(57)【要約】本発明は、特にペプチドの［18Ｆ］−フッ素化用の方法及び試薬に関する。得られる18Ｆ−標識化合物は、特に陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）で使用するための放射性医薬品として有用である。それによれば、18Ｆ−標識のための手段として、下記式（IV）、（Ｖ）又は（VI）の化合物のような式18Ｆ−（リンカー）−ＳＨの化合物を活性化ペプチドと反応させることができる。【化１】2005520857.tif 000090【化２】2005520857.tif 000091【化３】2005520857.tif 000092
2005520857.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）又は（Ｉａ）の化合物を下記式（II）の化合物と反応させて、それぞれ下記式（III）又は（IIIａ）の化合物を得ることを含んでなる放射性フッ素化方法。
【化１】
2005520857.tif 000057
【化２】
2005520857.tif 000058
【化３】
2005520857.tif 000059
（式中、
Ｘはクロロ、ブロモ及びヨードから選択される脱離基、好ましくはクロロであり、
Ｙは適宜ヘテロ原子を１〜６個含むＣ1-10ヒドロカルビル基であり、
式（II）中のリンカーは、適宜ヘテロ原子を１〜１０個含むＣ1〜30ヒドロカルビル基である。）
【化４】
2005520857.tif 000060
【化５】
2005520857.tif 000061
（式中、リンカー基は式（II）の化合物について定義した通りであり、Ｙは式（Ｉａ）の化合物について定義した通りである。）
【請求項２】
下記式（Ｉ）の化合物を下記式（IV）、（Ｖ）又は（VI）の化合物と反応させて、それぞれ下記式（VII）、（VIII）又は（IX）の化合物を得ることを含んでなる、請求項１記載の放射性フッ素化方法。
【化６】
2005520857.tif 000062
【化７】
2005520857.tif 000063
【化８】
2005520857.tif 000064
【化９】
2005520857.tif 000065
（式中、
Ｘはクロロ、ブロモ及びヨードから選択される脱離基、好ましくはクロロであり、
ｎは１〜２０の整数であり、
ｍは１〜１０の整数であり、
ｐは１〜２０の整数であり、
ｑは０〜４の整数であり、
ｒは１〜１０の整数である。）
【化１０】
2005520857.tif 000066
【化１１】
2005520857.tif 000067
【化１２】
2005520857.tif 000068
（式中、ｍ、ｎ、ｐ、ｑ及びｒは式（IV）、（Ｖ）又は（VI）の化合物について定義した通りである。）
【請求項３】
下記式（Ｉａ）の化合物を下記式（IV）、（Ｖ）又は（VI）の化合物と反応させて、それぞれ下記式（Ｘ）、（XI）又は（XII）の化合物を得ることを含んでなる、請求項１記載の放射性フッ素化方法。
【化１３】
2005520857.tif 000069
【化１４】
2005520857.tif 000070
【化１５】
2005520857.tif 000071
【化１６】
2005520857.tif 000072
（式中、
Ｙは適宜ヘテロ原子を１〜６個含むＣ1-10ヒドロカルビル基であり、
ｎは１〜２０の整数であり、
ｍは１〜１０の整数であり、
ｐは１〜２０の整数であり、
ｑは０〜４の整数であり、
ｒは１〜１０の整数である。）
【化１７】
2005520857.tif 000073
【化１８】
2005520857.tif 000074
【化１９】
2005520857.tif 000075
（式中、ｍ、ｎ、ｐ、ｑ及びｒは式（IV）、（Ｖ）又は（VI）の化合物について定義した通りであり、Ｙは式（１ａ）の化合物について定義した通りである。）
【請求項４】
下記式（IV）の化合物又はそのチオール保護前駆体。
【化２０】
2005520857.tif 000076
（式中、
ｎは１〜２０の整数であり、
ｍは１〜１０の整数である。）
【請求項５】
下記式（Ｖ）の化合物又はそのチオール保護前駆体。
【化２１】
2005520857.tif 000077
（式中、ｐは１〜２０の整数である。）
【請求項６】
下記式（VI）の化合物又はそのチオール保護前駆体。
【化２２】
2005520857.tif 000078
（式中、
ｑは０〜４の整数であり、
ｒは１〜１０の整数である。）
【請求項７】
下記式（VII）、（VIII）又は（IX）の化合物。
【化２３】
2005520857.tif 000079
【化２４】
2005520857.tif 000080
【化２５】
2005520857.tif 000081
（式中、
ｎは１〜２０の整数であり、
ｍは１〜１０の整数であり、
ｐは１〜２０の整数であり、
ｑは０〜４の整数であり、
ｒは１〜１０の整数である。）
【請求項８】
下記式（Ｘ）、（XI）又は（XII）の化合物。
【化２６】
2005520857.tif 000082
【化２７】
2005520857.tif 000083
【化２８】
2005520857.tif 000084
（式中、
ｎは１〜２０の整数であり、
ｍは１〜１０の整数であり、
ｐは１〜２０の整数であり、
ｑは０〜４の整数であり、
ｒは１〜１０の整数であり、
Ｙは適宜ヘテロ原子を１〜６個含むＣ1-10ヒドロカルビル基である。）
【請求項９】
下記式の化合物である、請求項８記載の式（XII）の化合物。
【化２９】
2005520857.tif 000085
【請求項１０】
（ｉ）下記式（IIａ）の化合物、及び
（ii）請求項１で定義した式（Ｉ）又は（Ｉａ）の活性化ペプチド
を含んでなる放射性フッ素化キット。
【化３０】
2005520857.tif 000086
（式中、
Ｌはｐ−トルエンスルホネート、トリフルオロメタンスルホネート又はメタンスルホネートのような脱離基であり、
リンカーは適宜ヘテロ原子を１〜１０個含むＣ1〜30ヒドロカルビル基であり、
Ｒは水素又はチオール保護基である。）
【請求項１１】
（ｉ）下記式（IVａ）、（Ｖａ）又は（VIａ）の化合物、及び
（ii）請求項１で定義した式（Ｉ）又は（Ｉａ）の活性化ペプチド
を含んでなる、請求項１０記載の放射性フッ素化キット。
【化３１】
2005520857.tif 000087
【化３２】
2005520857.tif 000088
【化３３】
2005520857.tif 000089
（式中、
ｎは１〜２０の整数であり、
ｍは１〜１０の整数であり、
ｐは１〜２０の整数であり、
ｑは０〜４の整数であり、
ｒは１〜１０の整数であり、
Ｌはｐ−トルエンスルホネート、トリフルオロメタンスルホネート又はメタンスルホネートのような脱離基であり、
Ｌ’はヨード、ｐ−トルエンスルホネート、トリフルオロメタンスルホネート又はメタンスルホネートのような脱離基であり、ｑが０である場合にＬ’はニトロ或いはヨードニウム又はアンモニウム塩であることができ、
Ｒは水素又はチオール保護基である。）
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、特にペプチドの［18Ｆ］−フッ素化の方法及び試薬に関する。得られた18Ｆ−標識化合物は、特に陽電子放出断層撮法（ＰＥＴ）で使用するための放射性医薬品として有用である。
【背景技術】
【０００２】
診断撮影のために放射性標識生物活性ペプチドを応用することは、核医学でますます重要になりつつある。特定の種類の細胞と選択的に相互作用する生物学的活性分子は、標的組織に放射能を導入するために有用である。例えば、放射性標識ペプチドは、診断撮影及び放射線治療の目的で腫瘍、梗塞部及び感染組織に放射能核種を導入するための大きな可能性を有している。１１０分の半減期を有する18Ｆは、多くの受容体撮影試験のために好適な陽電子放出核種である。したがって、18Ｆ−標識生物活性ペプチドは、多種多様の疾患を定量的に検出し特性決定するためにＰＥＴで利用できるという点で大きな臨床的可能性を有している。
【０００３】
国際公開公報第ＷＯ９９／１１５９０号には、チオール含有ペプチド及びタンパク質の［18Ｆ］−フッ素化のための方法が記載されている。
【０００４】
18Ｆ−標識ペプチドに関する難点の一つは、既存の18Ｆ−標識剤の製造には多くの時間がかかることである。ペプチド及びタンパク質を18Ｆで効率よく標識することは、適当な補欠分子団を用いることでのみ達成される。Ｎ−スクシンイミジル−４−［18Ｆ］フルオロベンゾエート、ｍ−マレイミド−Ｎ−（ｐ−［18Ｆ］フルオロベンジル）−ベンズアミド、Ｎ−（ｐ−［18Ｆ］フルオロフェニル）マレイミド及び４−［18Ｆ］フルオロフェナシルブロミドをはじめとして、若干のかかる補欠分子団が文献中に提唱されている。18Ｆによるペプチド及びタンパク質の標識のために今日使用されている方法のほとんどすべては、フッ素標識シントンの活性エステルを使用する。ペプチド及びタンパク質は活性エステルと反応し得る多数の官能基を含むことがあるので、これらの現行方法は部位特異的でない。例えば、３つのリジン残基を含むペプチドは、いずれもが標識シントンに対して等しい反応性を示す３つのアミン官能基を有している。したがって、温和な条件下で特にペプチド中に18Ｆを迅速で化学選択的に導入して高い放射化学収率及び純度で18Ｆ−標識生成物を得ることを可能にする18Ｆ−標識補欠分子団及び方法に対するニーズが今なお存在している。さらに、臨床環境での放射性医薬品の製造を容易にするための自動化に適合したかかる方法に対するニーズも存在している。
【特許文献１】国際公開公報第ＷＯ９９／１１５９０号。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
そこで本発明は、下記式（Ｉ）又は（Ｉａ）の化合物を下記式（II）の化合物と反応させて、それぞれ下記式（III）又は（IIIａ）の化合物を得ることを含んでなる放射性フッ素化方法を提供する。
【０００６】
【化１】
2005520857.tif 000003
【０００７】
【化２】
2005520857.tif 000004
【０００８】
【化３】
2005520857.tif 000005
【０００９】
式中、
Ｘはクロロ、ブロモ及びヨードから選択される脱離基、好ましくはクロロであり、
Ｙは適宜ヘテロ原子を１〜６個含むＣ1-10ヒドロカルビル基であり、
式（II）中のリンカーは、適宜ヘテロ原子を１〜１０個含むＣ1〜30ヒドロカルビル基である。
【００１０】
【化４】
2005520857.tif 000006
【００１１】
【化５】
2005520857.tif 000007
【００１２】
式中、リンカー基は式（II）の化合物について定義した通りであり、Ｙは式（Ｉａ）の化合物について定義した通りであり、ペプチドはそれぞれ式（Ｉ）又は（Ｉａ）の化合物について定義した通りである。
【００１３】
本発明は、ペプチド前駆体の合成中に標識の正確な導入部位が予め選択される、さらに化学選択的な放射性標識アプローチを提供する。ペプチド中の所定部位で反応するシントンのチオール官能基は、ただ１種の可能な生成物を与える。したがって、この方法は化学選択的であり、その適用は広範囲のペプチド及び生体分子に対して包括的であると考えられる。
【００１４】
好ましい態様では、本発明は、下記式（Ｉ）の化合物を下記式（IV）、（Ｖ）又は（VI）の化合物と反応させて、それぞれ下記式（VII）、（VIII）又は（IX）の化合物を得ることを含んでなる放射性フッ素化方法を提供する。
【００１５】
【化６】
2005520857.tif 000008
【００１６】
【化７】
2005520857.tif 000009
【００１７】
【化８】
2005520857.tif 000010
【００１８】
【化９】
2005520857.tif 000011
【００１９】
式中、
Ｘはクロロ、ブロモ及びヨードから選択される脱離基、好ましくはクロロであり、
ｎは１〜２０の整数であり、
ｍは１〜１０の整数であり、
ｐは１〜２０の整数であり、
ｑは０〜４の整数であり、
ｒは１〜１０の整数である。
【００２０】
【化１０】
2005520857.tif 000012
【００２１】
【化１１】
2005520857.tif 000013
【００２２】
【化１２】
2005520857.tif 000014
【００２３】
式中、ｍ、ｎ、ｐ、ｑ及びｒは式（IV）、（Ｖ）又は（VI）の化合物について定義した通りである。
【００２４】
この反応は、適当な溶媒（例えば、５〜１１のｐＨ範囲内の水性緩衝液）中において５〜６０℃の極端でない温度（好ましくは周囲温度）で行うことができる。
【００２５】
別の好ましい態様では、本発明は、下記式（Ｉａ）の化合物を下記式（IV）、（Ｖ）又は（VI）の化合物と反応させて、それぞれ下記式（Ｘ）、（XI）又は（XII）の化合物を得ることを含んでなる放射性フッ素化方法を提供する。
【００２６】
【化１３】
2005520857.tif 000015
【００２７】
【化１４】
2005520857.tif 000016
【００２８】
【化１５】
2005520857.tif 000017
【００２９】
【化１６】
2005520857.tif 000018
【００３０】
式中、
Ｙは適宜ヘテロ原子を１〜６個含むＣ1-10ヒドロカルビル基であり、
ｎは１〜２０の整数であり、
ｍは１〜１０の整数であり、
ｐは１〜２０の整数であり、
ｑは０〜４の整数であり、
ｒは１〜１０の整数である。
【００３１】
【化１７】
2005520857.tif 000019
【００３２】
【化１８】
2005520857.tif 000020
【００３３】
【化１９】
2005520857.tif 000021
【００３４】
式中、ｍ、ｎ、ｐ、ｑ及びｒは式（IV）、（Ｖ）又は（VI）の化合物について定義した通りであり、Ｙ及びペプチドは式（１ａ）の化合物について定義した通りである。
【００３５】
この反応は、適当な溶媒（例えば、５〜１１のｐＨ範囲内の水性緩衝液）中において５〜６０℃の極端でない温度（好ましくは周囲温度）で行うことができる。
【００３６】
式（Ｉ）及び（Ｉａ）中で、標識付けのために適したペプチドとしては、オクトレオチド、ボンベシン、バソアクティブ・インテスティナル・ペプチド、走化性ペプチド類似体、α−メラノサイト刺激ホルモン、ニューロテンシン、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐペプチドやその類似体、ヒトプロインスリン連結ペプチド、エンドテリン、アンギオテンシン及びホルミル−ノルロイシル−ロイシル−フェニルアラニル−ノルロイシル−チロシル−リシンのようなソマトスタチン類似体が挙げられる。標識付けのために好ましいペプチドは、国際公開公報第ＷＯ０１／７７４１５号及び同第ＷＯ０３／００６４９１号に記載されたもののような、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐペプチド及びその類似体である。特定の一態様では、式（Ｉ）又は（Ｉａ）中のペプチドは下記式（Ａ）を有する。
【００３７】
【化２０】
2005520857.tif 000022
【００３８】
式中、Ｘ7は−ＮＨ2又は次式の基である。
【００３９】
【化２１】
2005520857.tif 000023
【００４０】
式中、ａは１〜１０の整数であり、好ましくは１である。
【００４１】
当業者には容易に理解される通り、本発明の方法は、タンパク質、ホルモン、オリゴヌクレオチド及び抗体フラグメント並びに各種のＰＥＴトレーサーを得るための小分子のような他の生体分子の放射性フッ素化のためにも使用できる。
【００４２】
式（Ｉａ）中で、Ｙは適宜ヘテロ原子（例えば、酸素又は窒素）を１〜６個含むＣ1-10ヒドロカルビル基であり、好適にはＹは適宜Ｃ4-7シクロアルキル基を含むＣ1-10アルキル基であり、例えばＹはメチルシクロヘキシルであり得る。
【００４３】
式（II）中で、リンカーは適宜ヘテロ原子（例えば、酸素又は窒素）を１〜１０個含むＣ1-30ヒドロカルビル基であり、好ましい排泄特性のような良好な生体内薬物動態学を与えるように選択できる。好適なリンカー基には、アルキル鎖、アルケニル鎖、アルキニル鎖、芳香環、ポリ芳香環、ヘテロ芳香環、及びエチレングリコール、アミノ酸及び炭水化物サブユニットを含むポリマーがある。
【００４４】
式（IV）及び（VII）の化合物で、ｎは通例２〜６、好適には３であり、ｍは通例１〜４、好適には２である。
【００４５】
式（Ｖ）及び（VIII）の化合物で、ｐは通例１〜６、好適には３である。
【００４６】
式（VI）及び（IX）の化合物で、基18Ｆ(ＣＨ2)q−は好適にはアミド基に対してパラ位に結合しており、ｑは通例０〜４、好適には１であり、ｒは通例１〜４、好適には２である。
【００４７】
本発明のさらに別の態様として、上記に定義したような式（IV）、（Ｖ）又は（VI）の化合物が提供される。これらの化合物は、放射性フッ素化用の補欠分子団としての一般的有用性を有している。式（IV）、（Ｖ）及び（VI）の化合物のチオール保護誘導体も、かかる補欠分子団の合成前駆体としての有用性を有しており、チオールがトリチル基で保護されたものが特に好ましい。式（IV）、（Ｖ）又は（VI）の前駆体中での他のチオール保護基は当業者にとって公知であり、例えば、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ  Ｉｎｃ．から出版された「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」（Ｔｈｅｏｄｏｒａ  Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ及びＰｅｔｅｒ  Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ）に記載されている。
【００４８】
本発明のさらに別の態様として、上記に定義したような式（VII）、（VIII）、（IX）、（Ｘ）、（XI）又は（XII）の化合物が提供される。これらの化合物は、ＰＥＴトレーサーとしての有用性を有している。これらの化合物のうちでは、ペプチドが国際公開公報第ＷＯ０１／７７４１５号及び同第ＷＯ０３／００６４９１号に記載されたペプチドのようなＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐペプチド又はその類似体であるものが好ましい。本発明のこの態様で特に好ましいペプチドは、式（Ｉ）及び（Ｉａ）の化合物について上記に定義した式（Ａ）のものである。
【００４９】
式（Ｉ）の化合物は、例えば、Ａｔｈｅｒｔｏｎ，Ｅ．及びＳｈｅｐｐａｒｄ，Ｒ．Ｃ．、「Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ、オックスフォード、１９８９年に記載されているような標準的ペプチド合成方法（例えば、固相ペプチド合成法）で製造できる。式（Ｉ）の化合物中への基「Ｘ−ＣＨ2Ｃ(Ｏ)−」の組込みは、ペプチド結合形成のための標準的条件下でペプチドのＮ−末端を下記式（XIII）の試薬と反応させることで達成できる。
【００５０】
【化２２】
2005520857.tif 000024
【００５１】
式中、Ｘは式（Ｉ）の化合物について定義した通りであり、Ｚは−ＯＨ又はクロロ、ブロモ、フルオロ、−ＯＣ(Ｏ)ＣＨ2−Ｘ（式中、Ｘは式（Ｉ）の化合物について定義した通りである。）のような適当な活性化基である。或いは、Ｚが−ＯＨである場合、この酸は２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）又はＮ−［（ジメチルアミノ）−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−１−イルメチレン］−Ｎ−メチルメタナミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ−オキシド（ＨＡＴＵ）のようなインシトゥ（ｉｎ  ｓｉｔｕ）薬剤を用いて活性化できる。
【００５２】
式（Ｉａ）の化合物は、例えば、Ａｔｈｅｒｔｏｎ，Ｅ．及びＳｈｅｐｐａｒｄ，Ｒ．Ｃ．、「Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ、オックスフォード、１９８９年に記載されているような標準的ペプチド合成方法（例えば、固相ペプチド合成法）で製造できる。式（Ｉａ）の化合物中への基「マレイミド−Ｙ−」の組込みは、ペプチド結合形成のための標準的条件下でペプチドのＮ−末端を下記式（XIV）の試薬と反応させることで達成できる。
【００５３】
【化２３】
2005520857.tif 000025
【００５４】
式中、Ｙは式（Ｉａ）の化合物について定義した通りであり、Ｚは−ＯＨ或いはクロロ、ブロモ、フルオロ、又はペンタフルオロフェノールやＮ−ヒドロキシスクシンイミドのような活性エステルのような適当な活性化基である。或いは、Ｚが−ＯＨである場合、この酸は式（XIII）の化合物について上記に記載したＨＢＴＵ又はＨＡＴＵのようなインシトゥ（ｉｎ  ｓｉｔｕ）活性化剤を用いて活性化できる。
【００５５】
式（II）の化合物は、好適には塩基（例えば、テトラブチルアンモニウム又はＫ2ＣＯ3／Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ−２２２）からの蒸発で予め活性化したサイクロトロン製造［18Ｆ］−フッ化物水溶液と、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド又はジメチルスルホキシドのような適当な溶媒中において通例は高温（例えば、６０〜１２０℃）で反応させ、次いで標準的方法を用いてチオール保護基を除去することで、下記式（IIａ）の対応化合物から製造できる。
【００５６】
【化２４】
2005520857.tif 000026
【００５７】
式中、Ｌはｐ−トルエンスルホネート、トリフルオロメタンスルホネート又はメタンスルホネートのような脱離基であり、リンカーは式（II）の化合物について定義した通りであり、Ｒは水素又はチオール保護基である。
【００５８】
式（IV）の化合物は、好適には塩基（例えば、テトラブチルアンモニウム又はＫ2ＣＯ3／Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ−２２２）からの蒸発で予め活性化したサイクロトロン製造［18Ｆ］−フッ化物水溶液と、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド又はジメチルスルホキシドのような適当な溶媒中において通例は高温（例えば、６０〜１２０℃）で反応させ、次いで標準的方法を用いてチオール保護基を除去することで、下記式（IVａ）の対応化合物から製造できる。
【００５９】
【化２５】
2005520857.tif 000027
【００６０】
式中、Ｌはｐ−トルエンスルホネート、トリフルオロメタンスルホネート又はメタンスルホネートのような脱離基であり、ｎ及びｍは式（IV）の化合物について定義した通りであり、Ｒは水素又はチオール保護基である。
【００６１】
式（Ｖ）の化合物は、好適には塩基（例えば、テトラブチルアンモニウム又はＫ2ＣＯ3／Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ−２２２）からの蒸発で予め活性化したサイクロトロン製造［18Ｆ］−フッ化物水溶液と、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド又はジメチルスルホキシドのような適当な溶媒中において通例は高温（例えば、６０〜１２０℃）で反応させ、次いで標準的方法を用いてチオール保護基を除去することで、下記式（Ｖａ）の対応化合物から製造できる。
【００６２】
【化２６】
2005520857.tif 000028
【００６３】
式中、Ｌはｐ−トルエンスルホネート、トリフルオロメタンスルホネート又はメタンスルホネートのような脱離基であり、ｐは式（Ｖ）の化合物について定義した通りであり、Ｒは水素又はチオール保護基である。
【００６４】
式（VI）の化合物は、好適には塩基（例えば、テトラブチルアンモニウム又はＫ2ＣＯ3／Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ−２２２）からの蒸発で予め活性化したサイクロトロン製造［18Ｆ］−フッ化物水溶液と、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド又はジメチルスルホキシドのような適当な溶媒中において通例は高温（例えば、６０〜１２０℃）で反応させ、次いで標準的方法を用いてチオール保護基を除去することで、下記式（VIａ）の対応化合物から製造できる。
【００６５】
【化２７】
2005520857.tif 000029
【００６６】
式中、Ｌ’はヨード、ｐ−トルエンスルホネート、トリフルオロメタンスルホネート又はメタンスルホネートのような脱離基であり、ｑが０である場合にＬ’はニトロ或いはヨードニウム又はアンモニウム塩であることができ、ｑ及びｒは式（VI）の化合物について定義した通りであり、Ｒは水素又はチオール保護基である。
【００６７】
式（IIａ）、（IVａ）、（Ｖａ）及び（VIａ）中で、好適なチオール保護基には、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ  Ｉｎｃ．から出版された「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」（Ｔｈｅｏｄｏｒａ  Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ及びＰｅｔｅｒ  Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ）中に見出し得るような(フェニル)3Ｃ−（トリチル）などがある。かかるチオール保護基の除去は、Ｇｒｅｅｎｅの著書中に記載されているもののような標準的方法で行うことができる。例えば、Ｒがトリチルである場合、ジクロロメタンのような塩素化溶媒中において希酸（例えば、トリフルオロ酢酸）で処理することで遊離チオールを生成させることができる。
【００６８】
好ましい一態様では、式（IIａ）、（IVａ）、（Ｖａ）及び（VIａ）の化合物は、ポリマービーズ又は被膜（例えば、トリチル又はクロロトリチル樹脂）のような固体支持体に結合できる。この態様では、過剰の試薬及び放射性フッ素化反応の副生物は洗浄によってポリマー結合生成物から分離できる。上述の脱保護方法を用いれば、式（II）、（IV）、（Ｖ）又は（VI）の化合物が固体支持体から解離される。このようなアプローチは、式（II）、（IV）、（Ｖ）及び（VI）の化合物の自動化製造のために特に好適であり得る。別法として、チオール脱保護の副生物が反応混合物中に不溶である場合には、濾過で副生物を除去できる。
【００６９】
本発明のさらに別の態様に従えば、式（IIａ）、（IVａ）、（Ｖａ）又は（VIａ）の補欠分子団及び式（Ｉ）又は（Ｉａ）の活性化ペプチドを含んでなる放射性フッ素化トレーサーの製造用キットが提供される。
【００７０】
キットの使用に際しては、上述の方法を用いて式（IIａ）、（IVａ）、（Ｖａ）又は（VIａ）の化合物を式（II）、（IV）、（Ｖ）又は（VI）の対応化合物に転化すればよい。好ましくは、反応混合物を固相抽出（ＳＰＥ）カートリッジに通すことで、式（II）、（IV）、（Ｖ）又は（VI）の化合物或いはこれらのいずれかのチオール保護誘導体を廃棄反応体から分離できる。ＳＰＥカートリッジは、黒鉛パッド又はＣ18固定相を含み得る。チオール保護基は、例えば、トリフルオロ酢酸のような酸を添加することで除去できる。式（II）、（IV）、（Ｖ）又は（VI）の化合物抽出のチオール基がトリチル基のような疎水基で保護されている場合には、ＳＰＥカートリッジ上で脱保護を行うのが好都合であり得る。そうすれば、疎水性のチオール保護基（例えばトリチル）を固定相上に結合させたままで、式（II）、（IV）、（Ｖ）又は（VI）の標識補欠分子団が高い純度及び収率で溶出される。次いで、式（II）、（IV）、（Ｖ）又は（VI）の化合物を、好適には水性緩衝液（ｐＨ７〜１１）中に溶解し得る式（Ｉ）又は（Ｉａ）の化合物に添加すればよい。極端でない温度で１〜６０分間反応させた後、例えばＳＰＥで標識ペプチドを精製し回収することができる。
【実施例】
【００７１】
以下の実施例によって本発明を例証する。
【００７２】
18Ｆの製造
サイクロトロンにより、18Ｏ（ｐ，ｎ）18Ｆ反応を用いてフッ素−１８を製造した。５〜１０μＡｈの積分ビーム電流を用い、濃縮［18Ｏ］Ｈ2Ｏ（９８％18Ｏ）を陽子（１９ＭｅＶ）で照射した。
【００７３】
ＣｌＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−ＯＨペプチドの合成
【００７４】
【化２８】
2005520857.tif 000030
【００７５】
完全自動化合成装置（ＡＢＩ  ４３３Ａ）、Ｌｙｓ−ｓａｓｒｉｎ樹脂（０．１０ｍｍｏｌ）及び１０ｍｍｏｌのアミノ酸カートリッジを用いたアミノ酸配列のアセンブリ。ペプチド合成後、樹脂上のペプチドを手動バブラー装置に入れてＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で洗い、新たに調製したクロロ酢酸無水物（０．５ｍｍｏｌ）（クロロ酢酸（９４．５ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）及びジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣｌ）（１０２．６ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（ＤＣＭ）中で１０分間反応させ、ジシクロヘキシル尿素（ＤＣＵ）を濾別し、溶液を減圧下で蒸発させて無水物を得た）をＤＭＦに溶解して添加した。１時間後、Ｋａｉｓｅｒ試験が陰性となり（（無水物に原因する）黄赤色の樹脂）、溶媒を除去し、樹脂をＤＭＦで８回洗い、次いでＤＣＭ及びジエチルエーテル（ＤＥＥ）で洗ってからＮ2乾燥した。樹脂にトリイソプロピルシラン（ＴＩＳ）及び１滴の水を添加した後、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を添加した。５０分後に樹脂を濾別し、溶液を減圧下で蒸発させ、ＤＥＥで３回洗った。粗生成物を逆相分取クロマトグラフィーで精製して６４．３ｍｇの純生成物を得た（Ｖｙｄａｃ  ２１８ＴＰ１０２２カラム、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ3ＣＮ／０．１％ＴＦＡ、勾配は４０分で００〜３０％Ｂ、流量は１０ｍｌ／分、２５４ｎｍで検出）。（分析用ＨＰＬＣ：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ００Ｂ−４２５１−Ｅ０カラム、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ3ＣＮ／０．１％ＴＦＡ、勾配は１０分で００〜３０％Ｂ、流量は２．０ｍｌ／分、保持時間は２１４ｎｍ及び２５４ｎｍで検出して５．１分）。質量分析法を用いてさらに特性決定を行ったところ、６１２．８［ＭＨ+］のｍ／ｚ値が得られた。
【００７６】
実施例１：４−フルオロメチル−Ｎ−［２−（トリチルスルファニル）エチル］ベンズアミドの製造、脱保護及びクロロアセチル修飾ペプチドへの部位特異的結合
１．ａ）Ｓ−トリチルシステアミン
【００７７】
【化２９】
2005520857.tif 000031
【００７８】
トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（５０ｍｌ）中にシステアミン（Ｆｌｕｋａ、３．８５ｇ、５０．０ｍｍｏｌ）を含む撹拌溶液に、トリフェニルメタノール（１３．０ｇ、５０．０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で３０分間撹拌し、濃縮した。残留物にエーテル（２５０ｍｌ）を添加した。沈殿した物質を濾別し、エーテルで洗った。ＴＦＡ塩を１Ｍ  ＫＯＨ水溶液（１５０ｍｌ）とエーテル（１５０ｍｌ）との間で分配した。相を分離し、エーテル相を乾燥した（ＭｇＳＯ4）。溶液を濾過して濃縮し、生成物をエーテル／ｎ−ヘキサンから晶出させて９．２０ｇ（５８％）の白色固体を得た。
【００７９】
１．ｂ）４−ヒドロキシメチル−Ｎ−［２−（トリチルスルファニル）エチル］ベンズアミド
【００８０】
【化３０】
2005520857.tif 000032
【００８１】
ジクロロメタン（４０ｍｌ）中にＳ−トリチルシステアミン（１．６０ｇ、５．００ｍｍｏｌ）及び４−ヒドロキシメチル安息香酸ペンタフルオロフェニルエステル（ＭｉｌｌｉＧｅｎ、１．５１ｇ、５．００ｍｍｏｌ）を含む溶液に、Ｎ−メチルモルホリン（０．５５ｍｌ、５．０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で３６時間撹拌した。沈殿した物質を濾別し、ジクロロメタンで洗い、乾燥して１．３０ｇ（５７％）の白色固体を得た。ＮＭＲ分析結果は構造に合致していた。
【００８２】
１．ｃ）メタンスルホン酸４−［２−（トリチルスルファニル）エチルカルバモイル］ベンジルエステル
【００８３】
【化３１】
2005520857.tif 000033
【００８４】
乾燥ＴＨＦ（８ｍｌ）中に４−ヒドロキシメチル−Ｎ−［２−（トリチルスルファニル）エチル］ベンズアミド（２２６ｍｇ、０．５００ｍｍｏｌ）を含む溶液に、Ｎ−メチルピロリジノン（ＮＭＰ）（６１μｌ、０．５５ｍｍｏｌ）及び塩化メシル（８５μｌ、１．１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で４８時間撹拌し、シリカで濾過し、濃縮した。生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカ、クロロホルム中１％メタノール）で精製して２１３ｍｇの油を得たが、この油はゆっくりと凝固した。ＮＭＲ分析結果は構造に合致していた。
【００８５】
１．ｄ）４−フルオロメチル−Ｎ−［２−（トリチルスルファニル）エチル］ベンズアミド
【００８６】
【化３２】
2005520857.tif 000034
【００８７】
乾燥アセトニトリル（２００μｌ）中にＫｒｙｐｔｏｆｉｘ（Ｆｌｕｋａ、１５ｍｇ、４０μｍｏｌ）を含む溶液を固体フッ化カリウム（２．３ｍｇ、８０μｍｏｌ）に添加した。混合物を５分間振盪した。Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ／ＫＦ溶液を、アセトニトリル（４００μｌ）中にメタンスルホン酸４−［２−（トリチルスルファニル）エチルカルバモイル］ベンジルエステル（２１ｍｇ、４０μｍｏｌ）を含む溶液に添加した。混合物を６５℃で１０分間加熱した。アリコートをＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ３μｍ  Ｃ１８（２）  ５０×４．６０ｍｍ、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ、勾配は１０分で４０〜８０％Ｂ、流量は２．０ｍｌ／分、２１４ｎｍ及び２５４ｎｍでＵＶ検出）で分析したところ、出発原料（ｔR ５．６分）が新しい生成物（ｔR ６．３分）に完全に転化したことがわかった。逆相分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８（２）  ５μｍ  ２５０×２１．２ｍｍ、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ、勾配は６０分で４０〜８０％Ｂ、流量は１０．０ｍｌ／分、２１４ｎｍでＵＶ検出）で精製して４．５ｍｇの白色固体を得た。構造はＮＭＲ分光法で確認した。
【００８８】
１．ｅ）４−フルオロメチル−Ｎ−（２−メルカプトエチル）ベンズアミド
【００８９】
【化３３】
2005520857.tif 000035
【００９０】
１．４ｍｇ（３．０μｍｏｌ）の４−フルオロメチル−Ｎ−［２−（トリチルスルファニル）エチル］ベンズアミドに５０μｌのＴＦＡ／ＴＩＳ／Ｈ2Ｏ（９５：２．５：２．５）混合物を添加した。フラスコを静かに５分間旋回し、次いで真空中で濃縮した。ＬＣ−ＭＳ分析（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ３μｍ  Ｃ１８（２）  ５０×２．００ｍｍ、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＨＣＯＯＨ及びＢ＝アセトニトリル／０．１％ＨＣＯＯＨ、勾配は１０分で５〜６０％Ｂ、流量は０．３ｍｌ／分、２１４ｎｍ及び２５４ｎｍでＵＶ検出、ＥＳＩ−ＭＳ）の結果、ＭＨ+に対応する２１４にｍ／ｚを有するピーク（ｔR ６．８分）が得られた。
【００９１】
１．ｆ）クロロアセチル修飾ペプチドへの部位特異的結合
【００９２】
【化３４】
2005520857.tif 000036
【００９３】
上記で得られた残留物を１００μｌの０．１Ｍ炭酸水素ナトリウム／炭酸二ナトリウム緩衝液（ｐＨ９．１）に溶解した。この混合物に、１５０μｌの緩衝液中にペプチドクロロアセチル−ＫＧＦＧＫ−ＯＨ（３．７ｍｇ、６．０μｍｏｌ）を含む溶液を添加した。混合物を４５℃で２０分間加熱した。ＬＣ−ＭＳ分析（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ３μｍ  Ｃ１８（２）  ５０×２．００ｍｍ、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＨＣＯＯＨ及びＢ＝アセトニトリル／０．１％ＨＣＯＯＨ、勾配は１０分で５〜６０％Ｂ、流量は０．３ｍｌ／分、２１４ｎｍ及び２５４ｎｍでＵＶ検出、ＥＳＩ−ＭＳ）によれば、フルオロ化合物が、結合体についてのＭＨ+に対応する７８９．４にｍ／ｚを示す新しい生成物（ｔR ４．３分）に完全に転化したことがわかった。結合生成物を逆相ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８（２）  ５μｍ  ２５０×２１．２ｍｍ、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ、勾配は６０分で５〜６０％Ｂ、流量は１０．０ｍｌ／分、２１４ｎｍでＵＶ検出）で精製して２ｍｇの白色固体を得た。
【００９４】
実施例２：（３−フルオロ−プロピルスルファニル）トリフェニルメタンの製造、脱保護及びクロロアセチルペプチドへの部位特異的結合
２．ａ）３−トリチルスルファニル−プロパン−１−オールの合成
【００９５】
【化３５】
2005520857.tif 000037
【００９６】
塩化トリチル（２７．９ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（４９μｌ、０．５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２ｍｌ）に溶解した後、３−メルカプト−１−プロパノール（９μｌ、０．１ｍｍｏｌ）を添加した。６時間後にＤＣＭを減圧下で蒸発させ、粗生成物を逆相分取クロマトグラフィー（Ｖｙｄａｃ  ２１８ＴＰ１０２２カラム、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ3ＣＮ／０．１％ＴＦＡ、勾配は４０分で３０〜７０％Ｂ、流量は１０ｍｌ／分、２５４ｎｍで検出）で精製した。収量６ｍｇの精製物質を得た（分析用ＨＰＬＣ、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８，００Ｂ−４２５１−Ｅ０、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ3ＣＮ／０．１％ＴＦＡ、勾配は１０分で３０〜７０％Ｂ、流量は１．０ｍｌ／分、保持時間は２１４ｎｍ及び２５４ｎｍで検出して７．７３分）。構造はＮＭＲで確認した。
【００９７】
２．ｂ）メタンスルホン酸３−トリチルスルファニル−プロピルエステルの合成
【００９８】
【化３６】
2005520857.tif 000038
【００９９】
ＴＨＦ（１ｍｌ）中に３−トリチルスルファニル−プロパン−１−オール（５ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（３２μｌ、０．２３ｍｍｏｌ）を含む溶液に、塩化メシル（６μｌ、０．０７５ｍｍｏｌ）を添加した。３０分後、ＴＨＦを減圧下で蒸発させ、粗生成物をＤＣＭに溶解し、炭酸水素ナトリウムの飽和水溶液及び塩化ナトリウムの飽和溶液で洗い、ＭｇＳＯ4で乾燥した。減圧下で蒸発させた後に収量１０ｍｇを得た（分析用ＨＰＬＣ、カラム：Ｌｕｎａ  Ｃ１８，００Ｂ−４２５１−Ｅ０、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ3ＣＮ／０．１％ＴＦＡ、勾配は１０分で４０〜８０％Ｂ、流量は１．０ｍｌ／分、保持時間は２１４ｎｍ及び２５４ｎｍで検出して７．１２分）。構造はＮＭＲで確認した。
【０１００】
２．ｃ）（３−フルオロ−プロピルスルファニル）トリフェニルメタンの合成
【０１０１】
【化３７】
2005520857.tif 000039
【０１０２】
アセトニトリル（０．２ｍｌ）中にＫＦ（１．４ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）及びＫｒｙｐｔｏｆｉｘ  ２２２（９．０ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）を溶解した（加熱）。アセトニトリル（０．２ｍｌ）中に溶解したメタンスルホン酸３−トリチルスルファニル−プロピルエステル（５ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を８０°で９０分間加熱した。粗生成物を逆相分取クロマトグラフィー（Ｖｙｄａｃ  ２１８ＴＰ１０２２カラム、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ3ＣＮ／０．１％ＴＦＡ、勾配は４０分で４０〜８０％Ｂ、流量は１０ｍｌ／分、２５４ｎｍで検出）で精製した。収量２ｍｇの精製物質を得た（分析用ＨＰＬＣ、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８，００Ｂ−４２５１−Ｅ０、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ3ＣＮ／０．１％ＴＦＡ、勾配は１０分で４０〜８０％Ｂ、流量は１．０ｍｌ／分、保持時間は２１４ｎｍ及び２５４ｎｍで検出して８．２分）。構造はＮＭＲで確認した。
【０１０３】
２．ｄ）３−フルオロ−プロパン−１−チオールとＣｌ−Ａｃ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−ＯＨとの結合
【０１０４】
【化３８】
2005520857.tif 000040
【０１０５】
ＴＩＳ（５μｌ）及び水（５μｌ）の存在下で、（３−フルオロ−プロピルスルファニル）トリフェニルメタン（１．０ｍｇ、０．００３ｍｍｏｌ）からのトリチル基をＴＦＡ（２５μｌ）で解離した（５分）。ＴＦＡ溶液を氷上で冷却しながら、ｐＨが９になるまでアンモニア（２５％）を添加した。５０μｌの水中にＣｌＣＨ2ＣＯ−ＫＧＦＧＫ−ＯＨ（３．６ｍｇ、０．００６ｍｍｏｌ）を含む溶液を添加し、ｐＨをアンモニアで９に調整した。反応混合物を６０°で３０分間加熱した。反応混合物を水＋０．１％ＴＦＡで失活させ、逆相分取クロマトグラフィー（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ，Ｃ１８，００Ｇ−４２５３−Ｎ０カラム、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ3ＣＮ／０．１％ＴＦＡ、勾配は３０分で００〜３０％Ｂ、流量は５ｍｌ／分、２５４ｎｍで検出）を用いて精製した。収量０．４ｍｇの精製物質を得た（分析用ＨＰＬＣ、カラム：Ｌｕｎａ  ００Ｂ−４２５１−Ｅ０、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ3ＣＮ／０．１％ＴＦＡ、勾配は１０分で００〜３０％Ｂ、流量は１．０ｍｌ／分、保持時間は２１４ｎｍ及び２５４ｎｍで検出して６．８８分）。質量分析法を用いてさらに特性決定を行ったところ、６７０．３５［Ｍ−Ｈ+］のｍ／ｚ値が得られた。
【０１０６】
実施例３：（２−｛２−［２−（２−フルオロ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エチル）−トリチルスルフィドの製造、脱保護及びクロロアセチル修飾ペプチドへの部位特異的結合
３．ａ）トルエン−４−スルホン酸２−｛２−［２−（２−ヒドロキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エチルエステル
【０１０７】
【化３９】
2005520857.tif 000041
【０１０８】
２−｛２−［２−（２−ヒドロキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エタノール（２０ｇ、１０３ｍｍｏｌ）中に塩化ｐ−トルエンスルホニル（９．８２ｇ、５１．５ｍｍｏｌ）を含む０℃の撹拌懸濁液に、トリエチルアミン（１３ｍｌ、９３ｍｍｏｌ）を滴下した。懸濁液を０℃で１時間撹拌し、次いで室温でさらに１６時間撹拌した。得られた混合物をジクロロメタン（３５０ｍｌ）に溶解した。得られた無色透明の溶液を１Ｍ塩酸（２×１００ｍｌ）で抽出し、水（２００ｍｌ）で１回抽出した。有機相を乾燥し（ＭｇＳＯ4）、濾過し、蒸発させて無色の油を得た。酢酸エチルを用いるフラッシュクロマトグラフィーで粗生成物を精製した。最初にテトラエチレングリコールジトシレートが溶出し、次いで８．８９ｇ（４９％）のトルエン−４−スルホン酸２−｛２−［２−（２−ヒドロキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エチルエステルが無色の油として溶出した。
【０１０９】
３．ｂ）２−｛２−［２−（２−メルカプト−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エタノール
【０１１０】
【化４０】
2005520857.tif 000042
【０１１１】
無水アルコール（３２ｍｌ）中にチオ尿素（０．９４ｇ、１２．３５ｍｍｏｌ）及びトルエン−４−スルホン酸２−｛２−［２−（２−ヒドロキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エチルエステル（４．０９ｇ、１１．７５ｍｍｏｌ）を含む溶液を、アルゴン雰囲気下で２４時間加熱還流した。混合物を冷却し、１５ｍｌのエタノール／水（９：１、ｖ／ｖ）中にＮａＯＨ（１．２３ｇ、３０．７５ｍｍｏｌ）を含む溶液を添加した。アルゴン下で還流をさらに２．５時間続けた。次いで、反応混合物を周囲温度に冷却し、濃塩酸を用いてｐＨ２に酸性化し、減圧下で濃縮した。酢酸エチル／無水アルコール（１０：１）を用いるフラッシュクロマトグラフィーで残留物を精製し、生成物を無色の油として得た。収量１．５５ｇ（６６％）。
【０１１２】
３．ｃ）２−｛２−［２−（２−トリチルスルファニル−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エタノール
【０１１３】
【化４１】
2005520857.tif 000043
【０１１４】
丸底フラスコに入れた２−｛２−［２−（２−メルカプト−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エタノール（３１０ｍｇ、１．４７ｍｍｏｌ）及び塩化トリチル（４５２ｍｇ、１．６２ｍｍｏｌ、１．１当量）に、トリエチルアミン（２．１ｍｌ、１０当量）及びＴＨＦ（２５ｍｌ）を同時に添加した。初期の赤色は、周囲温度で１時間撹拌すると消失した。反応をＴＬＣ（酢酸エチル／エタノール（１：１）で監視したところ、６時間後に完了した。その後、メタノール（６ｍｌ）を添加して過剰の塩化トリチルを消費させ、混合物を５分間撹拌してから溶媒を蒸発させた。１００％酢酸エチルを用いるフラッシュクロマトグラフィーで残留物を精製し、生成物（５５０ｍｇ、８３％）を無色の油として得た。
【０１１５】
３．ｄ）メタンスルホン酸２−｛２−［２−（２−トリチルスルファニル−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エチルエステル
【０１１６】
【化４２】
2005520857.tif 000044
【０１１７】
２−｛２−［２−（２−トリチルスルファニル−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エタノール（２２７ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１３９μｌ、１．０ｍｍｏｌ）の撹拌ＴＨＦ（１２ｍｌ）溶液に、塩化メチルスルホニル（４７μｌ、０．６０ｍｍｏｌ、１．２当量）を添加した。周囲温度で２時間撹拌した後、混合物を濾過して沈殿したトリエチルアミン塩酸塩を除去し、溶媒を蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィーで残留物を精製し、生成物（２３８ｍｇ、９０％）を無色の油として得た。
【０１１８】
３．ｅ）（２−｛２−［２−（２−フルオロ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エチル）−トリチルスルフィドの合成
【０１１９】
【化４３】
2005520857.tif 000045
【０１２０】
メタンスルホン酸２−｛２−［２−（２−トリチルスルファニル−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エチルエステル（７１．６７ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）及びフッ化テトラブチルアンモニウム（ＴＨＦ中１．１Ｍ、１２７μｌ、０．１４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液を９０℃で３０分間加熱した。混合物を周囲温度に冷却し、蒸発乾固させた。酢酸エチル／ヘキサン（１：１）を用いるフラッシュクロマトグラフィーで生成物を精製し、生成物（７１％）を無色の油として得た。
【０１２１】
実施例３．ｆ）トリチル基の脱保護及びクロロアセチルペプチドへの部位特異的結合
【０１２２】
【化４４】
2005520857.tif 000046
【０１２３】
トリチル基の脱保護及びクロロアセチル官能化ペプチドへの部位特異的結合は、上述の実施例１．ｅ）及びｆ）に記載したようにして行った。
【０１２４】
実施例４〜６のためのＨＰＬＣ方法
Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｇｏｌｄ（登録商標）、カラム：Ｌｕｎａ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ），Ｃ１８，３μｍ，５０×４．６ｍｍ（内径）、流量１ｍｌ／分、溶媒Ａ：水（０．１％ＴＦＡ）、溶媒Ｂ：アセトニトリル（０．１％ＴＦＡ）。
【０１２５】
勾配方式１：１分間４０％Ｂ、１５分で４０→８０％Ｂ、５分間８０％Ｂ。
【０１２６】
勾配方式２：１分間０％Ｂ、１０分で０→３０％Ｂ、５分間３０％Ｂ、５分で３０→８０％Ｂ。
【０１２７】
実施例４：４−［18Ｆ］−フルオロメチル−Ｎ−［２−トリチルスルファニル）エチル］−ベンズアミドの製造、脱保護及びクロロアセチル修飾ペプチドへの部位特異的結合
４．ａ）３−［18Ｆ］−フルオロメチル−Ｎ−（２−メルカプトトリチル−エチル）−ベンズアミドの製造
【０１２８】
【化４５】
2005520857.tif 000047
【０１２９】
この製造は、実施例５ａ）に記載したものに類似した方法で行った。実施例１ｃ）に記載したようにして製造したメシレート前駆体を室温で１５分間撹拌して、所望生成物を２２％の放射化学収率（ＨＰＬＣ）で得た。
【０１３０】
４．ｂ）ペプチドＣｌ−ＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−ＯＨへの化学選択的連結
【０１３１】
【化４６】
2005520857.tif 000048
【０１３２】
実施例４ａ）からの18Ｆ−シントンの脱保護及びペプチド前駆体Ｃｌ−ＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−ＯＨとの連結を、実施例５に記載した方法に従って行った。ＨＰＬＣ分析により、８０％の放射化学純度を有する所望生成物が生成されたことがわかった。
【０１３３】
実施例５：３−［18Ｆ］−フルオロ−プロピルスルファニル）トリフェニルメタンの製造、脱保護及びクロロアセチルペプチドへの部位特異的結合
５．ａ）18Ｆ−シントン：３−［18Ｆ］−フルオロ−１−メルカプトトリチル−プロパンの製造
【０１３４】
【化４７】
2005520857.tif 000049
【０１３５】
Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ（登録商標）２２２（１０ｍｇ）、炭酸カリウム（１ｍｇを５０μｌの水に溶解）及びアセトニトリル（０．８ｍｌ）を仕込んだＷｈｅａｔｏｎバイアル（２ｍｌ）に、フッ素−１８含有水（１０ｍＣｉ、１ｍｌ）を添加した。窒素ガス流下で１１０℃で１時間加熱することで溶媒を除去した。無水アセトニトリル（０．５ｍｌ）を添加し、前回と同様にして再び蒸発させた。この段階を２回繰り返した。バイアルを室温に冷却した後、実施例２ｂ）に記載したようにして製造したメシチレート（１ｍｇ）を無水ＤＭＳＯ（０．２ｍｌ）中に含む溶液を注入した。反応混合物を８０℃で５分間撹拌し、ＨＰＬＣで分析した（勾配１、放射化学収率９０％）。
【０１３６】
反応混合物をＤＭＳＯ／水（１：１ｖ／ｖ、０．１５ｍｌ）で希釈し、コンディショニング（１０ｍｌアセトニトリル、２０ｍｌ水）済みのＳｅｐＰａｋ−Ｐｌｕｓカートリッジ（tＣ１８、Ｗａｔｅｒｓ）上に装填した。カートリッジを水で洗い、アセトニトリルを用いて生成物を溶出した。放射化学純度は９９％であった。
【０１３７】
５．ｂ）Ｃｌ−ＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−ＯＨに対するａ）の化学選択的連結
【０１３８】
【化４８】
2005520857.tif 000050
【０１３９】
窒素ガス流及び１００℃での加熱を用いて、アセトニトリル中に５ａ）からの生成物を含む溶液（０．５ｍｌ、１．１ｍＣｉ）を蒸発乾固させた。ＴＦＡ（０．０５ｍｌ）、トリイソプロピルシラン（０．０１ｍｌ）及び水（０．０１ｍｌ）の混合物を添加した後、８０℃で１０分間加熱した。バイアルを０℃に冷却した後、アンモニア（水中２７％、０．１ｍｌ）及び水（０．０５ｍｌ）中のＣｌ−ＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−ＯＨ（１ｍｇ）を添加した。混合物を８０℃で３０分間加熱した。ＨＰＬＣ（勾配２）による分析の結果、９３％の放射化学純度を有する所望生成物が生成されたことがわかった。
【０１４０】
実施例６：（２−｛２−［２−（２−［18Ｆ］−フルオロ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エチル）−トリチルスルフィドの製造、脱保護及びクロロアセチル修飾ペプチドへの部位特異的結合
６．ａ）18Ｆ−シントン：２−｛２−［２−（２−［18Ｆ］−フルオロ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−メルカプトトリチル−エタンの製造
【０１４１】
【化４９】
2005520857.tif 000051
【０１４２】
この製造は、実施例５ａ）に記載した方法と同様にして行った。実施例３ｄ）に記載したようにして製造したメシレート前駆体を８０℃のＤＭＳＯ中で１５分間反応させた後、放射化学収率７６％の生成物を得た（ＨＰＬＣ）。Ｓｅｐ−Ｐａｋによる抽出の結果、放射化学純度９７％の所望生成物が得られた。
【０１４３】
６．ｂ）ペプチドＣｌ−ＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−ＯＨへの化学選択的連結
【０１４４】
【化５０】
2005520857.tif 000052
【０１４５】
実施例６ａ）からの18Ｆ−シントンの脱保護及びペプチド前駆体Ｃｌ−ＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−ＯＨとの連結反応は、実施例５に記載した方法に従って行った。ＨＰＬＣ分析によれば、４１％の放射化学純度を有する所望生成物が生成されたことがわかった。
【０１４６】
実施例７
［Ｃｙｓ2-6］シクロ［ＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ（４−｛３−［２−（４−フルオロメチル−ベンゾイルアミノ）−エチルスルファニル］−２，５−ジオキソ−ピロリジン−１−イルメチル｝−シクロヘキサン−１−カルボニル）−Ｃｙｓ2−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ6−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ］−ＮＨ2の合成
【０１４７】
【化５１】
2005520857.tif 000053
【０１４８】
７．ａ）［Ｃｙｓ2-6］シクロ［ＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ2−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ6−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ］−ＮＨ2の合成
【０１４９】
【化５２】
2005520857.tif 000054
【０１５０】
国際公開公報第ＷＯ０３／００６４９１号に記載されたようにして表題化合物を合成した。
【０１５１】
７．ｂ）［Ｃｙｓ2-6］シクロ［ＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ（４−［Ｎ−マレイミドメチル］−シクロヘキサン−１−カルボニル）−Ｃｙｓ2−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ6−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ］−ＮＨ2の合成
【０１５２】
【化５３】
2005520857.tif 000055
【０１５３】
１ｍＬのＤＭＦに溶解した上記４ａ）からのペプチド５ｍｇに、３ｍｇのスルホスクシンイミジル４−［Ｎ−マレイミドメチル］−シクロヘキサン−１−カルボキシレート（Ｐｉｅｒｃｅ）及び０．０５ｍＬのＮＭＭを添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した後、５ｍＬの水で希釈し、半調製用Ｌｕｎａ  Ｃ１８カラム上に装填した。生成物画分を分取し凍結乾燥して、１ｍｇの所望生成物を得た。構造はＭＡＬＤＩ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋の期待値１１８９、実測値１１９０）で確認した。
【０１５４】
７．ｃ）マレイミド修飾ペプチドへの部位特異的結合
【０１５５】
【化５４】
2005520857.tif 000056
【０１５６】
（上述の実施例１ｄからの）４−フルオロメチル−Ｎ−［２−（トリチルスルファニル）エチル］ベンズアミド０．１６ｍｇ（０．３４μｍｏｌ）に、５０μｌのＴＦＡ／ＴＩＳ／Ｈ2Ｏ（９５：２．５：２．５）混合物を添加した。フラスコを静かに５分間旋回し、次いで真空中で濃縮した。残留物を５０μｌの水に溶解した。５０μｌの水中に０．４ｍｇ（０．３４μｍｏｌ）のマレイミド修飾ペプチドを含む溶液を混合物に添加し、０．００１Ｍ水酸化ナトリウムでｐＨを６．５に調整した。５０分後、ＬＣ−ＭＳ分析（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ３μｍ  Ｃ１８（２）  ５０×２．００ｍｍ、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＨＣＯＯＨ及びＢ＝アセトニトリル／０．１％ＨＣＯＯＨ、勾配は１０分で０〜５０％Ｂ、流量は０．３ｍｌ／分、２１４ｎｍ及び２５４ｎｍでＵＶ検出、ＥＳＩ−ＭＳ）によれば、マレイミド修飾ペプチドが、結合体についてのＭ＋Ｈ＋に対応する１４００．７にｍ／ｚを示す新しい生成物（ｔR ７．６分）にほぼ完全に転化したことがわかった。
【０１５７】
実施例８
［Ｃｙｓ2-6］シクロ［ＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ（４−｛３−［２−（４−［18Ｆ］−フルオロメチル−ベンゾイルアミノ）−エチルスルファニル］−２，５−ジオキソ−ピロリジン−１−イルメチル｝−シクロヘキサン−１−カルボニル）−Ｃｙｓ2−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ6−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ］−ＮＨ2の合成
実施例７ｃに記載したものに類似した方法を用いて４−［18Ｆ］−フルオロメチル−Ｎ−［２−（トリチルスルファニル）エチル］ベンズアミド（実施例４）と反応させることで、実施例７ｂの修飾ペプチドから表題化合物を製造した。
【国際調査報告】
2005520857.tif 000093
2005520857.tif 000094
2005520857.tif 000095