(57)【要約】本発明は、抗原ＣＡ１２５の内部イメージを表す抗イディオタイプ抗体と反応し、かつ該抗体自体に結合する、すなわち腫瘍関連抗原ＣＡ１２５に特異的である、特異的抗−抗イディオタイプ抗体に関する。特に本発明は抗イディオタイプ抗体ＡＣＡ１２５と反応するＣＡ１２５特異的抗−抗イディオタイプ抗体に関する。更に本発明はこれらの抗−抗イディオタイプ抗体を含有する、ＣＡ１２５発現性腫瘍、特に卵巣癌腫の治療のための医薬品組成物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗−抗イディオタイプ抗体であって、
（ｉ）抗原ＣＡ１２５の内部イメージを表す抗イディオタイプ抗体と反応し、
（ｉｉ）腫瘍関連抗原ＣＡ１２５に特異的であり、かつ該抗原と反応し、かつ
（ｉｉｉ）ＣＡ１２５発現性腫瘍細胞に対する抗体依存性細胞障害を仲介する
ことを特徴とする抗−抗イディオタイプ抗体。
【請求項２】
ハイブリドーマ３Ｄ５（ＤＳＭ ＡＣＣ２１２０）により産生されるモノクローナル抗イディオタイプ抗体ＡＣＡ１２５と反応する、請求項１記載の抗−抗イディオタイプ抗体。
【請求項３】
ポリクローナル免疫応答の結果として、抗原ＣＡ１２５の内部イメージを表す抗イディオタイプ抗体でのワクチン接種によって産生される、請求項１又は２記載の抗−抗イディオタイプ抗体。
【請求項４】
組み換えにより産生される、請求項１又は２記載の抗−抗イディオタイプ抗体。
【請求項５】
モノクローナル抗体としてハイブリドーマ細胞によって産生される、請求項１又は２記載の抗−抗イディオタイプ抗体。
【請求項６】
請求項５記載のモノクローナル抗−抗イディオタイプ抗体を産生する、ヒトハイブリドーマ細胞株。
【請求項７】
請求項１から５までのいずれか１項記載の抗−抗イディオタイプ抗体のフラグメントであって、抗−抗イディオタイプ抗体の結合特異性を有する、抗−抗イディオタイプ抗体のフラグメント。
【請求項８】
ヒトＦｃ部と結合されていてよい抗−抗イディオタイプ抗体のＦａｂフラグメント又はＦ（ａｂ）２フラグメントを含む、請求項７記載のフラグメント。
【請求項９】
請求項１から５までのいずれか１項記載の抗−抗イディオタイプ抗体又は請求項７又は８記載のフラグメントを含む医薬品組成物。
【請求項１０】
更に医薬品に慣用の賦形剤及び助剤を含有する、請求項９記載の医薬品組成物。
【請求項１１】
ＣＡ１２５発現性腫瘍の治療及び／又は予防のための、請求項９又は１０記載の医薬品組成物。
【請求項１２】
請求項１から５までのいずれか１項記載の抗−抗イディオタイプ抗体又は請求項７又は８記載のフラグメントの、ＣＡ１２５発現性腫瘍の治療及び／又は予防のための使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の詳細な説明
本発明は、抗原ＣＡ１２５の内部イメージを表す抗イディオタイプ抗体と反応し、そして更にその抗原自体に結合する特異的な抗−抗イディオタイプ抗体に関する。特に本発明は、腫瘍関連抗原ＣＡ１２５の内部イメージを表す抗−イディオタイプＡＣＡ１２５と反応する抗−抗イディオタイプ抗体に関する。更に本発明は、前記の抗−抗イディオタイプ抗体を含有する、ＣＡ１２５発現性腫瘍、特に卵巣癌腫の治療のための医薬品組成物に関する。
【０００２】
腫瘍疾患の治療のための免疫療法は数年来、数多くの研究論文の対象である。非常に様々な腫瘍タイプに関する腫瘍関連抗原が知られているが、腫瘍の退縮はかかる抗原でのワクチン接種によっては、まれにしか観察されない。こうして、例えば腫瘍関連抗原ＣＡ１２５でのワクチン接種によって卵巣癌腫を治療することが調査された。しかしながら免疫系による腫瘍排斥は不成功に終わった。腫瘍関連抗原ＣＡ１２５と自己抗原との間の近縁関係が抗腫瘍免疫性の障害の原因となると推測される。
【０００３】
腫瘍関連抗原ＣＡ１２５に対する生物の免疫寛容を克服するための有望な仮説は、抗原ＣＡ１２５の内部イメージを表す抗イディオタイプ抗体を使用下でのイディオタイプネットワーク仮説に基づくものである。前提条件は、その抗原結合部位で広範なＣＡ１２５抗原決定基のコピーを顕現し、従って抗原ＣＡ１２５を機能的に模倣する抗イディオタイプ抗体である。
【０００４】
ハイブリドーマ３Ｄ５（ＤＳＭ ＡＣＣ２１２０）によって産生される抗イディオタイプ抗体ＡＣＡ１２５は腫瘍関連抗原ＣＡ１２５を模倣し、そしてＣＡ１２５発現性腫瘍の免疫化のために使用される（ＥＰ０７００３０５号Ｂ１及びＵＳ５，８５８，３６１号）。
【０００５】
本発明の課題は、抗原ＣＡ１２５の内部イメージを表す抗イディオタイプ抗体、特に抗イディオタイプ抗体ＡＣＡ１２５に対する、腫瘍関連抗原ＣＡ１２５自体と反応し、そうしてＣＡ１２５発現性腫瘍細胞に対する抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）を仲介しうる抗−抗イディオタイプ抗体を提供することであった。
【０００６】
前記課題は、本発明によれば、ＣＡ１２５発現性腫瘍細胞に対するＡＤＣＣを引き起こしうる抗−抗イディオタイプ抗ＣＡ１２５抗体を見出したことで解決された。
【０００７】
従って本発明の対象は、
（ｉ）抗原ＣＡ１２５の内部イメージを表す抗イディオタイプ抗体と反応し、
（ｉｉ）腫瘍関連抗原ＣＡ１２５に特異的であり、かつ該抗原と反応し、かつ
（ｉｉｉ）ＣＡ１２５発現性腫瘍細胞に対する抗体依存性細胞障害を仲介する
抗−抗イディオタイプ抗体である。
【０００８】
本発明による抗体は、いわゆるＡｂ１′−抗体である。腫瘍関連抗原ＣＡ１２５から始まって、前記の抗原から誘導され、そしてこの抗原に特異的な抗体Ａｂ１−抗体が挙げられる。今まで公知のＡｂ１−抗体はマウス起源であり、そしてＡＤＣＣ反応を仲介し得ない。ＣＡ１２５抗原による免疫化によって誘導されるイメージを有するＡｂ１−抗体は抗原認識のための特異的な可変断片を有する。従ってＡｂ１−抗体はＣＡ１２５と特異的に結合可能である。しかしながら該可変断片は、抗原としてさえも作用する配列を含む。この配列はイディオタイプ決定基と呼ばれ、それ自体免疫原であり、従って抗イディオタイプ抗体、いわゆるＡｂ２抗体のイメージを誘導しうる。かかるＡｂ２抗体の例はＡＣＡ１２５である。Ａｂ２抗体の幾つかは、本来の抗原、従ってＣＡ１２５の立体構造（内部イメージ）を模倣できる。これらのＡｂ２抗体は、従って他方で抗体の誘導のための抗原としてさえも使用可能である。特に患者における抗イディオタイプＡｂ２抗体との接触によって抗−抗イディオタイプ抗体、いわゆるＡｂ３抗体はイディオタイプ陽性Ｂ細胞により誘導できる。Ａｂ３抗体は抗イディオタイプ抗体Ａｂ２に結合するが、その一方でかかる抗体は相応の抗原、本願ではＣＡ１２５には結合しない。本発明は目下、抗イディオタイプ抗体Ａｂ２によって誘導されているいわゆるＡｂ１′−抗体に関する。本発明によるＡｂ１′−抗体は、抗イディオタイプ抗体Ａｂ２とも本来の腫瘍抗原ＣＡ１２５とも結合可能である。これらの本発明による抗体は、更にＣＡ１２５発現性腫瘍細胞に対する抗体依存性細胞障害を仲介しうる。更に本発明によるＡｂ１′−抗体は、特にヒト起源の抗体である。
【０００９】
本発明の有利な実施形において、ハイブリドーマ３Ｄ５（ＤＳＭ ＡＣＣ２１２０）によって産生されるモノクローナル抗イディオタイプ抗体ＡＣＡ１２５とであるが、特に抗原ＣＡ１２５と反応する抗体である。
【００１０】
本発明による抗−抗イディオタイプ抗体は、ポリクローナル抗体としてもモノクローナル抗体としても存在してよい。
【００１１】
本発明によるポリクローナル抗−抗イディオタイプ抗体は、慣習的で当業者に公知のいかなるポリクローナル抗体の製造方法によっても製造できる。有利にはポリクローナル抗−抗イディオタイプ抗体は、抗イディオタイプ抗体によるワクチン接種によってポリクローナル免疫応答として産生される。特に有利にはポリクローナル抗−抗イディオタイプ抗体はモノクローナル抗イディオタイプ抗体ＡＣＡ１２５でのワクチン接種によって産生される。
【００１２】
本発明によるモノクローナル抗−抗イディオタイプ抗体は、慣習的で当業者に公知のモノクローナル抗体の製造方法によって製造できる。例えばヒト細胞を使用するハイブリドーマ技術が適当である。従って本発明の更なる対象は、本発明によるモノクローナル抗−抗イディオタイプ抗体を産生するヒトハイブリドーマ細胞株である。モノクローナル抗体の製造のためにマウスハイブリドーマ細胞を使用する場合には、確かに完全な抗−抗イディオタイプ抗体の結合能を示すが、この形においては、すなわちマウスモノクローナル抗体としてはＡＤＣＣ反応を仲介できない抗体を得ることができるにすぎない。
【００１３】
かかるマウス抗体又はそのフラグメント、特にＦａｂフラグメント又はＦ（ａｂ）２フラグメントは、本発明による抗−抗イディオタイプ抗体を得るためにヒトＦｃ部にカップリングさせねばならない。
【００１４】
本発明の更なる有利な実施形において、抗−抗イディオタイプ抗体は組み換えにより製造できる。
【００１５】
本発明の更なる対象は、完全な抗−抗イディオタイプ抗体の結合能を有し、同時にＡＤＣＣ反応を仲介する本発明による抗−抗イディオタイプ抗体のフラグメントに関する。有利には本発明によるフラグメントは少なくとも１つのＦａｂフラグメント又はＦ（ａｂ）２フラグメント並びに１つのヒトＦｃ部を含む。このために、完全な抗−抗イディオタイプ抗体の結合能を有する少なくとも１つのＦａｂフラグメント又はＦ（ａｂ）２フラグメントを含むフラグメントをＡＤＣＣ反応を仲介するヒトＦｃ部とカップリング又は融合させることも可能である。該フラグメントは、有利には抗原ＣＡ１２５の内部イメージを表す抗イディオタイプ抗体と反応でき、腫瘍関連抗原ＣＡ１２５に特異的であり、かつＣＡ１２５発現性腫瘍細胞に対する抗体依存性細胞障害を仲介しうる。更に本発明によるフラグメントは、慣習的な当業者に公知の方法、例えばタンパク質分解、制限タンパク質分解、組み換え発現などによって製造できる。
【００１６】
本発明のもう一つの対象は、本発明による抗−抗イディオタイプ抗体又は本発明によるそのフラグメントを含む医薬品組成物である。本発明による医薬品組成物は、付加的に場合により医薬品に慣用の賦形剤及び助剤を含有してよい。
【００１７】
本発明による医薬品組成物は、局所的に、非経口で、静脈内で、筋内で、皮下に又は経皮で適用可能な形で存在してよく、そして慣習的な当業者に公知の方法により製造できる。有利には本発明による医薬品組成物は溶液又は懸濁液の形で製造される。
【００１８】
本発明による医薬品組成物は、ＣＡ１２５発現性腫瘍の治療及び／又は予防のために使用される。有利には本発明による医薬品組成物は卵巣癌腫の治療及び／又は予防のために使用される。
【００１９】
この場合に、本発明による医薬品組成物を、腫瘍疾患を患う患者に、相応のＣＡ１５発現性腫瘍の治療を達成するのに十分な量で適用する。適用されるべき医薬品組成物の量は、この場合に多くの要素、例えば適用型（注射、点滴など）、腫瘍疾患のタイプ及び程度並びに患者の年齢、体重及び一般的状態に依存し、そしてその量は腫瘍疾患の分野では前記の要素を考慮して当業者により容易に規定できる。
【００２０】
本発明による医薬品組成物の適用は、局所的、非経口的、静脈内、筋内、皮下又は経皮で行われる。有利には医薬品組成物は注射もしくは点滴で投与される。個々の場合において、該医薬品組成物の体腔（Koerperhoehl）への目標を定めた注入を行うことができ、又はカテーテルを介して、腫瘍領域もしくは腫瘍が存在する器官の血管中に行うことができる。
【００２１】
以下の図面並びに以下の実施例は本発明を詳細に具体的に示すものである。
【００２２】
図面
図１は、ポリクローナル免疫応答を、抗イディオタイプ抗体ＡＣＡ１２５と反応する抗−抗イディオタイプ抗体（いわゆるＡｂ３抗体）の形で産生しえた患者集団を示している。抗原ＣＡ１２５と特異的に反応するポリクローナル抗体（いわゆるＡｂ１′−抗体）の誘導並びにＡＤＣＣ応答
図２は、２６人の患者のうち１４人におけるＣＡ１２５陽性細胞（ＯＡＷ−４２）に対するＣＡ１２５陰性細胞（ＳＫＯＶ−３）に対してのＡＤＣＣ応答の検出を示している。
【００２３】
図３は、ＡＤＣＣ陽性患者（Ａ及びＣ）及びＡＤＣＣ陰性患者（Ｂ及びＤ）におけるＣＡ１２５特異的Ａｂ１′抗体の検出を示している。Ａ及びＢ：ＣＡ１２５陽性細胞（ＯＡＷ−４２）とＣＡ１２５陰性細胞（ＳＫＯＶ−３）への免疫前血清及び免疫後血清（１：２０）の結合。Ｃ及びＤ：免疫後血清（１：５０）中での単離されたＣＡ１２５抗原による遊離のＡｂ１′−抗体及びＡｂ１′−免疫複合体の検出。
【００２４】
免疫前血清は、ＣＡ１２５抗原と反応性を示さない。
【００２５】
実施例
導入部
臨床段階Ｉ／ＩＩ研究の範囲で、卵巣癌腫患者を、腫瘍関連抗原ＣＡ１２５を機能的に模倣する抗イディオタイプ抗体ＡＣＡ１２５（Ａｂ２）で免疫化した。ＡＣＡ１２５（Ａｂ２）に対する特異的抗−抗イディオタイプＡｂ３抗体の誘導は、免疫反応のための代替マーカとしてみなし、そして患者の生存に有効な影響を有する。本研究の目的は、Ａｂ３応答を詳細にキャラクタリゼーションし、そして、抗−抗イディオタイプＡｂ３抗体がＣＡ１２５発現性腫瘍細胞に対する抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）をどのように仲介しうるかを示すことにある。
【００２６】
実施
２６人のＡｂ３陽性患者（Ａｂ３＞１００００ａｒｂＵ／ｍｌ）の集団において、ＣＡ１２５特異的Ａｂ１′抗体の誘導を種々のアッセイ方法で評価した。膜在ＣＡ１２５抗原への結合の検出のために、ＣＡ１２５陽性卵巣癌腫細胞（ＯＡＷ−４２）及びＣＡ１２５陰性卵巣癌腫細胞（ＳＫＯＶ−３）を患者の免疫前血清及び免疫後血清（１：２０）と一緒にインキュベートし、そしてＦＩＴＣ結合抗ヒトＩｇＧによる呈色後にフローサイトメトリーにより分析した。
【００２７】
更に遊離のＡｂ１′−抗体並びに循環ＣＡ１２５に結合しているＡｂ１′−抗体（複合体）の反応性を血清（１：５０）中で単離されたＣＡ１２５抗原で調査した（ＥＬＩＳＡ）。このために、ＣＡ１２５で被覆されたマイクロタイタープレートを免疫前血清及び免疫後血清と一緒にインキュベートし、そして結合されたＡｂ１′をＡＣＡ１２５（Ａｂ２）とＨＲＰ標識された抗マウスＩｇＧ（Ｆｃ特異的）での２段階検出によって検出した。Ａｂ１′−免疫複合体の検出は、同様に該複合体の解離後に血清（１：５０）の酸処理及び熱処理によって行った。
【００２８】
更にＡｂ１′により仲介されるＡＤＣＣ応答を、健康な発端者のＰＢＬによるＣＡ１２５陽性細胞もしくはＣＡ１２５陰性細胞の溶解（エフェクター：ターゲット比  ２５：１）をもとにして患者の熱不活性化された免疫前血清及び免疫後血清を添加した後に調査した（方法：ＬＤＨ放出アッセイ）。
【００２９】
結果
免疫化後に陽性Ａｂ３免疫応答を有する抗イディオタイプ抗体ＡＣＡ１２５と反応した２６人の患者のうち２２人において、種々の検出法によって特異的Ａｂ１′−抗体のイメージを検出した。しかしながらこの場合に単離されたＣＡ１２５抗原と卵巣癌腫細胞上のＣＡ１２５との反応性の間に矛盾が見られる。それというのも１８人の患者はＣＡ１２５陽性細胞に対する特異抗体を有するが、その一方で単離されたＣＡ１２５との反応性は６人のケースでのみ検出できたに過ぎないからであった。アッセイ方法の異なる感度並びにＣＡ１２５の精製によるエピトープの損失がこの現象を説明できるものである。しかしながらＡｂ１′−抗原複合体の解離後に、２０人の患者で、単離された抗原との反応性が検出できた（図１）。
【００３０】
２６人の患者のうち１４人に、免疫後血清の添加後にＣＡ１２５陽性細胞に対するＡＤＣＣが観察された（１０．８〜５０％の溶解）（図２）。これは、Ａｂ１′−抗体がＣＡ１２５陽性細胞に特異的に結合する患者であった（図３Ａ）。それに対して、１２人のＡＤＣＣ陰性患者では、４人のケースでのみＣＡ１２５陽性細胞への弱い結合が見出された（図３Ｂ）。遊離のＡｂ１′−抗体もしくはＡｂ１′−複合体と単離されたＣＡ１２５抗原との反応性とＡＤＣＣ応答との間の直接的な相関関係は存在しない。それというのもどちらも同様にＡＤＣＣ陰性患者とＡＤＣＣ陽性患者で検出できなかったからである（図３Ｃ及びＤ）。
【００３１】
結論
抗イディオタイプワクチンＡＣＡ１２５は、ＣＡ１２５に対する免疫寛容を克服できる。それというのもＡｂ３陽性患者の８５％においてＣＡ１２５特異的なＡｂ１′−抗体が検出できたからである。本研究の結果は、ＣＡ１２５陽性細胞に結合するＡｂ１′−抗体が、従って抗イディオタイプワクチン接種の考えられる細胞毒性メカニズムである特異的ＡＤＣＣ応答を媒介できることを示している。しかしながらＡｂ１′−抗体と循環ＣＡ１２５の間の免疫複合体のイメージは、ヒトの場合には細胞毒性反応の誘導をＡＤＣＣの形で抑制すると思われる。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１】図１は、ポリクローナル免疫応答を、抗イディオタイプ抗体ＡＣＡ１２５と反応する抗−抗イディオタイプ抗体（いわゆるＡｂ３抗体）の形で産生しえた患者集団を示している
【図２】図２は、２６人の患者のうち１４人におけるＣＡ１２５陽性細胞（ＯＡＷ−４２）に対するＣＡ１２５陰性細胞（ＳＫＯＶ−３）に対してのＡＤＣＣ応答の検出を示している
【図３】図３は、ＡＤＣＣ陽性患者（Ａ及びＣ）及びＡＤＣＣ陰性患者（Ｂ及びＤ）におけるＣＡ１２５特異的Ａｂ１′抗体の検出を示している
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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