(57)【要約】本発明は、手術の外傷および他の創傷からの回復の哺乳動物体のプロセスに対する、患者の身体中での抗炎症性サイトカインのアップレギュレーションおよび／または炎症性サイトカインのダウンレギュレーションによりもたらされる役割、ならびに改善された内皮機能によりもたらされる役割の新規の理解に基づく。天然のアポトーシスプロセス（プログラムされた細胞死）は、哺乳動物体における抗炎症性サイトカインのアップレギュレーションおよび炎症性サイトカインのダウンレギュレーション、ならびに内皮機能の改善を導く。【特許請求の範囲】
【請求項１】
創傷後の外傷に罹患した哺乳動物患者を処置するための、またはこのような後の持続した外傷の重篤度を軽くするかまたは該外傷からの回復を加速するために創傷手術または受けた手術の外傷に罹患したかまたは罹患したと予想される哺乳動物の患者を処置するための、医薬の調製における、免疫系改変実体の使用であって、各々は、アポトーシス哺乳動物細胞またはアポトーシス本体と同様のサイズの本体を含み、そしてその表面がホスホ−アミノ酸基で曝露された場合、該実体は、炎症誘発性サイトカインの阻害および／または抗炎症性サイトカインの促進を含む有益な効果を付随して該患者の免疫系の細胞によって摂取され得る、使用。
【請求項２】
前記実体が、ホスファチジルセリン（ＰＳ）担持本体である、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記ＰＳ担持本体が、天然の実体である、請求項２に記載の使用。
【請求項４】
前記ＰＳ担持本体が、合成ビーズである、請求項２に記載の使用。
【請求項５】
前記ＰＳ担持本体が、ＰＳリポソームである、請求項２に記載の使用。
【請求項６】
前記ＰＳリポソームが、５０重量％〜１００重量％のＰＳを含む、請求項５に記載の使用。
【請求項７】
前記本体が、５０ナノメーター〜５００ミクロンの直径を有する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項８】
約５００〜２，０００，０００の単位用量の前記実体の、請求項１〜７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項９】
約５００〜２０×１０９の実体の単位用量の前記実体の、請求項１〜８にいずれか１項に記載の使用。
【請求項１０】
創傷後の外傷に罹患した哺乳動物患者を処置するための、またはこのような後の持続した外傷の重篤度を軽くするかまたは該外傷からの回復を加速するために創傷手術または受けた手術の外傷に罹患したかまたは罹患したと予想される哺乳動物の患者を処置するためのプロセスであって、該プロセスは、該被験体に、免疫系改変有効量の免疫改変実体を投与する工程を包含し、該免疫系改変実体の各々は、アポトーシス哺乳動物細胞またはアポトーシス本体と同様のサイズの本体を含み、そしてその表面がホスホ−アミノ酸基で曝露された場合、該実体は、炎症誘発性サイトカインの阻害および／または抗炎症性サイトカインの促進を含む有益な効果を付随して該患者の免疫系の細胞によって摂取され得る、プロセス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、有害な医学的状態の影響を低減する医学的処置および予防法における治療組成物およびその使用に関する。より詳細には、本発明は、手術の身体的外傷ならびに他の創傷および損傷状態からの患者の回復の促進、ならびにこのような身体的外傷により抗するように哺乳動物の身体をプレコンディショニングする方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発現の背景）
手術手順を受けた患者の入院期間を短縮する必要が、継続して存在している。これは、実際、手術の外傷または他の損傷からの患者の回復速度の促進を意味する。このことは、前もって予定されていた手術または選択した手術を受ける患者、および偶然の損傷または予期できない医療的危機の処置結果として手術を受ける患者の両方にあてはまる。患者の快適さおよび迅速な回復の両方のために、および健康管理費上の利益のために、手術後または偶然の創傷もしくは損傷を受けた後の外傷からの患者の回復速度を速めることができることが望ましい。
【０００３】
手術を受けることが計画されている患者が、手術に伴う外傷に抗し、その後の外傷からのより迅速な回復を導くことをよりよくできるよう、その患者をプレコンディショニングすることができることもまた望ましい。損傷を被る危険性のある者（軍隊員、救急隊員など）がこのような外傷からより迅速に回復することを可能にするようプレコンディショニングできることもまた有利である。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
（発明の要旨）
本発明は、手術の外傷および他の創傷からの回復の哺乳動物体のプロセスに対する、患者の身体中での抗炎症性サイトカインのアップレギュレーションおよび／または炎症性サイトカインのダウンレギュレーションによりもたらされる役割、ならびに改善された内皮機能によりもたらされる役割の新規の理解に基づく。天然のアポトーシスプロセス（プログラムされた細胞死）は、哺乳動物体における抗炎症性サイトカインのアップレギュレーションおよび炎症性サイトカインのダウンレギュレーション、ならびに内皮機能の改善を導く。本発明は、創傷（手術による創傷または偶然の創傷）の外傷からの患者の回復の促進プロセス、およびその後の経験したこのような外傷からの回復を促進するためのプレコンディショニングプロセスを提供する。このようなプレコンディショニングは、哺乳動物体のアポトーシスプロセスを模倣し、そしてこのようなプロセスをもたらす、インビボでアポトーシスから生じる有益な効果に乗じる。
【０００５】
本発明の１つの局面に従って、創傷後損傷を患った哺乳動物患者を処置するプロセス、または（手術的処置によって、または予期しない偶然の損傷、戦いの損傷などを被ることによって）このような外傷を受けそうであるかまたは受ける可能性のある哺乳動物患者を、このようなその後に残る外傷の重篤度を低減するかまたはこのような外傷からの回復を促進するために処置するプロセスが提供される。このプロセスは、有効免疫系調節量の免疫系調節要素を患者に投与する工程を包含し、各々の要素は、アポトーシス性哺乳動物細胞またはアポトーシス体と同様の大きさの本体を含み、そしてその表面上にホスホ−アミノ酸基が曝されており、これらの要素は、有益な効果（炎症誘発性サイトカインの阻害および／または抗炎症性サイトカインの促進を含む）を伴って患者の免疫系の細胞により取り込まれ得る。
【０００６】
（好ましい実施形態）
このような要素の１つのカテゴリーは、外膜表面上にホスファチジルセリン（ＰＳ）を有する天然の生物学的小胞である。このような小胞は、哺乳動物患者に投与した際に、アポトーシスプロセスを模倣し、その結果、炎症誘発性サイトカインのダウンレギュレーションおよび／または抗炎症性サイトカインのアップレギュレーションをもたらす。免疫細胞は、アポトーシスに類似のインビボプロセスにおいてその膜上のＰＳ基がＰＳレセプターと相互作用するので、その要素を飲み込み得、その結果、炎症誘発性サイトカインのダウンレギュレーションおよび／または抗炎症性サイトカインのアップレギュレーションをもたらす。本発明の実施形態において特に目的とする、外膜表面上にＰＳを提示する天然の生物学的小胞としては、以下が挙げられる：
エキソソーム（培養細胞から剥離する微小胞であり、そして、例えば、網状赤血球の成熟の間にもインビボで産生され得る）（Ｔｒａｍｓら，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  ｅｔ  Ｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ，６４５（１９８１）６３−７０を参照のこと；およびＪｏｈｎｓｔｏｎｅ，Ｂｉｏｃｈｅｍ，Ｃｅｌｌ，Ｂｉｏｌ．，７０（１９８２）１７９−１９０もまた参照のこと）；
プロスタゾーム（精子プラズマ中に見出される小胞性細胞外オルガネラである）（Ｒｏｏｎｅｙら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ，１７７，Ｍａｙ  １９９３，１４０９−１４２０）を参照のこと）；
自然に流出した膜および誘導されて流出した小胞膜（すなわち、界面活性剤（例えば、リソホスファチジルコリン（ｌｙｓｏｐｈａｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ））を用いた誘導の結果として細胞から流出した膜小胞または自然に細胞から流出した膜小胞）（Ｆｅｒｂｅｒら，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ，５９５（１９８０）２４４−２５６を参照のこと；Ｅｍｅｒｓｏｎら，Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１２７（２），Ａｕｇｕｓｔ  １９８１，４８２−４８６もまた参照のこと）；
原形質膜小胞に結合した凝固誘導因子（ｐｒｏｃｏａｇｕｌａｎｔ（すなわち、例えば、気管支肺胞洗浄液中に見出され、そして肺胞マクロファージに由来する、膜小胞に関連するトロンボプラスチン様活性）（Ｌｙｂｅｒｇら，Ｅｕｒ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｊ．，３（１９９０），６１−６７を参照のこと）；
外表面にＰＳを発現する裏返し（ｉｎｓｉｄｅ  ｏｕｔ）赤血球ゴースト、および病理の一部としてその表面にＰＳを発現する鎌状細胞赤血球細胞（Ｓｃｈｒｏｉｔら，Ｂｉｏｌ．Ｃｅｌｌ  ５１（１９８４）２２７−２３８を参照のこと）
リン脂質の非対称性を喪失した赤血球（すなわち、無作為化された、対称性の二重膜を通じた（ｔｒａｎｓｂｉｌａｙｅｒ）リン脂質の分配を有する赤血球；これらは、例えば、細胞内Ｃａ＋＋レベルを評価することにより、産生され得る。）（Ｐｒａｄｈａｍら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １１（１９９４）１８１−１８８を参照のこと）；
血小板の膜二重層の内側リーフレットから外側リーフレットへのＰＳの再配向に関連する、活性化された血小板、凝固誘導活性を有する血小板（Ｂｅｖｅｒｓら，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ，７３６：（１９８３）５７−６６を参照のこと）；
血小板由来微粒子（血小板活性化後に血小板膜から流出した膜小胞または微粒子）（Ｇｉｌｂｅｒｔら，Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２６６  Ｎｏ．２６，Ｓｅｐｔ．１６，１９９１，１７２６１−１７２６８を参照のこと）。
【０００７】
このような天然の生物学的小胞は、外傷に苦しみそうである患者（例えば、手術を受ける予定の患者または切迫した戦闘行為、天然災害などの結果として創傷からの外傷に苦しむ高い危険性のある患者）への投与のために使用され得、そしてこのような外傷からの回復を促進するために患者の身体をプレコンディショニングする。これらはまた、すでに外傷を負った患者に投与される場合、外傷からの患者の回復を促進する効果を有する。
【０００８】
このような要素の別のカテゴリー（外傷の処置および外傷に対するプレコンディショニングにおけるそれらの使用が、本発明の別の実施形態に寄与する）は、以下：
三次元的頭部分（その最大寸法が、５０ナノメートル〜５００ミクロンである）；
各々の頭部分に結合されている複数の尾部分であって、以下：
抗原提示細胞上のレセプターと相互作用し得るホスホ−アミノ酸末端基、および
少なくとも３個の直鎖炭素原子の化学スペーサー基であって、各々の頭部分にそれらの近位端が結合されており、そしてホスホ−アミノ酸基のリン酸にそれらの遠位端が結合されている、スペーサー基
を有する、尾部分、
を含む、生物適合性の合成要素である。
【０００９】
本発明のこの実施形態において使用される要素の末端基を形成するホスホ−アミノ酸基は、以下の一般式：
【００１０】
【化１】
2005504075.tif 000002
を有する。
式中、Ｒは、これらが抗原提示細胞上の適切なレセプターと相互作用する限り、Ｃ１〜Ｃ４の直鎖または分枝鎖アルキレン、アルキレン−オキシ、アルキレン−チオ、アルキレン−アミン、フェニル、ヨード置換フェニル、および５員Ｎ複素環基を表す。
【００１１】
本発明のこの実施形態において使用される組成物において好ましいホスホ−アミノ酸基は、ホスホ−セリン基およびホスホスレオニン基であり、最も好ましくは、以下の式：
【００１２】
【化２】
2005504075.tif 000003
のホスホセリンである。
【００１３】
特に好ましい実施形態において、誘導体化されたビーズの尾部分は、以下の化学式：
【００１４】
【化３】
2005504075.tif 000004
を有し、アミド末端基は、頭部分表面に結合している。
【００１５】
本明細書中で使用される場合、用語「ビーズ」は、実質的に任意の生体適合性の物体（固形、半固形または中空、保形、および代表的に（しかし排他的にではなく）真円、円柱形、長円形（偏球および幅広の楕円形を含む）、ヘビ形、腎臓形など）であり、そして直径約５０ナノメートル〜約５００ミクロンでありことを意味することが意図される。これらは、可撓性であっても剛性であってもよい。これらの組成に好ましい材料は、哺乳動物患者への投与について認証された等級の、ポリメチルメタクリレート、ポリアクリレート（ｐｏｌａｃｒｙｌａｔｅ）、ポリメタクリレート、ガラス、ポリスチレン、ポリエチレン、ポリプロピレンなどである。
【００１６】
本発明のこの実施形態において使用される要素におけるホスホ−アミノ酸末端基は、その近位端が物体に結合しているリン脂質の遠位末端基であり得る。これらとしては、薬品工業において一般的に使用されるような、生体適合性材料、天然材料または合成材料（例えば、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポリスチレンなど、多糖（例えば、ヒドロキシエチルスターチ、ヒドロキシエチルセルロース、アガロースなど））の粒子、顆粒、ミクロスフィア、またはビーズが挙げられる。ＰＳに結合するための誘導体化のためのいくつかのこのような適切な基材（そして、アガロースの場合、ＰＳが結合された基材）は、例えば、Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．４００  Ｖａｌｌｅｙ  Ｒｏａｄ，Ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ，ＰＡ  １８９７６、またはＳｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｆｉｎｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓから市販されている。これらのビーズは、中実または中空であり得るか、または生体適合性材料で充填され得る。これらは、必要な場合、それらの表面上でＰＳ分子を保有するよう修飾され得る。
【００１７】
このようなホスホ−アミノ酸保有実体は、創傷を含む外傷を被ろうとしている患者（例えば、手術を受けようとしているかまたは切迫した戦闘行為、自然災害などの結果として創傷を被る危険性の高い患者）への投与のために用いられ得、そしてこのような、その後遭遇する外傷からの回復を加速するように患者の身体を予め条件付けする。これらはまた、既に外傷を受けた患者に投与された場合に、患者の回復を加速する影響を有する。
【００１８】
本発明の別の実施形態において使用するためのさらなるカテゴリーの実体は、上記で言及される適切なサイズ（すなわち、アポトーシス性哺乳動物細胞またはアポトーシス体のサイズに似たサイズ）で、かつ、表面ＰＳ分子を有する、リポソームである。リン脂質として、ＰＳは、単独の膜構成要素として、または他のリン脂質および／もしくは膜形成物質を伴う、その主要構成要素もしくは微量構成要素のいずれかとして、リポソームの膜を形成し得る。リポソーム（すなわち、脂質小胞）は、ミクロン範囲またはミクロン未満の範囲の、シールされた嚢であり、その壁は、適切な両親媒性物質の層からなる。これらは通常、水性媒体を含む。
【００１９】
リン脂質は、両親媒性分子（すなわち、両親媒性物質）であり、この化合物が、水不溶性炭化水素鎖に結合した極性水溶性基を有する分子を含むことを意味する。マトリクスの層として役立つ両親媒性物質は、規定された極性領域および非極性領域を有する。この両親媒性物質は、単独で、または互いに混合されて用いられる、天然に存在する脂質（例えば、ＰＳ、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルコリン、コレステロール、セラミドおよびスフィンゴミエリン）を含み得る。これらは、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルエステルおよびサッカロースジエステルのような合成化合物であり得る。
【００２０】
本発明は、ＰＳを膜構成要素として有するリポソームの使用だけでなく、非ＰＳ膜置換基を有するが、その外表面に（例えば、リポソーム表面の化学的改変によって化学的に結合された）ＰＳ分子を保有して、患者のレシピエント免疫系の成分とのその後の相互作用にＰＳを利用可能にするリポソームの使用をも意図する。
【００２１】
好ましいのは、５０重量％〜１００重量％の程度がホスファチジルセリン（ＰＳ）であり、残りが、ホスファチジルコリン（ＰＣ）または他のこのような生物学的に受容可能なリン脂質であるように構成されたリポソームである。より好ましいのは、６５重量％〜９０重量％の程度のＰＳによって構成されたリポソームである。これらは、出発物質としての適切な量のリン脂質の混合物から、既知の方法によって調製される。
【００２２】
適切なサイズのリポソームを調製する方法は、当該分野で公知であり、そして本発明の一部分を形成しない。この主題についての種々の教科書および文献論文が参照され得る。例えば、概説論文「Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ａｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ」、Ｙｅｃｈｅｚｋｅｌ  ＢａｒｅｎｈｏｌｚおよびＤａａｎ  Ｊ．Ａ．Ｃｈｒｏｍｅｌｉｎｅ、ならびにその中に引用される文献（例えば、Ｎｅｗ，Ｒ．Ｃ．，「Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ」，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ  ａｔ  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，Ｅｎｇｌａｎｄ（１９９０）、およびＮａｓｓａｎｄｅｒ，Ｕ．Ｋ．ら，「Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ  ａｓ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ」（Ｍ．ＣｈａｓｉｎおよびＲ．Ｌａｎｇｅｒ編）Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ  Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  １９９０，２６１頁〜３３８頁）。
【００２３】
このようなＰＳ保有リポソームは、創傷を含む外傷を被ろうとする患者（例えば、手術を受けようとしているかまたは切迫した戦闘行為、自然災害などの結果として創傷を被る危険性の高い患者）への投与のために用いられ得、そしてこのような、その後遭遇する外傷からの回復を加速するように患者の身体を予め条件付けする。これらはまた、既に外傷を受けた患者に投与された場合に、患者の回復を加速する影響を有する。
【００２４】
本発明の別の好ましい実施形態において使用するためのさらなるカテゴリーの実体は、アポトーシス性細胞およびそれらのアポトーシス体である。「アポトーシス性細胞」および「アポトーシス体」は、これらの用語が本明細書中で用いられる場合、アポトーシスに特有の以下の特徴のうちの１以上を示す、細胞および細胞体を意味する：標準的な受け入れられた検出方法（例えば、Ａｎｎｅｘｉｎ  Ｖ染色）によって検出した場合の、ホスファチジルセリンの表面露出；標準的な受け入れられた方法（例えば、Ｓａｌｖｉｏｌｉ，Ｓ．，Ａｒｄｉｚｚｏｎｉ，Ａ．，Ｆｒａｎｃｅｓｃｈｉ，Ｃ．Ｃｏｓｓａｒｉｚｚａ，Ａ．（１９９７）「ＪＣ−１，ｂｕｔ  ｎｏｔ  ＤｉＯＣ６（３）  ｏｒ  Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ  １２３，ｉｓ  ａ  Ｒｅｌｉａｂｌｅ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｐｒｏｂｅ  ｔｏ  ａｓｓｅｓｓ  Ｄｅｌｔａ  Ｐｓｉ  Ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  Ｉｎｔａｃｔ  Ｃｅｌｌｓ：Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  Ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｎ  Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ  ｄｕｒｉｎｇ  Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ」，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ４１１：７７−８２）によって測定される、ミトコンドリア膜透過性における変更；細胞からのＤＮＡ抽出後の、アガロースゲル電気泳動におけるＤＮＡラダー化の出現［Ｔｅｉｇｅｒ，Ｅ．，Ｄａｍ，Ｔ．Ｖ．，Ｒｉｃｈａｒｄ，Ｌ．，Ｗｉｓｎｅｗｓｋｙ，Ｃ．，Ｔｅａ，Ｂ．Ｓ．，Ｇａｂｏｕｒｙ，Ｌ．，Ｔｒｅｍｂｌａｙ，Ｊ．，Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｋ．およびＨａｍｅｔ，Ｐ．（１９９６）「Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｉｎ  Ｐｒｅｓｓｕｒｅ  Ｏｖｅｒｌｏａｄ−ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｈｅａｒｔ  Ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｒａｔ」，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  ９７；２８９１−２８９７］またはインサイチュ標識（上記で参照した、Ｇａｖｒｉｅｌｉら，１９９２を参照のこと）によるような、ＤＮＡ断片化の証拠。
【００２５】
本発明のこの実施形態において使用するためのアポトーシス性細胞および／またはアポトーシス体は、それらが投与されるべき哺乳動物患者の細胞と適合性である哺乳動物細胞からエキソビボで調製される。これらは、培養細胞株を含め、実質的に任意の型の哺乳動物細胞から調製され得る。好ましくは、これらは、哺乳動物患者自体の身体に由来するかまたは確立された細胞株に由来する細胞型から調製される。より好ましくは、これらは、哺乳動物患者の血液と適合する血液の白血球（より好ましくは、患者自体の白血球、さらにより好ましくは患者自体のＴリンパ球）から調製される。さらにより好ましくは、これらは、確立された細胞株から調製される。アポトーシス性細胞および／またはアポトーシス体は、患者への投与前に体外で調製される。従って、１つの実施形態では、患者血液のアリコートは、（例えば、静脈穿刺によって）採取され得、そしてその白血球の少なくとも一部分が、体外でアポトーシス誘導条件に供され得る。
【００２６】
アポトーシス性細胞およびアポトーシス体を作製するように、哺乳動物細胞においてアポトーシスを誘導する種々の方法は、当該分野で公知であり、そしてこれらのうちの本質的に任意のものが、本発明において使用するためのアポトーシス体を調製する際に採用され得る。１つのこのような方法は、細胞を電離放射線（γ線、Ｘ線など）および／または非電離電磁放射線（紫外光を含む）に供することである。アポトーシスは、細胞を超音波に供することによって誘導され得る。
【００２７】
別の方法は、細胞を薬物（例えば、スタウロスポリンによって例示されるような非特異的プロテインキナーゼインヒビター）で処置することである（Ｂｏｍｂｅｌｉ，Ｋａｒｓａｎ，ＴａｉｔおよびＨｉｒｌａｎ，（１９９７）「Ａｐｏｐｔｏｔｉｃ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｃｅｌｌｓ  Ｂｅｃｏｍｅ  Ｐｒｏｃｏａｇｕｌａｎｔ」，Ｂｌｏｏｄ，Ｖｏｌ．８９：２４２９−２４４２を参照のこと）。また、悪性腫瘍の処置のために用いられる特定の化学療法剤（例えば、アドリアマイシン）は、スタチン薬物（３−ヒドロキシ−３メチルグルタリル補酵素Ａレダクターゼインヒビター）［Ｇｕｉｊａｒｒｏ  Ｃ，Ｂｌａｎｃｏ−Ｃｏｌｉｏ  ＬＭ，Ｏｒｔｅｇｏ  Ｍ，Ａｌｏｎｓｏ  Ｃ，Ｏｒｔｉｚ  Ａ，Ｐｌａｚａ  ＪＪ，Ｄｉａｚ  Ｃ，Ｈｅｒｍａｎｄｅｚ  Ｇ，Ｅｄｉｇｏ  Ｊ（１９９８），「３−ｈｙｄｒｏｘｙ−３ｍｅｔｈｙｌｇｌｕｔａｒｙｌ  ｃｏｅｎｚｙｍｅ  Ａ  ｒｅｄｕｃｔａｓｅ  ａｎｄ  ｉｓｏｐｒｅｎｙｌａｔｉｏｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｉｎｄｕｃｅ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｏｆ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｓｍｏｏｔｈ  ｍｕｓｃｌｅ  ｉｎ  ｃｕｌｔｕｒｅ」，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ８３：４９０−５００］およびコルヒチン［Ｓｕｚｕｋｉ  Ｙ（１９９８），「Ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ，ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｎｅｕｒｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｉｎ  ｍｏｕｓｅ  ｏｌｆａｃｔｏｒｙ  ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ  ａｎｄ  ｖｏｍｅｒｏｎａｓａｌ  ｏｒｇａｎ  ａｆｔｅｒ  ｃｏｌｃｉｃｉｎｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ」，Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ８５５：２５２−２５４］がアポトーシスを誘導し得るのと同様に、アポトーシスを誘導する。細胞に対するデスレセプターについてのリガンド（例えば、Ｆａｓ−リガンド）の使用は、上記のアポトーシスの考察から、アポトーシスを誘導するために明らかである。
【００２８】
なお別の方法は、体外での細胞への酸化的ストレスの適用である（例えば、ＢｕｔｔｋｅおよびＳａｎｄｓｔｒｏｍ（１９９４）「Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  Ｓｔｒｅｓｓ  ａｓ  ａ  Ｍｅｄｉａｔｏｒ  ｏｆ  Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ」，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ，Ｖｏｌ．１５：７−１０を参照のこと）。これは、細胞を懸濁状態で、化学的酸化剤（例えば、過酸化水素、他の過酸化物およびヒドロペルオキシド、オゾン、過マンガン酸塩、過ヨウ素酸塩など）を用いて処理することによって達成され得る。生物学的に受容可能なこのような酸化剤は、このようにして形成されたアポトーシス性細胞およびアポトーシス体の残余物および夾雑物に関連した潜在的問題を低減するために、好ましくは用いられる。
【００２９】
本発明の使用のこの実施形態は、本明細書中での使用のための、アポトーシス性細胞およびアポトーシス体を産生する任意の特定の方法に制限されず、そして任意の適切な公知のプロセスが用いられ得る。
【００３０】
アポトーシスの検出および定量のための方法を用いて、本発明において患者に投与されるべき調製物中のアポトーシスの存在およびレベルを決定し得る。上記の序論において記載した方法のうちの少なくとも１つは、投与の前に達成されたアポトーシスのレベルを確認するために用いられるべきである。これらは、分画遠心分離のような当該分野で公知の方法によって、使用前に適切に精製される。
【００３１】
本発明において使用するためのアポトーシス性細胞およびアポトーシス体を調製する１つの好ましいプロセスは、患者由来の細胞または適合性哺乳動物細胞株の培養を含む。次いで、培養された細胞を処理して、アポトーシスを誘導し得、そしてその中にアポトーシス性細胞および／またはアポトーシス体を作製し得る。次いで、患者の血漿または別の適切な懸濁培地（例えば、生理食塩水または平衡哺乳動物細胞培養培地）中に懸濁した細胞は、以下に示されるように投与され得る。アポトーシス性細胞および／またはアポトーシス体の数は、上記の参考論文を含め、この主題についての科学文献において利用可能な公開された方法によって決定され得る。必要な臨床的利益を得るために患者への投与のために必要なこのようなアポトーシス性細胞および／またはアポトーシス体の数は、細胞供給源、患者の状態、患者の年齢および体重、ならびに担当臨床医によって容易に決定され得る他の適切な要因に依存して変動する。
【００３２】
本発明のプロセスの首尾一貫した適用は、幾つかの様式で、個々に、または集約的に表され得る。患者は、創傷治癒の加速した速度、および／または創傷の結果としての炎症性サイトカイン作用および熱から生じる上昇した体温のより急速な低下を表し得る。さらにまたは代替的に、患者は、関節移動度のより急速な回復（例えば、欠損した身体関節（膝、尻、肩など）を置換または修復するための整形外科手術の後）を証明し得る。重傷の患者のより大きな生存率は、本発明の使用の結果として予測される。結果として、患者の入院期間は、有意に減少され得る。
【００３３】
傷害からの外傷の結果として床で長期間過ごすことを余儀なくされた患者の別の共通の兆候は、医用潰瘍（褥瘡性潰瘍または圧力潰瘍）の発症である。本発明のプロセスは、このような潰瘍の治癒の加速化のために示され、実際には、一般に哺乳動物の潰瘍を処置し、および潰瘍の治癒を加速化し、それによって、さらに患者の入院期間を短縮するために示される。
【００３４】
本発明に使用される免疫改変実体のサイズは、その免疫改変実体が、アポトーシス擬似様式で患者の免疫系の細胞によって摂取されるサイズである。一般に、どのような型の実体が選択されようと、これは、約５０ナノメーター〜約５００ミクロン、より好ましくは、約５０ナノメーター〜約５００ナノメーターのサイズを意味する。
【００３５】
本発明のプロセスにおいて使用される実体は、患者の免疫系の活性成分と患者を有効に接触させる任意の適切な手段によって患者に投与され得る。好ましくは、実体は、生理食塩水のような生体適合性液体中の液体懸濁液に構成され、患者に、動脈内に、静脈内に、または最も好ましくは筋肉内にもしくは皮下に、投与される。
【００３６】
注入のコースとして患者に実体を投与する好ましい様式は、一週間から数ヶ月までの範囲の期間にわたる、毎日、一週間あたり数回、週毎または月毎の、患者への投与である。投与のコースの頻度および期間は、おそらく患者に依存して、および処置される外傷の重篤度に従って、または前調整される外傷に対して、大きく変更し得る。その設計および最適化は、担当医の技量の十分範囲内である。
【００３７】
投与される実体の量は、処置することが意図される外傷の重篤度、または前調整することが意図される外傷、および患者の同一性および特徴に依存して非常に大きく異なる。有効な量の実体は患者に対して非毒性であり、免疫系を壊滅するほど多くないことが重要である。
【００３８】
実体の液体懸濁液の動脈内、静脈内、皮下または筋肉内投与を使用する場合、各用量について、等量の全血に通常見られる細胞の数またはそれらから発生され得るアポトーシス体の数の１．０％〜１０００％にほぼ等価な量の実体を含む約０．１〜５０ｍｌの液体を投与することが好ましい。一般に、ヒト患者に対して一回の送達あたり投与される合成実体の数は、前臨床研究によって示されるように、適切には約５００〜約２０×１０９の範囲内であり、好ましくは１０，０００〜約２×１０９の範囲内である。動物モデルが免疫系改変シナリオにおいて、体重の単純な倍数における必要とされる数の本当の代表例ではあり得ないため、有用なヒト投与量もまた、５００〜２０，０００，０００の範囲内に見出され得る。
【００３９】
本発明のプロセスにおいて、ワクチンの性質において免疫系改変因子として合成実体が作用しているため、各投与に対して注入部位に投与されたこのような本体の数は、患者体重単位あたりの合成実体の数または重量より有意な量である。同じ理由で、小さな哺乳動物の使用のための合成実体の有効な量または数は、重量比をベースに、より大きな哺乳動物に対して有効な量に、直接変換され得ない。
【００４０】
本発明はさらに、以下の具体的実施例において、例示的な目的について記載される。
【００４１】
（実施例）
本発明は、実験用ラットについての実験、ホスファチジルセリンリポソームの注入の経過でそれらを前処置する工程、前処置した動物に温度および心拍測定プローブを外科的に挿入する工程、および挿入のために必要とされる外科的な主な開腹からのそれらの開腹の手段として、それらの体温および他の生命徴候を測定する工程によって証明され得る。これらの結果は、ヒトを含む他の哺乳動物に与える影響の前兆である。
【００４２】
３０個体の７週齢実験用繁殖ラットの全てを、２×１５の哺乳動物に分ける。試験群Ａの各動物に、１日目、２日目、および１４日目に、１５０μＬの容量のＰＢＳに懸濁したサイズ１００±２０ナノメーターの７５％ホスファチジルセリン−２５％ホスファチジルコリンリポソームの臀部内注入を投与し、各注入は、１，８００，０００のリポソームを含む。コントロール群Ｂの各動物は、同様に１日目、２日目および１４日目において、リポソームを含まない５０μＬのＰＢＳを投与する。
【００４３】
注入の完了の４日後、哺乳動物を麻酔し、遠隔測定プローブを各動物の大腿動脈に外科的に挿入する。この遠隔測定プローブ（ＤＡＴＡＱＵＥＳＴ  ＬＡＢＰＲＯ、Ｄａｔａ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ製）は、無線送信機を装備した市販のプローブであり、哺乳動物のさらなる操作なしに、心拍、収縮期血圧、拡張期血圧および他のシグナルを受信可能である。体温を測定するために、追加のプローブが、各動物の腹腔内に外科的に挿入される。
【００４４】
体温、血圧および心拍の毎日の連続的な記録が、各動物から、手術後の１０日間、行われる。群Ａの試験動物は、コントロール群Ｂより正常な体温の著しく早い回復を示し、これは、試験群における手術からの創傷治癒および回復のより早い速度を証明する。
【００４５】
上で引用した全ての特許、特許出願、および刊行物は、本明細書において、全体を通して参考として援用される。
【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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