(57)【要約】本発明は、シクロスポリンＡに構造的に類似しているシクロスポリン類似体、特にシクロスポリンＡに構造的に類似しているシクロスポリン類似体の異性体混合物を含む製剤に関するものである。これらの製剤は、安定なマイクロエマルションプレコンセントレートを形成し、すぐれた薬剤バイオアベイラビリティを提供し、及び／又はシクロスポリンＡの投与に関連する１種類以上の副作用を軽減することができる。これらの製剤の使用方法及び調製方法も開示される。
2005506990.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）薬物学的有効量のＩＳＡＴＸ２４７；
ｂ）ビタミンＥ ＴＰＧＳ；
ｃ）ＭＣＴ油；
ｄ）ツイーン４０及びツイーン８０からなる群から選択される乳化剤；及び
ｅ）エタノール
を含んでなるマイクロエマルションプレコンセントレート。
【請求項２】
医薬製剤が、約５ないし約１０重量％のＩＳＡＴＸ２４７、０％より多く約５０重量％までのビタミンＥ ＴＰＧＳ、０％より多く約５０重量％までのＭＣＴ油、０％より多く約５０重量％までの乳化剤、及び約５ないし約１５重量％のエタノールとを含み、前記製剤は、室温では液体マイクロエマルションプレコンセントレートである、請求項１に記載のマイクロエマルションプレコンセントレート。
【請求項３】
ａ：ｂ：ｃ：ｄ：ｅの重量比が約０．５−１：４：２：２：１である、請求項２に記載のマイクロエマルションプレコンセントレート。
【請求項４】
ＭＣＴ油、乳化剤、エタノール、ビタミンＥ ＴＰＧＳ、及び適量のＩＳＡＴＸ２４７を、ＩＳＡＴＸ２４７が完全に溶解するまで混合することを含み、前記製剤は室温で液体である、請求項１に記載のマイクロエマルションプレコンセントレートを調製する方法。
【請求項５】
ａ）薬物学的有効量のＩＳＡＴＸ２４７；
ｂ）ビタミンＥ ＴＰＧＳ；
ｃ）ＭＣＴ油；
ｄ）ツイーン４０；及び
ｅ）エタノール
を含んでなる医薬製剤。
【請求項６】
約５％ないし約１０重量％のＩＳＡＴＸ２４７、約２０％ないし約５０重量％のビタミンＥ ＴＰＧＳ、約５％ないし約２０重量％のＭＣＴ油、約５％ないし約５０重量％のツイーン４０、及び約５％ないし約１５重量％のエタノールを含んでなる、請求項５に記載の医薬製剤。
【請求項７】
ａ：ｂ：ｃ：ｄ：ｅの重量比が約０．５−１：４：２：２：１である、請求項６に記載の医薬製剤。
【請求項８】
ＭＣＴ油、ツイーン４０、エタノール、ビタミンＥ ＴＰＧＳ、及び適量のＩＳＡＴＸ２４７を、ＩＳＡＴＸ２４７が完全に溶解するまで混合することを含む、請求項５に記載の医薬製剤を調製する方法。
【請求項９】
ａ）薬物学的有効量のＩＳＡＴＸ２４７；
ｂ）ビタミンＥ ＴＰＧＳ；
ｃ）ＭＣＴ油；
ｄ）ツイーン８０；及び
ｅ）エタノール
を含んでなる医薬製剤。
【請求項１０】
約５％ないし約１０重量％のＩＳＡＴＸ２４７、約２０％ないし約５０重量％のビタミンＥ ＴＰＧＳ、約５％ないし約２０重量％のＭＣＴ油、約５％ないし約５０重量％のツイーン８０、約５％ないし約１５重量％のエタノールを含んでなる、請求項９に記載の医薬製剤。
【請求項１１】
ａ：ｂ：ｃ：ｄ：ｅの重量比が約０．５−１：２：４：２：１である、請求項１０に記載の医薬製剤。
【請求項１２】
ＭＣＴ油、ツイーン８０、エタノール、ビタミンＥ ＴＰＧＳ、及び適量のＩＳＡＴＸ２４７を、ＩＳＡＴＸ２４７が完全に溶解するまで混合することを含む、請求項９に記載の医薬製剤を調製する方法。
【請求項１３】
ａ）薬物学的有効量のＩＳＡＴＸ２４７；
ｂ）ＭＣＴ油；
ｃ）ツイーン８０；
ｄ）トリアセチン；及び
ｅ）エタノール
を含んでなる医薬製剤。
【請求項１４】
約５％ないし約１０重量％のＩＳＡＴＸ２４７、約２０％ないし約５０重量％のトリアセチン、約５％ないし約５０重量％のＭＣＴ油、約５％ないし約５０重量％のツイーン８０、及び約５％ないし約１５重量％のエタノールとを含んでなる、請求項１３に記載の医薬製剤。
【請求項１５】
ａ：ｂ：ｃ：ｄ：ｅの重量比が約０．５−１：５：３：１：１である、請求項１４に記載の医薬製剤。
【請求項１６】
ＭＣＴ油、ツイーン８０、エタノール、トリアセチン、及び適量のＩＳＡＴＸ２４７を、ＩＳＡＴＸ２４７が完全に溶解するまで混合することを含む、請求項１３に記載の医薬製剤を調製する方法。
【請求項１７】
ａ）薬物学的有効量のＩＳＡＴＸ２４７；
ｂ）ツイーン８０；
ｃ）ビタミンＥ ＴＰＧＳ；
ｄ）エタノール；及び
ｅ）ミリスチン酸イソプロピル
を含んでなる医薬製剤。
【請求項１８】
約５％ないし約１０重量％のＩＳＡＴＸ２４７、約２０％ないし約５０重量％のビタミンＥ ＴＰＧＳ、約５％ないし約５５重量％のミリスチン酸イソプロピル、約５％ないし約５０重量％のツイーン８０、及び約５％ないし約１５重量％のエタノールを含んでなる、請求項１７に記載の医薬製剤。
【請求項１９】
ａ：ｂ：ｃ：ｄ：ｅの重量比が約０．５−１：２：１：１：６である、請求項１８に記載の医薬製剤。
【請求項２０】
ミリスチン酸イソプロピル、ツイーン８０、エタノール、ビタミンＥ ＴＰＧＳ、及び適量のＩＳＡＴＸ２４７を、ＩＳＡＴＸ２４７が完全に溶解するまで混合することを含む、請求項１７に記載の医薬製剤を調整する方法。
【請求項２１】
ａ）薬物学的有効量のＩＳＡＴＸ２４７；
ｂ）ビタミンＥ ＴＰＧＳ；
ｃ）ＭＣＴ油；
ｄ）ツイーン４０；及び
ｅ）エタノール
を含んでなる医薬製剤プレコンセントレートであって、
水性メジウムと混合すると透明な安定マイクロエマルション溶液を形成する、前記医薬製剤プレコンセントレート。
【請求項２２】
約５％ないし約１０重量％のＩＳＡＴＸ２４７、約２０％ないし約５０重量％のビタミンＥ ＴＰＧＳ、約５％ないし約２０重量％のＭＣＴ油、約５％ないし約５０重量％のツイーン４０、約５％ないし約１５重量％のエタノールを含んでなる、請求項２１に記載の医薬製剤プレコンセントレート。
【請求項２３】
ａ：ｂ：ｃ：ｄ：ｅの重量比が約０．５−１：４：２：２：１である、請求項２２に記載の医薬製剤プレコンセントレート。
【請求項２４】
ａ）薬物学的有効量のＩＳＡＴＸ２４７；
ｂ）ビタミンＥ ＴＰＧＳ；
ｃ）ＭＣＴ油；
ｄ）ツイーン４０；及び
ｅ）エタノール
を含んでなるマイクロエマルションプレコンセントレートであって、
プレコンセントレート約１部対水性メジウム約１０ないし約１００部の割合で水性メジウムと混合すると、透明な安定マイクロエマルション溶液を形成する、前記マイクロエマルションプレコンセントレート。
【請求項２５】
前記水性メジウムが、水、果汁（グレープフルーツジュースを除く）、茶、ミルク及びココアからなる群から選択される、請求項２１に記載の医薬製剤。
【請求項２６】
前記果汁がリンゴジュースである、請求項２５に記載の医薬製剤。
【請求項２７】
ＭＣＴ油、ツイーン４０、エタノール、ビタミンＥ ＴＰＧＳ ｎ、及び適量のＩＳＡＴＸ２４７を、ＩＳＡＴＸ２４７が完全に溶解するまで混合し、その後この製剤を水性メジウムに加えて、マイクロエマルションプレコンセントレートを形成するまで混合することを含む、請求項２１に記載の医薬製剤を調製する方法。
【請求項２８】
ａ）薬物学的有効量のＩＳＡＴＸ２４７；
ｂ）ビタミンＥ ＴＰＧＳ；
ｃ）ＭＣＴ油；
ｄ）ツイーン４０；及び
ｅ）エタノール
を含んでなる医薬製剤であって、
皮下又は筋肉内投与に適する、前記医薬製剤。
【請求項２９】
エマルション又はマイクロエマルションである、請求項１、５、９、１３、又は１７のいずれかの項に記載の医薬製剤。
【請求項３０】
エマルション又はマイクロエマルションプレコンセントレートである、請求項５、９、１３、又は１７のいずれかの項に記載の医薬製剤。
【請求項３１】
ＩＳＡＴＸ２４７のバイオアベイラビリティが約３０％より大きい、請求項１、５、９、１３、１７、２１、又は２８のいずれかの項に記載の医薬製剤。
【請求項３２】
経口投与のためのものである、請求項１、５、９、１３、１７又は２１のいずれかの項に記載の医薬製剤。
【請求項３３】
さらに、保護コロイドとしての生体適合性ポリマー類、懸濁液安定剤又は増量剤、賦形剤、結合剤及び担体を含む、請求項１、５、９、１３、１７、２１、又は２８のいずれかの項に記載の医薬製剤。
【請求項３４】
生体適合性ポリマーが、ポリオキシエチレングリコール化天然又は水素化植物油、クレモフォル（商標）、ニッコル（商標）、ツイーン類、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン ブロックコポリマー類、レシチン類、プロピレングリコールモノ−及びジ−脂肪酸エステル類及びプロピレングリコール カプリル−カプリン酸ジエステルからなる群から選択される、請求項３３に記載の医薬製剤。
【請求項３５】
ツイーンが、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノパルミテート、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタントリオレエート、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタントリステアレート、ポリオキシエチレン（４）ソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレン（４）ソルビタンモノステアレート、及びポリオキシエチレン（５）ソルビタンモノオレエートからなる群から選択される、請求項３４に記載の医薬製剤。
【請求項３６】
免疫抑制を必要とする対象に、請求項１、５、９、１３、１７、２１又は２８のいずれかの項に記載の医薬製剤の有効量を投与することを含む、免疫抑制を生成する方法。
【請求項３７】
投与する医薬製剤の量が、前記対象の体重１ｋｇあたり約０．５ないし３ｍｇ／日である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記医薬製剤が１日１回投与される、請求項３６に記載の方法。
【請求項３９】
前記医薬製剤が１日２回投与される、請求項３６に記載の方法。
【請求項４０】
前記医薬製剤を使用して、前記対象の炎症性又は自己免疫疾患又は障害を治療する、請求項３６に記載の方法。
【請求項４１】
請求項１、５、９、１３、１７、２１又は２８のいずれかの項に記載の医薬製剤をつくることによって、ＩＳＡＴＸ２４７の免疫抑制効果を増強する方法。
【請求項４２】
前記プレコンセントレートを、プレコンセントレート約１部対水性メジウム約１０ないし約１００部の割合で水性メジウムと混合する、請求項１、５、９、１３、１７、又は２８のいずれかの項に記載の医薬製剤。
【請求項４３】
前記水性メジウムが、水、果汁（グレープフルーツジュースを除く）、茶、ミルク及びココアからなる群から選択される、請求項４２に記載の医薬製剤。
【請求項４４】
前記果汁がリンゴジュースである、請求項４３に記載の医薬製剤。
【請求項４５】
経口製剤がソフトゼラチンカプセルに封入されている、請求項３２に記載の医薬製剤。
【請求項４６】
対象に投与した際に免疫抑制を生成するための薬剤の製造における、請求項１、５、９、１３、１７、２１、又は２８のいずれかの項に記載の医薬製剤の使用。
【請求項４７】
前記薬剤が、前記対象の体重１ｋｇあたり前記医薬製剤約０．５ないし３ｍｇ／日の投与に適する、請求項３６に記載の使用。
【請求項４８】
前記薬剤が１日１回投与される、請求項３６に記載の使用。
【請求項４９】
前記薬剤が１日２回投与される、請求項３６に記載の使用。
【請求項５０】
前記薬剤を使用して、前記対象の炎症性又は自己免疫疾患又は障害を治療する、請求項３６に記載の使用。
【請求項５１】
ＩＳＡＴＸ２４７の免疫抑制効果を増強するための薬剤の製造における、請求項１、５、９、１３、１７、２１、又は２８のいずれかの項に記載の医薬製剤の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、米国特許法第１１９条（ｅ）項のもとで、２００２年４月５日に提出された米国仮出願第６０／３７０，５９７号（代理人事件番号０３１９９３−０４１）及び２００１年１０月１９日に提出された米国仮出願第６０／３４６，２０１号（代理人事件番号０３１９９３−１２５）に対する優先権を請求する。前記２件の出願の開示は、本明細書にそのまま組み込まれる。
【０００２】
本発明は、構造的にシクロスポリンＡに類似しているシクロスポリン類似体を含有する製剤に関する。特に、これらの製剤は、シクロスポリン類似体ＩＳＡＴＸ２４７の異性体混合物を含有する。これらの製剤は、高い薬剤溶解性、すぐれた薬剤バイオアベイラビリティをもたらし、シクロスポリン投与に関係する１種類以上の副作用を軽減する安定なマイクロエマルションを形成する。これらの製剤の使用方法及び調製方法も開示される。
【背景技術】
【０００３】
下記の参考文献は、本明細書の該当部分において括弧書きの数字によって参照される。
【非特許文献１】
１．グプタ（Gupta）及びロビンソン（Robinson）著、経口コントロールド−ドラッグデリバリーに関する論文、テキスト版、１９９２、イージス・カデンス（Aegis Cadence）編、マンデル・デッカー社
【非特許文献２】
２．トレイバー（Traber）ら著：Helv. Chim. Acta、６０巻、ｐ．１２４７−１２５５（１９７７）
【非特許文献３】
３．コベル（Kobel）ら著：Europ. J. Applied Microbiology and Biotechnology、１４巻、ｐ．２３７−２４０（１９８２）
【非特許文献４】
４．フォン ワルトバーグ（von Wartburg）ら著：Progress in Allergy、３８巻、ｐ．２８−４５（１９８６）
【非特許文献５】
５．リッチ（Rich）ら著：J. Med. Chem.、２９巻、ｐ．９７８（１９８６）
【０００４】
【特許文献１】
６．米国特許第４，３８４，９９６号、１９８３年５月２４日発行
【特許文献２】
７．米国特許第４，７７１，１２２号、１９８８年９月１３日発行
【特許文献３】
８．米国特許第５，２８４，８２６号、１９９４年２月８日発行
【特許文献４】
９．米国特許第５，５２５，５９０号、１９９６年６月１１日発行
【０００５】
【非特許文献６】
１０．スケトリス（Sketris）ら著、Clin. Biochem.、２８巻：ｐ.１９５−２１１（１９９５）
【非特許文献７】
１１．ベネット（Bennett）著、Renal Failure、２０巻：ｐ．６８７−９０（１９９８）
【非特許文献８】
１２．ワング（Wang）ら著、Transplantation、５８巻：ｐ．９４０−９４６（１９９４）
【非特許文献９】
１３．「イーストマンのビタミンＥ ＴＰＧＳ（Eastman Vitamin Ｅ ＴＰＧＳ）」Eastman Brochure、Eastman Chemical Co.、Kingsport、Tenn（１９９６年１０月）
【非特許文献１０】
１４．ホーレイズ・コンデンスド・ケミカル・ディクショナリー（Hawley's Condensed Chemical Dictionary）（１９８７）
【非特許文献１１】
１５．エリス（Ellis）著、Progress in Medical Chemistry 25（１９８８）エルセヴィール、アムステルダム
【非特許文献１２】
１６．ソコル（Sokol, R.J.）、Lancet、３３８（８７６１）：２１２（１９９１）
【非特許文献１３】
１７．ソコル、Lancet、３３８（８７６８）：６９７（１９９１）
【０００６】
上記の各出版物又は特許の開示は、個々の各出版物及び特許の専門用語が特異的にかつ個々に参考として組み込まれるのと同様に、そのまま参考として本明細書に組み込まれる。
【０００７】
シクロスポリンの治療薬としての使用
大部分の移植処置において、ホスト−ドナー組織型適合によるグラフト拒絶を回避する努力が行われているにもかかわらず、免疫抑制治療は、ホスト中のドナー臓器の生存能力のために重要である。種々の免疫抑制剤、例えばアザチオプリン、メトトレキセート、シクロホスファミド、ＦＫ−５０６、ラパマイシン及びコルチコステロイド類などが移植手術に使用されている。シクロスポリン類は、Ｔ−細胞介在性反応に対するそれらの好ましい効果のために、免疫抑制治療にますます多く使用されるようになっている（１）。
【０００８】
シクロスポリンは、体液性免疫及び細胞介在性免疫反応、例えば同種移植片拒絶、遅延型過敏症、実験的アレルギー性脳脊髄炎、フロイント アジュバント関節炎及びグラフト対ホスト病（ＧＶＨＤ）などを抑制することが証明された。それは、臓器移植に続く臓器拒絶の予防に、リウマチ性関節炎の治療に、乾癬の治療に、そしてその他のＩ型糖尿病、クローン病及び狼瘡などの免疫病の治療に使用される。多くの天然シクロスポリン類が、当該技術では公知である。非天然シクロスポリン類は、全−又は半合成手段によって、又は改良培養法の適用によってつくられる。このように、入手できるシクロスポリン群は重要であり、例えば、天然シクロスポリンＡ（ＣｓＡ）からシクロスポリンＺ（ＣｓＺ）まで、並びにその他の非天然シクロスポリン誘導体、ジヒドロ−及びイソ−シクロスポリンなどがある（２、３、４）。修飾された１−位置のアミノ酸を含むＣｓＡ類似体が、リッチらによって報告された（９）。免疫抑制性、抗炎症性及び抗寄生虫性ＣｓＡ類似体が、サンド社に譲渡された米国特許第４，３８４，９９６号（６）、第４，７７１，１２２号（７）、第５，２８４，８２６号（８）及び第５，５２５，５９０号（特許文献４）に記載されている。
【０００９】
シクロスポリンは、分子量１２０２ダルトンを有する親油性分子である。シクロスポリンＡは、水に難溶で、高い親油性を有するため、従来の固体又は液体の薬剤用担体を有するシクロスポリンＡ医薬組成物は不都合であることが多い。例えば、シクロスポリン類はこのような組成物からは満足に吸収されず、又はこのような組成物は耐容性がよくなく、又はそれらの保存時における安定性は十分ではない。その溶解濃度は、１日投与量に対して低いことが多い。
【００１０】
シクロスポリン治療の副作用
シクロスポリン治療に関しては、多数の副作用がある。これらには腎毒性、肝毒性、白内障発生、多毛症、パラセシス（parathesis）及び歯肉過形成などがある（１０）。最も深刻な副作用は、腎毒性である。
【００１１】
急性シクロスポリン腎毒性は形態学的に、封入体、アイソメトリック空胞形成、及び微小カルシウム沈着を特徴とする細管損傷を伴う。それは、糸球体濾過率の低下に導く。これは、シクロスポリンで治療した患者の血清クレアチニンの速やかな増加によって確認できる（１１）。
シクロスポリンが腎臓障害を起こす正確なメカニズムは知られていない。ラット研究において、慢性的ＣｓＡ−誘起性腎臓機能及び腎臓構造の悪化は、腎脂質の過酸化を伴った。抗酸化剤をＣｓＡと同時投与すると、これらのラットにおける腎臓障害は軽減することをワングらが証明した（１２）。
シクロスポリン治療と関連する腎毒性リスクを軽減する、これまでの当該技術での取り組みは、この薬剤をシクロスポリンの代謝を遅らせる作用物質と同時に投与し、治療的血中濃度を維持するために必要な用量を効果的に減らすことである。しかし、この方法は、シクロスポリンのバイオアベイラビリティが著しく変動するという問題を解決しないことが多い（１２）。このように、すぐれたバイオアベイラビリティーを有しながらも、副作用を起こさないシクロスポリン製剤を調製するという問題は、当該技術では公知である。
【００１２】
投与型
薬剤がその治療効果を実現するためには、その薬剤の治療量はバイオアベイラブルでなければならない、すなわち、それは患者の作用部位に到達できなければならない。経口ドラッグデリバリーは当該技術では知られており、投与が容易であるため一般的に利用されている。しかし経口投与型は、その薬剤が、まず腸内である与えられた時間内にその投与型から遊離しなければならず、また、消化管内で溶解し、吸収されなければならないため、複雑である。例えば、その投与型からの正しい薬剤放出、及び消化（ＧＩ）管内における薬剤の可溶化が重要である。
【００１３】
ＧＩ管の領域内でよくはたらく公知の経口投与型は、錠剤、カプセル、ゲルカプセル、シロップ、懸濁液、エマルション、マイクロエマルション類及びプレエマルションコンセントレート類などである。経口投与製剤の開発において、溶解度が重要な役割を果たす。なぜならば、活性薬剤を運搬するために使用される製剤は、ある与えられた時間の間、活性部位に到着する薬剤の量及び／又は濃度に影響を与えるからである。その製剤の組成も、消化管内における薬剤化合物の可溶化に直接影響を与え、その結果、活性薬剤化合物の血流への吸収程度及び吸収速度に影響を与える。その上、薬剤の治療効果は、その薬剤がデリバリーシステムそのものから放出される速度によって影響を受ける。デリバリーシステムそれ自体は、吸収前の消化管における活性化合物の溶解速度及び溶解程度に影響を与える（１）。
【００１４】
当該技術で知られている従来システムにおいて、薬剤の内容物は、短時間内に消化管に放出され、ある与えられた時間、通常は投与後数時間内に、血中薬剤濃度はピークに達する。シクロスポリン製剤を含む公知の経口ドラッグデリバリーシステムの設計は、不都合な用量関連性副作用をもたらすリスクを冒して、可能な限り速かな薬剤溶解を得ることに基準をおいている。
【００１５】
したがって、毒性が低く、高度のバイオアベイラビリティーを保持し、他の薬剤と共に投与する必要のないシクロスポリン製剤が是が非でも必要である。
【発明の開示】
【００１６】
本発明は、ある種の製剤、好ましくはマイクロエマルションプレコンセントレート及びマイクロエマルション製剤が、シクロスポリン類似体、ＩＳＡＴＸ２４７のデリバリーを行うことができるという発見に基づくものである。シクロスポリン類似体ＩＳＡＴＸ２４７は、シクロスポリンに関連する副作用の一つ以上を軽減する一方、その薬剤の高いバイオアベイラビリティーは保持するものである。さらに、本発明の製剤は、十分なバイオアベイラビリティーを提供することによって、ＩＳＡＴＸ２４７の免疫抑制効果も高める。
【００１７】
本発明の製剤は全て、活性成分としてのＩＳＡＴＸ２４７、及びポリオキシル化部分を有する非イオン性界面活性剤などの合成補助乳化剤で乳化された、合成又は植物性油を含有する。したがって、本発明の製剤は、ＩＳＡＴＸ２４７、界面活性剤、エタノール、親油性及び／又は両親媒性溶媒を含む。本発明の製剤は、必要に応じてｐＨ及び等張性を調節でき、保護コロイドなどの生体適合性ポリマー類、懸濁液安定剤及び形成剤、賦形剤、結合剤及び担体なども必要に応じて含むことができる。
【００１８】
好ましい一態様において、本発明は、ａ）薬物学的有効量のＩＳＡＴＸ２４７、ｂ）ビタミンＥ ＴＰＧＳ、ｃ）ＭＣＴ油、ｄ）ツイーン４０及びツイーン８０からなる群から選択される乳化剤、及びｅ）エタノールを含んでなるマイクロエマルションプレコンセントレートに関するものである。より好ましくは、このマイクロエマルションプレコンセントレートは、約５ないし約１０重量％のＩＳＡＴＸ２４７、０％より多く約５０重量％までのビタミンＥ ＴＰＧＳ、０％より多く約５０重量％までのＭＣＴ油、０％より多く約５０重量％までの乳化剤、及び約５％ないし約１５重量％のエタノールを含み、前記製剤は、室温では液体マイクロエマルションプレコンセントレートである。より好ましくは、ａ：ｂ：ｃ：ｄ：ｅの重量比は、約０．５−１：４：２：２：１である。
【００１９】
本発明は、ＭＣＴ油、乳化剤、エタノール、ビタミンＥ ＴＰＧＳ及び正しい量のＩＳＡＴＸ２４７を、ＩＳＡＴＸ２４７が完全に溶解するまで混合することを含む、マイクロエマルションプレコンセントレートの調製方法も意図しており、製剤は、室温では液体である。
【００２０】
また別の態様において、本発明は、ａ）薬物学的有効量のＩＳＡＴＸ２４７、ｂ）ビタミンＥ−−トコフェリルポリエチレングリコール１０００琥珀酸（ビタミンＥ ＴＰＧＳ）、ｃ）中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）油、ｄ）ツイーン４０、及びｅ）エタノールを含んでなる医薬製剤に関するものである。好ましくは、この医薬製剤はマイクロエマルションである；より好ましくは、この製剤はマイクロエマルションプレコンセントレートである。この製剤は、好ましくは約５ないし約１０重量％のＩＳＡＴＸ２４７、約２０ないし約５０重量％のビタミンＥ ＴＰＧＳ、約５ないし約２０重量％のＭＣＴ油、約５％ないし約５０％のツイーン４０及び約５ないし約１５重量％のエタノールを含む。より好ましくは、ａ：ｂ：ｃ：ｄ：ｅの重量比が０．５−１：４：２：２：１である。
【００２１】
さらにまた別の態様において、本発明は免疫抑制を必要とする対象に、ａ）薬物学的有効量のＩＳＡＴＸ２４７、ｂ）ビタミンＥ ＴＰＧＳ、ｃ）ＭＣＴ油、ｄ）ツイーン４０、及びｅ）エタノールを含んでなる医薬製剤の有効量を投与することを含む、免疫抑制を生成する方法に関するものである。
【００２２】
本発明は、ＭＣＴ油、ツイーン４０、エタノール、ビタミンＥ ＴＰＧＳ、及び適量のＩＳＡＴＸ２４７を、ＩＳＡＴＸ２４７が完全に溶解するまで混合することを含む、本発明のこの態様の医薬製剤を調製する方法も意図している。
【００２３】
その他の態様において、本発明は、ａ）薬物学的有効量のＩＳＡＴＸ２４７、ｂ）ビタミンＥ ＴＰＧＳ、ｃ）ＭＣＴ油、ｄ）ツイーン８０、及びｅ）エタノールを含んでなる医薬製剤に関するものである。好ましくは、この医薬製剤はマイクロエマルションであり；より好ましくは、この製剤はマイクロエマルションプレコンセントレートである。この医薬製剤は、好ましくは約５％ないし１０重量％のＩＳＡＴＸ２４７、約２０％ないし約５０重量％のビタミンＥ ＴＰＧＳ、約５％ないし約２０重量％のＭＣＴ油、約５％ないし約５０重量％のツイーン８０、及び約５％ないし約１５重量％のエタノールを含む。より好ましくは、ａ：ｂ：ｃ：ｄ：ｅの重量比が約０．５−１：２：４：２：１である。
【００２４】
その他の態様において、本発明は、免疫抑制を必要とする対象に、ａ）薬物学的有効量のＩＳＡＴＸ２４７、ｂ）ビタミンＥ ＴＰＧＳ、ｃ）ＭＣＴ油、ｄ）ツイーン８０、及びｅ）エタノールを含んでなる医薬製剤の有効量を投与することを含む、免疫抑制を生成する方法に関するものである。
【００２５】
本発明は、ＭＣＴ油、ツイーン８０、エタノール、ビタミンＥ ＴＰＧＳ、及び適量のＩＳＡＴＸ２４７を、ＩＳＡＴＸ２４７が完全に溶解するまで混合することを含む、本発明のこの態様の医薬製剤を調製する方法も意図している。
【００２６】
また別の態様において、本発明は、ａ）薬物学的有効量のＩＳＡＴＸ２４７、ｂ）ＭＣＴ油、ｃ）ツイーン８０、ｄ）トリアセチン、及びｅ）エタノールを含んでなる、医薬製剤に関するものである。好ましくは、この医薬製剤はマイクロエマルションであり；より好ましくは、この製剤はマイクロエマルションプレコンセントレートである。この医薬製剤は、好ましくは約５％ないし１０重量％のＩＳＡＴＸ２４７、約２０％ないし約５０重量％のトリアセチン、約５％ないし約５０重量％のＭＣＴ油、約５％ないし約５０重量％のツイーン８０及び約５％ないし約１５重量％のエタノールを含む。より好ましくは、ａ：ｂ：ｃ：ｄ：ｅの重量比が約０．５−１：５：３：１：１である。
【００２７】
さらにまた別の態様において、本発明は、免疫抑制を必要とする対象に、ａ）薬物学的有効量のＩＳＡＴＸ２４７、ｂ）ＭＣＴ油、ｃ）ツイーン８０、ｄ）トリアセチン、及びｅ）エタノールを含んでなる医薬組成物の有効量を投与することを含む、免疫抑制を生成する方法に関するものである。
【００２８】
本発明は、ＭＣＴ油、ツイーン８０、エタノール、トリアセチン、及び適量のＩＳＡＴＸ２４７を、ＩＳＡＴＸ２４７が完全に溶解するまで混合することを含む、本発明のこの態様の医薬製剤を調製する方法も意図している。
【００２９】
さらにまた別の態様において、本発明は、ａ）薬物学的有効量のａ）ＩＳＡＴＸ２４７、ｂ）ツイーン８０、ｃ）ビタミンＥ ＴＰＧＳ、ｄ）エタノール、及びｅ）ミリスチン酸イソプロピルを含んでなる医薬製剤に関するものである。好ましくは、この医薬製剤はマイクロエマルションであり；より好ましくは、この製剤はマイクロエマルションプレコンセントレートである。この医薬製剤は、好ましくは約５％ないし約１０重量％のＩＳＡＴＸ２４７、約２０％ないし約５０重量％のビタミンＥ ＴＰＧＳ、約５％ないし約５５重量％のミリスチン酸イソプロピル、約５％ないし約５０重量％のツイーン８０及び約５％ないし約１５重量％のエタノールを含む。より好ましくは、ａ：ｂ：ｃ：ｄ：ｅの重量比が約０．５−１：２：１：１：６である。
【００３０】
また別の態様において、本発明は、免疫抑制を必要とする対象に、ａ）ＩＳＡＴＸ２４７、ｂ）ツイーン８０、ｃ）ビタミンＥ ＴＰＧＳ、ｄ）エタノール、及びｅ）ミリスチン酸イソプロピルを含んでなる医薬製剤の有効量を投与することを含む、免疫抑制を生成する方法に関するものである。
【００３１】
本発明は、ミリスチン酸イソプロピル、ツイーン８０、エタノール、ビタミンＥ ＴＰＧＳｎ、及び適量のＩＳＡＴＸ２４７を、ＩＳＡＴＸ２４７が完全に溶解するまで混合することを含む、本発明のこの態様の医薬製剤を調製する方法も意図している。
【００３２】
さらにまた別の態様において、本発明は、ａ）薬物学的有効量のＩＳＡＴＸ２４７、ｂ）ビタミンＥ ＴＰＧＳ、ｃ）ＭＣＴ油、ｄ）ツイーン４０、及びｅ）エタノールを含んでなる医薬製剤プレコンセントレートに関するものである。この医薬製剤プレコンセントレートは、好ましくは約５％ないし約１０重量％のＩＳＡＴＸ２４７、約２０％ないし約５０重量％のビタミンＥ ＴＰＧＳ、約５％ないし約２０重量％のＭＣＴ油、約５％ないし約５０重量％のツイーン４０、及び約５％ないし約１５重量％のエタノールを含む。より好ましくは、ａ：ｂ：ｃ：ｄ：ｅの重量比が約０．５：４：２：２：１である。さらにより好ましいのは、製剤がマイクロエマルションプレコンセントレートであって、このプレコンセントレートは、水性メジウムと混合すると透明な安定マイクロエマルション溶液を形成することである。好ましくは、この水性メジウムは、水又は果汁（グレープフルーツジュースを除く）である。加えて、このプレコンセントレートは、プレコンセントレート約１部対水性メジウム約１０ないし約１００部という比で、水性メジウムと混合するのがより好ましい。
【００３３】
また別の態様において、本発明は、水性メジウムに混入したａ）薬物学的有効量のＩＳＡＴＸ２４７、ｂ）ビタミンＥ ＴＰＧＳ、ｃ）ＭＣＴ油、ｄ）ツイーン４０、及びｅ）エタノールを含んでなる医薬製剤の有効量を、免疫抑制を必要とする対象に投与することを含む、免疫抑制を生成する方法に関するものである。
【００３４】
本発明は、ＭＣＴ油、ツイーン４０、エタノール、ビタミンＥ ＴＰＧＳｎ、及び適量のＩＳＡＴＸ２４７を、ＩＳＡＴＸ２４７が完全に溶解するまで混合することを含む、本発明のこの態様の医薬製剤を調製する方法も意図している。生成したプレコンセントレートは、その後水性メジウムと、１部のプレコンセントレート対約１０ないし約１００部のメジウムという比で混合するのが好ましい。
【００３５】
さらにまた別の態様において、本発明は、ａ）薬物学的有効量のＩＳＡＴＸ２４７、ｂ）ビタミンＥ ＴＰＧＳ、ｃ）ＭＣＴ油、ｄ）ツイーン４０、及びｅ）エタノールを含んでなる医薬製剤に関するものである。この医薬製剤は、皮下（ＳＣ）又は筋肉内（ＩＭ）投与など、非経口的に投与することができ、任意に滅菌される。
【００３６】
本発明のもう一つの態様において、前記マイクロエマルションプレコンセントレート製剤のいずれかが、水性メジウムと混合して透明で熱力学的安定なマイクロエマルション溶液を形成することができる。水性メジウムは、水、又はグレープフルーツジュースを除く果汁である。グレープフルーツジュースは、ＩＳＡＴＸ２４７と不都合な反応をおこすことがある。加えて、プレコンセントレートは、プレコンセントレート約１部対水性メジウム約１０ないし約１００部の比で水性メジウムと混合する。
【００３７】
本発明のさらにもう一つの態様において、前記マイクロエマルションプレコンセントレート製剤のいずれかは、好ましくはソフトゼラチンカプセルに封入された、経口製剤である。
【００３８】
発明を実施するための形態
概して、本出願における用語は、当該技術において理解される意味で一貫して使用される。
【００３９】
用語「cyclosporin」及び「cyclosporine」は単にスペルの違いであり、ここでは交換可能に用いられ、同じ化合物をあらわす。例えば、シクロスポリンＡ（cyclosporin Ａ及びcyclosporine Ａ）は、場合によって同じ化合物又は同じ化合物群をあらわす。
【００４０】
本明細書に使用する用語「マイクロエマルションプレコンセントレート」は、マイクロエマルションをつくる水性メジウムと接触可能である系を意味する。用語マイクロエマルションは、本明細書では、水及び有機化合物（疎水性（親油性）有機化合物を含める）を含む、不透明でない（透明な）又は実質的に不透明でない熱力学的に安定なコロイド分散系として一般的に受け入れられている意味で使用される。
【００４１】
用語「エマルション」は、小滴の形で他の液に細かく分散している少なくとも１種類の不混和性液からなる不均質系であり、上記小滴の直径は通常０．１ｍｍを超える。このような系は、最小の安定性を有し、それは界面活性剤、微粉固体などの添加物によってさらに不安定になる。従来の「エマルション」は、本発明のマイクロエマルションとは異なり、熱力学的に不安定な分散系と考えられる。
【００４２】
Ａ．製剤の製法
本発明の製剤は全て、活性成分としてのＩＳＡＴＸ２４７と、補助乳化剤、好ましくはポリオキシル化部分を有する非イオン性界面活性剤などの補助乳化剤で乳化した合成又は植物油を含む。本発明の製剤は、ｐＨ及び等張性を必要に応じて調節できる。本発明の製剤は、保護コロイドなどの生体適合性ポリマー類、懸濁液安定剤及び形成剤、賦形剤、結合剤及び担体も、必要に応じて含むことができる。幾つかの好ましい実施形態は、比較的高い薬剤溶解度及び水性メジウムへの比較的速やかな溶解（撹拌して約５分未満）を有し、透明マイクロエマルションを形成する、透明な安定製剤を形成する。
【００４３】
このように、本発明の製剤は、ＩＳＡＴＸ２４７、界面活性剤、油、エタノール及び、親油性及び／又は両親媒性溶媒である乳化剤を含む、マイクロエマルション又はマイクロエマルションプレコンセントレートである。ある実施形態において、この製剤は、約５％ないし約１０重量％のＩＳＡＴＸ２４７、約２０％ないし約５０重量％の界面活性剤、例えばトコフェリルポリエチレングリコールカルボン酸エステルなど（又は任意にトリアセチンなどのエマルション安定剤）、約５％ないし約２０重量％の油成分、例えばＭＣＴ油又はミリスチン酸イソプロピルなど、約５&ないし約１５重量％のエタノール、及び約２０％ないし約４０重量％の親油性溶媒及び／又は約１０％ないし約５５重量％の両親媒性溶媒を含む。その他に、この製剤は、任意にその他の界面活性剤を約１０％ないし約２０重量％含むことができる。
【００４４】
本発明の実施形態は、十分な薬剤バイオアベイラビリティ（表３及び５、及び図２を参照）及び／又は軽減された毒性（表５及び７を参照）を有する。この高められるバイオアベイラビリティ及び／又は軽減される毒性のメカニズムは不明である。しかし、理論によって制限されるものではないが、ビタミンＥ ＴＰＧＳが製剤のこれらの特徴に寄与している可能性がある。例えば、ビタミンＥ ＴＰＧＳの同時投与は、小児における肝臓移植後のシクロスポリンのバイオアベイラビリティを高めることが証明された（ソコルら）。ビタミンＥ ＴＰＧＳは、腸内におけるチトクロームＰ４５０の薬剤代謝を阻害することによって、バイオアベイラビリティを高める。ビタミンＥ ＴＰＧＳは、シクロスポリン誘起性腎臓チトクロームＰ−４５０の生成を抑制し、二次的に酸素化代謝産物の形成を減らす。又は、ビタミンＥ ＴＰＧＳは、Ｐ−ｇｐ−コントロールド逆輸送を阻害し、腸の腸細胞層を通過する薬剤類の正味の輸送を高め、同時投与される薬剤のバイオアベイラビリティの増加を引きおこしうる。加えて、ビタミンＥ ＴＰＧＳはよく知られた抗酸化剤である。また、ビタミンＥ ＴＰＧＳは、アラキドン酸放出及びリポキシゲナーゼ酵素活性を阻害することによって、プロスタグランジン形成に影響を与えるというやり方で、アラキドン酸代謝にある役割を果たす。このプロセスにより、ビタミンＥ ＴＰＧＳは血小板凝集を阻止し、それによってＩＳＡＴＸ２４７の腎毒性作用を減らす（１５）。又は、ＩＳＡＴＸ２４７そのものが、シクロスポリンＡやその他の関連化合物に比べてよりバイオアベイラブルであり、より低毒性である可能性もある。これらのメカニズムのいずれか、これらのメカニズムの組合わせのいずれか、又は未知のメカニズムが、ここに開示される組成物の高いバイオアベイラビリティ及び低い毒性に貢献しているのであろう。
【００４５】
本発明の製剤の好ましい活性成分は、シクロスポリンの類似体、ＩＳＡＴＸ２４７である。ＩＳＡＴＸ２４７は、Ｅ−及びＺ−異性体の混合物として、又は単独のＥ−又はＺ−異性体として製剤中に存在する。ＩＳＡＴＸ２４７異性体の構造式は次のとおりである：
【化１】
2005506990.tif 000003
【００４６】
本発明の製剤は、薬剤ＩＳＡＴＸ２４７、合成又は植物油、好ましくはポリオキシエチル化部分を有する非イオン性界面活性剤、好ましくはポリオキシエチル化ビタミンＥなどの合成補助乳化剤で乳化されたＭＣＴ（中鎖トリグリセリド）油を含む。処方された内容物は、ｐＨ及び等張性を必要に応じて調節することができる。これらの製剤は、ポリ（ビニルピロリドン）（ＰＶＰ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの生体適合性ポリマー類及びその他のポリマー類を保護コロイドとして、及び懸濁剤又は増量剤、賦形剤、結合剤及び／又は担体も場合により含むことができる。
【００４７】
ウィッティヒ反応によるＩＳＡＴＸ２４７の（Ｅ）及び（Ｚ）−異性体混合物の合成
ここに例示されるウィッティヒ反応経路は、図３の参照番号３１によって確認される。方法１は、臭素中間体アセチル−η−ブロモシクロスポリン４１を経て進むが、方法２は、出発点としてアセチルシクロスポリンＡアルデヒド５１を使用する。以下に記載する典型的方法はウィッティヒ反応を用い、混合立体化学的配置を有するアルケン官能基を導入する。
【００４８】
本明細書に開示される典型的実施形態において、ＩＳＡＴＸ２４７の（Ｅ）及び（Ｚ）−異性体混合物を合成するために用いられるウィッティヒ反応は、任意にリチウムハリドの存在下で行ってもよい。ウィッティヒ反応におけるリチウムハリドの存在は、生成する幾何異性体類の比に影響をもつことはよく知られており、したがってこのような化合物の添加は、ＩＳＡＴＸ２４７の（Ｅ）及び（Ｚ）−異性体の所望混合物の生成に役立つ。
【００４９】
方法１
本発明の一実施形態において、ＩＳＡＴＸ２４７の（Ｅ）及び（Ｚ）−異性体混合物は、図４に示すようにつくられる。図４における波線（特に、化合物４３と４４を参照）の表示の使用は、例示的反応系列が（Ｅ）及び（Ｚ）−異性体の混合物を生成することを示すものとする。一実施形態において、生成した（Ｅ）対（Ｚ）−異性体のパーセント比は、（Ｅ）−異性体の約１０ないし９０パーセントから（Ｚ）−異性体の約９０ないし１０パーセントまでの範囲であるが、これらの範囲は単なる例示であり、多くの他の範囲が可能である。例えば、混合物は約１５ないし８５重量パーセントの（Ｅ）−異性体及び約８５ないし１５パーセントの（Ｚ）−異性体を含むことができる。その他の実施形態において、混合物は約２５ないし７５重量パーセントの（Ｅ）−異性体及び約７５ないし２５重量パーセントの（Ｚ）−異性体；約３５ないし６５重量パーセントの（Ｅ）−異性体及び約６５ないし３５重量パーセントの（Ｚ）−異性体；及び、約４５ないし５５重量パーセントの（Ｅ）−異性体及び約５５ないし４５パーセントの（Ｚ）−異性体を含む。また別の実施形態において、異性体混合物は、約４５ないし５０重量パーセントの（Ｅ）−異性体及び約５０ないし５５重量パーセントの（Ｚ）−異性体を含むＩＳＡＴＸ２４７混合物である。これらの重量パーセントは組成物の総重量を基準としており、（Ｅ）異性体及び（Ｚ）異性体の重量の合計が１００重量パーセントであることは当然である。言い換えれば、混合物は６５重量パーセントの（Ｅ）−異性体及び３５重量パーセントの（Ｚ）−異性体を含むことができ、又はその逆でもよい。
【００５０】
図４を参照すると、アセチルシクロスポリンＡの１−アミノ酸残基の側鎖の末端η炭素を次の反応工程において臭素化する；すなわち、四塩化炭素などの溶媒中でアセチルシクロスポリンＡ３５をＮ−ブロモスクシンイミド及びアゾ−ビス−イソブチロニトリルと共に還流し、中間体アセチル−η−ブロモシクロスポリンＡ４１を生成する。Ｎ−ブロモスクシンイミドは、アリル水素を臭素で置換するためによく用いられる試薬であり、これは遊離基メカニズムによって行われると考えられている。この中間体４１の製法は、エバール及びナニンガーによって「シクロスポリンＡの主代謝産物（ＯＬ−１７）の合成」（J. Org. Chem.、５７巻、ｐ．２６８６−２６９１（１９９２））で詳細に記載されている。
【００５１】
新規の中間体、アセチルシクロスポリンＡトリフェニルホスホニウムブロミド４２は、アセチル−η−ブロモシクロスポリンＡ４１から、この化合物をトルエンなどの溶媒中でトリフェニルホスフィンと共に加熱することによってつくることができる。
【００５２】
新規の中間体４２及びこれに類似するその他のものは、１−アミノ酸残基中に共役ジエン系を含む複数のシクロスポリンＡ類似体の合成における重要な中間体であると考えられる。例えば、トリフェニルホスフィンに加えて、トリアリールホスフィン類、トリアルキルホスフィン類、アリールアルキルホスフィン類、及びトリアリールアルシン類などの化合物をアセチル−η−ブロモシクロスポリンＡ４１と反応させて４２に類似するその他の活性化合物をつくることができる。
【００５３】
再び図４を参照すると、アセチルシクロスポリンＡのトリフェニルホスホニウムブロミド４２と過剰のホルムアルデヒドをトルエン中で室温で撹拌することによって、アセチル−１，３−ジエン４３の（Ｅ）及び（Ｚ）−異性体混合物をつくることができる。ホルムアルデヒドの添加後、水酸化ナトリウムなどの塩基を滴下し、ジエン類の異性体混合物を酢酸エチルで抽出する。
【００５４】
多数の有機化学の教科書が、ウィッティヒ反応を説明している。説明の一つは、特にマクマリーが「有機化学（Organic Chemistry）」、５版（ブルックス／コール、パシフィック グローブ、２０００）、ｐ．７８０−７８３で記載しているものである。ウィッティヒ反応は、ケトン又はアルデヒドをアルケンに変換するために利用される。このようなプロセスにおいて、リンイリド（ホスホランとも呼ばれる）をアルデヒド又はケトンと反応させると、ベタインと呼ばれる二極性中間体が得られる。一般的には、ベタイン中間体は分離されない；むしろ、それは四員環を経て自然に分解して、アルケンとトリフェニルホスフィンオキシドを与える。正味の結果は、元々はリンに結合していたＲ２Ｃ＝基によってカルボニル酸素原子が置換されることである。
【００５５】
非常に種々様々の試薬が上述の典型的ウィッティヒ反応試薬の代わりになり得ることは、当業者には明らかである。例えば、多数のアルキル、アリール、アルデヒド及びケトン化合物をホルムアルデヒドの代わりに使用すると、膨大な数のシクロスポリン誘導体がつくられる。出願人は、上記の合成をホルムアルデヒドで行い、また、ホルムアルデヒドの代わりにアセトアルデヒド、ジューテロ化ホルムアルデヒド、ジューテロ化アセトアルデヒド、２−クロロベンズアルデヒド、ベンズアルデヒド、及びブチルアルデヒドなどの化合物で行った。このようなウィッティヒ反応を、トリフェニルホスホニウム誘導体以外の化合物、例えばトリアリールホスフィン類、トリアルキルホスフィン類、アリールアルキルホスフィン類及びトリアリールアルシン類などで行ってもよい。水酸化ナトリウムを使用する代わりに、種々のその他の塩類、例えば炭酸ナトリウム、ブチルリチウム、ヘキシルリチウム、ナトリウムアミド、リチウム ジイソプロピルアミドのようなリチウム障害性塩基、及びアルカリ金属アルコキシド類などを使用してもよい。これら種々の試薬が使用できる上に、反応は種々の有機溶媒中又は有機溶媒と水との混液中で、種々の塩、特にリチウムハリドの存在下で、種々の温度で行うことができる。上に列挙した因子の全ては、当業者によって合理的に選択され、形成される二重結合の立体化学、すなわちシス対トランス異性体の比に所望の効果を与える。
【００５６】
この合成の最終工程において、β−炭素上の保護基を下記の手順によって除去する。アセチル−（Ｅ）−１，３−ジエン及びアセチル−（Ｚ）−１，３ジエンの混合物４３をメタノールに溶解し、それから水を加える。炭酸カリウムのような塩基を加え、反応混合物を室温で撹拌する。使用できる炭酸カリウム以外の塩基として水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、ナトリウムアルコキシド及びカリウムアルコキシドなどがある。その後、酢酸エチルを使用して最終生成物であるＩＳＡＴＸ２４７の（Ｅ）及び（Ｚ）−異性体混合物４４を抽出する。
【００５７】
方法２
ＩＳＡＴＸ２４７の（Ｅ）及び（Ｚ）−異性体混合物を、ウィッティヒ反応戦略によって合成するまた別の反応経路においては、以下のように４工程の合成経路を使用する：１）方法１のようなβ−アルコールの保護、２）第一工程から生成したアセチル−シクロスポリンＡを酸化してアルデヒドをつくる；３）ウィッティヒ反応；４）ウィッティヒ反応生成物を脱アシル化し、又は同等に、酢酸エステルを加水分解して、アルコールを回復させる。この反応系列は、図５で明らかにされる。
【００５８】
この合成経路は、第一工程が酢酸エステル基でβ−アルコールを保護するという点で、 図４のウィッティヒ反応経路と同様にして開始される。しかし、これら２経路は次の点で互いに異なる；方法２の次の工程は、アセチル−シクロスポリンＡ３５をアルデヒド、すなわちアセチルシクロスポリンＡアルデヒド５１に変換する。この反応は、十分強い酸化剤を使用し、Ｃ＝Ｃ結合を切断して２つの断片を生成する。アルケン切断は、当該技術では公知である。オゾンはおそらく最も一般的に使用される二重結合切断試薬であるが、その他の酸化剤、例えば過マンガン酸カリ（ＫＭｎＯ４）又は四酸化オスミウムも、二重結合切断を起こすことができる。
【００５９】
ルテニウム−ベースの酸化剤の使用が、カールセンらの「四酸化ルテニウム触媒による有機化合物の酸化法の顕著な改良」J. Org. Chem.、４６巻、１９号、ｐ．３７３６−３７３８（１９８１）で述べられている。カールセンらは、歴史的に、ルテニウム金属の費用が触媒法の発達の動機となったことを教示しており、最も人気のある触媒法は、化学量論的酸化剤として過ヨウ素酸塩か次亜塩素酸塩を使用している。これらの研究者はルテニウムの一般的使用では反応経過中に触媒活性が喪失することを見いだし、それはカルボン酸の存在によると仮定した。反応混合物にニトリル、特にアセトニトリルを加えると、ＣＣｌ４／Ｈ２Ｏ／ＩＯ４−系においてアルケン類の酸化分解の速度及び程度が顕著に高まることが判明した。
【００６０】
本発明の一実施形態によると、アセチルシクロスポリンＡアルデヒド５１は、次の手順でアセチルシクロスポリンＡ３５から生成する；すなわち、アセチルシクロスポリンＡ３５をアセトニトリルと水との混液に溶解し、それから最初に過ヨウ素酸ナトリウムを加え、次に塩化ルテニウム水加物を加える。アルデヒド５１は酢酸エチルで抽出される。この酸化分解戦略によるアルデヒド５１の合成は、多くの立体選択的経路にとって重要であることに留意すべきである。
【００６１】
方法２の第三工程は、方法１のそれと同様に、アルデヒド５１をウィッティヒ反応によって（Ｅ）及び（Ｚ）ジエンの混合物に変換することを含む。方法１と同様に、リンイリドをアルデヒドに加えるとベタインを生じ（これは分離しない）、その結果、アルデヒドのカルボニル酸素原子が、元々はリンに結合していたＲ２Ｃ＝基によって置換される。ここでも、このようなウィッティヒ反応は、トリフェニルホスホニウム誘導体以外のリン含有化合物、例えばトリアリールホスフィン、トリアルキルホスフィン、アリールアルキルホスフィン及びトリアリールアルシンなどで、種々の温度で行うことができる。また種々の塩基性溶液及び溶媒の使用又は種々の無機塩の添加によって、新たに形成される二重結合の立体化学に影響を与えることもできる。
【００６２】
一実施形態において、アセチルシクロスポリンＡアルデヒド５３をトルエンに溶解し、それに水酸化ナトリウム水溶液のような塩基を加える。それからアリルトリフェニルホスホニウムブロミド５２を加え、反応物をしばらく撹拌する。生成したアセチル（Ｅ）及び（Ｚ）−１，３−ジエン混合物５３の処理は、ヘキサン及び／又は酢酸エチルによる抽出を含む；ここで、用語「処理（workup）」は、反応体、生成物、溶媒などの混合物から反応生成物を抽出及び／又は分離するプロセスを意味する。
【００６３】
方法２の最終工程において、方法１の最終工程と同様に、β−炭素位置のアルコールを保護する酢酸エステル基を炭酸カリウムで除去すると、ＩＳＡＴＸ２４７の（Ｅ）及び（Ｚ）−異性体混合物５４が得られる。保護基の除去に使用できる炭酸カリウム以外の塩基としては、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、ナトリウムアルコキシド、及びカリウムアルコキシドなどがある。
【００６４】
ビタミンＥ ＴＰＧＳ
トコフェリル類が、製剤中で抗酸化剤として使用される。Ｄ−トコフェリルポリエチレングリコール１０００琥珀酸（ビタミンＥ ＴＰＧＳ）（イーストマンコダック、ロチェスター、ＮＹ）は、ビタミンＥの水溶性誘導体であり、親水性と親油性の二重の性質を有し、当該技術で公知の製剤で、抗酸化剤又は保存料として使用されている。抗酸化剤として使用する際には、トコフェリル又はビタミンＥ ＴＰＧＳは、約０．５％ないし約１％、かつ５重量％以下の範囲で存在する。
【００６５】
ビタミンＥ ＴＰＧＳは水と混和可能で、約２０重量％までの濃度で水溶液を形成する。この濃度を超えると、液体結晶相が形成されることがある。ビタミンＥ ＴＰＧＳは、高い分解温度及び良い耐熱性を有する。０．０２重量パーセントでミセルを形成する。ビタミンＥ ＴＰＧＳ濃度が２０重量パーセントを超えると、粘度のより高い液体結晶相が形成される。水中ビタミンＥ ＴＰＧＳ濃度が増すにつれ、より複雑な液体結晶相が生成し、それは等方性球状ミセルから等方性シリンダ状ミセル及び、六方晶形、六方晶形、混合六方晶形及び逆六方晶形、逆球状ミセルに、そしてラメラ相に至る（１３）。これらの製剤において、ビタミンＥ ＴＰＧＳは、界面活性剤又は乳化剤として役立つ。それは、溶媒、結合剤及びフィラーとしてはたらくその他の多数の賦形剤を含む複雑な製剤にも使用される。
さらに、本発明のビタミンＥ ＴＰＧＳは、乳化剤及びアジュバントとして存在するだけでなく、油の変性を阻止し、それらが悪臭を発生するのを防ぐ。
【００６６】
油成分
本発明の製剤の油成分は、植物油、合成油、トリアセチンなどの油代替品、鉱油又は中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）油、すなわち、炭水化物鎖が８−１０個の炭素原子を有するトリグリセリド油でよい。好ましくは、油成分はＭＣＴ油である。
【００６７】
ＭＣＴ油は、植物油に比べて多くの利点を有する：すなわち、１）酸化しにくい；２）約０．９４−０．９５の特異的密度；これは植物油の密度より高く、水の密度に近く、それによって安定なマイクロエマルションが容易に得られる；３）植物油より疎水性が小さく、溶解する薬剤の濃度をより高くすることができる；４）比較的低い粘度を有し、組成物の粘度を実質的に高めることなしに、組成物中の油相の濃度をより高くすることができる（１５）。
【００６８】
ＭＣＴ油は市販されている。本発明によって意図されるＭＣＴ油の例には、ＴＣＲ（商標）（脂肪酸鎖の約９５％が８又は１０個の炭素を有するトリグリセリド混合物につけられたSociete Industrielle des Oleagineaux社（フランス）の商品名）及びＭＩＧＬＹＯＬ８１２（商標）（グリセリン及びカプリル及びカプリン酸の混合トリエステルにつけられたダイナミット・ノーベル（Dynamit Nobel）社（スウェーデン）の商品名）などがあるが、これに限定するものではない。ミリスチン酸イソプロピルは、本発明の製剤に使用されるもう一つの市販油である。
【００６９】
本発明によって意図される植物油の例は、大豆油、綿実油、オリーブ油、ゴマ油及びヒマシ油などであるが、これに限定するものではない。鉱油は、限定するものではないが、天然炭化水素又はそれらの合成類似体を含む。オレイン酸及びリノレン酸などの油性脂肪酸類、オレイルアルコールなどの脂肪アルコール類、ソルビタンモノオレエートなどの脂肪エステル類及び疎水性スクロースエステル類は、油成分として使用できるが、本明細書に記載されるその他の油のようには好ましくない。本発明の製剤に使用できるその他の脂質には、合成及び半合成モノ−、ジ−及び／又はトリグリセリド、天然、合成又は半合成トリグリセリドの溶媒分別又は熱分別によりつくられたトリグリセリド類、及びエステル交換及び／又は指向性又はランダム再配列によってつくられたトリグリセリド類があるが、これに限定するものではない。
【００７０】
乳化剤
本発明の製剤は、少なくとも１種類の乳化剤を含む。好ましくは、乳化剤又は界面活性剤は、非イオン性親油性溶媒又は非イオン性両親媒性溶媒である；乳化剤は、ツイーン４０、ツイーン８０などのツイーンでよい。しかし、マイクロエマルションプレコンセントレートを形成できるいかなる界面活性剤でも使用できる。幾つかの例を以下に記載する。
【００７１】
界面活性剤成分は、両親媒性、親水性又は親油性界面活性剤又はこれらの混合物を含む。特に好ましいのは、非イオン性親水性界面活性剤及び非イオン性親油性界面活性剤である。界面活性剤成分として使用するために適した親水性界面活性剤の例は、天然又は水素化植物油とエチレングリコールとの反応生成物である。このような生成物は、公知の方法によって、例えば、天然又は水素化ヒマシ油又はそれらの断片とエチレンオキシドとを反応させ、任意にその生成物から遊離ポリエチレングリコール成分を除去することによって得られる。商品名クレモフォル（Cremophor）（商標）として市販されている種々のテンシド類、又は界面活性剤類も適する。特に適しているのは、クレモフォル（商標）ＲＨ４０及びクレモフォル（商標）ＥＬである。ニッコル（Nikkol）（商標）の商品名で市販される種々のテンシド類も、この範疇で使用するのに適する。
【００７２】
その他の例には、ポリオキシエチレン−ソルビタン−脂肪酸エステル、例えばモノ−及びトリラウリル、パルミチル、ステアリル及びオレイルエステル、例えば、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート［ツイーン（商標）２０］、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノパルミテート［ツイーン（商標）４０］、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート［ツイーン（商標）６０］、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート［ツイーン（商標）８０］、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタントリステアレート［ツイーン（商標）６５］、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタントリオレエート［ツイーン８５］、ポリオキシエチレン（４）ソルビタンモノラウレート［ツイーン（商標）２１］、ポリオキシエチレン（４）ソルビタンモノステアレート［ツイーン（商標）６１］、及びポリオキシエチレン（５）ソルビタンモノオレエート［ツイーン（商標）８１］などのツイーン類がある。本発明の組成物に使用するためにこの群のなかで特に好ましい製品は、ツイーン４０及びツイーン８０、ポリオキシエチレンステアリン酸エステルなどのポリオキシエチレン脂肪酸エステル類、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン コポリマー類、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン ブロックコポリマー類、例えば商品名ポロキサマー（Poloxamer）（商標）として市販される公知の種類のもの、琥珀酸ジオクチル、スルホ琥珀酸ジオクチルナトリウム、琥珀酸ジ−２−エチルヘキシル又はラウリル硫酸ナトリウム及びリン脂質、特にレシチン類である。本発明の組成物での使用に適したレシチンには、大豆レシチン類が含まれるが、これに限定するものではない。その他の適切な製品には、クレモフォルＴＭ、ニッコルＴＭ、グリコール化天然又は水素化植物油、及びカプリル−カプリン酸ジエステルがある。プロピレングリコールモノ−及びジ脂肪酸エステル、例えばプロピレングリコールジカプリレート、プロピレングリコールジラウレート、プロピレングリコールヒドロキシステアレート、プロピレングリコールイソステアレート、プロピレングリコールラウレート、プロピレングリコールリシノレート、プロピレングリコールステアレートなども適する。
【００７３】
本発明の製剤はさらに、薬物学的に容認される界面活性剤、コロイド、懸濁液、増量剤、賦形剤、担体、テンシド又はコテンシドを含むことができる。
【００７４】
Ｂ．本発明の好ましい製剤
本発明の実施形態は、好ましくは、十分な薬剤のバイオアベイラビリティ及び／又は低い毒性をもたらす安定なマイクロエマルションプレコンセントレートである。これらの製剤は、薬剤のバイオアベイラビリティを高め、シクロスポリン及びその類似体の投与に関連する副作用を軽減するすぐれた能力を有する。マイクロエマルション製剤は、より小さい粒子の薬剤のデリバリーを可能にする。より小さい粒子の薬剤の単位投与量のデリバリーは、表面積の増加を可能にし、おそらくより高い吸収率、及びより良いバイオアベイラビリティを可能にする。マイクロエマルションは、当該技術では公知である。しかし、本発明の製剤の成分類を用いたマイクロエマルションは、エタノール、ビタミンＥ ＴＰＧＳ、油成分、及び乳化剤の比を適切に選択することによって形成される。これは、これまでに知られている製剤の、ＩＳＡＴＸ２４７に類似する活性薬剤に対する比の範囲外である。５％未満のエタノール、又は５０％より多いビタミンＥ ＴＰＧＳを含む組成物は、室温では固体のマイクロエマルションプレコンセントレートを形成する。これは、本発明の製剤の比較的好ましくない実施形態である。
【００７５】
本発明の組成物中の諸成分の相対的比率は、関係する組成物の特殊なタイプによって、例えば、それが「マイクロエマルションプレコンセントレート」、マイクロエマルション、通常のエマルション、又は溶液などであるかどうかによって、かなり変動することはもちろんである。相対的比率は、組成物中の成分類の特定の機能によっても変化する；例えば「マイクロエマルションプレコンセントレート」の界面活性成分の場合に、それが単に界面活性剤として使われるか又は界面活性剤及び補助溶剤の両方として使われるかによっても変化する。相対的比率は、使用する特定の成分類及び製品組成物の所望の物理的特性によっても変化する。いかなる特殊な場合でも、適用可能な比率の決定は、当業者の能力の範囲内であるのが普通である。よって、全ての指示された比率及び以下に記載する相対的重量範囲は、好ましい或いは個々の発明的教示を示唆するものに過ぎず、本発明をその一般的観点で制限するものではないことを理解すべきである。本発明のマイクロエマルションは、マイクロエマルションプレコンセントレートである。本発明の好ましい製剤は、下記のとおりである：
【００７６】
製剤１
ａ）薬物学的有効量のＩＳＡＴＸ２４７；
ｂ）ビタミンＥ ＴＰＧＳ；
ｃ）ＭＣＴ油；
ｄ）ツイーン４０；及び
ｅ）エタノール
成分類の比  ０．５−１：４：２：２：１
【００７７】
製剤２
ａ）薬物学的有効量のＩＳＡＴＸ２４７；
ｂ）ビタミンＥ ＴＰＧＳ；
ｃ）ＭＣＴ油；
ｄ）ツイーン８０；及び
ｅ）エタノール
成分類の比  ０．５−１：２：４：２：１
【００７８】
製剤３
ａ）薬物学的有効量のＩＳＡＴＸ２４７；
ｂ）ＭＣＴ油；
ｃ）ツイーン８０；
ｄ）トリアセチン；及び
ｅ）エタノール
成分類の比  ０．５−１：５：３：１：１
【００７９】
製剤４
ａ）薬物学的有効量のＩＳＡＴＸ２４７
ｂ）ツイーン８０；
ｃ）ビタミンＥ ＴＰＧＳ
ｄ）エタノール；及び
ｅ）ミリスチン酸イソプロピル
成分類の比  ０．５−１：２：１：１：６
【００８０】
製剤５
ａ）薬物学的有効量のＩＳＡＴＸ２４７；
ｂ）ビタミンＥ ＴＰＧＳ；
ｃ）ＭＣＴ油；
ｄ）ツイーン４０；及び
ｅ）エタノール
【００８１】
成分類の比  ０.５−１：４：２：２：１；組成物はさらに水性メジウムと混合され、透明な安定マイクロエマルション溶液を形成する。水性メジウムは、限定するものではないが、水、リンゴジュースなどの果汁、茶、ミルク及びココアなどである。有用な果汁としては、グレープフルーツジュースを除き、リンゴジュースなどが好ましい。製剤は、水性メジウム中に、製剤約１部対水性メジウム約１０ないし約１００部の割合で溶解するのが好ましい。
【００８２】
本発明の医薬製剤は、十分なバイオアベイラビリティを有することが好ましい。好ましくは、ＩＳＡＴＸ２４７のバイオアベイラビリティは３０％以上であり、バイオアベイラビリティが約４０％より大きいことがより好ましい。医薬製剤は、マイクロエマルション又はマイクロエマルションプレコンセントレートなどの、経口投与型であるのが好ましい。水性メジウムは、経口製剤として容易に摂取できるように、患者の口に合うものであるのが好ましい。
【００８３】
本発明の製剤は、必要とする患者に有効量を投与すると、免疫抑制をもたらす。好ましくは、投与する医薬製剤の量は、約０．１ないし１０ｍｇ／ｋｇ患者体重／日であり、より好ましくは約０．５ないし３ｍｇ／ｋｇ患者体重／日である。製剤は、１日１回又は２回投与するのが好ましい。
【００８４】
正しく投与すると、本発明の製剤は、例えば臓器拒絶又はグラフト対ホスト病の予防、及び、病気及び障害、特に自己免疫疾患及び障害及び炎症性疾患及び障害の治療を含む免疫抑制のために使用できる。ここで意図される自己免疫病及び炎症性疾患の例は、非制限的に、橋本甲状腺炎、悪性貧血、アジソン病、乾癬、糖尿病、リウマチ性関節炎、全身性エリテマトーデス、皮膚筋炎、シェーグレン症候群、皮膚筋炎、エリテマトーデス、多発性硬化症、重症筋無力症、ライター症候群、関節炎（リウマチ性関節炎、慢性進行性関節炎及び変性関節炎）、及びリウマチ疾患、自己免疫性血液病（溶血性貧血、再生不良性貧血、赤芽球ろう及び特発性血小板減少症）、全身性エリテマトーデス、多発性軟骨炎、強皮症、ウェーゲナー肉芽腫症、皮膚筋炎、慢性活性肝炎、重症筋無力症、乾癬、スチーブン−ジョンソン症候群、特発性スプルー、自己免疫性炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎及びクローン病）、内分泌性眼障害、グレーブス眼症、サルコイドーシス、原発性胆汁性肝硬変、若年性糖尿病（Ｉ型糖尿病）、ブドウ膜炎（前部及び後部）、乾性角結膜炎及び春季角結膜炎、腸肺線維症、乾癬性関節炎及び糸球体腎炎などである。
【００８５】
本発明の製剤は、マラリヤ、コクシジオイデス真菌症及び住血吸虫症などの抗寄生虫疾患又は抗原虫疾患の治療にも使用できる。それらは、腫瘍における抗ガン剤耐性を後退又は排除するための薬剤としても使用できる。
【００８６】
本発明は、非経口投与（皮下又は筋肉内投与）製剤も意図している。この製剤は、下記を含んでなる：
ａ）薬物学的有効量のＩＳＡＴＸ２４７；
ｂ）ビタミンＥ ＴＰＧＳ；
ｃ）ＭＣＴ油；
ｄ）ツイーン４０；及び
ｅ）エタノール。
このような製剤は、投与前に滅菌されるのが好ましい。
【００８７】
Ｃ．方法論
我々は、シクロスポリン類似体ＩＳＡＴＸ２４７の安定製剤を調製し得ることを見いだした。本発明の製剤は、下記の方法でつくることができる。しかし、当業者はこれらの工程のいかなる手順も可能であることを知っている。さらに、以下で使用する成分類の量は上述したものと同じであり、以下に記載する方法は、一つ以上の工程を変えたり又はプロセスを完全に逆にすることが容易である。
【００８８】
製剤５だけが、マイクロエマルションプレコンセントレートを水溶液に加えてマイクロエマルションを形成する方法を詳述しているが、どのマイクロエマルションプレコンセントレート製剤も、水性メジウムと混合することによってマイクロエマルションに変えることができる。プレコンセントレートを、プレコンセントレート１部対メジウム１０−１００部の割合で水性メジウムと混合するのが好ましい。水性メジウムが、リンゴジュースであるのがより好ましい。
【００８９】
製剤１
まず、ＭＣＴ油をツイーン４０に加えて、室温（２０−２５℃）で混合物を形成する。次に、エタノールをＭＣＴ油とツイーン４０との混合物に加える。次に、ビタミンＥ ＴＰＧＳをその混合物に加える。混合物を３０−３５℃で、透明になるまで撹拌しながらインキュベートする。その後、適量のＩＳＡＴＸ２４７を加える。最後に、成分類を３０−３５℃で混合し、ＩＳＡＴＸ２４７を完全に溶解させる。
【００９０】
製剤２
まず、ＭＣＴ油をツイーン８０に加えて、室温（２０−２５℃）で混合物を形成する。次に、エタノールをＭＣＴ油とツイーン８０との混合物に加える。次に、ビタミンＥ ＴＰＧＳをその混合物に加える。混合物を３０−３５℃で、透明になるまで撹拌しながらインキュベートする。その後、適量のＩＳＡＴＸ２４７を加える。最後に、成分類を３０−３５℃で混合し、ＩＳＡＴＸ２４７を完全に溶解させる。
【００９１】
製剤３
まず、ＭＣＴ油をツイーン８０に加えて、室温（２０−２５℃）で混合物を形成する。次に、エタノールをＭＣＴ油とツイーン８０との混合物に加える。次に、トリアセチンをその混合物に加える。混合物を３０−３５℃で、透明になるまで撹拌しながらインキュベートする。その後、適量のＩＳＡＴＸ２４７を加える。最後に、成分類を３０−３５℃で混合し、ＩＳＡＴＸ２４７を完全に溶解させる。
【００９２】
製剤４
まず、ＭＣＴ油をツイーン８０に加えて、室温（２０−２５℃）で混合する。次に、ミリスチン酸イソプロピル及びエタノールを、室温（２０−２５℃）でその混合物に加える。その後、適量のＩＳＡＴＸ２４７を加える。最後に、成分類を室温（２０−２５℃）で混合し、ＩＳＡＴＸ２４７を完全に溶解させる。
【００９３】
製剤５
まず、ＭＣＴ油をツイーン４０に加えて、室温（２０−２５℃）で混合物を形成する。次に、エタノールをＭＣＴ油とツイーン４０との混合物に加える。次に、ビタミンＥ ＴＰＧＳをその混合物に加える。混合物を３０−３５℃で、透明になるまで撹拌しながらインキュベートする。その後、適量のＩＳＡＴＸ２４７を加える。最後に、成分類を３０−３５℃で混合し、ＩＳＡＴＸ２４７を完全に溶解させる。生成したプレコンセントレートを、その後水性メジウムと混合する。好ましくは、プレコンセントレートは水性メジウムと、プレコンセントレート１部対メジウム１０−１００部の割合で混合する。
好ましい方法では、上記各製剤は、まずＩＳＡＴＸ２４７をエタノールに溶解することによってつくられる。残りの成分類は、どんな順序で加えてもよい。
【００９４】
発明の実施例の開示
下の実施例において、下記の略号は下記の意味を有する。略号が定義されていない場合、それは一般的に容認される意味を有するものとする。
ｗ／ｗ      ＝  重量対重量
ＮＦ        ＝  （National Formulary）承認された処方
ＮＦ／ＮＰ  ＝  承認された処方／国際薬局方
ＵＳＰ      ＝  米国薬局方
ｍｇ        ＝  ミリグラム
ｍＬ        ＝  ミリリットル
ｋｇ        ＝  キログラム
ｎｇ        ＝  ナノグラム
ｎｍ        ＝  ナノメーター
Ｔｍａｘ      ＝  最高濃度に達するまでの時間
Ｃｍａｘ      ＝  最高濃度
ＡＵＣ      ＝  曲線下面積
ＬＣＭＳ    ＝  液体クロマトグラフィー−質量分析
ＭＣＴ      ＝  中鎖トリグリセリド
ＰＫ        ＝  薬物動態
ＰＳ        ＝  ブタの皮膚
【００９５】
２種類の薬剤製品、経口溶液及びソフトゼラチンカプセルが、イソテクニカ社によって開発された。両薬剤製品共、界面活性剤、エタノール、親油性及び／又は両親媒性溶媒を成分として含む。各薬剤製品の製法を以下に記す。
【００９６】
実施例１：ＩＳＡＴＸ２４７経口溶液の製法
次の成分類がＩＳＡＴＸ２４７薬剤製品−経口溶液を構成する：ＩＳＡＴＸ２４７、ｄ−アルファ トコフェリル ポリエチレングリコール１０００琥珀酸（ビタミンＥ ＴＰＧＳ）ＮＦ、中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）油ＵＳＰ、ツイーン４０ ＮＦ、及び９５％エタノールＵＳＰ。
【００９７】
【表１】
2005506990.tif 000004
【００９８】
ビタミンＥ ＴＰＧＳをホットボックス中で融解し、液体ディスペンサーに移した。各ＴＰＧＳ容器の温かい内容物を最低１分間混合し、均質な液体であることを肉眼で確認した。各バレルの内容物の温度が３５℃になったとき、必要温度である３７．５±２．５℃のグレン（Groen）容器を準備した。
【００９９】
必要量の成分ビタミンＥ ＴＰＧＳ、ＭＣＴ油、ツイーン４０及び９５％エタノールを、確認のために正しくラベルをつけた別々の容器に秤量した。ビタミンＥ ＴＰＧＳは、直ちにグレン容器に移した。ＭＣＴ油、ツイーン４０及びエタノールを、あらかじめ秤量したビタミンＥ ＴＰＧＳを収容している容器に、逐次定量的に移した。エタノール蒸発を減らすために、その容器にしっかりと蓋をし、エタノール添加後１５−２０分間、３７．５±２．５℃で混合した。
【０１００】
最上部と底部のサンプルを、無菌ガラス製使い捨てピペットを用いて観察した。ピペットの内容物は、肉眼的に均質、透明であることが期待された。
【０１０１】
軽くボルテックスできるようなミキサーをセットした。容器に蓋をし、混合中のエタノールの蒸発を減らした。連続的に混合しているブレンドに、ＩＳＡＴＸ２４７を加えた。その後、容器を密封した。混合物を、粉末が完全に溶解するまで３０分ごとにチェックした。
【０１０２】
実施例２：ＩＳＡＴＸ２４７ゼラチンカプセルの製法
本発明は、ソフトゼラチンカプセルも意図している。このカプセルは、ＩＳＡＴＸ２４７及び経口溶液のような非薬剤成分を、ゼラチン、グリセリン、水、及びソルビトールを含有するゼラチン２Ｄ ＰＳ型（ＮＦ／ＮＰ）カプセルに封入して含む。
【０１０３】
ＩＳＡＴＸ２４７ゼラチンカプセルは、ＩＳＡＴＸ２４７、ビタミンＥ ＴＰＧＳ ＮＦ、中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）油ＵＳＰ、ツイーン４０ ＮＦ、及び９５％エタノールＵＳＰを含んでなるＩＳＡＴＸ２４７経口溶液（５０ｍｇ／ｍＬ）を、ゼラチン２Ｄ ＰＳ型（ＮＦ／ＮＰ）カプセルに封入するというやり方でつくられた。ゼラチン２Ｄ ＰＳ型（ＮＦ／ＮＰ）カプセルは、ゼラチンＮＦ（ブタ皮膚）、グリセリンＵＳＰ、精製水ＵＳＰ、及び７６％ソルビトールスペシャルを用いてつくられた。
【０１０４】
実施例３：安定性／保存寿命の測定
下表はびん（３０℃で保存）に入れた製剤１、及びソフトゲルカプセル形（室温で保存）の製剤１両方について、公知のＬＣＭＳ法によって測定した安定性データを示す。製剤は、通常の保存条件では安定である。
【表２】
2005506990.tif 000005
【０１０５】
実施例４：薬物動態（ＰＫ）曲線の比較
下に示す製剤を、ＳＤラットに経口胃管栄養法によって与え、ＩＳＡＴＸ２４７の血中濃度を規則的時間間隔でモニターし、濃度対時間曲線（すなわち薬物動態曲線）を作成した。下表は、ここに開示された製剤を含む、種々のＩＳＡＴＸ２４７製剤のＰＫ曲線の比較である。群２は、表３に示されるように、ラットモデルにおいて良いバイオアベイラビリティを示すが、これらの結果は、イヌ又はヒトモデルではかなり変動する（表４を参照されたい）。
【表３】
2005506990.tif 000006
【０１０６】
群１：
ＶｉｔＥ ＴＰＧＳ／ＭＣＴ油／ツイーン４０／エタノール：４／２／２／１（ｗ／ｗ／ｗ／ｗ）。（ここでは製剤１として開示されている）
群２：
ＶｉｔＥ ＴＰＧＳ／ＭＣＴ油／ツイーン８０／エタノール：２／４／２／１（ｗ／ｗ／ｗ／ｗ）。（ここでは製剤２として開示されている）
群３：
ＭＣＴ油／ツイーン８０／トリアセチン／エタノール：５／３／１／１（ｗ／ｗ／ｗ／ｗ）。（ここでは製剤３として開示されている）
群４：ツイーン８０／ＶｉｔＥ ＴＰＧＳ／エタノール／ミリスチン酸イソプロピル：２／１／１／６（ｗ／ｗ／ｗ／ｗ）。（ここでは製剤４として開示されている）
群５（比較実施例）：
ＶｉｔＥ／プロピレングリコール／マイシン／クレモフォルＲＨ４０／エタノール：３／１．２／５／６．２／２（ｗ／ｗ／ｗ／ｗ）。
群６：
これはリンゴジュースで１：６５に希釈され、マイクロエマルションを形成した製剤である。（ここでは製剤５として開示されている）。
【０１０７】
実施例５：マイクロエマルションの製法
製剤の成分の比を１００以上入れ替えて、マイクロエマルション形成を試験した（４８５及び９００ｎｍにおける吸収率を、それぞれ０．１及び０．０１未満と定義した）。試験した製剤は、下記の成分比を含んでいた：
５−１０％ＩＳＡＴＸ２４７
０−５０％ビタミンＥ ＴＰＧＳ
０−５０％ツイーン４０及び／又はツイーン８０
０−５０％ＭＣＴ油
５−１５％エタノール。
【０１０８】
試験した製剤の２０％未満が、マイクロエマルションを生成した。マイクロエマルション形成は、ビタミンＥ ＴＰＧＳ又はエタノールのどちらの比にも比較的依存しない。しかし、５０％より大きい比のビタミンＥ ＴＰＧＳ及び５％未満の比のエタノールを有する製剤は、室温で凍結するプレコンセントレートを生成し、それはあまり好ましくない。図１は、ツイーン４０及びＭＣＴ油の賦形剤比の関数としてのマイクロエマルションプレコンセントレート形成をあらわす表である。
【０１０９】
実施例６：イヌにおける薬物動態（ＰＫ）曲線の比較
図２は、ビーグル犬における本発明のＩＳＡＴＸ２４７マイクロエマルションの薬物動態（ＰＫ）曲線を、ネオラル（商標）のそれと比較したグラフを示す。データは、下表にも示される。製剤をビーグル犬（６匹）に経口胃管栄養法で与え、ＩＳＡＴＸ２４７の血中濃度を規則的時間間隔でモニターし、濃度対時間曲線（すなわち薬物動態曲線）を作成した。より詳細に述べれば、イヌにいずれかの製剤２ｍＬ（１００ｍｇ／ｍＬ）を経口胃管栄養法によって与えた。投与後０、０．５、１、２．５、５、７．５、１２及び２４時間に採血し、液体クロマトグラフィー・質量分析（ＬＣＭＳ）によって分析した。
【０１１０】
【表４】
2005506990.tif 000007
【０１１１】
群１：
製剤１：ＶｉｔＥ ＴＰＧＳ／ＭＣＴ油／ツイーン４０／エタノール：４／２／２／１（ｗ／ｗ／ｗ／ｗ）。
群２：
ネオラル（商標）
【０１１２】
これらのデータによると、ＩＳＡＴＸ２４７製剤のバイオアベイラビリティは、ネオラル（商標）に比べてわずかに低いが、サンディミューン（Sandimmune）（商標）によるバイオアベイラビリティよりは実質的に大きい（データは示されず）。ネオラル（商標）は通常、約４０％のバイオアベイラビリティであることが報告されている。表４が示すように、群１のバイオアベイラビリティはネオラル（商標）に匹敵する。
これらのデータは、本発明の製剤が、シクロスポリンの他の製剤に匹敵するバイオアベイラビリティを有し、シクロスポリン投与に関連する副作用を軽減することを示している。
【０１１３】
実施例７：ＩＳＡＴＸ２４７及びシクロスポリンＡの薬物動態及び毒物動態特性
ＩＳＡＴＸ２４７（４５−５０％のＥ−異性体及び５０−５５％のＺ−異性体）及びシクロスポリンＡの薬物動態及び毒物動態パラメーターを、ウサギモデルで試験した。そのウサギは、シクロスポリンＡ腎臓毒性を研究するためのモデルとしても使われているが、ラットほどよく使われてはいない。研究では、ウサギに投与したシクロスポリンＡは他の動物モデルでこれまでに報告されたものより低い用量、しかもヒトにおける治療範囲の少なくとも高い方の濃度以下でもある用量で、構造的及び機能的変化を引き起こすことが見いだされた（スリヴァリスら、１９９１、１９９４）。また、細管の細胞学的変化に加えて、間質性線維症及び動脈症の所見があることは、ウサギが腎臓毒性の研究により適したモデルであることを示唆する。なぜならば、これらの構造的変化は、ヒトで認められる腎臓毒性の顕著な特徴だからである。下記のスケジュールによって、ＩＳＡＴＸ２４７を最初の７日間静脈注射（ｉ．ｖ．）し、さらに２３日間皮下注射した（ｓ．ｃ．）。
【０１１４】
【表５】
2005506990.tif 000008
【０１１５】
認められたいかなる腎臓変化もＩＳＡＴＸ２４７効果によるもので、病原体によるものではないことを確実にするために、無病原体ウサギ（ＳＰＦ）を使用した。１及び７日目に、薬剤を投与する前と、投与後０．５、１、２、４、８、１２、１８及び２４時間後に血液サンプルを集め、薬物動態曲線を作成した。その他の評価パラメーターは、臨床的観察、体重、食餌消費量、血液検査値、臨床化学検査、肉眼的病理試験、及び選択された組織／臓器の組織病理学的検査などである。
【０１１６】
血液サンプルを、質量分析と高性能液体クロマトグラフィーとの組合わせ（ＬＣＭＳ）によって分析した。下の表５は、シクロスポリンＡ又はＩＳＡＴＸ２４７の１０ｍｇ／ｋｇを投与したウサギにおける平均薬物動態パラメーターをまとめたものである。
【０１１７】
【表６】
2005506990.tif 000009
【０１１８】
１０ｍｇ／ｋｇ／日を投与した雄ウサギでは、シクロスポリンＡとＩＳＡＴＸ２４７との薬物動態パラメーターの間に統計的有意差はなかった。同量を投与した雌ウサギのＩＳＡＴＸ２４７の薬物動態パラメーターは、７日目の最大濃度を除けば雄ウサギで認められたパラメーターと有意に異ならなかった。
【０１１９】
ビヒクル対照、シクロスポリンＡ、又はＩＳＡＴＸ２４７を投与されたウサギの血液学的パラメーターにおいて有意な変化は認められなかった。下の表６に示すように、研究コース中、種々の群においてクレアチニン濃度に差が認められた。これらの差は、シクロスポリンＡが、ビヒクル対照又はＩＳＡＴＸ２４７のいずれよりも有意に大きい負の効果を腎臓に与えることを示した。５０％多い量、すなわち１５ｍｇ／ｋｇ／日でさえ、１０ｍｇ／ｋｇ／日シクロスポリンＡに比べて、ＩＳＡＴＸ２４７は血清クレアチニン濃度の有意な増加を誘起しなかった。
【０１２０】
【表７】
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【０１２１】
ビヒクル対照、１０ｍｇ／ｋｇシクロスポリンＡ、５ｍｇ／ｋｇ ＩＳＡＴＸ２４７、又は１０ｍｇ／ｋｇ ＩＳＡＴＸ２４７を投与した全てのウサギの試験では、有意な異常はあらわれなかった。これは特に腎臓では事実であった；腎臓ではシクロスポリンＡ投与動物で通常見られる、間質性線維症（スリヴァリスら、１９９１、１９９４）の徴候は認められなかった。１５ｍｇ／ｋｇ ＩＳＡＴＸ２４７を投与した雄ウサギでは、精子形成の減少が認められた。この１５ｍｇ／ｋｇ用量のＩＳＡＴＸ２４７投与で試験を完了した３匹の雌ウサギには、変化は認められなかった。
【０１２２】
本発明を詳細に示し、その好ましい実施形態を参照して記述したが、添付の請求によって規定される本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、形態及び詳細に種々の変更が行われ得ることは当業者には理解できるであろう。
【０１２３】
上に述べた全ての参考文献は、参考としてそのまま本明細書に組み込まれる。
【図面の簡単な説明】
【０１２４】
【図１】図１は、ツイーン４０及びＭＣＴ油に関する賦形剤比の関数としてのマイクロエマルションプレコンセントレートの形成を示す表であり；
【図２】図２は、ビーグル犬においてネオラル（Neoral）（商標）と比較した本件のＩＳＡＴＸ２４７マイクロエマルションの薬物動態（ＰＫ）曲線を示すグラフであり；
【図３】図３は、本発明のシクロスポリン類似体をつくるために使用できる典型的合成経路の概観を示し、ここで立体選択的経路は反応条件によってグループ化される；
【図４】図４は、臭素化前駆体からＩＳＡＴＸ２４７の（Ｅ）及び（Ｚ）−異性体の混合物を生成する合成経路を示す図である；
【図５】図５は、アルデヒド前駆体からＩＳＡＴＸ２４７の（Ｅ）及び（Ｚ）−異性体の混合物を生成する別の合成経路を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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