(57)【要約】  本発明は、処置を必要としている対象における、血管形成介在眼障害、例えば、傷害または感染後の血管新生、水晶体後線維増殖症および血管新生緑内障を含む、眼内血管新生、網膜血管新生、加齢に関連する黄斑変性症、糖尿病性網膜症、病的近視、眼のヒストプラスマ症、血管新生緑内障、未熟児網膜症、角膜移植の後遺症、術後眼炎症の制御（例えば、白内障手術後）、嚢胞様黄斑浮腫（ＣＭＥ）および角膜ヘルペスなどの処置方法を提供する。その方法は、式Ｉ（式中、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、定義する通りである）のＣＯＸ−２阻害剤；その医薬的に許容し得る塩；またはその医薬的に許容し得るプロドラッグエステルの有効量を対象に投与することを含む。【化１】2005515241.tif 000016
2005515241.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
2005515241.tif 000015
式中、
Ｒは、メチルまたはエチルであり；
Ｒ１は、クロロまたはフルオロであり；
Ｒ２は、水素またはフルオロであり；
Ｒ３は、水素、フルオロ、クロロ、メチル、エチル、メトキシ、エトキシまたはヒドロキシであり；
Ｒ４は、水素またはフルオロであり；そして、
Ｒ５は、クロロ、フルオロ、トリフルオロメチルまたはメチルである；
の化合物、その医薬的に許容し得る塩もしくはプロドラッグエステルの、血管形成介在眼障害の処置で使用するための薬剤の製造における、使用。
【請求項２】
処置を必要としている対象における血管形成介在眼障害の処置方法であって、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容し得る塩もしくはプロドラッグエステルの有効量を投与することを含む、方法。
【請求項３】
血管形成介在眼障害の処置における使用のための指示書と共に、請求項１に記載の式Ｉの化合物、またはその医薬的に許容し得る塩もしくはプロドラッグエステルを含む、パッケージ。
【請求項４】
式Ｉの化合物が、５−メチル−２−（２−クロロ−６−フルオロアニリノ）−フェニル酢酸またはその医薬的に許容し得る塩もしくはその医薬的に許容し得るプロドラッグエステルである、請求項１に記載の使用、または請求項２に記載の方法、または請求項３に記載のパッケージ。
【請求項５】
血管形成介在眼障害が、傷害または感染後の血管新生、水晶体後線維増殖症および血管新生緑内障を含む、眼内血管新生、網膜血管新生、加齢に関連する黄斑変性症、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、病的近視、眼のヒストプラスマ症、血管新生緑内障、未熟児網膜症、角膜移植の後遺症、術後眼炎症の制御（例えば、白内障手術後）、嚢胞様黄斑浮腫（ＣＭＥ）および角膜ヘルペスから選択される、請求項１に記載の使用、または請求項２に記載の方法、または請求項３に記載のパッケージ。
【請求項６】
式Ｉの化合物が経口組成物形態である、請求項１に記載の使用、または請求項２に記載の方法、または請求項３に記載のパッケージ。
【請求項７】
式Ｉの化合物が局所組成物形態である、請求項１に記載の使用、または請求項２に記載の方法、または請求項３に記載のパッケージ。
【請求項８】
血管形成介在眼障害が、加齢に関連する黄斑変性症、糖尿病性網膜症および糖尿病性黄斑浮腫から選択される、請求項６に記載の使用または方法またはパッケージ。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、選択的シクロオキシゲナーゼ−２阻害剤（ＣＯＸ−２阻害剤）、特に、網膜血管新生および脈絡膜血管新生などの眼内血管新生疾患のような、血管形成関連眼疾患の処置におけるＣＯＸ−２阻害剤の使用に関する。
【０００２】
ＣＯＸ−２阻害剤と、炎症性疾患および疼痛の処置用の非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）としてのそれらの使用は、当分野で周知である。さらに、角膜移植片拒絶、眼内血管新生、網膜血管新生（傷害または感染後の血管新生を含む）、糖尿病性網膜症、水晶体後線維増殖症および血管新生緑内障などの眼の症状を含む、血管形成関連疾患を処置するためのＣＯＸ−２阻害剤の使用が提唱されてきた（例えば、ＵＳＰ６,０２５,３５３、Searle 参照）。
【０００３】
この度、ある種のＣＯＸ−２阻害剤、特に５−アルキル置換２−アリールアミノフェニル酢酸誘導ＣＯＸ−２阻害剤が、眼内血管新生疾患の処置に使用するのに望ましい特性を有することが判明した。
【０００４】
従って、本発明は、処置を必要とする対象における血管形成介在眼障害の処置方法を提供する。その方法は、対象に式Ｉ
【化１】
2005515241.tif 000003
式中、
Ｒは、メチルまたはエチルであり；
Ｒ１は、クロロまたはフルオロであり；
Ｒ２は、水素またはフルオロであり；
Ｒ３は、水素、フルオロ、クロロ、メチル、エチル、メトキシ、エトキシまたはヒドロキシであり；
Ｒ４は、水素またはフルオロであり；そして、
Ｒ５は、クロロ、フルオロ、トリフルオロメチルまたはメチルである；
のＣＯＸ−２阻害剤、その医薬的に許容し得る塩；または、
その医薬的に許容し得るプロドラッグエステル、
の有効量を投与することを含む。
【０００５】
さらに、本発明は、血管形成介在眼障害の処置における使用のための薬剤を製造するための、上記定義の式Ｉの化合物（またはその医薬的に許容し得る塩またはプロドラッグエステル）の使用を提供する。
【０００６】
さらなる態様では、本発明は、血管形成介在眼障害の処置のための、上記定義の式Ｉの化合物（またはその医薬的に許容し得る塩またはプロドラッグエステル）の使用を提供する。
【０００７】
なおさらなる態様では、本発明は、有効成分として上記定義の式Ｉの化合物（またはその医薬的に許容し得る塩またはプロドラッグエステル）を含む、眼内血管形成を阻害または後退する剤を提供する。
【０００８】
なおまたさらなる態様では、本発明は、血管形成介在眼疾患の処置における使用のための指示書と共に、上記定義の式Ｉの化合物（またはその医薬的に許容し得る塩またはプロドラッグエステル）を含むパッケージ（package）を提供する。
【０００９】
本発明に従って処置され得る血管形成介在眼障害には、眼内血管新生、脈絡膜血管新生、一般的に虚血性網膜症を含む網膜血管新生、傷害または感染後の血管新生、水晶体後線維増殖症および血管新生緑内障などの、血管形成または血管新生を直接的または間接的に伴う眼疾患および障害、加齢に関連する黄斑変性症、糖尿病性網膜症、病的近視（pathologic myopia）、眼のヒストプラスマ症、血管新生緑内障、未熟児網膜症、角膜移植の後遺症、術後眼炎症の制御（例えば、白内障手術後）、嚢胞様黄斑浮腫（ＣＭＥ）および角膜ヘルペスが含まれる。
【００１０】
本記載では、用語「処置」または「処置する」は、予防または防止的処置、並びに治療的または疾患緩解処置の両方を表し、疾患に罹患するリスクがあるか、または疾患に罹患した疑いのある患者、並びに、発病しているか、または疾病もしくは医学的症状を持っていると診断された患者の処置を含む。
【００１１】
特に好ましい式Ｉの化合物は、Ｒがメチルまたはエチルであり；Ｒ１がクロロまたはフルオロであり；Ｒ２が水素であり；Ｒ３が、水素、フルオロ、クロロ、メチルまたはヒドロキシであり；Ｒ４が水素であり；そしてＲ５が、クロロ、フルオロまたはメチルであるもの；それらの医薬的に許容し得る塩；およびそれらの医薬的に許容し得るエステルである。
【００１２】
特に好ましい実施態様は、Ｒがメチルまたはエチルであり；Ｒ１がフルオロであり；Ｒ２が水素であり；Ｒ３が、水素、フルオロまたはヒドロキシであり；Ｒ４が水素であり；そしてＲ５がクロロである、式Ｉの化合物；それらの医薬的に許容し得る塩；およびそれらの医薬的に許容し得るプロドラッグエステルに関する。
【００１３】
別の特に好ましい本発明の実施態様は、Ｒがエチルまたはメチルであり；Ｒ１がフルオロであり；Ｒ２が水素またはフルオロであり；Ｒ３が、水素、フルオロ、エトキシまたはヒドロキシであり；Ｒ４が水素またはフルオロであり；そしてＲ５が、クロロ、フルオロまたはメチルである、式Ｉの化合物；それらの医薬的に許容し得る塩；およびそれらの医薬的に許容し得るプロドラッグエステルに関する。
【００１４】
さらに、Ｒがメチルまたはエチルであり；Ｒ１がフルオロであり；Ｒ２−Ｒ４が水素またはフルオロであり；そしてＲ５がクロロまたはフルオロである、当該化合物；それらの医薬的に許容し得る塩；およびそれらの医薬的に許容し得るプロドラッグエステルである。
【００１５】
本発明のさらなる実施態様は、Ｒがメチルまたはエチルであり；Ｒ１がフルオロであり；Ｒ２がフルオロであり；Ｒ３が、水素、エトキシまたはヒドロキシであり；Ｒ４がフルオロであり；そしてＲ５がフルオロである、式Ｉの化合物；それらの医薬的に許容し得る塩；およびそれらの医薬的に許容し得るプロドラッグエステルに関する。
【００１６】
本発明の別の実施態様は、Ｒがメチルであり；Ｒ１がフルオロであり；Ｒ２が水素であり；Ｒ３が水素またはフルオロであり；Ｒ４が水素であり；そしてＲ５がクロロである、式Ｉの化合物；それらの医薬的に許容し得る塩；およびそれらの医薬的に許容し得るプロドラッグエステルに関する。
【００１７】
特に好ましい本発明の実施態様は、以下に関するものである；
（ａ）Ｒがメチルであり；Ｒ１がフルオロであり；Ｒ２が水素であり；Ｒ３が水素であり；Ｒ４が水素であり；そしてＲ５がクロロである、式Ｉの化合物；その医薬的に許容し得る塩；およびその医薬的に許容し得るプロドラッグエステル；
（ｂ）Ｒがメチルであり；Ｒ１がフルオロであり；Ｒ２が水素であり；Ｒ３がフルオロであり；Ｒ４が水素であり；そしてＲ５がクロロである、式Ｉの化合物；その医薬的に許容し得る塩；およびその医薬的に許容し得るプロドラッグエステル；
（ｃ）Ｒがエチルであり；Ｒ１がフルオロであり；Ｒ２がフルオロであり；Ｒ３が水素であり；Ｒ４がフルオロであり；そしてＲ５がフルオロである、式Ｉの化合物；その医薬的に許容し得る塩；およびその医薬的に許容し得るプロドラッグエステル；および
（ｄ）Ｒがエチルであり；Ｒ１がクロロであり；Ｒ２が水素であり；Ｒ３がクロロであり；Ｒ４が水素であり；そしてＲ５がメチルである、式Ｉの化合物；その医薬的に許容し得る塩；およびその医薬的に許容し得るプロドラッグエステル。
【００１８】
最も好ましくは、５−メチル−２−（２'−クロロ−６'−フルオロアニリノ）−フェニル酢酸またはその医薬的に許容し得る塩、またはその医薬的に許容し得るプロドラッグが、本発明のＣＯＸ−２阻害剤として使用される。
【００１９】
式Ｉの化合物の薬学的に許容し得る塩は、好ましくは、塩基との塩、元素周期表のＩａ、Ｉｂ、ＩＩａおよびＩＩｂ族から誘導される常套の金属塩（カリウムおよび特にナトリウム塩などのアルカリ金属塩、または好ましくはカルシウムまたはマグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩を含む）、およびアンモニアまたは有機アミンとのアンモニウム塩である。
【００２０】
式Ｉの化合物の医薬的に許容し得るプロドラッグエステルは、加溶媒分解により、または生理的条件下で、式Ｉの遊離カルボン酸に変換できるエステル誘導体である。かかるエステルは、例えば、低級アルキルエステル（メチルまたはエチルエステルなど）、カルボキシ−低級アルキルエステル（カルボキシメチルエステルなど）、ニトロオキシ−低級アルキルエステル（４−ニトロオキシブチルエステルなど）等である。好ましいプロドラッグは、式Ｉａ
【化２】
2005515241.tif 000004
式中、ＲおよびＲ１−Ｒ５は、式Ｉの化合物について上記で定義した通りの意味を有する、の化合物；およびそれらの医薬的に許容し得る塩である。
【００２１】
式ＩおよびＩａの化合物およびそれらの合成は、公開された国際特許出願ＷＯ９９／１１６０５およびＷＯ０１／２３３４６に記載されており、これらの教示を出典明示により本明細書の一部とする。
【００２２】
式ＩのＣＯＸ−２阻害剤化合物およびそれらの医薬的に許容し得る塩およびエステルは、好ましくは、経腸、非経腸または局所適用のいずれかに適する賦形剤または担体との組合せまたは混合物中にそれらの有効量を含む、医薬組成物の形態で使用される。さらに、それらは他の治療的に価値のある物質も含有し得る。組成物は、常套の混合、造粒またはコーティング方法に従って各々製造し得、そして、約０.１ないし９０％、好ましくは約１ないし６０％の有効成分を含有する。
【００２３】
式Ｉの化合物を含む医薬組成物は、例えば、経口、経直腸、エーロゾル吸入または鼻腔内投与などの経腸用組成物；静脈または皮下投与などの非経腸用組成物；経皮投与（例えば、受動的またはイオン泳動的な）用組成物、または局所投与用組成物であり得る。
好ましくは、式Ｉの化合物を含む医薬組成物は、経口または局所投与に適合させる。
【００２４】
個々の投与様式および用量は、患者の特性、特に年齢、体重、生活様式、活動レベルなどを考慮に入れ、手当てする医師により選択され得る。
【００２５】
好ましい経口形態は、以下のものと共に有効成分を含む錠剤およびゼラチンカプセル剤である；ａ）希釈剤、例えば、ラクトース、デキストロース、ショ糖、マンニトール、ソルビトール、セルロースおよび／またはグリシン；ｂ）潤滑剤、例えば、シリカ、タルク、ステアリン酸、そのマグネシウムまたはカルシウム塩および／またはポリエチレングリコール；また、錠剤用に、ｃ）結合剤、例えば、ケイ酸アルミニウム・マグネシウム、スターチペースト、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムおよび／またはポリビニルピロリドン；所望により、ｄ）崩壊剤、例えば、スターチ、寒天、アルギン酸またはそのナトリウム塩、または発泡性混合物；および／または、ｅ）吸収剤、着色剤、香料および甘味料。錠剤は、当分野で既知の方法に従い、フィルムコーティングまたは腸溶性コーティングし得る。
【００２６】
適する注射可能組成物は、水性等張液剤または懸濁剤であり、座剤は、脂肪性乳液または懸濁液から有利に製造される。該組成物は、滅菌し得、かつ／または、保存料、安定剤、湿潤剤または乳化剤、溶解促進剤、浸透圧調節用の塩、および／または緩衝剤などの添加剤を含有し得る。
【００２７】
経皮適用に適する製剤は、有効量の本発明化合物を担体と共に含む。有利な担体には、宿主の皮膚を通過するのを補助する、吸収可能な薬学的に許容し得る溶媒が含まれる。例えば、経皮デバイスは、裏張り部分、場合により担体と共に化合物を含有する貯蔵部、場合により、制御され、予め決められた速度で長期間にわたり宿主の皮膚に化合物を送達するための速度制御障壁、およびデバイスを皮膚に固定するための手段を含む、バンデージの形態である。
【００２８】
皮膚や眼などへの局所適用に好ましい製剤には、水性液剤、懸濁剤、軟膏、クリーム、ゲルまたは例えばエーロゾルなどによる送達のための噴射可能製剤が含まれる。かかる局所製剤は、典型的に、約０.１ないし約５０重量％、好ましくは約１ないし約２０重量％のＣＯＸ−２阻害剤化合物を含有する。
【００２９】
投与されるＣＯＸ−２阻害剤の用量は、対象、体重、年齢および個々の症状、および投与形態によって決まる。約５０ないし７０ｋｇ体重の哺乳動物への経口投与のための単位用量は、約５ないし２０００ｍｇ、例えば１００−８００ｍｇ、好ましくは２００−４００ｍｇの有効成分を含有し得る。ＣＯＸ−２阻害剤が５−メチル−２−（２'−クロロ−６'−フルオロ−アニリノ）−フェニル酢酸またはその医薬的に許容し得る塩であるとき、適する用量は、１日に１００ないし１５００ｍｇの５−メチル−２−（２'−クロロ−６'−フルオロ−アニリノ）−フェニル酢酸の範囲にあり、例えば、２００、４００、５００、６００、８００、９００または１０００ｍｇ／日などの２００−１０００ｍｇ／日であり、１日に１または２回投与される。
【００３０】
非経腸製剤は、とりわけ、静脈、筋肉内、腹腔内、鼻腔内、皮内または皮下などの様々な様式で有効な、注射可能流体である。
【００３１】
本発明に従って使用するための式Ｉの化合物を含む医薬組成物は、例えば、その単回用量または複数回用量として、または反復適用（例えば、局所適用）のための組成物貯蔵物として、組成物を含み、血管形成介在眼障害の処置における使用のための書面指示書または他の表示（例えば、添付文書）を伴うパッケージの形態で、都合よく供給される。
【００３２】
式Ｉの化合物は、イバンドロネート、アレンドロネートまたはゾレドロネート（zoledronate）などのビスフォスフォネート（bisphophonate）並びにそれらの塩およびエステル、ＥＧＦＲアンタゴニストを含む、他の抗血管形成剤と共に使用し得る。
【００３３】
本発明の好ましい実施態様には、式（Ｉ）の化合物、特に５−メチル−２−（２'−クロロ−６'−フルオロアニリノ）−フェニル酢酸、それらの医薬的に許容し得る塩；またはそれらの医薬的に許容し得るプロドラッグエステルが、経口用組成物形態であり、血管形成介在眼障害が、好ましくは、加齢に関連する黄斑変性症、糖尿病性網膜症および糖尿病性黄斑浮腫から、より好ましくは加齢に関連する黄斑変性症および糖尿病性網膜症から選択される、上記の使用、方法およびパッケージが含まれる。
【００３４】
式Ｉの化合物の眼の抗血管形成特性は、例えば下記のような、適する手法および動物モデルを使用して立証し得る。
【００３５】
虚血性網膜症のマウスの薬物処置
以下の方法で、Ｃ５７／ＢＬ６Ｊマウスに虚血性網膜症を起こす：
７日齢のマウスおよびこれらの母親を、気密インキュベーターに入れ、７５±３％酸素雰囲気に５日間曝す。インキュベーターの温度を２３±２℃に維持し、８時間毎に酸素分析装置で酸素を測定する。５日後、マウスをインキュベーターから出し、室内空気に置き、ＣＯＸ−２阻害剤薬物処置を開始する。薬物をそれらの溶解特性に応じてリン酸緩衝塩水（ＰＢＳ）または１％ジメチルスルホキシドで希釈し、次いでＰＢＳで最終濃度に希釈する。媒体（対照）または様々な濃度の薬物を含有する媒体（容積＝新生仔で５０μｌ、成体マウスで１００μｌ）を、胃管栄養法により胃に入れる。Ｐ１７での５日間の処置の後、マウスを屠殺し、眼を迅速に取り出し、最適切削温度包埋化合物（OCT; Miles Diagnostics, Elkhart, IN）中で凍結させるか、または１０％リン酸緩衝ホルマリンで固定し、パラフィンに包埋する。成体のＣ５７ＢＬ６Ｊマウスも、胃管栄養法により薬物または媒体で処置し、５日後に屠殺し、それらの眼を凍結またはパラフィン切片に加工する。
【００３６】
網膜血管新生の定量
薬物処理マウスおよび対照マウス由来の眼の凍結切片（１０μｍ）を、内皮細胞に選択的に結合するビオチン化グリフォニア・シンプリシフォリア（griffonia simplicifolia）レクチンＢ４（Vector Laboratories, Burlingame, CA）で組織化学染色する。スライドをメタノール／Ｈ２Ｏ２中で３０分間、４℃でインキュベートし、０.０５Ｍ ＴＢＳで洗浄し、１０％正常ブタ血清中で３０分間インキュベートする。スライドを０.０５Ｍ Ｔｒｉｓ−緩衝塩水、ｐＨ７.６（ＴＢＳ）ですすぎ、室温で２時間、ビオチン化レクチンとインキュベートする。０.０５Ｍ ＴＢＳですすいだ後、スライドをペルオキシダーゼ結合アビジン（Vector Laboratories）と４５分間、室温でインキュベートする。１０分間０.０５Ｍ ＴＢＳで洗浄した後、スライドをジアミノベンジジンとインキュベートし、茶色の反応生成物を得る。いくつかのスライドはヘマトキシリンで対比染色し、全て Cytoseal でマウントする。
【００３７】
定量的評価を実施するために、各眼の全範囲にわたる１０μｍの連続切片を切る。だいたい５０−６０μｍずつ離れた切片を染色することにより全眼を標本抽出し、分析用に各眼１３枚の切片を得る。Axioskop 顕微鏡 (Zeiss, Thornwood, NY）でレクチン染色切片を調べ、３ＣＣＤカラービデオカメラ（IK-TU40A, Toshiba, Tokyo, Japan）およびフレーム取込み器を使用して、画像をデジタル化する。Image-Pro Plus ソフトウェア（Media Cybernetics, Silver Spring, MD）を使用して網膜表面上のレクチン染色細胞を描写し、それらの面積を測定する。各眼からの１３の測定値の平均を、単一の実験値として使用する。
【００３８】
網膜血管発達中のマウスの薬物処置
同腹の新生Ｃ５７／ＢＬ６Ｊマウスを、各々１０ｍｇ／ｋｇの薬物または媒体の皮下注射を毎日受ける処置群と対照群に分ける。Ｐ７またはＰ１０で、マウスをエーテルで麻酔し、５０ｍｇ／ｍｌのフルオレセイン標識デキストラン（２ｘ１０６平均ｍｗ、Sigma, St. Louis, MO）を含有するリン酸緩衝塩水１ｍｌで潅流する。眼を取り出し、１０％リン酸緩衝ホルマリン中で１時間固定する。角膜およびレンズを取り出し、網膜全体を注意深く眼杯から切り離し、網膜の端から放射状に、赤道上で全部で４つの四文円形に切り、光受容体が上面に向くように、Aquamount 中に広げてマウントする。広げてマウントしたものを蛍光顕微鏡で調べ、３ＣＣＤカラービデオカメラ（IK-TU40A, Toshiba, Tokyo, Japan）およびフレーム取込み器を使用して、画像をデジタル化する。Image-Pro Plus ソフトウェア（Media Cybernetics, Silver Spring, MD）を使用して、各四文円において視神経の中心から発達中の網膜血管の先端までの距離を測定し、平均を単一の実験値として使用する。
【００３９】
脈絡膜血管新生のあるマウスの薬物処置
脈絡膜血管新生は、以前に記載した技法の改変により生成させる。簡単に述べると、４ないし５週齢の雄のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスを、ケタミン塩酸塩（１００ｍｇ／ｋｇ体重）で麻酔し、１％トロピカミドで瞳孔を拡大させる。Coherent Model 920 Photocoagulator のスリットランプ送達システム、および接眼レンズとして手持ちのカバースライドを使用して、クリプトンレーザー眼内光凝固による３つの火傷（１００μｍスポットサイズ、０.１秒間、１５０ｍＷ）を各網膜に与える。火傷は、網膜後極の９時、１２時および３時の位置に実施する。Bruch 氏膜の破裂を示すレーザー時の気泡の生成は、ＣＮＶを得るのに重要な要素であるので、３つ全部の火傷に気泡が生成されたマウスのみを研究に含める。１０匹のマウスを媒体単体での処置にランダムに割り当て、１０匹のマウスは、試験薬物の１つを１２０μモル／ｋｇ／日で含有する媒体を、胃管栄養法により経口で与えられて受容する。１４日後、ペントバルビタールナトリウムの過剰用量でマウスを殺し、それらの眼を迅速に取り出し、最適切削温度包埋化合物（ＯＣＴ）中で凍結させる。
【００４０】
脈絡膜血管新生の定量
各火傷の全範囲にわたる凍結連続切片（１０μｍ）を切り、内皮細胞に選択的に結合するビオチン化グリフォニア・シンプリシフォリアレクチンＢ４（Vector Laboratories, Burlingame, CA）で組織化学染色する。スライドをメタノール／Ｈ２Ｏ２中で３０分間、４℃でインキュベートし、０.０５Ｍ ＴＢＳで洗浄し、１０％正常ブタ血清中で３０分間インキュベートする。スライドを０.０５Ｍ ＴＢＳですすぎ、３７℃で２時間、ビオチン化レクチンとインキュベートする。０.０５Ｍ ＴＢＳですすいだ後、スライドをストレプトアビジン−ホスファターゼ（Kirkegaard and Perry Laboratories, Cabin John, MD）と３０分間、室温でインキュベートする。１０分間０.０５Ｍ Ｔｒｉｓ緩衝液、ｐＨ７.６で洗浄した後、スライドを Histomark Red (Kirkegaard and Perry）中で顕色させ、赤色の反応生成物を得、Cytoseal (Stephens Scientific, Riverdale, NJ）でマウントする。いくつかのスライドは、Contrast Blue (Kirkegaard and Perry）で対比染色する。
【００４１】
定量的評価を実施するために、Axioskop 顕微鏡 (Zeiss, Thornwood, NY）でレクチン染色切片を調べ、３ＣＣＤカラービデオカメラ（IK-TU40A, Toshiba, Tokyo, Japan）およびフレーム取込み器を使用して、画像をデジタル化する。Image-Pro Plus ソフトウェア（Media Cybernetics, Silver Spring, MD）を使用して、網膜下空間中のレクチン染色血管の領域を描写し、測定する。各病変について、病変が現れている全切片の面積測定を行い、一緒に足し合わせ、統合された面積測定値を得る。値を平均し、１匹のマウスにつき１つの実験値を得る。不均一な分散のための２サンプルのｔ検定を実施し、処置マウスと対照マウスとの間で統合された面積の対数平均を比較する。
【００４２】
上記のモデルで試験すると、式Ｉの化合物は眼内血管形成を阻害する。
【００４３】
以下の実施例は、本発明を例示説明することを意図しており、それらに限定するように構成されたものではない。
【００４４】
実施例
Ａ．製剤の実施例
実施例１
【表１】
2005515241.tif 000005
** 薬物物質の重量は、アッセイ値に基づき乾燥物質（１００パーセント）として表示する（フラクトリゼーションによる）。重量の差異は、使用する微結晶セルロースの量で合わせる。
*** 加工中に除去される。
**** コーティング加工中の損失のために、５０％過剰量を含む。
【００４５】
上記表１は、５−メチル−２−（２'−クロロ−６'−フルオロアニリノ）−フェニル酢酸の即時放出フィルムコーティング錠剤約２５０,０００個のバッチ用の処方を記載する。錠剤を作成するために、二酸化チタンを水中に分散させ、続いてポビドンを添加し、２０分間撹拌してポビドン／二酸化チタン懸濁液を作成する。薬物物質、ラクトース、微結晶セルロースおよびクロスカルメロースを、高剪断（high shear）ミキサー（例えば、Collette Gral）中で５分間混合し、薬物混合物を形成する。薬物混合物を、ポビドン／二酸化チタン懸濁液と共に高剪断ミキサー中で造粒する。懸濁液は、３ｋｇ／分の速度で薬物混合物に注入する。生じる混合物を、全懸濁液が添加された後さらに９０秒間混合する。湿式造粒を流動床乾燥機（fluid bed dryer）で、５０℃の流入空気温度を使用して乾燥させる。残留水分目標は、３.５％（許容範囲２.５−４.５％）である。乾燥した造粒を、ミル（オシレータ）と３０目のふるいを使用してふるいに通す。先の工程を反復し、第２造粒を作成する。
【００４６】
造粒工程以降（extra-granular phase）の二酸化チタンを、６０目の手動ふるい通す。乾燥造粒を、造粒相外の微結晶セルロース、クロスカルメロースナトリウムおよび二酸化チタンと、二枚刃（twin shell）ミキサー中、３００回転で混合し、最終前の（penultimate）混合物を形成する。ステアリン酸マグネシウムを６０目の手動ふるいに通し、二枚刃ミキサー中、５０回転で、最終前の混合物と混合し、打錠用混合物を形成する。打錠用化混合物を、打錠機（tablet press）と楕円形パンチを使用して、錠剤に打錠する。
【００４７】
コーティング粉末（Opadry）を精製水と混合し、１５％ｗ／ｗコーティング懸濁液を作成する。６０℃ないし７５℃の流入空気温度を使用して、コーティングパン中で、錠剤をコーティング懸濁液でフィルムコーティングする。
【００４８】
表２は、２００ｍｇ５−メチル−２−（２'−クロロ−６'−フルオロアニリノ）フェニル酢酸フィルムコーティング錠剤の内容を記載する。
【表２】
2005515241.tif 000006
* 加工中に除去される。
【００４９】
加えて、錠剤製剤は、５−メチル−２−（２'−クロロ−６'−フルオロアニリノ）ベンジルアルコールおよび／または５−メチル−２−（２'−クロロ−６'−フルオロアニリノ）安息香酸を、約０.０１ないし２重量％、ことさらに約０.１ないし１の量で含有し得る。
【００５０】
実施例２
別の製剤を、パーセントｗ／ｗ、ｍｇ／用量およびｋｇ／５０,０００錠剤バッチとしての情報と共に、表３に記載する。
【表３】
2005515241.tif 000007
* 用量は最終生成物に現れない。造粒に使用し、添加した水のパーセントは、薬物物質およびクロスカルメロースナトリウムの乾燥重量をベースとする。
【００５１】
実施例１に記載のようにバッチを造粒する。残留水分（％ＬＯＤ）１.７９％まで顆粒を乾燥させる。製剤法は、コーティングパン中での Opadry コーティングの添加工程以外、上記の開発バッチと同じである。コーティング粉末（Opadry）を精製水と混合し、１５％ｗ／ｗコーティング懸濁液を作成する。６０℃ないし７５℃の流入空気温度を使用して、コーティングパン中で、錠剤をコーティング懸濁液でフィルムコーティングする。摩損度データに基づき、１８ＫＮ（１６−２０ＫＮ範囲）の目標値（target force）を使用して、バッチの残りを圧縮し、許容し得る摩損度（０.５％より小さい）と、５分間より短い崩壊時間にする。押出力は、打常中を通して約８００Ｎである。このことは、混合物（blend）が適切に潤滑化されていることを示す。打錠した表面に、２２５分後にキズ（picking）／付着（sticking）は観察されない。従って、高剪断造粒法を使用し、１７Ｘ６.７ｍｍ楕円状（ovaloid）部品を使用して、より高い薬物含量（６５％）でより小さいサイズの錠剤が達成され、許容し得る硬度と摩損度特性を有する錠剤が得られる。
【００５２】
加えて、錠剤製剤は、５−メチル−２−（２'−クロロ−６'−フルオロアニリノ）ベンジルアルコールおよび／または５−メチル−２−（２'−クロロ−６'−フルオロアニリノ）安息香酸を、約０.０１ないし２重量％、ことさらに約０.１ないし１％の量で含有し得る。
【００５３】
実施例３
湿式造粒錠剤組成物
【表４】
2005515241.tif 000008
【００５４】
用量強度５ないし１２５ｍｇの錠剤は、総錠剤重量と、最初の３つの成分の割合を変化させることにより適応できる。一般に、微結晶セルロース：ラクトース一水和物の比を１：１に維持するのが好ましい。
【００５５】
実施例４
直接圧縮錠剤組成物
【表５】
2005515241.tif 000009
【００５６】
用量強度５ないし１２５ｍｇの錠剤は、総錠剤重量と、最初の３つの成分の割合を変化させることにより適応できる。一般に、微結晶セルロース：ラクトース一水和物の比を１：１に維持するのが好ましい。
【００５７】
実施例５
ハードゼラチンカプセル組成物
【表６】
2005515241.tif 000010
【００５８】
用量強度１ないし５０ｍｇのカプセル剤は、総充填重量と、最初の３つの成分の割合を変化させることにより適応できる。一般に、微結晶セルロース：ラクトース一水和物の比を１：１に維持するのが好ましい。
【００５９】
実施例６
経口液剤
【表７】
2005515241.tif 000011
【００６０】
実施例７
経口懸濁剤
【表８】
2005515241.tif 000012
経口懸濁剤
【表９】
2005515241.tif 000013
【００６１】
用量強度１ないし５０ｍｇ／５ｍｌの懸濁剤は、最初の２つの成分の割合を変化させることにより適応できる。
【００６２】
実施例８
静脈点滴
【表１０】
2005515241.tif 000014
【国際調査報告】
2005515241.tif 000017
2005515241.tif 000018
2005515241.tif 000019