(57)【要約】ウイルス性、増殖性および炎症性の疾患のための薬成分が開示されており、この成分は、インターフェロン複合体と組み合わされた、薬学的に許容し得るかなりの量のビタミンＢ１２複合体を含んでいる。ビタミンＢ１２複合体は、ウイルス性、増殖性および炎症性の疾患の治療において進んだ治療効果が得られるように、インターフェロン複合体と別個にまたは同時に、あるいは該複合体と組み合わされて、投与される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ウイルス性疾患、増殖性疾患、炎症性疾患、増殖性・炎症性疾患、増殖性・ウイルス性疾患、ウイルス性・炎症性疾患、および増殖性・ウイルス性・炎症性疾患からなるグループから選択された病気の治療のための薬成分であって、
ｉ）少なくとも一つのビタミンＢ１２複合体と、
ii）少なくとも一つのインターフェロン複合体と、
を備えた薬成分。
【請求項２】
増殖性疾患の治療のための薬成分であって、
ｉ）少なくとも一つのビタミンＢ１２複合体と、
ii）少なくとも一つのインターフェロン複合体と、
を備えた薬成分。
【請求項３】
ウイルス性疾患の治療のための薬成分であって、
ｉ）少なくとも一つのビタミンＢ１２複合体と、
ii）少なくとも一つのインターフェロン複合体と、
を備えた薬成分。
【請求項４】
炎症性疾患の治療のための薬成分であって、
ｉ）少なくとも一つのビタミンＢ１２複合体と、
ii）少なくとも一つのインターフェロン複合体と、
を備えた薬成分。
【請求項５】
多発性硬化症の治療のための薬成分であって、
ｉ）少なくとも一つのビタミンＢ１２複合体と、
ii）少なくとも一つのインターフェロン複合体と、
を備えた薬成分。
【請求項６】
Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、単純ヘルペスウイルスII型および口内炎ウイルスからなるグループから選択されたウイルスの治療のための薬成分であって、
ｉ）少なくとも一つのビタミンＢ１２複合体と、
ii）少なくとも一つのインターフェロン複合体と、
を備えた薬成分。
【請求項７】
癌の治療のための薬成分であって、
ｉ）少なくとも一つのビタミンＢ１２複合体と、
ii）少なくとも一つのインターフェロン複合体と、
を備えた薬成分。
【請求項８】
星状膠細胞腫および神経膠腫の治療のための薬成分であって、
ｉ）少なくとも一つのビタミンＢ１２複合体と、
ii）少なくとも一つのインターフェロン複合体と、
を備えた薬成分。
【請求項９】
多発性硬化症の治療のための薬成分において、
ｉ）ビタミンＢ１２と、
ii）インターフェロン・ベータと、
を備えた薬成分。
【請求項１０】
Ｂ型肝炎の治療のための薬成分であって、
ｉ）ビタミンＢ１２と、
ii）インターフェロン・ベータと、
を備えた薬成分。
【請求項１１】
Ｃ型肝炎の治療のための薬成分であって、
ｉ）ビタミンＢ１２と、
ii）インターフェロン・ベータと、
を備えた薬成分。
【請求項１２】
多発性硬化症の治療のための薬成分において、
ｉ）ビタミンＢ１２と、
ii）インターフェロン・アルファと、
を備えた薬成分。
【請求項１３】
Ｂ型肝炎の治療のための薬成分であって、
ｉ）ビタミンＢ１２と、
ii）インターフェロン・アルファと、
を備えた薬成分。
【請求項１４】
Ｃ型肝炎の治療のための薬成分であって、
ｉ）ビタミンＢ１２と、
ii）インターフェロン・アルファと、
を備えた薬成分。
【請求項１５】
クレーム１ないし１４のいずれかに記載の薬成分において、
第１の複合体が第２の複合体に抱合されている、
ことを特徴とする薬成分。
【請求項１６】
ウイルス性、増殖性および炎症性の疾患からなるグループから選択された病気を治療するための方法であって、
クレーム１ないし１５のいずれかに記載された薬成分を患者に投与する工程を含んでいる、
ことを特徴とする方法。
【請求項１７】
多発性硬化症を治療するための方法であって、
クレーム１、４、５、９、１２、１５、１６のいずれかに記載された薬成分を患者に投与する工程を含んでいる、
ことを特徴とする方法。
【請求項１８】
Ｂ型肝炎を治療するための方法であって、
クレーム１、３、６、１０、１３、１５、１６のいずれかに記載された薬成分を患者に投与する工程を含んでいる、
ことを特徴とする方法。
【請求項１９】
Ｃ型肝炎を治療するための方法であって、
クレーム１、３、６、１１、１４、１５、１６のいずれかに記載された薬成分を患者に投与する工程を含んでいる、
ことを特徴とする方法。
【請求項２０】
ウイルス性、増殖性および炎症性の疾患からなるグループから選択された病気を治療するための方法であって、
ａ）少なくとも一つのビタミンＢ１２複合体と、
ｂ）少なくとも一つのインターフェロン複合体とを一緒にまたは別個に患者に投与する工程を含んでいる、
ことを特徴とする方法。
【請求項２１】
多発性硬化症を治療するための方法であって、
ａ）少なくとも一つのビタミンＢ１２複合体と、
ｂ）少なくとも一つのインターフェロン複合体とを一緒にまたは別個に患者に投与する工程を含んでいる、
ことを特徴とする方法。
【請求項２２】
多発性硬化症を治療するための方法であって、
ａ）ビタミンＢ１２と、
ｂ）インターフェロン・ベータとを一緒にまたは別個に患者に投与する工程を含んでいる、
ことを特徴とする方法。
【請求項２３】
クレーム１６ないし２１のいずれかに記載された方法において、
ビタミンＢ１２複合体の投与量が１０〜２５００ｍｇである、
ことを特徴とする方法。
【請求項２４】
クレーム２２に記載された方法において、
ビタミンＢ１２の投与量が１０〜２５００ｍｇである、
ことを特徴とする方法。
【請求項２５】
クレーム１６ないし２２のいずれかに記載された方法において、
インターフェロン複合体の投与量が、インターフェロン複合体を単独で使用するときの治療用投与量の範囲と等しくなっている、
ことを特徴とする方法。
【請求項２６】
クレーム１６ないし２２のいずれかに記載された方法において、
インターフェロン複合体の投与量が、インターフェロン複合体を単独で使用するときの治療用投与量よりも少なくなっている、
ことを特徴とする方法。
【請求項２７】
ウイルス性、増殖性または炎症性の疾患を治療するためのクレーム１ないし１５のいずれかに記載の複合体の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インターフェロン複合体と組み合わされたビタミンＢ１２複合体を用いて、ウイルス性、炎症性または増殖性の疾患の治療のための薬成分および使用方法を提供する。
【背景技術】
【０００２】
ウイルス性、炎症性および増殖性の疾患についての説明
著しい炎症性、ウイルス性および（または）増殖性の成分を有する疾患および障害は、広範囲に拡がって、世界中の何百万人の人々に影響を与える。炎症性、ウイルス性および（または）増殖性の疾患の例としては、多発性硬化症、糖尿病、再狭窄、癌、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ＨＩＶ／ＡＩＤＳおよび生殖器疣が挙げられる。これらの病気は、共通した病状を有しており、このため、関連したまたは共通の治療法がしばしば用いられている。
【０００３】
ウイルス性疾患
ウイルスは、該ウイルスに冒された細胞の重大な機能変性（しばしば細胞死に帰着する）を引き起こす強力な伝染性・病原性因子である。ウイルス性疾患における細胞障害が、ウイルスの増殖によりもたらされた直接的な損傷だけでなく、ウイルス感染により誘発された種々の免疫反応を含むということが一般に認識されている。ウイルス性疾患の結果は、感染ウイルス粒子の量、ウイルスの繁殖および蔓延のスピード、細胞機能への影響、細胞障害に対する宿主の二次的応答性、ならびに宿主の免疫防御および無指定防御（non-specific）のようないくつかのウイルス・宿主因子に依存している。一般に、ウイルス性疾患の影響は、急性および慢性の無症候性の感染と、種々の癌の誘発とを含んでいる。よく知られたウイルス性疾患の一例は、肝臓の急性または慢性の炎症に帰着して、肝細胞の癌につながることになるウイルス性肝炎感染である。現在までのところ、流行しているＡ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型およびＧ型肝炎ウイルスを含むいくつかのタイプの肝炎ウイルスが確認されている。たとえば、リバー・ファウンデーション・インターナショナルの算定では、Ｂ型肝炎またはＣ型肝炎で苦しんでいる人が世界中に５億２０００万人以上いるとされている。
【０００４】
炎症性疾患
炎症性疾患は、或るタイプの細胞およびメディエーターの流入によって特徴付けられる疾患および機能障害の類であって、これらの細胞やメディエーターの存在は、組織の障害や死をもたらし得るものである。炎症性疾患は、炎症性のカスケードとして知られるものの引き金となっている。炎症性のカスケードは、免疫反応の開始（triggering）、活性細胞によるケモカイン、サイトカインおよび毒素因子の解放、細胞表面接着分子のアップ・レギュレーション(up-regulation)、および細胞移動を含む複雑なプロセスである。典型的には、炎症は、外部物質およびバクテリアの侵入、ならびに物理的外傷、毒素および腫瘍形成に対する宿主の防御反応として発生する。内因性刺激による自己免疫反応もまた、炎症性反応を引き起こし得る。
【０００５】
炎症性疾患の一例は、多発性硬化症（ＭＳ：multiple sclerosis）である。ＭＳは、人間の中枢神経システムにおいて神経の電気信号電導性を低下させることになる多因性の炎症性疾患である。米国における１００万人の３分の１に近い人々がＭＳを有していると考えられている。ＭＳは、中枢神経システムの神経軸索を取り囲むミエリンの炎症および破壊に起因していると考えられている。この病気は、炎症性細胞の浸潤の増加、希突起神経膠細胞の損失、および増加したグリオーシス (gliosis)（星状神経膠細胞の肥大および増殖）によって、特徴付けられている（参考のため、1999年のAmitら；1999年のPoulyら；1993年のSteinmanら；1994年のMillerらを参照）。
【０００６】
増殖性疾患
癌は、もっともよく知られた増殖性疾患である。とくに、癌は、細胞の増殖、浸潤および転移を調整するキーとなる分子（key molecules）の突然変異から起こる病気を総体的に表す包括的な用語である。腫瘍細胞が転移できる能力は、遺伝子の過剰生産または突然変異を介した規制解除を含んでおり、この遺伝子は、細胞が元の組織から外部に浸潤して、接触の影響を受けることなく残存するとともに、免疫認識から逃れ、離れた場所にとどまって、新しい組織内の適切な場所に浸潤してそこで成長するのを許容する。腫瘍の開始、発達および転移に通常含まれている分子は、接着分子、成長因子受容体、細胞骨格の調整因子、細胞周期を調整する主幹スイッチ、増殖抑制体遺伝子、プロテアーゼおよび転写因子を含んでいる。多くの腫瘍の壊死誘引能力は、浸潤能力と最終的には転移能力に直接関係している。
【０００７】
ウイルス性、炎症性および増殖性疾患は共通した病状を共有している
ウイルス性、炎症性および増殖性疾患に共通したいくつかの分子の類および病状（disease processes）がある。これらは、接着分子、サイトカインおよびマトリックス・メタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）の高められた発現、増加した細胞増殖および細胞移動、増加した炎症性細胞の活性化および浸潤、増加した血管形成、増加した組織破壊および機能障害のマトリックス改変を含んでいる。したがって、これらの病気の治療のための複合体は、免疫システム、細胞増殖、細胞接着および細胞移動、ならびにサイトカインのレベル、活性またはウイルスの複製を変えることを意図している。
【０００８】
インターフェロン
インターフェロンは、ウイルス複製の抑制（抗ウイルス効果）、細胞増殖の抑制（抗増殖効果）、炎症の抑制（抗炎症効果）のような多面的効果を細胞に生じさせることができる多機能サイトカインである。インターフェロン、インターフェロン・アルファおよびインターフェロン・ベータに対するこうした細胞応答によって、インターフェロン、インターフェロン・アルファおよびインターフェロン・ベータが、多発性硬化症、Ｂ／Ｃ型肝炎および多くの癌のようなウイルス性、増殖性および炎症性疾患の治療において、臨床的に有用であることが分かってきている。インターフェロン治療はまた、その他の炎症性疾患、ウイルス性疾患および増殖性疾患の治療にとって潜在的な使用を有している。
【０００９】
副作用を減少させるために複合体を増強する必要性
インターフェロン複合体は、炎症性、ウイルス性および増殖性疾患を治療するのに使用され、あるいはこれらの疾患の治療に潜在的に用いられ得るが、これらの複合体は、好ましくない多くの副作用を有し、これらの副作用は投与量が多いときに悪化する。これらの副作用は、局部的な充血反応、インフルエンザ類似の症候群および鬱病を含み得る。このため、患者の中には、治療効果を得るのに必要な投与に耐えることができない者もいる。
【００１０】
また、多くの抗ウイルス性、抗炎症性および抗増殖性複合体は、炎症性、ウイルス性および増殖性疾患に対して、試験管内では見込みどおりの結果を示すが、生体内では非常に多量の投与量が必要とされる場合がある。このような服用量は、しばしば有毒であって、激しい副作用をともなう。したがって、このような治療法は、副作用がない状態で最大の効能を得るのに十分な量の複合体を使用することに制限がある。
【００１１】
このため、炎症性、ウイルス性または増殖性疾患の治療効果を上げるために、抗ウイルス性、抗増殖性または抗炎症性複合体と組み合わすことができる複合体が必要である。また、投与量を減らすことができるとともに、副作用を減らして効能を維持しまたは向上させるために投与回数を減らすことができる複合体が必要である。
【００１２】
たとえば、ＭＳの治療においてインターフェロン・ベータの効能を上げることができる複合体は、インターフェロン・ベータにより生じる副作用を減らして、ＭＳの患者内でインターフェロン・ベータに対する中和抗体（neutralizing antibodies）の出現を減少させつつ、インターフェロン・ベータの投与量および（または）投与回数を潜在的に減らすことになるだろう。
【００１３】
インターフェロン・ベータに対する中和抗体は、インターフェロン・ベータで治療されたＭＳ患者の約３分の１に発生し、インターフェロン・ベータの治療効能の損失と明らかに相関関係を有している（Deisenhammerら(1999)）。
【００１４】
また、これらの複合体は、現行のまたは潜在的な抗ウイルス性、抗増殖性または抗炎症性治療の効能を向上させるばかりでなく、これらの治療の使用をその他多くの炎症性、増殖性およびウイルス性疾患にまで広げるだろう。
【００１５】
多発性硬化症のような炎症性疾患の治療のために、インターフェロンと組み合わされて他の治療薬が試験されているという報告がある。しかしながら、これらの複合治療は、限られた効能しかなく、副作用を減少させることができなかった。たとえば、コパクソーン（copaxone）およびインターフェロン・アルファによる複合治療は、ＥＡＥ処理のマウスにおける治療ポイント（clinical score）を上げなかった（Brodら(2000)）。抗増殖性薬であるノーバントロン（novantrone）は、インターフェロン・ベータとともに複合治療のために、最近臨床試験で試験されているが、ノーバントロンは、心臓に有毒な重大な副作用を有していることが分かっている。ノーバントロンは、その使用が制限されている。というのは、心臓病の危険が投与量の蓄積とともに増加することになるからである。食糧・薬品局（the Food and Drug Administration）によれば、ＭＳ患者は、ノーバントロンの８〜１２回分以上の量を投与されるべきではなく、２〜３年以上投与されるべきではないとされている。
【００１６】
したがって、最小の副作用で最大の効能を得るのに十分なレベルの抗ウイルス性、抗炎症性および抗増殖性複合体に帰着することになる、ウイルス性、炎症性または増殖性疾患のための治療を開発する必要がある。ウイルス性、炎症性または増殖性疾患の治療のために、抗ウイルス性、抗炎症性および抗増殖性の複合治療を開発する必要があり、組み合わされた要素は、副作用を最小限に抑えつつ、進んだ治療効果を有している。
【００１７】
ビタミンＢ１２
ビタミンＢ１２は、生体内で生体作用に種々の影響を与える、コバルトを含むビタミンＢ複合体である。ビタミンＢ１２は、良好に解明された類似体（アナローグ；analogue）および抱合体（conjugates）のファミリーである。ビタミンＢ１２複合体は、代謝作用に含まれていることが知られており、ビタミンＢ１２の欠乏は、不治の貧血や神経障害を引き起こすことが知られていた。これは、細胞代謝とともにＤＮＡおよび細胞領域の統合につながる代謝パスウエイに不可欠な共同因子である。生化学的証拠は、ビタミンＢ１２複合体が遺伝子の転写およびこれによるタンパク質の合成をアップ・レギュレートする点を示唆している（Watanabeら(1994)）。ビタミンＢ１２複合体が免疫システムの調節に重要な役割を果たしているということも示唆されてきた（Tamuraら(1999)および Sakaneら(1982)）。
【００１８】
具体的にいうと、ビタミンＢ１２複合体は、限定された抗ウイルス性（Weinbergら(1995, 1998)、Lottら(2001)、Poydock(1979)、Tsaoら(1990)）、抗増殖性（Nishizawaら(1997)、Shimizu(1987)、Poydockら(1975, 1985)）、および抗炎症性（米国特許第5,508,271号、米国特許第5,964,224号、米国特許第5,716,941号）をそれ自身具備しているとされてきた。ビタミンＢ１２はまた、特殊な炎症性疾患または増殖性疾患の治療のために、他の治療薬と組み合わされることも試されてきた（欧州特許第0835660、米国特許第6,096,737号）。しかしながら、現在までのところ、ウイルス性、炎症性または増殖性疾患の治療のために、インターフェロン複合体と組み合わされて、ビタミンＢ１２が進んだ治療効果を示す科学的証拠は何もなかった。
【００１９】
したがって、ウイルス性、炎症性または増殖性疾患の進んだ治療のために、インターフェロン複合体とともにビタミンＢ１２複合体を用いた複合治療を提供することが、本発明の目的である。
【特許文献１】
米国特許第5,508,271号
【特許文献２】
米国特許第5,964,224号
【特許文献３】
米国特許第5,716,941号
【特許文献４】
欧州特許第0835660号
【特許文献５】
米国特許第6,096,737号
【発明の開示】
【００２０】
本発明は、ウイルス性疾患、増殖性疾患、炎症性疾患、増殖性・炎症性疾患、増殖性・ウイルス性疾患、ウイルス性・炎症性疾患、および増殖性・ウイルス性・炎症性疾患からなるグループから選択された病気の治療のための薬成分を有している。この成分は、少なくとも一つのビタミンＢ１２複合体と、少なくとも一つのインターフェロン複合体とを備えている。
【００２１】
本発明の他の実施例は、癌のような増殖性疾患の治療のための薬成分であって、少なくとも一つのビタミンＢ１２複合体と、少なくとも一つのインターフェロン複合体とを備えている。
【００２２】
本発明のさらに他の実施例は、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ヘルペスまたはベスティキュラー（vesticular）口内炎のようなウイルス性疾患の治療のための薬成分を有している。この成分は、少なくとも一つのビタミンＢ１２複合体と、少なくとも一つのインターフェロン複合体とを備えている。
【００２３】
本発明のさらに他の実施例は、炎症性疾患の治療のための薬成分を有している。この成分は、少なくとも一つのビタミンＢ１２複合体と、少なくともインターフェロン複合体とを備えている。
【００２４】
本発明のさらに他の実施例は、星状膠細胞腫（astrocytoma）および神経膠腫（glioma）の治療のための薬成分であって、少なくとも一つのビタミンＢ１２複合体と、少なくとも一つのインターフェロン複合体とを備えている。
【００２５】
本発明の他の実施例は、多発性硬化症(ＭＳ)の治療のための薬成分を有している。この成分は、少なくとも一つのビタミンＢ１２複合体と、インターフェロン・アルファまたはインターフェロン・ベータのような少なくとも一つのインターフェロン複合体とを備えている。
【００２６】
本発明の他の特徴部分は、Ｂ型肝炎の治療のための薬成分であって、ビタミンＢ１２と、インターフェロン・アルファまたはインターフェロン・ベータとを有している。
【００２７】
本発明の他の特徴部分は、Ｃ型肝炎の治療のための薬成分であって、ビタミンＢ１２と、インターフェロン・アルファまたはインターフェロン・ベータとを有している。
【００２８】
本発明の他の特徴部分は、上述された特徴部分のいずれかによる薬成分であって、ビタミンＢ１２複合体が第２の複合体に抱合（conjugated）されている。
【００２９】
本発明の他の特徴部分は、ＭＳ、Ｂ型肝炎およびＣ型肝炎を含むウイルス性、増殖性または炎症性の疾患を治療するための方法であって、上述したいずれかの薬成分を患者に投与する工程を含んでいる。
【００３０】
本発明の他の特徴部分は、ＭＳ、Ｂ型肝炎およびＣ型肝炎を含むウイルス性、増殖性または炎症性疾患を治療するための方法であって、１日１回以上、毎日、週に１回以上、毎週、月に１回以上および毎月からなるグループから選択された頻度でビタミンＢ１２複合体を投与する工程と、１日１回以上、毎日、週に１回以上、毎週、月に１回以上および毎月からなるグループから選択された頻度で第２の複合体を投与する工程とを備えている。
【００３１】
本発明の他の特徴部分は、ＭＳ、Ｂ型肝炎およびＣ型肝炎を含むウイルス性、増殖性および炎症性疾患を治療するための方法であって、一つまたはそれ以上のビタミンＢ１２複合体と、一つまたはそれ以上のインターフェロン複合体とを一緒にまたは別個に患者に投与する工程を含んでいる。
【００３２】
ビタミンＢ１２複合体の投与量が１０〜２５００ｍｇであり、かつ（あるいは）インターフェロン複合体の投与量が、使用される治療用インターフェロンの投与量の範囲と類似しているかまたはこれよりも少なくなっているところの上記治療のいずれかが本発明の範囲に含まれている。
【００３３】
本発明の他の特徴部分は、ウイルス性、増殖性または炎症性疾患を治療するために、上述した複合体のいずれかを使用することである。
【００３４】
定義
本発明の説明をする前に、以下で用いられる用語の定義を最初にしておくことは、本発明の理解に有用である。
【００３５】
「ＣＦＡ」とは、完全フロイントアジュバント（complete Freunds’adjuvant）を意味する。
【００３６】
「ＤＭ２０」とは、イソプロテイン・プロテオリピドタンパク質である。これは、中枢神経システム（ＣＮＳ）における重要な内在性膜タンパク質である。ＤＭ２０は、通常、成長初期（生後の）の段階で表現されている。
【００３７】
「ＥＡＥ」または「実験的自己免疫性脳脊髄炎（experimental autoimmune encephalomyelitis）」とは、マウスモデル、とくに多発性硬化症のために免疫抑制されたマウスモデルを意味している。
【００３８】
「促進（増強）（enhanced, enhancing, enhances）」とは、たとえば、「促進された効果」のような文脈で用いられるが、促進された治療的効果を意味し、相乗効果を含んでいる。
【００３９】
「炎症性疾患(inflammatory diseases)」とは、以下のいずれか一つの事項によって特徴付けられる種々の病気および機能障害の類を意味している。すなわち、炎症反応の開始、炎症性のカスケードのいずれかのアップ・レギュレーション、炎症性のカスケードのいずれかのダウン・レギュレーション。炎症性疾患は、糖尿病、動脈硬化、炎症性大動脈瘤、再狭窄、虚血(阻血または駆血)/再潅流損傷、糸球体腎炎、類肉腫症癌（sacoidosis cancer）、再潅流損傷、リウマチ熱、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ(リウマチ様関節炎)、ライター症候群、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、股関節炎、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、骨盤内炎症性疾患、多発性硬化症、骨髄炎、癒着性関節炎、oligoarthritis、骨関節炎(骨関節症または変形性関節症)、関節周囲炎、多発性関節炎、乾癬、スチル病、滑膜炎、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化、骨粗鬆症、炎症性皮膚疾患および創傷治癒を含んでいる。単数形の「炎症性疾患(inflammatory disease)」は、炎症性疾患(inflammatory diseases)の類から選択されたいずれか一つまたはそれ以上の病気または機能障害を含むとともに、病気の状態の一要素が炎症性疾患の類から選択された一つの病気または機能障害を含んでいるところの複合されたいずれかの病状を含んでいる。
【００４０】
「インターフェロン複合体（interferon compounds）」とは、インターフェロン・アルファ、インターフェロン・アルファ類似体（analogues）、インターフェロン・アルファ誘導体、インターフェロン・アルファ抱合体（conjugates）、インターフェロン・ベータ、インターフェロン・ベータ類似体、インターフェロン・ベータ誘導体、インターフェロン・ベータ抱合体、およびこれらの組合わせを含んでいる。インターフェロン・アルファ遺伝子およびインターフェロン・ベータ遺伝子は、インターフェロン・ベータ類似体を生産するために、たとえば、ヒトの組換えシステインが使い尽くされた、またはシステインが置き換えられた類似体のようなオリゴヌクレオチド特異的突然変異誘発によって変化させられてもよい。さらに、一つ以上のアミノ酸のアイデンティティーまたは位置は、標的突然変異誘発によって変更されていてもよい。タンパク質の第１アミノ酸配列は、グリコシレーションによって、あるいは脂質、リン酸およびアセチルグループのようなその他の補助的な分子によって増強されていてもよい。さらに、チェイン内の個々のアミノ酸残基は、酸化、還元、またはその他の誘導的手段(derivatization)によって、変更されていてもよい。インターフェロン・アルファまたはインターフェロン・ベータ・タンパク質は、活性を保持する断片を獲得するために切断されていてもよい。タンパク質全体またはその断片は、免疫グロブリンおよびその他のサイトカインのようなタンパク質またはその他のペプチドと融合される。インターフェロン・アルファ抱合体およびインターフェロン・ベータ抱合体は、たとえば、ポリアルキレングリコール部分を含む、自然界に存在しないポリマーに結合されたインターフェロン・ベータからなる組成を表している。好ましいインターフェロン複合体は、ロフェロン(R)、イントロン(R)、アルフェロン(R)、インファゲン(R)、オムニフェロン(R)、アルファコン-１、インターフェロン・アルファ、インターフェロン・アルファ類似体、ペグインターフェロン・アルファ、重合インターフェロン・アルファ、二量化インターフェロン・アルファ、保因者に抱合されたインターフェロン・アルファ、経口吸入剤としてのインターフェロン・アルファ、注入可能な成分としてのインターフェロン・アルファ、局所の組成としてのインターフェロン・アルファ、ロフェロン(R)類似体、イントロン(R)類似体、アルフェロン(R)類似体、およびインファゲン(R)類似体、オムニフェロン(R)類似体、アルファコン-１類似体、インターフェロン・ベータ、アボネックスTM、ベータセロンTM、ベータフェロンTM、レビフTM、インターフェロン・ベータ類似体、ペグインターフェロン・ベータ、重合インターフェロン・ベータ、二量化インターフェロン・ベータ、保因者に抱合されたインターフェロン・ベータ、経口吸入剤としてのインターフェロン・ベータ、注入可能な成分としてのインターフェロン・ベータ、局所の組成としてのインターフェロン・ベータ、アボネックスTM類似体、ベータセロンTM、ベータフェロンTM類似体、レビフTM類似体を含んでいる。あるいは、インターフェロン・アルファまたはインターフェロン・ベータの引き起こす、あるいはインターフェロン・アルファまたはインターフェロン・ベータの作用を模��する因子についても採用するようにしてもよい。単数形の「インターフェロン複合体（interferon compound）」は、インターフェロン複合体（interferon compounds）の類からのいずれか一つまたはそれ以上の複合体を意味している。
【００４１】
「ＭＢＰ」とは、ミエリン塩基性タンパク質（myelin basic protein）を意味している。
【００４２】
「擬似ペプチド（mimetic peptide）」とは、ホルモン、サイトカイン、酵素基質、ウイルス、またはその他のバイオ分子における能動抗原決定基（active determinants）を生物学的に模倣するとともに、ナチュラルリガンドの生理的活性を賦活し、拮抗し、あるいは調節するペプチドのことである。
【００４３】
「ＮＤ４  マウスモデル」とは、ＤＭ２０の多数のコピーを用いて形質転換することにより得られた、多発性硬化症のためのトランスジェニックマウスモデルを意味しており、多発性硬化症のための遺伝マウスモデルのことである。
【００４４】
「ＰＢＳ」または「リン酸緩衝化生理食塩水（phosphate buffer saline）」とは、何ら生物学的効果または治療効果を有していないために負の調節（negative control）として機能する注入可能な溶液を意味している。
【００４５】
「ＰＬＰ」とは、イソプロテイン・プロテオリピドタンパク質を意味している。ＰＬＰは、成人において主流になっている。
【００４６】
「増殖性疾患（proliferative diseases）」とは、制御の欠如によって特徴付けられる、あるいは制御がうまくできていない細胞分裂または細胞増殖によって特徴付けられる種々の病気および機能障害の類を意味している。増殖性疾患は、肛門がん、胆管がん、結腸がん、食道がん、胆嚢がん、膵がん、小腸がん、胃がん、骨肉腫、卵巣上皮がん、妊娠性栄養膜腫瘍、子宮肉腫、膣がん、外陰がん、卵巣胚細胞腫瘍、軟組織肉腫、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、小細胞肺がん、悪性中皮腫、悪性胸腺腫、下咽頭がん、喉頭がん、鼻咽頭がん、口咽頭がん、上皮小体がん、唾液腺がん、脳腫瘍、膠腫(グリオーマ)、小脳星細胞腫、大脳星細胞腫、上衣腫、髄芽腫、副腎皮質がん、下垂体腫瘍、島細胞がん、膀胱がん、腎臓がん、陰茎がん、ウィルムス腫瘍(腎芽細胞腫)、エイズ関連リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、ユーイング肉腫、慢性骨髄性白血病、幼年性血管腫、菌状息肉症、毛髪様（毛様）細胞白血病、カポジ肉腫(特発性多発性出血性肉腫)、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、基底細胞がん、悪性黒色腫、大腸がん、非小細胞肺がん、膵がん、腎細胞がん、神経芽細胞腫、乳がん、子宮頚がん、肝がん、肉腫、甲状腺がん、子宮内膜がん、子宮がん、精巣（睾丸）がん、網膜芽（細胞）腫、口腔がん、直腸がん、前立腺がん、再狭窄、動脈硬化、増殖性糖尿病網膜症を含んでいる。単数形の「増殖性疾患（proliferative disease）」は、複数形の増殖性疾患（proliferative diseases）の類から選択されたいずれか一つまたはそれ以上の病気を含むとともに、病状の一部が複数形の増殖性疾患（proliferative diseases）の類から選択された一つの病気を含むところの複合された任意の病状を含んでいる。
【００４７】
「ＰＴＸ」または「百日咳毒素（pertussis toxin）」とは、百日咳を引き起こす有機体である百日咳菌の有毒な菌株により産出される主要なタンパク質毒素を意味している。ＰＴＸは、ＥＡＥ（実験的アレルギー性脳脊髄炎）を含む種々の自己免疫疾患を引き出すのに用いられるマクロファージを特発（primes）する強力な補助的アジュバントである。
【００４８】
「ＳＪＬ／Ｊ」とは、マウスモデルのことである。とくに、メスのＳＪＬ／Ｊマウスは、自己免疫疾患の発症に対する罹患性が増加した。ＳＪＬ／Ｊトランスジェニックマウスの菌株は、ＥＡＥの誘導に対して罹患しやすい（その他の多くのマウスの菌株よりもＥＡＥの発症に対して罹患しやすい）。このマウスにおける自己免疫と同様に腫瘍の発症は、免疫応答性の効果的な増幅に起因している。
【００４９】
「相乗（synergistic）」とは、抗炎症性、抗増殖性および（または）抗ウイルス性複合体とビタミンＢ１２との複合治療を用いることにより、これらの治療用複合体のいずれかを単独で使用した場合よりも、より大きな抗炎症性、抗増殖性および（または）抗ウイルス性効果が生じることを意味している。このような相乗効果は、類似したまたは異なる機構あるいは作用経路を通じて働く。相乗効果を用いた複合治療の一つの利点は、単独で投与されるいずれかの複合体による効果の追加から期待されるよりもより大きな治療効果のために、標準的な投薬量を用いることができるということである。あるいは、よりよい治療効果を得るために、治療用複合体の投与量または投与回数を減少させてもよいということである。
【００５０】
「ウイルス性疾患（viral diseases）」とは、ウイルスによって引き起こされる、またはウイルスによって引き起こされると考えられている種々の病気および機能障害の類を意味している。ウイルス性疾患の類は、生殖器疣（ＨＰＶ）、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ、ヘルペス、インフルエンザ、はしか、ポリオ、水疱瘡、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｄ型肝炎、Ｅ型肝炎、Ｇ型肝炎、髄膜炎、ベスティキュラー（vesticular）口内炎ウイルス感染およびデング熱を含んでいる。単数形の「ウイルス性疾患（viral disease）」は、複数形のウイルス性疾患（viral diseases）の類から選択されたいずれか一つまたはそれ以上の病気を含んでおり、病状の一部がウイルス性疾患（viral diseases）の類から選択された病気を含んでいるところのいずれかの複合症状を有している。
【００５１】
「ビタミンＢ１２複合体（vitamin B12 compounds）」は、ビタミンＢ１２と、その類似体、誘導体または抱合体とを含む複合体の類である。ビタミンＢ１２複合体の類は、シアノコバラミン（CN-Cbl）、アクアコバラミン、アデノシルコバラミン、メチルコバラミン、ヒドロキシコバラミン（ＨＣ）、シアノコバラミン・カルバナリド、５-o-メチルベンジルコバルミン［(5-OmeB-za)CN-Cbl］を含むとともに、デスジメチル、モノエチラミド、および上述したすべてのメチラミド類似体を含んでいる。また、ビタミンＢ１２補酵素の如きコバマミドや５-デオキシデノシルコバラミンの種々の類似体および相同体（homologues）を含んでいる。その他の類似体は、クロロコバルミン、亜硫酸コバルミン、ニトロコバラミン、チオシアンコバラミン、および5,6-ジクロロベンズイミダゾール、5-ヒドロキシベンズイミダゾール、トリメチルベンズイミダゾールの如きベンズイミダゾール誘導体を含むとともに、アデノシルシアンコバラミン［(Ade)CN-Cbl］、コバラミン・ラクトン、コバラミン・ラクタム、アニリド、エチルアミド、モノカルボン酸、ジカルボン酸、ビタミンＢ１２誘導体またはその類似体を含んでいる。ビタミンＢ１２の好ましい誘導体は、モノカルボン酸、ジカルボン酸およびトリカルボン酸の誘導体、またはビタミンＢ１２のプロプリオナミド誘導体である。また、複合体は、これらの類似体のポリマーを含み、または他の分子に抱合されまたは被嚢されたビタミンＢ１２を含んでいる。単数形の「ビタミンＢ１２複合体（vitamin B12 compound）」は、複数形のビタミンＢ１２複合体（vitamin B12 compounds）の類からのいずれか一つまたはそれ以上の複合体を意味している。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５２】
本発明は、ウイルス性、炎症性または増殖性疾患の治療における、ビタミンＢ１２複合体単独の場合の効果と、インターフェロン複合体と組み合わされた場合の効果とについて開示している。ビタミンＢ１２複合体は単独で効能を表すが、ウイルス性、炎症性および増殖性疾患の治療のために、インターフェロン複合体と組み合わされたとき、向上した効果または相乗効果をはっきりと示す。
【００５３】
薬成分
本発明は、抗ウイルス性、抗増殖性および抗炎症性の効果を向上させるための薬成分と、ウイルス性、増殖性および炎症性疾患のための薬成分を提供する。この薬成分は、ビタミンＢ１２複合体である第１の複合体と、インターフェロン複合体である第２の薬成分とを有している。
【００５４】
添加剤
本発明による薬成分は、好ましくは、薬学的に許容し得るキャリヤーを含んでおり、あるいは、複合体または混合物を、経口的に、鼻腔から、非経口的に、皮内に、筋肉内に、皮下に、直腸に、吸入により、頬からまたは経皮から、投与するのに適した添加剤を含んでいる。活性成分は、薬学的に許容し得る一般的な任意のキャリヤーまたは添加剤と混合されまたは調合されていてもよい。本発明による薬成分を準備して投与するために、任意の投与方法や、従来採用されてきた、活性剤に対して不活性である賦形剤やキャリヤーを用いてもよいということが、当該分野の当業者には理解されるだろう。このような方法、賦形剤およびキャリヤーの説明は、たとえば、「レミングトンの薬科学（Remington’s Pharmaceutical Science），第４版（1970）」に記述されている。本発明の原理に触れた当該分野の当業者は、何ら困難を経験することなく、適切な賦形剤、添加剤およびキャリヤーを決定し、あるいは、活性成分を調合して本発明の薬成分を構成するだろう。
【００５５】
本発明による成分はまた、分子、モノクローナル抗体を輸送するのに、あるいは、受容体細胞を優先的にターゲットする小胞やミセルのようなものを輸送するのに、抱合されていてもよい。
【００５６】
投与
本発明による成分は、記述された投薬量において、経口的に、鼻腔から、吸入により、腹腔から、皮下に、筋肉内に、経皮から、舌下に、または静脈内に投与される。経口投与については、薬成分は、たとえば、当該分野の当業者に知られた方法で準備された錠剤、トローチ、カプセル、エリキシル剤、懸濁液、シロップ、ウエファー、チューイングガムなどの形態で用意される。このように治療に有用な成分または調合における活性複合体の量は、適切な投与が得られるように定められる。
【００５７】
本発明の薬成分に含まれるべき活性剤の薬学的に効果的な量は、それぞれの場合において、いくつかの要因に基づいて決定される。たとえば、治療される患者のタイプ、体格および状態、意図された投与方法、意図された投与量を受け入れる患者の適応力、および病気の進行状態などである。
【００５８】
各インターフェロン複合体に適用される投与量は、病状発現前、臨床学上、および商業的に用いられている、当該分野の当業者に知られた投与量に類似している。これらの複合体とビタミンＢ１２との組合せがこれらの複合体の効能を増加させるので、濃度は、現在使用されている投与量よりも低くてもよい。確かに、ビタミンＢ１２は、効果的な治療を達成しかつインターフェロン複合体によるマイナスの影響を減らすために、インターフェロン複合体の投与量を減少させる目的で、インターフェロン複合体と組み合わされてよい。
【００５９】
インターフェロン・アルファおよびインターフェロン・ベータの投与量は、当該分野で知られている。たとえば、インターフェロン・ベータの投与量は、典型的には、３０〜２５０μgの範囲である。アボネックスTM、ベータセロンTMおよびレビフTMの間の主な違いは、与えられたインターフェロン・ベータの量、ならびに投薬の経路および頻度である。アボネックスTMは、一週間に一度、筋肉注射によって３０μgの量が投与されるのが好ましい。ベータセロンTMは、一日おきに、皮下注射によって２５０μgの量が投与されるのが好ましい。レビフTMは、一週間に三度、皮下注射によって４４μgの量が投与されるのが好ましい。いくつかの臨床的研究では、多発性硬化症の治療において、一日おきにまたは一週間に三度、組換えインターフェロン・アルファ-２ａの９ＭＩＵまでの投与量が用いられていた（Durelliら(1996)、 Nylandら(1996)）。Ｃ型肝炎の臨床的徴候のために、ノン・ペジレートおよびペジレート・インターフェロン・アルファ-２ａまたは２ｂの双方に一般に用いられていた投与量は、ノン・ペジレート形態のものについて一週間に三度、３〜１０ＭＩＵの範囲であり、毎週７０〜１８０μgである（Komanduri and Cotler(2002)）。毛髪様（毛様）細胞白血病のような増殖性疾患の治療において用いられるインターフェロンの投与量は、毎日または一週間に二度、１〜３６ＭＩＵの範囲である。
【００６０】
本発明におけるビタミンＢ１２複合体の好ましい投与量は、最高の改善効果が得られるように患者が要求する最大量である。ビタミンＢ１２の投与量の絶対的な上限量により調整されるこの最大量は、患者が耐えることができ、重い合併症を何ら併発することがない最大量である。ビタミンＢ１２複合体は、悪性貧血に対する注入可能治療として、長年の間利用されてきており、投与量は典型的には１０００μｃｇであった。ビタミンＢ１２複合体は、一般的な口内健康剤として長い歴史があり、この場合の投与量も「μｃｇ」の範囲であった。ビタミンＢ１２の複合体であるヒドロキソコバラミンは、Cyanokit(R)(米国特許第 5,834,448号)と呼ばれるシアン化合物解毒剤として利用可能である。Cyanokit(R)は、緊急目的で投与される、一度に５グラムというヒドロキソコバラミンの多量投与である。ビタミンＢ１２は少数の炎症性疾患の治療に使用されてきたが、インターフェロン複合体とともに組み合わされたビタミンＢ１２の高い投与量が進んだ治療効果を達成するであろうことを示した者はこれまでだれもいなかった。我々の実験では、マウスに１５ｍｇ/ｋｇの濃度のビタミンＢ１２を用いても、何ら毒性は発見されなかった。事前に行われた激しい毒性調査では、マウスおよびウサギに対して、それぞれ体重の１ｇ/ｋｇおよび１００ｍｇ/ｋｇ（Mizoule(1966)）までのビタミンＢ１２（ヒドロキソコバラミン）投与量に対して何ら毒性は観察されなかった。我々の発明におけるビタミンＢ１２複合体の投与量は、毎日１０ｍｇ〜２．５ｇの範囲である。
【００６１】
当該分野の当業者は、本発明にしたがって患者に投与されるべき、本発明による薬成分の種々の成分量が、上述した要因により決定されるということに気づくであろう。
【００６２】
方法および使用
本発明は、インターフェロン複合体により生じる抗ウイルス性、抗増殖性および抗炎症性効果を向上させまたは助長するための方法を提供するとともに、かなりの量のビタミンＢ１２複合体をインターフェロン複合体と組み合わせて患者に投与することによって、ウイルス性、増殖性または炎症性疾患を治療する方法を提供する。ビタミンＢ１２複合体は、患者のウイルス性、増殖性または炎症性疾患の治療において、インターフェロン複合体を単独で投与する場合と比較してインターフェロン複合体の効能を高めるために、異なる量および経路の投薬計画の下で、同時に、別個に、またはインターフェロン複合体と組み合わされて投与してもよい。
【００６３】
治療の第１の方法は、ビタミンＢ１２とインターフェロン複合体の双方を含む薬成分を投与することである。治療の他の方法は、ビタミンＢ１２複合体を含む薬成分を投与する工程に続いて、インターフェロン複合体を含む第２の薬成分を投与する工程を含んでいる。また、ビタミンＢ１２複合体の投与が、インターフェロン複合体の投与の後に続いていてもよい。さらに、薬成分の投与が別個にまたは同時に行われていてもよい。
【００６４】
以下は、受け入れ可能な投薬計画の例である。
１．抗ウイルス性、抗増殖性および抗炎症性疾患の効果的な治療のために、インターフェロン複合体と組み合わされたビタミンＢ１２複合体の混合物を１日１回以上、毎日、週に１回以上、毎週、月に１回以上または毎月投与。
２．抗ウイルス性、抗増殖性および抗炎症性疾患の効果的な治療のために、インターフェロン複合体と同時にビタミンＢ１２複合体の混合物を１日１回以上、毎日、週に１回以上、毎週、月に１回以上または毎月投与。
３．インターフェロン複合体を用いて１日１回以上、毎日、週に１回以上、毎週、月に１回以上または毎月治療するとともに、ビタミンＢ１２複合体を１日１回以上、毎日、週に１回以上、毎週、月に１回以上または毎月別個に投与。
４．インターフェロン複合体とビタミンＢ１２複合体との混合物を１日１回以上、毎日、週に１回以上、毎週、月に１回以上または毎月投与するとともに、ビタミンＢ１２複合体を１日１回以上、毎日、週に１回以上、毎週、月に１回以上または毎月補助的に投与。
【００６５】
当該分野の当業者は、本発明中ではっきりと述べた病状がこれに限定する意図ではないことをすぐに理解するだろう。むしろ、本発明による複合体は、炎症性、増殖性またはウイルス性反応を特徴付ける任意の疾患を治療するのに用いられてもよい。
【００６６】
実験例
以下の実験例は、本発明の実施例の代表例である。
（Ａ）ビタミンＢ１２複合体を用いたインターフェロンベースの複合治療の抗炎症性効果を示す例
例１：ＮＤ４マウスモデルにおいて、ビタミンＢ１２、インターフェロン・ベータ、およびインターフェロン・ベータを含むビタミンＢ１２の組合せの効果
＜説明＞
インターフェロンまたはビタミンＢ１２が単独で用いられて治療を行った場合と比較して、ビタミンＢ１２およびインターフェロンの組合せがこのような炎症性疾患の治療に用いられた場合の相乗効果を実証するために、ビタミンＢ１２およびインターフェロン・ベータが脱髄トランスジェニックマウスモデルに用いられた。
【００６７】
＜実験のプロトコル＞
マウスが生後約３ヶ月の若い生体において徴候を示すところの、緩やかな進行性の脱髄トランスジェニックマウスモデルとして、ＮＤ４モデルが使用された。このモデルにおいては、症状の激しさが最大約６ヶ月まで増加し、約８〜９ヶ月で瀕死状態となった。評価された症状には、一般的な震え、発作、頭部の痙攣、下肢および尾の震え、足のふらつきおよび尾の弛緩が含まれていた。各症状に対して、０（無し）から４（常時かつ制御不能の動き有り）までのスケールが用いられた。
【００６８】
１グループごとに４匹のマウスが、１５ｍｇ/ｋｇの投与量のビタミンＢ１２（シアノコバラミン）のみを用いて治療されるとともに、週に一度、インターフェロン・ベータ１ａ（レビフTM）と組み合わされた。インターフェロン・ベータ１ａは、単独で投与されるとともに、ビタミンＢ１２と組み合わされて３週間ごとに５０００ＩＵの投与量のインターフェロン・ベータ１ａが投与された。すべての治療は、脱髄疾患の症状が明らかとなる生後３ヶ月の月齢にマウスが到達したときに開始された。治療は、マウスが犠牲となったときに、停止された。
【００６９】
＜結果および結論＞
インターフェロン・ベータまたはビタミンＢ１２を用いたＮＤ４マウスの治療は、炎症性疾患であるＭＳの症状の軽減を示したが（図１参照）、インターフェロン・ベータおよびビタミンＢ１２の複合治療は、インターフェロン・ベータまたはビタミンＢ１２単独による治療よりも、炎症性疾患の症状を軽減させる相乗効果を示した。
【００７０】
例２：ＥＡＥマウスモデルにおいて、ビタミンＢ１２、インターフェロン・ベータ、ビタミンＢ１２およびインターフェロン・ベータの組合せの効果
＜説明＞
インターフェロンまたはビタミンＢ１２のいずれかを単独で用いて治療を行なった場合と比較して、ビタミンＢ１２およびインターフェロンの組合せが炎症性疾患の治療に用いられた場合に向上した効果を実証するために、ビタミンＢ１２およびインターフェロン・ベータが自己免疫疾患のＥＡＥモデルに用いられた。
【００７１】
＜実験のプロトコル＞
実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）が、生後７〜８週間のメスのＳＪＬマウスに誘発された。各マウスには、第１日目に、総量１００μl中に２００ｎｇの百日咳毒素（ＰＴ）が尾に静脈注射された。４８時間後、２００ｎｇのＰＴが再び投与された。尾の静脈注射は、３０．５ゲージの針を用いて行なわれた。ＰＴ注射に続いて、ＭＢＰ/ＣＦＡ（Becton Dickinson）のエマルション注射が一度行なわれた。各マウスには、５０μlの完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）で乳化された２００μg/５０μlのＭＢＰが２７．５ゲージの針を用いて尾の付け根に皮下注射された。注入量の総量は１００μlであった。マウスは最初の注射後、毎日観察され、病気の徴候が記録された。これらの徴候には、不安定な足取り、震え、尾の垂れ、体重低下などが含まれた。免疫感作（immunization）に続いて第７日目から１日おきに臨床ポイントが評価された。マウスは、１１日間毎日治療された。
【００７２】
１グループごとに４匹のマウスが、１０ｍｇ/ｋｇの投与量のビタミンＢ１２（シアノコバラミン）のみを用いて治療されるとともに、毎日インターフェロン・ベータ１ａ（レビフTM）と組み合わされた。インターフェロン・ベータ１ａは、単独で投与されるとともに、毎日５０００ＩＵの投与量でビタミンＢ１２と組み合わされた。ビタミンＢ１２およびインターフェロン・ベータは、最初の免疫感作の日に始まって別個の注射で投与された。治療は、マウスが犠牲となったときに、停止された。マウスは、免疫感作後、ＥＡＥの臨床的徴候のために、第７日目から毎日観察されて、０〜５のスケールで記録された。０ポイントは徴候がないことを表し、５ポイントは瀕死のマウスに与えられた。
【００７３】
＜結果および結論＞
インターフェロン・ベータのみを用いたＥＡＥマウスの治療は、炎症性疾患の症状の軽減を示したが（図２参照）、インターフェロン・ベータおよびビタミンＢ１２の複合治療は、インターフェロン・ベータおよびビタミンＢ１２の組合せがインターフェロン・ベータの抗炎症性作用を向上させるのに効果的であったことを示しており、炎症性疾患の症状を軽減させるのにより効果的であった。
【００７４】
例３：ビタミンＢ１２の相乗効果に対するインターフェロン濃度の影響
＜説明＞
濃度を変化させたインターフェロン・ベータおよびビタミンＢ１２（シアノコバラミン）が、ビタミンＢ１２の相乗効果に対するインターフェロンの濃度の影響を実証するために、上述のＮＤ４トランスジェニックモデルに用いられた。
【００７５】
＜実験のプロトコル＞
ＮＤ４マウスは、実験の期間中、（ａ）治療を受けていない、あるいは、１週間に３度、（ｂ）インターフェロン・ベータ１a（レビフTM）のみ（５０００ＩＵ）で治療、（ｃ）１０００ＩＵのインターフェロン・ベータ１ａおよびビタミンＢ１２（１５ｍｇ/ｋｇ）で治療、（ｄ）２５００ユニットのインターフェロン・ベータ１ａおよびビタミンＢ１２（１５ｍｇ/ｋｇ）で治療、または（ｅ）５０００ＩＵのインターフェロン・ベータ１ａおよびビタミンＢ１２（１５ｍｇ/ｋｇ）で治療、のいずれかであった。治療は、マウスが生後３ヶ月の時に始められ、１１週間続けられた。マウスは、病状について１週間に２度評価されるとともに、臨床ポイントが週間ベースで平均された。実験の詳細については、例１を参照のこと。
【００７６】
＜結果および結論＞
実験の結果は、インターフェロン・ベータの濃度が５０００ＩＵのときに臨床ポイントが著しく減少しており、複合治療の効果がインターフェロン・ベータの濃度に左右されるということを示した。このため、ビタミンＢ１２およびインターフェロン・ベータを組み合わせて薬理学的作用を達成するには、低い値のインターフェロンが必要とされた（表１参照）。
【表１】
2005506957.tif 000002
【００７７】
（Ｂ）ビタミンＢ１２複合体を用いたインターフェロンベースの複合治療の抗増殖性効果を示す例
例４：試験管内で細胞増殖を抑制する際におけるビタミンＢ１２、インターフェロン、ならびにビタミンＢ１２およびインターフェロンの組合せの効果
＜説明＞
インターフェロンは、カポジ肉腫、黒色種、線維肉腫、およびグレードの進んだ星状膠腫のような増殖性疾患を治療するのに効果的であると報告されてきた治療薬であった。以下の実験は、ビタミンＢ１２が、星状膠細胞腫細胞系（astrocytoma cell lines）においてインターフェロンの抗増殖性効果を高めることができるかどうかを決定するために実行された。
【００７８】
＜実験のプロトコル＞
マウスの星状膠腫細胞は、９６ウエルのプレートに接種され、標準的な成長条件下で６０％の集合体に成長した。治療に先立って、細胞が洗浄されて、培養基が、（ａ）５００ＩＵ/ｍｌのインターフェロン・ベータのみ、（ｂ）２５μｇ/ｍｌのビタミンＢ１２（メチルコバラミン）のみ、または（ｃ）５００ＩＵ/ｍｌのインターフェロン・ベータおよび２５μｇ/ｍｌのビタミンＢ１２の組合せ、を含む培養基に取り替えられて、一晩中培養された。
【００７９】
CellTiter 96(R) AQUEOUS One Solution Cell Proliferation Assay は、増殖中の生育可能細胞の数を決定するための側色方法として用いられていた。細胞増殖分析は、少量のCellTiter 96(R) AQUEOUS One Solution Reagent を直接培養ウエルに加え、１〜４時間培養した後、９６ウエル・プレートリーダーを用いて４９０ｎｍでの吸光度を記録することによって行なわれた。４９０ｎｍの吸光度で測定されたホルマザンの量は、培養基中の生育細胞の数と正比例することが当該分野では知られている。
【００８０】
＜結果および結論＞
インターフェロン・ベータのみまたはビタミンＢ１２（メチリココバラミン）のみのいずれかによるマウス治療は、治療を受けていない細胞と比較して増殖性活性が減少した。その一方、抗増殖性活性は、細胞がビタミンＢ１２およびインターフェロン・ベータの組合せで治療されたときには（以下の表２参照）、ビタミンＢ１２単独またはインターフェロン・ベータ単独で治療されたときと比較して、著しく増加した。
【表２】
2005506957.tif 000003
【００８１】
例５：星状膠細胞グリオーシスに対するビタミンＢ１２、インターフェロン、ならびにビタミンＢ１２およびインターフェロンの組合せの効果
＜説明＞
星状膠細胞グリオーシスは、中枢神経システムにおいて星状膠細胞の反応性および増殖性の増加に関係しており、脳内の病巣の発達において大きな役割を果たしていると考えられている。とくに、星状膠細胞グリオーシスは、人間の脳の血行性転移の周囲で観察されており、反応性星状膠細胞のタンパク質マーカーであるＧＦＡＰ（グリア細胞繊維性酸性タンパク質）は、化学的に引き起こされたガンの早期発見用の医用マーカーとして用いられてきた。ＮＤ４およびＥＡＥのマウスモデルのいずれもが、星状膠細胞グリオーシスに対する複合治療の効果を示すために、以下において用いられた。ＮＤ４トランスジェニックマウスは、生後３ヶ月まで正常に成長し、その後、脱髄が進行した。原発性脱髄とともに、アストログリオーシスが、約３ヶ月の月齢で正常値の約２倍の値から成長段階で拡張性アストログリオーシスまで増加する。同様に、ＥＡＥ導入のマウスもまた、拡張性アストログリオーシスを示した。
【００８２】
（ａ）ＮＤ４モデル
＜実験のプロトコル＞
ＮＤ４マウスモデルは、例１においてすでに説明したように治療された。種々の治療の後、マウスは犠牲になった。その後、ＧＦＡＰ染色および計量のために、脳の部分が取り出された。脳の歯状回近傍における海馬領域は、ホルマリン液に固定され、パラフィンに埋め込まれて、５μｍの薄片にされた。アンチＧＦＡＰ抗体を用いた免疫組織化学が、ＧＦＡＰの染色のために用いられた。グリア細胞繊維性酸性タンパク質は、星状膠細胞（とくに反応性星状膠細胞）によって発現されるタンパク質であり、これらの細胞のマーカーとして使用された。
【００８３】
また、タンパク質の発現のより正確な値を提供するために、標準マウス、ＮＤ４で治療されていないマウス、およびＮＤ４で治療されたマウスの脳内のＧＦＡＰの定量化が行なわれた。脳のすべてのホモジェネートが、スロットブロットによりＧＦＡＰのために分析された。脳は、５０ｍＭのトリスＨＣＬ（ｐＨ７．６）、０．５ｍＭのＤＴＴ、１ｍＭのＥＤＴＡ、および０．４３ｍＭのＰＭＳＦを含む緩衝液内でホモジェナイズされた。ホモジェネートは、４℃において１１０００ｒｐｍで３０分間遠心分離機にかけられた。ペレットは、分離されて、１０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ７．５）、２ｍＭのＤＴＴ、６Ｍのカルバミド、および１ｍＭのＥＤＴＡを含む緩衝液内で再び懸濁された。検体は、真空下でスロットブロット装置（BioDot Biorad）に装填された。ブロットは、アンチＧＦＡＰ抗体と反応し、次に第２の抗体と反応した。ブロットは成長し、各バンドの相対量が定量化された。
【００８４】
＜結果および結論＞
治療されていないＮＤ４マウスにおいて、標準マウスと比べてＧＦＡＰ染色の著しい増加があり（図３参照）、拡張性星状膠細胞グリオーシスを示した。このような高いレベルのＧＦＡＰ染色は、インターフェロンで治療されたマウスでは減少した。インターフェロンでの治療は、活性化された繊維性の星状膠細胞の数をわずかに減少させるとともに、脳内ホモジェネートのＧＦＡＰ値を減少させた。インターフェロン・ベータおよびビタミンＢ１２による治療は、活性化された星状膠細胞の数およびＧＦＡＰ値を標準レベル近くまで抑制した（表３参照）。これらのデータは、インターフェロン・ベータのビタミンＢ１２との複合治療が相乗効果的に作用して星状膠細胞の増殖および活性化を抑制するということを明らかに示した。
【表３】
2005506957.tif 000004
【００８５】
（ｂ）ＥＡＥモデル
＜実験のプロトコル＞
ＥＡＥマウスモデルは、例２においてすでに説明したように治療された。種々の治療の後、マウスは犠牲になった。その後、ＧＦＡＰ染色および計量のために、脳の部分が取り出された。脳の歯状回近傍における海馬領域は、ホルマリン液に固定され、パラフィンに埋め込まれて、５μｍの薄片にされた。アンチＧＦＡＰ抗体を用いた免疫組織化学が、ＧＦＡＰの染色のために用いられた。グリア細胞繊維性酸性タンパク質は、星状膠細胞（とくに反応性星状膠細胞）によって発現されるタンパク質であり、これらの細胞のマーカーとして使用された。
【００８６】
また、タンパク質の発現のより正確な値を提供するために、標準マウス、ＥＡＥで治療されていないマウス、およびＥＡＥで治療されたマウスの脳内のＧＦＡＰの定量化が行なわれた。脳のすべてのホモジェネートが、スロットブロットによりＧＦＡＰのために分析された。脳は、５０ｍＭのトリスＨＣＬ（ｐＨ７．６）、０．５ｍＭのＤＴＴ、１ｍＭのＥＤＴＡ、および０．４３ｍＭのＰＭＳＦを含む緩衝液内でホモジェナイズされた。ホモジェネートは、４℃において１１０００ｒｐｍで３０分間遠心分離機にかけられた。ペレットは、分離されて、１０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ７．５）、２ｍＭのＤＴＴ、６Ｍのカルバミド、および１ｍＭのＥＤＴＡを含む緩衝液内で再び懸濁された。検体は、真空下でスロットブロット装置（BioDot Biorad）に装填された。ブロットは、アンチＧＦＡＰ抗体と反応し、次に第２の抗体と反応した。ブロットは成長し、各バンドの相対量が定量化された。
【００８７】
＜結果および結論＞
ビタミンＢ１２での治療は、ＧＦＡＰ値の低下に効果的ではなかったが、インターフェロン・ベータでの治療はＧＦＡＰの量を５０％まで減少させることができた。その一方、インターフェロン・ベータおよびビタミンＢ１２による治療は、治療グループの中でもっとも効果的であった。複合治療は、活性化された星状膠細胞のレベルおよびＧＦＡＰのレベルを標準レベル近くまで抑制した（表４参照）。これらのデータは、インターフェロン・ベータのビタミンＢ１２との複合治療が相乗効果的に作用して星状膠細胞の増殖および活性化を抑制するということを明らかに示した。
【表４】
2005506957.tif 000005
【００８８】
（Ｃ）ビタミンＢ１２とのインターフェロンベースの複合治療の抗ウイルス性効果を実証する例
例６： ヒトのＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）の治療に対してインターフェロン複合体のビタミンＢ１２複合体との促進効果を示す試験管内研究
＜説明＞
Hep G2.2.15は、ＨＢＶゲノムと安定してトランスフェクトされかつ細胞増殖培地内にＨＢＶビリオンを分泌し続けるHep G2細胞系であった。この細胞系は、ＨＢＶ感染に対して抗ウイルス性剤の作用を研究するのに広く用いられてきており、この研究においても、ＨＢＶ感染を治療する上でビタミンＢ１２複合体のインターフェロン複合体との促進効果を評価するのに用いられた。インターフェロンは、臨床でＢ型およびＣ型肝炎の双方を治療するのに用いられた。
【００８９】
＜実験のプロトコル＞
ＨＢＶゲノムと安定してトランスフェクトされる細胞形であるHep G2.2.15細胞が、抗生物質を含まない状態で、２または４％の最終濃度でウシ胎仔血清とともにＲＰＭＩ-１６４０内で培養された。細胞は、９６ウエルのプレートに2×104（細胞/ウエル）の密度で播種され、一晩生育された。次に、培地は廃棄されて、（種々の濃度の）ヒドロキソコバラミン（ビタミンＢ１２の一形態）のみを含む、または（種々の国際単位の）インターフェロン・ベータのみを含む、あるいは、投与量を変化させたヒドロキソコバラミン（ＨＣ）およびＨＣに対して投与量を種々に変化させたインターフェロン・ベータの混合物を含む１００μlの培養基で置き換えられた。各濃度に対して３組の試料が取り出された。細胞は、３７℃で９日間培養された。薬剤/培地は毎日交換された。９日目に、放出されたＨＢＶビリオンを含む培基が採取され、ＨＢＶ ＤＮＡを抽出するのに用いられた。
【００９０】
薬剤で処理されたHep G2.2.15の細胞培養培地からのＨＢＶ ＤＮＡは、製造者の指示にしたがって、QIAamp DNA ミニキットである血液・体液スピンカラムを用いて抽出された。簡潔に説明すると、１０μlのＱＩＡＧＥＮ プロテイナーゼ Ｋが１．５mlのエッペンドルフ管に加えられた。５０μlの細胞浮遊物および５０μlのＡＬ緩衝液が管に加えられた。試料は、５６℃の水浴で３時間培養された。培養の終期に、５０μlのエタノールが試料に加えられた。混合物は、QIAampスピンカラムに移送され、１４０００rpmで１時間遠心分離された。フィルターは廃棄された。次に、５０μlの緩衝液ＡＷ１が、カラムに加えられ、１４０００rpmで１分間遠心分離された。洗浄および再遠心分離に続いて、ＤＮＡが、５０μlの dＨ２Ｏ内に溶離された。
【００９１】
ＨＢＶ ＤＮＡは、Lightcycler 分析を用いたリアルタイムＰＣＲによって検出された。反応は、以下のものを含む２０μlの溶液中で行われた。すなわち、6.4/4.8μlの dＨ２Ｏ、２μl ２５ｍＭの ＭgＣl2、１μl １０μＭのセンスプライマー、１μl 1０μＭのアンチセンスプライマー、8/1.6μlのLightCycler プローブ（５μＭのフルオレセイン標識の）、0.8/1.6μlのLightCycler プローブ２（１０μＭの LC Red ６４０標識の）、２μlのLC FastStart DNA Master Hyb プローブ、および１μlのウラシルＤＮＡグリコシラーゼ（glycosylase）。
【００９２】
ＰＣＲ混合物は、ガラス管内に分取され、次に、５μl ＤＮＡのテンプレートがＰＣＲ混合物内に加えられた。ＨＢＶ プラスミド  ＤＮＡ（１×１０８，１×１０７，１×１０６，...，１×１０2，２５の複製）の範囲は、定量分析のための基準として用いられた。反復条件は表５に示されている。
【表５】
2005506957.tif 000006
【００９３】
試験複合体の抗ウイルス性効果は、端点としてＤＮＡ複製番号を用いて計算された。とくに、抗ウイルス性活性は、以下の式に基づいて計算された。
（抗ウイルス性効果）＝（Ｃcontrol-Ｃtest）/Ｃcontrol
ここで、Ｃcontrolは、制御ウエル内（薬剤なし）におけるＨＢＶ ＤＮＡの複写であり、Ｃtestは、一定濃度の試験複合体とともに試験ウエル内におけるＨＢＶ ＤＮＡの複写である。
【００９４】
向上したまたは相反する効果は、コンピュータソフトウエアのCalcuSyn（Biosoft, St Louis）を用いて、中間効果式（median effect equation（Chou およびTalalay, 1984））により、数学的に解析された。組合せ指数（ＣＩ：combination index）の範囲は、以下の表６に示されている。
【表６】
2005506957.tif 000007
【００９５】
＜結果および結論＞
【表７】
2005506957.tif 000008
【表８】
2005506957.tif 000009
【００９６】
ウイルス性活性は、細胞がインターフェロン・ベータで治療されたとき、減少したが、ビタミンＢ１２で治療されたときは、減少しなかった。ビタミンＢ１２のインターフェロン・ベータとの複合治療は、これらの複合体が単独で用いられたときと比較して、ウイルス活性を衰退させるのにより効果的であった。ビタミンＢ１２およびインターフェロンが組み合わされたとき、Ｂ型肝炎感染の治療に対して促進効果があった。より詳細は、表７を参照のこと。
【００９７】
とくに、ＨＢＶに対するインターフェロン・ベータ活性についての強い増強効果およびわずかな増強効果が、ＨＣについて、１０μg/mlのＨＣおよび１００ＩＵ/mlのインターフェロン・ベータよりも高濃度で調べられた。組合せ指数解析の結果に基づいて、インターフェロン・ベータのビタミンＢ１２との抗ウイルス性効果は、相乗的であった。結果は、上記表８に要約されている。
【００９８】
例７：単純ヘルペスウイルス・タイプ２（ＨＳＶ-２）およびベスティキュラー（vesticular）口内炎ウイルス（ＶＳＶ）に対してインターフェロン抗ウイルス性活性のビタミンＢ１２との促進効果を示す試験管内研究
＜説明＞
ＭＲＣ-５（ヒトの繊維芽細胞）は、ＨＳＶおよびＶＳＶに感染しやすい細胞系であり、ＶＳＶおよびＨＳＶ感染に対する抗ウイルス性剤の活性を研究するために広く使用されていた。この細胞系は、ＶＳＶおよびＨＳＶ感染の治療に対するビタミンＢ１２複合体のインターフェロン・アルファおよびインターフェロン・ベータとの促進効果を評価するために、当該研究において用いられた。
【００９９】
＜実験のプロトコル＞
ＣＰＥ(細胞変性効果)抑制分析が行われた。この分析は、ウイルスによるlysis遺伝子から細胞を保護する薬剤または物質の能力を測定する。簡潔に説明すると、９６ウエルプレート内の集密したＭＲＣ-５細胞は、種々の濃度のヒドロキソコバラミン（ＨＣ）のみ、インターフェロン・アルファのみ、またはインターフェロン・ベータのみ、あるいは、種々の投与量のＨＣおよびインターフェロン・アルファ（またはインターフェロン・ベータ）の組合せとともに培養された。ＨＣの試験濃度は、０，１，１０，１００，５００および１０００μg/mlであり、インターフェロン・アルファおよびインターフェロン・ベータの試験濃度は、０，５，１０，５０，１００および５００ＩＵ/mlであった。３組の試料が、９６ウエルプレートフォーマットで各濃度について試験された。ＡＴＣＣにより、ＭＲＣ-５細胞の培養基が推奨された（１．５g/Ｌの重炭酸ナトリウム、０．１ｍＭの非必須アミノ酸、１．０ｍＭのピルビン酸ナトリウム、および１０％のウシ胎仔血清を含むように調整されたアールのＢＳＳと２ｍＭのＬ-グルタミン酸とを有するイーグルの最少必須培地）。
【０１００】
一晩の培養の後、細胞は、３７℃で１時間、０．５pfu/cellのモイ（感染多重度）でＶＳＶに、または０．２pfu/cellのモイでＨＳＶ-２に感染した。ウイルス接種原の除去に続いて、感染細胞は、ＰＢＳで洗浄された。そして、感染細胞は、制御ウエル内のＣＰＥが１００％になるまで、上述したような、濃度の増加したまたは増加していない試験複合体を含む培地により３７℃で２〜３日間覆われた。ＣＰＥから保護された細胞は、ニュートラルレッド摂取法を用いて測定された。とくに、培養基は、ポンプによって、９６ウエルのプレート内の細胞から除去された。次に、細胞は、２００μlのＰＢＳで一度洗浄された。続いて、１００μlの０．０１％ニュートラルレッド（ＰＢＳ中の）が各ウエルに加えられ、３７℃で３０分間培養された。次に、染液が取り除かれて、細胞が各ウエルごとに２００μlのＰＢＳで２度洗浄された。染液は、５０％エタノール１００μl／ＰＢＳ内１％氷状酢酸を各ウエルに加えることによって抽出されるとともに、１２０〜１５０rpmでゆっくりと振とうさせつつ室温で１５分間培養された。５５０ｎｍでの吸光度は、ＥＬＩＳＡリーダーで読み取られた。
【０１０１】
抗ウイルス性効果は、以下の式に基づいて計算された。
（抗ウイルス性効果）＝（ＯＤTest-ＯＤ０）/（ＯＤcontrol-ＯＤ０）
ここで、ＯＤTestは、一定濃度の試験複合体とともに測定された吸光度であり、ＯＤ０は、薬剤濃度ゼロで測定された吸光度であり、ＯＤcontrolは、非感染細胞の吸光度である。
【０１０２】
助長する効果は、中間効果式（median effect equation(ChouおよびTalalay, 1984)）を用いて、コンピュータプログラムのCalcuSyn（Biosoft, St. Louis）により、数学的に解析された。得られた組合せ指数（ＣＩ：combination index）と相乗作用の程度との相関関係は、表６を参照のこと。
【０１０３】
＜結果および結論＞
（ａ）ＨＳＶ−２感染
ビタミンＢ１２のインターフェロン・アルファまたはインターフェロン・ベータとの複合治療は、これらの複合体が単独で用いられたときに比べて、ウイルス活性を弱体化するのにより効果的であった（表９参照）。ビタミンＢ１２、インターフェロンおよび抗ウイルス性剤が組み合わされたとき、単純ヘルペスウイルス感染の治療に対して促進効果があった。とくに、ＨＣおよびインターフェロン・アルファの濃度がそれぞれ１０μg/mlおよび１０ＩＵ/mlよりも高いときに、ＨＳＶ−２に対するインターフェロン・アルファ活性の助長効果がＨＣについて観察された。試験されたすべての濃度において、ＨＳＶ−２に対するインターフェロン・ベータ活性の強力な助長効果およびわずかな助長効果がＨＣについて観察された。組合せ指数解析の結果に基づいて、ビタミンＢ１２と組み合わされたインターフェロン・アルファまたはインターフェロン・ベータの抗ウイルス性効果は、相乗的であった（表１０参照）。
【表９】
2005506957.tif 000010
【表１０】
2005506957.tif 000011
【０１０４】
（ｂ）ＶＳＶ感染
抗ウイルス性活性（ＣＰＥの保護によってもたらされたような）は、細胞がビタミンＢ１２、インターフェロン・アルファまたはインターフェロン・ベータで治療されたときに、著しく増加した。ビタミンＢ１２のインターフェロン・アルファまたはインターフェロン・ベータとの複合治療は、これらの複合体が単独で用いられたときに比べて、ウイルス活性を弱体化するのにより効果的であった（表１１参照）。ビタミンＢ１２、インターフェロンおよび抗ウイルス性剤が組み合わされたとき、ベスティキュラー（vesticular）口内炎ウイルス感染の治療に対して促進効果があった。とくに、ＨＳＶに対するインターフェロン・ベータ活性の強力な助長効果が、試験されたすべての濃度においてＨＣについて観察されるとともに、ＨＳＶに対するインターフェロン・アルファ活性の強力な助長効果が、ＨＣおよびインターフェロン・アルファの濃度がそれぞれ１００μg/mlおよび５０ＩＵ/mlよりも高いときに、ＨＣについて観察された。組合せ指数解析の結果に基づいて、ビタミンＢ１２と組み合わされたインターフェロン・アルファまたはインターフェロン・ベータの抗ウイルス性効果は、相乗的であった（表１２参照）。
【表１１】
2005506957.tif 000012
【表１２】
2005506957.tif 000013
【０１０５】
＜例の要約＞
要約すると、これらの例は、インターフェロン複合体と協働したビタミンＢ１２複合体の複合治療が炎症性、増殖性および（または）ウイルス性疾患を治療するのに効果的であり、ビタミンＢ１２がこれらの疾患に対するインターフェロンの有効性を向上させるということを明らかに実証している。
【０１０６】
本発明は、好ましい実例とともに記述されてきたが、当該分野の当業者には明らかであるような変形例が構築されてもよい。このような変形例は、本発明の範囲内にあるとみなされるべきである。
【０１０７】
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【図面の簡単な説明】
【０１３１】
【図１】ＮＤ４マウスモデルにおいてビタミンＢ１２、インターフェロン・ベータ、並びにビタミンＢ１２およびインターフェロン・ベータの組合せの臨床ポイントに対する効果を示すグラフである。
【図２】ＥＡＥマウスモデルにおいてビタミンＢ１２、インターフェロン・ベータ、並びにビタミンＢ１２およびインターフェロン・ベータの組合せの臨床ポイントに対する効果を示すグラフである。
【図３】標準動物、ＮＤ４未治療動物、インターフェロン・ベータ治療のＮＤ４動物、並びにインターフェロン・ベータおよびビタミンＢ１２治療のＮＤ４動物からの脳のＧＦＡＰ染色を示す図である。
【図１】
2005506957.tif 000014
【図２】
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【図３】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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