(57)【要約】置換による分析物検出に有用な固体担体上の被覆された金属表面  固体担体上の被覆された金属表面であって、該被覆は、金属表面に堅く付加したタンパク質層からなり、該タンパク質層は、低分子量抗原に結合したリンカー分子と結合し、リンカー分子はタンパク質層と結合し、官能性末端基を経由して抗原と結合し、官能性末端基間に炭素数が１、２または３である脂肪族炭化水素を含み、抗原は所望により抗原に対して特異的な抗体に可逆的に結合する、被覆された金属表面を開示する。固体担体上の被覆された金属表面は、被覆の抗原よりも抗体に対して高い親和力を有する水溶液中の分析物抗原を、被覆からの抗体の置換を監視することにより、検出するための分析装置、例えば圧電結晶微量天秤装置または表面プラズモン共鳴バイオセンサー、の一部として分析物抗原の検出方法に使用できる。
2005530175.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
固体担体上の被覆された金属表面であって、
前記被覆が、前記金属表面に堅く付加したタンパク質層からなり、
前記タンパク質層が、低分子量抗原に結合したリンカー分子と結合し、
前記リンカー分子が前記タンパク質層と結合し、官能性末端基を経由して前記抗原と結合し、かつ、前記官能性末端基間に炭素数が１、２または３である脂肪族炭化水素を含有し、
前記抗原が所望により前記抗原に対して特異的な抗体に可逆的に結合するものである、固体担体上の被覆された金属表面。
【請求項２】
前記金属が、金、銀、アルミニウム、クロムおよびチタンからなる群から選択される、請求項１に記載の固体担体上の被覆された金属表面。
【請求項３】
前記抗原が、同一または異なるものであり、同じタンパク質層に、またはタンパク質層の異なったパッチに結合しており、所望により誘導体化された爆薬および麻薬からなる群から選択される、請求項１または２に記載の固体担体上の被覆された金属表面。
【請求項４】
前記爆薬が、トリニトロトルエン（ＴＮＴ）、ジニトロトルエン（ＤＮＴ）、ヘキサヒドロ−１，３，５−トリニトロ−１，３，５−トリアジン（ＲＤＸ）、オクタヒドロ−１，３，５，７−テトラニトロ−１，３，５，７−テトラジン（ＨＭＸ）、ペンタエリトリトールテトラニトレート（ＰＥＴＮ）、およびニトログリセリン（ＮＧ）からなる群から選択される、請求項３に記載の固体担体上の被覆された金属表面。
【請求項５】
前記麻薬が、コカイン、ヘロイン、アンフェタミン、メタアンフェタミン、カンナビノール、テトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）、およびメチレンジオキシ−Ｎ−メチルアンフェタミン（エクスタシー）からなる群から選択される、請求項３に記載の固体担体上の被覆された金属表面。
【請求項６】
前記固体担体が、圧電結晶電極またはガラス板またはプリズムである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の固体担体上の被覆された金属表面。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の固体担体上の被覆された金属表面の使用であって、
前記被覆から前記抗体が置換されるのを監視することにより、抗体に対する親和力が前記被覆の抗原より高い分析物抗原を水溶液中で検出するための分析装置の一部としての使用。
【請求項８】
分析物抗原を水溶液中で検出する方法であって、
必要であれば、抗原に特異的な抗体を前記被覆された金属表面と水溶液中で接触させることにより、抗体が結合していない請求項１〜６のいずれか一項に記載の固体担体上の被覆された金属表面を活性化することと、
前記抗体を前記被覆の前記抗原に結合させることと、
過剰の前記抗体を除去することと、
前記抗体に対する親和力が前記被覆の前記抗原より高い前記分析物抗原を含む可能性がある前記水溶液を、前記被覆に可逆的に結合した前記抗体と接触させることと、
前記抗体を解離させ、前記分析物抗原と反応させること、および
分析装置を使用して前記被覆された金属表面上の質量損失を検出することとを含んでなる、方法。
【請求項９】
前記分析装置が、圧電結晶微量天秤装置および表面プラズモン共鳴バイオセンサーからなる群から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記分析装置が、請求項１〜６のいずれか一項に記載の固体担体上の被覆された金属表面が中に配置されているフローセルを備えてなる、請求項８または９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、可逆的に結合した、分析物（analyte）に特異的な抗体を金属表面被覆から置換することにより、水溶液中の分析物を検出するのに有用な、固体担体上の被覆された金属表面に関する。水溶液中の分析物の置換を、従って、その存在を検出することは、分析装置、例えば圧電結晶微量天秤(Piezoelectric Crystal Microbalance)（ＰＣＭ）装置または表面プラズモン共鳴(Surface Plasmon Resonance)（ＳＰＲ）バイオセンサーで行う。
【背景技術】
【０００２】
ＳＰＲバイオセンサーは、特定金属表面の近くにおける分子相互作用に関する情報を引き出すのに使用できる、敏感なリアル−タイム技術である。この技術により、濃度、会合および解離速度定数および親和力ならびにエピトープマッピングおよび相互作用特異性の測定が可能になる[B. Liedberg and K. Johansen, Affinity biosensing based on surface plasmon detection in 「Methods in Biotechnology, Vol. 7: Affinity Biosensors: Techniques and Protocols」, K.R. Rogers and A. Muchandani (Eds.), Humana Press Inc., Totowa, NJ, pp. 31-53]。この研究された反応に関与する成分の一つは、ＳＰＲ実験の前または最中に金属表面上に固定される。固定された分子を連続流に露出し、その中に相互作用する化学種を注入することができる。この方法は、光学的検出に基づき、検知信号は、表面における誘電関数または屈折率の変化を反映する。これらの変化は、表面における分子の相互作用により引き起こされる。
【０００３】
ＰＣＭ技術は、微量天秤装置中の振動する圧電結晶に基づき、結晶は、例えば石英、窒化アルミニウム（ＡｌＮ）またはニオブ酸ナトリウムカリウム（ＮＫＮ）からなる。結晶が石英結晶である場合、その装置はＱＣＭ（石英結晶微量天秤）と呼ばれる。ＰＣＭおよびＱＣＭは、重量センサーであり、従って、質量変化に敏感である。ＱＣＭは、圧電石英結晶板を備えてなり、その上に金属電極が両側に堆積している。そのような結晶板上に印加された交流電位差がせん断波を誘導する。厚さが半波長の奇数整数になるような特定周波数で、結晶は共鳴する[M. Rodahl, F. Hoeoek, A. Krozer, P. Brzezinski and B. Kasemo, Quartz crystal microbalance setup for frequency and Q-factor measurements in gaseous and liquid environments, Review of Scientific Instruments 66 (1995) pp. 3924-3930]および[Saurbrey, Z.Phys. (1959), pp 155,206-222]。エネルギー的に最も好ましい半波長の数は１である。共鳴周波数は、結晶の厚さによって異なるが、通常はＭＨｚ領域にある。板の表面上における質量変化により、共鳴周波数が変化する。０．０１Ｈｚの周波数変化を容易に測定できることから、ＱＣＭは、質量変動を測定するための敏感なセンサーになる。多くの特許および他の文献が、圧電石英結晶（ＱＣＭ）の、例えば様々な免疫測定技術、および細菌およびウイルスの検出における、親和力に基づく化学的センサー／検出器としての使用を記載している。これらの用途のほとんどで、抗体と抗原の相互作用の後における結晶の重量増加を分析するのにＱＣＭ計器を使用している。
【０００４】
結晶は、非常に小さな質量を測定するための微量天秤として使用される。我々の実験で使用した薄い圧電センサー結晶電極は、両側で金を蒸着してある。結晶は、電極上にＡＣ電圧を印加することにより、その共鳴周波数で振動させることができる。ＱＣＭ技術の原理は、結晶の質量が変化する時に共鳴周波数が変化することである。この方法を使用することにより、結晶の生物分子層における質量変化を監視することができる。ＱＣＭを利用する多くの研究が報告されているが、そこでは結晶が、分子または粒子、例えば細菌、ウイルス、抗体または抗原、と特異的に相互作用する被覆が施されており、結晶の重量損失または増加を引き起こし、その重量変化を測定する。
【０００５】
小分子を従来の免疫センサーで分析することには、応答が遅い、すなわちセンサー結晶の重量変化が小さいために、明らかな難点がある。小分子の必要な検出を行うには、装置の感度を改良しなければならない。これは、大きな抗体分子をセンサー表面から、解離、およびセンサー表面に結合した抗原よりも抗体に対して高い親和力を有する分析物抗原との反応により、脱離させる、置換反応を使用して達成することができる(Willner et al. ヨーロッパ特許第０８４３８１６号明細書）。
発明の説明
【０００６】
本発明は、可逆的に結合した抗体が、解離および分析物抗原との反応により被覆から置換されるのを監視することにより、水溶液中で分析物抗原を検出する分析装置に有用な、固体担体上の被覆された金属表面を提供する。
【０００７】
本明細書および請求項では、抗体の用語は、抗体全体または抗体の、抗原と結合する部分または合成された抗原と結合する分子を含んでなる。
【０００８】
従って、本発明の一態様は、固体担体上の被覆された金属表面に関し、該被覆は、金属表面に堅く付加したタンパク質層からなり、該タンパク質層は、低分子量抗原に結合したリンカー分子と結合し、リンカー分子はタンパク質層と結合し、官能性末端基を経由して抗原と結合し、官能性末端基間に炭素数が１、２または３である脂肪族炭化水素を含み、抗原は所望により抗原に対して特異的な抗体に可逆的に結合する。
【０００９】
タンパク質層と金属表面との堅い付加は、タンパク質、例えばアルブミン、カゼイン、各種グロブリン、ＬＤＨ、オボアルブミン、を、清浄な金属表面と接触させ、タンパク質を表面に密着させるか、またはタンパク質を、予め堆積させた官能性表面（例えばチオール、カルボン酸および／またはアミノ基を含む）上に固定するか、もしくは表面上の重合体構造と架橋させ、表面上にグラフト化させることにより、達成できる。
【００１０】
リンカー分子は、リンカー分子上の官能性末端基、例えばチオール、カルボン酸、アミノ、および水酸化物基、と、タンパク質上の官能基、例えばチオール、カルボン酸、水酸基およびアミノ基、との間の反応により、タンパク質層と結合させる。
【００１１】
リンカー分子は、通常、リンカー分子上の官能性末端基、例えばチオール、カルボン酸、アミノ、および水酸基または離脱基、例えばハロゲン化物、メシレート、トシレート、活性化されたカルボン酸、例えば無水物および酸塩化物、と、抗原上の官能基、例えばアミノ、ケト、および水酸基、との間の反応により、低分子量抗原に先ず結合させる。例えば、抗原が反応のための官能基を持たない場合、反応の前に、低分子量抗原上に反応性官能基を導入または形成する必要があろう。
【００１２】
本発明の被覆におけるリンカー分子の重要な特徴は、リンカー分子が、タンパク質層を抗原と反応させるための官能性末端基に加えて、炭素数が１、２または３である短い脂肪族炭化水素を有することである。被覆中のリンカー分子が炭素数３より長い場合、抗体に対する親和力が高すぎるので、水溶液中の分析物抗原に露出された時に、抗体の限られた置換しか監視されず、感度が低下する。
【００１３】
本発明の固体担体上の被覆された金属表面は、通常、使用の前は抗原に特異的な抗体とは別に保存する。しかし、置換分析に使用する時、固体担体上の被覆された金属表面は、被覆の抗原に可逆的に結合した特異的な抗体を含んでなる。
【００１４】
本発明の固体担体上の被覆された金属表面の金属は、好ましくは金、銀、アルミニウム、クロムおよびチタンからなる群から選択される。現在好ましい金属は金である。
【００１５】
被覆の抗原は、リンカー分子への結合を通して固定されていることを除いて、分析物抗原と同一であるか、またはその誘導体である。例えば、被覆の抗原は、水溶液中で結合された抗体の解離を調整するために誘導体化することができる。
【００１６】
本発明の被覆のリンカー分子に結合される抗原は、同一であるか、または異なるものであって、同じタンパク質層に、またはタンパク質層の異なったパッチに結合する、すなわち抗原は、同じ特異的抗体に結合してもよいし、あるいは異なった特異的抗体に結合する２種類以上の結合した抗原の混合物があり、水溶液中で幾つかの異なった分析物抗原の存在を検出することもできる。抗体が異なったマーカー、例えば蛍光マーカー、を有する場合、異なった抗体の置換を検出することができる。しかし、幾つかの異なった抗体の混合物は、通常、試料の、標的抗原のいずれかに対するスクリーニング、例えば試料の、麻薬または爆薬のいずれかに対するスクリーニング、が十分である場合に使用する。異なった抗体は、異なった抗原を支持するタンパク質の個別パッチまたはスポットの微小列で金属表面を被覆することにより、相互に分離することができる。本発明の好ましい実施態様では、被覆の抗原を、所望により誘導体化した爆薬および麻薬からなる群から選択する。選択された被覆の抗原と特異的な抗体との結合が強すぎて、水溶液中での抗体の解離が妨害される場合、例えば官能基、例えばエステルまたはアミノ基、の変性により（本来の基を除去するか、または置き換えることにより）、あるいは抗原分子の一部を排除するか、または新しい官能基もしくは側鎖を抗原分子に導入することにより、抗原分子を化学的に変性し、その抗体に対する親和力を下げることができる。
【００１７】
爆薬は、好ましくはトリニトロトルエン（ＴＮＴ）、ジニトロトルエン（ＤＮＴ）、ヘキサヒドロ−１，３，５−トリニトロ−１，３，５−トリアジン（ＲＤＸ）、オクタヒドロ−１，３，５，７−テトラニトロ−１，３，５，７−テトラジン（ＨＭＸ）、ペンタエリトリトールテトラニトレート（ＰＥＴＮ）、およびニトログリセリン（ＮＧ）からなる群から選択され、麻薬は、好ましくはコカイン、ヘロイン、アンフェタミン、メタアンフェタミン、カンナビノール、テトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）、およびメチレンジオキシ−Ｎ−メチルアンフェタミン（エクスタシー）からなる群から選択される。
【００１８】
現在好ましい実施態様では、本発明の固体担体上の被覆された金属表面の固体担体は、圧電結晶電極またはガラス板またはプリズムである。結晶が石英結晶である場合、圧電石英結晶電極上の被覆された金属表面は、ＱＣＭ装置で使用するのに好適であるのに対し、ガラス板またはプリズム上の被覆された金属表面は、ＳＰＲ装置で使用するのに好適である。
【００１９】
本発明の別の態様は、本発明の固体担体上の被覆された金属表面の、被覆から抗体が置換されるのを監視することにより、特異的抗体に対する親和力が被覆の抗原より高い分析物抗原を水溶液中で検出するための分析装置の一部としての使用に関する。
【００２０】
本発明のさらに別の態様は、分析物抗原を水溶液中で検出する方法であって、必要であれば、抗体が結合していない本発明の固体担体上の被覆された金属表面を、抗原に特異的な抗体を被覆された金属表面と水溶液中で接触させることにより、活性化すること、抗体を被覆の抗原に結合させること、過剰の抗体を除去すること、抗体に対する親和力が被覆の抗原より高い分析物抗原を含む可能性がある水溶液を、被覆に可逆的に結合した抗体と接触させ、抗体を解離させ、分析物抗原と反応させること、および分析装置を使用して被覆された金属表面上の質量損失を検出することを含んでなる方法に関する。本発明の方法の一実施態様では、分析装置は、圧電結晶微量天秤装置および表面プラズモン共鳴バイオセンサーからなる群から選択される。圧電結晶は、例えば石英、窒化アルミニウム（ＡｌＮ）またはニオブ酸ナトリウムカリウム（ＮＫＮ）の結晶である。
【００２１】
現在好ましい実施態様では、分析装置は、本発明の固体担体上の被覆された金属表面が中に配置されているフローセルを備えてなる。
【００２２】
ここで本発明を幾つかの図面および実験の説明により例示するが、本発明は、具体的に説明する細部に限定されるものではない。
実験の一般的な説明
【００２３】
実験は、低分子量化合物の分析感度を改善するために最適化した電極を有するＱＣＭ装置で行った。この免疫検知機構は置換の原理に基づいている。
【００２４】
免疫測定装置は、短いリンカー分子およびタンパク質層を経由して電極の金表面に固定された抗原誘導体で官能化された電極からなる。次いで、抗原に対するモノクローナル抗体を抗原官能化された電極に導入した。
【００２５】
抗原に対するモノクローナル抗体は、本発明の被覆に使用する炭素数１〜３のリンカーより長いリンクによりＫＬＨ(Keyhole Limpet Hemocyanin)に結合された同じ抗原でマウスを免疫化することにより調製した。この抗体合成手順は、良く知られている手順である［例えばBioscience & Medicine. T.A.Springer, 編集者、Plenum Press, 1985におけるHybridoma Technology参照］。我々の分析で使用した抗体は、非常に明確な特異性で抗原に対してナノモル未満の親和力を示す。
【００２６】
電極を遊離の抗原（分析物）に溶液中で露出した時、表面に結合した抗体の置換による重量減少が見られる。この電極の重量減少は、結晶の振動周波数増加により監視する（図５、６）。
【００２７】
この実験で、検出すべき抗原（分析物抗原）に対する抗体は、先ず、表面に位置する抗原誘導体、すなわち本発明の被覆の抗原に、弱い相互作用により、物理的に結合させる。これらの弱く結合した抗体／抗原複合体が溶液中の抗原（分析物抗原）に露出されると、弱く結合した抗体の画分が、溶液中の分析物抗原に対するより強い親和力のために、表面被覆を離れる。これによってＱＣＭ結晶の質量が低下し、周波数が増加する。この概念は、抗体が溶液中の抗原（分析物）に対して、表面に位置する抗原に対する親和力と比較して、より高い親和力を有する（高い解離定数Ｋｄ）という事実に基づいている。抗体と表面との間の親和力を、抗原を含まない緩衝液と接触した時に重量を過度に損失せずに、低濃度の分析物抗原と接触した時に重量を損失するように最適化することが最も重要である。従って、表面に結合した抗原に対する抗体の親和力を最適化することが非常に重要である。
【００２８】
本方法では、背景信号のレベルが問題である。表面に結合した抗体の、固定された抗原に対する親和力が高すぎる場合、遊離抗原による抗体の置換が非常に困難になり、表面から抗体を置換するのに大量の抗原が必要になる。他方、表面に結合した抗体が表面に結合した抗原に対して示す親和力が低すぎる場合、その抗体は、遊離抗原が存在しなくても、表面から過度に急速に離れてしまう。そのような系における弱い生物学的相互作用の力学は重要であり、結合と放出が同時に起こり、バイオセンサーに技術的に使用する系を予見し、最適化するのが容易ではない。
【００２９】
石英結晶電極は、タンパク質、特に抗体、の吸着を最少に抑えるために化学的に変性した金属、例えば金、で被覆する。さらに、表面層も、問題とする抗体に対して弱い抗原として機能する抗原誘導体で官能化する。他の抗体の吸着（非特異的吸着）が起きていないことが非常に重要である。タンパク質をはじく（非特異的吸着が無い）、抗原で官能化された表面被覆を見出すために、数多くの様々な表面変性を試験した。
【００３０】
我々は、トリニトロトルエン（ＴＮＴ）、ジニトロトルエン（ＤＮＴ）、ヘロイン、アンフェタミン、メタアンフェタミン、メチレンジオキシ−Ｎ−メチルアンフェタミン（エクスタシー）、テトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）およびコカインに関連する抗原構造を、ＱＣＭ装置の電極表面を変性するのに使用する様々なタンパク質上にグラフト化することにより、本方法を試験した。抗原は、抗原に結合したリンカー上のカルボン酸基を経由してタンパク質上のアミノ基上にグラフト化させた。
実験の詳細な説明
【００３１】
タンパク質、例えば各種アルブミン、ガンマグロブリン、および他の十分に特徴付けられたタンパク質へのコカインの共役
一般的に、我々は、水溶性カルボジイミド ＥＤＣ［（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド］をＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）と共に使用することにより、抗原をタンパク質に共役させ、カルボキシル化された抗原誘導体（例えば図１および２におけるカルボキシル化された薬物−リンカー分子）の活性エステル中間体を形成した。次いで、抗原の活性化されたＮＨＳ−エステルをタンパク質の水溶液に加え、続いて緩衝液に対して透析した。
【００３２】
抗原（２０μモル）をＮＨＳ６０μモルおよびＥＤＣ５０μモルとジメチルホルムアミド（０．５ｍｌ）中、室温で２時間反応させた。タンパク質（２０ｍｇ）（例えばアルブミン）を０．１Ｍ  ＮａＨＣＯ３、ｐＨ８、３ｍｌ中に溶解させた。活性化されたコカインのＤＭＦ溶液をタンパク質溶液と室温で４時間混合し、続いて緩衝液に対して２４時間透析した。
【００３３】
ＱＣＭ電極の被覆
圧電電極の金表面を様々な溶剤および水で洗浄してから、電極をタンパク質共役物の溶液（濃度０．１〜３ｍｇ／ｍｌ）に室温で１時間浸漬し、続いて蒸留水で十分に洗浄し、乾燥させる。
【００３４】
測定手順
被覆された圧電電極を、内容積約１０μｌのフロースルーセル中に固定した。セル容積を軟質ゴムＯリングで密封し、電極の片側だけを流動系と接触させる。流量は５〜５００μｌ／分に調節した（リン酸塩緩衝液、ＰＢＳ）。試料をループ（５０〜１００μｌ）を経由してセルに注入する（流量５〜５００μｌ／分）。表面変性した電極の反応（重量増加または重量損失）を周波数変化の測定により監視する。
結果
【００３５】
コカインに対する抗体（濃度０．０２ｍｇ／ｍｌ、ループ容積０．１ｍｌ）を注入した時、抗体の選択的な吸着が直ちに起こり、周波数が大きく低下した（図５参照）。抗体注入後、緩衝溶液が連続的にセルを通って流れる時、周波数の僅かな増加がよく観察されるが、これは抗体の僅かな損失を示している。しかし、コカインの試料（濃度１０ｐｇ／μｌおよび１００ｐｇ／μｌ、ループ容積０．１ｍｌ）を注入すると、周波数の増加が観察される。
【００３６】
ＴＮＴに対する抗体を注入した時およびＴＮＴ試料を注入した時、同じパターンが図６でも見られる。
【００３７】
コカイン誘導体、すなわちリンカー分子に結合したコカイン、とタンパク質のアルブミンとの間の一連の共役物を製造した。コカイン−リンカー分子の一種を図２に示す。官能性末端基（図２のカルボン酸基）中で可能な炭素原子に加えて、炭素原子数４より短い脂肪族鎖を有する誘導体だけが、分析物（すなわちコカイン）に露出した時に、抗体の重大な置換を示す。
【００３８】
分子に結合した長いリンカーを有する他のコカイン誘導体も試験したが、溶液中の遊離コカイン露出した時に抗体の置換は起きなかった。これらの実験から、結論として、長いリンカーを使用した場合、固定されたコカイン抗原とその抗体との間の親和力が高すぎて置換分析には使用できない。
【００３９】
ヘロイン抗原を同様にそのＯＨ基およびＮ基上で官能化した。その結果は、リンカー分子の炭素数が４未満である場合に、検出される置換が著しく増加することを明らかに示している。
本発明の最終的な抗原／抗体被覆された金属表面で行った観察
【００４０】
１．選択的抗体と比較して抗体の非選択的吸着が非常に少ない。
２．置換反応用水溶液中で長時間活性である（例えば＞８時間、室温、フローセル中）。
３．分析物が存在しない場合、抗体の脱着は僅かである。（例えばフローセル中の水溶液中で０．５％／分）
４．抗原を装填した時、乾燥状態で安定している（室温（ＲＴ）で＞３箇月）。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１】図１は、幾つかの麻薬、すなわちヘロイン、アンフェタミン、エクスタシー、およびメタアンフェタミン、および麻薬−リンカー分子、すなわちヘロイン−リンカー分子、アンフェタミン−リンカー分子、エクスタシー−リンカー分子、およびモルヒネ−リンカー分子、の化学式を示す。
【図２】図２は、幾つかの他の麻薬、すなわちカンナビノール、テトラヒドロカンナビノールおよびコカイン、およびコカイン−リンカー分子の化学式を示す。
【図３】図３は、幾つかの爆薬、すなわち２，４，６−トリニトロトルエン（ＴＮＴ）および２，４−ジニトロトルエン（２，４−ＤＮＴ）の化学式を示す。
【図４】図４は、金表面に付加したタンパク質に共役した抗原−リンカー分子の典型的な被覆を図式的に示す図である。抗原の、リンカー分子を経由するタンパク質への結合を拡大して示す。
【図５】図５は、コカイン（０．０２ｍｇ／ｍｌ）に対する抗体注入およびその後に続くコカイン（１０ｐｇ／μｌ）の注入による相対的な周波数変化を示す。流量は５０μｌ／分であり、注入量（ループ体積）は１００μｌである。
【図６】図６は、抗体注入およびその後に続くＴＮＴの注入（１０ｐｇ／μｌおよび１００ｐｇ／μｌ）による相対的な周波数変化を示す。流量は２５０μｌ／分である。
【図１】
2005530175.tif 000003
【図２】
2005530175.tif 000004
【図３】
2005530175.tif 000005
【図４】
2005530175.tif 000006
【図５】
2005530175.tif 000007
【図６】
2005530175.tif 000008
【国際調査報告】
2005530175.tif 000009
2005530175.tif 000010
2005530175.tif 000011