(57)【要約】  本発明は、水性媒体に難溶性の活性物質と、多孔質支持体とを相互作用させた化合物を調製する方法に関する。本発明は、（ａ）超臨界流体により生成された活性物質と、所定量の多孔質支持体とを混合し、（ｂ）超臨界流体と、工程（ａ）にて得られた混合物とを工程（ａ）で得られた混合物の水性媒体中での溶解を高めるのに必要な時間、静的に接触させることにより分子拡散の工程を行い、（ｃ）工程（ｂ）で得られた相互作用化合物を超臨界流体流の流束にて洗浄し、（ｄ）このようにして形成された相互作用化合物の粒子を回収する工程を含んでなることを特徴とする。本発明はまた、上記方法により得られる化合物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
水性媒体への溶解度が低い活性物質と多孔質支持体とを相互作用させた化合物を製造する方法であって、以下の工程：
（ａ）超臨界流体により生成された活性物質と、所定量の多孔質支持体とを混合し、
（ｂ）超臨界流体と、工程（ａ）にて得られた混合物とを、工程（ａ）にて得られた混合物の水性媒体中における溶解を高めるのに必要な時間、静的に接触させることにより、分子拡散し、
（ｃ）工程（ｂ）にて得られた相互作用させた化合物を超臨界流体の流束にて洗浄し、
（ｄ）前記工程にて形成された相互作用させた化合物の粒子を回収すること
を含んでなることを特徴とする、方法。
【請求項２】
前記多孔質支持体が超臨界流体により生成され、前記工程（ａ）が以下の工程：
（ａ１）活性物質と、多孔質支持体とを、有機溶媒に溶解し、ここで有機溶媒は超臨界流体に可溶であり、
（ａ２）工程（ａ１）にて得られた溶液と、超臨界流体とを連続的に接触させ、前記活性物質および前記支持体の制御された脱溶媒和を実行し、かつ、コアセルべーションを確保し、
（ａ３）前記工程にて形成された複合体を、前記超臨界流体を用いて残留溶媒を抽出することにより洗浄した後に、液体状の前記溶媒と気体状の前記超臨界流体とを分離すること
を含んでなることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記活性物質が、前記工程（ａ）において用いられる前に、以下の工程：
（ｉ）前記活性物質を有機溶媒に溶解し、ここで該有機溶媒は超臨界流体に可溶であり、
（ii）工程（ｉ）にて得られた溶液と、超臨界流体とを連続的に接触させ、前記活性物質の脱溶媒和を実行し、かつ、そのコアセルべーションを確保し、
（iii）前記工程にて形成された前記活性物質の粒子を、前記超臨界流体を用いて残留溶媒を抽出することにより洗浄した後、液体状の前記溶媒と気体状の前記超臨界流体とを分離すること
を含んでなる方法により生成されたものであり、かつ、工程（ａ）において用いられる前記多孔質支持体が固体状であること
を特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記活性物質が、前記工程（ａ）において用いられる前に、以下の工程：
（ｉ）前記活性物質を、所望により補助溶媒と混合した超臨界流体にて抽出し、
（ii）該超臨界混合物を気化させ、前記活性物質の脱溶媒和を実行し、かつ、コアセルべーションを確保し、
（iii）前記工程にて形成された前記活性物質の粒子を、超臨界流体にて洗浄した後、所望により液体状の前記補助溶媒と気体状の前記超臨界流体とを分離すること
を含んでなる方法により生成されたものであり、かつ、工程（ａ）にて用いられる前記多孔質支持体が固体状であること
を特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記工程（ａ）が、以下の工程：
（ａ１）前記活性物質を、有機溶媒に溶解し、ここで該有機溶媒は超臨界流体に可溶であり、
（ａ２）前記工程にて得られた溶液と、超臨界流体とを連続的に接触させ、予め反応槽内に配置した多孔質支持体上にて、前記活性物質の脱溶媒和を実行し、かつ、コアセルべーションを確保し、
（ａ３）前記工程にて形成された複合体を、前記超臨界流体を用いて残留溶媒を抽出することにより洗浄した後、液体状の前記溶媒と気体状の前記超臨界流体とを分離すること
を含んでなることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記工程（ａ）が、以下の工程：
（ａ１）前記活性物質を、所望により補助溶媒と混合した超臨界流体にて抽出し、
（ａ２）該超臨界混合物を気化させ、予め反応槽内に配置した多孔質支持体上にて、前記活性物質の脱溶媒和を実行し、かつ、コアセルべーションを確保し、
（ａ３）前記工程にて形成された複合体を、前記超臨界流体にて洗浄した後、所望により液体状の補助溶媒と気体状の超臨界流体とを分離すること
を含んでなることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記有機溶媒または前記補助溶媒が、アルコール類、ケトン類、酢酸、酢酸エチル、ジクロロメタン、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、およびそれらの混合物からなる群から選択されることを特徴とする、請求項２〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記超臨界流体が、ＣＯ２であることを特徴とする、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記活性物質が、アニリド誘導体、特に（Ｓ）−２’，３’，５’−トリメチル−４’−ヒドロキシ−α−ドデシルチオフェニルアセトアニリド、エピポドフィロトキシン誘導体、特に４’−ジメチル−４’−デオキシ−４’−ホスフェート−４−Ｏ−（２，３−ビス−（２，３，４，５，６−ペンタフルオロフェノキシアセチル）−４，６−エチリデン−β−Ｄ−グルコシル）エピポドフィロトキシン、ピロキシカム、吉草酸、オクタン酸、ラウリン酸、およびステアリン酸からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記多孔質支持体が、シクロデキストリン類およびそれらの混合物からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記工程（ｂ）の分子拡散が、攪拌によって行われることを特徴とする、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記工程（ｂ）の分子拡散が、拡散剤の存在下で行われることを特徴とする、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記拡散剤が、アルコール、界面活性剤を含むまたは含まない水、およびそれらの混合物からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記超臨界流体の圧力が１０ＭＰ〜４０ＭＰの間であり、かつ、温度が０〜１２０℃の間であることを特徴とする、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記本方法の各工程が、閉系反応槽、特にオートクレーブ中で行われることを特徴とする、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
連続的に行われることを特徴とする、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法によって得ることができることを特徴とする、水性媒体中において溶解度の低い活性物質と、多孔質支持体とを相互作用させたものである、化合物。
【請求項１８】
前記複合化した活性物質が、５％ラウリル硫酸ナトリウム水溶液中において約６００μｇ／ｍＬよりも高い溶解度を有することを特徴とする、請求項１７に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、超臨界流体、特にＣＯ２の技術により、ナノ粒子(nanopaticulate)の活性物質と多孔質支持体とを相互反応させる方法に関する。
【０００２】
新規な医薬分子の約４０％のものが水に不要であるか、または溶解度が低く、このことはそのバイオアベラビリティーにとって不利となる。粉末の比表面積を増すと、それらの溶解速度は高まる。溶解速度が高まれば、活性成分のバイオアベラビリティーは著しく高まりうる。
【０００３】
超臨界流体の技術による比表面積の高い微粉末の調製がここ１５年間用いられている。通常、ＲＥＳＳ（超臨界溶液の急速膨張）法およびＳＡＳ（溶媒−貧溶媒(solvent-antisolvent）法の二種の方法が、通常用いられている。それらの反応条件を変化させることで、活性物質から生成される粒子の形態と大きさを制御することができる。
【０００４】
溶媒として超臨界ＣＯ２を用いる利点は、次のようにいくつかある。
・熱に敏感な活性物質には、低温（＞３１℃）にて作用させることができる。
・方法のパラメーター（圧力、温度、流量など）を制御することにより、溶解度が容易に調節できる。
・単に減圧することにより、溶媒／溶質混合物を容易に分離できる。
・溶媒が化学的に不活性である（無毒、不燃性、非腐食性）。
・通常用いられる有機溶媒に比べて低コストである。
【０００５】
医薬、化粧品、およびニュートラシューティカル(nutraceutical)分野には、活性物質のコーティング剤中へのマイクロカプセル化に関する多くの特許および刊行物が存在する。しかし、記載されている方法の大部分はバイオアベラビリティーの向上に関するものではなく、むしろ活性物質の支持体への吸着に関するものである。
【０００６】
Bertucco et al.(Drugs encapsulation using a compressed gas antisolvent technique - Proceedings of the  4th Italian Conference on Supercritical Fluids and their Applications 1997, 327-334 - Ed. E. Reverchon)には、活性物質を支持体として働く生体高分子の溶液に懸濁させる方法が記載されている。この懸濁液をオートクレーブに入れた後、超臨界ＣＯ２の存在下に置いて脱溶媒和し（超臨界流体による溶媒の抽出）、活性物質の過飽和により支持体の複合化が行なわれる。この方法はバッチ法であり、活性物質が懸濁状態にあることから、活性物質が超臨界流体によって沈殿しない。従って、活性物質の粒子の構造は変わらず、水性媒体中での溶解度の向上に寄与するものではない。
【０００７】
同様の方法が、Benoit et alによって特許出願ＷＯ９８／１３１３６において記載されている。
【０００８】
支持体の沈降の他の技術は、支持体を超臨界流体に溶解した後、この支持体を活性物質上に沈殿させることからなる。目的のために、活性物質と支持体とを予め攪拌オートクレーブに入れ、超臨界ＣＯ２を注入して支持体だけを溶解し（これは支持体は超臨界流体に可溶であって、活性物質は不溶であることを意味する）、オートクレーブ内の圧力および温度を変えることにより、沈殿させる。この場合、活性物質の最初の構造はそのまま変わらず、また、沈殿複合体として得られる活性物質／支持体比を制御することは難しい。このバッチ法はBenoit et alの特許出願ＥＰ７０６８２１に詳細に記載されている。
【０００９】
ShineおよびGelbが特許出願ＷＯ９８／１５３４８に記載しているマイクロカプセル化法は、
１．活性物質とカプセル化ポリマーとを混合し、
２．超臨界流体の流束を通すことによりポリマーを溶かし、
３．活性物質の周囲のポリマーが固化するように急速減圧を行う
ことからなる。
【００１０】
この方法は、超臨界流体に不溶な活性物質およびポリマーを用いる場合にのみ適用できる。結局のところ、活性物質は元の構造を維持し、バイオアベラビリティーの向上には寄与しない。
【００１１】
PerrutおよびMajewskiの特許出願ＦＲ２７９８８６３にあっては、予め超臨界流体で抽出した活性物質（カバ(kava-kava)、ウコン(curcuma)、ブラックペッパーとスィートペッパーとの混合物)を多孔質支持体を含むオートクレーブ内で沈殿させている。検討された多孔質媒体はマルトデキストリンである。従ってこの方法では、多孔質中への単純な封入がなされるのみであり、支持体中に活性物質を静的に(static mode)で拡散させる工程はない。しかし、支持体上での沈殿は、水性媒体中の活性物質の溶解度を実質的に高めるには十分なものでない。
【００１２】
Tomaskoら(Chou et al., GAS crystallization of polymer-pharmaceutical composite particles, Proceedings of  the  4th International Symposium on Supercritical Fluids, 1997, 55-57およびKim J.-H. et al., Microencapsulation of Naproxen using Rapid Expansion of Supercritical Solutions, Biotechnol. Prog. 1996, 12, 650-661)は、超臨界ＣＯ２を用いたＲＥＳＳおよびＳＡＳによる２種の共沈殿法について言及している。検討された活性物質はナプロキセンであり、支持体はポリ−Ｌ−乳酸（Ｌ−ＰＬＡ）である。ＳＡＳの場合には、これら二種の化合物は、アセトンに同時に溶解させた後にＣＯ２の向流注入により沈殿させる。このようにして形成された複合体は、洗浄工程の後に回収する。ＲＥＳＳ法の場合には、ナプロキセンおよびＬ−ＰＬＡの混合物をチャンバーに入れ、そこからこの二種の化合物を超臨界流体により抽出し、２回目のオートクレーブにて沈殿させる。しかし、活性物質および支持体の沈殿または共沈殿は、水性媒体中の活性物質の溶解度を実質的に高めるには十分なものでない。さらにここでも、これら二種の方法において、活性物質および支持体の相互浸透を高めるための静的な分子拡散の工程は記載されていない。最後に、活性物質の水性媒体中における溶解度も検討されていない。
【００１３】
同様な共沈法が、以下にも記載されている：Sze Tu et al. (Applications of dense gases in pharmaceutical processing, Proceedings of the 5th Meeting on Supercritical Fluids 1998, Tome 1, 263-269)、Weber et al., (Coprecipitation with compressed antisolvents for the manufacture of microcomposites, Proceedings of the 5th Meeting on Supercritical Fluids 1998, Tome 1, 243-248)、およびBleich and Muller (Production of drug loaded by the use of supereritical gases with the Aerosol Solvent Extraction System (ASES) process, J. Microencapsulation 1996, 13, 131-139)。
【００１４】
Subramaniam et al.は、特許出願ＷＯ９７／３１６９１において、臨界点付近および超臨界の貧溶媒から出発して、粒子を沈殿させ、コーティングすることを可能とする装置および方法を開発した。溶液、すなわち溶質を含有する懸濁液と超臨界貧溶媒の間との接触段階は、溶液を多数の液滴にする高周波を生じさせて行う。この特許でクレームに記載の粒径は、０．１〜１０μｍである。また、コーティング法も記載されている。ヒドロコルチゾン、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−グリコシド）、イブプロフェンおよびカンプトテシンの結晶化が記載されている。しかし、活性物質と支持体との沈殿または共沈殿は、水性媒体中における活性物質の溶解度を実質的に高めるには十分なものでない。また、この方法には、活性物質のバイオアベラビリティーを高める静的な分子拡散の工程は記載されていない。
【００１５】
Tom et al. (Applications of supercritical fluids in controlled  release of drugs, Supercritical Fluids Engineering Science ACS Symp. Ser. 514, American Chemical Society, Washington DC, 1992)は、ポリマーＤＬ−ＰＬＡと複合化したロバスタチン活性物質（抗コレステロール血症性）のマイクロ粒子のＲＥＳＳ法による最初の共沈殿を報告している。この二種の化合物をオートクレーブに入れ、超臨界ＣＯ２で抽出し、第二のチャンバー内で沈殿させる。この方法の主な欠点は、複合体として得られる活性物質／支持体の比率である。これは、この比率が超臨界状態のＣＯ２中における二種の化合物の各溶解度によって決まるため、厳密に選択できないからである。しかし、この活性物質と支持体の共沈殿は、水性媒体中における活性物質の溶解度を実質的に高めるには十分なものでない。そのうえ、この方法には、活性物質のバイオアベラビリティーを高める静的モードにおける分子拡散の工程は記載されておらず、さらに水性媒体中におけるその溶解度も検討されていない。
【００１６】
Carli et al.の特許出願ＷＯ９９／２５３２２では、医薬活性物質を含浸させる方法をクレームとしている。詳しくは以下の通りである。
１．ＲＥＳＳ法により活性成分を溶解させる。
２．活性成分を含有する超臨界流体と架橋ポリマーとを接触させる。
３．静的にまたは動的に、橋ポリマーを含浸させる。
４．超臨界流体を除去する。
【００１７】
第一の工程は活性成分を超臨界流体にて抽出することからなるので、超臨界流体に可溶な活性物質だけがこの方法に合致する。さらに、この方法は封入法ではなく、支持体への含浸法であり、このようにして調製された活性成分について、水性媒体中における溶解度の向上に関する結果は得られない。そしてなにより、この含浸ポリマーには、超臨界流体による洗浄工程が施されていない。
【００１８】
Fisher および Mullerは、米国特許第５，０４３，２８０号で、超臨界流体を用いて支持体上に活性物質を調製する方法を記載している。この方法は、超臨界媒体中で一以上の活性物質と一以上の支持体とを接触させることからなる。目的のため、活性物質と支持体とをＳＡＳ法および／またはＲＥＳＳ法により沈殿させるか、共沈殿させる。これらの化合物は無菌状態で得られる。しかし、この活性物質と支持体との沈殿または共沈殿は、水性媒体中における活性物質の溶解度を実質的に高めるには十分なものでない。そのうえ、この方法では、活性物質のバイオアベラビリティーを高める静的な分子拡散の工程は記載されておらず、さらに水性媒体中におけるその溶解度も検討されていない。
【００１９】
Van Hees et al. (Application of supercritical carbon dioxide for the preparation of a Piroxicam-β-cyclodextrin inclusion compound, Pharmaceutical Research, Vol. 16, No. 12, 1999)は、その刊行物の中において、超臨界ＣＯ２を用いたβ−シクロデキストリン中にピロキシカムを封入する方法を記載している。この方法はピロキシカムとβ−シクロデキストリンの混合物（モル比１／２．５）を加圧したオートクレーブに入れ、静的な状態に置く。減圧後、得られた混合物を粉砕し、ホモジナイズした後に特性決定する。
【００２０】
これらの分析ではピロキシカムとβ−シクロデキストリンとの複合化の程度に関する結果を導き出すことは可能であるが、ピロキシカム単独に関するピロキシカム／β−シクロデキストリン複合体の水性媒体中における溶解度の向上についての結果は何ら得られない。また、用いられた活性物質は超臨界流体により生成されたものではなく、超臨界流体を用いて複合体を洗浄する工程も行われていない。
【００２１】
Kamihira M. et al. (Formation of inclusion complexes between cyclodextrins and aromatic compounds under pressurized carbon dioxide, J. of Fermentation and Bioengineering, Vol. 69, No. 6, 350-353, 1990)は、揮発性芳香族化合物を抽出し、シクロデキストリンに封入することによりそれらを捕捉する方法を記載している。この方法においてはＲＥＳＳ法によりゲラニオールおよびマスタードオイルを抽出し、シクロデキストリンと水との混合物を含有する２回目のオートクレーブ中、動的に気化させる。温度、圧力および水分含量などのパラメーターの影響は、シクロデキストリン中の活性物質の封入レベルを測定することにより検討されている。この刊行物に記載されている封入工程は、本発明にて請求されるような静的なものではなく、動的に行われている。また、この方法では超臨界流体の洗浄工程は含まれていない。最後に、水性媒体中での活性物質の溶解度も検討されてない。
【００２２】
Sze Tu L. et al. (Application of dense gases in pharmaceutical processing, Proceedings of 5th meeting on supercritical fluids, Nice, France,  March 1998)は、その刊行物において、活性物質（パラヒドロ安息香酸）およびポリマー（ＰＬＧＡ−ポリラクティックチド−コ−グリコシド−またはＰＬＡ−ポリ−Ｌ−乳酸）のＳＡＳによる沈殿化を行う方法を記載している。この共沈殿法は、二つの方法、すなわちポリマーと活性物質とを二種の異なる溶液として用いるか、または同じ溶液として用いるかのいずれかで行われる。どちらの場合でも、二種類の化合物を含有するものである二つの溶液または一つの溶液が、超臨界ＣＯ２  ＳＡＳにより処理される。しかし、この活性物質と多孔質支持体との共沈殿は、水性媒体中における活性物質の溶解度を実質的に高めるに十分なものでない。そのうえ、この方法では、活性物質のバイオアベラビリティーを高める静的モードにおける分子拡散の工程は記載されておらず、さらには水性媒体中でのその溶解度も検討されていない。
【００２３】
Jung et al.が、特許公報ＦＲ２８１５５４０に記載している共沈殿法についても同様なことがいえる。これは、ホスト分子中に挿入された少なくとも１つの活性成分を含む微粒子を製造する方法、およびこの方法を実施することができる装置である。この方法は、第一の溶媒に活性成分を溶解させ、第二の溶媒にシクロデキストリンまたはクラウンエーテル型のホスト分子から形成された生成物を溶解させることからなる。次にこれらの溶液を、ＳＡＳ法にて、超臨界圧の流体と接触させて、分子を沈殿させる。Sze Tu L.が上記引用文献にて記載している方法のように、これらの成分を同じ溶媒に溶解させることができる。Jung et al.が示している結果には、溶解速度に関することは何ら主張されていない。しかし、この活性物質とシクロデキストリン型の支持体の共沈殿は、水性媒体中における活性物質の溶解度を実質的に高めるには十分なものでない。また、この方法は、活性物質のバイオアベラビリティーを高める静的な分子拡散の工程は記載されておらず、さらに水性媒体中におけるその溶解度も検討されていない。
【００２４】
本明細書の発明者らは驚くことに、超臨界流体により水性媒体中において溶解度の低い活性物質を生成し、それを多孔質支持体と混合した後、静的に超臨界流体による分子拡散を行う工程、および超臨界流体を用いて洗浄する工程を含んでなる方法によれば、水性媒体中における活性物質の溶解度、ひいてはバイオアベラビリティーを著しく高められた、相互反応した化合物を調製することができることを見出した。
【００２５】
実際、静的な封入工程と、その支持体への活性物質の沈殿工程と組み合わせると、驚くことに、水性媒体中における活性物質の溶解度を高めることができた。さらに、超臨界媒体中において洗浄する第三工程は、超臨界ＣＯ２の流束を通すことにより、残りの溶媒を除去することからなり、驚くことに、相互作用させた化合物を洗浄することに加えて、この工程の後には溶解度を向上させることも可能となる。
【００２６】
さらに、これらの工程は、特に拡散および洗浄の工程にあっては、バッチ式または連続的に行うことができる。従って、これにより、従来の：
１．結晶化
２．固体／液体分離
３．乾燥
４．支持体への封入
５．微粉化
に関する方法を、軽減することができる。
【００２７】
従って、よって本発明によれば、水性媒体中において、溶解度の低い活性物質と、多孔質支持体とを相互作用させた化合物を製造する方法であって、以下の工程：
（ａ）超臨界流体により生成された活性物質と、所定量の多孔質支持体とを混合し、有利には緊密に混合し、
（ｂ）超臨界流体と、工程（ａ）にて得られた混合物とを、工程（ａ）で得られた混合物の水性媒体中における溶解が高めるのに必要な時間、静的に接触させることにより、分子拡散し、
（ｃ）工程（ｂ）にて得られた相互作用させた化合物を超臨界流体の流束にて洗浄し、
（ｄ）前記工程にて形成された相互作用させた化合物の粒子を回収すること
を含んでなることを特徴とする、方法が提供される。
【００２８】
本発明の目的のためには、水性媒体中における溶解度の低い活性物質は、水性媒体中における溶解度が低いか、または不溶性のいずれの活性物質であってもよく、特には溶解度が少なくとも２０μｇ／ｍＬ未満であるいずれの活性物質であってもよい。特にこれは医薬、化粧品、またはニュートラシューティカル(nutraceutical)活性を有するものであってもよい。有利には、上記活性物質は、アニリド誘導体、エピポドフィロトキシン誘導体、ピロキシカム、吉草酸、オクタン酸、ラウリン酸、およびステアリン酸からなる群から選択される活性物質である。アニリド誘導体の場合、上記活性物質は、以下の一般式Ｉの誘導体：
【化１】
2005512621.tif 000002
｛式中、
Ｒ１およびＲ２は、同一であっても異なっていてもよく、互いに独立に水素原子；直鎖または分枝Ｃ１−Ｃ６アルキル基；所望により１以上のＣ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、ヒドロキシルまたはハロ基により置換されていてもよいフェニル、ナフチルまたはピリジルのような芳香族基を表し、
Ｒ３は、直鎖または分枝Ｃ６−Ｃ１５アルキル鎖、または所望により１以上のＣ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、ヒドロキシルまたはハロ基により置換されていてもよいフェニル基を表し、
Ａは、硫黄または酸素原子またはスルホキシ基を表す｝
であるのが有利である。
【００２９】
特に有利には、上記物質は、（Ｓ）−２’，３’，５’−トリメチル−４’−ヒドロキシ−α−ドデシルチオフェニル−アセトアニリド（Ｆ１２５１１）である。式Ｉの化合物は不斉中心を有しうることから、本発明による活性物質は、種々の立体異性体または鏡像異性体の一方のものまたはそれらの混合物でありうる。これらの誘導体およびそれらを製造する方法は、特許出願ＦＲ２７４１６１９に記載されている。
【００３０】
エピポドフィロトキシン誘導体の場合、上記物質は、以下の一般式II
【化２】
2005512621.tif 000003
｛式中、
Ｒ’は、水素原子；リン酸モノエステル基；−ＣＯ−Ｎ（Ｒ１Ｒ２）型のカルバミン酸基（ここで、Ｎ（Ｒ１Ｒ２）は、アミノ二酢酸基、および３−アミノキヌクリジンなどの多環式アミンを表す）；ホスホノ酢酸型のＨ２Ｏ３Ｐ−ＣＨ２−ＣＯのアシル基またはＲ基を表し、
Ｒは、式Ａ−Ｚ−ＣＨ２−ＣＯのアシル基を表し、ここで、Ｚは酸素もしくは硫黄原子、ＳＯ２基、直鎖もしくは分枝Ｃ１−４アルキレンを表し、この場合、Ａは置換または非置換置換フェニル核を表し、
ここで、Ｒ＝Ｒ’の場合、言い換えればトリアシル誘導体の場合、Ａは塩に変わりうる機能(salifiable function)を有する芳香核を表し、
Ｒ’≠Ｒの場合、Ａはベンジル、ナフチル、またはヘテロアリール基、または置換もしくは非置換フェニル基であり、ここで、このフェニルは芳香核上のその位置にかかわらず、ハロゲン、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、直鎖または環式Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキル、メチレンジオキシ、ＯＣＦ３、ＣＦ３、ＮＯ２、ＣＮ、ＯＣＨ２アリール、ＯＨ、ＯＰＯ３Ｈ２、ＯＨ２ＰＯ３Ｈ２、ＰＯ３Ｈ２、ＯＣＨ２ＣＯ２Ｈ、ＣＯＯＨ、ＣＨ２ＣＯＯＨ、ＣＯＣＨ３、ＣＨＯなどの基により１回以上置換することが可能であり、
また、Ａ−Ｚは、ＯＣＨ２ＣＯ２Ｈ、ＳＯ２ＣＨ２ＣＯＯＨまたはＰＯ３Ｈ２基を表してもよい｝
の誘導体であるのが有利である。
【００３１】
この物質は、４’−デメチル−４’−デオキシ−４’−ホスフェート−４−Ｏ−（２，３−ビス−（２，３，４，５，６−ペンタフルオロフェノキシアセチル）−４，６−エチリデン−β−Ｄ−グルコシル）−エピポドフィロトキシン（Ｌ００８１）であることが、より一層好ましい。
【００３２】
これらの誘導体およびそれらを製造する方法は、特許出願ＦＲ２７２５９９０に記載されている。
【００３３】
本発明の目的のためには、超臨界流体により生成された活性物質は、超臨界流体による生成工程、言い換えれば、超臨界流体の使用によってその比表面積を増加させる工程を受けた、上記で定義されるいずれかの活性物質とされる。このような工程は、有利には、ＲＥＳＳまたはＳＡＳ法からなる。
【００３４】
本発明の目的のためには、多孔質支持体は、水性媒体中において可溶な適当な任意の多孔質支持体である。多孔質支持体は、有利にはシクロデキストリン類およびそれらの混合物からなる群から選択される。その支持体は、有利にはγ−シクロデキストリンである。
【００３５】
本発明の目的のためには、超臨界流体は、それらの臨界値よりも高い温度および圧力で用いる任意の流体である。流体は、有利にはＣＯ２である。
【００３６】
「静的に」とは、本発明の意味においては、総ての反応体を同時に混合して反応させる反応または方法を意味する。例えば、本発明の工程（ｂ）では、共沈殿粉末、水および超臨界ＣＯ２をオートクレーブに入れ、１６時間反応させる。反応中、生成物の質量は変化しない。
【００３７】
これに対して「動的に」は、反応または生産の進行に従って反応体を供給する。「動的に」は、多くの場合、流体を循環かせるか攪拌する。反応中に生成物の質量は変化する。本発明の方法では、工程（ａ）は通常動的工程である。
【００３８】
本発明の目的のためには、緊密混合物は、得られた混合物中においてＡとＢは均一に分布している、ＡとＢとの混合物である。
【００３９】
本発明の特定の実施態様によれば、多孔質支持体は超臨界流体により生成され、工程（ａ）は、以下の工程：
（ａ１）活性物質と多孔質支持体とを有機溶媒（ここで、この有機溶媒は超臨界流体に可溶である）に溶解し、
（ａ２）工程（ａ１）にて得られた溶液と超臨界流体とを連続的に接触させ、活性物質および支持体の制御された脱溶媒和を実行して、それらのコアセルべーションを確保し、
（ａ３）前記工程にて形成された複合体を、超臨界流体を用いて残留溶媒を抽出した後、液体状の溶媒と気体状の超臨界流体とを分離することによって洗浄すること
を含んでなるものである。
【００４０】
有利には、工程（ａ）は、ＳＡＳ法による活性物質と多孔質支持体との共沈殿からなる。
【００４１】
他の実施態様によれば、本発明の方法は、活性物質が、工程（ａ）で用いる前に、以下の工程：
（ｉ）活性物質を有機溶媒（ここで、この有機溶媒は超臨界流体に可溶である）に溶解し、
（ii）工程（ｉ）で得られた溶液と、超臨界流体とを連続的に接触させ、活性物質との脱溶媒和を実行して、そのコアセルべーションを確保し、
（iii）前記工程にて形成された活性物質の粒子を、超臨界流体を用いて残留溶媒を抽出することにより洗浄した後、液体状の溶媒と気体状の超臨界流体とを分離すること
を含んでなり、かつ、工程（ａ）で用いられる多孔質支持体は固体状である、方法により生成されるものである。
【００４２】
活性物質は、工程（ａ）で用いる前に、ＳＡＳ法に従って沈殿させることにより生成するのが有利である。
【００４３】
第三の実施形態では、本発明による方法は、活性物質が、工程（ａ）で用いられる前に、以下の工程：
（ｉ）活性物質を、所望により補助溶媒と混合した超臨界流体にて抽出し、
（ii）この超臨界混合物を気化させ、活性物質の脱溶媒和を実行して、そのコアセルべーションを確保し、
（iii）前記工程にて形成された活性物質の粒子を超臨界流体にて洗浄した後、所望により、液体状の補助溶媒と気体状の超臨界流体とを分離すること
を含んでなるプロセスにより生成され、かつ、工程（ａ）で用いられる多孔質支持体が固体状である、方法である。
【００４４】
活性物質は、工程（ａ）で用いる前に、ＲＥＳＳ法に従って沈殿させることにより生成するのが有利である。
【００４５】
第四の実施態様によれば、本発明による方法は、工程（ａ）が、以下の工程：
（ａ１）活性物質を有機溶媒（ここで、この有機溶媒は超臨界流体に可溶である）に溶解し、
（ａ２）前記工程にて得られた溶液と、超臨界流体とを、予め反応槽に入れた多孔質支持体上にて、活性物質の脱溶媒和を遂行し、かつ、そのコアセルべーションを確保するように連続的に接触させ、
（ａ３）前記工程にて形成された複合体を、超臨界流体を用いて残留溶媒を抽出することにより洗浄した後、液体状の溶媒と気体状の超臨界流体とを分離すること
を含んでなる、方法である。
【００４６】
有利には、工程（ａ）は、ＳＡＳ法による多孔質支持体上への活性物質の沈殿からなる。
【００４７】
第五の実施態様によれば、本発明による方法は、工程（ａ）が、以下の工程：
（ａ１）活性物質を、所望により補助溶媒と混合した超臨界流体にて抽出し、
（ａ２）この超臨界混合物を気化させ、予め反応槽に入れた多孔質支持体上にて、活性物質の脱溶媒和を実行し、そのコアセルべーションを確保し、
（ａ３）前記工程にて形成された複合体を、超臨界流体にて洗浄した後、所望により液体状の補助溶媒と、気体状の超臨界流体とを分離すること
を含んでなる、方法である。
【００４８】
有利には、工程（ａ）は、ＲＥＳＳ法による多孔質支持体上への活性物質の沈殿からなる。
【００４９】
有利には、有機溶媒または補助溶媒は、アルコール類、特にはメタノールまたはブタノール；ケトン類、特にはアセトン、メチルエチルケトン、シクロヘキサノンまたはＮ−メチルピロリドン；酢酸、酢酸エチル、ジクロロメタン、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、およびそれらの混合物からなる群から選択されるのが有利である。溶媒または補助溶媒はエタノールまたはジメチルスルホキシドである。
【００５０】
有利には、本発明による方法の工程（ｂ）の分子拡散は、攪拌しながら行うものである。
さらに有利には、本発明による方法の工程（ｂ）の分子拡散は、拡散剤の存在下で行うものである。
本発明の目的にあっては、拡散剤は活性物質と支持体との相互作用を促進する任意の溶媒である。
有利には、この拡散剤は、アルコール、界面活性剤を含む、または含まない水、およびそれらの混合物からなる群から選択される。より一層有利には、この拡散剤は水である。
この拡散剤は、連続的に加えても断続的に加えてもよい。
【００５１】
工程（ｂ）の分子拡散に必要な時間は、適当ないずれかの方法によって決定される。この工程（ｂ）は、所望の溶解速度を得るために必要な回数繰り返してもよい。有利には、工程（ｂ）は約１６時間継続する。
【００５２】
工程（ｂ）の圧力および温度は、分子拡散を促進するように選択する。有利には、超臨界流体の圧力は、１０ＭＰａ〜４０ＭＰａの間、温度は０〜１２０℃の間である。
【００５３】
さらに一層有利には、超臨界流体は、本発明による方法の総ての工程において、圧力１０ＭＰａ〜４０ＭＰａの間、温度は０〜１２０℃の間で用いる。
【００５４】
本発明による方法の各工程は、閉鎖系反応槽、特にオートクレーブにて行うのが有利である。
本発明による方法は、連続的に行うことが有利である。
同様に本発明は、本発明による方法により得られることを特徴とする、水性媒体中において溶解度の低い活性物質と多孔質支持体とを相互作用させた化合物を提供する。
有利には、本発明による相互作用させた化合物は、上記にて複合化した活性物質が、５％ラウリル硫酸ナトリウム水溶液において約６００μｇ／ｍＬを超える溶解度を示すものとされる。
【００５５】
種々の工程における粉末体の物理特性：
ＲＥＳＳにより得られる活性成分粉末：
・特に極めて軽い微粉末
・単分散結晶の大きさおよび種別：長さ１〜３μｍ、直径１００〜２００ｎｍのロッドレット(rodlet)
・嵩密度１２ｋｇ／ｍ３
【００５６】
ＳＡＳにより得られる活性成分粉末：
・極めて軽い微粉末
・単分散結晶の大きさおよび種別：長さ１０〜２０μｍ、直径１００ｎｍのロッドレット
・嵩密度９７ｋｇ／ｍ３
【００５７】
共結晶化粉末（活性成分／シクロデキストリン）
・ごく細かい、軽い微粉末
・嵩密度１７６ｋｇ／ｍ３
熟成させた共結晶化粉末（活性成分／シクロデキストリン）
・濃度の高い、微粉でない粉末
・嵩密度６３９ｋｇ／ｍ３
【００５８】
本発明の他の目的および利点は、当業者にとって、以下の詳細な説明および以下の例示的な図面から明らかであろう。
【００５９】
本発明による方法は、特に超臨界媒体中における分子拡散工程を含み、これにより、走査型電子顕微鏡にて撮影した写真により示されているように（図１〜６）、提案されている支持体における活性物質粒子の高レベルの相互作用が可能となる。これらの写真では、化合物の構造が拡散中において全体的に改変されることが分かるであろう。さらに、水性媒体中における溶解度も改変される。
【００６０】
よって、図１および２の化合物は、５％ラウリル硫酸ナトリウム水溶液において２時間後に約６μｇ／ｍＬの溶解度を示す。
【００６１】
図３および４の複合体は、５％ラウリル硫酸ナトリウム水溶液において２時間後に約８６μｇ／ｍＬの溶解度を示す。
【００６２】
図５および６の複合体は、５％ラウリル硫酸ナトリウム水溶液において２時間後に約５１６μｇ／ｍＬの溶解度を示す。
【００６３】
この拡散工程の目的は、活性物質の微粒子の溶解度を高めることである。
【００６４】
以降の工程、すなわち、超臨界流体にて洗浄する工程により、さらに活性物質と多孔質支持体とを相互作用させた化合物の溶解速度を向上させることができる。
【００６５】
本発明による方法によれば、水性媒体における２時間後の溶解度は、約１００倍とされる。
以下、本方法をどのようにして実施するか例を示すが、これに限定されるものではない。
【実施例】
【００６６】
粉末の分析プロトコール
製品Ｆ１２５１１の溶解試験
操作条件：
分光光度検出器は２２０ｎｍに設定した。
Ｃ８グラフトカラム(Lichrospher 6ORP-Select B)、寸法２５×０．４ｃｍ、粒径：５μｍ。
移動相：
＊アセトニトリル        ８２０ｍＬ
＊精製水                １８０ｍＬ
＊氷酢酸                １ｍＬ
流速：１ｍＬ／分
【００６７】
溶液の調製：
試験溶液
Ｈ２Ｏ中５％（ｍ／Ｖ）のラウリル硫酸ナトリウム１０ｍＬ中に、約１００ｍｇの製品Ｆ１２５１１に相当する量の複合体を入れる。この系を３７℃±０．５℃のウォーターバス中、磁気攪拌下に置く。攪拌２時間後にこの懸濁液のサンプル２ｍＬを採取し、Gelman GHP Acrodisc GF（登録商標）フィルターにて濾過する。サンプルを移動相にて１／５希釈する。試験は２回行う。
【００６８】
対照溶液
１００ｍｌフラスコに参照製品Ｆ１２５１１（複合体の調製に用いた出発材料）８ｍｇを入れ、これを１ｍＬのテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）に溶解する。移動相にて一定量とする。
【００６９】
範囲
【表１】
2005512621.tif 000004
【００７０】
試験方法：
各対照溶液２０μＬを注入する。製品Ｆ１２５１１のピーク面積を測定し、その変化量を、濃度の関数としてグラフに表す。相関係数は＞０．９９５である。試験溶液２０μＬを注入する。試験溶液に存在する製品Ｆ１２５１１のピーク面積を測定し、これがＴ１とＴ５の間の範囲に入るようにする。そうならなければ、可溶化溶媒にて希釈を行い、かつ／または試験溶液の注入量を調節する。これから、試験溶液の濃度Ｘ（μｇ／ｍＬ）を求める。下式：
Ｘ×２０×Ｆ×５  
１０００×Ｙ
Ｙ：試験溶液の注入量
Ｆ：希釈率
により、製品Ｆ１２５１１の溶解量（ｍｇ／ｍＬ）を算出する。
【００７１】
比表面積の測定
比表面積の測定は、Micrometrics製のBET ASAP 2010吸光度装置にて行った。
【００７２】
サンプル調製
測定工程の前に、サンプルには脱気工程が必要である。この工程は、少なくとも０．００３ｍｍＨｇ、または約０．００４ミリバールの真空が安定して達成されるまで、サンプルの入ったセルを排気することからなる。この脱気は５０℃で行う（継続時間は約１６時間）。
脱気が終了したら、サンプルの入ったセルにヘリウムを満たし、測定ステーションに移すが、ここで、排気は分析まで繰り返す。
【００７３】
吸着等温線のプロセシング
比表面積はＢＥＴ理論に従い、すなわち、以下の関係式：
１           ＝   １    ＋  Ｃ−１．（Ｐ／Ｐ０）
Ｗ．［（Ｐ０／Ｐ）−１］   ＣＷｍ           Ｗｍ．Ｃ
Ｗ：サンプル単位量当たりの、吸着された気体の体積（標準温度および圧力（ＳＴＰ）条件下）
Ｗｍ：サンプル単位量当たりの、単層に吸着された気体の体積（ＳＴＰ条件下）
Ｐ０：飽和圧力
Ｃ：定数
に従って求めた。
【００７４】
次に等温線を以下のようにプロットした。
１           
Ｗ．［（Ｐ０／Ｐ）−１］
関数としてのＰ／Ｐ０：発明者らはその直線を得、傾きと原点の縦座標からＣとＷｍを得た。
【００７５】
次に比表面積を下式により求める。
ａ（ｍ２・ｇ−１）＝ＮｍＮＡＥ
｛Ｅ：窒素分子の空間占有率。７７Ｋの操作温度での窒素については、これは一般にＥ＝０．１６２ｎｍ２であると考えられる。
ＮＡ：アボガドロ数
Ｎｍ：Ｗｍから算出された、サンプル単位量当たりの、単層に吸着された窒素の分子数(mol)｝
【００７６】
測定はＢＥＴ理論が有効な通常の相対圧の範囲、すなわち、０．０５＜Ｐ／Ｐ０＜０．２にて行う。この理論の有効性を確かめるため、一つの実用的手段は、Ｎabsorbed．（１−Ｐ／Ｐ０）の量がＰ／Ｐ０の関数として変化する方向を調べることであり、前記量はＰ／Ｐ０とともに連続的に増加しなければならない。
このようにしてＢＥＴ理論の適用性の範囲を確認し、必要であれば、相対圧の範囲を再調整する。
【００７７】
比較例１：製品Ｆ１２５１１のＳＡＳ／ＤＭＳＯによる沈殿
１．３７Ｌのバスケットを備えた２Ｌのオートクレーブにて、ＣＯ２の存在下、濃度１１５ｇ／Ｌの、ＤＭＳＯ中製品Ｆ１２５１１の溶液１５０ｍＬを、溶媒−貧溶媒（ＳＡＳ）法によって連続的に沈殿させる。溶媒ポンプの流速は０．６ｍＬ／分とする。オートクレーブ内の温度および圧力は、ＣＯ２密度が０．８となるように選択する。約１３０ｍＬの溶液を沈殿させた後、溶質の注入と、その後ＣＯ２の注入を停止し、ＣＯ２の流束（３００バール、５０℃）を３時間通すことで洗浄する。その後、オートクレーブを減圧する。この工程の収率は８７％である。
【００７８】
【表２】
2005512621.tif 000005
【００７９】
比較例２：製品Ｆ１２５１１のＲＥＳＳによる沈殿
１０ｇの製品Ｆ１２５１１をオートクレーブに入れ、１００℃、２６５バールにてＣＯ２にて抽出する。次に、この流体を第二のチャンバーにて沈殿させ、０．６ｇの製品Ｆ１２５１１を回収する。２時間後の溶解度および比表面積を測定する。
【００８０】
【表３】
2005512621.tif 000006
【００８１】
比較例３：ＳＡＳ／ＤＭＳＯによるＦ１２５１１およびγ−シクロデキストリンの共沈殿
１．３７Ｌのバスケットを備えた２Ｌのオートクレーブにて、ＣＯ２の存在下、ＤＭＳＯ中製品Ｆ１２５１１（濃度５７．５ｇ／Ｌ）およびγ−シクロデキストリン（濃度１７２．５ｇ／Ｌ）の溶液１５０ｍＬを、溶媒−貧溶媒（ＳＡＳ）法によって連続的に沈殿させる。溶媒ポンプの流速は０．４ｍＬ／分とする。オートクレーブ内の温度および圧力はＣＯ２濃度が０．９となるように選択する。約１００ｍｌの溶液を沈殿させた後、溶質の注入と、その後ＣＯ２の注入を停止し、ＣＯ２流（３００バール、５０℃）を２時間通すことで洗浄する。その後、オートクレーブを減圧する。この工程の収率は８１％である。溶解度測定の結果を下表にまとめる。
【００８２】
【表４】
2005512621.tif 000007
【００８３】
実施例４：ＤＭＳＯ中、製品Ｆ１２５１１およびγ−シクロデキストリンの溶液から出発する共沈殿、封入および洗浄
４Ｌのバスケットを備えた６Ｌのオートクレーブにて、ＣＯ２の存在下、ＤＭＳＯ中製品Ｆ１２５１１（濃度４０ｇ／Ｌ）およびγ−シクロデキストリン（濃度２４０ｇ／Ｌ）の溶液４５０ｍＬを、溶媒−貧溶媒（ＳＡＳ）法によって連続的に沈殿させる。溶媒ポンプの流速は１．１ｍＬ／分とする。オートクレーブ内の温度および圧力は、ＣＯ２濃度が０．９±０．０５となるように選択する。約４５０ｍＬの溶液を沈殿させた後、溶質の注入と、ＣＯ２の注入を停止し、この系を超臨界流体が液化しないように穏やかに降下させる。
この工程の収率は９４％である。
【００８４】
上記の工程で共沈殿した粉末と浸透水とを混合し（質量比は水の２５％）、この混合物を４Ｌのポーラルバスケットに入れ、次にこれを６Ｌの沈殿オートクレーブに入れる。
【００８５】
オートクレーブを閉じ、この系を超臨界ＣＯ２とともに、オートクレーブ内の静圧が３００バール、温度が６５℃となるように加圧する。
【００８６】
一晩分子拡散の後、オートクレーブを穏やかに降下(let down)させ、この工程を、拡散剤（水）を加えずに一晩繰り返す。
【００８７】
このようにして得られた複合体を、次に超臨界ＣＯ２（２７０バール、４０℃）の流束にて８時間洗浄する。降下させた後、得られた粉末の溶解度を測定する。
【００８８】
【表５】
2005512621.tif 000008
【００８９】
これらの結果は、水性媒体中における活性成分の溶解度の向上について、超臨界媒体中での共沈殿、封入および洗浄を組み合わせた方法の利点を示している。
【００９０】
イヌに対する薬物動態試験を、この方法により得られたＦ１２５１１／γ−シクロデキストリン相互作用化合物を用いて行った。標準量３ｍｇ／ｋｇを５匹のイヌに投与し、Ｆ１２５１１の血漿濃度（ｎｇ／ｍＬ・ｈで表す）を測定した。常法による結晶化および乾燥により得られたＦ１２５１１に関する結果、および本発明の上記方法により得られたＦ１２５１１／γ−シクロデキストリン相互作用化合物に関する結果は、図７のヒストグラムに示されている。
【００９１】
本発明の方法により得られたＦ１２５１１／γ−シクロデキストリン相互作用化合物から調製した用量を投与すると、イヌのバイオアベラビリティーを１０ファクター(factor)高めることができることが分かる。
【００９２】
比較例５：ＳＡＳ法／エタノールにより生成された製品Ｆ１２５１１のγ−シクロデキストリン中への沈殿および封入
４Ｌのバスケットを備えた６Ｌのオートクレーブにて、ＣＯ２の存在下、エタノール中製品Ｆ１２５１１の溶液（濃度５ｇ／Ｌ）８Ｌを溶媒−貧溶媒（ＳＡＳ）法によって連続的に沈殿させる。溶媒ポンプの流速は４１．７ｍＬ／分とする。オートクレーブ内の温度および圧力はＣＯ２濃度が０．８となるように選択する。約８Ｌの溶液を沈殿させた後、溶質の注入およびＣＯ２の注入を停止し、この系を超臨界流体が液化しないように穏やかに降下させる。
上記の工程にて沈殿した活性物質４．３ｇを、２５．８ｇのγ−シクロデキストリンおよび１０ｇの浸透水と混合し、この混合物を４Ｌのポーラルバスケット(Poral basket)に入れ、次にこれを６Ｌの沈殿オートクレーブに入れる。
【００９３】
オートクレーブを閉じ、この系を超臨界ＣＯ２とともに、オートクレーブ内の静圧が３００バール、温度が６５℃となるように加圧する。
１６時間の分子拡散の後、降下を行う。
【００９４】
【表６】
2005512621.tif 000009
【００９５】
比較例６：ＳＡＳ法／ＤＭＳＯにより生成された製品Ｆ１２５１１のγ−シクロデキストリン中への沈殿および封入
１．３７Ｌのバスケットを備えた２Ｌのオートクレーブにて、ＣＯ２の存在下、ＤＭＳＯ中製品Ｆ１２５１１の溶液（濃度２００ｇ／Ｌ）１５０ｍＬを溶媒−貧溶媒（ＳＡＳ）法によって連続的に沈殿させる。溶媒ポンプの流速は０．５ｍＬ／分とする。オートクレーブ内の温度および圧力は、ＣＯ２濃度が０．９となるように選択する。約１３５ｍＬの溶液を沈殿させた後、溶質の注入およびＣＯ２の注入を停止し、この系を超臨界流体が液化しないように穏やかに降下させる。
【００９６】
上記の工程にて沈殿した活性物質１ｇを、６ｇのγ−シクロデキストリンおよび２．３３ｇの浸透水と混合し、この混合物を１．３７Ｌのポーラルバスケットに入れ、次にこれを２ｌの沈殿オートクレーブに入れる。
【００９７】
オートクレーブを閉じ、この系を超臨界ＣＯ２とともに、オートクレーブ内の静圧が３００バール、温度が１００℃となるように加圧する。
１６時間の分子拡散の後、降下を行う。
【００９８】
【表７】
2005512621.tif 000010
【００９９】
比較例７：ＲＥＳＳ法により生成された製品Ｆ１２５１１のγ−シクロデキストリン中への封入
４０ｇの製品Ｆ１２５１１を、４Ｌのバスケットに入れ、次にこれを６Ｌのオートクレーブに入れる。活性物質を、ＣＯ２およびエタノールの超臨界混合物（５重量％）にて抽出し、この物質を１２０バール、５５℃にて沈殿させる。３時間後、ＣＯ２およびエタノールの注入を停止する。
【０１００】
上記の工程にて沈殿した活性物質８．９６ｇを、５３．７６ｇのγ−シクロデキストリンおよび２０．８７ｇの浸透水と混合し、この混合物を４Ｌのポーラルバスケットに入れ、次にこれを６Ｌの沈殿オートクレーブに入れる。
【０１０１】
オートクレーブを閉じ、この系を超臨界ＣＯ２とともに、オートクレーブ内の静圧が３００バール、温度が６５℃となるように加圧する。
１６時間の分子拡散の後、オートクレーブを穏やかに降下させる。
【０１０２】
【表８】
2005512621.tif 000011
【０１０３】
比較例８：攪拌分子拡散による製品Ｌ００８１のγ−シクロデキストリン中への封入
４．０ｇの製品Ｌ００８１、２４．０ｇのγ−シクロデキストリン、および９．３ｇの水を混合した。
得られた混合物を、１リットルの攪拌オートクレーブの底に入れる。オートクレーブを密閉した後、超臨界状態のＣＯ２とともに３００バールまで加圧する。温度を、５０℃±１０℃に設定する。攪拌を始め（４００ｒｐｍ）、この圧力および温度を一晩維持する。一晩の後、加熱および攪拌を切り、オートクレーブを穏やかに減圧する。総ての粉末を回収し、溶解試験を行い、攪拌をせずに同じ条件下にて得られた粉末と比較する。
【０１０４】
【表９】
2005512621.tif 000012
【０１０５】
結果のまとめ
下表は、用いた種々の方法および対応する溶解の結果をまとめたものであり、この表から、水性媒体において高い溶解度を持つ製品Ｆ１２５１１の製造に最も適した方法を推定することができる。
【０１０６】
【表１０】
2005512621.tif 000013
【０１０７】
【表１１】
2005512621.tif 000014
【０１０８】
これらの結果からして、水性媒体中における製品Ｆ１２５１１の最も高い溶解度が得られる方法は、超臨界流体を用いて、有利には製品Ｆ１２５１１およびγ−シクロデキストリンの共沈殿、静的モードでの分子拡散（有利には攪拌を伴う）、および洗浄により製品Ｆ１２５１１を生成する工程を組み合わせた方法であることが明らかである。
【０１０９】
比較試験９：
実際に、中間的な工程ではなく、この全体としての方法により最終的な結果が得られたことを確認するため、発明者らは上記と同じ溶解試験を種々の混合物に対して行い、以下の結果が得られた。
【０１１０】
【表１２】
2005512621.tif 000015
【０１１１】
他の活性物質、他の支持体および他の溶媒での試験
Ｆ１２５１１で得られた結果を確認するため、異なる治療分類に属する種々の分子を試験した。
【０１１２】
【表１３】
2005512621.tif 000016
【０１１３】
試験粉末の製造条件
各試験粉末については、次のような方法を適用した。
活性物質およびシクロデキストリンを溶媒に溶かす。
試験する活性物質およびシクロデキストリンを、超臨界ＣＯ２の存在下、ＳＡＳにより緊密混合する。
得られた粉末を乾燥させる。
サンプルを採取する（場合による）。
この粉末と浸透水とを混合した後、超臨界圧のＣＯ２下にて封入する。
得られた粉末を乾燥させる。
サンプルを採取する。
【０１１４】
これら新規な分子について、種々の溶媒および種々のタイプの支持体にて試験を行った。行った種々の試験を下表にまとめる。
【０１１５】
【表１４】
2005512621.tif 000017
【０１１６】
実施例１０：ケトプロフェン／β−シクロデキストリン／ＤＭＳＯ
操作パラメーター：
【表１５】
2005512621.tif 000018
【０１１７】
粉末分析プロトコール：溶解試験
操作条件：
２６０ｎｍの波長におけるＵＶ分析
【０１１８】
対照溶液：
Ｈ２Ｏにて標準液を調製する。吸光度＜２が維持されていることを確認する。
【０１１９】
分析の実施：
活性成分５０ｍｇ当量の粉末量を加えることにより、５０ｍＬのケトプロフェン水溶液を調製する。
【０１２０】
この粉末を、３７±０．５℃のウォーターバス中スターラーバーを用いて磁気攪拌して溶かす。
【０１２１】
攪拌２時間後にこの懸濁液２ｍＬを採取し、０．４５μｍ  Ｇｅｌｍａｎ  ＧＨＰフィルターにて濾過する。
【０１２２】
ＵＶ分析を行い、吸光度が２未満であることを確認する。そうでなければ、希釈を行う。
【０１２３】
得られた結果：
溶解２時間後、測定された濃度（μｇ／ｍＬ）は以下の通りである。
【０１２４】
【表１６】
2005512621.tif 000019
【０１２５】
実施例１１：オメプラゾール／γ−シクロデキストリン／ＤＭＳＯ：
操作パラメーター：
【表１７】
2005512621.tif 000020
【０１２６】
粉末分析プロトコール：溶解試験
操作条件：
２９６ｎｍの波長におけるＵＶ分析
【０１２７】
対照溶液：
Ｈ２Ｏ中、１％（ｍ／Ｖ）ラウリル硫酸ナトリウムの標準液を調製する。吸光度＜２が維持されていることを確認する。
【０１２８】
分析の実施：
活性成分５０ｍｇ当量の粉末量を加えることで、５０ｍＬのオメプラゾール水溶液を調製する。
この粉末を、３７±０．５℃のウォーターバス中でスターラーバーを用いて磁気攪拌して溶かす。
攪拌２時間後にこの懸濁液２ｍＬを採取し、０．４５μｍ  Ｇｅｌｍａｎ  ＧＨＰフィルターにて濾過する。
ＵＶ分析を行い、吸光度が２未満であることを確認する。そうでなければ、希釈を行う。
【０１２９】
得られた結果：
溶解２時間後、測定された濃度（μｇ／ｍＬ）は以下の通りである。
【０１３０】
【表１８】
2005512621.tif 000021
【０１３１】
実施例１２：オメプラゾール／γ−シクロデキストリン／ＤＭＦ：
操作パラメーター
【表１９】
2005512621.tif 000022
【０１３２】
粉末分析プロトコール：溶解試験
操作条件：
２９６ｎｍの波長におけるＵＶ分析
【０１３３】
対照溶液：
Ｈ２Ｏ中、１％（ｍ／Ｖ）ラウリル硫酸ナトリウムの標準液を調製する。吸光度＜２が維持されていることを確認する。
【０１３４】
分析の実施：
有効成分５０ｍｇ当量の粉末量を加えることで、５０ｍＬのオメプラゾール水溶液を調製する。
この粉末を、３７±０．５℃のウォーターバス中、スターラーバーを用いて磁気攪拌して溶かす。
攪拌２時間後にこの懸濁液２ｍＬを採取し、０．４５μｍ  Ｇｅｌｍａｎ  ＧＨＰフィルターにて濾過する。
ＵＶ分析を行い、吸光度が２未満であることを確認する。そうでなければ、希釈を行う。
【０１３５】
得られた結果：
溶解２時間後、測定された濃度（μｇ／ｍＬ）は以下の通りである。
【０１３６】
【表２０】
2005512621.tif 000023
【０１３７】
実施例１３：シンバスタチン／γ−シクロデキストリン／ＤＭＳＯ：
操作パラメーター
【表２１】
2005512621.tif 000024
【０１３８】
粉末分析プロトコール：溶解試験
操作条件：
２４８ｎｍの波長でのＵＶ分析
【０１３９】
対照溶液：
Ｈ２Ｏ中、１％（ｍ／Ｖ）ラウリル硫酸ナトリウムの標準液を調製する。吸光度＜２が維持されていることを確認する。
【０１４０】
分析の実施：
活性成分５０ｍｇ当量の粉末量を加えることにより、５０ｍＬのシンバスタチン水溶液を調製する。
この粉末を、３７±０．５℃のウォーターバス中でスターラーバーを用いて磁気攪拌して溶かす。
攪拌２時間後にこの懸濁液２ｍＬを採取し、０．４５μｍ  Ｇｅｌｍａｎ  ＧＨＰフィルターにて濾過する。
ＵＶ分析を行い、吸光度が２未満であることを確認する。そうでなければ、希釈を行う。
【０１４１】
得られた結果：
溶解２時間後、測定された濃度（μｇ／ｍＬ）は以下の通りである。
【０１４２】
【表２２】
2005512621.tif 000025
【０１４３】
実施例１４：シンバスタチン／γ−シクロデキストリン／ＤＭＦ：
操作パラメーター：
【表２３】
2005512621.tif 000026
【０１４４】
粉末分析プロトコール：溶解試験
操作条件：
２４８ｎｍの波長でのＵＶ分析
【０１４５】
対照溶液：
Ｈ２Ｏ中、１％（ｍ／Ｖ）ラウリル硫酸ナトリウムの標準液を調製する。吸光度＜２が維持されていることを確認する。
【０１４６】
分析の実施：
活性成分５０ｍｇ当量の粉末量を加えることで、５０ｍｌのシムバスタチン水溶液を調製する。
この粉末を、３７±０．５℃のウォーターバス中でスターラーバーを用いて磁気攪拌して溶かす。
攪拌２時間後にこの懸濁液２ｍＬを採取し、０．４５μｍ  Ｇｅｌｍａｎ  ＧＨＰフィルターにて濾過する。
ＵＶ分析を行い、吸光度が２未満であることを確認する。そうでなければ、希釈を行う。
【０１４７】
得られた結果：
溶解２時間後、測定された濃度（μｇ／ｍＬ）は以下の通りである。
【０１４８】
【表２４】
2005512621.tif 000027
【０１４９】
実施例１５：テルフェナジン／β−シクロデキストリン／ＤＭＳＯ：
操作パラメーター：
【表２５】
2005512621.tif 000028
【０１５０】
粉末分析プロトコール：溶解試験
操作条件：
２５９ｎｍの波長でのＵＶ分析
【０１５１】
対照溶液：
Ｈ２Ｏ中、１％（ｍ／Ｖ）ラウリル硫酸ナトリウムの標準液を調製する。吸光度＜２が維持されていることを確認する。
【０１５２】
分析の実施：
活性成分５０ｍｇ当量の粉末量を加えることで、５０ｍＬのテルフェナジン水溶液を調製する。
この粉末を、３７±０．５℃のウォーターバス中でスターラーバーを用いて磁気攪拌して溶かす。
攪拌２時間後にこの懸濁液２ｍＬを採取し、０．４５μｍ  Ｇｅｌｍａｎ  ＧＨＰフィルターにて濾過する。
ＵＶ分析を行い、吸光度が２未満であることを確認する。そうでなければ、希釈を行う。
【０１５３】
得られた結果：
溶解２時間後、測定された濃度（μｇ／ｍＬ）は以下の通りである。
【０１５４】
【表２６】
2005512621.tif 000029
【０１５５】
実施例１６：テルフェナジン／β−シクロデキストリン／ＤＭＦ：
操作パラメーター：
【表２７】
2005512621.tif 000030
【０１５６】
粉末分析プロトコール：溶解試験
操作条件：
２５９ｎｍの波長でのＵＶ分析
【０１５７】
対照溶液：
Ｈ２Ｏ中、１％（ｍ／Ｖ）ラウリル硫酸ナトリウムの標準液を調製する。吸光度＜２が維持されていることを確認する。
【０１５８】
分析の実施：
活性成分５０ｍｇ当量の粉末量を加えることにより、５０ｍＬのテルフェナジン水溶液を調製する。
この粉末を、３７±０．５℃のウォーターバス中でスターラーバーを用いて磁気攪拌して溶かす。
攪拌２時間後にこの懸濁液２ｍＬを採取し、０．４５μｍ  Ｇｅｌｍａｎ  ＧＨＰフィルターで濾過する。
ＵＶ分析を行い、吸光度が２未満であることを確認する。そうでなければ、希釈を行う。
得られた結果：
溶解２時間後、測定された濃度（μｇ／ｍＬ）は以下の通りである。
【０１５９】
【表２８】
2005512621.tif 000031
【０１６０】
実施例１７：テルフェナジン／メチル−β−シクロデキストリン／エタノール：
操作パラメーター：
【表２９】
2005512621.tif 000032
【０１６１】
粉末分析プロトコール：溶解試験
操作条件：
２５９ｎｍの波長でのＵＶ分析
【０１６２】
対照溶液：
Ｈ２Ｏ中、１％（ｍ／Ｖ）ラウリル硫酸ナトリウムの標準液を調製する。吸光度＜２が維持されていることを確認する。
【０１６３】
分析の実施：
活性成分５０ｍｇ当量の粉末量を加えることにより、５０ｍＬのテルフェナジン水溶液を調製する。
この粉末を、３７±０．５℃のウォーターバス中でスターラーバーを用いて磁気攪拌して溶かす。
攪拌２時間後にこの懸濁液２ｍＬを採取し、０．４５μｍ  Ｇｅｌｍａｎ  ＧＨＰフィルターで濾過する。
ＵＶ分析を行い、吸光度が２未満であることを確認する。そうでなければ、希釈を行う。
【０１６４】
得られた結果：
溶解２時間後、測定された濃度（μｇ／ｍＬ）は以下の通りである。
【０１６５】
【表３０】
2005512621.tif 000033
【０１６６】
下表は総ての試験分子について得られた種々の溶解結果（μｇ／ｍＬ）をまとめたものである。
【０１６７】
【表３１】
2005512621.tif 000034
【０１６８】
これらの結果からして、水性媒体中で活性成分の最も高い溶解度が得られる方法は、活性成分および多孔質支持体（有利にはシクロデキストリン）の混合、分子拡散、および乾燥の工程を組み合わせたものであることが明らかである。この特性は種々の活性成分、種々のタイプのシクロデキストリン、および種々の溶媒について認められる。
【図面の簡単な説明】
【０１６９】
【図１】常法による結晶化および乾燥の後に得られた製品Ｆ１２５１１の１０００倍のＳＥＭ写真を示す。
【図２】常法による結晶化および乾燥の後に得られた製品Ｆ１２５１１の２０００倍のＳＥＭ写真を示す。
【図３】ＳＡＳ法による共沈殿並びに、製品Ｆ１２５１１およびγ−シクロデキストリンのＤＭＳＯ溶液の超臨界ＣＯ２による洗浄の後に得られた複合体の１０００倍のＳＥＭ写真を示す。
【図４】ＳＡＳ法による共沈殿並びに、製品Ｆ１２５１１およびγ−シクロデキストリンＤＭＳＯの溶液の超臨界ＣＯ２による洗浄の後に得られた複合体の２０００倍のＳＥＭ写真を示す。
【図５】水の存在下、超臨界媒体中における１６時間の分子拡散の後の、図３および４と同じ複合体の１０００倍のＳＥＭ写真を示す。
【図６】水の存在下、超臨界媒体中における１６時間の分子拡散の後の、図３および４と同じ複合体の２０００倍のＳＥＭ写真を示す。
【図７】イヌにおける、使用製剤（本発明の方法によるγ−シクロデキストリンと相互作用させた化合物または結晶化させた製品Ｆ１２５１１）による製品Ｆ１２５１１のバイオアベラビリティーのヒストグラムを示す。
【図１】
2005512621.tif 000035
【図２】
2005512621.tif 000036
【図３】
2005512621.tif 000037
【図４】
2005512621.tif 000038
【図５】
2005512621.tif 000039
【図６】
2005512621.tif 000040
【図７】
2005512621.tif 000041
【国際調査報告】
2005512621.tif 000042
2005512621.tif 000043
2005512621.tif 000044
2005512621.tif 000045
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