(57)【要約】局所的に投与される医薬および薬理的活性化合物の有効性および/または経皮性輸送を向上させるための方法であって、親油性で医薬的に受け入れられる化合物のリン酸塩誘導体の１つまたは数種の複合体の有効量を含んで成るキャリアーの中に医薬または薬理的活性化合物を組み入れるステップを含んで成る方法を供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
局所的に投与される医薬および薬理的活性化合物の有効性および/または経皮性輸送を向上させるための方法であって、親油性で医薬的に受け入れられる化合物のリン酸塩誘導体の１つまたは数種の複合体の有効量を含んで成るキャリアーの中に医薬または薬理的活性化合物を組み入れるステップを含んで成る方法。
【請求項２】
前記親油性で医薬的に受け入れられる化合物がトコフェロール、ビタミンＡ（レチノール）、ビタミンＫ(メナジオン)、トコトリエノール類、ビタミンＤ（カルシフェロール）およびこれらの混合体からなるグループから選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記親油性で医薬的に受け入れられる化合物のリン酸塩誘導体の複合体がアルギニン、リジンおよび第３級置換アミンからなるグループから選択された複合体形成剤から調合される、上記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４】
前記親油性で医薬的に受け入れられる化合物のリン酸誘導体が親油性で医薬的に受け入れられる化合物のモノフォスフェート、親油性で医薬的に受け入れられる化合物のジフォスフェートおよびこれらの混合体からなるグループから選択される、上記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記親油性で医薬的に受け入れられる化合物のリン酸塩誘導体の１つまたは数種の有効量がキャリアーの総重量の１から90％ｗ/ｗの範囲にある、上記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
その有効量が40から90％ｗ/ｗの範囲にある、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
その有効量が4５から75％ｗ/ｗの範囲にある、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
その有効量が50から60％ｗ/ｗの範囲にある、請求項7に記載の方法。
【請求項９】
その有効量が1から10％ｗ/ｗの範囲にある、請求項５に記載の方法。
【請求項１０】
その有効量が1から15％ｗ/ｗの範囲にある、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
その有効量が5から10％ｗ/ｗの範囲にある、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記親油性で医薬的に受け入れられる化合物のリン酸塩誘導体の1つまたは数種の複合体がトコフェロールおよびそれらの混合体のリン酸塩誘導体の1つまたは数種の複合体からなるグループから選択される、上記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記親油性で医薬的に受け入れられる化合物のリン酸塩誘導体の1つまたは数種の複合体がラウリルアミノジプロピオン酸トコフェリルモノフォスフェート、ラウリルアミノジプロピオン酸トコフェリルジフォスフェートおよびこれらの混合体からなるグループから選択される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
トコフェロールのリン酸塩誘導体の1つまたは数種の複合体の有効量がキャリアーの総重量の0.1から１０％（ｗ／ｗ）の範囲にある、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項１５】
その有効量が5から１０％ｗ/ｗの範囲にある、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
その有効量がおよそ7.5％ｗ/ｗである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
キャリアーがさらに溶媒、表面活性剤、軟化剤、防腐剤、着色剤、芳香剤およびこれらの混合体からなるグループから選択された添加剤を含んで成る、上記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
キャリアーが7.50％のラウリルアミノジプロピオン酸トコフェリルフォスフェート、61.95％の脱イオン水、5.00％のグリセリン、0.05％のトリソジウムＥＤＴＡ、0.50％のカルボマー（Carbopol Ultrez 10）、2.00％のPhoenoxol T(セテアリールアルコールおよびceteareth-20)、1.00%のグリセリルステアレート（Emerest 2400)、5.00%のイソプロピルミリステート（Pelemol IPM)、3.50％のセチルエチルヘキサノエート（Pelemol 168)、3.50％のイソセチルベヘネート（Pelemol ICB)、3.00％のオレイルエルケート（Cetiol J−600)、0.50％のジメチコン（Dow 200,100 cSt)、5.00％の脱イオン水、0.50％のトリエタノールアミン（99％）および1.00%のGermaben II（プロピレングリコール、ジアゾリジニル尿素、メチルパラベンおよびプロピルパラベン）を含んで成る、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
医薬および薬理的活性化合物がモルヒネ、アトロピン、エストラジオールおよびテストステロンからなるグループから選択される、上記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
医薬または薬理的活性化合物の局所的な投薬において使用される、親油性の医薬的に受け入れられる化合物のリン酸塩誘導体の１つまたは数種の複合体の有効量を含んで成るキャリアー。
【請求項２１】
医薬または薬理的活性化合物の局所的な投薬において使用される、親油性で医薬的に受け入れられる化合物のリン酸塩誘導体の１つまたは数種の複合体の有効量を含んで成るキャリアーの組成物。
【請求項２２】
１つまたは数種の医薬または薬理的活性化合物および親油性で医薬的に受け入れられる化合物のリン酸塩誘導体の１つまたは数種の複合体の有効量を含んで成るキャリアーを含んで成る医薬組成物。
【請求項２３】
医薬または薬理的活性化合物の局所的投薬における使用のためのキャリアーの製造において、親油性で医薬的に受け入れられる化合物のリン酸塩誘導体の１つまたは数種の複合体の有効量の他の添加物をともなう使用。
【請求項２４】
局所的に投薬される医薬および薬理的活性化合物の有効性および経皮性輸送を向上させるための方法であって、親油性で医薬的に受け入れられる化合物の１つまたは数種のリン酸塩誘導体の有効量を含んで成るキャリアーの中に医薬または薬理的活性化合物を組み入れるステップを含んで成る方法。
【請求項２５】
医薬および薬理的活性化合物の局所的投薬における使用のための、親油性で医薬的に受け入れられる化合物の１つまたは数種のリン酸塩誘導体の有効量を含んで成るキャリアー。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は医薬又は薬理的活性化合物の局所への投薬において使用するキャリアーに関連する。
【背景技術】
【０００２】
本明細書において、公知文書、公用又は公知事実が言及され、又は論議されている場合、この言及または論議は、優先日においてこの公知文書、公用又は公知事実が存在したことを是認するものとして、即ち一般常識の一部であることまたは本明細書が関与するいかなる問題を解決するための試みと関連があると知られていること、として是認されているものと解釈されるべきではない。
【０００３】
薬剤の送達における主な目的は所望の作用部位で、適切な生物学的効果を獲得することである。キャリアーの選択は局所的に送達された医薬または薬理的活性化合物の効能に重要であるはずである。薬剤の生物活性は、しかしながら仮に製剤から皮膚を通過した後の反応の標的場所まで、生物学的活性体の放出させるために適正な物理化学的特性を持たないならば、最適状態には及ばないだろう。
【０００４】
皮膚中の薬剤トランスファー
【０００５】
薬剤が製剤から開放されると、角質層の外側の脂質へと最初に分配されるだろう。吸収度は主に薬剤のこれらの脂質への溶解度および皮膚と製剤中の薬剤の分配係数に依存するであろう。最大限にこのようにする簡単な方法は、薬剤がその溶解度の限度に達するように製剤の成分を選ぶことである。Ostrenga et al  は水とプロピレングリコールの配合比を操作することを通じてこの二つのコルチコステロイドの溶解と分配の特徴を向上することによりこの原理を証明し、その結果もっとも効果的な製剤は薬剤最終生成物の中で最大の薬剤濃度に溶解するためには適当なプロピレングリコールを含むものであるということを証明した。（Ostrenga J.Steinmetz C,Poulsen B.Significance of vehicle composition 1.Relatonship between topical vehicle composition,skin penetrability,and clinical efficacy.J.Pharm.Sci.1971;60：1175−1179）
【０００６】
また、過飽和系は薬剤の皮膚への浸透力を高める有機体よりも優れた熱力学的活性を与えることが報告されている。溶媒として揮発性と不揮発性溶剤の混合物を使用している薬溶剤系は、皮膚から揮発性化合物が蒸発する場所において、皮膚表面に飽和溶液をつくり、薬剤の吸収を促進することができる。いくつかの経皮性絆創膏の送達系は皮膚から水を吸収する能力を有し、それにより薬剤の熱力学的活性を強め過飽和溶液をつくり、皮膚への通過を促進すると考えられている。しかしながら、揮発性と不揮発性送達系の混合物を使用する際の主な問題のひとつは再現性のある系をつくるうえでの困難性にあり、なぜなら揮発性蒸発の割合と程度は塗布の際の周囲条件に大きく依存するであろうからである。吸収速度論における変異は送達された薬剤において変動と信頼できない臨床的な効果の原因となる。
【０００７】
適した溶媒系が決定できない時は懸濁液を使ってよい。これらの製剤において組み込んだ薬剤化合物の適した粒径は効果的な吸収に著しく影響しうる。これは様々なフルオシノロンアセトニド製剤を使いBarrettによって証明された。（Barrett CW,Hadgraft JW,Caron GA,Sarkany I.The effect of particle size and vehicle on the percutaneous absorption of fluocinolone acetonide.Brit.J.Dermatol.1965;77:576-78）製剤はボランティアの前腕の皮膚に塗られ、血管収縮度が測定された。その効果はプロピレングリコールとともに溶液に入っていた粉砕された薬剤を使用したこれらの製剤の中でもっとも優れたものだった。薬剤の可溶性と分配特性は製薬において皮膚吸収を促進させるために明らかに重要な要素であると結論された。
理論的には、よい油と水の可溶性とつりあいのとれた分配係数を有する薬剤は皮膚によく浸透することを意味する。
【０００８】
最近の薬剤は一般に最適な可溶特性を持たず、現在のところこれは可溶パラメーターを使って定量される。これは皮膚にとっておよそ10であると推定されている。したがってこれに似た可溶パラメーターを有する薬剤は溶解度が高く、皮膚を介し大きな濃度勾配を生じさせ、高い分配係数を作ると予期されるこれに似ている。これの重要性は水溶性溶液で90化合物の浸透性を研究し、肌のなかの浸透係数(Kp)は以下の関係においてそのオクタノール−水分配率と分子量に関係することを決定したPottsとGuyによる皮膚の透過性のデータの分析において明らかである。（Potts RO,Guy RH.Predicting skin permeability.Pharm.Res.1992;9:663-669）
【０００９】
Log Kp (cm s-1）＝− 6.3 + 0.71 logP − 0.0061 MW (r2＝0.69)
【００１０】
これは可溶と分配係数の重要性を強調するが、多くの数学的構造活性の関係のように二次元の答えから三次元の問題にもたらす。例えば、この等式を使った皮膚での線速は未だ明らかでない分配係数の放物線依存をもたらす。もしも真の線形からなる濃度勾配が存在するならば、濃度勾配が大きいほど、薬剤吸収率はより高くなるであろう。その関係が線形ではないという事実は、皮膚中の穴の数ややはり膜輸送を促進する溶解および分散といった可溶性以外の物理化学的力といった物理的制限が存在することを示唆する。高いlog P（高親油性化合物）では、その角質層から外への送達が律速となること、または高いlogＰ値を有するその薬剤は一般に水溶性水溶液に乏しいことが示唆されている。これは脂質可溶性薬剤がリン脂質細胞膜に留まる傾向にあることを意味し、なぜならそれらは本来親油性であり、即ち薬剤が皮膚中で捕獲され標的場所へと放されないためである。
【００１１】
この等式と付随する濃度勾配により皮膚を通って薬剤が送達されるという論理に基づけば、1から3までの範囲にあるlog Pを有する薬剤はより皮膚に浸透することが示唆される。しかしながら、これは単に皮膚中を容易に移動するであろう薬剤を認識するために働く。これは難溶性で高い親油性の薬剤の送達を増進する助けとはならない。
【００１２】
スキンエンハンサー
【００１３】
最近の多くの薬剤は高い親油性であるため、スキンエンハンサーと様々な製薬技術は皮膚中へのこれらの吸収を高めるために発展してきた。スキンエンハンサーは薬剤化合物の浸透性を強めるため、脂質マトリックスを溶解し、又は干渉することにより構造、特に角質層を変化させるために一般的に機能する。例はカプリン酸、オレイン酸、アゾン、デシルメチルスルホキシドおよびヒドロキシシンナメイトのようなものを含む。例えば皮膚のプロゲステロンの吸収は角質層を脱脂した場合に143％増える。増強は角質層を完全に除去すると８４３％に増える。このような強烈な変更に伴う、このような系の反復使用の問題には、局所的な炎症を防ぐため体のまわりの薬剤の絆創膏や貼付剤を移動させることを要する接触皮膚炎、皮膚の赤み、かゆみ、ひりひり感等を含む。赤みは絆創膏を除去して数時間以内に消失すると言われている。しかし懸念は長期間の使用のリスクやこのタイプの伝達系の安全性に関し高まっている。主には、薬剤の増加している透過性が基本的に重要な皮膚の保護層を損傷するに至ったことによる。
【００１４】
Morgan,TM.et al(1998) ‘Enhanced transdermal delivery of sex hormones in swine with a novel topical aerosol;J pbarm.Sci.87（10）： 1219-1225による研究では浸透性エンハンサー、パディメイトOを含む新規の計量投与式局所エーロゾルを使用し、豚でのテストステロンとエストラジオールの経皮性送達を調査した。その著者はその投薬システムが適応性を与え、そしてより広い塗布面積を供するために移動されうると主張する。しかしながら、その計量投与型装置は効果的に使用するためには位置調整および手作業での器用さを必要とする。さらには、またその薬剤を周囲にわたって移動させることが必要であっただろう。なぜなら、エンハンサーは皮膚を損傷させ、及びかゆみ並びに紅斑を生じさせるヒドロキシシンナメイトだからである。したがって、エーロゾル投薬法はエンハンサーを含む絆創膏に勝るなんら利点を提供しないだろう。
【００１５】
皮膚により攻撃的でない薬剤送達系を開発させるための試みの数々があった。しかしながら、それらのいずれの試みも商業上、受け入れられる製品を提供することはなかった。例えば：
【００１６】
米国特許6,479,540号は帯電した両親媒性でありかつ水溶性である医薬活性化合物を可溶化するためのトコールを基礎とする送達系に基づくトコールの使用について開示する。その特許は帯電したトコフェロールのエステル、例えばリン酸塩、コハク酸塩、アスパラギン酸塩及びグルタミン酸塩が適当な薬基質とイオン対を形成し、その後トコールエマルションと結合することを教示する。この処方は、このようにして、その活性化合物をより親油性にし、粘膜を通ってより輸送されやすいミセルに組み込まれるように変える。
【００１７】
米国特許5,583,105号は所定の薬剤を治療に有効となるのに、十分高い濃度で溶かすための溶媒としてトコールおよびトコール誘導体例えば、トコフェロールポリエチレングリコール１０００サクシネート（TPGS）の使用について開示する。可溶化物によるエマルションと乳化は薬剤送達業界において長い歴史をもつ。TPGSは医薬的に受け入れることが可能な水と混和できる可溶化物として使用され、またTPGSと親油性医薬との間の、他のいかなる相互作用に関する教示はない。
【００１８】
国際特許出願WO96/21440はイノシトールリン酸塩とビフォスフォネート分子の共有結合よる薬剤の生物学的利用能を改良するための方法を開示する。得られる接合体は非接合薬剤に比べて水の可溶性が増大していると言われている。
【００１９】
このため、有効な局所的な薬剤送達の当業は、その薬剤が水溶性の生物学的媒体中で可溶性であること、及び特有の薬剤分子または薬剤分子の非常に小さな集合体のいずれの輸送も許容する適切な形態で可溶性であることの両方を必要とする。この目的は脂質可溶性で有意に水溶性でない薬剤で具現化することは送達系が通常の膜輸送系によって認識されない限り難しいかもしれない。こうした薬剤分子は、輸送が起こる高い誘電率に富む水媒体中で、大きな集合体を形成する疎水性の部分を有する。
【００２０】
局所的に医薬または薬理的活性化合物の広い範囲を送達が可能であり、標的範囲において皮膚を傷つけることなく、医薬または薬理的活性化合物の吸収を向上させる適切なキャリアーはそのために必要である。
【発明の開示】
【００２１】
驚いたことに、医薬またはこれらのリン酸化類似体と混合した、トコフェリルフォスフェートのような親油性で医薬的に受けいれられる化合物のリン酸塩合成物を含むキャリアー組成物が、医薬または薬理的活性化合物の速くて効率的な輸送を許容することが発見されている。
【００２２】
局所的に塗布されると、医薬は炎症または崩壊の形跡なしに皮膚を通して吸収される。このキャリアーは長期間にわたる投薬が必要な治療のために、及びキャリアーが副作用を抑えかつ患者の健康を向上することができることを必要とする場合に使用できる。
【００２３】
多くの親油性リン酸塩は細胞の機能において重要であることが知られており、体内で効率よく輸送されている。これらの輸送メカニズムは親油性リン酸塩と結びついた物質に対して耐性のようである。したがって、エンハンサーとしてこの化合物群は比類のない価値を有するものとする。
【００２４】
発明の第一の観点によると、医薬および薬理的活性化合物の局所的投薬において使用するためのキャリアーが供給されるという。前記キャリアーは効果的な１つまたは数種の親油性で医薬的に受けいれられる化合物のリン酸塩誘導体の複合体を含んで成る。
【００２５】
好ましくは、親油性で医薬的に受けいれられる化合物のリン酸塩誘導体の複合体はトコフェロールのリン酸塩誘導体の１つまたは数種の複合体を含んで成る群から選択される。
【００２６】
本発明第二の観点によると局所的に投与された医薬および薬理的活性化合物の効能および経皮輸送を向上するための方法を提供する。前記方法では、当該医薬または薬理的活性化合物を、有効量で１つ又は数種の親油性で医薬的に受け入れられる化合物のリン酸塩誘導体を含んで成るキャリアーに組み込むステップを含んでなる。
【００２７】
好ましくは、親油性で医薬的に受けいれられる化合物のリン酸塩誘導体の複合体はトコフェロールのリン酸塩誘導体の１つまたは数種の複合体を含んで成る群から選択される。
【００２８】
本発明はまた医薬または薬理的活性化合物の局所的投薬における使用のためのキャリアーの製造における、親油性で医薬的に受けいれられる化合物のリン酸塩誘導体の１つまたは数種の複合体、例えば、トコフェロールのリン酸塩誘導体の複合体の有効量と、他の添加剤との使用を提供する。
【００２９】
本発明はまた１つまたは数種の医薬または薬理的に受け入れることができる化合物およびトコフェロールのリン酸塩誘導体の複合体のような、親油性で医薬的に受け入れることができる化合物のリン酸塩誘導体の１つ又は数種の複合体の有効量を含んで成るキャリアーを含んで成る医薬組成物を提供する。
【００３０】
本発明のさらなる観点によると、局所的に投薬された医薬及び薬理的活性化合物の効能および経皮性の輸送を向上させる方法を提供する。上記方法は、有効量の親油性で医薬的に受けいれられる化合物の１つまたはそれ以上のリン酸塩誘導体を含んでなるキャリアーにおいて医薬または薬理的活性化合物を組み入れる工程を含んで成るとされる。
【００３１】
本発明のこの観点は医薬および薬理的活性化合物の局所的投薬において使用されるキャリアーを含む。上記キャリアーは親油性で医薬的に受け入れることができる化合物の１つまたは数種のリン酸塩誘導体の有効量を含んで成る。
【００３２】
本明細書において、‘キャリアー‘の語は全身的なまたは皮膚的な効果を達成するために人への、またはその他の動物の皮膚への局所的な医薬の投与として使用される、いかなる製剤を意味するものとして使われる。それは限定されず、クリーム、ローション、ジェル、エマルション、リポソーム、エーロゾル、絆創膏、湿布薬、皮下のデポ、硬膏および吸収速度を０次放出よりも高く変更するために設計された、徐放システムも含む。
【００３３】
本明細書において‘有効量‘の語はある患者によって示される１つまたは数種の症状の軽減において有意に有効な量において、医薬または薬理的活性化合物が皮膚の表皮及び表皮層へ達するために角質層に浸透することを可能にする、親油性で医薬的に受けいれられる化合物のリン酸塩誘導体の１つまたは数種の複合体の量を意味するものとして使用される。親油性で医薬的に受けいれられる化合物のリン酸塩誘導体の１つまたは数種の複合体の有効量は、キャリアーの総重量の99.99％W/Wにまで及ぶであろう。当業者は、実際の総量が薬剤から薬剤へと変化することを理解するであろう。有効量は治療可能な薬剤の範囲内での量を供給するのに十分であろう。使用される量もまた、当該１つまたは数種の親油性で医薬的に受け入れられる化合物のリン酸塩誘導体の複合体が製剤の特性、例えば、可溶性または表面活性を補助するために使用されているかどうかに依存するであろう。親油性で医薬的に受けいれられる化合物のリン酸塩の１つまたはそれ以上の複合体が可溶性物質として作用している場合、その有効量は製剤における薬剤濃度に依存し、40％から90％W/W、好ましくは45％から75％W/W、より好ましく50％から60％W/Wの範囲であろう。親油性で医薬的に受けいれられる化合物のリン酸塩の１つまたは数種の複合体が可溶性特性として要求されない場合では、有効量は0.01％から20％W/W、好ましくは1％から15％W/W、より好ましくは5％から10％W/Wの範囲内であろう。
【００３４】
好ましくは（可溶性特性が要求されない場合）、トコフェロールのリン酸塩誘導体の１つまたは数種の複合体の有効量はキャリアーの総重量の0.1％から10％W/Wの範囲内にある。より好ましくは5％から10％W/Wの範囲内、そして最も好ましいのは7.5％W/Wである。
【００３５】
‘親油性で医薬的に受けいれられる化合物‘なる語は帯電しておらず、かつ容易に水素結合をつくることができない化合物を意味し、それ故にこのように化合物が容易に脂質層に組み込まれ、リン酸化可能（リン酸基は化合物を表面活性とするよう親水性であろう）であり、医薬化合物での使用のために受け入れることが可能であり、または医薬化合物の吸収を促進させうる。このような化合物の例はトコフェロール（ビタミンE）、レチノール（ビタミンA）、メナジオン（ビタミンK）、トコトリエノール類、カルシフェロール（ビタミンD）を含む。私たちのトコフェリルフォスフェート類の複合体を用いたテスト結果に基づけば、私たちは他の親油性で医薬的に受けいれられる化合物のリン酸塩誘導体で似た結果が達成されると予想する。この予想は親油性リン酸塩化合物が細胞内の機能において重要であることが知られており、及び体内において効果的に輸送されているという事実に基づく。理論によって拘束されることを望むわけではないが、これらの親油性リン酸塩化合物は皮膚内での輸送メカニズムを助けるために機能し、これによりエンハンサーとしての独自な価値があることが信じられる。
【００３６】
‘親油性で医薬的に受けいれられる化合物のリン酸塩誘導体‘は酸素がリン酸基のリン原子に共有結合して炭素―酸素―リンの結合を形成している化合物を含んで成る。その酸素原子は一般に親油性で医薬的に受けいれられる化合物の水酸基に由来する。リン酸塩誘導体は遊離リン酸、その塩、親油性で医薬的に受け入れられる化合物の二つの分子を持つリン酸エステルまたは遊離リン酸の酸素がアルキル基もしくは置換されたアルキル基との結合を形成するフォスファチジル化合物の形態において存在しうる。
【００３７】
‘親油性化合物のリン酸塩誘導体の複合体‘なる語は国際特許出願 no PCT/AU01/01476で開示されたように、親油性化合物の１つまたは数種のリン酸塩誘導体と、両性の表面活性剤、陽イオン表面活性剤、窒素官能基をもつアミノ酸及びこれらのアミノ酸が豊富なたんぱく質からなるグループから選択された１つまたは数種の複合体形成剤との反応生成物を意味する。
【００３８】
好ましくは、トコフェロールのリン酸塩誘導体の複合体は国際特許出願 no PCT/AU01/01475で開示されているように、１つのモノトコフェリルフォスフェート誘導体と１つのジトコフェリルフォスフェート誘導体の混合物から調整される。そこではモノトコフェリルフォスフェート誘導体の量はジトコフェリルフォスフェート誘導体の量の等モル以上である。例えば混合物は70％トコフェリルフォスフェートと26％ジトコフェリルフォスフェートを含む。
【００３９】
好ましい複合体形成剤はアルギニン、リジン及び第３級置換アミンからなるグループから選択される。これらは例えば以下の式による。
【００４０】
ＮＲ1Ｒ2Ｒ3
【００４１】
式中、Ｒ1はＣ6からＣ22までの直鎖または分岐鎖が混ざった複合アルキルラジカル、及びカルボニル誘導体を含んでなる基から選ばれる。
【００４２】
Ｒ2とＲ3は独立にＨ、ＣＨ2ＣＯＯＸ、ＣＨ2ＣＨＯＨＣＨ2ＳＯ3Ｘ、
ＣＨ2ＣＨＯＨＣＨ2ＯＰＯ3Ｘ、ＣＨ2ＣＨ2ＣＯＯＸ、ＣＨ2ＣＯＯＸ、
ＣＨ2ＣＨ2ＣＨＯＨＣＨ2ＳＯ3ＸまたはＣＨ2ＣＨ2ＣＨＯＨＣＨ2ＯＰＯ3Ｘを含む基から選ばれる。そして、ＸはＨ、Ｎa、Ｋまたはアルカノールアミンである。但し、Ｒ2およびＲ3はともにＨではない。そして、
【００４３】
Ｒ1がＲＣＯのとき、Ｒ2はＣＨ3であってもよく、そしてＲ3は（ＣＨ2ＣＨ2）Ｎ（Ｃ2Ｈ4ＯＨ）Ｈ2ＣＨＯＰＯ3であってもよく、またはＲ2とＲ3はともにＮ（ＣＨ2）2Ｎ（Ｃ2Ｈ4ＯＨ）ＣＨ2ＣＯＯ-であってもよい。
【００４４】
好ましくは、トコフェロールのリン酸塩誘導体の１つまたは数種の複合体はラウリルアミノジプロピオン酸トコフェリルモノフォスフェート、ラウリルアミノジプロピオン酸トコフェリルジフォスフェートおよびそれらの混合体からなるグループから選択される。
【００４５】
本明細書中‘医薬または薬理的活性化合物‘なる語は人間または獣医用塗布薬のための医薬的活性化合物を意味するものとして使用される。医薬化合物の例としては限定することなく、モルヒネおよびレボルファノールのような麻酔性鎮痛剤、コデインおよびアセトアミノフェンのような非麻酔性鎮痛剤、コルチゾンのようなコルチコステロイド剤、プロポフォルのような麻酔剤、スコポラミンのような制吐剤、アドレナリンおよびドーパミンのような交感神経興奮剤およびフォスフェニトインのような抗てんかん剤、イブプロフェンのような抗炎症剤、甲状腺ホルモンおよび抗甲状腺障害剤、例えばチロキシン、植物性化学物質、例えばα-ビサボロール、オイゲノール、シリビン、大豆イソフラボン類、イリドイドグリコシド類、例えばアウクビンおよびカタルポール（catalpol）、セスキテルペンラクトン類、例えばアルニカカミッソニス（Arnica chamissonis）からのシュードグアヤノリド(pseudoguaianolide)、テルペン類、例えばロスマリン酸（rosmarinic acid）およびロスマノール(rosmanol)、フェノリックグリコシド類、例えばサリチル酸塩、サリシン、サリゲニンおよびサリチル酸、トリテルペンタクサステロールまたはα-ラクツセロール、およびイソラクツセロール、ｐ−ヒドロキシフェニル酢酸誘導体タラクサコシド、ヒドロキノン誘導体、例えばアルブチン、フェニルアルカノン類、例えばジンゲロール類(gingerols)およびシャガオール類（shagaols）、ヒパーシン(hypercin)およびアシルフロログルシド、例えば、キサントフモール、ルプロン、フムロンおよび２−メチルブタ−３エン−２−オールが含まれる。
医薬または薬理的活性化合物はリン酸塩誘導体を含むどれか適切な形態に存在しうる。
【００４６】
当業者は当該キャリアーにどのような他の添加剤を含ませてよいかを知っているであろう。他の添加剤の選択は医薬または薬理的活性化合物の特性に依存するであろう。他の添加物の例は溶媒、表面活性剤、緩和剤、防腐剤、着色剤、芳香剤等を含む。他の添加剤の選択もまた、局所的投薬の使用に依存するであろう。
【００４７】
本発明によるとキャリアーのための典型的な添加物は61.95％の脱イオン水、5.00％のグリセリン、0.05％のトリゾジウムＥＤＴＡ、0.50％のカルボマー（Carbopol Ultrez 10）、2.00％のPhenoxolＴ（セテアリールアルコールおよびセテアレス-20）、1.00％のグリセルステアレート（Emerest 2400）、5.00％のイソプロピルミリステート（Pelemol IPM）、3.50％のセチルエチルヘエキサノエート（Pelemol 168）、3.50％のイソセチルベヘネート（Pelemol IGB）、3.00％のオレイルエルケート（Cetiol J-600）、0.50％のジメチコン（Dow 200,100 cSt）、5.00％の脱イオン水、0.50％のトリエタノールアミン（99％）、および1.00％のGermaben II（プロピレングリコール、ジアゾリジニル尿素、メチルパラベンおよびプロピルパラベン）を含む。
本発明はさらに以下の制限のない例によって説明され、図説される。
【実施例１】
【００４８】
本発明に従うキャリアークリームは以下のように調合される。
フェーズＡ                                                            Ｗ/Ｗ
脱イオン水                                                            61.95％
グリセリン                                                             5.00
トリソジウムＥＤＴＡ                                                   0.05
カルボマー（Carbopol Ultrez 10）2                                      0.50
トコフェリルリン酸ラウリルアミノジプロビオン酸                         7.50
フェーズＢ
セテアリールアルコール Ceteareth-20(Phoenoxol T)3                      2.00
グリセリルステレート (Emeresut 2400)4                                  1.00
イソプロピルミリステート(Pelemol IBM)3                                 5.00
セチルエチルヘキサノエート(Pelemol 168)3                               3.50
イソセチルベヘネート(Pelemol IGB)3                                     3.50
オレイルエルケート(Cetinol J-600)4                                     3.00
ジメコン(Dow 200,100 cSt.)5                                            0.50
フェーズＣ
脱イオン水                                                             5.00
トリエタノールアミン（９９％）                                         0.50
フェーズＤ
プロピレングリコールとジアゾリジニル尿素とメチルパラベンと             1.00
ポリピルパラベン(Germaben II)6
1 Vital Health Sciences 
Pty Ltd
2 B.F Goodrich,Incorporated
3 Phoenic Chemical, Incorporated
4 Cognis, Incorporated
5 Dow-Corning, Incorporated
6 ISP Corporation
【００４９】
手順
手順：カルボマーおよびラウリルアミノジプロピオン酸トコフェリルフォスフェートを除いたフェーズＡの各化合物を撹拌しながら混合させる。溶液を得たら、この溶液の中でカルボマーを分散させる。十分にかき混ぜながら、フェーズＡを７０−７５℃への加熱を開始する。ラウリルアミノジプロピオン酸トコフェリルフォスフェートをさっとかき混ぜながらカルボマーに分散させる。十分にかき混ぜながら、フェーズＢの各化合物を混合させ７５−８０℃に温める。７０−７５℃の均一なフェーズＡと７５−８０℃の均一なフェーズＢを用いる。十分にかき混ぜながらフェーズＢをフェーズＡに加える。ＡＢを冷やして５０℃にする。それからフェーズＣ溶液をＡＢに加える。ＡＢＣの十分なかき混ぜを４５℃になるまで続ける。フェーズＤをＡＢＣに加える。３５℃になるまで十分なかき混ぜを続ける。
【実施例２】
【００５０】
エストラジオールおよびエストラジオール３リン酸塩の毛のないラットモデルへの経皮性送達はこの実施例において評価した。
【００５１】
方法
動物：２３匹の雌のアルビノの毛のないラットはイソフラン誘発麻酔下で卵巣が切除され、そして実験前に１０日間回復させた。これによりその体からいかなるエストロゲンも排除されたはずである。
【００５２】
血液採取：血液サンプル（５００μｌ）はエストラジオール（ｎ＝5）およびエストラジオールフォスフェート（ｎ＝6）製剤の両方の塗布後、０、１、２、４，８，１６および２４時間後に意識のある拘束したラットの尾の血管から得られた。血液はＥＤＴＡチューブに集められ、それから５０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。血漿は除去され、分析まで−８０℃で保管した。
【００５３】
経皮性製剤の準備と塗布：エストラジオールとエストラジオールフォスフェートはVital Health Sciences Pty Ltdによって提供され、および実施例１からのキャリアークリームにおける塗布の約１時間前に２０μｇ/ｍｇの濃度で準備した。
【００５４】
エストラジオールフォスフェート（ＥＰ）：ＥＰ4.3 mg はアセトン（0.25 mg/ml）17.3 ml 中に溶かした。２０μlをエッペンドルフチューブに移し、そして溶媒は窒素細流中で蒸発させた。それから実施例１からのキャリアークリームの0.999 g を加え、そしてガラス棒を使って混ぜ、そして遠心分離した。これは５回繰り返した。最終濃度＝4.90  μg/mlであった。
【００５５】
エストラジオール（Ｅ）：6.7  mg は無水エタノール26.8 ml 中に溶かした（0.25 mg/ml）。２０μｌをエッペンドルフチューブに移し、そして溶媒は窒素細流中で蒸発させた。それから実施例１からのキャリアークリーム1.003 g を加え、およびガラス棒を使って混ぜ、そして遠心分離した。これは５回繰り返した。最終濃度＝4.89 μg/mlであった。
【００５６】
エタノール中のＥおよびＥＰ製剤：ＥおよびＥＰ0.5 mg をエタノール50 ml と混ぜた。これらの溶液２０μｌを皮膚に直接塗布した。
【００５７】
各製剤を麻酔したラットの背面のフェルトマーカーで印をつけた約4 cm2 の範囲の皮膚に塗布した。約30±3.2 ｍgの塗布製剤（ＥまたはＥＰを0.15±0.02μg含む）は、その場所に曲がったガラス棒アプリケーターを使って塗布した。その製剤を皮膚に吸収されたように見えるまで、すり込んだ。これは５分から１０分かかった。この手順の間、製剤の粘度におけるいかなる変化も記録した。塗布した製剤の量および塗布面積は各動物ごとに測定した。
【００５８】
器官の採集：２４時間の観察後、動物は麻酔薬を過剰投与して殺した。すべての器官を取り出し、秤量し、そして分析まで−８０℃で保管した。
【００５９】
全エストロゲンＲＩＡ：ＲＩＡは商業的に入手可能な１７β-エストラジオールおよびエストロゲンについて１００％交差反応をともなうエストロゲンキット（ＩＣＮ pharmaceutical、カタログ＃07−140205）を使用して行った。本分析のためのスタンダードカーブの範囲は2.5-100 pg/ml(ｒ2=-0.943)である。抽出率はラットの血漿および器官のための抽出溶媒としてジエチルエーテルを使用した一連のスパイキングアッセイを通して決定され、９０から９８％の間だった。この溶剤は本分析に干渉しなかった。１００μｌの血漿量を分析に使用した。
【００６０】
結果
製剤の塗布：その動物の背面における製剤の塗布の平均面積（±ＳＥ）はＥおよびＥＰグループに対して、それぞれ 3.88±0.03 cm2 および3.88±0.07 cm2 であった。ＥおよびＥＰグループにおけるこれらの製剤の平均塗布量は0.15±0.02 μgであった。その実験において紅斑または水腫のような炎症の兆候はなんら得られなかった。
【００６１】
血漿中の全エストロゲン：エストロゲン（スタンダードカーブの2.5-100 pg/ml の範囲）の有意なレベルが動物の両方のグループに存在し、Ｅグループでは塗布後２,８および１６時間で、16.63±8.18(±ＳＥを意味) pg/mlの血漿の最大濃度が測定された、そしてＥＰグループでは塗布後１６時間後で49.16±13.21 pg/mlの血漿の最大濃度が測定された
（図１）。ｔ＝0でとられる基準となる測定値は血漿に存在するバックグランドレベルを補正するために全値から差し引かれている。
【００６２】
議論
この研究は雌の毛のないラット中のＥＰおよびＥの経皮性送達を評価した。血液中のエストラジオールの濃度はエストラジオールフォスフェートを塗布して２４時間にわたり一貫して高かった（統計的に有意Ｐ＜0.01 ２,４及び１６時間で）。等量の塗布されたＥＰの投薬量においてはＥ処理と比べてホルモンの血漿濃度が少なくとも２倍という結果になった。これは明らかに実施例１由来のキャリアーにおいて送達されたＥＰが、Ｅの送達より効果的な製剤を提供しているであろうことを示す。興味深いことに、実施例１からのキャリアーにおけるＥの塗布後、送達された遊離エストラジオールの量もまた非常に有意であった。もっとも重要なことには、ＥまたはＥＰ処理はどちらも、いかなる炎症の兆候を生じさせなかった。
【００６３】
Morgan et al.(Morgan TM,O’Sullivan HMM,Reed BL,Finnin Bc.Transdermal Delivery of Estradiol in Posimenopausal Women with a Novel Topical Aerosol.J. Pharm.Sci.1998;87(10):1226-1128)は日ごとに３０cm2 以上含むスキンエンハンサーPadimate Oを含むキャリアーにおいてエストラジオール３mgを４人の閉経後の女性に９日間送達した。その実験の最後に、投薬後２４時間のエストラジオールの平均血液レベルはエストラジオールとエストロンの両方を計測する商業的な放射性免疫アッセイキットで５３±7 pg/mlであると計測された。これは13±5 pg/mlの循環しているエストラジオールの基準値レベルから４倍の増大を示し、そして臨床的に関連する用量あると思われた。
【００６４】
対照的に、この例において、ＥおよびＥＰグループについてそれぞれ、その動物の背面の3.88±0.03 cm2 および3.88±0.07 cm2 の平均表面積に0.17μｇ塗布すると、塗布後１６時間のＥグループにおいて16.63±8.18（±ＳＥを意味する） pg/mlの最大の血漿濃度、および同じ時間のＥＰグループにおいて49.16±13.21 pg/mlの最大の血漿濃度が検出された（図１）。動物モデルと人間の皮膚の間の皮膚の生理における違いを無視すれば、たとえ実質的により少ない用量が本発明に従うキャリアーを含む組成物において使用されたとしても、だいたい同じエストラジオールレベルに達する。
【００６５】
例え、異なるモデルが使用されても、他の実験との比較が本発明に従うキャリアーが皮膚を通してエストラジオールの輸送を促進することを明らかにする。
【００６６】
結論
本試験はエストラジオールの有用な用量が毛のないラットのモデルに基づき送達されうることを明らかにし、そのことは、毛のないラットの特性の人間の皮膚の特性に対する類似性から、本発明で提案した方法により調合されたエストラジオールフォスフェートがホルモン置換治療に有効であることを推測させうる。
【００６７】
興味深いことに、この例において利用された極端に少ない薬剤用量は有効なにエストラジオールの治療用量を送達させた。そのキャリアーは血液中に遊離エストラジオールの有意な量を放出させることができることは非常に明らかであり、そしてそれゆえ標的部位での所望された生物的反応を促進するであろう。
【００６８】
その試験もまた、処理された両腕において利用されたキャリアーがエストラジオールフォスフェートだけでなくエストラジオールの吸収を向上することを証明した。これは
キャリアー依存性の吸収刺激が使用した薬剤の類似体から独立していたことを示唆する。
【００６９】
理論によって拘束されることを望むわけではないが、輸送の有意な向上は角質層中の脂質と本発明によるキャリアーとの温和な相互作用が原因するようであり、そして本発明のキャリアーの独特な界面系に関係するであろう。
【００７０】
以前に出版されたエタノール製剤についての文献と矛盾なく、エストラジオールの、より多い量が皮膚を通して送達される。これはおそらく、角質層を取り除いたことによる細胞の破壊が原因である。しかしながら、エタノール製剤を塗布した後、皮膚の炎症、紅斑および損傷が観察された。実施例１に由来するキャリアーが使用された時、皮膚の炎症はなかった。
【実施例３】
【００７１】
3Ｈ-エストラジオール（3Ｈ-Ｅ）および 3Ｈ-エストラジオールフォスフェート（3Ｈ-ＥＰ）の急性経皮性浸透を本実施例において評価した。
【００７２】
方法
動物：６匹の雌のアルビノの毛のないラットを本実験において使用した（n=３ 処理されたグループ）。
経皮性製剤の準備および塗布：3Ｈ-Ｅおよび3Ｈ-ＥＰはVital Health Sciences Pty Ltdによって提供され、そして塗布の約１時間前に、実施例１由来のキャリアークリームに処方した。
【００７３】
3Ｈ-Ｅおよび3Ｈ-ＥＰ２０μｌを１ｍｌのエッペンドルフチューブに分別した。3Ｈ-Ｅおよび3Ｈ-ＥＰからの溶媒は窒素細流下において蒸発した。完全に乾燥させたら、実施例１のキャリアークリーム0.498ｇを3Ｈ-Ｅに、および0.502ｇを3Ｈ-ＥＰに加え、そしてガラス棒で混ぜ、そして１分間遠心分離した。これは５回繰り返した。
【００７４】
各製剤を麻酔した消えないフェルトペンで印をつけた約４ｃｍ2においてラットの背面の皮膚に塗布した。約３０ｍｇの製剤（3Ｈ-Ｅおよび3Ｈ-ＥＰを５μｇ含む）を曲がったガラス棒アプリケーターでその部位に塗布した。その製剤を皮膚に吸収されたように見えるまで、すり込んだ。これは５分から１０分かかった。動物が製剤を取り去ることを防ぐため、Tegaderm（３Ｍ）絆創膏をその領域に適用した。
【００７５】
結果および議論
この実験は、本発明を使用して経皮的適用すると、ＥＰがより容易に吸収されたことを証明する（図３）。薬剤の形態がエストラジオール送達の量の向上に有意な影響を持つが、キャリアーが両方の薬剤類似体の皮膚を通した急速な輸送を促進することに注目することが重要である。個々の皮膚層の分析はまたこの実験において行われ、塗布後２４時間に極小のＥまたはＥＰが皮膚に残存することを示した。より多い量のＥＰが２４時間の間に皮膚を通して移動するために、より高いレベルのＥＰが表皮および真皮で発見された。
【００７６】
結論
その試験は毛のないラットのモデルに基づいて、有用なエストラジオールの用量がおそらく送達されることを証明した。そのキャリアーが血液中の遊離エストラジオールの有意な量を放出することができたことは極めて明らかである。それゆえに、作用部位で所望される生物的反応を促進しているようである。
【００７７】
その試験はまた、双方の処理を施した腕において利用されたキャリアーがエストラジオールフォスフェートだけでなくエストラジオールの吸収を向上することを証明した。これは依存性の吸収刺激が使用した薬剤の類似体から独立していたことを示唆する。
【実施例４】
【００７８】
実施例１由来のキャリアーが使用されている毛のないラットのモデル中のテストステロンおよびテストステロンフォスフェートの経皮性送達はこの例により調査された。
【００７９】
方法
動物：１２匹の雌のアルビノの毛のないラットはイソフラン誘発麻酔下で卵巣が切除され、そして実験前に１５日間回復させた。
【００８０】
血液採取：血液サンプル（５００μｌ）はテストステロン（ｎ＝6）およびテストステロンフォスフェート（ｎ＝6）製剤の両方の塗布後、０、１、２、４，８，１６および２４時間後に意識のある拘束したラットの尾の血管から得られた。血液はＥＤＴＡチューブに集められ、それから５０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。血漿を除去し、分析まで−８０℃で保管した。
【００８１】
経皮性製剤の準備と塗布：テストステロンとテストステロンフォスフェートはVital Health Sciences Pty Ltdによって提供され、そして塗布の約１時間前に実施例１由来のキャリアークリームにおいて準備された。
【００８２】
テストステロンフォスフェート（ＴＰ）：ＴＰ4.41 mg を15 ｍｌの水に溶かし、それからエタノールで100 ｍｌとした。１ｍlをエッペンドルフチューブに移し、および溶媒は窒素細流中で蒸発させた。実施例１由来のキャリアークリーム1.00 g を加え、そしてガラス棒を使って混ぜ、そして遠心分離した。これを５回繰り返した。
【００８３】
テストステロン（Ｔ）：3.94 mg のＴを15 ml の水に溶かし、およびエタノールで100 ｍｌとした。１ｍlをエッペンドルフチューブに移し、および溶媒は窒素細流中で蒸発させた。実施例１由来のキャリアークリームの1.00 g を加え、そしてガラス棒を使って混ぜ、そして遠心分離した。これを５回繰り返した。
【００８４】
各製剤を麻酔したラットの、消えないフェルトマーカーで印をつけた約4 cm2 の範囲の背面の皮膚に塗布した。製剤（ＴまたはＴＰを1μg含む）の約30 ｍgの塗布はその場所に曲がったガラス棒アプリケーターを使って塗布した。その製剤を皮膚に吸収されたように見えるまで、すり込んだ。これは５分から１０分かかった。この手順が記録されるあいだ、製剤の粘度におけるいかなる変化も記録した。
【００８５】
結果
製剤の塗布：ＴおよびＴＰグループにおけるこれらの製剤の塗布の平均量は、1μｇ±0.02μｇであった。
【００８６】
血漿中の全テストステロン：テストステロン（スタンダードカーブの2.5-100 pg/ml の範囲）の有意なレベルが動物の両方のグループに存在し、Ｔグループでは塗布後１,８および１６時間で30.90±11.00(±ＳＤを意味) pg/mlの血漿の最大濃度が測定された。ｔ＝0でとられる基準となる測定値は血漿に存在するバックグランドレベルを補正するために全値から差し引かれている。
【００８７】
雄のテストステロンの標準レベルは 437 から 707 pg/mlであり、および雌では24 から 47 pg/mlである。この実験で塗布した用量１μｇは雌において治療的な用量を供する。
【００８８】
議論
血液中のテストステロンの濃度はテストステロンおよびテストステロンフォスフェートが塗布されると、ともに上昇した。これは実施例１由来のキャリアーにおける処方されたテストステロンとテストステロンフォスフェートがテストステロンの輸送にとって有効な製剤を提供することを示唆する。
【実施例５】
【００８９】
実施例１由来のキャリアーを使用したラット中のアトロピンの経皮性送達はこの実施例において調査された。
【００９０】
静脈内（ＩＶ）実験
意識のある Sprague Dawley ラットに１回 2 mg/kg でアトロピンスルフェート（Sigma カタログ＃Ａ−0257）（ｎ＝3）またはアトロピンフォスフェート（ｎ＝4）のいずれかのＩＶ注射をし、および６時間観察した。いずれかのアトロピン製剤の投薬前に、すべての動物（ｎ＝７）に生理食塩水注射をした。結果は図５および図６で示す。
アトロピンスルフェートについての薬剤投与前ベースラインに対する投薬後の最初の６０分に関し、Ｐ＜0.05 はであった。
前もって２４時間処理されたラットに与えられたアトロピンスルフェートについての薬剤投与前ベースラインに対する投薬後の最初の3０分に関し、Ｐ＜0.05であった。
無垢なラットに与えたアトロピンフォスフェートについての薬剤投与前ベースラインに対する投薬後の最初の３０分に関し、Ｐ＜0.05であった。
【００９１】
結果
生理食塩水（ｎ＝７）は５分にわたりで、心拍数（ＨＲ）および平均動脈圧（ＭＡＰ）において無視できるほどの効果しかなかった。
【００９２】
予測したように、アトロピンスルフェート（ｎ＝３）はＨＲ（1-way ANOVA、反復測定値,P＜0.05）の有意な増大を引き起こしたが、ＭＡＰは増大させなかった。この効果は注射後約６０分間持続した。
【００９３】
アトロピンフォスフェート（ｎ＝４）はＨＲ（1-way ANOVA、反復測定値,P＜0.05）の有意な増大を引き起こしたが、ＭＡＰは増大させなかった。この効果は注射後約３０分間持続した。
【００９４】
アトロピンスルフェートはまた、アトロピンフォスフェートを前もって受けていた（i.e.後）４匹のうち、３匹のラットに与えられた。アトロピンスルフェートはアトリオピンフォスフェートにみられたのと極めて近いＨＲ（1-way ANOVA 、反復測定値,P＜0.05）の増加の経時的変化を引き起こした。
【００９５】
経皮性絆創膏の実験
意識のある Sprague Dawley ラットはアトロピンスルフェート（２０mg/kgで、実施例１によるキャリアーで調合された、 n=6）またはアトロピンフォスフェート（２０mg/kgで、実施例１によるキャリアーで調合された n=6）を受けた。これは局所的に背面の後半部（２４時間前に毛を剃られ、`除毛剤`で処理された）に塗布された。薬剤／媒体にさらされた皮膚面は、それからTegaderm（３Ｍ）絆創膏で覆い、そして２４時間観察した。意識のある Sprague Dawley ラットはまたアトロピンスルフェート２mg/kgを静脈注射によって受けた。結果は図７および図８で示す。
【００９６】
薬剤投与前ベースラインに対するアトロピンスルフェートの投薬後６時間について、Ｐ＜0.01であった（1-way RM ANOVA ）。
媒体に対するアトロピンファスフェートの効果は、Ｐ＜0.01であった（2-way RM ANOVA ）。
薬剤投与前ベースラインに対するアトロピンフォスフェートの投薬後５分について、Ｐ＜0.01であった（1-way RM ANOVA ）。
媒体に対するアトロピンフォスフェートの処理／時間 相互作用について、十Ｐ＜0.05であった（2-way RM ANOVA ）。
【００９７】
結果：
実施例１に由来するキャリアーは単独では（ｎ＝７）２４時間にわたって、心拍数（ＨＲ）および平均動脈圧（ＭＡＰ）において無視できるほどの効果を有した。
【００９８】
ラットにおいて、アトロピンスルフェートは６時間にわたり、ＨＲを急速に、および増大を持続させた。これは２４時間までに回復した。この効果は媒体処理されたグループ（2-way ANOVA 、反復測定,P＜0.01）に対するのと同様に、その薬剤投与前ベースラインおよびＩＶ投与したアトロピンスルフェート（1-way ANOVA 、反復測定,P＜0.01）に対して有意であった。
【００９９】
アトロピンフォスフェートはＨＲを増大させたが、たった５分だけであり（P＜0.01）、そしてこの頻脈は急速に衰えた。この効果は媒体処理されたグループ（2-way ANOVA 、反復測定,P＜0.01）に対するのと同様に、その薬剤投与前ベースラインに対して有意であった。アトロピンフォスフェートはＭＡＰを変化させなかった。
【０１００】
結論
実施例１に由来するキャリアーにおいて調合されたアトロピンは、ＩＶおよび局所的投薬（時間以内）により与えられると、統計的に有意な頻脈を起こした。アトロピンフォスフェートはＩＶ投与ではアトロピンと似たように活性であるようにみえたが、局所的投薬では弱い効果だった。重要なことは、心拍数が変化しているあいだに平均動脈血圧は有意に変化しなかった。これは心拍数の変化はアトロピンの有効な経皮性送達が原因であり、実験動物または他の実験条件の操作によっては引き起こされないことを強く示す。
【実施例６】
【０１０１】
実施例１由来のキャリアーを使用するラットにおけるモルヒネの経皮性送達はこの例において調査された。
【０１０２】
方法
動物：グループ当たり意識のある Sprague Dawly ラット（〜280ｇ）ｎ＝6。
【０１０３】
経皮性製剤の準備：モルヒネＨＣｌ，Glaxo Australia Pty Ltd(カタログナンバー22284)。モルヒネの遊離塩基は炭酸カリウムを加えることにより、水溶液中でＨＣｌの形態から得られた。 このプロセスはMonash大学で完成された (モルヒネＨＣＬはクリームに使用できなかったため、遊離塩基が使用された）。
【０１０４】
実施例１からのキャリアーにおけるモルヒネ（10ｍｇ／ｋｇ）を塗布し、および腹腔内投与で同じ用量で与えたものと比較した。その効果はモルヒネの作用として、ラットの熱に対する遅延反応を、足をひっこめるまでにかかる時間の遅れにより測定された。
【０１０５】
腹腔内（i.p.）製剤：モルヒネＨＣｌ，Glaxo Australia Pty Ltd(カタログナンバー22284)を、生理食塩水に溶かした。３および１０ｍｇ／ｋｇ。
【０１０６】
試験方法
その足のうらの無痛覚計は小さな実験動物における速くて、有効な無痛覚レベルのスクリーニングのために設計された。その装置は動物の後ろ足に熱源（〜４５℃の赤外線から）をあてるために使用し、そして足を引っ込めるまでにかかった時間（足のはらいのけ時間）を測定した。そのホットプレートは一定の表面温度を提供し、0.1℃の精度を有する内蔵デジタル温度計および0.1秒の精度を有するタイマーを有する。動物をホットプレート上に置き、プレートを覆ったクリアーアクリルゲージに閉じ込め、そして足なめ作用を観察した。足なめ作用の前の増加した時間は無痛覚を示している。
【０１０７】
全身の無痛覚実験
意識のある Sprague Dawly ラットを生理食塩水または、３および１０ｍｇ/ｋｇの２通りの用量で分けたラットのグループへのモルヒネヒドロクロライド（ＨＣｌ）のいずれかの腹腔内（i.p.）注射の前および後の無痛覚試験において試験した。
【０１０８】
その結果は図９に示す。生理食塩水（n=6）は潜伏時間において効果はなかった。モルヒネは潜伏時間において用量依存性の遅延を引き起こすようにみえ、無痛作用を示唆している（ポジティブコントロール）。
【０１０９】
経皮性絆創膏の実験
任意の経皮性絆創膏の適用の少なくとも２４時間前にラットの皮膚の背面の後半部に体毛除去クリームを塗った（麻痺下で）。意識のある Sprague Dawlyラット（〜４００グラム）は実施例１由来のキャリアーにおいてモルヒネ１０ｍｇ/ｋｇを受けた。この用量はモルヒネＨＣｌの腹腔内注射の図９の結果に基づいて選択した。薬剤／媒体にさらした皮膚面はそれからTegaderm 絆創膏で覆った。すべての動物はモルヒネの投与の前および後に無痛覚テストを受けた。
【０１１０】
最初の試験日に、３匹の動物は実施例１（媒体）由来のキャリアーのみを受け、そして３匹は実施例１からのキャリアー中のモルヒネを受けた。次の日、すべての６匹のラットが媒体またはモルヒネのいずれかを与えられるように、２日間のクロスオーバー計画において処理を繰り返した。その実験をラットのセカンドセットで繰り返した。その結果は図１０から図１３において示す。キャリアー製剤のみ（n=6）は足の払いのけ時間において、効果を有さなかった。実施例１由来のキャリアー（n=6）におけるモルヒネは足の払いのけ時間を増大した。クロスオーバー計画は１日目または２日目のいずれでも、似た結果を表し、２日目の媒体試験（１日目にモルヒネ試験をした後の同じラットにおける）は１日目の他のラットにおける媒体試験と近似していたことから、モルヒネは２４時間後において持続した効果を有さなかったことを示している。しかしながら、１日目に試験したモルヒネデータの詳しい調査によれば（図１２）、このラット群はモルヒネの投与前に高いベースラインを有し、およびこれはこのグループでのモルヒネ投与後の潜伏時間における比較的小さな増加に貢献したであろう。
【０１１１】
結果
反応の経時的変化はすべてのグループで近似しており、即ち、このモルヒネの効果は塗布後、早くも１５分で現れた。最大の効果がグループ間においてとても近似しているようにみえ、１５−９０分という近似した遅延反応時間を伴った（即ち、これらの時間の間の効果にいてプラトーであった）。
【０１１２】
モルヒネ処理を与えられたときのラットの‘行動と外観‘、は眠気および体のわずかな衰えであり、それらは経皮的に塗布されたときの、その系におけるモルヒネの効果の程度のさらなる兆候である。これはその薬剤が皮膚を通して輸送され、およびいくつかの中枢神経系媒介効果を有したことを示す。塗布した部位の周りには紅斑または炎症の兆候はなかった。
【０１１３】
結論
結論において、このデータは本発明に従うキャリアー系を使用して、モルヒネが皮膚を通して送達され得ること、および中枢神経系効果を媒介することの予備の証拠を提供する。すべてのケースにおいて、塗布の場所に関係した紅斑または炎症の兆候はなかった。
【０１１４】
実施例１由来のキャリアーにおけるモルヒネは足の払いのけ時間を増大させ、モルヒネの経皮性塗布に続いて、無痛覚が生じたことを示唆している。
【０１１５】
本明細書において使用している‘含んで成る‘なる語および‘含んで成る‘の形式はいかなる異なるもの、または追加するものを除外するために、本発明を制限するものではない。
【０１１６】
本発明における修正および改良は当業者において、容易に自明であろう。このような修正および改良は本発明の範囲内において示されている。
【図面の簡単な説明】
【０１１７】
【図１】エストロゲン（Ｅ）またはエストロゲンフォスフェート（ＥＰ）を約0.17μgを含む製剤を塗布された、卵巣を切除された毛のないラットから得た血漿のサンプル中の計量された総エストロゲン（±ＳＥを意味する）の変化。
【図２】エタノール中のエストロゲン（Ｅ）またはエストロゲンフォスフェート（ＥＰ）を約0.17μgを含む製剤を塗布された、卵巣を切除された毛のないラットから得た血漿のサンプル中の計量された総エストロゲン（±ＳＥを意味する）の変化。
【図３】トリチウム化エストロゲンとトリチウム化エストロゲンフォスフェートを塗布した２４時間後の卵巣を切除された毛のないラットにおけるトリチウム化エルトロゲンとトリチウム化エルトロゲンフォスフェートの吸収％。
【図４】ＴまたはＴＰ約1.00μg±0.02μgを含む製剤を塗布した、卵巣を切除された毛のないラットから得た血漿のサンプル中の計量された総テストステロン（±ＳＤを意味する）の変化。
【図５】６時間（上図）及び２時間（下図）にわたり記録された意識のあるラットにおける心拍数に対するアトロピン（2 mg/kg,IV）製剤の効果。矢印は薬剤の投薬の時間。
【図６】６時間（上図）及び２時間（拡張、下図）にわたり記録された意識のあるラットにおける平均的な動脈の圧力（ＭＡＰ）でのアトロピン（2 mg/kg,IV）製剤の効果。矢印は薬剤の投薬の時間。
【図７】24時間（上図）及び２時間（拡張、下図）にわたり記録された意識のあるラットにおける心拍数に対するアトロピン（20 mg/kg,IV）製剤の効果。矢印は薬剤の投薬の時間。
【図８】24時間（上図）及び２時間（拡張、下図）にわたり記録された意識のあるラットに対する平均的な動脈の圧力（ＭＡＰ）でのアトロピン（20 mg/kg,IV）製剤の効果。矢印は薬剤の投薬の時間。
【図９】２時間にわたりテストされた足の払いのけ時間に対する腹腔内モルヒネ3または10 mg/kgの効果。
【図１０】２時間にわたりテストされた足の払いのけ時間に対するキャリアーに存在するモルヒネ10 mg/kgの効果（pooled data）。
【図１１】コントロール媒体（each n=3）またはモルヒネ（each n=3）について日平均値としてプロットされた、図2からのデータ。
【図１２】２時間にわたりテストされた足の払いのけ時間に対するキャリアーに存在するモルヒネ10 mg/kgの効果（pooled data）。
【図１３】コントロール媒体（each n=3）またはモルヒネ（each n=3）について日平均値としてプロットされた、図4からのデータ。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【手続補正書】
【提出日】平成16年3月5日(2004.3.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
Morgan,TM.et al(1998) ‘Enhanced transdermal delivery of sex hormones in swine with a novel topical aerosol;J pbarm.Sci.87（10）： 1219-1225による研究では浸透性エンハンサー、パディメイトOを含む新規の計量投与式局所エーロゾルを使用し、豚でのテストステロンとエストラジオールの経皮性送達を調査した。その著者はその投薬システムが適応性を与え、そしてより広い塗布面積を供するために移動されうると主張する。しかしながら、その計量投与型装置は効果的に使用するためには位置調整および手作業での器用さを必要とする。


【国際調査報告】
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