(57)【要約】本発明は、梗塞の予防および梗塞の処置ならびに狭心症の処置のための、心臓保護成分を有する抗不整脈剤として適する式（Ｉ）のジヒドロ−チア−フェナントレン−カルボニル−グアニジン（式中、Ｒ1〜Ｒ9は明細書で示した意味を有する）に関する。該化合物は、虚血により誘導される傷害に起因する、特に虚血により誘導される心臓不整脈を開始させる病態生理学的過程を抑制すると共に防御する。  【化１】2005517015.tif 000024
2005517015.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2005517015.tif 000023
〔式中の意味が：
Ｒ（１）およびＲ（３）は、
互いに独立して、水素、１、２、３もしくは４個の炭素原子を有するアルキル、１、２、３もしくは４個の炭素原子を有するアルコキシ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＮ、ＮＲ（１０）Ｒ（１１）、−Ｏp−(ＣＨ2)n−(ＣＦ2)x−ＣＦ3または−(ＳＯm)p−(ＣＨ2)n−(ＣＦ2)x−ＣＦ3であり；
Ｒ（１０）およびＲ（１１）は、
互いに独立して、水素、１、２、３もしくは４個の炭素原子を有するアルキルまたは−(ＣＨ2)n−(ＣＦ2)x−ＣＦ3であり；
ｍは、ゼロ、１または２であり；
ｎは、ゼロ、１、２、３、４、５または６であり；
ｘおよびｐは、
互いに独立して、ゼロまたは１であり；
Ｒ（２）は、水素、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＮ、１、２、３または４個の炭素原子を有するアルキル、メトキシ、３、４、５、６、７または８個の炭素原子を有するシクロアルキルであり；
Ｒ（４）およびＲ（５）は、
互いに独立して、水素、１、２、３または４個の炭素原子を有するアルキルであり；
Ｒ（６）、Ｒ（７）、Ｒ（８）およびＲ（９）は、
互いに独立して、水素、１、２、３もしくは４個の炭素原子を有するアルキル；１、２、３もしくは４個の炭素原子を有するアルコキシ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＮ、ＮＲ（１２）Ｒ（１３）、−Ｏq−(ＣＨ2)r−(ＣＦ2)s−ＣＦ3または−(ＳＯw)t−(ＣＨ2)u−(ＣＦ2)v−ＣＦ3であり；
Ｒ（１２）およびＲ（１３）は、
互いに独立して、水素、１、２、３または４個の炭素原子を有するアルキルであり；
ｗは、ゼロ、１または２であり；
ｒおよびｕは、
ゼロ、１、２、３、４、５または６であり；
ｑ、ｓ、ｔおよびｖは、
互いに独立して、ゼロまたは１であり；
または
Ｒ（６）およびＲ（７）、またはＲ（７）およびＲ（８）、またはＲ（８）およびＲ（９）は、
それらを担持するフェニル環と一緒になって、ナフタレン系を形成し；
Ａは、−Ｓ−、−ＳＯ−または−ＳＯ2−である〕、
のジヒドロチアフェナントレンカルボニルグアニジンおよびその製薬上好適な塩。
【請求項２】
式中の意味が、
Ｒ（１）およびＲ（３）は、
互いに独立して、水素、メチル、エチル、メトキシ、エトキシ、Ｆ、Ｃｌ、ＣＮ、ＮＲ（１０）Ｒ（１１）、−Ｏp−(ＣＨ2)n−ＣＦ3または−(ＳＯm)p−(ＣＨ2)n−ＣＦ3であり；
Ｒ（１０）およびＲ（１１）は、
互いに独立して、水素、メチル、エチルまたは−ＣＨ2−ＣＦ3であり；
ｍは、ゼロ、１または２であり；
ｎは、ゼロ、１、２または３であり；
ｐは、互いに独立して、ゼロまたは１であり；
Ｒ（２）は、水素、Ｆ、Ｃｌ、ＣＮ、１、２、３または４個の炭素原子を有するアルキル、メトキシ、３、４、５または６個の炭素原子を有するシクロアルキルであり；
Ｒ（４）およびＲ（５）は、
互いに独立して、水素、メチルまたはエチルであり；
Ｒ（６）、Ｒ（７）、Ｒ（８）およびＲ（９）は、
互いに独立して、水素、１、２、３もしくは４個の炭素原子を有するアルキル；メトキシ、エトキシ、Ｆ、Ｃｌ、ＣＮ、ＮＲ（１２）Ｒ（１３）、−Ｏq−(ＣＨ2)r−ＣＦ3または−(ＳＯw)t−(ＣＨ2)u−ＣＦ3であり；
Ｒ（１２）およびＲ（１３）は、
互いに独立して、水素、メチルまたはエチルであり；
ｗは、ゼロ、１または２であり；
ｒおよびｕは、
ゼロ、１、２または３であり；
ｑおよびｔは、
互いに独立して、ゼロまたは１であり；
または
Ｒ（６）およびＲ（７）、またはＲ（７）およびＲ（８）、またはＲ（８）およびＲ（９）は、
それらを担持するフェニル環と一緒になって、ナフタレン系を形成し；
Ａは、−Ｓ−、−ＳＯ−または−ＳＯ2−である、
請求項１に記載の式Ｉの化合物およびその製薬上好適な塩。
【請求項３】
式中の意味が、
Ｒ（１）は、
水素、メチル、エチル、メトキシ、エトキシ、Ｆ、Ｃｌ、ＮＲ（１０）Ｒ（１１）、−Ｏp−(ＣＨ2)n−ＣＦ3または−(ＳＯm)p−(ＣＨ2)n−ＣＦ3であり；
Ｒ（１０）およびＲ（１１）は、
互いに独立して、水素、メチル、エチルまたは−ＣＨ2−ＣＦ3であり；
ｍは、ゼロ、１または２であり；
ｎ、ｐは、互いに独立して、ゼロまたは１であり；
Ｒ（２）は、水素、Ｆ、Ｃｌ、メチル、３、４、５または６個の炭素原子を有するシクロアルキルであり；
Ｒ（３）、Ｒ（４）およびＲ（５）は、
水素であり；
Ｒ（６）、Ｒ（７）、Ｒ（８）およびＲ（９）は、
互いに独立して、水素、メチル；メトキシ、エトキシ、Ｆ、Ｃｌ、ＮＲ（１２）Ｒ（１３）、−Ｏq−(ＣＨ2)r−ＣＦ3または−(ＳＯw)t−(ＣＨ2)u−ＣＦ3であり；
Ｒ（１２）およびＲ（１３）は、
互いに独立して、水素、メチルまたはエチルであり；
ｗは、ゼロ、１または２であり；
ｑ、ｒ、ｔおよびｕは、
互いに独立して、ゼロまたは１であり；
または
Ｒ（６）およびＲ（７）、またはＲ（７）およびＲ（８）、またはＲ（８）およびＲ（９）は、
それらを担持するフェニル環と一緒になって、ナフタレン系を形成し；
Ａは、−Ｓ−、−ＳＯ−または−ＳＯ2−である、
請求項１または２に記載の式Ｉの化合物およびその製薬上好適な塩。
【請求項４】
式中の意味が、
Ｒ（１）は、
水素、メチル、メトキシ、エトキシ、Ｃｌ、ＮＲ（１０）Ｒ（１１）、−Ｏ−ＣＨ2−ＣＦ3または−(ＳＯm)p−(ＣＨ2)n−ＣＦ3であり；
Ｒ（１０）およびＲ（１１）は、
互いに独立して、水素、メチル、エチルまたは−ＣＨ2−ＣＦ3であり；
ｍは、ゼロ、１または２であり；
ｐは、ゼロまたは１であり；
Ｒ（２）は、水素、Ｆ、Ｃｌまたはメチルであり；
Ｒ（３）、Ｒ（４）およびＲ（５）は、
水素であり；
Ｒ（６）、Ｒ（７）、Ｒ（８）およびＲ（９）は、
互いに独立して、水素、メチル、メトキシ、エトキシ、Ｆ、Ｃｌ、−Ｏ−ＣＨ2−ＣＦ3または−(ＳＯw)t−(ＣＨ2)u−ＣＦ3であり；
ｗは、ゼロ、１または２であり；
ｔおよびｕは、
互いに独立して、ゼロまたは１であり；
または
Ｒ（６）およびＲ（７）、またはＲ（７）およびＲ（８）、またはＲ（８）およびＲ（９）は、
それらを担持するフェニル環と一緒になって、ナフタレン系を形成し；
Ａは、−ＳＯ2−である、
請求項１〜３のいずれか１項に記載の式Ｉの化合物およびその製薬上好適な塩。
【請求項５】
虚血性状態によって引き起こされる障害を処置または予防する医薬を製造するための、請求項１に記載の化合物Ｉの使用。
【請求項６】
慣用の添加物と混合し、好適な投与形態で投与する請求項１に記載の化合物Ｉの有効量を含む、虚血性状態によって引き起こされる障害を処置または予防する方法。
【請求項７】
心筋梗塞または不整脈を処置または予防する医薬を製造するための、請求項１に記載の化合物Ｉの使用。
【請求項８】
狭心症を処置または予防する医薬を製造するための、請求項１に記載の化合物Ｉの使用。
【請求項９】
心臓の虚血性状態を処置または予防する医薬を製造するための、請求項１に記載の化合物Ｉの使用。
【請求項１０】
末梢および中枢神経系ならびに卒中の虚血性状態を処置または予防する医薬を製造するための、請求項１に記載の化合物Ｉの使用。
【請求項１１】
末梢器官および四肢の虚血性状態を処置または予防する医薬を製造するための、請求項１に記載の化合物Ｉの使用。
【請求項１２】
ショックの状態を処置または予防する医薬を製造するための、請求項１に記載の化合物Ｉの使用。
【請求項１３】
外科手術および臓器移植をする間に用いる医薬を製造するための、請求項１に記載の化合物Ｉの使用。
【請求項１４】
外科操作のための移植組織片を保存または貯蔵する医薬を製造するための、請求項１に記載の化合物Ｉの使用。
【請求項１５】
細胞増殖が一次性または二次性原因を表す障害を処置する医薬を製造するための、請求項１に記載の化合物Ｉの使用。
【請求項１６】
脂質代謝の障害を処置または予防する医薬を製造するための、請求項１に記載の化合物Ｉの使用。
【請求項１７】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物Ｉの有効量を含む医薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ジヒドロチアフェナントレンカルボニルグアニジン、それらの製造方法、医薬または診断補助剤としてのそれらの使用およびそれらを含む医薬に関する。
【発明の開示】
【０００２】
本発明は、式Ｉのジヒドロチアフェナントレンカルボニルグアニジン：
【化１】
2005517015.tif 000003
（式中の意味が：
Ｒ（１）およびＲ（３）は、
互いに独立して、水素、１、２、３もしくは４個の炭素原子を有するアルキル、１、２、３もしくは４個の炭素原子を有するアルコキシ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＮ、ＮＲ（１０）Ｒ（１１）、−Ｏp−(ＣＨ2)n−(ＣＦ2)x−ＣＦ3または−(ＳＯm)p−(ＣＨ2)n−(ＣＦ2)x−ＣＦ3であり；
Ｒ（１０）およびＲ（１１）は、
互いに独立して、水素、１、２、３もしくは４個の炭素原子を有するアルキルまたは−(ＣＨ2)n−(ＣＦ2)x−ＣＦ3であり；
ｍは、ゼロ、１または２であり；
ｎは、ゼロ、１、２、３、４、５または６であり；
ｘおよびｐは、
互いに独立して、ゼロまたは１であり；
【０００３】
Ｒ（２）は、水素、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＮ、１、２、３または４個の炭素原子を有するアルキル、メトキシ、３、４、５、６、７または８個の炭素原子を有するシクロアルキルであり；
Ｒ（４）およびＲ（５）は、
互いに独立して、水素、１、２、３または４個の炭素原子を有するアルキルであり；
Ｒ（６）、Ｒ（７）、Ｒ（８）およびＲ（９）は、
互いに独立して、水素、１、２、３もしくは４個の炭素原子を有するアルキル；１、２、３もしくは４個の炭素原子を有するアルコキシ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＮ、ＮＲ（１２）Ｒ（１３）、−Ｏq−(ＣＨ2)r−(ＣＦ2)s−ＣＦ3または−(ＳＯw)t−(ＣＨ2)u−(ＣＦ2)v−ＣＦ3であり；
Ｒ（１２）およびＲ（１３）は、
互いに独立して、水素、１、２、３または４個の炭素原子を有するアルキルであり；
ｗは、ゼロ、１または２であり；
ｒおよびｕは、
ゼロ、１、２、３、４、５または６であり；
ｑ、ｓ、ｔおよびｖは、
互いに独立して、ゼロまたは１であり；
または
Ｒ（６）およびＲ（７）、またはＲ（７）およびＲ（８）、またはＲ（８）およびＲ（９）は、
それらを担持するフェニル環と一緒になって、ナフタレン系を形成し；
Ａは、−Ｓ−、−ＳＯ−または−ＳＯ2−である）、
およびその製薬上好適な塩に関する。
【０００４】
好ましいものは、式中の意味が：
Ｒ（１）およびＲ（３）は、
互いに独立して、水素、メチル、エチル、メトキシ、エトキシ、Ｆ、Ｃｌ、ＣＮ、ＮＲ（１０）Ｒ（１１）、−Ｏp−(ＣＨ2)n−ＣＦ3または−(ＳＯm)p−(ＣＨ2)n−ＣＦ3であり；
Ｒ（１０）およびＲ（１１）は、
互いに独立して、水素、メチル、エチルまたは−ＣＨ2−ＣＦ3であり；
ｍは、ゼロ、１または２であり；
ｎは、ゼロ、１、２または３であり；
ｐは、互いに独立して、ゼロまたは１であり；
Ｒ（２）は、水素、Ｆ、Ｃｌ、ＣＮ、１、２、３または４個の炭素原子を有するアルキル、メトキシ、３、４、５または６個の炭素原子を有するシクロアルキルであり；
Ｒ（４）およびＲ（５）は、
互いに独立して、水素、メチルまたはエチルであり；
Ｒ（６）、Ｒ（７）、Ｒ（８）およびＲ（９）は、
互いに独立して、水素、１、２、３もしくは４個の炭素原子を有するアルキル；メトキシ、エトキシ、Ｆ、Ｃｌ、ＣＮ、ＮＲ（１２）Ｒ（１３）、−Ｏq−(ＣＨ2)r−ＣＦ3または−(ＳＯw)t−(ＣＨ2)u−ＣＦ3であり；
Ｒ（１２）およびＲ（１３）は、
互いに独立して、水素、メチルまたはエチルであり；
ｗは、ゼロ、１または２であり；
ｒおよびｕは、
ゼロ、１、２または３であり；
ｑおよびｔは、
互いに独立して、ゼロまたは１であり；
または
Ｒ（６）およびＲ（７）、またはＲ（７）およびＲ（８）、またはＲ（８）およびＲ（９）は、
それらを担持するフェニル環と一緒になって、ナフタレン系を形成し；
Ａは、−Ｓ−、−ＳＯ−または−ＳＯ2−である、
式Ｉの化合物およびその製薬上好適な塩である。
【０００５】
特に好ましいものは、式中の意味が：
Ｒ（１）は、
水素、メチル、エチル、メトキシ、エトキシ、Ｆ、Ｃｌ、ＮＲ（１０）Ｒ（１１）、−Ｏp−(ＣＨ2)n−ＣＦ3または−(ＳＯm)p−(ＣＨ2)n−ＣＦ3であり；
Ｒ（１０）およびＲ（１１）は、
互いに独立して、水素、メチル、エチルまたは−ＣＨ2−ＣＦ3であり；
ｍは、ゼロ、１または２であり；
ｎ、ｐは、互いに独立して、ゼロまたは１であり；
Ｒ（２）は、水素、Ｆ、Ｃｌ、メチル、３、４、５または６個の炭素原子を有するシクロアルキルであり；
Ｒ（３）、Ｒ（４）およびＲ（５）は、
水素であり；
Ｒ（６）、Ｒ（７）、Ｒ（８）およびＲ（９）は、
互いに独立して、水素、メチル；メトキシ、エトキシ、Ｆ、Ｃｌ、ＮＲ（１２）Ｒ（１３）、−Ｏq−(ＣＨ2)r−ＣＦ3または−(ＳＯw)t−(ＣＨ2)u−ＣＦ3であり；
Ｒ（１２）およびＲ（１３）は、
互いに独立して、水素、メチルまたはエチルであり；
ｗは、ゼロ、１または２であり；
ｑ、ｒ、ｔおよびｕは、
互いに独立して、ゼロまたは１であり；
または
Ｒ（６）およびＲ（７）、またはＲ（７）およびＲ（８）、またはＲ（８）およびＲ（９）は、
それらを担持するフェニル環と一緒になって、ナフタレン系を形成し；
Ａは、−Ｓ−、−ＳＯ−または−ＳＯ2−である、
式Ｉの化合物およびその製薬上好適な塩である。
【０００６】
非常に特に好ましいものは、式中の意味が：
Ｒ（１）は、
水素、メチル、メトキシ、エトキシ、Ｃｌ、ＮＲ（１０）Ｒ（１１）、−Ｏ−ＣＨ2−ＣＦ3または−(ＳＯm)p−(ＣＨ2)n−ＣＦ3であり；
Ｒ（１０）およびＲ（１１）は、
互いに独立して、水素、メチル、エチルまたは−ＣＨ2−ＣＦ3であり；
ｍは、ゼロ、１または２であり；
ｐは、ゼロまたは１であり；
Ｒ（２）は、水素、Ｆ、Ｃｌまたはメチルであり；
Ｒ（３）、Ｒ（４）およびＲ（５）は、
水素であり；
Ｒ（６）、Ｒ（７）、Ｒ（８）およびＲ（９）は、
互いに独立して、水素、メチル；メトキシ、エトキシ、Ｆ、Ｃｌ、−Ｏ−ＣＨ2−ＣＦ3または−(ＳＯw)t−(ＣＨ2)u−ＣＦ3であり；
ｗは、ゼロ、１または２であり；
ｔおよびｕは、
互いに独立して、ゼロまたは１であり；
または
Ｒ（６）およびＲ（７）、またはＲ（７）およびＲ（８）、またはＲ（８）およびＲ（９）は、
それらを担持するフェニル環と一緒になって、ナフタレン系を形成し；
Ａは、−ＳＯ2−である、
化合物およびその製薬上好適な塩である。
【０００７】
式Ｉの化合物は、適切に置換されて、立体異性体型で存在することができる。式Ｉの化合物が１個またはそれ以上の不斉中心を含有する場合には、これらは互いに独立して、Ｓ配置またはＲ配置を有すことができる。全ての可能な立体異性体、例えばエナンチオマーまたはジアステレオマー、および２種またはそれ以上の立体異性体の任意比率の混合物、例えばエナンチオマーおよび／またはジアステレオマーは、本発明に属する。従って、例えば、左旋性および右旋性対掌体の両者として光学的に純粋な形態、ならびに２種のエナンチオマーの種々の比率の混合物の形態またはラセミ体の形態のエナンチオマーが、本発明に属する。個々の立体異性体は、所望により、慣用法による混合物の分別、または例えば立体選択的合成によって製造することができる。移動性水素原子が存在するならば、本発明は、式Ｉの化合物の全ての互変異性体も含む。
【０００８】
指定したアルキル基は、直鎖状または分枝状であってよい。さらに、本発明は、式ＩＩの化合物
【化２】
2005517015.tif 000004
（式中、Ｒ（１）〜Ｒ（９）およびＡは上記の意味を有し、そしてＬは容易に求核置換を受ける脱離基である）をグアニジンと反応させることを含む、式Ｉの化合物の製造方法に関する。
【０００９】
Ｌがアルコキシ、好ましくはメトキシ基、フェノキシ基、フェニルチオ、メチルチオ、２−ピリジルチオ基、窒素ヘテロ環、好ましくは１−イミダゾリルである式ＩＩの活性化酸誘導体は、基礎をなすカルボニルクロリド（式ＩＩ、Ｌ＝Ｃｌ）（これ自体は、基礎をなすカルボン酸（式ＩＩ、Ｌ＝ＯＨ）から本来公知の手段で製造できる）から、例えばチオニルクロリドを用いて、本来公知の手段で有利に得られる。
【００１０】
式ＩＩのカルボニルクロリド（Ｌ＝Ｃｌ）のほかに、他の式ＩＩの活性化酸誘導体は、基礎をなす安息香酸誘導体（式ＩＩ、Ｌ＝ＯＨ）から本来公知の手段で製造することもでき、例えば、Ｌ＝ＯＣＨ3である式ＩＩのメチルエステルは、メタノール中のガス状ＨＣｌで処理することにより、式ＩＩのイミダゾリドは、カルボニルジイミダゾールで処理することにより［Ｌ＝１−イミダゾリル、Ｓｔａａｂ，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．１，３５１−３６７（１９６２）］、混合無水物ＩＩは、不活性溶剤中でトリエチルアミンの存在下にＣｌ−ＣＯＯＣ2Ｈ5またはトシルクロリドで処理することにより、ならびに安息香酸をジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）またはＯ−［（シアノ（エトキシカルボニル）メチレン）アミノ]−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（「ＴＯＴＵ」）で活性化することにより［Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ２１ｓｔ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ，Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  １９９０，Ｅｄｉｔｏｒｓ  Ｅ．Ｇｉｒａｌｔ  ａｎｄ  Ｄ．Ａｎｄｒｅｕ，Ｅｓｃｏｍ，Ｌｅｉｄｅｎ，１９９１］、得ることができる。式ＩＩの活性化カルボン酸誘導体を製造するための多数の好適な方法は、Ｊ．Ｍａｒｃｈ，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９８５），３５０頁に示されており、出典となる文献が示されている。
【００１１】
式ＩＩの活性化カルボン酸誘導体とグアニジンとの反応は、本来公知の手段で、プロトン性または非プロトン性の極性であるが不活性の有機溶剤中で行われる。安息香酸メチル（ＩＩ、Ｌ＝ＯＭｅ）とグアニジノメタノールとの反応において好適であることが証明されているものは、イソプロパノールまたはＴＨＦであり、２０℃からこれらの溶剤の沸点までの温度である。化合物ＩＩと塩不含グアニジンとの反応の大部分は、非プロトン性の不活性溶剤、例えばＴＨＦ、ジメトキシエタン、ジオキサン中で有利に行われてきた。しかしながら、例えばＮａＯＨのような塩基を用いるならば、ＩＩとグアニジンとの反応に水を溶剤として用いることもできる。ＬがＣｌである場合には、酸掃去剤を、例えば過剰のグアニジンの形で添加してハロ水素酸を結合することが有利である。
【００１２】
ジヒドロチアフェナントレンカルボン酸骨格を組み立てるには、有利には、適切に置換
されたベンジルスルファニル、フェニルメタンスルフィニルまたはフェニルメタンスルホニル化合物から出発する。これらは、原理的に公知のように、分子内アリール−アリールカップリングに付される（Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．９５（７），２４５７（１９９５）または“Ｍｅｔａｌ−ｃａｔａｌｙｚｅｄ  Ｃｒｏｓｓ−ｃｏｕｐｌｉｎｇ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ”，Ｄｉｅｄｅｒｉｃｈ，Ｆｒａｎｃｏｉｓ；Ｓｔａｎｇ，Ｐｅｔｅｒ  Ｊ．；Ｅｄｉｔｏｒｓ  Ｇｅｒｍａｎｙ（１９９８）  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ：（Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ），５１７）またはＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ（１９９８），５４（３／４），２６３参照）。ボロン酸を、アリールクロリド、アリールブロミド、アリールヨージドのような好適なアリールハライドと、またはアリールメシレートもしくはアリールトリフルオロメタンスルホネートのような好適なアリールエステルとカップリングさせることが好ましい。これらの場合、ベンジルおよび安息香酸反応関与体の両方にボロン酸官能を導入しておくことができる。Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．（１９９７），３８（２２），３８４１−３８４４に記載されているように、ビス（ピナコラート）ジボロンを用いることも、特に好ましい。式ＩＩＩはこのような出発材料を説明しており、この式中、Ｒ（１）〜Ｒ（９）およびＡおよびＬは上記の意味を有し、ならびにＸおよびＹはそれぞれハロゲンまたは−Ｏ−ＳＯ2ＣＨ3または−Ｏ−ＳＯ2ＣＦ3である。好ましい触媒金属はパラジウムであり、その錯体Ｐｄ（ｄｐｐｆ）2が特に好ましい。反応は、双極性の非プロトン性溶剤、好ましくはＤＭＦまたはＤＭＡ中で、０℃から溶剤の沸点までの温度、好ましくは４０℃〜１２０℃の温度で行われる。
【００１３】
【化３】
2005517015.tif 000005
【００１４】
一般式ＩＩＩの誘導体は、好ましくは、式ＩＶの３−メルカプト安息香酸誘導体または３−スルフィノ安息香酸誘導体から、式Ｖの活性化ベンジル誘導体を用いて製造される：
【化４】
2005517015.tif 000006
【００１５】
この場合、Ｚは、例えば塩素、臭素、ヨウ素、メシレート、トシレートまたはトリフルオロメタンスルホネートのような容易に求核置換を受ける脱離基である。誘導体ＩＶおよ
びＶを、ＤＭＦ、ＴＨＦまたはアセトニトリルのような好適な溶剤中で、トリエチルアミンまたはＤＩＰＥＡのような塩基を用いて、−２０℃から溶剤の沸点までの温度、好ましくは０℃〜４０℃の温度で反応させる。
【００１６】
アロイルグアニジンＩは、一般的に弱塩基であり、そして酸を結合して塩を形成することができる。好適な酸付加塩は、全ての製薬上許容される酸の塩、例えばハライド、特に塩酸塩、乳酸塩、硫酸鉛、クエン酸塩、酒石酸塩、酢酸塩、リン酸塩、メチルスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩である。化合物Ｉは、置換されたアシルグアニジンである。
【００１７】
公知の化合物と比較して、本発明の化合物は、Ｎａ+／Ｈ+交換の抑制における非常に高い活性によって区別される。
【００１８】
公知の化合物と全く同様に、本発明の化合物は望ましくなく不利な塩分排泄特性を有しないが、例えば酸素欠乏の発症に関連して生じる障害の処置のために重要であるように、非常に良好な抗不整脈特性を有する。それらの薬理学的特性の結果として、本化合物は、梗塞の予防および梗塞の処置ならびに狭心症の処置のための心臓保護成分を有する抗不整脈剤として著しく適しており、それらは虚血により誘導される損傷の発達に関連する病態生理学的過程を、特に虚血により誘導される心臓不整脈の開始について、予防的手段で抑制するか、または大きく減少させる。病因性の低酸素および虚血性状況に対するそれらの保護効果のために、本発明の式Ｉの化合物は、細胞性Ｎａ+／Ｈ+交換機構を抑制する結果として、虚血により誘導される全ての急性もしくは慢性損傷、またはそれから一次的もしくは二次的に誘導される障害を処置するための医薬として使用することができる。これは、外科手術のための、例えば臓器移植においける医薬としての、それらの使用に関し、この場合、本化合物は、ドナーの臓器を摘出する前および間に保護するため、ならびに例えば臓器を生理的浴液で処理または該浴液中で貯蔵する間およびレシピエント生物体に移入する際に、摘出臓器を保護するため、の両方に使用することができる。同様に、本化合物は、血管形成外科手術を例えば心臓および末梢の血管に行う場合に、保護効果を有する価値ある医薬である。虚血により誘導される損傷に対するそれらの保護効果により、本化合物は、神経系、特にＣＮＳの虚血を処置するための医薬としても適しており、例えば卒中または脳浮腫を処置するため適している。加えて、本発明の式Ｉの化合物は、例えばアレルギー性、心臓性、血液量減少性および細菌性のショックのような型のショックを処置するためにも適している。
【００１９】
加えて、本発明の式Ｉの化合物は、細胞の増殖、例えば線維芽細胞増殖および血管平滑筋細胞の増殖に対する強い抑制効果によって区別される。それ故に、式Ｉの化合物は、細胞増殖が一次性または二次性原因を表す障害に対する価値ある治療剤として適しており、従って、抗アテローム性動脈硬化剤、糖尿病の遅発性合併症、癌、肺線維症、肝線維症または腎線維症のような線維症障害、臓器の肥大および過形成、特に前立腺過形成および前立腺肥大を予防する薬剤として使用することができる。
【００２０】
本発明の化合物は、細胞性ナトリウム−プロトン逆輸送体（Ｎａ+／Ｈ+交換体）の有効な抑制剤であり、この逆輸送体は、多くの障害（本態性高血圧、アテローム性動脈硬化、糖尿病など）において、例えば赤血球、血小板または白血球のような容易に測定できる細胞中でも増加する。それ故に、本発明の化合物は、例えば、高血圧だけでなく、アテローム性動脈硬化、糖尿病、増殖性障害などの特定の型を決定および識別するための診断補助剤として該化合物を使用する際の、優秀かつ単純な科学的ツールとして適している。加えて、式Ｉの化合物は、高血圧、例えば本態性高血圧の進行を予防する予防治療のために適している。
【００２１】
さらに、式Ｉの化合物は、血清リポタンパク質に対して有益な効果を示すことを見出した。高すぎる血中脂質レベル、いわゆる高リポタンパク血症は、アテローム性動脈硬化性血管病変、特に冠状動脈性心疾患の進行に対して相当の危険因子を表すことが、一般的に認められている。それ故に、上昇した血清リポタンパク質を低下させることは、アテローム性動脈硬化性病変の予防および退縮のために非常に重要である。全血清コレステロールの低下ほかに、この全コレステロールの特定のアテローム形成性脂質分画、特に低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）および超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）の割合を低下させることは、これらの脂質分画がアテローム形成性危険因子を表すので、特に重要である。反対に、冠状動脈性心疾患に対する保護機能は、高密度リポタンパク質に帰因する。従って、脂肪血低下剤は、全コレステロールだけでなく、特にＶＬＤＬおよびＬＤＬ血清コレステロール分画を減少できるようにするべきである。今回、式Ｉの化合物が、血清脂質レベルに対する効果に関して価値ある治療上利用可能な特性を示すことを見出した。このように、本化合物は、例えば、コレステロールおよび脂質に富んだ食物の食事性摂取の増加により、または病因性代謝変化、例えば遺伝に関係する高脂肪血症に関連して観察される、上昇した血清ＬＤＬおよびＶＬＤＬ濃度を有意に低下させる。それ故に、本化合物は、原因的危険因子の除去によって、アテローム性動脈硬化性病変の予防および退縮のために用いることができる。これらは、一次性高脂肪血だけでなく、例えば糖尿病に関連して生じるような一定の二次性高脂肪血を含む。加えて、式Ｉの化合物は、代謝異常により誘導される梗塞の顕著な減少、ならびに特に誘導された梗塞のサイズおよびその重症度の有意な減少に導く。さらに、式Ｉの化合物は、代謝異常により誘導される内皮性損傷に対する有効な保護に導く。内皮性機能不全の症候群に対するこの血管保護は、式Ｉの化合物を、冠状動脈血管痙攣、アテローム形成およびアテローム性動脈硬化、左心室肥大および拡張性心筋症ならびに血栓性障害を予防および処置するための価値ある医薬にする。
【００２２】
それ故に、上記化合物は、高コレステロール血症を処置する医薬を製造するため；アテローム形成を予防する医薬を製造するため；アテローム性動脈硬化を予防および処置する医薬を製造するため；上昇したコレステロールレベルにより誘導される障害を予防および処置する医薬を製造するため；内皮性機能不全により誘導される障害を予防および処置する医薬を製造するため；アテローム性動脈硬化により誘導される高血圧を予防および処置する医薬を製造するため；アテローム性動脈硬化により誘導される血栓症を予防および処置する医薬を製造するため；高コレステロール血症により誘導され、かつ内皮性機能不全により誘導される虚血性損傷および虚血後潅流障害を予防および処置する医薬を製造するため；高コレステロール血症により誘導され、かつ内皮性機能不全により誘導される心臓肥大、心筋症およびうっ血性心不全（ＣＨＦ）を予防および処置する医薬を製造するため；高コレステロール血症により誘導され、かつ内皮性機能不全により誘導される冠状動脈血管痙攣および心筋梗塞を予防および処置する医薬を製造するため；降圧物質、好ましくはアンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤およびアンギオテンシン受容体拮抗剤と組み合わせて上記障害を処置する医薬、式ＩのＮＨＥ抑制剤と脂肪血低下活性成分、好ましくはＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤（例えばロバスタチンまたはプラバスタチン）との組み合わせを製造するために、有利に用いられ、脂肪血低下効果を有し、従って式ＩのＮＨＥ抑制剤の低脂血特性を増大する後者は、増強された効果および減少した活性成分の使用により、好ましい組み合わせであることがわかる。
【００２３】
上昇した血中脂質レベルを低下させるための新規医薬としての式Ｉのナトリウム／プロトン交換抑制剤の投与、ならびにナトリウム／プロトン交換抑制剤と血圧降下剤および／または脂肪血低下活性を有する医薬との組み合わせを、特許請求している。
【００２４】
また、式Ｉのナトリウム／プロトン交換抑制剤の投与、ならびに、ＣＨＦを処置するための新規医薬としての、式Ｉのナトリウム／プロトン交換抑制剤と血圧降下剤、特にＡＣＥ抑制剤（例えばラミプリル）およびアンギオテンシン受容体拮抗剤（例えばロサルタン
）との組み合わせを、特許請求している。
【００２５】
さらに、化合物Ｉを含む医薬は、経口的、非経口的、静脈内、直腸内に、または吸入により投与することができ、好ましい投与は障害の特別の出現に依存する。さらに、化合物Ｉは、単独で、または製薬用賦形剤と一緒に、獣医学上の医薬またはヒトの医薬に使用することができる。
【００２６】
当業者は彼の専門知識に基づいて、所望の製薬処方物に適する賦形剤に精通している。溶剤、ゲル形成剤、坐剤用基剤、錠剤用賦形剤および他の活性成分用担体のほかに、例えば抗酸化剤、分散剤、乳化剤、消泡剤、矯味矯臭剤、保存剤、可溶化剤または着色剤を使用することが可能である。
【００２７】
経口使用のための形態の場合、活性化合物は、この目的に適する添加物、例えば担体、安定剤または不活性希釈剤と混合され、そして慣用法により好適な投与形態、例えば錠剤、被服錠剤、ツーピースカプセル、水性、アルコール性または油性の溶液に変換される。使用できる不活性担体の例は、アラビアゴム、マグネシア、炭酸マグネシウム、リン酸カリウム、乳糖、ブドウ糖または澱粉、特にトウモロコシ澱粉である。さらに、調製は、乾燥または湿潤顆粒の両方として行うことができる。好適な油性の担体または溶剤の例は、植物油または動物油、例えばヒマワリ油または魚肝油である。
【００２８】
皮下または静脈内投与の場合、活性化合物は、所望により、この目的に慣用の物質、例えば可溶化剤、乳化剤または他の助剤を用いて、溶液、懸濁液またはエマルジョンに変換される。好適な溶剤の例は次のものである：水、生理食塩水またはアルコール、例えばエタノール、プロパノール、グリセロール、ブドウ糖もしくはマンニトール溶液のような糖溶液、またはそのほかに上記の種々の溶剤の混合物。
【００２９】
エアゾールまたはスプレーの形態での投与するための製剤処方物として適するものは、例えば、特にエタノールもしくは水またはこれらの溶剤の混合物のような製薬上許容される溶剤中の式Ｉの活性成分の溶液、懸濁液またはエマルジョンである。処方物は、必要ならば他の製薬用賦形剤、例えば界面活性剤、乳化剤および安定剤ならびに噴射ガスを含むこともできる。このような処方物は、活性成分を一般的に約０.１〜１０、特に約０.３〜３重量％の濃度で含有する。投与すべき式Ｉの活性成分部の用量および投与頻度は、使用化合物の効力および活性の持続時間に；また、処置すべき障害の性質および重症度、ならびに処置すべき哺乳類の性、年齢、体重および個々の応答に依存する。
【００３０】
体重が約７５ｋｇの患者に対する式Ｉの化合物の一日量は、平均して少なくとも０.００１ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０.０１ｍｇ／ｋｇであり、１０ｍｇ／ｋｇの最大量まで、好ましくは１ｍｇ／ｋｇ体重の最大量までである。障害の急性発作の場合、例えば心筋梗塞にかかった直後には、用量はより高く、そして特により頻回に、例えば１日当たり４回までの単一投与が必要なこともある。特にＩ．Ｖ．使用において、例えば集中治療部の梗塞患者には、１日および体重１ｋｇ当たり２００ｍｇまでが必要なことがある。
【００３１】
略語のリスト
ＤＩＰＥＡ          ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡ              Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド
ＤＭＥ              １，２−ジメトキシエタン
ＤＭＦ              Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＥＡ                酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）
ｅｑ．              当量
ＭｅＯＨ            メタノール
Ｐｄ(ｄｐｐｆ)2     ［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）クロリド／−塩化メチレン錯体（１：１）
ＲＴ                室温
ｍ．ｐ．            融点
ＴＨＦ              テトラヒドロフラン
【実施例】
【００３２】
ジヒドロチアフェナントレンカルボニルグアニジンを合成するための一般的方法
段階１）  ４−ブロモ−５−クロロスルホニル−２−メチル安息香酸メチル
４−ブロモ−５−クロロスルホニル−２−メチル安息香酸（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９７，４０，２０１７）１２ｇおよびチオニルクロリド２０ｍｌを、水分を排除して還流下に８時間煮沸した。過剰のチオニルクロリドを減圧下回転蒸発器で除去し、残留物を乾燥トルエン５０ｍｌに吸収させ、再び蒸発させた。粗製の酸クロリドを無水トルエン２５ｍｌに溶解し、ＭｅＯＨ１.７ｍｌを加えた後、５０℃で２時間撹拌した。次いで、さらにＭｅＯＨ１.７ｍｌを加え、続いて５０℃で４時間撹拌した。反応混合物をＥＡ２００ｍｌで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ3水溶液１００ｍｌで洗浄した。Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥した後、溶剤を減圧除去した。淡黄色油状物１１.０ｇを得、これをさらに精製することなく用いた。
【００３３】
段階２）  ２−ブロモ−５−メトキシカルボニル−４−メチルベンゼンスルフィン酸
Ｎａ2ＳＯ3５５０ｍｇを水２ｍｌに溶解し、ＤＭＦ２ｍｌ中の４−ブロモ−５−クロロスルホニル−２−メチル安息香酸メチル３３７ｍｇの溶液を、７０℃で滴下した。滴下中に、この溶液は弱酸性になった（ｐＨ＝５）。次いで、この混合物を７０℃で２.５時間撹拌し、冷却させ、ＨＣｌ水溶液でｐＨ１〜２に調節した。これをＥＡ５０ｍｌで希釈し、飽和ＮａＣｌ水溶液５０ｍｌで洗浄した。Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥した後、溶剤を減圧除去した。淡黄色油状物２２８ｍｇを得、これをさらに精製することなく用いた。
【００３４】
段階３）  ４−ブロモ−５−（２−ブロモフェニルメタンスルホニル）−２−メチル安息香酸メチル
２−ブロモ−５−メトキシカルボニル−４−メチルベンゼンスルフィン酸（段階２）１５０ｍｇ（０.５１ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ１.５ｍｌに溶解した。これに、ＤＭＦ０.５ｍｌに溶解した２−ブロモベンジルブロミド１２８ｍｇ（０.５１ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ０.１ｍｌ（０.５６ｍＭｏｌ）を加え、この混合物を、水分を排除して室温で１６時間撹拌した。反応溶液を濾過し、ＥＡ２０ｍｌで希釈し、１Ｎ塩酸２０ｍｌ、次いで５％濃度の塩水２０ｍｌで洗浄した。有機相を乾燥用カートリッジ（無水硫酸ナトリウム）を通し、カートリッジをＥＡ５ｍｌで洗浄した。濾液を蒸発させた。粗生成物を分取ＨＰＬＣにより精製した。
【００３５】
下記の一般的反応式
【化５】
2005517015.tif 000007
に従って、同様に以下の生成物を製造した：
【００３６】
【表１】
2005517015.tif 000008
【００３７】
使用したベンジルブロミドであって購入できなかったものは、対応するメチル芳香族化合物からＮ−ブロモスクシンイミドを用いるフリーラジカル臭素化により、またはベンジルアルコールから水性ＨＢｒとの反応もしくはメタンスルホニルクロリド／トリエチルアミンに続くテトラブチルアンモニウムブロミドとの反応により製造した。粗生成物を、場合によりＤＭＦ０.２ｍｌを含むアセトニトリル／水＝９：１（１ｍｌ）と共に撹拌し、カートリッジを通して吸引濾過し、アセトニトリル／水＝９：１（０.５ｍｌ）で洗浄した。沈殿した固体を真空オーブン中５０℃で乾燥した。純度はＨＰＬＣ／ＭＳによれは＞８０％であった。母液は生成物の大部分をなお含有していたので、それらを分取ＨＰＬＣ
により精製した。
【００３８】
段階４）  ６−メチル−９，９−ジオキソ−９，１０−ジヒドロ−９−チアフェナントレン−７−カルボン酸メチル
ビス（ピナコラート）ジボロン６８ｍｇ（０.２６６ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム７１ｍｇ（０.７２５ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ｄｐｐｆ）2９ｍｇ（０.０１２ｍｍｏｌ）を、ＤＭＡ２ｍｌに導入した。これに、ＤＭＡ４ｍｌに溶解した４−ブロモ−５−（２−ブロモフェニルメタンスルホニル）−２−メチル安息香酸メチル（段階３）１１２ｍｇ（０.２４２ｍｍｏｌ）を加え、この混合物を保護ガス下に８０℃で一夜撹拌した。反応溶液をシリカゲルに通して濾過し、ＥＡ２０ｍｌで洗浄した。有機相を水および５％濃度の塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空蒸発させた。粗生成物を分取ＨＰＬＣにより精製した。
【００３９】
下記の一般的反応式
【化６】
2005517015.tif 000009
に従って、同様に以下の生成物を製造した：
【００４０】
【表２】
2005517015.tif 000010
【００４１】
段階５）  ジヒドロチアフェナントレンカルボニルグアニジン、一般的方法
【化７】
2005517015.tif 000011
カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド５３ｍｇ（０.５ｍｍｏｌ）を、乾燥ＤＭＦ２ｍｌに懸濁させた。これにグアニジン塩酸塩５０ｍｇ（０.５５ｍｍｏｌ）を加え、この懸濁液を、水分を排除してＲＴで３０分間撹拌した。次いで、ＤＭＦ１ｍｌに溶解した、段階４からのメチルエステル０.１ｍｍｏｌを加え、この混合物をＲＴで一夜撹拌した。沈殿した塩を濾別し、濾液を直ちに分取ＨＰＬＣ（カラム材料  Ｍｅｒｃｋ  Ｓｕｐｅｒｓｐｈｅｒｅ  ＲＰ１８ｅ、緩衝液として０.１％ギ酸を含むアセトニトリル／水の勾配）により精製した。得られた生成物を、Ａｇｉｌｅｎｔシリーズ１１００装置で分析ＨＰＬＣ／ＭＳにより特性決定した。質量の検出は陽イオン化を用いて行った。
【００４２】
方法Ａ：
カラム：      ＭＥＲＣＫ  ＬｉＣｈｒｏＣａｒｔ  ５５−２
パッキング：  ＰｕｒｏＳｐｈｅｒ  ＳＴＡＲ  ＲＰ１８
流速：        ０.７５ｍｌ／分
温度：        ４０℃
勾配：
溶剤Ａ      アセトニトリル／水（９０：１０）＋０.５％ギ酸
溶剤Ｂ      アセトニトリル／水（１０：９０）＋０.５％ギ酸
時間（分）   溶剤Ｂ[％]  
０.００            ９５.０
０.５０            ９５.０
１.７５              ５.０
４.２５              ５.０
４.５０            ９５.０
５.００            ９５.０
６.２０            停止
【００４３】
方法Ｂ：
カラム：      ＹＭＣ  Ｊ’Ｓｐｈｅｒｅ  ＯＤＳ  Ｈ８０
パッキング：  ４μ
流速：        １.０ｍｌ／分
温度：        ３０℃
勾配：
溶剤Ａ      ／水＋０.０５％トリフルオロ酢酸
溶剤Ｂ      アセトニトリル
時間（分）   溶剤Ｂ[％]  
０.００            １０.０
２.５０            ９５.０
３.３０            ９５.０
３.３５            １０.０
３.６０             停止
【００４４】
実施例１〜１１の表題の化合物を、ジヒドロチアフェナントレンカルボニルグアニジンを合成するための一般的方法により合成した：
【００４５】
実施例１：  Ｎ−（６−メチル−９，９−ジオキソ−９，１０−ジヒドロ−９−チアフェナントレン−７−カルボニル）グアニジニウムホルメート
【化８】
2005517015.tif 000012
ＭＳ（ＥＳ）：３３０（Ｍ＋１)+    保持時間２.３８４分（２２０ｎｍ、方法Ａ）
【００４６】
実施例２：  Ｎ−（２−メチル−５，５−ジオキソ−５，６−ジヒドロ−５−チアベンゾ［ｃ］フェナントレン−３−カルボニル）グアニジニウムホルメート
【化９】
2005517015.tif 000013
ＭＳ（ＥＳ）：３８０（Ｍ＋１)+    保持時間１.７９３分（２２０ｎｍ、方法Ｂ）
【００４７】
実施例３：  Ｎ−（３，６−ジメチル−９，９−ジオキソ−９，１０−ジヒドロ−９−チアフェナントレン−７−カルボニル）グアニジニウムホルメート
【化１０】
2005517015.tif 000014
ＭＳ（ＥＳ）：３４４（Ｍ＋１)+    保持時間２.４１１分（２２０ｎｍ、方法Ａ）
【００４８】
実施例４：  Ｎ−（２−クロロ−６−メチル−９，９−ジオキソ−９，１０−ジヒドロ−９−チアフェナントレン−７−カルボニル）グアニジニウムホルメート
【化１１】
2005517015.tif 000015
ＭＳ（ＥＳ）：３６４（Ｍ＋１)+    保持時間２.３９０分（２２０ｎｍ、方法Ａ）
【００４９】
実施例５：  Ｎ−（３−フルオロ−６−メチル−９，９−ジオキソ−９，１０−ジヒドロ−９−チアフェナントレン−７−カルボニル）グアニジニウムホルメート
【化１２】
2005517015.tif 000016
ＭＳ（ＥＳ）：３４８（Ｍ＋１)+    保持時間２.２１５分（２２０ｎｍ、方法Ａ）
【００５０】
実施例６：  Ｎ−（１−フルオロ−６−メチル−９，９−ジオキソ−９，１０−ジヒドロ−９−チアフェナントレン−７−カルボニル）グアニジニウムホルメート
【化１３】
2005517015.tif 000017
ＭＳ（ＥＳ）：３４８（Ｍ＋１)+    保持時間２.２１８分（２２０ｎｍ、方法Ａ）
【００５１】
実施例７：  Ｎ−（３−クロロ−６−メチル−９，９−ジオキソ−９，１０−ジヒドロ−９−チアフェナントレン−７−カルボニル）グアニジニウムホルメート
【化１４】
2005517015.tif 000018
ＭＳ（ＥＳ）：３６４（Ｍ＋１)+    保持時間２.３９４分（２２０ｎｍ、方法Ａ）
【００５２】
実施例８：  Ｎ−（２−メトキシ−６−メチル−９，９−ジオキソ−９，１０−ジヒドロ−９−チアフェナントレン−７−カルボニル）グアニジニウムホルメート
【化１５】
2005517015.tif 000019
ＭＳ（ＥＳ）：３６０（Ｍ＋１)+    保持時間２.２７１分（２２０ｎｍ、方法Ａ）
【００５３】
実施例９：  Ｎ−（１−クロロ−６−メチル−９，９−ジオキソ−９，１０−ジヒドロ−９−チアフェナントレン−７−カルボニル）グアニジニウムホルメート
【化１６】
2005517015.tif 000020
ＭＳ（ＥＳ）：３６４（Ｍ＋１)+    保持時間２.３５８分（２２０ｎｍ、方法Ａ）
【００５４】
実施例１０：  Ｎ−（４，６−ジメチル−９，９−ジオキソ−９，１０−ジヒドロ−９−チアフェナントレン−７−カルボニル）グアニジニウムホルメート
【化１７】
2005517015.tif 000021
ＭＳ（ＥＳ）：３４４（Ｍ＋１)+    保持時間２.３０２分（２２０ｎｍ、方法Ａ）
【００５５】
実施例１１：  Ｎ−（２，６−ジメチル−９，９−ジオキソ−９，１０−ジヒドロ−９−チアフェナントレン−７−カルボニル）グアニジニウムホルメート
【化１８】
2005517015.tif 000022
ＭＳ（ＥＳ）：３４４（Ｍ＋１)+    保持時間２.６７１分（２２０ｎｍ、方法Ａ）
【００５６】
ＪａｎｓｅｎのＮＨＥ阻害方法
ＮＨＥ−１阻害ＩＣ50［ｎＭ］を下記のように定量した：
ヒトＮＨＥ−１を発現する形質転換細胞系におけるｐＨiの回復の測定によりＮＨＥ−１阻害剤を定量するためのＦＬＩＰＲアッセイ
ＦＬＩＰＲ（蛍光造影プレートリーダー）において、透明底面を有する黒色壁の９６ウェルマイクロタイタープレートを用いて、アッセイを行った。種々のＮＨＥサブタイプを発現する形質転換した細胞系（親細胞系ＬＡＰ−１［Ｐｒｏｆ．Ｐｏｕｙｓｓｅｇｕｒ，Ｎｉｃｅから入手］は突然変異および続く選択の結果として内因性ＮＨＥ活性を示さない）は、前日に約２５０００細胞／ウェルの密度であった。［形質転換細胞のための成長培地（ｌｓｃｏｖｅ＋１０％ウシ胎児血清）は、トランスフェクトした配列の存在を確認するために、選択用抗生物質としてＧ４１８をさらに含有した。］
【００５７】
実際のアッセイは、成長培地の除去、およびの負荷緩衝液（２０ｍＭ  ＮＨ4Ｃｌ、１１５ｍＭ塩化コリン、１ｍＭ  ＭｇＣｌ2、１ｍＭ  ＣａＣｌ2、５ｍＭ  ＫＣｌ、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、５ｍＭブドウ糖；ｐＨ７.４［ＫＯＨで調節］中の５μＭ  ＢＣＥＣＦ−ＡＭ［２’，７’−ビス（カルボキシエチル）−５−（および−６）−カルボキシフルオレセイン，アセトキシメチルエステル］）ウェル当たり１００μｌの添加で始まった。次いで、細胞を３７℃で２０分間インキュベートした。このインキュベーションは、蛍光染料（その蛍光強度はｐＨiに依存する）およびＮＨ4Ｃｌ（これは細胞を僅かにアルカリ性にする）を細胞に負荷することになる。［非蛍光性染料前駆体ＢＣＥＣＦ−ＡＭは、エステルとして、膜貫通性である。実際の染料ＢＣＥＣＦは膜貫通性でないが、エステラーゼにより細胞内に遊離される。］
【００５８】
この２０分間のインキュベーションの後、ＮＨ4Ｃｌおよび遊離ＢＣＥＣＦ−ＡＭを含有する負荷緩衝液を、細胞洗浄器（Ｔｅｃａｎ  Ｃｏｌｕｍｂｕｓ）において、それぞれの場合に洗浄緩衝液（１３３.８ｍＭ塩化コリン、４.７ｍＭ  ＫＣｌ、１.２５ｍＭ  ＭｇＣｌ2、１.２５ｍＭ  ＣａＣｌ2、０.９７ｍＭ  Ｋ2ＨＰＯ4、０.２３ｍＭ  ＫＨ2ＰＯ4、５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、５ｍＭブドウ糖；ｐＨ７.４［ＫＯＨで調節］）４００μｌで３
回洗浄することにより除去した。ウェルに残った残存量は９０μｌ（５０〜１２５μｌが可能）であった。この洗浄段階は遊離ＢＣＥＣＦ−ＡＭを除去し、外部ＮＨ4+イオンが除去される結果として、細胞内酸性化（ｐＨi約６.３〜６.４）を生じる。
【００５９】
細胞外ＮＨ4+が除去され、続いて瞬間的にＮＨ3が細胞膜を通過することにより、細胞内ＮＨ4+とＮＨ3およびＨ+との平衡が撹乱されるので、洗浄工程はＨ+を細胞内部に留めることになり、これが細胞内酸性化の原因である。これは、十分長時間持続すれば、結局は細胞死に導く。
【００６０】
この点で、洗浄緩衝液はナトリウムを含有しないこと（＜１ｍＭ）が重要である。なぜならば、細胞外ナトリウムイオンは、クローン化ＮＨＥイソ型の活性によってｐＨiの瞬間的回復に導くであろうからである。
【００６１】
同様に、使用する全ての緩衝液（負荷緩衝液、洗浄緩衝液、回復緩衝液）はＨＣＯ3-イオンを含有しないことが重要である。なぜならば、重炭酸塩の存在は、親ＬＡＰ−１細胞系に存在する干渉性の重炭酸塩依存性ｐＨi調節系の活性化に導くであろうからである。
【００６２】
次いで（酸性化した後２０分まで）、酸性化した細胞を含むマイクロタイタープレートをＦＬＩＰＲに移した。ＦＬＩＰＲにおいて、細胞内蛍光染料は、アルゴンレーザーにより発生した波長４８８ｎｍの光で励起され、ウェル当たりの平均蛍光シグナルが３００００〜３５０００相対蛍光単位になるように、測定パラメーターが選択された。
【００６３】
ＦＬＩＰＲにおける実際の測定は、ソフトウェア制御下に２秒ごとにＣＣＤカメラで写真撮影することで始まった。１０秒後に、ＦＬＩＰＲに組み込んだ９６ウェルピペッターにより、回復緩衝液（１３３.８ｍＭ  ＮａＣｌ、４.７ｍＭ  ＫＣｌ、１.２５ｍＭ  ＭｇＣｌ2、１.２５ｍＭ  ＣａＣｌ2、０.９７ｍＭ  Ｋ2ＨＰＯ4、０.２３ｍＭ  ＫＨ2ＰＯ4、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、５ｍＭブドウ糖；ｐＨ７.４［ＫＯＨで調節］）９０μｌを加えることによって、細胞内ｐＨの回復が開始された。
【００６４】
陽性対照ウェル（１００％ＮＨＥ活性）は、純粋な回復緩衝液を加えたものである一方、陰性対照（０％ＮＨＥ活性）には、洗浄緩衝液を入れた。他の全てのウェルには、試験物質を２倍濃度で含む回復緩衝液を加えた。ＦＬＩＰＲにおける測定は、６０回の測定（２分間）後に終了した。
【００６５】
生データは、Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｂａｓｅプログラムにエクスポートした。このプログラムは、最初に各試験物質濃度に関するＮＨＥ活性値を計算し、これらの値から、該物質に関するＩＣ50値を計算した。ｐＨi回復の進行は実験全体にわたって線形ではないが、
より高いｐＨi値でＮＨＥ活性が減少するために最終的には低下するので、測定の評価のために、陽性対照物の蛍光の増加が線形である部分を選択することが重要である。
【００６６】
実施例   ＮＨＥ−１阻害ＩＣ50[ｎＭ]
１                  １５.６
２                  ２４.２
３                    ８.６
４                  １０.８
５                  １５.６
６                  １６.５
７                  １１.７
８                  １０.２
９                  １３.９
10                  ６７.７
11                  １９.５
【国際調査報告】
2005517015.tif 000025
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2005517015.tif 000027
2005517015.tif 000028
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