(57)【要約】本発明は、（−）−オリビルを含み、そして抗酸化剤として有用な新規な組成物を提供する。本発明は、抗酸化剤として有用な、添加剤とともに、またはそれと組み合わせて有効量の（−）オリビルを含む、薬学的組成物；Ｓｔｅｒｅｏｓｐｅｒｍｕｍ  ｐｅｒｓｏｎａｔｕｍからの（−）−オリビルの単離のためのプロセスに関し、そしてまた活性フラクション（−）−オリビルの、抗酸化剤またはフリーラジカルスカベンジャーとしての使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗酸化剤として用いられる薬学的組成物であって、有効量の（−）オリビルを、薬学的に受容可能な添加剤とともに含む、組成物。
【請求項２】
前記添加剤が、（−）オリビルの効目に影響または妨害しないように選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記添加剤が、栄養物から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
用いられる前記栄養物が、炭水化物であり得る、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
用いられる前記栄養物が、糖であり得る、請求項３に記載の組成物。
【請求項６】
用いられる前記栄養物が、タンパク質であり得る、請求項３に記載の組成物。
【請求項７】
用いられる前記栄養物が、脂肪であり得る、請求項３に記載の組成物。
【請求項８】
用いられる前記栄養物が、適切な薬学的に受容なキャリアであり得る、請求項３に記載の組成物。
【請求項９】
（−）オリビルが、既知の抗酸化剤と比較してより少ない量の用量で有効である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
投与される（−）オリビルの量が、少なくとも１日に２回、用量あたり３００ｍｇ〜４００ｍｇの間の範囲にある、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
前記組成物が、錠剤、カプセル、シロップまたは／および粉末の形態で投与され得る、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
請求項１に記載の組成物の活性成分を構成する、植物Ｓｔｅｒｅｏｓｐｅｒｍｕｍ  ｐｅｒｓｏｎａｔｕｍからの（−）−オリビルの単離のためのプロセスであって、以下の工程：
ａ）Ｓｔｅｒｅｏｓｐｅｒｍｕｍ  ｐｅｒｓｏｎａｔｕｍの乾燥木粉末をヘキサンで抽出する工程；
ｂ）工程（ａ）からの残渣をクロロホルムでさらに抽出する工程；
ｃ）工程（ｂ）のクロロホルム溶液を減圧下で濃縮し、暗褐色抽出物を得る工程；
ｄ）工程（ｃ）の該暗褐色抽出物を、シリカゲル（６０〜１２０メッシュ）カラム（４ｃｍ直径、１００ｃｍの高さ）に充填されたシリカゲル（６０〜１２０メッシュ）に吸収する工程；
ｅ）工程（ｄ）の産物を、クロロホルム−メタノールのグラディエントの混合物で溶出する工程、および
ｆ）クロロホルム中の４％メタノールでの溶出フラクションを収集し、そして収集されたフラクションを濃縮して純粋な（−）−オリビルを得る工程、を包含する、プロセス。
【請求項１３】
用いられる溶媒が、ヘキサン、クロロホルムおよび／またはメタノールである、請求項１２に記載のプロセス。
【請求項１４】
（−）−オリビルの収率が、植物を乾燥した植物材料の約０．０７３％である、請求項１２に記載のプロセス。
【請求項１５】
（−）−オリビルが、新規供給源Ｓｔｅｒｅｏｓｐｅｒｍｕｍ  ｐｅｒｓｏｎａｔｕｍから得られる、請求項１２に記載のプロセス。
【請求項１６】
動物およびヒト哺乳動物のための抗酸化剤またはフリーラジカルスカベンジャーとしての（−）−オリビルの使用。
【請求項１７】
抗酸化剤として有用な組成物を製造するための（−）−オリビルの使用。
【請求項１８】
有効量の（−）−オリビルを含む前記組成物が経口投与される、請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
前記組成物が、栄養物から選択される添加剤を含む、請求項１７に記載の使用。
【請求項２０】
前記栄養物が、炭水化物であり得る、請求項１９に記載の使用。
【請求項２１】
前記栄養物が、糖であり得る、請求項１９に記載の使用。
【請求項２２】
前記栄養物が、タンパク質であり得る、請求項１９に記載の使用。
【請求項２３】
前記栄養物が、脂肪であり得る、請求項１９に記載の使用。
【請求項２４】
前記栄養物が、薬学的に受容可能なキャリアであり得る、請求項１９に記載の使用。
【請求項２５】
有効量の（−）−オリビルを含む前記組成物が、１日少なくとも２回、用量あたり３００ｍｇ〜４００ｍｇの範囲で投与される、請求項１１に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、新規植物供給源である、Ｓｔｅｒｅｏｓｐｅｒｍｕｍ  ｐｅｒｓｏｎａｔｕｍからの化合物、すなわち（−）−オリビルの良好な収率の単離に関する。これは、現在用いられている、薬効のある重要な親油性抗酸化剤プルブコール（Ｐｒｕｂｕｃｏｌ）およびα−トコフェロールより有用かつより良好な抗酸化剤分子であることが証明されている。これは、炎症性疾患状態、アテローム性動脈硬化症、糖尿病合併症、癌、肝毒性、および増加した世代に起因するかまたはフリーラジカルの除去下の、酸化ストレスおよび／または明白な酸化負荷を通じて媒介されるかまたは育成される種々の疾患状態において、良好な治療能力を有し得る。
【背景技術】
【０００２】
果実および野菜の豊富な食餌と、心臓血管病および特定の形態の癌の低減されたリスクとの間の関連を示す、かなりの量の疫学的証拠が存在する。一般に、これらの保護的効果に貢献する能動的な本源は、主に、抗酸化的植物化学物質のみであると推定されている。
【０００３】
過去１０年間における研究は、抗変異誘発剤、抗炎症剤、抗無分割硬化症（ａｎｔｉａｍｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ）剤、抗糖尿病剤、抗肝毒性剤、老化防止剤としてのフリーラジカルスカベンジャー／抗酸化剤の有益な効果、および種々の神経学的障害における有益な効果を示すために十分な証拠を蓄積している。従って、新たな抗酸化剤本源のための調査は、フリーラジカル／酸化的損傷に起因するか、または抗酸化剤／酸化剤恒常性間のアンバランスのいずれかに関連する、白内障、リュウマチ性疾患、アテローム性動脈硬化症、アルツハイマー病およびその他の神経変性状態のような病理学的症状の薬理学的処置を改善するために必須になりつつある。
【０００４】
従って、薬理学的アプローチは、抗酸化剤本源が豊富な可能性ある資源の調査に焦点をあてている。抗酸化剤本源の豊富な比率を保持する植物の薬効の重要性が、それ故ホットな項目になりつつある。
【０００５】
Ｓｔｅｒｅｏｓｐｅｒｍｕｍ  ｐｅｒｓｏｎａｔｕｍは、伝統的なインド医学で用いられる薬効植物であり、そして、利尿剤、結石溶解剤、去痰剤、強心剤、性欲亢進剤、食欲増進剤、抗炎症剤、抗細菌剤、消化不良、下剤、腎臓および膀胱結石、咳、喘息、過形成、痔核および胃酸過多疾患症状のための調製物において広く唱道されている（Ｉｎｄｉａｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｐｌａｎｔｓ、Ｖｏｌ．５、１９２頁）。それは、さらに、抗細菌活性、抗真菌活性、血糖低下活性、ｐ３８８リンパ性白血病細胞に対する活性を所有することが報告されている（Ｉｎｄ．Ｊｏｕｒ，ｏｆ  Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．１９７１，９，１００）。それ故、このような重要な生物学的性質を所有する分子を捜すことが核心となっている。この意味で、Ｓｔｅｒｅｏｓｐｅｒｍｕｍ  ｐｅｒｓｏｎａｔｕｍの植物化学物質の調査を取り上げた。本出願人らは、良好な収率の（−）−オリビル（（−）−Ｏｌｉｖｉｌｌ）の単離に努力した。（−）−オリビルは、表１に示されるいくつかの活性を所有することが知られている。
【０００６】
【表１】
2005505522.tif 000002
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
（発明の目的）
本発明の主要な目的は、抗酸化剤として用いられる、（−）−オリビルおよび添加剤を含む新規な組成物を提供することである。
【０００８】
別の目的は、（−）−オリビルを良好な収率で得るための新規な供給源を提供することである。
【０００９】
本発明のなお別の目的は、植物供給源、すなわち、Ｓｔｅｒｅｏｓｐｅｒｍｕｍ  ｐｅｒｓｏｎａｔｕｍから（−）−オリビルを生成するプロセスを提供することである。
【００１０】
本発明のなお別の目的は、（−）−オリビルの抗酸化剤としての使用に関する。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
（発明の要旨）
従って、本発明は、（−）−オリビルを含み、そして抗酸化剤として有用な新規な組成物を提供する。本発明はさらに、新規な植物供給源、すなわち、Ｓｔｅｒｅｏｓｐｅｒｍｕｍ  Ｐｅｒｓｏｎａｔｕｍからの（−）−オリビルの単離のための方法を提供する。
【００１２】
本発明によれば、（−）−オリビルが、新規な供給源、Ｓｔｅｒｅｏｓｐｅｒｍｕｍ  Ｐｅｒｓｏｎａｔｕｍから顕著な収率で単離されることが見出され、そして（−）−オリビルが、抗酸化剤の性質を示すことが見出された。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
（発明の詳細な説明）
抗酸化剤化合物は、最近、フリーラジカルが重要な役割を演じる、複数の器官の障害、すなわち、冠状心臓疾患、癌、糖尿病、リウマチ性障害および炎症症状においてそれらの広範な活性スペクトルに起因して注目を集めている。今や、多くの注目が、天然資源から抗酸化剤化合物を利用し、かつ収穫することに向けられている。
【００１４】
化合物（−）−オリビルは純粋の形態で用いられる。それ故、その使用法は、現在用いられている類似の性質を有する化合物の混合物より有益であり得る。（−）−オリビルの単離のプロセスは高度に経済的であることに注目することもまた重要である。
【００１５】
本発明は、（−）−オリビルが純粋かつ強力な抗酸化剤分子として単離される抗酸化剤本源を含む、有用な供給源Ｓｔｅｒｅｏｓｐｅｒｍｕｍ  Ｐｅｒｓｏｎａｔｕｍを提供する。（−）−オリビルは、現存する薬理学的／治療的に受容された抗酸化剤プロブコールおよびα−トコフェロールと比較されている。（−）−オリビルは、上記で述べられた参照薬物より良好であることが見出され、そしてそれ故、薬学的／治療的に受容可能な添加剤とともに用いられ得る。
【００１６】
本発明の実施形態では、（−）−オリビルは、上記で述べられた参照薬物よりかなり少ない量で有効であり得る。
【００１７】
本発明の１つの実施形態は、抗酸化剤として有用な組成物に関し、この組成物は、薬学的に受容可能な添加剤と組み合わせて、またはそれと関連して、有効量の（−）−オリビルを含む。
【００１８】
本発明の別の実施形態では、この薬学的に受容可能な添加剤は、（−）−オリビルの効目に影響しないか、または妨害しないように選択される。
【００１９】
本発明のなお別の実施形態では、この添加剤は、炭水化物、糖、タンパク質、脂質および薬学的に受容可能なキャリアのような栄養物から選択される。
【００２０】
本発明の実施形態では、添加剤に対する（−）−オリビルの比は、０．１：１０〜３：１０の間の範囲、好ましくは０．４：１０〜２：１０の範囲にある。
【００２１】
本発明のなお別の実施形態では、投与される（−）−オリビルの量は、１日あたり少なくとも２回で、用量あたり３００ｍｇ〜４００ｍｇの間の範囲である。
【００２２】
本発明のなお別の実施形態では、上記組成物は、錠剤、カプセル、シロップまたは粉末の形態で経口経路を通じて投与される。
【００２３】
本発明のもう１つの実施形態は、植物Ｓｔｅｒｅｏｓｐｅｒｍｕｍ  ｐｅｒｓｏｎａｔｕｍからの（−）−オリビルの単離のためのプロセスに関し、このプロセスは、以下の工程：
ａ）Ｓｔｅｒｅｏｓｐｅｒｍｕｍ  Ｐｅｒｓｏｎａｔｕｍの乾燥木粉末をヘキサンで抽出する工程；
ｂ）工程（ａ）からの残渣をクロロホルムでさらに抽出する工程；
ｃ）工程（ｂ）のクロロホルム溶液を減圧下で濃縮する工程；
ｄ）暗褐色抽出物を、シリカゲル（６０〜１２０メッシュ）に吸収する工程であって、そしてシリカゲル（６０〜１２０メッシュ）カラム（４ｃｍ直径、１００ｃｍの高さ）にロードする、工程；
ｅ）クロロホルム  メタノールのグラディエントでこのカラムを溶出する工程、および
ｆ）クロロホルム中の４％メタノールでの溶出フラクションを収集し、そしてフラクションを濃縮して純粋な（−）−オリビルを得る工程、を包含する。
【００２４】
本発明の別の実施形態では、用いられる溶媒は、ヘキサン、クロロホルムおよびメタノールから選択される。
【００２５】
本発明の別の実施形態では、得られる（−）−オリビルの収率は、植物乾燥材料の約０．０７３％である。
【００２６】
もう１つの実施形態は、動物およびヒトのための抗酸化剤またはフリーラジカルスカベンジャーとしての（−）−オリビルの使用に関する。
【００２７】
なお別の実施形態では、抗酸化剤として有用な組成物の製造のための（−）−オリビルの使用に関する。
【００２８】
本発明のなお別の実施形態では、（−）−オリビルは経口投与される。
【００２９】
本発明のなお別の実施形態は、フリーラジカル除去の処置のための方法に関し、有効量の（−）−オリビルを、それを必要とする被験体に投与する工程を包含し、好ましくは、（−）−オリビルは、１日に２回、３００ｍｇ〜４００ｍｇ／用量の範囲で投与される。
【００３０】
それ故、Ｓｔｅｒｅｏｓｐｅｒｍｕｍ  ｐｅｒｓｏｎａｔｕｍは、（−）−オリビルの新規な供給源であり、そしてこの植物における良好な収率でのその存在は、本発明をより重要にする。異なる植物からの（−）−オリビルの収率の比較を表２に示す。
【００３１】
【表２】
2005505522.tif 000003
本発明は、新規植物供給源からの抗酸化剤本源としての、（−）−オリビルの単離を具現化し、そして薬効的に重要な抗酸化剤薬物分子と比較したそのフリーラジカル除去性質を同定している。
【００３２】
本発明は、例示の様式により与えられ、そしてそれ故いかなる様式においても本発明を制限すると解釈されるべきでない以下の実施例にさらに記載される。
【実施例１】
【００３３】
（実験プロトコール：）
上記のリグナンの単離のためのプロセス。Ｓｔｅｒｅｏｓｐｅｒｍｕｍ  ｐｅｒｓｏｎａｔｕｍの乾燥木粉末（３Ｋｇ）をソックスレー装置上に充填した。この粉末は、最初、ヘキサンで抽出した。ヘキサンの抽出からの残渣をクロロホルムでさらに抽出した。このクロロホルム溶液を真空下で濃縮した。暗褐色抽出物（２２ｇ）を、シリカゲル（６０〜１２０メッシュ）に吸着させ、そしてシリカゲル（６０〜１２０メッシュ）カラム（４ｃｍ直径、１００ｃｍの高さ）にロードした。
【００３４】
このカラムを、クロロホルム  メタノールグラディエントを用いる溶出に供する。このクロロホルム  メタノールグラディエントは、特定のフラクションを得、それによって所望の化合物を得るように選択される。現在の場合には、クロロホルム中４％メタノールで溶出されたフラクションが別々に収集され、そして濃縮される。
【００３５】
上記のフラクションを、クロロホルム  メタノールグラディエントを用いるシリカゲルカラム（＞２００メッシュ、２．５ｃｍ直径および５０ｃｍ長）を用いるさらなる精製に供する。クロロホルム中の４％メタノールにおける溶出は、純粋な（−）−オリビル（２．２ｇ）を与えた。（−）−オリビルのスペクトルデータを以下に示す。
【００３６】
【化１】
2005505522.tif 000004
【実施例２】
【００３７】
（フリーラジカル除去抗酸化活性能力のインビトロ評価）
化合物の抗酸化活性を、最も広く用いられているフリーラジカル１，１−ジフェニル−２−ピクリルヒラジルラジカル（ＤＰＰＨ）を除去するその能力／有効性について試験した。良く受容され、かつ試験された抗酸化剤、すなわち、プロブコールおよびα−トコフェロールを参照化合物とした。化合物の１ｍｇ／ｍｌ  ＤＭＳＯ濃度を調製し、そして次に、ＤＭＳＯでより低い濃度まで希釈した。２００μｌの試験化合物をｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．４）中の１ｍｌに再構築した。エタノールに溶解した等容積の５００μＭのＤＰＰＨラジカルをこれと反応させた。暗所で４５分間のインキュベーションの後、５１７ｎｍにおける吸光度を記録した。ラジカル除去活性％をその後算出した。すべての読み取り値は３つの重複で行った。結果（図１および表３）は、考慮中のこの化合物が、強力な抗酸化／フリーラジカル清掃性質を所有すること示す。
【００３８】
【表３】
2005505522.tif 000005
【図面の簡単な説明】
【００３９】
【図１】図１は、Ｓｔｅｒｅｏｓｐｅｒｍｕｍ  ｐｅｒｓｏｎａｔｕｍからの（−）−オリビルおよび参照化合物の抗酸化（抗フリーラジカル、ＤＰＰＨ）活性を示す。
【図２】図２は、（−）−オリビルの構造を示す。
【図１】
2005505522.tif 000006
【図２】
2005505522.tif 000007
【国際公開パンフレット】
2005505522.tif 000008
2005505522.tif 000009
2005505522.tif 000010
2005505522.tif 000011
2005505522.tif 000012
2005505522.tif 000013
2005505522.tif 000014
2005505522.tif 000015
2005505522.tif 000016
2005505522.tif 000017
2005505522.tif 000018
【国際調査報告】
2005505522.tif 000019
2005505522.tif 000020
2005505522.tif 000021
2005505522.tif 000022
2005505522.tif 000023