(57)【要約】本発明は、血管疾患を処置したりまたは予防するのに有用な組成物および方法に関する。本発明は、血管疾患を有する宿主の処置のため、または血管疾患の発症もしくは進行を抑制するために宿主の予防学的処置のための、抗血管新生薬としてのセファロタキシンアルカロイドを含有する組成物を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
血管疾患を有する宿主の処置方法であって、該宿主を、血管新生を抑制するのに十分な量のセファロタキシンと接触させることを含み、ここで、該血管疾患は固形腫瘍ではない、該方法。
【請求項２】
血管疾患は、炎症性疾患、糖尿病性網膜症、または黄斑変性症からなる群から選ばれる、請求項１記載の方法。
【請求項３】
炎症性疾患は、関節リウマチ、骨関節炎、喘息、および肺線維症からなる群から選ばれる、請求２記載の方法。
【請求項４】
セファロタキシンは、ホモハリングトニン（セファロタキシン、４−メチル−２−ヒドロキシ−２−(４−ヒドロキシ−４−メチルペンチル)ブタン二酸エステルを含む、請求項１記載の方法。
【請求項５】
セファロタキシンは、ホモハリングトニンアナログを含む、請求項１記載の方法。
【請求項６】
セファロタキシンは、該宿主に、経口、静脈内、局所、血管内、腹腔内、筋肉内、皮内、皮下、または動脈内で投与する、請求項１記載の方法。
【請求項７】
宿主の予防学的処置方法であって、該宿主を、血管疾患の発症または進行を抑制するのに十分な量のセファロタキシンと接触させることを含む、該方法。
【請求項８】
血管疾患は癌である、請求項７記載の方法。
【請求項９】
癌は、微小腫瘍性または微小転移性の癌細胞であることを特徴とする、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
血管疾患は癌以外の血管疾患である、請求項７記載の方法。
【請求項１１】
血管疾患は、炎症性疾患、糖尿病性網膜症、または黄斑変性症からなる群から選ばれる、請求項７記載の方法。
【請求項１２】
炎症性疾患は、関節リウマチ、骨関節炎、喘息、および肺線維症からなる群から選ばれる、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
セファロタキシンは、ホモハリングトニン（セファロタキシン、４−メチル−２−ヒドロキシ−２−(４−ヒドロキシ−４−メチルペンチル)ブタン二酸エステル）を含む、請求項７記載の方法。
【請求項１４】
セファロタキシンは、ホモハリングトニンアナログを含む、請求項７記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本出願は、米国特許仮出願60/397,657（2002年7月22日出願）の利益を主張する。
【０００２】
（技術分野）
本発明は、血管疾患を処置しまたは予防するのに有用な組成物および方法に関する。本発明は、血管疾患を有する宿主の処置のため、または血管疾患の発症もしくは進行を抑制するために宿主の予防学的処置のための、抗血管新生薬としてのセファロタキシンアルカロイドを含有する組成物を提供する。
【０００３】
（背景技術）
血管新生は、新規な血管の形成および分化として定義される。そのものは、多数の疾患および病気、特に癌、炎症およびある網膜の障害と関連する。血管疾患としては例えば、固形腫瘍、糖尿病網膜症、炎症性疾患（例えば、関節リウマチ、骨関節炎、喘息、および肺線維症）、黄斑変性症、血管線維腫、血管新生緑内症(neovascular glaucoma)、動静脈奇形(arteriovenous malformations)、骨癒合不全(nonunion fracture)、ループスおよび他の結合組織疾患、オースラー−ウェーバー症候群、アテローム硬化型プラーク、乾癬、角膜移植片血管新生、化膿性肉芽腫、水晶体後線維増殖症、強皮症、肉芽形成、血管腫、トラコーマ、血友病性関節、並びに血管接着を含むが、これらに限定されない。
【０００４】
血管新生インヒビターは最近、いくつかの化合物を用いた場合の癌との闘いにおける高プロフィル薬である。最も注目すべきことに、アンギオスタチン、エンドスタチン、コンブレタスタチン、ＳＵ５４１６、ＴＮＰ４７０、抗−ＶＥＧＦ化合物およびその他は、抗癌剤としての臨床的な治験に進んでいる。
【０００５】
血管新生（これは、新しい血管が形成されるプロセスである）は、正常な身体の活動（例えば、生殖、発生、創傷修復を含む）にとって必須である。該プロセスは完全に理解されていないが、内皮細胞（毛細血管の一次細胞）の増殖を制御する分子の複雑な相互作用に関与すると考えられる。正常な条件下では、これらの分子は、長期間（これは、数週間、時には数１０年間続き得る）、静止状態で微小血管系を保つ（すなわち、全く毛細菅の成長がない）と考えられる。必要な場合（例えば、創傷治癒の間）には、これらの同じ細胞は、５日間内に速い増殖および代謝回転を受け得る（Folkman, J.およびShing, Y.による、J. Biol. Chem., 267(16), 10931-10934；並びに、Folkman, J.およびKlagsbrun, M.による、Science, 235, 442-447 (1987)）。
【０００６】
血管新生は正常な条件下で非常に制御されたプロセスであるが、多数の疾患（これは、血管新生疾患として特徴的である）は、持続的な非調節性の血管新生によって働く。それ以外に述べると、非調節性の血管新生は、ある疾患を直接に引き起こしたり、あるいは現存する病理学的な病気を悪化し得る。例えば、眼の新生血管は失明のほとんどの原因として関連付けられ、そして約２０の眼疾患を支配する。ある現存する病気（例えば、関節炎）において、新たに形成する毛細血管は関節に侵入し、そして軟骨を破壊する。糖尿病の場合には、網膜中で形成する新たな毛細血管は、硝子体、出血に侵入し、そして失明を引き起こす。固形腫瘍の増殖および転移はまた、血管新生に依存する（Folkman, J.による、(1986) Cancer Research, 46, 467-473；Folkman, J.による、(1989) J. National Cancer Institute, 82, 4-6（これらは共に本明細書の一部を構成する））。例えば、２ｍｍ以上に拡大する腫瘍はそれら自身による血液供給を得なければならず、そしてこのことは新しい毛細血管の増殖を引き起こすことによってそれを成すことが分かっている。これらの血管が腫瘍中に包埋した後には、それらは腫瘍が異なる部位（例えば、肝臓、肺または骨）に転移するための手段を提供する（Weidner, N.らによる、(1991) The New England Journal of Medicine, 324 (1), 1-8）。
【０００７】
今日まで、いくつかの天然に存在する血管新生因子が記載され、そして確認されている（Fidler, J. I.およびEllis, L. M.による、(1994) Cell, 79, 185-189）。最近、O' Reillyらは、腫瘍を有するマウスの血清および尿から、内皮細胞の増殖を抑制する３８キロダルトン(ｋＤａ)のタンパク質を単離精製した（O' Reilly, M.らによる、(1994) Cell, 79, 315-328；および国際特許出願WO 95/29242（1995年11月2日公開））。この内皮インヒビターの小配列分析より、マウスプラスミノーゲンの内部フラグメントと９８％配列相同性を示した。アンギオスタチン（これは、マウス阻害性フラグメントと呼ばれる）は、マウスプラスミノーゲンの最初の４クリングル領域を含むペプチドであった。ヒトプラスミノーゲンの同じ領域由来のペプチドフラグメント（すなわち、１〜４個のクリングルを含有する）はまた、毛細内皮細胞の増殖をインビトロおよびインビボで強く抑制した。このペプチドフラグメントが由来する無傷のプラスミノーゲンは、強い阻害効果を有しなかった。
【０００８】
血管疾患を処置する際に使用するためのいくつかの血管新生インヒビターが、現在開発中であるが（Gasparini, G.およびHarris, A. L.による、(1995) J. Clin. Oncol., 13 (3): 765-782）、これらの化合物に関連する欠点が存在する。例えば、スラミンは強力な血管新生インヒビターであるが、しかし、抗腫瘍活性に必要な用量では、激しい全身性毒性の原因である。例えば、レチノイド、インターフェロンおよび抗エストロゲン剤などの化合物は、ヒトの使用には安全であるが、抗血管新生効果が弱い。
【０００９】
従って、哺乳類において血管疾患を処置する際に有用な化合物に対する要求が存在する。加えて、血管疾患の発症、進行または再発生を予防しまたは抑制するために、宿主の予防学的処置において有用な化合物に対する要求が存在する。
【００１０】
いくつかの抗血管新生インヒビターが同定されているが、臨床的な使用における改善はなお探索中である。本明細書中に記載する発明は、血管新生を抑制し、その結果血管疾患に影響を及ぼし得る、ホモハリングトニンを含めたセファロタキシンアルカロイドおよびその誘導体の新規な使用を示す。
【００１１】
（発明の概要）
上記の目的によれば、本発明は、望まない血管新生を抑制する際に有効である、組成物および方法を提供する。本発明の１態様は、血管疾患を有する宿主の処置方法を提供することであって、該方法は、該宿主を、血管新生を抑制するのに十分な量のセファロタキシンと接触させることを含む。本発明の１実施態様において、該血管疾患は、固形腫瘍以外の疾患である。本発明の更なる実施態様において、該血管疾患は、炎症性疾患（例えば、関節リウマチ、骨関節炎、喘息、および肺線維症を含む）；糖尿病性網膜症；および、黄斑変性症からなる群から選ばれる。
【００１２】
本発明の好ましい実施態様において、上記の方法において使用されるセファロタキシンは、ホモハリングトニン（セファロタキシン、４−メチル−２−ヒドロキシ−２−(４−ヒドロキシ−４−メチルペンチル)ブタン二酸エステル）を含む。更に好ましい実施態様において、該セファロタキシンは、ホモハリングトニンアナログを含む。
【００１３】
本発明の好ましい実施態様において、該セファロタキシンは、宿主に経口投与される。本発明の更に好ましい実施態様において、該セファロタキシンは、宿主に、静脈内、局所、血管内、腹腔内、筋肉内、皮内、皮下、または動脈内で投与される。
【００１４】
別の態様において、本発明は宿主の予防学的処置の方法を提供し、該方法は、該宿主を、血管疾患の発症または進行を抑制するのに十分な量のセファロタキシンと接触させることを含む。本方法の１実施態様において、血管疾患は癌である。更に好ましい実施態様において、血管疾患は、微小腫瘍性(microtumors)または微小転移性(micrometastatic)の癌細胞を特徴とする癌である。更に好ましい実施態様において、血管疾患は、癌以外の血管疾患であって、例えば炎症疾患（例えば、関節リウマチ、骨関節炎、喘息、および肺線維症を含む）；糖尿病性網膜症；または、黄斑変性症を挙げられる。
【００１５】
本発明の好ましい実施態様において、上記の方法において使用する該セファロタキシンは、ホモハリングトニン（セファロタキシン、４−メチル−２−ヒドロキシ−２−(４−ヒドロキシ−４−メチルペンチル)ブタン二酸エステル）を含む。更に好ましい実施態様において、該セファロタキシンは、ホモハリングトニンアナログを含む。
【００１６】
（詳細な記載）
（１）血管疾患を有する宿主の処置；および（２）血管疾患の発症または進行を予防するための宿主の予防学的処置、のための方法および組成物を提供する。好ましい実施態様において、該セファロタキシンは、抗血管新生効果を与える。
【００１７】
化合物または化学的薬物は、血管の形成を抑制する際の血管新生インヒビターである。
【００１８】
セファロタキシンは、イヌガヤ科(Cephalotaxus fortunei Hook)および他の関連種（例えば、セファロタックス・シネンシス(Cepholotaxus sinensis)Ｌｉ、Ｃ．ハイナネンシス(hainanensis)、およびＣ．ウィルソニアナ(wilsoniana)（これは、Ｃ．オリべリ(oliveri)およびＣ．ハリングトニア(harringtonia)を含む））の皮、茎、葉および種から抽出されるアルカロイドである（Powell, R. G.による、(1972) J. Pharm Sci., 61 (8): 1227-1230）。
【００１９】
本明細書中に使用する用語「セファロタキシン」とは、中国常緑樹であるイヌガヤ(Cephalotaxus fortunei）のアルカロイド誘導体およびそのアナログを含有する化学的ファミリーの全ての要素を含む。該セファロタキシンファミリーは、図１中に示す化学構造によって定義される。
【００２０】
セファロタキシンアナログは更に、Ｒ１およびＲ２で置換基を有する、図１中に示される構造に定義されるが、それに限定されない。Ｒ１および／またはＲ２の例としては、エステル（例えば、ハリングトニン、イソハリングトニン、ホモハリングトニン、デオキシハリングトニン、アセチルセファロタキシンなど）を含む。表１は、これらのアナログのいくつかについてのＲ１およびＲ２の構造を例示する。Ｒ１およびＲ２の置換基は典型的に、生物学的活性、製薬的な寄与（例えば、バイオアベイラビリティまたは安定性）を改善するのに、あるいは毒性を低下させるのに使用する。１実施態様において、Ｒ１および／またはＲ２は、アルキル置換基（例えば、メチル、エチル、プロピルなど）を含む。別の実施態様において、Ｒ１および／またはＲ２は、エステル（例えば、メトキシ、エトキシ、ブトキシなど）を含む。しかしながら、Ｒ１およびＲ２は、本発明の範囲内において上記の例に限定されない。
【表１】
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【００２１】
セファロタキシンアナログは、更なる化学的な改良物である。セファロタキシンの具体例はホモハリングトニンであって、このものはセファロタキシンのブタン二酸エステル、４−メチル−２−ヒドロキシ−２−(４−ヒドロキシ−４−メチルペンチル)（図２）である。
【００２２】
実施例中に例示する通り、セファロタキシンは、血管新生インヒビターである。本発明の態様は、血管疾患を有する宿主の処置における使用のために、セファロタキシンを含有する組成物を提供する。本発明の更なる態様は、血管疾患の発症または進行を予防するために予防学的処置において使用するための、セファロタキシンを含有する組成物を提供する。
【００２３】
血管疾患としては、例えば固形腫瘍、糖尿病性網膜症、炎症性疾患（例えば、関節リウマチ、骨関節炎、喘息、および肺線維症）、黄斑変性症、血管線維腫、血管新生緑内症、動静脈奇形、骨癒合不全、ループスおよび他の結合組織疾患、オースラー−ウェーバー症候群、アテローム硬化型プラーク、乾癬、角膜移植片血管新生、化膿性肉芽腫、水晶体後線維増殖症、強皮症、肉芽形成、血管腫、トラコーマ、血友病性関節、並びに血管接着を含むが、これらに限定されない。
【００２４】
本発明の１実施態様において、セファロタキシンは、血管疾患を有する宿主に投与される。該セファロタキシンは、血管新生を抑制するのに十分な量で投与され、その結果、血管新生および血管疾患の進行を抑制する。
【００２５】
本発明の１実施態様において、血管疾患は、固形腫瘍以外の疾患である。本発明の別の実施態様において、血管疾患は固形腫瘍である。
【００２６】
腫瘍の増殖および転移は、血管新生に依存する。固形腫瘍は、生存しそして増殖するのに酸素および栄養素を必要とする。血液が供給されない場合には、潜在的な腫瘍は、死亡するかまたは休止したままのいずれかである。これらの潜在的な腫瘍は、例えば微小腫瘍性または微小転移性の癌細胞であり得る。「微小腫瘍」は、死亡する細胞が新しい細胞によって置き代えられる、安定な細胞個体群として残る。微小腫瘍は、例えば他の固形腫瘍を有しない宿主における固形腫瘍の開始となり得る。微小腫瘍はまた、微小腫瘍が転移する固形腫瘍が除かれたりまたは根絶された後は、宿主において存在する残留腫瘍細胞となり得る。この病気は、癌性腫瘍が寛解中の宿主において生じ得る。微小転移性癌細胞は、未だ血管新生化せず、固形腫瘍を形成する癌細胞を意味する。
【００２７】
微小腫瘍は、血管新生化する場合には速い増殖性腫瘍となり、そしてこのものは、血管新生化後２週間で、最初の大きさの１６,０００倍にまで拡張し得る。血液が供給されない場合には、増殖は全く見られない（Folkman, J.による、(1974) Tumor Angiogenesis, Adv. Cancer Res. 19: 331 358；Ausprunk, D. H.およびFolkman, J.による、(1977) Migration and Proliferation of Endothelial Cells in Preformed and Newly Formed Blood Vessels During Tumor Angiogenesis, Microvasc. Res. 14: 53 65（これらは共に本明細書の一部を構成する））。
【００２８】
該腫瘍に栄養素および酸素を供給することに加えて、血管新生は、固形腫瘍が転移することを可能とする。新規な血管は、細胞が固形腫瘍から宿主中の他の部位に転移することを可能とする経路を供し、その結果二次性腫瘍の形成を生じる。
【００２９】
従って、血管新生を抑制することによって、該微小腫瘍の血管新生化は最少となり、そして転移および腫瘍増殖の進行は抑制されたりまたは停止される。
【００３０】
本発明の１実施態様において、セファロタキシンは、微小腫瘍を有する宿主に投与される。該セファロタキシンは、血管新生を抑制するのに十分な量で投与され、その結果、該微小腫瘍の増殖および転移を抑制する。該微小腫瘍は、腫瘍の増殖を特徴とする疾患の早期発症であり得る。該微小腫瘍は、確立された固形腫瘍の転移の結果であり得る。
【００３１】
過剰な血管の増殖を特徴とする別の疾患は、糖尿病性網膜症である。最近の研究は、慢性高血糖への応答の際の、眼におけるレニン−アンギオテンシン系（ＲＡＳ）および血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）についての病原的な役割を示している（Wilkinson-Berka J. L.らによる、(2001) The Interaction Between the Renin-Angiotensin System and Vascular Endothelial Growth Factor in the Pathogenesis of Retinal Neovascularization in Diabetes, J Vasc Res., 38(6): 527-35）。
【００３２】
本発明の１実施態様において、セファロタキシンは、糖尿病性網膜症を患っているかあるいは糖尿病性網膜症を患う危険がある、糖尿病を有する宿主に投与される。該セファロタキシンは、血管新生を抑制するのに十分な量で投与され、その結果、糖尿病性網膜症の進行を遅らせる。
【００３３】
血管新生は、慢性炎症性疾患（例えば、関節リウマチ、骨関節炎、喘息、および肺線維症を含む）に関与する（Walsh, D. A.およびPearson'  C. I.による、(2001), Angiogenesis in the Pathogenesis of Inflammatory Joint and Lung Diseases, Arthritis Res., (3): 147-153；Storgard1, C. M.,らによる、(1999), Decreased Angiogenesis and Arthritic Disease in Rabbits Treated with an vβ3 Antagonist, J. Clin. Invest, 3 (1): 47-54（これらは各々、本明細書の一部を構成する））。
【００３４】
本発明の１実施態様において、セファロタキシンは、炎症性疾患を有する宿主に投与される。該セファロタキシンは、血管新生を抑制するのに十分な量で投与し、その結果、炎症性疾患の進行を遅らせる。本発明の好ましい実施態様において、該炎症性疾患は、関節リウマチである。更に好ましい実施態様において、該炎症性疾患は、骨関節炎である。別の更に好ましい実施態様において、該炎症性疾患は喘息である。更に別の好ましい実施態様において、該炎症性疾患は、肺線維症である。
【００３５】
本発明の更なる実施態様において、セファロタキシンは、予防学的処置として宿主に投与される。「予防学的処置」とは、血管疾患の発症または進行を予防するために、宿主にセファロタキシンを投与することを意味する。本発明の１実施態様において、セファロタキシンは、腫瘍の増殖もしくは転移の発症、または腫瘍の増殖もしくは転移を特徴とする疾患を予防するために、宿主に投与される。該処置は、例えば腫瘍（例えば、癌性腫瘍）の増殖を示すが、現在寛解中の宿主において所望され得る。
【００３６】
更に好ましい実施態様において、セファロタキシンは、癌性腫瘍の増殖以外の血管疾患の発症または進行を予防するために、宿主に投与される。１実施態様において、該セファロタキシンは、炎症性疾患（例えば、関節リウマチ、骨関節炎、喘息、または肺線維症）を示す危険がある宿主に投与される。
【００３７】
更に好ましい実施態様において、セファロタキシンは、糖尿病性網膜症の発症を予防したりまたは抑制するための予防学的処置として、糖尿病であるかあるいは糖尿病となる危険がある宿主に投与される。別の更に好ましい実施態様において、セファロタキシンは、黄斑変性症の発症を予防したりまたは抑制するための予防学的処置として、黄斑変性症を示す危険がある宿主（例えば、老人）に投与される。
【００３８】
上記の予防学的処置について、該セファロタキシンは、血管疾患の発症または進行を抑制するのに十分な量で投与される。
【００３９】
上記の本発明の化合物は、当該分野の当業者にとって知られる製剤化方法を用いて、医薬的に許容し得る製剤として供することができる。これらの製剤は、標準的な経路によって投与することができる。一般的に、該化合物は、経口、静脈内、局所、血管内、腹腔内、筋肉内、皮内、皮下、または動脈内で投与することができる。加えて、該組み合わせは、該化合物の除放を可能とする生分解性ポリマー中に導入することができ、ここで、該ポリマーは、薬物運搬が所望される場所（例えば、腫瘍部位）の近傍にインプラントする。該生分解性ポリマーおよびそれらの使用が、例えばBremらによるJ. Neurosurg. 74: 441-446 (1991)中に詳述されている。
【００４０】
該化合物の用量は、処置する病気、ある化合物、および他の臨床的な因子（例えば、ヒトまたは動物の体重および病状、並びに該化合物の投与経路）に依存する。本発明は、ヒトおよび家畜での使用のための使用法を有すると、理解されるべきである。
【００４１】
本発明の１実施態様において、該セファロタキシンは、０．０５〜５．０ｍｇ／ｍ２の範囲で宿主に投与される。好ましい実施態様において、該セファロタキシンは、０．１〜３．０ｍｇ／ｍ２の範囲で宿主に投与される。更に好ましい実施態様において、該セファロタキシンは、０．１〜１．０ｍｇ／ｍ２の範囲で宿主に投与される。
【００４２】
該セファロタキシンは、血管新生を抑制したりまたは血管疾患の発症もしくは進行を抑制するのに必要に応じて、隔週で、毎週、毎日、１日に２回、またはそれ以上の回数で投与することができる。
【００４３】
該製剤は、経口、腸、眼（例えば、硝子体内または眼房内を含む）、鼻腔、局所（例えば、頬側および舌下を含む）、膣、または非経口（例えば、皮下、筋肉内、静脈内、皮内、気管内、および硬膜外）の投与に適当な製剤を含む。該製剤は、１回投与形態で容易に供することができ、そして通常の製薬技術によって製造することができる。それらの技術としては、活性成分および医薬的な担体若しくは賦形剤を組み合わせる工程を含む。一般的に、該製剤は、活性成分を液体担体もしくは細かく分割した固体担体と均一にまたは密封に組み合わせ、次いで必要な場合には、該生成物を成型することによって製造する。
【００４４】
経口投与に適当な本発明の製剤は、各々予め決めた量の活性成分を含有する別個の単位（例えば、カプセル剤、サッシェ、または錠剤）；散剤もしくは顆粒剤；水性液体もしくは非水性液体中の液剤もしくは懸濁剤；水中油型乳剤もしくは油中水型乳剤；および、ボーラスなどとして供することができる。
【００４５】
錠剤は、場合により１個以上の補助成分と一緒に圧縮または成形によって製造することができる。圧縮錠剤は、適当な機械で流動性形態（例えば、粉末または顆粒）の活性成分（このものは、場合により結合剤、滑沢剤、不活性な希釈剤、保存剤、界面活性剤、または分散剤と混合する）を圧縮することによって製造することができる。成形した錠剤は、適当な機械で、不活性な液体希釈剤を用いて湿らせた粉末状の化合物の混合物を成形することによって製造することができる。該錠剤は、場合によりコーティングされたりまたはスコアされ、そして該錠剤中の活性成分の数分間から数時間、数日間での遅いかまたは制御された放出を得るために製剤化することができる。
【００４６】
口腔中での局所投与に適当な製剤としては、芳香基剤（これは通常、スクロース、およびアカシアまたはトラガカント）中に成分を含有するトローチ剤；不活性基剤（例えば、ゼラチンおよびグリセリン、またはスクロースおよびアカシア）中に活性成分を含有するパステル剤(pastille)；および、適当な液体担体中に投与される成分を含有する含そう剤を含む。
【００４７】
皮膚への局所投与に適当な製剤は、医薬的に許容し得る担体中で投与される成分を含有する、軟膏剤、クリーム剤、ゲル剤、およびペースト剤として供することができる。好ましい局所運搬系は、投与する成分を含有する経皮パッチである。
【００４８】
腸投与のための製剤は、例えばココアバターまたはサリチル酸を含有する適当な基剤を有する坐剤として供することができる。
【００４９】
担体が固体である鼻腔投与に適当な製剤としては、吹入剤を投与する様式で投与される（すなわち、鼻の近くに保った粉末の容器から鼻腔経路を通る速い吸入による）、例えば２０〜５００ミクロンの範囲のサイズを有する粗い粉末を含む。例えば、鼻スプレー剤または点鼻剤として投与のための、担体が液体である適当な製剤としては、活性成分の水性または油性の液剤を含む。
【００５０】
膣投与に適当な製剤は、活性成分に加えて、適当であると当該分野において知られる担体を含有する、ペッサリー、タンポン(tamports)、クリーム剤、ゲル剤、ペースト剤、発泡剤として供することができる。
【００５１】
非経口投与に適当な製剤としては、水性および非水性の減菌注射液剤（これは、抗酸化剤、緩衝化剤、静菌剤、および該製剤を目的のレシピエントの血液と等張とする溶質を含む）；並びに、水性および非水性の減菌懸濁剤（これは、懸濁化剤および増粘剤を含み得る）を含む。該製剤は、１回投与または多数回投与の容器、例えば封したアンプル剤およびバイアルで供することができ、そして、使用する直前に減菌液体担体（例えば、注射用の水）の添加のみを必要とするフリーズドライ（凍結乾燥）の条件で保存することができる。即時注射の液剤および懸濁剤は、上記の種類の減菌の散剤、顆粒剤および錠剤から製造することができる。
【００５２】
好ましい１回投与製剤は、本明細書中に上記で列挙する通り、投与する活性成分の１日の用量若しくは単位、１日サブ用量、またはそれらの適当な画分を含有する製剤である。
【００５３】
上記の成分に加えて、本発明の製剤は、関心ある製剤の種類について当該分野において一般的である他の剤を含み、例えば経口投与に適当な剤は芳香剤を含み得ると、理解すべきである。
【００５４】
加えて、本発明のセファロタキシン組成物は、他の活性化合物と一緒に投与することができる。セファロタキシン組成物と同時投与することができる活性化合物としては例えば、他の抗血管新生剤（例えば、アンギオスタチン、ＶＥＧＦインヒビター、エンドスタチン、コンブレタスタチン、２−メトキシ−エストラジオール、サイリドマイドおよびアバスタチン(Avastatin)（登録商標）、タキサン、代謝拮抗剤（例えば、メトトレキセート、コルチコステロイド、コルヒチンおよびアナログ）、血管新生標的に対する抗体、インターフェロン、糖尿病制御剤（例えば、インスリンおよびインスリン増殖因子インヒビター）、抗炎症剤（例えば、ＣＯＸ−２インヒビター）、抗関節炎剤、アスピリン、イブプロフェン、ナプロシンなど；並びに、血管新生、アンチセンス療法およびＲＮＡ干渉療法の遺伝子標的、結合性(associated)ｍＲＮＡおよびタンパク質標的に対する、遺伝子療法、アンチセンス療法およびＲＮＡ干渉療法が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５５】
活性成分は、セファロタキシン組成物の投与前、その間、またはその後に、宿主に投与することができる。本発明の１実施態様において、該活性成分を投与前にセファロタキシンと一緒に混合し、そして該混合物を宿主に投与する。更なる実施態様において、該活性成分およびセファロタキシンを、宿主に別々であるがしかし同時に投与する。別の更なる実施態様において、該活性成分を、セファロタキシンの前に投与する。好ましい実施態様において、該活性成分を、該活性成分が宿主中になお全身的に存在した状態で、該セファロタキシンの前に投与する。別の更なる実施態様において、該活性成分を、セファロタキシンの後に投与する。好ましい実施態様において、活性成分を、該セファロタキシンが宿主中に未だ全身的に存在する間に、セファロタキシンの後に投与する。
【００５６】
本発明の適当な宿主は、ヒトまたは他の動物を含む。
【００５７】
以下の実施例は、上記の本発明を用いる様式をより十分に記載するために、並びに本発明の様々な態様を実施するために企図する最善の態様を記載するために用いる。これらの実施例はいかなる形でも本発明の真の範囲を限定するように用いるものではなく、むしろ例示の目的で提示するものと理解する。本明細書中に引用する全ての刊行物は、本明細書の一部を構成する。
【００５８】
実施例
（実施例１）
ＣＡＭアッセイにおけるホモハリングトニンの影響
（プロトコール）
鶏の受精卵（HiChick Breeding Co, Kapunda, South Australia）を、３８℃で３日間インキュベートした。３日後に、胚を該卵から砕いてとり出し、このものをプラスチック製菅から構成されるカップ（このものは、頂上部でプラスチック製フィルムを伸張して、懸濁させる卵のためにハンモックを形成する）中に入れた。ペニシリンおよびストレプトマイシンを含有するＤＭＥＭ（２ｍＬ）を、該卵を加える前に各カップに加えた。頂上のペトリ皿は、無菌を保った。インキュベートは、加湿の３７℃のインキュベーター中で続けた。
【００５９】
４日目に、絨毛尿膜（ＣＡＭ）は増殖し始め、そして各胚の写真を×５で撮影して、影像分析ソフトウェア（Video Pro 32, Leading Edge Pty Ltd, South Australia）を用いてＣＡＭの面積を測定した。次いで、胚をそれらＣＡＭの面積に従って群化し、これらは比較のために各々中にコントロール胚を有する。ホモハリングトニンの６．２５、１２．５および２５ｎｇを用いて処理した場合に、４個の一致した胚が存在した。該ＣＡＭの増殖中でのこれらの初期の発生段階の変化が劇的であるので、群化は重要である。４日目での比較的に小さいサイズの差違は、５日目でのＣＡＭにおける大きな差異に翻訳され、このことより処理を比較することは困難である。物質はメチレンセルロースディスク中で使用し、このものは最初に真空下で終夜乾燥した。該メチレンセルロースディスクを該ＣＡＭの頂上部に適用する。処理の開始時には、該ＣＡＭ面積よりも少なくとも３〜４倍に大きくなり、このことは処理がＣＡＭ表面全体にいきわたったことを示す。
【００６０】
５日目に、造影剤を有する脱脂乳をＣＡＭ中に注射した。次いで、写真を×６３倍までの様々なレベルの拡大率で撮影した。定量的な測定は、×５の写真から行なった。ＣＡＭ面積、並びに静脈および動脈の長さを影像分析（Video Pro 32, Leading Edge Pty Ltd, South Australia）を用いて測定した。次いで、血管の長さの相対値を、全長／ＣＡＭ面積として算出した。統計学的な分析は、有意水準のレベルとしてｐ＜０．０５を有する、SigmaStat and OneWay ANOVAを用いて行なった。
【００６１】
該ＣＡＭの正常な組織化は均一であって、主な静脈は左の方向にドレインし、そして動脈の枝分れは該ＣＡＭの頂上部および底部の端にまで及んだ。図３は、血管の長さの測定について実施した、静脈および動脈の枝分かれのトレーシングを図示的に例示する。
【００６２】
血管新生インヒビターであるホモハリグトニンは、ChemGenex Therapeutics, Inc.（Menlo Park, CA）から入手し、そしてこのものは減菌水中、適当な濃度に調製した。ホモハリングトニンを用いた初期用量では、該用量が減少するために、該胚の死を引き起こした。ホモハリングトニンは、６．２５、１２．５および２５ｎｇ（１１．３、２２．５および４５ｎＭ）の用量で使用し、これらを水処理のコントロールと比較した。結果を、表２中に示す。ホモハリングトニンは、２５ｎｇで処理したＣＡＭの場合には、コントロールの４２％にまで、該ＣＡＭの増殖を減少させた。該静脈、動脈および総血管の長さはまた、２５ｎｇの群の場合には有意に低下し、６．２５および１２．５ｎｇで処理した群の場合には、血管の長さは有意に低下しなかった。該静脈、動脈および総血管の長さは、それぞれコントロールの１５％、１８％、および１７％にまで低下した。驚くべきことではないが、ホモハリングトニンの全３個の用量レベルについて、該血管の長さの相対値はまた低下し、動脈の長さの相対値は有意に低下し、そして最も高用量のホモハリングトニンの場合にだけ、静脈および総血管の長さの相対値は有意に相違した。
【表２】
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【００６３】
ＣＡＭのホモハリングトニン処理は、図４に例示する通り、血管における有意な低下を生じた。
【００６４】
図４に示す通り、最も低用量のホモハリグトニンの場合でさえも、該ＣＡＭはより小さくなり、そして正常な血管の組織化は妨害される。該ＣＡＭの底部での大きな静脈および動脈の枝分かれの重なりに注意する。１２．５ｎｇの場合の該ＣＡＭは、血管における一般的な低下を有し、組織化における多くの障害はなかった。最も高用量の２５ｎｇは、微細な痕跡血管だけが残り、そして血管の発生はほとんど完全に遮断された。２５ｎｇの用量は、より小さい１胚を殺した。
【００６５】
より高い拡大率でホモハリングトニンに起因して見られる変化は特異的であって、そして試験を行なった他の基質とは似ていなかった。図５において、正常なＣＡＭおよび２５ｎｇのホモハリングトニン処理のＣＡＭを示す。水コントロールは、よく可視化される。ホモハリングトニン処理は、血流の著しい低下を生じ、赤血球を運搬する場において少しの微細な血管だけが存在する。特異的な特徴は、血流が止まった場所で血管中にトラップされた赤血球を示す視野に広がる黒点である。このものをタキソールを用いた場合に見られる変化と、該血管および残留血流が全くないより大きな血管の骨格の外側への赤血球の拡散性漏出について比較する。
【００６６】
ホモハリングトニンの抗血管新生活性を、早期の鶏絨毛尿膜（ＣＡＭ）を用いて試験した。ホモハリングトニンの使用により、ＣＡＭ中の血管発生の有意な低下を生じ、このことはタキソールの場合から観察される効力および定性的な変化の両方の面で差違が存在する。これらの差違は、作用機構の変化（例えば、冒される内皮細胞の増殖、アポトーシス、およびこれらの基質が原因の移動）に反映され得る。
【図面の簡単な説明】
【００６７】
【図１】図１は、セファロタキシンファミリーの一般的な化学構造を示す図面である。
【図２】図２は、ホモハリングトニンの化学構造を示す図面である。
【図３】図３は、絨毛尿膜（ＣＡＭ）血管の図示を示す図面である。
【図４】図４は、ＣＡＭにおけるホモハリングトニンの影響を示す図面である。
【図５】図５は、ホモハリングトニンおよびタキソールによって引き起こされる定性的な変化の比較を示す図面である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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