(57)【要約】グルカゴン受容体に対してグルカゴンペプチドホルモンの作用に拮抗するように作用する、新規なクラスの化合物。そのグルカゴン受容体の拮抗作用に起因して、当該化合物は高血糖症、１型糖尿病、２型糖尿病、脂質代謝障害および肥満のような、グルカゴン拮抗作用が有益である何れかの疾患および障害の治療および／または予防のために適する可能性がある。
2005537231.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（I）の化合物、並びにその何れかの光学異性体もしくは幾何異性体、互変異性体、これらの混合部物、またはその薬学的に許容可能な塩：
【化１】
2005537231.tif 000093
ここで、
R2は、水素またはC1-6-アルキルであり、
Bは、
【化２】
2005537231.tif 000094
であり、
R38は、水素、-S(=O)2-C1-6-アルキル、または-C(=O)-C1-6-アルキルであり、
Aは、原子価結合、-(CR3R4)-、-(CR3R4)(CR5R6)-であり、
R1、R3、R4、R5、およびR6は、独立に水素、またはC1-6-アルキルであり、
Zは、アリーレンであるか、または窒素、酸素および硫黄から選択される1〜2のヘテロ原子を含む5〜6員のヘテロ芳香族環から誘導される二価の基であり、これはハロゲン、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR9、-NR9R10およびC1-6-アルキルから選択される一つまたは二つの基R7およびR8で任意に置換されてもよく、ここでのR9およびR10は独立に水素またはC1-6-アルキルであり、
Xは、
【化３】
2005537231.tif 000095
であり、ここで、
rは、0または1であり、
qおよびsは、独立に0、1、2、または3であり、
R11、R12、R13、およびR14は、独立に水素、またはC1-6-アルキルであり、
Dは、
【化４】
2005537231.tif 000096
であり、
ここで、R15、R16、R17、およびR18は、独立に
・水素、ハロゲン、-CN、-CH2CN、-CHF2、-CF3、-OCF3、-OCHF2、
-OCH2CF3、-OCF2CHF2、-S(O)2CF3、-SCF3、-NO2、-OR21、
-NR21R22、-SR21、-NR21S(O)2R22、-S(O)2NR21R22、-S(O)NR21R22、
-S(O)R21、-S(O)2R21、-C(O)NR21R22、-OC(O)NR21R22、-NR21C(O)R22、
-CH2C(O)NR21R22、-OCH2C(O)NR21R22、-CH2OR21、-CH2NR21R22、
-OC(O)R21、-C(O)R21 または-C(O)OR21、
・C1-6-アルキル、C2-6-アルケニルまたはC2-6-アルキニル、
（これは任意に、ハロゲン、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR21、-NR21R22
およびC1-6-アルキルから選択される一以上の置換基で置換されてもよい）
・C3-8-シクロアルキル、C4-8-シクロアルケニル、ヘテロシクリル、C3-8-シクロ
アルキル-C1-6-アルキル、C3-8-シクロアルキル-C1-6-アルコキシ、C3-8-シク
ロアルキルオキシ、C3-8-シクロアルキル-C1-6-アルキルチオ、C3-8-シクロアル
キルチオ、C3-8-シクロアルキル-C2-6-アルケニル、C3-8-シクロアルキル-C2-6-
アルキニル、C4-8-シクロアルケニル-C1-6-アルキル、C4-8-シクロアルケニ
ル-C2-6-アルケニル、C4-8-シクロアルケニル-C2-6-アルキニル、
へテロシクリル-C1-6-アルキル、ヘテロシクリル-C2-6-アルケニル、ヘテロシ
クリル-C2-6-アルキニル、アリール、アリールオキシ、アリールオキシカルボ
ニル、アロイル、アリール-C1-6-アルコキシ、アリール-C1-6-アルキル、
アリール-C2-6-アルケニル、アリール-C2-6-アルキニル、ヘテロアリール、
ヘテロアリール-C1-6-アルキル、ヘテロアリール-C2-6-アルケニル、または
ヘテロアリール-C2-4-アルキニル（その環状部分は任意に、ハロゲン、-CN、
-CF3、-OCF3、-NO2、-OR21、-NR21R22およびC1-6-アルキルから選択される
一以上の置換基で置換されてもよい）
ここで、R21およびR22は、独立に水素、C1-6-アルキルまたはアリールで
あるか、
またはR21およびR22は、これらが同じ窒素原子に結合するときは、該窒素原子
と一緒になって、任意に窒素、酸素および硫黄から選択される一つまたは二つの
更なるヘテロ原子を含み、且つ任意に一つまたは二つの二重結合を含む3〜8員の
ヘテロ環を形成してもよい：
であるか、またはR15〜R18のうちの二つは、隣接する位置に置かれるときは、それらが一緒になってブリッジ -(CR23R24)a-O-(CR25R26)c-O-を形成し、
ここで、
aは、0、1、または2であり、
cは、1または2であり、
R23、R24、R25およびR26は、独立に、水素、C1-6-アルキル、またはフッ素であり、
R19およびR20は、独立に、水素、C1-6-アルキル、C3-8-シクロアルキル、またはC3-8-シクロアルキル-C1-6-アルキルであり、
Eは、
【化５】
2005537231.tif 000097
であり、ここで、
R27およびR28は、独立に、
水素、ハロゲン、-CN、-CF3、-OCF3、OR32、-NR32R33、C1-6-アルキル、C3-8-シクロアルキル、C4-8-シクロアルケニル、またはアリールであり、
ここでのアリール基は、任意に、ハロゲン、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR32、-NR32R33、およびC1-6-アルキルから選択される１以上の置換基で置換されてもよく、
ここで、
R32およびR33は、独立に水素、もしくはC1-6-アルキルであるか、
またはR32およびR33は、これらが同じ窒素原子に結合するときは、該窒素原子と一緒になって、任意に窒素、酸素および硫黄から選択される一つまたは二つの更なるヘテロ原子を含み、且つ任意に一つまたは二つの二重結合を含む3〜8員のヘテロ環を形成してもよく、
R29、R30およびR31は、独立に、
・水素、ハロゲン、-CHF2、-CF3、-OCF3、-OCHF2、-OCH2CF3、-OCF2CHF2、
-SCF3、-OR34、-NR34R35、-SR34、-S(O)R34、-S(O)2R34、-C(O)NR34R35、
-OC(O)NR34R35、-NR34C(O)R35、-OCH2C(O)NR34R35、-C(O)R34、または
-C(O)OR34
・C1-6-アルキル、C2-6アルケニルまたはC2-6-アルキニル［これらは任意にハロゲン、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR34、-NR34R35およびC1-6-アルキルから選択される一以上の置換基で置換されてもよい］、
・C3-8-シクロアルキル、C4-8-シクロアルケニル、ヘテロシクリル、C3-8-シクロアルキル-C1-6-アルキル、C3-8-シクロアルキル-C2-6-アルケニル、C3-8-シクロアルキル-C2-6-アルキニル、C4-8-シクロアルケニル-C1-6-アルキル、C4-8-シクロアルケニル-C2-6-アルケニル、C4-8-シクロアルケニル-C2-6-アルキニル、へテロシクリル-C1-6-アルキル、ヘテロシクリル-C2-6-アルケニル、ヘテロシクリル-C2-6-アルキニル、アリール、アリールオキシ、アロイル、アリール-C1-6-アルコキシ、アリール-C1-6-アルキル、アリール-C2-6-アルケニル、アリール-C2-6-アルキニル、ヘテロアリール、ヘテロアリール-C1-6-アルキル、ヘテロアリール-C2-6-アルケニル、またはヘテロアリール-C2-4-アルキニル、［その環部分は任意に、ハロゲン、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR34、-NR34R35およびC1-6-アルキルから選択される一以上の置換基で置換されてもよい］であり、
ここでのR34およびR35は、独立に水素、C1-6-アルキルまたはアリールであるか、
またはR34およびR35は、同じ窒素原子に結合するときは、これらは該窒素原子と一緒になって、任意に窒素、酸素および硫黄から選択される一つまたは二つの更なるヘテロ原子を含み且つ任意に一つまたは二つの二重結合を含む3〜8員のヘテロ環を形成してもよく、
または基R29、R30およびR31のうちの二つは、同じ環炭素原子または異なる環炭素原子に結合するときは、それらが一緒になって基-O-(CH2)t-CR36R37-(CH2)l-O-、-(CH2)t-CR36R37-(CH2)l-、または-S-(CH2)t-CR36R37-(CH2)l-S-を形成してもよく、
ここで、
tおよびlは、独立に0、1、2、3、4または5であり、
R36およびR37は、独立に水素またはC1-6-アルキルである。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物であって、Bが
【化６】
2005537231.tif 000098
であり、AおよびR1は請求項１に定義した通りである化合物。
【請求項３】
請求項１に記載の化合物であって、Bが
【化７】
2005537231.tif 000099
である化合物。
【請求項４】
請求項１に記載の化合物であって、Bが
【化８】
2005537231.tif 000100
である化合物。
【請求項５】
請求項１に記載の化合物であって、Bが
【化９】
2005537231.tif 000101
であり、R38は請求項１に定義したとおりである化合物。
【請求項６】
請求項１または２に記載の化合物であって、R1が水素である化合物。
【請求項７】
請求項１、２または６の何れか１項に記載の化合物であって、Aが、原子価結合、-CH2-、または-CH2CH2-である化合物。
【請求項８】
請求項７に記載の化合物であって、Aが、-CH2-である化合物。
【請求項９】
先行する全請求項の何れか１項に記載の化合物であって、R2が水素である化合物。
【請求項１０】
先行する全請求項の何れか１項に記載の化合物であって、Zが、
【化１０】
2005537231.tif 000102
であり、R7およびR8は請求項１で定義した通りである化合物。
【請求項１１】
請求項１０に記載の化合物であって、Zが、
【化１１】
2005537231.tif 000103
である化合物。
【請求項１２】
先行する全請求項の何れか１項に記載の化合物であって、Xが、
【化１２】
2005537231.tif 000104
であり、ここで、ｑは0または1であり、ｒは0または1であり、ｓは0、1または2であり、R12およびR13は独立に水素またはC1-6-アルキルである化合物。
【請求項１３】
請求項１２に記載の化合物であって、Xが、
-C(O)NH-、-C(O)NHCH2-、-C(O)NHCH(CH3)-、-C(O)NHCH2CH2-、-C(O)CH2-、-C(O)CH=CH-、-(CH2)s-、-C(O)-、-C(O)O-、または-NHC(O)-であり、ｓが0または1である化合物。
【請求項１４】
請求項１３に記載の化合物であって、Xが、
-C(O)NH-、-C(O)NHCH2-、-C(O)NHCH(CH3)-、-C(O)NHCH2CH2-、-C(O)CH2-、-CH2-、-C(O)-、または-NHC(O)-である化合物。
【請求項１５】
請求項１４に記載の化合物であって、Xが-C(O)NH-である化合物。
【請求項１６】
先行する全請求項の何れか１項に記載の化合物であって、Dが、
【化１３】
2005537231.tif 000105
であり、ここでのR15、R16、R17、R18、R19およびR20は請求項１で定義した通りである化合物。
【請求項１７】
請求項１６に記載の化合物であって、Dが、
【化１４】
2005537231.tif 000106
であり、ここでのR15、R16およびR17は請求項１で定義した通りである化合物。
【請求項１８】
請求項１６または１７に記載の化合物であって、R15、R16およびR17が、独立に、水素、ハロゲン、-CN、-NO2、-CF3、-OCF3、-SCF3、C1-6-アルキル、C1-6-アルコキシ、-S-C1-6-アルキル、-C(O)OR21、-C(O)R21、-CH2OR21、-C(O)NR21R22、-S(O)2R21、-S(O)2CF3、-S(O)2NR21R22、C3-8-シクロアルキル、もしくはアリールであるか、
またはR15、R16およびR17のうちの二つは、隣接する位置に置かれるとき、それらが一緒になって、ブリッジ -(CR23R24)a-O-(CR25R26)c-O-を形成し、ここでのR21およびR22は独立に水素またはC1-6-アルキルであり、ａ、ｃ、R23、R24、R25およびR26は請求項１において定義した通りである。
【請求項１９】
請求項１８に記載の化合物であってR15、R16およびR17が、独立に、水素、-S-C1-6-アルキル、ハロゲン、-CN、-CF3、-OCF3、もしくはC1-6-アルコキシであるか、またはここで隣接位置にある置換基の二つが、ブリッジ -CF2-O-CF2-O-を形成する化合物。
【請求項２０】
請求項１９に記載の化合物であって、R15、R16およびR17が、独立に、水素、ハロゲン、-S-CH3、-CF3、もしくは-OCF3であるか、またはここで隣接位置にある置換基の二つが、ブリッジ -CF2-O-CF2-O-を形成する化合物。
【請求項２１】
先行する全請求項の何れか１項に記載の化合物であって、Eが、
【化１５】
2005537231.tif 000107
であり、ここでのR27、R28、R29、R30およびR31は請求項１に定義した通りである化合物。
【請求項２２】
請求項２１に記載の化合物であって、Eが、
【化１６】
2005537231.tif 000108
であり、ここでのR27およびR28は請求項１に定義した通りである化合物。
【請求項２３】
請求項２１または２２に記載の化合物であって、R27およびR28が、独立に、水素、C1-6-アルキル、C3-8-シクロアルキル、C4-8-シクロアルケニルまたはフェニルである化合物。
【請求項２４】
請求項２３に記載の化合物であって、R27が水素であり、R28がC1-6-アルキル、C4-8-シクロアルケニルまたはC3-8-シクロアルキルである化合物。
【請求項２５】
請求項２１に記載の化合物であって、Eが、
【化１７】
2005537231.tif 000109
であり、ここでのR29、R30およびR31は請求項１に定義した通りである化合物。
【請求項２６】
請求項２５に記載の化合物であって、Eが、
【化１８】
2005537231.tif 000110
であり、ここでのR29、R30およびR31は請求項１に定義した通りである化合物。
【請求項２７】
請求項２５または２６に記載の化合物であって、R29、R30およびR31が独立に、
・水素、-CHF2、-CF3、-OCF3、-OCHF2、-OCH2CF3、-OCF2CHF2、
-SCF3、-OR34、-NR34R35、-SR34、-S(O)R34、-S(O)2R34、-C(O)NR34R35、
-OC(O)NR34R35、-NR34C(O)R35、-OCH2C(O)NR34R35、-C(O)R34、または
-C(O)OR34
・C1-6-アルキル、C2-6アルケニルまたはC2-6-アルキニル［これらは任意にハロゲン、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR34、-NR34R35およびC1-6-アルキルから選択される一以上の置換基で置換されてもよい］、
・C3-8-シクロアルキル、またはC4-8-シクロアルケニル［任意に、ハロゲン、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR34、-NR34R35およびC1-6-アルキルから選択される一以上の置換基で置換されてもよい］であり、
ここでのR34およびR35は、独立に水素、C1-6-アルキルまたはアリールであるか、
またはR34およびR35は、同じ窒素原子に結合するときは、これらは該窒素原子と一緒になって、任意に窒素、酸素および硫黄から選択される一つまたは二つの更なるヘテロ原子を含み、且つ任意に一つまたは二つの二重結合を含む3〜8員のヘテロ環を形成してもよい化合物。
【請求項２８】
請求項２７に記載の化合物であって、R29、R30およびR31が独立に、
・水素、C1-6-アルコキシ、-CF3、-OCF3、-NR34R35［ここで、R34およびR35は請求項１において定義したとおりである］、または
・C1-6-アルキル、C3-8シクロアルキルまたはC4-8-シクロアルケニル［これらは請求項１で定義したように任意に置換される］
である化合物。
【請求項２９】
請求項２７に記載の化合物であって、R29、R30およびR31が独立に、
・水素、または
・C1-6-アルキル、C3-8シクロアルキルまたはC4-8-シクロアルケニル［これらは請求項１で定義したように任意に置換される］
である化合物。
【請求項３０】
請求項２９に記載の化合物であって、R29、R30およびR31が独立に、水素、C1-6-アルキル、C3-8シクロアルキル、またはC4-8-シクロアルケニルである化合物。
【請求項３１】
請求項３０に記載の化合物であって、R29およびR31の両者が水素であり、R30がC1-6-アルキル、C3-8シクロアルキル、またはC4-8-シクロアルケニルである化合物。
【請求項３２】
請求項３１に記載の化合物であって、R29およびR31の両者が水素であり、R30がC1-6-アルキルである化合物。
【請求項３３】
下記一般式（Ia）の請求項１に記載の化合物：
【化１９】
2005537231.tif 000111
ここで、R1、R2、R3、R4、R7、R8、X、D、およびEは、請求項１または先行する全請求項の何れか１項において定義した通りである。
【請求項３３】
請求項３３に記載の化合物であって、R1、R2、R3、R4、R7およびR8が水素である化合物。
【請求項３５】
下記一般式（Ib）の請求項１に記載の化合物：
【化２０】
2005537231.tif 000112
ここで、R2、R7、R8、X、D、およびEは、請求項１または先行する全請求項の何れか１項において定義した通りである。
【請求項３６】
下記一般式（Ic）の請求項１に記載の化合物：
【化２１】
2005537231.tif 000113
ここで、R2、R7、R8、X、D、およびEは、請求項１または先行する全請求項の何れか１項において定義した通りである。
【請求項３７】
下記一般式（Id）の請求項１に記載の化合物：
【化２２】
2005537231.tif 000114
ここで、R2、R7、R8、R38、X、D、およびEは、請求項１または先行する全請求項の何れか１項において定義した通りである。
【請求項３８】
請求項３５〜３７の何れか１項に記載の化合物であって、R2、R7およびR8が水素である化合物。
【請求項３９】
請求項１〜２２または請求項３３〜３８の何れか１項に記載の化合物であって、Eが
【化２３】
2005537231.tif 000115
である化合物。
【請求項４０】
請求項３７に記載の化合物であって、Xが-C(O)NHCH(CH3)-であり、Eが
【化２４】
2005537231.tif 000116
である化合物。
【請求項４１】
請求項４０に記載の化合物であって、-X-Dが
【化２５】
2005537231.tif 000117
である化合物。
【請求項４２】
下記から選択される化合物、並びにその何れかの光学異性体もしくは幾何異性体、互変異性体、これらの混合部物、またはその薬学的に許容可能な塩：
3-[1(R)-(4-ブロモフェニル)エチル]-1-(4-tert-ブチルシクロヘキシル)-1-4-[1-(R)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素,
3-[1(R)-(4-ブロモフェニル)エチル]-1-(4-tert-ブチルシクロヘキシル)-1-4-[1-(S)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素,
3-[1(S)-(4-ブロモフェニル)エチル]-1-(4-tert-ブチルシクロヘキシル)-1-4-[1-(R)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素,
3-[1(S)-(4-ブロモフェニル)エチル]-1-(4-tert-ブチルシクロヘキシル)-1-4-[1-(S)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素,
3-[1(R)-(4-クロロフェニル)エチル]-1-(4-tert-ブチルシクロヘキシル)-1-4-[1-(R)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素,
3-[1(R)-(4-クロロフェニル)エチル]-1-(4-tert-ブチルシクロヘキシル)-1-4-[1-(S)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素,
3-[1(S)-(4-クロロフェニル)エチル]-1-(4-tert-ブチルシクロヘキシル)-1-4-[1-(R)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素,
3-[1(S)-(4-クロロフェニル)エチル]-1-(4-tert-ブチルシクロヘキシル)-1-4-[1-(S)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素,
3-[1(S)-(4-クロロフェニル)エチル]-1-(4-シクロヘキシルフェニル)-1-4-[1-(S)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素,
3-[1(S)-(4-クロロフェニル)エチル]-1-(4-シクロヘキシルフェニル)-1-4-[1-(R)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素,
3-[1(R)-(4-クロロフェニル)エチル]-1-(4-シクロヘキシルフェニル)-1-4-[1-(S)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素, 
3-[1(R)-(4-クロロフェニル)エチル]-1-(4-シクロヘキシルフェニル)-1-4-[1-(R)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素,
3-[1(S)-(4-ブロモフェニル)エチル]-1-(4-シクロヘキシルフェニル)-1-4-[1-(S)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素,
3-[1(S)-(4-ブロモフェニル)エチル]-1-(4-シクロヘキシルフェニル)-1-4-[1-(R)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素,
3-[1(R)-(4-ブロモフェニル)エチル]-1-(4-シクロヘキシルフェニル)-1-4-[1-(S)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素、および
3-[1(R)-(4-ブロモフェニル)エチル]-1-(4-シクロヘキシルフェニル)-1-4-[1-(R)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素。
【請求項４３】
下記から選択される化合物、並びにその何れかの光学異性体もしくは幾何異性体、互変異性体、これらの混合部物、またはその薬学的に許容可能な塩：
3-[1(S)-(4-ブロモフェニル)エチル]-1-(4-シクロヘキサ-1-エニルフェニル)-1-4-[1-(S)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素、
3-[1(S)-(4-ブロモフェニル)エチル]-1-(4-シクロヘキサ-1-エニルフェニル)-1-4-[1-(R)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素、
3-[1(R)-(4-ブロモフェニル)エチル]-1-(4-シクロヘキサ-1-エニルフェニル)-1-4-[1-(S)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素、
3-[1(R)-(4-ブロモフェニル)エチル]-1-(4-シクロヘキサ-1-エニルフェニル)-1-4-[1-(R)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素、
3-[1(S)-(4-クロロフェニル)エチル]-1-(4-シクロヘキサ-1-エニルフェニル)-1-4-[1-(S)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素、
3-[1(S)-(4-クロロフェニル)エチル]-1-(4-シクロヘキサ-1-エニルフェニル)-1-4-[1-(R)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素、
3-[1(R)-(4-クロロフェニル)エチル]-1-(4-シクロヘキサ-1-エニルフェニル)-1-4-[1-(S)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素、および
3-[1(R)-(4-クロロフェニル)エチル]-1-(4-シクロヘキサ-1-エニルフェニル)-1-4-[1-(R)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素。
【請求項４４】
先行する全請求項の何れか１項に記載の化合物であって、明細書に記載のグルカゴン結合アッセイ（I）およびグルカゴン結合アッセイ（II）によって測定したときに、5μM以下のIC50値を有する化合物。
【請求項４５】
請求項４４に記載の化合物であって、明細書に記載のグルカゴン結合アッセイ（I）およびグルカゴン結合アッセイ（II）によって測定したときに、1 μM未満、好ましくは500 nM未満、更に好ましくは100 nM未満のIC50値を有する化合物。
【請求項４６】
先行する全請求項の何れか1項に記載の化合物であって、高脂血症、IGT、２型糖尿病、１型糖尿病および肥満からなる群から選択される適用症の治療のために有用な薬剤である化合物。
【請求項４７】
医薬として使用するための、請求項１〜４６の何れか１項に記載の化合物。
【請求項４８】
一以上の薬学的に許容可能なキャリアまたは賦形剤と共に、活性成分として、請求項１〜４６の何れか１項に記載の少なくとも一つの化合物を含有する薬学的組成物。
【請求項４９】
単位投与量形態の請求項４８に記載の薬学的組成物であって、約0.05mg〜約1000mg、好ましくは約0.1mg〜約500mg、特に好ましくは約0.5mg〜約200mgの請求項１〜４６の何れか１項に記載の化合物を含有する薬学的組成物。
【請求項５０】
請求項１〜４６の何れか１項に記載の化合物の使用であって、グルカゴンンアンタゴニスト作用が有用である障害または疾患を治療および／または予防する医薬を調製するための使用。
【請求項５１】
請求項１〜４６の何れか１項に記載の化合物の使用であって、グルカゴンに媒介される障害および疾患を治療および／または予防する医薬を調製するための使用。
【請求項５２】
請求項１〜４６の何れか１項に記載の化合物の使用であって、高脂血症を治療および／または予防する医薬を調製するための使用。
【請求項５３】
請求項１〜４６の何れか１項に記載の化合物の使用であって、哺乳動物における血糖を低下させる医薬を調製するための使用。
【請求項５４】
請求項１〜４６の何れか１項に記載の化合物の使用であって、IGTを治療／および予防する医薬を製造するための使用。
【請求項５５】
請求項１〜４６の何れか１項に記載の化合物の使用であって、２型糖尿病を治療および／または予防する医薬を製造するための使用。
【請求項５６】
請求項５５に記載の使用であって、IGTから２型糖尿病への進行を遅延または防止する医薬を製造するための使用。
【請求項５７】
請求項５５に記載の使用であって、非インスリン要求性２型糖尿病からインスリン要求性２型糖尿病への進行を遅延または防止する医薬を製造するための使用。
【請求項５８】
請求項１〜４６の何れか１項に記載の化合物の使用であって、１型糖尿病を治療および／または予防する医薬を製造するための使用。
【請求項５９】
請求項１〜４６の何れか１項に記載の化合物の使用であって、肥満を治療および／または予防する医薬を製造するための使用。
【請求項６０】
請求項５０〜６１の何れか１項に記載の使用であって、更なる抗糖尿病剤での治療を含んでなる治療計画における使用。
【請求項６１】
請求項５０〜６１の何れか１項に記載の使用であって、更なる抗肥満剤での治療を含んでなる治療計画における使用。
【請求項６２】
請求項５０〜６１の何れか１項に記載の使用であって、更なる血圧降下薬での治療を含んでなる治療計画における使用。
【請求項６３】
グルカゴンアンタゴニスト作用が有益である障害または疾患を治療および／または予防する方法であって、それを必要としている患者に対して、有効量の請求項１〜４６の何れか1項に記載の化合物、または請求項４８もしくは４９に記載の薬学的組成物を投与することを含んでなる方法。
【請求項６４】
請求項６３に記載の方法であって、前記化合物の有効量が、１日当り約0.05mg〜約2000mg、好ましくは約0.1mg〜約1000mg、特に好ましくは約0.5mg〜約500mgである方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の分野】
【０００１】
本発明は、グルカゴン受容体上において、グルカゴンペプチドホルモンの作用に拮抗するように作用する薬剤に関する。更に特定すれば、本発明はグルカゴンアンタゴニストまたは逆アゴニストに関する。
【発明の背景】
【０００２】
グルカゴンは、インスリンと協働して、血中グルコース量のホメオスタシス調節を媒介する重要なホルモン物質である。グルカゴンは、血中グルコースレベルが低下したときに、主に一定の細胞（殆どは肝細胞）を刺激してグルコースを放出させることにより作用する。このグルカゴンの作用はインスリンの作用とは逆であり、インスリンは、血中グルコースレベルが上昇したときに細胞を刺激してグルコースを摂取および蓄積する。グルカゴンおよびインスリンは両者共にペプチドホルモンである。
【０００３】
グルカゴンは、膵臓のα島細胞で産生され、インスリンはβ島細胞で産生される。糖尿病は、グルコース代謝に共通した障害である。この疾患は高血糖を特徴とし、インスリン依存性形態の１型糖尿病、またはインスリン非依存性を特徴とする２型糖尿病に分類される。１型糖尿病の患者は、高血糖および低インスリン性であり、この形態の疾患の慣用的治療法はインスリンを与えることである。しかし、１型または２型糖尿病の幾らかの患者では、絶対的または相対的に上昇したグルカゴンレベルが高血糖状態に寄与することが示されている。健康な対照動物、並びに１型および２型糖尿病のモデル動物の両者において、選択的且つ特異的抗体を用いた循環グルカゴンの除去により、血糖レベルの低下がもたらされた（Brand et al., Diabetologia 37, 985(1994)；Diabetes 43, [suppl 1], 172A (1994)；Am. J. Physiol. 269, E469-E477 (1995)；Diabetes 44 [suppl 1], 134A (1995)；Diabetes 45, 1076 (1996)）。これらの研究は、グルカゴンの抑制またはグルカゴンに拮抗する作用が、糖尿病患者における高血糖の従来の治療法に対する有用な補助となり得ることを示唆している。グルカゴンの作用は、アンタゴニストまたは逆アゴニスト、即ち、グルカゴンに誘起された応答を阻害し、または妨げる物質を与えることによって抑制することができる。このアンタゴニストは本質的にペプチド性または非ペプチド性であることができる。
【０００４】
天然のグルカゴンは、下記の配列を有する29アミノ酸からなるペプチドである：
His-Ser-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Ser-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Met-Asn-Thr-OH
グルカゴンは、その受容体に結合してこれを活性化することによりその作用を発揮するが、該受容体は、7回膜貫通Ｇタンパク質結合受容体ファミリーのグルカゴン-セクレチン分枝の一部である（Jelinek et al., Science 259, 1614, (1993)）。当該受容体は、アデニルシクラーゼ・セカンドメッセンジャー系を活性化することによって機能し、その結果はcAMPレベルの増大である。
【０００５】
幾つかの刊行物が、グルカゴンアンタゴニストとして作用すると述べられたペプチド類を開示している。おそらく、最も完全に特徴付けされたアンタゴニストは、DesHis1[Glu9]-グルカゴンアミドである（Unson et al.，peptides 10，1171(1989)；Post et al.，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 90，1662(1993)）。他のアンタゴニストは、DesHis1, Phe6[Glu9]-グルカゴンアミド（Azizh et al.，Bioorganic & Medicinal Chem．Lett．16,1849(1995)）およびNLeu9、Ala11,16-グルカゴンアミドである（Unson et al.，J．Biol．Chem．269(17)，12548(1994)）。
【０００６】
ペプチドホルモン類のペプチドアンタゴニストは、非常に強力であることが多い。しかし、それらは生理学的酵素による分解およびインビボでの分布が乏しいため、一般には経口的に利用可能でないことが知られている。従って、ペプチドホルモン類の経口的に利用可能な非ペプチドアンタゴニストが一般に好ましい。この非ペプチドグルカゴンアンタゴニストの中で、キノキサリン誘導体である2-スチリル-3-[3-(ジメチルアミノ)プロピルメチルアミノ]-6,7-ジクロロキノキサリンは、ラット肝臓受容体からグルカゴンを置換することが分った（Collins，J．L．et al.，Bioorganic、およびMedicinal Chemistry Letters 2(9)：915-918(1992)）。WO 94/14426(The Welcome Foundation Limited)は、スキリン(skyrin)、即ち、一対の連結された9,10-アントラセンジオン基を含む天然物およびその合成類縁体の、グルカゴンアンタゴニストとしての使用を開示している。米国特許第4,359,474号(Sandoz)は、1-フェニルピラゾール誘導体のグルカゴン阻害特性を開示している。米国特許第4,374,130号(Sandoz)は、グルカゴン阻害剤としての置換ジシラシクロヘキサン(disilacyclohexanes)を開示している。WO 98/04528(Bayer Corporation)は、グルカゴンアンタゴニストとしての置換ピリジンおよびビフェニル類を開示している。米国特許第5,776,954号(Merck & Co.、Inc.)は、グルカゴンアンタゴニストとしての置換ピリジルピロールを開示しており、またWO 98/21957、WO 98/22108、WO 98/22109および米国特許第5,880,139号(Merck & Co.，Inc.)は、グルカゴンアンタゴニストとしての2,4-ジアリール-5-ピリジルイミダゾールを開示している。更に、WO 97/16442および米国特許第5,837,719号(Merck & Co.、Inc.)は、グルカゴンアンタゴニストとしての2,5-置換のアリールピロールを開示している。WO 98/24780、WO 98/24782、WO 99/24404およびWO 99/32448(Amgen Inc.)は、置換ピリミジノンおよびピリドン化合物、並びに置換ピリミジン化合物をそれぞれ開示しており、これらはグルカゴンアンタゴニスト活性を有していると述べられている。Madsen et al.(J．Med．Chem．1998(41) 5151-7)は、一連の2-(ベンズ-イミダゾール-2-イルチオ)-l-(3,4-ジヒドロキシフェニル)-1-エタノンを、拮抗的ヒトグルカゴン受容体アンタゴニストとして開示している。WO 99/01423およびWO 00/39088(Novo Nordisk A/S)は、異なる一連のアルキリデンヒドラジドを、グルカゴンアンタゴニスト／逆アゴニストとして開示している。WO 00/69810、WO 02/00612、WO 02/4444、WO 02/40445、およびWO 02/40446(Novo Nordisk A/S)は、更なる種類のグルカゴンアンタゴニストを開示している。
【０００７】
これら公知のグルカゴンアンタゴニストは、本発明の化合物とは構造的に異なっている。
【定義】
【０００８】
以下は、本発明の化合物を説明するために使用される用語の詳細な定義である：
「ハロゲン」は、F、Cl、BrおよびIからなる群から選択される原子を意味する。
【０００９】
ここで使用する「C1-6-アルキル」の用語は、1〜6の炭素原子を有する分岐鎖もしくは直鎖の飽和炭化水素基を表す。代表的な例には、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、n-ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、tert-ペンチル、n-ヘキシル、イソヘキシル等が含まれるが、これらに限定されない。
【００１０】
ここで使用する「C2-6-アルケニル」の用語は、2〜6の炭素原子および少なくとも一つの二重結合を有する、分岐鎖若しくは直鎖の炭化水素基を表す。このような基の例には、ビニル、1-プロペニル、2-プロペニル、イソ-プロペニル、1,3-ブタジエニル、1-ブテニル、2-ブテニル、3-ブテニル、2-メチル-1-プロペニル、1-ペンテニル、2-ペンテニル、3-ペンテニル、4-ペンテニル、3-メチル-2-ブテニル、1-ヘキセニル、2ヘキセニル、3-ヘキセニル、2,4-ヘキサジエニル、5-ヘキセニル等が含まれるが、これらに限定されない。
【００１１】
ここで用いる「C2-6-アルキニル」の用語は、2〜6の炭素原子および少なくとも一つの三重結合を有する、分岐鎖もしくは直鎖の炭化水素基を表す。このような基の例には、 エチニル、1-プロピニル、2-プロピニル、1-ブチニル、2-ブチニル、3-ブチニル、1-ペンチニル、2-ペンチニル、3-ペンチニル、4-ペンチニル、1-ヘキシニル、2-ヘキシニル、3-ヘキシニル、4-ヘキシニル、5-ヘキシニル、2,4-ヘキサジイニル等が含まれるが、これらに限定されない。
【００１２】
ここで用いる「C1-6-アルコキシ」の用語は、-O-C1-6-アルキルの基を意味し、ここでC1-6-アルキルは上記で定義した通りである。代表的な例は、メトキシ、エトキシ、n-プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、sec-ブトキシ、tert-ブトキシ、ペントキシ、イソペントキシ、ヘキソキシ、イソヘキソキシ等である。
【００１３】
ここで用いる「C3-8-シクロアルキル」の用語は、3〜8の炭素原子を有する飽和の炭素環基を表す。代表的な例は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル等である。
【００１４】
ここで使用する「C4-8-シクロアルケニル」の用語は、4〜８の炭素原子を有し、且つ1または2の二重結合を含む非芳香族性の炭素環基を表す。代表的な例は、1-シクロペンテニル、2-シクロペンテニル、3-シクロペンテニル、1-シクロヘキセニル、2-シクロヘキセニル、3-シクロヘキセニル、2-シクロヘプテニル、3-シクロヘプテニル、2-シクロオクテニル、1,4-シクロオクタジエニル等である。
【００１５】
ここで用いる「ヘテロシクリル」の用語は、窒素、酸素および硫黄から選択される一以上のヘテロ原子を含み且つ任意に1または2の二重結合を含む、3〜10員の非芳香族環状基を表す。代表的な例は、ピロリジニル、ピペリジル、ピペラジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、アジリジニル、テトラヒドロフラニル等である。
【００１６】
ここで用いる「アリール」の用語は、芳香族性の炭素環系、例えば6員の単環系、並びに9〜14員の二環および三環系の芳香族炭素環系を含めることを意図している。代表的な例は、フェニル、ビフェニリル、ナフチル、アントラセニル、フェナントレニル、フルオレニル、インデニル、アズレニル等である。アリールはまた、上記で列記した環系の部分的に水素化された誘導体をも含めることを意図している。このような部分的に水素化された誘導体の非限定的な例は、1,2,3,4-テトラヒドロナフチル、1,4-ジヒドロナフチル等である。
【００１７】
ここで用いる「アリーレン」の用語は、二価の芳香族炭素環系、例えば6員の単環系、並びに9〜14員の二環および三環系の二価の芳香族炭素環系を含めることを意図している。代表的な例は、フェニレン、ビフェニリレン、ナフチレン、アントラセニレン、フェナントレニレン、フルオレニレン、インデニレン、アズレニレン等である。アリーレンもまた、上記で列記した環系の部分的に水素化された誘導体を含めることを意図している。このような部分的に水素化された誘導体の非限定的な例は、1,2,3,4-テトラヒドロナフチレン、1,4-ジヒドロナフチレン等である。
【００１８】
ここで用いる「アリールオキシ」の用語は、-O-アリール基を意味し、ここでのアリールは上記で定義した通りである。
【００１９】
ここで用いる「アロイル」の用語は、-C(O)-アリール基を意味し、ここでのアリールは上記で定義した通りである。
【００２０】
ここで用いる「ヘテロアリール」の用語は、窒素、酸素および硫黄から選択される一以上のヘテロ原子を含む芳香族のヘテロ環系、例えば、窒素、酸素および硫黄から選択される一以上のヘテロ原子を含む5〜7員の単環、並びに8〜14員の二環系および三環系の芳香族へテロ環系を含めることを意図している。代表的な例は、フリル、チエニル、ピロリル、オキサゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、1,2,3-トリアゾリル、1,2,4-トリアゾリル、ピラニル、ピリジル、ピリダニジル、ピリミジニル、ピラジニル、1,2,3-トリアジニル、1,2,4-トリアジニル、1,3,5-トリアジニル、1,2,3-オキサジアゾリル、1,2,4-オキサジアゾリル、1,2,5-オキサジアゾリル、1,3,4-オキサジアゾリル、1,2,3-チアジアゾリル、1,2,4-チアジアゾリル、1,2,5-チアジアゾリル、1,3,4-チアジアゾリル、テトラゾリル、チアジアジニル、インドリル、イソインドリル、ベンゾフリル、ベンゾチエニル、インダゾリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾイソチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、プリニル、キナゾリニル、キノリジニル、キノリニル、イソキノリニル、キノキサリニル、ナフチリジニル、プテリジニル、カルバゾリル、アゼピニル、ジアゼピニル、アクリジニル等である。ヘテロアリールはまた、上記に列記した環系の部分的に水素化された誘導体を含めることを意図している。このような部分的に水素化された誘導体の非限定的な例は、2,3-ジヒドロベンゾフラニル、ピロリニル、ピラゾリニル、インドリニル、オキサゾリジニル、オキサゾリニル、オキサゼピニル等である。
【００２１】
「アリールC1-6-アルキル」、「ヘテロアリールC1-6-アルキル」、「アリール-C2-6-アルケニル」等は、上記で定義したアリール若しくはヘテロアリールによって置換された、上記で定義したC1-6-アルキルまたはC2-4-アルケニル、例えば、
【化２６】
2005537231.tif 000003
【００２２】
を意味する。
【００２３】
ここで用いる「任意に置換された」の用語は、問題の基が非置換であるか、または特定された一以上の置換基で置換されていることを意味する。問題の基が二以上の置換基で置換されるとき、これらの置換基は同じであっても異なっていてもよい。
【００２４】
上記で定義した一定の用語は、当該構造式中に二回以上出てくることがあり、このような場合、夫々の用語は他から独立して定義されるべきものである。
【００２５】
更に、「独立に…である」および「…から独立に選択され」の用語を用いるとき、それは、問題の基が同じでもよく、異なってもよいと理解されるべきものである。
【発明の説明】
【００２６】
本発明は、異化に開示される一般式（I）の化合物芽、グルカゴン受容体に対する高い親和性を示し、グルカゴンの作用に拮抗するとの予測しなかった観察に基づいている。
【００２７】
従って、本発明は、下記一般式（I）の化合物、並びにその何れかのジアステレオマー、エナンチオマーまたは互変異性体およびこれらを含む混合物、またはその薬学的に許容可能な塩に関する：
【化２７】
2005537231.tif 000004
【００２８】
ここで、
R2は、水素またはC1-6-アルキルであり、
Bは、
【化２８】
2005537231.tif 000005
【００２９】
であり、
R38は、水素、-S(=O)2-C1-6-アルキル、または-C(=O)-C1-6-アルキルであり、
Aは、原子価結合、-(CR3R4)-、-(CR3R4)(CR5R6)-であり、
R1、R3、R4、R5、およびR6は、独立に水素、またはC1-6-アルキルであり、
Zは、アリーレンであるか、または窒素、酸素および硫黄から選択される1〜2のヘテロ原子を含む5〜6員のヘテロ芳香族環から誘導される二価の基であり、これはハロゲン、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR9、-NR9R10およびC1-6-アルキルから選択される一つまたは二つの基R7およびR8で任意に置換されてもよく、ここでのR9およびR10は独立に水素またはC1-6-アルキルであり、
Xは、
【化２９】
2005537231.tif 000006
【００３０】
であり、ここで、
rは、0または1であり、
qおよびsは、独立に0、1、2、または3であり、
R11、R12、R13、およびR14は、独立に水素、またはC1-6-アルキルであり、
Dは、
【化３０】
2005537231.tif 000007
【００３１】
であり、
ここで、R15、R16、R17、およびR18は、独立に
・水素、ハロゲン、-CN、-CH2CN、-CHF2、-CF3、-OCF3、-OCHF2、
-OCH2CF3、-OCF2CHF2、-S(O)2CF3、-SCF3、-NO2、-OR21、
-NR21R22、-SR21、-NR21S(O)2R22、-S(O)2NR21R22、-S(O)NR21R22、
-S(O)R21、-S(O)2R21、-C(O)NR21R22、-OC(O)NR21R22、-NR21C(O)R22、
-CH2C(O)NR21R22、-OCH2C(O)NR21R22、-CH2OR21、-CH2NR21R22、
-OC(O)R21、-C(O)R21 または-C(O)OR21、
・C1-6-アルキル、C2-6-アルケニルまたはC2-6-アルキニル、
（これは任意に、ハロゲン、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR21、-NR21R22
およびC1-6-アルキルから選択される一以上の置換基で置換されてもよい）
・C3-8-シクロアルキル、C4-8-シクロアルケニル、ヘテロシクリル、C3-8-シクロ
アルキル-C1-6-アルキル、C3-8-シクロアルキル-C1-6-アルコキシ、C3-8-シク
ロアルキルオキシ、C3-8-シクロアルキル-C1-6-アルキルチオ、C3-8-シクロアル
キルチオ、C3-8-シクロアルキル-C2-6-アルケニル、C3-8-シクロアルキル-C2-6-
アルキニル、C4-8-シクロアルケニル-C1-6-アルキル、C4-8-シクロアルケニ
ル-C2-6-アルケニル、C4-8-シクロアルケニル-C2-6-アルキニル、
へテロシクリル-C1-6-アルキル、ヘテロシクリル-C2-6-アルケニル、ヘテロシ
クリル-C2-6-アルキニル、アリール、アリールオキシ、アリールオキシカルボ
ニル、アロイル、アリール-C1-6-アルコキシ、アリール-C1-6-アルキル、
アリール-C2-6-アルケニル、アリール-C2-6-アルキニル、ヘテロアリール、
ヘテロアリール-C1-6-アルキル、ヘテロアリール-C2-6-アルケニル、または
ヘテロアリール-C2-4-アルキニル（その環状部分は任意に、ハロゲン、-CN、
-CF3、-OCF3、-NO2、-OR21、-NR21R22およびC1-6-アルキルから選択される
一以上の置換基で置換されてもよい）
ここで、R21およびR22は、独立に水素、C1-6-アルキルまたはアリールで
あるか、
またはR21およびR22は、これらが同じ窒素原子に結合するときは、該窒素原子
と一緒になって、任意に窒素、酸素および硫黄から選択される一つまたは二つの
更なるヘテロ原子を含み、且つ任意に一つまたは二つの二重結合を含む3〜8員の
ヘテロ環を形成してもよい：
であるか、またはR15〜R18のうちの二つは、隣接する位置に置かれるときは、それらが一緒になってブリッジ -(CR23R24)a-O-(CR25R26)c-O-を形成し、
ここで、
aは、0、1、または2であり、
cは、1または2であり、
R23、R24、R25およびR26は、独立に、水素、C1-6-アルキル、またはフッ素であり、
R19およびR20は、独立に、水素、C1-6-アルキル、C3-8-シクロアルキル、またはC3-8-シクロアルキル-C1-6-アルキルであり、
Eは、
【化３１】
2005537231.tif 000008
【００３２】
であり、ここで、
R27およびR28は、独立に、
水素、ハロゲン、-CN、-CF3、-OCF3、OR32、-NR32R33、C1-6-アルキル、C3-8-シクロアルキル、C4-8-シクロアルケニル、またはアリールであり、
ここでのアリール基は、任意に、ハロゲン、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR32、-NR32R33、およびC1-6-アルキルから選択される１以上の置換基で置換されてもよく、
ここで、
R32およびR33は、独立に水素、もしくはC1-6-アルキルであるか、
またはR32およびR33は、これらが同じ窒素原子に結合するときは、該窒素原子と一緒になって、任意に窒素、酸素および硫黄から選択される一つまたは二つの更なるヘテロ原子を含み、且つ任意に一つまたは二つの二重結合を含む3〜8員のヘテロ環を形成してもよく、
R29、R30およびR31は、独立に、
・水素、ハロゲン、-CHF2、-CF3、-OCF3、-OCHF2、-OCH2CF3、-OCF2CHF2、
-SCF3、-OR34、-NR34R35、-SR34、-S(O)R34、-S(O)2R34、-C(O)NR34R35、
-OC(O)NR34R35、-NR34C(O)R35、-OCH2C(O)NR34R35、-C(O)R34、または
-C(O)OR34
・C1-6-アルキル、C2-6アルケニルまたはC2-6-アルキニル［これらは任意にハロゲン、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR34、-NR34R35およびC1-6-アルキルから選択される一以上の置換基で置換されてもよい］、
・C3-8-シクロアルキル、C4-8-シクロアルケニル、ヘテロシクリル、C3-8-シクロアルキル-C1-6-アルキル、C3-8-シクロアルキル-C2-6-アルケニル、C3-8-シクロアルキル-C2-6-アルキニル、C4-8-シクロアルケニル-C1-6-アルキル、C4-8-シクロアルケニル-C2-6-アルケニル、C4-8-シクロアルケニル-C2-6-アルキニル、へテロシクリル-C1-6-アルキル、ヘテロシクリル-C2-6-アルケニル、ヘテロシクリル-C2-6-アルキニル、アリール、アリールオキシ、アロイル、アリール-C1-6-アルコキシ、アリール-C1-6-アルキル、アリール-C2-6-アルケニル、アリール-C2-6-アルキニル、ヘテロアリール、ヘテロアリール-C1-6-アルキル、ヘテロアリール-C2-6-アルケニル、またはヘテロアリール-C2-4-アルキニル、［その環部分は任意に、ハロゲン、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR34、-NR34R35およびC1-6-アルキルから選択される一以上の置換基で置換されてもよい］であり、
ここでのR34およびR35は、独立に水素、C1-6-アルキルまたはアリールであるか、
またはR34およびR35は、同じ窒素原子に結合するときは、これらは該窒素原子と一緒になって、任意に窒素、酸素および硫黄から選択される一つまたは二つの更なるヘテロ原子を含み且つ任意に一つまたは二つの二重結合を含む3〜8員のヘテロ環を形成してもよく、
または基R29、R30およびR31のうちの二つは、同じ環炭素原子または異なる環炭素原子に結合するときは、それらが一緒になって基-O-(CH2)t-CR36R37-(CH2)l-O-、-(CH2)t-CR36R37-(CH2)l-、または-S-(CH2)t-CR36R37-(CH2)l-S-を形成してもよく、
ここで、
tおよびlは、独立に0、1、2、3、4または5であり、
R36およびR37は、独立に水素またはC1-6-アルキルである。
【００３３】
一つの実施形態において、Bは
【化３２】
2005537231.tif 000009
【００３４】
であり、ここでのAおよびR1は式（I）において定義した通りである。
【００３５】
更なる実施形態において、Aは、原子価結合、-CH2-または-CH2CH2-であり、例えばAは-CH2-である。
【００３６】
更なる実施形態において、R1は水素である。
【００３７】
もう一つの実施形態において、Bは
【化３３】
2005537231.tif 000010
【００３８】
である。
【００３９】
更にもう一つの実施形態において、Bは
【化３４】
2005537231.tif 000011
【００４０】
である。
【００４１】
更にもう一つの実施形態において、Bは
【化３５】
2005537231.tif 000012
【００４２】
であり、R38は式（I）において定義したとおりである。
【００４３】
更なる実施形態において、R2は水素である。
【００４４】
もう一つの実施形態において、Zは
【化３６】
2005537231.tif 000013
【００４５】
であり、R7およびR8は式（I）において定義した通りである。
【００４６】
更にもう一つの実施形態において、Zは
【化３７】
2005537231.tif 000014
【００４７】
である。
【００４８】
更にもう一つの実施形態において、Xは
【化３８】
2005537231.tif 000015
【００４９】
であり、ここで、ｑは0または1であり、ｒは0または1であり、ｓは0、1または2であり、R12およびR13は独立に水素またはC1-6-アルキルである。
【００５０】
更にもう一つの実施形態では、Xは、-C(O)NH-、-C(O)NHCH2-、-C(O)NHCH(CH3)-、-C(O)NHCH2CH2-、-C(O)CH2-、-C(O)CH=CH-、-(CH2)s-、-C(O)-、-C(O)O-、または-NHC(O)-であり、ｓは0または1である。
【００５１】
更なる実施形態において、Xは、-C(O)NH-、-C(O)NHCH2-、-C(O)NHCH(CH3)-、-C(O)NHCH2CH2-、-C(O)CH2-、-CH2-、-C(O)-、または-NHC(O)-であり、例えば-C(O)NH-である。
【００５２】
もう一つの実施形態において、Dは
【化３９】
2005537231.tif 000016
【００５３】
であり、ここでのR15、R16、R17、R18、R19およびR20は式（I）において定義した通りである。
【００５４】
更にもう一つの実施形態において、Dは
【化４０】
2005537231.tif 000017
【００５５】
であり、ここでのR15、R16およびR17は式（I）において定義した通りである。
【００５６】
一つの実施形態において、R15、R16およびR17は独立に、水素、ハロゲン、-CN、-NO2、-CF3、-OCF3、-SCF3、C1-6-アルキル、C1-6-アルコキシ、-S-C1-6-アルキル、-C(O)OR21、-C(O)R21、-CH2OR21、-C(O)NR21R22、-S(O)2R21、-S(O)2CF3、-S(O)2NR21R22、C3-8-シクロアルキル、もしくはアリールであるか、
またはR15、R16およびR17のうちの二つは、隣接する位置に置かれるとき、それらが一緒になって、ブリッジ -(CR23R24)a-O-(CR25R26)c-O-を形成し、ここでのR21およびR22は独立に水素もしくはC1-6-アルキルであり、ａ、ｃ、R23、R24、R25およびR26は式（I）において定義した通りである。
【００５７】
もう一つの実施形態において、R15、R16およびR17は独立に、水素、-S-C1-6-アルキル、ハロゲン、-CN、-CF3、-OCF3、もしくはC1-6-アルコキシであるか、またはここで隣接位置にある置換基の二つが、ブリッジ -CF2-O-CF2-O-を形成する。
【００５８】
更にもう一つの実施形態において、R15、R16およびR17は独立に、水素、ハロゲン、-S-CH3、-CF3、もしくは-OCF3であるか、またはここで隣接位置にある置換基の二つが、ブリッジ -CF2-O-CF2-O-を形成する。
【００５９】
更なる実施形態において、Eは
【化４１】
2005537231.tif 000018
【００６０】
であり、ここでのR27、R28、R29、R30およびR31は式（I）において定義した通りである。
【００６１】
更なる実施形態において、Eは
【化４２】
2005537231.tif 000019
【００６２】
であり、ここでのR27およびR28は式（I）において定義した通りである。
【００６３】
その一つの実施形態において、R27およびR28は独立に、水素、C1-6-アルキル、C3-8-シクロアルキル、C4-8-シクロアルケニルまたはフェニルである。
【００６４】
そのもう一つの実施形態において、R27は水素であり、R28はC1-6-アルキル、C4-8-シクロアルケニルまたはC3-8-シクロアルキルである。
【００６５】
更にもう一つの実施形態において、Eは
【化４３】
2005537231.tif 000020
【００６６】
であり、ここでのR29、R30およびR31は式（I）において定義した通りである。
【００６７】
更にもう一つの実施形態において、Eは
【化４４】
2005537231.tif 000021
【００６８】
であり、ここでのR29、R30およびR31は式（I）において定義した通りである。
【００６９】
その一つの実施形態において、R29、R30およびR31は独立に、
・水素、-CHF2、-CF3、-OCF3、-OCHF2、-OCH2CF3、-OCF2CHF2、
-SCF3、-OR34、-NR34R35、-SR34、-S(O)R34、-S(O)2R34、-C(O)NR34R35、
-OC(O)NR34R35、-NR34C(O)R35、-OCH2C(O)NR34R35、-C(O)R34、または
-C(O)OR34
・C1-6-アルキル、C2-6アルケニルまたはC2-6-アルキニル［これらは任意にハロゲン、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR34、-NR34R35およびC1-6-アルキルから選択される一以上の置換基で置換されてもよい］、
・C3-8-シクロアルキル、またはC4-8-シクロアルケニル［これらは任意に、ハロゲン、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR34、-NR34R35およびC1-6-アルキルから選択される一以上の置換基で置換されてもよい］であり、
ここでのR34およびR35は、独立に水素、C1-6-アルキルまたはアリールであるか、
またはR34およびR35は、同じ窒素原子に結合するときは、該窒素原子と一緒になって、任意に窒素、酸素および硫黄から選択される一つまたは二つの更なるヘテロ原子を含み且つ任意に一つまたは二つの二重結合を含む3〜8員のヘテロ環を形成してもよい。
【００７０】
そのもう一つの実施形態において、R29、R30およびR31は独立に、
・水素、C1-6-アルコキシ、-CF3、-OCF3、-NR34R35［ここで、R34およびR35は式（I）において定義したとおりである］、または
・C1-6-アルキル、C3-8シクロアルキルまたはC4-8-シクロアルケニル［これらは式（I）において定義したように任意に置換される］
である。
【００７１】
その更にもう一つの実施形態において、R29、R30およびR31は独立に、
・水素、または
・C1-6-アルキル、C3-8シクロアルキルまたはC4-8-シクロアルケニル［これらは式（I）において定義したように任意に置換される］
である。
【００７２】
その更にもう一つの実施形態において、R29、R30およびR31は独立に、水素、C1-6-アルキル、C3-8シクロアルキル、またはC4-8-シクロアルケニルである。
【００７３】
その更にもう一つの実施形態において、R29およびR31は両者とも水素であり、R30はC1-6-アルキル、C3-8シクロアルキルまたはC4-8-シクロアルケニル（例えばC1-6-アルキル）である。
【００７４】
もう一つの実施形態において、本発明は、下記一般式（Ia）の化合物に関する：
【化４５】
2005537231.tif 000022
【００７５】
ここで、R1、R2、R3、R4、R7、R8、X、D、およびEは、式（I）について定義し、または上記の実施形態において定義した通りである。
【００７６】
その一つの実施形態において、R1、R2、R3、R4、R7およびR8が水素である。
【００７７】
もう一つの実施形態において、本発明は、下記一般式（Ib）の化合物に関する：
【化４６】
2005537231.tif 000023
【００７８】
ここで、R2、R7、R8、X、D、およびEは、式（I）について定義し、または上記の実施形態において定義した通りである。
【００７９】
更にもう一つの実施形態において、本発明は、下記一般式（Ic）の化合物に関する：
【化４７】
2005537231.tif 000024
【００８０】
ここで、R2、R7、R8、X、D、およびEは、式（I）について定義し、または先行上記の実施形態において定義した通りである。
【００８１】
更にもう一つの実施形態において、本発明は、一般式（Id）の化合物に関する：
【化４８】
2005537231.tif 000025
【００８２】
ここで、R2、R7、R8、R38、X、D、およびEは、、式（I）について定義し、または先行上記の実施形態において定義した通りである。
【００８３】
一つの実施形態において、式（Ia）、（Ib）、（Ic）および（Id）におけるR2、R7およびR8は水素である。
【００８４】
もう一つの実施形態において、Eは
【化４９】
2005537231.tif 000026
【００８５】
である。
【００８６】
式（Id）の一つの実施形態において、Xは-C(O)NHCH(CH3)-であり、Eは
【化５０】
2005537231.tif 000027
【００８７】
である。
【００８８】
式（Id）の更なる実施形態において、-X-Dは
【化５１】
2005537231.tif 000028
【００８９】
である。
【００９０】
更なる実施形態において、本発明は下記から選択される化合物、並びにその何れかの光学異性体もしくは幾何異性体、互変異性体、これらの混合部物、またはその薬学的に許容可能な塩に関する：
3-[1(R)-(4-ブロモフェニル)エチル]-1-(4-tert-ブチルシクロヘキシル)-1-4-[1-(R)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素,
3-[1(R)-(4-ブロモフェニル)エチル]-1-(4-tert-ブチルシクロヘキシル)-1-4-[1-(S)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素,
3-[1(S)-(4-ブロモフェニル)エチル]-1-(4-tert-ブチルシクロヘキシル)-1-4-[1-(R)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素,
3-[1(S)-(4-ブロモフェニル)エチル]-1-(4-tert-ブチルシクロヘキシル)-1-4-[1-(S)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素,
3-[1(R)-(4-クロロフェニル)エチル]-1-(4-tert-ブチルシクロヘキシル)-1-4-[1-(R)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素,
3-[1(R)-(4-クロロフェニル)エチル]-1-(4-tert-ブチルシクロヘキシル)-1-4-[1-(S)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素,
3-[1(S)-(4-クロロフェニル)エチル]-1-(4-tert-ブチルシクロヘキシル)-1-4-[1-(R)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素,
3-[1(S)-(4-クロロフェニル)エチル]-1-(4-tert-ブチルシクロヘキシル)-1-4-[1-(S)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素,
3-[1(S)-(4-クロロフェニル)エチル]-1-(4-シクロヘキシルフェニル)-1-4-[1-(S)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素,
3-[1(S)-(4-クロロフェニル)エチル]-1-(4-シクロヘキシルフェニル)-1-4-[1-(R)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素,
3-[1(R)-(4-クロロフェニル)エチル]-1-(4-シクロヘキシルフェニル)-1-4-[1-(S)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素, 
3-[1(R)-(4-クロロフェニル)エチル]-1-(4-シクロヘキシルフェニル)-1-4-[1-(R)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素,
3-[1(S)-(4-ブロモフェニル)エチル]-1-(4-シクロヘキシルフェニル)-1-4-[1-(S)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素,
3-[1(S)-(4-ブロモフェニル)エチル]-1-(4-シクロヘキシルフェニル)-1-4-[1-(R)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素,
3-[1(R)-(4-ブロモフェニル)エチル]-1-(4-シクロヘキシルフェニル)-1-4-[1-(S)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素、および
3-[1(R)-(4-ブロモフェニル)エチル]-1-(4-シクロヘキシルフェニル)-1-4-[1-(R)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素。
【００９１】
更なる実施形態において、本発明は下記から選択される化合物、並びにその何れかの光学異性体もしくは幾何異性体、互変異性体、これらの混合部物、またはその薬学的に許容可能な塩に関する：
3-[1(S)-(4-ブロモフェニル)エチル]-1-(4-シクロヘキサ-1-エニルフェニル)-1-4-[1-(S)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素、
3-[1(S)-(4-ブロモフェニル)エチル]-1-(4-シクロヘキサ-1-エニルフェニル)-1-4-[1-(R)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素、
3-[1(R)-(4-ブロモフェニル)エチル]-1-(4-シクロヘキサ-1-エニルフェニル)-1-4-[1-(S)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素、
3-[1(R)-(4-ブロモフェニル)エチル]-1-(4-シクロヘキサ-1-エニルフェニル)-1-4-[1-(R)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素、
3-[1(S)-(4-クロロフェニル)エチル]-1-(4-シクロヘキサ-1-エニルフェニル)-1-4-[1-(S)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素、
3-[1(S)-(4-クロロフェニル)エチル]-1-(4-シクロヘキサ-1-エニルフェニル)-1-4-[1-(R)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素、
3-[1(R)-(4-クロロフェニル)エチル]-1-(4-シクロヘキサ-1-エニルフェニル)-1-4-[1-(S)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素、および
3-[1(R)-(4-クロロフェニル)エチル]-1-(4-シクロヘキサ-1-エニルフェニル)-1-4-[1-(R)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素。
【００９２】
もう一つの側面において、本発明は下記一般式（I’）の化合物に関する：
【化５２】
2005537231.tif 000029
【００９３】
ここで、
R2は、水素またはC1-6-アルキルであり、
Bは、
【化５３】
2005537231.tif 000030
【００９４】
であり、
Aは、原子価結合、-(CR3R4)-、-(CR3R4)(CR5R6)-であり、
R1、R3、R4、R5、およびR6は、独立に水素、またはC1-6-アルキルであり、
Zは、アリーレンであるか、または窒素、酸素および硫黄から選択される1〜2のヘテロ原子を含む5〜6員のヘテロ芳香族環から誘導される二価の基であり、これはハロゲン、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR9、-NR9R10およびC1-6-アルキルから選択される一つまたは二つの基R7およびR8で任意に置換されてもよく、ここでのR9およびR10は独立に水素またはC1-6-アルキルであり、
Xは、
【化５４】
2005537231.tif 000031
【００９５】
であり、ここで、
rは、0または1であり、
qおよびsは、独立に0、1、2、または3であり、
R11、R12、R13、およびR14は、独立に水素、またはC1-6-アルキルであり、
Dは、
【化５５】
2005537231.tif 000032
【００９６】
であり、
ここで、R15、R16、R17、およびR18は、独立に
・水素、ハロゲン、-CN、-CH2CN、-CHF2、-CF3、-OCF3、-OCHF2、
-OCH2CF3、-OCF2CHF2、-S(O)2CF3、-SCF3、-NO2、-OR21、
-NR21R22、-SR21、-NR21S(O)2R22、-S(O)2NR21R22、-S(O)NR21R22、
-S(O)R21、-S(O)2R21、-C(O)NR21R22、-OC(O)NR21R22、-NR21C(O)R22、
-CH2C(O)NR21R22、-OCH2C(O)NR21R22、-CH2OR21、-CH2NR21R22、
-OC(O)R21、-C(O)R21 または-C(O)OR21、
・C1-6-アルキル、C2-6-アルケニルまたはC2-6-アルキニル、
（これは任意に、ハロゲン、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR21、-NR21R22
およびC1-6-アルキルから選択される一以上の置換基で置換されてもよい）
・C3-8-シクロアルキル、C4-8-シクロアルケニル、ヘテロシクリル、C3-8-シクロ
アルキル-C1-6-アルキル、C3-8-シクロアルキル-C1-6-アルコキシ、C3-8-シク
ロアルキルオキシ、C3-8-シクロアルキル-C1-6-アルキルチオ、C3-8-シクロアル
キルチオ、C3-8-シクロアルキル-C2-6-アルケニル、C3-8-シクロアルキル-C2-6-
アルキニル、C4-8-シクロアルケニル-C1-6-アルキル、C4-8-シクロアルケニ
ル-C2-6-アルケニル、C4-8-シクロアルケニル-C2-6-アルキニル、
へテロシクリル-C1-6-アルキル、ヘテロシクリル-C2-6-アルケニル、ヘテロシ
クリル-C2-6-アルキニル、アリール、アリールオキシ、アリールオキシカルボ
ニル、アロイル、アリール-C1-6-アルコキシ、アリール-C1-6-アルキル、
アリール-C2-6-アルケニル、アリール-C2-6-アルキニル、ヘテロアリール、
ヘテロアリール-C1-6-アルキル、ヘテロアリール-C2-6-アルケニル、または
ヘテロアリール-C2-4-アルキニル（その環状部分は任意に、ハロゲン、-CN、
-CF3、-OCF3、-NO2、-OR21、-NR21R22およびC1-6-アルキルから選択される
一以上の置換基で置換されてもよい）
ここで、R21およびR22は、独立に水素、C1-6-アルキルまたはアリールで
あるか、
またはR21およびR22は、これらが同じ窒素原子に結合するときは、該窒素原子
と一緒になって、任意に窒素、酸素および硫黄から選択される一つまたは二つの
更なるヘテロ原子を含み、且つ任意に一つまたは二つの二重結合を含む3〜8員の
ヘテロ環を形成してもよい：
であるか、またはR15〜R18のうちの二つは、隣接する位置に置かれるときは、それらが一緒になってブリッジ -(CR23R24)a-O-(CR25R26)c-O-を形成し、
ここで、
aは、0、1、または2であり、
cは、1または2であり、
R23、R24、R25およびR26は、独立に、水素、C1-6-アルキル、またはフッ素であり、
R19およびR20は、独立に、水素、C1-6-アルキル、C3-8-シクロアルキル、またはC3-8-シクロアルキル-C1-6-アルキルであり、
Eは、
【化５６】
2005537231.tif 000033
【００９７】
であり、ここで、
R27およびR28は、独立に、
水素、ハロゲン、-CN、-CF3、-OCF3、OR32、-NR32R33、C1-6-アルキル、C3-8-シクロアルキル、C4-8-シクロアルケニル、またはアリールであり、
ここでのアリール基は、任意に、ハロゲン、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR32、-NR32R33、およびC1-6-アルキルから選択される１以上の置換基で置換されてもよく、
ここで、
R32およびR33は、独立に水素、もしくはC1-6-アルキルであるか、
またはR32およびR33は、これらが同じ窒素原子に結合するときは、該窒素原子と一緒になって、任意に窒素、酸素および硫黄から選択される一つまたは二つの更なるヘテロ原子を含み、且つ任意に一つまたは二つの二重結合を含む3〜8員のヘテロ環を形成してもよく、
R29、R30およびR31は、独立に、
・水素、ハロゲン、-CHF2、-CF3、-OCF3、-OCHF2、-OCH2CF3、-OCF2CHF2、
-SCF3、-OR34、-NR34R35、-SR34、-S(O)R34、-S(O)2R34、-C(O)NR34R35、
-OC(O)NR34R35、-NR34C(O)R35、-OCH2C(O)NR34R35、-C(O)R34、または
-C(O)OR34
・C1-6-アルキル、C2-6アルケニルまたはC2-6-アルキニル［これらは任意にハロゲン、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR34、-NR34R35およびC1-6-アルキルから選択される一以上の置換基で置換されてもよい］、
・C3-8-シクロアルキル、C4-8-シクロアルケニル、ヘテロシクリル、C3-8-シクロアルキル-C1-6-アルキル、C3-8-シクロアルキル-C2-6-アルケニル、C3-8-シクロアルキル-C2-6-アルキニル、C4-8-シクロアルケニル-C1-6-アルキル、C4-8-シクロアルケニル-C2-6-アルケニル、C4-8-シクロアルケニル-C2-6-アルキニル、へテロシクリル-C1-6-アルキル、ヘテロシクリル-C2-6-アルケニル、ヘテロシクリル-C2-6-アルキニル、アリール、アリールオキシ、アロイル、アリール-C1-6-アルコキシ、アリール-C1-6-アルキル、アリール-C2-6-アルケニル、アリール-C2-6-アルキニル、ヘテロアリール、ヘテロアリール-C1-6-アルキル、ヘテロアリール-C2-6-アルケニル、またはヘテロアリール-C2-4-アルキニル［その環部分は任意に、ハロゲン、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR34、-NR34R35およびC1-6-アルキルから選択される一以上の置換基で置換されてもよい］であり、
ここでのR34およびR35は、独立に水素、C1-6-アルキルまたはアリールであるか、
またはR34およびR35は、同じ窒素原子に結合するときは、該窒素原子と一緒になって、任意に窒素、酸素および硫黄から選択される一つまたは二つの更なるヘテロ原子を含み且つ任意に一つまたは二つの二重結合を含む3〜8員のヘテロ環を形成してもよく、
または基R29、R30およびR31のうちの二つは、同じ環炭素原子または異なる環炭素原子に結合するときは、それらが一緒になって基-O-(CH2)t-CR36R37-(CH2)l-O-、-(CH2)t-CR36R37-(CH2)l-、または-S-(CH2)t-CR36R37-(CH2)l-S-を形成してもよく、
ここで、
tおよびlは、独立に0、1、2、3、4または5であり、
R36およびR37は、独立に水素またはC1-6-アルキルである。
【００９８】
本発明の化合物は１以上の非対称中心を有する可能性があり、如何なる光学異性体も、即ち、分離された純粋な、もしくは部分的に精製された光学異性体、またはそれらの混合物も本発明の範囲内に含まれるものである。
【００９９】
更に、分子内に二重結合、完全にもしくは部分的に飽和した環系存在するときは、幾何異性体が形成される可能性がある。分離された、純粋な、若しくは部分的に精製された幾何異性体、またはその混合物のような如何なる幾何異性体も、本発明の範囲内に含まれるものである。同様に、回転が制限された結合を有する分子も幾何異性体を形成する可能性がある。これらもまた、本発明の範囲内に含まれるものである。
【０１００】
更に、本発明の化合物の幾つかは、異なる互変異性形で存在する可能性があり。当該化合物が形成できる如何なる互変異性形も、本発明の範囲内に含まれるものである。
【０１０１】
本発明はまた、本発明の化合物の薬学的に許容可能な塩をも包含するものである。このような塩には、薬学的に許容可能な酸付加塩、薬学的に許容可能な金属塩、アンモニウム塩およびアルキル化アンモニウム塩が含まれる。酸付加塩には、無機酸並びに有機酸の塩が含まれる。適切な無機酸の代表的な例には、塩酸、臭素酸、ヨウ素酸、リン酸、硫酸、硝酸等が含まれる。適切な有機酸の例には、蟻酸、酢酸、トリクロロ酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、安息香酸、桂皮酸、クエン酸、フマル酸、グリコール酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、蓚酸、ピクリン酸、ピルビン酸、サリチル酸、コハク酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、酒石酸、アスコルビン酸、パモ酸（pamoic acid)、ビスメチレンサリチル酸、エタンジスルホン酸、グルコン酸、シトラコン酸、アスパラギン酸、ステアリン酸、パルミチン酸、EDTA、グリコール酸、p-アミノ安息香酸、グルタミン酸、ベンゼンスルホン酸、p-トルエンスルホン酸等が含まれる。薬学的に許容可能な無機酸もしくは有機酸の酸付加塩の更なる例には、本明細書の一部として援用するJ．Pharm. Sci. 1977, 66, 2に列記された薬学的に許容可能な塩が含まれる。金属塩の例には、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩等が含まれる。アンモニウム塩およびアルキル化アンモニウム塩の例には、アンモニウム塩、メチルアンモニウム塩、ジメチルアンモニウム塩、トリメチルアンモニウム塩、エチルアンモニウム塩、ヒドロキシエチルアンモニウム塩、ジエチルアンモニウム塩、ブチルアンモニウム塩、テトラメチルアンモニウム塩等が含まれる。
【０１０２】
本発明の化合物が形成できる水和物もまた、薬学的に許容可能な酸付加塩として意図されるものである。
【０１０３】
更に、薬学的に許容可能な塩には、リジン、アルギニンおよびオルニチンのような塩基性アミノ酸塩も含まれる。
【０１０４】
これらの酸付加塩は、化合物合成の直接の生成物として得ることができる。或いは、適切な酸を含有する適切な溶媒中に遊離塩基を溶解し、溶媒を蒸発させ、或いは塩と溶媒を分離することにより塩を単離してもよい。
【０１０５】
本発明の化合物は、当業者に周知の方法を使用して、標準の低分子量溶媒との溶媒和物を形成してもよい。このような溶媒和物もまた、本発明の範囲内にあるものと想定される。
【０１０６】
本発明はまた、本発明の化合物のプロドラッグをも包含するものであり、該プロドラッグは、投与したときに、薬理学的に活性な物質になる前に代謝プロセスによる化学的変換を受ける。一般に、このようなプロドラッグは、インビボで式（I）の必要な化合物に容易に変換可能な、一般式（I）の化合物の官能基誘導体であろう。適切なプロドラッグ誘導体を選択および調製するための従来の方法は、例えば、H．Bundgaard，Elsevier編の「プロドラッグの設計（Design of Prodrugs）」（1985）に記載されている。
【０１０７】
本発明はまた、本発明の活性代謝物をも包含する。
【０１０８】
本発明による化合物は、グルカゴンの作用に拮抗するように作用し、従って、このような拮抗作用が有益であるような障害および疾患の治療および／または予防のために有用である。
【０１０９】
従って、本発明の化合物は、高血糖症、IGT（グルコース寛容減損）、インスリン抵抗性症候群、シンドロームX、1型糖尿病、2型糖尿病、高脂血症、異常脂血症、高トリグリセリド血症、高リポ蛋白血症、高コレステロール血症、アテローム硬化症を含む動脈硬化症、グルカゴノーマ、急性膵炎、心臓血管系疾患、高血圧、心臓肥大、胃腸系障害、肥満、肥満の結果としての糖尿病、糖尿病性異常脂血症等の治療および／または予防に適用することができる。
【０１１０】
更に、それらは、グルカゴン受容体に欠陥を有する患者を同定するための診断剤として、また胃酸分泌を増大させるため、およびグルカゴン投与による腸の低運動性を反転させるための治療法として適用可能である。
【０１１１】
それらはまた、ラベルされた形態において、新たなグルカゴンアンタゴニストを同定するための結合アッセイにおけるツールまたは参照分子として有用であるかもしれない。
【０１１２】
従って、更なる側面において、本発明は、医薬として使用するための本発明の化合物に関する。
【０１１３】
本発明はまた、一以上の薬学的に許容可能なキャリアまたは賦形剤と共に、活性成分として少なくとも一つの本発明による化合物を含有する薬学的組成物に関する。
【０１１４】
この薬学的組成物は、好ましくは、約0.05mg〜約1000mg、好ましくは約0.1mg〜約500mg、特に好ましくは約0.5mg〜約200mgの本発明による化合物を含有する単位投与量形態である。
【０１１５】
更に、本発明は、グルカゴン拮抗作用が有益である障害または疾患の治療および／または予防のための、本発明による化合物の使用に関する。
【０１１６】
本発明はまた、グルカゴン拮抗作用が有益である障害または疾患を治療および／または予防するための方法に関し、該方法は、それを必要としている患者に対して、本発明による有効量の化合物を投与することを含む。
【０１１７】
本発明の好ましい実施形態において、本発明の化合物は、グルカゴンに媒介される何らかの症状および疾患を治療する医薬の製造のために使用される。
【０１１８】
本発明の好ましい実施形態において、本発明の化合物は、高血糖症の治療のための医薬を製造するために使用される。
【０１１９】
本発明の更なる好ましい実施形態において、本発明の化合物は、哺乳類における血中グルコースを低下させるための医薬を製造するために使用される。本発明の化合物は、絶食中および摂食後の段階の両方において、血中グルコースを低下させるのに有効である。
【０１２０】
本発明のもう一つの好ましい実施形態において、本発明の化合物は、ＩＧＴの治療および／または予防のための薬学的組成物を調製するために使用される。
【０１２１】
本発明の更にもう一つの好ましい実施形態において、本発明の化合物は、２型糖尿病の治療および／または予防のための薬学的組成物を調製するために使用される。
【０１２２】
本発明の更にもう一つの好ましい実施形態において、本発明の化合物は、ＩＧＴの２型糖尿病への進行を遅延または予防する薬学的組成物を調製するために使用される。
【０１２３】
本発明の更にもう一つの好ましい実施形態において、本発明の化合物は、非インスリン要求性２型糖尿病からインスリン要求性２型糖尿病への進行を遅延または予防する薬学的組成物を調製するために使用される。
【０１２４】
本発明の更なる好ましい実施形態において、本発明の化合物は、１型糖尿病を治療および／または予防する薬学的組成物を調製するために使用される。このような治療および／または予防は、通常はインスリン療法を伴う。
【０１２５】
本発明の更なる好ましい実施形態において、本発明の化合物は、肥満を治療および／または予防する薬学的組成物を調製するために使用される。
【０１２６】
本発明の更なる好ましい実施形態において、本発明の化合物は、脂質代謝障害を治療および／または予防する薬学的組成物を製造するために使用される。
【０１２７】
本発明の更なる好ましい実施形態において、本発明の化合物は、食欲調節障害またはエネルギー消費障害を治療および／または予防する薬学的組成物を調製するために使用される。
【０１２８】
本発明の更なる側面において、本発明の化合物を用いた患者の治療は、ダイエットおよび／または運動と組み合わされる。
【０１２９】
本発明の更なる側面において、本発明の化合物は、何れかの適切な比率で一以上の更なる活性物質と組合わせて投与される。このような更なる活性物質は、例えば、抗肥満剤、抗糖尿病剤、抗高血圧剤、糖尿病に由来しまたはこれに付随した合併症を治療するための薬剤、肥満に由来またはこれに付随した合併症および障害を治療するための薬剤から選択されてよい。
【０１３０】
従って、本発明の更なる側面において、本発明の化合物は１以上の抗肥満剤、または食欲調節剤と組合せて投与されてよい。
【０１３１】
このような薬剤は、CART（コカインアンフェタミン調節された転写体）アゴニスト、NPY（ニューロペプチドY）アゴニスト、MC4（メラノコルチン4）アゴニスト、MC3（メラノコルチン3）アゴニスト、オーレキシンアンタゴニスト、TNF（腫瘍壊死因子）アゴニスト、CRF（コルチコトロピン放出因子）アゴニスト、CRF BP（コルチコトロピン放出因子結合タンパク質）アンタゴニスト、ウロコルチンアゴニスト、β3アドレナリン作動性アゴニスト（例えばCL-316243、AJ-9677、GW-0604、LY362884、LY377267またはAZ-40140）、MSH（メラニン細胞刺激ホルモン）アゴニスト、MCH（メラニン細胞濃縮ホルモン）アンタゴニスト、CCK（コレシストキニン）アゴニスト、セロトニン再吸収阻害剤（例えばフルオキセチン、セロキサット、またはシタロプラム）、セロトニンおよびノルアドレナリン再吸収阻害剤、混合型セロトニン作動性およびノルアドレナリン作動性化合物、5HT（セロトニン）アゴニスト、ボンベシンアゴニスト、ガラニンアンタゴニスト、成長ホルモン、成長因子（例えばプロラクチンまたは胎盤ラクトゲン）、成長ホルモン放出化合物、THR（チロトロピン(thyreotropin)放出ホルモン）アゴニスト、UPC2もしくはUPC3（アンカップリングタンパク質2もしくは3）モジュレータ、レプチンアゴニスト、DA（ドパミン）アゴニスト（例えばブロモクリプチン、ドプレキシン）、リパーゼ／アミラーゼ阻害剤、PPAR（ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体；peroxisome proliferator-activated receptor）モジュレータ、RXR（レチノイドX受容体）モジュレータ、TRβアゴニスト、AGRP（アグーチ関連タンパク質）阻害剤、H3ヒスタミンアンタゴニスト、オピオイドアンタゴニスト（例えばナルトレキソン）、エキセンジン-4、GLP-1、および繊毛ニューロトロフィック因子からなる群から選択される。
【０１３２】
本発明の一つの実施形態において、前記抗肥満剤はレプチンである。
【０１３３】
もう一つの実施形態において、前記抗肥満剤はデキシアンフェタミンまたはアンフェタミンである。
【０１３４】
もう一つの実施形態において、前記抗肥満剤はフェンフルラミンまたはデキシフェンフルラミンである。
【０１３５】
更にもう一つの実施形態において、前記抗肥満剤はシブトラミンである。
【０１３６】
更なる実施形態において、前記抗肥満剤はオルリスタットである。
【０１３７】
もう一つの実施形態において、前記抗肥満剤はマジンドール（mazindol）またはフェンテルミン（phentermine）である。
【０１３８】
更にもう一つの実施形態において、前記抗肥満剤はフェンジメトラジン、ジエチルプロピオン、フルオキセチン、ブプロピオン、トピラメート、またはエコピパムである。
【０１３９】
適切な抗糖尿病剤には、インスリン；本明細書の一部として援用する下記文献に開示されたインスリン類縁体および誘導体、即ち、EP 792 290（Novo Nordisk A/S）、例えばNεB29-テトラデカノイルdes(B30)ヒトインスリン；EP 214 826およびEP 705 275（Novo Nordisk A/S）、例えばAspB28ヒトインスリン；米国特許第5,504,188号（Eli Lilly）、例えばLysB28ProB29ヒトインスリン；EP 368 187（Aventis）、例えばランツス（Lantus）；GLP-1および本明細書の一部として援用するWO 98/08871（Novo Nordisk A/S）に開示されたようなGLP-1誘導体、並びに経口的に活性な血糖降下剤が含まれる。
【０１４０】
この経口的に活性な血糖降下剤には、好ましくは、イミダゾリン、スルホニル尿素、ビグアニド、メグリチニド（meglitinides）、オキサジアゾリジンジオン、チアゾリジンジオン、インスリン感作剤、グリメプリドのようなインスリン分泌促進物質、αグリコシダーゼ阻害剤、β細胞のATP依存性カリウムチャンネルに対して作用する薬剤、例えば本明細書の一部として援用するWO 97/26265、WO 99/03861およびWO 00/37474（Novo Nordisk A/S）に開示されているようなカリウムチャンネル開放剤、またはミチグリニド、またはBTS-67582のようなカリウムチャンネルブロッカー、ナテグリニド、本明細書の一部として援用するWO 99/01423およびWO 00/39088（Novo Nordisk A/SおよびAgouron Pharmaceuticals, Inc.）に開示されたようなグルカゴンアンタゴニスト、本明細書の一部として援用するWO 00/42026（Novo Nordisk A/SおよびAgouron Pharmaceuticals, Inc.）に開示されたようなGLP-1アゴニスト、DPP-IV（ジペプチジルペプチダーゼ-IV）阻害剤、PTPase（タンパク質チロシンホスファターゼ）阻害剤、グルコース新生および／またはグリコーゲン分解の刺激に関与する肝臓酵素の阻害剤、グルコース取込み調節剤、GSK-3（グリコーゲンシンターゼキナーゼ-3）阻害剤、抗脂血症剤のような脂質代謝を変更する化合物、食物摂取を低下させる化合物、PPAR（ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体）、およびALRT-268、LG-1268もしくはLG-1069のようなRXR（レチノイドＸ受容体）アゴニストが包含される。
【０１４１】
一つの実施形態において、本発明の化合物はインスリン、またはNεB29-テトラデカノイルdes(B30)ヒトインスリン、AspεB28ヒトインスリン、LysB28ProB29ヒトインスリン、Lantus（登録商標）のようなインスリン類縁体もしくは誘導体、またはこれらの一以上を含む混合製剤と組合わせて投与される。
【０１４２】
本発明の更なる実施形態において、本発明の化合物は、スルホニル尿素、例えばトルブタミド、クロルプロアミド、トラザミド、グリベンクラミド、グリピジド、グリメピリド、グリカジド、またはグリブリドと組合わせて投与される。
【０１４３】
本発明のもう一つの実施形態において、本発明の化合物はビグアニド、例えばメトホルミンと組合わせて投与される。
【０１４４】
本発明の更にもう一つの実施形態において、本発明の化合物はメグリチニド、例えばレパグリニドまたはナテグリニドと組合わせて投与される。
【０１４５】
本発明の更にもう一つの実施形態おいて、本発明の化合物はチアゾリジンジオンインスリン感作剤、例えばトログリタゾン、シグリタゾン（ciglitazone）、ピオグリタゾン（pioglitazone）、ロシグリタゾン（rosiglitazone）、イサグリタゾン（isaglitazone）、ダルグリタゾン（darglitazone）、エングリタゾン（englitazone）、CS011/CI-1037もしくはT 174、または本明細書の一部として援用するWO 97/41097、WO 97/41119、WO 97/41120、WO 00/41121およびWO 98/45292（Dr．Reddy's Research Foundation）に開示された化合物と組合わせて投与される。
【０１４６】
更にもう一つの実施形態において、本発明の化合物は、GI 262570、YM-440、MCC-555、JTT-501、AR-H039242、KRP-297、GW-409544、CRE-16336、AR-H049020、LY510929、MBX-102、CLX-0940、GW-501516のようなインスリン感作剤、テサグリタザル（tesaglitazar；AZ 242）、または本明細書の一部として援用するWO 99/19313、WO 00/50414、WO 00/63191、WO 00/63192、WO 00/63193（Dr. Reddy's Research Foundation）およびWO 00/23425、WO 00/23415、WO 00/23451、WO00/23445、WO 00/23417、WO 00/23416、WO00/63153、WO 00/63196、WO 00/63209、WO 00/63190およびWO00/63189（Novo Nordisk A/S）に開示された化合物と組合わせて投与してもよい。
【０１４７】
本発明の更なる実施形態において、本発明の化合物は、αグルコシダーゼ阻害剤、例えばボグリボース（voglibose）、エミグリテート（emiglitate）、ミグリトールまたはアカルボースと組合わせて投与される。
【０１４８】
本発明のもう一つの実施形態において、本発明の化合物は、β細胞のATP依存性カリウムチャンネルに作用する薬剤、例えば、トルブタミド（tolbutamide）、グリベンクラミド（glibenclamide）、グリピジド（glipizide）、グリカジド（glicazide）、BTS-67582、またはレパグリニド（repaglinide）と組合わせて投与される。
【０１４９】
更にもう一つの実施形態において、本発明の化合物はナテグリニドと組合せて投与される。
【０１５０】
本発明の更にもう一つの実施形態において、本発明の化合物は、抗脂血症剤、例えばコレスチラミン、コレスチポール、クロフィブレート、ジェムフィブロジル、ロバスタチン、プラバスタチン、シンバスタチン、プロブコール、またはデキストロチロキシンと組合わせて投与される。
【０１５１】
本発明のもう一つの側面において、本発明の化合物は、上記化合物の一以上と組合わせて、例えば、メトホルミンおよびスルホニル尿素（例えばグリブリド）；スルホニル尿素およびアカルボース；ナテグリニドおよびメトホルミン；アカルボースおよびメトホルミン；スルホニル尿素、メトホルミンおよびトログリタゾン；インスリンおよびスルホニル尿素；インスリンおよびメトホルミン；インスリン、メトホルミンおよびスルホニル尿素；インスリンおよびトログリタゾン；インスリンおよびロバスタチン；等と組合わせて投与される。
【０１５２】
更に、本発明による化合物は、一以上の抗高血圧剤と組合わせて投与してもよい。抗抗血圧剤の例は、βブロッカー（例えば、アルプレノロール、アテノロール、チモロール、ピンドロール、プロプラノロールおよびメトプロロール）、ACE（アンジオテンシン変換酵素）阻害剤（例えば、ベナゼプリル(benazepril)、カプトプリル(captopril)、エナラプリル(enalapril)、フォシノプリル(fosinopril)、リシノプリル(lisinopril)、キナプリル(quinapril)およびラミプリル(ramipril)）、カルシウムチャンネルブロッカー（例えば、ニフェジピン(nifedipine)、フェロジピン(felodipine)、ニカルジピン(nicardipine)、イスラジピン(isradipine)、ニモジピン(nimodipine)、ジルチアゼム(diltiazem)およびベラパミル(verapamil)）、およびαブロッカー（例えば、ドキサゾシン(doxazosin)、ウラピジル(urapidil)、プラゾシン(prazosin)およびテラゾシン(terazosin)）である。更に、Remington：The Science and Practice of Pharmacy, 19th Edi-tion, Gennaro, Ed., Mack Publishing Co., Easton, PA, 1995を参照することができる。
【０１５３】
なお、ダイエットおよび／または運動、上記で述べた化合物の一以上、および任意に一以上の他の活性物質と、本発明による化合物との如何なる適切な組合せも、本発明の範囲内にあると看做されることが理解されるべきである。
【０１５４】
＜薬学的組成物＞
本発明の化合物は、単独で、または薬学的に許容可能なキャリアまたは賦形剤と組合わせて、単回投与または多数回投与で投与すればよい。本発明による薬学的組成物は、薬学的に許容可能なキャリアまたは希釈剤、並びに他の既知のアジュバントおよび賦形剤を用いて、Remington：The Science and Practice of Pharmacy, 19th Edition, Gennaro，Ed., Mack Publishing Co., Easton, PA, 1995に開示されたような従来の技術に従って処方すればよい。
【０１５５】
この薬学的組成物は、口腔、直腸、鼻腔、肺、局所（バッカルおよび舌下を含む）、経皮、大槽内、腹腔内、膣、および非経腸的（皮下、筋肉内、くも膜下腔内、静脈内、および皮内を含む）の経路のような何れかの適切な経路による投与のために特別に処方すればよく、経口経路が好ましい。好ましい経路は、治療すべき患者の一般条件および年齢、並びに選択された活性成分に依存することが理解されるであろう。
【０１５６】
経口投与のための薬学的組成物には、カプセル、錠剤、糖衣錠、ピル、トローチ剤、散剤および顆粒のような固体投与量形態が含まれる。適切な場合、それらは腸溶性コーティングを伴って調製することができ、または当該技術で既知の方法に従って、持続性放出もしくは遅延性放出のような活性成分の制御された放出を提供するように処方することができる。
【０１５７】
経口投与のための液体投与量形態には、溶液、エマルジョン、懸濁液、シロップおよびエリキシールが含まれる。
【０１５８】
非経腸的投与のための薬学的組成物には、滅菌された水性および非水性の注射用溶液、分散液、懸濁液またはエマルジョン、並びに使用前に滅菌注射溶液もしくは分散液に再構成される滅菌された粉末が含まれる。デポー注射処方剤もまた、本発明の範囲内であると考えられる。
【０１５９】
他の適切な投与形態には、座薬、スプレー、軟膏、クリーム、ゲル、吸入剤、皮膚パッチ、インプラントなどが含まれる。
【０１６０】
典型的な経口投与量は、1回以上の投与、例えば1〜3回の投与で投与される1日当り約0.001〜約100mg/kg体重、好ましくは1日当り約0.01〜約50mg/kg体重、より好ましくは1日当り約0.05〜約10mg/kg体重である。正確な投与量は、投与の頻度および形式、治療すべき患者の性別、年齢、体重および一般症状、治療される症状の性質および重篤度、並びに治療すべき併発疾患および当業者に明らかな他の因子に依存するであろう。
【０１６１】
当該処方剤は、当業者に知られた方法によって、単位投与量形態で提供されるのが便利である。1日当り1回以上、例えば1日1〜3回の経口投与のための典型的な単位投与量形態は、0.05〜約1000mg、好ましくは約0.1〜約500mg、より好ましくは0.5mg〜約200mgを含有することができる。
【０１６２】
静脈内、くも膜下腔内、筋肉内および同様の投与等の非経腸的経路について、典型的な投与量は、経口投与で用いられる投与量の約半分のレベルである。
【０１６３】
本発明の化合物は、一般には遊離の物質として、またはその薬学的に許容可能な塩として利用される。一つの例は、遊離酸の有用性を有する化合物の塩基付加塩である。式（Ｉ）の化合物が遊離の酸を含むときは、このような塩は、式（Ｉ）の遊離酸の溶液または懸濁液を化学的当量の薬学的に許容可能な塩基で処理することにより、従来の方法で調製される。代表的な例は上記で述べたとおりである。ヒドロキシ基を有する化合物の生理学的に許容可能な塩には、ナトリウムまたはアンモニウムイオンのような適切な陽イオンと組合された前記化合物の陰イオンが含まれる。
【０１６４】
非経腸的投与のためには、滅菌水溶液、水性プロピレングリコール、水性ビタミンE、またはゴマ油もしくはピーナッツ油の中の新規化合物（Ｉ）の溶液を用いればよい。このような水溶液は必要であれば適切にバッファーされ、また希釈液は最初に食塩水もしくはグルコースを用いて等張にされる。この水溶液は、静脈内、筋肉内、皮下および腹腔内の投与に特に適している。用いられる滅菌水性媒体は全て、当業者に既知の標準的技術によって容易に入手可能である。
【０１６５】
適切な薬学的キャリアには、不活性な固体希釈剤または充填剤、滅菌水溶液および種々の有機溶媒が含まれる。固体キャリアの例は、乳糖、白土、蔗糖、シクロデキストリン、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アカシア、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、およびセルロースの低級アルキルエーテルである。液体キャリアの例は、シロップ、ピーナッツ油、オリーブ油、リン脂質、脂肪酸、脂肪酸アミン、ポリオキシエチレン、および水である。同様に、キャリアまたは希釈剤は、単独のまたはワックスと混合されたグリセリルモノステアレートまたはグリセリルジステアレートのような、当該技術において知られた何れかの持続放出材料を含んでいてもよい。式（Ｉ）の新規化合物および薬学的に許容可能なキャリアを組合せることにより形成された薬学的組成物は、次いで、開示された投与経路に適した種々の投与量形態で容易に投与される。この処方剤は、調剤技術における既知の方法により、単位投与形態で便宜に提供することができる。
【０１６６】
経口投与に適した本発明の処方剤は、夫々が予め定められた量の活性成分を含有し、且つ適切な賦形剤を含んでもよいカプセルもしくは錠剤のような、分離された単位として提供することができる。更に、経口的に利用可能な処方剤は、粉末もしくは顆粒、水性液もしくは非水性液中の溶液もしくは懸濁液、または油中水もしくは水中油の液体エマルジョンの形態であってもよい。
【０１６７】
経口投与のために固体キャリアが使用されるときは、この製剤は錠剤化してもよく、粉末もしくはペレットの形態で硬質ゼラチンカプセル中に配置してもよく、またはトローチもしくはロゼンジの形態であってもよい。固体キャリアの量は広範囲に変化し得るが、通常は約25mg〜約1 gであろう。液体キャリアが使用されるとき、当該製剤はシロップ、エマルジョン、軟質ゼラチンカプセル、または水性もしくは非水性の液体懸濁液もしくは溶液のような滅菌注射液の形態であってもよい。
【０１６８】
従来の錠剤化技術によって調製できる典型的な錠剤は、下記のものを含有する：
＜コア＞:
活性化合物（遊離化合物またはその塩として）            5.0mg
Lactosum Ph．Eur．                                  67.8mg
微結晶セルロース（Avicel）                            31.4mg
アンバーライトTM IRP88＊                               1.0mg
ステアリン酸マグネシウム Ph. Eur.                      q. s.
＜コーティング＞:
ヒドロキシプロピルメチルセルロース                  約9mg
Mywacett 9-40 T＊＊                                   約0.9mg 
＊ ポラクリンカリウム（Polacrillin potassium）NF、
錠剤崩壊剤、Rohm and Haas社製
＊＊フィルムコーティングのための可塑剤として使用された
アクリル化モノグリセリド
所望であれば、本発明の薬学的組成物は、上記で述べたような更なる薬理学的活性物質と共に、式（Ｉ）の化合物を含有してもよい。
【実施例】
【０１６９】
本発明化合物の調製ついて以下の例を用いて詳細に記載するが、ここで記載される化学反応は、本発明のグルカゴンアンタゴニストの調製への一般的な適用の観点から開示されるものである。場合によっては、本発明の開示する範囲に含まれる各化合物の中には、当該反応が記載通りに適用されないものがあるかもしれない。当業者は、このようなことが生じる化合物を容易に認識するであろう。これらの場合、当業者に既知の慣用的な修飾、即ち、干渉基の適切な保護、他の慣用的試薬への変更、または反応条件の所定の改変によって首尾よく実施することができる。或いは、ここに開示する他の反応または従来の反応が、本発明の対応する化合物の調製に適用可能であろう。全ての調製方法において、出発物質は全て公知であるか、または公知の出発物質から容易に調製することができるる。
【０１７０】
温度は全て摂氏度で記載され、また他に指示がない限り、収率を表す場合の部(parts)およびパーセンテージは全て重量で記載され、溶媒および溶出剤を表す場合の部は全て容量で記載される。
【０１７１】
以下に示されるNMRデータの幾つかは選抜されたデータのみである。以下の例及び薬理学的手法において、下記の用語は次の意味を有するものである：
DCM：ジクロロメタン
DCP：1,2-ジクロロプロパン
DIPEA：ジイソプロピルエチルアミン
DMF：N,N-ジメチルホルムアミド
DMSO：ジメチルスルホキシド
M.p.：融点
EDAC：1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩
EGTA：エチレングリコール bis(β-アミノエチルエーテル) N,N,N',N'-テトラ酢酸
IBMX：イソブチルメチルキサンチン
TFA：トリフルオロ酢酸
THF：テトラヒドロフラン
TMOF：オルト蟻酸トリメチル。
【０１７２】
HPLC-MS（方法Ａ）
以下の機器を用いた：
・Sciex API 100 Single 四極子質量分析計
・Perkin Elmer シリーズ 200 Quard ポンプ
・Perkin Elmer シリーズ 200 自動試料採取器
・Applied Biosystems 785A UV検出器
・Sedex 55 蒸発式光散乱検出器(evaporative scattering detector)
・ポンプからのタイミングを図った事象により制御されるValcoアクチュエータ
を備えたValco カラムスイッチ
機器の制御およびデータ取得のために、Macintosh PowerPC 7200コンピュータ上で動作するSciex 試料制御ソフトウェアが用いられた。HPLCポンプは以下を含んだ４つの溶出液リザーバに連結される：
A：アセトニトリル
B：水
C：水中の0.5％ TFA
D：0.02M 酢酸アンモニウム。
【０１７３】
試料の要件は、分析すべき略500μg/mLの化合物が、メタノール、エタノール、アセトニトリル、THF、水、およびこれらの混合物のような許容可能な溶媒中に含まれていることである。（強力に溶出させる高濃度の溶媒は、低濃度のアセトニトリルでのクロマトグラフィに干渉するであろう）。
【０１７４】
この分析は、20μLの試料溶液をカラムに注入し、該カラムを、0.05％TFAまたは0.002M 酢酸アンモニウム中のアセトニトリル勾配を用いて溶出することにより室温で実施された。分析方法に応じて種々の溶出条件が用いられた。
【０１７５】
カラムからの溶出液は、略20μL/分で分流Ｔ型コネクタを通過し、１ｍの75μ石英ガラス毛細管を経てAPI 100分光計のAPI界面に達した。
【０１７６】
残りの1.48mL/分はUV検出器およびELS検出器を通過する。
【０１７７】
LC-分析の間、質量分析計、UV検出器およびELS検出器から同時に、検出データが取得された。異なる方法で用いられるLC条件、検出器の設定および質量分析計の設定を、以下の表に挙げる。
【表１】
2005537231.tif 000034
【０１７８】
HPLC-MS（方法Ｂ）
本方法は方法Ａと同一であるが、以下の条件及び設定を用いる：
【表２】
2005537231.tif 000035
【０１７９】
調製的HPLC（方法Ｃ）
装置：モジュラー設定：Gilsonポンプモデル306，Gilson UV検出器モデル117，
Gilson希釈器モデル401C及びGilson 画分収集器モデル233 XL。
【０１８０】
カラム：20×250mm Chiralpak AD カラム（シリカゲル上に被覆されたアミロース
誘導体）
溶出液：n-ヘプタン：2-プロパノール：TFA(80：20：0.1)
勾配：なし（定組成）
流速：6mL/分。
【０１８１】
分析的HPLC（方法Ｄ）
装置：HP 1090 LC(Hewlett Packard)
カラム：4.6×250mm Chiralpak AD カラム（シリカゲル上に被覆されたアミロース
誘導体）カラム
溶出液：n-ヘプタン：2-プロパノール：TFA(80：20：0.1)
勾配：なし（定組成）
流速：0.8mL/分。
【０１８２】
例1及び例2において使用すべきビルディングブロック
4-[(4-tert-ブチルフェニルアミノ)メチル]安息香酸メチルエステル
4-ホルミル安息香酸メチルエステル(10.6g，64mmol)をメタノール(200mL)中に溶解させた。4-tert-ブチルアニリン(9.61g，64mmol)を添加し、得られた懸濁物を15分還流させた。室温にまで冷却後、TFA(5.18mL，68mmol)を添加し、続いて水素化シアノホウ素ナトリウム(3.26g，52mmol)を滴下により添加した。得られた混合物を室温で2時間撹拌し、真空下で濃縮した。残渣を、酢酸エチル(200mL)及び1N 水酸化ナトリウム水溶液(150及び100mL)の間で分配した。有機相を乾燥させ(硫酸マグネシウム)、真空下で蒸発させて19.0g(99％)の4-[(4-tert-ブチルフェニルアミノ)メチル]安息香酸メチルエステルを固体で得た。
【０１８３】
1H NMR(CDCl3)：δ1.28(9H，s)，3.92(3H，s)，4.39(2H，s)，6.57(2H，d)，7.20(2H，d)，7.44(2H，d)，8.00(2H，d)。
【０１８４】
例12で使用すべきビルディングブロック
工程Ａ：4-シクロヘキサ-1-エニルアニリン
この化合物の調製は、Braun et al., J. Liebigs Ann. Chem., 472(1929)，1-89の記載と同様に、アニリン(2当量)、シクロヘキサノン(1当量)をエタノール及び37％塩酸中で4〜5日間還流させ、続いて酢酸エチル、水、及び水酸化ナトリウムを添加し、85％リン酸を用いて中和させ、相を分離し、有機相を希釈することから行った。残渣に触媒量の硫酸を添加し、蒸留した(180℃，5-7mbar)。蒸留物を再び蒸留し(120℃，3mbar)、49％ 収率の所望の4-シクロヘキシ-1-エニルアニリンを得た（残渣中に）。
【０１８５】
1H NMR(DMSO-d6)：δ1.50-1.60(m, 2H)，1.60-1.70(m, 2H)，2.10-2.15(m, 2H)，2.20-2.30(brd s, 2H)，5.00(s, 2H)，5.90(t, 1H)，6.50(d, 2H)，7.10(d, 2H)。
【０１８６】
工程Ｂ：4-[(4-シクロヘキシ-1-エニルフェニルアミノ)メチル]安息香酸メチルエステル
DCM(50mL)及びメタノール(15mL)中の4-シクロヘキセニルアニリン(3,40g，0.023mol)及び4-ホルミル安息香酸メチル(3.77g，0.023mol)の溶液に、触媒量の酢酸を添加した。溶液を3時間撹拌した後、Na(OAc)3BH(24g，0.115mol)を添加した。反応物を室温で16時間撹拌した。この反応混合物を酢酸エチルで希釈し、重炭酸ナトリウム水溶液(3x)、塩水(2x)を用いて洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、ろ過し、濃縮して橙色の固体を得た。この粗成物をシリカゲルのカラム内に導入し、酢酸エチル：ヘキサン(5：95)を用いて溶出し、4-[(4-シクロヘキシ-1-エニルフェニルアミノ)メチル]安息香酸メチルエステル(5g，0.015mol)を得た。
【０１８７】
1H NMR(DMSO-d6)：δ1.56(m, 2H)，1.67(m, 2H)，2.11(m, 2H)，2.25(m, 2H)，3.81(s, 3H)，4.34(d, 2H)，5.89(t, 1H)，6.34(t, 1H)，6.49(d, 2H)，7.10(d, 2H)，7.47(d, 2H)，7.90(d, 2H)；MS(APCI, pos)：322.1, 323.1。
【０１８８】
工程Ｃ：4-[3-(3,5-ジクロロフェニル-1-(シクロヘキシ-1-エニルフェニル)ウレイドメチル]安息香酸メチルエステル
上記4-[(4-シクロヘキシ-1-エニルフェニルアミノ)メチル]安息香酸メチルエステル(5g，0.015mol)を無水DCM中に溶解させ、ジイソプロピルエチルアミン(5.8g，0.045mol)を添加した。この溶液にイソシアン酸塩(例えば3,5-ジクロロフェニルイソシアン酸塩)(0.018mol)を添加した。反応物混合物を3時間撹拌後、溶液を酢酸エチルで希釈し、1N塩酸(2x)，水, 塩水を用いて洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラム中に導入し、酢酸エチル：ヘキサン(10：90)を用いて抽出し、4-[3-(3,5-ジクロロフェニル-1-(シクロヘキシ-1-エニルフェニル)ウレイドメチル]安息香酸メチルエステル(4g)を得た。
【０１８９】
1H NMR(DMSO-d6)：δ1.58(m, 2H)；1.70(m, 2H)；2.16(m, 2H)；2.32(m, 2H)；3.71(s, 3H)；4.98(s, 2H)；6.18(t, 1H)；7.12(s, 1H)；7.20(d, 2H)；7.39(d, 2H)；7.41(d, 2H)；7.62(s, 2H)；7.89(d, 2H)；8.56(s, 1H)；MS(APCI, pos)：509.0, 510.0, 511.1。
【０１９０】
例29〜32で用いるべきビルディングブロック
1(2)-(1-メトキシ-1-メチルエチル)-5-メチル-1(2)H-テトラゾール
5-メチルテトラゾール(3,5g，42mmol)をトルエン(100mL)中に懸濁させ、2,2-ジメトキシプロパン(20mL)を添加した。懸濁物を１時間還流で加熱することにより透明な溶液を得た。溶媒を回転蒸発により除去し、得られた油状物をアセトニトリルから２回ストリップした。標題化合物を1：5の異性体混合物で得た。
【０１９１】
1H NMR(CDCl3，主要でない異性体)：δ1.93 ppm.(s, 6H)；2.72(s, 3H)；3.15(s, 3H)。
【０１９２】
1H NMR(CDCl3，主要な異性体)：δ1.98 ppm.(s, 6H)；2.57(s, 3H)；3.12(s, 3H)。
【０１９３】
イソシアン酸(R)-1-(4-ブロモフェニル)エチル
(R)-1-(4-ブロモフェニル)エチルアミン(1.07g，5.36mmol)を酢酸エチル(15mL)中の1M 乾燥HCl 中に溶解させ、アミン塩酸塩の塩を生成した。溶媒を真空下で除去し、結晶状の残渣を、トルエン(15mL)中の20％ホスゲン溶液中に懸濁させた。この反応混合物を60℃で16時間撹拌することにより透明な溶液を得た。溶媒を回転蒸発により除去して、標題の物質を定量的に透明な油状物で得た。プロトンNMRによればこの油状物は純粋であっり(+95％)、さらに精製することなく一般手順（Ｆ）の工程８において用いられた。
【０１９４】
1H NMR(CDCl3)：δ7.48 ppm(d, 2H)；7.20(d, 2H)；4.73(q, 1H)；1.57(d, 3H)。
【０１９５】
イソシアン酸(S)-1-(4-ブロモフェニル)エチル
この化合物は、(S)-1-(4-ブロモフェニル)エチルアミンを出発物質に用い、上述したイソシアン酸(R)-1-(4-ブロモフェニル)エチルと同様の手順により調製した。
【０１９６】
一般手順Ａ
【化５７】
2005537231.tif 000036
【０１９７】
例1（一般手順（Ａ）
4-[1-(4-tert-ブチルフェニル)-3-(4-トリフルオロメトキシフェニル)ウレイドメチル]-N-5-オキソ-4,5-ジヒドロ-[1,2,4]オキサジアゾール-3-イルメチル)ベンズアミド
【化５８】
2005537231.tif 000037
【０１９８】
工程１：4-[tert-ブトキシカルボニル-(4-tert-ブチルフェニル)アミノ]メチル安息香酸メチルエステル
【化５９】
2005537231.tif 000038
【０１９９】
4-[(4-tert-ブチルフェニルアミノ)メチル]安息香酸メチルエステル(5g，16.8mmol)をTHF(10mL)及び水酸化ナトリウム水溶液(1N，16.8mL)の混合物中に溶解させた。THF(20mL)中のピロ炭酸ジ-tert-ブチルの溶液を滴下添加し、混合物を室温で16時間撹拌した。この反応混合物を真空下で濃縮し、酢酸エチル(150mL)、水(50mL)及び塩酸(4N，8.4mL)を添加した。水相を酢酸エチル(25mL)で抽出した。合体した有機相を水で洗浄し(3×30mL)、乾燥させ(硫酸マグネシウム)、真空下で濃縮して6.9gの4-[tert-ブトキシカルボニル-(4-tert-ブチルフェニルアミノ)]メチル安息香酸メチルエステルを得た。
【０２００】
1H NMR(DMSO-d6)：δ1.25(s, 9H)；1.37(s, 9H)；3.34(s, 3H)；3.84(s, 2H)；4.90(s, 1H)；7.13-7.19(d, 2H)；7.3-7.4(dd, 4H)；7.9-7.96(d, 2H)。
【０２０１】
工程２：4-[tert-ブトキシカルボニル-(4-tert-ブチルフェニル)アミノ]メチル安息香酸
【化６０】
2005537231.tif 000039
【０２０２】
4-[tert-ブトキシカルボニル-(4-tert-ブチルフェニルアミノ)]メチル安息香酸メチルエステル(6.9g，17.4mmol)を、エタノール(96％，80mL)及び水酸化ナトリウム水溶液(4N，17mL)の混合物中に懸濁させ、室温で16時間撹拌した。この反応混合物を真空下で濃縮し、残渣を水(50mL)中に溶解させ、塩酸(4N，14mL)を用いて酸性にし、酢酸エチル(50mL)を用いて抽出した。水相を酢酸エチル(50mL)で抽出した。合体した有機相を水で洗浄し(3×30mL)、乾燥させ(硫酸マグネシウム)、真空下で濃縮した。残渣を酢酸エチル：n-ヘプタンから結晶化させて、4.11gの4-[tert-ブトキシカルボニル-(4-tert-ブチルフェニル)アミノ]メチル安息香酸を得た。
【０２０３】
1H NMR(DMSO-d6)：δ1.24(s, 9H)；1.35(s, 9H)；4.88(2H)；7.10-7.18(d, 2H)；7.28-7.36(dd, 4H)；7.85-7.93(d, 2H)；12.90(broad, 1H)。
【０２０４】
工程３：N-(4-tert-ブチルフェニル)-N-[4-(シアノメチルカルバモイル)ベンジル]カルバミン酸tert-ブチルエステル
【化６１】
2005537231.tif 000040
【０２０５】
4-[tert-ブトキシカルボニル-(4-tert-ブチルフェニル)アミノ]メチル安息香酸(4.1g，10.7mmol)をDMF(40mL)中に溶解させた。ヒドロキシベンゾトリアゾール(1.59g，11.8mmol)及びEDAC(2.25g，1.8mmol)を添加し、この反応混合物を室温で30分撹拌した。アミノアセトニトリル塩酸塩(1.38g，15mmol)及びジイソプロピルエチルアミン(2.55mL，15mmol)を添加し、この反応混合物を室温で16時間撹拌した。この反応混合物を酢酸エチル(150mL)で希釈し、水(125mL)を用いて抽出した。水相を酢酸エチル(50mL)で抽出した。合体した有機相を、塩酸(0.2N，3×50mL)及び、水と塩化ナトリウム飽和物との混合物(1：1, 3×50mL)を用いて洗浄し、乾燥させ(硫酸マグネシウム)、真空下で濃縮した。残渣を、酢酸エチル/n-ヘプタン(3：7)を溶出剤として用いるシリカゲル(150g)上のカラムクロマトグラフィにより精製して、3.8gのN-(4-tert-ブチルフェニル)-N-[4-(シアノメチルカルバモイル)ベンジル]カルバミン酸tert-ブチルエステルを得た。
【０２０６】
1H NMR(DMSO-d6)：δ1.25(9H，s)，1.35(9H，s)，4.3(2H，d)，4.89(2H，s)，7.15(2H，d)，7.30-7.38(4H，dd)，7.82(2H，d)，9.15(1H，t)；HPLC-MS（方法Ａ）：m/z：422；Rt＝7.50分。
【０２０７】
工程４：N-(4-tert-ブチルフェニル)-N-4-[(N-ヒドロキシアミジノメチル)カルバモイル]ベンジルカルバミン酸tert-ブチルエステル
【化６２】
2005537231.tif 000041
【０２０８】
トリエチルアミン(2.29g，22.6mmol)を、DMSO(7mL)中のヒドロキシルアミン塩酸塩(1.57g，22.6mmol)の溶液に添加した。10分後、混合物をろ過し、フィルタをTHFを用いて洗浄した。合体した濾液を真空下で濃縮した。ヒドロキシルアミンを含んだDMSO溶液にN-(4-tert-ブチルフェニル)-[4-(シアノメチルカルバモイル)ベンジル]カルバミン酸tert-ブチルエステル(1.9g，4.5mmol)を添加し、この反応混合物を85℃で16時間撹拌した。この反応混合物を酢酸エチル(50mL)及び水(20mL)を用いて希釈した。有機相を塩酸(1N，9mL)及び水(2×20mL)を用いて抽出し、乾燥させ(硫酸マグネシウム)、真空下で濃縮した。残渣をヘプタン及び酢酸エチルから結晶化させて、1.02gのN-(4-tert-ブチルフェニル)-N-4-[(N-ヒドロキシアミジノメチル)カルバモイル]ベンジルカルバミン酸tert-ブチルエステルを得た。M.p. 154-156℃。
【０２０９】
1H NMR(DMSO-d6)：δ1.22(9H，s)，1.39(9H，s)，4.21(2H，d)，4.89(2H，s)，7.12(2H，d)，7.32(4H，dd)，7.88(2H，d)，9.05(1H，t)，10.80(1H，s)，12.50(1H，broad)；HPLC-MS（方法Ａ）：m/z：455；Rt＝5.55分。
【０２１０】
微量分析：C25H35Cl1N4O4についての計算値：C, 61.15％；H，7.18％;N，11.41％。実測値：C, 61.52％；H，7.39％;N，11.16％。
【０２１１】
工程５：N-(4-tert-ブチルフェニル)-N-4-[5-オキソ-4,5-ジヒドロ-[1,2,4]オキサジアゾール-3-イルメチル)カルバモイル]ベンジルカルバミン酸tert-ブチルエステル
【化６３】
2005537231.tif 000042
【０２１２】
クロロ蟻酸2-エチルヘキシル(0.34g，1.76mmol)を、DMF(5mL)中のN-(4-tert-ブチルフェニル)-N-4-[(N-ヒドロキシアミジノメチル)カルバモイル]ベンジルカルバミン酸tert-ブチルエステル(0.80g，1.76mmol)及びピリジン(0.15g，1.90mmol)の溶液に温度を０℃に維持しながら滴下添加した。30分後０℃でこの反応混合物を酢酸エチル(25mL)及び水(10mL)を用いて希釈した。有機相を水で洗浄し(5×10mL)、乾燥させ(硫酸マグネシウム)、真空下で濃縮した。残渣をm-キシレン(10mL)中に溶解させ、2時間還流させた。この反応混合物を真空下で濃縮し、残渣を、酢酸エチル及びヘプタンの混合物(7：3)を用いて溶出するシリカゲル(33g)上のカラムクロマトグラフィにより精製して、0.31gのN-(4-tert-ブチルフェニル)-N-4-[5-オキソ-4,5-ジヒドロ-[1,2,4]オキサジアゾール-3-イルメチル)カルバモイル]ベンジルカルバミン酸tert-ブチルエステルを得た。
【０２１３】
1H NMR(DMSO-d6)：δ1.22(9H，s)，1.39(9H，s)，4.38(2H，d)，4.88(2H，s)，7.12(2H，d)，7.30(4H，dd)，7.82(2H，d)，9.00(1H，t)，12.40(1H，broad)；HPLC-MS（方法Ａ）：m/z＝381(M+1)；Rt＝7.10分。
【０２１４】
工程６：4-[(4-tert-ブチルフェニルアミノ)メチル]-N-(5-オキソ-4,5-ジヒドロ-[1,2,4]オキサジアゾール-3-イルメチル)ベンズアミド
【化６４】
2005537231.tif 000043
【０２１５】
N-(4-tert-ブチルフェニル)-N-4-[5-オキソ-4,5-ジヒドロ-[1,2,4]オキサジアゾール-3-イルメチル)カルバモイル]ベンジルカルバミン酸tert-ブチルエステル(0.20g，0.45mmol)を酢酸エチル(4mL)中に懸濁させ、酢酸エチル中の乾燥塩化水素(3M，4mL)を添加した。2.5時間後40℃でこの反応混合物を真空下で濃縮し、残渣を酢酸エチルから結晶化させ、0.15gの4-[(4-tert-ブチルフェニルアミノ)メチル]-N-(5-オキソ-4,5-ジヒドロ-[1,2,4]オキサジアゾール-3-イルメチル)ベンズアミド塩酸塩を得た。
【０２１６】
1H NMR(DMSO-d6)：δ1.22(9H，s)，4.39(2H，d)，4.48(2H，s)，7.05(2H，broad)，7.31(2H，d)，7.55(2H，d)，7.86(2H，d)，9.05(1H，t)，12.45(1H，broad)；HPLC-MS（方法Ａ）：m/z：355；Rt＝4.23分；HPLC-MS（方法Ｂ）：m/z＝381(M+1)；Rt＝4.77分。
【０２１７】
工程７：
アセトニトリル(5mL)中の4-[(4-tert-ブチルフェニルアミノ)メチル]-N-(5-オキソ-4,5-ジヒドロ-[1,2,4]オキサジアゾール-3-イルメチル)ベンズアミド塩酸塩(100mg，0.26mmol)及びジイソプロピルエチルアミン(33.6mg，0.26mmol)の溶液に、4-(トリフルオロメトキシ)フェニルイソシアン酸塩(52.8mg，0.26mmol)を添加した。この反応混合物を4.5時間20℃で撹拌し、真空下で濃縮した。残渣を、DCM及びエタノール中の10％ アンモニア(85：15)の混合物を用いて溶出するシリカゲル(33g)上のカラムクロマトグラフィにより精製して、100mgの標題化合物を得た。
【０２１８】
1H NMR(DMSO-d6)：δ1.25(9H，s)，4.34(2H，d)，4.96(2H，s)，7.15-7.28(4H，dd)，7.38(4H，d)，7.55(2H，d)，7.82(2H，d)，8.45(1H，s)，8.95(1H，t)；HPLC-MS（方法Ａ）：m/z：584；Rt＝7.37分。
【０２１９】
例2（一般手順（Ａ））  4-[1-(4-tert-ブチルフェニル)-3-(3-フルオロ-5-トリフルオロメチルフェニル)ウレイドメチル]-N-(5-オキソ-4,5-ジヒドロ[1,2,4]オキサジアゾール-3-イルメチル)ベンズアミド
【化６５】
2005537231.tif 000044
【０２２０】
3-アミノ-5-フルオロベンゾトリフルオライド(70mg，0.34mmol)を酢酸エチル(1mL)中に溶解させ、酢酸エチル中の乾燥塩化水素(3.4M，3mL)を添加した。10分後、混合物を真空下で濃縮し、残渣をトルエンから３回蒸発させた(4mL)。残渣をトルエン(4mL)中に懸濁させ、ジホスゲン(0.20mL，1.7mmol)を添加した。この反応混合物を120℃で3時間撹拌し、真空下で濃縮した。残渣をトルエンから３回蒸発させた(4mL)。残渣をDCM(1mL)中に溶解させ、DCM(2mL)中の4-[(4-tert-ブチルフェニルアミノ)メチル]-N-(5-オキソ-4,5-ジヒドロ-[1,2,4]オキサジアゾール-3-イルメチル)ベンズアミド塩酸塩(130mg，0.31mmol)及びジイソプロピルエチルアミン(44mg，0.34mmol)の溶液に添加した。この反応混合物を16時間20℃で撹拌し、真空下で濃縮した。残渣を、DCM 及びエタノール中の10％ アンモニア(7：3)の混合物を用いるシリカゲル(33g)上のカラムクロマトグラフィにより精製して、54mgの標題化合物を得た。
【０２２１】
1H NMR(DMSO-d6)：δ1.25(9H，s)，4.20(2H，d)，4.98(2H，s)，7.16-7.26(4H，dd)，7.35-7.43(4H，dd)，7,73(1H，s)，7.82(2H，d)，8.8(1H，s)；HPLC-MS（方法Ａ）：m/z：586；Rt＝7.48分。
【０２２２】
一般手順（Ｂ）
【化６６】
2005537231.tif 000045
【０２２３】
ここでXは、-C(O)NH-、-C(O)NHCH2-、-C(O)NHCH(CH3)-、-C(O)NHCH2CH2-又は-C(O)O-であり、D及びEは式(I)で定義したとおりである。
【０２２４】
この手順を下記例3で説明する。
【０２２５】
例3（一般手順（Ｂ））  5-4-[1-(4-tert-ブチルフェニル)-3-(2,2,4,4-テトラフルオロ-4H-ベンゾ[1,3]ジオキシン-6-イル)ウレイドメチル]フェニルペンタ-2,4-ジエン酸
【化６７】
2005537231.tif 000046
【０２２６】
工程１：5-(4-ホルミルフェニル)ペンタ-2,4-ジエン酸の調製
乾燥THF(100mL)中の、水素化ナトリウムの氷冷却された溶液(2.26g，67.2mmol、鉱物油中の60％懸濁物として）に、乾燥THF(200mL)中のトリメチル-4-ホスホノクロトネート(10.5g，50.4mmol)の溶液を滴下添加し、溶液を不活性雰囲気下にて０℃で3時間撹拌した。テレフタルジアルデヒドモノジエチルアセタール(7.00g，33.6mmol)を乾燥THF(200mL)中に溶解させ、上記溶液にゆっくりと添加した。撹拌を２時間０℃で続けた。水(400mL)、続いて酢酸エチル(500mL)をゆっくりと添加し、層を混合させた。有機層を回収し、無水硫酸ナトリウムを用いて乾燥させた。溶媒を回転蒸発により除去して10.0gの粗製の橙色の生成物を得、これをエタノール(20mL)中に溶解させ、水酸化カリウムの20％溶液(100mL)を添加した。混合物を室温で5時間撹拌し、次いで酢酸エチル(500mL)及び水(500mL)の間で分配した。有機層を水(200mL)で洗浄し、合体した水相を、酢酸エチル(300mL)を用いて逆抽出した。水相を氷酢酸でpH 3.5にまで酸性にし、酢酸エチルを用いて抽出した(2×500mL)。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、乾燥させて標題の物質を橙色の粉末で得た。収率：6.78g(100％)。
【０２２７】
1H NMR(DMSO-d6)：δ12.35(s, 1H)；9.98(s, 1H)；7.90(d, 2H)；7.77(d, 2H)；7.38(d, 1H)；7.30(d, 1H)；7.15(d, 1H)；6.08(d, 1H)。HPLC-MS（方法Ｂ）：m/z＝203(M+1)；Rt＝2.71分。
【０２２８】
工程２：樹脂結合した5-(4-ホルミルフェニル)ペンタ-2,4-ジエン酸の調製
5-(4-ホルミルフェニル)ペンタ-2,4-ジエン酸(510mg，2.52mmol)をエタノール(5mL)中に懸濁させ、水(1.3mL)、続いて固体の炭酸セシウム(684mg，2.1mmol)を添加した。混合物を室温で30分撹拌し、次いで乾燥させた。セシウム塩をDMF(25mL)中に再び懸濁させ、ヨウ化カリウム(35mg，0.21mmol)を添加した。次いで、この懸濁物をブロモ-wang樹脂(2.0g，1.05mmol/g負荷)に添加した。この反応混合物を50℃で一晩振盪し、次いで排液(drain)して、DMF(2×30mL)；水：DMF(2×30mL)、DMF(2×30mL)及びDCM(3×30mL)で洗浄した。樹脂を真空オーブンにて40℃で一晩乾燥させた。
【０２２９】
工程３：樹脂に結合された5-4-[(4-tert-ブチルフェニルアミノ)メチル]フェニルペンタ-2,4-ジエン酸の調製
5-(4-ホルミルフェニル)ペンタ-2,4-ジエン酸(50mg)に結合した樹脂をNMP：DCP(2mL，1：1)中に30分間懸濁させ、次いでDMFを用いて洗浄した(3×2mL)。溶媒を除去し、DMF：TMOF(1.5mL，1：1)中のtert-ブチルアニリン(30mg，0.2mmol)の溶液を添加し、続いてHOAc(100μL)添加した。この混合物を2時間室温で撹拌した後、DMF-MeOH(1mL，1：1)中の水素化シアノホウ素ナトリウム(11mg，0.15mmol)の溶液を添加した。混合物を一晩室温で撹拌し、次いで溶媒を排出させ(drain for solvent)、DMF(3×2mL)及びDCM(2mL)を用いて洗浄した。DCM(2mL)中の50％ DIPEA 溶液を添加し、樹脂を30分撹拌した。樹脂を、DCM(3×2mL)、MeOH(1×2mL)及びDCP(2×2mL)を用いて連続して洗浄した。
【０２３０】
工程4：5-4-[1-(4-tert-ブチルフェニル)-3-(2,2,4,4-テトラフルオロ-4H-ベンゾ[1,3]ジオキシン-6-イル)ウレイドメチル]フェニルペンタ-2,4-ジエン酸の調製
上記の調製した樹脂に、DCP(1mL)中の2,2,4,4-テトラフルオロ-6-イソシアナト4H-ベンゾ[1,3]ジオキシン(124mg，0.5mmol)の溶液を添加した。溶液を一晩室温で振盪し、次いでDMF(3×2mL)及びDCM(10×2mL)を用いて洗浄した。樹脂をDCM中のTFAの50％溶液(2mL 1：1)を用いて40分処理することにより、樹脂から標題生成物を開裂(cleave)させた。窒素気流により溶媒を除去し、標題の物質を結晶状の固体で得た。HPLC-MS（方法Ａ）：m/z＝586(M+1)；Rt＝8.23分。
【０２３１】
同様に以下の化合物を調製した：
例4（一般手順（Ｂ））  5-4-[3-(3,5-Bis(トリフルオロメチル)フェニル)-1-(4-tert-ブチルフェニル)ウレイドメチル]フェニルペンタ-2,4-ジエン酸
【化６８】
2005537231.tif 000047
【０２３２】
HPLC-MS（方法Ａ）：m/z＝591(M+1)；Rt＝8.38分。
【０２３３】
例5（一般手順（Ｂ））  5-4-[3-[1-(4-ブロモフェニル)エチル]-1-(4-tert-ブチルフェニル)ウレイドメチル]フェニルペンタ-2,4-ジエン酸
【化６９】
2005537231.tif 000048
【０２３４】
HPLC-MS（方法Ａ）：m/z＝562(M+1)；Rt＝7.78分。
【０２３５】
例6（一般手順（Ｂ））  5-4-[1-(4-tert-ブチルシクロへキシル)-3-(2,2,4,4-テトラフルオロ-4H-ベンゾ[1,3]ジオキシン-6-イル)ウレイドメチル]フェニルペンタ-2,4-ジエン酸
【化７０】
2005537231.tif 000049
【０２３６】
HPLC-MS（方法Ａ）：m/z＝591(M+1)；Rt＝8.20分。
【０２３７】
例7（一般手順（Ｂ））  5-4-[3-(3,5-Bis(トリフルオロメチル)フェニル)-1-(4-tert-ブチルシクロへキシル)ウレイドメチル]フェニルペンタ-2,4-ジエン酸
【化７１】
2005537231.tif 000050
【０２３８】
HPLC-MS（方法Ａ）：m/z＝597(M+1)；Rt＝8.87分。
【０２３９】
例8（一般手順（Ｂ））  5-4-[3-[1-(4-ブロモフェニル)エチル]-1-(4-tert-ブチルシクロへキシル)ウレイドメチル]フェニルペンタ-2,4-ジエン酸 
【化７２】
2005537231.tif 000051
【０２４０】
HPLC-MS（方法Ａ）：m/z＝568(M+1)；Rt＝8.23分。
【０２４１】
例9（一般手順（Ｂ））  5-4-[1-(4-シクロヘキシ-1-エニルフェニル)-3-(2,2,4,4-テトラフルオロ-4H-ベンゾ[1,3]ジオキシン-6-イル)ウレイドメチル]フェニルペンタ-2,4-ジエン酸
【化７３】
2005537231.tif 000052
【０２４２】
HPLC-MS（方法Ａ）：m/z＝609(M+1)；Rt＝8.42分。
【０２４３】
例10（一般手順（Ｂ））  5-4-[3-(3,5-Bis(トリフルオロメチル)フェニル)-1-(4-シクロヘキシ-1-エニルフェニル)ウレイドメチル]フェニルペンタ-2,4-ジエン酸
【化７４】
2005537231.tif 000053
【０２４４】
HPLC-MS（方法Ａ）：m/z＝615(M+1)；Rt＝8.70分。
【０２４５】
例11（一般手順（Ｂ））  5-4-[3-[1-(4-ブロモフェニル)エチル]-1-(4-シクロヘキシ-1-エニルフェニル)ウレイドメチル]フェニルペンタ-2,4-ジエン酸 
【化７５】
2005537231.tif 000054
【０２４６】
HPLC-MS（方法Ａ）：m/z＝586(M+1)；Rt＝8.22分。
【０２４７】
例12  5-4-[1-(4-シクロヘキシ-1-エニルフェニル)-3-(3,5-ジクロロフェニル)ウレイドメチル]フェニルペンタ-2,4-ジエン酸
【化７６】
2005537231.tif 000055
【０２４８】
工程１：1-(4-シクロヘキシ-1-エニルフェニル)-3-(3,5-ジクロロフェニル)-1-(4-[ヒドロキシメチル]ベンジル)尿素
4-[1-(4-シクロヘキシ-1-エニルフェニル)-3-(3,5-ジクロロフェニル)ウレイドメチル]安息香酸メチルエステル(20g；39mmol)をトルエン(750mL)中に溶解させ、溶液を−78℃にまで冷却した。温度を−65℃未満に維持しながら水素化ジイソブチルアルミニウムの溶液(163mL；トルエン中に1.2M)を滴下添加した。混合物を40分−78℃で、及び3時間室温で撹拌した。混合物を、エーテル(200mL)中の1N 塩酸を用いて中和した後、水(750mL)を添加した。有機層を分離し、無水硫酸ナトリウムを用いて乾燥させ、真空下での回転蒸発により乾固させて1-(4-シクロヘキシ-1-エニルフェニル)-3-(3,5-ジクロロフェニル)-1-(4-[ヒドロキシメチル]ベンジル)尿素を得た。収率：18.0g(96％)。
【０２４９】
1H NMR(DMSO-d6)：δ8.50(s, 1H)；7.61(d, 2H)；7.38(d, 2H)；7.22(d, 2H)；7.20-7.10(m, 5H)；6.18(m, 1H)；5.12(t, 1H)；4.89(s, 2H)；4.45(d, 2H)；2.34(m, 2H)；2.15(m, 2H)；1.70(M, 2H)；1.58(m, 2H)。
【０２５０】
工程２：1-(4-シクロヘキシ-1-エニルフェニル)-3-(3,5-ジクロロフェニル)-1-(4-ホルミルベンジル)尿素
1-(4-シクロヘキシ-1-エニルフェニル)-3-(3,5-ジクロロフェニル)-1-(4-[ヒドロキシメチル]ベンジル)尿素(10.0g；20.8mmol)をDCM(200mL)中に溶解させ、重クロム酸ピリジニウムを添加した(15.6g，41.5mmol)。混合物を、TLC(酢酸エチル/ヘプタン(50：50)，Rf＝0.6)により完了したと判断されるまで(7時間)、周囲温度で撹拌した。不溶物質をろ過除去し、溶媒を回転蒸発により除去して油状物を得た。この油状物を高温の酢酸エチル(400mL)中に溶解させた。ろ過後、真空下での回転蒸発により溶媒を半量の体積にまで減らした。次いで溶液を氷浴で冷やし、結晶化を開始させた。生成物をろ過除去し、低温の酢酸エチルを用いて洗浄した。母液の体積を減らし、冷却し、沈殿した結晶をろ過除去することにより、第２の産物である結晶を得た。1-(4-シクロヘキシ-1-エニルフェニル)-3-(3,5-ジクロロフェニル)-1-(4-ホルミルベンジル)尿素の総収率は6.20g(62％)であった。
【０２５１】
1H NMR(DMSO-d6)：δ9.95(s, 1H)；8.60(s, 1H)；7.86(d, 2H)；7.62(s, 2H)；7.50(d, 2H)；7.41(d, 2H)；7.21(d, 2H)；7.15(s, 1H)；6.20(s, 1H)；5.01(s, 2H) 2.35(m, 2H)；2.18(m, 2H)；1.70(m, 2H)；1.60(m, 2H)。
【０２５２】
4-ホスホノクロトン酸トリエチル(145mg；0.65mmol)を乾燥THF(2.0mL)中に溶解させ、水素化ナトリウム(50mg；60％ 油状物懸濁物，1.24mmol)を添加した。混合物を０℃で10分撹拌した後、THF(2.0mL)中の1-(4-シクロヘキシ-1-エニルフェニル)-3-(3,5-ジクロロフェニル)-1-(4-ホルミルベンジル)尿素(150mg；0.31mmol)の溶液を導入した。溶液を０℃で１時間撹拌した。水(1mL)を添加し、撹拌をさらに30分室温で続けた。溶媒を回転蒸発により除去し、残渣の油状物を水(5mL)中に溶解させた。酢酸(1.0mL)を添加することにより溶液から沈殿させ、ろ過により回収し、水を用いて洗浄して標題化合物を得た。収率：150mg。
【０２５３】
1H NMR(DMSO-d6)：δ12.40(bs, 1H)；8.50(s, 1H)；7.57(s, 2H)；7.40(d, 2H)；7.38(d, 2H)；7.24(d, 2H)；7.20(s, 1H)；7.15(d, 2H)；7.10(d, 1H)；7.05(s, 1H)；7,01(s, 1H)；6.18(s, 1H)；5.95(d, 1H)；4.90(s, 2H)；2.35(m, 2H)；2.20(m, 2H)；1.70(m, 2H)；1.55(m, 2H)；HPLC-MS（方法Ａ）：m/z＝547(M+1)；Rt＝6.14分。
【０２５４】
一般手順（Ｃ）
【化７７】
2005537231.tif 000056
【０２５５】
ここでXは-C(O)NH-、-C(O)NHCH2-、-C(O)NHCH(CH3)-又は-C(O)NHCH2CH2-であり、D及びEは式(I)で定義したとおりである。
【０２５６】
例13（一般手順（Ｃ））  5-4-[1-(4-tert-ブチルフェニル)-3-(4-トリフルオロメトキシフェニル)ウレイドメチル]フェニルペンタ-4-エン酸
【化７８】
2005537231.tif 000057
【０２５７】
工程１：1-(4-ジエトキシメチルフェニル)プロパ-2-エン-1-オール
THF(100mL)中のテレフタルジアルデヒド・モノ-ジエチルアセタール(9.95mL，50mmol)の氷冷した溶液に、THF中の臭化ビニルマグネシウムの溶液(55mL，1M，55mmol)を、内部反応温度が10℃を超えない速度で滴下添加した。添加後、溶液を室温で2時間撹拌した後、塩化アンモニウム飽和水溶液(100mL)を用いてゆっくりとクエンチングした。水(100mL)及び酢酸エチル(200mL)を添加し、この２相系を勢いよく10分撹拌した。有機相を分離し、塩化アンモニウム飽和水溶液(100mL)を用いて１回洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、次いで乾燥するまで蒸発させた。粗成物を、ヘプタン中の25％ 酢酸エチルを溶出剤として用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィによりさらに精製した。純粋な画分をプールし、乾燥するまで蒸発させて標題の物質を淡い黄色の油状物で得た。収率：3.60g(31％)。
【０２５８】
1H NMR(CDCl3)：δ7.45(d, 2H)；7.34(d, 2H)；6.02(m, 1H)；5.48(s, 1H)；5.35(d, 1H)；5.18(s, 1H)；5.16(d, 1H)；3.55(m, 4H)；1.20(t, 6H)。
【０２５９】
工程２：5-(4-ホルミルフェニル)ペンタ-4-エン酸
1-(4-ジエトキシメチルフェニル)プロプ-2-エン-1-オール(9.90g，42mmol)をオルト蟻酸トリエチル(50mL)中に溶解させ、プロピオン酸(1.0mL)を添加した。溶液を140℃にまで48時間加熱した。溶媒を回転蒸発により除去し、橙色の油状物をHCl水溶液(200mL，2N)中に再び懸濁させた。混合物を還流にまで4時間加熱し、次いで氷浴で30分冷却した。沈殿した物質を回収し、水で２回洗浄し、真空オーブンで乾燥させた。収率：3.02g(35％)。
【０２６０】
1H NMR(CDCl3)：δ12.10(s, 1H)；9.93(s, 1H)；7.82(d, 2H)；7.60(d, 2H)；6.53(ds, 2H)；2.55(m, 2H)；2.50(m, 2H)。
【０２６１】
工程３：樹脂結合した5-(4-ホルミルフェニル)ペンタ-4-エン酸の調製
5-(4-ホルミルフェニル)ペンタ-4-エン酸(700mg，3.40mmol)をエタノール(8mL)中に懸濁させ、水(2mL)を、続いて固体の炭酸セシウム(1095mg，3.36mmol)を添加した。混合物を室温で90分撹拌した後、透明な溶液を得た。溶媒を回転蒸発により除去し、続けてジオキサンから２回蒸発させた。セシウム塩をDMF(30mL)中に再び懸濁させ、ヨウ化カリウム(35mg，0.21mmol)を添加した。この懸濁物をブロモ-wang樹脂(2.8g，負荷1.05mmol/g)に添加した。この反応混合物を50℃で一晩振盪し、次いで排液し、DMF(2×30mL)；水：DMF(2×30mL，1：1)、DMF(2×30mL)及びDCM(3×30mL)を用いて洗浄した。樹脂を真空オーブンにて40℃で一晩乾燥させ、3.00gの生成物を得た。
【０２６２】
工程4：樹脂結合した5-4-[(4-tert-ブチルフェニルアミノ)メチル]フェニルペンタ-4-エン酸の調製
5-(4-ホルミルフェニル)ペンタ-4-エン酸(50mg)に結合された樹脂をNMP：DCP(2mL，1：1)中に30分懸濁させ、次いでDMFを用いて洗浄した(3×2mL)。溶媒を除去し、DMF-TMOF(1.5mL，1：1)中のtert-ブチルアニリン(30mg，0.2mmol)の溶液を添加し、続いてHOAc(100μL)を添加した。混合物を2時間室温で撹拌し後、DMF：MeOH(1mL，1：1)中の水素化シアノホウ素ナトリウム(11mg，0.15mmol)の溶液を添加した。混合物を一晩室温で撹拌し、次いで溶媒を排液し、DMF(3×2mL)及びDCM(2mL)を用いて洗浄した。DCM(2mL)中の50％ DIPEAの溶液を添加し、得られた樹脂を30分撹拌した。樹脂を、DCM(3×2mL)、MeOH(1×2mL)及びDCP(2×2mL)を連続して用いて洗浄した。
【０２６３】
工程５：5-4-[1-(4-tert-ブチルフェニル)-3-(4-トリフルオロメトキシフェニル)ウレイドメチル]フェニルペンタ-4-エン酸の調製
上記の調製した樹脂を、DCP(1mL)中のトリフルオロメトキシフェニルイソシアン酸塩(101mg，0.5mmol)の溶液に添加した。溶液を一晩室温で振盪し、次いでDMF(3×2mL)及びDCM(10×2mL)を用いて洗浄した。樹脂をDCM(2mL 1：1)中のTFAの50％溶液を用いて40分処理することにより、標題化合物を樹脂から開裂させた。溶媒を窒素気流により除去し、標題の物質を結晶状の固体で得た。HPLC-MS（方法Ｂ）：m/z＝541(M+1)；Rt＝6.56分。
【０２６４】
同様の方法で以下の化合物を調製した。
【０２６５】
例14（一般手順（Ｃ））  5-4-[3-[1-(4-ブロモフェニル)エチル]-1-(4-tert-ブチルフェニル)ウレイドメチル]フェニルペンタ-4-エン酸
【化７９】
2005537231.tif 000058
【０２６６】
HPLC-MS（方法Ａ）：m/z＝564(M+1)；Rt＝6.39分。
【０２６７】
例15（一般手順（Ｃ））  5-4-[1-(4-tert-ブチルフェニル)-3-(3,5-ジクロロフェニル)ウレイドメチル]フェニルペンタ-4-エン酸
【化８０】
2005537231.tif 000059
【０２６８】
HPLC-MS（方法Ａ）：m/z＝526(M+1)；Rt＝6.95分。
【０２６９】
例16（一般手順（Ｃ））  5-4-[1-(4-シクロヘキシ-1-エニルフェニル)-3-(4-トリフルオロメトキシフェニル)ウレイドメチル]フェニルペンタ-4-エン酸
【化８１】
2005537231.tif 000060
【０２７０】
HPLC-MS（方法Ａ）：m/z＝565(M+1)；Rt＝6.90分。
【０２７１】
例17（一般手順（Ｃ））  5-4-[1-(4-シクロヘキシ-1-エニルフェニル)-3-(3,5-ジクロロフェニル)ウレイドメチル]フェニルペンタ-4-エン酸
【化８２】
2005537231.tif 000061
【０２７２】
HPLC-MS（方法Ａ）：m/z＝550(M+1)；Rt＝7.33分。
【０２７３】
一般手順（Ｄ）
【化８３】
2005537231.tif 000062
【０２７４】
ここでXは-C(O)NH-、-C(O)NHCH2-、-C(O)NHCH(CH3)-又は-C(O)NHCH2CH2-であり、D及びEは式(I)で定義したとおりである。
【０２７５】
例18（一般手順（Ｄ））  3-(3,5-Bis(トリフルオロメチル)フェニル)-1-(4-tert-ブチルシクロへキシル)-1-4-[1-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素
【化８４】
2005537231.tif 000063
【０２７６】
工程１の出発物質：2-(1-メトキシ-1-メチルエチル)-5-メチル-2H-テトラゾール
5-メチル-2H-テトラゾール(3.50g；42.2mmol)をトルエン(100mL)中に懸濁させる。2,2-ジメトキシプロパン(20mL)を添加し、混合物を還流で3時間加熱し、透明な無色の溶液を得る。溶媒を回転蒸発により除去し、NMRによれば20％の位置異性体を含んだ標題の物質を無色の油状物で得る。この粗成物をさらに精製せずに用いる。
【０２７７】
1H NMR(CDCl3)：δ3.13(s, 3H；主要でない異性体)；3.11(s, 3H；主要な異性体)；2.72(s, 3H，主要でない異性体)；2.57(s, 3H；主要な異性体) 1.98(s, 6H，主要な異性体)；1.92(s, 6H，主要でない異性体)。
【０２７８】
工程１：4-[1-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンズアルデヒド
ドライアイス-アセトン浴で−78℃にまで冷却した乾燥THF(100mL)中の2-(1-メトキシ-1-メチルエチル)-5-メチル-2H−テトラゾール溶液に、内部反応温度を−65℃未満に維持しながらヘキサン(32mL，1.6M)中のn-ブチルリチウムの溶液をゆっくりと添加した。温度を40分にわたり０℃にまで上げた。次いで温度を−78℃にまで下げ、THF(100mL)中のテレフタルジアルデヒドモノ-ジエチルアセタール(6.8mL，34mmol)の溶液を10分にわたり滴下添加する間に、透明な暗色の反応混合物が暗色から黄色に変化した。温度を再び０℃にまで上げ、混合物を酢酸(4.3mL)を用いて反応停止させた。混合物を室温で5時間撹拌し、次いで酢酸エチル(500mL)及び水(500mL)の間で分配した。有機層を水(500mL)を用いて１回洗浄し、次いで連続して1N 水酸化ナトリウム水溶液(2×250mL)、10％ 亜硫酸ナトリウム水溶液(2×250mL)及び塩水(250mL)を用いて洗浄した。次いで有機相を無水硫酸ナトリウムを用いて乾燥させ、回転蒸発により乾固させた。残渣を1N HCl水溶液(100mL)中に懸濁させ、2時間還流にまで加熱した。次いで得られた透明な溶液を加熱しながらろ過し、次いで冷却し、乾燥させた。残渣をアセトニトリルから２回ストリップして純粋な標題物質をオフホワイト色の結晶で得た。
【０２７９】
1H NMR(DMSO-d6)：δ9.96(s, 1H)；7.88(d, 2H)；7.57(d, 2H)；5.09(dd, 1H)；3.22(ddd, 2H)。
【０２８０】
工程２：樹脂に結合された4-[1-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンズアルデヒドの調製
DCM中に1時間予め膨潤させた2-クロロトリチル樹脂(1.3g，負荷1.26mmol/g)に、DMF(10mL)中の4-[1-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンズアルデヒド(1,4g，4.4mmol)及びDIPEA(0.931mL，5.4mmol)の溶液及びDCM(5mL)を添加した。混合物を室温で一晩窒素下で反応させた。次いで樹脂を排液し、DMF(3×30mL)及びDCM(5×30mL)を用いて洗浄し、真空オーブンで一晩乾燥させた。
【０２８１】
工程３：樹脂に結合された結合1-4-[(4-tert-ブチルシクロへキシルアミノ)メチル]フェニル-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エタノールの調製
樹脂に結合された4-[1-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンズアルデヒド(50mg)を30分DCM中で膨潤させた。溶媒を除去し、樹脂をDMFで１回洗浄した。DMF(1mL)中の50％ TMOF中の4-tert-ブチルシクロへキシルアミン(25mg，0.164mmol)の溶液を添加し、続いて酢酸(50μL)を添加した。混合物を室温で3時間振盪し、次いでDMF(1mL)中の50％ MeOH 中の水素化シアノホウ素ナトリウム(13mg，0.20mmol)の溶液を添加した。樹脂混合物を一晩室温で振盪し、次いで排液し、DMF(3×2mL)及びDCP(3×2mL)を用いて洗浄した。
【０２８２】
工程4：3-(3,5-bis(トリフルオロメチル)フェニル)-1-(4-tert-ブチルシクロへキシル)-1-4-[1-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素の調製
樹脂結合した1-4-[(4-tert-ブチルシクロへキシルアミノ)メチル]フェニル-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エタノール(50mg)をDCP(500μL)中に懸濁させ、N,O-bis(トリメチルシリル)アセタミド(100μL)を添加した。混合物を室温で１時間振盪し、次いでDCP(500μL)中の3,5-bis(トリフルオロメチル)フェニルイソシアン酸塩(48mg，0.19mmol)の溶液を添加した。この樹脂混合物を一晩室温で振盪し、次いで排液し、DCM(3×2mL)；DMF(3×2mL)；水(2×2mL，各々20分洗浄)、THF(3×2mL)及び最後にDCM(6×2mL)を用いて洗浄した。次いで樹脂をDCM中の50％ TFAを用いて30分処理した。溶媒をろ過により回収し、真空下での回転により乾固させた。
【０２８３】
同様に、以下の化合物を調製した：
例19（一般手順（Ｄ））  3-[1-(4-ブロモフェニル)エチル]-1-(4-tert-ブチルシクロへキシル)-1-4-[1-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル 尿素
【化８５】
2005537231.tif 000064
【０２８４】
HPLC-MS（方法Ａ）：m/z＝584(M+1)；Rt＝5.70分。
【０２８５】
例20（一般手順（Ｄ））  3-(3-メチルチオフェニル)-1-(4-tert-ブチルシクロへキシル)-1-4-[1-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル 尿素
【化８６】
2005537231.tif 000065
【０２８６】
HPLC-MS（方法Ａ）：m/z＝523(M+1)；Rt＝5.62分。
【０２８７】
例21（一般手順（Ｄ））  3,4-(トリフルオロメトキシフェニル)-1-(4-tert-ブチルシクロへキシル)-1-4-[1-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル 尿素
【化８７】
2005537231.tif 000066
【０２８８】
HPLC-MS（方法Ａ）：m/z＝561(M+1)；Rt＝5.62分。
【０２８９】
例22（一般手順（Ｄ））  3-(3,5-ジクロロフェニル)-1-(4-tert-ブチルシクロへキシル)-1-4-[1-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル 尿素
【化８８】
2005537231.tif 000067
【０２９０】
HPLC-MS（方法Ａ）：m/z＝546(M+1)；Rt＝6.30分。
【０２９１】
例23（一般手順（Ｄ））  3-(3-フルオロ-5-トリフルオロメチルフェニル)-1-(4-tert-ブチルシクロへキシル)-1-4-[1-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル 尿素
【化８９】
2005537231.tif 000068
【０２９２】
HPLC-MS（方法Ａ）：m/z＝588(M+1)；Rt＝6.22分。
【０２９３】
一般手順（Ｅ）
【化９０】
2005537231.tif 000069
【０２９４】
ここでXは-C(O)NH-、-C(O)NHCH2-、-C(O)NHCH(CH3)-又は-C(O)NHCH2CH2-であり、D及びEは式(I)で定義したとおりである。
【０２９５】
例24（一般手順（Ｅ））  3-(3,5-Bis(トリフルオロメチル)フェニル)-1-(4-tert-ブチルシクロへキシル)-1-4-[1-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素（純粋なエナンチオマーとして）
【化９１】
2005537231.tif 000070
【０２９６】
工程１：trans-4-[(4-tert-ブチルシクロへキシルアミノ)メチル]安息香酸メチルエステル
4-ホルミル安息香酸メチルエステル(10.6g，64.4mmol)をメタノール(200mL)中に溶解させた。4-tert-ブチルシクロへキシルアミンの17：83 cis/trans の混合物(10.0g，64.4mmol，Aldrich)を添加すると、直ちに白色の結晶が沈殿した。混合物を30分加熱還流させてイミン形成を完了させ、次いで氷浴で０℃にまで冷却した。次いで結晶状の純粋なtrans形態物をろ過により回収し、一晩真空下で乾燥させた。収率：15.3g(78％)。
【０２９７】
1H NMR(CDCl3)，300MHz：δ8.37 ppm(s, 1H)；8.06(d, 2H)；7.77(d, 2H)；3.92(s, 3H)；3.17(m, 1H)；1.83(m, 4H)；1.60(m, 2H)，1.09(m, 3H)；0.87(s, 9H)。
【０２９８】
微量分析：C19H27NO2についての計算値：C：75.71％，H：9.03％，N：4.65％。実測値：C：75.60％，H：9.37％，N：4.68％。
【０２９９】
trans-4-[(4-tert-ブチルシクロへキシルイミノ)メチル]安息香酸メチルエステル(21.0g，69.2mmol)をメタノール(300mL)中に懸濁させ、酢酸(50mL)を添加した。得られた透明な溶液に水素化シアノホウ素ナトリウム(3.5g，55.5mmol)を添加し、混合物を周囲温度で30分撹拌した。次いで反応物容積を回転蒸発により３分の１にまで減らし、酢酸エチル(500mL)を添加した。有機相を炭酸ナトリウム溶液(5％，500mL)で洗浄し、硫酸ナトリウムを用いて乾燥させた。溶媒を回転蒸発により除去して、さらなる反応のために十分に純粋な白色の結晶状の固体で、標題の物質を得た。収率：21.1g(100％)。
【０３００】
1H NMR(CDCl3)，300MHz：δ7.98 ppm.(d, 2H)；7.38(d, 2H)；3.90(s, 3H)；3.86(s, 2H)；2.39(m, 1H)；2.01(m, 2H)；1.77(m, 2H);1.51(bs, 1H)；0.93-1.18(m, 5H)；0.82(s, 9H)。
【０３０１】
LC-MS（方法Ｂ）C19H29NO2についての計算値：303.4；実測値304.2(M+H)+。
【０３０２】
工程２：trans-4-[tert-ブトキシカルボニル-(4-tert-ブチルシクロへキシル)アミノ]メチル安息香酸
trans-4-[(4-tert-ブチルシクロへキシルアミノ)メチル]安息香酸メチルエステル(20.0g，65.9mmol)をTHF(300mL)中に溶解させた。ジ-tert-ブチルピロカーボネート(16.0g，73.4mmol)及びジイソプロピルエチルアミン(12.0g，92.9mmol)を添加し、透明な溶液を一晩周囲温度で撹拌した。溶媒を回転蒸発により除去し、結晶状の残渣をエタノール(200mL)中に再び溶解させた。水酸化ナトリウム水溶液(100mL，4 N)を添加し、混合物を70℃にまで4時間加熱した。冷却後、反応物容積を回転蒸発により３分の１にまで減らし、水(300mL)を添加した。混合物をジエチルエーテル(2×200mL)で抽出し、痕跡量の加水分解されていない物質を除去した。次いで水相に4N HCl水溶液を添加することによりpH 3.0 にまで酸性にした後、溶液から標題の物質が緻密な結晶で分離した。結晶を水で１回洗浄し、真空オーブン(40℃)で一晩乾燥させた。収率：24.3g(93％)。1H NMR(CDCl3)，300MHz：δ8.04 ppm.(d, 2H)；7.31(d, 2H)；4.39(bs, 2H)；4.05(bs, 1H)；1.78(bd, 4H)；0.95-1.65(m, 14H)；0.83(s, 9H)。cis/trans カルバメート異性体の存在により信号が幅広くなった。
【０３０３】
微量分析：C23H35NO4についての計算値：C：70.92％，H：9.06％，N：3.60％。実測値：C：70.67％，H：9.36％，N：3.57％。
【０３０４】
工程３：N-メトキシ-N-メチル-trans-4-[tert-ブトキシカルボニル-(4-tert-ブチルシクロへキシル)アミノ]メチルベンズアミド
trans-4-[tert-ブトキシカルボニル-(4-tert-ブチルシクロへキシル)アミノ]メチル安息香酸(5.0g，12.8mmol)をDCM(50mL)中の50％ DMF中に溶解させた。1-ヒドロキシベンゾトリアゾール(1.0g，14.1mmol)を、続いてN-エチル-N'-ジメチルアミノプロピルカルボジイミド塩酸塩(2.7g，14.1mmol)を添加した。混合物を室温で1時間撹拌した後、N,O-ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩(1.4g，14.1mmol)及びDIPEA(2.4mL，14.1mmol)を添加した。この反応混合物を室温で一晩撹拌し、次いで酢酸エチル(300mL)及び炭酸水素ナトリウム飽和水溶液(200mL)の間で分配した。有機相を回収し、無水硫酸ナトリウムを用いて乾燥させ、回転蒸発により乾固させ、標題の物質を透明な黄色の油状物で得た。収率：4.8g(87％)。
【０３０５】
1H NMR(CDCl3)，δ7.60(d, 2H)；7.25(d, 2H)；4.38(bs, 2H)；4.02(bs, 1H)；3.55(s, 3H)；3.35(s, 3H)；1.78(bd, 4H)；0.95-1.65(m, 14H)；0.81(s, 9H)。
【０３０６】
工程4：N-メトキシ-N-メチル-trans-4-[4-tert-ブチルシクロへキシルアミノ]メチルベンズアミド
N-メトキシ-N-メチル-trans-4-[tert-ブトキシカルボニル-(4-tert-ブチルシクロへキシル)アミノ]メチルベンズアミド(1.0g，2.3mmol)をDCM(10mL)中に溶解させ、TFA(10mL)を添加した。この反応混合物を周囲温度で2時間撹拌し、次いで回転蒸発により乾固させた。次いで結晶状の残渣を酢酸エチル(100mL)中に溶解させ、有機相を炭酸ナトリウム飽和水溶液で洗浄した(2×100mL)。合体した水相を酢酸エチル(100mL)で１回逆抽出し；合体した有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を回転蒸発により除去し、標題化合物を微細な白色の結晶で得た。収率：760mg(99％)。
【０３０７】
1H NMR(CDCl3)δ7.62(d, 2H)；7.34(d, 2H)；3.83(s, 2H)；3.53(s, 3H)；3.33(s, 3H)；2.40(m, 1H)；2.01(m, 2H)；1.78(m, 2H)；1.20-0.95(m, 4H)，0.84(s, 9H)。
【０３０８】
微量分析：C20H32N2O2についての計算値：C：72.25％，H：9.70％，N：8.43％。実測値：C：71.22％，H：9.79％，N：8.29％。
【０３０９】
工程５：1-4-[(4-tert-ブチルシクロへキシルアミノ)メチル]フェニル-2-[2-(1-メトキシ-1-メチルエチル)-2H-テトラゾール-5-イル]エタノン
ドライアイス-アセトン浴で−78℃にまで冷却したTHF(10mL)中の2-(1-メトキシ-1-メチルエチル)-5-メチル-2H-テトラゾール(893mg，5.7mmol)溶液に、ヘキサン中のn-ブチルリチウム溶液(3.6mL，1.6M，5.7mmol)を滴下添加した。混合物を−78℃で30分撹拌し、０℃でさらに30分撹拌し、次いで−78℃にまで再び冷却した。次いでこの溶液をゆっくりと、−78℃に維持したTHF(15mL)中のN-メトキシ-N-メチル-trans-4-[4-tert-ブチルシクロへキシルアミノ]メチルベンズアミド(760mg，2.3mmol)の溶液に移した（カニューレ法により）。この反応混合物を30分−78℃で撹拌し、次いでメタノール(2mL)の添加により反応を停止させた。溶媒を回転蒸発により除去し、残渣を酢酸エチル(100mL)中に溶解させた。有機相を炭酸水素ナトリウム飽和水溶液(100mL)で１回洗浄し；無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、回転蒸発により乾固させて1.0g(100％)の標題の物質を透明な油状物で得た。
【０３１０】
1H NMR(CDCl3)，δ7.96(d, 2H)；7.42(d, 2H)；4.62(s, 2H)；3.88(s, 2H)；3.10(s, 3H)；2.38(m, 1H)；1.99(s, 6H)；1.85(m, 2H)；1.78(m, 2H)；1.20-0.95(m, 4H)，0.84(s, 9H)。HPLC-MS（方法Ｂ）：m/z＝356.2(M+1)；Rt＝2.57分。
【０３１１】
工程６：3-(3,5-Bis(トリフルオロメチル)フェニル)-1-(4-tert-ブチルシクロへキシル)-1-[4-(2-2H-テトラゾール-5-イル-アセチル)ベンジル]尿素
1-4-[(4-tert-ブチルシクロへキシルアミノ)メチル]フェニル-2-[2-(1-メトキシ-1-メチルエチル)-2H-テトラゾール-5-イル]エタノン(320mg，0.75mmol)をTHF(5mL)中に溶解させ、イソシアン酸3,5-bis(トリフルオロメチル)フェニル(191mg，0.75mmol)を添加した。この反応混合物を室温で2時間撹拌し、次いで回転蒸発により乾固させた。残渣をアセトニトリルから２回ストリップして、450mg(88％)の標題物質を得た。
【０３１２】
1H NMR(DMSO-d6)：δ9.05(s, 1H)；8.22(s, 2H)；8.02(d, 2H)；7.60(s, 1H)；7.45(d, 2H)；4.89(s, 2H)；4.68(s, 2H)；4.08(m, 1H)；1.72(m, 4H)；1.45(m, 2H)；1.15(m, 2H)；8.82(s, 9H)。HPLC-MS（方法Ｂ）：m/z＝611.2(M+1)；Rt＝5.94分。
【０３１３】
工程７：
THF(1mL)中の、トルエン(17μL，0.17mmol，1M)中の(R)-テトラヒドロ-1-メチル-3,3-ジフェニル-1H，3H-ピロロ[1,2-c][1,3,2]オキサザボロールの溶液に、ボラン-THF 複合物(328μL，0.32mmol，THF中に1M)を添加した。次いでTHF(1.0mL)中の3-(3,5-bis(トリフルオロメチル)フェニル)-1-(4-tert-ブチルシクロへキシル)-1-[4-(2-2H-テトラゾール-5-イル-アセチル)ベンジル]尿素(100mg，0.17mmol)の溶液を30分にわたり滴下添加した。この反応混合物を室温で一晩撹拌し、次いで1N HCl水溶液(100μL)を用いて反応を停止させた。溶媒を回転蒸発により除去した。残渣をTHF(500μL)中に溶解させ、自動試料採取器(Xterra MS C18 5μm 19mm×100mm，勾配：水中の10％アセトニトリル→100％アセトニトリル)を備えたGilson 2.11上の準備HPLC中に導入した。
【０３１４】
1H NMR(DMSO-d6)：δ9.02(s, 1H)；8.25(s, 2H)；7.58(s, 1H)；7.26(d, 2H)；7.20(d, 2H)；4.92(m, 1H)；4.55(s, 2H)；4.05(m, 1H)；3.15(ddd, 2H)；1.63(m. 4H)；1.42(m, 2H)；1.10(m, 2H)；0.92(m, 1H)；0.80(s, 9H)。
【０３１５】
例25（一般手順（Ｅ））  3-(3,5-Bis(トリフルオロメチル)フェニル)-1-(4-tert-ブチルシクロへキシル)-1-4-[1-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素（他方の純粋なエナンチオマーで）
【化９２】
2005537231.tif 000071
【０３１６】
THF(1mL)中の、トルエン中の(S)-テトラヒドロ-1-メチル-3,3-ジフェニル-1H,3H-ピロロ[1,2-c][1,3,2]オキサザボロールの溶液(17μL，0.17mmol，1M)に、ボラン-THF複合物(328μL，0.32mmol，THF中に1M)を添加した。次いで、THF(1.0mL)中の3-(3,5-bis(トリフルオロメチル)フェニル)-1-(4-tert-ブチル-シクロへキシル)-1-[4-(2-2H-テトラゾール-5-イル-アセチル)-ベンジル]尿素(100mg，0.17mmol)の溶液を30分にわたり滴下添加した。この反応混合物を室温で一晩撹拌し、次いで1N HCl水溶液(100μL)を用いて反応を停止させた。溶媒を回転蒸発により除去した。残渣をTHF(500μL)中に溶解させ、自動試料採取器(Xterra MS C18 5μm 19mm×100mm，勾配：水中の10％アセトニトリル→100％アセトニトリル)を備えたGilson 2.11上の準備HPLC中に導入した。
【０３１７】
1H NMR(DMSO-d6)：δ9.02(s, 1H)；8.25(s, 2H)；7.58(s, 1H)；7.26(d, 2H)；7.20(d, 2H)；4.92(m, 1H)；4.55(s, 2H)；4.05(m, 1H)；3.15(ddd, 2H)；1.63(m. 4H);1.42(m, 2H)；1.10(m, 2H)；0.92(m, 1H)；0.80(s, 9H)。
【０３１８】
例26  1-(4-シクロヘキシ-1-エニルフェニル)-3-(3,5-ジクロロフェニル)-1-4-[1-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素
【化９３】
2005537231.tif 000072
【０３１９】
ドライアイス-アセトン浴で−78℃にまで冷却したTHF(5mL)中の2-(1-メトキシ-1-メチルエチル)-5-メチル-2H-テトラゾール(1000mg，6.41mmol)溶液に、ヘキサン中のn-ブチルリチウムの溶液(4.0mL，1.6M，6.4mmol)を滴下添加した。混合物を−78℃で30分撹拌し、さらに０℃で30分撹拌し、次いで−78℃にまで再び冷却した。次いで1-(4-シクロヘキシ-1-エニルフェニル)-3-(3,5-ジクロロフェニル)-1-(4-ホルミルベンジル)尿素(250mg，0.52mmol，例12の工程２から)を固体で添加し、混合物を−78℃で20分維持した。反応温度を０℃にまで上げ、混合物を20分撹拌した後、酢酸(2mL)を添加した。静置後、白色の固体が沈殿し始め、これを回収し、低温のアセトニトリルを用いて洗浄した。固体を真空下でオーブン乾燥させ、582mg(95％)を得た。
【０３２０】
1H NMR(DMSO-d6)：δ8.50(s, 1H)；7.59(s, 2H)；7.38(d, 2H)；7.25(d, 2H)；7.20(d, 2H)；7.12(d, 2H)；7.09(s, 1H)；6.18(s, 1H)；4.92(m, 1H)；4.86(s, 2H)；3.14(ddd, 2H)；2.32(m, 2H)；2.15(m, 2H)；1.70(m, 2H)；1.52(m, 2H)。HPLC-MS（方法Ｂ）：m/z＝564.1(M+1)；Rt＝5.35分。
【０３２１】
例27  メタンスルホン酸1-4-[1-(4-シクロヘキシ-1-エニル-フェニル)-3-(3,5-ジクロロ-フェニル)ウレイドメチル]フェニル-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチルエステル
【化９４】
2005537231.tif 000073
【０３２２】
1-(4-シクロヘキシ-1-エニルフェニル)-3-(3,5-ジクロロフェニル)-1-4-[1-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素(100mg，0.17mmol)をDCM(1mL)中に溶解させ、トリエチルアミン(27μL，0.195mmol)を添加した。混合物を0℃にまで冷却し、塩化メタンスルホニル(15μL，0.195mmol)を添加し、続いて1,8-ジアザビシクロ[5,4,0]-ウンデカ-7-エン(29μL，0.195mmol)を添加した。混合物を０℃で2時間、室温で一晩撹拌し、次いでDCM(20mL)をで希釈し、塩水(20mL)で洗浄した。有機溶液を、無水硫酸ナトリウムを用いて乾燥させ、乾燥するまで蒸発させ、純粋な標題物質を白色の粉末で得た。収率：113mg(100％)。
【０３２３】
1H NMR(DMSO-d6)：δ8.54(s, 1H)；7.60(s, 2H)；7.40(d, 2H)；7.30(d, 2H)；7.25(d, 2H)；7.18(d, 2H)；7.14(s, 1H)；6.20(s, 1H)；6.05(m, 1H)；4.88(s, 2H)；3.45(ddd, 2H)；2.34(bs, 2H)；2.18(bs, 2H)；2.10(s, 3H)；1.70(m, 2H)；1.60(m, 2H)。
【０３２４】
例28  酢酸1-4-[1-(4-シクロヘキシ-1-エニルフェニル)-3-(3,5-ジクロロフェニル)ウレイドメチル]フェニル-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチルエステル
【化９５】
2005537231.tif 000074
【０３２５】
1-(4-シクロヘキシ-1-エニルフェニル)-3-(3,5-ジクロロフェニル)-1-4-[1-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素(30mg，0.05mmol)をDCM(1.5mL)中に溶解させ、無水酢酸(15μL)を添加した。混合物を室温で一晩撹拌し、次いで乾燥させた。残渣の油状物をエタノール(2mL)中に溶解させ、0.5分還流にまで加熱した。次いで冷却し、乾燥するまで蒸発させた。残渣をアセトニトリルから２回ストリップし、定量的収率で標題化合物を得た。
【０３２６】
1H NMR(DMSO-d6)：δ8.52(s, 1H)；7.60(d, 2H)；7.90(d, 2H)；7.30(d, 2H)；7.22(d, 2H)；7.15(d, 2H)；7.10(s, 1H)；6.18(s, 1H)；6.05(dd, 1H)；4.85(s, 2H)；3.38(ddd, 2H)；2.32(m, 2H)；2.15(m, 2H)；1.98(s, 3H)；1.68(m, 2H)；1.57(m, 2H)。
【０３２７】
以下の化合物もまた本発明の範疇にあり、例12と同様に調製され得る：
【化９６】
2005537231.tif 000075
【０３２８】
ここで、
【化９７】
2005537231.tif 000076
【化９８】
2005537231.tif 000077
【化９９】
2005537231.tif 000078
【化１００】
2005537231.tif 000079
【化１０１】
2005537231.tif 000080
【０３２９】
である。
【０３３０】
以下の化合物もまた本発明の範疇にあり、例1及び12と同様に調製され得る：
ここで、
【化１０２】
2005537231.tif 000081
【化１０３】
2005537231.tif 000082
【化１０４】
2005537231.tif 000083
【化１０５】
2005537231.tif 000084
【化１０６】
2005537231.tif 000085
【０３３１】
である。
【０３３２】
以下の化合物もまた本発明の範疇にあり、例24及び25と同様に調製され得る：
ここで、
【化１０７】
2005537231.tif 000086
【化１０８】
2005537231.tif 000087
【化１０９】
2005537231.tif 000088
【化１１０】
2005537231.tif 000089
【化１１１】
2005537231.tif 000090
【０３３３】
である。
【０３３４】
一般手順（Ｆ）
【化１１２】
2005537231.tif 000091
【０３３５】
*)はキラル中心を表す。
【０３３６】
この手順（式中、Eはtert-ブチルシクロへキシルであり、Dは4-ブロモフェニルである）を以下の例29〜32で説明する。
【０３３７】
例29及び30（一般手順（Ｆ））
trans-3-[1(R)-(4-ブロモフェニル)エチル]-1-(4-tert-ブチルシクロへキシル)-1-4-[1-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素，純粋なジアステレオマー1 及び
trans-3-[1(R)-(4-ブロモフェニル)エチル]-1-(4-tert-ブチルシクロへキシル)-1-4-[1-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素，純粋なジアステレオマー2
工程１：trans-4-[(4-tert-ブチルシクロへキシルアミノ)メチル]安息香酸メチルエステル
4-ホルミル安息香酸メチルエステル(10.6g，64.4mmol)をメタノール(200mL)中に溶解させた。4-tert-ブチルシクロへキシルアミンの17：83 cis/trans混合物(10.0g，64.4mmol，Aldrich)を添加すると、すぐに白色の結晶が沈殿した。イミン形成を完了させるために混合物を30分加熱還流し、次いで０℃にまで氷浴で冷却した。次に、結晶状の純粋なtrans形態物をろ過により回収し、一晩真空下で乾燥させた。収率：15.3g(78％)。
【０３３８】
1H NMR(CDCl3)，300MHz：δ8.37 ppm.(s, 1H)；8.06(d, 2H)；7.77(d, 2H)；3.92(s, 3H)；3.17(m, 1H)；1.83(m, 4H)；1.60(m, 2H)，1.09(m, 3H)；0.87(s, 9H)。
【０３３９】
C19H27NO2についての微量分析：計算値：C：75.71％，H：9.03％，N：4.65％；実測値：C：75.60％，H：9.37％，N：4.68％。
【０３４０】
trans-4-[(4-tert-ブチルシクロへキシルイミノ)メチル]安息香酸メチルエステル(21.0g，69.2mmol)をメタノール(300mL)中に懸濁させ、酢酸(50mL)を添加した。得られた透明な溶液に、水素化シアノホウ素ナトリウム(3.5g，55.5mmol)を添加し、混合物を周囲温度で30分撹拌した。次いで回転蒸発により反応物容積を３分の１にまで減らし、酢酸エチル(500mL)を添加した。有機相を炭酸ナトリウム溶液(5％，500mL)で洗浄し、硫酸ナトリウムを用いて乾燥させた。溶媒を回転蒸発により除去し、標題の物質をさらなる反応のために十分に純粋な白色の結晶状の固体で得た。収率：21.1g(100％)。
【０３４１】
1H NMR(CDCl3)，300MHz：δ7.98 ppm.(d, 2H)；7.38(d, 2H)；3.90(s, 3H)；3.86(s, 2H)；2.39(m, 1H)；2.01(m, 2H)；1.77(m, 2H);1.51(bs, 1H)；0.93-1.18(m, 5H)；0.82(s, 9H)；LC-MS（方法Ｂ）：m/z＝304.2(M+H)+。
【０３４２】
C19H29NO2についての微量分析：計算値：C：75.21％，H：9.63％，N：4.62％；実測値：C：75.30％，H：9.64％，N：4.48％。
【０３４３】
工程２：trans-4-[tert-ブトキシカルボニル-(4-tert-ブチルシクロへキシル)アミノ]メチル安息香酸
trans-4-[(4-tert-ブチルシクロへキシルアミノ)メチル]安息香酸メチルエステル(20.0g，65.9mmol)を、THF(300mL)中に溶解させた。ピロ炭酸ジ-tert-ブチル (16.0g，73.4mmol)及びDIPEA(12.0g，92.9mmol)を添加し、透明な溶液を一晩周囲温度で撹拌した。溶媒を回転蒸発により除去し、結晶状の残渣をエタノール(200mL)中に再び溶解させた。水酸化ナトリウム水溶液(100mL，4 N)を添加し、混合物を4時間70℃にまで加熱した。冷却後、反応物容積を回転蒸発により３分の１にまで減らし、水(300mL)を添加した。混合物をジエチルエーテル(2×200mL)で抽出し、痕跡量の加水分解されない物質を除去した。次いで水相に4N HCl水溶液を添加することによりpH 3.0にまで酸性にすると、標題の物質が溶液から緻密な結晶で直ちに分離した。この結晶を水で１回洗浄し、真空オーブン(40℃)で一晩乾燥させた。収率：24.3g(93％)。
【０３４４】
1H NMR(CDCl3)，300MHz：δ8.04 ppm.(d, 2H)；7.31(d, 2H)；4.39(bs, 2H)；4.05(bs, 1H)；1.78(bd, 4H)；0.95-1.65(m, 14H)；0.83(s, 9H)。cis/trans カルバミン酸塩異性体の存在のために、信号が広がった。
【０３４５】
C23H35NO4についての微量分析：計算値C：70.92％，H：9.06％，N：3.60％；実測値：C：70.67％，H：9.36％，N：3.57％。
【０３４６】
工程３：N-メトキシ-N-メチル-trans-4-[tert-ブトキシカルボニル-(4-tert-ブチルシクロへキシル)アミノ]メチルベンズアミド
trans-4-[tert-ブトキシカルボニル-(4-tert-ブチルシクロへキシル)アミノ]メチル安息香酸(5.0g，12.8mmol)を50％ DMF：DCM(50mL)中に溶解させた。1-ヒドロキシベンゾトリアゾール(1.0g，14.1mmol)を、続いてN-エチル-N'-ジメチルアミノプロピルカルボジイミド塩酸塩(2.7g，14.1mmol)を添加した。混合物を室温で1時間撹拌した後、N,O-ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩(1.4g，14.1mmol)及びDIPEA(2.4mL，14.1mmol)を添加した。この反応混合物を室温で撹拌し、次いで酢酸エチル(300mL)及び炭酸水素ナトリウム飽和水溶液(200mL)の間で分配した。有機相を回収し、無水硫酸ナトリウムを用いて乾燥させ、回転蒸発により乾固させ、標題の物質を透明な黄色の油状物で得た。収率：4.8g(87％)。
【０３４７】
1H NMR(CDCl3)：δ7.60(d, 2H)；7.25(d, 2H)；4.38(bs, 2H)；4.02(bs, 1H)；3.55(s, 3H)；3.35(s, 3H)；1.78(bd, 4H)；0.95-1.65(m, 14H)；0.81(s, 9H)。
【０３４８】
工程4：N-メトキシ-N-メチル-trans-4-[4-tert-ブチルシクロへキシルアミノ]メチルベンズアミド
N-メトキシ-N-メチル-trans-4-[tert-ブトキシカルボニル-(4-tert-ブチルシクロへキシル)アミノ]メチルベンズアミド(1.0g，2.3mmol)をDCM(10mL)中に溶解させ、TFA(10mL)を添加した。この反応混合物を周囲温度で2時間撹拌し、次いで回転蒸発により乾固させた。次に、結晶状の残渣を酢酸エチル(100mL)中に溶解させ、有機相を炭酸ナトリウム飽和水溶液で洗浄した(2×100mL)。合体した水相を酢酸エチル(100mL)で１回逆抽出し、合体した有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を回転蒸発により除去し、標題化合物を微細な白色の結晶で得た。収率：760mg(99％)。
【０３４９】
1H NMR(CDCl3)：δ7.62(d, 2H)；7.34(d, 2H)；3.83(s, 2H)；3.53(s, 3H)；3.33(s, 3H)；2.40(m, 1H)；2.01(m, 2H)；1.78(m, 2H)；1.20-0.95(m, 4H)，0.84(s, 9H)。
【０３５０】
C20H32N2O2についての微量分析：計算値：C：72.25％，H：9.70％，N：8.43％；実測値：C：71.22％，H：9.79％，N：8.29％。
【０３５１】
工程５：1-4-[(4-tert-ブチルシクロへキシルアミノ)メチル]フェニル-2-[2-(1-メトキシ-1-メチルエチル)-2H-テトラゾール-5-イル]エタノン
THF(10mL)中の2-(1-メトキシ-1-メチルエチル)-5-メチル-2H-テトラゾール(893mg，5.7mmol)の溶液に、ドライアイス-アセトン浴で−78℃にまで冷却したヘキサン中のn-ブチルリチウム溶液(3.6mL，1.6M，5.7mmol)を滴下添加した。混合物を−78℃で30分撹拌し、0℃でさらに30分撹拌し、次いで再び−78℃にまで冷却した。次に、この溶液をゆっくりと（カニューレ法により）、−78℃に維持したTHF(15mL)中のN-メトキシ-N-メチル-trans-4-[4-tert-ブチルシクロへキシルアミノ]メチルベンズアミド(760mg，2.3mmol)の溶液に移した。この反応混合物を30分−78℃で撹拌し、次いでメタノール(2mL)の添加により反応を停止させた。溶媒を回転蒸発により除去し、残渣を酢酸エチル(100mL)中に溶解させた。有機相を炭酸水素ナトリウム飽和水溶液(100mL)で１回洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、回転蒸発により乾固させて1.0g(100％)の標題の物質を透明な油状物で得た。
【０３５２】
1H NMR(CDCl3)：δ7.96(d, 2H)；7.42(d, 2H)；4.62(s, 2H)；3.88(s, 2H)；3.10(s, 3H)；2.38(m, 1H)；1.99(s, 6H)；1.85(m, 2H)；1.78(m, 2H)；1.20-0.95(m, 4H)，0.84(s, 9H)。LC-MS（方法Ｂ）：m/z＝356.2(M+1)；Rt＝2.57分。
【０３５３】
工程６：1-4-[N-Fmoc-N-(4-tert-ブチルシクロへキシル)アミノメチル]フェニル-2-[2H-テトラゾール-5-イル]エタノン
1-4-[(4-tert-ブチルシクロへキシルアミノ)メチル]フェニル-2-[2-(1-メトキシ-1-メチルエチル)-2H-テトラゾール-5-イル]エタノン(4.00g，9.48mmol)をTHF：ジオキサン(1：1, 80mL)中に溶解させ、DIPEA(1.84mL，10.8mmol)を添加した。この溶液を氷浴で0℃に冷却し、THF(10mL)中のクロロ蟻酸9-フルオレニルメチル(Fmoc-Cl, 2.79g，10.8mmol)の溶液を滴下添加した。TLC(酢酸エチル中に50％ ヘプタン)により反応が完了したと判断された後、溶媒を回転蒸発により除去して透明な黄色の油状物を得た。この油状物をアセトニトリルから２回蒸発させた後、THF(200mL)中に溶解させた。HCl水溶液(1N，14mL)を添加し、溶液を周囲温度で一晩撹拌した。溶媒を回転蒸発により除去し、残渣の油状物をフラッシュクロマトグラフィ（酢酸エチル：ヘプタン：酢酸(50：50：2)）により連続的に精製し、Rf値0.15の物質を回収した。溶媒を除去して、3.22g(60％)の純粋な標題生成物を得た。
【０３５４】
1H NMR(CDCl3)：δ7.88(d, 2H)；7.75(d, 2H)；7.62(d, 2H)；7.50-7.30(m, 4H)；7.18(m, 2H)；4.74(m, 4H)；4.53(m, 1H)；4.30(d, 2H)；3.21(m, 1H)；1.70(m, 2H)；1.55(m, 2H)；1.20-0.95(m, 4H)，0.84(s, 9H)；LC-MS（方法Ｂ）：m/z＝578.4(M+1)；Rt＝5.75分。
【０３５５】
工程７：樹脂結合した1-4-[N-Fmoc-N-(4-tert-ブチルシクロへキシル)アミノメチル]フェニル-2-[2H-テトラゾール-5-イル]エタノン
塩化2-クロロトリチル樹脂(2.00g，負荷1.2mmol/g)をDCM中で30分膨潤させた。1-4-[N-Fmoc-N-(4-tert-ブチルシクロへキシル)アミノメチル]フェニル-2-[2H-テトラゾール-5-イル]エタノン(1.00g ；1.7mmol)をDCM(3mL)及びDMF(3mL)の混合物中に溶解させ、DIPEA(1.16mL，6.8mmol)を添加した。この反応混合物を3時間振盪させた。樹脂を排液し、10mLのDCM：メタノール：DIPEA(17：2：1)の混合物を用いて２回洗浄し、次いでDMF(3×10mL)及び最後にDCM(10×10mL)を用いて洗浄した。樹脂を排液し、真空下にて45℃で72時間乾燥させた。収率：2.39g。生成物負荷(0.48mmol/g)は、2.50ppmでのDMSOピークを内部基準として用いたDMSO-d6中での1H NMR滴定により決定された。
【０３５６】
工程８：3-[1(R)-(4-ブロモフェニル)エチル]-1-(4-tert-ブチルシクロへキシル)-1-[4-(2H-テトラゾール-5-イル-アセチル)ベンジル]尿素に連結された樹脂
樹脂(200mg，88μmol)をDCM中で30分膨潤させた。DMF中のピペリジンの20％ 溶液を添加し、反応器を30分周囲温度で振盪した。次いで、樹脂をDMF(3x)及びDCM(10x)で洗浄した。ウェルを排液し、乾燥THF(200μL)中のイソシアン酸(R)1-(4-ブロモフェニル)エチル(180mg，0.8mmol)の溶液を添加した。樹脂を室温で２時間振盪し、次いで排液し、DCM(10x)を用いて洗浄した。
【０３５７】
工程９：3-[1(R)-(4-ブロモフェニル)エチル]-1-(4-tert-ブチルシクロへキシル)-1-4-[1(R/S)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素に連結された樹脂
上述した樹脂に、THF中の2％メタノール(1500μL)中のホウ化水素ナトリウム(90mg，2.4mmol)の溶液を添加した。反応物を周囲温度で一晩振盪した。溶媒を除去し、樹脂をメタノール(3x)、DMF(3x)、DCM(10x)をで洗浄した。
【０３５８】
工程10：3-[1(R)-(4-ブロモフェニル)エチル]-1-(4-tert-ブチルシクロへキシル)-1-4-[1(R/S)-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素
上述した樹脂を、DCM中の50％ TFAを用いて30分処理した。溶媒を回収し、窒素気流により除去して標題の物質を結晶状の固体で得た。
【０３５９】
工程11：工程10から得たジアステレオマー混合物のHPLC分離
上記で得られた混合物を、調製的HPLC（方法Ｃ）を用いて、その光学活性で純粋なジアステレオマー（エピマー）に分離した。続いて、分析的HPLC（方法Ｄ）を用いて試料純度に取組んだ。
【０３６０】
例29（一般手順（Ｆ））  trans-3-[1(R)-(4-ブロモフェニル)エチル]-1-(4-tert-ブチルシクロへキシル)-1-4-[1-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素，純粋なジアステレオマー１
収率：10mg。1H NMR(CDCl3)：δ7.48(d, 2H)；7.25(d. 2H)；7.20(d, 2H)；7.12(d, 2H)；6.52(d, 1H)；4.93(dd, 1H)；4.87(t, 1H)；4.39(s, 2H)；3.90(t, 1H)；3.16(m, 2H)；1.69(m, 2H)；1.56(m, 2H)；1.30(m, 2H)；1.15(m, 2H) 1.03(d, 3H)；0.80(s, 9H)；Rt＝11.5分；225nmでの純度：96.6％(HPLC  方法Ｄ）。
【０３６１】
例30（一般手順（Ｆ））  trans-3-[1(R)-(4-ブロモフェニル)エチル]-1-(4-tert-ブチルシクロへキシル)-1-4-[1-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素，純粋なジアステレオマー２
収率：11mg。1H NMR(CDCl3)：δ7.48(d, 2H)；7.25(d. 2H)；7.20(d, 2H)；7.12(d, 2H)；6.51(d, 1H)；4.93(dd, 1H)；4.85(t, 1H)；4.39(s, 2H)；3.91(t, 1H)；3.18(m, 2H)；1.68(m, 2H)；1.57(m, 2H)；1.30(m, 2H)；1.15(m, 2H)；1.05(d, 3H)；0.80(s, 9H)；Rt＝15.5分；での純度 225nm：97.4％(HPLC 方法D)。
【０３６２】
同様に、以下の２つの化合物を、工程８のイソシアン酸 (S)-1-(4-ブロモフェニル)エチルを用いて得た。
【０３６３】
例31（一般手順（Ｆ））  trans-3-[1(S)-(4-ブロモフェニル)エチル]-1-(4-tert-ブチルシクロへキシル)-1-4-[1-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素，純粋なジアステレオマー３
収率：10mg。1H NMR(CDCl3)：δ7.46(d, 2H)；7.26(d. 2H)；7.19(d, 2H)；7.13(d, 2H)；6.52(d, 1H)；4.94(dd, 1H)；4.85(t, 1H)；4.39(s, 2H)；3.92(t, 1H)；3.12(m, 2H)；1.70(m, 2H)；1.55(m, 2H)；1.30(m, 2H)；1.15(m, 2H)；1.02(d, 3H)；0.80(s, 9H)；Rt＝18.3分；225nmでの純度：97.6％(HPLC 方法D)。
【０３６４】
例32（一般手順（Ｆ））  trans-3-[1(S)-(4-ブロモフェニル)エチル]-1-(4-tert-ブチルシクロへキシル)-1-4-[1-ヒドロキシ-2-(2H-テトラゾール-5-イル)エチル]ベンジル尿素，純粋なジアステレオマー４
収率：8mg。1H NMR(CDCl3)：δ7.48(d, 2H)；7.25(d. 2H)；7.20(d, 2H)；7.12(d, 2H)；6.51(d, 1H)；4.95(dd, 1H)；4.85(t, 1H)；4.39(s, 2H)；3.90(t, 1H)；3.18(m, 2H)；1.66(m, 2H)；1.55(m, 2H)；1.30(m, 2H)；1,29(d, 3H);1.15(m, 2H)；0.80(s, 9H)；Rt＝23.4分；225nmでの純度 ：99.0％（HPLC 方法Ｄ）。
【０３６５】
以下の化合物（アステリスク(*)はキラル中心を表す）もまた本発明の範疇にあり、例29〜32と同様に調製すればよい：
【化１１３】
2005537231.tif 000092
【０３６６】
＜薬理学的方法＞
以下のセクションでは、本発明の化合物の有効性を評価するために有用な、結合アッセイ並びに機能的アッセイが記載される。
【０３６７】
グルカゴン受容体への結合は、クローン化されたヒトグルカゴン受容体を用いた競合結合アッセイにおいて決定すればよい。
【０３６８】
拮抗作用(antagonism)は、5 nM グルカゴンの存在下において、形成されたｃＡＭＰ量を阻害する当該化合物の能力として決定すればよい。
【０３６９】
グルカゴン結合アッセイ（Ｉ）：
受容体結合は、クローン化されたヒト受容体（Lok et al.，Gene 140，203-209 (1994)）を用いて試験される。EcoRI/SSt1 制限部位（Lok et al.）を用いてpLJ6'発現ベクターに挿入された受容体を、新生児ハムスターの腎臓細胞株（A3 BHK 570-25）において発現させる。クローンは0.5mg/mL G-418 の存在下で選別され、40継代以上に亘って安定であることが示される。Kdは、0.1nMであることが示される。
【０３７０】
細胞を周密状態にまで増殖させ、それらを表面から剥がし、細胞を冷緩衝液［10 mM tris/HCl，pH7.4：30 mM NaCl、1 mM ジチオトレイトール、5mg/L ロイペプチン(Sigma)、5mg/L ペプスタチン(Sigma)、100mg/L バシトラシン(Sigma)、および15mg/L 組換えアプロチニン(Novo Nordisk A/S)］中に懸濁させ、Polytron PT 10-35ホモジナイザー(Kinematica)を使用して10秒バーストで２回ホモジナイズし、41 w/v％の蔗糖層上において95.000×gで75分遠心分離することにより、原形質膜を調製する。原形質膜を含有する沈殿を緩衝液中に懸濁し、使用するまで-80℃で保存する。二つの相の間に位置する白色のバンドを緩衝液中に希釈し、40.000×gで45分間遠心分離する。原形質膜を含有する沈殿を緩衝液中に懸濁し、使用するまで-80℃で保存する。
【０３７１】
グルカゴンを、クロラミンＴ法（Hunter and Greenwood, Nature 194，495(1962)）に従ってヨウ素化し、陰イオン交換クロマトグラフィーを使用して精製する（Jorgensen et al., Hormone and Metab. Res. 4, 223-224(1972)）。比活性は、ヨウ素化の日で 460μCi／μgである。トレーサーは-18℃においてアリコートに分けて保存し、解凍後に直ちに使用する。
【０３７２】
結合アッセイは、フィルター・マイクロタイタープレート（MADV N65、Millipore）中で３回実施する。このアッセイに用いた緩衝液は、50 mM HEPES、5 mM EGTA、5 mM MgCl2、0.005％ツイーン20、pH 7.4である。グルカゴンを0.05M HCl中に溶解させ、同量（w/w）のヒト血清アルブミンを添加し、凍結乾燥させた。これを使用する当日に水中に溶解させ、緩衝液中で所望の濃度にまで希釈する。
【０３７３】
試験化合物を、DMSO中に溶解および希釈する。140μLの緩衝液、25μLのグルカゴンまたは緩衝液、および10μLのDMSOまたは試験化合物を各ウエルに添加する。トレーサー（50.000 cpm）を緩衝液中に希釈し、25μLを各ウエルに添加する。1〜4μgの新鮮な解凍した原形質膜タンパク質を緩衝液中で希釈し、次いで25μLのアリコートを各ウエルに添加する。プレートを30℃で２時間インキュベートする。10-6Mのグルカゴンを用いて非特異的結合を決定する。次いで、結合したトレーサーおよび未結合のトレーサーを真空濾過（Millipore vacuum manifold）により分離する。2×100μL/ウエルの緩衝液でプレートを洗浄する。このプレートを２時間乾燥し、その際にミリポアパンチャー（Millipore Puncher）を使用して、フィルターをプレートから分離する。該フィルターをガンマ線計数機の中でカウントする。
【０３７４】
機能的アッセイ（Ｉ）：
機能的アッセイは、96ウエルのマイクロタイタープレート（組織培養プレート、Nunc）中で行う。このアッセイで得られたる緩衝液濃度は、50 mM tris/HCl、1 mM EGTA、1.5 mM MgSO4、1.7 mM ATP、20μM GTP、2 mM IBMX、0.02％ツイーン20、および0.1％ヒト血清アルブミンである。pHは7.4である。グルカゴンおよび提案アンタゴニストを、50 mM tris/HCl、1 mM EGTA、1.85 mM MgSO4、0.0222％ツイーン-20、および0.111％ヒト血清アルブミン、pH 7.4中に希釈した35μLのアリコートで添加する。20μLの50 mM tris/HCl、1 mM EGTA、1.5 mM 硫酸マグネシウム、11.8 mM ATP、0.14 mM GTP、14 mM IBMX、および0.1％ヒト血清アルブミン、pH 7.4を添加する。アッセイの直前にGTPを溶解する。
【０３７５】
5μgの原形質膜タンパク質を含有する50μLを、tris/HCl、EGTA、硫酸マグネシウム、ヒト血清アルブミン緩衝液（実際の濃度は保存された原形質膜中のタンパク質濃度に依存する）中に添加する。
【０３７６】
合計のアッセイ容積は140μLである。プレートを、連続的に振盪しながら37℃で２時間インキュベートする。25μLの0.5N HClを添加することにより、反応を停止させる。シンチレーションプロキシミティーキット（Amersham）を使用して、cAMPを測定する。
【０３７７】
グルカゴン結合アッセイ（II）：
BHK（新生児ハムスター腎臓細胞株）細胞に、ヒトグルカゴン受容体をトランスフェクトし、該細胞の膜プレパレーションを調製する。シンチラントを含む小麦胚芽アグルチニン誘導SPAビーズ（WGA beads；Amersham）がこの膜に結合した。125I-グルカゴンが膜中のヒトグルカゴン受容体に結合し、WGAビーズ中のシンチラントを励起させて発光させた。受容体に結合するグルカゴンまたはサンプルは、125I-グルカゴンと競合した。
【０３７８】
膜調製における全てのステップは、氷上で維持されるか、または４℃で行われる。BHK細胞を回収し、遠心分離する。ペレットをホモジナイゼーション緩衝液（25 mM HEPES、pH＝7.4、2.5 mM CaCl2、1.0 mM MgCl2、250mg/L バシトラシン、0.1 mM ペファブロック(Pefabloc)）中に再懸濁させ、ポリトロン(Polytron)10-35ホモジナイザー(Kinematica)を使用して2×10秒間ホモジナイズし、再懸濁のために使用したのと同量のホモジナイゼーション緩衝液を添加する。遠心分離（2000×gで15分）した後、その上清を冷遠心管に移して、40,000×gで45分間遠心分離する。そのペレットをホモジナイゼーション緩衝液中に懸濁させ、2×10秒間ホモジナイズし（Polytron）、更に追加のホモジナイゼーション緩衝液を添加する。この懸濁液を40,000×gで45分間遠心分離し、そのペレットを再懸濁緩衝液（25 mM HEPES、pH＝7.4,2.5 mM、CaCl2、1.0 mM MgCl2）の中に再懸濁させ、2×10秒間ホモジナイズする（Polytron）。そのタンパク質濃度は、通常は略1.75mg/mLである。安定化緩衝液（25 mM HEPES、pH＝7.4、2.5 mM CaCl2、1.0 mM MgCl2、1％ウシ血清アルブミン、500mg/L バシトラシン、2.5M 蔗糖）を加え、膜プレパレーションを-80℃で保存する。
【０３７９】
このグルカゴン結合アッセイは、オプティプレート（ポリスチレン製マイクロプレート、Packard）において行う。50μLのアッセイ緩衝液（25 mM HEPES、pH＝7.5、2.5 mM CaCl2、1.0 mM MgCl2、0.003％ツイーン20、0.005％バシトラシン、0.05％ナトリウムアジド）、および5μLのグルカゴンまたは試験化合物（DMSO中）を各ウエルに加える。次いで、50μLのトレーサー（125I-ブタグルカゴン、50,000cpm）およびヒトグルカゴン受容体を含む50μLの膜（7.5μg）を各ウエルに加える。最後に、50μLのWGAビーズ（1mgのビーズを含有）を、各ウエルに移す。このプレートを振盪器上で４時間インキュベートし、次いで８〜48時間静置する。該オプティプレート(opti plates)をトップカウンタ(Topcounter)の中でカウントする。500 nMのグルカゴンを用いて、非特異的結合を決定する。
【０３８０】
既述の例による殆どの化合物は、500 nM未満のIC50値を示した。
【０３８１】
ＧＩＰ結合アッセイ：
BHK（新生児ハムスター腎臓細胞株）細胞をヒトGIP受容体で形質転換し、該細胞の膜プレパレーションを調製する。シンチラントを含む小麦胚芽アグルチニン誘導SPAビーズ（WGA beads；Amersham）がこの膜に結合した。125I-GIPが膜中のヒトGIP受容体に結合し、WGAビーズ中のシンチラントを励起させて発光させた。受容体に結合するGIPまたはサンプルは、125I-GIPと競合した。
【０３８２】
膜調製における全てのステップは、氷上で維持されるか、または４℃で行われる。BHK細胞を回収し、遠心分離する。ペレットをホモジナイゼーション緩衝液（25 mM HEPES、pH＝7.4、2.5 mM CaCl2、1.0 mM MgCl2、250mg/L バシトラシン、0.1 mM ペファブロック(Pefabloc)）中に再懸濁させ、ポリトロン(Polytron)10-35ホモジナイザー(Kinematica)を使用して2×10秒間ホモジナイズし、再懸濁のために使用したのと同量のホモジナイゼーション緩衝液を添加する。遠心分離（2000×gで15分）した後、その上清を冷遠心管に移し、40,000×gで45分間遠心分離する。そのペレットをホモジナイゼーション緩衝液中に再懸濁させ、2×10秒間ホモジナイズし(Polytron)、更に追加のホモジナイゼーション緩衝液を添加する。この懸濁液を40,000×gで45分間遠心分離し、そのペレットを再懸濁緩衝液（25 mM HEPES、pH＝7.4，2.5 mM、CaCl2、1.0 mM MgCl2）の中に再懸濁させ、2×10秒間ホモジナイズする(Polytron)。そのタンパク質濃度は、通常は略1.75mg/mLである。安定化緩衝液（25 mM HEPES、pH＝7.4、2.5 mM CaCl2、1.0 mM MgCl2、1％ウシ血清アルブミン、500mg/L バシトラシン、2.5M 蔗糖）を加え、膜プレパレーションを-80℃で保存する。
【０３８３】
このＧＩＰ結合アッセイは、オプティプレート（ポリスチレン製マイクロプレート、Packard）中において行い、50μLのアッセイ緩衝液（25 mM HEPES、pH＝7.5、2.5 mM CaCl2、1.0 mM MgCl2、0.003％ツイーン20、0.005％バシトラシン、0.05％ナトリウムアジド）、および5μLのＧＩＰまたは試験化合物（DMSO中）を各ウエルに加える。次いで、50μLのトレーサー（125I-ブタＧＩＰ、50,000cpm）およびヒトＧＩＰ受容体を含む50μLの膜（20μg）を各ウエルに加える。最後に、50μLのWGAビーズ（1mgのビーズを含有）を各ウエルに移す。このプレートを振盪器上で3.5時間インキュベートし、次いで８〜48時間静置する。該オプティプレート(opti plates)をトップカウンタ(Topcounter)の中でカウントする。500 nMのＧＩＰを用いて、非特異的結合が決定される。
【０３８４】
一般に、当該化合物は、ＧＩＰ受容体に比較して、グルカゴン受容体に対するより高い親和性を示す。
【国際調査報告】
2005537231.tif 000118
2005537231.tif 000119
2005537231.tif 000120