(57)【要約】  本発明は、所望されない細胞増殖または増殖亢進により特徴付けられる疾患または状態の処置における、化合物、それらの調製のための方法、およびそれらの中間体、ならびにそれらの化合物の使用のための方法を提供する。１つの局面において、本発明は、ゲルダナマイシンに関連する新規ベンゾキノンアンサマイシンを提供する。これらのアナログは、化学的操作および／または遺伝的操作を介して調製される。改善された溶解特性を有する化合物およびＨｓｐ９０を結合するために最適化された構造を有する化合物もまた提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式
【化１】
2005515164.tif 000029
を有する化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグであり：
ここでＲ１は、ＭｅＯ、（ＣＨ２）３ＮまたはＲ９−ＮＨであり、ここでＲ９は、Ｈ、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ６アルケニル、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキニル、置換または非置換Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、ピペリジニル、Ｎ−アルキルピペリジニル、ヘキサヒドロピラニル、フルフリル、テトラヒドロフルフリル、ピロリジニル、Ｎ−アルキルピロリジニル、ピペラジニルアミノ、Ｎ−アルキルピペラジニル、モルホリニル、Ｎ−アルキルアジリジニルメチル、（１−アザビシクロ［１．３．０］ヘキシ−１−イル）エチル、２−（Ｎ−メチル−ピロリジン−２−イル）エチル、２−（４−イミダゾリル）エチル、２−（１−メチル−４−イミダゾリル）エチル、２−（１−メチル−５−イミダゾリル）エチル、２−（４−ピリジル）エチルおよび３−（４−モルホリノ）−１−プロピルからなる群から選択されるか、またはＲ６は、Ｈであり、そしてＲ１およびＲ５は、一緒になって式ＮＨ−Ｚ−Ｏの基を形成し、ここでＺは、１〜６個の炭素原子および０〜２個の窒素原子から構成されるリンカーであり、ここでＯは、Ｒ５の位置で結合され；
Ｒ２は、Ｈ、ハロゲン、ＯＲ１０、ＮＨＲ１０、ＳＲ１０、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され、ここでＲ１０は、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ６アルケニル、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキニルおよび置換または非置換Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキルからなる群から選択され；
Ｒ３は、Ｈ、ＯＨまたはＯＭｅであり；
Ｒ４は、ＨまたはＭｅであり；
Ｒ５は、ＯＨまたはＯ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２ＮＨ２であり、そしてＲ６は、Ｈであるか、またはＲ５およびＲ６は一緒になって＝Ｏまたは＝Ｎ−ＯＲ１１を形成し、ここでＲ１１は、Ｈ、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ６アルケニル、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキニル、置換または非置換Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールからなる群から選択され；
Ｒ７はＨであり、そしてＲ８はＨまたはＯＨであるか、またはＲ７およびＲ８は一緒になって結合を形成し；そしてＸはＯまたは結合であり、ただし、Ｒ３がＨであり、Ｒ４がＭｅである場合、Ｒ７はＨであり、そしてＲ８はＨであるか、またはＲ７およびＲ８は一緒になって結合を形成し、Ｒ６はＨでありそしてＲ１およびＲ５は一緒になって式ＮＨ−Ｚ−Ｏの基を形成し、ここで、Ｚは、１〜６個の炭素原子および０〜２個の窒素原子から構成されるリンカーであり、ここでＯは、Ｒ５の位置で結合されるか、またはＲ１は、（ＣＨ２）３ＮまたはＲ９−ＮＨであり、ここでＲ９は、ピペリジニル、Ｎ−アルキルピペリジニル、ヘキサヒドロピラニル、フルフリル、テトラヒドロフルフリル、ピロリジニル、Ｎ−アルキルピロリジニル、ピペラジニルアミノ、Ｎ−アルキルピペラジニル、モルホリニル、Ｎ−アルキルアジリジニルメチル、（１−アザビシクロ［１．３．０］ヘキシ−１−イル）エチル、２−（Ｎ−メチル−ピロリジン−２−イル）エチル、２−（４−イミダゾリル）エチル、２−（１−メチル−４−イミダゾリル）エチル、２−（１−メチル−５−イミダゾリル）エチル、２−（４−ピリジル）エチルおよび３−（４−モルホリノ）−１−プロピルからなる群から選択され；そしてここでＲ３はＨであり、そしてＲ４がＭｅであり、Ｒ７がＨである場合、そしてＲ８はＯＨである、
化合物。
【請求項２】
請求項１の化合物であって、
ここでＲ１は（ＣＨ２）３ＮまたはＲ９−ＮＨであり、ここでＲ９はピペリジニル、Ｎ−アルキルピペリジニル、ヘキサヒドロピラニル、フルフリル、テトラヒドロフルフリル、ピロリジニル、Ｎ−アルキルピロリジニル、ピペラジニルアミノ、Ｎ−アルキルピペラジニル、モルホリニル、Ｎ−アルキルアジリジニルメチル、（１−アザビシクロ［１．３．０］ヘキシ−１−イル）エチル、２−（Ｎ−メチル−ピロリジン−２−イル）エチル、２−（４−イミダゾリル）エチル、２−（１−メチル−４−イミダゾリル）エチル、２−（１−メチル−５−イミダゾリル）エチル、２−（４−ピリジル）エチルおよび３−（４−モルホリノ）−１−プロピルからなる群から選択され；
Ｒ２は、Ｈ、ハロゲン、ＯＲ１０、ＮＨＲ１０、ＳＲ１０、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され、ここでＲ１０は、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ６アルケニル、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキニルおよび置換または非置換Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキルからなる群から選択され；
Ｒ３は、Ｈ、ＯＨまたはＯＭｅであり；
Ｒ４は、ＨまたはＭｅであり；
Ｒ５は、ＯＨまたはＯ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２ＮＨ２であり、そしてＲ６は、Ｈであるか、またはＲ５およびＲ６は一緒になって＝Ｏまたは＝Ｎ−ＯＲ１１を形成し、ここでＲ１１は、Ｈ、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ６アルケニル、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキニル、置換または非置換Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールからなる群から選択され；
Ｒ７はＨであり、そしてＲ８はＨまたはＯＨであるか、またはＲ７およびＲ８は一緒になって結合を形成し；そして
ＸはＯまたは結合である、
化合物。
【請求項３】
Ｒ３がＯＨまたはＯＭｅである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ４がＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ７がＨであり、そしてＲ８がＯＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
請求項１に記載の化合物であって、ここでＲ１およびＲ５は、一緒になって式ＮＨ−Ｚ−Ｏの基を形成し、ここでＺは、１〜６個の炭素原子および０〜２個の窒素原子から構成されるリンカーであり、ここでＯは、Ｒ５の位置で結合される、
化合物。
【請求項７】
所望でない細胞増殖または過剰増殖によって特徴付けられる疾患または状態の処置において使用するための、薬学的組成物であって、請求項１に記載の化合物および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
【請求項８】
所望でない細胞増殖または過剰増殖によって特徴付けられる疾患または状態を罹患する被験体において、所望でない細胞増殖または過剰増殖によって特徴付けられる疾患または状態を処置する方法であって、該方法は、治療的有効量の請求項７に記載の組成物を該被験体に投与する工程を包含する、
方法。
【請求項９】
前記疾患が癌である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
所望でない細胞増殖または過剰増殖によって特徴付けられる疾患または状態を罹患する被験体において、所望でない細胞増殖または過剰増殖によって特徴付けられる疾患または状態を処置する方法であって、該方法は以下の工程：
（ａ）該被験体に実質的に毒性以下の用量のＨｓｐ９０クライアントタンパク質インヒビターを投与する工程；
（ｂ）実質的に有効な応答の発生を可能にするのに十分な時間待つ工程；
（ｃ）該被験体に相乗作用の用量のベンゾキノンアンサマイシンを投与する工程、
を包含する、方法。
【請求項１１】
前記Ｈｓｐ９０クライアントタンパク質キナーゼインヒビターがタンパク質キナーゼインヒビターである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
請求項１１に記載の方法であって、前記タンパク質キナーゼインヒビターが、キナゾリン、フェニルアミノ−ピリジン、ピラゾロ−ピリジン、ピロロ−ピリジン、インドール、オキシンドール、ベンジリデンマロノニトリル、フラボン、スタウロスポリン、抗体およびリボソームタンパク質キナーゼインヒビターからなる群から選択される、
方法。
【請求項１３】
請求項１１に記載の方法であって、前記タンパク質インヒビターが、Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシ−６−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］−４−キナゾリンアミン、２−（２−クロロフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８［（３Ｓ，４Ｒ）−３−ヒドロキシ−１−メチル−４−ピペリジニル］−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン、４−［（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル］−Ｎ−［４−メチル−３−［［４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］アミノ］フェニル］ベンズアミノ、Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−４−キナゾリンアミンモノヒドロクロリドおよび３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）メチレン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オンからなる群から選択される、
方法。
【請求項１４】
請求項１０に記載の方法であって、前記ベンゾキノリンアンサマイシンが、請求項１に記載の化合物、１７−アリルアミノ−１７−デスメトキシ−ゲルダナマイシンおよび１７−（２−（ジメチルアミノ）エチルアミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシンからなる群から選択される、
方法。
【請求項１５】
所望でない細胞増殖または過剰増殖によって特徴付けられる疾患または状態を罹患する被験体において、所望でない細胞増殖または過剰増殖によって特徴付けられる疾患または状態を処置する方法であって、該方法は以下の工程：
（ａ）該被験体に相乗作用の用量のベンゾキノンアンサマイシンを投与する工程；
（ｂ）実質的に有効な応答の発生を可能にするのに十分な時間待つ工程；
（ｃ）該被験体に毒性以下の用量のＨｓｐ９０クライアントタンパク質インヒビターを投与する工程、
を包含する、方法。
【請求項１６】
前記Ｈｓｐ９０クライアントタンパク質インヒビターが微小管安定剤である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記微小管安定剤が、パクリタキセル、エポチロン（ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅ）、ディスコーダモリド（ｄｉｓｃｏｄｅｒｍｏｌｉｄｅ）およびロウリマリド（ｌａｕｌｉｍａｌｉｄｅ）からなる群から選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
請求項１６に記載の方法であって、前記ベンゾキノリンアンサマイシンが、請求項１に記載の化合物、１７−アリルアミノ−１７−デスメトキシ−ゲルダナマイシンおよび１７−（２−（ジメチルアミノ）エチルアミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシンからなる群から選択される、
方法。
【請求項１９】
所望でない細胞増殖または過剰増殖によって特徴付けられる疾患または状態を罹患する被験体において、所望でない細胞増殖または過剰増殖によって特徴付けられる疾患または状態を処置する方法であって、該方法は、請求項７に記載の組成物と５−フルオロウラシル、メトトレキセート、ビンブラスチン、シクロホスファミド、メクロレタミン、クロラムブシル、メルファラン、イフォスファミド、ブレオマイシン、マイトマイシンおよびドキソルビシンからなる群から選択される細胞傷害性薬物とを組み合わせて、該被験体に投与する工程を包含する、
方法。
【請求項２０】
請求項１０〜請求項１５のいずれか１項に記載の方法であって、前記毒性以下の用量は、前記Ｈｓｐ９０クライアントタンパク質インヒビターの最大の耐量と最大の２分の１の耐量との間であり、そして前記相乗作用の用量は、前記ベンゾキノンアンサマイシンの最大の耐量である、
方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本願は、「Ｇｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎ  Ａｎａｌｏｇｓ」と題された、米国特許仮出願番号６０／３１０，０７９（２００１年８月６日出願）および各々「Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｇｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎ  Ｐｏｌｙｋｅｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈａｓｅ  Ｇｅｎｅｓ」と題された、米国特許仮出願番号６０／３８９，２５５（２００２年６月１４日出願）；同６０／３９３，９２９（２００２年７月３日）（Ａｔｔｙ．登録番号３００９７．０２）に対する優先権を主張する。上記の文献は、その全体が、本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
（政府権利の状態）
本発明は、一部、ＮＩＨ助成金番号Ｒ４３ＣＡ９６２６２−０１の下で作成された。合衆国政府は、本発明において特定の権利を有し得る。
【０００３】
（背景）
多くの潜在的な抗癌化合物の臨床的有用性は、非標的細胞に対する所望されない毒性により制限される。薬物の所望されない毒性は、代表的に、標的組織または作用機構のいずれかにおける、特異性の欠如に起因する。薬物標的が正常な組織および罹患した組織に存在する場合、正常な組織および罹患した組織が、薬物により影響され得る。薬物はまた、複数の毒性機構を有し得、その一方は、罹患した細胞に特異的であり、そして他方は、非特異的である。いずれの例においても、しばしば、正常な組織および罹患した組織に対する薬物の作用において、用量依存的な差異が存在し、罹患した組織に対する効果は、正常な組織に対する効果より低い濃度で観察される。従って、抗癌治療の主要な作用は、薬物が治療的有効であり、正常な組織に対する最小限の効果を有する投与量を決定することである。
【０００４】
第Ｉ期の臨床試験が、代表的に、潜在的な抗癌化合物の最大限耐性用量（ＭＴＤ）（すなわち、毒性を引き起こすことなく安全に投与され得る最大用量）を決定するために用いられる。ＭＴＤと治療有効用量との差は、治療枠として知られている。多数の抗癌剤について、ＭＴＤは、治療有効量に非常に近い（すなわち、治療枠が非常に小さい）。ＭＴＤは、治療有効用量より低くさえあり、このことは、その薬物を臨床において使用不可能にする。
【０００５】
臨床的抗癌治療は、しばしば、有効性と所望されない毒性との間の繊細なバランスの達成を試みることを含む。罹患した組織に対する薬物の作用を助けながら、一方で、正常な組織に対する毒性に影響を与えない薬物は、ＭＴＤより十分に低い用量の薬物の有効な使用を可能にし、従って、治療枠を広げかつその治療の安全性および有効性を増強する。
【０００６】
ゲルダナマイシン（図１）は、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｇｅｌｄａｎｕｓから単離されたベンゾキノンアンサマイシンポリケチドである。元々は微生物抽出物の抗菌活性および抗ウイルス活性についてのスクリーニングにより発見されたが、ゲンタマイシンは、その後、インビトロで、特定の腫瘍細胞に対して細胞毒性であり、ラウス肉種ウイルスにより形質転換された細胞の形態を正常な状態に復帰させることが見出された。
【０００７】
腫瘍細胞依存性の異常なプロテインキナーゼに対する、ゲルダナマイシンのナノモーラーでの能力および見かけの特異性、ならびに哺乳動物におけるその主要な標的が、遍在するＨｓｐ９０タンパク質シャペロンであるという発見は、この抗癌剤の開発における興味を刺激した。しかし、肝毒性とゲルダナマイシン投与との関連から、第Ｉ期臨床試験が取りやめられた。いくつかの他の有望な抗癌剤同様に、ゲルダナマイシンもまた、乏しい水溶性を有し、このことは、治療有効用量での送達を困難にする。
【０００８】
より最近では、Ｈｓｐ９０結合を維持しながら、減少した肝毒性を示す、ゲルダナマイシンの１７−アミノ誘導体、特に１７−（アリルアミノ）−１７−（デスメトキシゲルダナマイシン（１７−ＡＡＧ；図１）に注目が集まってきた。ゲルダナマイシンの特定の１７−アミノ誘導体（１１−オキソゲルダナマイシン、および５，６−ジヒドロゲルダナマイシン）が、米国特許第４，２６１，９８９号；同第５，３８７，５８４号；および同第５，９３２，５６６号（これらの各々は、本明細書中に参考として援用される）において開示される。ゲルダナマイシン同様に、１７−ＡＡＧは、制限された水溶性を有する。この特性は、可溶化キャリア（最も一般的には、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒｅ（登録商標）（ＢＡＳＦ  Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ）、ポリエトキシル化ヒマシ油）の使用を要求するが、これはある患者において深刻な副作用を生じ得る。
【０００９】
ゲルダナマイシンまたは１７−ＡＡＧを用いる癌細胞の処置は、サイクリンＤ−サイクリン依存性ｃｄｋ４プロテインキナーゼ活性およびサイクリンＤ−サイクリン依存性ｃｄｋ６プロテインキナーゼ活性に関する誘導経路のダウンレギュレーションにより媒介される、網膜芽細胞腫タンパク質−依存性Ｇ１ブロックを引き起こす。細胞周期停止に続き、分化およびアポトーシスが起こる。Ｇ１進行は、変異した網膜芽細胞腫タンパク質を有する細胞において、ゲルダナマイシンにも１７−ＡＡＧにも影響を受けない；この細胞は、有し分裂後に、細胞周期停止を受け、次いで、アポトーシスを起こす。
【００１０】
ベンゾキノンアンサマイシンの作用機構は、Ｈｓｐ９０への結合および引き続くＨｓｐ９０関連クライアント（ｃｌｉｅｎｔ）タンパク質の分解を介するようである。ほとんどの感受性クライアントタンパク質のうち、ベンゾキノンアンサマイシンの標的は、Ｈｅｒキナーゼ（ＥｒｂＢとしても公知）、Ｒａｆ、Ｍｅｔチロシンキナーゼ、およびステロイドレセプターである。Ｈｓｐ９０はまた、ストレス（熱、放射線、および毒素を含む）に対する細胞性応答に関連する。従って、特定のベンゾキノンアンサマイシン（例えば、１７−ＡＡＧ）は、Ｈｓｐ９０クライアントタンパク質を標的化しない細胞毒素とのそれらの相互作用を決定するために研究されてきた。
【００１１】
米国特許第６，２４５，７５９号；同第６，３０６，８７４号；および６，３１３，１３８号（これらの各々は、本明細書中に参考として援用される）は、１７−ＡＡＧと共に特定のチロシンキナーゼインヒビターを含む組成物、およびそのような組成物を用いて癌を処置する方法を開示する。Ｍｕｅｎｓｔｅｒら、（「Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｓｐ９０  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ａｎｓａｍｙｃｉｎｓ  ｓｅｎｓｉｔｉｚｅｓ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ  ｔｏ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｉｎ  ａｎ  ＲＢ−ａｎｄ  ｓｃｈｅｄｕｌｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｍａｎｎｅｒ」、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００１）７：２２２８−２２３６）は、１７−ＡＡＧにより、パクリタキセルおよびドキソルビシンの細胞毒性効果に対して、培養物中の細胞を感作することを開示する。Ｍｕｅｎｓｔｅｒの参考文献は、１７−ＡＡＧによるパクリタキセルに対する感作が、細胞周期の異なる段階でのこれらの２つの薬物の作用に起因して、網膜芽細胞腫タンパク質産生細胞においてスケジュール依存性であることをさらに開示する；パクリタキセルおよび１７−ＡＡＧの組みあわせでの細胞の処置が相乗的にアポトーシスを生じさせることが報告されているが、一方で、１７−ＡＡＧを用いる細胞の前処理と引き続くパクリタキセルでの処理によりアポトーシスを抑止されることが報告されている。パクリタキセルを用いる細胞の処置と引き続く４時間後の１７−ＡＡＧを用いる処理は、同時処理と同様の相乗効果を示すことが報告されている。
【００１２】
Ｃｉｔｒｉら「Ｄｒｕｇ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｕｂｉｑｕｉｔｙｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＥｒｂＢ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅｓ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ」、ＥＭＢＯ  Ｊｏｕｒｎａｌ（２００２）２１：２４０７〜２４１７は、ゲルダナマイシンおよび不可逆性プロテインキナーゼインヒビター（ＣＩ−１０３３）の同時投与の際の、インビトロでのＥｒｂＢ２−発現癌細胞の増殖に対する相加的な効果を開示する。対照的に、ＣＩ−１０３３と抗ＥｒｂＢ２抗体（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）との拮抗作用が開示されている。
【００１３】
従って、ベンゾキノンアンサマイシン、特にゲルダナマイシンおよび１７−ＡＧＧには非常に多くの研究目的があるが、そのような化合物を単独でかまたは他の薬剤と組みあわせてかのいずれかで用いる、癌または所望されない細胞増殖亢進により特徴付けられる他の疾患もしくは状態を処置するための有効な治療レジメンに対する必要性が存在したままである。水溶性ベンゾキノンアンサマイシンが入手可能であれば、そのような化合物は、より容易に処方され得、そして危険な肝毒性を伴わず、臨床的処置においてより有効であり得る。他の証明された抗癌化合物と共にベンゾキノンアンサマイシンを投与するための有効な治療的処置レジメンが利用可能であれば、癌を処置するための新規のより有効な手段となり得る。別の抗癌剤の有効用量を低下するようなベンゾキノンアンサマイシンを用いる能力が現実化され得るならば、より割安の治療が利用可能になる（より少ない量の薬物の投与が必要とされるので）だけでなく、より重要には、以前は、それらの狭い治療枠に起因して化学療法において有用でなかった薬物を使用し得る。従って、組み合わせ治療のための適切な投薬スケジュールに沿って、治療有効性を維持しながら最大限の耐性用量より有意に少ない用量の投与を可能とする抗癌化合物の相乗効果についての未だ考慮されていない必要性が存在する。本発明は、新規のベンゾキノンアンサマイシンを提供し、そしてこれらの新規の化合物および公知の化合物を、単一薬剤治療および組み合わせ治療において用いるための方法を提供するようにして、このような必要性を満たす。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１４】
（発明の要旨）
本発明は、所望されない細胞増殖または増殖亢進により特徴付けられる疾患または状態の処置における、化合物、それらの調製のための方法、およびそれらの中間体、ならびにそれらの化合物の使用のための方法を提供する。
【００１５】
１つの局面において、本発明は、ゲルダナマイシンに関連する新規ベンゾキノンアンサマイシンを提供する。これらのアナログは、化学的操作および／または遺伝的操作を介して調製される。改善された溶解特性を有する化合物およびＨｓｐ９０を結合するために最適化された構造を有する化合物もまた提供される。
【００１６】
第二の局面において、本発明は、遺伝的に操作された形態のゲルダナマイシンポリケチドシンターゼ生合成遺伝子クラスター、この遺伝子クラスターを含むベクター、これらのベクターを含む宿主細胞、およびこれらの宿主細胞を用いてゲルダナマイシンアナログを産生するための方法を提供する。
【００１７】
第三の局面において、本発明は、所望されない細胞増殖または増殖亢進により特徴付けられる疾患または状態を処置するためのベンゾキノンアンサマイシンを含む組成物を提供する。特定の実施形態において、この疾患は、癌である。
【００１８】
第四の局面において、本発明は、所望されない細胞増殖亢進により特徴付けられる疾患または状態の処置における使用のための、ベンゾキノンアンサマイシンおよび第二の薬剤の使用を包含する、組み合わせ治療を提供する。特定の実施形態において、この疾患は、癌である。特定の実施形態において、第二の薬剤は、Ｈｓｐ９０クライアントタンパク質のインヒビターである。特定の実施形態において、第二の薬剤は、プロテインキナーゼインヒビターである。特定の実施形態において、第二の薬剤は、微小管安定化剤である。特定の実施形態において、第二の薬剤は、細胞毒性薬物である。１つの実施形態において、第二の薬剤は、Ｆｅｄｅｒａｌ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎにより、癌の処置のための独立した薬剤として認可されている。別の実施形態において、第二の薬剤は、明らかな毒性または狭い治療枠に起因して、合衆国において臨床試験に入っていないか、または臨床試験に入っているが進行していない。
【００１９】
第五の局面において、本発明は、インビボでの使用に関して、デバイス上での所望されない細胞の接着および増殖を防ぐ方法を提供する。これらのデバイスとしては、ステント、カテーテル、補綴物などが挙げられる。
【００２０】
（発明の詳細な説明）
本発明は、所望されない細胞増殖亢進により特徴付けられる疾患または状態の処置における使用のための、化合物、それらの中間体、およびそれらの化合物の使用のための方法を提供する。
【００２１】
本発明の範囲に関する提示および本明細書中で用いられる用語の定義は以下に列挙される。定義は、特定の例において他に限定されない限り、（個々としてかまたはより大きな群の一部としてかのいずれでも）その用語が本明細書を通して用いられる際に、適用される。
【００２２】
立体化学が詳細に示されない場合、本発明の化合物のすべての立体異性体が、それらの純粋な化合物および混合物同様に、本発明の範囲内に含まれる。他に示されない限り、個々のエナンチオマー、ジアステレオマー、幾何学異性体、およびそれらの組みあわせおよび混合物は、全て本発明により包含される。多様な結晶形態および溶媒和物もまた、本発明の範囲に含まれる。
【００２３】
本発明の化合物の保護された形態は、本発明の範囲に含まれる。種々の保護基が開示されている（例えば、Ｔ．Ｈ．ＧｒｅｅｎｅおよびＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ、Ｐｒｅｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第３版、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９９））。本発明は、本発明の活性な化合物のプロドラッグを、その範囲内に含む。そのようなプロドラッグは、一般に、インビボで所望される化合物へと容易に変換可能な、この化合物の機能的誘導体である。従って、本発明の処置方法において、用語「投与する」は、詳細に開示された化合物を用いるか、または詳細には開示されていないがそれらを必要とする患者への投与の後にインビボで、特定の化合物に変換する化合物を用いる、記載の種々の障害の処置を包含する。適切なプロドラッグ誘導体の選択および調製のための従来の手順は、例えば、「Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ」Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ編、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、１９８５において記載されている。
【００２４】
本明細書中で使用される場合、用語「ベンゾキノンアンサマイシン」とは、２つの隣接しない位置に大環状ラクタムが結合するベンゾキノン核を含む化合物をいう。天然に存在するベンゾキノンの特定の例としては、ゲルダナマイシン、ハービマイシン、マクベシン、ミコトリエン、およびアンサミトシンが挙げられるが、これらに限定されない。用語「ゲルダナマイシンアナログ」とは、化学的操作によってか、またはゲルダナマイシン生合成遺伝子クラスターの操作によって、ゲルダナマイシンから誘導され得るベンゾキノンアンサマイシンの型（例えば、１７−アリルアミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシン（１７−ＡＡＧ））、１７−（２−ジメチルアミノエチル）アミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシン（１７−ＤＭＡＧ）、または式（Ｉ）に示される構造を有する化合物）をいう。
【００２５】
本明細書中で使用される場合、用語「脂肪族」とは、飽和および非芳香族不飽和の、直鎖、分枝鎖、環式、または多環式の炭化水素をいう。脂肪族基の例示的な例としては、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基およびシクロアルキニル基が挙げられる。用語「アルキル」とは、直鎖または分枝鎖の飽和炭化水素置換基をいう。「アルケニル」とは、少なくとも１つの炭素−炭素の二重結合を有する直鎖または分枝鎖の炭化水素置換基をいう。アルキニルとは、少なくとも１つの炭素−炭素の三重結合を有する直鎖または分枝鎖の炭化水素置換基をいう。
【００２６】
用語「アリール」とは、好ましくは１個〜１４個の炭素原子を含む少なくとも１つの芳香族環構造を有する単環式基または多環式基をいう。アリール基の例示的な例としては、以下：ナフチル、フェニル、テトラヒドロナフチルなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２７】
用語「ヘテロアリール」とは、１個以上のヘテロ原子、好ましくは１個〜１４個の炭素原子を含む少なくとも１つの芳香族環構造を有する単環式基または多環式基をいう。ヘテロアリール基の例示的な例としては、以下：フラニル、イミダゾリル、インダニル、インドリル、インダゾリル、イソキサゾリル、イソキノリル、オキサゾリル、オキサジアゾリル、ピラジニル、ピリジル、ピリミジニル、ピロリル、ピラゾリル、キノリル、キノキサリル、テトラゾリル、チアゾリル、チエニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２８】
脂肪族部分、アリール部分、およびヘテロアリール部分は、１つ以上の置換基、好ましくは１〜５つの置換基、より好ましくは１〜３つの置換基、最も好ましくは１〜２つの置換基で置換され得、そしてそれらは、「置換脂肪族」「置換アリール」および「置換ヘテロアリール」として示される。ある分子中の特定の位置での任意の置換基または変化の定義は、その分子の他の場所での定義から独立している。本発明の化合物の置換基および置換基のパターンは、化学的に安定でありかつ当該分野において公知の技術および本明細書中に示される方法により容易に合成され得る化合物を提供するように、当業者により選択され得ることが理解される。適切な置換基の例としては、以下：脂肪族、ハロ脂肪族、ハロゲン、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、アジド、チオ、アルキルチオ、アリールチオ、アミノ、アルキルアミノ、アリールアミノ、アシル、カルバモイル、スルホンアミド、ニトロ、シアノ、カルボキシ、グアニジンなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２９】
用語「ハロ脂肪族」とは、１つ以上のハロゲンで置換された置換脂肪族基をいう。
【００３０】
用語「ハロ」、「ハロゲン」、または「ハライド」とは、フッ素、塩素、臭素、およびヨウ素をいう。
【００３１】
用語「アシル」とは、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒをいい、ここで、Ｒは、脂肪族基である。
【００３２】
用語「アルコキシ」とは、−ＯＲをいい、ここで、Ｒは、脂肪族基である。
【００３３】
用語「アリールオキシ」とは、−ＯＲをいい、ここで、Ｒは、アリール基である。
【００３４】
用語「カルバモイル」は、−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲＲ’を指し、ここでＲおよびＲ’は、独立してＨ、脂肪族、またはアリール基である。
【００３５】
用語「アルキルアミノ」は、−ＮＨＲを指し、ここで、Ｒは、アルキル基である。
【００３６】
用語「ジアルキルアミノ」は、−ＮＲＲ’を指し、ここで、ＲおよびＲ’の両方は、アルキル基である。
【００３７】
用語「ヒドロキシアルキル」は、−Ｒ−ＯＨを指し、ここで、Ｒは、脂肪族基である。
【００３８】
用語「アミノアルキル」は、−Ｒ−ＮＨ２を指し、ここで、Ｒは、脂肪族基である。用語「アルキルアミノアルキル」は、−Ｒ−ＮＨ−Ｒ’を指し、ここで、ＲおよびＲ’の両方は、脂肪族基である。用語「ジアルキルアミノアルキル」は、−Ｒ−Ｎ（Ｒ’）−Ｒ”を指し、ここで、Ｒ、Ｒ’およびＲ”は、脂肪族基である。用語「アリールアミノアルキル」は、−Ｒ−ＮＨ−Ｒ’を指し、ここで、Ｒは、脂肪族であり、そしてＲ’は、アリール基である。
【００３９】
用語「オキソ」は、カルボニル酸素（＝Ｏ）を指す。
【００４０】
用語「単離された」は、本明細書中で使用される場合、単離された物質が調製物中にあり、この調製物中で、この物質が調製物の主要な成分を構成している（例えば、調製物中で約５０重量％、約６０重量％、約７０重量％、約８０重量％、約９０重量％、約９５重量％、約９９重量％、またはそれより多い成分を構成する）ことを意味する。
【００４１】
用語「被験体」は、本明細書中で使用される場合、動物、典型的には哺乳動物またはヒトを指し、これらの被験体は、処置、観察および／または実験の対象である。この用語が、化合物または薬物の投与と組み合わせて使用される場合、この被験体は、この化合物または薬物の処置、観察および／または投与の対象である。
【００４２】
用語「治療有効量」は、本明細書中で使用される場合、細胞培養物、組織系、動物またはヒトにおける生物学的応答または医薬応答を誘発する活性な化合物または医薬品の量を意味し、この量は、研究者、獣医師、臨床医、または内科医によって探求されており、この生物学的応答または医薬応答は、処置される疾患、状態、または障害の症状の軽減を含む。
【００４３】
用語「組成物」は、特定の量で特定の成分を含む生成物、およびその特定の量の特定の成分の組み合わせから直接的にかまたは間接的に生じる任意の生成物を包含することを意図する。
【００４４】
用語「薬学的に受容可能な塩」は、１種以上の化合物の塩のことをいう、適切な薬学的に受容可能な化合物の塩は、酸付加塩を含み、例えば、薬学的に受容可能な酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、安息香酸、酢酸、クエン酸、酒石酸、リン酸、炭酸など）の溶液とこの化合物の溶液との混合によって形成され得る。この化合物が１つ以上の酸部分を保持する場合、薬学的に受容可能な塩は、この化合物の溶液を薬学的に受容可能な塩基（例えば、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、テトラアルキル水酸化アンモニウム、炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、アンモニア、アルキルアミンなど）の溶液で処理することによって形成され得る。
【００４５】
用語「薬学的に受容可能なキャリア」は、化合物の所望の投薬形態を調製するために使用される媒体をいう。薬学的に受容可能なキャリアとしては、以下が挙げられ得る：１種以上の溶媒、希釈剤、または他の液体ビヒクル；分散助剤または懸濁助剤；界面活性剤；等張剤；増粘剤または乳化剤；防腐剤；固形バインダー；潤滑剤；など。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｆｉｆｔｅｅｎｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、１９７５）およびＨａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ、第３版、Ａ．Ｈ．Ｋｉｂｂｅ編（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃ．２０００）は、薬学的組成物を処方するのに使用される種々のキャリアおよびその調製のための公知の技術を開示する。
【００４６】
用語「薬学的に受容可能なエステル」は、生理学的に関連する条件下で加水分解して、化合物またはその塩を生成するエステルをいう。適切なエステル群の例示的な例としては、ギ酸エステル、酢酸エステル、プロピオン酸エステル、酪酸エステル、コハク酸エステル、およびコハク酸エチルエステルが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４７】
用語「クライアントタンパク質（ｃｌｉｅｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ）」は、シャペロン（例えば、Ｈｓｐ９０）と相互作用するタンパク質をいう。１つの局面において、シャペロンとの相互作用は、適切な折り畳みまたは安定化および維持のいずれかのために有用であるかまたは必要とされる。別の局面において、このシャペロンは、機能レセプター複合体の核を形成する。これらの局面の両方において、シャペロンとの相互作用は、直接的であり得るかまたは１種以上の他のタンパク質を介して媒介され得る。以下の表１は、Ｈｓｐ９０のクライアントタンパク質の例示的なリストを提供する。用語「クライアンテル（ｃｌｉｅｎｔｅｌｅ）」は、シャペロンに対するクライアントタンパク質の完全なセットをいう。
【００４８】
（表１．Ｈｓｐ９０  クライアントタンパク質の例示的なリスト）
クライアントタンパク質                          機能
ステロイドホルモンレセプター
グルココルチコイドレセプター                    リガンド−媒介性遺伝子転写
エストロゲンレセプター                          リガンド−媒介性遺伝子転写
アンドロゲンレセプター                          リガンド−媒介性遺伝子転写
プロゲステロンレセプター                        リガンド−媒介性遺伝子転写
プロテインキナーゼ
ｃ−ＳＲＣ、ｖ−ＳＲＣ                          シグナル伝達
ＬＣＫ                                          Ｔ細胞発生および機能
ＷＥＥ１                                        細胞周期制御（Ｇ２）
ＭＹＴ１                                        細胞周期制御（Ｇ２）
ＥｒｂＢ２（Ｈｅｒ−２）                        シグナル伝達
ＥＧＦＲ（ＥｒｂＢ１）                          シグナル伝達
ＦＰＳ／ＦＥＳ                                  細胞増殖
ｃ−ＲＡＦ−１、ｖ−ＲＡＦ−１                  ＭＡＰＫシグナル伝達
ＭＥＫ                                          ＭＡＰＫシグナル伝達
カゼインキナーゼ２                              多面性キナーゼ
ＣＤＫ４                                        細胞周期制御（Ｇ１）
ＡＫＴ（ＰＫＢ）                                ＰＩ３キナーゼシグナル伝達
デスドメインキナーゼ  ＲＩＰ                    ＴＮＦ媒介性壊死
Ｂｃｒ−ＡＢＬ                                  骨髄性白血病病因
ＰＩＭ−１                                      サイトカイン媒介性増殖
ＭＯＫ                                        ＭＡＰＫシグナル伝達
Ｐｏｌｏ−１キナーゼ（ＰＬＫ）                細胞周期制御（Ｇ２／Ｍ）
フォーカルアドヒージョンキナーゼ（ＦＡＫ）    アクチンベース細胞運動
ｃ−ＭＥＴ                              ＨＧＦ／ＳＦ−ＭＥＴ運動性シグナル伝達
ｅＩＦ２キナーゼ                          転写調節
他のクライアントタンパク質
変異体ｐ５３                          細胞周期チェックポイントタンパク質変異体
Ｂ型肝炎逆転写酵素                        ウイルス転写
ｈＴＥＲＴ（テロメラーゼサブユニット）    細胞死、老化
三量体Ｇタンパク質のβγサブユニット      シグナル変換
内皮ＮＯＳ                                ＮＯ合成
カルシニュリン                            Ｃａ２＋依存性シグナル伝達
チューブリン                              微小管形成
ＨＩＦ−１α                              低酸素誘導性新脈管形成
網膜芽腫タンパク質                        細胞周期制御（Ｇ１／Ｓ）
腫瘍壊死因子レセプター１                  ＴＮＦ媒介性アポトーシス
嚢胞性線維症膜貫通コンダクタンス調節因子  イオンチャネル／嚢胞性線維症
免疫グロブリン鎖                          免疫応答
ファンコーニ貧血タンパク質                造血
アポタンパク質Ｂ                          アテローム硬化症
アリール炭化水素レセプター                遺伝子転写
ＳＶ４０  Ｔ抗原                          ウイルスオンコジーン
本発明の１つの局面において、ゲルダナマイシン（ｇｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎ）アナログは、以下：
【００４９】
【化２】
2005515164.tif 000002
に提供される式（Ｉ）を有し、Ｒ１は、ＭｅＯ、（ＣＨ２）３ＮまたはＲ９−ＮＨであり、ここでＲ９は、Ｈ、置換または非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、置換または非置換のＣ１〜Ｃ６アルケニル、置換または非置換のＣ１〜Ｃ６アルキニル、置換または非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、ピペリジニル、Ｎ−アルキルピペリジニル、ヘキサヒドロピラニル、フルフリル、テトラヒドロフルフリル、ピロリジニル、Ｎ−アルキルピロリジニル、ピペラジニルアミノ、Ｎ−アルキルピペラジニル、モルホリニル、Ｎ−アルキルアジリジニルメチル、（１−アザビシクロ［１．３．０］ヘキサ−１−イル）エチル、２−（Ｎ−メチル−ピロリジン−２−イル）エチル、２−（４−イミダゾリル）エチル、２−（１−メチル−４−イミダゾリル）エチル、２−（１−メチル−５−イミダゾリル）エチル、２−（４−ピリジル）エチルおよび３−（４−モルホリノ）−１−プロピルからなる群から選択されるか、またはＲ６は、Ｈであり、そしてＲ１およびＲ５は、一緒になって式ＮＨ−Ｚ−Ｏの基を形成し、ここでＺは、１〜６個の炭素原子および０〜２個の窒素原子から構成されるリンカーであり、ここでＯは、Ｒ５の位置で結合され；Ｒ２は、Ｈ、ハロゲン、ＯＲ１０、ＮＨＲ１０、ＳＲ１０、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され、ここでＲ１０は、置換または非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、置換または非置換のＣ１〜Ｃ６アルケニル、置換または非置換のＣ１〜Ｃ６アルキニルおよび置換または非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキルからなる群から選択され；Ｒ３は、Ｈ、ＯＨまたはＯＭｅであり；Ｒ４は、ＨまたはＭｅであり；Ｒ５は、ＯＨまたはＯ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２ＮＨ２であり、そしてＲ６は、Ｈであるか、またはＲ５およびＲ６は一緒になって＝Ｏまたは＝Ｎ−ＯＲ１１を形成し、ここでＲ１１は、Ｈ、置換または非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、置換または非置換のＣ１〜Ｃ６アルケニル、置換または非置換のＣ１〜Ｃ６アルキニル、置換または非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールからなる群から選択され；Ｒ７はＨであり、そしてＲ８はＨまたはＯＨであるか、またはＲ７およびＲ８は一緒になって結合を形成し；そしてＸはＯまたは結合であり、ただし、Ｒ３はＨであり、Ｒ４はＭｅであり、そしてＲ７はＨであり、そしてＲ８はＨであるか、またはＲ７およびＲ８は一緒になって結合を形成し、Ｒ６はＨでありそしてＲ１およびＲ５は一緒になって式ＮＨ−Ｚ−Ｏの基を形成し、ここで、Ｚは、１〜６個の炭素原子および０〜２個の窒素原子から構成されるリンカーであり、ここでＯは、Ｒ５の位置で結合されるか、またはＲ１は、（ＣＨ２）３ＮまたはＲ９−ＮＨであり、ここでＲ９は、ピペリジニル、Ｎ−アルキルピペリジニル、ヘキサヒドロピラニル、フルフリル、テトラヒドロフルフリル、ピロリジニル、Ｎ−アルキルピロリジニル、ピペラジニルアミノ、Ｎ−アルキルピペラジニル、モルホリニル、Ｎ−アルキルアジリジニルメチル、（１−アザビシクロ［１．３．０］ヘキサ−１−イル）エチル、２−（Ｎ−メチル−ピロリジン−２−イル）エチル、２−（４−イミダゾリル）エチル、２−（１−メチル−４−イミダゾリル）エチル、２−（１−メチル−５−イミダゾリル）エチル、２−（４−ピリジル）エチルおよび３−（４−モルホリノ）−１−プロピルからなる群から選択され；そしてここでＲ３はＨであり、そしてＲ４はＭｅであり、Ｒ７はＨであり、そしてＲ８はＯＨである。
【００５０】
１つの実施形態において、式（Ｉ）を有する化合物が提供され、ここで、Ｒ１は（ＣＨ２）３ＮまたはＲ９−ＮＨであり、ここでＲ９は、ピペリジニル、Ｎ−アルキルピペリジニル、ヘキサヒドロピラニル、フルフリル、テトラヒドロフルフリル、ピロリジニル、Ｎ−アルキルピロリジニル、ピペラジニルアミノ、Ｎ−アルキルピペラジニル、モルホリニル、Ｎ−アルキルアジリジニルメチル、（１−アザビシクロ［１．３．０］ヘキシ−１−イル）エチル、２−（Ｎ−メチル−ピロリジン−２−イル）エチル、２−（４−イミダゾリル）エチル、２−（１−メチル−４−イミダゾリル）エチル、２−（１−メチル−５−イミダゾリル）エチル、２（４−ピリジル）エチルおよび３−（４−モルホリノ）−１−プロピルからなる群から選択され；Ｒ２は、Ｈ、ハロゲン、ＯＲ１０、ＮＨＲ１０、ＳＲ１０、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され、ここでＲ１０は、置換または非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、置換または非置換のＣ１〜Ｃ６アルケニル、置換または非置換のＣ１〜Ｃ６アルキニルおよび置換または非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキルからなる群から選択され；Ｒ３は、Ｈ、ＯＨまたはＯＭｅであり；Ｒ４は、ＨまたはＭｅであり；Ｒ５は、ＯＨまたはＯ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２ＮＨ２であり、そしてＲ６は、Ｈであるか、またはＲ５およびＲ６は一緒になって＝Ｏまたは＝Ｎ−ＯＲ１１を形成し、ここでＲ１１は、Ｈ、置換または非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、置換または非置換のＣ１〜Ｃ６アルケニル、置換または非置換のＣ１〜Ｃ６アルキニル、置換または非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールからなる群から選択され；Ｒ７はＨであり、そしてＲ８はＨまたはＯＨであるか、またはＲ７およびＲ８は一緒になって結合を形成し；そしてＸはＯまたは結合である。
【００５１】
１つの実施形態において、式（Ｉ）を有する化合物が提供され、ここで、Ｒ１（ＣＨ２）３ＮまたはＲ９−ＮＨであり、ここでＲ９は、ピペリジニル、Ｎ−アルキルピペリジニル、ヘキサヒドロピラニル、フルフリル、テトラヒドロフルフリル、ピロリジニル、Ｎ−アルキルピロリジニル、ピペラジニルアミノ、Ｎ−アルキルピペラジニル、モルホリニル、Ｎ−アルキルアジリジニルメチル、（１−アザビシクロ［１．３．０］ヘキシ−１−イル）エチル、２−（Ｎ−メチル−ピロリジン−２−イル）エチル、２−（４−イミダゾリル）エチル、２−（１−メチル−４−イミダゾリル）エチル、２−（１−メチル−５−イミダゾリル）エチル、２（４−ピリジル）エチルおよび３−（４−モルホリノ）−１−プロピルからなる群から選択され、Ｒ２はＨであり；Ｒ３はＨ、ＯＨまたはＯＭｅであり；Ｒ４は、ＨまたはＭｅであり；Ｒ５は、ＯＨまたはＯ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２ＮＨ２であり、そしてＲ６は、Ｈであるか、またはＲ５およびＲ６は一緒になって＝Ｏまたは＝Ｎ−ＯＲ１１を形成し、ここでＲ１１は、Ｈ、置換または非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、置換または非置換のＣ１〜Ｃ６アルケニル、置換または非置換のＣ１〜Ｃ６アルキニル、置換または非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールからなる群から選択され；Ｒ７はＨであり、そしてＲ８はＨまたはＯＨであるか、またはＲ７およびＲ８は一緒になって結合を形成し；そしてＸはＯまたは結合である。
【００５２】
１つの実施形態において、改善された可溶性を有するゲルダナマイシンアナログが提供され、このゲルダナマイシンアナログは、式（Ｉ）を有する化合物を提供するためのゲルダナマイシンの化学的操作から得られ、ここで、Ｒ１（ＣＨ２）３ＮまたはＲ９−ＮＨであり、ここでＲ９は、Ｈ、置換または非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、置換または非置換のＣ１〜Ｃ６アルケニル、置換または非置換のＣ１〜Ｃ６アルキニル、置換または非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、ピペリジニル、Ｎ−アルキルピペリジニル、ヘキサヒドロピラニル、フルフリル、テトラヒドロフルフリル、ピロリジニル、Ｎ−アルキルピロリジニル、ピペラジニルアミノ、Ｎ−アルキルピペラジニル、モルホリニル、Ｎ−アルキルアジリジニルメチル、（１−アザビシクロ［１．３．０］ヘキサ−１−イル）エチル、２−（Ｎ−メチル−ピロリジン−２−イル）エチル、２−（４−イミダゾリル）エチル、２−（１−メチル−４−イミダゾリル）エチル、２−（１−メチル−５−イミダゾリル）エチル、２−（４−ピリジル）エチルおよび３−（４−モルホリノ）−１−プロピルからなる群から選択され；Ｒ２は、Ｈ、ハロゲン、ＯＲ１０、ＮＨＲ１０、ＳＲ１０、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され、ここでＲ１０は、置換または非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、置換または非置換のＣ１〜Ｃ６アルケニル、置換または非置換のＣ１〜Ｃ６アルキニルおよび置換または非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキルからなる群から選択され；Ｒ３はＨであり；Ｒ４はメチルであり；Ｒ５は、ＯＨまたはＯ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２ＮＨ２であり、そしてＲ６は、Ｈであるか、またはＲ５およびＲ６は一緒になって＝Ｏまたは＝Ｎ−ＯＨを形成し、Ｒ７およびＲ８はＨであるか、またはＲ７およびＲ８は一緒になって結合を形成し；そしてＸはＯまたは結合である。
【００５３】
本発明の別の実施形態において、式（Ｉ）を有する化合物が提供され、ここで：Ｒ１はＲ９−ＮＨであり、ここで、Ｒ９は、エチル、２−（ジメチルアミノ）エチル、２−フルオロエチル、２，２−ジフルオロエチル、２−（Ｎ−メチルピロリジン−２−イル）エチル、２−（４−イミダゾリル）エチル、２−（１−メチル−４−イミダゾリル）エチル、２−（１−メチル−５−イミダゾリル）エチル、２−（４−ピリジル）エチル、３−（４−モルホリノ）−１−プロピル、３−（ジメチルアミノ）−１−プロピル、３−（ジメチルアミノ）−２−プロピル、２−（ジメチルアミノ）−１−プロピル、およびシクロプロピル−メチルからなる群から選択され；Ｒ２はＨであり；Ｒ３はＨであり；Ｒ４はメチルであり；Ｒ５は、ＯＨまたはＯ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２ＮＨ２であり、そしてＲ６は、Ｈであるか、またはＲ５およびＲ６は一緒になって＝Ｏまたは＝Ｎ−ＯＨを形成し；Ｒ７およびＲ８はＨであるか、またはＲ７およびＲ８は一緒になって結合を形成し；そしてＸはＯまたは結合である。
【００５４】
本発明の別の実施形態において、以下の構造：
【００５５】
【化３】
2005515164.tif 000003
を有する化合物が提供される。
【００５６】
別の実施形態において、式（Ｉ）を有するゲルダナマイシンアナログが提供され、ここで、Ｒ１はＯＭｅであり；Ｒ２はＨであり；Ｒ３はＨ、ＯＨ、またはＯＭｅであり；Ｒ４はＨまたはメチルであり；Ｒ５はＯＨであり、そしてＲ６はＨであり；Ｒ７はＨであり、そしてＲ８はＨまたはＯＨであるか、あるいはＲ７およびＲ８は、一緒になって結合を形成し；そしてＸは結合であり、ただし、ゲルダナマイシンおよび４，５−ジヒドロゲルダナマイシンは含まれない。
【００５７】
本発明の他の実施形態は、以下の式を有する化合物を提供する：
【００５８】
【化４】
2005515164.tif 000004
本発明の他の実施形態において、上記のゲルダナマイシンアナログは、可溶基の化学付加のための開始物質として働く。１つの実施形態において、１５−ヒドロキシゲルダナマイシンが誘導体化され、式（Ｉ）を有する化合物を提供し、ここで：Ｒ１は（ＣＨ２）３ＮまたはＲ９−ＮＨであり、ここで、Ｒ９は、Ｈ、置換または非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、置換または非置換のＣ１〜Ｃ６アルケニル、置換または非置換のＣ１〜Ｃ６アルキニル、置換または非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、ピペリジニル、Ｎ−アルキルピペリジニル、ヘキサヒドロピラニル、フルフリル、テトラヒドロフルフリル、ピロリジニル、Ｎ−アルキルピロリジニル、ピペラジニルアミノ、Ｎ−アルキルピペラジニル、モルホリニル、Ｎ−アルキルアジリジニルメチル、（１−アザビシクロ［１．３．０］ヘキサ−１−イル）エチル、２−（Ｎ−メチル−ピロリジン−２−イル）エチル、２−（４−イミダゾリル）エチル、２−（１−メチル−４−イミダゾリル）エチル、２−（１−メチル−５−イミダゾリル）エチル、２−（４−ピリジル）エチルおよび３−（４−モルホリノ）−１−プロピルからなる群から選択され；Ｒ３はＯＨであり；Ｒ４はメチルであり；Ｒ５はＯＨまたはＯ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２ＮＨ２であり、そしてＲ６はＨであるか、またはＲ５およびＲ６は一緒になって＝Ｏまたは＝Ｎ−ＯＨを形成し；そしてＲ７およびＲ８は、一緒になって結合を形成し；そしてＸは、Ｏまたは結合である。
【００５９】
本発明の別の実施形態において、１５−ヒドロキシゲルダナマイシンが誘導体化され、式（Ｉ）を有する化合物を提供し、ここで：Ｒ１は（ＣＨ２）３ＮまたはＲ９−ＮＨであり、ここで、Ｒ９は、アリル、エチル、２−（ジメチルアミノ）エチル、２−フルオロエチル、２，２−ジフルオロエチル、２−（Ｎ−メチルピロリジン−２−イル）エチル、２−（４−イミダゾリル）エチル、２−（１−メチル−４−イミダゾリル）エチル、２−（１−メチル−５−イミダゾリル）エチル、２−（４−ピリジル）エチル、３−（４−モルホリノ）−１−プロピル、３−（ジメチルアミノ）１−プロピル、３−（ジメチルアミノ）−２−プロピル、２−（ジメチルアミノ）−１−プロピル、およびシクロプロピルメチルからなる群から選択され；Ｒ２はＨ；Ｒ３はＯＨであり；Ｒ４はメチルであり；Ｒ５はＯＨまたはＯ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２ＮＨ２であり、そしてＲ６はＨであるか、またはＲ５およびＲ６は一緒になって＝Ｏまたは＝Ｎ−ＯＨを形成し；そしてＲ７およびＲ８は、一緒になって結合を形成し；そしてＸは、Ｏまたは結合である。
【００６０】
別の実施形態において、以下の式：
【００６１】
【化５】
2005515164.tif 000005
を有する１５−ヒドロキシゲルダナマイシンアナログが提供される。
【００６２】
１つの実施形態において、２８−デスメチルゲルダナマイシンが誘導体化され、式（Ｉ）を有する化合物を提供し、ここで：Ｒ１は（ＣＨ２）３ＮまたはＲ９−ＮＨであり、ここで、Ｒ９は、Ｈ、置換または非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、置換または非置換のＣ１〜Ｃ６アルケニル、置換または非置換のＣ１〜Ｃ６アルキニル、置換または非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、ピペリジニル、Ｎ−アルキルピペリジニル、ヘキサヒドロピラニル、フルフニル、テトラヒドロ−フルフニル、ピロリジニル、Ｎ−アルキルピロリジニル、ピペラジニルアミノ、Ｎ−アルキルピペラジニル、モルホリニル、Ｎ−アルキルアジリジニルメチル、（１−アザビシクロ［１．３．０］ヘキサ−１−イル）エチル、２−（Ｎ−メチルピロリジン−２−イル）エチル、２−（４−イミダゾリル）エチル、２−（１−メチル−４−イミダゾリル）エチル、２−（１−メチル−５−イミダゾリル）エチル、２−（４−ピリジル）エチル、および３−（４−モルホリノ）−１−プロピルからなる群から選択され；Ｒ２は、Ｈ、ハロゲン、ＯＲ１０、ＮＨＲ１０、ＳＲ１０、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され、ここでＲ１０は、置換または非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、置換または非置換のＣ１〜Ｃ６アルケニル、置換または非置換のＣ１〜Ｃ６アルキニルおよび置換または非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキルからなる群から選択され；Ｒ３はＨであり；Ｒ４はＨであり；Ｒ５はＯＨまたはＯ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２ＮＨ２であり、そしてＲ６はＨであるか、またはＲ５およびＲ６は一緒になって＝Ｏまたは＝Ｎ−ＯＨを形成し；そしてＲ７およびＲ８は、一緒になって結合を形成し；そしてＸは、Ｏまたは結合である。
【００６３】
本発明の別の実施形態において、２８−デスメチルゲルダナマイシンが誘導体化され、式（Ｉ）を有する化合物を提供し、ここで：Ｒ１は（ＣＨ２）３ＮまたはＲ９−ＮＨであり、ここで、Ｒ９はアリル、エチル、２−（ジメチルアミノ）エチル、２−フルオロエチル、２，２−ジフルオロエチル、２−（Ｎ−メチルピロリジン−２−イル）エチル、２−（４−イミダゾリル）エチル、２−（１−メチル−４−イミダゾリル）エチル、２−（１−メチル−Ｓ−イミダゾリル）エチル、２−（４−ピリジル）エチル、３−（４−モルホリノ）−１−プロピル、３−（ジメチルアミノ）−１−プロピル、３−（ジメチルアミノ）−２−プロピル、２−（ジメチルアミノ）−１−プロピルおよびシクロプロピルメチルからなる群から選択され；Ｒ２は、Ｈであり；Ｒ３はＨであり；Ｒ４はＨであり；Ｒ５はＯＨまたはＯ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２ＮＨ２であり、そしてＲ６はＨであるか、またはＲ５およびＲ６は一緒になって＝Ｏまたは＝Ｎ−ＯＨを形成し；そしてＲ７およびＲ８は、一緒になって結合を形成し；そしてＸは、Ｏまたは結合である。
【００６４】
別の実施形態において、以下の式：
【００６５】
【化６】
2005515164.tif 000006
を有する２８−デスメチルゲルダナマイシンアナログが提供される。
【００６６】
別の実施形態において、４，５−ジヒドロ−５−ヒドロキシゲルダナマイシンが誘導体化され、式（Ｉ）を有する化合物を提供し、ここで：Ｒ１は（ＣＨ２）３ＮまたはＲ９−ＮＨであり、ここで、Ｒ９は、Ｈ、置換または非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、置換または非置換のＣ１〜Ｃ６アルケニル、置換または非置換のＣ１〜Ｃ６アルキニル、置換または非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、ピペリジニル、Ｎ−アルキルピペリジニル、ヘキサヒドロピラニル、フルフニル、テトラヒドロ−フルフニル、ピロリジニル、Ｎ−アルキルピロリジニル、ピペラジニルアミノ、Ｎ−アルキルピペラジニル、モルホリニル、Ｎ−アルキルアジリジニルメチル、（１−アザビシクロ［１．３．０］ヘキサ−１−イル）エチル、２−（Ｎ−メチルピロリジン−２−イル）エチル、２−（４−イミダゾリル）エチル、２−（１−メチル−４−イミダゾリル）エチル、２−（１−メチル−５−イミダゾリル）エチル、２−（４−ピリジル）エチル、および３−（４−モルホリノ）−１−プロピルからなる群から選択され；Ｒ２は、Ｈ、ハロゲン、ＯＲ１０、ＮＨＲ１０、ＳＲ１０、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され、ここでＲ１０は、置換または非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、置換または非置換のＣ１〜Ｃ６アルケニル、置換または非置換のＣ１〜Ｃ６アルキニルおよび置換または非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキルからなる群から選択され；Ｒ３はＨであり；Ｒ４はメチルであり；Ｒ５はＯＨまたはＯ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２ＮＨ２であり、そしてＲ６はＨであるか、またはＲ５およびＲ６は一緒になって＝Ｏまたは＝Ｎ−ＯＨを形成し；そしてＲ７は、Ｈであり；Ｒ８は、ＯＨであり；そしてＸは、Ｏまたは結合である。
【００６７】
本発明の別の実施形態において、４，５−ジヒドロ−５−ヒドロキシゲルダナマイシンは、式（Ｉ）を有する化合物を提供するために、誘導体化される。ここで、Ｒ１は（ＣＨ２）３ＮまたはＲ９−ＮＨであり、ここで、Ｒ９は、アリル、エチル、２−（ジメチルアミノ）エチル、２−フルオロエチル、２，２−ジフルオロエチル、２−（Ｎ−メチルピロリジン−２−イル）エチル、２−（４−イミダゾリル）エチル、２−（１−メチル−４−イミダゾリル）エチル、２−（１−メチル−５−イミダゾリル）エチル、２−（４−ピリジル）エチル、３−（４−モルホリノ）−１−プロピル、３−（ジメチルアミノ）−１−プロピル、３−（ジメチルアミノ）−２−プロピル、２−（ジメチルアミノ）−１−プロピル、およびシクロプロピルメチルからなる群より選択され；Ｒ２はＨであり；Ｒ３はＨであり；Ｒ４はメチルであり；Ｒ５はＯＨまたはＯ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２ＮＨ２であり、そしてＲ６はＨであるか、またはＲ５およびＲ６は一緒になって＝Ｏまたは＝Ｎ−ＯＨを形成し；Ｒ７はＨであり；Ｒ８はＯＨであり；そしてＸはＯまたは単結合である。
【００６８】
別の実施形態において、以下の式
【００６９】
【化７】
2005515164.tif 000007
を有する４，５−ジヒドロ−５−ヒドロキシゲルダナマイシンアナログが提供される。
【００７０】
本発明の別の局面において、構造が束縛された（ｃｏｎｓｔｒａｉｎ）ゲルダナマイシンアナログが提供される。１つの実施形態において、式（Ｉ）を有する化合物が提供され、ここで、Ｒ１およびＲ５は一緒になって式ＮＨ−Ｚ−Ｏの基を形成し、ここで、Ｚは１〜６個の炭素原子、および０〜２個の窒素原子を含むリンカーであり、ここで、ＯはＲ５の位置で結合され；Ｒ２は、Ｈ、ハロゲン、ＯＲ１０、ＮＨＲ１０、ＳＲ１０、アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択され、ここで、Ｒ１０は置換または非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、置換または非置換のＣ１〜Ｃ６アルケニル、置換または非置換のＣ１〜Ｃ６アルキニル、置換または非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキルからなる群より選択され、Ｒ３はＨまたはＯＨであり；Ｒ４はＨまたはメチルであり；Ｒ７はＨであり、そしてＲ８はＨもしくはＯＨであるか、またはＲ７およびＲ８は一緒になって単結合を形成し；そしてＸはＯまたは単結合である。
【００７１】
本発明の１つの実施形態において、式（Ｉ）を有する化合物が提供され、ここで、Ｒ１およびＲ５は一緒になって、式ＮＨ−（ＣＨ２）４−Ｏ、ＮＨ−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２−ＯまたはＮＨ−ＣＨ２ＣＣＣＨ２−Ｏの基を形成し；Ｒ２はＨであり；Ｒ３はＨ、ＯＨまたはＯＭｅであり；Ｒ４はＨまたはメチルであり；Ｒ７はＨであり、そしてＲ８はＨもしくはＯＨであるか、またはＲ７およびＲ８は一緒になって単結合を形成し；そしてＸはＯまたは単結合である。
【００７２】
本発明の別の実施形態において、式（Ｉ）を有する化合物が提供され、ここで、Ｒ１およびＲ５は一緒になって式ＮＨ−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２−Ｏの基を形成し；Ｒ２はＨであり；Ｒ３はＨ、ＯＨまたはＯＭｅであり；Ｒ４はＨまたはメチルであり；Ｒ７はＨであり、そしてＲ８はＨもしくはＯＨであるか、またはＲ７およびＲ８は一緒になって単結合を形成し；そしてＸはＯまたは単結合である。
【００７３】
本発明の別の実施形態において、式（Ｉ）を有する化合物が提供され、これらは以下の構造を有する：
【００７４】
【化８】
2005515164.tif 000008
別の実施形態において、上記の水溶性アナログは、向上した溶解性およびＨｓｐ９０に対する向上した特異性の両方を有するゲルダナマイシンアナログを提供するような構造的束縛に供される。水溶性が乏しいことは、ゲルダナマイシンおよび１７−ＡＡＧの臨床有用性を制限する主要な要因である。化合物の水溶性の向上を、化合物の脂肪親和性を低下させるために、その化合物に可溶化（ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｉｎｇ）官能基を含む基を付加することかまたはその化合物から疎水性基を除去することのいずれかのよる、本発明の方法に従って、達成し得る。可溶化官能基を含む代表的な基は、図２に示され、そしてこれらとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：２−（ジメチルアミノエチル）アミノ、ピペリジニル、Ｎ−アルキルピペリジニル、ヘキサヒドロピラニル、フルフリル、テトラヒドロフルフリル、ピロリジニル、Ｎ−アルキルピロリジニル、ピペラジニルアミノ、Ｎ−アルキルピペラジニル、モルホリニル、Ｎ−アルキルアジリジニルメチル、（１−アザシクロ［１．３．０］ヘクス−１−イル）エチル、２−（Ｎ−メチルピロリジン−２−イル）エチル、２−（４−イミダゾリル）エチル、２−（１−メチル−４−イミダゾリル）エチル、２−（１−メチル−５−イミダゾリル）エチル、２−（４−ピリジル）エチル、および３−（４−モルホリノ）−１−プロピル。
【００７５】
可溶化基は、ゲルダナマイシンのアミンとの反応によりゲルダナマイシンアナログに、追加される。これは、スキーム１に図示され、そして実施例１に例示されたアミンによって１７−メトキシ基の置換を生じる。（Ｓｃｈｎｕｒら、（１９９５）「Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ｐｒｏｄｕｃｔ  ｐ１８５ｅｒｂＢ−２  ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  Ｖｉｖｏ  ｂｙ  Ｇｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎ  ａｎｄ  Ｄｉｈｙｄｒｏｇｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ」Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３８、３８０６−３８１２；Ｓｃｈｎｕｒら、（１９９５）「ｅｒｂＢ−２  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｇｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ：Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  Ａｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ」Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３８，３８１３−３８２０；Ｓｃｈｎｕｒら、「Ａｎｓａｍｙｃｉｎ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ａｓ  ａｎｔｉｏｎｃｏｇｅｎｅ  ａｎｄ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ａｇｅｎｔｓ」、米国特許第５，９３２，６５５号（これらの全ては、本明細書中で参考として援用される）。可溶化官能基を有する代表的なアミンとしては、以下が挙げられる：２−（ジメチルアミノ）−エチルアミン、４−アミノピペリジン、４−アミノ−１−メチルピペリジン、４−アミノヘキサヒドロピラン、フルフリルアミン、テトラヒドロフルフリルアミン、３−（アミノメチル）テトラヒドロフラン、２−（アミノ−メチル）ピロリジン、２−（アミノメチル）−１−メチルピロリジン、１−メチルピペラジン、モルホリン、１−メチル−２（アミノメチル）アジリジン、１−（２−アミノエチル）−１−アザビシクロ−［１．３．０］ヘキサン、１−（２−アミノエチル）ピペラジン、４−（２−アミノエチル）モルホリン、１−（２−アミノ−エチル）ピロリジン、２−（２−アミノエチル）ピリジン、２−フルオロエチルアミン、２，２−ジフルオロエチルアミンなど。
【００７６】
（スキーム１）
【００７７】
【化９】
2005515164.tif 000009
類似の可溶化基は、本発明の方法に従う可溶化置換基を含むアミンを用いて、１９−ブロモ−ゲルダナマイシンまたはアナログを処置することによって導入され得、１９−アミノ−置換ゲルダナマイシンアナログを生じる。この１９−ブロモ誘導体は、適切なブロモ化試薬（例えば、過臭化臭化ピリジニウム）を用いてゲルナダマイシンアナログを処理する際に、形成される（Ｓｃｈｎｕｒら、（１９９５）「Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３８、３８０６−３８１２；本明細書中で参考として援用される）。本発明の方法に従い、パラジウム触媒の存在下でアリールボロン酸との、１９−ブロモゲルダナマイシンの反応は、スキーム２に図示されるように１９−アリール置換ゲルダナマイシンを与える。ボロン酸（例えば、フェニルボロン酸、（４−ジメチル−アミノ）フェニル−ボロン酸、４−ピリジルボロン酸、４−メトキシフェニルボロン酸、２−フリルボロン酸、および４−（ジメチルアミノメチル）−フェニルボロン酸など）もまた使用され得る。
【００７８】
（スキーム２）
【００７９】
【化１０】
2005515164.tif 000010
本発明の別の実施形態において、ゲルダナマイシンアナログを酸化して、スキーム３に図示されるように、対応する１１−オキソゲルダナマイシンを生成する。
【００８０】
（スキーム３）
【００８１】
【化１１】
2005515164.tif 000011
１１−ＯＨの酸化より生じる１１−オキソゲルダナマイシンアナログは、ヒドロキシルアミンまたはアルコキシルアミンとの反応によって、１１−オキシミノアナログに転換される。
【００８２】
本発明の別の実施形態において、ゲルダナマイシンアナログを過酸化酸（例えば、３−クロロペルオキシ安息香酸（ｍＣＰＢＡ））を用いて処理して、スキーム３に図示されるように、８，９−エポキシドを生成する。別の局面において、本発明は、ゲルダナマシンポリケチド合成酵素の生合成遺伝子クラスターの、遺伝子操作された形態、前出の遺伝子クラスターを含むベクター、このベクターを含む宿主細胞、ならびにこの宿主細胞を使用するゲルダナマイシンアナログの生成のための方法を、提供する。
【００８３】
本発明の１つの実施形態において、２−メチルマロニル−ＣｏＡの代わりにマロニル−ＣｏＡに特異的な遺伝子を有するゲルダナマイシンＰＫＳ遺伝子のモジュール１中のアシルトランスフェラーゼドメインの置換は、２８−デスメチル−ゲルダナマイシンの形成を生じる。このドメイン入れ換えは、異種性ＰＫＳ遺伝子（例えば、ラパマイシン、チロシンまたはＦＫ５２０ＰＫＳ遺伝子など）由来のマロニル−ＣｏＡ特異的アシルトランスフェラーゼドメインを、ゲルダナマイシンＰＫＳ遺伝子座に、ゲルダナマイシン産生株への相同組み換え（選択可能な抗生物質耐性遺伝子によって支援される）によって導入し、次いで二重クロスオーバー（ｄｏｕｂｌｅ  ｃｒｏｓｓｏｖｅｒ）事象（ここで、野生型アシルトランスフェラーゼドメインが、マロニル−ＣｏＡに特異的なアシルトランスフェラーゼドメインに置換される）から生じた組み換え体を単離することによって、作製される。この詳細は、以下の実施例５に提供される。
【００８４】
本発明の別の実施形態において、ゲルダナマイシンＰＫＳ遺伝子のモジュール１におけるアシルトランスフェラーゼドメインは、Ｒｅｅｖｅｓら「Ａｌｔｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ａ  ｍｏｄｕｌａｒ  ｐｏｌｙｋｅｔｉｄｅ  ｓｙｎｔｈａｓｅ  ａｃｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ｄｏｍａｉｎ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｓｉｔｅ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ」、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２００１、４０：１５４６４−１５４７０、および表題「Ａｌｔｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ａ  ｍｏｄｕｌａｒ  ＰＫＳ  ＡＴ  ｄｏｍａｉｎ」の米国特許出願第６０／３１０，７３０（これは、本明細書中で参考として援用される）に記載されるような方法に従って、変異誘発される。この詳細は、以下の実施例６に提供される。
【００８５】
本発明の別の実施形態において、モジュール６（これは、ＤＨおよびＫＲドメインの両方を有する）の還元カセットのコード配列は、ＫＲドメインのみを有する還元カセットのコード配列で置換される。この詳細な説明は、以下の実施例７において提供される。
【００８６】
本発明の別の実施形態において、本発明の方法に従って、野生型ドメインの部位特異的変異によって、ゲルダナマイシンＰＫＳ遺伝子のモジュール６におけるデヒドラーゼ（ｄｅｈｙｄｒａａｓｅ）の不活性化は、４，５−ジヒドロ−５−ヒドロキシゲルダナマイシンの産生を生じる。この詳細は、以下の実施例８に提供される。
【００８７】
本発明の別の実施形態において、ＡＴドメインの末端の間のモジュール６におけるヌクレオチド配列の実質的な部分は、４，５−ジヒドロ−５−ヒドロキシゲルダナマイシンを提供するように欠失される。この詳細は、以下の実施例９に提供される。
【００８８】
本発明の別の実施形態において、モジュール１のデヒドラターゼドメインは、モジュール６について、上記のように置換されるかまたは不活性化して、１５−ヒドロキシ−ゲルダナマイシンを提供する。この詳細は、以下の実施例１０に提供される。
【００８９】
本発明の別の実施形態において、本発明の方法に従って、野生型ドメインの部位特異的変異によって、ゲルダナマイシンＰＫＳ遺伝子のモジュール１におけるデヒドラターゼの不活性化は、１５−ヒドロキシゲルダナマイシンの産生を生じる。この詳細は、以下の実施例１１に提供される。
【００９０】
ネイティブなゲルダナマイシン生産体以外の宿主細胞において、本発明の方法に従って調製された、ゲルダナマイシン遺伝子クラスター、またはゲルダナマイシン遺伝子クラスターの変異されたバージョンを発現することも可能である。ＰＫＳ遺伝子の異種性発現のための方法、ならびにこれら遺伝子の発現およびポリケチドの産生に適切な宿主細胞は、例えば、以下に記載される：米国特許第５，８４３，７１８号および同第５，８３０，７５０号；ＰＣＴ公開ＷＯ０１／３１０３５およびＷＯ０１／２７３０６；ならびに米国特許出願第１０／０８７，４５１号；同６０／＿＿，＿＿＿号、（発明者ＰｆｅｉｆｅｒおよびＫｈｏｓｌａによる、表題「Ｐｒｏｃｅｓｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｅ．ｃｏｌｉ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ６−ｄｅｏｘｙｅｒｙｔｈｒｏｎｏｌｉｄｅ  Ｂ」（事務所処理番号３０２２６．００））；および同第６０／＿＿，＿＿号（発明者Ｋｅａｌｅｙ、ＤａｙｅｍおよびＳａｎｔｉによる、表題「Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ｐａｔｈｗａｙｓ  ｆｏｒ  Ｓｔａｒｔｅｒ  Ｕｎｉｔｓ  ｉｎ  Ｐｏｌｙｋｅｔｉｄｅ  Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｉｎ  Ｅ．Ｃｏｌｉ」（事務所処理番号３００８８．００）（これらの各々がは本明細書中で参考として援用される）。
【００９１】
本発明の方法に従うデヒドラターゼドメインの不活性化はまた、正常にゲルダナマイシンを産生する生物のランダムな変異誘発によって得られ得る。この例の場合、産生生物の胞子を、化学的変異誘発剤（例えば１−メチル−３−ニトロ−１−ニトロソグアニジン（ＭＮＮＧ）、ジメチルスルフェートなど）を用いるか、またはまたは変異誘発性レベルの照射（例えば、紫外線）によるかのいずれかで、処理し得る。次いで、生存する胞子を適切な培地上で増殖させ、そして得られたクラスターを、所望される、新規のゲルダナマイシンアナログの存在について、分析する（例えば、ＬＣ質量分析）。Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓのランダムな変異誘発の方法は、Ｋｉｅｓｅｒら、「Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ」、Ｔｈｅ  Ｊｏｈｎ  Ｉｎｎｅｒｓ，Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，Ｎｏｒｗｉｃｈ（２０００）（これは本明細書中で参考として援用される）に記載される。
【００９２】
本発明の方法に従って、ゲルダナマイシンＰＫＳにおいて他のアシルトランスフェラーゼドメインの置換を使用して、デスメチルアナログまたはデスメトキシアナログのそれぞれを作製し得、そして他のデヒドラターゼドメインの不活性バージョンでの置換を使用して、対応するジヒドロ−ヒドロキシアナログを作製し得る。このようなアナログは、それらがより少ない親油性置換基を有する（２８−デスメチルゲルダナマイシン）か、またはさらなる親水性置換基を有する（４，５−ジヒドロ−５−ヒドロキシゲルダナマイシンまたは１５−ヒドロキシゲルダナマイシン）ので、より水溶性であることが期待される。
【００９３】
上記のような本発明の方法に従ってゲルダナマイシンＰＫＳの遺伝子操作により作製されたゲルダナマイシンアナログを使用することによって、前出の化学的形質転換体を使用して、これらのアナログを、より水溶性で、より強力で、より特異的なＨｓｐ９０インヒビターへと転換し得る。従って、このような化合物は、これらの投与の際にＣｒｅｍｏｐｈｏｒｅ（登録商標）のような毒性ビヒクルを使用する必要性を解消し得、そして向上した選択性および低減した副作用を示し得る。本発明の１つの実施形態において、遺伝子操作により調製されたゲルダナマイシンアナログは、上記のスキーム１に図示されるように、アミンと反応され得る。
【００９４】
１１−Ｏ−アリル−１７−アリルアミノ−１７−デスメトキシ−ゲルダナマイシンまたは類似のアナログの環を形成するオレフィンメタセシスは、本発明の方法に従って、構造的に束縛されたベンゾキノンアンサマイシン構造を生成する。本発明の１つの実施形態において、１７−ＡＡＧをアリル化試薬で処理すること（例えば、ｔｅｒｔ−ブチルカルボネートおよびパラジウム触媒）は、スキーム４に図示され、そして実施例２に例示されるように、１１−Ｏ−アリル−１７−アリルアミノ−１７−デスメトキシ−ゲルダナマイシンを生成する。
【００９５】
【化１２】
2005515164.tif 000012
アリルアミン以外のアミン（例えば、ブト−３−エン−１−イルアミンおよびペント−４−エン−１−イルアミン）での１７−メトキシ基の置換から生じる関連ゲルダナマイシンアナログの反応は、結果的に、本発明の方法に従って、対応する１７−ブテニルアミノ−１１−Ｏ−アリルアナログおよび１７−ペンテニルアミノ−１１−Ｏ−アリルアナログの形成を生じる。オレフィンメタセシス触媒、（例えば、ベンジリデンビス（トリシクロヘキシルホスフィン）ルテニウムジクロライド）を用いたこれら１１−Ｏ−アリル化合物の処理は、スキーム５に示されるように、炭素鎖を介して１１位および１７位の連結、ならびにゲルダナマイシンのコンホメーションの束縛を生じる。これは、以下の実施例３に例示される。
【００９６】
（スキーム５）
【００９７】
【化１３】
2005515164.tif 000013
本発明の方法に従って、１１−Ｏ−基および１７−Ｎ−基の変更は、リンカー鎖の長さのバリエーションを可能とする。従って、１１−Ｏ−アリル−１７−アリルアミノ−１７−デスメトキシ−ゲルダナマイシンの使用は、４炭素リンカーを生じ、そして１１−Ｏ−アリル−１７−（ブト−３−エン−１−イルアミノ）−１７−デスメトキシ−ゲルダナマイシンの使用は、５炭素リンカーを生じ、そして１１−Ｏ−アリル−１７−（ペント−４−エン−１−イルアミノ）−１７−デスメトキシ−ゲルダナマイシンの使用は、６炭素リンカーを生じる。リンカーの炭素−炭素二重結合は、必要に応じて、還元によって（例えば、ジイミドを使用して）還元されて飽和したリンカーを提供し得る。
【００９８】
アルキニルリンカーは、本発明の方法に従って、リンカーの１末端にアミノ基を含有し、そして他の末端に置換可能な基（例えば、ハロゲンまたはスルホネートエステル）を含有する二官能性アルキレンを用いて、ゲルダナマイシンおよびゲルダナマイシンアナログを処理することによって、調製され得る。この二官能性リンカーとのゲルダナマイシンまたはアナログの反応は、最初に、アミンによる１７−メトキシ基の置換が生じる。続く塩基処理は、スキーム６に図示されるような１１−ヒドロキシルのアルキル化を生じる。
【００９９】
（スキーム６）
【０１００】
【化１４】
2005515164.tif 000014
上記のように、リンカー長の変更は、この鎖の中の炭素原子数におけるバリーションにより達成され得る。
【０１０１】
本発明の別の局面において、ベンゾキノンアンサマイシンを含む組成物を使用して、所望されない細胞の増殖または過剰増殖によって特徴付けられる疾患または状態を処置する。１つの実施形態において、この疾患は癌である。別の実施形態において、この疾患は狭窄症または再狭窄である。別の実施形態において、この疾患は乾癬である。別の実施形態において、この疾患は神経変性疾患である。好ましい実施形態において、このベンゾキノンアンサマイシンは、式（Ｉ）、１７−ＡＡＧまたは１７−ＤＭＡＧを有する化合物である。
【０１０２】
本発明の別の局面において、ベンゾキノンアンサマイシンは、第２の薬剤との組み合わせ療法において使用される。１つの実施形態において、第２の薬剤は、Ｈｓｐ９０クライアントプロテイン（ｃｌｉｅｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ）のインヒビターである。適切なＨｓｐ９０クライアントプロテインとしては、表１に列挙されるものが挙げられるがこれらに限定されない。
【０１０３】
本発明の１つの実施形態において、ベンゾキノンアンサマイシンは、プロテインキナーゼインヒビターとの組み合わせ療法において使用される。適切なプロテインキナーゼインヒビターとしては、表２に列挙される化合物が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１０４】
（表２．プロテインキナーゼインヒビターの例示的な一覧）
【０１０５】
【表２】
2005515164.tif 000015
表２に列挙されたプロテインキナーゼインヒビターは、これらの化学型（ｃｈｅｍｏｔｙｐｅ）に従って分類され得、これらとしては、以下が挙げられる：キナゾリン類、特に、４−アニリノキナゾリン類（例えば、Ｉｒｅｓｓａ（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ；Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシ−６−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］−４−キナゾリンアミン）およびＴａｒｃｅｖａ（Ｒｏｃｈｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ；Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−４−キナゾリンアミン一塩酸塩））；フェニルアミノ−ピリミジン類（例えば、Ｇｌｅｅｖｅｃ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ；４−［（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル］−Ｎ−［４−メチル−３−［［４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］アミノ］フェニル］ベンズアミド））；ピロロピリミジン類−およびピラゾロピリミジン類（例えば、ＢＩＢＸ  １３８２（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ；Ｎ８−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−Ｎ２−（１−メチル−４−ピペリジニル）−ピリミド［５，４−ｄ］ピリミジン−２，８−ジアミン））；インドール類およびオキシインドール類（例えば、Ｓｅｍａｘｉｎｉｂ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ；３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）メチレン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オン））；ベンジリデンマロノニトリル類；フラボン類（例えば、フラボピリドール（Ａｖｅｎｔｉｓ；２−（２−クロロフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−［（３Ｓ，４Ｒ）−３−ヒドロキシ−１−メチル−４−ピペリジニル］−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン））；スタウロスポリン類（例えば、ＣＥＰ−７０１（Ｃｅｐｈａｌｏｎ））；抗体類（例えば、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ））；ならびにリボザイム類（例えば、Ａｎｇｉｏｚｙｍｅ（Ｒｉｂｏｚｙｍｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ））。代表的なプロテインキナーゼインヒビターの構造は、図４に与えられる。
【０１０６】
本発明の別の実施形態において、ベンゾキノンアンサマイシンは、微小管安定化剤（パクリタキセル、エポシロン（ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅ）、ジスコデルモリド（ｄｉｓｃｏｄｅｒｍｏｌｉｄｅ）、およびラウリマリド（ｌａｕｌｉｍａｌｉｄｅ）を含む）との組み合わせ療法において使用される。好ましい実施形態において、ベンゾキノリンアンサマイシンは、式（Ｉ）を有する化合物、１７−ＡＡＧ、または１７−ＤＭＡＧである。
【０１０７】
別の局面において、本発明は、所望されない細胞増殖または細胞過増殖によって特徴付けられる疾患または状態の処置のための組み合わせ療法を提供する。治療における２つ以上の薬物の組み合わせは、以下の３つの結果の１つを生じ得る：（１）相加的、すなわち、組み合わせの効果が、単独投与の場合の各薬物の講和の総和と等しい；（２）相乗的、すなわち、組み合わせの効果が、単独投与の場合の各薬物の効果の総和より大きい；または（３）拮抗的、すなわち、組み合わせの効果が、単独投与の場合の各薬物の効果の総和より小さい。本発明の１つの実施形態において、被験体は、まず、実質的に毒性用量以下のプロテインキナーゼインヒビターで処置される。プロテインキナーゼインヒビターの投与に対する、実質的に効果的な応答を発生させるのに十分な期間の待機後、ベンゾキノンアンサマイシンの相乗的用量が投与される。この投薬スケジュールを使用して、２つの化合物の相加的効果ではなく相乗的効果が達成される。本発明の１つの実施形態において、プロテインキナーゼインヒビターは、表２に列挙される化合物であり、そしてベンゾキノンアンサマイシンは、式（Ｉ）を有する化合物、１７−ＡＡＧ、または１７−ＤＭＡＧである。本発明の別の実施形態において、プロテインキナーゼインヒビターは、連邦医薬品局によって、癌の独立型治療薬として認可された薬物であり、そしてベンゾキノンアンサマイシンは、式（Ｉ）を有する化合物、１７−ＡＡＧ、または１７−ＤＭＡＧである。１つの好ましい実施形態において、細胞傷害性剤は、Ｉｒｅｓｓａであり、そしてベンゾキノンアンサマイシンは、１７−ＡＡＧまたは１７−ＤＭＡＧである。
【０１０８】
本発明の別の実施形態において、被験体はまず、第１の毒性用量以下のプロテインキナーゼインヒビターを用いて処置される。プロテインキナーゼインヒビターに対する実質的に効果的な応答を発生させるのに十分な期間の待機後、第２の毒性用量以下のプロテインキナーゼインヒビターと共に相乗的用量のベンゾキノンアンサマイシンを含有する処方物が投与される。一般的に、プロテインキナーゼインヒビターに対する実質的に効果的な応答を発生させるのに十分な、適当な期間は、プロテインキナーゼインヒビターの薬物動態学に依存し、そしてプロテインキナーゼインヒビター単独を使用する療法の臨床的試行の間に決定される。本発明の１つの実施形態において、プロテインキナーゼインヒビターに対する実質的に効果的な応答を発生させるのに十分な期間は、１時間と９６時間との間である。本発明の別の実施形態において、プロテインキナーゼインヒビターに対する実質的に効果的な応答を発生させるのに十分な期間は、２時間と４８時間との間である。本発明の別の実施形態において、プロテインキナーゼインヒビターに対する実質的に効果的な応答を発生させるのに十分な期間は、４時間と２４時間との間である。
【０１０９】
プロテインキナーゼインヒビターは、表２に列挙されるものから選択されるが、これらに限定されない。実施例４および図３Ａにおいて下記されるように、１７−ＡＡＧでの処置の前の、ＥＧＦＲインヒビターＩｒｅｓｓａでの培養ＳＫＢｒ３細胞の前処理は、Ｉｒｅｓｓａの効果の相乗的増強を生じる。対照的に、逆順の投与または同時投与は、相加的である。類似した結果が、図３Ｂに示されるように、Ｉｒｅｓｓａおよび１７−ＤＭＡＧを用いて得られた。従って、最適な相乗効果を得るために、プロテインキナーゼインヒビターをまず提供し、プロテインキナーゼインヒビターに対する実質的に効果的な応答を発生させるのに十分な期間待機し、次いで、ベンゾキノンアンサマイシンを提供することが必要である。  別の実施形態において、被験体は、毒性用量以下のベンゾキノンアザマイシンでまず治療される。ベンゾキノンアザマイシンに対する実質的に効果的な応答を発生させるのに十分な期間の待機後、相乗的投薬量の微小管安定化剤が投与される。この投薬スケジュールを使用して、２つの化合物の相加的な効果ではなく相乗的な効果が達成される。予想に反して、Ｍｕｎｓｔｅｒら、「Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｓｐ９０  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ａｎｓａｍｙｃｉｎｓ  ｓｅｎｓｉｔｉｚｅｓ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ  ｔｏ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｉｎ  ａｎ  ＲＢ−ａｎｄ  ｓｃｈｅｄｕｌｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｍａｎｎｅｒ」、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００１）７：２２２８−２２３６から見て、１７−ＡＡＧでの処置前の、微小管安定化剤（パクリタキセル）での培養ＳＫＢｒ３細胞の前処理は、実施例４および図５に下記されるように、相加的効果を生じる。対照的に、逆順の投与は、相乗的効果を生じる。微小管安定化剤の例示的な例としては、パクリタキセル、ドセタキセル、エポシロン、ジスコデルモリド、およびラウリマリドが挙げられるがこれらに限定されない。ベンゾキノンアンサマイシンは、式（Ｉ）を有する化合物、１７−ＡＡＧ、または１７−ＤＭＡＧであり得る。本発明の１つの実施形態において、微小管安定化剤は、パクリタキセルおよびエポシロン、ジスコデルモリドまたはアナログ、あるいは、ラウリマリドまたはアナログである。本発明の好ましい実施形態において、微小管安定化剤は、エポシロンＤである。
【０１１０】
本発明の別の実施形態において、組み合わせ療法の第２の薬剤は、連邦医薬品局によって、癌の独立型治療薬として認可された薬物であり、そしてベンゾキノンアンサマイシンは、式（Ｉ）を有する化合物であるか、あるいは、１７−ＡＡＧ、または１７−ＤＭＡＧである。適切な薬物の例示的な例としては、５−フルオロウラシル、メトトレキサート、ビンブラスチン、シクロホスファミド、メクロレタミン、クロラムブシル、メルファラン、イホスファミド、ブレオマイシン、マイトマイシンおよびドキソルビシンが挙げられるがこれらに限定されない。
【０１１１】
別の実施形態において、組み合わせ療法は、組み合わせ治療剤からの潜在的な副作用を軽減する薬剤または手順を包含し得る。下痢は、下痢止め剤（例えば、オピオイド類（例えば、コデイン、ジフェノキシラート、ジフェノキシン、およびロエラミド（ｌｏｅｒａｍｉｄｅ）））、次サリチル酸ビスマス、およびオクトレオチドで処置され得る。吐気および嘔吐は、制吐剤（例えば、デキサメタゾン、メトクロプラミド、ジフェニヒドラミン（ｄｉｐｈｅｎｙｈｙｄｒａｍｉｎｅ）、ロラゼパム、オンダンセトロン、プロクロルペラジン、チエチルペラジン、およびドロナビノール）で処置され得る。ポリエトキシ化ひまし油（例えば、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標））を含むこれらの組成物について、コルチコステロイド（例えば、デキサメタゾンおよびメチルプレドニゾロン）ならびに／あるいはＨ１アンタゴニスト（例えば、ジフェニルヒドラミンＨＣｌ）および／またはＨ２アンタゴニストでの前処置は、アナフィラキシーを軽減するために使用され得る。
【０１１２】
ベンゾキノリンアンサマイシンとの組み合わせ療法において使用される場合、第２の薬剤の用量は、第２の薬剤が単独の治療剤として使用される場合に観察される最大許容用量（ＭＴＤ）に基づいて決定される。本発明の１つの実施形態において、ベンゾキノリンアンサマイシンとの組み合わせ療法において使用される場合に、第２の薬剤の用量は、ＭＴＤである。本発明の別の実施形態において、ベンゾキノリンアンサマイシンとの組み合わせ療法において使用される場合に、第２の薬剤の用量は、ＭＴＤの１％とＭＴＤとの間である。本発明の別の実施形態において、ベンゾキノリンアンサマイシンとの組み合わせ療法において使用される場合に、第２の薬剤の用量は、ＭＴＤの５％とＭＴＤとの間である。本発明の別の実施形態において、ベンゾキノリンアンサマイシンとの組み合わせ療法において使用される場合に、第２の薬剤の用量は、ＭＴＤの５％とＭＴＤの７５％との間である。本発明の別の実施形態において、ベンゾキノリンアンサマイシンとの組み合わせ療法において使用される場合に、第２の薬剤の用量は、ＭＴＤの２５％とＭＴＤの７５％との間である。
【０１１３】
ベンゾキノンアンサマイシンの使用は、より低い治療用量の第２の薬剤の使用を可能にし、従って、処置のための治療領域を有意に広くする。１つの実施形態において、第２の薬剤の治療用量は、少なくとも１０％減少される。別の実施形態において、第２の薬剤の治療用量は、１０〜２０％減少される。別の実施形態において、第２の薬剤の治療用量は、２０〜５０％減少される。別の実施形態において、第２の薬剤の治療用量は、５０〜２００％減少される。別の実施形態において、第２の薬剤の治療用量は、１００〜１０００％減少される。
【０１１４】
ある化合物についてのＭＴＤは、医薬分野および薬理学分野において公知である方法および材料を使用して（例えば、用量エスカレーション実験によって）決定される。１人以上の患者が、まず、低い用量の化合物（代表的に、インビトロ細胞培養実験の結果に治療的に基づいて治療的であると予想される用量の１０％）で処置される。この患者らは、毒性の発生を決定するために、ある期間観察される。毒性は、代表的に、以下の症状のうち１つ以上の観察として明示される：嘔吐、下痢、末梢神経障害、運動失調、好中球減少、または肝臓酵素の上昇。毒性が観察されない場合、用量は、２倍に増加され、そして患者は、再度、毒性の証拠について観察される。このサイクルは、毒性の証拠を生じる用量に到達するまで、繰り返される。許容されない毒性の開始のすぐ前の用量が、ＭＴＤとして採用される。
【０１１５】
組み合わせ療法において使用されるベンゾキノンアンサマイシンの相乗的用量は、ベンゾキノンアンサマイシンが単独の治療剤として使用される場合に観察される、最大許容用量に基づいて決定される。臨床試験は、１７−ＡＡＧについて４０ｍｇ／ｍ２のＭＴＤを決定した。本発明の１つの実施形態において、組み合わせ療法において使用される場合のベンゾキノンアンサマイシンの用量は、ＭＴＤである。本発明の別の実施形態において、組み合わせ療法において使用される場合のベンゾキノンアンサマイシンの用量は、ＭＴＤの１％とＭＴＤとの間である。本発明の別の実施形態において、組み合わせ療法において使用される場合のベンゾキノンアンサマイシンの用量は、ＭＴＤの５％とＭＴＤとの間である。本発明の別の実施形態において、組み合わせ療法において使用される場合のベンゾキノンアンサマイシンの用量は、ＭＴＤの５％とＭＴＤの７５％との間である。本発明の別の実施形態において、組み合わせ療法において使用される場合のベンゾキノンアンサマイシンの用量は、ＭＴＤの２５％とＭＴＤの７５％との間である。
【０１１６】
ベンゾキノンアンサマイシンおよびＨｓｐ９０クライアントプロテインインヒビターの投薬量は、組み合わせ療法において使用される場合、使用される化合物、処置される疾患または状態、および患者の個々の医学的状態に依存してさらなる最適化を必要とし得る。関連する因子としては、使用する特定の化合物の活性；被験体の年齢、体重、全般的健康状態、性別、および食事；投与時間および投与経路ならびに薬物の排出速度；ならびに処置される状態の重篤度が挙げられる。
【０１１７】
本発明は、１つ以上の活性薬物および薬学的に受容可能なキャリアの処方物である材料の組成物を提供する。１つの実施形態において、この処方物は、本発明の新規ベンゾキノンアンサマイシンアナログを含む。別の実施形態において、この処方物は、本発明の新規ベンゾキノンアンサマイシンアナログを、本発明の方法に従う組み合わせ療法における使用のためのＨｓｐ９０クライアントプロテインインヒビターとの混合物として含有する。これらの実施形態の両方において、活性化合物は、それらの遊離形態でか、または、薬学的に受容可能な誘導体（例えば、プロドラッグ、エステル、または塩）として適切な形態で存在し得る。
【０１１８】
組成物は、任意の適切な形態（例えば、固体形態、半固体形態、または液体形態）であり得る。Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，第５版，Ｌｉｐｐｉｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ（１９９１）（本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。一般的に、薬学的調製物は、外部適用、経腸的適用、または非経口的適用に適切な、有機または無機の、キャリアまたは賦形剤との混合物中に、活性成分として本発明の１つ以上の化合物を含有する。活性成分は、例えば、錠剤、小丸剤、カプセル剤、坐剤、腟坐薬、溶液、エマルジョン、懸濁液、および使用に適切な他の任意の形態のために、通常の非毒性の薬学的に受容可能なキャリアと調合され得る。使用され得るキャリアとしては、固体形態、半固体形態、または液状化形態での、水、グルコース、ラクトース、アカシアゴム、ゼラチン、マンニトール、スターチペースト、三ケイ酸マグネシウム、タルク、コーンスターチ、ケラチン、コロイド状シリカ、ジャガイモデンプン、尿素、および調製物の製造の際の使用に適切な他のキャリアが挙げられる。さらに、補助安定化剤、増粘剤、および着色剤ならびに香料が、使用され得る。
【０１１９】
１つの実施形態において、本発明の方法において有用な化合物を含む組成物は、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒｅ（登録商標）を含まない。Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒｅ（登録商標）（ＢＡＳＦ  Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ）は、ポリエトキシル化ヒマシ油（代表的には、低溶解性の薬物を処方する際に界面活性剤として使用される）である。しかし、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒｅ（登録商標）は、被験体に置いてアレルギー反応を起こし得るので、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒｅ（登録商標）を最少にするか、または排除する組成物が好ましい。
【０１２０】
適用可能である場合、本発明の方法において有用な化合物は、マイクロカプセルおよびナノ粒子として処方され得る。一般的なプロトコルは、例えば、Ｍｉｃｒｏｃａｐｓｕｌｅｓ  ａｎｄ  Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、Ｍａｘ  Ｄｏｎｂｒｏｗ（編）、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ（１９９２）および米国特許第５，５１０，１１８号；同第５，５３４，２７０号；および同第５，６６２，８８３号（これらは全て、本明細書中に参考として援用される）に記載される。これらの処方物は、体積に対する表面領域の比率を増加することによって化合物の経口送達を可能にするが、そうでなければ経口送達の影響を受けることはできない。
【０１２１】
本発明の方法において有用な化合物はまた、以前に低溶解性薬物について使用された他の方法を使用して処方され得る。例えば、この化合物は、ビタミンＥ、またはＰＣＴ公開ＷＯ  ９８／３０２０５およびＷＯ  ００／７１１６３に記載されるようなそのペグ化誘導体（これらの各々は、本明細書中に参考として援用される）と共に乳濁液を形成し得る。代表的には、本発明の方法において有用な化合物は、エタノールを含む（好ましくは１％ｗ／ｖより少ない）水溶液に溶解される。ビタミンＥまたはペグ化ビタミンＥが、添加される。次いで、エタノールが、除去され、静脈内投薬経路用または経口投薬経路用に処方され得る前乳濁液（ｐｒｅ−ｅｍｕｌｓｉｏｎ）を形成する。別の方法が、本発明の方法において有用な化合物をリポソーム内にカプセル化することに関する。薬物送達ビヒクルとしてリポソームを形成するための方法は、当該分野で周知である。適切なプロトコルとしては、別の比較的低溶解度の制癌剤であるパクリタキセルに関連する米国特許第５，６８３，７１５号；同第５，４１５，８６９号，および５，４２４，０７３号（これらは、本明細書中に参考として援用される）ならびにエポチロン（ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅ）Ｂに関連するＰＣＴ公開ＷＯ  ０１／１０４１２（これは、本明細書中に参考として援用される）に記載されるプロトコルが挙げられる。使用され得る種々の脂質のうちで、カプセル化リポソームを作製するために特に好ましい脂質としては、ホスファチジルコリンおよびポリエチレングリコール誘導体化ジステアリルホスファチジル−エタノールアミンが挙げられる。
【０１２２】
なお別の方法は、ポリマー（例えば、生体ポリマーまたは生体適合性（合成であるか、または天然に存在する）ポリマーのようなポリマー）を使用する、本発明の方法において有用な化合物を処方する工程を包含する。生体適合性ポリマーは、生物分解性および非生物分解性として分類され得る。生物分解性ポリマーは、化学的組成物、製造方法、および移植構造の機能としてインビボで分解する。合成ポリマーの例示的な例としては、ポリ無水物、ポリヒドロキシ酸（例えば、ポリ乳酸、ポリグリコール酸およびそれらのコポリマー）、ポリエステル、ポリアミド、ポリオルトエステルおよびいくつかのポリホスファゼンが挙げられる。天然に存在するポリマーの例示的な例としては、タンパク質および多糖（例えば、コラーゲン、ヒアルロン酸、アルブミン、およびゼラチン）が挙げられる。
【０１２３】
別の方法は、本発明の方法において有用な化合物を、水溶性を増大するポリマーに結合体化する工程を包含する。適切なポリマーの例としては、ポリエチレングリコール、ポリ−（ｄ−グルタミン酸）、ポリ−（ｌ−グルタミン酸）、ポリ−（ｌ−グルタミン酸）、ポリ−（ｄ−アスパラギン酸）、ポリ−（ｌ−アスパラギン酸）、ポリ−（ｌ−アスパラギン酸）およびそれらのコポリマーが挙げられる。約５，０００〜約１００，０００の間の分子量を有するポリグルタミン酸が好ましく、約２０，０００〜約８０，０００の間の分子量を有するポリグルタミン酸がより好ましく、そして約３０，０００〜約６０，０００の間の分子量を有するポリグルタミン酸が最も好ましい。このポリマーは、米国特許第５，９７７，１６３号（これは、本明細書中に参考として援用される）に本質的に記載されるプロトコルを使用して、本発明のゲルダナマイシン（ｇｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎ）の１つ以上のヒドロキシルにエステル連結を介して結合体化される。
【０１２４】
別の方法において、本発明の方法において有用な化合物は、モノクローナル抗体に結合体化される。この方法は、特異的な標的に対する本発明の化合物の標的化を可能にする。結合体化抗体の設計および使用に関する一般的なプロトコルは、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｂａｓｅｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ、Ｍｉｃｈａｅｌ  Ｌ．Ｇｒｏｓｓｂａｒｄ，編（１９９８）（これは、本明細書中に参考として援用される）に記載される。
【０１２５】
単回投薬形態を製造するために、キャリア物質と組み合され得る活性成分の量は、処置される被験体および特定の投与様式に依存して変動する。例えば、静脈内使用のための処方物は、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬの範囲、好ましくは約５ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬの範囲、そしてより好ましくは約１０ｍｇ／ｍＬの量の本発明の化合物を含む。静脈内組成物は、代表的には、使用前に通常の生理食塩水または５％デキストロース溶液で、約２倍と約３０倍との間で希釈される。
【０１２６】
本発明の１つの局面において、本発明の方法において有用な化合物は、癌を処置するために使用される。１つの実施形態において、本発明の化合物は、頭および頸部の癌（これらとしては、鼻腔の腫瘍、副鼻腔の腫瘍、鼻咽頭の腫瘍、口腔の腫瘍、中咽頭の腫瘍、喉頭の腫瘍、下咽頭の腫瘍、唾液腺の腫瘍、および傍神経節腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない）を処置するために使用される。別の実施形態において、本発明の化合物は、肝臓および胆嚢および胆管（ｂｉｌｉａｒｙ  ｔｒｅｅ）の癌、特に肝細胞癌腫を処置するために使用される。別の実施形態において、本発明の化合物は、腸の癌、特に結腸直腸癌を処置するために使用される。別の実施形態において、本発明の化合物は、卵巣癌を処置するために使用される。別の実施形態において、本発明の化合物は、小細胞肺癌および非小細胞肺癌を処置するために使用される。別の実施形態において、本発明の化合物は、乳癌を処置するために使用される。別の実施形態において、本発明の化合物は、肉腫（線維肉腫、悪性線維性組織球腫、胎児性横紋筋肉腫（ｒｈａｂｄｏｍｙｓｏｃａｒｃｏｍａ）、平滑筋肉腫（ｌｅｉｏｍｙｓｏｓａｒｃｏｍａ）、神経線維肉腫、骨肉腫、滑膜肉腫、脂肪肉腫および胞状軟部肉腫を含む）を処置するために使用される。別の実施形態において、本発明の化合物は、中枢神経系の新生物、特に脳の癌を処置するために使用される。別の実施形態において、本発明の化合物は、リンパ腫（ホジキンリンパ腫、リンパ形質細胞様リンパ腫、濾胞性リンパ腫、粘膜に関連したリンパ組織のリンパ腫、外套細胞リンパ腫、Ｂ系列大細胞型リンパ腫、バーキットリンパ腫、およびＴ細胞未分化大細胞型リンパ腫（Ｔ−ｃｅｌｌ  ａｎａｐｌａｓｔｉｃ  ｌａｒｇｅ  ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ）を含む）を処置するために使用される。
【０１２７】
別の実施形態において、本発明の方法において有用な化合物および組成物は、非癌性疾患の処置において、非常に選択的な活性を達成するために、他の薬剤と組み合わせて、細胞毒性レベル下で使用される。この実施形態において、本発明の方法において有用な化合物は、Ｈｓｐ９０クライアントタンパク質（次いで、第２の薬剤によって効果的に阻害される）の細胞レベルを低減するために使用される。Ｈｓｐ９０へのクライアントタンパク質の結合は、クライアントタンパク質を安定化し、そしてそれらを、活性化刺激に応答する用意が整った可溶性の不活性形態で維持する。Ｈｓｐ９０へのベンゾキノンアンサマイシンアナログの結合は、プロテアソームへのクライアントタンパク質の標的化、およびそれに続く分解を生じる。しかし、ステロイドレセプターの系について、Ｈｓｐ９０は、Ｈｓｐ７０、Ｈｓｐ４０、ｐ２３、ｈｉｐ、Ｈｓｐ５６、およびイムノフィリンのような他のいくつかのたんぱく質とともに機能的レセプター複合体の全体部分を形成する。Ｈｓｐ９０は、高アフィニティーホルモン結合配座にレセプターを維持することによって、ステロイドレセプターの活性を調節するようである。Ｈｓｐ９０へのゲルダナマイシンの結合は、複合体からのｐ２３の解離を生じ、そしてレセプターに結合するホルモンのレベルを低減するようである（Ｆｌｉｓｓら、（２０００）、「Ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  ｅｓｔｒｏｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｌｉｇａｎｄ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｂｙ  Ｈｓｐ９０」、Ｊ．Ｓｔｅｒｏｉｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．７５：２２３−３０；ＫｉｍｍｉｎｓおよびＭａｃＲａｅ（２０００）、「Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｔｅｒｏｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ：ａｎ  ｅｘａｍｐｌｅ  ｏｆ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｃｏｏｐｅｒａｔｉｏｎ  ａｍｏｎｇ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｈａｐｅｒｏｎｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ」、Ｃｅｌｌ  Ｓｔｒｅｓｓ  Ｃｈａｐｅｒｏｎｅｓ  ５：７６−８６）。
【０１２８】
従って、ゲルダナマイシン、ゲルダナマイシンアナログ、ラジシコル（ｒａｄｉｃｉｃｏｌ）などのようなＨｓｐ９０インヒビターは、ホルモンレセプターの機能を変更し、シグナル伝達経路に関連するタンパク質を標的とする、低レベルの第２の薬剤を使用して、関連するシグナル経路を阻害することを容易にするために、本発明の方法に従って使用され得る。このような組合せ療法は、所望の薬物のレベルを低減することによって、治療に伴う非特異的毒性を低減するために有用であり得る。
【０１２９】
別の実施形態において、本発明の方法において有用な化合物は、望ましくない細胞の過剰増殖（神経変性疾患、乾癬、狭窄、および再狭窄を含む）によって特徴づけられる非癌性疾患または非癌性状態を処置するために使用される。
【０１３０】
別の実施形態において、本発明の方法において有用な化合物は、望ましくない細胞の過剰増殖（神経変性疾患、乾癬、狭窄、および再狭窄を含む）によって特徴づけられる非癌性疾患または非癌性状態を処置するために、上記のような他の薬剤と組み合わせて使用される。この組合せ療法によって処置可能な非癌性疾患の具体的な例としては、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病などのような神経変性疾患が挙げられる。イムノフィリンＦＫＢＰ−５２が、種々のステロイドレセプター複合体の形成において、Ｈｓｐ９０に対するクライアントタンパク質として関与し、そして損傷したニューロンの再生において機能することの証拠がある（Ｇｏｌｄら、「Ｉｍｍｕｎｏｐｈｉｌｉｎ  ＦＫ５０６−Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ５２（Ｎｏｔ  ＦＫ５０６−Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  １２）Ｍｅｄｉａｔｅｓ  ｔｈｅ  Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ  Ａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ＦＫ５０６」、１９９９，Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ＆  Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．２８９：１２０２−１２１０）。従って、本発明の方法に従う、ゲルダナマイシン、ゲルダナマイシンアナログ、ラジシコルなどの、ＦＫＢＰ−５２と結合する第２の薬剤との組合せおよび／またはＦＫＢＰ−５２を阻害する第２の薬剤との組合せは、神経変性疾患を処置するために使用され得る。
【０１３１】
本発明の組合せ療法によって処置可能な非癌性疾患のさらなる例としては、細胞の過剰増殖（例えば、乾癬、狭窄、および再狭窄）によって特徴づけられる非癌性疾患が挙げられる。細胞増殖は、タンパク質チロシンキナーゼによって調節され、タンパク質チロシンキナーゼのうちの多くが、Ｈｓｐ９０に対するクライアントタンパク質であることが公知である。乾癬は、タンパク質チロシンキナーゼである上皮増殖因子レセプター（ＥＧＦＲ）に関連すると考えられており、そしてＥＧＦＲのインヒビターは、乾癬の処置剤として提案されている（Ｂｅｎ−ＢａｓｓａｔおよびＫｌｅｉｎ、「Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  Ｔｙｒｏｓｉｎｅ  Ｋｉｎａｓｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｐｓｏｒｉａｓｉｓ」、（２０００），Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｄｅｓ．６：９３３−９４２）。ゲルダナマイシンおよびハービマイシンは、ＥＧＦＲの成熟をブロックすることが示されている（Ｓａｋａｇａｍｉら、「Ｂｅｎｚｏｑｕｉｎｏｉｄ  ａｎｓａｍｙｃｉｎｓ（ｈｅｒｂｉｍｙｃｉｎ  Ａ  ａｎｄ  ｇｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎ）ｉｎｔｅｒｆｅｒｅ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅｓ」（１９９９）Ｃｅｌｌ  Ｓｔｒｅｓｓ  Ｃｈａｐｅｒｏｎｅｓ  ４：１９−２８）。従って、本発明の方法に従う、ゲルダナマイシンまたはゲルダナマイシンアナログの、ＥＧＦＲのインヒビターとの組合せは、乾癬を処置するために使用され得る。
【０１３２】
本発明の方法において有用な化合物はまた、狭窄および再狭窄（特に、ステントのようなインビボデバイスと関連した狭窄および再狭窄）を処置するために使用され得る。１つの実施形態において、本発明の方法において有用な化合物は、ステントおよび他の外科的移植可能デバイスをコーティングするために使用される。別の実施形態において、本発明の方法において有用な化合物は、ステント、カテーテル、人工装具、および他のインビボデバイスをコーティングするために、上記のような他の薬剤と組み合わせて使用される。
【０１３３】
本発明の詳細な説明は上記に提供され、以下の実施例は、本発明の例示を目的として提供され、本発明または特許請求の範囲を限定するように解釈されるものではない。
【実施例】
【０１３４】
（実施例１）
（１７−アルキルアミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシンの調製）
１７−アルキルアミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシンを調製するための基本手順は、以下のとおりである。ゲルダナマイシンアナログ（２５ｍｍｏｌ）を、不活性雰囲気下で３５０ｍＬの無水ＣＨ２Ｃｌ２に懸濁する。１０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中のアルキルアミン（５０ｍｍｏｌ）の溶液を、滴下する。１時間後、この混合物を、エバポレートして乾燥させ、そしてその残渣を、５０ｍＬのクロロホルム中に溶解し、そして６００ｍＬのヘキサンを添加することによって沈殿させる。濾過および減圧乾燥して生成物を得る。この生成物をＮＭＲおよびＬＣ／ＭＳによって特徴づける。この方法に従って調製される化合物としては、以下が挙げられる。
１７−アリルアミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシン；
１７−（２−（ジメチルアミノ）エチル）アミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシン；
１７−エチルアミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシン；
１７−プロピルアミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシン；
１７−ブチルアミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシン；
１７−（シクロプロピル）メチルアミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシン；
１７−シクロブチルアミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシン；
１７−（２−フェニルシクロプロピル）アミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシン；
１７−（２−フルオロエチル）アミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシン；
１７−（２，２−ジフルオロエチル）アミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシン；
１７−アゼチジニル−１７−デスメトキシゲルダナマイシン；
１７−アミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシン；
１７−（３−（ジメチルアミノ）プロピルアミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシン；
１７−（４−（ジメチルアミノ）ブチルアミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシン；
１７−（３−ジメチルアミノ）−２−プロピルアミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシン；
１７−（２−ジメチルアミノ）−１−プロピルアミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシン；
１７−（Ｎ−エチルピロリジン−２−ｙｌ）メチルアミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシン；
１７−（１−ピラジニル）エチルアミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシン；
１７−（２−ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ）エチルアミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシン；
１７−（Ｎ−メチルピロリジン−２−イル）エチルアミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシン；
１７−（３−（ジエチルアミノ）プロピルアミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシン；
１７−（３−（４−モルホリノ）プロピルアミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシン；
１７−（４−イミダゾリル）エチルアミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシン；
１７−（ｌ−メチル−４−イミダゾリル）エチルアミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシン；
１７−（ｌ−メチル−５−イミダゾリル）エチルアミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシン；
１７−（４−ピリジル）エチルアミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシン；
１７−（２−ヒドロキシエチル）アミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシン；
１７−（１−ヒドロキシメチル）プロピルアミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシン；
１７−（２−（ヒドロキシメチル）シクロヘキシル）アミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシン；
１７−（２−ジオキソラン−１−イル）エチルアミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシン；
１７−（３，３−ジメトキシプロピル）アミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシン；
１７−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エチルアミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシン；および
１７−（Ｎ−メチル  ２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エチルアミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシン
（実施例２）
（１１−Ｏ−アリル−１７−アルキルアミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシンの調製）
１１−Ｏ−アリル−１７−アルキルアミノ−１７−デスメトキシ−ゲルダナマイシンを調製するための基本手順は、以下のとおりである。１７−アルキルアミノ−１７−デスメトキシ−ゲルダナマイシンアナログ（１０ｍｍｏｌ）、アリル−ｔｅｒｔ−ブチルカーボネート（１４ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（０．１ｍｍｏｌ）、およびトリフェニルホスフィン（０．６７ｍｍｏｌ）を、不活性雰囲気下で６０ｍＬの、新しく蒸留した、空気を含まないテトラヒドロフランに溶解する。この混合物を、１６時間還流して加熱し、そして薄層クロマトグラフィーによってモニタリングする。完了時に、溶媒を減圧で除去し、そして生成物をシリカゲルクロマトグラフィーによって単離する。
【０１３５】
（実施例３）
（１１，１７−連結−１７−アミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシンの調製）
１１，１７−連結−１７−アミノ−１７−デスメトキシ−ゲルダナマイシンを調製するための基本手順は、以下のとおりである。１１−Ｏ−アリル−１７−アルキルアミノゲルダナマイシンアナログ（１０ｍｍｏｌ）、およびベンジリデン−ビス（トリシクロヘキシルホスフィン）ルテニウムジクロリド（５ｍｍｏｌ）を、不活性雰囲気下で２５０ｍＬの無水ＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、そしてこの反応物を、薄層クロマトグラフィーによってモニタリングする。２４時間後、この反応物を濃縮し、そしてその残渣をシリカゲルクロマトグラフィーによって精製する。
【０１３６】
（実施例４）
（ＳＫＢｒ３細胞におけるゲルダナマイシンアナログと細胞創傷性薬剤との相互作用）
ＳＫＢｒ３細胞株およびＨ３５８細胞株は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）から購入した。細胞を、１０％  ウシ胎仔血清を有するＭｃＣｏｙ’５Ａ培地中で維持した。１７−ＡＡＧおよび１７−ＤＭＡＧを、ＤＭＳＯ中に１０ｍＭで溶解し、そして−２０℃で保存した。
【０１３７】
細胞を、４０００細胞／ウェルで、不透明な壁で囲まれた９６ウェルマイクロタイタープレート中に２連で播種し、一晩付着させた。各々の薬物の連続的な希釈物を添加し、そして細胞を、７２時間インキュベートした。ＩＣ５０を、生存細胞の数と相関するＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を用いて決定した。
【０１３８】
薬物の組合せアッセイのために、細胞を、２連の９６ウェルプレート（４０００細胞／ウェル）に播種した。一晩のインキュベーションの後、細胞を、単独または組み合わせた薬物で処理した。各々の個々の薬物のＩＣ５０値に基いて、合わせた薬物での処理を、２つの薬物の一定の比で設定した（すなわち、それらのＩＣ５０の比に対応する）。３つの異なる処理スケジュールを用いた。第１の処理スケジュールは、１７−ＡＡＧと第２の細胞傷害性薬剤の両方に対する７２時間の同時曝露を用いた。第２のスケジュールでは、細胞を、１７−ＡＡＧまたは１７−ＤＭＡＧに対して、２４時間曝露した。次いで、第２の細胞傷害性薬剤を、細胞に添加し、そして４８時間インキュベートした。第三の処理スケジュールでは、細胞を、第２の細胞傷害性薬剤単独に２４時間曝露し、次いで、さらに１７−ＡＡＧまたは１７−ＤＭＡＧに４８時間添加した。細胞生存率を、蛍光アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）によって決定した。組合せ分析を、Ｃａｌｃｕｓｙｎソフト（Ｂｉｏｓｏｆｔ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）を用いて実施した。「組合せインデックス」（ＣＩ）は、組合せて投与した２つの薬物の効果の加算性の測定値をいい、以下の式に従って算出した：
ＣＩ＝［Ｄ］１／［Ｄｘ］１＋［Ｄ］２／［Ｄｘ］２
ここで、［Ｄ］１および［Ｄ］２は、組合せて、アッセイにおいてｘ％の応答を提供する、第１の薬物および第２の薬物の個々の濃度を表し、そして［Ｄｘ］１および［Ｄｘ］２は、単独で用いた場合、アッセイにおいてｘ％の応答を提供する、第１の薬物および第２の薬物の個々の濃度を表す。この式に従って、ＣＩ＝１は、組合せにおける２つの薬剤の単一相加効果を示し、それに対して、ＣＩ＜１は、相乗作用を示し、そしてＣＩ＞１は、２つの薬物の間の拮抗作用を示す。
【０１３９】
Ｉｒｅｓｓａに曝露した後の細胞への１７−ＡＡＧまたは１７−ＤＭＡＧの添加は、Ｉｒｅｓｓａの細胞傷害性を相乗的に増加させた（図３）。Ｉｒｅｓｓａの前に、細胞を１７−ＡＡＧまたは１７−ＤＭＡＧに曝露した場合、相加効果が検出された。細胞の１７−ＡＡＧまたは１７−ＤＭＡＧと同時にＩｒｅｓｓａとに対する曝露もまた、相加効果を生じた。従って、最適な相乗効果は、プロテインキナーゼインヒビターに細胞を曝露、次いでプロテインキナーゼインヒビターの効果を生じさせる時間の期間を待った後、ベンゾキノンアンサマイシンに曝露する場合にのみ観察される。
【０１４０】
対照的に、パクリタキセルに曝露した後の細胞への１７−ＡＡＧまたは１７−ＤＭＡＧの添加は、パクリタキセルの細胞傷害性を、相加的に増加させた（図５）。初めに細胞をパクリタキセルに曝露し、そしてその後に１７−ＡＡＧまたは１７−ＤＭＡＧで処理した場合、相乗効果が観察された。この場合、最適な相乗作用は、初めに細胞をベンゾキノンアンサマイシンに曝露し、次いでベンゾキノンアンサマイシンの効果を生じさせる時間の期間を待った後、微小管安定化剤に曝露する場合にのみ観察される。
【０１４１】
（実施例５）
（ＡＴドメイン置換による２８−デスメチルゲルダナマイシンの生成）
ゲルダナマイシンＰＫＳ遺伝子のモジュール１におけるアシルトランスフェラーゼドメインの、２−メチルマロニル−ＣｏＡの代わりにマロニル−ＣｏＡに特異的なＡＴドメインとの置換は、２８−デスメチル−ゲルダナマイシンを形成する。このドメイン置換は、選択可能な抗生物質耐性遺伝子の助けを借りたゲルダナマイシン生成株への相同組換えによって、異種のＰＫＳ遺伝子（例えば、ラパマイシン、チロシンまたはＦＫ５２０  ＰＫＳ遺伝子など）からゲルダナマイシンＰＫＳ遺伝子座にマロニル−ＣｏＡ特異的アシルトランスフェラーゼドメインを導入し、次いで野生型アシルトランスフェラーゼドメインが、マロニル−ＣｏＡ特異的なドメインで置換される二重交差現象から生じる組換体を単離することによって作製される。モジュール１のＡＴドメインは、配列番号１のおよそヌクレオチド１６２６〜２６７０にコードされている。この配列情報は、米国特許第６，３９９，７８９号；米国特許第６，４０３，７７５号；および米国特許第５，９６２，２９０号に記載される方法とともに、当業者が、モジュール１のネイティブＡＴドメインをマロニル−ＣｏＡ特異性を有するＡＴドメインで置換する組換ベクターを構築することを、可能とする。マロニル−ＣｏＡ特異性を有するＡＴドメインの適切な例は、以下に見出され得る：ラパマイシンＰＫＳ遺伝子（モジュール２、モジュール５、モジュール８、モジュール９、モジュール１１、モジュール１２およびモジュール１４）（米国特許第６，３９９，７８９号に記載）、ならびにチロシンＰＫＳ遺伝子（モジュール３およびモジュール７）（米国特許第５，８７６，９９１号に記載）；スピラマイシン遺伝子（モジュール１〜３およびモジュール７）（米国特許第５，９４５，３２０号に記載）；ＦＫ５２０遺伝子（モジュール３およびモジュール１０）（ＷＯ  ００／２０６０１に記載）；ピクロマイシン遺伝子（モジュール２）（ＷＯ  ９９／６１５９９に記載）；ナルボマイシン遺伝子（モジュール２）（米国特許第６，３０３，７６７号に記載）；アベルメクチン遺伝子（モジュール２）など。上記文書の各々は、参考として本明細書中に援用される。ネイティブ株がゲルダナマイシンを産生する条件下での、残存するゲルダナマイシン生合成遺伝子と一緒に、生じたハイブリッドＰＫＳを含む宿主細胞の発酵、続く培養液の抽出および精製は、２８−デスメチル−ゲルダナマイシンを提供する。
【０１４２】
（実施例６）
（部位指定変異誘発による２８−デスメチルゲルダナマイシンの作製）
ゲルダナマイシンＰＫＳ遺伝子のモジュール１中のアシルトランスフェラーゼドメインを、Ｒｅｅｖｅｓら、「Ａｌｔｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ａ  ｍｏｄｕｌａｒ  ｐｏｌｙｋｅｔｉｄｅ  ｓｙｎｔｈａｓｅ  ａｃｙｌｔｒａｎｓｅｒａｓｅ  ｄｏｍａｉｎ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｓｉｔｅ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ」Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２００１，４０：１５４６４−１５４７０、および米国特許出願番号６０／３１０，７３０，表題「Ａｌｔｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ａ  ｍｏｄｕｌａｒ  ＰＫＳ  ＡＴ  ｄｏｍａｉｎ」（参考として本明細書中で援用される）に記載される方法に従って変異誘発する。配列番号１中の２１９４位〜２２０５位のヌクレオチド配列ＴＡＣ−ＧＣＣ−ＴＣＣ−ＣＡＣ（配列番号４）でコードされるアミノ酸配列Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｈｉｓ（配列番号３）を、当業者に公知の方法を用いて変異誘発し、例えば、上記で引用したＲｅｅｖｅｓらの参考文献に記載されるように、ＣＡＣ−ＧＣＣ−ＴＴＣ−ＣＡＣ（配列番号６）へのヌクレオチド配列の変異誘発により、変異アミノ酸配列Ｈｉｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ（配列番号５）を生じる。ネイティブ株がゲルダナマイシンを産生する条件下での、残存するゲルダナマイシン生合成を遺伝子と一緒に、生じた変異誘発ＰＫＳを含む宿主細胞の発酵、続く培養液の抽出および精製は、２８−デスメチル−ゲルダナマイシンを提供する。
【０１４３】
（実施例７）
（還元的ドメインスワップによる４，５−ジヒドロ−５−ヒドロキシゲルダナマイシンの産生）
ＤＨドメインおよびＫＲドメインの両方を有する、モジュール６の還元カセットのコード配列を、ＫＲドメインのみを有する還元カセットのコード配列で置換する。この還元カセットは、ＡＴドメインの終端（配列番号２のおよそ２８０５位のヌクレオチド）と、ＡＣＰドメインの開始部分（配列番号２のおよそ６０２８位のヌクレオチド）との間の配列中に含まれる。この配列情報は、米国特許第６，３９９，７８９号；米国特許第６，４０３，７７５号；および米国特許第５，９６２，２９０号に記載される方法とともに、当業者が、モジュール６のネイティブ還元カセットを、ＫＲドメインのみをコードするカセットで置換する組換ベクターを構築することを、可能とする。ＫＲドメインのみをコードするカセットの適切な例は、米国特許第６，３９９，７８９号に記載されるようにエリスロマイシンＰＫＳ遺伝子およびラパマイシンＰＫＳ遺伝子で見出され得る。ネイティブ株がゲルダナマイシンを産生する条件下での、残存するゲルダナマイシン生合成遺伝子と一緒に、生じたハイブリッドＰＫＳを含む宿主細胞の発酵、続く培養液の抽出および精製は、４，５−ジヒドロ−５−ヒドロキシ−ゲルダナマイシンを提供する。
【０１４４】
（実施例８）
（部位指定変異誘発による４，５−ジヒドロ−５−ヒドロキシゲルダナマイシンの産生）
野生型ドメインの部位特異的変異誘発による、ゲルダナマイシンＰＫＳ遺伝子のモジュール６におけるデヒドラターゼドメインの不活性化は、４，５−ジヒドロ−５−ヒドロキシゲルダナマイシンを生じる。モジュール６のＤＨドメインは、配列番号２のおよそヌクレオチド２８０５〜４２７６にコードされている。２つの特定の配列が、ＤＨドメインの変異不活性化の標的となり得る。１つの実施形態において、ＤＨペプチドモチーフＨｉｓ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ（配列番号７）をコードするＤＮＡ配列（配列番号２のヌクレオチド２９５６〜２９８５）を、１番目の位置にヒスチジン以外のアミノ酸配列を有するペプチドを産生するように突然変異させる。ヒスチジンをコードするＣＡＣコドンを、例えば、配列番号８に例示するように、グルタミンをコードするＣＡＡまたはＣＡＧに変異させる。ネイティブ株がゲルダナマイシンを産生する条件下での、残存するゲルダナマイシン生合成遺伝子と一緒に、生じた変異誘発ＰＫＳを含む宿主細胞の発酵、続く培養液の抽出および精製は、４，５−ジヒドロ−５−ヒドロキシ−ゲルダナマイシンを提供する。
【０１４５】
（実施例９）
（欠失による４，５−ジヒドロ−５−ヒドロキシゲルダナマイシンの産生）
ＡＴドメインの終端（配列番号２のおよそ２８０５位のヌクレオチド）とＫＲドメインの開始部分（配列番号２のおよそ５２１２位のヌクレオチド）との間のモジュール６中のヌクレオチド配列の一部を欠失させ、４，５−ジヒドロ−５−ヒドロキシ−ゲルダナマイシンの生成のための、改変ＰＫＳを提供する。配列番号２のおよそ２８０５位と３２７０位との間のヌクレオチド配列を、ＡＴドメインとＫＲドメインとの間のおよそ４６５アミノ酸のリンカー領域を切除するように欠失させる。ネイティブ株がゲルダナマイシンを産生する条件下での、残存するゲルダナマイシン生合成遺伝子と一緒に、生じた改変ＰＫＳを含む宿主細胞の発酵、続く培養液の抽出および精製は、４，５−ジヒドロ−５−ヒドロキシ−ゲルダナマイシンを提供する。
【０１４６】
（実施例１０）
（還元的ドメインスワップによる１５−ヒドロキシゲルダナマイシンの産生）
モジュール１中の還元カセットは、ＡＴドメインの終端（配列番号１のおよそ２６７０位のヌクレオチド）とＡＣＰドメインの開始部分（配列番号１のおよそ５８９５位のヌクレオチド）との間の配列にコードされる。この配列情報は、米国特許第６，３９９，７８９号；米国特許第６，４０３，７７５号；および米国特許第５，９６２，２９０号に記載される方法とともに、当業者が、モジュール１のネイティブ還元カセットを、ＫＲドメインのみをコードするカセットで置換する組換ベクターを構築することを、可能とする。ＫＲドメインのみをコードするカセットの適切な例は、米国特許第６，３９９，７８９号に記載されるようにエリスロマイシンＰＫＳ遺伝子およびラパマイシンＰＫＳ遺伝子で見出され得る。ネイティブ株がゲルダナマイシンを産生する条件下での、残存するゲルダナマイシン生合成遺伝子と一緒に、生じたハイブリッドＰＫＳを含む宿主細胞の発酵、続く培養液の抽出および精製は、１５−ヒドロキシ−ゲルダナマイシンを提供する。
【０１４７】
（実施例１１）
（部位指定変異誘発による１５−ヒドロキシゲルダナマイシンの産生）
野生型ドメインの部位特異的変異誘発による、ゲルダナマイシンＰＫＳ遺伝子のモジュール１におけるデヒドラターゼドメインの不活性化は、１５−ヒドロキシゲルダナマイシンを生じる。モジュール１のＤＨドメインは、配列番号１のおよそヌクレオチド２６７０〜４１４０にコードされている。２つの特定の配列が、ＤＨドメインの変異不活性化の標的となり得る。１つの実施形態において、ＤＨペプチドモチーフＨｉｓ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ（配列番号９）をコードするＤＮＡ配列（配列番号１のヌクレオチド２８２１〜２８５０）を、１番目の位置にヒスチジン以外のアミノ酸を有するペプチドを産生するように変異させる。ヒスチジンをコードするＣＡＣコドンを、例えば、配列番号１０に例示するように、グルタミンをコードするＣＡＡまたはＣＡＧに変異させる。ネイティブ株がゲルダナマイシンを産生する条件下での、残存するゲルダナマイシン生合成遺伝子と一緒に、生じた変異誘発ＰＫＳを含む宿主細胞の発酵、続く培養液の抽出および精製は、１５−ヒドロキシ−ゲルダナマイシンを提供する。
【０１４８】
（実施例１２）
（８，９−エポキシ−８，９−ジヒドロゲルダナマイシン）
ジクロロメタン（５ｍＬ）中のゲルダナマイシン（１２０ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）の溶液に、８５％  ３−クロロペルオキシ安息香酸（９３ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を、室温で一晩攪拌した後、ＴＬＣは、反応が完了していることを示した。この反応混合物を、酢酸エチルで希釈し、そして次いで、硫酸ナトリウム水溶液、重炭酸水溶液、およびブラインで洗浄した。その有機溶液を、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、そしてエバポレートして乾燥させた。その粗製生成物を、シリカゲルを用いたフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、３０ｍｇの８，９−エポキシ−８，９−ジヒドロゲルダナマイシンを、黄色固形物として得た。この化合物を、ＮＭＲおよびＭＳ分光測定により特徴付けした。
【０１４９】
（実施例１３）
（８，９−エポキシ−１７−［２−（ジメチルアミノ）エチルアミノ］−８，９−ジヒドロ−１７−デメチオキシゲルダナマイシン（ｄｅｍｅｔｈｙｏｘｙｇｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎ））
１，２−ジクロロメタン（２ｍＬ）中の８，９−エポキシ−８，９−ジヒドロゲルダナマイシン（２０ｍｇ、０．０３５ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ，Ｎ−ジメチルエチレンジアミン（１０μＬ、０．０９ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を、室温で一晩攪拌した。この反応物を、酢酸エチルで希釈し、そして重炭酸水溶液、およびブラインで連続して洗浄することによってワークアップした。その有機溶液を、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、そしてエバポレートして乾燥させた。その粗製生成物を、Ｃ−１８カラムを用いたＨＰＬＣで精製し、１０ｍｇの８，９−エポキシ−１７−［２−（ジメチルアミノ）エチルアミノ］−８，９−ジヒドロ−１７−デメトキシゲルダナマイシンを、紫色固形物として得た。この化合物を、ＮＭＲおよびＭＳ分光測定により特徴付けした。
【０１５０】
（実施例１４）
（１７−［２−（ジメチルアミノ）エチルアミノ］−１７−デメチオキシゲルダナマイシン）
１，２−ジクロロメタン（４ｍＬ）中のゲルダナマイシン（６０ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）溶液に、Ｎ，Ｎ−ジメチルエチレンジアミン（２２μＬ、０．２ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を、室温で一晩攪拌した。この反応物を、酢酸エチルで希釈し、そして重炭酸水溶液およびブラインで、連続して洗浄した。その有機溶液を、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、そしてエバポレートして乾燥させた。その粗製生成物を、シリカゲルを用いたフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、５９ｍｇの１７−［２−（ジメチルアミノ）−エチルアミノ］−１７−デメチオキシゲルダナマイシンを、紫色固形物として得た。この化合物を、ＮＭＲおよびＭＳ分光測定により特徴付けした。
【０１５１】
（実施例１５）
（１７−［２−（ジメチルアミノ）エチルアミノ］−１１−オキソ−１７−デメチオキシゲルダナマイシン）
クロロホルム（５ｍＬ）中の１７−［２−（ジメチルアミノ）エチルアミノ］−１７−デメチオキシゲルダナマイシン（５０ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎピリオジネート（２０８ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を、１時間加熱して、還流した。この反応混合物を、酢酸エチル中に希釈し、そしてチオ硫酸ナトリウム水溶液、重炭酸水溶液およびブラインで、連続して洗浄した。その有機溶液を、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、そしてエバポレートして乾燥させた。その粗製生成物を、Ｃ−１８カラムを用いたＨＰＬＣで精製し、２６ｍｇの１７−［２−（ジメチルアミノ）エチルアミノ］−１１−オキソ−１７−デメチオキシゲルダナマイシンを、紫色固形物として得た。この化合物を、ＮＭＲおよびＭＳ分光測定により特徴付けした。
【０１５２】
（実施例１６）
（１７−［２−（ジメチルアミノ）エチルアミノ］−１１−オキソ−１７−デメチオキシゲルダナマイシン−１１−オキシム）
エタノール（４ｍＬ）中の１７−［２−（ジメチルアミノ）エチルアミノ］−１１−オキソ−１７−デメチオキシ（ｄｅｍｅｔｈｙｏｘｙ）−ゲルダナマイシン（３０ｍｇ、０．０４９ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（６０μＬ、０．４３ｍｍｏｌ）および塩酸ヒドロキシルアミン（３０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を、室温で３時間攪拌した後、ＴＬＣは、反応の完了を示した。エタノールをエバポレートした後、残渣をクロロホルムおよび水の中に溶解した。その有機層を、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、そしてエバポレートして乾燥させた。その粗製生成物を、シリカゲルを用いたフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、１０ｍｇの１７−［２−（ジメチルアミノ）エチルアミノ］−１１−オキソ−１７−デメチオキシゲルダナマイシン−１１−オキシムを、紫色固形物として得た。この化合物を、ＮＭＲおよびＭＳ分光測定により特徴付けした。
【図面の簡単な説明】
【０１５３】
【図１】図１は、種々の天然に存在するベンゾキノンアンサマイシンおよび１７−ＡＡＧおよび１７−ＤＭＡＧの構造を示す。
【図２】図２は、可溶性の機能を有する基を有する式（Ｉ）を有する化合物の特定の実施形態を示す。
【図３Ａ】図３は、本発明の方法に従う、ベンゾキノンアンサマイシンならびにプロテインキナーゼインヒビターＩｒｅｓｓａでのＳＫＢｒ３細胞の処理の結果を示す。パネルＡは、１７−ＡＡＧの結果を示す。
【図３Ｂ】図３は、本発明の方法に従う、ベンゾキノンアンサマイシンおよびプロテインキナーゼインヒビターＩｒｅｓｓａでのＳＫＢｒ３細胞の処理の結果を示す。パネルＢは、１７−ＤＭＡＧの結果を示す。
【図４】図４は、代表的なプロテインキナーゼインヒビターの構造を示す。
【図５】図５は、本発明の方法に従う、１７−ＡＡＧおよび微小管安定化剤パクリタキセルでのＨ３５８細胞の処理の結果を示す。
【配列表】
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2005515164.tif 000027
2005515164.tif 000028
【図１】
2005515164.tif 000030
【図２】
2005515164.tif 000031
【図３Ａ】
2005515164.tif 000032
【図３Ｂ】
2005515164.tif 000033
【図４】
2005515164.tif 000034
【図５】
2005515164.tif 000035
【手続補正書】
【提出日】平成17年2月4日(2005.2.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2005515164000001.app
【国際調査報告】
2005515164.tif 000036