(57)【要約】本開示は、慢性閉塞性肺疾患(COPD)、または例えば慢性気管支炎、肺気腫、および不可逆性の喘息を含めた、その徴候の任意の1つを治療するための薬剤の調製における、インターロイキン-8に対する抗体の使用に関する。本開示は、慢性閉塞性肺疾患(COPD)、および特に慢性気管支炎、肺気腫、および不可逆性の喘息を含めた、そのさまざまな徴候の治療法も提供する。治療養生法は一般に、抗インターロイキン-8抗体を患者に投与して、患者の免疫系により炎症応答の重症度を低下させることを含む。
2005520854.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
慢性閉塞性肺疾患(COPD)を治療するための薬剤の調製における、インターロイキン-8に対する抗体の使用。
【請求項２】
抗体がインターロイキン-8を中和することができる、請求項1に記載の使用。
【請求項３】
抗体がインターロイキン-8の活性を下方制御することができる、請求項1に記載の使用。
【請求項４】
抗体がモノクローナル抗体である、請求項1に記載の使用。
【請求項５】
抗体が完全ヒト抗体である、請求項1に記載の使用。
【請求項６】
完全ヒト抗体がABX-IL8抗体である、請求項5に記載の使用。
【請求項７】
慢性気管支炎を治療するための薬剤の調製における、インターロイキン-8に対する抗体の使用。
【請求項８】
抗体がインターロイキン-8を中和することができる、請求項7に記載の使用。
【請求項９】
抗体がインターロイキン-8の活性を下方制御することができる、請求項7に記載の使用。
【請求項１０】
抗体がモノクローナル抗体である、請求項7に記載の使用。
【請求項１１】
抗体が完全ヒト抗体である、請求項7に記載の使用。
【請求項１２】
完全ヒト抗体がABX-IL8抗体である、請求項11に記載の使用。
【請求項１３】
慢性閉塞性肺疾患(COPD)の症状に苦しむ患者の治療法であって、前記症状を低下させるのに有効な量のヒトインターロイキン-8に特異的な抗体を投与することを含む方法。
【請求項１４】
抗体が患者の前記ヒトインターロイキン-8を中和する、請求項13に記載の方法。
【請求項１５】
抗体が患者のインターロイキン-8の活性を下方制御する、請求項13に記載の方法。
【請求項１６】
静脈内、腹腔内、吸入、筋肉内、皮下および経口からなる群から選択される経路の1つまたは複数によって抗体を投与する、請求項13に記載の方法。
【請求項１７】
抗体がモノクローナル抗体である、請求項13に記載の方法。
【請求項１８】
抗体が完全ヒト抗体である、請求項13に記載の方法。
【請求項１９】
完全ヒト抗体がABX-IL8抗体である、請求項18に記載の方法。
【請求項２０】
慢性気管支炎の症状に苦しむ患者の治療法であって、前記症状を低下させるのに有効な量のインターロイキン-8に特異的な抗体を投与することを含む方法。
【請求項２１】
抗体が患者の前記ヒトインターロイキン-8を中和する、請求項20に記載の方法。
【請求項２２】
抗体が患者のインターロイキン-8の活性を下方制御する、請求項20に記載の方法。
【請求項２３】
静脈内、腹腔内、吸入、筋肉内、皮下および経口からなる群から選択される経路の1つまたは複数によって抗体を投与する、請求項20に記載の方法。
【請求項２４】
抗体がモノクローナル抗体である、請求項20に記載の方法。
【請求項２５】
前記抗体が完全ヒト抗体である、請求項20に記載の方法。
【請求項２６】
完全ヒト抗体がABX-IL8抗体である、請求項25に記載の方法。
【請求項２７】
ヒト対象の慢性閉塞性肺疾患(COPD)を治療する方法であって、薬剤として許容可能なベヒクルに配合したインターロイキン-8に特異的な抗体を治療上有効な量、前記対象に投与するステップを含む方法。
【請求項２８】
抗体が患者の前記ヒトインターロイキン-8を中和する、請求項27に記載の方法。
【請求項２９】
抗体が患者のインターロイキン-8の活性を下方制御する、請求項27に記載の方法。
【請求項３０】
静脈内、腹腔内、吸入、筋肉内、皮下および経口からなる群から選択される経路の1つまたは複数によって抗体を投与する、請求項27に記載の方法。
【請求項３１】
抗体がモノクローナル抗体である、請求項27に記載の方法。
【請求項３２】
前記抗体が完全ヒト抗体である、請求項27に記載の方法。
【請求項３３】
完全ヒト抗体がABX-IL8抗体である、請求項32に記載の方法。
【請求項３４】
薬剤として許容可能なベヒクルがリン酸緩衝生理食塩水を含む、請求項27に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
慢性閉塞性肺疾患(COPD)の治療において使用するための、抗インターロイキン-8抗体を記載する。
【背景技術】
【０００２】
慢性閉塞性肺疾患(COPD)は、米国における最も一般的な慢性疾患の1つであり、4番目の主たる死因である。COPDは、患者の呼息能を制限する、いくつかの関連障害を含む。したがって患者は、呼吸困難、または息切れをしばしば経験する。呼吸困難は典型的には患者の不快感を引き起こし、身体活動に携わる患者の能力を制限し、低い酸素供給のために、他の有害な健康上の影響を誘導する可能性がある。COPDに付随する2つの最も一般的な障害は、慢性気管支炎および肺気腫であるが、COPDに苦しむ患者は、慢性の喘息、気管支拡張症、免疫グロブリン不全、およびのう胞性線維症を有する可能性もある。
【０００３】
さまざまな環境毒素がCOPDの原因であると考えられているが、煙草の煙が最も一般的な原因である。煙草の煙は、すべてのCOPD症例の80%を超える原因であると考えられている。煙草の煙は、気道および肺に炎症を与える、有害な刺激物質を含む。したがって、この炎症によって、身体の免疫系中で一連の生化学的事象が誘発され、肺および気道の相当な損傷が引き起こされる。
【０００４】
この免疫応答は、炎症組織中のマクロファージおよび内皮細胞が、タンパク質インターロイキン-8(IL-8)、好中球(炎症に応答する食細胞)を引き付け活性化させる走化性因子を分泌すると起こる。これらの好中球は血流を出て、高いIL-8濃度に向かって引きつけられる。炎症の部位に達すると、活性化好中球は、感染抵抗性酵素、好中球エラスターゼを生成し放出する。残念ながら、大規模な好中球応答では、好中球エラスターゼの生成および分泌が組織を圧倒し、肺柔組織中の弾性および構造要素を分解し、肺および気道の損傷をもたらす。肺に対するこの不可逆的損傷によって、大部分のCOPD患者で一般的な、初期の息切れが引き起こされる。状態が進行すると、肺容量がさらに減少し、患者は咳、喘鳴、多量の粘液生成、および感染を経験する可能性がある。肺容量が減少すると、換気不良によって体内の酸素レベルが低下し(低酸素症)、二酸化炭素レベルが上昇する(高炭酸症)。長期かつ重度の低酸素症および高炭酸症である患者は、呼吸障害、心臓リズムの異常、および他の生命を脅かす状態の危険がある。
【０００５】
IL-8はC-X-Cケモカインファミリーのメンバーであり、ARDS、慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患、糸球体腎炎、乾癬、アルコール性肝炎、潅流障害などを含めた、多くの炎症性疾患と関係がある、好中球の主な化学走性誘因物質として作用する。さらにIL-8は、内皮細胞の強力な血管新生因子であり、腫瘍血管新生と関連づけられている。
【０００６】
他の人が、細菌性肺炎(米国特許第5,686,070号)、喘息(米国特許第5,874,080号)、および潰瘍性大腸炎(米国特許第5,707,622号)の治療用に開発され開示されている、抗IL8抗体技術を記載している。
【０００７】
当分野で必要とされているのは、例えば慢性気管支炎、肺気腫、および不可逆性の喘息を含めた、COPDおよびそのさまざまな徴候の、安全で有効な治療である。
【特許文献１】米国特許第5,686,070号
【特許文献２】米国特許第5,874,080号
【特許文献３】米国特許第5,707,622号
【非特許文献１】Singleton他、Dictionary of Microbiology and Molecular Biology 2nd ed., J.Wiley & Sons(New York, NY 1994)
【非特許文献２】Sambrook他、Molecular Cloning:A Laboratory Manual(2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.(1989))
【特許文献４】1987年7月28日に発行された米国特許第4,683,195号
【非特許文献３】Mullis他、Cold Spring Harbor Symp.Quant.Biol.51:263(1987);Erlich, ed., PCR Technology(Stockton Pres, NY, 1989)
【非特許文献４】Chothia他、J.Mol.Biol. 186:651(1985;Novotny and Haber, Proc.Natl.Acad. Sci.U.S.A.82:4592(1985)
【非特許文献５】Chothia他、Nature342:877〜883(1989))
【非特許文献６】Kohler他、Nature, 256:495(1975)
【特許文献５】米国特許第4,816,567号
【非特許文献７】Clackson他、Nature, 352:624〜628(1991)
【非特許文献８】Marks他、J.Mol.BioL, 222:581〜597(1991)
【非特許文献９】Ravetch and Kinet, Annu.Rev.Immunol 9:457〜92(1991)、464ページの表3
【特許文献６】米国特許第5,500,362号
【特許文献７】米国特許第5,821,337号
【非特許文献１０】Clynes他、PNAS(USA)95:652〜656(1988)
【非特許文献１１】Kabat他(1991)
【非特許文献１２】Kabat他、Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed.Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD(1991)
【非特許文献１３】Chothia and Lesk J.Mot.Biol.196:901〜917(1987)
【非特許文献１４】Bruce Alberts他、Molecular Biology of the Cell, Garland Publishing, Inc., New York(3ded.1994)
【非特許文献１５】Abgenix, Inc.of Fremont, California(www.abgenix.com)
【非特許文献１６】Immunology--A Synthesis(2nd Edition, E.S.Golub and D.R Gren, Eds., Sinauer Associates, Sunderland, Mass.(1991)
【非特許文献１７】Bowie他、Science 253:164(1991)
【非特許文献１８】Proteins, Structures and Molecular Principles(Creighton, Ed., W.H.Freeman and Company, New York(1984))
【非特許文献１９】Introduction to Protein Structure(C.Branden and J.Tooze, eds., Garland Publishing, New York, N.Y.(1991))
【非特許文献２０】Thornton他、Nature 354:105(1991)
【非特許文献２１】The McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms(Parker, S., Ed., McGraw-Hill, San Francisco(1985)
【非特許文献２２】Ferrante, A.& Thong, Y.H.A Raid One-step Procedure for Purification of Mononuclear and Polymorphonuclear Leukocytes from Human Blood Using a Modification of the Hypaque-Ficoll Technique, J.Immunol.Methods24:389〜393(1978)
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明の一態様は、慢性閉塞性肺疾患(COPD)、または例えば慢性気管支炎、肺気腫、および不可逆性の喘息を含めた、その徴候の任意の1つを治療するための薬剤の調製における、インターロイキン-8に対する抗体の使用である。このような抗体は、インターロイキン-8の活性を下方制御することができることが好ましい。抗体はモノクローナル抗体であることが好ましい。より好ましくは抗体は、Abgenix, Inc.(Fremont, CA)から入手可能なABX-IL8抗体などの完全ヒト抗体である。
【０００９】
本発明の他の態様は、慢性閉塞性肺疾患(COPD)の症状に苦しむ患者の治療法であって、この症状を低下させるのに有効な量のヒトインターロイキン-8(IL-8)に特異的な抗体を投与することを含む方法である。好ましい実施形態では抗体は、患者のIL-8の活性を中和または下方制御することができる。好ましい抗体送達経路には、静脈内、腹腔内、吸入、筋肉内、皮下および経口投与がある。抗体はモノクローナル抗体であることが好ましい。より好ましくは抗体は、Abgenix, Inc.(Fremont, CA)から入手可能なABX-IL8抗体などの完全ヒト抗体である。
【００１０】
本発明の他の態様は、慢性気管支炎、肺気腫、および不可逆性の喘息を含めた、COPDのさまざまな徴候の治療法である。特に、本発明の一態様は、慢性気管支炎の症状に苦しむ患者の治療法であって、この症状を低下させるのに有効な量のヒトIL-8に特異的な抗体を投与することを含む方法である。好ましい実施形態では抗体は、患者のIL-8の活性を中和または下方制御することができる。好ましい抗体送達経路には、静脈内、腹腔内、吸入、筋肉内、皮下および経口投与がある。抗体はモノクローナル抗体であることが好ましい。より好ましくは抗体は、完全ヒト抗体、ABX-IL8抗体などである。
【００１１】
本発明の他の態様では、抗IL-8抗体を薬剤として許容可能なベヒクルに配合することができ、次いでそれをCOPDまたは任意のその徴候に苦しむ患者に投与する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明の一実施形態は、インターロイキン-8(IL-8)と結合することができる抗体を投与することにより、肺の炎症性疾患を治療するための方法である。例えば慢性閉塞性肺疾患(COPD)は、抗IL-8抗体を患者に投与することにより、治療することができる。COPDは、肺および呼吸管の炎症と関連があるいくつかの徴候、慢性気管支炎、肺気腫、および不可逆性の喘息などを含むことができる。これらの徴候は、呼吸管に対する損傷によって引き起こされる、特に呼吸困難または息切れを含めた共通の特徴を有する。したがって、抗IL-8抗体を使用して、COPDの任意の徴候を治療することができると予想される。
【００１３】
一実施形態では、COPDに苦しむ患者に、薬剤として許容可能なベヒクル中の抗IL-8抗体を、静脈内または経口投与する。この治療は、患者のCOPDの症状を低下させるのに有効である。一実施形態では、0.1〜10mg/体重1kgの抗IL-8抗体を患者に投与する。より好ましくは、1〜10mg/体重1kgの抗IL-8抗体を投与する。この投与は、必要に応じて毎月繰り返すことが好ましい。他の用量および投与スケジュールを、以下に記載する。
【００１４】
定義:
他に特に定義しない限り、本発明に関して使用する科学および技術用語は、当業者によって一般的に理解されている意味を有するものとする。さらに、文脈により他に特に必要とされない限り、単数形の用語は複数形を含むものとし、複数形の用語は単数形を含むものとする。一般に、本明細書に記載する、細胞および組織培養、分子生物学の技術、およびタンパク質およびオリゴまたはポリヌクレオチドの化学的性質およびハイブリダイゼーションに関して使用する名称は、当分野でよく知られており、一般的に使用されているものである。組換えDNA、オリゴヌクレオチド合成、ならびに組織培養および形質転換(例えばエレクトロポレーション、リポフェクション)用の、標準的な技法を使用する。酵素反応および精製技法は、製造者の仕様書に従い、または当分野で一般的に行われているのと同様に、あるいは本明細書に記載するのと同様に行う。前述の技法および手順は、当分野でよく知られている従来の方法に従い、本明細書中に列挙し論じている、さまざまな一般的およびより詳細な参照文献に記載されたのと同様に一般的に行う。例えばSingleton他、Dictionary of Microbiology and Molecular Biology 2nd ed., J.Wiley & Sons(New York, NY 1994);Sambrook他、Molecular Cloning:A Laboratory Manual(2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.(1989))を参照のこと。本明細書に記載する、分析化学、合成有機化学、および医用および薬剤化学の実験手順および技法に関して使用する名称は、当分野でよく知られており、一般的に使用されているものである。化学合成、化学分析、薬剤調製、配合、および送達、および患者の治療用の、標準的な技法を使用する。
【００１５】
本開示に従い使用するように、以下の用語は、他に特に示さない限り、以下の意味を有すると理解されたい:
【００１６】
「COPD」は、慢性閉塞性肺疾患、および/または例えば慢性気管支炎、肺気腫、不可逆性の喘息、気管支拡張症、免疫グロブリン不全、およびのう胞性線維症を含めた、任意のその徴候を指す。したがって、「患者のCOPDを治療する」という言及は、例えば「患者の慢性気管支炎を治療する」ことを含むものとする。ただし問題の患者が、慢性気管支炎を有するものとする。
【００１７】
「ポリメラーゼ連鎖反応」または「PCR」は、1987年7月28日に発行された米国特許第4,683,195号に記載されたのと同様に、微量の核酸、RNAおよび/またはDNAの特定の破片を増幅させる、手順または技法を指す。一般に、挿入領域あるいはそれ以外の端部からの配列情報が入手可能である必要があり、したがってオリゴヌクレオチドプライマーを設計することができ;これらのプライマーは、増幅する鋳型の反対の鎖と配列が同一または類似であろう。2つのプライマーの5'末端ヌクレオチドは、増幅する物質の端部と一致する可能性がある。PCRを使用して、特定のRNA配列、ゲノムDNA全体からの特定のDNA配列、および細胞RNA全体から転写したcDNA、バクテリオファージまたはプラスミド配列などを増幅することができる。Mullis他、Cold Spring Harbor Symp.Quant.Biol.51:263(1987);Erlich, ed., PCR Technology(Stockton Pres, NY, 1989)を概略的に参照のこと。本明細書で使用するようにPCRは、核酸試験サンプルを増幅させるための核酸ポリメラーゼ反応法の一例であって、プライマーとしての知られている核酸および核酸ポリメラーゼを使用して、核酸の特定の破片を増幅または作製することを含む方法であると考えられるが、これが唯一の方法ではない。
【００１８】
「抗体」(Ab)および「免疫グロブリン」(Ig)は、同じ構造特性を有する糖タンパク質である。抗体は特定の抗原と結合特異性を示すが、免疫グロブリンは抗体、および抗原特異性が欠けている他の抗体様分子の両方を含む。後者の種類のポリペプチドは、例えばリンパ系により低レベルで、骨髄腫により高レベルで生成される。
【００１９】
「元の抗体および免疫グロブリン」は通常、2本の同一の軽(L)鎖および2本の同一の重(H)鎖から構成される、約150,000ダルトンのヘテロテトラマー糖タンパク質である。それぞれの軽鎖は、1つの共有ジスルフィド結合によって重鎖と連結し、ジスルフィド結合の数は、異なる免疫グロブリンイソ型の重鎖の間で変わる。それぞれの重鎖および軽鎖は、規則的に位置する鎖内ジスルフィド架橋も有する。それぞれの重鎖は一端に、可変ドメイン(VH)次にいくつかの定常ドメインを有する。それぞれの軽鎖は一端に可変ドメイン(VL)を、その他端に定常ドメインを有する;軽鎖の定常ドメインは重鎖の第一の定常ドメインと一直線に並んでおり、軽鎖の可変ドメインは重鎖の可変ドメインと一直線に並んでいる。特定のアミノ酸残基が、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインの間の界面を形成すると考えられている(Chothia他、J.Mol.Biol. 186:651(1985;Novotny and Haber, Proc.Natl.Acad. Sci.U.S.A.82:4592(1985);Chothia他、Nature342:877〜883(1989))。
【００２０】
本明細書では用語「抗体」は最も広い意味で使用し、完全なモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも2つの完全な抗体から形成された多重特異性抗体(例えば二重特異性抗体)、およびFabおよびF(ab)'2を含めた抗体フラグメントを具体的に含み、ただしこれらは所望の生物学的活性を示すものとする。任意の脊椎動物種からの抗体(免疫グロブリン)の「軽鎖」は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、κおよびλと呼ばれる2つの明らかに異なる型の1つに割り当てることができる。
【００２１】
抗体の重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、完全な抗体を異なる「クラス」に割り当てることができる。5つの主要なクラスの完全な抗体:IgA、IgD、IgE、IgGおよびIgMが存在し、これらのいくつかは、「サブクラス」(イソ型)、例えばIgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgAおよびIgA2にさらに分けることができる。異なるクラスの抗体に対応する重鎖の定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γおよびμと呼ばれる。異なるクラスの免疫グロブリンの、サブユニット構造および三次元立体配置はよく知られている。
【００２２】
本明細書で使用する用語「モノクローナル抗体」は、ほぼ均質な抗体の一群から得られる抗体を指し、すなわちその群を含む個々の抗体は、微量で存在する可能性がある天然に存在する可能性がある突然変異体以外は同一である。モノクローナル抗体は非常に特異的であり、1つの抗原部位を対象とする。さらに、異なる抗原決定基(エピトープ)を対象とする異なる抗体を含む、ポリクローナル抗体の調製物とは対照的に、それぞれのモノクローナル抗体は、抗原上の1つの抗原決定基を対象とする。その特異性以外に、他の抗体によって汚染されずにそれらを合成することができる点で、モノクローナル抗体は有利である。
【００２３】
修飾語「モノクローナル」は、ほぼ均質な抗体の群から得られる抗体の特性を示し、任意の特定の方法による抗体の生成を必要とするものとして解釈すべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、Kohler他、Nature, 256:495(1975)によって最初に記載された、ハイブリドーマ法により作製することができ、あるいは組換えDNA法(例えば米国特許第4,816,567号を参照のこと)によって作製することができる。「モノクローナル抗体」は、例えばClackson他、Nature, 352:624〜628(1991)およびMarks他、J.Mol.Biol., 222:581〜597(1991)中に記載された技法を使用して、ファージ抗体ライブラリーから単離することもできる。
【００２４】
「単離」抗体は、その元の環境の要素から、同定され、分離され、かつ/あるいは回収された抗体である。その元の環境の汚染要素は、抗体の診断または治療用途を害すると思われる物質であり、酵素、ホルモン、および他のタンパク質性または非タンパク質性溶質を含むことができる。好ましい実施形態では、抗体を(1)ローリー法により決定されるように抗体の重量の95%を超えて、かつスピンカップ配列決定装置を使用して末端または内部アミノ酸配列を、あるいは(3)クーマシーブルー、または好ましくは銀染色液を使用して還元または非還元条件下において、SDS-PAGEにより均質に精製する。単離抗体は、組換え細胞中のin situの抗体を含む。なぜなら、抗体の元の環境の少なくとも1つの要素が存在しないからである。しかしながら通常は、単離抗体は、少なくとも1つの精製ステップによって作製される。
【００２５】
「中和抗体」は、抗体が結合する標的抗原のエフェクター機能を、排除するかあるいは大幅に低下させることができる抗体分子である。したがって、「中和」IL-8抗体は、エフェクター機能、IL-8活性などを、排除するかあるいは大幅に低下させることができる。
【００２６】
「抗体依存性細胞仲介型細胞障害性」および「ADCC」は、細胞仲介型の反応を指し、その中で、IgFc受容体(FcR)を発現する非特異的細胞障害性細胞(例えばナチュラルキラー(NK)細胞、好中球、およびマクロファージ)が、標的細胞上の結合抗体を認識し、その後標的細胞の溶解を引き起こす。ADCCを仲介する主要細胞、NK細胞は、FcγRIIIのみを発現し、一方単球はFcγRI、FcγRIIおよびFcγRIIIを発現する。造血細胞上でのFcRの発現は、Ravetch and Kinet, Annu.Rev.Immunol 9:457〜92(1991)、464ページの表3に要約されている。当該の分子のADCC活性を評価するために、in vitroのADCCアッセイ、例えば米国特許第5,500,362号または米国特許第5,821,337号中に記載されたものなどを行うことができる。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核球細胞(PBMC)およびナチュラルキラー(NK)細胞がある。代替的に、あるいは追加的に、当該の分子のADCC活性を、例えばClynes他、PNAS(USA)95:652〜656(1988)中に開示されたものなどの動物モデルにおいて、in vivoで評価することができる。
【００２７】
用語「可変」は、可変ドメインのある部分の配列が抗体間で大きく異なり、各特定の抗体のその特定の抗体に対する結合および特異性において使用される事実を指す。しかしながら可変性は、抗体の可変ドメイン中に均一に分布しているわけではない。それは、Ig軽鎖および重鎖可変ドメイン中の、相補性決定領域(CDR)または超可変領域と呼ばれる3つの部分に集中している。可変ドメインのさらに充分に保存された部分は、フレームワーク(FR)と呼ばれる。元の重鎖および軽鎖の可変ドメインはそれぞれ、4つのFR領域を含み、これらの領域は主にβシート配置をとり、3つのCDRによって結合しており、βシート構造の一部分と結合しているか、いくつかの場合はこれらを形成する、環を形成する。それぞれの鎖中のCDRは、FR領域の近くに非常に密接して、他の鎖からのCDRと一緒に保たれており、抗体の抗原結合部位の形成に貢献している(Kabat他(1991)を参照のこと)。定常ドメインは、抗体と抗原の結合とは直接関係ないが、さまざまなエフェクター機能、抗体依存性細胞障害における抗体の関与などを示す。
【００２８】
「Fv」は、完全な抗原認識および結合部位を含む、最少の抗体フラグメントである。2本鎖Fv種では、この領域は、固く非共有結合した1本の重鎖と1本の軽鎖の可変ドメインの二量体からなる。1本鎖Fv種では、1本の重鎖と1本の軽鎖の可変ドメインは、柔軟なペプチド連結基によって共有結合することができ、したがって軽鎖と重鎖は、2本鎖Fv種中のそれと類似した「二量体」構造で、会合することができる。この立体配置中では、それぞれの可変ドメインの3つのCDRが相互作用して、VH-VL二量体の表面上の抗原結合部位を画定する。集合的に6つのCDRが、抗原結合特異性を抗体に与える。しかしながら、1つの可変ドメイン(または抗原に特異的な3つのCDRのみを含むFvの半分)さえも、結合部位全体より低い親和性ではあるが、抗原を認識しそれと結合する能力を有する。
【００２９】
用語「超可変領域」は、本明細書で使用すると、抗原結合を担う抗体のアミノ酸残基を指す。超可変領域は一般に、「相補性決定領域」すなわち「CDR」からのアミノ酸残基(例えば、軽鎖の可変ドメイン中の残基24〜34(L1)、50〜62(L2)、および89〜97(L3)、および重鎖の可変ドメイン中の31〜55(H1)、50〜65(H2)および95〜102(H3);Kabat他、Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed.Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD(1991))、および/または「超可変環」からの残基(例えば、軽鎖の可変ドメイン中の残基26〜32(L1)、50〜52(L2)および91〜96(L3)、および重鎖の可変ドメイン中の26〜32((H1)、53〜55(H2)および96〜101(H3);Chothia and Lesk J.Mot.Biol.196:901〜917(1987))を含む。「フレームワーク領域」すなわち「FR」残基は、本明細書で定義する超可変領域の残基以外の、可変ドメインの残基である。
【００３０】
用語「相補性決定領域」すなわち「CDR」は、本明細書で使用すると、特定のリガンドと接触しその特異性を決定する、免疫受容体の一部分を指す。免疫受容体のCDRは、受容体タンパク質の最も可変性のある部分であり、受容体にその多様性を与え、受容体の可変ドメインの末端の6つの環上に保たれており、3つの環は受容体の2つの可変ドメインのそれぞれに由来するものである。
【００３１】
用語「エピトープ」は、タンパク質抗原上の(モノクローナルまたはポリクローナル)抗体の、結合部位を指すために使用する。
【００３２】
本明細書で使用するように、用語「アミノ酸」または「アミノ酸残基」は、変異体に関して以下でさらに記載する、天然に存在するLアミノ酸またはDアミノ酸を指す。アミノ酸に関して一般的に使用されている、一文字および三文字の略語を本明細書で使用する(Bruce Alberts他、Molecular Biology of the Cell, Garland Publishing, Inc., New York(3ded.1994))。
【００３３】
用語「ABX-IL8抗体」は、Abgenix, Inc.of Fremont, California(www.abgenix.com)によって開発されたヒト抗IL-8抗体の一実施形態を意味する。
【００３４】
用語「疾患状態」は、細胞または身体機能、系、または器官の妨害、停止、または障害が起こっている、細胞または哺乳動物全体の生理的状態を指す。
【００３５】
用語「症状」は、それが一般的にその障害に特徴的であるかどうかに関係なく、任意の物理的または観察可能な障害の兆候を意味する。用語「症状」は、すべてのこのような兆候または任意のそのサブセットを意味することができる。
【００３６】
用語「治療する」または「治療」は、療法的治療、および予防または防止対策を指し、その目的は望ましくない生理的変化または障害、癌の進行または蔓延などを予防または遅延(低下)させることである。本発明の目的のために、有益または望ましい臨床結果には、症状の低下、疾患の程度の低下、安定した(すなわち悪化していない)疾患状態、疾患進行の遅延すなわち遅れ、疾患状態の改善または一時的緩和、および検出可能であれ検出不能であれ寛解(部分的であれ完全であれ)があるが、これらだけには限られない。「治療」は、治療を施さない場合に予想される生存状態と比較して、長期の生存状態を意味することもできる。治療の必要がある人には、疾患または障害を既に有する人、ならびに疾患または障害を有する傾向がある人、あるいは疾患または障害を予防すべき人がある。
【００３７】
治療目的の「投与」は、患者への送達を意味する。このような送達は、静脈内、腹腔内、吸入による、筋肉内、皮下、経口、局所、経皮、または外科手術によるものであってよい。
【００３８】
治療目的の「治療上有効な量」は、患者の状態および/または症状の観察可能な変化が、単独または他の治療と組み合わせた、その投与から生じると思われるような量を意味する。
【００３９】
治療目的の「薬剤として許容可能なベヒクル」は、患者に投与することができる物理的実施形態である。薬剤として許容可能なベヒクルは、ピル、カプセル、カプレット、錠剤、経口投与用流体、注射用流体、スプレー、エアロゾル、トローチ剤、栄養補助食品、クリーム、ローション、油、溶液、ペースト、粉末、蒸気、または液体であってよいが、これらだけには限られない。薬剤として許容可能なベヒクルの一例は、リン酸緩衝生理食塩水(PBS)などの緩衝等張溶液である。
【００４０】
治療目的の「中和」は、部分的または完全に、化学および/または生物学的活性を抑制することを意味する。
【００４１】
治療目的の「下方制御」は、特定の標的組成物のレベルを低下させることを意味する。
【００４２】
治療目的の「哺乳動物」は、ヒト、家畜および飼育動物、および動物園、スポーツ用、またはペット用動物、例えばサル、イヌ、ウマ、ネコ、ウシなどを含めた、哺乳動物として分類された任意の動物を指す。
【００４３】
用語「ポリペプチド」は、本来のタンパク質、断片、またはポリペプチド配列の類似体を指すための、一般的な用語として本明細書で使用する。したがって、本来のタンパク質、断片、および類似体は、ポリペプチド類の数種である。本発明の好ましいポリペプチドは、図l、5、9、13、17、21、25および29によって表されるヒト重鎖免疫グロブリン分子、および図3、7、11、15、19、23、27および31によって表されるヒトkappa軽鎖免疫グロブリン分子、および重鎖免疫グロブリン分子とkappa軽鎖免疫グロブリン分子などの軽鎖免疫グロブリン分子、及びその逆を含む組合せによって形成される抗体分子、ならびにその断片および類似体を含む。
【００４４】
本明細書で使用し物体に適用する、用語「天然に存在する」は、ある物体を天然で発見することができる事実を指す。例えば、天然の源から単離することができ、研究室において人間によって意図的に改変されたものではなく、あるいはそれ以外の場合は天然に存在する、微生物(ウイルス含む)中に存在するポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列。
【００４５】
本明細書で使用するように、20個の従来のアミノ酸およびそれらの略称は、従来の使用に従う。Immunology--A Synthesis(2nd Edition, E.S.Golub and D.R. Gren, Eds., Sinauer Associates, Sunderland, Mass.(1991))を参照のこと。20個の従来のアミノ酸の立体異性体(例えばD-アミノ酸)、非天然アミノ酸、α-,α-二置換アミノ酸、N-アルキルアミノ酸、乳酸など、および他の非従来型のアミノ酸も、本発明のポリペプチドに適した要素である可能性がある。非従来型のアミノ酸には、4-ヒドロキシプロリン、γ-カルボキシグルタメート、ε-N,N,N-トリメチルリシン、ε-N-アセチルリシン、O-ホスホセリン、N-アセチルセリン、N-ホルミルメチオニン、3-メチルヒスチジン、5-ヒドロキシリシン、σ-N-メチルアルギニン、および他の類似のアミノ酸およびイミノ酸(例えば4-ヒドロキシプロリン)がある。本明細書で使用するポリペプチド表記では、標準的使用および慣習に従い、左手方向がアミノ末端方向であり、右手方向がカルボキシ末端方向である。
【００４６】
本明細書で論じるように、抗体または免疫グロブリン分子のアミノ酸配列のわずかな変化は、本発明により含まれると企図される。ただし、アミノ酸配列の変化は、少なくとも75%、より好ましくは少なくとも80%、90%、95%、および最も好ましくは99%が維持されるものとする。特に、保存アミノ酸置換体が企図される。保存置換体は、その側鎖が関連しているアミノ酸のファミリー中で生じるものである。遺伝的にコードされているアミノ酸は、一般に以下のファミリーに分けられる:(1)酸性=アスパラギン酸、グルタミン酸;(2)塩基性=リシン、アルギニン、ヒスチジン;(3)非極性=アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン;および(4)非電荷極性=グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、トレオニン、チロシン。より好ましいファミリーは以下のファミリーである:セリンおよびトレオニンは脂肪族ヒドロキシファミリーであり;アスパラギンおよびグルタミンアミド含有ファミリーであり;アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシンは脂肪族ファミリーであり;かつフェニルアラニン、トリプトファンおよびチロシンは芳香族ファミリーである。例えば、ロイシンとイソロイシンまたはバリン、アスパラギン酸とグルタミン酸、トレオニンとセリンの単離置換、またはあるアミノ酸と構造的に関連があるアミノ酸の類似の置換は、置換が骨格部位中のアミノ酸と関係ない場合は特に、生成する分子の結合または性質に対して重大な影響を有することは無いと予想することが妥当である。アミノ酸の変化が機能性ペプチド中で起こるかどうかは、ポリペプチド誘導体の特異的活性をアッセイすることによって、容易に決定することができる。アッセイは本明細書に詳細に記載する。抗体または免疫グロブリン分子の断片または類似体は、当業者により容易に作製することができる。好ましいアミノおよびカルボキシ末端の断片または類似体は、機能性ドメインの境界の近くに存在する。構造および機能性ドメインは、ヌクレオチドおよび/またはアミノ酸配列データを、公または専売の配列データベースと比較することによって、同定することができる。好ましくは、コンピュータによる比較法を使用して、構造および/または機能が知られている他のタンパク質中に存在する、配列モチーフまたは予想されるタンパク質の立体配座ドメインを同定する。知られている三次元構造に折りたたまれている、タンパク質配列を同定するための方法は知られている。Bowie他、Science 253:164(1991)。したがって前述の例によって、当業者は、配列モチーフおよび構造的立体配座を理解することができ、これらを使用して、本発明に従い構造および機能性ドメインを定義することができることが実証される。
【００４７】
好ましいアミノ酸の置換は以下のものである:(1)タンパク質分解のし易さを低下させるもの、(2)酸化のし易さを低下させるもの、(3)タンパク質複合体形成に関する結合親和性を変えるもの、(4)結合親和性を変えるもの、および(4)このような類似体の他の物理化学的または機能的性質を与えるかあるいは改変するもの。類似体は、天然に存在するペプチド配列以外の配列の、さまざまな突然変異体を含むことができる。例えば、1つまたは複数のアミノ酸の置換(好ましくは保存アミノ酸の置換)を、天然に存在する配列において(好ましくは、分子内の接触部分を形成するドメインの外側のポリペプチドの一部分において)行うことができる。保存アミノ酸の置換は、親配列の構造特性を実質的に変えてはならない(例えばアミノ酸の置換は、親配列中に存在するヘリックスを破壊する、あるいは親配列を特徴付ける他の型の二次構造を破壊する傾向があってはならない)。当分野で認められているポリペプチドの二次構造および三次構造の例は、Proteins, Structures and Molecular Principles(Creighton, Ed., W.H.Freeman and Company, New York(1984));Introduction to Protein Structure(C.Branden and J.Tooze, eds., Garland Publishing, New York, N.Y.(1991));およびThornton他、Nature 354:105(1991)中に記載されている。
【００４８】
本明細書で使用する、用語「ポリペプチド断片」は、アミノ末端および/またはカルボキシ末端欠失があるポリペプチドを指すが、この場合残りのアミノ酸配列は、天然に存在する推定配列中の対応する位置、例えば完全長cDNA配列からのものと同一である。断片は典型的には、少なくとも5、6、8または10アミノ酸長、好ましくは少なくとも14アミノ酸長、より好ましくは少なくとも20アミノ酸長、通常は少なくとも50アミノ酸長、およびさらに好ましくは少なくとも70アミノ酸長である。
【００４９】
本明細書で使用するように、用語「標識」または「標識済み」は、例えば放射標識したアミノ酸または結合体を、標識済みアビジン(例えば、光学または比色法により検出することができる、蛍光マーカーまたは酵素活性を含むストレプトアビジン)により検出することができるポリペプチドのビオチニル部分に取り込ませることによる、検出可能なマーカーの取り込みを指す。いくつかの状況では、標識またはマーカーは治療用であってもよい。ポリペプチドおよび糖タンパク質を標識するさまざまな方法が、当分野で知られており、それらを使用することができる。ポリペプチド用の標識の例には、以下のもの:放射性同位体または放射核(例えば、3H、14C、15N、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I)、蛍光標識(例えばFITC、ローダミン、ランタニドリン酸)、酵素標識(例えばホースラディッシュペルオキシダーゼ、β-ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ)、化学発光物質、ビオチニル基、二次受容体によって認識される所定のポリペプチドエピトープ(例えばロイシンジッパー対配列、二次抗体の結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ)があるが、これらだけには限られない。いくつかの実施形態では、標識をさまざまな長さのスペーサーアームにより結合させて、考えられる立体障害を減少させる。
【００５０】
本明細書で使用する、用語「薬剤物質または薬剤」は、患者に適切に投与すると所望の治療効果を誘導することができる、化学化合物または組成物を指す。本明細書における他の化学用語は、The McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms(Parker, S., Ed., McGraw-Hill, San Francisco(1985))により例示されたのと同様に、当分野での従来の使用に従い使用する。
【００５１】
本明細書で使用するように、「実質的に純粋である」は、主題の種が存在する主な種であり(すなわち、モルベースで、その種が組成物中のいかなる他の種よりも豊富である)、好ましくは実質的に精製された分画が、その主題の種が存在する全てのマクロ分子種の少なくとも約50%を構成する(モルベースで)、組成物であることを意味する。一般的に、実質的に純粋である組成物は、組成物中に存在する全てのマクロ分子種の約80%より多くを、より好ましくは約85%、90%、95%および99%より多くを構成するであろう。主題の種をほぼ均質に精製し(従来の検出法により、組成物中の汚染種を検出することはできない)、組成物がほぼ1つのマクロ分子種からなることが最も好ましい。
【００５２】
用語、患者は、ヒトおよび獣の対象を含む。
【００５３】
本発明では、抗IL-8抗体をCOPDで苦しむ患者に投与して、患者の状態を改善することができる。したがって、慢性気管支炎、肺気腫、不可逆性の喘息、気管支拡張症、免疫グロブリン不全、およびのう胞性線維症などの、COPDのさまざまな兆候の1つまたは複数で苦しむ患者を、本発明の抗IL-8抗体を使用して治療することができる。
【００５４】
本発明によれば、抗IL-8抗体を投与して患者の症状を軽減することができ、あるいはそれを投与して、障害そのものの機構に対抗することができる。これらの治療目的は関連していることが多く、さまざまな要因に基づいて個々の患者に関して、治療を調節することができることは、当業者により理解されるであろう。これらの要因は、患者の年齢、性別、または健康状態、COPDの進行、呼吸困難の程度、患者の呼吸管に対する組織損傷の量、患者の喫煙歴、およびさまざまな環境要因(例えば、温度、湿度、および大気汚染を含む)を含むことができ、これらが患者の状態に貢献すると思われる。患者の治療法は、投与の用量、タイミング、投与の経路に応じて、および他の治療剤を同時または順次に投与することによって、調節することができる。
【００５５】
以下の実施例8は、本発明の一実施形態を記載するものであり、その中では抗IL-8抗体を、800mgの負荷用量、次に400mgの治療で3カ月間月に1回患者に投与する。しかしながら、他の用量(特に高用量)および他の投与スケジュールも、有効であろうことが予想される。例えば患者に、約100mg、200mg、300mg、400mg、500mg、600mg、700mg、800mg、900mg、1000mg、1100mg、1200mg、1300mg、1400mg、1500mg、1600mg、1700mg、1800mg、1900mg、2000mg、2500mg、3000mg、3500mg、4000mg、4500mg、または5000mg以上の抗IL-8抗体を1月当たりに与えることができる。さらに、抗IL-8抗体の投与は、1日1回、半週間に1回、週1回、2週に1回、1月に1回、2月に1回、あるいは患者および任意のヘルスケア提供者に好都合であり、薬学的有効性を与える何か他のスケジュールで、施すことができる。同様に抗IL-8抗体は、患者の現在の兆候および/または症状に従った要求で、あるいは悪化した状態、煙草の煙の存在への暴露時に投与することができる。用量および投与スケジュールを選択する際の考慮事項は、患者の呼吸状態、年齢、体重、性別、および以前の治療の結果を含むことができる。
【００５６】
最後に、抗IL-8抗体は、IL-8が炎症の化学走性誘因物質として作用する、あるいはそれ以外の場合は有害または破壊応答を仲介する、他の状態を治療するのに有用であろうことが企図される。COPD以外に、このような状態は、ARDS、慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患、糸球体腎炎、乾癬、アルコール性肝炎、潅流障害、腫瘍血管新生などを含むことができる。
【実施例】
【００５７】
(実施例1)
抗IL-8抗体による、COPD患者の喀痰中の好中球の走化性活性の阻害
方法:
患者から合計28の喀痰サンプルを得た。好中球は、以前に確立された方法を使用して、正常なドナーの末梢血から単離した。Ferrante, A.& Thong, Y.H.A Raid One-step Procedure for Purification of Mononuclear and Polymorphonuclear Leukocytes from Human Blood Using a Modification of the Hypaque-Ficoll Technique, J.Immunol.Methods24:389〜393(1978)を参照のこと。簡潔には、血液中をヘパリン中に回収し、Ficoll上で層状にした。好中球を単離し、使用前に4回洗浄した。0.5%ウシ血清アルブミンを含むRPMI培地に/4×106mlで、細胞を再懸濁させた。
【００５８】
喀痰中の好中球の走化性活性を、Boydenチャンバーを使用して決定した。喀痰の2つの希釈液(1:10および1:100)を使用し、下部チャンバー中に置いた(三連)。4×106好中球/mlである50μlの懸濁液を、上部チャンバー中に置いた。喀痰のそれぞれの希釈液を、25μg/mlのヒト抗IL-8モノクローナル抗体、ABX-IL8(Abgenix, Inc., Fremont, CA)、10nMのIL-8によって生じた90%を超える走化性活性を中和することを以前に決定した量の存在下において、単独で試験した。5μの孔サイズを有するポリカーボネート製フィルタを、チャンバーと分けた。
【００５９】
37℃で45分の後、フィルタの上側表面から移動しなかった細胞を、こすり取ることによって除去し、フィルタの下側をDiff-Quik(登録商標)染色液で染色した。移動した細胞の数は、最少6倍の視野から光学顕微鏡によって計数した。絶対的な移動を、いかなる喀痰も含まないウエルから観察された任意の無作為な移動を、差し引くことによって決定した。
【００６０】
結果:
図1は、2種類のIL-8濃度、1nMおよび10nMに関して、ABX-IL8濃度(μg/mlで測定したもの)の関数として、好中球の走化性を示すグラフである。図1に示すように、10nMの濃度の組換えIL-8で観察された、90%を超える好中球の走化性活性を中和するのに充分な、ABX-IL8の量は25μg/mlであった。このように、この濃度をすべての実験で選択して、COPD患者から採取した喀痰サンプルからの好中球の走化性活性に対する、IL-8の役割を評価した。
【００６１】
図2および3は、それぞれ1:10および1:100の希釈での、喀痰誘導型の好中球の走化性に対する、ABX-IL8の阻害効果を示す。これらの棒グラフの両方において、X軸に沿って示される0〜100%の範囲の阻害率が、それぞれ個々のドナーに関して示される。走化性の平均阻害率を、25μg/mlのABX-IL8を含むウエルと含まないウエルの、三連のウエルからの平均移動を使用して評価した。これらの図中に示されるように、25人の患者中12人が1:10の希釈で50%を超える阻害率を示し、25人の患者中16人が1:100の希釈で50%を超える阻害率を示した。それぞれの喀痰試料の実際の阻害率、および関連する走化性指標(CI、バックグラウンドに対して観察された走化性の量)、ならびに個々の症例の病歴データを、表1に示す。
【００６２】
図4は、ELISAにより決定された、それぞれの喀痰サンプル中の免疫反応性 IL-8の量を示す。この図は、X軸に沿って示されるそれぞれ個々のドナーに関する、0〜50ng/mlの範囲で測定されたIL-8の量を示す。
【００６３】
概要:
これらの研究によって、COPD患者からの喀痰試料で見られる好中球の走化性活性において、IL-8が重要な役割を果たしていることが示される。ELISAにより測定される実際のタンパク質レベルと、相関関係がないことによって、ELISAによる検出を害する喀痰中の阻害因子が示唆される。
【００６４】
【表１ａ】
2005520854.tif 000003
【表１ｂ】
2005520854.tif 000004
【００６５】
【表１ｃ】
2005520854.tif 000005
【００６６】
【表１ｄ】
2005520854.tif 000006
【００６７】
(実施例2)
IL-8抗体のin vivo投与によるによる肺炎症の阻害
方法:
IL8誘導型肺炎症のラットモデルにおいて、ヒト抗IL-8抗体ABX-IL8を使用することの有効性を評価する前に、ex vivoでの研究を使用して、ヒトIL-8がラット好中球を活性化させることができるかどうか、およびその活性化をABX-IL8抗体によって阻害することができるかどうかを決定した。
【００６８】
5匹のラットに、ヒトIgG2対照抗体PK16.3またはABX-IL8(0.3または3mg/kg)を静脈内に与えた。投与の24時間後、動物を採血した。ヒトIL-8(0.1〜1000nM)に応答する、全血中の好中球CD1lb(細胞表面接着分子および好中球の活性マーカー)の上方制御、および対照抗体と比べた阻害の程度(すなわちABX-IL8治療した動物における右側への曲線の変化)を、フローサイトメトリーによって評価した。図5は、ヒトIL-8(0.1〜10000nMの範囲)の濃度の関数として、好中球CD1lbの発現(80〜240の範囲の基本率)を示す。図5に示すように、IL-8はラット好中球の活性化を実際に刺激することができ、ABX-lL8は、ヒトIL8誘導型のラット好中球の活性化を阻害することができた。
【００６９】
COPDの治療剤としてABX-IL8を全身投与することの、潜在的な有用性を評価するために、IL8誘導型の肺炎症のラットモデルを、ヒトIL-8を気管内(i.t.)投与することによって確立した。8匹のラットに、ベヒクル対照(PBS+0.1%のわずかなエンドトキシン、ウシ血清アルブミン)、0.3μgのヒトIL-8、1μgのヒトIL-8、および3μgのヒトIL-8を気管内に与えた。気管内投与の4時間後、点滴注入、気管支肺胞洗浄(BAL)を、3×5mLの生理食塩水の等分試料を使用して行った。BAL液を、全体および特定の白血球細胞数に関して分析した。図6は、BAL中の好中球の合計数を示す。ヒトIL-8(0.3、1、および3μg)を気管内投与することによって、ラットがIL-8を発現しなくても、用量依存性の好中球のラットの気道への移動が誘発された。最大の好中球の合計数は、3μgの用量を与えたラットにおいて現れた。これらの結果に基づいて、3μgのヒトIL-8という用量を、ABX-IL8の研究用に選択した。なぜなら、この用量によって、肺中への最高レベルの好中球の移動がもたらされたからである。
【００７０】
IL-8仲介による好中球の侵入に対する、ABX-IL8抗体の影響を決定するために、グループ1(ラット10匹)、およびグループ2(ラット9匹)の動物には全身治療は施さなかったが、一方グループ3の動物(ラット11匹)には、ABX-IL8(5mg/kg)を第4日および第1日に静脈内投与した。グループ4の動物(ラット11匹)には、イソ型適合の対照モノクローナル抗体(PK16.3.1)(5mg/kg)を第4日および第1日に与えた。第0日に、グループ1のラットに、ベヒクル対照(100μL)を気管内投与し、グループ2、3、および4のラットには、3μgのヒトIL-8を気管内に100μLの容量で与えた。
【００７１】
結果:
図7は、ベヒクル対照、3μgのヒトIL-8、3μgのヒトIL-8+5mg/kgのABX-IL8、および3μgのヒトIL-8+5mg/kgの対照抗体PK16.3.1を与えたラットの、BAL中の合計好中球数を示す。図7に示すように、気管内に点滴注入したヒトIL-8によって、好中球の気道への侵入の3倍の増大が誘発され、ラット好中球がin vivoでヒトIL-8に応答することができることが実証された。5mg/kgのABX-IL8を静脈内投与することによって、IL8誘導型の気道への好中球の移動および蓄積の有意な阻害がもたらされ(p<0.001)、ABX-IL8に全身を曝すことによって、気道のIL-8を中和し、肺および気道の炎症を阻害することができることが示された。
【００７２】
(実施例3)
COPD患者におけるABX-IL8の安全性および有効性の評価
要約:
これは、COPDを有する患者での、二重盲検、平行群、3カ月試験であった。患者は閉塞性肺疾患の徴候を有しており、予測値の70%以下および30%以上のベースライン1秒量(FEV1)によって定義される中等度の重度の疾患をわずかに有していた。患者は慢性気管支炎の臨床診断も受けていた。肺気腫の徴候を有する患者を含めた。ただし彼らは、慢性気管支炎と一致する症状も有していた。すべての被験者は50才を超え、20年を超える喫煙歴を有していた。
【００７３】
この試験に登録した患者を1:1に無作為に分けて、ABX-IL8(800mgの負荷用量、次に2つの400mgの治療用量を月に1回投与した)またはプラセボのいずれかを与えた。この無作為化は、予想値の40%未満または40%以上のベースラインFEV1で階層化する。さらに患者は、気管支拡張剤応答の有無によって階層化した。気管支拡張剤応答は、アルブテロール吸入30分後のFEV1の12%以上および200mL以上の改善として定義した。
【００７４】
患者には2カ月の間に3回静脈内注入した(1回は第0カ月目に800mgの注入、1回は第1カ月目に400mgの注入、および1回は第2カ月目に400mgの注入)。試験用薬剤は、注入ポンプによって30〜60分間で注入した。
【００７５】
この試験の第一の目的は、第3カ月目の一時的呼吸困難指標(Transitional Dyspnea lndex)によって評価する3カ月間でのCOPDの治療に関してプラセボと比較した、ABX-IL8(800mgの負荷用量、次に400mgを合計3回毎月投与した)の、優れた臨床効果を実証することであった。
【００７６】
この試験の第二の目的は、1)慢性気管支炎を有する患者における、ABX-IL8の安全性および忍容を実証すること;2)UCSDの息切れに関するアンケートにより評価された患者の報告された呼吸困難に対する、ABX-IL8の影響を評価すること;3)6分間歩行および改変されたボルグ呼吸困難スケールにより測定された運動耐性に対する、ABX-IL8の影響を評価すること;4)セントジョージの呼吸に関するアンケートにより評価された生命の健康関連の性質に対する、ABX-IL8の影響を評価すること;5)患者の日記により測定された救済型気管支拡張剤療法に対する、ABX-IL8の影響を評価すること;6)COPD病状悪化の発生および最初のCOPD病状悪化時間に対する、ABX-IL8の影響を評価すること;7)COPDを有する患者に月に1回投与したABX-IL8の薬物動態を評価すること;8)BAL液中の細胞数、IL-8および他の炎症仲介物質レベルに対する、ABX-IL8の影響を評価すること、および気管支検査を受けた患者の亜群における、BAL液中のABX-IL8のレベルを評価すること;9)肺活量、呼吸困難の測定、および試験第4および5カ月目でのセントジョージの呼吸に関するアンケートによってABX-IL8の作用期間を評価することであった。
【００７７】
方法:
この試験は、119人の被験者、プラセボを与えた60人、およびABX-IL8抗体を与えた59人で始めた。これらの候補は、以下に記載するようにこの試験への参加に関して選択した。最終的に、53人のプラセボ被験者および56人のABX-IL8被験者が、この試験を終了した。被験者がこの試験を終了しなかった理由には、有害事象、有効性の欠如、または被験者の同意の撤回があった。
【００７８】
抗体を与えた被験者には、最初に800mgの負荷用量、および次に2回の400mgの用量を月に1回ずつ与え;プラセボ被験者には、同じスケジュールでプラセボ注射を与えた。被験者の評価は、第2週目、および第1〜5カ月目にベースラインで行った。
【００７９】
この試験のサンプルサイズは、第3カ月でのFEV1の改善の150mLの差異を検出するための0.05のαレベルで、ABX-IL8で治療した患者のベースラインと比較して、プラセボと比較して、全体の80%程度であった。ただし、プラセボ患者は50mLの改善を示し、ABX-IL8で治療した患者は200mLのFEV1の改善を示し、共通の標準偏差は265mLである。
【００８０】
患者のベースラインFEV1(予想された割合として)、およびスクリーニングにおける気管支拡張剤に対する患者のFEV1応答の程度に従って、患者を4つの階層に階層化した。4つの階層を以下のものによって定義した:
1. 予測値の40%以上のFEV1、および気管支拡張剤後のFEV1の12%未満または200mL未満の改善
2. 予測値の40%以上のFEV1、および気管支拡張剤後のFEV1の12%以上および200mL以上の改善
3. 予測値の40%未満のFEV1、および気管支拡張剤後のFEV1の12%未満または200mL未満の改善、および
4. 予測値の40%未満のFEV1、および気管支拡張剤後のFEV1の12%以上および200mL以上の改善。
【００８１】
それぞれの階層中では、2つの治療群(ABX-IL8またはプラセボ)の1つに1:1の比で、患者を無作為に分ける。
【００８２】
以下の包含規準および除外規準を使用して、候補者がこの試験に適した被験者であるかどうかを決定した:
【００８３】
1. 組入規準
a. 患者は50才以上である。
b. 患者は20年以上の喫煙歴を有していなければならない。
c. 閉経後である(閉経後は過去1年間月経がないものとして定義する。月経の停止が12カ月以内である場合、閉経後範囲の予備試験に入れるものとして、FSHを記録しなければならない)、外科手術により不妊状態である、あるいは妊娠を妨げる医学的状態(例えば多のう胞性卵巣疾患)を有する、経口またはインプラント避妊薬、またはIUDを使用している、この試験の開始時に妊娠検査で陰性の血清を有する女性患者、あるいはこの試験の登録時に二重の産児制限を使用することを望む男性パートナー。唯一のパートナーが精管切除している女性患者は、産児制限を使用する必要はない。子供をもうける可能性があるすべての親は、試験の間中、あるいはどのような長さであれ、試験用薬剤を最後に投与した後少なくとも5カ月、許容可能な産児制限法を使用し続けるものとする。
d. 患者は慢性気管支炎の臨床診断を受けていなければならない。
e. COPDを除き、患者は他の場合、病歴、身体検査、および日常的な試験室でのスクリーニング試験に基づいて、一般的で良好な健康状態であると診断されている。
f. 患者が試験手順を理解しており、文書化されたインフォームドコンセントを提出することによって、試験に参加することに同意している。
g. 患者が、改変されたMedical Research Councilの呼吸困難程度で、等級1以上の息切れの基本重度を有している。
h. BALを用いて気管支検査を行う部位において、患者はいくつかの手順に関して医学上安定していると判断され、気管支拡張剤前の40%以上、1.5リットル以上の予測FEV1を有していなければならず、50mmHg未満の大気動脈圧pCO2、および60mmHgを超えるp02を有していなければならず、これらの手順に関して文書化されたインフォームドコンセントを提出しなければならない。
i. スクリーニングにおいて、患者は6分間歩行首尾よく終了しなければならない。
j. 予備試験来院において、患者は以下の規準も満たさなければならない。:
i. 予測値の30%以上のFEV1、および予測値の70%以下のFEV1
ii. 70%未満のFEV1/FVC
【００８４】
2. 除外規準
a. 患者が、気管支拡張症、のう胞性線維症、結核、喘息、α1抗トリプシン欠損症、または左側うっ血性心不全だけには限られないがこれらを含めた、有効性の評価を乱すかあるいは害すると思われる併発する医学的/肺疾患を有する。
b. 患者が脈管炎の病歴を有する。
c. 患者が、アルブテロール(180μg)吸入治療後30分で、どのような大きさのものであれ30%を超えるかあるいは300mLを超えるものとして定義される気管支拡張剤に対する有意な応答、FEV1の改善を示し、気管支拡張剤後のFEV1が予測値の70%を超える。
d. 患者が酸素療法(夜間使用以外)を必要とするか、あるいは運動試験(6分間歩行)中に酸素療法を必要とする。
e. 患者が精神的または法的に無力であり、試験時に重大な感情の問題を有し、あるいは精神病の病歴を有する。
f. 患者が、安静または最少活動時に起こる症状を伴うアンギナを有する、かつ/あるいは過去6カ月以内に心筋梗塞症、冠状動脈拡張症、または冠状動脈バイパス移植の病歴を有する。
g. 患者が、運動関連の失神または跛行の病歴を有する。
h. 患者が制御されていない高血圧症を有する(注:医学的に制御された高血圧症を有する患者(拡張期血圧90以下、収縮期血圧150以下)を加えることができる。)
i. 患者がHIVに関して血清反応陽性である。
j. 患者がB型肝炎表面抗原またはC型肝炎抗体に陽性である(患者がC型肝炎抗体に陽性であり、患者がC型肝炎RNAに陰性であると診断される場合、患者は許容可能である)。
k. 患者が腫瘍性疾患の病歴を有し、以下に列挙する例外の1つに適合しない。白血病、リンパ腫、または骨髄増殖性疾患の病歴を有する患者は、治療後の時間に関係なくこの試験には不適格であり、このような場合、例外は適用しない。
例外
i. 適切に治療された基底細胞癌、皮膚扁平上皮癌、または子宮正常所在癌を有する患者。
ii. スクリーニングの5年以上前に治療が成功した他の悪性腫瘍を有する患者であって、治験責任医師および治療医師の判断で、適切な追跡調査により、治療時からスクリーニング時までに再発の証拠が示されなかった患者。
iii. Abgenixモニターと治験責任医師の共同の意見で、試験の期間中に再発を被る可能性が低い患者。
l. 患者が、治験責任医師の意見で、試験の結果を乱す可能性があるか、あるいは患者に対する他の危険を引き起こす可能性がある、任意の疾患の病歴を有する。
m. 治験責任医師または医学モニターの意見で、患者が、予備試験の臨床試験または試験室での安全性試験において、臨床上重大な異常を有する。
n. 患者が現在、任意の違法薬剤の使用者である(「気晴らしの使用」を含む)、あるいは薬剤またはアルコール乱用の病歴を有する(過去5年以内)。
o. 最近4週間以内に患者が一単位の血液または血漿を提供しているか、あるいは治験薬に関する他の臨床試験に参加している。(プロトコルに参加中に、血液または血液産物の提供を控えようとしない患者も、除外される。)
p. 患者が臨床試験において、ABX-IL8に以前に曝されている。
q. スクリーニングにおける、以下の具体的な酸素検査異常の病歴:
白血球減少症(<3×109/L)
好中球減少症(<1.5×109/L)
貧血症(Hgb<11g/dL)
血小板減少症(<100×109/L)
高血清クレアチニン(>1.5mg/dL)
通常の上限の2倍を超えて多い、トランスアミナーゼ(ALTまたはAST)
15秒より大きいPT、または40秒より大きいPTT
r. COPD病状悪化の最近の病歴(試験来院2の2カ月以内)、あるいは入院または救急室治療を必要とする肺炎
s. 入院または静脈内抗生物質を必要とする感染の病歴(試験開始の2週間以内)、および/または活発な感染の臨床的徴候/症状
t. 近年の外科手術(試験開始の1カ月以内)。
u. 現在治癒されている外科手術的または非外科手術的障害。
【００８５】
3. 事前または同時薬剤療法
a. 患者に試験来院2前の1カ月以内に(試験薬剤療法の最初の投与)、不連続な経口または非経口コルチコステロイドを与えることができず、患者はそれらを有することもできない。
b. 患者には試験来院2前の1週間以内に(試験薬剤療法の最初の投与)、不連続な吸入コルチコステロイド、ロイコトリエン受容体アンタゴニスト、セオフィリン含有調製物または経口βアゴニストを与えることができず、患者はそれらを有することもできない。
c. 患者にはスクリーニング時または試験開始時に、経口または非経口抗生物質を与えることができない。
d. 患者は吸入型長期作用βアゴニスト(キシナホ酸サルメテロール)を使用することができるが、それぞれの試験来院前の少なくとも12時間、それらの使用を控えなければならない。
e. 患者は吸入型臭化イパトロピウムを使用することができるが、それぞれの試験来院前の少なくとも6時間、それらの使用を控えなければならない。
f. 患者は吸入型短期作用βアゴニスト(例えばアルブテロール)を使用することができるが、それぞれの試験来院前の少なくとも6時間、それらの使用を控えなければならない。「必要に応じた」規模で投与する、吸入型気管支拡張剤の使用は、試験の行程中に患者の日記に記録する。
g. 患者にはスクリーニング時または治療期間中に、ワルファリンまたはヘパリン含有化合物を与えることができない。
【００８６】
試験来院:
試験来院を、以下のプロトコルに従って行った:
【００８７】
試験来院1:
可能性のある患者を評価して、患者が登録要件を満たすかどうかを決定した。治験責任医師は身体検査、肺活量測定(気管支拡張剤の前後)、改変されたMedical Research Councilの呼吸困難程度の、6分間歩行およびスクリーニング実験を行った。スクリーニングを首尾よく終えた患者は、無作為化に適していた。これらの患者に関しては、試験来院2は試験来院1の後、2週間のスケジュールであった。
【００８８】
試験来院2:
試験来院2はベースライン来院であった。以下の手順を行った:
1. 患者にセントジョージの呼吸に関するアンケート、およびUCSDの息切れに関するアンケートを終了させた
2. 基本的呼吸困難に関するアンケートを実施した
3. バイタルサインおよび体重
4. 略式身体検査
5. 肺活量測定、肺容量および拡散容量
6. 180μgの吸入型アルブテロールの30分後に肺活量測定
7. ボルグ呼吸困難スケールで6分間歩行
8. BALを用いて気管支検査を、患者の亜集団に指定のBAL部位で行った
9. 尿妊娠検査
10. 尿検査
11. 投与前に、以下のもの用に血液を採取した:
分画および絶対血小板数を含むCBC
血清化学
HAHA
ABX-IL8PKを介したもの
内因性の遊離血清IL-8レベル;血清はサイトカイン分析用に保管した。
【００８９】
試験用薬剤を、滅菌条件下において約30分の間静脈内投与した。バイタルサインの通常の評価を、試験用薬剤注入中およびその30分後に得た。投与の終了後30分で、ピークのABX-IL8PKに関して、血液を採取した。有害事象を、試験用薬剤注入中およびその後に記録した。そのβアゴニストの使用を記録するために、患者に日記を渡した。
【００９０】
試験来院3:
試験来院3を、試験来院2の1カ月後に行った。以下の手順を行った:
1. 患者のβアゴニストによる救済薬剤療法の記録
2. 有害事象の記録
3. 患者にセントジョージの呼吸に関するアンケート、およびUCSDの息切れに関するアンケートを終了させた
4. 一時的呼吸困難指標に関するアンケートを実施した
5. バイタルサインおよび体重
6. 身体検査
7. 肺活量測定(気管支拡張剤の前後)
8. ボルグ呼吸困難スケールで6分間歩行
9. 尿妊娠検査
10. 尿検査
11. 投与前に、以下のもの用に血液を採取した:
分画および絶対血小板数を含むCBC
血清化学
ABX-IL8PKを介したもの
内因性の遊離血清IL-8レベル;血清は他のサイトカイン分析用に保管した。
【００９１】
試験用薬剤を、滅菌条件下において約30分の間静脈内投与した。バイタルサインの通常の評価を、試験用薬剤注入中およびその30分後に得た。ピークのABX-IL8PKに関して(投与の終了後約30分で)、血液を採取した。
【００９２】
試験来院4:
試験来院4を、試験来院2の約2カ月後に行った。以下の手順を行った:
1. 患者のβアゴニストによる救済薬剤療法の記録
2. 有害事象の記録
3. 患者にセントジョージの呼吸に関するアンケート、およびUCSDの息切れに関するアンケートを終了させた
4. 一時的呼吸困難指標に関するアンケートを実施した
5. バイタルサインおよび体重
6. 身体検査
7. 肺活量測定(気管支拡張剤の前後)
8. ボルグ呼吸困難スケールで6分間歩行
9. 尿妊娠検査
10. 尿検査
11. 投与前に、以下のもの用に血液を採取した:
分画および絶対血小板数を含むCBC
血清化学
ABX-IL8PKを介したもの
内因性の遊離血清IL-8レベル;血清は他のサイトカイン分析用に保管した。
【００９３】
試験用薬剤を、滅菌条件下において約30分の間静脈内投与した。バイタルサインの通常の評価を、試験用薬剤注入中およびその30分後に得た。ピークのABX-IL8PKに関して(投与の終了後約30分で)、血液を採取した。
【００９４】
試験来院5:
試験来院5を、試験来院2の約3カ月後に行った。以下の手順を行った:
1. 患者のβアゴニストによる救済薬剤療法の記録
2. 有害事象の記録
3. 患者にセントジョージの呼吸に関するアンケート、およびUCSDの息切れに関するアンケートを終了させた
4. 一時的呼吸困難指標に関するアンケートを実施した
5. バイタルサインおよび体重
6. 身体検査
7. 肺活量測定、肺容量および拡散容量
8. 気管支拡張剤の30分後に肺活量測定
9. ボルグ呼吸困難スケールで6分間歩行
10. BALを用いて気管支検査を、患者の亜集団に指定のBAL部位で行った
11. 尿妊娠検査
12. 尿検査
13. 以下のもの用に血液を採取した:
分画および絶対血小板数を含むCBC
血清化学
HAHA
ABX-IL8PKを介したもの
内因性の遊離血清IL-8レベル;血清は他のサイトカイン分析用に保管した。
【００９５】
試験来院6-安全性追跡調査
試験来院6を、試験来院2の約4カ月後に行った。以下の手順を行った:
1. 有害事象および同時薬剤療法の記録
2. 患者にセントジョージの呼吸に関するアンケート、およびUCSDの息切れに関するアンケートを終了させた
3. 一時的呼吸困難指標に関するアンケートを実施した
4. バイタルサインおよび体重
5. 身体検査
6. 肺活量測定(気管支拡張剤の前後)
7. 以下のもの用に血液を採取した:
分画および絶対血小板数を含むCBC
血清化学
ABX-IL8PKを介したもの
HAHA
血清はサイトカイン分析用に保管した
【００９６】
試験来院7-安全性追跡調査
試験来院7を、試験来院2の約5カ月後に行った。以下の手順を行った:
1. 有害事象および同時薬剤療法の記録
2. 患者にセントジョージの呼吸に関するアンケート、およびUCSDの息切れに関するアンケートを終了させた
3. 一時的呼吸困難指標に関するアンケートを実施した
4. バイタルサインおよび体重
5. 身体検査
6. 肺活量測定(気管支拡張剤の前後)
7. 以下のもの用に血液を採取した:
分画および絶対血小板数を含むCBC
血清化学
ABX-IL8PKを介したもの
HAHA
血清はサイトカイン分析用に保管した
【００９７】
それぞれの試験来院で行った手順を、表2に示す。
【００９８】
【表２】
2005520854.tif 000007
【００９９】
結果
ABX-IL8抗体を与えた被験者の平均TDI値は、プラセボを与えた被験者の平均TDI値と比べて改善されたことを発見した。同じBDIを有するプラセボ被験者と比較して、7以上ベースライン呼吸困難指標(BDI)を有し抗体治療を施した被験者において、FEV1の好ましい変化があったことも発見した。したがって、IL-8に対する抗体を用いたCOPDの治療は、患者のCOPDの影響を低下させるために有効であった。
【０１００】
(実施例4)
ヒトにおけるCOPDの治療
COPDで苦しむ患者を識別する。5mg/kgの用量のABX-IL8抗体を、静脈内注射により患者に投与する。追加投与を3週間後、その後3週間毎に行う。ABX-IL8抗体は、炎症した呼吸組織中で、好中球の走化性の部分的または全体的な阻害を引き起こす。好中球の走化性のこの阻害によって、肺の組織損傷の重度が低下し、空気の通過が患者の免疫応答によって引き起こされた。
【０１０１】
(実施例5)
ヒトにおける慢性気管支炎の治療
慢性気管支炎によって特徴付けられるCOPDで苦しむ、患者を識別する。5mg/kgの用量のABX-IL8抗体を、静脈内注射により患者に投与する。追加投与を3週間後、その後3週間毎に行う。ABX-IL8抗体は、炎症した呼吸組織中で、好中球の走化性の部分的または全体的な阻害を引き起こす。好中球の走化性のこの阻害によって、肺の組織損傷の重度が低下し、空気の通過が患者の免疫応答によって引き起こされた。
【０１０２】
(実施例6)
ヒトにおける肺気腫の治療
肺気腫によって特徴付けられるCOPDで苦しむ、患者を識別する。5mg/kgの用量のABX-IL8抗体を、静脈内注射により患者に投与する。追加投与を3週間後、その後3週間毎に行う。ABX-IL8抗体は、炎症した呼吸組織中で、好中球の走化性の部分的または全体的な阻害を引き起こす。好中球の走化性のこの阻害によって、肺の組織損傷の重度が低下し、空気の通過が患者の免疫応答によって引き起こされた。
【０１０３】
(実施例7)
ヒトにおける不可逆性の喘息の治療
後期または不可逆性の喘息によって特徴付けられるCOPDで苦しむ、患者を識別する。5mg/kgの用量のABX-IL8抗体を、静脈内注射により患者に投与する。追加投与を3週間後、その後3週間毎に行う。ABX-IL8抗体は、炎症した呼吸組織中で、好中球の走化性の部分的または全体的な阻害を引き起こす。好中球の走化性のこの阻害によって、肺の組織損傷の重度が低下し、空気の通過が患者の免疫応答によって引き起こされた。
【図面の簡単な説明】
【０１０４】
【図１】ABX-IL8濃度の関数として、好中球の走化性を示す図である。
【図２】1:10に希釈したCOPDの喀痰を使用する実験での、ABX-IL8による好中球の走化性の阻害率を示す図である。
【図３】1:100に希釈したCOPDの喀痰を使用する実験での、ABX-IL8による好中球の走化性の阻害率を示す図である。
【図４】COPD患者の喀痰中で検出された、IL8の量を示す図である。
【図５】ラットの研究における、ABX-IL8によるIL8誘導型の好中球の活性の阻害を示す図である。
【図６】さまざまな量のヒトIL-8で与えられる、ラットの好中球の量を示す図である。
【図７】ヒトIL-8およびABX-IL8で与えられる、ラットの好中球の量を示す図である。
【図１】
2005520854.tif 000008
【図２】
2005520854.tif 000009
【図３】
2005520854.tif 000010
【図４】
2005520854.tif 000011
【図５】
2005520854.tif 000012
【図６】
2005520854.tif 000013
【図７】
2005520854.tif 000014
【国際調査報告】
2005520854.tif 000015
2005520854.tif 000016