(57)【要約】本発明はフェナレノン誘導体、微生物ペニシリウム属ヘルクエイ（herquei）ベイナー＆サルトリー（Bainer & Sartory）、ＤＳＭ１４１４２、を発酵させそしてかかる発酵中に生成したフェナレノンを誘導体化することによるフェナレノン誘導体の製造、さらには腫瘍性疾患、細菌性感染症および／または真菌症およびリウマチ性疾患を特に治療するための医薬品としてのかかるフェナレノン誘導体の使用に関する。【化１】2005517710.tif 000024
2005517710.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ−Ａ）
【化１】
2005517710.tif 000014
もしくは、式（Ｉ−Ｂ）
【化２】
2005517710.tif 000015
｛式中、
Ｘは式（Ｉ−Ｃ）
【化３】
2005517710.tif 000016
もしくは式（Ｉ−Ｄ）
【化４】
2005517710.tif 000017
のいずれかの基であり、
そして、Ｒ1および存在するのであればＲ2は同時に、
１.０  Ｈ、もしくは
２.０  Ｃ1〜Ｃ6−アルキル、Ｃ2〜Ｃ6−アルケニルもしくはＣ2〜Ｃ6−アルキニル［
式中、アルキル、アルケニルおよびアルキニルは直鎖もしくは分岐鎖であり、そして
２.１  −ＯＨ、
２.２  ＝Ｏ、
２.３  −Ｏ−Ｃ1〜Ｃ6−アルキル（式中、アルキルは直鎖もしくは分岐鎖である）
、
２.４  −Ｏ−Ｃ2〜Ｃ6−アルケニル（式中、アルケニルは直鎖もしくは分岐鎖であ
る）、
２.５  −アリール、
２.６  −ＮＨ−Ｃ1〜Ｃ6−アルキル（式中、アルキルは直鎖もしくは分岐鎖である
）、
２.７  −ＮＨ−Ｃ2〜Ｃ6−アルケニル（式中、アルケニルは直鎖もしくは分岐鎖で
ある）、
２.８  −ＮＨ2、もしくは
２.９  ハロゲン
（式中、置換基２.１〜２.９もまた−ＣＮ、−アミドもしくは−オキシム官能基によりさらに置換され得る）により場合により一置換もしくは二置換される］｝
の化合物、ならびに／または式（Ｉ−Ａ）もしくは式（Ｉ−Ｂ）の化合物の立体異性体ならびに／またはあらゆる割合におけるこの異性体の混合物、ならびに／または式（Ｉ−Ａ）もしくは式（Ｉ−Ｂ）の化合物の生理学的に許容し得る塩。
【請求項２】
Ｒ1およびＲ2がＨまたはＣ1〜Ｃ6−アルキルである、請求項１記載の式（Ｉ−Ａ）または式（Ｉ−Ｂ）の化合物。
【請求項３】
式（II−Ａ）
【化５】
2005517710.tif 000018
または式（II−Ｂ）
【化６】
2005517710.tif 000019
またはその生理学的に許容し得る塩を有することを特徴とする、請求項１または２に記載の式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）の化合物。
【請求項４】
１．微生物ペニシリウム属ヘルクエイ（herquei）ベイナー＆サルトリー（Bainer & Sa
rtory）、ＤＳＭ１４１４２、またはその変異株もしくは突然変異体の１つを水性栄養培
地において培養し、
２．ａ）式（II−Ａ）
【化７】
2005517710.tif 000020
もしくは式（II−Ｂ）
【化８】
2005517710.tif 000021
の化合物を分離しそして精製するか、または、
ｂ）式（III−Ａ）
【化９】
2005517710.tif 000022
もしくは式（III−Ｂ）
【化１０】
2005517710.tif 000023
の化合物を分離しそして精製し、
３．ａ）式（II−Ａ）もしくは式（II−Ｂ）の化合物を誘導体化して式（Ｉ−Ａ）もしくは式（Ｉ−Ｂ）の化合物を得るか、または、
ｂ）式（III−Ａ）もしくは式（III−Ｂ）の化合物を誘導体化して式（Ｉ−Ａ）もしくは式（Ｉ−Ｂ）の化合物を得て、そして、
４．式（Ｉ−Ａ）または式（Ｉ−Ｂ）の化合物を、場合によっては、薬理学的に許容し得る塩に転換すること、
を含むことを特徴とする、請求項１または２に記載の式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）の化合物の製造方法。
【請求項５】
１．微生物ペニシリウム属ヘルクエイ  ベイナー＆サルトリー、ＤＳＭ１４１４２、またはその変異株もしくは突然変異体の１つを水性栄養培地において培養し、
２．式（II−Ａ）または式（II−Ｂ）の化合物を分離および精製し、そして、
３．式（II−Ａ）または式（II−Ｂ）の化合物を、場合によっては、薬理学的に許容し得る塩に転換すること、
を含むことを特徴とする、請求項３に記載の式（II−Ａ）または（II−Ｂ）の化合物の製造方法。
【請求項６】
アルキル化剤を用いて実施する誘導体化である請求項４に記載の製造方法。
【請求項７】
アルキル化剤がジアゾメタン誘導体である請求項６に記載の製造方法。
【請求項８】
医薬品の製造のための、請求項１〜３のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項９】
腫瘍症の治療および予防のための医薬品を製造するための、請求項８に記載の化合物の使用。
【請求項１０】
細菌性感染症および／または真菌症の治療および予防のための医薬品を製造するための、請求項８に記載の化合物の使用。
【請求項１１】
リウマチ性疾患の治療および予防のための医薬品を製造するための、請求項８記載の化合物の使用。
【請求項１２】
マトリックス金属蛋白分解酵素の阻害により治療し得る疾患に対する医薬品を製造するための、請求項８に記載の化合物の使用。
【請求項１３】
請求項１〜３のいずれかに記載の化合物の抗酸化剤としての使用。
【請求項１４】
請求項１〜３のいずれかに記載の少なくとも１つの化合物、および生理学的に許容し得る１つまたはそれ以上の添加剤を含有する医薬品。
【請求項１５】
ペニシリウム属ヘルクエイ  ベイナー＆サルトリー菌株、ＤＳＭ１４１４２。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はフェナレノン誘導体、その製造方法、およびその医薬品としての使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
癌は通常致死的な経過をたどる、そして内因性細胞の無秩序な増殖によって生じるヒトおよび動物の疾患である。癌は、悪性増殖（マリグノーマ）、新生物（腫瘍および癌腫）の形成、または白血球の悪性変性および成熟障害（白血病、血液の癌）を表す語である。癌または腫瘍細胞は内因性細胞の転換により形成される。癌細胞の悪性度は増殖の自律性すなわち、浸潤様式で、器官の構成プランに類別されず、さらには組織破壊を伴う非抑制性の増殖能力で表現される。悪性度の確かな兆候は、腫瘍細胞の血行性またはリンパ行性拡散後の腫瘍の遠隔性沈着の形成（転移）である。癌はヒトの最も多い死因であり、そしてそのために、悪性変性の治療または処置の方法および手段には多大な必要性が存在する。
【０００３】
悪性腫瘍の治療の可能性には、可能であれば腫瘍の根治的な外科的除去に加えて、Ｘ線、α−、β−、γ−線を用いた放射線学的治療、免疫療法および化学療法がある。免疫療法は現在では限られた範囲にのみ用い得る。腫瘍の化学療法は、腫瘍および局所的な外科的治療または放射線照射後の残存する腫瘍細胞の処置のための細胞毒素（細胞増殖抑制剤）の投与を意味すると理解される。これらの物質は細胞分裂の特定の過程に特異的に介入し、その結果、分裂する細胞を高い比率で有する組織、例えば急速に増殖する腫瘍組織がより鋭敏に反応する。アルキル化化合物、例えばシクロホスファミド（The Merck Index、第12版、463頁）、代謝拮抗剤、例えばメトトレキサート（The Merck Index、第12版、1025頁）、アルカロイド、例えばビンクリスチン（The Merck Index、第12版、1704頁）ならびに抗生物質、例えばダウノマイシン（The Merck Index、第12版、479頁）およびアドリアマイシン（The Merck Index、第12版、581-582頁）が使用される。しかし、これらの薬剤はすべて著しい副作用のために多大な不利益を有し、その結果、罹患したヒトの死を回避するのではなく遅らせるだけである。さらに、変性した（癌）細胞では使用した薬剤に対する耐性が生じ、その結果、現在の薬物はもはや細胞増殖抑制的にではなく、副作用のために毒性的に作用する。さらに、細胞増殖抑制剤の併用または連続投与は個々の細胞増殖抑制剤（単独療法）の活性を上回ることが示されており、そしてそれによって併用化学療法においては考慮すべき副作用を付加しないことが可能になる。これらすべての理由のために、新規な化学療法剤が緊急に必要とされ、そのために全世界で追求されている。
【０００４】
フェナレノンの母体構造を有する天然物質はすでに記載されている。フェナレンは、空気中で分解する、縮合した不完全な芳香環構造である。フェナレノンは１位にカルボニル基を有するその酸化生成物である。
特許出願WO 99/60992は、毛髪着色剤としての使用のためにＣ１以外のすべての位置を
水素またはＣ1〜Ｃ4−アルキル好ましくはメチル、またはＣ1〜Ｃ4−アルコキシ好ましくはメトキシにより置換され得るフェナレノンを包括的に記載する。
【０００５】
日本の特開昭60―199849は、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）阻害剤として有効でありそして動脈硬化、気管支喘息、糖尿病および癌の治療に使用できるフェナレノン誘導体、２,７,８,９−テトラヒドロキシ−４−メトキシ−５−メチルフェナレン−１−オンを記
載する。
D. A. Frost & G. A. Morrison; J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1,20, 2388-2396, 19
73 はペニシリウム属ヘルクエイ（herquei）ベイナー＆サルトリー（Bainer & Sartory）からのノルキサントヘルクエイン（２,３,４,７,８,９−ヘキサヒドロキシ−５−メチル
−フェナレン−１−オン）の単離を記載する。
【０００６】
D. H. R. Barton他（Tetrahedron, 6, 48, 1959）はペニシリウム属アトロベネツム（atrovenetum）およびペニシリウム属ヘルクエイ  ベイナー＆サルトリーからのアトロベネチンの単離を記載する。アトロベネチンはY. Ishikawa他（J. Am. Oil Chem. Soc. 68, 666-668, 1991）において抗酸化剤として、そしてWO00/45165において抗腫瘍性作用を有する細胞増殖抑制剤として記載されている。
N. Narasimhachi他（J. Antibiotics, 25, 155, 1972）およびJ. Simpson (Chem. Soc.
Perkin Trans. 1, 1979, 1233-1238)は、ペニシリウム属ヘルクエイから単離可能なそしてグラム陽性微生物に対して抗菌性作用を示す化合物デオキシヘルクエイノン（２−Ｏ−メチルアトロベネチン）の互変異性体を記載する。
【０００７】
本発明は、腫瘍の治療に使用できる他のフェナレノン誘導体を提供するという目的に基づくものである。
【発明の開示】
【０００８】
本発明は式（Ｉ−Ａ）
【化１】
2005517710.tif 000003
もしくは式（Ｉ−Ｂ）
【化２】
2005517710.tif 000004
｛式中、Ｘは式（Ｉ−Ｃ）
【化３】
2005517710.tif 000005
もしくは式（Ｉ−Ｄ）
【化４】
2005517710.tif 000006
のいずれかの基であり、
そして、Ｒ1および存在するのであればＲ2は同時に、
１.０  Ｈ、もしくは
２.０  Ｃ1〜Ｃ6−アルキル、Ｃ2〜Ｃ6−アルケニルもしくはＣ2〜Ｃ6−アルキニル［
式中、アルキル、アルケニルおよびアルキニルは直鎖もしくは分岐鎖であり、そして、
２.１  −ＯＨ、
２.２＝Ｏ、
２.３  −Ｏ−Ｃ1〜Ｃ6−アルキル（式中、アルキルは直鎖もしくは分岐鎖である）
、
２.４  −Ｏ−Ｃ2〜Ｃ6−アルケニル（式中、アルケニルは直鎖もしくは分岐鎖であ
る）、
２.５  −アリール、
２.６  −ＮＨ−Ｃ1〜Ｃ6−アルキル（式中、アルキルは直鎖もしくは分岐鎖である
）、
２.７  −ＮＨ−Ｃ2〜Ｃ6−アルケニル（式中、アルケニルは直鎖もしくは分岐鎖で
ある）、
２.８  −ＮＨ2、もしくは
２.９ハロゲン
（式中、置換基２.１〜２.９もまた−ＣＮ、−アミドもしくは−オキシム官能基によりさらに置換され得る）により場合により一置換もしくは二置換される］｝
の化合物、ならびに／または式（Ｉ−Ａ）もしくは式（Ｉ−Ｂ）の化合物の立体異性体、ならびに／またはあらゆる割合におけるこの異性体の混合物、ならびに／または式（Ｉ−Ａ）もしくは（Ｉ−Ｂ）の化合物の生理学的に許容し得る塩に関する。
Ｒ1およびＲ2は、好ましくはＨまたはＣ1〜Ｃ6−アルキルである。
【０００９】
キラル中心は、他に指定しない場合には、Ｒ立体配置またはＳ立体配置において存在する。本発明は光学的に純粋な化合物ならびにあらゆる割合の立体異性体の混合物例えば鏡像異性体の混合物およびジアステレオマーの混合物の両者に関する。
【００１０】
本発明に記載の化合物は極性、化学構造、生物活性またはさらには物理的特性において、文献から知られる物質とは異なる。
【００１１】
ペニシリウム属ヘルクエイ  ベイナー＆サルトリー菌株、ＤＳＭ１４１４２はグルコース、デンプン、オートフレークまたはグリセリンを含有する栄養液において、まとめて式（II）の化合物として以下に示される、式（II−Ａ）および（II−Ｂ）のペニレノンと称される化合物、
【化５】
2005517710.tif 000007
ならびに、まとめて式（III）の化合物として以下に示される、式（III−Ａ）および（III−Ｂ）のアトロベネチンを生成する。
【化６】
2005517710.tif 000008
【００１２】
Ｒ1がＨとは異なる式（Ｉ−Ａ）および（Ｉ−Ｂ）の化合物は異性体であり、他とは別
々に分離可能であり、さらには例えばＲ1がＨである場合のＲ1基を除去し、そして続いて各例で他の互変異性体から始めて誘導体化して、Ｒ1がＨとは異なる式（Ｉ−Ａ）または
（Ｉ−Ｂ）の化合物の他の異性体を得ることにより互いに変換できる。
式（Ｉ−Ａ）および（Ｉ−Ｂ）の化合物は、まとめて式（Ｉ）の化合物として以下に示される。
【００１３】
式（II−Ａ）および（II−Ｂ）の化合物は互変異性体であり、そして通常の条件下（例えば室温）では互いに別々に分離できない。式（II−Ａ）および（II−Ｂ）の化合物は、まとめて式（II）の化合物として以下に示される。
【００１４】
式（III−Ａ）および（III−Ｂ）の化合物は同様に互変異性体であり、そして通常の条件下（例えば室温）では互いに別々に分離できない。式（III−Ａ）および（III−Ｂ）の化合物は、まとめて式（III）の化合物として以下に示される。
【００１５】
Ｒ1がＨである式（Ｉ−Ａ）および（Ｉ−Ｂ）の化合物は、それ自体既知の方法で、例
えばJerry March による書籍 Advanced Organic Chemistry, John Wiley & Sons, 第4版,
1992に記載されるように、ヒドロキシル基をアルキル化剤と反応させることにより本発
明に従って選択的に誘導体化され得る。アルキル化剤は例えばジアゾメタン誘導体、好ましくはトリメチルシリルジアゾメタンである。反応を選択的に実施するには、反応の前にそれ自体既知の方法で適当な保護基を導入することが有利になり得る。その保護基は反応後に除去し、次いで反応生成物を精製する。
【００１６】
今までは、本発明に記載の化合物を得るためのフェナレノンの選択的アルキル化は記載されてはいない。例えば、デゾキシヘルクエイノンをジアゾメタンとSuga 他 (Bull. Chem Soc. Jpn., 56, 3661-3666, 1983) に従って反応させると、デゾキシヘルクエイノンジメチルエーテルまたは異性化合物エンド−アトロベネチントリメチルエーテルが得られる。
【００１７】
Ｒ1がＨである式（Ｉ−Ａ）および（Ｉ−Ｂ）の化合物は例えば、Ｒ1がＨと異なる式（Ｉ−Ａ）および（Ｉ−Ｂ）の化合物のエーテルの開裂により調製できる。エーテルの開裂はそれ自体既知の方法で、例えばJerry March による書籍 Advanced Organic Chemistry, John Wiley & Sons, 第4版, 1992 に記載されるように実施できる。
【００１８】
従って本発明はさらに、式（II）を有する式（Ｉ）の化合物、または式（II）の化合物の薬理学的に許容し得る塩に関する。
【００１９】
従って本発明はそれに加えて、
１．微生物ペニシリウム属ヘルクエイ  ベイナー＆サルトリー、ＤＳＭ１４１４２、またはその変異株もしくは突然変異体の１つを水性栄養培地において培養し、
２．式（II）の化合物を分離および精製し、そして、
３．式（II）の化合物を、場合によっては、薬理学的に許容し得る塩に転換すること、を含む式（II）の化合物の製造方法に関する。
【００２０】
本発明はさらに、
１．微生物ペニシリウム属ヘルクエイ ベイナー＆サルトリー、ＤＳＭ１４１４２、ま
たはその変異株もしくは突然変異体の１つを水性栄養培地において培養し、
２．ａ）式（II）の化合物を分離しそして精製するか、または、
ｂ）式（III）の化合物を分離しそして精製し、
３．ａ）式（II）の化合物を誘導体化して式（Ｉ）の化合物を得るか、または、
ｂ）式（III）の化合物を誘導体化して式（Ｉ）の化合物を得て、そして、
４．式（Ｉ）の化合物を、場合によっては、薬理学的に許容し得る塩に転換すること、を含む式（Ｉ）の化合物の製造方法に関する。
【００２１】
ペニシリウム属ヘルクエイ  ベイナー＆サルトリー菌株、ＤＳＭ１４１４２はグルコース、デンプン、オートフレークまたはグリセリンを含有する栄養液において、ペニレノンおよび二次生成物を生成する。
【００２２】
ペニシリウム属ヘルクエイ  ベイナー＆サルトリーの分離株は、the Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen (German Collection of Microorganisms and Cell Cultures) GmbH(DSM), Mascheroder Weg 1B, 38124 Brunswick, Germanyに、ブダペスト条約の規則に従って、以下の番号：ＤＳＭ１４１４２で、２００１年３月６日付で寄託した。
【００２３】
ペニシリウム属ヘルクエイ  ベイナー＆サルトリー菌、ＤＳＭ１４１４２は灰色から発光性の緑色の基底菌糸および非常にわずかな気中菌糸を有する。浸出液は麦芽培地上には生じず、そして色素は該培地へ排出されない。培養において該菌株は、表面がラフである、２００〜４００×３.５〜４.０μmのペニシリウム属の特性である密集した胞子嚢を形成する。その「メトレ（metulae）」は比較的短く、通常４〜６、１０〜１２×３.０〜５.０μmであり、そして棍棒形である。フィアライド（phialida）はアンプル形の７〜１０×３.０μmの６〜１０の「バーティシリ（varticilli）」に配置される。分生胞子は、スムーズな細胞壁を有する３.５〜５.０×３.０〜３.５μmの「尖端型の（apiculate）」楕円形である。該分生胞子は長さ１００μmまでの平行な連鎖を形成する。
【００２４】
かかる工程はペニシリウム属ヘルクエイ  ベイナー＆サルトリー、ＤＳＭ１４１４２、その変異株および／または突然変異体を好気性条件下で、少なくとも各例において１つの炭素および窒素源、無機塩ならびに場合により微量元素を含有する培地において培養することを含む。
培養は２０〜３５℃の温度でそしてｐＨ２〜９で実施するのが好ましい。
【００２５】
ＤＳＭ１４１４２菌株の代わりにその変異株および突然変異体も、それらが本発明に記載の化合物を生成する限りにおいて使用することができる。かかる変異株は物理的な手法例えば紫外線もしくはＸ線を用いるといった放射線照射、または化学的突然変異誘発物質、例えばエチルメタンスルホネート（ＥＭＳ）、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン（ＭＯＢ）もしくはＮ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（ＭＮＮＧ）による本質的に既知な方法で作製できる。
【００２６】
発酵のための適当な好ましい炭素源は、同化可能な炭水化物および糖アルコール例えばグルコース、ラクトース、スクロースまたはＤ−マンニトール、ならびに炭水化物を含有する天然物例えば麦芽エキスまたは酵母エキスである。適当な窒素を含有する栄養源はアミノ酸、ペプチドおよびタンパク質、ならびにそれらの分解生成物例えばカゼイン、ペプトンまたはトリプトン、そして肉エキス、酵母エキス、例えばトウモロコシ、コムギ、インゲンマメ、ダイズ、コメまたはワタの粉砕した種子、アルコール製品、肉粉または酵母エキスの蒸留残留物、さらにはアンモニウム塩および硝酸塩、特には合成的または生合成的に得られるペプチドである。栄養液が含有し得る無機塩は例えば、アルカリ金属またはアルカリ土類金属、鉄、亜鉛、コバルトおよびマンガンの塩化物、炭酸塩、硫酸塩またはリン酸塩である。
【００２７】
本発明に記載の化合物の生成は、例えば約０.０５〜５％好ましくは１〜２％の麦芽エ
キス；および０.０５〜３％好ましくは０.０５〜１％の酵母エキス；０.２〜５％好まし
くは０.５〜２％のグルコース；および０.５〜３％好ましくは１.５〜３％のオートフレ
ークを含有する栄養液中で特に良好に進行する。パーセンテージの詳細は、各例において栄養液全体の重量に基づくものである。
【００２８】
この栄養液において、ペニシリウム属ヘルクエイ  ベイナー＆サルトリー、ＤＳＭ１４１４２は本発明に記載の化合物の混合物を生成する。栄養液の組成により、本発明に記載の１つまたはそれ以上の化合物の計量可能な含量は変化し得る。さらに、ある化合物をまったく生成しないか、またはその微生物の検出限界未満の量で生成するように、個々の化合物の合成を培養液の組成によって制御することができる。
【００２９】
該微生物の培養は好気的に、すなわち例えば液中でシェーカーフラスコもしくは発酵槽中で振とうもしくは攪拌しながらまたは固形培地上で、空気または酸素を場合により注入して実施する。該培養は約１５〜３０℃、好ましくは約２０〜３０℃、特には２５〜３０℃の範囲の温度で実施し得る。ｐＨの範囲は４〜１０、好ましくは６.５〜７.５にすべきである。該微生物はこれらの条件下で一般的に４８〜７２０時間、好ましくは７２〜３５０時間培養する。培養はいくつかの工程すなわち、液体栄養培地で１つまたはそれ以上の前培養液を最初に調製し、次いで実際の生産用培地である主培養液へ、例えば１：１０〜１：１００の量で接種することによって有利に実施する。前培養液は例えば、菌糸体を栄養液中に接種した後それを約２０〜１２０時間、好ましくは４８〜７２時間増殖させることにより得る。菌糸体は例えば、約１〜４２日間、好ましくは２１〜３５日間、固体または液体の栄養培地例えば酵母麦芽寒天、オートフレーク寒天またはポテトデキストロース寒天上で菌株を培養させることにより得られる。
【００３０】
本発明に記載の化合物を生産する変異株および突然変異体に関する発酵の過程ならびにスクリーニングは、当業者に既知の方法に従って、例えば生物検定法における生物活性の検定により、または薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）もしくは高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）といったクロマトグラフィーの方法によりモニターできる。
【００３１】
ペニシリウム属ヘルクエイ  ベイナー＆サルトリー菌、ＤＳＭ１４１４２は、固形栄養培地における表面または静置培養により、本発明に記載の化合物を生産し得る。固形栄養培地は例えば水性栄養培地に寒天またはゼラチンを添加して調製する。さらに、液中製法（submerse process）、すなわち水性懸濁液におけるペニシリウム属ヘルクエイ  ベイナー＆サルトリー菌、ＤＳＭ１４１４２の発酵により、本発明に記載の化合物を得ることが可能である。本発明に記載の化合物は菌糸体および培養濾液の両方に生じ得るが、通常、大部分の量は細胞本体に見出される。従って、発酵液を濾過または遠心分離により分離するのが適当である。濾液は吸着樹脂を固相として使用して抽出する。菌糸体は、表面培養も同様だが、有機溶媒例えばメタノールまたはプロパン−２−オールを用いて抽出するのが適当である。
【００３２】
抽出は幅広いｐＨ範囲で実施できるが、中性または弱酸性、好ましくはｐＨ３〜ｐＨ７の環境で作業するのが適当である。抽出物は濃縮しそして例えば真空中で乾燥させ得る。
【００３３】
式（II）および式（III）の化合物は、分離および精製の工程中に特定の処置が行われ
ない場合には不安的な物質である。１）分離および精製の工程中に還元性条件下、例えばアスコルビン酸の常時存在下で作業を実施し、２）ｐＨが７未満、好ましくはｐＨ範囲が２〜５の酸性の環境で分離を実施し、３）精製の工程中に緩和な薬剤のみを、例えば吸着樹脂をクロマトグラフィー用担体として使用し、そして４）全工程中でアミンの存在を排除する場合に、ＤＳＭ１４１４２菌株の培養物からペニレノンが非常に良好な収率で得られることが見出されている。
【００３４】
本発明に記載の化合物の単離に適当な方法は、それ自体既知の方法による溶媒分配である。精製の別の方法は、吸着樹脂例えばダイヤイオン(R)ＨＰ−２０（三菱化学（株）、
東京）、アンバーライト(R)ＸＡＤ７（ローム・アンド・ハース、米国）、アンバークロ
ム(R)ＣＧ（トーソー・ハース、フィラデルフィア、米国）または類似のものを用いたク
ロマトグラフィーである。指定した条件下でさらに適当なのは、例えば高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）に関連して一般的に知られているＲＰ8およびＲＰ18といった多
数の逆相の担体である。指定した条件下での他の精製の可能性としては、「順相」クロマトグラフィー用担体例えばシリカゲルまたはＡｌ2Ｏ3またはそれ自体既知の他のものの使用がある。別の分離工程としては、分子ふるい、例えばフラクトゲル(R)ＴＳＫＨＷ−４
０、セファデックス(R)Ｇ−２５および他のもののそれ自体既知の方法での使用がある。
【００３５】
例えば有機溶媒およびそれらの混合物、無水物または水の添加を用い得る結晶化による濃縮後に、本発明に記載の式（Ｉ）の化合物を得ることがさらに可能である。
【００３６】
本発明に記載の化合物の分離および精製のための他の工程は、陰イオン交換体の好ましくはｐＨ範囲４〜７での使用、および陽イオン交換体の好ましくはｐＨ範囲２〜５での使用である。これに特に適当なのは、有機溶媒の部分を添加している緩衝液の使用である。
【００３７】
一方、本発明に記載の化合物を昇華により分離および／または精製することもまた可能である。
本発明に記載の化合物の分離のための特に有利な精製方法は、それ自体既知の様式で実施する結晶化である。
【００３８】
本発明に記載の式（Ｉ）の化合物は、当業者に既知の手法に従って、対応する薬理学的に許容し得る塩に変換できる。本発明に記載の化合物の薬理学的に許容し得る塩は、Remingtons Pharmaceutical Sciences (第17版, 1418頁 [1985]）に記載されるような無機および有機の両方の塩を意味すると理解される。可能な塩としては特にアルカリ金属塩、アンモニウム塩、アルカリ土類金属塩、生理学的に許容し得るアミンとの塩ならびに無機酸または有機酸例えばＨＣｌ、ＨＢｒ、Ｈ2ＳＯ4、マレイン酸、フマル酸との塩がある。一方で、可能な塩としては金属イオン例えばカルシウム、マグネシウム、亜鉛、鉄または他のものとの錯体もある。式（Ｉ）の化合物はイオン、好ましくは陽イオンと錯体の形態で結合する著明な傾向を有する。
【００３９】
驚いたことに、本発明に記載の式（Ｉ）の化合物は強力な細胞増殖抑制作用を有するため、組織もしくは細胞の無秩序な増殖によって生じる疾患、または腫瘍症の治療および／または予防に適することが見出されている。特に注目に値するのは、本発明に記載の化合物は従来の細胞増殖抑制剤に対して交差耐性をまったく有しないことである。
【００４０】
式（Ｉ）の化合物はタンパク質キナーゼを阻害することが見出されている。該キナーゼは、アデノシン三リン酸から他の基質へリン酸基を転移する転移酵素に属する。タンパク質および酵素はタンパク質キナーゼにより、通常、セリン、トレオニンまたはチロシン側鎖上でリン酸化され、それらの活性が修飾されて、そのことは代謝およびシグナル伝達における広範囲の調節の原理として認識されている。癌の場合には患部組織は無秩序な様式で増殖し、従って、キナーゼの制御する増殖の調節への介入が望ましい。複数のキナーゼが細胞増殖のカスケードに関与する。それらのキナーゼのいくつかは本発明に記載の化合物によって阻害される。
【００４１】
さらに重要視されるのは、細菌例えば黄色ブドウ球菌、ストレプトミセス・ムリヌス、および真菌例えば難治性で致命的な感染症を生じ得るアスペルギルス・ニガーに対する本発明に記載の式（Ｉ）の化合物の抗菌性阻害作用である。その抗菌性活性は例えば「寒天拡散法」によって実証され得る。例えばペニレノンは、ストレプトミセス・ムリヌスの培養物を含有する寒天平板上で１mg／mlの溶液で１１mmの阻止円を、そして０.１mg／mlの
溶液で８mmの阻止円を形成する。従って本発明に記載の式（Ｉ）の化合物は同様に、細菌性感染症および／または真菌性病の治療および／または予防に適する。
【００４２】
式（Ｉ）の化合物は抗酸化剤としても使用できる。抗酸化剤（酸化防止剤）は、保護されるべき物質において酸素の作用によって生じる好ましくない変化を阻害または防止する有機化合物である。抗酸化剤は例えば経年劣化に対する保護のためにプラスチックにおいて、酸敗に対する保護のために脂肪において、樹脂化に対して油において、臭気の悪化に対して芳香族物質において、食物において、そして医薬品において必要である。抗酸化剤の作用は通常、酸化で生じるフリーラジカルに対するラジカルスカベンジャーとしての作用である。アトロベネチン（式（III）の化合物）の抗酸化性作用はすでに、Y. Ishikawa他 J. Am. Oil Chem. Soc. 68, 666-668, 1991 に記載されている。しかし、微生物性の
抗酸化剤はしばしば弱すぎるか、またはそれらの作用において必ずしも許容できるものではない。従って、新規で効果的でそして許容できる抗酸化剤には相当な必要性がある。式（Ｉ）の化合物は、その作用においてアトロベネチンに著しく勝る非常に有効な抗酸化剤である。溶液中および固体形態でアトロベネチンが空中酸素と徐々にのみ（例えば時間単位で）反応するのに対して、例えば式（II）のペニレノンは酸素と秒単位内でまたは数分間で結合する。実際に、酸素に対するペニレノンのこの増大した親和性は、酸化を非常に受けやすい物質では明らかに有利である。
【００４３】
本発明に記載の化合物の他の化学的特性は、多価好ましくは２−および３−価の陽イオ
ン、例えばＣａ2+、Ｍｇ2+、Ｚｎ2+、Ｆｅ3+との錯体形成の能力である。その錯体形成能力は医薬品の製造に有利になり得るものであり、従って、例えばマトリックス金属蛋白分解酵素（ＭＭＰ）の亜鉛と結合できる該酵素の阻害剤が知られている。一方、その発症が体内での異常な金属イオン濃度として現われる疾患に対する使用という他の可能性もまた考えられる。本発明に記載の化合物の錯体形成能力を、医薬品以外、例えば水に関する技術、ボディケアの成分、および重合化技術に利用できるようにすることもまた可能である（Ullmans Enzyklopadie der Technischen Chemie [Ullman's encyclopedia of industrial chemistry], 第5版, A 10, 95-100, 1985-1995）。
【００４４】
本発明に記載の式（Ｉ）の化合物はリウマチ性疾患例えば関節リウマチの治療で同様に作用し得る。関節リウマチに対するフリーラジカルスカベンジャーまたは抗酸化剤による酸化的ストレスの低下における有効成分は、例えばOstrakhovitch and Afanas (Biochemical Pharmacology, 2001, 743-746) に記載されている。
【００４５】
従って本発明はまた、本発明に記載の式（Ｉ）の化合物の医薬品としての使用、特に腫瘍症、細菌性感染症、真菌症、リウマチ性疾患およびマトリックス金属蛋白分解酵素の阻害により治療し得る疾患の治療および／または予防にも関する。
【００４６】
加えて、本発明は少なくとも１つの本発明に記載の化合物を含有する医薬品に関する。
かかる医薬品は、少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物を１つまたはそれ以上の生理学的に許容し得る添加剤と混合し、そしてそれを適当な投薬形態にすることによって製造する。
【００４７】
本発明に記載の医薬品は経腸的（経口的）、腸管外的（筋肉内的もしくは静脈内的）、直腸的または局所的（外用）に投与できる。それらは液剤、粉剤（錠剤、マイクロカプセルを含むカプセル剤）、軟膏剤（クリームもしくはゲル）、または坐剤の形態で投与できる。この種類の剤型のために可能な生理学的に許容し得る添加剤は、製剤で一般的な液体もしくは固体の賦形剤および増量剤、溶剤、乳化剤、潤滑剤、矯味矯臭剤、着色剤ならびに／または緩衝物質である。適切な投与量としては、体重１kg当たり０.１〜１０００、
好ましくは０.２〜１００mgを投与する。それらを、本発明に記載の化合物の少なくとも
有効な１日量例えば３０〜３０００、好ましくは５０〜１０００mgを含有する投薬単位で適切に投与する。
【００４８】
以下の実施例は、本発明をより非常に詳しく説明するために提供する意図のものであり、本発明の範囲を何らかの様式で制限することを望むものではない。
【実施例】
【００４９】
実施例１
ペニシリウム属ヘルクエイ  ベイナー＆サルトリー、ＤＳＭ１４１４２のグリセリン培養液の調製
滅菌した１００mlの三角フラスコ中の栄養液（麦芽エキス２.０％、酵母エキス０.２％、グルコース１.０％、（ＮＨ4)2ＨＰＯ4 ０.０５％、ｐＨ６.０）３０mlにペニシリウム属ヘルクエイ  ベイナー＆サルトリー菌株、ＤＳＭ１４１４２を接種した後、回転式振とう培養機で２５℃および１４０rpmで６日間培養する。次いで、この培養液１.５mlを８０％濃度のグリセリン２.５mlで希釈し、そして−１３５℃で保管する。
【００５０】
実施例２
ペニシリウム属ヘルクエイ  ベイナー＆サルトリー、ＤＳＭ１４１４２の三角フラスコ中での前培養液の調製
滅菌した３００mlの三角フラスコ中の栄養液（麦芽エキス２.０％、酵母エキス０.２％
、グルコース１.０％、（ＮＨ4)2ＨＰＯ4 ０.０５％、ｐＨ６.０）１００mlにペニシリウム属ヘルクエイ  ベイナー＆サルトリー菌株、ＤＳＭ１４１４２を接種した後、回転式振とう培養機で２５℃および１４０rpmで４日間培養する。次いで、この前培養液２mlを本
培養液の調製のために接種する。
【００５１】
実施例３
ペニシリウム属ヘルクエイ  ベイナー＆サルトリー、ＤＳＭ１４１４２の本培養液の調製
以下の栄養液（麦芽エキス２.０％、酵母エキス０.２％、グルコース１.０％、（ＮＨ4)2ＨＰＯ4 ０.０５％、ｐＨ６.０）１００mlを含有する滅菌した３００mlの三角フラスコに傾斜管（寒天２％を加える以外は同様の栄養液）で培養した培養物または前培養液（実施例２を参照）２mlを接種した後、１４０rpmおよび２５℃で振とう培養機で培養する。本発明に記載のペニレノンの１つまたはそれ以上の化合物の最大生成量は、約１４４時間後に達成される。１０〜２００Ｌの発酵槽の接種には、同様の栄養液の９６〜１４４時間の液内培養（接種量約１０％）で十分である。この発酵槽の条件は以下である。
温度２５℃
撹拌機の速度：２００rpm
通気１５Ｌmin-1
気泡の形成は、エタノール性多価アルコール溶液を繰り返し添加することで抑制できる。最大の生産量は約９６〜１４４時間後に達成される。
【００５２】
実施例４
化合物（II）および（III）の分離
実施例３に従って得た培養液５リットルを遠心分離した後、その細胞塊（０.５リット
ル）を、０.１％アスコルビン酸を添加したメタノール２リットルで抽出した。透明な濾
過後のメタノール性相を真空中で１Ｌに濃縮し、そして１Ｌの容量の吸着樹脂ＭＣｌゲル(R)ＣＨＰ２０Ｐを充填したカラムに付した。カラムの寸法：幅×高さ：７cm×２７cm。
０.１％アスコルビン酸水溶液中で１０％プロパン−２−オール〜９０％プロパン−２−
オールの溶媒勾配を用いて溶離を実施した。カラム溶出液（１４０ml／分）を２５０ml毎の分画に収集した。ＨＰＬＣ分析により確認されたペニレノンを含有する分画２３〜２６（式（II−Ａ）および（II−Ｂ）の化合物の混合物、まとめて式（II）の化合物と称する）ならびにアトロベネチンを含有する分画４３〜５１（式（III−Ａ）および（III−Ｂ）の化合物の混合物、まとめて式（III）の化合物と称する）を収集し、そして真空中で濃縮しておいた。各例で合一した分画を真空中で濃縮した後、冷却保存した。ペニレノン（式（II）の化合物２６０mg）を分画２３〜２６から結晶化し、アトロベネチン（式（III）の化合物）１.２ｇを分画４３〜５１から得た。結晶はアルゴン保護ガス雰囲気下で濾過した後、酸素を除去して冷却保存した。
【００５３】
実施例５
ＨＰＬＣによる分離および精製
カラム：スーパースフェル（Superspher）１００ＲＰ−１８ｅ(R)、２５０−４、プレ
カラム付き
移動相：
２分：０.１％リン酸中５％アセトニトリル
１８分：０.１％リン酸中５％〜１００％アセトニトリルの勾配、次いで１００％アセ
トニトリルで一定
流速：１ml／分
２１０nmにおけるＵＶ吸収による検出
式（II）の化合物では１３.５分、そして式（III）の化合物では２０.５分の保持時間
が見出された。
【００５４】
実施例６
式（II）の化合物の特性決定
ペニレノンの物理化学的および分光学的特質は以下のように要約できる。
外見：黄色の結晶性物質、極性培養液および極性有機溶媒中で可溶性、水には溶けにくい。融点は分解のために測定できない。還元条件下で弱酸性溶剤中で安定。酸素の影響下では、中性薬剤中またはアミンの存在でペニレノンは緑色に変わる。
実験式：Ｃ14Ｈ10Ｏ6
分子量：２７４.２３
ＥＳＩ＋（エレクトロスプレーイオン化）質量分析法により分子イオン２７５.２[Ｍ＋Ｈ]+が見出され、そしてＥＳＩ（陰性）条件下で２７３[Ｍ−Ｈ]-または２７１[Ｍ−３Ｈ]-が測定された。
ＵＶ極大値：２１５nm、２４８(sh)nm、２７５(sh)nm、３８９nm
【００５５】
【表１】
2005517710.tif 000009
【００５６】
実施例７
式（IV−Ａ）および（IV−Ｂ）のペニレノンジメチルエーテル誘導体の取得
式（II）の化合物（ペニレノン、実施例４に従って分離）４０mgをテトラヒドロフラン３０ml中に溶解した後、２.０Ｍ（トリメチルシリル）ジアゾメタン０.５mlを用いて処理し、ヘキサン[Aldrich, cat. no. 36,283-2]中に溶解した。１時間後、水を添加して反応
を終了させ、そして真空中で溶媒を留出除去した。次いで、その反応生成物をヌクレオシル（Nucleosil）ＨＤ(R)カラム（２１mm×２５０mm）上で分離した。使用した溶離液は、０.１％酢酸中の１０％〜９９％アセトニトリルの勾配であった。毎分２０mlのカラムの
流出を分画に収集した。メチル化生成物を含有したその分画を各例で合一し、真空中で濃縮した後、結晶化した。
式（IV−Ａ）のペニレノンジメチルエーテル（実験式：Ｃ16Ｈ14Ｏ6、分子量：３０２.２９）６mgおよび式（IV−Ｂ）のペニレノンジメチルエーテル（実験式：Ｃ16Ｈ14Ｏ6、分子量：３０２.２９）１mgを得た。
【００５７】
式（IV−Ａ）のペニレノンジメチルエーテル：
ＵＶ極大値：２１６nm、２４２nm、２８０nm(sh)、３８７nm
【表２】
2005517710.tif 000010
【００５８】
式（IV−Ｂ）のペニレノンジメチルエーテル：
ＵＶ極大値：２１３nm、２４１nmおよび３９０nm
【表３】
2005517710.tif 000011
【００５９】
実施例８
アトロベネチン誘導体（Ｖ−Ａ）および（Ｖ−Ｂ）の取得
式（III）の化合物（アトロベネチン、実施例４に従って調製）１００mgをテトラヒド
ロフラン５ml中に溶解した後、２.０Ｍ（トリメチルシリル）ジアゾメタン１mlを用いて
処理し、ヘキサン[Aldrich, cat. no. 36,283-2]中に溶解した。１５分後、水を添加して反応を終了させ、そして真空中で溶媒を留出除去した。次いで、その反応生成物をヌクレオシル（Nucleosil）ＡＢ(R)カラム（２１mm×２５０mm）上で分離した。使用した溶離液は、水酸化アンモニウムでｐＨ４.５に調整した０.０２％トリフルオロ酢酸中の１０％〜９９％アセトニトリルの勾配であった。毎分１５mlのカラムの流出を分画に収集した。メチル化生成物を含有したその分画を各例で合一し、真空中で濃縮した後、結晶化した。
アトロベネチンモノメチルエーテル（Ｖ−Ａ）（実験式：Ｃ20Ｈ20Ｏ6、分子量：３５
６.３８）２４mgおよび式（Ｖ−Ｂ）のアトロベネチンモノメチルエーテル（Ｖ−Ｂ）（
実験式：Ｃ20Ｈ20Ｏ6、分子量：３５６.３８）１０mgを得た。
【００６０】
アトロベネチンモノメチルエーテル（Ｖ−Ａ）：
ＵＶ極大値：２１８nm、２６０nm(sh)、３９４nm
【表４】
2005517710.tif 000012
【００６１】
アトロベネチンモノメチルエーテル（Ｖ−Ｂ）：
ＵＶ極大値：２２２nm、２８２nm、３８５nm
【表５】
2005517710.tif 000013
【国際調査報告】
2005517710.tif 000025
2005517710.tif 000026
2005517710.tif 000027
2005517710.tif 000028
2005517710.tif 000029
2005517710.tif 000030