(57)【要約】本発明は、陰イオン多糖と銀の複合体を含む創傷包帯材料を提供する。この材料は、約０．１ｗｔ％〜約３ｗｔ％の銀を含む。本発明はまた、このような材料を含む創傷包帯と、医療にこのような材料を使用することを含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
創傷包帯材料であって、陰イオン多糖と銀の複合体を含み、前記材料が、約０．１ｗｔ％〜約３ｗｔ％の範囲の銀を含むことを特徴とする創傷包帯材料。
【請求項２】
前記複合体が前記陰イオン多糖とＡｇ+とで生成された塩を含むことを特徴とする請求項１に記載の創傷包帯材料。
【請求項３】
前記陰イオン多糖がポリカルボキシレートであることを特徴とする請求項１または２に記載の創傷包帯材料。
【請求項４】
前記陰イオン多糖が、アルギン酸塩、ヒアルロン酸、ペクチン、カラゲナン、ザンサンンガム、硫酸デキストラン、セルロース誘導体、酸化セルロース、及びこれらの組合せからなる群から選択されることを特徴とする請求項１乃至３に記載の創傷包帯材料。
【請求項５】
前記複合体の銀の量が、前記陰イオン多糖の質量に対して約１ｗｔ％〜約５０ｗｔ％であることを特徴とする請求項１乃至４に記載の創傷包帯材料。
【請求項６】
前記材料が、凍結乾燥スポンジシート、織物シート、不織布シート、またはゲルシートの形態であることを特徴とする請求項６に記載の創傷包帯材料。
【請求項７】
前記創傷包帯材料が、約０．１ｗｔ％〜約１０ｗｔ％の範囲の前記複合体を含むことを特徴とする請求項１乃至６に記載の創傷包帯材料。
【請求項８】
前記創傷包帯材料における前記銀の量が約０．１ｗｔ％〜約２ｗｔ％の範囲であることを特徴とする請求項１乃至７に記載の創傷包帯材料。
【請求項９】
前記創傷包帯材料が、銀と複合体をなした酸化再生セルロース（ＯＲＣ）及びコラーゲンを含むことを特徴とする請求項１乃至８に記載の創傷包帯材料。
【請求項１０】
前記請求項１乃至９に記載の創傷包帯材料を含むことを特徴とする創傷包帯。
【請求項１１】
前記創傷包帯が、滅菌され微生物が通過できない容器にパッケージングされていることを特徴とする請求項１０に記載の創傷包帯。
【請求項１２】
約０．１ｗｔ％〜約３ｗｔ％の範囲の銀を含む創傷の治療に使用する材料の調製に陰イオン多糖と銀の複合体を使用すること。
【請求項１３】
前記創傷が、静脈潰瘍、褥瘡潰瘍、または糖尿病性潰瘍などの慢性創傷であることを特徴とする請求項１３に記載の使用。
【請求項１４】
前記治療が、前記創傷の表面に直接前記創傷包帯材料を適用することを含むことを特徴とする請求項１２または１３に記載の使用。
【請求項１５】
約０．１ｗｔ％〜約３ｗｔ％の範囲の銀を含む炎症の治療に使用する材料の調製に陰イオン多糖と銀の複合体を使用すること。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、酸化再生セルロース（ＯＲＣ）などの陰イオン多糖（anionic polysaccharide）と銀で形成された複合体を含む創傷包帯材料、及び創傷の治療に対するその使用に関する。
【０００２】
アルギン酸塩、ヒアルロン酸及びその塩、及び酸化再生セルロース（ＯＲＣ）などの酸化セルロースなどの陰イオン多糖は創傷包帯材料としての使用が知られている。アルギン酸塩及びＯＲＣは創傷に当てると止血効果がある。
【０００３】
欧州特許出願第０４３７０９５号に、酢酸ナトリウムなどの弱酸の塩の緩衝液でＯＲＣを反応させて中和ＯＲＣ布を得る方法が開示されている。緩衝試薬の使用によりＯＲＣ布が分解しにくくなると言われている。中和ＯＲＣは、トロンビンまたはｔ‐ＰＡなどの酸感受性止血剤を支持することができる。
【０００４】
ＰＣＴ国際公開第９８／００１８０号に、酸化再生セルロース（ＯＲＣ）と混合したコラーゲンの凍結乾燥スポンジを慢性創傷の治療に使用することが開示されている。この混合スポンジは、静脈性潰瘍、褥瘡性潰瘍、及び糖尿病性潰瘍などの慢性潰瘍の治癒を促進する。この明細書に、スルファジアジン銀またはクロルヘキシジンが防腐添加物として含めることができると記載されている。
【０００５】
英国特許出願第７４８２８３号に、銀を含む様々な金属と多糖の複合体が開示されている。国際公開第９１／１１２０６号に、アルギン酸銀塩（silver alginate salts）の創傷包帯への使用が開示されている。国際公開第８７／０５５１７号に、抗菌創傷包帯として或いはその包帯に含めて用いることができるヒアルロン酸の銀塩が開示されている。
【０００６】
ＰＣＴ国際公開第０２／４３７４３号に、陰イオン多糖の銀塩及びその銀塩の光安定性を改善する物質を含む創傷包帯が開示されている。この光安定物質として、アンモニア、アンモニウム塩、チオ硫酸塩、塩化物、及び／または過酸化物を挙げることができる。好適な実施形態では、光安定剤は塩化アンモニウム水である。
【０００７】
本発明は、銀と陰イオン多糖の複合体を含む創傷包帯材料を提供する。この材料は、約０．１ｗｔ％〜約３ｗｔ％の銀を含む。
【０００８】
ここで用いる用語「複合体」は、分子スケールでの均質混合物を指し、好ましくは銀と多糖がイオン結合または共有結合している。この複合体は、陰イオン多糖とＡｇ+で形成された塩を含むのが好ましいが、例えばこの複合体を光に曝露するなどして生成する銀クラスター及び／またはコロイド状銀金属を含むこともできる。
【０００９】
好ましくは、陰イオン多糖はポリカルボキシレートである。好適な陰イオン多糖として、アルギン酸塩、ヒアルロン酸、ペクチン、カラゲナン、ザンサンガム、硫酸デキストラン、カルボキシメチルセルロースなどのセルロース誘導体、及び酸化セルロースを挙げることができる。
【００１０】
ここで用いる用語「酸化セルロース」は、例えば４酸化２窒素でのセルロースの酸化によって生成されるあらゆる物質を指す。このような酸化により、多糖残基の第１級アルコール基がカルボン酸基に転換され、セルロース鎖内にウロン酸残基が形成される。酸化反応の選択性が完全でないため、炭素２及び炭素３のヒドロキシル基がケト形に転換されることがある。このようなケト単位は、ｐＨ７以上でラクトン及び糖の環を切断してポリマー分解を開始するアルカリで不安定な結合を誘導する。従って、酸化セルロースは、生理的条件下で生体分解性かつ生体吸収性である。
【００１１】
本発明に用いるのに好適な酸化セルロースは、レーヨンなどの再生セルロースの酸化によって生成される酸化再生セルロース（ＯＲＣ）である。以前から、ＯＲＣは止血特性を有することが知られている。ＯＲＣは、１９５０年からＳＵＲＧＩＣＥＬ（ジョンソン・アンド・ジョンソン・メディカル・インコーポレイテッド（Johnson & Johnson medical, Inc.）の登録商標）と呼ばれる止血布として市販されている。この製品は、編レーヨン材料を酸化して製造される。
【００１２】
陰イオン多糖は、ｐＨ７で実質的に水に溶解しないのが好ましい。陰イオン多糖の分子量は、好ましくは約２０，０００を超える、より好ましくは約５０，０００を超える。陰イオン多糖は、フィルムの形態または長さが１ｍｍを超える繊維が好ましい。
【００１３】
複合体中の銀の質量は、陰イオン多糖の質量に対して、好ましくは約０．１ｗｔ％〜約５０ｗｔ％、より好ましくは約１ｗｔ％〜約４０ｗｔ％、更に好ましくは２ｗｔ％〜３０ｗｔ％、最も好ましくは約５ｗｔ％〜約２５ｗｔ％である。
【００１４】
銀含有複合体が抗菌創傷包帯材料の製造に適していることが分かっている。銀は、創傷包帯に抗菌特性を付与する。更に驚くべきことに、複合体の銀は、約０．１ｗｔ％〜約３ｗｔ％の低濃度で創傷を治癒する細胞を増殖させる効果があり、本発明の複合体を創傷に直接当てるだけで創傷の治癒が促されると期待される。培養細胞に対する銀の微量効果は、細菌と細胞の両方の増殖に影響を及ぼすとして知られている。従って、本発明の包帯の銀が創傷治癒に重要なある種の細胞に逆効果を有し得るという発見は驚きである。
【００１５】
驚くべきことに、上記した低レベルの銀を含む創傷包帯材料がＴＮＦ‐α及びＩＬ‐１の産生を抑制する驚くべき能力を有するということが分かった。これは、創傷包帯材料の有益な抗炎症活性につながると期待される。
【００１６】
本発明に従った創傷包帯材料は、粉末、微小球、フレーク、マット、またはフィルムなどのあらゆる便利な形態にすることができる。
【００１７】
ある実施形態では、本発明に従った創傷包帯材料は局所適用のために半固体すなわちゲル軟膏の形態である。
【００１８】
ある実施形態では、本発明に従った創傷包帯材料は、慢性創傷に適用するために凍結乾燥スポンジまたは溶剤乾燥生体吸収性スポンジの形態である。スポンジの孔の大きさの平均は、好ましくは１０μｍ〜５００μｍ、より好ましくは１００μｍ〜３００μｍである。
【００１９】
別の実施形態では、本発明に従った創傷包帯材料は、連続的または断続的（例えば、穿孔された）にすることができる可撓性フィルムの形態である。この可撓性フィルムは、可撓性を付与するグリセロールなどの可塑剤を含むのが好ましい。
【００２０】
創傷包帯材料は、例えば実質的に厚みが均一のシートなどのシート状であるのが好ましい。このようなシートの面積は通常、約１ｃｍ2〜約４００ｃｍ2であり、その厚みは通常、約１ｍｍ〜約１０ｍｍである。このシートは、例えば乾燥凍結スポンジ、または網繊維シート、織繊維シート、不織繊維シート、またはゲルシートとすることができる。このシートは、約１５ｗｔ％の水を含むのが好ましい。
【００２１】
創傷包帯材料は銀含有複合体を、好ましくは約０．１ｗｔ％〜１００ｗｔ％、より好ましくは約０．１ｗｔ％〜５ｗｔ％、例えば約０．２ｗｔ％〜約２ｗｔ％含む。創傷包帯材料の銀の量は、約０．１ｗｔ％〜約３ｗｔ％、好ましくは約０．１ｗｔ％〜約１ｗｔ％、例えば約０．２ｗｔ％〜約０．６ｗｔ％、一般的には約０．３ｗｔ％である。銀の量が少ないと、抗菌効果が不十分となる。銀の量が多いと、創傷を治癒する細胞に対する増殖抑制効果が上昇する。
【００２２】
本発明に従った創傷包帯材料は更に、銀と複合体を形成していない１または複数の種類の多糖を含むことができる。このような多糖は、銀と複合体をなすのに好適であるとして上記した任意の１または複数の種類の陰イオン多糖を含むことができる。別法或いはこれに加えて、別の多糖として、例えばセルロース、レーヨンなどの再生セルロース、ヒドロキシエチルセルロースなどの非陰イオンセルロース誘導体、及びデンプン誘導体などの任意の他の医学的に許容される多糖を挙げることができる。
【００２３】
本発明に従った創傷包帯材料は更に、例えば、ビスマス、銅、ニッケル、亜鉛、マンガン、マグネシウム、金、またはこれらの組合せなどの銀以外の治療効果のある金属イオンと複合体を形成した陰イオン多糖を含むことができる。このような他の金属と複合体を形成した多糖の量は、好ましくは創傷包帯材料の約０．０１ｗｔ％〜１０ｗｔ％、より好ましくは約０．０１ｗｔ％〜１ｗｔ％である。このような他の金属の量は、好ましくは創傷包帯材料の１０ｐｐｍ〜１０，０００ｐｐｍ、より好ましくは約５０ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍである。
【００２４】
本発明に従った創傷包帯材料は更に、多糖の他に、ナイロンやポリエステルの人造繊維などの織物繊維、溶融吹込みナイロン繊維などの不織繊維、及びポリラクチド／ポリグリコリド繊維などの生体吸収性繊維を含む他の医学的に許容される材料を含むことができる。このような繊維を用いて、多糖の補強及び希釈をすることができる。このような繊維は、好ましくは創傷包帯材料の最大約９０ｗｔ％、より好ましくは約２５ｗｔ％〜約７５ｗｔ％である。
【００２５】
本発明に従った創傷包帯材料は更に、陰イオン多糖の銀複合体に加えてコラーゲンを含むことができる。包帯材料におけるコラーゲンの量は、創傷包帯材料の乾燥質量に対して、好ましくは約１０ｗｔ％〜約９０ｗｔ％、より好ましくは約２５ｗｔ％〜約７５ｗｔ％である。
【００２６】
このようなコラーゲンは、Ｉ型、ＩＩ型、ＩＩＩ型天然コラーゲンなどの天然コラーゲン、アテロペプチド（atelopeptide）コラーゲン、再生コラーゲン、及びゼラチンから選択することができる。
【００２７】
ある実施形態では、創傷包帯材料のコラーゲンの少なくとも一部が銀と複合体をなしている。これは、コラーゲンを銀塩溶液で処理して達成することができる。この銀塩は、例えば、約０．０１モル〜約１モルの濃度の酢酸銀または硝酸銀とすることができる。この処理は、ｐＨ約５〜約９で実施するのが好ましい。この銀は、コラーゲンアミノ酸の窒素含有側鎖、具体的にはリシン、ヒドロキシリシン、アスパラギン、グルタミン、及びアルギニンと主に複合体をなすと考えられる。銀はまた、存在する場合はメチオニン及びシステイン残基のスルフヒドリル基、並びにアスパラギン酸及びグルタミン酸のカルボキシル基に結合することができる。
【００２８】
コラーゲン複合体の銀の量は、コラーゲンの質量に対して好ましくは約０．０１ｗｔ％〜約３０ｗｔ％、より好ましくは約０．１ｗｔ％〜約２０ｗｔ％、更に好ましくは約２ｗｔ％〜約１０ｗｔ％である。創傷包帯材料における銀‐コラーゲン複合体の量は、好ましくは約０．１ｗｔ％〜約１０ｗｔ％、より好ましくは約０．１ｗｔ％〜約２ｗｔ％である。いずれの場合も、創傷包帯材料における銀の合計量は概ね上記した通りである。
【００２９】
ある実施形態では、本発明に従った創傷包帯材料は完全に吸収性である。本発明に従った創傷包帯材料は、創傷面への直接の適用に適しているのが好ましい。
【００３０】
本発明に従った好適な創傷包帯材料は、言及することを以ってその内容の全てを本明細書の一部とするＰＣＴ国際出願第９８／００１８０号または欧州特許出願第１１５３６２２号に開示されている銀を含むタイプの包帯材料である。要するに、このような包帯材料は、コラーゲンとＯＲＣの混合物を含む凍結乾燥スポンジ、好ましくはこのような混合物から実質的になる凍結乾燥スポンジである。ＯＲＣに対するコラーゲンの質量比は、好ましくは約４０：６０〜約６０：４０である。本発明に従ったスポンジでは、このＯＲＣの一部が銀／ＯＲＣ複合体で置換され、かつ／またはコラーゲンの一部が銀／コラーゲン複合体で置換され得る。好ましくは、ＯＲＣの約０．１ｗｔ％〜約５０ｗｔ％を銀‐ＯＲＣ複合体で置換し、コラーゲンも同様の率で同様に置換することができる。銀イオン交換は、このようなコラーゲン／ＯＲＣ創傷包帯材料におけるコラーゲンとＯＲＣの間で起こり得ることを理解されたい。
【００３１】
特に好適な創傷包帯材料は、約３５ｗｔ％〜約６０ｗｔ％のＯＲＣ、約６０ｗｔ％〜約３５ｗｔ％のコラーゲン、約０．５ｗｔ％〜約５ｗｔ％のＯＲＣ／銀複合体を含む凍結乾燥スポンジである。この複合体は、その乾燥重量に対して約１０ｗｔ％〜約４０ｗｔ％の銀を含む。好適な実施形態では、この材料は、約０．５ｗｔ％〜約２ｗｔ％のＯＲＣ／銀複合体を含む。好適な実施形態では、この材料は、コラーゲン、ＯＲＣ、ＯＲＣ／銀複合体から本質的になる。
【００３２】
別の態様では、本発明は、本発明に従った創傷包帯材料を含む創傷包帯を提供する。この創傷包帯は、本発明に従った創傷包帯材料からなるまたは本質的になる。
【００３３】
この創傷包帯は、好ましくはシート状であって、本発明に従った創傷包帯材料の活性層を含む。この活性層は、通常は使用中に創傷に接触する層であるが、ある実施形態では、液体浸透防止シートによって創傷から分離することができる。活性層の面積は、好ましくは約１ｃｍ2〜約４００ｃｍ2、より好ましくは約４ｃｍ2〜約１００ｃｍ2である。
【００３４】
創傷包帯は更に、活性層の創傷側と反対側の活性層の上層をなす裏当てシートを含むのが好ましい。この裏当てシートは活性層よりも大きく、幅が約１ｍｍ〜５０ｍｍ、好ましくは５ｍｍ〜２０ｍｍの辺縁部が活性層の周囲に延在して、いわゆるアイランド型包帯を形成するのが好ましい。このような場合、裏当てシートの少なくとも辺縁部に、医療用感圧接着剤をコーティングするのが好ましい。
【００３５】
裏当てシートは、実質的に液体不浸透性であるのが好ましい。裏当てシートは、半浸透性であるのが好ましい。つまり、裏当てシートは、水蒸気は透過させるが水或いは滲出液は浸透させないのが好ましい。裏当てシートはまた、微生物が通過できないのが好ましい。連続的で柔軟性の好適な裏当てシートは、温度３７．５℃、相対湿度差１００％〜１０％の条件で、２４時間で好ましくは３００ｇ／ｍ2〜５，０００ｇ／ｍ2、より好ましくは５０ｇ／ｍ2０〜２，０００ｇ／ｍ2の水蒸気透過率（ＭＶＴＲ）を有するのが好ましい。裏当てシートの厚みは、好ましくは１０μｍ〜１，０００μｍ、より好ましくは１００μｍ〜５００μｍの範囲である。
【００３６】
本発明に従った包帯のＭＶＴＲは全体として、穿孔されたシートが部分的に水蒸気の包帯通過を妨げるため、裏当てシートのみの場合よりも低い。好ましくは、包帯のＭＶＴＲ（包帯のアイランド部分で測定）は、裏当てシートのみの場合のＭＶＴＲの２０％〜８０％、より好ましくは２０％〜６０％、最も好ましくは約４０％である。このような水蒸気透過率により、創傷の周りの皮膚がふやけずに水蒸気条件下で包帯の下側の創傷が治癒できることが分かった。
【００３７】
裏当てシートの形成に好適なポリマーとして、英国特許出願第１２８０６３１号に開示されているようなポリウレタン、ポリアルコキシアルキルアクリレート、及びメタクリレートを挙げることができる。裏当てシートは、大部分が独立した気泡である高密度遮断ポリウレタンフォームの連続層を含むのが好ましい。好適な裏当てシート材料は、ＥＳＴＡＮＥ５７１４Ｆ（登録商標）として販売されているポリウレタンフィルムである。
【００３８】
接着層（含まれる場合）は、水蒸気が通過できる水蒸気透過性及び／またはパターンとすべきである。接着層は、例えば英国特許出願第１２８０６３１号に記載されているようなアクリレートエステルコポリマー系、ポリビニルエチルエーテル系、及びポリウレタン系の感圧接着剤などの、アイランド型創傷包帯に従来から使用されている連続的に水蒸気を透過させる感圧接着剤層であるのが好ましい。接着層の基本質量は、好ましくは２０〜２５０ｇ／ｍ2、より好ましくは５０〜１５０ｇ／ｍ2である。ポリウレタン系感圧接着剤が好ましい。
【００３９】
更に多層吸収剤の層を、活性層と保護シートとの間に形成することができる。例えば、このような層は、使用時に活性層を支持する穿孔されたプラスチックフィルムを含むことができる。このような場合、フィルムの孔は、ヒドロゲル層の孔と整合するのが好ましい。
【００４０】
この包帯は更に、特に滲出している創傷部に用いる場合、活性層と保護シートとの間に吸収層を含むことができる。このオプションの吸収層は、ガーゼ、不織布、超吸収剤、ヒドロゲル、及びこれらの組合せを含め、創傷治癒の分野で創傷の滲出液、血清、または血液を吸収するために従来から用いられているあらゆる層とすることができる。吸収層は、言及することを以ってその内容の全てを本明細書の一部とする欧州特許出願第０５４１３９１号に従って製造される開放気泡親水性ポリウレタンフォームなどの吸収フォームの層を含むのが好ましい。別の実施形態では、吸収層は、例えばビスコース人造繊維のカード繊維（carded web）などの不織布繊維とすることができる。吸収層の基本質量は、５０ｇ／ｍ2〜５００ｇ／ｍ2の範囲、例えば１００ｇ／ｍ2〜４００ｇ／ｍ2とすることができる。圧縮されていない吸収層の厚みは、０．５ｍｍ〜１０ｍｍの範囲で、例えば１ｍｍ〜４ｍｍとすることができる。生理食塩水で測定した開放（非圧縮）液体吸収値は、２５℃で５〜３０ｇ／ｇの範囲とすることができる。吸収層は、キトサン／ＯＲＣ層と実質的に同様に延在するのが好ましい。
【００４１】
包帯の創傷に面する側は、取り外し可能なカバーシートで保護するのが好ましい。このカバーシートは通常、可撓性の熱可塑性材料から形成される。好適な材料として、ポリエステル及びポリオレフィンを挙げることができる。カバーシートの接着面は、剥離面であるのが好ましい。つまり、この剥離面は、活性層及び裏当てシートの接着剤に弱く接着して、ヒドロゲル層からカバーシートを剥がし易くする。例えば、カバーシートは、フルオロポリマーなどの非接着プラスチックから形成するか、或いはシリコンなどの剥離コーティングまたはフルオロポリマー剥離コーティングを設けることができる。
【００４２】
本発明に従った創傷包帯材料及び／または創傷包帯は滅菌するのが好ましい。これらはまた、微生物が通過できない容器にパッケージするのが好ましい。滅菌保障レベルは、１０-6よりも高くするのが好ましい。この包帯はγ線で滅菌するのが好ましい。
【００４３】
更なる態様では、本発明は、創傷、特に静脈性潰瘍、褥瘡潰瘍、または糖尿病性潰瘍などの慢性創傷を治療に用いる本発明に従った創傷包帯材料の製造に銀と陰イオン多糖の複合体を使用することを含む。好ましくは、この治療は、創傷面に直接、創傷包帯材料を適用することを含む。
【００４４】
更なる態様では、本発明は、創傷を治療する方法を提供する。この方法は、陰イオン多糖と銀の複合体を有効量含む創傷包帯材料を創傷に適用することを含む。この複合体は、抗菌効果はあるが、創傷を治癒する細胞に対する有意な増殖抑制活性を有していない。創傷包帯材料は、炎症を抑制する効果を有するのが好ましい。この方法は、静脈潰瘍、褥瘡潰瘍、または糖尿病性潰瘍などの慢性創傷の治療に特に適している。
【００４５】
本発明に従った材料は、驚くべきことに、マクロファージからのＴＮＦ‐αの放出を抑制する効果があることが分かった。この特性により、炎症の治療に対して材料を有効にできると期待される。従って、別の態様では、本発明は、炎症の治療に用いる銀を約０．１ｗｔ％〜約３ｗｔ％を含む材料の製造に陰イオン多糖と銀の複合体を使用することを含む。
【００４６】
本発明の材料に含まれる陰イオン多糖と銀の複合体は、銀塩溶液で陰イオン多糖を処理するステップを含む方法で得ることができる。この溶液は、水溶液であるのが好ましい。
【００４７】
陰イオン多糖は、ｐＨ７の水に実質的に溶解しないのが好ましい。従って、固体状の多糖に対して処理する。例えば、多糖は、固体繊維、シート、スポンジ、または布の形態とすることができる。ある実施形態では、陰イオン多糖は塩であり、従って処理をイオン交換とみなすことができる。別の実施形態では、陰イオン多糖は少なくとも部分的に遊離酸の形である。このような場合、銀塩は、例えば酢酸銀などの弱酸の塩であるのが好ましい。従って、陰イオン多糖は銀塩によって少なくとも部分的に中和される。同様の処理が、言及することを以ってその内容の全てを本明細書の一部とする欧州特許出願第０４３７０９５号に開示されている。
【００４８】
中和反応は、水のみまたはアルコールのみで実施することができるが、水とアルコールの混合液で実施するのが好ましい。水とアルコールの混合液を用いることにより、水によって弱酸塩の溶解性が高くなり、アルコールによって中和反応中における陰イオン多糖の過度な膨張、歪み、及び弱体化が防止される。従って、材料の物理特性が維持される。上記した多くの塩がエタノールと水の混合液に良く溶けるため、メタノールが好適なアルコールである。水に対するアルコールの比率は約４：１〜１：４の範囲が好ましい。混合液のアルコールが多すぎると、特にアルコールがメタノール以外の場合、一部の塩が溶解できなくなる。混合液の水が多くなりすぎると、中和反応中に多糖の膨張が起こり、多糖の引張り強さなどの物理特性の一部が失われる。他の有用なアルコールとして、例えばエチルアルコール、プロピルアルコール、及びイソプロピルアルコールを挙げることができる。
【００４９】
酢酸銀などの軽度の中和剤を使用して中和の程度を制御することができる。化学量論的及び化学的に等量の中和剤と陰イオン多糖のカルボン酸を用いても１００％中和された多糖を生成することができない。なぜなら、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、及び水酸化アンモニウムなどの塩基との強い不可逆反応で生成されるためである。
【００５０】
陰イオン多糖がイオン交換体として働き、そこを通過するあらゆる銀塩の銀陽イオンを溶液から取り出す。この交換の副産物は塩からの酸であり、有機弱酸の塩を使用すると、多糖を破壊しない酢酸などの弱酸が生成される。塩化ナトリウムや硫酸ナトリウムなどの強酸の塩を使用すると、副産物としてそれぞれ塩酸または硫酸が生成され、これらの強塩が多糖の解重合を引き起こすなどして多糖を破壊する。
【００５１】
弱酸の銀塩を用いる場合、銀のイオンが多糖の陽子と交換され、塩の一部が弱酸に転換される。このような溶液中での酸と塩の混合で緩衝液となり、ｐＨを殆ど一定に維持し中和の程度を制御する。平衡反応が確立され、銀イオンが多糖の酸部分及び塩の分子に結合する。銀イオンのこのような分配により、多糖の中和反応が終了しない。
【００５２】
例えば理論量の酢酸銀を使用することで、酸化セルロースポリマーのカルボン酸基を約６５％〜７５％中和することができる。自己緩衝液生成によるこのｐＨの調節と、メタノールの使用による材料の膨張制御により、材料が部分的に中和され、例えば多糖の引張り強度及び形状などの物理特性が維持される。
【００５３】
使用する銀塩の量は通常、多糖のカルボン酸量の理論量とほぼ等量から最大２倍である。別法では、第１のチャージが一定のｐＨに達した後、新しい溶媒と塩で反応を再チャージする場合、理論量の銀塩の第２のチャージを用いることができる。次いで、ｐＨが上昇した材料を洗浄して過剰な銀塩及びイオンを取り除く。
【００５４】
上記した方法で得た複合体を、本発明の任意の態様に従った製品及び方法に用いることができることを理解されたい。より一般的には、好ましいとして本発明の任意の態様または上記した方法を用いて記載した全ての特徴またはそれらの組合せは、本発明の他の全ての態様においても好ましい。更に、ここに記載した特定の特徴または好ましい特徴の任意の組合せも開示の範囲内に含まれる。
【００５５】
本発明に従ったプロセス及び製品の特定の実施形態を単なる例として添付の図面を用いて以下に記載する。
【００５６】
例１
次のようにＯＲＣと銀の複合体を用意した。
【００５７】
スクリーンプレート内でロータリーナイフカッターを用いてＳＵＲＧＩＣＥＬ布（アーリントンに所在のジョンソン・アンド・ジョンソン・メディカル（Johnson & Johnson Medical,Arlington））を、６０℃未満に維持しながら、粉砕して繊維状ＯＲＣ粉末を用意した。
【００５８】
酢酸銀粉末（４．０８ｇ）を８００ｍｌの脱イオン水に溶解した。全ての粉末が溶解して無色透明の液体になったら、粉砕したＯＲＣ繊維（５ｇ）をこの溶液に添加した。次いで、ＯＲＣを６０分間または所望に応じてそれ以下の時間反応させた。次いで、この溶液を濾過して繊維を収集し、脱イオン水またはアルコールで洗浄した。次いで、ＯＲＣの銀複合体を一晩または繊維が乾燥するまで３７℃で乾燥させた。最終産物が暗くなるのを軽減するために、反応の間、反応液及び反応した繊維に光が当たらないようにした。
【００５９】
例２‐７
本発明に従った創傷包帯材料として用いるのに適した凍結乾燥コラーゲン／ＯＲＣスポンジを以下のように作製した。
【００６０】
まず、次のようにウシ真皮からコラーゲン成分を調製した。ウシ真皮を、皮から分離し、削り落とし、次亜塩素酸ナトリウム溶液（０．０３％ ｗ／ｖ）に浸漬して、微生物活動が後続の処理を妨げるのを防止する。
【００６１】
次いで、この真皮を水で洗浄し、水酸化ナトリウム（０．２％ ｗ／ｖ）及び過酸化水素（０．０２％ ｗ／ｖ）を含む溶液で、周囲温度で処理し、真皮を膨張させ滅菌した。
【００６２】
次いで、この真皮細片に対して、水酸化ナトリウム、水酸化カルシウム、及び炭酸水素ナトリウム（それぞれ０．４％ ｗ／ｖ、０．６％ ｗ／ｖ、及び０．０５％ ｗ／ｖ）を含む溶液で、ｐＨ１２．２超、周囲温度、１０〜１４日の期間、アミド窒素レベルが０．２４ｍＭ／ｇよりも低くなるまで混転し、アルカリ処理ステップを実施した。
【００６３】
次いで、この真皮細片に対して、周囲温度、ｐＨ０．８〜１．２、１％塩酸で酸処理ステップを実施した。この処理は、真皮細片が酸を十分に吸収してｐＨが２．５未満になるまで混転を続けた。次いで、この細片をｐＨが３．０〜３．４になるまで水で洗浄した。
【００６４】
次いで、この真皮細片を、初めは粗い設定、次は細かい設定にしてボールチョッパーの中で氷で粉砕した。氷としての水１００ｇに対して真皮細片６５０ｇの割合の得られたペーストを、次の工程で使用するまで凍結して保存した。しかしながら、コラーゲンは次の工程でＯＲＣと混ぜるまで凍結乾燥しないで保管した。
【００６５】
次いで、ｐＨ値が３．０になるよう酢酸で酸性化した十分な量の水に、銀‐ＯＲＣ複合体、粉砕した非修飾ＯＲＣ粉末、必要量（固体の量による）の凍結コラーゲンペーストを、以下に示す質量割合となり、総固形分が１．０％〜２．０％になるように添加した。
例２：４５％銀‐ＯＲＣ／５５％コラーゲン
例３：２０％銀‐ＯＲＣ＋１５％ＯＲＣ／５５％コラーゲン
例４：１０％銀‐ＯＲＣ＋３５％ＯＲＣ／５５％コラーゲン
例５：２％銀‐ＯＲＣ＋４３％ＯＲＣ／５５％コラーゲン
例６：１％銀‐ＯＲＣ＋４４％ＯＲＣ／５５％コラーゲン
例７：０．２％銀‐ＯＲＣ＋４４．８％ＯＲＣ／５５％コラーゲン
【００６６】
この混合物を、Ｆｒｙｍａ ＭＺ１３０Ｄホモジナイザーを用いて均質なスラリーになるように設定を徐々に細かくしてホモジナイズした。このスラリーのｐＨは２．９〜３．１に維持した。スラリーの温度は、２０℃未満に維持し、固形分を１％±０．０７に維持した。
【００６７】
得られたスラリーを脱気器に移送した。スラリーのガスが抜けるように断続的に撹拌する３０分間の真空引きを開始した。次いで、このスラリーを凍結乾燥トレイに２５ｍｍの深さになるまで移送した。このトレイを、−４０℃に設定されたフリーザーの棚に置いた。次いで、凍結乾燥プログラムを開始して乾燥させ、脱水凍結によりコラーゲンとＯＲＣを架橋結合させて厚いスポンジパッドを形成した。
【００６８】
このサイクルが完了したら、真空を解除し、凍結乾燥したブロックを取り出し、この上面層と底面層を除去し、次いでこのブロックを３ｍｍ厚のパッドに分割した。凍結乾燥したブロックをパッドに分割するステップはＦｅｃｋｅｎ Ｋｉｒｆｅｌ Ｋ１スリッターで実施した。
【００６９】
最後に、これらのパッドをダイカッターで所望の大きさ及び形状に切断し、パッケージングし、１８‐２９ＫＧｙのコバルト６０γ線照射で滅菌した。驚くべきことに、この照射でコラーゲンの著しい変性が起こらなかった。これは、ＯＲＣの存在による安定化と考えられる。得られた凍結乾燥コラーゲンＯＲＣパッドは均一の白いビロード状の外観であった。
【００７０】
例８‐１１
コラーゲンの一部を次に示すようにコラーゲン‐銀複合体で置換したコラーゲン／ＯＲＣスポンジを非修飾ＯＲＣとコラーゲンから作製した。
【００７１】
酢酸銀粉末（１．４８ｇ）を４００ｍｌの脱イオン水に入れ、撹拌及び加温して溶解した。
【００７２】
コラーゲンスラリー（４１７ｇ、固体はスラリーの１．２％で５ｇ）を、酢酸銀溶液に添加し、ゆっくり攪拌しながら１０分間反応させた（コラーゲンをより長い時間反応させると、コラーゲンが繊維質になり酢酸で再びスラリーにするのが困難となる）。
【００７３】
この溶液を漏斗と濾過紙を用いて濾過し、その固体を脱イオン水で洗浄した。濾過紙を両側から軽く押して固体に含まれている余分な液体を搾り出した。このステップ及び続くステップでは、このコラーゲンの固体に光が当たらないようにした。
【００７４】
この固体を、０．０５Ｍ酢酸を用いて４１７ｇの質量にした。この混合物を工業用のワーリングブレンダー（Ｗａｒｉｎｇ Ｂｌｅｎｄｅｒ）に入れ、滑らかなスラリーになるまで混合した。
【００７５】
次いで、例２‐７で説明したように、非修飾ＯＲＣと、一部を銀‐コラーゲン複合体スラリーで置換したコラーゲンスラリーを用いて凍結乾燥スポンジを作製した。これらの例は、本発明の範囲内であるとみなされる。なぜなら、銀‐コラーゲン複合体の銀もまた、調製条件下でＯＲＣと複合体を形成し交換する。以下の混合物を用意した。
例８：５５％銀‐コラーゲン／４５％ＯＲＣ
例９：４５％銀‐コラーゲン＋１０％コラーゲン／４５％ＯＲＣ
例１０：３０％銀‐コラーゲン＋２５％コラーゲン／４５％ＯＲＣ
例１１：１５％銀‐コラーゲン＋４０％コラーゲン／４５％ＯＲＣ
【００７６】
手順１
例２‐７で作製したスポンジの緑膿菌（Pseudomonas Aeruginosa）及び黄色ブドウ球菌（Staphylococcus Aureus）に対する殺菌力を阻止帯から調べた。
【００７７】
滅菌条件下で、それぞれのサンプルから６個の正方形（２ｃｍ×２ｃｍ）をカットした。実験の１日目に、緑膿菌及び黄色ブドウ球菌の両方の培養物を診断鋭敏寒天培地（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ Ａｇａｒ：ＤＳＡ）で好気的に、３７℃で２４時間インキュベートした。２４時間後に、それぞれの試験サンプルをＤＳＡプレートに入れ、０．５ｍｌの緩衝液で迅速に濡らした。３個の正方形サンプルをプレートに入れて緑膿菌を接種し、別の３個のサンプルをプレートに入れて黄色ブドウ球菌を接種した。次いで、プレートを３７℃で２４時間インキュベートした。次いで、サンプルの周りの増殖が阻止された領域をキャリパーで測定し、この試験サンプルを新しく接種したＤＳＡプレートに入れた。サンプルの下側部分をスワブ試験した。ＤＳＡプレートのスワブを塗布して２４時間インキュベートし、その成長を調べて、サンプルが殺菌ではないにしても静菌であったかを決定した。このサンプルを新しく接種したプレートに移して上記した手順を、サンプルが無傷である限り、７２時間の間、２４時間ごとに実施した。
【００７８】
ネガティブコントロールとして、銀を一切含まない４５％ＯＲＣ／５５％コラーゲンの凍結乾燥スポンジを試験した。市販の銀含有抗菌包帯（スミス・アンド・ネフュー（Smith & Nephew）の登録商標であるＡＣＴＩＣＯＡＴ）及び硝酸銀溶液（０．５％）をポジティブコントロールとして用い、試験の間、両方の阻止帯を観察した。
【００７９】
図１及び図２を参照すると、１％以上の銀‐ＯＲＣを含む材料で、黄色ブドウ球菌に対して著しい殺菌効果があったことが分かる。この能力はＡＣＴＩＣＯＡＴ（登録商標）包帯の能力に相当する。
【００８０】
図３を参照すると、１０％以上の銀‐ＯＲＣを含む材料で、緑膿菌に対して著しい殺菌効果があったことが分かる。２４時間後における能力は、ＡＣＴＩＣＯＡＴ（登録商標）包帯の能力よりも優れていた。
【００８１】
例８‐１１で作製したスポンジの殺菌力を緑膿菌に対して上記した方法と同様の方法で阻止帯を調べて試験した。ここでも、５５％コラーゲン／４５％ＯＲＣスポンジをネガティブコントロールとして用い、硝酸銀溶液（０．５％）及びＡＣＴＩＣＯＡＴ（登録商標）をポジティブコントロールとして用いた。４８時間後の結果が図５に示されている。コラーゲン‐銀複合体で作製したスポンジが、ポジティブコントロール及び図３の銀‐ＯＲＣ複合体に類似した阻止帯を示すことが分かる。
【００８２】
手順２
上記した例で作製した包帯材料の増殖抑制効果を次のように評価した。
【００８３】
プロトタイプ抽出物は、試験するそれぞれの創傷包帯材料１ｍｇを１ｍｌの無血清培地に入れ、滅菌条件下、３７℃で２４時間インキュベートして調製した。
【００８４】
成人ヒト皮膚線維芽細胞をＤＭＥＭ １０％ＦＢＳで増殖させ維持した（標準培地、ダルベッコ最小必須培地(Dulbecco's minimal essential medium)、ウシ胎児血清）。これらの細胞を通常の継代培養し、９５％コンフルエントで実験に用いた。成人ヒト皮膚線維芽細胞を９５％コンフルエントで採取し、細胞密度が２．５×１０4細胞／ｍｌで、９６ウェルマイクロタイタープレート（１００μｌ／ウェル）のＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳに再び播種した。加湿されたインキュベータ（３７℃、５％ＣＯ2）で細胞がプレート表面に付着できるように２４時間インキュベートした。次いで、この培地を吸引除去し、細胞の単層を無血清ＤＭＥＭで洗浄した。試験サンプル（それぞれのプロトタイプの抽出物）を、細胞の単層（１００μｌ／ウェル）に添加し、それぞれの濃度で６回試験した。血清含有成長培地（ＤＭＥＭ １０％ＦＢＳ）をポジティブコントロールとして用い、無血清培地をネガティブコントロールとして用いた。全てのサンプルを細胞と共に、３７℃、５％ＣＯ2で４８時間インキュベートした。このインキュベーションの後、条件培地を吸引除去し、ボーリンガー・マンハイム（Boehringer Mannheim）から入手可能な細胞増殖キットＸＴＴ（Cell Proliferation Kit II、カタログ番号１４６５０１５）の標識液で置換した。この標識液を添加したら、４５０ｎｍにおける最初の吸光度を測定し、次いでマイクロタイタープレートを３７℃、５％ＣＯ2でインキュベートし、吸光度を４時間に亘って監視した。それぞれのプロトタイプの増殖効果を、ポジティブコントロール及びネガティブコントロールに対して測定した吸光度を比較して評価した。
【００８５】
銀を一切含まない４５％ＯＲＣ／５５％コラーゲンの凍結乾燥スポンジが線維芽細胞の増殖を促進することが分かっているため、これをポジティブコントロールとして試験した。
【００８６】
ＡＣＴＩＣＯＡＴ（登録商標）が培養細胞に対する銀の効果が有毒であって高濃度で細胞死を引き起こすことが分かっているため、これをネガティブコントロールとして用いた。
【００８７】
図４に示されている結果は非常に驚きである。０．２％の銀‐ＯＲＣ複合体含むサンプル及び１％の銀‐ＯＲＣ複合体を含むサンプルはそれぞれ、線維芽細胞の成長を著しく促進することが分かった。この効果は、細胞増殖を刺激することが既に分かっているコラーゲン／ＯＲＣ単独で観察された効果の少なくとも２倍であった。この刺激効果は、銀‐ＯＲＣの濃度が低い場合に限定され、２％以上の濃度では細胞増殖にとって有害であった。この実験のＡＣＴＩＣＯＡＴ（登録商標）コントロールは、線維芽細胞の成長に対して予想された有害効果を示した。
【００８８】
図６を参照すると、４５％の銀‐コラーゲン、１０％の非修飾コラーゲン、及び４５％のＯＲＣで作製したコラーゲン／ＯＲＣ材料のサンプル（例９）は線維芽細胞の増殖を刺激するが、コラーゲン／ＯＲＣポジティブコントロールほど刺激しないことが分かる。
【００８９】
手順３
本発明に従った創傷包帯材料の抗炎症活性の可能性を次のように調べた。
【００９０】
リポ多糖（ＬＰＳ）が、単球マクロファージ細胞におけるＴＮＦ‐α及びＩＬ‐１の産生を誘導することが分かっている。ＴＮＦ‐α及びＩＬ‐１が炎症プロセスを促進することが分かっているため、この応答を用いて創傷包帯の抗炎症活性の可能性を評価することができる。
【００９１】
創傷包帯材料の抗炎症活性を評価するために、サンプルをリポ多糖（E.Coli 055.B5、シグマ・ケミカル社（Sigma Chemical Co.））の存在下及び非存在下で単球（ＴＨＰ‐１細胞、欧州細胞培養コレクション（European Collection of Cell Cultures）から入手）と共にインキュベートした。ポジティブコントロール及びネガティブコントロールとして、様々な基準包帯材料と様々な濃度の酢酸銀を、ＬＰＳの存在下及び非存在下でＴＨＰ‐１細胞と共にインキュベートした。酢酸銀の濃度は、０．０１Ｍ〜０．００１ｍＭの範囲とした。酢酸銀は、この範囲の高濃度で細胞毒性を有し、低濃度では細胞毒性を有していないことが知られている。ＴＨＰ‐１細胞が産生するＴＮＦ‐α及びＩＬ‐１の両方のレベルを、ＬＰＳを添加してから２４時間測定した。
【００９２】
以下に示す創傷包帯材料を試験した。
（Ａ）例６で説明したように用意した１ｗｔ％の銀／ＯＲＣ複合体を含む本発明に従った凍結乾燥スポンジ創傷包帯材料
（Ｂ）ジョンソン・アンド・ジョンソン・ウーンドケア（Johnson & Johnson Wound Care）からＰＲＯＭＯＧＲＡＮ（登録商標）として入手可能で、欧州特許出願第１１５３６２２号に開示されているように用意した、５５ｗｔ％のコラーゲンと４５ｗｔ％のＯＲＣからなる凍結乾燥スポンジ
（Ｃ）ジョンソン・アンド・ジョンソン・ウーンドケア（Johnson & Johnson Wound Care）がＳＯＦ‐ＷＩＣＫ（登録商標）として販売している医療用ガーゼ
【００９３】
実験の手順は次の通りである。
【００９４】
ＴＨＰ‐１細胞は低濃度ＬＰＳ １０％ＦＢＳに放置した。次いで、これらの細胞を１，０００ｒｐｍで１０分間スピンダウンし、再懸濁させて１０，０００細胞／ｍｌの濃度とした。次いで、ＰＭＡ（ホルボール１２‐ミリステート１３‐アセテート、シグマ・ケミカル社（Sigma Chemical Co.））をこの細胞懸濁液に添加して２．４×１０-7Ｍの最終濃度にした。
【００９５】
次いで、この細胞懸濁液を用いて、１０，０００細胞／ウェルで２４ウェルマイクロタイタープレートで播種した。次いで、このプレートを３６℃、５％ＣＯ2で７２時間インキュベートし、細胞が組織培養プラスチックに付着するようにした。
【００９６】
１ｍｇ／ｍｌのＬＰＳを含むＲＰＭＩ培地を用意した（ＬＰＳは、滅菌したリン酸緩衝食塩水で１ｍｇ／ｍｌに戻した）。インキュベーション後、２４ウェルマイクロタイタープレートのＰＭＡ培地を吸引除去し、ＲＰＭＩ＋ＬＰＳまたはＲＰＭＩ培地で置換した。
【００９７】
試験する材料から６ｍｍにパンチしたサンプルを用意して、２分以下、ＰＢＳに浸漬した。それぞれの種類の包帯材料から２つのサンプルを４回サンプリングし、それぞれの種類の包帯材料について合計８個のサンプルを得た。酢酸銀溶液をＲＰＭＩ培地で、０．１Ｍ、１０ｍＭ、１ｍＭ、及び０．１ｍＭの濃度に調製した。
【００９８】
予め浸漬した包帯材料のサンプル及び異なった濃度の酢酸銀をマイクロタイタープレートに添加した。それぞれの酢酸銀溶液１０μｌをそれぞれの試験ウェルに添加して、０．０１Ｍ、１ｍＭ、０．１ｍＭ、及び０．０１ｍＭの試験濃度にした。
【００９９】
次いでマイクロタイタープレートを３７℃、５％ＣＯ2でインキュベートした。インキュベーションの４時間後、６時間後、及び２４時間後に、それぞれのウェルから条件培地の２０μｌアリコットを取り出した。サンプルをブレットチューブ（bullet tubes）に移して、ＥＬＩＳＡ分析まで−７０℃で保管した。
【０１００】
ＥＬＩＳＡ分析の前に、培地サンプルを１０μｌのアリコットに分割して、較正希釈液で１：２に希釈した（使用する較正希釈液は実施するＥＬＩＳＡによって異なる）。この希釈により、サンプルを標準曲線範囲内にした。ＥＬＩＳＡキットの製造取扱説明書に従った。ＥＬＩＳＡキットはＲ＆Ｄシステムズ社（R&D Systems Limited）から入手した。
【０１０１】
ＴＮＦ‐α及びＩＬ‐１βの両方の標準曲線をプロットし、導出した式を用いてサンプルの吸光度を相当するサイトカイン濃度に変換した。ＴＮＦ‐α及びＩＬ‐１βの両方の平均濃度を、各時間における各サンプル条件について算出した。次いで、これらの結果を用いて時間における試験条件の違いを比較した。
【０１０２】
細胞毒レベル（０．０１Ｍ）では、酢酸銀が細胞死を誘導するためＴＮＦ‐αが産生されなかった。弱細胞毒レベル（０．１ｍＭ、及び０．００１ｍＭ）では、ＴＨＰ‐１細胞は生存（顕微鏡検査で確認）し、産生されたＴＮＦ‐αの用量反応曲線を得ることができた。０．０１ｍＭ 酢酸銀では、産生されるＴＮＦ‐αの量を抑制する能力を示すが、最も低い濃度の酢酸銀はＬＰＳで刺激した後も産生されるＴＮＦ‐αの量に影響を与えないことが分かった。
【０１０３】
図７を参照すると、試験した様々な包帯材料が、ＴＨＰ‐１細胞が産生するＴＮＦ‐αの量に影響を与える能力がそれぞれ異なっていることが分かる。ガーゼ（サンプルＣ）は殆ど影響を与えず、この包帯に存在する細胞は、ポジティブコントロール（ＬＰＳのみ）と同じレベルのＴＮＦ‐αを産生した。
【０１０４】
銀を含まないコラーゲン／ＯＲＣスポンジ包帯（サンプルＢ）に存在する細胞は、ＬＰＳのみよりも低いレベルの炎症性サイトカインを産生した。
【０１０５】
しかしながら、アッセイウェルに入れた本発明に従った銀含有コラーゲン／ＯＲＣスポンジ包帯材料（サンプルＡ）では、ＴＨＰ‐１細胞は実質的にＴＮＦ‐αを産生しなかった。本発明に従った材料による抑制効果は、驚くべきことに、この材料に存在するのに等しい酢酸銀濃度（０．０１ｍＭ）で得られた抑制効果よりも優れていた。
【０１０６】
ＩＬ‐１βの結果（データは不図示）はＴＮＦ‐αの結果に類似していた。
【０１０７】
これらの結果は、本発明に従った材料がＴＨＰ‐１単球マクロファージによる重要な炎症性サイトカインの産生を抑制する能力を示している。この効果は２４時間の試験期間に亘って持続されることが示され、本発明の材料が長期間に亘ってサイトカインの産生を抑制する能力があることを示唆している。本発明に従った材料の抗炎症活性は、２つの成分のみからは推測できなかったものである。
【０１０８】
ここに示した例は単なる例示目的であり、本明細書を読んだ当業者には、本発明の範囲内の他の多くの構成及び方法も明らかであろう。
【図面の簡単な説明】
【０１０９】
【図１】創傷包帯材料の第１の範囲の材料における、２日後の黄色ブドウ球菌（Staphylococcus Aureus）に対する抗菌効果を阻止帯（単位：ｍｍ）としてプロットしたグラフ図である。
【図２】創傷包帯材料の第２の範囲の材料における、２４時間後及び４８時間後の黄色ブドウ球菌（Staphylococcus Aureus）に対する抗菌効果を阻止帯（単位：ｍｍ）としてプロットしたグラフ図である。
【図３】創傷包帯材料の第２の範囲の材料における、２４時間後、４８時間後、及び７２時間後の緑膿菌（Pseudomonas Aeruginosa）に対する抗菌効果を阻止帯（単位：ｍｍ）としてプロットしたグラフ図である。
【図４】創傷包帯材料の第３の範囲の材料からの抽出物の細胞増殖に対する効果を示すグラフ図である。
【図５】創傷包帯材料の第４の範囲の材料における、２日後の緑膿菌（Pseudomonas Aeruginosa）に対する抗菌効果を阻止帯（単位：ｍｍ）としてプロットしたグラフ図である。
【図６】創傷包帯材料の第５の範囲の材料からの抽出物の細胞増殖に対する効果を示すグラフ図である。
【図７】リポ多糖体及び単球マクロファージと共にインキュベートした（Ａ）本発明に従った創傷包帯材料、（Ｂ）０．０１Ｍ 酢酸銀溶液、（Ｃ）銀を含まない凍結乾燥コラーゲン／ＯＲＣ包帯、及び（Ｄ）従来の創傷包帯ガーゼの時間に対するＴＮＦ‐α濃度のグラフ図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
2005537882.tif 000008
【国際調査報告】
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