(57)【要約】式（Ｉ）：Ｃ’−Ｌ−Ｔ（式中、Ｃ’はカンプトセシン基であり、Ｌは結合部分であり、Ｔはタキソイド基である。）で表される化合物およびその薬学的に許容可能な塩。当該化合物は、特に、治療を必要とする被験体の癌の治療、細胞分化の誘導、および細胞有糸分裂の阻害に有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下式Ｉで表される化合物または薬学的に許容可能なその塩。
Ｃ’−Ｌ−Ｔ    （Ｉ）
｛式中、
Ｃ’は下式IIで表されるカンプトセシン基であり、
【化１】
2005535587.tif 000013
（式中、
Ｒ1は、Ｈ、アルキル、アルデヒド、カルボニル、アルコキシ、アルキルアリール、ヒドロキシアルキル、ハロアルキル、アミノアルキル、ジアルキルアミノ、ジアルキルアミノアルキル、シクロアミノアルキル、アリール、アリールオキシ、Ｃ−グリカール、ニトロ、シアノ、およびＯ−グリコシルからなる群から選択され、
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5は、それぞれ独立して、Ｈ、アミノ、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、アルキルチオール、アルキルアミノ、アミノアルキル、ジ（アルキル）アミノ、シクロアミノアルキル、アミノアルコキシ、アリール、アリールオキシ、Ｃ−グリカール、シアノ、メチレンジオキシ、ホルミル、ニトロ、ハロ、アジド、アミノ、ヒドラジノ、アミノ窒素原子を介してＡ環に結合した任意の２０種の標準的なアミノ酸、ＳＲ8、ＮＲ8Ｒ8、またはＯ−グリコシルからなる群から選択されるか、または、Ｒ3とＲ4とで５員環または６員環の芳香環またはジオキソラン環を形成するか、または、Ｒ2とＲ3、Ｒ3とＲ4、またはＲ4とＲ5が結合し、
但し、Ｒl、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5のうちの１つは、Ｌと共有結合するものとし、
Ｒ6は、Ｈ、ハロ、アルキル、アルコキシ、アルキルアリール、ヒドロキシアルキル、またはハロアルキルであり、
Ｒ7は、アルキル、アルキルアリール、ヒドロキシアルキル、またはアリールであり、
Ｒ8は、独立して、Ｈ、アルキル、アルキルアリール、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、アシル、またはアリールからなる群から選択される。）
Ｌは結合部分であり、
Ｔは、下式IIIで表されるタキソイド基である。
【化２】
2005535587.tif 000014
（式中、
Ｒ11は、Ｈ、アルキル、アルコキシ、アミノアルキル、およびアシルからなる群から選択され、
Ｒ12およびＲ13は、それぞれ独立して、Ｈ、アルキル、アリール、アルコキシ、アルキルアリール、ヒドロキシアルキル、ハロアルキル、アミノアルキル、ジアルキルアミノ、ジアルキルアミノアルキル、シクロアミノアルキル、アリールオキシ、ニトロ、シアノ、およびハロからなる群から選択される。）｝
【請求項２】
Ｒ1がホルミル基である請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ6がハロゲンである請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒllがアシル基であり、Ｒ12およびＲl3が、それぞれ独立して、フェニル基である請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ11がＨであり、Ｒ12がｔ−ブトキシ基であり、Ｒ13がフェニル基である請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｌが、前記タキソイド基の７位と前記カンプトセシン基のＲ1とにおける下式IVで表される結合部分である請求項１に記載の化合物。
−Ｘ−Ｒ21−Ａ−    （IV）
（式中、
Ｘは電子求引基であり、
Ｒ21は、アルキレンおよびアリールアルキレンからなる群から選択され、
Ａは、アミノおよびイミンからなる群から選択される。）
【請求項７】
前記結合部分が、エステル結合およびイミン結合を含む請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
前記結合部分が下式Ｖを有する請求項１に記載の化合物。
【化３】
2005535587.tif 000015
（式中、
Ｒ21は、アルキレンおよびアリールアルキレンからなる群から選択され、
Ｒ22は、Ｈおよびアルキルからなる群から選択される。）
【請求項９】
前記結合部分が脂肪族アミノ酸を含む請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
前記結合部分が芳香族アミノ酸を含む請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｌが、式−Ｌa−Ｌb−で表される結合部位である請求項１に記載の化合物。
｛式中、
Ｌbは、存在するか存在せず、
ＬaおよびＬbは、それぞれ独立して、下式からなる群から選択される。
【化４】
2005535587.tif 000016
（式中、ｎは０〜６であり、ａは０〜３であり、ｂは０〜３であり、Ｒ25は、アルキレン、アルケニル、およびアリーレニルからなる群から選択される。）｝
【請求項１２】
以下の構造を有する請求項１の化合物。
【化５Ａ】
2005535587.tif 000017
【化５Ｂ】
2005535587.tif 000018
【請求項１３】
薬学的に許容可能なキャリア中に請求項１に記載の化合物を含有する薬学的処方物。
【請求項１４】
前記キャリアが水性キャリアである請求項１に記載の薬学的処方物。
【請求項１５】
癌を治療する方法であって、治療を必要とする被験体に、治療有効量の請求項１に記載の化合物を投与するステップを含む方法。
【請求項１６】
前記癌が、小細胞肺癌、精巣癌、リンパ腫、白血病、食道癌、胃癌、結腸癌、乳癌、卵巣癌、中枢神経系癌、肝臓癌、および前立腺癌からなる群から選択される請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記癌が乳癌である請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
前記癌が卵巣癌である請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
前記癌が前立腺癌である請求項１５に記載の方法。
【請求項２０】
前記癌がカンプトセシンに耐性を示す請求項１５に記載の方法。
【請求項２１】
前記癌がパクリタキセルに耐性を示す請求項１５に記載の方法。
【請求項２２】
前記癌が、カンプトセシンおよびパクリタキセルの両方に耐性を示す請求項１５に記載の方法。
【請求項２３】
細胞分化を誘導する方法であって、癌細胞に、分化有効量の請求項１に記載の化合物を接触させるステップを含む方法。
【請求項２４】
前記接触させるステップをインビボで行う請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記接触させるステップをインビトロで行う請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
細胞有糸分裂を阻害する方法であって、細胞に、有糸分裂阻害量の請求項１に記載の化合物を接触させるステップを含む方法。
【請求項２７】
前記接触させるステップをインビボで行う請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記接触させるステップをインビトロで行う請求項２６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［連邦政府による資金提供の記述］
本発明は、国立衛生研究所の助成金番号HL51818の政府支援によって行った。政府は、本発明に一定の権利を有する。
【０００２】
［技術分野］
本発明は、カンプトセシンおよびそのアナログとトキソイド類との抱合体(conjugate)、これを含有する薬学的処方物、ならびに特に乳癌、卵巣癌、および前立腺癌などの癌治療のための抗有糸分裂薬および抗腫瘍薬としてのその使用方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
図１に記載のパクリタキセル（１）および図１に記載のカンプトセシン（２）は共に現在臨床で使用されている植物由来の抗腫瘍薬である(M.C.Wani et al.,Taxus brevifolia,1971,93,2325-2327およびM.E.Wall et al.,J.Am.Chem.Soc.,1966,88,3888-3890)。パクリタキセルは、1992年に進行性卵巣癌治療用としておよび1994年に乳癌治療用としてＦＤＡに承認された。
【０００４】
パクリタキセルの抗腫瘍効果の機構は、抗有糸分裂性であり、詳細には、チューブンリンの微小管への不可逆的アセンブリを促進する(P.B.Schiff et al.,Nature,1979,277,665-667)。カンプトセシンもまたＤＮＡトポイソメラーゼＩ(DNA topoI)の阻害に寄与し得る有意な抗腫瘍活性を有する(Y.H.Hsiang et al.,J.Biol.Chem.,1985,260,14873-14878およびJ.C.Wang,Biochim.Biophys.Acta.,1987,909,1-9)。両化合物は、より有用な化学療法薬を開発する目的で、継続的に構造を修飾されてきている。しかし、パクリタキセルおよびカンプトセシンは共に強力な抗腫瘍活性を有するが、最近の報告でこれらの薬物での治療により多くの望ましくない副作用や多剤耐性を頻繁に示すことが示された。したがって、副作用がより少なく且つ種々の腫瘍クラスに対して改良された活性を有する新規の抗癌薬の開発が不可欠でありつづけている。
【０００５】
以前に、本発明者らは、哺乳動物ＤＮＡトポイソメラーゼＩおよびIIのインヒビターとしての２つの４’−Ｏ−デメチルエピポドフィロトキシン−カンプトセシン抱合体（図１に記載の３および４）の合成および評価を報告した(K.F.Bastow et al.,Bioorg.Med.Chem.,1997,5,1481-1488)。最も活性の高い抱合体は、ｔｏｐｏＩおよびIIの阻害構成要素の両方と同様に細胞成長を阻害した。これらの抱合体は、いくつかの癌細胞系（ＨＯＰ−６２白血病、ＳＷ−６２０結腸癌、ＭＣＦ／ＡＤＲアドリアマイシン耐性乳癌、およびＡ−４９８腎臓癌が含まれる）におけるエピポドフィロトキシンよりも細胞傷害性が高い。ある抱合体は、エトポシドよりも（２）ヌードマウスでのヒトＫＢ（鼻咽頭）およびＤＵ−１４５（前立腺）腫瘍細胞成長に対して活性が高かった。現在、パクリタキセルとダウノルビシンまたはクロラムブシルとの抱合体を記載したいくつかの報告が存在する(A.K.Kar et al.,Bioorg.Med.Chem.Let.,2000,10,261-264およびM.D.Wittman et al;,Bioorg Med.Chem.Let.,2001,11,811-814)。しかし、ＤＮＡトポイソメラーゼインヒビター−パクリタキセルハイブリッドは調査されていない。
【発明の開示】
【０００６】
本発明の実施形態によれば、本発明は、下式Ｉで表される化合物または薬学的に許容可能なその塩に関する。
Ｃ’−Ｌ−Ｔ    （Ｉ）
｛式中、
Ｃ’は式IIで表されるカンプトセシン基であり、
【化１】
2005535587.tif 000002
（式中、
Ｒ1は、Ｈ、アルキル、アルデヒド、カルボニル、アルコキシ、アルキルアリール、ヒドロキシアルキル、ハロアルキル、アミノアルキル、ジアルキルアミノ、ジアルキルアミノアルキル、シクロアミノアルキル、アリール、アリールオキシ、Ｃ−グリカール、ニトロ、シアノ、およびＯ−グリコシルからなる群から選択され、
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5は、それぞれ独立して、Ｈ、アミノ、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、アルキルチオール、アルキルアミノ、アミノアルキル、ジ（アルキル）アミノ、シクロアミノアルキル、アミノアルコキシ、アリール、アリールオキシ、Ｃ−グリカール、シアノ、メチレンジオキシ、ホルミル、ニトロ、ハロ、アジド、アミノ、ヒドラジノ、アミノ窒素原子を介してＡ環に結合した任意の２０種の標準的なアミノ酸、ＳＲ8、ＮＲ8Ｒ8、またはＯ−グリコシルからなる群から選択されるか、または、Ｒ3とＲ4とで５員環または６員環の芳香環またはジオキソラン環を形成するか、または、Ｒ2とＲ3、Ｒ3とＲ4、またはＲ4とＲ5が結合し、
但し、Ｒl、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5のうちの１つは、Ｌと共有結合するものとし、
Ｒ6は、Ｈ、ハロ、アルキル、アルコキシ、アルキルアリール、ヒドロキシアルキル、またはハロアルキルであり、
Ｒ7は、アルキル、アルキルアリール、ヒドロキシアルキル、またはアリールであり、
Ｒ8は、独立して、Ｈ、アルキル、アルキルアリール、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、アシル、またはアリールからなる群から選択される。）
Ｌは結合部分であり、
Ｔは、式IIIで表されるタキソイド基であり、
【化２】
2005535587.tif 000003
（式中、
Ｒ11は、Ｈ、アルキル、アルコキシ、アミノアルキル、およびアシルからなる群から選択され、
Ｒ12およびＲ13は、それぞれ独立して、Ｈ、アルキル、アリール、アルコキシ、アルキルアリール、ヒドロキシアルキル、ハロアルキル、アミノアルキル、ジアルキルアミノ、ジアルキルアミノアルキル、シクロアミノアルキル、アリールオキシ、ニトロ、シアノ、およびハロからなる群から選択される。）｝
【０００７】
本発明の他の実施形態によれば、本発明は、薬学的に許容可能なキャリア中に上記式Ｉの化合物を含む薬学的処方物に関する。
【０００８】
本発明のさらに他の実施形態によれば、本発明は、癌を治療する方法であって、治療を必要とする被検体に、治療有効量の上記式Ｉの化合物を投与するステップを含む方法に関する。治療することができる癌の例には、小細胞肺癌、精巣癌、リンパ腫、白血病、食道癌、胃癌、結腸癌、乳癌、卵巣癌、中枢神経系癌、肝臓癌、および前立腺癌が含まれるが、これらに限定されない。
【０００９】
本発明のさらに他の実施形態によれば、本発明は、細胞分化を誘導する方法であって、（インビボまたはインビトロで）癌細胞に分化有効量の上記式Ｉの化合物を接触させるステップを含む方法に関する。
【００１０】
本発明の他の実施形態によれば、本発明は、細胞有糸分裂を阻害する方法であって、（インビボまたはインビトロで）細胞に有糸分裂阻害量の上記式Ｉの化合物を接触させるステップを含む方法に関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明は、ここに、本明細書中に記載の本発明をさらに例示する添付の図面に関して以後により完全に説明する。しかし、本発明を異なる形態で具体化することができ、本明細書中に記載の実施形態に制限されると解釈すべきではない。むしろ、この開示が十分且つ完全であり、当業者に本発明の範囲が完全に伝達されるように、これらの実施形態を提供する。
【００１２】
本発明の説明で使用する専門用語は、特定の実施形態を説明することのみを目的とし、本発明の制限を意図しない。本発明の説明および添付の特許請求の範囲で使用されるように、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、他で明確に示さない限り、複数形も含むことが意図される。
【００１３】
他で定義しない限り、本明細書中で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明に属する当業者によって共通に理解されるものと同一の意味を有する。本明細書中に記載の全ての刊行物、特許出願、特許、および他の引例は、その全体が本明細書中で参考として組み込まれる。
【００１４】
本明細書中で使用される、用語「アルキル」または「低級アルキル」は、Ｃ１〜Ｃ４、Ｃ６またはＣ８アルキル（直鎖でも分岐鎖でもよく、且つ飽和でも不飽和でも良い）をいう。
【００１５】
用語「シクロアルキル」は、本明細書に記載のように特定され、典型的にはＣ３、Ｃ４、またはＣ５〜Ｃ６またはＣ８シクロアルキルである。
【００１６】
本明細書中で使用される、用語「アルケニル」または「低級アルケニル」は、同様に、Ｃ１〜Ｃ４アルケニルをいい、本明細書中で使用される、用語「アルコキシ」または「低級アルコキシ」は、同様に、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシをいう。
【００１７】
本明細書中で使用される、用語「アルコキシ」は、直鎖または分岐鎖、飽和または不飽和のオキソ−炭化水素鎖をいう（例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、およびｔ−ブトキシが含まれる）。
【００１８】
本明細書中で使用される、用語「アリール」は、フェニルおよびナフチルなどのＣ３〜Ｃ１０芳香環基をいい、トリルなどの置換アリール基が含まれる。
【００１９】
本明細書中で使用される、「ハロ」は、クロロ、フルオロ、ブロモ、またはヨードなどの任意のハロゲン基をいう。
【００２０】
本明細書中で使用される、用語「ヒドロキシアルキル」は、Ｃ１〜Ｃ４直鎖または分岐鎖水酸基置換アルキル（すなわち、−ＣＨ2ＯＨ、−（ＣＨ2）2ＯＨなど）をいう。
【００２１】
本明細書中で使用される、用語「アミノアルキル」は、Ｃ１〜Ｃ４直鎖または分岐鎖アミノ置換アルキルをいい、用語「アミノ」は、ＮＲ’Ｒ’’基（式中、Ｒ’およびＲ’’は、独立して、Ｈまたは上記定義の低級アルキルから選択される）（すなわち、ＮＨ2、−ＮＨＣＨ3、−Ｎ（ＣＨ3）2など）をいう。
【００２２】
本明細書中で使用される、用語「オキシアルキル」は、Ｃ１〜Ｃ４酸素置換アルキル（すなわち、−ＯＣＨ3）をいい、本明細書中で使用される、用語「オキシアリール」は、Ｃ３〜Ｃ１０酸素置換芳香環基をいう。
【００２３】
本明細書中で使用される、「治療する」または「治療」は、（例えば、１つまたは複数の症状において）患者の病態の改善、疾患の進行の遅延、または疾患発症の予防もしくは遅延など、罹患患者に利益を与えるあらゆる種類の治療をいう。
【００２４】
本明細書中で使用される、「薬学的に許容可能な」は、化合物または組成物が、疾患の重症度および治療の必要性に照らして過度の副作用を起こすことなく本明細書中に記載の治療を達成するための被験体への投与に適切であることを意味する。
【００２５】
本発明は、主に、ヒト被験体の治療に関するが、獣医学的目的のために他の動物被験体（すなわち、哺乳動物、鳥類）の治療に使用することもできる。哺乳動物が好ましく、ヒトが特に好ましい。
【００２６】
一般に、本発明の活性化合物は、下式Ｉで表される構造を有する。
Ｃ’−Ｌ−Ｔ      （Ｉ）
（式中、Ｃ’はカンプトセシンおよびそのアナログを含むカンプトセシン基であり、Ｔはトキソイド基であり、Ｌは共有結合基である。）本明細書中に記載の活性化合物には、その薬学的に許容可能な塩が含まれる。本発明には、それぞれの右旋性または左旋性の純粋な調製物ならびにその混合物（ラセミ混合物またはエナンチオマーが豊富な混合物）が含まれる。上記式Ｉと組み合わせて使用することができる種々の基を、以下でさらに考察する。
【００２７】
［Ａ．カンプトセシン］
任意のカンプトセシンまたはカンプトセシンアナログを使用して、本発明を実施することができる。カンプトセシンは公知であり、公知の技術にしたがって生成することができる。一般に、Merck Index,Monograph No.1783.(12th ed.1996)を参照のこと。
【００２８】
本発明を実施するために使用することができるカンプトセシンアナログの例には、Wall et al.に付与された米国特許第4,894,456号；Miyasaka,et al.に付与された米国特許第4,399,282号；Miyasaka,et al.に付与された米国特許第4,399,276号；Vishnuvajjala,et al.に付与された米国特許第4,943,579号；欧州特許出願第0 321 122 A2号；Miyasaka,et al.に付与された米国特許第4,473,692号；欧州特許出願第0 325 247 A2号；Takeda Chemical Industriesによって提出された欧州特許出願第0 556 585 A2号；Wall,et al.に付与された米国特許第4,981,968号；Wall,et al.に付与された米国特許第5,049,668号；Comins,et al.に付与された米国特許第5,162,532号；Wall,et alに付与された米国特許第5,180,722号；Comins,et al.に付与された米国特許第5,200,524号；Comins,et al.に付与された米国特許第5,459,269号；Fang et al．に付与された米国特許第5,162,532号；およびAngelucci et al.に付与された米国特許第6,328,953号（本明細書中で引用した全ての特許の引例の開示全体が本明細書中で参考として組み込まれる）に記載のものが含まれるが、これらに限定されない。このような化合物は、一般に、下式IIで表される。
【化３】
2005535587.tif 000004
（式中、
Ｒ1は、Ｈ、アルキル、アルデヒド、カルボニル、アルコキシ、アルキルアリール、ヒドロキシアルキル、ハロアルキル、アミノアルキル、ジアルキルアミノ、ジアルキルアミノアルキル、シクロアミノアルキル、アリール、アリールオキシ、Ｃ−グリカール、ニトロ、シアノ、およびＯ−グリコシルからなる群から選択され、
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5は、それぞれ独立して、Ｈ、アミノ、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、アルキルチオール、アルキルアミノ、アミノアルキル、ジ（アルキル）アミノ、シクロアミノアルキル、アミノアルコキシ、アリール、アリールオキシ、Ｃ−グリカール、シアノ、メチレンジオキシ、ホルミル、ニトロ、ハロ、アジド、アミノ、ヒドラジノ、アミノ窒素原子を介してＡ環に結合した任意の２０種の標準的なアミノ酸、ＳＲ8、ＮＲ8Ｒ8、またはＯ−グリコシルからなる群から選択されるか、または、Ｒ3とＲ4とで５員環または６員環の芳香環またはジオキソラン環を形成するか、または、Ｒ2とＲ3、Ｒ3とＲ4、またはＲ4とＲ5が結合し、
但し、Ｒl、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5のうちの１つは、Ｌと共有結合するものとし、
Ｒ6は、Ｈ、ハロ、アルキル、アルコキシ、アルキルアリール、ヒドロキシアルキル、またはハロアルキルであり、
Ｒ7は、アルキル、アルキルアリール、ヒドロキシアルキル、またはアリールであり、
Ｒ8は、独立して、Ｈ、アルキル、アルキルアリール、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、アシル、またはアリールからなる群から選択される。）
【００２９】
［Ｂ．タキソイド基］
任意のタキソイド基を使用して本発明を実施することができる。タキソイド基は公知であり、公知の技術にしたがって生成することが得きる。一般に、Merck Index,Monograph No.1783.(12th ed.1996)を参照のこと。
【００３０】
好ましいタキサンは、微小管形成の増強に必要であることが当分野で公知の置換基を有するものである（例えば、パクリタキセルおよびドセタキセル）。パクリタキセルおよびドセタキセルの構造は、当分野で公知である。本発明の実施で使用することができるタキソイド基の例には、Kingston et al.に付与された米国特許第5,614,645号；Chattopadhyay et alに付与された同第6,028,206号；Kingston et al.に付与された同第5,411,984号；およびMagnusに付与された同第5,508,447号（本明細書中で引用した全ての特許の引例の開示全体が本明細書中で参考として組み込まれる）に記載のものが含まれるが、これらに限定されない。本発明の実施で使用することができるタキソイド基は、下式IIIで表される、またはその薬学的に許容可能な塩である。
【化４】
2005535587.tif 000005
（式中、
Ｒ11は、Ｈ、アルキル、アルコキシ、アミノアルキル、およびアシルからなる群から選択され、
Ｒ12およびＲ13は、それぞれ独立して、Ｈ、アルキル、アリール、アルコキシ、アルキルアリール、ヒドロキシアルキル、ハロアルキル、アミノアルキル、ジアルキルアミノ、ジアルキルアミノアルキル、シクロアミノアルキル、アリールオキシ、ニトロ、シアノ、およびハロからなる群から選択される。）
【００３１】
［Ｃ．結合部分］
２つの官能部分の共有結合の形成に使用することができる結合基は当分野で公知である。当業者に明白なように、使用される特定の結合基は、共有結合性抱合体の作製に使用される特定の合成方法に依存する。適切な結合基により、カンプトセシン基（Ｃ’）とタキソイド基（Ｔ）とが結合して代謝的に安定な抱合体（すなわち、Ｃ’基とＴ基との結合を妨害するほど立体障害は強くない抱合体）が得られる。
【００３２】
一般に、結合部分は、脂肪族の基、芳香族の基、または脂肪族と芳香族とが混合した基（例えば、アルキル、アリール、アルキルアリールなど）を含むことができ、１つまたは複数のアミノ酸またはヘテロ原子（Ｎ、Ｏ、Ｓなど）を含む。例えば、結合基Ｌは、式−Ｌa−Ｌb−で表される化合物であり得る。
｛式中、
Ｌbは存在するか存在せず、
ＬaおよびＬbはそれぞれ独立して、下式からなる群から選択される。
【化５Ａ】
2005535587.tif 000006
【化５Ｂ】
2005535587.tif 000007
（式中、ｎは０〜６であり、ａは０〜３であり、ｂは０〜３であり、Ｒ25はアルキレン、アルケニル、およびアリーレニルからなる群から選択される。）｝
【００３３】
結合基は、タキソイド基の７位とカンプトセシン基のＲ1における下式IVで表される結合部分も含み得る。
−Ｘ−Ｒ21−Ａ−    （IV）
（式中、
Ｘは電子求引基であり、
Ｒ21は、アルキレンおよびアリールアルキレンからなる群から選択され、
Ａは、アミノおよびイミンからなる群から選択される。）
【００３４】
結合基は、式Ｖを有する結合部分も含み得る。：
【化６】
2005535587.tif 000008
（式中、
Ｒ21は、アルキレンおよびアリールアルキレンからなる群から選択され、
Ｒ22は、Ｈおよびアルキルからなる群から選択される。）
【００３５】
［Ｄ．特定の化合物］
本発明の範囲内の特定の化合物には、以下のものが含まれるが、これらに限定されない。
【化７Ａ】
2005535587.tif 000009
【化７Ｂ】
2005535587.tif 000010
【００３６】
［Ｅ．化合物の合成］
本発明の化合物の合成を、使用した特定の結合化学に応じて決定することができる。以下の一般的な合成方法を変形したものは、当業者に容易に明らかであり、本発明の範囲内と考えられる。一般に、ベンゼン中でタキソイド化合物と共にカンプトセシン化合物を還流することによって式Ｉの抱合体を調製することができる。
【００３７】
特定の例として、上記の抱合体１６〜２０を、乾燥ベンゼン中で７−ホルミルカンプトセシンおよびタキソイドを溶解させることによって調製することができる。次いで、溶液を、４Åの分子篩で一晩還流する。混合物を濾過し、真空蒸発させて粗パクリタキセル−カンプトセシン抱合体を得る。生成物を、溶離液としてＣＨＣｌ3−ＭｅＯＨ（１：１）を使用したSephadex LH-20カラムクロマトグラフィによって精製する。
【００３８】
［Ｆ．薬学的に許容可能な塩］
本明細書中で使用される、用語「活性成分」には、化合物の薬学的に許容可能な塩が含まれる。薬学的に許容可能な塩は、本発明の化合物の所望の生物活性を保持し、且つ望ましくない毒物学的効果を与えない塩である。このような塩の例は、（ａ）無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸など）で形成された酸付加塩および有機酸（例えば、酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、グルコン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パルミチン酸、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、およびポリガラクツロン酸など）で形成された塩、ならびに（ｂ）塩素、臭素、およびヨウ素などの元素陰イオンから形成された塩である。
【００３９】
あるいは、本発明のための組成物の調製に使用される活性成分は、活性成分の薬学的に許容可能な遊離塩基の形態であり得る。そのような化合物の遊離塩基は、塩より溶解性が低いので、遊離塩基化合物は、活性成分を標的領域により長期間徐放させるために使用される。溶液にならない標的領域中に存在する活性成分は生理学的応答の誘導に利用可能でないが、段階的に溶液になる生物学的に利用可能な薬物の持続性薬剤として役立つ。
【００４０】
［Ｇ．薬学的処方物］
本発明の式Ｉのカンプトセシンとタキソイドとの化合物は、薬学的活性成分として有用であり、バルクの形態(bulk form)で使用することができる。しかし、より好ましくは、これらの化合物を、投与のための薬学的処方物に処方する。任意の多数の適切な薬学的処方物を、本発明の化合物の投与のための賦形剤として使用することができる。
【００４１】
式Ｉの化合物を、種々の治療条件での投与のために処方することができる。本発明の薬学的処方物の製造では、式Ｉの化合物およびその生理学的に許容可能な塩またはそのいずれかの酸誘導体（以後、「活性化合物」という）を、典型的には、特に許容可能なキャリアと混合する。キャリアは、勿論、処方物中の任意の他の成分と適合することができるという意味で許容可能でなければならず、患者に有毒であってはならない。キャリアは、固体でも液体でもその両方でもよく、好ましくは、単位用量処方物（例えば、０．５重量％から９５重量％までの活性化合物を含み得る錠剤）として化合物を使用して処方する。１つまたは複数の各活性化合物を本発明の処方物に組み込むことができ、必要に応じて１種類以上の副成分も含む成分を混合することから実質的になる、あらゆる周知の調剤技術によって調製することができる。
【００４２】
本発明の処方物には、経口、直腸、局所、口内（例えば、舌下）、非経口（例えば、皮下、筋肉内、経皮、または静脈内）、および経皮投与に適切なものが含まれるが、任意の所与の場合におけるほとんどの適切な経路は、治療を受ける病態の性質および重症度ならびに使用される特定の活性化合物の性質に依存する。
【００４３】
経口投与に好適な製剤は、それぞれが所定量の活性化合物を含有する分離した単位、たとえば、カプセル、カシェ剤、ロゼンジ、または錠剤；粉末または顆粒として；水性または非水性液体中の溶液または懸濁液として；または水中油乳剤または油中水乳剤として提供することができる。活性化合物と適切なキャリア（上記の１つまたは複数の副成分を含み得る）とを組み合わせる工程を含む任意の適切な製薬学的方法によって、このような処方物を調製することができる。
【００４４】
一般に、活性化合物と液体もしくは微粉化した固体キャリアまたはその両方とを均一且つ十分に混合し、必要に応じて得られた混合物を成形することによって、本発明の処方物を調製する。例えば、任意選択的に１つまたは複数の副成分を含む活性化合物を含む粉末または顆粒の圧縮または成形によって、錠剤を調製することができる。適切な機械により、任意選択的に結合剤、潤滑剤、不活性希釈剤、および／または界面活性剤／分散剤と混合した粉末または顆粒などの流動性形態の化合物を圧縮することによって、圧縮錠を調製することができる。適切な機械により、不活性液体結合剤で加湿した粉末化合物を成形することによって、圧縮錠を作製することができる。
【００４５】
口内（舌下）投与に適切な処方物には、味をつけた基剤（通常、スクロースおよびアカシアまたはトラガカント）中に活性化合物を含むロゼンジならびにゼラチンおよびグリセリンまたはスクロースおよびアカシアなどの不活性基剤中に化合物を含むトローチが含まれる。
【００４６】
非経口投与に適切な本発明の処方物は、活性化合物の滅菌水性調製物を都合よく含み、調製物は意図するレシピエントの血液と等張であることが好ましい。これらの調製物は、皮下、静脈内、筋肉内、または皮内への注入によって投与することができる。このような調製物を、化合物の水またはグリシン緩衝液との混合および得られた溶液の滅菌および血液と等張にすることによって都合よく調製することができる。
【００４７】
直腸投与に適切な処方物を、単位用量坐剤として提供することが好ましい。活性化合物と１つまたは複数の従来の固体キャリア（例えば、ココアバター）とを混合し、その後に得られた混合物を成形することによって、これらを調製することができる。
【００４８】
皮膚への局所投与に適切な処方物は、軟膏、クリーム、ローション、ペースト、ゲル、スプレー、エアゾール、またはオイルの形態をとることが好ましい。使用することができるキャリアには、ワセリン、ラノリン、ポリエチレングリコール、アルコール、経皮増強剤、およびその２つまたはそれ以上の組み合わせが含まれる。
【００４９】
レシピエントの表皮との長期間の十分な接触の保持に適合する個別のパッチとして経皮投与に適切な処方物を提供することができる。経皮投与に適切な処方物をイオン導入によって送達させることもでき（例えば、Pharmaceutical Research 3(6):318(1986)を参照のこと）、典型的には、活性化合物の任意選択的に緩衝化された水溶液の形態をとる。適切な処方物は、クエン酸またはｂｉｓ／ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ６）またはエタノール／水を含み、０．０１〜０．２Ｍの有効成分を含む。
【００５０】
［Ｈ．使用方法］
式Ｉの化合物に加えて、本発明はまた、有用な治療方法を提供する。例えば、本発明は、抗腫瘍活性の誘導方法を提供する。より詳細には、本発明は、ＤＮＡトポイソメラーゼＩの阻害方法を提供する。本方法は、インビトロまたはインビボでのトポイソメラーゼを阻害有効量の式Ｉの化合物と接触させるステップを含む。トポイソメラーゼＩの阻害は、腫瘍または癌細胞の成長の有用な阻害手段である。
【００５１】
本発明はまた、細胞分化の誘導方法を提供する。本方法は、癌細胞を分化有効量の式Ｉの化合物に接触させるステップを含む。分化させることができる癌細胞には、小細胞肺癌、精巣癌、リンパ腫、白血病、食道癌、胃癌、結腸癌、乳癌、卵巣癌、中枢神経系癌、肝臓癌、および前立腺癌由来の細胞が含まれる。
【００５２】
本発明はまた、癌を罹患した患者における癌の治療方法を提供する。本方法は、被験体に癌治療有効量の式Ｉの化合物を投与するステップを含む。本方法は、種々の癌細胞（小細胞肺癌、精巣癌、リンパ腫、白血病、食道癌、胃癌、結腸癌、乳癌、卵巣癌、中枢神経系癌、肝臓癌、および前立腺癌が含まれるが、これらに限定されない）の治療に有用である。
【００５３】
本発明の方法を使用して治療することができる被験体は典型的にはヒト被験体であるが、本発明の方法は、他の被験体、特に哺乳動物被験体（ウマ、ウシ、イヌ、ウサギ、鳥類、およびヒツジなどが含まれるが、これらに限定されない）に対する獣医学的目的に有用であり得る。上記のように、本発明は、任意の適切な投与経路（経口、直腸、局所、口内、非経口、筋肉内、皮内、静脈内、および経皮への投与が含まれるが、これらに限定されない）のための薬学的に許容可能なキャリア中に式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む薬学的処方物を提供する。
【００５４】
任意の特定の化合物の治療有効投薬量は、化合物ごと、患者ごとでいくらか変化し、患者の病態および送達経路に依存する。一般的提案として、約０．１〜約５０ｍｇ／ｋｇの投薬量は治療的に有効であり、経口および／またはエアゾール投与には潜在的にさらにより高い投薬量を使用する。より高いレベルで有毒な場合は静脈内投薬量をより低いレベル（約１０ｍｇ／ｋｇまでなど）に制限することができ、全ての重量は活性基剤の重量に基づいて計算される（塩を使用する場合を含む）。典型的には、静脈内または筋肉内への投与のために約０．５ｍｇ／ｋｇから約５ｍｇ／ｋｇまでの投薬量を使用する。経口投与のために約１０ｍｇ／ｋｇから約５０ｍｇ／ｋｇまでの投薬量を使用することができる。
【００５５】
本発明を、以下の非限定的な実施例でより詳細に説明する。
【実施例】
【００５６】
［Ａ．材料と方法］
パクリタキセル（１）を、Yung Shin Pharmaceutical Ind.Co.,Ltd.,Taiwanから得た。（２）からの７−ホルミルカンプトセシン（５）の調製（図１に記載）を、Bastow et al.(1997)Bioorg.Med.Chem.5:1481に報告されているように行った。全ての試薬および溶媒は試薬グレードであるか、使用前に標準的な方法によって精製した。内部標準としてＴＭＳを使用したVarian Gemini-300分光計によって1ＨＮＭＲスペクトルを得た。化学シフト（δ値）および結合定数（Ｊ値）を、それぞれｐｐｍおよびＨｚで与える。JASCO DIP-1000デジタル旋光計を使用して旋光度を測定した。シリカゲル６０（Merck 230-400メッシュ）でカラムクロマトグラフィを行い、予めシリカゲルをコーティングしたアルミニウムプレート(Aldrich,Inc.)を使用して薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）を行った。Atlantic Microlab Inc.,Norcross,GAによって元素分析を行った。Ｎ−Ｃｂｚ−β−アラニン(Sigma)を除いてベンジルクロロホルメートを使用したBerger et al.(1954)J.Am.Chem.Soc.76:5552に記載の標準的な方法を使用して、適切なアミノ酸からＮ−Ｃｂｚ−アミノ酸を調製した。Guy et al.(1996)Chem.Biol.3:1021に記載のように、２’−Ｏ−Ｃｂｚ−パクリタキセルを合成した。
【００５７】
２’−Ｏ−Ｃｂｚ−パクリタキセルの一般的な７−Ｏ−アシル化手順。２’−Ｏ−Ｃｂｚ−パクリタキセルおよび４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）ピリジン（１．０当量）を含む乾燥ジクロロメタン（５ｍＬ）溶液を、窒素下で適切なＮ−Ｃｂｚ−アミノ酸（５．０当量）およびジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、５．０当量）で室温で一晩処理した。混合物を、ジクロロメタン（５ｍＬ）で希釈し、濾過して尿素沈殿物を除去した。溶媒を真空蒸発させ、得られた残渣を、ｎ−ヘキサン−ＥｔＯＡｃ溶媒系（２：１から１：１）を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィによって精製して単独生成物として所望の２’−Ｏ−Ｃｂｚ−７−Ｏ−アシルパクリタキセルを得た。
【００５８】
２’−Ｏ−Ｃｂｚ−７−（Ｎ−Ｃｂｚ−β−アラニル）−パクリタキセル（６）。収率90.5%(59.3mgの２’−Ｏ−Ｃｂｚ−パクリタキセルから出発).;白色粉末,[α]D-44.7°(c0.76,CHCl3);1HNMR(CDCl3):δ1.16(3H,s),1.22(3H,s),1.81(3H,s),2.00(3H,s),2.06(3H,s),2.46(3H,s),3.46(2H,m),3.96(1H,d,J=7.0Hz),4.20(1H,d,J=8.5Hz),4.33(1H,d,J=8.5Hz),4.95(1H,d,J=8.5Hz),5.11(2H,m),5.17(2H,m),5.46(1H,d,J=2.5Hz),5.64(1H,dd,J=7.2,9.8Hz),5.70(1H,d.J=7.0Hz),5.77(1H,t,J=5.1Hz),5.98(1H,d,J=9.0Hz),6.26(1H,t,J=9.3Hz),6.29(1H,s),6.94(1H,d,J=9.0Hz),7.30-7.42(バンド,17H),7.44-7.54(3H,m),7.62(1H,m),7.74(2H,d,J=8.5Hz),8.13(2H,d,J=8.5Hz);FAB-MS m/z1193[M+1]+。全てのデータは以前に報告された文献の値と一致する。
【００５９】
２’−Ｏ−Ｃｂｚ−７−（Ｎ−Ｃｂｚ−４−アミノブチロイル）−パクリタキセル（７）。収率97.2%(69.1mgの２’−Ｏ−Ｃｂｚ−パクリタキセルから出発);白色粉末,[α]D-31.5°(c0.46,CHCl3);1HNMR(CDCl3):δ1.16(3H,s),1.21(3H,s),1.81(3H,s),1.99(3H,s),2.09(3H,s),2.45(3H,s),3.19-3.40(2H,m),3.94(1H,d.J=6.9Hz),4.20(1H,d,J=8.5Hz),4.33(1H,d,J=8.5Hz),4.95(1H,d,J=8.5Hz),5.08(2H,s),5.17(2H,m),5.45(1H,d,J=2.4Hz),5.57(1H,dd,J=6.9,10.2Hz),5.71(1H.d,J=6.9Hz),5.73(1H,t,J=5.1Hz),5.98(1H,dd,J=2.4,9.0Hz),6.24(1H,s),6.26(1H,t,J=9.3Hz),6.92(1H,d,J=9.0Hz),7.27-7.46(バンド,16H),7.48-7.54(3H,m),7.62(1H,m),7.73(2H,d,J=8.5Hz),8.13(2H,d,J=8.5Hz);ESI-MS m/z1230[M+Na]+。
【００６０】
２’−Ｏ−Ｃｂｚ−７−（Ｎ−Ｃｂｚ−６−アミノヘキサノイル）−パクリタキセル（８）。収率94.7%(78.3mgの２’−Ｏ−Ｃｂｚ−パクリタキセルから出発);白色粉末,[α]D-44.0°(c1.04,CHCl3);1HNMR(CDCl3):δ1.16(3H,s),1.21(3H,s),1.81(3H,s),2.00(3H,s),2.13(3H,s),2.45(3H,s),3.19(2H,dd,J=6.3,12.9Hz),3.96(1H,d,J=6.6Hz),4.19(1H,d,J=8.5Hz),4.32(1H,d,J=8.5Hz),4.96(1H,d,J=8.7Hz),5.08(2H,s),5.16(2H,m),5.45(1H,d,J=2.4Hz),5.60(1H,dd,J=7.2,10.5Hz),5.71(1H,d,J=6.9Hz),5.98(1H,dd,J=3.0,9.5Hz),6.26(1H,t,J=9.OHz),6.28(1H,s),6.95(1H,d,J=9.3Hz),7.26-7.43(バンド,16H),7.46-7.53(3H,m),7.61(1H,m),7.73(2H,d,J=8.5Hz),8.13(2H,d,J=8.5Hz);FAB-MS m/z1236[M+1]+。
【００６１】
２’−Ｏ−Ｃｂｚ−７−（Ｎ−Ｃｂｚ−４−メチルアミノベンゾイル）−パクリタキセル（９）。収率89.1%(70.4mgの２’−Ｏ−Ｃｂｚ−パクリタキセルから出発);白色粉末,[α]D-28.2°(c0.99,CHCl3);1HNMR(CDCl3):δ1.19(3H,s),1.21(3H,s),1.95(3H,s),1.97(3H,s),2.04(3H,s),2.48(3H,s),4.05(1H,d,J=6.9Hz),4.24(1H,d,J=8.5Hz),4.37(1H,d,J=8.5Hz),4.42(1H,d,J=6.0Hz),5.01(1H,d,J=8.4Hz),5.10-5.22(6H,m),5.48(1H,d,J=2.7Hz),5.74-5.81(2Hm),5.99(1H,dd,J=2.7,9.2Hz),6.27(1H,t,J=9.0Hz),6.41(1H,s),6.97(1H,d,J=9.3Hz),7.29-7.42(バンド,19H),7.46-7.54(3H,m),7.62(1H,m),7.74(2H,d,J=8.5Hz),7.89(2H,d,J=8.4Hz).8.15(2H,d,J=8.5Hz);ESI-MS m/z1277[M+Na]+。
【００６２】
２’−Ｏ−Ｃｂｚ−７−（Ｎ−Ｃｂｚ−４−（４−アミノフェニル）−ブチロイル）−パクリタキセル（１０）。収率83.8%(66.8mgの２’−Ｏ−Ｃｂｚ−パクリタキセルから出発;白色粉末,[α]D-46.5°(c0.40,CHCl3);1HNMR(CDCl3):δ1.17(3H,s),1.21(3H,s),1.81(3H,s),2.01(3H,s),2.13(3H,s),2.45(3H,s),3.96(1H,d,J=6.9Hz),4.19(1H,d,J=8.5Hz),4.33(1H,d,J=8.5Hz),4.96(1H,d,J=8.1Hz),5.12-5.21(4H,m),5.46(1H,d,J=2.7Hz),5.60(1H,dd,J=7.2,10.5Hz),5.70(1H,d,J=7.2Hz),5.98(1H,dd,J=2.7,9.2Hz),6.26(1H,t,J=9.0Hz),6.29(1H,s),6.66(1H,s),6.94(1H,d,J=9.3Hz),7.12(2H,d,J=8.7Hz),7.26-7.42(バンド,19H),7.46-7.53(3H,m),7.61(1H,m),7.73(2H,d,J=8.5Hz),8.13(2H,d,J=8.5Hz);FAB-MS m/z1306[M+Na]+。
【００６３】
ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）保護基の一般的な除去手順。タキソイドのメタノール溶液（図２に記載の６〜１０）を、窒素下で５０重量％の５％活性炭担持型パラジウム（DegussaE101型NO/W）で処理し、水素下（４０ｐｓｉ）に置いた。混合物をＰａｒｒ装置で７時間震盪し、内容物を濾過して触媒を除去し、真空下で蒸発乾燥させて所望の脱保護化合物１１〜１５（図２に示す）を得た。
【００６４】
７−Ｏ−β−アラニルパクリタキセル（１１）。収率81.2%(47.2mgの6から出発);白色フィルム,[α]D-39.1°(c0.34,MeOH3,1HNMR(CD3OD):δ1.10(3H,s),1.16(3H,s),1.78(3H,s),1.88(3H,s),2.16(3H,s),2.37(3H,s),3.12-3.22(2H,m),3.90(1H,d,J=7.0Hz),4.20(2H,dd,J=7.0,14.0Hz),4.73(1H,d,J=6.0Hz),5.00(1H,m),5.64(3H,m),6.15(1H,brt,J=6.2Hz),6.23(1H,s),7.28-7.68(バンド,11H),7.85(2H,d,J=8.5Hz),8.10(2H,d,J=8.5Hz);FAB-MS m/z925[M+1]+。全てのデータは報告された文献の値と一致する。
【００６５】
７−Ｏ−（４−アミノブチロイル）パクリタキセル（１２）。収率92.7%(59.1mgの7から出発);白色フィルム,[α]D-29.7°(c0.37,MeOH);1HNMR(CD3OD):δ1.11(3H,s),1.16(3H,s),1.78(3H,s),1.87(3H,s),2.16(3H,s),2.37(3H,s),3.01(2H,t,J=7.5Hz),3.90(1H,d,J=6.9Hz),4.20(2H,brt,J=8.7Hz),4.75(1H,d,J=5.4Hz),5.00(1H,d,J=9.3Hz),5.59-5.66(3H,m),6.15(1H,brt,J=6.2Hz),6.21(1H,s),7.26-7.69(バンド,11H),7.85(2H,d,J=8.5Hz),8.10(2H,d,J=8.5Hz);ESI-MS m/z939[M+l]+。
【００６６】
７−Ｏ−（６−アミノヘキサノイル）パクリタキセル（１３）。収率81.1%(67.1mgの8から出発);白色フィルム,[α]D-26.0°(c0.53,MeOH);1HNMR(CD3OD):δ1.11(3H,s),1.16(3H,s),1.77(3H,s),1.88(3H,s),2.14(3H,s),2.37(3H,s),2.92(2H,m),3.90(1H,d,J=6.9Hz),4.20(2H,m),4.75(1H,d,J=5.4Hz),4.99(1H,d,J=9.0Hz),5.58(1H,dd,J=7.8,10.5Hz),5.60-5.70(2H,m),6.15(1H,brt,J=.6.2Hz),6.24(1H,s),7.26-7.72(バンド,11H),7.85(2H,d,J=8.5Hz),8.10(2H,d,J=8.5Hz);FAB-MS m/z968[M+1]+。
【００６７】
７−Ｏ−（４−メチルアミノベンゾイル）パクリタキセル（１４）。収率96.7%(58.1mgの9から出発);白色フィルム,[α]D-12.9°(c0.38,MeOH);1HNMR(CD3OD):δ1.13(3H,s),1.15(3H,s),1.91(9H,s),2.40(3H,s),3.90(1H,d,J=6.9Hz),4.18-4.30(4H,m),4.76(1H,d,J=5.7Hz),5.05(1H,m),5.65(1H,d,J=5.lHz),570(1H,d,J=7.2Hz),5.76(1H,dd,J=7.2,10.5Hz),6.16(1H,brt,J=6.2Hz),6.35(1H,s),7.28-7.71(バンド,13H),7.85(2H,d,J=8.5Hz),7.94(2H,d,J=8.5Hz),8.12(2H,d,J=8.5Hz);ESI-MS m/z1009[M+Na]+。
【００６８】
７−Ｏ−（４−（４−アミノフェニル）ブチロイル）パクリタキセル（１５）。収率81.3%(67.1mgの10から出発);白色フィルム,[α]D-45.3°(c0.15,MeOH);1HNMR(CD3OD):δ1.11(3H,s),1.14(3H,s),1.77(3H,s),1.89(3H,s),2.09(3H,s),2.36(3H,s),2.46(2H,t,J=5.7Hz),3.89(1H,d,J=6.9Hz),4.19(2H,brs),4.75(1H,d,J=5.4Hz),4.97(1H,d,J=9.6Hz),5.56(1H,dd,J=7.8,10.5Hz),5.63-5.66(2H,m),6.15(1H,brt,J=6.2Hz),6.26(1H,s),6.67(2H,d,J=8.4Hz),6.93(2H,d,J=8.4Hz),7.28(1H,m),7.38-7.68(バンド,10H),7.84(2H,d,J=8.5Hz),8.10(2H,d,J=8.5Hz);FAB-MS m/z1038[M+Na]+。
【００６９】
パクリタキセル−カンプトセシン抱合体（１６〜２０）の一般的な合成手順。タキソイド（１１−１５）および７−ホルミルカンプトセシン（１．２当量）の乾燥ベンゼン溶液（１０ｍＬ）を、４Å分子篩に一晩還流した。混合物を濾過し、真空蒸発させて粗パクリタキセル−カンプトセシン抱合体（図２に記載の１６〜２０）を得た。溶離液としてＣＨＣｌ3−ＭｅＯＨ（１：１）を使用したSephadexLH-20カラムクロマトグラフィによって生成物を精製した。抱合体１６−２０の元素分析データを以下の表１に示す。
【００７０】
抱合体１６：収率85.4%[14.2mg(0.015mmol)の11から出発];淡黄色無定形固体,[α]D-33.9°(c0.18,CHCl3),1HNMR(CDCl3):δ1.02(3H,t,J=7.5Hz),1.18(3H,s),1.25(3H,s),1.80(3H,s),1.85(3H,s),2.19(3H,s),2.37(3H,s),3.92(1H,d,J=6.6Hz),4.14および4.29(それぞれ1H,d,J=8.4Hz),4.80(1H,brs),4.90(1H,d,J=9.3Hz),5.21(1H,d,J=16.5Hz),5.40(2H,s),5.58-5.70(3H,m),5.80(1H,dd,J=8.9,2.1Hz),6.19(1H,t,J=9.0Hz),6.24(1H,s),7.27-7.86(16H,m),8.09(2H,d,J=7.2Hz),8.27(1H,d,J=8.4Hz),8.45(1H,d,J=8.4Hz),9.32(1H,s);FAB-MS m/z(rel.int.)1284[M+1]+(35),1224(15),940(51),449(77),289(98),240(100).分析値(C71H72N4O18):理論値:C,67.18;H,5.72.実測値C,67.12;H,5.69。
【００７１】
抱合体１７：収率60.7%[27.0mg(0.029mmol)の12から出発];淡黄色無定形固体,[α]D-17.2°(c0.47,CHCl3),1HNMR(CDCl3):δ1.04(3H,t,J=7.5Hz),1.16(3H,s),1.20(3H,s),1.81(3H,s),1.83(3H,s),2.04(3H,s),2.38(3H,s),3.81-3.93(4H,m),4.18および4.31(それぞれ1H,d,J=8.4Hz),4.81(1H,dd,J=6.2,2.7Hz),4.93(1H,d,J=8.7Hz),5.30(1H,d,J=16.5Hz),5.50(2H,s),5.58(1H,dd,J=10.2,6.9Hz),5.67(1H,d,J=6.9Hz),5.74(1H,d,J=16.5Hz),5.80(1H,dd,J=8.9,2.4Hz),6.17(1H,t,J=9.0Hz),6.23(1H,s),7.14(1H,d,J=9.3Hz),7.30-7.87(15H,m),8.10(2H,d,J=7.2Hz),8.28(1H,d,J=8.4Hz),8.50(1H,d,J=8.4Hz),9.32(1H,s);ESI-MS m/z1320[M+Na]+.分析値(C72H74N4O18):理論値:C,67.38;H,5.81.実測値C,67.30;H,5.79。
【００７２】
抱合体１８：収率69.3%[27.8mg(0.029mmol)の13から出発];淡黄色無定形固体,[α]D-41.3°(c0.15,CHCl3),1HNMR(CDCl3):δ1.03(3H,t,J=7.5Hz),1.15(3H,s),1.25(3H,s),1.57(3H,s),1.76(3H,s),2.10(3H,s),2.28(3H,s),3.80(1H,d,J=6.6Hz),4.13および4.27(それぞれ1H,d,J=8.4Hz),4.79(1H,d,J=2.7Hz),4.85(1H,d,J=8.1Hz),5.31(1H,d,J=16.5Hz),5.46(1H,dd,J=10.2,7.2Hz),5.55(2H,s),5.61(1H,d,J=6.9Hz),5.74(2H,m),6.07(1H,t,J=9.0Hz),6.12(1H,s),7.18(1H,d,J=9.3Hz),7.32-7.88(15H,m),8.08(2H,d,J=7.2Hz),8.30(1H,d,J=8.4Hz),8.52(1H,d,J=8.4Hz),9.30(1H,s);ESI-MS m/z1348[M+Na]+.分析値(C74H78N4O18):理論値:C,67.77;H,5.99.実測値C,67.69;H,5.98。
【００７３】
抱合体１９：収率64.3%[28.2mg(0.029mmol)の14から出発];淡黄色無定形固体,[α]D-8.0°(c0.40,CHCl3),1HNMR(CDCl3):δ1.02(3H,t,J=7.5Hz),1.19(3H,s),1.25(3H,s),1.95(3H,s),2.17(3H,s),2.40(3H,s),2.63(3H,s),4.00(1H,d,J=6.3Hz),4.23および4.33(それぞれ1H,d,J=8.1Hz),4.82(1H,d,J=2.7Hz),4.98(1H,d,J=8.7Hz),5.14(2H,brs),5.28(1H,d,J=16.2Hz),5.52(2H,s),5.67-5.76(2H,m),5.81(1H,dd,J=8.7,2.1Hz),6.19(1H,t,J=9.0Hz),6.37(1H,s),7.21-7.96(20H,m),8.12(2H,d,J=7.2Hz),8.27(1H,d,J=8.4Hz),8.42(1H,d,J=8.4Hz),9.39(1H,s);ESI-MS m/z1396[M+Na]+.分析値(C76H74N4O18):理論値:C,68.56;H,5.60.実測値C,68.40;H,5.56。
【００７４】
抱合体２０：収率55.1%[23.3mg(0.023mmol)の15から出発];淡黄色無定形固体,[α]D-11.5°(c0.27,CHCl3),1HNMR(CDCl3):δ1.06(3H,t,J=7.5Hz),1.18(3H,s),1.25(3H,s),1.84(3H,s),1.85(3H,s),2.17(3H,s),2.39(3H,s),3.94(1H,d,J=6.6Hz),4.20および4.33(それぞれ1H,d,J=8.4Hz),4.81(1H,brs),4.96(1H,d,J=9.3Hz),5.33(1H,d,J=16.5Hz),5.58(1H,m),5.70(1H,d,J=5.7Hz),5.73(2H,s),5.81(1H,d,J=5..7Hz),6.19(1H,t,J=9.0Hz),6.26(1H,s),7.08(1H,d,J=9.3Hz),7.27-7.80(18H,m),7.88(1H,t,J=7.2Hz),8.12(2H,d,J=7.2Hz),8.33(1H,d,J=8.4Hz),8.56(1H,d,J=8.4Hz),9.55(1H,s);ESI-MS m/z1368[M+Na]+.分析値(C78H78N4O18):理論値:C,68.91;H,5.78.実測値C,68.86;H,5.77。
【００７５】
【表１】
2005535587.tif 000011
【００７６】
ヒト腫瘍細胞複製アッセイ。ＫＢ（類表皮癌、ＣＬ１７）およびＫＢ−ＣＰＴと呼ばれるカンプトセシン耐性亜系統、ＨＣＴ−８（回盲腺癌、ＣＣＬ  ２４４）、ＭＣＦ−７（乳癌、ＨＴＢ  ２２）、ＰＣ−３（前立腺癌、ＣＲＬ  １４３５）、１Ａ９（卵巣癌）および変異β−チューブリンを有するＰＴＸ１０と呼ばれるパクリタキセル耐性亜系統が含まれる固形腫瘍株の制限パネル(limited panel)に対する細胞成長のインヒビターとしての化合物を試験した。薬物耐性細胞系は、Y.C.Cheng博士(Yale University,New Haven,CT)およびP.Giannakakou博士(NIH,Bethesda,MD)から提供を受けた。細胞系を、２５ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ、２％ＮａＨＣＯ3、１０％（ｖ／ｖ）ウシ胎児血清、および１００μｇ／ｍＬカナマイシンを補足したＲＰＭＩ−１６４０培地での成長に適合させた。培養物を、３７℃の５％ＣＯ2雰囲気下に維持した。Rubinstein et al.(1990)J.Natl.Cancer Inst.82:1113に記載のスルホローダミンＢマイクロタイタープレートアッセイを使用して、細胞複製のインヒビターとしての化合物を評価した。Prizm(GraphPad software,San Diego,CA)を使用してデータに適合させた用量反応グラフ由来のＥＤ50値（３日間の連続曝露後にコントロールと比較して細胞系複製を５０％阻害する化合物の濃度）を挿入した。
【００７７】
ＤＮＡトポイソメラーゼＩ活性アッセイ。酵素触媒プラスミドＤＮＡ弛緩のインヒビターとして化合物を試験した。反応物は、０．５μｇのｐＢＲ３２２ＤＮＡおよび０．５ＵヒトＤＮＡトポイソメラーゼＩ(TopoGen,Columbus,OH)、５０μＭの化合物、および以前にKrishnan et al.(2000)Anticancer Drug Design 1D:255に記載の緩衝成分を含んでいた。３７℃で１５分後、プロテイナーゼＫ（０．１ｍｇ／ｍＬ）および１％（ｗ／ｖ）ＳＤＳの添加によって反応を停止させた。５０℃で１時間後、０．５ｍｇ／ｍＬ臭化エチジウムを含む標準的なＴＢＥ緩衝液を含む１％（ｗ／ｖ）アガロースゲルにてＤＮＡを分離し、polaroid667フィルムを使用して紫外線下で撮影した。
【００７８】
［Ｂ．結果と考察］
本研究の目的は、複数の抗腫瘍活性または改良された薬物耐性細胞に対する活性を示す抗腫瘍薬をパクリタキセル（１）とカンプトセシン（２）誘導体との抱合体によって調製することができ、その抗腫瘍効果がどのようにして抱合体に影響を受けるかどうかを調査することであった。本発明者らは、本明細書中に、細胞傷害薬およびＤＮＡ  ｔｏｐｏ  Ｉインヒビターとしてのパクリタキセル−カンプトセシン抱合体の合成および評価を報告する。
【００７９】
結合部分の選択は、タキサン核中のＣ−７エステル基の公知の耐性(Nicolaou et al.(1994)Angew.Chem.Intl.Ed.Engl.106:15,Guy et al.(1996)Chem.Biol.3:1021)および７置換カンプトセシンアナログの最近のＳＡＲ研究(Wang et al.(1994)Bioorg.Med.Chem.2:1397,Wang et al.(1990)J.Med.Chem.33:2660)に基づいていた。しかし、パクリタキセル側鎖のＣ−２’水酸基は、通常、最も反応性が高く、Ｃ−２’が保護された場合のみで選択的にＣ−７をアシル化することができる。Ｃ−７アミノ官能化パクリタキセル（１１〜１５）の調製にNicolaou et al.(1994)Angew.Chem.Intl.Ed.Engl.106:15の手順を使用した。したがって、２’−カルボキシベンジル（Ｃｂｚ）−パクリタキセルを、ＤＣＣおよびＤＭＡＰを含むＣＨ2Ｃｌ2の存在下でＮ−Ｃｂｚ−アミノ酸で処理して、高収率で６〜１０を得た。その後の水素化による両Ｃｂｚ基の還元的除去により、所望のＣ−７アミノ官能化パクリタキセル（１１〜１５）を得た。スキーム１に示すように、ベンゼン中の５つのパクリタキセル−カンプトセシン抱合体（１６〜２０）を、１１〜１５の７−ホルミル−カンプトセシン（５）との抱合によって得た。化合物１６〜２０は、シリカゲル上で不安定であるが（親化合物が再生された）、Sephadex LH-20カラムクロマトグラフィによって精製することができる。全抱合体（１６〜２０）は、その1Ｈ−ＮＭＲスペクトルのδ９．３０〜．５５で特徴的なイミンプロトンシグナルを示した。
【００８０】
Rubinstein et al.(1990)J.Natl.Cancer Inst.82:1113に記載のように、５つの抱合体（１６〜２０）を、ヒト腫瘍細胞系（ＨＴＣＬ）のパネル（パクリタキセル耐性誘導体およびカンプトセシン耐性誘導体が含まれる）に対する細胞傷害性について試験した。比較のために示したパクリタキセル（１）およびカンプトセシン（２）の値を含む結果を表２に示す。
【００８１】
【表２】
2005535587.tif 000012
【００８２】
ＭＣＦ−７（乳癌）細胞およびＨＣＴ−８（結腸腺癌）細胞に対する抱合体の活性プロフィールを、図３のパネルＡおよびパネルＢにそれぞれ示す。全ての抱合体は、２（カンプトセシン）と比較して活性が改良された腫瘍細胞複製の強力なインヒビターであり、カンプトセシン耐性ＫＢ−ＣＰＴ細胞に対して２よりも高い活性も示した。図３に示すように、１６〜１８は、１（パクリタキセル）および２よりもＨＣＴ−８細胞複製に対して活性が有意に高かった。パクリタキセルとカンプトセシン部分との間のリンカーの構造と活性の関係（ＳＡＲ:structure-activity relationship）を考慮すると、パクリタキセルとカンプトセシンが脂肪族アミノ酸によって結合した１６〜１８は、パクリタキセルとカンプトセシンが芳香族アミノ酸によって結合した１９および２０よりも良好な細胞傷害活性を示すことが示された。
【００８３】
Krishnan et al.(2000)Anticancer Drug Design 15:255に記載の様式でヒトDNA topo I活性のインヒビターとしての抱合体１６〜２０をインビトロでも試験した（図４）。このアッセイでは、全抱合体は２よりも有意に強力でなかった。化合物１６、１８、および１９は、５０Ｍで限界活性を示し、１７および２０は不活性であった。ＤＮＡ弛緩を阻害する抱合体は無かった。
【００８４】
薬物耐性細胞系複製に対する活性によると、抱合体は単純に「弱いタキサン」として作用するが、特にＭＣＦ−７およびＨＣＴ−８に対する活性スペクトル（図３）はこの結論と一致しないと結論付けることができる。後者の結果は、１および２と比較して、１６〜１８の細胞傷害プロフィールが非常に異なることを示す。さらに、DNA topo I阻害アッセイの結果は、２と異なり、抱合体はインビトロでDNA topo I阻害性ではないことを示すので、抱合体によって新規の作用機構が達成されたようである。
【００８５】
上記は本発明の例示であり、本発明の制限を意図しない。本発明は、以下の特許請求の範囲によって定義され、特許請求の範囲の等価物が本発明に含まれるべきである。
【図面の簡単な説明】
【００８６】
【図１】本発明に関する種々の化合物前駆体の構造を示す図である。
【図２】本発明の化合物の調製のための合成経路の実施形態を示す図である。
【図３】ＭＣＦ−７（パネルＡ）およびＨＣＴ−８細胞複製（パネルＢ）に対する化合物の活性プロフィールを示す図である。
【図４】ヒトＤＮＡトポイソメラーゼＩインヒビターとしての本発明の化合物を示す臭化エチジウム含有アガロースゲルを示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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