(57)【要約】本発明は、栄養組成物、栄養補助食品、予防組成物又は乳児用調製粉乳中におけるシスタチオニンの使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
シスタチオニンを含む栄養組成物。
【請求項２】
経腸栄養製品、非経口栄養製品、ヒトの栄養用の食品組成物及び動物の栄養用の食品組成物からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１に記載の栄養組成物。
【請求項３】
食品組成物１リットル当たり又は１キログラム当たりシスタチオニン０．０１〜３０ｇを含むことを特徴とする、請求項１又は請求項２に記載の栄養組成物。
【請求項４】
シスタチオニンを含む栄養補助食品。
【請求項５】
シスタチオニンを０．１〜９９％含むことを特徴とする、請求項４に記載の栄養補助食品。
【請求項６】
シスタチオニンを１０〜５０％含むことを特徴とする、請求項４に記載の栄養補助食品。
【請求項７】
シスタチオニンを含む予防組成物。
【請求項８】
シスタチオニンを０．１〜９９％含むことを特徴とする、請求項７に記載の予防組成物。
【請求項９】
シスタチオニンを３０〜６０％含むことを特徴とする、請求項７に記載の予防組成物。
【請求項１０】
シスタチオニンを含む乳児用調製粉乳。
【請求項１１】
シスタチオニンを０．１〜９９％含むことを特徴とする、請求項１０に記載の乳児用調製粉乳。
【請求項１２】
シスタチオニンを０．１〜２５％含むことを特徴とする、請求項１０に記載の乳児用調製粉乳。
【請求項１３】
前記シスタチオニンを繊維と併用する、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物形態でのシスタチオニンの使用。
【請求項１４】
シスタチオニンの使用であって、
酸化的ストレス、
代謝亢進、
感染症、
炎症、
呼吸ストレス及び／又は
筋肉減少
に抗するため、運動を準備、維持及び継続するため、やけどを負った又は大きな傷のある個体の回復を助けるため、並びに発育が遅れた未熟児又は乳児の発育を助けるための使用。
【請求項１５】
グルタチオニン状態を維持するため、及び／又はシステインに富んだタンパク質の合成を可能にするための、請求項１３又は請求項１４に記載のシスタチオニンの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、シスタチオニンを含む栄養組成物、栄養補助食品、予防組成物及び乳児用調製粉乳に関する。
【背景技術】
【０００２】
欧州特許出願第０６５５２４４  Ａ１号は、正常な個体の必要性に対応するシステインの割合よりも高い、ある割合の薬理学的に活性のあるシステインを含む、感染症を治療するためのアミノ酸系栄養組成物について記載している。しかし、遊離システインには大きな欠点がある。第１に、酸化して具体的にはシスチンになるので、熱処理に対する耐性が不十分である。第２に、硫化水素及び他の硫黄含有化合物を弱く放出する際、栄養液剤中に悪臭及びさらに非常に不愉快な味を発生させるので、システインは感覚受容性に乏しい。
【０００３】
製品にシステインを多く含める上でその不安定性のためにこれらの問題があるので、例えばシステイン前駆体を用いて、栄養製品を強化する他の液剤を見つける必要がある。メチオニンは、ホモシステインの合成（３ステップ）、次いで不可逆なステップでのシスタチオニンの合成、次いで最後にシステインの合成を伴う連続した５ステップでシステインの生合成を可能にする必須アミノ酸である。本発明者らは、メチオニンを供給することによっては、食餌にシステインを多く含めることにより観察される薬効を誘導することができないことを示した。したがって、本発明の目的は、シスタチオニンを提供することである。というのは、第１に、シスタチオニンは直接システインに変換され、第２に、シスタチオニンはシステインよりもはるかに安定であることを本発明者らは示したからである。
【０００４】
システインは、人体内で見つかる２０種のアミノ酸の１種である。これは、非必須アミノ酸であり、それは人体がこれを合成できるということを意味している。しかし、これは多くの化合物に変換できるので、重要である。システインを酸化してシステインスルフィン酸にし、次いで脱炭酸によってヒポタウリンとし、これはタウリンを与える。また、脱炭酸によって、アセチルＣｏＡの合成をもたらすことができ、さらに、ピルビン酸塩に変換することができる。硫黄含有アミノ酸として、システインは、細胞外血中タンパク質、細胞内タンパク質及び膜結合タンパク質の３次元構造を安定化させる働きをするジスルフィド結合の形成を可能にする。さらに、システインは、炎症状況（急性でも慢性でも）に応答して合成されるタンパク質中に高い割合で見られ、かつグルタチオンの構成成分の１つであるので、生物中でストレスが観察される場合において、システインの供給は重要である。
【０００５】
グルタチオンは、グリシン、グルタミン酸及びシステインからなるトリペプチドである。これは、生細胞中で補酵素として働き、酸化還元反応及びアミノ酸輸送に関与している。これはまた、特に、遊離基を中和し、したがって癌及び老化のリスクを防止する、生体内で最も重要な酸化防止剤の１つである。最後に、グルタチオンは肝臓中の主な解毒剤であり、したがって生体異物の排除に寄与する。
【０００６】
シスタチオニンについて、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、単離した細胞上、及びｉｎ  ｖｉｖｏで科学的研究が行われてきた。早くも１９４２年に、Ｖｉｇｎｅａｕｄら（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、１４３、５９、１９４２）による論文では、哺乳動物組織中でシスタチオニンがシステインに代謝される可能性について言及されている。Ｈｏｐｅ（Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｃｏｎｇｒ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．４ｔｈ、Ｖｉｅｎｎａ、１９５８、１３、６３、１９６０）による論文以降、シスタチオニンが、メチオニンの硫黄がホモシステインを介して自然に転移してシステインを与えるトランススルフィド化における中間分子であることがよく知られている。Ｐ．Ｗ．Ｂｅａｔｔｙ及びＤ．Ｊ．Ｒｅｅｄ（Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．、１９８０、２０４（１）、８０〜８７）は、その一部で、グルタチオン生合成におけるシスタチオニンの関与について言及している。最後に、ごく最近、ＭａｃＣｏｓｓら（Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ、２００１、２８０、Ｅ９４７〜Ｅ９５５）による論文では、標識されたメチオニンを注入した後のシスタチオニンの血漿濃縮を測定しており、したがって、ヒトにおけるメチオニンからシスタチオニンへの変換率を定量している。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、栄養組成物中にシスタチオニンを多く含めてシステインを提供し、かつ消費者又は患者の体内でグルタチオン状態を維持することによって、これらの不都合を無視することを提案する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、経口、経腸又は非経口栄養のためのシスタチオニンを含む栄養組成物、シスタチオニンを含む栄養補助食品、シスタチオニンを含む予防組成物、あるいはシスタチオニンを含む乳児用調製粉乳に関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
上述したように、システインには、熱安定性の点及び感覚受容性の点の両方からの大きな欠点がある。驚くべきことに、シスタチオニンはこれらの負の特徴を示さない。シスタチオニンは、ホモシステインとセリンの縮合生成物であり、シスタチオナーゼの作用によってシステインに変換される。この重要なジペプチドは、哺乳動物組織中に天然に存在する。
【００１０】
本発明の第１の態様は、経口、経腸又は非経口投与されるシスタチオニンを含む栄養組成物に関する。本発明の第２の態様は、シスタチオニンを含む栄養補助食品に関する。本発明の第３の態様は、シスタチオニンを含む予防組成物に関する。本発明の第４の態様は、シスタチオニンを含む乳児用調製粉乳に関する。本発明の最後の態様は、シスタチオニンの使用に関する。
【００１１】
「シスタチオニン」という用語は、Ｌ型のシスタチオニン、Ｄ型のシスタチオニン、シスタチオニン塩又は様々な形態のシスタチオニン混合物を表すものである。
【００１２】
「栄養組成物」という用語は、特にヒト又は動物を対象とした、経口、経腸、非経口、料理又は食餌栄養のための任意の組成物を表すものである。「経腸栄養製品」という用語は、消化管によって生物内に人工的に導入できる任意のタイプの組成物を表すものである。「非経口栄養製品」という用語は、消化管以外の経路を介して、特に皮下又は筋肉内注射によって、腹膜注射によって、あるいはとりわけ静脈内注入によって生物に導入できる任意の組成物（例えば、医薬又は栄養）を表すものである。「食品組成物」という用語は、任意の液状、粘性、構造化された、ゼラチン状、固形、氷冷した、冷蔵した又は粉末状組成物、あるいは特に製造変換を受けた任意の組成物を表すものである。本発明による栄養組成物は、周囲温度、冷蔵、冷凍、脱水した状態で保存できる可能性があり、特に液体、飲料、スープ、ムースリーヌ又はピューレ、シリアル、マヨネーズ、サラダドレッシング、練粉菓子又はピザ生地、パスタ、冷凍製品、デザートクリーム、乳製品、あるいはコーヒー粉、とりわけ粉末状ココアであってもよい。
【００１３】
「栄養補助食品」という用語は、正常かどうかを問わず所与のヒト又は動物集団の食餌の品質を向上させるための栄養素の任意の供給物、及び任意の食品添加物を表すものである。この定義には、食品の変換を容易にし、その品質、食感、味もしくは外観を安定化又は向上させ、あるいはその調製を容易にするために、一般に少量で食品に意図的に加えられる任意の物質も含まれる。「食品添加物」という用語は、その使用の結果、食品の不可欠な部分となり、もしくはこの食品の特異的な特徴を改変する前記物質又はその副産物が得られるあるいはおそらく得られるであろう、任意の物質を表すものである。
【００１４】
本発明で定義した栄養補助食品は、散剤、ゲル剤、液剤、乳剤、錠剤の形、あるいは液体と一緒に又は一緒でなくても摂取可能な任意の他の形態であってよい。例えば、本発明によるシスタチオニンは、ビタミン及び／又はミネラルも含んでいる栄養補助食品に取り込むことができる。
【００１５】
「予防組成物」という用語は、疾患の出現を防止するための任意の手段、さらに疾患に対する保護又は予防容量で使用される任意の薬剤を表すものである。本発明による予防組成物は、ヒト又は動物に使用でき、その後者は、産業的に又は小規模で飼育が可能なものである。これは特に、家禽類、ウサギ、ヒツジ、ブタ、子ウシ、げっ歯類あるいは養魚に関する。
【００１６】
本発明による予防組成物は、シスタチオニン以外に、例えば他のアミノ酸を含むことができる。これは、完全な栄養組成物、栄養補助食品又は注射可能な製品であってよい。
【００１７】
「乳児用調製粉乳」という用語は、通常必要な栄養、さらに特別に必要な栄養がある子供のための任意の変更可能な標準物質、及び連続調乳を含む、年齢が１２カ月未満の子供を対象とした母乳の任意の代替物又は補足物を表すものである。「連続調乳」という用語は、年齢が６カ月から３６カ月の離乳食の一部を構成している任意の食品を表すものである。
【００１８】
本発明の態様の１つによる栄養組成物中のシスタチオニン含有量は、食品組成物１リットル当たり又は１キログラム当たり０．０１〜１００ｇである。本発明による組成物は、食品組成物１リットル当たりシスタチオニン０．１〜５０ｇ、あるいは１キログラム当たり０．０１〜１５０ｇを含むことが好ましい。
【００１９】
この組成物の残りには、任意のタイプの成分及び賦形剤、特にタンパク質源（全タンパク質、ペプチド及び／又は遊離アミノ酸）、脂質源、特に炎症反応を改変する脂肪酸、炭水化物源、可溶性及び／又は不溶性繊維源、ビタミン（特に抗酸化ビタミン）、微量栄養素、着色剤、香料、安定剤などが含まれていてよい。これはまた、例えば、増殖因子、細菌及び／又はそれらの代謝物、フラボノイド又はリコペンもしくはルテインを含むカロテノイドを含んでいてもよい。最後に、これは、任意のタイプの疾患あるいは症候群、例えば、特に酸化的ストレス、代謝亢進、癌又は心血管疾患に対して作用する薬剤分子を含んでいてもよい。
【００２０】
本発明の第２の態様による栄養補助食品中のシスタチオニン含有量は、前記栄養補助食品の０．１〜１００％（固形分の重量パーセント値）、さらにより最適には１〜５０重量％である。この栄養補助食品の残りには、農業食品業界で使用できる任意のタイプの賦形剤、特に炭水化物、タンパク質、香料又は着色剤が含まれていてよい。これはまた、例えば、ビタミン、遊離アミノ酸又はペプチド、薬剤分子、酸性化剤、増粘剤、甘味剤又は甘味料、酸化防止剤、牛乳又は乳タンパク質、果物又は野菜ジュース、香料など他の栄養補助食品を含んでいてもよい。
【００２１】
本発明の第３の態様による予防組成物中のシスタチオニン含有量は、前記組成物の０．１〜９９％（固形分の重量パーセント値）、さらにより最適には３０〜６０重量％である。この組成物の残りには、農業食品業界で使用できる任意のタイプの栄養素及び賦形剤、特に糖、タンパク質、香料又は着色剤が含まれていてよい。これはまた、例えば、ビタミン、アミノ酸、抗生物質、酵素又は薬剤分子など他の栄養補助食品を含んでいてもよい。
【００２２】
本発明の第４の態様による乳児用調製粉乳中のシスタチオニン含有量は、前記調乳の０．１〜９９％（固形分の重量パーセント値）、さらにより最適には０．１〜２５重量％である。この調乳の残りには、農業食品業界、特に離乳食業界で一般に使用されている任意のタイプの栄養素又は食品、特に炭水化物、タンパク質、香料又は着色剤が含まれていてよい。これはまた、例えば、ビタミン、遊離アミノ酸又はペプチド、薬剤分子、酸性化剤、増粘剤、甘味剤又は甘味料、酸化防止剤、牛乳又は乳タンパク質、果物又は野菜ジュース、香料など他の栄養補助食品を含んでいてもよい。
【００２３】
本発明によるシスタチオニンの使用の目的は、グルタチオン状態を維持し、特定の疾患で合成されるシステインに富んだタンパク質の合成を可能にするために、システインを供給することである。これはまた、運動の準備、運動中、さらに運動後の回復段階中でもスポーツ栄養物に使用することができる。グルタチオンの内因性合成を容易にするためのシスタチオニンの使用は、酸化的ストレス、代謝亢進、感染症又は炎症、呼吸ストレス又は筋肉減少の状況下でも起こり得る。これはまた、やけどを負った又は大きな傷のある個体、発育が遅れた未熟児又は乳児の食事に加えることもできる。
【００２４】
本発明のいずれか１つの態様による組成物に含有されているシスタチオニンは、例えばその不十分な溶解性の克服を可能にする親水コロイド又は繊維と併用することができる。併用する繊維は、具体的には、アラビアゴム、キサンタン又はアカシアゴムであってよい。本発明を実施するのに決して必須ではないが、シスタチオニンの溶解性を増大させ、シスタチオニンを含有する溶液の粘性を増大させる他の手段を使用することもできる。これらは特に、カプセル化又は複乳剤の使用などの手段であってもよい。
【００２５】
物理化学的及び感覚受容性挙動に関する試験
シスタチオニンは極めて安定なアミノ酸であるということが判明している。これをＳＯＮＤＡＬＩＳ（商標）に加え、等モル濃度（４１ｍＭ、すなわちシステイン５ｇ／Ｌ）のシステインと比較しながら試験を行った。ＳＯＮＤＡＬＩＳは、エネルギーの３５％を脂質の形で、５０％を炭水化物、特にマルトデキストリンの形で、かつ１５％をタンパク質の形で含み、またビタミンＡ、Ｂ６、Ｂ１２、Ｃ、Ｄ、Ｅ及びＫを含めたビタミン、並びに特にリン及びマグネシウムなどの無機塩類も含む経腸栄養製品である。栄養補充したＳＯＮＤＡＬＩＳ１．０ｍｌを、オートクレーブ内で１５分間１２１℃にした。この手順は、操作の最初から温度降下段階まで２時間以上続くので、これは強力な熱処理に相当する。これらの厳しい条件は、粘稠度が濃く、生成物が茶色になることによって確認される。
【００２６】
この比較結果を以下の表に示す。
【表１】
2005505599.tif 000002
【００２７】
硫黄を含む化合物の酸化及び分解によって強烈で不愉快な悪臭がある誘導体が生成されることに限っては、シスタチオニン補充生成物に悪臭がないことは、特に経口調乳との適合性を証明する第１に重要な要素である。
【００２８】
安定性に関する試験
シスタチオニンの安定性をシステインと比較して、脱イオン水で、かつ様々な液状経腸調乳（ＳＯＮＤＡＬＩＳ及びＲＥＡＢＩＬＡＮ）中で試験した。ＲＥＡＢＩＬＡＮ及びＳＯＮＤＡＬＩＳ（登録商標）は、エネルギーの３５％を脂質の形で、５０〜５２．５％を炭水化物、特にマルトデキストリン及びデンプンの形で、１２．５〜１５％をペプチド又はタンパク質の形で含み、さらにビタミン、無機塩類及びタウリン又はＬ−カルニチンなど他の化合物も含む、異なる経腸組成物である。
【００２９】
＊水中での安定性
シスタチオニンを、２５℃における水への溶解度の最大レベル、すなわち水に対して０．６ｍｇ／ｍＬで加えた。この混合物を１２１℃で１５分間オートクレーブ内で処理し、分析した。
【００３０】
水中では、シスタチオニンは回収率が１００％なので、１２１℃で１５分間処理した後でも極めて安定であり、システインは僅かに酸化されてシスチンになる（６％）。
【００３１】
＊経腸調乳中での安定性
−  ３ｍＭ濃度における厳しい滅菌条件（１２１℃、１５分）下での安定性
熱処理前の経腸調乳では、システインは比較的不安定である。すなわち、システインは高度に酸化されており、特に加える量によってはさらに破壊され得る。システインとは違って、シスタチオニンは極めて安定であることが判明している。熱処理後の経腸調乳では、利用可能なシステインの量はかなり減少し、加える量が減るとシステインの相対的損失が増加する。システイン及びシスタチオニンの安定性は、これらを加える製品によって決まるが、試験した処理条件がどうであれ、シスタチオニンはシステインよりも常に安定である。熱処理（オートクレーブ内１２１℃で１５分間）後に得られた結果を以下の表に示す。
【表２】
2005505599.tif 000003
【００３２】
システインとは違って、経腸液剤にシスタチオニンを加えた場合、硫黄系の悪臭の放出が無いので、Ｈ２Ｓの放出がない。したがって、シスタチオニンは、システインよりも極めて優れた感覚受容特性を示す。
【００３３】
−  ＳＯＮＤＡＬＩＳにおける高濃度（４３ｍＭ）、ＴＨＡ滅菌条件（１４０℃、１５”）下での安定性
ＴＨＡ（管状加熱装置）滅菌条件は、工業プロセスでしばしば使用されるＵＨＴ（超高温）条件を正確に再現するわけではないが、ＵＨＴ条件に相当する。したがって、ＴＨＡ条件では、従来、上記よりはるかに少ないが、工業ＵＨＴ条件よりも僅かに多く分解が誘導される。経腸栄養製品で推奨され得る濃度の平均の範囲に入るので、高濃度（４３ｍＭ）を選択した。これらの条件下では、システインの損失は厳しい滅菌条件（１２１℃、１５’）よりも低いが、栄養製品で使用するにはまだ多すぎる（２７％）。一方、測定した損失が分析法の再現性の限界にあったので、シスタチオニンの安定性は非常に優れている。
【表３】
2005505599.tif 000004
【００３４】
以下の実施例は、例示として示したものに過ぎない。
【実施例１】
【００３５】
経腸栄養製品
水相中に、カゼイン及び大豆タンパク質の混合物からなるタンパク質３８ｇ／Ｌ、中鎖トリグリセリド、トウモロコシ油、大豆油、及び菜種油を含む脂質の混合物３５ｇ／Ｌ、並びにマルトデキストリンの形の炭水化物１２５ｇ／Ｌを含有する、エネルギー値が１０００ｋｃａｌ／Ｌの経腸栄養製品を調製する。これはまた、以下の表に記載した化合物（「ビタミン」という単語を「Ｖｉｔａ」と略し、「ＲＥ」は「レチノール当量」を表し、「ＴＥ」は「トコフェロール当量」を表す）を含む。このタンパク質はまた、シスタチオニン１０ｇ／Ｌも含む。
【表４】
2005505599.tif 000005
【実施例２】
【００３６】
栄養補助食品
高齢の個体を対象とした、１００ｍＬ当たり１００ｋｃａｌの液体形状の補助食品を含む栄養補助食品を調製する。この生成物の最終組成は以下の通りである。
2005505599.tif 000006
2005505599.tif 000007
【００３７】
この実施例で使用したタンパク質の起源は、粉末状脱脂粉乳、乳清、及び粉末状卵黄である。この実施例に記載した栄養補助食品は、シスタチオニンを１５ｇ含む。
【実施例３】
【００３８】
乳児用調製粉乳
以下の成分を、指示した割合で混合することによって、乳児用調製粉乳を調製する。この最終生成物は、１００ｇ当たり５１９ｋｃａｌ含み、粉末形状である。
2005505599.tif 000008
【００３９】
この生成物中に存在するタンパク質のアミノ酸プロファイルを以下に開示する。
【表５】
2005505599.tif 000009
【００４０】
この乳児用調製粉乳はまた、従来の割合で、従来の調乳に一般に使用されている微量栄養素も含む。
【実施例４】
【００４１】
シスタチオニンの生理学的有効性に関する試験
シスタチオニンの主な用途は、多くの病的な状況（敗血症、外科的処置、やけど、外傷など）においてその必要性が増大する、アミノ酸であるシステインの供給を増大させることである。実際、システインはタンパク質合成、特に発作の状況において活性化される炎症反応のタンパク質の合成に関して重要である。これらのタンパク質は、生物の防御において主要な役割を演じ、システインに富んでいる。
【００４２】
しかし、十分なシステイン供給に伴われる有効性の主要な目標は、グルタチオン状態の維持である。グルタチオンは、発作の場合での生物の防御（酸化的ストレス、代謝調節分子、生体異物の解毒、細胞内還元剤に対する防御）において主要な役割を演じるトリペプチドである。システインは、グルタチオン合成のための制限アミノ酸であり、敗血症のラットの食餌にシステインを補充すると、正常な動物のレベルで肝グルタチオン状態が回復可能になることが示されている。
【００４３】
したがって、肝グルタチオン低下状態を示す感染ラット（敗血症）において、食餌にシスタチオニンを補充することが、システインを補充することと同等にグルタチオン状態を再度高めるのに有効であるかどうかを試験するために、実験プロトコルを実施した。差別化した食餌を与えた病気のラットのグループを、様々な臓器、特に肝臓中のグルタチオン濃度に関して比較した。肝臓は、実際に全身についてグルタチオン合成を調節するのに主要な臓器である。比較したグループには、グルタチオンに対して中性と考えられているアミノ酸（アラニン）（対照グループ）、又はシステイン（正の対照グループ）、又はシスタチオニン（試験グループ）のいずれかを補充した標準的なタンパク質食餌を与えた。病気ではない動物のグループも実現化させる（正常グループ）。シスタチオニンを補充することにより、試験グループにおけるグルタチオニン濃度の維持が、正の対照グループと同等のレベルで可能になる。
【国際公開パンフレット】
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2005505599.tif 000022
2005505599.tif 000023
2005505599.tif 000024
2005505599.tif 000025
【国際調査報告】
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2005505599.tif 000027
2005505599.tif 000028
2005505599.tif 000029
2005505599.tif 000030
2005505599.tif 000031