(57)【要約】本発明は、式(I)：【化１】2005520501.tif 000053｛式中、HETは本明細書中に定義のごときである｝の特定のβ3-アドレナリン作用性レセプターアゴニスト、その医薬的に許容可能な塩、及び前記医薬的に許容可能な塩の水和物の製造に有用な方法を提供する。本発明はさらに、かかるアゴニストの製造で有用な中間体と、かかる中間体の製造で有用な方法とを提供する。
2005520501.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
構造式：
【化１】
2005520501.tif 000040
の化合物の製造方法であって、
(a)構造式：
【化２】
2005520501.tif 000041
のα-ブロモケトン誘導体またはその酸付加塩を還元して、構造式：
【化３】
2005520501.tif 000042
の(R)-ブロモアルコール誘導体を形成し；
(b)前記段階(a)の(R)-ブロモアルコール誘導体を保護して、構造式：
【化４】
2005520501.tif 000043
のO-保護化誘導体を形成し；
(c)前記段階(b)のO-保護化誘導体を構造式：
【化５】
2005520501.tif 000044
のアミンと縮合させて、構造式：
【化６】
2005520501.tif 000045
のO-保護化誘導体を製造し；次いで
(d)前記段階(c)のO-保護化誘導体を脱保護化して構造式：
【化７】
2005520501.tif 000046
の化合物を形成する各段階を含み、ここでHETは、オキサゾリル、ピラゾリル及びチアゾリルからなる群から選択される複素環部分であり；
Pは-SiR1R2R3、-CH2Ph、-CH2(p-CH3OPh)、-CH(OCH2CH3)CH3及び
【化８】
2005520501.tif 000047
｛式中、R1、R2及びR3はそれぞれ独立して(C1〜C6)アルキルまたはフェニルである｝からなる群から選択されるO-保護部分である、前記方法。
【請求項２】
段階(d)で形成した前記化合物を、遊離塩基、その医薬的に許容可能な塩、または前記医薬的に許容可能な塩の水和物として単離する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
HETが、2-オキサゾリル、4-オキサゾリル、3-ピラゾリル、4-ピラゾリル、2-チアゾリル及び4-チアゾリルからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
Ｐが-SiR1R2R3であり、ここでR1、R2及びR3がそれぞれ独立して(C1〜C6)アルキルまたはフェニルである、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
R1及びR2のいずれもが-CH3であり、R3が-C(CH3)3である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記還元段階(a)をアブシディア・シリンドロスポラ(Absidia  cylindrospora)ATCC  22751により媒介する、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
構造式：
【化９】
2005520501.tif 000048
の(R)-ブロモアルコール誘導体を製造する方法であって、構造式：
【化１０】
2005520501.tif 000049
のα-ブロモケトン誘導体またはその酸付加塩を菌によって還元して、前記(R)-ブロモアルコール誘導体を形成する段階を含む、前記方法。
【請求項８】
菌による前記還元をアブシディア・シリンドロスポラ(Absidia  cylindrospora)ATCC  22751により媒介する、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
以下の構造式：
【化１１】
2005520501.tif 000050
をもつ化合物またはその酸付加塩。
【請求項１０】
構造式：
【化１２】
2005520501.tif 000051
をもつ化合物またはその酸付加塩。
【請求項１１】
構造式：
【化１３】
2005520501.tif 000052
をもつ化合物またはその酸付加塩。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の分野
本発明は、特定のβ3-アドレナリン作用性レセプターアゴニストの製造で有用な方法及び中間体を提供する。このアゴニストは中でも、高血糖症、及び肥満の処置に有用で、且つ食用動物の赤身肉の増量に有用である。
【０００２】
発明の背景
糖尿病は、炭水化物の産生及び利用における代謝障害を特徴とし、適当な血糖レベルを維持できなくなってしまう。これらの障害の結果としては、中でも、高血糖または高血糖症が挙げられる。糖尿病の処置での研究は、空腹時及び食後血糖レベルを正常化すべく注力されてきた。現在の処置としては、外因性のインスリンの投与、薬剤の経口投与、及び食事療法が挙げられる。
【０００３】
糖尿病には主な二つの形態が認知されている。１型糖尿病または、インスリン-依存性糖尿病(IDDM)は、インスリン、炭水化物利用を制御するホルモンが絶対的に欠乏しているために生じる。２型糖尿病、または非-インスリン依存性糖尿病(NIDDM)は、正常または高いインスリンレベルで起きることが多く、組織がインスリンに適切に応答できないために生じるようである。ほとんどの２型糖尿病患者は肥満でもある。
【０００４】
肥満は死や、２型糖尿病、高血圧、及び高コレステロール血症の発生を導く主な健康上のリスクを構成する。合衆国では、成人人口の50%以上が標準体重より重く、この人口のほとんど25%が肥満とみなされている。肥満の発生は、合衆国では毎年３パーセントの累積的増加率で増えている。大部分の肥満が合衆国及びヨーロッパで発生しているものの、日本でも肥満の流行が高まっている。さらに、糖尿病は、個人の精神衛生及び自尊心をも打ち壊しかねないひどい病気であり、最終的には、その人の他人との社会的交流能力に影響を与えかねない。不幸にも肥満の原因は複雑でほとんど解明されておらず、肥満に関する社会的な固定観念及び憶測だけが糖尿病の心理的な影響を悪化させがちである。一般に社会における肥満の影響力により、肥満治療に多大な努力が払われているが、その長期治療及び予防ではうまくいっていない。
【０００５】
これに対して、たとえばβ3-アドレナリン作用性レセプター活性剤/アゴニストなどの多様な治療薬が開発されてきた。β3-アドレナリン作用性レセプターの活性化は、リポリーシス(たとえば脂肪組織トリグリセリドをグリセロールと脂肪酸とに分裂)と新陳代謝率(エネルギー消費)を刺激して、脂肪塊を減らし易くすることが公知である。従って、β3-アドレナリン作用性レセプターを刺激する化合物は、抗肥満薬として有用である。さらに、β3-アドレナリン作用性レセプターアゴニストである化合物は血糖降下性作用をもつが、その作用の詳細な機序は現在不明である。
【０００６】
2000年10月20日に出願され、本明細書中、参照として含まれる同一出願人による米国仮出願番号第60/242,274号では、一般構造式：
【０００７】
【化１】
2005520501.tif 000003
の特定のβ3-アドレナリン作用性レセプターアゴニスト、その立体異性体及びプロドラッグ、並びに前記化合物の医薬的に許容可能な塩、立体異性体及びプロドラッグを開示する。
【０００８】
本発明は、以下詳細に開示する、構造式(I)の特定のβ3-アドレナリン作用性アゴニストの製造に有用な方法を提供する。さらに本発明は、かかるアゴニストの製造で有用な中間体、及びかかる中間体の製造で有用な方法を開示する。
【０００９】
発明の概要
本発明は、構造式：
【００１０】
【化２】
2005520501.tif 000004
｛式中、HETは以下に定義のごときである｝の特定のβ3-アドレナリン作用性レセプターアゴニスト及びその医薬的に許容可能な塩、前記医薬的に許容可能な塩の水和物の製造に有用な方法を提供する。さらに本発明は、かかるアゴニストの製造に有用な中間体、及びかかる中間体の製造に有用な方法を提供する。
【００１１】
詳細な説明
本発明は、構造式：
【００１２】
【化３】
2005520501.tif 000005
｛式中、HETはオキサゾリル、ピラゾリル及びチアゾリルからなる群から選択される複素環部分である｝の特定のβ3-アドレナリン作用性レセプターアゴニスト、その医薬的に許容可能な塩、及び前記医薬的に許容可能な塩の水和物の製造で有用な方法を提供する。
【００１３】
さらに本発明は、かかるアゴニストの製造で有用な中間体、及びかかる中間体の製造で有用な方法を提供する。以下詳細に記載するこれらのエナンチオ選択的方法は収束様式(convergent  manner)で進行し、最小限の出発物質を使用し、全体で高度のエナンチオ特異性(enantiospecificity)を保持しつつ製品を仕上げる。
【００１４】
本発明の一つの側面において、構造式：
【００１５】
【化４】
2005520501.tif 000006
の化合物、その医薬的に許容可能な塩、または前記医薬的に許容可能な塩の水和物の製造方法であって、
(a)構造式：
【００１６】
【化５】
2005520501.tif 000007
のα-ブロモケトン誘導体またはその酸付加塩を還元して、構造式：
【００１７】
【化６】
2005520501.tif 000008
の(R)-ブロモアルコール誘導体を形成し；
(b)前記段階(a)の(R)-ブロモアルコール誘導体を保護して、構造式：
【００１８】
【化７】
2005520501.tif 000009
のO-保護化誘導体を形成し；
(c)前記段階(b)のO-保護化誘導体を構造式：
【００１９】
【化８】
2005520501.tif 000010
のアミンと縮合させて、構造式：
【００２０】
【化９】
2005520501.tif 000011
のO-保護化誘導体を製造し；次いで
(d)前記段階(c)のO-保護化誘導体を脱保護化して構造式：
【００２１】
【化１０】
2005520501.tif 000012
の化合物を形成する各段階を含み、ここでHETは、オキサゾリル、ピラゾリル及びチアゾリルからなる群から選択される複素環部分であり；及び
Pは-SiR1R2R3、-CH2Ph、-CH2(p-CH3OPh)、-CH(OCH2CH3)CH3及び
【００２２】
【化１１】
2005520501.tif 000013
｛式中、R1、R2及びR3はそれぞれ独立して(C1〜C6)アルキルまたはフェニルである｝からなる群から選択されるO-保護部分である、前記方法を提供する。
好ましくは、Pは-SiR1R2R3であり、HETは2-オキサゾリル、4-オキサゾリル、3-ピラゾリル、4-ピラゾリル、2-チアゾリル及び4-チアゾリルからなる群から選択される複素環部分である。式中、Ｐが-SiR1R2R3であり、ここでR1及びR2がいずれも-CH3であり、及びR3が-C(CH3)3である方法が特に好ましい。
【００２３】
上記で段階(a)と示した立体特異的還元段階は、菌の還元剤を使用するのが好ましい。通常、菌及び／または微生物の還元剤を医薬品の中間体の立体特異的バイオトランスフォーメーションで使用するのは公知である。たとえば、パテル(R.N.Patel)の“Advances  in  Applied  Microbiology”,43巻、91〜140ページ(1997年)を参照されたい。具体的には、α-ハロケトン類の種々の微生物による立体特異的還元も公知である。たとえば、パテル(R.N.Patel)ら、JAOCS、75巻(11)、1473〜1482ページ(1998年)を参照されたい。この文献は、α-ブロモケトン類の立体特異的還元におけるアグロバクテリウム・ツメファシエンス(Agrobacterium  tumefaciens)ATCC  15955、アルカリジェンス・エウトロファス(Alcaligenes  eutrophus)ATCC  17697、アルスロバクター・ペトロレオファガス(Arthrobacter  petroleophagus)ATCC  21494、デバリオマイセス・ハンセニ(Debaryomyces  hansenii)ATCC  66354、マイコバクテリウム(Mycobacterium  sp)ATCC  29676、ロドコッカス・ロドクロス(Rhodococcus  rhodochorous)ATCC  14347、ハンゼヌラ・アノマーラ(Hansenula  anomala)SC  13833、ハンゼヌラ・アノマーラ(H.anomala)ATCC  16142、ハンゼヌラ・サツヌス(H.saturnus)SC  13829、及びスピンゴモナス・パウシモビリス(Spingomonas  paucimobilis)SC  16113の使用について開示する。本発明の還元段階(a)の菌の還元剤は、アブシディア・シリンドロスポラ(Absidia  cylindrospora)ATCC  22751(米国菌培養収集所：American  Type  Culture  Collection、Rockville、MD)を含むのが好ましい。上記還元段階は、高度にエナンチオ選択的、すなわち＞90%鏡像異性体過剰率で対応する（R）-ブロモアルコールを提供する。この立体特異的還元段階(a)でこのようにして形成した(R)-ブロモアルコールを遊離塩基、またはその酸付加塩として単離するのが好ましい。
【００２４】
この立体特異的還元段階(a)で形成した(R)-ブロモアルコール生成物を、次いでO-保護化する。アルコール官能基を保護する合成法は当業者に公知であり、たとえばシリル、エーテル、またはそのエステル誘導体としてこのアルコールの官能基化を含むことができる。続く合成段階で使用する反応条件と適合可能な任意の慣用のO-保護基を本発明の方法で使用することができるが、段階(a)の(R)-ブロモアルコール生成物はO-シリルエーテル誘導体として保護するのが好ましい。一般に段階(b)と示した好ましいO-シリル化段階は、当業者に公知の標準的な方法に従って実施することができる。通常、そのような好ましいO-シリル化は、この(R)-ブロモアルコールを好適に置換したシリル化剤で処理することによって実施する。そのようなシリル化剤としては、たとえば式：R1R2R3Si-X｛式中、Xは好適な離脱基を含む｝のシリル誘導体を含むことができる。好ましくは、このシリル化剤は、式：R1R2R3Si-X｛式中、Xはハロゲン(たとえばクロロまたはブロモ)、シアノ、イミダゾリル、トリフレート(トリフルオロメタンスルホネート)等からなる群から選択される離脱基である｝の反応体を含む。しかしながら、本発明の方法に従って使用できる他のシリル化剤も当業者には公知である。好ましくは保護化アルコール部分：-OSiR1R2R3の定義において、R1、R2及びR3は独立して、(C1〜C6)アルキルまたはフェニルである。O-シリルエーテル誘導体｛式中、R1及びR2はいずれも-CH3であり、R3は-C(CH2)3である｝が特に好ましい。
【００２５】
通常、O-シリル化は、ハロゲン化炭化水素溶媒、たとえばジクロロメタン中、好適な有機塩基、たとえばアルキルアミン、たとえばトリエチルアミン、N,N-ジイソプロピルエチルアミン(Hunig塩基)または複素環式アミン、たとえばイミダゾールまたはジアザビシクロ[5.4.0]ウンデク-7-エン(DBU)の存在下で、シリル化剤と保護すべきアルコールとを縮合させることによって実施する。あるいは、極性の、非プロトン性溶媒、たとえばジメチルホルムアミドまたはジメチルスルホキシドも使用することができる。本発明のこのO-シリル化反応に関しては、ジメチルホルムアミドが好ましい。通常、そのようなシリル化は、室温または室温付近で、長時間、すなわち一晩撹拌することによって実施する。しかしながら、そのようなシリル化は、適宜、室温より高い温度または低い温度で実施することもできる。
【００２６】
シリル化剤を使用するこのような好ましい方法を含む、アルコール官能基を保護する方法の詳細な議論に関しては、グリーン(T.W.Greene)らの“Protective  Groups  in  Organic  Synthesis”、John  Wiley&Sons、New  York、NY(1991年)及びかかる本に引用される文献を参照されたい。
【００２７】
次いで、段階(b)で形成したO-保護化誘導体を、構造式：
【００２８】
【化１２】
2005520501.tif 000014
｛式中、HETは上記定義のごときである｝のアミンと縮合させて、構造式：
【００２９】
【化１３】
2005520501.tif 000015
の生成物を得る。
上記縮合段階(c)は、当業者に公知の標準的な反応条件下で実施することができる。好ましくは、この保護化(R)-ブロモアルコールとアミンとを、極性の、非プロトン性溶媒、たとえばジメチルスルホキシド中、好適な有機塩基、たとえばアルキルアミン、たとえばトリエチルアミン、またはN,N-ジイソプロピルエチルアミン(Hunig塩基)の存在下で縮合させる。そのような縮合は、高温、好ましくは約40℃〜約120℃の通常範囲で実施する。好ましい部分-SiR1R2R3の定義において、R1、R2及びR3は独立して(C1〜C6)アルキルまたはフェニルであるのが好ましい。式中、R1及びR2がいずれも-CH3であり、R3が-C(CH3)3である方法が特に好ましい。縮合段階(c)で使用するアミンは、以下詳細に記載する例示的な方法で製造することができる。
【００３０】
段階(d)として示した脱保護段階は、当業者に公知の標準的な方法に従って実施することができる。段階(c)で形成した好ましい-O-SiR1R2R3誘導体は、好適なアルキルアンモニウムフルオリド、たとえばテトラブチルアンモニウムフルオリドとの反応で脱保護するのが好ましい。そのような脱保護は、非プロトン性溶媒、たとえばテトラヒドロフラン中、周囲温度で実施することができる。O-シリルエーテルの脱保護化方法の詳細な議論に関しては、グリーン(T.W.Greene)らの上掲及びその中に引用される文献を参照されたい。
【００３１】
次いで段階(d)の脱保護化生成物を、遊離塩基の形、または所望により医薬的に許容可能な塩の形あるいは、かかる医薬的に許容可能な塩の水和物の形で単離する。かかる単離は、十分に確立された方法に従って実施することができる。同様に、医薬的に許容可能な塩は、たとえば単離した遊離塩基を共役有機酸、たとえばコハク酸、酒石酸、酢酸、クエン酸、マレイン酸、メタンスルホン酸またはp-トルエンスルホン酸などで処理するなどの公知の方法に従って製造することもできる。あるいは塩酸、臭化水素酸、硫酸または硝酸などの共役無機酸も使用することができる。段階(d)で形成した脱保護化生成物のトシレート塩、本明細書及び請求の範囲ではTsOHと略号化した、p-トルエンスルホン酸塩が特に好ましい。生成物の単離を容易にして、純度を高めるためには、そのような酸の形成は、反応に不活性な溶媒、たとえば形成時に所望の塩が沈殿するような非溶媒、より好ましくは、形成した塩が非溶媒を添加すると沈殿するような溶媒中で実施するのが好ましい。
【００３２】
さらに当業者には、かかる医薬的に許容可能な塩がその種々の水和形を形成することができ、かかる水和形は本発明の範囲内に包含されることが理解されよう。医薬的に許容可能な塩の水和物は、たとえば昇華、単一溶媒からの水和物の結晶化、二成分混合物から蒸発させることによる水和物の形成、蒸気拡散、熱処理などの公知方法に従って製造することができる。医薬的に許容可能な塩の水和物の製造法に関する議論については、たとえば、キース(J.Keith  Guillory)の“Polymorphism  in  Pharmaceutical  Solids”第５章、“Generation  of  Polymorphs,  Hydrates,  Solvates,  and  Amorphous  Solids”、183〜219ページ、Marcel  Dekker,Inc.(1999年)を参照されたい。
【００３３】
もう一つの側面では、本発明は、構造式：
【００３４】
【化１４】
2005520501.tif 000016
の化合物またはその酸付加塩の製造方法であって、
(a)構造式：
【００３５】
【化１５】
2005520501.tif 000017
の化合物を官能基化して構造式：
【００３６】
【化１６】
2005520501.tif 000018
の化合物を提供し；次いで
(b)段階(a)で形成した前記化合物を脱官能基化して、構造式：
【００３７】
【化１７】
2005520501.tif 000019
｛式中、HETはオキサゾリル、ピラゾリル、及びチアゾリルからなる群から選択される複素環部分である｝の化合物を提供する前記方法を提供する。
好ましくは、HETは2-オキサゾリル、4-オキサゾリル、3-ピラゾリル、4-ピラゾリル、2-チアゾリル、及び4-チアゾリルからなる群から選択される複素環部分を示す。
段階(a)で示した前記官能基化段階では、構造式：
【００３８】
【化１８】
2005520501.tif 000020
のフェノール性化合物を官能基化して、構造式：
【００３９】
【化１９】
2005520501.tif 000021
のカルバメートを提供する。
文献方法に従って、あるいは以下に開示する合成手順に従って製造し得るかかるフェノール性化合物は、一般式：PhCH2OCONHCH2CH2-Y｛式中、Yは好適な離脱基を含む｝をもつ化合物との反応によって、段階(a)で最も好都合に官能基化される。離脱基の例としては、トシレート(p-トルエンスルホネート)、メシレート(メタンスルホネート)、ハロゲン(たとえば、ブロモ、クロロまたはヨード)などからなる群から選択されるものが挙げられる。メシレート離脱基が通常好ましい。一般式：PhCH2OCONHCH2CH2-Y｛式中、Yは、メシレートである｝の化合物は、タウンゼンド(C.A.  Townsend)らのTetrahedron、47巻、2591ページ(1991年)に開示の如く製造することができる。このフェノール性化合物の官能基化は、極性の、非プロトン性溶媒、たとえばジメチルスルホキシド中、無機塩基、たとえば炭酸カリウムの存在下で実施するのが好ましい。この官能基化は、通常、高温、一般に約40℃〜約120℃の範囲で実施する。
【００４０】
上記官能基化段階(a)で形成したカルバメート誘導体を段階(b)で脱官能基化して、構造式：
【００４１】
【化２０】
2005520501.tif 000022
の化合物を提供する。段階(a)で形成したこのカルバメート生成物のかかる脱官能基化は、既成の方法に従って実施することができる。たとえばこのカルバメートは、好適な金属触媒、たとえばニッケル塩、若しくはその錯体、パラジウム塩、若しくはその錯体、またはプラチナ、若しくはその錯体を使用する接触水素化によって脱官能基化することができる。この脱官能基化は、金属触媒、たとえば活性炭に担持させたパラジウムの存在下で、極性の、非プロトン性溶媒、たとえばメタノール中で、蟻酸アンモニウム及び蟻酸を使用して実施するのが好ましい。かかる脱官能基化は、通常、高温、好ましくは使用する溶媒の還流温度で実施する。
【００４２】
次いで、段階(b)で形成したアミン生成物を、遊離塩基の形、またはその酸付加塩の形で単離するのが好ましい。そのような遊離塩基を単離する慣用法は当業者には公知である。同様に、アミン生成物の酸付加塩は、公知方法、たとえば単離した遊離塩基を共役有機酸、たとえばコハク酸、酒石酸、酢酸、クエン酸、マレイン酸、メタンスルホン酸若しくはp-トルエンスルホン酸などで、または共役無機酸、たとえば塩酸、臭化水素酸、硫酸若しくは硝酸などでの処理によって実施することもできる。既に記載の如く、生成物の単離を容易にして、純度を高めることは、そのような酸の形成を、反応に不活性な溶媒、たとえば形成時に所望の塩が溶媒から沈殿するような非溶媒、または形成した塩が非溶媒を添加すると沈殿するような溶媒中で実施するのが好ましい。
【００４３】
もう一つの側面では、本発明は、構造式：
【００４４】
【化２１】
2005520501.tif 000023
の化合物またはその酸付加塩を提供する。
もう一つの側面では、本発明は、構造式：
【００４５】
【化２２】
2005520501.tif 000024
の化合物またはその酸付加塩を提供する。
さらにもう一つの側面では、本発明は、構造式：
【００４６】
【化２３】
2005520501.tif 000025
の化合物またはその酸付加塩を提供する。
本発明を以下の実施例により説明する。しかしながら、他の変形も知られるように、本発明はこれらの実施例の特定の内容に限定されるものではないことは当業者には理解されよう。
【００４７】
実施例
中間体の製造
中間体(R)-2-ブロモ-1-ピリジン-3-イル-エタノールの製造：
【００４８】
【化２４】
2005520501.tif 000026
【００４９】
2-ブロモ-1-ピリジン-3-イル-エタノン臭化水素塩(G.B.Daviesら、Aust.J.Chem.、42巻、1735ページ(1989年))を、培地A[オートクレーブにかける前にpH4.85に調整した40g/lコーンスティープ固体(corn  steep  solids)及び20g/lグルコース]を含むFernbachフラスコまたは発酵槽培地の中で成長させたアブシディア・シリンドロスポラ(Absidia  cylindrospora)ATCC  22751の培地と接触させた。それぞれ培地Aを500ml含むFernbachフラスコ(８つ)を、アブシディア・シリンドロスポラ(Absidia  cylindrospora)ATCC  22751の種培養５mlで接種した。アブシディア・シリンドロスポラ(A.cylindrospora)の種培養は、それぞれ培地Aを40ml含む二つの300mlコニカルフラスコで製造した。これらの種培養は、アブシディア・シリンドロスポラ(A.cylindrospora)の胞子ストックで接種し、29℃で約24時間振盪(210rpm)した。全部で約41時間、29℃で振盪させたあと、2-ブロモ-1-ピリジン-3-イル-エタノンの臭化水素塩20g/l水溶液25mlをこのFernbachフラスコ培地にそれぞれ添加した。このフラスコをさらに５時間振盪し、その後、フラスコの内容物を混合し、遠心分離にかけて固体物質を除去した。
【００５０】
アブシディア・シリンドロスポラ(Absidia  cylindrospora)ATCC  22751の二つの培地を、培地A８lを含む発酵槽で成長させた。この発酵槽は、それぞれ培地A400mlを含むFernbachフラスコ中で成長させたアブシディア・シリンドロスポラ(A.cylindrospora)ATCC  22751の一つの培地で接種した。このFernbachフラスコ培地は、アブシディア・シリンドロスポラ(A.cylindrospora)ATCC  22751の胞子ストック1.8mlで接種し、約29℃で約40時間振盪(200rpm)させた。約24時間後、この二つの発酵槽培地を2-ブロモ-1-ピリジン-3-イル-エタノン臭化水素塩(30g/ｌ)の水溶液で処理した。一方の発酵槽には2-ブロモ-1-ピリジン-3-イル-エタノン臭化水素塩８ｇを添加し、もう一方の発酵槽には2-ブロモ-1-ピリジン-3-イル-エタノン臭化水素塩16ｇを添加した。2-ブロモ-1-ピリジン-3-イル-エタノン臭化水素塩８gを添加した発酵槽培地は、基質添加約24時間後に収穫し、もう一方の発酵槽は基質添加約５時間後に収穫した。両方の発酵槽培地の内容物を遠心分離にかけて、固体物質を除去した。
【００５１】
８つのFernbachフラスコ培地と、二つの発酵槽培地からの上清相を混合し、濾紙で濾し、XAD-16（登録商標）レジン(Rohm&Haas；Philadelphia,PA)737gを含むカラムに通した。次いでこの樹脂をメタノールと水との混合物(１lの10%methanol、１lの12%メタノール、１lの30%メタノール、１lの50%メタノール、3×１lの80%メタノール及び１lの100%メタノール)で溶離し、画分を集めた。これらの画分を10mMの酢酸アンモニウム：アセトニトリル(76.5：23.5、v/v)で1.0ml/分で溶出する4.6×150mmのKromasil(登録商標)C4カラム(Phenomenex；Torrance、CA)のHPLCで分析すると、これらの画分は所望の生成物を含んでいることが知見され、これをプールし(10%メタノール〜80%メタノール)、濃縮して溶媒を除去し、酢酸エチルで抽出した。この酢酸エチル抽出物を混合し、約600mlに濃縮し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過した。この物質を幾つかに分けて、次いで0.1%酢酸を含む酢酸エチルとヘキサンの混合物(酢酸エチル：ヘキサン：酢酸；60：40：0.1；v/v/v)で溶出するシリカゲルカートリッジ(1.2×7.5cm及び4×15cm、Biotage；Charlottesville、VA)でフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。所望の生成物を含む画分を濃縮すると、黄色油状の表記化合物1.93g(9.6%)が得られた。αD＝−16.4゜(c＝0.53、メタノール)。ヘキサン：イソプロピルアルコール(９：１；v/v)で1.5ml/分で溶出する4.6×250mmのChiraicel(登録商標)ODカラム(Chiral  Technologies；Exton,PA)でこの生成物をキラルHPLCで分析すると、91.2%の鏡像体過剰率であることが判明した。
【００５２】
1HNMR(400mHz，d6-DMSO)：δ8.55(d，1H，J＝2.1Hz)，8.44(dd，1H，J＝1.7,4.6Hz)，7.75(dd，1H，J＝2.5，4.2Hz)，7.33(m，1H)，5.93(d，1H，J＝4.6Hz)，4.85(m，1H)，3.60(ddd，2H，J＝5.0，10.4，14.9Hz)。GC-MS(m/z，%)：201/203(M+，10)，108(100)。
【００５３】
中間体(R)-3-(2-ブロモ-1-(tert-ブチル-ジメチル-シラニル)-エチル)-ピリジンの製造：
【００５４】
【化２５】
2005520501.tif 000027
【００５５】
乾燥N,N-ジメチルホルムアミド20ml中の1.54g(7.61mmol)の(R)-2-ブロモ-1-ピリジン-3-イル-エタノールの撹拌溶液に、室温で、1.55g(22.83mmol)のイミダゾール、続いて1.72g(11.4mmol)のtert-ブチルジメチルシリルクロリドを添加した。この混合物を室温で約18時間撹拌し、次いでさらに1.55g(22.83mmol)のイミダゾールと1.72g(11.4mmol)のtert-ブチルジメチルシリルクロリドを添加し、この混合物を室温でさらに24時間撹拌した。この混合物を水200mlに注ぎ、酢酸エチル(２×200ml)で抽出した。この有機抽出物を混合し、水(１×40ml)、塩水(１×40ml)の順で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、真空下で濃縮すると油状物が得られた。酢酸エチル：ヘキサン(２：３，v/v)で溶出するシリカゲルのクロマトグラフィーにより、所望の表記化合物1.41g(58%収率)が透明油状物として得られた。αD＝−51.5゜(ｃ＝0.60，クロロホルム)。この生成物のヘキサン：イソプロピルアルコール(７：３，v/v)で1.0ml/分で溶出する4.6×250mmのChiralcel(登録商標)ODカラム(Chiral  Technologies；Exton，PA)でのキラルHPLC分析により、鏡像体過剰率91.3%であることが判明した。
【００５６】
1HNMR(400mHz，CDCl3)：δ8.58(s，1H)，8.55(m，1H)，7.70(d，1H)，7.30(m，1H)，4.90(m，1H)，3.46(ddd，2H，J＝1.2，7.1，8.3Hz)，0.87(s，9H)，0.11(s，3H)。MS(m/z，%)：316/318(M+，100)。
【００５７】
中間体4-ヒドロキシ-チオベンズアミンの製造：
【００５８】
【化２６】
2005520501.tif 000028
【００５９】
丸底フラスコ中で、4-ヒドロキシベンゾニトリル(5.00g，41.9mmol)、ジエチルチオリン酸(7.02g，41.9mmol)及び水(８ml)を80℃に撹拌しながら約30分間加熱した。次いで追加の水10mlをこの懸濁液に添加し、この反応混合物を約１時間加熱して、放置して約16時間、室温で撹拌した。この反応混合物を水と、１：１のエーテル/酢酸エチルで抽出した。混合した有機抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥し、真空下で濃縮した。得られた固体をカラムクロマトグラフィー(ヘキサン〜酢酸エチル)により精製した。得られた生成物は黄色固体状で単離した(5.54g，87%収率)。
【００６０】
1HNMR(400mHz，CD3OD)：δ6.74(d，2H，J＝9.1Hz)，7.83(d，2H，J＝8.7Hz)。
中間体4-(チアゾール-2-イル)-フェノールの製造：
【００６１】
【化２７】
2005520501.tif 000029
【００６２】
丸底フラスコで、ブロモアセトアルデヒドジメトキシアセタール(123μl，1.04mmol)、p-トルエンスルホン酸(199mg，1.04mmol)及び4-ヒドロキシ-チオベンズアミド(160mg，1.04mmol)をエタノール(10ml)に溶解し、得られた溶液を還流下で約24時間加熱した。次いでこの反応混合物を濃縮すると油状物となり、これを酢酸エチルに再び溶解し、飽和炭酸ナトリウム水溶液で抽出した。混合した有機抽出物を塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、真空下で濃縮すると、油状物となった。この粗な生成物をカラムクロマトグラフィー(ヘキサン〜10%酢酸エチル/ヘキサン)により精製すると、白色固体状の表記化合物が得られた(113mg，61%収率)。LRMS([M+H+])＝177.8。
【００６３】
中間体1-(4-メトキシ-フェニル)-1H-ピラゾールの製造：
【００６４】
【化２８】
2005520501.tif 000030
【００６５】
酢酸銅(II)(960mg，5.28mmol)を、塩化メチレン中、ピラゾール(240mg，3.52mmol)、4-メトキシフェニルボロン酸(1.07g，7.04mmol)，4Aモレキュラーシーブ(1.35活性化粉末)及びピリジン(570μl，7.04mmol)を充填した火炎乾燥フラスコに添加した。この反応物を室温で約２日間撹拌し、次いで珪藻土を通して濾過した。この濾液を真空下で濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィー(定組成８%酢酸エチル/ヘキサン)により精製すると、表記化合物381mg(2.18mmol，62%収率)が得られた。LRMS([M+H+])＝175.2。
【００６６】
中間体4-ピラゾール-1-イル-フェノールの製造：
【００６７】
【化２９】
2005520501.tif 000031
【００６８】
1-(4-メトキシ-フェニル)-1H-ピラゾール(400mg，2.30mmol)を塩化メチレン(８ml)に溶解し、この溶液を−78℃に冷却した。三臭化硼素(塩化メチレン中1.0M，5.05ml)をこの溶液に約５分で滴下添加すると、茶色溶液が得られた。この反応混合物を放置して約30分間撹拌して、冷却浴を外し、混合物を室温でさらに約３時間撹拌した。この混合物を水に注ぎ、得られた混合物を約pH８に調節した。この混合物を塩化メチレン(３×25ml)で抽出し、混合した有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、真空下で濃縮した。得られた粗な固体をカラムクロマトグラフィー(25%酢酸エチル/ヘキサン)で精製すると、油状の所望の生成物183mg(50%収率)が得られた。LRMS([M+H+])＝161.1。
【００６９】
中間体4-ピラゾール-3-イル-フェノールの製造：
【００７０】
【化３０】
2005520501.tif 000032
【００７１】
丸底フラスコに、D,L-メチオニン(1.19g，7.96mmol)、3-(4-メトキシフェニル)-ピラゾール(990mg，5.68mmol)及びメタンスルホン酸(23ml)を添加した。得られた溶液を約48時間、約50℃に加熱し、次いで室温に放冷して水に注いだ。この溶液のpHを5Nの水酸化ナトリウムで約７に調節し、酢酸エチルで抽出した。この有機抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、真空下で濃縮すると、白色固体950mgが得られ、これはNMRにより約95%純粋であることが判明した。この物質をさらに精製することなく直接、続いて使用した。
【００７２】
中間体[2-(4-ピラゾール-3-イル-フェノキシ)-エチル]-カルバミン酸ベンジルエステルの製造：
【００７３】
【化３１】
2005520501.tif 000033
【００７４】
丸底フラスコに、乾燥ジメチルスルホキシド10.5ml中の4-ピラゾール-3-イル-フェノール(840mg，5.25mmol)、炭酸カリウム(2.17g，15.7mmol)、及びメタンスルホン酸2-ベンジルオキシカルボニルアミノ-エチルエステル(C.A.Townsendら，Tetrahedron，47巻，2591ページ(1991年))(2.86g，10.5mmol)を充填した。得られた溶液を約４日間、約70℃に加熱した。次いでこの反応混合物を1NのHClに注ぎ、水性相を酢酸エチルで２回抽出した。混合した有機抽出物を塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、真空下で濃縮した。この粗な物質をカラムクロマトグラフィー(塩化メチレン〜２%メタノール/塩化メチレン)で精製すると、所望の生成物1.09g(61%収率)が得られた。LRMS([M+H+])＝338.1。
【００７５】
中間体[2-(4-オキサゾール-4-イル-フェノキシ)-エチル]-カルバミン酸ベンジルエステルの製造：
【００７６】
【化３２】
2005520501.tif 000034
【００７７】
乾燥ジメチルスルホキシド4.6l中の290.0g(1.80mol)の4-オキサゾール-4-イル-フェノール(H.Jonesら，J.Med.Chem.；21巻，1110ページ(1978年))、737.7g(2.70mol)のメタンスルホン酸2-ベンジルオキシカルボニルアミノ-エチルエステル、及び746.0g(5.40mol)の炭酸カリウムの撹拌混合物を約85℃に加熱した。追加のジメチルスルホキシド500mlを添加し、この粘稠スラリーを約80℃でさらに約２時間撹拌した。得られた混合物を約50℃に冷却し、約１ｌの撹拌した氷水に注ぎ、約１時間、スラリー化し、次いで濾過した。このウェットフィルターケーキを水(２×１ｌ)で洗浄し、次いで真空下で約２時間吸引して部分的に乾燥した。湿った固体を丸底フラスコに充填し、メタノール６lを充填し、次いでこの混合物を約60℃に温めて、ここで水３ｌを添加した。熱源を除去し、この混合物を約18時間撹拌して、濾過した。このフィルターケーキを２：１のメタノール/水(v/v；２×500ml)で洗浄し、次いで約40℃、真空下で約18時間乾燥した。表記化合物がベージュ粉末状で得られた(389.5g，64%収率)。
【００７８】
中間体2-(4-オキサゾール-4-イル-フェノキシ)-エチルアミンの製造：
【００７９】
【化３３】
2005520501.tif 000035
【００８０】
メタノール5.6l中の234.0g(0.692mol)の[2-(4-オキサゾール-4-イル-フェノキシ)-エチル]-カルバミン酸ベンジルエステル、295.1ml(3.097mol)の1,4-シクロヘキサジエン及び93.60gの10%Pd/C(50%水で濡れている)の撹拌混合物を、室温で約22時間撹拌した。この混合物を珪藻土(13×3cm)で濾過し、フィルターケーキを12lの100：１(v/v)のメタノール/トリエチルアミンで洗浄した。濾液を真空下で蒸発させ、残存固体にトルエン250mlを添加した。この混合物を室温で約30分間撹拌し、次いでヘキサン2.5lを約５〜10分間で添加し、得られたスラリーを約１時間撹拌した。混合物を濾過し、次いでフィルターケーキを１：10のトルエン/ヘキサン(３×100ml)の混合物で洗浄し、固体を真空下、約50℃で約18時間乾燥した。表記化合物が白色粉末状で得られた(115g，81.5%収率)。
【００８１】
中間体(R)-(2-tert-ブチル-ジメチルシラノキシ)-2-ピリジン-3-イル-エチル)-(2-(4-オキサゾール-4-イル-フェノキシ)-エチル)-アミンの製造：
【００８２】
【化３４】
2005520501.tif 000036
【００８３】
乾燥ジメチルスルホキシド20ml中の1.24g(3.91mmol)の(R)-3-(2-ブロモ-1-(tert-ブチル-ジメチル-シラニル)-エチル)-ピリジン、1.6g(7.83mmol)の2-(4-オキサゾール-4-イル-フェノキシ)-エチルアミン及び1.4ml(7.83mmol)のジイソプロピルエチルアミンの撹拌混合物を、約90℃で約18時間加熱した。この混合物を水400mlに注ぎ、酢酸エチル(２×400ml)で抽出した。有機抽出物を混合し、水(２×100ml)及び塩水(１×100ml)の順で乾燥し、硫酸マグネシウムで乾燥し、真空下で濃縮すると、油状物が得られた。メタノール：ジクロロメタン(１：19，v/v)で溶出するシリカゲルのクロマトグラフィーにより、琥珀色油状物の表記化合物963mg(56%収率)が得られた。αD＝−45.7゜(ｃ＝0.49，クロロホルム)。
【００８４】
1HNMR(400mHz，CDCl3)：δ8.56(d，1H，J＝2.1Hz)，8.50(dd，1H，J＝1.7，5.0Hz)，7.90(d，1H，J＝0.8Hz)，7.84(d，1H，J＝0.8Hz)，7.65(m，3H)，7.26(m，2H)，6.90(m，2H)，4.85(dd，1H，J＝3.7，8.3Hz)，4.07(m，2H)，3.01(dd，2H，J＝4.6，6.2Hz)，2.88(dd，2H，J＝8.3，12.0Hz)，2.76(dd，2H，J＝3.7，11.6Hz)，0.88(s，9H)，0.06(s，3H)。MS(m/z，%)：441(M++1,100)。
【００８５】
実施例１
(R)-2-(2-(4-オキサゾール-4-イル-フェノキシ)-エチルアミノ)-1-ピリジン-3-イル-エタノールの製造：
【００８６】
【化３５】
2005520501.tif 000037
【００８７】
乾燥テトラヒドロフラン５ml中の646mg(1.47mmol)の(R)-(2-tert-ブチル-ジメチルシラノキシ)-2-ピリジン-3-イル-エチル)-(2-(4-オキサゾール-4-イル-フェノキシ)-エチル)-アミンの撹拌混合物に、室温で、テトラヒドロフラン中の1.0Mのテトラブチルアンモニウムフルオリド2.2ml(2.20mmol)を添加した。この混合物を室温で一晩撹拌し、水100mlに注ぎ、酢酸エチル(２×100ml)で抽出した。有機抽出物を混合し、水(１×20ml)次いで塩水(１×20ml)の順で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、真空下で濃縮して、固体を得た。メタノール：ジクロロメタン(１：９，v/v)で溶出するシリカゲルのクロマトグラフィーにより、固体が得られた。酢酸エチル：ヘキサン(１：１，v/v)10mlですりつぶすと、白色固体の表記化合物250mg(52%収率)が得られた。融点98〜100℃。αD＝−31.6゜(ｃ＝0.58，クロロホルム)。この生成物のアセトニトリル：メタノール(95：５，v/v)で10ml/分で溶出する4.6×5cmのChiralpak  AS(登録商標)カラム(Chiral  Technologies；Exton，PA)のキラルHPLC分析により、＞99.9%の鏡像体過剰率であることが判明した。
【００８８】
1HNMR(400mHz，d6-DMSO)：δ8.52(d，1H，J＝2.1Hz)，8.47(d，1H，J＝0.8，5.0Hz)，8.41(dd，1H，J＝1.7，4.6Hz)，8.38(d，1H，J＝0.8Hz)，7.70(m，3H)，7.30(m，1H)，6.96(ddd，2H，J＝2.5，4.6，9.5Hz)，5.47(d，1H，J＝3.7Hz)，4.67(d，1H)，4.02(m，2H)，2.89(t，2H，J＝5.4Hz)，2.72(d，2H，J＝6.2Hz)。MS(m/z，%)：326(M++1，100)。
【００８９】
C18H19N3O3の元素分析：計算値：C，66.45；H，5.89；N，12.91。実測値：C，66.22；H，5.92；N，12.83。
式中、HETがピラゾリルまたはチアゾリル基である化合物は、好適な中間体を使用する類似の方法で製造することができる。
【００９０】
実施例２
(R)-2-(2-(4-オキサゾール-4-イル-フェノキシ)-エチルアミノ)-1-ピリジン-3-イル-エタノール)p-トルエンスルホン酸塩の製造
【００９１】
【化３６】
2005520501.tif 000038
【００９２】
メタノール２ml中の197mg(0.61mmol)の(R)-2-(2-(4-オキサゾール-4-イル-フェノキシ)-エチルアミノ)-1-ピリジン-3-イル-エタノール)の撹拌溶液に、室温で、118mg(0.61mmol)のp-トルエンスルホン酸一水和物を添加した。この混合物を室温で約30分間撹拌し、次いでイソプロピルエーテル４mlを滴下添加した。得られた沈殿をさらに約15分間撹拌し、濾過し、イソプロピルエーテル：メタノール(３：１，v/v)４mlで洗浄し、乾燥すると、白色固体状の表記化合物225mg(74%収率)が得られた。融点155.5℃。αD=−16.9゜(ｃ＝0.49，メタノール)。アセトニトリル：メタノール(95：５，v/v)で、1.0ml/分で溶出する4.6mm×５cmのChiralpak  AS(登録商標)カラム(Chiral  Technologies，Exton，PA)のキラルHPLC分析により、＞99.9%の鏡像体過剰率であることが判明した。
【００９３】
1HNMR(400mHz，d6-DMSO)：δ8.85(s，br，2H)，8.59(d，1H，J＝1.7Hz)，8.51(m，2H)，8.40(d，1H，J＝0.8Hz)，7.80(ddd，1H，J＝1.7，3.7，7.9Hz)，7.72(ddd，2H，J＝2.9，4.6，9.6Hz)，7.43(m，3H)，7.04(m，4H)，6.30(d，1H，J＝4.2Hz)，5.01(dd，br，1H，J＝3.3，7.1Hz)，4.28(d，br，2H，J＝5.4Hz)，3.31(d，br，1H，J＝12.5Hz)，3.16(t，br，J＝11.2Hz)，2.25(s，3H)；MS(m/z，%)：326(M++1，100)。
【００９４】
C25H27N3SO6の元素分析：計算値：C，60.35；H，5.47；N，8.45。実測値：C，60.26；H，5.48；N，8.38。
実施例３
(R)-2-(2-(4-オキサゾール-4-イル-フェノキシ)-エチルアミノ)-1-ピリジン-3-イル-エタノール)、p-トルエンスルホン酸塩、一水和物の製造：
【００９５】
【化３７】
2005520501.tif 000039
【００９６】
３lのテトラヒドロフランと300mlの水との混合物に、1.025kgサンプルの(R)-2-(2-(4-オキサゾール-4-イル-フェノキシ)-エチルアミノ)-1-ピリジン-3-イル-エタノール)、p-トルエンスルホン酸塩を、約18時間懸濁させた。この固体を吸引濾過により集め、フィルターケーキを約１lのテトラヒドロフランで洗浄し、得られた固体を連続吸引下で約30分間乾燥した。次いでこの固体を約30℃の温度で約72時間真空乾燥すると、表記一水和物塩768.5gが得られた。
【００９７】
C25H29N3SO7の元素分析：計算値：C，58.47；H，5.77；N，8.17；S，6.36。実測値：C，58.18；H，5.70；N，8.12；S，6.26。
【国際調査報告】
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