(57)【要約】本発明は、トランスダクチン−１（ＴＤＣ１）又はトランスダクチン−２（ＴＤＣ２）のいずれかをコードするヌクレオチド配列から本質的になる単離又は精製された核酸分子、関連及び誘導核酸分子、該単離又は精製された核酸配列を含むベクター、このようなベクターを含む細胞、該核酸分子によってコードされるポリペプチド、モノクローナル抗体、及び該モノクローナル抗体を産生する細胞系を提供する。本発明はまた、難聴の治療、予後判定、及びモニターの方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
トランスダクチン−１（ＴＤＣ１）をコードするヌクレオチド配列又は少なくとも３１４個の連続ヌクレオチドを含むそのフラグメントから本質的になる、単離又は精製された核酸分子。
【請求項２】
ＴＤＣ１がヒトのものである、請求項１に記載の単離又は精製された核酸分子。
【請求項３】
（ｉ）配列番号２のアミノ酸配列又は少なくとも１０５個の連続アミノ酸を含むそのフラグメントをコードする、（ｉｉ）配列番号１のヌクレオチド配列又は少なくとも３１４個の連続ヌクレオチドを含むそのフラグメントから本質的になる、（ｉｉｉ）中程度のストリンジェント条件下、配列番号１又はそのフラグメントに相補的なヌクレオチド配列から本質的になる単離又は精製された核酸分子とハイブリダイズする、又は（ｉｖ）配列番号１と４３％以上の同一性を共有する、請求項１に記載の単離又は精製された核酸分子。
【請求項４】
（ｉ）配列番号６のアミノ酸配列又は少なくとも１０５個の連続アミノ酸を含むそのフラグメントをコードする、（ｉｉ）配列番号５のヌクレオチド配列又は少なくとも３１４個の連続ヌクレオチドを含むそのフラグメントから本質的になる、（ｉｉｉ）中程度のストリンジェント条件下、配列番号５又はそのフラグメントに相補的なヌクレオチド配列から本質的になる単離又は精製された核酸分子とハイブリダイズする、又は（ｉｖ）配列番号５と４０％以上の同一性を共有する、請求項１に記載の単離又は精製された核酸分子。
【請求項５】
ヒトＴＤＣ１又はそのフラグメントをコードするヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列から本質的になる単離又は精製された核酸分子。
【請求項６】
（ｉ）配列番号２のアミノ酸配列又は少なくとも１０５個の連続アミノ酸を含むそのフラグメントをコードするヌクレオチド配列に相補的である、（ｉｉ）配列番号１のヌクレオチド配列又は少なくとも３１４個の連続ヌクレオチドを含むそのフラグメントに相補的である、（ｉｉｉ）中程度のストリンジェント条件下、配列番号１又はそのフラグメントから本質的になる単離又は精製された核酸分子とハイブリダイズする、又は（ｉｖ）配列番号１に相補的な核酸配列と４３％以上の同一性を共有する、請求項５に記載の単離又は精製された核酸分子。
【請求項７】
トランスダクチン−２（ＴＤＣ２）をコードするヌクレオチド配列又は少なくとも１１０個の連続ヌクレオチドを含むそのフラグメントから本質的になる単離又は精製された核酸分子。
【請求項８】
ＴＤＣ２がヒトのものである、請求項７に記載の単離又は精製された核酸分子。
【請求項９】
（ｉ）配列番号４のアミノ酸配列又は少なくとも７０個の連続アミノ酸を含むそのフラグメントをコードする、（ｉｉ）配列番号３のヌクレオチド配列又は少なくとも１１０個の連続ヌクレオチドを含むそのフラグメントから本質的になる、（ｉｉｉ）中程度のストリンジェント条件下、配列番号３又はそのフラグメントに相補的なヌクレオチド配列から本質的になる単離又は精製された核酸分子とハイブリダイズする、又は（ｉｖ）配列番号３と４９％以上の同一性を共有する、請求項７に記載の単離又は精製された核酸分子。
【請求項１０】
（ｉ）配列番号８のアミノ酸配列又は少なくとも７１個の連続アミノ酸を含むそのフラグメントをコードする、（ｉｉ）配列番号７のヌクレオチド配列又は少なくとも１１０個の連続ヌクレオチドを含むそのフラグメントから本質的になる、（ｉｉｉ）中程度のストリンジェント条件下、配列番号７又はそのフラグメントに相補的なヌクレオチド配列から本質的になる単離又は精製された核酸分子とハイブリダイズする、又は（ｉｖ）配列番号７と４１％以上の同一性を共有する、請求項７に記載の単離又は精製された核酸分子。
【請求項１１】
ヒトＴＤＣ２をコードするヌクレオチド配列又はそのフラグメントのどちらか一方に相補的なヌクレオチド配列から本質的になる単離又は精製された核酸分子。
【請求項１２】
（ｉ）配列番号４のアミノ酸配列又は少なくとも７０個の連続アミノ酸を含むそのフラグメントをコードするヌクレオチド配列に相補的である、（ｉｉ）配列番号３のヌクレオチド配列又は少なくとも１１０個の連続ヌクレオチドを含むそのフラグメントに相補的である、（ｉｉｉ）中程度のストリンジェント条件下、配列番号３又はそのフラグメントから本質的になる単離又は精製された核酸分子とハイブリダイズする、又は（ｉｖ）配列番号３に相補的なヌクレオチド配列と４９％以上の同一性を共有する、請求項１１に記載の単離又は精製された核酸分子。
【請求項１３】
請求項１に記載の単離又は精製された核酸分子を含むベクター。
【請求項１４】
請求項５に記載の単離又は精製された核酸分子を含むベクター。
【請求項１５】
請求項７に記載の単離又は精製された核酸分子を含むベクター。
【請求項１６】
請求項１１に記載の単離又は精製された核酸分子を含むベクター。
【請求項１７】
場合によってはベクターの形態である請求項１に記載の単離又は精製された核酸分子と医薬上許容できる担体を含む組成物。
【請求項１８】
場合によってはベクターの形態である請求項５に記載の単離又は精製された核酸分子と医薬上許容できる担体を含む組成物。
【請求項１９】
場合によってはベクターの形態である請求項７に記載の単離又は精製された核酸分子と医薬上許容できる担体を含む組成物。
【請求項２０】
場合によってはベクターの形態である請求項１１に記載の単離又は精製された核酸分子と医薬上許容できる担体を含む組成物。
【請求項２１】
請求項１３に記載のベクターを含む細胞。
【請求項２２】
請求項１４に記載のベクターを含む細胞。
【請求項２３】
請求項１５に記載のベクターを含む細胞。
【請求項２４】
請求項１６に記載のベクターを含む細胞。
【請求項２５】
ＴＤＣ１をコードするアミノ酸配列又は少なくとも９５個の連続アミノ酸を含むそのフラグメントから本質的になる単離又は精製されたポリペプチド分子であって、そのどちらか１つは、場合によっては、グリコシル化、アミド化、カルボキシル化、リン酸化、エステル化、Ｎ−アシル化され、又は酸付加塩に変換されている、ポリペプチド分子。
【請求項２６】
ＴＤＣ１がヒトＴＤＣ１である、請求項２５に記載の単離又は精製されたポリペプチド分子。
【請求項２７】
（ｉ）配列番号１のヌクレオチド配列又は少なくとも２８５個の連続ヌクレオチドを含むそのフラグメントによってコードされる、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列又は少なくとも９５個の連続アミノ酸を含むそのフラグメントから本質的になる、又は（ｉｉｉ）配列番号２と２４％以上の同一性を共有する、請求項２５に記載の単離又は精製されたポリペプチド分子。
【請求項２８】
（ｉ）配列番号５のヌクレオチド配列又は少なくとも２８５個の連続ヌクレオチドを含むそのフラグメントによってコードされる、（ｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列又は少なくとも９５個の連続アミノ酸を含むそのフラグメントから本質的になる、又は（ｉｉｉ）配列番号６と２５％以上の同一性を共有する、請求項２５に記載の単離又は精製されたポリペプチド分子。
【請求項２９】
ＴＤＣ２をコードするアミノ酸配列又は少なくとも７１個の連続アミノ酸を含むそのフラグメントから本質的になる単離又は精製されたポリペプチド分子であって、そのどちらか１つは、場合によっては、グリコシル化、アミド化、カルボキシル化、リン酸化、エステル化、Ｎ−アシル化され、又は酸付加塩に変換されている、ポリペプチド分子。
【請求項３０】
ＴＤＣ２がヒトＴＤＣ２である、請求項２９に記載の単離又は精製されたポリペプチド分子。
【請求項３１】
（ｉ）配列番号３のヌクレオチド配列又は少なくとも２１３個の連続ヌクレオチドを含むそのフラグメントによってコードされる、（ｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列又は少なくとも7１個の連続アミノ酸を含むそのフラグメントから本質的になる、又は（ｉｉｉ）配列番号４と３１％以上の同一性を共有する、請求項２９に記載の単離又は精製されたポリペプチド分子。
【請求項３２】
（ｉ）配列番号７のヌクレオチド配列又は少なくとも２１３個の連続ヌクレオチドを含むそのフラグメントによってコードされる、（ｉｉ）配列番号８のアミノ酸配列又は少なくとも7１個の連続アミノ酸を含むそのフラグメントから本質的になる、又は（ｉｉｉ）配列番号８と３４％以上の同一性を共有する、請求項２９に記載の単離又は精製されたポリペプチド分子。
【請求項３３】
請求項２５に記載の単離又は精製されたポリペプチド分子と医薬上許容できる担体を含む組成物。
【請求項３４】
請求項２９に記載の単離又は精製されたポリペプチド分子と医薬上許容できる担体を含む組成物。
【請求項３５】
請求項２５に記載の単離又は精製されたポリペプチド分子に特異的なモノクローナル抗体を産生する細胞系。
【請求項３６】
請求項３５に記載の細胞系によって産生されるモノクローナル抗体。
【請求項３７】
請求項２９に記載の単離又は精製されたポリペプチド分子に特異的なモノクローナル抗体を産生する細胞系。
【請求項３８】
請求項３７に記載の細胞系によって産生されるモノクローナル抗体。
【請求項３９】
動物での難聴又は難聴の素因の検出方法であって、動物から得られたＴＤＣ１遺伝子を含む核酸を含む試験サンプルにおいてＴＤＣ１をコードする遺伝子における少なくとも１つの変異を検出することを含み、該少なくとも１つの変異が動物での難聴又は難聴の素因の指標である、方法。
【請求項４０】
動物での難聴又は難聴の素因の検出方法であって、動物から得られたＴＤＣ２遺伝子を含む核酸を含む試験サンプルにおいてＴＤＣ２をコードする遺伝子における少なくとも１つの変異を検出することを含み、該少なくとも１つの変異が動物での難聴又は難聴の素因の指標である、方法。
【請求項４１】
動物から得られた野生型ＴＤＣ１遺伝子及び／又は変異ＴＤＣ１遺伝子を含む核酸を含む試験サンプルにおける野生型ＴＤＣ１遺伝子及び／又は変異ＴＤＣ１遺伝子を含む核酸のレベルの測定方法であって、野生型ＴＤＣ１遺伝子及び／又は変異ＴＤＣ１遺伝子を含む核酸のレベルに関して試験サンプルをアッセイすることを含み、対照サンプルと比較して、試験サンプルにおける野生型ＴＤＣ１遺伝子を含む核酸のレベルの減少及び／又は変異ＴＤＣ１遺伝子を含む核酸のレベルの増加が動物での難聴又は難聴の素因の指標である、方法。
【請求項４２】
動物での難聴の予後判定に使用される請求項４１に記載の方法であって、試験サンプルにおける野生型ＴＤＣ１遺伝子及び／又は変異ＴＤＣ１遺伝子を含む核酸のレベルを、それぞれ、時間をおいて該動物から得られた別の試験サンプルにおける野生型ＴＤＣ１遺伝子及び／又は変異ＴＤＣ１遺伝子を含む核酸のレベルと比較することを更に含み、野生型ＴＤＣ１遺伝子を含む核酸のレベルの減少及び／又は変異ＴＤＣ１遺伝子を含む核酸のレベルの増加が好ましくない予後の指標であり、野生型ＴＤＣ１遺伝子を含む核酸のレベルの増加及び／又は変異ＴＤＣ１遺伝子を含む核酸のレベルの減少が好ましい予後の指標であり、野生型ＴＤＣ１遺伝子及び／又は変異ＴＤＣ１遺伝子を含む核酸のレベルの非変化が難聴における非変化の指標である、方法。
【請求項４３】
所定の抗難聴剤による動物での難聴の治療の効力の評価に使用される請求項４１に記載の方法であって、試験サンプルにおける野生型ＴＤＣ１遺伝子及び／又は変異ＴＤＣ１遺伝子を含む核酸のレベルを、それぞれ、時間をおいて該動物から得られた別の試験サンプルにおける野生型ＴＤＣ１遺伝子及び／又は変異ＴＤＣ１遺伝子を含む核酸のレベルと比較することを更に含み、野生型ＴＤＣ１遺伝子を含む核酸のレベルの減少及び／又は変異ＴＤＣ１遺伝子を含む核酸のレベルの増加が該抗難聴剤が有効である指標であり、野生型ＴＤＣ１遺伝子を含む核酸のレベルの増加及び／又は変異ＴＤＣ１遺伝子を含む核酸のレベルの減少が該抗難聴剤が無効である指標であり、野生型ＴＤＣ１遺伝子及び／又は変異ＴＤＣ１遺伝子を含む核酸のレベルの非変化が該抗難聴剤での治療による難聴の非変化の指標である、方法。
【請求項４４】
動物から得られた野生型ＴＤＣ２遺伝子及び／又は変異ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸を含む試験サンプルにおける野生型ＴＤＣ２遺伝子及び／又は変異ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸のレベルの測定方法であって、野生型ＴＤＣ２遺伝子及び／又は変異ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸のレベルに関して試験サンプルをアッセイすることを含み、対照サンプルと比較して、試験サンプルにおける野生型ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸のレベルの減少及び／又は変異ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸のレベルの増加が動物での難聴又は難聴の素因の指標である、方法。
【請求項４５】
動物での難聴の予後判定に使用される請求項４４に記載の方法であって、試験サンプルにおける野生型ＴＤＣ２遺伝子及び／又は変異ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸のレベルを、それぞれ、時間をおいて該動物から得られた別の試験サンプルにおける野生型ＴＤＣ２遺伝子及び／又は変異ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸のレベルと比較することを更に含み、野生型ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸のレベルの減少及び／又は変異ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸のレベルの増加が好ましくない予後の指標であり、野生型ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸のレベルの増加及び／又は変異ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸のレベルの減少が好ましい予後の指標であり、野生型ＴＤＣ２遺伝子及び／又は変異ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸のレベルの非変化が難聴における非変化の指標である、方法。
【請求項４６】
所定の抗難聴剤による動物での難聴の治療の効力の評価に使用される請求項４４に記載の方法であって、試験サンプルにおける野生型ＴＤＣ２遺伝子及び／又は変異ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸のレベルを、それぞれ、時間をおいて該動物から得られた別の試験サンプルにおける野生型ＴＤＣ２遺伝子及び／又は変異ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸のレベルと比較することを更に含み、野生型ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸のレベルの減少及び／又は変異ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸のレベルの増加が該抗難聴剤が有効である指標であり、野生型ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸のレベルの増加及び／又は変異ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸のレベルの減少が該抗難聴剤が無効である指標であり、野生型ＴＤＣ２遺伝子及び／又は変異ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸のレベルの非変化が該抗難聴剤での治療による難聴の非変化の指標である、方法。
【請求項４７】
動物での難聴又は難聴の素因の検出方法であって、動物から得られたＴＤＣ１を含む蛋白質を含む試験サンプルにおいて変異ＴＤＣ１を検出することを含み、試験サンプルにおける変異ＴＤＣ１の存在が該動物での難聴又は難聴の素因の指標である、方法。
【請求項４８】
動物での難聴又は難聴の素因の検出方法であって、動物から得られたＴＤＣ２を含む蛋白質を含む試験サンプルにおいて変異ＴＤＣ２を検出することを含み、試験サンプルにおける変異ＴＤＣ２の存在が該動物での難聴又は難聴の素因の指標である、方法。
【請求項４９】
動物から得られた野生型ＴＤＣ１及び／又は変異ＴＤＣ１を含む蛋白質を含む試験サンプルにおける野生型ＴＤＣ１及び／又は変異ＴＤＣ１のレベルの測定方法であって、野生型ＴＤＣ１及び／又は変異ＴＤＣ１のレベルに関して試験サンプルをアッセイすることを含み、対照サンプルと比較して、試験サンプルにおける野生型ＴＤＣ１のレベルの減少及び／又は変異ＴＤＣ１のレベルの増加が動物での難聴又は難聴の素因の指標である、方法。
【請求項５０】
動物での難聴の予後判定に使用される請求項４９に記載の方法であって、試験サンプルにおける野生型ＴＤＣ１及び／又は変異ＴＤＣ１のレベルを、それぞれ、時間をおいて該動物から得られた別の試験サンプルにおける野生型ＴＤＣ１及び／又は変異ＴＤＣ１のレベルと比較することを更に含み、野生型ＴＤＣ１のレベルの減少及び／又は変異ＴＤＣ１のレベルの増加が好ましくない予後の指標であり、野生型ＴＤＣ１のレベルの増加及び／又は変異ＴＤＣ１のレベルの減少が好ましい予後の指標であり、野生型ＴＤＣ１及び／又は変異ＴＤＣ１のレベルの非変化が難聴における非変化の指標である、方法。
【請求項５１】
所定の抗難聴剤による動物での難聴の治療の効力の評価に使用される請求項４９に記載の方法であって、試験サンプルにおける野生型ＴＤＣ１及び／又は変異ＴＤＣ１のレベルを、それぞれ、時間をおいて該動物から得られた別の試験サンプルにおける野生型ＴＤＣ１及び／又は変異ＴＤＣ１のレベルと比較することを更に含み、野生型ＴＤＣ１のレベルの減少及び／又は変異ＴＤＣ１のレベルの増加が該抗難聴剤が有効である指標であり、野生型ＴＤＣ１のレベルの増加及び／又は変異ＴＤＣ１のレベルの減少が該抗難聴剤が無効である指標であり、野生型ＴＤＣ１及び／又は変異ＴＤＣ１のレベルの非変化が該抗難聴剤での治療による難聴の非変化の指標である、方法。
【請求項５２】
動物から得られた野生型ＴＤＣ２及び／又は変異ＴＤＣ２を含む蛋白質を含む試験サンプルにおける野生型ＴＤＣ２及び／又は変異ＴＤＣ２のレベルの測定方法であって、野生型ＴＤＣ２及び／又は変異ＴＤＣ２のレベルに関して試験サンプルをアッセイすることを含み、対照サンプルと比較して、試験サンプルにおける野生型ＴＤＣ２のレベルの減少及び／又は変異ＴＤＣ２のレベルの増加が動物での難聴又は難聴の素因の指標である、方法。
【請求項５３】
動物での難聴の予後判定に使用される請求項５２に記載の方法であって、試験サンプルにおける野生型ＴＤＣ２及び／又は変異ＴＤＣ２のレベルを、それぞれ、時間をおいて該動物から得られた別の試験サンプルにおける野生型ＴＤＣ２及び／又は変異ＴＤＣ２のレベルと比較することを更に含み、野生型ＴＤＣ２のレベルの減少及び／又は変異ＴＤＣ２のレベルの増加が好ましくない予後の指標であり、野生型ＴＤＣ２のレベルの増加及び／又は変異ＴＤＣ２のレベルの減少が好ましい予後の指標であり、野生型ＴＤＣ２及び／又は変異ＴＤＣ２のレベルの非変化が難聴における非変化の指標である、方法。
【請求項５４】
所定の抗難聴剤による動物での難聴の治療の効力の評価に使用される請求項５２に記載の方法であって、試験サンプルにおける野生型ＴＤＣ２及び／又は変異ＴＤＣ２のレベルを、それぞれ、時間をおいて該動物から得られた別の試験サンプルにおける野生型ＴＤＣ２及び／又は変異ＴＤＣ２のレベルと比較することを更に含み、野生型ＴＤＣ２のレベルの減少及び／又は変異ＴＤＣ２のレベルの増加が該抗難聴剤が有効である指標であり、野生型ＴＤＣ２のレベルの増加及び／又は変異ＴＤＣ２のレベルの減少が該抗難聴剤が無効である指標であり、野生型ＴＤＣ２及び／又は変異ＴＤＣ２のレベルの非変化が該抗難聴剤での治療による難聴の非変化の指標である、方法。
【請求項５５】
野生型ＴＤＣ１の完全又は部分喪失による難聴に関する動物の予防的又は治療的処置の方法であって、該動物にＴＤＣ１を提供することを含み、その結果、該動物が難聴に関し予防的又は治療的に処置される、方法。
【請求項５６】
野生型ＴＤＣ１をコードし、発現する核酸を動物に投与することによって、ＴＤＣ１を該動物に提供する、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
野生型ＴＤＣ１蛋白質を動物に投与することによって、ＴＤＣ１を該動物に提供する、請求項５５に記載の方法。
【請求項５８】
野生型ＴＤＣ２の完全又は部分喪失による難聴に関する動物の予防的又は治療的処置の方法であって、該動物にＴＤＣ２を提供することを含み、その結果、該動物が難聴に関し予防的又は治療的に処置される、方法。
【請求項５９】
野生型ＴＤＣ２をコードし、発現する核酸を動物に投与することによって、ＴＤＣ２を該動物に提供する、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
野生型ＴＤＣ２蛋白質を動物に投与することによって、ＴＤＣ２を該動物に提供する、請求項５８に記載の方法。
【請求項６１】
細胞中でＴＤＣ１遺伝子及び／又はＴＤＣ２遺伝子と相互作用する１つ以上の薬剤の同定方法であって、ＴＤＣ１遺伝子及び／又はＴＤＣ２遺伝子を含む細胞に１つ以上の薬剤を投与し、細胞によるＴＤＣ１遺伝子及び／又はＴＤＣ２遺伝子の発現レベルをアッセイすることを含み、ＴＤＣ１遺伝子及び／又はＴＤＣ２遺伝子の発現レベルの増加又は減少が細胞中での１つ以上の薬剤とＴＤＣ１遺伝子及び／又はＴＤＣ２遺伝子との間の相互作用の指標である、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、トランスダクチン−１（transductin-1）（ＴＤＣ１；以後、膜貫通の蝸牛で発現される遺伝子１（ＴＭＣ−１）と言う）、トランスダクチン−２（ＴＤＣ２；以後、膜貫通の蝸牛で発現される遺伝子２（ＴＭＣ−２）と言う）をコードする単離又は精製された核酸、及びそのフラグメント、このような核酸を含むベクター、このようなベクターを含む細胞、単離又は精製されたポリペプチド、モノクローナル抗体産生細胞系、モノクローナル抗体、上記核酸とポリペプチドの医薬上許容できる組成物、並びに、難聴、特にＤＦＮＡ３６とＤＦＮＢ７／１１連関難聴の診断、予後判定（prognosis）及び治療の方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
難聴は、普通のコミュニケーション障害である。先天性聴覚障害は、米国で生まれる子供１，０００人にほぼ１人で起こる。Jain et al., A human recessive neurosensory nonsyndromic hearing impairment locus is a potential homologue of the murine deafness (dn) locus, Human Molecular Genetics 4 (12): 2391-2394 (1995); 及び Scott et al., Refining the DFNB7-DFNB11 deafness locus using intragenic polymorphisms in a novel gene, TMEM2, Gene 246: 265-274 (2000)参照。新生児集中ケアユニットの出所者の１−２％も、このような聴覚障害を有する。Jain et al. (1995)，上記参照。成人２人にほぼ１人は、人生８０歳までに機能的に重度の難聴を有する。
【０００３】
聴覚障害は、多くの環境的及び疾患関連の因子によって引き起こされ得る。しかし、発展国では、聴覚障害の症例の少なくとも５０％は遺伝性である。Scott et al. (2000)，上記参照。難聴のリスクの増大と関連する因子として、男性、アミノグリコシド抗生物質への暴露、騒音への暴露、頭部外傷、及び気圧障害が挙げられる。症例の大部分は、単一遺伝子変異を含むように思われる。更なる臨床的異常は無く、遺伝の常染色体劣性様式が優勢であるからである。非症候性遺伝性聴覚障害（ＮＳＨＨＩ）は、非常に不均質であると考えられており、多数の遺伝子によって引き起こされると考えられている。
【０００４】
脊椎動物は、聴側線知覚系で、音、身体加速、及び水の動きを検出する(Hudspeth et al., Sensitivity, polarity, and conductance change in the response of vertebrate hair cells to controlled mechanical stimuli, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74 (6): 2407-2411 (1977) )。この系の１次レセプターは、毛細胞という名の神経上皮細胞である。これらの細胞の各々は、その頂上表面に「毛束」を有する（それは、伸長した微絨毛（不動繊毛）、大部分の場合、単一の真の繊毛（運動繊毛）からなる）。音波などからの振動は、毛束を曲げることによって細胞を刺激する。毛束の曲がりによって、小さなレセプター電位が発生し、それは、化学又は電気シナプスによって、求心性神経線維を興奮させる。電位発生の正確な機構は未だ不明で、電位発生に関与するイオンに関する矛盾したデータが存在する(Corey et al., Ionic basis of the receptor potential in a vertebrate hair cell, Nature 281: 675-77 (1979))。
【０００５】
これまでは、連関研究は、遺伝性聴覚障害に関連する可能性ある座を同定するのに用いられた主要な方法であった。しかし、通常の連関解析に大きさで適当な単一ファミリーは、普通にはない。ＮＳＨＨＩも、聴力測定基準によるサブ分類にあまり役立たない。従って、伝統的研究では、地理的に隔離された集団からの同族ファミリーを用い、劣性ＮＳＨＨＩと関連した幾つかの異なる座をマップした（Jainら，(1995)，上記）。ヒトでは、ＮＳＨＨＩのある型は、染色体９のある領域に局在していることが知見された。例えば、Kurima et al., Genetic map localization of DFNA34 and DFNA36, two novel autosomal dominant nonsyndromic deafness loci, ARO Abstracts 24: 265 (2001) ; 及び  Scott et al. (2000), 上記，参照。Scottらは、該染色体の関連領域に、ある遺伝子を同定した。しかし、それは、特定の座での難聴にあまり関連していなかった。問題の蛋白質は、心臓、脳、脾臓、肺、肝臓、筋肉、腎臓などの種々の他の組織で発現され、転写物サイズや発現レベルでの差異は、ノーザンブロット解析によっては正常マウスと聴覚障害マウスの間で明白ではなかったからである。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
上記観点から、本発明の目的は、難聴と良く関連する遺伝子、並びにコードされるポリペプチド、及び関連ベクター、宿主細胞、ポリペプチド、抗体、抗体産生細胞系、並びに難聴の診断、予後判定、治療の方法を提供することである。本発明のこれらの目的や他の目的、及び利点、並びに更なる本発明の性質は、本明細書で提供される本発明の説明から明白となろう。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
発明の簡単な概要
本発明は、ＴＤＣ１をコードするヌクレオチド配列又は少なくとも３１４個の連続ヌクレオチドを含むそのフラグメントから本質的になる単離又は精製された核酸分子、及びヒトＴＤＣ１をコードするヌクレオチド配列又はそのフラグメントに相補的なヌクレオチド配列から本質的になる単離又は精製された核酸分子を提供する。
【０００８】
本発明は、ＴＤＣ２をコードするヌクレオチド配列又は少なくとも１１０個の連続ヌクレオチドを含むそのフラグメントから本質的になる単離又は精製された核酸分子、及びヒトＴＤＣ２をコードするヌクレオチド配列又はそのフラグメントに相補的なヌクレオチド配列から本質的になる単離又は精製された核酸分子を提供する。
【０００９】
本発明によって、上記単離又は精製された核酸分子の１つを含むベクターも提供される。更に、上記同定の核酸分子の１つを含む細胞が提供される。上記同定の単離又は精製された核酸分子又はベクターの１つと医薬上許容できる担体を含む組成物も提供される。
【００１０】
ＴＤＣ１をコードするアミノ酸配列又は少なくとも９５個の連続アミノ酸を含むそのフラグメントから本質的になる単離又は精製されたポリペプチド分子であって、場合によっては、グリコシル化、アミド化、カルボキシル化、リン酸化、エステル化、Ｎ−アシル化され、又は酸付加塩に変換されている、ポリペプチド分子も提供される。
【００１１】
ＴＤＣ２をコードするアミノ酸配列又は少なくとも７１個の連続アミノ酸を含むそのフラグメントから本質的になる単離又は精製されたポリペプチド分子であって、場合によっては、グリコシル化、アミド化、カルボキシル化、リン酸化、エステル化、Ｎ−アシル化され、又は酸付加塩に変換されている、ポリペプチド分子も更に提供される。
【００１２】
上記単離又は精製されたポリペプチド分子と医薬上許容できる担体を含む組成物も提供される。上記単離又は精製されたポリペプチド分子に特異的なモノクローナル抗体を産生する細胞系も更に提供される。上記細胞系によって産生される抗体も更になお提供される。
【００１３】
動物での難聴又は難聴の素因の検出方法も提供される。１実施態様では、該方法は、動物から得られたＴＤＣ１遺伝子を含む核酸を含む試験サンプルにおいてＴＤＣ１をコードする遺伝子における少なくとも１つの変異を検出することを含み、該少なくとも１つの変異が動物での難聴又は難聴の素因の指標である。毛細胞は、動物の内耳のものでありうる。別の実施態様では、該方法は、動物から得られたＴＤＣ２遺伝子を含む核酸を含む試験サンプルにおいてＴＤＣ２をコードする遺伝子における少なくとも１つの変異を検出することを含み、該少なくとも１つの変異が動物での難聴又は難聴の素因の指標である。
【００１４】
動物から得られた野生型ＴＤＣ１遺伝子及び／又は変異ＴＤＣ１遺伝子を含む核酸を含む試験サンプルにおける野生型ＴＤＣ１遺伝子及び／又は変異ＴＤＣ１遺伝子を含む核酸のレベルの測定方法も提供される。該方法は、野生型ＴＤＣ１遺伝子及び／又は変異ＴＤＣ１遺伝子を含む核酸のレベルに関して試験サンプルをアッセイすることを含み、対照サンプルと比較して、試験サンプルにおける野生型ＴＤＣ１遺伝子を含む核酸のレベルの減少及び／又は変異ＴＤＣ１遺伝子を含む核酸のレベルの増加が動物での難聴又は難聴の素因の指標である。本明細書記載の方法に従って本方法を使用すれば、難聴を予後判定、又は、所定の抗難聴剤による難聴の治療の効力を評価できる。
【００１５】
動物から得られた野生型ＴＤＣ２遺伝子及び／又は変異ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸を含む試験サンプルにおける野生型ＴＤＣ２遺伝子及び／又は変異ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸のレベルの測定方法も更に提供される。該方法は、野生型ＴＤＣ２遺伝子及び／又は変異ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸のレベルに関して試験サンプルをアッセイすることを含み、対照サンプルと比較して、試験サンプルにおける野生型ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸のレベルの減少及び／又は変異ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸のレベルの増加が、動物での難聴又は難聴の素因の指標である。本明細書記載の方法に従って本方法を使用すれば、難聴を予後判定、又は、所定の抗難聴剤による難聴の治療の効力を評価できる。
【００１６】
動物での難聴又は難聴の素因の検出方法も提供される。１実施態様では、該方法は、動物から得られたＴＤＣ１を含む蛋白質を含む試験サンプルにおいて変異ＴＤＣ１を検出することを含み、試験サンプルにおける変異ＴＤＣ１の存在が該動物での難聴又は難聴の素因の指標である。別の実施態様では、該方法は、動物から得られたＴＤＣ２を含む蛋白質を含む試験サンプルにおいて変異ＴＤＣ２を検出することを含み、試験サンプルにおける変異ＴＤＣ２の存在が該動物での難聴又は難聴の素因の指標である。
【００１７】
動物から得られた野生型ＴＤＣ１及び／又は変異ＴＤＣ１を含む蛋白質を含む試験サンプルにおける野生型ＴＤＣ１及び／又は変異ＴＤＣ１のレベルの測定方法も提供される。該方法は、野生型ＴＤＣ１及び／又は変異ＴＤＣ１のレベルに関して試験サンプルをアッセイすることを含み、対照サンプルと比較して、試験サンプルにおける野生型ＴＤＣ１のレベルの減少及び／又は変異ＴＤＣ１のレベルの増加が動物での難聴又は難聴の素因の指標である。本明細書記載の方法に従って本方法を使用すれば、難聴を予後判定、又は、所定の抗難聴剤による難聴の治療の効力を評価できる。
【００１８】
動物から得られた野生型ＴＤＣ２及び／又は変異ＴＤＣ２を含む蛋白質を含む試験サンプルにおける野生型ＴＤＣ２及び／又は変異ＴＤＣ２のレベルの測定方法も提供される。該方法は、野生型ＴＤＣ２及び／又は変異ＴＤＣ２のレベルに関して試験サンプルをアッセイすることを含み、対照サンプルと比較して、試験サンプルにおける野生型ＴＤＣ２のレベルの減少及び／又は変異ＴＤＣ２のレベルの増加が動物での難聴又は難聴の素因の指標である。本明細書記載の方法に従って本方法を使用すれば、難聴を予後判定、又は、所定の抗難聴剤による難聴の治療の効力を評価できる。
【００１９】
本発明は、野生型ＴＤＣ１の完全又は部分喪失による難聴に関する動物の予防的又は治療的処置の方法であって、該動物にＴＤＣ１を提供することを含み、その結果、該動物が難聴に関し予防的又は治療的に処置される、方法を更に提供する。野生型ＴＤＣ１をコードし、発現する核酸を動物に投与することによって、ＴＤＣ１を該動物に提供することができる。また、野生型ＴＤＣ１蛋白質を動物に投与することによって、ＴＤＣ１を該動物に提供することができる。
【００２０】
本発明は、野生型ＴＤＣ２の完全又は部分喪失による難聴に関する動物の予防的又は治療的処置の方法であって、該動物にＴＤＣ２を提供することを含み、その結果、該動物が難聴に関し予防的又は治療的に処置される、方法を更になお提供する。野生型ＴＤＣ２をコードし、発現する核酸を動物に投与することによって、ＴＤＣ２を該動物に提供することができる。また、野生型ＴＤＣ２蛋白質を動物に投与することによって、ＴＤＣ２を該動物に提供することができる。
【００２１】
細胞中でＴＤＣ１遺伝子及び／又はＴＤＣ２遺伝子と相互作用する１つ以上の薬剤の同定方法であって、ＴＤＣ１遺伝子及び／又はＴＤＣ２遺伝子を含む細胞に１つ以上の薬剤を投与し、細胞によるＴＤＣ１遺伝子及び／又はＴＤＣ２遺伝子の発現レベルをアッセイすることを含み、ＴＤＣ１遺伝子及び／又はＴＤＣ２遺伝子の発現レベルの増加又は減少が細胞中での１つ以上の薬剤とＴＤＣ１遺伝子及び／又はＴＤＣ２遺伝子との間の相互作用の指標である、方法も更に提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
発明の詳細な説明
ＴＤＣ１遺伝子とＴＤＣ２遺伝子は、遺伝性聴覚障害の２つの形態であるＤＦＮＡ３６−及びＤＦＮＢ７／１１−連関難聴に関与する。これらの遺伝子はまた、少なくとも部分的には、非遺伝性聴覚障害のある形態又は遺伝性聴覚障害の他の形態の原因でありうる。これらの遺伝子は、動物毛細胞、特に内耳の毛細胞のメカノトランスダクションチャネルをコードする。これらの細胞は、機械的刺激（音波など）を化学シグナルに変換する働きをする。化学シグナルは、脳によって処理されることができる。このメカノトランスダクションチャネルの正常発現の異常により、難聴が起こりうる。この異常発現は、当業界公知のように、特定の遺伝子を取り囲む配列（単数）又は配列（複数）での変異又は欠失、又は他の遺伝子異常から生じうる。特に、変異は、ＴＤＣ１遺伝子産物及び／又はＴＤＣ２遺伝子産物の、動物の内耳の毛細胞の成分を形成する能力を損傷し（compromise）得、それによって、難聴が起こりうる。変異はまた、ＴＤＣ１遺伝子産物及び／又はＴＤＣ２遺伝子産物の、動物の内耳の毛細胞のイオントランスダクションチャネルの全部又は一部を形成する能力を損傷し得る。更に、変異は、ＴＤＣ１遺伝子産物及び／又はＴＤＣ２遺伝子産物のメカノセンサリー活性を損傷し得る。難聴は、当業者が理解するように、聴覚の完全喪失又は部分喪失を意味しうる。難聴は、遺伝性、感覚神経性難聴、非症候性常染色体優性難聴、及び／又はＤＦＮＡ３６−又はＤＦＮＢ７／１１−連関難聴でありうる。
【００２３】
ＴＤＣ１及び／又はＴＤＣ２での変異は聴覚障害を引き起こし得る。特に、優性変異は、子供時代発症の、急速進行性の、両側性の感覚神経性難聴を引き起こし得る。幾つかの劣性変異は、先天性の、深刻な両側性の感覚神経性聴覚障害を引き起こし得る。また、劣性変異の幾つかにより無機能性アレル、即ち、ナンセンス変異、２つのエキソンのゲノム欠失、又はフレームシフト変異を生じうる。
【００２４】
聴覚レセプター内に毛細胞を有する任意の動物が、本発明から利益を得うる。望ましくは、動物は哺乳動物、好ましくはヒトである。しかし、トリなど、特にニワトリなどの動物も本発明から利益を得うる。
【００２５】
本発明は、トランスダクチンをコードするヌクレオチド配列又はそのフラグメントから本質的になる単離又は精製された核酸分子を提供する。トランスダクチンは、ＴＤＣ１及び／又はＴＤＣ２、好ましくは動物の、より一層好ましくはヒトのＴＤＣ１及び／又はＴＤＣ２を意味する。「単離された」は、トランスダクチンの天然環境からトランスダクチンが取り出されたことを意味する。「精製された」は、トランスダクチンが天然から取り出されようと、合成されようと、及び／又は実験室条件で増幅されようと、トランスダクチンの純度が増加したことを意味する。ここで、「純度」は相対的用語であって、「絶対的純度」ではない。「核酸分子」は、ＤＮＡ又はＲＮＡのポリマー、即ち、ポリヌクレオチドを包含するものとする。それは、単一鎖又は二重鎖でありえ、非天然又は改変ヌクレオチドを含みうる。更に、核酸及び遺伝子は、エキソン、イントロン、及び／又は制御領域及び要素を含み得る。
【００２６】
好ましくは、単離又は精製された核酸分子は、ＴＤＣ１をコードするヌクレオチド配列又は少なくとも３１４個の連続ヌクレオチドを含むそのフラグメントから本質的になる。ＴＤＣ１はヒトＴＤＣ１でありうる。１好適実施態様では、単離又は精製された核酸分子は、配列番号２のアミノ酸配列又は少なくとも１０５個の連続アミノ酸を含むそのフラグメントをコードしうる。より好ましくは、フラグメントは、少なくとも１１０個の連続アミノ酸を含む。更により好ましくは、フラグメントは、少なくとも１１５個の連続アミノ酸を含む。より一層好ましくは、フラグメントは、少なくとも１２０個の連続アミノ酸を含む。あるいは、単離又は精製された核酸分子は、配列番号１のヌクレオチド配列又は少なくとも３１４個の連続ヌクレオチドを含むそのフラグメントから本質的になる。より好ましくは、フラグメントは、少なくとも３２０個の連続ヌクレオチドを含む。更により好ましくは、フラグメントは、少なくとも３３０個の連続ヌクレオチドを含む。より一層好ましくは、フラグメントは、少なくとも３４０個の連続ヌクレオチドを含む。更に、例えば、天然起源や人為的作製の変異体などの、単離又は精製された核酸分子は、中程度のストリンジェント条件下、配列番号１又はそのフラグメントに相補的なヌクレオチド配列から本質的になる単離又は精製された核酸分子とハイブリダイズしうる。あるいは、しかし、更に好ましくは、例えば、天然起源や人為的作製の変異体などの、単離又は精製された核酸分子は、配列番号１と４３％以上の同一性を共有しうる。また、好ましくは、単離又は精製された核酸分子は、配列番号１と５０％以上の同一性を共有しうる。より好ましくは、単離又は精製された核酸分子は、配列番号１と７０％以上の同一性を共有しうる。更により好ましくは、単離又は精製された核酸分子は、配列番号１と９０％以上の同一性を共有しうる。
【００２７】
あるいは、単離又は精製された核酸分子は、配列番号６のアミノ酸配列又は少なくとも１０５個の連続アミノ酸を含むそのフラグメントをコードしうる。より好ましくは、フラグメントは、少なくとも１１０個の連続アミノ酸を含む。更により好ましくは、フラグメントは、少なくとも１１５個の連続アミノ酸を含む。より一層好ましくは、フラグメントは、少なくとも１２０個の連続アミノ酸を含む。あるいは、単離又は精製された核酸分子は、配列番号５のヌクレオチド配列又は少なくとも３１４個の連続ヌクレオチドを含むそのフラグメントから本質的になる。より好ましくは、フラグメントは、少なくとも３２０個の連続ヌクレオチドを含む。更により好ましくは、フラグメントは、少なくとも３３０個の連続ヌクレオチドを含む。より一層好ましくは、フラグメントは、少なくとも３４０個の連続ヌクレオチドを含む。更に、例えば、天然起源や人為作製の変異体などの、単離又は精製された核酸分子は、中程度のストリンジェント条件下、配列番号５又はそのフラグメントに相補的なヌクレオチド配列から本質的になる単離又は精製された核酸分子とハイブリダイズしうる。あるいは、しかし、更に好ましくは、例えば、天然起源や人為作製の変異体などの、単離又は精製された核酸分子は、配列番号５と４０％以上の同一性を共有しうる。また好ましくは、単離又は精製された核酸分子は、配列番号５と４５％以上の同一性を共有しうる。より好ましくは、単離又は精製された核酸分子は、配列番号５と６０％以上の同一性を共有しうる。更により好ましくは、単離又は精製された核酸分子は、配列番号５と８０％以上の同一性を共有しうる。
【００２８】
また好ましくは、単離又は精製された核酸分子は、ＴＤＣ２をコードするヌクレオチド配列又は少なくとも１１０個の連続ヌクレオチドを含むそのフラグメントから本質的になる。ＴＤＣ２はヒトＴＤＣ２でありうる。１好適実施態様では、単離又は精製された核酸分子は、配列番号４のアミノ酸配列又は少なくとも７０個の連続アミノ酸を含むそのフラグメントをコードしうる。より好ましくは、フラグメントは、少なくとも７５個の連続アミノ酸を含む。更により好ましくは、フラグメントは、少なくとも８０個の連続アミノ酸を含む。より一層好ましくは、フラグメントは、少なくとも８５個の連続アミノ酸を含む。あるいは、単離又は精製された核酸分子は、配列番号３のヌクレオチド配列又は少なくとも１１０個の連続ヌクレオチドを含むそのフラグメントから本質的になる。より好ましくは、フラグメントは、少なくとも１１５個の連続ヌクレオチドを含む。更により好ましくは、フラグメントは、少なくとも１３０個の連続ヌクレオチドを含む。より一層好ましくは、フラグメントは、少なくとも１５０個の連続ヌクレオチドを含む。更に好適な実施態様では、単離又は精製された核酸分子は、中程度のストリンジェント条件下、配列番号３又はそのフラグメントに相補的なヌクレオチド配列から本質的になる単離又は精製された核酸分子とハイブリダイズしうる。あるいは、しかし、更に好ましくは、単離又は精製された核酸分子は、配列番号３と４９％以上の同一性を共有しうる。また、好ましくは、単離又は精製された核酸分子は、配列番号３と５５％以上の同一性を共有しうる。より好ましくは、単離又は精製された核酸分子は、配列番号３と７０％以上の同一性を共有しうる。更により好ましくは、単離又は精製された核酸分子は、配列番号３と９０％以上の同一性を共有しうる。
【００２９】
あるいは、しかし、更に好ましくは、単離又は精製された核酸分子は、配列番号８のアミノ酸配列又は少なくとも７１個の連続アミノ酸を含むそのフラグメントをコードしうる。また好ましくは、単離又は精製された核酸分子は、配列番号７のヌクレオチド配列又は少なくとも１１０個の連続ヌクレオチドを含むそのフラグメントから本質的になりうる。より好ましくは、フラグメントは、少なくとも１１５個の連続ヌクレオチドを含む。更により好ましくは、フラグメントは、少なくとも１２０個の連続ヌクレオチドを含む。より一層好ましくは、フラグメントは、少なくとも１２５個の連続ヌクレオチドを含む。更に好適な実施態様では、フラグメントは、中程度のストリンジェント条件下、配列番号７又はそのフラグメントに相補的なヌクレオチド配列から本質的になる単離又は精製された核酸分子とハイブリダイズしうる。別の実施態様では、単離又は精製された核酸分子は、配列番号７と４１％以上の同一性を共有しうる。あるいは、しかし、更に好ましくは、単離又は精製された核酸分子は、配列番号７と５５％以上の同一性を共有しうる。より好ましくは、単離又は精製された核酸分子は、配列番号７と７５％以上の同一性を共有しうる。更により好ましくは、単離又は精製された核酸分子は、配列番号７と９０％以上の同一性を共有しうる。
【００３０】
変異体ＴＤＣ１をコードするヌクレオチド配列又はそのフラグメントから本質的になる単離又は精製された核酸分子は、１つ以上の挿入、欠失、逆位及び/又は置換を含みうる。望ましくは、変異体ＴＤＣ１は、例えば、配列番号１を含むものなどの、対応する非修飾ＴＤＣ１又は少なくとも３１４個の連続ヌクレオチドを含むそのフラグメントとは機能的に違わない。好ましくは、１個以上の置換により、コードされたＴＤＣ１のアミノ酸の、ほぼ等しい質量、構造、電荷の別のアミノ酸による置換が生じる。
【００３１】
変異体ＴＤＣ２をコードするヌクレオチド配列又はそのフラグメントから本質的になる単離又は精製された核酸分子は、１つ以上の挿入、欠失、逆位及び/又は置換を含みうる。望ましくは、変異体ＴＤＣ２は、例えば、配列番号３を含むものなどの、対応する非修飾ＴＤＣ２又は少なくとも１１０個の連続ヌクレオチドを含むそのフラグメントとは機能的に違わない。好ましくは、１個以上の置換により、コードされたＴＤＣ２のアミノ酸の、ほぼ等しい質量、構造、電荷の別のアミノ酸による置換が生じる。
【００３２】
本発明はまた、ヒトＴＤＣ１をコードするヌクレオチド配列又はそのフラグメントに相補的なヌクレオチド配列から本質的になる単離又は精製された核酸分子を提供する。このような単離又は精製された核酸分子は好ましくは、配列番号２のアミノ酸配列又は少なくとも１０５個の連続アミノ酸を含むそのフラグメントをコードするヌクレオチド配列に相補的である。より好ましくは、フラグメントは、少なくとも１１０個の連続アミノ酸を含む。更により好ましくは、フラグメントは、少なくとも１１５個の連続アミノ酸を含む。より一層好ましくは、フラグメントは、少なくとも１２０個の連続アミノ酸を含む。あるいは、しかし、更に好ましくは、単離又は精製された核酸分子は、配列番号１のヌクレオチド配列又は少なくとも３１４個の連続ヌクレオチドを含むそのフラグメントに相補的である。別の好適実施態様では、単離又は精製された核酸分子は、中程度のストリンジェント条件下、配列番号１又はそのフラグメントから本質的になる単離又は精製された核酸分子とハイブリダイズする。好ましくは、単離又は精製された核酸分子は、配列番号１に相補的なヌクレオチド配列と４３％以上の同一性を共有する。より好ましくは、単離又は精製された核酸分子は、配列番号１と５０％以上の同一性を共有する。より一層好ましくは、単離又は精製された核酸分子は、配列番号１と７０％以上の配列同一性を共有する。更により好ましくは、単離又は精製された核酸分子は、配列番号１と９０％以上の配列同一性を共有する。変異体ＴＤＣ１をコードするヌクレオチド配列又はそのフラグメントに相補的なヌクレオチド配列から本質的になる単離又は精製された核酸分子も得られうる。
【００３３】
本発明はまた、ヒトＴＤＣ２をコードするヌクレオチド配列又はそのフラグメントに相補的なヌクレオチド配列から本質的になる単離又は精製された核酸分子を提供する。このような単離又は精製された核酸分子は好ましくは、配列番号４のアミノ酸配列又は少なくとも７０個の連続アミノ酸を含むそのフラグメントをコードするヌクレオチド配列に相補的である。より好ましくは、フラグメントは、少なくとも７５個の連続アミノ酸を含む。更により好ましくは、フラグメントは、少なくとも８０個の連続アミノ酸を含む。より一層好ましくは、フラグメントは、少なくとも８５個の連続アミノ酸を含む。あるいは、しかし、更に好ましくは、単離又は精製された核酸分子は、配列番号３のヌクレオチド配列又は少なくとも１１０個の連続ヌクレオチドを含むそのフラグメントに相補的である。別の好適実施態様では、単離又は精製された核酸分子は、中程度のストリンジェント条件下、配列番号３又はそのフラグメントから本質的になる単離又は精製された核酸分子とハイブリダイズする。好ましくは、単離又は精製された核酸分子は、配列番号３に相補的なヌクレオチド配列と４９％以上の同一性を共有する。より好ましくは、単離又は精製された核酸分子は、配列番号３と５５％以上の同一性を共有する。より一層好ましくは、単離又は精製された核酸分子は、配列番号３と７５％以上の配列同一性を共有する。更により好ましくは、単離又は精製された核酸分子は、配列番号３と９０％以上の配列同一性を共有する。変異体ＴＤＣ２をコードするヌクレオチド配列又はそのフラグメントに相補的なヌクレオチド配列から本質的になる単離又は精製された核酸分子も得られうる。
【００３４】
本発明の実施態様は、ヒトへの適用という文脈で記載されているが、本明細書記載の教示は、ルーチンな実験事項として他の動物にも適応し得る。例えば、マウスＴＤＣ１（配列番号５（核酸）と６（アミノ酸））及びマウスＴＤＣ２（配列番号７（核酸）と８（アミノ酸））の配列が、本明細書で更に開示される。これらの配列も本発明において使用でき、別の好適実施態様を構成する。
【００３５】
上記に関し、所定の核酸分子における挿入、欠失、逆位、及び/又は置換の作製方法を当業者は知っている。例えば、「実施例」の下で本明細書で引用した参考文献を参照のこと。１個以上の置換により、アミノ酸の、ほぼ等しい質量、構造、電荷の別のアミノ酸による置換が生じる。
【００３６】
また上記に関し、「とは機能的に違わない」は、変異体トランスダクチンは、非修飾トランスダクチンに特徴的な活性を有することを意味することが意図される。換言すれば、それは、トランスダクチン−応答性遺伝子を制御する。しかし、変異体トランスダクチンは、本発明により所望されるように、非修飾トランスダクチンよりも多かれ少なかれ活性でありうる。
【００３７】
ポリヌクレオチド配列は実質的に同一であるという指摘は、中程度のストリンジェント条件下、２つの分子が互いに選択的にハイブリダイズするならば、ということである。句「とハイブリダイズする」は、標的配列が、不均質ＤＮＡ及び／又はＲＮＡの調製物に存在するとき、相補的配列の単一鎖標的ＤＮＡ又はＲＮＡ配列への、単一鎖核酸プローブの選択的結合を指す。「中程度のストリンジェント条件」は、配列依存性であり、異なる状況下で異なろう。一般的に、規定のイオン強度とｐＨでの特定配列の温度融解点（Ｔｍ）よりも約２０℃低いように、中程度のストリンジェント条件は選択される。Ｔｍは、標的配列の５０％が、完全にマッチしたプローブとハイブリダイズする温度（規定のイオン強度とｐＨ下）である。
【００３８】
例えば、中程度のストリンジェント条件下（その用語は、当業者に理解されるように）、好ましくは、約５０℃−約７５℃、更により好ましくは、約６０℃−約７０℃、最適には約６５℃−約６８℃、の範囲の温度で、標準ハイブリダイゼーション緩衝液を用いて、ハイブリダイゼーションを行う。あるいは、ホルムアミドを、ハイブリダイゼーション反応に含ませることができ、そしてハイブリダイゼーション温度は、約３５℃−約４５℃、より一層好ましくは、約４０℃−約４５℃、最適には約４２℃まで減少させることができる。望ましくは、ホルムアミドは、ハイブリダイゼーション反応に、濃度約３０％−約５０％、好ましくは約３５％−約４５％、最適には約４０％含める。更に、場合によっては、比較的に高い中程度のストリンジェント条件下（その用語は、当業者に理解されるように）、ハイブリダイズした配列は洗浄される（非特異的結合を減少させるのに必要ならば）。例えば、望ましくは、ハイブリダイズした配列は、塩と界面活性剤を含有する溶液を用いて、好ましくは温度約５０℃−約７５℃、より一層好ましくは、約６０℃−約７０℃、最適には、約６５℃−約６８℃で、１回以上洗浄される。好ましくは、塩（例えば、塩化ナトリウムなど）を、濃度約０．０１Ｍ−約１．０Ｍで洗浄溶液に含める。最適には、界面活性剤（例えば、ドデシル硫酸ナトリウムなど）も、約０．０１％−約１．０％の濃度で含める。
【００３９】
以下は、水緩衝液（ホルムアミド無し）中でのサザンハイブリダイゼーションのための高いストリンジェント条件下と中程度のストリンジェント条件下の例である(Sambrook and Russell, Molecular Cloning, 3rd Ed. SCHL Press (2001) )。
高いストリンジェント                    中程度のストリンジェント
ハイブリダイゼーション条件：            ハイブリダイゼーション条件：
６×ＳＳＣ又は６×ＳＳＰＥ              ６×ＳＳＣ又は６×ＳＳＰＥ
５×デンハルト試薬                      ５×デンハルト試薬
１％ＳＤＳ                              １％ＳＤＳ
100μg/mlサケ精子DNA                    10μg/mlサケ精子DNA
65-68℃でハイブリダイゼーション         58-64℃でハイブリダイゼーション
高いストリンジェント                    中程度のストリンジェント
洗浄条件：                              洗浄条件：
0.1×SSC/0.1%SDS                        2×SSC/0.1%SDS
65-68℃で洗浄                           58-64℃で洗浄
【００４０】
上記観点から、「ストリンジェント条件」では好ましくは約２０％のミスマッチ、より好ましくは約１５％までのミスマッチ、最好適には約５％までのミスマッチ、例えば、４％、３％、２％、又は１％ミスマッチが許容される。「少なくとも中程度のストリンジェント条件」では好ましくは、約４０％までのミスマッチ、より好ましくは約３０％までのミスマッチ、最好適には約２０％までのミスマッチが許容される。「低いストリンジェント条件」では好ましくは約６０％までのミスマッチ、より好ましくは約５０％までのミスマッチ、最好適には約４０％までのミスマッチが許容される。ミスマッチの上記範囲に関して、１％ミスマッチは、融解温度の１度減少に対応する。
【００４１】
上記単離又は精製された核酸分子はまた、「配列同一性のパーセンテージ」の点で特徴づけされうる。この点で、上記の所定核酸分子は、比較ウインドウにて核酸配列を最適にアラインメントすることによって、対応する遺伝子をコードする核酸分子（即ち、参照配列）と比較できる。ここで、比較ウインドウ中のポリヌクレオチドの部分は、参照配列と比較して付加又は欠失（即ち、ギャップ）を含みうる。参照配列は、２つの配列の最適アラインメントに関し、付加も欠失も含まない。両方の配列で同一核酸塩基である位置の数、即ち、マッチした位置の数を測定し、マッチした位置の数を比較ウインドウの位置の全数で割り、結果を１００倍し、配列同一性のパーセンテージを得ることによって、配列同一性のパーセンテージが計算される。比較のための配列の最適アラインメントは、公知のアルゴリズムのコンピューター実行によって(例えば ,the Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group (GCG), 575 Science Dr., Madison, WIの GAP, BESTFIT, FASTA, 及びTFASTA, 又は、the National Center for Biotechnology Information, Bethesda, MDから入手できるBlastN及び BlastX)、又は視察によって行いうる。デフォルトパラメーターを有するＢＥＳＴＦＩＴ又はＢｌａｓｔＮを用いて、配列は典型的には比較される。
【００４２】
「実質的な配列同一性」は、所定の核酸分子の配列の少なくとも７５％、好ましくは、少なくとも８０％、より好ましくは、少なくとも９０％、最好適には、少なくとも９５％（例えば、９６％、９７％、９８％、又は９９％）が、所定の参照配列と同一であることを意味する。ポリペプチドが構成されるアミノ酸の少なくとも４０％、好ましくは、少なくとも６０％、より好ましくは、少なくとも９０％、最好適には、少なくとも９５％（例えば、９６％、９７％、９８％、又は９９％）が同一であるか、所定の参照配列のアミノ酸の保存的置換を示すならば、典型的には、２つのポリペプチドは、実質的に類似であると考えられる。
【００４３】
しかし、２つのポリヌクレオチド配列が核酸レベルでかなり異なるが、遺伝コードの縮重のために、同一でないにせよ、実質的に類似のアミノ酸配列をコードしうることを当業者は認識しよう。本発明はこのようなポリヌクレオチド配列を包含することが意図される。
【００４４】
上記核酸分子は、単離又は精製、又は合成され得る。核酸合成の方法は当業界公知である。例えば、「実施例」の下で本明細書で引用した参考文献を参照のこと。
【００４５】
当業界公知の通常の手段を用いて、本発明方法において使用されるために、他の生物から対応する遺伝子を同定及び単離するために、上記核酸分子は、全体又は部分で（即ち、フラグメントやプライマーとして）用いられ得る。例えば、「実施例」の下で本明細書で引用した参考文献を参照のこと。
【００４６】
上記の観点から、本発明はまた、上記単離又は精製された核酸分子を含むベクターも提供する。上記核酸分子は、任意の適切なベクターにクローンされることができ、任意の適切な宿主を形質転換又はトランスフェクトするのに使用できる。ベクターの選別とベクターの構築方法は、当業者に普通に知られ、一般的な技術参考文献に記載されている(一般的には "Recombinant DNA Part D," Methods in Enzymology, Vol. 153, Wu and Grossman, eds., Academic Press (1987)及び本明細書の「実施例」で引用した参考文献参照）。望ましくは、ベクターは、転写や翻訳の開始や終結のコドンなどの制御配列を含む。制御配列は、適宜及びベクターがＤＮＡかＲＮＡを考慮して、ベクターが導入される宿主のタイプ（例えば、細菌、真菌、植物又は動物）に特異的である。好ましくは、ベクターは、宿主の属に特異的である制御配列を含む。最好適には、ベクターは、宿主の種に特異的である制御配列を含む。
【００４７】
環状又は線状であるベクターの構築体は、原核もしくは真核宿主細胞で機能を有する複製システムに連結された、上記完全核酸配列又はその部分を含むように調製されることができる。複製システムは、ＣｏｌＥ１、２ｍμプラスミド、λ、ＳＶ４０、ウシパピローマウイルスなど由来でありうる。
【００４８】
複製システムと挿入された核酸に加えて、構築体は、形質転換された、又はトランスフェクトされた宿主の選別を可能とする１つ以上のマーカー遺伝子を含み得る。マーカー遺伝子として、殺生物剤耐性、例えば、抗生物質、重金属などに耐性、栄養要求性宿主を相補してプロトトロフィーを提供することなどが挙げられる。
【００４９】
適切なベクターとして、増殖や拡大用に設計されたものや発現用に設計されたもの、又はその両方の目的で設計されたものが挙げられる。好適なクローニングベクターは、pUC シリーズ、 the pBluescript シリーズ (Stratagene, LaJolla, CA)、 pET シリーズ(Novagen, Madison, WI)、 pGEX シリーズ (Pharmacia Biotech, Uppsala, Sweden)、及び  pEX シリーズ(Clonetech, Palo Alto, CA)からなる群から選択される。λGT10, λGT11, λZaplI (Stratagene), λ EMBL4, 及びλ NM1149などのバクテリオファージベクターも使用できる。植物発現ベクターの例として、pBI101, pBI101.2, pBI101.3, pBI121及びpBIN19 (Clonetech, Palo Alto, CA)が挙げられる。動物発現ベクターの例として、pEUK-C1, pMAM及び pMAMneo (Clonetech)が挙げられる。
【００５０】
発現ベクターは、上記単離又は精製された核酸分子と機能可能に連結された天然又は非天然のプロモーターを含み得る。プロモーター、例えば、強い、弱い、誘導性、組織特異的、及び発生特異的、の選別は、当業界の技術の範囲内である。同様に、上記核酸分子とプロモーターとの組合せも当業界の技術の範囲内である。
【００５１】
また上記観点から、本発明は、上記単離又は精製された核酸分子又はベクターを含む細胞を提供する。適切な細胞の例として、ヒト細胞、ヒト細胞系、E.coli（例えば、E. coli TB-1, TG-2, DH5α, XL-Blue MRF' (Stratagene), SA2821及び Y1090)、B. subtilis, P. aerugenosa, S. cerevisiae, 及び N. crassaが挙げられるが、それらに限定されない。
【００５２】
本発明は更に、ＴＤＣ１をコードするアミノ酸配列又は少なくとも９５個の連続アミノ酸を含むそのフラグメントから本質的になる単離又は精製されたポリペプチド分子であって、そのどちらか１つは、場合によっては、グリコシル化、アミド化、カルボキシル化、リン酸化、エステル化、Ｎ−アシル化され、又は酸付加塩に変換されている、ポリペプチド分子を提供する。単離又は精製されたポリペプチド分子は好ましくは、哺乳動物源から得られる。より一層好ましくは、哺乳動物源はヒトである。単離又は精製されたポリペプチド分子は、配列番号１のヌクレオチド配列又は少なくとも２８５個の連続ヌクレオチドを含むそのフラグメントによってコードされうる。好ましくは、単離又は精製されたポリペプチド分子は、配列番号２のアミノ酸配列又は少なくとも９５個の連続アミノ酸を含むそのフラグメントから本質的になる。より好ましくは、フラグメントは、少なくとも１００個の連続アミノ酸を含む。更により好ましくは、フラグメントは、少なくとも１０５個の連続アミノ酸を含む。より一層好ましくは、フラグメントは、少なくとも１１０個の連続アミノ酸を含む。あるいは、しかし、更に好ましくは、単離又は精製されたポリペプチド分子は、配列番号２と２４％以上の同一性を共有する。より好ましくは、単離又は精製されたポリペプチド分子は、配列番号２と３０％以上の同一性を共有する。更により好ましくは、単離又は精製されたポリペプチド分子は、配列番号２と４５％以上の同一性を共有する。より一層好ましくは、単離又は精製されたポリペプチド分子は、配列番号２と６５％以上の同一性を共有する。
【００５３】
更なる実施態様では、単離又は精製されたポリペプチド分子は、配列番号５のヌクレオチド配列又は少なくとも２８５個の連続ヌクレオチドを含むそのフラグメントによってコードされうる。更に、単離又は精製されたポリペプチド分子は、配列番号６のアミノ酸配列又は少なくとも９５個の連続アミノ酸を含むそのフラグメントから本質的になりうる。より好ましくは、フラグメントは、少なくとも１００個の連続アミノ酸を含む。更により好ましくは、フラグメントは、少なくとも１１５個の連続アミノ酸を含む。より一層好ましくは、フラグメントは、少なくとも１３０個の連続アミノ酸を含む。あるいは、単離又は精製されたポリペプチド分子は、配列番号６と２５％以上の同一性を共有する。より好ましくは、単離又は精製されたポリペプチド分子は、配列番号６と３０％以上の同一性を共有する。更により好ましくは、単離又は精製されたポリペプチド分子は、配列番号６と４５％以上の同一性を共有する。より一層好ましくは、単離又は精製されたポリペプチド分子は、配列番号６と６５％以上の同一性を共有する。
【００５４】
変異体ＴＤＣ１をコードするアミノ酸配列又はそのフラグメントから本質的になる単離又は精製されたポリペプチド分子は、少なくとも９５個の連続アミノ酸を含み得、それは、場合によっては、グリコシル化、アミド化、カルボキシル化、リン酸化、エステル化、Ｎ−アシル化され、又は酸付加塩に変換されている。更に好ましくは、フラグメントは、少なくとも１００個の連続アミノ酸を含む。更により好ましくは、フラグメントは、少なくとも１０５個の連続アミノ酸を含む。より一層好ましくは、フラグメントは、少なくとも１１０個の連続アミノ酸を含む。
【００５５】
本発明は更に、ＴＤＣ２をコードするアミノ酸配列又は少なくとも７１個の連続アミノ酸を含むそのフラグメントから本質的になる単離又は精製されたポリペプチド分子であって、そのどちらか１つは、場合によっては、グリコシル化、アミド化、カルボキシル化、リン酸化、エステル化、Ｎ−アシル化され、又は酸付加塩に変換されている、ポリペプチド分子を提供する。単離又は精製されたポリペプチド分子は好ましくは、哺乳動物源から得られる。より一層好ましくは、哺乳動物源はヒトである。単離又は精製されたポリペプチド分子は、配列番号３のヌクレオチド配列又は少なくとも２１３個の連続ヌクレオチドを含むそのフラグメントによってコードされうる。好ましくは、単離又は精製されたポリペプチド分子は、配列番号４のアミノ酸配列又は少なくとも７１個の連続アミノ酸を含むそのフラグメントから本質的になる。より好ましくは、フラグメントは、少なくとも７５個の連続アミノ酸を含む。更により好ましくは、フラグメントは、少なくとも９０個の連続アミノ酸を含む。より一層好ましくは、フラグメントは、少なくとも１０５個の連続アミノ酸を含む。あるいは、しかし、更に好ましくは、単離又は精製されたポリペプチド分子は、配列番号４と３１％以上の同一性を共有する。より好ましくは、単離又は精製されたポリペプチド分子は、配列番号４と４０％以上の同一性を共有する。更により好ましくは、単離又は精製されたポリペプチド分子は、配列番号４と５５％以上の同一性を共有する。より一層好ましくは、単離又は精製されたポリペプチド分子は、配列番号４と７５％以上の同一性を共有する。
【００５６】
更なる実施態様では、単離又は精製されたポリペプチド分子は、配列番号７のヌクレオチド配列又は少なくとも２１３個の連続ヌクレオチドを含むそのフラグメントによってコードされうる。好ましくは、単離又は精製されたポリペプチド分子は、配列番号８のアミノ酸配列又は少なくとも７１個の連続アミノ酸を含むそのフラグメントから本質的になる。より好ましくは、フラグメントは、少なくとも７５個の連続アミノ酸を含む。更により好ましくは、フラグメントは、少なくとも９０個の連続アミノ酸を含む。より一層好ましくは、フラグメントは、少なくとも１０５個の連続アミノ酸を含む。あるいは、しかし、更に好ましくは、単離又は精製されたポリペプチド分子は、配列番号８と３４％以上の同一性を共有する。より好ましくは、単離又は精製されたポリペプチド分子は、配列番号８と４０％以上の同一性を共有する。更により好ましくは、単離又は精製されたポリペプチド分子は、配列番号８と５５％以上の同一性を共有する。より一層好ましくは、単離又は精製されたポリペプチド分子は、配列番号８と７５％以上の同一性を共有する。
【００５７】
変異体ＴＤＣ２をコードするアミノ酸配列又はそのフラグメントから本質的になる単離又は精製されたポリペプチド分子は、少なくとも７１個の連続アミノ酸を含み得、それは、場合によっては、グリコシル化、アミド化、カルボキシル化、リン酸化、エステル化、Ｎ−アシル化され、又は酸付加塩に変換されている。更に好ましくは、フラグメントは、少なくとも７５個の連続アミノ酸を含む。更により好ましくは、フラグメントは、少なくとも９０個の連続アミノ酸を含む。より一層好ましくは、フラグメントは、少なくとも１１５個の連続アミノ酸を含む。
【００５８】
ポリペプチドは好ましくは、アミノ末端とカルボキシル末端を含む。ポリペプチドは、Ｄ−アミノ酸、Ｌ−アミノ酸、又はＤ−とＬ−アミノ酸の混合物を含みうる。しかし、アミノ酸のＤ型が特に好適である。Ｄ−アミノ酸は、天然起源のプロテアーゼによって認識されないことを考えれば、Ｄ−アミノ酸からなるポリペプチドは、インビボでその生物活性のより大きな保持をもつことが期待されるからである。
【００５９】
ポリペプチドは、多くの通常の技術の任意のものによって製造できる。ポリペプチドは、天然源又は組換え源から、単離又は精製されることができる。例えば、組換えポリペプチドの場合、所望のペプチドをコードするＤＮＡフラグメントは、周知の分子遺伝技術（例えば、 Maniatis et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd ed. (Cold Spring Harbor Laboratory, 1989); 及び Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd ed. Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N. Y., 1989参照）を用いて適当なベクターにサブクローンすることができる。インビトロで、フラグメントは転写され得、次いでポリペプチドに翻訳され得る。市販のキットも使用できる（例えば、Clontech, Palo Alto, CA; Amersham Life Sciences, Inc., Arlington Heights, IL; InVitrogen, San Diego, CAなどによって製造されたようなものなど）。場合によっては、ポリメラーゼ連鎖反応を、核酸の増幅に使用できる。更に、ポリペプチド又はそのフラグメントは、当業界公知の方法に従ってグリコシル化できる。
【００６０】
変異体ポリペプチドを製造するための天然アミノ酸配列の改変は、当業者公知の種々の手段で行える。例えば、部位特異的変異は、発現ベクターに、修飾部位を含む合成オリゴヌクレオチドを連結することによって導入できる。あるいは、Walder et al., Gene, 42,133 (1986); Bauer et al., Gene, 37,73 (1985); Craik, Biotechniques, 12-19 (January 1995); 並びに 米国特許4,518,584及び 4,737,462に記載のようなオリゴヌクレオチド誘導−部位特異的変異誘発法が使用できる。
【００６１】
上記単離又は精製されたポリペプチド分子に関し、トランスダクチン分子の機能性ドメインをコードするヌクレオチド配列中の挿入、欠失、逆位及び/又は置換により、非機能性トランスダクチン分子が生成されうることを当業者は認識するだろう。好ましくは、上記のどの変異体も、トランスダクチン活性にあまり重要ではない、ドメインにおける挿入、欠失、逆位及び/又は置換などの変異を含むであろう。例えば、内在性膜蛋白質として、トランスダクチン分子の膜貫通ドメインへの挿入、逆位、欠失、及び/又は置換は、該分子が膜に挿入されるのを不可能にし得、そうして細胞膜を貫通するチャネルとして該分子を無効にし得る。あるいは、上記変異は、チャネル孔ドメインの、細胞膜を通り分子を移動させる能力に影響を与え得る。トランスダクチン活性に極めて重要な他のドメインは、それらのドメインの変異がトランスダクチン活性の減少を引き起こすかどうかを決定することによって同定できる。
【００６２】
任意の適切な発現ベクター（例えば、Pouwels et al., Cloning Vectors: A Laboratory Manual (Elsevior, NY: 1985)に記載されたもの）と対応する適切な宿主は、組換えポリペプチドの製造に使用できる。発現宿主として、Escherichia, Bacillus, Pseudomonas, Salmonella属内の細菌種、バキュロウイルス系を含む哺乳動物又は昆虫宿主細胞系（例えば、Luckow et al., Bio/Technology, 6, 47 (1988)に記載されたもの)、及びCOS-7, C127, 3T3, CHO, HeLa, BHK細胞系などの樹立細胞系などが挙げられる。勿論、発現宿主の選択は、製造されるポリペプチドのタイプに関連することに、当業者は気付いている。例えば、酵母又は哺乳動物細胞（例えば、ＣＯＳ−７細胞）で産生されるポリペプチドのグリコシル化は、Escherichia coliなどの細菌細胞で産生されるポリペプチドのグリコシル化とは異なろう。
【００６３】
あるいは、当業者周知の標準ペプチド合成技術（例えば、Bodanszky, Principles of Peptide Synthesis, (Springer Verlag, Heidelberg: 1984)に要約されている）を用いてポリペプチド（変異体ペプチドを含む）を合成できる。特に、ポリペプチドは、固相合成法を用い合成できる（例えば、Merrifield, J. Am. Chem. Soc., 85, 2149-54 (1963); Barany et al., Int. J. Peptide Protein Res., 30, 705-739 (1987); 及び米国特許 5,424,398参照）。所望ならば、これは自動化ペプチド合成機を用いて行える。ｔ−ブチルオキシカルボニル（ｔ−ＢＯＣ）又は９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）アミノ酸ブロッキング基の除去と、樹脂からのポリペプチドの分離は、例えば、低温での酸処理によって成就されうる。次いで、ポリペプチド含有混合物を、例えば、ジメチルエーテルによって抽出して非ペプチド性有機化合物を除去することができ、そして合成ポリペプチドを樹脂粉末から抽出することができる（例えば、約２５％ｗ／ｖ酢酸によって）。ポリペプチドの合成後、場合によっては、更なる精製（例えば、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて）を行い、不完全ポリペプチド又は遊離アミノ酸を除去することができるが、合成ポリペプチドに、アミノ酸分析及び／又はＨＰＬＣ分析を行い、そのアイデンティティを確認することができる。本発明による他の適用に関して、当業者公知の化学結合や遺伝子手段のいずれかにより、より大きな融合蛋白質の一部としてポリペプチドを製造することが好ましい可能性もある。
【００６４】
所望ならば、本発明のポリペプチド（変異体ポリペプチドを含む）は、例えば、グリコシル化、アミド化、カルボキシル化、もしくはリン酸化、又は本発明のポリペプチドの、酸付加塩、アミド、エステル、特にＣ末端エステル、及びＮ−アシル誘導体の生成によって修飾できる。また、ポリペプチドを、当業者公知の方法に従って、他のモイエティ(moiety)との共有結合又は非共有結合複合体を形成することにより修飾してポリペプチド誘導体を生成できる。化学モイエティを、ポリペプチドを含むアミノ酸側鎖の官能基又はＮ末端もしくはＣ末端と結合させることによって、共有結合複合体が製造できる。
【００６５】
従って、この点に関し、本発明はまた、上記単離又は精製されたポリペプチド分子又はそのフラグメントと標的指向モイエティを含むコンジュゲートを提供する。好ましくは、標的指向モイエティは、抗体又は抗原に反応性のそのフラグメントである。あるいは、標的指向モイエティは、放射能標識、蛍光標識、酵素（例えば、比色反応や蛍光反応を触媒するもの）、基質、固体マトリックス、又は担体（例えば、ビオチン又はアビジン）を含むが、それらに限定されないレポーター基でありうる。コンジュゲーションの方法は当業界公知である。更に、コンジュゲートキットは市販されている。
【００６６】
本発明はまた、医薬上許容できる担体と、（ｉ）上記単離又は精製された核酸分子又はそのフラグメント、（ｉｉ）上記ベクター、（ｉｉｉ）上記ポリペプチド分子又はそのフラグメント、又は（ｉｖ）上記単離又は精製されたポリペプチド分子もしくはそのフラグメントと標的指向モイエティを含む上記コンジュゲートのいずれかを含む組成物を提供する。医薬上許容できる担体は当業界周知であり、容易に利用できる。担体の選択は、部分的には、投与の特定経路によって、そして、核酸分子かポリペプチド分子（又はそのコンジュゲート）が投与されるかどうかによって決定されよう。従って、本発明において使用される種々の適切な製剤があり、そして本発明は、本発明の活性剤とそのための医薬上許容できる担体を含む医薬組成物を明白に提供する。以下の方法と担体は、単なる例示であり、決して限定的なものではない。
【００６７】
経口投与に適した製剤は、（ａ）液体溶液（例えば、希釈剤（例えば、水、生理食塩水、又はオレンジジュース）に溶解した有効量の化合物）；（ｂ）カプセル、サッチェ又は錠剤（各々は、固体又は顆粒として、所定量の活性成分を含む）；（ｃ）適当な液体中の懸濁液；及び、（ｄ）適切なエマルション；からなりうる。錠剤形態は、１種以上のラクトース、マンニトール、コーンスターチ、ポテトスターチ、微結晶性セルロース、アカシア、ゼラチン、コロイド性二酸化ケイ素、クロスカルメロースナトリウム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、並びに、他の賦形剤、着色剤、希釈剤、緩衝剤、湿潤剤、保存剤、フレーバー剤、及び、医薬として適合性のある賦形剤を含有しうる。ロゼンジ形態は、フレーバー中に、通常、シュークロース及びアカシア又はトラガカント中に活性成分を含み得る。香錠は、ゼラチンやグリセリン、又はシュークロースやアカシアなどの不活性基剤中に活性成分を含み得、エマルション、ゲルなどは、活性成分に加えて、当業界公知のような賦形剤／担体を含む。
【００６８】
単独又は他の適切な成分と組合せて、本発明の活性剤は、吸入により投与されるエアロゾル製剤に製造できる。これらのエアロゾル製剤は、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素などの加圧許容噴射剤中に入れることができる。これらのエアロゾル製剤はまた、ネブライザーやアトマイザー中などの、非加圧製剤の医薬として製剤化できる。
【００６９】
非経口投与に適した製剤として、水性及び非水性の、等張性滅菌注射溶液（それは、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、及び、製剤を意図された受容者の血液と等張にする溶質を含みうる）、並びに、懸濁剤、可溶化剤、増粘剤、安定化剤、及び保存剤を含みうる水性及び非水性の、滅菌懸濁液が挙げられる。製剤は、アンプルやバイアルなどの、単位投与量又は多重投与量の密封容器中で提出でき、使用直前に、注射のために、滅菌液体賦形剤、例えば、水の添加のみを必要とする凍結乾燥状態で保存できる。即時調製注射溶液と懸濁液は、上記種類の滅菌粉末、顆粒及び錠剤から調製できる。
【００７０】
更に、本発明の活性剤は、乳化基剤や水溶性基剤などの種々の基剤と混合することによって、座薬に製造できる。膣投与に適した製剤は、活性成分の他に、適当であることが当業界公知であるような担体を含む、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、泡状物、又はスプレー製剤として提供できる。更に適切な製剤は、Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., (Mack Publishing Company, Philadelphia, Pa.: 1985)に見出せ、薬剤送達の方法は、例えば、Langer, Science, 249, 1527-1533 (1990)にレビューされている。
【００７１】
標的指向モイエティはまた、細胞と上記単離又は精製された核酸分子の接触において使用できる。この点に関し、適切な送達ビヒクルなどを介し、標的指向モイエティが細胞表面レセプターと結合するように、治療用核酸と直接的又は間接的に連結できる任意の分子が使用できる。標的指向モイエティは、細胞表面のレセプター、基質、抗原決定基又は別の結合部位を介し細胞と結合できる。標的指向モイエティの例として、抗体（即ち、ポリクローナル又はモノクローナル抗体）、抗体の免疫反応性フラグメント、操作された免疫蛋白質など、蛋白質（標的は、レセプター、基質、又はＤＮＡもしくはＲＮＡの制御部位）、ポリペプチド（標的はレセプター）、ペプチド（標的はレセプター）、ＤＮＡ又はＲＮＡである核酸（即ち、単一鎖もしくは二重鎖、合成もしくは天然から単離精製された；標的は相補核酸）、ステロイド（標的はステロイドレセプター）などが挙げられる。
【００７２】
規定された標的と結合する能力を保持する標的指向モイエティのアナログも使用できる。更に、特定のエピトープに適合するような合成の標的指向モイエティも設計できる。あるいは、治療用核酸は、表面に標的指向モイエティを含むリポソームにカプセル化されることができる。
【００７３】
標的指向モイエティは、本発明において、上記核酸分子に標的指向モイエティを連結するのに使用できる連結基を含む。二官能性試薬を含む種々の連結基が使用できることは、当業者に明白であろう。標的指向モイエティは、共有結合又は非共有結合によって治療用核酸に連結されることができる。結合が非共有であるならば、コンジュゲーションは、水素結合、イオン結合、疎水もしくはファンデルワールス相互作用、又は任意の他の適切な型の結合を通じてのものでありうる。
【００７４】
上記単離又は精製された核酸分子に特異的なモノクローナル抗体を産生する細胞系が、更に本発明によって提供される。このような細胞系の製造方法は当業界公知である（例えば、本明細書の「実施例」で引用された参考文献参照）。好ましくは、細胞系が生成される由来の細胞は、多能性幹細胞である。より一層好ましくは、細胞は、全能性幹細胞である。従って、本発明はまた、細胞系によって産生されるモノクローナル抗体を提供する。
【００７５】
本発明は更に、動物での難聴又は難聴の素因の検出方法を提供する。１実施態様では、方法は、動物から得られたＴＤＣ１遺伝子及び／又はその多形性を含む核酸を含む試験サンプルにおいて、ＴＤＣ１をコードする遺伝子における1714G→A (D572N), 100C→T (R34X), 1534C→T (R512X), 295 del A (フレームシフト及び未成熟終結）, 1960 A→G(M654V), IVS3_IVS5del27kb, IVS13+1G→A, 又は IVS10-8T→Aなどの少なくとも１つの変異を検出することを含み、該少なくとも１つの変異が動物での難聴又は難聴の素因の指標である。別の実施態様では、方法は、動物から得られたＴＤＣ２遺伝子及び／又はその多形性を含む核酸を含む試験サンプルにおいて、ＴＤＣ２をコードする遺伝子における少なくとも１つの変異を検出することを含み、該少なくとも１つの変異が動物での難聴又は難聴の素因の指標である。難聴は、遺伝性でありえ、更に、感覚神経性難聴でありうる。該方法は、非症候性常染色体優性難聴を治療するのに更に使用できる。難聴はまた、アミノグリコシドで誘導されたものでありうる。更に、難聴は、ＤＦＮＡ３６に連関しうる。該方法はまた、少なくとも１つの変異が、ＴＤＣ１／ＴＤＣ２遺伝子産物が動物の内耳の毛細胞の成分を形成する能力を損傷する場合にも適用される。毛細胞の成分は、動物の内耳の毛細胞のイオントランスダクションチャネルの全部又は一部でありうる。あるいは、少なくとも１つの変異は、ＴＤＣ１／ＴＤＣ２遺伝子産物のメカノセンサリー活性を損傷し得る。
【００７６】
トランスダクチンをコードする遺伝子の少なくとも１つの変異（例えば、少なくとも２つの変異、少なくとも３つの変異、少なくとも４つの変異、少なくとも５つの変異、又は少なくとも１０個の変異でさえも）は、動物での難聴又は難聴の素因の指標であるトランスダクチンをコードする遺伝子の任意の１つ以上の変異として本明細書で定義される。少なくとも１つの変異は、例えば、トランスダクチンコード遺伝子での任意の挿入、重複、欠失、逆位、及び／又は置換から生じる、任意のフレームシフト変異、ミスセンス変異、及び／又はナンセンス変異でありうる。少なくとも１つの変異は、転写、転写後、翻訳、及び／又は翻訳後のプロセシングエラー、例えば、トランスダクチン遺伝子の最初のメチオニン以外のメチオニンをコードするコドン（例えば、トランスダクチン遺伝子の第３番目のメチオニンをコードするコドン）で翻訳が始まる翻訳エラーを引き起こし得る。更に、トランスダクチン遺伝子における少なくとも１つの変異は、１つ以上のスプライシングエラー（即ち、スプライシング変異）を引き起こし得、その結果、変異トランスダクチンが産生されうる。あるいは、又は、加えて、トランスダクチン遺伝子における少なくとも１つの変異は、未成熟に終結させる、トランスダクチン遺伝子の転写、転写後、翻訳、及び／又は翻訳後プロセシングを引き起こす変異でありえ、それによって、短縮形態のトランスダクチンの発現が導かれる。少なくとも１つの変異はまた、トランスダクチン遺伝子産物の転写、転写後、翻訳、及び／又は翻訳後プロセシングの効率の減少を引き起こし得る。更に、トランスダクチン遺伝子における少なくとも１つの変異は、野生型トランスダクチンと比較して、トランスダクチン遺伝子産物が正常に機能する能力の損傷と関連しうる。
【００７７】
トランスダクチン遺伝子における少なくとも１つの変異は、トランスダクチン遺伝子の１つ以上の核酸の位置で、例えば、トランスダクチン遺伝子の任意のコード領域内で、及び／又はトランスダクチン遺伝子の制御領域内で、検出できる。例えば、少なくとも１つの変異が、トランスダクチン分子が細胞膜を横切ることを可能とする膜貫通ドメインを損傷するならば、トランスダクチン遺伝子における少なくとも１つの変異は、動物での難聴又は難聴の素因の指標である。また、トランスダクチン遺伝子における少なくとも１つの変異が、他のこのような分子と結合してイオンチャネルを形成するトランスダクチン分子の能力を損傷するならば、トランスダクチン遺伝子における少なくとも１つの変異は動物での難聴又は難聴の素因の指標である。更に、トランスダクチン遺伝子における少なくとも１つの変異が、野生型トランスダクチンと比較して、トランスダクチン遺伝子産物が活性化されるようになる能力を損傷するならば、又は、細胞膜を横断してイオンを運ぶ、チャネル複合体の能力を損傷するならば、トランスダクチン遺伝子における少なくとも１つの変異は、動物での難聴又は難聴の素因の指標である。
【００７８】
動物から得られた試験サンプル中のトランスダクチン遺伝子は、当業界公知の任意の適切な増幅方法、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）；逆転写酵素ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）；リガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ）（米国特許No.4,883,750に開示）；等温増幅（Walker et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA 89: 392-396 (1992)に開示）；鎖置換増幅（ＳＤＡ）；及び、修復鎖反応（ＲＣＲ）；を用いて、増幅できる。標的特異的配列はまた、サイクリックプローブ反応（ＣＰＲ）を用いて検出できる。更に、逆転写の代替方法は、ＷＯ 90/07641に記載されている。
【００７９】
プライマー配列が野生型トランスダクチン遺伝子、変異トランスダクチン遺伝子、及び/又はその機能性配列アナログをコードする核酸とハイブリダイズできる限り、任意のプライマー配列が増幅方法で使用できる。例えば、Ｍ１３−テイルドプライマーは、増幅方法で使用できる（表１参照）。
【００８０】
増幅の鋳型として使用される配列は、任意の標準方法（Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Ed., Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1989)を用いて、試験サンプルから単離できる。あるいは、又は、更に、分離を行うのに、クロマトグラフィー技術を使用できる。該方法において使用できる多種のクロマトグラフィー（例えば、吸着、分配、イオン交換、分子ふるい、並びに、カラム、ペーパー、薄層及びガスクロマトグラフィーを含む上記を使用するための多数の特殊化技術）(Freifelder, Physical Biochemistry Applications to Biochemistry and Molecular Biology, 2nd Ed., Wm. Freeman and Co., New York, N.Y. (1982)）が存在することが理解されよう。
【００８１】
トランスダクチン遺伝子の増幅を確認するために、増幅産物は可視化される必要がある。１つの典型的可視化方法は、エチジウムブロミドによるゲルの染色とＵＶ光下での可視化を含む。あるいは、増幅産物が、放射標識ヌクレオチド又は蛍光標識ヌクレオチドと一体となって標識されるならば、次いで、増幅産物は、分離後、Ｘ線フィルムに露出され得、又は、適当な刺激スペクトル下、可視化され得る。１実施態様では、可視化は間接的に達成される。増幅産物の分離後、標識された核酸プローブを、増幅されたトランスダクチン遺伝子配列と接触させ、ハイブリダイズする。プローブは、発色団と結合されるが、放射標識されてもよい。別の実施態様では、プローブを、抗体やビオチンなどの結合パートナーと結合する。そこでは、結合対の他のメンバーは、検出可能モイエティ（即ち、標識）を有する。上記の１例は、米国特許No.5,279,721に記載され、該特許は、自動化電気泳動及び核酸移動の装置及び方法を開示する。
【００８２】
ハイブリダイゼーションを用いるとき、好ましくは、ハイブリダイゼーションは、高いストリンジェント条件で行う。「高いストリンジェント条件」は、プローブは、非特異的ハイブリダイゼーションよりも、検出可能的にはより大きい量で標的配列と特異的にハイブリダイズすることを意味する。そのとき、高いストリンジェント条件は、正確な相補配列を有するポリヌクレオチド又は２，３の散在性ミスマッチのみを含むポリヌクレオチドを、プローブにマッチした２，３の小領域（例えば、３−１０塩基）をたまたま有したランダム配列から区別する条件である。相補性を有するこのような小領域は、１４−１７個以上の塩基の完全長相補鎖よりも容易に融解し、中程度のストリンジェントハイブリダイゼーションにより容易に区別できる。比較的高いストリンジェント条件は、例えば、低塩及び／又は高温条件（例えば、約０．０２−０．１Ｍ ＮａＣｌ又は等価物、温度約５０−７０℃で提供されるような条件）を含む。このような比較的高いストリンジェント条件は、プローブと鋳型もしくは標的鎖との間のミスマッチを殆ど受け入れない（もし、あっても）、そして、それは、特異的トランスダクチンの発現を検出するのに特に適切である。ホルムアミドの添加量の増加によって、条件はよりストリンジェントにされ得ることが一般的に認識される。
【００８３】
少なくとも１つの変異は、トランスダクチン遺伝子を配列決定し、該配列を野生型配列と比較することによって検出できる。あるいは、少なくとも１つの変異は、当業界周知の方法であるサザンブロットハイブリダイゼーションによって検出し得る。更に別の代替は、ゲノムＤＮＡのアレル特異的ＰＣＲ増幅である。
【００８４】
上記に加え、本発明は、動物から得られた野生型ＴＤＣ１遺伝子及び／又は変異ＴＤＣ１遺伝子を含む核酸を含む試験サンプルにおける野生型ＴＤＣ１遺伝子及び／又は変異ＴＤＣ１遺伝子を含む核酸のレベルの測定方法を提供する。該方法は、野生型ＴＤＣ１遺伝子及び／又は変異ＴＤＣ１遺伝子を含む核酸のレベルに関して試験サンプルをアッセイすることを含み、対照サンプルと比較して、試験サンプルにおける野生型ＴＤＣ１遺伝子を含む核酸のレベルの減少及び／又は変異ＴＤＣ１遺伝子を含む核酸のレベルの増加が、動物での難聴（例えば、失聴）又は難聴の素因の指標である。
【００８５】
上記に加えて、本発明は、動物から得られた野生型ＴＤＣ２遺伝子及び／又は変異ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸を含む試験サンプルにおける野生型ＴＤＣ２遺伝子及び／又は変異ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸のレベルの測定方法を提供する。該方法は、野生型ＴＤＣ２遺伝子及び／又は変異ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸のレベルに関して試験サンプルをアッセイすることを含み、対照サンプルと比較して、試験サンプルにおける野生型ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸のレベルの減少及び／又は変異ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸のレベルの増加が、動物での難聴（例えば、失聴）又は難聴の素因の指標である。
【００８６】
野生型トランスダクチン遺伝子は、細胞膜を横断するカチオンチャネル能を持つ（すなわち、有する）トランスダクチン遺伝子産物をコードする任意のトランスダクチン遺伝子として本明細書では定義される。変異トランスダクチン遺伝子は、野生型トランスダクチンと比較して、細胞膜を横断してカチオンを運ぶ能力の損傷（例えば、能力が殆ど、又は全く無いこと）を有するトランスダクチン遺伝子産物をコードする任意のトランスダクチン遺伝子として本明細書で定義される。
【００８７】
動物から得られた試験サンプルでの野生型トランスダクチン遺伝子及び／又は変異トランスダクチン遺伝子のレベルは、試験サンプルにおいての、野生型トランスダクチン遺伝子を含む核酸の量及び／又は変異トランスダクチン遺伝子を含む核酸の量として、本明細書では定義される。野生型トランスダクチン遺伝子及び／又は変異トランスダクチン遺伝子のレベルの「減少」及び「増加」は、動物から得られた試験サンプルに存在する野生型及び／又は変異トランスダクチン遺伝子のレベルと、任意の適切な対照試験サンプルとの比較によって決定される。適切な対照試験サンプルとして、例えば、異なる時点で同一動物から得られた試験サンプルや同一種の異なる動物から得られた試験サンプルが挙げられる。
【００８８】
動物から得られた試験サンプルに存在する野生型トランスダクチン遺伝子及び／又は変異トランスダクチン遺伝子を含む核酸（即ち、ＤＮＡ又はＲＮＡ）の存在及び／又はレベルを測定するために、種々のアッセイが使用できる。例えば、米国特許No.6,197,506及び6,040,138に記載のように、野生型トランスダクチン遺伝子及び／又は変異トランスダクチン遺伝子の存在及び／又は非存在を検出するために、例えば、ＰＣＲとミクロアレイ分析を含むアッセイが使用できる。更に、使用されるアッセイのタイプは、アッセイされる問題の核酸がＤＮＡであるかＲＮＡであるかに依存することが理解される。試験サンプルにおける野生型トランスダクチン遺伝子及び／又は変異トランスダクチン遺伝子を含むＤＮＡレベルを測定するためのアッセイとして、例えば、サザンハイブリダイゼーション（即ち、サザンブロット）、in situハイブリダイゼーション及びミクロアレイ解析が挙げられる。試験サンプルにおける野生型トランスダクチン遺伝子及び／又は変異トランスダクチン遺伝子を含むＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）レベルを測定するためのアッセイとして、例えば、ノーザンハイブリダイゼーション（即ち、ノーザンブロット）、in situハイブリダイゼーション及びミクロアレイ解析が挙げられる。
【００８９】
トランスダクチンをコードする遺伝子を含む核酸と特異的に結合する、又は会合する核酸配列は、ＤＮＡであるにせよＲＮＡであるにせよ、ハイブリダイゼーションの測定用標識に結合できる。例えば、検出できる蛍光、放射活性、及び酵素標識、並びにリガンド（例えば、アビジン／ビオチン）を含む種々の適切な標識が当業界公知である。好ましくは、蛍光標識、又はウレアーゼ、アルカリホスファターゼもしくはペルオキシダーゼなどの酵素タグが、放射活性標識や他の環境的に望まれない標識の代わりに使用される。酵素タグの場合、分光学的に可視であって、又はヒトの眼にさえ可視であって、相補的トランスダクチン核酸含有サンプルとの特異的ハイブリダイゼーションを同定する検出システムを提供するために使用できる比色指示薬基質は公知である。
【００９０】
本発明はまた、動物での難聴（例えば、失聴）の予後判定における該方法の使用を提供する。該方法は、動物から得られた野生型ＴＤＣ１／ＴＤＣ２遺伝子及び／又は変異ＴＤＣ１／ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸を含む試験サンプルにおいて野生型ＴＤＣ１／ＴＤＣ２遺伝子及び／又は変異ＴＤＣ１／ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸のレベルを測定し、試験サンプルにおける野生型ＴＤＣ１／ＴＤＣ２遺伝子及び／又は変異ＴＤＣ１／ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸のレベルを、時間をおいて（over time）該動物から得られた別の試験サンプルにおけるそれぞれ野生型ＴＤＣ１／ＴＤＣ２遺伝子及び／又は変異ＴＤＣ１／ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸のレベルと比較することを含み、野生型ＴＤＣ１／ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸のレベルの減少及び／又は変異ＴＤＣ１／ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸のレベルの増加が、好ましくない予後の指標であり、野生型ＴＤＣ１／ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸のレベルの増加及び／又は変異ＴＤＣ１／ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸のレベルの減少が、好ましい予後の指標であり、野生型ＴＤＣ１／ＴＤＣ２遺伝子及び／又は変異ＴＤＣ１／ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸のレベルの非変化が、難聴における非変化の指標である。
【００９１】
本発明はまた、所定の抗難聴剤による動物での難聴の治療の効力の評価における該方法の使用を提供する。該方法は、試験サンプルにおける野生型ＴＤＣ１／ＴＤＣ２遺伝子及び／又は変異ＴＤＣ１／ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸のレベルを、時間をおいて該動物から得られた別の試験サンプルにおけるそれぞれ野生型ＴＤＣ１／ＴＤＣ２遺伝子及び／又は変異ＴＤＣ１／ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸のレベルと比較することを含み、野生型ＴＤＣ１／ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸のレベルの減少及び／又は変異ＴＤＣ１／ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸のレベルの増加が、該抗難聴剤が有効である指標であり、野生型ＴＤＣ１／ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸のレベルの増加及び／又は変異ＴＤＣ１／ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸のレベルの減少が、該抗難聴剤が無効である指標であり、野生型ＴＤＣ１／ＴＤＣ２遺伝子及び／又は変異ＴＤＣ１／ＴＤＣ２遺伝子を含む核酸のレベルの非変化が、該抗難聴剤での治療による難聴の非変化の指標である。
【００９２】
変異トランスダクチン遺伝子産物はまた、動物から得られた試験サンプルにおいて検出でき、動物での難聴又は難聴の素因の指標である。従って、本発明は、動物から得られたトランスダクチンを含む蛋白質を含む試験サンプルにおいて変異トランスダクチンを検出することを含む、動物での難聴又は難聴の素因の検出方法であって、試験サンプル中の変異トランスダクチンの存在が、動物での難聴又は難聴の素因の指標である、方法を更に提供する。難聴又は難聴の素因の指標であるこのような変異の例は、上に記載されている。即ち、方法は、動物から得られたＴＤＣ１／ＴＤＣ２を含む蛋白質を含む試験サンプルにおいて変異ＴＤＣ１／ＴＤＣ２を検出することを含み、該サンプルにおける変異ＴＤＣ１／ＴＤＣ２の存在が、該動物での難聴又は難聴の素因の指標である。難聴は、遺伝性、感覚神経性難聴、非症候性常染色体優性難聴、及び／又はＤＦＮＡ３６−連関難聴でありうる。変異ＴＤＣ１／ＴＤＣ２が動物の内耳の毛細胞の成分を形成する能力は損傷されうる。変異ＴＤＣ１／ＴＤＣ２が、動物の内耳の毛細胞のイオントランスダクションチャネルの全部又は一部を形成する能力は、損傷されうる。変異ＴＤＣ１／ＴＤＣ２のメカノセンサリー活性も損傷されうる。
【００９３】
野生型ＴＤＣ１／ＴＤＣ２及び／又は変異ＴＤＣ１／ＴＤＣ２のレベルも測定できる。従って、本発明はまた、動物から得られた野生型ＴＤＣ１／ＴＤＣ２及び／又は変異ＴＤＣ１／ＴＤＣ２を含む蛋白質を含む試験サンプルにおける野生型ＴＤＣ１／ＴＤＣ２及び／又は変異ＴＤＣ１／ＴＤＣ２のレベルの測定方法を提供する。該方法は、野生型ＴＤＣ１／ＴＤＣ２及び／又は変異ＴＤＣ１／ＴＤＣ２のレベルに関して試験サンプルをアッセイすることを含み、（上記のように）対照サンプルと比較して試験サンプルにおける野生型ＴＤＣ１／ＴＤＣ２のレベルの減少及び／又は変異ＴＤＣ１／ＴＤＣ２のレベルの増加が、動物での難聴又は難聴の素因の指標である。
【００９４】
動物から得られた試験サンプルにおける野生型トランスダクチン及び／又は変異トランスダクチンの量の検出及び／又は測定のために、種々のアッセイ（即ち、免疫結合アッセイ）が意図される。例えば、分離した、別々の抗体を調製し、使用して、それぞれ、野生型トランスダクチンと変異トランスダクチンを検出できる。あるいは、野生型トランスダクチンと変異トランスダクチンを用いて、それらに対する反応性を有する抗体を検出できる。種々の有用な免疫検出アッセイの工程は、例えば、Nakamura et al., Handbook of Experimental Immunology (4th Ed)., Vol. 1, Chapter 27, Blackwell Scientific Publ., Oxford (1987); Nakamura et al., Enzyme Immunoassays: Heterogenous and Homogenous Systems, Chapter 27 (1987)に記載されている。適切な免疫アッセイとして、例えば、ウエスタンハイブリダイゼーション（即ち、ウエスタンブロット）、免疫アフィニティ精製、免疫アフィニティ検出、酵素結合免疫吸着アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ）、放射免疫アッセイが挙げられる。更に、動物から得られた試験サンプルにおける野生型トランスダクチン及び／又は変異トランスダクチンのレベルの検出及び／又は測定のために、ミクロアレイを使用できる。
【００９５】
一般的に、免疫結合アッセイは、野生型トランスダクチン及び／又は変異トランスダクチンに対応する蛋白質、ペプチド、ポリペプチド、及び／又は抗体を含むことが推測される試験サンプルを得て、免疫複合体の形成を可能とするのに有効な条件下、試験サンプルを、１つ以上の抗体と接触させることを含む。例えば、動物から得られた試験サンプルを、野生型トランスダクチンに特異的な抗体及び変異トランスダクチンに特異的な抗体と、同時又は逐次、接触させることは適切である。
【００９６】
野生型トランスダクチンに特異的であるような任意の適切な抗体が、本発明に関連して使用できる。同様に、変異トランスダクチンに特異的であるような任意の適切な抗体が、本発明に関連して使用できる。特に、適切な抗体は、野生型トランスダクチンの１つ以上の部分及び変異トランスダクチンの１つ以上の部分を認識し、相互作用する（即ち、結合する）。更に、適切な抗体として、野生型トランスダクチンと結合する試験サンプル中に存在する他の抗体を認識し、相互作用する抗体が挙げられる。同様に、適切な抗体として、変異トランスダクチンと結合する試験サンプル中に存在する他の抗体を認識し、相互作用する抗体が挙げられる。本発明の方法で使用される抗体は、例えば、Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory (1988)に記載されているような任意の公知の技術によって産生できる。
【００９７】
免疫複合体（１次免疫複合体）の形成を可能とするのに有効な条件下、及びそれを可能とするのに十分な時間、野生型トランスダクチン及び／又は変異トランスダクチンを含む蛋白質を含む試験サンプルを、野生型トランスダクチン及び／又は変異トランスダクチンを認識する抗体と接触させることは、一般的に、試験サンプルに抗体を加え、抗体が野生型トランスダクチン及び／又は変異トランスダクチンとの免疫複合体を形成するのに十分に長い時間、混合物をインキュベートするということである。免疫複合体形成の検出は、当業界周知の多数の技術の適用により達成できる。これらの検出方法は一般的には、例えば、米国特許No.3,817,837, 3,850,752, 3,939,350, 3,996,345, 4,277,437, 4,275,149及び 4,366,241に記載のような、当業界標準使用の、任意の放射活性、蛍光、生物学的、酵素的標識などの、標識又はマーカーの検出に基く。勿論、当業界公知の、第２抗体やビオチン／アビジン リガンド結合配置などの２次結合リガンドを用いることによって、更なる利点が実現化しうる。
【００９８】
本発明において使用される抗体は、それ自体、検出可能標識と結合されることができる。このような検出可能標識により、１次免疫複合体の存在又は量が測定されるのが可能となる。あるいは、１次免疫複合体内で結合するようになる第１の添加成分は、第１抗体に結合アフィニティを有する第２結合リガンドによって検出できる。これらの場合、第２結合リガンドは、しばしば、それ自体、「２次」抗体と言われ得る抗体である。２次免疫複合体の形成を可能とするのに有効な条件下、そして、それを可能とするのに十分な時間、１次免疫複合体は、標識された２次結合リガンド又は抗体と接触させられる。次いで、２次免疫複合体は洗浄され、任意の非特異的結合の標識された２次抗体又はリガンドが除去され、次いで、２次免疫複合体中の残余の標識が検出される。
【００９９】
更に、該方法は、２工程アプローチによる１次免疫複合体の検出を含む。第１抗体に結合アフィニティを有する、抗体などの第２結合リガンドを用いて、上記のように２次免疫複合体を形成する。洗浄後、再び、免疫複合体（３次免疫複合体）の形成を可能とするのに有効な条件下、そして、それを可能とするのに十分な時間、２次免疫複合体は、第２抗体に結合アフィニティを有する第３結合リガンド又は抗体と接触させられる。第３リガンド又は抗体は、検出可能標識と結合し、こうして形成された３次免疫複合体の検出が可能となる。
【０１００】
本発明はまた、動物での難聴の予後判定における該方法の使用を提供する。該方法は、試験サンプルにおける野生型ＴＤＣ１／ＴＤＣ２及び／又は変異ＴＤＣ１／ＴＤＣ２のレベルを、時間をおいて該動物から得られた別の試験サンプルにおけるそれぞれ野生型ＴＤＣ１／ＴＤＣ２及び／又は変異ＴＤＣ１／ＴＤＣ２のレベルと比較することを含み、野生型ＴＤＣ１／ＴＤＣ２のレベルの減少及び／又は変異ＴＤＣ１／ＴＤＣ２のレベルの増加が、好ましくない予後の指標であり、野生型ＴＤＣ１／ＴＤＣ２のレベルの増加及び／又は変異ＴＤＣ１／ＴＤＣ２のレベルの減少が、好ましい予後の指標であり、野生型ＴＤＣ１／ＴＤＣ２及び／又は変異ＴＤＣ１／ＴＤＣ２遺伝子のレベルの非変化が、難聴における非変化の指標である。
【０１０１】
本発明はまた、動物での難聴の治療の効力の評価における該方法の使用を提供する。該方法は、試験サンプルにおける野生型ＴＤＣ１／ＴＤＣ２及び／又は変異ＴＤＣ１／ＴＤＣ２のレベルを、時間をおいて該動物から得られた別の試験サンプルにおけるそれぞれ野生型ＴＤＣ１／ＴＤＣ２及び／又は変異ＴＤＣ１／ＴＤＣ２のレベルと比較することを含み、野生型ＴＤＣ１／ＴＤＣ２のレベルの減少及び／又は変異ＴＤＣ１／ＴＤＣ２のレベルの増加は、抗難聴剤が有効である指標であり、野生型ＴＤＣ１／ＴＤＣ２のレベルの増加及び／又は変異ＴＤＣ１／ＴＤＣ２のレベルの減少が、抗難聴剤が無効である指標であり、野生型ＴＤＣ１／ＴＤＣ２及び／又は変異ＴＤＣ１／ＴＤＣ２のレベルの非変化が、抗難聴剤での治療による難聴の非変化の指標である。
【０１０２】
本発明はまた、野生型ＴＤＣ１／ＴＤＣ２の完全又は部分喪失による難聴（例えば、失聴）に関する動物の予防的又は治療的処置の方法であって、該動物にＴＤＣ１／ＴＤＣ２を提供することを含み、その結果、該動物が、難聴に関し予防的又は治療的に処置される、方法を提供する。用語「予防的」「予防」及びこれらの用語の派生語の使用は、難聴の完全予防に限定されず、難聴の１００％未満の予防も意味する。難聴の１００％未満の予防はなお動物に利益をもたらし得、従って、本発明の範囲内であると意図されることを、当業者は認識するだろう。難聴は、遺伝性、感覚神経性難聴、非症候性常染色体優性難聴、及び／又はＤＦＮＡ３６−連関難聴でありうる。変異ＴＤＣ１／ＴＤＣ２が、動物の内耳の毛細胞の成分を形成する能力は、損傷されうる。変異ＴＤＣ１／ＴＤＣ２が、動物の内耳の毛細胞のイオントランスダクションチャネルの全部又は一部を形成する能力は、損傷されうる。変異ＴＤＣ１／ＴＤＣ２のメカノセンサリー活性も損傷されうる。
【０１０３】
動物にトランスダクチンを投与又は提供する任意の適切な方法であって、トランスダクチンが、動物の難聴細胞の１つ以上（例えば、１つ以上の難聴細胞）の核及び／又は細胞質に入り、野生型トランスダクチンに典型的な様式で細胞内で機能する、方法が使用できる。例えば、動物に、野生型トランスダクチン蛋白質又はその部分（例えば、野生型トランスダクチンの２つ以上の異なる形態）を投与することによって、トランスダクチンを動物に提供できる。更に、１つ以上の問題のモイエティ（例えば、抗難聴剤、及び／又はトランスダクチンを刺激する任意の化合物などの、２つ以上、３つ以上、４つ以上、又は５つ以上の治療用モイエティ）と機能可能に連結した、野生型トランスダクチン又はその部分を含む融合蛋白質の投与により、トランスダクチンを動物に提供できる。別の実施態様では、野生型トランスダクチン、又はその部分をコードし、発現する核酸の投与により、トランスダクチンを動物に提供できる。更に、１つ以上の問題のモイエティと機能可能に連結した、野生型トランスダクチン又はその部分を含む融合蛋白質をコードし、発現する核酸の投与により、トランスダクチンを動物に提供できる。投与される核酸は任意の適切な形態でありうる。例えば、投与される核酸は、裸のＤＮＡ又はＲＮＡでありうる。更に、投与される核酸は、任意の適切なベクター又はベクターシステムの一部でありうる。該方法で使用されるベクターとして、例えば、プラスミドベクター、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ワクシニアウイルス、シンドビスウイルス、サイトメガロウイルス、単純ヘルペスウイルス、欠損Ｂ型肝炎ウイルス、及び当業界公知の任意の他のベクター又はベクターシステムが挙げられる。融合蛋白質、及び融合蛋白質をコードし、発現する核酸は、例えば、Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Ed., Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1989に記載されているように、当業界公知の組換え体の製造及び合成の任意の標準方法を用いて、製造できる。
【０１０４】
上記の観点から、組成物も提供される。組成物は、（ｉ）医薬上許容できる担体、及び、（ｉｉ）トランスダクチン又はその部分；１つ以上の問題のモイエティと機能可能に連結した、トランスダクチン又はその部分を含む融合蛋白質；トランスダクチン又はその部分をコードし、発現する核酸；及び／又は、１つ以上の問題のモイエティと機能可能に連結した、トランスダクチン又はその部分を含む融合蛋白質をコードし、発現する核酸；を含有する。
【０１０５】
担体は、任意の適切な担体でありうる。好ましくは、担体は医薬上許容できる担体である。組成物に関し、担体は、通常使用される任意のものでありえ、溶解性やトランスダクチンとの反応性の欠如などの物理化学的性質、及び投与経路によってのみ限定される。上記組成物の他に、本発明の方法の組成物は、シクロデキストリン包接複合体などの包接複合体、又はリポソームとして製剤化できることが当業者に認識されよう。本明細書記載の医薬上許容できる担体、例えば、ビヒクル、アジュバント、賦形剤、及び希釈剤は、当業者周知であり、公衆は容易に利用できる。医薬上許容できる担体は、トランスダクチンに化学的に不活性なもの、及び、使用条件下、有害副作用や毒性を有しないものであることが好ましい。
【０１０６】
当業界で理解されているように、担体の選択は、幾つかの因子、例えば、治療される難聴の型や組成物の投与経路、に依存する。本発明の組成物で使用される担体のこのような選択は、十分に当業界の技術の範囲内である。従って、本発明の組成物の種々の適切な製剤がある。このような組成物として、経口、エアロゾル、非経口、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、直腸、及び膣用の製剤が挙げられるが、それらに限定されない。
【０１０７】
動物、特にヒトへの本発明の組成物の適切な投与方法が利用でき、そして、１つ以上の経路が、特定の化合物を投与するのに使用できるが、特定の経路が他の経路よりも、より即時で、より有効な反応を提供できることを当業者は認識するだろう。
【０１０８】
望ましくは、ＴＤＣ１及び／又はＴＤＣ２の変異又は欠失から生じる動物の遺伝性聴覚障害を治療的に処置するのに、遺伝子置換療法が使用されよう。治療用遺伝子をコードするベクターの構築方法は、当業者公知である。このような構築体として、ウイルスベクター、好ましくは、アデノウイルスベクターもしくはアデノ随伴ウイルスベクター、裸のＤＮＡ、プラスミドベクター、及び他の遺伝子構築体が挙げられる。ベクターは、当業界公知の任意の方法によって送達できる。理想的には、ベクターは鼓膜経由で動物に送達されよう。
【０１０９】
動物、特に、ヒトに投与する用量は、難聴を予防的又は治療的に処置するのに十分であるべきである。投与量は、使用する特定の組成物の強さ、並びに、動物の年齢、種、状態、体重を含む種々の因子に依存することを当業者は認識するだろう。用量の大きさはまた、投与の経路、タイミング、頻度、並びに、特定の組成物の投与に伴いうる副作用及び所望の生理的効果の存在、性質、程度によっても決定されよう。
【０１１０】
適切な用量及び投与計画は、当業者公知の通常の範囲発見技術によって決定されうる。一般的には、組成物は、最初は、より少ない投与量が投与され、それは、組成物の最適用量より少ない。その後、状況下最適効果に達するまで、投与量を少しずつ増加する。
【０１１１】
動物の細胞のメカノトランスダクションチャネルと相互作用する１つ以上の薬剤の同定方法も提供される。本方法は、１つ以上の薬剤をメカノトランスダクションチャネルに投与し、メカノトランスダクションチャネルのメカノトランスダクション活性をアッセイすることを含み、メカノトランスダクションチャネルのメカノトランスダクション活性の増加又は減少が、１つ以上の薬剤と動物の細胞のメカノトランスダクションチャネルの相互作用の指標である。好ましくは、本方法で使用される細胞は、動物の内耳の毛細胞であろう。
【０１１２】
メカノトランスダクション活性は、当業者公知の技術により測定できる。例えば、電位を生成する細胞膜を横断するイオンチャネルは、一般的に、Corey et al., Ionic basis of the receptor potential in a vertebrate hair cell, Nature 281: 675-77 (1979), 及び Hudspeth et al., Sensitivity, polarity, and conductance change in response of vertebrate hair cells to controlled mechanical stimuli, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74 (6): 2407-11 (1977)に記載されているように、測定できる。
【０１１３】
細胞中でＴＤＣ１遺伝子及び／又はＴＤＣ２遺伝子と相互作用する１つ以上の薬剤の同定方法であって、ＴＤＣ１遺伝子及び／又はＴＤＣ２遺伝子を含む細胞に１つ以上の薬剤を投与し、本明細書において上記したように細胞によるＴＤＣ１遺伝子及び／又はＴＤＣ２遺伝子の発現レベルをアッセイすることを含み、ＴＤＣ１遺伝子及び／又はＴＤＣ２遺伝子の発現レベルの増加又は減少（用語は、上記されている）が、細胞での１つ以上の薬剤とＴＤＣ１遺伝子及び／又はＴＤＣ２遺伝子との間の相互作用の指標である、方法も更に提供される。
【０１１４】
ＴＤＣ１遺伝子及び／又はＴＤＣ２遺伝子の発現レベルをアッセイする幾つかの方法が存在することを当業者は認識するだろう。例えば、ＴＤＣ１及び／又はＴＤＣ２をコードするｍＲＮＡとハイブリダイズするために合成されるポリヌクレオチドを用いるノーザンブロット解析によって、ｍＲＮＡを定量化することができる。ポリヌクレオチドは、ＴＤＣ１及び／又はＴＤＣ２をコードするｍＲＮＡとの特異的ハイブリダイゼーションの検出を容易にするために、プローブに結合しえ、又は、放射性同位元素を含みうる。あるいは、ＴＤＣ１遺伝子及び／又はＴＤＣ２遺伝子の発現レベルはまた、細胞によって産生されるＴＤＣ１ポリペプチド及び／又はＴＤＣ２ポリペプチドを定量化することによって、アッセイすることができる。例えば、１つ以上の薬剤が投与された細胞は、ＴＤＣ１又はＴＤＣ２に特異的なモノクローナル抗体と接触することができる。例えば、蛋白質の抗体アッセイはまた、上記のように当業界周知である。
【０１１５】
本発明を難聴において記載したが、本発明は、バランスにおいて適用されることが可能である。実際、内耳は、２つのシステムを含むことが知られている：主に聴くために使用される聴覚システム、及び身体のバランスと平衡を維持するのに機能する前庭システム。聴覚システム（即ち、蝸牛）がＴＤＣ１及び／又はＴＤＣ２のいずれかの変異形態を発現するとき、難聴が生じることを本明細書で記載してきた。従って、直線加速や角加速（即ち、バランス）の役割を担う前庭システムも同様に、これらの遺伝子の変異形態を発現しうる可能性がある；しかし、前庭システムは、聴覚と対立するものとしてのバランスを制御するので、前庭システムでのこれらの遺伝子の変異及び／又は低発現レベルにより、異常バランス又はバランスの完全喪失さえ起こるであろう。従って、本発明の方法はＴＤＣ１及びＴＤＣ２に関係するので、難聴、並びに、恐らくは同様に、異常バランス又は異常バランスの素因に関して、本発明の方法を行いうる。
【０１１６】
実施例
以下の実施例は更に本発明を説明するが、勿論、本発明の範囲を限定するものとしては決して解釈されるべきではない。
【０１１７】
以下の参考文献は、本明細書記載のものに補充的な例示的手法の又は他の詳細を提供する程度まで、引用により本明細書に特別に含まれるものである。
【０１１８】
Birren et al., Genome Analysis: A Laboratory Manual Series, Volume 1, Analyzing DNA, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1997),
【０１１９】
Birren et al., Genome Analysis: A Laboratory Manual Series, Volume 2, Detecting Genes, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1998),
【０１２０】
Birren et al., Genome Analysis: A Laboratory Manual Series, Volume 3, Cloning Systems, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1999),
【０１２１】
Birren et al., Genome Analysis: A Laboratory Manual Series, Volume 4, Mapping Gnomes, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1999),
【０１２２】
Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1988),
【０１２３】
Harlow et al., Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1999), 及び
【０１２４】
Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1989)。
【実施例１】
【０１２５】
実施例１
マウスとヒトの蝸牛細胞を溶解し、ｍＲＮＡ転写体を細胞ライゼートから精製した。細胞溶解と次のｍＲＮＡ精製の方法は当業界周知である。連関研究で難聴と高度に連関するヒトゲノムにおける配列に関して、ヒトゲノムプロジェクトデータベースを解析した。当業界公知の技術を用い、この情報からＤＮＡプライマーを構築した。蝸牛細胞ライゼートからの精製ｍＲＮＡに関する逆転写酵素−ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）及びｃＤＮＡ末端の５’−と３’−迅速増幅（ＲＡＣＥ）でこれらのプライマーを用いた。両方の方法はまた、当業界周知である。生じたｃＤＮＡ分子を配列決定し、ＴＤＣ１とＴＤＣ２として同定した。
【０１２６】
本明細書で引用した全ての参考文献は、引用により内容の全部が本明細書に含まれるものである。
【０１２７】
好適実施態様を強調して、本発明を説明したが、好適化合物と方法のバリエーションが使用し得、本明細書で具体的に記載した以外に本発明を実施しうることが意図されることは、当業者に明白であろう。従って、本発明は、以下のクレームによって規定される本発明の思想と範囲内に包含される全ての改変を含むものである。
【図面の簡単な説明】
【０１２８】
【図１】図１は、ヒトＴＤＣ１ ｃＤＮＡのヌクレオチド（配列番号１）と演繹アミノ酸（配列番号２）の完全長配列を示す。
【図２】図２は、ヒトＴＤＣ２ ｃＤＮＡのヌクレオチド（配列番号３）と演繹アミノ酸（配列番号４）の完全長配列を示す。
【図３】図３は、マウスＴＤＣ１ ｃＤＮＡのヌクレオチド（配列番号５）と演繹アミノ酸（配列番号６）の完全長配列を示す。
【図４】図４は、マウスＴＤＣ２ ｃＤＮＡのヌクレオチド（配列番号７）と演繹アミノ酸（配列番号８）の完全長配列を示す。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図４−１】
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【図４−２】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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