）ＯＨおよび１Ｈ−テトラゾール−５−イルからなる群から選択され；
Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立に、水素、ハロ、ヒドロキシ、−ＣＯ２Ｈおよび１〜最大数の置換可能な位置でハロによって置換されていても良いＣ１−４アルキルからなる群から選択され；
Ｒ３は、水素および１〜最大数の置換可能な位置でハロおよびヒドロキシからなる群から独立に選択される置換基で置換されていても良いＣ１−４アルキルからなる群から選択され；
各Ｒ４は独立に、ハロ、Ｃ１−４アルキルおよびＣ１−３アルコキシからなる群から選択され；そのＣ１−４アルキルおよびアルコキシは、１〜最大数の置換可能な位置でハロで置換されていても良く；
Ｃは、
（１）Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ１−６アルキルまたは−ＣＨＯＨ−Ｃ１−６アルキル（前記Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ１−６アルキルおよび−ＣＨＯＨ−Ｃ１−６アルキルは、フェニルで置換されていても良い）、および
（２）フェニルまたはＨＥＴ（それぞれ、独立にハロ、フェニル、Ｃ１−４アルキルおよびＣ１−４アルコキシからなる群から選択される１〜３個の置換基で置換されていても良く；前記Ｃ１−４アルキル基およびＣ１−４アルコキシ基は、１〜最大数の置換可能な位置で、独立にハロおよびヒドロキシから選択される置換基で置換されていても良く；前記フェニルは、独立にハロおよび１〜３個のハロ基で置換されていても良いＣ１−４アルキルからなる群から選択される１〜５個の基で置換されていても良い）
からなる群から選択され；あるいは
Ｃは非存在であり；
Ｃが非存在である場合、Ｂはフェニル、Ｃ５−１６アルキル、Ｃ５−１６アルケニル、Ｃ５−１６アルキニル、−ＣＨＯＨ−Ｃ４−１５アルキル、−ＣＨＯＨ−Ｃ４−１５アルケニル、−ＣＨＯＨ−Ｃ４−１５アルキニル、Ｃ４−１５アルコキシ、−Ｏ−Ｃ４−１５アルケニル、−Ｏ−Ｃ４−１５アルキニル、Ｃ４−１５アルキルチオ、−Ｓ−Ｃ４−１５アルケニル、−Ｓ−Ｃ４−１５アルキニル、−ＣＨ２−Ｃ３−１４アルコキシ、−ＣＨ２−Ｏ−Ｃ３−１４アルケニル、−ＣＨ２−Ｏ−Ｃ３−１４アルキニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ４−１５アルキル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ４−１５アルケニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ４−１５アルキニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ３−１４アルキル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ３−１４アルケニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ３−１４アルキニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ６）（Ｒ７）−Ｃ３−１４アルキル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ６）（Ｒ７）−Ｃ３−１４アルケニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ６）（Ｒ７）−Ｃ３−１４アルキニル、−Ｎ（Ｒ６）（Ｒ７）−Ｃ３−１４アルキル、−Ｎ（Ｒ６）（Ｒ７）−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ３−１４アルケニルおよび−Ｎ（Ｒ６）（Ｒ７）−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ３−１４アルキニルからなる群から選択され；
ＣがフェニルまたはＨＥＴである場合、ＢはＣ１−６アルキル、Ｃ１−５アルコキシ、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ１−５アルキル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ１−４アルキル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ６）（Ｒ７）−Ｃ１−４アルキル、
【００１８】
【化３】
2005515259.tif 000006
からなる群から選択され；
ＣがＣ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ１−６アルキルまたは−ＣＨＯＨ−Ｃ１−６アルキルである場合、Ｂはフェニルであり；
Ｒ６およびＲ７は独立に、水素、Ｃ１−９アルキルおよび（ＣＨ２）ｐ−フェニルからなる群から選択され；ｐは１〜５であり；フェニルは、独立にそれぞれ１〜３個のハロ基で置換されていても良いＣ１−３アルキルおよびＣ１−３アルコキシからなる群から選択される１〜３個の置換基で置換されていても良い。
【００１９】
本発明の１実施形態は、
Ａｒがフェニルであり；
基−Ｂ−Ｃが３位もしくは４位で前記フェニル環に結合しており；
ＣがフェニルまたはＨＥＴであり；それぞれが独立にハロ、フェニル、Ｃ１−４アルキルおよびＣ１−４アルコキシからなる群から選択される１〜３個の置換基で置換されていても良く；前記Ｃ１−４アルキル基およびＣ１−４アルコキシ基が１〜最大数の置換可能な位置で独立にハロおよびヒドロキシから選択される置換基で置換されていても良く；前記フェニルが、独立にハロおよび１〜３個のハロ基で置換されていても良いＣ１−４アルキルからなる群から選択される１〜５個の基で置換されていても良く；
あるいはＣは非存在であり；
Ｃが非存在である場合、ＢがＣ７−１２アルキル、Ｃ７−１２アルケニル、Ｃ７−１２アルキニル、Ｃ６−１１アルコキシ、−Ｏ−Ｃ６−１１アルケニル、−Ｏ−Ｃ６−１１アルキニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ６−１１アルキル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ６−１１アルケニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ６−１１アルキニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ５−１０アルキル、（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ５−１９アルケニルおよび−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ５−１０アルキニルからなる群から選択され；そしてＣは非存在であり；
ＣがフェニルまたはＨＥＴである場合、ＢはＣ１−５アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ１−４アルキル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ１−３アルキル、フェニルおよびＨＥＴからなる群から選択される式Ｉの化合物を含む。
【００２０】
本明細書に関して、基−Ｂ−Ｃが３位または４位で前記フェニル環に結合している場合、それは以下に示した位置を意味する。
【００２１】
【化４】
2005515259.tif 000007
【００２２】
本明細書に関して、ＣはＢ上の置換可能な位置で置換されていても良い。例えば、Ｂがメトキシであり、Ｃがチオフェンである場合、チオフェンはメトキシ基上の水素に置き換わっている。さらなる別形態を、下記の例に示してある。さらに、Ｂに関して示した結合箇所は、Ａｒ基に対するものである。例えば、Ｂが−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ６−１１アルキニルである場合、それはＢがＡｒ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ６−１１アルキニルのようにＡｒに結合していることを意味する。そしてＣは、Ｂ上のいずれか置換可能な位置で置換されていても良い。
【００２３】
本発明の１実施形態は、ＨＥＴが下記のものからなる群から選択される式Ｉの化合物を包含する。
【００２４】
【化５】
2005515259.tif 000008
【００２５】
別の実施形態は、ｍが０である式Ｉの化合物を包含する。
【００２６】
別の実施形態は、ｍが１である式Ｉの化合物を包含する。
【００２７】
別の実施形態は、ｎが０である式Ｉの化合物を包含する。
【００２８】
別の実施形態は、ｎが１である式Ｉの化合物を包含する。
【００２９】
別の実施形態は、ＢがＣ７−１２アルキル、Ｃ７−１２アルケニル、Ｃ７−１２アルキニル、Ｃ６−１１アルコキシ、−Ｏ−Ｃ６−１１アルケニル、−Ｏ−Ｃ６−１１アルキニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ６−１１アルキル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ６−１１アルケニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ６−１１アルキニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ５−１０アルキル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ５−１９アルケニルおよび−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ５−１０アルキニルからなる群から選択され；Ｃが非存在である式Ｉの化合物を包含する。
【００３０】
本発明の別の実施形態は、Ｂがメトキシであり；Ｃが、フェニルおよびＣ１−４アルキルで置換されたＨＥＴであり；前記Ｃ１−４アルキルが、１〜最大数の置換可能位置でハロによって置換されていても良く；前記フェニルが、ハロおよび１〜３個のハロ基で置換されていても良いＣ１−４アルキルからなる群から独立に選択される１〜５個の置換基で置換されていても良い式Ｉの化合物を包含する。この実施形態には、Ｃが下記のものからなる群から選択される式Ｉの化合物が包含される。
【００３１】
【化６】
2005515259.tif 000009
Ｃがチオフェンまたはフランである式Ｉの化合物も包含される。
【００３２】
本発明の別の実施形態は、Ｂがメトキシであり、ＣがＨＥＴである式Ｉの化合物を包含する。この実施形態には、Ｃが下記のものからなる群から選択される式Ｉの化合物が包含される。
【００３３】
【化７】
2005515259.tif 000010
この実施形態には、Ｃがベンゾチオフェンまたはベンゾフランである式Ｉの化合物が包含される。
【００３４】
本発明の別の実施形態は、Ｂがメトキシであり；Ｃが２個のＣ１−４アルキル基で置換されたフェニルであり；前記Ｃ１−４アルキルが、１〜最大数の置換可能な位置でハロで置換されていても良い式Ｉの化合物を包含する。
【００３５】
本発明の別の実施形態は、ＢがＨＥＴであり；ＣがフェニルおよびＣ１−４アルキルで置換されたＨＥＴであり；前記Ｃ１−４アルキルが１〜最大数の置換可能な位置でハロで置換されていても良く；前記フェニルが、独立にハロ、１〜３個のハロ基で置換されていても良いＣ１−４アルキルからなる群から選択される１〜５個の置換基で置換されていても良い請求項１に記載の化合物を包含する。この実施形態には、Ｂが１，２，４−オキサジアゾールである式Ｉの化合物が包含される。この実施形態には、Ｂが１，２，４−オキサジアゾールであり；Ｃが、下記のものからなる群から選択される式Ｉの化合物が包含される。
【００３６】
【化８】
2005515259.tif 000011
この実施形態には、Ｂが１，２，４−オキサジアゾールであり；Ｃがチオフェンまたはフランである式Ｉの化合物も包含される。
【００３７】
本発明の別の実施形態には、ｍ＝０であり、Ａが−ＣＯ２Ｈである式Ｉの化合物が包含される。この実施形態には、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３が水素である式Ｉの化合物が包含される。
【００３８】
本発明の別の実施形態には、基−Ｂ−Ｃが４位で前記フェニル環に結合している式Ｉの化合物が包含される。
【００３９】
本発明には、下記式ＩＩによって表される化合物またはその化合物の製薬上許容される塩もしくは水和物も包含される。
【００４０】
【化９】
2005515259.tif 000012
式中、
ｎ＝０または１であり；
Ｒ３は、水素および１〜最大数の置換可能な位置で、独立にハロおよびヒドロキシからなる群から選択される置換基で置換されていても良いＣ１−４アルキルからなる群から選択され；
各Ｒ４は独立に、ハロ、Ｃ１−４アルキルおよびＣ１−３アルコキシからなる群から選択され；前記Ｃ１−４アルキルおよびＣ１−３アルコキシは、１〜最大数の置換可能な位置でハロで置換されていても良い。
【００４１】
本発明の別の実施形態には、ｎが０である式ＩＩの化合物が包含される。
【００４２】
本発明の別の実施形態には、ｎが１である式ＩＩの化合物が包含される。
【００４３】
本発明の別の実施形態には、Ｒ３が水素である式ＩＩの化合物が包含される。
【００４４】
本発明にはまた、下記式ＩＩＩによって表される化合物またはその化合物の製薬上許容される塩もしくは水和物も包含される。
【００４５】
【化１０】
2005515259.tif 000013
式中、
ｎ＝０または１であり；
Ｒ３は、水素および１〜最大数の置換可能な位置で独立にハロおよびヒドロキシからなる群から選択される置換基で置換されていても良いＣ１−４アルキルからなる群から選択され；
各Ｒ４は独立に、ハロ、Ｃ１−４アルキルおよびＣ１−３アルコキシからなる群から選択され；前記Ｃ１−４アルキルおよびＣ１−３アルコキシは、１〜最大数の置換可能な位置でハロで置換されていても良い。
【００４６】
本発明の別の実施形態には、ｎが０である式ＩＩＩの化合物が包含される。
【００４７】
本発明の別の実施形態には、ｎが１である式ＩＩＩの化合物が包含される。
【００４８】
本発明の別の実施形態には、Ｒ３が水素である式ＩＩＩの化合物が包含される。
【００４９】
本発明には、処置を必要とする哺乳動物患者における免疫調節異常の治療方法において、前記患者に対して、前記免疫調節異常を治療する上で有効な量で式Ｉの化合物を投与する段階を有する方法も包含される。
【００５０】
この実施形態には、前記免疫調節異常が、全身紅斑性狼瘡、慢性関節リウマチ、Ｉ型糖尿病、炎症性腸疾患、胆汁性肝硬変、ブドウ膜炎、多発性硬化症、クローン病、潰瘍性大腸炎、類天疱瘡、サルコイドーシス、乾癬、自己免疫筋肉炎、ヴェグナー肉芽腫、魚鱗癬、グレーブス眼症および喘息からなる群から選択される自己免疫疾患または慢性炎症性疾患である上記方法が包含される。
【００５１】
この実施形態には、前記免疫調節異常が、骨髄もしくは臓器の移植片拒絶または移植片対宿主病である上記方法が包含される。
【００５２】
この実施形態には、前記免疫調節異常が、臓器もしくは組織の移植、移植によって生じる移植片対宿主病、関節リウマチなどの自己免疫症候群、全身紅斑性狼瘡、橋本甲状腺炎、多発性硬化症、重症筋無力症、Ｉ型糖尿病、ブドウ膜炎、後部ブドウ膜炎、アレルギー性脳脊髄炎、糸球体腎炎、リウマチ熱および感染後糸球体腎炎などの感染後自己免疫疾患、炎症性および高増殖性皮膚疾患、乾癬、アトピー性皮膚炎、接触皮膚炎、湿疹性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、扁平苔癬、天疱瘡、類天疱瘡、表皮水疱症、蕁麻疹、血管浮腫、脈管炎、紅斑、皮膚好酸球増加症、紅斑性狼瘡、アクネ、円形脱毛症、角結膜炎、春季結膜炎、ベーチェット病に関連するブドウ膜炎、角膜炎、疱疹性角膜炎、円錐角膜、角膜上皮異栄養症、角膜白斑、眼天疱瘡、モーレン潰瘍、強膜炎、グレーブス眼症、フォークト−小柳−原田症候群、サルコイドーシス、花粉アレルギー、可逆的閉塞性気道疾患、気管支喘息、アレルギー性喘息、内因性喘息、外因性喘息、塵埃喘息、慢性もしくは難治性喘息、遅発性喘息および気道過敏症、気管支炎、胃潰瘍、虚血性疾患および血栓症によって生じる血管損傷、虚血性腸疾患、炎症性腸疾患、壊死性小腸大腸炎、熱傷に関連する腸病変、腹腔疾患、直腸炎、好酸球性胃腸炎、肥満細胞症、クローン病、潰瘍性大腸炎、片頭痛、鼻炎、湿疹、間質性腎炎、グッドパスチャー症候群、溶血尿毒症症候群、糖尿病性腎症、多発性筋炎、ギランバレー症候群、メニエール病、多発性神経炎、多発性神経炎、単発神経炎、神経根症、甲状腺機能亢進、バセドー病、純赤血球無形成症、無形成性貧血、形成不全性貧血、特発性血小板減少性紫斑病、自己免疫性溶血性貧血、無顆粒球症、悪性貧血、巨大赤芽球性貧血、赤血球形成不全、骨粗鬆症、サルコイドーシス、肺線維症、特発性間質性肺炎、皮膚筋炎、尋常性白斑、尋常魚鱗癬、光アレルギー性過敏、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、動脈硬化、アテローム性動脈硬化、大動脈炎症候群、結節性多発動脈炎、心筋症、強皮症、ヴェグナー肉芽腫、シェーグレン症候群、脂肪過多症、好酸球増加症性筋膜炎、歯肉，歯周組織，歯槽骨，歯のセメント質の病変、糸球体腎炎、脱毛防止もしくは毛髪萌芽の提供および／または毛髪発生および毛髪成長の促進による男性型脱毛症もしくは老人性脱毛、筋ジストロフィー、膿皮症およびセザール症候群、アジソン氏病、防腐、移植もしくは虚血疾患時に起こる臓器の虚血−再潅流損傷、内毒素ショック、偽膜性大腸炎、薬剤もしくは放射線照射によって生じる大腸炎、虚血性急性腎機能不全、慢性腎機能不全、肺−酸素もしくは薬剤によって生じる中毒症、肺癌、肺気腫、白内障、鉄沈着症、色素性網膜炎、老年斑点性変性、ガラス体（vitreal）瘢痕化、角膜アルカリやけど、多形紅斑性皮膚炎、線状ＩｇＡ水疱症およびセメント皮膚炎、歯肉炎、歯周炎、敗血症、膵炎、環境汚染，加齢，癌発生，癌の転移および高山病によって生じる疾患、ヒスタミンもしくはロイコトリエン−Ｃ４放出によって生じる疾患、ベーチェット病、自己免疫肝炎、原発性胆汁性肝硬変、硬化性胆管炎、部分肝臓切除術、急性肝臓壊死、毒物，ウィルス性肝炎，ショックもしくは無酸素によって生じる壊死、Ｂ型ウィルス肝炎、非Ａ非Ｂ肝炎、肝硬変、アルコール性肝��変、肝不全、激症肝不全、遅発性肝不全、「慢性急性化（acute-on-chronic）」肝不全、化学療法効果の増強、サイトメガロウイルス感染、ＨＣＭＶ感染、ＡＩＤＳ、癌、老人性痴呆、外傷ならびに慢性細菌感染からなる群から選択される上記方法も包含される。
【００５３】
本実施形態には、前記免疫調節異常が多発性硬化症である上記方法も包含される。
【００５４】
本実施形態には、前記免疫調節異常が関節リウマチである上記方法も包含される。
【００５５】
本実施形態には、前記免疫調節異常が全身紅斑性狼瘡である上記方法も包含される。
【００５６】
本実施形態には、前記免疫調節異常が乾癬である上記方法も包含される。
【００５７】
本実施形態には、前記免疫調節異常が移植臓器もしくは組織の拒絶である上記方法も包含される。
【００５８】
本実施形態には、前記免疫調節異常が炎症性腸疾患である上記方法も包含される。
【００５９】
本実施形態には、前記免疫調節異常が急性および慢性のリンパ球性白血病およびリンパ腫などのリンパを起源とする悪性腫瘍である上記方法も包含される。
【００６０】
本発明には、免疫抑制を必要とする哺乳動物患者での免疫系の抑制方法において、その患者に対して免疫抑制上有効量の式Ｉの化合物を投与する段階を有する方法も包含される。
【００６１】
本発明には、製薬上許容される担体との組み合わせで式Ｉの化合物からなる医薬組成物も包含される。
【００６２】
本発明の例として下記の化合物が挙げられる。
【００６３】
【表２】
2005515259.tif 000014
2005515259.tif 000015
2005515259.tif 000016
2005515259.tif 000017
2005515259.tif 000018
2005515259.tif 000019
2005515259.tif 000020
2005515259.tif 000021
2005515259.tif 000022
2005515259.tif 000023
【００６４】
別段の断りがない限り、下記の定義を用いて本発明を説明する。
【００６５】
「ハロゲン」または「ハロ」という用語は、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒおよびＩを含む。
【００６６】
「アルキル」という用語は、指定数の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐の構造およびそれらの組み合わせを意味する。そこで例えば、Ｃ１−６アルキルにはメチル、エチル、プロピル、２−プロピル、ｓ−およびｔ−ブチル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、１，１−ジメチルエチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルなどがある。
【００６７】
「アルコキシ」という用語は、指定数の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状の形状のアルコキシ基を意味する。例えばＣ１−６アルコキシには、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシなどがある。
【００６８】
「アルキルチオ」という用語は、直鎖、分岐または環状の形状の指定数の炭素原子を有するアルキルチオ基を意味する。、例えばＣ１−６アルキルチオには、メチルチオ、プロピルチオ、イソプロピルチオなどがある。
【００６９】
「アルケニル」という用語は、少なくとも１個の炭素−炭素二重結合を有し、水素がさらに別の炭素−炭素二重結合によって置き換わっていても良い指定数の炭素原子の直鎖もしくは分岐の構造およびそれらの組み合わせを意味する。例えばＣ２−６アルケニルには、エテニル、プロペニル、１−メチルエテニル、ブテニルなどがある。
【００７０】
「アルキニル」という用語は、少なくとも１個の炭素−炭素三重結合を有する指定数の炭素原子の直鎖もしくは分岐の構造およびそれらの組み合わせを意味する。例えばＣ３−６アルキニルには、プロペニル、１−メチルエテニル、ブテニルなどがある。
【００７１】
「シクロアルキル」という用語は、直鎖もしくは分岐の構造を組み合わせても良い指定数の炭素原子の単環式、二環式もしくは三環式の構造を意味する。シクロアルキル基の例には、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘプチル、アダマンチル、シクロドデシルメチル、２−エチル−１−ビシクロ［４．４．０］デシルなどがある。
【００７２】
「アリール」という用語は、単環式もしくは二環式芳香環系と定義され、例えばフェニル、ナフチルなどを含む。
【００７３】
「アラルキル」という用語は、アルキル水素原子の一つに代えて上記で定義のアリール基を有する１〜６個の炭素原子の上記で定義のアルキル基を意味し、例えばベンジルなどがある。
【００７４】
「アリールオキシ」という用語は、酸素原子によって分子に結合している上記で定義のアリール基（アリール−Ｏ）を意味し、例えば、フェノキシ、ナフトキシなどがある。
【００７５】
「アラルコキシ」という用語は、酸素原子によって分子に結合した上記で定義のアラルキル基（アラルキル−Ｏ）を意味し、例えばベンジルオキシなどがある。
【００７６】
「アリールチオ」という用語は、硫黄原子によって分子に結合した上記で定義のアリール基（アリール−Ｓ）を意味し、例えばチオフェニオキシ（thiophenyoxy）、チオナフトキシなどがある。
【００７７】
「アロイル」という用語は、カルボニル基によって分子に結合した上記で定義のアリール基（アリール−Ｃ（Ｏ）−）を意味し、例えば、ベンゾイル、ナフトイルなどがある。
【００７８】
「アロイルオキシ」という用語は、酸素原子によって分子に結合した上記で定義のアロイル基（アロイル−Ｏ）を意味し、例えばベンゾイルオキシまたはベンゾキシ、ナフトイルオキシなどがある。
【００７９】
「ＨＥＴ」という用語は、Ｏ、ＳおよびＮから選択される１〜５個のヘテロ原子を有し、１〜２個のオキソ基で置換されていても良い５〜１０員の芳香族、部分芳香族または非芳香族の単環式もしくは二環式環と定義される。好ましくは「ＨＥＴ」は、例えばピリジン、ピリミジン、ピリダジン、フラン、チオフェン、チアゾール、オキサゾール、イソオキサゾールなどのＯ、ＳおよびＮから選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５員もしくは６員の芳香族もしくは非芳香族単環式環であり、あるいは複素環は、例えば、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、インドール、ピラノピロール、ベンゾピラン、キノリン、ベンゾシクロヘキシル、ナフチリジンなどのＯ、ＳおよびＮから選択される１〜３個のヘテロ原子を有する９員もしくは１０員の芳香族または部分芳香族二環式環である。「ＨＥＴ」はまた、ベンズイミダゾリル、ベンゾフラニル、ベンゾピラゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾチオフェニル、ベンゾオキサゾリル、カルバゾリル、カルボリニル、シンノリニル、フラニル、イミダゾリル、インドリニル、インドリル、インドラジニル、インダゾリル、イソベンゾフラニル、イソインドリル、イソキノリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、ナフチリジニル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、ピラジニル、ピラゾリル、ピリドピリジニル、ピリダジニル、ピリジル、ピリミジル、ピロリル、キナゾリニル、キノリル、キノキザリニル、チアジアゾリル、チアゾリル、チエニル、トリアゾリル、アゼチジニル、１，４−ジオキサニル、ヘキサヒドロアゼピニル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピロリジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、ジヒドロベンズイミダゾリル、ジヒドロベンゾフラニル、ジヒドロベンゾチオフェニル、ジヒドロベンゾオキサゾリル、ジヒドロフラニル、ジヒドロイミダゾリル、ジヒドロインドリル、ジヒドロイソオキサゾリル、ジヒドロイソチアゾリル、ジヒドロオキサジアゾリル、ジヒドロオキサゾリル、ジヒドロピラジニル、ジヒドロピラゾリル、ジヒドロピリジニル、ジヒドロピリミジニル、ジヒドロピロリル、ジヒドロキノリニル、ジヒドロテトラゾリル、ジヒドロチアジアゾリル、ジヒドロチアゾリル、ジヒドロチエニル、ジヒドロトリアゾリル、ジヒドロアゼチジニル、メチレンジオキシベンゾイル、テトラヒドロフラニルおよびテトラヒドロチエニルを含むものである。
【００８０】
ＨＥＴの好ましい群は下記のものである。
【００８１】
【化１１】
2005515259.tif 000024
【００８２】
「治療」という用語は、患者に処置を行って、患者の疾患または状態の徴候および症状を改善することだけでなく、無症候の患者を予防的に処置して、疾患または状態の発症もしくは進行を防止することをも包含する。「治療上有効量」という用語は、研究者、獣医、医師その他の臨床関係者が追求する組織、系、動物またはヒトの生理的もしくは医学的応答を誘発する薬剤または医薬の量を意味する。その用語は、研究者、獣医、医師その他の臨床関係者が追求する組織、系、動物またはヒトで予防すべき生理的もしくは医学的事象の発生を防止またはリスク低下させる医薬の量をも包含する。
【００８３】
本明細書に記載の本発明は、製薬上許容される塩および水和物を含むものである。製薬上許容される塩には、金属（無機）塩および有機塩の両方があり、そのリストがレミングトンの著作にある（Remington′s Pharmaceutical Sciences, 17th Edition, pg.1418 (1985)）。適切な塩の形態は、物理的および化学的安定性、流動性、含水性および溶解性に基づいて選択されることは、当業者には公知である。当業者には明らかなように、製薬上許容される塩には、塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩、二リン酸塩、臭化水素酸塩および硝酸塩などの無機酸の塩、あるいはリンゴ酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩もしくはパモ酸塩、サリチル酸塩およびステアリン酸塩などの有機酸の塩などがあるが、これらに限定されるものではない。同様に製薬上許容されるカチオンには、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アルミニウム、リチウムおよびアンモニウム（特に、２級アミンとのアンモニウム塩）などがあるが、これらに限定されるものではない。上記で記載の理由で好ましい本発明の塩には、カリウム塩、ナトリウム塩、カルシウム塩およびアンモニウム塩などがある。本発明の範囲には、式Ｉの化合物の結晶型、水和物および溶媒和物も含まれる。
【００８４】
本明細書に関して、「製薬上許容される水和物」とは、１以上の水分子によって結晶化して水和型を形成する本発明の化合物を意味する。
【００８５】
本発明はまた、１以上の立体異性体の形態、実質的に純粋な形態、または立体異性体の混合物の形態で式Ｉの範囲に包含される化合物をも含むものである。そのような異性体はいずれも、本発明の範囲に包含される。
【００８６】
Ｓ１Ｐ１／Ｅｄｇ１作動薬活性があることで本発明の化合物は、自己免疫または慢性炎症性疾患の治療または予防に有用な免疫調節剤である。本発明の化合物は、骨髄、臓器もしくは移植片拒絶、全身紅斑性狼瘡、慢性関節リウマチ、Ｉ型糖尿病、炎症性腸疾患、胆汁性肝硬変、ブドウ膜炎、多発性硬化症、クローン病、潰瘍性大腸炎、類天疱瘡、サルコイドーシス、乾癬、自己免疫筋肉炎、ヴェグナー肉芽腫、魚鱗癬、グレーブス眼症および喘息などの自己免疫および慢性炎症性疾患での場合のように、免疫抑制が望ましい場合において免疫系を抑制する上で有用である。
【００８７】
より詳細には本発明の化合物は、臓器もしくは組織の移植、移植によって生じる移植片対宿主病、関節リウマチなどの自己免疫症候群、全身紅斑性狼瘡、橋本甲状腺炎、多発性硬化症、重症筋無力症、Ｉ型糖尿病、ブドウ膜炎、後部ブドウ膜炎、アレルギー性脳脊髄炎、糸球体腎炎、リウマチ熱および感染後糸球体腎炎などの感染後自己免疫疾患、炎症性および高増殖性皮膚疾患、乾癬、アトピー性皮膚炎、接触皮膚炎、湿疹性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、扁平苔癬、天疱瘡、類天疱瘡、表皮水疱症、蕁麻疹、血管浮腫、脈管炎、紅斑、皮膚好酸球増加症、紅斑性狼瘡、アクネ、円形脱毛症、角結膜炎、春季結膜炎、ベーチェット病に関連するブドウ膜炎、角膜炎、疱疹性角膜炎、円錐角膜、角膜上皮異栄養症、角膜白斑、眼天疱瘡、モーレン潰瘍、強膜炎、グレーブス眼症、フォークト−小柳−原田症候群、サルコイドーシス、花粉アレルギー、可逆的閉塞性気道疾患、気管支喘息、アレルギー性喘息、内因性喘息、外因性喘息、塵埃喘息、慢性もしくは難治性喘息、遅発性喘息および気道過敏症、気管支炎、胃潰瘍、虚血性疾患および血栓症によって生じる血管損傷、虚血性腸疾患、炎症性腸疾患、壊死性小腸大腸炎、熱傷に関連する腸病変、腹腔疾患、直腸炎、好酸球性胃腸炎、肥満細胞症、クローン病、潰瘍性大腸炎、片頭痛、鼻炎、湿疹、間質性腎炎、グッドパスチャー症候群、溶血尿毒症症候群、糖尿病性腎症、多発性筋炎、ギランバレー症候群、メニエール病、多発性神経炎、多発性神経炎、単発神経炎、神経根症、甲状腺機能亢進、バセドー病、純赤血球無形成症、無形成性貧血、形成不全性貧血、特発性血小板減少性紫斑病、自己免疫性溶血性貧血、無顆粒球症、悪性貧血、巨大赤芽球性貧血、赤血球形成不全、骨粗鬆症、サルコイドーシス、肺線維症、特発性間質性肺炎、皮膚筋炎、尋常性白斑、尋常魚鱗癬、光アレルギー性過敏、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、動脈硬化、アテローム性動脈硬化、大動脈炎症候群、結節性多発動脈炎、心筋症、強皮症、ヴェグナー肉芽腫、シェーグレン症候群、脂肪過多症、好酸球増加症性筋膜炎、歯肉，歯周組織，歯槽骨，歯のセメント質の病変、糸球体腎炎、脱毛防止もしくは毛髪萌芽の提供および／または毛髪発生および毛髪成長の促進による男性型脱毛症もしくは老人性脱毛、筋ジストロフィー、膿皮症およびセザール症候群、アジソン氏病、防腐、移植もしくは虚血疾患時に起こる臓器の虚血−再潅流損傷、内毒素ショック、偽膜性大腸炎、薬剤もしくは放射線照射によって生じる大腸炎、虚血性急性腎機能不全、慢性腎機能不全、肺−酸素もしくは薬剤によって生じる中毒症、肺癌、肺気腫、白内障、鉄沈着症、色素性網膜炎、老年斑点性変性、ガラス体（vitreal）瘢痕化、角膜アルカリやけど、多形紅斑性皮膚炎、線状ＩｇＡ水疱症およびセメント皮膚炎、歯肉炎、歯周炎、敗血症、膵炎、環境汚染，加齢，癌発生，癌の転移および高山病によって生じる疾患、ヒスタミンもしくはロイコトリエン−Ｃ４放出によって生じる疾患、ベーチェット病、自己免疫肝炎、原発性胆汁性肝硬変、硬化性胆管炎、部分肝臓切除術、急性肝臓壊死、毒物，ウィルス性肝炎，ショックもしくは無酸素によって生じる壊死、Ｂ型ウィルス肝炎、非Ａ非Ｂ肝炎、肝硬変、アルコール性肝硬変、肝��全、激症肝不全、遅発性肝不全、「慢性急性化（acute-on-chronic）」肝不全、化学療法効果の増強、サイトメガロウイルス感染、ＨＣＭＶ感染、ＡＩＤＳ、癌、老人性痴呆、外傷ならびに慢性細菌感染からなる群から選択される疾患または障害を治療または予防する上で有用である。
【００８８】
本発明の実施形態には、処置を必要とする哺乳動物患者での臓器もしくは組織の移植に対する抵抗または移植拒絶を予防または治療する方法において、治療上有効量の式Ｉの化合物を投与する段階を有する方法もある。
【００８９】
処置を必要とする哺乳動物患者で免疫系を抑制する方法において、その患者に対して免疫系を抑制する量の式Ｉの化合物を投与する段階を含む方法が、さらに別の実施形態である。
【００９０】
特に詳細には本明細書に記載の方法は、骨髄もしくは臓器移植片拒絶の治療または予防方法において、そのような治療または予防を必要とする哺乳動物患者に対して、骨髄もしくは臓器移植片拒絶の治療または予防において有効な量で式Ｉの化合物またはそれの製薬上許容される塩もしくは水和物を投与する段階からなる方法を包含する。
【００９１】
さらに、本発明の化合物の好ましい群は、Ｓ１Ｐ３／Ｅｄｇ３受容体と比較して選択性を有するＳ１Ｐ１／Ｅｄｇ１受容体の作動薬である。Ｅｄｇ１選択的作動薬は、現行の治療法に勝る利点を有し、リンパ球隔離剤の治療の幅を広げ、比較的高い用量でより良好な耐容性を可能とすることから、単独療法としての効力を高めるものである。下記の化合物が、Ｓ１ＰＲ３／Ｅｄｇ３受容体と比較して、３５Ｓ−ＧＴＰγＳ結合アッセイで評価されるＳ１Ｐ１／Ｅｄｇ１受容体におけるＥＣ５０値のＳ１Ｐ３／Ｅｄｇ３受容体におけるＥＣ５０値に対する比によって測定される値として少なくとも２０倍のＳ１Ｐ１／Ｅｄｇ１受容体に対する選択性を有し、３５Ｓ−ＧＴＰγＳ結合アッセイによって評価されるＳ１Ｐ１／Ｅｄｇ１受容体への結合に関するＥＣ５０が１００ｎＭ以下である。
【００９２】
【表３】
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【００９３】
本発明はまた、製薬上許容される担体および式Ｉの化合物またはそれの製薬上許容される塩もしくは水和物を含む医薬組成物をも包含する。その製剤の好ましい実施形態は、第２の免疫抑制剤も含まれているものである。そのような第２の免疫抑制剤の例には、アザチオプリン、ブレキナー（brequinar）ナトリウム、デオキシスペルグアリン（deoxyspergualin）、ミザリビン（mizaribine）、マイコフェノール酸モルホリノエステル、シクロスポリン、ＦＫ−５０６、ラパマイシンおよびＦＴＹ７２０があるが、これらに限定されるものではない。
【００９４】
塩および水和物を含む本発明の化合物は、骨髄移植物、外来臓器移植物の拒絶および／または関連する苦痛、疾患および病気の予防を含めた自己免疫疾患の治療において有用である。
【００９５】
本発明の化合物は、温血動物の身体における作用部位と有効成分化合物との接触を行うあらゆる手段によって投与することができる。例えば投与は、経口、局所（経皮など）、眼球、口腔内、経鼻、吸入、膣、直腸、大槽内および非経口投与であることができる。本明細書で使用される「非経口」という用語は、皮下、静脈、筋肉、関節内の注射もしくは注入、胸骨内および腹腔内投与などの投与形態を指す。
【００９６】
前記化合物は、個々の治療薬としてあるいは併用治療薬での医薬と組み合わせて使用するのに利用可能な従来の手段によって投与することができる。その化合物は単独で投与することができるが、通常は選択される投与経路および標準的な医薬上の実務に基づいて選択される医薬担体とともに投与される。
【００９７】
投与される用量は、被投与者の年齢、健康状態および体重、疾患の程度、行っている場合には併用治療の種類、投与回数および所望の効果の性質によって決まる。通常、有効成分化合物の１日用量は約０．１〜２０００ｍｇ／日である。通常では、１以上の用途において１〜１００ｍｇ／日が所望の結果を得る上で効果的である。その用量は、自己免疫疾患の治療、外来臓器移植物の拒絶および／または関連する苦痛、疾患および病気の予防に有効な量である。
【００９８】
前記有効成分は、カプセル、錠剤、トローチ、糖衣丸、粒剤および粉剤などの固体製剤で、あるいはエリキシル剤、シロップ、乳濁液、分散液および懸濁液などの液体製剤で経口投与することができる。有効成分はまた、分散液、懸濁液または液剤などの無菌液体製剤の形態で非経口投与することもできる。有効成分を投与するのにやはり用いることができる他の製剤には、軟膏、クリーム、滴剤、局所投与用の経皮貼付剤もしくは粉剤として、眼科溶液または懸濁液の形態、すなわち眼球投与用の点眼剤として、吸入もしくは経鼻投与用のエアロゾル噴霧剤もしくは粉末組成物として、あるいは直腸投与もしくは膣投与用のクリーム、軟膏、噴霧剤もしくは坐剤としてのものがある。
【００９９】
ゼラチンカプセルは、有効成分ならびに乳糖、デンプン、セルロース誘導体、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸などの粉末担体を含む。同様の希釈剤を用いて、圧縮錠を製造することができる。錠剤およびカプセルのいずれも、徐放剤として製造して、長時間にわたる医薬品の連続放出を行うことができる。圧縮錠は、糖コーティングまたは薄膜コーティングを施して、不快な味覚を隠し、雰囲気から錠剤を保護したり、あるいは消化管での選択的崩壊のために腸溶コーティングすることができる。
【０１００】
経口投与用の液体製剤は、着色剤および香味剤を含んで、患者による許容度を高めることができる。
【０１０１】
通常、水、好適なオイル、生理食塩水、水性ブドウ糖（グルコース）および関連する糖溶液ならびにプロピレングリコールもしくはポリエチレングリコール類などのグリコール類が、非経口液剤に好適な担体である。非経口投与用の液剤は好ましくは、有効成分の水溶性塩、好適な安定剤、および必要に応じて緩衝物質を含む。単独または組み合わせでの重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムもしくはアスコルビン酸などの酸化防止剤が、好適な安定剤である。クエン酸およびそれの塩ならびにナトリウムＥＤＴＡも使用される。さらに非経口溶液は、塩化ベンザルコニウム、メチルもしくはプロピルパラベンおよびクロロブタノールなどの保存剤を含むことができる。
【０１０２】
好適な医薬担体は、当該分野での標準的な参考文献であるレミングトンの著作（Remington′s Pharmaceutical Sciences, A. Osol）に記載されている。
【０１０３】
吸入による投与の場合、本発明の化合物は簡便には、加圧パックまたはネブライザーからのエアロゾル噴霧剤の形態で投与することができる。その化合物は、製剤可能な粉剤として投与することもでき、その粉末組成物を通気粉剤吸入装置の助けを借りて吸入することができる。吸入に好ましい投与系は、フルオロカーボン類または炭化水素などの好適な推進剤中の式Ｉの化合物の懸濁液もしくは溶液として製剤することができる計量吸入（ＭＤＩ）エアロゾルである。
【０１０４】
眼球投与の場合、適切な眼科媒体中の式Ｉの化合物の適切な重量パーセントの溶液もしくは懸濁液を用いて眼科製剤を調製して、その化合物が眼球の角膜領域および内部領域を透過できるだけの期間にわたり、その化合物が眼球表面と接触状態に維持されるようにすることができる。
【０１０５】
本発明の化合物の投与に有用な医薬製剤は、下記のように示すことができる。
【０１０６】
カプセル
標準的な２ピース硬ゼラチンカプセルそれぞれに粉末状の有効成分１００ｍｇ、乳糖１５０ｍｇ、セルロース５０ｍｇおよびステアリン酸マグネシウム６ｍｇを充填することで、多数の単位カプセルを製造する。
【０１０７】
軟ゼラチンカプセル
大豆油、綿実油またはオリーブ油などの食用油中の有効成分の混合物を調製し、容積移送式ポンプによってゼラチン中に注入して、有効成分１００ｍｇが入った軟ゼラチンカプセルを形成する。カプセルを洗浄および乾燥する。
【０１０８】
錠剤
従来法によって多数の錠剤を製造し、単位製剤が有効成分１００ｍｇ、コロイド状二酸化ケイ素０．２ｍｇ、ステアリン酸マグネシウム５ｍｇ、微結晶セルロース２７５ｍｇ、デンプン１１ｍｇおよび乳糖９８．８ｍｇとなるようにする。適切なコーティングを施して、嗜好性を高めたり、吸収を遅らせることができる。
【０１０９】
注射剤
注射による投与に好適な非経口組成物は、１０体積％のプロピレングリコール中で１．５重量％の有効成分を撹拌することで調製される。その溶液を注射用水で規定量とし、滅菌する。
【０１１０】
懸濁液
各５ｍＬが微粉砕した有効成分１００ｍｇ、カルボキシメチルセルロースナトリウム１００ｍｇ、安息香酸５ｍｇ、ソルビトール溶液ＵＳＰ１．０ｇおよびバニリン０．０２５ｍＬを含むように、経口投与用に水系懸濁液を調製する。
【０１１１】
本発明の化合物を段階的にまたは別の治療薬との併用で投与する場合には、同じ製剤を用いることができる。薬剤を物理的に組み合わせて投与する場合、製剤および投与経路は、組み合わせる薬剤の適合性に応じて選択すべきである。従って、共投与という用語は、２薬剤を同時または順次に投与すること、あるいは２種類の活性成分の固定用量の組み合わせとして投与することを含むものと理解される。
【０１１２】
合成方法
本発明における化合物を製造するのに用いることができる２種類の一般的方法を図式１に描いてある。中間体ｉは、商業的入手先から入手可能であるか（例：アゼチジン−３−カルボン酸（Ｒ１＝Ｈ、Ｒ２＝Ｈ、ｍ＝０、ｎ＝０）またはピロリジン−３−カルボン酸（Ｒ１＝Ｈ、Ｒ２＝Ｈ、ｍ＝０、ｎ＝１）、あるいは下記に記載の方法を用いて製造することができる。適合性の溶媒（例：メタノール、エタノール、アセトニトリル、塩化メチレン）中で適切な還元剤（例：水素化シアノホウ素ナトリウム、水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム、水素化ホウ素ナトリウム）の存在下に中間体ｉをアリールアルデヒドｉｉと組み合わせることで、構造ｉｉｉの化合物を得ることができる。別法として、適合溶媒（例：メタノール、エタノール、アセトニトリル）中で適切な塩基（例：炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン）の存在下に、中間体ｉをハロゲン化ベンジルまたはスルホン酸エステルｉｖと室温またはそれより高温で組み合わせることで、構造ｉｉｉの化合物を得ることができる。構造ｉにおけるＡがｉｉｉへの変換を妨害すると考えられる場合、Ａをマスクし、ｉｉもしくはｉｖとのカップリング後にＡを脱離させることが可能であると考えられる適切な保護基（Greene & Wuts, Eds., ″Protecting Groups in Organic Synthesis″, John Wiley & Sons, Inc.）を用いることができる。ｉｉｉが不斉中心を有する場合、ｉｉｉの個々の立体異性体は、立体特異的合成、エナンチオマー的に純粋な酸もしくは塩基によるｉｉｉの塩もしくはそれの製造時に使用される中間体の分割、エナンチオマー的に純粋な固定相を用いるＨＰＬＣによるｉｉｉまたはそれの製造において使用される中間体の分割など（これらに限定されるものではない）の当業者には公知の方法によって得ることができる。
【０１１３】
【化１２】
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【０１１４】
ｍ＝０、ｎ＝１およびＡ＝−ＣＯ２Ｈである本発明における化合物は、図式２に示した方法を用いて製造することができる。官能基Ｒ１および／またはＲ２（例：Ｒ１および／またはＲ２＝Ｈ、アルキル、トリハロアルキルまたはカルボキシ）で置換されたアクリル酸（ｖ）を、適切な溶媒（例：塩化メチレン、アセトニトリル）中にて触媒量の酸（例：トリフルオロ酢酸、リン酸）存在下にｖｉから発生させたアゾメチンイリドと反応させて、構造ｖｉｉの化合物を得ることができる。別法として、ｖｉｉｉ（原料としてアクリル酸エステルを用いた以外はｖｉｉと同様にして製造）を、エーテル系溶媒（例：ＴＨＦ、１，２−ジメトキシエタン）中にて室温以下で強塩基（例：リチウムジイソプロピルアミド、ナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド、カリウムビス（トリメチルシリル）アミド）で処理し、次に求電子剤（例：ヨウ化メチル、２−（フェニルスルホニル）−３−フェニルオキサジリジン、フルオロベンゼンスルホンイミド）によって処理することでｉｘを得ることができる。次に、ｉｘをケン化することでｖｉｉを得ることができる。ｖｉｉが不斉中心を有する場合、図式１でｉｉｉについて記載したものと同様の方法を用いて、個々の立体異性体を得ることができる。
【０１１５】
【化１３】
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【０１１６】
上記の図式で中間体ｉとして用いることができると考えられる化合物を製造するのに用いることができる方法をいくつか、図式３に示してある。ｍ＝０、ｎ＝１、Ｒ１＝Ｈ、Ｒ２＝ＨおよびＡ＝−ＰＯ３Ｈ２である場合、ビニルホスホン酸ジエチル（ｘ）を、適切な溶媒（例：塩化メチレン、アセトニトリル）中、触媒量の酸（例：トリフルオロ酢酸、リン酸）の存在下にＮ−メトキシメチル−Ｎ−トリメチルシリルメチルベンジルアミンと反応させて、構造ｘｉの化合物を得ることができる。接触水素化（Ｈ２、Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃ、ＨＯＡｃ；ギ酸アンモニウム、Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃ、ＭｅＯＨ）または化学的方法（クロルギ酸１−クロロエチル、ＤＣＥ、還流、次にＭｅＯＨ、還流）を用いたＮ−ベンジル基の開裂によって、ｘｉｉを得ることができる。ｍ＝０、ｎ＝１、Ｒ１＝ＯＨ、Ｒ２＝ＨおよびＡ＝−ＰＯ３Ｈ２である場合、３−ヒドロキシピロリジン（ｘｉｉｉ）のＮ−ｔ−ブトキシカルボニル保護とそれに続く温和な酸化（例えば、塩化メチレン中−７８℃でのオキサリルクロライドおよびＤＭＳＯによる処理とそれに続くトリアルキルアミン塩基による処理、そして昇温（スウェルン酸化）；アセトニトリル中での４−メチルモルホリンＮ−オキサイドおよび触媒量の過ルテニウム酸テトラプロピルアンモニウムによる処理）によって、ｘｉｖを得ることができる。室温以上で３級アミン塩基（トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン）存在下にｘｉｖを亜リン酸ジアルキルで処理し、次に酸性条件下（例：ＭｅＯＨ中ＨＣｌ、無希釈のＴＦＡ）でのｔ−ブチルカーバメートの脱離によって、ｘｖを得ることができる。ｍ＝０、ｎ＝１、Ｒ１＝Ｈ、Ｒ２＝ＨおよびＡ＝５−テトラゾリルの場合、適切な溶媒（例：塩化メチレン、アセトニトリル）中触媒量の酸（例：トリフルオロ酢酸、リン酸）存在下に、アクリロニトリル（ｘｖｉ）をＮ−メトキシメチル−Ｎ−トリシリルメチルベンジルアミンと反応させて、構造ｘｖｉｉの化合物を得ることができる。ｘｖｉｉのＮ−ベンジル基をベンジルカーバメートに変換し、次にテトラゾール形成（例：高温での塩化アンモニウム、アジ化ナトリウム、ＤＭＦ；アジ化トリメチルスズ、トルエン、還流）および接触水素化を行うことで、ｘｖｉｉｉを得ることができる。
【０１１７】
【化１４】
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【０１１８】
上記図式１において中間体ｉｉとして用いることができる化合物を製造するのに用いることができる方法をいくつか、図式４に示してある。多くのアリールカルボン酸、アリールカルボン酸ハライド、アリールカルボン酸エステルおよびアリールＮ−アルコキシル−Ｎ−アルキルカルボキサミド（ｘｉｘ）が市販されており、当業者には公知の還元方法を用いてアリールアルデヒド（ｘｘ）に変換することができる（Larock, ″Comprehensive Organic Transformations, A Guide to Functional Group Preparations″, VCH Publishers, Inc.参照）。別法として、多くのベンジルアルコール（ｘｘｉ）が市販されており、当業者には公知の酸化方法を用いてアリールアルデヒド（ｘｘｉｉ）に変換することができる。Ｂ＝アルコキシである場合、適合性の溶媒（例：メタノール、エタノール、アセトニトリル）中で室温以上にて、適切な塩基（例：炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン）存在下に、ヒドロキシベンズアルデヒドｘｘｉｉｉをハロゲン化アルキルまたはスルホン酸エステルと結合させて、構造ｘｘｉｖの化合物を得ることができる。別法として、ヒドロキシベンズアルデヒドｘｘｉｉｉを適切な溶媒（ＴＨＦ、トルエン、塩化メチレン）中にてアルコール、アゾジカルボン酸ジアルキル（例：アゾジカルボン酸ジエチル、アゾジカルボン酸ジイソプロピル）およびトリフェニルホスフィンと結合させて、ｘｘｉｖを得ることができる。Ｂが１，２，４−オキサジアゾリルである場合、Ｎ−ヒドロキシアミジンｘｘｖを、加熱しながらアミン塩基（ピリジン、ＤＢＵ）存在下に適切な溶媒（キシレン、トルエン）中で酸塩化物によって処理することで、中間体ｘｘｖｉを得ることができる。別法として、適切な溶媒（キシレン、トルエン）中にて、ｘｘｖをカルボン酸、カルボジイミド（例：Ｎ，Ｎ′−ジシクロヘキシルカルボジイミド、１−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−３−エチルカルボジイミド）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾールで処理して、ｘｘｖｉを得ることができる。いずれかの方法によって製造したら、ｘｉｘをｘｘに変換するのに用いた方法によって、ｘｘｖｉのエステル基をアルデヒドに変換することができる。Ｂが−（Ｃ＝Ｏ）Ｃ６−１１アルキルであり、Ｒ４＝Ｈである場合、エーテル系溶媒（例：ＴＨＦ、ジエチルエーテル、１，２−ジメトキシエタン）中にて室温以下で、アリール１，４−ジアルデヒド（ｘｘｖｉｉ）を限られた量のアルキル有機金属試薬（例：アルキルマグネシウムブロミド、アルキルリチウム）で処理して、中間体ｘｘｖｉｉｉを得ることができる。ｘｘｖｉｉｉの温和な酸化（例えば、塩化メチレン中−７８℃でのオキサリルクロライドおよびＤＭＳＯ、次にトリアルキルアミン塩基による処理と、昇温（スウェルン酸化）；アセトニトリル中での４−メチルモルホリンＮ−オキサイドおよび触媒量の過ルテニウム酸テトラプロピルアンモニウムによる処理）によって、アルデヒドｘｉｘを得ることができる。
【０１１９】
【化１５】
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【０１２０】
下記の実施例において、本発明の化合物の製造方法についてさらに説明する。当業界の実務者にとって、別途経路は容易に理解できよう。
【０１２１】
全般
溶液の濃縮は、減圧下にロータリーエバポレータによって行った。従来のフラッシュクロマトグラフィーは、シリカゲル（２３０〜４００メッシュ）で行った。記載の大きさのプレパックカートリッジ中のシリカゲル（３２〜６３ｍＭ、孔径６０Å）でのバイオテージ（Biotage）フラッシュクロマトグラフィー装置（ダイアクス（Dyax）社）を用いて、フラッシュクロマトグラフィーも行った。別段の記載がない限り、ＮＭＲスペクトラムはＣＤＣｌ３溶液中で得たものである。カップリング定数（Ｊ）はヘルツ（Ｈｚ）単位である。略称：ジエチルエーテル（エーテル）、トリエチルアミン（ＴＥＡ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）、飽和水溶液（ｓａｔ′ｄ）、室温（ｒｔ）、時間（ｈまたはｈｒ）、分（ｍｉｎ）。下記の表において、化合物の後にＮＭＲデータを示している。
【０１２２】
ＨＰＬＣ条件
ＬＣ−１：ウォーターズ（Waters）のエクステラ（Xterra）ＭＳＣ１８、５μ、４．６×５０ｍｍカラム、４．５分かけて１０：９０から９５：５（体積比）ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ＋０．０５％ＴＦＡ、１分間保持、ＰＤＡ検出２００〜６００ｎｍ、流量＝２．５ｍＬ／分。
【０１２３】
ＬＣ−２：アナリティカル・セールズ・アンド・サービス（Analytical Sales and Service）のアーマー（Armor）Ｃ８、５μ、２０×１００ｍｍカラム、１２分かけて１０：９０から９０：１０（体積比）ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ＋０．０５％ＴＦＡ、４分間保持、２１０ｎｍまたは２５４ｎｍでＵＶ検出、流量＝１０ｍＬ／分。
【０１２４】
アルデヒド中間体の製造
アルデヒド１
４−ノニルベンズアルデヒド
４−ノニルベンゾイルクロライド２．０ｇ（７．５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（７５ｍＬ）溶液を−７８℃で、１Ｍリチウムトリ−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）水素化アルミニウムのＴＨＦ溶液７．５ｍＬ（７．５ｍｍｏｌ）で処理した。−７８℃で３０分後、２Ｎ  ＨＣｌで反応停止し、昇温させて室温とした。混合物をＥｔ２Ｏに投入し、２Ｎ  ＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ３および飽和ＮａＣｌで洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で脱水し、濃縮した。残留物を、溶離液として１００：１（体積比）ヘキサン／Ｅｔ２Ｏを用いる４０Ｍバイオテージカラムで精製して、標題化合物７０８ｍｇ（４１％）を得た。１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ０．８７（ｔ、Ｊ＝７．０、３Ｈ）、１．２６〜１．３１（ｍ、１２Ｈ）、１．６０〜１．６６（ｍ、２Ｈ）、２．６８（ｔ、Ｊ＝７．８、２Ｈ）、７．３２（ｄ、Ｊ＝８．０、２Ｈ）、７．７９（ｄ、Ｊ＝８．０、２Ｈ）、９．９７（ｓ、１Ｈ）。
【０１２５】
アルデヒド２
４−デシルベンズアルデヒド
４−ノニルベンゾイルクロライドに代えて４−デシルベンゾイルクロライドを用い、アルデヒド１と類似の手順を用いて標題化合物を製造した。１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ０．８７（ｔ、Ｊ＝６．９、３Ｈ）、１．２５〜１．３１（ｍ、１４Ｈ）、１．６０〜１．６６（ｍ、２Ｈ）、２．６８（ｔ、Ｊ＝７．７、２Ｈ）、７．３３（ｄ、Ｊ＝８．０、２Ｈ）、７．７９（ｄ、Ｊ＝８．０、２Ｈ）、９．９７（ｓ、１Ｈ）。
【０１２６】
アルデヒド３
３−（オクチルオキシ）ベンズアルデヒド
３−ヒドロキシベンズアルデヒド１．００ｇ（０．８２ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム１．７０ｇ（１２．２ｍｍｏｌ）および１−ヨードオクタン２．１６ｇ（９．００ｍｍｏｌ）の混合物を、アセトニトリル中８０℃で１６時間加温した。反応液を冷却し、濾過し、濃縮した。残留物を、２０：１（体積比）ヘキサン／酢酸エチルを用いるフラッシュクロマトグラフィーを用いて精製して、標題化合物１．６３ｇを無色油状物として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ０．８９（ｔ、Ｊ＝６．９、３Ｈ）、１．２４〜１．３９（ｍ、８Ｈ）、１．４２〜１．５０（ｍ、２Ｈ）、１．８０（ｍ、２Ｈ）、４．０１（ｔ、Ｊ＝６．６、２Ｈ）、７．１９（ｍ、１Ｈ）、７．４０（ｓ、１Ｈ）、７．４４〜７．４６（ｍ、２Ｈ）、９．９９（ｓ、１Ｈ）。
【０１２７】
アルデヒド４
４−（オクチルオキシ）ベンズアルデヒド
３−ヒドロキシベンズアルデヒドに代えて４−ヒドロキシベンズアルデヒドを用い、アルデヒド３と類似の手順を用いて標題化合物を製造した。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ０．９１（ｔ、Ｊ＝６．９、３Ｈ）、１．２９〜１．４１（ｍ、８Ｈ）、１．４６〜１．５２（ｍ、２Ｈ）、１．７１〜１．８６（ｍ、２Ｈ）、４．０６（ｔ、Ｊ＝６．６、２Ｈ）、７．０１（ｄ、Ｊ＝８．７、２Ｈ）、７．８５（ｄ、Ｊ＝８．７、２Ｈ）、９．９０（ｓ、１Ｈ）。
【０１２８】
アルデヒド５
３−ブロモ−５−メトキシ−４−オクチルオキシベンズアルデヒド
３−ヒドロキシベンズアルデヒドに代えて３−ブロモ−４−ヒドロキシ−５−メトキシベンズアルデヒドを用い、アルデヒド３と類似の手順を用いて標題化合物を製造した。ＥＳＩ−ＭＳ：３４３（Ｍ＋Ｈ）。
【０１２９】
アルデヒド６
３−エトキシ−４−（オクチルオキシ）ベンズアルデヒド
３−ヒドロキシベンズアルデヒドに代えて３−エトキシ−４−ヒドロキシベンズアルデヒドを用い、アルデヒド３と類似の手順を用いて標題化合物を製造した。１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ０．８８〜０．９８（ｍ、３Ｈ）、１．３０〜１．４１（ｍ、８Ｈ）、１．４６〜１．５１（ｍ、５Ｈ）、１．８５〜１．９１（ｍ、２Ｈ）、４．０６〜４．１８（ｍ、４Ｈ）、６．９７（ｄ、Ｊ＝８．０、１Ｈ）、７．３９〜７．４４（ｍ、２Ｈ）、９．８４（ｓ、１Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ２７９．１（Ｍ＋Ｈ）。
【０１３０】
アルデヒド７
３，５−ジブロモ−４−（オクチルオキシ）ベンズアルデヒド
３−ヒドロキシベンズアルデヒドに代えて３，５−ジブロモ−４−ヒドロキシベンズアルデヒドを用い、アルデヒド３と類似の手順を用いて標題化合物を製造した。
【０１３１】
アルデヒド８
３−メトキシ−４−（オクチルオキシ）ベンズアルデヒド
３−ヒドロキシベンズアルデヒドに代えて３−メトキシ−４−ヒドロキシベンズアルデヒドを用い、アルデヒド３と類似の手順を用いて標題化合物を製造した。ＥＳＩ−ＭＳ２６５．２（Ｍ＋Ｈ）。
【０１３２】
アルデヒド９
３−メチル−４−（オクチルオキシ）ベンズアルデヒド
３−ヒドロキシベンズアルデヒドに代えて３−メチル−４−ヒドロキシベンズアルデヒドを用い、アルデヒド３と類似の手順を用いて標題化合物を製造した。
【０１３３】
アルデヒド１０
４−（オクチルオキシ）−１−ナフトアルデヒド
３−ヒドロキシベンズアルデヒドに代えて４−ヒドロキシ−１−ナフトアルデヒドを用い、アルデヒド３と類似の手順を用いて標題化合物を製造した。
【０１３４】
アルデヒド１１
２−クロロ−４−（オクチルオキシ）ベンズアルデヒド
３−ヒドロキシベンズアルデヒドに代えて２−クロロ−４−ヒドロキシベンズアルデヒドを用い、アルデヒド３と類似の手順を用いて標題化合物を製造した。ＥＳＩ−ＭＳ２６９．０（Ｍ＋Ｈ）。
【０１３５】
アルデヒド１２
３−クロロ−４−（オクチルオキシ）ベンズアルデヒド
３−ヒドロキシベンズアルデヒドに代えて３−クロロ−４−ヒドロキシベンズアルデヒドを用い、アルデヒド３と類似の手順を用いて標題化合物を製造した。
【０１３６】
アルデヒド１３
４−（トランス−３，７−ジメチル−２，６−オクタジエン−１−イルオキシ）ベンズアルデヒド
４−ヒドロキシベンズアルデヒドおよびゲラニルブロミドを用いて、アルデヒド３と類似の手順を用いて標題化合物を製造した。ＲＦ：０．２９（１９：１（体積比）ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ１．５８〜１．８３（ｍ、９Ｈ）、２．００〜２．１６（ｍ、４Ｈ）、４．６５（ｄ、Ｊ＝６．６、２Ｈ）、５．１０（ｍ、１Ｈ）、５．５０（ｍ、１Ｈ）、７．０２（ｄ、Ｊ＝８．７、２Ｈ）、７．８５（ｄ、Ｊ＝８．７、２Ｈ）、９．９０（ｓ、１Ｈ）。
【０１３７】
アルデヒド１４
４−［ビス（３，５−トリフルオロメチル）ベンジルオキシ］ベンズアルデヒド
４−ヒドロキシベンズアルデヒドおよびビス（３，５−トリフルオロメチル）ベンジルブロミドを用い、アルデヒド３と類似の手順を用いて標題化合物を製造した。ＲＦ：０．２８（９：１（体積比）ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ５．２８（ｓ、２Ｈ）、７．１４（ｄ、Ｊ＝８．７、２Ｈ）、７．９１〜７．９５（ｍ、５Ｈ）、９．９５（ｓ、１Ｈ）。
【０１３８】
アルデヒド１５
３−（４−（ホルミル）フェニル）−５−（４−フェニル−５−トリフルオロメチル−２−チエニル）−１，２，４−オキサジアゾール
段階Ａ：（Ｅ／Ｚ）−２−フェニル−３−クロロ−４，４，４−トリフルオロ−２−ブタナール
ＤＭＦ１５ｍＬに０℃でオキシ塩化リン（７．５ｍＬ、８０ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を昇温させて室温とし、１時間撹拌した。１，１，１−トリフルオロメチル−３−フェニル−２−プロパノン５．０ｇ（２６．６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍＬ）溶液を加え、得られた混合物を７０℃で２０時間撹拌した。反応混合物を冷却して室温とし、氷１５０ｇ上に投入し、室温で１時間撹拌した。反応停止した混合物をエーテル２００ｍＬで抽出した。抽出液を水２００ｍＬで洗浄し、脱水し、濃縮した。溶離液としてヘキサン（４リットル）を用いるバイオテージ４０Ｍカートリッジでのクロマトグラフィーによって、標題化合物５．１ｇ（８２％）を得た。
【０１３９】
段階Ｂ：（４−フェニル−５−トリフルオロメチル）チオフェン−２−カルボン酸エチル
ＮａＨ６００ｍｇ（２５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４５ｍＬ）懸濁液に、内部温度を２５℃に維持しながら、メルカプト酢酸エチル（２．７５ｍＬ、２５．０ｍｍｏｌ）を加えた。（Ｅ／Ｚ）−２−フェニル−３−クロロ−４，４，４−トリフルオロ−２−ブタナール５．１０ｇ（２１．７ｍｍｏｌ）の溶液（段階Ａから）を加え、得られた混合物を室温で２０時間撹拌した。５０ｍＬの飽和ＮＨ４Ｃｌで反応停止し、得られた混合物をエーテル２５０ｍＬと水１００ｍＬとの間で分配した。有機層を分離し、脱水し、濃縮した。溶離液としてヘキサン（１リットル）、次に４：１（体積比）ヘキサン／ＣＨ２Ｃｌ２（１リットル）を用いるバイオテージ４０Ｍカートリッジでのクロマトグラフィーによって、標題化合物５．１０ｇ（７８％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００Ｍhz）δ１．４０（ｔ、Ｊ＝７．２、３Ｈ）、４．３９（ｑ、Ｊ＝７．２、２Ｈ）、７．４２（見かけのｓ、５Ｈ）、７．７４（ｑ、Ｊ＝１．６、１Ｈ）。
【０１４０】
段階Ｃ：（４−フェニル−５−トリフルオロメチル）チオフェン−２−カルボン酸
４−フェニル−５−トリフルオロメチル−チオフェン−２−カルボン酸エチル（段階Ｂから）５．１０ｇ（１７．０ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（２０ｍＬ）溶液を５．０Ｎ  ＮａＯＨ１０ｍＬで処理し、室温で３０分間撹拌した。ＥｔＯＨを減圧下に除去した。残留水系混合物を１Ｎ  ＨＣｌでｐＨ２の酸性とし、１：１（体積比）ＥｔＯＡｃ／エーテル３００ｍＬで抽出した。抽出液を分液し、脱水し、濃縮した。２０：１（体積比）ヘキサン／エーテル２００ｍＬからの再結晶によって、標題化合物４．３０ｇ（９３％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ７．４３（見かけのｓ、５Ｈ）、７．８４（見かけのｓ、１Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、１２５ＭＨｚ）δ１２１．７（ｑ、Ｊ＝２６９）、１２８．５、１２８．６、１２８．８、１３２．５（ｑ、Ｊ＝３６）、１３３．３、１３３．８、１３７．５、１４４．８、１６７．０。
【０１４１】
段階Ｄ：３−［４−（カルボメトキシ）フェニル］−５−（４−フェニル−５−トリフルオロメチル−２−チエニル）−１，２，４−オキサジアゾール
４−フェニル−５−トリフルオロメチル−チオフェン−２−カルボン酸４０８ｍｇ（１．５ｍｍｏｌ）およびオキサリルクロライド１ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）溶液をＤＭＦ５滴で処理した。得られた混合物を室温で１時間撹拌し、濃縮した。粗酸塩化物および４−（カルボメトキシ）ベンズアミドキシム２９１ｍｇ（１．５ｍｍｏｌ）を６：１（体積比）キシレン／ピリジン７ｍＬに溶かした。得られた溶液を１４０℃で１時間加熱し、冷却した。混合物を１：１  ＥｔＯＡｃ／エーテル５０ｍＬと１Ｎ  ＨＣｌ  ５０ｍＬとの間で分配した。有機層を分液し、１Ｎ  ＨＣｌ  ５０ｍＬで３回、飽和ＮａＨＣＯ３  ５０ｍＬで洗浄し、脱水し、濃縮した。溶離液としてヘキサン（１リットル）、次に２０：１（体積比）ヘキサン／ＥｔＯＡｃ（１リットル）を用いるバイオテージ４０Ｍカートリッジでのクロマトグラフィーによって、標題化合物４２３ｍｇ（６５％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ３．９７（ｓ、３Ｈ）、７．４８（見かけのｓ、５Ｈ）、７．９２（ｓ、１Ｈ）、８．１８（見かけのｄ、Ｊ＝８．５、２Ｈ）、８．２３（見かけのｄ、Ｊ＝８．５、２Ｈ）。
【０１４２】
段階Ｅ：３−［４−（ヒドロキシメチル）フェニル］−５−（４−フェニル−５−トリフルオロメチル−２−チエニル）−１，２，４−オキサジアゾール
３−［４−（カルボメトキシ）フェニル］−５−（４−フェニル−５−トリフルオロメチル−２−チエニル）−１，２，４−オキサジアゾール（段階Ｄから）３９０ｍｇ（０．９１ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）溶液を−７８℃で、１．０Ｍ  ＤＩＢＡＬＨ溶液のＣＨ２Ｃｌ２溶液２．７ｍＬで処理した。得られた溶液を冷却下に１時間撹拌し、飽和ロッシェル塩溶液５ｍＬで反応停止した。混合物をＣＨ２Ｃｌ２１００ｍＬと１Ｎ  ＮａＯＨ５０ｍＬとの間で分配した。有機層を分液し、脱水し、濃縮した。溶離液として４：１（体積比）ヘキサン／ＥｔＯＡｃ（１リットル）を用いるバイオテージ４０Ｓカートリッジでのクロマトグラフィーによって、標題化合物３２５ｍｇ（８９％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ１．８０（見かけのｓ、１Ｈ）、４．８０（ｄ、Ｊ＝４．０、２Ｈ）、７．４６〜７．４８（５Ｈ）、７．５２（ｄ、Ｊ＝８．０、２Ｈ）、７．９１（ｑ、Ｊ＝１．５、１Ｈ）、８．１４（ｄ、Ｊ＝８．０、２Ｈ）。
【０１４３】
段階Ｆ：３−［４−（ホルミル）フェニル］−５−（４−フェニル−５−トリフルオロメチル−２−チエニル）−１，２，４−オキサジアゾール
３−［４−（ヒドロキシメチル）フェニル］−５−（４−フェニル−５−トリフルオロメチル−２−チエニル）−１，２，４−オキサジアゾール（段階Ｅから）３１０ｍｇ（０．７７ｍｍｏｌ）、４−メチルモルホリンＮ−オキサイド５２７ｍｇ（１．５ｍｍｏｌ）および４Åモレキュラーシーブス５００ｍｇのＣＨ３ＣＮ（１５ｍＬ）中混合物を、過ルテニウム酸テトラプロピルアンモニウム１２ｍｇ（０．０３４ｍｍｏｌ）で処理し、得られた混合物を室温で２時間撹拌した。固体を濾過し、濾液を濃縮した。溶離液として９：１（体積比）ヘキサン／ＥｔＯＡｃ（１リットル）を用いるバイオテージ４０Ｓカートリッジでのクロマトグラフィーによって、標題化合物２０５ｍｇ（６６％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ７．４８（見かけのｓ、５Ｈ）、７．９３（見かけのｓ、１Ｈ）、８．０３（ｄ、Ｊ＝８．５、２Ｈ）、８．３３（ｄ、Ｊ＝８．５、２Ｈ）、１０．１（ｓ、１Ｈ）。
【０１４４】
アルデヒド１６
４−［（４−フェニル−５−トリフルオロメチル−２−チエニル）メトキシ］ベンズアルデヒド
段階Ａ：２−ヒドロキシメチル−４−フェニル−５−トリフルオロメチル−チオフェン
４−フェニル−５−トリフルオロメチル−チオフェン−２−カルボン酸（アルデヒド１５から、段階Ｃ）２．１０ｇ（７．７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）溶液を、２．０Ｍボラン−ジメチルスルフィド錯体のＴＨＦ溶液５．０ｍＬで処理した。得られた溶液を３時間加熱還流し、冷却して室温とし、ＭｅＯＨ  １０ｍＬで反応停止し、濃縮した。溶離液として９：１（体積比）ヘキサン／ＥｔＯＡｃを用いるバイオテージ４０Ｍカートリッジでのクロマトグラフィーによって、標題化合物１．９５ｇ（９８％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ２．０５（見かけのｓ、１Ｈ）、４．８７（ｓ、２Ｈ）、６．９９（ｓ、１Ｈ）、７．４１（見かけのｓ、５Ｈ）。
【０１４５】
段階Ｂ：４−（（４−フェニル−５−トリフルオロメチル−２−チエニル）メトキシ）ベンズアルデヒド
２−ヒドロキシメチル−４−フェニル−５−トリフルオロメチル−チオフェン（段階Ａから）１．９５ｇ（７．５ｍｍｏｌ）、４−ヒドロキシベンズアルデヒド９２５ｍｇ（７．６ｍｍｏｌ）およびトリフェニルホスフィン（triphenylphosphene）３．０ｇ（１１．４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４０ｍＬ）溶液を０℃で、アゾジカルボン酸ジエチル２．０ｇ（１１．４ｍｍｏｌ）で処理した。得られた混合物を昇温させて室温とし、２時間撹拌し、濃縮した。溶離液として９：１（体積比）ヘプタン／ＥｔＯＡｃを用いるバイオテージ７５Ｓカートリッジでのクロマトグラフィーによって、純度の低い標題化合物２．５ｇを得た。溶離液として１９：１（体積比）ヘキサン／ＥｔＯＡｃ（１リットル）、次に４：１（体積比）ヘキサン／ＥｔＯＡｃ（１リットル）を用いるバイオテージ４０Ｍカートリッジでのクロマトグラフィーによって、標題化合物１．６５ｇ（６０％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ５．３２（ｓ、２Ｈ）、７．１０（ｄ、Ｊ＝８．５、２Ｈ）、７．１２（ｓ、１Ｈ）、７．４１〜７．４３（５Ｈ）、７．８５〜７．９０（２Ｈ）、９．９２（ｓ、１Ｈ）。
【０１４６】
段階Ｂで４−（ヒドロキシ）ベンズアルデヒドに代えて適切に置換されたベンズアルデヒドを用い、アルデヒド１６で記載のものと同様の手順を用いてアルデヒド１７〜２１を製造した。
【０１４７】
アルデヒド１７
３−（（４−フェニル−５−トリフルオロメチル−２−チエニル）メトキシ）ベンズアルデヒド。
【０１４８】
アルデヒド１８
２−クロロ−４−（（４−フェニル−５−トリフルオロメチル−２−チエニル）メトキシ）ベンズアルデヒド。
【０１４９】
アルデヒド１９
３−クロロ−４−（（４−フェニル−５−トリフルオロメチル−２−チエニル）メトキシ）ベンズアルデヒド。
【０１５０】
アルデヒド２０
３−メチル−４−（（４−フェニル−５−トリフルオロメチル−２−チエニル）メトキシ）ベンズアルデヒド。
【０１５１】
アルデヒド２１
３−メトキシ−４−（（４−フェニル−５−トリフルオロメチル−２−チエニル）メトキシ）ベンズアルデヒド。
【０１５２】
アルデヒド２２
４−（４−フェニルブトキシ）ベンズアルデヒド
１−ヨードオクタンに代えて４−（ヨードブチル）ベンゼンを用い、アルデヒド４と類似の手順を用いて標題化合物を製造した。ＥＳＩ−ＭＳ２５５．２（Ｍ＋Ｈ）。
【０１５３】
アルデヒド２３
４−（ノン−１−オイル）ベンズアルデヒド
段階Ａ：４−（１−ヒドロキシノン−１−イル）ベンズアルデヒド
テレフタルジカルボキシアルデヒド（２．００ｇ、１４．９１ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（２５ｍＬ）に溶かし、冷却して０℃とした。オクチルマグネシウムクロライド（７．５ｍＬ、２．０Ｍ  ＴＨＦ溶液、１５ｍｍｏｌ）を滴下した。１５分後、２Ｎ塩酸水溶液（５０ｍＬ）で反応停止し、酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈した。有機層を分液し、飽和ＮａＣｌ（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、濃縮した。９１：９（体積比）ヘキサン／ＥｔＯＡｃを溶離液とするシリカゲルクロマトグラフィーによって、標題化合物０．１９ｇ（０．７７ｍｍｏｌ、５．１％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ１０．０（ｓ、１Ｈ）、７．８７（ｄ、Ｊ＝８．０、２Ｈ）、７．５２（ｄ、Ｊ＝８．３、２Ｈ）、４．７５〜４．８０（ｍ、１Ｈ）、１．６８〜１．８２（ｍ、２Ｈ）、１．２２〜１．４５（ｍ、１２Ｈ）、０．９１（ｔ、Ｊ＝７．０、３Ｈ）。
【０１５４】
段階Ｂ：４−（ノン−１−オイル）ベンズアルデヒド
段階Ａからの４−（１−ヒドロキシノン−１−イル）ベンズアルデヒド（０．１２５ｇ、０．５０５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（３．０ｍＬ）溶液に、デス−マーチンペルヨージナン（０．２６８ｇ、０．６３２ｍｍｏｌ）を加えた。１時間後、反応液を濾過し、濃縮した。１９：１（体積比）ヘキサン／ＥｔＯＡｃを溶離液とするシリカゲルクロマトグラフィーによって、標題化合物０．１０７ｇ（０．４４６ｍｍｏｌ、８８％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ１０．１（ｓ、１Ｈ）、８．１０（ｄ、Ｊ＝８．２、２Ｈ）、７．９７（ｄ、Ｊ＝８．２、２Ｈ）、３．００（ｔ、Ｊ＝７．３、２Ｈ）、１．７０〜１．８（ｍ、２Ｈ）、１．２２〜１．４２（ｍ、１０Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝７．０、３Ｈ）。
【０１５５】
アルデヒド２４
４−（ホルミル）安息香酸ヘプチル
１−ヘプタノールと４−ホルミル安息香酸との間の縮合によって、標題化合物を製造した。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ１０．１０（ｓ、１Ｈ）、８．２０（ｄ、Ｊ＝８．２、２Ｈ）、７．９５（ｄ、Ｊ＝８．２、２Ｈ）、４．３５（ｔ、Ｊ＝６．８、２Ｈ）、１．７５〜１．８５（ｍ、２Ｈ）、１．４０〜１．５０（ｍ、２Ｈ）、１．２５〜１．４０（ｍ、６Ｈ）、０．８９（ｔ、Ｊ＝７．０、３Ｈ）。
【０１５６】
段階Ｂで２−ヒドロキシメチル−４−フェニル−５−トリフルオロメチル−チオフェンに代えて適切に置換されたアルコールを用い、アルデヒド１６で記載のものと同様の手順を用いて、アルデヒド２５および２６を製造した。
【０１５７】
アルデヒド２５
４−［（ベンゾチエン−２−イル）メトキシ］ベンズアルデヒド
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ５．３４（ｓ、２Ｈ）、７．０４（ｄ、Ｊ＝８．７、２Ｈ）、７．１８（ｓ、１Ｈ）、７．２５〜７．３０（ｍ、４Ｈ）、７．７６（ｄ、Ｊ＝８．７、２Ｈ）、９．８２（ｓ、１Ｈ）。
【０１５８】
アルデヒド２６
４−［（２，３−ジフェニル−２Ｈ−ピラゾール−５−イル）メトキシ］ベンズアルデヒド
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ５．２１（ｓ、２Ｈ）、６．５５（ｓ、１Ｈ）、７．１０（ｄ、Ｊ＝８．７、２Ｈ）、７．１４〜７．１７（ｍ、５Ｈ）、７．２１〜７．３０（ｍ、５Ｈ）、７．７９（ｄ、Ｊ＝８．７、２Ｈ）、９．８２（ｓ、１Ｈ）。
【０１５９】
実施例化合物の製造
（実施例１）
（Ｒ／Ｓ）−１−（４−（ノニル）フェニル）メチル−３−ヒドロキシ−ピロリジン−３−イル）ホスホン酸
段階Ａ：（Ｒ／Ｓ）−１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−３−ヒドロキシピロリジン
（Ｒ／Ｓ）−３−ヒドロキシピロリジン２．５ｇ（２８．７ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）溶液を０℃で、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ジカーボネート６．８９ｇ（３１．６ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（２ｍ）溶液および４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）ピリジン０．３５ｇ（２．８ｍｍｏｌ）で処理した。１０分間撹拌後、反応液を昇温させて室温とし、終夜撹拌した。反応液をＣＨ２Ｃｌ２１００ｍＬで希釈し、１Ｎ  ＨＣｌ１００ｍＬおよび１Ｎ  ＮａＨＣＯ３１００ｍＬで洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮した。残留物を、溶離液として７：３（体積比）ヘキサン／アセトンを用いる４０Ｍバイオテージカラムで精製して、標題化合物５．３ｇ（９９％）を得た。ＲＦ：０．２６（７：３（体積比）ヘキサン／アセトン）；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ１．４５（ｓ、９Ｈ）、１．８８〜２．００（ｍ、２Ｈ）、２．５２（ｂｒｓ、１Ｈ）、３．２９〜３．５０（ｍ、４Ｈ）、４．４２（ｍ、１Ｈ）。
【０１６０】
段階Ｂ：１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−３−オキソ−ピロリジン
オキサリルクロライド２．３ｍＬ（２６ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（８０ｍＬ）溶液を−７８℃で、ＤＭＳＯ３．８ｍＬ（５３ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）溶液で処理した。得られた混合物を冷却下に５分間撹拌した。（Ｒ／Ｓ）−１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−３−ヒドロキシピロリジン（段階Ａから）２．０ｇ（１０．７ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）溶液を加えた。得られた混合物を３０分間撹拌し、ＤＩＥＡ１８．７ｍＬ（１０７ｍｍｏｌ）で処理し、昇温させて０℃とした。４５分間撹拌後、Ｈ２Ｏで反応停止し、１Ｎ  ＨＣｌ  １００ｍＬに投入した。層を分離した後、有機層を飽和ＮａＣｌ１００ｍＬで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮した。残留物を、溶離液として４：１（体積比）ヘキサン／アセトンを用いる４０Ｍバイオテージカラムで精製して、標題化合物１．９ｇ（９６％）を得た。ＲＦ：０．４９（７：３（体積比）ヘキサン／アセトン）；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ１．４８（ｓ、９Ｈ）、２．５８（ｔ、Ｊ＝７．９、２Ｈ）、３．７１〜３．７８（ｍ、４Ｈ）。
【０１６１】
段階Ｃ：（Ｒ／Ｓ）−１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−３−ヒドロキシ−ピロリジン−３−イルホスホン酸・ジエチルエステル
１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−３−オキソピロリジン（段階Ｂから）１．９ｇ（１０．３ｍｍｏｌ）、亜リン酸ジエチル１．３ｍＬ（１０．３ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ１．４ｍＬ（１０．３ｍｍｏｌ）の混合物を１００℃で１．５時間撹拌した。揮発分を減圧下に除去した。残留物を、溶離液として１３：７（体積比）ヘキサン／アセトンを用いる４０Ｍバイオテージカラムで精製して、標題化合物１．７８ｇ（５３％）を黄色油状物として得た。ＲＦ：０．１６（７：３（体積比）ヘキサン／アセトン）；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ１．３３（ｔ、Ｊ＝７．０、６Ｈ）、１．４５（ｓ、９Ｈ）、２．０８（ｍ、１Ｈ）、２．１８（ｍ、１Ｈ）、３．４７〜３．６４（ｍ、４Ｈ）、４．１３〜４．２２（ｍ、４Ｈ）。
【０１６２】
段階Ｄ：（Ｒ／Ｓ）−３−ヒドロキシ−ピロリジン−３−イルホスホン酸・ジエチルエステル
（Ｒ／Ｓ）−１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−３−ヒドロキシ−ピロリジン−３−イルホスホン酸ジエチルエステル（段階Ｃから）１．７８ｇ（５．５ｍｍｏｌ）の２Ｎ  ＨＣｌ／ＥｔＯＨ溶液を室温で５．５時間撹拌した。反応液をＣＨ２Ｃｌ２から数回濃縮した。粗生成物をＮＨ４ＯＨ水溶液とＣＨＣｌ３／イソプロパノール（３：１（体積比））との間で分配した。相を分液した後、水層をＣＨＣｌ３／イソプロパノール（３：１（体積比））で３回抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮した。残留物を、溶離液として９０：１０：１（体積比）ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨを用いる４０Ｓバイオテージカラムで精製して、標題化合物を明褐色油状物として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ１．３５（ｔ、Ｊ＝７．０、６Ｈ）、１．９２（ｍ、１Ｈ）、２．２０（ｍ、１Ｈ）、２．７８〜２．９９（ｍ、３Ｈ）、３．０６（ｄｄ、Ｊ＝１２．７、３．７、１Ｈ）、３．１３（ｄｄ、Ｊ＝１２．７、６．２、１Ｈ）、３．２０（ｍ、１Ｈ）、４．１６〜４．２３（ｍ、４Ｈ）。
【０１６３】
段階Ｅ：（Ｒ／Ｓ）−１−（４−（ノニルフェニル）メチル−３−ヒドロキシ−ピロリジン−３−イルホスホン酸・ジエチルエステル
（Ｒ／Ｓ）−３−ヒドロキシピロリジン−３−イルホスホン酸・ジエチルエステル（段階Ｄから）６０ｍｇ（０．２３ｍｍｏｌ）およびアルデヒド１  ５４ｍｇ（０．２３ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１．５ｍＬ）溶液を水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム７３ｍｇ（０．３４ｍｍｏｌ）で処理した。室温で３時間後、反応液をＣＨ２Ｃｌ２２５ｍＬで希釈し、１Ｎ  ＮａＨＣＯ３２５ｍＬで洗浄した。相を分液後、水層をＣＨ２Ｃｌ２２５ｍＬで抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＣｌ  ５０ｍＬで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮した。残留物を、溶離液として３：１（体積比）ヘキサン／アセトンを用いてフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物３３ｍｇ（３２％）を得た。ＲＦ：０．３１（７：３（体積比）ヘキサン／アセトン）；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ０．８９（ｔ、Ｊ＝７．０、３Ｈ）、１．２７〜１．３６（ｍ、１８Ｈ）、１．５７〜１．６３（ｍ、２Ｈ）、１．９７（ｍ、１Ｈ）、２．４１〜２．５４（ｍ、２Ｈ）、２．５９（ｔ、Ｊ＝７．７、２Ｈ）、２．８５〜２．９２（ｍ、２Ｈ）、３．０１（ｍ、１Ｈ）、３．６７（ＡＢｑ、Ｊ＝１３．１、２Ｈ）、４．１６〜４．２３（ｍ、４Ｈ）、７．１２（ｄ、Ｊ＝７．８、２Ｈ）、７．２４（ｄ、Ｊ＝７．８、２Ｈ）。
【０１６４】
段階Ｆ：（Ｒ／Ｓ）−１−（４−ノニルベンジル）−３−ヒドロキシピロリジン−３−イルホスホン酸
（Ｒ／Ｓ）−１−（４−ノニルベンジル）−３−ヒドロキシピロリジン−３−イルホスホン酸ジエチルエステル（段階Ｅから）３３ｍｇ（０．０７５ｍｍｏｌ）のクロロホルム（１ｍＬ）溶液をヨードトリメチルシラン０．０５３ｍＬ（０．３７ｍｍｏｌ）で処理した。反応液を室温で１時間撹拌した。ＭｅＯＨで反応停止し、ＭｅＯＨから数回濃縮した。ＬＣ−２を用いて残留物を精製して、標題化合物４．６ｍｇ（１６％）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ３８５（Ｍ＋Ｈ）；ＬＣ−１：３．０１分。
【０１６５】
（実施例２〜１０）
段階Ｅで適切なアルデヒドを代わりに用いて、実施例１に記載のものと同様の手順によって実施例２〜１０の化合物を製造した。段階Ｆで、ＴＭＳ−ＢｒはＴＭＳ−Ｉ感受性官能部分を有する基質に置き換えた（実施例１１段階Ｄ参照）。実施例５および６においては、分取キラルＨＰＬＣ（キラルパック（Chiralpak）ＡＤ２×２５ｃｍＨＰＬＣカラム、９：１（体積比）ヘキサン／ＥｔＯＨ、流量＝９．０ｍＬ／分、λ＝２１０ｎＭ）によって、段階Ｅ後にエナンチオマーを分割した。
【０１６６】
【表４】
2005515259.tif 000033
2005515259.tif 000034
【０１６７】
（実施例１１）
（Ｒ／Ｓ）−１−（４−ノニルフェニル）メチル−ピロリジン−３−イルホスホン酸
段階Ａ：（Ｒ／Ｓ）−１−ベンジル−ピロリジン−３−イルホスホン酸・ジエチルエステル
ビニルホスホン酸ジエチル６．０ｇ（３６．６ｍｍｏｌ）およびＮ−（メトキシメチル）−Ｎ−（トリメチルシリルメチル）ベンジルアミン１１ｍＬ（４４ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１５０ｍＬ）溶液を０℃で３０分間撹拌した。反応混合物を１Ｎ  ＮａＨＣＯ３１５０ｍＬおよび飽和ＮａＣｌ  １５０ｍＬで洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮した。残留物を、勾配として３：２および１：１（体積比）ヘキサン／アセトンを用いる４０Ｌバイオテージカラムで精製して、標題化合物９．４４ｇ（８７％）を淡黄色油状物として得た。ＲＦ：０．２４（３：２（体積比）ヘキサン／アセトン）；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ１．３２（ｔ、Ｊ＝７．０、６Ｈ）、２．０４〜２．１２（ｍ、２Ｈ）、２．３９〜２．５８（ｍ、３Ｈ）、２．８３（ｍ、１Ｈ）、２．９７（ｍ、１Ｈ）、３．６４（ｓ、２Ｈ）、４．０６〜４．１６（ｍ、４Ｈ）、７．２４〜７．３４（ｍ、５Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ２９８（Ｍ＋Ｈ）；ＬＣ−１：１．２分。
【０１６８】
段階Ｂ：（Ｒ／Ｓ）−ピロリジン−３−イルホスホン酸ジエチルエステル
（Ｒ／Ｓ）−１−ベンジル−ピロリジン−３−イルホスホン酸ジエチルエステル（段階Ａから）３ｇ（１０ｍｍｏｌ）、ギ酸アンモニウム９．５ｇ（１５０ｍｍｏｌ）および１０％パラジウム／活性炭１．０ｇのＭｅＯＨ（６０ｍＬ）中混合物を昇温させて４０℃とし、１．５時間経過させた。反応液を冷却し、セライト層で濾過し、濃縮した。混合物を１Ｎ  ＮａＯＨ７５ｍＬとＣＨ２Ｃｌ２１００ｍＬとの間で分配した。層を分液した後、水相をＣＨ２Ｃｌ２１００ｍＬで３回抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮した。残留物を、溶離液として９０：１０：１（体積比）ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨを用いる４０Ｍバイオテージカラムで精製して、標題化合物を淡黄色油状物として得た。ＲＦ：０．１３（９５：５：０．５（体積比）ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ）；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ１．２２（ｔ、Ｊ＝７．１、６Ｈ）、１．８１（ｍ、１Ｈ）、１．９５（ｍ、１Ｈ）、２．２５（ｍ、１Ｈ）、２．７３（ｍ、１Ｈ）、２．８９〜２．９９（ｍ、３Ｈ）、４．０６〜４．１６（ｍ、４Ｈ）。
【０１６９】
段階Ｃ：（Ｒ／Ｓ）−１−（４−ノニルフェニル）メチル−ピロリジン−３−イルホスホン酸ジエチルエステル
（Ｒ／Ｓ）−ピロリジン−３−イルホスホン酸ジエチルエステル（段階Ｂから）４１ｍｇ（０．１９ｍｍｏｌ）およびアルデヒド１  ４３ｍｇ（０．１８ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１ｍＬ）溶液を水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム５７ｍｇ（０．２７ｍｍｏｌ）で処理した。室温で終夜撹拌後、反応液をＣＨ２Ｃｌ２２５ｍＬで希釈し、１Ｎ  ＮａＨＣＯ３２５ｍＬで洗浄した。相を分液後、水層をＣＨ２Ｃｌ２２５ｍＬで抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＣｌ５０ｍＬで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮した。残留物を、溶離液として４９：１（体積比）ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨを用いるフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物６７ｍｇ（９９％）を得た。ＲＦ：０．３９（１９：１（体積比）ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ）；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ０．９０（ｔ、Ｊ＝７．０、３Ｈ）、１．２０〜１．３５（ｍ、１７Ｈ）、１．５９〜１．６５（ｍ、２Ｈ）、２．０４〜２．１３（ｍ、３Ｈ）、２．４１〜２．６２（ｍ、５Ｈ）、２．８５（ｍ、１Ｈ）、２．９９（ｍ、１Ｈ）、３．６２（ｓ、２Ｈ）、４．０８〜４．１７（ｍ、４Ｈ）、７．１４（ｄ、Ｊ＝８．０、２Ｈ）、７．２４（ｄ、Ｊ＝８．０、２Ｈ）。
【０１７０】
段階Ｄ：（Ｒ／Ｓ）−１−（４−ノニルベンジル）−ピロリジン−３−イルホスホン酸
（Ｒ／Ｓ）−１−（４−ノニルベンジル）−ピロリジン−３−イルホスホン酸ジエチルエステル（段階Ｃから）６７ｍｇ（０．１６ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１ｍＬ）溶液をブロモトリメチルシラン０．０９４ｍＬ（０．７１ｍｍｏｌ）で処理した。反応液を８０℃で１時間撹拌した。ＭｅＯＨで反応停止し、ＭｅＯＨから数回濃縮した。残留物をＬＣ−２によって精製して、標題化合物２７ｍｇ（４６％）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ３６８（Ｍ＋Ｈ）；ＬＣ−１：３．１分。
【０１７１】
（実施例１２〜１７）
段階Ｃで適切なアルデヒドを代わりに用い、実施例１１に記載のものと同様の手順を用いて、実施例１２〜１７の化合物を製造した。実施例１５および１６では、分取キラルＨＰＬＣ（キラルセル（Chiralcel）ＯＤ２×２５ｃｍＨＰＬＣカラム、１９：１（体積比）ヘキサン／ｉＰｒＯＨ、流量＝９．０ｍＬ／分、λ＝２１０ｎＭ）によって、段階Ｅ後にエナンチオマーを分割した。
【０１７２】
【表５】
2005515259.tif 000035
【０１７３】
（実施例１８）
（Ｒ／Ｓ）−１−｛４−［（４−フェニル−５−トリフルオロメチル−２−チエニル）メトキシ］ベンジル｝−ピロリジン−３−イルカルボン酸
段階Ａ：（Ｒ／Ｓ）−１−ベンジル−ピロリジン−３−イルカルボン酸ベンジルエステル
０℃としたアクリル酸ベンジル１０．０ｇ（６１．６ｍｍｏｌ）およびＮ−（メトキシメチル）−Ｎ−（トリメチルシリルメチル）ベンジルアミン１９ｍＬ（７４．２ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（７５ｍＬ）溶液を、内部温度を３℃より低く維持しながら、ＴＦＡ０．５ｍＬ（６．５ｍｍｏｌ）で処理した。反応液を昇温させて室温とし、２．５時間撹拌した。反応混合物を１Ｎ  ＮａＨＣＯ３２５０ｍＬおよび飽和ＮａＣｌ  ２５０ｍＬで洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮した。残留物を、溶離液として１９：１（体積比）ヘキサン／アセトンを用いる４０Ｌバイオテージカラムで精製して、標題化合物１８ｇ（９９％）を明黄色油状物として得た。ＲＦ：０．２８（９：１（体積比）ヘキサン／アセトン）；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ２．１５〜２．２０（ｍ、２Ｈ）、２．６０（ｍ、１Ｈ）、２．７３〜２．７７（ｍ、２Ｈ）、３．０２（ｍ、１Ｈ）、３．１３（ｍ、１Ｈ）、３．６６〜３．７３（ｍ、２Ｈ）、５．１７（ｓ、２Ｈ）、７．２８〜７．４２（ｍ、５Ｈ）。
【０１７４】
段階Ｂ：（Ｒ／Ｓ）−１−ベンジルオキシカルボニル−ピロリジン−３−イルカルボン酸ベンジルエステル
０℃とした（Ｒ／Ｓ）−１−ベンジル−ピロリジン−３−イルカルボン酸ベンジルエステル（段階Ａから）１８ｇ（６１ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）溶液を、内部温度を６℃より低く維持しながら、クロルギ酸ベンジル２１．３ｍＬ（２３１ｍｍｏｌ）で処理した。反応液を終夜で昇温させて室温とした。室温で２４時間後、追加のクロルギ酸ベンジル１０ｍＬ（１０．８ｍｍｏｌ）を加えた。室温で２４時間撹拌後、反応液を濃縮した。残留物を、溶離液として１９：１（体積比）ヘキサン／アセトンを用いる４０Ｌバイオテージカラムで精製して、標題化合物８．４２ｇ（３９％）を無色油状物として得た。ＲＦ：０．１４（９：１（体積比）ヘキサン／アセトン）；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ２．１９〜２．２２（ｍ、２Ｈ）、３．１５（ｍ、ＬＨ）、３．４５〜３．７５（ｍ、４Ｈ）、５．１３〜５．２０（ｍ、４Ｈ）、７．３３〜７．４１（ｍ、１０Ｈ）。
【０１７５】
段階Ｃ：（Ｒ／Ｓ）−ピロリジン−３−イルカルボン酸
（Ｒ／Ｓ）−１−ベンジルオキシカルボニル−ピロリジン−３−イルカルボン酸ベンジルエステル（段階Ｂから）８．４ｇ（２４．７ｍｍｏｌ）および１０％パラジウム／活性炭２．８６ｇのＭｅＯＨ（８０ｍＬ）中混合物を、水素風船を用いて大気圧下で６．５時間水素化した。反応液をセライト層で濾過し、濃縮して、標題化合物２．７２ｇ（９５％）を白色固体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）δ２．１７〜２．２６（ｍ、２Ｈ）、３．０３（ｍ、１Ｈ）、３．２４〜３．３８（ｍ、３Ｈ）、３．５１（ｍ、１Ｈ）。
【０１７６】
段階Ｄ：（Ｒ／Ｓ）−１−｛４−［（４−フェニル−５−トリフルオロメチル−２−チエニル）メトキシ］ベンジル｝−ピロリジン−３−イルカルボン酸
（Ｒ／Ｓ）−ピロリジン−３−イルカルボン酸（段階Ｃから）１７．５ｍｇ（０．１５ｍｍｏｌ）、アルデヒド１６  ７８ｍｇ（０．２１ｍｍｏｌ）および水素化シアノホウ素ナトリウム９ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２ｍＬ）中混合物を、室温で終夜撹拌した。反応液を濃縮し、溶離液として１９：１（体積比）ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ、次に８５：１５：１．５（体積比）ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨを用いるフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物４２ｍｇ（６３％）を白色泡状物として得た。ＲＦ：０．２９（８５：１５：１．５（体積比）ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ）；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）δ２．２３〜２．３５（ｍ、２Ｈ）、３．０９（ｍ、１Ｈ）、３．２６〜３．４１（ｍ、３Ｈ）、３．５３（ｍ、１Ｈ）、４．３０（ＡＢｑ、Ｊ＝１３．０、２Ｈ）、５．３８（ｓ、２Ｈ）、７．１３（ｄ、Ｊ＝８．５、２Ｈ）、７．２２（ｓ、１Ｈ）、７．３９〜７．４５（ｍ、５Ｈ）、７．４８（ｄ、Ｊ＝８．５、２Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ４６２（Ｍ＋Ｈ）；ＬＣ−１：２．７分。
【０１７７】
（実施例１９〜３３）
段階Ｄで適切なアルデヒドを代わりに用い、実施例１８に記載のものと同様の手順を用いて、実施例１９〜３３の化合物を製造した。
【０１７８】
【表６】
2005515259.tif 000036
2005515259.tif 000037
【０１７９】
（実施例３５）
（Ｒ／Ｓ）−１−（４−ノニルフェニル）メチル−３−フルオロ−ピロリジン−３−イルカルボン酸
段階Ａ：（Ｒ／Ｓ）−１−ベンジル−ピロリジン−３−イルカルボン酸メチルエステル
アクリル酸ベンジルに代えてアクリル酸メチルを用い、実施例１８段階Ａに記載のものと同様の手順を用いて標題化合物を製造した。ＲＦ：０．２９（９：１（体積比）ヘキサン／アセトン）；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ２．１０〜２．１４（ｍ、２Ｈ）、２．５５（ｍ、１Ｈ）、２．６６（ｍ、１Ｈ）、２．７５（ｍ、１Ｈ）、２．９４（ｍ、１Ｈ）、３．０６（ｍ、１Ｈ）、３．６５（ｓ、２Ｈ）、３．６９（ｓ、３Ｈ）、７．２５〜７．３５（ｍ、５Ｈ）。
【０１８０】
段階Ｂ：（Ｒ／Ｓ）−ピロリジン−３−イルカルボン酸メチルエステル塩酸塩
（Ｒ／Ｓ）−１−ベンジル−ピロリジン−３−イルカルボン酸メチルエステル（段階Ａから）０．５２ｇ（２．３ｍｍｏｌ）の１，２−ジクロロエタン（５ｍＬ）溶液をクロルギ酸１−クロロエチル（ＡＣＥ−Ｃｌ）０．３ｍＬ（２．７ｍｍｏｌ）で処理した。得られた混合物を室温で３時間撹拌し、３０分間還流した。反応液を冷却し、濃縮した。残留物をＭｅＯＨ  ５ｍＬ中で１時間加熱還流させた。反応液を冷却し、濃縮した。粗生成物を、それ以上精製せずに段階Ｃで用いた。
【０１８１】
段階Ｃ：（Ｒ／Ｓ）−１−（４−ノニルフェニル）メチル−ピロリジン−３−イルカルボン酸メチルエステル
（Ｒ／Ｓ）−３−ヒドロキシピロリジン−３−イルホスホン酸ジエチルエステルに代えて（Ｒ／Ｓ）−ピロリジン−３−イルカルボン酸メチルエステル塩酸塩（段階Ｂから）を用い、塩酸塩を中和するのにＤＩＥＡを用いて、実施例１段階Ｅに記載のものと同様の手順を用いて標題化合物を製造した。ＲＦ：０．４４（４：１（体積比）ヘキサン／アセトン）；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ０．９１（ｔ、Ｊ＝６．９、３Ｈ）、１．３０〜１．３５（ｍ、１２Ｈ）、１．６０〜１．６６（ｍ、２Ｈ）、２．１３〜２．１７（ｍ、２Ｈ）、２．５４〜２．６９（ｍ、４Ｈ）、２．８０（ｍ、１Ｈ）、２．９９（ｍ、１Ｈ）、３．０９（ｍ、１Ｈ）、３．６６（ｓ、２Ｈ）、３．７２（ｓ、３Ｈ）、７．１６（ｄ、Ｊ＝８．０、２Ｈ）、７．２７（ｄ、Ｊ＝８．０、２Ｈ）。
【０１８２】
段階Ｄ：（Ｒ／Ｓ）−１−（４−ノニルフェニル）メチル−３−フルオロピロリジン−３−イルカルボン酸メチルエステル
０．３２ＭリチウムジイソプロピルアミドのＴＨＦ溶液１ｍＬ（０．３２ｍｍｏｌ）に−７８℃で、内部温度を−７０℃より低く維持しながら、（Ｒ／Ｓ）−１−１−（４−ノニルフェニル）メチルベンジル）−ピロリジン−３−イルカルボン酸メチルエステル（段階Ｃから）９０ｍｇ（０．２６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１．５ｍＬ）溶液を加えた。１５分後、内部温度を−６８℃より低く維持しながら、フルオロベンゼンスルホンイミド１１１ｍｇ（０．３５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（０．５ｍＬ）を加えた。１５分間撹拌後、反応液を昇温させて０℃とし、０．１Ｎ  ＨＣｌで反応停止した。反応混合物をＥｔ２Ｏ５０ｍＬに投入し、１Ｎ  ＮａＨＣＯ３５０ｍＬおよび飽和ＮａＣｌ  ５０ｍＬで洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で脱水し、濃縮した。残留物を、溶離液として１９：１（体積比）ヘキサン／アセトンを用いるフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物４７ｍｇ（５０％）を無色フィルム状物として得た。ＲＦ：０．３６（９：１（体積比）ヘキサン／アセトン）；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ０．９１（ｔ、Ｊ＝６．８、３Ｈ）、１．３０〜１．３５（ｍ、１２Ｈ）、１．６０〜１．６６（ｍ、２Ｈ）、２．２８（ｍ、１Ｈ）、２．４９（ｍ、１Ｈ）、２．６２（ｔ、Ｊ＝７．８、２Ｈ）、２．６９（ｍ、１Ｈ）、２．９５〜３．１０（ｍ、３Ｈ）、３．６９（ＡＢｑ、Ｊ＝１２．８、２Ｈ）、３．８３（ｓ、３Ｈ）、７．１６（ｄ、Ｊ＝７．８、２Ｈ）、７．２７（ｄ、Ｊ＝７．８、２Ｈ）。
【０１８３】
段階Ｅ：（Ｒ／Ｓ）−１−（４−ノニルフェニル）メチル−３−フルオロピロリジン−３−イルカルボン酸
（Ｒ／Ｓ）−１−（４−ノニルフェニル）メチル−３−フルオロピロリジン−３−イルカルボン酸メチルエステル（段階Ｄから）４６ｍｇ（０．１２ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（３ｍＬ）溶液を１Ｎ  ＮａＯＨ０．１６ｍＬ（０．１６ｍｍｏｌ）で処理し、室温で終夜撹拌した。反応液をｐＨ７緩衝液２ｍＬで中和し、濃縮した。トルエンを加え、得られた混合物を濃縮した。残留物を、溶離液として１９：１（体積比）ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ、次に９０：１０：１（体積比）ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨを用いるフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物３８ｍｇ（８６％）を白色ロウ状の固体として得た。ＲＦ：０．２１（８５：１５：１．５（体積比）ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ）；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ０．７９（ｔ、Ｊ＝６．８、３Ｈ）、１．１８〜１．２３（ｍ、１２Ｈ）、１．４８〜１．５２（ｍ、２Ｈ）、２．３０（ｍ、１Ｈ）、２．４７〜２．５９（ｍ、３Ｈ）、３．２９〜３．４４（ｍ、３Ｈ）、３．７３（ｍ、１Ｈ）、３．８７（ｂｒｍ、１Ｈ）、４．１７（ＡＢｑ、Ｊ＝１２．９、２Ｈ）、７．１２（ｄ、Ｊ＝７．９、２Ｈ）、７．２８（ｄ、Ｊ＝７．９、２Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ３５０（Ｍ＋Ｈ）；ＬＣ−１：３．３分。
【０１８４】
（実施例３６）
（Ｒ／Ｓ）−１−（４−ノニルフェニル）メチル−３−ヒドロキシピロリジン−３−イルカルボン酸
段階Ａ：（Ｒ／Ｓ）１−（４−ノニルフェニル）メチル−３−ヒドロキシピロリジン−３−イルカルボン酸メチルエステル
１．０Ｍナトリウムヘキサメチルシラジド０．５２ｍＬ（０．５２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液を−７８℃とし、内部温度を−７２℃より低く維持しながら、それに（Ｒ／Ｓ）−１−（４−ノニルフェニル）メチル−ピロリジン−３−イルカルボン酸メチルエステル（実施例３４段階Ｃから）１５３ｍｇ（０．４４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１ｍＬ）溶液を加えた。２０分後、内部温度を−６９℃より低く維持しながら、２−（フェニルスルホニル）−３−フェニルオキサジリジン（デービス（Davis）試薬）１７２ｍｇ（０．６５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１ｍＬ）溶液を加えた。−７８℃で１．２５時間撹拌後、１Ｎ  ＮａＨＣＯ３で反応停止し、昇温させて室温とした。減圧下に揮発分を除去した後、反応混合物を１Ｎ  ＮａＨＣＯ３５０ｍＬおよび飽和ＮａＣｌ  ５０ｍＬで希釈した。水相をＣＨ２Ｃｌ２５０ｍＬで３回抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮した。残留物を、勾配として４：１（体積比）ヘキサン／ＥｔＯＡｃおよび４：１（体積比）ヘキサン／アセトンを用いるフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物１１ｍｇ（７％）を無色フィルム状物として得た。ＲＦ：０．３９（４：１（体積比）ヘキサン／アセトン）；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ０．９０（ｔ、Ｊ＝６．８、３Ｈ）、１．２８〜１．３３（ｍ、１２Ｈ）、１．５９〜１．６４（ｍ、２Ｈ）、２．０２（ｍ、１Ｈ）、２．４２（ｍ、１Ｈ）、２．６０（ｔ、Ｊ＝７．８、２Ｈ）、２．６７（ｍ、１Ｈ）、２．８６（ＡＢｑ、Ｊ＝１０．１、２Ｈ）、２．９７（ｍ、１Ｈ）、３．６９（ｓ、２Ｈ）、３．８２（ｓ、３Ｈ）、７．１４（ｄ、Ｊ＝７．９、２Ｈ）、７．２６（ｄ、Ｊ＝７．９、２Ｈ）。
【０１８５】
段階Ｂ：（Ｒ／Ｓ）−１−（４−ノニルフェニル）メチル−３−ヒドロキシピロリジン−３−イルカルボン酸
（Ｒ／Ｓ）−１−（４−ノニルフェニル）メチル−３−フルオロピロリジン−３−イルカルボン酸チルエステルに代えて（Ｒ／Ｓ）−１−（４−ノニルフェニル）メチル−３−ヒドロキシピロリジン−３−イルカルボン酸メチルエステル（段階Ａから）を用い、実施例３４段階Ｅに記載のものと同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＲＦ：０．１５（９０：１０：１（体積比）ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ）；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）δ０．８９（ｔ、Ｊ＝６．９、３Ｈ）、１．２８〜１．３３（ｍ、１２Ｈ）、１．６０〜１．６３（ｍ、２Ｈ）、２．１０（ｍ、１Ｈ）、２．４９（ｍ、１Ｈ）、２．６４（ｔ、Ｊ＝７．７、２Ｈ）、３．２５（ｍ、１Ｈ）、３．４９〜３．６２（ｍ、３Ｈ）、４．３８（ＡＢｑ、Ｊ＝１３．０、２Ｈ）、７．２８（ｄ、Ｊ＝７．８、２Ｈ）、７．４２（ｄ、Ｊ＝７．８、２Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ３４８（Ｍ＋Ｈ）；ＬＣ−１：３．０分。
【０１８６】
（実施例３７）
（Ｒ／Ｓ）−１−（４−ノニルフェニル）メチル−ピロリジン−３−イル酢酸
段階Ａ：（Ｒ／Ｓ）−１−（４−ノニルフェニル）メチル−ピロリジン−３−イル酢酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
（Ｒ／Ｓ）−３−ヒドロキシピロリジン−３−イルホスホン酸ジエチルエステルに代えて（Ｒ／Ｓ）−ピロリジン−３−イル酢酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル塩酸塩を用い、塩酸塩を中和するのにＤＩＥＡを用いて、実施例１段階Ｅに記載のものと同様の手順を用いて標題化合物を製造した。ＲＦ：０．５３（４：１（体積比）ヘキサン／アセトン）；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ０．９０（ｔ、Ｊ＝６．８、３Ｈ）、１．２８〜１．６４（ｍ、２５Ｈ）、２．０９（ｍ、１Ｈ）、２．２６〜２．３７（ｍ、３Ｈ）、２．５８〜２．６９（ｍ、４Ｈ）、２．８９（ｍ、１Ｈ）、３．６１〜３．６４（ｍ、２Ｈ）、７．１４（ｄ、Ｊ＝７．４、２Ｈ）、７．２６（ｄ、Ｊ＝７．４、２Ｈ）。
【０１８７】
段階Ｂ：（Ｒ／Ｓ）−１−（４−ノニルフェニル）メチル−ピロリジン−３−イル酢酸
（Ｒ／Ｓ）−１−（４−ノニルフェニル）メチル−ピロリジン−３−イル酢酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（段階Ａから）５０．５ｍｇ（０．１２ｍｍｏｌ）のギ酸溶液を５５℃で２．２５時間撹拌した。揮発分を減圧下に除去した。溶離液として１９：１（体積比）ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ、次に８５：１５：１．５（体積比）ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨを用いるフラッシュクロマトグラフィーによって残留物を精製して、標題化合物４１ｍｇ（９４％）を粘稠なロウ状のフィルム状物として得た。ＲＦ：０．３１（８５：１５：１．５（体積比）ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ）；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）δ０．９０（ｔ、Ｊ＝６．９、３Ｈ）、１．２９〜１．３３（ｍ、１２Ｈ）、１．６１〜１．６４（ｍ、２Ｈ）、１．７７（ｍ、１Ｈ）、２．２６〜２．４５（ｍ、３Ｈ）、２．６４（ｔ、Ｊ＝７．７、２Ｈ）、２．７１（ｍ、１Ｈ）、３．０８（ｍ、１Ｈ）、３．２３（ｍ、１Ｈ）、３．３８〜３．４４（ｍ、２Ｈ）、４．２８（ｓ、２Ｈ）、７．２８（ｄ、Ｊ＝８．１、２Ｈ）、７．３９（ｄ、Ｊ＝８．１、２Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ３４６（Ｍ＋Ｈ）；ＬＣ−１：３．３分。
【０１８８】
（実施例３８）
（Ｒ／Ｓ）−１−｛４−［（４−フェニル−５−トリフルオロメチル−２−チエニル）メトキシ］ベンジル｝−ピロリジン−３−イル酢酸
段階Ａでアルデヒド１に代えてアルデヒド１６を用い、実施例３６に記載のものと同様の手順を用いて標題化合物を製造した。ＲＦ：０．２９（８５：１５：１．５（体積比）ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ）；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）δ１．７７（ｍ、１Ｈ）、２．２６〜２．４６（ｍ、３Ｈ）、２．７１（ｍ、１Ｈ）、３．０７（ｍ、１Ｈ）、３．２３（ｍ、１Ｈ）、３．３７〜３．３４（ｍ、２Ｈ）、４．２８（ｓ、２Ｈ）、５．３８（ｓ、２Ｈ）、７．１３（ｄ、Ｊ＝８．７、２Ｈ）、７．２３（ｓ、１Ｈ）、７．４０〜７．４７（ｍ、７Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ４７６（Ｍ＋Ｈ）；ＬＣ−１：３．０分。
【０１８９】
（実施例３９）
（Ｒ／Ｓ）−５−［１−（４−ノニルフェニル）メチルピロリジン−３−イル］−１Ｈ−テトラゾール
段階Ａ：（Ｒ／Ｓ）−１−ベンジルオキシカルボニル−３−シアノピロリジン
段階Ａでアクリル酸ベンジルに代えてアクリロニトリルを用い、実施例１８（段階ＡおよびＢ）に記載のものと同様の手順を用いて標題化合物を製造した。ＲＦ：０．１９（４：１（体積比）ヘキサン／アセトン）；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ２．１８〜２．２８（ｍ、２Ｈ）、３．１２（ｍ、１Ｈ）、３．５３（ｍ、１Ｈ）、３．６１〜３．７８（ｍ、３Ｈ）、５．１６（ｄ、Ｊ＝３．０、２Ｈ）、７．３２〜７．４２（ｍ、５Ｈ）。
【０１９０】
段階Ｂ：（Ｒ／Ｓ）−５−［１−ベンジルオキシカルボニル−ピロリジン−３−イル］−１Ｈ−テトラゾール
（Ｒ／Ｓ）−１−ベンジルオキシカルボニル−３−シアノピロリジン（段階Ａから）１．８ｇ（７．８ｍｍｏｌ）、アジ化ナトリウム１．５ｇ（２３ｍｍｏｌ）および塩化アンモニウム１．２５ｇ（２３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（７０ｍＬ）中混合物を、１０５℃で終夜撹拌した。冷却して室温とした後、反応液をＣＨ２Ｃｌ２１５０ｍＬに投入し、１Ｎ  ＨＣｌ１５０ｍＬおよびＨ２Ｏ１５０ｍＬ（２回）で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で脱水し、濃縮した。残留物を、溶離液として８０：２０：１（体積比）ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ／ＨＯＡｃを用いる４０Ｍバイオテージカラムで精製して、標題化合物６７０ｍｇ（３１％）を得た。ＲＦ：０．２３（８０：２０：１（体積比）ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ／ＨＯＡｃ）；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ２．２９、２．４８（２ｍ、２Ｈ）、３．５４〜４．０３（ｍ、５Ｈ）、５．１４〜５．２４（ｍ、２Ｈ）、７．３０〜７．３７（ｍ、５Ｈ）、１０．４３（ｂｒ、１Ｈ）。
【０１９１】
段階Ｃ：（Ｒ／Ｓ）−５−（ピロリジン−３−イル）−１Ｈ−テトラゾール
（Ｒ／Ｓ）−５−［１−ベンジルオキシカルボニル−ピロリジン−３−イル］−１Ｈ−テトラゾール（段階Ｂから）６６２ｍｇ（２．４ｍｍｏｌ）および１０％パラジウム／活性炭２２０ｍｇのＭｅＯＨ（５ｍＬ）中混合物を、水素風船を用いて大気圧下で３時間水素化した。反応液をセライト層で濾過し、濃縮して、標題化合物を白色固体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）δ２．２７（ｍ、１Ｈ）、２．４９（ｍ、１Ｈ）、３．３９〜３．５１（ｍ、３Ｈ）、３．７０（ｍ、１Ｈ）、３．８５（ｍ、１Ｈ）。
【０１９２】
段階Ｄ：（Ｒ／Ｓ）−５−［１−（４−ノニルベンジル）メチル−ピロリジン−３−イル］−１Ｈ−テトラゾール
（Ｒ／Ｓ）−ピロリジン−３−イルカルボン酸に代えて（Ｒ／Ｓ）−５−（ピロリジン−３−イル）−１Ｈ−テトラゾール（段階Ｃから）を用い、実施例１８段階Ｄに記載のものと同様の手順を用いて標題化合物を製造した。１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）δ０．８９（ｔ、Ｊ＝７．０、３Ｈ）、１．２８〜１．３３（ｍ、１２Ｈ）、１６０．〜１．６３（ｍ、２Ｈ）、２．３３（ｍ、１Ｈ）、２．５５（ｍ、１Ｈ）、２．６４（ｔ、Ｊ＝７．６、２Ｈ）、３．４７〜３．５５（ｍ、３Ｈ）、３．７６（ｍ、１Ｈ）、３．９２（ｍ、１Ｈ）、４．４０（ｓ、２Ｈ）、７．２９（ｄ、Ｊ＝８．０、２Ｈ）、７．４２（ｄ、Ｊ＝８．０、２Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ３５６（Ｍ＋Ｈ）；ＬＣ−１：３．３分。
【０１９３】
（実施例４０）
１−｛４−［（４−フェニル−５−トリフルオロメチル−２−チエニル）メトキシ］ベンジル｝−３−アゼチジンカルボン酸
３−アゼチジンカルボン酸０．１２ｍｍｏｌ、アルデヒド１６  ０．１ｍｍｏｌ、酢酸０．００７ｍＬ（０．１２ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２ｍＬ）中混合物を水素化シアノホウ素ナトリウム１０ｍｇ（０．１６ｍｍｏｌ）で処理し、得られた混合物を室温で３時間撹拌することで、標題化合物を製造した。生成物をＬＣ−２を用いて精製した。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）δ３．３４〜３．３７（ｍ、１Ｈ）、４．０８（見かけのｓ、２Ｈ）、４．１０（見かけのｓ、２Ｈ）、４．２２（ｓ、２Ｈ）、４．８６（ｓ、２Ｈ）、５．３５（ｓ、２Ｈ）、７．１０（見かけのｄ、Ｊ＝８．０、２Ｈ）、７．２０（ｓ、１Ｈ）、７．３９〜７．４３（５Ｈ）。
【０１９４】
（実施例４１〜４５）
アルデヒド１６に代えて適切なアルデヒドを用い、実施例４１に記載のものと同様の手順を用いて、実施例４１〜４５の化合物を製造した。
【０１９５】
【表７】
2005515259.tif 000038
【０１９６】
（実施例４６〜５３）
アゼチジン−３−カルボン酸または（±）−ピロリジン−３−カルボン酸０．１２ｍｍｏｌ、アルデヒド０．１ｍｍｏｌ、酢酸７μＬ（０．１２ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２ｍＬ）中混合物を水素化シアノホウ素ナトリウム１０ｍｇ（０．１６ｍｍｏｌ）で処理し、得られた混合物を室温で１〜３時間撹拌することで、下記の化合物を製造した。反応混合物をＬＣ−２を用いて精製した。
【０１９７】
【表８】
2005515259.tif 000039
2005515259.tif 000040
【０１９８】
（実施例５５）
（３Ｓ，４Ｒまたは３Ｒ，４Ｓ）−１−（４−ノニルベンジル）−４−トリフルオロメチルピロリジン−３−イルカルボン酸
段階Ａ：４−（ノニル）ベンジルアミン
４−ノニルベンゾイルクロライド（６ｇ、２０ｍｍｏｌ）およびＮＨ４ＯＡｃ（６ｇ、）をアセトン（１００ｍＬ）に懸濁させ、室温で１時間撹拌した。水（５０ｍＬ）を加え、混合物を濾過した。残留物を水で洗浄し、乾燥させた。得られた粗アミド（２．４７ｇ、約１０ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５ｍＬ）に溶かし、加熱還流しながらボラン・ジメチルスルフィド錯体（２Ｍ溶液１０ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を１時間加熱し、氷浴で冷却した。メタノール（２．５ｍＬ）を滴下し、次に１Ｎ  ＨＣｌのエーテル溶液（１１ｍＬ）を滴下した。ベンジルアミンのＨＣｌ塩の白色沈殿を濾過し、エーテルで洗浄した。ＨＣｌ塩を２．５Ｎ  ＮａＯＨおよびエーテルに取り、有機層を分液し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。溶媒留去によって、標題化合物１．３ｇを得た。
【０１９９】
段階Ｂ：Ｎ−（メトキシメチル）−Ｎ−（トリメチルシリルメチル）−（４−ノニル）ベンジルアミン
４−（ノニル）ベンジルアミン（段階Ａから）１．３ｇ（６ｍｍｏｌ）およびクロロメチルトリメチルシラン７００ｍｇ（６ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（５ｍＬ）溶液を９０℃で３時間、次に室温で１６時間撹拌した。混合物をＭＴＢＥと１Ｎ  ＮａＯＨとの間で分配した。有機層を分液し、飽和ＮａＣｌで洗浄し、脱水し、濃縮した。溶離液として９：１（体積比）ヘキサン／ＥｔＯＡｃを用いるフラッシュクロマトグラフィーによって、Ｎ−（トリメチルシリルメチル）−４−（ノニル）ベンジルアミン７００ｍｇを得た。
【０２００】
前記の粗Ｎ−（トリメチルシリルメチル）−４−（ノニル）ベンジルアミン、パラホルムアルデヒド１４０ｍｇおよび粉末ＮａＯＨ１５ｍｇのＭｅＯＨ（５ｍＬ）中混合物を、４０℃で１時間撹拌した。混合物をエーテルで希釈し、１６時間熟成させた。混合物を濃縮し、乾燥させて、標題化合物７００ｍｇを得た。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）δ：７．２５（ｍ、２Ｈ）；７．１５（ｍ、２Ｈ）；４．０３（ｍ、２Ｈ）；３．７４（ｍ、２Ｈ）；３．２８（ｍ、２Ｈ）；２．６１（ｍ、２Ｈ）；２．２２（ｍ、２Ｈ）；１．６３（ｍ、４Ｈ）；１．３０（ｍ、１４Ｈ）；０．９０（ｍ、３Ｈ）；０．０８（ｍ、９Ｈ）。
【０２０１】
段階Ｃ：１−（４−（ノニル）フェニル）メチル−３−（Ｒ／Ｓ）−カルボキシ−４−（Ｒ／Ｓ）−トリフルオロメチルピロリジン
Ｎ−（メトキシメチル）−Ｎ−（トリメチルシリルメチル）−（４−ノニル）ベンジルアミン（段階Ｂから）５０ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）およびトランス−４，４，４−トリフルオロ−２−ブテン酸（０．１３７ｍｍｏｌ）２０ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１ｍＬ）溶液をＴＦＡ１滴で処理し、得られた混合物を３５℃で１時間加熱した。反応液を冷却し、濃縮し、ＬＣ−２を用いて精製して標題化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）δ７．２５（ｄ、Ｊ＝８、２Ｈ）；７．１９（ｄ、Ｊ＝８、２Ｈ）；３．８７（ｍ、２Ｈ）；３．５４（ｍ、１Ｈ）；３．２７（ｍ、４Ｈ）；２．９３（ｍ、１Ｈ）；２．６１（ｍ、２Ｈ）；１．６２（ｍ、２Ｈ）；１．３０（ｍ、１４Ｈ）；０．９０（ｔ、Ｊ＝６．７、３Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ４００．３（Ｍ＋Ｈ）。
【０２０２】
（実施例５６〜５９）
段階Ｃで適切なα，β−不飽和酸を代わりに用い、実施例５５に記載のものと同様の手順を用いて、実施例５６〜５８の化合物を製造した。
【０２０３】
【表９】
2005515259.tif 000041
【０２０４】
生理活性
本発明の化合物のＳ１Ｐ１／Ｅｄｇ１、Ｓ１Ｐ３／Ｅｄｇ３、Ｓ１Ｐ２／Ｅｄｇ５、Ｓ１Ｐ４／Ｅｄｇ６またはＳ１Ｐ５／Ｅｄｇ８活性を、下記のアッセイを用いて評価することができる。
【０２０５】
Ｅｄｇ／Ｓ１Ｐ受容体へのリガンド結合アッセイ
５０ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４、１ｍＭメルカプトエタノール、１ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４、２５ｍＭ  ＫＦ、２ｍＭセミカルバジド、１ｍＭ  Ｎａ２ＥＤＴＡ、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、５０ｍＭスフィンゴシン、０．１％トリトン（Triton）Ｘ−１１４および１ｍＣｉγ３３Ｐ−ＡＴＰ（ＮＥＮ；比放射能３０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）を含む反応混合物中で、スフィンゴシンキナーゼ活性を有する粗酵母抽出物を用いて、γ３３Ｐ−ＡＴＰおよびスフィンゴシンから３３Ｐ−スフィンゴシン−１−リン酸を酵素的に合成した。反応生成物をブタノールで抽出し、３３Ｐ−スフィンゴシン−１−リン酸をＨＰＬＣによって精製した。
【０２０６】
Ｅｄｇ／Ｓ１Ｐ受容体を発現する細胞を、酵素を含まない解離溶液（Specialty Media, Lavallette, NJ）で回収した。それを冷ＰＢＳで１回洗浄し、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ−Ｎａ、ｐＨ７．５、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＣａＣｌ２および０．５％脂肪酸非含有ＢＳＡからなる結合アッセイ緩衝液に懸濁させた。３３Ｐ−スフィンゴシン−１−リン酸を結合アッセイ緩衝液中で、０．１ｎＭスフィンゴシン−１−リン酸とともに超音波処理した。リガンド混合物１００μＬを、９６ウェル微量定量皿中の細胞１００μＬ（細胞１×１０６個／ｍＬ）に加えた。緩やかに混和しながら、室温で６０分間結合を行った。次に、細胞をパッカード（Packard）フィルターメート・ユニバーサル・ハーベスタ（Filtermate Universal Harvester）でＧＦ／Ｂフィルタープレート上に回収した。フィルタープレートを３０分間乾燥後、マイクロシンチ（Microscint）２０  ４０μＬを各ウェルに加え、ワラック（Wallac）マイクロベータ（Microbeta）シンチレーションカウンタで結合を測定した。非特異的結合は、０．５μＭの冷スフィンゴシン−１−リン酸存在下での残留放射能の量と定義した。
【０２０７】
別法として、リガンド結合アッセイを、Ｅｄｇ／Ｓ１Ｐ受容体を発現する細胞から得た膜で実施した。細胞を、酵素を含まない解離溶液で回収し、冷ＰＢＳで１回洗浄した。キネマティカ（Kinematica）ポリトロン（polytron）（設定５、１０秒間）を用いて氷冷２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、１０ｍＭ  ＥＤＴＡ中での均質化によって、細胞を破壊した。ホモジネートを４８０００×ｇで４℃にて１５分間遠心し、ペレットを２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、０．１ｍＭ  ＥＤＴＡ中に懸濁させた。第２の遠心後に、最終ペレットを、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２に懸濁させた。膜タンパク質０．５〜２μｇを用いて、上記の方法に従ってリガンド結合アッセイを行った。
【０２０８】
Ｅｄｇ／Ｓ１Ｐ受容体の作動薬および拮抗薬は、３３Ｐ−スフィンゴシン−１−リン酸結合アッセイで確認することができる。ＤＭＳＯ、メタノールその他の溶媒に溶解させた化合物を、微量定量皿中で３３Ｐ−スフィンゴシン−１−リン酸および結合アッセイ緩衝液を含むプローブと混合した。Ｅｄｇ／Ｓ１Ｐ受容体を発現する細胞から得た膜を加え、３３Ｐ−スフィンゴシン−１−リン酸に対する結合を上記の方法に従って実施した。各種濃度の化合物存在下での結合量の測定およびＭＲＬＣａｌｃ（Merck Research Laboratories）またはＰＲＩＳＭ（GraphPad Software）などの非線形回帰ソフトウェアによるデータ解析を用いて、受容体に対する化合物の親和性を測定した。各個々の受容体（Ｓ１Ｐ１／Ｅｄｇ１、Ｓ１Ｐ３／Ｅｄｇ３、Ｓ１Ｐ２／Ｅｄｇ５、Ｓ１Ｐ４／Ｅｄｇ６、Ｓ１Ｐ５／ＥＤＧ８）でトランスフェクションした細胞から得た膜を用いて、化合物存在下での３３Ｐ−スフィンゴシン−１−リン酸結合のレベルを測定することで、Ｅｄｇ／Ｓ１Ｐ受容体についての化合物の選択性を確認した。
【０２０９】
３５Ｓ−ＧＴＰγＳ結合アッセイ
Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇ受容体のＧタンパク質への機能的カップリングを、３５Ｓ−ＧＴＰγＳ結合アッセイで測定した。Ｅｄｇ／Ｓ１Ｐ受容体に対するリガンド結合アッセイに記載の方法に従って製造される膜（膜タンパク質１〜１０μｇ）を、９６ウェル微量定量皿で、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳｐＨ７．４、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、５μＭ  ＧＤＰ、０．１％脂肪酸非含有ＢＳＡ（Sigma、カタログ番号Ａ８８０６）、各種濃度のスフィンゴシン−１−リン酸および１２５ｐＭ３５Ｓ−ＧＴＰγＳ（ＮＥＮ；非放射能１２５０Ｃｉ／ｍｍｏｌ）を含む容量２００μＬ中でインキュベートした。緩やかに混合しながら結合を室温で１時間行い、パッカード・フィルターメート・ユニバーサル・ハーベスタによってＧＦ／Ｂフィルタープレート上に膜を回収することで終了した。フィルタープレートを３０分間乾燥後、マイクロシンチ２０  ４０μＬを各ウェルに加え、結合をワラック・マイクロベータ・シンチレーションカウンタで測定した。
【０２１０】
Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇ受容体の作動薬および拮抗薬を、３５Ｓ−ＧＴＰγＳ結合アッセイで識別することができる。ＤＭＳＯ、メタノールその他の溶媒で希釈した化合物を微量定量皿に加えて、０．０１ｎＭ〜１０Ｍの最終アッセイ濃度を得た。Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇ受容体を発現する細胞から得た膜を加え、３５Ｓ−ＧＴＰγＳへの結合を上記の方法に従って行った。天然リガンドその他の公知の作動薬の非存在下でアッセイを行った場合に、内因性レベルより高く３５Ｓ−ＧＴＰγＳ結合を刺激する化合物は作動薬と見なし、３５Ｓ−ＧＴＰγＳ結合の内因性レベルを阻害する化合物を逆作動薬と見なした。亜最大レベルの天然リガンドまたは公知のＳ１Ｐ／Ｅｄｇ受容体作動薬の存在下での３５Ｓ−ＧＴＰγＳ結合アッセイで拮抗薬を検出し、その化合物は３５Ｓ−ＧＴＰγＳ結合のレベルを低下させた。各種濃度の化合物の存在下での結合量の測定を用いて、Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇ受容体の作動薬、逆作動薬または拮抗薬としての化合物の効力を測定した。作動薬を評価するため、基底線レベルを超えての刺激パーセントを、化合物存在下での結合をリガンド非存在下での結合で割り、それに１００を掛けた値として計算した。非線形回帰曲線適合プログラムＭＲＬＣａｌｃ（Merck Research Laboratories）を用いて用量応答曲線をプロットし、ＥＣ５０値を作動薬の最大刺激の５０％を与えるのに必要なその作動薬の濃度と定義した。Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇ受容体に対する化合物の選択性を、各個々の受容体でトランスフェクションした細胞から得られた膜を用いて化合物存在下での３５Ｓ−ＧＴＰγＳ結合のレベルを測定することで求めた。
【０２１１】
細胞内カルシウムフラックスアッセイ
Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇ受容体のＧタンパク質に対する機能的結合に関連する細胞内カルシウム動員を、ＦＬＩＰＲ（蛍光画像プレート読取装置（Fluorescence Imaging Plate Reader）、Molecular Devices）を用いて測定した。Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇ受容体を発現する細胞を回収し、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、０．１％ＢＳＡおよび７１０μｇ／ｍＬプロベニシド（probenicid）（Sigma））を含むアッセイ緩衝液（ハンクス緩衝生理食塩水溶液（ＢＲＬ）で１回洗浄した。５００ｎＭのカルシウム感受性色素Ｆｌｕｏ−４（Molecular Probes）を含む同じ緩衝液中で、３７℃および５％ＣＯ２で１時間にわたって細胞を標識した。細胞を緩衝液で２回洗浄してから、９６ウェルのポリリジンコーティングを施した黒色の微量定量皿で１．５×１０５個／ウェル（９０μＬ）で平板培養した。スフィンゴシン−１−リン酸その他の作動薬をアッセイ緩衝液２００μＬで希釈することで９６ウェルリガンドプレートを作製して、最終試験濃度の２倍の濃度を得た。リガンドプレートと細胞プレートをＦＬＩＰＲ装置に入れて分析を行った。プレートを、３７℃で平衡状態とした。等量のリガンドを細胞プレートに移すことでアッセイを開始し、３分間の間隔をかけてカルシウムフラックスを記録した。細胞応答を、面積（合計）または最大ピーク高さ（最大）として定量した。適切な溶媒での化合物の希釈およびＦｌｕｏ−４標識細胞への移動によって、天然リガンドの非存在下で作動薬を評価した。Ｆｌｕｏ−４標識細胞を各種濃度の化合物で１５分間前処理してから、天然リガンドその他のＳ１Ｐ／Ｅｄｇ受容体作動薬を加えることでカルシウムフラックスを開始することによって、拮抗薬を評価した。
【０２１２】
Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇ受容体を発現する細胞の取得
各種方法のいずれかを用いて、Ｓ１Ｐ１／Ｅｄｇ１、Ｓ１Ｐ３／Ｅｄｇ３、Ｓ１Ｐ２／Ｅｄｇ５、Ｓ１Ｐ４／Ｅｄｇ６またはＳ１Ｐ５／Ｅｄｇ８をクローニングすることができる。その方法には、（１）ＲＡＣＥ  ＰＣＲクローニング法（Frohman, et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 8998-9002）［５′および／または３′ＲＡＣＥを行って、全長ｃＤＮＡ配列を形成することができる］；（２）適切な発現ベクター系におけるＳ１Ｐ／Ｅｄｇ含有ｃＤＮＡライブラリの構築後のＥｄｇ／Ｓ１ＰｃＤＮＡの直接機能的発現；（３）Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇタンパク質のアミノ酸配列から設計された標識縮重オリゴヌクレオチドプローブを用いたバクテリオファージもしくはプラスミドベクター中で構築されたＳ１Ｐ／Ｅｄｇ含有ｃＤＮＡライブラリのスクリーニング；（４）Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇタンパク質をコードする部分ｃＤＮＡを用いたバクテリオファージもしくはプラスミドベクター中で構築されたＳ１Ｐ／Ｅｄｇ含有ｃＤＮＡライブラリのスクリーニング［この部分ｃＤＮＡは、Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇタンパク質に関連する他のタンパク質について知られているアミノ酸配列からの縮重オリゴヌクレオチドプライマーの設計によるＳ１Ｐ／ＥｄｇＤＮＡ断片の特異的ＰＣＲ増幅によって得られる］；（５）哺乳動物Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇタンパク質に対する相同性を有する部分ｃＤＮＡまたはオリゴヌクレオチドを用いたバクテリオファージもしくはプラスミドベクター中で構築されたＳ１Ｐ／Ｅｄｇ含有ｃＤＮＡライブラリのスクリーニング［この戦略では、Ｓ１Ｐ／ＥｄｇｃＤＮＡのＰＣＲ増幅において遺伝子特異的オリゴヌクレオチドプライマーを使用する場合もある］；あるいは（６）Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇヌクレオチド配列を鋳型として用いて５′および３′遺伝子特異的オリゴヌクレオチドを設計して、公知のＲＡＣＥ法によって全長ｃＤＮＡを形成することができるか、あるいはその同じ公知のＲＡＣＥ法によってコード領域の一部を形成して、コード領域の一部を形成および単離して、多くの種類のｃＤＮＡおよび／またはゲノムライブラリのうちのひとつをスクリーニングするためのプローブとして用いて、Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇをコードするヌクレオチド配列の全長版を単離する方法などがあるが、これらに限定されるものではない。
【０２１３】
他の種類のライブラリならびに他の細胞種もしくは動物種から構築されたライブラリが、Ｓ１Ｐ／ＥｄｇをコードするＤＮＡまたはＳ１Ｐ／Ｅｄｇ同族体を単離する上で有用となり得ることは、当業者には容易に理解されるものである。他の種類のライブラリには、他の細胞由来のｃＤＮＡライブラリなどがあるが、それに限定されるものではない。
【０２１４】
好適なｃＤＮＡライブラリがＳ１Ｐ／Ｅｄｇ活性を有する細胞または細胞系から取得可能であることは、当業者には容易に理解されるものである。Ｓ１Ｐ／ＥｄｇをコードするｃＤＮＡを単離するためのｃＤＮＡライブラリを得るのに使用される細胞または細胞系の選択は、最初にそのような目的に利用可能な公知のアッセイを用いて細胞関連のＳ１Ｐ／Ｅｄｇ活性を測定することで行うことができる。
【０２１５】
ｃＤＮＡライブラリの取得は、当業界で公知の標準的な方法によって行うことができる。公知のｃＤＮＡライブラリ構築法は、例えばサムブロックらの著作（Sambrook et al., 1989, Molecular Cloning: A Laboratory Manual; Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York）に記載されている。相補的ＤＮＡライブラリは、クローンテク・ラボラトリーズ社（Clontech Laboratories, Inc.）およびストラタジーン（Stratagene）など（それらに限定されるものではない）の多くの商業的入手先からも得ることができる。
【０２１６】
Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇ様タンパク質をコードするＤＮＡを含む発現ベクターを、組換え宿主細胞におけるＳ１Ｐ／Ｅｄｇの発現に用いることができる。そのような組換え宿主細胞を好適な条件下で培養することで、Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇまたは生物学的に等価なものを得ることができる。発現ベクターには、クローニングベクター、変性クローニングベクター、特異的に設計されたプラスミドまたはウィルスなどがあり得るが、これらに限定されるものではない。商業的に入手可能な哺乳動物発現ベクターが、組換えＳ１Ｐ／Ｅｄｇ発現に好適である場合がある。
【０２１７】
組換え宿主細胞は、原核細胞または真核細胞であることができ、大腸菌などの細菌、酵母などの真菌細胞、ウシ、ブタ、サルおよび齧歯類起源の細胞系など（それらに限定されるものではない）の哺乳動物細胞；ならびにショウジョウバエおよびカイコ由来の細胞系など（それらに限定されるものではない）の昆虫細胞などがあるが、これらに限定されるものではない。
【０２１８】
各種Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇ受容体についてのヌクレオチド配列が当業界では公知である。例えば下記のものを参照する。
【０２１９】
Ｓ１Ｐ１／Ｅｄｇ１ヒト
Hla, T. and T. Maciag 1990 An abundant transcript induced in differentiating human endothelial cells encodes a polypeptide with structural similarities to G-protein coupled receptors. J. Biol Chem. 265: 9308-9313（参照によってその全内容が本明細書に組み込まれる）；
１９９１年１０月１７日公開のＷＯ９１／１５５８３（参照によってその全内容が本明細書に組み込まれる）； 
１９９９年９月１６日公開のＷＯ９９／４６２７７（参照によってその全内容が本明細書に組み込まれる）。
【０２２０】
Ｓ１Ｐ１／Ｅｄｇ１マウス
２０００年１０月１２日公開のＷＯ００５９５２９（参照によってその全内容が本明細書に組み込まれる）；
２００１年１１月２７日認可の米国特許第６３２３３３３号（参照によってその全内容が本明細書に組み込まれる）。
【０２２１】
Ｓ１Ｐ１／Ｅｄｇ１ラット
Lado, D. C. , C. S. Browe, A. A. Gaskin, J. M. Borden, and A. J. MacLennan. 1994 Cloning of the rat EDG-1 immediate-early gene: expression pattern suggests diverse functions. Gene 149: 331-336（参照によってその全内容が本明細書に組み込まれる）；
１９９６年１２月１７日認可の米国特許第５５８５４７６号（参照によってその全内容が本明細書に組み込まれる）；
１９９９年１月５日認可の米国特許第５８５６４４３号（参照によってその全内容が本明細書に組み込まれる）。
【０２２２】
Ｓ１Ｐ３／Ｅｄｇ３ヒト
An, S. , T. Bleu, W. Huang, O. G. Hallmark, S. R. Coughlin, E. J. Goetzl 1997 Identification of cDNAs encoding two G protein-coupled receptors for lysosphingolipids FEBS Lett. 417: 279-282（参照によってその全内容が本明細書に組み込まれる）；
１９９９年１１月２５日公開のＷＯ９９／６００１９（参照によってその全内容が本明細書に組み込まれる）；
２０００年１０月１０日認可の米国特許第６１３００６７号（参照によってその全内容が本明細書に組み込まれる）。
【０２２３】
Ｓ１Ｐ３／Ｅｄｇ３マウス
２００１年２月１５日公開のＷＯ０１／１１０２２（参照によってその全内容が本明細書に組み込まれる）。
【０２２４】
Ｓ１Ｐ３／Ｅｄｇ３ラット
２００１年４月１９日公開のＷＯ０１／２７１３７（参照によってその全内容が本明細書に組み込まれる）。
【０２２５】
Ｓ１Ｐ２／Ｅｄｇ５ヒト
An, S., Y. Zheng, T. Bleu 2000 Sphingosine 1-Phosphate-induced cell proliferation, survival, and related signaling events mediated by G Protein-coupled receptors Edg3 and Edg5. J. Biol. Chem 275: 288-296（参照によってその全内容が本明細書に組み込まれる）；
１９９９年７月１５日公開のＷＯ９９／３５２５９（参照によってその全内容が本明細書に組み込まれる）；
１９９９年１０月２８日公開のＷＯ９９／５４３５１（参照によってその全内容が本明細書に組み込まれる）；
２０００年９月２８日公開のＷＯ００／５６１３５（参照によってその全内容が本明細書に組み込まれる）。
【０２２６】
Ｓ１Ｐ２／Ｅｄｇ５マウス
２０００年１０月１２日公開のＷＯ００／６００５６（参照によってその全内容が本明細書に組み込まれる）。
【０２２７】
Ｓ１Ｐ２／Ｅｄｇ５ラット
Okazaki, H. , N. Ishizaka, T. Sakurai, K. Kurokawa, K. Goto, M. Kumada, Y. Takuwa 1993 Molecular cloning of a novel putative G protein-coupled receptor expressed in the cardiovascular system. Biochem. Biophys. Res. Comm. 190: 1104-1109（参照によってその全内容が本明細書に組み込まれる）；
MacLennan, A. J., C. S. Browe, A. A. Gaskin, D. C. Lado, G. Shaw 1994 Cloning and characterization of a putative G-protein coupled receptor potentially involved in development. Mol. Cell. Neurosci. 5: 201-209（参照によってその全内容が本明細書に組み込まれる）；
１９９６年１２月１７日認可の米国特許第５５８５４７６号（参照によってその全内容が本明細書に組み込まれる）；
１９９９年１月５日認可の米国特許第５８５６４４３号（参照によってその全内容が本明細書に組み込まれる）。
【０２２８】
Ｓ１Ｐ４／Ｅｄｇ６ヒト
Graler, M. H., G. Bernhardt, M. Lipp 1998 Edg6, a novel G-protein-coupled receptor related to receptors for bioactive lysophospholipids, is specifically expressed in lymphoid tissue. Genomics 53: 164-169（参照によってその全内容が本明細書に組み込まれる）；
１９９８年１０月２９日公開のＷＯ９８／４８０１６（参照によってその全内容が本明細書に組み込まれる）；
１９９９年６月１５日認可の米国特許第５９１２１４４号（参照によってその全内容が本明細書に組み込まれる）；
１９９８年１１月１２日公開のＷＯ９８／５０５４９（参照によってその全内容が本明細書に組み込まれる）；
２０００年５月９日日認可の米国特許第６０６０２７２号（参照によってその全内容が本明細書に組み込まれる）；
１９９９年７月１５日公開のＷＯ９９／３５１０６（参照によってその全内容が本明細書に組み込まれる）；
２０００年３月２３日公開のＷＯ００／１５７８４（参照によってその全内容が本明細書に組み込まれる）；
２０００年３月１６日公開のＷＯ００／１４２３３（参照によってその全内容が本明細書に組み込まれる）。
【０２２９】
Ｓ１Ｐ４／Ｅｄｇ６マウス
２０００年３月２０日公開のＷＯ００／１５７８４（参照によってその全内容が本明細書に組み込まれる）。
【０２３０】
Ｓ１Ｐ５／Ｅｄｇ８ヒト
Im, D. -S., J. Clemens, T. L. Macdonald, K. R. Lynch 2001 Characterization of the human and mouse sphingosine 1-phosphate receptor, S1P5 (Edg-8): Structure-Activity relationship of sphingosine 1-phosphate receptors. Biochemistry 40: 14053-14060（参照によってその全内容が本明細書に組み込まれる）；
２０００年３月２日公開のＷＯ００／１１１６６（参照によってその全内容が本明細書に組み込まれる）；
２０００年６月２日公開のＷＯ００／３１２５８（参照によってその全内容が本明細書に組み込まれる）；
２００１年１月１８日公開のＷＯ０１／０４１３９（参照によってその全内容が本明細書に組み込まれる）；
２００１年４月１１日公開のＥＰ１０９０９２５（参照によってその全内容が本明細書に組み込まれる）。
【０２３１】
Ｓ１Ｐ５／Ｅｄｇ８ラット
Im, D. -S., C. E. Heise, N. Ancellin, B. F. O′Dowd, G. -J. Shei, R. P. Heavens, M. R. Rigby, T. Hla, S. Mandala, G. McAllister, S. R. George, K. R. Lynch 2000 Characterization of a novel sphingosine 1-phosphate receptor, Edg-8. J. Biol. Chem. 275: 14281-14286（参照によってその全内容が本明細書に組み込まれる）；
２００１年１月２５日公開のＷＯ０１／０５８２９（参照によってその全内容が本明細書に組み込まれる）。
【０２３２】
心血管効果の測定
心血管パラメータに対する本発明の化合物の効果を、以下の手順によって評価することができる。成体雄ラット（体重約３５０ｇ）に、それぞれ動脈血圧測定および静脈化合物投与のための大腿動脈および静脈カテーテルを取り付けた。ネンブタール（５５ｍｇ／ｋｇ、腹腔内投与）で動物に麻酔を施した。血圧および心拍数を、グールド（Gould）Ｐｏ−Ｎｅ−Ｍａｈデータ獲得系で記録した。心拍数は、動脈パルス波由来であった。馴致期間後、基底線値読み取りを行い（約２０分）、データの平均を求めた。化合物を静脈投与し（約５秒間のボラス注射または１５分間の注入）、データを化合物投与後に１分ごとに６０分間にわたって記録した。データを、心拍数におけるピーク変化または平均動脈血圧として計算するか、あるいは時間に対する心拍数もしくは血圧における変化における曲線下の面積として計算する。データは、平均ＳＥＭとして表現する。片側の対応のあるスチュデントのｔ検定を基底線値に対する統計的比較に用い、ｐ＜０．０５で有意と見なした。
【０２３３】
ラット心血管系に対するＳ１Ｐ効果がスギヤマらの報告に記載されている（Sugiyama, A., N. N. Aye, Y. Yatomi, Y. Ozaki, K. Hashimoto 2000 Effects of Sphingosine-1-Phosphate, a naturally occurring biologically active lysophospholipid, on the rat cardiovascular system. Jpn. J. Pharmacol. 82: 338-342；参照によって全体が本明細書に組み込まれる）。
【０２３４】
マウス急性毒性の測定
１匹のマウスに、無毒性媒体に溶かした被験化合物０．１ｍＬを静脈投与し（尾静脈）、毒性の徴候を評価する。重度の徴候には、死亡、発作、麻痺または意識喪失などがあり得る。比較的軽度の徴候も記録し、それには運動失調、荒い呼吸、苛立ちまたは正常と比較して低下した活動などがあり得る。徴候を記録する際、投与溶液は同じ媒体で希釈する。希釈用量液を第２のマウスに同様にして投与し、同様に徴候の観察を行う。徴候を生じない用量に達するまでそのプロセスを繰り返す。それを、推定無効果レベルと見なす。別のマウスにそのレベルで投与を行って、徴候がないことを確認する。
【０２３５】
リンパ球減少症の評価
マウス急性毒性の評価に記載の方法に従って化合物を投与し、リンパ球減少症を以下にように投与３時間後にマウスで評価する。ＣＯ２によってマウスの意識を喪失させた後、胸部を開き、直接心臓穿刺によって血液０．５ｍＬを抜き取り、ＥＤＴＡによって血液を直ちに安定化させ、マウス百分率実施用に較正した臨床血液検査値自動分析装置（H2000, Careside, Culver City CA）を用いて、血液検査値を評価する。試験処置によるリンパ球減少を、マウス３匹と媒体投与マウス３匹の血液学パラメータを比較することで確認する。その評価に用いる用量は、上記の希釈方法の変法を用いた耐容性によって決定する。それに関しては、効果なしが望ましく、軽度の効果は許容され、重度に有毒な用量については一連の希釈を行って、ごく軽度の効果を生じるレベルとする。
【国際調査報告】
2005515259.tif 000060
2005515259.tif 000061
2005515259.tif 000062