(57)【要約】本発明は、式（I）から（IV）のＹ型分鎖ＰＥＧ誘導体に関する。本発明は、これらのＹ型分鎖の結合生成物および薬剤分子、これらの結合生成物を含む医薬組成物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Iで示されるＹ型分鎖親水性ポリマー誘導体。
【化１】
2005520006.tif 000015
上記式中：
ＰaおよびＰbが、同一若しくは異なる親水性ポリマーであり、
ｊが、１から１２までの整数であり、
Ｒiが、Ｈ、置換若しくは置換されていないＣ1-12のアルキル基、置換アリール基、アラルキル基、及びヘテロアルキル基からなる群から選択され、
Ｘ1およびＸ2が、独立して、結合基であり、Ｘ1が、（ＣＨ2）nであり、Ｘ2が、（ＣＨ2）n、（ＣＨ2）nＯＣＯ、（ＣＨ2）nＮＨＣＯおよび（ＣＨ2）nＣＯからなる群から選択され、ｎが、１から１０の整数であり、
Ｆが、治療薬または基質のアミノ基、ヒドロキシル基またはチオール基と反応して、共有結合を形成することができるヒドロキシル基、カルボキシル基、エステル基、カルボン酸塩化物、ヒドラジン、マレイミドおよびピリジンジスルフィドからなる群から選択される１つの官能基である。
【請求項２】
前記親水性ポリマーが、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリアクリルモルホリンおよびそれらの共重合体からなる群から選択される請求項１に記載の親水性ポリマー誘導体。
【請求項３】
前記親水性ポリマーが、ポリエチレングリコールである請求項２に記載の親水性ポリマー誘導体。
【請求項４】
式IIで示されるＹ型分鎖ポリエチレングリコール誘導体。
【化２】
2005520006.tif 000016
上記式中：
ＰaおよびＰbが、同一または異なるポリエチレングリコールであり、
ｎおよびｊが、独立して、１から１２までの整数であり、
Ｒiが、Ｈ、置換若しくは置換されていないＣ1-12のアルキル基、置換アリール基、アラルキル基およびへテロアルキル基からなる群から選択され、
Ｆが、治療薬または基質のアミノ基、ヒドロキシル基またはチオール基と反応して、共有結合を形成することができるヒドロキシル基、カルボキシル基、エステル基、カルボン酸塩化物、ヒドラジン、マレイミドおよびピリジンジスルフィドからなる群から選択される１つの官能基である。
【請求項５】
式IIIで示されるＹ型分鎖ポリエチレングリコール誘導体。
【化３】
2005520006.tif 000017
上記式中：
ＰaおよびＰbが、同一または異なるポリエチレングリコールであり、
ｎ、ｍおよびｊが、独立して、１から１２までの整数であり、
Ｒiが、Ｈ、置換若しくは置換されていないＣ1-12のアルキル基、置換アリール基、アラルキル基およびへテロアルキル基からなる群から選択され、
Ｆが、治療薬または基質のアミノ基、ヒドロキシル基またはチオール基と反応して、共有結合を形成することができるヒドロキシル基、カルボキシル基、エステル基、カルボン酸塩化物、ヒドラジン、マレイミドおよびピリジンジスルフィドからなる群から選択される１つの官能基である。
【請求項６】
式IVで示されるＹ型分鎖ポリエチレングリコール誘導体。
【化４】
2005520006.tif 000018
上記式中：
ＰaおよびＰbが、同一または異なるポリエチレングリコールであり、
ｎおよびｊが、独立して、１から１２までの整数であり、
Ｒiが、Ｈ、置換若しくは置換されていないＣ1-12のアルキル基、置換アリール基、アラルキル基およびへテロアルキル基からなる群から選択され、
Ｆが、治療薬または基質のアミノ基、ヒドロキシル基またはチオール基と反応して、共有結合を形成することができるヒドロキシル基、カルボキシル基、エステル基、カルボン酸塩化物、ヒドラジン、マレイミドおよびピリジンジスルフィドからなる群から選択される１つの官能基である。
【請求項７】
ＰaおよびＰbが、式（V）の同一または異なるＰＥＧでありうる請求項１から６のいずれかに記載の誘導体。
【化５】
2005520006.tif 000019
Ｒが、Ｈ、Ｃ1-12のアルキル基、シクロアルキル基またはアラルキル基であり、
ｎが、重合度を示す整数である。
【請求項８】
Ｒが、Ｈ、メチル基、エチル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロヘキシル基およびベンジル基からなる群から選択される請求項７に記載の誘導体。
【請求項９】
ＰＥＧの分子量が、３００〜６００００ダルトンである請求項７に記載の誘導体。
【請求項１０】
請求項４に記載のＰＥＧ誘導体を調製する方法であって、
エチレンオキシドの重合を、０℃、触媒存在下で、Ｎ，Ｎ−ジ−２−ヒドロキシルエチル−２−ベンジルオキシエチルアミンにより開始し、
ついで、末端のヒドロキシル基をアルキル化し、そして、前記ベンジル基を触媒水素化を介して除去し、
さらに、新たなヒドロキシル基を誘導体化して、末端基Ｆを形成することを含む方法。
【請求項１１】
請求項５または６に記載のＰＥＧ誘導体を調製する方法であって、
１つのメトキシルポリエチレングリコールを標準的な条件下でアミノ酸と反応させて、得られた生成物を別のメトキシポリエチレングリコール誘導体とさらに反応させ、さらに、誘導体化させて末端基Ｆを形成する方法。
【請求項１２】
前記別のメトキシポリエチレングリコール誘導体が、ｍＰＥＧ−カルボキシエチルＮＨＳエステルである請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
請求項１、４、５および６のいずれかに記載の誘導体を、末端基Ｆを介して薬剤分子と反応させることにより得られる結合生成物。
【請求項１４】
末端基Ｆを介して結合した請求項１、４、５および６のいずれかに記載の誘導体と別のポリマーとの共重合体。
【請求項１５】
前記薬剤が、アミノ酸、タンパク質、酵素、ヌクレオシド、糖類、有機酸、グリコシド、フラボノイド、アントラキノン、テルペノイド、フェニルプロパノイドフェノール、ステロイドおよびグリコシドおよびそれらのアルカロイドからなる群から選択される請求項１３に記載の結合生成物。
【請求項１６】
前記薬剤が、天然医薬の有効成分である請求項１３に記載の結合生成物。
【請求項１７】
前記天然有効成分が、シノブファギン、グリシレチン酸またはスコポレチンである請求項１６に記載の結合生成物。
【請求項１８】
前記薬剤が、抗腫瘍剤である請求項１３に記載の結合生成物。
【請求項１９】
前記抗腫瘍剤が、パクリタキセル、カンプトテシン、インターフェロンおよびそれらの誘導体である請求項１８に記載の結合生成物。
【請求項２０】
前記インターフェロンが、α−、β−またはγ−インターフェロンである請求項１９に記載の結合生成物。
【請求項２１】
請求項１３から２０のいずれかに記載の結合生成物、および任意に医薬的に許容される担体および賦形剤を含む医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（本発明の分野）
本発明は、Ｙ型分鎖親水性ポリマー誘導体、それらの調製方法、および前記誘導体と薬剤分子との結合生成物、特に、タンパク質およびポリペプチドに関する。また、本発明は、前記結合生成物を含む医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
（本発明の背景技術）
天然および組み合わせタンパク質ならびにポリペプチドは、医薬として使用されている。精製および分離後の製品は、非経口的経路により、特異的な疾患を治療するために使用できる。しかしながら、非経口投与すると、タンパク質は、免疫原性を有する場合、比較的水に不溶である場合、若しくは生理学的半減期が短い場合がある。体内において非常に効果的な血清濃度を生じ、かつ保持する方法が、極めて重要である。
【０００３】
タンパク質に加えて、天然医薬のその他の成分、例えば、フラボノイド、テルペノイド、アントラキノン、ステロイドおよびアルカロイドを変化させて、それらの生理学的半減期を延ばし、目的部位に到達するように安定性および可能性を高め、水に溶解できるようにし、投与経路を変更し、さらに、バイオアベイラビリティーを改善する必要がある。
【０００４】
近年、それらの生理学的半減期の延長、およびそれらの免疫原性および毒性を低減する目的で、ＰＥＧが、タンパク質、ペプチドまたは別の治療剤を結合するために広く使用されている。臨床的には、ＰＥＧおよびその誘導体は、市販製剤の製造のための担体として広く使用されている。ＰＥＧを薬剤分子に結合させる試みは、この１０年で著しい進化を遂げ、多くの公式認可薬剤に適用されている。例えば、ＰＥＧとα−インターフェロンとの結合生成物であるPEG-intron(R)は、より長い循環半減期と、よりよい治療効果とを示す。ＰＥＧとパクリタキセルとの結合生成物は、毒性を低減し、生物活性を増加する。ＰＥＧの代謝過程は周知であり、ＰＥＧは、安全な薬剤調整剤として受け入れられている。
【０００５】
ＰＥＧと薬剤とを結合する場合、ＰＥＧ化（PEGylation）と呼ばれるあるプロセスがよく用いられる。すなわち、ＰＥＧの１または２以上の末端基を活性化し、薬剤の少なくとも１つの官能基と反応し、それと安定した結合を形成できる適正な官能基を形成する。
【０００６】
多くのＰＥＧ誘導体が報告されている。直鎖ＰＥＧプロピオン酸、ブタン酸およびそれらのＮＨＳエステルが、報告されている（例えば、特許文献１）。最近では、Ｕ型分鎖ＰＥＧが報告されている（例えば、特許文献２）。これらのＰＥＧ誘導体において、２つの直鎖ＰＥＧは、２つの同一の官能基、例えば、２つのアミノ基または２つのカルボキシル基を介して１つの分子または構造と結合する。前記特許文献２の１つの実施例では、前記分鎖ＰＥＧは、直鎖ＰＥＧと、２つのアミノ基を有するアミノ酸であるリジンとから誘導される。
【特許文献１】米国特許第５６７２６６２号明細書
【特許文献２】米国特許第５６４３５７号明細書
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の目的は、新たなＹ型分鎖親水性ポリマー誘導体を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
（本発明の概要）
本発明は、式Iで示される新たなＹ型分鎖親水性ポリマー誘導体を提供する。
【０００９】
【化６】
2005520006.tif 000002
【００１０】
上記式中：
ＰaおよびＰbが、同一若しくは異なる親水性ポリマーであり、
ｊが、１から１２までの整数であり、
Ｒiが、Ｈ、置換若しくは置換されていないＣ1-12のアルキル基、置換アリール基、アラルキル基、及びヘテロアルキル基からなる群から選択され、
Ｘ1およびＸ2が、独立して結合基であり、Ｘ1が、（ＣＨ2）nであり、およびＸ2が、（ＣＨ2）n、（ＣＨ2）nＯＣＯ、（ＣＨ2）nＮＨＣＯおよび（ＣＨ2）nＣＯからなる群から選択され、ｎは、１から１０の整数であり、
Ｆが、治療薬または基質のアミノ基、ヒドロキシル基またはチオール基と反応して、共有結合を形成することができるヒドロキシル基、カルボキシル基、エステル基、カルボン酸塩化物、ヒドラジン、マレイミドおよびピリジンジスルフィドからなる群から選択される１つの官能基である。
【００１１】
本発明のその他の態様として、式IIで示されるＹ型分鎖ポリ（エチレングリコール）誘導体を提供する。
【００１２】
【化７】
2005520006.tif 000003
【００１３】
上記式中：
ＰaおよびＰbが、同一または異なるポリエチレングリコールであり、
ｎおよびｊが、独立して１から１２までの整数であり、
Ｒiが、Ｈ、置換若しくは置換されていないＣ1-12のアルキル基、置換アリール基、アラルキル基およびへテロアルキル基からなる群から選択され、
Ｆが、治療薬または基質のアミノ基、ヒドロキシル基またはチオール基と反応して、共有結合を形成することができるヒドロキシル基、カルボキシル基、エステル基、カルボン酸塩化物、ヒドラジン、マレイミドおよびピリジンジスルフィドからなる群から選択される１つの官能基である。
【００１４】
本発明のさらに他の態様として、式IIIで示されるＹ型分鎖ポリ（エチレングリコール）誘導体を提供する。
【００１５】
【化８】
2005520006.tif 000004
【００１６】
上記式中：
ＰaおよびＰbが、同一または異なるポリエチレングリコールであり、
ｎ、ｍおよびｊが、独立して１から１２までの整数であり、
Ｒiが、Ｈ、置換若しくは置換されていないＣ1-12のアルキル基、置換アリール基、アラルキル基およびへテロアルキル基からなる群から選択され、
Ｆが、治療薬または基質のアミノ基、ヒドロキシル基またはチオール基と反応して、共有結合を形成することができるヒドロキシル基、カルボキシル基、エステル基、カルボン酸塩化物、ヒドラジン、マレイミドおよびピリジンジスルフィドからなる群から選択される１つの官能基である。
【００１７】
本発明のさらに他の態様として、式IVで示されるＹ型分鎖ポリ（エチレングリコール）誘導体を提供する。
【００１８】
【化９】
2005520006.tif 000005
【００１９】
上記式中：
ＰaおよびＰbが、同一または異なるポリエチレングリコールであり、
ｎおよびｊが、独立して１から１２までの整数であり、
Ｒiが、Ｈ、Ｃ1-12の置換若しくは置換されていないアルキル基、置換アリール基、アラルキル基およびへテロアルキル基からなる群から選択され、
Ｆが、治療薬または基質のアミノ基、ヒドロキシル基またはチオール基と反応して、共有結合を形成することができるヒドロキシル基、カルボキシル基、エステル基、カルボン酸塩化物、ヒドラジン、マレイミドおよびピリジンジスルフィドからなる群から選択される１つの官能基である。
【００２０】
本発明のさらにその他の態様として、前記式IIのＰＥＧ誘導体を調製する方法であって、エチレンオキシドの重合を、０℃、触媒存在下で、Ｎ，Ｎ−ジ−２−ヒドロキシルエチル−２−ベンジルオキシエチルアミンにより開始し、ついで、末端のヒドロキシル基をアルキル化し、前記ベンジル基を触媒水素化により除去し、そして、新たなヒドロキシル基を誘導体化して、末端基Ｆを形成することを含む方法を提供する。
【００２１】
本発明のさらにその他の態様として、前記式（II）および（III）のＰＥＧ誘導体を調製する方法であって、ポリエチレングリコールモノメチルエステル−メシラートを、標準的な条件下でアミノ酸と反応させて、得られた生成物を別のポリエチレングリコールモノメチルエーテル誘導体とさらに反応させて、さらに誘導体化させて末端基Ｆを形成することを含む方法を提供する。
【００２２】
本発明のさらにその他の態様として、前記官能基Ｆを介した前記ポリマー誘導体と薬剤分子との結合生成物を提供する。
【００２３】
本発明のさらにその他の態様として、前記結合生成物を含む医薬組成物を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２４】
（図面の詳細な説明）
図１は、Ｙ型分鎖ポリエチレングリコール誘導体（１）の合成を示す。
【００２５】
図２は、Ｙ型分鎖ポリエチレングリコール誘導体（２）および（７）の合成を示す。
【００２６】
図３は、Ｙ型分鎖ポリエチレングリコール誘導体（５）の合成を示す。
【００２７】
図４は、Ｙ型分鎖ポリエチレングリコール誘導体（６）の合成を示す。
【００２８】
図５は、Ｙ型分鎖ポリエチレングリコール誘導体（１）の結合生成物のおよび薬剤（エステル結合を介した）の合成を示す。
【００２９】
図６は、Ｙ型分鎖ポリエチレングリコール誘導体と薬剤との（その他の結合を介した）結合生成物の合成を示す。
【００３０】
図７は、Ｙ型分鎖ポリエチレングリコール誘導体とタンパク質との結合生成物の合成を示す。
【００３１】
（発明の詳細な説明）
本発明において、前記親水性ポリマーは、例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリアクリルモルホリンまたはそれらの共重合体であり、特には、ポリエチレングリコールおよびそれらの共重合体である。
【００３２】
本発明の式（II）から式（IV）のＰＥＧ誘導体において、ＰaおよびＰbは、同一でも異なっていてもよく、下記式（V）で示されるＰＥＧであってもよい。
【００３３】
【化１０】
2005520006.tif 000006
【００３４】
上記式中：
Ｒが、Ｈ、Ｃ1-12のアルキル基、シクロアルキル基またはアラルキル基であり、ｎが、重合度を示す整数であり、ＰＥＧの分子量が３００から６００００となる整数であることが好ましい。
【００３５】
式（V）において、Ｒが、Ｈ、メチル基、エチル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロヘキシル基またはベンジル基であることが好ましい。
【００３６】
本発明のＹ型分鎖親水性ポリマー誘導体は、２つの直鎖ＰＥＧ鎖を小分子のアミノ基に結合させることにより調製することが好ましい。
【００３７】
ここでは、一例として、ＰＥＧを用いて本発明のＹ型分鎖親水性ポリマー誘導体の調製を説明する。
【００３８】
ＰＥＧの一般的な構造は、下記式のように示される。
【００３９】
【化１１】
2005520006.tif 000007
【００４０】
上記式中、ＲはＨ、Ｃ1-12アルキル基、シクロアルキル基またはアラルキル基であり、ｎは重合度を示す整数である。
【００４１】
低アルキル基としては、Ｒが、１〜６の炭素原子を有する低アルキル基であってもよく、例えば、メチル基、エチル基、n-プロピル基、iso-プロピル基、n-ブチル基、iso-ブチル基、n-ペンチル基、またはn-ヘキシル基であってもよい。シクロアルキル基としては、Ｒが、３〜７の炭素原子を含むシクロアルキル基、例えば、シクロプロピル基、シクロブチル基、およびシクロヘキシル基であることが好ましい。これらの中でも、シクロヘキシル基がより好ましい。典型的な化合物は、メトキシ−ポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ）である。その他のポリエチレングリコールの類似体および誘導体、例えば、ポリプロピレングリコール、ポリビニルアルコールおよびポリアクリルモルホリンなどを、本発明において使用してもよい。
【００４２】
ＰＥＧについては、通常、分子量で評価される。前記結合生成物を形成するＰＥＧの分子量が、３００〜６００００ダルトンの範囲、ｎでいうと約６〜約１３００であることが好ましい。より好ましくは、ｎが２８、１１２および４５０であり、分子量がそれぞれ１３２５、５０００および２００００である。通常、自己の繰り返し単位ｎよりもそれらの分子量により定義されるが、出発原料ＰＥＧは、潜在的に非均一であるため、ＰＥＧは、ｎで表される自己の繰り返し単位で特定されるかわりに、ＰＥＧは、一般的に重量平均分子量で特定される。異なる分子量を有する出発材料ＰＥＧ化合物は、当該技術分野の従来公知の方法を用いて容易に合成でき、または市販のものを使用できる。
【００４３】
本発明のＹ型ＰＥＧ誘導体は、当該分野の通常の方法により合成し、調製できる。本明細書において権利主張をしている異なる化合物は、当該分野の技術文献および特許文献を参照して、一致する方法により合成および調製する。
【００４４】
ＰaおよびＰbがｍＰＥＧであって、Ｘ1およびＸ2が単一の分鎖アルキル基であって、Ｆがヒドロキシル基である場合、とりうる式は以下のとおりである。
【００４５】
【化１２】
2005520006.tif 000008
【００４６】
適当な重合開始剤を調製して、エチレンオキシドまたはエチレングリコールとの重合を促進することにより得られる。その標準的な調製方法を以下に示す。
【００４７】
【化１３】
2005520006.tif 000009
【００４８】
ＰaおよびＰbがメトキシポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ）であり、Ｘ1およびＸ2が相違する場合、とりうる式は以下のとおりである。
【００４９】
【化１４】
2005520006.tif 000010
【００５０】
この化合物は、アミノ基を含む化合物と、ＰＥＧとを段階的に反応させることにより得られる。アミノ基を含む選択化合物は、アミノ酸、アミノケトンまたはアミノ基を有するその他の分子であってもよい。標準的な調製経路を以下に示す。しかしながら、当該分野で、この誘導体を調製するためのより適当若しくは経済的な方法がまだ存在する。
【００５１】
【化１５】
2005520006.tif 000011
【００５２】
本発明の親水性ポリマー誘導体を使用する場合、官能基Ｆが重要な役割を示す。異なる末端基を有する誘導体は、異なる用途を有する。これらの官能基の導入は、これらの誘導体の構造および適当な分野を確定する。所望の用途に関して、末端官能基を改変させるためには、以下の方法が使用できる。
【００５３】
１．アミノ化
ヒドロキシル基よりもアミノ基のほうが、反応性が優れるため、結合生成物を得るためには、アミノ化したＰＥＧ誘導体は、カルボキシル基を有する分子と反応において重要である。
【００５４】
【化１６】
2005520006.tif 000012
【００５５】
２．カルボキシル化
カルボキシル化は、ＰＥＧの反応性の向上を助け、アミノ基またはヒドロキシル基を有する分子との結合を行うことができる。
【００５６】
【化１７】
2005520006.tif 000013
【００５７】
アミノ酸を出発物質として使用する場合、得られたＹ型ＰＥＧの末端基はカルボキシル基を有するものである。特に、アミノ酸またはポリマーを含む複数のカルボキシル基を使用する場合、末端基は、数個のカルボキシル基を有するものである。この種の構造は、小さな天然薬剤分子の負荷を増加させ、さらに、徐々に分解することにより遅効性効果を発揮させることに有用である。
【００５８】
３．その他の改変方法
その他の改変、例えば、酸塩化物、ヒドラジン、マレイミド、ピリジンジスルフィドなどを適当に適応させることにより、対応する誘導体を得ることができる。この分野において、対応する調製方法を得るのは容易である。
【００５９】
天然薬剤の多くの組成物は、体内において、単糖類、多糖類、ヌクレオシド、ポリヌクレオシド、ホスホリルなどと結合して、活性薬理学的構造を形成する活性官能基、例えば、アミノ基、カルボキシル基、およびヒドロキシル基を有する。
【００６０】
同様に、改変した末端官能基を有するＰＥＧ誘導体は、薬剤分子と結合することにより、同様にして生物有機分子に代えて、短い生理学的半減期および低治療効果の欠点を克服することができる、以下のモデルは、一般的なエステル合成反応である。
【００６１】
【化１８】
2005520006.tif 000014
【００６２】
エステル基は、体内で生分解により除去され、有効成分を放出することができる。アミド基は、体内で比較的安定である。
【００６３】
本発明のＹ型親水性ポリマー誘導体は、適当な官能基を介して薬剤分子と結合生成物を形成することができる。前記官能基は、遊離アミノ酸、タンパク質、ポリペプチドおよびその他の天然薬剤のヒドロキシル基およびチオール基と前記ポリマー誘導体とを結合させることができる。高分子量を有するタンパク質およびペプチドに対して、１つの分子が、１つ以上のＰＥＧ誘導体と結合して、体内において薬剤分子の生理学的効果を向上することができる。低分子量を有する天然薬剤の有効成分としては、１つのＰＥＧ誘導体が適当な官能基を介して１以上の薬剤分子と結合し、適当な薬剤濃度および徐放効果を確実にすることができる。
【００６４】
前記した適用例は、前記ＰＥＧ誘導体の医学的用途のための可能な規範モデルを提示したものである。実際に適用するための適当な誘導体の選択は、いくつかの必要な工程、例えば、動物薬理学、毒性および臨床試験により確認しなければならない。
【００６５】
本発明の結合生成物に含まれる薬剤分子が、天然植物から単離された有効成分、例えば、パクリタキセル、カンプトテシン、シノブファギン、グリシレチン酸およびスコポレチンであることが好ましい。前記薬剤が、腫瘍の治療に使用される天然医薬の成分、例えば、パクリタキセル、カンプトテシンおよびそれらの誘導体であることが好ましい。また、前記薬剤は、インターフェロン、例えば、α-およびβ-インターフェロンであることが好ましい。
【００６６】
本発明の結合生成物は、純化合物または適当な医薬組成物の形態、適当な経路を介して若しくは同様の用途の薬剤を含んだ状態で投与することができる。すなわち、前記結合生成物は、経口、鼻腔、非経口、局所的、経皮的、直腸または注入経路により、固体、半固体、凍結乾燥粉末または液体、例えば、錠剤、坐薬、ピル、ソフトおよびハードゼラチンカプセル剤、粉剤、溶剤、懸濁剤およびエアロゾル剤等の投与形態で投与できる。正確な投与量および簡便な投与に適した単位投与形態が好ましい。前記組成物は、従来の薬学的担体または賦形剤および、前記有効成分として本発明の結合生成物を含む。さらに、その他の薬剤、担体および賦形剤を含んでいてもよい。
【００６７】
所望の投与方法に依存するが、一般的には、薬学的に許容させる組成物は、本発明の結合生成物を約１〜約９９重量％と、適当な薬学的賦形剤を９９重量％〜１重量％含んでいてもよい。これらは、結合生成物を５重量％〜７５重量％含み、残りは、適当な薬学的賦形剤であることが好ましい。
【００６８】
好ましい投与方法は、治療する疾患の重篤度に基づき調整することができるため、一般的な一日量計画により注入することである。本発明の結合生成物またはそれらの薬学上許容させる塩は、注入用の投与の形態、例えば、液体の薬学的担体、例えば、水、食塩水、グルコース水溶液、グリセロール、エタノール等中に前記活性成分を０．５％〜５０％溶解することにより、懸濁液を形成することにより調製できる。
【００６９】
例えば、液剤や懸濁液といった液体の形態で投与される前記組成物は、本発明の結合生成物（約０．５％〜２０％）および任意の薬学的賦形剤を担体に溶解または分散させることで調製できる。前記担体の例としては、水、食塩水、グルコース水溶液、グリセロール、エタノール等である。
【００７０】
必要に応じて、本発明の医薬組成物は、さらに、少量のアジュバント、例えば、湿剤、乳化剤、ｐＨ緩衝液、抗酸化剤などを含んでいてもよい。例えば、クエン酸、ソルビタンモノラウレート、トリエタノールアミンオレアート、ブチル化ヒドロキシトルエンなどを加えることができる。
【００７１】
このような投薬形態の実際の調製方法は、当該技術分野の技術者に公知又は自明であって、例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th edition (Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania, 1990)を参照できる。ともかく、本発明の技術によれば、使用される組成物は、対応する疾患を治療するための有効量の本発明の結合生成物を含んでいる。
【００７２】
（実施例）
本発明のポリマー誘導体および結合生成物、ならびにそれらの調製方法を、以下の実施例によりさらに説明する。これらの実施例は、いかなる場合であっても本発明の範囲を制限するものではない。本発明の範囲は、請求の範囲にのみ制限される。
【実施例１】
【００７３】
Ｙ型分鎖ポリエチレングリコール誘導体（１）の合成
前記合成を、図１に示す。０℃で、２００ｍｇのＮ，Ｎ−ジ−２−ヒドロキシエチル−２−ベンジルオキシエチルアミンと５０ｍｇの乾燥ＮａＨとを入れた丈夫なフラスコに、１０ｍｌの乾燥エチレンオキシドを加えた。その反応混合物を、前記温度をゆっくり上昇させながら撹拌した。２８時間後、粘性液を水で急冷し、ポリマーをジクロロメタンで抽出した。その有機相を、無水硫酸ナトリウムで乾燥させて、減圧下で前記溶媒を除去した。収率：８．２ｇ（８１％）、Ｍｐ：５６〜５８℃。
【００７４】
５ｇの(PEG)2-N-CH2CH2O-Bz（分子量１００００、前記工程で得られたもの）を、５０ｍｌのトルエンに溶解した。０．１ｇの水素化ナトリウムと０．５ｇのベンゼンスルホン酸メチルエステルとを、前記溶液に加えた。前記反応混合物を、８０℃で２４時間加熱した。ついで、前記溶液を２ｍｌのイソプロピルアルコールで急冷した。前記溶媒を減圧下で除去し、その残渣に２００ｍｌのイソプロピルアルコールを加えた。その沈殿物を、ろ過により回収し、真空中で乾燥させた。収率：４.６ｇ（９２％）、Ｍｐ：５７〜５９℃。
【００７５】
３ｇの(MeO-PEG)2-N-CH2CH2O-Bz（分子量１００００、前記工程で得られたもの）を、３０ｍｌの無水１，４−ジオクサンに溶解した。ついで、０.１ｇのＰｄ／Ｃを触媒として前記溶液混合物に加え、Ｈ2ガス（４０ｐｓｉ）を前記反応容器に導入した。前記溶液を、室温で一晩、力強く撹拌した。前記触媒をろ過により除去し、新たなジクロロメタンで洗浄した。前記溶媒をロータリーエバポレーションにより除去し、その残渣をエチルエーテルに加えた。その沈殿物をろ過により回収し、真空中で乾燥させた。収率：２．４ｇ（８０％）。NMR(DMSO)：3.5 (br m, H in PEG), 3.24 (s, 6H), 2.63 (t, 6H)。
【実施例２】
【００７６】
Ｙ型分鎖ポリエチレングリコールスクシニミジルカルボン酸（２）の合成
図２に、前記合成を示す。分子量１００００のＹ型分鎖ＰＥＧ誘導体((MeO-PEG)2-N-CH2CH2OH、実施例１より得られたもの)１ｇと、ジ−スクシイミジルカルボン酸０．１ｇとを、２０ｍｌのアセトニトリルに溶解した。０．１ｍｌのピリジンを前記溶液に加えた。この反応混合物を窒素ガス保護下で、１晩撹拌した。前記溶媒を、ロータリーエバポレーションで除去し、その残渣を減圧下で乾燥させた。その固体残渣を、１０ｍｌの乾燥ジクロロメタンに加えた。溶解しなかった固体は濾過した。その有機相を、酢酸ナトリウム緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ５．５）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ロータリーエバポレーションで濃縮し、エチルエーテル中に沈殿させた。その生成物を真空中で乾燥させた。収率：０.９ｇ（９０％）。NMR (DMSO): 3.5 (br m, H in PEG), 3.24 (s, 6H), 4.45(t, 2H), 2.82 (s, 4H)。
【実施例３】
【００７７】
ｍＰＥＧ−グリシン（３）の合成
分子量５０００のｍＰＥＧ５ｇを５０ｍｌトルエンに溶解し、窒素ガス保護下で、２時間、共沸蒸留し、蒸留して抽出した溶液１０ｍｌを得て、ついで、室温に冷却した。３ｍｌの乾燥ジクロロメタンと０．０８ｍｌの乾燥トリエチルアミンとをその反応物に加えた。前記混合物を、氷水浴で冷却し、０．１２ｍｌの乾燥メタンスルホニルクロライドを滴下した。その混合物を、窒素ガス保護下、室温で、一晩撹拌した。その反応物を、２ｍｌの無水エタノールを加えることにより急冷した。前記溶媒の一部を、ロータリーエバポレーションにより除去し、その沈殿物をろ過により回収し、ついで、１５０ｍｌのエチルエーテルを加えた。沈殿物をろ過により回収し、真空中で乾燥させた。収率：４.８g（９６％）。NMR(DMSO): 3.5 (br m, H in PEG), 3.24 (s, 3H), 4.32 (t, 2H)。
【００７８】
２ｇの塩酸グリシンを、２０ｍｌの脱イオン水に溶解した。１ｇのＮａＯＨを、前記グリシン溶液に加え、ｐＨを１０.５に調整した。ついで、分子量５０００のｍＰＥＧメシラートエステル（前記工程で得られたもの）２ｇを、前記溶液に加えた。その溶液を、３７℃、７２時間インキュベートし、ついで、塩酸溶液でｐＨを約７に中和した。ジクロロメタンでポリマーを抽出した。有機相を、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下で除去した。収率：１．７ｇ（８５％）、Ｍｐ：５５〜５７℃。NMR (DMSO): 3.5 (br m, H in PEG), 3.24 (s, 3H), 2.95 (t, 2H), 3.11 (s, 2H)。
【実施例４】
【００７９】
ｍＰＥＧ−アラニン（４）の合成
分子量５０００のｍＰＥＧ５ｇを、５０ｍｌのトルエンに溶解し、窒素ガス保護下で、２時間、共沸蒸留し、蒸留して抽出した溶液１０ｍｌを得て、ついで、室温に冷却した。３ｍｌの乾燥ジクロロメタンと０．０８ｍｌの乾燥トリエチルアミンとをその反応物に加えた。その混合物を、氷水浴で冷却し、０．１２ｍｌの乾燥メタンスルホニルクロライドを滴下した。その混合物を室温、窒素ガス保護下で一晩撹拌した。その反応物を、２ｍｌの無水エタノールを加えることにより急冷した。前記溶媒をロータリーエバポレーションにより除去し、その沈殿物をろ過により回収し、ついで、１５０ｍｌのエチルエーテルを加えた。その沈殿物をろ過により回収し、真空中で乾燥させた。収率：４．５ｇ（９０％）。NMR (DMSO): 3.5 (br m, H in PEG), 3.24 (s, 3H), 4.32 (t, 2H)。
【００８０】
２ｇの塩酸アラニンを、２０ｍｌの脱イオン水に溶解した。１ｇのＮａＯＨをそのアラニン溶液に加え、ｐＨを１０.５に調整した。ついで、分子量５０００のｍＰＥＧメシラート２ｇをその溶液に加えた。前記溶液を、３７℃で７２時間インキュベートし、ついで、塩酸溶液で、ｐＨを約７に中和した。そのポリマーをジクロロメタンで抽出した。その有機相を、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で溶媒を除去した。収率：１．９ｇ（９４％）、Ｍｐ：５５〜５７℃。NMR (DMSO): 3.5 (br m, H in PEG), 3.24 (s, 3H), 2.94 (m, 1H), 1.24 (d, 3H)。
【実施例５】
【００８１】
アミノ基反応性Ｙ型分鎖ＰＥＧ誘導体（５）の合成
図３に、前記合成を示す。分子量５０００のｍＰＥＧ−グリシン（３）またはｍＰＥＧ−アラニン（４）（実施例３または４で得られたもの）１ｇを、２０ｍｌのジクロロメタンに溶解した。１ｇのｍＰＥＧカルボキシエチルＮＨＳエステル（mPEG-O-CH2-CO-NHS、分子量５０００）および０．１ｍｌのトリエチルアミンを前記溶液に加えた。その溶液を一晩撹拌した。前記溶媒を減圧下で除去し、その残渣をエチルエーテルに加えた。その沈殿物をろ過により回収し、減圧下で乾燥させた。その生成物（Ｙ型分鎖ＰＥＧ酸）を、さらに、イオン交換クロマトグラフィーにより精製した。収率：０．９８ｇ（５０％）。
【００８２】
０．５ｇのＹ型分鎖ｍＰＥＧ酸を１０ｍｌのジクロロメタンに溶解した。７ｍｇのＮ−ヒドロキシルスクシイミド（ＮＨＳ）と１３ｍｇのジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）とを前記溶液に加えた。前記溶液を室温で６時間撹拌した。前記溶媒を減圧下で除去した。その残渣を２０ｍｌのイソプロピルアルコール（ＩＰＡ）に加えた。その生成物をろ過により回収し、減圧下で乾燥させた。収率：０．４８ｇ（９６％）。NMR (DMSO): 3.5 (br m, H in PEG), 3.24, (s, 6H), 2.81 (s, 4H), 4.15 (s, 2H), 4.07 (t, 2H), 4.48 (t, 2H)。
【実施例６】
【００８３】
アミン基反応性Ｙ型分鎖ＰＥＧ誘導体（６）の合成
図４に、その合成を示す。分子量５０００のｍＰＥＧ−グリシン（３）またはｍＰＥＧ−アラニン（４）（実施例３または４で得られたもの）１ｇを、２０ｍｌのジクロロメタンに溶解した。分子量５０００ダルトンのｍＰＥＧ ＮＨＳカルボン酸（mPEGO-CO-NHS）１ｇとトリエチルアミン０．１ｍｌとを前記溶液に加えた。その溶液を１晩撹拌した。前記溶媒を減圧下で除去し、その残渣をエチルエーテルに加えた。その沈殿物をろ過により回収し、減圧下で乾燥させた。その生成物（Ｙ型分鎖ＰＥＧ酸）をさらにイオン交換クロマトグラフィーにより精製した。収率：０．９８ｇ（５０％）。
【００８４】
０．５ｇのＹ型分鎖ｍＰＥＧ酸を、１０ｍｌのジクロロメタンに溶解した。７ｍｇのＮ−ヒドロキシルスクシイミド（ＮＨＳ）と１３ｍｇのジシクロヘキシルカルボジイミドとをその溶液に加えた。その溶液を室温で６時間撹拌した。前記溶媒を減圧下で除去した。その残渣を２０ｍｌのイソプロピルアルコールに加えた。その沈殿物をろ過により回収し、減圧下で乾燥させた。収率：０．４８ｇ（９６％）。NMR (DMSO): 3.5 (br m, H in PEG), 3.24 (s, 6H), 2.81 (s, 4H), 4.15 (s, 2H), 4.07 (t, 2H)。
【実施例７】
【００８５】
チオール基反応性Ｙ型分鎖ＰＥＧ誘導体（７）の合成
図２に、その合成を示す。分子量１００００のＹ型分鎖ＰＥＧ(MeO-PEG)2- NCH2CH2OH)（実施例２で得られたもの）１ｇを、トルエンに溶解し、窒素ガス保護下で２時間、共沸蒸留し、ついで室温に冷却した。３ｍｌの乾燥ジクロロメタンと０．０８ｍｌの乾燥トリエチルアミンとをその溶液に加えた。その混合物を氷水浴で冷却し、乾燥メタンスルホニルクロライドを滴下した。その混合物を室温、乾燥窒素ガス下で一晩撹拌した。その反応物に、３ｍｌの無水エタノールを添加することにより急冷した。前記溶媒をロータリーエバポレーションにより除去し、その沈殿物をろ過により除去し、ついで、１５０ｍｌのエチルエーテルを加えた。その沈殿物をろ過により回収し、真空中で乾燥させた。収率：０．８ｇ（８０％）。
【００８６】
分子量１００００のＹ型分鎖ＰＥＧメシラート(MeO-PEG)2-N-CH2CH2OMs)１ｇを、５％塩化アンモニウムを含むアンモニウム水溶液３０ｍｌに溶解した。その溶液を７２時間、室温で撹拌した。その溶液をジクロロエタンで３回抽出した。その有機相を合わせたものを無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。前記溶媒を減圧下で除去した。その残渣を５０ｍｌのイソプロピルアルコールに加えた。その沈殿物を回収し、減圧下で乾燥させた。収率：０．７ｇ（７０％）。
【００８７】
０．５ｇのＹ型分鎖ＰＥＧアミン((MeO-PEG)2-N-CH2CH2NH2)を、アセトニトリルに溶解した。２０ｍｇのＮＨＳ−３−マレイミドプロピオン酸をその溶液に加えた。その溶液を室温で、一晩撹拌した。前記溶媒を減圧下で除去した。その残渣を３０ｍｌのイソプロピルアルコールに加えた。その沈殿物を回収し、減圧下で乾燥させた。収率：０．４２ｇ（８４％）。NMR (DMSO): 3.5 (br m, H in PEG), 3.24 (s, 6H), 3.05 (t, 2H), 2.56 (t, 2H), 6.71 (s, 2H in マレイミド)。
【実施例８】
【００８８】
Ｙ型分鎖ＰＥＧ−ＮＨＳ誘導体とα−インターフェロンとの結合生成物（８）
図７に、その合成を示す。７５ｍｇのＹ型分鎖ポリエチレングリコールスクシイミジルエステル（実施例２、５または６から得られたもの）を、インターフェロン濃度５ｍｇ／ｍｌの緩衝化したα−インターフェロン溶液（ｐＨ７．４）５ｍｌに溶解した。反応溶液中のＰＥＧとα−インターフェロンとの割合は、３：１であった。その溶液を４℃で１時間、ついで室温で５時間静かに混ぜ合わせた。その溶液を最終インターフェロン濃度０．５ｍｇ／ｍｌとなるように希釈し、ゲルカラムのＨＰＬＣで精製した。α−インターフェロンの一置換Ｙ型分鎖ＰＥＧ結合生成物を回収した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥは、前記生成物に、遊離α−インターフェロンを含まないことを示した。
【００８９】
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析：反応混合物と精製したＰＥＧ−ＩＦＮとを、ドデシル（ラウリル）硫酸ナトリウム／ポリアクリルアミド（８〜１６％）ゲル電気泳動にかけ、クーマシーブルー色素（Coomassie blue dye）を用いてタンパク質を着色した。前記ＰＥＧ２−ＩＮＦ結合生成物の一部のＰＥＧを、チトリソール（Titrisol）ヨウ素溶液（EM Science, Gibbstown, New Jersey）を用いて別に着色した。前記ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを、蒸留水ですすぎ、５％塩化バリウム溶液に浸した。１０分後、前記ゲルを蒸留水で洗浄し、０．１Ｎチトリソール（Titrisol）ヨウ素溶液にさらに１０分間浸した。チトリソールを蒸留水で洗浄した。Ｙ−ＰＥＧ−ＩＦＮ試料を含むＰＥＧを着色した（オレンジブラウンのバンド）ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルは、加熱封入したカパック／スコッチパック（Kapak/Scotchpak）バッグの中に蒸留水を入れて保存した。
【実施例９】
【００９０】
Ｙ型分鎖ＰＥＧ−ＮＨＳとβ−インターフェロンとの結合生成物
Ｙ型分鎖ポリエチレングリコールスクシニミジルエステル（実施例５または６）を、インターフェロン濃度１ｍｇ／ｍｌの緩衝化したβ−インターフェロン溶液（ｐＨ７．４）５ｍｌに溶解した。反応液において、ＰＥＧとβ−インターフェロンとの割合は、３：１であった。その溶液を、７時間静かに混ぜ合わせた。その溶液を、ゲルカラムのＨＰＬＣにより精製した。β−インターフェロンの一置換Ｙ型分鎖ＰＥＧ結合生成物を回収した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥとＣＥは、生成物に遊離βインターフェロンが含まないことを示した。
【実施例１０】
【００９１】
Ｙ型分鎖ＰＥＧ誘導体とパクリタキセルとの結合生成物（１０）
図５に、その合成を示す。１ｇのＹ型分鎖ＰＥＧカルボン酸（実施例５または６から得られたもの）を、１０ｍｌのジクロロメタンに溶解した。９０ｍｇのパクリタキセル、８ｍｇのジメチルアミノピリジンおよび２５ｍｇのジシクロヘキシルカルボジイミドをその溶液に加えた。その溶液を室温で６時間撹拌した。前記溶媒を減圧下で除去した。その残渣を、２０ｍｌのイソプロピルアルコールに加えた。その沈殿物をろ過により回収し、エーテルで洗浄し、減圧下で乾燥させた。収率：０．８ｇ（８０％）、Ｍｐ：５５〜５７℃。
【実施例１１】
【００９２】
Ｙ型分鎖ＰＥＧ誘導体とカンプトテシンとの結合生成物（１１）
図６に、その合成を示す。１ｇのＹ型分鎖ＰＥＧカルボン酸（実施例５または６）を、１０ｍｌのジクロロメタンに溶解した。１２０ｍｇのグリシン−カンプトテシン、５０ｍｇのジメチルアミノピリジンおよび９５ｍｇのジシクロヘキシルカルボジイミドをその溶液に加えた。その溶液を室温で６時間撹拌した。前記溶媒を減圧下で除去した。その残渣を、２０ｍｌの１，４−ジオクサンに溶解した。その沈殿物をろ過により除去した。その溶液を濃縮し、その残渣を２０ｍｌのエチルエーテルに加えた。その沈殿物をろ過により回収し、エチルエーテルで洗浄して、減圧下で乾燥させた。収率：０．８ｇ（８０％）、Ｍｐ：５６〜５８℃。
【実施例１２】
【００９３】
Ｙ型分鎖ＰＥＧ誘導体とシノブファギンとの結合生成物（１２）
図５に、その合成を示す。１ｇのＹ型分鎖ＰＥＧカルボン酸（実施例５または６）を１０ｍｌのジクロロメタンに溶解した。６０ｍｇのシノブファギン、１２ｍｇの１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、１６ｍｇのジメチルアミノピリジンおよび４０ｍｇのジシクロヘキシルカルボジイミドを、前記溶液に加えた。その溶液を室温で６時間撹拌した。前記溶媒を減圧下で除去した。その残渣を２０ｍｌのイソプロピルアルコールに加えた。その沈殿物をろ過により回収し、エーテルで洗浄し、減圧下で乾燥させた。収率：０．７５ｇ（７５％）、Ｍｐ：５７〜５９℃。
【実施例１３】
【００９４】
Ｙ型分鎖ＰＥＧ誘導体とスコポレチンとの結合生成物（１３）
図５に、その合成を示す。１ｇのＹ型分鎖ＰＥＧカルボン酸（実施例５または６）を、２０ｍｌのジクロロメタンに溶解した。３０ｍｇのシノブファギン、２０ｍｇの１−ヒドロキシベンゾトリアゾール。２０ｍｇのジメチルアミノピリジンおよび３８ｍｇのジクロロへキシル−カルボジイミドを前記溶液に加えた。その溶液を窒素ガス保護下、室温で１２時間撹拌した。前記溶媒を減圧下で濃縮した。その残渣に２０ｍｌの１，４−ジオキサンを加えた。その沈殿物をろ過により回収し、エーテルで洗浄し、空気排出装置で乾燥させた。前記溶媒を減圧下で除去した。残った残渣に、１００ｍｌのイソプロピルアルコールを加えた。その沈殿物をろ過により回収し、エーテルで洗浄し、空気排出装置で乾燥させた。その沈殿物を合わせて、減圧下で乾燥させた。収率：０．９２ｇ（９２％）、Ｍｐ：５６−５８℃。
【実施例１４】
【００９５】
Ｙ型分鎖ＰＥＧ誘導体とグリシレチン酸との結合生成物（１４）
図６に、その合成を示す。１ｇのＹ型分鎖ＰＥＧカルボン酸（実施例５または６）を、１０ｍｌのジクロロメタンに溶解した。０．２ｍｌの塩化チオニルを、その溶液に加えた。その溶液を２時間撹拌した。前記溶媒および低沸点を有する不純物を減圧下で除去した。７０ｍｇのグリシレチン酸を含むジクロロメタン溶液１０ｍｌを加え、混合して溶解させた。ついで、６０ｍｇの４−ジメチルアミノピリジンを加えた。その反応混合物を窒素ガス保護下、１２時間室温で撹拌した。前記溶媒を減圧下で濃縮した。その残渣を２０ｍｌのイソプロピルアルコールに加えた。その沈殿物をろ過により回収し、エチルエーテルで洗浄し、空気排出装置で乾燥させ、さらに減圧下で乾燥させた。収率：０．６ｇ（６０％）。Ｍ．ｐ．：５８〜６０℃。
【実施例１５】
【００９６】
この実施例では、典型的な非経口組成物の調製プロセスについて説明する。この生成物は、本発明の結合生成物を含む。
【００９７】
成分
実施例８で調製した結合生成物      ２ｍｇ
０．９％食塩水                    １００ｍｌ
実施例８で調製した結合生成物を、０．９％食塩水に溶解し、１００ｍｌの静脈注射用溶液を得た。これを０．２μｍ膜で濾過し、無菌包装した。注射用粉末は、凍結乾燥により得た。
【図面の簡単な説明】
【００９８】
【図１】図１は、Ｙ型分鎖ポリエチレングリコール誘導体（１）の合成を示すスキームである。
【図２】図２は、Ｙ型分鎖ポリエチレングリコール誘導体（２）および（７）の合成を示すスキームである。
【図３】図３は、Ｙ型分鎖ポリエチレングリコール誘導体（５）の合成を示すスキームである。
【図４】図４は、Ｙ型分鎖ポリエチレングリコール誘導体（６）の合成を示すスキームである。
【図５】図５は、Ｙ型分鎖ポリエチレングリコール誘導体（１）の結合生成物のおよび薬剤（エステル結合を介した）の合成を示すスキームである。
【図６】図６は、Ｙ型分鎖ポリエチレングリコール誘導体と薬剤との（その他の結合を介した）結合生成物の合成を示すスキームである。
【図７】図７は、Ｙ型分鎖ポリエチレングリコール誘導体とタンパク質との結合生成物の合成を示すスキームである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
2005520006.tif 000027
2005520006.tif 000028
2005520006.tif 000029
2005520006.tif 000030