(57)【要約】本発明は、アデノシンＡ1／Ａ2アゴニスト活性を有する化合物またはその医薬的に許容される塩の医薬有効量の投与を、それを必要とする患者に、再灌流の開始後10分未満以内の時点、再灌流時、および再灌流の10分またはそれより前に始めて、再灌流の開始後30分以上の期間継続することからなる、それを必要とする患者に心臓保護を提供する方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
アデノシンＡ1／Ａ2アゴニスト活性を有する化合物の医薬有効量を、それを必要とする患者に、再灌流の開始後10分未満以内の時間に始め、再灌流の開始後30分以上の期間継続して投与することからなるそれを必要とする患者に心臓保護を提供する方法。
【請求項２】
化合物の投与は再灌流の開始時に始め、再灌流の開始後30分以上の期間継続する請求項１記載の方法。
【請求項３】
アデノシンＡ1／Ａ2アゴニスト活性を有する化合物の医薬有効量の投与を、それを必要とする患者に、再灌流の開始10分またはそれより前の時点で始め、再灌流後30分以上の期間継続することからなる、それを必要とする患者に心臓保護を提供する方法。
【請求項４】
化合物の投与は再灌流の開始後70分以上の期間継続する請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
アデノシンＡ1／Ａ2アゴニスト活性を有する化合物の医薬有効量を、それを必要とする患者に、再灌流の開始後10分未満以内に始め、再灌流の開始後30分以上の期間継続して投与することからなる、それを必要とする患者における再灌流傷害に対する保護方法。
【請求項６】
化合物の投与は再灌流の開始時に始め、再灌流の開始後30分以上の期間継続する請求項５記載の方法。
【請求項７】
アデノシンＡ1／Ａ2アゴニスト活性を有する化合物の医薬有効量を、それを必要とする患者に、再灌流の開始10分またはそれより前に始め、再灌流の開始後30分以上の期間継続して投与することからなる、それを必要とする患者における再灌流傷害に対する保護方法。
【請求項８】
化合物の投与は再灌流の開始後70分以上の期間継続する請求項５〜７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
アデノシンＡ1／Ａ2アゴニスト活性を有する化合物の医薬有効量を、それを必要とする患者に、再灌流の開始後10分未満以内に始め、再灌流の開始後30分以上の期間継続して投与することからなる、それを必要とする患者の虚血傷害に対する保護方法。
【請求項１０】
化合物の投与は再灌流の開始時に始め、再灌流の開始後30分以上の期間継続する請求項９記載の方法。
【請求項１１】
アデノシンＡ1／Ａ2アゴニスト活性を有する化合物の医薬有効量を、それを必要とする患者に、再灌流の開始より10分またはそれ以上前に始め、再灌流の開始後30分以上の期間継続して投与することからなる、それを必要とする患者における虚血傷害に対する保護方法。
【請求項１２】
化合物の投与は再灌流の開始後70分以上の期間継続する請求項９〜１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
アデノシンＡ1／Ａ2アゴニスト活性を有する化合物の医薬有効量を、それを必要とする患者に、再灌流の開始後10分未満以内に始め、再灌流の開始後30分以上の期間継続して投与することからなる、心臓外科手術前、手術時または手術後のそれを必要とする患者に心臓保護を提供する方法。
【請求項１４】
化合物の投与は再灌流の開始時に始め、再灌流の開始後30分以上の期間継続することからなる請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
アデノシンＡ1／Ａ2アゴニスト活性を有する化合物の医薬有効量を、それを必要とする患者に、再灌流の開始10分またはそれより前に始め、再灌流の開始後30分以上の期間継続して投与することからなる、それを必要とする患者において、心臓外科手術前、手術時または手術後の心臓保護を提供する方法。
【請求項１６】
化合物の投与は再灌流の開始後70分以上の期間継続する請求項１３〜１５のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
アデノシンＡ1／Ａ2アゴニスト活性を有する化合物の医薬有効量を、それを必要とする患者に、再灌流の開始後10分未満の時点で始め、再灌流の開始後30分以上の期間継続して投与することからなる、それを必要とする患者に虚血発作前、発作時または発作後の心臓保護を提供する方法。
【請求項１８】
化合物の投与は再灌流の開始時に始め、再灌流の開始後30分以上の期間継続する請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
アデノシンＡ1／Ａ2アゴニスト活性を有する化合物の医薬有効量を、それを必要とする患者に、再灌流の開始前10分またはそれより前に始め、再灌流の開始後30分以上の期間継続して投与することからなる、それを必要とする患者に虚血発作前、発作時または発作後の心臓の保護を提供する方法。
【請求項２０】
化合物の投与は再灌流の開始後70分以上の期間継続する請求項１７〜１９のいずれかに記載の方法。
【請求項２１】
化合物は式
【化１】
2005504009.tif 000009
の化合物またはその医薬的に許容される塩である請求項１〜２０のいずれかに記載の方法。
【請求項２２】
化合物は医薬的に許容される塩として投与される請求項１〜２０のいずれかに記載の方法。
【請求項２３】
投与される化合物は、医薬的に許容される担体および化合物の医薬有効量からなる医薬組成物中に含有される請求項１〜２２のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アデノシンＡ1／Ａ2アゴニスト活性を有する化合物の医薬有効量を、それを必要とする患者に投与することからなる、心臓保護を提供する方法を目的とするものである。
【発明の開示】
【０００２】
本発明は、アデノシンＡ1／Ａ2アゴニスト活性を有する化合物の医薬有効量の投与を、それを必要とする患者に、再灌流の開始後10分未満以内の時点、再灌流時、および再灌流の10分またはそれ以上前に始めて、再灌流の開始後30分以上の期間継続することからなる、それを必要とする患者に心臓保護を提供する方法に関する。
【０００３】
上に使用したように、本発明の説明を通して用いられる以下の語はとくに他の指示がない限り、以下の意味を有するものとして理解すべきである。
「患者」の語には、ヒトおよび他の動物が包含される。
「有効量」の語は、所望の治療効果を生じるのに有効な、本発明の方法に使用されるＡ1／Ａ2アゴニスト活性を有する化合物の量を記載する。
「心臓保護」の語は、たとえば虚血発作前、発作時または発作後、再灌流時、心臓外科手術前、手術時または手術後における心筋傷害に対する保護または軽減を意味する。
「アデノシンＡ1／Ａ2アゴニスト」または「アデノシンＡ1／Ａ2アゴニスト活性を有する化合物」の語は、アデノシン受容体のＡ1およびＡ2両サブタイプに対するアゴニストである化合物、たとえばAMP 579を意味する。
【０００４】
「AMP 579」は [1S-[1α,2β,3β,4α(S*)]]-4-[7-[[3-クロロ-2-チエニル]メチル]プロピル]アミノ]-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル]-N-エチル-2,3-ジヒドロキシシクロペンタンカルボキシアミドであり、式：
【化１】
2005504009.tif 000002
で表される。
【０００５】
虚血／再灌流傷害に対するアデノシンＡ1／Ａ2受容体アゴニストAMP 579による処置のタイミングおよび継続の効果は、30分間の局部的虚血／３時間再灌流に付したウサギ心臓を用いてその部位（in situ）で検討した。AMP 579は再灌流の10分前から40分間継続してか、再灌流の開始時から70分間、または再灌流の10分後から70分間注入した。非処置の心臓では、36.4％±3.1％のリスク域が梗塞された。保護は再灌流時にAMP 579を開始した70分群でのみ観察された（13.0±1.9％, p＜0.05）。アデノシン150、300または400μg／kg／分を再灌流の10分前から始めて70分間注入した。保護は認められなかった。したがって保護のためには、再灌流の瞬間およびその後30分間以上、AMP 579が存在しなければならない。本発明者らはアデノシンによるAMP579の抗梗塞効果を再現することはできなかった。
【０００６】
それぞれＡ1およびＡ2a受容体サブタイプに対するKi＝５および56nMを有する新規なアデノシンＡ1／Ａ2受容体アゴニストAMP 579｛シクロペンタンカルボキサミド, 4-[4-[[(1R)-[(3-クロロ-2-チエニル)メチル]プロピル]アミノ]-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-7-イル]-N-エチル-2,3-ジヒドロキシ-, (1S,2R,3S,4R)-(9Cl)｝（Smits, G.J., McVey, M., Cox, B.F., Perrone, M.H., Clark, K.L., 1998, Cardioprotective effects of the novel adenosine A1／A2 receptor agonist AMP 579 in a porcine model of myocardial infarction. J Pharmacol Exp Ther 286, 611-618）（以下Smitsらと呼ぶ）は様々な動物種において、長期にわたる虚血および再灌流後の梗塞から心臓を保護することが証明されている（Smitsら; McVey, M.J., Smits, G.J., Cox, B.F., Kitzen, J.M., Clark, K.L., Perrone, M.H., 1999. Cardiovascular Pharmacology of the adenosine A1／A2-receptor agonist AMP 579: coronary hemodynamic and cardioprotective effects in the canine myocardium. J Cardiovasc Pharmacol 33, 703-710）（以下McVeyらと呼ぶ）；Budde, J.M., Velez, D.A., Zhao, Z.-Q., Clark, K.L., Morris, C.D., Muraki, S., Guyton, R.A., Vinten-Johansen J, 2000. Comparative study of AMP579 and adenosine in inhibition of neutrophil-mediated vascular and myocardial injury during 24h of reperfusion. Cardiovasc Res 47, 294-305（以下Buddeらと呼ぶ）。この物質の興味ある、臨床的に重要と思われる作用は、AMP 579 の投与を再灌流の実施直前に開始した場合でさえ、梗塞が制限されたことであった（Buddeら）。これらの結果は、AMP 579が急性心筋梗塞の整復（setting）における治療剤であり得ることを指示している。報告された研究では、AMP 579は再灌流前10分に開始して70分注入した。この実験室での前の研究では、保護に要求される用量が検討された（Xu, Z., Yang, X.-M., Cohen, M.V., Neumann, T., Heusch, G., Downey, J.M., 2000. Limitation of infarct size in rabbit hearts by the novel adenosine receptor agonist AMP 579 administered at reperfusion. J Mol Cell Cardiol 32, 2339-2347）（以下Xuらと呼ぶ）。本発明者らは、３μg／kg／分では保護を示したが１μg／kg／分では保護は認められないことを見出した。本研究においては、本発明者らは、AMP 579の保護におけるタイミングの必要を検討した。AMP 579の低血圧の副作用から、それは可能な限り短い間投与することが望ましい。さらに、本発明者らは、再灌流を起こしたのちに開始してもなお有効であるかどうかを知ることを望んだ。数名の研究者が、保護にはアデノシン受容体の活性化が関与すること（Smitsら；McVeyら；Xuら）を記録しているが、奇妙なことに、アデノシンの注入ではAMP 579の保護は再現されなかった（Buddeら）。アデノシンは臨床的使用のために容易に入手できることおよびそれは前の研究において梗塞のサイズを制限すると報告されていること（Norton, E.D., Jackson, E.K., Virmani, R., Forman, M.B., 1991. Effect of intravenous adenosine on myocardial reperfusion injury in a model with low myocardial collateral blood flow. Am Heart J 122, 1283-1291（以下Nortonらと呼ぶ）; Olafsson, B., Forman, M.B., Puett, D.W., Pou, A., Cates, C.U., Friesinger, G.C., Virmani, R., 1987. Reduction of reperfusion injury in the canine reperfusion by intracoronary adenosine: importance of the endothelium and the no-reflow phenomenon. Circulation. 76, 1135-1145（以下Olafssonらと呼ぶ）から、本発明者らはアデノシンが本モデルにおいてAMP 579の抗梗塞作用を再現できるか否かを試験した。
【０００７】
材料および方法
この研究は The Guide for the Care and Use of Laboratory Animals（National Academy Press, Washington, DC, 1996）に従って実施された。
【０００８】
外科的調製
オスおよびメスの両方のNew Zealand白色ウサギ、体重1.6〜2.5 kgをペントバルビタール（30 mg／kg iv）で麻酔し、気管開口術によって挿管し、正圧のレスピレーター（MD industries, Mobile, AL）を介して100％の酸素を送った。換気速度および１回換気量は生理学的範囲のpCO2およびpHを維持するように調整した。体温は38〜39℃に維持した。血圧のモニター用にカテーテルを左頚動脈に挿入した。他のカテーテルは薬物の注入のために右頚静脈に挿入した。第四肋骨のスペースに左開胸術を実施し、心膜を開いて心臓を露出させた。曲った先細の針に通した２−０絹縫合糸を、左冠状動脈突出枝周囲の心筋を通過させた。縫合糸の末端は、軟質ビニルチューブの小片を通過させてスネアを形成させた。スネアを引いて虚血を誘導し、ついでそれを、小さな止血鉗子でチューブをクランプして固定した。虚血はチアノーゼの出現によって確認した。スネアを緩めて再灌流を行い、それは心室表面上に観察される充血によって確認した。
【０００９】
３時間の再灌流後に、ウサギに過用量のペントバルビタールを投与し、心臓を胸部から速やかに摘出し、ラーゲンドルフ装置に載せて食塩水で灌流して血液を除去した。ついで、冠状動脈を再閉鎖し、0.1％の亜鉛／カドミウムサルファイド粒子（直径１〜10μm, Duke Scientific Corp, Palo Alto, CA）５mLを灌流液に注入し、蛍光のない組織領域として、リスク領域を識別した。心臓を秤量し、凍結し、2.5-mm厚のスライスに切断した。このスライスを、リン酸ナトリウム緩衝液中、37℃で20分間、１％の塩化トリフェニルテトラゾリウム（TTC）とインキュベートした。スライスを10％ホルマリンに浸漬して、染色（可視部）および非染色（壊死）組織の間のコントラストを増大させ、ついで正確に２mm離して置いたガラスプレートの間に圧縮した。リスクのある心筋はスライスを紫外光線で照らして同定した。梗塞されたリスク領域は透明なアセテートシート上にトレースし、処置を知らされていない研究者により面積計で定量された。この面積は面積にスライス厚を乗じて容量に変換した。梗塞のサイズはリスク領域の百分率として表す。
【００１０】
実験プロトコール
８群のウサギを30分間の局部的虚血に続いて３時間の再灌流に付した。対照群には薬物の処置は行わなかった。すべての群に、AMP 579を30μg／kg ivのボーラス注射として投与し、ついで３μg／kg／分の注入を行った。最初の２群のAMP 579群では、AMP 579の注入は再灌流の10分前に開始し、30（AMP 30min）または40（AMP 40min）分続けた。次の２群では、AMP 579は70分間注入したが、注入は再灌流とともに（AMP 70min, onset）または再灌流10分後（AMP 70 min, late）のいずれかに開始した。次の３群は再灌流の前10分に開始してアデノシンの静脈内注入を70分間受けたが、これはAMP 579が保護を示した本発明者の以前の研究における元のスケジュールであった（Xuら）。アデノシンの血漿半減期はAMP 579の場合よりもはるかに短いので、ボーラス投与は必要がなかった。アデノシンの血行動態作用は、注入開始後数分間で、再灌流の十分前にプラトウになった。これらのウサギは150 (Ado 150)、300 (Ado 300)、または400 (Ado 400)μg／kg／分のアデノシンを静脈内に投与された。
【００１１】
化学薬品
AMP 579はAventis Pharmaから入手し、梗塞には独立した作用を示さないジメチルスルホキシド（DMSO）の小容量に溶解した。DMSO溶液をついで食塩水に希釈した。DMSOの最終濃度は＜0.1％であった。アデノシンはSigmaから入手し、正常食塩水に溶解した。
【００１２】
統計
すべてのデータは平均±SEMとして表した。群間のベースライン血行動態と梗塞のサイズにおける差の試験には、一元ANOVAをScheffeのpost hoc検定と組み合わせて使用した。各群内実験時における血行動態の変化を検定するためにはANOVAを反復して用いた。0.05未満のｐ値を有意とみなした。
【００１３】
結果
ベースライン心拍数および平均動脈圧には８群の間で差はなかった（表１および２）。表1はAMP 579についての血行動態データを示す（平均±SEM）。血行動態は30分の虚血の最後に測定した。表1に使用した略号は次の意味を有する：AMP（30, 40min）＝AMP 579の投与を再灌流の10分前に開始し、それぞれ計30、40分投与；AMP（70min, late）＝AMP 579の投与を再灌流の10分後に開始し、70分間継続；AMP（70min, onset）＝AMP 579の投与を再灌流の実施時に開始し、70分持続；HR＝心拍数；MAP＝平均動脈圧；Rep＝再灌流。表２はアデノシンの血行動態データを示す。血行動態は30分の虚血の最後に測定した。略号は表1の場合と同じで、さらに、アデノシン150, 300, 400＝アデノシンそれぞれ150、300、400μg／kg／分注入を意味する。虚血はすべての群で動脈圧を低下させた。AMP 579はさらに、再灌流の実施前に開始した場合（AMP 30minおよびAMP 40min群）、緩和な血圧降下作用を生じた。アデノシンの最低用量（150μg／kg／分）はそれに匹敵する緩和な低血圧を生じたが、２つの高用量では有意に高度な低血圧を招来した。これは用量の更なる増加を排除するものである。
【００１４】
体重、心臓重量およびリスク領域のサイズには群間で有意差はなかった（表３および４）。表３はAMP 579についての梗塞サイズのデータを示す（平均±SEM, ｐ＜0.05 vs 対照）。表３における略号は表１の場合と同じである。さらに、ｎは各群におけるウサギの数である。表４はアデノシンについての梗塞サイズのデータである（平均±SEM）。表４における略号は表２および３の場合と同じである。対照心臓における梗塞サイズは36.4±3.1％であった。再灌流の前に投与した場合、AMP 579の30分も40分も梗塞のサイズを低下させず（それぞれ30.1±1.4および24.8±5.9％）、処置の持続が重要であることを指示した。70分群ではAMP 579は、再灌流の実施後すぐに注入した場合には保護を示さなかった（27.6±7.2％）が、再灌流の実施時に存在する場合はきわめて有効であった（13.0±1.9％, ｐ＜0.05 vs対照）。データはAMP 579が再灌流の最初の数分間に起こる一部の臨界的事象に対しては保護することを示しているが、それらはまた、再灌流の実施後30分以上、薬物の存在の持続が必要であることを指示している。
【００１５】
本発明者らは次に、アデノシンの注入を再灌流の実施前10分に開始して70分間投与した場合、AMP579 の保護を再現できるか否かを試験した。アデノシンを３段階の用量で試験したが、表５に示すようにいずれの用量も保護を生じなかった。表５は再灌流前10分に開始し100分間露出時のデータを示す。顕著な降圧が400μg／kg／分を越える用量の増大を阻止した。
【００１６】
考察
本研究では、AMP579は、再灌流の実施時に投与し、比較的長時間（70分）継続した場合にのみ有益な作用を示した。より短い処置（30および40分）では、再灌流の10分前に注入を開始しても保護は認められなかった。これらの結果は多少驚くべきことであった。AMP579の投与開始を再灌流後丁度10分まで遅らせると、保護は完全に消失した。本発明者らの最初の研究では、再灌流の前10分に開始し70分の注入で、ウサギの心臓は保護された（Xuら）。ウサギにおいては、副行血流は無視できることから、この研究では、再灌流前に虚血領域に有意な薬物が侵入したかは疑いがもたれる。にもかかわらず、本発明者らはAMP 579が虚血の最後10分間に起こる事象に対しその保護作用を発揮する可能性を払拭することはできなかった。本研究では、AMP 70min, onset群におけるAMP579のボーラス負荷の直後に冠状動脈のスネアを緩め、保護は以前の研究に見られたのとほぼ同じであった（12.3±1.0％, 前回, Xuらvs 13.0±1.9, 今回）。これは、AMP 579が再灌流の最初の数分間における一部の毒性事象に対し保護を示したと解釈することができるが、またさらに30分以上存在しなければならなかった。AMP 579の保護作用には、投与のタイミングと持続が重要なことが明らかである。
【００１７】
AMP 579は、再灌流前に投与した場合、虚血／再灌流後の心筋梗塞に対して心臓を保護することが証明されている（Smitsら；Buddeら）。本研究では、AMP 579は保護すべき再灌流の瞬間に存在しなければならない。その投与が再灌流後10分遅れると保護は完全に消失し、AMP 579は再灌流型傷害を消失させることが示唆される。ある場合には、再灌流の作用自体がある型の傷害を誘導することも提案された（Braunwald, E., Kloner, R.A., 1985. Myocardial reperfusion: a double-edged sword？ J Clin Invest 76, 1713-1719）。遊離ラジカルまたはカルシウムの大量流入がこの再灌流傷害のメディエーターとして様々に提案されている（Piper, H.M., Garcia-Dorado, D., Ovize, M., 1998. A fresh look at reperfusion injury. Cardiovasc Res 38, 291-300）が、いずれが梗塞に寄与するのかの直接的証明を明らかにすることは難しい。本発明者らは最近、AMP 579が再灌流に伴う痙縮の発症を著しく緩和することを見出した（Xu, Z., Downey, J.M., Cohen, M.V., 2001. AMP 579 reduces contracture and limits infarction in rabbit heart by activating adenosine A2 receptors, J Cardiovasc Phamacol 38, 474-481）（以下Xuら, IIと呼ぶ）。これは再灌流時のカルシウムの流入を低下させるという仮説と矛盾しないものである。また同時に本発明者らは、ニワトリの心筋細胞モデルにおいて、AMP 579が再灌流時に認められる遊離ラジカルのバーストを抑制できることを見出した（Xu, Z., Cohen, M.V., Downey, J.M., Vanden Hoek, T.L., Yao, Z., 2001a. Attenuation of oxidant stress during reoxygenation by AMP 579 in cardiomyocytes. Am J Physiol 281, H2585-H2589）（以下Xuら IIIと呼ぶ）。これらの結果は、AMP 579が虚血傷害から心臓を保護するのみでなく、再灌流傷害自体からも保護することを強く示唆するものである。しかしながら、その保護が再灌流の最初の10分間に起こる事象に対するものであるならば、なぜ薬物が再灌流後さらに30分も存在しなければならないのか明らかではない。
【００１８】
幾つかの報告はAMP 579の保護がアデノシン受容体ブロッカーで遮断できることを指示している（Smitsら；McVeyら；Xuら）。さらに、保護作用にはＡ2受容体サブタイプが関与しているように思われる（Smitsら；XuらII）。しかしながら最近の一研究では、アデノシンはAMP 579の保護を再現することができなかった（Buddeら）。再灌流の直前に開始したアデノシンは梗塞サイズを制限するという報告が数報あった（Nortonら；Olafssonら）。しかし、それらの結果は、他の研究者によって再現されなかった（Goto, M., Miura, T., Iliodoromitis. F,K., O'Leary, E.L., Ishimoto, R., Yellon, D.M., Iimura, O., 1991. Adenosine infusion during early reperfusion failed to limit myocardial infarct size in a collateral deficient species. Cardiovasc Res 25, 934-949；Vander Heide, R.S., Reimer, K.A., 1996. Effect of adenosine therapy at reperfusion on myocardial infarct size in dogs. Cardiovasc Res 31, 711-718）ことから論争になっている。本研究では３つの異なる用量でアデノシンを投与したが、AMP 579が保護を示した場合に用いられたのと同じタイミングで注入しても、いずれの場合も保護は認められなかった。AMP 579およびアデノシンの両者は、血管に対するA2アデノシン受容体の活性化を通じて血管を拡張させることにより一次的に血圧を低下させる。血圧降下の程度は、アデノシンの低用量とAMP 579群で類似していたので、本発明者らは、いずれの場合もＡ2受容体による占拠が類似していると推定した。しかしながら、アデノシンは保護を示さなかった。ニワトリ心筋を用いた本発明者らの最近の研究においては、100μMのアデノシン（受容体飽和濃度）は再灌流時の遊離ラジカルのバーストを遮断しなかったが、１μMのAMP 579はそれを明らかに消失させた（XuらIII）。すなわち、アデノシン受容体の活性化にはAMP 579の保護を要するが、アデノシンそれ自体は、その作用を再現しないものと思われる。これは、その分子以外の何かがアデノシン受容体刺激に相乗的に作用して保護を生じることを指示する可能性が考えられる。
【００１９】
要約すると本発明者らは、AMP579が再灌流の最初の瞬間に存在するのみでなく、開胸ウサギモデルにおいて抗梗塞作用を達成するためには、再灌流の開始後の30分以上にわたって残存しなければならないことを立証した。奇妙なことにはAMP579が保護的であるのと同一のスケジュールで投与されたアデノシンは、心筋組織を救助することはなかった。
【００２０】
【表１】
2005504009.tif 000003
【００２１】
【表２】
2005504009.tif 000004
【００２２】
【表３】
2005504009.tif 000005
【００２３】
【表４】
2005504009.tif 000006
【００２４】
【表５】
2005504009.tif 000007
【００２５】
本発明の第１の実施態様は、アデノシンＡ1／Ａ2アゴニスト活性を有する化合物の医薬有効量を、それを必要とする患者に再灌流の実施後10分未満に開始し、再灌流の実施後30分以上継続して投与することからなる心臓の保護方法を提供する。
【００２６】
本発明の第２の実施態様は、第１の実施態様において、化合物の投与を再灌流の開始とともに始めて、再灌流の開始後30分以上の期間継続することからなる方法である。
【００２７】
本発明の第３の実施態様は、心臓保護の必要な患者に、アデノシンＡ1／Ａ2アゴニスト活性を有する化合物の医薬有効量を、再灌流の実施前10分またはそれ以上前に開始し、再灌流の実施後30分以上の期間継続して投与することからなる、それを必要とする患者の心臓保護を提供する方法である。
【００２８】
本発明の第４の実施態様は、第１、第２または第３の実施態様において、化合物の投与を、再灌流の実施後70分以上の期間継続する方法である。
【００２９】
本発明の第５の実施態様は、アデノシンＡ1／Ａ2アゴニスト活性を有する化合物の医薬有効量を、それを必要とする患者に、再灌流の実施後10分未満に開始し、再灌流の実施後30分以上の期間継続して投与することからなる、それを必要とする患者における再灌流傷害に対する保護方法である。
【００３０】
本発明の第６の実施態様は、第５の実施態様において、化合物の投与を再灌流の開始時に始めて、再灌流の実施後30分またはそれ以上の期間継続する方法である。
【００３１】
本発明の第７の実施態様は、それを必要とする患者に、アデノシンＡ1／Ａ2アゴニスト活性を有する化合物の医薬有効量を、再灌流の開始10分またはそれ以上前に開始し、再灌流の開始後30分以上継続して投与することからなる再灌流傷害に対する保護方法である。
【００３２】
本発明の第８の実施態様は、第５、第６または第７の実施態様において、化合物の投与は再灌流の実施後70分以上継続する方法である。
【００３３】
本発明の第９の実施態様は、それを必要とする患者に、アデノシンＡ1／Ａ2アゴニスト活性を有する化合物の医薬有効量を、再灌流の実施後10分未満に開始し、再灌流の実施後30分以上継続して投与することからなるそれを必要とする患者における虚血傷害に対する保護方法である。
【００３４】
本発明の第１０の実施態様は、第９の実施態様において、化合物の投与は再灌流の開始時に始め、再灌流の開始後30分以上の期間継続する方法である。
【００３５】
本発明の第１１の実施態様は、アデノシンＡ1／Ａ2アゴニスト活性を有する化合物の医薬有効量を、それを必要とする患者に再灌流の実施10分またはそれ以上前に開始し、再灌流の実施後30分以上の期間継続して投与することからなる虚血傷害の保護方法である。
【００３６】
本発明の第１２の実施態様は、第１１の実施態様において、化合物の投与を再灌流の開始後70分以上継続することからなる方法である。
【００３７】
本発明の第１３の実施態様は、心臓外科手術前、手術時または手術後のそれを必要とする患者に、アデノシンＡ1／Ａ2アゴニスト活性を有する化合物の医薬有効量を、再灌流の実施後10分未満の時間に開始し、再灌流の実施後30分以上継続して投与することからなる心臓保護を提供する方法である。
【００３８】
本発明の第１４の実施態様は、第１３の実施態様において、化合物の投与を再灌流の開始とともに始め、再灌流の開始後30分以上継続することからなる方法である。
【００３９】
本発明の第１５の実施態様は、心臓外科手術前、手術時または手術後のそれを必要とする患者に、アデノシンＡ1／Ａ2アゴニスト活性を有する化合物の医薬有効量を、再灌流の開始の10分またはそれ以上前に開始し、再灌流の開始後30分以上の期間継続して投与することからなる心臓の保護を提供する方法である。
【００４０】
本発明の第１６の実施態様は、第１３、第１４または第１５の実施態様において、化合物の投与は再灌流の開始後70分以上の期間継続する方法である。
【００４１】
本発明の第１７の実施態様は、虚血発作前、発作時または発作後、それを必要とする患者に、アデノシンＡ1／Ａ2アゴニスト活性を有する化合物の医薬有効量の投与を、再灌流の開始後10分未満の時点で始め、再灌流の開始後30分以上の期間継続する方法である。
【００４２】
本発明の第１８の実施態様は、第１７の実施態様において、化合物の投与を再灌流の開始とともの始め、再灌流の開始後30分以上の期間継続して投与する方法である。
【００４３】
本発明の第１９の実施態様は、虚血発作前、発作時または発作後、それを必要とする患者に、アデノシンＡ1／Ａ2アゴニスト活性を有する化合物の医薬有効量を、再灌流の開始10分以上前に始め、再灌流の開始後30分以上継続して投与することからなる心臓の保護を提供する方法である。
【００４４】
本発明の第２０の実施態様は、第１７, 第１８または第１９の実施態様において、化合物の投与は再灌流の開始後70分以上の期間継続する方法である。
【００４５】
本発明の第２１の実施態様は、第１〜第２０のいずれかの実施態様において、化合物は式
【化２】
2005504009.tif 000008
の化合物またはその医薬的に許容される塩である方法である。
【００４６】
本発明の第２２の実施態様は、第１〜第２０のいずれかの実施態様において、化合物は医薬的に許容される塩として投与される方法である。
【００４７】
本発明の第２３の実施態様は、第１〜第２２のいずれかの実施態様において、投与される化合物は、医薬的に許容される担体および化合物の医薬的有効量からなる医薬組成物中に含有される方法。
【００４８】
本発明の実施に際し本発明の方法において投与されるアデノシンＡ1／Ａ2アゴニスト化合物は、非経口的に、局所的に、経直腸的に、経皮的に、肺内的にまたは経口的に投与されるが、好ましくは非経口的および／または経口的に、さらに好ましくは非経口的に投与される。
【００４９】
本発明の方法において使用される一部の化合物は塩基性であり、このような化合物は、遊離塩基の形態またはその医薬的に許容される酸付加塩の形態で有用である。
【００５０】
使用するには酸付加塩の方が便利な形態であり、実際には塩の形態では、遊離塩基型の使用量に対して固有の比で用いられる。酸付加塩の調製に使用できる酸には、好ましくは遊離塩基と混合した場合、医薬的に許容される塩、すなわち、その陰イオンが塩の医薬的用量で患者に非毒性であり、遊離塩基に固有の有益な阻害作用が陰イオンに帰せられる副作用によって損なわれることのない塩が包含される。医薬的に許容される塩には、鉱酸および有機酸から誘導される塩、たとえば、ハイドロハライドたとえば塩酸塩および臭化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、スルファミン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、マロン酸塩、シュウ酸塩、サリチル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸、フマール酸塩、マレイン酸塩、メチレン−ビス−β−ヒドロキシナフトエ酸塩、ゲンチジン酸塩、イセチオン酸塩、ジ−ｐ−トルオイル酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、シクロヘキシルスルファミン酸塩およびキニン酸塩が包含される。
【００５１】
本発明の方法により投与される化合物が酸性の残基で置換されている場合には、塩基付加が形成され、使用には単純により便利な形態である。実際には塩の形態では、遊離酸型の使用量に対して固有の比で用いられる。塩基付加塩の調製に使用できる塩基には、好ましくは遊離酸と混合した場合、医薬的に許容される塩、すなわち、その陽イオンが塩の医薬的用量で患者に非毒性であり、遊離塩基に固有の有益な阻害作用が陽イオンに帰せられる副作用によって損なわれることのない塩が包含される。医薬的に許容される塩には、アルカリおよびアルカリ土類金属から誘導される塩が包含される。本発明の範囲には、以下の塩基、たとえば、水素化ナトリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化アルミニウム、水酸化リチウム、水酸化マグネシウム、水酸化亜鉛、アンモニア、エチレンジアミン、N−メチル−グルカミン、リジン、アルギニン、オルニチン、コリン、N,N'−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、ジエタノールアミン、プロカイン、N−ベンジルフェニルエチルアミン、ジエチルアミン、ピペラジン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、テトラメチル水酸化アンモニウム等から誘導される塩が包含される。
【００５２】
本発明により使用される化合物を含有する組成物は慣用方法によって調製することができる。たとえば、本発明により使用される化合物は、適当な担体に溶解または懸濁することができる。
【００５３】
本発明により使用される化合物は、最も適当な経路による投与が可能な形態で提供され、本発明はまた、医薬もしくは獣医薬への使用に適した本発明の化合物を含有する医薬組成物の投与により心臓を保護する方法に関する。これらの組成物は、アジュバントまたは賦形剤からなる１または２種以上の医薬的に許容される担体を用いて慣用方法により調製される。アジュバントはとくに希釈剤、滅菌水性メジウムおよび様々な非毒性有機溶媒からなる。組成物は、錠剤、丸剤、カプセル、ロゼンジ、トローチ、硬質キャンディー、顆粒、粉末、水性溶液または懸濁液、注射用溶液、エリキシールまたはシロップ、粉末、肺内投与用溶液または懸濁液の形態で提供され、医薬的に許容される製剤を得るために、甘味剤、賦香剤、着色剤または安定剤から選択される１または２種以上の物質を含有させることができる。
【００５４】
ビヒクルおよびビヒクル中の本発明に使用される化合物の内容の選択は、一般に、化合物の溶解度および化学的性質、とくに投与様式および製薬実務に認められる規定によって決定される。たとえば、滅菌水、リンゲル溶液、ラクトース、クエン酸ナトリウム、等張食塩溶液（リン酸一または二ナトリウム、塩化ナトリウム、カリウム、カルシウムまたはマグネシウム、またはこのような塩の混合物）、錠剤を調製するためには、炭酸カルシウム、および崩壊剤たとえばデンプン、アルギン酸、およびある種の複合ケイ酸塩を、滑沢剤たとえばステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウムおよびタルクと混合して使用することができる。カプセルの調製には、ラクトースおよび高分子量ポリエチレングリコールの使用が有利である。水性懸濁液を使用する場合には、それらには乳化剤または懸濁を容易にする物質を含有させることができる。希釈剤、たとえば、スクロース、エタノール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、グリセロールおよびクロロホルムまたはそれらの混合物も使用できる。
【００５５】
非経口投与のためには、本発明に用いられる化合物の植物油たとえばゴマ油、穀物油またはオリーブ油中の乳化液、懸濁液または溶液、水−有機溶媒溶液たとえば水とプロピレングリコールの溶液、注射用有機エステルたとえばオレイン酸エチル中の溶液、ならびに医薬的に許容される塩の滅菌水溶液が有用である。本発明に用いられる化合物の塩の溶液は、とくに、筋肉内、静脈内、動脈内または皮下注射または注入技術による投与に有用である。塩の純粋な蒸留水中溶液からなる水溶液も、pHを適当に調整し、それらが正しく緩衝化され、十分な量のグルコースまたは塩化ナトリウムによって等張化され、また熱、照射またはマイクロろ過によって滅菌されている限り、静脈内投与に使用できる。
【００５６】
アデノシンＡ1／Ａ2アゴニスト活性を有する化合物はまた、血管（動脈または静脈）壁からの運搬および／または拡散による急速なクリアランスに抵抗するように処方し、所望の作用部位における組成物の維持時間を上昇させることもできる。本発明による有用なデポ剤は、コポリマーマトリックスたとえばエチレンビニルアセテートまたはポリビニルアルコールゲル中に加え、Silasticの殻で取り囲むことができる。また、アデノシンＡ1／Ａ2アゴニスト活性を有する化合物は、血管外膜に移植したシリコンポリマーから局所的に送達することもできる。
【００５７】
経皮的な経血管送達時における化合物のウオッシュアウトを最小限にするための他のアプローチは、非拡散性、薬物溶出マイクロ粒子の使用からなる。マイクロ粒子は様々な合成ポリマーたとえばポリラクチド、またはタンパク質もしくはポリサッカライドを含む天然物質からなる。このようなマイクロ粒子は、薬物の総用量およびその放出のキネティクスを含む変数の戦略的操作を可能にする。マイクロ粒子は、多孔性バルーンカテーテルにより動脈もしくは静脈内に、またはステント上のバルーンに効率的に注入して、血管壁中および外膜周囲組織に少なくとも約２週間維持させる。治療薬の局所的な血管内への部位特異的送達の処方および方法は、たとえばReissenら（J. Am. Coll. Cardiol. 1994; 23: 1234-1244）に論じられている。
【００５８】
アデノシンＡ1／Ａ2アゴニスト活性を有する化合物のメジウムはまた、生物適合性を有する、非毒性（ホモまたはヘテロ）ポリマーから調製されるヒドロゲル、薬物吸収スポンジとして働く、たとえば親水性ポリアクリル酸ポリマーとすることができる。このようなポリマーは、たとえば出願WO93／08845に記載されている。これは、その全内容を引用によって本明細書に導入される。ある種のそれら、とくにエチレンおよび／またはプロピレンオキシドから得られるものは、市販品を入手することができる。
【００５９】
さらに化合物は、親水性フィルム（たとえばヒドロゲル）でコーティングした血管形成バルーンを用い、または化合物のための注入チャンバーを含む他の任意のカテーテルにより、血管壁に直接投与することができる。これによれば、処置すべき部位に正確に化合物を適用できる。
【００６０】
成人では、アデノシンＡ1／Ａ2アゴニスト化合物の投与量は、吸入の場合一般に１日約0.00001〜約0.5、好ましくは約0.0001〜約0.05mg／kg体重、経口投与の場合１日約0.0001〜約１、好ましくは0.001〜0.5mg／kg体重、静脈内投与の場合１日約0.00001〜約0.1、好ましくは約0.0001〜約0.01mg／kg体重である。
【００６１】
本発明に使用される化合物は、所望の治療効果を得るためには、必要な頻度で投与することができる。本発明の方法を実施するに際しての投与量基準は、改善が得られるまでの最大の治療応答および、ついで緩解を与える最小有効レベルを保証することである。患者によっては、高用量または低用量に迅速に応答し、はるかに低い維持用量が適当である。特定の場合に適当な投与量を選択する際には、患者の体重、一般的健康状態、年齢、および薬物に対する応答に影響する可能性がある他の因子について考慮しなければならない。化合物の治療的に有効な血中レベルを維持するためには、連続的な非経口注入も考慮される。
【００６２】
本発明は、本発明の精神またはその必須の寄与から逸脱することなく、他の特定の形態で具現化することもできる。
【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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