(57)【要約】末端活性エステルを有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）連結基を持つ細胞毒性薬剤、ＰＥＧ連結基を介して細胞結合剤に連結している１種以上の細胞毒性薬剤を含んでなる細胞毒性コンジュゲート、および両者の製造方法を開示する。治療的有効量の本発明の細胞毒性コンジュゲートの１種を含んでなる治療的組成物、ならびに、標的細胞または標的細胞を含有する組織を、有効量の細胞毒性コンジュゲートの１種と接触させることを含んでなる、選択した細胞集団を死滅させる方法も、開示する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式２の、末端活性エステルおよび１〜２０モノマー単位を有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）連結基を持つ細胞毒性薬剤：
【化１】
2005517032.tif 000106
［式中、
Ｚは前記細胞毒性薬剤であり；
Ｑは、Ｒ２ＣＯＯ−、Ｒ２Ｒ３ＮＣＯＯ−、Ｒ２ＯＣＯＯ−、Ｒ２Ｏ−、Ｒ２ＣＯＮＲ３−、Ｒ２Ｒ３Ｎ−、Ｒ２ＯＣＯＮＲ３−、またはＳ−であり、
ここにおいて、
Ｒ２はＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−｛Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキルまたは分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよい｝であり、
Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり；
ｎは、０〜２０の整数であり；
ｘは、１または２であり；そして、
Ｙは、Ｎ−スクシンイミジル、Ｎ−スルホスクシンイミジル、Ｎ−フタルイミジル、Ｎ−スルホフタルイミジル、２−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、２，４−ジニトロフェニル、３−スルホニル−４−ニトロフェニル、または３−カルボキシ−４−ニトロフェニルである］。
【請求項２】
式２の、末端活性エステルおよび２１〜４０モノマー単位を有するＰＥＧ連結基を持つ細胞毒性薬剤：
【化２】
2005517032.tif 000107
［式中、
Ｚは前記細胞毒性薬剤であり；
Ｑは、Ｒ２ＣＯＯ−、Ｒ２Ｒ３ＮＣＯＯ−、Ｒ２ＯＣＯＯ−、Ｒ２Ｏ−、Ｒ２ＣＯＮＲ３−、Ｒ２Ｒ３Ｎ−、Ｒ２ＯＣＯＮＲ３−、またはＳ−であり、
ここにおいて、
Ｒ２はＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−｛Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキルまたは分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよい｝であり、
Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり；
ｎは、２１〜４０の整数であり；
ｘは、１または２であり；そして、
Ｙは、Ｎ−スクシンイミジル、Ｎ−スルホスクシンイミジル、Ｎ−フタルイミジル、Ｎ−スルホフタルイミジル、２−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、２，４−ジニトロフェニル、３−スルホニル−４−ニトロフェニル、または３−カルボキシ−４−ニトロフェニルである］。
【請求項３】
式２の、末端活性エステルおよび４１〜１０００モノマー単位を有するＰＥＧ連結基を持つ細胞毒性薬剤：
【化３】
2005517032.tif 000108
［式中、
Ｚは前記細胞毒性薬剤であり；
Ｑは、Ｒ２ＣＯＯ−、Ｒ２Ｒ３ＮＣＯＯ−、Ｒ２ＯＣＯＯ−、Ｒ２Ｏ−、Ｒ２ＣＯＮＲ３−、Ｒ２Ｒ３Ｎ−、Ｒ２ＯＣＯＮＲ３−、またはＳ−であり、
ここにおいて、
Ｒ２はＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−｛Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキルまたは分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよい｝であり、
Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり；
ｎは、４１〜１０００の整数であり；
ｘは、１または２であり；そして、
Ｙは、Ｎ−スクシンイミジル、Ｎ−スルホスクシンイミジル、Ｎ−フタルイミジル、Ｎ−スルホフタルイミジル、２−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、２，４−ジニトロフェニル、３−スルホニル−４−ニトロフェニル、または３−カルボキシ−４−ニトロフェニルである］。
【請求項４】
１〜２０モノマー単位を有するＰＥＧ連結基を介して細胞結合剤に共有結合している１種以上の細胞毒性薬剤を含んでなり、前記１種以上の細胞毒性薬剤の１種の連結が式３に例示される、細胞毒性コンジュゲート：
【化４】
2005517032.tif 000109
［式中、
Ｚは前記細胞毒性薬剤であり；
Ｑは、Ｒ２ＣＯＯ−、Ｒ２Ｒ３ＮＣＯＯ−、Ｒ２ＯＣＯＯ−、Ｒ２Ｏ−、Ｒ２ＣＯＮＲ３−、Ｒ２Ｒ３Ｎ−、Ｒ２ＯＣＯＮＲ３−、またはＳ−であり、
ここにおいて、
Ｒ２はＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−｛Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキルまたは分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよい｝であり、
Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり、
ｎは、０〜２０の整数であり；
ｘは、１または２であり；そして、
Ａは前記細胞結合剤である］。
【請求項５】
２１〜４０モノマー単位を有するＰＥＧ連結基を介して細胞結合剤に共有結合している１種以上の細胞毒性薬剤を含んでなり、前記１種以上の細胞毒性薬剤の１種の連結が式３に例示される、細胞毒性コンジュゲート：
【化５】
2005517032.tif 000110
［式中、
Ｚは前記細胞毒性薬剤であり；
Ｑは、Ｒ２ＣＯＯ−、Ｒ２Ｒ３ＮＣＯＯ−、Ｒ２ＯＣＯＯ−、Ｒ２Ｏ−、Ｒ２ＣＯＮＲ３−、Ｒ２Ｒ３Ｎ−、Ｒ２ＯＣＯＮＲ３−、またはＳ−であり、
ここにおいて、
Ｒ２はＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−｛Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキルまたは分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよい｝であり、
Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり、
ｎは、２１〜４０の整数であり；
ｘは、１または２であり；そして、
Ａは前記細胞結合剤である］。
【請求項６】
４１〜１０００モノマー単位を有するＰＥＧ連結基を介して細胞結合剤に共有結合している１種以上の細胞毒性薬剤を含んでなり、前記１種以上の細胞毒性薬剤の１種の連結が式３に例示される、細胞毒性コンジュゲート：
【化６】
2005517032.tif 000111
［式中、
Ｚは前記細胞毒性薬剤であり；
Ｑは、Ｒ２ＣＯＯ−、Ｒ２Ｒ３ＮＣＯＯ−、Ｒ２ＯＣＯＯ−、Ｒ２Ｏ−、Ｒ２ＣＯＮＲ３−、Ｒ２Ｒ３Ｎ−、Ｒ２ＯＣＯＮＲ３−、またはＳ−であり、
ここにおいて、
Ｒ２はＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−｛Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキルまたは分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよい｝であり、
Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり、
ｎは、４１〜１０００の整数であり；
ｘは、１または２であり；そして、
Ａは前記細胞結合剤である］。
【請求項７】
治療的有効量の請求項４〜６のいずれかに記載の細胞毒性コンジュゲートと、医薬的に許容しうる担体とを含んでなる、治療用組成物。
【請求項８】
式２の、末端活性エステルおよび１〜２０モノマー単位を有するＰＥＧ連結基を持つ細胞毒性薬剤の製造方法であって、：
【化７】
2005517032.tif 000112
［式中、
Ｚは前記細胞毒性薬剤であり；
Ｑは、Ｒ２ＣＯＯ−、Ｒ２Ｒ３ＮＣＯＯ−、Ｒ２ＯＣＯＯ−、Ｒ２Ｏ−、Ｒ２ＣＯＮＲ３−、Ｒ２Ｒ３Ｎ−、Ｒ２ＯＣＯＮＲ３−、またはＳ−であり、
ここにおいて、
Ｒ２はＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−｛Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキルまたは分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよい｝であり、
Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり；
ｎは、０〜２０の整数であり；
ｘは、１または２であり；そして、
Ｙは、Ｎ−スクシンイミジル、Ｎ−スルホスクシンイミジル、Ｎ−フタルイミジル、Ｎ−スルホフタルイミジル、２−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、２，４−ジニトロフェニル、３−スルホニル−４−ニトロフェニル、または３−カルボキシ−４−ニトロフェニルである］
前記方法が：
ａ）１〜２０モノマー単位を有する式１のＰＥＧ連結基：
【化８】
2005517032.tif 000113
［式中、
Ｒ’は、２−ピリジル、４−ピリジル、５−ニトロ−２−ピリジル、５−ニトロ−４−ピリジル、２−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、または２，４−ジニトロフェニルであり；
Ｑは、Ｒ２ＣＯＯ−、Ｒ２Ｒ３ＮＣＯＯ−、Ｒ２ＯＣＯＯ−、Ｒ２Ｏ−、Ｒ２ＣＯＮＲ３−、Ｒ２Ｒ３Ｎ−、Ｒ２ＯＣＯＮＲ３−、またはＳ−であり、
ここにおいて、
Ｒ２はＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−｛Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキルまたは分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよい｝であり、
Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり；
ｎは、０〜２０の整数であり；
ｘは、１または２であり；そして、
Ｒは、Ｈ、塩を形成するカチオン、またはエステルを形成する化学基である］
を、チオール含有細胞毒性薬剤と反応させる工程、そして、
ｂ）工程ａ）の生成物のＲ基を活性エステルに転化させ、それにより末端活性エステルおよび１〜２０モノマー単位を有するＰＥＧ連結基を持つ細胞毒性薬剤を製造する工程、
を含んでなる、前記製造方法。
【請求項９】
式２の、末端活性エステルおよび２１〜４０モノマー単位を有するＰＥＧ連結基を持つ細胞毒性薬剤の製造方法であって：
【化９】
2005517032.tif 000114
［式中、
Ｚは前記細胞毒性薬剤であり；
Ｑは、Ｒ２ＣＯＯ−、Ｒ２Ｒ３ＮＣＯＯ−、Ｒ２ＯＣＯＯ−、Ｒ２Ｏ−、Ｒ２ＣＯＮＲ３−、Ｒ２Ｒ３Ｎ−、Ｒ２ＯＣＯＮＲ３−、またはＳ−であり、
ここにおいて、
Ｒ２はＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−｛Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキルまたは分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよい｝であり、
Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり；
ｎは、２１〜４０の整数であり；
ｘは、１または２であり；そして、
Ｙは、Ｎ−スクシンイミジル、Ｎ−スルホスクシンイミジル、Ｎ−フタルイミジル、Ｎ−スルホフタルイミジル、２−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、２，４−ジニトロフェニル、３−スルホニル−４−ニトロフェニル、または３−カルボキシ−４−ニトロフェニルである］
前記方法が：
ａ）２１〜４０モノマー単位を有する式１のＰＥＧ連結基：
【化１０】
2005517032.tif 000115
［式中、
Ｒ’は、２−ピリジル、４−ピリジル、５−ニトロ−２−ピリジル、５−ニトロ−４−ピリジル、２−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、または２，４−ジニトロフェニルであり；
Ｑは、Ｒ２ＣＯＯ−、Ｒ２Ｒ３ＮＣＯＯ−、Ｒ２ＯＣＯＯ−、Ｒ２Ｏ−、Ｒ２ＣＯＮＲ３−、Ｒ２Ｒ３Ｎ−、Ｒ２ＯＣＯＮＲ３−、またはＳ−であり、
ここにおいて、
Ｒ２はＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−｛Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキルまたは分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよい｝であり、
Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり；
ｎは、２１〜４０の整数であり；
ｘは、１または２であり；そして、
Ｒは、Ｈ、塩を形成するカチオン、またはエステルを形成する化学基である］
を、チオール含有細胞毒性薬剤と反応させる工程、そして、
ｂ）工程ａ）の生成物のＲ基を活性エステルに転化させ、それにより末端活性エステルおよび２１〜４０モノマー単位を有するＰＥＧ連結基を持つ細胞毒性薬剤を製造する工程、
を含んでなる、前記製造方法。
【請求項１０】
式２の、末端活性エステルおよび４１〜１０００モノマー単位を有するＰＥＧ連結基を持つ細胞毒性薬剤の製造方法であって：
【化１１】
2005517032.tif 000116
［式中、
Ｚは前記細胞毒性薬剤であり；
Ｑは、Ｒ２ＣＯＯ−、Ｒ２Ｒ３ＮＣＯＯ−、Ｒ２ＯＣＯＯ−、Ｒ２Ｏ−、Ｒ２ＣＯＮＲ３−、Ｒ２Ｒ３Ｎ−、Ｒ２ＯＣＯＮＲ３−、またはＳ−であり、
ここにおいて、
Ｒ２はＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−｛Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキルまたは分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよい｝であり、
Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり；
ｎは、４１〜１０００の整数であり；
ｘは、１または２であり；そして、
Ｙは、Ｎ−スクシンイミジル、Ｎ−スルホスクシンイミジル、Ｎ−フタルイミジル、Ｎ−スルホフタルイミジル、２−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、２，４−ジニトロフェニル、３−スルホニル−４−ニトロフェニル、または３−カルボキシ−４−ニトロフェニルである］
前記方法が：
ａ）４１〜１０００モノマー単位を有する式１のＰＥＧ連結基：
【化１２】
2005517032.tif 000117
［式中、
Ｒ’は、２−ピリジル、４−ピリジル、５−ニトロ−２−ピリジル、５−ニトロ−４−ピリジル、２−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、または２，４−ジニトロフェニルであり；
Ｑは、Ｒ２ＣＯＯ−、Ｒ２Ｒ３ＮＣＯＯ−、Ｒ２ＯＣＯＯ−、Ｒ２Ｏ−、Ｒ２ＣＯＮＲ３−、Ｒ２Ｒ３Ｎ−、Ｒ２ＯＣＯＮＲ３−、またはＳ−であり、
ここにおいて、
Ｒ２はＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−｛Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキルまたは分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよい｝であり、
Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり；
ｎは、４１〜１０００の整数であり；
ｘは、１または２であり；そして、
Ｒは、Ｈ、塩を形成するカチオン、またはエステルを形成する化学基である］
を、チオール含有細胞毒性薬剤と反応させる工程、そして、
ｂ）工程ａ）の生成物のＲ基を活性エステルに転化させ、それにより末端活性エステルおよび４１〜１０００モノマー単位を有するＰＥＧ連結基を持つ細胞毒性薬剤を製造する工程、
を含んでなる、前記製造方法。
【請求項１１】
１〜２０モノマー単位を有するＰＥＧ連結基を介して細胞結合剤に共有結合している１種以上の細胞毒性薬剤を含んでなる細胞毒性コンジュゲートの製造方法であって、前記方法が、
１種以上の細胞毒性薬剤を細胞結合剤と反応させ、
ここにおいて、前記１種以上の細胞毒性薬剤はそれぞれ、末端活性エステルおよび１〜２０モノマー単位を有するＰＥＧ連結基を持ち、そして末端活性エステルおよび１〜２０モノマー単位を有するＰＥＧ連結基を持つ前記細胞毒性薬剤は、式２の化合物：
【化１３】
2005517032.tif 000118
［式中、
Ｚは前記細胞毒性薬剤であり；
Ｑは、Ｒ２ＣＯＯ−、Ｒ２Ｒ３ＮＣＯＯ−、Ｒ２ＯＣＯＯ−、Ｒ２Ｏ−、Ｒ２ＣＯＮＲ３−、Ｒ２Ｒ３Ｎ−、Ｒ２ＯＣＯＮＲ３−、またはＳ−であり、
ここにおいて、
Ｒ２はＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−｛Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキルまたは分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよい｝であり、
Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり；
ｎは、０〜２０の整数であり；
ｘは、１または２であり；そして、
Ｙは、Ｎ−スクシンイミジル、Ｎ−スルホスクシンイミジル、Ｎ−フタルイミジル、Ｎ−スルホフタルイミジル、２−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、２，４−ジニトロフェニル、３−スルホニル−４−ニトロフェニル、または３−カルボキシ−４−ニトロフェニルである］
である；
それにより、前記１種以上の細胞毒性薬剤の１種の連結を有する、式３に例示される細胞毒性コンジュゲート
【化１４】
2005517032.tif 000119
［式中、
Ｚは前記細胞毒性薬剤であり；
Ｑは、Ｒ２ＣＯＯ−、Ｒ２Ｒ３ＮＣＯＯ−、Ｒ２ＯＣＯＯ−、Ｒ２Ｏ−、Ｒ２ＣＯＮＲ３−、Ｒ２Ｒ３Ｎ−、Ｒ２ＯＣＯＮＲ３−、またはＳ−であり、
ここにおいて、
Ｒ２はＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−｛Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキルまたは分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよい｝であり、
Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり；
ｎは、０〜２０の整数であり；
ｘは、１または２であり；そして、
Ａは前記細胞結合剤である］
を製造する、
ことを含んでなる、前記細胞毒性コンジュゲートの製造方法。
【請求項１２】
２１〜４０モノマー単位を有するＰＥＧ連結基を介して細胞結合剤に共有結合している１種以上の細胞毒性薬剤を含んでなる細胞毒性コンジュゲートの製造方法であって、前記方法が、
１種以上の細胞毒性薬剤を細胞結合剤と反応させ、
ここにおいて、前記１種以上の細胞毒性薬剤はそれぞれ、末端活性エステルおよび２１〜４０モノマー単位を有するＰＥＧ連結基を持ち、そして末端活性エステルおよび２１〜４０モノマー単位を有するＰＥＧ連結基を持つ前記細胞毒性薬剤は、式２の化合物：
【化１５】
2005517032.tif 000120
［式中、
Ｚは前記細胞毒性薬剤であり；
Ｑは、Ｒ２ＣＯＯ−、Ｒ２Ｒ３ＮＣＯＯ−、Ｒ２ＯＣＯＯ−、Ｒ２Ｏ−、Ｒ２ＣＯＮＲ３−、Ｒ２Ｒ３Ｎ−、Ｒ２ＯＣＯＮＲ３−、またはＳ−であり、
ここにおいて、
Ｒ２はＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−｛Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキルまたは分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよい｝であり、
Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり；
ｎは、２１〜４０の整数であり；
ｘは、１または２であり；そして、
Ｙは、Ｎ−スクシンイミジル、Ｎ−スルホスクシンイミジル、Ｎ−フタルイミジル、Ｎ−スルホフタルイミジル、２−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、２，４−ジニトロフェニル、３−スルホニル−４−ニトロフェニル、または３−カルボキシ−４−ニトロフェニルである］
である；
それにより、前記１種以上の細胞毒性薬剤の１種の連結を有する、式３に例示される細胞毒性コンジュゲート
【化１６】
2005517032.tif 000121
［式中、
Ｚは前記細胞毒性薬剤であり；
Ｑは、Ｒ２ＣＯＯ−、Ｒ２Ｒ３ＮＣＯＯ−、Ｒ２ＯＣＯＯ−、Ｒ２Ｏ−、Ｒ２ＣＯＮＲ３−、Ｒ２Ｒ３Ｎ−、Ｒ２ＯＣＯＮＲ３−、またはＳ−であり、
ここにおいて、
Ｒ２はＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−｛Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキルまたは分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよい｝であり、
Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり；
ｎは、２１〜４０の整数であり；
ｘは、１または２であり；そして、
Ａは前記細胞結合剤である］
を製造する、
ことを含んでなる、前記細胞毒性コンジュゲートの製造方法。
【請求項１３】
４１〜１０００モノマー単位を有するＰＥＧ連結基を介して細胞結合剤に共有結合している１種以上の細胞毒性薬剤を含んでなる細胞毒性コンジュゲートの製造方法であって、前記方法が、
１種以上の細胞毒性薬剤を細胞結合剤と反応させ、
ここにおいて、前記１種以上の細胞毒性薬剤はそれぞれ、末端活性エステルおよび４１〜１０００モノマー単位を有するＰＥＧ連結基を持ち、そして末端活性エステルおよび４１〜１０００モノマー単位を有するＰＥＧ連結基を持つ前記細胞毒性薬剤は、式２の化合物：
【化１７】
2005517032.tif 000122
［式中、
Ｚは前記細胞毒性薬剤であり；
Ｑは、Ｒ２ＣＯＯ−、Ｒ２Ｒ３ＮＣＯＯ−、Ｒ２ＯＣＯＯ−、Ｒ２Ｏ−、Ｒ２ＣＯＮＲ３−、Ｒ２Ｒ３Ｎ−、Ｒ２ＯＣＯＮＲ３−、またはＳ−であり、
ここにおいて、
Ｒ２はＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−｛Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキルまたは分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよい｝であり、
Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり；
ｎは、４１〜１０００の整数であり；
ｘは、１または２であり；そして、
Ｙは、Ｎ−スクシンイミジル、Ｎ−スルホスクシンイミジル、Ｎ−フタルイミジル、Ｎ−スルホフタルイミジル、２−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、２，４−ジニトロフェニル、３−スルホニル−４−ニトロフェニル、または３−カルボキシ−４−ニトロフェニルである］
である；
それにより、前記１種以上の細胞毒性薬剤の１種の連結を有する、式３に例示される細胞毒性コンジュゲート
【化１８】
2005517032.tif 000123
［式中、
Ｚは前記細胞毒性薬剤であり；
Ｑは、Ｒ２ＣＯＯ−、Ｒ２Ｒ３ＮＣＯＯ−、Ｒ２ＯＣＯＯ−、Ｒ２Ｏ−、Ｒ２ＣＯＮＲ３−、Ｒ２Ｒ３Ｎ−、Ｒ２ＯＣＯＮＲ３−、またはＳ−であり、
ここにおいて、
Ｒ２はＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−｛Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキルまたは分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよい｝であり、
Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり；
ｎは、４１〜１０００の整数であり；
ｘは、１または２であり；そして、
Ａは前記細胞結合剤である］
を製造する、
ことを含んでなる、前記細胞毒性コンジュゲートの製造方法。
【請求項１４】
請求項１１〜１３のいずれか一項に従った方法であって、前記方法が、末端活性エステルを有するＰＥＧ連結基を持つ細胞毒性薬剤を調製する初期工程をさらに含んでなり、前記初期工程が、チオール含有細胞毒性薬剤を、式１のＰＥＧ連結基：
【化１９】
2005517032.tif 000124
［式中、
Ｒ’は、２−ピリジル、４−ピリジル、５−ニトロ−２−ピリジル、５−ニトロ−４−ピリジル、２−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、または２，４−ジニトロフェニルであり；
Ｑは、Ｒ２ＣＯＯ−、Ｒ２Ｒ３ＮＣＯＯ−、Ｒ２ＯＣＯＯ−、Ｒ２Ｏ−、Ｒ２ＣＯＮＲ３−、Ｒ２Ｒ３Ｎ−、Ｒ２ＯＣＯＮＲ３−、またはＳ−であり、
ここにおいて、
Ｒ２はＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−｛Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキルまたは分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよい｝であり、
Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり；
ｎは０〜２０の整数であるか、ｎは２１〜４０の整数であるか、またはｎは４１〜１０００の整数であり；
ｘは、１または２であり；そして、
Ｒは、Ｈ、塩を形成するカチオン、またはエステルを形成する化学基である］
と反応させることを含んでなる、前記方法。
【請求項１５】
選択した細胞集団を死滅させる方法であって、標的細胞または標的細胞を含有する組織を、有効量の請求項４〜６のいずれかに記載の細胞毒性コンジュゲートと接触させることを含んでなる、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の分野
本発明は、反応性ポリエチレングリコールリンカーを持つ細胞毒性薬剤およびそのような薬剤の製造方法に関する。これらの薬剤は、細胞毒性コンジュゲートの製造に、または他の目的のために、例えば、細胞毒性薬剤を認識し結合する細胞成分の単離に用いるための親和性樹脂に、用いることができる。
【０００２】
本発明はまた、ポリエチレングリコールリンカーを含んでなる新規細胞毒性コンジュゲート、そのコンジュゲートの製造方法、およびその治療的使用に関する。より具体的には、本発明は、ヘテロ二官能性ポリエチレングリコールリンカーを用いて細胞結合剤に接合させた細胞毒性薬剤を含んでなる新規細胞毒性コンジュゲート、そのコンジュゲートの製造方法、およびその治療的使用に関する。これら新規細胞毒性コンジュゲートは、細胞毒性薬剤の細胞結合剤への連結により、コンジュゲートの細胞毒性部を標的方式で特定の細胞集団に送達することができるという点において、治療的使用を有する。
【０００３】
発明の背景
メイタンシノイド(maytansinoid)およびＣＣ−１０６５類似体のような強い細胞毒性薬剤と、細胞結合剤とのコンジュゲートは、例外的な標的特異性抗腫瘍活性を保有することが示されている（米国特許第５２０８０２０号、第５４１６０６４号、第５４７５０９２号、および第５８４６５４５号）。そのような細胞毒性コンジュゲートにおいて、細胞毒性薬剤は、ジスルフィド結合または短いジスルフィド含有リンカーを介して細胞結合剤に結合している。これまでに、そのようなジスルフィド含有リンカーは共に保存時に安定であり、腫瘍細胞内部で効果的に開裂して、十分に活性な薬物を放出することが示されている（Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９３：８６１８−８６２３（１９９６）；Ｃｈａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５５：４０７９−４０８４（１９９５）；Ｃｈａｒｉ，Ｒ．Ｖ．Ｊ．，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．３１：８９−１０４（１９９８））。開裂は、ジスルフィド連結した細胞毒性薬剤と、グルタチオンのような細胞内チオールとのジスルフィド交換を介して、起こると思われる。
【０００４】
しかしながら、細胞毒性コンジュゲートに使用される大部分の効力の高い細胞毒性薬剤は疎水性なので、２つ技術的問題が生じる。第一は、細胞毒性薬剤と細胞結合剤とのコンジュゲーション反応では、細胞毒性薬剤の疎水性に対応する反応条件が必要となる点である。これらの条件には、非常に希釈された溶液、大容量の使用、およびタンパク性細胞結合剤に損傷を与えうる大量の非水性共溶媒の存在が含まれる。結果として、調製および精製プロセスはきわめて扱いにくくなり、最終的な細胞毒性コンジュゲートは低濃度で得られるため、患者に対し大容量の投与が必要になる。
【０００５】
第二の技術的問題は、ジスルフィド結合または短いジスルフィド含有リンカーを用いて調製した細胞毒性コンジュゲートは、患者への非経口投与に典型的に用いられる医薬溶液にわずかにしか溶解しない点である。したがって、そのようなコンジュゲートの場合、製剤の製造が難しい。
【０００６】
したがって、細胞毒性コンジュゲートの改善された製造方法を開発し、そのコンジュゲートを含有する医薬溶液の製剤における柔軟性を高めるために、細胞毒性薬剤と細胞毒性薬剤を用いて製造した細胞毒性コンジュゲートとの両方の疎水性に対応する必要がある。
【０００７】
これらの目標の両方を満たす方法の一つは、疎水性細胞毒性薬剤を水性条件下で処理できるようにし、水性および非水性条件下の両方で可溶である細胞毒性コンジュゲートの形成を可能にする、新規リンカー分子を開発することである。
【０００８】
ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）は、細胞毒性薬物をプロドラッグに転化させ、それによりｉｎ  ｖｉｖｏでの循環における薬物の半減期を延長し、かつその水溶性を改善するのに有用であることが見いだされている（総説についてはＧｒｅｅｎｗａｌｄ，Ｒ．Ｂ．，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ７４：１５９−１７１（２００１）参照）。例えば、抗がん薬Ｔａｘｏｌは、エステル結合を介してＰＥＧをＴａｘｏｌのＣ−２’位に連結することにより、プロドラッグＰＥＧ−Ｔａｘｏｌに転化されている（米国特許第５８２４７０１号；Ｇｒｅｅｎｗａｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３９：４２４−４３１（１９９６）；Ｇｒｅｅｎｗａｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６０：３３１−３３６（１９９５））。
【０００９】
しかしながら、そのような適用に用いられるＰＥＧは通常、非常に大きい（平均分子量４００００）。そのようなサイズは、薬物の薬物動態を著しく改変するのに必要である。薬物分子はまた、典型的には薬物のエステルまたはカルバメート基を介してＰＥＧと反応し、薬物の効力における徹底した低下をもたらすことができる。これに加えて、ＰＥＧ部分は、ある酵素的機序によりｉｎ  ｖｉｖｏで開裂して薬物の活性を回復させなければならず、これは、非効率的であることが多いプロセスである。最後に、そのような適用に用いられるＰＥＧは、典型的には単官能性である、すなわち、ＰＥＧ分子の一末端のみが、薬物に連結できるように修飾されている。
【００１０】
本発明者らは、上記問題の両方に対する解決を提供する新規ＰＥＧ連結基を調製した。これら新規ＰＥＧ連結基は、水および非水性溶媒の両方に可溶であり、１種以上の細胞毒性薬剤を細胞結合剤に接合させるのに用いることができる。ＰＥＧ連結基はヘテロ二官能性リンカーであり、リンカーの相対する末端において、一方の末端では官能性スルフヒドリルまたはジスルフィド基を介して、そして他方の末端では活性エステルを介して、細胞毒性薬剤および細胞結合剤に結合する。その連結基は、他の連結基に比べ、（１）ジスルフィド結合を介して非水性溶媒中で細胞毒性薬剤に化学的に接合し、それにより薬剤の疎水性を克服し、薬剤を非水性および水性溶媒の両方に可溶にすることができる点、ならびに（２）その連結基を用いて製造した細胞毒性コンジュゲートは、より高い水への溶解度を有し、それにより患者に非経口投与するための医薬溶液の製剤においてはるかに優れた柔軟性が可能になる点で、二重の利点を有する。
【００１１】
したがって、末端活性エステルを有するＰＥＧ連結基を持つ細胞毒性薬剤、およびＰＥＧ連結基を介して細胞結合剤に接合している１種以上の細胞毒性薬剤を含んでなる細胞毒性コンジュゲートを、本明細書中に開示する。これに加えて、細胞毒性コンジュゲートを含んでなる治療的組成物を開示する。
【００１２】
末端活性エステルを有するＰＥＧ連結基を持つ細胞毒性薬剤の調製方法、およびＰＥＧ連結基を介して細胞結合剤に接合している１種以上の細胞毒性薬剤を含んでなる細胞毒性コンジュゲートの調製方法も開示する。最後に、細胞毒性コンジュゲートを用いて、選択した細胞集団を死滅させるための方法を開示する。
【００１３】
発明の概要
本発明の一態様において、末端活性エステルを有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）連結基を持つ細胞毒性薬剤を開示する。この態様、および続く各態様で意図される細胞毒性薬剤には、チオール含有メイタンシノイド、チオール含有タキサン、チオール含有ＣＣ−１０６５類似体、チオール含有ダウノルビシン類似体およびチオール含有ドキソルビシン類似体、ならびにそれらのチオール含有類似体または誘導体が含まれる。この態様、および続く各態様で意図されるＰＥＧ連結基の末端活性エステルのコアは、アミノ基と容易に反応するエステル、例えばＮ−スクシンイミジル、Ｎ−スルホスクシンイミジル、Ｎ−フタルイミジル、Ｎ−スルホフタルイミジル、２−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、２，４−ジニトロフェニル、３−スルホニル−４−ニトロフェニル、または３−カルボキシ−４−ニトロフェニルエステルが含まれる。
【００１４】
好ましい態様において、ＰＥＧ連結基は１〜２０モノマー単位を有する。同等に好ましい態様において、ＰＥＧ連結基は２１〜４０モノマー単位を有する。さらに同等に好ましい態様において、ＰＥＧ連結基は４１〜１０００モノマー単位を有する。
【００１５】
具体的に意図されるのは、式２の、末端活性エステルおよび１〜２０モノマー単位を有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）連結基を持つ細胞毒性薬剤である：
【００１６】
【化１】
2005517032.tif 000002
【００１７】
［式中、
Ｚは前記細胞毒性薬剤であり；
Ｑは、Ｒ２ＣＯＯ−、Ｒ２Ｒ３ＮＣＯＯ−、Ｒ２ＯＣＯＯ−、Ｒ２Ｏ−、Ｒ２ＣＯＮＲ３−、Ｒ２Ｒ３Ｎ−、Ｒ２ＯＣＯＮＲ３−、またはＳ−であり、
ここにおいて、
Ｒ２はＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−｛Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキルまたは分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよい｝であり、
Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり；
ｎは、０〜２０の整数であり；
ｘは、１または２であり；そして、
Ｙは、Ｎ−スクシンイミジル、Ｎ−スルホスクシンイミジル、Ｎ−フタルイミジル、Ｎ−スルホフタルイミジル、２−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、２，４−ジニトロフェニル、３−スルホニル−４−ニトロフェニル、または３−カルボキシ−４−ニトロフェニルである］。
【００１８】
式２の、末端活性エステルおよび２１〜４０モノマー単位を有するＰＥＧ連結基を持つ細胞毒性薬剤も意図される：
【００１９】
【化２】
2005517032.tif 000003
【００２０】
［式中、
Ｚは前記細胞毒性薬剤であり；
Ｑは、Ｒ２ＣＯＯ−、Ｒ２Ｒ３ＮＣＯＯ−、Ｒ２ＯＣＯＯ−、Ｒ２Ｏ−、Ｒ２ＣＯＮＲ３−、Ｒ２Ｒ３Ｎ−、Ｒ２ＯＣＯＮＲ３−、またはＳ−であり、
ここにおいて、
Ｒ２はＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−｛Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキルまたは分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよい｝であり、
Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり；
ｎは、２１〜４０の整数であり；
ｘは、１または２であり；そして、
Ｙは、Ｎ−スクシンイミジル、Ｎ−スルホスクシンイミジル、Ｎ−フタルイミジル、Ｎ−スルホフタルイミジル、２−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、２，４−ジニトロフェニル、３−スルホニル−４−ニトロフェニル、または３−カルボキシ−４−ニトロフェニルである］。
【００２１】
式２の、末端活性エステルおよび４１〜１０００モノマー単位を有するＰＥＧ連結基を持つ細胞毒性薬剤も意図される：
【００２２】
【化３】
2005517032.tif 000004
【００２３】
［式中、
Ｚは前記細胞毒性薬剤であり；
Ｑは、Ｒ２ＣＯＯ−、Ｒ２Ｒ３ＮＣＯＯ−、Ｒ２ＯＣＯＯ−、Ｒ２Ｏ−、Ｒ２ＣＯＮＲ３−、Ｒ２Ｒ３Ｎ−、Ｒ２ＯＣＯＮＲ３−、またはＳ−であり、
ここにおいて、
Ｒ２はＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−｛Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキルまたは分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよい｝であり、
Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり；
ｎは、４１〜１０００の整数であり；
ｘは、１または２であり；そして、
Ｙは、Ｎ−スクシンイミジル、Ｎ−スルホスクシンイミジル、Ｎ−フタルイミジル、Ｎ−スルホフタルイミジル、２−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、２，４−ジニトロフェニル、３−スルホニル−４−ニトロフェニル、または３−カルボキシ−４−ニトロフェニルである］。
【００２４】
上記例のいずれか１種に従った細胞毒性薬剤であって、前記細胞毒性薬剤が、チオール含有メイタンシノイド、チオール含有タキサン、チオール含有ＣＣ−１０６５類似体、チオール含有ダウノルビシン類似体およびチオール含有ドキソルビシン類似体、ならびにそれらのチオール含有類似体または誘導体からなる群より選択されるものも意図される。
【００２５】
上記当該例に従った細胞毒性薬剤であって、前記チオール含有メイタンシノイドがＣ−３チオール含有メイタンシノイドであるものも意図される。
上記当該例に従った細胞毒性薬剤であって、前記Ｃ−３チオール含有メイタンシノイドが、Ｎ−メチル−アラニン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノイドであるものも意図される。
【００２６】
上記当該例に従った細胞毒性薬剤であって、前記Ｎ−メチル−アラニン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノイドが、以下の式Ｍ１から選択される化合物であるものも意図される：
【００２７】
【化４】
2005517032.tif 000005
【００２８】
［式中、
ｌは、１〜１０の整数であり；そして
ｍａｙは、メイタンシノイドである］。
【００２９】
上記当該例に従った細胞毒性薬剤であって、前記Ｎ−メチル−アラニン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノイドが、以下の式Ｍ２から選択される化合物であるものも意図される：
【００３０】
【化５】
2005517032.tif 000006
【００３１】
［式中、
Ｒ１およびＲ２は、Ｈ、ＣＨ３またはＣＨ２ＣＨ３であり、同一または異なっていてもよく；
ｍは、０、１、２または３であり；そして
ｍａｙは、メイタンシノイドである］。
【００３２】
上記当該例に従った細胞毒性薬剤であって、前記Ｎ−メチル−アラニン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノイドが、以下の式Ｍ３から選択される化合物であるものも意図される：
【００３３】
【化６】
2005517032.tif 000007
【００３４】
［式中、
ｎは、３〜８の整数であり；そして
ｍａｙは、メイタンシノイドである］。
【００３５】
上記当該例に従った細胞毒性薬剤であって、前記Ｎ−メチル−アラニン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノイドが、Ｎ−メチル−アラニン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノール(maytansinol)であるものも意図される。
【００３６】
上記当該例に従った細胞毒性薬剤であって、前記Ｎ−メチル−アラニン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノールが、デクロロメイタンシノールであるものも意図される。
上記当該例に従った細胞毒性薬剤であって、前記Ｎ−メチル−アラニン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノールが、以下の式Ｍ６から選択される化合物であるものも意図される：
【００３７】
【化７】
2005517032.tif 000008
【００３８】
［式中、
ｌは、１、２または３であり；
Ｙ０は、ＣｌまたはＨであり；そして
Ｘ３は、ＨまたはＣＨ３である］。
【００３９】
上記当該例に従った細胞毒性薬剤であって、前記Ｃ−３チオール含有メイタンシノイドが、Ｎ−メチル−システイン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノイドであるものも意図される。
【００４０】
上記当該例に従った細胞毒性薬剤であって、前記Ｎ−メチル−システイン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノイドが、以下の式Ｍ４から選択される化合物であるものも意図される：
【００４１】
【化８】
2005517032.tif 000009
【００４２】
［式中、
ｏは、１、２または３であり；
ｐは、０〜１０の整数であり；そして
ｍａｙは、メイタンシノイドである］。
【００４３】
上記当該例に従った細胞毒性薬剤であって、前記Ｎ−メチル−システイン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノイドが、Ｎ−メチル−システイン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノールであるものも意図される。
【００４４】
上記当該例に従った細胞毒性薬剤であって、前記Ｎ−メチル−システイン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノールが、デクロロメイタンシノールであるものも意図される。
上記当該例に従った細胞毒性薬剤であって、前記Ｎ−メチル−システイン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノールが、以下の式Ｍ５から選択される化合物であるものも意図される：
【００４５】
【化９】
2005517032.tif 000010
【００４６】
［式中、
ｏは、１、２または３であり；
ｑは、０〜１０の整数であり；
Ｙ０は、ＣｌまたはＨであり；そして
Ｘ３は、ＨまたはＣＨ３である］。
【００４７】
上記当該例に従った細胞毒性薬剤であって、前記チオール含有タキサンが、以下の式Ｔ１から選択される化合物であるものも意図される：
【００４８】
【化１０】
2005517032.tif 000011
【００４９】
［式中、
Ｒ１は、Ｈ、電子求引基、または電子供与基であり、そしてＲ１’およびＲ１’’は、同一または異なっていて、Ｈ、電子求引基、または電子供与基であり；
Ｒ２は、複素環式か、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状エステルまたはエーテルか、あるいは式−ＣＯＮＲ１０Ｒ１１のカルバメート｛式中、Ｒ１０およびＲ１１は、同一または異なっていて、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルか、またはアリールである｝であり；
Ｒ３は、アリールか、または１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルであり；
Ｒ４は、−ＯＣ（ＣＨ３）３またはフェニルであり；
Ｒ５は、チオール部分であり；そして
Ｒ６は、複素環式か、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状エステルまたはエーテルか、あるいは式−ＣＯＮＲ１０Ｒ１１のカルバメート｛式中、Ｒ１０およびＲ１１は、同一または異なっていて、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルか、またはアリールである｝である］。
【００５０】
上記当該例の化合物であって、Ｒ１が、Ｆ、ＮＯ２、ＣＮ、Ｃｌ、ＣＨＦ２、ＣＦ３、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、またはＮＲ７Ｒ８｛式中、Ｒ７およびＲ８は、同一または異なっていて、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルか、または１〜１０個の炭素原子を有する単純(simple)もしくは置換アリールである｝であるものも意図される。
【００５１】
上記当該例の化合物であって、Ｒ７およびＲ８がそれぞれ１〜４個の炭素原子を有するものも意図される。
上記当該例の化合物であって、Ｒ７およびＲ８が同一であるものも意図される。
【００５２】
上記当該例の化合物であって、Ｒ７およびＲ８が同一であるものも意図される。
上記当該例の化合物であって、Ｒ２が、−ＣＯＣ２Ｈ５、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ３−ＣＯ−モルホリノ、−ＣＯ−ピペリジノ、−ＣＯ−ピペラジノ、または−ＣＯ−Ｎ−メチルピペラジノであるものも意図される。
【００５３】
上記当該例の化合物であって、Ｒ５が、−（ＣＨ２）ｎＳ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＳ、−（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、−ＣＯＮＲ１２（ＣＨ２）ｎＳ、−ＣＯＮＲ１２（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−ＣＯＮＲ１２（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、−ＣＯ−モルホリノ−ＸＳ、−ＣＯ−ピペリジノ−ＸＳ、−ＣＯ−ピペラジノ−ＸＳ、または−ＣＯ−Ｎ−メチルピペラジノ−ＸＳであり；
ｎが、１〜１０の整数であり；そして
Ｒ１２が、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状アルキル、分枝状アルキルもしくは環状アルキルか、１〜１０個の炭素原子を有する単純もしくは置換アリールか、または複素環式であるものも意図される。
【００５４】
上記当該例の化合物であって、Ｒ１’およびＲ１’’がＨまたはＯＣＨ３であるときにＲ１がメタ位にあるものも意図される。
上記当該例の化合物であって、Ｒ３が−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）２であるものも意図される。
【００５５】
上記当該例に従った細胞毒性薬剤であって、前記チオール含有タキサンが、以下の式Ｔ１から選択される化合物であるものも意図される：
【００５６】
【化１１】
2005517032.tif 000012
【００５７】
［式中、
Ｒ１は、Ｈ、電子求引基、または電子供与基であり、そしてＲ１’およびＲ１’’は、同一または異なっていて、Ｈ、電子求引基、または電子供与基であり；
Ｒ２は、チオール部分であり；
Ｒ３は、アリールであるか、または１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルであり；
Ｒ４は、−ＯＣ（ＣＨ３）３またはフェニルであり；
Ｒ５は、複素環式か、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状エステルまたはエーテルか、あるいは式−ＣＯＮＲ１０Ｒ１１のカルバメート｛式中、Ｒ１０およびＲ１１は、同一または異なっていて、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルか、またはアリールである｝であり；そして
Ｒ６は、複素環式か、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状エステルまたはエーテルか、あるいは式−ＣＯＮＲ１０Ｒ１１のカルバメート｛式中、Ｒ１０およびＲ１１は、同一または異なっていて、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルか、またはアリールである｝である］。
【００５８】
上記当該例の化合物であって、Ｒ１の少なくとも１種が、Ｆ、ＮＯ２、ＣＮ、Ｃｌ、ＣＨＦ２、ＣＦ３、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、またはＮＲ７Ｒ８｛式中、Ｒ７およびＲ８は、同一または異なっていて、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルか、または１〜１０個の炭素原子を有する単純もしくは置換アリールである｝であるものも意図される。
【００５９】
上記当該例の化合物であって、Ｒ７およびＲ８がそれぞれ１〜４個の炭素原子を有するものも意図される。
上記当該例の化合物であって、Ｒ７およびＲ８が同一であるものも意図される。
【００６０】
上記当該例の化合物であって、Ｒ７およびＲ８が同一であるものも意図される。
上記当該例の化合物であって、Ｒ５が、−（ＣＨ２）ｎＳ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＳ、−（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、−ＣＯＮＲ１２（ＣＨ２）ｎＳ、−ＣＯＮＲ１２（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−ＣＯＮＲ１２（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、−ＣＯ−モルホリノ−ＸＳ、−ＣＯ−ピペリジノ−ＸＳ、−ＣＯ−ピペラジノ−ＸＳ、または−ＣＯ−Ｎ−メチルピペラジノ−ＸＳであり；
ｎが、１〜１０の整数であり；そして
Ｒ１２が、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状アルキル、分枝状アルキルもしくは環状アルキルか、１〜１０個の炭素原子を有する単純もしくは置換アリールか、または複素環式であるものも意図される。
【００６１】
上記当該例の化合物であって、Ｒ５が、−ＣＯＣ２Ｈ５、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ３、−ＣＯ−モルホリノ、−ＣＯ−ピペリジノ、−ＣＯ−ピペラジノ、または−ＣＯ−Ｎ−メチルピペラジノであるものも意図される。
【００６２】
上記当該例の化合物であって、Ｒ１’およびＲ１’’がＨまたはＯＣＨ３であるときにＲ１がメタ位にあるものも意図される。
上記当該例に従った細胞毒性薬剤であって、前記チオール含有タキサンが、以下の式Ｔ１から選択される化合物であるものも意図される：
【００６３】
【化１２】
2005517032.tif 000013
【００６４】
［式中、
Ｒ１は、Ｈ、電子求引基、または電子供与基であり、そしてＲ１’およびＲ１’’は、同一または異なっていて、Ｈ、電子求引基、または電子供与基であり；
Ｒ２は、複素環式か、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状エステルまたはエーテルか、あるいは式−ＣＯＮＲ１０Ｒ１１のカルバメート｛式中、Ｒ１０およびＲ１１は、同一または異なっていて、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルか、またはアリールである｝であり；
Ｒ３は、アリールであるか、または１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルであり；
Ｒ４は、−ＯＣ（ＣＨ３）３またはフェニルであり；
Ｒ５は、複素環式か、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状エステルまたはエーテルか、あるいは式−ＣＯＮＲ１０Ｒ１１のカルバメート｛式中、Ｒ１０およびＲ１１は、同一または異なっていて、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルか、またはアリールである｝であり；
Ｒ６は、チオール部分である］。
【００６５】
上記当該例の化合物であって、Ｒ１が、Ｆ、ＮＯ２、ＣＮ、Ｃｌ、ＣＨＦ２、ＣＦ３、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、またはＮＲ７Ｒ８｛式中、Ｒ７およびＲ８は、同一または異なっていて、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルか、または１〜１０個の炭素原子を有する単純もしくは置換アリールである｝であるものも意図される。
【００６６】
上記当該例の化合物であって、Ｒ７およびＲ８がそれぞれ１〜４個の炭素原子を有するものも意図される。
上記当該例の化合物であって、Ｒ７およびＲ８が同一であるものも意図される。
【００６７】
上記当該例の化合物であって、Ｒ７およびＲ８が同一であるものも意図される。
上記当該例の化合物であって、Ｒ２が、−ＣＯＣ２Ｈ５、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ３、−ＣＯ−モルホリノ、−ＣＯ−ピペリジノ、−ＣＯ−ピペラジノ、または−ＣＯ−Ｎ−メチルピペラジノであるものも意図される。
【００６８】
上記当該例の化合物であって、Ｒ５が、−（ＣＨ２）ｎＳ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＳ、−（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、−ＣＯＮＲ１２（ＣＨ２）ｎＳ、−ＣＯＮＲ１２（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−ＣＯＮＲ１２（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、−ＣＯ−モルホリノ−ＸＳ、−ＣＯ−ピペリジノ−ＸＳ、−ＣＯ−ピペラジノ−ＸＳ、または−ＣＯ−Ｎ−メチルピペラジノ−ＸＳであり；
ｎが、１〜１０の整数であり；そして
Ｒ１２が、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状アルキル、分枝状アルキルもしくは環状アルキルか、１〜１０個の炭素原子を有する単純もしくは置換アリールか、または複素環式であるものも意図される。
【００６９】
上記当該例の化合物であって、Ｒ１’およびＲ１’’がＨまたはＯＣＨ３であるときにＲ１がメタ位にあるものも意図される。
上記当該例に従った細胞毒性薬剤であって、前記チオール含有ＣＣ−１０６５類似体が、式Ａ−３またはＡ−４のＡサブユニットが、式Ｆ−１のＢサブユニットまたは式Ｆ−３もしくはＦ−７のＢ−Ｃサブユニットのいずれかに、Ａサブユニットのピロール部分の第二級アミノ基からＢサブユニットのＣ−２カルボキシル基へのアミド結合を介して共有結合で連結しているものから形成されるシクロプロピルベンゾインドール含有細胞毒性化合物であるものも意図され、ここにおいて、
式Ａ−３およびＡ−４は以下のとおりであり：
【００７０】
【化１３】
2005517032.tif 000014
【００７１】
式Ｆ−１、Ｆ−３およびＦ−７は以下のとおりである：
【００７２】
【化１４】
2005517032.tif 000015
【００７３】
【化１５】
2005517032.tif 000016
【００７４】
［式中、
各Ｚは、同一または異なっていてもよく、ＯまたはＮＨであってもよく；そして
式Ｆ−１においてＲ４はチオール部分であり、式Ｆ−３においてＲまたはＲ４の一方はチオール部分であり、式Ｆ−７においてＲ’またはＲ４の一方はチオール部分であり；ＲまたはＲ’がチオール部分であるとき、Ｒ１〜Ｒ６は、同一または異なっていてもよく、水素、Ｃ１−Ｃ３線状アルキル、メトキシ、ヒドロキシル、第一級アミノ、第二級アミノ、第三級アミノ、またはアミドであり；そして、Ｒ４がチオール部分であるとき、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、同一または異なっていてもよく、水素、Ｃ１−Ｃ３線状アルキル、メトキシ、ヒドロキシル、第一級アミノ、第二級アミノ、第三級アミノ、またはアミドであり、Ｒ’は、ＮＨ２、アルキル、Ｏ−アルキル、第一級アミノ、第二級アミノ、第三級アミノ、またはアミドである］。
【００７５】
上記当該例の細胞毒性薬剤であって、ＲおよびＲ’がチオール部分であり、Ｒ１〜Ｒ６がそれぞれ水素であるものも意図される。
上記当該例の細胞毒性薬剤であって、ＲまたはＲ４が、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）ｌＳ、ＮＨＣＯＣ６Ｈ４（ＣＨ２）ｌＳ、またはＯ（ＣＨ２）ｌＳであり、Ｒ’が、（ＣＨ２）ｌＳ、ＮＨ（ＣＨ２）ｌＳ、またはＯ（ＣＨ２）ｌＳであるもの｛式中、ｌは１〜１０の整数である｝も意図される。
【００７６】
上記当該例の細胞毒性薬剤であって、ＲまたはＲ４が、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）ｌＳ、ＮＨＣＯＣ６Ｈ４（ＣＨ２）ｌＳ、またはＯ（ＣＨ２）ｌＳであり、Ｒ’が、（ＣＨ２）ｌＳ、ＮＨ（ＣＨ２）ｌＳ、またはＯ（ＣＨ２）ｌＳであるもの｛式中、ｌは１〜１０の整数である｝も意図される。
【００７７】
上記当該例の細胞毒性薬剤であって、ｌが１であるものも意図される。
上記当該例の細胞毒性薬剤であって、ｌが２であるものも意図される。
上記当該例に従った細胞毒性薬剤であって、前記チオール含有ドキソルビシン類似体が、以下の式Ｄ２から選択される化合物であるものも意図される：
【００７８】
【化１６】
2005517032.tif 000017
【００７９】
［式中、
Ｙは、ＯまたはＮＲ２｛式中、Ｒ２は、１〜５個の炭素原子を有する線状または分枝状アルキルである｝であり；
Ｒは、チオール部分か、Ｈか、または１〜５個の炭素原子を有する線状もしくは分枝状アルキルであり；そして
Ｒ’は、チオール部分、Ｈ、または−ＯＲ１｛式中、Ｒ１は、１〜５個の炭素原子を有する線状または分枝状アルキルである｝であり；
ただし、ＲおよびＲ’は、同時にチオール部分であることはない］。
【００８０】
上記当該例の化合物であって、ＮＲ２がＮＣＨ３であるものも意図される。
上記当該例の化合物であって、Ｒ’が−Ｏであるものも意図される。
上記当該例の化合物であって、チオール部分が、−（ＣＨ２）ｎＳ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＳ、−（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、または−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ｛式中、ｎは１〜１０の整数である｝であるものも意図される。
【００８１】
上記当該例に従った細胞毒性薬剤であって、前記チオール含有ダウノルビシン類似体が、以下の式Ｄ３から選択される化合物であるものも意図される：
【００８２】
【化１７】
2005517032.tif 000018
【００８３】
［式中、
Ｙは、ＯまたはＮＲ２｛式中、Ｒ２は、１〜５個の炭素原子を有する線状または分枝状アルキルである｝であり；
Ｒは、チオール部分か、Ｈか、または１〜５個の炭素原子を有する線状もしくは分枝状アルキルであり；そして
Ｒ’は、チオール部分、Ｈ、または−ＯＲ１｛Ｒ１は、１〜５個の炭素原子を有する線状または分枝状アルキルである｝であり；
ただし、ＲおよびＲ’は、同時にチオール部分であることはないという条件が付く］。
【００８４】
上記当該例の化合物であって、ＮＲ２がＮＣＨ３であるものも意図される。
上記当該例の化合物であって、Ｒ’が−Ｏであるものも意図される。
上記当該例の化合物であって、チオール部分が、−（ＣＨ２）ｎＳ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＳ、−（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、または−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ｛式中、ｎは１〜１０の整数である｝であるものも意図される。
【００８５】
本発明の第二の態様において、ＰＥＧ連結基を介して細胞結合剤に連結している１種以上の細胞毒性薬剤を含んでなる細胞毒性コンジュゲートを開示する。この態様、および続く各態様で意図される細胞結合剤には、抗体（特にモノクローナル抗体および抗体フラグメント）、インターフェロン、リンホカイン、ホルモン、成長因子、ビタミン、および栄養分輸送(nutirent-transport)分子（トランスフェリンなど）が含まれる。
【００８６】
好ましい態様において、ＰＥＧ連結基は１〜２０モノマー単位を有する。同等に好ましい態様において、ＰＥＧ連結基は２１〜４０モノマー単位を有する。さらに同等に好ましい態様において、ＰＥＧ連結基は４１〜１０００モノマー単位を有する。
【００８７】
具体的に意図されるのは、１〜２０モノマー単位を有するＰＥＧ連結基を介して細胞結合剤に共有結合している１種以上の細胞毒性薬剤を含んでなり、前記１種以上の細胞毒性薬剤の１種の連結が式３に例示される、細胞毒性コンジュゲートである：
【００８８】
【化１８】
2005517032.tif 000019
【００８９】
［式中、
Ｚは前記細胞毒性薬剤であり；
Ｑは、Ｒ２ＣＯＯ−、Ｒ２Ｒ３ＮＣＯＯ−、Ｒ２ＯＣＯＯ−、Ｒ２Ｏ−、Ｒ２ＣＯＮＲ３−、Ｒ２Ｒ３Ｎ−、Ｒ２ＯＣＯＮＲ３−、またはＳ−であり、
ここにおいて、
Ｒ２はＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−｛Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキルまたは分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよい｝であり、
Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり、
ｎは、０〜２０の整数であり；
ｘは、１または２であり；そして、
Ａは前記細胞結合剤である］。
【００９０】
２１〜４０モノマー単位を有するＰＥＧ連結基を介して細胞結合剤に共有結合している１種以上の細胞毒性薬剤を含んでなり、前記１種以上の細胞毒性薬剤の１種の連結が式３に例示される、細胞毒性コンジュゲートも意図される：
【００９１】
【化１９】
2005517032.tif 000020
【００９２】
［式中、
Ｚは前記細胞毒性薬剤であり；
Ｑは、Ｒ２ＣＯＯ−、Ｒ２Ｒ３ＮＣＯＯ−、Ｒ２ＯＣＯＯ−、Ｒ２Ｏ−、Ｒ２ＣＯＮＲ３−、Ｒ２Ｒ３Ｎ−、Ｒ２ＯＣＯＮＲ３−、またはＳ−であり、
ここにおいて、
Ｒ２はＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−｛Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキルまたは分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよい｝であり、
Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり、
ｎは、２１〜４０の整数であり；
ｘは、１または２であり；そして、
Ａは前記細胞結合剤である］。
【００９３】
４１〜１０００モノマー単位を有するＰＥＧ連結基を介して細胞結合剤に共有結合している１種以上の細胞毒性薬剤を含んでなり、前記１種以上の細胞毒性薬剤の１種の連結が式３に例示される、細胞毒性コンジュゲートも意図される：
【００９４】
【化２０】
2005517032.tif 000021
【００９５】
［式中、
Ｚは前記細胞毒性薬剤であり；
Ｑは、Ｒ２ＣＯＯ−、Ｒ２Ｒ３ＮＣＯＯ−、Ｒ２ＯＣＯＯ−、Ｒ２Ｏ−、Ｒ２ＣＯＮＲ３−、Ｒ２Ｒ３Ｎ−、Ｒ２ＯＣＯＮＲ３−、またはＳ−であり、
ここにおいて、
Ｒ２はＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−｛Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキルまたは分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよい｝であり、
Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり、
ｎは、４１〜１０００の整数であり；
ｘは、１または２であり；そして、
Ａは前記細胞結合剤である］。
【００９６】
上記当該例のいずれか１種に従った細胞毒性コンジュゲートであって、前記細胞毒性薬剤が、チオール含有メイタンシノイド、チオール含有タキサン、チオール含有ＣＣ−１０６５類似体、チオール含有ダウノルビシン類似体およびチオール含有ドキソルビシン類似体、ならびにそれらのチオール含有類似体または誘導体からなる群より選択され、前記細胞結合剤が、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、抗体フラグメント、インターフェロン、リンホカイン、ホルモン、成長因子、ビタミン、および栄養分輸送分子からなる群より選択されるものも意図される。
【００９７】
上記当該例に従った細胞毒性コンジュゲートであって、前記チオール含有メイタンシノイドがＣ−３チオール含有メイタンシノイドであるものも意図される。
上記当該例に従った細胞毒性コンジュゲートであって、前記Ｃ−３チオール含有メイタンシノイドが、Ｎ−メチル−アラニン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノイドであるものも意図される。
【００９８】
上記当該例に従った細胞毒性コンジュゲートであって、前記Ｎ−メチル−アラニン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノイドが、以下の式Ｍ１から選択される化合物であるものも意図される：
【００９９】
【化２１】
2005517032.tif 000022
【０１００】
［式中、
ｌは、１〜１０の整数であり；そして
ｍａｙは、メイタンシノイドである］。
【０１０１】
上記当該例に従った細胞毒性コンジュゲートであって、前記Ｎ−メチル−アラニン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノイドが、以下の式Ｍ２から選択される化合物であるものも意図される：
【０１０２】
【化２２】
2005517032.tif 000023
【０１０３】
［式中、
Ｒ１およびＲ２は、Ｈ、ＣＨ３またはＣＨ２ＣＨ３であり、同一または異なっていてもよく；
ｍは、０、１、２または３であり；そして
ｍａｙは、メイタンシノイドである］。
【０１０４】
上記当該例に従った細胞毒性コンジュゲートであって、前記Ｎ−メチル−アラニン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノイドが、以下の式Ｍ３から選択される化合物であるものも意図される：
【０１０５】
【化２３】
2005517032.tif 000024
【０１０６】
［式中、
ｎは、３〜８の整数であり；そして
ｍａｙは、メイタンシノイドである］。
【０１０７】
上記当該例に従った細胞毒性コンジュゲートであって、前記Ｎ−メチル−アラニン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノイドが、Ｎ−メチル−アラニン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノールであるものも意図される。
【０１０８】
上記当該例に従った細胞毒性コンジュゲートであって、前記Ｎ−メチル−アラニン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノールが、デクロロメイタンシノールであるものも意図される。
【０１０９】
上記当該例に従った細胞毒性コンジュゲートであって、前記Ｎ−メチル−アラニン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノールが、以下の式Ｍ６から選択される化合物であるものも意図される：
【０１１０】
【化２４】
2005517032.tif 000025
【０１１１】
［式中、
ｌは、１、２または３であり；
Ｙ０は、ＣｌまたはＨであり；そして
Ｘ３は、ＨまたはＣＨ３である］。
【０１１２】
上記当該例に従った細胞毒性コンジュゲートであって、前記Ｃ−３チオール含有メイタンシノイドが、Ｎ−メチル−システイン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノイドであるものも意図される。
【０１１３】
上記当該例に従った細胞毒性コンジュゲートであって、前記Ｎ−メチル−システイン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノイドが、以下の式Ｍ４から選択される化合物であるものも意図される：
【０１１４】
【化２５】
2005517032.tif 000026
【０１１５】
［式中、
ｏは、１、２または３であり；
ｐは、０〜１０の整数であり；そして
ｍａｙは、メイタンシノイドである］。
【０１１６】
上記当該例に従った細胞毒性コンジュゲートであって、前記Ｎ−メチル−システイン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノイドが、Ｎ−メチル−システイン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノールであるものも意図される。
【０１１７】
上記当該例に従った細胞毒性コンジュゲートであって、前記Ｎ−メチル−システイン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノールが、デクロロメイタンシノールであるものも意図される。
【０１１８】
上記当該例に従った細胞毒性コンジュゲートであって、前記Ｎ−メチル−システイン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノールが、以下の式Ｍ５から選択される化合物であるものも意図される：
【０１１９】
【化２６】
2005517032.tif 000027
【０１２０】
［式中、
ｏは、１、２または３であり；
ｑは、０〜１０の整数であり；
Ｙ０は、ＣｌまたはＨであり；そして
Ｘ３は、ＨまたはＣＨ３である］。
【０１２１】
上記当該例に従った細胞毒性コンジュゲートであって、前記チオール含有タキサンが、以下の式Ｔ１から選択される化合物であるものも意図される：
【０１２２】
【化２７】
2005517032.tif 000028
【０１２３】
［式中、
Ｒ１は、Ｈ、電子求引基、または電子供与基であり、そしてＲ１’およびＲ１’’は、同一または異なっていて、Ｈ、電子求引基、または電子供与基であり；
Ｒ２は、複素環式か、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状エステルまたはエーテルか、あるいは式−ＣＯＮＲ１０Ｒ１１のカルバメート｛式中、Ｒ１０およびＲ１１は、同一または異なっていて、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルか、またはアリールである｝であり；
Ｒ３は、アリールか、または１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルであり；
Ｒ４は、−ＯＣ（ＣＨ３）３またはフェニルであり；
Ｒ５は、チオール部分であり；そして
Ｒ６は、複素環式か、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状エステルまたはエーテルか、あるいは式−ＣＯＮＲ１０Ｒ１１のカルバメート｛式中、Ｒ１０およびＲ１１は、同一または異なっていて、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルか、またはアリールである｝である］。
【０１２４】
上記当該例の化合物であって、Ｒ１が、Ｆ、ＮＯ２、ＣＮ、Ｃｌ、ＣＨＦ２、ＣＦ３、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、またはＮＲ７Ｒ８｛式中、Ｒ７およびＲ８は、同一または異なっていて、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルか、または１〜１０個の炭素原子を有する単純もしくは置換アリールである｝であるものも意図される。
【０１２５】
上記当該例の化合物であって、Ｒ７およびＲ８がそれぞれ１〜４個の炭素原子を有するものも意図される。
上記当該例の化合物であって、Ｒ７およびＲ８が同一であるものも意図される。
【０１２６】
上記当該例の化合物であって、Ｒ７およびＲ８が同一であるものも意図される。
上記当該例の化合物であって、Ｒ２が、−ＣＯＣ２Ｈ５、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ３、−ＣＯ−モルホリノ、−ＣＯ−ピペリジノ、−ＣＯ−ピペラジノ、または−ＣＯ−Ｎ−メチルピペラジノであるものも意図される。
【０１２７】
上記当該例の化合物であって、Ｒ５が、−（ＣＨ２）ｎＳ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＳ、−（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、−ＣＯＮＲ１２（ＣＨ２）ｎＳ、−ＣＯＮＲ１２（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−ＣＯＮＲ１２（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、−ＣＯ−モルホリノ−ＸＳ、−ＣＯ−ピペリジノ−ＸＳ、−ＣＯ−ピペラジノ−ＸＳ、または−ＣＯ−Ｎ−メチルピペラジノ−ＸＳであり；
ｎが、１〜１０の整数であり；そして
Ｒ１２が、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状アルキル、分枝状アルキルもしくは環状アルキルか、１〜１０個の炭素原子を有する単純もしくは置換アリールか、または複素環式であるものも意図される。
【０１２８】
上記当該例の化合物であって、Ｒ１’およびＲ１’’がＨまたはＯＣＨ３であるときにＲ１がメタ位にあるものも意図される。
上記当該例の化合物であって、Ｒ３が−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）２であるものも意図される。
【０１２９】
上記当該例に従った細胞毒性コンジュゲートであって、前記チオール含有タキサンが、以下の式Ｔ１から選択される化合物であるものも意図される：
【０１３０】
【化２８】
2005517032.tif 000029
【０１３１】
［式中、
Ｒ１は、Ｈ、電子求引基、または電子供与基であり、そしてＲ１’およびＲ１’’は、同一または異なっていて、Ｈ、電子求引基、または電子供与基であり；
Ｒ２は、チオール部分であり；
Ｒ３は、アリールであるか、または１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルであり；
Ｒ４は、−ＯＣ（ＣＨ３）３またはフェニルであり；
Ｒ５は、複素環式か、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状エステルまたはエーテルか、あるいは式−ＣＯＮＲ１０Ｒ１１のカルバメート｛式中、Ｒ１０およびＲ１１は、同一または異なっていて、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルか、またはアリールである｝であり；そして
Ｒ６は、複素環式か、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状エステルまたはエーテルか、あるいは式−ＣＯＮＲ１０Ｒ１１のカルバメート｛式中、Ｒ１０およびＲ１１は、同一または異なっていて、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルか、またはアリールである｝である］。
【０１３２】
上記当該例の化合物であって、Ｒ１の少なくとも１種が、Ｆ、ＮＯ２、ＣＮ、Ｃｌ、ＣＨＦ２、ＣＦ３、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、またはＮＲ７Ｒ８｛式中、Ｒ７およびＲ８は、同一または異なっていて、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルか、または１〜１０個の炭素原子を有する単純もしくは置換アリールである｝であるものも意図される。
【０１３３】
上記当該例の化合物であって、Ｒ７およびＲ８がそれぞれ１〜４個の炭素原子を有するものも意図される。
上記当該例の化合物であって、Ｒ７およびＲ８が同一であるものも意図される。
【０１３４】
上記当該例の化合物であって、Ｒ７およびＲ８が同一であるものも意図される。
上記当該例の化合物であって、Ｒ５が、−（ＣＨ２）ｎＳ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＳ、−（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、−ＣＯＮＲ１２（ＣＨ２）ｎＳ、−ＣＯＮＲ１２（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−ＣＯＮＲ１２（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、−ＣＯ−モルホリノ−ＸＳ、−ＣＯ−ピペリジノ−ＸＳ、−ＣＯ−ピペラジノ−ＸＳ、または−ＣＯ−Ｎ−メチルピペラジノ−ＸＳであり；
ｎが、１〜１０の整数であり；そして
Ｒ１２が、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状アルキル、分枝状アルキルもしくは環状アルキルか、１〜１０個の炭素原子を有する単純もしくは置換アリールか、または複素環式であるものも意図される。
【０１３５】
上記当該例の化合物であって、Ｒ５が、−ＣＯＣ２Ｈ５、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ３、−ＣＯ−モルホリノ、−ＣＯ−ピペリジノ、−ＣＯ−ピペラジノ、または−ＣＯ−Ｎ−メチルピペラジノであるものも意図される。
【０１３６】
上記当該例の化合物であって、Ｒ１’およびＲ１’’がＨまたはＯＣＨ３であるときにＲ１がメタ位にあるものも意図される。
上記当該例に従った細胞毒性コンジュゲートであって、前記チオール含有タキサンが、以下の式Ｔ１から選択される化合物であるものも意図される：
【０１３７】
【化２９】
2005517032.tif 000030
【０１３８】
［式中、
Ｒ１は、Ｈ、電子求引基、または電子供与基であり、そしてＲ１’およびＲ１’’は、同一または異なっていて、Ｈ、電子求引基、または電子供与基であり；
Ｒ２は、複素環式か、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状エステルまたはエーテルか、あるいは式−ＣＯＮＲ１０Ｒ１１のカルバメート｛式中、Ｒ１０およびＲ１１は、同一または異なっていて、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルか、またはアリールである｝であり；
Ｒ３は、アリールであるか、または１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルであり；
Ｒ４は、−ＯＣ（ＣＨ３）３またはフェニルであり；
Ｒ５は、複素環式か、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状エステルまたはエーテルか、あるいは式−ＣＯＮＲ１０Ｒ１１のカルバメート｛式中、Ｒ１０およびＲ１１は、同一または異なっていて、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルか、またはアリールである｝であり；
Ｒ６は、チオール部分である］。
【０１３９】
上記当該例の化合物であって、Ｒ１が、Ｆ、ＮＯ２、ＣＮ、Ｃｌ、ＣＨＦ２、ＣＦ３、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、またはＮＲ７Ｒ８｛式中、Ｒ７およびＲ８は、同一または異なっていて、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルか、または１〜１０個の炭素原子を有する単純もしくは置換アリールである｝であるものも意図される。
【０１４０】
上記当該例の化合物であって、Ｒ７およびＲ８がそれぞれ１〜４個の炭素原子を有するものも意図される。
上記当該例の化合物であって、Ｒ７およびＲ８が同一であるものも意図される。
【０１４１】
上記当該例の化合物であって、Ｒ７およびＲ８が同一であるものも意図される。
上記当該例の化合物であって、Ｒ２が、−ＣＯＣ２Ｈ５、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ３、−ＣＯ−モルホリノ、−ＣＯ−ピペリジノ、−ＣＯ−ピペラジノ、または−ＣＯ−Ｎ−メチルピペラジノであるものも意図される。
【０１４２】
上記当該例の化合物であって、Ｒ５が、−（ＣＨ２）ｎＳ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＳ、−（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、−ＣＯＮＲ１２（ＣＨ２）ｎＳ、−ＣＯＮＲ１２（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−ＣＯＮＲ１２（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、−ＣＯ−モルホリノ−ＸＳ、−ＣＯ−ピペリジノ−ＸＳ、−ＣＯ−ピペラジノ−ＸＳ、または−ＣＯ−Ｎ−メチルピペラジノ−ＸＳであり；
ｎが、１〜１０の整数であり；そして
Ｒ１２が、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状アルキル、分枝状アルキルもしくは環状アルキルか、１〜１０個の炭素原子を有する単純もしくは置換アリールか、または複素環式であるものも意図される。
【０１４３】
上記当該例の化合物であって、Ｒ１’およびＲ１’’がＨまたはＯＣＨ３であるときにＲ１がメタ位にあるものも意図される。
上記当該例に従った細胞毒性コンジュゲートであって、前記チオール含有ＣＣ−１０６５類似体が、式Ａ−３またはＡ−４のＡサブユニットが、式Ｆ−１のＢサブユニットまたは式Ｆ−３もしくはＦ−７のＢ−Ｃサブユニットのいずれかに、Ａサブユニットのピロール部分の第二級アミノ基からＢサブユニットのＣ−２カルボキシル基へのアミド結合を介して共有結合で連結しているものから形成されるシクロプロピルベンゾインドール含有細胞毒性化合物であるものも意図され、ここにおいて、
式Ａ−３およびＡ−４は以下のとおりであり：
【０１４４】
【化３０】
2005517032.tif 000031
【０１４５】
式Ｆ−１、Ｆ−３およびＦ−７は以下のとおりである：
【０１４６】
【化３１】
2005517032.tif 000032
【０１４７】
［式中、
各Ｚは、同一または異なっていてもよく、ＯまたはＮＨであることができ；そして
式Ｆ−１においてＲ４はチオール部分であり、式Ｆ−３においてＲまたはＲ４の一方はチオール部分であり、式Ｆ−７においてＲ’またはＲ４の一方はチオール部分であり；ＲまたはＲ’がチオール部分であるとき、Ｒ１〜Ｒ６は、同一または異なっていてもよく、水素、Ｃ１−Ｃ３線状アルキル、メトキシ、ヒドロキシル、第一級アミノ、第二級アミノ、第三級アミノ、またはアミドであり；そして、Ｒ４がチオール部分であるとき、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、同一または異なっていてもよく、水素、Ｃ１−Ｃ３線状アルキル、メトキシ、ヒドロキシル、第一級アミノ、第二級アミノ、第三級アミノ、またはアミドであり、Ｒ’は、ＮＨ２、アルキル、Ｏ−アルキル、第一級アミノ、第二級アミノ、第三級アミノ、またはアミドである］。
【０１４８】
上記当該例の細胞毒性コンジュゲートであって、ＲおよびＲ’がチオール部分であり、Ｒ１〜Ｒ６がそれぞれ水素であるものも意図される。
上記当該例の細胞毒性コンジュゲートであって、ＲまたはＲ４が、−ＮＨＣＯ（ＣＨ２）ｌＳ、−ＮＨＣＯＣ６Ｈ４（ＣＨ２）ｌＳ、または−Ｏ（ＣＨ２）ｌＳであり、Ｒ’が、−（ＣＨ２）ｌＳ、−ＮＨ（ＣＨ２）ｌＳ、または−Ｏ（ＣＨ２）ｌＳであるもの｛式中、ｌは１〜１０の整数である｝も意図される。
【０１４９】
上記当該例の細胞毒性コンジュゲートであって、ＲまたはＲ４が、−ＮＨＣＯ（ＣＨ２）ｌＳ、−ＮＨＣＯＣ６Ｈ４（ＣＨ２）ｌＳ、または−Ｏ（ＣＨ２）ｌＳであり、Ｒ’が、−（ＣＨ２）ｌＳ、−ＮＨ（ＣＨ２）ｌＳ、または−Ｏ（ＣＨ２）ｌＳであるもの｛式中、ｌは１〜１０の整数である｝も意図される。
【０１５０】
上記当該例の細胞毒性コンジュゲートであって、ｌが１であるものも意図される。
上記当該例の細胞毒性コンジュゲートであって、ｌが２であるものも意図される。
上記当該例に従った細胞毒性コンジュゲートであって、前記チオール含有ドキソルビシン類似体が、以下の式Ｄ２から選択される化合物であるものも意図される：
【０１５１】
【化３２】
2005517032.tif 000033
【０１５２】
［式中、
Ｙは、ＯまたはＮＲ２｛式中、Ｒ２は、１〜５個の炭素原子を有する線状または分枝状アルキルである｝であり；
Ｒは、チオール部分か、Ｈか、または１〜５個の炭素原子を有する線状もしくは分枝状アルキルであり；そして
Ｒ’は、チオール部分、Ｈ、または−ＯＲ１｛式中、Ｒ１は、１〜５個の炭素原子を有する線状または分枝状アルキルである｝であり；
ただし、ＲおよびＲ’は、同時にチオール部分であることはない］。
【０１５３】
上記当該例の化合物であって、ＮＲ２がＮＣＨ３であるものも意図される。
上記当該例の化合物であって、Ｒ’が−Ｏであるものも意図される。
上記当該例の化合物であって、チオール部分が、−（ＣＨ２）ｎＳ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＳ、−（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、または−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ｛式中、ｎは１〜１０の整数である｝であるものも意図される。
【０１５４】
上記当該例に従った細胞毒性コンジュゲートであって、前記チオール含有ダウノルビシン類似体が、以下の式Ｄ３から選択される化合物であるものも意図される：
【０１５５】
【化３３】
2005517032.tif 000034
【０１５６】
［式中、
Ｙは、ＯまたはＮＲ２｛式中、Ｒ２は、１〜５個の炭素原子を有する線状または分枝状アルキルである｝であり；
Ｒは、チオール部分か、Ｈか、または１〜５個の炭素原子を有する線状もしくは分枝状アルキルであり；そして
Ｒ’は、チオール部分、Ｈ、または−ＯＲ１｛式中、Ｒ１は、１〜５個の炭素原子を有する線状または分枝状アルキルである｝であり；
ただし、ＲおよびＲ’は、同時にチオール部分であることはないという条件が付く］。
【０１５７】
上記当該例の化合物であって、ＮＲ２がＮＣＨ３であるものも意図される。
上記当該例の化合物であって、Ｒ’が−Ｏであるものも意図される。
上記当該例の化合物であって、チオール部分が、−（ＣＨ２）ｎＳ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＳ、−（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、または−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ｛式中、ｎは１〜１０の整数である｝であるものも意図される。
【０１５８】
上記当該例に従った細胞毒性コンジュゲートであって、前記細胞結合剤がモノクローナル抗体であるものも意図される。
上記当該例に従った細胞毒性コンジュゲートであって、前記細胞結合剤が抗体フラグメントであるものも意図される。
【０１５９】
上記当該例に従った細胞毒性コンジュゲートであって、前記細胞毒性薬剤がタキサンであり、前記細胞結合剤がモノクローナル抗体であるものも意図される。
本発明の第三の態様において、治療的有効量の本発明の細胞毒性コンジュゲートの１種と、医薬的に許容しうる担体とを含んでなる、治療的組成物を開示する。
【０１６０】
具体的に意図されるのは、治療的有効量の上記当該例の細胞毒性コンジュゲートと医薬的に許容しうる担体とを含んでなる治療的組成物である。
上記当該例に従った治療的組成物であって、細胞毒性コンジュゲートの治療的有効量が１０μｇ〜１００ｍｇであるものも意図される。
【０１６１】
上記当該例に従った治療的組成物であって、細胞毒性コンジュゲートの治療的有効量が５０μｇ〜３０ｍｇであるものも意図される。
上記当該例に従った治療的組成物であって、細胞毒性コンジュゲートの治療的有効量が１ｍｇ〜２０ｍｇであるものも意図される。
【０１６２】
本発明の第四の態様において、末端活性エステルを有するＰＥＧ連結基を持つ細胞毒性薬剤の製造方法を開示する。本方法は、ａ）ＰＥＧ連結基を、ジスルフィド基を介してチオール含有細胞毒性薬剤と反応させ、そしてｂ）工程ａ）の生成物の末端カルボン酸基または保護的化学基を活性エステルに転化させ、それにより末端活性エステルを有するＰＥＧ連結基を持つ細胞毒性薬剤を製造することを含んでなる。
【０１６３】
好ましい態様において、ＰＥＧ連結基は１〜２０モノマー単位を有する。同等に好ましい態様において、ＰＥＧ連結基は２１〜４０モノマー単位を有する。さらに同等に好ましい態様において、ＰＥＧ連結基は４１〜１０００モノマー単位を有する。
【０１６４】
具体的に意図されるのは、式２の、末端活性エステルおよび１〜２０モノマー単位を有するＰＥＧ連結基を持つ細胞毒性薬剤：
【０１６５】
【化３４】
2005517032.tif 000035
【０１６６】
［式中、
Ｚは前記細胞毒性薬剤であり；
Ｑは、Ｒ２ＣＯＯ−、Ｒ２Ｒ３ＮＣＯＯ−、Ｒ２ＯＣＯＯ−、Ｒ２Ｏ−、Ｒ２ＣＯＮＲ３−、Ｒ２Ｒ３Ｎ−、Ｒ２ＯＣＯＮＲ３−、またはＳ−であり、
ここにおいて、
Ｒ２はＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−｛Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキルまたは分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよい｝であり、
Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり；
ｎは、０〜２０の整数であり；
ｘは、１または２であり；そして、
Ｙは、Ｎ−スクシンイミジル、Ｎ−スルホスクシンイミジル、Ｎ−フタルイミジル、Ｎ−スルホフタルイミジル、２−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、２，４−ジニトロフェニル、３−スルホニル−４−ニトロフェニル、または３−カルボキシ−４−ニトロフェニルである］
の製造方法であって、前記方法が：
ａ）１〜２０モノマー単位を有する式１のＰＥＧ連結基：
【０１６７】
【化３５】
2005517032.tif 000036
【０１６８】
［式中、
Ｒ’は、２−ピリジル、４−ピリジル、５−ニトロ−２−ピリジル、５−ニトロ−４−ピリジル、２−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、または２，４−ジニトロフェニルであり；
Ｑは、Ｒ２ＣＯＯ−、Ｒ２Ｒ３ＮＣＯＯ−、Ｒ２ＯＣＯＯ−、Ｒ２Ｏ−、Ｒ２ＣＯＮＲ３−、Ｒ２Ｒ３Ｎ−、Ｒ２ＯＣＯＮＲ３−、またはＳ−であり、
ここにおいて、
Ｒ２はＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−｛Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキルまたは分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよい｝であり、
Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり；
ｎは、０〜２０の整数であり；
ｘは、１または２であり；そして、
Ｒは、Ｈ、塩を形成するカチオン、またはエステルを形成する化学基である］
を、チオール含有細胞毒性薬剤と反応させる工程、そして、
ｂ）工程ａ）の生成物のＲ基を活性エステルに転化させ、それにより末端活性エステルおよび１〜２０モノマー単位を有するＰＥＧ連結基を持つ細胞毒性薬剤を製造する工程、
を含んでなる、前記製造方法である。
【０１６９】
式２の、末端活性エステルおよび２１〜４０モノマー単位を有するＰＥＧ連結基を持つ細胞毒性薬剤：
【０１７０】
【化３６】
2005517032.tif 000037
【０１７１】
［式中、
Ｚは前記細胞毒性薬剤であり；
Ｑは、Ｒ２ＣＯＯ−、Ｒ２Ｒ３ＮＣＯＯ−、Ｒ２ＯＣＯＯ−、Ｒ２Ｏ−、Ｒ２ＣＯＮＲ３−、Ｒ２Ｒ３Ｎ−、Ｒ２ＯＣＯＮＲ３−、またはＳ−であり、
ここにおいて、
Ｒ２はＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−｛Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキルまたは分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよい｝であり、
Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり；
ｎは、２１〜４０の整数であり；
ｘは、１または２であり；そして、
Ｙは、Ｎ−スクシンイミジル、Ｎ−スルホスクシンイミジル、Ｎ−フタルイミジル、Ｎ−スルホフタルイミジル、２−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、２，４−ジニトロフェニル、３−スルホニル−４−ニトロフェニル、または３−カルボキシ−４−ニトロフェニルである］
の製造方法であって、前記方法が：
ａ）２１〜４０モノマー単位を有する式１のＰＥＧ連結基：
【０１７２】
【化３７】
2005517032.tif 000038
【０１７３】
［式中、
Ｒ’は、２−ピリジル、４−ピリジル、５−ニトロ−２−ピリジル、５−ニトロ−４−ピリジル、２−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、または２，４−ジニトロフェニルであり；
Ｑは、Ｒ２ＣＯＯ−、Ｒ２Ｒ３ＮＣＯＯ−、Ｒ２ＯＣＯＯ−、Ｒ２Ｏ−、Ｒ２ＣＯＮＲ３−、Ｒ２Ｒ３Ｎ−、Ｒ２ＯＣＯＮＲ３−、またはＳ−であり、
ここにおいて、
Ｒ２はＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−｛Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキルまたは分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよい｝であり、
Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり；
ｎは、２１〜４０の整数であり；
ｘは、１または２であり；そして、
Ｒは、Ｈ、塩を形成するカチオン、またはエステルを形成する化学基である］
を、チオール含有細胞毒性薬剤と反応させる工程、そして、
ｂ）工程ａ）の生成物のＲ基を活性エステルに転化させ、それにより末端活性エステルおよび２１〜４０モノマー単位を有するＰＥＧ連結基を持つ細胞毒性薬剤を製造する工程、
を含んでなる、前記製造方法も意図される。
【０１７４】
式２の、末端活性エステルおよび４１〜１０００モノマー単位を有するＰＥＧ連結基を持つ細胞毒性薬剤：
【０１７５】
【化３８】
2005517032.tif 000039
【０１７６】
［式中、
Ｚは前記細胞毒性薬剤であり；
Ｑは、Ｒ２ＣＯＯ−、Ｒ２Ｒ３ＮＣＯＯ−、Ｒ２ＯＣＯＯ−、Ｒ２Ｏ−、Ｒ２ＣＯＮＲ３−、Ｒ２Ｒ３Ｎ−、Ｒ２ＯＣＯＮＲ３−、またはＳ−であり、
ここにおいて、
Ｒ２はＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−｛Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキルまたは分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよい｝であり、
Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり；
ｎは、４１〜１０００の整数であり；
ｘは、１または２であり；そして、
Ｙは、Ｎ−スクシンイミジル、Ｎ−スルホスクシンイミジル、Ｎ−フタルイミジル、Ｎ−スルホフタルイミジル、２−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、２，４−ジニトロフェニル、３−スルホニル−４−ニトロフェニル、または３−カルボキシ−４−ニトロフェニルである］
の製造方法であって、前記方法が：
ａ）４１〜１０００モノマー単位を有する式１のＰＥＧ連結基：
【０１７７】
【化３９】
2005517032.tif 000040
【０１７８】
［式中、
Ｒ’は、２−ピリジル、４−ピリジル、５−ニトロ−２−ピリジル、５−ニトロ−４−ピリジル、２−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、または２，４−ジニトロフェニルであり；
Ｑは、Ｒ２ＣＯＯ−、Ｒ２Ｒ３ＮＣＯＯ−、Ｒ２ＯＣＯＯ−、Ｒ２Ｏ−、Ｒ２ＣＯＮＲ３−、Ｒ２Ｒ３Ｎ−、Ｒ２ＯＣＯＮＲ３−、またはＳ−であり、
ここにおいて、
Ｒ２はＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−｛Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキルまたは分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよい｝であり、
Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり；
ｎは、４１〜１０００の整数であり；
ｘは、１または２であり；そして、
Ｒは、Ｈ、塩を形成するカチオン、またはエステルを形成する化学基である］
を、チオール含有細胞毒性薬剤と反応させる工程、そして、
ｂ）工程ａ）の生成物のＲ基を活性エステルに転化させ、それにより末端活性エステルおよび４１〜１０００モノマー単位を有するＰＥＧ連結基を持つ細胞毒性薬剤を製造する工程、
を含んでなる、前記製造方法も意図される。
【０１７９】
上記当該例のいずれか１つに従った、末端活性エステルを有するＰＥＧ連結基を持つ細胞毒性薬剤の製造方法であって、化学基が、メチル、エチル、フェニル、ベンジル、またはｔｅｒｔ−ブチルであるものも意図される。
【０１８０】
上記当該例のいずれか１つに従った、末端活性エステルを有するＰＥＧ連結基を持つ細胞毒性薬剤の製造方法であって、前記細胞毒性薬剤が、チオール含有メイタンシノイド、チオール含有タキサン、チオール含有ＣＣ−１０６５類似体、チオール含有ダウノルビシン類似体およびチオール含有ドキソルビシン類似体、ならびにそれらのチオール含有類似体または誘導体からなる群より選択されるものも意図される。
【０１８１】
上記当該例に従った方法であって、前記チオール含有メイタンシノイドがＣ−３チオール含有メイタンシノイドであるものも意図される。
上記当該例に従った方法であって、前記Ｃ−３チオール含有メイタンシノイドが、Ｎ−メチル−アラニン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノイドであるものも意図される。
【０１８２】
上記当該例に従った方法であって、前記Ｎ−メチル−アラニン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノイドが、以下の式Ｍ１から選択される化合物であるものも意図される：
【０１８３】
【化４０】
2005517032.tif 000041
【０１８４】
［式中、
ｌは、１〜１０の整数であり；そして
ｍａｙは、メイタンシノイドである］。
【０１８５】
上記当該例に従った方法であって、前記Ｎ−メチル−アラニン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノイドが、以下の式Ｍ２から選択される化合物であるものも意図される：
【０１８６】
【化４１】
2005517032.tif 000042
【０１８７】
［式中、
Ｒ１およびＲ２は、Ｈ、ＣＨ３またはＣＨ２ＣＨ３であり、同一または異なっていてもよく；
ｍは、０、１、２または３であり；そして
ｍａｙは、メイタンシノイドである］。
【０１８８】
上記当該例に従った方法であって、前記Ｎ−メチル−アラニン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノイドが、以下の式Ｍ３から選択される化合物であるものも意図される：
【０１８９】
【化４２】
2005517032.tif 000043
【０１９０】
［式中、
ｎは、３〜８の整数であり；そして
ｍａｙは、メイタンシノイドである］。
【０１９１】
上記当該例に従った方法であって、前記Ｎ−メチル−アラニン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノイドが、Ｎ−メチル−アラニン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノールであるものも意図される。
【０１９２】
上記当該例に従った方法であって、前記Ｎ−メチル−アラニン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノールが、デクロロメイタンシノールであるものも意図される。
上記当該例に従った方法であって、前記Ｎ−メチル−アラニン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノールが、以下の式Ｍ６から選択される化合物であるものも意図される：
【０１９３】
【化４３】
2005517032.tif 000044
【０１９４】
［式中、
ｌは、１、２または３であり；
Ｙ０は、ＣｌまたはＨであり；そして
Ｘ３は、ＨまたはＣＨ３である］。
【０１９５】
上記当該例に従った方法であって、前記Ｃ−３チオール含有メイタンシノイドが、Ｎ−メチル−システイン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノイドであるものも意図される。
上記当該例に従った方法であって、前記Ｎ−メチル−システイン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノイドが、以下の式Ｍ４から選択される化合物であるものも意図される：
【０１９６】
【化４４】
2005517032.tif 000045
【０１９７】
［式中、
ｏは、１、２または３であり；
ｐは、０〜１０の整数であり；そして
ｍａｙは、メイタンシノイドである］。
【０１９８】
上記当該例に従った方法であって、前記Ｎ−メチル−システイン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノイドが、Ｎ−メチル−システイン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノールであるものも意図される。
【０１９９】
上記当該例に従った方法であって、前記Ｎ−メチル−システイン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノールが、デクロロメイタンシノールであるものも意図される。
上記当該例に従った方法であって、前記Ｎ−メチル−システイン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノールが、以下の式Ｍ５から選択される化合物であるものも意図される：
【０２００】
【化４５】
2005517032.tif 000046
【０２０１】
［式中、
ｏは、１、２または３であり；
ｑは、０〜１０の整数であり；
Ｙ０は、ＣｌまたはＨであり；そして
Ｘ３は、ＨまたはＣＨ３である］。
【０２０２】
上記当該例に従った方法であって、前記チオール含有タキサンが、以下の式Ｔ１から選択される化合物であるものも意図される：
【０２０３】
【化４６】
2005517032.tif 000047
【０２０４】
［式中、
Ｒ１は、Ｈ、電子求引基、または電子供与基であり、そしてＲ１’およびＲ１’’は、同一または異なっていて、Ｈ、電子求引基、または電子供与基であり；
Ｒ２は、複素環式か、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状エステルまたはエーテルか、あるいは式−ＣＯＮＲ１０Ｒ１１のカルバメート｛式中、Ｒ１０およびＲ１１は、同一または異なっていて、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルか、またはアリールである｝であり；
Ｒ３は、アリールか、または１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルであり；
Ｒ４は、−ＯＣ（ＣＨ３）３またはフェニルであり；
Ｒ５は、チオール部分であり；そして
Ｒ６は、複素環式か、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状エステルまたはエーテルか、あるいは式−ＣＯＮＲ１０Ｒ１１のカルバメート｛式中、Ｒ１０およびＲ１１は、同一または異なっていて、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルか、またはアリールである｝である］。
【０２０５】
上記当該例に従った方法であって、Ｒ１が、Ｆ、ＮＯ２、ＣＮ、Ｃｌ、ＣＨＦ２、ＣＦ３、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、またはＮＲ７Ｒ８｛Ｒ７およびＲ８は、同一または異なっていて、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルか、または１〜１０個の炭素原子を有する単純もしくは置換アリールである｝であるものも意図される。
【０２０６】
上記当該例に従った方法であって、Ｒ７およびＲ８がそれぞれ１〜４個の炭素原子を有するものも意図される。
上記当該例に従った方法であって、Ｒ７およびＲ８が同一であるものも意図される。
【０２０７】
上記当該例に従った方法であって、Ｒ７およびＲ８が同一であるものも意図される。
上記当該例に従った方法であって、Ｒ２が、−ＣＯＣ２Ｈ５、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ３−ＣＯ−モルホリノ、−ＣＯ−ピペリジノ、−ＣＯ−ピペラジノ、または−ＣＯ−Ｎ−メチルピペラジノであるものも意図される。
【０２０８】
上記当該例に従った方法であって、Ｒ５が、−（ＣＨ２）ｎＳ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＳ、−（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、−ＣＯＮＲ１２（ＣＨ２）ｎＳ、−ＣＯＮＲ１２（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−ＣＯＮＲ１２（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、−ＣＯ−モルホリノ−ＸＳ、−ＣＯ−ピペリジノ−ＸＳ、−ＣＯ−ピペラジノ−ＸＳ、または−ＣＯ−Ｎ−メチルピペラジノ−ＸＳであり；
ｎが、１〜１０の整数であり；そして
Ｒ１２が、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状アルキル、分枝状アルキルもしくは環状アルキルか、１〜１０個の炭素原子を有する単純もしくは置換アリールか、または複素環式であるものも意図される。
【０２０９】
上記当該例に従った方法であって、Ｒ１’およびＲ１’’がＨまたはＯＣＨ３であるときにＲ１がメタ位にあるものも意図される。
上記当該例に従った方法であって、Ｒ３が−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）２であるものも意図される。
【０２１０】
上記当該例に従った方法であって、前記タキサンが、以下の式Ｔ１から選択される化合物であるものも意図される：
【０２１１】
【化４７】
2005517032.tif 000048
【０２１２】
［式中、
Ｒ１は、Ｈ、電子求引基、または電子供与基であり、そしてＲ１’およびＲ１’’は、同一または異なっていて、Ｈ、電子求引基、または電子供与基であり；
Ｒ２は、チオール部分であり；
Ｒ３は、アリールであるか、または１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルであり；
Ｒ４は、−ＯＣ（ＣＨ３）３またはフェニルであり；
Ｒ５は、複素環式か、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状エステルまたはエーテルか、あるいは式−ＣＯＮＲ１０Ｒ１１のカルバメート｛式中、Ｒ１０およびＲ１１は、同一または異なっていて、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルか、またはアリールである｝であり；そして
Ｒ６は、複素環式か、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状エステルまたはエーテルか、あるいは式−ＣＯＮＲ１０Ｒ１１のカルバメート｛式中、Ｒ１０およびＲ１１は、同一または異なっていて、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルか、またはアリールである｝である］。
【０２１３】
上記当該例に従った方法であって、Ｒ１の少なくとも１種が、Ｆ、ＮＯ２、ＣＮ、Ｃｌ、ＣＨＦ２、ＣＦ３、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、またはＮＲ７Ｒ８｛Ｒ７およびＲ８は、同一または異なっていて、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルか、または１〜１０個の炭素原子を有する単純もしくは置換アリールである｝であるものも意図される。
【０２１４】
上記当該例に従った方法であって、Ｒ７およびＲ８がそれぞれ１〜４個の炭素原子を有するものも意図される。
上記当該例に従った方法であって、Ｒ７およびＲ８が同一であるものも意図される。
【０２１５】
上記当該例に従った方法であって、Ｒ７およびＲ８が同一であるものも意図される。
上記当該例に従った方法であって、Ｒ５が、−（ＣＨ２）ｎＳ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＳ、−（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、−ＣＯＮＲ１２（ＣＨ２）ｎＳ、−ＣＯＮＲ１２（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−ＣＯＮＲ１２（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、−ＣＯ−モルホリノ−ＸＳ、−ＣＯ−ピペリジノ−ＸＳ、−ＣＯ−ピペラジノ−ＸＳ、または−ＣＯ−Ｎ−メチルピペラジノ−ＸＳであり；
ｎが、１〜１０の整数であり；そして
Ｒ１２が、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状アルキル、分枝状アルキルもしくは環状アルキルか、１〜１０個の炭素原子を有する単純もしくは置換アリールか、または複素環式であるものも意図される。
【０２１６】
上記当該例に従った方法であって、Ｒ５が、−ＣＯＣ２Ｈ５、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ３、−ＣＯ−モルホリノ、−ＣＯ−ピペリジノ、−ＣＯ−ピペラジノ、または−ＣＯ−Ｎ−メチルピペラジノであるものも意図される。
【０２１７】
上記当該例に従った方法であって、Ｒ１’およびＲ１’’がＨまたはＯＣＨ３であるときにＲ１がメタ位にあるものも意図される。
上記当該例に従った方法であって、前記タキサンが、以下の式Ｔ１から選択される化合物であるものも意図される：
【０２１８】
【化４８】
2005517032.tif 000049
【０２１９】
［式中、
Ｒ１は、Ｈ、電子求引基、または電子供与基であり、そしてＲ１’およびＲ１’’は、同一または異なっていて、Ｈ、電子求引基、または電子供与基であり；
Ｒ２は、複素環式か、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状エステルまたはエーテルか、あるいは式−ＣＯＮＲ１０Ｒ１１のカルバメート｛式中、Ｒ１０およびＲ１１は、同一または異なっていて、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルか、またはアリールである｝であり；
Ｒ３は、アリールであるか、または１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルであり；
Ｒ４は、−ＯＣ（ＣＨ３）３またはフェニルであり；
Ｒ５は、複素環式か、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状エステルまたはエーテルか、あるいは式−ＣＯＮＲ１０Ｒ１１のカルバメート｛式中、Ｒ１０およびＲ１１は、同一または異なっていて、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルか、またはアリールである｝であり；
Ｒ６は、チオール部分である］。
【０２２０】
上記当該例に従った方法であって、Ｒ１が、Ｆ、ＮＯ２、ＣＮ、Ｃｌ、ＣＨＦ２、ＣＦ３、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、またはＮＲ７Ｒ８｛Ｒ７およびＲ８は、同一または異なっていて、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルか、または１〜１０個の炭素原子を有する単純もしくは置換アリールである｝であるものも意図される。
【０２２１】
上記当該例に従った方法であって、Ｒ７およびＲ８がそれぞれ１〜４個の炭素原子を有するものも意図される。
上記当該例に従った方法であって、Ｒ７およびＲ８が同一であるものも意図される。
【０２２２】
上記当該例に従った方法であって、Ｒ７およびＲ８が同一であるものも意図される。
上記当該例に従った方法であって、Ｒ２が、−ＣＯＣ２Ｈ５、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ３、−ＣＯ−モルホリノ、−ＣＯ−ピペリジノ、−ＣＯ−ピペラジノ、または−ＣＯ−Ｎ−メチルピペラジノであるものも意図される。
【０２２３】
上記当該例に従った方法であって、Ｒ５が、−（ＣＨ２）ｎＳ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＳ、−（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、−ＣＯＮＲ１２（ＣＨ２）ｎＳ、−ＣＯＮＲ１２（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−ＣＯＮＲ１２（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、−ＣＯ−モルホリノ−ＸＳ、−ＣＯ−ピペリジノ−ＸＳ、−ＣＯ−ピペラジノ−ＸＳ、または−ＣＯ−Ｎ−メチルピペラジノ−ＸＳであり；
ｎが、１〜１０の整数であり；そして
Ｒ１２が、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状アルキル、分枝状アルキルもしくは環状アルキルか、１〜１０個の炭素原子を有する単純もしくは置換アリールか、または複素環式であるものも意図される。
【０２２４】
上記当該例に従った方法であって、Ｒ１’およびＲ１’’がＨまたはＯＣＨ３であるときにＲ１がメタ位にあるものも意図される。
上記当該例に従った方法であって、前記チオール含有ＣＣ−１０６５類似体が、式Ａ−３またはＡ−４のＡサブユニットが、式Ｆ−１のＢサブユニットまたは式Ｆ−３もしくはＦ−７のＢ−Ｃサブユニットのいずれかに、Ａサブユニットのピロール部分の第二級アミノ基からＢサブユニットのＣ−２カルボキシル基へのアミド結合を介して共有結合で連結しているものから形成されるシクロプロピルベンゾインドール含有細胞毒性化合物であるものも意図され、ここにおいて、
式Ａ−３およびＡ−４は以下のとおりであり：
【０２２５】
【化４９】
2005517032.tif 000050
【０２２６】
式Ｆ−１、Ｆ−３およびＦ−７は以下のとおりである：
【０２２７】
【化５０】
2005517032.tif 000051
【０２２８】
［式中、
各Ｚは、同一または異なっていてもよく、ＯまたはＮＨであってもよく；そして
式Ｆ−１においてＲ４はチオール部分であり、式Ｆ−３においてＲまたはＲ４の一方はチオール部分であり、式Ｆ−７においてＲ’またはＲ４の一方はチオール部分であり；ＲまたはＲ’がチオール部分であるとき、Ｒ１〜Ｒ６は、同一または異なっていてもよく、水素、Ｃ１−Ｃ３線状アルキル、メトキシ、ヒドロキシル、第一級アミノ、第二級アミノ、第三級アミノ、またはアミドであり；そして、Ｒ４がチオール部分であるとき、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、同一または異なっていてもよく、水素、Ｃ１−Ｃ３線状アルキル、メトキシ、ヒドロキシル、第一級アミノ、第二級アミノ、第三級アミノ、またはアミドであり、Ｒ’は、ＮＨ２、アルキル、Ｏ−アルキル、第一級アミノ、第二級アミノ、第三級アミノ、またはアミドである］。
【０２２９】
上記当該例に従った方法であって、ＲおよびＲ’がチオール部分であり、Ｒ１〜Ｒ６がそれぞれ水素であるものも意図される。
上記当該例に従った方法であって、ＲまたはＲ４が、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）ｌＳ、ＮＨＣＯＣ６Ｈ４（ＣＨ２）ｌＳ、またはＯ（ＣＨ２）ｌＳであり、Ｒ’が、（ＣＨ２）ｌＳ、ＮＨ（ＣＨ２）ｌＳ、またはＯ（ＣＨ２）ｌＳであるもの｛式中、ｌは１〜１０の整数である｝も意図される。
【０２３０】
上記当該例に従った方法であって、ＲまたはＲ４が、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）ｌＳ、ＮＨＣＯＣ６Ｈ４（ＣＨ２）ｌＳ、またはＯ（ＣＨ２）ｌＳであり、Ｒ’が、（ＣＨ２）ｌＳ、ＮＨ（ＣＨ２）ｌＳ、またはＯ（ＣＨ２）ｌＳであるもの｛式中、ｌは１〜１０の整数である｝も意図される。
【０２３１】
上記当該例に従った方法であって、ｌが１であるものも意図される。
上記当該例に従った方法であって、ｌが２であるものも意図される。
上記当該例に従った方法であって、前記チオール含有ドキソルビシン類似体が、以下の式Ｄ２から選択される化合物であるものも意図される：
【０２３２】
【化５１】
2005517032.tif 000052
【０２３３】
［式中、
Ｙは、ＯまたはＮＲ２｛Ｒ２は、１〜５個の炭素原子を有する線状または分枝状アルキルである｝であり；
Ｒは、チオール部分か、Ｈか、または１〜５個の炭素原子を有する線状もしくは分枝状アルキルであり；そして
Ｒ’は、チオール部分、Ｈ、または−ＯＲ１｛Ｒ１は、１〜５個の炭素原子を有する線状または分枝状アルキルである｝であり；
ただし、ＲおよびＲ’は、同時にチオール部分であることはないという条件が付く］。
【０２３４】
上記当該例に従った方法であって、ＮＲ２がＮＣＨ３であるものも意図される。
上記当該例に従った方法であって、Ｒ’が−Ｏであるものも意図される。
上記当該例に従った方法であって、チオール部分が、−（ＣＨ２）ｎＳ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＳ、−（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、または−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ｛式中、ｎは１〜１０の整数である｝であるものも意図される。
【０２３５】
上記当該例に従った方法であって、前記チオール含有ダウノルビシン類似体が、以下の式Ｄ３から選択される化合物であるものも意図される：
【０２３６】
【化５２】
2005517032.tif 000053
【０２３７】
［式中、
Ｙは、ＯまたはＮＲ２｛Ｒ２は、１〜５個の炭素原子を有する線状または分枝状アルキルである｝であり；
Ｒは、チオール部分か、Ｈか、または１〜５個の炭素原子を有する線状もしくは分枝状アルキルであり；そして
Ｒ’は、チオール部分、Ｈ、または−ＯＲ１｛Ｒ１は、１〜５個の炭素原子を有する線状または分枝状アルキルである｝であり；
ただし、ＲおよびＲ’は、同時にチオール部分であることはない］。
【０２３８】
上記当該例に従った方法であって、ＮＲ２がＮＣＨ３であるものも意図される。
上記当該例に従った方法であって、Ｒ’が−Ｏであるものも意図される。
上記当該例に従った方法であって、チオール部分が、−（ＣＨ２）ｎＳ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＳ、−（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、または−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ｛式中、ｎは１〜１０の整数である｝であるものも意図される。
【０２３９】
本発明の第五の態様において、ＰＥＧ連結基を介して細胞結合剤に共有結合している１種以上の細胞毒性薬剤を含んでなる細胞毒性コンジュゲートの製造方法を開示する。本方法は、１種以上の細胞毒性薬剤を細胞結合剤と反応させ（ここにおいて、各細胞毒性薬剤は、末端活性エステルを有するＰＥＧ連結基を持つ）、それにより細胞毒性コンジュゲートを製造することを含んでなる。
【０２４０】
好ましい態様において、ＰＥＧ連結基は１〜２０モノマー単位を有する。同等に好ましい態様において、ＰＥＧ連結基は２１〜４０モノマー単位を有する。さらに同等に好ましい態様において、ＰＥＧ連結基は４１〜１０００モノマー単位を有する。
【０２４１】
具体的に意図されるのは、１〜２０モノマー単位を有するＰＥＧ連結基を介して細胞結合剤に共有結合している１種以上の細胞毒性薬剤を含んでなる細胞毒性コンジュゲートの製造方法であって、前記方法が、
１種以上の細胞毒性薬剤を細胞結合剤と反応させ、
ここにおいて、前記１種以上の細胞毒性薬剤はそれぞれ、末端活性エステルおよび１〜２０モノマー単位を有するＰＥＧ連結基を持ち、そして末端活性エステルおよび１〜２０モノマー単位を有するＰＥＧ連結基を持つ前記細胞毒性薬剤は、式２の化合物：
【０２４２】
【化５３】
2005517032.tif 000054
【０２４３】
［式中、
Ｚは前記細胞毒性薬剤であり；
Ｑは、Ｒ２ＣＯＯ−、Ｒ２Ｒ３ＮＣＯＯ−、Ｒ２ＯＣＯＯ−、Ｒ２Ｏ−、Ｒ２ＣＯＮＲ３−、Ｒ２Ｒ３Ｎ−、Ｒ２ＯＣＯＮＲ３−、またはＳ−であり、
ここにおいて、
Ｒ２はＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−｛Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキルまたは分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよい｝であり、
Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり；
ｎは、０〜２０の整数であり；
ｘは、１または２であり；そして、
Ｙは、Ｎ−スクシンイミジル、Ｎ−スルホスクシンイミジル、Ｎ−フタルイミジル、Ｎ−スルホフタルイミジル、２−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、２，４−ジニトロフェニル、３−スルホニル−４−ニトロフェニル、または３−カルボキシ−４−ニトロフェニルである］
である；
それにより、前記１種以上の細胞毒性薬剤の１種の連結を有する、式３に例示される細胞毒性コンジュゲート
【０２４４】
【化５４】
2005517032.tif 000055
【０２４５】
［式中、
Ｚは前記細胞毒性薬剤であり；
Ｑは、Ｒ２ＣＯＯ−、Ｒ２Ｒ３ＮＣＯＯ−、Ｒ２ＯＣＯＯ−、Ｒ２Ｏ−、Ｒ２ＣＯＮＲ３−、Ｒ２Ｒ３Ｎ−、Ｒ２ＯＣＯＮＲ３−、またはＳ−であり、
ここにおいて、
Ｒ２はＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−｛Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキルまたは分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよい｝であり、
Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり；
ｎは、０〜２０の整数であり；
ｘは、１または２であり；そして、
Ａは前記細胞結合剤である］
を製造する、
ことを含んでなる、前記細胞毒性コンジュゲートの製造方法である。
【０２４６】
２１〜４０モノマー単位を有するＰＥＧ連結基を介して細胞結合剤に共有結合している１種以上の細胞毒性薬剤を含んでなる細胞毒性コンジュゲートの製造方法であって、前記方法が、
１種以上の細胞毒性薬剤を細胞結合剤と反応させ、
ここにおいて、前記１種以上の細胞毒性薬剤はそれぞれ、末端活性エステルおよび２１〜４０モノマー単位を有するＰＥＧ連結基を持ち、そして末端活性エステルおよび２１〜４０モノマー単位を有するＰＥＧ連結基を持つ前記細胞毒性薬剤は、式２の化合物：
【０２４７】
【化５５】
2005517032.tif 000056
【０２４８】
［式中、
Ｚは前記細胞毒性薬剤であり；
Ｑは、Ｒ２ＣＯＯ−、Ｒ２Ｒ３ＮＣＯＯ−、Ｒ２ＯＣＯＯ−、Ｒ２Ｏ−、Ｒ２ＣＯＮＲ３−、Ｒ２Ｒ３Ｎ−、Ｒ２ＯＣＯＮＲ３−、またはＳ−であり、
ここにおいて、
Ｒ２はＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−｛Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキルまたは分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよい｝であり、
Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり；
ｎは、２１〜４０の整数であり；
ｘは、１または２であり；そして、
Ｙは、Ｎ−スクシンイミジル、Ｎ−スルホスクシンイミジル、Ｎ−フタルイミジル、Ｎ−スルホフタルイミジル、２−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、２，４−ジニトロフェニル、３−スルホニル−４−ニトロフェニル、または３−カルボキシ−４−ニトロフェニルである］
である；
それにより、前記１種以上の細胞毒性薬剤の１種の連結を有する、式３に例示される細胞毒性コンジュゲート
【０２４９】
【化５６】
2005517032.tif 000057
【０２５０】
［式中、
Ｚは前記細胞毒性薬剤であり；
Ｑは、Ｒ２ＣＯＯ−、Ｒ２Ｒ３ＮＣＯＯ−、Ｒ２ＯＣＯＯ−、Ｒ２Ｏ−、Ｒ２ＣＯＮＲ３−、Ｒ２Ｒ３Ｎ−、Ｒ２ＯＣＯＮＲ３−、またはＳ−であり、
ここにおいて、
Ｒ２はＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−｛Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキルまたは分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよい｝であり、
Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり；
ｎは、２１〜４０の整数であり；
ｘは、１または２であり；そして、
Ａは前記細胞結合剤である］
を製造する、
ことを含んでなる、前記細胞毒性コンジュゲートの製造方法も具体的に意図される。
【０２５１】
４１〜１０００モノマー単位を有するＰＥＧ連結基を介して細胞結合剤に共有結合している１種以上の細胞毒性薬剤を含んでなる細胞毒性コンジュゲートの製造方法であって、前記方法が、
１種以上の細胞毒性薬剤を細胞結合剤と反応させ、
ここにおいて、前記１種以上の細胞毒性薬剤はそれぞれ、末端活性エステルおよび４１〜１０００モノマー単位を有するＰＥＧ連結基を持ち、そして末端活性エステルおよび４１〜１０００モノマー単位を有するＰＥＧ連結基を持つ前記細胞毒性薬剤は、式２の化合物：
【０２５２】
【化５７】
2005517032.tif 000058
【０２５３】
［式中、
Ｚは前記細胞毒性薬剤であり；
Ｑは、Ｒ２ＣＯＯ−、Ｒ２Ｒ３ＮＣＯＯ−、Ｒ２ＯＣＯＯ−、Ｒ２Ｏ−、Ｒ２ＣＯＮＲ３−、Ｒ２Ｒ３Ｎ−、Ｒ２ＯＣＯＮＲ３−、またはＳ−であり、
ここにおいて、
Ｒ２はＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−｛Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキルまたは分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよい｝であり、
Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり；
ｎは、４１〜１０００の整数であり；
ｘは、１または２であり；そして、
Ｙは、Ｎ−スクシンイミジル、Ｎ−スルホスクシンイミジル、Ｎ−フタルイミジル、Ｎ−スルホフタルイミジル、２−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、２，４−ジニトロフェニル、３−スルホニル−４−ニトロフェニル、または３−カルボキシ−４−ニトロフェニルである］
である；
それにより、前記１種以上の細胞毒性薬剤の１種の連結を有する、式３に例示される細胞毒性コンジュゲート
【０２５４】
【化５８】
2005517032.tif 000059
【０２５５】
［式中、
Ｚは前記細胞毒性薬剤であり；
Ｑは、Ｒ２ＣＯＯ−、Ｒ２Ｒ３ＮＣＯＯ−、Ｒ２ＯＣＯＯ−、Ｒ２Ｏ−、Ｒ２ＣＯＮＲ３−、Ｒ２Ｒ３Ｎ−、Ｒ２ＯＣＯＮＲ３−、またはＳ−であり、
ここにおいて、
Ｒ２はＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−｛Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキルまたは分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよい｝であり、
Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり；
ｎは、４１〜１０００の整数であり；
ｘは、１または２であり；そして、
Ａは前記細胞結合剤である］
を製造する、
ことを含んでなる、前記細胞毒性コンジュゲートの製造方法も具体的に意図される。
【０２５６】
上記当該例のいずれか１種に従った細胞毒性コンジュゲートの製造方法であって、前記細胞毒性薬剤が、チオール含有メイタンシノイド、チオール含有タキサン、チオール含有ＣＣ−１０６５類似体、チオール含有ダウノルビシン類似体およびチオール含有ドキソルビシン類似体、ならびにそれらのチオール含有類似体または誘導体からなる群より選択され、前記細胞結合剤が、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、抗体フラグメント、インターフェロン、リンホカイン、ホルモン、成長因子、ビタミン、および栄養分輸送分子からなる群より選択されるものも意図される。
【０２５７】
上記当該例に従った方法であって、前記チオール含有メイタンシノイドがＣ−３チオール含有メイタンシノイドであるものも意図される。
上記当該例に従った方法であって、前記Ｃ−３チオール含有メイタンシノイドが、Ｎ−メチル−アラニン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノイドであるものも意図される。
【０２５８】
上記当該例に従った方法であって、前記Ｎ−メチル−アラニン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノイドが、以下の式Ｍ１から選択される化合物であるものも意図される：
【０２５９】
【化５９】
2005517032.tif 000060
【０２６０】
［式中、
ｌは、１〜１０の整数であり；そして
ｍａｙは、メイタンシノイドである］。
【０２６１】
上記当該例に従った方法であって、前記Ｎ−メチル−アラニン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノイドが、以下の式Ｍ２から選択される化合物であるものも意図される：
【０２６２】
【化６０】
2005517032.tif 000061
【０２６３】
［式中、
Ｒ１およびＲ２は、Ｈ、ＣＨ３またはＣＨ２ＣＨ３であり、同一または異なっていてもよく；
ｍは、０、１、２または３であり；そして
ｍａｙは、メイタンシノイドである］。
【０２６４】
上記当該例に従った方法であって、前記Ｎ−メチル−アラニン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノイドが、以下の式Ｍ３から選択される化合物であるものも意図される：
【０２６５】
【化６１】
2005517032.tif 000062
【０２６６】
［式中、
ｎは、３〜８の整数であり；そして
ｍａｙは、メイタンシノイドである］。
【０２６７】
上記当該例に従った方法であって、前記Ｎ−メチル−アラニン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノイドが、Ｎ−メチル−アラニン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノールであるものも意図される。
【０２６８】
上記当該例に従った方法であって、前記Ｎ−メチル−アラニン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノールが、デクロロメイタンシノールであるものも意図される。
上記当該例に従った方法であって、前記Ｎ−メチル−アラニン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノールが、以下の式Ｍ６から選択される化合物であるものも意図される：
【０２６９】
【化６２】
2005517032.tif 000063
【０２７０】
［式中、
ｌは、１、２または３であり；
Ｙ０は、ＣｌまたはＨであり；そして
Ｘ３は、ＨまたはＣＨ３である］。
【０２７１】
上記当該例に従った方法であって、前記Ｃ−３チオール含有メイタンシノイドが、Ｎ−メチル−システイン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノイドであるものも意図される。
上記当該例に従った方法であって、前記Ｎ−メチル−システイン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノイドが、以下の式Ｍ４から選択される化合物であるものも意図される：
【０２７２】
【化６３】
2005517032.tif 000064
【０２７３】
［式中、
ｏは、１、２または３であり；
ｐは、０〜１０の整数であり；そして
ｍａｙは、メイタンシノイドである］。
【０２７４】
上記当該例に従った方法であって、前記Ｎ−メチル−システイン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノイドが、Ｎ−メチル−システイン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノールであるものも意図される。
【０２７５】
上記当該例に従った方法であって、前記Ｎ−メチル−システイン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノールが、デクロロメイタンシノールであるものも意図される。
上記当該例に従った方法であって、前記Ｎ−メチル−システイン含有Ｃ−３チオール含有メイタンシノールが、以下の式Ｍ５から選択される化合物であるものも意図される：
【０２７６】
【化６４】
2005517032.tif 000065
【０２７７】
［式中、
ｏは、１、２または３であり；
ｑは、０〜１０の整数であり；
Ｙ０は、ＣｌまたはＨであり；そして
Ｘ３は、ＨまたはＣＨ３である］。
【０２７８】
上記当該例に従った方法であって、前記チオール含有タキサンが、以下の式Ｔ１から選択される化合物であるものも意図される：
【０２７９】
【化６５】
2005517032.tif 000066
【０２８０】
［式中、
Ｒ１は、Ｈ、電子求引基、または電子供与基であり、そしてＲ１’およびＲ１’’は、同一または異なっていて、Ｈ、電子求引基、または電子供与基であり；
Ｒ２は、複素環式か、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状エステルまたはエーテルか、あるいは式−ＣＯＮＲ１０Ｒ１１のカルバメート｛式中、Ｒ１０およびＲ１１は、同一または異なっていて、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルか、またはアリールである｝であり；
Ｒ３は、アリールか、または１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルであり；
Ｒ４は、−ＯＣ（ＣＨ３）３またはフェニルであり；
Ｒ５は、チオール部分であり；そして
Ｒ６は、複素環式か、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状エステルまたはエーテルか、あるいは式−ＣＯＮＲ１０Ｒ１１のカルバメート｛式中、Ｒ１０およびＲ１１は、同一または異なっていて、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルか、またはアリールである｝である］。
【０２８１】
上記当該例に従った方法であって、Ｒ１が、Ｆ、ＮＯ２、ＣＮ、Ｃｌ、ＣＨＦ２、ＣＦ３、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、またはＮＲ７Ｒ８｛Ｒ７およびＲ８は、同一または異なっていて、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルか、または１〜１０個の炭素原子を有する単純もしくは置換アリールである｝であるものも意図される。
【０２８２】
上記当該例に従った方法であって、Ｒ７およびＲ８がそれぞれ１〜４個の炭素原子を有するものも意図される。
上記当該例に従った方法であって、Ｒ７およびＲ８が同一であるものも意図される。
【０２８３】
上記当該例に従った方法であって、Ｒ７およびＲ８が同一であるものも意図される。
上記当該例に従った方法であって、Ｒ２が、−ＣＯＣ２Ｈ５、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ３、−ＣＯ−モルホリノ、−ＣＯ−ピペリジノ、−ＣＯ−ピペラジノ、または−ＣＯ−Ｎ−メチルピペラジノであるものも意図される。
【０２８４】
上記当該例に従った方法であって、Ｒ５が、−（ＣＨ２）ｎＳ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＳ、−（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、−ＣＯＮＲ１２（ＣＨ２）ｎＳ、−ＣＯＮＲ１２（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−ＣＯＮＲ１２（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、−ＣＯ−モルホリノ−ＸＳ、−ＣＯ−ピペリジノ−ＸＳ、−ＣＯ−ピペラジノ−ＸＳ、または−ＣＯ−Ｎ−メチルピペラジノ−ＸＳであり；
ｎが、１〜１０の整数であり；そして
Ｒ１２が、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状アルキル、分枝状アルキルもしくは環状アルキルか、１〜１０個の炭素原子を有する単純もしくは置換アリールか、または複素環式であるものも意図される。
【０２８５】
上記当該例に従った方法であって、Ｒ１’およびＲ１’’がＨまたはＯＣＨ３であるときにＲ１がメタ位にあるものも意図される。
上記当該例に従った方法であって、Ｒ３が−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）２であるものも意図される。
【０２８６】
上記当該例に従った方法であって、前記タキサンが、以下の式Ｔ１から選択される化合物であるものも意図される：
【０２８７】
【化６６】
2005517032.tif 000067
【０２８８】
［式中、
Ｒ１は、Ｈ、電子求引基、または電子供与基であり、そしてＲ１’およびＲ１’’は、同一または異なっていて、Ｈ、電子求引基、または電子供与基であり；
Ｒ２は、チオール部分であり；
Ｒ３は、アリールであるか、または１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルであり；
Ｒ４は、−ＯＣ（ＣＨ３）３またはフェニルであり；
Ｒ５は、複素環式か、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状エステルまたはエーテルか、あるいは式−ＣＯＮＲ１０Ｒ１１のカルバメート｛式中、Ｒ１０およびＲ１１は、同一または異なっていて、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルか、またはアリールである｝であり；そして
Ｒ６は、複素環式か、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状エステルまたはエーテルか、あるいは式−ＣＯＮＲ１０Ｒ１１のカルバメート｛式中、Ｒ１０およびＲ１１は、同一または異なっていて、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルか、またはアリールである｝である］。
【０２８９】
上記当該例に従った方法であって、Ｒ１の少なくとも１種が、Ｆ、ＮＯ２、ＣＮ、Ｃｌ、ＣＨＦ２、ＣＦ３、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、またはＮＲ７Ｒ８｛Ｒ７およびＲ８は、同一または異なっていて、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルか、または１〜１０個の炭素原子を有する単純もしくは置換アリールである｝であるものも意図される。
【０２９０】
上記当該例に従った方法であって、Ｒ７およびＲ８がそれぞれ１〜４個の炭素原子を有するものも意図される。
上記当該例に従った方法であって、Ｒ７およびＲ８が同一であるものも意図される。
【０２９１】
上記当該例に従った方法であって、Ｒ７およびＲ８が同一であるものも意図される。
上記当該例に従った方法であって、Ｒ５が、−（ＣＨ２）ｎＳ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＳ、−（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、−ＣＯＮＲ１２（ＣＨ２）ｎＳ、−ＣＯＮＲ１２（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−ＣＯＮＲ１２（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、−ＣＯ−モルホリノ−ＸＳ、−ＣＯ−ピペリジノ−ＸＳ、−ＣＯ−ピペラジノ−ＸＳ、または−ＣＯ−Ｎ−メチルピペラジノ−ＸＳであり；
ｎが、１〜１０の整数であり；そして
Ｒ１２が、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状アルキル、分枝状アルキルもしくは環状アルキルか、１〜１０個の炭素原子を有する単純もしくは置換アリールか、または複素環式であるものも意図される。
【０２９２】
上記当該例に従った方法であって、Ｒ５が、−ＣＯＣ２Ｈ５、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ３、−ＣＯ−モルホリノ、−ＣＯ−ピペリジノ、−ＣＯ−ピペラジノ、または−ＣＯ−Ｎ−メチルピペラジノであるものも意図される。
【０２９３】
上記当該例に従った方法であって、Ｒ１’およびＲ１’’がＨまたはＯＣＨ３であるときにＲ１がメタ位にあるものも意図される。
上記当該例に従った方法であって、前記タキサンが、以下の式Ｔ１から選択される化合物であるものも意図される：
【０２９４】
【化６７】
2005517032.tif 000068
【０２９５】
［式中、
Ｒ１は、Ｈ、電子求引基、または電子供与基であり、そしてＲ１’およびＲ１’’は、同一または異なっていて、Ｈ、電子求引基、または電子供与基であり；
Ｒ２は、複素環式か、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状エステルまたはエーテルか、あるいは式−ＣＯＮＲ１０Ｒ１１のカルバメート｛式中、Ｒ１０およびＲ１１は、同一または異なっていて、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルか、またはアリールである｝であり；
Ｒ３は、アリールであるか、または１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルであり；
Ｒ４は、−ＯＣ（ＣＨ３）３またはフェニルであり；
Ｒ５は、複素環式か、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状エステルまたはエーテルか、あるいは式−ＣＯＮＲ１０Ｒ１１のカルバメート｛式中、Ｒ１０およびＲ１１は、同一または異なっていて、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルか、またはアリールである｝であり；
Ｒ６は、チオール部分である］。
【０２９６】
上記当該例に従った方法であって、Ｒ１が、Ｆ、ＮＯ２、ＣＮ、Ｃｌ、ＣＨＦ２、ＣＦ３、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、またはＮＲ７Ｒ８｛Ｒ７およびＲ８は、同一または異なっていて、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルか、または１〜１０個の炭素原子を有する単純もしくは置換アリールである｝であるものも意図される。
【０２９７】
上記当該例に従った方法であって、Ｒ７およびＲ８がそれぞれ１〜４個の炭素原子を有するものも意図される。
上記当該例に従った方法であって、Ｒ７およびＲ８が同一であるものも意図される。
【０２９８】
上記当該例に従った方法であって、Ｒ７およびＲ８が同一であるものも意図される。
上記当該例に従った方法であって、Ｒ２が、−ＣＯＣ２Ｈ５、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ３、−ＣＯ−モルホリノ、−ＣＯ−ピペリジノ、−ＣＯ−ピペラジノ、または−ＣＯ−Ｎ−メチルピペラジノであるものも意図される。
【０２９９】
上記当該例に従った方法であって、Ｒ５が、−（ＣＨ２）ｎＳ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＳ、−（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、−ＣＯＮＲ１２（ＣＨ２）ｎＳ、−ＣＯＮＲ１２（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−ＣＯＮＲ１２（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、−ＣＯ−モルホリノ−ＸＳ、−ＣＯ−ピペリジノ−ＸＳ、−ＣＯ−ピペラジノ−ＸＳ、または−ＣＯ−Ｎ−メチルピペラジノ−ＸＳであり；
ｎが、１〜１０の整数であり；そして
Ｒ１２が、Ｈか、１〜１０個の炭素原子を有する線状アルキル、分枝状アルキルもしくは環状アルキルか、１〜１０個の炭素原子を有する単純もしくは置換アリールか、または複素環式であるものも意図される。
【０３００】
上記当該例に従った方法であって、Ｒ１’およびＲ１’’がＨまたはＯＣＨ３であるときにＲ１がメタ位にあるものも意図される。
上記当該例に従った方法であって、前記チオール含有ＣＣ−１０６５類似体が、式Ａ−３またはＡ−４のＡサブユニットが、式Ｆ−１のＢサブユニットまたは式Ｆ−３もしくはＦ−７のＢ−Ｃサブユニットのいずれかに、Ａサブユニットのピロール部分の第二級アミノ基からＢサブユニットのＣ−２カルボキシル基へのアミド結合を介して共有結合で連結しているものから形成されるシクロプロピルベンゾインドール含有細胞毒性化合物であるものも意図され、ここにおいて、
式Ａ−３およびＡ−４は以下のとおりであり：
【０３０１】
【化６８】
2005517032.tif 000069
【０３０２】
式Ｆ−１、Ｆ−３およびＦ−７は以下のとおりである：
【０３０３】
【化６９】
2005517032.tif 000070
【０３０４】
［式中、
各Ｚは、同一または異なっていてもよく、ＯまたはＮＨであってもよく；そして
式Ｆ−１においてＲ４はチオール部分であり、式Ｆ−３においてＲまたはＲ４の一方はチオール部分であり、式Ｆ−７においてＲ’またはＲ４の一方はチオール部分であり；ＲまたはＲ’がチオール部分であるとき、Ｒ１〜Ｒ６は、同一または異なっていてもよく、水素、Ｃ１−Ｃ３線状アルキル、メトキシ、ヒドロキシル、第一級アミノ、第二級アミノ、第三級アミノ、またはアミドであり；そして、Ｒ４がチオール部分であるとき、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、同一または異なっていてもよく、水素、Ｃ１−Ｃ３線状アルキル、メトキシ、ヒドロキシル、第一級アミノ、第二級アミノ、第三級アミノ、またはアミドであり、Ｒ’は、ＮＨ２、アルキル、Ｏ−アルキル、第一級アミノ、第二級アミノ、第三級アミノ、またはアミドである］。
【０３０５】
上記当該例に従った方法であって、ＲおよびＲ’がチオール部分であり、Ｒ１〜Ｒ６がそれぞれ水素であるものも意図される。
上記当該例に従った方法であって、ＲまたはＲ４が、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）ｌＳ、ＮＨＣＯＣ６Ｈ４（ＣＨ２）ｌＳ、またはＯ（ＣＨ２）ｌＳであり、Ｒ’が、（ＣＨ２）ｌＳ、ＮＨ（ＣＨ２）ｌＳ、またはＯ（ＣＨ２）ｌＳであるもの｛式中、ｌは１〜１０の整数である｝も意図される。
【０３０６】
上記当該例に従った方法であって、ＲまたはＲ４が、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）ｌＳ、ＮＨＣＯＣ６Ｈ４（ＣＨ２）ｌＳ、またはＯ（ＣＨ２）ｌＳであり、Ｒ’が、（ＣＨ２）ｌＳ、ＮＨ（ＣＨ２）ｌＳ、またはＯ（ＣＨ２）ｌＳであるもの｛式中、ｌは１〜１０の整数である｝も意図される。
【０３０７】
上記当該例に従った方法であって、ｌが１であるものも意図される。
上記当該例に従った方法であって、ｌが２であるものも意図される。
上記当該例に従った方法であって、前記チオール含有ドキソルビシン類似体が、以下の式Ｄ２から選択される化合物であるものも意図される：
【０３０８】
【化７０】
2005517032.tif 000071
【０３０９】
［式中、
Ｙは、ＯまたはＮＲ２｛Ｒ２は、１〜５個の炭素原子を有する線状または分枝状アルキルである｝であり；
Ｒは、チオール部分か、Ｈか、または１〜５個の炭素原子を有する線状もしくは分枝状アルキルであり；そして
Ｒ’は、チオール部分、Ｈ、または−ＯＲ１｛Ｒ１は、１〜５個の炭素原子を有する線状または分枝状アルキルである｝であり；
ただし、ＲおよびＲ’は、同時にチオール部分であることはないという条件が付く］。
【０３１０】
上記当該例に従った方法であって、ＮＲ２がＮＣＨ３であるものも意図される。
上記当該例に従った方法であって、Ｒ’が−Ｏであるものも意図される。
上記当該例に従った方法であって、チオール部分が、−（ＣＨ２）ｎＳ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＳ、−（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、または−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ｛式中、ｎは１〜１０の整数である｝であるものも意図される。
【０３１１】
上記当該例に従った方法であって、前記チオール含有ダウノルビシン類似体が、以下の式Ｄ３から選択される化合物であるものも意図される：
【０３１２】
【化７１】
2005517032.tif 000072
【０３１３】
［式中、
Ｙは、ＯまたはＮＲ２｛Ｒ２は、１〜５個の炭素原子を有する線状または分枝状アルキルである｝であり；
Ｒは、チオール部分か、Ｈか、または１〜５個の炭素原子を有する線状もしくは分枝状アルキルであり；そして
Ｒ’は、チオール部分、Ｈ、または−ＯＲ１｛Ｒ１は、１〜５個の炭素原子を有する線状または分枝状アルキルである｝であり；
ただし、ＲおよびＲ’は、同時にチオール部分であることはない］。
【０３１４】
上記当該例に従った方法であって、ＮＲ２がＮＣＨ３であるものも意図される。
上記当該例に従った方法であって、Ｒ’が−Ｏであるものも意図される。
上記当該例に従った方法であって、チオール部分が、−（ＣＨ２）ｎＳ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＳ、−（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、または−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ｛式中、ｎは１〜１０の整数である｝であるものも意図される。
【０３１５】
上記当該例に従った方法であって、前記細胞結合剤がモノクローナル抗体であるものも意図される。
上記当該例に従った方法であって、前記細胞結合剤が抗体フラグメントであるものも意図される。
【０３１６】
上記当該例に従った方法であって、前記細胞毒性薬剤がタキサンであり、当該細胞結合剤がモノクローナル抗体であるものも意図される。
上記当該例のいずれか一つに従った方法であって、前記方法がさらに、末端活性エステルを有するＰＥＧ連結基を持つ細胞毒性薬剤を調製する初期工程を含んでなり、前記初期工程が、チオール含有細胞毒性薬剤を、式１のＰＥＧ連結基：
【０３１７】
【化７２】
2005517032.tif 000073
【０３１８】
［式中、
Ｒ’は、２−ピリジル、４−ピリジル、５−ニトロ−２−ピリジル、５−ニトロ−４−ピリジル、２−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、または２，４−ジニトロフェニルであり；
Ｑは、Ｒ２ＣＯＯ−、Ｒ２Ｒ３ＮＣＯＯ−、Ｒ２ＯＣＯＯ−、Ｒ２Ｏ−、Ｒ２ＣＯＮＲ３−、Ｒ２Ｒ３Ｎ−、Ｒ２ＯＣＯＮＲ３−、またはＳ−であり、
ここにおいて、
Ｒ２はＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−｛Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキルまたは分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよい｝であり、
Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり；
ｎは０〜２０の整数であるか、ｎは２１〜４０の整数であるか、またはｎは４１〜１０００の整数であり；
ｘは、１または２であり；そして、
Ｒは、Ｈ、塩を形成するカチオン、またはエステルを形成する化学基である］
と反応させることを含んでなる、前記方法も意図される。
【０３１９】
本発明の最終的態様において、選択した細胞集団を死滅させる方法であって、標的細胞または標的細胞を含有する組織を、有効量の本明細書中に開示している細胞毒性コンジュゲートまたは治療的組成物の１種と接触させることを含んでなる方法を、開示する。
【０３２０】
具体的に意図されるのは、選択した細胞集団を死滅させる方法であって、標的細胞または標的細胞を含有する組織を、有効量の上記当該例の細胞毒性コンジュゲートと接触させることを含んでなる方法である。
【０３２１】
以下、添付の図面について説明する。
図１は、カルボキシ−ＰＥＧリンカーの調製法を示した図である。ポリエチレングリコール４をアクリル酸エステル５またはブロモ酢酸エステル６のいずれかと組み合わせると、ＰＥＧモノエステル７または８がそれぞれ生成する。ＰＥＧ７およびＰＥＧ８の化合物を、式９により表す。図１において、ｎは任意の整数であり；Ｘはエステルを形成する化学基であり；ｘは１または２である。
【０３２２】
図２は、カルボキシ−ＰＥＧリンカーからω−メルカプトカルボキシ−ＰＥＧリンカーへの転化と、これに続くそれらから式１３のヘテロ二官能性ＰＥＧ連結基へのさらなる転化を示した図である。式１３の化合物の末端上の保護的化学基を除去すると、式１４のカルボキシレート化合物を得ることができる。同様に、式１４の化合物の塩を調製すると、式１５の化合物を得ることができる。図２において、ｎは任意の整数であり；ｘは１または２であり；Ｘはエステルを形成する化学基であり；Ｒ’は、２−ピリジル、４−ピリジル、５−ニトロ−２−ピリジル、５−ニトロ−４−ピリジル、２−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、または２，４−ジニトロフェニルであり；そして、Ｍはカチオンであり、塩を形成する。
【０３２３】
図３−Ａ〜３−Ｄは、カルボキシ−ＰＥＧリンカーからω−アミノカルボキシ−ＰＥＧリンカーへの転化と、これに続くそれらから式２０、２３および２６のヘテロ二官能性ＰＥＧ連結基へのさらなる転化を示した図である。図３−Ａは、２種の代替的反応スキームを介した式１９の化合物の形成を示す。その後、式１９の化合物を、図３−Ｂ、３−Ｃおよび３−Ｄにそれぞれ示すような式２０、２３および２６のヘテロ二官能性ＰＥＧ連結基に転化させる。後者３種の図面のそれぞれにおいて、保護的化学基を除去して、式２１、２４および２７のカルボキシレート化合物を得ることも示す。同様に、化合物の塩を生成させて、式２２、２５および２８の化合物を得ることも示す。図３−Ａにおいて、ｎは任意の整数であり；ｘは１または２であり；Ｘはエステルを形成する化学基であり；Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルである。図３−Ｂ、３−Ｃおよび３−Ｄにおいて、Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり；ｎは任意の整数であり；ｘは１または２であり；Ｘはエステルを形成する化学基であり；Ｒ２はＲ’ＳＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−であり；Ｒ’は、２−ピリジル、４−ピリジル、５−ニトロ−２−ピリジル、５−ニトロ−４−ピリジル、２−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、または２，４−ジニトロフェニルであり；Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよく；そして、Ｍは塩を形成するカチオンである。
【０３２４】
図４−Ａ〜４−Ｄは、カルボキシＰＥＧリンカーから式２９、３２、３５および３８のヘテロ二官能性ＰＥＧ連結基への転化を示した図である。図４−Ａは、式２９の化合物を生成させた後、保護的化学基を除去して式３０のカルボキシレート化合物を得、続いて式３０の化合物の塩を生成させて式３１の化合物を得ることを示した図である。同様に、図４−Ｂ〜４−Ｄは、式３２、３５および３８の化合物を生成させた後、保護的化学基を除去して式３３、３６および３９のカルボキシレート化合物を得、続いて式３３、３６および３９の化合物の塩を生成させて、それぞれ式３４、３７および４０の化合物を得ることを示す。図４−Ａ、４−Ｃおよび４−Ｄにおいて、ｎは任意の整数であり；ｘは１または２であり；Ｘはエステルを形成する化学基であり；Ｒ２はＲ’ＳＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−であり；Ｒ’は、２−ピリジル、４−ピリジル、５−ニトロ−２−ピリジル、５−ニトロ−４−ピリジル、２−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、または２，４−ジニトロフェニルであり；Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよく；そして、Ｍは塩を形成するカチオンである。図４−Ｂにおいて、Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり；ｎは任意の整数であり；ｘは１または２であり；Ｘはエステルを形成する化学基であり；Ｒ２はＲ’ＳＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−であり；Ｒ’は、２−ピリジル、４−ピリジル、５−ニトロ−２−ピリジル、５−ニトロ−４−ピリジル、２−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、または２，４−ジニトロフェニルであり；Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよく；そして、Ｍは塩を形成するカチオンである。
【０３２５】
図５は、反応性ＰＥＧ部分を持つ細胞毒性薬剤の調製法を示した図である。ヘテロ二官能性ＰＥＧ連結基１３〜１５および２０〜４０を、式１により表す。式１のヘテロ二官能性ＰＥＧ連結基を、チオール基を持つ細胞毒性薬剤と反応させると、式４１の中間体化合物が生成する。その後、式４１の中間体化合物を、活性末端エステルを持つ式２の化合物に転化させる。Ｒ’は、２−ピリジル、４−ピリジル、５−ニトロ−２−ピリジル、５−ニトロ−４−ピリジル、２−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、または２，４−ジニトロフェニルであり；Ｑは、Ｒ２ＣＯＯ−、Ｒ２Ｒ３ＮＣＯＯ−、Ｒ２ＯＣＯＯ−、Ｒ２Ｏ−、Ｒ２ＣＯＮＲ３−、Ｒ２Ｒ３Ｎ−、Ｒ２ＯＣＯＮＲ３−、またはＳ−｛式中、Ｒ２はＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−であり、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよく、そしてＲ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルである｝であり；ｎは任意の整数であり；ｘは１または２であり；Ｒは、Ｈか、塩を形成するカチオンか、またはエステルを形成する化学基であり；Ｚは細胞毒性薬剤であり；そして、Ｙは、Ｎ−スクシンイミジル、Ｎ−スルホスクシンイミジル、Ｎ−フタルイミジル、Ｎ−スルホフタルイミジル、２−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、２，４−ジニトロフェニル、３−スルホニル−４−ニトロフェニル、または３−カルボキシ−４−ニトロフェニルである。
【０３２６】
図６は、式３の細胞毒性コンジュゲートの調製法を示した図である。式２の反応性ＰＥＧ部分を持つ細胞毒性薬剤を、細胞結合剤と組み合わせると、式３の細胞毒性コンジュゲートが得られる。Ｚは細胞毒性薬剤であり；Ｑは、Ｒ２ＣＯＯ−、Ｒ２Ｒ３ＮＣＯＯ−、Ｒ２ＯＣＯＯ−、Ｒ２Ｏ−、Ｒ２ＣＯＮＲ３−、Ｒ２Ｒ３Ｎ−、Ｒ２ＯＣＯＮＲ３−、またはＳ−｛式中、Ｒ２はＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−であり、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキルまたは分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよく、そしてＲ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルである｝であり；ｎは任意の整数であり；ｘは１または２であり；Ｙは、Ｎ−スクシンイミジル、Ｎ−スルホスクシンイミジル、Ｎ−フタルイミジル、Ｎ−スルホフタルイミジル、２−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、２，４−ジニトロフェニル、３−スルホニル−４−ニトロフェニル、または３−カルボキシ−４−ニトロフェニルであり；そして、Ａは細胞結合剤である。
【０３２７】
図７は、ヘテロ二官能性ＰＥＧ連結基１５−（２−ピリジルジチオ）−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル１３ａの調製と、これに続くその１５−（２−ピリジルジチオ）−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸１４ａへの転化を示した図である。
【０３２８】
図８は、ヘテロ二官能性ＰＥＧ連結基１５−［Ｎ−（３−（２−ピリジルジチオ）−プロピオニル）］−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル２０ａの調製と、これに続くその１５−［Ｎ−（３−（２−ピリジルジチオ）−プロピオニル］−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸２１ａへの転化を示した図である。
【０３２９】
図９は、ヘテロ二官能性ＰＥＧ連結基１５−［Ｏ−｛３−（２−ピリジルジチオ）−プロピオニル｝］−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル２９ａの調製と、これに続くその１５−［Ｏ−（３−（２−ピリジルジチオ）−プロピオネート）−ヒドロキシ］−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸３０ａへの転化を示した図である。
【０３３０】
図１０は、１５−［Ｎ−（３−（Ｌ−ＤＭ１−ジチオ）−プロピオニル］−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル連結基２ａを含んでなる細胞毒性薬剤の調製法を示した図である。
【０３３１】
図１１は、１５−（Ｌ−ＤＭ１−ジチオ）−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル連結基２ｂを含んでなる細胞毒性薬剤の調製法を示した図である。
【０３３２】
図１２は、１５−［Ｎ−（３−（Ｌ−ＤＭ１−ジチオ）−プロピオニル］−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド連結基を用いた細胞毒性コンジュゲート３ａの調製法を示した図である。ｍＡｂは、マウス抗上皮成長因子受容体モノクローナル抗体ＫＳ−７７である。
【０３３３】
図１３は、式Ｔ１のタキサンの主要な４態様の好ましい例を示した図である。
図１４は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの細胞毒性コンジュゲートＫＳ−７７−ＰＥＧ−ＤＭ１のバッチ１および２の細胞毒性ならびに特異性を決定するために実施した解析の結果を示した図である。
【０３３４】
図１５は、非コンジュゲート型ＫＳ−７７抗体および細胞毒性コンジュゲートＫＳ−７７−ＰＥＧ−ＤＭ１の結合親和性を比較するために実施した解析の結果を示した図である。
【０３３５】
発明の詳細な記述
本発明の各態様は、ヘテロ二官能性ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）連結基の使用に基づいている。本明細書中で検討するように、薬物分子へ付着させるための単官能基としてＰＥＧを使用することは、細胞毒性薬物をプロドラッグに転化させ、薬物の半減期および水可溶性を改善するための手段として、既に開示されている。本明細書中に開示するＰＥＧ連結基はヘテロ二官能性であり、リンカーの相対する末端において、一方の末端では官能性スルフヒドリルまたはジスルフィド基を介して、そして他方の末端では活性エステルを介して、細胞毒性薬剤および細胞結合剤に結合する。したがって、本明細書中に開示する新規アプローチは、２種の別個かつ特有の官能基を含有するＰＥＧ連結基を利用して、２種の異なる置換基、具体的には細胞毒性薬物を含む細胞毒性薬剤を、細胞結合剤に連結することである。
【０３３６】
ＰＥＧ連結基
本発明のＰＥＧ連結基は、他の連結基に比べ、（１）ジスルフィド結合を介して非水性溶媒中で細胞毒性薬剤に化学的に接合し、それにより薬剤の疎水性を克服し、薬剤を非水性および水性溶媒の両方に可溶にすることができる点、ならびに（２）該連結基を用いて製造した細胞毒性コンジュゲートは、より高い水への溶解度を有し、それにより患者に投与するための医薬溶液の製剤においてはるかに優れた柔軟性が可能になる点で、二重の利点を有する。
【０３３７】
本発明のＰＥＧ連結基は、以下の式１：
【０３３８】
【化７３】
2005517032.tif 000074
【０３３９】
［式中、
Ｒ’は、２−ピリジル、４−ピリジル、５−ニトロ−２−ピリジル、５−ニトロ−４−ピリジル、２−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、または２，４−ジニトロフェニルであり；
Ｑは、Ｒ２ＣＯＯ−、Ｒ２Ｒ３ＮＣＯＯ−、Ｒ２ＯＣＯＯ−、Ｒ２Ｏ−、Ｒ２ＣＯＮＲ３−、Ｒ２Ｒ３Ｎ−、Ｒ２ＯＣＯＮＲ３−、またはＳ−であり、
ここにおいて、
Ｒ２はＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−｛Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキルまたは分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよい｝であり、
Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり；
ｎは、任意の整数であり；
ｘは、１または２であり；そして、
Ｒは、Ｈ、塩を形成するカチオン、またはエステルを形成する化学基である］
に基づく、ある範囲の異なるサイズの分子を含んでなる。  
【０３４０】
好ましい態様において、ｎは０〜１０００の整数である。より好ましい態様において、ｎは０〜２０、２１〜４０、または４１〜１０００の整数である。
線状アルキルの好ましい例には、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、およびヘキシルが含まれる。
【０３４１】
分枝状アルキルの好ましい例には、イソプロピル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソペンチル、および１−エチル−プロピルが含まれる。
環状アルキルの好ましい例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、およびシクロヘキシルが含まれる。
【０３４２】
各ＰＥＧ連結基は一方の末端に末端反応性ジスルフィド部分を持ち、これは、他方の末端の、末端カルボン酸部分もしくは好ましくはエステルの形にある保護カルボン酸か、またはカルボン酸塩のいずれか一方から、ポリエチレングリコール鎖により分離されている。好ましくは、保護的エステルは、メチル、エチル、フェニル、ベンジル、もしくはｔｅｒｔ−ブチルエステルであるか、または対応するカルボン酸に容易に転化することができる他のエステルである。
【０３４３】
上記のように、好ましい態様では、式１のＰＥＧ連結基においてｎは０〜１０００のいずれかの整数であることができる。当分野の技術者なら、ＰＥＧ連結基を製造するための合成反応のそれぞれに用いるための市販されている形のＰＥＧの選択は、水性溶媒中で最適な溶解度を実現し、それによりｎが０〜２０であるか、ｎが２１〜４０であるか、またはｎが４１〜１０００であるＰＥＧ連結基を製造することに基づき選択することができることを、理解するであろう。
【０３４４】
式１のＰＥＧ連結基の合成を、図１、２、３−Ａ〜３−Ｄ、および４−Ａ〜４−Ｄに示す。簡潔に述べると、ヘテロ二官能性ＰＥＧ連結基は、最初に金属ナトリウムを無水ＴＨＦおよびポリエチレングリコール４（１〜１０００モノマー単位を含んでなる）に撹拌しつつ加えることにより、調製することができる。ナトリウムが完全に溶解した後、アクリル酸エステル、例えばアクリル酸ｔｅｒｔ−ブチル５を加える。その後、溶液を室温で撹拌して終結させ、続いてＨＣｌで中和する。溶媒を好ましくは減圧下で除去し、残渣をブラインに懸濁させた後、酢酸エチルで抽出する。有機層を合わせたものを、ブライン、次に水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した後、溶媒を除去する。得られる無色オイルを減圧乾燥すると、式７の化合物を得る（図１）。
【０３４５】
あるいは、アクリル酸エステルの代わりにブロモ酢酸エステルを用いてもよい。実験計画は、ブロモ酢酸ｔｅｒｔ−ブチル６をアクリル酸ｔｅｒｔ−ブチル５の代わりに加える点を除き、上記と同様である。得られる化合物は、式８の化合物の１種である（図１）。
【０３４６】
式７および式８の化合物は、一緒に式９に包含される（図１）。
その後、式９の化合物を、多くのヘテロ二官能性ＰＥＧ連結基の１種、例えば、図２、３−Ａ〜３−Ｄ、および４−Ａ〜４−Ｄに示す式１３〜１５および２０〜４０の化合物に、転化させてもよい。
【０３４７】
第１群の化合物は式１３〜１５の化合物である（図２）。これらは、式９の化合物を冷却条件下でピリジンと反応させ、続いて三臭化リンを徐々に加えることにより製造される。反応溶液を、そのまま撹拌して終結させる。その後、水を反応容器に注ぎ入れ、有機物を塩化メチレン中に抽出する。有機層を合わせたものを、重炭酸ナトリウム、続いてブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧除去する。残渣を、シリカゲル上でニート(neat)酢酸エチルを溶離剤として用いるなどして精製すると、式１０の化合物が得られる（図２）。
【０３４８】
その後、式１０の化合物を、アンバーライトイオン交換樹脂ＩＲＡ−４００（Ｃｌ−形）を入れたフラスコと、メタノール（ＭｅＯＨ）中に溶解した水硫化ナトリウム水和物（ＮａＳＨ・Ｈ２Ｏ）の溶液とを最初に準備することにより、式１２の化合物に転化させる。撹拌しつつ反応物を放置して懸濁させた後、ＭｅＯＨ中のトリエチルアミン塩酸塩の溶液を加える。その後、ＭｅＯＨ中の式１０の化合物の溶液を滴下して加え、得られる溶液を反応が終結するまでそのまま撹拌する。その後、得られる樹脂を濾過により除去し、塩酸を加える。有機層を分離し、水層を塩化メチレン中に２回抽出する。有機層を合わせたものを無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧除去する。得られる残渣を、シリカゲル上でニート酢酸エチルを溶離剤として用いるなどして精製すると、式１２のチオール化合物が得られる（図２）。
【０３４９】
あるいは、水硫化ナトリウム水和物の代わりに、チオ尿素とこれに続いて水性水酸化ナトリウム（チオ尿素／ＯＨ−）、またはチオール酢酸カリウムとこれに続いて水性水酸化ナトリウム（ＫＳＡｃ／ＯＨ−）を用いてもよい。
【０３５０】
あるいは、式１２のチオール化合物を、式９の化合物を塩化トシル（ＴｓＣｌ）と反応させて式１１の化合物を得ることにより製造してもよい。その後、式１１の化合物を、式１０の化合物から式１２のチオール化合物への転化に関して記載したようなＮａＳＨまたはチオ尿素／ＯＨ−もしくはＫＳＡｃ／ＯＨ−との反応により、式１２のチオール化合物へ転化させることができる。
【０３５１】
エタノール中の得られた式１２のチオール化合物の溶液に、２，２’−ジチオジピリジンおよび氷酢酸を加える。その混合物をアルゴン雰囲気下で終結まで撹拌し、溶媒を蒸発させる。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーなどにより精製すると、式１３の化合物、ヘテロ二官能性ＰＥＧ連結基が得られる（図２）。
【０３５２】
所望の場合、保護的化学基を式１３の化合物から、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）およびトリエチルシラン（Ｅｔ３ＳｉＨ）をジクロロメタン中でそのような化合物に加えることにより、除去してもよい。撹拌して終結させた後、混合物をトルエンで希釈する。その後、混合物を蒸発させ、続いてトルエンと共蒸発させ、減圧乾燥すると、式１４の化合物が得られる（図２）。
【０３５３】
最後に、式１４の化合物の塩を、１当量の塩基、例えば水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウムの添加により生成させると、式１５の化合物を得ることができる（図２）。
式９の化合物を転化させることができるヘテロ二官能性ＰＥＧ連結基の第２群は、図３Ｂ〜３Ｄに示す式２０〜２８の化合物である。これらは、アセトニトリル中の式９の化合物の溶液をトリエチルアミンで処理することにより製造する。その後、アセトニトリル中の塩化トシルの溶液を、約３０分間かけて添加漏斗により滴下して加える。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）分析を用いて、反応の終結を追跡してもよい。形成するトリエチルアミン塩酸塩を濾過により除去し、溶媒を除去する。残渣を、ヘキサン中の２０％酢酸エチルでカラムを充填しニート酢酸エチルで溶離してシリカゲルなどにより精製すると、式１７の化合物が得られる（図３Ａ）。
【０３５４】
あるいは、式９の化合物を、塩化メチレン中でトリフェニルホスフィンおよび四臭化炭素と反応させると、式１０の化合物を得ることができる（図３Ａ）。
その後、式１０および１７の化合物を同様に処理すると、式１８の化合物が得られる。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に、式１０または１７の化合物およびアジ化ナトリウムを撹拌しつつ加える。反応物を加熱し、ＴＬＣにより終結についてモニタリングしてもよい。その後、反応物を冷却し、水を加えて反応を止める。水層を分離し、酢酸エチル中に抽出する。有機層を合わせたものを無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、溶媒を減圧除去する。式１８の粗製アジ化物は、さらに精製することなく用いることができる（図３Ａ）。
【０３５５】
その後、式１８の化合物を、粗製アジ化物をエタノール中に溶解し、炭素上のパラジウム触媒（Ｐｄ／Ｃ）を加えることにより、式１９の化合物に転化させることができる。系を真空下で減圧し、激しく撹拌しつつ風船を介して１ａｔｍの水素ガス下におき、これを４回繰り返して確実に純粋な水素雰囲気にする。その後、反応物を室温で一晩撹拌する。ＴＬＣを用いて反応終結を確認してもよい。粗製反応物を、酢酸エチルですすいでセライトの短いパッドに通す。溶媒を除去し、アミンを、シリカゲル上で塩化メチレン中の１５％メタノールおよび２．５％トリエチルアミンの混合物を溶離剤として用いるなどして精製すると、式１９の所望のアミンが得られる（図３Ａ）。
【０３５６】
その後、式１９のアミンを、いくつかの異なるヘテロ二官能性ＰＥＧ連結基のいずれかに転化させることができる。その一部を、式２０〜６８により表す（図３Ｂ〜３Ｄ）。
式２０〜２２の連結基に転化させる場合、小さなフラスコに、式１９のアミン、３−（２−ピリジルジチオ）−プロピオン酸、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドヒドロクロリド（ＥＤＣ）、４−（ジメチルアミノ）ピリジン（ＤＭＡＰ）、および塩化メチレンを入れる。反応物を室温で一晩撹拌して終結させる。反応物に塩化アンモニウムを用いて反応を止め、酢酸エチル中に抽出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧除去する。残渣を、塩化メチレン中の５％メタノール中でのＴＬＣモニタリングによりアルミナ上でニート酢酸エチルを用いるなどして精製すると、式２０のヘテロ二官能性ＰＥＧ連結基が得られる（図３Ｂ）。
【０３５７】
所望の場合、保護的エステル基を、有機溶媒中の酸、例えば塩化メチレン中のトリフルオロ酢酸または酢酸エチル中の無水塩化水素を加えることにより、式２０の化合物から除去してもよい。その後、混合物をクロマトグラフィーまたは結晶化により精製すると、式２１の化合物が得られる（図３Ｂ）。
【０３５８】
最後に、式２１の化合物の塩を、１当量の塩基、例えば水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウムの添加により生成させると、式２２の化合物を得ることができる（図３Ｂ）。
式２３〜２５の連結基に転化させる場合、式１９のアミンを、例えばアルキルトシレートで処理することにより、アルキル化反応に付す。その後、反応混合物を精製すると、式２３のヘテロ二官能性ＰＥＧ連結基が得られる（図３Ｃ）。
【０３５９】
所望の場合、保護的エステル基を、有機溶媒中の酸、例えば塩化メチレン中のトリフルオロ酢酸または酢酸エチル中の無水塩化水素を加えることにより、式２３の化合物から除去できる。その後、混合物を精製すると、式２４の化合物が得られる（図３Ｃ）。
【０３６０】
最後に、式２４の化合物の塩を、１当量の塩基、例えば水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウムの添加により生成させると、式２５の化合物を得ることができる（図３Ｃ）。
式２６〜２８の連結基に転化させる場合、式１９のアミンをクロロギ酸アルキルで処理する。その後、反応混合物を精製すると、式２６のヘテロ二官能性ＰＥＧ連結基が得られる（図３Ｄ）。
【０３６１】
所望の場合、保護的エステル基を、有機溶媒中の酸、例えば塩化メチレン中のトリフルオロ酢酸または酢酸エチル中の無水塩化水素を加えることにより、式２６の化合物から除去してもよい。その後、混合物を結晶化またはクロマトグラフィーにより精製すると、式２７の化合物が得られる（図３Ｄ）。
【０３６２】
最後に、式２７の化合物の塩を、１当量の塩基、例えば水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウムの添加により生成させると、式２８の化合物を得ることができる（図３Ｄ）。
ヘテロ二官能性ＰＥＧ連結基を式９の化合物から調製して、図４Ａ−〜４Ｄに示した式２９〜４０の化合物を得ることもできる。
【０３６３】
式２９〜３１の化合物を、小さなフラスコに、アルコール９、３−（２−ピリジルジチオ）−プロピオン酸、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドヒドロクロリド（ＥＤＣ）、４−（ジメチルアミノ）ピリジン（ＤＭＡＰ）、および塩化メチレンを入れることにより製造する。反応物を室温で一晩撹拌して終結させる。反応物に塩化アンモニウムを加えて反応を止め、酢酸エチル中に抽出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、溶媒を減圧除去する。残渣を、シリカゲル上でニート酢酸エチルを溶離剤として用いるなどして精製すると、式２９のヘテロ二官能性ＰＥＧ連結基が得られる（図４Ａ）。
【０３６４】
保護的エステル基を式２９の化合物から、塩化メチレン中のそのような化合物を小さなフラスコへ加えることにより、除去することができる。この溶液に、ＴＦＡを反応が終結するまで撹拌しつつ加える。その後、トルエンを反応混合物に加え、溶媒を減圧除去する。残渣を、シリカゲル上でニート酢酸エチルを溶離剤として用いるなどして精製すると、式３０の化合物が得られる（図４Ａ）。
【０３６５】
最後に、式３０の化合物の塩を、１当量の塩基、例えば水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウムの添加により生成させると、式３１の化合物を得ることができる（図４Ａ）。
式３２〜３４の化合物を、小さなフラスコに、トルエンまたは塩化メチレンのような適切な有機溶媒中でアルコール９、ホスゲン、およびアンモニアまたは第一級もしくは第二級アミンを入れることにより製造する。残渣を、シリカゲル上でニート酢酸エチルを溶離剤として用いるなどして精製すると、式３２のヘテロ二官能性ＰＥＧ連結基が得られる（図４Ｂ）。
【０３６６】
有機溶媒中の酸、保護的エステル基を、例えば塩化メチレン中のトリフルオロ酢酸または酢酸エチル中の無水塩化水素との反応により、式３２の化合物から除去することができる。残渣を、シリカゲル上でニート酢酸エチルを溶離剤として用いるなどして精製すると、式３３の化合物が得られる（図４Ｂ）。
【０３６７】
式３３の化合物の塩を、１当量の塩基、例えば水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウムの添加により生成させると、式３４の化合物を得ることができる（図４Ｂ）。
式３５〜３７の化合物を、小さなフラスコに、アルコール９、ホスゲン、およびアルコールを入れることにより製造する。残渣を、シリカゲル上でニート酢酸エチルを溶離剤として用いるなどして精製すると、式３５のヘテロ二官能性ＰＥＧ連結基が得られる（図４Ｃ）。
【０３６８】
保護的エステル基を、有機溶媒中の酸、例えば塩化メチレン中のトリフルオロ酢酸または酢酸エチル中の無水塩化水素との反応により、式３５の化合物から除去することができる。残渣を、シリカゲル上でニート酢酸エチルを溶離剤として用いるなどして精製すると、式３６の化合物が得られる（図４Ｃ）。
【０３６９】
式３６の化合物の塩を、１当量の塩基、例えば水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウムの添加により生成させると、式３７の化合物を得ることができる（図４Ｃ）。
式３８〜４０の化合物を、小さなフラスコに、塩化メチレンのような溶媒中でアルコール９、トリフェニルホスフィン、および四臭化炭素を入れることにより製造する。残渣を、シリカゲル上でニート酢酸エチルを溶離剤として用いるなどして精製すると、式３８のヘテロ二官能性ＰＥＧ連結基が得られる（図４Ｄ）。
【０３７０】
保護的エステル基を、有機溶媒中の酸、例えば塩化メチレン中のトリフルオロ酢酸または酢酸エチル中の無水塩化水素との反応により、式３８の化合物から除去することができる。残渣を、シリカゲル上でニート酢酸エチルを溶離剤として用いるなどして精製すると、式３９の化合物が得られる（図４Ｄ）。
【０３７１】
最後に、式３９の化合物の塩を、１当量の塩基、例えば水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウムの添加により生成させると、式４０の化合物を得ることができる（図４Ｄ）。  
本発明のヘテロ二官能性ＰＥＧ連結基には、式１３〜１５および２０〜４０に包含されるような化合物が含まれる。総合して、これらの化合物を式１により表す。
【０３７２】
反応性ＰＥＧ部分を持つ細胞毒性薬剤
本発明の態様における細胞毒性薬剤はそれぞれ、末端活性エステルを有するＰＥＧ連結基を持つ。
【０３７３】
末端活性エステルを有するＰＥＧ連結基を持つ細胞毒性薬剤（細胞毒性薬剤−ＰＥＧ）を、式２により例示する：
【０３７４】
【化７４】
2005517032.tif 000075
【０３７５】
［式中、
Ｚは細胞毒性薬剤であり；
Ｑは、Ｒ２ＣＯＯ−、Ｒ２Ｒ３ＮＣＯＯ−、Ｒ２ＯＣＯＯ−、Ｒ２Ｏ−、Ｒ２ＣＯＮＲ３−、Ｒ２Ｒ３Ｎ−、Ｒ２ＯＣＯＮＲ３−、またはＳ−であり、
ここにおいて、
Ｒ２はＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−｛Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキルまたは分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよい｝であり、
Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり；
ｎは、任意の整数であり；
ｘは、１または２であり；そして、
Ｙは、Ｎ−スクシンイミジル、Ｎ−スルホスクシンイミジル、Ｎ−フタルイミジル、Ｎ−スルホフタルイミジル、２−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、２，４−ジニトロフェニル、３−スルホニル−４−ニトロフェニル、または３−カルボキシ−４−ニトロフェニルである］。
【０３７６】
好ましい態様において、ｎは０〜１０００の整数である。より好ましい態様において、ｎは０〜２０、２１〜４０、または４１〜１０００の整数である。
線状アルキルの好ましい例には、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、およびヘキシルが含まれる。
【０３７７】
分枝状アルキルの好ましい例には、イソプロピル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソペンチル、および１−エチル−プロピルが含まれる。
環状アルキルの好ましい例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、およびシクロヘキシルが含まれる。
【０３７８】
細胞毒性薬剤は、細胞の死滅をもたらす、または細胞死を誘発するか、細胞の生存力を一定の方式で低下させる、いずれかの化合物であることができ、ここにおいて、各細胞毒性薬剤はチオール部分を含んでなる。好ましい細胞毒性薬剤は、メイタンシノイド、タキサン、ＣＣ−１０６５類似体、ダウノルビシンおよびドキソルビシン類似体、ならびにそれらの類似体または誘導体であり、以下に定義する。
【０３７９】
各連結基において、活性エステルは、水性溶媒または緩衝液中でアミノ基と容易に反応するものである。好ましい態様において、活性エステルは、Ｎ−スクシンイミジル、Ｎ−スルホスクシンイミジル、Ｎ−フタルイミジル、Ｎ−スルホフタルイミジル、２−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、２，４−ジニトロフェニル、３−スルホニル−４−ニトロフェニル、または３−カルボキシ−４−ニトロフェニルエステルである。
【０３８０】
本発明の反応性ＰＥＧ部分を持つ細胞毒性薬剤の合成法を図５に例示する。ＰＥＧ連結基を、反応性ジスルフィド部分を含有する末端において、ジスルフィド交換反応により細胞毒性薬剤に接合させる。得られるジスルフィド結合は、標的細胞中またはその付近で、十分に活性な細胞毒性薬剤を放出する部位として働く。合成は、式１のＰＥＧ連結基と、チオール含有細胞毒性薬剤、例えば、メイタンシノイド、タキサン、ＣＣ−１０６５類似体、ダウノルビシン類似体およびドキソルビシン類似体、またはそれらの類似体もしくは誘導体との反応で開始し、ここにおいて各細胞毒性薬剤はチオール部分を含有する。手短に述べると、細胞毒性薬剤および式１のＰＥＧ連結基をエチルアルコールに溶解する。その後、リン酸カリウム緩衝液を加え、その溶液を、反応が終結するまでアルゴン雰囲気下で撹拌する。その後、反応混合物をＨＰＬＣにより精製することができる。所望の生成物を収集し、減圧下での回転蒸発により溶媒を除去すると、式４１の化合物が得られる（図５）。
【０３８１】
細胞毒性薬剤に接合させるＰＥＧ連結基は、少なくとも２種の形にあることができる。一方は、Ｒが保護的化学基である式１のＰＥＧ連結基である。ポリエチレン鎖の一方の末端に末端反応性ジスルフィド部分が形成する間に、他方の末端のカルボン酸が化学基により保護される。保護的化学基は、リンカーと細胞毒性薬剤との反応中、ＰＥＧ連結基上に残しておくことができる。ＰＥＧ連結基を細胞毒性薬剤と接合させた後、保護的化学基を化学部分と置き換えると、細胞毒性薬剤−ＰＥＧ連結基を細胞結合剤に接合させるのに用いるための活性エステルを生じさせることができる。
【０３８２】
細胞毒性薬剤に接合させることができるＰＥＧ連結基のもう一方の形は、Ｒが水素である式１のＰＥＧ連結基である。この後者の見解では、末端反応性ジスルフィド部分の形成後で（例えば、図４Ａ、式２９の化合物から式３０の化合物への転化参照）、かつＰＥＧ連結基を細胞毒性薬剤と接合させる前に、保護的化学基をＰＥＧ連結基から除去する。上記のように、接合反応の終結後、活性エステルが連結基の自由な末端に形成する。
【０３８３】
ジスルフィド交換反応および式２の化合物の形成が起こった後、Ｒが水素である場合の式１のＰＥＧ連結基を用いると、末端カルボン酸を活性エステルに転化させる。手短に述べると、式４１の化合物を塩化メチレンに溶解し、これにＮ−ヒドロキシスクシンイミドおよび１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドヒドロクロリドを加える。その溶液を反応が終結するまで室温で撹拌し、次にシリカクロマトグラフィーにより精製することができる。溶媒を減圧除去すると、式２の、反応性ＰＥＧ部分を含む細胞毒性薬剤が得られる。得られる式２の化合物は、標準的化学手段、例えば、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、シリカゲルクロマトグラフィー、または結晶化により、精製することができる。
【０３８４】
あるいは、Ｒが保護的化学基である式１のＰＥＧ連結基を用いる場合は、末端保護的化学基を除去して水素で置き換えた後、活性エステルに転化させる。手短に述べると、保護的化学基を酸加水分解により除去し、得られるカルボン酸を通常の方法で活性エステルに転化させる。同様に、得られるものは、式２の、反応性ＰＥＧ部分を含有する細胞毒性薬剤である。
【０３８５】
本発明の細胞毒性薬剤は、その使用において、上記のようにＰＥＧ連結基を介して細胞結合剤に共有結合している細胞毒性薬剤を含んでなる細胞毒性コンジュゲートを形成させることに限定されない。当分野の技術者なら、本発明の反応性ＰＥＧ部分を持つ細胞毒性薬剤を用いることができる数多くの使用があることを、理解するであろう。そのような追加的使用には、例えば親和性樹脂の調製が含まれ、これは、続いて細胞成分、例えば、細胞毒性薬剤と相互作用するタンパクまたは酵素を単離するために、用いることができる。
【０３８６】
細胞毒性コンジュゲート
本発明の細胞毒性コンジュゲートはそれぞれ、ＰＥＧ連結基を介して細胞結合剤に共有結合している１種以上の細胞毒性薬剤を含んでなる。式３は細胞毒性コンジュゲートの態様を例示するもので、上記ＰＥＧ連結基を介した細胞毒性薬剤の１種の連結を例示している：
【０３８７】
【化７５】
2005517032.tif 000076
【０３８８】
［式中、
Ｚは細胞毒性薬剤であり；
Ｑは、Ｒ２ＣＯＯ−、Ｒ２Ｒ３ＮＣＯＯ−、Ｒ２ＯＣＯＯ−、Ｒ２Ｏ−、Ｒ２ＣＯＮＲ３−、Ｒ２Ｒ３Ｎ−、Ｒ２ＯＣＯＮＲ３−、またはＳ−であり、
ここにおいて、
Ｒ２はＳＣＲ４Ｒ５Ｒ６−｛Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、Ｈ、線状アルキル、環状アルキルまたは分枝状アルキルであり、同一または異なっていてもよい｝であり、
Ｒ３は、Ｈ、または線状アルキル、環状アルキル、または分枝状アルキルであり、
ｎは、任意の整数であり；
ｘは、１または２であり；そして、
Ａは細胞結合剤である］。
【０３８９】
好ましい態様において、ｎは０〜１０００の整数である。より好ましい態様において、ｎは０〜２０、２１〜４０、または４１〜１０００の整数である。
線状アルキルの好ましい例には、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、およびヘキシルが含まれる。
【０３９０】
分枝状アルキルの好ましい例には、イソプロピル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソペンチル、および１−エチル−プロピルが含まれる。
環状アルキルの好ましい例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、およびシクロヘキシルが含まれる。
【０３９１】
２種以上の細胞毒性薬剤が、ＰＥＧ連結基を介して連結して、各細胞結合剤分子に接合することができる。
細胞毒性薬剤は、細胞の死滅をもたらす、または細胞死を誘発するか、細胞の生存力を一定の方式で低下させる、いずれかの化合物であることができ、ここにおいて、各細胞毒性薬剤はチオール部分を含んでなる。好ましい細胞毒性薬剤は、メイタンシノイド、タキサン、ＣＣ−１０６５類似体、ダウノルビシン類似体およびドキソルビシン類似体、ならびにそれらの類似体または誘導体であり、以下に定義する。細胞結合剤は、特異的または非特異的のいずれかの様式で、細胞に結合することができる任意の化合物であることができる。好ましくは、細胞結合剤は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、抗体フラグメント、インターフェロン、リンホカイン、ホルモン、成長因子、ビタミン、または栄養分輸送分子であり、以下でさらに検討するとおりである。
【０３９２】
本発明の代表的細胞毒性コンジュゲートの合成法を図６に例示する。合成は、反応性ＰＥＧ部分を持つ１種以上の細胞毒性薬剤２と細胞結合剤との反応で開始し、これにより、各反応性ＰＥＧ部分の末端活性エステルが細胞結合剤のアミノ酸残基により置き換えられて、ＰＥＧ連結基を介して細胞結合剤に共有結合している１種以上の細胞毒性薬剤を含んでなる細胞毒性コンジュゲートが得られる。例えば、式２の化合物を無水エタノールに溶解して、保存濃縮物を得る。その後、ＮａＣｌおよびエチレンジアミン四酢酸を含有するリン酸カリウム緩衝液中の、モノクローナル抗体などの細胞結合剤の溶液を、モル過剰の式２の化合物と処理する。反応混合物を外界温度で約２時間インキュベートする。その後、細胞毒性コンジュゲートを、あらかじめリン酸緩衝生理食塩水で平衡化しておいたセファデックスＧ２５カラムでのサイズ排除クロマトグラフィーにより精製すると、未反応化合物２およびその他の低分子量材料を除去することができる。
【０３９３】
細胞結合剤は、各細胞毒性薬剤−ＰＥＧと接合させる前に、どのような様式でも修飾する必要がないことは重要である。細胞結合剤は、アミノ基を保有することのみが必要である。
【０３９４】
細胞毒性コンジュゲートは、セファデックスＧ２５もしくはセファクリルＳ３０００カラムでのゲル濾過のような標準的生化学手段により、または先に記載したような透析により、精製することができる。
【０３９５】
メイタンシノイド
本発明に用いることができるメイタンシノイドは当業界で周知であり、公知の方法に従って天然源から単離するか、公知の方法に従って合成的に調製することができる。
【０３９６】
適切なメイタンシノイドの例には、メイタンシノールおよびメイタンシノール類似体が含まれる。適切なメイタンシノール類似体の例には、修飾された芳香環を有するものおよび他の位置に修飾を有するものが含まれる。
【０３９７】
修飾された芳香環を有するメイタンシノールの適切な類似体の具体例には、
（１）Ｃ−１９−デクロロ（米国特許第４２５６７４６号）（アンサマイトシンＰ２のＬＡＨ還元により調製される）；
（２）Ｃ−２０−ヒドロキシ（またはＣ−２０−デメチル）＋／−Ｃ−１９−デクロロ（米国特許第４３６１６５０号および第４３０７０１６号）（ＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓもしくはＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓを用いた脱メチル化またはＬＡＨを用いた脱塩素化により調製される）；および
（３）Ｃ−２０−デメトキシ、Ｃ−２０−アシルオキシ（−ＯＣＯＲ）、＋／−デクロロ（米国特許第４２９４７５７号）（塩化アシルを用いたアシル化により調製される）、
が含まれる。
【０３９８】
他の位置の修飾を有するメイタンシノールの適切な類似体の具体例には、
（１）Ｃ−９−ＳＨ（米国特許第４４２４２１９号）（メイタンシノールとＨ２ＳまたはＰ２Ｓ５の反応により調製される）；
（２）Ｃ−１４−アルコキシメチル（デメトキシ／ＣＨ２ＯＲ）（米国特許第４３３１５９８号）；
（３）Ｃ−１４−ヒドロキシメチルまたはアシルオキシメチル（ＣＨ２ＯＨまたはＣＨ２ＯＡｃ）（米国特許第４４５０２５４号）（Ｎｏｃａｒｄｉａから調製される）；
（４）Ｃ−１５−ヒドロキシ／アシルオキシ（米国特許第４３６４８６６号）（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓによるメイタンシノールの変換により調製される）；
（５）Ｃ−１５−メトキシ（米国特許第４３１３９４６号および第４３１５９２９号）（Ｔｒｅｗｉａ  ｎｕｄｉｆｌｏｒａから単離される）；
（６）Ｃ−１８−Ｎ−デメチル（米国特許第４３６２６６３号および第４３２２３４８号）（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓによるメイタンシノールの脱メチル化により調製される）；および
（７）４，５−デオキシ（米国特許第４３７１５３３号）（メイタンシノールの三塩化チタン／ＬＡＨ還元により調製される）、
が含まれる。
【０３９９】
本発明に用いられるメイタンシノイドはチオール部分を含有する。そのようなチオール含有メイタンシノイドは、メイタンシノイドのチオールとＰＥＧ連結基のジスルフィド置換基との間のジスルフィド交換により、ＰＥＧ連結基に共有結合している。本発明に用いられるチオール含有メイタンシノイドの合成法は、米国特許第５２０８０２０号および第５４１６０６４号に十分に開示されており、それらの全体を参照として本明細書煮含める。
【０４００】
チオール含有メイタンシノイドへのＰＥＧ連結基の付加は、２カ所以上の位置で起こることができる。例えば、Ｃ−３位、Ｃ−１４位、Ｃ−１５位またはＣ−２０位にチオール部分を有するメイタンシノイドは、すべて有用であると予期される。Ｃ−３位が好ましく、メイタンシノールのＣ−３位が特に好ましい。Ｎ−メチル−アラニン含有Ｃ−３チオール部分メイタンシノイド、およびＮ−メチル−システイン含有Ｃ−３チオール部分メイタンシノイド、ならびにそれぞれの類似体も好ましい。
【０４０１】
本発明に有用なＮ−メチル−アラニン含有Ｃ−３チオール部分メイタンシノイド誘導体の具体例は、式Ｍ１、Ｍ２、Ｍ３およびＭ６により表される。
【０４０２】
【化７６】
2005517032.tif 000077
【０４０３】
［式中、
ｌは、１〜１０の整数であり；そして
ｍａｙは、メイタンシノイドである］。
【０４０４】
【化７７】
2005517032.tif 000078
【０４０５】
［式中、
Ｒ１およびＲ２は、Ｈ、ＣＨ３またはＣＨ２ＣＨ３であり、同一または異なっていてもよく；
ｍは、０、１、２または３であり；そして
ｍａｙは、メイタンシノイドである］。
【０４０６】
【化７８】
2005517032.tif 000079
【０４０７】
［式中、
ｎは、３〜８の整数であり；そして
ｍａｙは、メイタンシノイドである］。
【０４０８】
【化７９】
2005517032.tif 000080
【０４０９】
［式中、
ｌは、１、２または３であり；
Ｙ０は、ＣｌまたはＨであり；そして
Ｘ３は、ＨまたはＣＨ３である］。
【０４１０】
本発明に有用なＮ−メチル−システイン含有Ｃ−３チオール部分メイタンシノイド誘導体の具体例は、式Ｍ４およびＭ５により表される。
【０４１１】
【化８０】
2005517032.tif 000081
【０４１２】
［式中、
ｏは、１、２または３であり；
ｐは、０〜１０の整数であり；そして
ｍａｙは、メイタンシノイドである］。
【０４１３】
【化８１】
2005517032.tif 000082
【０４１４】
［式中、
ｏは、１、２または３であり；
ｑは、０〜１０の整数であり；
Ｙ０は、ＣｌまたはＨであり；そして
Ｘ３は、ＨまたはＣＨ３である］。
【０４１５】
タキサン
本発明に従った、反応性ＰＥＧ部分を持つ細胞毒性薬剤および細胞毒性コンジュゲートを含んでなる細胞毒性薬剤は、タキサンであることもできる。
【０４１６】
本発明に用いることができるタキサンは、チオール部分を含有するように修飾することができ、そこに、ＰＥＧ連結基が、チオールとＰＥＧ連結基のジスルフィド置換基との間のジスルフィド交換により共有結合する。
【０４１７】
本発明に有用なタキサンは、以下に示す式Ｔ１を有する：
【０４１８】
【化８２】
2005517032.tif 000083
【０４１９】
これら新規タキサンは、主要な４態様、すなわち化合物（１）、（２）、（３）および（４）のタキサンに分けることができる。４態様の好ましい例を図１３に示す。
態様（１）〜（４）において、Ｒ１は、Ｆ、ＮＯ２、ＣＮ、Ｃｌ、ＣＨＦ２もしくはＣＦ３のような電子求引基か、または−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、ＮＲ７Ｒ８、−ＯＲ９｛式中、Ｒ７およびＲ８は、同一または異なっていて、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキル基か、または１〜１０個の炭素原子を有する単純もしくは置換アリールである｝のような電子供与基である。好ましくは、Ｒ７およびＲ８に関する炭素原子の数は１〜４個である。また、好ましくは、Ｒ７およびＲ８は同一である。好ましい−ＮＲ７Ｒ８基の例には、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、ジプロピルアミノ、およびジブチルアミノが含まれ、ここにおいてブチル部分は、第一級、第二級、第三級またはイソブチルのいずれかである。Ｒ９は、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状または環状アルキルである。
【０４２０】
Ｒ１は、Ｈであることもできる。
Ｒ１’およびＲ１’’は、同一または異なっていて、Ｈ、電子求引基、または電子供与基である。
【０４２１】
Ｒ１は、好ましくはＯＣＨ３、Ｆ、ＮＯ２またはＣＦ３である。
好ましくは、Ｒ１はメタ位にあり、Ｒ１’およびＲ１’’は、ＨまたはＯＣＨ３である。
【０４２２】
態様（１）、（２）および（４）において、Ｒ２は、複素環式か、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状エステルか、複素環式か、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状エーテルか、または式−ＣＯＮＲ１０Ｒ１１のカルバメート｛式中、Ｒ１０およびＲ１１は、同一または異なっていて、Ｈか、１〜１０個の原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキルか、または１〜１０個の炭素原子を有する単純アリールもしくは置換アリールである｝である。エステルの場合、好ましい例には、−ＣＯＣＨ２ＣＨ３および−ＣＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３が含まれる。エーテルの場合、好ましい例には、−ＣＨ２ＣＨ３および−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３が含まれる。カルバメートの場合、好ましい例には、−ＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ３、−ＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＯ−モルホリノ、−ＣＯ−ピペラジノ、−ＣＯ−ピペリジノ、または−ＣＯ−Ｎ−メチルピペラジノが含まれる。
【０４２３】
態様（３）において、Ｒ２はチオール含有部分である。
態様（１）、（３）および（４）において、Ｒ３は、アリールであるか、または１〜１０個の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキル、好ましくは−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である。
【０４２４】
態様（２）において、Ｒ３は−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）２である。
すべての態様において、Ｒ４は、−ＯＣ（ＣＨ３）３または−Ｃ６Ｈ５である。
態様（１）および（２）において、Ｒ５はチオール含有部分であり、Ｒ６はＨであるか、態様（１）、（２）および（４）の場合のＲ２に関する上記と同じ定義を有する。
【０４２５】
態様（３）において、Ｒ５はＨであるか、態様（１）、（２）および（４）の場合のＲ２に関する上記と同じ定義を有する。
態様（３）において、Ｒ６はＨであるか、態様（１）、（２）および（４）の場合のＲ２に関する上記と同じ定義を有する。
【０４２６】
態様（４）において、Ｒ５はＨであるか、態様（１）、（２）および（４）の場合のＲ２に関する上記と同じ定義を有し、Ｒ６はチオール部分である。
チオール含有部分の導入に好ましい位置はＲ２およびＲ５であり、Ｒ２がもっとも好ましい。
【０４２７】
チオール部分を備える側鎖は、線状もしくは分枝状の芳香族または複素環式であることができる。当分野の技術者なら、適切な側鎖を容易に特定することができる。チオール部分の具体例には、−（ＣＨ２）ｎＳ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＳ、−（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、−ＣＯＮＲ１２（ＣＨ２）ｎＳ、−ＣＯＮＲ１２（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、または−ＣＯＮＲ１２（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、−ＣＯ−モルホリノ−ＸＳ、−ＣＯ−ピペラジノ−ＸＳ、−ＣＯ−ピペリジノ−ＸＳ、および−ＣＯ−Ｎ−メチルピペラジノ−ＸＳ｛式中、Ｘは、１〜１０個の炭素原子を有する線状アルキルまたは分枝状アルキルである｝が含まれる。
【０４２８】
Ｒ１２は、１〜１０個の炭素原子を有する線状アルキル、分枝状アルキルもしくは環状アルキルか、１〜１０個の炭素原子を有する単純アリールもしくは置換アリールか、または複素環式であり、Ｈであることができ、そして
ｎは、０〜１０の整数である。
【０４２９】
線状アルキルの例には、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、およびヘキシルが含まれる。
分枝状アルキルの例には、イソプロピル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソペンチル、および１−エチル−プロピルが含まれる。
【０４３０】
環状アルキルの例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、およびシクロヘキシルが含まれる。
単純アリールの例には、フェニルおよびナフチルが含まれる。
【０４３１】
置換アリールの例には、上記のようなアリールであって、アルキル基か、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆなどのハロゲンか、またはニトロ基、アミノ基、スルホン酸基、カルボン酸基、ヒドロキシ基、もしくはアルコキシ基で置換されているものが含まれる。
【０４３２】
複素環の例は、ヘテロ原子がＯ、ＮおよびＳから選択される化合物であり、モルホリノ、ピペリジノ、ピペラジノ、Ｎ−メチルピペラジノ、ピロリル、ピリジル、フリル、およびチオフェンを含む。
【０４３３】
チオール部分を有するタキサンは、公知の方法に従って合成することができる。合成のための出発物質は市販の１０−デアセチルバッカチン(deacetylbaccatin)ＩＩＩである。さまざまな置換基を導入するための化学が、いくつかの刊行物（Ｏｊｉｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３９：３８８９−３８９６（１９９６）；Ｏｊｉｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４０：２６７−２７８（１９９７）；Ｏｊｉｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，９６：４２５６−４２６１（１９９９）；米国特許第５４７５０１１号および米国特許第５８１１４５２号）に記載されている。
【０４３４】
フェニル環上の置換基Ｒ１および置換基Ｒ１の位置は、所望の毒性の化合物が得られるまで変動させることができる。さらに、フェニル環上の置換度を変動させて、所望の毒性を実現することができる。すなわち、フェニル環は、１個以上の置換基を有することができ（例えば、フェニル環の一置換、二置換、または三置換）、これは、所望の毒性を実現するための他の手段を提供する。当業者なら、Ｒ１に適した化学部分およびＲ１に適した位置を、日常的実験を用いるだけで決定することができる。
【０４３５】
例えば、メタ位における電子求引基は細胞毒性の効力を増大させるが、パラ位での置換は、親化合物のタキサンと比較して、効力を増大させるとは予期されない。典型的には、異なる位置（オルト、メタおよびパラ）に置換基を有する少数の代表的なタキサンを最初に調製し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの細胞毒性について評価する。
【０４３６】
チオール部分は、ヒドロキシル基が既に存在している位置の一つに導入することができる。さまざまなヒドロキシル基を保護する一方、所望の１個を反応させるための化学は、これまでに説明されている（例えば、上記参考文献参照）。自由なヒドロキシル基を、ジスルフィド含有エーテル、ジスルフィド含有エステル、またはジスルフィド含有カルバメートに単に転化させることにより、置換基を導入する。この転換は、以下のように実現される。所望のヒドロキシル基を、上記Ｏｊｉｍａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）に記載されているように、テトラヒドロフラン中の市販試薬リチウムヘキサメチルジシラザン（１．２当量）と−４０℃で処理することにより脱プロトン化する。その後、得られるアルコキシドアニオンを、過剰のジハロ化合物、例えばジブロモエタンと反応させると、ハロエーテルが得られる。ハロゲンをチオールで置換すると（チオ酢酸カリウムとの反応および弱塩基またはヒドロキシルアミンとの処理により）、所望のチオール含有タキサンが得られる。
【０４３７】
あるいは、所望のヒドロキシル基を、ハロゲン化アシル、例えば３−ブロモプロピオニルクロリドとの反応により直接エステル化すると、ブロモエステルを得ることができる。チオ酢酸カリウムとの処理によりブロモ基を置換し、上記のようにさらに処理すると、チオール含有タキサンエステルが得られる。
【０４３８】
ＣＣ−１０６５類似体
本発明に従った、反応性ＰＥＧ部分を持つ細胞毒性薬剤および細胞毒性コンジュゲートを含んでなる細胞毒性薬剤は、ＣＣ−１０６５類似体であることもできる。
【０４３９】
本発明に従って、ＣＣ−１０６５類似体は、ＡサブユニットおよびＢまたはＢ−Ｃサブユニットを含有しなければならない。Ａサブユニットは、天然の閉じたシクロプロピル形もしくは開いたクロロメチル形におけるＣＰＩ（シクロプロパピロロインドール単位: cyclopropapyrroloindol unit）であるか、または閉じたシクロプロピル形もしくは開いたクロロメチル形にあるＣＢＩ単位（シクロプロピルベンゾインドール単位: cyclopropylbenzindol unit）である。ＣＣ−１０６５類似体のＢおよびＣサブユニットは非常に似ており、２−カルボキシ−インドールおよび２−カルボキシ−ベンゾフラン誘導体である。活性であるために、ＣＣ−１０６５の類似体は、少なくとも１種のそのような２−カルボキシ−インドールサブユニットまたは２−カルボキシ−ベンゾフランサブユニットを必要とするが、２種のサブユニット（すなわちＢ−Ｃ）は、その類似体の効力をより高くする。天然のＣＣ−１０６５およびその公表されている類似体（例えば、Ｗａｒｐｅｈｏｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３１：５９０−６０３（１９８８））から明らかなように、ＢおよびＣサブユニットは、インドールまたはベンゾフラン環上の異なる位置に異なる置換基を備えることもできる。
【０４４０】
ＣＣ−１０６５類似体をＰＥＧ連結基に接合させるために、その類似体を最初に、チオール部分を含むように修飾する。その後、ＰＥＧ連結基を、チオールとＰＥＧ連結基のジスルフィド置換基との間のジスルフィド交換によりＣＣ−１０６５類似体に共有結合させることができる。
【０４４１】
チオール部分を含有するＣＣ−１０６５類似体は、以下の式Ａ−１｛ＣＰＩ（シクロプロピル形）｝、Ａ−２｛ＣＰＩ（クロロメチル形）｝、Ａ−３｛ＣＢＩ（シクロプロピル形）｝、およびＡ−４｛ＣＢＩ（クロロメチル形）｝のＡサブユニットが、Ａサブユニットのピロール部分の第二級アミノ基から式Ｆ−１のＢサブユニットまたは式Ｆ−３もしくはＦ−７のＢ−ＣサブユニットのいずれかのＣ−２カルボキシ基へのアミド結合を介して共有結合で連結している任意のものであることができる。
【０４４２】
Ａサブユニット
【０４４３】
【化８３】
2005517032.tif 000084
【０４４４】
【化８４】
2005517032.tif 000085
【０４４５】
Ｂおよび共有結合しているＢとＣのサブユニット
【０４４６】
【化８５】
2005517032.tif 000086
【０４４７】
［式中、
各Ｚは、同一または異なっていてもよく、ＯまたはＮＨであることができ；そして
式Ｆ−１においてＲ４はチオール部分であり、式Ｆ−３においてＲまたはＲ４の一方はチオール部分であり、式Ｆ−７においてＲ’またはＲ４の一方はチオール含有部分であり；ＲまたはＲ’がチオール部分であるとき、Ｒ１〜Ｒ６は、同一または異なっていてもよく、水素、Ｃ１−Ｃ３線状アルキル、メトキシ、ヒドロキシル、第一級アミノ、第二級アミノ、第三級アミノ、またはアミドであり；そして、Ｒ４がチオール部分であるとき、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、同一または異なっていてもよく、水素、Ｃ１−Ｃ３線状アルキル、メトキシ、ヒドロキシル、第一級アミノ、第二級アミノ、第三級アミノ、またはアミドであり、Ｒ’は、ＮＨ２、アルキル、Ｏ−アルキル、第一級アミノ、第二級アミノ、第三級アミノ、またはアミドである］。
【０４４８】
好ましい態様において、ＲおよびＲ’はチオール部分であり、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ水素である。その他の好ましい態様において、ＲおよびＲ’はチオール部分であり、Ｒ１〜Ｒ６はそれぞれ水素である。
【０４４９】
特に好ましい態様において、ＲまたはＲ４は、−ＮＨＣＯ（ＣＨ２）ｌＳ、−ＮＨＣＯＣ６Ｈ４（ＣＨ２）ｌＳ、または−Ｏ（ＣＨ２）ｌＳであり、Ｒ’は、−（ＣＨ２）ｌＳ、−ＮＨ（ＣＨ２）ｌＳ、またはＯ（ＣＨ２）ｌＳである｛式中、ｌは１〜１０の整数である｝。
【０４５０】
第一級アミンの例には、メチルアミン、エチルアミン、およびイソプロピルアミンが含まれる。
第二級アミンの例には、ジメチルアミン、ジエチルアミン、およびエチルプロピルアミンが含まれる。
【０４５１】
第三級アミンの例には、トリメチルアミン、トリエチルアミン、およびエチル−イソプロピル−メチルアミンが含まれる。
アミド基の例には、Ｎ−メチルアセトアミド、Ｎ−メチル−プロピオンアミド、Ｎ−アセトアミド、およびＮ−プロピオンアミドが含まれる。
【０４５２】
Ｒ’により表されるアルキルの例には、Ｒ’が連結基でない場合、Ｃ１−Ｃ５線状または分枝状アルキルが含まれる。
Ｒ’により表されるＯ−アルキルの例には、Ｒ’が連結基でない場合、アルキル部分がＣ１−Ｃ５線状または分枝状アルキルである化合物が含まれる。
【０４５３】
上記ＣＣ−１０６５類似体は天然源から単離することができ、続く修飾、合成的調製、または両者の組合わせを包含するその調製方法は、十分に説明されている（例えば、米国特許第５４７５０９２号、第５５８５４９９号、および第５８４６５４５号参照）。
【０４５４】
ダウノルビシン／ドキソルビシン類似体
本発明に従った、反応性ＰＥＧ部分を持つ細胞毒性薬剤および細胞毒性コンジュゲートを含んでなる細胞毒性薬剤は、ダウノルビシン類似体またはドキソルビシン類似体であることもできる。
【０４５５】
本発明のダウノルビシンおよびドキソルビシン類似体は、チオール部分を含むように修飾することができる。その後、ＰＥＧ連結基を、チオールとＰＥＧ連結基のジスルフィド置換基との間のジスルフィド交換により、ダウノルビシン／ドキソルビシン類似体に共有結合させることができる。
【０４５６】
本発明に有用な修飾されたドキソルビシン／ダウノルビシン類似体は、以下に示す式Ｄ１を有する：
【０４５７】
【化８６】
2005517032.tif 000087
【０４５８】
［式中、
Ｘは、ＨまたはＯＨであり；
Ｙは、ＯまたはＮＲ２｛式中、Ｒ２は、１〜５個の炭素原子を有する線状または分枝状アルキルである｝であり；
Ｒは、チオール部分か、Ｈか、または１〜５個の炭素原子を有する線状もしくは分枝状アルキルであり；そして
Ｒ’は、チオール部分、Ｈ、または−ＯＲ１｛式中、Ｒ１は、１〜５個の炭素原子を有する線状または分枝状アルキルである｝であり；
ただし、ＲおよびＲ’は、同時にチオール部分であることはないという条件が付く］。
【０４５９】
好ましい態様において、ＮＲ２はＮＣＨ３である。その他の好ましい態様において、Ｒ’は−Ｏである。
特に好ましい態様において、チオール部分は、−（ＣＨ２）ｎＳ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＳ、−（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｓ、−（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ、または−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣ（ＣＨ３）２Ｓ｛式中、ｎは１〜１０の整数である｝である。
【０４６０】
Ｒ、Ｒ１およびＲ２で表される１〜５個の炭素原子を有する線状または分枝状アルキルの例には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、および８種の異性体配置のいずれかにあるペンチルが含まれる。
【０４６１】
Ｒ１およびＲ２は、好ましくはメチルである。
線状アルキルの例には、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、およびヘキシルが含まれる。
【０４６２】
分枝状アルキルの例には、イソプロピル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソペンチル、および１−エチル−プロピルが含まれる。
ＲまたはＲ’のいずれかが連結基でない場合、その位置における置換基を、所望の毒性の化合物が得られるまで変動させることができる。７２時間の暴露時間で、培養がん細胞に対するＩＣ５０を１×１０−１２〜１×１０−９Ｍの範囲に有することを、強い毒性と定義する。置換基の代表例は、上記のようにＨ、アルキル、およびＯ−アルキルである。当業者なら、日常的実験を用いるだけで、ＲおよびＲ’に適した化学部分を決定することができる。
【０４６３】
例えば、メチルおよびメトキシ置換基は細胞毒性の効力を増大させると予期されるが、水素は、親化合物のドキソルビシンまたはダウノルビシン類似体と比較して、効力を増大させるとは予期されない。典型的には、異なる位置に置換基を有する少数の代表的な修飾ドキソルビシンまたはダウノルビシン類似体を最初に調製し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの細胞毒性について評価する。
【０４６４】
本発明の修飾されたドキソルビシン／ダウノルビシン類似体は、チオール部分を有し、ＷＯ０１／３８３１８に記載されている。修飾されたドキソルビシン／ダウノルビシン類似体は、公知の方法に従って合成することができる（例えば、米国特許第５１４６０６４号参照）。
【０４６５】
類似体および誘導体
細胞毒性薬剤の分野の当業者なら、本明細書中に記載した細胞毒性薬剤のそれぞれを、得られる化合物がなお出発化合物の特異性および／または活性を維持するように修飾することができることを、容易に理解するであろう。当業者なら、これらの化合物の多くを、本明細書中に記載した細胞毒性薬剤の代わりに用いることができることも、理解するであろう。したがって、本発明の細胞毒性薬剤には、本明細書中に記載した化合物の類似体および誘導体が含まれる。
【０４６６】
細胞結合剤
本発明の細胞毒性コンジュゲートのそれぞれを含む細胞結合剤は、現在知られている、または知られるようになる、いずれかの種類からなることができ、ペプチドおよび非ペプチドを含む。細胞結合剤は、特異的または非特異的のいずれかの様式で、細胞に結合することができる任意の化合物であることができる。一般にこれらは、抗体（特にモノクローナル抗体および抗体フラグメント）、インターフェロン、リンホカイン、ホルモン、成長因子、ビタミン、栄養分輸送分子（トランスフェリンなど）、またはその他のいずれかの細胞結合性分子または物質であることができる。
【０４６７】
用いることができる細胞結合剤のより具体的な例には、
−表面再処理(resurfaced)抗体（米国特許第５６３９６４１号）；
−抗体のフラグメント、例えば、ｓＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、およびＦ（ａｂ’）２（Ｐａｒｈａｍ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３１：２８９５−２９０２（１９８３）；Ｓｐｒｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１３：４７０−４７８（１９７４）；Ｎｉｓｏｎｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．８９：２３０−２４４（１９６０））；
−インターフェロン（例えば、α、β、γ）；
−リンホカイン、例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６；
−ホルモン、例えば、インスリン、ＴＲＨ（甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン）、およびＭＳＨ（メラニン細胞刺激ホルモン）、ならびにアンドロゲンおよびエストロゲンなどのステロイドホルモン
−ビタミン、例えば葉酸；
−成長因子およびコロニー刺激因子、例えば、ＥＧＦ、ＴＧＦ−α、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、およびＧＭ−ＣＳＦ（Ｂｕｒｇｅｓｓ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  ５：１５５−１５８（１９８４））；および
−トランスフェリン（Ｏ’Ｋｅｅｆｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：９３２−９３７（１９８５））、
が含まれる。
【０４６８】
モノクローナル抗体技術により、特異的モノクローナル抗体の形のきわめて特異的な細胞結合剤の製造が可能になる。当業界でとりわけよく知られるのは、マウス、ラット、ハムスター、またはその他のいずれかのほ乳類を、所定の抗原、例えば、無傷標的細胞、その標的細胞から単離した抗原、全ウイルス、および弱毒化全ウイルス、ならびにウイルス性コートタンパクなどのウイルスタンパクで免疫することにより産生される、モノクローナル抗体を作り出すための技術である。感作ヒト細胞を用いることもできる。モノクローナル抗体を作り出すための他の方法は、ｓＦｖ（一本鎖可変領域）、具体的にはヒトｓＦｖのファージライブラリーの使用である（例えば、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第５８８５７９３号；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，ＷＯ９２／０１０４７；Ｌｉｍｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，ＷＯ９９／０６５８７参照）。
【０４６９】
適切な細胞結合剤の選択は、標的にしようとする特定の細胞集団に依存する選択の問題であるが、適切なものが入手可能な場合は、一般にモノクローナル抗体が好ましい。
例えば、モノクローナル抗体Ｍｙ９は、急性骨髄性白血病（Acute Myeloid Leukemia:ＡＭＬ）細胞に見いだされるＣＤ３３抗原に特異的なマウスＩｇＧ２ａ抗体であり（Ｒｏｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ７７：２４０４−２４１２（１９９１））、ＡＭＬ患者の処置に用いることができる。同様に、モノクローナル抗体の抗−Ｂ４はマウスＩｇＧ１であり、これは、Ｂ細胞のＣＤ１９抗原に結合し（Ｎａｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３１：２４４−２５０（１９８３））、標的細胞がＢ細胞であるか、この抗原を発現する疾患細胞、例えば、非ホジキンリンパ腫または慢性リンパ芽球性白血病である場合に、用いることができる。同様に、抗体Ｎ９０１は、小細胞肺がん細胞および神経内分泌に起因するその他の腫瘍細胞に見いだされるＣＤ５６に結合するマウスモノクローナルＩｇＧ１抗体である（Ｒｏｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎａｔ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．８８：１１３６−１１４５（１９９６））。
【０４７０】
これに加えて、骨髄細胞に結合するＧＭ−ＣＳＦを、急性骨髄性白血病からの疾患細胞への細胞結合剤として用いることができる。活性化Ｔ−細胞に結合するＩＬ−２は、移植片拒絶の防止、移植片対宿主疾患の治療および防止、ならびに急性Ｔ−細胞白血病の処置に用いることができる。メラニン細胞に結合するＭＳＨは、黒色腫の処置に用いることができる。卵巣がんおよび他のがんに発現する葉酸受容体を標的とする葉酸も、適切な細胞結合剤である。
【０４７１】
乳房および精巣のがんは、細胞結合剤としてそれぞれエストロゲン（もしくはエストロゲン類似体）またはアンドロゲン（もしくはアンドロゲン類似体）で、十分に標的化することができる。
【０４７２】
細胞毒性アッセイ
本発明の細胞毒性コンジュゲートを、さまざまな不必要な細胞系の増殖を抑制するそれらの能力について、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで評価することができる。例えば、ヒト類表皮がん系Ａ−４３１、ヒト小細胞肺がん細胞系ＳＷ２、ヒト乳房腫瘍系ＳＫＢＲ３、およびバーキットリンパ腫系Ｎａｍａｌｗａなどの細胞系を、これらの化合物の細胞毒性の評定に容易に用いることができる。評価しようとする細胞を化合物に２４時間暴露し、細胞の生存率を公知の方法により直接的アッセイで測定することができる。その後、ＩＣ５０値を、アッセイの結果から算出することができる。
【０４７３】
細胞毒性はまた、Ｇｏｌｄｍａｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，J.  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３５：３６４８−３６５１（１９８５）に記載されているような細胞増殖曲線の後方外挿法(back-extrapolation)によるか、またはＧｏｌｄｍａｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１０２：１３１２−１３１９（１９８６）に記載されているようなクローン原性アッセイ(clonogenic assay)により、測定することができる。
【０４７４】
治療用成物
本発明はまた、
（Ａ）有効量の１種以上の細胞毒性コンジュゲート、および
（Ｂ）医薬的に許容しうる担体、
を含んでなる治療用組成物を提供する。
【０４７５】
同様に、本発明は、標的細胞または標的細胞を含有する組織を、有効量の細胞毒性コンジュゲートまたは細胞毒性コンジュゲートを含んでなる治療薬と接触させることを含んでなる、選択した細胞集団を死滅させるための方法を提供する。
【０４７６】
細胞毒性コンジュゲートは上記のように調製する。
細胞毒性コンジュゲートを、これまでに記載されている方法（例えば、Ｒ．Ｖ．Ｊ．Ｃｈａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５５：４０７９−４０８４（１９９５）参照）によりｉｎ  ｖｉｔｒｏでの効力および特異性について評価することができる。抗腫瘍活性は、やはりこれまでに記載されている方法（例えば、Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９３：８６１８−８６２３（１９９６））により、マウスでのヒト腫瘍異種移植モデルにおいて評価することができる。
【０４７７】
適切な医薬的に許容しうる担体は周知であり、当業者なら、臨床状況に応じ
て決定することができる。本明細書中で用いたように、担体には、希釈剤および賦形剤が含まれる。
【０４７８】
適切な担体、希釈剤および／または賦形剤の例は、（１）ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水、ｐＨ約７．４、約１ｍｇ／ｍＬ〜２５ｍｇ／ｍＬのヒト血清アルブミンを含有するものまたは含有しないもの、（２）０．９％生理食塩水（０．９％ｗ／ｖの塩化ナトリウム（ＮａＣｌ））、および（３）５％（ｗ／ｖ）デキストロースを含み；そして、トリプタミンなどの酸化防止剤およびＴｗｅｅｎ  ２０などの安定剤も含有することができる。
【０４７９】
選択した細胞集団を死滅させるための方法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏ、またはｅｘ  ｖｉｖｏで実行することができる。本明細書中で用いたように、死滅は、細胞死を引き起こす、細胞を溶解させる、細胞死を誘発する、または細胞の生存力を低下させることを意味する。
【０４８０】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの使用の例には、疾患細胞または悪性細胞を死滅させるために同一患者に移植する前に行う自己骨髄の処置；コンピテントＴ細胞を死滅させ、移植片対宿主疾患（graft-versus- host-disease: ＧＶＨＤ）を防止するための、移植術前の骨髄の処置；標的抗原を発現しない所望の変異体を除く、すべての細胞を死滅させるための細胞培養の処置；または、望ましくない抗原を発現する変異体を死滅させるための細胞培養の処置が含まれる。
【０４８１】
非臨床的なｉｎ  ｖｉｔｒｏでの使用条件は、当業者により容易に決定される。
臨床的なｅｘ  ｖｉｖｏでの使用の例は、がんの処置または自己免疫疾患の処置において自己移植術の前に骨髄から腫瘍細胞またはリンパ系細胞を除去すること、あるいは、移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）を防止するために、移植前に自己または同種異系の骨髄または組織からＴ細胞および他のリンパ系細胞を除去することである。処置は以下のように実施することができる。骨髄を患者またはその他の個人から採取した後、本発明の細胞毒性薬剤を加えた血清を含有する培地でインキュベートする。約３７℃で、約３０分間〜約４８時間にわたり、濃度を約１０μＭ〜１ｐＭの範囲にする。インキュベーションの濃度および時間の正確な条件、すなわち用量は、当業者により容易に決定される。インキュベーション後、骨髄細胞を血清含有培地で洗浄し、公知の方法に従って静脈内注入により患者に戻す。患者が、骨髄採取時と処置細胞の再注入時の間に他の処置、例えば、外科的化学療法または全身照射法のコースを受けている状況では、処置した骨髄細胞を標準的医療器具を用いて液体窒素中で凍結させて保存する。
【０４８２】
臨床的なｉｎ  ｖｉｖｏでの使用の場合、本発明の細胞毒性薬剤を、無菌性およびエンドトキシンレベルについて試験される溶液として供給する。細胞毒性コンジュゲート投与の適切な実験計画の例は以下のとおりである。コンジュゲートを、各週に静脈内薬物適用量一回分(bolus)として、４週間にわたり毎週与える。この適用量一回分の用量を５０〜１００ｍＬの正常食塩水に入れて与えるが、これに５〜１０ｍＬのヒト血清アルブミンを加えることができる。投与量は、静脈内投与１回あたり１０μｇ〜１００ｍｇである（１日あたり１００ｎｇ〜１ｍｇ／ｋｇ）。より好ましくは、投与量は５０μｇ〜３０ｍｇである。もっとも好ましくは、投与量は１ｍｇ〜２０ｍｇである。処置４時間後、患者は週単位で処置を受け続けることができる。投与経路、賦形剤、希釈剤、用量、時間などに関する具体的な臨床実験計画は、当業者なら、臨床状況に応じて決定することができる。
【０４８３】
選択した細胞集団をｉｎ  ｖｉｖｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏで死滅させる方法に従って処置することができる医学的状態には、あらゆるタイプの悪性腫瘍、例えば、肺、乳房、結腸、前立腺、腎臓、膵臓、卵巣、およびリンパ器官のがんを含む；自己免疫疾患、例えば、全身性狼瘡、リウマチ様関節炎、および多発性硬化症；移植片拒絶、例えば、腎移植拒絶、肝移植拒絶、肺移植拒絶、心臓移植拒絶、および骨髄移植拒絶；移植片対宿主疾患；ウイルス感染、例えば、ｍＶ感染、ＨＩＶ感染、ＡＩＤＳなど；ならびに、寄生虫感染、例えば、ランブル鞭毛虫症、アメーバ症、住血吸虫症、および当業者により決定される他の疾患が含まれる。
【０４８４】
実施例
実施例１−代表的なＰＥＧ連結基の合成
１５−ヒドロキシ−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（９ａ）
３００ｍＬの無水ＴＨＦに、８０ｍｇ（０．００２５ｍｏｌ）の金属ナトリウムおよび１２８ｍＬのテトラエチレングリコール４ａ（０．９４ｍｏｌ）を撹拌しつつ加えた（ＳｅｉｔｚおよびＫｕｎｚ，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，６２：８１３−８２６（１９９７））。ナトリウムが完全に溶解した後、アクリル酸ｔｅｒｔ−ブチル（２４ｍＬ、０．３３ｍｏｌ）を加えた。溶液を室温で２０時間撹拌し、８ｍＬの１．０Ｍ  ＨＣｌで中和した。溶媒を減圧除去し、残渣をブライン（２５０ｍＬ）中に懸濁させ、酢酸エチル（３×１２５ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせたものを、ブライン（１００ｍＬ）、続いて水（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を除去した。得られた無色オイルを減圧乾燥すると、７７．１３ｇ（収率７３％）の生成物９ａが得られた（図７）。
【０４８５】
【化８７】
2005517032.tif 000088
【０４８６】
１５−ブロモ−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１０ａ）
１ｍＬのピリジン中の化合物９ａ（１．０ｇ、３．１１ｍｍｏｌ）の撹拌下の溶液に、０℃でシリンジにより三臭化リン（０．１１６ｍＬ、１．２２ｍｍｏｌ）を徐々に加えた（Ｂｒａｄｓｈａｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｈｅｔ．Ｃｈｅｍ．，２７：３４７−３４９（１９９０））。溶液を一晩そのまま撹拌した。この期間に、ＴＬＣ分析は反応が終結したことを示した。水（２５ｍＬ）を反応容器に注ぎ入れ、有機物を塩化メチレン（３×２５ｍＬ）中に抽出した。有機層を合わせたものを、重炭酸ナトリウム（２５ｍＬ）、続いてブライン（２５ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧除去した。残渣を、シリカゲル上でニート酢酸エチルを溶離剤として用いて精製すると、４００ｍｇ（収率３５％）の純粋な生成物１０ａが得られた（図７）。
【０４８７】
【化８８】
2005517032.tif 000089
【０４８８】
あるいは、１．６１ｇ（５．０３ｍｍｏｌ）の化合物９ａを、１００％エタノールおよびトルエンと連続的に共蒸発させた後、ジクロロメタン中の無水硫酸ナトリウムおよび４Ａモレキュラーシーブで乾燥した。混合物を濾過し、濃縮した。２０ｍＬのジクロロメタン中の乾燥した化合物（１．４２ｇ）に、２．４８ｇの四臭化炭素（ＣＢｒ４、７．４７ｍｍｏｌ）および１．５０ｇのトリフェニルホスフィン（ＰＰｈ３、５．７１ｍｍｏｌ）を加えた。アルゴン雰囲気下で一晩撹拌後、反応混合物をシリカゲル床に通して濾過し、続いて濃縮して、シリカゲルクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、勾配は１：２の割合で開始して２：３の割合に変化させる）により精製すると、０．９２ｇの生成物１０ａが得られた（６２％）。
【０４８９】
【化８９】
2005517032.tif 000090
【０４９０】
１５−メルカプト−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１２ａ）
フラスコにアンバーライトイオン交換樹脂ＩＲＡ−４００（Ｃｌ−形）（１．３ｇ、４．９４ｍｍｏｌのＣｌ−）を入れ、８ｍＬのＭｅＯＨ中に溶解したＮａＳＨ・Ｈ２Ｏ（０．２１８ｇ、３．９ｍｍｏｌ）の溶液を撹拌しつつ加えた（ＣｈｏｉおよびＹｏｏｎ，Ｓｙｎ．，３７３−３７５（１９９５））。反応物が不透明となる期間である１時間にわたりそのまま撹拌した後、１．５ｍＬのＭｅＯＨ中のトリエチルアミン塩酸塩（０．１８０ｇ、１．３０ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。その後、２ｍＬのＭｅＯＨ中の化合物１０ａ（０．５００ｇ、１．３ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加え、室温で１６時間そのまま撹拌した。その後、樹脂を濾過により除去し、３０ｍＬの０．５Ｍ  ＨＣｌを加えた。有機層を分離し、水層を塩化メチレン（２×２５ｍＬ）中に抽出した。有機層を合わせたものを無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧除去した。残渣をシリカゲル上でニート酢酸エチルを溶離剤として用いて精製すると、２５０ｍｇ（収率６０％）のチオール１２ａが得られた（図７）。
【０４９１】
【化９０】
2005517032.tif 000091
【０４９２】
ＭＳ  ｍ／ｚ  計算値：３６１．１７、実測値：３６１．９４。
あるいは、純粋なエタノール中の８００ｍｇのＮａＨＳ・Ｈ２Ｏを、完全に溶解するまで撹拌した。そのエタノール溶液に、３ｍＬのテトラヒドロフラン中の５００ｍｇの化合物１０ａを加えた。アルゴン下で５時間撹拌後、０．５ｍＬの酢酸を加えた。混合物を蒸発乾固した後、ＴＨＦ／ＥｔＯＡｃで懸濁させ、シリカゲル床に通して濾過した。濾液を濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン  ２：１）により精製すると、３８２ｍｇの化合物１２ａが得られた（８７％）。
【０４９３】
【化９１】
2005517032.tif 000092
【０４９４】
１５−（２−ピリジルジチオ）−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１３ａ）
５ｍＬのエタノール中の１５−メルカプト−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１２ａ）の溶液に、２，２’−ジチオジピリジン（３００ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）および２０μｇの氷酢酸を加えた。その混合物をアルゴン雰囲気下で一晩撹拌し、溶媒を蒸発させた。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン  ３：２）により精製すると、１４６ｍｇ（収率８８％）の表題化合物１３ａが得られた（図７）。Ｒｆ＝０．４４（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン  ２：１）；
【０４９５】
【化９２】
2005517032.tif 000093
【０４９６】
１５−（２−ピリジルジチオ）−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸（１４ａ）
５ｍＬのジクロロメタン中の１４０ｍｇの１５−（２−ピリジルジチオ）−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１３ａ）の溶液に、１．０ｍＬのＴＦＡおよび２５０μＬのＥｔ３ＳｉＨを加えた。２時間撹拌後、混合物を５ｍＬのトルエンで希釈した。その混合物を蒸発させた後、５ｍＬのトルエンと３回共蒸発させ、減圧乾燥すると、１２２ｍｇ（収率９９％）の表題化合物１４ａが得られた（図７）。
【０４９７】
【化９３】
2005517032.tif 000094
【０４９８】
１５−Ｏ−トシル−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１７ａ）
アセトニトリル（１００ｍＬ）中の化合物９ａ（１０ｇ、３１ｍｍｏｌ）の溶液を、トリエチルアミン（５．１８ｍＬ）で処理した。５０ｍＬのアセトニトリル中の塩化トシル（７．１２ｇ、３７．３ｍｍｏｌ）の溶液を、３０分間かけて添加漏斗により滴下して加えた。５時間後、ＴＬＣ分析は、反応が終結したことを示した。形成したトリエチルアミン塩酸塩を濾過により除去し、溶媒を除去した。残渣を、ヘキサン中の２０％酢酸エチルでカラムを充填しニート酢酸エチルで溶離してシリカゲル上で精製すると、１１．２ｇ（収率７６％）の化合物１７ａが得られた（図８）。
【０４９９】
【化９４】
2005517032.tif 000095
【０５００】
１５−アジド−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１８ａ）
１０ｍＬのＤＭＦに、化合物１７ａ（４．０ｇ、８．４ｍｍｏｌ）およびアジ化ナトリウム（０．７３７ｇ、１１．３ｍｍｏｌ）を撹拌しつつ加えた。反応物を８０℃に加熱し、ＴＬＣによりモニタリングした。５時間後、ＴＬＣ分析は、反応が終結したことを示した。その反応物を室温まで冷却し、水（２５ｍＬ）を加えて反応を止めた。水層を分離し、酢酸エチル（３×２５ｍＬ）中に抽出した。有機層を合わせたものを無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、溶媒を減圧除去した。粗製アジ化物１８ａを、さらに精製することなく使用した（図８）。
【０５０１】
【化９５】
2005517032.tif 000096
【０５０２】
１５−アミノ−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１９ａ）
粗製材料１８ａ（３．０ｇ、８．０ｍｍｏｌ）をエタノール（２０ｍＬ）中に溶解し、３００ｍｇの１０％  Ｐｄ／Ｃを加えた。系を真空下で減圧し、激しく撹拌しつつ風船を介して１ａｔｍの水素ガス下におき、これを４回繰り返して確実に純粋な水素雰囲気にした。その後、反応物を室温で一晩撹拌した。ＴＬＣは、１６時間後に反応が終結したことを示した。粗製反応物を、酢酸エチルですすいでセライトの短いパッドに通した。溶媒を除去し、アミンを、シリカゲル上で塩化メチレン中の１５％メタノールおよび２．５％トリエチルアミンの混合物を溶離剤として用いて精製すると、２．３ｇ（収率８５％）の所望のアミン１９ａが得られた（図８）。
【０５０３】
【化９６】
2005517032.tif 000097
【０５０４】
ＭＳ：ｍ／ｚ  計算値：３２２．２１、実測値：３２１．９７。
１５−［Ｎ−（３−（２−ピリジルジチオ）−プロピオニル）］−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２０ａ）
小さなフラスコに、アミン１９ａ（０．５５０ｇ、１．７ｍｍｏｌ）、３−（２−ピリジルジチオ）−プロピオン酸（０．５５０ｇ、２．６ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（０．６９４ｇ、３．４ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（０．１０３ｇ、０．８８ｍｍｏｌ）、および塩化メチレン（１２ｍＬ）を入れた。反応物を室温で一晩撹拌した。ＴＬＣは、１６時間後にすべての出発材料が消費されたことを示した。反応物に塩化アンモニウム（５０ｍＬ）を加えて反応を止め、酢酸エチル（３×５０ｍＬ）中に抽出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧除去した。残渣を、塩化メチレン中の５％メタノール中でのＴＬＣモニタリングによりアルミナ上でニート酢酸エチルを用いて精製すると、５６２ｍｇ（収率６５％）の所望のカップリングした生成物２０ａが得られた（図８）。
【０５０５】
【化９７】
2005517032.tif 000098
【０５０６】
Ｃ２３Ｈ３８Ｎ２Ｏ７Ｓ２−Ｎａ＋に関するＭＳ：ｍ／ｚ  計算値：５４１．２０；実測値：５４１．１１。
１５−［Ｎ−（３−（２−ピリジルジチオ）−プロピオニル］−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸（２１ａ）
小さなフラスコに、３ｍＬの塩化メチレン中の化合物２０ａ（３５ｍｇ、０．０６７４ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液に０．５ｍＬのＴＦAを撹拌しつつ加えた。１時間後、ＴＬＣによると反応は終結していた。トルエン（３ｍＬ）を反応混合物に加え、溶媒を減圧除去した。残渣を、シリカゲル上で塩化メチレン中の１０％メタノールおよび２％酢酸の混合物を溶離剤として用いて精製すると、１４ｍｇ（収率４５％）の所望の生成物２１ａが得られた（図８）。
【０５０７】
【化９８】
2005517032.tif 000099
【０５０８】
ｍ／ｚ  Ｃ１９Ｈ３０Ｎ２Ｏ７Ｓ２−Ｎａ＋に関するＬＣ／ＭＳ：計算値：４８５．１４；実測値：４８５．００。
１５−［Ｏ−｛３−（２−ピリジルジチオ）−プロピオニル｝］−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２９ａ）
小さなフラスコに、アルコール９ａ（０．５００ｇ、１．５５ｍｍｏｌ）、３−（２−ピリジルジチオ）−プロピオン酸（０．６６６ｇ、３．１ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（０．５９３ｇ、３．１ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（０．０９５ｇ、０．７６ｍｍｏｌ）、および塩化メチレン（１０ｍＬ）を入れた。反応物を室温で一晩撹拌した。ＴＬＣ分析は、１６時間後にすべての出発材料が消費されたことを示した。反応物に塩化アンモニウム（５０ｍＬ）を加えて反応を止め、酢酸エチル（３×５０ｍＬ）中に抽出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧除去した。残渣を、シリカゲル上でニート酢酸エチルを溶離剤として用いて精製すると、５００ｍｇ（収率６２％）の所望のカップリングした生成物２９ａが得られた（図９）。
【０５０９】
【化９９】
2005517032.tif 000100
【０５１０】
ＭＳ：ｍ／ｚ  計算値：５４２．１９。実測値：５４２．０６。
１５−［Ｏ−（３−（２−ピリジルジチオ）−プロピオネート）−ヒドロキシ］−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸（３０ａ）
小さなフラスコに、３ｍＬの塩化メチレン中の化合物２９ａ（４５ｍｇ、０．０８６７ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液に、０．７ｍＬのＴＦＡを撹拌しつつ加えた。１時間後、ＴＬＣによると反応は終結した。トルエン（２ｍＬ）を反応混合物に加え、溶媒を減圧除去した。残渣を、シリカゲル上でニート酢酸エチルを溶離剤として用いて精製すると、３２ｍｇ（収率８０％）の所望の生成物３０ａが得られた（図９）。
【０５１１】
【化１００】
2005517032.tif 000101
【０５１２】
ＭＳ：Ｃ１９Ｈ２９ＮＯＳ２−Ｎａ＋に関するｍ／ｚ：計算値：４８６．１３；実測値：４８６．００。
【０５１３】
実施例２−反応性ＰＥＧ部分を持つ細胞毒性薬剤の合成
１５−［Ｎ−（３−（Ｌ−ＤＭ１−ジチオ）−プロピオニル］−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸（４１ａ）
１ｍＬのフラスコ中で、Ｌ−ＤＭ１（８．１ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）および１５−［Ｎ−（３−（２−ピリジルジチオ）−プロピオニル］−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸２１ａ（６．９ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）を、０．４０ｍＬのガラス蒸留(glass distilled)エチルアルコールに溶解した。リン酸カリウム緩衝液（０．２０ｍＬ、１００ｍＭ、２ｍＭ  ＥＤＴＡ  ｐＨ７．５）を加え、溶液をアルゴン雰囲気下で２時間撹拌した。反応混合物を、室温において、２５０×１０ｃｍのＶｙｄａｃ  ＯＤＳ  ＩＩカラムを用い、４．５ｍＬ／分の流速、脱イオン水(di-water)０．０５％トリフルオロ酢酸、アセトニトリル（３０分間で２０％アセトニトリル〜７０％アセトニトリル）の直線勾配で、ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物（保持時間１７．２分）を収集し、溶媒を減圧下での回転蒸発により除去すると、７ｍｇ（収率５８％）の所望の生成物４１ａが得られた（図１０）。
【０５１４】
【化１０１】
2005517032.tif 000102
【０５１５】
１５−［Ｎ−（３−（Ｌ−ＤＭ１−ジチオ）−プロピオニル］−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（２ａ）
１５−［Ｎ−（３−（Ｌ−ＤＭ１−ジチオ）−プロピオニル］−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸４１ａ（７ｍｇ、０．００６４ｍｍｏｌ）を１．０ｍＬの塩化メチレンに溶解し、これにＮ−ヒドロキシスクシンイミド（１０ｍｇ、０．０８７ｍｍｏｌ）および１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドヒドロクロリド（１０ｍｇ、０．０５２ｍｍｏｌ）を加えた。その溶液を室温で２．５時間撹拌し、塩化メチレン：メチルアルコール：酢酸  ９０：９．９：０．１の移動相を用いたシリカクロマトグラフィーにより精製し、溶媒を減圧除去すると、５ｍｇ（収率６５％）の所望の生成物２ａが得られた（図１０）。
【０５１６】
【化１０２】
2005517032.tif 000103
【０５１７】
１５−（Ｌ−ＤＭ１−ジチオ）−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸（４１ａ）
１ｍＬのフラスコ中で、Ｌ−ＤＭ１（１３ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）および１５−（２−ピリジルジチオ）−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸１４ａ（９ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ）を、０．４０ｍＬのガラス蒸留エチルアルコールに溶解した。リン酸カリウム緩衝液（０．２０ｍＬ、１００ｍＭ、２ｍＭ  ＥＤＴＡ  ｐＨ７．５）を加え、溶液をアルゴン雰囲気下で２時間撹拌した。反応混合物を、室温において、２５０×１０ｃｍのＶｙｄａｃ  ＯＤＳ  ＩＩカラムを用い、４．５ｍＬ／分の流速、脱イオン水０．０５％トリフルオロ酢酸、アセトニトリル（３０分間で２０％アセトニトリル〜７０％アセトニトリル）の直線勾配で、ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物（保持時間１８．５分）を収集し、溶媒を減圧下での回転蒸発により除去すると、１１ｍｇ（収率６１％）の所望の生成物４１ｂが得られた（図１１）。
【０５１８】
【化１０３】
2005517032.tif 000104
【０５１９】
１５−（Ｌ−ＤＭ１−ジチオ）−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（２ｂ）
１５−（Ｌ−ＤＭ１−ジチオ）−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸４１ｂ（１０ｍｇ、０．００９８ｍｍｏｌ）を１．０ｍＬの塩化メチレンに溶解し、これにＮ−ヒドロキシスクシンイミド（８．０ｍｇ、０．０７０ｍｍｏｌ）および１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドヒドロクロリド（９．１ｍｇ、０．０４７ｍｍｏｌ）を加えた。その溶液を室温で２．５時間撹拌し、塩化メチレン：メチルアルコール：酢酸  ９０：９．９：０．１の移動相を用いたシリカクロマトグラフィーにより精製し、溶媒を減圧除去すると、１０ｍｇ（収率９１％）の所望の生成物２ｂが得られた（図１１）。
【０５２０】
【化１０４】
2005517032.tif 000105
【０５２１】
実施例３−ＰＥＧ連結基を介して細胞結合剤に連結している細胞毒性薬剤を含んでなる細胞毒性コンジュゲートの合成
化合物２ａを介して細胞結合剤に連結している細胞毒性薬剤を含んでなる細胞毒性コンジュゲート
化合物２ａを無水エタノールに溶解して、５ｍＭ（５．９ｍｇ／ｍＬ）の保存濃度を得た。この実験に用いた細胞結合剤は、ＩｍｍｕｎｏＧｅｎ社で開発された上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）を標的とするマウスモノクローナル抗体であった。５０ｍＭのＮａＣｌおよび２ｍＭのエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を含有するｐＨ  ６．５の５０ｍＭのリン酸カリウム緩衝液中の、抗ＥＧＦＲ抗体ＫＳ−７７（２ｍｇ／ｍＬ、０．２５ｍＬ）の溶液を、１２倍モル過剰の化合物２ａで処理した。反応混合物中のエタノールの最終濃度は５％（ｖ／ｖ）であった。反応混合物を外界温度で約２時間インキュベートした。細胞毒性コンジュゲート３ａ（図１２）を、あらかじめｐＨ  ６．５のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で平衡化しておいたセファデックスＧ２５カラムでのサイズ排除クロマトグラフィーにより精製した。この精製工程により、未反応化合物２ａおよびその他の低分子量材料を除去した。最終的コンジュゲートでは、以下の吸光係数を用いて決定されるように、１抗体分子あたり平均して１．９個のＤＭ１分子が連結していた：化合物２ａの吸光係数：ε２５２ｎｍ＝２４６８１Ｍ−１ｃｍ−１、ε２８０ｎｍ＝５７００Ｍ−１ｃｍ−１、および抗体の吸光係数：ε２５２ｎｍ＝８２８８０Ｍ−１ｃｍ−１、ε２８０ｎｍ＝２２４０００Ｍ−１ｃｍ−１。このコンジュゲート３ａを、ＫＳ−７７−ＰＥＧ−ＤＭ１、バッチ１とよぶ。
【０５２２】
その他のコンジュゲート（“ＫＳ−７７−ＰＥＧ−ＤＭ１、バッチ２”と名付ける）を、ＤＭ１−ＰＥＧリンカー２ａをエタノールではなくてジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）に溶解した点を除き、類似の方法で調製した。コンジュゲーション混合物中の最終的なＤＭＡ濃度は、５％  ｖ／ｖであった。コンジュゲートを上記のように精製した。これは、１抗体分子あたり平均して１．８個のＤＭ１分子を含有していた。
【０５２３】
実施例４−Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏでの細胞毒性アッセイ
ＫＳ−７７−ＰＥＧ−ＤＭ１、バッチ１および２のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの細胞毒性を、ＥＧＦ−受容体−陽性ヒト腫瘍細胞系Ａ−４３１（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１５５５）を用いたクローン原性アッセイで測定した。細胞毒性効果の標的特異性を、抗体−陰性ヒト黒色腫細胞系Ａ−３７５（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１６１９）を用いて測定した。６穴の組織培養プレート中の１０％ウシ胎仔血清で補ったダルベッコの変性最少必須培地（Dulbecco's modified minimum essectial medium: ＤＭＥＭ）において、細胞を異なる密度で平板培養した。さまざまな濃度（３×１０−１１〜３×１０−９Ｍ）の細胞毒性コンジュゲートを加え、細胞を、約２０細胞またはそれより多くの細胞のコロニーが形成するまで（６〜１０日）、３７℃、６％  ＣＯ２の吸湿雰囲気中で維持した。対照プレートは細胞毒性コンジュゲートを含有していなかった。その後、細胞をホルムアルデヒドで固定し、クリスタルバイオレットで染色し、低倍率顕微鏡下で計数した。その後、平板効率をコロニー数から決定し、細胞の生存率を、処理試料の平板効率と対照の平板効率の比として算出した。
【０５２４】
図１４は、標的抗原−陽性細胞系Ａ４３１における２種のバッチのＫＳ−７７−ＰＥＧ−ＤＭ１コンジュゲートに関する細胞毒性決定の結果を示している。両バッチからのコンジュゲートは、標的細胞に対し同様の高い細胞毒性を示しており；ＩＣ５０値は３×１０−１１Ｍ（最低試験濃度）未満である。１×１０−９Ｍのコンジュゲート濃度に暴露すると、生存率は１０−３未満になった（０．１％未満の細胞が生存している）。対照的に、コンジュゲートは抗原陰性細胞に対し実質上非毒性であり、ＩＣ５０値は３×１０−９Ｍ（最高試験濃度）を超える。これらの結果は、抗原陽性細胞が選択的に死滅し、細胞毒性コンジュゲートの細胞毒性効果が抗体成分を介した特異的結合に依存していることを実証している。
【０５２５】
実施例５−親和性の決定
非コンジュゲート型(unconjugated)ＫＳ−７７抗体の特異的親和性を、抗原発現性Ａ−４３１細胞での結合アッセイにより、２種の細胞毒性コンジュゲート、ＫＳ−７７−ＰＥＧ−ＤＭ１、バッチ１および２（実施例３に記載している）の親和性と比較した。Ａ−４３１細胞を、１０％ウシ胎仔血清で補ったＤＭＥＭを含有する組織培養用フラスコ中で成長させた。その後、細胞をトリプシンで処理し、３７℃で３０分間、組織がプラスチックに接着するのを防止するために組織培養用ではないフラスコ内で、同一培地中に懸濁させてインキュベートした。その後、細胞を９６穴プレートの穴に移し、２５％ヒトプール血清を含有する最少必須培地中に再び懸濁させた。細胞懸濁液（２０００００細胞／穴を含有する０．２ｍＬの懸濁液）を、さまざまな濃度の細胞毒性コンジュゲートまたは非コンジュゲート型ＫＳ−７７抗体のいずれかと、４℃で２時間インキュベートした。その後、細胞を、２％ヤギ血清を含有する緩衝液で洗浄し、続いて４℃でフルオレセイン標識ヤギ抗−マウスＩｇＧと１時間処理した。その後、細胞を再び緩衝液で洗浄し、リン酸緩衝生理食塩水中の１％ホルムアルデヒドで固定した。平均細胞蛍光をフローサイトメーターで測定した。平均蛍光を抗体またはコンジュゲート濃度の関数としてプロットする。結果（図１５）は、非コンジュゲート型抗体および２種のＤＭ１細胞毒性コンジュゲートが、抗体発現性Ａ−４３１細胞に対し同様の親和性（抗体およびそのコンジュゲートに関しＫＤ＝１．３×１０−９Ｍ）で結合していることを示している。したがって、ＤＭ１−ＰＥＧの抗体への連結は、標的細胞の抗原に対するその結合親和性を維持している。
【０５２６】
実施例６−Ｉｎ  Ｖｉｖｏでの抗腫瘍活性
ＫＳ−７７−ＰＥＧ−ＤＭ１細胞毒性コンジュゲートの抗腫瘍効果を、以下のように、ＳＣＩＤマウスでのヒト扁平がん（Ａ４３１）異種移植で測定することができる。最初に、ＳＣＩＤマウス中にヒト腫瘍異種移植モデルを確立する。５週齢の雌ＳＣＩＤマウス（２０匹）の右側腹部の皮下に、０．１ｍＬの無血清培地中のＡ４３１ヒト扁平がん細胞（１．５×１０６細胞／マウス）を接種する。腫瘍を１００．０ｍｍ３の平均サイズ（５０〜１５０ｍｍ３の範囲）まで１１日間成長させる。その後、動物を無作為に４群（各群５匹）に分ける。最初の２群は、２種のＫＳ−７７−ＰＥＧ−ＤＭ１細胞毒性コンジュゲート（１８ｍｇ／ｋｇ、１日１回×５）を静脈内に投与する。第３群は、非コンジュゲート型ＫＳ−７７抗体（１８ｍｇ／ｋｇ、１日１回×５）で処置し、同様に静脈内に投与する。第４群の動物は対照群で、第１〜３群での場合と同じ処置計画を用いてＰＢＳで処置する。腫瘍のサイズを週２回測定し、腫瘍体積を式：１／２（長さ×幅×高さ）で計算する。動物の体重も週２回測定する。抗腫瘍効果は、時間の関数として腫瘍のサイズをプロットすることにより決定することができる。
【０５２７】
実施例７−Ｉｎ  Ｖｉｖｏでのクリアランス試験および薬物動態
典型的な１２５Ｉ−標識されたマウスまたはヒト化非コンジュゲート型ＩｇＧ１抗体およびその対応する１２５Ｉ−標識−細胞毒性コンジュゲートの血液クリアランスを、雌ＣＤ−１マウスで決定する。非コンジュゲート型抗体および細胞毒性コンジュゲートを、ＢｏｌｔｏｎおよびＨｕｎｔｅｒの方法（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．１３３：５２９−５３９（１９７３））により放射性ヨウ素化する。その抗体およびコンジュゲートを、別々の一群の動物の尾部静脈に静注する。ヘパリン添加血試料を、さまざまな時点（２分〜７２時間）に眼窩後静脈叢から収集し、放射能の含量を測定する。その後、残留放射能を、時間の関数としてプロットする。
【０５２８】
本発明をその具体的態様に関連して詳細に記載したが、本発明の精神および範囲を逸脱することなく、それにさまざまな変更および修正を加えることができることが、当分野の技術者には明らかであろう。
【図面の簡単な説明】
【０５２９】
【図１】カルボキシ−ＰＥＧリンカーの調製法を示した図である。
【図２】カルボキシ−ＰＥＧリンカーからω−メルカプトカルボキシ−ＰＥＧリンカーへの転化と、これに続くそれらから式１３のヘテロ二官能性ＰＥＧ連結基へのさらなる転化を示した図である。
【図３−Ａ】カルボキシ−ＰＥＧリンカーからω−アミノカルボキシ−ＰＥＧリンカーへの転化を示した図であり、２種の代替的反応スキームを介した式１９の化合物の形成を示す。
【図３−Ｂ】ω−アミノカルボキシ−ＰＥＧリンカーから式２０のヘテロ二官能性ＰＥＧ連結基等への転化させ、保護的化学基を除去して、式２１のカルボキシレート化合物を得、当該化合物の塩を生成させて、式２２の化合物を得ることを示した図である。
【図３−Ｃ】ω−アミノカルボキシ−ＰＥＧリンカーから式２３のヘテロ二官能性ＰＥＧ連結基等への転化させ、保護的化学基を除去して、式２４のカルボキシレート化合物を得、当該化合物の塩を生成させて、式２５の化合物を得ることを示した図である。
【図３−Ｄ】ω−アミノカルボキシ−ＰＥＧリンカーから式２６のヘテロ二官能性ＰＥＧ連結基等への転化させ、保護的化学基を除去して、式２７のカルボキシレート化合物を得、当該化合物の塩を生成させて、式２８の化合物を得ることを示した図である。
【図４−Ａ】カルボキシＰＥＧリンカーから式２９のヘテロ二官能性ＰＥＧ連結基への転化させた後、保護的化学基を除去して式３０のカルボキシレート化合物を得、続いて式３０の化合物の塩を生成させて式３１の化合物を得ることを示した図である。
【図４−Ｂ】カルボキシＰＥＧリンカーから式３２のヘテロ二官能性ＰＥＧ連結基への転化をさせた後、保護的化学基を除去して式３３のカルボキシレート化合物を得、続いて式３３の化合物の塩を生成させて、式３４の化合物を得ることを示す。
【図４−Ｃ】カルボキシＰＥＧリンカーから式３５のヘテロ二官能性ＰＥＧ連結基への転化をさせた後、保護的化学基を除去して式３６のカルボキシレート化合物を得、続いて式３６の化合物の塩を生成させて、式３７の化合物を得ることを示す。
【図４−Ｄ】カルボキシＰＥＧリンカーから式３８のヘテロ二官能性ＰＥＧ連結基への転化をさせた後、保護的化学基を除去して式３９のカルボキシレート化合物を得、続いて式３９の化合物の塩を生成させて、式４０の化合物を得ることを示す。
【図５】反応性ＰＥＧ部分を持つ細胞毒性薬剤の調製法を示した図である。
【図６】式３の細胞毒性コンジュゲートの調製法を示した図である。
【図７】ヘテロ二官能性ＰＥＧ連結基１５−（２−ピリジルジチオ）−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル１３ａの調製と、これに続くその１５−（２−ピリジルジチオ）−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸１４ａへの転化を示した図である。
【図８】ヘテロ二官能性ＰＥＧ連結基１５−［Ｎ−（３−（２−ピリジルジチオ）−プロピオニル）］−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル２０ａの調製と、これに続くその１５−［Ｎ−（３−（２−ピリジルジチオ）−プロピオニル］−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸２１ａへの転化を示した図である。
【図９】ヘテロ二官能性ＰＥＧ連結基１５−［Ｏ−｛３−（２−ピリジルジチオ）−プロピオニル｝］−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル２９ａの調製と、これに続くその１５−［Ｏ−（３−（２−ピリジルジチオ）−プロピオネート）−ヒドロキシ］−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸３０ａへの転化を示した図である。
【図１０】１５−［Ｎ−（３−（Ｌ−ＤＭ１−ジチオ）−プロピオニル］−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル連結基２ａを含んでなる細胞毒性薬剤の調製法を示した図である。
【図１１】１５−（Ｌ−ＤＭ１−ジチオ）−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル連結基２ｂを含んでなる細胞毒性薬剤の調製法を示した図である。
【図１２】１５−［Ｎ−（３−（Ｌ−ＤＭ１−ジチオ）−プロピオニル］−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド連結基を用いた細胞毒性コンジュゲート３ａの調製法を示した図である。ｍＡｂは、マウス抗上皮成長因子受容体モノクローナル抗体ＫＳ−７７である。
【図１３】式Ｔ１のタキサンの主要な４態様の好ましい例を示した図である。
【図１４】ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの細胞毒性コンジュゲートＫＳ−７７−ＰＥＧ−ＤＭ１のバッチ１および２の細胞毒性ならびに特異性を決定するために実施した解析の結果を示した図である。
【図１５】非コンジュゲート型ＫＳ−７７抗体および細胞毒性コンジュゲートＫＳ−７７−ＰＥＧ−ＤＭ１の結合親和性を比較するために実施した解析の結果を示した図である。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３−Ｂ】
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【図３−Ｃ】
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【図３−Ｄ】
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【図４−Ａ】
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【図４−Ｂ】
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【図４−Ｃ】
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【図４−Ｄ】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【国際調査報告】
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