(57)【要約】本発明は式（Ｉ）：（式中、Ａは活性ヒドロキシもしくはアミノ官能基を含む活性物質であり、Ｂは活性ヒドロキシもしくはアミノ官能基を含むバイオポリマーであり、Ｘ1およびＸ2は独立してＮもしくはＯであり、そしてＲは長さが原子数１から約３０個である置換アルキルもしくは非置換アルキルまたは非置換もしくは置換ヘテロアルキルである）のバイオコンジュゲートを提供する。【化１】2005537266.tif 000067  バイオポリマーは、例えば輸送タンパク質または輸送タンパク質へ向けられた抗体（例えば、ｐ９７タンパク質またはそれに対する抗体）でもよい。活性物質は化学療法薬または抗新生物薬または酵素等の治療薬であってよい。バイオコンジュゲートは、活性物質の治療適応による治療用途に使用できる。バイオコンジュゲートおよびそのようなバイオコンジュゲートを作製する際に使用できる二官能イソシアネート架橋試薬を作製する方法が提供される。
2005537266.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の式のバイオコンジュゲート化合物を生成する方法であって、
【化１】
2005537266.tif 000061
（式中、
Ａは活性物質成分であり、
Ｂはバイオポリマー成分であり、
Ｘ1およびＸ2は独立してＮまたはＯであり、
Ｒは置換アルキレンもしくは非置換アルキレンまたは非置換もしくは置換ヘテロアルキレンであり、ここで、前記Ｒ成分は長さが原子数１から約３０個である）
Ａ前駆体もしくはＢ前駆体（ここで、Ａ前駆体およびＢ前駆体は独立して活性ヒドロキシもしくはアミノ官能基を含む）の一方を、下記の式：
【化２】
2005537266.tif 000062
または
【化３】
2005537266.tif 000063
の一方の二官能イソシアネート化合物と、イソシアネート官能基がＡ前駆体もしくはＢ前駆体のヒドロキシもしくはアミノ基と共有的に反応して第１反応生成物を生成する反応条件下で接触させるステップと；そして次に
Ａ前駆体もしくはＢ前駆体の他方と第１反応生成物とを、第１反応生成物がＡ前駆体もしくはＢ前駆体の他方と反応してバイオコンジュゲート化合物を生成する反応条件下で接触させるステップと
を含む方法。
【請求項２】
前記活性物質が薬物である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記バイオポリマーがタンパク質である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
Ａを二官能イソシアネート成分と接触させて、第１反応生成物が生成される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
Ｂを二官能イソシアネート成分と接触させて、第１反応生成物が生成される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
Ｘ1がＯである、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
Ｘ1がＮである、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
Ｘ2がＯである、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
Ｘ2がＮである、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
Ｒの長さが原子数１から約１０個である、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
Ｒが−（ＣＨ2Ｏ）nＣＨ2−であり、ｎが１から約１５である、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
Ｒが−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）nＣＨ2−であり、ｎが１から約１０である、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
Ｒの長さが原子数３から７個である、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
二官能イソシアネート化合物が式：
【化４】
2005537266.tif 000064
の化合物である、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記二官能イソシアネート化合物が式：
【化５】
2005537266.tif 000065
の化合物である、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記バイオポリマーがｐ９７である、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記ｐ９７が組換え型である、請求項２に記載の方法。
【請求項１８】
前記活性物質が薬物である、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記薬物が抗新生物薬である、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
前記薬物がカンプトテシン、１０−ヒドロキシカンプトテシン、タキソール、またはドキソルビシンである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記薬物が中枢神経系障害を治療するために有用である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
前記活性物質が酵素である、請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
前記活性物質が酵素である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２４】
前記薬物が１，０００ダルトン未満の薬物である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２５】
前記薬物が４００ダルトン未満の薬物である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２６】
以下の式のバイオコンジュゲート化合物。
【化６】
2005537266.tif 000066
（式中、
Ａは活性物質成分であり、
Ｂはバイオポリマー成分であり、
Ｘ1およびＸ2は独立してＮまたはＯであり、
Ｒは長さが原子数１から約３０個の、置換アルキレンもしくは非置換アルキレンまたは非置換もしくは置換ヘテロアルキレンである）
【請求項２７】
前記活性物質が標識されている、請求項２６に記載の化合物。
【請求項２８】
前記バイオポリマーがタンパク質である、請求項２６に記載の化合物。
【請求項２９】
Ｘ1がＯである、請求項２６に記載の化合物。
【請求項３０】
Ｘ1がＮである、請求項２６に記載の化合物。
【請求項３１】
Ｘ2がＯである、請求項２６に記載の化合物。
【請求項３２】
Ｘ2がＮである、請求項２６に記載の化合物。
【請求項３３】
Ｒの長さが原子数１から約１０個である、請求項２６に記載の化合物。
【請求項３４】
Ｒが−（ＣＨ2Ｏ）nＣＨ2−であり、ｎが１から約１５である、請求項２６に記載の化合物。
【請求項３５】
Ｒが−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）nＣＨ2−であり、ｎが１から約１０である、請求項２６に記載の化合物。
【請求項３６】
Ｒの長さが原子数３から７個である、請求項２６に記載の化合物。
【請求項３７】
前記バイオポリマーがｐ９７である、請求項２６に記載の化合物。
【請求項３８】
前記活性物質が薬物である、請求項２６に記載の化合物。
【請求項３９】
前記薬物が抗新生物薬である、請求項２６に記載の化合物。
【請求項４０】
前記薬物がカンプトテシン、１０−ヒドロキシカンプトテシン、タキソール、またはドキソルビシンである、請求項３９に記載の化合物。
【請求項４１】
前記薬物が中枢神経系障害を治療するために有用である、請求項３８に記載の化合物。
【請求項４２】
前記活性物質が酵素である、請求項２６に記載の化合物。
【請求項４３】
前記活性物質がアルデュラザイムである、請求項３７に記載の化合物。
【請求項４４】
前記薬物が１，０００ダルトン未満の薬物である、請求項３８に記載の化合物。
【請求項４５】
前記薬物が４００ダルトン未満の薬物である、請求項３８に記載の化合物。
【請求項４６】
請求項２６〜４５のいずれか一項に記載の化合物および医薬上許容される賦形剤を含む組成物。
【請求項４７】
被検対象を治療する方法であって、前記被検対象へ請求項４６に記載の組成物を投与するステップを含む方法。
【請求項４８】
前記投与するステップが静脈内、経口、腹腔内、皮内または経直腸経路による、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記バイオコンジュゲートが標識をさらに含む、請求項２６に記載の化合物。
【請求項５０】
前記バイオコンジュゲートがＳＹＮ０２７である、請求項２６に記載の化合物。
【請求項５１】
アミド成分を介して長さが原子数５０個までのＰＥＧ鎖へ共有結合し、これが順にカルバメート成分を介して長さが原子数１から１５個のアルキル鎖へ結合され、さらに順にカルバメート成分を解して第１活性物質へ結合されているｐ９７を含むバイオコンジュゲート。
【請求項５２】
ＰＥＧがＰＥＧ４−１０である、請求項５１に記載のバイオコンジュゲート。
【請求項５３】
アルキルの長さが原子数３から約１０個のホモアルキルである、請求項５１に記載のバイオコンジュゲート。
【請求項５４】
第１活性物質が１０−ヒドロキシカンプトテシンである、請求項５１に記載のバイオコンジュゲート。
【請求項５５】
アミド成分を介して長さが原子数５０個までのＰＥＧ鎖へ共有結合している少なくとも１つの他の共有結合を含むバイオコンジュゲートであって、ＰＥＧ鎖が順にカルバメート成分を介して長さが原子数１から１５個のアルキル鎖へ結合しており、アルキル鎖が順にカルバメート成分を介して第２活性物質へ結合している、請求項５１に記載のバイオコンジュゲート。
【請求項５６】
第１および第２活性物質が同一であるか、または異なるものであり、異なるものである場合には同一の疾患または状態を治療する際に有用である、請求項５５に記載のバイオコンジュゲート。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の分野は、バイオコンジュゲートの薬理学である。
【背景技術】
【０００２】
活性物質とタンパク質、ポリ核酸、および多糖類等のバイオポリマーとのバイオコンジュゲーションは、活性物質およびバイオポリマー両方の複合特性を有する有用な物質を提供することができる。例えば、薬物とタンパク質または抗体とのコンジュゲーションは、遊離薬物と比較して向上した特異性、選択性、親和性、または治療指数を備える治療薬を提供することができる。バイオポリマーと検出可能な標識とのコンジュゲーションは、その移動をインビボまたはインビトロで容易に監視できるバイオポリマーを提供できる。そのようなバイオコンジュゲートは、併用の利点を保持できるように生理的条件下で加水分解に対して安定性であることが好ましい。
【０００３】
活性物質とバイオポリマーとのバイオコンジュゲートを調製するためには、多数の試薬および架橋剤を使用することができる。例えば、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ  Ｇ．Ｔ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（１９９６）を参照。イソシアネート架橋試薬を使用すると、ヒドロキシル官能基を有する生体分子を架橋させて化学的安定性のカルバメート結合を生成することができる、またはアミン官能基を有する分子と架橋させて化学的安定性のイソ尿素結合を生成することができる。しかしそのようなイソシアネート試薬は、それらが水分の存在下では急速に分解するので一般に好ましくない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
そのようなバイオコンジュゲートに関わる１つの困難は、コンジュゲート化バイオポリマーまたは化学結合がコンジュゲート化活性物質の生物学的活性を妨害する可能性である。本発明は、活性物質がインビボで加水分解して活性物質を遊離させることのできる結合を通して架橋されているバイオポリマーおよび活性物質のバイオコンジュゲートを提供する。本発明は、そのようなコンジュゲートを作製するための合成方法および架橋試薬をさらに提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
１つの態様では、本発明は活性物質がインビボおよびインビトロで酵素の攻撃にさらされるイソ尿素結合およびカルバメート結合を通して架橋されているバイオポリマーおよび活性物質のバイオコンジュゲートを提供する。これらのバイオコンジュゲートは式：
【化１】
2005537266.tif 000003
式Ｉ
（式中、Ａは活性ヒドロキシもしくはアミノ官能基を含む活性物質であり、Ｂは活性ヒドロキシもしくはアミノ官能基を含むバイオポリマーである；Ｘ1およびＸ2は独立してＮもしくはＯである；Ｒは長さが原子数１〜約３０個または１〜５０個の置換アルキルもしくは非置換アルキルまたは非置換もしくは置換ヘテロアルキルであり、ｎは１〜３０である）のバイオコンジュゲートである。ある実施形態では、バイオポリマーは輸送タンパク質（例えば、トランスサイトーシスを受ける、または１つの実体に結合してそれを身体内の１つ以上の細胞膜障壁を越えて輸送するタンパク質）または抗体である。ある実施形態では、バイオポリマーは哺乳類もしくはヒトｐ９７タンパク質または哺乳類もしくはヒトｐ９７タンパク質のフラグメントを含む。また別の実施形態では、治療薬は化学療法薬または抗新生物薬である。また別の実施形態では、活性物質は酵素活性を有する、または目的とする被検対象において不足しているタイプの酵素である。ある実施形態では、治療薬は中枢神経系の障害、状態、もしくは疾患を治療する際に有用である、または中枢神経系内の活性を調節する薬物である。ある実施形態では、ｎは１〜３０、または１〜１０である。また別の実施形態では、ｎは２〜２０である。ある実施形態では、式Ｉのバイオコンジュゲートが標識される。また別の実施形態では、標識はカルバメート基またはイソ尿素基を通してバイオコンジュゲートに共有結合した蛍光標識である。
【０００６】
また別の態様では、本発明はそのようなバイオコンジュゲートを作製するための方法および架橋試薬を提供する。本発明は、活性物質と式Ｉによるバイオポリマーとのバイオコンジュゲートを作製するための式ＩＩおよび式ＩＩＩの二官能架橋試薬の使用に及ぶ。式ＩＩおよび式ＩＩＩの二官能架橋試薬は下記の一般式を有する：
【化２】
2005537266.tif 000004
式ＩＩ
【化３】
2005537266.tif 000005
式ＩＩＩ
【０００７】
式ＩＩでは、Ｇは保護基またはブロック基を表す。ある実施形態では、ブロック基は対応するｔ−ブチルエステルを生成するｔｅｒｔ−ブチルである。式ＩＩおよび式ＩＩＩでは、Ｒは長さが原子数１〜約３０個である置換アルキルもしくは非置換アルキルまたは非置換もしくは置換ヘテロアルキルである。ある実施形態では、Ｒはポリ（メチレン）である。また別の実施形態では、Ｒは−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）n−、ポリエチレングリコールである。
【０００８】
ある実施形態では、式Ｉのバイオコンジュゲート化合物は、ＡもしくはＢの一方を下記の式：
【化４】
2005537266.tif 000006
式ＩＶ
【化５】
2005537266.tif 000007
式ＩＩＩ
の一方の二官能イソシアネート化合物と、イソシアネート官能基がＡもしくはＢのヒドロキシルもしくはアミノ基と共有的に反応して第１反応生成物を生成する反応条件下で接触させるステップと、そして次にＡもしくはＢの他方を第１反応生成物と、第１反応生成物がＡもしくはＢの他方と反応してバイオコンジュゲート化合物を生成する反応条件下で接触させるステップとによって作製される。
【０００９】
また別の態様では、本発明は活性物質とバイオポリマーとのバイオコンジュゲートを提供するが、このとき活性物質は治療薬であり、バイオポリマーは治療薬を標的部位もしくは標的区画へ輸送する、方向付ける、または送達するタンパク質であり、そして治療薬とバイオポリマーとの結合は有益にもインビボで酵素（例、プロテアーゼ、エステラーゼなど）と接触すると加水分解されて、標的部位もしくは標的区画で活性物質を遊離する。ある実施形態では、本バイオコンジュゲートはその治療薬を必要とする被検対象へ標的部位もしくは標的区画で投与され、加水分解酵素はその被検対象にとって内因性である。また別の実施形態では、バイオポリマーは輸送タンパク質または抗体である。ある実施形態では、バイオポリマーはｐ９７タンパク質である。また別の実施形態では、治療薬は化学療法薬または抗新生物薬である。また別の実施形態では、活性物質は酵素活性を有する、または目的とする投与対象において不足しているタイプの酵素である。さらに別の実施形態では、治療薬は中枢神経系の障害、状態、もしくは疾患を治療する際に有用である、または中枢神経系内の活性を調節する薬物である。そのような実施形態では、加水分解性バイオコンジュゲートは式Ｉのバイオコンジュゲートである。
【００１０】
別の態様では、本発明は式Ｉによる化合物を含む医薬組成物およびそのような医薬組成物を使用する方法を提供する。ある実施形態では、本発明は血液脳関門を越えて、または細胞内区画内へ活性物質を送達するための、活性物質とｐ９７もしくはｐ９７へ特異的に結合できる基質であるバイオポリマーとを含む、式Ｉによるバイオコンジュゲートを含む医薬組成物を提供する。本バイオコンジュゲートは、医薬上許容される担体もしくは希釈剤に入れて投与することができる。バイオポリマー、好ましくはｐ９７に対する抗体は、その物質へコンジュゲートさせることができる。他の実施形態では、ｐ９７融合タンパク質をバイオコンジュゲートのバイオポリマーとして使用できる。活性物質は成長因子またはリンホカインまたは薬物等の治療活性を有する物質であってよい。本発明は、式Ｉのバイオコンジュゲートを投与するステップを含む血液脳関門を越えて活性物質を送達する方法にさらに関するが、このときバイオポリマーはｐ９７等のトランスサイトーシスを受けるタンパク質またはそのようなタンパク質もしくはｐ９７に対する抗体またはｐ９７輸送活性を備えるｐ９７タンパク質部分もしくはｐ９７フラグメントを含む。本発明の組成物は、さらにまた血液眼障壁または血液胎盤障壁を越えて物質を送達するためにも使用できる。
【００１１】
下記の図面は本明細書の一部を成しており、本発明の態様を詳細に例示するために含まれている。本発明は、本明細書に提示した特定の実施形態についての詳細な説明と組み合わせて図面を参照することにより明確に理解できよう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明によるバイオコンジュゲートおよび好ましい実施形態は、式：
【化６】
2005537266.tif 000008
式Ｉ
（式中、Ａは活性ヒドロキシもしくはアミノ官能基を含む活性物質もしくは薬物である；およびＢは活性ヒドロキシもしくはアミノ官能基を含むターゲティングバイオポリマーもしくはデリバリーバイオポリマーである；およびＸ1およびＸ2は独立してＮもしくはＯである；Ｒは長さが原子数１〜約３０個または長さが原子数１〜５０個の置換アルキルもしくは非置換アルキルまたは非置換もしくは置換ヘテロアルキルである；およびｎは１〜３０である）のバイオコンジュゲートである。ｎが１より大きい場合、活性物質は同一であっても異なるものであってもよい。異なるものである場合、活性物質は同一の疾患または状態を治療するために有用である。「アルキル」は下記に定義するアルカンの二価ラジカルを含む。
【００１３】
また別の実施形態では、標識Ｌは式Ｉの化合物に共有結合している。標識は、活性物質部分、バイオポリマー部分、または活性物質をバイオポリマーへ結合するリンカーでバイオコンジュゲートへ結合されてよい。
【化７】
2005537266.tif 000009
式Ｖ
いくつかの実施形態では、標識は好ましくはバイオコンジュゲートのバイオポリマー部分へ結合されている。
【００１４】
これらのバイオコンジュゲートは、遊離能力という長所を有する。本発明によるイソシアネート試薬がヒドロキシ基と反応すると、それが投与される被検対象の身体内で内因性酵素（例えば、プロテアーゼ）によって加水分解され得るカルバメート結合を生成する。本発明によるイソシアネート試薬はアミノ基と反応するとイソ尿素結合を生成するが、これもまたそれが投与される被検対象の身体内で内因性酵素によって加水分解され得る。バイオポリマーとの結合によって、薬物コンジュゲートは身体内の標的区画もしくは標的部位へ送達され、プロテアーゼまたは他の内因性酵素がカルバメート結合もしくはイソ尿素結合を加水分解して標的部位もしくは標的区画で遊離薬を遊離させる。
【００１５】
典型的なバイオコンジュゲートは、当技術分野において周知のようにＰＥＧ化ペプチドおよびタンパク質の官能基を通してＰＥＧ成分へ共有結合したバイオポリマー（例えば、ｐ９７等のトランスサイトーシスタンパク質）を含むが、ＰＥＧ成分は順にカルバメート結合を介して活性物質もしくは薬物へ結合している。また別の実施形態では、本コンジュゲートは、カルバメート基を介してＰＥＧ部分へ共有結合しているが、ＰＥＧ成分は順にカルバメート結合を通して活性物質もしくは薬物へ結合している。また別の実施形態では、本コンジュゲートは、カルバメート基を通してＰＥＧ成分へ共有結合しており、ＰＥＧ成分は順にカルバメート結合を通してアルキルもしくはホモアルキル成分へ結合しており、アルキルもしくはホモアルキル成分は順にカルバメート結合を通して活性物質もしくは薬物へ結合している。ある実施形態では、活性物質は１０−ヒドロキシカンプトテシンであり、ＰＥＧ成分はＰＥＧ３〜ＰＥＧ２０（例、ＰＥＧ４、ＰＥＧ５、ＰＥＧ６）のいずれか１つであり、アルキル結合はホモアルキル（例、ブチル、ペンチル、ヘキシル）であり、そしてバイオポリマーは可溶性ｐ９７もしくはその一部分である。例えば、１０−ヒドロキシカンプトテシンとの典型的なｐ９７バイオコンジュゲートは、次の式のバイオコンジュゲートである。
【化８】
2005537266.tif 000010
【００１６】
これらのバイオコンジュゲートは、本発明の方法によると高効率で合成できるという長所も有する。イソシアネート基とヒドロキシ基およびアミノ基との本発明の反応は極めて効率的である；そして収率は極めて高い（通常は９０％を超える）。バイオポリマーを備える修飾された薬物小分子の合成もまた便宜的であり、たった１つのステップで実施できる。さらに、イソシアネート基とヒドロキシ基もしくはアミノ基との反応によって生成される新規結合は、その薬物の水溶性を増加させるであろう。この特性は重要かつ極めて有用である。
【００１７】
［用語の定義］
他に定義していない限り、本明細書で使用するすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者が一般に理解している意味と同一の意味を有する。本明細書で言及した各出版物、特許出願、特許、およびその他の参考文献は、本発明の開示と矛盾しない程度まで、その全体を参照することによって本明細書に組み込まれる。
【００１８】
本明細書で使用するように、「１つの」および「その」という単数形にはその状況が明確に他の意味を指示していない限り、複数形が含まれることに留意されたい。
【００１９】
置換基が左から右へ記述されるそれらの従来型化学式によって規定される場合、それらは右から左へ構造を記述する結果として生じる化学的に同一の置換基を同等に含む。例えば、−ＣＨ2Ｏ−は−ＯＣＨ2−も意味することが意図されている。
【００２０】
［本発明の一般的化合物］
本発明の化合物は１つ以上の不斉中心を含む可能性があり、このためラセミ酸塩およびラセミ混合物、単一鏡像異性体、ジアステレオ異性体混合物および個別ジアステレオ異性体として発生する可能性がある。本発明は、本発明の化合物のそのような異性体形すべてを含むことを意味する。
【００２１】
そのような本発明の化合物は、例えばメタノールもしくは酢酸エチルまたはその混合物等の適切な溶媒からの分別結晶化によって鏡像異性体のジアステレオ異性体対に分離することができる。このように入手した鏡像異性体対は、例えば分割剤等の光学活性酸の使用によるような従来型手段によって個別ステレオ異性体に分離することができる。
【００２２】
あるいは、そのような本発明の化合物のいずれかの鏡像異性体は、構造が知られている光学的に純粋な出発物質を使用して立体特異的合成によって入手することができる。
【００２３】
本発明のバイオコンジュゲートおよび試薬は、１つ以上のそれらの原子で不自然な比率の原子同位体を有していてよい。例えば、本化合物はトリチウムまたは炭素−１４等の同位体を用いて放射性標識することができる。本発明の化合物のすべての同位体変形物は、放射性であってもなくても、本発明の範囲内に含まれる。
【００２４】
本バイオコンジュゲートは、使用する無機酸および有機酸に由来する塩等の医薬上許容されるそれらの酸付加塩の形状で単離できる。そのような酸には、塩酸、硝酸、硫酸、リン酸、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、マレイン酸、コハク酸、マロン酸等を含むことができる。さらに、酸性機能を含有する一定化合物は、対イオンをナトリウム、カリウム、リチウム、カルシウム、マグネシウム等、並びに有機塩基から選択できるそれらの無機塩の形状にあってよい。用語「医薬上許容される塩」は、無機塩基もしくは酸および有機塩基もしくは酸を含む医薬上許容される非毒性塩基もしくは酸から調製された塩を意味する。
【００２５】
本発明は、バイオコンジュゲートの加水分解の前または後に代謝プロセスによって化学的に転換して活性な薬理学的物質になる活性物質のプロドラッグをさらに含む。一般に、そのようなプロドラッグは、インビボで本発明の機能的化合物へ容易に転換できるバイオコンジュゲートの誘導体であろう。適切なプロドラッグ誘導体を選択および調製するための従来型方法は、例えば「Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ」，Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ編集，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，１９８５の中に記載されている。本発明は、活性物質自体としての活性物質の活性代謝産物をさらに含む。
【００２６】
本明細書に記載の化合物の一部はオレフィン二重結合を含有しており、他に特に記載しない限り、ＥおよびＺ両方の幾何異性体を含むことを意味する。
【００２７】
本明細書に記載した活性物質および化合物の一部は、互変異性体と呼ばれる相違する水素結合点を備えて存在することがある。そのような例はケトンおよびケト−エノール互変異性体として知られるそのエノール形であってよい。個別互変異性体並びにその混合物は本発明の式に含まれている。
【００２８】
あるいは、本発明のバイオコンジュゲートのいずれかの鏡像異性体または本発明の活性物質もしくは試薬もしくは他の化合物は、構造が知られている光学的に純粋な出発物質または試薬を使用して立体特異的合成によって入手することができる。
【００２９】
本明細書で使用する用語「ヘテロ原子」は、酸素（Ｏ）、窒素（Ｎ）、硫黄（Ｓ）およびシリコン（Ｓｉ）を含むことを意味する。
【００３０】
それ自体または他の置換基の一部としての「アルキル」は、他に規定しない限り、完全飽和、モノもしくはポリ不飽和であってよい直鎖状、分岐鎖、もしくは環状炭化水素基、またはそれらの組み合わせを意味しており、対応する二価および多価基を含むことを意味する。一部の実施形態では、アルキル部分は指定の炭素原子数を有する（すなわち、Ｃ1−Ｃ10は１〜１０個の炭素を意味する）。飽和炭化水素基の例には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、シクロヘキシル、（シクロヘキシル）メチル、シクロプロピルメチル、例えばｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル等のホモログおよび異性体が含まれるが、それらに限定されない。不飽和アルキル基は、１つ以上の二重結合または三重結合を有するアルキル基である。不飽和アルキル基の例には、ビニル、２−プロペニル、クロチル、２−イソペンテニル、２−（ブタジエニル）、２，４−ペンタジエニル、３−（１，４−ペンタジエニル）、エチニル、１−プロピニル、３−プロピニル、３−ブチニルおよび高級ホモログおよび異性体が含まれるが、それらに限定されない。用語「アルキル」は、他に言及しない限り、例えば「ヘテロアルキル」および「アルキレン」、「シクロアルキル」および「ヘテロシクロアルキル」等の下記に詳細に定義するアルキルの誘導体を含むことも指されている。炭化水素基に限定したアルキル基は、「ホモアルキル」と呼ばれる。アルカンもしくはアルキルメンバーが式ＩにおいてＲと指定される場合は、例えば対応する二価アルキル基が指示される。例えば、Ｒがメタン、メチル、もしくはメチレンであると指定される場合は、対応する式Ｉの化合物は下記であろう。
【化９】
2005537266.tif 000011
【００３１】
それ自体または別の置換基の一部としての用語「アルキレン」は、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2−によって例示されるがそれに限定されないアルカンに由来する二価基を意味するが、さらに下記で「ヘテロアルキレン」と記載する基も含む。典型的には、アルキル（もしくはアルキレン）基は１〜２４個の炭素原子を有するが、本発明において好ましいのは１０個以下の炭素原子を有するアルキル基である。「低級アルキル」もしくは「低級アルキレン」は、一般に８個以下の炭素原子を有する短鎖のアルキル基もしくはアルキレン基である。
【００３２】
それ自体または他の用語と組み合わせた用語「ヘテロアルキル」は、他に規定しない限り、規定数の炭素原子およびＯ、Ｎ、ＳｉおよびＳからなる群から選択される少なくとも１つのヘテロ原子からなる安定性直鎖状、分岐鎖、もしくは環状炭化水素基、またはそれらの組み合わせを意味しており、このとき窒素および硫黄原子は任意で酸化されていて、そして窒素ヘテロ原子は任意で四元化されていてよい。ヘテロ原子のＯ、Ｎ、ＳおよびＳｉはヘテロアルキル基のいずれかの内部位置に、またはアルキル基が分子の残りに結合している位置に配置されてよい。用語「ヘテロアルキル」には「ヘテロアルキレン」が含まれる。それ自体または別の置換基の一部としての用語「ヘテロアルキレン」は、−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｓ−ＣＨ2−ＣＨ2−および−ＣＨ2−Ｓ−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＨ−ＣＨ2−；−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｏ−ＣＨ2−、−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＨ−ＣＨ2−、−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｎ（ＣＨ3）−ＣＨ2−、−ＣＨ2−Ｓ−ＣＨ2−ＣＨ2−，−ＣＨ2−ＣＨ2，−Ｓ（Ｏ）−ＣＨ2−、−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｓ（Ｏ）2−ＣＨ2−、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｏ−ＣＨ2−、−Ｓｉ（ＣＨ3）3、−ＣＨ2−ＣＨ＝Ｎ−ＯＣＨ2−、および−ＣＨ＝ＣＨ−Ｎ（ＣＨ3）−ＣＨ2−によって例示されるが、それらに限定されないヘテロアルキルに由来する二価基を意味する。例えば−ＣＨ2−ＮＨ−ＯＣＨ2−および−ＣＨ2−Ｏ−Ｓｉ（ＣＨ3）2ＣＨ2−のような２個までのヘテロ原子は連続的であってよい。一部の実施形態では、薬物とバイオポリマーとを架橋結合する鎖のアルキルバックボーンにおいてたった１個のヘテロ原子が連続的である。ヘテロアルキレン基については、ヘテロ原子は鎖の末端の一方または両方を占めることがある（例、アルキレンオキシ、アルキレンジオキシ、アルキレンアミノ、アルキレンジアミノ等）。さらにまた、アルキレンおよびヘテロアルキレン結合基については、結合基の方向は結合基の式が記載されている方向によっては示されない。例えば、式−ＣＨ2Ｏ−は−ＣＨ2Ｏ−および−ＯＣＨ2−の両方を表している。
【００３３】
アルカンもしくはアルキルもしくはアルキレンメンバーが式ＩにおいてＲと指定される場合は、例えば対応する二価アルキル基が指示される。例えば、Ｒがメタン、メチル、もしくはメチレンであると指定される場合は、対応する式Ｉの化合物は下記であろう。
【化１０】
2005537266.tif 000012
【００３４】
それ自体または他の用語と組み合わせた用語「シクロアルキル」および「ヘテロシクロアルキル」は、他に規定しない限り、「アルキル」および「ヘテロアルキル」各々の環状バージョンを表す。さらに、ヘテロシクロアルキルについては、ヘテロ原子は複素環が分子の残りに結合している位置を占めることができる。シクロアルキルの例には、シクロペンチル、シクロヘキシル、１−シクロヘキサノール、３−シクロヘキサノール、シクロヘプチル等が含まれるが、それらに限定されない。ヘテロシクロアルキルの例には、１−（１，２，５，６−テトラヒドロピリジル）、１−ピペリジニル、２−ピペリジニル、３−ピペリジニル、４−モルホリニル、３−モルホリニル、テトラヒドロフラン−２−イル、テトラヒドロフラン−３−イル、テトラヒドロチエン−２−イル、テトラヒドロチエン−３−イル、１−ピペラジニル、２−ピペラジニル等が含まれるが、それらに限定されない。
【００３５】
それら自体または他の置換基の一部としての用語「ハロ」または「ハロゲン」は、他に規定しない限り、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素原子を意味する。さらに、「ハロアルキル」等の用語は、モノハロアルキルおよびポリハロアルキルを含むことを意味する。例えば、用語「ハロ（Ｃ1−Ｃ4）アルキル」は、トリフルオロメチル、２，２，２−トリフルオロエチル、４−クロロブチル、３−ブロモプロピル等を含むが、それらに限定されないことを意味する。
【００３６】
上記の用語「アルキル」、「ヘテロアルキル」は指示された基の置換形および非置換形の両方を含むことを意味する。各タイプの基にとって好ましい置換基を下記に挙げる。
【００３７】
アルキル基およびヘテロアルキル基（しばしばアルキレン、アルケニル、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、シクロアルケニルおよびヘテロシクロアルケニルと呼ばれる基を含む）のための置換基は０から（２ｍ’＋１）（式中、ｍ’はそのような基における炭素原子の総数である）の範囲内の数で−ＯＲ’、＝Ｏ、＝ＮＲ’、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＳＲ’、−ハロゲン、−ＳｉＲ’Ｒ’’Ｒ’’’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＣＯ2Ｒ’、−ＣＯＮＲ’Ｒ’’、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＮＲ’−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）2Ｒ’、−ＮＲ−Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’Ｒ’’’）＝ＮＲ’’’’、−ＮＲ−Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’）＝ＮＲ’’’、−Ｓ（ＯＲ）’、−Ｓ（Ｏ）2Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）2ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲＳＯ2Ｒ’、−ＣＮおよび−ＮＯ2から選択されるが、それらに限定されない様々な基の１つ以上であってよい。Ｒ’、Ｒ’’、Ｒ’’’およびＲ’’’’は各々、好ましくは独立して水素、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換アリール、例えば１から３個のハロゲンと置換されたアリール、置換もしくは非置換アルキル、アルコキシもしくはチオアルコキシ基、またはアリールアルキル基と呼ばれる。本発明の化合物が２つ以上のＲ基を含む場合は、例えば、Ｒ基の各々は２つ以上のこれらの基が存在する場合に各々Ｒ’、Ｒ’’、Ｒ’’’およびＲ’’’’基であるように独立して選択される。Ｒ’およびＲ’’が同一窒素原子に結合している場合は、それらは窒素と結合して５−員環、６−員環、または７−員環を生成することができる。例えば、−ＮＲ’Ｒ’’は、１−ピロリジニルおよび４−モルホリニルを含むが、それらに限定されないことを意味する。置換基についての上記の考察から、当業者であれば用語「アルキル」がハロアルキル（例、−ＣＦ3および−ＣＨ2ＣＦ3）およびアシル（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ3、−Ｃ（Ｏ）ＣＦ3、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ2ＯＣＨ3等）のような水素基以外の基へ結合した炭素原子を含む基を含むことを意味することを理解するであろう。
【００３８】
［活性物質］
本発明による活性物質には、生物学的プロセスに影響を及ぼす物質が含まれる。用語「薬物」または「治療薬」は、治療有効量で投与したときに薬理学的活性を有する、または健康に有益である活性物質をいう。薬物または治療薬の例には、疾患または状態の予防、診断、緩和、治療もしくは治癒に使用される物質が含まれる。
【００３９】
Ａとしての薬物成分は、生きている宿主における生物学的プロセスを調節できるいずれかの分子、およびいずれかの結合部分もしくはそのフラグメントであってよい。一般に、Ａはあらゆるサイズであってよいが、好ましくは当該標的に結合できる有機小分子である。バイオコンジュゲートの薬物成分は、小分子である場合は、一般に少なくとも約５０Ｄの分子量、通常は少なくとも約１００Ｄを有するが、このとき分子量は５００Ｄ以上の高さであってよいが、通常は約２，０００Ｄを超えないであろう。
【００４０】
薬物成分は、本方法の実践中にバイオコンジュゲートが投与される宿主中で標的と相互作用できる。標的は、多数の様々なタイプの天然型構造であってよく、当該標的には細胞内標的および細胞外標的の両方が含まれ、そのような標的はタンパク質、リン脂質、核酸等であってよいが、タンパク質が特に重要である。重要な特異的タンパク質性標的は、制限なく、例えばキナーゼ、ホスファターゼ、レダクターゼ、シクロオキシゲナーゼ、プロテアーゼ等の酵素、例えばＳＨ２、ＳＨ３、ＰＴＢおよびＰＤＺドメイン等のタンパク質−タンパク質相互作用に関係するドメインを含む標的、例えばアクチン、チューブリン等の構造的タンパク質、膜受容体、例えばＩｇＥの免疫グロブリン、例えばインテグリン等の細胞接着受容体、イオンチャンネル、膜貫通ポンプ、転写調節因子、シグナルタンパク質等が含まれる。
【００４１】
活性物質または薬物はイソシアネート試薬と反応するためのヒドロキシ基もしくはアミノ基を有する、または活性物質はイソシアネート試薬と反応するためのヒドロキシ基もしくはアミノ基を導入するために化学修飾されている。
【００４２】
一部の実施形態では、活性物質または薬物は、好ましくは活性物質の所望の生物学的活性を失うことなく、共有結合において修飾および／または関与できる領域をさらに含んでいるであろう。薬物成分は、しばしば環状炭素または複素環構造および／または１つ以上の上記の官能基と置換された芳香族もしくはポリ芳香族構造を含む。同様に薬物成分として重要であるのは、特にペプチド、糖類、脂肪酸、ステロイド、プリン、ピリミジン、誘導体、構造的アナログもしくはそれらの組み合わせを含む生体分子、タンパク質、酵素、多糖類、およびポリ核酸に見いだされる構造である。
【００４３】
本バイオコンジュゲートは同一バイオポリマーに結合した１種以上の活性物質を含むことができる。例えば、コンジュゲーション反応は、１〜５個、約５個、約１〜１０個、約５〜１０個、約１０〜２０個、約２０〜３０個、または３０個以上の分子の活性物質をそのバイオポリマーとコンジュゲートさせることができる。これらの調製物は混合物として使用できる、またはそれらは特定（モル比）調製物に精製することができる。当業者であればどのフォーマットおよびどのモル比が好ましいのかを決定することができる。さらに、標的部位もしくは区画への２種以上のタイプの物質の送達が所望である場合に、２種以上のタイプの活性物質をバイオポリマーと結合させることができる。複数の活性物質種は、バイオポリマーがｐ９７関連タンパク質である場合のアドリアマイシン−シスプラチンバイオコンジュゲート組成物と同様に、同一のバイオポリマーへ結合させることができる。したがって、これらのバイオコンジュゲートはある範囲のモル比から構成され、２種以上のタイプの活性物質を組み込むことができる。これらは、さらに、精製混合物に分離できる、または凝集体中に使用することもできる。活性物質には、参照して本明細書に組み込まれる米国特許第６，３７２，７１２号に同定された活性物質が含まれる。
【００４４】
薬物成分をそれから引き出すことのできる重要な特定薬物には、例えば（１）全身麻酔薬（バルビツール酸系、ベンゾジアゼピン、ステロイド剤、シクロヘキサノン誘導体、および種々の薬剤）、鎮痛・催眠薬（ベンゾジアゼピン、バルビツール酸系、ピペリジンジオンおよびトリオン、キナゾリン誘導体、カルバメート、アルデヒドおよびその誘導体、アミド、非環式ウレイド、ベンザゼピンおよび関連薬、フェノチアジン等）、中枢随意筋緊張修飾薬（ヒダントイン、バルビツール酸系、オキサゾリジンジオン、スクシンイミド、アシルウレイド、グルタルイミド、ベンゾジアゼピン、第２級および第３級アルコール、ジベンザゼピン誘導体、バルプロ酸およびその誘導体、ＧＡＢＡアナログ等の鎮痙剤）、鎮痛剤（モルヒネおよびその誘導体、オリパビン誘導体、モルフィナン誘導体、フェニルピペリジン、２，６−メタン−３−ベンザゾカイン誘導体、ジフェニルプロピルアミンおよびイソエステル、サリチル酸塩、ｐ−アミノフェノール誘導体、５−ピラゾロン誘導体、アリール酢酸誘導体、フェナメートおよびイソエステル等）のような中枢数神経系抑制薬、（２）例えば覚醒薬（呼吸刺激薬、痙攣刺激薬、精神運動刺激薬）、麻薬拮抗薬（モルヒネ誘導体、オリパビン誘導体、２，６−メタン−３−ベンゾキサシン誘導体、モルフィナン誘導体）、向知性薬等の中枢神経系刺激薬、（３）例えば抗不安薬鎮静薬（ベンゾジアゼピン、プロパンジオールカルバメート）、抗精神病薬（フェノチアジン誘導体、チオキサンチン誘導体、その他の三環式化合物、ブチロフェノン誘導体およびイソエステル、ジフェニルブチルアミン誘導体、置換ベンズアミド、アリールピペラジン誘導体、インドール誘導体等）、抗うつ薬（三環式化合物、ＭＡＯ阻害剤等）等の精神薬理剤、（４）例えば中枢鎮咳薬（アヘンアルカロイドおよびそれらの誘導体）等の呼吸器薬；（１）例えば局所麻酔薬（エステル誘導体、アミド誘導体）等の抹消神経系薬、（２）例えばコリン作用薬、抗コリン作用薬、神経筋遮断薬、アドレナリン作用薬、抗アドレナリン作用薬等の交感神経もしくは神経効果器接合部で作用する薬物、（３）例えば鎮痙薬（抗コリン作用薬、筋向性鎮痙薬）、血管拡張剤、平滑筋刺激薬等の平滑筋活性薬、（４）例えばヒスタミンおよびその誘導体（ベタゾール）、抗ヒスタミン剤（Ｈ1アンタゴニスト、Ｈ2アンタゴニスト）、ヒスタミン代謝薬等のヒスタミン剤および抗ヒスタミン剤、（５）例えば、強心剤（植物抽出物、ブテノリド、ペンタジエノリド、ｅｒｙｔｈｒｏｐｈｌｅｕｍ種由来アルカロイド、イオノフォア、アドレナリン受容体刺激薬等）、抗不整脈薬、抗高血圧薬、抗高脂血薬（クロフィブリン酸誘導体、ニコチン酸誘導体、ホルモンおよびそのアナログ、抗生物質、サリチル酸およびその誘導体）、抗静脈瘤薬、止血剤等の心血管薬、（６）例えば、抗貧血薬、血液凝固薬（止血薬、抗凝固薬、抗血栓薬、血栓溶解薬、血液タンパク質およびそれらの分画）等の血液製剤および造血系製剤、（７）例えば、消化剤（健胃薬、催胆薬）、抗潰瘍薬、下痢止め薬等の消化管薬、（８）局所的に作用する薬剤、等の薬力学的作用薬；（１）例えば外部寄生生物撲滅薬（塩素化炭化水素、ピレチン、加硫化合���）等の抗感染症薬、駆虫薬、抗原虫薬、抗マラリア薬、抗アメーバ薬、抗リーシュマニア薬、抗トリコモナス薬、抗トリパノソーマ薬、スルホンアミド、抗マイコバクテリウム薬、抗ウイルス化学療法薬等、および（２）細胞増殖抑制薬、すなわち抗新生物薬、または例えば塩酸メクロレタミン（Ｎｉｔｒｏｇｅｎ  Ｍｕｓｔａｒｄ、Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ、ＨＮ２）、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｖａｎ、Ｅｎｄｏｘａｎａ）、イホスファミド（ＩＦＥＸ）、クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ）、メルファラン（Ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ  Ｍｕｓｔａｒｄ、Ｌ−ｓａｃｒｏｌｙｓｉｎ，Ａｌｋｅｒａｎ，Ｌ−ＰＡＭ）、ブスルファン（Ｍｙｌｅｒａｎ）、チオテパ（トリエチレンチオホスホルアミド）、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ、ＢＣＮＵ）、ロムスチン（ＣｅｅＮＵ、ＣＣＮＵ）、ストレプトゾシン（Ｚａｎｏｓａｒ）等のようなアルキル化剤等の細胞毒性薬等の化学療法薬；例えばビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ）、ビンブラスチン（Ｖｅｌｂａｎ、Ｖｅｌｂｅ）、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ）等の植物アルカロイド；例えばメトトレキセート（ＭＴＸ）、メルカプトプリン（Ｐｕｒｉｎｅｔｈｏｌ、６−ＭＰ）、チオグアニン（６−ＴＧ）、フルオロウラシル（５−ＦＵ）、シタラビン（Ｃｙｔｏｓａｒ−Ｕ、Ａｒａ−Ｃ）、アザシチジン（Ｍｙｌｏｓａｒ，５−ＡＺＡ）等の抗代謝薬；例えばダクチノマイシン（Ａｃｔｉｏｎｏｍｙｃｉｎ  Ｄ、Ｃｏｓｍｅｇｅｎ）、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ）、ダウノルビシン（ｄｕａｎｏｍｙｃｉｎ、Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ）、イダルビシン（Ｉｄａｍｙｃｉｎ）、ブレオマイシン（Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ）、ピカマイシン（Ｍｉｔｈｒａｍｙｃｉｎ、Ｍｉｔｈｒａｃｉｎ）、マイトマイシン（Ｍｕｔａｍｙｃｉｎ）等の抗生物質、および例えばヒドロキシウレア（Ｈｙｄｒｅａ）、プロカルバジン（Ｍｕｔａｌａｎｅ）、ダカルバジン（ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ）、シスプラチン（Ｐｌａｔｉｎｏｌ）、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ）、アスパラギナーゼ（Ｅｌｓｐａｒ）、エトポシド（ＶｅＰｅｓｉｄ、ＶＰ−１６−２１３）、アムサクリン（ＡＭＳＡ、ｍ−ＡＭＳＡ）、ミトーテン（Ｌｙｓｏｄｒｅｎ）、ミトキサントロン（Ｎｏｖａｔｒｏｎｅ）等のその他の抗細胞増殖薬；
例えばアミカシン、アプラマイシン、アルベカシン、バンベルマイシン、ブチロシン、ジベカシン、ジヒドロストレプトマイシン、フォーチミシン、ゲンタマイシン、イセパミシン、カナマイシン、ミクロノムシン、ネオマイシン、ネチルミシン、パロマイシン、リボスタマイシン、シソマイシン、スペクチノマイシン、ストレプトマイシン、トブラマイシン、トロスペクトマイシン等のアミノグリコシド系；例えばアジダムフェニコール、クロラムフェニコール、フロルフェニコール、およびタイマフェニコール等のアムフェニコール系；例えばリファミド、リファンピン、リファマイシン、リファペンチン、リファキシミン等のアンサマイシン系；例えばカルバセフェム、カルバペネム、セファロスポリン、セファマイシン、モノバクタム、オキサフェネム、ペニシリン等のβラクタム系；例えば、クリナマイシン、リンコマイシン等のリンコサミド系；例えばクラリスロマイシン、ジルスロマイシン、エリスロマイシン等のマクロライド系；例えばアムホマイシン、バシトラシン、カプレオマイシン等のポリペプチド系；例えばアピサイクリン、クロルテトラサイクリン、クロモサイクリン等のテトラサイクリン系；例えば２，４−ジアミノピリミジン、ニトロフラン、キノロンおよびそのアナログ、スルホンアミド、スルホン等の合成抗菌剤等の抗生物質；
例えばアムホテリシンＢ、カンジシジン、デルモスタチン、フィリピン、ファンジクロミン、ハチマイシン、ハマイシン、ルセンソマイシン、メパルトリシン、ナタマイシン、ナイスタチン、ペチロシン、ペリマイシン等のポリエン類；ブテナフィン、ナフチフィン、テルビナフィン等のアリルアミン類；例えばビフォナゾール、ブトコナゾール、クロルダントイン、クロルミダゾール等のイミダゾール類、例えばトルシクレート等のチオカルバメート類、例えばフルコナゾール、イトラコナゾール、テルコナゾール等のトリアゾール類等の合成抗真菌薬などの抗真菌薬；
例えばアレコリン、アスピジン、アスピジノール、ジクロロフェン、エンベリン、コシン、ナフタレン、ニクロサミド、ペレチエリン、キナクリン、アラントラクトン、アモカルジン、アモスカネート、アスカリドール、ベフェニウム、ビトスカネート、四塩化炭素、カルバクロール、シクロベンダゾール、ジエチルカルバマジン等の抗蠕虫薬；
例えばアセダプソン、アモジアキン、アルテエーテル、アルテメーテル、アルテミシニン、アーテスネート、アトバクオン、ベベリン、ベルベリン、チラータ、クロルグアニド、クロロキン、クロロプロガウニル、シンコナ、シンコニジン、シンコニン、シクログアニル、ゲンチオピクリン、ハロファントリン、ヒドロキシクロロキン、塩酸メフロキン、３−メチルアルサセチン、パマキン、プラスモシド、プリマキン、ピリメタミン、キナクリン、キニジン、キニン、キノシド、キノリン、二塩基性ヒ酸ナトリウム等の抗マラリア薬；
例えばアクラニル、チニダゾール、イプロニダゾール、エチルスチバミン、ペンタミジン、アセタルゾン、アミニトロゾール、アニソマイシン、ニフラテル、チニダゾール、ベンジダゾール、スラミン等の抗原虫薬、が含まれるがそれらに限定されない。
【００４５】
薬物成分がそれから引き出される重要な薬物化合物は、Ｇｏｏｄｍａｎ  ＆  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ，Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（第９版）（Ｇｏｏｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．編集）（ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ）（１９９６）；および１９９９  Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（１９９８）にも列挙されている。
【００４６】
重要な特定化合物には米国特許第５，８８０，１６１号、第５，８７７，２０６号、第５，７８６，３４４号、第５，７６０，０４１号、第５，７５３，６６８号、第５，６９８，５２９号、第５，６８４，００４号、第５，６６５，７１５号、第５，６５４，４８４号、第５，６２４，９２４号、第５，６１８，８１３号、第５，６１０，２９２号、第５，５９７，８３１号、第５，５３０，０２６号、第５，５２５，６３３号、第５，５２５，６０６号、第５，５１２，６７８号、第５，５０８，２７７号、第５，４６３，１８１号、第５，４０９，８９３号、第５，３５８，９５２号、第５，３１８，９６５号、第５，２２３，５０３号、第５，２１４，０６８号、第５，１９６，４２４号、第５，１０９，０２４号、第５，１０６，９９６号、第５，１０１，０７２号、第５，０７７，４０４号、第５，０７１，８４８号、第５，０６６，４９３号、第５，０１９，３９０号、第４，９９６，２２９号、第４，９９６，２０６号、第４，９７０，３１８号、第４，９６８，８００号、第４，９６２，１１４号、第４，９２７，８２８号、第４，８９２，８８７号、第４，８８９，８５９号、第４，８８６，７９０号、第４，８８２，３３４号、第４，８８２，３３３号、第４，８７１，７４６号、第４，８６３，９５５号、第４，８４９，５６３号、第４，８４５，２１６号、第４，８３３，１４５号、第４，８２４，９５５号、第４，７８５，０８５号、第４，６８４，７４７号、第４，６１８，６８５号、第４，６１１，０６６号、第４，５５０，１８７号、第４，５５０，１８６号、第４，５４４，５０１号、第４，５４１，９５６号、第４，５３２，３２７号、第４，４９０，５４０号、第４，３９９，２８３号、第４，３９１，９８２号、第４，３８３，９９４号、第４，２９４，７６３号、第４，２８３，３９４号、第４，２４６，４１１号、第４，２１４，０８９号、第４，１５０，２３１号、第４，１４７，７９８号、第４，０５６，６７３号、第４，０２９，６６１号、第４，０１２，４４８号に開示されている抗新生物薬；
米国特許第５，１９２，７９９号、第５，０３６，０７０号、第４，７７８，８００号、第４，７５３，９５１号、第４，５９０，１８０号、第４，６９０，９３０号、第４，６４５，７７３号、第４，４２７，６９４号、第４，４２４，２０２号、第４，４４０，７８１号、第５，６８６，４８２号、第５，４７８，８２８号、第５，４６１，０６２号、第５，３８７，５９３号、第５，３８７，５８６号、第５，２５６，６６４号、第５，１９２，７９９号、第５，１２０，７３３号、第５，０３６，０７０号、第４，９７７，１６７号、第４，９０４，６６３号、第４，７８８，１８８号、第４，７７８，８００号、第４，７５３，９５１号、第４，６９０，９３０号、第４，６４５，７７３号、第４，６３１，２８５号、第４，６１７，３１４号、第４，６１３，６００号、第４，５９０，１８０号、第４，５６０，６８４号、第４，５４８，９３８号、第４，５２９，７２７号、第４，４５９，３０６号、第４，４４３，４５１号、第４，４４０，７８１号、第４，４２７，６９４号、第４，４２４，２０２号、第４，３９７，８５３号、第４，３５８，４５１号、第４，３２４，７８７号、第４，３１４，０８１号、第４，３１３，８９６号、第４，２９４，８２８号、第４，２７７，４７６号、第４，２６７，３２８号、第４，２６４，４９９号、第４，２３１，９３０号、第４，１９４，００９号、第４，１８８，３８８号、第４，１４８，７９６号、第４，１２８，７１７号、第４，０６２，８５８号、第４，０３１，２２６号、第４，０２０，０７２号、第４，０１８，８９５号、第４，０１８，７７９号、第４，０１３，６７２号、第３，９９４，８９８号、第３，９６８，１２５号、第３，９３９，１５２号、第３，９２８，３５６号、第３，８８０，８３４号、第３，６６８，２１０号に開示されている精神薬理薬／精神作用薬；
米国特許第４，９６６，９６７号、第５，６６１，１２９号、第５，５５２，４１１号、第５，３３２，７３７号、第５，３８９，６７５号、第５，１９８，４４９号、第５，０７９，２４７号、第４，９６６，９６７号、第４，８７４，７６０号、第４，９５４，５２６号、第５，０５１，４２３号、第４，８８８，３３５号、第４，８５３，３９１号、第４，９０６，６３４号、第４，７７５，７５７号、第４，７２７，０７２号、第４，５４２，１６０号、第４，５２２，９４９号、第４，５２４，１５１号、第４，５２５，４７９号、第４，４７４，８０４号、第４，５２０，０２６号、第４，５２０，０２６号、第５，８６９，４７８号、第５，８５９，２３９号、第５，８３７，７０２号、第５，８０７，８８９号、第５，７３１，３２２号、第５，７２６，１７１号、第５，７２３，４５７号、第５，７０５，５２３号、第５，６９６，１１１号、第５，６９１，３３２号、第５，６７９，６７２号、第５，６６１，１２９号、第５，６５４，２９４号、第５，６４６，２７６号、第５，６３７，５８６号、第５，６３１，２５１号、第５，６１２，３７０号、第５，６１２，３２３号、第５，５７４，０３７号、第５，５６３，１７０号、第５，５５２，４１１号、第５，５５２，３９７号、第５，５４７，９６６号、第５，４８２，９２５号、第５，４５７，１１８号、第５，４１４，０１７号、第５，４１４，０１３号、第５，４０１，７５８号、第５，３９３，７７１号、第５，３６２，９０２号、第５，３３２，７３７号、第５，３１０，７３１号、第５，２６０，４４４号、第５，２２３，５１６号、第５，２１７，９５８号、第５，２０８，２４５号、第５，２０２，３３０号、第５，１９８，４４９号、第５，１８９，０３６号、第５，１８５，３６２号、第５，１４０，０３１号、第５，１２８，３４９号、第５，１１６，８６１号、第５，０７９，２４７号、第５，０７０，０９９号、第５，０６１，８１３号、第５，０５５，４６６号、第５，０５１，４２３号、第５，０３６，０６５号、第５，０２６，７１２号、第５，０１１，９３１号、第５，００６，５４２号、第４，９８１，８４３号、第４，９７７，１４４号、第４，９７１，９８４号、第４，９６６，９６７号、第４，９５９，３８３号、第４，９５４，５２６号、第４，９５２，６９２号、第４，９３９，１３７号、第４，９０６，６３４号、第４，８８９，８６６号、第４，８８８，３３５号、第４，８８３，８７２号、第４，８８３，８１１号、第４，８４７，３７９号、第４，８３５，１５７号、第４，８２４，８３１号、第４，７８０，５３８号、第４，７７５，７５７号、第４，７７４，２３９号、第４，７７１，０４７号、第４，７６９，３７１号、第４，７６７，７５６号、第４，７６２，８３７号、第４，７５３，９４６号、第４，７５２，６１６号、第４，７４９，７１５号、第４，７３８，９７８号、第４，７３５，９６２号、第４，７３４，４２６号、第４，７３４，４２５号、第４，７３４，４２４号、第４，７３０，０５２号、第４，７２７，０７２号、第４，７２１，７９６号、第４，７０７，５５０号、第４，７０４，３８２号、第４，７０３，１２０号、第４，６８１，９７０号、第４，６８１，８８２号、第４，６７０，５６０号、第４，６７０，４５３号、第４，６６８，７８７号、第４，６６３，３３７号、第４，６６３，３３６号、第４，６６１，５０６号、第４，６５６，２６７号、第４，６５６，１８５号、第４，６５４，３５７号、第４，６５４，３５６号、第４，６５４，３５５号、第４，６５４，３３５号、第４，６５２，５７８号、第４，６５２，５７６号、第４，６５０，８７４号、第４，６５０，７９７号、第４，６４９，１３９号、第４，６４７，５８５号、第４，６４７，５７３号、第４，６４７，５６５号、第４，６４７，５６１号、第４，６４５，８３６号、第４，６３９，４６１号、第４，６３８，０１２号、第４，６３８，０１１号、第４，６３２，９３１号、第４，６３１，２８３号、第４，６２８，０９５号、第４，６２６，５４８号、第４，６１４，８２５号、第４，６１１，００７号、第４，６１１，００６号、第４，６１１，００５号、第４，６０９，６７１号、第４，６０８，３８６号、第４，６０７，０４９号、第４，６０７，０４８号、第４，５９５，６９２号、第４，５９３，０４２号、第４，５９３，０２９号、第４，５９１，６０３号、第４，５８８，７４３号、第４，５８８，７４２号、第４，５８８，７４１号、第４，５８２，８５４号、第４，５７５，５１２号、第４，５６８，７６２号、第４，５６０，６９８号、第４，５５６，７３９号、第４，５５６，６７５号、第４，５５５，５７１号、第４，５５５，５７０号、第４，５５５，５２３号、第４，５５０，１２０号、第４，５４２，１６０号、第４，５４２，１５７号、第４，５４２，１５６号、第４，５４２，１５５号、第４，５４２，１５１号、第４，５３７，９８１号、第４，５３７，９０４号、第４，５３６，５１４号、第４，５３６，５１３号、第４，５３３，６７３号、第４，５２６，９０１号、第４，５２６，９００号、第４，５２５，４７９号、第４，５２４，１５１号、第４，５２２，９４９号、第４，５２１，５３９号、第４，５２０，０２６号、第４，５１７，１８８号、第４，４８２，５６２号、第４，４７４，８０４号、第４，４７４，８０３号、第４，４７２，４１１号、第４，４６６，９７９号、第４，４６３，０１５号、第４，４５６，６１７号、第４，４５６，６１６号、第４，４５６，６１５号、第４，４１８，０７６号、第４，４１６，８９６号、第４，２５２，８１５号、第４，２２０，５９４号、第４，１９０，５８７号、第４，１７７，２８０号、第４，１６４，５８６号、第４，１５１，２９７号、第４，１４５，４４３号、第４，１４３，０５４号、第４，１２３，５５０号、第４，０８３，９６８号、第４，０７６，８３４号、第４，０６４，２５９号、第４，０６４，２５８号、第４，０６４，２５７号、第４，０５８，６２０号、第４，００１，４２１号、第３，９９３，６３９号、第３，９９１，０５７号、第３，９８２，０１０号、第３，９８０，６５２号、第３，９６８，１１７号、第３，９５９，２９６号、第３，９５１，９５０号、第３，９３３，８３４号、第３，９２５，３６９号、第３，９２３，８１８号、第３，８９８，２１０号、第３，８９７，４４２号、第３，８９７，４４１号、第３，８８６，１５７号、第３，８８３，５４０号、第３，８７３，７１５号、第３，８６７，３８３号、第３，８７３，７１５号、第３，８６７，３８３号、第３，６９１，２１６号、第３，６２４，１２６号に開示されている心血管薬；
米国特許第５，９０２，５９４号、第５，８７４，４７６号、第５，８７４，４３６号、第５，８５９，０２７号、第５，８５６，３２０号、第５，８５４，２４２号、第５，８１１，０９１号、第５，７８６，３５０号、第５，７８３，１７７号、第５，７７３，４６９号、第５，７６２，９１９号、第５，７５３，７１５号、第５，７４１，５２６号、第５，７０９，８７０号、第５，７０７，９９０号、第５，６９６，１１７号、第５，６８４，０４２号、第５，６８３，７０９号、第５，６５６，５９１号、第５，６４３，９７１号、第５，６４３，９５０号、第５，６１０，１９６号、第５，６０８，０５６号、第５，６０４，２６２号、第５，５９５，７４２号、第５，５７６，３４１号、第５，５５４，３７３号、第５，５４１，２３３号、第５，５３４，５４６号、第５，５３４，５０８号、第５，５１４，７１５号、第５，５０８，４１７号、第５，４６４，８３２号、第５，４２８，０７３号、第５，４２８，０１６号、第５，４２４，３９６号、第５，３９９，５５３号、第５，３９１，５４４号、第５，３８５，９０２号、第５，３５９，０６６号、第５，３５６，８０３号、第５，３５４，８６２号、第５，３４６，９１３号、第５，３０２，５９２号、第５，２８８，６９３号、第５，２６６，５６７号、第５，２５４，６８５号、第５，２５２，７４５号、第５，２０９，９３０号、第５，１９６，４４１号、第５，１９０，９６１号、第５，１７５，１６０号、第５，１５７，０５１号、第５，０９６，７００号、第５，０９３，３４２号、第５，０８９，２５１号、第５，０７３，５７０号、第５，０６１，７０２号、第５，０３７，８０９号、第５，０３６，０７７号、第５，０１０，１０９号、第４，９７０，２２６号、第４，９１６，１５６号、第４，８８８，４３４号、第４，８７０，０９３号、第４，８５５，３１８号、第４，７８４，９９１号、第４，７４６，５０４号、第４，６８６，２２１号、第４，５９９，２２８号、第４，５５２，８８２号、第４，４９２，７００号、第４，４８９，０９８号、第４，４８９，０８５号、第４，４８７，７７６号、第４，４７９，９５３号、第４，４７７，４４８号、第４，４７４，８０７号、第４，４７０，９９４号、第４，３７０，４８４号、第４，３３７，１９９号、第４，３１１，７０９号、第４，３０８，２８３号、第４，３０４，９１０号、第４，２６０，６３４号、第４，２３３，３１１号、第４，２１５，１３１号、第４，１６６，１２２号、第４，１４１，９８１号、第４，１３０，６６４号、第４，０８９，９７７号、第４，０８９，９００号、第４，０６９，３４１号、第４，０５５，６５５号、第４，０４９，６６５号、第４，０４４，１３９号、第４，００２，７７５号、第３，９９１，２０１号、第３，９６６，９６８号、第３，９５４，８６８号、第３，９３６，３９３号、第３，９１７，４７６号、第３，９１５，８８９号、第３，８６７，５４８号、第３，８６５，７４８号、第３，８６７，５４８号、第３，８６５，７４８号、第３，７８３，１６０号、第３，７６４，６７６号、第３，７６４，６７７号に開示されている抗菌薬；
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米国特許第４，４５０，１５９号、第４，４５０，１５９号、第５，９０５，０８５号、第５，８８３，１１９号、第５，８８０，２８０号、第５，８７７，１８４号、第５，８７４，５９４号、第５，８４３，４５２号、第５，８１７，６７２号、第５，８１７，６６１号、第５，８１７，６６０号、第５，８０１，１９３号、第５，７７６，９７４号、第５，７６３，４７８号、第５，７３９，１６９号、第５，７２３，４６６号、第５，７１９，１７６号、第５，６９６，１５６号、第５，６９５，７５３号、第５，６９３，６４８号、第５，６９３，６４５号、第５，６９１，３４６号、第５，６８６，４６９号、第５，６８６，４２４号、第５，６７９，７０５号、第５，６７９，６４０号、第５，６７０，５０４号、第５，６６５，７７４号、第５，６６５，７７２号、第５，６４８，３７６号、第５，６３９，４５５号、第５，６３３，２７７号、第５，６２４，９３０号、第５，６２２，９７０号、第５，６０５，９０３号、第５，６０４，２２９号、第５，５７４，０４１号、第５，５６５，５６０号、第５，５５０，２３３号、第５，５４５，７３４号、第５，５４０，９３１号、第５，５３２，２４８号、第５，５２７，８２０号、第５，５１６，７９７号、第５，５１４，６８８号、第５，５１２，６８７号、第５，５０６，２３３号、第５，５０６，２２８号、第５，４９４，８９５号、第５，４８４，７８８号、第５，４７０，８５７号、第５，４６４，６１５号、第５，４３２，１８３号、第５，４３１，８９６号、第５，３８５，９１８号、第５，３４９，０６１号、第５，３４４，９２５号、第５，３３０，９９３号、第５，３０８，８３７号、第５，２９０，７８３号、第５，２９０，７７２号、第５，２８４，８７７号、第５，２８４，８４０号、第５，２７３，９７９号、第５，２６２，５３３号、第５，２６０，３００号、第５，２５２，７３２号、第５，２５０，６７８号、第５，２４７，０７６号、第５，２４４，８９６号、第５，２３８，６８９号、第５，２１９，８８４号、第５，２０８，２４１号、第５，２０８，２２８号、第５，２０２，３３２号、第５，１９２，７７３号、第５，１８９，０４２号、第５，１６９，８５１号、第５，１６２，３３４号、第５，１５１，４１３号、第５，１４９，７０１号、第５，１４７，８７７号、第５，１４３，９１８号、第５，１３８，０５１号、第５，０９３，３３８号、第５，０９１，３８９号、第５，０６８，３２３号、第５，０６８，２４７号、第５，０６４，８３５号、第５，０６１，７２８号、第５，０５５，２９０号、第４，９８１，７９２号、第４，８１０，６９２号、第４，４１０，６９６号、第４，３４６，０９６号、第４，３４２，７６９号、第４，３１７，８２５号、第４，２５６，７６６号、第４，１８０，５８８号、第４，０００，２７５号、第３，７５９，９２１号に開示されている免疫抑制薬；
米国特許第５，２９２，７３６号、第５，６８８，８２５号、第５，５５４，７８９号、第５，４５５，２３０号、第５，２９２，７３６号、第５，２９８，５２２号、第５，２１６，１６５号、第５，４３８，０６４号、第５，２０４，３６５号、第５，０１７，５７８号、第４，９０６，６５５号、第４，９０６，６５５号、第４，９９４，４５０号、第４，７４９，７９２号、第４，９８０，３６５号、第４，７９４，１１０号、第４，６７０，５４１号、第４，７３７，４９３号、第４，６２２，３２６号、第４，５３６，５１２号、第４，７１９，２３１号、第４，５３３，６７１号、第４，５５２，８６６号、第４，５３９，３１２号、第４，５６９，９４２号、第４，６８１，８７９号、第４，５１１，７２４号、第４，５５６，６７２号、第４，７２１，７１２号、第４，４７４，８０６号、第４，５９５，６８６号、第４，４４０，７７９号、第４，４３４，１７５号、第４，６０８，３７４号、第４，３９５，４０２号、第４，４００，５３４号、第４，３７４，１３９号、第４，３６１，５８３号、第４，２５２，８１６号、第４，２５１，５３０号、第５，８７４，４５９号、第５，６８８，８２５号、第５，５５４，７８９号、第５，４５５，２３０号、第５，４３８，０６４号、第５，２９８，５２２号、第５，２１６，１６５号、第５，２０４，３６５号、第５，０３０，６３９号、第５，０１７，５７８号、第５，００８，２６４号、第４，９９４，４５０号、第４，９８０，３６５号、第４，９０６，６５５号、第４，８４７，２９０号、第４，８４４，９０７号、第４，７９４，１１０号、第４，７９１，１２９号、第４，７７４，２５６号、第４，７４９，７９２号、第４，７３７，４９３号、第４，７２１，７１２号、第４，７１９，２３１号、第４，６８１，８７９号、第４，６７０，５４１号、第４，６６７，０３９号、第４，６５８，０３７号、第４，６３４，７０８号、第４，６２３，６４８号、第４，６２２，３２６号、第４，６０８，３７４号、第４，５９５，６８６号、第４，５９４，１８８号、第４，５６９，９４２号、第４，５５６，６７２号、第４，５５２，８６６号、第４，５３９，３１２号、第４，５３６，５１２号、第４，５３３，６７１号、第４，５１１，７２４号、第４，４４０，７７９号、第４，４３４，１７５号、第４，４００，５３４号、第４，３９５，４０２号、第４，３９１，８２７号、第４，３７４，１３９号、第４，３６１，５８３号、第４，３２２，４２０号、第４，３０６，０９７号、第４，２５２，８１６号、第４，２５１，５３０号、第４，２４４，９５５号、第４，２３２，０１８号、第４，２０９，５２０号、第４，１６４，５１４号、第４，１４７，８７２号、第４，１３３，８１９号、第４，１２４，７１３号、第４，１１７，０１２号、第４，０６４，２７２号、第４，０２２，８３６号、第３，９６６，９４４号に開示されている鎮痛剤；
米国特許第５，２１９，８７２号、第５，２１９，８７３号、第５，０７３，５６０号、第５，０７３，５６０号、第５，３４６，９１１号、第５，４２４，３０１号、第５，０７３，５６０号、第５，２１９，８７２号、第４，９００，７４８号、第４，７８６，６４８号、第４，７９８，８４１号、第４，７８２，０７１号、第４，７１０，５０８号、第５，４８２，９３８号、第５，４６４，８４２号、第５，３７８，７２３号、第５，３４６，９１１号、第５，３１８，９７８号、第５，２１９，８７３号、第５，２１９，８７２号、第５，０８４，２８１号、第５，０７３，５６０号、第５，００２，９５５号、第４，９８８，７１０号、第４，９００，７４８号、第４，７９８，８４１号、第４，７８６，６４８号、第４，７８２，０７１号、第４，７４５，１２３号、第４，７１０，５０８号に開示されているコリン作用薬；
米国特許第５，０９１，５２８号、第５，０９１，５２８号、第４，８３５，１５７号、第５，７０８，０１５号、第５，５９４，０２７号、第５，５８０，８９２号、第５，５７６，３３２号、第５，５１０，３７６号、第５，４８２，９６１号、第５，３３４，６０１号、第５，２０２，３４７号、第５，１３５，９２６号、第５，１１６，８６７号、第５，０９１，５２８号、第５，０１７，６１８号、第４，８３５，１５７号、第４，８２９，０８６号、第４，５７９，８６７号、第４，５６８，６７９号、第４，４６９，６９０号、第４，３９５，５５９号、第４，３８１，３０９号、第４，３６３，８０８号、第４，３４３，８００号、第４，３２９，２８９号、第４，３１４，９４３号、第４，３１１，７０８号、第４，３０４，７２１号、第４，２９６，１１７号、第４，２８５，８７３号、第４，２８１，１８９号、第４，２７８，６０８号、第４，２４７，７１０号、第４，１４５，５５０号、第４，１４５，４２５号、第４，１３９，５３５号、第４，０８２，８４３号、第４，０１１，３２１号、第４，００１，４２１号、第３，９８２，０１０号、第３，９４０，４０７号、第３，８５２，４６８号、第３，８３２，４７０号に開示されているアドレナリン作用薬；
米国特許第５，８７４，４７９号、第５，８６３，９３８号、第５，８５６，３６４号、第５，７７０，６１２号、第５，７０２，６８８号、第５，６７４，９１２号、第５，６６３，２０８号、第５，６５８，９５７号、第５，６５２，２７４号、第５，６４８，３８０号、第５，６４６，１９０号、第５，６４１，８１４号、第５，６３３，２８５号、第５，６１４，５６１号、第５，６０２，１８３号、第４，９２３，８９２号、第４，７８２，０５８号、第４，３９３，２１０号、第４，１８０，５８３号、第３，９６５，２５７号、第３，９４６，０２２号、第３，９３１，１９７号に開示されている抗ヒスタミン剤；
米国特許第５，８６３，５３８号、第５，８５５，９０７号、第５，８５５，８６６号、第５，７８０，５９２号、第５，７７６，４２７号、第５，６５１，９８７号、第５，３４６，８８７号、第５，２５６，４０８号、第５，２５２，３１９号、第５，２０９，９２６号、第４，９９６，３３５号、第４，９２７，８０７号、第４，９１０，１９２号、第４，７１０，４９５号、第４，０４９，８０５号、第４，００４，００５号、第３，６７０，０７９号、第３，６０８，０７６号、第５，８９２，０２８号、第５，８８８，９９５号、第５，８８３，０８７号、第５，８８０，１１５号、第５，８６９，４７５号、第５，８６６，５５８号、第５，８６１，３９０号、第５，８６１，３８８号、第５，８５４，２３５号、第５，８３７，６９８号、第５，８３４，４５２号、第５，８３０，８８６号、第５，７９２，７５８号、第５，７９２，７５７号、第５，７６３，３６１号、第５，７４４，４６２号、第５，７４１，７８７号、第５，７４１，７８６号、第５，７３３，８９９号、第５，７３１，３４５号、第５，７２３，６３８号、第５，７２１，２２６号、第５，７１２，２６４号、第５，７１２，２６３号、第５，７１０，１４４号、第５，７０７，９８４号、第５，７０５，４９４号、第５，７００，７９３号、第５，６９８，７２０号、第５，６９８，５４５号、第５，６９６，１０６号、第５，６７７，２９３号、第５，６７４，８６１号、第５，６６１，１４１号、第５，６５６，６２１号、第５，６４６，１３６号、第５，６３７，６９１号、第５，６１６，５７４号、第５，６１４，５１４号、第５，６０４，２１５号、第５，６０４，２１３号、第５，５９９，８０７号、第５，５８５，４８２号、第５，５６５，５８８号、第５，５６３，２５９号、第５，５６３，１３１号、第５，５６１，１２４号、第５，５５６，８４５号、第５，５４７，９４９号、第５，５３６，７１４号、第５，５２７，８０６号、第５，５０６，３５４号、第５，５０６，２２１号、第５，４９４，９０７号、第５，４９１，１３６号、第５，４７８，９５６号、第５，４２６，１７９号、第５，４２２，２６２号、第５，３９１，７７６号、第５，３８２，６６１号、第５，３８０，８４１号、第５，３８０，８４０号、第５，３８０，８３９号、第５，３７３，０９５号、第５，３７１，０７８号、第５，３５２，８０９号、第５，３４４，８２７号、第５，３４４，８２６号、第５，３３８，８３７号、第５，３３６，６８６号、第５，２９２，９０６号、第５，２９２，８７８号、第５，２８１，５８７号、第５，２７２，１４０号、第５，２４４，８８６号、第５，２３６，９１２号、第５，２３２，９１５号、第５，２１９，８７９号、第５，２１８，１０９号、第５，２１５，９７２号、第５，２１２，１６６号、第５，２０６，４１５号、第５，１９４，６０２号、第５，１６６，２０１号、第５，１６６，０５５号、第５，１２６，４８８号、第５，１１６，８２９号、第５，１０８，９９６号、第５，０９９，０３７号、第５，０９６，８９２号、第５，０９３，５０２号、第５，０８６，０４７号、第５，０８４，４５０号、第５，０８２，８３５号、第５，０８１，１１４号、第５，０５３，４０４号、第５，０４１，４３３号、第５，０４１，４３２号、第５，０３４，５４８号、第５，０３２，５８６号、第５，０２６，８８２号、第４，９９６，３３５号、第４，９７５，５３７号、第４，９７０，２０５号、第４，９５４，４４６号、第４，９５０，４２８号、第４，９４６，８３４号、第４，９３７，２３７号、第４，９２１，８４６号、第４，９２０，０９９号、第４，９１０，２２６号、第４，９００，７２５号、第４，８９２，８６７号、第４，８８８，３３６号、第４，８８５，２８０号、第４，８８２，３２２号、第４，８８２，３１９号、第４，８８２，３１５号、第４，８７４，８５５号、第４，８６８，１６７号、第４，８６５，７６７号、第４，８６１，８７５号、第４，８６１，７６５号、第４，８６１，７６３号、第４，８４７，０１４号、第４，７７４，２３６号、第４，７５３，９３２号、第４，７１１，８５６号、第４，７１０，４９５号、第４，７０１，４５０号、第４，７０１，４４９号、第４，６８９，４１０号、第４，６８０，２９０号、第４，６７０，５５１号、第４，６６４，８５０号、第４，６５９，５１６号、第４，６４７，４１０号、第４，６３４，６９５号、第４，６３４，６９３号、第４，５８８，５３０号、第４，５６７，０００号、第４，５６０，５５７号、第４，５５８，０４１号、第４，５５２，８７１号、第４，５５２，８６８号、第４，５４１，９５６号、第４，５１９，９４６号、第４，５１５，７８７号、第４，５１２，９８６号、第４，５０２，９８９号、第４，４９５，１０２号に開示されているステロイド剤、が含まれるがそれらに限定されない。
上記の開示のすべては、参照することによって本明細書に組み込まれる。
【００４７】
バイオコンジュゲートの薬物成分は化合物全体、または本タンパク質リガンドもしくはリンカーへ共有結合するための結合部位を有しながら当該標的に対する親和性および特異性を保持している結合フラグメントもしくはその部分であってよい。
【００４８】
［本発明によるバイオポリマー］
本バイオポリマーは天然型または修飾タンパク質、ペプチド、ポリ核酸、または多糖類を含んでいてよい。本バイオポリマーは、好ましくは天然型タンパク質である。タンパク質は、標的部位または標的区画へ活性物質を送達できるあらゆるタンパク質であってよい。好ましい実施形態では、タンパク質は自体および／または結合実体を細胞外表面から細胞内区画へ移動させることのできる膜輸送タンパク質である。また別の実施形態では、タンパク質は血液脳関門を越えて結合実体を輸送できる膜輸送タンパク質である。また別の実施形態では、この区画はＣＮＳまたはＣＳＦ区画である。また別の実施形態では、タンパク質は特定の組織または細胞タイプへ結合する輸送タンパク質である。
【００４９】
また別の実施形態では、バイオポリマーは上記のように標的部位または標的区画へ活性物質を送達できるタンパク質へ向けて方向付けられる抗体である。また別の実施形態では、バイオポリマーは腫瘍もしくは疾患関連抗原に対する抗体または細胞表面マーカーである。
【００５０】
ある実施形態では、バイオポリマーはｐ９７またはｐ９７に対する抗体のようにｐ９７へ特異的に結合できる物質を含む。さらに別の実施形態では、この物質は成長因子、またはリンホカイン、酵素もしくは薬物等の治療活性を有する物質であってよい。本発明は、式Ｉのバイオコンジュゲートを投与するステップを含む血液脳関門を越えて活性物質を送達する方法にさらに関するが、このときバイオポリマーはｐ９７またはｐ９７に対する抗体またはｐ９７輸送活性を備えるｐ９７タンパク質部分もしくはフラグメントを含む。ある実施形態では、ｐ９７タンパク質は可溶性である。米国特許第５，９８１，１９４号に教示されたｐ９７タンパク質が特に好ましい。ｐ９７はヒトｐ９７タンパク質またはそのフラグメントであってよい。ｐ９７はマウス等の哺乳類由来であってよい。マウスｐ９７は、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる国際特許出願公開第０１／５９５４９号に開示されている。
【００５１】
本発明の組成物中に使用する「ｐ９７」には、膜結合ｐ９７（すなわち、ＧＰＩまたは他の脂質に結合したｐ９７）、可溶性ｐ９７、開裂ｐ９７、ｐ９７の等価物であるｐ９７のアナログ（ｐ９７の対立遺伝子変異体を含む、ペプチド配列レベルの４０％、６０％、８０％、もしくは９０％を超える相同性）、ヒト、マウス、ニワトリおよび／またはウサギｐ９７、およびそれらの誘導体、部分、もしくはフラグメントが含まれる。ｐ９７は酸性塩もしくは塩基性塩の形状、または天然形であってよい。さらに、個々のアミノ酸残基は、例えば酸化または還元によって修飾することができる。アミノ酸またはＤＮＡ核酸配列には様々な置換、欠失、または付加を加えることができ、それらの正味の作用はｐ９７の所望の生物学的活性に基づき保持または改良することができる。例えばコード縮退のために、同一アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列には相当に大きな変動があってもよい。本明細書で使用するｐ９７には、ｐ９７の所望の生物学的活性を保持または改良することを可能にするｐ９７の十分な部分および対応する自然のｐ９７アミノ酸配列に対する相同性を含有するｐ９７のいずれかの部分またはその生物学的に同等のアナログを含むｐ９７のフラグメントもさらに含まれる。他の態様では、本発明は実質的にその受容体結合またはトランスサイトーシス特性に影響を及ぼさないアミノ酸配列においてほんの少数の置換しか有していないｐ９７バイオコンジュゲートに及ぶ。
【００５２】
本発明のｐ９７化学療法薬において使用するために好ましい化学療法薬には、脳腫瘍またはその他の脳内もしくは脳周囲の腫瘍を治療するために有用な可能性がある、遊離形、または遊離形では余り有用でない場合はｐ９７に結合すると有用であるすべての薬物が含まれる。そのような化学療法薬にはアドリアマイシン（ドキソルビシンとしても知られる）、シスプラチン、パクリタキセル、それらのアナログ、並びにエキソビボおよびインビボで腫瘍に対する活性を示す他の化学療法薬が含まれる。そのような化学療法薬には、アルキル化剤、代謝拮抗薬、天然製剤（ビンカアルカロイド、エピドフィロトキシン、抗生物質、酵素および生物機能修飾物質）、トポイソメラーゼ阻害剤、微小管阻害剤、紡錘体阻害剤、ホルモン剤およびそのアンタゴニスト、並びに白金配位錯体、アントラセンジオン、置換尿素等のような種々の物質が含まれるが、当業者であれば他の化学療法薬を知っているであろう。
【００５３】
ｐ９７化学療法薬は、ｐ９７に結合した１種以上の化合物成分を含んでいてよい。例えば、コンジュゲーション反応は分子数１〜１０個以上のアドリアマイシンを単一ｐ９７分子へコンジュゲートさせることができる。原子数が数個の金またはヨウ素を単一ｐ９７ポリペプチドへコンジュゲートさせることができる。これらの調製物は混合物として使用できる、またはそれらは特異的ｐ９７：化合物（モル比）調製物へ精製することができる。当業者であれば、どのフォーマットおよびどのモル比が好ましいのかを決定できる。さらに、化合物の混合物は、実施例に示したｐ９７−アドリアマイシン−シスプラチン組成物のようにｐ９７へ結合させることができる。これらのｐ９７化学療法薬は、ある範囲のモル比から構成されてよい。これらは、さらに精製混合物に分離できる、またはそれらは凝集体中で使用できる。
【００５４】
本発明の組成物は、さらにまた血液眼関門または血液胎盤関門を越えて物質を送達するためにも使用できる。
【００５５】
［標識］
一部の実施形態では、本バイオコンジュゲートはその検出を容易にするために標識される。「標識」または「検出可能な成分」は、分光学的、光化学的、生化学的、免疫化学的、化学的、またはその他の物理的手段によって検出可能な組成物である。例えば、本発明に使用するために適切な標識には、例えば放射性標識（例、32Ｐ）、蛍光体（例、フルオレセイン）、高電子密度試薬、酵素（例、一般にＥＬＩＳＡ法によって使用される）、ビオチン、ジゴキシゲニン、または例えばハプテンもしくはペプチド内に放射性標識を組み込むことによって検出可能にできる、あるいはハプテンもしくはペプチドと特異的に反応性である抗体を検出するために使用されるハプテンおよびタンパク質が含まれる。
【００５６】
上記のように、使用したスクリーニングアッセイに依存して、バイオコンジュゲートの薬物、リンカーまたはバイオポリマー部分を標識することができる。使用した特定の標識または検出可能な基は、それがバイオコンジュゲートの生物学的活性を有意に妨害しない限り、本発明の重大な態様ではない。検出可能な基は、検出可能な物理的または化学的特性を有するあらゆる物質であってよい。そこで、標識は、分光的、光化学的、生化学的、免疫化学的、電気的、光学的または化学的手段によって検出可能なあらゆる組成物である。
【００５７】
本発明で使用するために適合する標識の例には、蛍光色素（例えば、フルオレセインイソチオシアネート、テキサスレッド、ローダミン等）、放射性標識（例えば、3Ｈ、125Ｉ、35Ｓ、14Ｃ、もしくは32Ｐ）、酵素（例えば、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼおよびＥＬＩＳＡで一般に使用される他の酵素）、および金コロイドもしくは着色ガラスもしくはプラスチックビーズ（例えば、ポリスチレン、ポリプロピレン、ラテックス等）等の比色標識が含まれるが、それらに限定されない。
【００５８】
標識は、当技術分野において周知の方法によるアッセイの所望の成分へ直接的もしくは間接的に結合させることができる。好ましくは、ある実施形態における標識は、本発明による活性成分をコンジュゲートさせるためにイソシアネート試薬を使用してバイオポリマーへ共有結合されている。本発明の１つの態様では、本発明の二官能イソシアネート試薬を使用すると、標識をバイオポリマーへコンジュゲートさせてそれに結合した活性物質を含まない標識バイオポリマーコンジュゲートを生成することができる。標識バイオポリマーコンジュゲートは本発明による標識バイオコンジュゲートを合成するための中間体として使用できる、またはバイオポリマーコンジュゲートを検出するために使用できる。上記で指示したように、必要な感受性、所望のアッセイ成分とのコンジュゲートの容易さ、安定性要件、利用できる器械類、および廃棄条件に依存して標識を選択することにより、広範囲の標識を使用できる。非放射性標識は、しばしば間接的手段により結合される。一般に、リガンド分子（例えば、ビオチン）はその分子へ共有結合している。リガンドは次に、本質的に検出可能である、もしくは例えば検出可能な酵素、蛍光化合物、または化学発光化合物等のシグナル系へ共有結合しているかのいずれかである別の分子（例えば、ストレプトアビジン）に結合する。
【００５９】
本バイオコンジュゲートは、例えば酵素または蛍光体とのコンジュゲーションによって、シグナル発生化合物へ直接的にコンジュゲートさせることができる。標識として使用するために適切な酵素には、加水分解酵素、特別にはホスファターゼ、エステラーゼおよびグリコシダーゼ、または酸化還元酵素、特別にはペルオキシダーゼが含まれるが、それらに限定されない。標識と使用するために適切な蛍光化合物、すなわち蛍光体には、フルオレセインおよびその誘導体、ローダミンおよびその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン等が含まれるが、それらに限定されない。適切な蛍光体の他の例には、エオシン、ＴＲＩＴＣ−アミン、キニン、フルオレセインＷ、アクリジンイエロー、リサミンローダミン、Ｂ  スルホニルクロリドエリスロセイン、ルテニウム（トリス、ビピリジニウム）、テキサスレッド、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド、フラビンアデニンジヌクレオチド等が含まれるが、それらに限定されない。標識として使用するために適切な化学発光化合物には、ルシフェリンおよび２，３−ジヒドロフタラジンジオン、例えばルミノールが含まれるが、それらに限定されない。本発明の方法に使用できる様々な標識化またはシグナル生成系を検討するためには、例えば米国特許第４，３９１，９０４号を参照。
【００６０】
標識を検出する手段は、当業者には周知である。そこで、例えば標識が放射性標識である場合は、検出のための手段にはシンチレーションカウンターまたはオートラジオグラフィーにおけるような写真フィルムが含まれる。標識が蛍光標識である場合は、適切な波長の光線を用いて蛍光色素を励起し、結果として生じる蛍光を検出することにより検出できる。蛍光は、例えば荷電結合素子（ＣＣＤ）または光電子増倍管等の電子検出器の使用によって視覚的に検出できる。同様に、酵素標識は酵素に対して適切な基質を用意し、そして結果として生じた反応生成物を検出することによって検出できる。比色もしくは化学発光標識は、標識と結び付いた色を観察することによって単純に検出できる。本発明の方法に使用するために適切な他の標識系および検出系は、当業者には容易に明白であろう。
【００６１】
［本発明によるイソシアネート試薬］
二官能架橋試薬は、そのうちの少なくとも１つがイソシアネート官能基である少なくとも２つの反応性基を含む。ある実施形態では、二官能架橋試薬は下記の式：
【化１１】
2005537266.tif 000013
式ＩＩＩ
（式中、Ｒは長さが原子数１〜約３０個または長さが原子数約３０〜約５０個の非置換アルキレンもしくは置換アルキルまたは非置換もしくは置換ヘテロアルキレンである）のジイソシアネートである。
【００６２】
また別の実施形態では、二官能架橋試薬は下記の式：
【化１２】
2005537266.tif 000014
式ＩＶ
（式中、Ｒは長さが原子数１〜約３０個、または長さが原子数３０〜約５０個の置換アルキレンもしくは非置換アルキレンまたは非置換もしくは置換ヘテロアルキレンである）のイソシアネートである。ｔ−ブチル基以外の他のブロック基は当業者には明白であろう。
【００６３】
用語「保護基」または「適合する保護基」は、下記の：１）所望の官能基と選択的に反応して良好な収率でそれに対する保護が所望である企図された反応に対して安定性である誘導体を生じさせる；２）誘導体化固相支持体から化学的および／または酵素的に選択的に除去して所望の官能基を生じさせることができる；および、３）そのような企図された反応において生成した他の１つ以上の官能基と適合する試薬によって良好な収率で除去できる、という特徴を示す化学基を意味する。保護基の例は、Ｇｒｅｅｎｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１），Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，第２版（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ニューヨーク）の中に見いだすことができる。好ましい保護基には、酸不安定性保護基（ＢｏｃもしくはＤＭＴ等）；塩基不安定性保護基（例えばＦｍｏｃ、Ｆｍ、ホスホニオエトキシカルボニル（Ｐｅｏｃ）等）；例えばＤＢＭＢ、アリル（ａｌｌｙｌ）もしくはａｌｌｏｃ、２−ハロエチル等の、中性条件（例、金属イオン支援加水分解）下で除去できる基；例えば２−（トリメチルシリル）エトキシメチル（ＳＥＭ）、２−（トリメチルシリル）−エチルオキシカルボニル（Ｔｅｏｃ）もしくは２−（トリメチルシリル）エチル（Ｔｅ）Ｓ等の、フッ化物イオンを使用して除去できる基；およびＬｅｖ等の、軽度の還元条件（例、水素化ホウ素ナトリウムもしくはヒドラジン）下で除去できる基が含まれるが、それらに限定されない。特に好ましい保護基には、Ｆｍｏｃ、Ｆｍ、Ｍｅｎｐｏｃ、Ｎｖｏｃ、Ｎｖ、Ｂｏｃ、ＣＢＺ、アリル（ａｌｌｙｌ）、ａｌｌｏｃ（アリルオキシカルボニル）、Ｎｐｅｏｃ（４−ニトロフェンエチルオキシカルボニル）、Ｎｐｅｏｍ（４−ニトロフェネチルオキシメチルオキシ）、α，α−ジメチル−３，５−ジメチルオキシベンジルオキシカルボニル（ｄｄｚ）およびトリチル基が含まれるが、それらに限定されない。使用する特定の除去可能な保護基は、本発明の方法にとっては重大ではない。
【００６４】
用語「直交保護基」は、相互の存在下で区別を付けて除去できる、または区別を付けて除去されない場合は区別を付けて再保護できる２つ以上の適合する保護基を意味する。ある実施形態では、例えば合成の完了時に、１つのステップですべての保護基を除去するのが所望な場合がある。
【００６５】
それ自体または他の置換基の一部としての用語「アルキル」の意味は、上記に定義したとおりである。
【００６６】
アルカンもしくはアルキルもしくはアルキレンメンバーが式ＩにおいてＲと指定される場合は、例えば対応する二価アルキル基が指示される。例えば、Ｒがメタン、メチル、もしくはメチレンと指定される場合は、対応する式ＩＩＩまたはＩＶの化合物は下記であろう。
【化１３】
2005537266.tif 000015
【００６７】
ある実施形態では、架橋試薬はＯ＝Ｃ＝Ｎ（ＣＨ2）nＮＨＣ（Ｏ）（ＯＣＨ2ＣＨ2）m（ＣＨ2）pＣ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ3）3（式中、ｎは約２〜１２であり、ｍは約２〜３０であり、そしてｐは約１〜１２である）である。１つの好ましい実施形態では、ｎは６であり、ｍは５であり、そしてｐは２である：
【化１４】
2005537266.tif 000016
【００６８】
［医薬組成物を使用する方法、およびそれらの投与方法］
用語「医薬上許容される担体」はリン酸緩衝生理食塩液、水、およびエマルジョン（例えば水中油型もしくは油中水型エマルジョン）、および様々な湿潤剤および／またはアジュバントを含む標準的な医薬担体、バッファーおよび賦形剤のいずれかを含む。適切な医薬担体およびそれらの調製物はＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，イーストン、第１９版、１９９５）に記載されている。好ましい医薬担体は、活性物質の目的とする投与様式に依存する。典型的な投与様式は下記で記載する。
【００６９】
用語「有効量」は、被検対象の健康状態、病理、または疾患に依存して所望の結果を生じさせるために十分な用量を意味する。所望の結果は、その投与のレシピエントにおける主観的または客観的改善を含むことがある。
【００７０】
「予防的治療」は、疾患の徴候を示していない、または疾患の初期徴候しか示していない被検対象に投与される治療であって、このとき治療は病理的状態を発生するリスクを減少させるために投与される治療である。本発明のバイオコンジュゲート化合物は、予防的治療として与えることができる。
【００７１】
「治療的治療」は、病理の徴候を示す被検対象に投与される治療であり、治療は病理的徴候を減少させる、または排除するために投与される。本発明のバイオコンジュゲート化合物は、予防的治療として与えることができる。
【００７２】
医薬組成物におけるような用語「組成物」は、１種以上の活性成分、および担体を生成する１種以上の不活性成分、並びにあらゆる２種以上の成分の組み合わせ、複合もしくは凝集の結果として、または１種以上の成分の解離、または１種以上の成分の他のタイプの反応もしくは相互作用の結果として直接的もしくは間接的に生じる成分を含むことが意図されている。したがって、本発明の医薬組成物は本発明のバイオコンジュゲート化合物と医薬上許容される担体を混合することによって作製されたいずれかの組成物を含む。用語「医薬組成物」は、動物またはヒトを含む被検対象における医薬上の使用のために適切な組成物を指示する。医薬組成物は、一般に有効量のバイオコンジュゲートおよび医薬上許容される担体を含む。
【００７３】
これらのバイオコンジュゲートは様々な経路によって投与できる。経口用調製物については、錠剤、散剤、顆粒剤もしくはカプセル剤を作製するために、バイオコンジュゲートを単独で、または例えば乳糖、マンニトール、コーンスターチもしくはジャガイモデンプン等の従来型添加物；微結晶性セルロース、セルロール誘導体、アカシア、コーンスターチもしくはゼラチン等の結合剤；コーンスターチ、ジャガイモデンプンもしくはカルボキシメチルセルロースナトリウム等の崩壊剤；タルクもしくはステアリン酸マグネシウム等の潤滑剤；並びに所望であれば希釈剤、緩衝剤、湿潤剤、保存料および矯味剤と組み合わせて使用することができる。
【００７４】
本バイオコンジュゲートは、それらを例えば植物油もしくは他の類似の油、合成脂肪族系酸グリセリド、高級脂肪族系酸のエステルもしくはプロピレングリコール等の水性もしくは非水性溶媒中に；および所望であれば例えば可溶化剤、等張性物質、懸濁化剤、乳化剤、安定剤および保存料等の従来型添加物を用いて、溶解、懸濁化もしくは乳化させることによって注射用調製物に調製することができる。
【００７５】
本バイオコンジュゲートは、吸入によって投与されるエーロゾル調製物で利用できる。本発明の化合物は、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素等の許容される加圧噴射剤中に調製することができる。
【００７６】
さらに、本バイオコンジュゲートは例えば乳化性塩基または水溶性塩基等の様々な塩基と混合することにより坐剤に作製することができる。本発明の化合物は、坐剤により経直腸投与することができる。坐剤には、体温では融解するが、室温では固化しているカカオ脂、カーボワックスおよびポリエチレングリコール等の賦形剤を含むことができる。
【００７７】
シロップ剤、エリキシル剤、および懸濁剤等の経口もしくは経直腸投与するための本バイオコンジュゲートの単位剤形を提供することができるが、このとき例えば小さじ１杯、大さじ１杯、錠剤もしくは坐剤等の各用量単位は活性物質を含有する所定量の組成物を含有する。同様に、注射もしくは静脈内投与用の単位剤形は、無菌水、正常食塩液もしくは他の医薬上許容される担体中の液剤としての組成物中に本バイオコンジュゲートを含むことができる。本明細書で使用する用語「単位剤形」は、ヒトおよび動物対象のための単一用量として適切な物理的に個別の単位を意味しており、各単位は医薬上許容される希釈剤、担体もしくはビヒクルと結び付けて所望の作用を生じさせるために十分な量で計算された所定量の本発明の化合物を含有する。本発明の新規の単位剤形についての詳細は、使用される特定バイオコンジュゲートおよび達成される作用、並びに宿主中での各化合物と結び付いた薬力学に依存する。
【００７８】
実際の使用では、本発明によるバイオコンジュゲートは従来型の薬学的配合技術によって均質混合物中で有効成分として医薬上担体と結合させることができる。担体は、例えば経口または非経口（静脈内投与を含む）投与のために所望の調製物の形状に依存して広範囲の形状を取ることができる。経口剤形用の組成物を調製するためには、例えば懸濁剤、エリキシル剤および液剤等の経口液体調製物の場合には例えば水、グリコール、油、アルコール、矯味剤、保存料、着色剤等、あるいは例えば散剤、硬質および軟質カプセル剤および錠剤等の経口固体調製物の場合にはデンプン、糖、微結晶性セルロース等の担体、希釈剤、顆粒化剤、潤滑剤、結合剤、分解剤等の通常の医薬上の媒質のいずれかを使用できるが、液体調製物より固体経口調製物の方が好ましい。
【００７９】
経皮的投与経路に関しては、薬物の経皮的投与の方法はＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１７版，（Ｇｅｎｎａｒｏ  ｅｔ  ａｌ．編集，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，１９８５）に開示されている。本発明の化合物を経皮的に送達するためには、皮膚パッチが好ましい手段である。パッチは、好ましくは化合物の吸収を増加させるためにＤＭＳＯ等の吸収強化剤を提供する。経皮的薬物送達のための他の方法は米国特許第５，９６２，０１２号、第６，２６１，５９５号、および第６，２６１，５９５号に開示されている。それらの各々は参照することによりその全体が組み込まれる。
【００８０】
ビヒクル、アジュバント、担体または希釈剤等の医薬上許容される賦形剤は市販で入手できる。さらに、例えばｐＨ調整剤および緩衝剤、張性調整剤、安定剤、湿潤剤等の医薬上許容される補助物質も市販で入手できる。
【００８１】
当業者であれば、用量レベルが特定化合物、症状の重症度および副作用に対する被検対象の感受性の関数として変動する可能性があることを容易に理解するであろう。所与の化合物にとって好ましい用量は、様々な手段によって当業者が容易に決定することができる。
【００８２】
これらの態様の各々では、組成物には経口、経直腸、局所、非経口（皮下、筋内、および静脈内）投与、肺（鼻孔もしくは口腔吸入）、または経鼻投与のために適切な組成物が含まれるがそれらに限定されない。だが所与の場合に最も適切な経路は、一部には治療される状態の性質および重症度並びに有効成分の性質に依存するであろう。典型的な投与経路は、経口および静脈内経路である。本組成物は、製薬技術分野において周知のいずれかの方法によって便宜的に単位剤形で調製できる。
【００８３】
実際の使用では、本発明による化合物は従来型の薬学的配合技術によって均質混合物中で有効成分として医薬上担体と結合させることができる。担体は、例えば経口または非経口（静脈内投与を含む）投与のために所望の調製物の形状に依存して広範囲の形状を取ることができる。経口剤形用の組成物を調製するためには、例えば懸濁剤、エリキシル剤および液剤等の経口液体調製物の場合には例えば水、グリコール、油、アルコール、矯味剤、保存料、着色剤等、あるいは例えば散剤、硬質および軟質カプセル剤および錠剤等の経口固体調製物の場合にはデンプン、糖、微結晶性セルロース等の担体、希釈剤、顆粒化剤、潤滑剤、結合剤、分解剤等の通常の医薬上の媒質のいずれかを使用できるが、液体調製物より固体経口調製物の方が好ましい。
【００８４】
投与が容易であるために、錠剤およびカプセル剤は、固体医薬担体が明白に使用される最も有益な経口単位剤形を表している。所望であれば、錠剤は標準の水性または非水性技術によって被覆することができる。これらの組成物中の活性化合物のパーセンテージは当然ながら変動してよく、便宜的には単位重量の約２％から約６０％であってよい。
【００８５】
本発明のバイオコンジュゲートは動物、および特にヒトにおける治療的、予防的および診断的介入のために有用である。本明細書に記載したように、本バイオコンジュゲートは使用するバイオポリマーに依存していずれかの標的器官、区画、または部位中での活性物質の優先的蓄積および／または遊離を示す。
【００８６】
本発明の組成物は、ウイルスエンベロープもしくはウイルス小胞内に被包化もしくは結合し、または細胞内に組み込んで投与することができる。小胞は、通常は球形であり、そしてしばしば脂質であるミセル粒子である。リポソームは、二層膜から形成された小胞である。適切な小胞には、単層小胞および多層脂質小胞もしくはリポソームが含まれるが、それらに限定されない。そのような小胞およびリポソームは、例えば米国特許第４，３９４，４４８号に記載されているような標準技法を使用して、例えばホスファチジルコリン、ホスファチジン酸、ホスファチジルセリン、ホスファチジルエタノールアミン、スフィンゴミエリン、糖脂質、ガングリオシド等の広範囲の脂質もしくはリン脂質化合物から作製できる。そのような小胞またはリポソームを使用すると、化合物を細胞内に投与することができる、または化合物を標的器官に送達することができる。重要なｐ９７−組成物の制御された遊離は、カプセル封入法を使用して達成できる（例えば、米国特許第５，１８６，９４１号を参照）。
【００８７】
本バイオコンジュゲート組成物を血流中に、または少なくとも血液脳関門の外側で希釈するあらゆる投与経路を使用できる。本組成物は、好ましくは末梢内に、最も好ましくは静脈内に、または心カテーテルによって投与される。頸静脈内および頸動脈内経路もまた有用である。本組成物は、腹膜内のように局所的または局部的に投与することができる。１つの態様では、本組成物は適切な医薬希釈剤または担体と一緒に投与される。
【００８８】
投与される用量は個々の必要、所望の作用、使用される活性物質、バイオポリマーおよび選択された投与経路に依存するであろう。バイオコンジュゲートの好ましい用量範囲は約０．２ｐｍｏｌ／ｋｇ〜約２５ｎｍｏｌ／ｋｇであり、および特に好ましい用量範囲は２〜２５０ｐｍｏｌ／ｋｇである；または、バイオコンジュゲートの好ましい用量範囲は０．０２〜２，０００ｍｇ／ｋｇであってよい。これらの用量は、活性物質の数またはバイオポリマーと結び付いた薬物成分によって影響を受けるであろう。または、用量は投与される活性物質に基づいて計算できる。
【００８９】
好ましい実施形態では、本バイオポリマーはｐ９７である。例えば、０．００５〜１００ｍｇ／ｋｇのアドリアマイシンを含むｐ９７−アドリアマイシンの用量はインビボにおいても有用である。特に好ましいのは、０．０５ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇのアドリアマイシンを含むｐ９７−アドリアマイシンの用量である。当業者であれば、化合物の遊離形のために使用される推奨用量に基づいてｐ９７へ結合した他の化合物について適切な用量を決定できる。ｐ９７は一般に、同一作用を入手するために必要とされる薬物の量を低下させる。
【００９０】
本発明のｐ９７−化合物は、動物、および特にヒトにおける治療的、予防的および診断的介入のために有用である。本明細書に記載したように、ｐ９７−化合物は肺、肝臓、腎臓および脾臓内への優先的蓄積を示し、そしてそれらは心臓への化合物の送達を有意に減少させる。診断的使用のために好ましい医学的適応には、例えば当該の標的器官（例、肺、肝臓、腎臓、脾臓）と結び付いたいずれかの条件、またはその心毒性を減少させることによって利益が得られるであろう心毒性化合物を必要とするいずれかの状態が含まれる。
【００９１】
本方法は、様々な相違する疾患状態の治療において利用される。一定の実施形態では、特に重要なのは活性物質もしくは所望の活性を有する薬物が以前に同定されたが、活性物質もしくは薬物が標的部位、領域または区画を標的としていない疾患状態における本方法の使用である。そのような活性物質もしくは薬物を使用すると、本方法は活性物質もしくは薬物の治療有効性および治療指数を強化するために使用できる。
【００９２】
本バイオコンジュゲートを用いて治療可能な特異的疾患状態は、バイオコンジュゲート内に存在する可能性のある薬物成分のタイプと同様に変化する。そこで、疾患状態には、腫瘍疾患等の細胞増殖性疾患、自己免疫疾患、心血管疾患、ホルモン異常疾患、変性性疾患、加齢疾患、中枢神経系疾患（例、アルツハイマー病、癲癇）、精神病および精神状態（例、精神分裂病、うつ病および不安等の気分障害）、感染性疾患等が含まれる。
【００９３】
治療は、バイオコンジュゲートの投与に結び付いた、疾患を獲得する可能性の減少、疾患の予防、疾患の進行の緩徐化、停止または逆転、もしくは宿主を苦しめる疾患状態に結び付いた症状の改善を含む被検対象にとってあらゆる有益な転帰を含むことが意図されているが、このとき改善もしくは利益は広い意味で例えば炎症やそれに関連する疼痛等の治療される病理的状態と結び付いた症状のようなパラメーターの大きさの少なくとも減少を意味するために使用される。そこで、治療には宿主がもはや病理的状態、または少なくとも病理的状態を特徴とする症状に苦しまないように、病理的状態、または少なくともそれに結び付いた症状が完全に阻害される、例えば発生が防止される、または停止される、例えば終了される状態がさらに含まれる。
【００９４】
本方法によると、様々な宿主または被検対象を治療できる。一般にそのような宿主は、「哺乳類」または「哺乳動物」であり、このときこれらの用語は肉食動物目（例、イヌおよびネコ）、齧歯類目（例、マウス、モルモット、およびラット）、並びに霊長類目（例、ヒト、チンパンジー、およびサル）を含む哺乳動物綱内に含まれる生物を記載するために広く使用される。多数の実施形態では、宿主はヒトであろう。
【００９５】
通常は経口用量または注射用量およびしばしば貯蔵安定性調製物中に含まれる本バイオコンジュゲートの単位用量を含むキットが提供される。そのようなキットには、単位用量を含有する容器に加えて、重要な病理的状態を治療する際の薬物の使用方法および付随する利点を記載した包装添付文書が含まれるであろう。好ましい化合物および単位用量は上記に記載した化合物および単位用量である。
【００９６】
［実施例］
下記の実施例は、限定するためではなく例示する目的でのみ提供する。当業者であれば、本質的に類似の結果を生じさせるために変更または修飾することのできる様々な非臨界的パラメーターを容易に認識するであろう。
【００９７】
イソシアネートリンカーは、特別に小さな薬物分子からタンパク質（例えば、ｐ９７）までを含むバイオコンジュゲートを合成するために驚くほど極めて効率的な試薬であることが見いだされている。これらのリンカーは、活性ヒドロキシ基またはアミノ基を含有するあらゆる活性物質にとって特に有用である。そのような薬物は、例えばドキソルビシン、タキソール、カンプトテシン、ＳＮ−３８、１０−ヒドロキシカンプトテシン、７−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）１０−ヒドロキシカンプトテシン等である。
【００９８】
本発明の化合物は、市販で入手できる出発物質を用いて作製できる。下記の方法は、本発明を限定するためではなく例示することを意図した典型的な合成経路である。有益であるように、当業者であれば本明細書に開示した方法の変形方法、改良方法、および代替方法を認識できるであろう。
【実施例１】
【００９９】
ヒドロキシもしくはアミノ反応性カップリング基を含有するバイオポリマーと共にヒドロキシ基もしくはアミノ基を含有する薬物のバイオコンジュゲートを生成するための２種の典型的な二官能架橋剤の使用
（Ａ）ヒドロキシ基もしくはアミノ官能基を有する薬物と本発明の典型的な架橋試薬とを共有結合させるステップ。
【化１５】
2005537266.tif 000017
【０１００】
（Ｂ）修飾した小さな薬物を典型的なバイオポリマーと反応させてバイオコンジュゲートを生成するステップ。
【化１６】
2005537266.tif 000018
【実施例２】
【０１０１】
活性物質を修飾するための典型的なイソシアネートリンカーの合成およびそれらの使用
典型的なイソシアネートリンカーには、下記の式のイソシアネートリンカーが含まれるが、それらに限定されない。
【化１７】
2005537266.tif 000019
【０１０２】
上記の典型的なリンカーの合成。
Ａ．それらの二酸アナログから合成したジイソシアネートリンカー：
【化１８】
2005537266.tif 000020
【０１０３】
出発物質の二酸化合物をアジ化ジフェニルホスホリルにより処理して予想されたジイソシアネートリンカーを高収率で入手した。置換基Ｒは、例えばアルキル基またはＰＥＧ鎖（ｎ＝３〜１０）であろう。
【０１０４】
イソシアネートｔｅｒｔ−ブチルエステルリンカーの合成：
【化１９】
2005537266.tif 000021
【０１０５】
ＰＥＧ（ｎ＝３〜１０）化合物を最初にｔｅｒｔ−ブチルアクリレートと反応させてモノｔｅｒｔ−ブチルエステルを生成し、これを次にジイソシアネート化合物（ｍ＝４〜６）とさらに反応させてイソシアネートｔｅｒｔ−ブチルエステルリンカーを生成した。
【実施例３】
【０１０６】
新規のリンカーを使用した薬物小分子の修飾の実施例およびｐ９７との小薬物バイオコンジュゲートのためのそれらの使用。
１０−ヒドロキシカンプトテシンとコンジュゲートさせたジイソシアネートリンカー
【化２０】
2005537266.tif 000022
試薬および条件：（ａ）１０当量の１，６−ビス（イソシアネート）ヘキサン、トリエチルアミン、ＤＭＦ、室温、３０分間、９０〜９５％；（ｂ）１００当量のＤＭＦ中の化合物２、室温、一晩。ＭＳＲ＝６．１、タンパク質回収率＝９６％。
【０１０７】
１０−ヒドロキシカンプトテシン１をジイソシアネートリンカーと反応させるとモノイソシアネート修飾１０−ヒドロキシカンプトテシンが９０％を超える収率で得られた。ＤＭＦ中の化合物２の溶液をｐ９７と単純に混合すると、ＭＳＲ＝６、タンパク質回収率９６％で予想されたコンジュゲート３が生成され得る。
【０１０８】
ＳＮ−３８とコンジュゲートさせたジイソシアネートリンカー：
【化２１】
2005537266.tif 000023
【０１０９】
ジイソシアネートＰＥＧリンカーとＳＮ−３８またはドキソルビシンとの反応
【化２２】
2005537266.tif 000024
【化２３】
2005537266.tif 000025
【実施例４】
【０１１０】
イソシアネートｔｅｒｔ−ブチルエステルリンカーとタキソールまたはＳＮ−３８との反応
【化２４】
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【化２５】
2005537266.tif 000027
【０１１１】
［実験方法；材料および方法並びに分析データ］
カンプトテシンおよび１０−ヒドロキシカンプトテシンは市販で入手できる（例、Ａｂｒａｔｒａ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社（住所：７８  Ｘｉｙｉｎｇ  Ｒｏａｄ  Ｘｉ’ａｎ，７１００５４，中国，Ｔｅｌ：８６−２９−５５１−３４８９，Ｆａｘ：８６−２９−５５１−０４８６）、ｅｍａｉｌ：ｉｎｆｏ＠ａｂａｔｒａ．ｃｏｍ，ａｂａｔｒａ＠ｙｅａｈ．ｎｅｔ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｂａｔｒａ．ｃｏｍ．）。
【０１１２】
Ｓｌｉｄｅｒ−Ａ−Ｌｙｚｅｒ  Ｄｉａｌｙｓｉｓ  Ｃａｓｓｅｔｔｅ（１０，０００ＭＷＣＯ）およびＳｎａｋｅＳｋｉｎ（商標）透析用チューブ（１０，０００ＭＷＣＯ）はＰｉｅｒｃｅ社（３７４７  Ｎ．Ｍｅｒｉｄｉａｎ  Ｒｏａｄ，私書箱１１７，イリノイ州ロックフォード、米国６１１０５、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｐｉｅｒｃｅｎｅｔ．ｃｏｍ）から購入した。Ｄ−Ｓａｌｔ（商標）Ｅｘｃｅｌｌｕｌｏｓｅ（商標）プラスチック製脱塩カラム（２０４５０型、５ｍＬ、ゲル排除限界５，０００ＭＷ）はＰｉｅｒｃｅ社（３７４７  Ｎ．Ｍｅｒｉｄｉａｎ  Ｒｏａｄ、私書箱１１７、イリノイ州ロックフォード６１１０５，ｗｗｗ．ｐｉｅｒｃｅｎｅｔ．ｃｏｍ）から購入した。ＦＰＬＣは、Ｍｏｎｏ  Ｑ（登録商標）ＨＲ  １０／１０イオン交換カラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ社）およびＰＢＳバッファー（０．０１Ｍ、ｐＨ＝７．４）並びに１Ｍ  ＮａＣｌ−０．００１Ｍ  ＰＢＳバッファー移動相またはＢＩＯＳＥＰ（商標）サイズ排除カラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ社、カリフォルニア州トランス、米国）および０．０１Ｍ  ＰＢＳバッファー（ｐＨ＝６．８０）を使用して、ＡＫＴＡ  Ｐｕｒｉｆｉｅｒ（商標）ＦＰＬＣ（ＵＮＩＣＯＲＮ（商標）バージョン３．１０，Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ社、を使用する）に記録した。その他すべての化学試薬および溶媒はＡｌｄｒｉｃｈ社、Ｓｉｇｍａ社、またはＶＷＲ社から購入し、受領したままで使用した。フラッシュクロマトグラフィーに使用したシリカゲルは、Ｍｅｒｃｋ社シリカゲル６０、２３０−４００メッシュであったが、他方Ｒf値はＭｅｒｃｋ社シリカＴＬＣアルミシート（シリカゲル６０  Ｆ254）上で測定した。融点はＴｈｏｍａｓホットステージまたはＢｕｃｈｉ装置上で測定し、補正しなかった。1Ｈおよび13Ｃ  ＮＭＲスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＣ−２００またはＡＭＸ−３００装置上で記録した。ＵＶ−Ｖｉｓスペクトルは、指示した溶媒中でＨＰ８４５２Ａ光ダイオードアレイ分光光度計（機器精度±２ｎｍ）上で記録した。元素分析は、ＵＢＣ（ブリティッシュコロンビア大学）化学学科微量分析研究所によって実施された。高分解能および低分解能質量スペクトルは、ＵＢＣ化学学科質量分光計サービス研究所によって入手された。
【０１１３】
１０−ヒドロキシカンプトテシン６−イソシアネートヘキシルカルバメート［Ｃ28Ｈ28Ｎ4Ｏ7、ＦＷ＝５３２］
【化２６】
2005537266.tif 000028
【０１１４】
マグネチックスターラーバーを装備した１００ｍＬの単一首丸底フラスコに、１０−ヒドロキシカンプトテシン（６００ｍｇ、１．６５ｍｍｏｌ）および無水ＤＭＦ（４０ｍＬ）を装填した。このフラスコを固体が全部溶解するまで超音波浴内に入れた。この混合液を攪拌し、１，６−ビス（イソシアネート）ヘキサン（２．７７ｍＬ、１６．５ｍｍｏｌ、１０当量）を添加し、続いてトリエチルアミン（２ｍＬ）を添加した。光線から保護するためにフラスコをアルミホイルで被覆した。反応はＴＬＣ（ジクロロメタン／メタノール、９５／５（ｖ／ｖ））によって監視した。出発物質はＲf値０．４を有しており、生成物のＲf値は０．７であった。３０分後、ＴＬＣによりこの反応が完了したことが確証された。溶媒を乾燥するまで真空下で除去した。この残留物を次に無水エーテル（４０ｍＬ）と混合し、次にフラスコを超音波浴内に３０秒間入れた。この懸濁液を次に４℃で３時間保持した。この固体を吸引濾過により収集すると、淡黄色粉末として予想された生成物（７９０ｍｇ、９０％）が得られた。
【０１１５】
融点（ｍ．ｐ．）：２３０−２３５℃。
【０１１６】
1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，２００ＭＨｚ），δ＝０．９５（ｔ，Ｊ＝７．３２Ｈｚ，３Ｈ，ＣＨ3），１．４０−１．７０（ｍ，８Ｈ，４ＣＨ2），１．９０（ｑ，Ｊ＝７．３２Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．９０（ｔ，Ｊ＝７．２０Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），３．２０（ｔ，Ｊ＝７．２０Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），５．２０（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2），５．４０（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2），６．６０（ｓ，１Ｈ），７．２０（ｓ，１Ｈ），７．６０（ｍ，１Ｈ），７．９０（ｓ，１Ｈ），７．９５（ｍ，１Ｈ），８．２０（ｄ，１Ｈ），８．６０（ｓ，１Ｈ）ｐｐｍ．（図１６を参照）
【０１１７】
1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，５００ＭＨｚ），δ＝０．８６（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ，ＣＨ3），１．３０−１．６０（ｍ，８Ｈ，４ＣＨ2），１．９０（ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．９５（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），３．２０（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），５．２５（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），５．４０（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2），６．５０（ｄ，Ｊ＝２．４６Ｈｚ，１Ｈ），７．３０（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），７．６２（ｍ，１Ｈ），７．８５（ｍ，１Ｈ），７．９５（ｍ，１Ｈ），８．１５（ｍ，１Ｈ），８．６０（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ）ｐｐｍ．
【０１１８】
13Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，１００ＭＨｚ），δ＝７．７６（ＣＨ3），２５．６８，２６．０１，２９．０３，２９．１７，３０．０２，３０．４７，４２．５１，５０．２０，６５．２４，７２．３７，９６．５６，１１８．５９，１１８．９７，１２６．２４，１２８．４０，１３０．２０，１３０．２３，１３０．９８，１４５．４３，１４５．５１，１４９．７１，１４９．９９，１５２．１２，１５４．０３，１５６．７９，１７２．４３ｐｐｍ．（図１７を参照）
【０１１９】
ＬＳＩＭＳ（マトリックス：チオグリセロール），ｍ／ｅ＝６４１，５３３，４２９，３６５，３２１，２１５．ＨＲＭＳ（ＬＳＩＭＳ，マトリックス：チオグリセロール）：［Ｃ28Ｈ29Ｎ4Ｏ7］+に対する実測値５３３．２０３８５、計算値５３３．２０３６３．（図１８を参照）
【０１２０】
ＵＶ−ｖｉｓ（１０ｍＭ中で３０％  ＤＭＦ，ｐＨ７．４  ＰＢＳ），λ（ε）＝３８２（２０６００），２８０（７２００），２５９（２２０００）ｎｍ．ＵＶ−ｖｉｓ（ＤＭＦ）λ（ε）＝３８２（２４０００），２８０（７５００），２５９（２５６００）．ＤＭＦ中の１０−ヒドロキシカンプトテシン６−イソシアネートヘキシルカルバメートのＵＶ−Ｖｉｓは図１に示されている。
【０１２１】
１，６−（ビス（１０−ヒドロキシカンプトテシンカルバメート）ヘキサン［Ｃ48Ｈ44Ｎ6Ｏ12，ＦＷ＝８９６］
【化２７】
2005537266.tif 000029
【０１２２】
マグネチックスターラーバーを装備した１００ｍＬの単一首丸底フラスコに、１０−ヒドロキシカンプトテシン（２００ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）および無水ＤＭＦ（１０ｍＬ）を装填した。このフラスコを固体が全部溶解するまで超音波浴内に入れた。この混合液を攪拌し、１，６−ビス（イソシアネート）ヘキサン（０．１８１ｍＬ、１．１０ｍｍｏｌ、２．０当量）を添加し、続いてトリエチルアミン（０．５ｍＬ）を添加した。光線から保護するためにフラスコをアルミホイルで被覆した。反応はＴＬＣ（ジクロロメタン／メタノール、９５／５（ｖ／ｖ））によって監視した。出発物質はＲf値０．４を有しており、生成物のＲf値は０．９であった。３０分後、ＴＬＣによりこの反応が完了したことが確証された。溶媒を乾燥するまで真空下で除去した。この残留物を次に無水エーテル（４０ｍＬ）と混合し、次にフラスコを超音波浴内に３０秒間入れた。この懸濁液を次に４℃で３時間保持した。この固体を吸引濾過により収集すると、淡黄色粉末として予想された生成物（２３０ｍｇ、９３％）が得られた。
【０１２３】
融点：＞２８０℃。
【０１２４】
1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，２００ＭＨｚ），δ＝０．９５（ｔ，Ｊ＝７．３２Ｈｚ，６Ｈ，２ＣＨ3），１．４０−１．７０（ｍ，８Ｈ，４ＣＨ2），１．９０（ｑ，Ｊ＝７．３２Ｈｚ，４Ｈ，２ＣＨ2），２．９５（ｔ，Ｊ＝７．２０Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），３．２０（ｔ，Ｊ＝７．２０Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），５．２３（ｓ，４Ｈ，２ＣＨ2），５．４０（ｓ，４Ｈ，２ＣＨ2），６．６０（ｓ，２Ｈ），７．２０（ｓ，２Ｈ），７．６０（ｍ，２Ｈ），７．９０（ｓ，２Ｈ），７．９５（ｍ，２Ｈ），８．２０（ｄ，２Ｈ），８．６０（ｓ，２Ｈ）ｐｐｍ．（図１９を参照）
【０１２５】
1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，５００ＭＨｚ），δ＝０．８８（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，６Ｈ，２ＣＨ3），１．３０−１．６０（ｍ，８Ｈ，４ＣＨ2），１．８５（ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，４Ｈ，２ＣＨ2），２．９５（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），３．１０（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），５．２５（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，４Ｈ，２ＣＨ2），５．４５（ｓ，４Ｈ，２ＣＨ2），６．５０（ｓ，２Ｈ），７．３０（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ），７．６２（ｍ，２Ｈ），７．８５（ｍ，２Ｈ），７．９５（ｍ，２Ｈ），８．１５（ｍ，２Ｈ），８．６０（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）ｐｐｍ．
【０１２６】
13Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，１００ＭＨｚ），δ＝７．７２，２５．９８，２９．１０，３０．００，３０．３０，５０．１４，６５．２１，７２．３３，９６．５２，１１８．５３，１１８．９３，１２６．１８，１２８．３５，１３０．０６，１３０．９１，１４５．３８，１４６．３８，１４９．６９，１４９．９５，１５２．０４，１５３．６７，１５６．７４，１５８．０９，１７２．３８ｐｐｍ．（図２０）。
【０１２７】
ＬＳＩＭＳ（マトリックス：チオグリセロール），ｍ／ｅ＝１０３９，８９７，８０９，５３３，３６５，３２１．（図２１を参照）。
【０１２８】
ＨＰＬＣ（水中で３０％アセトニトリル）、Ｔｒ＝１８．２ｍｉｎ．
【０１２９】
１０ＣＰＴ−ＣＨＵ−Ｐ９７コンジュゲートの合成
【化２８】
2005537266.tif 000030
【０１３０】
Ｐ９７（ロット番号１８，２８０ｎｍでのＯＤ＝１．６７、ｃ＝１．３７ｍｇ／ｍＬ、１０８ｍＬ、１４８ｍｇ、１．５６８２×１０-3ｍＭ）を２５０ｍＬフラスコに入れた。この溶液に、１０−ヒドロキシカンプトテシン６−イソシアネートヘキシルカルバメートの溶液（２、８３．４ｍｇ、０．１５６８ｍｍｏｌ、ＤＭＦ（５０ｍＬ）中で１００当量。ＤＭＦは液体全体に対して３０．７％であった）を添加した。この混合液を室温で１６時間攪拌し、次にＰＢＳ（１０ｍＭ、ｐＨ＝７．４）に対してＳｎａｋｅ  Ｓｋｉｎチューブ（ＭＷＣＯ＝１０Ｋ）を使用する透析によって精製すると純粋コンジュゲート（１９０ｍＬ）が得られた。タンパク質ｐ９７の回収率は９６％であった。
ＳＹＮ−０２６（１０ＣＰＴ−ＣＡＨ−ｐ９７）（方法１）
【０１３１】
【表１】
2005537266.tif 000031
【０１３２】
［ＭＳＲの決定］
理論値：１０−ヒドロキシカンプトテシンは３８２ｎｍでモル吸光係数が２５５００の強力な吸光度を有するが（ＤＭＦ中。文献Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．１９９１，３９（１２），３１８３−３１８８を参照）、ｐ９７に対して同一波長で吸光が見られる。このため、３８２ｎｍでのＵＶ−Ｖｉｓ吸光度を測定することによって１０−ヒドロキシカンプトテシン濃度を決定できる。Ｐ９７は２８０ｎｍで強力な吸光度を有するが、１０−ヒドロキシカンプトテシンは同一波長で弱い吸光度を有する。そこでｐ９７の濃度は２８０ｎｍでの総吸光度から同一波長での１０−ヒドロキシカンプトテシンの吸光度を差し引いた結果から推定できよう。
【０１３３】
１０−ヒドロキシカンプトテシンの標準ＵＶ−Ｖｉｓ：
（１）ストック液の調製：２．１５ｍｇの１０−ヒドロキシカンプトテシンを５ｍＬのＤＭＦ中に溶解させた。
（２）サンプルの調製：ストック液のアリコート（ｍＬ）を取り出し、総量が０．３０ｍＬとなるように必要量のＤＭＦと混合した。次に０．７０ｍＬのＰＢＳバッファー（１０ｍｍｏｌ、ｐＨ７．４）を添加し、０．３ｍＬのＤＭＦと混合した。全サンプルについて２８０ｎｍおよび３８２ｎｍでのＵＶ−Ｖｉｓ吸光度を記録した。結果は、表２および図２に列挙した。
【０１３４】
【表２】
2005537266.tif 000032
【０１３５】
ＭＳＲを測定するために、３８２ｎｍおよび２８０ｎｍでのコンジュゲートの吸光度を単純に測定した。次にｐ９７、１０−ヒドロキシカンプトテシン並びにＭＳＲの濃度を計算するために下記の方程式を使用した：
【０１３６】
［方法１：標準曲線を使用する］
１０−ヒドロキシカンプトテシンの濃度：
Ｃ10CPT（ｍｇ／ｍＬ）＝０．０２１１４*Ａ382−０．００２３２９
Ｃ10CPT（ｍｏｌ／Ｌ）＝（５．８０７２*Ａ382−０．６４）*１０-5
【０１３７】
ｐ９７の濃度
Ａ280（ｐ９７）＝Ａ280（コンジュゲート）−Ａ280（１０ＣＰＴ）
＝Ａ280−（１８．５１２（０．０２１１４*Ａ382−０．００２３２９）＋０．０２２５）
＝Ａ280−０．３９１３*Ａ382＋０．０２０６１
Ｃp97（ｍｇ／ｍＬ）＝（Ａ280−０．３９１３*Ａ382＋０．０２０６１）／１．２１８
【０１３８】
ＭＳＲ計算機：
ＭＳＲ＝（Ｃ10CPT／Ｃp97）*（９４４２０／３６４）
【０１３９】
［方法２：Ｌａｍｂｅｒｔ−Ｂｅｅｒ法を使用する］
３８２ｎｍおよび２８０ｎｍでの１０−ヒドロキシカンプトテシンに対するモル吸光係数は各々１９４００および７２１０ｍｏｌ-1*Ｌ*ｃｍ-1であった。
Ａ＝εｌｃ
【０１４０】
Ａは吸光度である；εはｍｏｌ-1*Ｌ*ｃｍ-1でのモル吸光係数である；ｃはｍｏｌ*Ｌ-1での濃度である。
【０１４１】
Ｃ10CPT＝（Ａ382／１９４００）*３６４＝０．０１８７６*Ａ382ｍｇ／ｍＬ
Ｃp97＝（Ａ280−Ａ382*（７２１０／１９４００））／１．２１８＝（Ａ280−０．３７１６*Ａ382）／１．２１８ｍｇ／Ｌ
ＭＳＲ＝（Ｃ10CPT／Ｃp97）*（９４４２０／３６４）
【０１４２】
１０−ヒドロキシカンプトテシンおよびｐ９７混合物の既知の濃度を使用した方法１の試験
【表３】
2005537266.tif 000033
注意：この混合液は下記のとおりに調製した：ＤＭＦ中の１０−ヒドロキシカンプトテシンのストック液を取り出して０．１５ｍＬのＤＭＦを作製し、次に０．３５ｍＬの濃度が知られているｐ９７と混合した。次に混合したサンプルの３８２ｎｍおよび２８０ｎｍでのＵＶ−Ｖｉｓを記録した。
【０１４３】
【表４】
2005537266.tif 000034
注意：この混合液は下記のとおりに調製した：ＤＭＦ中の１０−ヒドロキシカンプトテシンのストック液を取り出して０．１５ｍＬのＤＭＦを作製し、次に０．３５ｍＬの濃度が知られているｐ９７と混合した。次に混合したサンプルの３８２ｎｍおよび２８０ｎｍでのＵＶ−Ｖｉｓを記録した。
【０１４４】
表３および表４の結果から、ＭＳＲの結果が理論値と良好に一致している方法１が低濃度で良好であり、そして方法２が高濃度混合物に対して良好であることを推定できよう。
【実施例５】
【０１４５】
［方法Ａによるイソシアネートリンカーの典型的な合成］
［モノ（ｔｅｒｔ−ブチルアクリレート）ポリエチレングリコールの合成］
【化２９】
2005537266.tif 000035
ポリエチレングリコール（１．０ｍｏｌ）をＴＨＦ中に溶解させた。この混合液を攪拌した。ナトリウム（０．２１２ｇ、９．２ｍｍｏｌ）を添加した。水浴を使用してナトリウムが全部溶解するまで、この混合液を４０℃で攪拌した。次に水浴を取り除き、ｔｅｒｔ−ブチルアクリレート（５１ｍＬ、０．３４ｍｍｏｌ）を添加した。この混合液を一晩、室温で攪拌した。ｐＨ７．０へ調整するために、攪拌しながら２％  ＨＣｌを緩徐に添加した。真空下で溶媒を除去した。酢酸エチル（５００ｍＬ）によって淡黄色の油性残留物を取り出し、食塩水（１００ｍＬ）を用いて分配した。有機層を分離し、酢酸エチル（６×１５０ｍＬ）により水層を抽出した。有機層と抽出物を結合し、食塩水（２×２００ｍＬ）を用いて洗浄し、無水硫酸ナトリウムの上方で乾燥させた。溶媒を真空下で除去すると黄色油性粗生成物が得られたので、これを高真空下で一晩乾燥させると予想された生成物が得られたので、これをそれ以上精製せずに直接使用した。分析用サンプルは、溶離剤としてジクロロメタン−メタノール（９５／５（ｖ／ｖ））を使用するシリカゲルクロマトグラフィーカラムにより精製した。
【０１４６】
［Ｔｅｒｔ−ブチル３−（テトラエチレングリコール）プロパノエート［Ｃ15Ｈ30Ｏ7、ＦＷ＝３２２］の合成］
【化３０】
2005537266.tif 000036
【０１４７】
方法Ａによる調製、収率８４％
【０１４８】
ＩＲ，ｖ＝３４５０，２８７０，１７２６，１４５１，１３６５，１３２９，１２４９，１１０５，１０６８，９４５，８８７，８４７，７５６，５２８ｃｍ-1．1Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3），δ＝１．５０（ｓ，９Ｈ，３  ＣＨ3），２．５０（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），３．８０（ｍ，１９Ｈ，９ＯＣＨ2，ＯＨ）ｐｐｍ．13Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3），δ＝２７．５０（ＣＨ3），２７．８５（ＣＨ2），３６．００（ＣＨ2），６２．３４，６６．６１，７０．２８（大きなピーク），７２．３０，７６．３６，８０．１８（ＯＣＭｅ3），１７０．６２（ＣＯＯ）ｐｐｍ．ＬＳＩＭＳ（マトリックス：チオグリセロール），ｍ／ｅ＝３３３［Ｍ＋１］+．Ｃ15Ｈ30Ｏ7・Ｈ2Ｏについての分析計算値；Ｃ、５２．９２；Ｈ、９．４８．実測値：Ｃ、５２．７５；Ｈ、９．３２．
【０１４９】
参考文献：Ｓｅｉｔｚ  Ｏ．；Ｋｕｎｚ  Ｈ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９７，６２，８１３−８２６．
【０１５０】
［Ｔｅｒｔ−ブチル３−［トリ（エチレングリコール）プロパノエート［Ｃ13Ｈ26Ｏ6、ＦＷ＝２７８］の合成］
【化３１】
2005537266.tif 000037
【０１５１】
方法Ａによる調製、収率８０．５％
【０１５２】
ＩＲ，ｖ＝３３４０，２８６９，１７２６，１４５６，１３９２，１３６５，１３３０，１２５２，１１１１，１０６４，９４３，８８７，７５６，５４７ｃｍ-1．1Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3），δ＝１．５３（ｓ，９Ｈ，３ＣＨ3），２．５０（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），３．８５（ｍ，１４Ｈ，７ＯＣＨ2，ＯＨ）ｐｐｍ．13Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＣＤＣ１3），δ＝２８．５（ＣＨ3），３５．２（ＣＨ2），６２．１，６４．５，７０．３（大きなピーク），７２．１５，８２．２（ＯＣＭｅ3），１７２．３（ＣＯＯ）ｐｐｍ．ＭＳ（ＥＳ），ｍ／ｅ＝２９６［Ｍ＋Ｎａ］+．Ｃ13Ｈ26Ｏ6についての分析計算値；Ｃ、５６．１０；Ｈ、９．４２．実測値：Ｃ、５６．４５；Ｈ、９．３２．
【０１５３】
参考文献：Ｓｅｉｔｚ  Ｏ．；Ｋｕｎｚ  Ｈ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９７，６２，８１３−８２６．
【０１５４】
［Ｔｅｒｔ−ブチル３−［ジ（エチレングリコール）］プロパノエート［Ｃ11Ｈ22Ｏ5、ＦＷ＝２３４］の合成］
【化３２】
2005537266.tif 000038
【０１５５】
方法Ａによる調製、収率７２％
【０１５６】
ＩＲ，ｖ＝３４５２，２８７２，１７２６，１４５４，１３９２，１３６７，１３３２，１２５２，１１５７，１１１２，１０６２，９３３，８８９，８４６，７５４，５４８，５１７ｃｍ-1．1Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣ１3），δ＝１．２０（ｓ，９Ｈ，３ＣＨ3），２．２０（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），３．４０（ｍ，６Ｈ，３ＯＣＨ2）ｐｐｍ．13Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＣＤＣ１3），δ＝２７．９，３６．０，６１．３７，６６．６，７０．１（３炭素），７２．３，８０．３，１７１．１（ＣＯＯ）ｐｐｍ．ＭＳ（ＥＳ），ｍ／ｅ＝２５７［Ｍ＋Ｎａ］+．Ｃ11Ｈ22Ｏ5についての分析計算値；Ｃ、５６．３９；Ｈ、９．４６．実測値：Ｃ、５６．７８；Ｈ、９．６５．
【０１５７】
参考文献：Ｓｅｉｔｚ  Ｏ．；Ｋｕｎｚ  Ｈ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９７，６２，８１３−８２６．
【実施例６】
【０１５８】
［方法Ｂ−モノ（ブチルアクリレート）ポリエチレングリコールを合成するための一般的方法］
【化３３】
2005537266.tif 000039
【０１５９】
ポリ（エチレングリコール）（１．０ｍｏｌ）をＴＨＦ中に溶解させた。この混合液を攪拌し、ナトリウム（０．２１２ｇ、９．２ｍｍｏｌ）を添加した。水浴を使用してナトリウムが全部溶解するまで、この混合液を４０℃で攪拌した。次に水浴を取り除き、ブチルアクリレート（５１ｍＬ、０．３４ｍｍｏｌ）を添加した。この混合液を室温で一晩攪拌した。ｐＨ７．０へ調整するために、攪拌しながら２％  ＨＣｌ溶液を緩徐に添加した。真空下で溶媒を除去した。酢酸エチル（５００ｍＬ）によって淡黄色の油性残留物を取り出し、食塩水（１００ｍＬ）を用いて分配した。有機層を分離し、酢酸エチル（６×１５０ｍＬ）により水層を抽出した。有機層と抽出物を結合し、食塩水（２×２００ｍＬ）を用いて洗浄し、無水硫酸ナトリウムの上方で乾燥させた。溶媒を真空下で除去すると黄色油性粗生成物が得られたので、これを高真空下で一晩乾燥させると予想された生成物が得られたので、それ以上精製せずに直接使用した。分析用サンプルは、溶離剤としてジクロロメタン−メタノール（９５／５（ｖ／ｖ））を使用するシリカゲルクロマトグラフィーカラムにより精製した。
【０１６０】
［Ｔｅｒｔ−ブチル−３−（トリ（エチレングリコール）プロパノエート［Ｃ11Ｈ22Ｏ5、ＦＷ＝２３４］の合成］
【化３４】
2005537266.tif 000040
方法Ｂによる調製、収率８４％
【０１６１】
ＩＲ，ｖ＝３４４８，２８７２，１７３２，１４５８，１３５２，１２５３，１１８２，１１１２，９３７，８８５，８１２，５３２ｃｍ-1．1Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣ１3），δ＝１．１０（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ，ＣＨ3），１．４０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），１．６０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．３０（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），３．００（Ｂｒｓ，１Ｈ，ＯＨ），３．６５（ｍ，１０Ｈ，５ＯＣＨ2），４．００（ｍ，２Ｈ，ＯＣＨ2）ｐｐｍ．13Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＣＤＣ１3），δ＝１３．８，１８．９，３０．５，３４．９，６１．５，６４．３，６６．５，７０．３（４炭素），７２．５，１７１．２（ＣＯＯ）ｐｐｍ．ＭＳ（ＥＳ），ｍ／ｅ＝２５７［Ｍ＋Ｎａ］+．Ｃ11Ｈ22Ｏ5についての分析計算値；Ｃ、５６．３９；Ｈ、９．４６．実測値：Ｃ、５６．６８；Ｈ、９．３０．
【０１６２】
参考文献：Ｓｅｉｔｚ  Ｏ．；Ｋｕｎｚ  Ｈ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９７，６２，８１３−８２６．
【０１６３】
［Ｔｅｒｔ−ブチル−３−（ドデカ（エチレングリコール）プロパノエート［Ｃ31Ｈ62Ｏ15、ＦＷ＝６７４］の合成］
【化３５】
2005537266.tif 000041
出発物質の１つとしてＰＥＧ３００を使用して、方法Ｂにより調製した。収率６８％。
【０１６４】
ＩＲ，ｖ＝３４４８，２８６８，２３６１，１７３２，１６８５，１４５８，１３５０，１２４９，１１８４，１１０１，９４３，８４２，８１２，５４２ｃｍ-1．1Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣ１3），δ＝１．０５（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ，ＣＨ3），１．４０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），１．６０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．４０（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），３．００（Ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ＯＨ），３．６５（ｍ，５０Ｈ，２５ＯＣＨ2），４．００（ｍ，２Ｈ，ＯＣＨ2）ｐｐｍ．13Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＣＤＣ１3），δ＝１３．６，１８．９，３０．５，３５．１，６１．５２，６３．５．６６．２，７０．５（大きなピーク），７２．５，１７２．４（ＣＯＯＨ）ｐｐｍ．
【０１６５】
参考文献：Ｓｅｉｔｚ  Ｏ．；Ｋｕｎｚ  Ｈ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９７，６２，８１３−８２６．
【０１６６】
イソシアナトｔｅｒｔ−ブチルアクリレートリンカー１［Ｃ23Ｈ42Ｎ2Ｏ9，ＦＷ＝４９０］
【化３６】
2005537266.tif 000042
【０１６７】
１，６−ジイソシアナトヘキサン（５ｍＬ、０．０３ｍｏｌ）を無水ジクロロメタン（５０ｍＬ）中に溶解させた。次にジクロロメタン（５０ｍＬ）およびトリエチルアミン（１．５ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチルテトラ（エチレングリコール）プロピオネート（１０．２８ｇ、９５％、０．０３ｍｏｌ）の溶液を３０分かけて攪拌しながら滴下法で添加した。この混合液を室温で一晩攪拌した。真空下で溶媒を除去した。高真空下で油性残留物を一晩かけてポンプで吸い上げると粗生成物１２．０ｇ（８２％）が得られたので、それ以上精製せずに直接使用した。分析用サンプルは、溶離剤としてジクロロメタンを使用するシリカゲルクロマトグラフィーカラムにより精製した。
【０１６８】
ＩＲ，ｖ＝３３３７，２９３１，２８６６，２２６８，１７２０，１６２７，１５３５，１４５８，１３６５，１２４７，１１０７，９４９，８４６，７７５，７５６ｃｍ-1．
1Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3），δ＝１．６０（ｓ，９Ｈ，３ＣＨ3），１．６５（ｍ，８Ｈ，４ＣＨ2），２．４５（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），３．２０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），３．３２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），３．６０（ｍ，１４Ｈ，７ＯＣＨ2），４．２０（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），５．１０（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）ｐｐｍ．
【０１６９】
13Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＣＤＣ１3），δ＝２５．７０（ＣＨ2），２７．７２（ＣＨ2），２９．７７（ＣＨ3），３１．０６（ＣＨ2），３６．２０（ＣＨ2），４０．７６（ＣＨ2），４２．７８（ＣＨ2），４５．４３（ＣＨ2），６３．７４（ＯＣＨ2），６６．８０（ＯＣＨ2），７０．５１（ｂｒ，ＯＣＨ2），８０．６７（ＯＣＭｅ3），１２２．３３（Ｎ＝Ｃ＝Ｏ），１５６．４１（ＮＨ−ＣＯ−Ｏ），１７０．８０（ＣＯＯ）ｐｐｍ．ＬＳＩＭＳ（マトリックス：チオグリセロール），ｍ／ｅ＝４９１［Ｍ＋１］+．
【０１７０】
Ｃ23Ｈ42Ｎ2Ｏ9・０．５Ｈ2Ｏに対する分析計算値：Ｃ、５５．２９；Ｈ、８．６８；Ｎ、５．６１．実測値：Ｃ、５４．８８；Ｈ、８．４５；Ｎ、５．２０．
【実施例７】
【０１７１】
［ＳＹＮ０２７バイオコンジュゲートの合成］
ＳＹＮ−０２７：１０−ヒドロキシカンプトテシンは、ＣＨＣ−ＰＥＧ４リンカーを通してｐ９７へ共有結合している。容易に記憶するために、このコンジュゲートは１０ＣＰＴ−ＣＨＣ−ＰＥＧ４−ｐ９７と呼ぶことができる。［Ｃ−カルバメート；Ｈ−ヘキシル；ＰＥＧ４−４エチレングリコール単位］．
【０１７２】
化学構造
【化３７】
2005537266.tif 000043
【０１７３】
合成のフローチャート：
【表５】
2005537266.tif 000044
【０１７４】
ＳＹＮ−０２７コンジュゲートの全合成には下記の３つのステップが含まれる（スキーム２）：ステップ１：予想中間体ｔｅｒｔ−ブチルエステルＣＨＣ−ＰＥＧ４−１０−ヒドロキシカンプトテシン３を生成するためにイソシアナト−ｔｅｒｔ−ブチルエステルリンカー１を用いて１０−ヒドロキシカンプトテシン２を処理するステップ；
【化３８】
2005537266.tif 000045
スキーム２
試薬および条件：ステップ１、２．０当量のイソシアナトヘキシルｔｅｒｔ−ブチル−エステル１、トリエチルアミン、ＤＭＦ、室温、４時間、６１％；ステップ２、トリフルオロ酢酸、室温、１０分間、７７％；ステップ３、３．０当量のＯ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム四フッ化物、ＤＭＦ、トリエチルアミン、室温、２時間、次に１／１００当量のｐ９７、室温、一晩。ＭＳＲ＝５．４、タンパク質回収率＝８５％。
【０１７５】
ステップ２：脱保護ＣＨＣ−ＰＥＧ４−１０−ヒドロキシカンプトテシン４を提供するために、この中間体をトリフルオロ酢酸により処理するステップ；ステップ３：Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム四フッ化ホウ素（ＢＴＴＵ）を使用して遊離酸を活性化し、次にｐ９７と直接的に結合させることにより予想コンジュゲートが得られた。
【０１７６】
［コンジュゲート（ＳＹＮ０２７）の合成の最適化］
ｐ９７へ結合した１０−ヒドロキシカンプトテシンのＭＳＲが高すぎるとｐ９７のトランスサイトーシスにとって有効な場合がある。そしてＭＳＲが低すぎると薬物送達の効率が低下するであろう。このため、ＭＳＲが４〜６の１０−ヒドロキシカンプトテシンとのコンジュゲートとを合成しようと考えた。最高の反応条件を見いだすため、本発明者らは使用した反応時間および１０−ヒドロキシカンプトテシンの相違するモル過剰の効果を調査するために、室温、ＤＭＦ  ３０％で固定して反応を実施した。反応の監視はＦＰＬＣによって実施した。様々な反応時間での１０−ヒドロキシカンプトテシン−ｐ９７コンジュゲートの典型的なＦＰＬＣプロフィールは図３〜８に示した。
【０１７７】
ＦＰＬＣは、４時間の反応時間後にｐ９７のほぼ９５％がコンジュゲートに転換したことを明確に証明した（図３〜５）。ｐ９７へ結合した１０−ヒドロキシカンプトテシンの比率は、３８２ｎｍおよび２８０ｎｍでのコンジュゲートのピーク比によって容易に監視できよう（表６）。
【０１７８】
【表６】
2005537266.tif 000046
*反応条件：ＤＭＦ＝３０％、化合物４、５０当量、室温、ｐＨ＝７．４０．ＦＰＬＣ：カラム：ＢｉｏＳｅｐ  ３００サイズ排除カラム、バッファー：０．１Ｍリン酸ナトリウム、ｐＨ６．８、流量：１ｍＬ／ｍｉｎ。
【０１７９】
表６（または図９）から、ＭＳＲは反応時間２０時間後に最大値に到達する。これは、この反応が約２０時間後に終了することを示唆した。
【０１８０】
図１０〜１３は、ＭＳＲへの様々なモル当量過剰が及ぼす作用を示している。反応条件は下記のとおりであった：ＤＭＦ＝３０％、反応時間は室温で３時間、ｐ９７濃度１．２３ｍｇ／ｍＬ、ｐＨ＝７．４０．カラム：ＢｉｏＳｅｐ  ３００サイズ排除カラム、溶離剤バッファー：０．１Ｍ  第１リン酸ナトリウム、ｐＨ６．８、流量：１．０ｍＬ／ｍｉｎ．
【０１８１】
リンカー１は下記（スキーム３）のとおりに合成した。
【化３９】
2005537266.tif 000047
試薬および条件：（ａ）Ｎａ、ＴＨＦ、室温、２０時間、９５％；（ｂ）１，６−ジイソシアナトヘキサン、トリエチルアミン、ＣＨ2Ｃ１2，８２％。
【０１８２】
無水テトラヒドロフラン中の１当量のｔｅｒｔ−ブチルアクリレートおよび触媒量のナトリウムを用いてテトラ（エチレングリコール）６を室温で一晩処理し、モノｔｅｒｔ−ブチルアクリレート結合テトラ（エチレングリコール）８を９５％で入手し、これをさらにジクロロメタンおよびトリエチルアミン中の１，６−ジイソシアナトヘキサンと反応させてイソシアナト−ｔｅｒｔ−ブチルアクリレートリンカー９を８２％で得た。
【０１８３】
［この新規のコンジュゲートについての概略］
・  ｐ９７への１ステップ合成。
・  生分解性であり、標的部位へ薬物が送達された後に遊離１０−ヒドロキシカンプトテシンを遊離させることのできる１０−ヒドロキシカンプトテシンへのカルバメート結合。
・  薬物の水溶性を上昇させる４ＰＥＧ単位を含有する。
・  修飾１０−ヒドロキシカンプトテシンおよびｐ９７コンジュゲートの両方について高い収率および極めて効率的な合成。
・  確証された新規のイソシアナト結合テクノロジー。
このコンジュゲートを合成するための実験方法については実験の部を参照。
【０１８４】
［ＭＳＲの決定］
理論値：１０−ヒドロキシカンプトテシンは３８２ｎｍでモル吸光係数が２５５００の強力な吸光度を有するが（ＤＭＦ中。文献Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．１９９１，３９（１２），３１８３−３１８８を参照）、ｐ９７に対しては同一波長で吸光が発生する。このため、３８２ｎｍでのＵＶ−Ｖｉｓ吸光度を測定することによって１０−ヒドロキシカンプトテシン濃度を決定できる。Ｐ９７は２８０ｎｍで強力な吸光度を有するが、１０−ヒドロキシカンプトテシンは同一波長で弱い吸光度を有する。そこでｐ９７の濃度は２８０ｎｍでの総吸光度から同一波長での１０−ヒドロキシカンプトテシンの吸光度を差し引いた結果から推定できよう。
【０１８５】
［方法１：標準曲線を使用する］
Ｃ10CPT（ｍｇ／ｍＬ）＝０．０２１１４*Ａ382−０．００２３２９
Ｃp97（ｍｇ／ｍＬ）＝（Ａ280−０．３９１３*Ａ382＋０．０２０６１）／１．２１８
ＭＳＲ＝（Ｃ10CPT／Ｃp97）*（９４４２０／３６４）
【０１８６】
［方法２：Ｌａｍｂｅｒｔ−Ｂｅｅｒ法を使用する］
３８２ｎｍおよび２８０ｎｍでの３０％  ＤＭＣ−ＰＢＳ（２０ｍｍｏｌ、ｐＨ７．５）中の１０−ヒドロキシカンプトテシンに対するモル吸光係数は各々１９４００および７２１０ｍｏｌ-1*Ｌ*ｃｍ-1であった。
【０１８７】
Ｃ10CPT（ｍｇ／ｍＬ）＝０．０１８７６*Ａ382
Ｃp97（ｍｇ／ｍＬ）＝（Ａ280−０．３７１６*Ａ382）／１．２１８
ＭＳＲ＝（Ｃ10CPT／Ｃp97）*（９４４２０／３６４）
【０１８８】
【表７】
2005537266.tif 000048
【表８】
2005537266.tif 000049
【０１８９】
［イソシアネートヘキシル−カルバメート−ＰＥＧ４−ｔ−ブチルエステル結合１０−ヒドロキシカンプトテシン［Ｃ43Ｈ58Ｎ4Ｏ14、ＦＷ＝８５４］］
【化４０】
2005537266.tif 000050
【０１９０】
マグネチックスターラーバーを装備した１００−ｍＬの単一首丸底フラスコに１０−ヒドロキシカンプトテシン（５００ｍｇ、１．３７ｍｍｏｌ）および無水ＤＭＦ（３０ｍＬ）およびトリエチルアミン（１．０ｍＬ）を装填した。フラスコを固体が全部溶解するまで超音波浴内に入れた。この混合液を攪拌し、ジクロロメタン（１０ｍＬ）中のイソシアナトヘキシル−カルバマト−ＰＥＧ４−ｔｅｒｔ−ブチルエステルリンカー（１、１．３５ｇ、２．７５ｍｍｏｌ、２．０当量）の溶液を添加した。光線から保護するためにフラスコをアルミホイルで被覆した。反応はＴＬＣ（ジクロロメタン／メタノール、９５／５（ｖ／ｖ））によって監視した。出発物質はＲf値０．４を有しており、生成物のＲf値は０．６であった。２時間後、ＴＬＣによりこの反応が完了したことが確証された。溶媒を乾燥するまで真空下で除去した。残留物をメタノール（５ｍＬ）によって取り出し、次に無水エーテル（４０ｍＬ）と混合した。生じた懸濁液混合物を超音波浴内に３０秒間入れ、次に４℃で３時間保持した。この固体を吸引濾過により収集すると、淡黄色粉末として予想された生成物（７１７ｍｇ、６１％）が得られた。
【０１９１】
融点：１８０−１８３℃。
【０１９２】
ＩＲ，ｖ＝３３１３，２９２９，２８６０，１７１８，１６５４，１６００，１５４１，１４８９，１４４６，１３４８，１２２７，１１９５，１１０３，１０４３，１００１，９１６，８３５，８００，９６０ｃｍ-1．（図２６を参照）
【０１９３】
1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，２００ＭＨｚ），δ＝０．９８（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ，ＣＨ3），１．２０−１．４０（ｍ，１７Ｈ，４ＣＨ2，３ＣＨ3），１．８５（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），３．０６（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），３．１２（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），３．４１（ｍ，１４Ｈ，７ＯＣＨ2），４．０４（ｍ，２Ｈ，ＯＣＨ2），５．２４（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2），５．４３（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2），６．５２（ｓ，１Ｈ），７．２６（ｍ，１Ｈ），７．６１（ｍ，１Ｈ），７．９８（ｍ，１Ｈ），８．０８（ｍ，１Ｈ），８．１１（ｍ，１Ｈ），８．６８（ｍ，１Ｈ）ｐｐｍ．（図２３を参照）
【０１９４】
1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，４００ＭＨｚ），δ＝０．８５（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ，ＣＨ3），１．２０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），１．３０（ｍ，４Ｈ，２ＣＨ2），１．４０（ｓ，９Ｈ，３ＣＨ3），１．５０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），１．８０（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．４１（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．９０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），３．１０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），３．３５（水のピークと共に不明瞭，ｍ，２Ｈ，ＣＨ2）３．５５（ｍ，１４Ｈ，７ＯＣＨ2），４．０５（ｍ，２Ｈ，ＯＣＨ2），５．２５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），５．４５（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2），６．５０（ｓ，１Ｈ），７．２０（ｍ，１Ｈ），７．３８（ｍ，１Ｈ），７．６５（ｍ，１Ｈ），７．８５（ｍ，１Ｈ），７．９５（ｍ，１Ｈ），８．１５（ｍ，１Ｈ），８．６２（ｍ，１Ｈ）．
【０１９５】
13Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，１００ＭＨｚ），δ＝７．７５（ＣＨ3），２５．９４，２７．５５（ＣＨ3），２９．１３，２９．３４，３０．０１，３０．３１，３５．８２，５０．１８，６２．９６，６５．３４，６６．２０，６８．８９，６９．６８（ｍ，９ＯＣＨ2），７２．３６，７９．６９，９６．５６（ＣＨ），１１８．５７（ＣＨ），１１８．９７，１２６．２３（ＣＨ），１２８．４０，１３０．１０（ＣＨ），１３０．２０，１３０．９７（ＣＨ），１４５．４３，１４５．５０，１４９．７２，１５０．００，１５２．１０，１５４．０１，１５６．１４，１５６．７８，１７０．３８（ＣＯＯ），１７２．４３（ＣＯＯ）ｐｐｍ．（図２４を参照）
【０１９６】
ＬＳＩＭＳ（マトリックス：チオグリセロール），ｍ／ｅ＝８５５［Ｍ+＋ｌ］，７９９，３６５．ＨＲＭＳ（ＬＳＩＭＳ，マトリックス：チオグリセロール）：［Ｃ43Ｈ59Ｎ4Ｏ14］+に対する実測値８５５．４０２５１、計算値８５５．４０２７８．（図２５）ＵＶ−ｖｉｓ（ＤＭＦ）λ（ε）＝２９５（１１４００），３３２（１３４００），３６８（３２６００），３８２（２８４００）ｎｍ．ＵＶ−ｖｉｓ（メタノール）λ（ε）＝２９２（９３５０），３３０（１４４００），３６２（２９３００），３７５（２８２００）ｎｍ．ＵＶ−ｖｉｓ（ＤＭＳＯ）λ（ε）＝２８６（２７６００），３３２（１１２００），３６８（２７９０００），３８５（２５０００）ｎｍ．（図２７を参照）
【０１９７】
Ｃ43Ｈ58Ｎ4Ｏ14・０．５Ｈ2Ｏに対する分析計算値：Ｃ、５９．７８；Ｈ、６．８８；Ｎ、６．４９．実測値：Ｃ、６０．０４；Ｈ、７．０４；Ｎ、６．１１．
【０１９８】
［イソシアネートヘキシル−カルバメート−ＰＥＧ４−酸結合１０−ヒドロキシカンプトテシン［Ｃ39Ｈ50Ｎ4Ｏ14、ＦＷ＝７９８］］
【化４１】
2005537266.tif 000051
【０１９９】
マグネチックスターラーを装備した５０ｍＬの丸底フラスコにｔｅｒｔ−ブチル−ＰＥＧ４−カルバマト−ヘキシル−カルバメート−１０−ヒドロキシカンプトテシン（３、５００ｍｇ，０．５８５ｍｍｏｌ）を入れた。トリフルオロ酢酸（１０ｍＬ）を添加し、この混合液を２０分間、室温で攪拌した。次に無水エーテル（６０ｍＬ）を緩徐に５分間かけて添加した。次に懸濁液を２分間かけて超音波浴の上方に置いた。吸引濾過によって黄色固体を収集した。粗生成物を最小量のＤＭＦ中に再溶解させ、無水エーテルによって沈降させた。濾過によって予想化合物４（４２９ｍｇ、９２％）を入手し、真空下で一晩乾燥させた。
【０２００】
融点：１９５−１９９℃（ｄｅｃ．）。
【０２０１】
ＩＲ，ｖ＝３３１１，２９２０，２８５８，１７３０，１６５５，１６００，１５３９，１４９８，１４４３，１３４８，１２２６，１１９５，１１５１，１１０３，１０４３，１００１，９１４，８３３ｃｍ-l．（図３１を参照）
【０２０２】
1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，２００ＭＨｚ），δ＝０．９５（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ，ＣＨ3），１．２５（ｍ，８Ｈ，４ＣＨ2），１．８５（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），３．０５（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），３．１０（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），３．４０（ｍ，１４Ｈ，７ＯＣＨ2），４．００（ｍ，２Ｈ，ＯＣＨ2），５．２０（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2），５．４０（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2），６．５０（ｓ，１Ｈ），７．２５（ｍ，１Ｈ），７．６０（ｍ，１Ｈ），７．９５（ｍ，１Ｈ），８．０５（ｍ，１Ｈ），８．１０（ｍ，１Ｈ），８．６５（ｍ，１Ｈ），１２．２０（ｂｒｓ，１Ｈ）ｐｐｍ．（図２８を参照）
【０２０３】
1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，４００ＭＨｚ），δ＝０．８５（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ，ＣＨ3），１．２５−１．５０（ｍ，８Ｈ，４ＣＨ2），１．８４（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．９５（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），３．１３（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），３．５５（ｍ，１４Ｈ，７ＯＣＨ2），４．０５（ｍ，２Ｈ，ＯＣＨ2），５．２５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），５．４４（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2），６．５５（ｓ，１Ｈ），７．２６（ｍ，１Ｈ），７．６０（ｍ，１Ｈ），７．９５（ｍ，１Ｈ），８．０８（ｍ，１Ｈ），８．１６（ｍ，１Ｈ），８．６７（ｍ，１Ｈ），１２．１０（ｂｒｓ，１Ｈ）ｐｐｍ．
【０２０４】
13Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，１００ＭＨｚ），δ＝７．７６（ＣＨ3），２５．９４，２９．１４，２９．３４，３０．２１，３４．７１，５０．１９，６４．９０，６５．２４，６６．２０，６８．８８，６９．７５（ｍ，９ＯＣＨ2），７２．３６，９６．６４（ＣＨ），１１８．５９（ＣＨ），１１８．９７，１２６．１９（ＣＨ），１２８．４０，１３０．２１（ＣＨ），１３０．８４，１３１．０９（ＣＨ），１３１．６４，１４５．４４，１４９．７１，１４９．９９，１５２．１０，１５４．０２，１５６．１５，１５６．７９，１７２．４４（ＣＯＯ），１７２．６１（ＣＯＯ）ｐｐｍ．（図２９を参照）
【０２０５】
ＬＳＩＭＳ（マトリックス：チオグリセロール），ｍ／ｅ＝  ７９９［Ｍ+＋１］，４２９，３６５．ＨＲＭＳ（ＬＳＩＭＳ，マトリックス：チオグリセロール）：［Ｃ39Ｈ51Ｎ4Ｏ14］+に対する実測値７９９．３４０５３、計算値７９９．３４０１８．（図３０を参照）
【０２０６】
ＵＶ−ｖｉｓ（ＤＭＦ）λ（ε）＝２８３（１０６００），３３２（１１８００），３６７（２８９００），３８５（２５０００）ｎｍ．ＵＶ−ｖｉｓ（メタノール）λ（ε）＝２８３（１５８００），３３２（１１８００），３６７（２８９００），３８５（２５０００）ｎｍ．ＵＶ−ｖｉｓ（ＤＭＳＯ）λ（ε）＝２８６（１７１００），３３２（９３００），３６８（２３７００），３８６（２１１００）ｎｍ．（図３２を参照）
【０２０７】
Ｃ39Ｈ50Ｎ4Ｏ14・０．３３Ｈ2Ｏに対する分析計算値：Ｃ、５８．２０；Ｈ、６．３５；Ｎ、６．９６．実測値：Ｃ、５７．８３；Ｈ、６．０５；Ｎ、７．０５．
【０２０８】
［ＳＹＮ−０２７の合成］
【化４２】
2005537266.tif 000052
反応条件：ＤＭＦ＝３０％、化合物４、１００モル当量、室温、ｐＨ＝７．４０．反応時間＝室温で２０時間。
【０２０９】
プロピオン酸−ＰＥＧ４−カルバマト−ヘキシル−カルバメート−１０−ヒドロキシカンプトテシン［４、１１４．５ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ］、ＢＴＴＵ（１３８ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ、３．０当量の４）、トリエチルアミン（０．２０８ｍＬ、１．４３４ｍｍｏｌ、１０当量の４）、ＤＭＦ（１０ｍＬ）の混合液を室温で６０分間攪拌した。この溶液を下記の反応のために保存した。
【０２１０】
Ｐ９７（ロット番号１９、２８０ｎｍでのＯＤ（光学密度）＝１．５０、ｃ＝１．２３ｍｇ／ｍＬ、１１０ｍＬ、１．４３３×１０-3ｍＭ）を２５０ｍＬの丸底フラスコに入れた。この溶液に、上記から調製したカンプトテシン化合物（溶液全体に対して〜３０％の３７ｍＬのＤＭＦと混合した１０ｍＬ、０．１４ｍｍｏｌ、１００当量）を力強く攪拌しながら５分間かけて滴下法で添加した。ｐＨ＝７．４０へ調整するために数滴のＮａＯＨ（１Ｍ）を添加した。この混合液を室温で２０時間攪拌し、次にＰＢＳ（１０ｍＭ，ｐＨ＝７．４）に対してＳｎａｋｅ  Ｓｋｉｎチューブ（ＷＭＣＯ＝１０Ｋ）を使用する透析によって精製した。ＭＳＲ＝５．５、タンパク質回収率８５％、最終量は１５４ｍＬであった。
【０２１１】
【表９】
2005537266.tif 000053
【０２１２】
【表１０】
2005537266.tif 000054
【０２１３】
［ＳＮ−３８と１，６−ジイソシアナトヘキサンとの反応］
【化４３】
2005537266.tif 000055
【０２１４】
７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシン（ＳＮ−３８、６００ｍｇ、１．５３ｍｍｏｌ）および無水ＤＭＦ（１００ｍＬ）は、マグネチックスターラーバーを装備した２５０ｍＬの単一首丸底フラスコへ添加した。このフラスコを固体が全部溶解するまで超音波浴内に浸漬した。この混合液を攪拌し、１，６−ビス（イソシアネート）ヘキサン（２．５７ｍＬ、２．５７ｇ、１５．３ｍｍｏｌ、１０．０当量）を添加し、続いてトリエチルアミン（２ｍＬ、１４ｍｍｏｌ、９．０当量）を添加した。光線から保護するためにフラスコをアルミホイルで被覆した。反応はＴＬＣ（ジクロロメタン／メタノール、９５／５（ｖ／ｖ））によって監視した。出発物質はＲf値０．５を有しており、生成物のＲf値は０．８であった。２０分後、ＴＬＣによりこの反応が完了したことが確証された。溶媒を乾燥するまで真空下で除去した。この残留物を次に無水エーテル（８０ｍＬ）と混合し、次にフラスコを超音波浴内に３０秒間入れた。この懸濁液を次に４℃で３時間保持した。この固体を吸引濾過により収集すると、淡黄色粉末として予想された生成物（７９７ｍｇ、９３％）が得られた。
【０２１５】
融点：１３０−１３５℃（ｄｅｃ．）。
【０２１６】
ＩＲ，ｖ＝３４１８，２９３３，２８６０，２２７２，１７２２，１６５６，１６０２，１５６０，１４６０，１１９１，１１６５，１１０９，１０３３，９９７，９２０，８３７ｃｍ-1．（図３６を参照）
【０２１７】
1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，４００ＭＨｚ），δ＝０．８７（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ，ＣＨ3），１．３０（ｍ，１１Ｈ，ＣＨ3，４ＣＨ2），１．５５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），１．８５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．９５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），３．２５（ｍ，４Ｈ，２ＣＨ2），５．３０（ｄ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨｚ），５．４０（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2），５．７０（ｍ，１Ｈ，ＮＨ），６．５０（ｓ，１Ｈ，ＯＨ），７．３０（ｓ，１Ｈ），７．６０（ｓ，１Ｈ），７．９０（ｍ，２Ｈ），８．１０（ｔ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ）ｐｐｍ．（図３３を参照）
【０２１８】
13Ｃ−ＡＰＴ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，１００ＭＨｚ），δ＝７．７７（ＣＨ3），１３．７３（ＣＨ3），２２．２０，２５．２７，２６．０１，２９．０３，３０．４５，３９．９１，４０．５０，４２．４８，４９．４９，６５．２４，７２．３５，９６．４９（ＣＨ），１１４．５２（ＣＨ），１１８．８３，１２５．８１（ＣＨ），１２７．０４，１２８．３７，１３０．９７（ＣＨ），１４５．０１，１４６．０８，１４９．８５，１５０．００，１５１．４６，１５Ｌ．５１，１５４．０８，１５６．７９，１５８．０９，１７２．４３（ＣＯＯ）ｐｐｍ．（図３４を参照）
【０２１９】
ＬＳＩＭＳ（マトリックス：グリセロール），ｍ／ｅ＝５６１［Ｍ+＋１］，３９３，３４９．ＨＲＭＳ（ＬＳＩＭＳ，マトリックス：グリセロール）：［Ｃ30Ｈ33Ｎ4Ｏ7］+に対する実測値５６１．２３４１８、計算値５６１．２３４１０．（図３５を参照）
【０２２０】
ＵＶ−Ｖｉｓ  ＭＦ）λ（ε）＝３８０（１８４００），３６５（２０６００），３３５（１０７００），２９０（１０４００），２７０（１１０００）ｎｍ．ＵＶ−Ｖｉｓ（ＤＭＳＯ）λ（ε）＝３８０（１８８００），３６５（２０６００），３３５（１０２００），２９５（７１００），２６５（１２７００）ｎｍ．ＵＶ−Ｖｉｓ（ＭｅＯＨ）λ（ε）＝３６０（２０  ７００），２５５（１６  ６００）ｎｍ．ＵＶ−Ｖｉｓ（２０％  ＤＭＦ／８０％  ＰＢＳ）λ（ε）＝３７０（１７９００），３６０（１８３００），２６０（１６２００）ｎｍ．（図３６を参照）
【０２２１】
Ｃ30Ｈ32Ｎ4Ｏ7・０．５Ｈ2Ｏに対する分析計算値：Ｃ、６３．２６；Ｈ、５．８４；Ｎ、９．８４．実測値：Ｃ、６３．５５；Ｈ、６．０５；Ｎ、９．９５．
【０２２２】
上記の方法から入手したＦＰＬＣ、ＮＭＲ、ＭＳＲの決定およびタンパク質回収率データは図１４〜３６に描出した。
【０２２３】
本明細書で言及したすべての出版物、特許、および特許出願および参考文献は、各個別出版物または特許出願が特別かつ個別に参照して組み込まれると指示されているかのように、本開示と矛盾しない程度まで参照して組み込まれる。
【０２２４】
上記の発明を明確に理解する目的で説明および例示によってある程度詳細に記載してきたが、添付の請求の範囲の精神から逸脱することなく一定の変化および修飾を加えることのできる本発明の教示に照らせば当業者には容易に明白になるであろう。
【図面の簡単な説明】
【０２２５】
【図１】ＤＭＦ中の１０−ヒドロキシカンプトテシン６−イソシアネートヘキシルカルバメートのＵＶ−Ｖｉｓ吸光度スペクトルを示した図である。
【図２】３０％  ＤＭＦおよび７０％  ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中の１０−ヒドロキシカンプトテシンの、２８０ｎｍおよび３８２ｎｍでのＵＶ−Ｖｉｓ吸光度を示した図である。
【図３−８】様々な反応時間での１０−ヒドロキシカンプトテシン−ｐ９７コンジュゲートの典型的なＦＰＬＣのトレースを示した図である。反応条件：ＤＭＦ＝３０％、化合物４  ５０当量、ｒ．ｔ．、ｐＨ＝７．４０．カラム：ＢｉｏＳｅｐ  ３００サイズ排除カラム、バッファー：０．１Ｍリン酸ナトリウム、ｐＨ６．８。８．２０分後のピークは開始時ｐ９７、そして６．９５分後のピークは予測される１０−ヒドロキシカンプトテシンコンジュゲートに指定された。図３は、反応時間が１時間のＦＰＬＣトレースを示している。図４は、反応時間が２時間のＦＰＬＣトレースを示している。図５は、反応時間が４時間のＦＰＬＣトレースを示した図である。図６は、反応時間が６時間のＦＰＬＣトレースを示している。図７は、反応時間が９時間のＦＰＬＣトレースを示している。図８は、反応時間が２０時間のＦＰＬＣトレースを示している。これらのＦＰＬＣプロフィールを入手するために使用したＦＰＬＣ条件は下記のとおりであった：
【表１１】
2005537266.tif 000056
【図９】反応時間（時間）と共に、コンジュゲート５のピーク面積比およびピーク高さ比（２８０ｎｍ／３８２ｎｍ）を示した図である。（表６を参照）反応条件：ＤＭＦ＝３０％、化合物４、５０当量、室温、ｐＨ＝７．４０。ＦＰＬＣ：カラム：ＢｉｏＳｅｐ  ３００サイズ排除カラム、バッファー：０．１Ｍリン酸ナトリウム、ｐＨ６．８、流量：１ｍＬ／ｍｉｎ。
【図１０−１３】様々なモル当量過剰がＭＳＲに及ぼす作用を示した図である。反応条件は下記のとおりであった：ＤＭＦ＝３０％、反応時間は室温で３時間、ｐ９７の濃度１．２３ｍｇ／ｍＬ、ｐＨ＝７．４０。カラム：ＢｉｏＳｅｐ  ３００サイズ排除カラム、溶離剤バッファー：０．１Ｍ第１リン酸ナトリウム、ｐＨ６．８、流量：１．０ｍＬ／ｍｉｎ。実行方法は図３〜８に使用した方法と同一であった。図１０は、３０モル当量過剰がＭＳＲに及ぼす作用を示している。図１１は、５０モル当量過剰がＭＳＲに及ぼす作用を示している。図１２は、７５モル当量過剰がＭＳＲに及ぼす作用を示している。図１３は、１００モル当量過剰がＭＳＲに及ぼす作用を示している。
【図１４】ＳＹＮ０２６の第１日のＦＰＬＣを示した図である。Ｍｏｎｏ  Ｑ  ＨＲ  １０／１０イオン交換カラム、バッファーＡ：トリス（２０ｍＭ、ｐＨ７．５）、バッファーＢ：１Ｍ  ＮａＣｌを含有するトリス（２０  ｍＭ、ｐＨ７．５）。カラムパラメーターは下記の表に示した：
【表１２】
2005537266.tif 000057
【図１５】ＳＹＮ０２６の１０日後のＦＰＬＣを示した図である。Ｍｏｎｏ  Ｑ  ＨＲ  １０／１０イオン交換カラム、バッファーＡ：トリス（２０  ｍＭ、ｐＨ７．５）、バッファーＢ：１Ｍ  ＮａＣｌを含有するトリス（２０  ｍＭ、ｐＨ７．５）。カラムパラメーターは下記の表に示した：
【表１３】
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【図１６】サンプル７０２８（モノイソシアネート修飾１０−ヒドロキシカンプトテシン）のＮＭＲ分析についての1Ｈ  ＮＭＲデータ、構造、および機器パラメーターを示した図である。
【図１７】サンプル７０２８のＮＭＲ分析についての13Ｃ  ＮＭＲデータ、構造、および機器パラメーターを示した図である。
【図１８】図１６および１７で分析した構造についてのＭＳデータを示した図である。
【図１９】サンプル６９８１（１，６−（ビス（１０−ヒドロキシカンプトテシンカルバメート）ヘキサン）のＮＭＲ分析についての1Ｈ  ＮＭＲデータ、構造、および機器パラメーターを示した図である。
【図２０】サンプル６９８１のＮＭＲ分析についての13Ｃ  ＮＭＲデータ、構造、および機器パラメーターを示した図である。
【図２１】図１９および２０で分析した構造についてのＭＳデータを示した図である。
【図２２】２８０ｎｍおよび３８２ｎｍでの検出におけるＳＹＮ０２７の第１日についての典型的なＦＰＬＣトレースを示した図である。ＢｉｏＳｅｐサイズ排除カラム、洗浄バッファー：０．１Ｍ第１リン酸ナトリウム、ｐＨ６．８０。このＦＰＬＣランについてのカラムパラメーターは下記の表に記載したとおりであった：
【表１４】
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【図２３】２８０ｎｍおよび３８２ｎｍでの検出におけるＳＹＮ０２７の合成２週間後の典型的なＦＰＬＣトレースを示した図である。ＢｉｏＳｅｐサイズ排除カラム、洗浄バッファー：０．１Ｍ第１リン酸ナトリウム、ｐＨ６．８０．このＦＰＬＣランについてのカラムパラメーターは下記の表に記載したとおりであった：
【表１５】
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【図２４】サンプル７０２７（ｔｅｒｔ−ブチル−ＰＥＧ４−カルバマト−ｈｅｘｙｌ−カルバマト−１０−ヒドロキシカンプトテシン）のＮＭＲ分析についての13Ｃ  ＮＭＲデータ、構造、および機器パラメーターを示した図である。
【図２５】図２４で分析した構造についてのＭＳデータを示した図である。
【図２６】図２４で分析した構造についてのＩＲスペクトルを示した図である。
【図２７】図２４で分析した構造についてのＵＶスペクトルを示した図である。
【図２８】サンプル１１８８（酸−ＰＥＧ４―ｃｂｍ−ヘキシル−ｃｂｍ−１０ＣＰＴ）のＮＭＲ分析についての1Ｈ  ＮＭＲデータ、構造、および機器パラメーターを示した図である。
【図２９】サンプル１１８８のＮＭＲ分析についての13Ｃ  ＮＭＲデータ、構造、および機器パラメーターを示した図である。
【図３０】図２８および２９で分析した構造についてのＭＳデータを示した図である。
【図３１】図２８および２９で分析した構造についてのＩＲスペクトルを示した図である。
【図３２】図２８および２９で分析した構造についてのＩＶスペクトルを示した図である。
【図３３】サンプル１７７６（ＳＮ−３８と１，６−ジイソシアナトヘキサンの反応の反応生成物）のＮＭＲ分析についての1Ｈ  ＮＭＲデータ、構造、および機器パラメーターを示した図である。
【図３４】サンプル１７７６のＮＭＲ分析についての13Ｃ  ＮＭＲデータ、構造、および機器パラメーターを示した図である。
【図３５】図３３および３４で分析した構造についてのＭＳデータを示した図である。
【図３６】図３３および３４で分析した構造についてのＩＲスペクトルを示した図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【国際調査報告】
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