(57)【要約】本発明は、腺腫細胞の増殖速度を低下させる方法に関する。この方法において、前記下垂体腺腫細胞を、1またはそれより多いSSTR1アゴニスト、および／または1またはそれより多いSSTR2アゴニスト、および／または1またはそれより多いSSTR5アゴニスト、または1またはそれより多い薬剤的に許容可能なそれらの塩と、単独でまたは組み合わせて、接触させることが含まれる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下垂体腺腫細胞の増殖速度を減少させるための方法であって、前記下垂体腺腫細胞を、1またはそれより多いSSTR1アゴニスト、および／または1またはそれより多いSSTR2アゴニスト、および／または1またはそれより多いSSTR5アゴニスト、または1またはそれより多い薬剤的に許容可能なそれらの塩と、単独でまたは組み合わせて、接触させることを含む、前記方法。
【請求項２】
前記下垂体腺腫細胞を、SSTR1優先的アゴニストと接触させることを含む、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
前記下垂体腺腫細胞を、SSTR1選択的アゴニストと接触させることを含む、請求項1に記載の方法。
【請求項４】
前記SSTR1アゴニストがSSTR-1に対して10 nM未満または1 nM未満のKi値を有する、請求項1に記載の方法。
【請求項５】
前記下垂体腺腫細胞を、SSTR2優先的アゴニストと接触させることを含む、請求項1に記載の方法。
【請求項６】
前記下垂体腺腫細胞を、SSTR2選択的アゴニストと接触させることを含む、請求項1に記載の方法。
【請求項７】
前記SSTR2アゴニストがSSTR-2に対して10 nM未満または1 nM未満のKi値を有する、請求項1に記載の方法。
【請求項８】
前記下垂体腺腫細胞を、SSTR5優先的アゴニストと接触させることを含む、請求項1に記載の方法。
【請求項９】
前記下垂体腺腫細胞を、SSTR5選択的アゴニストと接触させることを含む、請求項1に記載の方法。
【請求項１０】
前記SSTR5アゴニストが、SSTR-5に対して10 nM未満または1 nM未満のKi値を有する、請求項1に記載の方法。
【請求項１１】
前記下垂体腺腫細胞を、1またはそれより多いSSTR2優先的アゴニストおよび1またはそれより多いSSTR5優先的アゴニストと接触させることを含む、請求項1に記載の方法。
【請求項１２】
前記SSTR1アゴニストがCaeg-c（D-Cys-Pal-D-Trp-Lys-D-Cys）-Thr（Bzl）-Tyr-NH2であり、前記SSTR2アゴニストがD-Nal-シクロ［Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys］-Thr-NH2、シクロ［Tic-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Phe］、4-（2-ヒドロキシエチル）-1-ピペラジニルアセチル-D-Phe-シクロ（Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys）-Thr-NH2、または4-（2-ヒドロキシエチル）-1-ピペラジン-2-エタンスルホニル-D-Phe-シクロ（Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys）-Thr-NH2であり、そして前記SSTR5アゴニストがD-Phe-Phe-Trp-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-NH2、またはその薬剤的に許容可能な塩である、請求項1に記載の方法。
【請求項１３】
前記下垂体腺腫が、成長ホルモン-分泌性腺腫、ACTH-分泌性腺腫、プロラクチン-分泌性腺腫、TSH-分泌性腺腫、ゴナドトロピン-分泌性腺腫、混合分泌性腺腫、または非-機能性腺腫である、請求項1に記載の方法。
【請求項１４】
有効量のSSTR1アゴニストまたはその薬剤的に許容可能な塩を投与する必要がある患者に対して、有効量のSSTR1アゴニストまたはその薬剤的に許容可能な塩を投与することを含む、下垂体腺腫の治療方法。
【請求項１５】
前記SSTR1アゴニストがSSTR1選択的アゴニスト、またはその薬剤的に許容可能な塩を含む、請求項11に記載の方法。
【請求項１６】
有効量のSSTR2アゴニストまたはその薬剤的に許容可能な塩を投与することが必要な患者に対して、有効量のSSTR2アゴニストまたはその薬剤的に許容可能な塩を投与することを含む、下垂体腺腫の治療方法。
【請求項１７】
前記SSTR2アゴニストがSSTR2選択的アゴニスト、またはその薬剤的に許容可能な塩を含む、請求項13に記載の方法。
【請求項１８】
有効量のSSTR5アゴニストまたはその薬剤的に許容可能な塩を投与することが必要な患者に対して、有効量のSSTR5アゴニストまたはその薬剤的に許容可能な塩を投与することを含む、下垂体腺腫の治療方法。
【請求項１９】
前記SSTR5アゴニストがSSTR5選択的アゴニスト、またはその薬剤的に許容可能な塩を含む、請求項15に記載の方法。
【請求項２０】
有効量のSSTR2アゴニストまたはその薬剤的に許容可能な塩をSSTR5アゴニストまたはその薬剤的に許容可能な塩と組み合わせて投与することが必要な患者に対して、有効量のSSTR2アゴニストまたはその薬剤的に許容可能な塩をSSTR5アゴニストまたはその薬剤的に許容可能な塩と組み合わせて投与することを含む、下垂体腺腫の治療方法。
【請求項２１】
前記SSTR2アゴニストがSSTR2選択的アゴニストを含み、そして前記SSTR5アゴニストがSSTR5選択的アゴニストを含む、請求項17に記載の方法。
【請求項２２】
前記SSTR1アゴニストがCaeg-c（D-Cys-Pal-D-Trp-Lys-D-Cys）-Thr（Bzl）-Tyr-NH2、またはその薬剤的に許容可能な塩である、請求項12に記載の方法。
【請求項２３】
前記SSTR-2選択的アゴニストが：
D-Nal-シクロ［Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys］-Thr-NH2；
シクロ［Tic-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Phe]；
4-（2-ヒドロキシエチル）-1-ピペラジニルアセチル-D-Phe-シクロ（Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys）-Thr-NH2；および
4-（2-ヒドロキシエチル）-1-ピペラジン-2-エタンスルホニル-D-Phe-シクロ（Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys）-Thr-NH2；または
その薬剤的に許容可能な塩；
からなる群から選択される化合物である、請求項14に記載の方法。
【請求項２４】
前記SSTR5選択的アゴニストがD-Phe-Phe-Trp-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-NH2、またはその薬剤的に許容可能な塩である、請求項16に記載の方法。
【請求項２５】
1またはそれより多い成長ホルモン、ACTH、プロラクチン、TSHおよび／またはゴナドトロピンの分泌を減少させる必要がある患者において、1またはそれより多い成長ホルモン、ACTH、プロラクチン、TSHおよび／またはゴナドトロピンの分泌を減少させる方法であって、前記患者に対して、有効量の1またはそれより多いSSTR1アゴニスト、および／または1またはそれより多いSSTR2アゴニスト、および／または1またはそれより多いSSTR5アゴニスト、または1またはそれより多い薬剤的に許容可能なそれらの塩を、単独でまたは組み合わせて、投与することを含み、ここで前記有効量は前記分泌を減少させるために有効な量である、前記方法。
【請求項２６】
腺腫を患っている患者を治療する方法であって、前記患者に対して、有効量の1またはそれより多いSSTR1アゴニスト、および／または1またはそれより多いSSTR2アゴニスト、および／または1またはそれより多いSSTR5アゴニスト、または1またはそれより多い薬剤的に許容可能なそれらの塩を、単独でまたは組み合わせて、投与することを含み、ここで前記有効量は、治療効果をもたらすために有効な量である、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の背景
ソマトスタチン（SRIF）は、Brazeauらにより発見されたテトラデカペプチドであるが、下垂体、膵臓および胃腸管などの組織における様々な分泌性プロセスに対して強力な阻害性作用を有することが示された。SRIFはまた、中枢神経系における神経修飾物質としても作用する。SRIFのこれらの生物学的作用は、全て本質的に阻害性であるが、5種類の異なるサブタイプ（SSTR1-SSTR5）が同定されている一連のGタンパク質結合型受容体を介して引き起こされる（Reubi JC, et al., Cancer Res 47: 551-558；Reisine T, et al., Endocrine Review 16: 427-442；Lamberts SW, et al., Endocr Rev 12: 450-482；Patel YC, 1999 Front Neuroendocrinology 20: 157-198）。これら5種のサブタイプは、内在性SRIFリガンドに対して同様の親和性を有するが、様々な組織において様々な分布を有する。ソマトスタチンは、5種類の異なる受容体（SSTR）サブタイプと結合し、それぞれのサブタイプに対して比較的高くそして同等な親和性を有する。
【０００２】
SRIFは、SSTR1、2、4、および5サブタイプを介して細胞増殖を阻止することにより、細胞増殖を制御するという証拠や（Buscail L, et al., 1995 Proc Natl Acad Sci USA 92: 1580-1584；Buscail L, et al., 1994 Proc Natl Acad Sci USA 91: 2315-2319；Florio T, et al., 1999 Mol Endocrinol 13: 24-37；Sharma K, et al., 1999 Mol Endocrinol 13: 8290）、またはSSTR3サブタイプを介してアポトーシスを誘導することにより、細胞増殖を制御するという証拠（Sharma K, et al., 1996 Mol Endocrinol 10: 1688-1696）が存在する。SRIFおよび様々な類似体が、特異的SRIF受容体（SSTR's）（Patel YC, 1999 Front Neuroendocrinology 20: 157-198）および可能性のある様々な受容体後作用（Weckbecker G, et al., Pharmacol Ther 60: 245-264；Bell GI, Reisine T 1993 Trends Neurosci 16: 34-38；Patel YC, et al., Biochem Biophys Res Commun 198: 605-612；Law SF, et al., Cell Signal 7: 1-8）を介して、正常の細胞増殖そして腫瘍性の細胞増殖をin vitroおよびin vivoで阻害することが示された（Lamberts SW, et al., Endocr Rev 12: 450-482）。さらに、性質が異なるSSTRサブタイプが、正常なヒト組織そして腫瘍性のヒト組織において発現され、様々なSRIF類似体に対する様々な組織親和性やそれらの治療的作用に対する変動的な臨床的応答を付与する。
【０００３】
当業者には周知であるように、SRIFおよび類似体は、非常に多様な疾患および／または症状の治療に有用である。例示的なしかし決して完全なものではないそのような疾患および／または症状のリストには、以下のものが含まれる：クッシング症候群（Clark, R.V. et al., Clin. Res. 38, p. 943A, 1990を参照）；ゴナドトロピノーマ（Ambrosi B., et al., Acta Endocr. (Copenh.) 122,569-576,1990を参照）；上皮小体機能亢進症（Miller, D., et al., Canad. Med. Ass. J., Vol. 145, pp. 227-228,1991を参照）；ページェット病（Palmieri, G.M.A., et al., J. of Bone and Mineral Research, 7,(Suppl. 1), p. S240 (Abs. 591), 1992を参照）；VIP産生腫瘍（Koberstein, B., et al., Z. Gastroenterology, 28,295-301, 1990；およびChristensen, C., Acta Chir. Scand. 155, 541-543, 1989を参照）；膵島細胞症および高インスリン症（Laron, Z., Israel J. Med. Sci., 26, No. 1, 1-2, 1990；Wilson, D.C., Irish J. Med. Sci., 158, No.1, 31-32, 1989；およびMicic, D., et al., Digestion, 16, Suppl. 1.70. Abs. 193, 1990を参照）；ガストリン産生腫瘍（Bauer, F.E., et al., Europ. J. Pharmacol., 183, 55 1990を参照）；ゾリンジャー-エリソン症候群（Mozell, E., et al., Surg. Gynec. Obstet., 170, 476-484, 1990を参照）；AIDSおよびその他の症状に関連する過分泌下痢（AIDSによるものに関しては、Cello, J.P., et al., Gastroenterology, 98, No. 5, Part 2, Suppl., A163 1990を参照；ガストリン-放出ペプチドの上昇に関しては、Alhindawi, R., et al., Can. J. Surg., 33, 139-142,1990を参照；続発性の腸管移植片vs.宿主疾患については、Bianco J.A., et al., Transplantation, 49, 1194-1195, 1990を参照；化学療法に関連する下痢に関しては、Petrelli, N., et al., Proc. Amer. Soc. Clin. Oncol., Vol. 10, P 138, Abstr. No. 417 1991を参照）；過敏性腸症候群（O'Donnell, L.J.D., et al., Aliment. Pharmacol. Therap., Vol. 4., 177-181, 1990を参照）；急性または慢性膵炎（Tulassay, Z., et al., Gastroenterology, 98, No.5, Part 2, Suppl., A238, 1990を参照）；クローン病（Fedorak, R.N., et al., Can. J. Gastroenterology, 3, No. 2, 53-57, 1989を参照）；全身性硬化症（Soudah, H., et al., Gastroenterology, 98, No. 5, Part 2, Suppl., A129, 1990を参照）；甲状腺癌（Modigliani, E., et al., Ann. Endocr. (Paris), 50, 483-488, 1989を参照）；乾癬（Camisa, C., et al., Cleveland Clinic J. Med., 57, No.1, 71-76, 1990を参照）；低血圧症（Hoeldtke, R.D., et al., Arch. Phys. Med. Rehabil., 69, 895-898, 1988；およびKooner, J.S., et al., Brit. J. Clin. Pharmacol., 28, 735P-736P, 1989を参照）；パニック発作（Abelson, J.L., et al., Clin. Psychopharmacol., 10, 128-132, 1990を参照）；強皮症（sclerodoma）（Soudah, H., et al., Clin. Res., Vol. 39, p.303A, 1991を参照）；小腸閉塞（Nott, D.M., et al., Brit. J. Surg., Vol. 77, p.A691, 1990を参照）；胃食道逆流（Branch, M.S., et al., Gastroenterology, Vol. 100, No. 5, Part 2 Suppl., p. A425, 1991を参照）；十二指腸胃逆流（Hasler, W., et al., Gastroenterology, Vol. 100, No.5, Part2, Suppl., p. A448, 1991を参照）；グレーブス病（Chang, T.C., et al., Brit. Med. J., 304, p. 158, 1992を参照）；多嚢胞性卵巣疾患（Prelevic, G.M., et al., Metabolism Clinical and Experimental, 41, Suppl. 2, pp 76-79, 1992を参照）；上部消化管出血（Jenkins, S.A., et al., Gut., 33, pp. 404-407, 1992；およびArrigoni, A., et al., American Journal of Gastroenterology, 87, p. 1311, (abs. 275), 1992を参照）；膵偽嚢胞および腹水（Hartley, J.E., et al., J. Roy. Soc. Med., 85, pp.107-108, 1992を参照）；白血病（Santini, et al., 78, (Suppl. 1), p. 429A (Abs. 1708), 1991を参照）；髄膜腫（Koper, J.W., et al., J. Clin. Endocr. Metab., 74, pp. 543-547, 1992を参照）；そして癌悪液質（Bartlett, D.L., et al., Surg. Forum., 42, pp. 14-16, 1991を参���）。
【０００４】
様々な型のソマトスタチン受容体サブタイプに対する結合が、様々な症状および／または疾患の治療に関連してきた。例えば、成長ホルモンの阻害は、ソマトスタチン2型受容体（“SSTR-2”）に起因する（例えば、Raynor, et al., Molecular Pharmacol. 43: 838 (1993)；Lloyd, et al., Am. J. Physiol. 268:G102 (1995)を参照）；一方、インスリンの阻害は、ソマトスタチン5型受容体（“SSTR-5”）に起因する（例えば、Coy, et al. 197: 366-371 (1993)を参照）。SRIF受容体サブタイプの活性化と関連するその他の指標は、インスリンおよび／またはグルカゴンの阻害、そしてより具体的には、糖尿病、血管障害、増殖性網膜症、曙現象（dawn phenomenon）および腎障害；胃酸分泌の阻害、そしてより具体的には消化性潰瘍、腸皮フィステルおよび膵皮膚フィステル（pancreaticocutaneous fistula）、ダンピング症候群、漿液性下痢症候群、および消化管ホルモン分泌性腫瘍；肝細胞癌などの癌の治療；血管形成の阻害、関節炎などの炎症性障害の治療；網膜症；慢性同種異系移植片拒絶；血管形成術；移植片血管および消化管出血の予防；である。
【０００５】
特異的SRIF受容体サブタイプまたは所望の生物学的反応を引き起こすサブタイプに対して選択性が高い類似体を有することが好ましく、したがって、所望しない副作用を引き起こす可能性のあるその他の受容体サブタイプとの相互作用を減少させるものが好ましい。さらに、天然のSRIFの半減期がが短いことから、様々なSRIF類似体が、例えば末端肥大症を治療するために開発された（Raynor, et al., Molecular Pharmacol. 43: 838 (1993)）。
【０００６】
SRIF受容体サブタイプ2および5の活性化は、成長ホルモン抑制に関連しており、より具体的にはGH分泌性腺腫（末端肥大症）およびTSH分泌性腺腫に関連している。培養下垂体腺腫細胞における研究により、SSTRサブタイプ2および5は、成長ホルモンおよびプロラクチンの分泌の抑制において、相乗的に作用することが示された（Shimon I, et al., 1997 J. Clinical Invest. 100: 2386-2392；Jaquet P, et al., 2000 J Clin Endocrinol Metab. 85: 781-792）。2型の活性化は、プロラクチン分泌性腺腫の治療に関連するが、5型は関連しない。しかしながら、下垂体腺腫はSSTR'sを発現することが知られているが、SRIF類似体の腫瘍細胞に対する抗増殖性活性は、明確には示されていない（Mahler C, et al., Clin Endocrinol 33: 261-9；Lupoli G, et al., Cancer 78: 1114-8；Smid WM, et al., Neth J Med 40: 240-243）。
【０００７】
このように、下垂体腺腫細胞増殖に対して選択的であるSSTRサブタイプ類似体の開発および評価は、臨床用用途のための有用なツールを提供する。本発明は、［3H］thy取り込みおよび細胞数という点で、サブタイプ選択的アゴニストによるSSTR-1、SSTR2およびSSTR5の活性化に反応する下垂体腺腫を発見したことに関する。SSTR1、SSTR2およびSSTR5サブタイプ選択的アゴニストのいずれかは、［3H］thy取り込みを有意に抑制する、すなわち、DNA合成を阻害し、そして細胞増殖を抑制し、SSTR1選択的アゴニストは、3種の中でも最も強力な作用を示した。さらに、SSTR2優先的アゴニストをSSTR5優先的なアゴニストと組み合わせて投与すると、結果として相乗作用が生じ、そうでない場合に予想される増殖の抑制よりも、強力に増殖を抑制する。
【０００８】
発明の概要
一態様において、本発明は、下垂体腺腫細胞の増殖速度を減少させる方法に関するものであり、その方法は、前記下垂体腺腫細胞を、1またはそれより多いSSTR1アゴニスト、および／または1またはそれより多いSSTR2アゴニスト、および／または1またはそれより多いSSTR5アゴニスト、または1またはそれより多い薬剤的に許容可能なそれらの塩のいずれかと、単独でまたは組み合わせて、接触させることを含む。
【０００９】
上述した観点の好ましい方法は、前記下垂体腺腫細胞をSSTR1優先的アゴニストと接触させることを特徴とする。上述した観点の別の好ましい方法は、前記下垂体腺腫細胞をSSTR1選択的アゴニスト、より好ましくはCaeg-c（D-Cys-Pal-D-Trp-Lys-D-Cys）-Thr（Bzl）-Tyr-NH2、またはその薬剤的に許容可能な塩と接触させることを特徴とする。
【００１０】
上述した観点の別の好ましい方法は、前記下垂体腺腫細胞をSSTR2優先的アゴニストに接触させることを特徴とする。上述した観点の別の好ましい方法は、前記下垂体腺腫細胞をSSTR2選択的アゴニスト、より好ましくはD-Nal-シクロ［Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys］-Thr-NH2、シクロ［Tic-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Phe］、4-（2-ヒドロキシエチル）-1-ピペラジニルアセチル-D-Phe-シクロ（Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys）-Thr-NH2、または4-（2-ヒドロキシエチル）-1-ピペラジン-2-エタンスルホニル-D-Phe-シクロ（Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys）-Thr-NH2、またはその薬剤的に許容可能な塩であって、ここで“4-（2-ヒドロキシエチル）-1-ピペラジニルアセチル”は、次式の構造：
【００１１】
【化１】
2005518335.tif 000002
【００１２】
を意味し、そして“4-（2-ヒドロキシエチル）-1-ピペラジン-2-エタンスルホニル-”は、次式の構造：
【００１３】
【化２】
2005518335.tif 000003
【００１４】
を意味する。
上述した観点のさらに別の好ましい方法は、前記下垂体腺腫細胞をSSTR5優先的アゴニストと接触させることを特徴とする。上述した観点のさらに別の好ましい方法は、前記下垂体腺腫細胞を、SSTR5選択的アゴニスト、より好ましくはD-Phe-Phe-Trp-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-NH2、またはその薬剤的に許容可能な塩と接触させることを特徴とする。
【００１５】
上述した観点のさらに別の好ましい方法は、前記下垂体腺腫細胞を1またはそれより多いSSTR2優先的アゴニストと1またはそれより多いSSTR5優先的アゴニストと共に接触させることを特徴とする。
【００１６】
上述した観点の一態様において、前記SSTR1アゴニストは、Caeg-c（D-Cys-Pal-D-Trp-Lys-D-Cys）-Thr（Bzl）-Tyr-NH2、またはその薬剤的に許容可能な塩を含み、前記SSTR2アゴニストはD-Nal-シクロ［Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys］-Thr-NH2、シクロ［Tic-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Phe］、4-（2-ヒドロキシエチル）-1-ピペラジニルアセチル-D-Phe-シクロ（Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys）-Thr-NH2、または4-（2-ヒドロキシエチル）-1-ピペラジン-2-エタンスルホニル-D-Phe-シクロ（Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys）-Thr-NH2、またはその薬剤的に許容可能な塩を含み、そして前記SSTR5アゴニストは、D-Phe-Phe-Trp-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-NH2、またはその薬剤的に許容可能な塩を含む。
【００１７】
上述した観点のさらに別の好ましい方法において、前記下垂体腺腫は、成長ホルモン-分泌性腺腫、ACTH-分泌性腺腫、プロラクチン-分泌性腺腫、TSH-分泌性腺腫、ゴナドトロピン-分泌性腺腫、混合性分泌性腺腫、または非-機能性腺腫である。
【００１８】
別の観点において、本発明は、1またはそれより多い成長ホルモン、ACTH、プロラクチン、TSHおよび／またはゴナドトロピンの分泌を減少させることを必要としている患者において、それらを減少させるための方法に関し、前記方法は、有効量の1またはそれより多いSSTR1アゴニスト、および／または1またはそれより多いSSTR2アゴニスト、および／または1またはそれより多いSSTR5アゴニスト、または1またはそれより多い薬剤的に許容可能なそれらの塩を、単独でまたは組み合わせて、患者に対して投与することを含み、ここで前記有効量は、前記分泌を減少させるために有効な量のことをいう。
【００１９】
別の観点において、本発明は、腺腫を患っている患者を治療するための方法に関するものであり、その方法は、前記患者に対して有効量の1またはそれより多いSSTR1アゴニスト、および／または1またはそれより多いSSTR2アゴニスト、および／または1またはそれより多いSSTR5アゴニスト、または1またはそれより多い薬剤的に許容可能なそれらの塩を、単独でまたは組み合わせて、患者に対して投与することを含み、ここで前記有効量は、所望の治療効果をもたらすために有効な量のことをいう。
【００２０】
本発明のこの観点の好ましい方法は、有効量のSSTR1アゴニストまたはその薬剤的に許容可能な塩を必要とする患者に投与することを含む、下垂体腺腫を治療する方法を特徴とする。今まさに上述した観点の好ましい方法において、前記SSTR1アゴニストは、SSTR1選択的アゴニスト、またはその薬剤的に許容可能な塩を含む。
【００２１】
本発明のこの観点の別の好ましい方法は、有効量のSSTR2アゴニストまたはその薬剤的に許容可能な塩と必要とする患者に対して投与することを含む、下垂体腺腫の治療方法を特徴とする。今まさに上述した観点の好ましい方法において、前記SSTR2アゴニストは、SSTR1選択的アゴニスト、またはその薬剤的に許容可能な塩を含む。
【００２２】
本発明のこの観点の別の好ましい方法は、有効量のSSTR5アゴニストまたはその薬剤的に許容可能な塩を必要とする患者に対して投与することを含む、下垂体腺腫の治療方法を特徴とする。今まさに上述した観点の好ましい方法において、前記SSTR5アゴニストは、SSTR5選択的アゴニスト、またはその薬剤的に許容可能な塩を含む。
【００２３】
本発明のこの観点において、別の好ましい方法は、有効量のSSTR2アゴニストまたはその薬剤的に許容可能な塩を、SSTR5アゴニストまたはその薬剤的に許容可能な塩と組み合わせて必要とする患者に対して投与することを含む、下垂体腺腫の治療方法を特徴とする。今まさに上述した観点の好ましい方法において、前記SSTR2アゴニストは、SSTR2選択的アゴニスト、またはその薬剤的に許容可能な塩を含み、そして前記SSTR5アゴニストはSSTR5選択的アゴニストまたはその薬剤的に許容可能な塩を含む。
【００２４】
さらに別の好ましい方法において、前記SSTR1アゴニスト、および／または前記SSTR2アゴニスト、および／またはSSTR5アゴニストのそれぞれは、独立して、明細書中にて記載する受容体結合アッセイにより測定した場合、10 nM未満、より好ましくは5 nM未満、さらに好ましくは1 nM未満のKi値を有する。
【００２５】
別の観点において、本発明は、腺腫細胞の分泌性活性を減少させる方法を含み、この方法は、前記腺腫細胞を1またはそれより多いSSTR1アゴニスト、および／または1またはそれより多いSSTR2アゴニスト、および／または1またはそれより多いSSTR5アゴニスト、または1またはそれより多い薬剤的に許容可能なそれらの塩を、単独でまたは組み合わせて、接触させることを含む。容易に理解されるように、この方法は、本発明の上述した観点の原理的な特徴を共有する。
【００２６】
発明の詳細な説明
当業者は、本明細書中の記載に基づいて、本発明をその最大の範囲まで利用することができると考えられる。したがって、以下の具体的な態様は、単に説明的なものであると解釈されるべきであり、どのようなものであれ開示のそれ以外の部分のいずれにも限定されるものではない。
【００２７】
本明細書中で使用される全ての技術的用語および科学的用語は、別の意味に定義されている場合以外は、本発明が属する分野の当業者により一般的に理解されている意味と同一の意味を有する。同様に、本明細書中で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、そしてその他の参考文献は、その全体それぞれを参考文献として援用される。
【００２８】
ソマトスタチンアゴニストは、1またはそれより多いSSTR-1アゴニスト、SSTR-2アゴニスト、SSTR-3アゴニスト、SSTR-4アゴニストまたはSSTR-5アゴニストであってよい。
ソマトスタチン1型受容体アゴニスト（すなわち、SSTR-1アゴニスト）により意味されるものは、（1）SSTR-1に対して高い結合親和性（例えば、100 nM未満のKiまたは好ましくは10 nm未満または1 nM未満のKi）を有する化合物（例えば、以下に記載する受容体結合アッセイにより定義される場合）および（2）下垂体腺腫細胞の増殖速度を減少させる化合物（例えば、以下に記載する生物学的アッセイにより示される場合）である。ソマトスタチン1型受容体選択的アゴニストにより意味されるものは、SSTR-2またはSSTR-5に対しての親和性よりも、SSTR-1に対してより高い結合親和性（すなわち、より低いKi）を有するソマトスタチン1型受容体アゴニストである。
【００２９】
ソマトスタチン2型受容体アゴニスト（すなわち、SSTR-2アゴニスト）により意味されるものは、（1）SSTR-2に対して高い結合親和性（例えば、100 nM未満のKiまたは好ましくは10 nm未満または1 nM未満のKi）を有する化合物（例えば、以下に記載する受容体結合アッセイにより定義される場合）および（2）下垂体腺腫細胞の増殖速度を減少させる化合物（例えば、以下に記載する生物学的アッセイにより示される場合）である。ソマトスタチン2型受容体選択的アゴニストにより意味されるものは、SSTR-1またはSSTR-5に対する親和性よりも、SSTR-2に対してより高い結合親和性（すなわち、より低いKi）を有するソマトスタチン2型受容体アゴニストである。
【００３０】
ソマトスタチン5型受容体アゴニスト（すなわち、SSTR-5アゴニスト）により意味されるものは、（1）SSTR-5に対して高い結合親和性（例えば、100 nM未満のKiまたは好ましくは10 nM未満または1 nM未満のKi）を有する化合物（例えば、以下に記載する受容体結合アッセイにより定義される場合）および（2）下垂体腺腫細胞の増殖速度を減少させる化合物（例えば、以下に記載する生物学的アッセイにより示される場合）である。ソマトスタチン5型受容体選択的アゴニストにより意味されるものは、SSTR-1またはSSTR-2に対する親和性よりも、SSTR-5に対してより高い結合親和性（すなわち、より低いKi）を有するソマトスタチン5型受容体アゴニストである。
【００３１】
一態様において、SSTR-1アゴニストはまた、SSTR-1選択的アゴニストである。別の態様において、SSTR-1選択的アゴニストは、SSTR-2受容体に対して有するKi値またはSSTR-5受容体に対して有するKi値よりも、SSTR-1に対して少なくとも2倍（例えば、少なくとも5または少なくとも10倍）低いKi値を有する（例えば、以下に記載する受容体結合アッセイにより定義される場合）。
【００３２】
別の態様において、SSTR-2アゴニストはまた、SSTR-2選択的アゴニストである。別の態様において、SSTR-2選択的アゴニストは、SSTR-1受容体またはSSTR-5受容体に対して有するKi値よりも、SSTR-2に対して少なくとも2倍（例えば、少なくとも5倍または少なくとも10倍）低いKi値を有する（例えば、以下に記載する受容体結合アッセイにより定義される場合）。
【００３３】
さらに別の態様において、SSTR-5アゴニストはまた、SSTR-5選択的アゴニストである。別の態様において、SSTR-5選択的アゴニストは、SSTR-1受容体またはSSTR-2受容体に対するKi値よりも、SSTR-5に対して少なくとも2倍（例えば、少なくとも5倍または少なくとも10倍）低いKi値を有する（例えば、以下に記載する受容体結合アッセイにより定義されるもの）。
【００３４】
本発明を実施するために使用することができるSSTR-1アゴニストの例には、以下の構造：
【００３５】
【化３】
2005518335.tif 000004
【００３６】
を有するCaeg-c（D-Cys-Pal-D-Trp-Lys-D-Cys）-Thr（Bzl）-Tyr-NH2、（化合物1）が含まれるが、これには限定されない。
本発明を実施するために使用することができるSSTR-2アゴニストの例には：
D-Nal-シクロ［Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys］-Thr-NH2、すなわち、LANREOTIDE
シクロ［Tic-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Phe］、（化合物2）
4-（2-ヒドロキシエチル）-1-ピペラジニルアセチル-D-Phe-シクロ（Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys）-Thr-NH2、および
4-（2-ヒドロキシエチル）-1-ピペラジン-2-エタンスルホニル-D-Phe-シクロ（Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys）-Thr-NH2
が含まれるが、これらには限定されない。
【００３７】
本発明を実施するために使用することができるSSTR-5アゴニストの例には：
D-Phe-Phe-Trp-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-NH2（化合物3）
が含まれるが、これには限定されない。
【００３８】
ソマトスタチンアゴニストのさらなる例は、化学式により包含されるもの、または以下に言及する刊行物中に具体的に列挙されるものがあり、これらの全ては参考文献として本明細書中に援用される。
【００３９】
【化４】
2005518335.tif 000005
2005518335.tif 000006
【００４０】
本明細書中に記載された全てのソマトスタチンアゴニストに関して、それぞれのアミノ酸残基は、-NH-C（R）H-CO-〔ここで、Rは、側鎖である（例えば、AlaについてはCH3）〕の構造を示すことに注目すべきである。アミノ酸残基間の線は、アミノ酸を結合させるペプチド結合を示す。同様に、アミノ酸残基が光学的に活性である場合、L-型立体構造であり、D-型が特に明示されていない場合にはこのように意図される。明確にするために、2つのCys残基の遊離チオール間に存在するジスルフィド結合（例えば、ジスルフィド架橋）は示さない。一般的なアミノ酸の略称は、IUPAC-IUBの推奨に従う。
【００４１】
ソマトスタチンアゴニストの合成
ソマトスタチンアゴニストを合成する方法は、十分に文書化されており、当業者の能力の範囲内のものである。
【００４２】
短鎖アミノ酸配列の合成は、ペプチド技術分野において十分に確立されている。例えば、上述したH-D-Phe-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-NH2の合成は、欧州特許出願0 395 417 A1の実施例1に記載される以下のプロトコルにより、達成することができる。置換N-末端を有するソマトスタチンアゴニストの合成は、例えば、WO88/02756、欧州特許出願No. 0 329 295、およびPCT国際公開No. WO 94/04752中に記載される以下のプロトコルにより、達成することができる。
【００４３】
本発明の化合物のいくつかは、少なくとも1つの不斉中心を有することができる。分子上の様々な置換基の性質に依存して、分子上に不斉中心がさらに存在していてもよい。それぞれのそのような不斉中心は、2つの光学異性体を生成しうるものであり、そして分離され、精製されたまたは部分的に精製された光学異性体、そのラセミ混合物またはジアステレオマー混合物としての全てのそのような光学異性体は、本発明の範囲内に包含されることが意図される。
【００４４】
本発明の化合物は一般的に、無機酸および有機酸を使用することにより得られる酸などの、それらの薬剤的に許容可能な酸付加塩の形状で単離することができる。そのような酸の例としては、塩酸、硝酸、硫酸、リン酸、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、マレイン酸、コハク酸、D-酒石酸、L-酒石酸、マロン酸、メタンスルホン酸などがある。さらに、カルボキシなどの酸性官能基を含有する特定の化合物を、それらの無機酸の形状で単離することができ、その場合、対イオンはナトリウム、カリウム、リチウム、カルシウム、マグネシウムなどから、および有機塩基から選択することができる
薬剤的に許容可能な塩は、約1等量の例えばSSTR-1アゴニスト、例えば、化合物1を取り、そしてそれを約1等量またはそれより多い所望する塩の適切な対応する酸と接触させることにより形成することができる。得られた塩の精密試験および単離は、当業者に対して周知である。
【００４５】
本発明の化合物は、経口、非経口（例えば、筋肉内注射、腹腔内注射、静脈内注射または皮下注射、またはインプラント）、鼻、膣、直腸、舌下、または局所経路の投与により投与することができ、そして薬剤的に許容可能な担体と共に製剤化して、それぞれの経路の投与に適した単位用量剤形を提供することができる。したがって、本発明は、その範囲内に、活性成分として少なくとも1つのSSTR-2アゴニストを薬剤的に許容可能な担体と共に含む医薬組成物が含まれる。
【００４６】
経口投与用の固形単位用量剤形には、カプセル、錠剤、ピル、粉剤、および顆粒剤が含まれる。そのような固形単位用量剤形において、活性な化合物を、スクロース、ラクトース、またはスターチなどの少なくとも1つの不活性な薬剤的に許容可能な担体と共に混合する。そのような単位用量剤形はまた、通常の実施の場合と同様に、そのような不活性希釈剤以外の追加的な物質、例えば、ステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤を含むこともできる。カプセル、錠剤およびピルの場合、単位用量剤形はまた、緩衝化剤を含んでもよい。錠剤およびピルは、さらに腸溶性コーティングにより調製してもよい。
【００４７】
経口投与用の液体単位用量剤形には、当該技術分野において一般的に使用される不活性な希釈物、例えば水、を含有する薬剤的に許容可能なエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップ、エリキシルを含む。そのような不活性な希釈剤、に加えて、組成物はまた、湿潤剤、乳化剤、および懸濁剤などのアジュバント、および甘味剤、着香剤および香料を含んでもよい。
【００４８】
非経口投与用の本発明の調製物には、滅菌水性または非-水性溶液、懸濁物、または乳化物が含まれる。非-水性溶媒またはビヒクルの例には、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油およびトウモロコシ油などの植物油、ゼラチン、およびエチルオレエートなどの注射可能な有機エステル類がある。そのような単位用量剤形はまた、保存剤、湿潤剤、乳化剤、および分散剤などのアジュバントを含有してもよい。それらは、例えば、細菌-保持性フィルターを介した濾過により、組成物中に殺菌剤を組み込むことにより、組成物に放射線照射することにより、または組成物を加熱することにより、滅菌することができる。それらはまた、滅菌水、または何らか他の滅菌注射可能媒体中に使用直前に溶解することができる、滅菌固体組成物の形状で製造することもできる。
【００４９】
直腸または膣投与のための組成物は、好ましくは坐剤であり、それは活性物質に加えて、ココアバターまたは坐剤ワックスなどの賦形剤を含有してもよい。
鼻または舌下投与用の組成物はまた、当該技術分野において周知の標準的な賦形剤と共に調製される。
【００５０】
一般的に、本発明の組成物における活性成分の有効用量は、変更することができる；しかしながら、活性成分の量は、適切な用量剤形が得られるようなものであることが必要である。選択された用量は、所望の治療効果、投与経路、そして治療期間に依存するが、それらの全てが当業者の知識の範囲内のものである。一般的には、1日0.0001〜100 mg/kg体重の範囲の用量レベルをヒトおよびその他の動物、例えば、哺乳動物、に対して投与する。
【００５１】
好ましい用量範囲は、1日0.01〜10.0 mg/kg体重であり、これを単回投与として、または複数投与に分割して、投与することができる。
SSTR選択的アゴニストおよびアンタゴニスト
機能性アッセイ
均一な溶解性を得てそして様々な調製物表面に対する非-特異的結合を防止するため、それぞれの化合物を、0.1％ウシ血清アルブミン（BSA）を含有する0.01 N酢酸中に再懸濁した。類似体の特異性および選択性を、それぞれのSSTRサブタイプで以下に記載する様に安定的にトランスフェクトしたCHO-K1細胞上で、放射性リガンド結合アッセイにより測定した。
【００５２】
SSTR1、2、3、および4遺伝子のゲノム断片の完全なコード配列およびSSTR 5についてのcDNAクローンを、哺乳動物発現ベクターpCMV（Life Technologies, Milano, Italy）中にサブクローニングした。SSTR 1-5を安定的に発現するクローン化細胞株を、リン酸カルシウム共沈殿法（Davis L, et al., 1994 In : Basic methods in Molecular Biology, 2nd edition, Appleton & Lange, Norwalk, CT, USA: 611-646）を用いてCHO-K1細胞（ATCC, Manassas,Va, USA）中にトランスフェクションすることにより得た。プラスミドpRSV-neo（ATCC）を、選択可能マーカーとして包含させた。クローン化細胞株を0.5 mg/mlのG418（Life Technologies, Milano, Italy）を含有するRPMI 1640培地中で選択し、リングクローニングし（ring cloned）、そして培養中で増殖させた。
【００５３】
in vitro受容体結合アッセイ用の膜を、SSTRのサブタイプを発現するCHO-K1細胞を氷冷50 mM Tris-HCl中でホモジナイズし、そして39000 g（10 min）で2回遠心分離し、新鮮なバッファー中に中間相を再懸濁することにより得た。最終ペレットを、アッセイ用に10 mM Tris-HCl中に再懸濁した。SSTR 1、3、4、および5のアッセイ用に、膜調製物のアリコートを、10 mg/ml BSA、5 mM MgCl2、200 KIU/ml Trasylol、0.02 mg/mlバシトラシン、および0.02 mg/mlフェニルメチルスルホニルフッ化物を含有する50 mM HEPES（pH 7.4）中、0.05 nM［125I-Tyr11］SRIF-14と共に、25℃にて90分間、インキュベートした。最終アッセイ容量は、0.3 mlであった。SSTR 2アッセイ用に、0.05 nM［125I］MK-678を放射性リガンドとして使用し、そしてインキュベーション時間は25℃にて90分間であった。Brandel濾過マニホルドを使用して、GF/Cフィルター（0.3％ポリエチレンイミン中に事前に浸漬したもの）を介して、急速濾過によりインキュベーションを終了させた。それぞれのチューブおよびフィルターをその後5 mlアリコートの氷冷バッファーを用いて3回洗浄した。特異的結合は、全結合放射性リガンドからSSTR 1、3、4、および5については1000 nM SRIF-14の存在下で、またはSSTR2については1000 nM MK-678の存在下で結合したものを差し引いたものとして定義した。
【００５４】
生物学的活性評価
SSTR選択的アゴニストおよびアンタゴニストの生物学的活性は、ヒトSSTR1、SSTR2またはSSTR5を発現するCHO-K1細胞中でのカルシウム可動性アッセイにより評価した。細胞は、0.3％EDTA/リン酸緩衝化塩類溶液（25℃）中でインキュベートすることにより回収し、そして遠心分離により2回洗浄した。蛍光Ca2+指示薬、Fura-2AMのローディングのため、洗浄した細胞をHank's-緩衝化塩類溶液（HBSS）中に再懸濁した。細胞懸濁液（約106細胞/ml）を、25℃にて30分間、2 mM Fura-2AMと共にインキュベートした。ロードされなかったFura-2AMを was removed by centrifugation twice in HBBS中で2回遠心分離することにより取り除き、そして最終懸濁液を、マグネティックスターラー機構と温度制御性キュベットホルダーを備えた分光蛍光計（Hitachi F-2000）に移した。37℃に平衡化した後、SRIF類似体を、細胞内Ca2+可動性の測定のために添加した。励起波長および放射波長は、それぞれ340および510 nmであった。細胞内Ca2+可動性の評価により、それぞれの様々な類似体の生物学的活性は、その受容体結合プロフィールと一致していたことが示された。
【００５５】
SSTR1、SSTR2およびSSTR 5サブタイプに対して様々な親和性および特異性を有するSRIF類似体が細胞増殖性活性に影響を与える能力を、［3H］thy取り込み、DNA合成活性の間接的測定、そして生細胞数を考慮することにより、評価することができた。
【００５６】
DNA合成
SSTR選択的アゴニストおよびアンタゴニストの下垂体腺腫細胞DNA合成に対する作用を、以前に記載されたように（Davis L, et al., 1994 In: Basic methods in Molecular Biology, 2nd edition, Appleton & Lange, Norwalk, CT, USA: 611-646, degli Uberti EC, et al., 1991 J Clin EndocrinolMetab 72: 1364-1371）、［3H］チミジン取り込み速度を調べることにより評価した。
【００５７】
二機能性腺腫由来のおよそ105下垂体細胞を、外科手術の日に4つのウェルにプレート化し、そして翌日にSRIFにより、そして化合物1、2、3、および10-9 M LANREOTIDEにより処理した。10％FBSを添加した培地中で［3H］thy（1.5μCi/mL；87 Ci/mmol）の存在下、それぞれのSRIF類似体と共にまたは伴わずに、48時間インキュベーションした後、最初の24時間のインキュベーションの後、培地を取り除くことなく、ウェルに対して新鮮な類似体を添加することにより、処理を繰り返す。
【００５８】
インキュベーション後、細胞を、氷冷PBSで3回、そして10％氷冷トリクロロ酢酸（TCA）で2回洗浄した。TCA-沈殿した物質を、500μLの0.2 mol/L水酸化ナトリウムおよび0.1％SDS中にて可溶化した。次いで、細胞結合性放射活性を、シンチレーション分光計中で計測した。結果（カウント/分/ウェル）は、4連にした実験で少なくとも6回の実験の平均値を測定することにより得られた。対照培地中および処理培地中の細胞の生存率は、トリパンブルー染色により評価した。
【００５９】
細胞増殖
SSTR選択的アゴニストの下垂体腺腫細胞増殖に対する作用は、CELLTITER 96水性非-放射活性細胞増殖アッセイ（Aqueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay；Promega, Milano, Italy）、増殖アッセイにおいて生細胞数を測定するための比色法により、評価した。アッセイには、テトラゾリウム化合物の溶液（オーウェン試薬；MTS）および電子共役試薬（フェナジンメトサルフェート；PMS）の溶液が含まれる。MTSは、細胞により生体還元されて、組織培養液中に溶解性のホルマザンとなる。490 nmでのホルマザンの吸光度は、96ウェルアッセイプレートから直接的に測定することができる（Zatelli MC, et al., 2000 J Clin Endocrinol Metab 85: 847-852; Cory AH, et al., 1991 Cancer Commun 3: 207-212）。MTSの水溶性ホルマザンへの転化は、代謝的に活性な細胞中で見られる脱水素酵素により達成される。490 nmでの吸光度により測定したホルマザン生成物の量は、培養中の生細胞数に直接的に比例する。
【００６０】
簡単に述べれば、腺腫細胞を、96-マルチウェルプレート（2×104細胞/ウェル）中にプレート化し、そして10％FBSを添加した培地中、109 Mの濃度それぞれのSRIF類似体（一つの事例では化合物2と3とを一緒に含む）の存在下または不在下にて、48時間インキュベートした。最初の24時間のインキュベーションの後、新鮮な類似体をウェルに添加することにより、処理を繰り返した。インキュベーション時間の終了時、20μlの組み合わせMTS/PMS溶液をそれぞれのウェルに添加してピペッティングを繰り返し、そしてプレートをさらに37℃にて4時間、湿潤化5％CO2雰囲気下にてインキュベートした。次いで、490 nmでの吸光度をELISAプレートリーダー（EASIA Reader, Medgenix）を使用して記録した。結果（490 nmでの吸光度）を、少なくとも8連にした実験で6回の実験の平均値を測定することにより得た。
【００６１】
【表１】
2005518335.tif 000007
【００６２】
本発明を実施例とその詳細な説明とを組み合わせて記載してきたが、that 前述の記載は、添付の請求の範囲により画定される本発明の範囲を説明することを意図するものであり、これを限定することを意図するものではないことは、理解されるべきである。その他の観点、利点、および修飾は、請求の範囲内のものである。
【国際調査報告】
2005518335.tif 000008
2005518335.tif 000009
2005518335.tif 000010