(57)【要約】細胞保護化合物（その多くは、ベンゾフラン誘導体である）は、発作、心筋梗塞、うっ血性心不全、および炎症または酸化障害により特徴付けられる皮膚障害を含むがこれらに限定されない特定の虚血性状態または炎症状態の処置に有用である。これらはまた、このような状態の処置のための薬学的処方物および美容処方物の製造において有用である。本発明はまた、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）を低減することによって炎症を処置する方法に関する。本発明はまた、皮膚炎症および他の皮膚障害の処置のための美容用処方物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉにより示される化合物
【化１】
2005517014.tif 000047
であって、ここで
Ｒ１は：水素、必要に応じて置換された（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル、必要に応じて置換された（Ｃ２〜Ｃ１０）−アルケニル、必要に応じて置換されたアリール、（必要に応じて置換された（Ｃ１〜Ｃ６）−アルコキシ）カルボニル、またはハロゲンであり；
Ｒ２およびＲ３は、必要に応じて置換された（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル、必要に応じて置換された（Ｃ２〜Ｃ１０）−アルケニル、または必要に応じて置換された（Ｃ３〜Ｃ８）−シクロアルキルから独立して選択され；
Ｒ４は：水素、必要に応じて置換されたアリール、（必要に応じて置換された（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル）カルボニル、（必要に応じて置換されたアリール）カルボニル、（必要に応じて置換されたヘテロシクリル）カルボニル、（必要に応じて置換されたヘテロシクリルアルキル）カルボニル、（必要に応じて置換された（Ｃ１−Ｃ６）−アルコキシ）カルボニル、（必要に応じて置換された（Ｃ２〜Ｃ１０）−アルケニルオキシ）カルボニル、（必要に応じて置換された）カルボニル、カルボキシ、ホルミル、またはヒドロキシ（必要に応じて置換された）（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキルであり；
Ｒ５は：水素、（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル、（Ｃ２〜Ｃ１０）−アルケニル、（必要に応じて置換されたアルコキシ）カルボニル、カルボキシ、（必要に応じて置換されたアミノ）カルボニル、または必要に応じて置換されたアリールであり；
ただし、Ｒ４またはＲ５の一方は水素であり、Ｒ４が水素である場合、Ｒ５は水素ではなく、そしてＲ５が水素である場合、Ｒ４は水素でなく；
Ｒは、水素、（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキルカルボニル、ホスホリル、もしくはポリアルコキシ；または
ＲおよびＲ１は、これらが結合している原子と一緒に、必要に応じて置換された環を形成し；該式Ｉの化合物の単一の立体異性体、立体異性体の混合物、および薬学的に受容可能な塩を含む、化合物。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物であって、Ｒ１は、水素またはハロゲンである、化合物。
【請求項３】
請求項１に記載の化合物であって、Ｒ２およびＲ３は、（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキルである、化合物。
【請求項４】
請求項３に記載の化合物であって、Ｒ１は、水素である、化合物。
【請求項５】
請求項４に記載の化合物であって、Ｒは水素である、化合物。
【請求項６】
請求項５に記載の化合物であって、Ｒ５は、必要に応じて置換されたフェニルであり、１つ以上の置換基は、（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）−アルコキシ、ヒドロキシ、カルボキシ、（Ｃｌ〜Ｃ６）−アルコキシカルボニル、ニトロ、ハロ、およびシアノから独立して選択される、化合物。
【請求項７】
請求項６に記載の化合物であって、Ｒ４は水素である、化合物。
【請求項８】
請求項５に記載の化合物であって、Ｒ４は、必要に応じて置換されたフェニルであり、１以上の置換基は、（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）−アルコキシ、ヒドロキシ、カルボキシ、（Ｃ１〜Ｃ６）−アルコキシカルボニル、ニトロ、ハロ、およびシアノから独立して選択される、化合物。
【請求項９】
請求項８に記載の化合物であって、Ｒ４は、４−ニトロフェニルまたは４−シアノフェニルであり、Ｒ５は水素である、化合物。
【請求項１０】
請求項５に記載の化合物であって、Ｒ４は、ホルミル、必要に応じて置換されたフェニルカルボニル、必要に応じて置換された（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキルカルボニル、またはヒドロキシ（必要に応じて置換された（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル）であり、１以上の置換基は、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、ハロゲン、シアノ、およびヘテロシクリルから独立して選択される、化合物。
【請求項１１】
請求項１０に記載の化合物であって、Ｒ４は、ホルミル、フェニルカルボニル、アセチル、ブロモアセチル、モルホリン−１−イル−アセチル、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシ−２−モルホリニル−４−イルエチル、または６−ヒドロキシ−３−メチル−［１，３］オキサジナン−６−イルであり；Ｒ５は水素である、化合物。
【請求項１２】
請求項５に記載の化合物であって、Ｒ４は、（Ｃ１〜Ｃ６）−アルコキシカルボニル、（Ｃ２〜Ｃ１０）−アルケニルオキシカルボニル、または必要に応じて置換されたアミノカルボニルであり、ここで１以上の置換基は、（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキルおよびヒドロキシ−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキルから独立して選択される、化合物。
【請求項１３】
請求項１２に記載の化合物であって、Ｒ４は、ビス−（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド、２−ヒドロキシ−エチル−アミド、カルボン酸；カルボン酸メチルエステル；カルボン酸３，７ジメチル−オクタ−２，６−ジエニルエステル；［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］エチルエステルまたはモルホリン−１−イルカルボニルであり；Ｒ５は水素である、化合物。
【請求項１４】
請求項１に記載の化合物であって、ＲおよびＲ１は、これらが結合している原子と一緒に、必要に応じて置換された環を形成する、化合物。
【請求項１５】
請求項１４に記載の化合物であって、ＲおよびＲ１は、これらが結合している原子と一緒になって、フェニルで置換されたフラン環を形成し、該フェニルは、アルキル、アルケニル、ヒドロキシ、アルコキシ、ニトロ、シアノ、カルボキシ、エステル、ハロアルキル、およびハロから独立して選択される１以上の置換基で必要に応じて置換される、化合物。
【請求項１６】
以下の群から選択される、請求項１に記載の化合物：
・（５−ヒドロキシ−３，６，７−トリメチル−ベンゾフラン−２−イル）−フェニル−メタノン；
・（５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−イル）−モルホリン−４−イル−メタノン；
・１−（５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−イル）−エタノン；
・酢酸２−（２−ブロモ−アセチル）−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−５−イルエステル；
・２−（１−ヒドロキシ−２−モルホリン−４−イル−エチル）−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−５−オール；
・酢酸６，７−ジメチル−２−（２−モルホリン−１−イル−アセチル）−ベンゾフラン−５−イルエステル；
・酢酸２−（６−ヒドロキシ−３−メチル−［１，３］オキサジナン−６−イル）−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−５−イルエステル；
・１−（５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−イル）−２−モルホリン−４−イル−エタノン；
・１−（４−ブロモ−５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−イル）−エタノン；
・２−ヒドロキシメチル−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−５−オール；
・６，７−ジメチル−３−フェニル−ベンゾフラン−５−オール；
・６，７−ジメチル−２−（４−ニトロ−フェニル）−ベンゾフラン−５−オール；
・５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−カルバルデヒド；
・４−（５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−イル）−ベンゾニトリル；
・５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−カルボン酸；
・５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−カルボン酸メチルエステル；
・５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−カルボン酸３，７−ジメチル−オクタ−２，６−ジエニルエステル；
・５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−カルボン酸ビス−（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド；
・５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−カルボン酸２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチルエステル；
・５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド；
・（５−ヒドロキシ−３，６，７−トリメチル−ベンゾフラン−２−イル）−フェニル−メタノン；
・酢酸２−（２−ブロモ−アセチル）−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−５−イルエステル；
・２−ヒドロキシメチル−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−５−オール；
・６，７−ジメチル−３−フェニル−ベンゾフラン−５−オール；
・６，７−ジメチル−２−（４−ニトロ−フェニル）−ベンゾフラン−５−オール；
・５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−カルバルデヒド；
・５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−カルボン酸；
・５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−カルボン酸メチルエステル；
・５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−カルボン酸ビス−（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド；
・５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−カルボン酸２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチルエステル；
・５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド；
・３−（４−メトキシ−フェニル）−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−５−オール；
・３−（４−クロロ−フェニル）−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−５−オール；
・３−（４−フルオロ−フェニル）−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−５−オール；
・４，５−ジメチル−１，８−ジフェニル−ベンゾ［１，２−ｂ；４，３−ｂ’］ジフラン；
・１，８−ビス−（４−フルオロ−フェニル）−４，５−ジメチル−ベンゾ［１，２−ｂ；４，３−ｂ’］ジフラン；および
・１，８−ビス−（４−メトキシ−フェニル）−４，５−ジメチル−ベンゾ［１，２−ｂ；４，３−ｂ’］ジフラン。
【請求項１７】
少なくとも１つの受容可能な賦形剤と混合されて、請求項１〜１６のいずれかに記載の化合物を含む、薬学的処方物または化粧品処方物。
【請求項１８】
医薬品としての使用するための、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１９】
酸化的ストレスによって特徴付けられる疾患の処置または予防のための医薬品の製造のための、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の１以上の化合物の使用。
【請求項２０】
請求項１９に記載の使用であって、前記状態は、発作、大脳虚血、腎虚血、心筋梗塞、慢性心不全、術後認知機能不全、末梢神経障害、脊髄傷害、頭部傷害、および手術外傷を含む、使用。
【請求項２１】
請求項１９に記載の使用であって、前記状態は、炎症性成分または自己免疫成分に関連する、使用。
【請求項２２】
請求項１９に記載の使用であって、前記状態は、皮膚の状態である、使用。
【請求項２３】
請求項２２に記載の使用であって、前記状態は、皮膚状態の調節、皮膚加齢の徴候の調節、毛髪成長調整の調節、ならびに接触性皮膚炎、皮膚色素沈着、レチノイド誘導性刺激、挫瘡、乾癬、加齢関連損傷および有害な（ＵＶ）照射、ストレスまたは疲労から生じる損傷を含む刺激の処置を含む、使用。
【請求項２４】
上昇したＣ反応性タンパク質レベルにより特徴付けられる炎症状態の処置または予防のための医薬品の製造のための、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の１以上の化合物の使用。
【請求項２５】
請求項２４に記載の使用であって、前記炎症状態は、心血管炎症状態、呼吸器炎症状態、敗血症、糖尿病、筋肉疲労、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、末期腎臓病（ＥＲＳＤ）、歯周疾患、および炎症性の皮膚状態を含む、使用。
【請求項２６】
本明細書中に記載される発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、細胞保護活性を有する特定の組成物に関し、特に、一連のベンゾフラン誘導体に関する。本発明はまた、脳卒中、心筋梗塞および慢性心不全ならびに代表的に細胞性酵素調節に応答性の他の酸化的ストレス関連状態を処置するための処方物および方法に関する。本発明はまた、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）を低減することによって炎症を処置する方法に関する。本発明はまた、皮膚炎症および他の皮膚障害の処置のための美容用処方物に関する。
【背景技術】
【０００２】
（背景情報）
本発明は、細胞保護性化合物に関し、これらは、ベンゾフラン誘導体であり、上記誘導体は、立体異性体、立体異性体の混合物およびその薬学的に受容可能な塩を含む。
【０００３】
本発明の組成物は、例えば、特定の虚血状態または炎症状態（脳卒中、心筋梗塞、鬱血性心不全、および炎症または酸化的損傷によって特徴付けられる皮膚障害を含むがこれらに限定されない）における効力を予測する、特定の実験モデルにおいて活性である。それゆえ、本発明は、このような状態における細胞保護誘導体の使用に関する。
【０００４】
２，３−ジヒドロ−５−オキシ−４，６，７−トリメチル−２−必要に応じて置換されたアルキルベンゾフランは、米国特許第５，１１４，９６６号において、抗虚血特性を有する抗酸化性薬学的生成物として開示される。２，３−ジヒドロベンゾフランカルボン酸のヒドロキサミン誘導体は、米国特許第５，４８０，６４５号において開示される。新生血管形成を予防および処置する際に有用な２，３−ジヒドロフラン誘導体は、米国特許第５，７１９，１６７号および同第５，７９８，３５６号に開示される。５−ヒドロキシベンゾフランは、米国特許第５，６７４，８７６号において、病理学的細胞増殖疾患の処置について開示される。６−ヒドロキシベンゾフランにより哺乳動物ロイコトリエン生合成を阻害する方法が、米国特許第４，７１４，７１１号に開示される。
【０００５】
種々の薬剤が、このような状態のためにこれまで提供されてきたが、しかし、酸化的ストレスによって特徴付けられる状態についての新たな治療を提供すること、特に、大脳虚血、紫外線曝露または炎症の事象における保護を提供することに；特に、虚血性障害または酸化的障害後に、かなりの期間（例えば、約５時間以上）の後に最初に投与される場合でさえも有効である薬剤が望まれる。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
（発明の要旨）
本発明は、酸素欠乏に供された、酸化能力のある細胞において代謝完全性を回復または保存する際に特に活性である、特定の新規および関連の細胞保護化合物に関する。このような化合物は、主としてベンゾフラン誘導体であり、虚血傷害または酸化的傷害後にかなりの時間間隔が経ってから投与された場合でさえも、酸化的ストレスによって特徴付けられる多数の状態を処置するための、薬学的組成物の製造において有用であり、そして特に、脳の虚血または紫外線曝露、または炎症の事象において保護を提供する際に有用である。特に、本発明の組成物は、限局性脳虚血の標準的実験モデルにおいて神経保護を提供することによって実証されるように、脳卒中の処置において有用である。これらはまた、心筋虚血（心筋梗塞）、ならびに酸化的ストレスおよび／または炎症によって特徴付けられる他の適応症（糖尿病、腎臓疾患、月経前症候群、喘息、心肺炎症障害、慢性心不全、慢性関節リウマチ、筋肉疲労、間欠性跛行を含むがこれらに限定されない）の処置において、および移植用の同種移植片組織の保存のために、有用である。特に、皮膚科学的状態に関して、本発明の化合物、処方物および方法は、皮膚の状態を調節する際に、皮膚老化の徴候を調節する際に、そして多数の状態を処置する際（加齢性損傷または例えば、有害な（ＵＶ）放射線、ストレスおよび疲労から生じる損傷に対する皮膚組織の予防および保護の際を含むが、これらに限定されない）に、有用である。本発明のこれらの化合物、処方物および方法はまた、例えば、接触性皮膚炎、挫創、刺激（網膜誘導性刺激を含む）、多毛症、発毛の調節、色素沈着における障害、または乾癬、の処置において有用であり、そして、殺菌剤、抗真菌剤ならびに抗菌剤として使用され得る。本発明の化合物はまた、多くの疾患および障害（心血管疾患、糖尿病ならびに感染性疾患を含むが、これらに限定されない）に関連する上昇したＣＲＰレベルの減少についての活性を示す。
【０００７】
本発明は、式Ｉ：
【０００８】
【化２】
2005517014.tif 000002
によって表される化合物（１つの立体異性体、立体異性体の混合物、ならびにその薬学的に受容可能な塩を含む）に関し、
ここで：
Ｒ１は、水素、必要に応じて置換されたアルキル、必要に応じて置換されたアルケニル、必要に応じて置換されたアリール、（必要に応じて置換されたアルコキシ）カルボニルまたはハロゲンであり；
Ｒ２およびＲ３は、必要に応じて置換されたアルキル、必要に応じて置換されたアルケニル、必要に応じて置換されたシクロアルキルから独立して選択され；
Ｒ４は、水素、必要に応じて置換されたアリール、（必要に応じて置換されたアルキル）カルボニル、（必要に応じて置換されたアリール）カルボニル、（必要に応じて置換されたヘテロシクリル）カルボニル、（必要に応じて置換されたヘテロシクリルアルキル）カルボニル、（必要に応じて置換されたアルコキシ）カルボニル、（必要に応じて置換されたアルケニルオキシ）カルボニル、（必要に応じて置換されたアミノ）カルボニル、カルボキシ、ホルミル、またはヒドロキシ（必要に応じて置換された）アルキルであり；
Ｒ５は、水素、アルキル、アルケニル、（必要に応じて置換されたアルコキシ）カルボニル、カルボキシ、（必要に応じて置換されたアミノ）カルボニル、または必要に応じて置換されたアリールであり；
ただし、Ｒ４またはＲ５のうちの１つは、水素であり、そしてＲ４が水素である場合、Ｒ５は、水素ではなく、かつ、Ｒ５が水素である場合、Ｒ４は、水素ではない；
Ｒは、水素、アルキル、アシル、ホスホリル、またはポリアルコキシであり；もしくは
ＲおよびＲ１は、それらが結合する原子とともに、必要に応じて置換された環を形成する。
【０００９】
本発明の好ましい実施形態は、Ｒ２およびＲ３が、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、好ましくはメチルである、式Ｉの化合物に関し、そして、Ｒが水素である式Ｉの化合物のサブセットが含まれる。
【００１０】
別の実施形態において、本発明は、式Ｉの化合物に関し、ここで、Ｒ２およびＲ３は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、好ましくはメチルであり、Ｒは、水素であり、Ｒ５は、水素であり、Ｒ４は、必要に応じて置換されたアリール、（必要に応じて置換されたアルキル）カルボニル、（必要に応じて置換されたアリール）カルボニル、（必要に応じて置換されたヘテロシクリル）カルボニル、（必要に応じて置換されたヘテロシクリルアルキル）カルボニル、（必要に応じて置換されたアルコキシ）カルボニル、（必要に応じて置換されたアルケニルオキシ）カルボニル、（必要に応じて置換されたアミノ）カルボニル、カルボキシ、ホルミル、またはヒドロキシ（必要に応じて置換された）アルキルであり、特に、ここで、このアリールは、置換されていないフェニル、またはアルキル、アルコキシ、ヒドロキシ、（必要に応じて置換されたアルコキシ）カルボニル、ニトロ、ハロ、およびシアノから選択される１つ以上の置換基によって置換されたフェニルである。
【００１１】
別の実施形態において、本発明は、式Ｉの化合物に関し、ここで、Ｒ２およびＲ３は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、好ましくはメチルであり、Ｒは水素であり、Ｒ４は水素であり、Ｒ５は、必要に応じて置換されたアリールであり、好ましくは、置換されていないフェニル、またはアルキル、アルコキシ、ヒドロキシ、（必要に応じて置換されたアルコキシ）カルボニル、ニトロ、ハロ、およびシアノから選択される１つ以上の置換基によって置換されたフェニルである。
【００１２】
別の実施形態において、本発明は、式Ｉの化合物に関し、ここで、ＲおよびＲ１は、環を形成し、好ましくは、ＲおよびＲ１は、置換されていないフェニル、またはアルキル、アルケニル、ヒドロキシ、アルコキシ、ニトロ、シアノ、カルボキシ、カルボキシエステル、ハロアルキルおよびハロから選択される１つ以上の置換基によって置換されたフェニルで置換されたフラン環を形成する。
【００１３】
本発明の特定の実施形態は、異なる発明の式から垂れ下がる置換基の新規かつ好ましい組み合わせを提供する。
【００１４】
別の局面において、本発明は、少なくとも１つの薬学的に受容可能な賦形剤と混合された治療有効量の式Ｉの化合物を含む薬学的組成物および／もしくは美容用組成物、またはその薬学的に受容可能な塩に関する。式Ｉの化合物が、好ましい化合物から選択される薬学的組成物または美容用組成物が、特に好ましい。
【００１５】
本発明の別の局面は、酸化的ストレスによって特徴付けられる状態に罹患する哺乳動物を、治療有効量の式Ｉによって表される化合物（単一の立体異性体、立体異性体の混合物およびその薬学的に受容可能な塩を含む）を投与することによって処置するための方法に関する。
【００１６】
１つの実施形態において、本発明は、心血管状態、脳血管状態、神経学的状態、炎症性状態、自己免疫状態および／または皮膚科学的状態の処置の方法に関する。別の実施形態において、本発明は、脳卒中、大脳虚血、心筋梗塞、慢性心不全、網膜虚血、術後認知機能不全、末梢ニューロパシー、脊髄損傷、頭部損傷および手術の外傷から選択される状態を処置するための方法に関する。別の実施形態において、状態は、炎症性成分または自己免疫成分を含む。
【００１７】
別の実施形態において、本発明は、以下の酸化的ストレスによって特徴付けられる皮膚状態を処置するための方法に関する：皮膚状態の調節、皮膚の老化徴候の調節、接触皮膚炎、挫創、皮膚色素沈着、発髪調節、刺激（網膜誘導性刺激を含む）、乾癬、加齢関連損傷および有害（ＵＶ）放射線から生じる損傷、ストレスから生じる損傷もしくは疲労が挙げられるが、これらに限定されない。別の実施形態において、式Ｉの化合物またはその組成物は、局所的に投与される。別の実施形態において、状態は、皮膚科学的であり、式Ｉの上記化合物を組み込んだ薬学的組成物または美容用組成物を皮膚に塗布するように使用者に指示することによって、生成を促進する方法をさらに包含する。
【００１８】
なお別の実施形態において、本発明は、脳卒中および他の酸化的ストレス関連状態を処置する方法に関し、これらの状態は、哺乳動物において、細胞性酵素調節（例えば、大脳虚血、心筋梗塞、慢性心不全、およびＵＶ照射に対する曝露）に対して応答性である。この処置は、このような処置を必要とする哺乳動物に、治療有効量の式Ｉのいずれかの化合物、またはその薬学的に受容可能な塩を投与することによる。
【００１９】
なお別の局面において、本発明は、炎症に関連するＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）のレベルを低減させる方法に関し、炎症としては、心血管炎症状態、呼吸器炎症状態、敗血症、糖尿病、筋肉疲労、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、末期腎疾患（ＥＲＳＤ）、歯周疾患、ならびに炎症性皮膚状態が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２０】
式Ｉの化合物が好ましい化合物から選択される、処置の方法およびそのための薬学的組成物および／または美容用組成物の製造における使用が、特に好ましい。
【００２１】
（発明の詳細な説明）
（定義）
本明細書中で使用される場合、以下の語および句は、一般に以下に示す意味を有すると意図され、これらが用いられる文脈が他のように示す程度を除外する。
【００２２】
用語「任意の」または「必要に応じて」は、続いて記載される事象または状況が、生じても生じなくてもよいこと、そしてこの記載が、上記の事象または状況が生じる場合およびそれが生じない場合を含むことを意味する。例えば、「必要に応じて置換されたアルキル」は、以下に規定されるような「アルキル」または「置換アルキル」のいずれかを意味する。１つ以上の置換基を含む任意の基に関して、このような基が立体的に実際的でなく、そして／または合成的に実行不可能な任意の置換または置換パターンを導入するよう意図されないことが、当業者に理解される。
【００２３】
特定の化合物、反応物、または反応パラメータの略語が、以下の様に規定される：
・「ＤＣＭ」は、ジクロロメタンまたは塩化メチレンをいう。
・「ｔ−Ｂｕ」とは、ｔ−ブチルをいう
・「ＤＣＣ」とは、１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド
・「ＤＩＣ」とは、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルカルボジイミドをいう
・「ＤＩＰＥＡ」とは、ジイソプロピルエチルアミンをいう
・「ＤＭＡＰ」とは、４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジンをいう
・「ＤＭＦ」とは、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドをいう
・「Ｅｑ．」とは、当量をいう
・「ＥＤＣｌ」とは、塩酸１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドをいう
・「ＭｅＯＨ」とは、メタノールをいう
・「ＴＨＦ」とは、テトラヒドロフランをいう
・「ＥｔＯＡｃ」とは、酢酸エチルをいう。
【００２４】
用語「アシル」とは、−Ｃ（Ｏ）−Ｈ基、−Ｃ（Ｏ）−（必要に応じて置換されたアルキル）基、−Ｃ（Ｏ）−（必要に応じて置換されたシクロアルキル）基、−Ｃ（Ｏ）−（必要に応じて置換されたアルケニル）基、−Ｃ（Ｏ）−（必要に応じて置換されたシクロアルケニル）基、−Ｃ（Ｏ）−（必要に応じて置換されたアリール）基、−Ｃ（Ｏ）−（必要に応じて置換されたヘテロアリール）基および−Ｃ（Ｏ）−（必要に応じて置換されたヘテロシクリル）基をいう。
【００２５】
用語「アルケニル」とは、約２〜２０個の炭素原子（より好ましくは約２〜１０個の炭素原子）を有する、モノラジカルの、分枝または非分枝の、不飽和または多価不飽和の炭化水素鎖をいう。この用語は、エテニル、ブト−２−エニル、３−メチル−ブト−２−エニル（「プレニル」ともいわれる）、オクタ−２，６−ジエニル、３，７−ジメチル−オクタ−２，６−ジエニル（「ゲラニル」ともいう）などのような基によって例示される。
【００２６】
用語「置換（された）アルケニル」とは、１以上（約５まで、好ましくは約３まで）の水素原子が、例えば、以下の置換基によって置換されているアルケニル基をいう：ヒドロキシ、アルコキシ、カルボキシ、シアノ、ハロゲンまたはニトロ。
【００２７】
用語「アルコキシ」とは、−Ｏ−アルキル基、−Ｏ−アルケニル基、−Ｏ−シクロアルキル基、−Ｏ−シクロアルケニル基、および−Ｏ−アルキニル基をいう。好ましいアルコキシ基は、−Ｏ−アルキルおよび−Ｏ−アルケニルであり、そして例えば、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソ−プロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｎ−ペントキシ、ｎ−ヘキソキシ、１，２−ジメチルブトキシ、３，７−ジメチル−オクタ−２，６−ジエニルオキシなどが挙げられる。
【００２８】
用語「置換（された）アルコキシ」とは、−Ｏ−（置換されたアルキル）基、−Ｏ−（置換されたアルケニル）基、−Ｏ−（置換されたシクロアルキル）基、−Ｏ−（置換されたシクロアルケニル）基、−Ｏ−（置換されたアルキニル）基および−Ｏ−（必要に応じて置換されたアルキレン）−アルコキシ基をいう。１つの好ましい置換されたアルコキシ基は、「ポリアルコキシ」または−Ｏ−（置換されたアルキレン）−アルコキシであり、そして例えば、−ＯＣＨ２ＯＣＨ３基、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３基、および（またはＰＥＧ）基（例えば、−Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｘＣＨ３および−Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｘＨであって、ここで、ｘは、約２〜２０、好ましくは約２〜１０、そしてより好ましくは約２〜５の整数である）を包含する。
【００２９】
用語「アルキル」とは、モノラジカルの分枝または非分枝の飽和炭化水素鎖（好ましくは、約１〜２０個の炭素原子、より好ましくは約１〜１０個の炭素原子、そしてさらにより好ましくは約１〜６個の炭素原子を有する）をいう。この用語は、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソ−プロピル基、ｎ−ブチル基、イソ−ブチル基、ｎ−ヘキシル基、ｎ−デシル基、テトラデシル基などによって例示される。
【００３０】
用語「置換（された）アルキル」とは、１以上（約５まで、好ましくは約３まで）の水素原子が、以下の基：＝Ｏ、＝Ｓ、アシル、アシルオキシ、必要に応じて置換されたアルコキシ、必要に応じて置換されたアミノ、アジド、カルボキシル、（必要に応じて置換されたアルコキシ）カルボニル、（必要に応じて置換されたアミノ）カルボニル、シアノ、必要に応じて置換されたシクロアルキル、必要に応じて置換されたシクロアルケニル、ヘテロシクリル、カルボキシ、ハロゲン、ヒドロキシル、ニトロ、シアノ、スルファニル、スルフィニル、およびスルホニルから独立して選択される置換基によって置換されているか、または２個の置換基が、それらが結合する炭素と一緒になって環を形成し得る、アルキル基をいう。アルキルに関する好ましい任意の置換基のうちの１つは、ヒドロキシアルキル基（例えば、２−ヒドロキシエチル、３−ヒドロキシプロピル、３−ヒドロキシブチル、４−ヒドロキシブチルなど）；ジヒドロキシアルキル基（グリコール）（例えば、２，３−ジヒドロキシプロピル、３，４−ジヒドロキシブチル、２，４−ジヒドロキシブチルなど）；ならびにポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールおよびポリブチレングリコールなどとして公知の化合物によって例示されるヒドロキシである。置換基が環を形成する、好ましい「置換されたアルキル」は、６−ヒドロキシ−３−メチル−［１，３］オキサジナン−６−イルである。
【００３１】
用語「アミノ」とは、−ＮＨ２基をいう。
【００３２】
用語「置換（された）アミノ」とは、−ＮＨＲ基または−ＮＲＲ基である。ここで、各Ｒは、以下：必要に応じて置換されたアルキル、必要に応じて置換されたシクロアルキル、必要に応じて置換されたアルケニル、必要に応じて置換されたシクロアルケニル、必要に応じて置換されたアルキニル、必要に応じて置換されたアリール、必要に応じて置換されたヘテロアリール、必要に応じて置換されたヘテロシクリル、アシル、必要に応じて置換されたアルコキシ、カルボキシおよびアルコキシカルボニルから独立して選択される基であり、そしてここで、ＲＲは、それらが結合する窒素とともに、環状アミンを形成し、この環状アミンは、必要に応じて、Ｏ、ＮおよびＳから選択される１つ以上のさらなるヘテロ原子を組み込む。
【００３３】
用語「アリール」とは、単一の環（例えば、フェニル）または複数縮合（ｃｏｎｄｅｎｓｅｄ；ｆｕｓｅｄ）環（例えば、ナフチルまたはアントリル）を有する、６〜２０個の炭素原子の芳香族環状炭化水素基をいう。好ましいアリールとしては、フェニル，ナフチルなどが挙げられる。
【００３４】
用語「置換（された）アリール」とは、アリール置換基に関する定義によって制約されない限り、以下からなる群より独立して選択される１〜５個の置換基（好ましくは１〜３個の置換基）で置換された、上記で定義した通りのアリール基をいう：＝Ｏ、＝Ｓ、アシル、アシルオキシ、必要に応じて置換されたアルケニル、必要に応じて置換されたアルコキシ、必要に応じて置換されたアルキル（例えば、トリ−ハロメチル）、必要に応じて置換されたアルキニル、必要に応じて置換されたアミノ、必要に応じて置換されたアリール、必要に応じて置換されたアリールオキシ、アジド、カルボキシル、（必要に応じて置換されたアルコキシ）カルボニル、（必要に応じて置換されたアミノ）カルボニル、シアノ、必要に応じて置換されたシクロアルキル、必要に応じて置換されたシクロアルケニル、ハロゲン、必要に応じて置換されたヘテロアリール、必要に応じて置換されたヘテロアリールオキシ、必要に応じて置換されたヘテロシクリル、必要に応じて置換されたヘテロシクロオキシ、ヒドロキシル、ニトロ、スルファニル、スルフィニル、およびスルホニル。好ましいアリール置換基としては、以下が挙げられる：必要に応じて置換されたアルケニル、アルキル、アルコキシ、置換されたアミノ、ハロ、ヒドロキシル、アルコキシカルボニル、カルボキシ、シアノ、ニトロ、ホスホリル。
【００３５】
用語「カルボニル」とは、「−Ｃ（Ｏ）−」とも図示される、ジラジカル「−Ｃ（＝Ｏ）−」をいう。
【００３６】
用語「（必要に応じて置換されたアルコキシ）カルボニル」とは、以下の基をいう：−Ｃ（Ｏ）Ｏ−（必要に応じて置換されたアルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−（必要に応じて置換されたシクロアルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−（必要に応じて置換されたアルケニル）、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−（必要に応じて置換されたアルキニル）、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−（必要に応じて置換されたアリール）、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−（必要に応じて置換されたヘテロアリール）、および−Ｃ（Ｏ）Ｏ−（必要に応じて置換されたヘテロシクリル）。これらの部分はまた、エステルとも呼ばれる。
【００３７】
用語「（必要に応じて置換されたアミノ）カルボニル」とは、−Ｃ（Ｏ）−（必要に応じて置換されたアミノ）基をいう。この部分はまた、１級カルボキサミド、２級カルボキサミドまたは３級カルボキサミドと呼ばれ、「置換されたアミノ」は、環状アミンであり得る。
【００３８】
用語「カルボキシ」または「カルボキシル」とは、「−ＣＯＯＨ」としても図示される、「−Ｃ（Ｏ）ＯＨ」部分をいう。
【００３９】
用語「式Ｉの化合物」は、開示された通りの本発明の誘導体および／またはそのような化合物の薬学的に受容可能な塩を包含することを意図する。さらに、本発明において用いられる化合物としては、個々の立体化学的異性体（置換基の選択から生じる）および異性体の混合物が挙げられる。
【００４０】
用語「化粧品」とは、メーキャップ製品、ファンデーション製品、およびスキンケア製品を包含する。用語「メーキャップ」とは、顔面に色を残す製品をいい、ファンデーション、黒、および褐色、すなわち、マスカラ、コンシーラー、アイライナー、ブロウカラー、アイシャドウ、頬紅、リップカラーなどを包含する。用語「ファンデーション」とは、皮膚の全体的着色を均一にする、液体、クリーム、ムース、パンケーキ、コンパクト、コンシーラーなどの製品をいう。ファンデーションは、代表的には、加湿した皮膚および／または油を塗った皮膚上で良好に機能するように製造される。用語「スキンケア製品」とは、皮膚を加湿、改善または清浄にするために処置または手入れするために使用される製品をいう。語句「スキンケア製品」によって企図される製品としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：接着剤、包帯、歯磨き粉、無水閉鎖性保湿剤、制汗剤、脱臭剤、粉末洗浄剤、柔軟仕上げ用タオル、閉鎖性薬物送達パッチ、マニキュア、パウダー、ティッシュ、ワイプ、固体乳剤コンパクト、無水ヘアコンディショナー、薬用シャンプー、頭皮トリートメントなど。
【００４１】
用語「ＣＲＰ」または「Ｃ反応性タンパク質」とは、炎症の生化学マーカーをいう。上昇したレベルのＣＲＰの存在は、例えば、以下のような、種々の炎症性状態に関連することが示されている：心臓血管疾患または心臓血管障害（例えば、心房性細動、不安定狭心症、冠状動脈疾患、末梢動脈疾患、心臓同種移植血管症（ｃａｒｄｉａｃ  ａｌｌｏｇｒａｆｔ  ｖａｓｃｕｌｏｐａｔｈｙ（ＣＡＶＤ）））；乳腺炎；プレクランプルシア（ｐｒｅｃｌａｍｐｓｉａ）；炎症性腸状態；発作；組織梗塞形成；腰椎座骨神経痛（ｌｕｍｂｏｓｃｉａｔｉｃ）；エストロゲン／プロゲスチンホルモン補充療法（ＨＲＴ）；感染（細菌、ウイルスおよび原生動物）；細菌性髄膜炎；外傷；外科手術；医用材料移植；喫煙；糖尿病；神経変性疾患（例えば、アルツハイマー）；感染性疾患（例えば、心筋炎、心筋症、急性心内膜炎、心膜炎）；アテローム性動脈硬化症；全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）／敗血症；成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）；喘息；慢性関節リウマチ、変形性関節症、全身性エリテマトーデス；気道反応性亢進（ＡＨＲ）；気管支の反応亢進；慢性的な閉塞性の肺疾患（ＣＯＰＤ）；うっ血性心不全（ＣＨＦ）；Ｉ型糖尿病およびＩＩ型糖尿病の炎症性合併症；代謝症候群；末期腎臓疾患（ＥＳＲＤ）、月経前症候群（ＰＭＳ）、または、筋疲労、または、炎症；多臓器機能不全症候群（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｏｒｇａｎ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ（ＭＯＤＳ））；気道応答性亢進（ａｉｒｗａｙ  ｈｙｐｅｒ−ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ（ＡＨＲ））；気管支高反応性；老齢化；急性アレルギー反応；歯肉炎および皮膚状態。ＣＲＰは、全身性炎症についてのマーカーとして、Ｓｐａｎｈｅｉｍｅｒ（２００１、Ｐｏｓｔｇｒａｄ．Ｍｅｄ．１０９（４）２６）およびＲｉｄｋｌｅｒら（２０００、Ｎ．Ｅ．Ｊ．Ｍ．３４２（１２）８３６−４３）によって報告されている。
【００４２】
用語「シクロアルキル」とは、１つ以上の環からなる一価の飽和基をいい、この環は、他に示されなければ、必要に応じて、以下で置換されている：ヒドロキシ、シアノ、低級アルキル、低級アルコキシ、チオアルキル、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、ニトロ、アルコキシカルボニル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アミノカルボニル、カルボニルアミノ、アミノスルホニル、スルホニルアミノまたはスルホニル。シクロアルキル基の例としては、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどが挙げられるがこれらに限定されない。
【００４３】
用語「皮膚科学的に受容可能な」は、本明細書中で使用される場合、組成物またはその記載されている成分が、過度の毒性、不適合性、不安定性、アレルギー応答などを伴わずに、ヒトの皮膚と接触して使用するために適切であることを意味する。
【００４４】
用語「ハロ」または「ハロゲン」とは、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードをいう。
【００４５】
用語「ヘテロアリール」とは、少なくとも１つの環内に、約１〜４０（好ましくは約３〜１５）個の炭素原子および約１〜１０個のヘテロ原子（好ましくは、窒素、硫黄、リン、および／または酸素から選択される、約１〜４個のヘテロ原子）を有する、芳香族環状炭化水素基をいう。このようなヘテロアリール基は、単一の環（例えば、ピリジルまたはフリル）または複数縮合環（例えば、インドリジニルまたはベンゾチエニル）を有する。好ましいヘテロアリールとしては、ピリジル、［２，２’］ビピリジニル、ピロリルおよびフリルが挙げられる。
【００４６】
用語「複素環」、「複素環式」および「ヘテロシクリル」とは、環内に、約１〜４０（好ましくは約３〜１５）個の炭素原子および約１〜１０個のヘテロ原子（好ましくは、窒素、硫黄、リン、および／または酸素から選択される約１〜４個のヘテロ原子）を有する、モノラジカルの、飽和または不飽和の、非芳香族環状炭化水素基をいう。このようなヘテロ環状基は、単一環または複数縮合環を有し得る。好ましい複素環式としては、モルホリノ、ピペリジニル、１，３−オキサジナンなどが挙げられる。
【００４７】
用語「置換（された）複素環」、「置換（された）複素環式」および「置換（された）ヘテロシクリル」とは、他に複素環式に関する定義によって制約されない限り、以下からなる群より独立して選択された１〜５個の置換基（好ましくは１〜３個の置換基）で置換されている、上記で定義された通りのヘテロシクリル基をいう：＝Ｏ、＝Ｓ、アシル、アシルオキシ、必要に応じて置換されたアルケニル、必要に応じて置換されたアルコキシ、必要に応じて置換されたアルキル（例えば、トリ−ハロメチル）、必要に応じて置換されたアルキニル、必要に応じて置換されたアミノ、必要に応じて置換されたアリール、必要に応じて置換されたアリールオキシ、アジド、カルボキシル、（必要に応じて置換されたアルコキシ）カルボニル、（必要に応じて置換されたアミノ）カルボニル、シアノ、必要に応じて置換されたシクロアルキル、必要に応じて置換されたシクロアルケニル、ハロゲン、必要に応じて置換されたヘテロアリール、必要に応じて置換されたヘテロアリールオキシ、必要に応じて置換されたヘテロシクリル、必要に応じて置換されたヘテロシクロオキシ、ヒドロキシル、ニトロ、スルファニル、スルフィニル、およびスルホニル。
【００４８】
用語「ヘテロシクロアルキル」とは、各々が、本明細書中で定義された通りの意味を有する、「−アルキレン−複素環」部分をいう。
【００４９】
用語「置換（された）ヘテロシクロアルキル」とは、各々が、本明細書中で定義された通りの意味を有する、「−（必要に応じて置換されたアルキレン（ａｋｌｙｌｅｎｅ））−（必要に応じて置換された複素環式）」部分をいう。
【００５０】
用語「炎症」、「炎症性状態」、または「炎症状態」としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：筋肉疲労、変形性関節症、関節リウマチ、炎症性腸症候群または障害、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎）、乾燥症、湿疹、酒さ、脂漏症、乾癬、アテローム性動脈硬化症、熱傷および放射傷、挫瘡、油性肌、皺、過剰セルライト、過剰孔径、固有の皮膚加齢、光加齢、写真損傷、有害なＵＶ損傷、角質化異常、レチノイド誘導刺激を含む刺激、多毛症、脱毛症、色素沈着異常、創傷に起因する炎症、瘢痕もしくは皮膚萎縮線条、弾性喪失、皮膚萎縮および歯肉炎。
【００５１】
用語「虚血」は、血管の機能的収縮または実際の閉塞に起因する器官または組織に対する血液欠乏をいう。発作としても知られる脳虚血は、脳の血管への血液および酸素の妨害または減少から通常生じる；よりまれには、これは出血の結果であり得る。発作の徴候としては、ただいくつかの名前を挙げると、麻痺、不明瞭言語、一般的な錯乱、歩行障害、つま先、足および脚にわたる皮質感覚喪失、ならびに尿失禁が挙げられる。心臓の構造異常に起因する心臓不整脈または疾患を含む多くの型の心臓疾患は、脳塞栓を生じ得る。リウマチ性弁膜疾患を含む、任意の原因からの心房細動が、脳の動脈へ移動し得る作り出されている塞栓を生じ得る。塞栓形成および塞栓移動は、動脈硬化心臓血管疾患および心筋梗塞の結果として生じ得る。塞栓形成はまた、心臓内手術および補綴バルブ置換に関する明確な危険である。心臓バイパス手術および血管形成は、脳の動脈中に移動し得、多くの動脈中の一連の閉塞を引き起こして、精神的障害を生じる、微小塞栓の形成を生じ得る。大脳塞栓はまた、人工心臓の移植における、主要な合併症である。さらに、任意の型の全身手術の後の発作の全体的な危険は、０．２％〜１％である。急性および亜急性の細菌性心内膜炎の病的増殖物は、主な頭蓋内の動脈を閉塞し得る塞栓を生じ得る。虚血の危険がある集団は、冠状動脈バイパス移植手術（ＣＡＢＧ）について予定される患者、術後合併症の危険がある患者、クモ膜下出血（ＳＡＨ）を有する患者、第１のまたは第２の虚血性発作を有する患者、急性の虚血性発作有する患者、心肺蘇生術（ＣＰＲ）を受けている患者、一時的な葉摘手術を受けている患者、優位半球切除した患者、予防脳照射を受ける患者、神経学的欠損を有する閉鎖性頭部外傷を有する患者、微小脈管多発脳梗塞性痴呆を有する患者、ホモ接合性およびヘテロ接合性ＭＥＬＡＳ（ミトコンドリアミオパシー、脳障害、ラクトアシドーシス、発作）を有する患者；アテローム性動脈硬化症もしくは進行性核上性麻痺疾患を有する患者、症候性のおよび無症候性のハンティングトン病を有する患者、新生児仮死を有する患者、髄膜炎もしくは脳炎を有する患者、疱疹後神経障害を有する患者、間欠性跛行を有する患者、脊髄損傷を有する患者、ハンティングトン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）もしくはフリートライヒ運動失調を患う患者、糖尿病ニューロパシーを患う患者、または全身性疾患、癌腫、血管収縮（可逆性脳血管収縮（例えば、片頭痛、外傷、特発疾患）を含む）、または静脈状態（脱水症、肺動脈塞栓症、頭蓋周囲感染、分娩後状態および術後状態ならびに全身系癌を含む）の後の凝固能亢進性状態と関連する疾患を有する患者を含むが、これに限定されない。
【００５２】
用語「個人用ケア製品」とは、皮膚および頭髪を美しくし、そして仕立てるために処方されていると一般に認識されている、健康用および化粧用の化粧（ｂｅａｕｔｙ  ａｉｄ）製品をいう。例えば、個人用ケア製品としては、日焼け止め製品（例えば、ローション、皮膚クリームなど）、化粧品、トイレタリー、および局所での使用が意図される公衆衛生用製品が挙げられる。
【００５３】
本明細書中で使用される場合、「薬学的に受容可能なキャリア」または「薬学的に受容可能な賦形剤」としては、任意および全ての、溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などが挙げられる。薬学的に活性な物質に関するこのような媒体および薬剤の使用は、当該分野で周知である。任意の従来の媒体または薬剤が活性成分と不適合である場合を除いて、治療組成物におけるその使用が企図される。補助活性成分がまた、この組成物中に組み込まれ得る。
【００５４】
用語「薬学的に受容可能な塩」とは、本発明の化合物の生物学的有効性および特性を保持し、そして生物学的にもそれ以外にも望ましくない塩をいう。多くの場合、本発明の化合物は、アミノ基および／もしくはカルボキシル基またはそれらと類似の基の存在によって、酸性塩および／または塩基性塩を形成し得る。薬学的に受容可能な塩基付加塩は、無機塩基および有機塩基より調製され得る。無機塩基由来の塩としては、単なる例として、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、アンモニウム塩、カルシウム塩、およびマグネシウム塩が挙げられる。有機塩基由来の塩としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：１級アミン、２級アミン、および３級アミン（例えば、アルキルアミン、ジアルキルアミン、トリアルキルアミン、置換アルキルアミン、ジ（置換アルキル）アミン、トリ（置換アルキル）アミン、アルケニルアミン、ジアルケニルアミン、トリアルケニルアミン、置換アルケニルアミン、ジ（置換アルケニル）アミン、トリ（置換アルケニル）アミン、シクロアルキルアミン、ジ（シクロアルキル）アミン、トリ（シクロアルキル）アミン、置換シクロアルキルアミン、二置換シクロアルキルアミン、三置換シクロアルキルアミン、シクロアルケニルアミン、ジ（シクロアルケニル）アミン、トリ（シクロアルケニル）アミン、置換シクロアルケニルアミン、二置換シクロアルケニルアミン、三置換シクロアルケニルアミン、アリールアミン、ジアリールアミン、トリアリールアミン、ヘテロアリールアミン、ジヘテロアリールアミン、トリヘテロアリールアミン、複素環式アミン、二複素環式アミン、三複素環式アミン、混合ジアミンおよび混合トリアミン（ここで、アミン上の少なくとも２つの置換基が、異なっており、そして、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、複素環式などからなる群より選択される）。また、アミノ基の窒素と一緒になった２つまたは３つの置換基が複素環式基またはヘテロアリール基を形成するアミンも含まれる。
【００５５】
薬学的に受容可能な酸付加塩は、無機酸および有機酸から調製され得る。無機酸から誘導される塩としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの塩が挙げられる。有機酸から誘導される塩としては、以下が挙げられる：酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−
トルエンスルホン酸、サリチル酸などの塩。
【００５６】
用語「ホスホリル」とは、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ”）２基をいい、ここでＲ”は、水素、またはアルキルおよびアリールから独立して選択され、この基はまた、時々、「ホスホノ」、または「ホスフェート」もしくは「ホスホン酸」ともいわれる。
【００５７】
「皮膚状態を調節すること」は、皮膚における視認可能な不連続および／または触知可能な不連続を含む皮膚状態を、予防的に調節することおよび／または治療的に調節することを包含し、このことは例えば、以下を包含するがこれらに限定されない：皮膚組織における視認可能な不連続を調節することおよび／または触知可能な不連続を調節すること、炎症後の過剰色素沈着を低減すること、皮膚の非メラニンの変色を調節すること、皮膚の保湿性および障壁機能を調節すること、皮膚の上皮分化を調節すること、皮膚の剥離を調節すること、皮膚を肥厚させて皮膚の萎縮を低減すること、皮膚の弾性を調節すること、油性肌を低減すること、皮膚内のセルライトを調節すること、皮膚におけるかゆみを調節すること、ならびに皮膚における創傷治療を促進すること。本明細書中で使用される場合、皮膚状態を予防的に調節することは、皮膚における視認可能なおよび／または触知可能な不連続を遅滞させ、最小化および／または予防することを、包含する。本明細書中で使用される場合、皮膚状態を治療的に調節することは、皮膚における不連続を改善すること、例えば、減少、最小化および／または除去することを包含する。皮膚状態を調節することは、皮膚の外観および／または感触を改善することに関する。皮膚状態を調節することは、身体／頭蓋髪の成長の調節（身体および／または毛髪の成長を遅延および／または防ぐことを含む）を含む。皮膚状態を調節することには、炎症（レチノイド誘導性炎症を含む）を調節することが挙げられる。本明細書中で使用される場合、皮膚を調節することは、殺菌剤、真菌剤および抗生物質としての本発明の化合物の使用を含む。
【００５８】
「皮膚の老化徴候を調節すること」は、以下のような徴候の１つ以上を、予防的に調節することおよび／または治療的に調節することを包含する：同様に、皮膚の老化の所定の徴候を調節すること、（例えば、線（ｌｉｎｅ）、皺（ｗｒｉｎｋｌｅ）もしくは間隙）は、この徴候を予防的に調節することおよび／または治療的に調節することを包含する）。本明細書中で使用される場合、このような徴候を予防的に調節することは、皮膚の老化徴候を遅滞、最小化および／または予防することを包含する。本明細書中で使用される場合、このような徴候を治療的に調節することは、皮膚の老化徴候を改善すること、例えば、減少、最小化および／または除去することを包含する。
【００５９】
「皮膚老化徴候」は、皮膚の加齢に起因する、全ての表面上の視認的および触知的に知覚可能な発現（ｍａｎｉｆｅｓｔａｔｉｏｎ）、ならびに任意の他のマクロまたはミクロな影響が挙げられるが、これらに限定されない。このような徴候は、内在性要因または外来性要因（例えば、経時的な老化および／または環境的損傷（例えば、日光、ＵＶ、喫煙、オゾン、汚染物質、ストレスなど））によって、誘導され得るかまたは引き起こされ得る。これらの徴候は、以下に挙げられるようなプロセスから生じ得るが、これらに限定されない：皺のような組織不連続の発達、（細かい表面上の皺および粗く深い皺の両方を含む）、皮膚の皺、顔面の眉間の皺、表情の皺、皺（ｒｈｙｔｉｄｅ）、皮膚日射病（ｄｅｒｍａｔｏｈｅｌｉｏｓｉｓ）、光損傷、早発の皮膚の老化、裂け目、瘤、くぼみ、大きな間隙（例えば、汗腺管、皮脂腺または毛包のような付属器の構造と関連する）、「ミカン膚」皮膚外観、乾燥、鱗状（ｓｃａｌｉｎｅｓｓ）、鱗状（ｆｌａｎｋｉｎｅｓｓ）、および／または皮膚の不均一もしくは粗さの他の形態；しみ（例えば、アクネ）、丘疹、切断；過剰な皮膚脂質の問題（例えば、皮脂の過剰な産生、脂、顔面のてかり、支持構造の崩壊）；異常な剥離（もしくは剥脱）、または鱗状（ｓｃａｌｉｎｅｓｓ）、鱗状（ｆｌａｎｋｉｎｅｓｓ）、角化症、角質増殖症のような異常な上皮分化（例えば、異常な皮膚の代謝回転）；皮膚障壁損傷、乾燥環境により引き起こされるような不適切な皮膚加湿（または水和）；弾力線維症、弛み（眼の領域および顎における腫脹を含む）のような皮膚弾力性の喪失（機能性皮膚弾力の喪失および／または作用不能）、皮膚の固さの喪失、皮膚の強靭性の喪失、変形からの皮膚の戻り（ｒｅｃｏｉｌ）の喪失；目の下のくま、痣（例えばしゅさに起因する、例えばむらのある紅色化）、血色の悪い（蒼白な色）、毛細血管拡張症またはクモ状脈管（ｓｐｉｄｅｒ  ｖｅｓｓｅｌ）により引き起こされる変色のような、非メラニン皮膚の変色；加齢斑（肝臓斑、褐色斑）およびそばかすのような、メラニン関連性の過剰色素沈着（もしくは色素沈着したむらのある）皮膚領域；炎症事象後（例えば、アクネ病変、成長中の毛髪、昆虫／クモの咬傷もしくは刺痛、引っ掻き傷、切断、創傷、擦過傷など）に起こる炎症後の過剰色素沈着；萎縮症（加齢またはステロイド使用と関連する萎縮症（しかし、これに限定されない））；基質（ｇｒｏｕｎｄ  ｓｕｂｓｔａｎｃｅ）（例えば、ヒアルロン酸、グリコサミノグリカン、など）のような皮膚構成要素における他の組織化学的変化または微視的な変化、コラーゲン断裂および構造変化または構造異常（例えば、角質層、真皮、表皮上皮、皮膚血管系（例えば、毛細血管拡張症もしくはクモ状脈管）における変化）；侵襲に対する組織応答（例えば、かゆみ（ｉｔｃｈ）もしくはそう痒（ｐｒｕｒｉｔｕｓ）；ならびに基礎組織（例えば、皮下脂肪、セルライト、筋肉、小柱、中隔（ｓｅｐｔａｅ）など）、特に皮膚に対して近接する基礎組織に対する変化。
【００６０】
用語「治療有効量」とは、以下に規定されるような処置を必要とする哺乳動物に投与される場合に、そのような処置をもたらすのに十分である、式Ｉのいずれかの化合物の量をいう。この治療有効量は、被験体および処置される疾患状態、被験体の体重および年齢、疾患状態の重篤度、選択される特定の化合物、従うべき投薬レジメン、投与の時期、投与方法など（これらの全てが当業者に容易に決定され得る）に依存して、変動する。
【００６１】
用語「処置」または「処置すること」とは、哺乳動物における疾患または障害の任意の処置を意味し、以下を包含する：
その疾患または障害に対して予防または保護すること、すなわち、その臨床状態を発症させないこと；
その疾患または障害を阻害すること、すなわち、臨床症状の発症を阻止または抑制すること；および／あるいは
その疾患または障害を緩和すること、すなわち、臨床状態の退行を引き起こすこと。
ヒトの医療において、最終的に誘導される事象が未知で潜在性であり得るか、または患者がその事象の発現の充分後まで確認されないので、「予防」と「抑制」との間を区別することが常に可能であるわけではないことは、当業者によって理解される。従って、本明細書中で使用される場合、用語「予防」とは、本明細書中で規定されるような「予防」および「抑制」の両方を包含するように、「処置」の１要素として意図される。用語「保護」は、本明細書中で使用される場合、「予防」を含むように意味される。
【００６２】
本明細書種で使用される場合、用語「局所的投与」とは、皮膚の表面上へ本発明の組成物を塗りつけることまたは拡げることを意味する。
【００６３】
（命名法）
一般に、本願において使用される命名法は、ＩＵＰＡＣ系統的命名法の作製についての、ＡＵＴＯＮＯＭＴＭｖ２．１、Ｂｅｉｌｓｔｅｉｎ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅコンピューターシステムに基づく。
【００６４】
本発明の化合物は、以下に記載されるように、命名および番号付けされる。
【００６５】
【化３】
2005517014.tif 000003
式Ｉａは、式Ｉに従う化合物を表し、ここで、Ｒ、Ｒ１、Ｒ５は、水素であり、Ｒ２およびＲ３は、メチルであり、そしてＲ４は、ｐ−ニトロ−フェニルであり、これは、６，７−ジメチル−２−（４−ニトロ−フェニル）−ベンゾフラン−５−オールと命名され得る。
【００６６】
【化４】
2005517014.tif 000004
式Ｉｂは、式Ｉに従う化合物を表し、ここで、Ｒ、Ｒ１、Ｒ４は、水素であり、Ｒ２およびＲ３は、メチルであり、そしてＲ５は、フェニルであり、これは、６，７−ジメチル−３−フェニル−ベンゾフラン−５−オールと命名され得る。
【００６７】
（本発明の化合物の合成）
（合成反応パラメーター）
用語「溶媒」、「不活性有機溶媒」または「不活性溶媒」は、これらに関連して記載される反応条件下で不活性な溶媒を意味する。本発明の化合物の合成において用いられる溶媒としては、例えば、以下が挙げられる：メタノール、アセトン、水、アセトニトリル、１，４−ジオキサン、ジメチルホルムアミド（「ＤＭＦ」）、ベンゼン、トルエン、テトラヒドロフラン（「ＴＨＦ」）、クロロホルム、塩化メチレン（すなわちジクロロメタン（「ＤＣＭ」））、ジエチルエーテル、ピリジンなど、ならびにそれらの混合物。逆に指定しない限り、本発明の反応において使用される溶媒は、不活性な有機溶媒である。
【００６８】
用語「ｑ．ｓ．」は、言及された機能を達成するのに十分な量（例えば、溶液を所望の容量（すなわち、１００％）にするのに十分な量）添加することを意味する。
【００６９】
逆に指定しない限り、本明細書中に記載される反応は、−１０℃〜１１０℃（好ましくは、０℃〜４０℃；最も好ましくは「室温」または「周囲温度」（例えば、２０℃））の温度範囲内で大気圧にて生じる。さらに、他に指定しない限り、反応時間および反応条件は、概算（例えば、約−１０℃〜約１１０℃（好ましくは、約−１０℃〜約４０℃；最も好ましくは、約「室温」または「周囲温度」（例えば、約２０℃））の温度範囲内で、約１時間〜約１０時間（好ましくは約５時間）の期間にわたってほぼ大気圧で生じる）であることが意図される。実施例において与えられるパラメーターは、特定のものであって、概算のものではないことが意図される。
【００７０】
本明細書中に記載される化合物および中間体の単離および精製は、所望の場合、任意の適切な分離手順または精製手順（例えば、濾過、抽出、結晶化、カラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィーもしくは厚層（ｔｈｉｃｋ−ｌａｙｅｒ）クロマトグラフィー、またはこれらの手順の組合せ）によってもたらされ得る。適切な分離手順および単離手順の特定の例示は、本明細書中以下の実施例を参照して行われ得る。しかし、他の等価な分離手順または単離手順もまた、もちろん使用され得る。
【００７１】
（出発物質）
出発物質（例えば、２，３−ジメチルヒドロキノン）は、例えば、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩから市販されているか、または一般的に使用される方法論を使用して当業者によって容易に調製され得る。
【００７２】
【化５】
2005517014.tif 000005
反応スキーム１を参照して、式１０１の２，３−置換ヒドロキノンを、溶媒（例えば、アセトン、ＴＨＦ、またはＤＭＦ）中、塩基（例えば、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムまたは炭酸セシウム）の存在下で、１当量の２−ハロ−１−置換−エタノン、好ましくは、２−ブロモ−１−置換−エタノン、最も好ましくは、２−ブロモ−１−置換フェニルエタノンとともに処理して、式１０２の２−（４−ヒドロキシ−２，３−置換−フェノキシ）−１−置換−エタノンを得る。式１０２の化合物は、続いて、不活性な溶媒（トルエンまたはキシレン）中で酸（ポリリン酸、塩酸、または硫酸）により処理されて、式１０３のベンゾフラン化合物へと環化し得る。
【００７３】
同様に、式１０２の２，３−置換ヒドロキノンを、塩基の存在下で２当量以上の２−ハロ−１−置換エタノンで処理し、その後、酸の存在下で環化することで、式１０５の化合物を得ることができる。
【００７４】
（反応スキーム２）
【００７５】
【化６】
2005517014.tif 000006
スキーム２を参照して、式２０１の化合物（ここで、「Ｐｒｏｔ」は、ヒドロキシ保護基、好ましくはテトラヒドロピラニル基であり、溶媒（例えば、アセトン、ＴＨＦまたはＤＭＦ）中、塩基（例えば、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムまたは炭酸セシウム）の存在下で、２−ハロ−１−置換エタノン、好ましくは２−ブロモ−１−置換エタノンと反応させ、次いで、反応スキーム１に記載される通りの酸の存在下で環化すると、式２０２の化合物を得ることができる。
【００７６】
（好ましい化合物）
置換基の以下の組み合せおよび順列（それぞれ、優先度のオーダーを増加させてサブグループ化してある）は、本発明に従う方法および薬学的組成物および化粧組成物に使用するための事項および化合物の組成物として好ましい化合物を定義する。
【００７７】
任意の式Ｉの化合物であって、ここでＲ２およびＲ３は、必要に応じて置換されたアルキルであり、特にＲ２およびＲ３はメチルである。
【００７８】
好ましくは、Ｒ１は水素またはハロゲンである。
【００７９】
特にＲは、水素である。
【００８０】
任意の式Ｉの化合物であって、Ｒ１は、水素またはハロである。
【００８１】
好ましくは、Ｒ１は、水素である。
【００８２】
任意の式Ｉの化合物であって、ここで、Ｒは、水素、アルキル、アシル、ホスホリルまたはポリアルコキシ、好ましくは、水素であり、そして、Ｒ１は水素である。
【００８３】
１．特にＲ２およびＲ３は、メチルである。
【００８４】
特に、式Ｉの化合物において、Ｒ５は、必要に応じて置換されたアリールであり、ここで、置換基は、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシル、（必要に応じて置換されたアルコキシ）カルボニル、ニトロ、ハロおよびシアノから選択される。
【００８５】
特にＲ５は、必要に応じて置換されたフェニルである。
【００８６】
特にＲ５は、必要に応じて置換されたフェニルであり、そしてＲ４は、水素である。
【００８７】
特に式Ｉの化合物において、Ｒ４は、必要に応じて置換されたアリールである。
【００８８】
特に、Ｒ４は、必要に応じて置換されたフェニルである。
【００８９】
好ましくは、Ｒ４は、パラ−置換されたフェニルであり、ここで、置換基は、アルキル，アルコキシ、ヒドロキシ、（必要に応じて置換されたアルコキシ）カルボニル、ニトロ、ハロおよびシアノから選択される。
【００９０】
好ましくは、Ｒ４は、４−ニトロフェニル、４−シアノフェニルであり、Ｒ５は、水素である。
【００９１】
特に、式Ｉの化合物において、ここでＲ４は、ホルミル、（必要に応じて置換されたアルキル）カルボニル、（必要に応じて置換されたアリール）カルボニル、（必要に応じて置換されたヘテロシクリル）カルボニル、（必要に応じて置換されたヘテロシクリルアルキル）カルボニルである。
【００９２】
特に、Ｒ４は、（必要に応じて置換されたアリール）カルボニルである。
【００９３】
特に、Ｒ４は、（必要に応じて置換されたアルキル）カルボニルである。
【００９４】
特に、Ｒ４は、必要に応じてハロゲンで置換されたアルキルカルボニル、ヒドロキシまたはヘテロシクリル、特にモルホリン−１−イルで置換される。
【００９５】
特に、Ｒ４は、ホルミルである。
【００９６】
好ましくは、Ｒ４は、ホルミル、フェニルカルボニル、ブロモアセチル、モルホリン−１−イル−アセチルおよびアセチルであり、；そしてＲ５は、水素である。
【００９７】
特に、Ｒ４は、（必要に応じて置換されたアルコキシ）カルボニル、（必要に応じて置換されたアルケニルオキシ）カルボニル、（必要に応じて置換されたアミノ）カルボニル、カルボキシまたはヒドロキシ（必要に応じて置換された）アルキルである。
【００９８】
特に、Ｒ４は、（必要に応じて置換されたアルコキシ）カルボニル（好ましくは、アルコキシがポリアルコキシである）または必要に応じて置換されたアルケニルオキシ）カルボニル（好ましくは、アルケニルオキシがゲラニルオキシである）である。
【００９９】
特に、Ｒ４は、（必要に応じて置換されたアミノ）カルボニル（好ましくは、アミノが、必要に応じて置換されたアルキル（特に、ヒドロキシアルキル）で置換されるか、またはアミノが環状アミンである）である。
【０１００】
好ましくは、Ｒ４は、以下：モルホリン−１−イル−カルボニル；ビス−（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド、２−ヒドロキシ−エチル−アミド、カルボン酸；カルボン酸メチルエステル；カルボン酸３，７−ジメチル−オクタ−２，６−ジエニルエステル；［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］エチルエステルであり；そしてＲ５は水素である。
【０１０１】
特に、Ｒ４は、ヒドロキシ（必要に応じて置換された）アルキルである。
【０１０２】
特に、Ｒ４は、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシ−２−モルホリン−４−イルエチルまたは６−ヒドロキシ−３−メチル−［１，３］オキサジナン−６−イルである。
【０１０３】
ＲおよびＲ１とそれらが結合される原子とが、必要に応じて置換された環を形成する任意の式Ｉの化合物。
【０１０４】
特に、ＲおよびＲ１と、それらが結合される原子とが、非置換フェニル環または置換フェニル環で置換されたフラン環を形成し、ここで１つ以上の置換基は、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、カルボキシ、エステル、ハロアルキルおよびハロから独立して選択される。
【０１０５】
本発明における使用のために好ましい化合物としては、以下ならびにそれらの立体異性体、塩および混合物（適切な場合）が挙げられる：
（５−ヒドロキシ−３，６，７−トリメチル−ベンゾフラン−２−イル）−フェニル−メタノン；
（５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−イル）−モルホリン−４−イル−メタノン；
１−（５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−イル）−エタノン；
酢酸２−（２−ブロモ−アセチル）−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−５−イル−エステル；
２−（１−ヒドロキシ−２−モルホリン−４−イル−エチル）−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−５−オール；
酢酸６，７−ジメチル−２−（２−モルホリン−１−イル−アセチル）−ベンゾフラン−５−イルエステル；
酢酸２−（６−ヒドロキシ−３−メチル−［１，３］オキサジナン−６−イル）−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−５−イルエステル；
１−（５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−イル）−２−モルホリン−４−イル−エタノン；
１−（４−ブロモ−５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−イル）−エタノン；
２−ヒドロキシメチル−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−５−オール；
６，７−ジメチル−３−フェニル−ベンゾフラン−５−オール；
６，７−ジメチル−２−（４−ニトロフェニル）−ベンゾフラン−５−オール；
５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−カルボアルデヒド（ｃａｒｂａｌｄｅｈｙｄｅ）；
４−（５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−イル）−ベンゾニトリル；
５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−カルボン酸；
５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−カルボン酸メチルエステル；
５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−カルボン酸３，７−ジメチル−オクタ−２，６−ジエニルエステル；
５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−カルボン酸ビス−（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド；
５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−カルボン酸２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチルエステル；
５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド；
３−（４−メトキシ−フェニル）−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−５−オール；
３−（４−クロロ−フェニル）−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−５−オール；
３−（４−フルオロ−フェニル）−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−５−オール；
４，５−ジメチル−１，８−ジフェニル−ベンゾ［１，２−ｂ；４，３−ｂ’］ジフラン；
１，８−ビス−  （４−フルオロ−フェニル）−４，５−ジメチル−ベンゾ［１，２−ｂ；４，３−ｂ’］ジフラン；および
１，８−ビス−（４−メトキシ−フェニル）−４，５−ジメチル−ベンゾ［１，２−ｂ；４，３−ｂ’］ジフラン。
【０１０６】
（有用性、試験および投与）
（一般的有用性）
本発明の化合物、組成物／処方物および方法は、多数の障害（特に、酸化的ストレスおよび／または炎症によって特徴付けられる障害）を処置する際に有用である。特に本発明の化合物は、大脳虚血（「脳卒中」）、心筋虚血（心筋梗塞および心臓疾患の他の形態）、糖尿病、腎臓疾患、月経前症候群、喘息、心肺炎症障害、慢性心不全、慢性関節リウマチ、筋肉疲労、間欠性跛行を処置する際に、および移植のための同種移植片組織の保存のために、使用され得る。
【０１０７】
本発明の化合物はまた、炎症および／または炎症状態（心臓血管の疾患および障害を含む）に関連するＣ反応性蛋白（ＣＲＰ）を減少における使用を示し、これらとしては、例えば、以下が挙げられる：心房性細動、不安定狭心症、冠動脈炎疾患、末梢性動脈疾患、心臓性同種移植片脈管障害（ｃａｒｄｉａｃ  ａｌｌｏｇｒａｆｔ  ｖａｓｃｕｌｏｐａｔｈｙ：ＣＡＶＤ）、乳腺炎、プレクランプルシア（ｐｒｅｃｌａｍｐｌｓｉａ）、炎症性腸疾患、脳卒中、組織梗塞形成、腰仙坐骨神経痛（ｌｕｍｂｏｓｃｉａｔｉｃ）、エストロゲン／プロゲスチンホルモン補充療法（ＨＲＴ）、感染（細菌、ウイルスおよび原生動物）、細菌性髄膜炎、外傷、手術、生物材料移植、喫煙、肥満症、神経変性疾患（例えば、アルツハイマー病）、炎症性疾患（例えば、心筋炎、心筋症、急性心内膜炎または心外膜炎、動脈硬化症、全身性（ｓｕｓｔｅｍｉｃ）炎症性応答（ＳＩＲＳ）／セプシス、成人呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）、ぜん息、慢性関節リウマチ、変形性関節症、全身性エリテマトーデス、気道応答性亢進（ａｉｒｗａｙ  ｈｙｐｅｒｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ：ＡＨＲ）、気管支高反応性（ｂｒｏｎｃｈｉａｌ  ｈｙｐｅｒ−ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、うっ血性心不全（ＣＨＦ）、Ｉ型およびＩＩ型の真性〕糖尿病の炎症性合併症、代謝症候群、後期腎疾患（ＥＳＲＤ）、月経前症候群（ＰＭＳ）または筋肉疲労、あるいは炎症、複数器官機能障害（ＭＯＤＳ）、気道応答性亢進（ＡＨＲ）、気管支高反応性、加齢、急性アレルギー反応、歯周疾患（例えば、歯肉炎および皮膚状態（炎症性皮膚状態を含む）。
【０１０８】
本発明の化合物、処方物および方法は、多数の皮膚科学的状態を処置において有用であり、処置としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：加齢性損傷または障害（例えば、有害な紫外線（ＵＶ）放射線、ストレスおよび疲労）から生じる損傷に対する予防および皮膚の保護。このような化合物、処方物および方法は、例えば、薬用シャンプー、無水ヘアコンディショナーなどへの取り込みによって、同様にヘアケアおよび頭皮の処置に有用である。このような化合物、処方物および方法は、同様に、発毛の減少において有用である。
【０１０９】
例えば、太陽光への曝露は、皮膚に対する多数の危険を生じ得る。太陽光への長時間の曝露の、主要な短期間の危険は、紅斑（すなわち、日焼け）であり、これは、主として、約２９０ｎｍ〜約３２０ｎｍの波長を有するＵＶＢ放射線から生じる。しかし、長期間にわたって、このような長時間の曝露は、しばしば、皮膚表面に生じる悪性の変化を引き起こし得る。疫学的研究は、太陽光曝露とヒト皮膚癌との間の強い関連を実証する。紫外放射線の別の長期間の危険は、皮膚の尚早な加齢であり、これは主として、約３２０ｎｍ〜約４００ｎｍの波長を有するＵＶＡ放射線によって引き起こされる。この状態は、他の物理的変化（例えば、ひび割れ、毛細管拡張症、日光皮膚病、斑状出血、および弾性の損失）と共に、皮膚のしわおよび色素変化によって特徴付けられる。個体、特に、容易に日焼け（ｂｕｒｎ）し、そして日焼けによる変色（ｔａｎ）が少ない、淡色の皮膚を有する個体、小児期にかなり太陽に曝露された個体は、後の成人の生活において、以下の皮膚の著しい変化を示し得る：しわ、硬化（ｌｅａｔｈｅｒｉｎｅｓｓ）、黄ばみ、弛緩、肌荒れ、乾燥、斑点形成（色素過剰症）および種々の前悪性増殖（しばしば、潜在性）。太陽光のこれらの蓄積効果は、しばしば、「光加齢（ｐｈｏｔｏａｇｉｎｇ）」と称される。皮膚の解剖学的変性は、老年期において最も進行するが、過剰の太陽曝露の破壊効果は、２０年目までに既に明らかである。表皮および真皮の重篤な微視的変化は、これらが臨床的に可視になる数十年前に起こる。しわ、黄ばみ、硬化および弾性の損失は、非常に遅い変化である。
【０１１０】
本発明の組成物は、体毛および／または頭髪の発育の調節に有用であり、特に発毛の減退に有用である。代表的には、この組成物は顔に適用され得、特に顔の鬚部位（すなわち、頬、首、上唇、および顎）に適用され得る。この組成物はまた、足、腕、胴および脇にも適用され得る。この組成物は、特に、多毛の処置に適する。知覚される発毛の減退を達成するためには、ヒトにおいて、この組成物を、１日に１回または２回あるいはより頻繁に、少なくとも３ヶ月間、適用すべきである。
【０１１１】
本発明の方法によって利益を受け得る他の皮膚状態としては、おむつかぶれ（乳児およびおむつを着用する成人において起こる、通常の形態の接触皮膚炎および刺激）が挙げられるが、これに限定されない。米国特許第６，２１１，１８６号（本明細書中に参考として援用される）は、この状態を処置するための可能な病因学および方法を記載する。１種以上の糞便酵素および脂肪分解酵素、ならびにアンモニア、細菌、尿のｐＨ、水分過剰およびカンジダアルビカンスが、おむつかぶれに関連する皮膚の刺激および炎症の発症に関与し得ることが、一般的に考えられている。刺激物に対する皮膚の生理学的応答（例えば、ケラチノサイトによるサイトカインの産生）が、この状態に特徴的な紅斑、丘疹、剥離（ｓｃａｌｉｎｇ）および潰瘍化の外観を確実にすることに寄与することもまた、ありそうである。さらに、本発明の組成物および方法は、挫創（激しい炎症成分によって特徴付けられる皮膚状態）および刺激（レチノイド誘導刺激を含む）を処置する際に、有用であり得る。
【０１１２】
本発明の組成物はまた、皮膚状態（可視および／または触覚による皮膚の不連続（特に、皮膚表面；このような不連続は、一般に所望されない）が挙げられる）を調節するために有用である。このような不連続は、内因および／または外因によって誘導され得るかまたは引き起こされ得、そして本明細書中に記載される皮膚の老化の徴候を含む。明白な不連続としては、色素沈着障害が挙げられる。
【０１１３】
本発明の組成物は、皮膚の老化の徴候（特に、加齢に関連する皮膚組織における可視および／または触覚による不連続）を調節するために有用である。本発明は、皮膚の老化に関する上述の機構に起因して生じる「皮膚老化の徴候」の調節に限定されず、このような徴候の機構の起源にかかわらず、このような徴候の調節を包含することが意図されることが、理解されるべきである。
【０１１４】
（試験）
この節は、本発明の組成物を組み込んだ組成物が、例えばインビトロおよび／またはインビボ動物モデルを使用してどのように選択され、そして３つの例示的な適応症（すなわち、発作、慢性心不全および心筋梗塞）における治療的介入としてどのように使用されるかを記載する。
【０１１５】
脳に対する傷害（ｉｎｓｕｌｔ）（虚血として、脳の血液供給を中断させるか、または低酸素（低い酸素）または無酸素（酸素無し）として、脳の酸素供給を中断する）によって、細胞死を導くニューロン不均衡が急速にもたらされる（Ｆｌｙｎｎ，Ｃ．Ｊ．，ら，１９８９，Ｇ．Ｓｉｅｇｅｌら，（編），Ｂａｓｉｃ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ）。種々の型の脳虚血に関するニューロン損傷および炎症を導く細胞機構および分子機構の研究は、インビボでのニューロンの代謝特徴を保持するインビトロモデル系（例えば、初代細胞培養物）を使用して実行され得る。このような細胞ベースのモデルの使用は、無酸素、低血糖症、興奮毒性、および反応性酸素種への曝露のような状態におけるニューロン死を導く生化学機構の同定において進歩を導いている。褐色細胞腫細胞株、ＰＣ１２のようなニューロン細胞株はまた、これらの細胞株において発現されるニューロン特異的タンパク質の構造および機能に対する酸化ストレスの影響を研究するための有用なモデルである。多くのニューロン細胞株が本当のニューロンの特性全てを発現するわけではないので、ここで、初代ニューロン培養物を、インタクトな脳で生じるプロセスを識別するインビトロモデルとして幅広く使用する。
【０１１６】
虚血のインビトロモデルは、例えば、ニューロン培養物を、大きな無酸素性チャンバまたは低酸素性チャンバに配置し、そして培養培地を脱酸素化規定イオン組成の培地と交換することによって、インビボ条件を模倣する酸素およびグルコース欠乏に近似させる。ニューロングルタミン酸レセプター（特に、Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）レセプター）の毒性過剰刺激は、低酸素虚血ニューロン損傷（Ｃｈｏｉ，Ｄ．Ｍ．，１９８８，Ｎｅｕｒｏｎ  １：６２３−６３４）、反応性酸素種（ＲＯＳ）の虚血誘導（Ｗａｔｓｏｎ，Ｂ．Ｄ．，ら，１９８８，Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．，５９：２６９−２８１）、過剰なカルシウム流入（Ｇｒｏｔｔａ，Ｊ．Ｃ．，１９８８，Ｓｔｒｏｋｅ１９：４４７−４５４）、アラキドン酸増加（Ｓｉｅｓｊｏ，Ｂ．Ｋ．，１９８１，Ｊ．Ｃｅｒｅｂ．Ｂｌｏｏｄ  Ｆｌｏｗ  Ｍｅｔａｂ．１：１５５−１８６）およびＤＮＡ損傷（ＭａｃＭａｎｕｓ，Ｊ．Ｐ．，ら，１９９３，Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．，１６４：８９−９２）（それぞれが神経変性のカスケードをひきおこす）に寄与する。
【０１１７】
初代胚性海馬ニューロン細胞は、ニューロン機能のモデルにおいて有用であるとして幅広く認識されている。海馬は、一般に、中枢神経系（ＣＮＳ）ニューロンに代表的な十分に特徴付けられた特性を有する、比較的均一な集団の供給源のニューロンである。錐体ニューロン（海馬において主要な細胞型）は、全ニューロン集団の８５％〜９０％を占めると推定されている（ＢａｎｋｅｒおよびＧｏｓｌｉｎ，１９９８，Ｃｕｌｔｕｒｉｎｇ  Ｎｅｒｖｅ  Ｃｅｌｌｓ，第２版、Ｔｈｅ  ＭＩＴ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）。海馬はまた、長期増強のような、シナプス機能における活性依存性変化について顕著な能力を示す（Ｈａｗｋｉｎｓ  ＲＤ，Ｋａｎｄｅｌ  ＥＲ，Ｓｉｅｇｅｌｂａｕｍ  ＳＡ．（１９９３）Ｌｅａｒｎｉｎｇ  ｔｏ  ｍｏｄｕｌａｔｅ  ｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒ  ｒｅｌｅａｓｅ：ｔｈｅｍｅｓ  ａｎｄ  ｖａｒｉａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｓｙｎａｐｔｉｃ  ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ［総説］，Ａｎｎ．Ｒｅｖ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１６：６２５−６６５．）。
【０１１８】
実施例に詳細に記載される方法に従って、本発明を支持して実施される実験において、無酸素／虚血を、海馬ニューロン細胞の初代培養物において誘導し、そして化合物を、細胞死を妨げるそれらの能力について試験した。次いで、このようなインビトロアッセイにおいて活性を有することが見出された化合物を、大脳虚血（「発作」）の１つ以上の動物モデル（例えば、ラットにおける中大脳動脈閉塞（ＭＣＡＯ）モデル）においてさらに試験した。
【０１１９】
簡単に述べると、海馬ニューロンの初代培養物は、ニューロン保護における活性について化合物を試験するために使用される。海馬培養物は、代表的に、１８〜１９日目の胎仔ラットから調製される。この年齢において、錐体ニューロンの発生（Ｅ１５においてラットで開始する）が基本的に完了する。この段階の脳組織は、比較的容易に解離し、髄膜は、容易に除去され、そしてグリア細胞の数は、依然として比較的中程度である（Ｐａｒｋ  ＬＣ，Ｃａｌｉｎｇａｓａｎ  ＮＹ，Ｕｃｈｉｄａ  Ｋ，Ｚｈａｎｇ  Ｈ，Ｇｉｂｓｏｎ  ＧＥ．（２０００）Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ  ｅｌｉｃｉｔｓ  ｂｒａｉｎ  ｃｅｌｌ  ｔｙｐｅ−ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  ｓｔｒｅｓｓ  ａｎｄ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ  ｉｎ  ｃｕｌｔｕｒｅ．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ  ７４（１）：１１４−１２４）。
【０１２０】
本発明の化合物の活性を評価するために、試験化合物を、実施例に詳細に記載されるように、１つ以上の標準的なストレッサー（低酸素を含む）に対して細胞を保護するその能力について評価する。一般的に、所望の治療化合物候補は、約１ｍＭ未満の濃度、なおより好ましくは約１００μＭ未満の濃度でこのモデルにおいて効果的である。効果的（有効）とは、このような化合物が、ストレッサー誘導死から、試験される細胞の少なくとも２０％、好ましくは３０％、より好ましくは、４０％、さらにより好ましくは５０％以上を保護することを意味する。例として、約１〜１０００μＭの範囲の濃度にわたって保護を提供する際に効果的である化合物は、インビボで神経保護を提供すると期待される。正確な値は、神経保護細胞アッセイが行われる特定の条件に依存して変化し得るので、本発明の化合物が効果的であるとみなされる絶対的な濃度を提供するよりもむしろ、引き続いて試験化合物を比較することに対する基準の形態で、ガイドラインとして上記基準を提供することが、本開示の意図である。代表的に、このようなインビトロ細胞系において神経保護性であることが見出される化合物は、次いで、神経保護のインビボ動物モデル（例えば、下記のラット中大脳動脈閉塞モデル、または当該分野で周知のモデルのような他の適切なモデル）においてさらに試験される。
【０１２１】
大脳虚血傷害は、頭蓋への血管または頭蓋内の血管を閉塞することによって、動物においてモデル化される（Ｍｏｌｉｎａｒｉ，Ｇ．Ｆ．，１９８６，Ｈ．Ｊ．Ｍ．Ｂａｒｎｅｔｔ，ら，（編）Ｓｔｒｏｋｅ：Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ，Ｖｏｌ．１，Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ  Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ，ＮＹ）。ラット中大脳動脈閉塞（ＭＣＡＯ）モデルは、ヒト（例えば、発作を経験するヒト）における大脳虚血損傷に近似する一過性の限局性大脳虚血を誘導するための最も幅広く使用される技術のうちの１つである。このモデルにおいて虚血の引き金として使用される中大脳動脈は、ヒト発作において最も影響を受ける血管である。このモデルはまた、再灌流の期間（これは、代表的に、ヒト発作において生じる）を伴う。２時間の閉塞を含むＭＣＡＯは、２４時間の時点での死亡率の増加なしに得られ得る最大サイズの皮質梗塞を生成することが見出された。
【０１２２】
簡単に述べると、ナイロンフィラメントが、ラットの右頸動脈内に移植される。閉塞をもたらすために、ラットを麻酔し、そしてフィラメントを、内動脈および外動脈の分岐点から１８〜２０ｍｍ、内頸動脈へ進め、フィラメントの周りで縫合糸を２時間、きつく結合する。２時間の閉塞後、動物を再び麻酔し、そしてフィラメントを除去して、実験の残りのために再灌流させる。試験薬物を、このプロセスの間、閉塞の前、閉塞の間、または閉塞後の任意のときに投与し得、種々の手段の１つ以上（限定しないが、脳室内（ＩＣＶ）注入、静脈内（ＩＶ）注入、腹腔内（ＩＰ）投与、ならびに腸内投与（例えば、胃管栄養法））によって投与し得る。動物を、実施例に記載されるように、実験の間、正常温度に維持する。閉塞および再灌流後の所定の時間において、動物を屠殺し、そしてそれらの脳を取り出し、そして梗塞容積によって測定されるような、損傷の評価のために処理する。一般的に、化合物は、このモデルにおいて、これらが、ＩＣＶまたはＩＶで投与される場合、約１０ｍｇ／ｋｇ未満、好ましくは、１ｍｇ／ｋｇ未満、より好ましくは、１００μｇ／ｋｇ未満、そしてさらにより好ましくは約１μｇ／ｋｇ未満である用量で、全梗塞容積の有意な減少を提供する場合、活性を有するとみなされる。全梗塞容積の有意な減少とは、コントロール値と比較して、少なくとも２０％、好ましくは、少なくとも３０％、より好ましくは、少なくとも４０％、そしてさらにより好ましくは、約５０％の減少を意味する。
【０１２３】
神経保護における効力のさらなる確証は、機能試験（例えば、握力試験またはロトロッド（ｒｏｔｏｒｏｄ）試験）において評価され得る。神経保護を示す化合物を用いて処置された動物は、梗塞サイズの有意な減少を示し、そして感覚運動機能の喪失を示す未処置の動物と比較して、ＭＣＡＯ後に、それらのＭＣＡＯ前握力値を維持する。同様に、神経保護を示す化合物で処置された動物はまた、より高い脳レベルにおける感覚運動機能の喪失を示す、ロトロッドスコアの有意な減少を示した未処置の動物と比較して、ＭＣＡＯ後のそれらのＭＣＡＯ前ロトロッド活性スコアを維持した。
【０１２４】
同様に、筋細胞の初代培養物は、例えば、心筋虚血またはうっ血性心不全から生じる心臓損傷に対する保護を提供する能力についてインビトロで化合物を試験するために使用され得る。新生仔のラット由来の心筋細胞の調製は、実施例に記載される。このような細胞は、代表的に、心筋虚血の分子モデルを研究するために使用され（Ｗｅｂｓｔｅｒ，ＫＡ，Ｄｉｓｃｈｅｒ，ＤＪ＆Ｂｉｓｈｏｐｒｉｃ，ＮＨ．１９９５．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｃａｒｄｉｏｌ．２７：４５３−４５８；Ｃａｍｉｌｌｅｒｉ，Ｌ，Ｍｏｉｎｓ，Ｎ，Ｐａｐｏｎ，Ｊ，Ｍａｕｂｌａｎｔ，Ｊ，Ｂａｉｌｌｙ，Ｐ，ｄｅ  Ｒｉｂｅｒｏｌｌｅｓ，Ｃ＆Ｖｅｙｒｅ，Ａ．１９９７．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．＆Ｔｏｘｉｃｏｌ．１３：４３５−４４４；Ｂｉｅｌａｗｓｋａ，ＡＥ，Ｓｈａｐｉｒｏ，ＪＰ，Ｊｉａｎｇ，Ｌ，Ｍｅｌｋｏｎｙａｎ，ＨＳ，Ｐｉｏｔ，Ｃ，Ｗｏｌｆｅ，ＣＬ，Ｔｏｍｅｉ，ＬＤ，Ｈａｎｎｕｎ，ＹＡ＆Ｕｍａｎｓｋｙ，ＳＲ．１９９７．Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１５１：１２５７−１２６３）、従って、心筋保護活性の指標として受容される。この目的のための例示的なストレッサーアッセイが、実施例に提供される。例えば、培養物中の心筋細胞は、収縮性（「拍動」）活性を示し；各心筋細胞の収縮は、「カルシウムトランジエント（ｃａｌｃｉｕｍ  ｔｒａｎｓｉｅｎｔ）」と呼ばれる細胞内カルシウムの上昇と関連する。これらのカルシウムトランジエントは、Ｆｌｕｏ−４（カルシウムが結合すると大きな蛍光強度の増加を示す蛍光色素）を使用して測定され得る。このアッセイは、細胞ベースであり、そして虚血損傷に対して保護し、かつ細胞にそれらの収縮機能を維持させる、潜在的な細胞保護分子の能力を試験する。
【０１２５】
化合物のさらなる確認は、全器官アッセイ（例えば、心臓機能の単離された心臓（Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ）モデル）において実行され得る。同様に、化合物は、疾患（例えば、糖尿病、腎不全、発疹、筋肉疲労、炎症）のさらなる動物モデルにおいて、当該分野で周知であるように、さらに確認され得る。
【０１２６】
この節では、本発明の組成物を組み込んだ組成物を、インビトロおよびインビボ動物モデルを用いて選択する方法、および皮膚科学的兆候における治療的処置として使用する方法について記載する。炎症性応答の媒介物についての多くの細胞スクリーニングアッセイが、当該分野で周知である。このような媒介物としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：炎症性サイトカイン、インターロイキンー１β、および腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ．α）。他の分子は、炎症のマーカー（例えば、Ｃ−反応性タンパク質（ＣＲＰ）、特定の接着分子、ならびにロイコトリエン、トロンボキサンおよびイソプロスタンのようなタンパク質が挙げられる）としての使用について報告されている。
【０１２７】
抗炎症性活性のインビトロ評価は、十分に特徴付けされたアッセイ（例えば、実施例９に例示されるＥ−セレクチン（ＥＬＡＭ）産生アッセイまたはＣＲＰアッセイ）によって決定され得、そしてインビボ評価は、カラギナン誘導性の足水腫アッセイによって決定され得る。ＥＬＡＭアッセイは、活性化された内皮細胞中の低下したＥＬＡＭの発現における、試験化合物の活性を測定する。簡単に述べると、内皮細胞は、公知のアクチベータ（例えば、リポポリサッカリド、ＴＮＦ、またはＩＬ−１β）を単独またはいくつかの組み合わせで添加することによって、活性化される。活性化細胞は、ＥＬＡＭを産生し、ＥＬＡＭは、例えば、Ｅ−セレクチンモノクローナル抗体ベースのＥＬＩＳＡアッセイを用いて測定され得る。本発明を支持して実行される研究において、ＥＬＡＭ産生が低下した。実施例１０において記載されるような、抗炎症性活性のインビボ評価は、十分に特徴付けられたアッセイによって決定され得る（Ｇａｂｏｒ，Ｍ．，Ｍｏｕｓｅ  Ｅａｒ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  Ｍｏｄｅｌｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，２０００）。カラゲナン誘導足浮腫は、炎症のモデルであり、これは、ラットの足の足底内表面へのカラゲナン投与に続く、時間依存性の浮腫の形成を引き起こす。マウスの耳へのアラキドン酸（ＡＡ）の適用は、即時の血管拡張および紅斑を生じ、続いて、浮腫の急激な発生を生じる（これは、４０〜６０分で最大である）。浮腫の発生は、タンパク質および白血球の管外遊出と同時である。１時間後、浮腫は急速に減少し、そして炎症細胞が組織を離れ、その結果、６時間で、耳は、ほぼ正常に回復する。これらのアッセイは、それぞれ、投与の全身経路および局所経路を介してこれらの炎症性プロセスを処置する、試験化合物の能力を測定する。
【０１２８】
皮膚についての細胞保護活性は、実施例７において記載されるように、Ｍａｔｔｅｋ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｓｈｌａｎｄ，ＭａｓｓからのＥｐｉｄｅｒｍ  Ｓｋｉｎ  Ｍｏｄｅｌ（ＥＰＩ−１００）を使用して細胞培養物で評価され得る。新生児包皮の細胞培養物を、製造業者の指示に従って培養し、そして細胞によって取り込まれた３−（４，５−ジメチルチアゾール（ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈａｚｏｌ）−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）色素の量を測定することによって、細胞生存度のパーセントについてアッセイする。
【０１２９】
発毛阻害に関する活性を、実施例８に記載する。
【０１３０】
（投与）
式Ｉの化合物は、治療的有効投薬量（例えば、先に記載された疾患状態に対する処置を提供するのに十分な投薬量）で投与される。本発明の化合物またはその薬学的に受容可能な塩の投与は、類似の有用性を提供する薬剤についての投与の受容された様式のいずれかにより得る。
【０１３１】
ヒト投薬量レベルが本発明の化合物について最適化されなければならないものの、一般的に、毎日の用量は、体重１ｋｇ当たり約０．０１〜２．０ｍｇ、好ましくは、体重１ｋｇ当たり約０．１〜１．５ｍｇ、そして最も好ましくは、体重１ｋｇ当たり約０．３〜１．０ｍｇである。従って、７０ｋｇのヒトへの投与について、投薬量範囲は、１日当たり約０．７〜１４０ｍｇ、好ましくは、１日当たり約７．０〜１０５ｍｇ、そして最も好ましくは、１日当たり約２１〜７０ｍｇである。投与される活性化合物の量は、もちろん、処置される被験体および疾患状態、苦痛の重篤度、投与の方法およびスケジュール、ならびに処方する医師の判断に依存する。
【０１３２】
本発明の組成物は、紫外線照射の有害な影響に対する保護を（好ましくは、ヒトケア製品（ｃａｒｅ  ｐｒｏｄｕｃｔ）において）提供するのに適切である。より好ましくは、本発明の組成物は、ＵＶ照射の有害な影響（日焼けおよび皮膚の早期な老化が挙げられるが、これらの限定されない）からのヒトの皮膚に対する保護を提供するための、日焼け止め剤としての使用に適する。従って、本発明はまた、さらに、ＵＶ照射の有害な影響からヒトの皮膚を保護する方法に関する。このような方法は、一般的に、皮膚表面に達するＵＶ照射の量を減弱または減少することを包含する。本発明の場合において、紫外線照射の有害な影響に対する処置の方法はまた、ＵＶ照射への曝露がすでに行われた後の、本発明の組成物の投与を包含する。ＵＶ照射から皮膚を保護するために、安全かつ有効な（光保護）量の組成物が、局所的に皮膚に適用される。「局所適用」とは、皮膚の表面上への塗りつけ、噴霧などによる、本発明の組成物の適用をいう。適用される正確な量は、所望されるＵＶ保護のレベルに依存して変化し得る。皮膚１平方センチメートル当たり約０．５ｍｇの組成物〜皮膚１平方センチメートル当たり約２５ｍｇの組成物が、代表的に適用される。
【０１３３】
本発明の化合物および方法は、減少した炎症性応答が望ましい任意の皮膚ケア適用において使用され得る。例えば、本発明の化合物および組成物は、リーブオンおよびリンスオフ（ｌｅａｖｅ−ｏｎ  ａｎｄ  ｒｉｎｓｅ−ｏｆｆ）挫瘡調製物、顔面ミルクおよびコンディショナー、シャワージェル、発泡性および非発泡性の洗顔剤、化粧品、ハンドローションおよびボディーローション、リーブオン湿潤剤、化粧および洗浄ワイプ、毒ツタ（ｉｖｙ）、水痘またはそう痒に対する軟膏などに組み込まれ得る。一般的に、皮膚適用のために、局所適用が好ましい；しかし、本明細書中で他に記載されるように、全身投与もまた可能である。
【０１３４】
本発明の組成物はまた、美容用組成物において使用され得る。本発明の美容用組成物は、理想的には光沢または艶のある仕上がりを有する、永久的または半永久的な色を唇に適用するための、特に、リップスティックまたはリップクリームの形態で、皮膚および唇を処置する際に使用することに理想的に適する。美容用組成物はまた、有害な天候（風および雨を含む）、乾燥および／または熱い環境、環境汚染（例えば、オゾン、煙など）への曝露または過剰な線量の日光への曝露に対する保護のための皮膚ケア剤を用いて、皮膚および／または唇を処置する際に使用され得る。これらの組成物はまた、日光からの保護を提供し、髪および皮膚の加湿および／またはコンディショニング、改善された皮膚の感触、制御された皮膚の肌目、微細な線および皺の減少、髪または皮膚の油っぽい輝きの減少、皮膚の色を薄くすること（ｌｉｇｈｔｅｎｉｎｇ）および皮膚または髪の臭いの減少に有用である。
【０１３５】
従って、美容用組成物は、装飾および／または保護フィルムを皮膚および／または唇に提供するために、従来のホルダーまたはアプリケーターを用いるかまたは用いない従来の様式で、皮膚および／または唇に適用され得る。
【０１３６】
上記状態の処置のために本発明の化合物を使用する際、薬学的に受容可能な投与の様式のいずれかが使用され得る。式Ｉの化合物は、単独でまたは薬学的に受容可能な賦形剤とともにのいずれかで投与され得、これには、固体、半固体、液体またはエアロゾル投薬形態（例えば、錠剤、カプセル剤、散剤、液体、懸濁剤、坐剤、エアロゾルなど）が挙げられる。式Ｉの化合物はまた、好ましくは、正確な投薬量の単回投与に適した単位投薬形態で、所定の速度での化合物の長期投与のために、持続放出または制御放出の投薬形態（蓄積注射、浸透圧ポンプ、丸剤、経皮（電気輸送を含む）パッチなどを含む）で投与され得る。組成物は、代表的に、従来の薬学的キャリアまたは賦形剤および式Ｉの化合物またはその薬学的に受容可能な塩を含む。さらに、これらの組成物は、他の医療的薬剤、薬学的薬剤、キャリア、アジュバントなど（限定しないが、抗凝固剤、血餅溶解剤、透過性増強剤および徐放性処方物が挙げられる）を含み得る。
【０１３７】
一般的に、意図される投与の様式に依存して、薬学的に受容可能な組成物は、約０．１重量％〜９０重量％、好ましくは、約０．５重量％〜５０重量％の式Ｉの化合物または塩を含み、残りは、適切な薬学的賦形剤、キャリアなどである。
【０１３８】
上で詳細に記載される状態のための投与の１つの好ましい方法は、苦痛の程度に従って調節され得る従来の毎日の投薬レジメンを使用する、経口である。このような経口投与のために、薬学的に受容可能な非毒性の組成物を、任意の通常使用される賦形剤（例えば、マンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、ナトリウムサッカリン、滑石、セルロース、クロスカルメロースナトリウム、グルコース、ゼラチン、スクロース、炭酸マグネシウムなど）のいずれかを組み込むことによって形成する。このような組成物は、溶液、懸濁液、錠剤、分散性錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、徐放性処方物などの形態をとる。
【０１３９】
好ましくは、組成物は、丸剤または錠剤の形態をとり、従って、組成物は、活性成分とともに、ラクトース、スクロース、リン酸二カルシウムなどのような希釈剤；ステアリン酸マグネシウムなどのような滑沢剤；ならびにデンプン、アカシアガム、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、セルロースおよびこれらの誘導体のような結合剤などを含む。
【０１４０】
液体の薬学的に投与可能な組成物は、例えば、上記に規定される活性化合物および任意の薬学的アジュバントを、キャリア（例えば、水、生理食塩水、水性デキストロース、グリセロール、グリコール、エタノールなど）中に溶解、分散などして、それによって、溶液または懸濁液を形成することによって、調製され得る。所望である場合、投与されるべき薬学的組成物はまた、小量の非毒性補助物質（例えば、湿潤剤、乳化剤、または可溶化剤、ｐＨ緩衝化剤など（例えば、酢酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、シクロデキストリン誘導体、ソルビタンモノラウレート、トリエタノールアミンアセテート、トリエタノールアミンオレエートなど））を含み得る。このような投薬形態を調製する実際の方法は、当業者に公知であるか、または明らかである；例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，第１５版，１９７５を参照のこと。投与されるべき組成物または処方物は、いずれにしても、処置される被験体の症状を軽減するのに有効な量で、ある量の活性化合物を含む。
【０１４１】
０．００５％〜９５％の範囲の活性成分を含む投薬形態または組成物（残りは、非毒性キャリアから構成される）が調製され得る。
【０１４２】
経口投与のために、薬学的に受容可能な非毒性組成物は、通常使用される賦形剤（例えば、薬学的グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、滑石、セルロース誘導体、クロスカルメロースナトリウム、グルコース、スクロース、炭酸マグネシウム、ナトリウムサッカリン、滑石など）のいずれかの組み込みによって形成される。このような組成物は、溶液、懸濁液、錠剤、カプセル剤、散剤、持続性処方物などの形態をとる。このような組成物は、０．０１％〜９５％の活性成分、好ましくは、０．１〜５０％の活性成分を含み得る。
【０１４３】
固体投薬形態のために、溶液または懸濁液（例えば、プロピレンカルボネート、植物油、またはトリグリセリド中）は、好ましくは、ゼラチンカプセル中にカプセル化される。このようなジエステル溶液、ならびにそれらの調製およびカプセル化は、米国特許第４，３２８，２４５号；同第４，４０９，２３９号；および同第４，４１０，５４５号に開示される。液体投薬形態について、溶液（例えば、ポリエチレングリコール中）は、投与のために容易に測定されるのに十分な量の薬学的に受容可能な液体キャリア（例えば、水）で希釈され得る。
【０１４４】
あるいは、液体または半固体の経口処方物は、活性化合物または塩を、植物油、グリコール、トリグリセリド、プロピレングリコールエステル（例えば、プロピレンカーボネート）など中に溶解または分散し、そしてこれらの溶液または懸濁液をハードゼラチンカプセルシェルまたはソフトゼラチンカプセルシェル中にカプセル化することによって調製され得る。
【０１４５】
他の有用な処方物としては、米国再発行特許２８，８１９号および米国特許第４，３５８，６０３号に示される処方物が挙げられる。
【０１４６】
処方物は、連続処置のために、単回の単位投薬形態で投与され得るか、または症状の軽減が特に必要とされる場合、任意に、単回の単位投薬形態で投与され得る。例えば、処方物は、脳卒中、心筋梗塞、または慢性心不全の症状の発症後に、ボーラスとして、または連続的な静脈内注入として投与され得る。
【０１４７】
非経口投与は、一般的に、皮下、筋肉内または静脈内のいずれかでの、注射によって特徴付けられる。注射可能物は、従来の形式で、液体、溶液または懸濁液、注射の前に液体中の溶液または懸濁液に適切な固体形態、あるいはエマルジョンとしてのいずれかで調製され得る。適切な賦形剤は、例えば、水、生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなどである。さらに、所望である場合、投与されるべき薬学的組成物はまた、小量の非毒性補助物質（例えば、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝化剤、溶解性向上剤など（例えば、酢酸ナトリウム、ソルビタンモノラウレート、トリエタノールアミンオレエート、シクロデキストリンなど））を含み得る。
【０１４８】
非経口投与のためのより最近開発されたアプローチは、一定レベルの投薬量が維持されるように、徐放性または持続性システムの移植を実施する。例えば、米国特許第３，７１０，７９５号を参照のこと。このような非経口組成物に含まれる活性化合物のパーセンテージは、それらの特定の性質、ならびにその化合物の活性および被験体の必要性に高く依存する。しかし、溶液中の０．０１％〜１０％の活性成分のパーセンテージは、使用可能であり、そしてこの組成物が、後に上記パーセンテージに希釈される固体である場合、より高い。好ましくは、組成物は、溶液中に、０．２〜２％の活性薬剤を含む。
【０１４９】
活性化合物単独または他の薬学的に受容可能な賦形剤とあわせた経鼻溶液もまた投与され得る。
【０１５０】
活性化合物または塩の処方物はまた、噴霧器のためのエアロゾルまたは溶液として、あるいは吸入のための微細粉末として、単独で、または不活性なキャリア（例えば、ラクトース）とともに、呼吸管に投与され得る。このような場合、処方物の粒子は、５０ミクロン未満、好ましくは、１０ミクロン未満の直径を有する。
【０１５１】
本発明の皮膚科用処方物は、代表的に、式Ｉのいずれかの細胞保護性誘導体、および必要に応じて、極性溶媒を含む。本発明の処方物における使用に  適した溶媒としては、細胞保護性誘導体を溶解し得る任意の極性溶媒が挙げられる。適切な極性溶媒としては、以下が挙げられる：水；アルコール（例えば、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ヘキサノール、およびベンジルアルコール）；ポリオール（例えば、プロピレングリコール、ポリプロピレングリコール、ブチレングリコール、ヘキシレングリコール、マルチトール、ソルビトール、および、グリセリン）；ならびにグリセリンに溶解したパンテノール；フレーバー油およびこれらの混合物。これらの溶媒の混合物もまた使用され得る。例示的な極性溶媒は、多水酸基アルコールおよび水である。好ましい溶媒の例としては、グリセリン、グリセリン中のパンテノール、グリコール（例えば、プロピレングリコールおよびブチレングリコール、ポリエチレングリコール）、水およびこれらの混合物が挙げられる。使用のためのさらに好ましい極性溶媒は、アルコール、グリセリン、パンテノール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、ヘキシレングリコールおよびこれらの混合物である。
【０１５２】
代表的には、本発明の処方物は、約０．１％〜約８０％、好ましくは、約０．５％〜約６０％、より好ましくは、約１％〜約３０％、そして最も好ましくは、約３％〜約１８％の極性溶媒を含む。
【０１５３】
皮膚軟化薬もまた、本発明の化粧用／皮膚用組成物に添加され得る。皮膚軟化薬成分は、脂肪、油、脂肪アルコール、脂肪酸、およびエステルを含み、これらは、適用および接着を補助し、光沢を生じ、最も重要なことには、閉塞性加湿（ｏｃｃｌｕｓｉｖｅ  ｍｏｉｓｔｕｒｉｚａｔｉｏｎ）を提供する。使用に適切な皮膚軟化薬は、イソステアリン酸誘導体、イソプロピルパルミテート、ラノリン油、ジイソプロピルジメレート（ｄｉｍｅｒａｔｅ）、マレイン酸化大豆油、オクチルパルミテート、イソプロピルイソステアレート、セチルラクテート、セチルリシノーレート、トコフェロールアセテート、アセチル化ラノリンアルコール、セチルアセテート、フェニルトリメチコン（ｔｒｉｍｅｔｈｉｃｏｎｅ）、グリセリルオレエート、トコフェリルリノレート、小麦麦芽グリセリド、アラキジルプロピオネート、ミリスチルラクテート、デシルオレエート、プロピレングリコールリシノーレート、イソプロピルラノレート（ｌａｎｏｌａｔｅ）、ペンタエリスリチルテトラステアレート、ネオペンチルグリコールジカプリレート（ｄｉｃａｐｒｙｌａｔｅ）／ジカプレート（ｄｉｃａｐｒａｔｅ）、水素化されたココヤシ−グリセリド、イソノニルイソノナノエート、イソトリデシルイソノナノエート、ミリスタル（ｍｙｒｉｓｔａｌ）ミリステート、トリイソセチルシトレート、セチルアルコール、オクチルドデカノール、オレイルアルコール、パンテノール、ラノリンアルコール、リノール酸、リノレン酸、脂肪酸のスクロースエステル、オクチルヒドロキシステアレートおよびこれらの混合物である。他の適切な  皮膚軟化薬の例は、Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｂｅｎｃｈ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，１．１９−１．２２頁（１９９６）（本明細書中において参考として援用される）に見出され得る。適切な皮膚軟化薬としては、極性皮膚軟化薬乳化剤（例えば、直鎖または分枝鎖のポリグリセロールエステル）および非極性皮膚軟化薬が挙げられる。皮膚軟化薬成分は、代表的に、美容用組成物の約１％〜約９０％、好ましくは、約１０％〜約８０％、より好ましくは、約２０％〜約７０％、そして最も好ましくは、約４０％〜約６０％を構成する。
【０１５４】
「極性皮膚軟化薬」とは、本明細書中で使用される場合、少なくとも１つの極性部分を有し、そして極性皮膚軟化薬中の細胞保護誘導体化合物の溶解性（３０℃における）が、約１．５％より大きい、好ましくは約２％より大きい、より好ましくは、約３％より大きい、任意の皮膚軟化薬乳化剤を意味する。適切な極性皮膚軟化薬としては、ポリオールエステルおよびポリオールエーテル（例えば、直鎖または分枝鎖のポリグリセロールエステルおよびポリグリセロールエーテル）が挙げられるが、これらに限定されない。このような皮膚軟化薬の非限定的な例としては、ＰＧ３ジイソステアレート、ポリグリセリル−２−セスキイソステアレート、ポリグリセリル−５−ジステアレート、ポリグリセリル−１０−ジステアレート、ポリグリセリル−１０−ジイソステアレート、アセチル化モノグリセリド、グリセロールエステル、グリセロールトリカプリレート／カプレート、グリセリルリシノレート、グリセリルイソステアレート、グリセリルミリスチレート、グリセリルリノレート、ポリアルキレングリコール（例えば、ＰＥＧ  ６００）、モノグリセリド、２−モノラウリン、ソルビタンエステルおよびこれらの混合物が挙げられる。
【０１５５】
「非極性皮膚軟化薬」とは、本明細書中で使用される場合、永久電気モーメントを有さない任意の皮膚軟化薬乳化剤を意味する。適切な非極性皮膚軟化薬としては、エステルおよび直鎖または分枝鎖の炭化水素が挙げられるが、これらに限定されない。このような皮膚軟化薬の非限定的な例は、イソノニルイソノナノエート、イソプロピルイソステアレート、オクチルヒドロキシステアレート、ジイソプロピルジメレート、ラノリン油、オクチルパルミテート、イソプロピルパルミテート、パラフィン、イソパラフィン（ｉｓｏｐａｒｒｉｆｉｎ）、アセチル化ラノリン、スクロース脂肪酸エステル、イソプロピルミリステート、イソプロピルステアレート、鉱油、シリコーン油、ジメチコン（ｄｉｍｅｔｈｉｃｏｎｅ）、アラントイン、イソヘキサデカン、イソドデカン、ペトロラタム、およびこれらの混合物である。極性皮膚軟化薬または非極性皮膚軟化薬中の化合物の溶解性は、当該分野で公知の方法に従って決定される。
【０１５６】
適切な油としては、エステル、トリグリセリド、炭化水素およびシリコーンが挙げられる。これらは、単一の物質または１つ以上の物質の混合物であり得る。これらは、通常、皮膚軟化薬成分の０％〜約１００％、好ましくは、約５％〜約９０％、そして最も好ましくは、約７０％〜約９０％を構成する。
【０１５７】
皮膚軟化剤として作用するオイルはまた、口紅のような化粧用組成物に粘性、粘着性、および薬物特性を付与する。適切なオイルの例としては、以下が挙げられる：カプリル酸トリグリセリド；カプリン酸トリグリセリド；イソステアリン酸トリグリセリド；アジピン酸トリグリセリド；プロピレングリコールミリスチルアセテート；ラノリン；ラノリンオイル；ポリブテン；パルミチン酸イソプロピル；ミリスチン酸イソプロピル；イソステアリン酸イソプロピル；セバシン酸ジエチル；アジピン酸ジイソプロピル；酢酸トコフェリル；リノール酸トコフェリル；ステアリン酸ヘキサデシル；乳酸エチル；オレイン酸セチル；リシノール酸セチル；オレイルアルコール；ヘキサデシルアルコール；ヒドロキシステアリン酸オクチル；オクチルドデカノール；小麦麦芽オイル；硬化植物油；ひまし油；ペトロラタム；変性ラノリン；分枝鎖炭化水素；アルコールおよびエステル；トウモロコシ油；綿実油；オリーブ油；パーム種油；菜種油；ベニバナ油；ホホバオイル；マツヨイグサ油；アボカドオイル；鉱油、シアバター、オクチルパルミテート、マレイン酸変性（ｍａｌｅａｔｅｄ）大豆油、グロセロールトリオクタノエート、ダイマー酸ジイソプロピル（ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌ  ｄｉｍｅｒａｔｅ）、ならびに揮発性シリコーンオイルおよび不揮発性シリコーンオイル（フェニルトリメチコーンを含む）。
【０１５８】
本明細書における使用に適切なオイルは、アセチルグリセリド、アルコールおよび多価アルコールのオクタン酸エステルおよびデカン酸エステル（例えば、グリコールおよびグリセロールのオクタン酸エステルおよびデカン酸エステル）、アルコールおよび多価アルコールのリシノール酸エステル（例えば、リシノール酸セチル）、ＰＧ−３ジイソステアレート、ポリグリセロールエーテル、ポリグリセロールエステル、カプリル酸トリグリセリド、カプリン酸トリグリセリド、イソステアリン酸トリグリセリド、アジビン酸トリグリセリド、フェニルトリメチコーン、ラノリンオイル、ポリブテン、パルミチン酸イソプロピル、イソステアリン酸イソプロピル、リシノール酸セチル、オクチルドデカノール、オレイルアルコール、硬化植物油、ひまし油、変性ラノリン、パルミチン酸オクチル、ラノリンオイル、マレイン酸変性大豆油、リシノール酸セチル、グリセリルトリオクタノエート、ダイマー酸ジイソプロピル、合成ラノリン誘導体および分枝鎖アルコール、脂肪酸のスクロースエステル、ヒドロキシステアリン酸オクチルならびにこれらの混合物である。
【０１５９】
好ましくは、使用されるオイルは、使用される大部分（少なくとも約７５％、好ましくは少なくとも約８０％および最も好ましくは少なくとも約９９％）の種類のオイルが、約１〜約０．１より多く異ならない、好ましくは約０．８〜約０．１より多く異ならない溶解度パラメーターを有するように選択される。
【０１６０】
界面活性剤もまた、有益な化粧特性または塗布特性を付与するために、本発明の組成物に添加され得る。使用に適切な界面活性剤は、エマルジョンおよび／または会合構造を形成し得る界面活性剤である。界面活性剤乳化剤は、配合の０％〜約２０％、好ましくは０％〜約１５％および最も好ましくは約１％〜約１０％であり得る。適切な乳化剤の例は、Ｄｕｎｐｈｙらの米国特許第５，０８５，８５６号およびＥｌ−Ｎｏｋａｌｙらの米国特許第５，６８８，８３１号に見出され得る。他の適切な乳化剤の例は、Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｂｅｎｃｈ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，ｐｐ．１．２２，１．２４−１．２６（１９９６）に見出され得る（その全てが、本明細書中に参考として援用される）。
【０１６１】
会合構造（好ましくは、層状または六方晶系液晶）を周囲温度にて極性溶媒と混合された場合に形成する界面活性剤もまた、本明細書において有用である。本明細書中で使用される場合の周囲温度／室温は、代表的には、約２０℃を意味する。一般的に、周囲温度は、温度領域に対して地理上の位置（すなわち、亜熱帯）のような変数に依存して、約１８℃〜約２７℃の範囲であり得、好ましくは約２０℃〜約２５℃の範囲であり得る。当業者は、会合構造が周囲温度において形成するか否かを容易に決定し得る。使用に適切な界面活性剤は一般的に、約周囲温度（約２０℃）以下、または一般的に約１８℃〜約２７℃以下、好ましくは約２０℃〜約２５℃以下のクラフト点を有する。
【０１６２】
クラフト点の定義は、当該分野で周知であり、そして当業者は、界面活性剤のクラフト点を容易に決定し得る。一般的な用語において、クラフト点は、界面活性剤の炭化水素鎖の融点である。これはまた、水中の会合コロイドの溶解度が、臨界ミセル濃度を超えてミセルが形成することに起因して、突然増加する温度として表され得る。
【０１６３】
会合構造を形成する能力を実証するために界面活性剤および極性溶媒のサンプル混合物を調整する際に、その界面活性剤は、会合構造が周囲温度において形成し得るように、その極性溶媒中で十分に可溶性である必要がある。当業者は、適合する相互作用を決定し得る。
【０１６４】
周囲温度において会合構造を形成し、そして化粧品における使用に適切な任意の界面活性剤は、本明細書における使用に適切である。化粧品における使用に適切な界面活性剤は、皮膚科学的問題または毒物学的問題を示さない。アニオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、両性界面活性剤およびこれらの混合物が、使用に適切である。好ましくは、約周囲温度以下のクラフト点を有するアニオン性界面活性剤および非イオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、両性界面活性剤、およびこれらの混合物が使用される。より好ましくは、約周囲温度以下のクラフト点を有する非イオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、両性界面活性剤、およびこれらの混合物が使用される。
【０１６５】
界面活性剤は、会合構造の約４％〜約９７％、好ましくは約５％〜約９５％、より好ましくは約２０％〜約９０％、そして最も好ましくは約３０％〜約７０％のレベルで使用され得る。
【０１６６】
本発明の化粧用組成物は、本明細書中で単一または集合的に「凝固剤」といわれ、化粧用組成物において使用される特定の液体基剤材料を凝固するのに有効な１種以上の材料を含み得る。（本明細書中で使用される場合、用語「凝固する」とは、周囲条件において固体または半固体を形成する（すなわち、安定な物理的構造を有し、そして通常の使用条件下で皮膚上に沈着され得る最終組成物を形成する）ように液体基剤材料の物理的変化および／または化学的変化をいう。）当業者に明らかであるように、化粧用組成物において使用するための特定の凝固剤の選択は、所望される組成物の特定の型（すなわち、ゲルまたはワックスベース）、所望のレオロジー、使用される液体基剤材料および組成物において使用される他の材料に依存する。凝固剤は、好ましくは、約０〜約９０％、より好ましくは約１〜約５０％、さらにより好ましくは約５％〜約４０％、最も好ましくは約３％〜約２０％の濃度で存在する。
【０１６７】
本発明のワックス化粧用スティックの実施形態は、好ましくは、約５％〜約５０％（重量基準）の蝋質凝固剤を含む。用語「蝋質凝固剤」は、本明細書中で使用される場合、蝋様の特徴を有する凝固剤を意味する。このような蝋質材料はまた、皮膚軟化薬として作用し得る。本明細書において有用な蝋質材料の中には、高融点蝋（すなわち約６５℃〜約１２５℃の融点を有する）があり、例えば、蜜蝋、鯨蝋、カルナウバ蝋、ベーラムノキ（ｂａｙｓｂｅｒｒｙ）、カンデリラ蝋、モンタン蝋、地蝋、セレシン、パラフィン、合成蝋（例えば、Ｆｉｓｈｅｒ−Ｔｒｏｐｓｃｈ蝋）、微結晶蝋、およびこれらの混合物である。セレシン、地蝋、白蜜蝋、合成蝋、およびこれらの混合物は、本明細書において有用な蝋であり、米国特許第４，０４９，７９２号、Ｅｌｓｎａｕ、１９７７年９月２０日発行（本明細書にその全体が参考として援用される）に開示される。約３７℃〜約７５℃の融点を有する低融点蝋は、本発明のワックススティック実施形態における使用に好ましい。本発明のワックススティック実施形態は、液体基剤材料として揮発性シリコーンオイルを含み、好ましくは、約１０％〜約３５％、より好ましくは、約１０％〜約２０％（重量基準）の低融点蝋を含む。このような材料としては、約８〜約３０個の炭素原子の脂肪鎖を有する、脂肪酸、脂肪アルコール、脂肪酸エステルおよび脂肪酸アミド、ならびにこれらの混合物が挙げられる。好ましい蝋様材料としては、セチルアルコール、パルミチン酸、ステアリルアルコール、ベヘンアミド、獣脂脂肪酸、ポリエチレングリコールのモノ脂肪酸エステルおよびジ脂肪酸エステル、ならびのこれらの混合物が挙げられる。ステアリルアルコール、セチルアルコール、およびこれらの混合物が、特に好ましい。本発明において有用なさらなる脂肪酸、脂肪アルコール、および他の蝋様材料はまた、当該分野で周知である。
【実施例】
【０１６８】
以下の調製および実施例は、当業者が本発明をより明瞭に理解し、そして本発明を実施することを可能にするために提供される。これらの実施例は、本発明の範囲を限定するとみなされるべきではなく、本発明の単なる例示およびその代表例と見なされるべきである。
【０１６９】
（一般的な特徴付け方法）
核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルを、Ｂｒｕｋｅｒ  ＤＴＸ３００分光計において、大半の場合にはテトラメチルシラン（ＴＭＳ）を内部参照として使用することにより、記録した。質量スペクトルを、エレクトロスプレーイオン化（正または負のモード）（ＥＳＩ）または大気圧化学イオン化（正または負のモード）（ＡＰＣＩ）のいずれかを使用して、Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００  ＬＣ／ＭＳＤ装置において得た。
【０１７０】
（実施例１）
（ニューロン細胞ストレスアッセイを利用する活性の決定）
（Ａ．初代海馬ニューロン細胞の単離および培養）
（材料）
・Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ／Ｂ２７ｉ：１×Ｂ２７補充物（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、０．５μＭ  Ｌ−グルタミン、２５μＭ  Ｌ−グルタミン酸、および１×ペニシリン／ストレプトマイシンを含有する、Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）。
・ハンクス基礎塩類溶液（ＨＢＳＳ，Ｃａ／Ｍｇを含まない）を、ＨＥＰＥＳ（１０ｍＭ、ｐＨ７．３）、重炭酸ナトリウム（０．３５％）、１×ペニシリン／ストレプトマイシン、および１ｍＭ  ピルビン酸塩を補充した１×ハンクスＣＭＦ（Ｇｉｂｃｏ）を調製することにより調製した。
・ポリ−Ｄ−リジン（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）、０．２μｍフィルターチューブを通して濾過した５０μｇ／ｍｌ溶液。
・Ｓｉｇｍａｃｏｔｅ（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）。
・ポリ−Ｄ−リジン（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）で処理したプラスチック培養フラスコ（Ｔ７５ｃｍ２）または１２ウェル細胞培養プレート。
【０１７１】
（初代海馬ニューロン細胞の調製）
雌性妊娠マウス（Ｅ１８〜Ｅ１９）を、ＣＯ２で安楽死させ、続いて子宮を取り出した。次いで、この子宮を滅菌プラスチックペトリ皿に置いた。胚を嚢から取り出し、胚性脳を取り出し、小さなペトリ皿中、冷（４ｏＣ）緩衝化塩類溶液（ＨＢＳＳ；Ｃａ／Ｍｇを含まない；Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中に浸した。次いで、解剖顕微鏡下で海馬を脳から取り出し、パラフィンで覆ったディッシュの上に置いた。髄膜を剥がし、解剖した海馬を小さなペトリ皿中のＨＢＳＳ中に回収した。海馬を、ＨＢＳＳを満たした１５ｍｌ遠心管に移した（通常は、１０〜１２個の脳）。脳を含む試験管を、卓上型遠心機で２分間、１０００ｒｐｍにて遠心分離した。上清を除去し、２ｍｌのＨＢＳＳを遠心管中の海馬に添加し、得られた懸濁液を、各々、徐々に小さくなった開口部を有する、シリコン処理した、先端を長くした硝子ピペットを用いて（標準的なサイズの開口部（約１．０ｍｍ直径）を有するピペットを用いて開始して、標準サイズの約１／２の開口部（約０．５ｍｍ直径）を有するピペット、次いで、そのサイズの約１／２（０．２５ｍｍ直径）の開口部を有するピペットを用いる）、２回倍散した。次いで、この懸濁液を再び卓上型遠心機で２分間１０００ｒｐｍにて遠心分離し、上清を廃棄し、２ｍｌのＮｅｕｒｏｂａｓａｌ／Ｂ２７ｉ（抗生物質を含む）を遠心管に添加した。次いで、上記の倍散手順をこの懸濁液に対して繰り返した。
【０１７２】
細胞の密度を、標準的な計数手順を用い、トリパンブルー染色排除（ｓｔａｉｎ  ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ）で細胞の生存能力について補正して、細胞の小さなアリコートに対して決定した。この手順を使用すると、推定収量は、３×１０５〜６×１０５細胞／脳である。次いで、細胞を、約１．５×１０６細胞（Ｔ７５フラスコ）または約７０，０００細胞／ウェル（２４ウェルプレート）の密度にて、Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ／Ｂ２７Ｉを入れたＰＤＬをコーティング２４ウェルプレート、フラスコまたはＭｅｔＴｅｋディッシュに添加した。プレートした細胞を、５％  ＣＯ２／９５％  Ｏ２の雰囲気にて３７℃でインキュベートした。新たなＮｅｕｒｏｂａｓａｌ／Ｂ２７ｍ培地（５μＭ  シトシンアラビノシド（ＡｒａＣ）を含む）で培地の半分を交換することにより、培地を３〜４日後に新しくした。最初の培養から７〜８日後、培地を、その半分または全部を回収し、等量の新たなＮｅｕｒｏｂａｓａｌ／Ｂ２７ｍ培地（Ａｒａ−Ｃなし）と交換することによって再び新しくした。
【０１７３】
（Ｂ．海馬の酸素欠乏−再酸素付加細胞死アッセイ）
このアッセイを使用して、培養海馬ニューロン細胞において、酸素欠乏−再酸素付加により虚血を誘導した。試験化合物を添加して、虚血誘導性ニューロン細胞傷害および細胞死に対する効能および効力を評価した。
【０１７４】
（材料）
・Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ培地、ＮｏＧ  ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ培地、Ｂ２７補充物およびＢ２７補充物（ＡＯなし）をＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓより入手した。
・Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ／Ｂ２７培地を、２×Ｂ２７（ＡＯなし）補充物、０．５ｍＭ  Ｌ−グルタミンおよび０．２５×ペニシリン／ストレプトマイシンを用いて調製した。
・Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｃｋｅｒ  Ｇｒｅｅｎを、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓから入手し、新たな５μＭ  溶液を、１０ｍＭ  ストックから使用直前に調製した。
・ＬｏＧ−Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌは、ＮｏＧ  ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ培地ならびに１ｍＭ  グルコース、０．５ｍＭ  Ｌ−グルタミン０．２５×ペニシリン／ストレプトマイシン、および１０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ（ｐＨ７．４）を含む。
・初代海馬ニューロン細胞を、上記の方法に従って調製し、使用前に、ポリ−Ｄ−リジンをコーティングした２４ウェルプレート中で１０〜１１日間培養した。
【０１７５】
脱酸素化ＬｏＧ−Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ培地（１００ｍｌ）を、低酸素チャンバにおいてＴ１５０ｃｍ２フラスコ中にその培地を一晩予備平衡化することにより調製した。低酸素条件下での予備インキュベーションの後、そのＬｏＧ−Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ培地を、１００％  Ｎ２を用いて３０分間軽く泡立たせ、培地を完全に脱酸素化した。さらに２０ｍｌのＬｏＧ−Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌを、Ｔ７５ｃｍ２フラスコ中で予備平衡化し、通常のインキュベーター（５％  ＣＯ２）において一晩インキュベートした。再酸素負荷培地を、培養インキュベーター（５％  ＣＯ２／９５％  Ｏ２）中に一晩Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ／Ｂ２７培地を入れることによって調製した。
【０１７６】
海馬神経のプレーティングから１０〜１１日後に、存在している培養培地を（Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ／Ｂ２７ｍ）、吸引することによって細胞から除去する。細胞を、６００μｌ／ウェル（２４ウェル培養プレート）のグルコースを含有しないＢＳＳで１回洗浄する。脱酸素化ＬｏＧ−Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ（２４ウェルプレートの各ウェルについて４００μｌ／ウェル）により、ニューロンを補充する。試験化合物を各ウェルに直接添加した（通常、３種類の濃度の化合物およびポジティブコントロール（各３連））。大部分の試験化合物を、１００％  ＤＭＳＯ中に溶解した；しかし、細胞培地中の最終ＤＭＳＯ濃度が決して０．５％を超えないように、濃度を調節した。試験化合物とともに細胞を含有するプレートを、プレートのふたを半開きにした状態で、低酸素チャンバに４〜５時間入れた。酸素正常状態コントロールについては、予備平衡化した酸素正常状態ＬｏＧ−Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ培地を各ウェルの細胞に添加し、プレートを、通常の培養インキュベーター中に４〜５時間再配置した。４〜５時間の低酸素症の後、存在する培地を、注意深く吸引し、４００μＬの新たな再酸素負荷（予備平衡化）Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ／Ｂ２７を各ウェルに添加した。同じ試験化合物（同じ濃度）を対応するウェルに添加し戻した。プレートを細胞培養インキュベーター（５％  ＣＯ２／９５％  Ｏ２）に入れ、２０〜２４時間再酸素負荷した。２０〜２４時間再酸素負荷した後、生存ニューロンを、以下に記載のｃｅｌｌ  ｔｒａｃｋｅｒ  ｇｒｅｅｎ蛍光法を使用して定量した。
【０１７７】
細胞生存性について試験するために、存在する培養培地を、２４ウェルプレートの各ウェルから吸引し、ニューロンを１ｍｌのＨＢＳＳ（ｐＨ７．４、３０〜３７℃に予め温めてある）で１回洗浄した。各ウェルに、ＨＢＳＳに溶解した５００μＬの５μＭ  Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｃｋｅｒ  Ｇｒｅｅｎ  蛍光色素を添加した。プレートを、遮光して、室温にて１５分間静置し、次いで、１ｍｌのＨＢＳＳで洗浄した。次いで、５００μＬのＨＢＳＳを各ウェルに添加し、蛍光性の細胞を、蛍光顕微鏡を使用して計数した。コントロール細胞と比較して有意に増加した細胞生存性は、保護化合物の指標である。
【０１７８】
上記のように試験した場合、本発明の化合物は、約１〜１０００μＭの範囲の濃度で、試験した細胞の少なくとも２０％においてストレッサー誘導性細胞死に対する保護を提供した。
【０１７９】
（実施例２）
（筋細胞カルシウム収縮性アッセイ）
（Ａ．初代新生児の筋細胞の単離および培養）
（材料）
・１０×心臓解剖溶液（Ｈｅａｒｔ  Ｄｉｓｓｅｃｔｉｏｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ）（ＨＤＳ）は、細胞培養グレード水中に以下の成分（ｇ／ｌ）を含む：ＮａＣｌ，６８；ＨＥＰＥＳ，４７．６；ＮａＨ２ＰＯ４，２；グルコース，１０；ＫＣｌ，４；ＭｇＳＯ４，１，ｐＨは７．４に調製された。希釈された（１×ＨＤＳ）溶液の濾過滅菌の前に、１０ｍｇフェノールレッドを、各５００ｍｌの培地に添加した。
・トランスフェリンおよびウシインシュリンを、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから得、組織培養グレード水に４ｍｇ／ｍｌの濃度で再懸濁した。
・ＤＭＥＭ−Ｆ１２（グルタミンおよび塩酸ピリドキンを１：１で含むＤＭＥＭ−Ｆ１２、粉末）をＬｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから購入した。１リットル当量の粉末に、撹拌しながら、９５０ｍｌの組織培養グレード水中に２．４３ｇの重炭酸ナトリウムおよび１０ｍｌの１００×ペニシリン／ストレプトマイシンを添加した。ｐＨを１Ｍ  ＨＣｌで７．２に調節し、そして体積を１リットルに調節した。この溶液を、濾過滅菌した後、２．５ｍｌの４ｍｇ／ｍｌトランスフェリン、２５０μｌの４ｍｇ／ｍｌインシュリンおよび３０．７ｍｇのブロモデオキシウリジンを添加した。
・４％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含有するＤＭＥＭ−Ｆ１２をまた、組織培養プレートを予めコーティングするためにそして心筋細胞ペレットの初期懸濁のために調製した。
・コラゲナーゼ溶液（４９ｍｇのコラゲナーゼを、１２０ｍｌの１×ＨＤＳに再懸濁した）。
【０１８０】
（初代新生児心筋培養物の調製）
組織培養ウェアを、９６ウェルプレートの１ウェルあたり５０μｌおよび１２ウェルプレートの１ウェルあたり０．２５ｍｌを、３７℃にてインキュベートすることによってＤＭＥＭ−Ｆ１２−４％ＦＢＳで予めコーティングした。
【０１８１】
２日齢のラットの子を、それらの母親から離し、そして滅菌した容器に入れる。子を、７０％のアルコール中に素早く浸し、次いで断頭し、そして身体を空の滅菌組織培養皿に配置した。切開を、首から始めそして腹に向かって進行させ、胸骨を通って切断した。心臓を取り除き、そして１×ＨＤＳを含有する組織培養皿に配置した。心房を切り取り、そして残っている心室（これらは各３〜４片に切り出される）を１×ＨＤＳを含有する別個の組織培養皿に配置した。次いで、心室を、滅菌した２５０ｍｌガラスフラスコに移し、そして１×ＨＤＳを除去した。２０ｍｌの予め温めたコラゲナーゼ溶液を心室に添加し、続いて振盪しながら３７℃にてインキュベートした。３０分後、コラゲナーゼ溶液を除去し、２０ｍｌの新しい予め温めたコラゲナーゼで置換した。インキュベートをさらに３０分続ける。インキュベートの終わりに、あらゆる組織の塊を処理し、その後、破壊した組織片からコラゲナーゼ（単離された心筋細胞を含む）を除去した。単離された筋細胞を、２ｍｌのウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を含む５０ｍｌのＦａｌｃｏｎチューブに添加した。残っている組織片を、２０ｍｌの新しい予め温められたコラゲナーゼの添加によって、二次消化に供し、３０分間上記のようにインキュベートする。次いで、この二次消化物を１０分間、１０００ｒｐｍで遠心分離した（卓上用遠心分離）。得られた上清を捨て、そして細胞ペレットを、４ｍｌのＦＢＳで懸濁した。得られた細胞懸濁液を、３７℃のインキュベーターに配置した。この工程を、さらに数回繰り返し、さらなる物質を回収した。
【０１８２】
Ｐｅｒｃｏｌｌ勾配を、混合しながら、２２．５ｍｌのＰｅｒｃｏｌｌ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に２．５ｍｌの１０×ＨＤＳを添加することによって調製した（Ｐｅｒｃｏｌｌストック）。上部勾配溶液（１１ｍｌ  Ｐｅｒｃｏｌｌストックおよび１４ｍｌ  １×ＨＤＳ）および底部勾配溶液（１３ｍｌ  Ｐｅｒｃｏｌｌストックおよび７ｍｌ  １×ＨＤＳ）を調製した。４ｍｌの上部勾配溶液を、６×１５ｍｌの滅菌したＦａｌｃｏｎチューブに移した。３ｍｌの底部勾配溶液を、チューブの底部に血清学的ピペットを挿入し、そしてゆっくりと液体を添加することによって、各チューブに入れた。
【０１８３】
全ての消化物（５）を、１つの５０ｍｌのＦａｌｃｏｎチューブにプールし、そして卓上用遠心分離で、１０分間１０００ｒｐｍで遠心分離した。上清を捨て、そして細胞ペレットを、１２ｍｌの１×ＨＤＳに再懸濁した。２ｍｌの細胞懸濁液を、各勾配の上部に添加した。次いで、勾配チューブを、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ａｌｌｅｇｒａ  ６遠心分離器（ＧＨ３．８Ａローター）で破壊せずに、３０分間３０００ｒｐｍで遠心分離した。遠心分離に次いで、細胞を、２つの界面で２つの鋭いバンドに分離した。２つのバンドのうちの低いほうのバンドは、心筋細胞について冨化させた；また、チューブの底部に心筋細胞ペレットが存在した。上部のバンドは、繊維芽細胞および他の非心筋細胞について冨化された。勾配の上部を、心筋細胞相のちょうど上まで吸引した。次いで、心筋細胞層を、ペレットと共に慎重に除去し、そして２つの画分を、さらなる勾配チューブからの対応する画分と共に滅菌した５０ｍｌのＦａｌｃｏｎチューブにプールした；次いで、１×ＨＤＳを、約５０ｍｌの全容量まで添加した。このチューブを、７分間１０００ｒｐｍで遠心分離した。上清を捨て、そして２５ｍｌの１×ＨＤＳに再懸濁した。さらに２５ｍｌの１×ＨＤＳを添加し、そして遠心分離工程を繰り返した。この細胞ペレットを、４０〜５０ｍｌのＤＭＥＭＦ１２〜４％  ＦＢＳに慎重であるが徹底的に再懸濁した。
【０１８４】
細胞懸濁液の小アリコートを、血球計で計数した。ＤＭＥＭ／Ｆ１２−ＦＢＳコート培地を、組織培養皿から吸引した。心筋細胞を、２００μＬ中９６ウェルあたり７．５×１０４／ウェルのプレーティング密度および３ｍｌ中１２ウェルあたり１．５×１０５／ウェルのプレーティング密度で皿に添加した。培養物を、３７℃にて、５％のＣＯ２で一晩インキュベートした。元の培地を除去し、そして使用する前に、新しいＤＭＥＭ／Ｆ１２−５％ＦＢＳを、各培養物に添加し、さらに４８時間、３７℃にて、５％のＣＯ２下でインキュベートした。
【０１８５】
（Ｂ．収縮性アッセイ）
（材料）
・完全ＤＭＥＭ−Ｆ１２：ＤＭＥＭ／Ｆ１２（粉末、１：１、グルタミンおよびピリドキシンヒドロクロリドを含有する）を、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）から購入した。１ｌの緩衝液を調製するのに十分な粉末および２．４３ｇの重炭酸ナトリウムを、９５０ｍｌの組織培養グレードの水に混合した。ｐＨを、１ＭのＨＣｌで７．２に調整し、そして残りの水を加えて１ｌにした。滅菌濾過の後、１０ｍｌの１００×ペニシリン／ストレプトマイシン、２．５ｍｌの４ｍｇ／ｍｌ  トランスフェリン、２５０μｌの４ｍｇ／ｍｌ  インシュリンおよび３０．７ｍｇのブロモデオキシウリジンを添加し、そしてこの混合物を、使用前に、３７℃でインキュベートした。
【０１８６】
・ＤＭＥＭ中１ｍＭのグルコースを、Ｌ−グルタミンも、グルコースも、ピルビン酸ナトリウムも含まないＤＭＥＭ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから購入）から作製した。
【０１８７】
・２０μＭ  Ｆｌｕｏ−４：Ｆｌｕｏ−４の細胞永続性ＡＭエステルを、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ（Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）から、−２０℃で保存された乾燥粉末として得た。この蛍光色素は、感光性であり、そして光分解を防止するために、使用前にＤＭＳＯ中１ｍＭに入れ替えるべきである。
【０１８８】
・１０ｍＭ  ＣａＣｌ２溶液を、毎日、１×ＨＢＳＳ中に入れ替え、そして使用前に３７℃でインキュベートした。新生児心筋細胞を、上記のようにして単離した。この心筋細胞を、９６ウェルフォーマットで、７．５×１０４／ウェルの密度でプレーティングし（黒色の透明な底のプレート）、そしてアッセイで使用する前に、５％  ＦＢＳの存在下で、２日間増殖させた。
【０１８９】
生理学的な虚血を、１ｍＭグルコースを含有するＤＭＥＭ中で、嫌気性チャンバー（０％  Ｏ２、８５％  Ｎ２、５％  ＣＯ２および１０％  Ｈ２）内に心筋細胞を配置することによってシミュレートした。ポジティブコントロール細胞を、２５ｍＭのグルコースを含有するＤＭＥＭ−Ｆ１２で処理し、この処理は低酸素に対して保護する。
【０１９０】
試験化合物を、９６ディープウェルのマザープレート中にてＤＭＥＭ（１ｍＭ）グルコース中で作製し、そしてアッセイに使用するために適切に希釈した。この培地を細胞から除去し、そして試験化合物を含むか含まない、２００μｌのＤＭＥＭ−Ｆ１２または１ｍＭ  ＤＭＥＭのいずれかで置換した。その後、プレートを、嫌気性チャンバ中にある３７℃インキュベーターの内側に配置し、１６時間インキュベートした。次いで、このプレートを除去し、そしてＤＭＥＭ−Ｆ１２の添加によって再酸素負荷した。試験化合物を含むＤＭＥＭまたは含まないＤＭＥＭを、細胞から注意深く取り出し、そして５％ＦＢＳを含む予め温めたＤＭＥＭ−Ｆ１２と置き換えた。低酸素処理は細胞に損傷を与え得、そして／または細胞を殺し得るので、培地の穏やかな吸引によってウェルの下部から細胞を取り除くことが、この工程で必要である。次いで、この細胞を、３７℃にて通常のインキュベーターに配置し、そして２時間インキュベートし、細胞に再酸素負荷した。
【０１９１】
２０μＭ  Ｆｌｕｏ−４の作業溶液を、予め温めた１×ＨＢＳＳに添加した。まず細胞から培地を除去し、そして１００μｌの２０μＭ  Ｆｌｕｏ−４で置換することによってこの細胞にＦｌｕｏ−４をロードした。ロードされていないコントロール細胞を、並行して１×ＨＢＳＳ単独で処理した。次いで、全細胞を３７℃で３０分間インキュベートした。蛍光測定を行う前に、細胞を、指示薬を含まない培地（ＨＢＳＳ）中で洗浄し、細胞表面で非特異的に会合している全ての染料を除去した。次いで、細胞を室温でさらに２０分間インキュベートした。基礎のＦｌｕｏ−４蛍光を、マイクロプレート蛍光計（ＦｌｕｏｒｓｋａｎＴＭ，Ｔｈｅｒｍｏ  Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ  Ｏｙ，Ｈｅｌｓｉｎｋｉ，Ｆｉｎｌａｎｄ）で、４８５ｎｍ励起フィルターと５３８ｎｍ発光フィルターの対を使用して測定する。各ウェルを、ベースライン読み取りを得るために１６０ミリ秒間読み、次に、１０ｍＭ  ＣａＣｌ２の添加によって接触するように刺激した。３７℃にて３０分間インキュベートした後、刺激された蛍光読み取りを、９０分後に行った。
【０１９２】
上記のように試験した場合、以下のような本発明の化合物は、少なくとも２０％の保護を示し、そして虚血損傷に対して保護し、細胞にそれらの収縮性機能を維持させる能力を示す量のカルシウム過渡応答（ｃａｌｃｉｕｍ  ｔｒａｎｓｉｅｎｔｓ）の存在を示す：
（５−ヒドロキシ−３，６，７−トリメチル−ベンゾフラン−２−イル）−フェニル−メタノン；
酢酸６，７−ジメチル−２−（２−モルホリン−１−イル−アセチル）−ベンゾフラン−５−イル  エステル；
２−（１−ヒドロキシ−２−モルホリン−４−イル−エチル）−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−５−オール；
酢酸２−（２−ブロモ−アセチル）−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−５−イルエステル；
１−（５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−イル）−２−モルホリン−４−イル−エタノン；
１−（４−ブロモ−５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−イル）−エタノン；
１−（５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−イル）−エタノン；
４−（５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−イル）−ベンゾニトリル；
５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−カルボアルデヒド；
２−ヒドロキシメチル−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−５−オール；
５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−カルボン酸メチルエステル；
５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−カルボン酸；
５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−カルボン酸ビス−（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド；
５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−カルボン酸２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチルエステル；および
５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−カルボン酸ビス−（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド。
【０１９３】
（実施例３）
（大脳虚血のラット中大脳動脈閉塞（ＭＣＡＯ）のモデル）
（Ａ．動物の準備）
体重３００〜３５０ｇの雄Ｗｉｓｔａｒラット（Ｈａｒｌａｎ，ＩＮ）を、これらの実験に一般的に使用する。動物が、標準の研究室条件下で、水および市販されるげっ歯類用食物を自由に入手できるようにする。室温を２０〜２３℃で維持し、そして部屋の照明は１２／１２時間の明／暗サイクルである。動物を研究前の５〜７日間研究室環境に順応させ、そして手術の前の一晩絶食させる（水は自由に飲める）
（Ｂ．中大脳動脈閉塞（ＭＣＡＯ））
麻酔を０．８％酸素中の３．０％イソフルラン（Ａｅｒｒａｎｅ，Ｆｒｏｎｔ  Ｄｏｄｇｅ，ＩＡ）の吸入によって維持する。手術の前に、動物の首を剃毛し、そして滅菌した。体温を外部の加熱冷却デバイスを介して３７．５℃＋／−１℃でコントロールし、維持した。体温をより低くするために、循環空気を冷やすために氷を使用する冷却チャンバーに動物を配置する。研究の間中、体温をラットの肩甲骨の間に、ＭＣＡＯの時に皮下に移植された温度トランスポンダー（ＢＭＤＳ  Ｉｎｃ．，Ｓｅａｆｏｒｄ，ＤＬ）を使用して記録する。この温度トランスポンダーは、使用者がポケットスキャナ（ＢＭＤＳ  Ｉｎｃ．，Ｓｅａｆｏｒｄ，ＤＬ）を介して体温を読み取るのを可能にする。体温はまた、動物の直腸へ温度プローブを挿入することによって測定し得る。体温を、閉塞後の６時間、１時間毎に記録するが、体温を動物の正常温度に維持し得るために頻繁に測定する。
【０１９４】
動物を、以下のように改変された腔内フィラメント技術（ｉｎｔｒａｌｕｍｉｎａｌ  ｆｉｌａｍｅｎｔ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）を使用して２時間のＭＣＡＯに供した。首の腹側部上にて正中切開をなし、外頸動脈および内頸動脈を曝す。右外頸動脈および総頸動脈を、縫合糸（絹５／０，Ｃａｒｌｉｓｌｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｆａｒｍｅｒｓ  Ｂｒａｎｃｈ，ＴＸ）によって結紮し、そして右内動脈を、微小血管クリップ（Ｆｉｎｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｔｏｏｌ  Ｉｎｃ．，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）を使用して一時的に結紮する。小さな切開を総頸動脈にてなした。ナイロンフィラメント（その先端は加熱によって丸くされている）を、釣り糸（Ｓｔｒｅｎ  Ｆｉｓｈｉｎｇ  Ｌｉｎｅｓ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥ）から調製し、そして右総頸動脈から挿入する。フィラメントを、内頸動脈および外頸動脈の分岐点から１８〜２０ｍｍにて内頸動脈の中に進行させ、そして縫合糸を、フィラメントの周りで密接に結紮する。閉塞の２時間後、動物を再麻酔し、フィラメントの除去により実験の残りのための再灌流を可能にする。
【０１９５】
（Ｃ．薬物投与）
試験化合物を、任意の多数の経路（例えば、下記のようなもの）によって投与し得る。プロトコルに適切なように、閉塞の前、最中または後に、化合物を、投与し得る。
【０１９６】
（ａ）脳室内（ＩＣＶ）注入）
麻酔した動物を、定位装置（Ｈａｒｖａｒｄ  Ａｐｐａｒａｔｕｓ，Ｓ．Ｎａｔｉｃｋ，ＭＡ）上に配置する。全ての手順の間、０．８％酸素中の３．０％イソフルラン（Ａｅｒｒａｎｅ，Ｆｒｏｎｔ  Ｄｏｄｇｅ，ＩＡ）の吸入によって、麻酔を維持する。手術の前に、頭皮を剃毛しそして滅菌する。約３ｃｍの長さの正中矢状切開を、目のわずかな後側でなし、頭蓋骨を曝す。頭蓋骨を端部の丸いスパチュラでこすり、骨膜結合性組織を取り除く。バーの穴を、ブレグマの左側から１．５ｍｍ外側、１ｍｍ後側に配置し、左側脳室を標識する。脳注入カニューレ（ＡＬＺＥＴ  Ｃｏ．，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）を、この穴へと４ｍｍの深さで挿入する。所望の深さを、カニューレにスペーサーで取り付けることにより調節する。４ｃｍのシラスチックカテーテル（Ｈｅｌｉｘ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｉｎｃ．，Ｃａｒｐｉｎｔｅｒｉａ，ＣＡ）に取りつけたカニューレを、歯科用セメント（Ｋｅｔａｃ−ｃｅｍｅｎｔ，Ｎｏｒｒｉｓｔｏｗｎ，ＰＡ）を用いて適所に固定する。カテーテルを、持続的注入のための肩甲骨の間の皮下に配置した準備された浸透圧ポンプか、短い注入のためのシリンジのいずれかに取り付ける。
【０１９７】
（ｂ）頸静脈への静脈内（ＩＶ）浸透圧ポンプ移植）
全ての手順の間、０．８％酸素中の３．０％イソフルラン（Ａｅｒｒａｎｅ，Ｆｒｏｎｔ  Ｄｏｄｇｅ，ＩＡ）の吸入によって、麻酔を維持する。手術の前に、動物の首を剃毛し、そして滅菌する。正中切開を首の腹側部でなし、頸静脈を曝す。静脈を分離し、そして切開点に対して吻側を縫合糸（絹５／０，Ｃａｒｌｉｓｌｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｆａｒｍｅｒｓ  Ｂｒａｎｃｈ，ＴＸ）で結紮し、そして微小血管クリップ（Ｆｉｎｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｔｏｏｌ  Ｉｎｃ．，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，  ＣＡ）を、心臓の近くに配置する。小さな切開を、２つの結紮の間でなす。ＡＬＺＥＴ（ＡＬＺＥＴ  Ｃｏ．，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）ポンプに接続したＰＥ−６０管（Ｂｅｃｔｏｎ．Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．Ｓｐａｒｋｓ，ＭＤ）に取り付けた２ｃｍシラシチックカテーテル（Ｈｅｌｉｘ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｉｎｃ．）を導入し、心臓に向かって頸静脈中に２ｍｍ進行させる。微小血管クリップを取り除き、そしてカテーテルを縫合糸（絹５／０，Ｃａｒｌｉｓｌｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｆａｒｍｅｒｓ  Ｂｒａｎｃｈ，ＴＸ）で適所に固定する。ポンプを、肩甲骨の間の皮下に作成されたポケットに配置し、カテーテルが、首および頭の自由な移動を可能にするに十分な緩さで頸静脈に首を越えて到達するようにする。
【０１９８】
（ｃ）大腿静脈を介するＩＶ注入）
全ての手順の間、０．８％酸素中の３．０％イソフルラン（Ａｅｒｒａｎｅ，Ｆｒｏｎｔ  Ｄｏｄｇｅ，ＩＡ）の吸入によって、麻酔を維持する。手術の前に、右側大腿静脈の外部部位を剃毛し、そして滅菌する。３ｃｍの切開を右側の鼡径部領域になし、そして大腿静脈を分離する。小さい切開を大腿静脈上になし、微小血管クリップで一時的に結紮し、ポリエチレン（ＰＥ−５０）カテーテル（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．Ｓｐａｒｋｓ，ＭＤ）を導入し、そして前進させる。カテーテルを、縫合糸（絹５／０，Ｃａｒｌｉｓｌｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｆａｒｍｅｒｓ  Ｂｒａｎｃｈ，ＴＸ）で適所に固定する。カテーテルの他の端部を、ボーラス注射のためのヘパリン化処理生理食塩水で満たしたシリンジに結合する。ボーラス注射または浸透圧ポンプによる連続注射のいずれかのために、首の項部での摘出点までＰＥカテーテルを持ち上げ得るために、止血物質を使用して、ポケットを動物の背中の皮下に作製する。
【０１９９】
（ｄ）腹腔内（ＩＰ）注射）
覚醒しているラットを、標準な手保持位置（ｈａｎｄ  ｈｏｌｄ  ｐｏｓｉｔｉｏｎ）に維持し、２３  ３／４Ｇニードルを、正中からわずかに離れて、腹膜を過ぎて腹部の下部右側４分の１へ注射する。器官注射を避けるために、シリンジのプランジャーをわずかに引き戻す。流体が引き戻されない場合、シリンジの内容物を腹腔へと送達する。
【０２００】
（Ｄ．挙動評価）
ＭＣＡＯの１時間後、動物を尾で穏やかに保持し、そして前肢屈曲について観察した。次いで、動物を床に配置し、歩行パターンを観察する；Ｂｅｄｅｒｓｏｎ格付けシステム（表１）でスコア３である動物のみを、この研究に含む。
【０２０１】
（表１  神経学的評価のためのＢｅｄｅｒｓｏｎ格付けシステム）
【０２０２】
【表１】
2005517014.tif 000007
（Ｅ．虚血損傷の評価）
いくつかの実験においてＭＣＡＯの２４時間後、またはより長い時間後、動物をＣＯ２窒息（ドライアイス）によって屠殺する。標準の手段を使用して、脳を頭蓋骨からすばやく取りだし、冷却した生理食塩水溶液でリンスし、そしてラット脳組織スライサー（ＡＳＩ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ，ＭＩ）上に配置した。２ｍｍの厚さの７つの冠状切片を、剃刀の刃を使用して各脳から切り出す。これらの切片を、１．０％の塩化２，３，５−トリフェニルテトラゾリウム（ｔｒｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｕｍｅ）（ＴＴＣ）（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を含有する０．９％生理食塩水中に浸し、そして３７℃の水浴中で、３０分間インキュベートした。
【０２０３】
染色後、各２ｍｍ切片を、ＴＭＣ−７カメラ（ＪＨ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａ）（これは、デスクトップＰＣに直接接続され、そして各脳切片の画像を取り込まれ、保存される）を用いて撮影する。この画像を、コンピューターベースの画像処理システム（Ｍｅｔａｍｏｒｐｈ）を使用して、目的の領域の測定のために使用する。
【０２０４】
各面積の測定のために、目的の領域をフリーハンド選択ツールを使用して選択し、面積を測定コマンドを選択することによって自動的に計算する。目的の主な領域についての測定は、右半球、左半球、総梗塞、皮質下梗塞、総半影および皮質下半影である。目的の全ての領域を脳の７つ全ての切片について測定した後、ＥｘｃｅｌＴＭマクロ統計学的ファイナル（ｓｔａｔｉｓｔｉｃ  ｆｉｎａｌ）を使用して、切片の番号および目的の対応する領域によって分類する。このマクロはまた、皮質の半影、皮質の梗塞および総虚血損傷を各切片について計算する；各ラットの脳の対応する面積）を一緒にし、各面積についての単一の測定を生成する。同側の半球は、ＭＣＡＯの後、腫張するので、水腫体積を計算し、各脳切片の右半球と左半球との間の体積測定の差異として報告する。腫張する半球％を使用して、全体積を水腫について較正する。各ラットの脳について以下の計算を使用して、損傷体積を測定する。
【０２０５】
【表２】
2005517014.tif 000008
（Ｆ．統計的分析）
サンプルの大きさを、有意な結果の９０％の可能性を達成するように選択する。各ラットの脳の７つの切片中で目的の同じ領域を示す測定値を一緒にし、各動物における総梗塞、皮質下梗塞、皮質梗塞、総半影、皮質下半影、皮質半影、総虚血損傷および水腫についての単一の測定値を得る。グループデータを、平均＋／−ＳＥＭとして示す。ｐ＜０．０５のレベルの差異を、統計的に有意であるとみなす。グループの間で、目的の各領域の比較を、片側スチューデントｔ検定（２つのグループの間）または一方向ＡＮＯＶＡにより、次いでＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉの複数比較あるいは非母数Ｄｕｎｎｅｔｔ試験（コントロールグループと薬物処理グループの間）によって行う。
【０２０６】
本発明の化合物は、上記のように試験され得る。
【０２０７】
（実施例４）
（心筋感染のモデル：左冠状動脈の結紮（ラット））
体重２５０〜３２０ｇの雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙを、標準的な実験室条件下で、水および市販のげっ歯類用食餌を自由に取れるようにする。室温を、２０〜２３℃に維持し、そして室内照明を、１２／１２時間の明／暗サイクルに設定する。動物を、研究の５〜７日前に研究室環境に順応させ、そして手術の前に一晩絶食させる。
【０２０８】
（急性実験のための外科的手順：）
ラットを、ウレタン（１．２〜１．５ｇｍ／ｋｇ）で麻酔する。中心体温を、加熱ブランケットを使用することによって、３７℃に維持する。手術領域を、剃毛し、そして腹側正中切開を行って、気管および頸静脈領域を露出する。カテーテル（ＰＥ５０）を、化合物の投与および麻酔の維持のために、頸静脈中に配置する。気管を切開し、そして１４〜１６ゲージの改変静脈内カテーテルを挿入し、気管内チューブとして適所に結びつける。この動物を、右横臥位にし、そして最初に５〜１０ｍｌ／ｋｇの一回呼吸気量を有するＨａｒｖａｒｄ人工呼吸器を取り付ける。１００％Ｏ２を、この人工呼吸器によってこの動物に送達する。ＥＣＧ電極を配置して、標準リードＩＩ  ＥＣＧを記録する。この手術部位をアルコール綿棒で清潔にし、皮膚切開を、第４〜第５肋間隙にわたり肋骨部で行う。下にある筋肉を、外側胸静脈を避けるよう慎重に解剖して、肋間筋肉を露出する。胸腔を、第４〜第５肋間隙を通して出し、そして切開部を広げて、心臓を見えるようにする。心膜を開いて、心臓を露出する。テーパー針に通した６−０シルク縫合糸を、その起点付近で左冠状動脈の周りに通し、この起点は、左心耳の挿入部から約１ｍｍで、肺動脈円錐の左縁部と接触して位置する。チューブの一片を、この縫合糸の上に配置して、オクルダーを形成する。この冠状動脈を、抵抗力が感じられるまでこのチューブをスライドして、このチューブを血管クランプを用いて適所に保持することによって、３０分間かけて塞ぐ。ＥＣＧを、虚血を示すＳ−Ｔ変化についてモニタリングする。３０分後、このオクルダーを取り出し、縫合糸を適所に残す。ＥＣＧを、再灌流の最初の１０分間、モニタリングする。このラットを、残りのプロトコルのために、圧力制御人工呼吸器に移す。これらのラットを、１０〜１５ｃｍ  Ｈ２Ｏの最大吸入圧および６０〜１１０呼吸／分の呼吸数で、小動物人工呼吸器により人工呼吸する。心臓を、９０分間再灌流させる。
【０２０９】
（２４時間研究のための外科的手順：）
ラットを、ケタミン／キシラジンの腹腔内注射（９５および５ｍｇ／ｋｇ）により麻酔し、そして１４〜１６ゲージの改変静脈内カテーテルを挿管する。麻酔レベルを、トウピンチによって１５分ごとにチェックする。中心体温を、加熱ブランケットを使用することによって、３７℃に維持する。手術領域を、剃毛し、こすり洗いする。腹側正中切開を行って、頸静脈を露出する。カテーテル（ＰＥ５０）を、化合物の投与および麻酔の維持のために、頸静脈中に配置する。この動物を、右横臥位にし、そして最初に、５〜１０ｍｌ／ｋｇ  Ｈ２Ｏの一回呼吸気量を有する人工呼吸器または８〜１５ｃｍ  Ｈ２Ｏの最大吸入圧および６０〜１１０呼吸／分の呼吸数を有する圧力制御人工呼吸器を取り付ける。１００％Ｏ２を、この人工呼吸器によってこの動物に送達する。ＥＣＧ電極を配置して、標準リードＩＩ  ＥＣＧを記録する。この手術部位を、外科用綿棒およびアルコールで清潔にする。皮膚切開を、第４〜第５肋間隙にわたり肋骨部で行う。下にある筋肉を、外側胸静脈を避けるよう慎重に解剖して、肋間筋肉を露出する。胸腔を、第４〜第５肋間隙を通して出し、そして切開部を広げて、心臓を見えるようにする。心膜を開いて、心臓を露出する。テーパー針に通した６−０シルク縫合糸を、その起点付近で左冠状動脈の周りに通し、この起点は、左心耳の挿入部から約１ｍｍで、肺動脈円錐の左縁部と接触して位置する。チューブの一片を、この縫合糸の上に配置して、オクルダーを形成する。この冠状動脈を、抵抗力が感じられるまでこのチューブをスライドして、このチューブを血管クランプを用いて適所に保持することによって、３０分間かけて塞ぐ。ＥＣＧを、虚血を示すＳ−Ｔ変化についてモニタリングする。３０分後、このオクルダーを取り出し、縫合糸を適所に残す。ＥＣＧを、再灌流の最初の１０分間、モニタリングする。この三層の切開部を閉じる。ＩＶカテーテルを取り出すかまたは皮膚の下を通し、そして肩甲骨の間で外に出して、血液の排出またはさらなる薬物治療を可能にする。このラットが自力で呼吸できるようになるまで、人工呼吸する。これらのラットから管を取り外し、加熱パッドの上で回復させる。一旦目が覚めると、これらのラットをそのケージに戻す。術後の鎮痛のために、動物にブプレノルフィン（０．０１〜０．０５ｍｇ／ｋｇ  ＳＱ）を投与する。所定の再灌流時間（２４時間）の後、これらの動物を麻酔し、そして深い麻酔をして、心臓を取り出す。
【０２１０】
（処置プロトコル）
（食餌：）
冠状動脈の結紮の前または後に、慣習的な食餌を動物に与える。処置の長さは、研究ごとに異なる。３００ｇｍのラットについて、１日あたり１５ｇｍの食餌の平均消費に基づいて、用量を計算する。研究の間、ラットの体重をモニタリングする。消費されなかった食餌を計量して、消費率を見積もる。
【０２１１】
（ＩＶ処置：）
腹切開を行い、頸静脈領域を露出する。化合物の投与のために、カテーテル（ＰＥ５０）を、頸静脈中に配置する。動物に、ボーラス注射および／または連続注入により投与する。処置の時間および継続時間は、プロトコルごとに異なる。
【０２１２】
（組織処理）
再灌流の後、各動物に、２００単位のヘパリン（ＩＶ）を、全身麻酔で静脈内投与し、そして心臓を取り出し、冷生理食塩水中に入れる。取り出した後、冠状動脈を、すでに適所にある縫合糸で結紮する。この心臓を、灌流装置に置き、Ｅｖａｎｓ  Ｂｌｕｅ色素を注入して、危険性のある領域を描写する。次いで、この心臓を、頂部から基部まで、５個の２ｍｍ厚の横断スライスに切る。これらのスライスを、０．９％生理食塩水中１％の塩化トリフェニルテトラゾリウム（ＴＴＣ）中で、３７℃で２０分間インキュベートする。テトラゾニウムは、デヒドロゲナーゼ酵素の存在下でＮＡＤＨと反応し、生存組織を深赤色に染色し、これは梗塞した淡く染色した壊死組織から容易に区別される。染色手順のために、これらのスライスを、小さいペトリ皿のフタの中に、頂端部を下にして置く。この皿の底を、これらのスライスの上に置き、これらのスライスを平らに保つ。これらのスライスを、底側を上にして、縁から底の順で写真を撮る。梗塞組織の面積、危険性のある面積および全左心室の面積を、コンピューター画像分析システムを使用して決定する。各領域の全面積を一緒にして、心臓全体の合計を得る。梗塞の大きさを、全心室の割合および危険性のある面積の割合の両方として表す。
【０２１３】
（統計的分析）
群のデータを、平均＋／−ＳＥＭとして表す。処置群間の比較を、ＡＮＯＶＡを使用して実施し、ここでｐ＜０．０５が有意であるとみなす。その後の比較を、Ｄｕｎｎｅｔｔ検定またはＴｕｋｅｙ検定のいずれかを使用して行い得る。
【０２１４】
本発明の化合物は、この方法により試験された場合、活性を示す。
【０２１５】
（実施例５）
（感覚運動挙動の評価）
（Ａ．ラットにおける前肢および後肢の握力）
中央大脳動脈（ＭＣＡ）の一過性または永久的な片側性閉塞により誘導される脳梗塞を有する動物、および偽操作したラットを、握力（神経筋機能および感覚運動形成の標準的なモデルである）について、ラット用のコンピューター握力メーター（Ｄｕａｌ  Ｓｔａｎｄ  Ｍｏｄｅｌ，Ｃｏｌｕｍｂｕｓ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｃｏｌｕｍｂｕｓ，ＯＨ）を使用して試験する。
【０２１６】
試験前の３０分間、動物を試験室に移す。試験の前に、製造業者の指示書に従って、各ゲージを既知の１組の重量物で較正し、装置を動物の大きさに調節する。前肢の測定を、最大に伸ばした状態でこのメーターを用いて実施し、被検動物がグリップバーから離れた時の読み取りを固定する。後肢の測定を、最大に圧縮した様式でこのメーターを用いて実施し、被検動物の後肢がバーからメーターに向かって引かれた時の読み取りを固定する。一貫した技術を使用してこのグリップバーを越えて引きながら、各動物を、研究者が手で保持し、前肢および後肢がこのグリップバーを自由に握れるようにする。
【０２１７】
試験を、盲目的な無作為様式で、操作後２日目に実施し、一週間に２回、所定の間隔で繰り返す。代表的には、データを記録しそして次の試験のために両方のメーターの目盛りをゼロにするのに十分長い試験間隔で、３つの連続的な読み取りを各動物について得る。
【０２１８】
（Ｂ．ラットにおけるロータ−ロッド（Ｒｏｔａ−Ｒｏｄ）試験）
（装置）
ラット用のＲｏｔａ−Ｒｏｄ  Ｔｒｅａｄｍｉｌｌ（７７５０  Ａｃｃｅｌｅｒａｔｉｎｇ  Ｍｏｄｅｌ，ＵＧＯ  ＢＡＳＩＬＥ，ＣＯＭＥＲＩＯ−ＩＴＡＲＹ製）。
【０２１９】
（手順）
中央大脳動脈（ＭＣＡ）の一過性または永久的な片側性閉塞により誘導される脳梗塞を有する動物、および偽操作したラットを、ラット用のＲｏｔａ−Ｒｏｄ    Ｔｒｅａｄｍｉｌｌ（７７５０  Ａｃｃｅｌｅｒａｔｉｎｇ  Ｍｏｄｅｌ，ＵＧＯ  Ｂａｓｉｌｅ，Ｃｏｍｅｒｉｏ，Ｉｔａｌｙ）を使用して、この研究において試験する。これらの動物を、試験の３０分前に試験室に移す。試験の前に、全てのラットは、２〜３時間の間隔で、１〜２分のトレーニングランを２〜３回受ける。
【０２２０】
装置上のシリンダーを、ラットを適所に配置する前に、作動させる。モーターを、ＲＥＳＥＴモードで、７７００にて一定の選択速度に設定し、そしてラットをそのセクションに一匹ずつ置く。
【０２２１】
試験を、盲目的な無作為様式で、操作後２日目に実施し、一週間に２回、所定の間隔で繰り返す。代表的には、データを記録しそして次の試験のために両方のメーターの目盛りをゼロにするのに十分長い試験間隔で、３つの連続的な読み取りを各動物について得る。
【０２２２】
（実施例６）
（うっ血性心不全のモデル）
（実験準備）
２２５〜２７５ｇの雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを、ケタミン／キシラジン（９５ｍｇ／ｋｇおよび５ｍｇ／ｋｇ）で麻酔し、１４〜１６ゲージの改良静脈内カテーテルを挿管する。中心体温を、加熱ブランケットを使用することによって、３７℃に維持する。操作領域をつまみ、こすり洗いする。この動物を、右横臥位にし、そして１０〜１５ｃｍ  Ｈ２Ｏのピーク吸気圧および６０〜１１０呼吸／分の呼吸量を有する人工呼吸器にまず配置する。１００％Ｏ２を、この人工呼吸器によってこの動物に送達する。ＥＣＧ電極を配置して、標準リードＩＩ  ＥＣＧを記録する。切開を、第４〜第５肋間隙にわたり肋骨部で行う。下にある筋肉を、外側胸静脈を避けるよう慎重に解剖して、肋間筋肉を露出する。胸腔に、第４〜第５肋間隙を通して入り、そして切開部を広げて、心臓を見えるようにする。心膜を開いて、心臓を露出する。
【０２２３】
テーパー針に通した６−０シルク縫合糸を、その起点付近で左冠状動脈の周りに通す。この起点は、左心耳の挿入部から約１ｍｍにある。冠状動脈を、縫合糸をこの動脈の周りに結ぶことによって塞ぐ。ＥＣＧを、虚血を示すＳ−Ｔ変化についてモニタリングする。この動物が心室性細動を発症した場合、穏やかな心臓マッサージを使用して、この動物を正常な拍動に変える。偽操作したコントロールを同じ手順に供すが、縫合糸を縛らない。切開部を三層に閉じる。感染動物または瀕死動物を、この研究から排除する。
【０２２４】
操作の４週間後、動物を麻酔し、そしてカテーテルを右頸動脈に配置し、そして血流力学的測定のために、左心室まで進める。圧力トレースを記録し、そして心拍数、左心室の収縮期血圧および拡張期血圧、左心室の展開時血圧、ならびにｄＰ／ｄｔ最大値およびｄＰ／ｄｔ最小値について分析する。測定を行った後、２ｍｌの血液を取り、血清チューブおよび血漿チューブに入れる。心臓を取り出し、そしてＬａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ装置を以下のように配置する。
【０２２５】
（Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ手順）
緩衝液調製：Ｋｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ（ＫＨ）緩衝溶液（ＮａＣｌ  １１８ｍｍｏｌ／Ｌ、ＫＣｌ  ４．７ｍｍｏｌ／Ｌ、ＭｇＳＯ４  １．２ｍｍｏｌ／Ｌ、ＫＨＰＯ４  １．２ｍｍｏｌ／Ｌ、グルコース  １１ｍｍｏｌ／Ｌ、ＮａＨＣＯ３  ２５ｍｍｏｌ／Ｌ、およびＣａＣｌ２  ２．５ｍｍｏｌ／Ｌ（Ｓｉｇｍａ）を含む）を、Ｎａｎｏｐｕｒｅ発熱物質を含まない水を使用して、毎日新たに作製する。
【０２２６】
動物に、２００単位のヘパリンを与え、胸部を開き、心臓を素早く切り出し、氷冷ＫＨ緩衝溶液中におく。心臓の収縮活性が完全に止んだ後に、心臓を切り取り、そして上行大動脈を結合組織から取り除く。心臓を、素早く秤量し、次いで、大動脈にカニューレを挿入し、そして心臓を、非再循環Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ灌流装置に取り付ける（Ｒａｄｎｏｔｉ  Ｇｌａｓｓ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｉｎｃ．，Ｍｏｎｒｏｖｉａ，ＣＡ）。心臓を、９５％Ｏ２および５％ＣＯ２で酸素付加したＫＨ緩衝溶液を用いて、大動脈を介して、逆行様式で灌流して、３７℃でｐＨ７．４を維持する。収縮機能を評価するために、ラテックスバルーンを、僧帽弁口を通して左心室に挿入し、そして剛性のポリエチレンチュービングによって、圧力変換器に接続する。バルーンを、水を用いて、１〜１０ｍｍＨｇの左心室最終拡張圧力（ＬＶＥＤＰ）まで、膨張させる。流速を、１２ｍｌ／分で開始し、そして６５ｍｍＨｇと７５ｍｍＨｇとの間の灌流圧力を得るために、ベースラインの最初の１５分間の間、調節する。ベースラインについての標的パラメーターは、以下の通りである：灌流圧力６５〜７５ｍｍＨｇ；ＬＶＥＤＰ  １０ｍｍＨｇ。
【０２２７】
心臓を１５分間安定化させる。この時間の後、機能的測定を行い、この後、圧力容積曲線を、バルーンの容積を０．０５ｍｌの増分で調節し、そして心室圧力を記録することによって作製する。左心室収縮期圧力（ＬＶＳＰ）、左心室拡張期圧力（ＬＶＥＤＰ）、左心室展開時（ｄｅｖｅｌｏｐｏｅｄ）圧力（ＬＶＤＰ）、左心室圧力の上昇および降下の一次導関数（ｄｐ／ｄｔ最大、ｄｐ／ｄｔ最小）、灌流圧力および心拍数を、コンピューター化したデータ獲得システムを使用して、自動的に記録する。
【０２２８】
（他の測定）
心臓、肺および肝臓を、除去後に秤量した。肺および肝臓を計量し、湿潤  対  乾燥の比を決定するために、一晩乾燥させる。
【０２２９】
Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ手順の完了後、心臓を冷生理食塩水に入れて、拍動を止め、次いで心尖から心底へと５つの２ｍｍの厚みの横断スライスに切断する。スライス＃３を、０．９％生理食塩水中１％のトリフェニルテトラゾリウムクロリド（ＴＴＣ）において、３７℃で２０分間インキュベートする。テトラゾニウムは、デヒドロゲナーゼ酵素の存在下でＮＡＤＨと反応し、生存組織を深赤色に染色する。これは、梗塞した淡く染色していない壊死組織から容易に区別される。染色手順のために、このスライスを、小さいペトリ皿のフタの中に、頂端部を下にして置く。この皿の底を、このスライスの上に置き、これらのスライスを平らに保つ。次いで、このスライスを写真撮影し、そして梗塞した組織、左心室および右心室の面積を、コンピューター画像分析システムを使用して決定する。梗塞の大きさを、全心室の割合として表す。左心室および右心室の全面積を測定する。残りの部分は、右心室および左心室に分けて、ＴＢＡＲＳアッセイおよびグルタチオンアッセイのために凍結する。
【０２３０】
（処理プロトコール）
偽操作群およびコントロール群に対して処理を与えない。
【０２３１】
（ＣＨＦ研究についての測定）
インビボ測定は、心拍数（ＨＲ）、左心室の収縮期血圧（ＬＶＳＰ）、左心室最終拡張期血圧（ＬＶＥＤＰ）、ｄＰ／ｄｔの最小値および最大値、右心室収縮期圧力（ＲＶＳＰ）、右心室拡張期圧力（ＲＶＤＰ）、および右心室最終拡張期圧力（ＲＶＥＤＰ）、ならびに全体重から構成される。エキソビボ測定は、ＨＲ、ＬＶＳＰ、ＬＶＥＤＰ、ｄＰ／ｄｔの最小値および最大値、ならびに圧力容積曲線から構成される。心臓重量、梗塞サイズ、グルタチオンペルオキシダーゼ（ＧＰＸ）、カタラーゼ、チオバルビタール反応性物質（ＴＢＡＲＳ）、グルタチオン比（ＧＳＨ／ＧＳＳＧ）、肺および肝臓の湿潤重量  対  乾燥重量の比、血清イソプロスタンおよびインターロイキン−６（ＩＬ−６）が、エキソビボでも測定される。
【０２３２】
本発明の特定の化合物は、この方法によって試験され得る。
【０２３３】
（実施例７）
（皮膚保護アッセイ）
皮膚の細胞保護活性を、Ｍａｔｔｅｋ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ａｓｈｌａｎｄ，Ｍａｓｓ．から得た上皮モデル（ＥＰＩ−１００）を使用して、細胞培養物において評価し得る。新生児包皮の細胞培養物を、製造業者の指示に従って培養する。そしてそれを、その細胞により取り込まれる３−（４，５−ジメチルタゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）色素の量を測定することによって、細胞生存パーセントについてアッセイする。生細胞は、この色素を取り込み、この色素を不溶性ホルマジン結晶に転換する。この結晶は、アルコールで抽出するまで細胞のミトコンドリア中に存在する。抽出可能なホルマジン結晶へと転換されるＭＴＴの量は、その細胞培養物の生存度に正比例する。ＭＴＴを、分光光度的に測定する。
【０２３４】
細胞を、１平方センチメートル当たり１時間につき１．５最小紅斑（ｅｒｙｔｈｅｍａｌ）線量（ＭＥＤ）の割合で、総線量ＵＶ約３１．５ｍＪ／ｃｍ２に対して、（２９０〜４００ｎｍの領域の波長を得るために濾光した）ソーラー（ｓｏｌａａｒ）シミュレーターからのＵＶ光に、細胞保護化合物またはその混合物の存在下で曝露して、試験化合物がその細胞培養物をＵＶ光から生じるフリーラジカルの生成から保護する効果を測定する。
【０２３５】
この研究のためのコントロールは、試験化合物を付加していない細胞培養物（ポジティブコントロール）である。すべての細胞培養物をまた、ＵＶ光に曝露されてもなく、細胞保護剤も細胞保護混合物も含まない培養物と比較して、細胞生存度を決定する（ネガティブコントロール）。この後者の測定は、１００％生存度に等しいと仮定する。
【０２３６】
本発明の細胞保護化合物で処理した細胞培養物は、上記のように試験した場合、ポジティブコントロールの細胞培養物よりも多くの生存を示す。
【０２３７】
（実施例８）
（体毛成長阻害）
毛髪成長の減少は、体毛除去頻度が減少した場合、または被検体が処理部位上の体毛の少なさを知覚した場合、または量的には、剃毛により除去した体毛の重量（すなわち、体毛量）が減少した場合に、実証される。ゴールデンシリアン（Ｇｏｌｄｅｎ  Ｓｙｒｉａｎ）ハムスターは、楕円形の側腹部器官（各々外径約８ｍｍ）を各側に１つ提示し、それらは、ヒトの髭と類似する濃黒色で粗い体毛を生やすという点で、ヒトの髭成長についての受け入れらるモデルであると考えられる。それらの器官は、ハムスターにおいて、アンドロゲンに応答して体毛を生じる。
【０２３８】
体毛成長を減少することにおける特定のインヒビターの有効性を評価するために、一群のハムスターの各々の側腹部器官を、チオグリコレートベースの化学脱毛薬（Ｓｕｒｇｅｘ）を適用することによって、除毛する。各動物の一方の器官に、１０μＬのビヒクル単独を一日一回適用し、一方、各動物のもう一方の器官に、そのインヒビターを含む等量のビヒクルを適用する。１３回の適用（１日当たり１回の適用を週に５日間）の後、側腹部器官を剃毛し、各々から回収した体毛の量（体毛量）を計量する。体毛成長の減少パーセントを、ビヒクル処理側の体毛量から試験化合物処理側の体毛量（ｍｇ）値を減算することによって、計算する。その後、得られたΔ値を、ビヒクル処理側の体毛値により除算し、得られた数を１００倍する。
【０２３９】
本発明の化合物を、このアッセイにおいて試験し得る。
【０２４０】
（実施例９）
（インビトロ細胞炎症アッセイ）
（Ａ．ヒトＨｅｐ３Ｂ細胞−ＣＲＰアッセイ）  Ｈｅｐ３Ｂ細胞株を、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣカタログ番号ＨＢ−８０６４）から得る。Ｈｅｐ３Ｂ細胞株は、８年齢黒色雄の肝臓組織に由来した。その細胞は、形態が上皮状であり、ヌードマウスにおいて腫瘍を生成する。その細胞は、α−フェトプロテイン、Ｂ型肝炎表面抗原、アルブミン、α−２−マクログロブリン、α−１−アンチトリプシン、トランスフェリン、プラスミノーゲン、補体Ｃ３およびβ−リポタンパク質を生成する（Ｋｎｏｗｌｅｓ  ＢＢら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９８０、２０９：４９７〜４９９）。この細胞株は、肝細胞サイトカインおよび急性期タンパク質放出を研究するために、広範に使用されている（例えば、Ｄａｍｔｅｗ  Ｂら、１９９３、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５０：４００１〜４００７）。  
【０２４１】
ＨＥＰ３Ｂ細胞を、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ；Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１×ペニシリン／ストレプトマイシン（ＧＩＢＣＯ，カタログ番号１５１４０−１２２）および０．１ｍＭ非必須アミノ酸（ＧＩＢＣＯ、カタログ番号１１１４０−０５０）を補充した、最小必須培地（ＭＥＭ；ＧＩＢＣＯ）において増殖させる。細胞を、当該分野で公知の標準的方法に従って、融解し、そして温培地に移す。
【０２４２】
細胞を、大気インキュベーターにおいて、５％ＣＯ２とともに３７℃にてフラスコ中でインキュベートする。ＨＥＰ３Ｂ増殖培地を、その細胞が７０〜８０％コンフルエンスに達するまで（約３〜４日間）、２日ごとに交換する。アッセイのために、その細胞を９６ウェルプレートに移し、培養培地中に１ウェル当たり５０００細胞で播種し、そして３７℃インキュベーター（５％ＣＯ２を補充した空気）中で７日間増殖させる。培地をアッセイまで毎日交換する。
【０２４３】
試験化合物を、「刺激緩衝液」（０．１ｍＭ非必須アミノ酸、１×ペニシリン／ストレプトマイシン、１０％  ＦＢＳおよび１０ｎｇ／ｍｌ  ＩＬ−１β、２０ｎｇ／ｍｌ  ＩＬ−６および１μＭデキサメタゾンを含む、ＭＥＭ培地）中に希釈する。培地を細胞から戻し、２００μｌの試験希釈液と交換する。細胞を、３７℃にて３日間、インキュベーターに戻す。その後、ＣＲＰ  ＥＬＩＳＡを、下記のように、その細胞の上清に対して実施する。
【０２４４】
Ｃｏｓｔａｒ  ＥＩＡ／ＲＩＡプレートを、炭酸緩衝液（１００μｌ／ウェル）中に１：４０００希釈したウサギ抗ヒトＣＲＰ（ＤＡＫＯ）を用いて、３７℃で４５分間コートする。その後、プレートを、自動プレート洗浄機を使用して、ＣＲＰ洗浄緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、０．３ｍＭ  ＮａＣｌ、０．５ｍｌ  Ｔｗｅｅｎ−２０、ｐＨ８．０）で５回洗浄する。プレートは、乾燥し、覆って、使用するまで冷蔵し得る。上清（１００μｌ）を、試験プレートの各ウェルから取り出し、予めコートしたＥＬＩＳＡプレートの対応するウェルに添加する。
【０２４５】
（ＣＲＰ洗浄緩衝液中に）１：５００希釈した１００μｌのＨＲＰ結合体化ウサギ抗ヒトＣＲＰ（ＤＡＫＯ）を、各ウェルに添加し、その後、３７℃にて３０分間インキュベートする。プレートを、自動プレート洗浄機を使用して、ＣＲＰ洗浄緩衝液で５回洗浄する。２００μｌの３，３’、５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）液体基質系（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を、各ウェルに添加し、その後、室温にて１５分間、暗所でインキュベートする。最後に、５０μｌの１Ｍ  Ｈ２ＳＯ４を各ウェルに添加し、４５０ｎｍでの吸光度を、マイクロタイター分光光度計においてすぐに測定する。
【０２４６】
上記のように測定したＣＲＰを、細胞生存アッセイ（例えば、Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｃｋｅｒ  Ｇｒｅｅｎアッセイ）を使用して、１ウェル当たりの細胞数に対して正規化する。これを行うために、培地の残りは、細胞試験プレートから得、細胞を、２００μｌの予め加温した１×ハンクス塩基性塩溶液（ＨＢＳＳ；ＧＩＢＣＯ）で洗浄し、１００μｌの５μＭのＣｅｌｌ  Ｔｒａｃｋｅｒ  Ｇｒｅｅｎ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ、Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を、各ウェルに添加する。その後、プレートを３７℃で３０分間インキュベートする。その後、予め加温した１×ＨＢＳＳで２回洗浄する。プレートを、４８５励起フィルター／５３８発光フィルター対を備えるＦｌｕｏｒｏｓｋａｎ（登録商標）蛍光測定器を使用して、すぐに読み取る。
【０２４７】
本明細書中に記載されるもののようなＣＲＰアッセイにおいて、以下のような化合物が、約１０μＭ〜約４０μＭの間のＥＣ５０で、ＣＲＰレベルを低下させるのに有効である：
６，７−ジメチル−３−フェニル−ベンゾフラン−５−オール；
１−（４−ブロモ−５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−イル）−エタノン；
１−（５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−イル）−２−モルフォリン−４−イル−エタノン；
酢酸２−（６−ヒドロキシ−３−メチル−［１，３］オキサジナン−６−イル）−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−５−イルエステル；
１−（５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−イル）−エタノン；
３−（４−メトキシ−フェニル）−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−５−オール；
４，５−ジメチル−１，８−ジフェニル−ベンゾ［１，２−ｂ；４，３−ｂ’］ジフラン；および
１，８−ビス−（４−フルオロ−フェニル）−４，５−ジメチル−ベンゾ［１，２−ｂ；４，３−ｂ’］ジフラン。
【０２４８】
（Ｂ．細胞−ＥＬＡＭ）
内皮性白血球接着分子（ＥＬＡＭ）（Ｅ−セレクチンとしても公知）は、内皮細胞表面上に発現する。このアッセイにおいて、リポポリサッカリド（ＬＰＳ）およびＩＬ−１βを用いて、ＥＬＡＭの発現を刺激する；内皮細胞表面への白血球接着の減少が、細胞傷害の減少に関係することを示す研究に従って、この発現を減少する能力について、試験試薬を試験する（例えば、Ｔａｋａｄａ，Ｍ．ら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ６４：１５２０〜２５，１９９７；Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇ，Ｊ．Ｂ．ら、Ｊ．Ｈｅａｒｔ  Ｌｕｎｇ  Ｔｒａｎｓ．１３：３０６〜３１３，１９９４）。
【０２４９】
内皮細胞は、任意の多数の供給源から選択され得、そして、当該分野で公知の方法に従って培養され得る；これら細胞としては、冠動脈内皮細胞、ヒト脳微小血管内皮細胞（ＨＢＭＥＣ；Ｈｅｓｓ，Ｄ．Ｃ．ら、Ｎｅｕｒｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．２１３（１）：３７〜４０，１９９６）、または肺内皮細胞が挙げられる。細胞を、９６ウェルプレートにて簡便に培養する。試験試薬の存在下で、１０μｇ／ｍｌのＬＰＳおよび１００ｐｇ／ｍｌのＩＬ−１βを含む溶液を、各ウェルに６時間添加して細胞を刺激する（特定の濃度および時間は、細胞型に依存して調整され得る）。処理緩衝液を除去し、室温で２５分間、前もって温めたＦｉｘｉｎｇ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（登録商標）（１００μＬ／ウェル）に置換する。次いで、細胞を３回洗浄し、次いで、室温で２５分間、ブロッキング緩衝液（ＰＢＳ＋２％  ＦＢＳ）とともにインキュベートする。モノクローナルＥ−セレクチン抗体（１：７５０、Ｓｉｇｍａ  Ｃａｔａｌｏｇ＃Ｓ−９５５５）を含むブロッキング緩衝液を各ウェルに添加する。プレートをシールし、４℃で一晩保存する。プレートを１ウェルあたり１６０μＬのブロッキング緩衝液で４回洗浄する。次いで、ブロッキング緩衝液中１：５０００に希釈した二次抗体−ＨＲＰを添加（１００μＬ／ウェル）し、プレートを室温で２時間インキュベートする（遮光する）。次いで、プレートを、室温で、１００μＬのＡＢＴＳ基質溶液（Ｚｙｍｅｄ，Ｃａｔａｌｏｇ＃００−２０２４）を添加する前に、ブロッキング緩衝液で４回洗浄する。ウェルを３５分間発色させ、その後、１０秒間の振盪プログラムをともなってＦｌｕｏｒｏｓｋａｎ（登録商標）リーダーの４０２ｎｍで測定する。コントロールウェルと比較して、試験ウェルのＥＬＡＭ濃度の減少として、陽性の結果を記録する。
【０２５０】
本明細書中に記載されるもののようなＥＬＡＭアッセイにおいて、１０〜１０００μＭの範囲、特に２００〜６００μＭの範囲のＥＣ５０での本発明の特定の化合物は、ＥＬＡＭの発現を減少し得た。
【０２５１】
（Ｃ．インターロイキン−１β  ミクログリア細胞アッセイ）
（材料および装置）
Ａ．細胞調製および実験のための材料
−マウスミクログリア細胞株
−ＤＭＥＭ高グルコース培地（Ｇｉｂｃｏ  Ｃａｔａｌｏｇ＃１１９６５−０９２）
−ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ  Ｃａｔａｌｏｇ＃ＳＨ３００７０．０３）
−１００×ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ  Ｃａｔａｌｏｇ＃１５１４０−１２２）
−ＬＰＳ（Ｓｉｇｍａ  Ｃａｔａｌｏｇ＃Ｌ２５３７）
−インターフェロン−γ（Ｓｉｇｍａ  Ｃａｔａｌｏｇ＃１４７７７）
−Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｃｋｅｒ  Ｇｒｅｅｎ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ  Ｃａｔａｌｏｇ＃Ｃ２９２５）
−ＨＢＳＳ緩衝液（９５０ｍｌ  発熱物質を含まない水、２．４４ｇ／Ｌ  ＭｇＣｌ２．６Ｈ２Ｏ、３．７３ｇ／Ｌ  ＫＣｌ、５９．５８ｇ／Ｌ  Ｈｅｐｅｓ、５８．４４ｇ／Ｌ  ＮａＣｌ、１．３６ｇ／Ｌ  ＫＨ２ＰＯ４、１．９１ｇ／Ｌ  ＣａＣｌ２．２Ｈ２ＯおよびＨＣｌを用いてｐＨ４．５まで）
−ポリ−Ｄ−リジンでプレコートした滅菌９６−ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃａｔａｌｏｇ＃３６６５）
−９６−ウェルディープウェルマザープレート、ＤｙＮＡ  Ｂｌｏｃｋ  １０００（ＶＷＲ  Ｃａｔａｌｏｇ＃４０００２−００８）。
【０２５２】
Ｂ．Ｉｌ−１β  Ｅｌｉｓａについての材料
−マウスＩＬ−１β  Ｄｕｏ  Ｓｅｔ（Ｒ  ＆  Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｃａｔａｌｏｇ＃  ＤＹ４０１）
−基質溶液（Ｒ  ＆  Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｃａｔａｌｏｇ＃ＤＹ  ９９９）
−ウシ血清アルブミン画分Ｖ（ＢＳＡ  Ｖ）（Ｓｉｇｍａ  Ｃａｔａｌｏｇ＃Ａ４５０３）
−９６−ウェルＣｏｓｔａｒ  ＥＩＡ高結合プレート（ＶＷＲ  Ｃａｔａｌｏｇ＃２９４４２−３０２）
−プレートシール（ＶＷＲ  Ｃａｔａｌｏｇ＃２９４４２−３１０）
−ＰＢＳ（Ｉｒｖｉｎｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｃａｔａｌｏｇ＃９２４０）
−細胞培養等級水（Ｉｒｖｉｎｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｃａｔａｌｏｇ＃９３１２）
−Ｔｗｅｅｎ  ２０（Ｓｉｇｍａ  Ｃａｔａｌｏｇ＃Ｐ  １３７９）
−スクロース（Ｓｉｇｍａ  Ｃａｔａｌｏｇ＃Ｓ７９０３）
−アジ化ナトリウム（Ｓｉｇｍａ  Ｃａｔａｌｏｇ＃Ｓ  ８０３２）
−Ｈ２ＳＯ４  ５Ｎ  （ＶＷＲ  Ｃａｔａｌｏｇ＃ＪＴ  ５６９１−２）。
【０２５３】
（実験調製および手順）
（マウス  ＩＬ−１β  Ｅｌｉｓａ）
溶液：
洗浄緩衝液：ＰＢＳ  １Ｌ＋５００μｌ  Ｔｗｅｅｎ  ２０（最終０．０５％）ｐＨ  ７．２−７．４。
ブロッキング緩衝液：５００ｍｌ  ＰＢＳ＋５ｇ  ＢＳＡ  Ｖ（１％）＋２５ｇスクロース（５％）＋０．２５ｇアジ化ナトリウム（０．０５％）。
試薬希釈液：５００ｍｌ  ＰＢＳ＋５ｇ  ＢＳＡ  Ｖ（１％）ｐＨ７．２〜７．４、そしてフィルターは、０．２μｍを通して滅菌する。
停止溶液：１５ｍｌのｄｄＨ２Ｏに、１０ｍｌの５ＮＨ２ＳＯ４を添加することによって２Ｎ硫酸を作る。
【０２５４】
Ｄｕｏ  Ｓｅｔ調製：
１．ＩＬ−１β捕捉抗体を、１ｍｌのＰＢＳで再構成して、最終濃度の７２０μｇ／ｍｌを得、そして作業濃度は、４μｇ／ｍｌであった。１つの９６ウェルプレート（１００μｌ／ウェルで）をコーティングするために、５６μｌの７２０μｇ／ｍｌストックを１０ｍｌのＰＢＳに希釈した。
２．ＩＬ−１β標準を、０．５ｍｌの試薬希釈液（７０ｎｇ／ｍｌ）で再構成した。高標準の１ｎｇ／ｍｌ（各々１００μｌ＋セリン希釈に十分な２ウェル）のために、７．１μｌの７０ｎｇ／ｍｌの標準を、０．５ｍｌの試薬希釈液に希釈した。
３．ＩＬ−１β検出抗体を、１ｍｌの試薬希釈液で再構成して、最終濃度の１８μｇ／ｍｌを得、そして作業濃度は、１００ｎｇ／ｍｌである。１つの９６ウェルプレート（１００μｌ／ウェルで）について、５６μｌの１８μｇ／ｍｌストックを、１０ｍｌの試薬希釈液に希釈した。
【０２５５】
（ＩＬ−１β  ＥＬＩＳＡ手順）
プレート調製：
１．Ｃｏｓｔａｒ  ＥＩＡ  Ｈｉ結合プレートを、捕捉抗体で、４μｇ／ｍｌで、コーティングした。５６μｌの７２０μｇ／ｍｌストックを１つのプレートにとり、そして１０ｍｌのＰＢＳに添加した。各ウェルを１００μｌでコーティングし、そしてプレートをシールし、そして室温で一晩インキュベートした。
２．各ウェルを吸引し、そして洗浄緩衝液で３回洗浄した。各ウェルを頂部まで満たし、分配し、そして任意の残りの緩衝液を、プレートを反転させることによって除去し、そしてきれいなペーパータオルに穏やかに吸い取らせて除去した。
３．非特異的結合部位を、３００μｌのブロック緩衝液を各ウェルに添加することによって、ブロックし、そしてシール後、室温で少なくとも１時間インキュベートした。
４．洗浄後、プレートをここで、サンプルのために準備した。
【０２５６】
アッセイ手順：
５．１００μｌの標準またはサンプルのいずれかを、捕捉コーティングされかつプレブロックされたプレートの各ウェルに添加した。プレートをシールし、そして２時間室温でインキュベートし、続いて、工程２のように洗浄した。
６．１００μｌの検出抗体（１００ｎｇ／ｍｌ）を各ウェルに添加した。１つの９６ウェルプレートについて、５６μｌの１８μｇ／ｍｌストックを１０ｍｌの試薬希釈液に希釈した。
７．プレートをシールし、そして室温で２時間インキュベートし、続いて、工程２のように洗浄した。
８．１００μｌのストレプトアビジン−ＨＲＰの作業希釈液を添加し、そしてプレートをシールし、そして暗所室温で、２０分間インキュベートし、続いて、工程２のように洗浄した。
９．新たな基質溶液を、呈色試薬Ａ（Ｈ２Ｏ２）および呈色試薬Ｂ（テトラメチルベンジジン）を、１：１の比で混合することによって、調製した。１００μｌのこの基質溶液混合物を、各ウェルに添加し、そしてプレートを暗所室温で、２０分間インキュベートした。
１０．５０μｌの停止溶液を、各ウェルに添加し、穏やかにたたく（ｔａｐｐｉｎｇ）ことによって混合を確実にした。
１１．各プレートを、Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘで１回、４５０ｎｍで読んだ。波長補正が可能な場合、５４０ｎｍまたは５７０ｎｍに設定する。
【０２５７】
本発明の化合物を、このモデルにおいて炎症を減少させる能力について試験し得る。
【０２５８】
（実施例１０：インビボ細胞炎症性アッセイ）
これらのアッセイは、試験化合物の、オキサゾロンおよびアラキドン酸に続く炎症を予防または減少する能力を測定する。
【０２５９】
Ａ．アラキドン酸。アルビノ雄性ＣＤ−１マウス（７〜９週齢）をこの試験に使用した。アセトン中２０％（ｗ／ｖ）のアラキドン酸溶液を調製する。２０μｌのアラキドン酸溶液をマウスの背部左耳に塗布する。その直後に、試験化合物（２０μｌ、７０％エタノール／３０％プロピレングリコール中）を左耳に塗布する。未処理の右耳を、コントロールとする。処理の１時間後、マウスをＣＯ２吸入で屠殺する。左耳および右耳を取り出し、各々から７ｍｍのパンチ生検（ｐｕｎｃｈ  ｂｉｏｐｓｙ）を採取する。パンチ生検の重量を測り、差を計算する。
【０２６０】
Ｂ．オキサゾロン。ＣＤ−１マウスに、３％オキサゾロン（Ｓｉｇｍａ）（トウモロコシ油：アセトン中３０ｍｇ／ｍｌに調製）を剃毛した腹部に塗布して、誘導する。５日後、マウスをアセトン中２％のオキサゾロン（２０ｍｇ／ｍｌ）で、左耳にチャレンジする（右耳は未処理のコントロールであった）。チャレンジの１時間後、７０％エタノール／３０％プロピレングリコール中の試験化合物を左耳に塗布する。２４時間後に動物を屠殺し、７ｍｍ耳パンチを取り出す。耳パンチをバランススケールに配置し、未処理の耳と処理した耳との間の差を決定する。ビヒクル群に対する％阻害を各群の平均を比較することにより計算する。（この試験において、ヒドロコルチゾンがポジティブコントロールとして用いられる）。
【０２６１】
本発明の化合物は、このモデルにおいて炎症を減少する能力について試験され得る。
【０２６２】
（実施例１１：６，７−ジメチル−３−フェニル−ベンゾフラン−５−オール）
【０２６３】
【化７】
2005517014.tif 000009
（工程１：）
アセトン（３０ｍＬ）中、２，３−ジメチル−１，４−ジヒドロキノン（１．０８ｇ、７．８２６ｍｍｏｌ）、２−ブロモアセトフェノン（１．４５ｇ、７．２９ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（１．７８ｇ、１２．９０ｍｍｏｌ）の混合物を、室温で３時間攪拌した。次いで、この混合物を水に注ぎ、沈殿の形成を生じた。この沈殿を水およびヘキサンで洗浄し、乾燥して、モノ生成物およびビス生成物を得た。シリカゲルカラム（ヘキサン中３０％  ＥｔＯＡｃで溶離する）で精製し、２−（４−ヒドロキシ−２，３−ジメチル−フェノキシ）−１−フェニル−エタノン（０．６５ｇ）および２−［２，３−ジメチル−４−（２−オキソ−２−フェニル−エトキシ）−フェノキシ］−１−フェニル−エタノン（０．５ｇ）を得た。
【０２６４】
（工程２：）
キシレン（１０ｍｌ）中の２−（４−ヒドロキシ−２，３−ジメチル−フェノキシ）−１−フェニル−エタノン（１．２ｇ、４．７０ｍｍｏｌ）およびポリリン酸（約１００ｍｇ）の混合物を１５０℃で５時間攪拌した。この混合物を水に注ぎ、酢酸エチルで抽出し、洗浄し、そして乾燥して淡褐色固体として６，７−ジメチル−３−フェニル−ベンゾフラン−５−オール（５６０ｍｇ）を得た。
【０２６５】
【化８】
2005517014.tif 000010
ブロモアセトフェノンを適切な置換ブロモアセトフェノンと置き換える以外は、上記の手順に従って、同様に、以下の化合物を得た：
・３−（４−フルオロ−フェニル）−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−５−オール；
【０２６６】
【化９】
2005517014.tif 000011
・３−（４−メトキシ−フェニル）−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−５−オール
【０２６７】
【化１０】
2005517014.tif 000012
・３−（４−クロロ−フェニル）−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−５−オール；）
【０２６８】
【化１１】
2005517014.tif 000013
（実施例１２）
（４，５−ジメチル−１，８−ジフェニル−ベンゾ［１，２−ｂ；４，３−ｂ’］ジフラン）
【０２６９】
【化１２】
2005517014.tif 000014
キシレン（１０ｍＬ）中の、実施例１１に記載されるようにして合成した２−［２，３−ジメチル−４−（２−オキソ−２−フェニル−エトキシ）−フェノキシ］−１−フェニル−エタノン（４８０ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）、過剰のブロモアセトフェノン、およびポリリン酸（ＰＰＡ、１００ｍｇ）の混合物を、１５０℃で１０時間撹拌した。次いで、この混合物を、水に注ぎ入れ、ＥｔＯＡｃで抽出し、有機層を水およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、そして濃縮した。残渣を、ヘキサン中１０〜２０％のＥｔＯＡｃで溶出するシリカゲルカラムにより精製して、１９０ｍｇの４，５−ジメチル−１，８−ジフェニルベンゾ［１，２−ｂ；４，３−ｂ’］ジフラン（２５０ｍｇ）を得た。
【０２７０】
【化１３】
2005517014.tif 000015
同様に、実施例１２の手順に従うことによって、以下の化合物を得た：
・１，８−ビス−（４−フルオロ−フェニル）−４，５−ジメチル−ベンゾ［１，２−ｂ；４，３−ｂ’］ジフラン；
【０２７１】
【化１４】
2005517014.tif 000016
・１，８−ビス−（４−メトキシ−フェニル）−４，５−ジメチル−ベンゾ［１，２−ｂ；４，３−ｂ’］ジフラン：
【０２７２】
【化１５】
2005517014.tif 000017
（実施例１３）
（（５−ヒドロキシ−３，６，７−トリメチル−ベンゾフラン−２−イル）フェニル−メタノン）
【０２７３】
【化１６】
2005517014.tif 000018
（工程１）
ジクロロメタン（１００ｍＬ）中の２，３−ジメチル−１，４−ジヒドロキノン（１１．５８ｇ）およびトリエチルアミン（２５ｍＬ）の懸濁液に、無水酢酸（１６ｍＬ）をゆっくりと添加した。次いで、この混合物を、固体が溶解するまで、室温で２時間撹拌した。この混合物を水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、そして乾固するまで濃縮して、固体を得た。この固体を、ヘキサンおよびエーテルで洗浄して、出発物質の１，４−ジアセテート誘導体（１５．４０ｇ）を得た。
【０２７４】
（工程２）
三フッ化ホウ素酢酸錯体（１５ｍＬ）中の工程１のジアセテート（５．０８ｇ）の懸濁液を、１１０℃で１時間撹拌した。冷却後、この混合物を氷に注ぎ、そしてこの混合物をジクロロメタンで抽出した。有機層を水で洗浄し、そして乾燥した。エバポレーションの後、残渣を、ＥｔＯＡｃ−ヘキサンから再結晶して、４．３７ｇの１−（２−ヒドロキシ−５−アセトキシ−３，４−ジメチル−フェニル）−エタノンを得た。
【０２７５】
（工程３）
工程２のフェニルエタノン（５００ｍｇ）を、ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）に溶解し、そして炭酸カリウム（１当量）を添加し、続いて水（１ｍＬ）を添加した。この混合物を室温で１時間撹拌し、次いで水に注ぎ入れた。この溶液を、ＨＣｌで酸性化し、そして沈殿物を形成させた。この沈殿物を回収し、そして風乾して、約３５０ｍｇの１−（２，５−ジヒドロキシ−３，４−ジメチル−フェニル）−エタノンを得た。
【０２７６】
（工程４）
工程３の１−（２，５−ジヒドロキシ−３，４−ジメチル−フェニル）−エタノン（２７５ｍｇ）を、ジクロロメタン（２０ｍＬ）に溶解し、そして３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン（０．２ｍＬ）を添加し、続いてピリジニウムｐ−トルエンスルホネート（ＰＰＴＳ）（３０ｍｇ）を添加した。この混合物を、室温で４時間撹拌した。この混合物をＭｇＳＯ４で乾燥し、そしてヘキサン中３０％のＥｔＯＡｃで溶出するシリカゲルカラムで精製して、３９７ｍｇの１−［２−ヒドロキシ−３，４−ジメチル−５−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ）−フェニル］−エタノンを黄色の固体として得た。
【０２７７】
（工程５）
ＤＭＦ中の、工程４のテトラヒドロフラン（２５０ｍｇ）、２−ブロモ−１−フェニル−エタノン（２５０ｍｇ）、および炭酸カリウム（３００ｍｇ）の混合物を、室温で３時間撹拌した。この混合物を水に注ぎ入れ、酢酸エチルで抽出し、有機層を乾燥し、そしてエバポレートした。ヘキサン中３０％のＥｔＯＡｃで溶出するシリカゲルカラムで精製して、２６０ｍｇの無色の固体を得、次いでこれをＤＭＦに溶解し、続いて炭酸セシウム（２当量）を添加した。この混合物を室温で一晩撹拌し、次いで水に注ぎ入れ、そして酢酸エチルで抽出し、有機層を乾燥し、そしてエバポレートした。粗生成物を、希ＨＣｌを含むＭｅＯＨに溶解し、そして１時間撹拌した。次いでこれを水に注ぎ入れ、そして酢酸エチルで抽出し、有機層を洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートした。ヘキサン中３０％のＥｔＯＡｃで溶出するシリカゲルカラムで精製して、（５−ヒドロキシ−３，６，７−トリメチル−ベンゾフラン−２−イル）−フェニル−メタノン（１８７ｍｇ）を得た。
【０２７８】
【化１７】
2005517014.tif 000019
（実施例１４）
（１−（５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−イル）−エタノン）
【０２７９】
【化１８】
2005517014.tif 000020
ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中の、１−［６，７−ジメチル−５−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ）−ベンゾフラン−２−イル］−エタノン（１．１ｇ）（実施例１３の工程３、４および５の手順に従って、２，５−ジヒドロキシ−３，４−ジメチル−ベンズアルデヒドから調製した）、および濃ＨＣｌ（１０滴）の混合物を、室温で２時間撹拌した。この混合物に水を注ぎ入れ、そして冷蔵庫中で一晩沈殿させた。この沈殿物を回収し、ヘキサンで洗浄し、そして乾燥して、１−（５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−イル）−エタノンを薄茶色の個体（４９０ｍｇ）として得た。
【０２８０】
【化１９】
2005517014.tif 000021
（実施例１５）
（１−（３−ブロモ−５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−イル）−エタノン）
【０２８１】
【化２０】
2005517014.tif 000022
クロロホルム（２０ｍＬ）中の１−［６，７−ジメチル−５−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ）−ベンゾフラン−２−イル］−エタノン（２００ｍｇ）の溶液に、臭素（１２０ｍｇ）を添加した。１時間後、この溶液を水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、そして濃縮した。残渣を、ＤＣＭ中１０％のヘキサンで溶出するシリカゲルカラムにより精製して、１−（３−ブロモ−５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−イル）−エタノンを黄色の固体として得た。
【０２８２】
【化２１】
2005517014.tif 000023
（実施例１６）
（２−ブロモ−１−（５−アセトキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−イル）−エタノン）
【０２８３】
【化２２】
2005517014.tif 000024
１−（５−アセトキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−イル）−エタノン（８３ｍｇ）（アセトアルデヒドおよびピリジンを用いて、実施例１４の１−（５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−イル）−エタノンから調製した）を、クロロホルム（１０ｍＬ）に溶解した。臭素（５０ｍｇ）を添加し、そしてこの溶液を７０℃で１０分間撹拌した。臭素の色が消えると、この混合物を乾固するまでエバポレートした。残渣を、ヘキサン中３０％のＥｔＯＡｃで溶出するシリカゲルカラムにより精製して、８５ｍｇの２−ブロモ−１−（５−アセトキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−イル）−エタノンを白色固体として得た。
【０２８４】
【化２３】
2005517014.tif 000025
（実施例１７）
（酢酸６，７−ジメチル−２−（２−モルホリン−４−イル−アセチル）−ベンゾフラン−５−イルエステル）
【０２８５】
【化２４】
2005517014.tif 000026
アセトン（１０ｍＬ）中の、実施例１６の２−ブロモ−１−（５−アセトキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−イル）−エタノン（４７ｍｇ）、モルホリン（１５ｍｇ）、および炭酸カリウム２５ｍｇ）の溶液を、室温で３０分間撹拌した。次いで、これを乾固するまでエバポレートし、そして残渣を、ＤＣＭ中５％のＭｅＯＨで溶出するシリカゲルカラムにより精製して、４３ｍｇの酢酸６，７−ジメチル−２−（２−モルホリン−４−イル−アセチル）−ベンゾフラン−５−イルエステルを油状物として得た。塩酸塩に変換して、黄色の固体を得た。
【０２８６】
【化２５】
2005517014.tif 000027
（実施例１８）
（１−（５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−イル）−２−モルホリン−４−イル−エタノン）
【０２８７】
【化２６】
2005517014.tif 000028
ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中の、酢酸６，７−ジメチル−２−（２−モルホリン−４−イル−アセチル）−ベンゾフラン−５−イルエステル（２３ｍｇ）（実施例１７のようにして調製した）の溶液を、炭酸水素ナトリウム）１０ｍｇ）を添加しながら撹拌した。次いで、この混合物を室温で一晩撹拌し、次いで乾固するまでエバポレートした。残渣を、ジクロロメタン中５％のＭｅＯＨで溶出するシリカゲルカラムにより精製して、１１ｍｇの１−（５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−イル）−２−モルホリン−４−イル−エタノンを油状物として得た。ＨＣｌ塩に変換して、黄色の固体を得た。
【０２８８】
【化２７】
2005517014.tif 000029
（実施例１９）
（２−（１−ヒドロキシ−２−モルホリン−４−イル−エチル）−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−５−オール）
【０２８９】
【化２８】
2005517014.tif 000030
酢酸６，７−ジメチル−２−（２−モルホリン−４−イル−アセチル）−ベンゾフラン−５−イルエステル（３５ｍｇ）（実施例１７において調製した）の、ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中の溶液を、ＮａＢＨ４（４０ｍｇ）を添加しながら撹拌し、そしてこの混合物を、室温でさらに４時間攪拌した。この混合物を水に注ぎ、そして酢酸エチルで抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、そしてエバポレートした。その残渣を、ＤＣＭ中５％のＭｅＯＨで溶出するシリカゲルカラムによって精製し、２１ｍｇの２−（１−ヒドロキシ−２−モルホリン−４−イル−エチル）−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−５−オールを油状物として得た。ＨＣｌ塩への変換により、黄色固体を得た。
【０２９０】
【化２９】
2005517014.tif 000031
（実施例２０）
（２−（５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−イル）−４−メチル−モルホリン−２−オール）
【０２９１】
【化３０】
2005517014.tif 000032
２−ブロモ−１−（５−アセトキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−イル）−エタノン（３０ｍｇ）、メチルアミノエタノール（７ｍｇ）、および炭酸カリウム（２０ｍｇ）の、アセトン（１０ｍＬ）中の混合物を、室温で１時間攪拌した。この混合物を水に注ぎ、そして酢酸エチルで抽出した。有機層を乾燥し、そしてエバポレートし、次いで、ＤＣＭ中５％のＭｅＯＨで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、２０ｍｇの２−（５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−イル）−４−メチル−モルホリン−２−オールを油状物として得、そしてＨＣｌ塩に変換した。ＮＭＲは、ヘミケタール形態とケトン形態との平衡を示した。
【０２９２】
【化３１】
2005517014.tif 000033
（実施例２１）
（５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−カルボン酸メチルエステル）
【０２９３】
【化３２】
2005517014.tif 000034
（工程１：）
２，５−ジヒドロキシ−３，４−ジメチル−ベンズアルデヒド（２．０ｇ）を、ジクロロメタン（５０ｍＬ）に溶解し、そして３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン（１．５ｇ）を添加し、次いで、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（２００ｇ）を添加した。この溶液を室温で１時間撹拌し、そして重炭酸ナトリウム溶液（１ｍＬ）を添加することによって、クエンチした。次いで、ジクロロメタン溶液をＭｇＳＯ４で乾燥し、そして濃縮した。その残渣を、ヘキサンおよび酢酸エチル（８：２）で溶出するシリカゲルカラムによって精製して、１．５ｇの２−ヒドロキシ−３，４―ジメチル−５−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ）ベンズアルデヒド生成物を得た。
【０２９４】
（工程２）
工程１からの２−ヒドロキシ−３，４―ジメチル−５−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ）ベンズアルデヒド（１５０ｍｇ）、ブロモ酢酸メチル（１８０ｍｇ）および炭酸カリウム（２００ｍｇ）の、ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の混合物を、室温で２時間撹拌した。次いで、この溶液を水に注ぎ、そして酢酸エチルで抽出した。この酢酸エチルを水およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、そして濃縮した。その残渣を、ヘキサンおよび酢酸エチル（９：１）で溶出するシリカゲルカラムによって精製して、１００ｍｇの［６−ホルミル−２，３−ジメチル−４−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ）−フェノキシ］−酢酸メチルエステルを得、これを次いで、ＤＭＦ（１５ｍＬ）に溶解した。この溶液に、炭酸セシウム（２００ｍｇ）を添加し、そしてこの混合物を、室温で一晩撹拌した。次いで、この溶液を水に注ぎ、そして酢酸エチルで抽出した。有機層を水およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、そして濃縮して、６，７−ジメチル−５−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ）−ベンゾフラン−２−カルボン酸メチルエステルを得た。このテトラヒドロピラニルエーテルをメタノールに溶解し、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（２０ｍｇ）を添加し、そしてこの溶液を室温で、さらに３０分間撹拌した。少量のＮａＨＣＯ３の添加後、メタノールをエバポレートした。その残渣を、ヘキサンおよび酢酸エチル（７：３）で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、３０ｍｇの５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−カルボン酸メチルエステルを得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、３００ＭＨｚ）δ：７．３９（ｓ、１Ｈ）、６．８７（ｓ、１Ｈ）、４．７５（ｓ、１Ｈ）、３．９５（ｓ、３Ｈ）、２．５０、２．２６（２ｓ、６Ｈ）ｐｐｍ。
【０２９５】
（実施例２２）
（５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−カルボン酸２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）エトキシ］−エチルエステル）
【０２９６】
【化３３】
2005517014.tif 000035
酸（５０ｍｇ）、２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）エトキシ］−エタノール（１００μＬ）、ＤＣＣ（１２０ｍｇ）、ＤＭＡＰ（５０ｍｇ）の、ＤＣＭ（２０ｍＬ）中の混合物を、室温で一晩撹拌した。この混合物を水に注ぎ、そして酢酸エチルで抽出した。有機層を水およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、そして濃縮した。その残渣を、ヘキサン中４０％のＥｔＯＡｃで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−カルボン酸２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）エトキシ］−エチルエステルのテトラヒドロピラニルエーテルを得た（４０ｍｇ）。この中間体をＭｅＯＨに溶解し、希ＨＣｌを添加し、そしてこの混合物を３０分間撹拌した。この混合物を水に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。その有機層を水およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、そして濃縮した。ＤＣＭ中２％のＭｅＯＨで溶出するシリカゲルカラムによって精製して、３０ｍｇの５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−カルボン酸２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）エトキシ］−エチルエステルを得た。
【０２９７】
【化３４】
2005517014.tif 000036
同様に、上記手順に従って、２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）エトキシ］−エタノールを適切なアルコールに置き換えて、以下の化合物を調製した：
ゲラニオールは、５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−カルボン酸３，７−ジメチル−オクタ−２，６−ジエニルエステルを与えた；
【０２９８】
【化３５】
2005517014.tif 000037
２−アミノエタノールは、５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）アミドを与えた；
【０２９９】
【化３６】
2005517014.tif 000038
２−（２−ヒドロキシ−エチルアミノ）−エタノールは、５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−カルボン酸ビス−（２−ヒドロキシ−エチル）−アミドを与えた；
【０３００】
【化３７】
2005517014.tif 000039
モルホリンは、（５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−イル）−モルホリン−４−イル−メタノンを与えた；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６−Ｄ２Ｏ、３００ＭＨｚ）δ：７．２２（ｓ、１Ｈ）、５．８８（１Ｈ）、３．６５（ｍ、８Ｈ）、２．３４（ｓ、３Ｈ）、２．１５（ｓ、３Ｈ）ｐｐｍ。ＭＳ  ２７６（Ｍ＋Ｈ＋）。
【０３０１】
（実施例２３）
（２−ヒドロキシメチル−６，７-ジメチル−ベンゾフラン−５−オール）
【０３０２】
【化３８】
2005517014.tif 000040
実施例２に記載されるように調製された５−ヒドロキシ−６，７-ジメチル−ベンゾフラン−２−カルボン酸メチルエステル（２３１ｍｇ）を、ＴＨＦに溶解し、水素化リチウムアルミニウム（９３ｍｇ）を添加した。この混合物を、室温で４時間攪拌した。次いで、溶液を、水に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチルを水およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、そして濃縮した。ヘキサン中の５０％  ＥｔＯＡｃで溶出するシリカゲルカラムによって精製し、８９ｍｇの２−ヒドロキシメチル−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−５−オールを得た。
【０３０３】
【化３９】
2005517014.tif 000041
（実施例２４）
（６，７-ジメチル−２−（４−ニトロ−フェニル）−ベンゾフラン−５−オール）
【０３０４】
【化４０】
2005517014.tif 000042
ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の、実施例２１のように調製された２−ヒドロキシ−３，４−ジメチル−５−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ）−ベンゾアルデヒド（２００ｍｇ）、ｐ−ニトロベンジルブロミド（２００ｍｇ）、および炭酸カリウム（２２０ｍｇ）の混合物を、室温で一晩攪拌した。次いで、この溶液を、水に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチルを水およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、そして濃縮した。残渣を、ヘキサン：酢酸エチル（８：２）で溶出するシリカゲルカラムによって精製し、６，７-ジメチル−２−（４−ニトロ−フェニル）−ベンゾフラン−５−オールのテトラヒドロピラニルエーテル２４２ｍｇを得た。ＤＭＦ（１０ｍＬ）中のエーテル（２４０ｍｇ）とＮａＯＭｅ（１７ｍｇ）との混合物を、７０℃で２時間攪拌した。次いで、溶液を、水に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。有機層を、水およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、そして濃縮した。残渣を、ＭｅＯＨ中に溶解し、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（２０ｍｇ）を添加し、溶液を、室温で１．５時間攪拌した。少量のＮａＨＣＯ３の添加後、メタノールをエバポレートし、残渣を、ヘキサンおよび酢酸エチル（７：３）で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、６，７-ジメチル−２−（４−ニトロ−フェニル）−ベンゾフラン−５−オール１７０ｍｇを得た。
【０３０５】
【化４１】
2005517014.tif 000043
上記手順に同様に従って、以下の化合物を、調製した：４−（５−ヒドロキシ−６，７-ジメチル−ベンゾフラン−２−イル）−ベンゾニトリル；
【０３０６】
【化４２】
2005517014.tif 000044
（実施例２５）
（５−ヒドロキシ−６，７-ジメチル−ベンゾフラン−２−カルボアルデヒド）
【０３０７】
【化４３】
2005517014.tif 000045
ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の２−ヒドロキシ−３，４−ジメチル−５−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ）−ベンゾアルデヒド（３００ｍｇ）、ブロモアセトアルデヒドジメチルアセタール（３００ｍｇ）および炭酸カリウム（３３０ｍｇ）の混合物を、１４０℃で２時間攪拌した。次いで、この溶液を、水に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。有機層を、水およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、そして濃縮した。残渣を、ヘキサン：酢酸エチル（８：２）で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−カルボアルデヒドのテトラヒドロピラニルエーテル１０２ｍｇを得た。酢酸（１５ｍＬ）中のこの中間体（１００ｍｇ）の溶液を、２時間還流した。酢酸をエバポレートし、残渣を、ヘキサン中の３０％酢酸エチルで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、７０ｍｇの５−ヒドロキシ−６，７−ジメチル−ベンゾフラン−２−カルボアルデヒドを得た。ジクロロメタンおよび酢酸エチル（９：１）で溶出するシリカゲルによるさらなる精製によって、純粋生成物（３６ｍｇ）を得た。
【０３０８】
【化４４】
2005517014.tif 000046
本発明は、その特定の実施形態を参照して記載されてきたが、本発明の真の精神および範囲から逸脱することなく、種々の変更がなされ、等価物が置換され得ることが、当業者に理解されるべきである。さらに、多くの改変が、特定の状況、材料、物質の組成、プロセスまたは処理工程を、本発明の目的、精神および範囲に対して適合され得る。このような改変の全ては、添付の特許請求の範囲内であることが意図される。上記の特許および刊行物の全ては、本明細書中で参考として援用される。
【国際調査報告】
2005517014.tif 000048
2005517014.tif 000049