(57)【要約】  本発明は、哺乳動物患者の様々な障害の処置および／または予防における、生物学的活性を有する三次元合成組成物および半合成組成物、ならびにその使用に関する。より詳細には、本発明は、合成本体および半合成本体（例えば、リポソーム）の調製およびその使用に関し、これは、患者の身体への導入後、有益な抗炎症性効果、器官保護効果および免疫調節効果を生じる。本発明はまた、炎症性疾患および自己免疫疾患ならびにそれらの症状を改善するための処置および組成物に関する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物において、インビボで抗炎症性応答を生じさせ得る物質の組成物であって、該組成物は、約２０ナノメートル（ｎｍ）〜５００マイクロメートル（μｍ）のサイズの薬学的に受容可能な本体を含み、該本体は、複数のホスフェート−グリセロール基またはホスフェート−グルセロール基に変換可能な基を含む、組成物。
【請求項２】
前記本体がリポソームである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記組成物が、非脂質の薬学的に受容可能な実体を本質的に含まない、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記組成物が、非脂質の薬学的に受容可能な実体を含まない、請求項２に記載の組成物。
【請求項５】
前記リポソームが、約６０〜１００％のホスファチジルグリセロール（ＰＧ）を含む、請求項２、３または４に記載の組成物。
【請求項６】
前記リポソームが、約７０〜９０％のホスファチジルグリセロールを含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記リポソームの残りが、ホスファチジルコリンを含む、請求項５または６に記載の組成物。
【請求項８】
前記リポソームが、約５０〜５００ナノメートルのサイズを有する、請求項２〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
前記リポソームが、約８０〜１２０ナノメートルのサイズを有する、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
Ｔ細胞機能媒介性障害の処置のための医薬の製造における使用であって、組成物は薬学的に受容可能な生体適合性本体を含み、該本体は、約２０ｎｍ〜５００μｍの範囲のサイズを有し、かつ表面上に複数のＰＧヘッド基を発現しているかまたは発現可能である、使用。
【請求項１１】
前記ＰＧヘッド基が、前記本体の表面に発現され、かつＰＧリガンドのヘッド基である、請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
前記本体がリポソームである、請求項１０または１１に記載の使用。
【請求項１３】
前記リポソームが、５０重量％〜１００重量％のホスファチジルグリセロールによって構成される、請求項１２に記載の使用。
【請求項１４】
前記リポソームが、６５重量％〜９０重量％のホスファチジルグリセロールによって構成される、請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
前記リポソームが、約２０ナノメートル〜約１０００ナノメートルの直径を有する、請求項１１、１２または１３に記載の使用。
【請求項１６】
前記組成物の単位投薬量が、約５０〜約２．５×１０９の本体を含む、請求項１０〜１５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１７】
前記組成物の単位投薬量が、約１０，０００〜約５０，０００，０００の本体を含む、請求項１６に記載の使用。
【請求項１８】
炎症性障害を処置するための医薬の製造における使用であって、組成物は、薬学的に受容可能な生体適合性本体を含み、該本体は、約２０ｎｍ〜５００μｍの範囲のサイズを有し、かつ表面上に複数のＰＧヘッド基を発現しているかまたは発現可能である、使用。
【請求項１９】
前記ＰＧヘッド基が、前記本体の表面に発現され、かつＰＧリガンドのヘッド基である、請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
前記本体がリポソームである、請求項１８または１９に記載の使用。
【請求項２１】
前記リポソームが、５０重量％〜１００重量％のホスファチジルグリセロールによって構成される、請求項２０に記載の使用。
【請求項２２】
前記リポソームが、６５重量％〜９０重量％のホスファチジルグリセロールによって構成される、請求項２１に記載の使用。
【請求項２３】
前記リポソームが、約２０ナノメートル〜約１０００ナノメートルの直径を有する、請求項２０、２１または２２に記載の使用。
【請求項２４】
前記組成物の単位投薬量が、約５０〜約２．５×１０９の本体を含む、請求項２０〜２３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２５】
内皮機能障害の処置のための医薬の製造における使用であって、組成物は薬学的に受容可能な生体適合性本体を含み、該本体は、約２０ｎｍ〜５００μｍの範囲のサイズを有し、かつ表面上に複数のＰＧヘッド基を発現しているかまたは発現可能である、使用。
【請求項２６】
前記ＰＧヘッド基が、前記本体の表面に発現され、かつＰＧリガンドのヘッド基である、請求項２５に記載の使用。
【請求項２７】
前記本体がリポソームである、請求項２５または２６に記載の使用。
【請求項２８】
前記リポソームが、５０重量％〜１００重量％のホスファチジルグリセロールによって構成される、請求項２７に記載の使用。
【請求項２９】
前記リポソームが、６５重量％〜９０重量％のホスファチジルグリセロールによって構成される、請求項２８に記載の使用。
【請求項３０】
前記リポソームが、約２０ナノメートル〜約１０００ナノメートルの直径を有する、請求項２７、２８または２９に記載の使用。
【請求項３１】
前記組成物の単位投薬量が、約５０〜約２．５×１０９の本体を含む、請求項２７〜３０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項３２】
前記組成物の単位投薬量が、約１０，０００〜約５０，０００，０００の本体を含む、請求項３１に記載の使用。
【請求項３３】
前記組成物の単位投薬量が、約１０，０００〜約５０，０００，０００の本体を含む、請求項３２に記載の使用。
【請求項３４】
不適切なサイトカイン発現によって特徴付けられる免疫障害の処置のための医薬の製造における使用であって、組成物は薬学的に受容可能な生体適合性本体を含み、該本体は、約２０ｎｍ〜５００μｍの範囲のサイズを有し、かつ表面上に複数のＰＧヘッド基を発現するかまたは発現可能である、使用。
【請求項３５】
前記ＰＧヘッド基が、前記本体の表面に発現され、かつＰＧリガンドのヘッド基である、請求項３４に記載の使用。
【請求項３６】
前記本体がリポソームである、請求項３４または３５に記載の使用。
【請求項３７】
前記リポソームが、５０重量％〜１００重量％のホスファチジルグリセロールによって構成される、請求項３６に記載の使用。
【請求項３８】
前記リポソームが、６５重量％〜９０重量％のホスファチジルグリセロールによって構成される、請求項３７に記載の使用。
【請求項３９】
前記リポソームが、約２０ナノメートル〜約１０００ナノメートルの直径を有する、請求項３６、３７または３８に記載の使用。
【請求項４０】
前記組成物の単位投薬量が、約５０〜約２．５×１０９の本体を含む、請求項３６〜３９のいずれか１項に記載の使用。
【請求項４１】
前記組成物の単位投薬量が、約１０，０００〜約５０，０００，０００の本体を含む、請求項４０に記載の使用。
【請求項４２】
前記組成物の単位投薬量が、約１０，０００〜約５０，０００，０００の本体を含む、請求項４１に記載の使用。
【請求項４３】
前記障害が、神経学的障害である、請求項３４〜４２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項４４】
哺乳動物患者に投与するための、単位投薬形態の薬学的組成物であって、該組成物は、薬学的に受容可能な本体および薬学的に受容可能なキャリアを含み、ここで該本体の少なくとも一部分は約２０ｎｍ〜５００μｍの範囲を有し、かつ該本体の表面は、ホスフェート−グリセロール基またはホスフェート−グルセロール基に変換可能な基を含み、該単位投薬量が、約５００〜約２．５×１０９の本体を含む、組成物。
【請求項４５】
前記本体がリポソームである、請求項４４に記載の薬学的組成物。
【請求項４６】
前記組成物が、非脂質の薬学的に受容可能な実体を本質的に含まない、請求項４５に記載の薬学的組成物。
【請求項４７】
前記組成物が、非脂質の薬学的に受容可能な実在を含まない、請求項４５に記載の薬学的組成物。
【請求項４８】
前記リポソームが、約６０〜１００％のホスファチジルグリセロール（ＰＧ）を含有するホスフェート−グリセロール基を含む、請求項４５、４６または４７に記載の薬学的組成物。
【請求項４９】
前記リポソームが、約７０〜９０％のＰＧを含む、請求項４８に記載の薬学的組成物。
【請求項５０】
前記リポソームの残りのいずれもが、ホスファチジルコリンである、請求項４８または４９に記載の薬学的組成物。
【請求項５１】
前記本体が、ホスフェート−グリセロール基の結合に特異的な哺乳動物免疫系の細胞上のレセプターに特異的に結合する表面基を含む、請求項４４に記載の薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、生物学的活性を有する三次元的な合成組成物および半合成組成物、ならびに哺乳動物患者における種々の障害の処置および／または予防におけるそれらの使用に関する。より詳細には、本発明は、患者の体内に導入された後、有益な抗炎症性の、器官保護効果および免疫調節効果を生じる合成体および半合成体の調製および使用に関する。本発明はまた、炎症疾患および自己免疫疾患ならびにそれらの徴候を緩和するための処置および組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
樹状細胞（ＤＣ）およびマクロファージ（Ｍｐｈ）を含む、専門的な抗原提示細胞（ＡＰＣ）は、抗原（Ａｇ）を能動的に捕捉および処理し、細胞片を一掃し、そして感染性生物および死滅細胞（死滅細胞由来の残骸を含む）を除去する。このプロセスの間、ＡＰＣは抗原（Ａｇ）または貪食物質の性質およびＡＰＣの成熟／活性化レベルに依存して、炎症性Ｔｈ１炎症誘発性サイトカイン（ＩＬ−１２、ＩＬ−１、ＩＮＦ−γ、ＴＮＦ−αなど）または調節性Ｔｈ２／Ｔｈ３サイトカイン（例えば、ＩＬ−１０、ＴＧＦ−β、ＩＬ−４など）のいずれかにより支配される応答の生成を刺激し得る。
【０００３】
ＡＰＣは、細胞片を除去する。そのうちのいくつかは、身体の細胞膜に由来し、いくらかは細菌および寄生虫の感染および共生生物（例えば、腸細菌）に由来する。この細胞片には、炎症誘発性応答を開始するものもあり、保護および抗炎症性応答を開始するものもある。
【０００４】
正常に機能する免疫系は、外来侵入生物の抗原（非自己）と「自己」由来の組織または残骸の抗原とを区別し得、外来抗原に対してのみ免疫応答を惹起する。患者の免疫系が、自己と非自己を区別できない場合、自己免疫障害が生じる。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
（発明の要旨）
本発明は、ホスフェート−グリセロール基を含む、薬学的に受容可能な本体（例えば、リポソーム、ビーズ、または類似の粒子）が、哺乳動物患者に投与された際に、抗炎症効果を引き起こし、従って多くの疾患を処置するのに使用され得るという発見に関する。これらの本体はさらに、微量成分として、不活性構成成分、および／または異なる機構を通して活性な構成成分を含む。
【０００６】
好ましい実施形態において、本発明は、哺乳動物においてインビボで抗炎症応答を生成し得る組成物に関する。この組成物は、約２０ナノメートル（ｎｍ）〜５００マイクロメートル（μｍ）の大きさの薬学的に受容可能な本体を含み、複数のホスフェート−グリセロール基またはこのような基に変換可能な基を含む。好ましくは、この本体は、非脂質性の薬学的に活性な実体を本質的に含まない。好ましくは、ホスフェート−グリセロール基は、本体上の活性な基の６０％〜１００％を構成する。哺乳動物に投与された後、この本体は、ホスフェート−グリセロール基を通して、免疫系と反応すると考えられる。結果として、そのように投与される場合、抗炎症応答が誘発される。
【０００７】
別の実施形態において、本発明は、２０ｎｍ〜５００μｍの範囲の大きさを有し、そして主要成分として、少なくとも１つの抗炎症促進リガンドを含むよう改変される、三次元的な合成または半合成本体（別途、本明細書中で、薬学的に受容可能な本体として言及される）に関する。ここで、このリガンドは、ホスフェート−グリセロール基を有する。
【０００８】
さらに別の実施形態において、本発明は、２０ｎｍ〜５００μｍの範囲の大きさを有し、そしてその表面上にホスフェート−グリセロール基を有する、三次元的な合成または半合成本体（別途、本明細書中で、薬学的に受容可能な本体として言及される）に関する。
【０００９】
別の局面において、本発明は、Ｔ細胞機能により媒介される障害を処置するための方法に関する。この方法は、Ｔ細胞機能により媒介される障害の進行を阻害および／または低減するのに有効数のホスフェート−グリセロール基を有する有効量の薬学的に受容可能な本体を哺乳動物患者に投与する工程を包含する。
【００１０】
本発明はさらに、炎症性障害を処置する方法に関する。この方法は、炎症障害の進行を阻害および／または低減するのに有効数のホスフェート−グリセロール基を有する有効量の薬学的に受容可能な本体を哺乳動物患者に投与する工程を包含する。
【００１１】
本発明のなお別の実施形態は、内皮機能障害を処置する方法である。この方法は、内皮機能障害の進行を阻害および／または低減するのに有効数のホスフェート−グリセロール基を有する有効量の薬学的に受容可能な本体を哺乳動物患者に投与する工程を包含する。
【００１２】
別の実施形態は、不適切なサイトカイン発現により特徴付けられる免疫障害を処置する方法である。この方法は、免疫障害の進行を阻害および／または低減するのに有効数の抗ホスフェート−グリセロール基を有する有効量の薬学的に受容可能な本体を哺乳動物患者に投与する工程を包含する。
【００１３】
本発明はさらに、哺乳動物心臓障害、患者の心電図における延長されたＱＴ−ｃ間隔を観察することにより検出可能な感受性の存在の処置または予防のためのプロセスに関する。このプロセスは、それに罹患しているかまたはそれに対して感受性の患者に、薬学的に受容可能な生体適合性の合成または半合成の本体（別途、本明細書中で薬学的に受容可能な本体と言及される）および薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物を投与する工程を包含する。この本体の少なくとも一部は、約２０ｎｍ〜５００μｍの範囲であり、そしてこの本体の表面は、主要成分として、少なくとも１つの抗炎症性促進基を有するよう改変されており、この基は、ホスフェート−グリセロール基である。
【００１４】
本発明の別の実施形態は、哺乳動物患者への投与のための、単回用量形態での薬学的組成物である。この薬学的組成物は、薬学的に受容可能な本体および薬学的に受容可能なキャリアを含み、本体の少なくとも一部は、約２０ｎｍ〜５００μｍの範囲の大きさであり、そしてこの本体の表面は、ホスフェート−グリセロール基またはホスフェート−グリセロール基に変換可能な基を有し、単回用量は、５００〜２．５×１０９個の本体を含む。
【００１５】
本発明のさらなる実施形態は、薬学的に受容可能な生体適合性の合成または半合成の本体（別途、本明細書中で薬学的に受容可能な本体として言及される）および薬学的に受容可能なキャリアを含み薬学的組成物に関する。この本体の少なくとも一部は約２０ｎｍ〜５００μｍの大きさを有し、そしてこの本体の表面は、主要成分として、少なくとも１つの抗炎症性促進基を有するよう改変されており、この基は、ホスフェート−グリセロール基である。
【００１６】
本発明のなおさらなる実施形態は、薬学的に受容可能な生体適合性合成本体または半合成本体（あるいは別に、本明細書で、薬学的に受容可能な本体ともいう）および薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物であり、ここで、この本体の少なくとも一部は、約２０ｎｍ〜５００μｍを有し、そしてカルジオリピンを含む。
【００１７】
必要に応じて、上記の本体は、不活性な構成表面基および／または別の機構（例えば、ホスファチジルセリン（例えば、Ｆａｄｏｋら，国際公開ＷＯ  ０１／６６７８５を参照のこと））を介して活性である構成表面基をさらに含み得る。
【００１８】
別の実施形態において、本発明は、ホスフェート−グリセロール基またはホスフェート−グリセロール基に変換可能な基を保有する凍結乾燥された（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ）または冷凍乾燥された（ｆｒｅｅｚｅ−ｄｒｉｅｄ）薬学的に受容可能な本体、ならびにホスフェート−グリセロール基またはホスフェート−グリセロール基に変換可能な基を保有する凍結乾燥されたまたは冷凍乾燥された本体および薬学的に受容可能なキャリアを備えるキットに関する。
【００１９】
別の局面において、本発明は、Ｔ細胞機能媒介障害を処置する方法に関し、この方法は、Ｔ細胞機能媒介障害に罹患するか、または罹患する危険性にある哺乳動物患者に、有効量の組成物を投与することを包含し、この組成物は、約２０ｎｍ〜５００μｍのサイズを有し、その表面に、複数のホスフェート−グリセロール基またはホスフェート−グリセロール基に変換可能な複数の基を含み、その結果、投与されると、Ｔ細胞機能媒介障害の進行は、抑制および／または低減される。
【００２０】
本発明のなお別の実施形態は、内皮機能障害を処置するための方法に関し、この方法は、内皮機能障害に罹患しているかまたは罹患する危険性がある哺乳動物患者に、薬学的に受容可能な本体を含む有効量の組成物を投与する工程を包含し、この本体は、約２０ｎｍ〜約５００μｍのサイズを有し、その表面に、複数のホスフェート−グリセロール基またはホスフェート−グリセロール基に変換可能な複数の基を含み、その結果、投与されると、内皮機能媒介障害の進行が抑制および／または低減される。
【００２１】
本発明の別の実施形態は、免疫障害に罹患しているかまたは罹患する危険性がある哺乳動物患者における免疫障害を処置するための方法に関し、この方法は、この哺乳動物患者に、薬学的に受容可能な本体を含む有効量の組成物を投与する工程を包含し、この本体は、約２０ｎｍ〜約５００μｍのサイズを有し、その表面に、複数のホスフェート−グリセロール基またはホスフェート−グリセロール基に変換可能な複数の基を含み、その結果、投与されると、免疫障害の進行が阻害および／または低減される。
【００２２】
本発明はまた、ホスフェート−グリセロール基に特異的に結合する哺乳動物免疫系（例えば、マクロファージ）の細胞上のレセプターの使用として、別の局面から視点を当てられ得る。本発明は、リガンドおよび基を含む本体を包含し、この基は、このようなレセプターに結合し、次いで、抗炎症性応答を生じる。従って、本発明は、リガンドまたはその活性基を含む本体として規定され、これらは、抗原提示細胞による本明細書に記載されるホスフェート−グリセロールを発現する本体の結合または取り込みと競合する。当業者は、特定の本体が、そのように競合するものであるか否かを、簡単な試験実験を実施することによって、容易に決定し得る。例えば、本体は、容易入手可能な単球細胞株（例えば、Ｕ９３７細胞株）を用いて試験され得る。第１の実験において、Ｕ９３７細胞を蛍光標識したＰＧリポソーム単独とともにインキュベートし、そして他の実験において、このＵ９３７細胞を、蛍光標識したＰＧリポソームと異なる量の試験化合物両方の存在下でインキュベートする。他の実験における蛍光標識したＰＧリポソームの取り込みは、第１の実験の取り込みと比較して減少する場合、試験化合物は、特異的レセプターに競合し、そして本発明の範囲内の化合物である。
【００２３】
（好ましい実施形態の説明）
本発明に従って、表面にホスフェート−グリセロール基を保有する薬学的に受容可能な本体は、患者に投与される。いかなる理論にも限定されないが、これらの本体は、有益な効果（例えば、インビボでの炎症前サイトカインの阻害および／または抗炎症性サイトカインの促進）を伴って、患者の免疫系と相互作用すると考えられる。反応している細胞は、免疫系細胞（例えば、プロフェッショナル抗原提示細胞またはノンプロフェッショナル抗原提示細胞、内皮細胞、調節細胞（例えば、ＮＫ−Ｔ細胞）など）であり得る。
【００２４】
これらの薬学的に受容可能な本体としては、合成および半合成の本体が挙げられ、これは、代表的に、回転楕円体、円筒体、楕円体（扁平楕円回転楕円体および長楕円回転楕円体を含む）、蛇行状、腎臓形などであるがこれらに限定されない形状を有し、そして直径が約２０ｎｍ〜約５００μｍのサイズ（好ましくは、その長軸に沿って測定される）であり、そしてその表面にホスフェート−グリセロール基を含む。
【００２５】
薬学的に受容可能な本体は、その外表面に所定の特性のホスフェート−グリセロール基を有する。いかなる理論にも限定されないが、これらの基は、インビボでの抗原提示細胞上で、ＰＳレセプターを除く適切なレセプターを相互作用し得る。これらの基の構造は、合成的に変化され得、そして元のホスフェート−グリセロール基の全て、一部または改変バージョンを含む。例えば、ホスフェート−グリセロール基のホスフェート基の負に荷電した酸素は、ホスフェートエステル基（例えば、Ｌ−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ’）（ＯＲ’’））に変換され得、ここで、Ｌは、ホスフェート−グリセロール基の残りであり、Ｒ’は、−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＯＨであり、そしてＲ’’は、１〜４個の炭素原子のアルキルまたは２〜４個の炭素原子のヒドロキシル置換アルキルおよび１〜３個のヒドロキシル基であり、ただし、Ｒ’’は、Ｒ’基よりインビボで、より容易に以下にまで加水分解される；ジホスフェート基（ジホスフェートエステル（例えば、Ｌ−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ’）ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ’’）２）を含む）であり、ＬおよびＲ’は、上記のように定義され、各Ｒ’’は、独立して水素、１〜４個の炭素原子のアルキル、または２〜４個の炭素原子のヒドロキシル置換アルキルおよび１〜３個のヒドロキシル基であり、ただし、第２のホスフェート基［−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’’）２］は、Ｒ’基よりインビボで、より容易に加水分解される；またはトリホスフェート基（トリホスフェートエステル（例えば、Ｌ−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ’）ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ’’）ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ’’）２）を含む）であり、ＬおよびＲ’は、上記のように定義され、各Ｒ’’は、独立して水素、１〜４個の炭素原子のアルキル、または２〜４個の炭素原子のヒドロキシル置換アルキルおよび１〜３個のヒドロキシル基であり、ただし、第２および第３のホスフェート基は、Ｒ’基よりインビボで、より容易に加水分解される；など。このような合成的に変化されたホスフェート−グリセロール基は、インビボでホスフェート−グリセロールを発現し得、従って、このような変化された基は、ホスフェート−グリセロール変換可能基である。
【００２６】
ホスファチジルグリセロールは、公知の化合物である。それは、例えば、天然に存在する二量体形態のホスファチジルグリセロールであるカルジオリピンを、ホスホリパーゼＤにより処理することによって生成され得る。それはまた、ホスホリパーゼＤを使用してホスファチジルコリンから酵素的合成によって調製され得る−例えば、米国特許第５，１８８，９５１号、Ｔｒｅｍｂｌａｙらを参照のこと。化学的に、ホスファチジルグリセロールは、ホスフェート−グリセロール基を有し、そして１対の類似しているが、異なるＣ１８〜Ｃ２０脂肪酸鎖を有する。
【００２７】
本明細書中で用いられる場合、用語「ＰＧ」は、広範囲の少なくとも１つの脂肪酸鎖を有するホスフェート−グリセロール基を保有するリン脂質を包含することが意図される。ただし、得られるＰＧ実体は、リポソームの構成成分として関与し得る。好ましくは、このようなＰＧ化合物は、式Ｉによって表され得る：
【００２８】
【化１】
2005515243.tif 000003
ここで、ＲおよびＲ１は、飽和または不飽和の、直鎖または限定された量の分枝を含む、Ｃ１〜Ｃ２４炭化水素鎖から独立して選択され、ここで、少なくとも１つの鎖は、１０〜２４の炭素原子を有する。本質的に、脂質鎖ＲおよびＲ１は、活性成分というよりむしろ、リポソームの構成成分を形成する。従って、これらは、構造的な機能を満たしさえすれば同じであっても異なっていてもよい、２つまたは１つのこのような脂質鎖を含むように変動し得る。好ましくは、脂質鎖は、飽和、一不飽和または多価不飽和の、直鎖であるか、または制限された量の分枝を有する、約１０〜約２４炭素原子長であり得る。ラウレート（Ｃ１２）、ミリステート（Ｃ１４）、パルミテート（Ｃ１６）、ステアレート（Ｃ１８）、アラキデート（Ｃ２０）、ベヘネート（Ｃ２２）およびリグノセレート（Ｃ２４）は、本発明において使用するためのＰＧについて有用な飽和脂肪鎖の例である。パルミトレエート（Ｃ１６）、オレエート（Ｃ１８）は、適切な一不飽和脂肪鎖の例である。リノレエート（Ｃ１８）、リノレネート（Ｃ１８）およびアラキドネート（ａｒｉｃｈｉｄｏｎａｔｅ）（Ｃ２０）は、本発明のリポソームにおけるＰＧの使用に適切な多価不飽和脂肪鎖の例である。本発明においても有用な、このような脂肪鎖を１つ有するリン脂質は、リゾリン脂質として公知である。本発明はまた、活性成分が二量体形態のＰＧ（すなわち、カルジオリピンであるが、式Ｉの他の二量体もまた適切である）であるリポソームの使用を包含するように拡大される。好ましくは、このような二量体は、合成架橋剤（例えば、マレイミド）と合成的に架橋されず、むしろ、Ｌｅｈｎｉｇｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５２５頁（１９７０）によって記載され、そして以下の反応によって図示されるようなグリセロール単位の除去によって架橋される：
【００２９】
【化２】
2005515243.tif 000004
ここで、各ＲおよびＲ’は、独立して、上記で定義した通りである。
【００３０】
上記のように、そしていかなる理論にも限定されないが、ＰＧ基およびその二量体は、リガンドであると考えられる。なぜなら、ＰＧ基およびその二量体は、タンパク質または他の分子（「ＰＧレセプター」）上の特定の部位に結合すると考えられるからであり、従って、このホスファチジルグリセロール（およびその二量体形態）分子は、ときに、本明細書で「リガンド」または「結合基」と称される。このような結合は、ホスフェート−グリセロール基−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−ＯＨを介して生じると考えられ、これは、ときに、本明細書で「ヘッド基」、「活性基」、または「結合基」と称される。上記の観点から、本明細書中の「結合」、「結合基」または「リガンド」への参照は、いかなる機構または作用の様式をも推定しない。それにも関らず、上記ホスフェート−グリセロール基は、患者の免疫系の成分との相互作用のために、本発明の本体の外表面上に存在すると考えられる。この相互作用は、アポトーシス細胞と抗原提示細胞上のホスファチジルセリンレセプターとの特異的相互作用と同じでないことは留意されるべきである。
【００３１】
「３次元本体部分」または「薬学的に受容可能な本体」の例としては、薬学の工業において通常使用されるような、天然または合成の生体適合性材料のリポソーム、中実ビーズ、中空ビーズ、充填ビーズ、粒子、顆粒およびミクロスフェアのような生体適合性の合成または半合成実体が挙げられる。ビーズは、中実または中空であり得るか、生体適合性材料で充填され得る。用語「生体適合性」とは、使用される量において、非毒性であるか、または受容可能な毒性プロフィールを有するかのいずれかであり、その結果、インビボでのそれらの使用が受容可能である物質をいう。同様に、「薬学的に受容可能な本体」に関連して使用されるような用語「薬学的に受容可能な」とは、薬学的に受容可能であり、そしてインビボでの送達に適切である１つ以上の物質から構成される本体をいう。このような本体としては、脂質から形成されるリポソームが挙げられ得、この１つは、ＰＧである。あるいは、薬学的に受容可能な本体は、生体適合性材料の、中実ビーズ、中空ビーズ、充填ビーズ、粒子、顆粒およびミクロスフェアであり得、これは、ポリエチレングリコール、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリビニルピロリドン、ポリスチレンおよび幅広い範囲の他の天然、半合成および合成の材料のような１つまたは１つ以上の生体適合性材料を、それらに結合されるホスフェート−グリセロール基とともに含む。
【００３２】
上記のように、改変活性基を有するホスファチジルグリセロールのアナログ（これはまた、ＰＧと同じレセプター経路によって抗原提示細胞のＰＧレセプターと相互作用するか、またはそれ以外で、レシピエント身体において抗炎症性反応を生じる）は、用語ホスファチジルグリセロールの範囲内に企図される。これには、１つ以上のヒドロキシル基および／またはホスフェート基が誘導される化合物、またはその塩の形態が挙げられるが、限定されない。多くのこのような化合物は、投与の際にまたは投与に続いて、インビボで遊離ヒドロキシル基を形成し、従って、変換可能なＰＧ基を含む。
【００３３】
好ましい組成物は、リポソームであり、これは、種々の脂質から構成され得る。しかし、好ましくは、脂質は、正に荷電されない。リポソームの場合、ホスファチジルグリセロールＰＧは、リポソーム層または壁の主要部分または全部分を構成し得、これは、そのホスフェート−グリセロール基部分が、結合基として作用するように、外部に提示されるように配向され、そして脂質鎖が、構造壁を形成する。
【００３４】
リポソーム、または脂質ベシクルは、ミクロンの範囲またはサブミクロンの範囲の密封された嚢（ｓａｃ）であり、この壁（単層または多層）は、適切な両親媒性物質を含む。これらは、通常、水性媒体を含むが、本発明のために、内部の内容物は、重要ではなく、そして一般的に、不活性である。従って、好ましい実施形態において、リポソーム、ならびに他の薬学的に受容可能な本体は、非脂質性の薬学的に重要な実体を本質的に含まず（例えば、＜１％）、より好ましくは、非脂質性の薬学的に受容可能な実体を含まない。このようなリポソームは、活性基がリポソーム本体上に外面的に提示されるように調製および処理される。本発明の好ましい実施形態のリポソームのＰＧは、このように、リガンドとリポソーム自体の構造成分との両方として役立つ。
【００３５】
従って、本発明の好ましい実施形態は、１つ以上のホスフェート−グリセロール基を結合基として作用するようにリポソームの表面上に露出するか、または露出するように処理もしくは誘導され得るリポソーム本体を提供する。ホスファチジルグリセロールは、好ましいＰＧリガンドであり、そしてこのような脂質は、１０％〜１００％のリポソームを含み、残りは、不活性成分（例えば、ホスファチジルコリンＰＣ）または異なる機構を介して作用するもの（例えば、ホスファチジルセリンＰＳ）またはこのようなものの混合物である。ＰＣのような不活性同時成分が好ましい。
【００３６】
このようなリポソームの少なくとも１０重量％は、ＰＧから構成され、好ましくは、少なくとも５０％、より好ましくは、６０〜１００％、そして最も好ましくは、７０〜９０％がＰＧから構成され、１つの最も好ましい実施形態は、約７５重量％のＰＧである。
【００３７】
ＰＧリポソームと不活性リポソームおよび／または異なる機構を介して作用するリン脂質のリポソームとの混合物もまた、使用され得るが、但し、ＰＧの合計量は、約１０％の最小量より上のままであり、好ましくは、混合物の合計の６０％より上のままである。
【００３８】
本発明における使用のための非リポソーム本体に関して、これらは、適切なサイズの生体適合性中実または中空ビーズを含むことが注記される。生体適合性非リポソーム合成または半合成本体は、表面に結合されるホスフェート−グリセロール基を有する、ポリエチレングリコール、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリビニルピロリドン、ポリスチレンおよび幅広い範囲の他の天然、半合成および合成の材料から選択され得る。このような材料としては、生分解性ポリマーが挙げられ、これは、Ｄｕｎｎら、米国特許第４，９３８，７６３号（これは、その全体が本明細書によって参考として援用される）によって開示される。
【００３９】
生分解性ポリマーは、当該分野において開示され、これには、例えば、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリカプロラクトン、ポリ無水物、ポリアミド、ポリウレタン、ポリエステルアミド、ポリオルトエステル、ポリジオキサノン、ポリアセタール、ポリケタール、ポリカルボネート、ポリオルトカルボネート、ポリホスファゼン、ポリヒドロキシブチレート、ポリヒドロキシバレレート、ポリアルキレンオキサレート、ポリアルキレンスクシネート、ポリ（リンゴ酸）、ポリ（アミノ酸）、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、ポリヒドロキシセルロース、キチン、キトサン、ならびにこれらのコポリマー、ターポリマーおよび組み合わせのような直鎖ポリマーが挙げられる。他の生分解性ポリマーとしては、例えば、ゼラチン、コラーゲンなどが挙げられる。
【００４０】
３次元本体に、基または結合基を有するリン脂質またはその一部を結合するための誘導化に適切な物質は、市販される（例えば、Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ．，４００  Ｖａｌｌｅｙ  Ｒｏａｄ，Ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ，ＰＡ  １８９７６、またはＳｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｆｉｎｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）。それらの誘導体化のための方法は、当該分野において公知である。このような方法の特定の好ましい例は、国際特許出願ＰＣＴ／ＣＡ０２／０１３９８  Ｖａｓｏｇｅｎ  Ｉｒｅｌａｎｄ  Ｌｉｍｉｔｅｄ（これは、本明細書中において参考として援用される）に開示される。
【００４１】
患者が、哺乳動物（ヒトおよび家畜（例えば、ウシ、ウマ、ブタ、イヌ、ネコなど）が挙げられるが、これらに制限されない）であり得ることが企図される。
【００４２】
リン脂質は、両親媒性分子（すなわち、両親媒性物質）であり、これは、この化合物が、水不溶性炭化水素鎖に結合された極性水溶性基を有する分子を含むことを意味する。マトリクスの層として役立つ両親媒性物質は、規定された極性および非極性領域を有する。両親媒性物質としては、本発明のＰＧに加えて、活性基を有するリン脂質とともに単独で、または別のものとの混合物で使用される他の天然に存在する脂質が挙げられ得る。リポソームの層として役立つ両親媒性物質は、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルエステルおよびサッカロースジエステルのような、不活性な構造を与える合成化合物であり得る。
【００４３】
適切なサイズのリポソームを調製する方法は、当該分野において公知であり、そして本発明の一部を形成しない。この問題についての種々の教科書および論文（例えば、Ｙｅｃｈｅｚｋｅｌ  Ｂａｒｅｎｈｏｌｚ  ａｎｄ  Ｄａａｎ  Ｊ．Ａ．Ｃｈｒｏｍｍｅｌｉｎによる、総説論文「Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ａｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ」、およびそこに引用される文献、例えば、Ｎｅｗ，Ｒ．Ｃ．「Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ」、ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ  ａｔ  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ（１９９０））に対して、参照がなされ得る。
【００４４】
本発明の好ましい実施形態のリポソームおよび他の薬学的に受容可能な本体の直径は、約２０ｎｍ〜約５００μｍ、より好ましくは、約２０ｎｍ〜約１０００ｎｍ、より好ましくは、約５０ｎｍ〜約５００ｎｍ、最も好ましくは、約８０ｎｍ〜約１２０ｎｍ（好ましくは、その最も長い軸に沿って測定される）である。１つの実施形態において、リポソームの直径は、６０ｎｍ〜５００μｍである。
【００４５】
薬学的に受容可能な本体は、薬学的に受容可能なキャリア（例えば、生理学的滅菌生理食塩水、滅菌水、発熱物質を含まない水、等張生理食塩水およびリン酸緩衝化溶液（例えば、ホスフェート緩衝剤を含む滅菌水溶液）、ならびに薬学的処方物中で使用される他の非毒性適合性物質（例えば、アジュバント、緩衝剤、防腐剤など））中に、懸濁され得る。好ましくは、この薬学的に受容可能な本体は、生体適合性の滅菌液体（例えば、緩衝化生理食塩水）中の液体懸濁物へと構成され、そして免疫系の１つ以上の構成要素にこれを曝露する任意の適切な経路（例えば、動脈内、静脈内、または最も好ましくは筋内もしくは皮下）で、患者に投与される。
【００４６】
薬学的に受容可能な本体は、後に投与のために再懸濁され得るように、凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅ−ｄｒｉｅｄまたはｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ）され得ることが企図される。本発明はまた、凍結乾燥された結合基保有本体、および薬学的に受容可能なキャリア（例えば、生理学的滅菌生理食塩水、滅菌水、発熱物質を含まない水、等張生理食塩水およびリン酸緩衝化溶液（例えば、ホスフェート緩衝剤を含む滅菌水溶液）、ならびに薬学的処方物（例えば、アジュバント、緩衝液、防腐剤など）中で使用される他の非毒性適合性物質）を含む部分のキットに関する。当該分野で公知のような凍結乾燥のための保護剤（例えば、ラクトースまたはスクロース）もまた、含まれ得る。
【００４７】
患者に薬学的に受容可能な本体を投与する好ましい様式は、一週間〜数ヶ月の範囲の期間にわたって、毎日、一週間に数回、毎週、毎月、患者に投与される注射の過程である。投与過程の頻度および持続時間は、患者によって、ならびに処置される状態、その重篤度、およびその処置が予防としてか、治療としてか、または治癒として意図されているかに従って、おそらく変動する。その設計および最適化は、十分に担当医の技術範囲内である。筋内注射、特に殿部筋肉を介した筋内注射は、最も好ましい。１つの特定の注射スケジュールは、本発明の適応症の少なくともいくつかについて、１日目に適切な量の本体、２日目にさらなる注射、１４日目にさらなる注射、次いで必要な場合、一月間隔での「追加」注射の、殿部筋肉を介した注射である。
【００４８】
本発明の多くの実施形態において、結合基としてＰＧ基をその表面に含む、薬学的に受容可能な本体は、ワクチンと類似の様式で、患者の免疫系の調節因子として作用していると推定される。従って、これらは、導入部位におけるこの本体の十分な局在化濃度を提供するような量で、そのような投与方法によって、使用される。免疫系改変に適切なこのような本体の量は、レシピエントの身体サイズとは直接相関しない可能性があり、従って、患者の血流および組織において治療レベルの活性物質を提供するように設計された薬物投薬量とは、明らかに識別され得る。従って、薬物投薬量は、免疫系改変投薬量よりもおそらくかなり多い。
【００４９】
リポソームの重量とリポソームの数との間の相関は、リポソーム処方の分野の当業者によって受け入れられた知識から誘導可能であり、１００ｎｍの直径の二層ベシクルは、ベシクル当たり８１，２３０個の脂質分子を有し、約５０：５０で、層間に分布している（Ｒｉｃｈａｒｄ  Ｈａｒｒｉｇａｎ−１９９２  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｃｏｌｕｍｂｉａ  ＰｈＤ  Ｔｈｅｓｉｓ「Ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ｐＨ  ｇｒａｄｉｅｎｔｓ  ｉｎ  ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ（ｍｉｃｒｏｆｏｒｍ）：ｄｒｕｇ−ｖｅｓｉｃｌｅ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｔｏｎ  ｆｌｕｘ」，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｌｉｂｒａｒｙ  ｏｆ  Ｃａｎａｄａ，Ｏｔｔａｗａ，Ｃａｎａｄａ（１９９３）刊行；Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｍｉｃｒｏｆｉｌｍｓ  ｏｒｄｅｒ  ｎｏ．ＵＭＩ００４０６７５６；Ｃａｎａｄｉａｎａ  ｎｏ．９４２０４２２２０，ＩＳＢＮ  ０３１５７９６９３６を参照のこと）。このことから、例えば、以下の特定のインビボ実施例において使用される用量のオーダーの、５×１０８個のベシクルの用量が、４．０６×１０１３個の脂質分子と等価であることを、計算し得る。１グラムの分子中の脂質分子の数のアボガドロ数（モル）である６．０２３×１０２３を使用して、これが、６．７４×１０−１１モルを示し、これは、ＰＧについての７２９の分子量で、このような投薬量について、約３．８３×１０−８ｇ、すなわち３８．３ｎｇのＰＧであることを、決定する。
【００５０】
投与される薬学的に受容可能な本体の量は、処置が意図される哺乳動物疾患の性質、ならびに患者の正体および特徴に依存して、変化する。好ましくは、有効量の薬学的に受容可能な本体は、患者に対して非毒性であり、かつ免疫系を圧倒するほど大きくはない。薬学的に受容可能な本体の滅菌液体懸濁物の、動脈内投与、静脈内投与、皮下投与または筋内投与を使用する場合、各用量において、等量の全血において通常見出される白血球の数の１０％〜１０００％と一般に等しい本体の量を含む、約０．１〜５０ｍｌの液体を投与することが好ましい。好ましくは、ヒト患者への送達１回当たり投与される本体の数は、約５００〜約２．５×１０９（リポソームの場合、本体の他の実施形態についての異なる密度について比例して、＜２５０ｎｇの本体）の範囲、より好ましくは約１，０００〜１，５００，０００，０００、なおより好ましくは１０，０００〜約５０，０００，０００、そして最も好ましくは約２００，０００〜約２，０００，０００の範囲である。
【００５１】
薬学的に受容可能な本体は、本発明のプロセスにおいて、ワクチンの性質で免疫系調節剤として作用しているので、各投与についての注射部位に投与されるこのような本体の数は、患者の体重単位当たりの本体の数または質量よりも、より意味のある定量であり得る。同じ理由のために、小動物用途についての本体の有効量または有効数は、より大きい動物（すなわち、５ｋｇより大きい）についての体重比基準の有効量へと直接変換されない可能性があることが、ここで企図される。
【００５２】
本発明は、Ｔ細胞機能、炎症、内皮細胞機能不全および不適切なサイトカイン発現が関与する、広範な種々の哺乳動物障害の予防および／または処置における使用のために示される。このような障害を有する患者または有すると疑われる患者が、処置のために選択され得る。「処置」は、症状の減少（例えば、特定の疾患の症状の重篤度もしくは数の低減、または症状のさらなる進行に対する制限が挙げられるが、これらに限定されない）をいう。
【００５３】
Ｔ細胞機能（Ｔ細胞媒介性）障害に関して、これらの障害としては、Ｔ細胞によって少なくとも一部媒介される任意および全ての障害（例えば、潰瘍および創傷、ならびに自己免疫障害（糖尿病、強皮症、乾癬および慢性関節リウマチが挙げられるが、これらに限定されない）が挙げられる。
【００５４】
本発明は、炎症性アレルギー反応、器官および細胞移植反応障害、ならびに炎症反応を生じる微生物感染との使用のために示される。本発明はまた、酸化的ストレスおよび／または虚血再灌流損傷、毒物接種、毒性化学物質への曝露、放射線損傷、ならびに風媒および水媒の刺激性物質への曝露など（これらは、損傷炎症を引き起こす）に対する予防における使用についても、示される。本発明はまた、内部器官（例えば、腎臓、肝臓、心臓など）の炎症、アレルギーおよびＴ細胞媒介性障害についても示される。
【００５５】
本発明が示される、不適切なサイトカイン発現を含む障害に関して、これらには、不適切なサイトカイン発現を含む任意および全ての障害が挙げられ、例えば、神経変性疾患が挙げられる。ダウン症候群、アルツハイマー病およびパーキンソン病を含む神経変性疾患は、インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）を含む特定のサイトカインのレベルの増大と関連する（Ｇｒｉｆｆｉｎ  ＷＳＴら（１９８９）；Ｍｏｇｉ  Ｍら（１９９６）を参照のこと）。ＩＬ−ｌβが、海馬における長期増強を阻害することもまた、示される（Ｍｕｒｒａｙ，Ｃ．Ａ．ら（１９９８））。海馬における長期増強は、シナプス可塑性の形態であり、そして一般に、記憶および学習についての適切なモデルであるとみなされている（Ｂｌｉｓｓ，Ｔ．Ｖ．Ｐ．ら（１９９３））。従って、脳における不適切なサイトカイン発現は、現在、神経変性疾患および神経炎症障害の発症および進行に関与すると考えられている。
【００５６】
従って、本発明は、広範な種々の哺乳動物神経変性障害および他の神経学的障害（ダウン症候群、アルツハイマー病、パーキンソン病、老年痴呆、うつ、ハンティングトン病、末梢ニューロパシー、ギヤン−バレー症候群、脊髄疾患、神経障害性関節症疾患、慢性炎症性脱髄疾患、モノニューロパシー、多発性ニューロパシー、対称性遠位性感覚ニューロパシー、神経筋接合部障害、筋無力症および筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を含むニューロパシーが挙げられる）の処置および予防のために示される。これらの神経変性疾患の処置および予防は、本発明の特に好ましい実施形態を示し、アルツハイマー病、パーキンソン病およびＡＬＳの処置が特に好ましい。
【００５７】
内皮機能不全を含む障害に関して、本発明は、広範な種々のこのような哺乳動物障害（内皮細胞機能不全によって少なくとも一部媒介される任意および全ての障害が挙げられる、例えば、以下：心血管疾患（例えば、アテローム硬化症、末梢動脈および動脈閉塞疾患、うっ血性心不全、脳血管疾患（発作）、心筋梗塞、アンギナ、高血圧など）、血管痙攣障害（例えば、レーノー病、心臓症候群Ｘ、片頭痛など）および虚血から生じる損傷（虚血損傷または虚血再灌流損傷））の処置および予防のために示される。まとめると、これは、その病理が不適切に機能する内皮細胞を含む、実質的に任意の障害であり得る。
【００５８】
本発明の組成物およびプロセスのためにさらに示されるものとしては、創傷治癒および潰瘍治癒の速度を加速するための患者の処置、手術からの回復速度（外科的創傷および切開の治癒速度を含む）を加速するための外科手術前の患者の処置、が挙げられる。
【００５９】
「心疾患」に関して、本発明は、広範な種々のこのような哺乳動物障害（心臓に関する任意および全ての障害を含み、これには、例えば、心室不整脈（心室の頻脈または細動）および心疾患からの突然死が挙げられる）の処置および予防のために示される。心臓障害（例えば、不整脈および突然心臓死）に対する患者の感受性は、しばしば、心臓の拍動リズムにおけるＱＴ−ｃ間隔の延長によって示される。本発明の好ましい実施形態に従う組成物の投与は、哺乳動物患者においてＱＴ−ｃ間隔を低下させると考えられ、これは、不整脈および突然心臓死に対する感受性の低下を示す。
【００６０】
本発明は、以下の非限定的実施例において、例示目的のためにさらに記載される。
【実施例】
【００６１】
以下の実施例において、以下の略号は、以下の意味を有する。略号が定義されていない場合、それは、その一般的に受容可能な意味を有する。
μｇ＝マイクログラム
μＬ＝マイクロリットル
μｍ＝マイクロメートル
μＭ＝マイクロモル濃度
ＣＨＳ＝接触過敏症
ｃｍ＝センチメートル
ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド
ＤＮＦＢ＝２，４−ジニトロフルオロベンゼン
ＤＨＳ＝遅延型過敏症
ＥｔＯＨ＝エタノール
ｇ＝グラム
ｈｒｓ＝時間
Ｈｚ＝ヘルツ
ＩＭ＝筋内
ＩＰ＝腹腔内
ｋｇ＝キログラム
ＬＰＳ＝リポポリサッカリド
ＬＴＰ＝長期相乗作用
ｍｇ＝ミリグラム
ｍｉｎ＝分
ｍｌ＝ミリリットル
ｍＭ＝ミリモル濃度
ｍｓ＝ミリ秒
ｎｇ＝ナノグラム
ｎｍ＝ナノメートル
ｎＭ＝ナノモル濃度
ＰＢＳ＝リン酸緩衝化生理食塩水
ＰＣＲ＝ポリメラーゼ連鎖反応
ＰＯＰＳ＝１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−［ホスホ−Ｌ−セリン］（本明細書中でＰＳともいわれる）
ＰＯＰＧ＝１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−［ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）］］（本明細書中でＰＧともいわれる）
ＰＯＰＣ＝１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホクロリン（本明細書中でＰＣともいわれる）
ＲＰＭ＝回転／分
Ｓ＝秒。
【００６２】
別段述べられていない場合、実験において使用される脂質の正確な形態は、上記で示されるように、ＰＯＰＳ、ＰＯＰＧおよびＰＯＰＣであった。
【００６３】
（実施例１）
平均直径１００±２０ｎｍのリポソームを、当該分野で公知の標準的方法に従って調製した。このリポソームは、以下の組成を有した：
群Ａ−１００％  ＰＳ
群Ｂ−１００％  ＰＧ
群Ｃ−コントロール、リポソームなし。
【００６４】
１ｍｌ当たり４．８×１０１４個のリポソームを含む、各リポソーム組成物のストック懸濁物を、ＰＢＳで希釈して、１ｍｌ当たり６×１０６個の粒子を含む注射懸濁物を得た。リポソーム懸濁物を、６〜８週齢かつ体重１９〜２３ｇのメスＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）に注射して、マウス接触過敏症（ＣＨＳ）モデルにおける耳腫大に対する影響を決定した。ＣＨＳモデルは、Ｔｈ１媒介性炎症反応について試験する。
【００６５】
動物を、各群５匹の動物で、３群のうちの１つに割り当てた。群ＡおよびＢに、約３×１０５の上記特定されたリポソーム（すなわち、それぞれ、１００％  ＰＣおよび１００％  ＰＧ）を、約５０μｌの容量を与えた。群Ｃは、リポソームを受けないコントロール群であった。
【００６６】
（プロトコル）
以下の実験を行った：
【００６７】
【表１】
2005515243.tif 000005
１日目〜６日目に、群Ａおよび群Ｂのマウスに、それぞれのリポソーム調製物を注射した。約３００，０００リポソームを、筋内（ＩＭ）注射を介して５０μｌ容量（試験期間にわたって、約１，８００，０００リポソームの総投与）において注射した。コントロール群（群Ｃ）のマウスにはリポソームを与えなかったが、感作を行い、チャレンジし、以下に記載のように、群Ａおよび群Ｂと同じように試験した。
【００６８】
（感作）
１日目に、その日についてはリポソーム注射後、マウスを、０．２ｍｌの５ｍｇ／ｍｌのペントバルビタールナトリウムでＩＰ注射を介して麻酔した。マウスの腹部皮膚に７０％  ＥｔＯＨを噴霧し、腹部から約１インチ直径のパッチの毛を外科用メスで使用して除去した。次いで、毛刈りした領域を、４：１アセトン：オリーブ油中の０．５％  ２，４−ジニトロフルオロベンゼン（ＤＮＦＢ）２５μｌでピペットチップを用いて染色した。
【００６９】
（チャレンジ）
６日目にリポソーム注射した後、マウスを以下のようにＤＮＦＢでチャレンジした：１０μｌの０．２％  ＤＮＦＢをピペットチップを用いて右耳の背部表面に塗布し、１０μｌのビヒクルをピペットチップを用いて左耳に塗布した。
【００７０】
（結果）
７日目に、チャレンジの２４時間後、各動物をハロタンで麻酔し、Ｐｅａｃｏｃｋバネ式マイクロメーターを用いて耳の厚さを測定した。データは、処置した右耳の厚さとビヒクル処置した左耳の厚さとの間の差異として表す。実験を、類似の動物で３回繰り返した。耳腫大の増加を、ＣＨＳ応答の指標として使用した。データの有意性を、ｓｔｕｄｅｎｔの両側ｔ検定により決定した。ｐ＜０．０５の値を、有意であるとみなした。
【００７１】
結果を、添付の図１に示す（耳腫大（μｍで）の３回の実験の平均値を示す棒グラフ）。
【００７２】
図１は、耳腫大の有意な減少が、本発明に従うリポソームの注入により達成されることを示す。１００％  ＰＧリポソームで達成される減少は、１００％  ＰＳリポソームからの減少より実質的に大きい。
【００７３】
（実施例２）
平均直径１００±２０ｎｍのリポソームを、当該分野で公知の標準的な方法に従って調製し、そのリポソームは、以下の組成を有した：
群Ａ−１００％  ＰＧ
群Ｂ−７５％  ＰＧ、２５％  ＰＣ
群Ｃ−５０％  ＰＧ、５０％  ＰＣ
群Ｄ−２５％  ＰＧ、７５％  ＰＣ
群Ｅ−ＰＢＳのみ
群Ｆ−注射なし
４．８×１０１４リポソーム／ｍｌを含有する各リポソームのストック懸濁液を、１２×１０６リポソーム／ｍｌを含有する注射懸濁液を得るために希釈した。リポソーム懸濁液を使用してマウスに注射し、マウスＣＨＳモデル（Ｔｈ１媒介性炎症反応をアッセイするために有用な生物学的系）において腫大した耳に対する効果を決定した。これらの実験において、６〜８週齢、１９〜２３ｇ体重の雌性ＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を使用した。
【００７４】
動物を、各群において１０匹の動物を有する６群の１つに割り当てた（上記の群Ａ〜Ｆ）。コントロール群はまた、注射なし（群Ｆ）、リポソームなしのＰＢＳ注射（群Ｅ）を受けた群を含んだ。群Ａ〜Ｄの動物を、各々、約６×１０５リポソームを含む上記のリポソーム懸濁液の５０μｌを注射した。
【００７５】
（プロトコル）
試験は、試験動物において潜在的に炎症を引き起こす物質での感作（Ｓｅｎｓ）、リポソームの注射（Ｉｎｊ）、またはコントロールにおけるＰＢＳ、およびリポソームの注射が、チャレンジによる炎症の発生に対して有効であるか否かを決定するための測定後（Ｍｅａｓ）の潜在的に炎症を引き起こす物質でのチャレンジ（Ｃｈａｌ）を包含した。
【００７６】
以下の実験を行った：
【００７７】
【表２】
2005515243.tif 000006
１日目〜６日目に、マウスに、上記に示したようなそれぞれのリポソームを注射した。リポソームを、ＩＭ注射を介して５０μｌ容量（すなわち、６００，０００リポソーム／注射、試験期間にわたって、３，６００，０００リポソームの総投与）において注射した。コントロール群のマウスにはリポソームを与えなかったが、感作を行い、チャレンジし、以下に記載のように、マウスの他の群と同じように試験した。
【００７８】
（感作（Ｓｅｎｓ））
１日目に、その日のリポソーム注射の後、マウスに、ＩＰ注射を介して、５ｍｇ／ｍｌのフェノバルビタールナトリウム０．２ｍｌで麻酔した。そのマウスの腹部皮膚に、７０％  ＥｔＯＨを噴霧し、刃を使用して、直径約１インチの毛を腹から除いた。この裸領域に、ピペットのチップを使用して、４：１のアセトン：オリーブ油中の０．５％の２，４−ジニトロフルオロベンゼン（ＤＮＦＢ）２５μｌを塗布した。
【００７９】
（チャレンジ（Ｃｈａｌ））
６日目に、その日のリポソーム注射の後に、マウスを、以下のようにしてＤＮＦＢでチャレンジした。１０μｌの０．２％  ＤＮＦＢを、ピペットのチップを用いて右耳の背面に塗布し、１０μｌのビヒクルを、ピペットのチップを用いて、左耳に塗布した。
【００８０】
（結果）
７日目に、チャレンジの２４時間後に、ハロタンで各動物に麻酔した。耳の厚さを、Ｐｅａｃｏｃｋスプリング装填マイクロメーターを使用して測定した（Ｍｅａｓ）。耳腫大の増加を、ＣＨＳ応答の尺度として使用した。データは、（処理した右耳の厚さ）−（ビヒクル処理した左耳の厚さ）の差として表した。この２つの群の間の有意性を、両側スチューデントｔ検定によって決定する。Ｐ値＜０．０５を有意であると見なす。
【００８１】
結果は、図２にグラフ表示される。これは、耳腫大をμｍ単位で示す棒グラフである。個々の実験からの平均値を、このグラフを集計する際に使用した。
【００８２】
図２は、１００％ＰＧおよび７５％ＰＧの両方を用いて、耳腫瘍の有意な減少が達成されることを示す。これは、これらの濃度の両方が、アレルギー性物質であるＤＮＦＢとの接触から生じる炎症の発生に対して保護することを示す。５０％ＰＧリポソームおよび２５％ＰＧリポソームもまた、両方のコントロールと比較して減少を示したが、この差異は、この実験において統計的有意性に達しなかった。  
【００８３】
（実施例３）
平均直径１００±２０ｎｍのリポソームを、当該分野で公知の標準的方法に従って調製した。それは、７５％ＰＧ、２５％ＰＣから構成された。１ｍｌ当たり４．８×１０１４リポソームを含むストック懸濁物を、上記のように使用し、ＰＢＳ中に希釈して、以下の濃度のリポソームを含む注射懸濁物を得た：
【００８４】
【表３】
2005515243.tif 000007
ＢＡＬＢ−ｃマウスを、リポソームを受けないが５０μＬのＰＢＳを注射されたコントロール群（Ｆ群）を含む、６つの群（Ａ群〜Ｆ群）に分割した。マウスの側腹部に感作し、同日ではあるが感作の後（１日目）、ならびに２日目、３日目、４日目、および５日目に、選択したリポソーム用量で右脚筋肉に筋肉内注射した。６日目に、それらのマウスに、実施例１に記載されるようにして、注射し、かつ耳にチャレンジした。その耳の厚さを、このチャレンジの２４時間後に、記載したようにして測定した。
【００８５】
この結果（図３）は、コントロール群（Ｆ群）とＣ群（１２×１０８リポソーム／ｍｌ）との間、およびコントロール群とＤ群（１２×１０７リポソーム／ｍｌ）との間およびコントロール群とＥ群（１２×１０６リポソーム／ｍｌ）との間の、有意な差異を示す。コントロール群と、Ａ群またはＢ群（それぞれ、１２×１０１１リポソーム／ｍｌおよび１２×１０９リポソーム／ｍｌ）との間には、ほとんど差異が存在しなかった。このことは、リポソーム濃度の最適範囲が存在し、この濃度を超えると、有益な効果が減少され得ることを示唆する。他の実験において、効果の減少はまた、リポソーム濃度が１２×１０４リポソーム／ｍｌより下に減少した場合に、観察された。
【００８６】
（実施例４）
処方１００％ＰＧおよび平均サイズ１００±２０ｎｍのリポソームを、標準的方法に従って調製した。１０匹のマウスからなる４つの群（Ａ群〜Ｄ群）を、実施例３に記載される手順およびスケジュールに従って感作し、注射した。以下の数の１００％ＰＧリポソームを、５０μｌ懸濁物中で送達した。
Ａ群−６×１０７
Ｂ群−６×１０６
Ｃ群−６×１０５
Ｄ群−６×１０４。
【００８７】
この結果は、実施例４からのＰＢＳコントロールと一緒になって、図４において同様な棒グラフ形式で示される。コントロール群と比較した場合の耳腫大の有意な減少が、試験群の各々について注目されるべきであるが、種々の群の間にはほとんど差がなかった。
【００８８】
（実施例５）
組成７５％ＰＧ、２５％ＰＣであり、かつ平均直径５０ｎｍ、１００ｎｍ、２００ｎｍ、もしくは４００ｎｍのリポソームを、標準的方法によって調製した。これらを、実施例３および４におけるようにして、マウスＣＨＳモデルにおいて試験した。この試験には、各注射のために５０μｌ懸濁物中６×１０５リポソームを使用し、そして実施例３におけるような、感作−注射−チャレンジスケジュールおよび手順を使用した。この群は、以下の通りであった：
Ａ群−５０ｎｍリポソーム
Ｂ群−１００ｎｍリポソーム
Ｃ群−２００ｎｍリポソーム
Ｄ群−４００ｎｍリポソーム
Ｅ群−リポソームなし。
【００８９】
この結果を、図５に示す。４００ｎｍ直径のリポソームを使用するＤ群からの結果は、コントロール群（Ｅ群）と有意には異ならない。このことは、このモデルにおけるプローブ可能なサイズ範囲臨界を示す。
【００９０】
（実施例６）
１ｍｌ当たり４．８×１０１４リポソームを含む、平均直径１００±２０ｎｍの７５％ＰＧリポソームのストック懸濁物を希釈して、１ｍｌ当たり６×１０５リポソームを含む注射懸濁物を得た。このリポソーム懸濁物を使用してマウスに注射して、マウスＤＨＳモデルにおける耳腫大に対する効果を決定した。実施例１におけるように、６〜８週齢でありかつ重量１９〜２３ｇである、雌ＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を使用した。
【００９１】
これらの動物を、各群において１０匹の動物を含む３つの群のうちの１つに割当てた。コントロール群（Ｃ群）は、ＰＢＳ注射のみを受けた。Ａ群およびＢ群の動物には、６×１０５リポソームを含む懸濁物５０μｌを注射した。
【００９２】
（プロトコル）
１３〜１８日目に、マウスに、下記に示すようにして、７５％ＰＧリポソームを注射した。リポソームを、５０μｌ容積中で筋肉内（ＩＭ）注射を介して（すなわち、１回の注射当たり６００，０００リポソーム）、試験期間全体にわたる全投与３，６００，０００リポソームのために注射した。感作およびチャレンジを、実施例２に記載されるように行った。
【００９３】
【表４】
2005515243.tif 000008
（結果）
この結果を、図６にグラフ表示する。この結果は、７５％ＰＧが、２回目のチャレンジ後の３回目の注射の２４時間後に、１６日目のＤＨＳモデルにおいて有効であることを示す。
【００９４】
（実施例７）
１００％カルジオリピン（ＣＬ）から構成され、かつ平均直径１００±２０ｎｍであるリポソームを、標準的方法によって調製した。これらを、実施例６に記載されるマウスＤＨＳモデルにおいて、１回の注射につき５０μｌ当たり投与量６×１０５リポソームにて使用した。ＣＬリポソームを注射した動物（Ａ群；１０匹の動物）から得たデータを、ＰＢＳのみを受けた動物（Ｂ群；１０匹の動物）から得たデータと比較した。感作、注射、およびチャレンジの手順は、実施例２に記載した通りであった。６回目の注射の２４時間後に１９日目に得た耳の厚さの測定結果を、図７に示す。この結果は、ＣＬ注射試験（Ａ群）における耳腫大の有意な減少を示した。
（実施例８）
平均直径１００ｎｍの、１００％または７５％いずれかのカルジオリピンおよび２５％ＰＣを含有するリポソームを、標準の方法で調製した。３つの群（Ａ〜Ｃ群）の１０匹のマウスを１日目に感作した。コントロール群は、１日目、２日目および６日目にＰＢＳの注射を受けた（Ｃ群）。他の２つの群は、同じスケジュールに従って、６×１０５  １００％カルジオリピンリポソーム（Ａ群）または６×１０５  ７５％カルジオリピンリポソーム（Ｂ群）（１回の注射あたり５０μｌのリポソーム）の注射を受けた。マウスに７日目に誘発し、そして先の実施例において記載されるように、耳の厚さを測定した。
【００９５】
図８は、各群における平均測定値を示す。ＣＬリポソームを受ける両方の群は、コントロール群と比較して、統計学的に有意なＣＨＳの抑制を示した。
【００９６】
（実施例９）
認識機能の基礎をなす細胞機構および分子機構を研究するために、長期増強作用（ＬＴＰ）動物モデルを使用する。ＬＴＰは、海馬の形成において生じるシナプス可塑性の形態であり、学習および記憶に関する生物学的基質として、提唱されている（Ｂｌｉｓｓら、Ｎａｔｕｒｅ  ３６１：３１−３９（１９９０））。ラット中のＬＴＰを、当業者に周知の方法によって電気生理学的にモニタリングする。次いで、動物を屠殺し、海馬組織中の生化学的変化を研究する。生化学的な海馬変化と電気生理学的データの結果を比較することは、ＬＴＰの基礎をなす細胞現象が、どのように神経炎症に関連する疾患または障害（例えば、老化、ストレス、アルツハイマー病、および細菌感染）を患う動物において変化し得るかを決定するために有用である。
【００９７】
リポポリサッカライド（ＬＰＳ）（グラム陰性菌の細胞壁の成分）の全身投与は、炎症誘発性サイトカイン（例えば、ＩＬ−１β）の増加を誘導することにより、免疫系の活性化を起こす。上記のように、ＬＰＳおよびＩＬ−１βにより誘導されるニューロン欠損の１つの例は、海馬中のＬＴＰの減少である。ＬＴＰの指標は、集団興奮性シナプス後電位（ｅｐｓｐ）の平均勾配である。テタヌス性刺激の際、ｅｐｓｐ勾配（％）は急激に増加し、これは増加したシナプス活性示す。ＬＴＰのＬＰＳ誘導性阻害は、勾配の増加を減少し、そして／またはｅｐｓｐ勾配をより急激にベースラインに戻す。このことは、増加したシナプス活性が、長続きしないことを示す。従って、テタヌス性刺激後の定時間隔での、ｅｐｓｐ勾配（％）の測定を使用して、炎症刺激並びに脳の海馬における炎症の後の記憶およびそれらの欠失を反映し得る。
【００９８】
平均直径１００±２０ｎｍのリポソームとは、当該分野で公知の標準方法に従って調製した。これは、７５％ＰＧおよび２５％ＰＣから構成された。１ｍｌあたり約２．９×１０１４リポソームを含むリポソームのストック懸濁液を、ＰＢＳで希釈し、１ｍｌあたり約１．２×１０７リポソームを含む注射懸濁液を得た。次いで、これを使用して、ラットに注射し、ＬＴＰのＬＰＳ誘導性減損に対する影響を決定した。これらの実験に、約３００ｇの重量の雄Ｗｉｓｔａｒラット（ＢｉｏＲｅｓｏｕｒｃｅｓ  Ｕｎｉｔ，Ｔｒｉｎｉｔｙ  Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｄｕｂｌｉｎ）を使用した。
【００９９】
動物を４つの群のうちの１つに割り振り、各群の８匹の動物を以下のように処理した：
Ａ群−生理食塩水＋コントロール
Ｂ群−生理食塩水＋ＰＧ
Ｃ群−ＬＰＳ＋コントロール
Ｄ群−ＬＰＳ＋ＰＧ
上で同定した各調製物１５０μｌを、ＩＭ注射を介し、１日目、１３日目、および１４日目に注射した。Ｂ群およびＤ群は、合計５，４００，０００リポソーム（１回の注射あたり１，８００，０００リポソーム）を受けた。ＬＴＰ手順および組織調製手順を、０日目に行った。
【０１００】
（ＬＴＰ手順）
ラットを、ウレタン（１．５ｇ／ｋｇ）のＩＰ注射により麻酔した。ラットは、ＬＰＳ（１００μｇ／ｋｇ）または生理食塩水のいずれかを腹腔内に受けた。３時間後、双極刺激電極および単極記録電極を、それぞれ貫通線維および歯状回の背部細胞体領域に配置した。０．０３３Ｈｚの試験ショックを与え、応答を高周波刺激（３列の刺激を３０秒間隔した、２５０Ｈｚを２００ｍｓ間）前１０分間および、高周波刺激後４５分間記録した。
【０１０１】
ラットを断頭により殺した。海馬、強直歯状回および非強直歯状回、皮質および嗅内皮質を氷上で解剖し、片化して、１０％  ＤＭＳＯを含む１ｍｌのクレブス溶液（クレブス（１ｍｌ）の組成：ＮａＣｌ  １３６、ＫＣｌ  ２．５４、ＫＨ２ＰＯ４  １．１８、ＭｇＳＯ４．７Ｈ２Ｏ  １．１８、ＮａＨＣＯ３  １６、グルコース１０、ＣａＣｌ２  １．１３）中で凍結した。
【０１０２】
（結果）
結果を図９に示す。グラフは、顆粒細胞の細胞体において記録した興奮性シナプス後電位（ｅｐｓｐ）における差異を示す。示したデータは、各処理群中の７つ〜８つの観察の平均であり、テタヌス性刺激直前５分での平均値に関して正規された、３０秒毎のｅｓｐｓ勾配における平均パーセント変化として表される。図９は、貫通線維−顆粒細胞シナプスにおけるＬＴＰのＬＰＳ誘導性阻害が、ＰＧリポソームで前処理することにより克服されたことを示す。黒三角はＡ群（生理食塩水＋コントロール）を示し、白三角はＢ群（生理食塩水＋ＰＧ）を示し、黒四角はＣ群（ＬＰＳ＋コントロール）を示し、そして白四角はＤ群（ＬＰＳ＋ＰＧ）を示す。
【０１０３】
図１０は、テタヌス性刺激後４０〜４５分の平均値の分析が、集団ｅｐｓｐ勾配が、コントロール−ＬＰＳ群（白棒）において減少したこと、およびＰＧリポソーム（斜線棒）が、この効果を有意に回復した（*Ｐ＜０．０１）ことを示すことを示している。記憶機能および学習機能の指標（ｉｎｄｅｘ）として、本実施例で示された、ＬＴＰの持続性における改善は、痴呆（例えば、アルツハイマー病および記憶障害）の処置の適合性を示す。
【０１０４】
（実施例１０）
ＩＬ−４は、Ｔｈ２サブクラスのリンパ球により分泌される多くのサイトカインの１つであり、抗炎症効果について知られている。図１１は、海馬中のＩＬ−４濃度が、ＰＧリポソームで前処理したＬＰＳ群中で有意に増加した（*Ｐ＜０．０５）ことを示す。白棒は、コントロール群（Ｅ群）を示し、そして斜線棒は、ＰＧ処理群（Ｆ群）を示す。ＩＬ−４をＥＬＩＳＡで測定し、そして総タンパク質１ｍｇあたりのＩＬ−４のＰＧとして表した。脳内のこの抗炎症サイトカインＩＬ−４のアップレギュレーションは、幅広い神経炎症障害（パーキンソン病、ＡＬＳ、クローン炎症脱髄性疾患、ＣＩＰＤおよびギャンバレー症候群を含む）の処置における、本発明の好ましい実施形態のプロセスおよび組成物の使用を示す。
【０１０５】
（実施例１１）
ＩＬ−１βは、Ｔｈ１サブクラスのリンパ球により分泌される多くのサイトカインの１つであり、その炎症促進効果が知られている。実施例９（そのＣ群およびＤ群）に記載したように処理した動物由来の脾臓を、抽出し、脾臓細胞を集めた。これらを以下のように調製した：
図１２は、脾臓細胞中のＩＬ−１β濃度が、ＰＧリポソームで前処理したＬＰＳ群中で有意に減少したこと（*Ｐ＜０．０５）を示す。ＩＬ−１βをＥＬＩＳＡで測定し、そして総タンパク質１ｍｇあたりのＩＬ−１βのピコグラムとして表した。これは、本発明の好ましい実施形態のプロセスおよび組成物の全身性炎症効果を示す。
【０１０６】
（実施例１２）
Ｕ９３７は、ホルボールエステルの投与によって、マクロファージに分化され得る単球白血病細胞株である。リポポリサッカリド（ＬＰＳ）（グラム陰性細菌の細胞壁の成分）での処理によって、ＴＮＦαを含む多くの炎症性分子の発現のアップレギュレーションを伴う、Ｕ９３７細胞中での炎症性応答が刺激される。このモデルは、抗炎症性療法の評価のための実験系を提供する。マクロファージを、擬似抗炎症性組成物の存在下で培養培地中で培養し得、ＴＮＦαの発現を測定し得る。
【０１０７】
平均直径１００±２０ｎｍのリポソームを、当該分野で公知の標準的な方法に従って調製し、これは、７５％ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、２５％ホスファチジルコリン（ＰＣ）の組成物を有した。リポソームのストック濃度は、約４０ｍＭ脂質であり、アッセイ中に以下の最終濃度まで希釈した：
１００μＭ  ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）
４０μＭ  ＰＧ
１０μＭ  ＰＧ
４．０μＭ  ＰＧ
１μＭ  ＰＧ。
Ｕ９３７細胞を、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）および１％ペニシリン／ストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ培地（ＧＩＢＣＯ  ＢＲＬ）中での増殖によって培養し、５％ＣＯ２を含む雰囲気下３７℃で、増殖した。５×１０５細胞を、６−ウェルプレートのウェルに播種し、１５０ｎＭ酢酸ミリスチン酸ホルボール（ＰＭＡ）で２〜３日間処理することによって、マクロファージに分化させた。次いで、細胞培地を、Ｕ９３７細胞が、マクロファージに分化した後に、完全培地と入れ換えた。次いで、細胞を、さらに２４時間インキュベートし、ＰＭＡ処理による多面的効果（ｐｌｅｏｔｒｏｐｉｃ  ｅｆｆｅｃｔ）を最小化した。
【０１０８】
次いで、細胞をいずれかと共にインキュベートした：
群Ａ  リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）（ネガティブコントロールとして）
群Ｂ  １０ｎｇ／ｍｌ  ＬＰＳ（ポジティブコントロールとして）
群Ｃ  １０ｎｇ／ｍｌ  ＬＰＳ＋１００μＭ  ＰＧ
群Ｄ  １０ｎｇ／ｍｌ  ＬＰＳ＋４０μＭ  ＰＧ
群Ｅ  １０ｎｇ／ｍｌ  ＬＰＳ＋１０μＭ  ＰＧ
群Ｆ  １０ｎｇ／ｍｌ  ＬＰＳ＋４．０μＭ  ＰＧ、または
群Ｇ  １０ｎｇ／ｍｌ  ＬＰＳ＋１μＭ  ＰＧ。
【０１０９】
細胞を、上記されるように、５％ＣＯ２下３７℃でインキュベートした。１８時間後、各処理からの上清を、回収し、標準的Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ  Ｅｎｚｙｍｅ−Ｌｉｎｋｅｄ  Ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ  Ａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＡ）キット（Ｒ  ＆  Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＵＳＡ）を使用してＴＦＮ−αについてアッセイした。
【０１１０】
（結果）
図１３は、ＰＧ１ｍｌ当たりの分泌されたＴＮＦ−αの量を示す。結果は、Ｕ９３７分化マクロファージ細胞が、正常な条件下で、非常に低いレベルのＴＮＦ−αを発現することを示す。しかし、一旦ＬＰＳに曝されると、これらは、大量のＴＮＦ−αを、周囲の培地に分泌し、これは、細胞性ストレスが生じていることを示す。細胞をＰＧリポソームと共にインキュベーションすることによって、用量依存性様式でＴＮＦ−αの分泌が阻害され、最高濃度の１００μＭは、９８％の低下を生じ、さらに最低濃度の１μＭは、ＴＮＦ−α発現の５８％の低下を生じる。
【０１１１】
（実施例１３）
本発明の好ましい実施形態のＰＧリポソームの内皮機能に対する効果を決定するために、実施例３に記載されるようにＣＨＳ研究に供されたマウスの耳中のエンドセリン−１（ＥＴ−１）含有量を、決定した。エンドセリン−１は、強力な血管収縮性薬剤であり、強心性作用およびマイトジェン性作用を有し、塩および水の恒常性を調節し、血管緊張および血圧の維持において重要な役割を果たす。種々の証拠の株は、内因性ＥＴ−１が、持続的血管収縮に関連する状態（例えば、心不全）の病態生理学に寄与し得ることを示す。心不全において、上昇したレベルの循環ＥＴ−１およびｂｉｇ−ＥＴ−１が観察される（Ｇｉａｎｎｅｓｓｉ  Ｄ，Ｄｅｌ  Ｒｙ  Ｓ，Ｖｉｔａｌｅ  ＲＬ．「Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  ｈｅａｒｔ  ｆａｉｌｕｒｅ」Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｒｅｓ  ２００１  Ｆｅｂ  ４３：２  １１１−２６）。従って、ＥＴ−１は、内皮機能のマーカーであり、組織中でのＥＴ−１の増加した産生は、内皮機能の損傷を示す。
【０１１２】
ＥＴ−１発現を決定するために、マウスの耳（右のチャレンジされた耳）を、ＣＨＳ実験においてチャレンジの２４時間後に採取した。耳を、６日間筋内的にＰＢＳを注射したマウス（群Ａ）および筋内的に７５％ＰＧ／２５％ＰＣリポソームを注射したマウス（６００，０００リポソーム／注射；群Ｂ）から得た。耳を、ＲＮＡ抽出まで、−２０℃でＲＮＡｌａｔｅｒ中に保存した。ＲＮＡを抽出し、ｃＤＮＡを、内部コントロールとしてＥＴ−１特異的プライマーと共に逆転写酵素（ＲＴ）を使用して生成し、ＰＣＲをまた、∃−アクチン−特異的プライマーを使用して実施した。ＰＣＲ産物を、１．５％アガロースゲル上で分離し、それらのＤＮＡバンドを、デンシトメトリー分析によって定量した。ＥＴ−１／β−アクチンの比を、計算した。
ＰＣＲ調製物：
ＰＣＲ  Ｍｉｘ（ＥＴ−１）  ＰＣＲ  Ｍｉｘ（β−アクチン）
５μｌ  ＰＣＲ緩衝液（１０×）            ５μｌ  ＰＣＲ緩衝液（１０×）
１．５μｌ  ＭｇＣｌ２（５０ｍＭ）        １．５μｌ  ＭｇＣｌ２（５０ｍＭ）
１μｌ  ｄＮＴＰ（１０ｍＭ）              １μｌ  ｄＮＴＰ（１０ｍＭ）
０．５μｌ  プライマー１（２５μＭ）      １μｌ  プライマー１（ｌ０μＭ）
０．５μｌ  プライマー２（２５μＭ）      １μｌ  プライマー２（１０μＭ）
０．２５μｌ  ＴＡＱ                      ０．２５μｌ  ＴＡＱ
２．５μｌ  ｃＤＮＡ                      ２．５μｌ  ｃＤＮＡ
３８μｌ  水                              ３７．７５μｌ  水
５０μｌ  総量                            ５０μｌ  総量
プライマー：（以前に記載されたとおり。例えば、Ｙａｎｇ，Ｌ；Ｈｕｓａｉｎ，Ｍ；およびＳｔｅｗａｒｔ．Ｄ．Ｊ．「Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ  ｃａｒｄｉａｃ  ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ−１  ｉｎ  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｍｉｃｅ」、ＦＡＳＥＢ  Ｊ  １５（５）：Ａ１１３８−Ａｌ１３８第２部、ＭＡＲ  ８  ２００１を参照のこと）
ＥＴ−ｌ（ｒ）５’−ＣＡＧ  ＣＡＣ  ＴＴＣ  ＴＴＧ  ＴＣＴ  ＴＴＴ  ＴＧＧ−３’
ＥＴ−ｌ（ｆ）５’−ＣＣＡ  ＡＧＧ  ＡＧＣ  ＴＣＣ  ＡＧＡ  ＡＡＣ  ＡＧ−３’
β−アクチン（Ｆ）５’−ＧＴＧ  ＧＧＣ  ＣＧＣ  ＴＣＴ  ＡＧＧ  ＣＡＣ  ＣＡＡ−３’
β−アクチン（ｒ）５’−ＣＴＣ  ＴＴＴ  ＧＡＴ  ＧＴＣ  ＡＣＧ  ＣＡＣ  ＧＡＴ  ＴＴＣ−３’
ＰＣＲ設定：
９４℃−５分
【０１１３】
【表５】
2005515243.tif 000009
７２℃−１０分
４℃−浸漬
６回の７５％ＰＧリポソームの毎日注射の後、ＥＴ−１のレベルは、同じ注射レジメンの間に、ＰＢＳを受容したコントロールマウスに比べて、３６％低下した。結果を、図１４にグラフ的に示す。この減少は、本発明の好ましい実施形態のリポソームの注射から生じる、Ｔｈ１媒介性炎症低減による、哺乳動物患者の内皮機能に対する、有利な効果を示す。
【０１１４】
（実施例１４）
細胞間接着分子−１（ＩＣＡＭ−１）は、白血球および内皮細胞を含む、いくつかの細胞型により発現される細胞表面分子である。これは、単球の内皮細胞への癒着に関与し、炎症性プロセスおよびＴ細胞媒介宿主防御システムにおける役割を果たす。ＩＣＡＭ−１発現は、種々の疾患の臨床的徴候に、主に正常な免疫機能を妨げることにより、おそらく貢献する。これらの疾患の中には、悪性腫瘍（例えば、黒色腫およびリンパ腫）、多くの炎症性疾患（例えば、喘息および自己免疫疾患）、アテローム性動脈硬化症、虚血、特定の神経病学的障害、および同種の器官移植がある（Ｖａｎ  ｄｅ  Ｓｔｏｌｐｅ  Ａ，ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｓａａｇ  ＰＴ，「Ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ−１」Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．（１９９６）７４：１  １３〜３３）。
【０１１５】
ヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）は、以下のように臍帯静脈から単離される内皮細胞の第一の細胞株である。
【０１１６】
Ｔ７５フラスコを、最小で１５／２０分の間または終夜、０．２％ゼラチン（５〜７ｍｌ／フラスコ）でコーティングすることにより調製した。次いで、過剰分を、取り除いた。臍帯に手順の前に７０％エタノールを噴霧し、臍帯にまだ付着したままである任意の胎盤を切り離した。次いで、臍帯を、およそ５〜６インチの長さに切った。臍帯は、厚い壁のある２つの動脈およびより大きくかつ薄い壁のある１つの静脈を有する。静脈の位置を捜し当て、ストッパーののこぎり状の端を静脈に配置した。次いで、およそ２０ｃｍのひもを用いて、臍帯をストッパーと結んだ。
【０１１７】
次いで、臍帯を、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）で、ＰＢＳが透明に流れるまで多くの回数徹底的に洗った。この後、１５〜２０ｍｌのコラゲナーゼ溶液を臍帯中に配置し；臍帯をすず箔でラッピングし、３７℃で１５分間インキュベートした。インキュベートの後、臍帯の結ばれた端を切り、そしてコラゲナーゼを５０ｍｌのチューブに排出した。次いで、コラゲナーゼを、臍帯に再び通し、臍帯を内皮細胞を緩和するようマッサージし、次いでＰＢＳを臍帯に通し、そしてコラゲナーゼ溶液を含む同じチューブに集めた。続いて、これを１６００ＲＰＭで遠心分離し、上清を取り除き、ペレットを１０〜１２ｍｌのＭ１９９完全培地中に再懸濁した。最後に細胞を含む培地を、ゼラチン化フラスコに加えた。
【０１１８】
平均の直径において１００±２０ｎｍのリポソームを、当該分野で公知の標準的な方法に従って調製し、これは７５％ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、２５％ホスファチジルコリン（ＰＣ）の組成を有した。リポソームのストック濃度は、４０ｍＭ脂質であり、これをアッセイ中１００μＭに希釈した。
【０１１９】
ＨＵＶＥＣを、多くの組織培養フラスコに分離し、フラスコの表面に付着するのを可能にし、そして続いて以下のように処理する：
群Ａ−ＰＢＳ−ネガティブコントロールとして、
群Ｂ−５００ｎｇ／ｍｌ  ＬＰＳ−ポジティブコントロールとして、
群Ｃ−５００ｎｇ／ｍｌ  ＬＰＳ＋１００μＭ  ＰＧ
群Ｄ−５００ｎｇ／ｍｌ  ＬＰＳ＋１００μＭ  ＰＣ
細胞を、３７℃、５％  ＣＯ２でインキュベートした。１８時間後、各々の処理からの上清を集め、標準ＥＬＩＳＡキット（Ａｓｓａｙ  Ｄｅｓｉｇｎｓより得られる）を用いてＥＴ−１についてアッセイし、そして細胞を、以下のようにＩＣＡＭ−１を分析するために採取した。
【０１２０】
細胞を、最初ＰＢＳで洗い、続いて２５〜３０分間３７℃で、細胞解離緩衝液でインキュベートした。続いて細胞を、遠心分離によって洗い、そして３０分間抗ＣＤ５４（ＩＣＡＭ−１）抗体でインキュベートした。続いて、二次ＦＩＴＣ抗体を、加え、以前のように細胞とともにインキュベートした。最後に、これらを１ｍｌのＰＢＳ中に再懸濁し、そしてフローサイトメーターで蛍光について分析した。
【０１２１】
（結果）
結果を図１５（各々の培養物におけるＩＣＡＭ−１についてポジティブに着色する細胞のパーセンテージのグラフ表示）に表す。ＰＧリポソーム含有培養物中ポジティブに着色する細胞の数が、ネガティブコントロールレベルまで減少し、ポジティブコントロールレベルよりはるかに低いことが、留意される。
【０１２２】
（実施例１５）
小神経膠細胞（脳マクロファージ）を培養し、そしてそのＴＮＦ−α（炎症性サイトカイン）のアウトプットを測定した。細胞を、ＡＬＳを患う患者の免疫グロブリン（ＩｇＧ）で刺激し、そしてＴＮＦ−αアウトプットが、結果として約８００倍に増加した。同じ細胞を、ＡＬＳ  ＩｇＧおよびＰＧリポソームの両方の存在下で増殖する場合、ＴＮＦ−αのアウトプットが約７５％減少し、ＡＬＳの処理における本発明の好ましい実施形態の可能性を示した。この結果を図１６に示す。
【図面の簡単な説明】
【０１２３】
【図１】図１は、実施例１（他のリポソームおよびコントロールと比較して、本発明の好ましい実施形態に従ったリポソームを使用する、マウス接触過敏症（ＣＨＳ、急性Ｔ細胞媒介炎症モデル）実験）の結果を棒グラフで示したものである。
【図２】図２は、マウスＣＨＳモデルである実施例２における、種々のホスファチジルグリセロール（ＰＧ）含有量のリポソームの使用を示す、類似のグラフ表示である。
【図３】図３は、実施例３（異なる濃度の７５％ＰＧリポソームをマウスＣＨＳモデルにおいて使用した）の結果の類似のグラフ表示である。
【図４】図４は、実施例４（異なる濃度の１００％ＰＧリポソームをマウスＣＨＳモデルにおいて使用した）の結果の類似のグラフ表示である。
【図５】図５は、ＣＨＳモデルにおいて異なるサイズのリポソームを使用した、実施例５の結果の類似のグラフ表示である。
【図６】図６は、遅延型過敏症（ＤＨＳ、慢性Ｔ細胞媒介炎症モデル）のマウスモデルを使用した、実施例６の結果の類似のグラフ表示である。
【図７】図７は、実施例７（ＤＨＳマウスモデルにおけるカルジオリピンリポソーム）の結果の類似のグラフ表示である。
【図８】図８は、実施例８（ＣＨＳマウスモデルにおけるカルジオリピンリポソーム）の結果の類似のグラフ表示である。
【図９】図９は、コントロールマウスおよび処置マウスにおける興奮性シナプス後電位（ＥＰＳＰ）傾きの割合の変化（これは、長期増強（ＬＴＰ）（実施例９）の効果を示す）を示す。
【図１０】図１０は、実施例９の棒チャートの形式で、図９に示されたデータを表示する。
【図１１】図１１は、実施例１０のコントロール動物および試験動物の海馬における抗炎症性サイトカインＩＬ−４の濃度の差を示す。
【図１２】図１２は、実施例１１のコントロール動物および試験動物の脾臓細胞の単一細胞懸濁物における炎症前サイトカインＩＬ−１βの濃度の差を示す。
【図１３】図１３は、実施例１２の種々の濃度の７５％ＰＧリポソームにより処理したＵ９３７単球細胞株におけるＴＮＦ−αの濃度の差を示す。
【図１４】図１４は、本発明の好ましい実施形態に従って処理したマウスの耳におけるエンドセリン−１内容量の実施例１３の結果のグラフ表示である。
【図１５】図１５は、本発明の好ましい実施形態の組成物の存在下および非存在下における、ＨＵＶＥＣ培養物からのＩＣＡＭ−１陽性細胞の実施例１４の結果のグラフ表示である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【手続補正書】
【提出日】平成16年4月8日(2004.4.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物患者に投与するための、単位投薬形態の薬学的組成物であって、該薬学的組成物は、薬学的に受容可能な本体および薬学的に受容可能なキャリアを含有し、ここで、該本体の少なくとも一部は、約２０ｎｍ〜５００μｍの範囲のサイズを有し、そして該本体の表面は、ホスフェート−グリセロール基またはホスフェート−グリセロール基に転換可能な基を含み、該単位投薬量は、約５００から約２．５×１０９個の本体を含む、薬学的組成物。
【請求項２】
前記本体は、リポソームである、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項３】
前記組成物は、非脂質性の薬学的に活性な実体を本質的に含まない、請求項１または２に記載の薬学的組成物。
【請求項４】
前記組成物は、非脂質性の薬学的に活性な実体を含まない、請求項３に記載の薬学的組成物。
【請求項５】
請求項２〜４のいずれかに記載の薬学的組成物であって、前記リポソームは、約６０％〜１００％のホスファチジルグリセロールを含み、そのホスファチジルグリセロールのヘッド基は、該リポソームの外面上に存在している、薬学的組成物。
【請求項６】
前記リポソームは、７０〜９０％のホスファチジルグリセロールを含む、請求項５に記載の薬学的組成物。
【請求項７】
前記リポソームの任意の残りは、ホスファチジルコリンである、請求項５または６に記載の薬学的組成物。
【請求項８】
請求項１に記載の薬学的組成物であって、前記本体は、ホスフェート−グリセロール基の結合に特異的な哺乳動物免疫系の細胞上のレセプターに特異的に結合する表面基を含む、薬学的組成物。
【請求項９】
前記単位投薬量は、約１０，０００〜約５０，０００，０００個の本体を含む、請求項１〜８のいずれかに記載の薬学的組成物。
【請求項１０】
約２０ｎｍ〜５００μｍの範囲のサイズを有し、かつ複数のホスフェート−グリセロール活性基の表面上で発現するかまたは発現可能である、薬学的に受容可能な生体適合性の本体を含有する組成物の使用であって、該組成物は、Ｔ細胞機能により媒介される障害、炎症性障害、および不適切なサイトカイン発現によって特徴付けられる免疫障害から選択される障害の処置または予防のための医薬の製造において、薬学的に活性な、非脂質性の実体を本質的に含まない、使用。
【請求項１１】
請求項１０に記載の組成物の使用であって、前記ホスフェート−グリセロール基は、前記本体の表面上で発現される、使用。
【請求項１２】
請求項１０または１１に記載の組成物の使用であって、前記ホスフェート−グリセロール活性基は、前記本体上の活性基の６０〜１００％を構成する、使用。
【請求項１３】
請求項１０〜１２のいずれかに記載の組成物の使用であって、前記ホスフェート−グリセロール活性基は、ＰＧリガンドのヘッド基である、使用。
【請求項１４】
請求項１０〜１３のいずれかに記載の組成物の使用であって、前記本体は、リポソームである、使用。
【請求項１５】
請求項１４に記載の組成物の使用であって、前記リポソームは、５０重量％〜１００重量％のホスファチジルグリセロールで構成される、使用。
【請求項１６】
請求項１４または１５に記載の組成物の使用であって、前記リポソームは、６５重量％〜９０重量％のホスファチジルグリセロールで構成される、使用。
【請求項１７】
請求項１２〜１６のいずれかに記載の組成物の使用であって、前記リポソームは、約２０ｎｍ〜約１０００ｎｍの直径を有する、使用。
【請求項１８】
約５００〜約２．５×１０９個の本体を含む前記組成物の単位投薬形態の、請求項１０〜１７のいずれかに記載の使用。
【請求項１９】
約１０，０００〜約５０，０００，０００個の本体を含む前記組成物の単位投薬形態の、請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
前記障害は、潰瘍および自己免疫障害から選択される、Ｔ細胞機能によって媒介される障害である、請求項１０〜１９のいずれかに記載の使用。
【請求項２１】
前記障害は、強皮症、乾癬および慢性関節リウマチから選択される自己免疫障害である、請求項２０に記載の使用。
【請求項２２】
前記障害は、炎症性アレルギー反応である、請求項１０〜１９のいずれかに記載の使用。
【請求項２３】
前記障害は、接触過敏症である、請求項２２に記載の使用。
【請求項２４】
前記障害は、遅延型過敏症である、請求項２３に記載の使用。
【請求項２５】
約２０ｎｍ〜５００μｍのサイズであり、かつホスフェート−グリセロール基またはホスフェート−グリセロール基に転換可能な基から本質的になる、本体上の活性基を有する薬学的に受容可能な生体適合性の本体を含有する組成物の使用であって、該組成物は、内皮機能不全障害の処置または予防のための医薬の製造おいて、薬学的に活性な、非脂質性の実体を本質的に含まず、該内皮機能不全障害は、末梢性動脈閉鎖疾患、うっ血性心不全、心室性不整脈、突然心臓死、発作、心筋梗塞、アンギナ、高血圧、血管痙攣障害、虚血損傷および虚血再灌流損傷から選択される、使用。
【請求項２６】
不適切なサイトカイン発現を含む障害の処置または予防のための医薬の製造のための、請求項１０〜１９のいずれかに記載の使用。
【請求項２７】
前記障害は、神経変性疾患である、請求項２６に記載の使用。
【請求項２８】
請求項２７に記載の使用であって、前記神経変性疾患は、ダウン症候群、アルツハイマー病、パーキンソン病、老年痴呆、うつ病、ハンティングトン病、末梢性ニューロパシー、ギラン・バレー症候群、脊髄疾患、神経障害性関節疾患、慢性炎症性脱髄疾患、モノニューロパシー、ポリニューロパシー、対側性遠位感覚ニューロパシー、神経筋接合障害、筋無力症、および筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）から選択される、使用。
【請求項２９】
前記神経変性疾患は、アルツハイマー病、パーキンソン病またはＡＬＳである、請求項２８に記載の使用。
【請求項３０】
約５００〜約２．５×１０９個の本体の量における、約２０ｎｍ〜約５００μｍのサイズの薬学的に受容可能な生体適合性の本体を含有する組成物の単位投薬形態の使用であって、該本体は、ホスフェート−グリセロール基またはホスフェート−グリセロール基に転換可能な基を含む、該本体表面上の活性基を有し、該組成物は、アテローム性動脈硬化症の処置または予防のための医薬の製造において、薬学的に活性な非脂質性の実体を本質的に含まない、使用。
【請求項３１】
前記本体は、ホスファチジルグリセロール含有リポソームである、請求項３０に記載の使用。
【請求項３２】
前記リポソームは、５０〜９０％のホスファチジルグリセロールから構成される、請求項３１に記載の使用。
【請求項３３】
哺乳動物において、インビボで抗炎症性応答を生じ得る組成物であって、該組成物は、約２０ｎｍ〜約５００μｍのサイズの薬学的に受容可能なリポソームを含有し、該リポソームは、５０重量％〜９０重量％のホスファチジルグリセロールを含み、そのホスフェート−グリセロール活性基は、外部に存在しており、該リポソームは、非脂質性の薬学的に活性な実体を本質的に含まない、組成物。
【請求項３４】
前記リポソームは、少なくとも６０重量％のホスファチジルグリセロールを含む、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
前記リポソームは、約７０〜９０％のホスファチジルグリセロールを含む、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３６】
前記リポソームの残りは、不活性な共構成成分を含む、請求項３３〜３５のいずれかに記載の組成物。
【請求項３７】
前記不活性な共構成要素は、ホスファチジルコリンである、請求項３６に記載の組成物。
【請求項３８】
前記組成物は、非脂質性の薬学的に活性な実体を含まない、請求項３３〜３７のいずれかに記載の組成物。
【請求項３９】
前記リポソームは、約５０〜５００ｎｍのサイズを有する、請求項１〜９、３３〜３８のいずれかに記載の組成物。
【請求項４０】
前記リポソームは、約８０〜２０ｎｍのサイズを有する、請求項３９に記載の組成物。
【請求項４１】
請求項３３〜４０のいずれかに記載の組成物であって、該組成物は、前記ホスファチジルグリセロール含有リポソームと、不活性なリポソームおよび／または異なる機構を介して作用するリン脂質のリポソームとの混合物を含有し、該ＰＧリポソームは、総混合物の少なくとも１０％を構成している、組成物。
【国際調査報告】
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