(57)【要約】プリオンに感染した物質を保有する表面は、この表面からできる限り多くのタンパク質性の物質を除去するために、アルカリ性洗浄溶液で洗浄される。この溶液は、アルカリ性洗浄剤（表面に残存するプリオンを攻撃し、そして洗浄工程の間に表面から除去されたプリオンを攻撃する）を含む。洗浄工程の後、この表面は、強いガス状の酸化剤、好ましくは過酸化水素蒸気に曝される。過酸化水素または他の強い酸化剤は、プリオン（特に、凝集されない（ｕｎｃｌｕｍｐｅｄ）プリオン鎖）を攻撃し、プリオンを不活化する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
プリオンを不活化する方法であって、以下：
プリオンに感染した物質を保有する表面を、プリオンを攻撃する洗浄剤で前処理する工程；および
該表面をガス状の酸化剤で処理する工程、
を特徴とする、方法。
【請求項２】
前記洗浄剤が、アルカリ洗浄剤であることをさらに特徴とする、請求項１に記載のプリオン不活化方法。
【請求項３】
前記酸化剤が、過酸化水素蒸気を含むことをさらに特徴とする、請求項１および２のいずれか１項に記載のプリオン不活化方法。
【請求項４】
前記酸化剤処理工程が、約４５℃〜６０℃で行われることをさらに特徴とする、請求項３に記載のプリオン不活化方法。
【請求項５】
前記アルカリ洗浄剤が、アルカリ金属水酸化物、アルカリ土類金属水酸化物、およびそれらの組み合わせからなる群の強アルカリを含むことをさらに特徴とする、請求項２に記載のプリオン不活化方法。
【請求項６】
前記強アルカリが、１つ以上の水酸化ナトリウムおよび水酸化カリウムを含むことをさらに特徴とする、請求項５に記載のプリオン不活化方法。
【請求項７】
前記アルカリ洗浄剤が、界面活性剤、カチオンポリマー、抗再析剤、腐食防止剤、緩衝液、キレート剤、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される添加剤をさらに含むことをさらに特徴とする、請求項２、５、および６のいずれか１項に記載のプリオン不活化方法。
【請求項８】
前記表面をガス状の酸化剤で処理する工程が、４５℃〜６０℃で行われることをさらに特徴とする、請求項７に記載のプリオン不活化方法。
【請求項９】
前記ガス状酸化剤処理工程の前の、前記表面から前記アルカリ洗浄剤をリンスする工程をさらに特徴とする、請求項２および５〜８のいずれか１項に記載のプリオン不活化方法。
【請求項１０】
請求項９に記載のプリオン不活化方法であって、以下：
前記表面のリンス後に、該表面を微生物バリア中にラップする工程；および
該ラップした表面を、前記ガス状酸化剤処理工程に供する工程、
を包含することをさらに特徴とする、方法。
【請求項１１】
前記洗浄工程およびガス状酸化剤処理工程が、５０℃と６０℃との間の温度範囲で行われることをさらに特徴とする、請求項８に記載のプリオン不活化方法。
【請求項１２】
前記洗浄工程およびガス状酸化剤処理工程が、同一の容器（１２’）中で行われることをさらに特徴とする、請求項１〜１１のいずれか１項に記載のプリオン不活化方法。
【請求項１３】
前記洗浄工程およびガス状酸化剤処理工程が、前記容器から前記表面の中間体を移動することなく行われることをさらに特徴とする、請求項１２に記載のプリオン不活化方法。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれか１項に記載のプリオン不活化方法であって、前記ガス状酸化剤処理工程が以下：
ａ）処理される前記表面をチャンバー（１２、１２’）に導入する工程；
ｂ）該チャンバー内の圧力を大気圧より下に低下させる工程；および
ｃ）該チャンバーに過酸化水素蒸気を導入する工程、
を包含することをさらに特徴とする、方法。
【請求項１５】
前記ガス状酸化剤処理工程が、工程ｂ）および工程ｃ）を１回以上繰り返す工程を包含することをさらに特徴とする、請求項１４に記載のプリオン不活化方法。
【請求項１６】
工程ｂ）が、前記チャンバー内の圧力を約１０トル以下に低下させる工程を包含することをさらに特徴とする、請求項１４および１５のいずれか１項に記載のプリオン不活化方法。
【請求項１７】
請求項１４に記載の方法であって、以下：
工程ｃ）の後に、前記チャンバー内の圧力を大気圧より下に低下させる工程；および
該圧力を、濾過空気を用いてより高い減圧に高める工程、
をさらに特徴とする、方法。
【請求項１８】
請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法であって、以下：
少なくとも１０のｐＨを有するアルカリ洗浄剤で前記表面を洗浄する工程を包含する、前処理の工程；および
該洗浄された表面を、該表面上の生存可能なプリオンを破壊するのに充分な時間、４５℃〜６０℃の温度で、過酸化水素を含む蒸気に曝露する工程を包含する処理工程、
をさらに特徴とする、方法。
【請求項１９】
アイテム上のプリオンを除去および不活化するためのプリオン不活化システムであって、以下：
該アイテムを受け入れるためのチャンバー（１２’）；
濃縮されたアルカリ洗浄剤を受け入れるために、該チャンバーと流体連結されるウェル（１８０）；
該濃縮されたアルカリ洗浄剤と混合してアルカリ洗浄溶液を生成する水を供給するために、該ウェルと流体連結される水の供給源（１８２）；
該チャンバーと可変的に連結される過酸化水素蒸気源（２０’）、
を特徴とする、システム。
【請求項２０】
前記チャンバーを少なくとも３０℃の温度に加熱するためのヒーター（７０’）
をさらに特徴とする、請求項１９に記載のプリオン不活化システム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生物学的除染の分野に関する。
【背景技術】
【０００２】
本発明は、医療用、歯科用、および製薬の機器からの、プリオン（タンパク質性−感染性の因子）のような有害な生物学的物質の除去および／または破壊に関連する特定の適用を見出し、そして、それに特定の参照とともに記載される。しかしながら、本発明の方法およびシステムは、装置、機器、およびプリオンに感染した物質で汚染された他の表面（例えば、製剤施設、食品加工施設、床を含む実験動物研究設備、調理台、装置、ケージ、発酵タンク、流体ライン等）の広い範囲の生物学的な除染において利用され得ることが認識される。
【０００３】
用語「プリオン」は、ヒトおよび／または動物における比較的類似の脳疾患（必ず致命的である）を引き起こすタンパク質性−感染性の因子を記述するのに使用される。これらの病気は、一般に伝染性海綿状脳症（ＴＳＥ）と言われる。ＴＳＥは、ヒトにおけるクロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）、および異型ＣＪＤ（ｖＣＪＤ）、ウシにおけるウシ海綿状脳症（ＢＳＥ）（「狂牛病」としても知られる）、ヒツジにおけるスクラピー、ならびにオオジカにおける萎縮病を含む。これらの病気の全ては、特定の病気に感受性の動物の神経器官を攻撃する。これらは、初期の長い潜伏期間、その後の短期の神経症状（痴呆および協調運動障害、最終的に死を含む）により特徴付けられる。
【０００４】
これらの疾患を引き起こす感染因子は、核酸に関連しない単純タンパク質であると考えられる。このようなプリオン疾患についての病原性機構は、初めに正常な宿主コード化タンパク質を必要とすることが提唱されている。このタンパク質は、異常な形態（プリオン）への立体配座の変化を起こし、これは、自己伝播の能力を有する。この変化の正確な原因は、現在は不明である。このタンパク質の異常な形態は、体内で有効に破壊されず、また特定の組織（特に、神経細胞）中への蓄積が、最終的に、細胞死のような組織の損傷を引き起こす。いったん有意な神経組織の損傷が起こると、臨床兆候が観察される。
【０００５】
プリオン疾患は、従って、タンパク質凝集疾患（これらとしてはまた、いくつかの他の致命的疾患（例えば、アルツハイマー病およびアミロイドーシス）が挙げられる）に分類され得る。ヒトにおける流行性プリオン疾患の大部分（人口の約１：１，０００，０００に起こる）であるＣＪＤの場合は、事例の約８５％は散発的に起こると考えられ、約１０％は遺伝したと考えられ、そして約５％は医原性に起こると考えられる。
【０００６】
高い伝染性であるとは考えられないにもかかわらず、プリオン疾患は、特定の危険性の高い組織（脳、脊髄、大脳髄液、および眼を含む）から感染され得る。プリオンに感染した患者の外科手術の手順の後に、プリオンを含む残存物は、外科手術の機器（特に神経外科的および眼科学的の機器）に残存し得る。長い潜伏期間の間、外科手術の候補者がプリオン保有者かどうかを判断することは極めて困難である。
【０００７】
微生物の除染の種々のレベルが、当業者に認知されている。例えば、衛生的にする（ｓａｎｉｔｉｚｉｎｇ）とは、清掃によってごみまたは病原体がないことを意味する。消毒（ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｎｇ）は、有害な微生物を破壊するために洗浄することを必要とする。生物学的な汚染の制御の最も高いレベルである滅菌（ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ）は、全ての生きている微生物の破壊を意味する。
【０００８】
従来の意味において生きていないかまたは複製しない特定の生物学的物質（例えば、プリオン）は、それにもかかわらず、複製および／または有害な存在への形質変換の能力があることが、現在公知である。本明細書中において、用語「不活化」を、このような有害な生物学的物質（例えば、プリオン）、および／またはその複製する能力もしくは有害な種への立体配座の変化を起こす能力の破壊を含んで、使用する。
【０００９】
気相滅菌は、再使用可能な医療機器の外面を除染または滅菌するための公知の技術であって、大気圧より低い選択的な適用を介して隙間の滅菌に適合されている。気相滅菌の間、医療機器は、滅菌が起こる密閉空間またはチャンバー内に設置される。滅菌されるアイテムは、「強度の真空」アプローチまたは「貫流」アプローチのどちらかを受ける。液体の滅菌剤は、熱せられた気化器中で気化される。いったん気化されると、排気かつ密閉されたチャンバー内に滅菌剤蒸気を引き込むために、強度の真空が使用される。貫流アプローチにおいて、気化された滅菌剤は、滅菌剤蒸気をチャンバー内へ、チャンバーを通って、そしてチャンバーの外へ送達する輸送ガスの流れと混和される。このチャンバーは、僅かに陰圧または陽圧であり得る。
【００１０】
例えば、Ｅｄｗａｒｄｓら、米国特許第５，７７９，９７３号は、プラスチック上包された点滴バッグの蒸気過酸化水素滅菌を開示する。開放貫流システムは、Ｃｈｉｌｄｅｒｓ、米国特許第５，１７３，２５８に開示される。
【００１１】
しかしながら、プリオンは、周知のことだが非常に強く、そして通常の除染および滅菌の方法に対して抵抗を示す。微生物とは異なり、プリオンは、破壊するもしくは分裂させるＤＮＡまたはＲＮＡを持たない。プリオンは、その疎水性の性質のため、凝集して不溶性の塊になる傾向がある。微生物に功を奏する滅菌をもたらす多様な条件下で、プリオンは、プリオン自体および潜在的なプリオンを滅菌プロセスから保護するより堅固な塊を形成する。プリオン不活化についての世界保健機関（１９９７）協約は、高濃度の水酸化ナトリウムまたは次亜塩素酸塩中に２時間器具を浸漬し、次いで、オートクレーブ１時間を提唱している。これらの攻撃的な処理は、医療用デバイス、特に可撓性の内視鏡およびプラスチック部品、真鍮部品、またはアルミニウム部品を有する他のデバイスに、しばしば不適合である。多くのデバイスは、高温への曝露によって損傷を受ける。強アルカリのような化学的処理は、通常、医療用デバイス材料または表面に損傷を与える。グルタルアルデヒド、ホルムアルデヒド、エチレンオキシド、過酸化水素水、ほとんどのフェノール類、アルコール、あるいは乾熱、煮沸、冷凍、ＵＶ、電離、およびマイクロ波放射のようなプロセスは、一般に、無効であると報告されている。プリオンに対して有効であるが、表面に適合性の製品プロセスの明確な必要性が存在する。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は、プリオンに感染した物質で汚染された表面の処理の新しいかつ改良された装置および方法であって、上に参照された問題などを克服する、装置および方法を提供する。
【００１３】
（発明の要旨）
本発明の１つの局面に従って、プリオンの不活化の方法が提供される。この方法は、プリオンに感染した物質を保有する表面を、プリオンを攻撃する洗浄剤を用いて前処理する工程、およびこの表面をガス状形態の酸化剤を用いて処理する工程を包含する。
【００１４】
本発明の別の局面に従って、物品上のプリオンを除去および不活化するためのプリオン不活化システムが提供される。このシステムは、物品を受け入れるためのチャンバーを含む。ウェル（ｗｅｌｌ）は、高濃度のアルカリ性洗浄剤を受け入れるために、可変的にチャンバーに接続される。水の供給は、水を供給するためにこのウェルと流体接続され、高濃度のアルカリ性洗浄剤と混和してアルカリ性洗浄剤を生成する。過酸化水素蒸気の供給源は、可変的にチャンバーに流体接続される。
【００１５】
本発明の１つの利点は、機器に温和なことである。
【００１６】
本発明の別の利点は、俊敏にかつ有効にプリオンを不活化することである。
【００１７】
本発明の別の利点は、広範囲の物質とデバイスとに適合し得ることである。
【００１８】
本発明のさらなるの利点は、以下の好ましい実施形態の詳細な記述を読みかつ理解することによって、通常の当業者に明らかになる。
【００１９】
（好ましい実施形態の詳細な説明）
プリオンで汚染され得る物質を保有する機器または他のアイテムの微生物の除染のための方法およびプリオン不活化のための方法は、アルカリ性洗浄剤を用いた洗浄操作に続いて、ガス状または気相の酸化剤を用いた処理を包含する。プリオンを含む生物学的物質で汚染された表面の洗浄および除染の好ましい方法は、この表面を少なくとも１０以上のｐＨを有するアルカリ洗浄剤で洗浄する工程、およびこの洗浄した表面を、表面上の生存可能なプリオンを破壊するのに十分な時間、過酸化水素を含む蒸気に曝露する工程を包含する。
【００２０】
この洗浄組成物は、好ましくは、濃縮物（アルカリ性洗浄剤、ならびに必要に応じて以下：界面活性剤、キレート剤、抗再堆積剤（ａｎｔｉ−ｒｅｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ  ａｇｅｎｔ）、カチオン性ポリマー、および金属腐食防止剤の１つ以上を含む）の希釈によって生成される。あるいは、この洗浄組成物の成分は、別々に水または他の適切な溶媒と混合される。
【００２１】
アルカリ性洗浄剤は、好ましくはアルカリ金属またはアルカリ土類金属の水酸化物である。例示的なアルカリ性洗浄剤は、水酸化カリウムおよび水酸化ナトリウムである。この水酸化物は、好ましくは濃縮物の２０〜６０重量％で存在する。
【００２２】
キレート剤は、水に硬度を与える塩（ｗａｔｅｒ  ｈａｒｄｎｅｓｓ  ｓａｌｔ）（例えば、カルシウムの塩およびマグネシウムの塩）とのキレート化のために提供され、洗浄される装置上に沈殿を生じる。適切なキレート剤としては、カルボン酸ベースのポリマー（例えば、ポリアクリル酸）、およびエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）またはその塩が挙げられるが、これらに限定されない。以下に考察されるヘキサメタリン酸ナトリウムもまた、ある程度はキレート剤として作用する。このキレート剤は、好ましくは濃縮物の約１〜１５重量％で存在する。好ましい濃縮物組成物は、２〜１０重量％のＮａ−ＥＤＴＡおよび０．１〜３重量％のポリアクリル酸を含む。
【００２３】
界面活性剤は、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、および双性イオン界面活性剤からなる群から選択され、洗浄性能を高める。このような界面活性剤の例としては、水溶性塩または高級脂肪酸モノグリセリドモノ硫酸塩（例えば、硬化やし油脂肪酸のモノ硫酸化モノグリセリドのナトリウム塩）、高級アルキル硫酸塩（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）、アルキルアリールスルホン酸塩（例えば、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム）、高級アルキルスルホ酢酸塩、１，２ジヒドロキシプロパンスルホン酸塩の高級脂肪酸エステル、および低級脂肪族アミノカルボン酸化合物の実質的に飽和した高級脂肪族アシルアミド（例えば、脂肪酸中に１２〜１６炭素、アルキル残基もしくはアシル残基などを有する高級脂肪族アシルアミド）が挙げられるが、これらに限定されない。最後に記載したアミドの例は、Ｎ−ラウロイルサルコシン、ならびにＮ−ラウロイル、Ｎ−ミリストイルまたはＮ−パルミトイルサルコシンのナトリウム塩、カリウム塩、およびエタノールアミン塩である。
【００２４】
さらなる例は、エチレンオキシドと、長い疎水性鎖（例えば、約１２〜２０炭素原子の脂肪族鎖）を有するそれらと反応性の種々の反応性水素含有化合物との縮合生成物）であり、そしてこの縮合生成物（「エトキサマー（ｅｔｈｏｘａｍｅｒ）」）は、親水性ポリオキシエチレン部分（例えば、脂肪酸、脂肪アルコール、脂肪アミド、多価アルコール（例えば、ソルビタンモノステアレート）およびポリプロピレンオキシド（例えば、プルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）物質）とポリ（エチレンオキシド）との縮合生成物)を含む。
【００２５】
適切な両性界面活性剤は、アルキル両性カルボン酸塩（例えば、混合Ｃ−８両性カルボン酸塩界面活性剤）である。好ましい濃縮物は、約０〜５重量％の濃度で混合Ｃ８両性カルボン酸塩を含む。
【００２６】
抗再析剤は、装置上への汚物の再析を阻害する。適切な抗再析剤としては、グルコン酸塩（例えば、グルコン酸ナトリウム）およびクエン酸塩が挙げられる。ポリアクリル酸もまた、抗再析剤として作用する。抗再析剤は、好ましくは、濃縮組成物の１〜１０重量％の濃度である。特に好ましい組成物は、組成物の０．１〜３重量％の濃度（さらに好ましくは約０．３重量％の濃度）でポリアクリル酸を含み、そして、組成物の１〜１０重量％の濃度（さらに好ましくは約１〜５重量％の濃度）でグルコン酸ナトリウムを含む。
【００２７】
カチオン性ポリマーは、マグネシウム化合物、ケイ酸塩化合物、および亜鉛化合物を溶液で維持するのに役立ち、防蝕剤を溶液に維持し、そして、洗浄化合物が硬水中で使用される場合、水−硬度物質の析出（ｗａｔｅｒ−ｈａｒｄｎｅｓｓ  ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ）および洗浄装置表面上のスケール形成を阻止するのに役立つ。このようなカチオン性ポリマーの例は、水溶性のカルボン酸ポリマー（例えば、ポリアクリル酸もしくはポリメタクリル酸またはビニル付加ポリマー）として包括的に分類され得るカルボキシル化ポリマーである。企図されるビニル付加ポリマーの例としては、酢酸ビニル、スチレン、エチレン、イソブチレン、アクリル酸およびビニルエーテルとの無水マレイン酸コポリマーが挙げられる。
【００２８】
例示的なカチオン性ポリマーは、塩化ジメチルジアリルアンモニウムホモポリマー、塩化ジメチルジアリルアンモニウム／アクリルアミドコポリマー、塩化ジメチルジアリルアンモニウム／アクリル酸コポリマー、およびビニルイミダゾールビニルピロリドンコポリマーのような、ジアルキルジアルキルアンモニウム塩（例えば、ハロゲン化物）のホモポリマーまたはコポリマーである。他の適切な非セルロース系カチオン性ポリマーは、ＣＴＦＡ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙに「Ｐｏｌｙｑｕａｔｅｒｎｉｕｍ」の表示の下に続く整数において開示される。上記のポリマーの全ては、水溶性または少なくとも水中にコロイド状に分散可能である。このような低分子量（分子量範囲約１，０００〜１００，０００未満）のカルボキシル化ポリマーは、炭酸塩が洗浄タンク中の望ましくないスケールを形成するのを阻止する抗核剤として作用する。塩化ジメチルジアリルアンモニウム／アクリルアミドコポリマーであるＰｏｌｙｑｕａｔｅｒｎｉｕｍ  ７は、例示的である。このカチオンポリマーは、好ましくは濃縮物の０〜１０重量％で存在する。
【００２９】
例示的な金属防蝕剤は、濃縮物の約０〜１０重量％の量のケイ酸塩およびリン酸塩である。
【００３０】
好ましいアルカリ洗浄剤濃縮物の濃度範囲は、表１に示される。
【００３１】
【表１】
2005505359.tif 000002
特に、以下の配合は、表２に指定される。
【００３２】
【表２】
2005505359.tif 000003
表１および表２に示すように、成分の多くは、既に部分的に希釈されている。従って、例えば、配合Ａの濃縮物中の水酸化カリウムの実際の濃度は、実際は約３０重量％であり、配合Ｂでは、約２１重量％である。
【００３３】
洗浄作業を行うために、洗浄剤濃縮物を約８〜１６ｃｃ／Ｌで水に希釈し、そして洗浄されるアイテムを洗浄溶液で処理し、好ましくは、３０〜６５℃で２〜３０分間、攪拌して混合する。自動洗浄機の代表的な全体のサイクルは、３０〜６５℃の水で２分間前洗浄する工程、８〜１６ｃｃ／Ｌのアルカリ性洗浄剤で２〜３０分間洗浄する工程、水で１５秒間リンスする工程、３０〜６５℃で１分間熱リンスする工程、および最終的に乾燥する工程（もし必要ならば）を包含し得る。代替のサイクルは、単に、上記のように前リンス、アルカリ洗浄、および後リンスする工程を包含し得る。
【００３４】
洗浄濃縮物は、必要に応じて低レベルの抗菌剤（例えば、フェノール、４級アンモニウム化合物、酸化剤（例えば、次亜塩素酸ナトリウム、過酸化水素、または過酢酸）、またはそれらの組み合わせ）を含む。
【００３５】
他の洗浄剤もまた検討される。洗浄剤は、種々のカテゴリーに分類される。酵素洗浄剤は、活性プロテアーゼ、リパーゼ、および表面上における組織または汚物の分解に役立つ他の酵素を含む。これらの生成物は、プリオンおよび他のタンパク質性物質の除去を補助するが、一般的に、プリオンに対する効力に乏しい（すなわち、プリオンはプロテアーゼ耐性である）。非酵素洗浄剤は、中性、酸性、およびアルカリベースの生成物に分類され得る。これらの洗浄剤は、表面からの汚物除去に役立つ多種の賦形剤（例えば、湿潤剤および界面活性剤）を含む。
【００３６】
プリオン除去効力について、様々なｐＨを有する洗浄剤をプリオンモデルに対して試験した。牛血清アルブミン（ＢＳＡ）は、プリオンと同じく、本質的にタンパク質性であり、同様の処理下でのプリオンの応答と相関する処理プロセスへの応答を示すことが明らかにされている。より具体的には、５％ＢＳＡ溶液を調製し、類似のステンレス鋼様の試片の各々上に２ｍｌをピペットで取った。これらの試片をオーブン中４３℃で１時間乾燥し、室温まで冷却し、そして秤量した。これらの乾燥条件下で、牛血清アルブミンは、感染性プリオンタンパク質と同様に高次βシートコンホメーションをとる。これらの試片を、ＳＴＥＲＩＳ  ４４４ＴＭ洗浄機／消毒機中でその機器サイクルを用いて、ただし種々の洗浄組成物で洗浄した。この機器サイクルは、２分間の前洗浄、６５℃で２分間の洗浄、リンス、熱リンス、および乾燥サイクルを包含する。このサイクルに次いで、これらの試片を洗浄機から取り出し、冷却し、そして秤量した。図１は、この洗浄サイクルで除去された物質の量を示し、ここで、組成物Ａ、Ｂ、ＣおよびＤはＡ〜Ｄへとアルカリ度が低下するアルカリ性洗浄剤であり、組成物Ｅは中性洗浄剤（Ｒｅｎｕ−ＫｌｅｎｚＴＭ、ＳＴＥＲＩＳ  Ｃｏｒｐ．、Ｍｅｎｔｏｒ  ＯＨから入手可能）であり、組成物Ｆは酸性洗浄剤（ＣＩＰ−２２０ＴＭ、ＳＴＥＲＩＳ  Ｃｏｒｐ．から入手可能）であり、そして組成物Ｇは淡水コントロール（ｐｌａｉｎ  ｗａｔｅｒ  ｃｏｎｔｒｏｌ）である。図２は、除去された物質対理論上の総アルカリ度（ｐｐｍ）のグラフである。図２に示すように、除去される物質の量とアルカリ度との間に強い相関があり、この量は洗浄剤組成物の総アルカリ度とともに増加する。
【００３７】
記載のように用いられた洗浄組成物は、タンパク質の凝集塊を含む固定したタンパク質性物質を除去する。残存するタンパク質性物質はいずれも、引き続く不活化工程において不活化剤によってより容易に浸透される薄いフィルムの形をとる。さらに、好ましいアルカリ洗性浄剤は、洗浄工程中に除去されない残渣フィルム中のプリオンの約５０％破壊をもたらす。
【００３８】
表１に基づいて至適化したアルカリ洗浄配合物を作製し、そして以下の結果に関して上記のように分析した：
【００３９】
【表３】
2005505359.tif 000004
最も有効な配合物（ＡおよびＢで標識）の組成物は、上記の表２に特定される。好ましい洗浄剤は、０．０３０Ｍ以上のＫＯＨを有し、かつ少なくとも１０のｐＨ、好ましくはｐＨ１３またはそれより高いｐＨを有する。
【００４０】
このタンパク質除去効力は、これらの至適化した配合物のアルカリ度の作用だけでなく、組成物のその他の成分にも基づく効力である。これを図３に示す。これらの配合物は、主に３つの成分（アルカリ性成分、水コントロール成分、および界面活性剤）からなる。これらのアルカリ性成分はまた、水コントロール剤としても作用し得る。例えば、ＥＤＴＡは、アルカリ度特性と水コントロール特性の両方を配合物にもたらす。水コントロール剤は、好ましくは含まれる。なぜなら、表面の洗浄に使用される水の質がかなり変動し、さもなければ、所定の配合物の効力に影響し得るためである。１つの例は、水の硬度であり、これは逆溶解性を示し、温度が高いほど、水に硬度を与える塩の溶解性は低下する。水に硬度を与える塩はまた、ｐＨ値が高いほど溶解性が低下する。したがって、ＥＤＴＡまたは他のキレート剤は、好ましくは、硬度を与える塩を溶液中に保持するために使用される。上記の３つの成分全ては、配合物が表面を洗浄するのを可能にするために、相乗的に作用すると考えられる。これは、図３に示され、９つの市販の配合物（上側曲線）のアルカリ当量をアルカリ度源としてＫＯＨ（下側曲線）単独のアルカリ当量と比較している。
【００４１】
アルカリ度単独の効果は、それぞれの比率の水酸化カリウム（ＫＯＨ）を洗浄機に加え、そして上記のように試験することによって、評価された。アルカリ度（ＫＯＨのモル濃度として表される）の影響は、有意（図３の下側曲線に示されるように）であるが、試験した配合物（表３の例１〜９）は、タンパク質除去の効力を高めた（例えば０．０２Ｍで、市販の配合物は１ｃｍ２当たり２〜２．５ｍｇのタンパク質を除去したのに対し、ＫＯＨ単独は１ｃｍ２当たり１ｍｇ未満のタンパク質を除去した）ことが実証された。
【００４２】
本発明者らは、洗浄組成物の適切な選択は、プリオンおよび他のタンパク質性物質を除去するだけでなく、少なくとも部分的にはプリオンを不活化することも見出した。特にアルカリ性洗浄剤は、酵素洗浄剤、中性洗浄剤、または酸性洗浄剤よりも、プリオンの不活化に効果的である。
【００４３】
種々の洗浄剤を、プリオンモデル（回腸流体従属生物（ｉｌｅａｌ  ｆｌｕｉｄ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｏｒｇａｎｉｓｍ）（ＩＦＤＯ）を、改変されたマイコプラスマベースのブロス中で人工的に培養し、段階希釈によって定量し、そして類似の寒天上にプレートした）に対して試験した。ＩＦＤＯは、元々は回腸流体から抽出されたので、この名で呼ばれている。これは、体の他の器官に見出されている。ＩＦＤＯは、処置プロセスに対する応答において、実際のプリオンと強い相関を示し、したがって、プリオン活性についてのモデルとして提唱される。配合物を水で調製し、各々へＩＦＤＯのアリコートを直接的に懸濁した。試験溶液を４０℃で３０分間インキュベートし、アリコートをサンプリングして段階希釈によって定量し、そして改変された生育寒天にプレーティングした。３７℃で４８時間インキュベーションに続いて、これらのプレートをカウントし、存在するＩＦＤＯおける対数減少を得た。これらの試験結果は図４に示し、ここで、洗浄剤Ａは淡水のコントロール、洗浄剤Ｂはアルカリ性洗浄剤（ＣＩＰ１５０ＴＭ）、洗浄剤Ｃは、２番目の、若干低いアルカリ性の洗浄剤（ＣＩＰ１００ＴＭ）、洗浄剤Ｄ（ＫｌｅｎｚｙｍｅＴＭ）および洗浄剤Ｅ（Ｅｎｚｙｃａｒｅ  ２ＴＭ）は、酵素洗浄剤、洗浄剤Ｆ（Ｒｅｎｕ−ＫｌｅｎｚＴＭ）および洗浄剤Ｇ（ＮｐＨ−ＫｌｅｎｚＴＭ）は、中性洗浄剤、ならびに洗浄剤Ｈ（ＣＩＰ  ２２０ＴＭ）は、酸性洗浄剤（試験した洗浄剤の各々は、ＳＴＥＲＩＳ  Ｃｏｒｐ．から得られた）である。
【００４４】
したがって、アルカリ性洗浄剤は、プリオン物質の除去により効果的であるだけでなく、除去されて溶液中にまだ存在するプリオンの不活化と同様に、残存しているかもしれないプリオン物質の不活化においても、有意により効果的である。
【００４５】
洗浄工程後、機器または他のアイテムをプリオン不活化工程にかける。プリオン不活化工程の間、これらのアイテムを、ガス、プラズマ、または気相の酸化剤（これら全ては、本明細書中においてガス状酸化剤と呼ばれる）に接触させる。好ましいガス状酸化剤としては、過酸化水素蒸気、プラズマ／過酸化水素または過酢酸、プラズマおよび／または気相過酸（例えば、過酢酸蒸気）、二酸化塩素ガス、ならびに過酸化水素と１以上の過酸との組み合わせが挙げられる。１つの実施形態において、過酸化水素蒸気のような蒸気は、除染するアイテム上で凝結することが可能である。引き続くエアレーション工程または排気工程において、凝結した滅菌剤は、蒸気に再変換され、そしてアイテムから除去される。特に好ましいガス状酸化剤としては、過酸化水素蒸気が挙げられる。このシステムの記載では特別に、蒸気過酸化水素をプリオン不活化剤と呼ぶとはいえ、他のガス状酸化剤もまた検討されると認識される。
【００４６】
ガス状酸化剤で処理されるアイテム（既に、アルカリ性洗浄組成物で洗浄され、すすがれ、そして好ましくは乾燥されている）は、滅菌チャンバー内あるいは単にテント、フード、または他の被覆下に覆われて配置される。好ましくは、気相プリオンの除染は、環境温度を超えた温度で行われ、より好ましくは、約２５℃〜６０℃で行われ、最も好ましくは、約４５℃〜５５℃で行われる。滅菌は、充分な流量の滅菌剤蒸気が存在するならば、環境条件（１５〜３０℃）で起こり得ることもまた検討される。
【００４７】
１つの実施形態において、過酸化水素蒸気を、排気可能なチャンバーに導入する。処理するアイテムを含むチャンバーを、まず、約１００トル（１．３３×１０４Ｐａ）以下の圧力まで排気し、最も好ましくは、約１０トル（１．３３×１０３Ｐａ）以下の圧力まで排気する。もしもアイテムがチャンバー内に設置したときに乾燥していなければ、どんな液体の残存物も気化させるのに充分な間、真空を持続させる。次に、過酸化水素蒸気を、アイテムに接触させるためにチャンバーに導入する。過酸化水素の導入前および／または過酸化水素パルス（ｐｕｌｓｅ）間に真空を適用すると、包装を通過する蒸気の侵入およびアイテムの到達しにくい領域内（例えば、狭い管腔）への蒸気の侵入を補助すると考えられる。この過酸化水素濃度は、好ましくは、アイテム上およびチャンバー壁上などで凝結するのを回避するために、その飽和レベルより下に維持される。例えば、過酸化水素は７５〜９５％の飽和率で維持される。このチャンバーが、１〜５％の範囲内で％飽和率を正確に維持することが可能な場合、好ましくは飽和率はほぼ９５％であり、許容誤差にさらに近い範囲内で％飽和率が維持され得るならば、さらにより高くあり得る。
【００４８】
好ましい実施形態において、図５に例示されるように、過酸化水素の２以上のパルスがチャンバーに導入され、各パルスは排気工程に先行し、その後排気工程が続く。第一の工程は、リーク試験／調整の工程として図５に示される。この工程は、過酸化水素の非存在下で実施され、排気工程Ａ（約１０トル以下まで）、次いで維持工程Ｂを包含し、ここで、チャンバー内の圧力は、もしあれば、圧力変化を観察することによって、リークについてモニターされる。工程Ｃの間、乾燥した空気をチャンバーに導入し、過酸化水素蒸気の導入に先立ってチャンバー内の湿度を低下させる。チャンバーは、約３００〜５００トルまで圧力を上げるＥでの過酸化水素の導入に先立って、Ｄで１０トル以下まで再度排気される。必要に応じて、圧力を５００−７５０トルに増大させるために、乾燥ガスを導入する。過酸化水素は、数秒から数分のＦの間、チャンバー内の機器に接触し、次いで、Ｇで約１０トル以下の圧力まで排気される。工程Ｅ、Ｆ、およびＧは、Ｅ’、Ｆ’、およびＧ’に図示するように、１回以上繰り返される。最終のエアレーション工程において、フィルター処理した空気を、Ｈでチャンバーに導入し、次いで、Ｊで排気することによって、プリオン不活化を受けるアイテム上に吸着されて残存するどんな過酸化水素もその空気とともに引き出す。フィルター処理した空気を再度チャンバーに入れ、チャンバーを開く前に圧力を大気圧までもっていく。
【００４９】
あるいは、過酸化水素を用いたプリオンの不活化は、大気条件または大気条件以上の下で行われる。大気圧または大気圧以上が用いられる場合、例示的なプリオン不活化サイクルは、以下の４つの段階：脱湿段階、調整段階、プリオン不活化段階、および通気段階、を含む。脱湿の間、相対湿度は、チャンバー内の空気を乾燥することによって（例えば、乾燥した空気をチャンバーを通って循環させることによって）、４０％ＲＨより低い湿度まで（例えば、約１０〜３０％ＲＨまで）低下される。乾燥した空気は、水分を抽出するために乾燥剤カートリッジを空気が通ることによって、または冷蔵システムを用いることによって、供給される。調整工程の間、過酸化水素蒸気は、過酸化水素と水との液体混合物（５〜９５％過酸化水素、より好ましくは、２５〜５０％過酸化水素、最も好ましくは３０〜３７％過酸化水素）を気化することによって作製される。この蒸気は、再循環気流に導入され、そしてチャンバー内に輸送され、そして通過する。次いで、プリオン不活化工程を、長い時間をかけて行う。再循環流速、過酸化水素の圧力、および温度を測定し、一定状態条件が維持されるように制御する。好ましくは、過酸化水素の濃度は、アイテムおよびチャンバーの壁の表面上での凝結を防ぐために、過酸化水素と水蒸気の両方の凝結点よりも低く維持される。１つの実施形態は、蒸気の濃度を凝結点よりも上に上げる工程、濃縮した過酸化水素が汚染された表面上に凝結するのを可能にする工程、次いで、通気工程の間、この表面に乾燥した空気を通過させることによって蒸気を再形成させる工程を含む。
【００５０】
凝縮することなく維持され得る過酸化水素の濃度は、温度に伴い指数関数的に上昇する。例えば、２０℃において、約１〜２ｍｇ／Ｌが維持され得る。３０℃において、２〜３ｍｇ／Ｌ、４０℃において、４〜５ｍｇ／Ｌ、そして５０℃において、８〜９ｍｇ／Ｌが維持され得る。しかしながら、約６０℃を超える温度では、過酸化水素の分解が、より急速に起こる傾向があり、またプリオンは、より密に凝集する傾向があるが、より攻撃困難な構造体になる。従って、約４５〜６０℃の温度が好ましく、より好ましくは５３〜５７℃であるが、より低い温度は、曝露時間が有意に増大する場合には有効である。
【００５１】
図６に関して、適切なプリオン不活化容器は、加圧可能または排気可能な内部チャンバー１２を規定するチャンバー壁１０を備える。蒸気流入口１４および流出口１６は、チャンバー壁に規定される。発生装置２０は、チャンバー１２に滅菌剤蒸気、好ましくは、気化ペルオキシ化合物（例えば、過酸化水素、過酢酸の蒸気、またはこれらの混合物）を供給し、キャリアーガス（例えば、空気）に同伴される。
【００５２】
循環システムは、発生装置２０から流入口１４に蒸気を輸送する、蒸気注入口ライン２４を含む。過酸化水素は、チャンバー１２を通過し、そして流出口１６を通ってチャンバーから出る。必要に応じて、返送ライン２６は、部分的に使用済みの過酸化水素蒸気を発生装置に返送して補給するため、または図６に示すように、部分的に使用済みの過酸化水素が破壊機２８および乾燥機３０を通過する。この破壊機は、過酸化物を水に変換して、乾燥機において除去される。
【００５３】
代替の実施形態において、過酸化水素蒸気は、この蒸気を発生装置からの新鮮な過酸化水素を用いて補給することなく返送ラインを経由する間、チャンバーを通って再循環される。
【００５４】
あるいは、図８に示すように、チャンバー１２を出た蒸気は、蒸気を非有害産物（例えば、水および酸素）に変換する触媒コンバータ３２を通って指向される。まだ別の代替としては、チャンバーを出た蒸気は、大気に発散され、ここでは、日光がこの蒸気を水蒸気および酸素に迅速に変換する。気化した過酸化水素は、温度、圧力、曝露時間、および過酸化水素濃度に関して選択された滅菌条件に到達するまで、チャンバー１２を通って貫流する。
【００５５】
あるいは、大気システムは、密閉箱中への蒸気の投入を可能にし、特定時間の間、密閉箱中に蒸気を保持し、そして密閉箱を排気するかまたは通気する。
【００５６】
発生装置２０は、好ましくは、気化された過酸化水素の制御可能な流れを発生する装置である。特に好ましい発生装置は、液体過酸化水素の液滴を熱せられた表面に接触させることによって気化させ、そしてこの蒸気をキャリアーガス（例えば、空気）の流れに同伴する装置である。次いで、このガスは、この蒸気とともにチャンバー１２に輸送される。
【００５７】
あるいは、過酸化水素は、例えば、過酸化水素を遊離する化合物を（例えば加熱して）処理することによって、チャンバー内でインサイチュで生成される。または、他の気化方法が使用され得、例えば、排気されたチャンバー内に液体過酸化水素を導入し、ここで、真空によって気化される。
【００５８】
液体過酸化水素は、過酸化水素の水中混合物（例えば、５〜９５重量％過酸化水素溶液、より好ましくは、３０〜３７％過酸化水素（図８））として、必要に応じて単一源（ｓｉｎｇｌｅ  ｓｏｕｒｃｅ）３６からこの発生装置に供給される。この液体成分は、完全に蒸気に変換され、その結果生じた蒸気は、この蒸気が生成される液体と同一の過酸化水素相対濃度を有する。より好ましい実施形態において、図６に示すように、蒸気の成分は、別々に含まれるか、あるいは、この蒸気の組成物が、蒸発器への各成分の供給速度を変化することによって調整可能であるように、より高い濃度またはより低い濃度で含まれる。蒸発器中で、この液体過酸化水素溶液は、ノズルを通って、熱せられた表面（図示せず）の上に滴下または噴霧され、この熱せられた表面は、この酸化剤を分解することなく気化させる。他の気化技術（例えば、超音波蒸発器、噴霧器など）もまた検討される。源（例えば、より高濃度の過酸化水素の貯留層４０およびより低濃度の過酸化水素水または水の源４２）は、蒸発器に入る液体中の過酸化水素の濃度が調整可能であるように、それぞれ供給ライン４４および供給ライン４６によって蒸発器２０に連結される。
【００５９】
図６に示すように、２つの源システムが使用される場合、注入口を通って入る追加の蒸気によって変化する圧力に適応するため以外には、返送ライン２６中の使用済みの蒸気を破壊または除去することは、必要ではない（または、単一源システムよりも低い率で起こり得る）。これは、蒸気の相対濃度が、供給（ｆｅｅｄ）中の２つの成分の比率を調整することによって、最初に選択されたレベルに調整または維持され得るためである。従って、過酸化水素の液体の全体的な消費は、この供給（ｆｅｅｄ）中における所望の過酸化水素濃度を蒸発器に対して達成するために、必要に応じて、過酸化水素と水の別個の源が使用されそして併用される場合よりも、一般により低い。
【００６０】
水と過酸化水素蒸気の混合物は、キャリアーガス（例えば、空気）と混合される。このキャリアーガスは、ライン４８を通って蒸発器に供給される。ＨＥＰＡフィルター５０のようなフィルターは、好ましくは、入ってくる空気をフィルター濾過する。この空気は、好ましくは、乾燥機５２を通過させて水分を除去し、そして、キャリアーガスを過酸化水素蒸気と混合する前に、ヒーター５４を通過させてキャリアーガスの温度を上げる。
【００６１】
第１ポンプ５８および第２ポンプ６０は、貯留層４０および４２から過酸化水素および水を送り込む。別個に調整可能な制御弁６２、６４は、ライン４４、４６を通過する流体流速を制御する。あるいは、流速の制御は、ポンプ５８、６０のポンピング速度を調整することによって調整される。代替の実施形態において、単一ポンプは、２つのポンプ５８、６０と置き換わる。
【００６２】
熱ジャケット６８（例えば、水ジャケットまたは抵抗ヒーター）は、必要に応じて、実質的に全てのチャンバー１２を囲む。このジャケット６８は、チャンバー内の選択された温度を維持するのに役立つ。ヒーター７０は、熱ジャケット６８に連結され、このジャケットを加熱する。あるいは、またはさらに、チャンバー１２は、このチャンバー１２からの熱損失を低減するために断熱される。特に好ましい実施形態において、ジャケットが装着されていない領域（例えば、扉）のさらなる断熱は、チャンバー１２の内部温度を維持するのにさらに役立つ。不活化されるアイテムは、扉（図示せず）を通ってこのチャンバーに導入される。
【００６３】
プリオンに対する過酸化水素の効力を試験するために、生物学的指標評価抵抗器（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｄｉｃａｔｏｒ  ｅｖａｌｕａｔｏｒ  ｒｅｓｉｓｔｏｍｅｒ）（ＢＩＥＲ）ベッセルが、必要に応じて使用される。このＢＩＥＲベッセルは、上記のプリオン不活化チャンバーと同様の様式で作動するが、結果の再現性を確実にするために、チャンバー条件の高レベルのコントロールおよびモニタリングを可能にする。さらに、通常のプリオン不活化システムにおいて、除染されるアイテムは、チャンバーの脱湿および条件調節の前に、従来の扉を通って導入されるのに対して、試験されるアイテムは、好ましくは、チャンバー内の条件が不活化研究のために選択された条件に到達するとすぐに、ポートを通ってこのチャンバーに導入される。１つの実施形態において、このＢＩＥＲベッセルは、単に標準蒸気滅菌ベッセルであり、制御された調査に適合されている。
【００６４】
好ましくは、図７に示すように、この試片は、扉で形成された小開口部（ｓｍａｌｌ  ｏｐｅｎｉｎｇ）８０を通って、またはチャンバー壁の他のどこかを通ってチャンバーに導入される。アクセスポート８２は、チャンバー条件を必要以上に乱すことなく、チャンバーへの試験されるアイテムの迅速な挿入を可能にする。このアクセスポートは、好ましくは、中空管８４を備え、これは、この開口部８０の周囲に扉から外向きに延長する。この管８４は、内部通路８５を規定し、試料ホルダーまたはＤ−管８６を受けるために成形される。この試料ホルダー８６は、チャンバー条件に曝露されるアイテム（例えば、プリオンに感染した物質で汚染された試片）または生物学的指示器を保持するために、多数の溝８８または外部容器を備える。
【００６５】
好ましくは、アクセスポート８２は、チャンバー１２へのもしくはチャンバー１２からのガスまたは蒸気の流れを最小にするために構築され、一方では、この試片および／または生物学的指示器は、平衡条件を乱すのを避けるために、チャンバー１２に収納されている。従って、汚染された試片または生物学的指示器は、予め選択された平衡滅菌条件に、比較的瞬時に曝露される。この観点で、２つのシール９０、９２は、管８４内部に取付けられ、挿入および除去の間、試料ホルダーとこの管との間にシールを形成する。使用しない時は、この管内通路８５は、弁９６によって閉鎖される。
【００６６】
選択された曝露時間の後、この試片および／または指示器は、チャンバー１２から取り出され、そして残存プリオン活性および／または微生物活性について評価する。
【００６７】
図示された実施形態において、好ましくはファン１０４をチャンバー１２内に配置し、チャンバー内でガスを混合し、それによって、混合物の均一性を向上させ、生物学的指示器上の滅菌剤の流速を高める。多孔上板１０６および多孔下板１０８は、それぞれ必要に応じて、チャンバー１２を通るガスの層流を誘導するために、チャンバー１２内に曝露される。
【００６８】
必要に応じて、発生装置からの気化した過酸化水素の流れは、チャンバーの内または外への気化した過酸化水素の流れを調節する役割を果たす流量制御デバイス１１０（例えば、ポンプ、真空源または真空送風機、調整弁、あるいは他の調節器）によって、さらに制御される。好ましくは、流量制御１１０は、注入口ライン２４または返送ライン２６に設置される。
【００６９】
プローブ１６０（例えば、温度プローブ、圧力プローブおよび湿度プローブ）は、チャンバー１２の内部に配置され、チャンバー環境を測定する役割を果たす。これらのプローブは、環境条件の変化をモニターするモニター１６２に接続される。好ましくは、このモニター１６２は、制御装置１６４（熱ジャケット６８の温度を調節するためにヒーター７０を制御することによって、そしてまた、流量制御１１０、気化した過酸化水素の発生装置２０、ポンプ５８と６０、およびバルブ６２と６４の操作を制御することによって、チャンバー１２内部の環境条件を制御する）に信号を送る。
【００７０】
センサー１６６はまた、過酸化水素濃度を直接的に検出するために、および／または蒸気の他の成分の濃度（過酸化水素濃度がこれらから間接的に規定（ｅｓｔａｂｌｉｓｈ）され得る）を検出するために、チャンバー内部に配置される。
【００７１】
真空環境を試験するために、真空源（例えば、ポンプ１７０）は、滅菌プロセス前、滅菌プロセス中、または滅菌プロセス後に、チャンバーを脱気する。必要に応じて、ライン２６の３方向バルブ１７２は、真空ポンプ１７０に接続される。第１ポジション（ここで、ライン２６を通過するチャンバーガスは、発生装置に返送される）と第２ポジション（ここで、チャンバーガスは、ポンプ１７０に向かう）との間のバルブ１７２を切り替えることによって、チャンバー１２は脱気される。必要に応じて、触媒コンバータ１７４および乾燥機１７６は、過酸化物蒸気を分解し、そしてこの空気が発生装置２０に再導入される前に、乾燥および加熱する。
【００７２】
より好ましくは、ＢＩＥＲベッセルシステムは、過酸化水素またはキャリアーガスを再循環せずに使用される。空気および過酸化水素の混合物は、単一通過でチャンバー１２を貫流し、その後、触媒コンバータ１７４を経由してチャンバーから排出される。これは、このシステムの優れた制御を提供する。
【００７３】
制御装置１６４は、曝露サイクル中のチャンバー内部の所望のプリオン不活化条件を維持するために、測定条件に応じてチャンバー温度、チャンバー圧力、気化速度、気化される液体中の過酸化水素濃度、またはチャンバーを通過する蒸気の流速のうちの１つ以上を制御する。
【００７４】
上記のＢＩＥＲベッセルの特徴は、チャンバー条件のより慎重なモニタリングおよび制御のために、図６のプリオン不活化システム（例えば、制御システム、プローブ、センサー、ファンなど）に組み込まれることが検討される。
プリオンモデル、特に回腸流体従属生物（ＩＦＤＯ）の付着した試片の蒸気過酸化水素への曝露は、種々の試験条件および曝露時間を用いてＢＩＥＲベッセル中で実行された。
【００７５】
これらの結果は、図５に示されるサイクルと類似の、過酸化水素の真空パルスを含むサイクルが、大気条件よりもプリオンモデル（ＩＦＤＯ）を不活化する際に、より有効であることを示した（図９）。
【００７６】
上記のように、アルカリ性洗浄剤で前洗浄する工程と併用されると、医療機器などの上に残存しているどんなプリオンでも確実に除去および不活化するための有効なプロセスが提供される。
【００７７】
これらの機器または部分的、肉眼的に清浄化された他のアイテムは、通気および乾燥をしないプリオン除染システムのチャンバーに有利に（ａｄｖａｎｔａｇｅｏｕｓｌｙ）移送される。これらの機器上に存在するどんな水分も、この前調整段階／脱湿段階中に除去される。必要に応じて、これらの機器は、これらの機器が過酸化水素除染を受ける前に、滅菌したラップ（例えば、ガーゼまたはＴｙｖｅｋＴＭラップ）で包まれる。多数の代替の洗浄手順および除染手順もまた、検討される。例えば、洗浄および滅菌を組み合わせたシステムが使用され得る。または、アイテムは、滅菌および／または洗浄の間、封入されたトレイ中に配置され得る。このようなトレイは、除染プロセスが完結した後、再利用の時までアイテムの無菌性を維持するために、密閉され得る。
【００７８】
アルカリ洗浄工程を含むプリオン不活化プロセスは、その後に過酸化水素工程または他の蒸気滅菌剤工程が続き、プリオンの除去および／または不活化に有効であるだけでなく、アイテムの滅菌にも有効である。従って、医療機器および他のデバイスは、患者または機器を操作する人に危険をもたらし得る微生物もまた分解されることを確実にするために、別個の滅菌プロセスを受ける必要はない。
従って、約０．０２Ｍ〜約０．２Ｍのアルカリ濃度でのアルカリ洗浄生成物洗浄とその後に続く蒸気過酸化水素処理との組み合わせは、従来の処理（１Ｎ  ＮａＯＨおよび／または１２０℃で１時間加熱の後、微生物除染）の有効な代替であり、処理される医療器具または他のアイテムに与える害が少ない。
このように記載されるプロセスは、必要に応じて、さらなる洗浄および／または微生物除染あるいはプリオン不活化工程と併用される。例えば、液体滅菌／プリオン不活化工程は、必要に応じてガス状酸化剤工程に先行する。例えば、器具は、アルカリ洗浄され、リンスされ、過酢酸溶液で滅菌され、滅菌ラップに包まれるかまたはトレイに収納され、その後最終的に、過酸化水素で滅菌／プリオン不活化される。
１つの実施形態において、図１０に示すように、洗浄機およびプリオン除染ベッセルの両方の機能を果たす装置が使用される。これにより、アルカリ洗浄されたアイテムを取り出し、それらを別の蒸気処理ベッセルに移動する必要性が回避される。このデバイスは、図６に示すものと類似している。類似の部分は、新しい番号を付した新しい構成要素に対してプライム（’）を付して同一視される。アイテムは、この装置のチャンバー１０’中にロードされ、アルカリ性洗浄剤で洗浄され、そしてリンスされる。１つの実施形態において、第一洗浄工程は、第一洗浄剤（例えば、アルカリ洗浄剤）を使用する。その後にリンス工程が続き、次いで第二洗浄剤（例えば、酵素的洗浄剤）を用いる別の洗浄工程、そしてさらにリンス工程が続く。濃縮アルカリ洗浄剤は、液体または固形でウェル１８０に供給される。水（好ましくは、約５０〜６０℃に加熱された）は、流動ライン１８２を通ってウェルに導入され、そしてアルカリ洗浄剤または他の洗浄剤を溶解状態でチャンバー１０’に設置されたノズル１８４に運ぶ。攪拌機１８６は、チャンバー内の液体を攪拌する。必要に応じて、ポンプ１８７は、加圧下でスプレーノズルに洗浄液を供給する。どんなプリオンで汚染された物質のバルクでもアイテムから除去するのに充分な期間の後、アルカリ洗浄剤は、排出ライン１８８を経由してチャンバーから空にされる。リンス水は、１回以上のリンスサイクルの間チャンバーに導入され、そして排出される。チャンバー内の湿気は、その後、ライン４８’からチャンバーを通過する乾燥気体の流れによって減少する。必要に応じて、チャンバーは、大気圧より低い気圧で耐圧可能であり、真空ポンプ１１０’で脱気される。発生装置２０’からの過酸化水素蒸気は、次いで、滅菌空気と混合されてチャンバー内に導入される。貫流システムにおいて、過酸化水素／キャリアーガスは、プリオン不活化を達成するのに充分な時間、チャンバーを貫流する。あるいは、図５に関連して上述したシステムと類似のパルスシステムが使用される。このシステムにおいて、チャンバーは脱気され、そしてその後、過酸化水素蒸気のパルスが導入される。
このチャンバーは、チャンバー内の条件の慎重なモニタリングおよび制御のために、好ましくは温度プローブおよび圧力プローブ、化学センサー、ならびに図７に関連して前述したものと類似の制御システムを取り付けられる。バルブ１９０、バルブ１９２は、それぞれ、蒸気供給および洗浄液供給を選択的に遮断するために、提供される。
必要に応じて、１つ以上のアイテムは、洗浄されそしてプリオン除染されるために、蒸気ポート１４’および洗浄液ポート１８４と連結されたトレイ１９４中に封入される。洗浄流体および／または洗浄蒸気は、このトレイを貫流する。このサイクルの最後には、バルブ１９６、バルブ１９８は、トレイへのアクセスを封鎖するために閉鎖され、従って、使用時まで、風媒性の汚染物質の進入に対してトレイを密封する。
本発明は、プリオンに特に関連して記述しているが、他のタンパク質性物質もまた本明細書に記載されるプロセスによって不活化され得ると評価される。さらに、プリオン不活化は、除染ベッセルまたはチャンバーに特に関連して記述しているが、部屋または他の包囲物およびこれらの内容物（例えば、無菌的充填ライン）は、上記と類似の方法で洗浄およびプリオン不活化されることもまた検討される。
本発明の範囲を制限する意図はなく、以下の実施例は、プリオンモデルにおける蒸気滅菌の効果を示す。
【実施例】
【００７９】
（実施例１）
蒸気過酸化水素の効力を試験するために、上記（図７）のＢＩＥＲベッセルを、プリオンモデル（ＩＦＤＯ）の減少を検討するために使用する。ステンレス鋼試片は、滅菌培地中にＩＦＤＯを懸濁したサンプルを播種し、そして乾燥する。乾燥した試片を、３つのプロセスの１つに曝露する。第一プロセスにおいて、試片を、大気圧で且つ１．５ｍｇ／ｌの濃度で且つ３０℃の温度で１５分間、蒸気過酸化水素に曝露する。第二プロセスにおいて、播種した試片を、大気圧で且つ３ｍｇ／ｌの濃度で且つ４０℃の温度で１５分間、蒸気過酸化水素に曝露する。第三プロセスにおいて、圧力を約１０トル（１．３３×１０３Ｐａ）未満に下げるために、真空ポンプをチャンバーに適用する。次いで、３０℃の過酸化水素蒸気の６パルスを約２．５ｍｇ／ｍｌの濃度で導入し、図５に関連して記述されているように、各々を、約１０トル脱気工程によって間隔をあける。図９は、得られた結果を示す。ここで留意すべきは、これらの試片を、真空サイクル試験のために全サイクルに曝露し、従ってこれらの試片はグラフに示した時間と無関係であることである。
残存しているＩＦＤＯの量は、もしあれば、試片に残存しそしてコロニーの生育が観察されるＩＦＤＯを培養することによって得られる。真空処理サンプル上で発育したコロニーの数は、１ｌｏｇ未満（すなわち、真空プロセスにおける少なくとも６ｌｏｇのＩＦＤＯの減少）である。
【００８０】
（実施例２）
蒸気過酸化水素の温度および濃度の影響を、図７に示したものと類似の試片導入ポートを有する真空滅菌器において検討する。滅菌培地中にＩＦＤＯを懸濁したサンプルをステンレス鋼試片に播種し、そして乾燥する。乾燥した試片を、始めに約１０トル未満の圧力に低下させたＢＩＥＲベッセル中に曝露する（１．３３×１０３Ｐａ）。選択された温度および濃度の過酸化水素蒸気の単一パルスを導入する。結果は、表４に示す。
【００８１】
【表４】
2005505359.tif 000005
残存しているＩＦＤＯの量は、もしあれば、試片に残存しそしてコロニーの生育が観察されるＩＦＤＯを培養することによって得られる。真空処理サンプル上に残存するＩＦＤＯから発育したコロニーの数は、１ｌｏｇ未満（すなわち、真空プロセスにおける少なくとも６ｌｏｇのＩＦＤＯの減少）である。
【００８２】
（実施例３）
タンパク質の分解を評価するために設計した実験は、プリオンモデルとしてＢＳＡタンパク質を用いて実施する。ＢＳＡの懸濁液のアリコートを、ステンレス鋼試片上に滴下し、乾燥させる。このタンパク質で汚染した試片を、蒸気過酸化水素処理プロセス（約１．５ｍｇ／Ｌ蒸気過酸化水素を用いて２５℃でＳＴＥＲＩＳ  ＶＨＰ  １０００ＴＭ滅菌器中で１時間）の前または後に検査する。より小さいフラグメントから完全なタンパク質を分離するために、ゲル電気泳動によって、回復したタンパク質を評価する。結果は、ＶＨＰがタンパク質を効果的に破壊することを示す。
【００８３】
（実施例４）
ＩＦＤＯタンパク質における温度および濃度の影響を、大気条件下で評価する。試片は、ステンレス鋼試片上にＩＦＤＯの水中懸濁液のアリコートを滴下し、次いで乾燥させることによって、作製する。この試片を、ＴｙｖｅｋＴＭラップで形成されたポーチ中に収納する。ラップされた試片を、１．５ｍｇ／Ｌかつ３０℃または３．０ｍｇ／Ｌかつ４０℃の過酸化水素に曝露する。図１１は、経時的に試片上に残存するＩＦＤＯの濃度を示す。より高い温度および濃度の影響は、有意である。
【００８４】
（実施例５）
ＩＦＤＯ播種した試片は、実施例４のように作製し、そして、図１２に図解的に示したように、真空チャンバー中で蒸気過酸化水素真空サイクルに曝露する。２つの脱気工程の後、１パルス（またはある場合には２パルス）の過酸化水素を、このチャンバーに１０分間導入する。次いで、このチャンバーを脱気し、その後に通気パルスが続く。さらなる脱気の後、このチャンバーを周囲圧に直面させ、そして試片を取り出す。表５は、ＩＦＤＯ種における対数減少の点から、種々の温度および蒸気過酸化水素濃度に関する結果を示す。
【００８５】
【表５】
2005505359.tif 000006
（実施例６）
サンプルを、実施例４と同様に作製するが、この場合は、さらに０％、１０％または５０％の血液で汚染させて作製する。これらのサンプルを、図１２に示すように、３０℃もしくは５０℃で過酸化水素蒸気の３パルスまたは６パルスのいずれかを用いた蒸気過酸化水素滅菌サイクルに曝露する。表６に示す結果は、プリオン除染工程の前にアイテムを洗浄することの重要性を示す。
【００８６】
【表６】
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第１回目の全ての汚物の除去（０％血液を意味する）または大部分の汚物の除去（１０％血液によって示される）によって、蒸気過酸化水素サイクルは、特に５０℃サイクルおよび７．０ｍｇ／Ｌ過酸化水素濃度を使用する場合、プリオンの除去に有効であり得ることが示され得る。
【００８７】
（実施例７）
試片は、ヒトＣＪＤ汚染された脳ホモジェネートの水中懸濁液のアリコートをステンレス鋼試片上に滴下し、次いで乾燥させることによって作製される。この試片を、ＴｙｖｅｋＴＭラップで形成されたポーチ中に収納する。これらのラップされた試片を、前洗浄工程なしに、大気圧または真空条件下のどちらかで、過酸化水素存在下と非存在下の両方で、種々の処理プロセスに曝露する。曝露後、これらの試片を、超音波処理（ｓｏｎｉｆｉｃａｔｉｏｎ）によってリン酸緩衝液生理食塩水中で抽出する。抽出液を濃縮し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離し、そしてウエスタンブロットする。プリオンタンパク質（ＰＲＰＳＣ）の存在または非存在を、抗体アレイを用いて決定する。表７に示す結果は、蒸気過酸化水素は有害な形態のプリオンタンパク質の破壊に有効であることを示す。
【００８８】
【表７】
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【図面の簡単な説明】
【００８９】
本発明は、種々の成分および成分の配列の形態をとり得、ならびに種々の工程および工程の配列の形態をとり得る。これらの図面は、好ましい実施形態を例証する目的のためのみであって、本発明を限定するものと解釈されるべきではない。
本発明の好ましい実施形態の詳細な説明は、添付の図を参照して行われる。
【図１】図１は、種々の洗浄組成物を用いたタンパク質性物質の除去を図示する。
【図２】図２は、タンパク質性物質対アルカリ度のグラフである。
【図３】図３は、タンパク質性物質の除去におけるＫＯＨ濃度単独の影響と洗浄配合物中の全体のアルカリ度の影響とを比較する。
【図４】図４は、プリオン（ＩＦＤＯ）モデルの減少における種々の洗浄組成物の効力を比較する。
【図５ａ】図５ａは、例示的な真空中プリオン不活化サイクルにおける圧力の変化を示すプロットである。
【図５ｂ】図５ｂは、例示的な大気のサイクルを示すプロットである。
【図６】図６は、プリオン不活化システムの概略図である。
【図７】図７は、不活化条件の制御および評価に適合させた図６のプリオン不活化システムを示す。
【図８】図８は、プリオン不活化システムの代替の実施例の概略図である。
【図９】図９は、ｌｏｇＩＦＤＯ対３つのプリオン不活化サイクルのための時間のプロットである（ＡＴＭ＝大気条件）。
【図１０】図１０は、一体化した洗浄機とプリオン不活化システムの略図である。
【図１１】図１１は、ＩＦＤＯ濃度対ＩＦＤＯを植え付けた試片（ｃｏｕｐｏｎ）を１．５ｍｇ／Ｌかつ３０℃でおよび３．０ｍｇ／Ｌかつ４０℃で過酸化水素蒸気に曝露した時間のプロットである。
【図１２】図１２は、例示的な真空／蒸気過酸化水素サイクルの略図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５ａ】
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【図５ｂ】
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【図６】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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