(57)【要約】本発明は、ペプチドデホルミラーゼを発現する微生物を、本明細書中に記載される有効量の化合物と接触させることによって、この微生物の成長を阻害するための方法を提供する。この方法は、グラム陽性微生物およびグラム陰性微生物（例えば、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ、Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｅ．ａｅｒｏｇｅｎｅｓ、Ｅ．ｃｌｏａｃａｅ、Ｍ．Ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅおよびＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）の成長を阻害する。この方法は、インビトロ、エキソビボおよびインビボで実施され得る。被験体に、有効量の上記の化合物を投与または送達することにより、この被験体においてペプチドデホルミラーゼを発現する微生物による感染の症状を軽減するための方法がさらに提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の構造を有する化合物であって：
【化１】
2005505502.tif 000052
ここでＲ１、Ｒ２、Ｒ４、およびＲ５は、独立して、同じかまたは異なり、そして水素、置換または無置換のＣ５〜Ｃ１４アリール基、および置換または無置換の、飽和または不飽和のＣ１〜Ｃ６アルキル基からなる群から選択され；
ここでＲ３は、置換または無置換のアリール基および置換または無置換の、飽和または不飽和のＣ１〜Ｃ６アルキル基ならびに−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｘ−ＣＨ３からなる群から選択され、ここでＸは、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−ＮＲ６−および−ＣＨ２−からなる群から選択され；Ｒ６は、低級アルキルであり；
ここでＡ１およびＡ３は、独立して、同じかまたは異なり、＝Ｏ、＝Ｓ、＝ＮＨ、＝Ｎ−ＯＨ、または＝Ｎ−Ｒ７からなる群から選択され、ここでＲ７は、水素またはＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
ここでＡ２は、存在しないか、または＝Ｏ、＝Ｓ、＝ＮＨ、＝Ｎ−ＯＨ、＝Ｎ−Ｒ８もしくは−Ｃ（Ｒ９）（Ｒ１０）−からなる群から選択され、ここでＲ８、Ｒ９、およびＲ１０は、独立して、同じかまたは異なり、そして水素またはＣ１〜Ｃ６アルキルからなる群から選択され；
ここでＢ１は、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、または−Ｎ（Ｒ１１）−からなる群から選択され、ここでＲ１１は水素およびＣ１〜Ｃ６アルキルからなる群から選択され；
ここでＢ２は、存在しないか、または−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ１２）−、もしくは−Ｃ（Ｒ１３）（Ｒ１４）−からなる群から選択され、ここでＲ１２、Ｒ１３、およびＲ１４は、独立して、同じかまたは異なり、水素または置換もしくは無置換の、飽和もしくは不飽和のアルキルからなる群から選択され；
ここでフラグメント−Ｂ２−Ｃ（Ｒ４）（Ｒ５）−Ｃ（＝Ａ３）−は、それ全体で、天然に存在するアミノ酸、そのアナログ、誘導体またはペプチド模倣物であり；
ここでＢ３は、存在しないかまたは−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、もしくは−Ｎ（Ｒ１５）−からなる群から選択され、ここでＲ１５は、水素およびＣ１〜Ｃ６アルキルからなる群から選択され；
ここでＢ４は、存在しないかまたは−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ６）−、および−Ｃ（Ｒ１６）（Ｒ１７）−からなる群から選択され、ここでＲ１６およびＲ１７は、独立して、同じかまたは異なり、そして水素または置換もしくは無置換の、飽和もしくは不飽和のアルキルからなる群から選択され；
ここで、リンカーは、存在しないかまたは無痕跡であり；そして
ここで、毒素は、活性化酵素による活性化の際に毒性である因子であり、但し、該毒素は、５−フルオロデオキシウリジンでも、その任意の誘導体でもアナログででもない、化合物。
【請求項２】
Ｒ１およびＲ２が、両方とも水素である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ３が、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｘ−ＣＨ３であり、ここでＸが、酸素、硫黄またはメチルからなる群から選択される、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｘが、硫黄または酸素である、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
Ａ１およびＡ２が、両方とも酸素である、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
Ｂ１が、−ＮＨである、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
請求項１に記載の化合物であって、リンカーが、Ｃ６Ｈ４−ＣＨ２−および−Ｃ６Ｈ４−ＣＨ２−Ｘ１−Ｃ（＝Ｘ２）−および−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲｂ−（Ｃ＝Ｏ）−からなる群から選択され、ここでＸ１およびＸ２は、独立して、同じかまたは異なり、−Ｏ−、−Ｓ−および−Ｎ（Ｒａ）−からなる群から選択され、そしてここでＲａは水素または低級アルキルであり；ｎは２または３であり、そしてＲｂは、水素または低級アルキルである、化合物。
【請求項８】
Ｂ４が存在しない、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
請求項８に記載の化合物であって、ここで前記毒素が、２−メルカプトピリジン−Ｎ−オキシド、シプロフロキサシン、ノルフロキサシン、ナイトロジェンマスタードならびにその誘導体、アナログおよび薬学的に受容可能な塩からなる群から選択される、化合物。
【請求項１０】
Ｂ２が−ＮＨであり、Ｂ３が−Ｏ−であり、Ｒ４が２−メチルプロピルであり、そしてＲ５が水素である、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
前記毒素が、ノルフロキサシンまたはその誘導体、アナログもしくは薬学的に受容可能な塩である、請求項９に記載の化合物。
【請求項１２】
フラグメント−Ｂ２−Ｃ（Ｒ４）（Ｒ５）−Ｃ（＝Ａ３）−が、プロリン、そのアナログ、誘導体またはペプチド模倣物である、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
以下の構造：
【化２】
2005505502.tif 000053
を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項１４】
以下の構造：
【化３】
2005505502.tif 000054
を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項１５】
以下の構造：
【化４】
2005505502.tif 000055
を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項１６】
以下の構造：
【化５】
2005505502.tif 000056
を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項１７】
以下の構造：
【化６】
2005505502.tif 000057
を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項１８】
請求項１に記載の化合物およびキャリアを含む、組成物。
【請求項１９】
前記キャリアが、薬学的に受容可能なキャリアである、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
以下の構造：
【化７】
2005505502.tif 000058
を有する、化合物。
【請求項２１】
以下の構造：
【化８】
2005505502.tif 000059
を有する、化合物。
【請求項２２】
微生物の成長を阻害するための方法であって、該微生物を、有効量の請求項１に記載の化合物と接触させる工程を包含する、方法。
【請求項２３】
前記微生物が、ペプチドデホルミラーゼを発現する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
被験体を処置するための方法であって、該被験体に、有効量の請求項１に記載の化合物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項２５】
潜在的な治療剤を同定するための方法であって、以下：
（ａ）微生物への請求項１に記載の化合物の取り込みに有利な条件下で、該化合物に該微生物を接触させる工程；および
（ｂ）該微生物の未処理のサンプルと比較して、該微生物の増殖の量についてアッセイする工程、
を包含する、方法。
【請求項２６】
前記微生物が、ペプチドデホルミラーゼを発現する、請求項２５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の引用）
本願は、２００１年５月９日出願の米国仮出願番号６０／２９０，０９９（この内容は、本明細書中で参考として本発明の開示中に援用される）に対して、米国特許法１１９条第（ｅ）項の下で利益を主張する。
【０００２】
（技術分野）
本発明は、Ｅｎｚｙｍｅ  Ｃａｔａｌｉｚｅｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ（ＥＣＴＡＴＭ）治療に関し、そして特に、Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｄｅｆｏｒｍｙｌａｓｅ（「ＰＤＦ」）を発現する微生物に特異的なＥＣＴＡ治療に関する。
【背景技術】
【０００３】
（背景）
本開示を通じて、種々の刊行物は、筆頭著者および日付によって、丸括弧内で特許番号または刊行物番号で参照される。完全な書誌参照は、本願の末尾にて示される。これらの参照の開示は、本願が属する分野の標準をより完全に説明するために、本開示中に参考として援用される。
【０００４】
Ｅｎｚｙｍｅ  Ｃａｔａｌｉｚｅｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ（ＥＣＴＡＴＭ）治療は、標的酵素についての独自のプロドラッグ物質を提供する新規技術である。従来の治療とは異なり、ＥＣＴＡプロドラッグは、標的酵素を阻害しも不可逆的に不活化しもしない。米国特許第６，１５９，７０６号；同第６，２４５，７５０号；および同第６，３３９，１５１号Ｂ１。ＰＣＴ／ＵＳ９８／１６６０７；ＰＣＴ／ＵＳ９９／０１３３２；およびＰＣＴ／ＵＳ００／２０００８もまた参照のこと。
【０００５】
標的酵素は、標的細胞内、またはこの標的酵素が感染細胞のようなそれが存在しない環境と比較して発現される環境において、ＥＣＴＡプロドラッグを優先的に毒素に転換する。これらの化合物は、標的化因子を必要としないので、局所的または全身的に直接利用され得る。
【０００６】
ＥＣＴＡ分子は、ほとんどの場合細胞傷害性産物を（標的酵素活性化なしには）自然に生じない。これらは、非標的化酵素によって感知できるほどには活性化されず、これは、非疾患組織または非感染組織に対する毒性を生じ得る。表１は、ＥＣＴＡ分子および酵素アクチベータの特徴を概説する。
【０００７】
（表１）
【０００８】
【表１】
2005505502.tif 000002
植物、ヒトまたは農業的に重要な動物における細菌感染、ウイルス感染および真菌感染の場合、病原性生物中に存在するが宿主中には存在しない代謝経路は、強力なＥＣＴＡ標的酵素の供給源である。例えば、いくつかの経路およびそれに関与する酵素は、細菌、真菌および植物においては見出されるが、哺乳動物細胞においては見出されない。１つの例は、「必須」アミノ酸（動物が合成できず、そして食物で摂取する必要があるアミノ酸）の合成である。ＮｅｌｓｏｎおよびＣｏｘ（１９７２）。
【０００９】
別の例は、成長するポリペプチド鎖中のＮ末端Ｎ−ホルミルメチオニンの脱ホルミル化を触媒する、ペプチドデホルミラーゼ（Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｄｅｆｏｒｍｙｌａｓｅ）（「ＰＤＦ」、ＥＣ  ３．５．１．３１）である。Ｍｅｉｎｎｅｌ、１９９９。この酵素は、細菌中に存在し、かつ細菌中で活性であるが（Ｍｅｉｎｎｅｌら、１９９３）、哺乳動物細胞中には存在しないことが報告されている。細菌ＰＤＦ配列に対する配列ホモログが、最近哺乳動物において見出されたが、その正確な機能は未知である。Ｇｉｇｌｉｏｎｅ（２０００ａ）および（２０００ｂ）。
【００１０】
この酵素は、ヒトにおいては活性でないので、抗菌剤（主にＰＤＦインヒビター）のための標的として使用されてきた。ジチオールは、スルフヒドリル基と活性部位金属イオンとの配位によって、非特異的ＰＤＦインヒビターとして作用し得る。Ｒａｊａｇｏｐａｌａｎ（１９９７）。１，２−ジチオールまたは１，３−ジチオールの場合、活性部位からの金属イオンのゆっくりとした抽出が生じる。それぞれ、安定な５員環または６員環の形成（各々、２個の金属−硫黄結合を含む）が、この効果を説明する。
【００１１】
合理的に設計されたコンビナトリアルライブラリーを使用して、一般構造ＨＳ−ＣＨ２−ＣＨ（Ｒａ）−ＣＯＮＨ−ＣＨ（Ｒｂ）−ＣＯＮＨ−Ｒｃの、機構に基づくＰＤＦインヒビターを選択した。Ｗｅｉら、（２０００ａ）。このライブラリーから選択される最適なインヒビターは、ｎ−Ｂｕ基を保有し、Ｒａ、Ｒｂは−（ＣＨ２）３−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ２であり、そしてＲｃは２−ナフタレンである。この化合物は、１５ｎＭのＫｉを有する、競合的ＰＤＦインヒビターとして作用する。
【００１２】
Ｊａｙａｓｅｋｅｒａら（２０００）は、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＰＤＦを阻害するための、既知の抗コレステロール血症チロプロピック酸（ｔｈｙｒｏｐｒｏｐｉｃ  ａｃｉｄ）に構造的に関連する一連の非ペプチド化合物を記載する。アクチノニン（ａｃｔｉｎｏｎｉｎ）は、ナノモル濃度下のＫｉ範囲の活性を有する、強力なＰＤＦインヒビターであることが報告されている。Ｃｈｅｎ（２０００）。
【００１３】
Ｗｅｉら（２０００ａ）は、５−フルオロデオキシウリジンの５’−ジペプチジル誘導体が、ＰＤＦ触媒された脱ホルミル化の際に、低分子（５−フルオロデオキシウリジン（５−Ｆ−ｄＵｒｄ）を放出することを記載している。５−Ｆ−ｄＵｒｄ形成は、精製ＰＤＦまたはＥ．ｃｏｌｉ粗製溶解物によって触媒される基質の反応においてモニタリングされた。この化合物は、Ｅ．ｃｏｌｉ細菌に適用された場合、僅かに細胞傷害性（ＩＣ５０＞１００μＭ）であった。効力は、（ＰＤＦ過剰発現株を使用した）細菌中のＰＤＦの発現の増加によって、増加しなかった。この化合物は、グラム陽性微生物に対して僅かにより効果的であった（ＩＣ５０＝５０μＭ）。
【００１４】
さらなるインヒビターは、Ａｐｆｅｌら（２０００）、Ａｐｆｅｌら（２００１ａ）、Ａｐｆｅｌら（２００１ｂ）、Ｃｌｅｍｅｎｔｓら（２００１）、Ｄｕｒａｎｄら（１９９９）およびＣｈｅｎら（２０００）に記載される。
【００１５】
しかし、インヒビターではないが、毒素に対してＰＤＦによってかなり選択的かつ効果的に活性化される化合物または薬剤は、記載されていない。本発明は、この必要性を満たし、そして関連の利点も提供する。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１６】
（本発明の開示）
本発明は、以下の構造：
【００１７】
【化９】
2005505502.tif 000003
を有するプロドラッグ化合物を提供し、
ここでＲ１、Ｒ２、Ｒ４、およびＲ５は、独立して、同じかまたは異なり、そして水素、置換または無置換のＣ５〜Ｃ１４アリール基、および置換または無置換の、飽和または不飽和のＣ１〜Ｃ６アルキル基からなる群から選択され；
ここでＲ３は、置換または無置換のアリール基および置換または無置換の、飽和または不飽和のＣ１〜Ｃ６アルキル基ならびに−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｘ−ＣＨ３からなる群から選択され、ここでＸは、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−ＮＲ６−および−ＣＨ２−からなる群から選択され；Ｒ６は、低級アルキルであり；
ここでＡ１およびＡ３は、独立して、同じかまたは異なり、＝Ｏ、＝Ｓ、＝ＮＨ、＝Ｎ−ＯＨ、または＝Ｎ−Ｒ７からなる群から選択され、ここでＲ７は、水素またはＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
ここでＡ２は、存在しないか、または＝Ｏ、＝Ｓ、＝ＮＨ、＝Ｎ−ＯＨ、＝Ｎ−Ｒ８もしくは−Ｃ（Ｒ９）（Ｒ１０）−からなる群から選択され、ここでＲ８、Ｒ９、およびＲ１０は、独立して、同じかまたは異なり、そして水素またはＣ１〜Ｃ６アルキルからなる群から選択され；
ここでＢ１は、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、または−Ｎ（Ｒ１１）−からなる群から選択され、ここでＲ１１は水素およびＣ１〜Ｃ６アルキルからなる群から選択され；
ここでＢ２は、存在しないか、または−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ１２）−、もしくは−Ｃ（Ｒ１３）（Ｒ１４）−からなる群から選択され、ここでＲ１２、Ｒ１３、およびＲ１４は、独立して、同じかまたは異なり、水素または置換もしくは無置換の、飽和もしくは不飽和のアルキルからなる群から選択され；
ここでフラグメント−Ｂ２−Ｃ（Ｒ４）（Ｒ５）−Ｃ（＝Ａ３）−は、それ全体で、天然に存在するアミノ酸（例えばプロリン）、そのアナログ、誘導体またはペプチド模倣物であり；
ここでフラグメント−Ｂ２−Ｃ（Ｒ４）（Ｒ５）−Ｃ（＝Ａ３）−は、それ全体で、プロリン、そのアナログ、誘導体またはペプチド模倣物であり；
ここでＢ３は、存在しないかまたは−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、もしくは−Ｎ（Ｒ１５）−からなる群から選択され、ここでＲ１５は、水素およびＣ１〜Ｃ６アルキルからなる群から選択され；
ここでＢ４は、存在しないかまたは−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ６）−、および−Ｃ（Ｒ１６）（Ｒ１７）−からなる群から選択され、ここでＲ１６およびＲ１７は、独立して、同じかまたは異なり、そして水素または置換もしくは無置換の、飽和もしくは不飽和のアルキルからなる群から選択され；
ここで、リンカーは、存在しないかまたは無痕跡リンカーであり、リンカーは、制限しないが、−Ｃ６Ｈ４−ＣＨ２−および−Ｃ６Ｈ４−ＣＨ２−Ｘ１−Ｃ（＝Ｘ２）−および−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲｂ−（Ｃ＝Ｏ）−からなる群から選択され、ここでＸ１およびＸ２は、独立して、同じかまたは異なり、−Ｏ−、−Ｓ−および−Ｎ（Ｒａ）−からなる群から選択され、そしてここでＲａは水素または低級アルキルであり、そして−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲｂ−（Ｃ＝Ｏ）−は、以下の構造：
【００１８】
【化１０】
2005505502.tif 000004
を有し；
ここで、ｎ＝２または３であり、Ｒｂは、水素または低級アルキルであり；そして
ここで、毒素は、「活性化」酵素による放出の際に細胞に対して毒性である任意の因子を含むことを意図し、但し、この毒素は、５−フルオロデオキシウリジン（５−Ｆ−ｄＵｒｄ）である。
【００１９】
１つの局面において、この化合物は、上記の通りであるが、Ｒ１およびＲ２が、ともに水素である。
【００２０】
さらなる局面において、この化合物は、上記の通りであるが、Ｒ３が、−ＣＨ２ＣＨ２−Ｘ−ＣＨ３であり、ここでＸが、酸素、イオウまたはメチレンからなる群より選択される。なおさらなる局面において、この化合物は、上記の通りであるが、Ｘがイオウである。
【００２１】
１つの局面において、この化合物は、上記の通りであるが、Ａ１およびＡ２が、ともに酸素である。
【００２２】
さらなる局面において、この化合物は、上記の通りであるが、Ｂ１が、−ＮＨ−である。
【００２３】
さらなる局面において、この化合物は、上記の通りであるが、Ｂ４が、存在しない。
【００２４】
さらなる局面において、毒素は、２−メルカプトピリジン−Ｎ−オキシド、シプロフロキサシン、ノルフロキサシン、およびナイトロジェンマスタード、ならびにそれらの誘導体およびアナログからなる群より選択される。
【００２５】
１つの局面において、この化合物は、上記の通りであるが、Ｂ２が、−ＮＨであり、Ｂ３が−Ｏ−であり、Ｒ４が、２−メチル−プロピルであり、そしてＲ５が、水素である。
【００２６】
１つの局面において、この化合物は、上記の通りであるが、Ｒ４が、２−メチル−プロピルであり、そしてＲ５が、水素である。
【００２７】
ＰＤＦを発現する微生物に有効量の上記化合物を接触させることによって、この微生物の増殖を阻害するための方法もまた、本発明によって提供される。この方法は、例えば、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ、Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｅ．ａｅｒｏｇｅｎｅｓ、Ｅ．ｃｌｏａｃａｅ、Ｍ．ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅおよびＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａのグラム陽性微生物およびグラム陰性微生物の増殖を阻害する。この方法は、インビトロ、エキソビボ、およびインビボで実施され得る。被験体に有効量の上記化合物を投与または送達することによって、この被験体において、ＰＤＦを発現する微生物による感染の症状を軽減するための方法がさらに提供される。「被験体」は、本明細書中で規定され、そしてヒト被験体のような哺乳動物を含む。
【００２８】
本発明はまた、上記プロドラッグ化合物（単独でまたは他の化合物もしくは他の薬剤（公知もしくは将来発見されるべき）とともに）およびキャリアを含む組成物を提供する。１つの局面において、このキャリアは、別の分子または不活性な物質（例えば、プレートまたはカラム）である。別の実施形態において、キャリアは、薬学的に受容可能なキャリアである。薬学的に受容可能なキャリアは、当該分野において公知であり、そして上記簡単に記載される。
【００２９】
（本発明を実施するための形態）
本発明の実施は、他に示さない限り、有機化学、薬学、分子生物学（組換え技術を含む）、細胞生物学、生化学、および、免疫学の従来技術（これらは、当該分野の範囲内である）を使用する。このような技術は、以下のような文献に完全に説明される：「ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ：  Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ」第２版（Ｓａｍｂｒｏｏｋら，１９８９）；「ＯＬＩＧＯＮＵＣＬＥＯＴＩＤＥ  ＳＹＮＴＨＥＳＩＳ」（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ，編，１９８４）；「ＡＮＩＭＡＬ  ＣＥＬＬ  ＣＵＬＴＵＲＥ」（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，編，１９８７）；ｔｈｅ  ｓｅｒｉｅｓ「ＭＥＴＨＯＤＳ  ＩＮ  ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ」（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；「ＨＡＮＤＢＯＯＫ  ＯＦ  ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬ  ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ」（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ  ＆  Ｃ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，編）；「ＧＥＮＥ  ＴＲＡＮＳＦＥＲ  ＶＥＣＴＯＲＳ  ＦＯＲ  ＭＡＭＭＡＬＩＡＮ  ＣＥＬＬＳ」（Ｊ．Ｍ．Ｍｉｌｌｅｒ  ＆  ＭＹ．Ｃａｌｏｓ，編，１９８７）；「ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ」（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら，編，１９８７，および定期的改訂）；「ＰＣＲ：ＴＨＥ  ＰＯＬＹＭＥＲＡＳＥ  ＣＨＡＩＮ  ＲＥＡＣＴＩＯＮ」（Ｍｕｌｌｉｓら，編，１９９４）；「ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ」（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎら，編，１９９１）；Ｊ．Ｍａｒｃｈ，ＡＤＶＡＮＣＥＤ  ＯＲＧＡＮＩＣ  ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ：ＲＥＡＣＴＩＯＮＳ，ＭＥＣＨＡＮＩＳＭＳ  ＡＮＤ  ＳＴＲＵＣＴＵＲＥ，第４版（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９２））。
【００３０】
本明細書中で使用される場合、特定の用語は、以下に規定される意味を有し得る。
【００３１】
単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が明らかにそうでないことを示さない限り、複数の参照を含む。例えば、用語「細胞（ａ  ｃｅｌｌ）」は、複数の細胞（その混合物を含む）を含む。
【００３２】
用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、この組成物および方法が、記載された要素を含み、他のものを排除しないことを意味することが意図される。組成物および方法を規定するために使用される場合、「から本質的になる」は、その組合せに対して、任意の本質的な重要な他の要素を排除することを意味する。従って、本明細書中に規定される要素から本質的になる組成物は、単離および精製方法ならびに薬学的に受容可能なキャリアからの微量の混入物（例えば、リン酸緩衝生理食塩水、保存剤など）を排除しない。「からなる」は、微量の要素より多い他の成分および本発明の組成物を投与するための実質的な方法の工程を排除することを意味する。これらの推移的（ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ）用語のそれぞれによって規定される実施形態が、本発明の範囲内である。
【００３３】
本明細書中で使用される場合、用語「ペプチド模倣物」とは、天然の親ペプチドの生物学的作用を模倣し得るかまたは拮抗し得る、非ペプチド性構造要素を含む化合物をいう。
【００３４】
本明細書中で使用される場合、用語「置換基」は、限定しないが、以下が挙げられる：ハロゲン原子およびハロメチル基（例えば、ＣＦ３およびＣＣｌ３）；酸素含有基（例えば、オキソ、ヒドロキシ、カルボキシ、カルボキシアルキル、アルコキシ、アルコイル、アルコイルオキシ、アリールオキシ、アリーロイル、およびアリーロイルオキシ）；窒素含有基（例えば、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、シアノ、アジドおよびニトロ）；イオウ含有基（例えば、チオール、アルキルチオール、スルホニルおよびスルホキシド）；ヘテロ環基（それら自体が置換され得る）；アルキル基（それら自体が置換され得る）；ならびにアリール基（それら自体が置換され得る）。
【００３５】
用語「アルキル」とは、任意の分枝または非分枝、環式または非環式、飽和（アルキル）または不飽和（アルカイル（ａｌｋａｙｌ）、アルケニルまたはアルキニル）のヒドロカルビル基をいう。この用語は、一価のラジカルに限定されない。環式である場合、アルキル基は、Ｃ３〜Ｃ１２である。非環式である場合、アルキル基は、Ｃ１〜Ｃ１６である。用語「アルコキシ」および「アリールオキシ」とは、それぞれ、アルキル−Ｏおよびアリール−Ｏ基を意味する。「アルコイル」基および「アリーロイル（ａｒｙｌｏｙｌ）」基に対する参照は、アルキル−ＣＯおよびアリール−ＣＯをそれぞれ意味する。
【００３６】
用語「アリール」とは、芳香族基（例えば、フェニルまたはナフチル）または１つ以上のヘテロ原子を含有するヘテロ原子基（例えば、ピリジル、ピロリル、フラニルおよびチオフェニル）をいう。この用語は、一価のラジカルに限定されない。この用語「芳香族」とは、少なくとも１つのベンゼン環の存在によって特徴付けられる任意の化合物をいう。芳香族基の例としては、限定しないが、ベンゼンおよびナフタレンが挙げられる。
【００３７】
アルキル基およびアリール基は、置換されていても置換されなくてもよい。用語「脂肪族」とは、炭素原子の直鎖によって特徴付けられる水素および炭素の任意の全ての有機化合物をいう。「脂肪族」化合物のサブグループとしては、アルカン、アルケン、およびアルキンが挙げられる。脂肪族基は、置換されていても置換されなくてもよい。置換基の例について上記を参照のこと。
【００３８】
用語「脂環式」とは、水素原子および炭素原子が結合して１つ以上の環を形成している、任意の全ての有機化合物をいい、そしてこれらの化合物を網羅する。脂環式基は、非置換であっても置換されていてもよい。置換基の例については、上記を参照のこと。
【００３９】
「シクロアルキル」とは、飽和の環状基（例えば、シクロプロピル、シクロブチル、またはシクロペンチル）を意図し、そしてこれらの環を包含する。この用語は、一価の基に限定されない。シクロアルキル基は、非置換であっても置換されていてもよい。置換基の例については、上記を参照のこと。
【００４０】
用語「アルケニル」とは、１つ以上の不飽和部位を有する、直鎖アルケニル基、分枝鎖アルケニル基、およびシクロアルケニル基をいう。「アルキニル」とは、直鎖または分枝鎖のいずれかの配置の炭化水素鎖、および１つ以上の三重結合（これは、この鎖に沿った任意の安定な位置に存在し得る）を含むことを意図し、例えば、エチニルおよびプロピニルである。これらの用語は、一価の基に限定されない。アルケニル基またはアルキニル基は、非置換であっても置換されていてもよい。置換基の例については、上記を参照のこと。
【００４１】
「低級アルキル」とは、直鎖低級アルキル基の場合には１〜６個の炭素、そして低級分枝鎖（例えば、２−メチル−プロパン）およびシクロアルキル基について適用可能である場合には、３〜６個の炭素を有するアルキル基の、上記の広い定義を意味する。「低級アルケニル」とは、同様に、直鎖低級アルケニル基については２〜６個の炭素、そして分枝鎖およびシクロ低級アルケニル基については３〜６個の炭素を有すると定義される。「低級アルキニル」もまた、同様に、直鎖低級アルキニル基については２〜６個の炭素、そして分枝鎖低級アルキニル基については４〜６個の炭素を有すると定義される。低級アルキル基、低級アルケニル基および低級アルキニル基は、非置換であっても置換されていてもよい。置換基の例については、上記を参照のこと。
【００４２】
「ハロアルキル」とは、特定の数の炭素原子を有し、１つ以上のハロゲンで置換されている、分枝鎖と直鎖との両方の、飽和脂肪族炭化水素基を包含することを意図する（例えば、ｖが１〜３であり、そしてｗが１〜（２ｖ＋１）である、−−ＣｖＦｗ）。用語ハロアルキルは、一価の基に限定されない。「ハロゲン」としては、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、およびアスタチンが挙げられる。ハロアルキルの例としては、トリフルオロメチル、トリクロロメチル、ペンタフルオロエチル、およびペンタクロロエチルが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４３】
用語「複素環式」とは、その環構造が１種より多い原子の組合せである、任意の化合物をいう。複素環式化合物の例としては、ピリジン、フランおよびピロールが挙げられるが、これらに限定されない。この用語は、一価の基に限定されない。複素環式基は、非置換であっても置換されていてもよい。置換基の例については、上記を参照のこと。
【００４４】
本明細書中において使用される場合、用語「プロドラッグ」とは、薬学的に活性な薬剤または物質の、前駆体または誘導体の形態であって、薬物代謝物と比較して標的細胞に対する細胞傷害性が低く、そして酵素的に活性化され得るかまたはより活性な形態に転換され得るものを意味する。
【００４５】
「組成物」とは、活性薬剤と別の化合物または組成物（不活性（例えば、表面、塗料、検出可能な薬剤または標識、あるいは薬学的に受容可能なキャリア）または活性（例えば、アジュバントまたは消毒薬））との組み合わせを意味するように意図される。
【００４６】
「薬学的組成物」とは、活性薬剤とキャリア（不活性または活性であり、組成物をインビトロ、インビボ、またはエキソビボでの診断的使用または治療的使用に適切にする）との組み合わせを包含することを意図する。
【００４７】
用語「予防的有効量」とは、被験体または植物の外寄生において、感染を予防する際に有効な量をいう。
【００４８】
用語「薬学的に受容可能なキャリア」および「生物学的に受容可能なキャリア」とは、宿主または患者に、本発明の化合物と共に投与され、そして有効量の化合物を送達するために十分な用量で投与される場合に、この化合物の薬理学的活性を破壊せず、そして非毒性である、キャリアまたはアジュバントをいう。適切なキャリアの例としては、液相キャリア（例えば、滅菌溶液または水溶液）、ならびに以下に記載されるものが挙げられる。薬学的に受容可能なキャリアの例としては、任意の標準的な薬学的キャリア（例えば、リン酸緩衝化生理食塩水、水、およびエマルジョン（例えば、水中油エマルジョンまたは油中水エマルジョン））、ならびに種々の型の湿潤剤が挙げられる。この組成物はまた、安定剤および防腐剤を含有し得る。キャリア、安定剤およびアジュバントの例については、Ｍａｒｔｉｎ，ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ  ＰＨＡＲＭ．ＳＣＩ．，第１５版（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌ．Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ（１９７５））を参照のこと。
【００４９】
用語「処置（する）」とは、以下のいずれかをいう：患者における特定の障害の症状の軽減；特定の障害に関連する確認可能な測定の改善；または微生物の数の減少。当業者は、宿主がいつ「処置された」かを、微生物負荷の減少または感染に関連する症状の軽減を記録することによって、決定し得る。
【００５０】
用語「薬学的に受容可能な塩、プロドラッグまたは誘導体」とは、本発明の化合物の任意の薬学的に受容可能な塩、エステル、エーテル、エステルの塩、溶媒和物（例えば、エタノール和物（ｅｔｈａｎｏｌａｔｅ））、または他の誘導体であって、レシピエントへの投与の際に、本発明の化合物、またはその活性な代謝産物もしくは残基を（直接的にまたは間接的に）提供し得るものをいう。特に好ましい誘導体およびプロドラッグは、このような化合物が哺乳動物に投与される場合に、本発明の化合物のバイオアベイラビリティを増加させるもの（例えば、経口投与された化合物が血液中により容易に吸収されるようにすることによって）、または生物学的区画（例えば、脳またはリンパ系）への親化合物の送達を増強するものである。
【００５１】
本発明の化合物の塩は、無機酸および無機塩基、または有機酸および有機塩基から誘導され得る。酸の例としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、リン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、コハク酸、トルエン−ｐ−スルホン酸、酒石酸、酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、およびベンゼンスルホン酸が挙げられる。他の酸（例えば、シュウ酸）は、それ自体は薬学的に受容可能ではないが、本発明の化合物およびその薬学的に受容可能な酸付加塩を得る際の中間体として有用な塩の調製において、使用され得る。塩基の例としては、アルカリ金属（例えば、ナトリウム）の水酸化物、アルカリ土類金属（例えば、マグネシウム）の水酸化物、アンモニア、式ＮＷ４＋の化合物（ここで、ＷはＣ１〜４アルキルである）、およびＴＨＡＭ（２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−１，３−プロパンジオール）が挙げられる。
【００５２】
塩の例としては、以下が挙げられる：酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、ショウノウ酸塩、ショウノウスルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、フルコヘプタン酸塩（ｆｌｕｃｏｈｅｐｔａｎｏａｔｅ）、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、シュウ酸塩、パルモ酸塩（ｐａｌｍｏａｔｅ）、ペクチン酸塩、過硫酸塩、フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピルビン酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシル酸塩、およびウンデカン酸塩。塩の他の例としては、適切な陽イオン（例えば、Ｎａ＋、Ｌｉ＋、ＮＨ４＋、およびＮＷ４＋（ここで、Ｗは、Ｃ１〜４アルキル基である））と化合した、本発明の化合物の陰イオンが挙げられる。
【００５３】
治療的使用のためには、本発明の化合物の塩は、薬学的に受容可能である。しかし、薬学的に受容可能ではない酸および塩基の塩もまた、例えば、薬学的に受容可能な化合物の調製または精製において、あるいは植物における微生物外寄生を減少させるために使用するために、用途を見出し得る。
【００５４】
用語「無痕跡（ｔｒａｃｅｌｅｓｓ）リンカー」とは、分子の２つの部分間で特定の結合が切断される場合に、その分子の第二の部分に付着したままであるコネクターが、それ自体の痕跡を残すことを排除するような、単一の分子の２部分間のスペーサーまたはコネクターを示す。例えば、ｄｅ  Ｇｒｏｏｔら（２０００）を参照のこと。
【００５５】
用語「有効量」とは、治療的または予防的に有効な量を包含する。この用語は、患者における感染、あるいは植物における外寄生の処置または予防において、単一治療（ｍｏｎｏｔｈｅｒａｐｙ）または他の薬剤との組合せのいずれかで有効な量をいう。
【００５６】
微生物の「増殖を阻害する」とは、薬剤との接触によって、このような微生物の増殖速度を、この薬剤と接触していない同じ種のコントロール微生物と比較して減少させることを意味する。
【００５７】
「被験体」とは、ＰＤＦ発現微生物に対する直接的または間接的な宿主であるか、またはこのような宿主であり得る、任意の生存生物であり、植物および動物（例えば、魚類、鳥類、または哺乳動物であり、好ましくは、ヒト）が挙げられる。魚類としては、ペットおよび水産物が挙げられるが、これらに限定されない。鳥類としては、ペット、スポーツ動物および家畜が挙げられるが、これらに限定されない。哺乳動物としては、マウス、サル、ヒト、家畜、スポーツ動物、およびペットが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５８】
例としては、無脊椎動物、脊椎動物（例えば、鳥類または哺乳動物（例えば、ヒト患者））が挙げられるが、これらに限定されない。哺乳動物としては、マウス、サル、ヒト、家畜、スポーツ動物、およびペットが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５９】
ＰＤＦは、十分に研究された酵素である。その結晶学的構造は、公知である。Ｃｈａｎら（１９９７）。この酵素は、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＢＬ２１（ＤＥ３）細胞において発現される（Ｒａｊａｇｏｐａｌａｎら（１９９７））。この文献の著者は、Ｅ．ｃｏｌｉ  ｄｅｆ遺伝子を、ＰＣＲによって、この遺伝子の配列に基づく文献データに基づいて設計されたプライマーを使用して、単離した。精製された酵素は、大気中の酸素による触媒作用部位Ｆｅ２＋の迅速な酸化に起因して、不安定である。Ｒａｊａｇｏｐａｌａｎら（１９９８）。不活化を回避するためのこの酵素の適切な取り扱いのための条件が、報告されている。Ｒａｊａｇｏｐａｌａｎら（１９９７）。重要なことには、Ｚｎ２＋およびＮｉ２＋を含有するＰＤＦは、安定であり、この酵素の触媒作用特性インビトロ評価を可能にする。ＰＤＦについての単純な連続比色定量アッセイが存在する。Ｗｅｉら（１９９７）。この酵素は、Ｎ−ホルミルメチオニルロイシンｐ−ニトロアニリドを、基質として利用する。ＰＤＦ反応に続く共役アミノペプチダーゼ反応は、ｐ−ニトロアニリンを放出し、これは、４０５ｎｍで分光光度的にモニタリングされ得る。
【００６０】
ＰＤＦは、完全なＥＣＴＡ標的酵素である。この酵素は、細菌中で活性であり、そしてヒト宿主において不活性である。この酵素は、広い基質特異性を有する。脱ホルミル化は、メチオニン（または基質のＲ３として許容される他のアミノ酸またはアミノ酸アナログ（例えば、ノルロイシン））の遊離アミノ基を放出し、これは、引き続く求核攻撃を起こし得る。合理的に設計されたジペプチドまたは基質の等価なペプチド模倣フラグメントを用いて、この遊離アミノ基は、基質の最適な位置のカルボニル基を攻撃し得、これによって、環状分子（例えば、ジケトピペラジン（ＤＫＰ））を形成し、そして毒素を放出する。この基質は、環化を増強するように最適化され得る。ジペプチドに基づく基質を例示する、提唱される反応のスキームは、図１に与えられる。ここで、Ｘは、例えば、硫黄（メチオニン）または−ＣＨ２−（ノルロイシン）であり得る。Ｒ１およびＲ２は、公開されたＰＤＦのＳＡＲデータに基づいて選択され得る脂肪族基である。Ｈｕら（１９９８）。
【００６１】
従って、１つの局面において、本発明は、以下の構造：
【００６２】
【化１１】
2005505502.tif 000005
を有するプロドラッグ化合物を提供し、
ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４およびＲ５は、独立して、同じであるかまたは異なり、そして水素、置換または非置換のＣ５〜Ｃ１４アリール基、ヘテロアリール（例えば、フェニルメチレン、４−ヒドロキシプロピル、３−アミノプロピル、Ｎ−メチル−３−アミノエチル、２−メトキシメチルなど）、ならびに置換または非置換の、飽和または不飽和のＣ１〜Ｃ６アルキル基（例えば、メチル、エチル、３−ヒドロキシプロピル、３−アミノプロピル、Ｎ−メチル−３−アミノエチル、２−メトキシメチルなど）からなる群より選択され；
ここで、Ｒ３は、置換または非置換のアリール基（例えば、フェニルメチル、トリアゾールメチレン、チオフェンメチレンなど）、および置換または非置換の、飽和または不飽和のＣ１〜Ｃ６アルキル基（例えば、エチル、プロピル、２−ヒドロキシエチルなど）、および−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｘ−ＣＨ３からなる群より選択され、ここで、Ｘは、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−ＮＲ６−、および−ＣＨ２−からなる群より選択され；ここで、Ｒ６は、例えば、メチルまたはエチルのような低級アルキルであり；
ここで、Ａ１およびＡ３は、独立して、同一かまたは異なり、そして＝Ｏ、＝Ｓ、＝ＮＨ、＝Ｎ−ＯＨ、または＝Ｎ−Ｒ７からなる群より選択され、ここで、Ｒ７は、水素またはＣ１〜Ｃ６アルキル（例えば、メチル、エチル、またはメトキシメチル）であり；
ここで、Ａ２は、存在しないか、あるいは＝Ｏ、＝Ｓ、＝ＮＨ、＝Ｎ−ＯＨ、＝Ｎ−Ｒ８、または−Ｃ（Ｒ９）（Ｒ１０）−からなる群より選択され、ここで、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、独立して、同一かまたは異なり、そして水素またはＣ１〜Ｃ６アルキル（例えば、メチル、エチル、またはメトキシメチル）からなる群より選択され；
ここで、Ｂ１は、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−または−Ｎ（Ｒ１１）−からなる群より選択され、ここで、Ｒ１１は、水素およびＣ１〜Ｃ６アルキル（例えば、メチル、エチル、またはメトキシメチル）からなる群より選択され；
ここで、Ｂ２は、存在しないか、あるいは−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ１２）−、または−Ｃ（Ｒ１３）（Ｒ１４）−からなる群より選択され、ここで、Ｒ１２、Ｒ１３およびＲ１４は、独立して、同一かまたは異なり、そして水素、または置換もしくは非置換の、飽和もしくは不飽和のアルキル（例えば、メチル、エチル、またはメトキシメチル）からなる群より選択され；
ここで、フラグメント−Ｂ２−Ｃ（Ｒ４）（Ｒ５）−Ｃ（＝Ａ３）−は、その全体が、２０種の天然に存在するアミノ酸のうちの１つ（例えば、プロリン）、そのアナログ、誘導体またはペプチド模倣物であり；
ここで、フラグメント−Ｂ２−Ｃ（Ｒ４）（Ｒ５）−Ｃ（＝Ａ３）−は、その全体が、プロリン、そのアナログ、誘導体またはペプチド模倣物であり；
ここで、Ｂ３は、存在しないか、あるいは−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、または−Ｎ（Ｒ１５）−からなる群より選択され、ここで、Ｒ１５は、水素およびＣ１〜Ｃ６アルキル（例えば、メチル、エチル、またはメトキシメチル）からなる群より選択され；
ここで、Ｂ４は、存在しないか、あるいは−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ６）−、または−Ｃ（Ｒ１６）（Ｒ１７）−からなる群より選択され、ここで、Ｒ１６およびＲ１７は、独立して、同一かまたは異なり、そして水素、または置換もしくは非置換の、飽和もしくは不飽和のアルキル（例えば、メチル、エチル、またはメトキシメチル）からなる群より選択され；
ここで、リンカーは、存在しないか、または−Ｃ６Ｈ４−ＣＨ２−および−Ｃ６Ｈ４−ＣＨ２−Ｘ１−Ｃ（＝Ｘ２）−、および−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲｂ−（Ｃ＝Ｏ）−からなるがこれらに限定されない群より選択される、無痕跡リンカーであり、ここで、Ｘ１およびＸ２は、独立して、同一かまたは異なり、そして−Ｏ−、−Ｓ−、および−Ｎ（Ｒａ）からなる群より選択され、ここで、Ｒａは、−水素または低級アルキルであり、そして−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲｂ−（Ｃ＝Ｏ）−は、以下の構造：
【００６３】
【化１２】
2005505502.tif 000006
を有し、ここで、ｎは、２または３であり、そしてＲｂは、水素または低級アルキルであり；
そしてここで、毒素は、細胞傷害性分子または抗生物質分子であり、これは、酵素による活性化の際に放出され、但し、この毒素は、５−Ｆ−ｄＵｒｄではない。
【００６４】
毒素の例としては、以下からなる群が挙げられるが、これらに限定されない：フルオロキノロン類、アミノグリコシド、マイトマイシン、ＣＣ−１０６５、ヅカルマイシン（ｄｕｃａｒｍｙｃｉｎ）、ＣＢＩアナログ、アントラサイクリン類、ビンカアルカロイド類、マイトマイシン類、ブレオマイシン類、ペニシリン類、セファロスポリン、オキサシリン、カルボペネム、テトラサイクリン、クロラムフェニコール、マクロライド、シクロセリン、フルオロキノロン（シプロフロキサシンおよびノルフロキサシンが挙げられるが、これらに限定されない）、グリコペプチド、アミノグリコシド、ペプチド抗生物質、オキサゾリジノン、キノロン、スルホンアミド、細胞傷害性ヌクレオシド、プテリジンファミリー、ナイトロジェンマスタード、ポリハロゲン化ビアリールエーテル、ジインエン類、ポドフィロトキシン、タキソイド、ドキソルビシン、カルミノマイシン、ダウノルビシン、アミノプテリン、メトトレキサート、メトプテリン、ジクロロメトトレキサート、マイトマイシンＣ、ポルフィロマイシン、６−メルカプトプリン、シトシンアラビノシド、ポドフィロトキシン、エトポシド、リン酸エトポシド、メルファラン、ビンデシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ロイロシジン、リューロシン（ｌｅｕｒｏｓｉｎｅ）、ビス−（２−クロロエチル）アミン、トリクロロカルバン、トリクロロカルバニリド、トリブロモサリチルアニリド、スルファメトキサゾール、クロラムフェニコール、シクロセリン、トリメトプリン、クロロヘキシジン、ヘキサクロロフェン、フェンチクロール、５−クロロ−２−（２，４−ジクロロフェノキシ）フェノール、４−クロロ−２−（２，４−ジクロロフェノキシ）フェノール、３−クロロ−２−（２，４−ジクロロフェノキシ）フェノール、６−クロロ−２−（２，４−ジクロロフェノキシ）フェノール、５−クロロ−２−（３，４−ジクロロフェノキシ）フェノール、５−クロロ−２−（２，５−ジクロロフェノキシ）フェノール、５−クロロ−２−（３，５−ジクロロフェノキシ）フェノール、２，２’−ジヒドロキシビフェニルエーテル、ハロゲン化２−ヒドロキシベンゾフェノン、２−メルカプトピリジン−Ｎ−オキシド、コンブレタスタチン、カンプトテシン、アポプトリデン、シスプラチン、エポチロン、ハリコンドリン、ヘミアステルリン、メチオプリム、タプシガルジン、クロロキン、４−ヒドロキシシクロホスファミド、エトポシド、コルヒチン、メルファラン、ケルセチン、ゲニステイン、エルブスタチン、Ｎ−（４−アミノブチル）−５−クロロ−２−ナフタレン−スルホンアミド、ピリジニルオキサゾール−２−オン、イソキノリルオキサゾロン−２−オン、ベラパミル、キニン、キニジン、およびクロロキン。
【００６５】
さらなる局面において、この化合物は、上記の通りであるが、その毒素は、２−メルカプトピリジン−Ｎ−オキシド、シプロフロキサシン、ノルフロキサシン、およびナイトロジェンマスタード、ならびにそれらの誘導体およびアナログからなる群より選択される。
【００６６】
１つの局面において、その化合物は、上記の通りであるが、Ｂ２は−ＮＨであり、Ｂ３は−Ｏ−であり、Ｒ４は２−メチルプロピルであり、そしてＲ５は水素である。
【００６７】
１つの局面において、フラグメント−Ｂ２−Ｃ（Ｒ４）（Ｒ５）−Ｃ（＝Ａ３）−は、それ全体で、天然に存在するアミノ酸（例えば、プロリン）、その誘導体もしくはアナログ、またはそのペプチドミメティックである。
【００６８】
１つの局面において、フラグメント−Ｂ２−Ｃ（Ｒ４）（Ｒ５）−Ｃ（＝Ａ３）−は、それ全体で、プロリン、その誘導体もしくはアナログ、またはそのペプチドミメティックである。
【００６９】
１つの局面において、その化合物は、上記に示されるとおりの構造を有し、但し、その毒素は、以下からなる構造の群から選択される：
【００７０】
【化１３】
2005505502.tif 000007
【００７１】
【化１４】
2005505502.tif 000008
、ならびにそれらの誘導体、アナログ、および塩。上記の毒素に対する種々の改変が、感知可能な活性の喪失を伴うことなくなされ得ることが、理解される。
【００７２】
１つの局面において、その化合物は、上記の通りであるが、Ｒ１およびＲ２が、両方とも水素である。
【００７３】
さらなる局面において、その化合物は、上記の通りであるが、Ｒ３が、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｘ−ＣＨ３であり、ここでＸが、酸素、硫黄またはメチルからなる群から選択される。さらなる局面において、Ｘが、硫黄である。
【００７４】
さらなる局面において、その化合物は、上記の通りであるが、Ａ１およびＡ２が、両方とも酸素である。
【００７５】
さらなる局面において、その化合物は、上記の通りであるが、Ｂ１が、−ＮＨ−である。
【００７６】
さらなる局面において、その化合物は、上記の通りであるが、そのリンカーが、以下の構造：
【００７７】
【化１５】
2005505502.tif 000009
を有する。
【００７８】
さらなる局面において、その化合物は、上記の通りであるが、Ｂ４が存在しない。
【００７９】
１つの局面において、その化合物は、２−（２−ホルミルアミノ−４−メチルスルファニル−ブチリルアミノ）−４−メチル−ペンタン酸４−（Ｎ−オキシド−ピリジン−２−イルスルファニルメチル）−フェニルエステル化合物であり、かつ以下の構造：
【００８０】
【化１６】
2005505502.tif 000010
を有する。
【００８１】
別の局面において、その化合物は、１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−７−ピペラジン−１−イル−１，４，４ａ，８ａ−テトラヒドロ−キノリン−３−カルボン酸４−［２−（２−ホルミルアミノ−４−メチルスルファニル−ブチリルアミノ）−４−メチル−ペンタノイルオキシ］−ベンジルエステルであり、かつ以下の構造：
【００８２】
【化１７】
2005505502.tif 000011
を有する。
【００８３】
１つの局面において、その化合物は、１−エチル−６−フルオロ−７−（４−｛４−［２−（２−ホルミルアミノ−４−メチルスルファニル−ブチリルアミノ）−４−メチル−ペンタノイルオキシ］−ベンジルオキシカルボニル｝−ピペラジン−１−イル）−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸であり、かつ以下の構造：
【００８４】
【化１８】
2005505502.tif 000012
を有する。
さらなる局面において、その化合物は、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−メチル−ペンタン酸５−クロロ−２−（２，４−ジクロロ−フェノキシ）−フェニルエステルであり、かつ以下の構造：
【００８５】
【化１９】
2005505502.tif 000013
を有する。
【００８６】
別の局面において、その化合物は、２−（２−ホルミルアミノ−４−メチルスルファニル−ブチリルアミノ）−４−メチル−ペンタン酸５−クロロ−２−（２，４−ジクロロ−フェノキシ）−フェニルエステルであり、かつ以下の構造：
【００８７】
【化２０】
2005505502.tif 000014
を有する。
【００８８】
１つの局面において、その化合物は、２−（２−ホルミルアミノ−４−メチルスルファニル−ブチリルアミノ）−４−メチル−ペンタン酸４−｛［ビス−（２−クロロ−エチル）−カルバモイルオキシ］−メチル｝−フェニルエステルであり、かつ以下の構造：
【００８９】
【化２１】
2005505502.tif 000015
を有する。
【００９０】
さらなる局面において、その化合物は、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−メチル−ペンタン酸４−ホルミル−フェニルエステルであり、かつ以下の構造：
【００９１】
【化２２】
2005505502.tif 000016
を有する。
【００９２】
さらなる局面において、その化合物は、２−（２−ホルミルアミノ−４−メチルスルファニル−ブチリルアミノ）−４−メチル−ペンタン酸４−ヒドロキシメチル−フェニルエステルであり、かつ以下の構造：
【００９３】
【化２３】
2005505502.tif 000017
を有する。
【００９４】
さらなる局面において、その化合物は、２−（２−ホルミルアミノ−４−メチルスルファニル−ブチリルアミノ）−４−メチル−ペンタン酸４−クロロメチル−フェニルエステルであり、かつ以下の構造：
【００９５】
【化２４】
2005505502.tif 000018
を有する。
【００９６】
上記の化合物のいずれかは、キャリア（例えば、薬学的に受容可能なキャリア）またはさらなる有効な薬剤（例えば、抗生物質）と組合され得る。これらの化合物および組成物はまた、公知の治療剤および治療方法またはなお発見されるべき治療剤および治療方法と組み合わせて、その薬物の治療または効力を増強するために使用されるために有用である。
【００９７】
また、本発明によって、ＰＤＦ発現微生物の増殖を阻害するための方法が提供され、この方法は、その微生物を、有効量の上記のような化合物と接触させる工程による。ＰＤＦ発現を検出するための方法は、当該分野で公知である。例えば、Ｗｅｉら（１９９７）を参照のこと。この方法は、グラム陽性微生物およびグラム陰性微生物（例えば、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ、Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｅ．ａｅｒｏｇｅｎｅｓ、Ｅ．ｃｌｏａｃａｅ、Ｍ．ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、およびＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、ならびに下記表２において同定される微生物）の増殖を阻害する際に特に有用である。さらに、被験体における感染の症状を軽減するための方法が提供され、この方法において、その感染は、ＰＤＦを発現する微生物によって引き起こされ、この方法は、その被験体に、有効量の上記の化合物を投与または送達することによる。また、本発明によって、ＰＤＦ発現微生物により引き起こされる感染を処置するための方法が提供され、この方法は、その被験体に、有効量の上記の化合物を投与または送達することによる。「被験体」とは、上記に規定されており、「被験体」とは、ヒト患者のような、哺乳動物を包含する。ＰＤＦ発現微生物、ならびにこれらの微生物による感染により引き起こされる対応する疾患および症状の例が、下記の表２に提供される。
【００９８】
【表２−１】
2005505502.tif 000019
【００９９】
【表２−２】
2005505502.tif 000020
本発明はまた、上記のようなプロドラッグ化合物（単独か、または公知もしくはなお発見されるべき、他の化合物もしくは他の薬剤と組み合わせて）と、キャリアとを含む組成物を提供する。１つの実施形態において、そのキャリアは、薬学的に受容可能なキャリアである。
【０１００】
そのプロドラッグの臨床的使用において、抗生物質は、十分に確立された指針におそらく従う。投薬量は、他のほとんどの抗生物質についてすでに使用されている投薬量とおそらく同様である。プロドラッグの用量は、１００μｇ〜１００ｍｇ〜１ｇの範囲であるか、または８時間毎に１回または１週間もしくは２週間の間１日１回であるか、または患者が感染性生物について陰性であると試験されるまで投与されると、推定される。
【０１０１】
１つの局面において、本発明は、ＰＤＦ発現微生物により引き起こされる感染から植物を処置または防御する方法を包含し、この方法は、有効量の基質プロドラッグを適用することによる。
【０１０２】
植物を処置するために使用される化合物の良好な分散および付着を達成するために、分散および不約を補助する成分とともに、その化合物を処方することが有利であり得る。適切な処方物は、当業者に公知である。
【０１０３】
本発明はまた、葉、根、または植物もしくは根の周辺の土壌に、有効量のこのプロドラッグ化合物を適用することによって、ＰＤＦを発現する微生物による感染から植物を処置または防御する方法を提供する。これらの単離された化合物は、公知の農薬または殺虫薬と組み合わせられ得る。
【０１０４】
本発明の化合物は、ＰＤＦを発現する微生物によって引き起こされる感染から植物を処置または防御するために使用される場合、水和剤、顆粒剤などとして処方され得るか、または適切な媒体などの中にマイクロカプセル化され得る。他の処方物の例としては、可溶性粉末、顆粒水和剤（ｗｅｔｔａｂｌｅ  ｇｒａｎｕｌｅ）、乾燥流動体（ｄｒｙ  ｆｌｏｗａｂｌｅ）、水性流動体（ａｑｕｅｏｕｓ  ｆｌｏｗａｂｌｅ）、顆粒水和分散剤（ｗｅｔｔａｂｌｅ  ｄｉｓｐｅｒｓｉｂｌｅ  ｇｒａｎｕｌｅ）、乳剤濃縮物、および水性懸濁物が挙げられるが、これらに限定されない。他の適切な処方物は、当業者に公知である。
【０１０５】
本発明はさらに、ＰＤＦを発現する微生物によって引き起こされる感染を予防するためかまたは処置するためのいずれかに有効な量で、魚類にこのプロドラッグ化合物を投与する方法を提供する。この化合物は、魚類用の食餌中にこの化合物を取り込ませることによって投与され得る。あるいは、この化合物は、魚類が生存する水に添加され得るか、またはその水中に含まれる。最後に、この化合物は、適切な薬学的調製物として魚類に投与され得る。他の適切な処方物は、当業者に公知である。
【０１０６】
さらに、本発明のプロドラッグを生成するプロセスが提供される。一般的に、このプロセスは、以下の工程を必要とする：
【０１０７】
【化２５】
2005505502.tif 000021
上記の図表に関して、Ｘは、硫黄（メチオニン）または−ＣＨ２−（ノルロイシン）であり得る。Ｒ１〜Ｒ５およびＢ１〜Ｂ３は、上記で規定された通りである。反応条件および省略形の正式名称は、下記の実験実施例において見出され得る。
【０１０８】
本発明は、ＰＤＦを発現する微生物を含むサンプルと、有効量の候補プロドラッグ化合物とを接触させることによって、ＰＤＦを発現する生物体の増殖を阻害する潜在的治療剤を同定する方法を提供する。別のサンプルにおいて、同じ微生物に、有効量の本発明のプロドラッグを接触させる。その薬剤が本明細書に記載されるプロドラッグと比較して同程度の抗増殖能を有する場合、その候補物は、ＰＤＦを発現する微生物の増殖を阻害するために有用であるか、またはＰＤＦを発現する微生物を殺傷するために有用である。
【０１０９】
プロドラッグを、ＰＤＦによるプロドラッグの活性化に有利な条件下でサンプルと接触させ、次いで、そのサンプルの増殖阻害または微生物の死滅をアッセイする。あるいは、サンプルを、ＰＤＦの基質に対する反応の副生成物の存在について試験し得る。種々の量の基質を、ＰＤＦを発現する微生物と、ＰＤＦが細胞から毒素を放出させるために有効な量の時間にわたって接触させ、その細菌を溶解し、そして当該分野において周知の方法（例えば、高速液体クロマトグラフィー（「ＨＰＬＣ」））を使用して分析物を分析し、反応生成物を同定する。
【０１１０】
種々の濃度の潜在的薬剤をサンプルと接触させて、その薬剤の最適有効濃度を決定する。従って、１つの局面では、本発明は、ＰＤＦに対する選択的基質である薬剤の発見、およびその使用に関する。
【０１１１】
また、本明細書に記載されるプロドラッグと、スクリーニングを実施するために必要な指示書とを備えたキットが本発明により提供される。
【０１１２】
本発明の方法は、インビトロ、エキソビボまたはインビボで実施され得る。動物（例えば、ラットまたはマウス）において本発明をインビボで行うことにより、この治療剤またはプロドラッグの臨床試験前に使用され得る、好都合な動物モデル系が提供される。この系において、潜在的プロドラッグは、未処理の感染動物とそれぞれ比較して、微生物の負荷（ｌｏａｄ）が低減されるかまたは感染の症状が緩和される場合に、成功となる。感染されておらず、比較の基礎を与える別のネガティブコントロール群の細胞または動物を有することもまた有用であり得る。
【０１１３】
インビボで実施される場合、候補プロドラッグは、有効量で動物に投与または送達される。本明細書で使用される場合、インビボおよびエキソビボでの目的のための、用語「投与（する）」とは、微生物の負荷を低減させるために有効な候補プロドラッグの有効量を被験体に与えることを意味する。これらの場合において、薬剤またはプロドラッグは、薬学的に受容可能なキャリアと共に投与され得る。本発明の薬剤、プロドラッグおよび組成物は、医薬の製造において使用され得、そして、従来の手順に従って投与することによりヒトおよび他の動物を処置するために使用され得る（例えば、薬学的組成物における活性成分）。
【０１１４】
薬学的組成物を投与する方法は、当業者に周知であり、そしてこれには、マイクロインジェクション投与、静脈内投与または非経口投与が挙げられるが、これらに限定されない。この組成物は、局所（ｔｏｐｉｃａｌ）投与、経口投与または局部（ｌｏｃａｌ）投与、ならびに静脈内、皮下または筋内用に意図される。投与は、処置の経過全体を通して、連続的または断続的になされ得る。最も有効な投与手段および投与用量を決定する方法は、当業者に周知であり、そして治療に使用されるプロドラッグ、治療の目的、処置される微生物、感染の重篤度、および処置される被験体に応じて変動する。単回または複数回の投与が、処置する主治医によって選択された用量レベルおよびパターンで実施され得る。例えば、この組成物は、抗生物質耐性細菌による感染に既に罹患している被験体に投与され得る。この状況下では、組成物の有効な「治療量」を投与して、微生物の成長および増殖を持続的に妨げ、そして少なくとも部分的に停止させ、そして感染に関連する症状を改善する。
【０１１５】
しかし、このプロドラッグは、感染に対して過敏性であるかまたは感染を発症する危険性がある被験体または個体に投与され得る。これらの実施形態では、「予防的有効量」の組成物を投与して、感染前のレベルに近いレベルで、細胞の生存度および機能を維持させる。
【０１１６】
インビボでの投与は、処置の経過全体を通して、１回の投与でか、連続的にか、または断続的になされ得る。最も有効な投与手段および投与用量を決定する方法は、当業者に周知であり、そして治療に使用される組成物、治療の目的、処置される標的細胞、および処置される被験体に応じて変動する。単回または複数回の投与が、処置する主治医によって選択された用量レベルおよびパターンで実施され得る。適切な投薬処方物および薬剤を投与する方法は、下記に見出され得る。
【０１１７】
薬学的組成物は、経口投与、鼻腔内投与、非経口投与され得るか、または吸入治療によって投与され得、そして錠剤、トローチ剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、アンプル、坐剤またはエアロゾル形態の形態をとり得る。これらはまた、水性または非水性の希釈剤中における活性成分の懸濁液、溶液およびエマルジョンの形態、シロップ剤、顆粒剤、または散剤の形態をとり得る。本発明の薬剤に加えて、この薬学的組成物はまた、他の薬学的に活性な化合物または複数の本発明の化合物を含み得る。
【０１１８】
より詳細には、本明細書で活性成分としてもまた言及される本発明の薬剤は、任意の適切な経路（経口、直腸、鼻腔内、局所（経皮、エアロゾル、口腔内および舌下を含む）、経膣、非経口（皮下、筋内、静脈内および皮内を含む）および肺を含む）によって、治療のために投与され得る。好ましい経路が、レシピエントの状態および年齢、ならびに処置される疾患に応じて変動することもまた理解される。
【０１１９】
理想的には、この薬剤は、疾患の部位で活性化合物のピーク濃度を達成するように投与されるべきである。これは、例えば、薬剤（必要に応じて、生理食塩水中にある）の静脈内注射によって達成され得るか、または、例えば、この活性成分を含む錠剤、カプセル剤、またはシロップ剤として経口投与され得る。薬剤の所望の血中濃度は、疾患組織内に治療量の活性成分を与えるための連続的注入によって維持され得る。有効な組み合わせの使用が、各個々の治療的化合物または薬物を単独で用いる場合に必要とされ得る各成分剤のより低い総投薬量しか必要とせず、それにより副作用を減少させる治療的組み合わせを提供するために意図される。
【０１２０】
この薬剤が単独で投与されることは可能ではあるが、上記で規定されたような少なくとも１つの活性成分と共にそのための１つ以上の薬学的に受容可能なキャリアを含み、そして必要に応じて他の治療剤を含む、薬学的処方物として存在させることが好ましい。各キャリアは、処方物の他の成分と適合性であり、かつ患者に対して有害ではないという意味において「受容可能」でなければならない。
【０１２１】
処方物は、経口、直腸、鼻腔内、局所（経皮、口腔内および舌下を含む）、経膣、非経口（皮下、筋内、静脈内および皮内を含む）および肺での投与に適切なものを含む。処方物は、都合良くは、単位投薬形態として提示され得、そして薬学分野において周知の任意の方法により調製され得る。このような方法は、１つ以上の副成分を構成するキャリアと活性成分を結合させる工程を包含する。一般的には、この処方物は、液体キャリアもしくは微粉化固体キャリアまたはその両方と、活性成分を均一かつ緻密に結合させる工程、次いで、必要に応じて、その生成物を成形する工程によって、調製される。
【０１２２】
経口投与に適切な本発明の処方物は、各々が予め決められた量の活性成分を含むカプセル剤、カシェ剤（ｃａｃｈｅｔ）または錠剤のような個別の単位として；散剤または顆粒剤として；水性または非水性の液体中における溶液または懸濁液として；あるいは水中油の液体エマルジョンまたは油中水の液体エマルジョンとして、提示され得る。活性成分はまた、ボーラス剤、舐剤またはペースト剤として提示され得る。
【０１２３】
錠剤は、必要に応じて１つ以上の副成分と共に、圧縮または成形されることによって作製され得る。圧縮錠剤は、必要に応じて結合剤（例えば、ポビドン、ゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、滑沢剤、不活性希釈剤、防腐剤、錠剤分解物質（例えば、グリコール酸ナトリウムデンプン（ｓｏｄｉｕｍ  ｓｔａｒｃｈ  ｇｌｙｃｏｌａｔｅ）、架橋性ポビドン、架橋性カルボキシメチルセルロースナトリウム）、界面活性剤または分散剤と混合された、粉末または顆粒のような自由自在に流動可能な形態の活性成分を、適切な機械において圧縮することによって調製され得る。成形錠剤は、不活性な液体希釈剤で湿らせた粉末化合物の混合物を、適切な機械において成形することによって作製され得る。錠剤は、必要に応じて、コーティングされ得るかまたは刻み目を入れられ得、そして、例えば、所望の放出プロフィールを与えるための種々の割合のヒドロキシプロピルメチルセルロースを使用して、その中で活性成分の緩やかな放出または制御された放出を与えるように処方され得る。錠剤は、必要に応じて、腸溶性コーティングを与えられて、胃ではなく腸の部分において放出を与え得る。
【０１２４】
口腔での局所投与のために適切な処方物としては、風味の付いた基剤（通常は、スクロース、およびアカシアまたはトラガカント）中に活性成分を含むトローチ剤（ｌｏｚｅｎｇｅ）；不活性な基剤（例えば、ゼラチンおよびグリセリン、またはスクロースおよびアカシア）中に活性成分を含むトローチ剤（ｐａｓｔｉｌｌｅ）；および適切な液体キャリア中に活性成分を含むうがい薬が挙げられる。
【０１２５】
本発明に従う局所投与のための薬学的組成物は、軟膏、クリーム、懸濁剤、ローション、粉末、溶液、ペースト（ｐａｓｔ）、ジェル（ｇｅｌ）、スプレー、エアロゾルまたは油として処方され得る。あるいは、処方物は、活性成分と、必要に応じて１つ以上の賦形剤または希釈剤とをしみ込ませた包帯（ｂａｎｄａｇｅ）または絆創膏のような、パッチまたは包帯（ｄｒｅｓｓｉｎｇ）を含み得る。
【０１２６】
所望される場合には、クリーム基剤の水相は、例えば、少なくとも約３０％（ｗ／ｗ）の多価アルコール（すなわち、２つ以上のヒドロキシル基を有するアルコール（例えば、プロピレングリコール、ブタン−１，３−ジオール、マンニトール、ソルビトール、グリセロールおよびポリエチレングリコール、ならびにそれらの混合物））を含み得る。局所処方物は、望ましくは、皮膚または他の罹患した領域を通した薬剤の吸収または浸透を増強する化合物を含み得る。このような皮膚浸透増強剤の例としては、ジメチルスルホキシドおよび関連のアナログが挙げられる。
【０１２７】
本発明のエマルジョンの油相は、公知の様式で公知の成分から構成され得る。この相は、乳化剤（ｅｍｕｌｓｉｆｉｅｒ）（他に、乳化剤（ｅｍｕｌｇｅｎｔ）としても公知）のみを含み得るが、好ましくは、脂質もしくは油との、または脂質および油の両方との、少なくとも１つの乳化剤の混合物を含む。好ましくは、親水性乳化剤は、安定化剤として作用する親油性乳化剤と共に含まれる。油および脂質の両方を含ませることもまた好ましい。まとめると、安定化剤を有するかまたは有さない乳化剤が、いわゆる乳化蝋を作り出し、そして油および／または脂質を共に有するこの蝋が、いわゆる乳化軟膏基剤を作り出し、この基剤がクリーム処方物の油性分散相を形成する。
【０１２８】
本発明の処方物において使用するために適切な乳化剤（ｅｍｕｌｇｅｎｔ）および乳化安定剤としては、Ｔｗｅｅｎ６０、Ｓｐａｎ８０、セトステアリルアルコール、ミリスチルアルコール、グリセリルモノステアレート、およびラウリル硫酸ナトリウムが挙げられ。
【０１２９】
処方物のために適切な油または脂質の選択は、所望される美容特性の達成に基づく。なぜなら、薬学的エマルジョン処方物において使用される可能性が高い大半の油におけるこの活性化合物の可溶度は、非常に低いからである。従って、クリームは、好ましくは、チューブまたは他の容器からの漏出を回避するために適切な粘度を有する、脂っこくない非染色性の洗浄可能な生成物であるべきである。直鎖状または分枝鎖状の一塩基性または二塩基性のアルキルエステル（例えば、ジ−イソアジペート、イソセチルステアレート、ココナッツ脂肪酸のプロピレングリコールジエステル、イソプロピルミリステート、デシルオレエート、イソプロピルパルミテート、ブチルステアレート、２−エチルヘキシルパルミテート、またはＣｒｏｄａｍｏｌ  ＣＡＰとして公知の分枝鎖エステルの混合物；この最後の３つが、好ましいエステルである）が使用され得る。これらは、必要とされる特性に依存して、単独または組み合わせて使用され得る。あるいは、白色軟パラフィンおよび／または液体パラフィンあるいは他の鉱油のような、高融点脂質が使用され得る。
【０１３０】
眼への局所投与のために適切な処方物はまた点眼薬を含み、ここで活性成分は、適切なキャリア（特に、薬剤についての水性溶媒）中に溶解または懸濁される。
【０１３１】
直腸投与のための処方物は、適切なベース（例えば、ココアバターまたはサリチラートを含む）を含む坐薬として提供され得る。
【０１３２】
膣投与のための適切な処方物は、薬剤に加えて、当該分野で適切であることが公知であるようなキャリアを含む、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォームまたはスプレー処方物として提供され得る。
【０１３３】
経鼻投与のための適切な処方物（ここで、キャリアは固体である）は、例えば、約２０ミクロン〜約５００ミクロンの範囲の粒径を有する粗砕粉末を含み、これは、乾燥粉末として投与されるか、または吸入デバイスによる迅速な吸入によって、密閉されたままの粉末の容器から鼻孔を通って鼻に投与される。適切な処方物（ここで、キャリアは、例えば、鼻噴霧、点鼻薬としての投与のための液体、または噴霧器によるエアロゾル投与のための液体である）としては、薬剤の水性溶液または油性溶液が挙げられる。
【０１３４】
非経口投与のために適切な処方物としては、水性等張性滅菌注射液および非水性等張性滅菌注射液が挙げられ、これらの注射液は、抗酸化剤、緩衝液、静菌薬、および処方物を意図されるレシピエントの血液と等張性にする溶質；ならびに水性滅菌懸濁液および非水性滅菌懸濁液を含み得、これらの懸濁液は、懸濁剤および濃厚剤、ならびに血液成分または１種以上の器官に対して化合物を標的するように設計される、リポソームまたは他の微小粒子系を含み得る。この処方物は、単回用量または多回用量でシールされた容器（例えば、アンプルおよびバイアル）中にて提供され得、そして例えば、使用の直前に滅菌液体キャリア（注射用水）の添加のみを必要とする凍結乾燥状態で保存され得る。即時注射溶液および即時注射懸濁液は、上記の種類の滅菌粉末、顆粒および錠剤から調製され得る。
【０１３５】
好ましい単位投薬処方物は、本明細書中で上記で引用されている、薬剤の１日の用量、または単位用量（１日の準用量（ｓｕｂｄｏｓｅ））、あるいはその適切なフラクションを含む処方物である。
【０１３６】
特に上述の成分に加えて、本発明の処方物が、当該処方物の型に関する分野において通常の他の薬剤（例えば、甘味剤、濃厚剤および香味剤のようなさらなる薬剤を含み得る、経口投与のために適切な薬剤）を含み得ることを理解すべきである。本発明の薬剤、組成物および方法が、他の適切な組成物および治療と組み合わされることがまた意図される。
【０１３７】
本発明のこれらの薬剤ならびに上記の化合物およびそれらの誘導体は、本明細書中に記載される方法における使用のための医薬の調製のために使用され得る。
【０１３８】
プロドラックの臨床的使用において、抗生物質が同様に十分に確立されたガイドラインに従う。投薬量も同様に、他のほとんどの抗生物質のために既に使用された投薬量に類似する。プロドラックの用量は、８時間おきに１回、または１日に１回、１週もしくは２週にわたって、または患者の感染生物に対する試験の結果がネガティブを示すまで、１００ｍｇ〜１ｇｍの範囲であることが推定されている。
【０１３９】
以下の実施例は、本発明を例示するものであり、限定するものでないことを意図する。
【実施例】
【０１４０】
（実施例１−合成スキーム）
特許請求される化合物の合成の以下の実施例は、本発明の合成の例示であり、本発明の合成を限定するものでないことを意味する。この化合物を合成するために使用される、例えば以下に示されるような合成方法は、有機化学および医療化学の当業者に周知である。有機化学および医療化学の当業者に周知である、本発明の化合物の合成において使用される、置換工程、改変工程、または付加工程は、予想される。例えば、Ｊ．Ｍａｒｃｈ，ＡＤＶＡＮＣＥＤ  ＯＲＧＡＮＩＣ  ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ：ＲＥＡＣＴＩＯＮＳ，ＭＥＣＨＡＮＩＳＭＳ  ＡＮＤ  ＳＴＲＵＣＴＵＲＥ，第４版（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９２））を参照のこと。
【０１４１】
（化合物＃１およびＮＢ２０４６の合成）
【０１４２】
【化２６】
2005505502.tif 000022
上記の合成スキームおよび以下の実施例において、以下の略語および定義が適用される：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）；ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）；−トリエチルアミン（ＴＥＡ）；テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）；室温（ＲＴ）；トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）；水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ４）；五塩化リン（ＰＣｌ５）；ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）；Ｎ−メチル−Ｎ−トリメチルシリルトリフルオロアセタミド（ＭＳＴＦＡ）；ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）；および１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデク−７−エン（ＤＢＵ）。
【０１４３】
（化合物１の合成−化合物ＮＢ２０４６のための中間体）
ＢＯＣロイシン（１．０ｇ、４．３２ｍｍｏｌ）、トリクロサン（ｔｒｉｃｌｏｓａｎ）（１．２５ｇ、４．３２ｍｍｏｌ）、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（１．９１ｇ、４．３２ｍｍｏｌ）、およびトリエチルアミン（１．３３ｇ、１２．９ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ溶液（２５ｍｌ）を、０℃、アルゴン雰囲気下で４時間攪拌した。水（２０ｍｌ）を添加し、そして反応混合物を酢酸エチル（２×３０ｍｌ）を用いて抽出した。合わせた有機層を水、ブラインで洗浄し、そしてＮａ２ＳＯ４で乾燥した。溶媒のエバポレーション、および溶出液として２％酢酸エチル（ヘキサン中）を用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーを用いた精製により、化合物１（１．６６ｇ、７５％）を無色のガム状物として得た。
【０１４４】
【化２７】
2005505502.tif 000023
（化合物ＮＢ２０４６の合成）
化合物−１（０．２５ｇ、０．５ｍｍｏｌ）の無水アニソール溶液（０．０５５ｇ、０．５ｍｍｏｌ）を、０℃まで冷却し、そしてＴＦＡ（０．５６ｇ、５．０ｍｍｏｌ）を、１５分かけてゆっくり添加した。氷浴から取り出し、そしてさらに３時間攪拌し続けた。次いで、全ての揮発物を、減圧下で除去してガム状物を得た。無水ＴＨＦを添加し、そしてアルゴン雰囲気下で０℃まで冷却した。ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（０．２５ｇ、０．５７ｍｍｏｌ）、Ｎ−ホルミルメチオニン（０．１ｇ、０．５７ｍｍｏｌ）、およびトリエチルアミン（０．２１ｇ、２．１ｍｍｏｌ）を添加した。薄層クロマトグラフィーは、０℃で０．５時間後に反応が完了したことを示した。この反応物を水、ブラインで洗浄し、そしてＮａ２ＳＯ４で乾燥した。シリカゲルカラムクロマトグラフィーでの精製により、ＮＢ２０４６を無色の濃厚なガム状物として得た。
【０１４５】
【化２８】
2005505502.tif 000024
（化合物ＮＢ３０２４、ＮＢ３０５７、ＮＢ３０６８およびＮＢ３１０３のための中間体（化合物３および４）の一般的な合成スキーム）
特許請求される化合物の合成の以下の実施例は、本発明の合成の例示であり、本発明の合成を限定するものでないことを意味する。この化合物を合成するために使用される、例えば以下に示されるような合成方法は、有機化学および医療化学の当業者に周知である。有機化学および医療化学の当業者に周知である、本発明の化合物の合成において使用される、置換工程、改変工程、または付加工程は、予想される。例えば、Ｊ．Ｍａｒｃｈ，ＡＤＶＡＮＣＥＤ  ＯＲＧＡＮＩＣ  ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ：ＲＥＡＣＴＩＯＮＳ，ＭＥＣＨＡＮＩＳＭＳ  ＡＮＤ  ＳＴＲＵＣＴＵＲＥ，第４版（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９２））を参照のこと。
【０１４６】
【化２９】
2005505502.tif 000025
（中間体の合成スキームの詳細な説明）
（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−メチル−ペンタン酸４−ホルミル−フェニルエステル（化合物１）の合成）
【０１４７】
【化３０】
2005505502.tif 000026
ＢＯＰ（１３．０ｍｍｏｌ）を、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−ロイシン（１０．９ｍｍｏｌ）および４−ヒドロキシベンズアルデヒド（１３．０ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ溶液（１２ｍＬ）に添加し、そして溶解するまで攪拌した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（４３．０ｍｍｏｌ）および４−ジメチルアミノピリジン（１ｍｍｏｌ）を、攪拌しながら添加した。生じる溶液を、２．５時間攪拌した。反応混合物を、ジクロロメタン（１００ｍＬ）で覆い、そして水、飽和重炭酸ナトリウム溶液、および飽和ブラインで洗浄した。このジクロロメタンを、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして減圧下で濃縮した。生じた赤色の油状物を、溶出液としてジクロロメタンを用いる、シリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製した。
【０１４８】
【化３１】
2005505502.tif 000027
（２−（２−ホルミルアミノ−４−メチルスルファニル−ブチリルアミノ）−４−メチル−ペンタン酸４−ホルミル−フェニルエステル（化合物２）の合成）
【０１４９】
【化３２】
2005505502.tif 000028
化合物１（１０ｍｍｏｌ）のＴＦＡ溶液（１００ｍｍｏｌ）を、不活性雰囲気下、ＲＴで１時間攪拌した。次いで、揮発物の全てを減圧下で除去し、そして残渣をＴＨＦ（１０ｍＬ）中に溶解した。攪拌しながら、Ｎ−ホルミル−Ｌ−メチオニン（１０ｍｍｏｌ）、ＢＯＰ（１３．０ｍｍｏｌ）を添加し、続いてＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３０．０ｍｍｏｌ）および４−ジメチルアミノピリジン（１ｍｍｏｌ）を添加した。反応の完了後、ＴＨＦを減圧下で除去し、そしてジクロロメタン（２５ｍｌ）を添加した。この反応混合物を、水、飽和重炭酸ナトリウム水溶液、および飽和ブラインで洗浄した。ジクロロメタンを、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして減圧下で濃縮した。生じた濃厚な（ｔｈｉｎｋ）ガム状物を、溶出液として０〜５％のメタノール（ジクロロメタン中）を用いる、シリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製した。
【０１５０】
（２−（２−ホルミルアミノ−４−メチルスルファニル−ブチリルアミノ）−４−メチル−ペンタン酸４−ヒドロキシメチル−フェニルエステル（化合物３）の合成）
【０１５１】
【化３３】
2005505502.tif 000029
上記の化合物を合成するために、化合物２（１．０ｍｍｏｌ）のメタノール溶液（１０ｍＬ）を、０℃まで冷却し、そしてＮａＢＨ４（０．２５ｍｍｏｌ）のメタノール溶液をゆっくりと添加した。５分後、０．１ＮのＨＣｌを添加し、揮発物を減圧下で除去した。生じた混合物を、水と酢酸エチル（１０ｍＬ）との間に分配した。分離した酢酸エチル層を、ブラインで洗浄し、そしてＮａ２ＳＯ４で乾燥した。揮発物の除去により、化合物３を定量収率で淡黄色のガム状物として得た。
【０１５２】
【化３４】
2005505502.tif 000030
（２−（２−ホルミルアミノ−４−メチルスルファニル−ブチリルアミノ）−４−メチル−ペンタン酸４−クロロメチル−フェニルエステル（化合物４）の合成）
【０１５３】
【化３５】
2005505502.tif 000031
化合物３（０．２ｇ、０．５５ｍｍｏｌ）の無水ジクロロメタン溶液を氷浴中で冷却し、そしてＰＣｌ５（０．１１ｇ、０．５５ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下で添加した。反応の完了後、水性ＮａＨＣＯ３を添加し、そして１０分間攪拌した。有機層を分離し、水、ブラインで洗浄し、そして乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）した。揮発物をエバポレートすることによって、表題化合物を得、この表題化合物を、さらに精製することなく、次の反応のために使用した。
【０１５４】
【化３６】
2005505502.tif 000032
（化合物ＮＢ３０２４の合成の合成スキーム）
【０１５５】
【化３７】
2005505502.tif 000033
（化合物ＮＢ３０２４の合成の詳細な説明）
（２−（２−ホルミルアミノ−４−メチルスルファニル−ブチリルアミノ）−４−メチル−ペンタン酸４−（１−ヒドロキシ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−２−イルスルファニルメチル）−フェニルエステル（ＮＢ３０２４））
【０１５６】
【化３８】
2005505502.tif 000034
化合物４（１．０ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ溶液（２ｍＬ）に、重炭酸ナトリウム（２．５ｍｍｏｌ）およびピリチオン（ｐｙｒｉｔｈｉｏｎｅ）（１．０ｍｍｏｌ）を添加し、そして不活性雰囲気下で１時間攪拌した。次いで、反応混合物を濾過し、そしてＤＭＦを減圧下で除去した。ショートシリカゲルカラムに通過させ、この粗生成物を精製した。
【０１５７】
【化３９】
2005505502.tif 000035
（化合物ＮＢ３０５７の合成の合成スキーム）
【０１５８】
【化４０】
2005505502.tif 000036
（化合物ＮＢ３０５７の合成の詳細な説明）
（１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−７−ピペラジン−１−イル−１，４−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸４−［２−（２−ホルミルアミノ−４−メチルスルファニル−ブチリルアミノ）−４−メチル−ペンタノイルオキシ］−ベンジルエステル）
【０１５９】
【化４１】
2005505502.tif 000037
化合物３（１．０ｍｍｏｌ）およびＢＯＣ−シプロフロキサシン（１．０ｍｍｏｌ）の無水ジクロロメタン溶液（１０ｍＬ）に、ＥＤＣＩ（２．０ｍｍｏｌ）を添加した。ＲＴで４８時間後に、この粗生成物をシリカゲルカラムに充填し、そしてこの生成物を５％メタノール（ジクロロメタン中）を用いて溶出した。
【０１６０】
【化４２】
2005505502.tif 000038
（化合物ＮＢ３０６８の合成の合成スキーム）
【０１６１】
【化４３】
2005505502.tif 000039
（ＮＢ３０６８の合成の詳細な説明）
（１−エチル−６−フルオロ−７−（４−｛４−［２−（２−ホルミルアミノ−４−メチルスルファニル−ブチリルアミノ）−４−メチル−ペンタノイルオキシ］−ベンジルオキシカルボニル｝−ピペラジン−１−イル）−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸（ＮＢ３０６８））
【０１６２】
【化４４】
2005505502.tif 000040
無水ジクロロメタン（２ｍＬ）中のノルフロキサシン（８４ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）の混合物にＭＳＴＦＡ（１００ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を添加し、そして室温で３０分間撹拌した。その間、化合物３（１４０ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（７０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）の溶液を別のフラスコに取り、そしてホスゲン（４０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。次いで、この溶液に、ノルフロキサシンの溶液を添加し、そして室温で１時間撹拌した。反応混合物を０．１Ｎ  ＨＣｌで洗浄し、そしてＮａ２ＳＯ４で乾燥した。揮発性物質を除去し、そしてエーテル（５ｍＬ）を加えた。次いで、沈殿した生成物を濾過した。
【０１６３】
【化４５】
2005505502.tif 000041
（化合物ＮＢ３１０３の合成の合成スキーム）
【０１６４】
【化４６】
2005505502.tif 000042
（ＮＢ３１０３の合成の詳細な説明）
（２−（２−ホルミルアミノ−４−メチルスルファニル−ブチリルアミノ）−４−メチル−ペンタン酸）４−｛［ビス−（２−クロロ−エチル）−カルバモイルオキシ］−メチル｝−フェニルエステル（ＮＢ３１０３））
【０１６５】
【化４７】
2005505502.tif 000043
無水ジクロロメタン中の化合物３の溶液に、ビス−ジクロロエタンカルバモイルクロリドおよびＤＢＵを、室温で添加した。１５分後、反応混合物を、水（１０ｍＬ）で洗浄し、そしてシリカゲルカラムで精製した。
【０１６６】
【化４８】
2005505502.tif 000044
（実施例２−感受性試験）
抗菌化合物のＭＩＣを決定するためのＮＣＣＬＳ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｆｏｒ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ）法を高スループットスクリーニングのために改変する。試験化合物の全てのストックを、溶解度に応じて、水またはＤＭＳＯのいずれか中で調製する。最も高い濃度で、ＤＭＳＯ含有量は、０．５％をこえるべきではない。簡単には、試験化合物の最も高い濃度から２２倍の連続希釈物を、３８４ウェルマイクロタイタープレートに作製する。各ウェルに、ブロス中の試験微生物を、約１〜１．５×１０６細胞／ｍｌの最終濃度まで播種する。細菌増殖を、マイクロプレートリーダー（Ｔｅｃａｎ  ＳｐｅｃｔｒａＦｌｕｏｒ  Ｐｌｕｓ）を用いて６００ｎｍの光学密度の増加により決定した。ＭＩＣを、細菌増殖（視覚的増殖に等しい）を、細菌増殖に必要とされる適切な温度でのインキュベーションの１６〜１８時間後に阻害した最も低い濃度として定義する。ＮＢ２０４６に関する結果を表３および４に示す。
【０１６７】
（表３）
【０１６８】
【表３】
2005505502.tif 000045
2005505502.tif 000046
（表４）
【０１６９】
【表４】
2005505502.tif 000047
Ｅ．ｃｏｌｉ／ＴＥＭ−Ｅ．ｃｏｌｉ発現ＴＥＭ−１β−ラクタマーゼ；ＭＲＳＡ−メチシリン耐性Ｓ．Ａｕｒｅｕｓ；ＭＳＳＡ−メチシリン感受性Ｓ．Ａｕｒｅｕｓ
哺乳動物細胞を、上記のようにＮＢ２０４６で処理した。化合物は、曝露の１６時間後、哺乳動物細胞に対して毒性ではない（約３０μＭのＩＣ５０）。
【０１７０】
上で提供されるアッセイを用いて、ＮＢ２０４６の能力を、トリクロサンと比較した。結果を表５に示す。
【０１７１】
（表５）
【０１７２】
【表５】
2005505502.tif 000048
（実施例３）
個別の実験において、ＰＤＦ  ＥＣＴＡ化合物の無細胞反応を、Ｒａｇｕｓａ  Ｓ．ら（２０００）およびＷｅｉら（２０００ｂ）に記載される手順に従って、ＰＤＦ−過剰発現Ｅ．ｃｏｌｉから精製したＰＤＦを用いて研究した。ＮＢ３０６８転換を、精製したＰＤＦにより触媒されるＰＤＦ  ＥＣＴＡ反応の例として用いた。これを、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）中で室温にて実行した。ＮＢ３０６８濃度を、２〜２５０μＭの範囲であり、そして反応混合物中の酵素の濃度は、２５ｎＭであった。転換をＨＰＬＣカラム（Ａｄｓｏｒｂｏｓｐｈｅｒｅ  ＨＳ、Ｃ１８、５μｍ、４．６ｍｍ×１５０ｍｍ、Ａｌｌｔｅｃｈ）への反応混合物の直接インジェクションによりモニターした。ＮＢ３０６８濃度の減少およびシプロフロキサシン濃度の増加の両方をモニターし、そして反応の初速度を計算した。反応の動力学的パラメーターを決定して、ミカエリス−メンテンの式に対してデータを適合させた。基質濃度に対する反応の速度の依存性を、図２に与える。この依存性から、以下の、ＰＤＦが触媒したＮＢ３０６８反応の動力学的パラメーター得た：ｋｃａｔ＝２．０７±０．１４ｓ−１、Ｋｍ＝１２５±１７μＭ、およびｋｃａｔ／Ｋｍ＝１．７×１０４Ｍ−１ｓ−１。
【０１７３】
あるいは、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）中の２０〜１００
μＭの濃度の一連のＰＤＦ  ＥＣＴＡ化合物を、２５ｎＭの濃度の精製したＰＤＦと接触させ、そしてこの化合物の消費を追跡した。化合物の消費を、指数方程式に適合させた。Ｋｍより低いかまたはＫｍに匹敵する基質濃度の条件下で、指数定数を、（ｋｃａｔ／Ｋｍ）×［Ｅ］と見積ることが出来る。多数の基質に対する相対的触媒効率パラメーター（ｋｃａｔ／Ｋｍ）を決定した；ＮＢ３０６８についてのｋｃａｔ／Ｋｍ値を１とした（表６を参照のこと）。
【０１７４】
（表６  ＰＤＦ  ＥＣＴＡ化合物の特性）
【０１７５】
【表６】
2005505502.tif 000049
＊ｔ１／２−半減期（括弧内−６時間後に残っている化合物のパーセント）
＊＊ｎ／ｄ−測定せず
ＮＢ３０６８形質転換を触媒する際のＰＤＦの役割を確認するために、異なる酵素濃度での反応の速度を決定した（図３および４）。理解されるように、反応の速度は、酵素濃度に比例する。
【０１７６】
ＰＤＦの役割をさらに確認するために、精製したＰＤＦにより触媒されＮＢ３０６８反応をアクチノニン（ＰＤＦ特異的インヒビター）の存在下で研究した。図５から理解されるように、反応混合物に対するアクチノニンの添加は、用量依存様式で反応を減速させた。
【０１７７】
（実施例４−安定性）
ＰＤＦ  ＥＣＴＡ化合物の安定性を、異なる培地（ＰＢＳ、ｐＨ７．４（Ｇｉｂｃｏ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（Ｓｉｇｍａ）ｐＨ７．５、Ｍｕｅｌｌｅｒ  Ｈｉｎｔｏｎブロス（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）、マウス血漿およびヒト血漿（Ｓｉｇｍａ））で決定した。時間に対する化合物の濃度に依存性を、以下の指数方程式に適合させた：
ｃ＝ｃ０×ｅｘｐ（−ｋ×ｔ）｝  ここで、ｃは化合物の実行濃度であり、ｃ０は、その初濃度であり、そしてｔは時間である。化合物の半減期をｔ１／２＝０．６９３／ｋと決定した。
【０１７８】
（実施例５−−感受性試験）
ＮＣＣＬＳ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｆｏｒ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ）法を抗菌化合物のＭＩＣを決定するために用いた。試験化合物の全てのストックを、溶解度に基づいて、水またはＤＭＳＯのいずれか中で調製した。試験化合物の最も高い濃度で、ＤＭＳＯ含有量は、０．５％をこえるべきではない。簡単には、試験化合物の最も高い濃度から２倍の連続希釈物を、９６ウェルマイクロタイタープレートに作製した。各ウェルに、ブロス中の試験微生物を、約５×１０５ＣＦＵ／ｍｌの最終濃度まで播種した。細菌増殖を、マイクロプレートリーダー（Ｔｅｃａｎ  ＳｐｅｃｔｒａＦｌｕｏｒ  Ｐｌｕｓ）を用いて６００ｎｍの光学密度の増加によりモニターした。ＭＩＣを、細菌増殖（視覚的増殖に等しい）を、３５℃でのインキュベーションの１８時間後に阻害した最も低い濃度として定義した。各化合物について得られたＭＩＣ値を表７に与える。
【０１７９】
（表７  ＰＤＦ  ＥＣＴＡ化合物についてのＭＩＣ値）
【０１８０】
【表７】
2005505502.tif 000050
＊ｎ／ｄ−測定せず
本発明を上記実施形態と合わせて記載したが、上の記載および実施例は、例示を意図し、本発明の範囲を限定することを意図しないことが理解されるべきである。本発明の他の局面、利点および改変は、本発明が属する技術分野の当業者に理解される。
【０１８１】
（参考文献）
【０１８２】
【表８】
2005505502.tif 000051
【図面の簡単な説明】
【０１８３】
【図１】図１は、本発明の化合物のＰＤＦ活性についての提案される反応スキームである。
【図２】図２は、ＮＢ３０６８濃度に対する、精製されたＰＤＦを発現によって触媒されるＮＢ３０６８反応の速度の依存性を示す。
【図３】図３は、精製されたＰＤＦの異なる濃度によって触媒される反応における、ＮＢ３０６８の濃度の時間依存性を示す。
【図４】図４は、ＰＤＦ濃度に対する、精製されたＰＤＦによって触媒されるＮＢ３０６８反応の初期速度の依存性を示す。
【図５】図５は、アクチノニンの異なる濃度において、精製されたＰＤＦによって触媒される反応における、ＮＢ３０６８の濃度の時間依存性を示す。
【図１】
2005505502.tif 000060
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際公開パンフレット】
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2005505502.tif 000123
2005505502.tif 000124
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2005505502.tif 000125
【国際調査報告】
2005505502.tif 000126