(57)【要約】アンサマイシンおよびその製造および使用方法を記載する。少なくともこれらアンサマイシンのあるいくつかは、改善された水性製剤化能力、化学安定性、およびバイオアベイラビリティの1またはそれ以上を示す。記載した誘導体のいくつかはダイマーである。これらおよび記載した他のものは、全部の化合物を薬剤およびプロドラッグとして有用にする利点が予想される1またはそれ以上の可溶化群を含むことができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式(I)：
【化１】
2005530689.tif 000278
で示される化合物またはその医薬的に許容される塩
［式中、Xは、所望により置換された(C1-C20)アルキル、所望により置換された(C1-C20)ヘテロアルキル、所望により置換された(C2-C20)アルケニル、所望により置換された(C2-C20)ヘテロアルケニル、所望により置換された(C2-C20)アルキニル、所望により置換されたアリール、所望により置換されたヘテロアリール、所望により置換されたアリールアルキル、所望により置換されたヘテロアリールアルキル、所望により置換されたシクロアルキル、所望により置換されたシクロヘテロアルキル、-N(R9)-C(O)R7、-N(R9)-C(O)-OR7、-N(R9)-C(O)-NR7R8、-N(R9)-C(S)R7、-N(R9)-C(S)-OR7、-N(R9)-C(S)-NR7R8、-OR6、および-N(R14)(R15)からなる群から選ばれる；
R1およびR2は、共にHであるかまたは一緒になって結合を形成する；
R3は、Hおよび所望により置換されたC1-C3アルキルからなる群から選ばれる；
R4およびR5は、独立してH、-OH、O-アルキル、O-アセチル、-O-アリール、OC(O)R10、-SO2-R10、および-NHR10からなる群から選ばれるか、または一緒になってオキソ(=O)またはヒドロキシルアミノ アルコキシイミンもしくはアリールオキシイミン、チオケトを形成する；
ここで、R10は、H、所望により置換された(C1-C20)アルキル、所望により置換された(C1-C20)ヘテロアルキル、所望により置換されたアリール、および所望により置換されたヘテロアリールからなる群から選ばれる；
R6は、H、所望により置換されたC1-C8アルキル、所望により置換されたC5-C8アリール、および所望により置換されたC1-C6アシルからなる群から選ばれる；
R7およびR8は、それぞれ独立してH、所望により置換された(C1-C20)アルキル、所望により置換された(C1-C20)ヘテロアルキル、所望により置換された(C2-C20)アルケニル、所望により置換された(C2-C20)ヘテロアルケニル、所望により置換された(C2-C20)アルキニル、所望により置換されたアリール、所望により置換されたヘテロアリール、所望により置換されたアリールアルキル、所望により置換されたヘテロアリールアルキル、所望により置換されたシクロアルキル、および所望により置換されたシクロヘテロアルキルからなる群から選ばれるか、または一緒になって所望により置換された4-7員環を形成する；
R9は、H、所望により置換されたC1-C6アルキル、所望により置換されたC5-C8アリール、および所望により置換されたC5-C8ヘテロアリールからなる群から選ばれるか、またはR7またはR8と一緒になって所望により置換された4-7員環を形成する；
R14およびR15は、独立してH、所望により置換された(C1-C20)アルキル、所望により置換された(C2-C20)ヘテロアルキル、所望により置換された(C2-C20)アルケニル、所望により置換された(C2-C20)ヘテロアルケニル、所望により置換された(C2-C20)アルキニル、所望により置換されたアリール、所望により置換されたヘテロアリール、所望により置換されたアリールアルキル、所望により置換されたヘテロアリールアルキル、所望により置換されたシクロアルキル、および所望により置換されたシクロヘテロアルキルからなる群から選ばれるか; または
R14とR15が一緒になって所望により置換された4-7員の複素環または炭素環を形成する；
ここで、Y1およびY2は、独立してH、-OH、O-アルキル、O-アセチル、-O-アリール、OC(O)R10、-SO2-R10、および-NHR10からなる群から選ばれるか、または一緒になってオキソ(=O)、またはヒドロキシルアミノ アルコキシイミンもしくはアリールオキシイミン、チオケトを形成する(ここで、R10は、H、所望により置換された(C1-C20)アルキル、所望により置換された(C1-C20)ヘテロアルキル、所望により置換されたアリールおよび所望により置換されたヘテロアリールからなる群から選ばれる。)か; または
Y1またはY2がR4またはR5と一緒になって所望により置換された5-7員の複素環もしくは炭素環を形成する；
ただし、Y1およびY2が共にHであり、XがN(R14)(R15)または-OR6である場合は、R4、R5、R6、R14、およびR15の少なくとも1つが-OP(O)(OR16)2(ホスフェート)、-CH2P(O)(OR16)2(ホスホネート)、および-NP(O)(OR16)2(ホスホルアミド)からなる群から選ばれるリン部分を含む(ここで、R16は、H、アルキル、ヘテロアルキル、アルケニル、ヘテロアルケニル、アルキニル、ヘテロアルキニル、アリール、およびヘテロアリールからなる群から選ばれる。)］。
【請求項２】
Xが、さらに-N(R9)-C(O)R7、-N(R9)-C(O)-OR7、-N(R9)-C(O)-NR7、-N(R9)-C(S)R7、-N(R9)-C(S)-OR7、-N(R9)-C(S)-NR7、およびN(R14)(R15)から選ばれる請求項1記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項３】
Xが、さらに所望により置換された(C1-C20)アルキル、所望により置換された(C1-C20)ヘテロアルキル、所望により置換された(C2-C20)アルケニル、所望により置換された(C2-C20)ヘテロアルケニル、所望により置換された(C2-C20)アルキニル、所望により置換されたアリール、所望により置換されたヘテロアリール、所望により置換されたアリールアルキル、所望により置換されたヘテロアリールアルキル、所望により置換されたシクロアルキル、および所望により置換されたシクロヘテロアルキルからなる群から選ばれる請求項1記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項４】
Xが-N(R14)(R15)である請求項2記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項５】
Xが-N(R9)-C(O)R7である請求項2記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項６】
以下の式で示される群から選ばれる式を有する請求項5記載の化合物またはその医薬的に許容される塩：
【化２】
2005530689.tif 000279
【化３】
2005530689.tif 000280
【化４】
2005530689.tif 000281
【化５】
2005530689.tif 000282
【化６】
2005530689.tif 000283
。
【請求項７】
以下の式で示される群から選ばれる式を有する請求項1記載の化合物またはその医薬的に許容される塩：
【化７】
2005530689.tif 000284
。
【請求項８】
以下の式で示される群から選ばれる式を有する請求項1記載の化合物またはその医薬的に許容される塩：
【化８】
2005530689.tif 000285
。
【請求項９】
Xが-N(R9)-C(O)-OR7である請求項1記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１０】
【化９】
2005530689.tif 000286
【化１０】
2005530689.tif 000287
からなる群から選ばれる請求項9記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１１】
【化１１】
2005530689.tif 000288
からなる群から選ばれる請求項1記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１２】
【化１２】
2005530689.tif 000289
からなる群から選ばれる請求項2記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１３】
【化１３】
2005530689.tif 000290
からなる群から選ばれる請求項1記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１４】
【化１４】
2005530689.tif 000291
からなる群から選ばれる請求項5記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１５】
Xが-OR6である請求項1記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１６】
式：
【化１５】
2005530689.tif 000292
で示される請求項15記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１７】
式：
【化１６】
2005530689.tif 000293
［式中、AおよびBは共にHであるかまたは一緒になって結合を形成する。］
で示される請求項3記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１８】
式(II)：
【化１７】
2005530689.tif 000294
で示される化合物またはその医薬的に許容される塩
［式中、R1'およびR2'は、独立して共にHであるかまたは一緒になって結合を形成する；
R3およびR3'は、独立してHおよび所望により置換されたC1-C6アルキルからなる群から選ばれる；
R4およびR5は、独立してH、-OH、O-アルキル、O-アセチル、-O-アリール、OC(O)R10、-SO2-R10、および-NHR10からなる群から選ばれるか、または一緒になってオキソ(=O)、またはヒドロキシルアミノ、アルコキシイミン、もしくはアリールオキシイミン、チオケトを形成する(ここで、R10は、H、所望により置換された(C1-C20)アルキル、所望により置換された(C1-C20)ヘテロアルキル、所望により置換されたアリール、および所望により置換されたヘテロアリールから選ばれる。)；
R4'およびR5'は、独立してH、-OH、O-アルキル、O-アセチル、-O-アリール、OC(O)R10、-SO2-R10、および-NHR10からなる群から選ばれるか、または一緒になってオキソ(=O)、またはヒドロキシルアミノ、アルコキシイミン、もしくはアリールオキシイミン、チオケトを形成する(ここで、R10は、H、所望により置換された(C1-C20)アルキル、所望により置換された(C1-C20)ヘテロアルキル、所望により置換されたアリール、および所望により置換されたヘテロアリールから選ばれる。)；
R6およびR6'は、独立してH、所望により置換された(C1-C6)アルキル、所望により置換された(C5-C10)アリール、および所望により置換された(C1-C6)アシルからなる群から選ばれる;
XおよびX'は、独立してNR11R12、-N(CO)-、-N(R13)-、-NC(O)-O、-NC(S)-、-NC(O)N-、-NC(CH2)-、-NC(NH)-、所望により置換されたアルキル、所望により置換されたアルケニル、所望により置換されたアルキニル、所望により置換されたアリール、所望により置換されたヘテロアリール,-OR11-、および-SR11-から選ばれる;
ここで、R11およびR12は、独立して所望により置換された(C1-C20)アルキル、所望により置換された(C2-C20)アルケニル、所望により置換された(C2-C20)アルキニル、所望により置換されたアリール、所望により置換されたヘテロアリール、所望により置換されたアリールアルキル、および所望により置換されたシクロアルキルから選ばれる；
ここで、R13は、H、所望により置換された(C1-C6)アルキル、所望により置換された(C5-C10)アリール、および所望により置換された(C1-C6)アシルからなる群から選ばれる;
Y1およびY2は、独立してH、-OH、O-アルキル、O-アセチル、-O-アリール、OC(O)R10、-SO2-R10、および-NHR10からなる群から選ばれるか、または一緒になってオキソ(=O)、またはヒドロキシルアミノ アルコキシイミンもしくはアリールオキシイミン、チオケトを形成する(ここで、R10は、H、所望により置換された(C1-C20)アルキル、所望により置換された(C1-C20)ヘテロアルキル、所望により置換されたアリールおよび所望により置換されたヘテロアリールから選ばれる。)か、または
Y1またはY2はR4またはR5と一緒になって所望により置換された5-7員の複素環または炭素環を形成する；
リンカーは、鎖中に少なくとも1の異種原子部分を有する所望により置換された3-20炭素原子鎖である(ここで、該異種原子部分は、所望により-NR6、-O-、-S-、-P-、スルホン、スルホネート、ホスホネート、ホスフェート、および-Y-C(O)-Q-C(O)-Y-からなる群から選ばれる。Yは、O、S、およびNから選ばれる。Qは、所望により置換されたアルキル、所望により置換されたアリール、および所望により置換されたヘテロアリールから選ばれる。)。］。
【請求項１９】
ホモダイマーである請求項18記載の化合物または医薬的に許容される塩。
【請求項２０】
ヘテロダイマーである請求項18記載の化合物または医薬的に許容される塩。
【請求項２１】
以下からなる式の群から選ばれる式を有する請求項18記載の化合物またはその医薬的に許容される塩：
【化１８】
2005530689.tif 000295
【化１９】
2005530689.tif 000296
【化２０】
2005530689.tif 000297
。
【請求項２２】
以下からなる式の群から選ばれる式を有する請求項18記載の化合物またはその医薬的に許容される塩：
【化２１】
2005530689.tif 000298
。
【請求項２３】
式：
【化２２】
2005530689.tif 000299
で示される請求項18記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項２４】
先の請求項のいずれかに記載の化合物またはその医薬的に許容される塩を含み、さらに、医薬的に許容される賦形剤、担体、充填剤、塩、水、およびアルコールからなる群から選ばれる1またはそれ以上のメンバーを含む医薬組成物。
【請求項２５】
所望によりバイアルおよびシリンジからなる群から選ばれる容器のメンバー中に配置された、静脈内投与用に製剤化された請求項24記載の医薬組成物。
【請求項２６】
所望によりゲルカプセル、錠剤、瓶、バイアル、および吸入器からなる群から選ばれる容器のメンバー中に配置された、経口投与用に製剤化された請求項25記載の医薬組成物。
【請求項２７】
HSP90阻害に感受性の増殖性疾患を特徴とするかまたはそれから保護しようとする細胞を、医薬的有効量の請求項24記載の化合物またはその医薬的に許容される塩と接触させることを含む、HSP90阻害に感受性の増殖性疾患の治療または予防方法。
【請求項２８】
該細胞がヒトのものであり、該増殖性疾患が癌および炎症性疾患からなる群から選ばれる請求項27記載の方法。
【請求項２９】
該癌が高レベルのHER-2を特徴とする肺癌であり、さらに該肺癌の治療または予防手段としてHER-2の量をモニターすることを含む請求項28記載の方法。
【請求項３０】
該増殖性疾患が染色体異常を特徴とする遺伝子的に定義された増殖性疾患である請求項27記載の方法。
【請求項３１】
該増殖性疾患がウイルス性または細菌性のものである請求項27記載の方法。
【請求項３２】
該増殖性疾患が関節リウマチである請求項27記載の方法。
【請求項３３】
以下の工程を含む合成スキーム：
【化２３】
2005530689.tif 000300
(a) 式5aの化合物またはその医薬的に許容される塩を還元して式5bの化合物またはその医薬的に許容される塩を形成し、
(b) 式5bの化合物またはその医薬的に許容される塩をアルキルまたはアリールカルボキシルハリドもしくは無水物と反応させて式5cのアミド化合物またはその医薬的に許容される塩を形成し、
(c) 式5cのアミド化合物またはその医薬的に許容される塩を酸化してRが請求項1記載のR7、OR7、およびNR7R8である式5dの化合物またはその医薬的に許容される塩を生成する。
【請求項３４】
以下の工程を含む合成スキーム：
【化２４】
2005530689.tif 000301
［式中、Rは、所望により置換された(C1-C20)アルキル、所望により置換された(C1-C20)ヘテロアルキル、所望により置換された(C2-C20)アルケニル、所望により置換された(C2-C20)ヘテロアルケニル、所望により置換された(C2-C20)アルキニル、所望により置換されたアリール、所望により置換されたヘテロアリール、所望により置換されたアリールアルキル、所望により置換されたヘテロアリールアルキル、所望により置換されたシクロアルキル、および所望により置換されたシクロヘテロアルキルである。］。
【請求項３５】
TfOで誘導体化したアンサマイシン。
【請求項３６】
ベンゾキノンアンサマイシンである請求項35記載のアンサマイシン。
【請求項３７】
17位がTfOで誘導体化された請求項36記載のアンサマイシン。
【請求項３８】
式：
【化２５】
2005530689.tif 000302
を有する請求項37記載のアンサマイシン。
【請求項３９】
繊維形成疾患を特徴とするかまたはそれから保護しようとする細胞を、医薬的有効量の請求項1記載の化合物またはその医薬的に許容される塩と接触させることを含む繊維形成疾患の治療または予防方法。
【請求項４０】
酸化ストレス性細胞死を特徴とするかまたはそれから保護しようとする細胞を、医薬的有効量の請求項1記載の化合物またはその医薬的に許容される塩と接触させることを含む酸化ストレス性細胞死の治療または予防方法。
【請求項４１】
神経学的傷害を特徴とするかまたはそれから保護しようとする細胞を、医薬的有効量の請求項1記載の化合物またはその医薬的に許容される塩と接触させることを含む神経学的傷害の治療または予防方法。
【請求項４２】
有効量の請求項1記載の化合物またはその医薬的に許容される塩を含む組成物を心停止または卒中(stroke)の患者に投与することを含む心停止または卒中から生じた神経学的傷害を減少させる方法。
【請求項４３】
該組成物が心停止または卒中の2時間以内に投与される請求項39〜42のいずれかに記載の方法。
【請求項４４】
該組成物が静脈内注入により投与される請求項39〜42のいずれかに記載の方法。
【請求項４５】
該組成物が経口投与される請求項39〜42のいずれかに記載の方法。
【請求項４６】
請求項1記載の化合物またはその医薬的に許容される塩を含み、さらに該化合物またはその医薬的に許容される塩を使用するための指示付きラベルを含む医薬組成物を入れた容器を含む製品。
【請求項４７】
感染しているかまたは感染から保護しようとする細胞と医薬的有効量のベンゾキノイドアンサマイシンを接触させることを含む感染の治療または予防方法。
【請求項４８】
感染しているかまたは感染から保護しようとする細胞と医薬的有効量の請求項1記載の化合物またはその医薬的に許容される塩を接触させることを含む感染の治療または予防方法。
【請求項４９】
該感染症が、HIV、HTLV、HSV、HBV、HCV、エボラ、レトロウイルス、ライノウイルス、肝炎、VZV、HAV、CMV、アデノウイルス、インフルエンザ、フラビウイルス、エコウイルス、コクサッキーウイルス、コルノウイルス(cornovirus)、呼吸器合胞体ウイルス、ムンプスウイルス、ロタウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、パルボウイルス、ワクシニアウイルス、デング熱ウイルス、パピローマウイルス、モルスカムウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、JCウイルス、アルボウイルス脳炎ウイルス、アレナウイルス、ブンヤウイルス、コロナウイルス、ヘパドナウイルス、エプスタインバーウイルス、サイトメガロウイルス、フラビウイルス、オルソミクソウイルス、パラミクソウイルス、ピコルノウイルス(picornoviruses)、ポリオーマウイルス、ポックスウイルス、レオウイルス、ラブドウイルス、ロタウイルス、トガウイルス、狂犬病、水疱性口内炎、レオウイルス、ワクシニア、麻疹ウイルス、サイトメガロウイルス、シンドビスウイルス、白血病、ポリオーマウイルス、ラウス(Rous)肉腫ウイルス(RSV)、BKウイルス、JCウイルス、マウス乳癌ウイルス(MMTV)、アルファウイルス接合領域、水痘、アデノウイルス、単純ヘルペスウイルスI型(HSV-I)、単純ヘルペスウイルスII型(HSV-II)、牛疫、ライノウイルス、エコウイルス、ロタウイルス、呼吸器合胞体ウイルス(RSウイルス)、パピローマウイルス、パポバウイルス、サイトメガロウイルス、エキノウイルス、アルボウイルス、ハンタウイルス、コクサッキーウイルス、ムンプスウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、およびポリオウイルスからなる群から選ばれるウイルスにより生じる請求項47記載の方法。
【請求項５０】
該ウイルスがHIVである請求項49記載の方法。
【請求項５１】
該ウイルスがHSVである請求項49記載の方法。
【請求項５２】
該ウイルスがライノウイルスである請求項49記載の方法。
【請求項５３】
該ウイルスが風邪症状を生じる請求項49記載の方法。
【請求項５４】
該ウイルスがエボラウイルスである請求項49記載の方法。
【請求項５５】
下記の群から選ばれる化合物またはその医薬的に許容される塩を用いるHIVの治療方法：
【化２６】
2005530689.tif 000303
【化２７】
2005530689.tif 000304
。
【請求項５６】
下記の群から選ばれる医薬的有効量の化合物またはその医薬的に許容される塩を投与することを含むHIVの治療方法：
【化２８】
2005530689.tif 000305
。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願）
本願は、米国仮特許出願60/367,055（2002年3月22日出願、表題「ANSAMYCINS HAVING IMPROVED PHARMACOLOGICAL AND BIOLOGICAL PROPERTIES」）、米国仮特許出願60/355,275（2002年2月8日出願、表題「NOVEL ANSAMYCINS HAVING IMPROVED PHARMACOLOGICAL AND BIOLOGICAL PROPERTIES」）、およびPCT/US02/39993（2002年12月12日出願、表題「Assay for Determining HSP90 Binding Activity」）の優先権を主張する。これらの内容は本明細書の一部を構成する。
【０００２】
本発明は、例えば抗生物質として、および種々の癌、炎症性疾患、および感染性疾患の治療に有用なアンサマイシン化合物に関する。
【背景技術】
【０００３】
以下の説明には、本発明を理解するのに有用と思われる情報が含まれる。本明細書に記載のあらゆる情報が、先行技術であるか、本発明に関連があるか、または具体的もしくは暗に参照しているあらゆる刊行物が先行技術であることを承認しない。
【０００４】
アンサマイシンは、芳香族環の式の反対側を架橋する種々の長さおよび構造の脂肪族環を特徴とする、天然、合成、および半合成の式のクラスおよびその還元等価物である。このクラス内には、芳香族環の式としてベンゾキノンを有するサブクラスのベンゾキノンアンサマイシンが含まれる。米国特許3,595,955、4,261,989、5,387,584、および5,932,566、ならびに国際出願PCT/US92/10189(WO93/14215)およびPCT/IB94/00160(WO95/01342)は、よく知られたベンゾキノンアンサマイシン、ゲルダナマイシン、およびその水素添加等価物を含む多くのアンサマイシンの単離、特徴付け、製造、および/または使用を記載している。Progress in the Chemistry of Organic Natural Products、Chemistry of the Ansamycin Antibiotics、33 1976、p.278も参照のこと。
【０００５】
微生物のStreptomyces hygroscopicusから最初に単離されたゲルダナマイシンは、最初はある種のキナーゼの強力な阻害剤として同定され、後にキナーゼの分解を促進することにより、具体的には、「分子シャペロン」、例えば熱ショックタンパク質90(HSP90)を標的とすることにより作用することが示された。次いで、種々の他のアンサマイシンが多かれ少なかれそのような活性を示し、最も有望なものに17-アリルアミノ-ゲルダナマイシン(17-AAG)があり、抗癌剤として用いる可能性について現在National Cancer Institute(NCI)により集中的に臨床試験が行われている。例えば、Federal Register、66(129):35443-35444; Erlichmanら、Proc. AACR (2001)、42、要約4474参照。
【０００６】
HSP90は、シグナル伝達、細胞周期制御、および転写調節に関与するキータンパク質を含む広範囲のタンパク質のホールディング、活性化、および構築に関与すると考えられる、天然で高度に保存された遍在性シャペロンタンパク質である。HSP90の例には、NCBI受託番号P07900およびXM 004515(各ヒトαおよびβHSP90)、P11499(マウス)、AAB2369(ラット)、P46633(チャイニーズハムスター)、JC1468(ニワトリ)、AAF69019(ニクバエ)、AAC21566(ゼブラフィッシュ)、AAD30275(サケ)、O02075(ブタ)、NP 015084(酵母)、およびCAC29071(カエル)がある。Grp94およびTrap-1は、HSP90阻害剤と接触すると同様の効果を示すかもしれない関連分子である。HSP90は、例えば、Raf-1、EGFR、v-Srcファミリーキナーゼ、Cdk4、およびErbB-2を含むステロイドホルモンレセプターおよびタンパク質キナーゼのような重要なシグナリングタンパク質と関連すると研究者が報告している(Buchner J.、1999、TIBS、24:136-141; Stepanova、L.ら、1996、Genes Dev. 10:1491-502; Dai,K.ら、1996、J. Biol. Chem. 271:22030-4)。研究はさらに、ある種のコシャペロン(co-chaperone)、例えば、Hsp70、p60/Hop/Stil、Hip、Bagl、HSP40/Hdj2/Hsj1、イムノフィリン、p23、およびp50がHSP90の機能を補助するかも知れないことを示唆している(例えば、Caplan、A.、1999、Trends in Cell Biol.、9:262-68参照)。
【０００７】
アンサマイシンは、HSP90のN末端ポケットと堅く結合することによりその抗癌効果を発揮すると考えられる(Stebbins、C.ら、1997、Cell、89:239-250)。このポケットは高度に保存されており、DNAギラーゼのATP結合部位と弱い相同性を有する(Stebbins、C.ら、上記; Grenert、J. P.ら、1997、J. Biol. Chem.、272:23843-50)。さらに、ATPおよびADPは共に、このポケットと低親和性に結合し、弱いATPアーゼ活性を有することが示されている(Proromou、C.ら、1997、Cell、90:65-75; Panaretou、B.ら、1998、EMBO J.、17:4829-36)。in vitroおよびin vivo試験は、このN末端ポケットをアンサマイシンおよび他のHSP90阻害剤(インヒビター)が占有するとHSP90機能が変化し、タンパク質のホールディングを阻害することを示した。より高濃度でアンサマイシンおよび他のHSP90阻害剤は、タンパク質基質のHSP90への結合を妨げることが示された(Scheibel、T.H.ら、1999、Proc. Natl. Acad. Sci. U S A 96:1297-302; Schulte、T. W.ら、1995、J. Biol. Chem. 270:24585-8; Whitesell、L.ら、1994、Proc. Natl. Acad. Sci. U S A 91:8324-8328)。アンサマイシンが、シャペロン関連タンパク質基質のATP依存性放出を阻害することも立証されている(Schneider、C.、L.ら、1996、Proc. Natl. Acad. Sci.U S A、93:14536-41; Sepp-Lorenzinoら、1995、J. Biol. Chem. 270:16580-16587)。いずれにおいても、該基質はプロテオソーム中でユビキチン依存性プロセスにより分解する(Schneider、C.、L.、上記; Sepp-Lorenzino、L.ら、1995、J. Biol. Chem.、270:16580-16587; Whitesell、L.ら、1994、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、91:8324-8328)。
【０００８】
この基質の不安定化は腫瘍および非形質転換細胞などに生じ、シグナリング調節物質のサブセット、例えばRaf(Schulte、T. W.ら、1997、Biochem. Biophys. Res. Commun. 239:655-9; Schulte、T. W.ら、1995、J. Biol. Chem. 270:24585-8)、核ステロイドレセプター(Segnitz、B.、およびU. Gehring. 1997、J. Biol. Chem. 272:18694-18701; Smith、D. F.ら、1995、Mol. Cell. Biol. 15:6804-12)、v-src(Whitesell、L.ら、1994、Proc. Natl. Acad. Sci. U S A 91:8324-8328)、およびある種の貫膜チロシンキナーゼ(Sepp-Lorenzino、L.ら、1995、J. Biol. Chem. 270:16580-16587)、例えばEGFレセプター(EGFR)およびHer2/Neu(Hartmann、F.ら、1997、Int. J. Cancer 70:221-9; Miller、P.ら、1994、Cancer Res. 54:2724-2730; Mimnaugh、E. G.ら、1996、J. Biol. Chem. 271:22796-801; Schnur、R.ら、1995、J. Med. Chem. 38:3806-3812)、CDK4、および突然変異体p53.(Erlichmanら、Proc. AACR(2001)、42、要約4474)に対して特に有効であることが示されている。これらタンパク質のアンサマイシン誘発性損失は、ある種の調節経路の選択的崩壊をもたらし、そのように処理した細胞の細胞周期の特定の期での増殖停止(Muise-Heimericks、R. C.ら、1998、J. Biol. Chem. 273:29864-72)、およびアポプトーシス、および/または分化(Vasilevskaya、A.ら、1999、Cancer Res.、59:3935-40)をもたらす。
【０００９】
最近、Nicchittaら、WO 01/72779(PCT/US01/09512)は、HSP90が熱ショックおよび/またはフルオロフォアビス-ANSによる結合によって種々のコンフォメーション(構造)をとりうることを明らかにした。具体的には、Nicchittaらは、この誘導された構造が正常細胞に優勢な異なる形のHSP90よりある種のHSP90リガンドにより高い親和性を示すことを明らかにした。同一出願人の出願PCT/US02/39993は、高親和性HSP90の優れた供給源として癌細胞溶解物の有効性と使用をさらに証明することによりこの発見を記載している。
【００１０】
抗癌および抗腫瘍作用に加え、HSP90阻害剤は、抗炎症剤、抗感染性疾患剤、自己免疫治療剤、卒中、虚血、心臓疾患治療剤、および神経再生を促進するのに有用な薬剤としての使用を含む広範囲の他の有用性にも関与していた(例えば、Rosenら、WO02/09696(PCT/US01/23640); Degrancoら、WO99/51223(PCT/US99/07242); Gold、米国特許6,210,974 B1；DeFrancoら、米国特許6,174,875参照)。上記と幾分重複するが、限定されるものではないが、強皮症、多発性筋炎、全身性エリテマトーデス、リウマチ性関節炎、肝硬変、ケロイド形成、間質性腎炎、および肺繊維症を含む繊維形成誘導性障害も治療可能であるかもしれないことが文献に報告されている(Strehlow、WO02/02123;PCT/US01/20578)。さらなるHSP90調節、モジュレーターおよびその使用は、PCT/US02/35938、PCT/US02/16287、PCT/US02/06518、PCT/US98/09805、PCT/US00/09512、PCT/US01/09512、PCT/US01/23640、PCT/US01/46303、PCT/US01/46304、PCT/US02/06518、PCT/US02/29715、PCT/US02/35069、PCT/US02/35938、PCT/US/02/39993、60/293,246、60/371,668、60/331,893、60/335,391、06/128,593、60/337,919、60/340,762、60/355,275、60/367,055、および60/359,484に記載されている。
【００１１】
しかしながら、現在、アンサマイシンの種々の知られた製造方法は、低収量、低純度、低溶解性、化学的不安定性(in vivoおよび/またはin vitro)、低医薬特性(短いt1/2、代謝的不安定性)、ハロゲン化有機溶媒の使用に伴う環境毒性、および時間、費用、廃棄物処理からみたさらなる付随的負担、およびそのように製造した薬剤を服用する者の健康上のリスクの1またはそれ以上を示す。同一出願人の出願第60/272,251号(出願日：2001年3月1日)、表題「Methods for Treating Genetically Defined Proliferative Disorders with HSP90」; 第60/326,639および60/331,893号(出願日各2001年9月24日および2001年11月21日)、ともに表題「Chemical Process for Preparing 17-allyl Amino Geldanamycin (17-AAG) and other Ansamycins and Ansamycin Dervatives」;および2001年12月2日出願の仮出願、表題「Assay for Determining HSP90 Binding Activity」は、これら問題のいくつかとそれらへの取り組み方について記載している。
【００１２】
本発明の目的は、従来のアンサマイシン製造法および用途に関する1またはそれ以上の問題、例えば低代謝安定性、低バイオアベイラビリティ、低水溶性、および/または製剤化困難性を改善することである。別の目的は、好ましくは有効性および薬物動態特性が改良された新規アンサマイシン化合物を提供することである。
(発明の要約)
【００１３】
以前の世代のアンサマイシン、例えばゲルダナマイシン(GM)および17-アリルアミノゲルダナマイシン(17-AAG)の欠点は、1またはそれ以上の悪い薬理学的特性、例えば、特に代謝的不安定性、悪いバイオアベイラビリティ、および/または特にin vivo静脈内投与のための製剤化困難性を有することである。有効なアンサマイシン薬を開発するために、これらの欠点に取り組み、新規GM類似体および誘導体を得ることが望ましい。
【００１４】
本明細書において出願人は、新規アンサマイシン誘導体およびその製造方法について説明する。少なくともあるものは、改良された薬理学的特性、例えば高い生物学的曝露、改良された生物学的半減期、水溶性の増加、および代謝および化学安定性の増加の1またはそれ以上を示す。これらアンサマイシン誘導体のあるもの、例えば、17-アルキルアミノゲルダナマイシンおよび17-アルキルアミノジヒドロゲルダナマイシンは、特にプロドラッグとしての使用に適している。他のあるものは、ゲルダナマイシンおよび/またはジヒドロゲルダナマイシンの二量体(ダイマー)の形をとる。
【００１５】
第一の局面において、本発明は、式(I)：
【化１】
2005530689.tif 000002
で示される化合物またはその医薬的に許容される塩を特徴とする
［式中、Xは、所望により置換された(C1-C20)アルキル、所望により置換された(C1-C20)ヘテロアルキル、所望により置換された(C2-C20)アルケニル、所望により置換された(C2-C20)ヘテロアルケニル、所望により置換された(C2-C20)アルキニル、所望により置換されたアリール、所望により置換されたヘテロアリール、所望により置換されたアリールアルキル、所望により置換されたヘテロアリールアルキル、所望により置換されたシクロアルキル、所望により置換されたシクロヘテロアルキル、-N(R9)-C(O)R7、-N(R9)-C(O)-OR7、-N(R9)-C(O)-NR7R8、-N(R9)-C(S)R7、-N(R9)-C(S)-OR7、-N(R9)-C(S)-NR7R8、-OR6、および-N(R14)(R15)からなる群から選ばれる；
R1およびR2は、共にHであるかまたは一緒になって結合を形成する；
R3は、Hおよび所望により置換されたC1-C3アルキルからなる群から選ばれる；
R4およびR5は、独立してH、-OH、O-アルキル、O-アセチル、-O-アリール、OC(O)R10、-SO2-R10、および-NHR10からなる群から選ばれるか、または一緒になってオキソ(=O)またはヒドロキシルアミノ アルコキシイミンもしくはアリールオキシイミン、チオケトを形成する；
ここで、は、H、所望により置換された(C1-C20)アルキル、所望により置換された(C1-C20)ヘテロアルキル、所望により置換されたアリール、および所望により置換されたヘテロアリールからなる群から選ばれる；
R6は、H、所望により置換されたC1-C8アルキル、所望により置換されたC5-C8アリール、および所望により置換されたC1-C6アシルからなる群から選ばれる；
R7およびR8は、それぞれ独立してH、所望により置換された(C1-C20)アルキル、所望により置換された(C1-C20)ヘテロアルキル、所望により置換された(C2-C20)アルケニル、所望により置換された(C2-C20)ヘテロアルケニル、所望により置換された(C2-C20)アルキニル、所望により置換されたアリール、所望により置換されたヘテロアリール、所望により置換されたアリールアルキル、所望により置換されたヘテロアリールアルキル、所望により置換されたシクロアルキル、および所望により置換されたシクロヘテロアルキルからなる群から選ばれるか、または一緒になって所望により置換された4-7員環を形成する；
R9は、H、所望により置換されたC1-C6アルキル、所望により置換されたC5-C8アリール、および所望により置換されたC5-C8ヘテロアリールからなる群から選ばれるか、またはR7またはR8と一緒になって所望により置換された4-7員環を形成する；
R14およびR15は、独立してH、所望により置換された(C1-C20)アルキル、所望により置換された(C2-C20)ヘテロアルキル、所望により置換された(C2-C20)アルケニル、所望により置換された(C2-C20)ヘテロアルケニル、所望により置換された(C2-C20)アルキニル、所望により置換されたアリール、所望により置換されたヘテロアリール、所望により置換されたアリールアルキル、所望により置換されたヘテロアリールアルキル、所望により置換されたシクロアルキル、および所望により置換されたシクロヘテロアルキルからなる群から選ばれるか; または
R14とR15が一緒になって所望により置換された4-7員の複素環または炭素環を形成する；
ここで、Y1およびY2は、独立してH、-OH、O-アルキル、O-アセチル、-O-アリール、OC(O)R10、-SO2-R10、および-NHR10からなる群から選ばれるか、または一緒になってオキソ(=O)、またはヒドロキシルアミノ、アルコキシイミンもしくはアリールオキシイミン、チオケトを形成する(ここで、は、H、所望により置換された(C1-C20)アルキル、所望により置換された(C1-C20)ヘテロアルキル、所望により置換されたアリールおよび所望により置換されたヘテロアリールからなる群から選ばれる。)か; または
Y1またはY2がR4またはR5と一緒になって所望により置換された5-7員の複素環もしくは炭素環を形成する；
ただし、Y1およびY2が共にHであり、XがN(R14)(R15)または-OR6である場合は、R4、R5、R6、R14、およびR15の少なくとも1つが-OP(O)(OR16)2(ホスフェート)、-CH2P(O)(OR16)2(ホスホネート)、および-NP(O)(OR16)2(ホスホルアミド)からなる群から選ばれるリン部分を含む(ここで、R16は、H,アルキル、ヘテロアルキル、アルケニル、ヘテロアルケニル、アルキニル、ヘテロアルキニル、アリール、およびヘテロアリールからなる群から選ばれる。)］。
【００１６】
ある態様において、Xは、さらに-N(R9)-C(O)R7、-N(R9)-C(O)-OR7、-N(R9)-C(O)-NR7、-N(R9)-C(S)R7、-N(R9)-C(S)-OR7、-N(R9)-C(S)-NR7、およびN(R14)(R15)から選ばれる。
【００１７】
ある態様において、Xは、さらに所望により置換された(C1-C20)アルキル、所望により置換された(C1-C20)ヘテロアルキル、所望により置換された(C2-C20)アルケニル、所望により置換された(C2-C20)ヘテロアルケニル、所望により置換された(C2-C20)アルキニル、所望により置換されたアリール、所望により置換されたヘテロアリール、所望により置換されたアリールアルキル、所望により置換されたヘテロアリールアルキル、所望により置換されたシクロアルキル、および所望により置換されたシクロヘテロアルキルからなる群から選ばれる。
【００１８】
ある態様において、Xは-N(R14)(R15)である。
【００１９】
ある態様において、Xは-N(R9)-C(O)R7である。
【００２０】
ある態様において、該化合物は、以下の式で示される群から選ばれる式を有する：
【化２】
2005530689.tif 000003
【化３】
2005530689.tif 000004
【化４】
2005530689.tif 000005
【化５】
2005530689.tif 000006
【化６】
2005530689.tif 000007
【化７】
2005530689.tif 000008
。
【００２１】
ある態様において、該化合物は、以下の式で示される群から選ばれる式を有する：
【化８】
2005530689.tif 000009
。
【００２２】
ある態様において、該化合物は、以下の式で示される群から選ばれる式を有する：
【化９】
2005530689.tif 000010
。
【００２３】
ある態様において、Xは-N(R9)-C(O)-OR7である。
【００２４】
ある態様において、該化合物は、
【化１０】
2005530689.tif 000011
【化１１】
2005530689.tif 000012
からなる群から選ばれる。
【００２５】
ある態様において、該化合物は、
【化１２】
2005530689.tif 000013
【化１３】
2005530689.tif 000014
からなる群から選ばれる。
【００２６】
ある態様において、該化合物は、
【化１４】
2005530689.tif 000015
からなる群から選ばれる。
【００２７】
ある態様において、該化合物は、
【化１５】
2005530689.tif 000016
からなる群から選ばれる。
【００２８】
ある態様において、該化合物は、
【化１６】
2005530689.tif 000017
からなる群から選ばれる。
【００２９】
ある態様において、Xは-OR6である。
【００３０】
ある態様において、該化合物は、式：
【化１７】
2005530689.tif 000018
を有する。
【００３１】
ある態様において、該化合物は、式：
【化１８】
2005530689.tif 000019
を有する。
【００３２】
別の局面において、該化合物は、式(II)：
【化１９】
2005530689.tif 000020
で示される化合物またはその医薬的に許容される塩を特徴とする
［式中、R1およびR2は、独立して共にHであるかまたは一緒になって結合を形成する；
R1'およびR2'は、独立して共にHであるかまたは一緒になって結合を形成する；
R3およびR3'は、独立してHおよび所望により置換されたC1-C6アルキルからなる群から選ばれる；
R4およびR5は、独立してH、-OH、O-アルキル、O-アセチル、-O-アリール、OC(O)R10、-SO2-R10、および-NHR10からなる群から選ばれるか、または一緒になってオキソ(=O)、またはヒドロキシルアミノ、アルコキシイミン、もしくはアリールオキシイミン、チオケトを形成する(ここで、R10は、H、所望により置換された(C1-C20)アルキル、所望により置換された(C1-C20)ヘテロアルキル、所望により置換されたアリール、および所望により置換されたヘテロアリールから選ばれる。)；
R4'およびR5'は、独立してH、-OH、O-アルキル、O-アセチル、-O-アリール、OC(O)R10、-SO2-R10、および-NHR10からなる群から選ばれるか、または一緒になってオキソ(=O)、またはヒドロキシルアミノ、アルコキシイミン、もしくはアリールオキシイミン、チオケトを形成する(ここで、R10は、H、所望により置換された(C1-C20)アルキル、所望により置換された(C1-C20)ヘテロアルキル、所望により置換されたアリール、および所望により置換されたヘテロアリールから選ばれる。)；
R6およびR6'は、独立してH、所望により置換された(C1-C6)アルキル、所望により置換された(C5-C10)アリール、および所望により置換された(C1-C6)アシルからなる群から選ばれる;
XおよびX'は、独立してNR11R12,-N(CO)-、-N(R13)-、-NC(O)-O、-NC(S)-、-NC(O)N-、-NC(CH2)-、-NC(NH)-、所望により置換されたアルキル、所望により置換されたアルケニル、所望により置換されたアルキニル、所望により置換されたアリール、所望により置換されたヘテロアリール,-OR11-、および-SR11-から選ばれる;
ここで、R11およびR12は、独立して所望により置換された(C1-C20)アルキル、所望により置換された(C2-C20)アルケニル、所望により置換された(C2-C20)アルキニル、所望により置換されたアリール、所望により置換されたヘテロアリール、所望により置換されたアリールアルキル、および所望により置換されたシクロアルキルから選ばれる；
ここで、R13は、H、所望により置換された(C1-C6)アルキル、所望により置換された(C5-C10)アリール、および所望により置換された(C1-C6)アシルからなる群から選ばれる;
Y1およびY2は、独立してH、-OH、O-アルキル、O-アセチル、-O-アリール、OC(O)R10、-SO2-R10、および-NHR10からなる群から選ばれるか、または一緒になってオキソ(=O)、またはヒドロキシルアミノ アルコキシイミンもしくはアリールオキシイミン、チオケトを形成する(ここで、R10は、H、所望により置換された(C1-C20)アルキル、所望により置換された(C1-C20)ヘテロアルキル、所望により置換されたアリールおよび所望により置換されたヘテロアリールから選ばれる。)か、または
Y1またはY2はR4またはR5と一緒になって所望により置換された5-7員の複素環または炭素環を形成する；
リンカーは、鎖中に少なくとも1の異種原子部分を有する所望により置換された3-20炭素原子鎖である(ここで、該異種原子部分は、所望により-NR6、-O-、-S-、-P-、スルホン、スルホネート、ホスホネート、ホスフェート、および-Y-C(O)-Q-C(O)-Y-からなる群から選ばれる。Yは、O、S、およびNから選ばれる。Qは、所望により置換されたアルキル、所望により置換されたアリール、および所望により置換されたヘテロアリールから選ばれる。)。］。
【００３３】
ある態様において、該化合物はホモダイマーである。
【００３４】
ある態様において、該化合物はヘテロダイマーである。
【００３５】
ある態様において、該化合物は以下からなる式の群から選ばれる式を有する：
【化２０】
2005530689.tif 000021
【化２１】
2005530689.tif 000022
【化２２】
2005530689.tif 000023
。
【００３６】
ある態様において、該化合物は以下からなる式の群から選ばれる式を有する：
【化２３】
2005530689.tif 000024
。
【００３７】
ある態様において、該化合物は、式：
【化２４】
2005530689.tif 000025
で示される式を有する。
【００３８】
別の局面において、本発明は、先の局面または態様のいずれかに記載の化合物を含み、さらに、医薬的に許容される賦形剤、担体、充填剤、塩、水、およびアルコールからなる群から選ばれる1またはそれ以上のメンバーを含む医薬組成物を特徴とする。
【００３９】
ある態様において、該組成物は、所望によりバイアルおよびシリンジからなる群から選ばれる容器のメンバー中に配置された、静脈内投与用に製剤化される。
【００４０】
ある態様において、該医薬組成物は、所望によりゲルカプセル、錠剤、瓶、バイアル、および吸入器からなる群から選ばれる容器のメンバー中に配置された、経口投与用に製剤化される。
【００４１】
別の局面において、本発明は、HSP90阻害に感受性の増殖性疾患を特徴とするかまたはそれから保護しようとする細胞を、医薬的有効量の先の局面または態様のいずれかに記載の化合物と接触させることを含む、HSP90阻害に感受性の増殖性疾患の治療または予防方法を特徴とする。
【００４２】
ある態様において、該細胞はヒトのものであり、該増殖性疾患は癌および炎症性疾患からなる群から選ばれる。
【００４３】
ある態様において、該癌は高レベルのHER-2を特徴とする肺癌であり、該方法はさらに該肺癌の治療または予防手段としてHER-2の量をモニターすることを含む。
【００４４】
ある態様において、該増殖性疾患は染色体異常を特徴とする遺伝子的に定義された増殖性疾患である。
【００４５】
ある態様において、該増殖性疾患はウイルス性、真菌性、または細菌性のものである。
【００４６】
ある態様において、該増殖性疾患は関節リウマチである。
【００４７】
別の局面において、本発明は、以下の工程を含む合成スキーム(反応式)を特徴とする：
【化２５】
2005530689.tif 000026
(a) 式5aの化合物を還元して式5bの化合物を形成し、
(b) 式5bの化合物をアルキルまたはアリールカルボキシルハリドもしくは無水物と反応させて式5cのアミド化合物を形成し、
(c) 式5cのアミド化合物を酸化してRが先の局面または態様に記載のR7、OR7、およびNR7R8である式5dの化合物を生成する。
【００４８】
別の局面において、本発明は、以下の工程を含む合成スキームを特徴とする：
【化２６】
2005530689.tif 000027
［式中、Rは、所望により置換された(C1-C20)アルキル、所望により置換された(C1-C20)ヘテロアルキル、所望により置換された(C2-C20)アルケニル、所望により置換された(C2-C20)ヘテロアルケニル、所望により置換された(C2-C20)アルキニル、所望により置換されたアリール、所望により置換されたヘテロアリール、所望により置換されたアリールアルキル、所望により置換されたヘテロアリールアルキル、所望により置換されたシクロアルキル、および所望により置換されたシクロヘテロアルキルである。］。
【００４９】
別の局面において、本発明はTfOブロッキング基(で誘導体化されること)により結合したアンサマイシンを特徴とする。ある態様において、化合物アンサマイシンはベンゾキノンアンサマイシンである。ある態様において、該アンサマイシンは17位がTfOで誘導体化されている。ある態様において、該アンサマイシンは、式：
【化２７】
2005530689.tif 000028
を有する。
【００５０】
別の局面において、本発明は、繊維形成疾患を特徴とするかまたはそれから保護しようとする細胞を、医薬的有効量の先の局面または態様に記載の化合物と接触させることを含む繊維形成疾患の治療または予防方法を特徴とする。
【００５１】
別の局面において、本発明は、酸化ストレス性細胞死を特徴とするかまたはそれから保護しようとする細胞を、医薬的有効量の先の局面または態様に記載の化合物と接触させることを含む酸化ストレス性細胞死の治療または予防方法を特徴とする。
【００５２】
別の局面において、本発明は、神経学的傷害を特徴とするかまたはそれから保護しようとする細胞を、医薬的有効量の先の局面または態様に記載の化合物と接触させることを含む神経学的傷害の治療または予防方法を特徴とする。
【００５３】
別の局面において、本発明は、有効量の先の局面または態様に記載の化合物を含む組成物を心停止または卒中(stroke)の患者に投与することを含む心停止または卒中から生じた神経学的傷害を減少させる方法を特徴とする。
【００５４】
先の方法の局面のある態様において、該組成物は心停止または卒中の2時間以内に投与される。先の方法の局面のある態様において、該組成物は静脈内注入により投与される。
【００５５】
先の方法の局面のある態様において、該組成物は経口投与される。
【００５６】
別の局面において、本発明は、先の局面または態様に記載の化合物を含み、さらに該化合物を使用するための指示付きラベルを含む医薬組成物を入れた容器を含む製品を特徴とする。
【００５７】
ある局面において、本発明は、感染しているかまたは感染から保護しようとする細胞と医薬的有効量のベンゾキノイドアンサマイシンを接触させることを含む感染の治療または予防方法を特徴とする。
【００５８】
ある局面において、本発明は、感染しているかまたは感染から保護しようとする細胞と医薬的有効量の先の局面または態様に記載の化合物を接触させることを含む感染の治療または予防方法を特徴とする。ある局面において、該感染症は、HIV、HTLV、HSV、HBV、HCV、エボラ、レトロウイルス、ライノウイルス、肝炎、VZV、HAV、CMV、アデノウイルス、インフルエンザ、フラビウイルス、エコウイルス、コクサッキーウイルス、コルノウイルス(cornovirus)、呼吸器合胞体ウイルス、ムンプスウイルス、ロタウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、パルボウイルス、ワクシニアウイルス、デング熱ウイルス、パピローマウイルス、モルスカムウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、JCウイルス、アルボウイルス脳炎ウイルス、アレナウイルス、ブンヤウイルス、コロナウイルス、ヘパドナウイルス、エプスタインバーウイルス、サイトメガロウイルス、フラビウイルス、オルソミクソウイルス、パラミクソウイルス、ピコルノウイルス(picornoviruses)、ポリオーマウイルス、ポックスウイルス、レオウイルス、ラブドウイルス、ロタウイルス、トガウイルス、狂犬病、水疱性口内炎、レオウイルス、ワクシニア、麻疹ウイルス、サイトメガロウイルス、シンドビスウイルス、白血病、ポリオーマウイルス、ラウス(Rous)肉腫ウイルス(RSV)、BKウイルス、JCウイルス、マウス乳癌ウイルス(MMTV)、アルファウイルス接合領域、水痘、アデノウイルス、単純ヘルペスウイルスI型(HSV-I)、単純ヘルペスウイルスII型(HSV-II)、牛疫、ライノウイルス、エコウイルス、ロタウイルス、呼吸器合胞体ウイルス(RSウイルス)、パピローマウイルス、パポバウイルス、サイトメガロウイルス、エキノウイルス、アルボウイルス、ハンタウイルス、コクサッキーウイルス、ムンプスウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、およびポリオウイルスからなる群から選ばれるウイルスにより生じる。
【００５９】
ある態様において、該ウイルスはHIV、HSV、ライノウイルス、またはエボラから選ばれる。
【００６０】
別の局面において、本発明は、下記の群から選ばれる化合物を用いるHIVの治療方法を特徴とする：
【化２８】
2005530689.tif 000029
。
【００６１】
ある局面において、本発明は、下記の群から選ばれる医薬的有効量の化合物を投与することを含むHIVの治療方法を特徴とする：
【化２９】
2005530689.tif 000030
。
【００６２】
他の局面は、先の局面または態様のいずれかに記載の化合物を含み、さらに医薬的に許容される塩、賦形剤、担体、充填剤、水、およびアルコールからなる群から選ばれる1またはそれ以上のメンバーを含む医薬組成物を含む。該医薬組成物は、あらゆる種類の投与、例えば、静脈内、経口など用に製剤化することができ、バイアルやシリンジのような容器のメンバー中に配置することができよう。
【００６３】
別の局面において、本発明は、HSP90に依存するかまたはHSP90阻害剤に感受性の増殖性疾患を治療および/または予防するための上記化合物の使用方法を特徴とする。該方法は、先の構造および属のいずれかにしたがって有効量の化合物を細胞と接触させることを含む。該細胞は、阻害することができるHSP90類似体のHSP90を有するあらゆる生物であり得る。該生物は植物または動物であり得るが、好ましくは動物、より好ましくはヒトである。増殖性疾患は、癌、炎症性疾患、例えば関節リウマチ、および細菌、酵母、真菌、およびウイルス感染症(例えば、HIV、HSV、HBV、HCV、レトロウイルスなど)からなる群から選ばれる。細菌、酵母、真菌、およびウイルス感染がまとめて「病原体」である。ある好ましい態様において、該増殖性疾患は、高レベルのHER-2を特徴とする乳癌である。他の態様において、該増殖性疾患は、染色体異常を特徴とする遺伝子的に定義された増殖性疾患である。
【００６４】
他の局面において、本発明は、限定されるものではないが強皮症、多発性筋炎、全身性狼瘡、関節リウマチ、肝硬変、ケロイド形成、間質性腎炎、および肺線維症を含む繊維形成疾患の治療および/または予防方法を特徴とする。
【００６５】
さらに他の局面において、本発明は、酸化ストレス性細胞死、ならびに停止、卒中および虚血から生じるかも知れないような神経学的傷害の治療および/または予防方法を特徴とする。該組成物は、酸化ストレス性細胞死および神経学的傷害の前または後のいつでも、好ましくはその2時間以内に投与してよい。投与経路はあらゆる種類であってよい。該方法は、例えば培養中で細胞株と接触させる「in vitro」、または例えば生きている多細胞生物内または上に含まれる細胞または細胞(複数)と接触させる「in vivo」でもあり得る。in vivo投与のあるタイプは「in situ」または生物内の特定の細胞または細胞群に直接、例えば腫瘍内になされる。細胞を最初に患者から取り出し、それを本発明の化合物または組成物と接触させて処理し、次いで患者に投与し戻す「ex vivo」法も想像される。該化合物および組成物は、種々の方法で、例えば静脈内、非経口的、経口的、バッカル的、筋肉内、舌下、局所的、エアロゾルにより、皮下、筋肉内、腹腔内、直腸内、膣内、腫瘍内、または腫瘍周囲に投与することができる。
【００６６】
さらに他の局面において、本発明は、包装され、所望によりラベルおよび使用説明書とともに提供されるあらゆる上記化合物を含む製品を特徴とする。
【００６７】
別の局面において、本発明は、実施例に記載の本発明化合物を製造するための種々の合成スキームを特徴とする。該スキームは出発アンサマイシンにゲルダナマイシンを用いて例示しているが、アンサマイシン出発試薬は、必ずしもではないがベンゾキノンアンサマイシンが好ましい。
【００６８】
本発明の各局面は、本発明のあらゆる他の局面に一致したあらゆる態様を想定することができよう。
【００６９】
本発明のある特定種の態様は、下記表に記載の式を有する化合物を含み、そのあるものは改良された水溶性を示し、あるものはプロドラッグとしての有用性を予告し、またあるものは両有用性を予告する。
表1
【００７０】
【表１】
2005530689.tif 000031
【００７１】
【表２】
2005530689.tif 000032
【００７２】
【表３】
2005530689.tif 000033
【００７３】
【表４】
2005530689.tif 000034
【００７４】
【表５】
2005530689.tif 000035
【００７５】
【表６】
2005530689.tif 000036
【００７６】
【表７】
2005530689.tif 000037
【００７７】
【表８】
2005530689.tif 000038
【００７８】
【表９】
2005530689.tif 000039
【００７９】
【表１０】
2005530689.tif 000040
【００８０】
【表１１】
2005530689.tif 000041
【００８１】
【表１２】
2005530689.tif 000042
【００８２】
【表１３】
2005530689.tif 000043
【００８３】
【表１４】
2005530689.tif 000044
【００８４】
【表１５】
2005530689.tif 000045
【００８５】
【表１６】
2005530689.tif 000046
【００８６】
【表１７】
2005530689.tif 000047
【００８７】
【表１８】
2005530689.tif 000048
【００８８】
【表１９】
2005530689.tif 000049
【００８９】
【表２０】
2005530689.tif 000050
【００９０】
【表２１】
2005530689.tif 000051
【００９１】
【表２２】
2005530689.tif 000052
【００９２】
【表２３】
2005530689.tif 000053
【００９３】
特定の局面および/または態様に応じて、本発明により明らかにされた利点には、よりよい水溶性(in vivoでの生物学的曝露および製剤化しやすさが増す)、プロドラッグの有用性(本明細書に記載の少なくともいくつかの化合物および組成物がin vivoで活性薬剤物質を放出する能力がある範囲で)、明確な生物学的プロフィール、および改良された化学安定性の1またはそれ以上が含まれる。後者に関して、本明細書に記載の多くの化合物および組成物は、以前に記載のアンサマイシンに比べてより長いin vivo半減期を有し、より少ない投与頻度で、より高いおよび/またはより一定の血中薬剤濃度を可能にする。
【００９４】
本発明の他の局面、態様、および利点は、以下の図面、説明、および特許請求の範囲から当業者に明らかであろう。
(図面の簡単な説明)
【００９５】
図1は、ナノモル量のアンサマイシンを用いたHIV複製阻害を示す。
【００９６】
図2は、マウスに経口、静脈内、および腹腔内投与した水溶性ダイマー、化合物#208の安定性プロフィールを示す。
【００９７】
図3は、化合物#237がin vivoにおけるA549異種移植の増殖を阻害することを示す。
【００９８】
図4は、本発明化合物またはビークルによる4治療単位の治療を受けたMDA435腫瘍保持動物の結果を示す。
【００９９】
図5は、SKOV-3卵巣異種移植モデルにおける化合物#237および化合物#563の効果を示す。
【０１００】
図6は、可移植ヒト乳癌異種移植モデルにおける化合物#237および17-AAGの効果を示す。
(発明の詳細な説明)
定義：
【０１０１】
用語「炭素鎖」は、互いに共有結合した複数の炭素原子を意味する。該鎖は、アルキル、アルケニル、アルキニル、芳香族、共役(結合)、分岐、非分岐、置換、環状、またはその組み合わせなどであってよい。炭素鎖は、1またはそれ以上の異種原子、すなわち炭素以外の原子を含んでいてもよい。
【０１０２】
「医薬的有効量」は、HSP90の阻害を通してと思われる治療および/または予防効果をもたらすことができる量を意味する。投与する化合物の特定用量は、もちろん例えば投与する特定の化合物、投与経路、治療する病状、および治療する個体を含む症例を取り囲む特定の環境により決定されるであろう。典型的な1日用量(単回または分割した用量で投与される)は、本発明の活性化合物を約0.01mg/kg〜約50-100mg/kg体重の用量レベルで含むであろう。好ましい1日用量は、一般に約0.05mg/kg〜約20mg/kg、理想的には約0.1mg/kg〜約10mg/kgであろう。クリアランス速度および半減期、薬剤の形(例えば、薬剤対プロドラッグ)、および最高耐量(MTD)のような因子をさらに決定しなければならないが、当業者は標準的方法を用いてこれらを決定することができる。
【０１０３】
ある方法の態様において、好ましい治療効果は、増殖性疾患、例えば乳癌に特徴的な細胞の増殖をある程度まで阻害する。治療効果は、通常、細胞増殖または細胞塊のサイズ以外の、1またはそれ以上の症状もある程度軽減するであろう(軽減しなくてもよい)。治療効果には、例えば、1またはそれ以上の1)細胞数の減少；2)細胞サイズの減少；3)例えば癌転移の場合に、周辺臓器への細胞浸潤の阻害(すなわち、ある程度遅くする、好ましくは止める)；4)細胞増殖のある程度の阻害；および/または5)該疾患に関連した1またはそれ以上の症状のある程度の軽減を含むことができよう。
【０１０４】
本発明化合物の標的となる増殖性疾患において、HSP90の「IC50」値は増殖性疾患を示す細胞、例えば乳癌細胞より正常細胞で大きくなることが好ましく、投与量は非罹患細胞より罹患細胞を予防または治療するのに十分であることが好ましい。
【０１０５】
「標準」により陽性または陰性コントロールを意味する。HER-2発現レベルとの関連において陰性コントロールは、例えば正常細胞と関連するHER-2タンパク質の量を有する試料である。陰性コントロールはHEP-2タンパク質を含まない試料も含んでよい。反対に、陽性コントロールは、好ましくは増殖性疾患、例えば乳癌にみられる過剰発現と関連する量のHEP-2タンパク質を含む。コントロールは細胞または組織試料由来であるか、またはその他に固定化もしくはその他の精製リガンド(またはリガンドなし)を含んでいてよい。ある態様において、1またはそれ以上のコントロールは診断用「ディップスティック」の形であってよい。
【０１０６】
「選択的に標的化する(targeting)」とは、例えば、ある種の乳癌のように、比較的低または正常Her-2レベルとは反対に高いレベルの細胞の場合に、あるタイプの細胞に対して別のものに対するより影響がかなり大きいことを意味する。
【０１０７】
「医薬組成物」は、1またはそれ以上の本明細書に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩と他の化学成分、例えば医薬的に許容される担体および/または賦形剤の混合物を表す。医薬組成物の目的は化合物の生物への投与を容易にすることである。
【０１０８】
本発明化合物の「医薬的に許容される塩」には、医薬的に許容される無機酸および有機酸および塩基から誘導されるものが含まれる。適切な酸の例には、塩化水素酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、リン酸、グリコール酸、グルコン酸、乳酸、サリチル酸、コハク酸、トルエン-p-スルホン酸、酒石酸、酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、ナフタレン-2-スルホン酸、ベンゼンスルホン酸、1,2 エタンスルホン酸(エジシレート)、ガラクトシル-d-グルコン酸などが含まれる。シュウ酸のような他の酸はそれ自身医薬的に許容されるものではないが、本発明化合物およびその医薬的に許容される酸付加塩を得る際の中間体として有用な塩の製造において用いることができよう。適切な塩基から誘導される塩には、アルカリ金属(例えばナトリウム)、アルカリ土類金属(例えばマグネシウム)、アンモニウム、およびN-(C.1-C4アルキル)4+塩などが含まれる。これらのいくつかの実例には、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化コリン、炭酸ナトリウムなどが含まれる。「化合物(例えば化合物「x」)またはその医薬的に許容される塩」を列挙し、該化合物のみを表示している請求項は、選択肢またはつながりにおいてそのような化合物の医薬的に許容される塩もしくは塩類を含むと解釈すべきである。
【０１０９】
「生理学的に許容される担体」は、生物に有意な刺激を生じない、投与した化合物の生物活性および特性を排除しない担体または希釈剤を表す。
【０１１０】
「賦形剤」は、化合物の投与をさらに促進する医薬組成物に加える不活性物質を表す。賦形剤の例には、限定されるものではないが、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、種々の糖およびデンプン類、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油、およびポリエチレングリコールが含まれる。
【０１１１】
用語「アルキル」は単独でまたは組み合わせて、炭素数1〜約30の、より好ましくは炭素数1〜12の、所望により置換された直鎖、所望により置換された分岐鎖、または所望により置換されたサイクリックアルキルラジカルを表す。アルキルラジカルの例には、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、イソブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、tert-アミル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチルなどが含まれる。サイクリック配置を含む用語「シクロアルキル」は、アルキルの定義内に包含され、具体的には各サイクリック部分が炭素数3〜約8であるモノサイクリック、ビサイクリック、トリサイクリック、およびより高いマルチサイクリックアルキルラジカルを表す。シクロアルキルの例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどが含まれる。「低級アルキル」は、例えば炭素数1〜約6のものを含む短鎖アルキルである。
【０１１２】
用語「アルケニル」は、単独または組み合わせて、炭素数2〜約30、より好ましくは2〜約18の、1またはそれ以上の炭素-炭素二重結合を有する所望により置換された直鎖、所望により置換された分岐鎖、または所望により置換されたサイクリックアルケニル炭化水素ラジカルを表す。アルケニルラジカルの例には、エテニル、プロペニル、ブテニル、1,4-ブタジエニルなどが含まれる。該用語にはサイクリックアルケニル構造を含むこともできる。「低級アルケニル」は、炭素数2〜約6のアルケニルを表す。
【０１１３】
用語「アルキニル」は、単独または組み合わせて、炭素数2〜約30の、より好ましくは炭素数2〜約12の、1またはそれ以上の炭素-炭素三重結合を有する所望により置換された直鎖、所望により置換された分岐鎖、またはサイクリックアルキニル炭化水素ラジカルを表す。該用語には、1またはそれ以上の炭素-炭素三重結合を有する、炭素数2〜約6および炭素数2〜約4の、所望により置換された直鎖または所望により置換された分岐鎖炭化水素ラジカルも含む。アルキニルラジカルの例には、エチニル、プロピニル、ブチニルなどが含まれる。
【０１１４】
用語ヘテロアルキル、ヘテロアルケニル、およびヘテロアルキニルには、炭素以外の原子、例えば酸素、窒素、硫黄、リン、またはその組み合わせから選ばれる1またはそれ以上の骨格鎖原子を有する、上記の所望により置換されたアルキル、アルケニル、およびアルキニル構造を含む。
【０１１５】
用語「炭素鎖」は、直鎖状、サイクリック、またはそのあらゆる組み合わせであってよい、あらゆるアルキル、アルケニル、アルキニル、またはヘテロアルキル、ヘテロアルケニル、またはヘテロアルキニル基を含むことができよう。リンカーの一部およびそのリンカーが中心骨格の部分として1またはそれ以上の環を含む場合は、鎖長を計算するために、「環」のみが特定の環の底部または先端(両方ではない)を構成する炭素原子を含み、環の先端および底部が同じ長さでない場合は短い方の距離を鎖長の決定に用いるべきである。該鎖が骨格の部分として異種原子を含む場合は、それら原子は炭素鎖長の部分として計算しない。
【０１１６】
用語「アルコキシ」は、単独または組み合わせて、アルキルエーテルラジカル、アルキル-O-を表す(ここで、用語アルキルは前記と同意義である。)。アルコキシラジカルの例には、メトキシ、エトキシ、n-プロポキシ、イソプロポキシ、n-ブトキシ、iso-ブトキシ、sec-ブトキシ、tert-ブトキシなどが含まれる。
【０１１７】
用語「アリールオキシ」は、単独または組み合わせて、アリールエーテルラジカルを表す(ここで、用語アリールは下記と同意義である。)。アリールオキシラジカルの例には、フェノキシ、ベンジルオキシなどが含まれる。
【０１１８】
用語「アルキルチオ」は、単独または組み合わせて、アルキルチオラジカル、アルキル-S-を表す(ここで用語アルキルは前記と同意義である。)。
【０１１９】
用語「アリールチオ」は、単独または組み合わせて、アリールチオラジカル、アリール-S-を表す(用語アリールは下記と同意義である。)。
【０１２０】
用語「オキソ」は=Oを表す。
【０１２１】
用語「アリール」は、単独または組み合わせて所望により置換された芳香族環系を表す。用語アリールには、炭素数6〜約20の、モノサイクリック芳香族環、多芳香族環、およびポリサイクリック芳香族環系が含まれる。用語アリールには、炭素数6〜約12および炭素数6〜約10の、モノサイクリック芳香族環、多芳香族環、およびポリサイクリック芳香族環系も含まれる。ポリ芳香族およびポリサイクリック芳香族環は2〜4環を含んでいてよい。アリール基の例には、限定されるものではないが、フェニル、ビフェニル、ナフチル、およびアントリル環系が含まれる。
【０１２２】
用語「ヘテロアリール」は、約5〜約20個の骨格環原子を含み、例えば酸素、窒素、硫黄、およびリンのような1またはそれ以上の異種原子を有する、所望により置換された芳香族環系を表す。用語ヘテロアリールには、5〜約12個の骨格環原子および5〜約10個の骨格環原子を有する所望により置換された芳香族環系も含まれる。用語ヘテロアリールは、5または6員のヘテロサイクリック環、ポリサイクリックヘテロ芳香族環系およびポリヘテロ芳香族環系を含んでいてよい(ここで該環系は2，3、または4環である。)。用語ヘテロサイクリック、ポリサイクリックヘテロ芳香族、およびポリヘテロ芳香族には、2〜4環のポリヘテロサイクリック環系を含む上記2以上の異種原子を有する所望により置換されたヘテロ芳香族環(例えば、2個の窒素を有する6員環)を含む環系が含まれる。用語ヘテロアリールには、例えば、フラニル、ベンゾフラニル、クロメニル、ピリジル、ピロリル、インドリル、キノリニル、N-アルキルピロリル、ピリジル-N-オキシド、ピリミドイル、ピラジニル、イミダゾリル、オキサゾリル、ベンゾチオフェニル、プリニル、インドリジニル、チエニルなどの環系が含まれる。
【０１２３】
用語「ヘテロアリールアルキル」は、ヘテロアリール基を含むC1-C4アルキル基(そのそれぞれが所望により置換されている。)を表す。
【０１２４】
用語「ヘテロアリールチオ」は、基-S-ヘテロアリールを表す。
【０１２５】
用語「アシルオキシ」は、Rが、H、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、またはアリールアルキルであり、アルキル、アルケニル、アルキニル、およびアリールアルキル基が所望により置換されていてよいエステル基-OC(O)-Rを表す。
【０１２６】
用語「カルボキシエステル」は、Rがアルキル、アリール、またはアリールアルキルであり、アルキル、アリール、およびアリールアルキル基が所望により置換されていてよい-C(O)ORを表す。
用語「カルボキサミド」は、RおよびR'のそれぞれが独立してH、アルキル、アリールおよびアリールアルキルからなる群から選ばれ、アルキル、アリール、およびアリールアルキル基が所望により置換されている
【化３０】
2005530689.tif 000054
を表す。
【０１２７】
用語「アリールアルキル」は、単独または組み合わせて、1個のH原子が例えばベンジル、2-フェニルエチルなどのような上記アリールラジカルにより置換されている上記アルキルラジカルを表す。
【０１２８】
用語ハロアルキル、ハロアルケニル、ハロアルキニル、およびハロアルコキシには、1またはそれ以上のフッ素、塩素、臭素、もしくはヨウ素、またはその組み合わせにより置換されている上記アルキル、アルケニル、アルキニルおよびアルコキシ構造が含まれる。
【０１２９】
用語シクロアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、アルキル、アルキニル、アルケニル、ハロアルキル、およびヘテロアルキルには、所望により置換されたシクロアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、アルキル、アルキニル、アルケニル、ハロアルキル、およびヘテロアルキル基が含まれる。
【０１３０】
用語「炭素環」には、所望により置換された、飽和または不飽和の、3〜8員のサイクリック構造(骨格原子はすべて炭素である。)が含まれる。
【０１３１】
用語「ヘテロ環」には、所望により置換された、飽和または不飽和の、3〜8員のサイクリック構造(1またはそれ以上の骨格原子が酸素、窒素、硫黄、リン、またはその組み合わせである。)が含まれる。代表的例には、ピリジン、ピラン、チオファン、ピロール、フラン、チオフェン、5原子および6原子ラクタム環などが含まれる。
【０１３２】
用語「員環」は、上記炭素環およびヘテロ環を含むあらゆるサイクリック構造を含むことができる。用語「員(の)」は、環を構成する骨格原子の数を表す。すなわち、例えばピリジン、ピラン、およびチオファンは6員環であり、ピロール、フラン、およびチオフェンは5員環である。
【０１３３】
用語「アシル」には、カルボニル官能性(例えば、-CO-アルキル、-CO-アリール、-CO-アリールアルキル、または-CO-ヘテロアリールアルキルなど)を介して化合物と結合したアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、またはヘテロアリールアルキル置換基が含まれる。
【０１３４】
「所望により置換された」基は、置換されているかまたは置換されていなくてよい。「所望により置換された」基の置換基には、限定されるものではないが、以下の基またはその示したサブセットから独立して選ばれる1またはそれ以上の置換基が含まれてよい：アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロアルキル、ハロアルケニル、ハロアルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、アルコキシ、アリールオキシ、ハロアルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキルチオ、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、オキソ、カルボキシエステル、カルボキサミド、アシルオキシ、H、F、Cl、Br、I、CN、NO2、NH2、N3、NHCH3、N(CH3)2、SH、SCH3、OH、OCH3、OCF3、CH3、CF3、C(O)CH3、CO2CH3、CO2H、C(O)NH2、ピリジニル、チオフェン、フラニル、インドール、インダゾール、エステル、アミド、ホスホネート、ホスフェート、ホスホラミド、スルホネート、サルフェート、スルホンアミド、カルバメート、尿素、チオ尿素、チオアミド、チオアルキル。所望により置換された基は、非置換(例えば-CH2CH3)、完全置換(例えば-CF2CF3)、モノ置換(例えば-CH2CH2F)、または完全置換とモノ置換の間のいずれかのレベルの置換(例えば、-CH2CF3)であってよい。
【０１３５】
用語「ハロゲン」にはF、Cl、Br、およびIが含まれる。
【０１３６】
用語「DMAG」は、17-ジメチルアミノエチルアミノ-17-デメトキシゲルダナマイシンの略号である。
アンサマイシン、その製造および使用
【０１３７】
アンサマイシンは、芳香族環構造の反対端を仮称する種々の長さおよび構造の脂肪族環を特徴とする広いクラスの構造を含む。あるより一般的なアンサマイシンには、例えばゲルダナマイシン、ゲルダナマイシン誘導体17-AAG、限定されるものではないが、ヘルビマイシンA、およびマクベシンが含まれ、その多くは米国特許3,595,955、4,261,989、5,387,584、および5,932,566に記載されている。アンサマイシンのクラス内には、サブクラスのベンゾキノンアンサマイシンが含まれる。ベンゾキノンアンサマイシンは、芳香族環構造としてベンゾキノンを有する。アンサマイシンおよびベンゾキノンアンサマイシンは、合成、天然、またはその2つの組み合わせ、すなわち半合成であり得る。ゲルダナマイシンは、例えばCN Biosciences、Darmstadt、Germany(Merck KGaAの関連会社、San Diego、California、USAに本社)(cat. no. 345805)から市販されており、他の多くのアンサマイシンは出発物質にゲルダナマイシンを用いて製造することができる。他のアンサマイシン、4,5-ジヒドロゲルダナマイシンおよびそのヒドロキノンのStreptomyces hygroscopicus(ATCC 55256)培養物からの生化学的精製は、国際出願のPCT/US92/10189(PfizerInc.に譲渡、WO93/14215(公開日1993年7月22日)、発明者Cullenら)に記載されており、ゲルダナマイシンの触媒的水素添加による4,5-ジヒドロゲルダナマイシンの合成方法も知られている。例えば、Progress in the Chemistry of Organic Natural Products、Chemistry of the Ansamycin Antibiotics、33 1976、278頁参照。
【０１３８】
同一出願人の仮出願第60/326,639および60/331,893(出願日、各2001年9月24日および2001年11月21日、表題は共に「Chemical Process for Preparing 17-Allyl Amino ゲルダナマイシン(17-AAG) and other Ansamycins and Ansamycin誘導体」)は、アンサマイシン、例えばベンゾキノンアンサマイシンおよびその誘導体、例えば17-AAGおよびその4,5ジヒドロ類似体の改良された製造方法に関する。該方法は、抽出およびプレパラティブクロマトグラフィ分離に関する時間と費用のかかる後処理を避けながら、よい純度と収量をもたらす。製造技術には、試薬と生成物両方を溶解するのに適した条件下の、1またはそれ以上の揮発性非プロトン性溶媒、例えばエーテルまたはアセテート中のゲルダナマイシンまたはそのジヒドロ等価物(好ましくは非ハロゲン化)の求核攻撃が含まれる。次に、得られた生成物を蒸発により濃縮し、濃縮生成物に揮発性プロトン性溶媒、例えば揮発性アルコールおよび/または水を、揮発性プロトン性溶媒が洗浄または(再)結晶媒質の目的をはたす条件下で加える。ろ過、濃縮、デカント、および/または蒸発を用いていずれの方法を助けてもよい。得られた生成物は、例えば抗生物質または抗癌剤としてアンサマイシンの有用性のために直接または間接的に用いることができる。間接的有用性に関して、該生成物は、例えばさらなるアンサマイシン誘導体、例えばUS5,932,566およびPCT/IB94/00160(WO 95/01342)(Schnurらに発行、Pfizer Inc.に譲渡)に記載のものの合成に中間体として有用である。
【０１３９】
同一出願人の出願第60/272,251号(2001年3月1日出願、表題「Methods for Treating Genetically Defined Proliferative Disorders with HSP90」)は、ある種のHSP90依存性タンパク質のアンサマイシン誘導性の損失がある種の調節経路の選択的破壊をもたらし、細胞周期の特定の相での成長停止(Muise-Heimericks、R. C.ら、1998、J. Biol. Chem. 273:29864-72)、そのように処理した細胞のアポトーシス(Vasilevskaya、A.ら、1999、Cancer Res.、59:3935-40)をもたらす。この出願は、さらに成長停止を、癌、およびHSP90依存性の、2つの異なる群の異常発現タンパク質により生じる他の増殖性疾患に対してどのようにして選択的に行うことができるかについて説明する。第一群の中には2つの正常細胞タンパク質のコーディング配列の部分を並列する染色体異常(例えば転座、欠失、および逆位)の結果として生じる融合タンパク質がある(Rabbitts、T.、1994、Nature 372:143-149)。第二群の中には天然遺伝子産物およびその機能を無効にし、支配し、もしくは覆い隠す細胞タンパク質の突然変異体およびアイソフォームがある。例えば、p53ファミリータンパク質および他の腫瘍抑制遺伝子産物の突然変異体およびアイソフォームは、ヘテロ接合体腫瘍細胞において対応する正常タンパク質の優勢阻害インヒビターとして作用することができる(Blagosklonny、M.ら、1995、Oncogene、11:933-939)。他の例には、ある種のキナーゼのウイルスによってコードされる種、例えばv-src、および他の優勢に作用する突然変異体癌遺伝子産物が含まれる(Uehara、Y.ら、1985、上記)。
【０１４０】
同一出願人のPCT出願であるPCT/US02/39993(2002年12月12日出願、表題「Assay for Determining HSP90 Binding Activity」)は、HSP90リガンドの結合親和性を同定および/または評価するためのアッセイを記載し、例えば癌細胞溶解物中に存在するような高親和性型のHSP90の存在と有用性を実証している。該アッセイでは、HSP90を既知HSP90リガンド、例えばゲルダナマイシンのようなアンサマイシンと接触させる。HSP90リガンドとの結合を検出できるように、アンサマイシンリガンドの17位をビオチン/ストレプトアビジンで「標識する」(本発明の種々の局面および態様において同じ位置が誘導体化される。)。該アッセイ時においてHSP90と結合もしくは結合したままでいる標識アンサマイシンの能力は、HSP90結合能を有すると思われるかまたはスクリーニングする化合物が同時に存在することにより競合することがありうる。目的とする化合物の結合能および結合親和性は、競合リガンドとして存在するシグナルの量に基づく。ラベルは、固体支持体、例えばマルチウェルディッシュもしくはプレート上で検出するのが好ましく、当該分野で知られた種々の市販の検出装置を用いて検出を助けることができよう。別の異なるアッセイがChiosisら、Chemistry and Biology 8:289-299(2001)により記載されているが、操作、ブロット、および抗体でプローブするのに必要なゲルの観点から煩雑で時間がかかる。さらに、Chiosisアッセイは、高速大量処理スクリーニングを好都合に支持する能力に制限がある。前記アッセイのいずれかで本発明化合物のHSP90結合(および推測によりHSP90阻害能)を評価することができる。
【０１４１】
国際特許出願PCT/US01/232640(WO0209696)(2001年7月27日出願、表題「Methods for Treating Cell-Proliferative Diseases and Viral Infections」)も本発明の背景的価値がある。本発明の種々の局面において標的とするウイルスには、すべてのウイルス、例えばHIV、HTLV、HSV、HBV、HCV、エボラ、レトロウイルス、ライノウイルス、肝炎、VZV、HAV、CMV、アデノウイルス、インフルエンザ、フラビウイルス、エコウイルス、コクサッキーウイルス、コルノウイルス(cornovirus)、呼吸器合胞体ウイルス、ムンプスウイルス、ロタウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、パルボウイルス、ワクシニアウイルス、デング熱ウイルス、パピローマウイルス、モルスカムウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、JCウイルス、アルボウイルス脳炎ウイルス、アレナウイルス、ブンヤウイルス、コロナウイルス、ヘパドナウイルス、エプスタインバーウイルス、サイトメガロウイルス、フラビウイルス、オルソミクソウイルス、パラミクソウイルス、ピコルノウイルス(picornoviruses)、ポリオーマウイルス、ポックスウイルス、レオウイルス、ラブドウイルス、ロタウイルス、トガウイルス、狂犬病、水疱性口内炎、レオウイルス、ワクシニア、麻疹ウイルス、サイトメガロウイルス、シンドビスウイルス、白血病、ポリオーマウイルス、ラウス(Rous)肉腫ウイルス(RSV)、BKウイルス、JCウイルス、マウス乳癌ウイルス(MMTV)、アルファウイルス接合領域、水痘、アデノウイルス、単純ヘルペスウイルスI型(HSV-I)、単純ヘルペスウイルスII型(HSV-II)、牛疫、ライノウイルス、エコウイルス、ロタウイルス、呼吸器合胞体ウイルス(RSウイルス)、パピローマウイルス、パポバウイルス、サイトメガロウイルス、エキノウイルス、アルボウイルス、ハンタウイルス、コクサッキーウイルス、ムンプスウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、およびポリオウイルスが含まれる。前記は種々の株および血清型を有していてもよく、それらはすべて本発明での使用が予期される。
【０１４２】
WO02/02123(PCT/US01/20578)(2001年7月28日出願)は、限定されるものではないが結合組織疾患、例えば強皮症、多発性筋炎、全身狼瘡、間接リウマチ、肝硬変、ケロイド形成、間質性腎炎、および肺線維症を含む繊維形成性疾患の予防および治療のためのゲルダナマイシンおよび関連化合物の使用について報告している。
【０１４３】
WO99-US7242(1999年1月1日公開)は、酸化ストレス性細胞死を阻害し、心停止および卒中からの傷害を治療するためのベンゾキノイドアンサマイシン、例えばGD、ヘルビマイシンA、およびマクベシンの使用について報告している。
【０１４４】
米国特許6,210,974(2001年4月3日発行、1999年4月7日出願)は、神経再生を促進する組成物および方法について報告している。
【０１４５】
米国特許公開公報2001/0038827 A1(2001年11月8日公開、1997年12月30日出願)は、吸入により新生物を治療するのに用いる製剤および方法について報告している。
【０１４６】
本発明の範囲内には、天然のアンサマイシン構造(例えばStreptomyces hygoscopicusから単離)、および非天然のアンサマイシン構造の両方に基づくアンサマイシン誘導体がある。Streptomyces hygoscopicusから単離された天然のゲルダナマイシンアンサマイシンの例を以下に示す。
【０１４７】
【化３１】
2005530689.tif 000055
【０１４８】
ゲルダナマイシンの非天然の異性体を合成し、生物学的、薬理学的、および薬物様特性を最適化することもできる。例えば、炭素-11(C-11)の逆立体配置は、最初にヒドロキシル基を酸化してケトン基とし、次いで立体選択的還元によりヒドロキシルとすることにより達成することができる。あるいはまた、Mitsunobu条件を利用して対応するエステルを経て逆のC-11ヒドロキシル立体配置を製造することができる。同様に、当業者に知られた合成化学をC-6、C-7、およびC-12で実施し、その中心に逆立体配置を得ることができる。
【０１４９】
立体異性体の化合物が存在する場合は、HPLCのようなよく知られた方法を用いてその個々の立体異性体成分に分離することもできよう。すなわち、一般構造は特許請求の範囲および本明細書の説明中に示しているが、そのような構造はすべての立体異性体、および種々の純度またはその組み合わせを含むことができると理解されよう。いくつかの態様は、実質的に純粋な(純度>約95%)立体異性体を特徴としてよい。
(プロドラッグ)
【０１５０】
プロドラッグは、宿主に効果的に保存/供給されることができるようにそれが結合する薬剤に溶解性および/または安定性の増大をもたらす機能がある化学的部分、例えばアミドまたはリン基を含む。一旦体内に入ると、プロドラッグは典型的にはin vivo酵素、例えばエステラーゼ、アミダーゼ、またはホスファターゼの作用を受けて薬理学的により活性な薬剤が遊離/生成する。この活性化は、内因性宿主酵素、またはプロドラッグの投与中、その前または後に宿主に投与される非内因性酵素の作用を介して生じるかもしれない。抗体による酵素の標的細胞への送達(「ADEPT」)の例は、米国特許4,975,278に記載されている。別の例、「GDEPT」すなわち遺伝子依存酵素-プロドラッグ療法は、Melton、R. G.およびSherwood、R. E.、J. Natl. Cancer Inst. 88:153-65(1996)に記載されている。一般的なプロドラッグの使用は、例えば米国特許5,627,165、およびPathakら、Enzymic protecting group techhiques in organic synthesis、Stereosel. Biocatal. 775-797(2000)に記載されており、また、本明細書に記載の特定の化合物および組成物を用いる本出願人の知識ではないが、当該分野でよく知られている。
(医薬組成物/製剤、投薬、および投与方法)
【０１５１】
当業者は、例えばGoodman and Gilman's、The Pharmacological Basis of Therapeutics、最新版; Pergamon Press;およびRemington's Pharmaceutical Sciences(最新版) Mack Publishing Co.、Easton、Paに記載のような製剤技術および投与技術をよく知っている。これら技術は、本発明の適切な局面および態様において用いることができる。
【０１５２】
本発明の方法に用いる化合物は、標準的薬務に従って単独または医薬組成物中で医薬的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤と組み合わせて投与することができよう。該化合物は、経口的に、または静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下、直腸内、および局所投与経路を含む非経口的に投与することができる。
【０１５３】
例えば、本発明の治療用組成物または医薬組成物は、治療を要する領域に局所投与することができる。これは、例えば、限定されるものではないが、外科手術時の局所注入、局所適用、例えばクリーム、軟膏、注射、カテーテル、またはインプラント(該インプラントは、シアラスティック(sialastic)膜のような膜、または繊維を含む多孔性、非多孔性、またはゲル状物質から作られた)により達成することができよう。投与は、腫瘍または新生物性もしくは前新生物性組織の部位(または元の部位)に直接投与することもできる。
【０１５４】
さらに、本発明化合物または組成物は、小胞、例えばリポソームを用いて送達することができる(例えば、Langer、1990、Science、249:1527-1533; Treatら、1989、Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer、Lopez-BernsteinおよびFidler(eds.)、Liss、N. Y.、pp.353-365参照)。
【０１５５】
本発明の方法に用いる化合物および医薬組成物は、制御放出系を用いて送達することができる。ある態様ではポンプを用いてよい(Sefton、1987、CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201; Buchwaldら、1980、Surgery、88:507; Saudekら、1989、N. Engl. J. Med.、321:574参照)。さらに、制御放出系は、治療標的の近傍に置くことができる(Goodson、1984、Medical Applications of Controlled Release、Vol.2、pp.115-138参照)。
【０１５６】
本発明の方法に用いる医薬組成物は、活性成分を、経口使用に適した形、例えば錠剤、トローチ、ローゼンジー錠、水性もしくは油性サスペンジョン剤、分散可能粉末もしくは顆粒剤、エマルジョン剤、硬もしくは軟カプセル剤、またはシロップ剤もしくはエリキシル剤として含むこともできる。経口使用を意図した組成物は、医薬組成物を製造するための当該分野で知られたあらゆる方法に従って製造してよく、そのような組成物は、医薬的に洗練された味のよい製剤を提供するため、甘味料、香味料、着色料、および保存料からなる群から選ばれる1またはそれ以上の物質を含んでよい。錠剤は、錠剤の製造に適した無毒性の医薬的に許容される賦形剤と混合した活性成分を含む。これら賦形剤は、例えば不活性希釈剤、例えば炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、乳糖、リン酸カルシウム、もしくはリン酸ナトリウム；顆粒化剤および崩壊剤、例えば微晶質セルロース、ナトリウムクロスカルセロース、コーンスターチ、またはアルギン酸；結合剤、例えばデンプン、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、もしくはアカシア、および潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、もしくはタルクであってよい。錠剤は、コートされていなくても、または薬剤の味を隠すかまたは消化管中の分解および吸収を遅らせて長期にわたる持続作用をもたらすための知られた技術によりコートすることができよう。例えば、味を隠すための水溶性物質、例えばヒドロキシプロピルメチルセルロースまたはヒドロキシプロピルセルロース、または時間遅延物質、例えばエチルセルロース、またはセルロースアセテートブチレートを適切に用いることができよう。
【０１５７】
経口使用のための製剤は、活性成分が不活性固体希釈剤、例えば炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、またはカオリンと混合している硬ゼラチンカプセル剤、または活性成分が水溶性担体、例えばポリエチレングリコールもしくは油状媒質、例えばピーナッツ油、水性パラフィン、もしくはオリーブ油と混合している軟ゼラチンカプセル剤として存在してもよい。
【０１５８】
水性サスペンジョン剤は、水性サスペンジョン剤を製造するのに適した賦形剤と混合した活性物質を含むことができる。そのような賦形剤は懸濁化剤として作用することができ、それには、例えばナトリウムカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、ガムトラガカントおよびガムアカシアが含まれ、分散剤または湿潤剤は天然のホスファチド、例えばレシチン、またはアルキレンオキシドと脂肪酸、例えばポリオキシエチレンステアレートとの縮合生成物、またはエチレンオキシドと長鎖脂肪酸アルコール、例えばヘプタデカエチレン-オキシセタノールとの縮合生成物、またはエチレンオキシドと脂肪酸から誘導した部分エステル、およびヘキシトール、例えばポリオキシエチレンソルビトールモノオレエートとの縮合生成物、またはエチレンオキシドと脂肪酸から誘導した部分エステル、およびヘキシトール無水物、例えばポリエチレンソルビタンモノオレエートとの縮合生成物であってよい。水性サスペンジョン剤は、1またはそれ以上の保存料、例えばエチルまたはn-プロピル p-ヒドロキシベンゾエート、1またはそれ以上の着色料、1またはそれ以上の香味料、および1またはそれ以上の甘味料、例えばショ糖、サッカリン、もしくはアスパルテームを含んでいてもよい。
【０１５９】
油状サスペンジョン剤は、植物油、例えばラッカセイ油、オリーブ油、ゴマ油、ココナッツ油、または鉱油、例えば液体パラフィンに活性成分を懸濁することにより製剤化することができよう。油状サスペンジョン剤は、増粘剤、例えば密蝋、硬パラフィン、またはセチルアルコールを含んでいてよい。上記したような甘味料および香味料を加えて味のよい経口用製剤を得てよい。これら組成物は、抗酸化剤、例えばブチル化ヒドロキシアニソール、α-トコフェロール、またはアスコルビン酸を加えることにより保存することができよう。
【０１６０】
水を加えることにより水性サスペンジョンを製造するのに適した分散可能な粉末剤および顆粒剤は、分散剤もしくは湿潤剤、懸濁化剤、および1またはそれ以上の保存料と混合した活性成分を提供する。適切な分散剤もしくは湿潤剤、および懸濁化剤は上記のものにより例示される。さらなる賦形剤、例えば甘味料、香味料、および着色料も存在してよい。これら組成物は、抗酸化剤を加えることにより保存することができよう。
【０１６１】
本発明の方法に用いる医薬組成物は油中水エマルジョン剤の形であってもよい。油相は、植物油、例えばオリーブ油もしくはラッカセイ油、または鉱油、例えば液体パラフィン、またはこれらの混合物であってよい。適切な乳化剤は、天然のホスファチド、例えばダイズレシチン、および脂肪酸から誘導されたエステルまたは部分エステル、およびヘキシトール無水物、例えばソルビタンモノオレエート、および該部分エステルと、エチルオキシド、例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートとの縮合生成物であってよい。エマルジョン剤は、甘味料、香味料、保存料、および抗酸化剤も含んでいてよい。
【０１６２】
シロップ剤およびエリキシル剤は、甘味料、例えばグリセロール、プロピレングリコール、ソルビトール、またはショ糖を用いて製剤化してよい。そのような製剤は、緩和薬、保存料、香味料および着色料、および抗酸化剤も含んでいてよい。
【０１６３】
医薬組成物は、無菌注射可能水性溶液の形であってよい。用いることができる許容されるビークルおよび溶媒の中には水、リンゲル溶液、および等張性塩化ナトリウム溶液がある。
【０１６４】
無菌注射可能製剤は、活性成分が油状相に溶解している、無菌注射可能油中水ミクロエマルジョン剤であってもよい。例えば、活性成分は最初にダイズ油とレシチンの混合物に溶解してよい。次に、油状溶液を水とグリセロールの混合物に導入し、加工してミクロエマルジョン剤を形成する。
【０１６５】
注射可能溶液剤またはミクロエマルジョン剤は、局所ボーラス注射により患者の血流に導入することができよう。あるいはまた、本化合物の一定の循環濃度が維持されるように溶液剤またはミクロエマルジョン剤を投与することが好都合なことがある。そのような一定濃度を維持するために、連続的静脈送達装置を用いてよい。そのような装置の例にはDeltec CADD-PLUS(登録商標)モデル5400静脈内用ポンプがある。
【０１６６】
医薬組成物は、筋肉内および皮下投与用の無菌注射可能水性または油脂性サスペンジョン剤の形であってよい。このサスペンジョン剤は、上記のそれら適切な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を用い知られた方法に従って製剤化することができよう。無菌注射可能製剤は、無菌の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の無菌注射可能溶液またはサスペンジョン(例えば、1,3-ブタンジオール中の溶液のような)であってよい。さらに、無菌不揮発油を常套的に溶媒または懸濁化媒質として用いる。この目的には、合成モノ-またはジグリセリドを含むあらゆる無刺激性不揮発油を用いてよい。さらに、オレイン酸のような脂肪酸は、注射可能剤の製造に用途がある。
【０１６７】
本発明の方法に用いるHSP90阻害剤は、薬剤の直腸内投与用の坐剤の形で投与することもできよう。これら坐剤は、該阻害剤と通常の温度で固体であるが直腸内温度で液体であり、直腸内で溶けて薬物を放出するであろう適切な非刺激性賦形剤と混合することにより製造することができる。そのような物質には、ココアバター、グリセリンゼラチン、水素化植物油、種々の分子量のポリエチレングリコールとポリエチレングリコールの脂肪酸エステルの混合物が含まれる。
【０１６８】
局所使用には、HSP90阻害剤を含むクリーム剤、軟膏、ゼリー剤、溶液剤、またはサスペンジョン剤などを用いることができる。本明細書で用いている局所適用には洗口液およびうがい薬を含むことができる。
【０１６９】
本発明の方法に用いる化合物は、適切な鼻内ビークルおよび送達装置の局所使用を介して経鼻形で、または当業者によく知られた経皮的皮膚パッチの形を用いる経皮経路で投与することができる。経皮送達系の形で投与するには、もちろん、投薬は投薬計画を通して間欠的より連続的であろう。
【０１７０】
本発明の方法および化合物は、治療する病状に対して特に有用であるように選んだ他のよく知られた治療剤と組み合わせて用いてもよい。例えば、本発明化合物は、知られた抗癌剤および細胞毒性剤と組み合わせると有用かもしれない。さらに、本発明の方法および化合物は、細胞表面増殖因子レセプターと核シグナル開始細胞増殖を結びつけるシグナリング経路の部分の他の阻害剤と組み合わせても有用かもしれない。
【０１７１】
本発明の方法は、限定されるものではないが、VEGFレセプター、アンギオスタチン、およびエンドスタチンを標的とするリボザイムおよびアンチセンスを含むVEGFレセプター阻害剤を含む、血管形成を阻害することにより腫瘍細胞の増殖および侵襲性を阻害する他の薬剤を用いても有用かもしれない。
【０１７２】
本発明の方法と組み合わせて用いることができる抗新生物薬の例には、一般に、アルキル化剤、代謝拮抗薬；エピドフィロトキシン；抗新生物酵素；トポイソメラーゼ阻害剤；プロカルバジン；メトキサントロン；プラチナ配位複合体；生物反応修飾物質および成長阻害剤；ホルモン／抗ホルモン性治療剤、および造血成長因子が含まれる。
【０１７３】
抗新生物剤の典型的なクラスには、例えばアントラサイクリンファミリーの薬剤、ビンカ薬、マイトマイシン、ブレオマイシン、細胞毒性ヌクレオシド、エポチロン、ジスコデルモリド、プテリジンファミリーの薬剤、ジイネン、およびポドフィロトキシンが含まれる。それらクラスの特に有用なメンバーには、例えば、カルミノマイシン、ダウノルビシン、アミノプテリン、メトトレキセート、メトプテリン、ジクロロメトトレキセート、マイトマイシンC、ポルフィロマシン、5-フルオロウラシル、6-メルカプトプリン、ゲムシタビン、シトシンアラビノシド、ポドフィロトキシンもしくはポドフィロトキシン誘導体、例えば、エトポシド、リン酸エトポシドまたはテニポシド、メルファラン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ラウロシジン、ビンデシン、ラウロシン、パクリタキセルなどが含まれる。他の有用な抗新生物薬には、エストラムスチン、カルボプラチン、シクロホスファミド、ブレオマイシン、ゲムシタビン、イフォサミド、メルファラン、ヘキサメチルメラミン、チオテパ、シタラビン、イダトレキセート、トリメトレキセート、ダカルバジン、L-アスパラギナーゼ、カンプトテシン、CPT-11、トポテカン、アラ-C、ビカルタミド、フルタミド、ロイプロリド、ピリドベンゾインドール誘導体、インターフェロン、およびインターロイキンが含まれる。
【０１７４】
本発明の方法に用いるHSP90阻害剤をヒト対象に投与するとき、1日用量は、通常担当医師が決定し、用量は一般に個々の患者の年齢、体重、および反応、ならびに患者の症状の重症度に従って変化するであろう。
【０１７５】
ある典型的適用において、適切な用量の化合物を、癌、例えば肺癌の治療を受ける哺乳動物に投与する。投与は、典型的には約0.01mg/kg体重〜約100mg/kg体重/日(単回または分割用量で投与)、より好ましくは、少なくとも約0.1mg/kg体重/日で行う。特定の治療用量には、例えば、化合物約0.01mg〜約1000mg、好ましくは例えば約1mg〜約1000mgを含む。製剤の単位用量中の活性化合物の量は、特定の適用に従って約0.1mg〜1000mg、好ましくは約1mg〜300mg、より好ましくは10mg〜200mgで変化または調節してよい。投与する量は、用いる化合物の特定のIC50値、および健康、体重、および年齢のような因子を考慮した担当医師の判断に応じて変化するであろう。
【０１７６】
好ましくは、医薬製剤は単位剤形である。そのような形では、製剤が適切な量のの活性成分、例えば所望の目的を達成するための有効量を含む単位用量に小さく分割される。
【０１７７】
用いる実際の用量は、患者の要求および治療すべき病状の重症度に応じて変えてよい。特定の状況のための適切な用量の決定は当該分野の技術の範囲内である。一般に、治療(処置)は、化合物の最適用量以下のより低用量で開始される。したがって、用量はその環境下で最適効果に達するまで小量ずつ増加させる。便宜上、総1日用量を分割し、所望により1日の間に部分に分けて投与してよい。
【０１７８】
本発明の方法に用いる化合物ならびに適用可能であれば他の化学療法剤の投与量および投与頻度は、患者の年齢、病状、および大きさ、ならびに治療すべき疾患の重症度といったような因子を考慮して担当臨床医(医師)の判断で調節されよう。
【０１７９】
一般に、本発明化合物、および併用療法を用いる態様では他の化学療法剤は、同じ医薬組成物で投与する必要はなく、異なる物理化学的特性のため異なる経路で投与しなければならないことがある。同じ医薬組成物での可能な投与方法および投与の妥当性の決定は、十分に熟練臨床医の知識内である。初回投与は当該分野で知られた確立されたプロトコールに従って行うことができ、次いで観察された効果に基づいて熟練臨床医が用量、投与方法、および投与回数を修正することができる。用いる化合物の特定の選択は、担当臨床医の診断、および患者の病状および適切な治療プロトコールの判定によって決まるであろう。該化合物は同時に(例えば、同時に、実質的に同時に、または同じ治療プロトコール内で)、または増殖性疾患の性状、患者の病状、および用いる化合物の実際の選択に応じて連続的に投与することができよう。
【０１８０】
治療プロトコール時における各治療剤の投与順序および投与の反復回数の決定は、十分に、治療する疾患および患者の病状の評価後の医師の知識内である。
【０１８１】
治療が投与した用量で有効かどうかの判断において担当医は、患者の一般的健康問題とより明確な徴候、例えば疾患関連症状の軽減、腫瘍成長の阻害、腫瘍の実際の縮小、または転移の阻害を考慮するであろう。腫瘍の大きさ(腫瘍を標的とする態様において)は、標準的方法、例えば放射線医学的試験、例えばCATまたはMRIスキャンにより測定することができ、継続的な測定値を用いて腫瘍の成長が遅くなってきたかまたはさらに逆転してきたかどうかを判定することができる。疼痛のような疾患関連症状の軽減、および全体的病状の改善を用いて治療効果の判定の助けとすることもできる。
(HSP90結合および下流効果を測定するアッセイ)
【０１８２】
HSP90に対する本発明化合物の効果を試験するために、種々のin vitroおよびin vivoアッセイが利用可能である。HSP90競合結合アッセイおよび機能アッセイは、本発明化合物に置き換えて当該分野で知られているように行うことができる。Chiosisら、Chemistry & Biology 8:289-299(2001)は、これを行うことができる知られた方法のいくつかを記載している。例えば、例えば、HSP90の競合結合阻害剤としてのゲルダナマイシンまたは17-AAGを用いる競合結合アッセイを用いて、目的の化合物または他の競合阻害剤をゲルまたは固体マトリックス上に固定化し、HSP90を他の阻害剤とプレインキュベーションし、プレインキュベーションした混合物をゲルまたはマトリックスに通し、次いでゲルまたはマトリックスに結合しているかまたは結合していないHSP90の量を測定することにより本発明化合物の相対HSP90親和性を決定することができる。
【０１８３】
下流効果は、例えばRaf1およびHer2を含む種々のステロイドレセプターおよびシグナリングタンパク質の機能および安定性に対するHSP90阻害の既知の効果に基づいて評価することもできる。HSP90阻害剤は、これら分子の用量依存的分解を誘導し、これを標準的技術を用いて測定することができる。HSP90の阻害は、HSP90および同時に測定可能な関連シャペロンタンパク質の上方調節ももたらす。種々の癌細胞系に対する抗増殖活性は、HSP90阻害に関連した形態学的および機能的分化同様に測定することもできる。例えば、
このように、タンパク質濃度を測定し、細胞内および液体試料中のタンパク質レベルを測定または予測するための、多くの異なるタイプの方法が当該分野で知られている。間接技術には、例えばポリメラーゼ鎖反応(PCR)を用いる核酸ハイブリダイゼーションおよび増幅が含まれる。これら技術は当業者に知られており、例えば、Sambrook、Fritsch & Maniatis、Molecular Cloning:A Laboratory Manual、Second Edition(1989)Cold Spring Harbor Laboratory Press、Cold Spring Harbor、N. Y.、Ausubelら、Current Protocols in Molecular Biology、John Wiley & Sons、NY、1994に記載されており、例えば、米国特許4,699,877、4,918,162、4,968,603、および5,846,749において患者試料中のHer-2/neuの定量、検出、および相対活性に応用されている。用いることができる2つの一般技術の簡単な説明を以下に示す。
【０１８４】
細胞がHER-2を過剰発現するか、または上昇したレベルを含むかの決定は、よく知られた抗体技術、例えばイムノブロッティング、ラジオイムノアッセイ、ウエスタンブロッティング、免疫沈降、酵素免疫測定法(ELISA)、およびHER-2に対する抗体を用いる派生技術を用いて決定することができる。例として、乳癌細胞におけるHER-2発現は、免疫組織化学アッセイ、例えばDako Hercep(登録商標)試験(Dako Corp.、Carpinteria、CA)を用いて決定することができる。Hercep(登録商標)試験は、腫瘍組織標本におけるHER-2の過剰発現を検出するために設計した抗体染色アッセイである。この特定のアッセイは、HER-2発現を4つのレベル：0、1、2、および3にランク付けし、レベル3はHER-2発現の最高レベルを表す。例えば、Press、M.ら、(2000)、Modern Pathology 13:225Aに記載のAutomated Cellular Imaging System(ACIS)を用いることにより厳密な定量を向上させることができる。
【０１８５】
抗体(ポリクローナルまたはモノクローナル)は種々の商品供給業者から購入することができるか、またはHarlowら、Antibodies:A Laboratory Manual、2ndEd; Cold Spring Harbor Laboratory Press、Cold Spring Harbor、N. Y. (1988)に記載のごとくよく知られた方法を用いて製造することができよう。
【０１８６】
HER-2タンパク質の過剰発現とそれをコードする遺伝子の増幅の間に高い相関が報告されているので、HER-2過剰発現を核酸レベルで測定することもできる。これを試験する1つの方法はRT-PCRを用いることによる。HER-2のゲノムおよびcDNA配列が知られている。特異的DNAプライマーを、よく知られた標準技術を用いて得ることができ、次いでこれを用いて細胞中にすでに存在する鋳型を増幅することができる。この例はKurokawa、Hら、Cancer Res. 60:5887-5894(2000)(PCR5'に用いることができるフォワードおよびリバースプライマーDNA配列の具体例を記載)に記載されている。PCRは、正常細胞と異常細胞、例えば癌性細胞および非癌性細胞の間のように定量的差が観察されるように標準化することができる。例えばデンシトメトリーを用いるよく知られた方法を用いて、PCRを用いて増幅された核酸レベルを定量および/または比較することができる。
【０１８７】
同様に、蛍光in situハイブリダイゼーション(FISH)アッセイおよび他のアッセイ、例えばノーザンおよび/またはサザンブロッティングを用いることができる。これらはHER-2遺伝子またはmRNAと上記PCRプライマーに対するものと同じかまたは同様の方法で設計することができる対応する核酸プローブとの核酸ハイブリダイゼーションを利用する。例えば、Mitchell MSおよびPress MF.、1999、Semin.Oncol.,Suppl. 12:108-16参照。FISHでは、この核酸プローブを、好ましくはハイブリダイゼーションと干渉しない、蛍光分子、例えばフルオレセインおよび/またはローダミンと結合させ、次いでハイブリダイゼーション後の蛍光を測定することができる。例えば、Kurokawa、Hら、Cancer Res. 60:5887-5894(2000)(配列、FAMにより5’末端、およびTAMRA-pにより3’末端に隣接した特定DNA配列を有する核酸プローブについて記載)参照。上記のACISベースのアプローチを用いてアッセイをより定量的にすることができる(de la Torre-Bueno、J.ら、2000、Modern Pathology 13:221A)。
【０１８８】
免疫および核酸検出法は、HSP90およびHer-2以外のタンパク質(それにもかかわらず、該タンパク質はHSP90阻害に応じて影響を受ける)に向けることもできる。
(本発明の種々の局面を実施するのに有用なハードウエア)
【０１８９】
本発明化合物は、貯蔵および/または患者に投与するために容器、例えばバイアル、シリンジなどに封入することができる。そのような容器は当該分野でよく知られており、本発明化合物の光による酸化/崩壊を防ぐために耐光性であってよい。
【０１９０】
種々のハードウエア、例えば分光光度計、質量分析器、濃度計、NMR装置、シンチレーションカウンター、HPLC装置、および他のクロマトグラフィ装置なども、本発明化合物の合成、純度、および/または生物学的またはin vitro効果を評価するのに有用なことがある。これらのものはすべて当該分野でよく知られており、本発明の適切な局面および態様の助けとして過度な実験を行うことなく常套的に用いることができる。
【０１９１】
以下の実験は、単に例示のために示すものであり、本発明の全範囲および精神を限定するものではない。
【実施例】
【０１９２】
以下の化合物はすべてStreptomyces hygoscopicusから単離したアンサマイシン基質から製造した。
二量体(ダイマー)
【０１９３】
以下の一般合成反応式は、実施例1〜5に適用でき、ゲルダナマイシンおよびゲルダナマイシン類似体の水溶性ダイマーの合成を説明する。該反応式にしたがって生成したダイマーは、17-アミノゲルダナマイシンと同様の効能を持つが、比較的長いin vivo半減期を示し、水性製剤としてより高い水溶性をもたらす塩を有する。すなわち、これら化合物は必要な投与頻度が比較的低く、患者に投与した時の相対血中レベル濃度がより一定になると期待できる。
【化３２】
2005530689.tif 000056
実施例1:化合物#208の製造
【０１９４】
3,3'-ジアミノ-N-メチルジプロピルアミン(1.32g、9.1mmol)を、N2下、火炎乾燥フラスコ中の、DMSO(200ml)中のゲルダナマイシン(lOg、17.83mmol)の溶液に滴加し、室温で撹拌した。12時間後、反応混合物を水で希釈した。沈殿物が形成され、これをろ過して粗生成物を得た。粗生成物をシリカクロマトグラフィ(5%CH3OH/CH2Cl2)にかけて所望のダイマーを紫色固体として得た(8.92g、7. 2mmol)。収率:81%;
【数１】
2005530689.tif 000057
【０１９５】
対応するHCl塩を以下の方法により製造した：EtOH(5ml、0.123N)中のHCl溶液を室温でTHF(15ml)およびEtOH(50ml)中の化合物#208(1gm、上記で製造)の溶液に加えた。反応混合物を10分間撹拌した。該塩を沈殿させ、ろ過し、大量のEtOHで洗浄し、次いで減圧乾燥した。
実施例2:化合物#237の製造
【０１９６】
化合物#237を、3,3'-ジアミノ-ジプロピルアミンを3,3'-ジアミノ-N-メチルジプロピルアミンの代わりに用いる以外は実施例1に記載したのと同じ方法により製造した。純粋な紫色の生成物をフラッシュクロマトグラフィ(シリカゲル)後に得た。収率：93%;
【数２】
2005530689.tif 000058
対応するHCl塩を実施例1に記載したのと同じ方法により製造した。
実施例3：化合物#207の製造
【０１９７】
化合物#207を、1,4-ビス(3-アミノプロピル)ピペラジンを3,3'-ジアミノ-N-メチルジプロピルアミンの代わりに用いる以外は実施例1に記載したのと同じ方法により製造した。純粋な紫色の生成物をカラムクロマトグラフィ(シリカゲル)後に得た。収率：90%;
【数３】
2005530689.tif 000059
対応するHCl塩を実施例1に記載したのと同じ方法により製造した。
実施例4:化合物#487の製造
【０１９８】
化合物#487を、N,N-ビス(3-アミノプロピル)-1,3-プロパンジアミンを3,3'-ジアミノ-N-メチルジプロピルアミンの代わりに用いる以外は実施例1に記載したのと同じ方法により製造した。純粋な紫色の生成物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィ後に得た。収率：90%；
【数４】
2005530689.tif 000060
対応するHCl塩を実施例1に記載したのと同じ方法により製造した。
実施例5：化合物#483の製造
【０１９９】
化合物#483を、2,2'-ジアミノ-N-メチルジエチルアミンを3,3'-ジアミノ-N-メチルジプロピルアミンの代わりに用いる以外は実施例1に記載したのと同じ方法により製造した。純粋な紫色の生成物をフラッシュクロマトグラフィ後に得た。収率：90%;
【数５】
2005530689.tif 000061
対応するHCl塩を実施例1に記載したのと同じ方法により製造した。
17-AGのプロドラッグ
【０２００】
以下の化合物を代謝的に分解し、既知の最も強力なゲルダナマイシン誘導体の1つである17-アミノゲルダナマイシン(17-AG)を得ることができる。17-AGは溶解性が低いが、これら水溶性プロドラッグははるかに可溶性であり、生物活性が高い17-AGのバイオアベイラビリティが増大する。これら化合物は、経口もしくは静脈内経路で投与することができる。そのようなプロドラッグのある合成態様は以下のごとく示されよう。
【０２０１】
【化３３】
2005530689.tif 000062
実施例6:化合物#481の製造
【０２０２】
火炎乾燥フラスコ中の、8mlの乾燥THF中の200mg(0.357mmol)のゲルダナマイシンに、窒素下で91.6mg(0.714mmol)のN-プロピル-1,4-ジアミノ-2-ブテンを滴加した。反応混合物を室温で4時間撹拌し、この時点でTLC分析は反応が完結したことを示した。溶媒をロータリーエバポレーションで除去し、粗物質をクロマトグラフィ(5%CH3OH/CH2Cl2〜15%CH3OH/CH2Cl2)にかけて、所望の化合物を紫色固体として得た(150mg、0.228mmol)。収率：64%;
【数６】
2005530689.tif 000063
対応するHCl塩を実施例1に記載したのと同じ方法により製造した。
水溶性ゲルダナマイシン誘導体
【０２０３】
以下の合成反応式を用いて、ゲルダナマイシンの水溶性類似体を得ることができよう。2つのそのような類似体の製造法を実施例7および8により詳細に説明する。これら化合物の塩は、改良された水性製剤、すなわち静脈内投与をもたらし、他の製剤成分の必要性を少なくする。そのような化合物は、錠剤またはカプセル剤の形で経口投与することもできる。
【０２０４】
【化３４】
2005530689.tif 000064
実施例7:化合物#480の製造
【０２０５】
火炎乾燥フラスコ中の、300mlの乾燥THF中の500mg(0.0.89mmol)のゲルダナマイシンに、窒素下で66mg(0.75mmol)の1,4-ジアミノ-ブタンを滴加した。反応混合物を室温で48時間撹拌し、この時点でTLC分析は反応が完結したことを示した。溶媒をロータリーエバポレーションで除去し、粗物質をクロマトグラフィ(5%CH3OH/CH2Cl2〜15%CH3OH/CH2Cl2)にかけて所望の化合物を紫色固体として得た(450mg、0.73mmol)。収率：97%;
【数７】
2005530689.tif 000065
実施例8:化合物#482の製造
【０２０６】
火炎乾燥フラスコ中の、8mlの乾燥THF中の35mg(0.057mmol)の化合物#480に、21.5mg(0.12mmol)のジエチルクロロホスフェートおよび12.6mg(0.12mmol)のトリエチルアミンを加えた。反応混合物を室温0.5時間撹拌し、この時点でTLC分析は反応が完結したことを示した。溶媒をロータリーエバポレーションで除去し、粗物質をクロマトグラフィ(5%CH3OH/CH2Cl2)にかけて、所望の化合物を紫色固体として得た(38mg、0.05mmol)。収率:89%;
【数８】
2005530689.tif 000066
実施例9-13：なし
【０２０７】
以下の一般合成反応式は実施例14-16に適用できる。
【０２０８】
【化３５】
2005530689.tif 000067
【０２０９】
本発明の化合物5dの合成は典型的には以下の工程のすべてまたはいくつかを含む。17-アミノゲルダナマイシン5aを最初に還元して式5bの対応するジヒドロキノンを得、次いでこれをアルキルまたはアリールカルボキシルと手際よく反応させて式5cのアミドを得る。化合物5cをメタノール中で空気酸化し、最終化合物5dを得る。
実施例14:化合物#513の製造
【０２１０】
EtOAc中の17-アミノゲルダナマイシン(1mmol)の溶液を室温でNa2S2O4(0.1M、300ml)で処理した。2時間後、水性層をEtOAcで2回抽出し、混合有機層をNa2SO4で乾燥し、次いで減圧下で濃縮して18,21-ジヒドロ-17-アミノゲルダナマイシンを褐色固体として得た。この後者を窒素雰囲気下で無水CH2Cl2に溶解し、次いで得られた溶液に0℃でEtN(i-Pr)2(1.5mmol)およびAc2O(1.2mmol)を加えた。室温で2時間後、反応混合物をEtOAcで希釈し、飽和NaHCO3で洗浄し、次いで空気雰囲気下で一夜Na2SO4で乾燥した。ろ過し、減圧下で溶媒を除去した後、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィで精製して17-アセチルアミノゲルダナマイシンを黄色固体として得た。Rf=0.46、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数９】
2005530689.tif 000068
実施例15:化合物#514の製造
【０２１１】
EtOAc中の17-アミノゲルダナマイシン(1mmol)の溶液を、室温でNa2S2O4(0.1M、300ml)で処理した。2時間後、水性層をEtOAcで2回抽出し、混合有機層をNa2SO4で乾燥し、減圧下で濃縮して18,21-ジヒドロ-17-アミノゲルダナマイシンを褐色固体として得た。この後者の化合物を窒素雰囲気下で無水CH2Cl2に溶解し、得られた溶液に0℃でEtN(i-Pr)2(1.5mmol)および(CH3CH2CO)2O(1.2mmol)を加えた。室温で2時間後、反応混合物をEtOAcで希釈し、飽和NaHCO3で洗浄し、次いで空気雰囲気下で一夜Na2SO4で乾燥した。ろ過し、溶媒を減圧下で除去した後、粗物質をフラッシュクロマトグラフィで精製して17-プロパノイルアミノゲルダナマイシンを黄色固体として得た。Rf=0.47、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数１０】
2005530689.tif 000069
実施例16:化合物#495の製造
【０２１２】
EtOAc中の17-アミノゲルダナマイシン(1mmol)の溶液を室温でNa2S2O4(0.1M、300ml)で処理した。2時間後、水性層をEtOAcで2回抽出し、混合有機層を乾燥し、18,21-ジヒドロ-17-アミノゲルダナマイシンを褐色固体として得た。この後者の化合物を窒素雰囲気下で無水THFに溶解し、次いで得られた溶液に室温でアリルイソシアネート(1.2mmol)を加えた。1時間後、溶媒を減圧下で除去し、次いで残渣をMeOHに溶解し、シリカ存在下で一夜撹拌した。ろ過後、溶媒を減圧下で除去し、残渣をフラッシュクロマトグラフィで精製して1-アリル-3-(17-ゲルダナマイシニル)-尿素を赤レンガ色固体として得た。Rf=0.38、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数１１】
2005530689.tif 000070
実施例17:化合物#529の製造
【０２１３】
EtOAc中の17-アミノゲルダナマイシン(1mmol)の溶液を室温でNa2S2O4(0.1M、300ml)で処理した。2時間後、水性層をEtOAcで2回抽出し、混合有機層をNa2SO4で乾燥し、次いで減圧下で濃縮して18,21-ジヒドロ-17-アミノゲルダナマイシンを黄色固体として得た。この後者を無水THFに溶解し、カニューレで塩化ピコリノイル(1.1mmol)およびMS4Å(1.2g)の混合物に移した。2時間後、さらにEtN(i-Pr)2(2.5mmol)を反応混合物に加えた。一夜撹拌後、反応混合物をろ過し、次いで減圧下で濃縮した。次に、水を残渣に加え、これをEtOAcで3回抽出し、混合有機層をNa2SO4で乾燥し、次いで減圧下で濃縮して粗生成物を得、これをフラッシュクロマトグラフィで精製して17-ピコリノイル-アミノゲルダナマイシンを黄色固体として得た。Rf=0.52、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数１２】
2005530689.tif 000071
実施例18:化合物#530の製造
【０２１４】
17-イソニコチノイル-アミノゲルダナマイシンの合成。この生成物を、イソニコチノイルクロリドを塩化ピコリノイルの代わりに用いる以外は化合物#529(実施例17)について記載の方法に従って製造した。Rf=0.44、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数１３】
2005530689.tif 000072
実施例19:化合物#557の製造
【０２１５】
17-(4-メチル-1,2,3-チアジアゾール-5-カルボニル-アミノ)-ゲルダナマイシンの合成。この生成物を、4-メチル-1,2,3-チアジアゾール-5-カルボキソイルクロリドを塩化ピコリノイルの代わりに用いる以外は化合物#529(実施例17)について記載の方法に従って製造した。Rf=0.35、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数１４】
2005530689.tif 000073
実施例20:化合物#558の製造
【０２１６】
17-(3,5-ジメチル-イソキサゾール-4-カルボニル-アミノ)-ゲルダナマイシンの合成。この生成物を、3,5-ジメチル-イソキサゾール-4-カルボキソイルクロリドを塩化ピコリノイルの代わりに用いる以外は化合物#529(実施例17)について記載の方法に従って製造した。Rf=0.35、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数１５】
2005530689.tif 000074
実施例21:化合物#559の製造
【０２１７】
17-(5-メチル-2-フェニル-2H-1,2,3-トリアゾール-4-カルボニル-アミノ)-ゲルダナマイシンの合成。この生成物を、5-メチル-2-フェニル-2H-1,2,3-トリアゾール-4-カルボキソイルクロリドを塩化ピコリノイルの代わりに用いる以外は化合物#529(実施例17)について記載の方法に従って製造した。Rf=0.44、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数１６】
2005530689.tif 000075
実施例22:化合物#560の製造
【０２１８】
17-(1,3-ジメチル-1H-ピラゾール-5-カルボニル-アミノ)-ゲルダナマイシンの合成。この生成物を、1,3-ジメチル-1H-ピラゾール-5-カルボキソイルクロリドを塩化ピコリノイルの代わりに用いる以外は化合物#529(実施例17)について記載の方法に従って製造した。Rf=0.30、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
Mp=193-195℃。
【数１７】
2005530689.tif 000076
実施例23:化合物#561の製造
【０２１９】
17-(l-t-ブチル-3-メチル-1H-ピラゾール-5-カルボニル-アミノ)-ゲルダナマイシンの合成。この生成物を、1-t-ブチル-3-メチル-1H-ピラゾール-5-カルボキソイルクロリドを塩化ピコリノイルの代わりに用いる以外は化合物#529(実施例17)について記載の方法に従って製造した。Rf=0.37、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数１８】
2005530689.tif 000077
実施例24:化合物#562の製造
【０２２０】
17-(3-t-ブチル-l-メチル-1H-ピラゾール-5-カルボニル-アミノ)-ゲルダナマイシンの合成。この生成物を、3-t-ブチル-l-メチル-1H-ピラゾール-5-カルボキソイルクロリドを塩化ピコリノイルの代わりに用いる以外は化合物#529(実施例17)について記載の方法に従って製造した。Rf=0.30、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数１９】
2005530689.tif 000078
実施例25:化合物#563の製造
【０２２１】
17-(ベンゾイル)-アミノゲルダナマイシンの合成。この生成物を、塩化ベンゾイルを塩化ピコリノイルの代わりに用いる以外は化合物#529(実施例17)について記載の方法に従って製造した。Rf=0.50、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数２０】
2005530689.tif 000079
実施例26:化合物#515の製造
【０２２２】
17-(4-フルオロ-ベンジル)-3-(17-ゲルダナマイシニル)-尿素の合成。この生成物を、4-フルオロ-ベンジルイソシアネートをアリルイソシアネートの代わりに用いる以外は化合物#495(実施例16)について記載の方法に従って製造した。Rf=0.42、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数２１】
2005530689.tif 000080
実施例27:化合物#484の製造
【０２２３】
化合物484を、2,2'チオビス(エチルアミン)を3,3'-ジアミノ-N-メチルジプロピルアミンの代わりに用いる以外は実施例1に記載したのと同じ方法により製造した。純粋な紫色の生成物をカラムクロマトグラフィ(シリカゲル)後に得た。収率:89%;
【数２２】
2005530689.tif 000081
実施例28:化合物#486の製造
【０２２４】
化合物486を、4,9-ジオキサ-1,12-ドデカンジアミンを3,3'-ジアミノ-N-メチルジプロピルアミンの代わりに用いる以外は実施例1に記載の方法に従って製造した。純粋な紫色の生成物をカラムクロマトグラフィ(シリカゲル)後に得た。収率：90%;
【数２３】
2005530689.tif 000082
【０２２５】
以下の反応式は実施例29に関する。
【０２２６】
【化３６】
2005530689.tif 000083
実施例29:化合物#556の製造
【０２２７】
撹拌棒を取り付けた50ml RBFに5ml無水THF中の200mg Aを加え、次いで該フラスコを窒素でフラッシュした。0℃に冷却後、15mg NaH(鉱油中の60%分散物)を加え、次いで反応液を15分間撹拌した。34μLのPOCl3を反応混合物に加え、次いで反応液を氷浴から取り出した。室温で16時間撹拌した後、少量のH2Oを加えた。高減圧下ですべての溶媒と水を除去し、得られた固体をプレパラティブTLC(90/10アセトン/H2O Rf=0.1)で精製して18mg(8%(収率))の556を紫色固体として得た。
以下の反応式を実施例30-33に適用する:
【０２２８】
【化３７】
2005530689.tif 000084
本発明の化合物IVの合成は典型的には下記工程のすべてまたはそのいくつかを含む。水酸化バリウム存在下で、最初にゲルダナマイシンIを加水分解して式IIの17-ヒドロキシ-ゲルダナマイシンを得、これを定量的にトリフリック無水物(triflic anhydride)と反応させて式IIIのトリフレートを得る。最適化Suzuki条件下で、この後者は中等度の収率で式IVの17-アリール-ゲルダナマイシンを得た。(合成の概要についてはD.A. Neelら、Bioorg. Med. Chem. Lett. 8:47-50,1998参照。)
実施例30:17-OTf-ゲルダナマイシンの製造
【０２２９】
0℃のCH2Cl2中の、17-ヒドロキシ-ゲルダナマイシン(1mmol)および(i-Pr)2NEt(2mmol)の紫色溶液に、トリフリック無水物(1.3mmol)を滴加した。30分間後、反応混合物を減圧下で濃縮した。次に、粗物質をフラッシュクロマトグラフィで精製して17-OTf-ゲルダナマイシンを黄色固体として得た。Rf=0.28、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数２４】
2005530689.tif 000085
実施例31:化合物#133の合成
【０２３０】
17-フェニル-ゲルダナマイシンの合成。ジオキサン中の17-OTf-ゲルダナマイシン(1mmol)、臭化セシウム(2mmol)、フッ化セシウム(2mmol)、Pd(dba)2(0.2mmol)、およびフェニルボロン酸(2mmol)の溶液を12時間40℃に加熱し、室温に冷却したらすぐに減圧下で濃縮して粗生成物を得た。この後者をEtOAcに溶解し、飽和NaHCO3で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、次いで減圧下で濃縮した。
粗物質をフラッシュクロマトグラフィで精製し、17-フェニル-ゲルダナマイシンを黄色固体として得た。Rf=0.49、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数２５】
2005530689.tif 000086
実施例32:化合物#212の合成
【０２３１】
17-(2-メトキシ-フェニル)-ゲルダナマイシンの合成。化合物212を、2-メトキシ-フェニルボロン酸をフェニルボロン酸の代わりに用いる以外は17-フェニル-ゲルダナマイシンについて記載した方法に従って製造した。Rf=0.36、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数２６】
2005530689.tif 000087
実施例33:化合物#232の合成
【０２３２】
17-(2-チオフェン)-ゲルダナマイシンの合成。2-チオフェンボロン酸をフェニルボロン酸の代わりに用いる以外は17-フェニル-ゲルダナマイシンについて記載した方法に従って製造した。Rf=0.50、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数２７】
2005530689.tif 000088
以下の反応式を実施例34に適用する:
【０２３３】
【化３８】
2005530689.tif 000089
実施例34:化合物#594の合成
【０２３４】
水素化ナトリウム(10.3mg、0.257mmol)を、N2下、火炎乾燥フラスコ中の、THF(10ml)中の化合物A(150mg、0.257mmol)の溶液に加え、室温で10分間撹拌した。テレフタロイルクロリド(26.1mg、0.129mmol)およびトリエチルアミン(36ul、0.257mmol)を加え、反応混合物を室温で2時間撹拌した。水を加え、得られた沈殿物をろ過して粗生成物の化合物#594を得た。シリカゲルクロマトグラフィ(5%CH3OH/CH2)により精製し、所望のダイマーを紫色固体として得た(140mg、0.107mmol)。収率：83%；
【数２８】
2005530689.tif 000090
実施例35:化合物#564の製造
【０２３５】
【化３９】
2005530689.tif 000091
化合物#564を、ニコチニルクロリドHCl塩を塩化ピコリノイルの代わりに用いる以外は化合物#529について記載の方法に従って製造した。Rf=0.27、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数２９】
2005530689.tif 000092
実施例36:化合物#1046の製造
【０２３６】
【化４０】
2005530689.tif 000093
【０２３７】
化合物#1046を、4-クロロメチル-塩化ベンゾイルを塩化ピコリノイルの代わりに用いる以外は化合物#529について記載の方法に従って製造した。(3.1g、81%)。Rf=0.45、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数３０】
2005530689.tif 000094
実施例37:化合物#687の製造
【０２３８】
【化４１】
2005530689.tif 000095
方法A：
【０２３９】
EtOAc(200ml)中の17-アミノゲルダナマイシン(1.12g、2.0mmol)の溶液を室温でNa2S2O4(10%、20ml)で処理した。2時間後、水性層をEtOAc(20ml)で抽出し、混合有機層をNa2SO4で乾燥し、減圧下で濃縮して18,21-ジヒドロ-17-アミノゲルダナマイシンを黄色固体として得た。この後者を無水DMF(10ml)に溶解し、室温でカニューレによりDMF(5ml)中の、4-N,N-ジメチルアミノメチル-安息香酸(0.48g、2.25mmol)、EDCI(0.47g、2.46mmol)、およびHOBT(0.33g、2.46mmol)の混合物に移した。12時間後、さらにCuSO4(0.2g、1.26mmol)およびMeOH(2ml)を反応混合物に加えた。4時間後、反応混合物を水(70ml)に注ぎ入れ、EtOAc(2x30ml)で抽出した。次に、水性層を飽和NaHCO3で中和してpH7とし、次いでEtOAc(3x30ml)で抽出した。混合有機層をNa2SO4で乾燥し、減圧下で濃縮して粗物質を得、これをフラッシュクロマトグラフィで精製し、i-PrOH中で再結晶して17-(4-ジメチルアミノメチル-ベンゾイル)-アミノゲルダナマイシンを黄色固体として得た(0.30g、21%)。Rf=0.10、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数３１】
2005530689.tif 000096
方法B：
【０２４０】
CH2Cl2(50ml)中の化合物#1046(3.73g、5.3mmol)の溶液に、Me2NH,HCl塩(1.51g、18.5mmol)、Et(i-Pr)2N(2.8ml)、およびNaI(0.79g、5.3mmol)を加えた。得られた溶液を6時間加熱還流し、次いで室温に冷却したらすぐに、EtOAc(600ml)で希釈し、水(100ml)で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、減圧下で濃縮して粗物質を得、これをEtOH中で再結晶して精製し、17-(4-ジメチルアミノメチル-ベンゾイル)-アミノゲルダナマイシンを黄色固体として得た(1.74g、46%)。
実施例38:化合物#696の製造
【０２４１】
【化４２】
2005530689.tif 000097
【０２４２】
化合物#696を、ペンタフルオロプロパノイルクロリドを塩化ピコリノイルの代わりに用いる以外は化合物#529について記載の方法に従って製造した。Rf=0.37、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数３２】
2005530689.tif 000098
実施例39:化合物#697の製造
【０２４３】
【化４３】
2005530689.tif 000099
【０２４４】
化合物#697を、ペンタフルオロベンゾイルクロリドを塩化ピコリノイルの代わりに用いる以外は化合物#529について記載の方法に従って製造した。Rf=0.43、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数３３】
2005530689.tif 000100
実施例40:化合物#723の製造
【０２４５】
【化４４】
2005530689.tif 000101
【０２４６】
化合物#723を、4-ヒドロキシフェニル酢酸を4-(ジメチルアミノメチル)安息香酸の代わりに用い、化合物#687について記載の方法Aに従って製造した。Rf=0.38、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数３４】
2005530689.tif 000102
実施例41:化合物#777の製造
【０２４７】
【化４５】
2005530689.tif 000103
【０２４８】
化合物#777を、20エトキシ酢酸を4-(ジメチルアミノメチル)安息香酸の代わりに用い、化合物#687について記載の方法Aに従って製造した。Rf=0.43、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数３５】
2005530689.tif 000104
実施例42:化合物#846の製造
【０２４９】
【化４６】
2005530689.tif 000105
【０２５０】
化合物#846を、4-ヒドロキシ安息香酸を4-(ジメチルアミノメチル)安息香酸の代わりに用い、化合物#687について記載の方法Aに従って製造した。Rf=0.13、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数３６】
2005530689.tif 000106
実施例43:化合物#847の製造
【０２５１】
【化４７】
2005530689.tif 000107
化合物#847を、3,5-ジクロロ安息香酸を4-(ジメチルアミノメチル)安息香酸の代わりに用い、化合物#687について記載の方法Aに従って製造した。Rf=0.13、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数３７】
2005530689.tif 000108
実施例44:化合物#850の製造
【０２５２】
【化４８】
2005530689.tif 000109
化合物#850を化合物#687について記載の方法に従って製造した。Rf=0.45、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数３８】
2005530689.tif 000110
実施例45:化合物#1059の製造
【０２５３】
【化４９】
2005530689.tif 000111
【０２５４】
THF(5ml)中の化合物#1046(0.14g、0.2mmol)の溶液に、ヨウ化ナトリウム(30mg、0.2mmol)およびモルホリン(35μl、0.4mmol)を加えた。得られた混合物を10時間加熱還流し、室温に冷却したらすぐに減圧下で濃縮し、次いで残渣をEtOAc(30ml)に再溶解し、水(10ml)で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、次いで再度濃縮した。次に、残渣をEtOH(10ml)中で再結晶して化合物1059を黄色固体として得た(100mg、66%)。Rf=0.10、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数３９】
2005530689.tif 000112
実施例46:化合物#1060の製造
【０２５５】
【化５０】
2005530689.tif 000113
化合物#1060を、N-エチルピペラジンをモルホリンの代わりに用い、化合物#1059について記載の方法に従って製造した。Rf=0.04、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MEOH中。
【数４０】
2005530689.tif 000114
実施例47:化合物#1066の製造
【０２５６】
【化５１】
2005530689.tif 000115
化合物#1066を、ピロリジンをモルホリンの代わりに用い、化合物#1059について記載の方法に従って製造した。Rf=0.28、80:10:10 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数４１】
2005530689.tif 000116
実施例48:化合物#1078の製造
【０２５７】
【化５２】
2005530689.tif 000117
化合物#1078を、tert-ブチル-N-ピペラジンカルボキシル酸をモルホリンの代わりに用い、化合物#1059について記載の方法に従って製造した。Rf=0.30、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数４２】
2005530689.tif 000118
実施例49:化合物#1102の製造
【０２５８】
【化５３】
2005530689.tif 000119
【０２５９】
CH2Cl2(2ml)中の化合物#1078(280mg、0.33mmol)の溶液に、室温で過剰の化合物#3COOH(2ml)を滴加し、15分間撹拌し、CH2Cl2(50ml)で希釈したらすぐに、飽和NaHCO3(10ml)で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、次いで減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィで精製して化合物#1102を黄色固体として得た(195mg、79%)。Rf=0.09、80:5:15 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数４３】
2005530689.tif 000120
実施例50:化合物#1140の製造
【０２６０】
【化５４】
2005530689.tif 000121
化合物#1140を、化合物#1102をモルホリンの代わりに用い、化合物#1059について記載の方法に従って製造した。Rf=0.50、80:10:10 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数４４】
2005530689.tif 000122
実施例51:化合物#1148の製造
【０２６１】
【化５５】
2005530689.tif 000123
化合物#1148を、N-(p-メトキシベンジル)-N-プロピルアミンをモルホリンの代わりに用い、化合物#1059について記載の方法に従って製造した。Rf=0.39、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数４５】
2005530689.tif 000124
実施例52:化合物#1149の製造
【０２６２】
【化５６】
2005530689.tif 000125
【０２６３】
CH2Cl2/H2O(3/0.3ml)中の化合物#1148(63mg、0.075mmol)の溶液に、DDQ(34mg、0.150mmol)を加え、室温で5時間撹拌し、次いでCH2Cl2(10ml)で希釈したらすぐにNaOH 1N(2ml)で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、次いで減圧下で濃縮した。残渣をプレパラティブt.l.c.(1000μM)で精製して化合物#1149を黄色固体として得た(10mg、18%)。Rf=0.17、80:10:10 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数４６】
2005530689.tif 000126
実施例53:化合物#1167の製造
【０２６４】
【化５７】
2005530689.tif 000127
【０２６５】
化合物#1167を、エチル-N-ピペラジンカルボキシレートをモルホリンの代わりに用い、化合物#1059について記載の方法に従って製造した。Rf=0.30、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数４７】
2005530689.tif 000128
実施例54:化合物#1168の製造
【０２６６】
【化５８】
2005530689.tif 000129
化合物#1168を、N-(4-クロロフェニル)-ピペラジンをモルホリンの代わりに用い、化合物#1059について記載の方法に従って製造した。Rf=0.36、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数４８】
2005530689.tif 000130
実施例55:化合物#1169の製造
【０２６７】
【化５９】
2005530689.tif 000131
【０２６８】
化合物#1169を、N-メチル-ピペラジンをモルホリンの代わりに用い、化合物#1059について記載の方法に従って製造した。Rf=0.09、80:10:10 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数４９】
2005530689.tif 000132
実施例56:化合物#1170の製造
【０２６９】
【化６０】
2005530689.tif 000133
【０２７０】
化合物#1170を、N-ホルミル-ピペラジンをモルホリンの代わりに用い、化合物#1059について記載の方法に従って製造した。Rf=0.52、80:10:10 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数５０】
2005530689.tif 000134
実施例57:化合物#1171の製造
【０２７１】
【化６１】
2005530689.tif 000135
【０２７２】
化合物#1171を、N-シクロヘキシル-ピペラジンをモルホリンの代わりに用い、化合物#1059について記載の方法に従って製造した。Rf=0.32、80:10:10 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数５１】
2005530689.tif 000136
実施例58:化合物#1172の製造
【０２７３】
【化６２】
2005530689.tif 000137
【０２７４】
化合物#1171を、N-アセチル-ピペラジンをモルホリンの代わりに用い、化合物#1059について記載の方法に従って製造した。Rf=0.51、80:10:10 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数５２】
2005530689.tif 000138
実施例59:化合物#1188の製造
【０２７５】
【化６３】
2005530689.tif 000139
【０２７６】
化合物#1188を、4-(2-ブロモエチル)-ベンゾイル-17-アミノゲルダナマイシンを化合物1046の代わりに用い、化合物#1059について記載の方法に従って製造した。Rf=0.53、80:10:10 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数５３】
2005530689.tif 000140
実施例60:化合物#1189の製造
【０２７７】
【化６４】
2005530689.tif 000141
【０２７８】
化合物#1189を、エチルピペラジンカルボキシレートをモルホリンの代わりに用い、化合物#1188について記載の方法に従って製造した。Rf=0.05、80:5:15 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数５４】
2005530689.tif 000142
実施例61:化合物#1203の製造
【０２７９】
【化６５】
2005530689.tif 000143
【０２８０】
化合物#1203を、ジイソプロピルアミンをモルホリンの代わりに用い、化合物#1059について記載の方法に従って製造した。Rf=0.40、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数５５】
2005530689.tif 000144
実施例62:化合物#1205の製造
【０２８１】
【化６６】
2005530689.tif 000145
【０２８２】
化合物#1205を、ピペリジンをモルホリンの代わりに用い、化合物#1059について記載の方法に従って製造した。Rf=0.41、80:10:10 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数５６】
2005530689.tif 000146
実施例63:化合物#1219の製造
【０２８３】
【化６７】
2005530689.tif 000147
【０２８４】
化合物#1219を、ジプロピルアミンをモルホリンの代わりに用い、化合物#1059について記載の方法に従って製造した。Rf=0.38、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数５７】
2005530689.tif 000148
実施例64:化合物#1235の製造
【０２８５】
【化６８】
2005530689.tif 000149
【０２８６】
化合物#1235を、ジブチルアミンをモルホリンの代わりに用い、化合物#1059について記載の方法に従って製造した。Rf=0.38、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数５８】
2005530689.tif 000150
実施例65:化合物#1236の製造
【０２８７】
【化６９】
2005530689.tif 000151
【０２８８】
化合物#1236を、ベンジルエチルアミンをモルホリンの代わりに用い、化合物#1059について記載の方法に従って製造した。Rf=0.43、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数５９】
2005530689.tif 000152
実施例66:化合物#1237の製造
【０２８９】
【化７０】
2005530689.tif 000153
【０２９０】
化合物#1237を、ジベンジルアミンをモルホリンの代わりに用い、化合物#1059について記載の方法に従って製造した。Rf=0.54、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数６０】
2005530689.tif 000154
実施例67:化合物#1238の製造
【０２９１】
【化７１】
2005530689.tif 000155
【０２９２】
化合物#1238を、2-チオフェニルカルボニルクロリドを塩化ベンゾイルの代わりに用い、化合物#529について記載の方法に従って製造した。Rf=0.47、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数６１】
2005530689.tif 000156
実施例68:化合物#1239の製造
【０２９３】
【化７２】
2005530689.tif 000157
【０２９４】
化合物#1239を、2-フロイルクロリドを塩化ベンゾイルの代わりに用い、化合物#529について記載の方法に従って製造した。Rf=0.47、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数６２】
2005530689.tif 000158
実施例69:化合物#1252の製造
【０２９５】
【化７３】
2005530689.tif 000159
【０２９６】
化合物#1252を、ベンジルブチルアミンをモルホリンの代わりに用い、化合物#1059について記載の方法に従って製造した。Rf=0.45、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数６３】
2005530689.tif 000160
実施例70:化合物#1253の製造
【０２９７】
【化７４】
2005530689.tif 000161
【０２９８】
化合物#1253を、1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリンをモルホリンの代わりに用い、化合物#1059について記載の方法に従って製造した。Rf=0.44、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【０２９９】
【数６４】
2005530689.tif 000162
17-カルバメート-ゲルダナマイシン
実施例71:化合物#656の製造
【０３００】
【化７５】
2005530689.tif 000163
【０３０１】
EtOAc(120ml)中の17-アミノゲルダナマイシン(0.6g、1.10mmol)の溶液を室温でNa2S2O4(10%、10ml)で処理した。2時間後、水性層をEtOAcで2回抽出し、混合有機層をNa2SO4で乾燥し、減圧下で濃縮して18,21-ジヒドロ-17-アミノゲルダナマイシンを黄色固体として得た。この後者を無水THF(5ml)に溶解し、カニューレで0℃のTHF(3ml)中の、エチルクロロホルメート(0.11ml、1.15mmol)およびMS4Å(1.2g)の混合物に移した。室温で12時間後、さらにEtN(i-Pr)2(0.38ml)、CuSO4(60mg、0.37mmol)、およびMeOH(2ml)を反応混合物に加えた。2時間後、反応混合物をろ過し、次いで減圧下で濃縮した。粗物質をEtOAc(100ml)に溶解し、2N HCl(10ml)および飽和NaHCO3(10ml)で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、減圧下で濃縮して粗物質を得、これをフラッシュクロマトグラフィで精製して17-エトキシカルボニル-アミノゲルダナマイシンを黄色固体として得た(0.25g、40%)。Rf=0.31、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数６５】
2005530689.tif 000164
実施例72:化合物#709の製造
【０３０２】
【化７６】
2005530689.tif 000165
【０３０３】
化合物#709を、4'-アセトキシ-ベンジル クロロホルメート(新しくパラ-アセトキシベンジルアルコールから調製)をエチルクロロホルメートの代わりに用い、化合物#656について記載の方法に従って製造した。Rf=0.41、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【０３０４】
【数６６】
2005530689.tif 000166
実施例73:化合物#736の製造
【０３０５】
【化７７】
2005530689.tif 000167
【０３０６】
化合物#736を、ベンジルクロロホルメートをエチルクロロホルメートの代わりに用い、化合物#656について記載の方法に従って製造した。Rf=0.38、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数６７】
2005530689.tif 000168
実施例74:化合物#737の製造
【０３０７】
【化７８】
2005530689.tif 000169
【０３０８】
化合物#737を、シクロペンチル-メチルクロロホルメート(シクロペンタンメチルアルコールから新しく調製)をエチルクロロホルメートの代わりに用い、化合物#656について記載の方法に従って製造した。Rf=0.30、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数６８】
2005530689.tif 000170
実施例75:化合物#748の製造
【０３０９】
【化７９】
2005530689.tif 000171
化合物#748を、7-ブロモヘプチルクロロホルメートをエチルクロロホルメートの代わりに用い、化合物#656について記載の方法に従って製造した。Rf=0.49、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数６９】
2005530689.tif 000172
実施例76:化合物#749の製造
【０３１０】
【化８０】
2005530689.tif 000173
【０３１１】
化合物#749を、イソブチルクロロホルメートをエチルクロロホルメートの代わりに用い、化合物#656について記載の方法に従って製造した。Rf=0.44、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数７０】
2005530689.tif 000174
実施例77:化合物#750の製造
【０３１２】
【化８１】
2005530689.tif 000175
【０３１３】
化合物#750を、ブチルクロロホルメートをエチルクロロホルメートの代わりに用い、化合物#656について記載の方法に従って製造した。Rf=0.44、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【０３１４】
【数７１】
2005530689.tif 000176
実施例78:化合物#765の製造
【０３１５】
【化８２】
2005530689.tif 000177
【０３１６】
化合物#765を、7-N-モルホリノ-ヘプチルクロロホルメート(7-(N-モルホリノ)-1-ヘプタノールHClから新たに調製)をエチルクロロホルメートの代わりに用い、化合物#656について記載の方法に従って製造した。Rf=0.24、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数７２】
2005530689.tif 000178
実施例79:化合物#766の製造
【０３１７】
【化８３】
2005530689.tif 000179
【０３１８】
化合物#766を、4'-ピバロキシ-ベンジルクロロホルメート(4-ピベロキシ-ベンジルアルコールから新たに調製)をエチルクロロホルメートの代わりに用い、化合物#656について記載の方法に従って製造した。Rf=0.47、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数７３】
2005530689.tif 000180
実施例80:化合物#822の製造
【０３１９】
【化８４】
2005530689.tif 000181
【０３２０】
化合物#822を、4-N-モルホリノ-ブチルクロロホルメート(4-(N-モルホリノ)-1-ブタノール-HClから新たに調製)をエチルクロロホルメートの代わりに用い、化合物#656について記載の方法に従って製造した。Rf=0.20、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数７４】
2005530689.tif 000182
実施例81：化合物#495の製造
【０３２１】
【化８５】
2005530689.tif 000183
【０３２２】
EtOAc(10ml)中の17-アミノゲルダナマイシン(20ml、0.036mmol)の溶液を室温でNa2S2O4(10%、0.5ml)で処理した。2時間後、水性層をEtOAcで2回抽出し、次いで混合有機層を乾燥して18,21-ジヒドロ-17-アミノゲルダナマイシンを褐色固体として得た。この後者を窒素雰囲気下で無水THF(2ml)に溶解し、得られた溶液に室温でアリルイソシアネート(64μl、0.072mmol)を加えた。1時間後、溶媒を減圧下で除去し、次いで、残渣をMeOHに溶解し、シリカ存在下で一夜撹拌した。ろ過後、溶媒を減圧下で除去し、残渣をフラッシュクロマトグラフィで精製して1-アリル-3-(17-ゲルダナマイシニル)-尿素を煉瓦色の固体として得た(5mg、22%)。Rf=0.38、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数７５】
2005530689.tif 000184
実施例82:化合物#515の製造
【０３２３】
【化８６】
2005530689.tif 000185
化合物#515を、p-フルオロベンジルイソシアネートをアリルイソシアネートの代わりに用い、化合物#495について記載の方法に従って製造した。Rf=0.42、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数７６】
2005530689.tif 000186
11-エステル-ゲルダナマイシン
【０３２４】
【化８７】
2005530689.tif 000187
実施例83:化合物#984の製造
【０３２５】
【化８８】
2005530689.tif 000188
【０３２６】
28.5mg(0.04mmol、1eq.)の化合物#563をフラスコ中で15.9mg(0.11mmol、2.8eq)チオフェン酢酸、22.5mg(0.11mmol、2.8eq)DCC、2.1mg(0.02mmol、0.43eq)DMAP、および1.5mlの無水CH2Cl2と混合した。室温で16時間撹拌した後、反応混合物をCH2Cl2で希釈し、ろ過し、次いで減圧下で濃縮した。残渣を40%アセトン/60%ヘキサンを用いるクロマトグラフィにかけて9.5mg(28%(収率))のエステルを黄色粉末として得た。化合物#984をプレパラティブTLC 40%アセトン/60%ヘキサンにより精製した(Rf=0.32)。
【数７７】
2005530689.tif 000189
実施例84:化合物#960の製造
【０３２７】
【化８９】
2005530689.tif 000190
【０３２８】
化合物#960を、2-エトキシ酢酸をチオフェン酢酸の代わりに用い、化合物#984について記載の方法に従って製造した。化合物#960をプレパラティブTLC 60%CH2Cl2/35%EtOAc/5%MeOHにより精製した(Rf=0.35)。
【数７８】
2005530689.tif 000191
実施例85:化合物#981の製造
【０３２９】
【化９０】
2005530689.tif 000192
【０３３０】
化合物#981を、2-ブロモ酢酸をチオフェン酢酸の代わりに用い、化合物#984について記載の方法に従って製造した。化合物#981をプレパラティブTLC 80%CH2Cl2/15%EtOAc/5%MeOHにより精製した(Rf=0.32)。
【数７９】
2005530689.tif 000193
実施例86:化合物#982の製造
【０３３１】
【化９１】
2005530689.tif 000194
化合物#982を、trans-3-(2-チエニル)アクリル酸をチオフェン酢酸の代わりに用い、化合物#984について記載の方法に従って製造した。化合物#982をプレパラティブTLC 60%CH2Cl2/35%EtOAc/5%MeOHにより精製した(Rf=0.36)。
【数８０】
2005530689.tif 000195
実施例87:化合物#983の製造
【０３３２】
【化９２】
2005530689.tif 000196
【０３３３】
化合物#983を、フェニル酢酸をチオフェン酢酸の代わりに用い、化合物#984について記載の方法に従って製造した。化合物#983をプレパラティブTLC 40%アセトン/60%ヘキサンにより精製した(Rf=0.3)。
【数８１】
2005530689.tif 000197
実施例88:化合物#985の製造
【０３３４】
【化９３】
2005530689.tif 000198
【０３３５】
化合物#985を、ヘキサン酸をチオフェン酢酸の代わりに用い、化合物#984について記載の方法に従って製造した。化合物#985をプレパラティブTLC 35%アセトン/65%ヘキサンにより製造した(Rf=0.3)。
【数８２】
2005530689.tif 000199
11-オキシム-ゲルダナマイシン
【０３３６】
【化９４】
2005530689.tif 000200
実施例89:化合物#1011の製造
【０３３７】
【化９５】
2005530689.tif 000201
【０３３８】
アリルヒドロキシルアミン・塩酸(0.032g、0.29mmol、8.35eq)を、1mlのエタノール中の、0.021g(0.032mmol、8.35eq)の化合物#868および38μL(0.29mmol、8.35eq)トリエチルアミンを含むフラスコに加えた。反応液を室温で24時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮した。プレパラティブTLC(40%アセトン/60%ヘキサン、Rf=0.3)後に化合物#1011(18mg、78%(収率))を黄色固体として得た。
【数８３】
2005530689.tif 000202
実施例90:化合物#1012の製造
【０３３９】
【化９６】
2005530689.tif 000203
【０３４０】
化合物#1012を、0-メチルヒドロキシルアミン・塩酸をアリルヒドロキシルアミン・塩酸の代わりに用い、化合物#1011と同じ方法を用いて得た。プレパラティブTLC(40%アセトン/60%ヘキサン、Rf=0.28)により化合物#1012(22mg、68%(収率))を黄色固体として得た。
【数８４】
2005530689.tif 000204
実施例91:化合物#1013の製造
【０３４１】
【化９７】
2005530689.tif 000205
【０３４２】
化合物#1013を、O-エチルヒドロキシルアミン・塩酸をアリルヒドロキシルアミン・塩酸の代わりに用い、化合物#1011と同じ方法を用いて得た。プレパラティブTLC(40%アセトン/60%ヘキサン、Rf=0.29)により化合物#1013(27mg、75%(収率))を黄色固体として得た。
【数８５】
2005530689.tif 000206
17-アリール-ゲルダナマイシン
実施例92:化合物#133の製造
工程1:17-OTf-ゲルダナマイシンの製造
【０３４３】
0℃のCH2Cl2中の、17-ヒドロキシ-ゲルダナマイシン(0.68g、1.24mmol)および(i-Pr)2NEt(0.43ml)の紫色溶液に、トリフリック無水物(0.28ml、1.62mmol)を滴加した。30分間後、反応混合物を減圧下で濃縮した。次いで、粗物質をフラッシュクロマトグラフィで精製し、17-OTf-ゲルダナマイシンを黄色固体として得た(0.62g、74%)。Rf=0.28、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数８６】
2005530689.tif 000207
【０３４４】
工程2:ジオキサン中の、17-OTf-ゲルダナマイシン(0.20g、0.30mmol)、臭化セシウム(128mg、0.60mmol)、フッ化セシウム(91mg、0.60mmol)、Pd(dba)2(43mg、0.075mmol)、およびフェニルボロン酸(73mg、0.60mmol)の溶液を、12時間40℃に加熱し、室温に冷却したらすぐに減圧下で濃縮して粗生成物を得た。この後者をEtOAcに溶解し、飽和NaHCO3で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、次いで減圧下で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィで精製し、17-フェニル-ゲルダナマイシンを黄色固体として得た(90mg、50%)。Rf=0.49、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数８７】
2005530689.tif 000208
実施例93：化合物#212の製造
【０３４５】
化合物#212を、2-メトキシ-フェニルボロン酸をフェニルボロン酸の代わりに用いる以外は17-フェニル-ゲルダナマイシンについて記載した方法に従って製造した。Rf=0.36、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数８８】
2005530689.tif 000209
実施例94：化合物#232の製造
【０３４６】
化合物#232を、2-チオフェンボロン酸をフェニルボロン酸の代わりに用いる以外は17-フェニル-ゲルダナマイシンについて記載した方法に従って製造した。Rf=0.50、80:15:5 CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。
【数８９】
2005530689.tif 000210
8-ヒドロキシメチルGM類似体
以下の一般合成反応式は実施例95に適用できる:
【０３４７】
【化９８】
2005530689.tif 000211
実施例95:化合物#914の製造
【０３４８】
【化９９】
2005530689.tif 000212
10mLのジオキサン中のゲルダナマイシン(500mg、0.89mmol)に、室温で二酸化セレニウム(IV)(198mg、1.78mmol)を加えた。反応混合物を100℃に加熱し、3時間撹拌した。室温に冷却後、溶液を酢酸エチルで希釈し、水および塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、次いで減圧下で蒸発させた。純粋な最終黄色生成物をカラムクロマトグラフィ(シリカゲル)後に得た。収率:75%;
【数９０】
2005530689.tif 000213
実施例96:化合物#915の製造
【０３４９】
【化１００】
2005530689.tif 000214
化合物#915を、17-アミノ-ゲルダナマイシンをゲルダナマイシンの代わりに用いる以外は化合物#914について記載したのと同じ方法により製造した。カラムクロマトグラフィ(シリカゲル)後に純粋な最終紫色生成物を得た。収率：65%;
【数９１】
2005530689.tif 000215
実施例97:化合物#760の製造
【０３５０】
【化１０１】
2005530689.tif 000216
化合物#760を、17-(2'-クロロエチルアミノ)-ゲルダナマイシンをゲルダナマイシンの代わりに用いる以外は化合物#914について記載したのと同じ方法により製造した。純粋な最終紫色生成物をカラムクロマトグラフィ(シリカゲル)後に得た。収率：79%;
【数９２】
2005530689.tif 000217
実施例98:化合物#842の製造
【０３５１】
【化１０２】
2005530689.tif 000218
化合物#842を、17-メチルアミノ-ゲルダナマイシンをゲルダナマイシンの代わりに用い、反応混合物を24時間70℃に加熱する以外は化合物#914について記載したのと同じ方法により製造した。純粋な最終紫色生成物をカラムクロマトグラフィ(シリカゲル)後に得た。収率：79%
【数９３】
2005530689.tif 000219
8-置換GM類似体
以下の一般合成反応式は実施例99-100に適用できる:
【０３５２】
【化１０３】
2005530689.tif 000220
実施例99:化合物#863の製造
【０３５３】
【化１０４】
2005530689.tif 000221
1mLのTHF中の化合物#842(30mg、0.052mmol)に、塩化アセチル(4.1μl、0.0574mmol)およびトリエチルアミン(7.27μl、0.052mmol)を加えた。反応混合物を室温で24時間撹拌した。溶媒をロータリーエバポレーションで除去した。純粋な紫色の生成物をカラムクロマトグラフィ(シリカゲル)後に得た。収率：70%;
【数９４】
2005530689.tif 000222
実施例100:化合物#964の製造
【０３５４】
【化１０５】
2005530689.tif 000223
化合物#964を、クロロアセチルクロリドを塩化アセチルの代わりに用いる以外は化合物#863について記載したのと同じ方法により製造した。純粋な最終紫色生成物をカラムクロマトグラフィ(シリカゲル)後に得た。収率：55%;
【数９５】
2005530689.tif 000224
8-ヒドロキシメチルGMダイマー類似体
以下の一般合成反応式は実施例101-102に適用できる:
【０３５５】
【化１０６】
2005530689.tif 000225
実施例101:化合物#970の製造
【０３５６】
【化１０７】
2005530689.tif 000226
化合物#970を、化合物#914をゲルダナマイシンの代わりに用いる以外は化合物#483について記載したのと同じ方法により製造した。純粋な紫色の生成物をカラムクロマトグラフィ(シリカゲル)後に得た。収率：89%;
【数９６】
2005530689.tif 000227
実施例102：化合物#950の製造
【０３５７】
【化１０８】
2005530689.tif 000228
化合物#950を、化合物#914をゲルダナマイシンの代わりに用いる以外は化合物#237について記載したのと同じ方法により製造した。純粋な紫色の生成物をカラムクロマトグラフィ(シリカゲル)後に得た。収率：89%;
【数９７】
2005530689.tif 000229
8-ヒドロキシメチル-17置換-アミノGM類似体
以下の一般合成反応式は実施例103-107に適用できる:
【０３５８】
【化１０９】
2005530689.tif 000230
実施例103:化合物#967の製造
【０３５９】
【化１１０】
2005530689.tif 000231
3mLのTHF中の化合物#914(50mg、0.05mmol)にアリルアミン(3.5mg、0.06mmol)を加えた。反応混合物を室温で24時間撹拌した。溶媒をロータリーエバポレーションで除去した。純粋な紫色の生成物をカラムクロマトグラフィ(シリカゲル)後に得た。収率：90%;
【０３６０】
【数９８】
2005530689.tif 000232
実施例104:化合物#1126の製造
【０３６１】
【化１１１】
2005530689.tif 000233
化合物#1126を、N,N-ジメチルエチレンジアミンをアリルアミンの代わりに用いる以外は化合物#967について記載したのと同じ方法により製造した。純粋な紫色の生成物をカラムクロマトグラフィ(シリカゲル)後に得た。収率：80%;
【数９９】
2005530689.tif 000234
【０３６２】
上記の変化が構造：
【化１１２】
2005530689.tif 000235
を有する化合物#952である。
化合物#952を、N,N-ジメチル-1,3-プロパンジアミンをアリルアミンの代わりに用いる以外は化合物#967について記載したのと同じ方法により製造した。純粋な紫色の生成物をカラムクロマトグラフィ(シリカゲル)後に得た。収率：85%;
【数１００】
2005530689.tif 000236
実施例105：化合物#956の製造
【０３６３】
【化１１３】
2005530689.tif 000237
化合物#956を、アゼチジンをアリルアミンの代わりに用いる以外は化合物#967について記載したのと同じ方法により製造した。純粋な最終紫色生成物をカラムクロマトグラフィ(シリカゲル)後に得た。収率：89%;
【数１０１】
2005530689.tif 000238
実施例106:化合物#の965製造
【０３６４】
【化１１４】
2005530689.tif 000239
化合物#965を、2-メトキシエチルアミンをアリルアミンの代わりに用いる以外は化合物#967について記載したのと同じ方法により製造した。純粋な最終紫色生成物をカラムクロマトグラフィ(シリカゲル)後に得た。収率：90%;
【数１０２】
2005530689.tif 000240
実施例107:化合物#979の製造
【０３６５】
【化１１５】
2005530689.tif 000241
化合物#979を、2-フルオロエチルアミンをアリルアミンの代わりに用いる以外は化合物#967について記載したのと同じ方法により製造した。純粋な最終紫色生成物をカラムクロマトグラフィ(シリカゲル)後に得た。収率：90%;
【数１０３】
2005530689.tif 000242
8-ヒドロキシルメチル-17アミドGM類似体
実施例108:化合物#951の製造
【０３６６】
【化１１６】
2005530689.tif 000243
化合物#951を、化合物#915を17-アミノゲルダナマイシンの代わりに用いる以外は化合物#563について記載したのと同じ方法により製造した。純粋な最終黄色生成物をカラムクロマトグラフィ(シリカゲル)後に得た。収率：80%;
【数１０４】
2005530689.tif 000244
8-ヒドロキシルメチル-17カルバメートGM類似体
実施例109:化合物#996の製造
【０３６７】
【化１１７】
2005530689.tif 000245
化合物#996を、化合物#915を17-アミノゲルダナマイシンの代わりに用いる以外は化合物#709について記載したのと同じ方法により製造した。純粋な最終黄色生成物をカラムクロマトグラフィ(シリカゲル)後に得た。収率：80%; mp 134.5〜150(分解);
【数１０５】
2005530689.tif 000246
11-ケトGMダイマー類似体
【０３６８】
以下の一般的合成反応式は実施例110〜113に適用できる：
【化１１８】
2005530689.tif 000247
実施例110:化合物#841の製造
【０３６９】
【化１１９】
2005530689.tif 000248
化合物#237(100mg、0.084mmol)をCHCl3(5ml)に溶解し、これに室温でDess-Martin(デス-マーチン)試薬(107mg、0.253mmol)を加えた。24時間後、反応が完結し、混合物をCHCl3で希釈し、水性チオ硫酸ナトリウムおよび飽和水性重炭酸ナトリウムで洗浄し、次いで硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒をロータリーエバポレーターで除去した。純粋な紫色の生成物をカラムクロマトグラフィ(シリカゲル)後に得た。収率：78%;
【数１０６】
2005530689.tif 000249
実施例111:化合物#865の製造
【０３７０】
【化１２０】
2005530689.tif 000250
化合物#865を、化合物#483を化合物#237の代わりに用いる以外は化合物#841について記載したのと同じ方法により製造した。純粋な紫色生成物をカラムクロマトグラフィ(シリカゲル)後に得た。収率：92%;
【数１０７】
2005530689.tif 000251
実施例112:化合物#864の製造
【０３７１】
【化１２１】
2005530689.tif 000252
化合物#864を、化合物#638を化合物#237の代わりに用いる以外は化合物#841について記載したのと同じ方法により製造した。純粋な紫色の生成物をカラムクロマトグラフィ(シリカゲル)後に得た。収率:83%;
【数１０８】
2005530689.tif 000253
実施例113:化合物#867の製造
【０３７２】
【化１２２】
2005530689.tif 000254
化合物#867を、化合物#484を化合物#237の代わりに用いる以外は化合物#841について記載したのと同じ方法により製造した。純粋な紫色の生成物をカラムクロマトグラフィ(シリカゲル)後に得た。収率：90%;
【数１０９】
2005530689.tif 000255
11-ケト-17-アミドGM類似体
実施例114:化合物#868の製造
【０３７３】
【化１２３】
2005530689.tif 000256
化合物#868を、化合物#563を化合物#237の代わりに用いる以外は化合物#841について記載したのと同じ方法により製造した。純粋な最終黄色生成物をカラムクロマトグラフィ(シリカゲル)後に得た。収率：75%;
【数１１０】
2005530689.tif 000257
実施例115:化合物#840の製造
【０３７４】
【化１２４】
2005530689.tif 000258
化合物#840を、化合物#513を化合物#237の代わりに用いる以外は化合物#に841ついて記載したのと同じ方法により製造した。純粋な最終黄色生成物をカラムクロマトグラフィ(シリカゲル)後に得た。収率:82%;
【数１１１】
2005530689.tif 000259
11-ケト-17-カルボメートGM類似体
実施例116：化合物#861の製造
【０３７５】
【化１２５】
2005530689.tif 000260
化合物#861を、化合物#656を化合物#237の代わりに用いる以外は化合物#に841ついて記載したのと同じ方法により製造した。純粋な最終黄色生成物をカラムクロマトグラフィ(シリカゲル)後に得た。収率:75%;
【数１１２】
2005530689.tif 000261
J.HemiacetalGM類似体
実施例117:化合物#1026の製造
【０３７６】
【化１２６】
2005530689.tif 000262
10mLのジオキサン中のゲルダナマイシン(500mg、0.89mmol)に室温で二酸化セレニウム(IV)(198mg、1.78mmol)を加えた。反応混合物を100℃に加熱し、6時間撹拌した。室温に冷却後、溶液を酢酸エチルで希釈し、水および塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、次いで減圧下で蒸発させた。純粋な最終黄色生成物をカラムクロマトグラフィ(シリカゲル)後に得た。収率：65%;
【数１１３】
2005530689.tif 000263
実施例118:化合物#1048の製造
【０３７７】
【化１２７】
2005530689.tif 000264
化合物#1048を、アゼチジンをアリルアミンの代わりに用い、化合物#1026を化合物#914の代わりに用いる以外は化合物#914について記載したのと同じ方法により製造した。純粋な最終紫色生成物をカラムクロマトグラフィ(シリカゲル)後に得た。収率：89%;
【数１１４】
2005530689.tif 000265
実施例119：化合物#1058の製造
【０３７８】
【化１２８】
2005530689.tif 000266
化合物#1058を、ピロリジンをアリルアミンの代わりに用い、化合物#1026を化合物#914の代わりに用いる以外は化合物#914について記載したのと同じ方法により製造した。純粋な最終紫色生成物をカラムクロマトグラフィ(シリカゲル)後に得た。収率：69%;
【数１１５】
2005530689.tif 000267
実施例120:化合物#1143の製造
【０３７９】
【化１２９】
2005530689.tif 000268
化合物#1143を、ジメチルアミノエチルアミンをアリルアミンの代わりに用い、化合物#1026を化合物#914の代わりに用いる以外は化合物#914について記載したのと同じ方法により製造した。純粋な最終紫色生成物をカラムクロマトグラフィ(シリカゲル)後に得た。収率：90%;
【数１１６】
2005530689.tif 000269
新規GMダイマー類似体
実施例121:化合物635の製造
【０３８０】
【化１３０】
2005530689.tif 000270
化合物#635を、塩化ジクリコリルを塩化テレフタロイルの代わりに用いる以外は化合物#594について記載したのと同じ方法により製造した。カラムクロマトグラフィ(シリカゲル)後に純粋な紫色の生成物を得た。収率：75%;
【数１１７】
2005530689.tif 000271
実施例122:化合物#713の製造
【０３８１】
【化１３１】
2005530689.tif 000272
水素化ナトリウム(15.1mg、0.377mmol)を、N2下、火炎乾燥フラスコ中の、THF(8ml)中の化合物Aの溶液(Kagen特許に記載)(200mg、0.343mmol)に加え、室温で撹拌した(溶液A)。1,1'-カルボニルジイミダゾール(61.1mg、0.377mmol)をTHF(4ml)中のN-メチルイミノ2酢酸(25.2mg、0.171mmol)の溶液に加え、20分間撹拌した(溶液B)。次に、溶液Bを室温で溶液Aに加えた。2時間後、反応混合物を水で希釈し、EtOACで抽出し、水、塩水で洗浄し、次いでMgSO4で乾燥した。粗物質をクロマトグラフィ(5%CH3OH/CH2Cl2)にかけ、所望のダイマーを紫色固体として得た(lOOmg、0.084mmol)。収率：50%;
【数１１８】
2005530689.tif 000273
実施例123:
腫瘍細胞株から得たHSP90は既知のHSP90モジュレーターと強く結合する
【０３８２】
最近、Nicchittaら、WO01/72779(PCT/US01/09512)は、HSP90が熱ショックおよび/またはフルオロフォアビス-ANSによる結合において種々の構造(コンホメーション)をとり得ることを証明した。具体的には、Nicchittaらは、これが誘導した構造が正常細胞に優勢な異なる型のHSP90よりある種のHSP90リガンドに対してより高い親和性を示すことを証明した。本出願人は、腫瘍においてより高い親和性のHSP90構造が優勢であることを証明することによりNicchittaの研究を推進する。
【０３８３】
精製天然HSP90タンパク質(Stressgen)または溶解用緩衝液(20mM Hepes、pH7.3、1mM EDTA、5mM MgCl2、100mM KCl)を用いて調製した細胞溶解物を17-AGGまたは被検化合物の存在下または非存在下で4℃、15分間インキュベーションした。次に、ビオチン-ゲルダナマイシン(ビオチン-GM)を先に記載のごとく混合物に加え、さらに反応液を4℃で1時間回転させてインキュベーションした。次に、BioMag(登録商標)ストレプトアビジン磁性ビーズを混合物に加え、反応液を4℃でさらに1時間回転させてインキュベーションした。チューブを磁性ラック上に置き、非結合上清を除去した。磁性ビーズを溶解用緩衝液で3回洗浄し、洗浄液を捨てた。SDS-PAGE試料用緩衝液をビーズに加え、95℃で5分間煮沸した。試料を10%SDSタンパク質ゲル(Novex)、次いで抗HSP90モノクローナル抗体(Stressgen SPA-830)を用いるウエスタンブロットを用いて分析した。ウエスタンブロットのバンドをBio-rad Fluor-S Imagerを用いて定量し、17-AGGまたは被検化合物の結合阻害%を計算した。報告したIC50は、半最大(half-maximal)結合阻害を生じるのに必要な化合物濃度である。熱ショックHSP90を用いた実験では、精製天然HSP90タンパク質を50℃で15分間インキュベーションした。ビス-ANS処理HSP90を用いた実験では、精製HSP90タンパク質をビス-ANS(Molecular Probes)で37℃、30分間インキュベーションした。結果を表2に示す。
表2
【０３８４】
【表２４】
2005530689.tif 000274
【０３８５】
表3に記載の種々の本発明化合物を用い、本出願人は、Nicchittaら、WO01/72779(PCT/US01/09512)に記載の試験を繰り返し、フルオロフォアビス-ANSにより結合したHSP90がアンサマイシンに選択的であり、関連シャペロニン、GRP94に対する相対選択性が種々のアンサマイシンの11位を官能化することにより増強されることを証明した。
表3
【０３８６】
【表２５】
2005530689.tif 000275
実施例124:MCF7癌細胞のHer-2分解および水溶性
【０３８７】
種々の上記化合物のHer-2分解能、およびさらに水溶性を評価した。
HER2阻害アッセイ
【０３８８】
MCF7細胞を24ウェルプレートに約30,000細胞/ウェルの密度で接種し、10%FBS添加DMEM中で16時間増殖させた。次に、薬剤を100uM〜0.01uMの濃度範囲で加える。細胞をさらに24インキュベーションする。薬剤処理細胞および非処理コントロールをトリプシン処理し、濃度0.25ug/mlのフィコエリスリン結合抗Her-2 neu Ab(Becton Dickinson、San Jose CA; Cat no.340552)またはフィコエリスリン結合非特異的コントロールIgG1(Becton Dickinson、San Jose CA; Cat no. 340761)と室温で15分間インキュベーションする。試料を、フィコエリスリン蛍光色素を励起するために15mWの488nm光を放射するアルゴンイオンレーザーを備えたFACS Caliburフローサイトメーター(Becton Dickinson)で分析した。1試料あたり10000事象を回収した。蛍光のヒストグラムを作製し、各試料の平均蛍光強度(mfi)をCellquestソフトウェアを用いて決定した。バックグラウンドはコントロールIgGでインキュベーションした細胞から生じたmfiとして定義し、HER-2/neu Abで染色した各試料から差し引いた。Her-2分解%は以下のように計算した：
%Her-2分解=(mfi HER-2試料)/(mfi HER-2非処理細胞)x100
水溶性試験
【０３８９】
種々の塩を実施例の項に記載のごとく作製し、室温で水に溶解した。MCF7細胞におけるHER2分解とともにHCl塩に関するデータを表4に示す。
表4
【０３９０】
【表２６】
2005530689.tif 000276
実施例125:In Vitro代謝評価
【０３９１】
実施例72で生成した化合物#709を、市販の、ヒト肝臓から製造したS9分画(In-Vitro Technologies、Baltimore MD 21227)とインキュベーションし、I相およびII相代謝反応両方ができるヒト由来系における代謝を評価した。該化合物を、37℃で1時間振盪させながら、NADPH再生系およびII相結合(硫酸化およびグルクロン酸抱合)の補助因子を含むヒトS9とインキュベーションした(最終濃度1.0μM、デュプリケート)。デュプリケートのコントロールインキュベーションを、水浴中で5分間沸騰させて不活化したS9を用いて行った。調製物の酵素的能力をクマリン(I相活性)および7-OHクマリン(II相活性)を用いて確認した。アセトニトリルを加えて反応を終わらせ、次いで単離(遠心により)し、水性/有機相を蒸発させた。実施例10および17-アミノゲルダナマイシン(17-AG)の濃度をUV検出(335nm)を用いる逆相高速液体クロマトグラフィで測定した。17-AGの同一性を、真正標準品と比較したHPLC保持時間およびUVスペクトルにより確認した。
実施例126:抗ウイルス作用の証明
【０３９２】
O'Keeffeら、「Requirement for a Kinase-specific chaperone Pathway in the Production of a Cdk9/Cyclin T1 Heterodimer Responsible for P-TEFb-mediated Tat Stiumation of HIV-1 Transcription」、Journal of Biological Chemistry、2000、275:279-287は、Cdk9と呼ばれるP-TEFbのサブユニットがHSP90との複合体中に存在し、ゲルダナマイシンはTat活性化に必要な活性P-TEFbの形成を阻害することを証明した。HIV-1転写のTat-活性化は、Tatタンパク質をリン酸化および活性化することが知られている転写伸長因子、P-TEFbにより調節される。これに基づき、本発明者らは、もしかするとHSP90阻害剤を用いてレトロウイルスの複製、特に複製をTatに依存するレトロウイルス、例えばHIVの複製を阻害することができると仮定した。このように、HSP90阻害剤は、感染しているかまたは感染しそうな個体の治療または予防薬として用いられることもあり得る。本明細書に記載の結果は、この可能性を確認している。複製にTatを必要とするすべてのウイルスが影響を受けそうである。Tatは種々の血清型およびウイルスの間でアミノ酸配列が異なる。
(方法)
【０３９３】
新鮮ヒトPBMCにおけるコンフォーマ化合物の抗HIV効果：
5種類のアンサマイシン化合物(17-AAG、化合物#208、化合物#483、化合物#749、化合物#1011)の、末梢血単核細胞(PBMC)におけるHIV-1ROJOに対する抗HIV活性を0.0009μM、0.003μM、0.01μM、0. 032μM、0.1μM、0.32μM、1μM、3.16μM、および10μMの希釈で試験した。
【０３９４】
抗HIV PBMCアッセイ：PBMCを新鮮ヒト血液から単離し、Ojwangら、1995、Antimicrobial Agents and Chemotherapy、39:2426-2435の記載に従ってPBMCアッセイを行った。簡単には、PBMCを96ウェルプレートに5x104細胞/ウェルで接種した。被検化合物を細胞に加え、細胞を2時間プレインキュベーションした。次に、HIV-1ROJOウイルスを各ウェルに加えた(最終MOI〜0.1)。化合物を加えなかった細胞をウイルスコントロールとして用いた。感染後、培養を7日間維持し、次いで上清を回収し、Buckheitら、1991、AIDS Research and Human Retroviruses、7:295-302の記載に従って逆転写酵素活性をアッセイした。
【０３９５】
PBMCの細胞毒性を測定するためのMTSアッセイ：
化合物で処理した(ウイルスなし)96ウェルプレート中のPBMCの細胞生存性と化合物毒性をMTSアッセイを用いてアッセイした(CellTiter 96 Aqueous Non-Radioactivity Cell Proliferation Assay、Promega、Madison、WI)。
(DATA分析)
【０３９６】
上記アッセイの結果を図1に示す。用いた各化合物について、抗ウイルス活性と毒性の生データをグラフにし、IC50(50%、ウイルス複製阻害)、TC50(50%細胞毒性)、および治療指数(TI、TC50/IC50)を表4に示す。AZTを抗HIVアッセイの関連陽性コントロール化合物として同時に評価した。
(結果)
表5：PBMCにおけるHIV-1ROJOに対するアンサマイシンの抗ウイルス効果
【０３９７】
【表２７】
2005530689.tif 000277
実施例127：抗腫瘍作用の証明
【０３９８】
図3〜6は、種々の本発明化合物の腫瘍阻害活性を示す。
【０３９９】
図3は、化合物#237がin vivoにおけるA549の異種移植片の増殖を阻害することを示す。それぞれ2つの樹立皮下A549腫瘍を有する動物5匹の群に、17-AAGまたは化合物#237を1週間に3日間連続で4週間IP投与した。化合物#237の予備として開発中の5種類の第二世代アンサマイシンでも同様の効果がみられた。
【０４００】
図4は、本発明化合物またはビークルによる4治療単位の治療を受けたMDA435腫瘍を有する動物の結果を示す。MDA435乳癌モデルはin vitroでアンサマイシンに感受性であり、ヌードマウスでは急速に増殖する。図5は、DMA435モデルにおける4つの実験のデータを示す。動物に、2カ所に5x106MDA435乳癌細胞を皮下注射し、腫瘍を10日間増殖させた。腫瘍の大きさが〜50mm3になったら、動物を無作為に5匹の群に分けた(腫瘍10個/群)。A549モデルで説明したスケジュールに従って治療を開始した。動物をビークル(△)、または薬剤の2用量の1つ(25または30mg/kg、□、40または50mg/kg、○)で処理した。MDA435において、17-AAGは有意な抗腫瘍活性を示すことができなかったが、化合物#237およびその他の主要な第2世代化合物は、腫瘍の増殖を70〜100%阻害した。
【０４０１】
図5は、SKOV-3卵巣異種移植モデルにおける化合物#237および化合物#563の効果を示す。化合物は、HER-2過剰発現腫瘍、例えばBT474乳癌およびSKOV-3卵巣癌でも試験した。SKOV-3での治療実験を図6に示す。処置、用量、およびスケジュールはA549およびMDA435実験で用いたのと同じであった。この例では、腫瘍を定着させ、処置開始前に比較的大きなサイズ(200mm3)に増殖させた。化合物#237および化合物#563は腫瘍の増殖をほぼ完全に抑制した。これらのデータは、HER-2性癌の感受性を確認し、これら化合物が十分定着した固形腫瘍異種移植片に有効であることを示す。同様な効果が、BT474異種移植片モデルで証明された。
【０４０２】
図6は、可植性ヒト乳癌異種移植片モデルにおける化合物#237および17-AAGの効果を示す。17-AAGおよび化合物#237の活性を原発ヒト乳癌異種移植片モデルで比較した。これら腫瘍は、原発ヒト悪性材料の移植により生じ、動物での連続継代のみで維持された。データを図7に示す。両化合物は30mg/kgを腹腔内投与した。17-AAGはこのモデルで不十分な抗腫瘍活性しか示さなかった。反対に、化合物#237で処置した動物は86%の腫瘍増殖抑制を示した。
【０４０３】
前記実施例は本発明の種々の局面および態様を単に例示するものであって、限定するものではない。本明細書に記載のすべての文献は、本発明の属する技術分野の水準を示す。いずれの文献も先行技術であると認めるものではないが、各文献の開示は、その全体が個々に本明細書の一部を構成するのと同じ程度に本明細書の一部を構成する。記載した試薬はすべて市販されているか、当業者が容易に到達でき、または本願の利益を得る当業者によって過度な実験を行うことなく製造される。
【０４０４】
当業者は、本発明が対象を実施し、記載した目的および利点ならびにその中の固有のものを得るために十分適合していることを容易に理解するであろう。記載した方法および組成物は好ましい態様を示し、例示であって、本発明の範囲を限定することを意図しない。ある種の修飾および他の使用を当業者が思いつくであろうし、特許請求の範囲に定義した本発明の精神内に含まれる。
【０４０５】
本発明の範囲と精神から離れることなく本発明に種々の置換および修飾を行ってよいことは当業者に容易にわかるであろう。すなわち、そのようなさらなる態様は本発明の範囲および以下の特許請求の範囲内である。
【０４０６】
本明細書に例示した本発明は、本明細書に具体的に開示していないあらゆる要素、限定なしに適切に実施することができよう。すなわち、例えば用語「含む(包含する)」、「実質的に〜からなる」、および「〜からなる」は、トランジションフレーズとしてそれぞれ異なる意味を持つが、そのような各フレーズは特許請求の範囲に種々の広さを与えるためにその他のものの代わりに用いてよい。用いている用語および表現は、説明の用語として用いており、限定ではなく、示し、記載した特徴のあらゆる等価物、またはその部分を除外するような用語および表現の使用を意図するものではない。本発明の範囲内で種々の修飾が可能であると認識される。
【０４０７】
さらに、本発明の特徴および局面はマーカッシュグループまたは代わりの他のグループ分けにより説明されている場合は、当業者は、本発明はマーカッシュグループまたは他のグループのあらゆる個々のメンバーもしくはメンバーのサブグループについてはそれによっても説明され、個々のメンバーが適切に(例えば但し書きにより)除外されていると認識するであろう。
【０４０８】
他の態様は以下の特許請求の範囲内にある。
【図面の簡単な説明】
【０４０９】
【図１】ナノモル量のアンサマイシンを用いたHIV複製阻害を示す。
【図２】マウスに経口、静脈内、および腹腔内投与した水溶性ダイマー、化合物#208の安定性プロフィールを示す。
【図３】化合物#237がin vivoにおけるA549異種移植の増殖を阻害することを示す。
【図４】本発明化合物またはビークルによる4治療単位の治療を受けたMDA435腫瘍保持動物の結果を示す。
【図５】SKOV-3卵巣異種移植モデルにおける化合物#237および化合物#563の効果を示す。
【図６】可移植ヒト乳癌異種移植モデルにおける化合物#237および17-AAGの効果を示す。
【図１】
2005530689.tif 000306
【図２】
2005530689.tif 000307
【図３】
2005530689.tif 000308
【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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