(57)【要約】尿管の病原体による感染症の治療用医薬組成物、より詳細には、任意にＮ−アセチルシステインと組み合わせたフォスフォマイシンを含有する組成物。【特許請求の範囲】
【請求項１】
大腸菌（Eschericia coli）及びその他の尿路の病原体によって生産されたバイオフィルムを阻害するか、又は破壊するためのフォスフォマイシンを含有する医薬組成物を製造する方法。
【請求項２】
大腸菌（Eschericia coli）及びその他の尿路の病原体によって生産されたバイオフィルムを阻害するか、又は破壊するＮ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）の活性を増大させるためのフォスフォマイシンを含有する医薬組成物を製造する方法。
【請求項３】
大腸菌（Eschericia coli）及びその他の尿路の病原体によって生産されたバイオフィルムを阻害するか、又は破壊するための、ＮＡＣ及びフォスフォマイシンを含有する医薬組成物、並びにそれを使用する方法。
【請求項４】
大腸菌（Eschericia coli）及びその他の尿路の病原体によって生産されたバイオフィルムの予防的処置又は破壊的処置用のＮＡＣを含有する医薬組成物を製造する方法。
【請求項５】
フォスフォマイシンを、ナトリウム塩又はトリハイドロキシメチルアミノメタンの塩として使用する請求項２〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
大腸菌（Eschericia coli）及びその他の尿路の病原体によって生産されたバイオフィルムを阻害するか、又は破壊する医薬組成物を製造するためにフォスフォマイシンを使用する方法。
【請求項７】
大腸菌（Eschericia coli）及びその他の尿路の病原体によって生産されたバイオフィルムを阻害するか、又は破壊する医薬組成物を製造するためにフォスフォマイシンとＮＡＣの両方を使用する方法。
【請求項８】
フォスフォマイシンが、ナトリウム塩又はトリハイドロキシメチルアミノメタンの塩の形である請求項６又は７に記載のフォスフォマイシンを使用する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、尿路の病原体による感染症の治療用医薬組成物に関し、特に、任意にＮアセチルシステインを組み合わせたフォスフォマイシンを含む組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｎ−アセチルシステイン（以下、ＮＡＣと呼ぶ）（メルクインデックス１３版第９４頁Ｎｏ．９０）は、ムコ多糖類を加水分解する活性と抗酸化活性を有する既知の薬剤であり、例えば、イタリアにおいて「FLUIMUCIL」の商標の下、販売されている。
【０００３】
フォスフォマイシン（メルクインデックス１３版第４２８１頁Ｎｏ．４２７７）は、抗菌活性を有する既知の薬剤であり、イタリアにおいて、トリハイドロキシメチルアミノメタンの塩として、「MONURIL」の商標の下、販売されている。
【０００４】
尿路の種々の病原体、例えば大腸菌（Eschericia coli）は、細菌の接着及びバイオフィルムの形成を促進する豊富な細胞外ムコポリ多糖体化合物を生産する能力を有する。
【０００５】
バイオフィルムは、これらの微生物によって引き起こされる感染症において主要な病原性因子であることが示されている。
【０００６】
多くの場合、バイオフィルムによって、人工器官又はカテーテルなどの外面に細菌がコロニーを形成できる。
【０００７】
バイオフィルムの内側では、免疫応答と抗生物質の両方を防ぐ環境で細菌が増殖できる。
【０００８】
したがって、バイオフィルムは、抗生物質治療において重要な問題であり、多くの場合、感染症再発の原因である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
それ故に、バイオフィルムの形成を阻害するか、又は既存のバイオフィルムを破壊することが可能な物質が必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
ＮＡＣは、緑膿菌（P．aeruginosa）のバイオフィルムを破壊する能力（Antimicrob. Agents Chemother.，35，1258，（1991））、及び表皮ブドウ球菌（S．epidermidis）によるバイオフィルムの形成を阻害する能力（J．Ant．Chem．，39，643，（1997））を有するものとして認識されている。
【００１１】
本発明者らは、フォスフォマイシンが、病原体によって形成されたバイオフィルムの量を減少させることができることを見出した。
【００１２】
また、本発明者らは、ＮＡＣが、病原体のバイオフィルムの形成を阻害するか、又は破壊するフォスフォマイシンの能力を増大させることができることを見出した。
【００１３】
以下、大腸菌（Eschericia coli）を中心に説明するが、当然のことながら、以下に述べることはバイオフィルムを生産できるその他の尿路の病原体にも適用できる。
【００１４】
したがって、本発明の第一の目的は、大腸菌（Eschericia coli）及びその他の尿路の病原体によって生産されるバイオフィルムを予防的又は破壊的に処置するフォスフォマイシンを含有する医薬組成物を製造する方法を提供することにある。
【００１５】
また、本発明の第二の目的は、大腸菌（Eschericia coli）及びその他の尿路の病原体によって生産されるバイオフィルムを阻害するか、又は破壊するフォスフォマイシンの能力を増大させるために用いることができるNACを含有する医薬組成物を製造する方法を提供することにある。
【００１６】
さらに、本発明の第三の目的は、フォスフォマイシンとＮＡＣとを含有する医薬組成物、及び大腸菌（Eschericia coli）及びその他の尿路の病原体によって生産されるバイオフィルムを阻害するか、又は破壊するためにそれを使用する方法を提供することにある。
【００１７】
最後に、本発明の第四の目的は、大腸菌（Eschericia coli）及びその他の尿路の病原体によって生産されるバイオフィルムを阻害するか、又は破壊するために使用することができるＮＡＣを含有する医薬組成物を製造する方法を提供することにある。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
上記の組成物は、大腸菌（Eschericia coli）がバイオフィルムによって保護されている場合でも大腸菌（Eschericia coli）を攻撃することを可能にする。
【００１９】
フォスフォマイシンは、トリハイドロキシメチルアミノメタンの塩又はナトリウム塩として使用することが好ましい。
【００２０】
既知の添加物を用い、かつ医薬分野で使用される従来の方法に従って、本発明の組成物の製造を行う。
【００２１】
選択した投与経路に応じて、本発明の組成物は、注射用バイアル、又は経口用の固形組成物、例えば、カプセル、錠剤及び発泡錠の形となっていてもよい。
【００２２】
大腸菌（Eschericia coli）感染症を治療するのが望ましい場合、好ましい投与経路は、経口又は注射である。
【００２３】
本発明の組成物は、予防的治療に用いることができる。
【００２４】
従来の抗生物質治療が、細菌上のバイオフィルムの保護作用が原因で効き目が弱いものであることが判明している場合、前記組成物を、この抗生物質治療において補助剤として使用することができる。
【００２５】
フォスフォマイシンの有効量は、200〜3000ｍｇ／日であって、１回又は複数回の投与で服用される。
【００２６】
ＮＡＣの有効量は、128〜2000ｍｇ／日であって、１回又は複数回の投与で服用される。
【００２７】
上記の投与量は、フォスフォマイシン及びＮＡＣのそれぞれを基にした既知の薬剤について現在投与されている投与量に近いので、好ましいものである。しかしながら、当業者であれば、本発明の範囲から逸脱することなく投与量及び投与回数を変更することができる。
【００２８】
以下の実施例は、本発明をより詳細に説明するためのものであって、本発明はこれらの実施例によって何ら制限されるものではない。
【実施例】
【００２９】
大腸菌（Eschericia coli）によって生産されたバイオフィルムに対するＮＡＣ及びフォスフォマイシンの効果を、ジェノバ大学の微生物コレクション由来の169、255、1263、1293と名付けた４種の株について評価した。
【００３０】
（実施例１）
バイオフィルムの形成及び定量
バイオフィルムの形成を、Ｕ底のポリスチレン・マイクロプレート（Corning Incorporated，NY）にて、分光光度法で測定した。
【００３１】
詳細には、バイオフィルムの形成に対するＮＡＣの影響を以下のようにして評価した。トリプティックソイブロス（Tryptic Soy Broth，TSB）にグルコース（0.25％）を添加したもの（TSBG）で一晩培養した培養物をTSBGで100倍希釈した。これらの懸濁液（各100μl）を、8mg/ml〜0.007mg/mlの範囲内の濃度のＮＡＣの適切な希釈物にそれぞれ添加した。37℃で24時間インキュベートした後、マイクロプレートを、10mMリン酸緩衝液pH7.4（PBS）で３回洗浄し、ブアン（Bouin）固定液で処理し、その後クリスタルバイオレット（0.01％）で染色した。
【００３２】
マイクロプレートの壁に接着しているバイオフィルムをPBSで洗浄することによって回収し、10％サルコシル内で懸濁し、分光光度法で492nmにおいて測定した。
【００３３】
ＮＡＣ及びフォスフォマイシンを単独で用いて、又は組み合わせて大腸菌（Eschericia coli）を処理した後のバイオフィルムの残量を計算するのに同様の方法を用いた。このために、２種の成熟度が異なるバイオフィルム、すなわち、初期（5時間）のバイオフィルムと、十分に圧密化したバイオフィルム（48時間）を、適当な濃度（8mg/ml〜0.007mg/ml）のＮＡＣに生体内で尿路において到達できる濃度のフォスフォマイシンを添加したものにさらした。
【００３４】
同時に、このような方法で処理したバイオフィルムを、依然として接着している細胞を分散させるためにソニケーションし、種々の処理で生き延びた生存ユニットを計算するために、適宜希釈した後、栄養豊富な培地に蒔いた。
【００３５】
（実施例２）
バイオフィルムの形成及び破壊に対するＮＡＣの効果と、細菌の生存度へのＮＡＣの影響
試験した大腸菌（Eschericia coli）のすべての株において、使用し、培地に添加した種々の濃度のＮＡＣによって、細菌の成長に明らかな変化が生じなかったが、73.8％〜35.9％のバイオフィルムが減少し、４種の株のうち、３種の株において50％を超えていた。
【００３６】
50％を超える（51.7％、64.0％、58.4％）減少が、大腸菌（Eschericia coli）の初期のバイオフィルムにおいて記録され、同様に、成熟したバイオフィルムでは、４種の株のうち３種の株において減少が50％を超えており、大腸菌（Eschericia coli）169では、減少は25.2％であった。
【００３７】
バイオフィルムの細胞に対し使用した最大濃度でのＮＡＣの活性によって、形成段階のバイオフィルム、圧密化したバイオフィルムのそれぞれにおいて、14.6％〜71.4％、9.1％〜54.2％のCFU／mlの減少がもたらされた。
【００３８】
(実施例３)
バイオフィルムの破壊及び細菌の生存度に対するフォスフォマイシン個別使用の効果
使用した最大濃度（2000mg/ml）のフォスフォマイシンによって、若いバイオフィルム及び成熟したバイオフィルムにおいて、それぞれ40％〜56.9％、及び41.5％〜49.3％のバイオフィルム量の減少がもたらされた。
【００３９】
128mg/mlでも、フォスフォマイシンは、30％〜48.1％及び27.5％〜44.7％のポリ多糖物質の減少をもたらした。
【００４０】
使用した最大濃度（2000mg/ml）において、フォスフォマイシンは、初期のバイオフィルムにおいては98.0％〜99.5％、充分に圧密化したバイオフィルムにおいては36％〜85.7％の生存ユニットの減少をもたらした。
【００４１】
128mg/mlのフォスフォマイシンによって、１より小さい対数のCFU／mlの減少がもたらされた。
【００４２】
(実施例４)
バイオフィルムの破壊及び細菌の生存度に対するフォスフォマイシンとＮＡＣの組み合わせの効果
大腸菌（Eschericia coli）の株において、使用した両方の濃度において、フォスフォマイシンは、ＮＡＣ（2mg/ml）と組み合わせた最大の破壊効果を示した。すなわち、2000mg/mlの濃度のフォスフォマイシンとＮＡＣ（2mg/ml）との組み合わせは、初期のバイオフィルムにおいて、66.6％（大腸菌1263）〜80.1％（大腸菌169）の減少をもたらし、充分に圧密化したバイオフィルムにおいて、60.2％（大腸菌1293）〜73.4％（大腸菌255）の減少をもたらした。
【００４３】
これらの減少は、フォスフォマイシン（50.3％〜74.4％）及びＮＡＣ（39％〜58.8％）の単独試験で得られた減少より大きいことが判明した。
【００４４】
しかしながら、ＮＡＣの濃度を、4〜8mg/mlまで増加させると、バイオフィルム破壊における減少のパーセンテージが低下した。したがって、初期のバイオフィルムにおいて、減少は46.2％（大腸菌1263）〜53.5％（大腸菌1293）の間であり、充分に圧密化したバイオフィルムにおいて、減少は46.8％（大腸菌1263）〜55.8％（大腸菌1293）の間であった。
【００４５】
細胞において、フォスフォマイシン2000mg/lとＮＡＣ 2mg/ml、フォスフォマイシン2000mg/lとＮＡＣ 0.5mg/ml、フォスフォマイシン2000mg/lとＮＡＣ 0.007mg/mlの組み合わせでは、それぞれ、未熟なバイオフィルム及び圧密化したバイオフィルムでのコロニー形成単位CFU/mlの減少が、3の対数（99.9％）及び2の対数（99％）より小さかった。128mg/mlのフォスフォマイシンを同じ濃度のＮＡＣに添加した場合、１の対数に近いCFU/mlの減少が見られた。
【国際調査報告】
2005539056.tif 000002
2005539056.tif 000003
2005539056.tif 000004