(57)【要約】ステロイドスルファターゼを阻害し得る、式（Ｉ）を有する化合物が提供され、ここで、Ｇは、Ｈまたは置換基であり、そしてＲ１は、スルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基のうちいずれか１つである。本発明は、有効なステロイドスルファターゼインヒビターとして作用し得る新規化合物を提供する。本発明は、本出願の化合物が有効なステロイドスルファターゼインヒビターであることを同定する。
2005506359.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
2005506359.tif 000130
を有する化合物であって、
ここで、ＧはＨまたは置換基であり、そしてＲ１は、スルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基のうちいずれか１つである、化合物。
【請求項２】
式ＩＩ
【化２】
2005506359.tif 000131
を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
式ＩＩＩ
【化３】
2005506359.tif 000132
を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
式ＩＶ
【化４】
2005506359.tif 000133
を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
式ＶＩＩ
【化５】
2005506359.tif 000134
を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
式ＶＩＩＩ
【化６】
2005506359.tif 000135
を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
式ＸＩ
【化７】
2005506359.tif 000136
を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
式ＸＩＩ
【化８】
2005506359.tif 000137
を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物であって、Ｇが、Ｈ、ＯＨまたはヒドロカルビル基である、化合物。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物であって、Ｇまたはヒドロカルビル基が、必要に応じて置換された炭化水素基である、化合物。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物であって、Ｇまたはヒドロカルビル基が、必要に応じて置換されたアルキル基である、化合物。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物であって、Ｇまたはヒドロカルビル基が、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基およびＣ１〜Ｃ３アルキル基のようなＣ１〜Ｃ１０アルキル基から選択される、化合物。
【請求項１３】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物であって、Ｇまたはヒドロカルビル基が、Ｃ１〜Ｃ１０ハロアルキル基、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル基、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル基、Ｃ１〜Ｃ１０ブロモアルキル基、Ｃ１〜Ｃ６ブロモアルキル基およびＣ１〜Ｃ３ブロモアルキル基から選択される、化合物。
【請求項１４】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物であって、Ｇまたはヒドロカルビル基が、−（ＣＨ２）１〜１０−アリール、−（ＣＨ２）１〜１０−Ｐｈ、（ＣＨ２）１〜１０−Ｐｈ−Ｃ１〜１０アルキル、−（ＣＨ２）１〜５−Ｐｈ、（ＣＨ２）１〜５−Ｐｈ−Ｃ１〜５アルキル、−（ＣＨ２）１〜３−Ｐｈ、（ＣＨ２）１〜３−Ｐｈ−Ｃ１〜３アルキル、−ＣＨ２−Ｐｈおよび−ＣＨ２−Ｐｈ−Ｃ（ＣＨ３）３から選択される、化合物。
【請求項１５】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物であって、Ｇまたはヒドロカルビル基が、−（ＣＨ２）１〜１０−シクロアルキル、−（ＣＨ２）１〜１０−Ｃ３〜１０シクロアルキル、−（ＣＨ２）１〜７−Ｃ３〜７シクロアルキル、−（ＣＨ２）１〜５−Ｃ３〜５シクロアルキル、−（ＣＨ２）１〜３−Ｃ３〜５シクロアルキルおよび−ＣＨ２−Ｃ３シクロアルキルから選択される、化合物。
【請求項１６】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物であって、Ｇまたはヒドロカルビル基がアルケン基である、化合物。
【請求項１７】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物であって、Ｇまたはヒドロカルビル基が、Ｃ１〜Ｃ１０アルケン基、Ｃ１〜Ｃ６アルケン基、Ｃ１〜Ｃ３アルケン基から選択される、化合物。
【請求項１８】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物であって、ＧがＨである、化合物。
【請求項１９】
請求項１〜１８のいずれか１項に記載の化合物であって、Ｒ１がスルファメート基である、化合物。
【請求項２０】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の化合物であって、Ｒ１またはスルファメート基が、式
【化９】
2005506359.tif 000138
のものであり、ここで、
Ｒ４およびＲ５は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルケニルおよびアリールまたはこれらの組み合わせから独立して選択されるか、あるいは一緒になって、アルキレンを示し、ここで、各アルキルまたはシクロアルキルまたはアルケニルは、必要に応じて、１つ以上のヘテロ原子またはヘテロ基を含む、化合物。
【請求項２１】
Ｒ４およびＲ５の少なくとも１つがＨである、請求項２０に記載の化合物。
【請求項２２】
Ｒ４およびＲ５がＨである、請求項２１に記載の化合物。
【請求項２３】
式ＸＩＩ
【化１０】
2005506359.tif 000139
を有する、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の化合物であって、
ここで、Ｇは、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ１〜Ｃ１０ハロアルキル、−（ＣＨ２）１〜１０−アリール、−（ＣＨ２）１〜１０−シクロアルキルおよびＣ１〜Ｃ１０アルケンから選択され；
ここで、Ｒ１は、ＯＨまたは式
【化１１】
2005506359.tif 000140
のスルファメート基であり、
ここで、Ｒ４およびＲ５は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルケニルおよびアリールまたはこれらの組み合わせから独立して選択されるか、あるいは一緒になって、アルキレンを示し、ここで、各アルキルまたはシクロアルキルまたはアルケニルは、必要に応じて、１つ以上のヘテロ原子またはヘテロ基を含む、化合物。
【請求項２４】
薬学的に受容可能なキャリア、希釈剤、賦形剤またはアジュバントと必要に応じて混合された、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の化合物を含む、薬学的組成物。
【請求項２５】
医薬において使用するための、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２６】
ステロイドスルファターゼ（ＳＴＳ）に関連する状態または疾患の治療において使用するための医薬の製造における、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項２７】
有害なＳＴＳレベルに関連する状態または疾患の治療において使用するための医薬の製造における、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項２８】
ステロイドスルファターゼ（ＳＴＳ）活性を阻害するための薬剤を製造する際の、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項２９】
ステロイドスルファターゼ（ＳＴＳ）活性を阻害するための薬剤を製造する際の、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項３０】
方法であって、以下
（ａ）請求項１〜２３のいずれか１項に規定されるような式を有する１つ以上の候補化合物を用いて、ステロイドスルファターゼアッセイを実施する工程；
（ｂ）１つ以上の該候補化合物が、ＳＴＳ活性を調節し得るか否かを決定する工程；ならびに
（ｃ）ＳＴＳ活性を調節し得る１つ以上の該候補化合物を選択する工程、
を包含する、方法。
【請求項３１】
方法であって、以下：
（ａ）請求項１〜２３のいずれか１項に規定されるような式を有する１つ以上の候補化合物を用いて、ステロイドスルファターゼアッセイを実施する工程；
（ｂ）１つ以上の該候補化合物が、ＳＴＳ活性を阻害し得るか否かを決定する工程；ならびに
（ｃ）ＳＴＳ活性を阻害し得る１つ以上の該候補化合物を選択する工程、
を包含する、方法。
【請求項３２】
請求項３０または請求項３１に記載の方法によって同定された、化合物。
【請求項３３】
医薬において使用するための、請求項３２に記載の化合物。
【請求項３４】
薬学的に受容可能なキャリア、希釈剤、賦形剤またはアジュバントと必要に応じて混合された、請求項３２に記載の化合物を含む、薬学的組成物。
【請求項３５】
ＳＴＳに関連する状態または疾患の治療において使用するための医薬の製造における、請求項３２に記載の化合物の使用。
【請求項３６】
有害なＳＴＳレベルに関連する状態または疾患の治療において使用するための医薬の製造における、請求項３２に記載の化合物の使用。
【請求項３７】
実施例のいずれか１つを参照して本明細書中に実質的に記載されたような、化合物。
【請求項３８】
実施例のいずれか１つを参照して本明細書中に実質的に記載されたような、組成物。
【請求項３９】
実施例のいずれか１つを参照して本明細書中に実質的に記載されたような、方法。
【請求項４０】
実施例のいずれか１つを参照して本明細書中に実質的に記載されたような、使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、化合物に関連する。特に、本発明は、ステロイドスルファターゼを阻害し得る化合物を提供する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
乳癌は、ほとんどの西洋諸国において女性の主要な死亡原因であり続ける、破壊的な疾患である。この疾患は、世界中で、１年に約１００万人の女性が罹患すると推定される１。
【０００３】
英国は、世界中で最も高い乳癌死亡率を有し、毎年３５，０００人を超える女性が診断され、これは、全ての癌の症例の５分の１に相当する。英国において８５歳まで生存する女性のうち１０人に１人が、その一生の間に乳癌を発症すると推定される。現在の処置方法ならびにこの疾患の早期検出により、生存率が大きく改善されているが、乳癌は、３５〜５４歳の女性についての主な死亡原因であり続けている２。
【０００４】
全ての女性に乳癌の危険性があるが、多数の危険因子が同定されており、これらのほとんどは、女性のホルモンおよび生殖歴、ならびに疾患の家族的背景に関連している。より高い危険性にある女性は、一般に、疾患の強力な家族歴、初経の早期発生、閉経の遅い発生または３０歳以降の最初の満期妊娠を有する２。
【０００５】
乳癌の最初期段階において、手術が、選択される処置であるようである。これらの症例のほとんどにおいて、乳房切除ではなく、乳房保存外科手順（例えば、乳房中のしこりの局所的切除）が含まれる。この疾患のいずれの再発をも予防するために、放射線療法が、特に乳房保存技術が含まれる場合に、しばしば処方される３。放射線療法はまた、保存手術が実施され得るような手術可能なサイズまで、大きい腫瘍を縮小するためにも使用される４。
【０００６】
進行した乳癌について、腫瘍が拡散したか再発した場合、処置の目的は、もはや治癒することではなく、待期制御を達成することである。腫瘍の転移が、骨、皮膚、リンパ節または脳のような位置に達したのが、この場合である。患者のホルモン状態（処置される女性が閉経前か閉経後か）および腫瘍の型に依存して、処置は変動する。実際、特定の腫瘍は、その増殖および発達についてエストロゲンに依存して、ホルモン依存的乳癌（ＨＤＢＣ、Ｉ−１を参照のこと）と称される癌を導くことが証明されている。その目的が、細胞傷害性剤の組み合わせを使用して、腫瘍細胞を差示的に殺傷することである場合、どのＨＤＢＣも化学療法では処置されないが５、ＨＤＢＣは、内分泌治療に応答することが予測される。
【０００７】
ホルモン依存的腫瘍の概念は、エストロゲン作用のモデルが最初に導入された、１９６０年代初期に現れた６。エストロゲンがヒトにおいて細胞の増殖および機能を調節するために、ヒトエストロゲンレセプター（ｈＥＲ）と称される特定のタンパク質が存在しなければならない７。このタンパク質は、核に局在し、エストロゲンと相互作用して、結合複合体の形成を生じる。これは、特定の遺伝子からのｍ−ＲＮＡの生成を活性化することによって、転写因子として作用し、これらのうちの１つ以上は、おそらく、効果的な腫瘍細胞増殖に必要である。
【０００８】
測定可能なレベルのレセプタータンパク質を有する患者は、エストロゲンレセプターネガティブ（ＥＲ−）とは反対に、エストロゲンレセプターポジティブ（ＥＲ＋）と分類される。閉経前の女性の約５０％および閉経後の女性の７５％が、ＥＲ＋群に入り８、ここで、乳癌の発症は、エストロゲンの存在に直接的に関連し得る。内分泌治療（ここで、薬物の使用は、細胞に対するエストロゲン刺激の喪失を生じる）は、ＨＤＢＣの処置に有効なアプローチであることが証明されている。元々、異なるストラテジーに応答する２つのクラスの薬物（抗エストロゲンおよびアロマターゼインヒビター）が開発された。
【０００９】
エストロゲンレセプターのアンタゴニストとしての抗エストロゲンは、ＨＤＢＣについて考慮された最初の処置の１つであった。その作用は、特異的レセプタータンパク質ｈＥＲに競合的に結合し、従って、その特異的結合部位に対する内因性エストロゲンのアクセスを防止するする能力に依存する。結果として、天然のホルモンは、腫瘍増殖を維持できない。
【００１０】
乳癌治療において一般に使用される抗エストロゲンのうち、タモキシフェン（以下）は、この分子の非常に低い毒性プロフィールに起因して、最も広く使用されている。その非ステロイド骨格にもかかわらず、タモキシフェンは、その治療能力を制限する、混合型のアゴニスト−アンタゴニスト活性を有する９。さらに、ある形態の薬物耐性が、長期のタモキシフェン処置の後に、患者において報告されている１０。
【００１１】
新規の純粋な抗エストロゲン薬物（例えば、ＩＣＩ  １６４３８４（以下））が発見されているが、タモキシフェンの効力と比較した効力の低下は、より高度に強力な標的を設計する必要性を示唆している１１。
【００１２】
【化１２】
2005506359.tif 000003
ここ数年間、標的組織（例えば、骨または肝臓）に対するエストロゲン性、ならびに生殖組織（例えば、乳房または子宮）における拮抗性および／または最小の作用性を合わせもつ、新規型の抗エストロゲンが出現している１２。選択的エストロゲンレセプター調節因子（ＳＥＲＭ）として設計されたこれらの化合物は、患者の乳癌腫の危険性を低減する際に潜在的に有効であるだけでなく、閉経後の女性において骨鉱質密度を増加させ、そして骨粗鬆症を予防することもまた、示されている。ラロキシフェンは、このクラスの化合物の最初に臨床的に使用されるものである１３。さらなるＳＥＲＭは、現在臨床試験中であり、そしてこれらの分子は、ＨＤＢＣを有する女性についての第一線の処置として、いつかタモキシフェンを置換するかもしれない。
【００１３】
ステロイド生合成経路の１つまたはいくつかの酵素を阻害する治療剤の使用は、エストロゲン依存性腫瘍の発症を制御するための別の重要なストラテジーを示す１４。酵素アロマターゼ（これは、アンドロゲン性Ｃ１９ステロイドを、エストロゲン性Ｃ１８ステロイドに転換する）は、エストロゲンレベルを低減するための第一の標的である。この酵素複合体（これは、シトクロムＰ４５０ヘムタンパク質（ｈａｅｍｏｐｒｏｔｅｉｎ）を含む）は、アンドロゲンＡ環の芳香族化、引き続くＣ１９メチル基の喪失を触媒して、エストロゲンを生じる。
【００１４】
アミノグルテチミド（以下）は、乳癌の処置に最初に使用されたアロマターゼインヒビターであった。しかし、所望されない多数の副作用が、他のＰ４５０依存性酵素に対する広いスペクトルの阻害効果を与えることが示されており、そして、元の構造に対する改善の試みは、臨床試験に入る多数の非ステロイド化合物を導いた１５。最後の世代の開発された化合物（例えば、レトロゾール（ｌｅｔｒｏｚｏｌｅ））（これは、この酵素に対する高い効力および高い選択性を併せ持つ）もまた、よりよく許容される。
【００１５】
【化１３】
2005506359.tif 000004
異なる型のアロマターゼインヒビターの構造。第Ｉ世代：アミノグルテチミド（ＡＧ）；第ＩＩＩ世代：レトロゾール。
【００１６】
伝統的に、アロマターゼインヒビターは、その疾患が、タモキシフェンによってもはや制御されない、進行したＨＤＢＣ患者についての第二線の処置として用意されている。しかし、最新のアロマターゼインヒビターのいくつかの、非常に良好な毒性プロフィールに起因して、最近の臨床試験は、ＨＤＢＣについての第一線の処置として、その適切さを評価するために実施されている。
【００１７】
生化学的および臨床的の両方で酵素アロマターゼの阻害だけでは、ＨＤＢＣに対するエストロゲン性刺激の有効な減少を提供することはできないという強力な証拠が、過去１０年間にわたって生じており、その理由は、エストロゲン生合成に他の経路が関与していることである。スルファターゼ経路は、現在、乳房腫瘍エストロゲン合成についての主要な経路であるとみなされている。なぜなら、スルファターゼ活性は、アロマターゼ活性よりも１０倍、エストロゲンを提供することが見出されているからである１６。
【００１８】
スルファターゼ経路において、エストロゲンは、非常に入手可能な前駆体であるエストロゲン−スルフェートから、以下の２つの酵素を介して合成される（以下のスキーム）：エストロゲン−スルフェートをエストロンに加水分解するエストロゲンスルファターゼ（ＳＴＳ）、およびエストロンをエストラジオールに還元する１７β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ（１７β−ＨＳＤ）。これら２つの酵素は、エストロゲン剥奪ストラテジーについての最新の標的を示す。
【００１９】
【化１４】
2005506359.tif 000005
正常細胞および腫瘍性乳房細胞におけるエストロゲンの起源。ＡＲ、アロマターゼ；ＳＴ：ステロイドスルホトランスフェラーゼ；ＳＴＳ−ステロイドスルファターゼ；１７β−ＨＳＤ、１７β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ；３β−ＩＳ、３β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ、Δ５，Δ４−イソメラーゼ；ＥＲ、エストロゲンレセプター。
【００２０】
いくつかの強力なインヒビターが、エストロンスルファターゼについて同定されている。それらは全て、酵素基質であるエストロン−スルフェートのフェノールＡ環を模倣する置換基を有する芳香族環の共通の構造的特徴を共有する。ステロイド性インヒビターの開発について、広範な種々の化学基が、Ｃ３位に導入されており、そのうち３−Ｏ−スルファメートは、エストロン分子について最も強力であることが見出されている。得られた化合物であるエストロン−３−Ｏ−スルファメート（以下）は、ＳＴＳの強力な阻害について必要な活性なファルマコフォアとして、アリール−Ｏ−スルファメート構造の同定を導いた。ＥＭＡＴＥは、時間依存的および濃度依存的な様式で、ステロイドスルファターゼ活性を阻害することが示され１７、そして経口投与についてインビボで活性であった１８。しかし、これは、高度にエストロゲン性であることが明らかとなり、ｈＥＲに対するアゴニスト活性を欠くＳＴＳインヒビターを設計する必要性が生じた。
【００２１】
活性ステロイド核に関連する問題を回避するために、非ステロイドベースのインヒビターが合成された。クマリンスルフェート（例えば、４−メチルクマリン−７−Ｏ−スルファメート（ＣＯＵＭＡＴＥ、以下）（ここでは、活性ファルマコフォアが保存されている））は、この型のインヒビターのなかで、最初に同定されたものである１９。ＣＯＵＭＡＴＥは、ＥＭＡＴＥよりも強力ではないが、非エストロゲン性であるという利点を有する２０。いくつかの三環式クマリンベースのスルファメートもまた、開発され、そしてＣＯＵＭＡＴＥよりもかなり強力であるが、その非エストロゲン性特徴を保持することがわかっている２１。６６７ＣＯＵＭＡＴＥ（これは、インビトロでＥＭＡＴＥよりも３倍ほど強力である）は、現在、臨床試験のための、前臨床開発段階である２２。
【００２２】
【化１５】
2005506359.tif 000006
ステロイドスルファターゼインヒビターＥＭＡＴＥ、ＣＯＵＭＡＴＥおよび６６７ＣＯＵＭＡＴＥの構造。
【００２３】
ＰＣＴ／ＧＢ９２／０１５８７は、新規なステロイドスルファターゼインヒビター、およびエストロン依存性腫瘍、特に乳癌の処置における使用のためのそれらを含む薬学的組成物を教示している。これらのステロイドスルファターゼインヒビターは、Ｎ，Ｎ−ジメチルエストロン−３−スルファメート、そして好ましくは、エストロン−３−スルファメート（ＥＭＡＴＥ）のようなスルファメートエステルである。ＥＭＡＴＥは、これが、０．１ｍＭでインタクトなＭＣＦ−７細胞においてＥ１−ＳＴＳ活性の９９％より大きい阻害を示すので、強力なＥ１−ＳＴＳインヒビターであることが知られている。ＥＭＡＴＥはまた、Ｅ１−ＳＴＳ酵素を、時間依存的様式および濃度依存的様式で阻害し、これが、活性部位特異的不活性化剤として作用することを示す。ＥＭＡＴＥは、当初は、Ｅ１−ＳＴＳの阻害のために設計されたが、これはまた、エストロゲンのステロイドアンドロステンジオールの生合成を調節することにおいて中心的な役割をもつと考えられている酵素である、デヒドロエピアンドロステロンスルファターゼ（ＤＨＡ−ＳＴＳ）を阻害する。また、今や、アンドロステンジオールは、乳腫瘍成長のプロモーターとしてなおより大きく重要であり得ることを示唆する証拠がある。ＥＭＡＴＥはまた、インビボで活性である。なぜなら、それが経口的、または皮下のいずれかで投与されるとき、ラット肝臓Ｅ１−ＳＴＳ活性のほぼ完全な阻害（９９％）およびＤＨＡ−ＳＴＳ活性のほぼ完全な阻害（９９％）が生じたからである。さらに、ＥＭＡＴＥは、ラットにおいて記憶増進効果を有することが示されている。マウスにおける研究は、ＤＨＡ−ＳＴＳ活性と、免疫応答の一部分の調節との間の関連を示唆した。これはまたヒトで生じ得ると考えられる。ＥＭＡＴＥ中のスルファメート部分の架橋Ｏ原子は、阻害活性にとって重要である。従って、この３−Ｏ原子が、エストロン−３−Ｎ−スルファメートおよびエストロン−３−Ｓ−スルファメートにおけるように他のヘテロ原子で置換されるとき、これらのアナログは、より弱い非時間依存的不活性化剤である。
【００２４】
Ｅ１−ＳＴＳの阻害の最適能力は、ＥＭＡＴＥで達成され得たが、エストロンがスルファターゼ阻害の間に放出され得る可能性、および、ＥＭＡＴＥおよびそのエストラジオール同属物がエストロゲンの活性を所有し得る可能性がある。
【００２５】
エストロゲンおよびアンドロゲン生合成における最終ステップを触媒する１７β−ＨＳＤもまた、エストロゲン欠乏戦略の標的として出現した。この酵素は、ステロイド類の酸化形態（より少ない活性）および還元形態（より活性）の相互転換を行う。その活性は、エストロゲン依存性腫瘍の成長および発生を、それが、エストロンをエストラジオールに好適に還元する２５ので直接、そしてより少ない程度で、アンドロゲンＤＨＥＡを、エストロゲンの性質を有し、かつエストロゲンレセプターに結合し得ることが最近示された２６、アンドロステンジオール（アジオール）への転換を経由して、支援する。
【００２６】
１７β−ＨＳＤは、その１１個が現在まで同定され、そしてクローン化されている２７イソ酵素のファミリーに属する。各型は、薬物作用の選択性が達成されなければならないことを意味する、選択的な基質親和性および指向活性を有する。１型１７β−ＨＳＤは、エストロンおよびエストラジオールの相互転換を触媒するイソ型である。
【００２７】
ＳＴＳインヒビターとは異なり、ごく僅かの１７β−ＨＳＤインヒビターが報告されているにすぎない。１型１７β−ＨＳＤのステロイドインヒビターの大部分は、共通のＤ環改変構造を有する。１６α位に良好な脱離基を持つ側鎖を含むエストラジオール誘導体は、強力クラスのインヒビターであることが示されている。特に、側鎖が酵素の活性部位中の求核アミノ酸残基に対して高い反応性を示す１６α−（ブロモアルキル）−エストラジオール２８は、有望な不可逆的インヒビターであることが見出された。１６位に短いブロモアルキル部分を含むアナログが最高の活性を示した（１６α−（ブロモプロピル）−エストラジオール、次いで１６α−（ブロモブチル）−エストラジオール、このシリーズで最も強力（３および４））。それらは、しかし、エストロゲンレセプターの純粋なアゴニストになる。
【００２８】
【化１６】
2005506359.tif 000007
１型１７β−ＨＳＤインヒビター：１６α−（ブロモプロピル）−エストラジオール、３：１６α−（ブロモプロピル）−エストラジオール、４およびフラボン誘導体アピゲニン。
【００２９】
強力なインヒビターの固有のエストロゲン形成性をなくし、そして恐らくは同時にこの分子中に抗エストロゲン形成性を加工する試みで、既知の抗エストロゲンＩＣＩ  １６４３８４のＣ７α−アルキルアミド側鎖を保持するいくつかの１６α−（広域）−エストラジオール誘導体が合成された２９。しかし、１型１７β−ＨＳＤのむしろ乏しい阻害が得られ、エストロゲン形成性は完全にはなくならず、そして抗エストロゲン形成性は導入されなかった。
【００３０】
平行して、１型１７β−ＨＳＤの非ステロイドインヒビターが設計された。エストロゲンに構造的に類似しているフラボノイドは、エストロゲン形成活性または抗エストロゲン形成活性を有するエストロゲンレセプターに結合し得る３０。アロマターゼ活性に対するそれらの作用は、文献に良く記載されており、そして最近の研究では、それらは、１型１７β−ＨＳＤにより触媒されるエストロンのエストラジオールへの転換を低減することが見出された３１。アピゲニン（図６）のようなフラボン誘導体が、阻害濃度でエストロゲン形成性なくして１型１７β−ＨＳＤに対するいくらかの阻害活性をもつ有望化合物として、ＳＡＲ研究から出現した３２。
【００３１】
Ａｈｍｅｄら（Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  １９９９  １月２７日；２５４（３）：８１１〜５）は、ＳＴＳのステロイドおよび非ステロイドインヒビターの構造−活性関係研究について報告している。
【００３２】
エストラジオール１７β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ（Ｅ２ＨＳＤ）のようなステロイドデヒドロゲナーゼ（ＤＨ）は、エストロゲンレセプターと相互作用するリガンドの利用可能性を調節することに中心的役割をもっている。Ｉ型Ｅ２ＨＳＤは、エストロン（Ｅ１）を、生物学的に活性なエストロゲンであるエストラジオール（Ｅ２）に還元し、その一方、ＩＩ型Ｅ２ＨＳＤは、Ｅ１へのその酸化を触媒することによりＥ２を不活性化する。それ故、ＤＨ阻害活性を有する化合物、特に、Ｉ型Ｅ２ＨＳＤのインヒビターの同定は、Ｅ２の形成を阻害することで治療的価値があり得る。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００３３】
（本発明の要約の局面）
本発明は、有効なステロイドスルファターゼインヒビターとして作用し得る新規化合物を提供する。本発明は、本出願の化合物が有効なステロイドスルファターゼインヒビターであることを同定する。
【００３４】
図１は、エストロンスルフェート、およびエストラジオールからのエストロンのインサイチュ合成に関与するいくつかの酵素を示す。「ＳＴＳ」は、エストロンスルファターゼを示し、「Ｉ型Ｅ２ＤＨ」は、Ｉ型エストラジオール１７β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ、または１、３、５および／または７型エストラジオール１７β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼを示し、そして「ＩＩ型Ｅ２ＤＨ」は、ＩＩ型エストラジオール１７β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ、または２および／または８型エストラジオール１７β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼを示す。
【００３５】
理解され得るように、エストロゲンの末梢合成に関与する２つの酵素は、酵素エストラジオール１７βヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼおよび酵素エストロンスルファターゼである。
【００３６】
エストロゲンのインサイチュ合成は、腫瘍中の高レベルエストロゲンに重要な寄与をなすると考えられ、そしてそれ故、エストロゲン生合成の特異的インヒビターは、内分泌依存性腫瘍の処置に潜在的価値を有している。
【００３７】
さらに、たとえ、スルファターゼ経路を経由する悪性乳組織および子宮内膜組織中のエストロゲン形成が、高濃度エストロゲンに主要な寄与をなすとしても、エストロゲンのインビボ合成に寄与するなお他の酵素経路が存在する。
【００３８】
従って、これらの癌の処置のための新たな治療を開発する緊急の必要性がある。
【００３９】
従って、本発明は、乳癌および子宮内膜癌を処置する先行技術の方法にともなう１つ以上の課題を克服することを求めている。
【００４０】
従って、１つの局面において、本発明は、エストロンスルファターゼ経路−この経路はエストロンをエストラジオールに、またはエストラジオールからエストロンに転換する−に影響（例えば、実質的に阻害）し得、かつ／またはステロイドデヒドロゲナーゼ経路−この経路はエストロンをエストラジオールに、またはエストラジオールからエストロンに転換する−に影響（例えば、実質的に阻害）し得る医薬の調製のための化合物の使用を提供する。
【００４１】
本発明のこの局面は有益である。なぜなら、１つの型の化合物の投与により、エストロンまたはＥ１Ｓからのエストラジオールの合成をブロックすることが可能であるからである。これ故、本発明は、特に乳癌および子宮内膜癌を処置するために、かなりの治療利点を有する化合物を提供する。
【００４２】
本発明の化合物は、その他の置換基を含み得る。これらの他の置換基は、例えば、本発明の化合物の活性をさらに増加および／または安定性を増加し得る（エクスビボおよび／またはインビボ）。
【００４３】
（本発明の詳細な局面）
本発明の１つの局面によれば、式Ｉを有する化合物が提供される。
【００４４】
【化１７】
2005506359.tif 000008
ここで、Ｇは、Ｈまたは置換基である。
【００４５】
本発明の１つの局面によれば、式Ｉを有する化合物を含み、薬学的に受容可能なキャリヤ、希釈剤、賦形剤またはアジュバントと混合された薬学的組成物が提供される。
【００４６】
【化１８】
2005506359.tif 000009
ここで、Ｇは、Ｈまたは置換基である。
【００４７】
本発明の１つの局面によれば、医薬における使用のための、式Ｉを有する化合物が提供される：
【００４８】
【化１９】
2005506359.tif 000010
ここで、Ｇは、Ｈまたは置換基である。
【００４９】
本発明の１つの局面によれば、ステロイドスルファターゼ（ＳＴＳ）に関連する症状または疾患の治療における使用のための医薬の製造における、式Ｉを有する化合物の使用が提供される。
【００５０】
【化２０】
2005506359.tif 000011
ここで、Ｇは、Ｈまたは置換基である。
【００５１】
本発明の１つの局面によれば、有害なＳＴＳレベルに関連する症状または疾患の治療における使用のための医薬の製造における、式Ｉを有する化合物の使用が提供される。
【００５２】
【化２１】
2005506359.tif 000012
ここで、Ｇは、Ｈまたは置換基である。
【００５３】
本発明の１つの局面によれば、ステロイドスルファターゼ（ＳＴＳ）活性を阻害するための薬剤の製造における、式Ｉを有する化合物の使用が提供される。
【００５４】
【化２２】
2005506359.tif 000013
ここで、Ｇは、Ｈまたは置換基である。
【００５５】
本発明の１つの局面によれば、ステロイドスルファターゼ（ＳＴＳ）活性を阻害する必要がある被験体において、ステロイドスルファターゼ（ＳＴＳ）活性を阻害する方法が提供され、この方法は、式Ｉを有する化合物を投与する工程を包含する。
【００５６】
【化２３】
2005506359.tif 000014
ここで、Ｇは、Ｈまたは置換基である。
【００５７】
本発明の１つの局面によれば、細胞周期を調整および／または休止および／または阻害するため、および／またはアポトーシスを調整および／または誘導するための薬剤の製造における、式Ｉを有する化合物の使用が提供される。
【００５８】
【化２４】
2005506359.tif 000015
ここで、Ｇは、Ｈまたは置換基である。
【００５９】
参照を容易にするため、本発明のこれらおよびさらなる局面は、適切なセクション表題の下ここで論議されている。しかし、各セクションにおける教示は、各特定のセクションに必ずしも限定されるものではない。
【００６０】
（好ましい局面）
（環系）
本発明のいくつかの局面では、好ましくは、化合物は式ＩＩを有する。
【００６１】
【化２５】
2005506359.tif 000016
ここで、ＧはＨまたは置換基であり、そしてここでＲ１は、スルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基のいずれか１つである。
【００６２】
本発明のいくつかの局面では、好ましくは、化合物は、式ＩＩＩを有する。
【００６３】
【化２６】
2005506359.tif 000017
ここで、ＧはＨまたは置換基であり、そしてここで、Ｒ１は、スルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基のいずれか１つである。
【００６４】
本発明のいくつかの局面では、好ましくは、化合物は、式ＩＶを有する。
【００６５】
【化２７】
2005506359.tif 000018
ここで、ＧはＨまたは置換基であり、そしてここで、Ｒ１は、スイファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基のいずれか１つである。
【００６６】
本発明のいくつかの局面では、好ましくは、化合物は、式Ｖを有する。
【００６７】
【化２８】
2005506359.tif 000019
ここで、ＧはＨまたは置換基であり、そしてここで、Ｒ１は、スルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基のいずれか１つである。
【００６８】
本発明のいくつかの局面では、好ましくは、化合物は、式ＶＩを有する。
【００６９】
【化２９】
2005506359.tif 000020
ここで、ＧはＨまたは置換基であり、そしてここで、Ｒ１は、スルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基のいずれか１つである。
【００７０】
本発明のいくつかの局面では、好ましくは、化合物は、式ＶＩＩを有する。
【００７１】
【化３０】
2005506359.tif 000021
ここで、ＧはＨまたは置換基であり、そしてここで、Ｒ１は、スルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基のいずれか１つである。
【００７２】
本発明のいくつかの局面では、好ましくは、化合物は、式ＶＩＩＩを有する。
【００７３】
【化３１】
2005506359.tif 000022
ここで、ＧはＨまたは置換基であり、そしてここで、Ｒ１は、スルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基のいずれか１つである。
【００７４】
本発明のいくつかの局面では、好ましくは、化合物は、式ＩＸを有する。
【００７５】
【化３２】
2005506359.tif 000023
ここで、ＧはＨまたは置換基であり、そしてここで、Ｒ１は、スルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基のいずれか１つである。
【００７６】
本発明のいくつかの局面では、好ましくは、化合物は、式Ｘを有する。
【００７７】
【化３３】
2005506359.tif 000024
ここで、ＧはＨまたは置換基であり、そしてここで、Ｒ１は、スルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基のいずれか１つである。
【００７８】
本発明のいくつかの局面では、好ましくは、化合物は、式ＸＩを有する。
【００７９】
【化３４】
2005506359.tif 000025
ここで、ＧはＨまたは置換基であり、そしてここで、Ｒ１は、スルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基のいずれか１つである。
【００８０】
本発明のいくつかの局面では、好ましくは、化合物は、式ＸＩＩを有する。
【００８１】
【化３５】
2005506359.tif 000026
ここで、ＧはＨまたは置換基であり、そしてここで、Ｒ１は、スルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基のいずれか１つである。
【００８２】
当該技術分野で周知のように、古典的ステロイド環構造は以下の一般式を有する：
【００８３】
【化３６】
2005506359.tif 000027
上記の式において、この環は、従来様式で表示されている。
【００８４】
バイオアイソスター（ｂｉｏ−ｉｓｏｓｔｅｒｅ）の例は、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤの任意の１つ以上の環がヘテロ環であるとき、および／またはＡ、Ｂ、ＣおよびＤの任意の１つ以上の環が置換されているとき、および／またはＡ、Ｂ、ＣおよびＤの任意の１つ以上の環が改変されているときであるが；ここで、このバイオアイソスターは、ステロイドの性質を有している。
【００８５】
この点で、本発明の環系は、ステロイド環構造に類似であり、そしてステロイド環構造のバイオアイソスターであり得る。
【００８６】
本発明の多環構造の構造は以下のように提示され得る：
【００８７】
【化３７】
2005506359.tif 000028
ここで、各環Ａ’、Ｂ’、およびＣ’は、独立して、ヘテロ環または非ヘテロ環を表し、そしてここで各環は、独立して、置換され得るか、または置換され得ず、飽和または不飽和であり得る。
【００８８】
例として、環Ａ’、Ｂ’、Ｃ’およびＤ’の任意の１つ以上は、独立して、適切な基−例えば、アルキル基、アリール基、水酸基、ハロ基、ヒドロカルビル基、オキシヒドロカルビル基など−で置換され得る。
【００８９】
Ａ’、Ｂ’、およびＣ’の少なくとも１つは、ヘテロ環基（ヘテロ環）または非ヘテロ環基であり得る。
【００９０】
Ａ’、Ｂ’、Ｃ’およびＤ’の少なくとも１つは、飽和環構造または不飽和環構造（例えば、アリール基）であり得る。
【００９１】
好ましくは、Ａ’、Ｂ’、Ｃ’およびＤ’の少なくとも１つはアリール環である。
【００９２】
好ましくは、化合物は、すべての置換基を含めて、約５０を超えない炭素原子、より通常には、約３０〜４０を超えない炭素原子を含む。
【００９３】
Ｄ’の例は、５または６員環である。
【００９４】
本発明の化合物の基礎となり得る好ましいステロイド核環Ａ’〜Ｄ’は、以下の環Ａ〜Ｄを含む：
エストロンおよび置換エストロン、すなわち：
エストロン                      １６β−ＯＨ−エストロン
４−ＯＨ−エストロン            １７−デオキシエストロン
６α−ＯＨ−エストロン          ２−ＯＨ−エストロン
７α−ＯＨ−エストロン          ２−ＭｅＯ−エストロン
１６α−ＯＨ−エストロン        エストロン
エストラジオールおよび置換エストラジオール、すなわち：
４−ＯＨ−１７β−エストラジオール      １６β−ＯＨ−１７β−エストラジオール
６α−ＯＨ−１７β−エストラジオール    １７α−エストラジオール
７α−ＯＨ−１７β−エストラジオール    １７β−エストラジオール
４−ＯＨ−１７α−エストラジオール    １７α−エチニル−１７β−エストラジオール
６α−ＯＨ−１７α−エストラジオール  １７β−エチニル−１７α−エストラジオール
７α−ＯＨ−１７α−エストラジオール    １７−デオキシエストラジオール
１６α−ＯＨ−１７α−エストラジオール  ２−ＯＨ−１７α−エストラジオール
１６α−ＯＨ−１７β−エストラジオール  ２−ＯＨ−１７β−エストラジオール
１６β−ＯＨ−１７α−エストラジオール  ２−ＭｅＯ−１７α−エストラジオール
２−ＭｅＯ−１７β−エストラジオール
エストリオールおよび置換エストリオール、すなわち：
エストリオール                    １７−デオキシエストリオール
４−ＯＨ−エストリオール          ２−ＯＨ−エストリオール
６α−ＯＨ−エストリオール        ２−ＭｅＯ−エストリオール
７α−ＯＨ−エストリオール
デヒドロエピアンドロステロンおよび置換デヒドロエピアンドロステロン、すなわち：
デヒドロエピアンドロステロン          １６α−ＯＨ−デヒドロエピアンドロステロン
６α−ＯＨ−デヒドロエピアンドロステロン  １６β−ＯＨ−デヒドロエピアンドロステロン
７α−ＯＨ−デヒドロエピアンドロステロン  ５−アンドロステンジオール
（Ｇ基）
本発明のいくつかの局面では、好ましくは、Ｇ基は、Ｈ、ＯＨおよびヒドロカルビル基から選択される。
【００９５】
本発明のいくつかの局面では、好ましくは、Ｇ基またはヒドロカルビル基は、必要に応じて置換された炭化水素基である。換言すれば、Ｇは、必要に応じて置換された炭化水素基であるか、またはＨ、ＯＨおよび必要に応じて置換された炭化水素基から選択される。
【００９６】
本発明のいくつかの局面では、好ましくは、Ｇまたはヒドロカルビル基は、必要に応じて置換されたアルキル基、必要に応じて置換されたハロアルキル基、アリール基、アルキルアリール基、アルキルアリールアルキル（ａｌｋｙｌａｒｙｌａｌｋｙｌ）基、およびアルケン基から選択される。
【００９７】
本発明のいくつかの局面では、好ましくは、Ｇまたはヒドロカルビル基は、必要に応じて置換されたアルキル基である。
【００９８】
本発明のいくつかの局面では、好ましくは、Ｇまたはヒドロカルビル基は、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル基（例えば、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、およびＣ１〜Ｃ３アルキル基）から選択される。代表的なアルキル基は、Ｃ１アルキル、Ｃ２アルキル、Ｃ３アルキル、Ｃ４アルキル、Ｃ５アルキル、Ｃ７アルキル、およびＣ８アルキルを含む。
【００９９】
本発明のいくつかの局面では、好ましくは、Ｇまたはヒドロカルビル基は、Ｃ１〜Ｃ１０ハロアルキル基、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル基、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル基、Ｃ１〜Ｃ１０ブロモアルキル基、Ｃ１〜Ｃ６ブロモアルキル基、およびＣ１〜Ｃ３ブロモアルキル基から選択される。代表的なハロアルキル基は、Ｃ１ハロアルキル、Ｃ２ハロアルキル、Ｃ３ハロアルキル、Ｃ４ハロアルキル、Ｃ５ハロアルキル、Ｃ７ハロアルキル、Ｃ８ハロアルキル、Ｃ１ブロモアルキル、Ｃ２ブロモアルキル、Ｃ３ブロモアルキル、Ｃ４ブロモアルキル、Ｃ５ブロモアルキル、Ｃ７ブロモアルキル、およびＣ８ブロモアルキルを含む。
【０１００】
本発明のいくつかの局面では、好ましくは、Ｇまたはヒドロカルビル基は、アリール基、アルキルアリール基、アルキルアリールアルキル基、−（ＣＨ２）１〜１０−アリール、−（ＣＨ２）１〜１０−Ｐｈ、（ＣＨ２）１〜１０−Ｐｈ−Ｃ１〜１０アルキル、−（ＣＨ２）１〜５−Ｐｈ、（ＣＨ２）１〜５−Ｐｈ−Ｃ１〜５アルキル、−（ＣＨ２）１〜３−Ｐｈ、（ＣＨ２）１〜３−Ｐｈ−Ｃ１〜３アルキル、−ＣＨ２−Ｐｈ、およびＣＨ２−Ｐｈ−Ｃ（ＣＨ３）３から選択される。
【０１０１】
Ｇまたはヒドロカルビル基が、アリール基であるか、またはアリール基を含む場合、このアリール基またはこのアリール基の１つ以上は、ヘテロ原子を含み得る。従って、このアリール基またはこのアリール基の１つ以上は、炭素環であり得るか、またはより多くの場合ヘテロ環であり得る。代表的なヘテロ環は、Ｏ、ＮおよびＳ、特にＮを含む。
【０１０２】
本発明のいくつかの局面では、好ましくは、Ｇまたはヒドロカルビル基は、−（ＣＨ２）１〜１０−シクロアルキル、−（ＣＨ２）１〜１０−Ｃ３〜１０シクロアルキル、−（ＣＨ２）１〜７−Ｃ３〜７シクロアルキル、−（ＣＨ２）１〜５−Ｃ３〜５シクロアルキル、−（ＣＨ２）１〜３−Ｃ３〜５シクロアルキル、および−ＣＨ２−Ｃ３シクロアルキルから選択される。
【０１０３】
本発明のいくつかの局面では、好ましくは、Ｇまたはヒドロカルビル基は、アルケン基である。代表的なアルケン基は、Ｃ１〜Ｃ１０アルケン基、Ｃ１〜Ｃ６アルケン基、Ｃ１〜Ｃ３アルケン基（例えば、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、またはＣ７アルケン基）を含む。好ましい局面では、このアルケン基は、１つ、２つ、または３つのＣ＝Ｃ結合を含む。好ましい局面では、このアルケン基は、１つのＣ＝Ｃ結合を含む。いくつかの好ましい局面では、少なくとも１つのＣ＝Ｃ結合または唯一のＣ＝Ｃ結合が、アルケン鎖の末端Ｃに対してであり、すなわち、この結合は、環系への鎖の遠位端にある。
【０１０４】
本発明のいくつかの局面では、好ましくは、ＧはＨである。
【０１０５】
（Ｒ１基）
本発明の化合物のＲ１基は、スルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基のいずれか１つである。
【０１０６】
１つの好適な局面では、Ｒ１は好ましくはスルファメート基である。
【０１０７】
Ｒ１またはスルファメート基は、以下の式のスルファメート基であり得
【０１０８】
【化３８】
2005506359.tif 000029
ここで、Ｒ４およびＲ５は、独立して、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルケニルおよびアリール、またはそれらの組み合わせから選択されるか、またはともにアルキレンを表し、ここで、これら、または各々のアルキルもしくはシクロアルキルもしくはアルケニルは、必要に応じて１つ以上のヘテロ原子またはヘテロ基を含む。
【０１０９】
本発明のいくつかの局面では、好ましくは、Ｒ４およびＲ５の少なくとも１つはＨである。
【０１１０】
本発明のいくつかの局面では、好ましくは、Ｒ４およびＲ５はＨである。
【０１１１】
（置換基）
本発明の化合物は、本明細書で示される環系の置換基以外の置換基を有し得る。さらに、本明細書に記載の環系は、一般式で与えられ、そしてそのように解釈されるべきである。所定の環メンバー上で特定して示される置換基がないときは、環メンバーが任意の成分で置換され得ることを示し、Ｈは１つの例に過ぎない。この環系は、１つ以上の程度の不飽和を含み得、例えば、いくつかの局面では、環系の１つ以上の環は芳香族である。この環系は、炭素環であり得るか、または１つ以上のヘテロ原子を含み得る。
【０１１２】
本発明の化合物、特に、本発明の発明の環系化合物は、本明細書に示される置換基以外の置換基を含み得る。例示すれば、これら他の置換基は、以下の１つ以上であり得る：１つ以上のスルファメート基、１つ以上のホスホネート基、１つ以上のチオホスホネート基、１つ以上のスルホネート基、１つ以上のスルホンアミド基、１つ以上のハロ基、１つ以上のＯ基、１つ以上の水酸基、１つ以上のアミノ基、１つ以上のイオウ含有基、１つ以上のヒドロカルビル基（例えば、オキシヒドロカルビル基）。
【０１１３】
一般的な意味で、本発明の化合物の環系Ａ’Ｂ’Ｃ’Ｄ’は、種々の非干渉置換基を含み得る。特に、環系Ａ’Ｂ’Ｃ’Ｄ’は、１つ以上の、ヒドロキシ、アルキル、特に低級（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチルおよびその他のペンチルアイソマー、およびｎ−ヘキシルおよびその他のヘキシルアイソマー、アルコキシ特に低級（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシなど、アルキニル、例えば、エチニル、またはハロゲン、例えば、フルオロ置換基を含み得る。
【０１１４】
本発明のいくつかの化合物では、環系は、ヒドロカルビルスルファニル基で置換されていることが好ましい。より好ましくは、この環系のＡ’環が、ヒドロカルビルスルファニル基で置換されている。用語「ヒドロカルビルスルファニル」は、少なくともヒドロカルビル基（本明細書で定義されるような）、およびイオウを含む基、好ましくは−Ｓ−ヒドロカルビル、より好ましくは−Ｓ−炭化水素を意味する。このイオウ基は、必要に応じて酸化され得る。
【０１１５】
本発明のいくつかの化合物では、環系のＡ’環の少なくとも２つの位置がヒドロカルビルスルファニル基で置換されていることが非常に好ましい。
【０１１６】
好ましくは、このヒドロカルビルスルファニル基は、−Ｓ−Ｃ１〜１０アルキル、より好ましくは−Ｓ−Ｃ１〜５アルキル、より好ましくは−Ｓ−Ｃ１〜３アルキル、より好ましくは−Ｓ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−Ｓ−ＣＨ２ＣＨ３または−ＳＣＨ３である。
【０１１７】
本発明のいくつかの化合物では、環系のＡ’環がアルコキシ基で置換されていることが非常に好ましい。
【０１１８】
本発明のいくつかの化合物では、環系のＡ’環の少なくとも２つの位置がアルコキシ基で置換されていることが非常に好ましい。
【０１１９】
好ましくは、このアルコキシ基はメトキシである。
【０１２０】
本発明のいくつかの化合物では、環系の少なくともＡ’環がヒドロカルビル基で置換されていることが非常に好ましい。
【０１２１】
本発明のいくつかの化合物について、環系のＡ’環の少なくとも２位が、アルキル基で置換されることが、非常に好ましい。
【０１２２】
好ましくは、このアルキル基は、エチルである。
【０１２３】
本発明のいくつかの化合物について、この化合物は、少なくとも２つ以上のスルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基を含むことが、非常に好ましい。
【０１２４】
本発明のいくつかの化合物について、この化合物は、少なくとも２つのスルファメート基を含むことが、非常に好ましい。
【０１２５】
本発明のいくつかの化合物について、この化合物は、少なくとも２つのスルファメート基を含み、ここで、このスルファメート基は、同じ環上に存在しないことが非常に好ましい。
【０１２６】
本発明のいくつかの化合物について、環系のＡ’環が、少なくとも１つのスルファメート基を含み、そしてここで、環系のＤ’環が、少なくとも１つのスルファメート基を含むことが非常に好ましい。
【０１２７】
本発明のいくつかの局面において、好ましくは、Ａ’環は、アルコキシ置換基およびアルキル置換基の１つ以上を含む。従って、本発明の１つの局面によれば、式ＸＩＩＩを有する化合物が提供される。
【０１２８】
【化３９】
2005506359.tif 000030
ここで、Ｒ２およびＲ３は、独立して、Ｈおよびヒドロカルビル基から選択され、ここで、Ｒ２およびＲ３のうちの少なくとも一方は、ヒドロカルビル基である。
【０１２９】
本発明の好ましい局面において、式ＸＩＶ〜ＸＩＸを有する化合物から選択される化合物が、提供される。
【０１３０】
【化４０】
2005506359.tif 000031
ここで、Ｒ２およびＲ３は、独立して、Ｈおよびヒドロカルビル基から選択され、ここで、Ｒ２およびＲ３のうちの少なくとも一方は、ヒドロカルビル基である。
【０１３１】
好ましくは、Ｒ２およびＲ３のうちの少なくとも一方は、アルキル基である。好ましくは、Ｒ２およびＲ３のうちの少なくとも一方は、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル基であり、好ましくは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基であり、好ましくは、Ｃ１〜Ｃ３アルキル基である。好ましくは、Ｒ２およびＲ３のうちの少なくとも一方は、−ＣＨ３または−ＣＨ２ＣＨ３である。
【０１３２】
１つの局面において、好ましくは、Ｒ２は、ヒドロカルビル基であり、そしてＲ３は、Ｈである。
【０１３３】
別の好ましい局面において、Ｒ２およびＲ３のうちの少なくとも一方は、アルコキシ基である。好ましくは、Ｒ２およびＲ３のうちのいずれか一方は、メトキシである。
【０１３４】
本発明の非常に好ましい化合物は、以下から選択され得る：
【０１３５】
【化４１】
2005506359.tif 000032
（さらなる局面）
本発明のさらなる局面によれば、以下の工程を包含する方法が提供される：（ａ）本明細書中に規定される式を有する１つ以上の候補化合物を用いて、ステロイドスルファターゼアッセイを実施する工程；（ｂ）この候補化合物のうちの１つ以上が、ＳＴＳ活性を調節し得るか否かを決定する工程；および（ｃ）ＳＴＳ活性を調節し得る１つ以上の候補化合物を選択する工程。
【０１３６】
本発明のさらなる局面によれば、以下の工程を包含する方法が提供される：（ａ）本明細書中に規定される式を有する１つ以上の候補化合物を用いて、ステロイドスルファターゼアッセイを実施する工程；（ｂ）この候補化合物のうちの１つ以上が、ＳＴＳ活性を阻害し得るか否かを決定する工程；および（ｃ）ＳＴＳ活性を阻害し得る１つ以上の候補化合物を選択する工程。
【０１３７】
本発明の方法のいずれか１つにおいて、１つ以上のさらなる工程が存在し得る。例えば、この方法はまた、同定された候補化合物を、（例えば、化学技術および／または酵素技術によって）改変する工程、およびこの改変された化合物をＳＴＳ阻害効果（これは、この効果がより大きいかまたは異なる場合に、見られ得る）について試験する、任意のさらなる工程を包含し得る。さらなる例として、この方法はまた、同定された候補化合物の構造を（例えば、結晶学的技術の使用によって）決定し、次いで、コンピュータモデル化研究を実施する工程（例えば、そのＳＴＳ阻害作用をさらに増加させるため）を包含し得る。従って、本発明はまた、この同定された候補化合物についてのデータセット（例えば、結晶学的座標）を有するコンピュータを包含する。本発明はまた、分析のためにコンピュータスクリーン上に提示される場合に同定される候補化合物（例えば、タンパク質結合研究）を包含する。
【０１３８】
本発明の１つの局面によれば、本発明の方法によって同定された化合物が提供される。
【０１３９】
本発明の１つの局面によれば、医薬において使用するための、本発明による化合物が提供される。
【０１４０】
本発明の１つの局面によれば、薬学的に受容可能なキャリア、希釈剤、賦形剤またはアジュバントと必要に応じて混合された、本発明による化合物を含有する薬学的組成物が提供される。
【０１４１】
本発明の１つの局面によれば、ＳＴＳに関連する状態または疾患の治療において使用するための医薬の製造における、本発明による化合物の使用が提供される。
【０１４２】
本発明の１つの局面によれば、有害なＳＴＳレベルに関連する状態または疾患の治療において使用するための医薬の製造における、本発明による化合物の使用が提供される。
【０１４３】
いくつかの適用について、好ましくは、これらの化合物は、エストロゲン性効果を有さないか、または最小にしか有さない。
【０１４４】
いくつかの適用について、好ましくは、これらの化合物は、エストロゲン性効果を有する。
【０１４５】
いくつかの適用について、好ましくは、これらの化合物は、可逆的な作用を有する。
【０１４６】
いくつかの適用について、好ましくは、これらの化合物は、不可逆的な作用を有する。
【０１４７】
１つの実施形態において、本発明の化合物は、乳癌の処置のために有用である。
【０１４８】
本発明の化合物は、塩の形態であり得る。
【０１４９】
本発明はまた、本発明の化合物を調製するために有用な新規な中間体を網羅する。例えば、本発明は、これらの化合物のための新規なアルコール前駆体を網羅する。さらなる例として、本発明は、これらの化合物のためのビス保護された前駆体を網羅する。これらの前駆体の各々の例は、本明細書中に提示される。本発明はまた、本発明の化合物の合成のための、これらの前駆体の各々または両方が関与するプロセスを包含する。
【０１５０】
本発明者らはまた、本発明のいくつかの局面において、本化合物が、ステロイドデヒドロゲナーゼ（ＨＳＤ）の活性をまた阻害し得ることを確認した。
【０１５１】
ステロイドデヒドロゲナーゼまたはＨＳＤとは、１７βヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼを意味する。１つの局面において、１７βヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼは、ＥＣ  １．１．１．６２である。
【０１５２】
好ましくは、ＨＳＤは、１型、３型、５型、および／または７型である。好ましくは、ＨＳＤは、エストロン（ケトン）をエストラジオール（ヒドロキシ）に転換する。
【０１５３】
好ましくは、ＨＳＤは、２型および／または８型である。好ましくは、ＨＳＤは、エストラジオール（ヒドロキシ）をエストロン（ケトン）に転換する。
【０１５４】
従って、さらなる局面において、本発明は、以下を提供する：
・ステロイドデヒドロゲナーゼに関連する状態または疾患の治療において使用するための医薬の製造における、本発明の化合物の使用。
・有害なステロイドデヒドロゲナーゼレベルに関連する状態または疾患の治療において使用するための医薬の製造における、本発明の化合物の使用。
・ステロイドデヒドロゲナーゼ活性を阻害するための製剤の製造における、本発明の化合物の使用。
・ステロイドデヒドロゲナーゼ活性を阻害するための製剤の製造における、本発明の化合物の使用。
・以下の工程を包含する方法：（ａ）本発明の１つ以上の候補化合物を用いて、ステロイドデヒドロゲナーゼアッセイを実施する工程；（ｂ）この候補化合物のうちの１つ以上がステロイドデヒドロゲナーゼ活性を調節し得るか否かを決定する工程；および（ｃ）ステロイドデヒドロゲナーゼ活性を調節し得る１つ以上の候補化合物を選択する工程。
・以下の工程を包含する方法：（ａ）本発明の１つ以上の候補化合物を用いて、ステロイドデヒドロゲナーゼアッセイを実施する工程；（ｂ）この候補化合物のうちの１つ以上がステロイドデヒドロゲナーゼ活性を阻害し得るか否かを決定する工程；および（ｃ）ステロイドデヒドロゲナーゼ活性を阻害し得る１つ以上の候補化合物を選択する工程。
・上記方法によって同定された化合物、この化合物を薬学的に受容可能なキャリア、希釈剤、賦形剤またはアジュバントと必要に応じて混合して含有する、医薬および薬学的組成物における使用。
【０１５５】
本発明のいくつかの局面において、ステロイドデヒドロゲナーゼは、ステロイドデヒドロゲナーゼＩ型であることが好ましい。
【０１５６】
本発明のいくつかの局面において、ステロイドデヒドロゲナーゼは、ステロイドデヒドロゲナーゼＩＩ型であることが好ましい。
【０１５７】
好ましくは、ＨＳＤは、１型、３型、５型、および／または７型である。好ましくは、ＨＳＤは、エストロン（ケトン）をエストラジオール（ヒドロキシ）に転換する。
【０１５８】
好ましくは、ＨＳＤは、２型および／または８型である。好ましくは、ＨＳＤは、エストラジオール（ヒドロキシ）をエストロン（ケトン）に転換する。
【０１５９】
本発明者らはまた、いくつかの局面において、ステロイドデヒドロゲナーゼ（ＨＳＤ）の活性を阻害するために、本発明の化合物は、スルファメート基、ホスホネート基、チオ不ホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基のうちの１つで置換されることが必要ではないことを同定した。従って、いくつかの局面において、本発明は、Ｒ１が任意の置換基である、本明細書中に規定されるような化合物を提供する。この局面において、好ましくは、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨまたはヒドロカルビル基であり、より好ましくは、ＯＨである。
【０１６０】
この知見を確認するデータは、以下の表２に与えられる。
【０１６１】
【表１】
2005506359.tif 000033
2005506359.tif 000034
2005506359.tif 000035
2005506359.tif 000036
2005506359.tif 000037
従って、さらなる局面において、本発明は、以下を提供する：
・以下の式を有する化合物
【０１６２】
【化４２】
2005506359.tif 000038
ここで、ＧはＨまたは置換基である。
・ステロイドデヒドロゲナーゼに関連する状態または疾患の治療において使用するための医薬の製造における、この化合物の使用。
・有害なステロイドデヒドロゲナーゼレベルに関連する状態または疾患の治療において使用するための医薬の製造における、この化合物の使用。
・ステロイドデヒドロゲナーゼ活性を阻害するための製剤の製造における、この化合物の使用。
・ステロイドデヒドロゲナーゼ活性を阻害するための製剤の製造における、この化合物の使用。
・以下の工程を包含する方法：（ａ）上記式を有する１つ以上の候補化合物を用いて、ステロイドデヒドロゲナーゼアッセイを実施する工程；（ｂ）この候補化合物のうちの１つ以上がステロイドデヒドロゲナーゼ活性を調節し得るか否かを決定する工程；および（ｃ）ステロイドデヒドロゲナーゼ活性を調節し得る１つ以上の候補化合物を選択する工程。
・以下の工程を包含する方法：（ａ）上記式を有する１つ以上の候補化合物を用いて、ステロイドデヒドロゲナーゼアッセイを実施する工程；（ｂ）この候補化合物のうちの１つ以上がステロイドデヒドロゲナーゼ活性を阻害し得るか否かを決定する工程；および（ｃ）ステロイドデヒドロゲナーゼ活性を阻害し得る１つ以上の候補化合物を選択する工程。
・上記方法によって同定された化合物、この化合物を薬学的に受容可能なキャリア、希釈剤、賦形剤またはアジュバントと必要に応じて混合して含有する、医薬および薬学的組成物における使用。
【０１６３】
本発明のさらに広範な局面は、以下に規定される：
・以下の式の環系を含む化合物
【０１６４】
【化４３】
2005506359.tif 000039
ここで、Ｇ、Ｈ、ＩおよびＪのうちの少なくとも１つは、置換された窒素である。用語「置換された窒素」とは、Ｈ以外の基に結合した窒素を意味する。好ましくは、このＮは、ヒドロカルビル基に結合している。
好ましくは、
・ここで、Ｇ、Ｈ、ＩおよびＪの他のものは、炭素である。
・Ｇ、Ｈ、ＩおよびＪの１つのみが、置換された窒素である。
・Ｈは、置換された窒素である。
・Ｇ、Ｈ、ＩおよびＪのうちの少なくとも１つが、Ｃ＝Ｏである。
・Ｇ、Ｈ、ＩおよびＪのうちの２つが、Ｃ＝Ｏである。
・ＧおよびＩの２つが、Ｃ＝Ｏである。
【０１６５】
【化４４】
2005506359.tif 000040
ここで、Ｒ１は、スルファターゼ基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基のいずれか１つであり；そしてここで、Ｇは、Ｈまたは置換基である。
好ましくは、
【０１６６】
【化４５】
2005506359.tif 000041
（いくつかの利点）
本発明の１つの主要な利点は、本発明の化合物が、ＳＴＳインヒビターとして働き得ることである。
【０１６７】
本発明の化合物の別の利点は、これらがインビボで強力であり得ることである。
【０１６８】
本発明の化合物のいくつかは、非エストロゲン性化合物であり得る。ここで、用語「非エストロゲン性」とは、エストロゲン性活性を全くまたは実質的に示さないことを意味する。
【０１６９】
別の利点は、これらの化合物のうちのいくつかが、ホルモン活性を示すかまたは誘導する化合物に代謝され得ないかもしれないことである。
【０１７０】
本発明の化合物のいくつかはまた、経口で活性であり得る点で有利である。
【０１７１】
本発明の化合物のいくつかは、癌（例えば、乳癌）および（または代替において）非悪性状態の処置のために有用であり得る（例えば、製剤が早期年齢から投与される必要があり得る場合に特に、自己免疫疾患の予防として）。
【０１７２】
従って、本発明の化合物のいくつかは、内分泌依存性の癌の処置以外ののための治療用途（例えば、自己免疫疾患の処置）を有すると考えられる。
【０１７３】
（ステロイドスルファターゼ）
ステロイドスルファターゼ（これは、ステロイドスルファターゼまたはステリルスルファターゼまたは短縮して「ＳＴＳ」と時々称される）は、いくつかの硫酸化ステロイド（例えば、エストロンスルフェート、デヒドロエピアンドロステロンスルフェートおよびコレステロールスルフェート）を加水分解する。ＳＴＳは、酵素番号ＥＣ  ３．１．６．２を割り当てられている。
【０１７４】
ＳＴＳは、クローニングおよび発現されている。例えば、Ｓｔｅｉｎら（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：１３８６５−１３８７２（１９８９））およびＹｅｎら（Ｃｅｌｌ  ４９：４４３−４５４（１９８７））を参照のこと。
【０１７５】
ＳＴＳは、多数の疾患状態に関与している酵素である。
【０１７６】
例として、研究者らは、ＳＴＳの全欠損が魚鱗癬を生じることを見出した。いくらかの研究者によれば、ＳＴＳ欠損は、日本国において家族潜在性である。いくらかの研究者ら（Ｓａｋｕｒａら、Ｊ  Ｉｎｈｅｒｉｔ  Ｍｅｔａｂ  Ｄｉｓ  １９９７年１１月；２０（６）：８０７−１０）はまた、アレルギー性疾患（例えば、気管支喘息、アレルギー性鼻炎、またはアトピー性皮膚炎）が、ステロイドスルファターゼ欠損に関連し得ることを報告した。
【０１７７】
疾患状態がＳＴＳ活性の全欠損を介してもたらされることに加えて、増加したレベルのＳＴＳ活性もまた、疾患状態をもたらし得る。例として、上に示されるように、乳癌の増殖および転移におけるＳＴＳの役割を支持する強力な証拠が存在する。
【０１７８】
ＳＴＳはまた、他の疾患状態に関与する。例として、Ｌｅ  Ｒｏｙら（Ｂｅｈａｖ  Ｇｅｎｅｔ  １９９９年３月；２９（２）：１３１−６は、マウスにおけるステロイドスルファターゼ濃度と発作行動の開始との間の遺伝的相関が存在し得ることを決定した。この著者らは、ステロイドの硫酸化は、複雑なネットワークの主要な移動物（ｍｏｖｅｒ）であり得ると結論付ける（変異誘発による攻撃に関与することが示されている遺伝子を含む）。
【０１７９】
（ＳＴＳ阻害）
ＳＴＳ活性に関連するいくつかの疾患状態は、非活性の硫酸化したエストロンの、活性な非硫酸化エストロンへの転換に起因すると考えられる。ＳＴＳ活性に関連する疾患状態において、ＳＴＳ活性を阻害することが望ましい。
【０１８０】
ここで、用語「阻害する」は、ＳＴＳの有害な作用を減少および／または排除および／またはマスクおよび／または防止することを包含する。
【０１８１】
（ＳＴＳインヒビター）
本発明によれば、本発明の化合物は、ＳＴＳインヒビターとして働き得る。
【０１８２】
ここで、用語「インヒビター」とは、本発明の化合物に関して本明細書中において使用される場合、ＳＴＳ活性を阻害（例えば、ＳＴＳの有害な作用を減少および／または排除および／またはマスクおよび／または防止）し得る化合物を意味する。ＳＴＳインヒビターは、アンタゴニストとして働き得る。
【０１８３】
化合物がエストロンスルファターゼ活性を阻害する能力は、インタクトなＭＣＦ−７乳癌細胞または胎盤ミクロソームのいずれかを使用して、評価され得る。さらに、動物モデルが使用され得る。適切なアッセイプロトコルについての詳細は、以下の節に提供される。他のアッセイを使用して、ＳＴＳ活性および従ってＳＴＳ阻害を決定し得ることが、注目されるべきである。例えば、ＷＯ−Ａ−９９／５０４５３の教示に対して参照がなされ得る。
【０１８４】
好ましくは、いくつかの適用について、この化合物は、スルファメート基がスルフェート基で置き換えられてスルフェート誘導体を形成する場合に、このスルフェート誘導体は、ステロイドスルファターゼ（Ｅ．Ｃ．３．１．６．２）活性を有する酵素によって加水分解可能であるという特徴によって、さらに特徴付けられる（すなわち、ｐＨ７．４および３７℃でステロイドスルファターゼＥ．Ｃ．３．１．６．２と共にインキュベートされる場合）。
【０１８５】
１つの好ましい実施形態において、この化合物のスルファメート基がスルフェート基と置き換えられてスルフェート化合物を形成する場合、このスルフェート化合物は、ステロイドスルファターゼ（Ｅ．Ｃ．３．１．６．２）活性を有する酵素によって加水分解可能であり、そしてｐＨ７．４および３７℃でステロイドスルファターゼＥ．Ｃ．３．１．６．２と共にインキュベートされる場合に、２００ミリモル濃度未満、好ましくは１５０ミリモル濃度未満、好ましくは１００ミリモル濃度未満、好ましくは７５ミリモル濃度未満、好ましくは５０ミリモル濃度未満のＫｍ値を与える。
【０１８６】
１つの好ましい実施形態において、この化合物のスルファメート基がスルフェート基と置き換えられてスルフェート化合物を形成する場合、このスルフェート化合物は、ステロイドスルファターゼ（Ｅ．Ｃ．３．１．６．２）活性を有する酵素によって加水分解可能であり、そしてｐＨ７．４および３７℃でステロイドスルファターゼＥ．Ｃ．３．１．６．２と共にインキュベートされる場合に、２００マイクロモル濃度未満、好ましくは１５０マイクロモル濃度未満、好ましくは１００マイクロモル濃度未満、好ましくは７５マイクロモル濃度未満、好ましくは５０マイクロモル濃度未満のＫｍ値を与える。
【０１８７】
好ましい実施形態において、本発明の化合物は、ステロイドスルファターゼ（Ｅ．Ｃ．３．１．６．２）活性を有する酵素によって加水分解可能ではない。
【０１８８】
いくつかの適用について、好ましくは、本発明の化合物は、所望の標的（例えば、ＳＴＳ）に対して、少なくとも約１００倍の選択性、好ましくは、所望の標的に対して、少なくとも約１５０倍の選択性、好ましくは、所望の標的に対して、少なくとも約２００倍の選択性、好ましくは、所望の標的に対して、少なくとも約２５０倍の選択性、好ましくは、所望の標的に対して、少なくとも約３００倍の選択性、好ましくは、所望の標的に対して、少なくとも約３５０倍の選択性を有する。
【０１８９】
本発明の化合物は、ＳＴＳ活性を阻害するその能力に加えて、またはその代替として、他の有利な特性を有し得ることに留意すべきである。
【０１９０】
（ステロイドデヒドロゲナーゼ）
ステロイドデヒドロゲナーゼまたは短縮して「ＤＨ」は、２つの型（Ｉ型およびＩＩ型）からなると分類され得る。酵素（例えば、エストラジオール１７β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ（Ｅ２ＨＳＤ））のこれらの２つの型は、エストロゲンレセプターと相互作用するためのリガンドの利用可能性を調節する際に、中心的な役割を有する。Ｉ型は、エストロン（Ｅ１）を、生物学的に活性なエストロゲンであるエストラジオール（Ｅ２）に還元し、一方でＥ２ＨＳＤ  ＩＩ型は、そのＥ１への酸化を触媒することによって、Ｅ２を不活性化させる。
【０１９１】
（ＤＨ阻害）
ＤＨ活性に関連するいくつかの疾患状態は、不活性なエストロンの、活性なエストラジオールへの転換に起因すると考えられる。ＤＨ活性に関連する疾患状態において、ＤＨ活性を損害することが望ましい。
【０１９２】
ここで、用語「阻害する」は、ＤＨの有害な作用を減少および／または排除および／またはマスクおよび／または防止することを包含する。
【０１９３】
（ＤＨインヒビター）
本発明によれば、本発明の化合物は、ＤＨインヒビターとして作用し得る。
【０１９４】
ここで、用語「インヒビター」とは、本発明の化合物に関して本明細書中において使用される場合、ＤＨ活性を阻害（例えば、ＤＨの有害な作用を減少および／または排除および／またはマスクおよび／または防止）し得る化合物を意味する。ＤＨインヒビターは、アンタゴニストとして働き得る。
【０１９５】
化合物がステロイドデヒドロゲナーゼ活性を阻害する能力は、Ｅ２ＨＳＤ  Ｉ型の活性が豊富なＴ４７Ｄ乳癌細胞、またはＩＩ型インヒビター研究についてはＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞のいずれかを使用して、評価され得る。両方の細胞株において、産物の形成は、時間および細胞数に対して直線的である。適切なアッセイプロトコルについての詳細は、実施例の節に提供される。
【０１９６】
本発明の化合物は、ＤＨ活性を阻害する能力に加えて、またはその代替として、他の有利な特性を有し得ることが注目されるべきである。
【０１９７】
（スルファメート基）
１つの実施形態において、環Ｘは、置換基としてスルファメート基を有する。用語「スルファメート」とは、本明細書中において使用される場合、スルファミン酸のエステル、またはスルファミン酸のＮ置換誘導体のエステルまたはその塩が挙げられる。
【０１９８】
Ｒ１がスルファメート基である場合、本発明の化合物は、スルファメート化合物と称される。
【０１９９】
代表的に、スルファメート基は、以下の式：
（Ｒ４）（Ｒ５）Ｎ−Ｓ（Ｏ）（Ｏ）−Ｏ−
を有し、ここで、好ましくは、Ｒ４およびＲ５は、独立して、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルケニルおよびアリールもしくはこれらの組み合わせから選択されるか、または一緒になって、アルキレンを表し、ここで、アルキルまたはシクロアルキルもしくはアルケニルの各々は、必要に応じて、１つ以上のヘテロ原子またはヘテロ基を含む。
【０２００】
置換される場合、本発明のＮ置換化合物は、１つまたは２つのＮ−アルキル置換基、Ｎ−アルケニル置換基、Ｎ−シクロアルキル置換基またはＮ−アリール置換基を含み得、好ましくは、最大１０個の炭素原子を含むか、または各々が含む。Ｒ４および／またはＲ５がアルキルである場合、好ましい値は、Ｒ４およびＲ５が各々独立して、１〜６個の炭素原子を含む低級アルキル基（すなわち、メチル、エチル、プロピルなど）から選択されるような値である。Ｒ４およびＲ５は、両方メチルであり得る。Ｒ４および／またはＲ５がアリールである場合、代表的な値は、フェニルおよびトリル（ＰｈＣＨ３；ｏ）である。Ｒ４およびＲ５がシクロアルキルを表す場合、代表的な値は、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどである。一緒に結合する場合、Ｒ４およびＲ５は、代表的に、４〜６個の炭素原子の鎖を提供するアルキレン基を表し、このアルキレン基は、必要に応じて１つ以上のヘテロ原子またはヘテロ基によって介在され、例えば、５員複素環（例えば、モルホリノ、ピロリジノまたはピペリジノ）を提供する。
【０２０１】
アルキル、シクロアルキル、アルケニルおよびアリールで置換された基の値には、置換基として、問題の化合物のスルファターゼ阻害活性を妨害しない１つ以上の基を含むものが含まれる。例示的な非限定的な置換基としては、ヒドロキシ、アミノ、ハロ、アルコキシ、アルキルおよびアリールが挙げられる。
【０２０２】
いくつかの実施形態において、スルファメート基は、基Ｘ内または基Ｘ上の１つ以上の原子に縮合（または結合）することによって、環構造を形成し得る。
【０２０３】
いくつかの実施形態において、１つより多いスルファメート基が存在し得る。例として、２つのスルファメートが存在し得る（すなわち、ビススルファメート化合物）。これらの化合物がステロイド核に基づく場合、好ましくは、第二（またはさらなるものの少なくとも１つ）のスルファメート基は、このステロイド核の１７位に位置する。これらの基は、同じである必要はない。
【０２０４】
いくつかの好ましい実施形態において、Ｒ４およびＲ５のうちの少なくとも一方は、Ｈである。
【０２０５】
いくつかのさらに好ましい実施形態において、Ｒ４およびＲ５の各々が、Ｈである。
【０２０６】
（ホスホネート基）
Ｒ１がホスホネート基である場合、本発明の化合物は、ホスホネート化合物と称される。
【０２０７】
代表的に、ホスホネート基は、以下の式を有する：
（Ｒ６）−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）−Ｏ−
ここで、好ましくは、Ｒ６は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、もしくはアリール、またはこれらの組み合わせであり、ここで、アルキルまたはシクロアルキルまたはアルケニルあるいはその各々は、必要に応じて、１つ以上のヘテロ原子またはヘテロ基を含む。
【０２０８】
置換される場合、本発明のＮ置換化合物は、１つまたは２つのＮ−アルキル置換基、Ｎ−アルケニル置換基、Ｎ−シクロアルキル置換基またはＮ−アリール置換基を含み得、好ましくは、最大１０個の炭素原子を含むか、または各々が含む。Ｒ６がアルキルである場合、Ｒ６は、１〜６個の炭素原子を含む低級アルキル基（すなわち、メチル、エチル、プロピルなど）であり得る。例として、Ｒ６は、メチルであり得る。Ｒ６がアリールである場合、代表的な値は、フェニルおよびトリル（ＰｈＣＨ３；ｏ）である。Ｒ６がシクロアルキルを表す場合、代表的な値は、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどである。Ｒ６はさらに、４〜６個の炭素原子の鎖を提供するアルキレン基を含み得、このアルキレン基は、必要に応じて１つ以上のヘテロ原子またはヘテロ基によって介在され、例えば、５員複素環（例えば、モルホリノ、ピロリジノまたはピペリジノ）を提供する。
【０２０９】
アルキル、シクロアルキル、アルケニルおよびアリールで置換された基の値には、問題の化合物のスルファターゼ阻害活性を妨害しない１つ以上の基を含む基を置換基として含むものが含まれる。例示的な非限定的な置換基としては、ヒドロキシ、アミノ、ハロ、アルコキシ、アルキルおよびアリールが挙げられる。
【０２１０】
いくつかの実施形態において、ホスホネート基は、基Ｘ内または基Ｘ上の１つ以上の原子に縮合（または結合）することによって、環構造を形成し得る。
【０２１１】
いくつかの実施形態において、１つより多いホスホネート基が存在し得る。例として、２つのホスホネートが存在し得る（すなわち、ビスホスホネート化合物）。これらの化合物がステロイド核に基づく場合、好ましくは、第二（またはさらなるものの少なくとも１つ）のホスホネート基は、このステロイド核の１７位に位置する。これらの基は、同じである必要はない。
【０２１２】
（チオホスホネート基）
Ｒ１がチオホスホネート基である場合、本発明の化合物は、チオホスホネート化合物と称される。
【０２１３】
代表的に、チオホスホネート基は、以下の式：
（Ｒ７）−Ｐ（Ｓ）（ＯＨ）−Ｏ−
を有し、ここで、好ましくは、Ｒ７は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルケニルおよびアリールもしくはこれらの組み合わせであり、ここで、アルキルまたはシクロアルキルもしくはアルケニルの各々は、必要に応じて、１つ以上のヘテロ原子またはヘテロ基を含む。
【０２１４】
置換される場合、本発明のＮ置換化合物は、１つまたは２つのＮ−アルキル置換基、Ｎ−アルケニル置換基、Ｎ−シクロアルキル置換基またはＮ−アリール置換基を含み得、好ましくは、最大１０個の炭素原子を含むか、または各々が含む。Ｒ７がアルキルである場合、Ｒ７は、１〜６個の炭素原子を含む低級アルキル基（すなわち、メチル、エチル、プロピルなど）であり得る。例として、Ｒ７は、メチルであり得る。Ｒ７がアリールである場合、代表的な値は、フェニルおよびトリル（ＰｈＣＨ３；ｏ）である。Ｒ７がシクロアルキルを表す場合、代表的な値は、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどである。Ｒ７はなお、４〜６個の炭素原子の鎖を提供するアルキレン基を含み得、このアルキレン基は、必要に応じて１つ以上のヘテロ原子またはヘテロ基によって介在され、例えば、５員複素環（例えば、モルホリノ、ピロリジノまたはピペリジノ）を提供する。
【０２１５】
アルキル、シクロアルキル、アルケニルおよびアリールで置換された基の値には、置換基として、問題の化合物のスルファターゼ阻害活性を妨害しない１つ以上の基を含むものが含まれる。例示的な非限定的な置換基としては、ヒドロキシ、アミノ、ハロ、アルコキシ、アルキルおよびアリールが挙げられる。
【０２１６】
いくつかの実施形態において、チオホスホネート基は、基Ｘ内または基Ｘ上の１つ以上の原子に縮合（または結合）することによって、環構造を形成し得る。
【０２１７】
いくつかの実施形態において、１つより多いチオホスホネート基が存在し得る。例として、２つのチオホスホネートが存在し得る（すなわち、ビスチオホスホネート化合物）。これらの化合物がステロイド核に基づく場合、好ましくは、第二（またはさらなるものの少なくとも１つ）のチオホスホネート基は、このステロイド核の１７位に位置する。これらの基は、同じである必要はない。
【０２１８】
（スルホネート基）
Ｒ１がスルホネート基である場合、本発明の化合物は、スルホネート化合物と称される。
【０２１９】
代表的に、スルホネート基は、以下の式：
（Ｒ８）−Ｓ（Ｏ）（Ｏ）−Ｏ−
を有し、ここで、好ましくは、Ｒ８は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルケニルもしくはアリールまたはこれらの組み合わせであり、ここで、アルキルまたはシクロアルキルもしくはアルケニルの各々は、必要に応じて、１つ以上のヘテロ原子またはヘテロ基を含む。
【０２２０】
本発明のＮ−置換化合物は、置換したとき、１個または２個のＮ−アルキル置換基、Ｎ−アルケニル置換基、Ｎ−シクロアルキル置換基またはＮ−アリール置換基を含有し得、これらは、好ましくは、最大で１０個の炭素原子を含有するか、それぞれ、含有する。Ｒ８がアルキルであるとき、Ｒ８は、１〜６個の炭素原子を含有する低級アルキル基（すなわち、メチル、エチル、プロピルなど）であり得る。例として、Ｒ８は、メチルであり得る。Ｒ８がアリールであるとき、典型的な値は、フェニルおよびトリル（ＰｈＣＨ３；ｏ）である。Ｒ８がシクロアルキルを表わす場合、典型的な値は、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどである。Ｒ８は、同様に、４〜６個の炭素原子の鎖を提供するアルキレン基を含有し得、これらは、必要に応じて、１個またはそれ以上のヘテロ原子または基で遮断されており、例えば、５員複素環（例えば、モルホリノ、ピロリジノまたはピペリジノ）を提供する。
【０２２１】
問題の化合物のスルファターゼ阻害活性を妨害しない１個またはそれ以上の基を置換基として含有する値内で、アルキル、シクロアルキル、アルケニルおよびアリールで置換される基が含まれる。代表的な非妨害置換基には、ヒドロキシ、アミノ、ハロ、アルコキシ、アルキルおよびアリールが挙げられる。
【０２２２】
ある実施形態では、このスルホネート基は、Ｘ基中またはＸ基上にある１個またはそれ以上の原子と縮合（または会合）されることにより、環構造を形成し得る。
【０２２３】
ある実施形態では、１個より多いスルホネート基が存在し得る。例として、２個のスルホネートが存在し得る（すなわち、ビス−スルホネート化合物）。もし、これらの化合物が、ステロイド核に基づいているなら、このステロイド核の１７位に、好ましくは、第二（または少なくとも１個の追加）スルホネート基が位置している。これらの基は、同じである必要はない。
【０２２４】
（スルホネート／ホスホネート／チオホスホネート／スルファメートの組合せ）
本発明のある化合物に対して、本明細書中で定義したスルホネートまたは本明細書中で定義したホスホネートまたは本明細書中で定義したチオホスホネートまたは本明細書中で定義したスルファメートのうちの１種；および本明細書中で定義したスルホネートまたは本明細書中で定義したホスホネートまたは本明細書中で定義したチオホスホネートまたは本明細書中で定義したスルファメートのうちの他種が存在し得る。例として、本発明の化合物は、１個のスルファメート基および１個のホスホネート基を含有し得る。
【０２２５】
もし、本発明のこれらの化合物が、ステロイド核に基づいているなら、好ましくは、これらの基の他方は、このステロイド核の１７位に位置している。
【０２２６】
（ヒドロカルビル）
本明細書中で使用する「ヒドロカルビル基」との用語は、少なくともＣおよびＨを含有する基を意味し、必要に応じて、１個またはそれ以上の他の適切な置換基を含有し得る。このような置換基の例には、ハロ基、アルコキシ基、ニトロ基、アルキル基、環状基などが挙げられ得る。この置換基が環状基である可能性に加えて、置換基を組み合わせて環状基が形成され得る。もし、このヒドロカルビル基が、１個より多いＣを含有するなら、これらの炭素は、必ずしも、互いに連結される必要はない。例えば、これらの炭素の少なくとも２個は、適切な元素または基を介して、連結され得る。それゆえ、このヒドロカルビル基は、ヘテロ原子を含有し得る。適切なヘテロ原子は、当業者に明らかであり、例えば、イオウ、窒素および酸素が挙げられる。ヒドロカルビル基の非限定的な例には、アシル基がある。
【０２２７】
典型的なヒドロカルビル基は、炭化水素基である。ここで、「炭化水素」との用語は、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基（この基は、直鎖、分枝または環状であり得る）またはアリール基のいずれか１個を意味する。炭化水素との用語には、また、必要に応じて置換されたこれらの基が挙げられる。もし、この炭化水素が、その上に置換基を有する分枝構造であるなら、その置換基は、炭化水素骨格上または分枝上のいずれかにあり得る；あるいは、これらの置換基は、この炭化水素骨格上および分枝上にあり得る。
【０２２８】
（オキシヒドロカルビル）
本明細書中で使用する「オキシヒドロカルビル」基との用語は、少なくとも、Ｃ、ＨおよびＯを含有し、必要に応じて、１個またはそれ以上の他の適切な置換基を含有し得る基を意味する。このような置換基の例には、ハロ基、アルコキシ基、ニトロ基、アルキル基、環状基などが挙げられ得る。これらの置換基が環状基である可能性に加えて、置換基の組合せは、環状基を形成し得る。もし、このオキシヒドロカルビル基が、１個より多いＣを含有するなら、これらの炭素は、必ずしも、互いに結合される必要はない。例えば、これらの炭素の少なくとも２個は、適切な元素または基を介して、結合され得る。それゆえ、このオキシヒドロカルビル基は、ヘテロ原子を含有し得る。適切なヘテロ原子は、当業者に明らかであり、これには、例えば、イオウおよび窒素が挙げられる。
【０２２９】
本発明の１実施形態では、このオキシヒドロカルビル基は、オキシ炭化水素基である。
【０２３０】
本明細書中で、「オキシ炭化水素」との用語は、アルコキシ基、オキシアルケニル基、オキシアルキニル基（これらの基は、直鎖、分枝または環状であり得る）またはオキシアリール基のいずれか１種を意味する。オキシ炭化水素との用語には、また、必要に応じて置換されたこれらの基が含まれる。もし、このオキシ炭化水素が、その上に置換基を有する分枝構造であるなら、この置換は、その炭化水素骨格上または分枝上のいずれかにあり得る；あるいは、これらの置換は、この炭化水素骨格上および分枝上であり得る。
【０２３１】
典型的には、このオキシヒドロカルビル基は、式Ｃ１〜６Ｏ（例えば、Ｃ１〜３Ｏ）である。
【０２３２】
（癌細胞を使用してＳＴＳ活性を決定するアッセイ（プロトコル１））
（ＭＣＦ−７細胞でのステロイドスルファターゼ活性の阻害）
インビトロで、無傷ＭＣＦ−７ヒト乳癌細胞を使用して、ステロイドスルファターゼ活性を測定する。このホルモン依存性細胞系は、ヒト乳癌細胞の成長の制御を研究するのに、広く使用されている。それは、有意なステロイドスルファターゼ活性を有し（Ｍａｃｌｎｄｏｅら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１２３，１２８１〜１２８７（１９８８）；Ｐｕｒｏｈｉｔ  ＆  Ｒｅｅｄ，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，５０，９０１〜９０５（１９９２））、米国において、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から、また、英国において、例えば、Ｔｈｅ  Ｉｍｐｅｒｉａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｕｎｄから入手できる。
【０２３３】
細胞を、最小必須培地（ＭＥＭ）（Ｆｌｏｗ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｒｖｉｎｅ，Ｓｃｏｔｌａｎｄ）（これは、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、５％ウシ胎仔血清、２ｍＭグルタミン、非必須アミノ酸および０．０７５％重炭酸ナトリウムを含有する）で維持する。３０回まで複製して、２５ｃｍ２組織培養フラスコに、上記培地を使用して、約１×１０５個の細胞／フラスコを播種する。細胞は、８０％のコンフルーエンシーまで増殖させ、その培地は、３日ごとに交換する。
【０２３４】
ＭＣＦ−７細胞の無傷単層を、３連で２５ｃｍ２組織培養フラスコにて、アール平衡塩溶液（ＥＢＳＳ；ＩＣＮ  Ｆｌｏｗ，Ｈｉｇｈ  Ｗｙｃｏｍｂｅ，Ｕ．Ｋ．）で洗浄し、そして３７℃で、３〜４時間にわたって、無血清ＭＥＭ（２．５ｍｌ）中にて、エストロン−３−スルファメート（１１種の濃度；０；１ｆＭ；０．０１ｐＭ；０．１ｐＭ；１ｐＭ；０．０１ｎＭ；０．１ｎＭ；１ｎＭ；０．０１ｍＭ；０．１ｍＭ；１ｍＭ）と共に、５ｐｍｏｌ（７×１０５ｄｐｍ）の［６，７−３Ｈ］エストロン−３−スルフェート（比活性６０Ｃｉ／ｍｍｏｌ；Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｎｕｃｌｅａｒ，Ｂｏｓｔｏｎ，Ｍａｓｓ．，Ｕ．Ｓ．Ａ．）と共にインキュベートする。インキュベーション後、各フラスコを冷却し、その培地（１ｍｌ）を、別のチューブ（これは、［１４Ｃ］エストロン（７×１０３ｄｐｍ）（比活性９７Ｃｉ／ｍｍｏｌ；Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｒａｄｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｅｎｔｒｅ，Ａｍｅｒｓｈａｍ，Ｕ．Ｋ．）を含む）にピペットで採取する。この混合物を、トルエン（５ｍｌ）と共に、３０秒間にわたって、十分に振盪する。実験により、この処理によって、その水相から、９０％を超える［１４Ｃ］エストロンおよび０．１％未満の［３Ｈ］エストロン−３−スルフェートが取り出されることが明らかとなった。その有機相の一部（２ｍｌ）を取り出し、蒸発させ、その残留物の３Ｈおよび１４Ｃ含量を、シンチレーション分光測定により、決定する。加水分解したエストロン−３−スルフェートの質量は、得られた３Ｈのカウント（これは、使用した培地および有機相の容量ならびに添加した［１４Ｃ］エストロンの回収について、補正した）および基質の比活性から計算した。実験の各バッチは、スルファターゼ陽性ヒト胎盤（陽性対照）および細胞なしフラスコ（この基質の見かけの非酵素的加水分解を評価するために）から調製したミクロソームのインキュベーションを含む。１フラスコあたりの細胞核の数は、その細胞単層をＺａｐｏｎｉｎで処理した後、Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｃｏｕｎｔｅｒを使用して決定する。トリパンブルー排除法を使って、各バッチあたり１個のフラスコを使用して、細胞膜の状態および生存度を評価する（Ｐｈｉｌｌｉｐｓ，Ｈ．Ｊ．（１９７３）：Ｔｉｓｓｕｅ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ａｎｄ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，［編者：Ｋｒｕｓｅ，Ｄ．Ｆ．およびＰａｔｔｅｒｓｏｎ，Ｍ．Ｋ．］；４０６〜４０８ページ；Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）。
【０２３５】
ステロイドスルファターゼ活性の結果は、このインキュベーション期間（２０時間）中に形成された全生成物（エストロン＋エストラジオール）の平均±１標準偏差として表わされ、これは、エストロン−３−スルファメートを含有しないインキュベーションに対する低下（阻害）割合として、１０６個の細胞について、および統計学的有意性を示す値について、計算される。不対Ｓｔｕｄｅｎｔ  ｔ−検定を使用して、結果の統計的な有意性を試験した。
【０２３６】
（胎盤ミクロソームを使用してＳＴＳ活性を決定するアッセイ（プロトコル２））
（胎盤ミクロソームでのステロイドスルファターゼ活性の阻害）
正常な満期妊娠から得たスルファターゼ陽性ヒト胎盤をハサミで十分に細かく刻み、そして冷リン酸緩衝液（ｐＨ  ７．４、５０ｍＭ）で１回洗浄し、次いで、冷リン酸緩衝液（５ｍｌ／組織１ｇ）に再懸濁した。Ｕｌｔｒａ−Ｔｕｒｒａｘホモジナイザーを使って、氷中での２分間の冷却期間で隔てられた３回の１０秒間バースト（ｂｕｒｓｔ）を使用して、均質化を達成する。２０００ｇで３０分間遠心分離（４℃）することにより、核および細胞の細片を除去し、その上清の一部（２ｍｌ）を２０℃で保存する。これらの上清のタンパク質濃度を、Ｂｒａｄｆｏｒｄの方法（Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，７２，２４８〜２５４（１９７６））により、決定する。
【０２３７】
１００ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度、２０ｍＭ［６，７−３Ｈ］エストロン−３−スルフェートの基質濃度（比活性６０Ｃｉ／ｍｍｏｌ；Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｎｕｃｌｅａｒ，Ｂｏｓｔｏｎ，Ｍａｓｓ．，Ｕ．Ｓ．Ａ．）および３７℃で２０分間のインキュベーション時間を使用して、インキュベーション（１ｍｌ）を実行する。必要なら、以下の８種の化合物濃度を使用する；０（すなわち、対照）；０．０５ｍＭ；０．１ｍＭ；０．２ｍＭ；０．４ｍＭ；０．６ｍＭ；０．８ｍＭ；１．０ｍＭ。インキュベーション後、各試料を冷却し、その培地（１ｍｌ）を、別のチューブ（これは、［１４Ｃ］エストロン（７×１０３ｄｐｍ）（比活性９７Ｃｉ／ｍｍｏｌ；Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｒａｄｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｅｎｔｒｅ，Ａｍｅｒｓｈａｍ，Ｕ．Ｋ．）を含む）にピペットで採取した。この混合物を、トルエン（５ｍｌ）と共に、３０秒間にわたって、十分に振盪する。実験により、この処理によって、その水相から、９０％を超える［１４Ｃ］エストロンおよび０．１％未満の［３Ｈ］エストロン−３−スルフェートが取り出されることが明らかとなった。その有機相の一部（２ｍｌ）を取り出し、蒸発させ、その残留物の３Ｈおよび１４Ｃ含量を、シンチレーション分光測定により決定した。加水分解したエストロン−３−スルフェートの質量は、得られる３Ｈのカウント（これは、使用した培地および有機相の容量ならびに添加した［１４Ｃ］エストロンの回収について、補正した）および基質の比活性から計算する。
【０２３８】
（ＳＴＳ活性を決定する動物アッセイモデル（プロトコル３））
（インビボでのエストロンスルファターゼ活性の阻害）
本発明の化合物は、動物モデル（特に、卵巣切除したラット）を用いて研究され得る。このモデルでは、エストロゲン性の化合物は、子宮の成長を刺激する。
【０２３９】
この化合物（５日間にわたって、１０ｍｇ／ｋｇ／日）をラットに経口投与し、別の群の動物にビヒクルだけ（プロピレングリコール）を与える。さらなる群に、１０μｇ／日の量で５日間、化合物ＥＭＡＴＥを皮下投与した。この研究の終了時点で、肝臓組織の試料を得、以前に記述されているように（ＰＣＴ／ＧＢ９５／０２６３８を参照）、基質として３Ｈエストロンスルフェートを使用して、エストロンスルファターゼ活性をアッセイした。
【０２４０】
（エストロゲン性活性を決定する動物アッセイモデル（プロトコル４））
（インビボエストロゲン性の欠如）
本発明の化合物は、動物モデル（特に、卵巣切除したラット）を用いて研究され得る。このモデルでは、エストロゲン性の化合物は、子宮の成長を刺激する。
【０２４１】
この化合物（５日間にわたって、１０ｍｇ／ｋｇ／日）をラットに経口投与し、別の群の動物にビヒクルだけ（プロピレングリコール）を与えた。さらなる群に、１０μｇ／日の量で５日間、エストロゲン性化合物ＥＭＡＴＥを皮下投与した。この研究の終了時点で、子宮を得、秤量して、その結果を、子宮重量／全体重×１００として表した。
【０２４２】
子宮の成長に対して有意な効果がない化合物は、エストロゲン性ではない。
【０２４３】
（ＳＴＳ活性を決定する生物工学アッセイ（プロトコル５））
化合物がエストロンスルファターゼ活性を阻害する性能はまた、例えば、高処理能力スクリーンにおいて、ＳＴＳをコードするアミノ酸配列またはヌクレオチド配列、または活性断片、それらの誘導体、相同体または改変体を使用して、評価できる。
【０２４４】
適切な標的（例えば、アミノ酸配列および／またはヌクレオチド配列）の任意の１個またはそれ以上は、種々の薬物スクリーニング技術のいずれかにおいて、ＳＴＳを調節することができる薬剤を同定するのに使用され得る。このような試験で使用される標的は、溶液中で遊離し得るか、固体支持体に固着され得るか、細胞表面に保有され得るか、または細胞内に位置し得る。標的活性の消滅または標的と試験する薬剤との間での結合複合体の形成が、測定され得る。
【０２４５】
本発明のアッセイは、スクリーンであり得、それにより、多数の薬剤が試験される。１局面では、本発明のアッセイ方法は、高処理能力スクリーンである。
【０２４６】
薬物スクリーニング技術は、１９８４年９月１３日に公開されたＧｅｙｓｅｎの欧州特許出願第８４／０３５６４号で記述された方法に基づき得る。要約すると、多数の異なる小ペプチド試験化合物を、固体基質（例えば、プラスチックピンまたはある種の他の表面）で合成する。これらのペプチド試験化合物を、適切な標的またはその断片と反応させて、洗浄する。結合した要素を、次いで、例えば、当該技術分野で周知の適切に適合させた方法により、検出する。精製した標的はまた、薬物スクリーニング技術で使用するために、プレート上に直接被覆できる。あるいは、このペプチドを捕捉して固体支持体上に固定化するために、非中和抗体が使用できる。
【０２４７】
本発明はまた、競合薬物スクリーニングアッセイの使用も考慮しており、このアッセイでは、標的を結合できる中和抗体は、標的を結合する試験化合物と特異的に競合する。
【０２４８】
他のスクリーニング技術は、これらの基質に対する適切な結合親和性を有する薬剤の高処理能力スクリーニング（ＨＴＳ）を提供し、ＷＯ８４／０３５６４で詳細に記述された方法に基づいている。
【０２４９】
本発明のアッセイ方法は、試験化合物の小規模スクリーニングおよび大規模スクリーニングの両方、ならびに定量アッセイで適切であると予想される。
【０２５０】
好ましい１局面では、本発明は、ＳＴＳを選択的に調節する薬剤を同定する方法に関し、これらの化合物は、式（１ａ）を有する。
【０２５１】
（レポーター）
本発明のアッセイ方法（およびスクリーン）では、広範囲のレポーターが使用され得、好ましいレポーターは、（例えば、分光法により）便利に検出可能な信号を提供する。例として、レポーター遺伝子は、光吸収特性を変える反応を触媒する酵素をコードし得る。
【０２５２】
他のプロトコルには、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）および蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）が挙げられる。２個の非妨害エピトープと反応性のモノクローナル抗体を利用する２部位モノクローナルベース免疫測定さえ、使用され得る。これらのアッセイおよび他のアッセイは、特に、Ｈａｍｐｔｏｎ  Ｒら（１９９０，Ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，ＡＰＳ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓｔ  Ｐａｕｌ  ＭＮ）およびＭａｄｄｏｘ  ＤＥら（１９８３，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １５  ８：  １２１  １）で記述される。
【０２５３】
レポーター分子の例には、β−ガラクトシダーゼ、インベルターゼ、緑色蛍光タンパク質、ルシフェラーゼ、クロラムフェニコール、アセチルトランスフェラーゼ、グルクロニダーゼ、エキソ−グルカナーゼおよびグルコアミラーゼが挙げられるが、これらに限定されない。あるいは、放射標識または蛍光タグ標識ヌクレオチドは、新生（ｎａｓｃｅｎｔ）転写物に取り込むことができ、これは、次いで、オリゴヌクレオチドプローブに結合したとき、同定される。
【０２５４】
さらに別の例として、多数の企業（例えば、Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ），Ｐｒｏｍｅｇａ（Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）およびＵＳ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｒｐ（Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ，ＯＨ））は、アッセイ手順用の市販のキットおよびプロトコルを供給している。適切なレポーター分子または標識には、それらの放射性核種、酵素、蛍光薬剤、化学発光薬剤または色素生産薬剤、ならびに基質、補因子、インヒビター、磁性粒子などが挙げられる。このような標識の使用を教示している特許には、ＵＳ−Ａ−３８１７８３７；ＵＳ−Ａ−３８５０７５２；ＵＳ−Ａ−３９３９３５０；ＵＳ−Ａ−３９９６３４５；ＵＳ−Ａ−４２７７４３７；ＵＳ−Ａ−４２７５１４９およびＵＳ−Ａ−４３６６２４１が挙げられる。
【０２５５】
（宿主細胞）
本発明に関連した「宿主細胞」との用語は、本発明の薬剤用の標的を含有できる任意の細胞を含む。
【０２５６】
それゆえ、本発明のさらに他の実施形態は、本発明の標的であるかそれを発現するポリヌクレオチドで形質転換またはトランスフェクトされる宿主細胞を提供する。好ましくは、当該ポリヌクレオチドは、この標的であるかまたはこの標的を発現するポリヌクレオチドを複製および発現するためのベクターで運ばれる。これらの細胞は、該ベクターと適合するように選択され、例えば、原核（例えば、細菌）細胞、真菌細胞、酵母細胞または植物細胞であり得る。
【０２５７】
グラム陰性菌Ｅ．ｃｏｌｉは、異種遺伝子発現のための宿主として、広く使用されている。しかしながら、その細胞の内部には、大量の異種タンパク質が蓄積する傾向にある。時には、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞内タンパク質のバルクから所望のタンパク質を引き続いて精製することが困難であり得る。
【０２５８】
Ｅ．ｃｏｌｉとは対照的に、バシラス属に由来の細菌は、それらが培地にタンパク質を分泌する能力があるために、異種宿主として非常に適切である。宿主として適切な他の細菌には、ストレプトマイセス属およびシュードモナス属に由来のものがある。
【０２５９】
本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの性質、および／または発現したタンパク質をさらに処理することの望ましさに依存して、真核生物宿主（例えば、酵母または他の真菌）が好まれ得る。一般に、酵母細胞は、操作し易いので、真菌細胞よりも好ましい。しかしながら、ある種のタンパク質は、酵母細胞からの分泌が少ないか、ある場合には、適切にプロセシングされない（例えば、酵母での糖鎖形成過剰）かいずれかである。これらの場合には、異なる真菌宿主生物を選択すべきである。
【０２６０】
本発明の範囲内で適切な発現宿主の例には、真菌（例えば、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）種（例えば、ＥＰ−Ａ−０１８４４３８およびＥＰ−Ａ−０２８４６０３）およびトリコデルマ属（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）種）；細菌（例えば、バシラス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）種（例えば、ＥＰ−Ａ−０１３４０４８およびＥＰ−Ａ−０２５３４５５で記述されたもの）、ストレプトマイセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）種およびシュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種）；および酵母（例えば、クルイベロマイセス属（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）種（例えば、ＥＰ−Ａ−００９６４３０およびＥＰ−Ａ−０３０１６７０で記述されたもの）およびサッカロミセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）種）がある。例として、典型的な発現宿主は、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ  ｖａｒ．ｔｕｂｉｇｅｎｉｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ  ｖａｒ．ａｗａｍｏｒｉ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ａｃｕｌｅａｔｉｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｖｚａｅ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｌａｃｔｉｓおよびＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅから選択され得る。
【０２６１】
適切な宿主細胞（例えば、酵母宿主細胞、真菌宿主細胞および植物宿主細胞）の使用は、本発明の組換え発現産物上で最適な生物学的活性を与えるのに必要であり得るように、翻訳後修飾（例えば、ミリストイル化、グリコシル化、短縮、脂質化（ｌａｐｉｄａｔｉｏｎ）、およびチロシン、セリンまたはスレオニンリン酸化）を提供し得る。
【０２６２】
（生物）
本発明に関連して、「生物」との用語は、本発明による標的および／またはそれから得た産物を含有できる任意の生物を含む。生物の例には、真菌、酵母または植物が挙げられ得る。
【０２６３】
本発明に関連して、「トランスジェニック生物」との用語は、本発明による標的および／またはそれから得た産物を含有する任意の生物を含む。
【０２６４】
（宿主細胞／宿主生物の形質転換）
先に示したように、この宿主生物は、原核生物または真核生物であり得る。適切な原核生物宿主の例には、Ｅ．ｃｏｌｉおよびＢａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓが挙げられる。原核生物宿主の形質転換に関する教示は、当該技術分野でよく引証されており、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２版、１９８９，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ）およびＡｕｓｕｂｅｌら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９９５），Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．を参照のこと。
【０２６５】
原核生物宿主を使用する場合、そのヌクレオチド配列は、形質転換前に、例えば、イントロンの除去により、適切に改変される必要があり得る。
【０２６６】
他の実施形態では、このトランスジェニック生物は、酵母であり得る。このことに関して、酵母もまた、異種遺伝子発現のためのビヒクルとして、広く使用されている。Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ種は、歴史上、長く工業で使用されており、これらには、異種遺伝子発現でそれを使用することが含まれる。Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅにおける異種遺伝子の発現は、Ｇｏｏｄｅｙら（１９８７，Ｙｅａｓｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｄ  Ｒ  Ｂｅｒｒｙら著、４０１〜４２９ページ、Ａｌｌｅｎ  ａｎｄ  Ｕｎｗｉｎ，Ｌｏｎｄｏｎ）およびＫｉｎｇら（１９８９，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｙｅａｓｔｓ，Ｅ  Ｆ  ＷａｌｔｏｎおよびＧ  Ｔ  Ｙａｒｒｏｎｔｏｎ編、１０７〜１３３ページ、Ｂｌａｃｋｉｅ，Ｇｌａｓｇｏｗ）により概説されている。
【０２６７】
いくつかの理由から、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅは、異種遺伝子発現によく適している。第一に、これは、ヒトに対して非病原性であり、特定のエンドトキシンを産生できない。第二に、これは、種々の目的のために何世紀にもわたり商業的な開発がなされたのに続いて、安全に使用されてきた長い歴史を持つ。これにより、広く大衆に受け入れられている。第三に、その生物に向けられた広範な商業的利用および研究の結果、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅの遺伝学および生理学ならびに大規模発酵特性についての豊富な知識が得られている。
【０２６８】
Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅにおける異種遺伝子発現および遺伝子産物の分泌の原理の概説は、Ｅ  Ｈｉｎｃｈｃｌｉｆｆｅ  Ｅ  Ｋｅｎｎｙ（１９９３，「Ｙｅａｓｔ  ａｓ  ａ  ｖｅｈｉｃｌｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ  ｇｅｎｅｓ」、Ｙｅａｓｔｓ，５巻、Ａｎｔｈｏｎｙ  Ｈ  Ｒｏｓｅ  ａｎｄ  Ｊ  Ｓｔｕａｒｔ  Ｈａｒｒｉｓｏｎ編、２版、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  Ｌｔｄ．）により与えられる。
【０２６９】
いくつかの型の酵母ベクターが利用可能であり、これらとしては、組込みベクター（それらの維持のために、宿主ゲノムとの組換えを必要とする）および自律複製プラスミドベクターが挙げられる。
【０２７０】
トランスジェニックＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓを調製するために、酵母中での発現のために設計された構築物にヌクレオチド配列を挿入することにより、発現構築物が調製される。異種発現に使用されるいくつかの型の構築物が開発されている。これらの構築物は、このヌクレオチド配列と融合された、酵母において活性なプロモーターを含み、通常、酵母起源のプロモーター（例えば、ＧＡＬ１プロモーター）が使用される。通常、酵母起源のシグナル配列（例えば、ＳＵＣ２シグナルペプチドをコードする配列）が使用される。酵母において活性なターミネーターは、この発現系を終了させる。
【０２７１】
酵母の形質転換のために、数種の形質転換プロトコルが開発されている。例えば、本発明によるトランスジェニックＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓは、Ｈｉｎｎｅｎら（１９７８，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＵＳＡ  ７５，１９２９）；Ｂｅｇｇｓ，Ｊ  Ｄ（１９７８，Ｎａｔｕｒｅ，Ｌｏｎｄｏｎ，２７５，１０４）；およびＩｔｏ，Ｈら（１９８３，Ｊ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ  １５３，１６３〜１６８）の教示に従って調製され得る。
【０２７２】
形質転換された酵母細胞は、種々の選択マーカーを使用して選択される。形質転換に使用されるマーカーには、多数の栄養要求マーカー（例えば、ＬＥＵ２、ＨＩＳ４およびＴＲＰ１）および優性抗生物質耐性マーカー（例えば、アミノグリコシド抗生物質マーカー（例えば、Ｇ４１８））がある。
【０２７３】
別の宿主生物は、植物である。遺伝子改変植物の構築における基本原理は、挿入した遺伝物質の安定な維持を得るために、その植物ゲノムに遺伝情報を挿入することである。この遺伝情報を挿入するためのいくつかの技術が存在しており、その２つの主要な原理は、遺伝情報の直接的な導入およびベクター系を使用することによる遺伝情報の導入である。一般的な技術の概説は、Ｐｏｔｒｙｋｕｓ（Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ［１９９１］４２：２０５〜２２５）およびＣｈｒｉｓｔｏｕ（Ａｇｒｏ−Ｆｏｏｄ−Ｉｎｄｕｓｔｒｙ  Ｈｉ−Ｔｅｃｈ  Ｍａｒｃｈ／Ａｐｒｉｌ  １９９４  １７〜２７）による文献に見出され得る。植物形質転換に関するさらなる教示は、ＥＰ−Ａ−０４４９３７５に見出され得る。
【０２７４】
従って、本発明はまた、標的であるか標的を発現するヌクレオチド配列で宿主細胞を形質転換する方法を提供する。このヌクレオチド配列で形質転換された宿主細胞は、そのコードされるタンパク質の発現に適切な条件下で培養され得る。組換え細胞により産生されるタンパク質は、その細胞の表面に提示され得る。所望の場合、当業者が理解しているように、コード配列を含む発現ベクターは、特定の原核生物細胞膜または真核生物細胞膜を通しての、これらのコード配列の分泌を導くシグナル配列を用いて設計され得る。他の組換え構築物は、このコード配列を、可溶性タンパク質の精製を容易にするポリペプチドドメインをコードするヌクレオチド配列と連結し得る（Ｋｒｏｌｌ  ＤＪら（１９９３）  ＤＮＡ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  １２：４４１〜５３）。
【０２７５】
（改変体／ホモログ／誘導体）
本明細書中で言及した特定のアミノ酸配列およびヌクレオチド配列に加えて、本発明はまた、それらの改変体、ホモログおよび誘導体の使用を包含する。本明細書中では、「相同性」との用語は、「同一性」と同等とみなされ得る。
【０２７６】
本発明の関係では、相同配列は、少なくとも７５％、８５％または９０％同一であり得、好ましくは、少なくとも９５％または９８％同一であり得るアミノ酸配列を含むと見なされる。相同性はまた、類似性（すなわち、類似の化学特性／機能を有するアミノ酸残基）の点で考慮され得るが、本発明の関係では、配列同一性の点で相同性を表現することが好ましい。
【０２７７】
相同性比較は、目で見て実施され得るが、より通常は、容易に入手可能な配列比較プログラムの補助により実施され得る。これらの市販のコンピュータープログラムは、２つ以上の配列間の相同性％を算出し得る。
【０２７８】
相同性％は、連続した配列に対して算出され得る。すなわち、一方の配列は、他方の配列とアラインメントされ、一方の配列中の各アミノ酸は、１残基ごとに、他方の配列中の対応するアミノ酸と直接比較される。これは、「アンギャップド」アラインメントと呼ばれている。代表的には、このようなアンギャップドアラインメントは、比較的に少数の残基にわたってのみ、実施される。
【０２７９】
これは、非常に単純で矛盾のない方法ではあるものの、例えば、他の点では同じである一対の配列において、１個の挿入または欠失によってその後のアミノ酸残基がアラインメントから外れること（従って、潜在的に、全体的なアラインメントを実行するとき、相同性％が大きく減少する可能性があること）を考慮していない。結果的に、ほとんどの配列比較方法は、過度の全体的な相同性スコアにペナルティーを課することなく、可能な挿入および欠失を考慮する最適なアラインメントを生じるように設計されている。これは、局所的相同性を最大にするように、その配列アラインメントに「ギャップ」を挿入することにより、達成される。
【０２８０】
しかしながら、これらのさらに複雑な方法は、そのアラインメントで起こる各ギャップに対して、「ギャップペナルティー」を割り当て、その結果、同数の同じアミノ酸に対して、可能な限り少数のギャップを有する配列アラインメント（これは、２個の比較した配列間でのより高い関連性を反映している）は、多くのギャップを有するものよりも高いスコアを達成する。代表的には、「アフィンギャップコスト（Ａｆｆｉｎｅ  ｇａｐ  ｃｏｓｔ）」が、使用される。これは、ギャップの存在に対して比較的高いコストを課し、またギャップにある各連続残基に対して小さいペナルティーを課する。これは、最も一般的に使用されるギャップスコアリングシステムである。高いギャップペナルティーは、もちろん、より少ないギャップを有する最適化したアラインメントを生じる。ほとんどのアラインメントプログラムは、これらのギャップペナルティーの修正が可能である。しかしながら、配列を比較するためにこのようなソフトウェアを使用する場合、そのデフォルト値を使用するのが好ましい。例えば、ＧＣＧ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｂｅｓｔｆｉｔパッケージ（以下を参照）を使用するとき、アミノ酸配列に対するデフォルトギャップペナルティーは、１ギャップに対して−１２であり、また、各伸長に対して、−４である。
【０２８１】
従って、最大相同性％の計算には、第一に、ギャップペナルティーを考慮して、最適なアラインメントを生成する必要がある。このようなアラインメントを実行するのに適切なコンピュータープログラムは、ＧＣＧ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｂｅｓｔｆｉｔパッケージ（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｕ．Ｓ．Ａ．；Ｄｅｖｅｒｅｕｘら、１９８４，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １２：３８７）である。配列比較を実行可能な他のソフトウェアの例には、ＢＬＡＳＴパッケージ（Ａｕｓｕｂｅｌら、１９９９（同書）、１８章を参照のこと）、ＦＡＳＴＡ（Ａｔｓｃｈｕｌら、１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，４０３〜４１０を参照のこと）および比較ツールのＧＥＮＥＷＯＲＫＳパッケージソフトが挙げられるが、これらに限定されない。ＢＬＡＳＴおよびＦＡＳＴＡの両方は、オフライン検索およびオンライン検索に利用できる（Ａｕｓｕｂｅｌら、１９９９（同書）、７−５８〜７−６０頁を参照のこと）。しかしながら、ＧＣＧ  Ｂｅｓｔｆｉｔプログラムを使用するのが好ましい。
【０２８２】
さらに有用な参考は、ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｌｅｔｔ  １９９９年５月１５日；１７４（２）：２４７−５０（およびＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｌｅｔｔ  １９９９年８月１日；１７７（１）：１８７−８において公開された正誤表）に見出されるものである。
【０２８３】
最終的な相同性％は、同一性の点で測定され得るが、そのアラインメントプロセス自体は、代表的には、全てか無か（ａｌｌ  ｏｒ  ｎｏｔｈｉｎｇ）の対比較に基づいていない。その代わりに、目盛りを付けた類似性スコアマトリックスが一般に使用され、このマトリクスは、化学的類似性または進化距離に基づいて、各ペアでの比較に対してスコアを割り当てる。一般的に使用されるこのようなマトリックスの例は、ＢＬＯＳＵＭ６２マトリックス（ＢＬＡＳＴプログラムのパッケージに対するデフォルトマトリックス）である。ＧＣＧ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎプログラムは、一般に、公開されたデフォルト値またはカスタムシンボル比較表（提供されている場合）のいずれかを使用する（さらなる詳細は、ユーザー取扱マニュアルを参照のこと）。ＧＣＧパッケージについては、公開されたデフォルト値を使用するのが好ましく、または他のソフトウェアの場合、デフォルトマトリックス（例えば、ＢＬＯＳＵＭ６２）を使用するのが好ましい。
【０２８４】
一旦、このソフトウェアが最適なアラインメントを生成すると、相同性％、好ましくは、配列同一性％を計算することが可能となる。このソフトウェアは、代表的には、この配列比較の一部としてこれを行い、数値結果を作成する。
【０２８５】
これらの配列はまた、サイレントな変化を生成し、機能的に等価な物質を生じるアミノ酸残基の欠失、挿入または置換を有し得る。意図的なアミノ酸の置換は、この物質の二次的結合活性が保持されている限り、それらの残基の極性、電荷、溶解度、疎水性、親水性および／または両親媒性の類似性に基づいて、行われ得る。例えば、負に荷電したアミノ酸としては、アスパラギン酸およびグルタミン酸が挙げられる；正に荷電したアミノ酸としては、リジンおよびアルギニンが挙げられる；そして類似の親水性値を有する非荷電の極性ヘッド基を有するアミノ酸としては、ロイシン、イソロイシン、バリン、グリシン、アラニン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、フェニルアラニンおよびチロシンが挙げられる。
【０２８６】
保存的な置換は、例えば、以下の表に従って、行われ得る。第二列の同じ枠、好ましくは、第三列の同じ行にあるアミノ酸は、互いに置換され得る。
【０２８７】
【表２】
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（発現ベクター）
標的として使用されるかまたは標的を発現するためのヌクレオチド配列は、組換え複製可能ベクターに取り込まれ得る。このベクターは、適合性宿主細胞内で、および／または適合性宿主細胞からヌクレオチド配列を複製および発現するのに使用され得る。発現は、プロモーター／エンハンサーおよび他の発現調節シグナルを含む制御配列を使用して、制御され得る。原核生物プロモーター、および真核生物細胞内で機能するプロモーターが使用され得る。組織特異的プロモーターまたは刺激特異的プロモーターが使用され得る。キメラプロモーターもまた使用され得、これは、上記の２つ以上の異なるプロモーターに由来する配列エレメントを含む。
【０２８８】
このヌクレオチド配列の発現による宿主組換え細胞により産生されるタンパク質は、使用する配列および／またはベクターに依存して、分泌され得るか、または細胞内に含有され得る。コード配列は、物質をコードする配列の、特定の原核生物細胞膜または真核生物細胞膜を通じた分泌を指示するシグナル配列を用いて設計され得る。
【０２８９】
（融合タンパク質）
標的アミノ酸配列は、例えば、抽出および精製を補助するために、融合タンパク質として生成され得る。融合タンパク質パートナーの例としては、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、６×Ｈｉｓ、ＧＡＬ４（ＤＮＡ結合および／または転写活性化ドメイン）および（−ガラクトシダーゼが挙げられる。融合タンパク質配列の除去を可能にするために、その融合タンパク質パートナーと目的のタンパク質配列との間に、タンパク質分解切断部位を含ませることもまた、好都合であり得る。好ましくは、融合タンパク質は、標的の活性を妨害しない。
【０２９０】
融合タンパク質は、本発明の物質に融合した抗原または抗原性決定基を含み得る。この実施形態では、この融合タンパク質は、天然には生じない融合タンパク質であり得、免疫系の全身刺激を与えるという意味でアジュバントとして作用し得る物質を含む。抗原または抗原性決定基は、この物質のアミノ末端またはカルボキシ末端のいずれかに結合され得る。
【０２９１】
本発明の別の実施形態では、アミノ酸配列は、融合タンパク質をコードするために異種配列に連結され得る。例えば、この物質の活性に影響を与え得る薬剤についてのペプチドライブラリをスクリーニングするために、市販の抗体により認識される異種エピトープを発現するキメラ物質をコードすることが有用であり得る。
【０２９２】
（治療）
本発明の化合物は、治療剤として（すなわち、治療用途で）使用され得る。
【０２９３】
用語「治療」は、治癒効果、軽減効果および予防効果を含む。
【０２９４】
この治療は、ヒトまたは動物（好ましくは、雌性の動物）に行われ得る。
【０２９５】
（薬学的組成物）
１つの局面において、本発明は、薬学的組成物を提供する。この組成物は、本発明に従う化合物および必要に応じて、薬学的に受容可能なキャリア、希釈剤または賦形剤（それらの組合せを含む）を含有する。
【０２９６】
この薬学的組成物は、医学および獣医学の医薬においてヒトまたは動物での使用のためであり得、代表的には、薬学的に受容可能な希釈剤、キャリアまたは賦形剤の任意の１つ以上を含む。治療用途に受容可能なキャリアまたは希釈剤は、製薬分野で周知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ編  １９８５）で記載されている。薬学的キャリア、賦形剤または希釈剤の選択は、意図した投与経路および標準的な製薬慣行に関連して、選択され得る。これらの薬学的組成物は、キャリア、賦形剤または希釈剤として、またはそれらに加えて、任意の適切な結合剤、滑沢剤、懸濁剤、コーティング剤、可溶化剤を含み得る。
【０２９７】
保存剤、安定剤、色素および香料でさえ、薬学的組成物中に提供され得る。保存剤の例としては、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸およびｐ−ヒドロキシ安息香酸エステルが挙げられる。酸化防止剤および懸濁剤もまた、使用され得る。
【０２９８】
異なる送達系に依存して、異なる組成物／処方の要件が存在し得る。例として、本発明の薬学的組成物は、ミニポンプを使用して、または粘膜経路により（例えば、スプレー式点鼻薬または吸入用エアロゾルまたは経口摂取可能溶液として）、または非経口的に（ここで、この組成物は、例えば、静脈内経路、筋肉内経路または皮下経路による送達のために注射可能形態で処方される）送達されるべく処方され得る。あるいは、処方物は、両方の経路により送達されるように、設計され得る。
【０２９９】
薬剤が胃腸粘膜を通って粘膜送達されるべき場合、薬剤は、胃腸管を通過している間安定なままであり得るべきである；例えば、薬剤は、タンパク質分解に対して耐性であるべきであり、酸性ｐＨで安定であり、そして胆汁の界面活性効果に対して耐性であるべきである。
【０３００】
適切な場合、これらの薬学的組成物は、吸入により、座剤またはペッサリーの形態で、ローション剤、液剤、クリーム剤、軟膏剤もしくは粉剤の形態で表面に、皮膚パッチを使用することにより、賦形剤（例えば、デンプンまたはラクトース）を含有する錠剤の形態で経口的に、またはカプセル剤もしくは卵剤（ｏｖｕｌｅｓ）中で単独でもしくは賦形剤と混合してかのいずれかで、または香料もしくは着色剤を含有するエリキシル剤、液剤もしくは懸濁剤の形態で投与され得るか、またはそれらは、例えば、静脈内、筋肉内もしくは皮下で、非経口的に注射され得る。非経口投与のために、これらの組成物は、無菌水溶液の形態で最もよく使用され得、これは、他の物質（例えば、その溶液を血液と等張性にするのに十分な塩または単糖類）を含有し得る。頬側または舌下投与のために、これらの組成物は、従来の様式で処方され得る錠剤またはトローチ剤の形態で投与され得る。
【０３０１】
（組合せ薬物）
本発明の化合物は、１つ以上の他の活性剤（例えば、１つ以上の他の薬学的活性剤）と併用され得る。
【０３０２】
例として、本発明の化合物は、他のＳＴＳインヒビターおよび／または他のインヒビター（例えば、アロマターゼインヒビター（例えば、４ヒドロキシアンドロステンジオン（４−ＯＨＡ））および／またはステロイド（例えば、天然に存在するステルニューロステロイドデヒドロエピアンドロステロンスルフェート（ＤＨＥＡＳ））およびプレグネノロンスルフェート（ＰＳ）および／または他の構造的に類似の有機化合物）と併用され得る。他のＳＴＳインヒビターの例は、上記参考文献に見出され得る。例として、本発明で使用されるＳＴＳインヒビターとしては、ＥＭＡＴＥ、ならびに本明細書中に示される化合物５に類似するその２−エチル１７−デオキシ化合物および２−メトキシ１７−デオキシ化合物のいずれかまたは両方が挙げられる。
【０３０３】
それに加えて、またはその代わりに、本発明の化合物は、生体応答調節因子と併用され得る。
【０３０４】
用語、生体応答調節因子（「ＢＲＭ」）は、サイトカイン、免疫調節因子、成長因子、造血調節因子、コロニー刺激因子、走化因子、溶血因子および血栓溶解因子、細胞表面レセプター、リガンド、白血球接着分子、モノクローナル抗体、予防および治療ワクチン、ホルモン、細胞外マトリックス成分、フィブロネクチンなどを含む。いくつかの用途については、好ましくは、この生体応答調節因子は、サイトカインである。サイトカインの例としては、以下が挙げられる：インターロイキン（ＩＬ）、例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１９；腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、例えば、ＴＮＦ−α；インターフェロンα、βおよびγ；ＴＧＦ−β。いくつかの用途については、好ましくは、このサイトカインは、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）である。いくつかの用途については、ＴＮＦは、任意の型のＴＮＦ（例えば、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β（それらの誘導体または混合物を含む））であり得る。より好ましくは、このサイトカインは、ＴＮＦ−αである。ＴＮＦに関する教示は、当該技術分野で見られ得る（例えば、ＷＯ−Ａ−９８／０８８７０およびＷＯ−Ａ−９８／１３３４８）。
【０３０５】
（投与）
代表的には、医師は、個々の被験体に最も適切な実際の投薬量を決定し、それは、特定の患者の年齢、体重および応答により変化する。以下の投薬量は、平均的な場合の例である。もちろん、それより高いまたは低い範囲が有益な個々の例に存在し得る。
【０３０６】
本発明の組成物は、直接的な注射により、投与され得る。この組成物は、非経口投与、粘膜投与、筋肉内投与、静脈内投与、皮下投与、眼内投与または経皮投与用のために処方され得る。薬剤は、必要に応じて、０．０１〜３０ｍｇ／ｋｇ体重、例えば、０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは、０．１〜１ｍｇ／ｋｇ体重の用量で、投与され得る。
【０３０７】
さらなる例として、本発明の薬剤は、１日１〜４回、好ましくは、１日１回または２回のレジメンに従って、投与され得る。任意の特定の患者に対する具体的な用量レベルおよび投薬頻度は、変化し得、それらは、使用する特定の化合物の活性、その化合物の代謝安定性および作用期間、年齢、体重、一般的な健康状態、性別、食生活、投与様式および投与時間、排泄の速度、薬物の組合せ、特定の状態の重症度および治療を受ける宿主を含む種々の因子に基づく。
【０３０８】
代表的な送達様式（上で示したようなもの）とは別に、用語「投与される」はまた、脂質媒介トランスフェクション、リポソーム、イムノリポソーム、リポフェクチン、カチオン性表面両親媒性物質（ＣＦＡ）およびそれらの組合せのような技術による送達を含む。このような送達機構の経路には、粘膜経路、鼻内経路、経口経路、非経口経路、胃腸経路、局所経路または舌下経路が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３０９】
用語「投与される」は、粘膜経路による（例えば、スプレー式点鼻薬もしくは吸入用エアロゾルとしてまたは経口摂取可能溶液として）；非経口的経路（ここで、送達は、注射可能形態（例えば、静脈内経路、筋肉内経路または皮下経路）による）による送達が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３１０】
従って、薬剤投与については、本発明のＳＴＳインヒビターは、従来の薬剤処方技術および薬学的キャリア、補助剤、賦形剤、希釈剤などを利用する任意の適切な様式で、通常は非経口投与のために処方され得る。大体の有効投薬割合は、当該化合物の個々の活性に依存して、平均的な体重（７０ｋｇ）の患者に対して、１〜１０００ｍｇ／日、例えば、１０〜９００ｍｇ／日、または１００〜８００ｍｇ／日の範囲でさえあり得る。好ましいさらに活性が高い化合物についてのさらに通常の投薬割合は、２００〜８００ｍｇ／日、より好ましくは、２００〜５００ｍｇ／日、最も好ましくは、２００〜２５０ｍｇ／日の範囲である。それらは、単回用量レジメン、分割用量レジメンおよび／または複数用量レジメン（これは、数日にわたって続けられる）で投与され得る。経口投与のために、それらは、単位用量あたり、１００〜５００ｍｇの化合物を含有する錠剤、カプセル剤、液剤または懸濁剤で処方され得る。あるいはそして好ましくは、これらの化合物は、非経口投与のために、適切な非経口投与可能なキャリア中で処方され、これは、２００〜８００ｍｇ、好ましくは、２００〜５００ｍｇ、より好ましくは、２００〜２５０ｍｇの範囲の単回毎日投薬割合を提供する。しかしながら、このような有効毎日用量は、その活性成分の固有の活性および患者の体重に依存して変わり、このような変動は、医師の技術および判断の範囲内である。
【０３１１】
（細胞周期進行）
本発明の化合物は、細胞周期進行障害の治療方法において有用であり得る。
【０３１２】
「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」、第３版、Ｌｏｄｉｓｈら、１７７〜１８１頁で議論されているように、異なる真核細胞は、極めて異なる速度で増殖し分裂し得る。例えば、酵母細胞は、１２０分ごとに分裂し得、ウニおよび昆虫の胚性細胞における受精卵の第一分裂は、１５３０分間しかかからない。なぜならば、１個の大きな既存細胞が細分されるからである。しかしながら、大部分の増殖中の植物細胞および動物細胞は、数が２倍になるのに１０〜２０時間かかり、一部のものは、ずっと遅い速度で複製する。成体における多くの細胞（例えば、神経細胞および横紋筋細胞）は、全く分裂しない；創傷の治癒を助ける線維芽細胞のような他のものは、要求に応じて増殖するが、そうでなければ、静止している。
【０３１３】
さらに、分裂するあらゆる真核細胞は、２個の娘細胞に同じ遺伝物質を供与する準備ができていなければならない。真核生物でのＤＮＡ合成は、この細胞分裂周期を通して起こるのではなく、細胞分裂前のその一部に制限される。
【０３１４】
真核ＤＮＡ合成と細胞分裂との間の関係は、増殖および分裂が全て可能な哺乳動物細胞の培養において、十分に分析されている。細菌とは対照的に、真核細胞は、ＤＮＡ合成においてその時間の一部しか費やさず、そしてそれは、細胞分裂（有糸分裂）の何時間も前に完了することが見出された。従って、ＤＮＡ合成後および細胞分裂前に、時間のギャップが生じる；他のギャップは、分裂後および次回のＤＮＡ合成の前で起こることが見出された。この分析により、真核細胞周期は、Ｍ（有糸分裂）期、Ｇ１期（第一ギャップ）、Ｓ（ＤＮＡ合成）期、Ｇ２期（第二ギャップ）からなり、そしてＭ期に戻ると結論付けられた。有糸分裂の間の期（Ｇ１、ＳおよびＧ２）は、総称して、間期として知られている。
【０３１５】
組織中の多くの非分裂細胞（例えば、全ての静止線維芽細胞）は、有糸分裂の後でかつＤＮＡ合成の直前で周期を停止している；このような「休止」細胞は、細胞周期から出ていて、Ｇ０状態にあるといわれる。
【０３１６】
細胞が、細胞周期の３つの間期段階のうちの１つにある場合、蛍光活性化セルソータ（ＦＡＣＳ）を用いて細胞の相対ＤＮＡ含有量を測定することによって、細胞を同定することが可能である：Ｇ１（ＤＮＡ合成前）にある細胞は、規定された量ｘのＤＮＡを有する；Ｓ（ＤＮＡ複製）の間、細胞は、ｘと２ｘとの間を有する；そしてＧ２（またはＭ）にある場合、細胞は２ｘのＤＮＡを有する。
【０３１７】
動物細胞における有糸分裂および細胞質分裂の段階は以下の通りである。
【０３１８】
（ａ）間期。間期のＧ２期は、有糸分裂の開始の直前にある。染色体ＤＮＡは、Ｓ期の間に複製されタンパク質に結合しているが、染色体は、まだ、明確な構造体には見えない。核小体は、光学顕微鏡下で可視である、唯一の核下部構造である。ＤＮＡ複製前の２倍体細胞では、各々の型の２つの形態学的染色体が存在し、そしてこの細胞は、２ｎであるといわれる。Ｇ２では、ＤＮＡ複製後、この細胞は４ｎである。４コピーの各染色体ＤＮＡが存在する。この姉妹染色体は、互いに未だに分離されていないので、これらは、姉妹染色分体と呼ばれる。
【０３１９】
ｂ）初期前期。中心小体（各々、新たに形成された娘中心小体を有する）は、細胞の反対の局に向かって移動し始める；この染色体は、長い糸として見られ得る。核膜は、小さな小胞へと脱凝集し始める。
【０３２０】
（ｃ）中期前期および後期前期。染色体凝縮が完了する；各可視の染色体構造は、それらの動原体によって一緒に支持されている、２つの染色分体から構成される。各染色分体は、新たに複製された２つの娘ＤＮＡ分子のうちの１つを含む。微小管紡錘体は、中心小体にまさに隣接する領域から放射状に広がり始め、これらは、それらの極により近くなるように移動する。いくつかの紡錘体線維は、極から極に到達する；大部分は、染色分体に行き、そして動原体で結合する。
【０３２１】
（ｄ）中期。これらの染色体は細胞の赤道に向かって移動し、赤道でこれらは赤道面に整列されるようになる。姉妹染色分体は、まだ別れていない。
【０３２２】
（ｅ）後期。これらの２つの姉妹染色分体は、独立した染色体に分かれる。各々は、紡錘体線維によって１つの極に連結された動原体を含み、この極に向かってこれらは移動する。従って、１コピーの各染色体は、各娘細胞に与えられる。同時に、この細胞は、極から極へと紡錘体が伸長するように伸長する。切断溝が形成され始めるにつれ、細胞質分裂が始まる。
【０３２３】
（ｆ）終期。新たな膜が娘核の周囲に形成される；この染色体はほどけ、そしてあまりはっきりしなくなり、核小体が再度見えるようになり、そして核膜が各娘核の周囲に形成される。細胞質分裂はほぼ完全であり、そして微小管および他の線維が脱重合するにつれ、紡錘体は消失する。有糸分裂全体を通して、各極での「娘」中心小体が、全長になるまで成長する。終期には、もともとの中心小体の各々の重複が完了し、そして新たな娘中心小体が次の間期の間に生成される。
【０３２４】
（ｇ）間期。細胞質分裂の完了の際に、この細胞は、細胞周期のＧ１期に入り、そして再度この周期を回り始める。
【０３２５】
細胞周期進行（ｃｅｌｌ  ｃｙｃｌｉｎｇ）が極めて重要な細胞プロセスであることが認識される。正常な細胞周期進行からの逸脱は、多数の医学的障害をもたらし得る。増大したおよび／または無制限の細胞周期進行は、癌をもたらし得る。減少した細胞周期進行は、変性状態をもたらし得る。本発明の化合物の使用は、このような障害および状態を処置する手段を提供し得る。
【０３２６】
従って、本発明の化合物は、細胞周期進行障害（例えば、ホルモン依存性およびホルモン独立性癌を包含する、癌）の処置において使用するために適切であり得る。
【０３２７】
さらに、本発明の化合物は、癌（例えば、乳癌、卵巣癌、子宮内膜癌、肉腫、黒色腫、前立腺癌、膵臓癌などおよび他の固形腫瘍）の処置に適切であり得る。
【０３２８】
いくつかの適用について、細胞周期進行は、阻害および／または妨害および／または阻止され、好ましくは、ここで、細胞周期進行が妨害および／または阻止される。１つの局面では、細胞周期進行は、Ｇ２／Ｍ期において阻害および／または妨害および／または阻止され得る。１つの局面では、細胞周期進行は、不可逆的に妨害および／または阻害および／または阻止され得、好ましくは、ここで、細胞周期進行は、不可逆的に妨害および／または阻止される。
【０３２９】
用語「不可逆的に妨害および／または阻害および／または阻止される」によって、本発明の化合物の適用後、この化合物が除去されたとき、この化合物の効果（すなわち、細胞周期進行の妨害および／または阻害および／または阻止）が依然として観察可能であることを意味する。より詳細には、用語「不可逆的に妨害および／または阻害および／または阻止される」によって、本明細書中に提示される細胞周期進行アッセイプロトコルに従ってアッセイされた場合、目的の化合物で処理された細胞が、プロトコルＩの第２段階後に、コントロール細胞よりも少ない増殖を示すことを意味する。このプロトコルについての詳細を以下に示す。
【０３３０】
従って、本発明は、以下の化合物を提供する：細胞周期進行を妨害および／または阻害および／または阻止することによって、エストロゲンレセプターポジティブ（ＥＲ＋）およびＥＲネガティブ（ＥＲ−）乳癌細胞の増殖の阻害をインビトロで引き起こす；ならびに／あるいはインタクトな（すなわち、卵巣摘出されていない）動物におけるニトロソ−メチルウレア（ＮＭＵ）誘発性乳腺癌の後退、あるいは／または癌細胞における細胞周期進行の妨害および／または阻害および／または阻止を引き起こす；ならびに／あるいは細胞周期進行を妨害および／または阻害および／または阻止することによってインビボで作用するか、あるいは／または細胞周期進行アゴニストとして作用する。
【０３３１】
（細胞周期進行アッセイ（プロトコル６））
（手順）
（第１段階）
ＭＣＦ−７乳癌細胞を、１０５細胞／ウェルの密度でマルチウェル培養プレートに播種する。細胞を、約３０％コンフルエントになるまで結合および増殖させた。この時点で以下の通りに処理する：
コントロール−処理なし；
目的の化合物（ＣＯＩ）２０μＭ。
【０３３２】
細胞を、培地／ＣＯＩを３日毎に交換しながら、ＣＯＩを含む増殖培地中で６日間増殖させる。この期間の最後に、Ｃｏｕｌｔｅｒ細胞計数器を用いて細胞数を計数した。
【０３３３】
（第２段階）
ＣＯＩを用いた６日間にわたる細胞の処理後、細胞を１０４細胞／ウェルの密度で再度播種する。さらなる処理を加えない。細胞を、増殖培地の存在下で、さらに６日間にわたって増殖させ続ける。この期間の最後に、細胞数を再度計数する。
【０３３４】
（癌細胞を用いてＤＨ活性を決定するためのアッセイ（プロトコル７））
エストロンのエストラジオールへの転換（Ｅ１→Ｅ２，Ｅ２ＤＨ  Ｉ型）およびエストラジオールのエストロンへの転換（Ｅ２→Ｅ１，Ｅ２ＤＨ  ＩＩ型）を、それぞれ、Ｔ４７Ｄ乳癌細胞およびＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳癌細胞のインタクトな細胞単層において測定した。細胞が８０〜９０％コンフルエントになるまで、細胞をフラスコ中で培養した。３Ｈ−Ｅ１または３Ｈ−Ｅ２（６ｐｍｏｌ、約９０Ｃｉ／ｍｍｏｌ）を、２．５ｍ１の培地中で、種々の試験化合物の非存在下（コントロール）または種々の試験化合物（１０μＭ）の存在下の各フラスコに添加した。基質をまた、細胞を含まないフラスコに添加し、並行してインキュベートした（ブランク）。
【０３３５】
３７℃での、３０分間にわたるＴ４７Ｄ細胞を用いたインキュベーションまたは３時間にわたるＭＤＡ細胞を用いたインキュベーションの後、２ｍｌの培地を、それぞれ、１４Ｃ−Ｅ２または１４Ｃ−Ｅ１（約５０００ｃｐｍ）および５０μｇのＥ２またはＥ１を含む試験管に添加した。ステロイドを、ジエチルエーテル（４ｍｌ）を用いて水性媒体から抽出した。水相を固体二酸化炭素−メタノール混合物中で凍結した後、エーテル相を、別個の管にデカントした。エーテルを、４０℃にて空気流れ下でエバポレートして乾固させた。残渣を小容量のジエチルエーテル中に溶解し、そして蛍光インジケーターを含むＴＬＣプレートに適用した。Ｅ１およびＥ２を、ＤＣＭ−酢酸エチル（４：１  ｖ／ｖ）を用いるＴＬＣによって分離した。各インキュベーションフラスコ由来の生成物の位置を、ＵＶ光下での可視化後、ＴＬＣプレート上でマークした。マークした領域を切り出し、そしてメタノール（０．５ｍｌ）を含むシンチレーションバイアル中に配置して生成物を溶出させた。形成された３Ｈ−生成物および回収された１４Ｃ−Ｅ１または１４Ｃ−Ｅ２の量を、シンチレーション分光光度法の後に算出した。形成された生成物の量を、手順による喪失および各フラスコ中の細胞数と相関させた。
【０３３６】
（癌）
示したように、本発明の化合物は、細胞周期進行障害の処置において有用であり得る。特定の細胞周期進行障害は癌である。
【０３３７】
癌は、大部分の西洋諸国における主な死因のままである。これまでに開発された癌治療は、ホルモンの作用または合成をブロックして、ホルモン依存性腫瘍の増殖を阻害することを含んでいた。しかし、より攻撃的化学療法が、ホルモン依存性腫瘍の処置のために現在用いられている。
【０３３８】
それゆえ、ホルモン依存性腫瘍および／またはホルモン非依存性腫瘍の抗癌処置のための薬剤の開発は、化学療法に関連したいくつかまたは全ての副作用を欠いているとはいえ、主な治療的進歩を表す。
【０３３９】
エストロゲンが、それらの合成後に多数の水酸化および結合体化反応を受けることが公知である。近年まで、このような反応は、エストロゲンを最終的に水溶性にし、身体からのそれらの除去を増強する代謝プロセスの一部であると考えられた。いくつかのヒドロキシ代謝産物（例えば、２−ヒドロキシおよび１６α−ヒドロキシ）および結合体（例えば、エストロンスルフェート、Ｅ１Ｓ）が、エストロゲンが身体中で有する複雑な作用のうちのいくつかを決定する際に重要であることが現在明らかである。
【０３４０】
研究者らは、２−ヒドロキシル化エストロゲンおよび１６−ヒドロキシル化エストロゲンの形成を、乳癌の危険性を変更する状態に関して調査した。現在、２−ヒドロキシラーゼ活性を増大させる因子が、癌の危険性の低減に関連するが、１６α−水酸化を増大させる因子は、乳癌の危険性を高め得るという証拠が存在する。エストロゲン代謝産物の生物学的役割におけるさらなる関心が、２−メトキシエストラジオールが、抗有糸分裂特性を有する内因性代謝産物であるというますます増加する証拠によって、刺激されている。２−ＭｅＯＥ２は、カテコールエストロゲンメチルトランスフェラーゼによって２−ヒドロキシエストラジオール（２−ＯＨＥ２）から形成される。カテコールエストロゲンメチルトランスフェラーゼは、身体全体に広範に分布する酵素である。
【０３４１】
研究者らは、インビボでの２−ＭｅＯＥ２が、Ｍｅｔｈ  Ａ肉腫、Ｂ１６黒色腫またはＭＤＡ−ＭＢ−４３５エストロゲンレセプターネガティブ（ＥＲ−）乳癌細胞の皮下注射によって生じた腫瘍の増殖を阻害することを示した。これはまた、内皮細胞の増殖および移動、ならびにインビトロでの脈管形成を阻害する。２−ＭｅＯＥ２が腫瘍増殖をインビボで阻害する能力が、腫瘍細胞増殖の直接的阻害というよりも、腫瘍誘発性脈管形成を阻害するその能力に起因し得るということが示唆された。
【０３４２】
２−ＭｅＯＥ２がその潜在的抗有糸分裂効果および抗脈管形成効果を発揮する機構は、依然として解明されていない。高濃度では、これが、微小管重合を阻害し得、そしてチューブリンに対するコルヒチン結合の弱いインヒビターとして作用し得るという証拠が存在する。しかし、近年、有糸分裂をブロックする濃度では、細胞内のチューブリンフィラメントは、脱重合されるとは見出されなかったが、タキソール（ｔａｘｏｌ）処理後に見られる形態と同一の形態を有することが見出された。それゆえ、乳癌治療および卵巣乳癌（ｏｖａｒｉａｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ）治療のために用いられる薬物であるタキソールと同様に、２−ＭｅＯＥ２が、微小管動力学を安定化することによって作用することが可能である。
【０３４３】
２−ＭｅＯＥ２が癌のための新たな処置と同定されたことは重要な進歩を表すが、経口投与されたエストロゲンのバイオアベイラビリティは乏しい。さらに、これらは、肝臓を通してのそれらの最初の通過の間に、相当の代謝を受け得る。乳癌治療のためのステロイドスルファターゼインヒビターを開発する研究プログラムの一部として、エストロン−３−Ｏ−スルファメート（ＥＭＡＴＥ）は、強力な活性部位特異的インヒビターと同定された。予想外なことに、ＥＭＡＴＥは、強力なエストロゲン特性を保有することが証明され、ラットにおけるその経口子宮栄養活性は、エストラジオールの１００倍高かった。その増強されたエストロゲン性は、肝臓を通るその通過の間の不活化から保護しかつ長期間にわたるその徐放のためのレザバとして作用する赤血球（ｒｂｃｓ）によるその吸収から生じると考えられる。２−メトキシエストロン−３−Ｏ−スルファメートを含め、多数のＡ環改変アナログを合成され、そして試験した。この化合物は、ステロイドスルファターゼインヒビターとしてＥＭＡＴＥと同等に強力であったが、この化合物は、エストロゲン性がなかった。
【０３４４】
本発明者らは、本発明の化合物は、癌（特に、乳癌）の処置のための手段を提供すると考える。
【０３４５】
さらに、またはその代わりに、本発明の化合物は、癌（白血病および固形腫瘍（例えば、胸部腫瘍、子宮内膜腫瘍、前立腺腫瘍、卵巣腫瘍および膵臓腫瘍）を包含する）の増殖をブロックする際に有用であり得る。
【０３４６】
（エストロゲンに関する治療）
本発明者らは、本発明の化合物のうちのいくつかは、（特に女性の）身体におけるエストロゲンレベルの制御において有用であり得ると考える。従って、これらの化合物のいくつかは、受精能制御手段（例えば、経口避妊用の錠剤、丸剤、液剤または菓子錠剤）を提供するので有用であり得る。あるいは、この化合物は、移植物の形態またはパッチとして存在し得る。
【０３４７】
従って、本発明の化合物は、エストロゲンに関連したホルモン状態を処置する際に有用であり得る。
【０３４８】
さらに、またはその代わりに、本発明の化合物は、エストロゲンに関連した状態に加えて、ホルモン状態を処置する際に有用であり得る。それゆえ、本発明の化合物はまた、ホルモン活性に影響を与え得、そしてまた免疫応答に影響を与え得る。
【０３４９】
（神経変性疾患）
本発明者らは、本発明の化合物のいくつかは、神経変性疾患および同様の状態の処置において有用であり得ると考える。
【０３５０】
例として、ＳＴＳインヒビターは、病気（例えば、健忘症、頭部損傷、アルツハイマー病、癲癇性痴呆、初老期痴呆、外傷後痴呆、老年痴呆、脈管痴呆および発作後痴呆）に罹患している患者または他の点で記憶増強を望む個体の記憶機能を増強する際に有用であり得ると考えられる。
【０３５１】
（ＴＨ１）
本発明者らは、本発明の化合物のいくつかは、ＴＨ１関連において有用であり得ると考える。
【０３５２】
例として、マクロファージまたは他の抗原提示細胞内でのＳＴＳインヒビターの存在は、感作Ｔ細胞がＴＨ１（高ＩＬ−２、ＩＦＮγ低ＩＬ−４）応答を高める能力の低下をもたらし得ると考えられる。それゆえ、他のステロイド（例えば、グルココルチコイド）の正常な調節の影響が優勢である。
【０３５３】
（炎症状態）
本発明者らは、本発明の化合物のいくつかが、炎症状態（例えば、自己免疫（例えば、慢性関節リウマチを包含する）、Ｉ型およびＩＩ型糖尿病、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、重症筋無力症、甲状腺炎、脈管炎、潰瘍性大腸炎およびクローン病、皮膚障害（例えば、乾癬および接触皮膚炎）；移植片対宿主病；湿疹；喘息および移植後の器官拒絶のうちのいずれか１つ以上に関連した状態）を処置する際に有用であり得ると考える。
【０３５４】
例として、ＳＴＳインヒビターが、免疫応答および／または炎症応答に対するＤＨＥＡまたは関連のステロイドの正常な生理学的影響を防止し得ると考えられる。
【０３５５】
本発明の化合物は、内因性グルココルチコイド様効果を示すための医薬の製造において有用であり得る。
【０３５６】
（その他の処置）
本発明の化合物／組成物は、他の重要な医療的意味を有し得ることもまた、理解される。
【０３５７】
例えば、本発明の化合物または組成物は、ＷＯ−Ａ−９９／５２８９０の全体に渡って列挙された障害の処置に有用であり得る：
さらに、またはその代わりに、本発明の化合物もしくは組成物は、ＷＯ−Ａ−９８／０５６３５に列挙された障害の処置に有用であり得る。参照を容易にするため、リストの一部分がここで提供される：癌、炎症または炎症性疾患、皮膚障害、発熱、心血管の影響、出血、凝固および急性期応答、悪液質、節食障害、急性感染、ＨＩＶ感染、ショック状態、移植片対宿主反応、自己免疫疾患、再潅流傷害、髄膜炎、偏頭痛およびアスピリン依存性抗血栓症；腫瘍の増殖、浸潤および拡散、血管新生、転移、悪性、腹水および悪性胸水；脳虚血、虚血性心疾患、変形関節炎、関節リウマチ、骨粗鬆症、喘息、多発性硬化症、神経変性症、アルツハイマー病、アステローム性動脈硬化症、脳卒中、血管炎、クローン病および潰瘍性大腸炎；歯周病、歯肉炎；乾癬、アトピー性皮膚炎、慢性潰瘍、表皮水泡症；角膜潰瘍形成（ｃｏｒｎｅａｌ  ｕｌｃｅｒａｔｉｏｎ）、網膜症および手術創傷治癒；鼻炎、アレルギー性結膜炎、湿疹、アナフィラキシー；再狭窄、うっ血性心不全、子宮内膜症、アテローム性動脈硬化症または内硬化症（ｅｎｄｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）。
【０３５８】
さらに、またはその代わりに、本発明の化合物もしくは組成物は、ＷＯ−Ａ−９８／０７８５９に列挙された疾患の処置に有用であり得る。参照を容易にするため、リストの一部分がここで提供される：サイトカインおよび細胞増殖／分化活性；免疫抑制剤または免疫賦活剤の活性（例えばヒト免疫不全ウィルスへの感染；リンパ球増殖の調節；癌および多くの自己免疫疾患の処置ならびに移植拒絶の防止、または腫瘍免疫誘導を含む免疫不全の処置のための）；造血の調節（例えば骨髄球性またはリンパ球性疾患の処置）；骨、軟骨、腱、靭帯、および神経組織の成長の促進（例えば創傷治癒、火傷、潰瘍および歯周病の処置、ならびに神経変性のための）；卵胞刺激ホルモンの抑制または活性化（受胎能の変調）；化学走性／ケモキネシス活性（例えば傷害または感染部位への特定の細胞型の動員のための）；止血活性および血栓溶解活性（例えば血友病および脳卒中の処置のための）；抗炎症活性（例えば敗血性ショックまたはクローン病の処置のための）；抗菌剤として；例えば代謝または行動の修飾因子；鎮痛薬として；特定の欠乏性障害の処置；例えば人間または獣医学における乾癬の処置において。
【０３５９】
さらに、またはその代わりに、本発明の化合物は、ＷＯ−Ａ−９８／０９９８５に列挙された障害の処置に有用であり得る。参照を容易にするため、リストの一部分がここで提供される：マクロファージ抑制および／またはＴ細胞抑制活性、ならびに従って、抗炎症活性；抗免疫活性、すなわち、炎症に関連しない応答を含む細胞性および／または体液性免疫応答に対する抑制作用；細胞外マトリックス成分およびフィブロネクチンに接着するマクロファージおよびＴ細胞の能力、ならびにＴ細胞におけるアップレギュレートされたｆａｓレセプターの発現の阻害；以下を含む不必要な免疫応答ならびに炎症の阻害；関節炎（関節リウマチを含む）、過敏症に付随する炎症、アレルギー反応、喘息、全身性エリテマトーデス、膠原病およびその他の自己免疫性疾患、アテローム性動脈硬化症に付随する炎症、アテローム性動脈硬化症、アテローム硬化性心疾患、再潅流傷害、心不全、心筋梗塞、血管炎症性疾患、呼吸窮迫症候群または他の心肺疾患、消化性潰瘍に付随する炎症、潰瘍性大腸炎、および他の消化管疾患、肝繊維症、アルコール性肝硬変または他の肝疾患、甲状腺炎または他の腺性疾患、子宮体腎炎または他の腎性障害および泌尿器障害、耳炎または他の耳鼻咽喉科疾患、皮膚炎または他の皮膚疾患、歯周病または他の歯科疾患、睾丸炎または精巣上体炎、不妊、睾丸外傷または他の免疫関連精巣疾患、胎盤機能不全（ｐｌａｃｅｎｔａｌ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ）、胎盤機能不全（ｐｌａｃｅｎｔａｌ  ｉｎｓｕｆｆｉｃｉｅｎｃｙ）、習慣性流産、子癇、前子癇ならびに他の免疫および／または炎症に関連する婦人科疾患、後部ブドウ膜炎、中間ブドウ膜炎、前部ブドウ膜炎、結膜炎、脈絡網膜炎、ブドウ膜強膜炎、視神経炎、眼内炎症（例えば、網膜炎または類嚢胞様黄斑水腫）、交換性眼炎、強膜炎、網膜色素変性症、変性眼底疾患の免疫成分および炎症性成分、眼外傷の炎症性成分、感染によって引き起こされた眼球炎、増殖性硝子体網膜症、急性虚血性視神経症、過度の瘢痕（例えば、緑内障の濾過操作に伴う）、眼球移植に対する免疫反応および／または炎症反応、ならびに他の免疫および炎症に関連する眼科疾患、中枢神経系（ＣＮＳ）においてまたは他の任意器官においての両方で、免疫および／または炎症の抑制が有益である、自己免疫疾患または自己免疫状態または自己免疫障害に関連する炎症、パーキンソン病、パーキンソン病の処置からの合併症および／または副作用、ＡＩＤＳ関連痴呆複合ＨＩＶ関連脳症、ドヴィック病、シドナム舞踏病、アルツハイマー病および他のＣＮＳの変性疾患、変性状態、変性障害、脳卒中の炎症性成分、後灰白質症候群、精神医学の免疫成分および炎症性成分、骨髄炎、脳炎、亜急性硬化性前脳炎、脳脊髄瘤、急性神経障害、亜急性神経障害、慢性神経障害、ギランバレー症候群、シドナム舞踏病、重症筋無力症、偽性大脳腫瘍、ダウン症候群、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、ＣＮＳの圧迫またはＣＮＳ外傷またはＣＮＳの感染の炎症性成分、筋萎縮症およびジストロフィーの炎症性成分、ならびに、中枢神経系および抹消神経系の免疫および炎症関連疾患、免疫および炎症関連状態または免疫および炎症関連傷害、外傷後の炎症、敗血性ショック��感染症、手術の炎症性合併症または副作用、骨髄移植または他の移植の合併症および／または副作用、体液性および／または細胞性の免疫応答の抑制もしくは阻害のため、または単球もしくはリンパ球の量を減らすことによる単球もしくは白血球の増殖性疾患（例えば白血病）の処置もしくは改善のため、角膜、骨髄、器官、レンズ、ペースメーカー、天然もしくは人工の皮膚組織のような天然もしくは人工の細胞、組織および／または器官の移植の場合の移植片拒絶の予防および／または処置のための、遺伝子治療の炎症性および／または免疫性の合併症および副作用（例えば、ウィルスキャリアでの感染、またはＡＩＤＳに関連する炎症に起因する）。
【０３６０】
（スルファメート化合物調製）
本発明のスルファメート化合物は、適切なアルコールと、適切なクロリドとを反応させることにより調製され得る。例示によって、本発明のスルファメート化合物は、適切なアルコールと、式Ｒ４Ｒ５ＮＳＯ２Ｃｌの適切なスルファモイルクロリドと反応させることにより調製され得る。
【０３６１】
反応を実施するための代表的条件は、以下の通りである。
【０３６２】
水素化ナトリウムおよびスルファモイルクロリドを、０℃にて無水ジメチルホルムアミド中のアルコール攪拌溶液に添加する。その後、反応系を室温まで加温し、その後に、攪拌を、さらに２４時間続ける。反応混合物を、炭酸水素ナトリウムの冷飽和溶液に注ぎ、得られた水相を、ジクロロメタンで抽出する。合わせた有機抽出物を、無水ＭｇＳＯ４で乾燥する。濾過後の減圧下での溶媒エバポレーションおよびトルエンとの同時エバポレーションにより、粗製残渣が得られ、これをさらに、フラッシュクロマトグラフィーにより精製する。
【０３６３】
好ましくは、そのアルコールは、適切な場合、スルファモイルクロリドとの反応前に誘導体化される。必要な場合、アルコールにおける官能基は、既知の様式にて保護され得、保護基は、反応の最後に除去され得る。
【０３６４】
好ましくは、そのスルフェート化合物は、Ｐａｇｅら（１９９０  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ４６；２０５９−２０６８）の教示に従って調製される。
【０３６５】
ホスホネート化合物は、Ｐａｇｅら（１９９０  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ４６；２０５９−２０６８）およびＰＣＴ／ＧＢ９２／０１５８６の教示を適切に組み合わせることによって調製され得る。
【０３６６】
スルホネート化合物は、Ｐａｇｅら（１９９０  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ４６；２０５９−２０６８）およびＰＣＴ／ＧＢ９２／０１５８６の教示を適切に適合させることにより調製され得る。
【０３６７】
チオホスホネート化合物は、Ｐａｇｅら（１９９０  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ４６；２０５９−２０６８）およびＰＣＴ／ＧＢ９１／００２７０の教示を適切に適合させることにより調製され得る。
【０３６８】
好ましい調製はまた、以下の本文中に提示される。
【０３６９】
（要旨）
まとめると、本発明は、ステロイドスルファターゼインヒビターおよび／またはステロイドデヒドロゲナーゼインヒビターとして使用するための化合物、ならびにそれについての薬学的組成物を提供する。
【実施例】
【０３７０】
本発明は、ここで例示によってのみ記載される。
【０３７１】
（実施例）
多くの化合物のＥ１Ｓ→Ｅ１の阻害を、研究した。阻害の程度を、本明細書中に規定されるプロトコルに従って決定した。得られたデータを、以下の表１の形態にて示す。各アッセイにおいて、Ｃｏｕｍａｔｅ  ６６７もまた、コントロールとして実行した。この化合物の対応する阻害の程度もまた、示す。
【０３７２】
【表３】
2005506359.tif 000043
2005506359.tif 000044
2005506359.tif 000045
2005506359.tif 000046
2005506359.tif 000047
本発明に従うさらなる化合物および本明細書中で参照される化合物の構造を、以下に示す。
【０３７３】
【表４】
2005506359.tif 000048
2005506359.tif 000049
2005506359.tif 000050
2005506359.tif 000051
本発明に従うさらなる化合物を合成し、生物学的データを、以下の研究において得た。
【０３７４】
（さらなる研究）
ＳＴＳインヒビターとＨＳＤインヒビター（およびいくつかの局面の抗エストロゲンにおいて）の両方の特徴を併せ持つ分子もまた、開発した。アルキルアミド側鎖が、エストロゲンレセプター活性化をブロックし得る２３という事実を信頼して、１７β−（Ｎ−アルキルカルバモイル）側鎖および１７β−（Ｎ−アルカノイル）側鎖を有するエストラジオールの３−Ｏ−スルファメート誘導体を、合成した２４。そのアルキル基／アルカノイル基を、酵素に対する親和性を増大し、ステロイドの発情原性を低下するべき膜挿入領域として設計する。これらの新規分子は、ＨＤＢＣの処置の潜在的治療剤であることを示す。なぜなら、ヘプチルアナログ１および２（下記）の活性は、エストロンスルファターゼの阻害に関して、発情原性であること以外は、ＥＭＡＴＥの活性と類似していることがわかったからである。
【０３７５】
【化４６】
2005506359.tif 000052
Ｎ−アルキルカルバモイル側鎖を有するエストロンの３−Ｏ−スルファメート−Ｃ１７−誘導体の構造
ＳＴＳの領域における研究により、いくつかの非常に強力なインヒビターが生成された（そのうちの１つは、臨床試験（ｃｌｉｎｉｑｕｅ）に入っている）が、１７β−ＨＳＤインヒビター設計は、なお開発のための準備がさらに整った分野である。本発明者らの知見の限りでは、１６α−（ブロモプロピル）−エストラジオールは、１７β−ＨＳＤ  １型の最も強力なインヒビターであり、このことは、ステロイド骨格のＤ環が、酵素による構造認識において大きな役割を果たし得ることを示唆する。しかし、１６α−（ブロモプロピル）−エストラジオールは、発情原性であり、その発情原性を減少させる試みの大部分は、失敗したか、またはその活性の減少を生じた。
【０３７６】
アゴニスト活性がないが、抗発情性活性を保有する、強力な１７β−ＨＳＤ  １型インヒビターは、ＨＤＢＣの処置のための新規な型の薬剤である。なぜなら、このインヒビターは、エストロゲン合成およびエストロゲン作用の二重サプレッサとして作用するからである。従って、このような薬剤を開発する試みが、非発情原性特性または抗発情原性特性の誘導を補助するいくつかの特定の改変の付加を有する３（または４）の構造的特徴に焦点を合わせ得ると提唱される。
【０３７７】
エストロゲンレセプターについての標的分子の親和性を減少させ、薬物によって誘導されるエストロゲンアゴニスト作用（ｏｅｓｔｒｏｇｅｎ−ａｇｏｎｉｓｍ）の機会を最小にするために、１７β−ヒドロキシル機能をカルボニル基で置換することが提唱された。エストラジオールは、実際、エストロンより乳房腫瘍細胞に対して１０倍高い増殖効果を有し、このことは、１７β−ヒドロキシル化化合物の発情原性を示唆する３３。これらの化合物の非発情性特性の最適化もまた、Ａ環の２位にメトキシ官能基を導入することによって行われ得る。なぜなら、２−メトキシエストロゲンは、それらの親エストロゲンより発情性が低いことが公知であるからである。それらはまた、腫瘍増殖および新脈管形成を阻害し得るので、標的化合物にさらなる特性を付与し得る３４。
【０３７８】
Ｄ環上の側鎖は、活性を担うので保持されなければならない一方、側鎖を誘導するストラテジーは、より大きな汎用性（ｖｅｒｓａｔｉｌｉｔｙ）を可能にしなければならず、このことは、Ｄ環自体を改変する必要性を示唆する。導入される側鎖としては、短鎖から長鎖のアルキル部分またはかさ高い疎水性置換基（酵素の活性に対するその効果は、疎水性ポケットの存在／非存在に関連し得る）が挙げられる。ブロモアルキルまたはクロロプロピル部分のような側鎖の他の型は、活性な側の求核性アミノ酸残基と潜在的に相互作用し得、不飽和が、側鎖に対して剛性を付与し得る。活性部位におけるその配向は、酵素の阻害についての決定要因であり得る。
【０３７９】
上記にまとめたこれらの要件を達成するために、化合物５（下記）を、良好な候補として仮定した。構造的に改変されたＤ環があれば、これは、Ｄ環のＮ−イミド原子に対する側鎖の非常に容易な導入を可能にするために、エストラジオールの上記の誘導体を超える利点もまた有する１７β−ＨＳＤ  １型阻害に対する新規なアプローチを、提供する。これはまた、別の計画から本発明者らのグループにおいて合成されたベンジルマリアノル酸から１工程にて到達され得る３５。
【０３８０】
【化４７】
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３−ヒドロキシ−１６，１７−ｓｅｃｏ−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１６，１７−イミド、５（Ｒ＝Ｒ’＝Ｈ）およびその親（Ｒ＝側鎖およびＲ’＝ＨまたはＳＯ２ＮＨ２）
（合成ストラテジー）
５から誘導された分子のファミリーについての構造活性関係を確立するために、効率的な合成経路が開発されなければならず、この合成経路は、Ｄ環に対する広範に種々の側鎖の容易かつ効率的な導入を可能にする。
【０３８１】
最も論理的なアプローチ（これは、標的の合成の間に汎用性を可能にする）は、側鎖をピペリジンジオン部分に変換した後に、Ｄ環上にその側鎖の導入を考慮することである。従って、一旦そのＣ３位にて保護されると、化合物５は、側鎖の導入が、Ｎ−アルキル化を介して一工程にて容易に行われ得るので、標的の合成のための重要な中間体であることが提唱された。次いで、その後の脱保護およびスルファモイル化により、最終のフェノール化合物およびスルファメート誘導体を得る。重要な中間体（枠で囲った）が、エストロンから利用可能に（ａｃｃｅｓｓｉｂｌｅ）出発するということを支持しつつ、粗製合成経路が、スキーム１において提唱される。
【０３８２】
【化４８】
2005506359.tif 000054
スキーム１．市販のエストロンから標的分子に到達するために提唱される合成アプローチ
Ｐ＝保護基、Ｒ＝側鎖、Ｒ’＝ＨまたはＳＯ２ＮＨ２。
（ａ）Ｄ環改変、保護；（ｂ）アルキル化；（ｃ）脱保護、スルファモイル化。
【０３８３】
ステロイドのＤ環を改変するために転位の使用は、しばしば、文献中に報告されている。Ｊｉｎｄａｌらは、本発明者らが研究することを決定した、１６−オキシイミノエストロン６（スキーム２）のＢｅｃｋｍａｎｎ転位を介して５のアセチル化誘導体への到達を提唱した３７。
【０３８４】
【化４９】
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スキーム２。７の合成のための文献の方法。
試薬：（ａ）ＫＯＣ（ＣＨ３）３、（ＣＨ３）２ＣＨ（ＣＨ２）２ＯＮＯ；（ｂ）Ａｃ２Ｏ／ＡＣＯＨ、還流。
【０３８５】
エストロンの脱保護を、無水２−メチル−プロパン−２−オール中に金属カリウムを溶解させることにより新たに調製した、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシドの作用の下で室温にて行った。過剰な亜硝酸イソアミルの添加により、ケトオキシム６を得、その収率は、６３％であった。後者のＢｅｃｋｍａｎｎ転位を、酢酸および無水酢酸の混合物の還流条件下で行って、７を得、収率５７％で単離した。
【０３８６】
７のＤ環改変構造は、十分に確立され、分光法を使用して確認した。イミド系の特徴的な振動バンドは、その化合物のＩＲスペクトル上に１７２５および１６９０ｃｍ−１にて示され、ＮＨ交換可能プロトンは、１Ｈ  ＮＭＲスペクトル上に一重項として１０．６４ｐｐｍにて現れた。四級炭素Ｃ１７およびＣ１８は、１３Ｃ  ＮＭＲスペクトル上で１７１．９ｐｐｍおよび１７８．７ｐｐｍにて特徴的な低磁場化学シフトを有した。
【０３８７】
６のＢｅｃｋｍａｎｎ転位は、エストロンから２工程にて中間体７を得るという利点を有する一方、全体的な収率（３６％）は、かなり低かったが、文献中に報告された収率に匹敵した。従って、これにより、遙かに高い収率で７をもたらす別のストラテジーを開発することが決定された。
【０３８８】
その後の開環および閉環を通じたＤ環の改変は、５の誘導体に到達する別の方法として提唱された。保護されたエストロンのＤ環は、実際に、ハロホルム反応を介して開環され得３５、アミンで熱縮合して閉環し、エストロンのピペリジンジオンＤ環誘導体を得た。スキーム３は、予測される経路およびＮ−アルキル化によって導入される側鎖をまとめる。
【０３８９】
【化５０】
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スキーム３。ベンジルマリアノル酸９を介する１０〜２１の合成のための別の方法。
試薬：（ａ）ＮａＨ／ＤＭＦ、ＢｎＢｒ、８０℃；（ｂ）Ｉ２、ＫＯＨ、ＭｅＯＨ、次いでＫＯＨ還流；（ｃ）尿素、１８０℃；（ｄ）ＮａＨ／ＤＭＦ、ＲＸ；（ｅ）ＲＮＨ２、１８０℃；（ｆ）Ｐｄ／Ｃ、Ｈ２、ＭｅＯＨ／ＴＨＦ；（ｇ）ＣｌＳＯ２ＮＨ２／ＤＭＡ。
【０３９０】
ベンジル−エストロン８（これは、エストロンのベンジル化によって容易に調製される）と、過剰の塩基（水酸化カリウム）と、ヨウ素とを反応させることにより、メチレンケトン官能基が、ビスハロゲン化され、次いで開裂された。ジカルボン酸への完全な変換を、ＫＯＨの濃溶液中で還流することにより達成した。次いで、ベンジルマリアノル酸９（これは、７５％の最適化収量で単離された）を、尿素の存在下で熱環化に供した。この縮合反応（これは、都合のよい６員環の形成をもたらす）は、短期間１８０℃にて試薬を加熱した場合に生じる。生じたＤ環改変ステロイド１０を、高収率（８０〜８９％）にて得、中間体１０合成するための全体的な収率は、５５％であった。従って、さらなる工程が存在するにも拘わらず、この別の方法は、文献の方法を超えるかなりの改善を示す。
【０３９１】
イミドは、アルキルハライドを攻撃するには非常に弱い塩基であるので、イミドは、Ｎ−アルキル化を受ける前に、最初にそれらの共役塩基に変換されなければならない。この目的のために、ＤＭＦ中の水素過ナトリウムを用いて１０を脱保護化し、その後、最も可能性が高いのは、種々のアルキル化薬剤とのＳＮ２反応を介して反応させた。この方法に従って、多くの側鎖を、首尾よく導入した。化合物１１〜２１を、７５〜９７％の範囲の収率および平均反応時間２時間で得た。
【０３９２】
Ｎ−アルキル化化合物もまた、アルキルアミンの存在下でベンジルマリアノル酸が加熱される場合に、ベンジルマリアノル酸から直接利用した。誘導体２１（Ｒ＝ベンジル）をこのようにして合成したが、その反応物の収率は、中程度（６５％）であった。従って、例外的にそのアルキルハライドが市販されていないかまたは１０のＮ−アルキル化に対して非反応性であると考えられる場合に、ＢＭＡからの直接法が、使用されることが提唱された。
【０３９３】
次いで、化合物１１〜２１のベンジルエーテルを、Ｐｄ／Ｃを使用する触媒的な水素付加によって切断して、一連の水素付加標的２２〜３２を高収率で得た。
【０３９４】
不飽和側鎖の導入のために、別のストラテジーを開発しなければならなかった。なぜなら、スキーム３の最後の工程は、不飽和基を同時に脱ベンジル化かつ水素付加するようである水素化分解を含むからである。ベンジル保護ヒドロキシル官能基の還元のためのいくつかの選択的方法が報告されてきた３８が、Ｎ−アルキル化前のｔｅｒｔ−ブチル−ジメチルシリル基での５の保護は、簡単で効率的な代替方法である。
【０３９５】
５のフェノール官能基の保護を、ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチルシリルクロリドおよびイミダゾールの存在下で、中間体反応性種の形成を介して行った。生じた保護化化合物３３のアリルブロミドでのアルキル化は、容易に３４を生じ、これを、テトラブチルアンモニウムフルオリドで脱保護化した。この特定のアプローチ（スキーム４）（アリル部分の導入のために開発した）はまた、Ｎ−原子上の他の不飽和基に適用可能であるはずである。
【０３９６】
【化５１】
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スキーム４。５のＮ−アリル誘導体の合成。
試薬：（ａ）ＴＢＤＭＳＣＩ／イミダゾール、ＤＭＦ；（ｂ）ＮａＨ／ＤＭＦ、ＣＨ２ＣＨＣＨ２Ｂｒ；（ｃ）ＴＢＡＦ／ＴＨＦ。
【０３９７】
ヒドロキシル化化合物のスルファモイル化を、Ｏｋａｄａら３９によって記載された最近の手順に従って行った。この方法において、フェノール化合物のスルファモイル化は、塩基の非存在下で、非プロトン性溶媒ジメチルアセトアミド中で行う。一般に、この方法（これは、わずかに過剰なスルファモイルクロリドのみを要する）は、ＮａＨ／ＤＭＦが使用される通常の手順よりよい収率のスルファメートを得る。ＤＭＦは、スルファモイルクロリドとの副反応（これは、ＤＭＡとは生じない）を受け得ることを提唱した。なぜなら、ホルミルプロトンの非利用可能性が原因であるからである。反応条件において塩基を排除したことが、最高収率をもたらし、おそらくＤＭＡが中程度の塩基として働いたことがわかった。
【０３９８】
本発明者らのグループにて開発された手順に従って、ヒドロキシル化誘導体５、２２〜３２および３５を、ＤＭＡ中の２．２当量のスルファモイルクロリドの存在下でスルファモイル化した。化合物３６〜４８を、主に、短時間の反応時間の後に高収率で得た。しかし、２８のスルファモイル化は、最初のＮａＨ／ＤＭＦ法に従って行わなければならなかった。なぜなら、ＤＭＡが溶媒である場合に、ブロモブチル側鎖とスルファモイルクロリドとの間で、副反応が生じるからである。予測外なことに、その副生成物は、クロロブチル側鎖を有する５のスルファメートであることがわかった。この粗製物質のＨＰＬＣ分析により、この副生成物が、予測された生成物４３の割合と同じ割合にて形成されたことが示された。ＨＰＬＣ実施で５．５分および６．５０分（溶出ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ  ６８：３２）の２つの十分に分離したピークが存在するにも拘わらず、フラッシュクロマトグラフィーまたは再結晶化による両方の生成物を分離する試みは失敗に終わった。従って、これらを、分取用ＨＰＬＣを使用して単離し、１Ｈ  ＮＭＲおよび正確な質量分析法により特徴付けした。
【０３９９】
ＮａＨ／ＤＭＦおよび６当量のスルファモイルクロリドを使用して、反応を行った場合、反応の単一の生成物として、４３を８１％の収率で単離した。この反応において、スルファモイルクロリド上のフェノレートイオン（ｐｈｅｎｏｌａｔｅ  ｉｏｎ）の求核攻撃から生じる塩素は、ＨＣＩとして捕捉され、従って、ブロモブチル側鎖と反応できない。
【０４００】
最後に、５およびそのスルファメートの２−メトキシ誘導体を、２−メトキシ−エストロンから出発する、スキーム３に記載されるものと同じ反応順に従って合成した。２−メトキシ−エストロンを、本発明者らのグループにおいて開発した効率的な２工程合成に従って調製した。ここで、２位上にメトキシ基を導入することは、メトキシドアニオンによるハロゲン原子の求核性置換にかかっている。
【０４０１】
この目的のために、２−ヨード−エストロン４９を、エストロンを酢酸中の酢酸水銀およびヨウ素で処理することにより調製した４０。２位での選択的ハロゲン化を、室温にて２時間以内に完了し、連続した再結晶化後の全体的な収率は、５６％であった。次いで、２−ヨード−エストロンを、還流ピリジン中の塩化銅の存在下で４１、大過剰の新たに調製したナトリウムメトキシドの溶液と反応させ、２−メトキシ−エストロン５０を得た（収率７５％）。この方法は、保護基を全く含めないという利点を有し、エストロンから２工程にて２−メトキシ−エストロンの合成について良好な全体的な収率（４２％）を得る。
【０４０２】
ベンジル化の後、生じた化合物５１は、ハロ形成反応に供した。メタノール中で５１の溶解性が制限されていることにより、５２の合成について、乏しい最適化されていない収率１８％がもたらされた。尿素の存在下での環閉環は、５９％の収率で５３を与え、その後の脱保護によれい、最終生成物５４を得た。５４のスルファモイル化は、大過剰のスルファモイルクロリドとともに、ＮａＨ／ＤＭＦを使用して行わなければならなかった。なぜなら、反応をＤＭＡ中で行った場合、反応性の欠如が認められたからである。これは、３位の立体障害に起因し得、これは、２位のメトキシ基の存在から生じる。
【０４０３】
【化５２】
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スキーム５。５およびそのスルファメートの２−メトキシ誘導体の合成。
試薬：（ａ）Ｈｇ（ＯＡｃ）２，Ｉ２、ＡｃＯＨ／ＴＨＦ；（ｂ）ＣｕＣｌ２／ピリジン、ＮａＯＭｅ、還流；（ｃ）ＫＯＣ（ＣＨ３）３／ＤＭＦ、ＢｎＢｒ；（ｄ）Ｉ２、ＫＯＨ、ＭｅＯＨ、次いでＫＯＨ還流；（ｅ）尿素、１８０℃；（ｆ）Ｐｄ／Ｃ、Ｈ２、ＭｅＯＨ／ＴＨＦ；（ｇ）ＣｌＳＯ２ＮＨ２／ＤＭＡ。
【０４０４】
（結果および考察）
化合物３６、３７、３９、４１、４５および４７のスルファターゼ活性のインビトロ阻害データを、以下に示す。残りの化合物は、ＳＴＳインヒビターであることがわかった。本明細書中に記載の化合物の各々はまた、ＨＳＤを阻害することがわかった。
【０４０５】
化合物３６、３７、３９、４１、４５および４７が、エストロンスルファターゼ活性を阻害する能力を、ヒト胎盤ミクロソーム中で試験した。種々の濃度のインヒビターありまたはなしでの［３Ｈ］−エストロンの胎盤ミクロソームとのインキュベーション、その後のトルエンへの抽出による生成物の単離は、表２に示す結果を与えた。比較目的で、異なるアッセイにおけるＥＭＡＴＥの活性もまた、含めた。ＩＣ５０値（これを使用して、これらのＤ環改変ステロイドの阻害性能力を比較した）もまた計算した。
【０４０６】
【表５】
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表２．種々のＤ環改変ステロイドによる、ヒト胎盤ステロイドスルファターゼの阻害についての、異なる濃度およびＩＣ５０値での％阻害。
【０４０７】
試験した異なる化合物のうち、ピペリジンジオンＤ環の窒素原子上に、プロピル、ベンジルおよび２−メチルプロピル部分を有するステロイドは最も強力であり、ＩＣ５０は、１ｎＭ〜３ｎＭの間である。従って、それらは、ＥＭＡＴＥより強力であり、特に、化合物４５は、１８倍より強力である。化合物３６（これは、Ｎ−原子での置換がない）および化合物３７（Ｎ−メチル誘導体）は、３９ほど強力ではなかった。しかし、それらのＩＣ５０値、それぞれ２０ｎＭおよび１２ｎＭは、それらの能力が、ＥＭＡＴＥの能力と類似していることを示唆する。予測外なことに、化合物４１（その側鎖は、ｎ−ペンチル部分である）は、有効性において劇的な減少を示し、ＩＣ５０値は、１５０ｎＭであった。有効性におけるこの喪失は、かなり急激であり、このことは、その酵素が、疎水性Ｎ−置換基の長さに付随するのではなく、そのサイズの変化に非常に感受性であることを示唆する。
【０４０８】
直鎖状アルキル側鎖について得た異なるデータから、制限された構造−活性関係のグラフを描いた（図２−種々の側鎖の長さ  対  ステロイドスルファターゼによって触媒されるエストロンスルフェートのエストロンへの変換の阻害についての構造−活性関係）。ここで各化合物のＩＣ５０は、側鎖中の炭素原子の数の関数としてプロットされる。化合物４１と化合物３６、３７および３９の群との間の活性の差異には下線を伏す。
【０４０９】
４１について観察された活性の喪失は、むしろ予測外である。なぜなら、ＳＴＳの強力なステロイドインヒビターの大部分が、４１と同様に、ＥＭＡＴＥの誘導体であり、かさ高い疎水性側鎖を含むからである。最近の例の大部分は、１７β−アルキルアミド側鎖を有するエストラジオールの３−Ｏ−スルファメート誘導体（１および２）であり、その活性は、アルキル基が、ヘプチル部分であった場合に最適であることが分かった。これらの有効性は、ＥＭＡＴＥの有効性と類似して、１７β−置換基の配向に対応する酵素活性部位中の疎水性ポケットの存在に下線が付される。
【０４１０】
従って、４１によるＳＴＳのより弱い阻害は、Ｄ環（６員）のＮ−原子に位置したその側鎖の配向が、酵素の活性部位との親和性の減少を誘導するために、１または２（５員Ｄ環）の１７β−側鎖の配向とは十分異なることを示唆する。１７β−置換基についての酵素活性部位中に疎水性ポケットが存在する一方、６員環のＮ−位置の周りの活性部位の位相は、かさ高い置換基に対してより制限があり得ることが提唱され得る。この過程を確証するために、分子モデリングは、好まれるツールである。
【０４１１】
Ｄ環および側鎖における原子の配向を解明するために、ならびに可能な将来的な分子モデリング研究のためのデータを集めるために、非常に強力なエストロン誘導体３９の結晶構造を決定した。アセトン／ヘキサン中でのゆっくりとした再結晶化から得た結晶（約寸法０．２０×０．１７×０．０８ｍｍ）を、データ収集のために使用した。
【０４１２】
４１の非対称性単位のＯＲＴＥＰプロットを、使用される表示スキームと共に以下に示す。スルファメート基（４つの環全て）、および改変Ｄ環の重要な特徴が、はっきりと見える。予測されるように、そのＤ環は、半分の鎖コンホメーションの中にある。なぜなら、そのイミド官能基は、同じ平面（ｐｌａｎ）に原子Ｃ１３、Ｃ１７、ＮおよびＣ１’、ならびにＣ１５、Ｃ１６、ＮおよびＣ１’の位置を含むからである。
【０４１３】
【化５３】
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４１のＸ線結晶構造のＯＲＴＥＰプロット。楕円体は、そのｘｘ％確率レベルにて示される。
【０４１４】
ＥＭＡＴＥのＸ線結晶構造のＯＲＴＥＰプロットと比較する場合４２、ＥＭＡＴＥのそのＣ１７β−配向および４１の６員環のＮ−アルキル配向は異なり、従って、ＳＴＳの活性部位の異なる領域と相互作用していることは明らかである。
【０４１５】
４５によるＳＴＳの良好な阻害、および４７によるわずかな程度の阻害は、ペンチル部分に調和的であるようではないとしても、活性部位中の疎水性結合領域の存在を示すようである。しかし、ベンジル基（およびベンジル関連基）は、より疎水性であり、かつ直鎖状のヘプチル側鎖より、合計７つの炭素であまり立体的に制限されないことが既知である。このことは、全て疎水性置換基を有する化合物４５または４７と、４１との間の有効性の差異を説明し得る。４５について見いだされたより高い活性はまた、活性部位のアミノ酸残基の中に水素結合供与体が存在することを示唆する。
【０４１６】
しかし、さらなる生物学的結果は、これまでのところ、得られたデータを十分に解釈する必要がある。化合物３８、４０および４２（それぞれ、エチル誘導体、ブチル誘導体およびヘキシル誘導体）の活性は、活性部位の位相に関して、これまで得られたＩＣ５０値の解釈を可能にし得る有用なデータを示す。
【０４１７】
当面、４１の結晶構造パラメーターは、コンピューター補助分子モデリングにより、タンパク質を含むこの型の分子の相互作用を調査し、新たな強力な分子の設計を補助するにあたって有用である。
【０４１８】
（まとめ）
乳癌は、欧州および北米において非常に重要な疾患である。英国では、任意の他の型の癌より、多くの人々が乳癌により亡くなっている。ホルモン依存性乳癌は、閉経後の女性においてこれらの症例の約２／３を示す；これは、腫瘍が、それらの増殖および発生のためにエストロゲンに依存している乳癌の型に対応する。
【０４１９】
内分泌治療（ここで、エストロゲン循環レベルが、エストロゲン生合成における１つまたはいくつかの酵素的経路を阻害する薬物の使用を介して制御される）は、ＨＤＢＣについての応答である。異なる標的が考慮され得、研究の大部分が、抗エストロゲンおよびアロマターゼインヒビターについて行われてきた。酵素ステロイドスルファターゼおよび１７β−ＨＳＤ  １型は、後に強力な標的として浮かび上がってきた。
【０４２０】
いくつかの強力なインヒビターが、ＳＴＳについて開発されてきた一方で、１７β−ＨＳＤ  １型は、それほど興味が持たれておらず、ごくわずかな分子が報告されているに過ぎない。ＥＭＡＴＥのＤ環誘導体が、１７β−ＨＳＤ  １型の強力なインヒビターであるという事実を信頼して、本発明者らは、減少した発情原性を有するＥＭＡＴＥのアナログの設計および合成を開始した。これは、Ｄ環がピペリジンジオン部分であり、かつそのＮ−原子が種々の側鎖を有する、一連の化合物をもたらした。
【０４２１】
ＳＴＳに対する生物学的試験（これは、乳癌細胞に対して行った）によって、プロピル側鎖またはピコリル側鎖を有する誘導体の非常に高い活性が明らかになった。ＩＣ５０は１ｎＭであり、それらは、ＥＭＡＴＥよりも遙かに強力である。
【０４２２】
（実験）
（１−一般的方法）
全ての化学物質は、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．（Ｇｉｌｌｉｎｇｈａｍ，Ｄｏｒｓｅｔ，ＵＫ）かまたはＬａｎｃａｓｔｅｒ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍｏｒｅｃａｍｂｅ，Ｌａｎｃａｓｈｉｒｅ，Ｕ．Ｋ．）のいずれかから購入した。全てのＡ．Ｒ．等級の有機溶媒は、Ｆｉｓｏｎｓ  ｐｌｃ（Ｌｏｕｇｈｂｏｒｏｕｇｈ，Ｕ．Ｋ．）により供与していただいた。全てのＮ−アルキル化反応およびスルファモイル化反応に使用したそれぞれ無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）およびＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）は、Ａｌｄｒｉｃｈから購入し、そして使用後はＮ２の陽圧下で保存した。塩化スルファモイルをＡｐｅｌおよびＢｅｒｇｅｒ４８の方法の適応により調製し、そしてＷｏｏらにより記載されるようにトルエン中に溶液として保存した。適切な容量のこの溶液を、真空中で使用直前に新たに濃縮した。
【０４２３】
Ｅ１ＳおよびＥ１は、Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．（Ｐｏｏｌｅ，Ｕ．Ｋ．）から購入した。［６，７−３Ｈ］Ｅ１Ｓ（比活性、５０Ｃｉ／ｍｍｏｌ）および［４−１４Ｃ］Ｅ１（比活性、５２ｍＣｉ／ｍｍｏｌ）は、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｎｕｃｌｅａｒ（Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）から購入した。［６，７−３Ｈ］Ｅ１（比活性、９７Ｃｉ／ｍｍｏｌ）は、Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｒａｄｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｅｎｔｒｅ（Ａｍｅｒｓｈａｍ，Ｕ．Ｋ．）から購入した。
【０４２４】
薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を、予めコーティングされたプレート（Ｍｅｒｃｋ  ＴＬＣアルミニウムシート  シリカゲル６０  Ｆ２５４、品目番号５５５４）上で実施した。生成物および出発物質（ＳＭ）を、ＵＶ光による可視化またはリンモリブデン酸のメタノール溶液での処理に続く加熱のいずれかによって検出した。フラッシュカラムクロマトグラフィーをシリカゲル（Ｓｏｒｂｓｉｌ  Ｃ６０）上で実施した。ＩＲスペクトルは、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  ＲＸＩ  ＦＴ−ＩＲを用いてＫＢｒ板として決定し、そしてピーク位置をｃｍ−１で表現した。１Ｈ  ＮＭＲおよびＤＥＰＴ編集１３Ｃ  ＮＭＲを、ＪＭＮ−ＧＸ  ４００  ＮＭＲ分光計により記録し、そして化学シフトを、内部基準としたテトラメチルシラン（ＴＭＳ）に対する百万分率（ｐｐｍ、δ）により報告した。以下の略号を使用し、１Ｈ  ＮＭＲスペクトルおよび１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルにおける共鳴を記載する：ｂｒ、ブロード；ｓ、一重項；ｄ、二重項；ｔ、三重項；ｑ、四重項；ｍ、多重項および組み合わせ（例えば、ｄｄ、二重の二重項）。ＡＢ系（δＡおよびδＢ）についての化学シフトは、各二重項の中間およびＪＡＢまたはＪＢＡとして標識された対応する結合定数を採用することによって概算した。例として、δＡおよびδＢを、化合物２１について付属書類２に示された以下の式について計算した。ＨＰＬＣ分析を、Ｗａｔｅｒｓ９９６ＰＤＡ検出器を備えたＷａｔｅｒｓ  Ｍｉｌｌｅｎｉｕｍ３２器機により実施した。トレースを、２ｍＬ／分でメタノール／水勾配で溶出したＷａｔｅｒｓ  Ｒａｄｉａｌｐａｃｋ  Ｃ１８、８×１００ｍｍカラムについて記録した。質量分析は、Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ  Ｓｅｒｖｉｃｅ  Ｃｅｎｔｅｒ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｂａｔｈにおいて記録した。ＦＡＢ−ＭＳを、マトリックスとしてｍ−ニトロベンジルアルコール（ＮＢＡ）を用いて行い、そして元素分析は、Ｍｉｃｒｏａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｂａｔｈにより実施した。融点を、Ｒｅｉｃｈｅｒｔ−Ｊｕｎｇ  Ｔｈｅｒｍｏ  Ｇａｌｅｎ  Ｋｏｆｌｅｒブロックを用いて決定し、未補正である。３９のＸ線結晶学的研究を、Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  ＢａｔｈにいらっしゃるＭ．Ｍａｈｏｎ博士により行っていただいた。
【０４２５】
（１−１−生物学的アッセイ）
全てのアッセイは、Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｉｍｐｅｒｉａｌ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  Ｓｃｈｏｏｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｔ．Ｍａｒｙ’ｓ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｌｏｎｄｏｎにおいて、Ａ．Ｐｕｒｏｈｉｔ博士およびＭ．Ｒｅｅｄ教授により、そして協力していただき実施した。
【０４２６】
ステロイドスルファターゼ活性を阻害するように合成された化合物の能力は、胎盤ミクロソーム調製物を用いて試験した。胎盤ミクロソーム（１０００００ｇ画分）を、正常妊娠期４９からの陽性−陽性ヒト胎盤から調製した。エストロンスルファターゼの阻害についてのＩＣ５０を決定するために、活性を、非標識基質１４により２０μＭまで調節した［３Ｈ］Ｅ１Ｓ（４×１０５ｄｐｍ）を用い、インヒビター（０．０５〜１．０μＭ）の存在下において測定した。胎盤ミクロソーム（１２５μｇのタンパク質／ｍＬ）と共に基質±インヒビターを３０分間インキュベートした後に、形成された生成物を、［４−１４Ｃ］Ｅ１を用い、トルエン（４ｍＬ）で抽出することによって混合物から単離し、手順による損失をモニタリングした。
【０４２７】
（１−２−塩化スルファモイルの調製）
ギ酸（６ｍＬ，１５０ｍｍｏｌ）を、１５０ｍＬの新たに蒸留したトルエン中のクロロスルフォニルイソシアネート（２５ｇ、１５０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＮ２雰囲気下、０℃で滴下した。得られた白色懸濁物を室温でＮ２下で一晩撹拌し、そして不溶物を、カニューレを用い、Ｎ２下で溶液から濾過した。濾液を真空下で濃縮し、明褐色の粗塩化スルファモイルを得た。次いで、塩化スルファモイルの基準溶液（約０．７０Ｍ）を、粗結晶性生成物を新たに蒸留したトルエン中に溶解させることによって調製し、Ｎ２下の冷蔵庫中で保存した。反応に先立って、ギ酸をホウ素無水物と共に一晩撹拌し、Ｎ２下で新たに蒸留した。
【０４２８】
（１−３−アルキル化についての一般的方法）
水素化ナトリウム（鉱油中６０％分散液、１．２当量）を、無水ＤＭＦ（１５ｍＬ）中の１０の撹拌溶液に、０℃、Ｎ２雰囲気下で添加した。水素発生が終了した後に、目的の（ｐａｒｅｎｔ）アルキル化剤（２当量）を添加した。この反応混合物を室温で撹拌し、そして水（５０ｍＬ）に注いだ。得られた溶液を酢酸エチル（５０ｍＬ）へと抽出させた。ブライン（４×２５ｍＬ）によりさらに十分に洗浄した後に、有機相を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして真空下で蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィーによって得られた粗生成物の分画によって、目的の化合物１１〜２１を得た。
【０４２９】
（１−４−水素化分解についての一般的方法）
Ｐｄ−Ｃ（１０％）をＭｅＯＨ／ＴＨＥ中の１０〜２１の溶液に添加し、そして得られた懸濁液を、水素を充填した風船を用いて室温で水素化処理した。濾過による支持触媒の除去および濾液の蒸発の後、得られた生成物を部分的に（分析用サンプル）または完全に精製し、目的の化合物５および２２〜３２を得た。
【０４３０】
（１−５−スルファモイル化についての一般的方法）
０℃のＮ２雰囲気下にあるＤＭＡ中の塩化スルファモイル（２．２当量）の撹拌溶液に、５、２２〜３２および３５を添加した。この反応混合物をＮ２下で、室温まで温かくなる時間で撹拌した。次いで、それを冷ブライン（１５ｍＬ）に注ぎ、得られた溶液を酢酸エチル（２×２０ｍＬ）により抽出した。有機相を合わせてブライン（６×２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過しそして減圧下で濃縮した。得られた粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィーによって分画および／または再結晶した。
【０４３１】
（２−合成）
（２−１−Ｄ環改変ステロイド部分の合成）
（１６−オキシイミノ−エストロン６）
金属カリウム（８０ｍｇ、２．０５ｍｍｏｌ）を２ｍＬのｔｅｒｔ−ブタノールに溶解させることによって新たに調製した、Ｎ２雰囲気下のカリウムｔｅｒｔ−ブトキシドの撹拌溶液に、エストロン（２００ｍｇ、７４０ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、この反応混合物をＮ２下において室温で１時間撹拌し、そして亜硝酸イソアミル（１８０μｍｏｌ、１．３４ｍｍｏｌ）を滴下した。得られた深赤色の混合物を一晩撹拌し、次いで、水（２０ｍＬ）へ注いだ。得られた溶液をエーテル（２×２０ｍＬ）により抽出し、そして水層を氷酢酸（１０ｍＬ）で酸性化し、明黄色の沈殿物を得た。これを２時間分離したままにし、その後、固体を濾過した（１４０ｍｇ、６３％）：
【０４３２】
【化５４】
2005506359.tif 000061
（３−アセトキシ−１６−オキシイミノ−エストロン）
４．５ｍＬの氷酢酸および７．５ｍＬの酢酸無水物の混合液中の６（１５０ｍｇ、５０１ｍｍｏｌ）の懸濁液を加熱し、Ｎ２雰囲気下で２０時間還流した。次いで、溶媒混合物を減圧下で除去し、そして水を添加した。ＮａＯＨ水溶液により塩基性化させた後、得られた溶液を、酢酸エチル（２×２０ｍＬ）により抽出した。有機層を分離し、水（２×１５ｍＬ）、次いでブライン（２×１５ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過しそして減圧下で濃縮した。溶出液としてクロロホルムを用いたフラッシュクロマトグラフィーによって得られた粗生成物の分画により、明黄色固体として７を得た（９７ｍｇ、５７％）：
【０４３３】
【化５５】
2005506359.tif 000062
【０４３４】
【化５６】
2005506359.tif 000063
ｃＣ−１３シグナルは、溶媒ピークに隠れている。
【０４３５】
（エストロン３−ベンジルエーテル（８））
水素化ナトリウム（鉱油中６０％分散液、０．６８ｇ、２０．３４ｍｍｏｌ）を、０℃Ｎ２雰囲気下で、無水ＤＭＦ（５０ｍＬ）中のＥ１（５．０ｇ、１８．４９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に添加した。得られた混合物をさらに１５分間撹拌した後に、臭化ベンジル（２．４２ｍＬ、２０．３４ｍｍｏｌ）を添加し、そして反応混合物を８０℃で４時間加熱した。残っている過剰な水酸化ナトリウムを、反応混合物を氷／水へ注ぐことによってクエンチした。分離した有機画分を酢酸エチル（１５０ｍＬ）へ抽出し、そして水（４×５０ｍＬ）でさらに十分に洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過しそして真空中で蒸発させた。得られた淡黄色の残渣をイソプロピルアルコールから再結晶し、白色薄片状結晶として８を得た（４．７３ｇ、７１％）：
【０４３６】
【化５７】
2005506359.tif 000064
（３−ベンジル−マリアノル酸（９））
９５ｍＬのＭｅＯＨ中のヨウ素（７．６ｇ、２９．９４ｍｍｏｌ）の溶液ならびに２７ｍＬの水および６１ｍＬのＭｅＯＨ中のＫＯＨ（１３．７ｇ）の溶液を、ＭｅＯＨ（１Ｌ）中のエストロン３−ベンジルエーテル（８）（３．８ｇ、１０．５４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に交互に滴下したところ、混合物の色は橙色／褐色のままである。４５分間にわたって滴下し、得られた明黄色の溶液を、Ｎ２雰囲気下、室温で一晩撹拌し、澄んだ明黄色の溶液を得た。次いで、混合物を真空中で濃縮し、水（８００ｍＬ）へ注いだ。５Ｍ  ＨＣｌで酸性化した後、有機画分をエーテル（６００ｍＬ）へ抽出し、そしてエーテル層をチオ硫酸ナトリウム水溶液（４×１００ｍＬ）、次いで水（４×１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過しそして真空下で蒸発させた。次いで、得られた黄色フォーム（４．５４ｇ）をＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（１：２、２２８ｍＬ）中のＫＯＨ（７．６ｇ）の溶液に溶解し、加熱して４時間還流させた。得られた橙色混合物を水（８００ｍＬ）に注ぎ、そして５Ｍ  ＨＣｌで酸性化した後に、有機画分を酢酸エチル（３００ｍＬ）へ抽出した。ブライン（４×２００ｍＬ）でさらに十分に洗浄した後に、有機層を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過しそして真空中で蒸発させ、黄色残渣を得た（４．３２ｇ）。これをＣＨＣｌ３／ヘキサン５：３から再結晶化し、クリーム状の粉末として９を得た（２．２９１ｇ、５３％）。生成物のさらなる回収を、ＣＨＣｌ３／ヘキサン５：３からの再結晶化の際の母液の残渣から得た（全体収量７５％）：
【０４３７】
【化５８】
2005506359.tif 000065
（３−ベンジルオキシ−１６，１７−ｓｅｃｏ−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１６，１７−イミド（１０））
３−ベンジル−マリアノル酸（９）（３．２５ｇ、７．９６ｍｍｏｌ）および尿素（３．２５ｇ、５４．１１ｍｍｏｌ）をＮ２雰囲気下で４５分間、１８０℃で加熱した。次いで、得られた褐色残渣を粉砕し、そしてアセトン（２００ｍＬ）を加え、褐色の懸濁液を得た。この混合物を約１００ｍＬまで濃縮し、シリカゲルを加え、そして溶媒を除去し、均一なベージュ色の粉末を得た。この粉末を湿潤充填（クロロホルム）フラッシュクロマトグラフィーカラムへ移した。クロロホルム／アセトン（９６：４）で溶出して、白色残渣として１０を得た（２．７５ｇ、８９％）：
【０４３８】
【化５９】
2005506359.tif 000066
ＨＰＬＣおよびＣＨＮ分析について、サンプルをＥｔＯＨから再結晶化し、無色の針状結晶を得た。ＨＰＬＣ（メタノール／水，８５：１５；λｍａｘ＝２７８．１ｎｍ）Ｒｔ＝８．１５分，１００％。実測値：Ｃ，７６．９０；Ｈ，６．９９；Ｎ，３．７３。Ｃ２５Ｈ２７ＮＯ３理論値：Ｃ，７７．０９；Ｈ，６．９９；Ｎ，３．６０。
【０４３９】
（２−２−Ｎ−アルキル化を介するＤ環に対する種々の側鎖の導入）
（３−ベンジルオキシ−Ｎ−メチル−１６，１７−ｓｅｃｏ−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１６，１７−イミド（１１））
アルキル化条件（ＶＩ−１−３を参照のこと）に従って、１０（５００ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）をＮａＨ（６２ｍｇ、１．５４ｍｍｏｌ）を処理し、次のヨウ化メチル（１６０μＬ、２．５７ｍｍｏｌ）との反応は、４５分以内に完了した。溶出液としてクロロホルムを用いたフラッシュクロマトグラフィーによって得られた粗生成物の分画により、白色残渣として１１を得た（４３２ｍｇ、８３％）：
【０４４０】
【化６０】
2005506359.tif 000067
ＨＰＬＣおよびＣＨＮ分析について、サンプルをＥｔＯＨから再結晶化し、無色結晶を得た。ＨＰＬＣ（メタノール／水、９０：１０；λｍａｘ＝２７８．１ｎｍ）Ｒｔ＝３．９３分，１００％。実測値：Ｃ，７７．３０：Ｈ，７．２２：Ｎ，３．４８。Ｃ２６Ｈ２９ＮＯ３理論値：Ｃ，７７．３９：Ｈ，７．２４：Ｎ，３．４７。
【０４４１】
（３−ベンジルオキシ−Ｎ−エチル−１６，１７−ｓｅｃｏ−エストラ−１，３，５（１０）トリエン−１６，１７−イミド（１２））
アルキル化条件（ＶＩ−１−３を参照のこと）に従って、１０（５００ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）をＮａＨ（６２ｍｇ、１．５４ｍｍｏｌ）により処理し、次のヨウ化エチル（２０５μＬ、２．５７ｍｍｏｌ）との反応は、１時間以内に完了した。溶出液としてクロロホルムを用いたフラッシュクロマトグラフィーによって得られた粗生成物の分画により、白色残渣として１２を得た（５０２ｍｇ、９４％）：
【０４４２】
【化６１】
2005506359.tif 000068
ＨＰＬＣおよびＣＨＮ分析について、サンプルをＥｔＯＨから再結晶化し、白色結晶を得た。ＨＰＬＣ（メタノール／水、８５：１５；λｍａｘ＝２７８．１ｎｍ）Ｒｔ＝８．１５分，１００％。実測値：Ｃ，：Ｈ，：Ｎ，Ｃ２７Ｈ３１ＮＯ３理論値：Ｃ，７７．６７：Ｈ，７．４８：Ｎ，３．３５。
【０４４３】
（３−ベンジルオキシ−Ｎ−プロピル−１６，１７−ｓｅｃｏ−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１６，１７−イミド（１３））
アルキル化条件（ＶＩ−１−３を参照のこと）に従って、１０（５００ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）をＮａＨ（６２ｍｇ、１．５４ｍｍｏｌ）により処理し、そして次のヨウ化プロピル（２５０μＬ、２．５７ｍｍｏｌ）との反応は、２時間以内に完了した。溶出液としてクロロホルムを用いたフラッシュクロマトグラフィーによって得られた粗生成物の分画により、白色残渣として１３を得た（５２４ｍｇ、９４％）：
【０４４４】
【化６２】
2005506359.tif 000069
ＨＰＬＣおよびＣＨＮ分析について、サンプルをＥｔＯＨから再結晶化し、白色結晶を得た。ＨＰＬＣ（メタノール／水、９０：１０；λｍａｘ＝２７８．１ｎｍ）Ｒｔ＝５．５０分，１００％。実測値：Ｃ，７７．６０：Ｈ，７．６８：Ｎ，３．２６。Ｃ２８Ｈ３３ＮＯ３理論値：Ｃ，７７．９３：Ｈ，７．７１：Ｎ，３．２５。
【０４４５】
（３−ベンジルオキシ−Ｎ−ブチル−１６，１７−ｓｅｃｏ−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１６，１７−イミド（１４））
アルキル化条件（ＶＩ−１−３を参照のこと）に従って、１０（５００ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）をＮａＨ（６２ｍｇ、１．５４ｍｍｏｌ）により処理し、そして次の臭化ブタン（２７６μＬ、２．５７ｍｍｏｌ）との反応は、４時間以内に完了した。溶出液としてクロロホルムを用いたフラッシュクロマトグラフィーによって得られた粗生成物の分画により、白色残渣として１４を得た（５１３ｍｇ、９０％）：
【０４４６】
【化６３】
2005506359.tif 000070
ＨＰＬＣおよびＣＨＮ分析について、サンプルをＥｔＯＨから再結晶化し、白色針状結晶を得た。ＨＰＬＣ（メタノール／水、８５：１５；λｍａｘ＝２７８．１ｎｍ）Ｒｔ＝８．１５分，１００％。実測値：Ｃ，７７．８０：Ｈ，７．８９：Ｎ，３．１３。Ｃ２９Ｈ３５ＮＯ３理論値：Ｃ，７８．１７：Ｈ，７．９２：Ｎ，３．１４。（僅かにずれている）。
【０４４７】
（３−ベンジルオキシ−Ｎ−ペンチル−１６，１７−ｓｅｃｏ−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１６，１７−イミド（１５））
アルキル化条件（ＶＩ−１−３を参照のこと）に従って、１０（５００ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）をＮａＨ（６２ｍｇ、１．５４ｍｍｏｌ）により処理し、そして次の臭化ペンチル（３１８μＬ、２．５７ｍｍｏｌ）との反応は、５時間以内に完了した。溶出液としてクロロホルムを用いたフラッシュクロマトグラフィーによって得られた粗生成物の分画により、白色残渣として１５を得た（５５０ｍｇ、９３％）：
【０４４８】
【化６４】
2005506359.tif 000071
ＨＰＬＣおよびＣＨＮ分析について、サンプルをＥｔＯＨから再結晶化し、無色の針状結晶を得た。ＨＰＬＣ（メタノール／水、９２：８；λｍａｘ＝２７６．９ｎｍ）Ｒｔ＝６．４６分，９７．７％。実測値：Ｃ，７８．２０：Ｈ，８．０８：Ｎ，３．０１。Ｃ３０Ｈ３７ＮＯ３理論値：Ｃ，７８．４０：Ｈ，８．１１：Ｎ，３．０５。
【０４４９】
（３−ベンジルオキシ−Ｎ−ヘキシル−１６，１７−ｓｅｃｏ−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１６，１７−イミド（１６））
アルキル化条件（ＶＩ−１−３を参照のこと）従って、１０（５００ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）をＮａＨ（６２ｍｇ、１．５４ｍｍｏｌ）により処理し、そして次の臭化ヘキシル（３６０μＬ、２．５７ｍｍｏｌ）との反応は、１．５時間以内に完了した。溶出液としてクロロホルムを用いたフラッシュクロマトグラフィーによって得られた粗生成物の分画により、白色残渣として１６を得た（５７５ｍｇ、９４％）：
【０４５０】
【化６５】
2005506359.tif 000072
ＨＰＬＣおよびＣＨＮ分析について、サンプルをＥｔＯＨから再結晶し、白色の針状結晶を得た。ＨＰＬＣ（メタノール／水、８５：１５；λｍａｘ＝２７８．１ｎｍ）Ｒｔ＝８．１５分，１００％。実測値：Ｃ，７８．１０：Ｈ，８．１６：Ｎ，２．９８。Ｃ３１Ｈ３９ＮＯ３理論値：Ｃ，７８．６１：Ｈ，８．３０：Ｎ，２．９６。（僅かにずれている）。
【０４５１】
（３−ベンジルオキシ−Ｎ−ブロモブチル−１６，１７−セコ−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１６，１７−イミド（１７））
アルキル化条件（ＶＩ−１−３を参照のこと）に従って、１０（５００ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）を、ＮａＨ（６２ｍｇ、１．５４ｍｍｏｌ）で処理し、引き続く１，４−ジブロモブタン（３１０μＬ、２．５７ｍｍｏｌ）との反応を、１．５時間以内に完了した。溶出液としてクロロホルムを用いるフラッシュクロマトグラフィーによって得られた粗生成物の画分から、白色残渣として１７（５６９ｍｇ、８４％）を得た：
【０４５２】
【化６６】
2005506359.tif 000073
2005506359.tif 000074
ＨＰＬＣ分析およびＣＨＮ分析のために、サンプルをＥｔＯＨから再結晶化して、白色結晶を得た。ＨＰＬＣ（メタノール／水、９０：１０；λｍａｘ＝２７８．１ｎｍ）Ｒｔ＝６．０４分、９９．７％。実測値：Ｃ、６６．３０；Ｈ、６．５１；Ｎ、２．５６。Ｃ２９Ｈ３４ＢｒＮＯ３理論値：Ｃ、６６．４１；Ｈ、６．５３；Ｎ、２．６７。
【０４５３】
（３−ベンジルオキシ−Ｎ−シクロプロピルメチル−１６，１７−セコ−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１６，１７−イミド（１８））
アルキル化条件（ＶＩ−１−３を参照のこと）に従って、１０（５００ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）を、ＮａＨ（６２ｍｇ、１．５４ｍｍｏｌ）で処理し、引き続くブロモメチル−シクロプロパン（２４６μＬ、２．５７ｍｍｏｌ）との反応を、３時間以内に完了した。溶出液としてクロロホルムを用いるフラッシュクロマトグラフィーによって得られた粗生成物の画分から、白色残渣として１８（５３６ｍｇ、９４％）を得た：
【０４５４】
【化６７】
2005506359.tif 000075
ＨＰＬＣ分析およびＣＨＮ分析のために、サンプルを、ＥｔＯＨから再結晶化して、白色結晶を得た。ＨＰＬＣ（メタノール／水、８５：１５；λｍａｘ＝２７８．１ｎｍ）Ｒｔ＝８．１５分、１００％。実測値：Ｃ、７８．３０；Ｈ、７．４７；Ｎ、３．１８。Ｃ２９Ｈ３３ＮＯ３理論値：Ｃ、７８．５２；Ｈ、７．５０；Ｎ、３．１６。
【０４５５】
（３−ベンジルオキシ−Ｎ−（３−ピコリル）−１６，１７−セコ−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１６，１７−イミド（１９））
水素化ナトリウム（鉱油中６０％分散、３１ｍｇ、７７０μｍｏｌ）を、１０（２５０ｍｇ、６４２μｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（１０ｍＬ）攪拌溶液に、Ｎ２雰囲気下で室温にて加えた。水素の発生が停止した後、３−（ブロモメチル）ピリジンヒドロブロミド（３２５ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）を加え、深橙色の混合物を得た。これを室温にて２時間攪拌し、次いでさらなる２当量の水酸化ナトリウム（５２ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）を、この混合物に加えた。これを、室温にて一晩攪拌し、そして水（４０ｍＬ）に注いだ。得られた暗赤色の混合物を、酢酸エチル（４０ｍＬ）に抽出した。さらに徹底的にブライン（４×２０ｍＬ）で洗浄した後、その有機層を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして減圧下でエバポレートした。溶出液としてクロロホルム／アセトン（９：１）を用いるフラッシュクロマトグラフィーによって得られた粗生成物の画分から、白色残渣として１９を得た。これを、クロロホルム／アセトン（９５：５）を用いる二次フラッシュクロマトグラフィーによってさらに精製した。白色粉末（２３０ｍｇ、７５％）を得た：
【０４５６】
【化６８】
2005506359.tif 000076
ＨＰＬＣ分析およびＣＨＮ分析のために、サンプルをＥｔＯＨから再結晶化して、無色針状結晶を得た。ＨＰＬＣ（メタノール／水、９０：１０；λｍａｘ＝２５９．２ｎｍ）Ｒｔ＝３．９０分、１００％。実測値：Ｃ、７７．００；Ｈ、６．７５；Ｎ、５．７３。Ｃ３２Ｈ３３Ｎ２Ｏ３理論値：Ｃ、７７．４７；Ｈ、６．７１；Ｎ、５．８３。
【０４５７】
（３−ベンジルオキシ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル−１６，１７−セコ−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１６，１７−イミド（２０））
アルキル化条件（ＶＩ−１−３を参照）に従って、１０（５００ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）を、ＮａＨ（６２ｍｇ、１．５４ｍｍｏｌ）で処理し、そして引く続く１−ブロモメチル−４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンゼン（４７２μＬ、２．５７ｍｍｏｌ）との反応を、３０分以内に完了した。溶出液としてクロロホルムを用いるフラッシュクロマトグラフィーによって得られる粗生成物の画分から、画色残渣として２０（６６７ｍｇ、９７％）を得た：
【０４５８】
【化６９】
2005506359.tif 000077
ＨＰＬＣ分析およびＣＨＮ分析のために、サンプルをＥｔＯＨから再結晶し、白色針状結晶を得た。ＨＰＬＣ（メタノール／水、９０：１０；λｍａｘ＝２５９．２ｎｍ）Ｒｔ＝３．９０分、１００％。実測値：Ｃ，；Ｈ，；Ｎ，。Ｃ２９Ｈ３５ＮＯ３理論値：Ｃ、８０．７１；Ｈ、７．７１；Ｎ、２．６１。
【０４５９】
（３−ベンジルオキシ−Ｎ−ベンジル−１６，１７−セコ−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１６，１７−イミド（２１））
３−ベンジル−マリアノル酸（９）（５００ｍｇ、１．２２ｍｍｏｌ）を、ベンジルアミン（６．２５ｍＬ、５７．２２ｍｍｏｌ）とともに攪拌し、そしてＮ２の雰囲気下にて３時間、１８０℃にて加熱した。冷却した後、得られた褐色混合物を、水（２５０ｍＬ）に注ぎ、ＨＣｌ  ５Ｍで酸性化し、そして有機画分を、酢酸エチル（５０ｍＬ）で抽出した。さらに徹底的に水（１×２５ｍＬ）、次いでブライン（３×２５ｍＬ）で洗浄し、その有機層を、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過しそして減圧下でエバポレートした。溶出液としてクロロホルム／ヘキサン（８／２）を用いるフラッシュクロマトグラフィーによって得られた粗生成物の画分から、クリーム色粉末として２１（３８５ｍｇ、６５％）を得た：
【０４６０】
【化７０】
2005506359.tif 000078
2005506359.tif 000079
ＨＰＬＣ分析およびＣＨＮ分析のために、サンプルをＭｅＯＨから再結晶化して、無色針状結晶を得た。ＨＰＬＣ（メタノール／水、９０：１０；λｍａｘ＝２２０．０ｎｍ）Ｒｔ＝５．８３分、９９．０％。実測値：Ｃ、８０．１０；Ｈ、６．９１；Ｎ、２．９４。Ｃ３２Ｈ３３ＮＯ３理論値：Ｃ、８０．１４；Ｈ、６．９４；Ｎ、２．９２。
【０４６１】
（２−３−前駆体の脱保護）
（３−ヒドロキシ−１６，１７−セコ−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１６，１７−イミド（５）（ＳＴＸ  １８７））
水素添加条件（１−４を参照）に従って、１０（３５０ｍｇ、８９９μｍｏｌ）およびＰｄ−Ｃ（１０％、１００ｍｇ）のＭｅＯＨ／ＴＨＦ  １：１（５０ｍＬ）懸濁液に５時間水素添加して、白色固体として５（２４６ｍｇ、９１％）を得た。分析用サンプルを、ＣＨＣｌ３／ヘキサン  ２：１から再結晶化して、白色結晶を得た：
【０４６２】
【化７１】
2005506359.tif 000080
2005506359.tif 000081
。
【０４６３】
（３−ヒドロキシ−Ｎ−メチル−１６，１７−セコ−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１６，１７−イミド（２２）（ＳＴＸ  １８８））
水素添加条件（ＶＩ−１−４を参照）に従って、１１（４００ｍｇ、９９２μｍｏｌ）およびＰｄ−Ｃ（１０％、２００ｍｇ）のＭｅＯＨ／ＴＨＦ  ２：１（３０ｍＬ）懸濁液に２時間水素添加して、白色固体として２２（２５３ｍｇ、８１％）を得た。分析用サンプルを、酢酸エチルから再結晶化して、白色結晶を得た：
【０４６４】
【化７２】
2005506359.tif 000082
ａＣ−１３シグナルは、溶媒ピークの下に隠れる。
【０４６５】
（３−ヒドロキシ−Ｎ−エチル−１６，１７−セコ−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１６，１７−イミド（２３）（ＳＴＸ  ２７５））
水素添加条件（ＶＩ−１−５を参照）に従って、１２（４７０ｍｇ、１．３３ｍｍｏｌ）およびＰｄ−Ｃ（１０％、２００ｍｇ）のＭｅＯＨ／ＴＨＦ  ２：１（３０ｍＬ）懸濁液に４．５時間水素添加して、白色粉末として２３（１８３ｍｇ、５０％）を得た。これを、アセトン中で洗浄して、白色粉末（１２１ｍｇ、３３％）を得た：
【０４６６】
【化７３】
2005506359.tif 000083
2005506359.tif 000084
。
【０４６７】
（３−ヒドロキシ−Ｎ−プロピル−１６，１７−セコ−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１６，１７−イミド（２４）（ＳＴＸ  １８９））
水素添加条件（ＶＩ−１−５を参照）に従って、１３（４００ｍｇ、９２７μｍｏｌ）およびＰｄ−Ｃ（１０％、１００ｍｇ）のＭｅＯＨ／ＴＨＦ  ２：１（３０ｍＬ）懸濁液に３時間水素添加して、白色固体として２４（２５６ｍｇ、８１％）を得た。分析用サンプルをメタノールから再結晶化して、無色の結晶を得た：
【０４６８】
【化７４】
2005506359.tif 000085
。
【０４６９】
（３−ヒドロキシ−Ｎ−ブチル−１６，１７−セコ−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１６，１７−イミド（２５）（ＳＴＸ  ２７７））
水素添加条件（ＶＩ−１−５を参照）に従って、１４（４８０ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ）およびＰｄ−Ｃ（１０％、２００ｍｇ）のＭｅＯＨ／ＴＨＦ  ２：１（３０ｍＬ）懸濁液に２時間水素添加して、白色固体として２５（３６１ｍｇ、９４％）を得た。これを、メタノールから再結晶化して、無色針状結晶（１９３ｍｇ、５０％）を得、この生成物のさらなる生成（ｃｒｏｐ）（４９ｍｇ）を、メタノールからの再結晶の際の母液の残渣から得た（全収率６３％）：
【０４７０】
【化７５】
2005506359.tif 000086
。
【０４７１】
（３−ヒドロキシ−Ｎ−ペンチル−１６，１７−セコ−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１６，１７−イミド（２６）（ＳＴＸ  １９０））
水素添加条件（ＶＩ−１−５を参照）に従って、１５（５２０ｍｇ、１．１３ｍｍｏｌ）およびＰｄ−Ｃ（１０％、１００ｍｇ）のＭｅＯＨ／ＴＨＦ  ２：１（３０ｍＬ）懸濁液に３時間水素添加し、白色固体として２６（３４７ｍｇ、８３％）を得た。分析用サンプルをメタノールから再結晶化して、白色結晶を得た：
【０４７２】
【化７６】
2005506359.tif 000087
2005506359.tif 000088
（３−ヒドロキシ−Ｎ−ヘキシル−１６，１７−セコ−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１６，１７−イミド（２７）（ＳＴＸ  ２７６））
水素添加条件（ＶＩ−１−５を参照）に従って、１６（５４０ｍｇ、１．１４ｍｍｏｌ）およびＰｄ−Ｃ（１０％、２００ｍｇ）のＭｅＯＨ／ＴＨＦ  ２：１（４５ｍＬ）懸濁液に３時間水素添加して、白色固体として２７（３８４ｍｇ、８８％）を得た。これをメタノールから再結晶化して、白色結晶（２１８ｍｇ、５０％）を得、そしてこの生成物のさらなる生成（４５ｍｇ）を、メタノールからの再結晶の際の母液の残渣から得た（全収率６０％）：
【０４７３】
【化７７】
2005506359.tif 000089
。
【０４７４】
（３−ヒドロキシ−Ｎ−ブロモブチル−１６，１７−ｓｅｃｏ−ｅｓｔｒａ−１，３，５（１０）−トリエン−１６，１７−イミド（２８）（ＳＴＸ２３５））
水素添加条件（ＶＩ−１−５参照）に従って、ＭｅＯＨ／ＴＨＦ２：１（３０ｍＬ）中の１７（２１０ｍｇ，３８１μｍｏｌ）およびＰｄ−Ｃ（１０％，１００ｍｇ）の懸濁液を、２時間水素添加し、白色固体（１４６ｍｇ、８４％）として、２８を得た。これを、メタノールから再結晶し、白色結晶（９８ｍｇ，５７％）を得た：
【０４７５】
【化７８】
2005506359.tif 000090
2005506359.tif 000091
（３−ヒドロキシ−Ｎ−シクロプロピルメチル−１６，１７−ｓｅｃｏ−ｅｓｔｒａ−１，３，５（１０）−トリエン−１６，１７−イミド（２９）（ＳＴＸ２７８））
水素添加条件（ＶＩ−１−５参照）に従って、ＭｅＯＨ／ＴＨＦ２：１（４５ｍＬ）中の１８（５００ｍｇ，１．１３ｍｍｏｌ）およびＰｄ−Ｃ（１０％，２００ｍｇ）の懸濁液を、２．５時間水素添加し、白色固体（３５６ｍｇ，８９％）として２９を得た。これをメタノールから再結晶し、無色結晶（１８１ｍｇ，４５％）を得、さらなるクロップの生成物（７３ｍｇ）を、メタノールからの再結晶の際の母液の残りから得た。（全収率６４％）：
【０４７６】
【化７９】
2005506359.tif 000092
2005506359.tif 000093
（３−ヒドロキシ−Ｎ−（３−ピコリル）−１６，１７−ｓｅｃｏ−ｅｓｔｒａ−１，３，５（１０）−トリエン−１６，１７−イミド（３０）（ＳＴＸ２３４））
水素添加条件（ＶＩ−１−５参照）に従って、ＭｅＯＨ／ＴＨＦ２：１（３０ｍＬ）中の１９（１９０ｍｇ，３９５μｍｏｌ）およびＰｄ−Ｃ（１０％，１００ｍｇ）の懸濁液を、２０時間水素添加し、クリーム状固体（１４１ｍｇ，９１％）として、３０を得た。分析サンプルを、酢酸メチルから沈殿させ、白色粉末を得た：
【０４７７】
【化８０】
2005506359.tif 000094
（３−ヒドロキシ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル−１６，１７−ｓｅｃｏ−ｅｓｔｒａ−１，３，５（１０）−トリエン−１６，１７−イミド（３１）（ＳＴＸ２７９））
水素添加条件（ＶＩ−１−５参照）に従って、ＭｅＯＨ／ＴＨＦ２：１（３０ｍＬ）中の２０（６２０ｍｇ，１．１６ｍｍｏｌ）およびＰｄ−Ｃ（１０％，２００ｍｇ）の懸濁液を、５時間水素添加し、クリーム状固体（５５０ｍｇ）として３１を得た。これを、メタノールから再結晶し、白色フレーク状結晶（４１７ｍｇ，８１％）を得、さらなるクロップの生成物（３１ｍｇ）を、メタノールからの再結晶の際の母液の残りから得た（全収率８７％）：
【０４７８】
【化８１】
2005506359.tif 000095
2005506359.tif 000096
（３−ヒドロキシ−Ｎ−ベンジル−１６，１７−ｓｅｃｏ−ｅｓｔｒａ−１，３，５（１０）−トリエン−１６，１７−イミド（３２）（ＳＴＸ２３３））
水素添加条件（ＶＩ−１−５参照）に従って，ＭｅＯＨ／ＴＨＦ２：１（３０ｍＬ）中の２１（２３０ｍｇ，４７９μｍｏｌ）およびＰｄ−Ｃ（１０％，１００ｍｇ）の懸濁液を、２時間水素添加し、白色固体（１７０ｍｇ，９１％）として３２を得た。これを沸騰ＭｅＯＨで洗浄し、白色沈殿物（１２２ｍｇ，６５％）を得た：
【０４７９】
【化８２】
2005506359.tif 000097
ｂ溶媒ピーク下に隠れた１本の二重線。
【０４８０】
（２−４−Ｎ−アリル誘導体の合成）
（３−ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチルシリル−１６，１７−ｓｅｃｏ−ｅｓｔｒａ−１，３，５（１０）−トリエン−１６，１７−イミド（３３））
ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の５（３５０ｍｇ，１．１７ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、室温、Ｎ２下で、イミダゾール（９６ｍｇ、１．４０ｍｍｏｌ）およびｔｅｒｔ−ブチル−ジメチルシリルクロリド（１９４ｍｇ，１．２９ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を室温、Ｎ２下で２時間撹拌し、別の２当量のイミダゾールおよびＴＢＤＭＳＣｌを加え、室温でさらに２時間後、反応の完了を可能にした。次いで、この混合物を水（１５０ｍＬ）に注入し、得られた溶液を酢酸エチル（１５０ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、Ｈ２Ｏ（４×８０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、減圧下で濃縮した。得られた白色固体をＥｔＯＨ／Ｈ２Ｏから再結晶し、白色結晶（３３６ｍｇ、７０％）として３３を得、さらなるクロップの生成物（４０ｍｇ）を、ＥｔＯＨ／Ｈ２Ｏからの再結晶の際の母液の残りから得た（全収率７８％）：
【０４８１】
【化８３】
2005506359.tif 000098
（３−ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチルシリル−Ｎ−アリル−１６，１７−ｓｅｃｏ−ｅｓｔｒａ−１，３，５（１０）−トリエン−１６，１７−イミド（３４））
アルキル化条件（ＶＩ−１−３参照）に従って、３３（３００ｍｇ、７２５μｍｏｌ）をＮａＨ（３５ｍｇ、８７０μｍｏｌ）で処理し、アリルブロミド（１２６μＬ、１．４５ｍｍｏｌ）との後の反応を、７時間内に完了した。溶出液としてのクロロホルムを用いたフラッシュクロマトグラフィーによって得られる粗生成物の画分化により、３４をクリーム状オイル（３０２ｍｇ、９２％）として得た：
【０４８２】
【化８４】
2005506359.tif 000099
（３−ヒドロキシ−Ｎ−アリル−１６，１７−ｓｅｃｏ−ｅｓｔｒａ−１，３，５（１０）−トリエン−１６，１７−イミド（３５）（ＳＴＸ２７４））
テトラブチルアンモニウムフルオリド水和物（１８３ｍｇ，７０１μｍｏｌ）を、室温、Ｎ２雰囲気下で、無水ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の３４（２６５ｍｇ、５８４μｍｏｌ）の撹拌溶液に加えた。この反応混合物を室温で２時間撹拌し、別の１．２当量のＴＢＡＦを加え、反応の完了を可能にした。５時間後、この混合物を水（４０ｍＬ）に注入し、形成した白色沈殿物をろ過し、洗浄し、空気乾燥し、白色粉末（１７２ｍｇ、８７％）を得た。酢酸エチルからの再結晶によって得られる粗生成物の精製は、３５を白色結晶（１０１ｍｇ、５１％）として得、さらなるクロップの生成物（１３ｍｇ）を、酢酸エチルからの再結晶の際の母液の残りから得た（全収率５８％）：
【０４８３】
【化８５】
2005506359.tif 000100
2005506359.tif 000101
（２−５−スルファモイル化した親化合物の合成）
（３−スルファモイル−１６，１７−ｓｅｃｏ−ｅｓｔｒａ−１，３，５（１０）−トリエン−１６，１７−イミド（３６）（ＳＴＸ２１１））
スルファモイル化条件（ＶＩ−１−５参照）に従って、１ｍＬ  ＤＭＡ中で５（１００ｍｇ，３３４μｍｏｌ）を塩化スルファモイルと反応させ、４時間後、粗生成物３６（９４ｍｇ）を得た。これを、沸騰アセトンで洗浄し、不溶の白色固体を濾過した（５６ｍｇ，４４％）。
【０４８４】
【化８６】
2005506359.tif 000102
（３−スルファモイル−Ｎ−メチル−１６，１７−ｓｅｃｏ−ｅｓｔｒａ−１，３，５（１０）−トリエン−１６，１７−イミド（３７）（ＳＴＸ２１２））
スルファモイル化条件（ＶＩ−１−５参照）に従って、１ｍＬ  ＤＭＡで２２（１００ｍｇ，３１９μｍｏｌ）を塩化スルファモイルと反応させ、３時間後、粗生成物３７（１０２ｍｇ）を得た。これを、クロロホルムから再結晶し、白色結晶（６０ｍｇ、４８％）として３７を得、さらなるクロップの生成物（２４ｍｇ）を、クロロホルムからの再結晶の際の母液の残りから得た（全収率６７％）：
【０４８５】
【化８７】
2005506359.tif 000103
（３−スルファモイル−Ｎ−エチル−１６，１７−ｓｅｃｏ−ｅｓｔｒａ−１，３，５（１０）−トリエン−１６，１７−イミド（３８）（ＳＴＸ２８１））
スルファモイル化条件（ＶＩ−１−５参照）に従って、１ｍＬ  ＤＭＡ中で２３（７０ｍｇ，２１４μｍｏｌ）を塩化スルファモイルと反応させ、１．５時間後、粗生成物３８（８６ｍｇ）を得た。これを、酢酸エチル／ヘキサン１：２から再結晶し、クリーム状結晶（７２ｍｇ、８３％）として３８を得た。
【０４８６】
【化８８】
2005506359.tif 000104
（３−スルファモイル−Ｎ−プロピル−１６，１７−ｓｅｃｏ−ｅｓｔｒａ−１，３，５（１０）−トリエン−１６，１７−イミド（３９）（ＳＴＸ２１３））
スルファモイル化条件（ＶＩ−１−５参照）に従って、１ｍＬ  ＤＭＡ中で２４（１００ｍｇ，２９３μｍｏｌ）を塩化スルファモイルと反応させ、６時間後、粗生成物３９（１５６ｍｇ）を得た。溶出液としてのクロロホルム／アセトン（９５：５）を用いるフラッシュクロマトグラフィーによって得られる粗生成物の画分化は、白色残渣として３９（１０７ｍｇ、８７％）を得た。分析サンプルを、アセトン／ヘキサン（１：２）から再結晶し、白色結晶を得た：
【０４８７】
【化８９】
2005506359.tif 000105
（３−スルファモイル−Ｎ−ブチル−１６，１７−ｓｅｃｏ−ｅｓｔｒａ−１，３，５（１０）−トリエン−１６，１７−イミド（４０）（ＳＴＸ２８３））
スルファモイル化条件（ＶＩ−１−５参照）に従って、１ｍＬ  ＤＭＡ中で２５（９０ｍｇ，２５３μｍｏｌ）を塩化スルファモイルと反応させ、１．５時間後、粗生成物４０（１０９ｍｇ）を得た。得られた粗生成物をアセトン／ヘキサン１：２から再結晶し、白色結晶として４０（６７ｍｇ、６１％）を得、さらなるクロップの生成物（１１ｍｇ）を、アセトン／ヘキサン１：２からの再結晶の際の母液の残りから得た（全収率７１％）：
【０４８８】
【化９０】
2005506359.tif 000106
2005506359.tif 000107
（３−スルファモイル−Ｎ−ペンチル−１６，１７−ｓｅｃｏ−ｅｓｔｒａ−１，３，５（１０）−トリエン−１６，１７−イミド（４１）（ＳＴＸ２１４））
スルファモイル化条件（ＶＩ−１−５参照）に従って、１ｍＬ  ＤＭＡ中で２６（１００ｍｇ，２７１μｍｏｌ）を塩化スルファモイルと反応させ、３．５時間後、粗生成物４１（１２０ｍｇ）を得た。溶出液としてクロロホルム／アセトン（９５：５）を用いるフラッシュクロマトグラフィーによって得られた粗生成物の画分を、白色泡状物（１１１ｍｇ、９２％）として４１を得た。分析サンプルを酢酸エチル／ヘキサン（１：２）から再結晶し、白色結晶を得た。
【０４８９】
【化９１】
2005506359.tif 000108
（３−スルファモイル−Ｎ−ヘキシル−１６，１７−ｓｅｃｏ−ｅｓｔｒａ−１，３，５（１０）−トリエン−１６，１７−イミド（４２）（ＳＴＸ２８２））
スルファモイル化条件（ＶＩ−１−５参照）に従って、２．５ｍＬ  ＤＭＡ中で２７（１３０ｍｇ，３３９μｍｏｌ）を塩化スルファモイルと反応させ、２時間後、粗生成物４２（１５７ｍｇ）を得た。得られた粗生成物を、溶出液としてクロロホルム／アセトン（９：１）を用いるフラッシュクロマトグラフィーによって画分化し、白色泡状物（１２７ｍｇ、８１％）を得た。これを酢酸エチル／ヘキサン１：２から再結晶し、無色結晶（７７ｍｇ、４９％）として、４２を得た：
【０４９０】
【化９２】
2005506359.tif 000109
（３−スルファモイル−Ｎ−ブロモブチル−１６，１７−ｓｅｃｏ−ｅｓｔｒａ−１，３，５（１０）−トリエン−１６，１７−イミド（４３）（ＳＴＸ２８６））
水素化ナトリウム（鉱油中６０％分散液，１４ｍｇ，３５９μｍｏｌ）を、０℃でＮ２雰囲気下で、無水ＤＭＦ（２ｍＬ）中の２８（１３０ｍｇ、２９９μｍｏｌ）の撹拌溶液に加えた。水素の発生がなくなった後、塩化スルファモイル（６当量）を加えた。次いで、この反応混合物を、Ｎ２下で２時間（この時間は、室温まで温まる時間である）撹拌した。この混合物をブライン（３０ｍＬ）に注入し、得られた溶液を酢酸エチル（２×３０ｍＬ）で抽出した。この有機層を分離し、ブライン（５×２５ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして減圧下で濃縮した。溶出液としてクロロホルム／アセトン（９：１）を用いるフラッシュクロマトグラフィーによって得られる粗生成物（１８８ｍｇ）の画分化により、白色泡状物（１５４ｍｇ、１００％）として、４３を与えた。これを、酢酸エチル／ヘキサン１：２から再結晶し、白色結晶（１１３ｍｇ、７３％）を得、さらなるクロップの生成物（１２ｍｇ）を、酢酸エチル／ヘキサン１：２からの再結晶の際の母液の残りから得た（全収率８１％）：
【０４９１】
【化９３】
2005506359.tif 000110
（３−スルファモイル−Ｎ−シクロプロピルメチル−１６，１７−ｓｅｃｏ−ｅｓｔｒａ−１，３，５（１０）−トリエン−１６，１７−イミド（４４）（ＳＴＸ２８４））
スルファモイル化条件（ＶＩ−１−５参照）に従って，１ｍＬ  ＤＭＡ中で２９（１００ｍｇ，２８３μｍｏｌ）を塩化スルファモイルと反応させ、１．５時間後、粗生成物４４（１２７ｍｇ）を得た。これをアセトン／ヘキサン１：２から再結晶し、白色結晶（８４ｍｇ、６９％）として４４を得、さらなるクロップの生成物（２８ｍｇ）を、アセトン／ヘキサン１：２からの再結晶の際の母液の残りから得た（全収率９２％）
【０４９２】
【化９４】
2005506359.tif 000111
2005506359.tif 000112
（３−スルファモイル−Ｎ−（３−ピコリル）−１６，１７−ｓｅｃｏ−ｅｓｔｒａ−１，３，５（１０）−トリエン−１６，１７−イミド（４５）（ＳＴＸ２３７））
スルファモイル化条件（ＶＩ−１−５参照）に従って、０．５ｍＬのＤＭＡ中で３０（５５ｍｇ，１５４μｍｏｌ）を塩化スルファモイルと反応させ、２時間後、粗生成物４５（５０ｍｇ）を得た。得られた粗生成物を、溶出液としてクロロホルム／アセトン（７：３）を用いたフラッシュクロマトグラフィーによって画分化し、白色粉末（２７ｍｇ、４１％）として４５を与えた。これを沸騰アセトンで洗浄し、白色沈殿物を濾過した（１０ｍｇ、１５％）：
【０４９３】
【化９５】
2005506359.tif 000113
（３−スルファモイル−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル−１６，１７−ｓｅｃｏ−ｅｓｔｒａ−１，３，５（１０）−トリエン−１６，１７−イミド（４６）（ＳＴＸ２８５））
スルファモイル化条件（ＶＩ−１−５参照）に従って、２ｍＬのＤＭＡ中で３１（２００ｍｇ，４４９μｍｏｌ）を塩化スルファモイルと反応させ、６．５時間後、粗生成物４６（２３５ｍｇ）を得た。これを、酢酸エチル／ヘキサン１：２から再結晶し、４６を白色結晶（１９９ｍｇ、８５％）として得た：
【０４９４】
【化９６】
2005506359.tif 000114
2005506359.tif 000115
（３−スルファモイル−Ｎ−ベンジル−１６，１７−ｓｅｃｏ−ｅｓｔｒａ−１，３，５（１０）−トリエン−１６，１７−イミド（４７）（ＳＴＸ２３６））
スルファモイル化条件（ＶＩ−１−５参照）に従って、１．５ｍＬのＤＭＡ中で３２（１５０ｍｇ，３８５μｍｏｌ）を塩化スルファモイルと反応させ、３時間後、粗生成物４７（２０５ｍｇ）を得た。得られた粗生成物を、溶出液としてクロロホルム／アセトン（９：１）を用いたフラッシュクロマトグラフィーによって画分化し、白色粉末（１５１ｍｇ、８４％）として４７を得た。これをアセトン／ヘキサン１：２から再結晶し、白色結晶（１３３ｍｇ、７４％）を得た：
【０４９５】
【化９７】
2005506359.tif 000116
（３−スルファモイル−Ｎ−アリル−１６，１７−ｓｅｃｏ−ｅｓｔｒａ−１，３，５（１０）−トリエン−１６，１７−イミド（４８）（ＳＴＸ２８０））
スルファモイル化条件（ＶＩ−１−５参照）に従って、２ｍＬのＤＭＡ中で３５（１５０ｍｇ，３４５μｍｏｌ）を塩化スルファモイルと反応させ、３時間後、粗生成物４８（８５ｍｇ）を得た。得られた粗生成物を、溶出液としてクロロホルム／アセトン（９：１）を用いたフラッシュクロマトグラフィーによって画分化し、白色泡状物（８５ｍｇ、９９％）として４８を得た。これをアセトン／ヘキサン１：２から再結晶し、白色結晶（７５ｍｇ、８７％）を得た：
【０４９６】
【化９８】
2005506359.tif 000117
ｃ溶媒ピーク下に隠れた１本の二重線。
【０４９７】
（２−６−スルファモイル化した親化合物の合成）
（２−ヨード−エストロン（４９）
５５℃まで加温した酢酸（５７０ｍＬ）およびテトラヒドロフラン（２８０ｍＬ）の混合物中のエストロン（ｏｅｓｔｒｏｎｅ）（１０ｇ、３６．９８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、酢酸水銀（５．８９ｇ、１８．４９ｍｍｏｌ）を加えた。１５分後、ヨウ素（８．７０ｇ、３４．３７ｍｍｏｌ）を加え、透明橙色溶液を得、これを室温で２時間撹拌した。次いで、この得られた希黄色混合物を減圧下で濃縮し、ヨウ化カリウムの溶液（５％水溶液、３００ｍＬ）を加えた。この有機画分を酢酸エチル（２×３００ｍＬ）で抽出し、チオ硫酸ナトリウム水溶液（３×２００ｍＬ）およびブライン（１×２００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、ろ過し、真空下でエバポレートした。酢酸からまず再結晶して得られた粗褐色固体は、青色固体（６．４２ｇ、４４％）として４９を得、さらなるクロップの生成物（３．００ｇ）をエタノールからの再結晶の際の母液の残りから得た（全「粗」収率６４％）。両方のクロップをさらにエタノールから再結晶し、希灰色のフレーク状結晶（８．２０ｇ、全収率５６％）を得た。
【０４９８】
【化９９】
2005506359.tif 000118
（２−メトキシ−エストロン（５０））
２−ヨードエストロン４９（４ｇ，１０．０９ｍｍｏｌ）および塩化銅（４５２ｍｇ，３．３６５ｍｍｏｌ）を、室温、Ｎ２雰囲気下、無水ピリジン（３５ｍＬ）中で、３０分間撹拌した。次いで、新たに調製したナトリウムメトキシド（０．１０１ｍｏｌ、１９．７ｍＬ）の５．１Ｍ溶液を、この混合物に加え、青色溶液をＮ２下で４５分間還流した。冷却後、得られた橙色溶液を氷中に注ぎ、５Ｍ  ＨＣｌで酸性化した。この有機層を酢酸エチル（３×２００ｍＬ）で抽出し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液（２×２００ｍＬ）およびブライン（２×２００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、真空下でエバポレートした。得られた粗生成物を、溶出液として酢酸エチル／ヘキサン（３：１７〜５：１５）を用いるフラッシュクロマトグラフィーによって画分化し、クリーム状残渣（２．５８ｇ、７８％）として５０を得た：
【０４９９】
【化１００】
2005506359.tif 000119
（２−メトキシ−３−ベンジルオキシ−エストロン（５１））
０℃、Ｎ２雰囲気下で、ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の５０（１．９１ｇ，６．３６ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ｔｅｒｔ−ブトキシドカリウム（１．０７ｇ、９．５４ｍｍｏｌ）を何回かにわけて加えた。得られた橙色懸濁液をＮ２下で二時間（これは、室温に温まる時間である）撹拌した。次いで、臭化ベンジル（１．１３ｍＬ、９．５４ｍｍｏｌ）を加え、この混合物を室温で、Ｎ２下で二時間撹拌した。この得られた橙色溶液を水（５０ｍＬ）に注ぎ、有機画分を酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で抽出し、水（２×５０ｍＬ）、ブライン（２×５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、真空下でエバポレートした。得られた粗生成物を、エタノールから再結晶し、希橙色粉末（２．３ｇ）として５１を得た。これをさらにエタノールから再結晶しクリーム状粉末（１．５２ｇ、６１％）を得、そしてさらなるクロップの生成物（０．２９ｇ）を、エタノールからの再結晶の際の母液の残りから得た（全収率７３％）：
【０５００】
【化１０１】
2005506359.tif 000120
（２−メトキシ−３−ベンジルオキシ−マリアノル酸（ｍａｒｒｉａｎｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）（５２））
これは、ベンジルマリアノル酸９の様式と同じ様式で調製した。３５ｍＬのＭｅＯＨ中のヨウ素（２．８１ｇ、１１．０７ｍｍｏｌ）の溶液および１０ｍＬの水中のＫＯＨ（５．０５ｇ）の溶液および２２ｍＬのＭｅＯＨを、ＭｅＯＨ（７００ｍＬ）中の２−メトキシ−３−ベンジルオキシ−エストロン（５１）（１．５２ｇ，３．８９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に交互に滴下した。次いで、この得られた粗橙色泡状物（１．８０ｇ）をＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（１：２、８４ｍＬ）中のＫＯＨ（２．８ｇ）の溶液に溶解し、温めて４時間還流した。得られた橙色残渣（４．３２ｇ）を溶出液としてクロロホルム／メタノール（９５：５）を用いたフラッシュクロマトグラフィーによって画分化し、５２を橙色残渣（３１１ｍｇ、１８％）として得た：
【０５０１】
【化１０２】
2005506359.tif 000121
（２−メトキシ−３−ベンジルオキシ−１６，１７−ｓｅｃｏ−ｅｓｔｒａ−１，３，５（１０）−トリエン−１６，１７−イミド（５３））
これは、１８０℃における２−メトキシ−３−ベンジルオキシ−マリアノル酸（５２）（３００ｍｇ、６８４ｍｍｏｌ）と尿素（３００ｍｇ、４．９９ｍｍｏｌ）との反応によって、１０の様式と同様の様式で調製した。得られた粗生成物を、溶出液としてクロロホルム／アセトン（９５：５）を用いたフラッシュクロマトグラフィーによって画分化し、５３を希黄色粉末（１７０ｍｇ、５９％）として得た：
【０５０２】
【化１０３】
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（２−メトキシ−３−ヒドロキシ−１６，１７−ｓｅｃｏ−ｅｓｔｒａ−１，３，５（１０）−トリエン−１６，１７−イミド（５４）（ＳＴＸ３２５））
水素化条件（ＶＩ−１−４を参照）に従って、ＭｅＯＨ／ＴＨＦ２：１（１５ｍＬ）中の５３（１５０ｍｇ、３５７μｍｏｌ）およびＰｄ−Ｃ（１０％、８０ｍｇ）の懸濁液を４時間水素化し、５４を希黄色粉末（１１５ｍｇ、９７％）として得た。分析サンプルをメタノールから再結晶し、白色結晶を得た：
【０５０３】
【化１０４】
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（２−メトキシ−３−スルファモイル−１６，１７−ｓｅｃｏ−ｅｓｔｒａ−１，３，５（１０）−トリエン−１６，１７−イミド（５５）（ＳＴＸ３２６））
水素化ナトリウム（鉱油中６０％分散液、８ｍｇ、２００μｍｏｌ）を、０℃、Ｎ２雰囲気下で、無水ＤＭＦ（１ｍＬ）中の５４（５５ｍｇ、１６７μｍｏｌ）の撹拌溶液に加えた。水素の発生がなくなった後、塩化スルファモイル（６当量）を加えた。次いで、この反応混合物をＮ２下で一晩（これは、室温まで温まる時間である）撹拌した。この混合物をブライン（２０ｍＬ）に注ぎ、得られた溶液を酢酸エチル（２×２０ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、ブライン（４×２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、減圧下で濃縮した。得られた粗生成物を溶出液としてクロロホルム／アセトン（８：２）を用いるフラッシュクロマトグラフィーによって画分化し、白色泡状物（３０ｍｇ、４８％）として５５を得た。これを、アセトン／ヘキサン１：２から再結晶し、白色結晶（２３ｍｇ、３７％）を得た：
【０５０４】
【化１０５】
2005506359.tif 000124
上記の明細書中で言及した全ての刊行物および特許および特許出願は、本明細書中で参考として援用される。
【０５０５】
本発明の種々の改変および変更は、本発明の範囲および精神から逸脱することなく、当業者に明らかである。本発明は特定の好ましい実施形態と組み合わせて記載されてきたが、請求される本発明は、このような特定の実施形態に過度に限定されるべきではないことが理解されるべきである。実際に、化学、生物学または関連の分野における当業者に自明である、本発明を実施するために記載された様式の種々の改変は、前述の特許請求の範囲の範囲内であることが意図される。
【０５０６】
（略語）
Å                  オングストローム
Ａｃ                アセチル
Ａｃｃ  ＭＳ        正確な質量分析
Ａｄｉｏｌ          アンドロステンジオール
Ａｄｉｏｎｅ        アンドロステンジオン
ＡＧ                アミノグルテチミド（ａｍｉｎｏｇｌｕｔｈｅｔｈｉｍｉｄｅ）
ａｑ                水溶液
Ａｒ                アリール
ａｒｏｍ            芳香族
ＢＭＡ              ３−ベンジル−マリアノル酸
Ｂｎ                ベンジル
ｂｒ                ブロード
℃                  摂氏度
１３Ｃ  ＮＭＲ        カーボンＮＭＲ
ｃａ                およそ
ｃｍ                センチメートル
ＣＯＵＭＡＴＥ      ４−メチルクマリン−７−Ｏ−スルファメート
δ                  化学シフト（ｐｐｍ）
ｄ                  二重線
ｄｄ                二重線の二重線
ＤＨＥＡ            デヒドロエピアンドロステロン
ＤＭＦ              Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ            ジメチルスルホキシド
Ｅ１                エステロン
Ｅ２                エストラジオール
ＥＭＡＴＥ          エストロン−３−Ｏ−スルファメート
ＥＲ                エストロゲンレセプター
ｅｑ                当量
ＦＡＢ              高速原子衝撃
ｇ                  グラム
ｈ                  時間
ｈＥＲ              ヒトエストロゲンレセプター
１Ｈ  ＮＭＲ        プロトンＮＭＲ
ＨＰＬＣ            高圧液体クロマトグラフィー
１７β−ＨＳＤ      １７β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ
Ｈｚ                ヘルツ
ＩＣ５０              ５０％阻害を引き起こす濃度
ＩＲ                赤外
Ｊ                  カップリング定数（Ｈｚ）
λｍａｘ              最大吸収波長
ｌｉｔ．            参考文献
μ                  マイクロ
ｍ                  多重線
Ｍ                  モル／リットル
ｍ−ＮＢＡ          メタ−ニトロベンジルアルコール
ｍ−ＲＮＡ          メッセンジャーリボ核酸
ＭＨｚ              メガヘルツ
ｍｉｎ              分
ｍｍｏｌ            ミリモル
ｍｏｌ              モル
ｍｐ                融点
ＭＳ                質量分析
Ｍ／Ｚ              質量／電荷比
ＭＡＤＰＨ          ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホスフェート
ｎＭ                ナノモル
ＮＭＲ              核磁気共鳴
ｐｐｍ              １００万分の１部
Ｒｆ                保持因子
ｒ．ｔ．            室温
Ｓ．Ｄ．            標準偏差
Ｐｄ−Ｃ            パラジウム−炭素
ＴＢＡＦ            テトラブチルアンモニウムフロリド
ＴＢＤＭＳ          ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチルシリル
ＴＨＦ              テトラヒドロフラン
ＴＬＣ              薄層クロマトグラフィー
ＴＭＳ              テトラメチルシラン
ν                  シグナルの振動数（Ｈｚ）
ｖｓ                対
【０５０７】
【表６】
2005506359.tif 000125
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2005506359.tif 000127
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【図面の簡単な説明】
【０５０８】
【図１】記載なし
【図２】記載なし
【図３】記載なし
【図１】
2005506359.tif 000141
【図２】
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【図３】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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