(57)【要約】例えばＫＳＰ活性をモジュレートすることによる細胞増殖性疾病・疾患の治療のために有用な化合物、組成物および方法が開示されている。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式I：
【化１】
2005539062.tif 000030
（式中：
Ｗ、Ｘ、Ｙ、およびＺは独立してＮ、Ｃ、ＣＨ、Ｏ、またはＳであり；そしてＺは存在しなくても良く、ただしＷ、Ｘ、Ｙ、およびＺのうちの２以下は−Ｎ＝であり、そしてＺが存在しない場合にのみＷ、Ｘ、またはＹはＯまたはＳであることができ；
構造中の点線は所望により二重結合を表し；
ＴおよびＴ’は独立して共有結合、−Ｃ（Ｏ）−、または置換されていてもよい低級アルキレンであり；
Ｒ１は水素、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいヘテロアリール、および置換されていてもよいヘテロアラルキルから選択され；
Ｒ２およびＲ２’は独立して水素、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルコキシ、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいヘテロアリール、および置換されていてもよいヘテロアラルキルから選択され；またはＲ２およびＲ２’は一緒になって、置換されていてもよい３〜７員環を形成し；
Ｒ１２は水素、置換されていてもよいアルキル−、置換されていてもよいアリール−、置換されていてもよいアラルキル−、置換されていてもよいヘテロアリール−、置換されていてもよいヘテロアラルキル−、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ３、および−Ｓ（Ｏ）２−Ｒ３ａから選択され；
Ｒ３は水素、置換されていてもよいアルキル−、置換されていてもよいアリール−、置換されていてもよいアラルキル−、置換されていてもよいヘテロアリール−、置換されていてもよいヘテロアラルキル−、Ｒ１５Ｏ−およびＲ１７−ＮＨ−から選択され；
Ｒ３ａは置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいヘテロアラルキル、およびＲ１５−ＮＨ−から選択され；
Ｒ４は水素、置換されていてもよいアルキル−、置換されていてもよいアリール−、置換されていてもよいアラルキル−、置換されていてもよいヘテロアラルキル−、および置換されていてもよいヘテロシクリル−から選択され；
またはＲ４およびＲ１２は一緒になって、それらが結合している窒素とともに、置換されていてもよい５〜１２員窒素含有複素環を形成し、該複素環は複素環中にＮ、Ｏ、およびＳから選択される１〜２個のさらなるヘテロ原子を所望により含み；
またはＲ４およびＲ２は一緒になって、置換されていてもよい５〜１２員窒素含有複素環を形成し、該複素環は複素環中にＮ、Ｏ、およびＳから選択される１〜２個のさらなるヘテロ原子を所望により含み；
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は独立して水素、アシル、置換されていてもよいアルキル−、置換されていてもよいアルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシル、ニトロ、シアノ、置換されていてもよいアミノ、アルキルスルホニル−、アルキルスルホンアミド−、アルキルチオ−、カルボキシアルキル−、アミノカルボニル−、置換されていてもよいアリールおよび置換されていてもよいヘテロアリール−から選択され、ただしＷ、Ｘ、Ｙ、またはＺがそれぞれ−Ｎ＝、Ｏ、Ｓであるかまたは存在しない場合、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は存在せず；
Ｒ１５は置換されていてもよいアルキル−、置換されていてもよいアリール−、置換されていてもよいアラルキル−、置換されていてもよいヘテロアリール−、および置換されていてもよいヘテロアラルキル−から選択され；そして
Ｒ１７は水素、置換されていてもよいアルキル−、置換されていてもよいアリール−、置換されていてもよいアラルキル−、置換されていてもよいヘテロアリール−、または置換されていてもよいヘテロ−アラルキル−である）
により表される群より選択される化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
【請求項２】
以下：
ＴおよびＴ’の１つまたは両方は共有結合であり；
Ｗ、Ｘ、ＹおよびＺは独立して−Ｃ＝または−Ｎ＝であり；
Ｒ１は水素、置換されていてもよいＣ１−Ｃ４アルキル、置換されていてもよいフェニル−Ｃ１−Ｃ４−アルキル−、置換されていてもよいヘテロアリール−Ｃ１−Ｃ４−アルキル−、置換されていてもよいナフタレニルメチル、置換されていてもよいフェニル、またはナフチルであり；
Ｒ２は置換されていてもよいＣ１−Ｃ４アルキルであり；
Ｒ２’は水素であり；
Ｒ１２は−Ｃ（Ｏ）Ｒ３であり；
Ｒ３は置換されていてもよいＣ１−Ｃ８アルキル、置換されていてもよいアリール−Ｃ１−Ｃ４−アルキル−、置換されていてもよいヘテロアリール−Ｃ１−Ｃ４−アルキル−、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいアリール、Ｒ１５Ｏ−およびＲ１７−ＮＨ−から選択され；
Ｒ１５は置換されていてもよいＣ１−Ｃ８アルキルおよび置換されていてもよいアリールから選択され；
Ｒ１７は水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル；シクロヘキシル；フェニル；およびハロ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、またはＣ１−Ｃ４アルキルチオにより置換されているフェニルから選択され；
Ｒ４は水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル；シクロヘキシル；ヒドロキシル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシまたはＣ１−Ｃ４アルキルにより置換されているフェニル；ベンジル；ヘテロアリールメチル−；ヘテロアリールエチル−；ヘテロアリールプロピル−；およびＲ１６−アルキレン−から選択され；
Ｒ１６はヒドロキシル、ジ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）アミノ−、（Ｃ１−Ｃ４アルキル）アミノ−、アミノ、（Ｃ１−Ｃ４)アルコキシ−、またはＮ−ヘテロシクリル−（特に、ピロリジノ、ピペリジノまたはイミダゾリル）であり；そして
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は独立してメトキシ、水素、シアノ、またはハロであるが、ただしＷ、Ｘ、Ｙ、またはＺ、がそれぞれ−Ｎ＝である場合、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は存在しない；
の１以上を含んでなる請求項１の化合物。
【請求項３】
以下：
ＴおよびＴ’の両方は共有結合であり；
Ｗ、Ｘ、ＹおよびＺはＣであり；
Ｒ１は置換されていてもよいフェニル−Ｃ１−Ｃ４−アルキル−または置換されていてもよいヘテロアリール−Ｃ１−Ｃ４−アルキル−であり；
Ｒ２はエチルまたはプロピルであり；
Ｒ３は置換されていてもよいＣ１−Ｃ８アルキル、置換されていてもよいヘテロアリール、または置換されていてもよいアリールであり；
Ｒ４はＲ１６−アルキレン−であり；
Ｒ１６はアミノ、Ｃ１−Ｃ４アルキルアミノ−、ジ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）アミノ−、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ−、ヒドロキシル、またはＮ−ヘテロシクリルであり；
Ｒ５はアミノ、アルキルアミノ、トリフルオロメチル、水素またはハロであり；
Ｒ６は水素、アルキル、またはハロであり；
Ｒ７は水素、ハロ、アルキル、アルコキシ、シアノ、またはトリフルオロメチルであり；そして
Ｒ８は水素またはハロである；
の１以上を含んでなる請求項２の化合物。
【請求項４】
以下：
Ｒ１はナフチル、フェニル、ブロモフェニル、クロロフェニル、メトキシフェニル、エトキシフェニル、トリル、ジメチルフェニル、クロロフルオロフェニル、メチルクロロフェニル、エチルフェニル、フェネチル、ベンジル、クロロベンジル、メチルベンジル、メトキシベンジル、シアノベンジル、ヒドロキシベンジル、ジクロロベンジル、ジメトキシベンジル、またはナフタレニルメチルであり；
Ｒ２はi−プロピルであり；
Ｒ３はトリル、ハロフェニル、ハロメチルフェニル、ヒドロキシメチルフェニル、メチレンジオキシフェニル、ホルミルフェニルまたはシアノフェニルであり；
Ｒ４はＲ１６−アルキレン−であり；
Ｒ１６はアミノであり；
Ｒ５、Ｒ６、およびＲ８は水素であり；そして
Ｒ７はシアノ、メトキシまたはハロゲンである；
の１以上を含んでなる請求項３の化合物。
【請求項５】
Ｒ１がベンジル、シアノベンジル、メトキシベンジル、またはナフタレニルメチルである請求項４の化合物。
【請求項６】
Ｒ１がベンジルである請求項５の化合物。
【請求項７】
Ｒ４およびＲ１２がそれらと結合している窒素と一緒になって、式：
【化２】
2005539062.tif 000031
（式中、Ｒ９は水素、置換されていてもよいＣ１−Ｃ８アルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいアリール−Ｃ１−Ｃ４−アルキル−、置換されていてもよいヘテロアリール−Ｃ１−Ｃ４−アルキル−、置換されていてもよいアリール−Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ−、置換されていてもよいヘテロアリール−Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ−、置換されていてもよいヘテロアリール−から選択され；そして
Ｒ１３およびＲ１３’は独立して水素、置換されていてもよいＣ１−Ｃ８アルキル、置換されていてもよいアリール、または置換されていてもよいアリール−Ｃ１−Ｃ４−アルキル−（特には、置換されていてもよいアルキル）である）
の置換されていてもよいイミダゾリニル環を形成している請求項１の化合物。
【請求項８】
以下：
Ｒ９はＣ１−Ｃ４−アルキル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ−、および／またはハロにより置換されているフェニル；フェニル；またはベンジルであり；
Ｒ１３は水素であり；そして
Ｒ１３’は置換されているＣ１−Ｃ４アルキルである；
の１以上を含んでなる請求項７の化合物。
【請求項９】
以下：
Ｒ９はトリル；ハロフェニル；またはハロメチルフェニルであり；
Ｒ１３は水素であり；そして
Ｒ１３’はアミノメチル、アミノエチル、アミノプロピル、アセチルアミノ−メチル、アセチルアミノエチル，ベンジルオキシカルボニルアミノ−メチルまたはベンジルオキシカルボニルアミノ−エチルである；
の１以上を含んでなる請求項８の化合物。
【請求項１０】
Ｒ１２がＲ４と一緒になって、以下の式：
【化３】
2005539062.tif 000032
（式中、Ｒ９は水素、置換されていてもよいＣ１−Ｃ８アルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいアリール−Ｃ１−Ｃ４−アルキル−、および置換されていてもよいヘテロアリール−から選択され；そして
Ｒ１０、Ｒ１０’、Ｒ１４、およびＲ１４’は独立して水素、置換されていてもよいＣ１−Ｃ８アルキル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいアリール−Ｃ１−Ｃ４−アルキル−から選択される）
の置換されていてもよいイミダゾリニル環を形成している請求項１の化合物。
【請求項１１】
以下：
Ｒ９はメチレンジオキシフェニル；フェニル；Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、および／またはハロにより置換されているフェニル；またはベンジルであり；そして
Ｒ１０、Ｒ１０’、Ｒ１４’、およびＲ１４は独立して水素または置換されていてもよいアルキルである；
の１以上を含んでなる請求項１０の化合物。
【請求項１２】
以下：
Ｒ９はメチレンジオキシフェニル−；フェニル；またはメトキシ、ハロおよび／またはメチルにより置換されているフェニルであり；
Ｒ１０およびＲ１０’は独立して水素または置換されていてもよいＣ１−Ｃ４アルキルからなる群より選択され；そして
Ｒ１４’およびＲ１４は水素である；
の１以上を含んでなる請求項１１の化合物。
【請求項１３】
Ｒ２およびＲ２’が結合している立体中心がＲ配置である前記請求項のいずれかに記載の化合物。
【請求項１４】
薬学的に許容される賦形剤および請求項１〜１２に記載のいずれかの化合物の有効量を含んでなる医薬製剤。
【請求項１５】
細胞増殖性疾患を患う患者に請求項１〜１２に記載のいずれかの化合物の有効量を投与することを含んでなる治療方法。
【請求項１６】
細胞増殖性疾患が癌、過形成、再狭窄、心肥大、免疫疾患または炎症である請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
疾患に冒された細胞におけるＫＳＰキネシン活性をモジュレートするために十分な量で、細胞増殖性疾患を患う患者に請求項１の化合物を投与することを含んでなる、細胞増殖性疾患の治療方法。
【請求項１８】
請求項１〜１２のいずれかに記載の化合物および前記化合物の有効量を投与することによる細胞増殖性疾患の治療に関する説明書を含む添付文書または他のラベルを含んでなるキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２００２年１２月１３日に出願された米国仮特許出願第６０／４１０，７４３号からの利益を請求し、全ての目的でこれは本願に組み込まれる。
【０００２】
発明の属する技術分野
本発明は、有糸分裂キネシンであるＫＳＰの阻害剤であって、細胞増殖性疾患（例えば癌、過形成、再狭窄、心肥大、免疫疾患、真菌疾患、および炎症など）の治療に有用な化合物に関する。
【背景技術】
【０００３】
癌の治療に用いられる治療剤の中には、微小管に作用するタキサン系薬剤およびビンカアルカロイドがある。微小管は紡錘体の主要な構造要素である。紡錘体は、細胞分裂により生じる２つの娘細胞のそれぞれへのゲノムの複製コピーの移動に関与する。これらの薬剤による紡錘体の破壊は、癌細胞分裂の抑制をもたらし、癌細胞死を引き起こすと推定される。しかしながら、微小管は、神経プロセスにおける細胞内輸送のためのレールを含む他のタイプの細胞構造を形成する。これらの薬剤は紡錘体を選択的に標的としないため、有用性の制限をもたらす副作用を有する。
【０００４】
これらの薬剤の投与に伴う副作用が軽減されれば治療メリットが実感されるので、癌の治療に用いる薬剤の選択性の向上は大変重要である。従来、癌の治療における劇的な改善は、新規なメカニズムにより作用する治療剤の特定と関係している。タキサン系薬剤のみでなく、トポイソメラーゼI阻害剤であるカンプトテシン類もまたこの例に含む。これらの両方の観点からすれば、有糸分裂キネシンは新規抗癌剤の魅力的な標的である。
【０００５】
有糸分裂キネシンは紡錘体の集合と機能に必須の酵素であるが、一般的には神経プロセスにおけるなどの他の微小管構造の一部ではない。有糸分裂キネシンは有糸分裂の全ての期にわたって必須の役割を果たしている。これらの酵素は、ＡＴＰの加水分解により放出されるエネルギーを、微小管にそって細胞積荷の指向性運動を駆動する機械力に変換する”分子モーター”である。この作業を満足する触媒ドメインは、おおよそ３４０アミノ酸のコンパクトな構造である。有糸分裂中は、キネシンは微小管を組織化して紡錘体である双極性構造にする。キネシンは、有糸分裂の特定の期に関連する紡錘体の構造変化と共に、紡錘体微小管にそっての染色体の移動を媒介する。有糸分裂キネシン機能を実験的に抑制すると、紡錘体の形成異常または機能異常をもたらし、高い頻度で細胞周期停止および細胞死をもたらす。
【０００６】
特定された有糸分裂キネシンの１つにＫＳＰがある。ＫＳＰは、集合して逆方向のホモダイマーからなる双極性ホモテトラマーを形成する、プラス端方向微小管モーターである、進化的に保存されたキネシンサブファミリーに属する。有糸分裂中は、ＫＳＰは紡錘体の微小管に集合している。ＫＳＰに対する抗体のヒト細胞中へのマイクロインジェクションにより、前中期における紡錘体極の分離が阻害され、単極紡錘体が生じ、有糸分裂停止およびプログラム細胞死の誘導がもたらされる。他の、ヒト以外の生命体におけるＫＳＰおよび関連キネシンは、逆平衡微小管を集合させ、お互いに相対的にスライドさせ、それにより２つの紡錘体極を反対側に動かす。ＫＳＰはまた、後期Ｂ紡錘体伸長および紡錘体極における微小管の集合にも介在することができる。
【０００７】
ヒトＫＳＰ（ＨｓＥｇ５とも言う）に関しては、Blangyら Cell, 83: 1159-69 (1995); Whiteheadら Arthriti Rheum., 39: 1635-42 (1996); Galgioら J. Cell Biol., 135: 339-414 (1996); Blangyら J Biol. Chem., 272: 19418-24 (1997); Blangyら Cell Motil Cytoskeleton, 40: 174-82 (1998); Whitehead and Rattner, J. Cell Sci., 111: 2551-61 (1998); Kaiserら JBC 274: 18925-31 (1999); GenBank 受け入れ番号: X85137、NM004523およびU37426 に記載されており、KSP遺伝子(TRIP5)のフラグメントはLeeら Mol Endocrinol., 9: 243-54 (1995);GenBank受け入れ番号L40372 に記載されている。ゼノパス(Xenopus)KSP相同体(Eg5)に加えて、ショウジョウバエ(Drosophila)KLP61 F/KRP1 30もまた報告されている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
ＫＳＰを含む有糸分裂キネシンは、新規抗有糸分裂化学療法剤の発見および開発のための魅力的な標的である。従って、ＫＳＰの阻害に有用な化合物、組成物および方法を提供することが、本発明の目的である。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
発明の概要
上記に概略した目的に基づき、本発明は細胞増殖性疾患の治療に使用できる化合物を提供する。本化合物はＫＳＰ阻害剤であり、特にヒトＫＳＰ阻害剤である。本発明はまた、細胞増殖性疾患の治療に使用することができるかかる化合物を含んでなる組成物、およびかかる化合物または組成物を用いる方法を提供する。
【００１０】
１つの態様において、本発明は、細胞増殖性疾患の治療方法に関し、そしてＫＳＰ活性の阻害による疾患の治療方法に関する。本方法は式I：
【化１】
2005539062.tif 000002
【００１１】
（式中：
Ｗ、Ｘ、Ｙ、およびＺは独立してＮ、Ｃ、ＣＨ、Ｏ、またはＳであり；そしてＺは存在しなくても良く、ただしＷ、Ｘ、Ｙ、およびＺのうちの２以下は−Ｎ＝であり、そしてＺが存在しない場合にのみＷ、Ｘ、またはＹはＯまたはＳであることができ；
構造中の点線は所望により二重結合を表し；
ＴおよびＴ’は独立して共有結合、−Ｃ（Ｏ）−、または置換されていてもよい低級アルキレンであり；
Ｒ１は水素、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいヘテロアリール、および置換されていてもよいヘテロアラルキルから選択され；
Ｒ２およびＲ２’は独立して水素、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルコキシ、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいヘテロアリール、および置換されていてもよいヘテロアラルキルから選択され；またはＲ２およびＲ２’は一緒になって、置換されていてもよい３〜７員環を形成し；
Ｒ１２は水素、置換されていてもよいアルキル−、置換されていてもよいアリール−、置換されていてもよいアラルキル−、置換されていてもよいヘテロアリール−、置換されていてもよいヘテロアラルキル−、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ３、および−Ｓ（Ｏ）２−Ｒ３ａから選択され；
Ｒ３は水素、置換されていてもよいアルキル−、置換されていてもよいアリール−、置換されていてもよいアラルキル−、置換されていてもよいヘテロアリール−、置換されていてもよいヘテロアラルキル−、Ｒ１５Ｏ−およびＲ１７−ＮＨ−から選択され；
Ｒ３ａは置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいヘテロアラルキル、およびＲ１５−ＮＨ−から選択され；
Ｒ４は水素、置換されていてもよいアルキル−、置換されていてもよいアリール−、置換されていてもよいアラルキル−、置換されていてもよいヘテロアラルキル−、および置換されていてもよいヘテロシクリル−から選択され；
またはＲ４およびＲ１２は一緒になって、それらが結合している窒素とともに、置換されていてもよい５〜１２員窒素含有複素環を形成し、該複素環は複素環中にＮ、Ｏ、およびＳから選択される１〜２個のさらなるヘテロ原子を所望により含み；
またはＲ４およびＲ２は一緒になって、置換されていてもよい５〜１２員窒素含有複素環を形成し、該複素環は複素環中にＮ、Ｏ、およびＳから選択される１〜２個のさらなるヘテロ原子を所望により含み；
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は独立して水素、アシル、置換されていてもよいアルキル−、置換されていてもよいアルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシル、ニトロ、シアノ、置換されていてもよいアミノ、アルキルスルホニル−、アルキルスルホンアミド−、アルキルチオ−、カルボキシアルキル−、アミノカルボニル−、置換されていてもよいアリールおよび置換されていてもよいヘテロアリール−から選択され、ただしＷ、Ｘ、Ｙ、またはＺがそれぞれ−Ｎ＝、Ｏ、Ｓであるかまたは存在しない場合、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は存在せず；
Ｒ１５は置換されていてもよいアルキル−、置換されていてもよいアリール−、置換されていてもよいアラルキル−、置換されていてもよいヘテロアリール−、および置換されていてもよいヘテロアラルキル−から選択され；そして
Ｒ１７は水素、置換されていてもよいアルキル−、置換されていてもよいアリール−、置換されていてもよいアラルキル−、置換されていてもよいヘテロアリール−、または置換されていてもよいヘテロ−アラルキル−である）
で表される化合物；式Iの化合物の薬学的に許容される塩；式Iの化合物の薬学的に許容される溶媒和物；または式Iの化合物の薬学的に許容される塩の薬学的に許容される溶媒和物（ただし式Iは単一の立体異性体および立体異性体の混合物を含む）を使用する。
【００１２】
１つの態様において、本発明は、式Iの化合物；式Iの化合物の薬学的に許容される塩；式Iの化合物の薬学的に許容される溶媒和物；または式Iの化合物の薬学的に許容される塩の薬学的に許容される溶媒和物の治療的有効量の投与によるＫＳＰの阻害により治療できる細胞増殖性疾患および他の疾患の治療方法に関する。かかる疾病・疾患は、癌、過形成、再狭窄、心肥大、免疫疾患、真菌疾患および炎症を含む。
【００１３】
他の態様において、本発明はＫＳＰキネシンの阻害に有用な化合物に関する。本化合物は、上記の式I；式Iの化合物の薬学的に許容される塩；式Iの化合物の薬学的に許容される溶媒和物；または式Iの化合物の薬学的に許容される塩の薬学的に許容される溶媒和物で表される構造を有する。本発明はまた、治療的有効量の式Iの化合物；式Iの化合物の薬学的に許容される塩；式Iの化合物の薬学的に許容される溶媒和物；または式Iの化合物の薬学的に許容される塩の薬学的に許容される溶媒和物；および１以上の医薬品賦形剤を含んでなる医薬組成物に関する。他の態様において、本組成物はさらに本発明の化合物以外の化学治療剤を含む。
【００１４】
さらなる態様において、本発明は、ＫＳＰキネシンに結合する化合物（例えば本発明の化合物の結合に置換または競合する化合物など）のスクリーニング法を提供する。本方法は、本発明の標識化合物、ＫＳＰキネシン、および少なくとも１つの候補薬剤を混合し、候補薬剤のＫＳＰキネシンへの結合を測定することを含む。
【００１５】
さらなる態様において、本発明はＫＳＰキネシン活性のモジュレーターのスクリーニング法を提供する。本方法は本発明の化合物、ＫＳＰキネシン、および少なくとも１つの候補薬剤を混合し、候補薬剤のＫＳＰキネシンへの効果を測定することを含む。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
発明の詳細な説明
定義
本明細書において用いる場合、以下の用語は、一般的に、これらが用いられている文脈中で他の意味で使われている場合を除いて以下に説明する意味を有する。以下の略語および用語は、本明細書全体にわたって表示した意味を有する：
Ａｃ＝アセチル
Ｂｏｃ＝ｔ−ブチルオキシカルボニル
Ｂｕ＝ブチル
ｃ−＝シクロ
ＣＢＺ＝カルボベンゾキシ＝ベンジルオキシカルボニル
ＤＣＭ＝ジクロロメタン＝塩化メチレン＝ＣＨ２Ｃｌ２
ＤIＥＡ＝Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ＝Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド
Ｅｔ＝エチル
Ｆｍｏｃ＝９−フルオレニルメトキシカルボニル
ＧＣ＝ガスクロマトグラフィー
ＨＭＤＳ＝ヘキサメチルジシラザン
ＨＯＡｃ＝酢酸
ＨＯＢｔ＝ヒドロキシベンゾトリアゾール
Ｍｅ＝メチル
ｍｅｓｙｌ＝メタンスルホニル
Ｐｈ＝フェニル
ＰｈＯＨ＝フェノール
Ｐｙ＝ピリジン
ｒｔ＝室温
ｓａｔ’ｄ＝飽和
ｓ−＝セカンダリー
ｔ−＝ターシャリー
ＴＥＳ＝トリメチルシリル
ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン
ＴＭＳ＝トリメチルシリル
ｔｏｓｙｌ＝ｐ−トルエンスルホニル
アルキルは、構造が飽和または不飽和であることができる、直鎖、分枝鎖、または環式の脂肪族炭化水素構造もしくはそれらの組み合わせを含むことを意味する。低級−アルキルは１〜５個の炭素原子、好ましくは１〜４個の炭素原子のアルキル基を言う。低級−アルキル基の例は、メチル−、エチル−、プロピル−、イソプロピル−、ブチル−、ｓ−およびｔ−ブチルなどを含む。好ましいアルキル基はＣ２０以下のものである。さらに好ましいアルキル基はＣ１３以下のものである。シクロアルキルはアルキルのサブセットであり、３〜１３炭素原子の環式脂肪族炭化水素基を含む。シクロアルキル基の例は、ｃ−プロピル−、ｃ−ブチル−、ｃ−ペンチル−、ノルボルニル−、アダマンチルなどを含む。シクロアルキル−アルキル−はアルキルの他のサブセットであり、非環式アルキル−を介して親構造に結合しているシクロアルキルを言う。シクロアルキル−アルキルの例は、シクロヘキシルメチル−、シクロプロピルメチル−、シクロヘキシルプロピル−、などを含む。本出願において、アルキルはアルカニル−、アルケニルおよびアルキニル基を含み；これはビニル−、アリル−、イソプレニルなどを含むことを意味する。特定の炭素数を有するアルキル基を命名する場合、その炭素数を有する全ての幾何異性体が含まれることを意味し；従って例えば”ブチル”はｎ−ブチル−、ｓｅｃ−ブチル−、イソブチルおよびｔ−ブチル−を含み；”プロピル”はｎ−プロピル−、イソプロピル−、およびｃ−プロピル−を含むことを意味する。
【００１７】
アルキレン−、アルケニレン−、およびアルキニレン−はアルキル−の他のサブセットであり、アルキル−と同一の残基を含むが、化学構造中に２つの結合部位を有する。アルキレンの例は、エチレン（−ＣＨ２ＣＨ２−）、プロピレン（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、ジメチルプロピレン（−ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２−）およびシクロヘキシルプロピレン（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（Ｃ６Ｈ１３）−）を含む。同様にアルケニレンの例は、エテニレン（−ＣＨ＝ＣＨ−）、プロペニレン（−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−）、およびシクロヘキシルプロペニレン（−ＣＨ＝ＣＨＣＨ（Ｃ６Ｈ１３）−）を含む。アルキニレンの例は、エチニレン（−Ｃ＝Ｃ−）およびプロピニレン（−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−）を含む。
【００１８】
シクロアルケニルはアルキルのサブセットであり、３〜１３炭素原子の不飽和環式炭化水素を含む。シクロアルケニル基の例は、ｃ−ヘキセニル−、ｃ−ペンテニルなどを含む。
【００１９】
アルコキシまたはアルコキシルは、酸素を介して親構造に結合している（即ち、アルキル−Ｏ−基）、直鎖、分枝鎖、または環式配置もしくはそれらの組み合わせの、好ましくは１〜８炭素原子を含むアルキル基を言う。例は、メトキシ−、エトキシ−、プロポキシ−、イソプロポキシ−、シクロプロピルオキシ−、シクロヘキシルオキシ−などを含む。低級−アルコキシは、１〜４炭素を含むアルコキシ基を言う。
【００２０】
アシルは、カルボニル基を介して親構造に結合している、直鎖、分枝鎖、または環式配置もしくはそれらの組み合わせの１〜８炭素原子の基を言う。かかる基は、飽和または不飽和であることができ、そして脂肪族または芳香族であることができる。アシル基の１以上の炭素は、親構造への結合個所がカルボニルのままである限り、酸素、窒素（例えばカルボキサミド）、または硫黄により置換することができる。例は、アセチル−、ベンゾイル−、プロピオニル−、イソブチリル−、オキサリル−、ｔ−ブトキシカルボニル−、ベンジルオキシカルボニル、モルホリニルカルボニルなどを含む。低級−アシルは、１〜４炭素を含むアシル基を言う。
【００２１】
アミノは−ＮＨ２基を言う。“置換アミノ”という用語は、−ＮＨＲまたは−ＮＲＲ基を言い、ここで各Ｒは独立して以下の基：置換されていてもよいアルキル−、置換されていてもよいアルコキシ、置換されていてもよいアミノカルボニル−、置換されていてもよいアリール−、置換されていてもよいヘテロアリール−、置換されていてもよいヘテロシクリル−、アシル−、アルコキシカルボニル−、スルファニル−、スルフィニルおよびスルホニル−（例えばジエチルアミノ、メチルスルホニルアミノ、フラニル−オキシ−スルホンアミノ）から選択される。置換アミノは、基ＮＲｃＣＯＲｂ、−ＮＲｃＣＯ２Ｒａ、および−ＮＲｃＣＯＮＲｂＲｃを含み、ここで
Ｒａは、置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキル−、アリール−、ヘテロアリール−、アリール−Ｃｌ−Ｃ４アルキル−、またはヘテロアリール−Ｃｌ−Ｃ４アルキル−基であり；
ＲｂはＨまたは置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキル−、アリール−、ヘテロアリール−、アリール−Ｃｌ−Ｃ４アルキル−、またはヘテロアリール−Ｃｌ−Ｃ４アルキル−基であり；そして
Ｒｃは水素またはＣ１−Ｃ４アルキル−であり；そして
ここで置換されていてもよいＲｂ基のそれぞれは、独立して、Ｃ１−Ｃ４アルキル−、アリール−、ヘテロアリール−、アリール−Ｃ１−Ｃ４アルキル−、ヘテロアリール−Ｃ１−Ｃ４アルキル−、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル−、−ＯＣ１−Ｃ４アルキル、−ＯＣ１−Ｃ４アルキルフェニル、−Ｃ１−Ｃ４アルキル−ＯＨ、−ＯＣ１−Ｃ４ハロアルキル、ハロゲン、−ＯＨ、−ＮＨ２、−Ｃ１−Ｃ４アルキル−ＮＨ２、−Ｎ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）（Ｃ１−Ｃ４アルキル）、−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）、−Ｎ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）（Ｃ１−Ｃ４アルキルフェニル）−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ４アルキルフェニル）、シアノ、ニトロ、オキソ（ヘテロアリールの置換基として）、−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１−Ｃ４アルキル、−ＣＯＮ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）（Ｃ１−Ｃ４アルキル）、−ＣＯＮＨ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）、−ＣＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ４アルキル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（フェニル）、−Ｎ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ４アルキル）、−Ｎ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）（フェニル）、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−Ｃ４アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−Ｃ４フェニル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、−ＯＣ（Ｏ）Ｃ１−Ｃ４アルキル、−ＳＯ２（Ｃ１−Ｃ４アルキル）、−ＳＯ２（フェニル）、−ＳＯ２（Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル）、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）、−ＳＯ２ＮＨ（フェニル）、−ＮＨＳＯ２（Ｃ１−Ｃ４アルキル）、−ＮＨＳＯ２（フェニル）、および−ＮＨＳＯ２（Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル）から独立して選択される１以上の置換基により非置換あるいは置換されている。
【００２２】
抗有糸分裂剤（antimitotic）は、例えば、分裂中期停止を引き起こすことにより有糸分裂を抑制または予防する薬剤を言う。一部の抗腫瘍剤は増殖を抑制し、抗有糸分裂剤と考えられている。
【００２３】
アリールおよびヘテロアリールは、Ｏ、Ｎ、またはＳから選択される０または１〜４ヘテロ原子をそれぞれが含む、５または６員の芳香環またはヘテロ芳香環；Ｏ、Ｎ、またはＳから選択される０または１〜４（またはそれ以上の）ヘテロ原子をそれぞれが含む、９または１０員の２環式芳香環またはヘテロ芳香環系；またはＯ、Ｎ、またはＳから選択される０または１〜４（またはそれ以上の）ヘテロ原子をそれぞれが含む、１２〜１４員の三環式芳香環またはヘテロ芳香環系を意味する。６〜１４員芳香族炭素環式環は、例えばフェニル−、ナフチル−、インダニル−、テトラリニル−、およびフルオレニルを含み、そして５〜１０員芳香族複素環は、例えばイミダゾリル−、ピリジニル−、インドリル−、チエニル−、ベンゾピラノニル−、チアゾリル−、フラニル−、ベンゾイミダゾリル−、キノリニル−、イソキノリニル−、キノキサリニル、ピリミジニル−、ピラジニル−、テトラゾリルおよびピラゾリル−を含む。
【００２４】
アラルキル−は、アリール部分がアルキル残基を介して親構造に結合している基を言う。例は、ベンジル−、フェネチル−、フェニルビニル−、フェニルアリルなどを含む。ヘテロアラルキル−は、ヘテロアリール部分がアルキル残基を介して親構造に結合している基を言う。例は、フラニルメチル−、ピリジニルメチル−、ピリミジニルエチルなどを含む。
【００２５】
アラルコキシは、−Ｏ−アラルキル基を言う。同様に、ヘテロアラルコキシは、−Ｏ−ヘテロアラルキル−基を言い；アリールオキシ−は−Ｏ−アリール−基を言い；アシルオキシ−は−Ｏ−アシル−基を言い；ヘテロアリールオキシ−は−Ｏ−ヘテロアリール−基を言い；そしてヘテロシクリルオキシ−は、−Ｏ−ヘテロシクリル基を言う（即ち、アラルキル−、ヘテロアラルキル−、アリール−、アシル−、ヘテロシクリル−、またはヘテロアリールが、酸素を介して親構造に結合している）。
【００２６】
カルボキシアルキル−は−アルキル−ＣＯＯＨ基を言う。
【００２７】
アミノカルボニルは−ＣＯＮＲｂＲｃ基を言い、ここで、
ＲｂはＨまたは置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキル−、アリール−、ヘテロアリール−、アリール−Ｃ１−Ｃ４アルキル−、またはヘテロアリール−Ｃ１−Ｃ４アルキル−基であり；そして
Ｒｃは水素またはＣ１−Ｃ４アルキル−であり；そして
ここでそれぞれの置換されていてもよいＲｂ基は、独立して、非置換であるかまたはＣ１−Ｃ４アルキル−、アリール−、ヘテロアリール−、アリール−Ｃ１−Ｃ４アルキル−、ヘテロアリール−Ｃ１−Ｃ４アルキル−、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル−、−ＯＣ１−Ｃ４アルキル−、−ＯＣ１−Ｃ４アルキルフェニル、−Ｃ１−Ｃ４アルキル−ＯＨ、−ＯＣ１−Ｃ４ハロアルキル、ハロゲン、−ＯＨ、−ＮＨ２、−Ｃ１−Ｃ４アルキル−ＮＨ２、−Ｎ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）（Ｃ１−Ｃ４アルキル）、−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）、−Ｎ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）（Ｃ１−Ｃ４アルキルフェニル）、−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ４アルキルフェニル）、シアノ、ニトロ、オキソ（ヘテロアリールの置換基として）、−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１−Ｃ４アルキル、−ＣＯＮ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）（Ｃ１−Ｃ４アルキル）、−ＣＯＮＨ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）、−ＣＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ４アルキル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（フェニル）、−Ｎ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ４アルキル）、−Ｎ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）（フェニル）、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−Ｃ４アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−Ｃ４フェニル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、−ＯＣ（Ｏ）Ｃ１−Ｃ４アルキル、−ＳＯ２（Ｃ１−Ｃ４アルキル）、−ＳＯ２（フェニル）、−ＳＯ２（Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル）、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）、−ＳＯ２ＮＨ（フェニル）、−ＮＨＳＯ２（Ｃ１−Ｃ４アルキル）、−ＮＨＳＯ２（フェニル）、および−ＮＨＳＯ２（Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル）から独立して選択される１以上の置換基により置換されている。アミノカルボニルは、カルバモイル−；低級−アルキルカルバモイル−；ベンジルカルバモイル−；フェニルカルバモイル−；メトキシメチル−カルバモイル−などを含む。
【００２８】
ハロゲンまたはハロは、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素を言う。フッ素、塩素および臭素が好ましい。ジハロアリール−、ジハロアルキル−、トリハロアリールなどは、示された複数のハロゲン（ここでは、それぞれ２、２または３である）により置換されているアリールおよびアルキルを言うが、必ずしも複数の同一のハロゲンで無くともよい。従って４−クロロ−３−フルオロフェニルはジハロアリールの範囲内である。
【００２９】
ヘテロシクリルは、１〜４の炭素が酸素、窒素または硫黄などのヘテロ原子により置換されたシクロアルキルまたはアリール基を意味する。本発明の範囲内の複素環の例は、アゼチジニル−、イミダゾリニル−、ピロリジニル−、ピラゾリル−、ピロリル−、インドリル−、キノリニル−、イソキノリニル−、テトラヒドロイソキノリニル−、ベンゾフラニル−、ベンゾジオキサニル−、ベンゾジオキシル（置換基として存在する場合、通常、メチレンジオキシフェニル−と呼ばれる）、テトラゾリル−、モルホリニル−、チアゾリル−、ピリジニル−、ピリダジニル−、ピペリジニル−、ピリミジニル−、チエニル−、フラニル−、オキサゾリル−、オキサゾリニル−、イソオキサゾリル−、ジオキサニル−、テトラヒドロフラニルなどを含む。“Ｎ−ヘテロシクリル”は窒素含有複素環を意味する。
【００３０】
ヘテロシクリルという用語は、ヘテロシクリル−のサブセットであるヘテロアリール−を含む。Ｎ−ヘテロシクリル基の例は、アゼチジニル−、４−モルホリニル−、４−チオモルホリニル−、１−ピペリジニル−、１−ピロリジニル−、３−チアゾリジニル−、ピペラジニルおよび４−（３，４−ジヒドロベンゾキサジニル）を含む。置換ヘテロシクリルの例は、４−メチル−１−ピペラジニルおよび４−ベンジル−１−ピペリジニル−を含む。
【００３１】
脱離基または原子は、反応条件下で出発物質から開裂し、それにより特定部位での反応を促進する任意の基または原子を言う。かかる基の適切な例は、特記しない限り、ハロゲン原子、メシルオキシ、ｐ−ニトロベンゼンスルホニルオキシおよびトシルオキシ基である。
【００３２】
所望の（optional）または所望により（optionally）は、後に記載する事象または状況が存在してもしなくてもよいことを意味し、前記事象または状況が生じる例と生じない例を記載が含むことを意味する。例えば、本明細書に記載する時、“置換されていてもよいアルキル”は“アルキル”および”置換アルキル”を含む。１以上の置換基を含む任意の基に関して、立体的に非現実的なおよび／または合成的に実現不能なおよび／または本質的に不安定であるいずれの置換または置換パターンがかかる基に導入されないものであることを当業者は理解できるであろう。
【００３３】
置換アルコキシは、アルキル構成成分が置換されているアルコキシ（即ち、−Ｏ−（置換アルキル））を言う。適切な置換アルコキシ基の１つは、“ポリアルコキシ”即ち−Ｏ−（置換されていてもよいアルキレン）−（置換されていてもよいアルコキシ）であり、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、およびポリエチレングリコールおよび−Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｘＣＨ３（ここでｘは約２〜２０の整数、好ましくは約２〜１０、そしてさらに好ましくは約２〜５である）などのグリコールエーテル残基などの基を含む。他の適切な置換アルコキシ基はヒドロキシアルコキシまたは−ＯＣＨ２（ＣＨ２）ｙＯＨ（ここでｙは約１〜１０、好ましくは約１〜４の整数）である。
【００３４】
置換−アルキル−、アリール−、およびヘテロアリール−は、それぞれ、１以上の（最大約５まで、好ましくは最大約約３まで）の水素原子が以下の基：−Ｒａ、−ＯＲｂ、−Ｏ（Ｃ１−Ｃ２アルキル）Ｏ−（例えばメチレンジオキシ−またはエチレンジオキシ−）、−ＳＲｂ、グアニジン、グアニジンの水素の１以上が低級−アルキル基により置換されているグアニジン、−ＮＲｂＲｃ、ハロゲン、シアノ、ニトロ、−ＣＯＲｂ、−ＣＯ２Ｒｂ、−ＣＯＮＲｂＲｃ、−ＯＣＯＲｂ、−ＯＣＯ２Ｒａ、−ＯＣＯＮＲｂＲｃ、−ＮＲｃＣＯＲｂ、−ＮＲｃＣＯ２Ｒａ、−ＮＲｃＣＯＮＲｂＲｃ、−ＣＯ２Ｒｂ、−ＣＯＮＲｂＲｃ−、−ＮＲｃＣＯＲｂ、−ＳＯＲａ、−ＳＯ２Ｒａ、−ＳＯ２ＮＲｂＲｃ、および−ＮＲｃＳＯ２Ｒａ、
（ここでＲａは置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキル−、アリール−、ヘテロアリール−、アリール−Ｃ１−Ｃ４アルキル−、またはヘテロアリール−Ｃ１−Ｃ４アルキル−基であり；
ＲｂはＨまたは置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキル−、アリール−、ヘテロアリール−、アリール−Ｃ１−Ｃ４アルキル−、またはヘテロアリール−Ｃ１−Ｃ４アルキル−基であり；
Ｒｃは水素またはＣ１−Ｃ４アルキル−であり；
ここで、置換されていてもよいＲａ基およびおよびＲｂ基のそれぞれは、独立して、Ｃ１−Ｃ４アルキル−、アリール−、ヘテロアリール−、アリール−Ｃ１−Ｃ４アルキル−、ヘテロアリール−Ｃ１−Ｃ４アルキル−、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル−、−ＯＣ１−Ｃ４アルキル−、−ＯＣ１−Ｃ４アルキルフェニル−、−Ｃ１−Ｃ４アルキル−ＯＨ、−ＯＣ１−Ｃ４ハロアルキル−、ハロゲン、−ＯＨ、−ＮＨ２、−Ｃ１−Ｃ４アルキル−ＮＨ２、
−Ｎ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）（Ｃ１−Ｃ４アルキル）、−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）、−Ｎ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）（Ｃ１−Ｃ４アルキルフェニル）、−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ４アルキルフェニル）、シアノ、ニトロ、オキソ（ヘテロアリールの置換基として）、−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１−Ｃ４アルキル−、−ＣＯＮ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）（Ｃ１−Ｃ４アルキル）、−ＣＯＮＨ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）、−ＣＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ４アルキル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（フェニル）、−Ｎ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ４アルキル）、−Ｎ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）（フェニル）、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−Ｃ４アルキル−、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−Ｃ４フェニル−、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル−、−ＯＣ（Ｏ）Ｃ１−Ｃ４アルキル−、−ＳＯ２（Ｃ１−Ｃ４アルキル）、−ＳＯ２（フェニル）、−ＳＯ２（Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル）、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）、−ＳＯ２ＮＨ（フェニル）、−ＮＨＳＯ２（Ｃ１−Ｃ４アルキル）、−ＮＨＳＯ２（フェニル）、および−ＮＨＳＯ２（Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル）から独立して選択される１以上の置換基により非置換または置換されている）、から独立して選択される置換基により置換されているアルキル−、アリール−、およびヘテロアリールを言う。Ｔおよび／またはＴ’が置換アルキレンである式Iの化合物において、“置換”という用語はまた、１以上の（最大約３、特別には１）炭素原子が、Ｏ、ＮまたはＳから独立して選択されるヘテロ原子により置換されているアルキレン基（−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２−など）も言う
スルファニルは−Ｓ−（置換されていてもよいアルキル）、−Ｓ−（置換されていてもよいアリール）、−Ｓ−（置換されていてもよいヘテロアリール）、および−Ｓ−（置換されていてもよいヘテロシクリル）基を言う。
【００３５】
スルフィニルは−Ｓ（Ｏ）−Ｈ、−Ｓ（Ｏ）−（置換されていてもよいアルキル）、−Ｓ（Ｏ）−置換されていてもよいアリール）、−Ｓ（Ｏ）−（置換されていてもよいヘテロアリール）、−Ｓ（Ｏ）−（置換されていてもよいヘテロシクリル）；および−Ｓ（Ｏ）−（置換されていてもよいアミノ）基を言う。
【００３６】
スルホニルは−Ｓ（Ｏ２）−Ｈ、Ｓ（Ｏ２）−（置換されていてもよいアルキル）、−Ｓ（Ｏ２）−置換されていてもよいアリール）、−Ｓ（Ｏ２）−（置換されていてもよいヘテロアリール）、−Ｓ（Ｏ２）−（置換されていてもよいヘテロシクリル）、−Ｓ（Ｏ２）−（置換されていてもよいアルコキシ）、−Ｓ（Ｏ２）−置換されていてもよいアリールオキシ）、−Ｓ（Ｏ２）−（置換されていてもよいヘテロアリールオキシ）、−Ｓ（Ｏ２）−（置換されていてもよいヘテロシクリルオキシ）；および−Ｓ（Ｏ２）−（置換されていてもよいアミノ）基を言う。
【００３７】
薬学的に許容される塩は、適切な酸または塩基により形成される、遊離化合物の生物学的効果を保持しかつ医薬用として生物学的に好ましくないかあるいは不適切ではない塩を言い、薬学的に許容される酸付加塩および塩基付加塩を含む。薬学的に許容される酸付加塩は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸から誘導される塩、および酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイヒ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸などの有機酸から誘導される塩を含む。
【００３８】
薬学的に許容される塩基付加塩は、ナトリウム、カリウム、リチウムアンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、マンガン、およびアルミニウムの塩などの無機塩基から誘導される塩を含む。特定の実施形態は、アンモニウム、ナトリウム、カルシウム、およびマグネシウム塩である。塩基付加塩はまた、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、およびエタノールアミンなどの、一級、二級、および三級アミン、天然に存在する置換アミンを含む置換アミン、環状アミンおよび塩基性イオン交換樹脂の塩を含む、薬学的に許容される無毒の有機塩基から誘導される塩を含む。
【００３９】
保護基は、有機合成において従来用いられている基を意味し、即ち、化学反応が他の保護されていない反応性部位に選択的に行われ、該基が選択的反応が完了した後に容易に除去されうる、多官能性化合物における１以上の反応性部位を選択的にふさぐ基の意味を有する。例えば、T. H. Greene and P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, Third Edition, John Wiley & Sons, New York (1999) に、種々の保護基が開示されている（その全体を本明細書に組み込む）。例えば、ヒドロキシ保護体は、化合物中に存在する少なくとも１つのヒドロキシル基がヒドロキシ保護基により保護されているものを言う。同様に、アミンおよび他の反応性基も同じように保護できる。
【００４０】
溶媒和物は、溶媒と式Iの化合物またはその塩の相互作用により形成される化合物を言う。式Iの化合物またはその塩の適切な溶媒和物は、水和物を含む薬学的に許容される溶媒和物である。
【００４１】
本明細書に記載の化合物の多くは、１以上の不斉中心（例えばＲ２およびＲ２’（Ｒ２はＲ２’と異なっている）が結合している炭素が結合している）を含み、従って、絶対立体化学構造に関して（Ｒ）−または（Ｓ）−で定義される、エナンチオマー、ジアステレオマー、および他の立体異性体が生じる可能性がある。本発明は、ラセミ混合物、光学的純粋体および中間体混合物を含む、かかるあらゆる可能性のある異性体を含む。光学活性（Ｒ）−および（Ｓ）異性体は、キラルシントンまたはキラル試薬を用いるかあるいは慣用法を用いて分割するかにより製造できる。本明細書に記載の化合物がオレフィン二重結合または他の幾何学的非対称中心を含み、かつ特段の記載が無い場合は、化合物はＥおよびＺ幾何異性体の両方を含む。同様に全ての互変異性体および回転異性体を含む。
【００４２】
所望であれば、結晶化などにより分離できる、ジアステレオ異性体塩または錯体の形成；結晶化、ガスクロマトグラフィーまたは液体クロマトグラフィーなどにより分離できる、ジアステレオ異性誘導体の生成；酵素的酸化または還元とそれに続く修飾および非修飾エナンチオマーの分離などの、エナンチオマー特異的試薬を用いるエナンチオマーの１つの選択的反応；またはキラルリガンド結合シリカなどのキラル担体を用いるかまたはキラル溶媒の存在下などでのキラル環境におけるガスクロマトグラフィーまたは液体医クロマトグラフィーなどの、当業者に知られた方法を用いてＲ−およびＳ−異性体を分割できる。所望のエナンチオマーが前述の分離法の１つにより他の化学物質に変換される場合、所望のエナンチオマーを遊離するためにさらなる工程を所望される場合があることが理解されるであろう。あるいはまた、光学活性の試薬、基質、触媒または溶媒を用いる不斉合成、または不斉変換による１つのエナンチオマーから他のエナンチオマーへの変換により、特定のエナンチオマーを合成できる
本発明の化合物
本発明は、１以上の有糸分裂キネシン阻害剤であるチオクロメノン誘導体と記載できる、新規化合物の１つのクラスに関する。有糸分裂キネシンを阻害し、かつ他のキネシン（例えば輸送キネシン）を阻害しないことにより、細胞増殖を選択的に抑制することができる。特定の理論に拘束されることを意図するわけではないが、本発明は、有糸分裂キネシン機能を抑制することにより紡錘体の形成異常または機能異常をもたらし、しばしば細胞周期停止および細胞死につながるという所見を利用する。本発明の１つの実施形態によれば、本明細書に記載の化合物は有糸分裂キネシンであるＫＳＰを阻害し、特にヒトＫＳＰを阻害する。他の実施形態において、本化合物は、有糸分裂キネシン、ＫＳＰを阻害すると共に、ＨＳＥＴ（米国特許第６，３６１，９９３号を参照のこと（その全体を本明細書に組み込む））；ＭＣＡＫ（米国特許第６，３３１，４２４号を参照のこと（その全体を本明細書に組み込む））；ＣＥＮＰ−Ｅ（国際公開番号ＷＯ９９／１３０６１号を参照のこと（その全体を本明細書に組み込む））；Ｋiｆ４（米国特許第６，４４０，６８４号を参照のこと（その全体を本明細書に組み込む））；ＭＫＬＰ１（米国特許第６，４４８，０２５号を参照のこと（その全体を本明細書に組み込む））；Ｋiｆｌ５（米国特許第６，３５５，４６６号を参照のこと（その全体を本明細書に組み込む））；Ｋiｄ（米国特許第６，３８７，６４４号を参照のこと（その全体を本明細書に組み込む））；Ｍｐｐｌ、ＣＭＫｒｐ、ＫiｎI−３（米国特許第６，４６１，８５５号を参照のこと（その全体を本明細書に組み込む））；Ｋiｐ３ａ（国際公開番号ＷＯ０１／９６５９３号を参照のこと（その全体を本明細書に組み込む））；Ｋiｐ３ｄ（米国特許第６，４９２，１５１号を参照のこと（その全体を本明細書に組み込む））；およびＲａｂＫ６からなる群より選択されるヒト有糸分裂キネシンの１以上をモジュレートする。
【００４３】
有糸分裂キネシンの阻害方法は、本発明の阻害剤とキネシン（特にヒトキネシン、より具体的には、ヒトＫＳＰまたはフラグメントおよびそれらの変異体）を接触させることを含む。本阻害は、紡錘体が破壊されるような、ＫＳＰキネシンおよび／または紡錘体形成のＡＴＰ加水分解活性の阻害であることができる。減数分裂紡錘糸もまた破壊されうる。
【００４４】
本発明は、細胞増殖が関連する疾患の治療のための、有糸分裂キネシン、特にＫＳＰ、そしてとりわけヒトＫＳＰの阻害剤を提供する。本明細書に記載の化合物、組成物および方法は、異なる選択性を有することができ、癌、過形成、再狭窄、心肥大、免疫疾患、真菌疾患および炎症を非限定的に含む細胞増殖性疾患の治療に用いられる。
【００４５】
従って、本発明は、式I：
【化２】
2005539062.tif 000003
【００４６】
（式中：
Ｗ、Ｘ、Ｙ、およびＺは独立してＮ、Ｃ、ＣＨ、Ｏ、またはＳであり；そしてＺは存在しなくても良く、ただしＷ、Ｘ、Ｙ、およびＺのうちの２以下は−Ｎ＝であり、そしてＺが存在しない場合にのみＷ、Ｘ、またはＹはＯまたはＳであることができ；
構造中の点線は所望により二重結合を表し；
ＴおよびＴ’は独立して共有結合、−Ｃ（Ｏ）−、または置換されていてもよい低級アルキレンであり；
Ｒ１は水素、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいヘテロアリール、および置換されていてもよいヘテロアラルキルから選択され；
Ｒ２およびＲ２’は独立して水素、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルコキシ、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいヘテロアリール、および置換されていてもよいヘテロアラルキルから選択され；またはＲ２およびＲ２’は一緒になって、置換されていてもよい３〜７員環を形成し；
Ｒ１２は水素、置換されていてもよいアルキル−、置換されていてもよいアリール−、置換されていてもよいアラルキル−、置換されていてもよいヘテロアリール−、置換されていてもよいヘテロアラルキル−、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ３、および−Ｓ（Ｏ）２−Ｒ３ａから選択され；
Ｒ３は水素、置換されていてもよいアルキル−、置換されていてもよいアリール−、置換されていてもよいアラルキル−、置換されていてもよいヘテロアリール−、置換されていてもよいヘテロアラルキル−、Ｒ１５Ｏ−およびＲ１７−ＮＨ−から選択され；
Ｒ３ａは置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいヘテロアラルキル、およびＲ１５−ＮＨ−から選択され；
Ｒ４は水素、置換されていてもよいアルキル−、置換されていてもよいアリール−、置換されていてもよいアラルキル−、置換されていてもよいヘテロアラルキル−、および置換されていてもよいヘテロシクリル−から選択され；
またはＲ４およびＲ１２は一緒になって、それらが結合している窒素とともに、置換されていてもよい５〜１２員窒素含有複素環を形成し、該複素環は複素環中にＮ、Ｏ、およびＳから選択される１〜２個のさらなるヘテロ原子を所望により含み；
またはＲ４およびＲ２は一緒になって、置換されていてもよい５〜１２員窒素含有複素環を形成し、該複素環は複素環中にＮ、Ｏ、およびＳから選択される１〜２個のさらなるヘテロ原子を所望により含み；
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は独立して水素、アシル、置換されていてもよいアルキル−、置換されていてもよいアルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシル、ニトロ、シアノ、置換されていてもよいアミノ、アルキルスルホニル−、アルキルスルホンアミド−、アルキルチオ−、カルボキシアルキル−、アミノカルボニル−、置換されていてもよいアリールおよび置換されていてもよいヘテロアリール−から選択され、ただしＷ、Ｘ、Ｙ、またはＺがそれぞれ−Ｎ＝、Ｏ、Ｓであるかまたは存在しない場合、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は存在せず；
Ｒ１５は置換されていてもよいアルキル−、置換されていてもよいアリール−、置換されていてもよいアラルキル−、置換されていてもよいヘテロアリール−、および置換されていてもよいヘテロアラルキル−から選択され；そして
Ｒ１７は水素、置換されていてもよいアルキル−、置換されていてもよいアリール−、置換されていてもよいアラルキル−、置換されていてもよいヘテロアリール−、または置換されていてもよいヘテロ−アラルキル−である）
で表される化合物；式Iの化合物の薬学的に許容される塩；式Iの化合物の薬学的に許容される溶媒和物；または式Iの化合物の薬学的に許容される塩の薬学的に許容される溶媒和物（ただし式Iは単一の立体異性体および立体異性体の混合物を含む）を使用する方法に関する。特定の実施形態において、Ｒ２およびＲ２’が結合しているステレオ中心はＲ配置である。
【００４７】
命名法
式Iの化合物は、以下に示すように（例えば、ISIS-DRAWのAutoNom version 2.1またはChemDrawを用いて）命名し、番号付けをすることができる。例えば、以下の化合物：
【化３】
2005539062.tif 000004
【００４８】
（即ち、Ｗ、Ｘ、Ｙ、およびＺはＣであり、ＴおよびＴ’は存在せず、Ｒ１はベンジルであり、Ｒ２はプロピル（特に、i−プロピル）であり、Ｒ２’は水素であり；Ｒ１２はＣ（Ｏ）Ｒ３であり；Ｒ３はｐ−トリルであり；Ｒ４は３−アミノプロピルであり；Ｒ５、Ｒ６、およびＲ８は水素であり；そしてＲ７はクロロである、式Iによる化合物）は、Ｎ−（３−アミノ−プロピル）−Ｎ−［１−（３−ベンジル−７−クロロ−４−オキソ−４Ｈ−チオクロメン−２−イル）−２−メチル−プロピル］−４−メチル−ベンズアミドと命名することができる。
【００４９】
合成反応パラメーター
式Iの化合物は、以下の反応スキームに関連して記載した以下の方法にしたがって製造できる。
【００５０】
特記しない限り、“溶媒”、“不活性有機溶媒”または“不活性溶媒”という用語は、溶媒に関連して記載されている反応条件下で不活性な溶媒［例えばベンゼン、トルエン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン（“ＴＨＦ”）、ジメチルホルムアミド（“ＤＭＦ”）、クロロホルム、塩化メチレン（即ち、ジクロロメタン）、ジエチルエーテル、メタノール、ピリジンなどを含む］を意味する。特記しない限り、本発明の反応に用いる溶媒は不活性有機溶媒である。
【００５１】
“適量(q.s.)”という用語は、例えば、溶液を所望の用量（すなわち、１００％）にするなど、規定の機能を達成するために十分な量を加えることを意味する。
【００５２】
一般に、カルボン酸のエステルは、通常のエステル化法により製造でき、例えばアルキルエステルは、所要の活性化カルボン酸と適切なアルカノールとを、一般的に酸性条件下で反応させることにより製造できる。同様にアミドは、通常のアミド化法を用いて製造でき、例えばアミドは、所要の活性化カルボン酸と適切なアミンとを反応させることにより製造できる。あるいはまた、酸のメチルエステルなどの低級−アルキルエステルを、Tetrahedron Lett. 48, 4171-4173, (1977). に記載の方法に従って、所望によりトリメチルアルミニウムの存在下で、アミンと反応させて所望のアミドを得ることができる。カルボキシル基は、メチルエステルなどのアルキルエステルとして保護化できるが、かかるエステルは慣用法を用いて製造および除去でき、カルボメトキシからカルボキシルへ変換する便利な方法の１つには、水酸化リチウム水溶液の使用がある。
【００５３】
本明細書に記載の化合物の塩および溶媒和物は、必要に応じて、当業界で通常用いられる方法により製造できる。例えば、発明化合物が酸である場合、所望の塩基付加塩は、例えばアミン（一級、二級、または三級）；水酸化アルカリ金属または水酸化アルカリ土類金属；などの無機または有機塩基と遊離酸を反応させることにより製造できる。適切な塩の具体例は、グリシンおよびアルギニンなどのアミノ酸；アンモニア；一級、二級、および三級アミン（エチレンジアミンなど、およびシクロヘキシルアミン、ピペリジン、モルホリン、およびピペラジンなどの環状アミン）；から誘導される有機塩、ならびにナトリウム、カルシウム、カリウム、マグネシウム、マンガン、鉄、銅、亜鉛、アルミニウム、およびリチウムから誘導される無機塩を含む。
【００５４】
化合物が塩基の場合、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、などの無機酸、あるいは酢酸、マレイン酸、コハク酸、マンデル酸、フマル酸、マロン酸、ピルビン酸、シュウ酸、グリコール酸、サリチル酸、ピラノシジル酸（グルクロン酸またはガラクツロン酸など）、α−ヒドロキシ酸（クエン酸または酒石酸など）、アミノ酸（アスパラギン酸またはグルタミン酸など）、芳香族酸（安息香酸またはケイヒ酸など）、スルホン酸（ｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸など）などの有機酸と遊離塩基とを反応させることを含む、当該技術分野で知られている適切な方法のいずれによっても所望の酸付加塩を製造できる。
【００５５】
本明細書に記載の化合物および中間体の分離および精製は、所望であれば、例えば、濾過、抽出、結晶化、カラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィーまたは厚層クロマトグラフィー、もしくはそれらの組み合わせなどの任意の適切な分離または精製法により行うことができる。適切な分離および単離法の特定の例は、以下の実施例を参照することにより得られる。しかしながら、もちろん、他の同等な分離法または単離法もまた使用することができる。
【００５６】
式Iの化合物の合成
以下の反応スキームに関連して記載した方法に従って、式Iの化合物を製造できる。
【００５７】
反応スキームの簡単な説明
反応スキーム１は、式Iの化合物の合成における中間体である式１１３の化合物の合成を説明する。
【００５８】
反応スキーム２は、Ｒ１２が−Ｃ（Ｏ）Ｒ３である式Iの化合物の合成を説明する。
【００５９】
反応スキーム３は、Ｒ７が−ＯＨである式Iの化合物の合成を説明する。
【００６０】
反応スキーム４は、Ｒ７が−ＯＣＨ３である式Iの化合物の合成を説明する。
【００６１】
反応スキーム５は、Ｒ１２が−ＳＯ２Ｒ３ａである式Iの化合物の合成を説明する。
【００６２】
反応スキーム６は、式Iの化合物の合成を説明する。
【００６３】
反応スキーム７は、Ｒ１２およびＲ４がそれらと結合している窒素と一緒になって置換されていてもよいイミダゾリルを形成する式Iの化合物の合成を説明する。
【００６４】
反応スキーム８は、Ｒ１２およびＲ４がそれらと結合している窒素と一緒になって置換されていてもよいイミダゾリルを形成する式Iの化合物の他の合成を説明する。
【００６５】
反応スキーム９は、Ｒ１２およびＲ４がそれらと結合している窒素と一緒になって置換されていてもよいイミダゾリルを形成する式Iの化合物の合成を説明する。
【００６６】
反応スキーム１０は、Ｒ１２およびＲ４がそれらと結合している窒素と一緒になって置換されていてもよいイミダゾリルを形成する式Iの化合物の第２の合成を説明する。
【００６７】
反応スキーム１１は、Ｒ１２が、Ｒ３が−ＯＲ１５である−Ｃ（Ｏ）Ｒ３である式Iの化合物を説明する。
【００６８】
反応スキーム１２は、Ｒ１２が、Ｒ３が−ＮＨＲ１７である−Ｃ（Ｏ）Ｒ３である式Iの化合物の合成を説明する。
【００６９】
反応スキーム１３は、Ｒ１２およびＲ４がそれらと結合している窒素と一緒になって置換されていてもよいジアゼピノンを形成する式Iの化合物の合成を説明する。
【００７０】
反応スキーム１４は、Ｒ１２およびＲ４がそれらと結合している窒素と一緒になって置換されていてもよいジアゼピノンを形成する式Iの化合物の合成を説明する。
【００７１】
反応スキーム１５は、Ｒ１２およびＲ４がそれらと結合している窒素と一緒になって置換されていてもよいピペラジン環を形成する式Iの化合物の合成を説明する。
【００７２】
出発物質
置換されていてもよい式１０１の化合物は市販されている（例えば、Aldrich Chemical Company（ウィスコンシン州ミルウォーキー）から）。他の反応剤もまた同様に市販されているかあるいは、通常用いられる合成方法論を用いて当業者により容易に合成される。ＰＣＴＷＯ０３／３９４６０、ＷＯ０３／４９６７８、ＷＯ０３／５０１２２、ＷＯ０３／４９５２７、ＷＯ０３４９６７９、ＷＯ０３／５００６４もまた参照のこと（それぞれをその全体を本明細書に組み込む）。
【化４】
2005539062.tif 000005
【００７３】
式１０３の化合物の製造
反応スキーム１工程１に関しては、式１０１の化合物およびトリエチルアミンなどの塩基の、ＣＨ２Ｃｌ２などの非極性非プロトン性溶媒中の０℃溶液に、Ｎ，Ｎ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（好ましくは約１．２当量）を加える。約１５分後、生成物（式１０３の化合物）を単離し、さらに精製せずに用いる。
【００７４】
式１０５の化合物の製造
反応スキーム１工程２に関しては、式Ｒ１ＣＨ２Ｂｒ（約１．２当量）の化合物、マグネシウム屑、およびＴＨＦなどの非極性非プロトン性溶媒をおよそ室温にて、不活性雰囲気下で混合する。〜１０分後、反応混合物は発熱を始め、反応混合物を放置して還流に至らせる。１．５時間後、グリニャール反応は完了し、溶液を冷却して室温にする。
【００７５】
式１０３の化合物および、ＴＨＦなどの非極性非プロトン性溶媒の溶液を、上記で製造したグリニャール試薬の溶液にカニューレを通して加える。内部温度計により温度をモニターし、〜４０℃を超えないようにした。約３時間後、室温で、生成物（式１０５の化合物）を分離し精製する。
【００７６】
式１０７の化合物の製造
反応スキーム１工程３に関しては、水素化ナトリウムなどの塩基を、ＤＭＦなどの極性非プロトン性溶媒中の約１当量のαトルエンチオールの室温溶液に加える。約３０分後、式１０５の化合物を一度に加える。室温で約１時間後、生成物（式１０７の化合物）を分離しさらに精製せずに用いる。
【００７７】
式１０９の化合物の製造
反応スキーム１工程４に関しては、三塩化アルミニウム（約２．７５当量）を、トルエンなどの非極性非プロトン性溶媒中の、式１０７の化合物の室温溶液に加える。室温で約１時間後、生成物（式１０９の化合物）を分離し精製する。
【００７８】
式１１１の化合物の製造
反応スキーム１工程５に関しては、リチウムビス（トリメチルシリル）アミド（好ましくは約１．０ＭのＴＨＦ溶液、さらに好ましくは約４当量以上）などの強塩基を、ＴＨＦなどの非極性非プロトン性溶媒中の式１０９の化合物の−７８℃溶液に加える。添加が完了した後、得られた溶液を−７８℃に約１時間維持する。ついで反応溶液を０℃に２時間暖める。ついで反応溶液を−７８℃に冷却する。式Ｆ−（ＣＯ）−Ｒ−Ｃ（Ｒ２）（Ｒ２’）−Ｔ’−（ＮＨＰＧ）の酸フッ化物の溶液およびＴＦＨなどの非極性非プロトン性溶媒を、シリンジを通して反応溶液に滴下する。−７８℃で約１５分後、反応溶液を室温に温める。約２時間後、生成物（式１１１の化合物）を分離しさらに精製せずに用いる。
【００７９】
式１１３の化合物の製造
反応スキーム１工程６に関しては、式１１１の化合物および３０％ＨＢｒ・ＡｃＯＨの溶液を約１時間室温で維持する。生成物（式１１３の化合物）を分離し精製する。
【化５】
2005539062.tif 000006
【００８０】
式２０３の製造
反応スキーム２工程１に関しては、式１１３の化合物の溶液に、Ｒ４’（即ち、Ｒ４’ＣＨ２−はＲ４に相当し、そしてＲ４は前述のとおりであるかあるいは、例えば（３−オキソ−プロピル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル）などの置換基への保護化前駆体である、式Ｒ４’ＣＨＯを有する化合物）を含んでなるアルデヒドの小過剰（好ましくは約１．２当量）およびトリアセトキシホウ水素化ナトリウムなどの還元剤を連続して加える。得られる化合物を数時間撹拌する。生成物（式２０３の化合物）を分離し精製する。
【００８１】
式２０５の製造
反応スキーム２工程２に関しては、式２０３の化合物およびジクロロメタンなどの非極性非プロトン性溶媒中のジイソプロピルエチルアミンなどのアミン塩基の溶液に、塩化Ｒ３アシル（Ｒ３が前述のものであるＣｌ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ３など）を加える。得られる溶液を室温、窒素雰囲気下で数時間撹拌する。生成物（式２０５）を分離し精製する。
【００８２】
ついで所望により、式２０５の化合物の任意の保護基を除去する。例えば、保護基がＢｏｃ基である保護化アミンをＲ４が含む場合、反応物をおよそ室温に維持しながら、ジクロロメタンなどの非極性非プロトン性溶媒中で、トリフルオロ酢酸などの酸で式２０５の化合物を処理することにより、Ｂｏｃ基を除去できる。反応は、例えばＴＬＣによりモニターされる。反応終了時に、生成物（遊離アミン）を分離し精製する。
【化６】
2005539062.tif 000007
【００８３】
式３０３の化合物の製造
反応スキーム３工程１に関しては、ＤＭＦなどの非極性非プロトン性溶媒中の式３０１の化合物の溶液にＮａＨを加える。得られた溶液を４５℃で約５分間撹拌し、ついでアリルアルコール（約１．４当量）をピペットを通して加える。得られる溶液を４５℃で約１２時間撹拌し、ついで室温に冷却する。生成物（式３０３の化合物）を分離し、さらに精製せずに用いる。
【００８４】
式３０５の化合物の製造
反応スキーム３工程２に関しては、アセトニトリルなどの非プロトン性溶媒中の式３０３の化合物の室温溶液に、モルホリンを加え、ついでＰｄ（ＰＰｈ３）４を加える。得られる溶液を約５分間撹拌する。生成物（式３０５の化合物）を分離し精製する。
【化７】
2005539062.tif 000008
【００８５】
反応スキーム４に関しては、式４０１の化合物をメタノール中の０．５Ｍナトリウムメトキシドに溶解し、約７０℃に加熱する。温度を約７０℃で約１２時間維持し、ついで室温に冷却する。生成物（式４０３の化合物）を分離し精製する。
【化８】
2005539062.tif 000009
【００８６】
反応スキーム５に関しては、式２０３の化合物およびジクロロメタンなどの非極性非プロトン性溶媒中のイソプロピルエチルアミンなどのアミン塩基の溶液に、Ｒ３ａが前述のものである、式Ｃｌ−Ｓ（Ｏ）２−Ｒ３ａまたはＯ−（Ｓ（Ｏ）２−Ｒ３ａ）２を有する化合物を加える。得られる溶液を窒素雰囲気下、室温で数時間撹拌する。生成物（式５０３の化合物）を分離し精製する。
【化９】
2005539062.tif 000010
【００８７】
反応スキーム６に関しては、式２０３の化合物およびジクロロメタンなどの非極性非プロトン性溶媒中でジイソプロピルエチルアミンなどのアミン塩基の溶液に、Ｒ１２が前述のものであり、ＸがＢｒまたはＣｌである式Ｘ−Ｒ１２を有する化合物を加える。得られる溶液を、窒素雰囲気下、室温あるいは加熱下数時間撹拌する。生成物（式６０３の化合物）を分離し精製する。
【化１０】
2005539062.tif 000011
【００８８】
式７０３の製造
反応スキーム７工程１に関しては、塩基（炭酸カリウムなど）の存在下、極性非プロトン性溶媒（ＤＭＦなど）中に溶解した置換されていてもよい式１１３の化合物に、脱離基（好ましくはハロゲン化物）をアルデヒドがさらに含む、置換されていてもよい適切な保護化アルデヒドの１当量を加える。溶液を還流条件下で加熱し、反応の完了を例えばＴＬＣによりモニターする。反応混合物を冷却し、置換されていてもよい式７０３に対応する化合物を分離し精製する。
【００８９】
式７０５の製造
反応スキーム７工程２に関しては、約１．５モル当量のアミン塩基（トリエチルアミンなど）の存在下、不活性溶媒（ジクロロメタンなど）中の置換されていてもよい式７０３の化合物に、Ｒ９が前述のものである、Ｃｌ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ９などのＲ９酸塩化物を約１．５モル当量加える。室温で４〜２４時間撹拌することにより反応を行う。反応の完了をたとえばＴＬＣによりモニターする。式７０５に対応する化合物を分離し精製する。
【００９０】
式７０７の製造
反応スキーム７工程３に関しては、式８０５の化合物および過剰量の酢酸中の酢酸アンモニウムの溶液を、還流条件下で１〜４時間加熱する。反応の完了を、例えばＴＬＣでモニターする。式７０７に対応する化合物を分離し精製する。
【化１１】
2005539062.tif 000012
【００９１】
式８０３の製造
反応スキーム８工程１に関しては、ＤＭＦなどの極性非プロトン性溶媒中の、式１１３の化合物、Ｘがハロゲン化物でありＲ１３’が本明細書に記載のものである式Ｒ１３’（ＣＯ）ＣＨ２Ｘのα−ハロケトン試薬、および炭酸カリウムなどの約１当量の塩基の懸濁液を室温で撹拌する。反応物を水で希釈し、得られる固体（式８０３の化合物）を、さらに精製せずに次の工程に用いる。
【００９２】
式８０５の製造
反応スキーム８工程２に関しては、塩化メチレンなどの有機溶媒中の、式８０３の化合物、トリエチルアミンなどの約１当量のアミン塩基および約１当量の酸塩化物（式Ｒ９−ＣＯＣｌの化合物など）の溶液を、室温で数時間撹拌する。反応の完了は、例えばＴＬＣによりモニターする。式８０５に対応する化合物を分離し精製する。
【００９３】
式８０７の製造
反応スキーム８工程３に関しては、式８０５の化合物および酢酸中の酢酸アンモニウムの過剰量の溶液を、ディーンスタークのトラップおよび冷却管を用い、還流条件下で加熱する。反応の完了は例えばＴＬＣによりモニターする。式８０７に対応する化合物を分離し精製する。
【００９４】
所望により、Ｒ１０がフタルイミド保護基を含む場合、該保護基は以下のように除去される。エタノールなどの極性プロトン性溶媒中の、式９０７の化合物および過剰量の無水ヒドラジンを還流条件下で加熱する。反応物を約５℃に冷却し、沈殿物があれば濾去する。濾液を減圧下で濃縮し、精製して対応する遊離アミンを得る。当業者は、他の保護基を除去するために他の条件が使用できることを理解できるであろう。
【化１２】
2005539062.tif 000013
【００９５】
式９０３の製造
反応スキーム９工程１に関しては、置換されていてもよいアルデヒド含有カルバミン酸エステルを用いる式１１３のアミンの還元的アミノ化により、ウレタン中間体を得る。Ｂｏｃ保護基の除去により、式９０５のアミンを得る。
【００９６】
さらに具体的には、ジクロロメタン中の、式１１３の化合物および適切に保護化されたアルデヒド（Seki et. al. Chem. Pharm. Bull. 1996, 44, 2061）の１当量の溶液に、トリアセトキシホウ水素化ナトリウムなどの還元剤の小過剰量を加える。得られるくもった混合物を周囲温度に維持する。反応の完了を、例えばＴＬＣによりモニターする。式９０３に対応する化合物を分離し、精製せずに次の工程に用いる。
【００９７】
式９０５の製造
反応スキーム９工程２に関して、ジクロロメタンなどの非極性非プロトン性溶媒中の式９０３の化合物に、トリフルオロ酢酸などの強酸を加える。得られる溶液を周囲温度に終夜維持し、減圧下で濃縮する。残渣を分離して式９０５の化合物を得、これを精製せずに次の工程に用いた。
【００９８】
式９０７の製造
反応スキーム９工程３に関しては、ジクロロメタンなどの非極性非プロトン性溶媒中の、式１００５の化合物の溶液に、過剰量、好ましくは約２当量のトリエチルアミンなどのアミン塩基を加え、ついで約１当量または小過剰量の酸塩化物を加える。得られる溶液を周囲温度で約３時間撹拌する。反応の完了を、例えばＴＬＣによりモニターする。式９０７に対応する化合物を分離し精製する。
【００９９】
式９０９の製造
反応スキーム９工程４に関しては、過剰量のオキシ塩化リン中の式９０７の化合物の溶液を還流条件下で加熱する。８時間後、反応混合物を放置して周囲温度に冷却し、減圧下で濃縮する。式９０９に対応する化合物を分離し精製する。
【化１３】
2005539062.tif 000014
【０１００】
式１００９の製造
反応スキーム９の工程３および４の代替法として、式９０５の一級アミンをアシル化し、ついで酢酸を用いて環化することにより中間体アミドを分離することなく目的化合物の式９０９を得ることができる。この経路を反応スキーム１０に示す。
【０１０１】
さらに具体的には、ジクロロメタンなどの非極性非プロトン性溶媒中の式９０５の化合物の溶液に、過剰量、好ましくは約２当量のトリエチルアミンなどのアミン塩基を加え、ついで約１当量の酸塩化物を加える。得られる溶液を周囲温度で２時間撹拌し、ついで減圧下溜去する。得られる固体を氷酢酸で処理し、ついで得られる縣濁液を還流条件下で約４８時間加熱する。反応物を周囲温度に冷却し、ついで減圧下で溜去する。式９０９に対応する化合物を分離し精製する。
【化１４】
2005539062.tif 000015
【０１０２】
反応スキーム１１に関しては、ジクロロメタンなどの非極性非プロトン性溶媒中で、トリエチルアミンなどの塩基の存在下、式２０３の化合物と小過剰の式Ｒ１５Ｏ（ＣＯ）Ｃｌの化合物を反応させる。生成物（式１１０３の化合物）を分離し精製する。
【化１５】
2005539062.tif 000016
【０１０３】
反応スキーム１２に関しては、ジクロロメタンなどの非極性非プロトン性溶媒中で、トリエチルアミンなどの塩基の存在下、式１２０３の化合物を小過剰量のイソシアネートＲ１７−Ｎ＝Ｃ＝Ｏで処理する。生成物（式１２０３の化合物）を分離し精製する。
【化１６】
2005539062.tif 000017
【０１０４】
反応スキーム１３に関しては、（２−オキソ−エチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを用いる、式１１３の化合物の一級アミノ基の還元的アミノ化により対応する二級アミンを得た。塩化アクリロイルを用いるアシル化とそれに続く三級アミンの脱保護および塩基による環化反応により所望のジアゼパノンを得た。所望であれば、当業者に良く知られている条件下で、塩基性アミンのさらなる官能基化を行うことができる。
【化１７】
2005539062.tif 000018
【０１０５】
反応スキーム１４に関しては、（２−オキソ−エチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを用いる式１１３の化合物の一級アミノ基の還元的アミノ化により、対応する二級アミンを得た。塩化クロロピバロイルを用いるアシル化とそれに続く三級アミドの脱保護および塩基による環化により、所望のジアゼパノンを得た。所望であれば、当業者に良く知られている条件下で、塩基性アミンのさらなる官能基化を行うことができる。
【化１８】
2005539062.tif 000019
【０１０６】
反応スキーム１５に関しては、式１５０１の化合物、２分の１モル当量の置換されていてもよいピペラジンまたはジアゼパム（Ｒ３２が本明細書に記載のものである、前記のもの）および過剰量の炭酸カリウムを有機溶媒（例えばアセトニトリル）中に混合する。窒素雰囲気下、高温（例えば１００℃）で８時間反応を行い、ついで少し低めの温度（例えば６０℃）で５日間反応を行う。生成物（式１５０３の化合物）を分離し精製する。
【０１０７】
所望により、Ｒ３２がＢｏｃなどのアミン保護基の場合、例えばＴＦＡ／水の９５／５混合物を用いて処理し、ついで室温で１時間撹拌することによりこの基を除去できる。生成物（Ｒ３２が水素である式１５０３の化合物）を分離し精製できる。所望であれば、当業者に良く知られている条件下で、塩基性アミンのさらなる官能基化を行うことができる。
【０１０８】
プロセスおよび最終工程
所望により、式Iの化合物を薬学的に許容される酸または塩基と接触させ、対応する酸または塩基付加塩を形成させる。
【０１０９】
所望により、薬学的に許容される式Iの化合物の酸付加塩を塩基と接触させ、対応する式Iの遊離塩基を形成させる。
【０１１０】
所望により、薬学的に許容される式Iの化合物塩基付加塩を酸と接触させ、対応する式Iの遊離酸を形成させる。
【０１１１】
本発明の化合物の特定の実施形態
Ｗ、Ｘ、Ｙ、およびＺ
式Iの化合物を考慮する時、１つの実施形態において、Ｗ、Ｘ、ＹおよびＺは独立して−Ｃ＝および−Ｎ＝から選択される。他の実施形態において、Ｗ、Ｘ、Ｙ、および所望によりＺを含む環は、置換されていてもよいピリジニル−、ピリミジニル−、ピラゾリル−、チアゾリル−、またはオキサゾリル環である。他の実施形態において、Ｗ、Ｘ、ＹおよびＺは−Ｃ＝である。
【０１１２】
構造中の点線は所望により二重結合を表す。従って、特定の実施形態においてＷ、Ｘ、Ｙ、および所望によりＺを含んでなる環は、置換されていてもよい芳香環または置換されていてもよいヘテロ芳香環である。他の実施形態において、環は芳香族あるいはヘテロ芳香族では無い。
【０１１３】
ＴおよびＴ’
式Iの化合物を考慮する時、Ｔは置換されていてもよいアルキレン、−Ｃ（Ｏ）−、または共有結合（即ち存在しない）であり；Ｔ’は置換されていてもよいアルキレン、−Ｃ（Ｏ）−であるか、または存在しない。１つの実施形態において、ＴおよびＴ’の１つは存在せず（即ち共有結合である）そしてもう１つは置換されていてもよいアルキレン（特に、所望により置換メチレン）である。他の実施形態において、両方とも存在しない。
【０１１４】
Ｒ１
式Iの化合物を考慮する時、特定の実施形態において、Ｒ１は、水素、置換されていてもよいＣ１−Ｃ４アルキル、置換されていてもよいフェニル−Ｃ１−Ｃ４−アルキル−、置換されていてもよいヘテロアリール−Ｃ１−Ｃ４−アルキル−、置換されていてもよいナフタレニルメチル、置換されていてもよいフェニル、またはナフチル（特に、置換されていてもよいアリールおよび置換されていてもよいアリール−Ｃ１−Ｃ４−アリル−）から選択される。さらに特定の実施形態において、Ｒ１は水素、置換されていてもよいＣ１−Ｃ４アルキル、置換されていてもよいフェニル−Ｃ１−Ｃ４−アルキル−、置換されていてもよいナフタレニルメチル、置換されていてもよいフェニル、およびナフチルから選択される。より具体的には、Ｒ１は置換されていてもよいフェニル−Ｃ１−Ｃ４−アルキル−または置換されていてもよいヘテロアリール−Ｃ１−Ｃ４−アルキル−である。
【０１１５】
最も特定の実施形態において、Ｒ１はナフチル、フェニル、ブロモフェニル、クロロフェニル、メトキシフェニル、エトキシフェニル、トリル、ジメチルフェニル、クロロフルオロフェニル、メチルクロロフェニル、エチルフェニル、フェネチル、ベンジル、クロロベンジル、メチルベンジル、メトキシベンジル、シアノベンジル、ヒドロキシベンジル、ジクロロベンジル、ジメトキシベンジル、またはナフタレニルメチルである。より具体的には、Ｒ１はベンジル、シアノベンジル、メトキシベンジル、またはナフタレニルメチルである。最も具体的には、Ｒ１はベンジルである。
【０１１６】
Ｒ２
式Iの化合物を考慮する時、当業者に理解されるであろうが、本明細書に記載の化合物は、Ｒ２およびＲ２’が結合している炭素部位でキラル中心を有する可能性がある。Ｒ２およびＲ２’基は同一であっても異なっていても良く；異なる場合、化合物はキラルである（即ち、ステレオ中心を有する）。Ｒ２およびＲ２’が異なる場合、特定の実施形態において、Ｒ２’は水素でありＲ２は水素以外のものである。本発明は純粋なエナンチオマーおよびラセミ混合物を含むエナンチオマーの混合物を考慮するが、実質的に光学的になエナンチオマーが一般的に好ましい。“実質的に光学的に純粋な”または“エナンチオマー的に純粋な”という用語は、少なくとも約９５％の記載のエナンチオマーを有し、かつ約１％以上の単一の不純物を伴わず、特に少なくとも約９７．５％エナンチオマー過剰率を有することを意味する。特定の実施形態において、Ｒ２およびＲ２’が結合しているステレオ中心はＲ配置である。
【０１１７】
１つの実施形態において、Ｒ２は置換されていてもよいＣ１−Ｃ４アルキルであり、そしてＲ２’は水素または置換されていてもよいＣ１−Ｃ４アルキルである。より具体的には、Ｒ２’は水素であり、そしてＲ２は置換されていてもよいＣ１−Ｃ４アルキルである。最も特定の実施形態において、Ｒ２はメチル、エチル、プロピル（特に、ｃ−プロピルまたはi−プロピル）、ブチル（特に、ｔ−ブチル）、メチルチオエチル、メチルチオメチル、アミノブチル、（ＣＢＺ）アミノブチル、シクロヘキシルメチル、ベンジルオキシメチル、メチルスルフィニルエチル、メチルスルフィニルメチル、およびヒドロキシメチルから選択され、そしてＲ２’は水素である。特に好ましいのは、Ｒ２’が水素であり、Ｒ２エチルまたはプロピル（特にｃ−プロピルまたはi−プロピル）の場合である。より具体的には、Ｒ２はi−プロピルである。さらに好ましいのはＲ２およびＲ２’が結合しているステレオ中心がＲ配置の実施形態である。
【０１１８】
他の実施形態において、Ｒ２およびＲ２’の両方は共に水素である。
【０１１９】
Ｒ４と一緒になったＲ２
他の実施形態において、Ｒ２およびＲ４は一緒になって、複素環中にＮ、Ｏ、およびＳから選択される１〜２個のさらなるヘテロ原子を所望により含む５〜１２員環を形成し、かつ１以上の以下の基：ヒドロキシル、ハロゲン（特にクロロおよびフルオロ）、置換されていてもよいＣ１−Ｃ４アルキル−（特にメチル−）、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ（特にメトキシ）、シアノ、アミノ、置換アミノ、オキソ、またはカルバミルにより置換されていても良く；そしてＲ２’は上記で定義したものである。特定の実施形態において、Ｒ４はオキソ基により置換されていてもよいＣ１−Ｃ４アルキルである。
【０１２０】
特定の実施形態において、Ｒ２およびＲ４は、一緒になって以下の式：
【化１９】
2005539062.tif 000020
【０１２１】
（式中Ｒ４１およびＲ４１’は、独立して水素、アルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、置換アルキル、置換アリール、置換アラルキル、および置換ヘテロアリールから選択され；ｍは０、１、２、または３であり；そしてＴ、Ｔ’、Ｒ１２、およびＲ２’は上記で定義したものである）の置換されていてもよい環を形成する。さらに特定の実施形態において、Ｒ４１は水素である。他の特定の実施形態において、Ｒ４１およびＲ４１’の両方は水素である。他の実施形態において、Ｒ１２は置換されていてもよいアラルキル（特にベンジル）または置換されていてもよいアシル（特にｐ−メチル−ベンゾイル）である。例えば米国特許出願第６０／４１４，７５６号を参照のこと（その全体を本明細書に組み込む）。
【０１２２】
他の実施形態において、Ｒ２およびＲ４は、一緒になって以下の式：
【化２０】
2005539062.tif 000021
【０１２３】
（式中、Ｒ１２、Ｒ２’、Ｔ、およびＴ’は上記で定義したものであり；Ｒ５１およびＲ５１’は独立して水素、アルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、置換アルキル、置換アリール、置換アラルキルおよび置換ヘテロアリールから選択され；Ｕは共有結合、ＣＲ’Ｒ”またはＮＲ’”であり；Ｒ’およびＲ”は独立して水素、ヒドロキシ、アミノ、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいアルキルアミノ、置換されていてもよいアルキルおよび置換されていてもよいアルコキシから選択され；そしてＲ’”は水素、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいヘテロアリール、および置換されていてもよいヘテロアラルキルから選択される、ただしＴ’が存在しない場合、Ｕは共有結合ではない）の置換されていてもよい環を形成する。
【０１２４】
特定の実施形態において、Ｒ５１は水素または置換されていてもよい低級アルキルであり；より具体的には、Ｒ５１は水素である。他の実施形態において、Ｒ５１’は水素または置換されていてもよい低級アルキルであり；より具体的には、Ｒ５１’は水素である。
【０１２５】
１つの実施形態において、Ｒ１２は、置換されていてもよいアリールまたは置換されていてもよいアラルキルであり；より具体的には、Ｒ１２は置換されていてもよいフェニル、ベンジルまたはメチル−ベンジル（特に、ベンジルまたはメチル−ベンジル）である。他の実施形態において、Ｒ１２は−Ｃ（Ｏ）Ｒ３であり、Ｒ３は置換されていてもよいアリールまたは置換されていてもよいアラルキルである。
【０１２６】
１つの実施形態において、ＵはＲ’および／またはＲ”が水素であるＣＲ’Ｒ”である。他の実施形態において、ＵはＲ’”が水素または置換されていてもよいアルキルであるＮＲ’”である。より具体的には、Ｒ’”は水素または置換されていてもよいアミノ−低級アルキルである。例えば米国特許出願第６０／３９８，２２４号を参照のこと（全ての目的のために本明細書に組み込まれる）。
【０１２７】
Ｒ１２
１つの実施形態において、Ｒ１２はＣ１−Ｃ１３アルキル；置換低級アルキル；フェニル；ナフチル；ハロ、低級アルキル、低級アルコキシ、ニトロ、メチレンジオキシ、またはトリフルオロメチルで置換されているフェニル；ビフェニリル、ベンジルおよびヘテロシクリルから選択される。より具体的には、Ｒ１２は置換フェニル、ヘテロシクリルおよびナフチルから選択される。最も具体的には、Ｒ１２はハロフェニル、ポリハロフェニル、トリル、ジメチルフェニル、メトキシフェニル、ジメトキシフェニル、シアノフェニル、トリフルオロメチルフェニル、トリフルオロメトキシフェニル、ビス（トリフルオロメチル）フェニル、カルボキシフェニル、ｔ−ブチルフェニル、メトキシカルボニルフェニル、ピペリジニルおよびナフチルから選択される。
【０１２８】
Ｒ１２が−Ｃ（Ｏ）Ｒ３であるＲ３基
Ｒ１２が−Ｃ（Ｏ）Ｒ３である式Iの化合物を考慮する場合、特定の実施形態において、Ｒ３は、置換されていてもよいＣ１−Ｃ８アルキル、置換されていてもよいアリール−Ｃ１−Ｃ４−アルキル−、置換されていてもよいヘテロアリール−Ｃ１−Ｃ４−アルキル−、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいアリール、Ｒ１５Ｏ−およびＲ１７−ＮＨ−から選択され、Ｒ１５は置換されていてもよいＣ１−Ｃ８アルキルおよび置換されていてもよいアリールから選択され、そしてＲ１７は水素、置換されていてもよいＣ１−Ｃ８アルキルおよび置換されていてもよいアリールから選択される。特定のＲ３は、置換されていてもよいＣ１−Ｃ８アルキル（例えば低級−アルコキシにより置換されているＣ１−Ｃ８アルキル）、置換されていてもよいヘテロアリール、および置換されていてもよいアリールである。
【０１２９】
さらに特定の実施形態において、Ｒ３がＲ１７ＮＨ−またはＲ１５Ｏ−ではない場合、Ｒ３は、フェニル；以下の置換基：ハロ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、ヒドロキシにより置換されているＣ１−Ｃ４アルキル（例えばヒドロキシメチル）、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４により置換されているアルコキシＣ１−Ｃ４アルキル、ニトロ、ホルミル、カルボキシ、シアノ、メチレンジオキシ、エチレンジオキシ、アシル（例えばアセチル）、−Ｎ−アシル（例えばＮ−アセチル）またはトリフルオロメチルの１以上により置換されているフェニル；ベンジル；フェノキシメチル−；ハロフェノキシメチル−；フェニルビニル−；ヘテロアリール−；Ｃ１−Ｃ４アルキルまたはハロにより置換されているＣ１−Ｃ４アルキル（例えばＣＦ３）により置換されているヘテロアリール−；Ｃ１−Ｃ４アルコキシ−により置換されているＣ１−Ｃ４アルキルおよびベンジルオキシメチル−から選択される。
【０１３０】
最も具体的な実施形態において、Ｒ３がＲ１７ＮＨ−またはＲ１５Ｏ−でない場合、Ｒ３はフェニル、ハロフェニル、ジハロフェニル、シアノフェニル、ハロ（トリフルオロメチル）フェニル、ヒドロキシメチルフェニル、メトキシフェニル、エトキシフェニル、カルボキシフェニル、エチルフェニル、トリル、メチレンジオキシフェニル、エチレンジオキシフェニル、メトキシクロロフェニル、ジヒドロ−ベンゾジオキシニル、メチルハロフェニル、トリフルオロメチルフェニル、ビス（トリフルオロメチル）フェニルベンジル、フラニル、Ｃ１−Ｃ４アルキル置換フラニル、トリフルオロメチルフラニル、Ｃ１−Ｃ４アルキル置換トリフルオロメチルフラニル、ベンゾフラニル、チオフェニル、Ｃ１−Ｃ４アルキル置換チオフェニル、ベンゾチオフェニル、ベンゾチアジアゾリル、ピリジニル、インドリル、メチルピリジニル、トリフルオロメチルピリジニル、ピロリル、キノリニル、ピコリニル、ピラゾリル、Ｃ１−Ｃ４アルキル置換ピラゾリル、Ｎ−メチルピラゾリル、Ｃ１−Ｃ４アルキル置換Ｎ−メチルピラゾリル、Ｃ１−Ｃ４アルキル置換ピラジニル、Ｃ１−Ｃ４アルキル置換イソオキサゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、モルホリノメチル、メチルチオメチル、メトキシメチル、Ｎ−メチルイミダゾリル、およびイミダゾリルから選択される。さらにより具体的には、Ｒ３は、トリル、ハロフェニル、ハロメチルフェニル、ヒドロキシメチルフェニル、メチレンジオキシフェニル、ホルミルフェニルまたはシアノフェニルである。
【０１３１】
さらに具体的な実施形態において、Ｒ３がＲ１７ＮＨ−の場合、Ｒ１７は水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル；シクロヘキシル；フェニル；およびハロ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、またはＣ１−Ｃ４アルキルチオにより置換されているフェニルから選択される。
【０１３２】
最も具体的な実施形態において、Ｒ３がＲ１７ＮＨ−の場合、Ｒ１７は水素、イソプロピル、ブチル、シクロヘキシル、フェニル、ブロモフェニル、ジクロロフェニル、メトキシフェニル、エチルフェニル、トリル、トリフルオロメチルフェニルまたはメチルチオフェニルである。
【０１３３】
１つの実施形態において、Ｒ３がＲ１５Ｏ−の場合、Ｒ１５は置換されていてもよいＣ１−Ｃ８アルキルおよび置換されていてもよいアリールから選択される。
【０１３４】
Ｒ１２が−ＳＯ２Ｒ３ａの場合のＲ３ａ基
１つの実施形態において、Ｒ１２が−ＳＯ２Ｒ３ａの場合、Ｒ３ａはＣ１−Ｃ１３アルキル；フェニル；ナフチル；ハロ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、シアノ、ニトロ、メチレンジオキシ、またはトリフルオロメチルにより置換されているフェニル；ビフェニリルおよびヘテロアリールから選択される。より具体的には、Ｒ３ａはハロ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、シアノ、ニトロ、メチレンジオキシ、またはトリフルオロメチルにより置換されているフェニルおよびナフチルから選択される。
【０１３５】
Ｒ４基
特定の実施形態において、水素、置換されていてもよいＣ１−Ｃ１３アルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいアリール−Ｃ１−Ｃ４−アルキル−、置換されていてもよいヘテロシクリル、および置換されていてもよいヘテロアリール−Ｃ１−Ｃ４−アルキル−（特に水素または置換されていてもよいＣ１−Ｃ１３アルキル）から選択される。
【０１３６】
より具体的には、Ｒ４は水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル；シクロヘキシル；ヒドロキシル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシまたはＣ１−Ｃ４アルキルにより置換されているフェニル；ベンジル；ヘテロアリールメチル−；ヘテロアリールエチル−；ヘテロアリールプロピル−；およびＲ１６−アルキレン−から選択され、ここでＲ１６はヒドロキシル、ジ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）アミノ−、（Ｃ１−Ｃ４アルキル）アミノ−、アミノ、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ−、またはＮ−ヘテロシクリル−であり、特にピロリジノ、ピペリジノまたはイミダゾリルである。
【０１３７】
より具体的には、Ｒ４はＲ１６−アルキレン−であり、ここでＲ１６はアミノ、Ｃ１−Ｃ４アルキルアミノ−、ジ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）アミノ−、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ−、ヒドロキシル、またはＮ−ヘテロシクリルである。特にＲ１６はアミノである。
【０１３８】
最も具体的な実施形態において、Ｒ４は水素、メチル、エチル、プロピル、ブチル、シクロヘキシル、カルボキシエチル、カルボキシメチル、メトキシエチル、ヒドロキシエチル、ヒドロキシプロピル、ジメチルアミノエチル、ジメチルアミノプロピル、ジエチルアミノエチル、ジエチルアミノプロピル、アミノプロピル、メチルアミノプロピル、２，２−ジメチル−３−（ジメチルアミノ）プロピル、１−シクロヘキシル−４−（ジエチルアミノ）ブチル、アミノエチル、アミノブチル、アミノペンチル、アミノヘキシル、アミノエトキシエチル、イソプロピルアミノプロピル、ジイソプロピルアミノエチル、１−メチル−４−（ジエチルアミノ）ブチル、（ｔ−Ｂｏｃ）アミノプロピル、ヒドロキシフェニル、ベンジル、メトキシフェニル、メチルメトキシフェニル、ジメチルフェニル、トリル、エチルフェニル、（オキソピロリジニル）プロピル、（メトキシカルボニル）エチル、ベンジルピペリジニル、ピリジニルエチル、ピリジニルメチル、モルホリニルエチル  モルホリニルプロピル、ピペリジニル、アゼチジニルメチル、アゼチジニルエチル、アゼチジニルプロピル  ピロリジニルエチル、ピロリジニルプロピル、ピペリジニルメチル、ピペリジニルエチル、イミダゾリルプロピル、イミダゾリルエチル、（エチルピロリジニル）メチル、（メチルピロリジニル）エチル、（メチルピペリジニル）プロピル、（メチルピペラジニル）プロピル、フラニルメチルおよびインドリルエチルから選択される。
【０１３９】
より具体的には、Ｒ４はアミノエチル、アミノプロピル、アミノブチル、アミノペンチル、アミノヘキシル、メチルアミノエチル、メチルアミノプロピル、メチルアミノブチル、メチルアミノペンチル、メチルアミノヘキシル、ジメチルアミノエチル、ジメチルアミノプロピル、ジメチルアミノブチル、ジメチルアミノペンチル、ジメチルアミノヘキシル、エチルアミノエチル、エチルアミノプロピル、エチルアミノブチル、エチルアミノペンチル、エチルアミノヘキシル、ジエチルアミノエチル、ジエチルアミノプロピル、ジエチルアミノブチル、ジエチルアミノペンチル、またはジエチルアミノヘキシルであり、最も具体的にはアミノプロピルである。
【０１４０】
Ｒ４と一緒になったＲ１２
式Iの化合物を考慮する時、１つの実施形態において、Ｒ４はＲ１２と一緒になって、それらが結合している窒素と共に、置換されていてもよい５〜１２員窒素含有複素環を形成し、該複素環は所望により複素環中にＮ、Ｏ、およびＳから選択される１〜２個のさらなるヘテロ原子を含む。
【０１４１】
特定の実施形態において、Ｒ４はＲ１２と一緒になって、それらが結合している窒素と共に、以下の式：
【化２１】
2005539062.tif 000022
【０１４２】
（式中、Ｒ９は水素、置換されていてもよいＣ１−Ｃ８アルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいアリール−Ｃ１−Ｃ４−アルキル−、置換されていてもよいヘテロアリール−Ｃ１−Ｃ４−アルキル−、置換されていてもよいアリール−Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ−、置換されていてもよいヘテロアリール−Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ−、置換されていてもよいヘテロアリール−から選択され；そしてＲ１３およびＲ１３’は独立して、水素、置換されていてもよいＣ１−Ｃ８アルキル、置換されていてもよいアリール、または置換されていてもよいアリール−Ｃ１−Ｃ４−アルキル−（特に置換されていてもよいアリール））の置換されていてもよいイミダゾリニル環を形成する。より具体的には、Ｒ９はＣ１−Ｃ４−アルキル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ−、および／またはハロ（特にＣ１−Ｃ４−アルキルおよび／またはハロ）；により置換されているフェニル；フェニル；またはベンジルである。さらにより具体的には、Ｒ９はトリル；ハロフェニル；またはハロメチルフェニルである。
【０１４３】
特定の実施形態において、Ｒ１３は水素であり、Ｒ１３’は置換Ｃ１−Ｃ４アルキルである。より具体的には、Ｒ１３は水素であり、Ｒ１３’はアミノメチル、アミノエチル、アミノプロピル、アセチルアミノ−メチル、アセチルアミノエチル、ベンジルオキシカルボニルアミノ−メチルまたはベンジルオキシカルボニルアミノ−エチルである。例えばＰＣＴ／ＵＳ０３／１４７８７を参照のこと（その全体を本明細書に組み込む）。
【０１４４】
他の特定の実施形態において、Ｒ１２はＲ４と一緒になって、以下の式：
【化２２】
2005539062.tif 000023
【０１４５】
（式中、Ｒ９は水素、置換されていてもよいＣ１−Ｃ８アルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいアリール−Ｃ１−Ｃ４−アルキル−、および置換されていてもよいヘテロアリール−から選択され；そしてＲ１０、Ｒ１０’、Ｒ１４、およびＲ１４’は水素、置換されていてもよいＣ１−Ｃ８アルキル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいアリール−Ｃ１−Ｃ４−アルキル−から独立して選択される）の置換されていてもよいイミダゾリニル環を形成する。より具体的には、Ｒ９はメチレンジオキシフェニル；フェニル；Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、および／またはハロフェニル；またはベンジルである。特定の実施形態において、Ｒ９はメチレンジオキシフェニル−；フェニル；またはメトキシ、ハロおよび／またはメチル（特にハロおよび／またはメチル、トリルを含む）により置換されているフェニルであり、より具体的にはメチレンジオキシフェニルまたは前記の置換フェニルである。他の特定の実施形態において、Ｒ１０、Ｒ１０’、Ｒ１４’、およびＲ１４は独立して水素または置換されていてもよいアルキル（特に置換されていてもよいＣ１−Ｃ４アルキル）である。より具体的には、Ｒ１０およびＲ１０’は独立して水素または置換されていてもよいＣ１−Ｃ４アルキル（そしてより具体的には、メチルまたはアミノアルキル−）からなる群より選択され、そしてＲ１４’およびＲ１４は水素である。
【０１４６】
他の実施形態において、Ｒ４はＲ１２と一緒になって以下の式：
【化２３】
2005539062.tif 000024
【０１４７】
（式中、ＡおよびＢはそれぞれ独立してＣ（Ｒ２０）（Ｒ２１）、Ｎ（Ｒ２２）、ＯまたはＳから選択され、Ｒ２０およびＲ２１はそれぞれ独立してＨ、置換されていてもよいアルキル  置換されていてもよいアリールおよび置換されていてもよいヘテロアリールから選択され；そしてＲ２２はＨ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいヘテロアラルキル、置換されていてもよいアルキルカルボニル、置換されていてもよいアリールカルボニル、置換されていてもよいヘテロアリールカルボニル、置換されていてもよいアラルキルカルボニル、置換されていてもよいヘテロアラルキルカルボニル、置換されていてもよいアルコキシカルボニル、置換されていてもよいアリールオキシカルボニル、置換されていてもよいヘテロアリールオキシカルボニル、置換されていてもよいアラルキルオキシカルボニル、置換されていてもよいヘテロアラルキルオキシカルボニルである）の置換されていてもよいジアゼピノン環を形成する。さらに特定の実施形態において、ジアゼピノン環は以下の基：置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいヘテロアリール、および置換されていてもよいヘテロアラルキルの１以上によりさらに置換されている。
【０１４８】
式Iの化合物のさらに他の実施形態において、ＡまたはＢの１つは、Ｃ（Ｒ２０）（Ｒ２１）であり、ここでＲ２０およびＲ２１はそれぞれ独立してＨまたはＣ１−Ｃ４アルキルから選択され、そしてＡまたはＢのもう１つはＮ（Ｒ２２）であり、ここでＲ２２はＨ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいヘテロアラルキル、Ｃ１−Ｃ６アルキルカルボニル、置換されていてもよいアリールカルボニル、置換されていてもよいヘテロアリールカルボニル、置換されていてもよいアラルキルカルボニル、置換されていてもよいヘテロアラルキルカルボニル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシカルボニル、置換されていてもよいアリールオキシカルボニル、置換されていてもよいヘテロアリールオキシカルボニル、置換されていてもよいアラルキルオキシカルボニル、置換されていてもよいヘテロアラルキルオキシカルボニルであり、ここで置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール基または部分は、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルコキシ、アミノ、Ｃ１−Ｃ４アルキルアミノ、ジ−Ｃ１−Ｃ４アルキルアミノ、カルボキシ、Ｃ１−Ｃ４アルキルカルボニルオキシ、Ｃ１−Ｃ４アルコキシカルボニル、カルボキサミド、Ｃ１−Ｃ４アルキルカルボキサミド、アミノカルボニル、Ｃ１−Ｃ４アルキルアミノカルボニル、ジ−Ｃ１−Ｃ４アルキルアミノカルボニル、シアノ、Ｃ１−Ｃ４アルキルカルボニル、ハロゲン、ヒドロキシル、メルカプトおよびニトロから選択される１以上の置換基により非置換であるかあるいは置換されている。他の実施形態において、ＡはＣ（Ｒ２０）（Ｒ２ｌ）であり、ここでＲ２０およびＲ２１はそれぞれＨまたはＣ１−Ｃ４アルキルであり、そしてＢはＮ（Ｒ２２）であり、ここでＲ２２はＨ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、アラルキル、ヘテロアラルキルＣ１−Ｃ６アルキルカルボニル、アリールカルボニル、ヘテロアリールカルボニルである。式Iの化合物の特定の実施形態において、ＡはＣＨ２であり、そしてＢはＮ（Ｒ２２）であり、ここでＲ２２はＨ、メチル、ベンジルまたはアセチル（−Ｃ（Ｏ）メチル）である。例えば米国特許出願第６０／４３５，００１号を参照のこと（その全体を本明細書に組み込む）。
【０１４９】
他の実施形態において、Ｒ４はＲ１２と一緒になって、以下の式：
【化３４】
2005539062.tif 000025
【０１５０】
（Ｒ３１およびＲ３２は独立して水素、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいアラルキル、および置換されていてもよいヘテロアラルキルから独立して選択され；そしてｎは１または２である）の置換されていてもよいピペラジンまたはジアゼパムを形成する。より具体的には、Ｒ３１はアリール（特にフェニル）、置換アリール（特に低級アルキル−、低級アルコキシ−、および／またはハロ−置換フェニル）、アラルキル（特にベンジルおよびフェニルビニル）、ヘテロアラルキル、置換アラルキル（特に置換ベンジルおよび置換フェニルビニル）、または置換ヘテロアラルキルであり；Ｒ３２は水素であり；そしてｎは１である。例えば米国特許出願第６０／４０４，８６４号を参照のこと（その全体を本明細書に組み込む）。
【０１５１】
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８基
式Iの化合物を考慮する場合、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は独立して水素；アシル；アルキル；アルキル、アルコキシ、ハロ、ヒドロキシル、ニトロ、シアノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキルスルホニル、アルキルスルホンアミド、アルキルチオ、カルボキシアルキル、カルボキサミド、アミノカルボニル、低級−アルキルアミノカルボニル−（例えばメチルアミノカルボニル−またはエチルアミノカルボニル−）、ジ（低級アルキル）アミノカルボニル−（例えばジメチルアミノカルボニル−またはジエチルアミノカルボニル−）、アリール、またはヘテロアリールにより置換されているアルキル；アルコキシ；アルキル、アシル、アルコキシ、ハロ、ヒドロキシル、ニトロ、シアノ、ジアルキルアミノ、アルキルスルホニル、アルキルスルホンアミド、アルキルチオ、カルボキシアルキル、カルボキサミド、アミノカルボニル、低級−アルキルアミノカルボニル−（例えばメチルアミノカルボニル−またはエチルアミノカルボニル−）、ジ（低級−アルキル）アミノカルボニル−（例えばジメチルアミノカルボニル−またはジエチルアミノカルボニル−）、アリール、またはヘテロアリールにより置換されているアルコキシ；ハロゲン；ヒドロキシル；ニトロ；シアノ；アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ；アルキルスルホニル；アルキルスルホンアミド；アルキルチオ；アミノカルボニル；アリール；アルキル、アシル、アルコキシ、ハロ、ヒドロキシル、ニトロ、シアノ、ジアルキルアミノ、アルキルスルホニル、アルキルスルホンアミド、アルキルチオ、カルボキシアルキル、カルボキサミド、アミノカルボニル、低級−アルキルアミノカルボニル−（例えばメチルアミノカルボニル−またはエチルアミノカルボニル−）、ジ（低級−アルキル）アミノカルボニル−（例えばジメチルアミノカルボニル−またはジエチルアミノカルボニル−）、アリール、またはヘテロアリールにより置換されているアリール；ヘテロアリール；またはアルキル、アシル、アルコキシ、ハロ、ヒドロキシル、ニトロ、シアノ、ジアルキルアミノ、アルキルスルホニル、アルキルスルホンアミド、アルキルチオ、カルボキシアルキル、カルボキサミド、アミノカルボニル、低級−アルキルアミノカルボニル−（例えばメチルアミノカルボニル−またはエチルアミノカルボニル−）、ジ（低級−アルキル）アミノカルボニル−（例えばジメチルアミノカルボニル−またはジエチルアミノカルボニル−）、アリール、またはヘテロアリールにより置換されているヘテロアリールから選択される。
【０１５２】
より具体的には、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は独立して水素、アミノ、アルキルアミノ、ヒドロキシル、ハロゲン（特にクロロおよびフルオロ）、Ｃ１−Ｃ４アルキル（特にメチル）、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル（特にトリフルオロメチル）、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ（特にメトキシ）、Ｃ１−Ｃ４ハロアルコキシおよびシアノから選択される。より具体的には、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８はメトキシ、水素、シアノ、またはハロ（特にＣｌ、Ｆ）である。さらに特定の置換基のそれぞれに関しては：Ｒ５はアミノ、アルキルアミノ、トリフルオロメチル、水素またはハロであり；Ｒ６は水素、アルキル（特に、メチル）またはハロであり；Ｒ７は水素、ハロ、アルキル（特に、メチル）、アルコキシ（特に、メトキシ）、シアノ、またはトリフルオロメチルであり；そしてＲ８は水素またはハロである。さらに特定の化合物は、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８の少なくとも１つが水素ではなく、特にＲ７が水素ではない化合物である。より具体的には、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ８が水素であり、Ｒ７がシアノ、メトキシまたはハロゲン（特にＣｌ、Ｆ）である化合物である
塩形態
本発明の化合物は、一般的に酸付加塩を形成することができる（即ち、酸付加塩を形成する薬学的に許容される酸と反応する部位を含む）。本発明は、式Iの化合物の薬学的に許容される酸付加塩を含む。本化合物の酸付加塩は、親化合物および塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、酢酸、マレイン酸、コハク酸またはメタンスルホン酸などの過剰量の酸から、適切な溶媒中、標準的な方法で製造できる。
【０１５３】
薬学的に許容されない式Iの化合物の塩および／または溶媒和物は、式Iの化合物の薬学的に許容される塩および／または溶媒和物または式Iの化合物それ自身の製造における中間体として有用でありうるが、そのことは本発明の他の態様を形成する。
【０１５４】
特定の亜属
式Iの化合物の特定の亜属（subgenus）において、
Ｗ、Ｘ、Ｙ、およびＺはＣであり；
ＴおよびＴ’は存在せず；
Ｒ１は置換されていてもよいアリール−Ｃ１−Ｃ４−アルキル−、置換されていてもよいヘテロアリール−Ｃ１−Ｃ４−アルキル−、またはナフタレニルメチル（特にベンジル、ハロベンジル、メトキシベンジル、シアノベンジル、またはナフタレニルメチル）であり；
Ｒ２は置換されていてもよいＣ１−Ｃ４−アルキル−（特にエチルまたはプロピル）であり；
Ｒ２’は水素であり；
Ｒ１２は−Ｃ（Ｏ）Ｒ３であり；
Ｒ３は水素、置換されていてもよいアルキル−、置換されていてもよいアラルキル−、置換されていてもよいヘテロアラルキル−、置換されていてもよいヘテロアリール−、置換されていてもよいアリール−、Ｒ１５Ｏ−およびＲ１７−ＮＨ−から選択され、ここでＲ１５は置換されていてもよいアルキルおよび置換されていてもよいアリールから選択され、そしてＲ１７は水素、置換されていてもよいアルキルおよび置換されていてもよいアリールから選択され；
Ｒ４は水素、置換されていてもよいアルキル−、置換されていてもよいアリール−、置換されていてもよいアラルキル−、置換されていてもよいヘテロアラルキル−、および置換されていてもよいヘテロシクリル−から選択され
Ｒ５、Ｒ６、およびＲ８は水素であり；そして
Ｒ７はハロ、シアノ、メトキシ、またはヒドロキシルである。
【０１５５】
より具体的には、Ｒ４は、Ｒ１６がヒドロキシ、ジ（低級アルキルアミノ）、（低級アルキル）アミノ、アミノ、ピロリジノ、ピペリジノ、イミダゾリルおよびモルホリノであるＲ１６−アルキレン−である。
【０１５６】
他の実施形態において、Ｗ、Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ｔ、Ｔ’、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ２’、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は上記で定義したものであり；そしてＲ１２は水素である。
【０１５７】
他の実施形態において、Ｗ、Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ｔ、Ｔ’、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ２’、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は上記で定義したものであり；そしてＲ１２はＲ４と一緒になって置換されていてもよいイミダゾリニル環を形成する。
【０１５８】
他の実施形態において、Ｗ、Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ｔ、Ｔ’、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ２’、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は上記で定義したものであり；そしてＲ１２はＲ４と一緒になって置換されていてもよいイミダゾリル環を形成する。
【０１５９】
他の実施形態において、Ｗ、Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ｔ、Ｔ’、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ２’、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は上記で定義したものであり；そしてＲ１２はＲ３ａが置換フェニルおよびナフチルから選択される−ＳＯ２Ｒ３ａである。
【０１６０】
本発明の特定の化合物はＮ−（３−アミノ−プロピル）−Ｎ−［ｌ−（３−ベンジル−７−クロロ−４−オキソ−４Ｈ−チオクロメン−２−イル）−２−メチル−プロピル］−４−メチル−ベンズアミドである。
【０１６１】
有用性、試験および投与
一般的有用性
ひとたび製造されれば、本発明の化合物は、有糸分裂の変化を含む種々の適用に使用できる。当業者には理解されるように、有糸分裂は種々の方法により変化を受けさせることができる。即ち、細胞分裂経路における成分の活性を増加させるかまたは減少させるかのいずれかにより有糸分裂に影響を及ぼすことができる。つまり、有糸分裂は、特定の成分を阻害または活性化することのいずれかを用いて平衡を阻害することにより影響を受けさせる（例えば、撹乱する）ことができる。減数分裂を変化させるために同様な方法を用いることができる。
【０１６２】
特定の実施形態において、本発明の化合物は、有糸分裂における長期の細胞周期停止をもたらす、紡錘体形成の抑制に用いられる。“抑制する”は、本明細書においては、紡錘体形成を減少させるかまたは妨害する、もしくは紡錘体機能異常をもたらすことを意味する。“紡錘体形成”は、本明細書においては、有糸分裂キネシンによる微小管の双極性構造への組織化を意味する。“紡錘体機能異常”は、本明細書においては、有糸分裂停止および単極性紡錘体形成を意味する。
【０１６３】
本発明の化合物は、有糸分裂キネシンであるＫＳＰに結合するために、および／またはそのキネシン活性を抑制するために有用である。１つの実施形態において、該ＫＳＰはヒトＫＳＰであるが、本化合物は、他の生物由来のＫＳＰキネシンに結合するために、またはそのキネシン活性を抑制するために有用であることができる。本明細書においては、“抑制する”は、形成異常、即ち紡錘体極の扁平化をもたらすかあるいは、他の紡錘体の形態学的混乱をもたらす、紡錘体極の分離の増加または減少のいずれかを意味する。この目的のためには、ＫＳＰの変異体および／またはフラグメントもまたＫＳＰの定義に含まれる。米国特許第６，４３７，１１５号を参照のこと（その全体を本明細書に組み込む）。本発明の化合物はＫＳＰに関して選択性を有することが示されている。しかしながら、本発明は、他の有糸分裂キネシンに結合するかまたはそれをモジュレートする化合物の使用を含む。
【０１６４】
本発明の化合物は、細胞増殖性疾患の治療に用いられる。本明細書に記載の化合物、組成物および方法により治療できる病状は、癌（以下にさらに説明する）、自己免疫疾患、真菌疾患、関節炎、移植片拒絶、炎症性腸疾患、医療処置（外科手術、血管形成などを非限定的に含む）後に誘発される細胞増殖を非限定的に含む。治療は細胞増殖抑制を含む。細胞が異常な状態ではないにもかかわらず治療を必要とする場合があることは認められるであろう。従って、１つの実施形態において、本発明は、患っている細胞または患者、もしくはこれらの疾患または病状のいずれか１つにより患う可能性のある被験者への適用を含む。
【０１６５】
本明細書に記載の化合物、医薬製剤および方法は、皮膚癌、乳癌、脳腫瘍、子宮頚癌、睾丸癌などの固形癌を含む癌の治療にとりわけ有用であると考えられる。より具体的には、治療できる癌は以下を非限定的に含む：
心臓：肉腫（血管肉腫、線維肉腫、横紋筋肉腫、脂肪肉腫）、粘液腫、横紋筋腫、線維腫、脂肪腫および奇形腫；
肺：気管支原性癌（扁平上皮細胞、未分化小細胞、未分化大細胞、腺癌）、肺胞（細気管支）癌、気管支腺腫、肉腫、リンパ腫、軟骨性過誤腫、中皮腫；
消化管：食道（扁平上皮癌、腺癌、子宮平滑筋肉腫、リンパ腫）、胃（癌、リンパ腫、子宮平滑筋肉腫）、膵臓（管状腺癌、インスリノーマ、グルカゴノーマ、ガストリノーマ、カルチノイド腫瘍、ＶIＰ分泌腫瘍）、小腸（腺癌、リンパ腫、カルチノイド腫瘍、カポジ肉腫、平滑筋腫、血管腫、脂肪腫、神経線維腫、線維腫）、大腸（腺癌、管状腺腫、絨毛腺腫、過誤腫、平滑筋腫）；
泌尿生殖路：腎臓（腺癌、ウイルムス腫瘍［腎芽細胞腫］、リンパ腫、白血病）、膀胱および尿道（扁平上皮癌、移行上皮癌、腺癌）、前立腺（腺癌、肉腫）、睾丸（精上皮腫、奇形腫、胎児性癌、奇形癌、絨毛癌、肉腫、間細胞癌、線維腫、線維腺腫、腺腫様腫瘍、脂肪腫）；
肝臓：肝癌（肝細胞癌）、胆管癌、肝芽腫、血管肉腫、肝細胞腺腫、血管腫；
骨：骨発生性肉腫（骨肉腫）、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性リンパ腫（細網細胞肉腫）、多発性骨髄腫、悪性巨細胞脊索腫、骨軟骨腫（骨軟骨性骸骨腫）、良性軟骨腫、軟骨芽細胞腫、軟骨粘液線維腫、類骨骨腫および巨細胞腫；
神経系：頭蓋骨（骨腫、血管腫、肉芽腫、黄色腫、変形性骨炎）、髄膜（髄膜腫、髄膜肉腫、神経膠腫症）、脳（星状細胞腫、髄芽腫、神経膠腫、上衣腫、胚細胞腫［松果体腫］、多型膠芽腫、乏突起膠腫、神経鞘腫、網膜芽細胞腫、先天性腫瘍）、脊髄神経線維腫、髄膜腫、神経膠腫、肉腫）；
婦人科：子宮（子宮内膜癌）、子宮頚（子宮頚癌、前癌頚管異形成）、卵巣（卵巣癌［悪性病変嚢胞腺癌、粘液性膵嚢胞腺腫、分類されていない癌］、顆粒膜細胞癌、Ｓｅｒｔｏｌi−Ｌｅｙｄiｇ細胞腫、未分化胚細胞腫、悪性奇形腫）、外陰（扁平上皮癌、上皮内癌、腺癌、線維肉腫、メラノーマ）、膣（明細胞癌、扁平上皮癌、ブドウ状肉腫（胎児性横紋筋肉腫］、ファロピウス管（癌）；
血液学：血液（骨髄性白血病［急性及び慢性］、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、脊髄増殖性疾患、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群）、ホジキン病、非−ホジキンリンパ腫［悪性リンパ腫］；
皮膚：悪性メラノーマ、基底細胞癌、扁平上皮癌、カポジ肉腫、モル異形成母斑、脂肪腫、血管腫、皮膚線維腫、ケロイド、乾癬；および
副腎：神経芽細胞腫。
【０１６６】
本明細書においては、癌の治療は、上記の疾患のいずれか１つに罹患している細胞を含む、癌細胞の治療を含む。従って、本明細書に記載の”癌細胞”という用語は、上記の疾患のいずれか１つに罹患している細胞を含む。
【０１６７】
本発明の他の有用な態様は、式Iの化合物、塩または溶媒和物を有するキットならびに該化合物、塩または溶媒和物の有効量を投与することによる細胞増殖性疾患の治療に関する説明書を含む添付文書または他のラベルである。本発明のキット中の式Iの化合物、塩または溶媒和物は、特に、細胞増殖性疾患の一連の治療のための１以上の投与剤で提供され、各投与剤は、薬学的に許容される賦形剤および式Iの化合物、塩または溶媒和物を含む医薬製剤であることができる。
【０１６８】
試験
ＫＳＰ−モジュレーター活性のアッセイに関しては、一般的に、ＫＳＰまたは本発明による化合物のいずれかが、分離したサンプル結合領域を有する不溶性担体（例えばマイクロタイタープレート、アレイなど）に、遊離しないかたちで結合されている。不溶性担体は、サンプルを結合できるものであればいずれの組成のものからでも製造でき、溶解性物質から容易に分離でき、そして他の点でもスクリーニングの全方法に適合する。かかる担体の表面は、固体でも多孔性であっても良く、そして任意の都合のよい形状であってもよい。適切な不溶性担体の例は、マイクロタイタープレート、アレイ、膜およびビードを含む。これらは一般的に、ガラス、プラスチック（例えばポリスチレン）、多糖類、ナイロンまたはニトロセルロース、テフロン（登録商標）などからできている。少量の試薬およびサンプルを用いて多くのアッセイを同時に実施できるため、マイクロタイタープレートおよびアレイが特に便利である。試薬および本発明の方法全体と適合し、サンプルの活性が維持されそして拡散しない限りにおいて、サンプル結合は特定の方法に限定されない。特定の結合方法は、抗体（タンパク質が担体と結合している時、リガンド結合部位または活性化順序のどちらも立体的に阻害しない）、“粘着性のある”またはイオン性担体への直接結合、化学的架橋、タンパク質の合成または表面への試薬などの使用を含む。サンプルの結合に続いて、過剰の未結合物質を洗浄により除去する。ついで、サンプルの結合領域をウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、カゼインまたは他の無害のタンパク質もしくは他の部分を用いるインキュベーションにより遮断することができる。
【０１６９】
本発明の化合物は、単独で、有糸分裂キネシン（特にＫＳＰ）の活性を阻害するために用いることができる。１つの実施形態において、本発明の化合物はＫＳＰと混合し、ＫＳＰの活性が検査される。キネシン（ＫＳＰを含む）活性は当該技術分野で公知であり、１以上のキネシン活性を含む。キネシン活性はＡＴＰ加水分解；微小管結合；すべりおよび重合／脱重合（微小管ダイナミクスへの影響）；紡錐体の他のタンパク質への結合；細胞周期調節に関与するタンパク質への結合；キナーゼまたはプロテアーゼなどの他の酵素への基質としてしての機能；および紡錘体極分離などの特定のキネシン細胞活性に影響する能力を含む。
【０１７０】
運動性アッセイの測定方法は、当該技術分野で良く知られている（例えば、Hallら(1996), Biophys. J., 71: 3467-3476, Turnerら 1996, AnaL Biochem. 242 (1): 20-5; Gittesら 1996, Biophys. J. 70 (1) : 418-29; Shirakawaら 1995, J. Exp. BioL 198: 1809-15; Winkelmannら 1995, Biophys. J. 68: 2444-53; Winkelmannら 1995, Biophys. J. 68: 72S. を参照のこと）。
【０１７１】
当該技術分野で知られている、ＡＴＰアーゼ加水分解活性の測定方法もまた使用できる。適切には、溶液に基づく試験が用いられる。米国特許第６，４１０，２５４号（その全体を本明細書に組み込む）は、かかるアッセイを記載している。あるいはまた、慣用法が用いられる。例えば、キネシンからのＰi放出が定量できる。１つの実施形態において、ＡＴＰアーゼ加水分解活性アッセイは、０．３ＭＰＣＡ（過塩素酸）およびマラカイトグリーン試薬（８．２７ｍＭモリブデン酸ナトリウム（II）、０．３３ｍＭマラカイトグリーン修酸塩、および０．８ｍＭトリトンＸ−１００）を用いる。試験を行うために、１０μＬの反応混合物を９０μＬの冷やした０．３ＭＰＣＡを加えて反応を停止する。放出されたｍＭ無機リン酸にデータを変換できる様に無機リン酸を用いる。全ての反応物と標準物質がＰＣＡ中で反応停止した時点で、１００μＬのマラカイトグリーン試薬をマイクロタイタープレート中の該当するウェルなどに加える。混合物を１０〜１５分間発色させ、プレートを６５０ｎｍの吸光度で読み取る。リン酸標準物質を用いれば、吸光度の読み取りをｍＭＰiに変換し、時間に対してプロットすることができる。さらに、当該技術分野で知られているＡＴＰアーゼアッセイは、ルシフェラーゼアッセイを含む。
【０１７２】
キネシンのモータードメインのＡＴＰアーゼ活性はまた、薬剤の効果をモニターすることにも使用でき、これは当業者に良く知られている。１つの実施形態において、キネシンのＡＴＰアーゼアッセイは微小管の非存在下で実施される。他の実施形態において、ＡＴＰアーゼアッセイは微小管の存在下で行われる。上記のアッセイにおいて、異なるタイプの薬剤を検出できる。１つの実施形態において、薬剤の効果は微小管およびＡＴＰの濃度に依存しない。他の実施形態において、ＡＴＰ、微小管または両方の濃度を増加させることにより、キネシンＡＴＰアーゼへの薬剤の効果を減少させることができる。さらに他の実施形態において、ＡＴＰ、微小管またはその両方の濃度を増加させることにより、薬剤の効果は増加する。
【０１７３】
次に、インビトロでＫＳＰの生化学的活性を抑制する化合物を、インビボでスクリーニングすることができる。インビボスクリーニング法は、細胞周期分布、細胞生存性または紡錘体の存在、形態学、活性、分布、もしくは数のアッセイを含む。細胞集団の細胞周期分布を例えばフローサイトメトリーによりモニターする方法は、細胞生存性を測定する方法として当業者に良く知られている。例えば、米国特許第６，４３７，１１５号を参照のこと（その全体を本明細書に組み込む）。紡錘体形成および形成異常を顕微鏡的方法でモニターする方法は、当業者に良く知られている（例えば、Whitehead and Rattner (1998), J. Cell Sci. 111: 2551-61 ; Galgio et al, (1996) J. Cell Biol., 135: 399-414を参照のこと）（それぞれその全体を本明細書に組み込む）。
【０１７４】
本発明の化合物はＫＳＰキネシンを阻害する。阻害の指標の１つは、IＣ５０であり、対照と比較してＫＳＰ活性が５０％減少する化合物の濃度で定義される。好ましい化合物は約１ｍＭ未満のIＣ５０値を有し、好ましい実施形態において約１００μＭ未満のIＣ５０値を有し、さらに好ましい実施形態において約１０μＭ未満のIＣ５０値を有し、特に好ましい実施形態において約１μＭ未満のIＣ５０値を有し、とりわけ好ましい実施形態において約１００ｎＭ未満のIＣ５０値を有し、そして最も好ましい実施形態において約１０ｎＭ未満のIＣ５０値を有する。IＣ５０の測定は、例えば本明細書に記載されているＡＴＰアーゼアッセイを用いて実施される。
【０１７５】
阻害の他の指標は、Ｋiである。１μＭ未満のIＣ５０値を有する化合物に関しては、ＫiまたはＫｄは本明細書に記載の化合物とＫＳＰとの相互作用に関する解離速度定数として定義される。好ましい化合物は約１００μＭ未満のＫi値を有し、好ましい実施形態において約１０μＭ未満のＫi値を有し、特に好ましい実施形態において約１μＭ未満のＫi値を有し、とりわけ好ましい実施形態において約１００ｎＭ未満のＫi値を有し、そして最も好ましい実施形態において約１０ｎＭ未満のＫi値を有する。
【０１７６】
化合物に関するＫi値は、３つの仮定およびミカエリス・メンテンの式に基づくIＣ５０から決定できる。第１に、ただ１つの分子のみが酵素に結合し、協同性が働かない。第２に、活性酵素および試験化合物の濃度が既知である（即ち、調合液中に有意な量の不純物または不活性形がない）。第３に、速度（即ち、化合物濃度）データが以下の式を満たす：
【数１】
2005539062.tif 000026
【０１７７】
（ここで、Ｖは実測速度であり、Ｖｍａｘは遊離酵素の速度であり、Iｏは阻害剤濃度であり、Ｅｏは酵素濃度であり、そしてＫｄは酵素−阻害剤複合体の解離定数である）。
【０１７８】
阻害の他の指標はＧI５０であり、細胞増殖速度を５０％抑制する化合物の濃度として定義される。好ましい化合物は約１ｍＭ未満のＧI５０値を有し；約２０μＭ未満のＧI５０値を有する化合物はさらに好ましく；約１０μＭ未満のＧI５０値を有する化合物はさらに好ましく；約１μＭ未満のＧI５０値を有する化合物はさらに好ましく；約１００ｎＭ未満のＧI５０値を有する化合物はさらに好ましく；そして約１０ｎＭ未満のＧI５０値を有する化合物はよりさらに好ましい。ＧI５０の測定は、例えば本明細書に記載の細胞増殖アッセイを用いて実施される。本クラスの化合物は、細胞増殖を阻害することが見出された。
【０１７９】
小分子阻害剤のインビトロ有効性は、例えば、化合物の９ポイント希釈シリーズへの７２時間暴露による、ヒト卵巣癌細胞（ＳＫＯＶ３）の生存性アッセイにより測定される。市販試薬であるＭＴＳ／ＰＭＳの生物還元により生成される生成物である、ホルマゾン（formazon）の吸光度を測定することにより、細胞生存性が測定される。用量反応曲線上の各ポイントは、７２時間での無処理対照細胞のパーセントからバックグラウンド吸収（完全細胞死）を差し引いたものとして算出される。
【０１８０】
癌の治療のために臨床上成功裏に用いられている増殖抑制化合物（癌化学療法剤）は、広い範囲のＧI５０値を有する。例えば、Ａ４５４９細胞においては、パクリタキセルのＧI５０値は４ｎＭであり、ドキソルビシンは６３ｎＭであり、５−フルオロウラシルは１μＭであり、そしてヒドロキシウレアは５００μＭである（米国立癌研究所・開発治療プログラム http://dtp.nci.nih.gov/ により提供されているデータ）。従って、細胞増殖を抑制する化合物は、阻害を発揮する濃度に関わりなく、臨床的有用性を有する可能性を有する。
【０１８１】
ＫＳＰキネシンに結合する化合物のスクリーニング法に本発明の化合物を用いるために、ＫＳＰを担体に結合させ、そして本発明の化合物をアッセイに加える。あるいはまた、本発明の化合物を担体に結合させ、そしてＫＳＰを加える。新規結合剤を求めることができる化合物のクラスには、特定の抗体、化学ライブラリーのスクリーニングで特定された非天然結合剤、ペプチド類似体などが含まれる。特に興味が持たれるスクリーニングアッセイには、ヒト細胞に対して低毒性を有する候補薬剤に関するものがある。標識インビトロタンパク−タンパク結合アッセイ、電気泳動移動度シフトアッセイ、タンパク結合用イムノアッセイ、機能アッセイ（リン酸化アッセイなど）などを含む多種多様のアッセイがこの目的のために使用できる。
【０１８２】
本発明の化合物のＫＳＰへの結合の測定は、多くの方法により実施できる。１つの実施形態において、例えば蛍光または放射活性部分により本化合物を標識化し、結合を直接測定する。例えば、全部または一部のＫＳＰを固定担体に結合させ、標識化されている試験化合物（例えば、少なくとも１つの原子が検出可能なアイソトープにより置換された本発明の化合物）を加え、過剰の試薬を洗い落とし、固体担体上に存在する標識の量を測定することにより、これが実施できる。
【０１８３】
本明細書において、“標識化されている”は、例えば放射性同位体、蛍光タグ、酵素、抗体、磁気粒子などの粒子、化学発光タグ、または特異的結合分子などの検出可能シグナルを提供する標識により直接または間接のいずれかにより標識化されていることを意味する。特異的結合分子はビオチンおよびストレプトアビジン、ジゴキシンおよび抗ジゴキシンなどの対を含む。特異的結合メンバーに関しては、相補的なメンバーは、通常、上記に概略を述べた公知の方法に基づき検出のために提供される分子により標識化されているであろう。標識は、検出可能シグナルを直接または間接に提供することができる。
【０１８４】
一部の実施形態において、成分の１つのみが標識化されている。例えば、キネシンタンパク質は１２５Iまたはフルオロフォアによりチロシン位置を標識化できる。あるいはまた、２以上の成分を異なる標識を用いて標識化でき、例えばタンパク質に関しては１２５Iを用い、そして抗有糸分裂剤に関してはフルオロフォアを用いて標識化できる。
【０１８５】
本発明の化合物はさらなる薬剤候補をスクリーニングするためのコンペティターとしても使用できる。本明細書においては、“候補薬剤”または“薬剤候補”または文法的同等物は、例えば、生物活性を試験するためのタンパク質、オリゴペプチド、小有機分子、多糖、ポリヌクレオチド、などの任意の分子を言う。本化合物は、核酸配列およびタンパク質配列を含む細胞増殖表現型または細胞増殖配列の発現を直接または間接に変えることができる。他の場合においては、細胞増殖タンパク質の結合および／または活性の変化がスクリーニングされる。この種類のスクリーニングは、微小管の存在下あるいは非存在下のいずれかで実施できる。タンパク質の結合または活性がスクリーニングされる場合は、特定の実施形態は、例えば微小管などのポリマー構造およびＡＴＰなどのエネルギー源などの特定のタンパク質に結合することが既に知られている分子を除く。本明細書におけるアッセイの特定の実施形態は、本明細書において”外因的な”薬剤として呼ぶ、内因的天然状態の細胞増殖タンパク質に結合しない候補薬剤を含む。他の実施形態において、外因的薬剤はさらに、ＫＳＰに対する抗体を含む。
【０１８６】
候補薬剤は、多くの化学的クラスを含むことができるが、該薬剤は一般的に有機分子であり、好ましくは１００より大きくかつ約２，５００ダルトン未満の分子量を有する小有機化合物である。候補薬剤は、特に水素結合および親油性結合などのタンパク質との構造的相互作用に必要な官能基を含み、そして一般的に少なくとも１つのアミン、カルボニル−、ヒドロキシル−、エーテル、またはカルボキシル基を含み、好ましくは少なくとも２つの官能基を含む。候補薬剤は、しばしば、１以上の上記の官能基により置換されている、環式炭素環式または複素環式構造および／または芳香族または多環芳香族構造を含む。候補薬剤はまた、ペプチド、糖質、脂肪酸、ステロイド、プリン類、ピリミジン、誘導体、構造類似体またはそれらの組み合わせを含む生物分子から見出される。
【０１８７】
候補薬剤は、合成または天然の化合物のライブラリーを含む広範囲の供給源から得られる。例えば、無作為化オリゴヌクレオチドの発現を含む、広範囲の有機化合物の無作為型合成および志向型合成のために多くの手段が利用できる。あるいはまた、細菌、真菌、植物および動物抽出物の形の天然化合物のライブラリーが入手可能であるかまたは容易に製造できる。さらに、天然からあるいは合成的に製造されたライブラリーおよび化合物は、通常の化学、物理および生化学的手段により容易に修飾される。既知薬剤にアシル化、アルキル化、エステル化、および／またはアミド化などの志向型または無作為型化学修飾を受けさせて、構造類似体を製造することができる。
【０１８８】
ＫＳＰおよび薬剤候補を第１のサンプル中に混合することにより競合スクリーニングアッセイを行うことができる。第２のサンプルは本発明の化合物、ＫＳＰおよび薬剤候補を含む。このアッセイは、微小管の存在下または非存在下のいずれかで実施できる。両方のサンプルに関して薬剤候補の結合を測定し、両サンプル間の結合における変化または差異は、ＫＳＰに結合できるその活性を阻害する可能性のある薬剤候補の存在を示す。即ち、薬剤候補の結合が第１のサンプルに比較して第２のサンプルに差異が見られれば、薬剤候補はＫＳＰに結合する能力がある。
【０１８９】
特定の実施形態において、候補薬剤のＫＳＰへの結合は、競合結合アッセイを用いて測定される。この実施形態において、コンペティターは、抗体、ペプチド、結合パートナー、リガンドなどのＫＳＰに結合する結合成分である。特定の環境下で、候補薬剤および結合成分間と結合成分および候補薬剤間の置換のような競合結合が存在しうる。
【０１９０】
１つの実施形態において、候補薬剤は標識化されている。存在する場合、候補薬剤、またはコンペティターのいずれか、あるいは両方をＫＳＰに最初に加えて結合するのに十分な時間放置する。最適活性を容易にするいずれの温度でもインキュベーションを行うことができるが、一般的に４〜４０℃で行う。
【０１９１】
最適活性のためにインキュベーション時間を選択するが、迅速なハイスループットスクリーニングを容易にするために最適化することもできる。一般的に、０．１〜１時間で十分である。過剰な試薬は、一般的に取り除くかあるいは洗い落とす。ついで第２の成分を加え、結合を示す標識化合物の有無を確認する。
【０１９２】
他の実施形態において、コンペティターを最初に加え、ついで候補薬剤を加える。コンペティターが置換されることは、候補薬剤がＫＳＰへ結合することを示し、それにより候補薬剤がＫＳＰに結合することができ、かつＫＳＰの活性を抑制できる可能性を示す。この実施形態において、どちらの成分も標識できる。従って、例えば、コンペティターが標識されている場合、洗浄溶液中の標識の存在は薬剤による置換を示す。あるいはまた、候補薬剤が標識されている場合、担体上の標識の存在は置換を示す
他の実施形態において、候補薬剤を最初に加え、インキュベートし洗浄した後コンペティターを加える。コンペティターが結合しない場合は、候補薬剤がＫＳＰと高い親和性をもって結合していることを示す。従って、候補薬剤が標識されている場合、担体上の標識の存在およびコンペティター結合の非存在により、候補薬剤がＫＳＰに結合できることを示すことができる。
【０１９３】
上記のように候補薬剤とＫＳＰとを混合する工程とＫＳＰの生物活性の変化を測定することを含んでなる、ＫＳＰ活性を阻害する能力を有する候補薬剤をスクリーニングすることにより阻害を試験する。従って、この実施形態において、候補薬剤はＫＳＰと結合（これは必ずしも必要ではないが）し、かつ本明細書に記載のＫＳＰの生物学的または生化学的活性を変化させなければならない。本方法は、前記に概略を述べた様に、細胞周期分布、細胞生存性における変化、または紡錘体の存在、形態学、活性、分布、もしくは量の変化に関する、細胞のインビトロスクリーニング法およびインビボスクリーニングの両方を含む。
【０１９４】
あるいはまた、天然のＫＳＰには結合するが修飾ＫＳＰには結合できない薬剤候補を特定するためにディファレンシャルスクリーニングを行うことができる。
【０１９５】
陽性対照および陰性対照を本アッセイに使用することができる。統計的に有意な結果を得るために、適切には、全ての対照サンプルおよび試験サンプルを少なくとも３回行う。薬剤がタンパク質に結合するために十分な時間、全てのサンプルのインキュベーションを行う。インキュベーションに続いて、全てのサンプルを洗浄して非特異的に結合している物質を除き、一般的には標識されている結合薬剤を測定する。例えば、放射性標識を用いる場合、サンプルをシンチレーションカウンター中で計数して結合している化合物の量を測定する。
【０１９６】
種々の他の薬剤を本スクリーニングアッセイに用いることができる。これらの薬剤は、最適なタンパク−タンパク結合を容易にするために、および／または非特異的またはバックグラウンドの相互作用を減少させるために使用することができる、塩、中性タンパク質（例えばアルブミン）、界面活性剤などの薬剤を含む。また別のやり方で本アッセイの効率を改善する薬剤（例えば、プロテアーゼインヒビター、ヌクレアーゼ阻害剤、抗菌剤など）も使用することができる。必要な結合を提供する成分の混合物を任意の順序で加えることができる。
【０１９７】
投与
したがって、本発明の化合物を細胞に投与する。本明細書において、“投与する”は、細胞培養または患者のいずれかにおける細胞に本発明の化合物の治療的有効量を投与することを意味する。本明細書において、“治療的有効量”は、投与の目的とする効果を生む投与量を意味する。正確な投与量は治療の目的により決まり、公知の技術を用いて当業者により確認される。当該技術分野で知られている様に、全身または局所送達、年齢、体重、一般健康状態、性別、食事、投与時間、薬剤相互作用および疾患の重篤度に関する調整が必要とされ、当業者によりルーチン試験を用いて確認される。本明細書においては、“細胞”は、有糸分裂または減数分裂を変化させることができる任意の細胞を意味する。
【０１９８】
本発明の目的に関する“患者”は、ヒトおよび動物の両方を含み、特に哺乳動物および他の生命体を含む。したがって、本方法は、ヒトの治療および獣医治療の両方に適用できる。好ましい実施形態において、患者は哺乳動物であり、そして最も好ましい実施形態において患者はヒトである。
【０１９９】
所望の薬理活性を有する本発明の化合物は、本明細書に記載のように、好ましくは、医薬賦形剤を含んでなる薬学的に許容される組成物で患者に投与することができる。序論の方法に従って、以下で説明するように、種々の方法で本化合物を製剤化することができる。本製剤における治療活性化合物の濃度は、約０．１〜１００重量％の範囲で変化させることができる。
【０２００】
本薬剤は、単独で、あるいは他の治療（即ち、放射線療法または微小管形成に作用すると推定される薬剤であるタキサン系薬剤またはトポイソメラーゼI阻害剤であるカンプトテシン系薬剤などの化学療法剤）と組み合わせて投与することが可能である。用いられる場合、他の化学療法剤は、本発明の化合物の投与の前、同時、または後に投与することが可能である。本発明の１つの態様において、本発明の化合物を１以上の他の化学療法剤と同時投与する。“同時投与する”は、実際に本化合物を同時を含んで投与するか否かに関わらず、本化合物と同時投与する化合物が患者の血流中に同時に見出される様に本化合物を患者に投与することを意味する。
【０２０１】
本発明の化合物および組成物の投与は、皮下、静脈内、鼻内、経皮、腹腔内、筋肉内、肺内、経膣、直腸内、または眼内を非限定的に含む種々の方法により行うことができる。場合によって、例えば、創傷および炎症の治療において、本化合物または組成物は溶液またはスプレーで直接に適用できる。
【０２０２】
医薬製剤は、式Iの化合物またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは塩の溶媒和物および１以上の医薬品賦形剤を含む。当該技術分野で知られている様に、医薬品賦形剤は、種々の製剤（例えば：錠剤、カプセル剤、および液剤などの経口剤；経皮剤、点眼剤、および点耳剤などの局所剤；座剤；注射剤；呼吸器系剤など）における薬物または薬剤の送達を可能にする、または増強する働きをする補助的な成分である。医薬品賦形剤は、活性成分の医薬効果に実質的に貢献する不活性または反応性のない成分、共力剤もしくは化学物質を含む。例えば、医薬品賦形剤は、投与剤の扱いと投与を容易にし、使用の利便性のために、あるいは生物学的利用率を調節するために、流動特性、製品の均一性、安定性、味覚、または外観を改善する働きをすることができる。医薬品賦形剤は、通常不活性または反応性がないと記載されているが、医薬品賦形剤の性質とそれを含む製剤との間に関連が存在することは当業者に認められている。
【０２０３】
担体または希釈剤として使用する適切な医薬品賦形剤は、当業界に公知であり、種々の製剤に使用できる。例えば、Remington’s Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, A. R. Gennaro, Editor, Mack Publishing Company (1990); Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Edition, A. R. Gennaro, Editor, Lippincott Williams & Wilkins (2000); Handbook of Pharmaceutical Excipients, 3rd Edition, A. H. Kibbe, Editor, American Pharmaceutical Association, and Pharmaceutical Press (2000);および Handbook of Pharmaceutical Additives, compiled by Michael and Irene Ash, Gower (1995) を参照のこと（その全体を本明細書に組み込む）。
【０２０４】
錠剤などの経口固体製剤は一般的に１以上の医薬品賦形剤を含むが、これは例えば、錠剤に十分な加工特性および圧縮特性を付与するのに役立ち、あるいはさらなる所望される物理的特性を付与するのに役立つ。希釈剤、結合剤、流動促進剤、滑沢剤、崩壊剤、色素、風味剤、甘味剤、ポリマー、ワックスまたは他の溶解性遅延物質からかかる医薬品賦形剤を選択することができる。
【０２０５】
静脈内投与用組成物は、一般に静脈内輸液（即ち、糖類、アミノ酸または電解質などの単純な化学物質の滅菌溶液であり、これらは容易に循環系で運ばれ吸収される）を含む。かかる輸液は注射用蒸留水ＵＳＰから製造される。
【０２０６】
非経口投与用製剤は、一般に静脈内輸液（即ち、糖類、アミノ酸または電解質などの単純な化学物質の滅菌溶液であり、これらは容易に循環系で運ばれ吸収される）を含む。かかる輸液は注射用蒸留水ＵＳＰから製造される。静脈内注射用に通常用いられる輸液は、Remington, The Science and Practice of Pharmacy ［詳しい引用は前述］に開示されており、以下を含む：
アルコール(例えば５％アルコール）（例えば、デキストロースおよび水溶液（”Ｄ／Ｗ”）または通常の生理食塩水（”ＮＳＳ”）中のＤ／Ｗ溶液、５％デキストロースおよび水（”Ｄ５／Ｗ”）、またはＮＳＳ中のＤ５／Ｗ溶液を含む）；
Aminosyn、FreAmine、Travasolなどの合成アミノ酸（例えば、それぞれ３．５または７；８．５；３．５，５．５または８．５％）；
塩化アンモニウム（例えば２．１４％）；
デキストラン４０のＮＳＳ溶液（例えば１０％）またはＤ５／Ｗ溶液（例えば１０％）；
デキストラン７０のＮＳＳ溶液（例えば６％）またはＤ５／Ｗ溶液（例えば６％）；
デキストロース（グルコース、Ｄ５／Ｗ）（例えば２．５−５０％）；
デキストロースおよび塩化ナトリウム（例えば５〜２０％デキストロースおよび０．２２〜０．９％ＮａＣｌ）；
乳酸リンゲル液（Hartmann’s）（例えば、ＮａＣｌ０．６％、ＫＣｌ０．０３％、ＣａＣｌ２０．０２％）；
乳酸（０．３％）；
マンニトール（例えば５％）（所望によりデキストロース（例えば１０％）またはＮａＣｌ（例えば１５または２０％）と組み合わせて）；
複数の電解質溶液（種々の組み合わせの電解質、デキストロース、フルクトース、転化糖リンゲル液（例えば、ＮａＣｌ０．８６％、ＫＣｌ０．０３％、ＣａＣｌ２０．０３３％）を含む）；
炭酸水素ナトリウム（例えば５％）；
塩化ナトリウム（例えば０．４５、０．９、３、または５％）；
乳酸ナトリウム（例えば１／６Ｍ）；および
滅菌注射用蒸留水。
【０２０７】
かかる注射用輸液のｐＨは変化させることができ、当該技術分野で知られている様に一般的に３．５〜８である。
【０２０８】
本発明の化合物、薬学的に許容される塩および溶媒和物は、単独で、あるいは他の治療（即ち、放射線療法または微小管形成に作用すると思われる薬剤であるタキサン系薬剤またはトポイソメラーゼI阻害剤であるカンプトテシン系薬剤などの化学療法剤）と組み合わせて投与することが可能である。このように用いられる場合、他の治療剤は、本発明の活性成分の投与の前、同時（分離製剤または混合製剤のいずれかで）、または後に投与することが可能である。
【実施例】
【０２０９】
以下の実施例により、上記の発明の使用方法をさらに十分に説明すると共に、本発明の種々の態様を実施するために考えられた最良の形態を説明する。これらの実施例は、本発明の真の範囲を限定するものでは決してなく、むしろ説明の目的のために提供されると理解される。本明細書に記載の特許および特許出願を非限定的に含む全ての出版物は、各出版が特別に個別に全てが説明されていると同様にその全体を本明細書に組み込むように、本願に参照として取り入れられる。
【０２１０】
全ての無水溶媒は、SureSeal（登録商標）容器に入ったものをAldrich Chemical社から購入した。大部分の試薬はAldrich Chemical社から購入した。
【０２１１】
実施例１
化合物の合成
【化２５】
2005539062.tif 000027
【０２１２】
Ｎ，Ｎ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（１１．５５ｇ，１２５ｍｍｏｌ）を１（２０ｇ，１０４ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（４３ｍＬ，３１２ｍｍｏｌ）、およびＣＨ２Ｃｌ２（２００ｍＬ）の０℃溶液に加えた。１５分後、反応混合物にＨ２Ｏ（１００ｍＬ）を加えて反応を停止し、２層を分離した。有機層をブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４）し、濾過し、そして濃縮して２２．６ｇ（〜９９％）の２を得、これをさらに精製せずに用いた。
【０２１３】
還流冷却器を装着した１Ｌ丸底フラスコ中、２３℃、Ｎ２雰囲気下で（２−ブロモエチル）ベンゼン（２８．０ｍＬ，２０８ｍｍｏｌ）、マグネシウム屑（５．６ｇ，２２９ｍｍｏｌ）、およびＴＨＦ（３００ｍＬ）を混合した。〜１０分後、反応混合物は発熱を開始し、反応混合物を放置すると還流に至った。１．５時間後、グリニャール反応は完結し、溶液は２３℃に冷えていた。２（〜２２．６ｇ，〜１０４ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（１００ｍＬ）の溶液をカニューレを通して臭化フェネチルマグネシウムの２０℃溶液に加えた。温度を内部温度計によりモニターし、〜４０℃を超えないようにした。３ｈ後、２３℃で、反応混合物を１ＮＨＣｌ（３００ｍＬ）中に注いで反応を停止した。２層を分離し、有機層をブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４）し、濾過し濃縮した。得られた残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン（１００％）；ヘキサン：ＥｔＯＡｃ（５０：１）；ヘキサン：ＥｔＯＡｃ（２５：１））により精製し、２３．２ｇ（８５％）の３を得た。ＬＲＭＳ（ＭＨ）ｍ／ｚ２６３．２
α−トルエンチオール（３．６６ｍＬ，３０．９ｍｍｏｌ）の２３℃ＤＭＦ（１５０ｍＬ）溶液に、水素化ナトリウム（１．３６ｇ，３４ｍｍｏｌ）を加えた。３０分後、ケトン３（８．１ｇ，３０．９ｍｍｏｌ）を一度に加えた。１時間後２３℃で、反応混合物を１ＮＨＣｌ（１００ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）に注いで反応を停止した。２層を分離し、有機層をブライン（３ｘ１５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４）し、濾過し、濃縮して、１１．３ｇ（〜９９％）の４を得、これをさらに精製せずに用いた。
【０２１４】
三塩化アルミニウム（１２．４ｇ，９２．７ｍｍｏｌ）を、ケトン４（１２．３ｇ，３３．５ｍｍｏｌ）およびＰｈＭｅ（１６０ｍＬ）の２３℃溶液に加えた。１時間後、２３℃で、反応混合物をＨ２Ｏ（２００ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）に注いで反応を停止した。２層を分離し、有機層をブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４）し、濾過し、濃縮した。得られた残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ（３０：１））により精製し、９．２７ｇ（８５％）の５を得た。ＬＲＭＳ（ＭＨ）ｍ／ｚ２７７．１
リチウムビス（トリメチルシリル）アミド（ＬＨＭＤＳ，ＴＨＦ１．０Ｍ溶液，１５．０ｍＬ，４．１当量）をケトン５（１．０１５ｇ，３．６６ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（１５ｍＬ）の−７８℃溶液を加えた。添加完了後、得られた溶液を−７８℃で１時間維持した。ついで反応溶液を０℃で２時間暖めた。ついで反応溶液を−７８℃に冷却した。酸フッ化物６（１．０１９ｇ，４．０３ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（１０ｍＬ）の溶液を反応溶液にシリンジを通して滴下した。−７８℃で１５分後、反応溶液を２３℃に加温した。２時間後、反応溶液に１ＮＨＣｌ（２０ｍＬ）を加えて反応を停止した。２層を分離し、有機層をブライン（２０ｍｌ）で洗浄した。有機層を乾燥（ＭｇＳ０４）し、濾過し濃縮した。得られた残渣をさらに精製せずに用いた。
【０２１５】
未精製の７（〜３．６６ｍｍｏｌ）および３０％ＨＢｒ酢酸（３０ｍＬ）溶液の溶液を、２３℃で１時間維持した。ついで反応溶液を濃縮した。得られた残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ（２：１））により精製し、４４１ｍｇ（５から３４％）の８を得た。ＬＲＭＳ（ＭＨ）ｍ／ｚ３５８．１
文献法（J. Org. Chem., 56(8), 2611-14; 1991）に従ってＣｂｚ−バリン−Ｆを製造した。
【０２１６】
実施例２
【化２６】
2005539062.tif 000028
【０２１７】
チオクロメノン８（４２０ｍｇ，１．２４ｍｍｏｌ）、アルデヒド１２（２８０ｍｇ，１．６ｍｍｏｌ）、ＮａＣＮ（ＯＡｃ）３ＢＨ（７９０ｍｇ，３．７ｍｍｏｌ）、およびＣＨ２Ｃｌ２（４．１ｍＬ）を２３℃で３時間維持する。反応混合物をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で希釈し、１ＮＮａＯＨ（５ｍＬ）およびブライン（５ｍＬ）で洗浄する。有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４）し、濾過し、濃縮する。得られた残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ（５：１）；ヘキサン：ＥｔＯＡｃ（３：１））で精製して４６０ｍｇ（７５％）の１３を粘性のあるオイルで得る。
【０２１８】
チオクロメノン１３（１．３ｇ，２．６ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（ＤIＥＡ，１．８ｍＬ）、およびＣＨ２Ｃｌ２（７．５ｍＬ）の溶液に、２３℃で、塩化ｐ−トルオイル（０．７ｍＬ，５．２２ｍｍｏｌ）を加える。２．５時間後、反応混合物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２ｘ２０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄する。有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４）し、濾過し、濃縮する。得られる残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ（３：１））で精製し、１．４３ｇ（８９％）の１４を無色オイルで得る。
【０２１９】
チオクロメノン１４（１．４３ｇ，２．３２ｍｍｏｌ）およびＴＦＡ：Ｈ２Ｏ（９７．５：２．５，３０ｍＬ）を２３℃で１時間維持する。反応混合物を濃縮する。残渣をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）に溶解し、１ＮＮａＯＨ（２５ｍＬ）およびブライン（２５ｍＬ）で洗浄する。有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４）し、濾過し、濃縮して白色固体を得るが、これは１ＨＮＭＲおよびＬＣＭＳ分析により純度９５％以上と推定された。
【０２２０】
実施例３
ＫＳＰ阻害剤で処理した細胞集団における有糸分裂停止の誘導
ＤＮＡ含量を測定することによる、細胞周期ステージを決定するためのＦＡＣＳ分析を以下のように行う。Ｓｋｏｖ−３細胞（ヒト卵巣癌）を１：１０に分割し、１０ｃｍディッシュにプレーティングし、５％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含有するＲＰＭI１６４０培地を用いてサブコンフルエンスに増殖させる。ついで細胞を、１０ｎＭのパクリタキセル、４００ｎＭの試験化合物、２００ｎＭの試験化合物、または０．２５％ＤＭＳＯ（化合物用ビヒクル）のいずれかで２４時間処理する。例えばパクリタキセルなどのよく知られた抗有糸分裂剤を陽性対照として用いる。ついで、細胞を５ｍＭＥＤＴＡを含むＰＢＳでプレートから洗い流し、ペレット化し、１％ＦＣＳを含むＰＢＳで一回洗浄し、ついで４℃、８５％エタノール中で終夜固定する。分析の前に、細胞をペレット化し、一回洗浄し、１０ｐｇのヨウ化プロピジウムおよび２５０ｐｇのリボヌクレアーゼ（ＲＮＡｓｅ）Ａ／ｍｌの溶液中、３７℃で半時間染色する。フローサイトメトリー分析をＢｅｃｔｏｎ−Ｄiｃｋiｎｓｏｎ ＦＡＣＳｃａｎを用いて行い、Ｍｏｄiｆiｔソフトウェアを用いて、１サンプルについて１０，０００細胞からのデータを分析する。
【０２２１】
実施例４
ＫＳＰ阻害剤適用後の単極性紡錘体形成
Ｇ２／Ｍ期の蓄積の性質を決定するために、４，０００細胞／ウェル（Ｓｋｏｖ−３＆ＨｅＬａ）または８，０００細胞／ウェル（Ａ５４９）の密度で、ヒト癌細胞株のＳｋｏｖ−３（卵巣）、ＨｅＬａ（子宮頸部）、およびＡ５４９（肺）を９６−ウェルプレートにプレーティングし、２４時間放置して付着させ、種々の濃度の試験化合物で２４時間処理する。細胞を４％ホルムアルデヒド中で固定し、抗チューブリン抗体（ついで蛍光標識二次抗体を用いて認識する）およびヘキスト染料（ＤＮＡを染色する）を用いて染色する。試験化合物の効果を評価するために、細胞を視覚的に調べることができる。例えば抗ＫＳＰ抗体のマイクロインジェクションは、単極性紡錘体を示す停止細胞を伴う有糸分裂停止をもたらす。
【０２２２】
実施例５
ＫＳＰ阻害剤で処理した癌細胞株における細胞増殖抑制
細胞を、１０００〜２５００細胞／ウェル（細胞株によって決める）の密度で９６−ウェルプレートにプレーティングし、２４時間付着／増殖させる。ついでこれらの細胞を種々の濃度の試験化合物で４８時間処理する。化合物を添加した時間をＴ０とみなす。３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム（ＭＴＳ）試薬（米国特許第５，１８５，４５０号）（Promega製品カタログ#G3580, CellTiter96(登録商標)AQueous One Solution Proliferation Assayを参照のこと）を用いるテトラゾリウムに基づくアッセイを、Ｔ０での生存細胞数および化合物暴露の４８時間後に残存している細胞数を測定するために使用する。４８時間後に残存している細胞数と試験化合物の添加時の生存細胞数とを比較しうることにより、増殖抑制の算出が可能となる。ビヒクルのみ（０．２５％ＤＭＳＯ）で処理した対照ウェル中の細胞の４８時間かけた増殖を１００％増殖とみなし、化合物を加えたウェル中での細胞の増殖とこれとを比較する。活性なＫＳＰ阻害剤は、以下の腫瘍タイプのヒト腫瘍細胞種の１以上における細胞増殖を抑制する：肺（ＮＣI−Ｈ４６０，Ａ５４９）、胸部（ＭＤＡ−ＭＢ−２３１，ＭＣＦ−７，ＭＣＦ−７／ＡＤＲ−ＲＥＳ）、結腸（ＨＴ２９，ＨＣＴ１５）、卵巣（ＳＫＯＶ−３，ＯＶＣＡＲ−３）、白血病（ＨＬ−６０（ＴＢ），Ｋ−５６２）、中枢神経系（ＳＦ−２６８）、腎臓（Ａ４９８）、骨肉腫（Ｕ２−ＯＳ）、および子宮頸部（ＨｅＬａ）、ならびにマウス腫瘍細胞株（Ｂ１６，メラノーマ）。
【０２２３】
ＧI５０の算出：処理ウェル中での細胞増殖の細胞増殖のパーセントに対するμＭでの化合物濃度をプロットすることにより算出される。化合物に関して算出されるＧI５０は、対照と比較して増殖が５０％抑制される算出濃度、すなわち以下で示される濃度である。
【０２２４】
１００ｘ[（処理物(Treated48)−T0）／（対照(Control48)−T0）］＝５０
化合物の全ての濃度で２度測定し、対照を１２ウェルについて平均する。大変類似した９６ウェルプレートレイアウトおよびＧI５０算出スキームがNational Cancer Instituteにより用いられている（Monks, et al., J. Natl. Cancer Inst. 83: 757-766 (1991)を参照のこと)。しかしながら、National Cancer Instituteが細胞数を定量するために用いている方法は、ＭＴＳではなく、その代わりに代替法を用いている。
【０２２５】
IＣ５０の算出：化合物のＫＳＰ活性に関するIＣ５０の測定にはＡＴＰアーゼアッセイを用いる。以下の溶液を用いる：溶液１は、３ｍＭホスホエノールピルビン酸カリウム塩（Sigma P-7127）、２ｍＭＡＴＰ（Sigma A-3377）、１ｍＭIＤＴＴ（Sigma D-9779）、５μＭパクリタキセル（Sigma T-7402）、１０ｐｐｍアンチフォーム２８９（Sigma A-8436）、２５ｍＭＰiｐｅｓ／ＫＯＨｐＨ６．８（Sigma P6757）、２ｍＭＭｇＣl２（VWR JT400301）、および１ｍＭＥＧＴＡ（Sigma E3889）からなる。溶液２は、１ｍＭＮＡＤＨ（Sigma N8129）、０．２ｍｇ／ｍｌＢＳＡ（Sigma A7906）、ピルビン酸キナーゼ７Ｕ／ｍｌ、Ｌ−乳酸脱水素酵素１０Ｕ／ｍｌ（Sigma P0294）、１００ｎＭＫＳＰモータードメイン、５０ｐｇ／ｍｌ微小管、１ｍＭＤＴＴ（Sigma D9779）、５μＭパクリタキセル（Sigma T-7402）、１０ｐｐｍアンチフォーム２８９（Sigma A-8436）、２５ｍＭＰiｐｅｓ／ＫＯＨｐＨ６．８（Sigma P6757）、２ｍＭＭｇＣ１２（VWRJT4003-01）、および１ｍＭＥＧＴＡ（Sigma E3889）からなる。組成物の連続希釈液（８〜１２の二倍希釈液）は、溶液１を用いて、９６−ウェルマイクロタイタープレート（Corning Costar 3695）中で作成する。連続希釈に続いて、各ウェルに５０μｌの溶液１を入れる。各ウェルに溶液２を５０μｌ添加することにより反応を開始する。添加は、手動または自動液体処理装置のいずれかで多チャンネルピペットを用いて実施できる。ついでマイクロタイタープレートをマイクロプレート吸光度リーダーに移し、各ウェルに関し速度論的方法で３４０ｎｍで複数回吸光度の読み取りを行う。ついで、観察された速度の変化（ＡＴＰアーゼの速度に比例する）を化合物濃度に応じてプロットする。標準のIＣ５０測定のためには、得られたデータを非線形フィッティングプログラム（例えば、Ｇｒａｆiｔ４）を用いる以下の４パラメーター方程式に当てはめる：
【数２】
2005539062.tif 000029
【０２２６】
（式中、ｙは実測速度であり、ｘは化合物濃度である）。
【０２２７】
実施例６
ＫＳＰ阻害剤で処理した癌細胞株における細胞生存性の抑制
材料および溶液：
細胞：ＳＫＯＶ３(ヒト卵巣癌）
培地：フェノールレッド不含ＲＰＭI＋５％ウシ胎児血清＋２ｍＭＬ−グルタミン
細胞生存性測定のための比色試薬：Promega MTSテトラゾリウム化合物
細胞死滅に関する対照化合物：トポテカン（１μＭ）
手順：１日目−細胞プレーティング：付着ＳＫＯＶ３細胞を１０ｍＬのＰＢＳで洗浄し、ついで２ｍＬの０．２５％トリプシンを加え、３７℃でインキュベーションを５分間行う。細胞を、８ｍｌの培地（フェノールレッド不含ＲＰＭI＋５％ＦＢＳ）を用いてフラスコから洗い落として、新しいフラスコに移す。細胞濃度をコールターカウンターを用いて測定し、１０００細胞／１００μＬを実現するために適切な細胞の用量を算出する。１００μＬの培地の細胞浮遊液（１０００細胞／１００μＬに調節）を９６−ウェルプレートの全ウェルに加え、ついで３７℃、１００％の湿度、および５％のＣＯ２で１８〜２４時間インキュベートし、細胞をプレートに付着させる。
【０２２８】
手順：２日目−化合物添加：加熱滅菌したアッセイブロックのウェルの一列に、最大所望濃度である４００Ｘで試験化合物の最初の２．５μｌを加える。１．２５μＬの４００Ｘ（４００μＭ）のトポテカンを他のウェルに加える（これらのウェルの吸光度を死細胞およびビヒクルのバックグラウンド吸光度として差し引くために用いる）。ＤＭＳＯを含まない５００μＬの培地を試験化合物を含むウェルに加え、そして２５０μｌをトポテカンウェルに加える。２５０μＬの培地＋０．５％ＤＭＳＯを残る全てのウェルに加え、これに試験化合物を順次希釈する。列単位で、化合物を含む培地をアッセイブロックから対応する細胞プレートに複製プレーティング（２回）する。細胞プレートを、３７℃、１００％の湿度、および５％のＣＯ２で７２時間インキュベートする。
【０２２９】
手順：４日目−ＭＴＳ添加およびＯＤ読み取り：プレートをインキュベーターから取り出し４０μｌのＭＴＳ／ＰＭＳを各ウェルに加える。ついでプレートを３７℃、１００％の湿度、５％のＣＯ２で１２０分間インキュベートし、次に９６ウェル分光光度計中で５秒振盪サイクルの後に４９０ｎｍの吸光度を読み取る。
【０２３０】
データ分析  対照（吸光度−バックグラウンド）の正規化％を算出し、生存性を５０％抑制するために必要とする化合物の濃度を測定するための用量反応曲線を作成するためにＸＬｆiｔを使用する。
【国際調査報告】
2005539062.tif 000033