(57)【要約】本発明は、すりつぶした豆を臨界超過二酸化炭素により抽出する工程を含む、より優れた製法により得られる精製されたアミラーゼ阻害剤を提供する。本発明はまた、このより優れた製法により得られるアミラーゼ阻害剤を、減量が必要な哺乳動物に効果的な量、投与することを含む、該哺乳動物の減量を促す方法を提供する。さらに本発明は、このより優れた製法により得られるアミラーゼ阻害剤を、糖尿病の哺乳動物に効果的な量、投与することを含む、該哺乳動物の食後耐糖能を改善させる方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の工程を含む方法を用いて得られる、精製されたアミラーゼ阻害剤。
(i)白インゲン豆をすりつぶし、荒くすりつぶした豆を形成する；
(ii)減圧下、荒くすりぶした豆を臨界超過二酸化炭素にさらして不純物を抽出し、豆
固形分を得る；
(iii)豆固形分を脱イオン水でインキュベートし、第一固体成分と第一液体成分を含
む第一豆懸濁液を得る；
(iv)第一固体成分を豆懸濁液から分離し、第一液体成分を残す；
(v) 第一固体成分を脱イオン水でインキュベートし、第二固体成分と第二液体成分を
含む第二豆懸濁液を得る；
(vi)第二固体成分を第二豆懸濁液から分離し、第二液体成分を残す；
(vii) 第一および第二液体成分を混合し、最終溶液を得る；
(viii) 最終溶液を熱交換し、濃縮された豆の抽出物を得る；
(ix) 濃縮された豆の抽出物を乾燥させる；
これにより精製されたアミラーゼ阻害剤を得る。
【請求項２】
前記方法の工程(iv)および(vi)の分離を、圧搾ろ過器を通してろ過することにより行う、請求項１記載の精製されたアミラーゼ阻害剤。
【請求項３】
前記方法の工程(iv)および(vi)の分離を遠心分離により行う、請求項１記載の精製されたアミラーゼ阻害剤。
【請求項４】
前記方法の工程(ix)の乾燥を、濃縮豆抽出物を噴霧乾燥することにより行って乾燥豆抽出物を形成し、そして方法がさらに以下の工程を含む、請求項１記載の精製されたアミラーゼ阻害剤。
(x)前記乾燥豆抽出物を再水和して再水和豆抽出物を形成する；および、
(xi)再水和豆抽出物を凍結乾燥させる。
【請求項５】
前記方法の工程(ix)の乾燥を凍結乾燥により行う、請求項１記載の精製されたアミラーゼ阻害剤。
【請求項６】
前記方法の工程(ii)の抽出を温度約48.9℃から93.3℃（120°Fから 200°F）で約二時間行う、請求項１記載の精製されたアミラーゼ阻害剤。
【請求項７】
前記方法の工程(ii)の抽出を温度約57.2℃から71.1℃（135°Fから 160°F）で約二時間行う、請求項１記載の精製されたアミラーゼ阻害剤。
【請求項８】
前記方法の工程(ii)の抽出を温度約62.8℃（145°F）で約二時間行う、請求項１記載の精製されたアミラーゼ阻害剤。
【請求項９】
工程(x)の乾燥豆抽出物の約40-70%を再水和させる、請求項４記載の精製されたアミラーゼ阻害剤。
【請求項１０】
工程(x)の乾燥豆抽出物の約60%を再水和させる、請求項４記載の精製されたアミラーゼ阻害剤。
【請求項１１】
請求項１記載の精製されたアミラーゼ阻害剤を、減量が必要な哺乳動物に効果的な量、投与することを含む、該哺乳動物の減量を促す方法。
【請求項１２】
哺乳動物がヒトである、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
請求項１記載の精製されたアミラーゼ阻害剤を、食後耐糖能の改善が必要な哺乳動物に効果的な量、投与することを含む、該哺乳動物の食後耐糖能を改善させる方法。
【請求項１４】
哺乳動物がヒトである、請求項１３記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
本発明の背景技術
アミラーゼは、人間の摂取物中の炭水化物の主なソース、具体的にはデンプン、の分解を担う酵素である。デンプンの消化は口の中で始まり、ここで、唾液に含まれるアルファアミラーゼがデンプンのグルコシド結合を加水分解する。
十分に噛んだ食べ物が胃に到達するころには、デンプンの平均鎖長は、数千あったものから、８グルコース単位未満にまで減少している。胃の中の酸性度が、唾液に含まれていたアルファアミラーゼを非活性化させる。デンプンの消化は、膵臓のアルファアミラーゼによって小腸の中でさらに進行し、これは唾液中のアルファアミラーゼの場合と同様である。
デンプンの消化を阻害することで炭水化物の吸収量を減らすことは、例えば、減量や糖尿病の分野においてとても有望な方策である。ダイエットの観点からは、デンプンの分解をターゲットとするのは重要なことである。なぜなら、デンプンは、あまり役にたたないカロリーを供給する、比較的必要度の低い栄養素だからである。
アミラーゼ阻害剤は、植物アルブミンや豆科の植物を含む、様々なソースから導かれる。現在のところ、豆の抽出物がアミラーゼ阻害剤のソースとして最もよく利用されている。
豆の濃縮や乾燥の工程を含む、アミラーゼ阻害剤の精製法として現在利用されている方法は、熱処理および／または溶剤の利用を伴う（Cestaro 等、米国特許第 6,340,699号）。しかし、熱処理および／または溶剤の利用にはいくつかの欠点がある。例えば、高温条件においては、豆のアミラーゼ阻害剤の熱に感受性のある成分は、劣化し得る。その結果、アミラーゼ阻害剤は安定性や有効性の低下を示す。
【０００２】
加えて、この精製過程における溶剤の利用には、環境面や健康面への影響の懸念が伴う。例えば、溶剤を利用して豆からアミラーゼ阻害剤を抽出すると、抽出物に有毒な溶剤が混入する。さらには、精製過程に必要な大量の溶剤の廃棄は、環境面における重大な懸念事項である。
従来の熱および溶剤を用いた方法によって、豆の抽出物から得られたアミラーゼ阻害剤は、精製されていない、即ち不純物および／または汚染物質が含まれている。このような不純物の例は、溶剤の残留物や、豆の非活性成分である。
アミラーゼ阻害剤は、例えば、粉末状のジュースの素、飲む段階でのセーキ、お菓子などの食品に、しばしば添加されて消費される。豆の抽出物に残る不純物および／または汚染物質は、そのような食品を食べる気を削ぐ、不快な味に結びつく。
近年の研究により、現在利用可能なアミラーゼ阻害剤は、インビトロではよく効くが、インビボにおいては効果的に働かないことが明らかになっている。その理由のいくつかとして、現在利用可能なアミラーゼ阻害剤は、pH の影響により消化管内において不安定であること、水に溶けないこと、および／または溶剤の利用や熱処理によって有効性が低下していること、が挙げられている（Layer, P 等、Gastroenterology 1985; 88(6):1895-1902 ）。
従って、現在のアミラーゼ阻害剤に存在する上記問題点を踏まえると、より純度の高く、有効性の高い、豆由来のアミラーゼ阻害剤と、そのより精巧な取得方法が必要である。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
本発明の概略
これらの、およびその他の目的は、本発明によって、より優れた製法により得られるアミラーゼ阻害剤を提供することにより、達成された。この製法は、白インゲン豆をすりつぶし、次いですりつぶした豆を、不純物を除去するために減圧下で臨界超過二酸化炭素により抽出する工程を含み、その結果、豆の固形分が残る。次いで豆の固形分を脱イオン水でインキュベートし、第一固体成分と第一液体成分を含む第一豆懸濁液を得る。第一液体成分を残しながら、第一固体成分を第一豆懸濁液から分離する。第一固体成分を、次いで脱イオン水でインキュベートし、第二固体成分と第二液体成分を含む第二豆懸濁液を得る。第二液体成分を残しながら、第二固体成分を第二豆懸濁液から分離する。第一、および第二液体成分を混合し、最終溶液を得る。最終溶液を熱交換し、濃縮された豆の抽出物を得る。濃縮された豆の抽出物を乾燥し、精製されたアミラーゼ阻害剤を得る。
本発明はまた、このより優れた製法により得られるアミラーゼ阻害剤を、減量が必要な哺乳動物に効果的な量、投与することを含む、該哺乳動物の減量を促す方法を提供する。
さらに本発明は、このより優れた製法により得られるアミラーゼ阻害剤を、糖尿病の哺乳動物に効果的な量、投与することを含む、該哺乳動物の食後耐糖能を改善させる方法を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００４】
本発明の詳細な説明
出願人は、驚くことに、本発明の新規方法によって、精製されたアミラーゼ阻害剤が得られることを発見した。
アミラーゼ阻害剤とは、炭水化物の分解を担う酵素、具体的にはアミラーゼ、を阻害する糖たんぱく質である。本発明のアミラーゼ阻害剤は豆から得られる。本発明での利用に適した豆は、例えばインゲン豆を含むインゲンマメ科に属するものである。好ましくは、アミラーゼ阻害剤は白インゲン豆から得る。白インゲン豆から得られるアミラーゼ阻害剤は、時に、ファセオラミンと呼ばれる。豆は遺伝子組み換え豆でないことが好ましい。この豆は一般的に小さく、傷のない豆である。
本発明のアミラーゼ阻害剤は、熱処理や化学処理を伴う従来の抽出法で得られたものと比較してより高度に精製されている点で、他のアミラーゼ阻害剤より優れている。その高度の精製により、従来技術のアミラーゼ阻害剤と比較して、本発明のアミラーゼ阻害剤はインビトロおよびインビボでより優れた安定性と有効性を示す。
【０００５】
本発明のアミラーゼ阻害剤は、例えば48.9℃から93.3℃（120°Fから 200°F）などの高温度下においても依然、安定である。このような熱安定性は、このアミラーゼ阻害剤を、例えば、その有益なデンプン遮断効果を失うことなく、熱調理される食品に使用することを可能にする。
このアミラーゼ阻害剤は、極端な pH 値の条件下においても依然、安定である。例えば、胃は pH約1-2 の値を取り得る。本発明のアミラーゼ阻害剤は、このような pH 条件下においても、大部分が依然、安定である。
加えて、このアミラーゼ阻害剤は、従来の熱処理／化学処理の製法から得られたものと比較して、より有効性が高い。理論に拘束されるものではないが、化学溶剤の使用を避けることで、アミラーゼ阻害剤の重要な三次構造が破壊されないと提唱されている。
本発明により、白インゲン豆をすりつぶし、荒くすりつぶした豆を形成する。豆は、当業者に知られているいかなる方法ですりつぶしてもよい。例えば、豆は手動ですりつぶしてもよいし、機械を用いてもよい。手動ですりつぶす方法の例としては、乳棒、乳鉢が挙げられる。機械を使用してすりつぶす方法の例としては、Robinson 製の Fitzpatrick Mill などの製粉機が挙げられる。
【０００６】
荒くすりつぶされた豆は、以下に述べるような方法で、不純物を除去するための抽出が行われる。抽出の工程は、臨界超過二酸化炭素の使用を伴う。二酸化炭素は通常の条件、即ち自然環境下の温度と圧力のもとでは、気体として存在する。CO2 の臨界温度(critical temperature, Tc) は31.06℃（88°F）で、臨界圧力(critical pressure, Pc) は73．8バールである。CO2 は、温度と圧力の双方がその Tc と Pc を超えた場合、臨界超過の状態である。臨界超過状態においては、CO2 は基本的に圧縮された高密度の液体である。
荒くすりつぶされた豆を抽出用の容器（即ち抽出器）に入れ、減圧下、臨界超過CO2で抽出する。減圧とは、一般的に、大気圧より低い圧力をいう。ある実施態様においては、抽出を温度約48.9℃から93.3℃（120°Fから 200°F）で約二時間行う。好ましくは、抽出を温度約57.2℃から71.1℃（135°Fから 160°F）で約二時間行う。より好ましくは、抽出を温度約62.8℃（145°F）で約二時間行う。
抽出の工程において、臨界超過 CO2 の液体はすりつぶされた豆の間を通り、豆からの不純物を溶解、抽出し、臨界超過溶液を形成する。従って、この臨界超過溶液は豆の不純物を含む。この不純物は基本的に豆に含まれる無極性の構成物質であり、例えば、脂質、油、脂肪、香料を含む。
【０００７】
抽出が完了した後、臨海超過溶液は減圧弁を通して抽出器から取り出される。臨海超過溶液の圧力と溶解力が減少し、その結果、豆の不純物が分離機の中で沈殿する。本発明の目的として、実質的に不純物の含まれない残りの物質を豆の固形分と呼ぶ。この豆の固形分は、糖たんぱく質、即ちアミラーゼ阻害剤を含む。
続いて、この豆の固形分を脱イオン水でインキュベートし、第一豆懸濁液を得る。脱イオン水とは、一般的に、イオンの除去された水をいう。脱イオン水の温度は、好ましくは約48.9℃から71.1℃（120°Fから 160°F）であり、より好ましくは脱イオン水の温度は約60℃（140°F）である。豆の固形分は、脱イオン水で長くて約6時間まで、より好ましくは約4時間の間インキュベートされる。インキュベートの間に、豆の固形分から糖たんぱく質が抽出される。
上記の通り、インキュベーションの後、第一豆懸濁液が得られる。この第一豆懸濁液は、第一固体成分と第一液体成分を含む。第一液体成分は脱イオン水と豆の固形分からの糖たんぱく質（即ちアミラーゼ阻害剤）を含む。第一の固体成分は、例えば、不純物などの、抽出されなかった残りのあらゆる物質を含む。続いて、第一固体成分は第一液体成分から分離される。第一液体成分は別の容器に回収される。
【０００８】
分離は、当業者に知られているいかなる方法で行ってもよい。例えば、分離は遠心分離またはろ過によって行われる。圧搾ろ過器によるろ過が好ましい。例えば、ろ過においては、第一豆懸濁液は、ろ紙などの多孔性の物質（即ちフィルター）の上に注がれる。フィルターは液体成分を通過させるが、固体成分は通過させない。
遠心分離は、固体と液体の分離を促すために、遠心力を利用する。例えば、遠心分離においては、第一豆懸濁液をチューブの中に入れる。次いで、チューブを遠心分離機の中に入れ、遠心力が加える。結果として、固体成分はチューブの下の部分に集まり（即ち沈殿）、一方、液体成分はチューブの上の部分に残る（即ち上清）。液体成分は別の容器に注いで回収される。
第一固体成分を第一液体成分から分離したあと、第一固体成分は、上記の通り、脱イオン水の中でインキュベートし、第二豆懸濁液を作製する。第二豆懸濁液は、第二固体成分と第二液体成分を含む。第二液体成分は、脱イオン水と、第一固体成分中の糖たんぱく質（即ちアミラーゼ阻害剤）を含む。第二固体成分は、例えば、不純物などの、抽出されなかった残りのあらゆる物質を含む。第二固体成分は、前述したあらゆる方法を含む適切な方法によって、第二液体成分から分離される。第二液体成分は別の容器に回収される。
【０００９】
第一液体成分と第二液体成分を混合して最終液体溶液を得る。この最終溶液は次いで、熱交換が行われる。熱交換とは、水を取り除く、蒸留の工程である。熱交換は、好ましくは減圧下で行う。熱交換に適した装置は、当業者に知られているものである。
熱交換を行うと、最終溶液から水が除去され、濃縮された豆の抽出物が得られる。この濃縮豆抽出物は約25−50%の水を含み得る。より好ましくは、この濃縮豆抽出物は約35%の水を含む。
次いでこの濃縮豆抽出物を乾燥する。この最終豆抽出物の乾燥は、当業者に知られているいかなる適切な方法で行ってもよい。例えば、ある実施態様においては、この乾燥の工程は凍結乾燥によって行われる。この凍結乾燥の工程では、昇華と脱着により、濃縮豆抽出物から残っている水を取り除く。
【００１０】
凍結乾燥の工程では、濃縮豆抽出物は冷却した容器に入れて運び、凍結乾燥機に移す。凍結乾燥機の乾燥槽の中にある濃縮器が濃縮豆抽出物から取り出された水を捕え、一方、減圧装置が乾燥を促進するために圧力を減少させる。凍結乾燥の工程が終了すると、精製されたアミラーゼ阻害剤が得られる。
別の実施態様においては、乾燥のステップは噴霧乾燥機を使用して行われる。この噴霧乾燥機は、送液ポンプ、噴霧装置、空気加熱機、空気調合機、乾燥槽、および排気クリーニングと粉塵回収のための装置よりなる。噴霧乾燥には空気、又はガスを使用し得る。噴霧乾燥機に使用できる高温ガスの例として、窒素が挙げられるが、これに限定されない。
【００１１】
この噴霧乾燥過程で使用されるノズルは、例えば、遠心性回転式ノズル（centrifugal wheel nozzle）または高圧ノズルが挙げられる。噴霧乾燥に使用される高温気体の吸込（入口）温度は約204℃から260℃（400°Fから 500°F）で、好ましくは約227℃（440°F）である。高温気体の吐出し（出口）温度は約65.6℃から121℃（150°Fから 250°F）で、好ましくは約98.9℃（210°F）である。噴霧乾燥過程では、濃縮豆抽出物は高温ガスの中に噴霧され、それにより濃縮豆抽出物を浮遊粒子状の豆抽出物に変化させる。
噴霧乾燥のあと、乾燥豆抽出物を再水和させて再水和豆抽出物を得る。再水和は、乾燥豆抽出物に水を加えることにより行う。水は脱イオン化されていることが好ましい。好ましい実施態様においては、約40-70%の乾燥豆抽出物が再水和される。好ましくは、約60%の乾燥豆抽出物が再水和される。
再水和された豆抽出物はその後、上述のとおり、凍結乾燥される。再水和された豆抽出物は、精製されたアミラーゼ阻害剤を得るため、凍結乾燥が行われる。
【００１２】
アミラーゼ阻害剤の主要な作用は、摂取物中のデンプンの、一時的な、安全な、副作用のない、吸収不良を起こさせることである。理論に拘束されるものではないが、本発明のアミラーゼ阻害剤は、アルファアミラーゼと結合し、中和させると考えられる。アルファアミラーゼを中和することにより、炭水化物の吸収が阻害される。下に述べるように、アミラーゼ阻害剤は減量を促すのに効果的である。
前述の通り、アルファアミラーゼは、デンプンの分解を担う、自然に生じるデンプン酵素（starch enzyme）である。例えば、ヒトにおいては、摂取物中のデンプンが体に利用できるようになるためには、グルコースなどのより小さな構成要素に分解されなければならない。摂取されたデンプンで、グルコースなどの小さな構成要素に分解されていないものは、インビボでは利用されない。従って、体内のアルファアミラーゼを中和することにより、体による、デンプンを利用する能力は妨げられ、利用されなかったデンプンは最終的に排出される。
デンプンの、グルコースへの消化、又は分解は、インシュリンの生産を引き起こす。従って、デンプンを多く含む食事をとるとインシュリンの量の異常な上昇を引き起こす。過剰なインシュリンは空腹や食欲を引き起こし、悪循環を招く。この悪循環を断つひとつの方法は、デンプンの摂取を減らす、またはやめることである。このやり方は、減量を促すことついて、長期間に渡って、ほとんど、あるいは全く効果がなかった。
【００１３】
本発明のひとつの実施態様において、減量が必要な哺乳動物に、減量を促す方法を提供する。この方法は、本発明のアミラーゼ阻害剤を、効果的な量で投与することを含む。
減量が必要な哺乳動物として、例えば、その体重が健康に悪影響を与えているあらゆる哺乳動物が挙げられる。減量が必要な哺乳動物の別の例としては、例えば、過剰な体重によって自らの外見に不満を持つ哺乳動物が挙げられる。哺乳動物の過剰な体重とは、主観によるものである。減量が必要な哺乳動物のいくつかの例として、糖尿病および／または肥満症をわずらう哺乳動物が挙げられるが、これらに限定されない。
理論に拘束されるものではないが、本発明の高純度アミラーゼ阻害剤は、デンプンの吸収を阻害することによって減量を促すものと考えられる。加えて、このアミラーゼ阻害剤は、炭水化物の吸収と関連して、食欲を制御する。摂取物中のデンプンの吸収阻害と、炭水化物の吸収と関連した食欲の制御により、このアミラーゼ阻害剤は減量を促す効果がある。
【００１４】
請求項記載の発明のアミラーゼ阻害剤は、例えば糖尿病などの、グルコース利用障害をわずらう哺乳動物にも使用される。グルコース利用障害は、膵臓におけるインシュリンの生産不足や、生産されたインシュリンの、グルコース利用効果の少なさの結果として起こり得る。下に述べるように、インシュリンは、血液中から細胞内への、グルコースの輸送に必要である。
インシュリンは、血液中のグルコース量を制御する鍵を握る、体内で自然に生産されるホルモンである。体内を循環する血液は、細胞のための燃料を供給するグルコースを運ぶ。グルコースを細胞内に入れるためには、膵臓のベータ細胞で生産されるインシュリンが必要である。通常、膵臓は、体がちょうど必要とする量のインシュリンを生産する。これは、下に述べるように、糖尿病などの高血糖症の場合にはあてはまらない。
【００１５】
糖尿病においては、インシュリンは欠乏しているか、不足しているか、あるいはその機能を効果的に果たせていないか、のいずれかである。グルコースは、細胞内に入れない場合、血液中に蓄積され、血液中のグルコース量が増える。食事をした後の血液中のグルコースの量が、食後グルコース量 （postprandial glucose level）である。
例えば、糖尿病でない人の体内では、血漿グルコースの量は、食事の約一時間後に最高点に達し、食後二時間後から三時間後のうちに食事前のレベルに戻る。対照的に、糖尿病をわずらう人は、そうでない人と比較して食後グルコース量がより高くまで上昇し、その状態がより長く続く。食後耐糖能異常は、例えば心疾患につながる可能性がある。
糖尿病をわずらう人は、通常、血液中のグルコースを細胞内に吸収させるのを助けるために、インシュリンを摂取しなくてはならない。炭水化物を多く含む料理を食べた場合、血液中の多量のグルコース量に対応するために、糖尿病患者は多くの場合、インシュリンの要求が飛躍的に高まる。
【００１６】
従って、摂取物中のデンプンの吸収を阻害することによって、本発明のアミラーゼ阻害剤は、糖尿病である哺乳動物のインシュリンの要求を効果的に下げる。加えて、本発明のアミラーゼ阻害剤は、同時に、食後の血液中のグルコース量を減らし、それにより食後耐糖能を改善させる。そこで、本発明の別の実施態様において、糖尿病である哺乳動物の、食後耐糖能を改善させる方法を提供する。
好ましくは、アミラーゼ阻害剤は全身投与される。全身投与は経腸で行ってもよいし、非経口で行ってもよい。経腸投与が好ましい。例えば、アミラーゼ阻害剤は容易に経口投与し得る。液体、または固体（例えば錠剤やゼラチンカプセル）製剤とすることも可能である。このような製剤には、医薬的に許容される補形薬、補助剤、希釈剤、又は担体を含むことができる。
【００１７】
アミラーゼ阻害剤はまた、砂糖を加えてあるあるいは加えていない、噛むことのできる錠剤の顆粒（chewable tablet granulations）、粉末ジュースの素、チューインガム、およびパン製品（baking products)に入れて投与される。好ましい実施態様においては、本発明のアミラーゼ阻害剤は、調理温度下においても安定であるため、パンケーキ、ワッフル、パン、ビスケット、クッキーなどの生地に入れて、効果的に投与される。
本発明において、アミラーゼ阻害剤の効果的な量は、摂取物中のデンプンの分解を効果的に阻害するとして当業者に知られている、いかなる量でもよい。好ましくは、効果的な量が、デンプンを多く含む食事をとる直前、食事中、又はその少し後に、哺乳動物に投与される。例えば、食前におけるアミラーゼ阻害剤の標準的な摂取量は、約500mg から1,500mgである。
本発明において、哺乳動物は、例えば、犬や猫などのペット用動物、ラットやマウスなどの実験用動物、馬や牛などの家畜用動物と共に、ヒトも含む。ヒトが最も好ましい。
【実施例１】
【００１８】
噴霧乾燥を利用したアミラーゼ阻害剤の精製
１、すりつぶし
まるごとの、乾燥させた、遺伝子組み換え作物でない(non-GMO) インゲンマメ科の豆を、清潔であるか点検した。豆が品質管理条件を満たすことを確認した後、1000gの乾燥された豆をFitzpatrick（登録商標）grinding mill（製粉機）の中に入れた。この製粉機で、#4の篩（すりつぶしサイズ、course ground size) を使用した。すりつぶし作業は、豆が適当な大きさになるまで続けた。
２、抽出
荒くすり潰した豆を、抽出器に入れ、臨界超過 CO2 で抽出した。抽出の工程は、減圧下で、温度約62.8℃（145°F）で約二時間行われる。臨界超過 CO2 は、荒くすりつぶした豆から不純物（例えば、脂質、油、脂肪、香料等）を取り除き、その結果、豆の固形分が残る。
その後、抽出器内の圧力を下げた。減圧によって、臨界超過溶液から、豆からの不純物が、分離機の中に沈殿する。
【００１９】
３、インキュベーション
約60℃（140°F）の脱イオン水を、豆の固形分に加え、4時間インキュベートした。インキュベーションをしている間に、糖たんぱく質が豆の固形分から抽出された。第一豆懸濁液が得られた。
４、分離
第一豆懸濁液は、豆懸濁液から固体成分を分離するために、圧搾ろ過器によりろ過を行った。（糖たんぱく質を含む）第一液体成分は、別の容器に回収した。第一固体成分を次いで、上記の通り、脱イオン水の中でインキュベートし、第二豆懸濁液を形成した。第二豆懸濁液は次いで、上記の通りろ過し、第二液体成分から第二固体成分を分離した。第一液体成分と第二液体成分を混合して最終液体溶液を得た。
【００２０】
５、熱交換
最終溶液について、水を取り除き、濃縮豆抽出物を得るために、熱交換を行った。
６、乾燥
濃縮豆抽出物は次いで、噴霧乾燥を行い、残っている水を取り除いた。噴霧乾燥の工程では高圧ノズルを使用した。濃縮豆抽出物を、乾燥された豆抽出物が形成されるまで、吸込温度227℃（440°F）、吐出し温度 98.9℃（210°F）の高温空気に噴霧した。
約40%(w/w) の乾燥豆抽出物を脱イオン水で水和した。水和した豆抽出物は次いで、凍結乾燥を行い、精製されたアミラーゼ阻害剤を得た。1000gの乾燥した豆から、約120gの精製されたアミラーゼ阻害剤を得た。
【実施例２】
【００２１】
凍結乾燥を利用したアミラーゼ阻害剤の精製
１、すりつぶし
まるごとの、乾燥させた、遺伝子組み換え作物でない(non-GMO) インゲンマメ科の豆を、清潔であるか点検した。豆が品質管理条件を満たすことを確認した後、1000gの乾燥された豆をFitzpatrick（登録商標）grinding mill（製粉機）の中に入れた。この製粉機で、#4の篩（すりつぶしサイズ、course ground size) を使用した。すりつぶし作業は、豆が適当な大きさになるまで続けた。
２、抽出
荒くすり潰した豆を、抽出器に入れ、臨界超過 CO2 で抽出した。抽出の工程は、減圧下で、温度約62.8℃（145°F）で約二時間行われる。臨界超過 CO2 は、荒くすりつぶした豆から不純物（例えば、脂質、油、脂肪、香料等）を取り除き、その結果、豆の固形分が残る。
その後、抽出器内の圧力を下げた。減圧によって、臨界超過溶液から、豆からの不純物が、分離機の中に沈殿する。
【００２２】
３、インキュベーション
約60℃（140°F）の脱イオン水を、豆の固形分に加え、4時間インキュベートした。インキュベーションをしている間に、糖たんぱく質が豆の固形分から抽出された。第一豆懸濁液が得られた。
４、分離
第一豆懸濁液は、豆懸濁液から固体成分を分離するために、圧搾ろ過器によりろ過を行った。（糖たんぱく質を含む）第一液体成分は、別の容器に回収した。第一固体成分を次いで、上記の通り、脱イオン水の中でインキュベートし、第二豆懸濁液を形成した。第二豆懸濁液は次いで、上記の通りろ過し、第二液体成分から第二固体成分を分離した。第一液体成分と第二液体成分を混合して最終液体溶液を得た。
【００２３】
５、熱交換
最終溶液について、水を取り除き、濃縮豆抽出物を得るために、熱交換を行った。
６、乾燥
濃縮した豆抽出物を次いで、凍結乾燥により乾燥させ、精製されたアミラーゼ阻害剤を得た。最初の1000gの豆から、約120gの精製されたアミラーゼ阻害剤を得た。
【国際調査報告】
2005535643.tif 000002