(57)【要約】  本発明は、哺乳動物におけるアロマターゼ阻害およびエストロゲン生合成の阻害に応答する病状の予防用医薬組成物の製造のための、式（Ｉ）:【化１】2005515207.tif 000007で示されるビス（シアノフェニル）メチル−トリアゾールまたは医薬上許容されるその塩の低用量の使用に関する。
2005515207.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物におけるアロマターゼ阻害およびエストロゲン生合成の阻害に応答する病状の予防用医薬組成物の製造のための、ビス（シアノフェニル）メチル−トリアゾールまたは医薬上許容されるその塩の使用。
【請求項２】
女性、とりわけ閉経後の女性または乳癌の素因がある女性における乳癌の発症を阻害するための、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
ビス（シアノフェニル）メチル−トリアゾールまたは医薬上許容されるその塩の用量が、哺乳動物におけるエストラジオールの血中濃度または卵胞刺激ホルモンの血中濃度に対して有意な効果を及ぼさないことを特徴とする、請求項１または２のいずれかに記載の使用。
【請求項４】
哺乳動物においてアロマターゼ阻害およびエストロゲン生合成の阻害に応答する病状を予防する方法であって、かかる処置を必要とする哺乳動物に、治療上有効量のビス（シアノフェニル）メチル−トリアゾール、または医薬上許容されるその塩を投与することを含んでなる方法。
【請求項５】
哺乳動物がヒト、とりわけ閉経後の女性または乳癌の素因がある女性である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
乳癌の発症を阻害するための、請求項４または５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
ビス（シアノフェニル）メチル−トリアゾールの１日用量が、哺乳動物におけるアロマターゼ阻害およびエストロゲン生合成の阻害に応答する病状の予防的処置に必要な１日用量の８.３〜２５分の１である、請求項４または６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
ビス（シアノフェニル）メチル−トリアゾールの１日用量が、かかる病状の予防的処置に必要な１日用量の１０〜２０分の１および好ましくは１０〜１６．７分の１である、請求項５に記載の方法。
【請求項９】
女性における乳癌の発症を阻害するためのビス（シアノフェニル）メチル−トリアゾールの１日有効量が、０.１〜０.３ｍｇ、好ましくは０.１２５ｍｇ〜０.２５ｍｇ、最も好ましくは０.１５ｍｇ〜０.２５ｍｇのビス（シアノフェニル）メチル−トリアゾールである、請求項４〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
女性における乳癌の発症を阻害するためのビス（シアノフェニル）メチル−トリアゾールの１日有効量が、０.００１〜０.０９９ｍｇ、好ましくは０.００２〜０.０２ｍｇのビス（シアノフェニル）メチル−トリアゾールである、請求項４〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
ビス（シアノフェニル）メチル−トリアゾールの１日用量が哺乳動物におけるエストラジオールの血中濃度または卵胞刺激ホルモンの血中濃度に対して有意な効果を及ぼさない、請求項４〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
治療上有効量のビス（シアノフェニル）メチル−トリアゾールが、ヒト対象に少なくとも３週間にわたって、その期間の約１４.２％〜約４２.８％の日のみに投与される、請求項４〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
治療上有効量のビス（シアノフェニル）メチル−トリアゾールが、ヒト対象に、３週間またはそれ以上の期間、隔日で週に１〜３回投与される、請求項４〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
週投与計画が３、４、５、６、７、または８週間行われる、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
処置期間の後に、薬物が投与されない１〜３週間の期間が続き、そしてこのサイクルが１〜数サイクル繰り返される、請求項１２〜１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
治療上有効量のビス（シアノフェニル）メチル−トリアゾールがヒト対象に、週に７〜４回、またはその期間の約１００％〜約５０％の日に、１〜３週間投与され、そして薬剤が投与されない１〜３週間の期間が続き、そしてこのサイクルが１〜数サイクル繰り返される、請求項４〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
治療上有効量のビス（シアノフェニル）メチル−トリアゾールがヒト対象に、毎日または２日に１回投与される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
治療上有効量のビス（シアノフェニル）メチル−トリアゾールが哺乳動物におけるエストラジオールの血中濃度および／または卵胞刺激ホルモンの血中濃度に対して有意な効果を及ぼさない、請求項１２〜１６のいずれかに記載の方法。
【請求項１９】
女性における乳癌の発症を阻害するためのビス（シアノフェニル）メチル−トリアゾールの有効量が０.１〜０.３ｍｇ、好ましくは０.１２５ｍｇ〜０.２５ｍｇ、最も好ましくは０.１５ｍｇ〜０.２５ｍｇのビス（シアノフェニル）メチル−トリアゾールである、請求項１２〜１６のいずれかに記載の方法。
【請求項２０】
哺乳動物におけるアロマターゼ阻害およびエストロゲン生合成の阻害に応答する病状の予防的処置に必要な１日用量の５〜２０分の１の量の、ビス（シアノフェニル）メチル−トリアゾールまたは医薬上許容されるその塩を含有する単位用量形態の医薬組成物。
【請求項２１】
ビス（シアノフェニル）メチル−トリアゾールの量が、哺乳動物におけるアロマターゼ阻害およびエストロゲン生合成の阻害に応答する病状の予防的処置に必要な１日用量の８.３〜２５分の１、好ましくは１０〜２０分の１、最も好ましくは１０〜１６.７分の１である、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
０.１〜０.３ｍｇ、好ましくは０.１２５ｍｇ〜０.２５ｍｇ、最も好ましくは０.１５ｍｇ〜０.２５ｍｇの量のビス（シアノフェニル）メチル−トリアゾールを含有する、請求項２０に記載の単位用量形態の医薬組成物。
【請求項２３】
ビス（シアノフェニル）メチル−トリアゾールの量が、哺乳動物におけるエストラジオールの血中濃度または卵胞刺激ホルモンの血中濃度に対して有意な効果を及ぼさないことを特徴とする、ビス（シアノフェニル）メチル−トリアゾールまたは医薬上許容されるその塩を含有する、単位用量形態の医薬組成物。
【請求項２４】
哺乳動物におけるアロマターゼ阻害およびエストロゲン生合成の阻害に応答する病状の予防的処置のための、活性成分の量が０.００１〜０.０９９ｍｇ、好ましくは０.００２〜０.０２ｍｇのビス（シアノフェニル）メチル−トリアゾールであることを特徴とする、ビス（シアノフェニル）メチル−トリアゾールまたは医薬上許容されるその塩を含有する単位用量形態の医薬組成物。
【請求項２５】
女性における乳癌の予防的処置のための、請求項２０〜２４のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項２６】
パッケージング材料、および当該パッケージング材料内に含まれるビス（シアノフェニル）メチル−トリアゾールまたは医薬上許容されるその塩を含んでなる製品であって、当該パッケージング材料は、乳癌の発症を阻害するための特定の投与計画にしたがって、ビス（シアノフェニル）メチル−トリアゾール、または医薬上許容されるビス（シアノフェニル）メチル−トリアゾールの塩が、女性、好ましくは閉経後の女性または乳癌の素因がある女性に、約０.１ｍｇ〜約０.３ｍｇ、好ましくは約０.１２５ｍｇ〜約０.２５ｍｇの量で投与されるべきことを示すラベル指示書を含んでなることを特徴とする、製品。
【請求項２７】
パッケージング材料、および当該パッケージング材料内に含まれるビス（シアノフェニル）メチル−トリアゾールまたは医薬上許容されるその塩を含んでなる製品であって、当該パッケージング材料は、乳癌の発症を阻害するための特定の投与計画にしたがって、ビス（シアノフェニル）メチル−トリアゾール、または医薬上許容されるビス（シアノフェニル）メチル−トリアゾールの塩が、女性、好ましくは閉経後の女性または乳癌の素因がある女性に、哺乳動物におけるエストラジオールの血中濃度および／または卵胞刺激ホルモンの血中濃度に対して有意な効果を及ぼさない量で投与されるべきことを示すラベル指示書を含んでなることを特徴とする、製品。
【請求項２８】
有効量のビス（シアノフェニル）メチル−トリアゾールが請求項２０〜２４に記載した医薬組成物の形態である、請求項２７に記載の製品。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、哺乳動物におけるアロマターゼ阻害およびエストロゲン生合成の阻害に応答する病状の予防用医薬組成物の製造のための、式（Ｉ）:
【化１】
2005515207.tif 000003
で示されるビス（シアノフェニル）メチル−トリアゾール（以後、本明細書において「化合物Ｉ」）または医薬上許容されるその塩の使用に関する。
【０００２】
「化合物Ｉ」は、レトロゾール［国際一般名（International Nonproprietary Name）]としても知られる。
【０００３】
「化合物Ｉ」は、すべて本出願人の名において１９８７年９月１６日に公開された欧州特許第０ ２３６ ９４０号、ならびに１９９０年１２月１８日に公開された米国特許第４,９７８,６７２号および日本国特許第２０１８１１２号において特定的に記載されている。
【０００４】
「化合物Ｉ」は、最初、アロマターゼのインヒビターとして同定された。
【０００５】
アロマターゼは、エストロゲン合成の最終工程、すなわちエストロゲン  エストロン（Ｅ１）およびエストラジオール（Ｅ２）へのアンドロゲン  アンドロステンジオンおよびテストステロンの変換に関与する酵素複合体である。エストロゲンが乳癌（breast cancer）を促進することを示す多くのデータが存在する。
【０００６】
次第に、女性の乳房は、エストロゲン産生のもう一つの重要な部位として認識されている。乳房脂肪組織（breast adipose tissue）における間質細胞は、傍分泌および自己分泌様式の両方で生物学的に活性であるエストロゲンを産生する。このことは、閉経後の女性の健康な乳房におけるエストロゲン濃度が血清中で予測を超えて高く（４〜６倍）、そして閉経前の女性と同程度であるという観察とおそらく関係がある。さらに、７０％までの乳癌細胞が、細胞内アロマターゼ発現の結果としてエストロゲンを合成することが示された。これにより、アロマターゼ発現および活性が、腫瘍周囲の脂肪中におけるよりも乳房腫瘍において、また無腫瘍乳房四分円（tumor-bearing quadrants）より腫瘍担持乳房四分円において、高い理由が説明される。この局所的エストロゲン産生が腫瘍増殖において主要な役割を果たし得ることの証拠が増えつつある。したがって、その合成の起点でのエストロゲンの阻害は、乳癌処置の理論的標的である。
【０００７】
「化合物Ｉ」は、既にアロマターゼのインヒビターとして知られ、そして乳癌の処置に有用である。
【０００８】
今回、驚くべきことに、哺乳動物におけるアロマターゼ阻害およびエストロゲン生合成の阻害に応答する病状の予防に特に役立つ治療特性を「化合物Ｉ」が有することが見出された。この化合物は、乳癌のエストロゲン介在性イニシエーションを排除する、予測を超える高い効力を示す。比較的少ない用量で、この化合物が正常な生理学的機能に影響することなく乳癌のエストロゲン介在性イニシエーションを排除する高い効力を示すことは、特に予測を超えることである。実際、哺乳動物におけるエストラジオールの血中濃度および／または卵胞刺激ホルモンの血中濃度に対して有意な影響を及ぼさない「化合物Ｉ」の用量の使用が、乳癌のエストロゲン介在性イニシエーションを排除する高い効力を示すことは、特に驚くべきことである。
【０００９】
したがって、本発明は、哺乳動物におけるアロマターゼ阻害およびエストロゲン生合成の阻害に応答する病状の予防用医薬組成物の製造のための、「化合物Ｉ」の使用に関する。
【００１０】
本発明は、さらに特に、女性、とりわけ閉経後の女性または乳癌の素因がある女性における乳癌の発症を阻害するための医薬組成物の製造のための、「化合物Ｉ」の使用に関する。
【００１１】
本発明は、さらに特に、「化合物Ｉ」の用量または１日用量が哺乳動物におけるエストラジオールの血中濃度および／または卵胞刺激ホルモンの血中濃度に対して有意な影響を及ぼさないことを特徴とする、女性、とりわけ閉経後の女性または乳癌の素因がある女性における乳癌の発症を阻害するための医薬組成物の製造のための「化合物Ｉ」の使用に関する。
【００１２】
本発明は、さらに特に、０.１〜０.３ｍｇ、好ましくは０.１２５〜０.２５ｍｇの「化合物Ｉ」を含有する単位用量形態の医薬組成物の製造のための「化合物Ｉ」の使用に関する。
【００１３】
本発明は、さらに特に、哺乳動物におけるエストラジオールの血中濃度および／または卵胞刺激ホルモンの血中濃度に対して有意な影響を及ぼさない「化合物Ｉ」の量を含有する単位用量形態の医薬組成物の製造のための「化合物Ｉ」の使用に関する。
【００１４】
第二の好適な実施態様における本発明は、０.００１〜０.１１ｍｇ、好ましくは０.００１〜０.０９９ｍｇまたは０.００１〜０.０９ｍｇ、最も好ましくは０.００２〜０.０２ｍｇの「化合物Ｉ」を含有する単位用量形態の医薬組成物の製造のための「化合物Ｉ」の使用に関する。
【００１５】
さらに別の実施態様において、本発明は、哺乳動物においてアロマターゼ阻害およびエストロゲン生合成の阻害に応答する病状を予防する方法であって、かかる処置を必要とする哺乳動物に、治療上有効量の「化合物Ｉ」、または医薬上許容されるその塩を投与することを含んでなる方法を提供する。
【００１６】
さらに別の実施態様において、本発明は、哺乳動物においてアロマターゼ阻害およびエストロゲン生合成の阻害に応答する病状を予防する方法であって、かかる処置を必要とする哺乳動物に、治療上有効量の「化合物Ｉ」、または医薬上許容されるその塩を投与することを含んでなり、治療上有効量の「化合物Ｉ」が哺乳動物におけるエストラジオールの血中濃度および／または卵胞刺激ホルモンの血中濃度に対して有意な影響を及ぼさないことを特徴とする方法を提供する。
【００１７】
好ましくは、該哺乳動物はヒト、とりわけ閉経後の女性または乳癌の素因がある女性である。
【００１８】
好ましくは、この方法は、哺乳動物におけるアロマターゼ阻害およびエストロゲン生合成の阻害に応答する病状の治療的処置に必要な１日用量の８.３〜２５分の１の「化合物Ｉ」の１日用量で使用される。良好な結果は、かかる病状の治療的処置に必要な１日用量の１０〜２０分の１で観察され、そして最良の結果は、１０〜１６.７分の１で得られる。
【００１９】
好ましくは、この方法は、乳癌の発症を阻害するために使用される。
【００２０】
好適な実施態様において、女性における乳癌の発症を阻害するための「化合物Ｉ」の１日有効量は、０.１〜０.３ｍｇ、好ましくは０.１２５ｍｇ〜０.２５ｍｇ、最も好ましくは０.１５ｍｇ〜０.２５ｍｇである。
【００２１】
第二の好適な実施態様において、女性における乳癌の発症を阻害するための「化合物Ｉ」の１日有効量は、０.００１〜０.１１ｍｇ、好ましくは０.００１〜０.０９９ｍｇまたは０.００１〜０.０９ｍｇ、最も好ましくは０.００２〜０.０２ｍｇである。
【００２２】
最も好適な実施態様において、女性における乳癌の発症を阻害するための「化合物Ｉ」の１日有効量は、処置される女性におけるエストラジオールの血中濃度および／または卵胞刺激ホルモンの血中濃度に有意な影響を及ぼさない。
【００２３】
好ましくは、「化合物Ｉ」は、ヒト対象に少なくとも３週間にわたって、その期間の約１４.２％〜約４２.８％の日のみに投与される。
【００２４】
好ましくは、「化合物Ｉ」は、３週間またはそれ以上の期間、隔日で週に１または２または３回投与される。
【００２５】
好ましくは、週投与計画（weekly dosage regimen）は、３、４、５、６、７、または８週の期間実行される。それぞれの処置期間に、薬剤が投与されない１〜３週、たとえば２週間の期間が続き得る。このサイクルは、１〜数サイクル、たとえば３または４〜８またはそれ以上のサイクル繰り返される。好ましくは、週投与計画は、処置期間の間、患者におけるエストラジオールの血中濃度および／または卵胞刺激ホルモンの血中濃度に対して有意な影響がないように行われる。
【００２６】
別の処置方法において、「化合物Ｉ」は、１〜３週間の期間、たとえば２週間、ヒト対象に週に７〜４回またはその期間の約１００％〜約５０％、隔日で、すなわち毎日または２日に１回投与され、その後、薬剤が投与されない１〜３週間、たとえば２週間の期間が続く。このサイクルが１〜数サイクル、たとえば３または４〜８またはそれ以上のサイクル繰り返される。好ましくは、処置の方法において、投与計画は、処置期間の間、患者におけるエストラジオールの血中濃度および／または卵胞刺激ホルモンの血中濃度に対して有意な影響がないように行われる。
【００２７】
好適な例は、２日に１回の０.０１〜０.０４ｍｇ、好ましくは０.０２ｍｇの投与である。第二の好適な例は、毎日の０.００１〜０.００４ｍｇ、好ましくは０.００２ｍｇの投与である。
【００２８】
本発明の第三の態様において、パッケージング材料、および当該パッケージング材料内に含まれる「化合物Ｉ」または医薬上許容されるその塩を含んでなる製品であって、当該パッケージング材料は、乳癌の発症を阻害するための特定の投与計画にしたがって、「化合物Ｉ」、または医薬上許容される「化合物Ｉ」の塩が、女性、とりわけ閉経後の女性または乳癌の素因がある女性に、約０.１ｍｇ〜約０.３ｍｇ、好ましくは約０.１２５ｍｇ〜約０.２５ｍｇの量で投与されるべきことを示すラベル指示書を含んでなることを特徴とする、製品が提供される。第二の好適な実施態様において、女性における乳癌の発症を阻害するための「化合物Ｉ」の有効量は、０.００１〜０.１１ｍｇ、好ましくは０.００１〜０.０９９ｍｇまたは０.００１〜０.０９ｍｇ、最も好ましくは０.００２〜０.０２ｍｇである。
【００２９】
さらなる実施態様において、本発明は、哺乳動物におけるアロマターゼ阻害およびエストロゲン生合成の阻害に応答する病状の予防的処置に必要な１日用量の８.３〜２５分の１の「化合物Ｉ」の量を含有する医薬組成物を提供する。最良の結果は、１日用量の１０〜２０分の１、好ましくは１０〜１６.７分の１で観察される。
【００３０】
本発明の別の態様において、パッケージング材料、および当該パッケージング材料内に含まれる「化合物Ｉ」または医薬上許容されるその塩を含んでなる製品であって、当該パッケージング材料は、乳癌の発症を阻害するための特定の投与計画にしたがって、「化合物Ｉ」、または医薬上許容される「化合物Ｉ」の塩が、女性、好ましくは閉経後の女性に、哺乳動物におけるエストラジオールの血中濃度および／または卵胞刺激ホルモンの血中濃度に対して有意な効果を及ぼさない量で投与されるべきことを示すラベル指示書を含んでなることを特徴とする、製品が提供される。
【００３１】
好適な実施態様において、本発明は、女性におけるアロマターゼ阻害およびエストロゲン生合成の阻害に応答する病状の予防的処置のための、０.１〜０.３ｍｇ、好ましくは０.１２５〜０.２５ｍｇの「化合物Ｉ」を含有する単位投与形態の医薬組成物を提供する。
【００３２】
最も好適な実施態様において、本発明は、ヒトにおけるアロマターゼ阻害およびエストロゲン生合成の阻害に応答する病状の予防的処置のための、０.１５ｍｇ〜０.２５ｍｇの「化合物Ｉ」を含有する医薬組成物を提供する。
【００３３】
第二の好適な実施態様において、本発明は、ヒトにおけるアロマターゼ阻害およびエストロゲン生合成に応答する病状の予防的処置のための、０.００１〜０.１１ｍｇ、好ましくは０.００１〜０.０９９ｍｇまたは０.００１〜０.０９ｍｇ、最も好ましくは０.００２〜０.０２ｍｇの「化合物Ｉ」を含有する医薬組成物を提供する。
【００３４】
好ましくは、女性における乳癌の予防的処置のための０.１２５〜０.３ｍｇまたは０.００２〜０.０２の「化合物Ｉ」を含有する医薬組成物。
【００３５】
最も好適な実施態様において、本発明は、乳癌の予防的処置のための、哺乳動物におけるエストラジオールの血中濃度および／または卵胞刺激ホルモンの血中濃度に対して有意な影響を及ぼさない、「化合物Ｉ」の量を含有する単位投与形態の医薬組成物を提供する。
【００３６】
以前の試験において、５μｇ「化合物Ｉ」／マウス／日（この用量は、以前の動物試験に基づいたものである。）を用いることにより、我々はアロマターゼ誘導性新生物発生前／新生物変化（aromatase-induced preneoplastic/neoplastic change）を完全に抑止できることが示された。しかしながら、選択される用量は、アロマターゼ誘導性前悪性変化（aromatase-induced premalignant change）の抑止に非常に有効であるだけでなく、これらの動物におけるいくつかの正常な内分泌機能にも影響した。現在の知見は、低用量の「化合物Ｉ」を用いることにより、正常な生理学的機能に影響することなくトランスジェニックマウスにおける乳癌のエストロゲン介在性イニシエーションを排除することが可能であることを示す。我々のデータは、本明細書に記載した低用量で使用した場合でさえ、「化合物Ｉ」はアロマターゼ誘導性乳房過形成（breast hyperplasia）の抑止に非常に有効であることを明確に実証している。我々のデータは、低用量の「化合物Ｉ」（０.２５、０.５μｇまたは１μｇ／日／動物、好ましくは０.２５および０.５μｇ）を用いることにより、子宮および卵巣の組織形態学的特徴に影響することなく、アロマターゼ誘導性新生物発生前変化を完全に抑止できることを示す。
【００３７】
これらの予想を超える良好な結果は、本明細書に記載したアッセイで「化合物Ｉ」の効果を試験することにより得られる。
【００３８】
特に、得られるデータは、低用量の「化合物Ｉ」（０.２５または０.５μｇ／日／動物）を用いることによりアロマターゼ誘導性新生物発生前変化を完全に抑止できることを示す。これらの用量は、子宮および卵巣に影響しなかった。コントロール（１２.５ｐｇ／ｍｌ）と低用量の「化合物Ｉ」（０.２５または０.５μｇ／日／動物）で処置された個々の群との間で、血中エストロゲン濃度に有意な差はない（それぞれ、１２.１および１２.５ｐｇ／ｍｌ）。コントロールと０.５μｇの「化合物Ｉ」で処置された動物との間で、血中ＦＳＨ濃度に有意な差はない（２００ｎｇ／ｍｌ）。我々は、また、ＰＣＮＡとサイクリンＤ１（これらは、低用量の「化合物Ｉ」（０.２５または０.５μｇ／日／動物）でのエストロゲン介在性増殖の良好なマーカーでもある。）の血中濃度に有意な差がないことにも気付いた。このことは、低用量の「化合物Ｉ」（０.２５または０.５μｇ／日／動物）が子宮および卵巣の組織形態学的特徴に影響しないという観察と矛盾しない。卵巣マーカー  ラクトフェリンの発現は、コントロールと０.２５−および０.５μｇ−処置動物との間で差を示さなかった。
【００３９】
これらの試験は、非常に低い濃度のアロマターゼインヒビターを用いることにより、正常な子宮および卵巣機能に影響することなく、トランスジェニックマウスにおける乳癌のエストロゲン介在性イニシエーションを排除できることを示唆している。
【００４０】
血中のエストロゲンおよび他のホルモンの濃度は、通常、さまざまな供給者から入手可能であり、そして当分野において周知であるＥＬＩＳＡ（酵素免疫吸着測定法；Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay）またはＲＩＡ（ラジオイムノアッセイ；Radio Immuno Assay）を用いて測定される。ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー；High performance Liquid Chromatography）または質量分析法は、より高感度、かつ、より複雑であり、したがって定常的には使用されない。
【００４１】
かくして、「化合物Ｉ」は、とりわけ哺乳動物におけるアロマターゼ阻害およびエストロゲン生合成の阻害に応答する病状の治療的処置に必要な１日用量の８.３〜２５分の１の１日用量で、哺乳動物におけるアロマターゼ阻害およびエストロゲン生合成の阻害に応答する病状の予防に極めて適していることが示される。最良の結果は、１日用量の１０〜２０分の１、好ましくは１０〜１６.７分の１で観察される。
【００４２】
かくして、「化合物Ｉ」は、とりわけ哺乳動物におけるエストラジオールの血中濃度および／または卵胞刺激ホルモンの血中濃度に対して有意な影響を及ぼさない用量または１日用量で、哺乳動物におけるアロマターゼ阻害に応答する病状の予防に極めて適していることが示される。
【００４３】
本明細書において使用される「アロマターゼ阻害およびエストロゲン生合成に応答する病状」なる語は、乳癌または乳腺癌（breast adenocarcinoma）を含むが、これらに限定されるわけではない。
【００４４】
本明細書において使用される「哺乳動物におけるエストラジオールの血中濃度および／または卵胞刺激ホルモンの血中濃度に対して有意な影響を及ぼさない」なる語は、「化合物Ｉ」で処置されていない患者と処置された患者との間にエストラジオールおよび／または卵胞刺激ホルモンの血中濃度に有意な差がないことを意味する。
【００４５】
本明細書において使用される「有意な影響がない」とは、処置前のコントロールの濃度に対して、エストラジオールおよび／または卵胞刺激ホルモンの血中濃度が、１５％、好ましくは１０％、最も好ましくは５％以上変化しないことを意味する。
【００４６】
乳腺癌または乳癌は、女性、特に３５才以上の年齢の女性における、主要な医学的問題である。現在では、女性が一生の間にこの疾患を発症する確率は９分の１であると見積もられている。乳癌（breast carcinoma）は、女性の主要な死因であり、ならびに能力障害、精神的トラウマおよび経済的損失の原因である。この疾患に罹患している数多くの女性は、最終的に、直接的にまたは合併症から間接的にその影響で死亡する。
【００４７】
本明細書で使用される「治療的（curative）」なる用語は、哺乳動物におけるアロマターゼ阻害およびエストロゲン生合成の阻害に応答する持続性の病状の処置における効力を意味する。
【００４８】
本明細書において、「予防（prevention）」なる語は、アロマターゼ阻害およびエストロゲン生合成に応答する病状の発症または再発を避ける（すなわち、乳癌の発達を阻害する）ために、該疾患に罹患しているリスクのある、または該疾患に罹患していると疑われる患者の処置を含む。
【００４９】
本明細書で使用される「乳癌の発達の阻害」なる語は、主に、癌性または悪性細胞への正常乳房細胞のデノボ（de novo）形質転換が阻害される場面を意味することが意図される。しかしながら、女性が乳房細胞に臨床的に検出されない癌性細胞を有する場面が存在し得、そしてこのような、今までのところ臨床的に重要でない癌の発達の阻害もまた、本発明の一部を形成する。既存の臨床的に検出可能な乳癌の治療は、本発明の範囲内に含まれない。
【００５０】
「乳癌の素因がある女性」なる用語は、年齢（現時点では、年齢は主要な同定可能なリスク因子である。乳癌のケースの８０％以上は、５０才以上の女性に起きている。）、民族性、遺伝因子および家族歴（乳癌を有するすべての女性の推計１０％は、この疾患の強い家族歴を有し、これは、しばしば、５０才以下の若い女性においてみられる  −  ＢＲＣＡ１またはＢＲＣＡ２として知られる遺伝子における遺伝的変異（inherited mutation）は、今では、乳癌の３０％〜５０％に関係すると信じられている。）、エストロゲンへの過剰曝露（乳房組織の成長はエストロゲンに非常に敏感であるので、女性の人生のうちエストロゲンに曝露される時間が多くなるほど、乳癌のリスクがより高くなる。）、身体的特徴、一定の乳房異常のような医師によく知られたいくつかの特定の基準に対応する女性に関する。
【００５１】
「化合物Ｉ」が、特に、良好な治療域（therapeutic margin）および他の利点を有し、アロマターゼ阻害およびエストロゲン生合成の阻害に応答する病状の予防に適していることを実証するために、臨床試験が当業者に既知の方法で行われ得る。
【００５２】
女性におけるアロマターゼ阻害およびエストロゲン生合成の阻害に応答する病状の治療的処置に現在使用される「化合物Ｉ」の用量は、１日あたり２.５ｍｇの経口用量である。
【００５３】
アロマターゼ阻害およびエストロゲン生合成の阻害に応答する病状の予防に使用される「化合物Ｉ」の正確な用量は、宿主、処置される病状の性質および重症度、投与様式に依存する。しかしながら、「化合物Ｉ」がヒトにおいて０.１〜０.３ｍｇ、好ましくは０.１２５〜０.２５ｍｇの１日用量で非経腸的、たとえば腹腔内、静脈内、筋肉内、皮下、腫瘍内、または直腸内、あるいは経腸的、たとえば、経口で、投与される（好適な投与を調べよ。）場合、満足な予防が達成され得る。最も好ましくは、哺乳動物におけるエストラジオールの血中濃度および／または卵胞刺激ホルモンの血中濃度に対して有意な影響を及ぼさない用量または１日用量で投与される。
【００５４】
最も好ましくは、「化合物Ｉ」は、０.１〜０.２５ｍｇ／日までの用量でマイクロエマルション、ソフトゲルまたは固体分散体のような投与形態により経口的に、１日３回まで投与される。最も好ましくは、哺乳動物におけるエストラジオールの血中濃度および／または卵胞刺激ホルモンの血中濃度に対して有意な影響を及ぼさない用量または１日用量で投与される。
【００５５】
用量の上限は副作用により課せられ、そして処置される宿主についての治験により決定され得る。
【００５６】
予防的処置は、しばしば、長期間の処置であり、したがって、処置レジメン（treatment regimen）は体内における「化合物Ｉ」の蓄積および処置の開始数週間後に起こり得る肝酵素のその後の増加のリスクを減らすように適用されるべきである。適用される処置レジメンは、また、「化合物Ｉ」の薬理学的作用に対する耐性の出現を避けるか、または処置される宿主におけるその薬理学的効力の低下を避けるべきである。
【００５７】
さらなる態様において、上記のリスクを減らすために、本発明は、少なくとも３週間にわたって、「化合物Ｉ」がその日々の約１４.２％〜約４２.８％の日のみに投与される処置レジメンに関する。
【００５８】
代わって、「化合物Ｉ」は、１〜３週間の期間、たとえば２週間、ヒト対象に週に７〜４回またはその期間の約１００％〜約５０％、隔日で、すなわち毎日または２日に１回投与され、その後、薬剤が投与されない１〜３週間、たとえば２週間の期間が続く。このサイクルは、１〜数サイクル、たとえば３または４〜８回またはそれ以上のサイクル繰り返される。
【００５９】
記載された処置レジメンまたは製品において、ビス（シアノフェニル）メチル−トリアゾールの有効量は、本明細書に記載された医薬組成物の形態であり得る。
【００６０】
「化合物Ｉ」は、０.１〜０.３ｍｇ、好ましくは０.１２５〜０.２５ｍｇ、最も好ましくは０.１５〜０.２５ｍｇを含有する単位投与形態で投与される。最も好ましくは、哺乳動物におけるエストラジオールの血中濃度および／または卵胞刺激ホルモンの血中濃度に対して有意な影響を及ぼさない単位投与形態で投与される。
【００６１】
本明細書において使用されるように、「週」なる表現は、７連続日（seven consecutive days）を意味する。かくして、３週は、カレンダー週（calendar week）の任意の日に始まる２１連続日である。最初に投与された日が、週の第１日と見なされる。カレンダー週を用いるいずれの議論も、例示目的のみを意図するものである。
【００６２】
「化合物Ｉ」は、１もしくはそれ以上の医薬上許容される担体、および所望により１もしくはそれ以上の他の慣用的な医薬アジュバントと組み合わされ、そして経腸的、たとえば経口的に、錠剤、カプセル剤、カプレットなどの形態で、または非経腸的、たとえば腹腔内または静脈内に、無菌の注射可能な溶液または懸濁液の形態で投与され得る。経腸および非経腸組成物は、慣用的手段により製造され得る。
【００６３】
本発明の注入用溶液は、好ましくは無菌である。これは、たとえば無菌濾過膜を通す濾過により、容易に行われ得る。液体の形態の任意の組成物の無菌的形成、バイアルの無菌的充填および／または無菌的条件下での本発明の医薬組成物と適当な希釈剤との組合せは、当業者によく知られている。
【００６４】
「化合物Ｉ」は、これらの病理において使用するために、単独または少なくとも１つの他の医薬活性化合物と組み合わせて使用され得る。これらの活性化合物は、同一の医薬調製物に組み合わせられるか、または「キット・オブ・パーツ（kit of parts）」の組合せ調製物の形態とすることができるが、そのキットの意味は、組合せパートナーが独立的に投与され得ること、または識別し得る量の組合せパートナーとの異なる固定組合せ剤として使用されること、すなわち、同時にまたは異なる時点で投与されるという意味である。次いで、キット・オブ・パーツのパーツは、例えば、同時にまたは時間的にずらして、すなわち、異なる時点で投与されるか、またはキット・オブ・パーツの任意のパーツについて同じ時間間隔もしくは異なる時間間隔で投与され得る。
【００６５】
有用な組成物の２つの非限定的実施例を以下に記載する。
【００６６】
組成物Ａ：
１００００個の１００ｍｇ錠（それぞれ０.２ｍｇの活性成分を含む。）を製造する：
【表１】
2005515207.tif 000004
【００６７】
錠核のすべての構成成分を混合する。均質な混合物を入手次第、圧縮して錠核を形成させる。
【００６８】
組成物Ｂ：
１００００個の１００ｍｇ錠（それぞれ０.１５ｍｇの活性成分を含む。）を製造する：
【表２】
2005515207.tif 000005
【００６９】
錠核のすべての構成成分を混合する。均質な混合物を入手次第、圧縮して錠核を形成させる。
【００７０】
組成物Ｃ：
１００００個の１００ｍｇ錠（それぞれ０.０１５ｍｇの活性成分を含む。）を製造する：
【表３】
2005515207.tif 000006
【００７１】
錠核のすべての構成成分を混合する。均質な混合物を入手次第、圧縮して錠核を形成させる。
【００７２】
好適な低用量錠剤は、たとえば０.０５ｍｇ、０.０２ｍｇ、０.０１５ｍｇ、０.０１ｍｇ、０.００９ｍｇ、０.００８ｍｇ、０.００７ｍｇ、０.００６ｍｇ、０.００５ｍｇ、０.００４ｍｇ、０.００３ｍｇ、０.００２ｍｇまたは０.００１ｍｇの活性成分を含有し得る。
【００７３】
しかしながら、それは例示目的のみであることを明確に理解されるべきである。
【００７４】
本発明は、低用量の他のアロマターゼインヒビター、たとえばアナストラゾール、酢酸メゲステロール、ボロゾール、ファドロゾール、エキセメスタン、アミノグルテチミドを用いて行われ得る。コード番号、一般名または商標名により同定される活性剤の構造は、標準的概論「メルク・インデックス（The Merck Index）」の現行版から、またはデータベース、たとえばパテント・インターナショナル（Patents International）（たとえばIMS World Publications）から入手され得る。その対応する内容を、出典明示により本明細書の一部とする。
【００７５】
アロマターゼ阻害およびエストロゲン生合成の阻害に応答する病状の予防のための「化合物Ｉ」の効力は、本明細書に記載した薬理試験により例証される。低用量でのこの予想を超える薬理活性は、また、ハーパー−ウィン  シーおよび協力者（Harper-Wynne C and col.）（Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 2002 Jul; 11(7): 614-21）により記載されたプロトコールのような臨床試験において例証され得る。その対応する内容を、出典明示により本明細書の一部とする。
【００７６】
薬理試験は、下記の薬理学的方法により行われる。これらの試験は、いかなる意味でも本発明の範囲を制限することなく本発明を例証する。
【００７７】
１.  アロマターゼ過剰発現トランスジェニックマウスおよび動物処置
雌性アロマターゼトランスジェニックマウスを、標準的コロニー（standard colony）において維持した。マウスをＡＡＡＬＡＣおよびＵＳＤＡにより認定された集中動物施設（centralized animal facility）において飼育し、そして実験動物のケアおよび使用のためのＮＩＨガイド（NIH Guide for the Care and Use of Laboratory Animals）において確立された勧告にしたがって維持した。乳腺においてアロマターゼを過剰発現するトランスジェニックマウス（以前は、ｉｎｔ−５／アロマターゼトランスジェニックマウスと呼ばれた）の作成は、以前に記載された（R.R. Tekmal et al., Overexpression of int-5/aromatase in mammary glands of transgenic mice results in the induction of hyperplasia and nuclear abnormalities, Cancer Res. 56 (1996) 31803185）。すべての動物を、サザンブロット解析を用いて遺伝子型の特定をし、そして年齢を合わせた非トランスジェニック同腹仔を、すべての実験においてコントロールとして使用した。
【００７８】
２.  乳腺および他の組織の形態学的および組織学的評価
乳房脂肪パッドが付着した皮膚を、１０％中性緩衝化ホルマリン中で少なくとも２４時間固定した。次いで、乳腺を皮膚から切り離し、そして組織学的試験のために加工した（D. Medina, Preneoplastic lesions in mouse mammary tumorigenesis, Methods Cancer Res. 7 (1973) 3-53. 514）。乳房組織、子宮および卵巣のルーチン切片を、パラフィン中に包埋することによる固定し、５μＭの厚さに切って調製し、そしてＨ＆Ｅで染色した。アロマターゼの発現を免疫局在化するために、アロマターゼおよび非トランスジェニック乳腺組織の厚さ５μＭの切片を使用した。キシレンおよびエタノール中での脱パラフィン化および再水和の後に、非特異的部位を０.０５Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌバッファー中の１％正常ヤギ血清でインキュベートすることによりブロックした。試薬をデカントした後、切片を、１：１００希釈でラットアロマターゼ合成ペプチドに対するウサギポリクローナル抗体で被覆した（アロマターゼ抗体は、Dr. Evan Simpson, University of Texas Southwestern Medical Center, Dallas, TX; 現在は、Prince Henry's Institute, Clayton, Vic., Australiaから入手した。）。試料を、加湿チャンバー中で４℃にて一夜インキュベートした。０.０５Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌバッファーで３回洗浄した後、スライドを、アルカリホスフェート結合二次抗体で室温にて３０分間インキュベートし、そして洗浄を繰り返し、そして切片を１％ｆａｓｔ ｒｅｄ／ナフトール ＡＳホスフェート溶液で５分間インキュベートした。切片を再び洗浄し、そしてカバーをはずし、そして染色パターンを、光学顕微鏡を用いて観察した。
【００７９】
３.  細胞調製物および特徴化
我々のアロマターゼコロニーからのアロマターゼトランスジェニックおよび非トランスジェニック雌性同腹仔が乳房組織の供給源であった。乳房上皮および間質細胞を、以前に記載されたように単離した［B.K. Levay-Young, et al. Primary culture systems for mammary biology studies, in: D. Medina (Ed.), Cellular and Molecular Biology of Cancer, Plenum Press, New York, 1987, pp 181-204 -  F.S. Kittrel, C.J. Oborn, D. Medina, Development of mammary paraneoplasia in vivo from mouse mammary epithelial cell lines in vivo, Cancer Res. 52 (1992) 19241932.］。乳腺を、１６週齢の処女雌から切開し、抗生物質入りの滅菌リン酸緩衝性生理食塩水で洗浄し、カミソリの刃で細かく刻み、そして０.１５％コラゲナーゼ（Type A; Boehirnger-Mannhem, Indianapolis, IN）の存在下で３７℃にて旋回水浴（gyratory water bath）中で４時間分離した。
【００８０】
細胞懸濁液を前に記載されたように差次的に遠心分離し、上皮細胞および間質細胞の両方を得た。上皮細胞および間質細胞の純度を証明するため、上皮細胞および間質細胞特異的抗体を用いて、細胞型を免疫組織化学的に同定した。上皮細胞および間質細胞をチャンバースライドに播種し、そしてブアン（Bouin）液で固定した。サイトケラチンおよびビメンチン免疫染色を行った。間質細胞はビメンチンに対する抗体（Zymed）により免疫染色されるが、サイトケラチンに対する抗体では免疫染色されず、これによりそれらの間質表現型（stromal phenotype）が確認された。上皮細胞は、サイトケラチンに対する抗体（Dako）により免疫染色され、これによってそれらの上皮起源性（epithelial origin）が確認された。
【００８１】
４.  アロマターゼインヒビターでの処置
高齢（約１６〜２０週齢）のアロマターゼトランスジェニック処女雌を用いて、これらのマウスの乳腺において誘導された新生物発生前および新生物変化に対する化学予防剤としての、アロマターゼインヒビター、「化合物Ｉ」の効果を調べた。この試験において、年齢を合わせたトランスジェニック雌を４つの群、すなわち１つのグループ（ｎ＝１０）はコントロール群として機能し、他の群は、「化合物Ｉ」を毎日皮下注射され、そして３つの異なる用量；動物あたり１００μｌの（リン酸緩衝性生理食塩水中）０.３％ヒドロキシプロピルセルロース中の０.２５、０５、１.０μｇの「化合物Ｉ」であった。コントロールの動物は、ビヒクルを皮下注射された。「化合物Ｉ」は、Drs. Ajay Bhatnagar and Dean Evans of Novartis Pharma（Basel, Switzerland）から提供された。６週の処置の終わりに、乳腺を除去し、そして１つずつの乳腺を組織分析のために使用した。他のすべての乳腺をプールし、次いで、下記の生化学的分析のために使用した。乳腺とともに、子宮および卵巣を生化学分析および組織分析のために回収した。
【００８２】
５.  ＲＮＡ分析
マウス乳房および子宮組織のホモゲナイズ後に、該組織からのトータルＲＮＡを、Ｔｒｉ Ｒｅａｇｅｎｔ（Sigma, St. Louis, MO）を用いて、製造者のプロトコールにしたがって単離した。次いで、ＥＲ、ＰＲ、ＰＣＮＡ、サイクリンＤ１および他の遺伝子の特異的発現を、ＧｅｎｅＡｍｐ  ＲＮＡ  ＰＣＲ  Ｋｉｔ（Perkin-Elmer, Foster City, CA）を用いてＲＴ−ＰＣＲにより確認した。特異的プライマーの使用およびＲＴ−ＰＣＲの条件は、前に記載された（N. Kirma, K. Gill, U. Mandava, R.R. Tekmal, Overexpression ofaromatase leads to hyperplasia and changes in the expression of genes involved in apoptosis, cell cycle, growth and tumor suppressor function in the mammary glands of the transgenic mice, Cancer Res., 2001, in press）。
【００８３】
特異的ｍＲＮＡ種の量に依存して、７０ｎｇ〜１.０ｍｇのトータルＲＮＡが、逆転写（ＲＴ）反応混合物中の出発鋳型（starting template）として使用された。ＲＴ−ＰＣＲ産物を、エチジウムブロミド染色を用いて１％アガロースゲル上で可視化した。等量のトータルＲＮＡがさまざまな遺伝子の発現の推定用各試料から使用されることを例証するために、ハウスキーピング遺伝子であるグリセルアルデヒド−３−ホスフェート・デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）が不変コントロールとして使用された。アガロースゲル上のＲＴ−ＰＣＲ産物のエチジウムブロミド染色からのＢｉｏ−Ｒａｄ（Hercules, CA）ＧＳ−７００イメージング・デンシトメーターを用いる濃度測定データは、異なる組織試料中のさまざまなｍＲＮＡレベルの発現における相対差を計算するために使用された。
【００８４】
６.  ウエスタンブロット解析
コントロールおよび「化合物Ｉ」処置アロマターゼ動物の両方の乳腺および子宮組織からタンパク質を単離するために、組織を溶解バッファー中でホモゲナイズした。各試料から等量（６０μｇ）のタンパク質を、変性ポリアクリルアミドゲル上で分離し、そしてナイロン膜に移した。抗体の非特異的結合を、０.０５％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００（ＴＢＳＴ）および５％脱脂粉乳を含むＴｒｉｓ−緩衝性生理食塩水（ＴＢＳ）で室温にて少なくとも４時間インキュベーションすることによりブロックした。次いで、膜を、それぞれの一次抗体（アクチン、ＥＲ、ＰＲ、ラクトフェリン、ＰＣＮＡおよびサイクリンＤ１）を用いてＴＢＳＴ−ミルク中で４℃にて一夜インキュベートし、そして特異的結合を、種特異的（二次抗体）ＩｇＧ、続いて促進型化学発光検出（ECL Kit; Amersham Pharmacia Biotech, NJ）およびＥＣＬ Ｘ線フィルムへの曝露を用いて可視化した。ウエスタンブロット（化学発光検出抗体結合タンパク質のＸ線像）からの濃度測定データは、個々のタンパク質の発現の差を計算するために使用された。ハウスキーピング遺伝子であるアクチンの発現は、必要な場合には、不変コントロールとして正規化のために使用された。
【００８５】
７.  血清エストラジオールおよびＦＳＨ濃度
コントロールおよび「化合物Ｉ」処置群の両方からの血液を、組織回収前に心臓穿刺により直接回収する。エストラジオールの血清濃度は、商品として入手可能な試薬（Diagnostic Products Corp., Los Angeles, CA）を用いる二重抗体ラジオイムノアッセイにより測定された。２００μｌの血清の等価物をデュプリケートで用いると、該アッセイは、２.５ｐｇ／ｍｌの下方感受性および５００ｐｇ／ｍｌの上限を有していた。５０から２００μｌに増量する血清のアッセイにより、標準曲線に平行な変位線（displacement line）を作成した。バラツキのアッセイ内およびアッセイ間の係数は、それぞれ１０.０未満および６.７％であった。ＦＳＨ濃度を、標準二重抗体ラジオイムノアッセイを用いて測定した。ＮＩＨのホルモン供給源から得られた精製ＦＳＨをスタンダードとして使用した。平均エストラジオールまたはＦＳＨ濃度の差を比較し、そして有意差を、対によるスチューデントｔ−検定を用いて測定した。
【００８６】
結果
乳腺、卵巣および子宮におけるエストロゲン誘導性過形成に対するアロマターゼインヒビター（「化合物Ｉ」）の効果。
【００８７】
トランスジェニックマウスにおいてアロマターゼにより誘導された新生物発生前／新生物変化がアロマターゼインヒビターにより完全に排除または低減化され得るかどうかを試験するために、我々は、アロマターゼインヒビターである「化合物Ｉ」の異なる用量（０.２５、０.５、１.０および５ｇ／日／動物）でアロマターゼトランスジェニック雌を処置し、乳房組織におけるアロマターゼ誘導性過形成および他の変化を完全に抑止または減らした。過去の試験により、５ｇ／日／動物の「化合物Ｉ」（腫瘍減退に基づく）の使用が乳房組織におけるアロマターゼ誘導性過形成および他の変化を完全に抑止または減らし得ることが示された。コントロールおよびさまざまな濃度の「化合物Ｉ」で処置されたアロマターゼトランスジェニック動物からの乳腺を、６週間の「化合物Ｉ」処置の終了後に調べた。我々の知見は、未処置アロマターゼトランスジェニック雌とは対照的に、「化合物Ｉ」で６週間処置されたアロマターゼ雌が、これらの動物においてアロマターゼの過剰発現により誘導される過形成ならびに他の新生物発生前および新生物変化の完全な減少／消失を示すことを示す。これらの結果は、明らかに、アロマターゼの過剰発現により誘導される乳房過形成および他の新生物発生前／新生物変化が「化合物Ｉ」のような強力なアロマターゼインヒビターにより抑止され得ることを例証する。我々のデータは、我々が低用量の「化合物Ｉ」（０.２５または０.５ｇ／日／動物）を用いることによりアロマターゼ誘導性新生物形成前の変化を完全に抑止できたことを示す。
【００８８】
乳腺、卵巣および子宮の組織学的特徴に対するさまざまな濃度の「化合物Ｉ」の効果。コントロールおよびさまざまな濃度の「化合物Ｉ」で処置されたアロマターゼトランスジェニックマウスからの乳腺の組織研究を行った。得られる結果は、我々が、低用量の「化合物Ｉ」（０.２５または０.５μｇ／日／動物）を用いることによりアロマターゼ誘導性新生物形成前変化を完全に抑止できたことを示している。これらの用量は、子宮および卵巣に影響しなかった。これらの低用量の「化合物Ｉ」（０.２５または０.５μｇ／日／動物）は、子宮および卵巣の組織形態学的特徴に影響しなかった。
【００８９】
アロマターゼトランスジェニックマウスにおけるエストラジオールの血中濃度に対する「化合物Ｉ」の効果。血中エストロゲン濃度について、コントロール（１２.５ｐｇ／ｍｌ）と低用量の「化合物Ｉ」（０.２５または０.５μｇ／日／動物）で処置されたそれぞれの群との間に有意差なし（それぞれ、１２.１および１２.５ｐｇ／ｍｌ）。０.５μｇ／日／動物の用量の「化合物Ｉ」は、２ｐｇ／ｍｌのエストラジオール血中濃度をもたらす。
【００９０】
アロマターゼトランスジェニックマウスにおける卵胞刺激ホルモンの血中濃度に対する「化合物Ｉ」の効果。血中ＦＳＨ濃度（２００ｎｇ／ｍｌ）について、コントロールと０.５μｇの「化合物Ｉ」で処置された動物との間に有意差なし。血中ＦＳＨ濃度（４８０ｎｇ／ｍｌ）について、コントロールと５.０μｇの「化合物Ｉ」で処置された群との間の差は、極めて有意である（対によるスチューデントｔ−検定）。
【００９１】
アロマターゼトランスジェニックマウスの乳房組織におけるエストロゲンレセプター（ＥＲ）、プロゲステロンレセプター（ＰＲ）、サイクリンＤ１および増殖性細胞核抗原（ＰＣＮＡ）のタンパク質レベルに対する「化合物Ｉ」の効果。ウエスタンブロット解析からの濃度測定データは、アクチン濃度に基づくあらゆる差の補正後のグラフ表示のために使用される。乳房増殖の減少と一致して、我々は、「化合物Ｉ」処置動物の乳房組織におけるＥＲ、ＰＲのタンパク質レベルの減少を観察した。
【００９２】
我々は、また、ＰＣＮＡおよびサイクリンＤ１（これらも、低用量の「化合物Ｉ」（０.２５または０.５μｇ／日／動物）でのエストロゲン介在性増殖の良好なマーカーである。）の濃度において有意な変化がないことにも気付いた。５μｇの「化合物Ｉ」の用量で、ＰＣＮＡの濃度は５０％減少する。このことは、低用量の「化合物Ｉ」（０.２５または０.５μｇ／日／動物）が子宮および卵巣の組織形態学的特徴に対して影響を及ぼさないという観察と矛盾しない。
【００９３】
アロマターゼトランスジェニックマウスの子宮組織におけるラクトフェリン、ＥＲ、およびＰＲのタンパク質レベルに対する「化合物Ｉ」の効果。ウエスタンブロット解析からの濃度測定データは、アクチン濃度に基づくあらゆる差の補正後のグラフ表示のために使用される。「化合物Ｉ」での処置がこれらの動物の内分泌機能に影響したかどうかを調べるために、我々は、ウエスタンブロット解析による子宮におけるエストロゲン調節（estrogenic regulation）下での遺伝子の発現を試験した。子宮マーカー  ラクトフェリンの発現は、コントロールと０.２５−および０.５μｇ−処置動物との間で差を示さなかった；しかしながら、コントロールと比較して、１.０μｇ／日／動物での処置動物において、１.８倍の減少が観察された。処置動物の子宮におけるＥＲおよびＰＲの発現において、差は見られなかった。
【国際調査報告】
2005515207.tif 000008
2005515207.tif 000009
2005515207.tif 000010
2005515207.tif 000011