(57)【要約】本発明は、（ｉ）少なくとも１つの非極性成分と、１つの極性成分とを含む脂質化合物で、非極性成分が式Ｘ−Ｙ−Ｚ−（式中、Ｘは、１個のＣ≡Ｃ結合を含有するアセチレン性ヒドロカルビル基であり、ＹはＯまたはＣＨ2であり、Ｚは任意のヒドロカルビル基である）であり、極性成分が式−［Ｔ］mＰＨＧ（式中、［Ｔ］mは、Ｃ（Ｏ）、ＮＨ、ＮＲ1、ＮＨＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、ＮＲ1Ｃ（Ｏ）、およびＣ（Ｏ）ＮＲ1およびＣＨ2から選択される任意の基であり、Ｒ1はヒドロカルビル基であり、ＰＨＧは極性の頭部基であり、ｍは非極性成分の数である）である脂質化合物、および（ｉｉ）治療剤を含む組成物を提供する。
2005505521.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）少なくとも１つの非極性成分と、１つの極性成分とを含む脂質化合物であって、
該非極性成分が、下記の式：
Ｘ−Ｙ−Ｚ−
（式中、Ｘは、１個のＣ≡Ｃ結合を含有するアセチレン性ヒドロカルビル基であり、ＹはＯまたはＣＨ2であり、Ｚは任意のヒドロカルビル基である）
であり、
該極性成分が、下記の式：
−［Ｔ］mＰＨＧ
（式中、［Ｔ］mは、Ｃ（Ｏ）、ＮＨ、ＮＲ1、ＮＨＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、ＮＲ1Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＲ1およびＣＨ2から選択される任意の基であり、この場合、Ｒ1はヒドロカルビル基であり、ＰＨＧは極性の頭部基であり、ｍは非極性成分の数である）
である、脂質化合物と、
（ｉｉ）治療剤と
を含む組成物。
【請求項２】
前記化合物が中性脂質である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記化合物がカチオン性脂質である、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記化合物が、下記の式：
【化１】
2005505521.tif 000048
（式中、ｐは１〜１０であり、好ましくは１、２または３であり、Ｘ、ＹおよびＺはそれぞれが互いに独立して選択される）
である、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記化合物が、下記の式：
【化２】
2005505521.tif 000049
である、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
少なくとも２つの非極性成分を含み、そのそれぞれが式Ｘ−Ｙ−Ｚ−で表される非極性成分から独立して選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記化合物が、下記の式：
【化３】
2005505521.tif 000050
（式中、Ｘ、ＹおよびＺはそれぞれが互いに独立して選択される）
である、請求項２に記載の組成物。
【請求項８】
前記化合物が、下記の式：
【化４】
2005505521.tif 000051
（式中、Ｘ、ＹおよびＺはそれぞれが互いに独立して選択される）
である、請求項６に記載の組成物。
【請求項９】
前記極性の頭部基が、リン脂質類、セラミド類、トリアシルグリセロール類、リゾリン脂質類、ホスファチジルセリン類、グリセロール類、アルコール類、アルコキシ化合物類、モノアシルグリセロール類、ガングリオシド類、スフィンゴミエリン類、セレブロシド類、ホスファチジルコリン類、ホスファチジルエタノールアミン類、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）類、ジアシルグリセロール類、ホスファチジン酸類、グリセロ炭水化物類、ポリアルコール類およびホスファチジルグリセロール類の１つに由来する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記極性の頭部基がリン脂質に由来する、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記リン脂質が中性リン脂質またはアニオン性リン脂質である、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記極性の頭部基が、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン−１，２−ジオール（ＤＡＰ）、および３−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニオプロパン−１，２−ジオール（ＴＡＰ）から選択される脂質に由来する、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１３】
前記極性の頭部基（ＰＨＧ）が以下の式、−Ｗ−リンカー−ＨＧ（式中、Ｗは、ＣＨ2、Ｏ、ＮＲ1およびＳから選択され、Ｒ1はＨまたはヒドロカルビル基であり、リンカーは任意のリンカー基であり、ＨＧは頭部基である）
である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記頭部基が、下記の式：
【化５】
2005505521.tif 000052
または下記の式：
【化６】
2005505521.tif 000053
（式中、Ｒは、Ｈおよびヒドロカルビルから独立して選択され、ｍは１〜１０であり、ｎは１〜１０である）
である、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
Ｒが、ＨおよびＣ1〜6アルキルから選択される、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
Ｒが、ＨおよびＣ1〜3アルキルから選択される、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
Ｒが、Ｈおよびメチルから選択される、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
ｍが１〜５であり、好ましくは１、２または３である、請求項１４〜１７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１９】
ｎが１〜５であり、好ましくは１、２または３である、請求項１４〜１８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２０】
Ｘが任意の置換アルキニル基である、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２１】
Ｘが非置換アルキニル基である、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２２】
Ｘが非置換のＣ6〜Ｃ24アルキニル基である、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２３】
Ｘが非置換のＣ10〜Ｃ18アルキニル基である、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２４】
Ｘが非置換のＣ16アルキニル基またはＣ17アルキニル基である、請求項１〜のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２５】
アセチレン性ヒドロカルビル基のＣ≡Ｃが２個〜１５個の炭素によって該アセチレン性ヒドロカルビル基の末端から隔てられている、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２６】
アセチレン性ヒドロカルビル基のＣ≡Ｃが、２個、３個、７個または１３個の炭素によって該アセチレン性ヒドロカルビル基の末端から隔てられている、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２７】
ＹがＣＨ2である、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２８】
ＹがＣＨ2であり、前記鎖Ｘ−Ｙ−Ｚが偶数個の原子を含有する、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２９】
前記鎖Ｘ−Ｙ−Ｚが偶数個の原子を含有する、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３０】
Ｚがアルキル基である、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３１】
ＺがＣ1〜Ｃ10アルキル基であり、好ましくはＣ1〜Ｃ6アルキル基であり、好ましくはＣ1〜Ｃ3アルキル基である、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３２】
Ｚが−ＣＨ2−である、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３３】
前記化合物が、下記の式：
【化７】
2005505521.tif 000054
（式中、Ｘ2およびＸ3は独立して、非置換のＣ10〜Ｃ18アルキニルから選択される）
である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３４】
前記化合物が、下記の式：
【化８】
2005505521.tif 000055
（式中、Ｘ2およびＸ3は独立して、非置換Ｃ14アルキニルおよび非置換Ｃ15アルキニルから選択される）
である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３５】
前記化合物が、下記の式：
【化９】
2005505521.tif 000056
（式中、Ｘ2およびＸ3は独立して、ＣＨ3（ＣＨ2）12Ｃ≡Ｃ−、ＣＨ3ＣＨ2ＣＨ2Ｃ≡Ｃ（ＣＨ2）10−、ＣＨ3（ＣＨ2）7Ｃ≡Ｃ（ＣＨ2）5−、ＣＨ3（ＣＨ2）6Ｃ≡Ｃ（ＣＨ2）5−、およびＣＨ3ＣＨ2Ｃ≡Ｃ（ＣＨ2）10−から選択される）
である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３６】
前記極性の頭部基が、リン脂質の極性の頭部基に由来する、請求項３３、３４または３５に記載の組成物。
【請求項３７】
前記極性の頭部基が、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン−１，２−ジオール（ＤＡＰ）、および３−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニオプロパン−１，２−ジオール（ＴＡＰ）から選択される脂質の極性の頭部基に由来する、請求項３３、３４または３５に記載の組成物。
【請求項３８】
前記治療剤がヌクレオチド配列である、請求項１〜３７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３９】
少なくとも１つの非極性成分と、１つの極性成分とを含む脂質化合物を含むリポソームであって、
該非極性成分が、下記の式：
Ｘ−Ｙ−Ｚ−
（式中、Ｘは、１個のＣ≡Ｃ結合を含有するアセチレン性ヒドロカルビル基であり、ＹはＯまたはＣＨ2であり、Ｚは任意のヒドロカルビル基である）
であり、
該極性成分が、下記の式：
−［Ｔ］mＰＨＧ
（式中、［Ｔ］mは、Ｃ（Ｏ）、ＮＨ、ＮＲ1、ＮＨＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、ＮＲ1Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＲ1およびＣＨ2から選択される任意の基であり、Ｒ1はヒドロカルビル基であり、ＰＨＧは極性の頭部基であり、ｍは非極性成分の数である）
であり、
該化合物が、ＤＯ（４−イン）ＰＣ、ＤＯ（９−イン）ＰＣおよびＤＯ（１４−イン）ＰＣではない、リポソーム。
【請求項４０】
請求項２〜３７のいずれか一項に記載される特徴によって特徴づけられる、請求項３９に記載のリポソーム。
【請求項４１】
少なくとも１つの非極性成分と、１つの極性成分とを含む脂質化合物であって、
該非極性成分が、下記の式：
Ｘ−Ｙ−Ｚ−
（式中、Ｘは、１個のＣ≡Ｃ結合を含有するアセチレン性ヒドロカルビル基であり、ＹはＯまたはＣＨ2であり、Ｚは任意のヒドロカルビル基である）
であり、
該極性成分が、下記の式：
−［Ｔ］mＰＨＧ
（式中、［Ｔ］mは、Ｃ（Ｏ）、ＮＨ、ＮＲ1、ＮＨＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、ＮＲ1Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＲ1およびＣＨ2から選択される任意の基であり、Ｒ1はヒドロカルビル基であり、ＰＨＧは極性の頭部基であり、ｍは非極性成分の数である）
であり、
該化合物が、ＤＯ（４−イン）ＰＣ、ＤＯ（９−イン）ＰＣ、ＤＯ（１４−イン）ＰＣ、ＤＯ（４−イン）ＰＥおよびＤＯ（１４−イン）ＰＥではない、脂質化合物。
【請求項４２】
請求項２〜３７のいずれか一項に記載される特徴によって特徴づけられる、請求項４１に記載の脂質化合物。
【請求項４３】
ヌクレオチド配列と混合されるか、ヌクレオチド配列と関連付けられる、請求項３９もしくは４０に記載のリポソームまたは請求項３９もしくは４０に記載の化合物。
【請求項４４】
治療において使用される、請求項１〜３８のいずれか一項に記載の組成物、または請求項３９もしくは４０に記載のリポソーム、または請求項４１もしくは４２に記載の化合物。
【請求項４５】
遺伝的な障害または状態または疾患を治療するための医薬の製造における、（ｉ）請求項１〜３８のいずれか一項に記載の組成物、または（ｉｉ）請求項３９もしくは４０に記載のリポソーム、または（ｉｉｉ）請求項４１もしくは４２に記載の化合物の使用。
【請求項４６】
遺伝的な障害または状態または疾患を治療するための医薬の製造における脂質化合物の使用であって、該化合物が、少なくとも１つの非極性成分と、１つの極性成分とを含む脂質化合物であり、
該非極性成分が、下記の式：
Ｘ−Ｙ−Ｚ−
（式中、Ｘは、１個のＣ≡Ｃ結合を含有するアセチレン性ヒドロカルビル基であり、ＹはＯまたはＣＨ2であり、Ｚは任意のヒドロカルビル基である）
であり、
該極性成分が、下記の式：
−［Ｔ］mＰＨＧ
（式中、［Ｔ］mは、Ｃ（Ｏ）、ＮＨ、ＮＲ1、ＮＨＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、ＮＲ1Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＲ1およびＣＨ2から選択される任意の基であり、Ｒ1はヒドロカルビル基であり、ＰＨＧは極性の頭部基であり、ｍは非極性成分の数である）
である使用。
【請求項４７】
カチオン性リポソームを調製する方法であって、少なくとも１つの非極性成分と、１つの極性成分とを含む脂質化合物からカチオン性リポソームを形成するステップを含み、
該非極性成分が、下記の式：
Ｘ−Ｙ−Ｚ−
（式中、Ｘは、１個のＣ≡Ｃ結合を含有するアセチレン性ヒドロカルビル基であり、ＹはＯまたはＣＨ2であり、Ｚは任意のヒドロカルビル基である）
であり、
該極性成分が、下記の式：
−［Ｔ］mＰＨＧ
（式中、［Ｔ］mは、Ｃ（Ｏ）、ＮＨ、ＮＲ1、ＮＨＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、ＮＲ1Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＲ1およびＣＨ2から選択される任意の基であり、Ｒ1はヒドロカルビル基であり、ＰＨＧは極性の頭部基であり、ｍは非極性成分の数である）
である方法。
【請求項４８】
請求項１〜３８のいずれか一項に記載の組成物と、薬学的に許容可能な希釈剤またはキャリアまたは賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項４９】
実質的には本明細書中および図面のいずれか１つを参照して記載される組成物。
【請求項５０】
実質的には本明細書中および図面のいずれか１つを参照して記載される組成物またはカチオン性リポソーム。
【請求項５１】
実質的には本明細書中および図面のいずれか１つを参照して記載される方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は組成物に関する。さらに、本発明は化合物およびリポソームに関し、そして治療、特に遺伝子治療（特に、遺伝子送達）におけるそのような組成物、化合物またはリポソームの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
遺伝子治療の態様の１つでは、外来核酸（ＤＮＡなど）を細胞内に導入して、外来核酸が発現されたタンパク質が所望する治療的機能を行い得るようにすることを伴う1a。
【０００３】
このタイプの治療の例には、ガンを治療するためにＴＫ遺伝子またはＴＳＧ遺伝子またはＩＬＧ遺伝子を挿入すること、嚢胞性線維症を治療するためにＣＦＴＲ遺伝子を挿入すること、神経変性障害および心臓血管障害を治療するためにＮＧＦ遺伝子またはＴＨ遺伝子またはＬＤＬ遺伝子を挿入すること、慢性関節リウマチを治療するためにＩＬ−１アンタゴニスト遺伝子を挿入すること、ＡＩＤＳ感染およびＣＭＶ感染を治療するためにＨＩＶ抗原およびＴＫ遺伝子を挿入すること、ワクチンとして作用させるために抗原およびサイトカインを挿入すること、そして、サラセミアなどの異常ヘモグロビン症状態を治療するためにβ−グロビンを挿入することが含まれる。
【０００４】
現在の多くの遺伝子治療研究では、アデノウイルス遺伝子ベクター（例えば、Ａｄ３もしくはＡｄ５）または他の遺伝子ベクターが利用されている。しかし、それらの使用は深刻な問題を伴っている2a。このため、遺伝子移入に対する、有害性がより少ない非ウイルス性のアプローチの開発が急がれている3a。
【０００５】
非ウイルスベクターもまた当分野では知られている。実質的には、非ウイルス性遺伝子治療では、ウイルスを模倣することができ、それにもかかわらず非病原性であるベクターが要求される。核酸は負に帯電していることに基づいて、リポソームおよびポリマーの２つのタイプのカチオン性の非ウイルスベクターが開発されている（これらはともに、核酸を濃縮するために役立つ）。その結果として得られるＤＮＡとの複合体（それぞれ、リポプレックス（lipoplex）およびポリプレックス（polyplex））は依然としてカチオン性であり、それにより、アニオン性の細胞表面におけるエンドサイトーシス（細胞による取り込み）を促進させる。一旦取り込まれると、複合体は、その後、図１に示される３つの目に遭う可能性がある。
【０００６】
可能性の高い非ウイルス移入システムでは、カチオン性リポソームの使用を伴う4a。これに関して、様々なカチオン性リポソーム（これらは、通常、中性リン脂質およびカチオン性脂質からなる）が、ＤＮＡ4a、ｍＲＮＡ5a、アンチセンスオリゴヌクレオチド6a、タンパク質7aおよび薬物8aを細胞内に移入するために使用されている。多数のカチオン性リポソームが市販されており4a、9a、そして、多くの新しいカチオン性脂質が、近年、合成されている10a。これらのリポソームの効力がインビトロ4aおよびインビボ11aの両方によって例示されている。
【０００７】
様々なリポソームが、脂質の分子的な自己集合によって形成される。カチオン性リポソームは、多くの場合、カチオン性の脂質および中性の「ヘルパー」脂質の両方の混合物と配合される。ＤＯＰＣ（１）およびＤＯＰＥ（２）は、そのような中性のヘルパー脂質の２つである。これは、いわゆる、それらが、カチオン性リポソームのトランスフェクション能力を改善する傾向を有しており、そしてまた、カチオン性脂質がリポソームを形成することを助け得るからである。さらに、２は、すべてのヘルパー脂質の中で最も一般的なものであり、その構成成分リポプレックスのトランスフェクション（遺伝子の送達および発現）の改善をもたらすことが明確に立証されている2b。そして、それは、その特有の融合誘導性のためであると考えられる。逆に、ＤＯＤＡＰ（３）（ｐＨ４．０で）2cおよびＤＯＴＡＰ（４）はともにカチオン性脂質である。これらの構造体はＤＮＡと静電的に結合する。
【化１】
2005505521.tif 000003
【０００８】
最も一般に使用されているカチオン性リポソームシステムの１つは、中性リン脂質のジオレイルホスファチジルエタノールアミン（これは「ＤＯＰＥ」として一般には知られている）と、カチオン性脂質の３β−［Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）カルバモイル］コレステロール（これは「ＤＣ−Ｃｈｏｌ」として一般には知られている）との混合物からなる12a。
【化２】
2005505521.tif 000004
【０００９】
リポソームは、送達される薬物分子をその水性の内部に効率的に封入するので、薬物送達のための媒介因子としてのその有用性が既に立証されており、多数の配合物が臨床試験に達している6b。カチオン性リポソームは、プラスミドＤＮＡと静電的に相互作用するが、それ自体は核酸を封入しない。そのような、結果として得られる粒子は、リポプレックス（ＬＤ）と呼ばれており、インビトロでの十分なトランスフェクションをもたらす。
【００１０】
知られているカチオン性リポソームの効力にもかかわらず、ヒトの遺伝子治療ではカチオン性リポソームの遺伝子移入効力を最適化することが依然として求められている10a。ヒトゲノム計画がほぼ完了したことにより、遺伝子治療として記載される、治療目的のための遺伝子の使用が医療に大きな変革をもたらすことがますます予想されている。これに関連して、ウイルス技術よりも依然として効果的ではないとしても、非ウイルス送達が、ヒト適用のための最も安全な選択肢として科学界によってますます認識されている。
【００１１】
この分野は、異なる既存の技術の多くの要素（ウイルスタンパク質またはウイルスペプチド、リポソーム、ポリマー、標的化方法および秘匿性）を含む複雑な高分子構築物が出現したことによってこの１０年間でかなり進化してきた。
【００１２】
国際特許出願公開ＷＯ０１／４８２３３には、ウイルスのコアペプチドＭｕ、プラスミドＤＮＡおよびカチオン性リポソームから構成されるトリプレックス（ＬＭＤ）に基づくシステムが教示される。この基盤技術は、インビトロでの良好な成功およびインビボでの有望な結果をもたらした。しかし、すべての既存の非ウイルス技術に関しては、さらなる開発が、インビボでの治療レベルを達成するために必要である。
【００１３】
この目的のために、配合は、生物学的流体（血清、肺粘液）における粒子の安定性を達成しなければならず、そして効率的なトランスフェクション能力を依然として維持しなければならない。
【００１４】
この条件は、既存の技術すべての大きな障害の１つである。現在の安定な配合物[1、2]では、トランスフェクションがほとんど達成されず、現在の効率的なトランスフェクション媒介因子のほとんどは、この不安定性のためにその適用範囲が極めて制限されている[3〜7]。
【００１５】
投与後（全身適用については血中において、または肺への局所的投与については粘液において）、荷電を有する複合体は塩および生物学的高分子にさらされ、これにより、強いコロイド状凝縮および生物学的に活性なエレメント（オプソニン）の吸着がその表面においてもたらされる[8〜11]。遺伝子ビヒクルは、沈殿、マクロファージによる粒子の排除をもたらすタンパク質の結合、およびその破壊をもたらす表面の乱れを含み得る激しい様々な変化を受ける。最も広く使用されている安定化された配合物は、表面にグラフト化されたポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖を伴う[12、13]。ＰＥＧは、ほとんどの高分子に対して大きい排除容量を有する非毒性の中性ポリエーテルである。残念なことに、必要なレベルの安定化を示す配合物は、その遺伝子移入能力を失うことが報告されている。これは、おそらくは、細胞に対する非特異的親和性が低下しているため、またはエンドソームを破壊する必要な性質を失っているためであると考えられる[14、15]。
【００１６】
リポプレックスに対する生物学的流体の破壊的作用を避けるための他の方法は、脂質二重層の性質を模倣し、脂質二重層の表面を多糖類で覆うことを試みることである[16、17]。
【００１７】
１９９１年に、オクタデカ−９−イン酸（６）がＤＮＡ結合性を示すことが報告された8b。オクタデカ−９−イン酸は、１．８ｍＭの見かけのＤＮＡ解離定数を有する。オクタデカ−９−イン酸は、トポイソメラーゼＩ媒介のＤＮＡフィルター結合を阻害するが、超らせん状プラスミドＤＮＡのＤＮＡトポイソメラーゼＩ媒介の弛緩を阻害しない。さらに、この脂肪酸はＤＮＡポリメラーゼαに対する弱い阻害性を有する。
【化３】
2005505521.tif 000005
【００１８】
血小板リポキシゲナーゼ（ＬＯＸ）はアセチレン性脂肪酸（acetylenic fatty acid）類によって選択的に阻害され得る。例えば、オクタデカ−９，１２−ジイン酸はＦｅ（ＩＩＩ）−ＬＯＸを不可逆的に阻害する9b。
【化４】
2005505521.tif 000006
【００１９】
シトクロムＰ４５０４Ａ４（ＣＹＰ４Ａ４）は、プロスタグランジンおよびアラキドン酸をそれらのω−ヒドロキシル化生成物に代謝する肺シトクロムＰ４５０である。プロスタグランジンは、生殖系、血管系および炎症系の調節において重要な役割を果たしている。オクタデカ−１７−イン酸は、ＣＹＰ４Ａ４の基質結合ポケットの効果的な阻害剤10bであることが示されている。
【化５】
2005505521.tif 000007
【００２０】
オクタデカ−５−イン酸（タリリン酸：tariric acid）は、Ｃ．ｔｏｍｅｎｔｏｓｉｃｏｌｌｉｓの卵のふ化を阻害する11b。
【００２１】
ウンデカ−１０−イン酸は、シトクロムＰ４５０４Ａ１の阻害剤であるが、ラット肝臓ミクロソームにおけるエタノールアミン特異的なリン脂質塩基交換反応を阻害する12b。
【化６】
2005505521.tif 000008
【００２２】
多数のアセチレン性脂肪酸類（オクタデカ−８，１０，１２−トリイン酸など）は、シクロオキシゲナーゼ酵素の強力な阻害剤であり、かつ５−リポオキシゲナーゼの弱い阻害剤であることが示されている13b。
【化７】
2005505521.tif 000009
【００２３】
アセチレン性脂肪酸のエイコサ−５，８，１１−トリイン酸は哺乳動物の肝臓グルタチオンＳ−トランスフェラーゼを阻害する14b。
【化８】
2005505521.tif 000010
【００２４】
蛍光性脂質および／または金属キレート性脂質を含むリポソームは、非ウイルス性遺伝子治療における封入されたＤＮＡの進行をモニターすることなどの、細胞生物学の世界におけるプローブとしての潜在的な用途を提供する。コンジュゲートされたジアセチレン性脂質が、ランタニドイオンをキレート化することができるエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）頭部基を用いて調製されている15b。これらの脂質（それぞれが２つのコンジュゲートされたアセチレン性脂肪アシル基（例えば、ジアセチレン性基）を有する）は、リポソームに取り込まれ、その後、ポリマー化させることに成功している。蛍光研究により、ジアセチレン性官能基（非ポリマー化脂質）およびコンジュゲートアルケン類（ポリマー化の後）はランタニドイオンに対する増感剤として使用できることが示される。
【化９】
2005505521.tif 000011
【００２５】
ジアセチレン性リン脂質は、リポソームに取り込まれ、ＵＶ光にさらされたときにポリマー化を受けることが示されている16b。そのようなシステムは、ポリマー化された脂質が存在しない場合よりも安定であり、徐放性薬物送達システムのために適する。
【化１０】
2005505521.tif 000012
【００２６】
Ｊｕｎｉｃｈｉら17bは、薬物の経口送達のための安定性が増強されたポリマー化されたリポソームの使用を報告している（国際特許出願公開ＷＯ９５／０３０３５）。経口送達される薬学的化合物をポリマー化されたリポソーム内に封入することができ、その後、小腸に送達することができる。リポソームの構成成分のリン脂質は二重結合含有オレフィン性リン脂質およびアセチレン性リン脂質を介してポリマー化される。そのようなポリマー化は強度を増し、流動性がより少ないリポソームをもたらす。この理由から、ポリマー化し得るリン脂質は、ポリマー化プロセスが可逆的でない限り、非ウイルス性遺伝子治療における限定された使用を提供し得る。一方で、リポソームは血液中で安定でなければならず、他方で、リポソームは、細胞内に入ったときには安定であってはならない。流動性（およびＨII相に対する付随的な親和性）は、インビトロでのトランスフェクションを改善することにおいて非常に重要であるようである。
【００２７】
リポソーム内でポリマー化したとき、ジアセチレン性ホスファチジルコリンはインビトロで血栓抵抗性を示している。この態様の安定性は、ポリマー化したホスファチジルコリンが凝固に関係することができないということの結果であると考えられる18b。
【００２８】
２００１年に、カチオン性脂質のビスグアニジニウム−ジアセチレン（ＢＧＤＡ）が、ＤＯＰＥとのカチオン性リポソームとして配合されたとき、インビトロでのトランスフェクションのために非常に効率的であることが示された19b。ジアセチレン性官能基の存在により、ポリマー化のための能力がもたらされ、従って、遺伝子トランスフェクションに対する新規な足場がもたらされる。これは、ポリマー化可能なドメインの作用を研究することにより、脂質／ＤＮＡ複合体の構造−活性関係へのさらなる見通しをもたらし得る。
【化１１】
2005505521.tif 000013
【発明の開示】
【００２９】
本発明は先行技術の様々な問題を解決するものである。
【００３０】
本発明の１つの態様によれば、（ｉ）少なくとも１つの非極性成分と、１つの極性成分とを含む脂質化合物で、非極性成分が、式Ｘ−Ｙ−Ｚ−（式中、Ｘは、１個のＣ≡Ｃ結合を含有するアセチレン性ヒドロカルビル基であり、ＹはＯまたはＣＨ2であり、Ｚは任意のヒドロカルビル基である）であり、極性成分が式−［Ｔ］mＰＨＧ（式中、［Ｔ］mは、Ｃ（Ｏ）、ＮＨ、ＮＲ1、ＮＨＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、ＮＲ1Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＲ1およびＣＨ2から選択される任意の基であり、Ｒ1はヒドロカルビル基であり、ＰＨＧは極性の頭部基であり、ｍは非極性成分の数である）である脂質化合物と、（ｉｉ）治療剤とを含む組成物が提供される。
【００３１】
本発明の別の態様によれば、少なくとも１つの非極性成分と、１つの極性成分とを含む脂質化合物を含むリポソームが提供されるが、この場合、非極性成分が式Ｘ−Ｙ−Ｚ−（式中、Ｘは、１個のＣ≡Ｃ結合を含有するアセチレン性ヒドロカルビル基であり、ＹはＯまたはＣＨ2であり、Ｚは任意のヒドロカルビル基である）であり、極性成分が式−［Ｔ］mＰＨＧ（式中、［Ｔ］mは、Ｃ（Ｏ）、ＮＨ、ＮＲ1、ＮＨＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、ＮＲ1Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＲ1およびＣＨ2から選択される任意の基であり、Ｒ1はヒドロカルビル基であり、ＰＨＧは極性の頭部基であり、ｍは非極性成分の数である）であり、ただし、該化合物は、ＤＯ（４−イン）ＰＣ、ＤＯ（９−イン）ＰＣおよびＤＯ（１４−イン）ＰＣではない。
【００３２】
本発明の別の態様によれば、少なくとも１つの非極性成分と、１つの極性成分とを含む脂質化合物が提供されるが、この場合、非極性成分が、式Ｘ−Ｙ−Ｚ−（式中、Ｘは、１個のＣ≡Ｃ結合を含有するアセチレン性ヒドロカルビル基であり、ＹはＯまたはＣＨ2であり、Ｚは任意のヒドロカルビル基である）であり、極性成分が式−［Ｔ］mＰＨＧ（式中、［Ｔ］mは、Ｃ（Ｏ）、ＮＨ、ＮＲ1、ＮＨＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、ＮＲ1Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＲ1およびＣＨ2から選択される任意の基であり、Ｒ1はヒドロカルビル基であり、ＰＨＧは極性の頭部基であり、ｍは非極性成分の数である）であり、ただし、該化合物は、ＤＯ（４−イン）ＰＣ、ＤＯ（９−イン）ＰＣ、ＤＯ（１４−イン）ＰＣ、ＤＯ（４−イン）ＰＥおよびＤＯ（１４−イン）ＰＥではない。
【００３３】
本発明の別の態様によれば、遺伝的な障害または状態または疾患を治療するための医薬品を製造する際における脂質化合物の使用が提供されるが、この場合、化合物は、少なくとも１つの非極性成分と、１つの極性成分とを含む脂質化合物であり、非極性成分が式Ｘ−Ｙ−Ｚ−（式中、Ｘは、１個のＣ≡Ｃ結合を含有するアセチレン性ヒドロカルビル基であり、ＹはＯまたはＣＨ2であり、Ｚは任意のヒドロカルビル基である）であり、極性成分が式−［Ｔ］mＰＨＧ（式中、［Ｔ］mは、Ｃ（Ｏ）、ＮＨ、ＮＲ1、ＮＨＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、ＮＲ1Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＲ1およびＣＨ2から選択される任意の基であり、Ｒ1はヒドロカルビル基であり、ＰＨＧは極性の頭部基であり、ｍは非極性成分の数である）である。
【００３４】
本発明の別の態様によれば、治療において使用される、本発明による化合物、組成物またはリポソームが提供される。
【００３５】
本発明の別の態様によれば、遺伝的な障害または状態または疾患を治療するための医薬品を製造する際における化合物、組成物またはリポソームの使用が提供される。
【００３６】
本発明の別の態様によれば、本発明による化合物から、または本発明のプロセスによって調製されたときの化合物から形成されるカチオン性リポソームが提供される。
【００３７】
本発明の別の態様によれば、カチオン性リポソームを調製する方法であって、本発明による化合物から、または本発明のプロセスによって調製されたときの化合物からカチオン性リポソームを形成するステップを含む方法が提供される。
【００３８】
本発明の別の態様によれば、治療において使用される本発明によるカチオン性リポソーム、または本発明の方法によって調製されるようなカチオン性リポソームが提供される。
【００３９】
本発明の別の態様によれば、本発明によるカチオン性リポソームまたは本発明の方法によって調製されるようなカチオン性リポソームの使用であって、遺伝的な障害または状態または疾患を治療するための医薬品を製造する際における使用が提供される。
【００４０】
本発明の別の態様によれば、ヌクレオチド配列と、本発明による化合物、本発明のプロセスによって調製されたときの化合物、本発明のリポソーム、本発明の方法によって調製されるようなリポソーム、本発明の組成物、または本発明の方法によって調製されるような組成物のいずれか１つまたは２つ以上との組合せが提供される。
【００４１】
本発明の別の態様によれば、治療において使用される本発明による組合せが提供される。
【００４２】
本発明の別の態様によれば、遺伝的な障害または状態または疾患を治療するための医薬品を製造する際における、本発明による組合せの使用が提供される。
【００４３】
本発明の別の態様によれば、本発明による化合物、本発明のプロセスによって調製された化合物、本発明による組成物、または本発明のプロセスによって調製された組成物を、医薬品と混合し、任意選択的に薬学的に許容可能な希釈剤またはキャリアまたは賦形剤と混合して含む医薬組成物が提供される。
【００４４】
本発明の別の態様によれば、本発明によるカチオン性リポソーム、または本発明の方法によって調製されるようなカチオン性リポソームを、医薬品と混合し、任意選択的に薬学的に許容可能な希釈剤またはキャリアまたは賦形剤と混合して含む医薬組成物が提供される。
【００４５】
本発明のいくつかのさらなる態様が、添付された請求の範囲に規定されている。
【００４６】
本発明者らは、（例えば、エンドソームがリソソームに成熟するにつれてｐＨが低下することを利用する）リポプレックスのエンドソーム分解を促進させること、リポプレックスの細胞特異的な標的化（リポポリペプチド）、リポプレックスのＤＮＡ濃縮、リポプレックスの核標的化、そして最後に、リポプレックスのインビボでの安定性を改善し、それにかかわらず、その融合誘導性を維持するというこれらの問題を研究してきた。
【００４７】
本発明の化合物または組成物の重要な利点は、本発明の化合物または組成物が、治療的利益を得るために、遺伝子治療において、特に、核酸（これには遺伝子およびアンチセンスＤＮＡ／ＲＮＡが含まれる）の細胞内への（インビトロ、インビボおよびエクスビボでの）送達において有用なカチオン性リポソームを調製する際に使用できるということであると考えられる。
【００４８】
遺伝子治療剤は、典型的には静脈投与される。逆説的ではあるが、カチオン性リポソームは、血液中では安定でなければならないが、それにもかかわらず、一旦細胞内に入ると、安定であってはならず、これにより、送達された核酸の流出が可能になる。血中の血清成分は現在のカチオン性リポソームの生物学的活性を低下させ、治療用核酸のクリアランスまたは排除をもたらし、従って、インビボでの良好でない結果をもたらし得る。本発明者らは、本発明のアセチレン性化合物のインビトロでのトランスフェクション活性がＤＯＰＥのインビトロでのトランスフェクション活性と匹敵し得ることを見出した。炭素−炭素の三重結合は、酸化に対する抵抗性が二重結合よりも大きく、そしてまた、膜の剛直性を増大させ得ると考えられる。本発明のアセチレン性化合物はまた、インビボでの結果を改善し得る血清中でのより大きな安定性を提供し得る。
【００４９】
本発明者らは、本発明の範囲に含まれる広範囲の化合物を研究し、様々な好都合な結果を観測している。特に、本発明者らは、３つのＣ１８モノアセチレン性脂肪酸（化合物５、６および７）および２つのＣ１７モノアセチレン性脂肪酸（化合物８および９）のそれぞれの、ＤＯＰＣ、ＤＯＰＥ、ＤＯＤＡＰおよびＤＯＴＡＰの対応する類似体を研究した。
【化１２】
2005505521.tif 000014
【００５０】
多数の脂質（すなわち、ＤＯＰＣ（１）、ＤＯＰＥ（２）、ＤＯＤＡＰ（３）およびＤＯＴＡＰ（４））の５つのモノアセチレン性類似体の合成が完了している。これらの脂質は、より良好な分子間充填が可能であるはずであり、それにより、流動性がより少ないリポソーム構造をもたらし、そしてそのようなリポソームのインビボでの循環半減期を高めるはずである。
【００５１】
−Ｃ≡Ｃ−三重結合は、酸化性が−Ｃ＝Ｃ−二重結合よりも小さく20b、一般には親電子剤による攻撃を受けにくい21bので、−Ｃ≡Ｃ−三重結合の存在は好都合であると考えられる。さらに、二重結合はシス／トランス異性化を受けやすく、一方、そのような異性化は三重結合に関しては起こり得ない。酸性条件およびＵＶ光はこのプロセスを促進させ得る。ＤＯＰＥにおけるシス型二重結合は、ＤＯＰＥ含有リポソームがＨII相を形成することを容易にし、従って、ＤＯＰＥ含有リポソームを融合誘導性にするので、ＤＯＰＥのトランスフェクション能力のためには不可欠であることが大いに予想される（下記を参照のこと）。より安定なトランス形態への異性化はトランスフェクション特性の低下をもたらし得るか、またはトランスフェクション特性の完全な喪失さえももたらし得る21c。
【００５２】
シス型二重結合を有する脂質（ＤＯＰＥなど）はその構成膜を流動性にする。ＤＯ（９−イン）ＰＥなどのアセチレン性類似体は、その構成リポソームに対して、より大きい剛直性をもたらし、従って、インビボでの増大した安定性をもたらすと考えられる。
【００５３】
Ｒｕｒｕｐら4bは、ＤＯＰＣの９−イン類似体（ＤＯ（９−イン）ＰＣ、３３）のラメラのゲル−液晶（Ｌβ／Ｌα）転移温度（Ｔm）が、基準のＤＯＰＣ（−１８℃）よりも約１５℃高い温度（−３．４℃）で生じることを示している。さらに、Ｒｕｒｕｐらは、三重結合が脂肪アシル鎖の中央からいずれかの方向に移動するに従い、Ｔmが、オレフィン性（二重結合）類似体に関するときのように増大することを示している（図１１）。
【００５４】
従って、対応するＤＯＰＥ類似体は、Ｌβ／Ｌα転移に対してだけでなく、Ｌα／ＨII相転移に対しても類似する挙動を示し得る。ラメラの液晶逆六方晶（Ｌα／ＨII）相転移温度（Ｔh）が基準のＤＯＰＥについては１０℃で生じる21d。ＨII相に対するその親和性のために、ＤＯＰＥは、膜が融合したとき、構造中間体が、ＨII相転移体に対する二重層（Ｌα）に関与する構造中間体に類似するので、融合誘導性の脂質として示される。ＤＯＰＥ含有リポソームをリポソーム膜とエンドソーム膜との融合によるトランスフェクションに対して効力のあるものにし、これにより、プラスミドＤＮＡの細胞質内への流出を可能にするのはこの融合誘導的特性であると考えられる。
【００５５】
Ｔhが低いために、ＤＯＰＥのリポソームを３７℃（または実際には２５℃で）およびｐＨ７．０の生理学的条件のもとで調製することは不可能である。ＤＯ（９−イン）ＰＣがＤＯＰＣよりも約１５℃高いＴmを有するということに基づいて、ＤＯ（９−イン）ＰＥのＴmがＤＯＰＥよりも約１５℃高いと考えられる。より重要なことに、ＤＯ（９−イン）ＰＥのＴhがＤＯＰＥの場合よりも約１５℃高いと考えられる。このことが事実であるとすれば、従って、本発明者らによる脂質のモノアセチレン性類似体（ＤＯＰＥなど）を含有するカチオン性リポソームを調製することは、室温（ＲＴ）では、脂質そのものを使用することよりも容易であると考えられる。最終的には、これは、カチオン性ＬＭＤの正荷電の低下をもたらすことができ、これにより、より良好な分子間充填、従って、より剛直な二重層構造のために、より安定であるだけでなく、粒子がより中性であるために、より安定であるトランスフェクション性粒子をもたらし得る。非ウイルス性遺伝子治療はインビボでの多数の問題によって妨げられている。１つのそのような問題は、多数の負荷電成分が血液中に存在するという事実である。これらは、静電的相互作用による破壊のためにカチオン性ＬＭＤを標識し得るか、またはより単純にはアニオン性のｍｕ−ＤＮＡ複合体を置換し得る。本発明のアセチレン性類似体は、凝集に対して、そして破壊的なアニオン性構成要素（anionic entities）に対してより安定であるベクターをより多く作製することができる。
【００５６】
［本発明の広範な態様］
本明細書中で使用される用語「アセチレン性ヒドロカルビル」は、少なくともＣおよびＨを含み、かつ少なくとも１つの−Ｃ≡Ｃ−結合を有する基を意味し、任意選択的に１つ以上の他の好適な置換基を含むことができる。そのような置換基の例には、ハロ基、アルコキシ基、ニトロ基、炭化水素基、Ｎ−アシル基、環状基などを挙げることができる。置換基が環状基である可能性に加えて、置換基の組合せにより、環状基が形成されることがある。ヒドロカルビル基が２個以上のＣを含む場合、それらの炭素は必ずしも相互に連結される必要はない。例えば、炭素の少なくとも２つが好適な元素または基を介して連結され得る。従って、ヒドロカルビル基はヘテロ原子を含有することができる。好適なヘテロ原子は当業者には明らかであり、好適なヘテロ原子には、例えば、イオウ、窒素および酸素が含まれる。
【００５７】
「Ｘは、１個のＣ≡Ｃ結合を含有するアセチレン性ヒドロカルビル基である」ことにより、Ｘまたは各Ｘがただ１つだけのＣ≡Ｃ結合を含有することが意図されることが当業者によって理解される。
【００５８】
本明細書中で使用される用語「ヒドロカルビル基」は、少なくともＣおよびＨを含む基を意味し、任意選択的に１つ以上の他の好適な置換基を含むことができる。そのような置換基の例には、ハロ基、アルコキシ基、ニトロ基、炭化水素基、Ｎ−アシル基、環状基などを挙げることができる。置換基が環状基であるという可能性に加えて、置換基の組合せにより、環状基が形成されることがある。ヒドロカルビル基が２個以上のＣを含む場合、それらの炭素は必ずしも相互に連結される必要はない。例えば、炭素の少なくとも２つが好適な元素または基を介して連結され得る。従って、ヒドロカルビル基はヘテロ原子を含有することができる。好適なヘテロ原子は当業者には明らかであり、好適なヘテロ原子には、例えば、イオウ、窒素および酸素が含まれる。
【００５９】
本発明の１つの好ましい実施形態において、ヒドロカルビル基は炭化水素基である。
【００６０】
本明細書中において、用語「炭化水素」は、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アシル基（これらの基は直鎖状または分枝状または環状であり得る）、またはアリール基のいずれか１つを意味する。炭化水素の用語にはまた、任意選択的に置換されているそのような基が含まれる。炭化水素が、置換基を有する分枝状構造である場合、置換基は炭化水素骨格上または分枝上のいずれかに存在し得る。あるいは、置換基は炭化水素骨格上および分枝上に存在し得る。
【００６１】
１つの広範な態様において、本発明は、（ｉ）少なくとも１つの非極性成分と、１つの極性成分とを含む脂質化合物で、非極性成分が式Ｘ−Ｙ−Ｚ−（式中、Ｘはアセチレン性ヒドロカルビル基であり、ＹはＯまたはＣＨ2であり、Ｚは任意のヒドロカルビル基である）であり、極性成分が式−［Ｔ］mＰＨＧ（式中、［Ｔ］mは、Ｃ（Ｏ）、ＮＨ、ＮＲ1、ＮＨＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、ＮＲ1Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＲ1およびＣＨ2から選択される任意の基であり、Ｒ1はヒドロカルビル基であり、ＰＨＧは極性の頭部基であり、ｍは非極性成分の数である）である脂質化合物、および（ｉｉ）治療剤を含む組成物を提供する。
【００６２】
１つの広範な態様において、本発明は、少なくとも１つの非極性成分と、１つの極性成分とを含む脂質化合物を含むリポソームを提供するが、この場合、非極性成分が式Ｘ−Ｙ−Ｚ−（式中、Ｘはアセチレン性ヒドロカルビル基であり、ＹはＯまたはＣＨ2であり、Ｚは任意のヒドロカルビル基である）であり、極性成分が式−［Ｔ］mＰＨＧ（式中、［Ｔ］mは、Ｃ（Ｏ）、ＮＨ、ＮＲ1、ＮＨＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、ＮＲ1Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＲ1およびＣＨ2から選択される任意の基であり、Ｒ1はヒドロカルビル基であり、ＰＨＧは極性の頭部基であり、ｍは非極性成分の数である）であり、ただし、該化合物は、ＤＯ（４−イン）ＰＣ、ＤＯ（９−イン）ＰＣおよびＤＯ（１４−イン）ＰＣではない。
【００６３】
１つの広範な態様において、本発明は、少なくとも１つの非極性成分と、１つの極性成分とを含む脂質化合物を提供するが、この場合、非極性成分が式Ｘ−Ｙ−Ｚ−（式中、Ｘはアセチレン性ヒドロカルビル基であり、ＹはＯまたはＣＨ2であり、Ｚは任意のヒドロカルビル基である）であり、極性成分が式−［Ｔ］mＰＨＧ（式中、［Ｔ］mは、Ｃ（Ｏ）、ＮＨ、ＮＲ1、ＮＨＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、ＮＲ1Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＲ1およびＣＨ2から選択される任意の基であり、Ｒ1はヒドロカルビル基であり、ＰＨＧは極性の頭部基であり、ｍは非極性成分の数である）であり、ただし、該化合物は、ＤＯ（４−イン）ＰＣ、ＤＯ（９−イン）ＰＣ、ＤＯ（１４−イン）ＰＣ、ＤＯ（４−イン）ＰＥおよびＤＯ（１４−イン）ＰＥではない。
【００６４】
１つの広範な態様において、本発明は、遺伝的な障害または状態または疾患を治療するための医薬品を製造する際における脂質化合物の使用を提供するが、この場合、化合物は、少なくとも１つの非極性成分と、１つの極性成分とを含む脂質化合物であり、非極性成分が式Ｘ−Ｙ−Ｚ−（式中、Ｘはアセチレン性ヒドロカルビル基であり、ＹはＯまたはＣＨ2であり、Ｚは任意のヒドロカルビル基である）であり、極性成分が式−［Ｔ］mＰＨＧ（式中、［Ｔ］mは、Ｃ（Ｏ）、ＮＨ、ＮＲ1、ＮＨＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、ＮＲ1Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＲ1およびＣＨ2から選択される任意の基であり、Ｒ1はヒドロカルビル基であり、ＰＨＧは極性の頭部基であり、ｍは非極性成分の数である）である。
【００６５】
本発明の上記の広範な態様のいくつかの好ましい実施形態において、Ｘまたは少なくとも１つのＸは、１個のＣ≡Ｃ結合を含有するアセチレン性ヒドロカルビル基である。
【００６６】
本発明の１つの好ましい実施形態において、アセチレン性ヒドロカルビル基はアルキニル基である。
【００６７】
参照を容易にするために、本発明のこれらの態様およびさらなる態様が、次に、適切な節の見出しのもとで議論される。しかし、それぞれの節における開示は、それぞれの特定の節に必ずしも限定される必要はない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００６８】
［好適な態様］
化合物はアニオン性脂質であってもよい。
【００６９】
好ましくは、化合物は中性脂質である。
【００７０】
好ましくは、化合物はカチオン性脂質である。
【００７１】
［極性成分］
［極性の頭部基（ＰＨＧ）］
極性の頭部基は、好適な脂質に由来するものであってよいことが当業者によって理解される。用語「脂質」により、脂肪酸または密接に関連する化合物（それらの対応するアルコール基部またはスフィンゴシン基部など）に基づく化合物を意味しうる。
【００７２】
１つの好ましい態様において、極性の頭部基は、リン脂質類、セラミド類、トリアシルグリセロール類、リゾリン脂質類、ホスファチジルセリン類、グリセロール類、アルコール類、アルコキシ化合物類、モノアシルグリセロール類、ガングリオシド類、スフィンゴミエリン類、セレブロシド類、ホスファチジルコリン類、ホスファチジルエタノールアミン類、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）類、ジアシルグリセロール類、ホスファチジン酸類、グリセロ炭水化物類、ポリアルコール類およびホスファチジルグリセロール類に由来する。
【００７３】
１つの好ましい態様において、極性の頭部基は、リン脂質類、セラミド類、トリアシルグリセロール類、リゾリン脂質類およびホスファチジルセリン類に由来する。
【００７４】
好ましくは、極性の頭部基はリン脂質に由来する。
【００７５】
好ましくは、リン脂質は中性リン脂質またはアニオン性リン脂質である。
【００７６】
１つの好ましい態様において、リン脂質は、ホスファチジルコリン（ＰＣ）およびホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）（ジオレオイル−Ｌ−α−ホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）など）から選択される。
【００７７】
好ましくは、極性の頭部基は、３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン−１，２−ジオール（ＤＡＰ）または３−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニオプロパン−１，２−ジオール（ＴＡＰ）に由来する。
【００７８】
１つの態様において、極性の頭部基（ＰＨＧ）は、以下の基、−Ｗ−リンカー−ＨＧ（式中、Ｗは、ＣＨ2、Ｏ、ＮＲ1およびＳから選択され、Ｒ1はＨまたはヒドロカルビル基であり、リンカーは任意のリンカー基であり、ＨＧは頭部基である）であってよい。
【００７９】
頭部基（ＨＧ）は極性または非極性であってよい。ＨＧが非極性であるとき、ＨＧは、以下の基、−Ｃ（Ｏ）Ｗ−リンカーによって極性にすることができる。そのような頭部基は、−Ｃ（Ｏ）Ｗ−リンカー−基に結合したとき、−Ｃ（Ｏ）Ｗ−リンカー−ＨＧが極性であり、ＨＧが極性であるならば、本発明の定義によって包含される。
【００８０】
１つの態様において、頭部基（ＨＧ）はアルキル基であり得る。この態様において、好ましくは、アルキルは少なくとも５個の炭素を含有し、例えば、アルキルは、Ｃ5〜100アルキル基、Ｃ5〜80アルキル基、Ｃ5〜60アルキル基、Ｃ5〜50アルキル基、Ｃ5〜40アルキル基、Ｃ5〜30アルキル基またはＣ5〜20アルキル基である。
【００８１】
１つの態様において、頭部基（ＨＧ）は、リン脂質類、セラミド類、トリアシルグリセロール類、リゾリン脂質類、ホスファチジルセリン類、グリセロール類、アルコール類、アルコキシ化合物類、モノアシルグリセロール類、ガングリオシド類、スフィンゴミエリン類、セレブロシド類、ホスファチジルコリン類、ホスファチジルエタノールアミン類、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）類、ジアシルグリセロール類、ホスファチジン酸類、グリセロ炭水化物類、ポリアルコール類およびホスファチジルグリセロール類に由来する。
【００８２】
１つの好ましい態様において、頭部基は、下記の式：
【化１３】
2005505521.tif 000015
または下記の式：
【化１４】
2005505521.tif 000016
（式中、Ｒは、Ｈおよびヒドロカルビル基から独立して選択され、ｍは１〜１０であり、ｎは１〜１０である）
である。
【００８３】
好ましくは、Ｒは、ＨおよびＣ1〜6アルキルから選択され、より好ましくはＨおよびＣ1〜3アルキルから選択され、より好ましくはＨおよびメチルから選択される。
【００８４】
好ましくは、ｍは１〜５であり、より好ましくは１、２または３である。
【００８５】
好ましくは、ｎは１〜５であり、より好ましくは１、２または３である。
【００８６】
［リンカー］
Ｗ−リンカー−ＨＧのリンカーは任意の好適な基であり得る。典型的なリンカー基には、ヒドロカルビル基がある。
【００８７】
本明細書中で使用される用語「ヒドロカルビル基」は、少なくともＣおよびＨを含む基を意味し、任意選択的に１つ以上の他の好適な置換基を含むことができる。そのような置換基の例には、ハロ基、アルコキシ基、ニトロ基、アルキル基、環状基などを挙げることができる。置換基が環状基である可能性に加えて、置換基の組合せにより、環状基が形成されることがある。ヒドロカルビル基が２個以上のＣを含む場合、それらの炭素は必ずしも相互に連結される必要はない。例えば、炭素の少なくとも２つが好適な元素または基を介して連結され得る。従って、ヒドロカルビル基はヘテロ原子を含有することができる。好適なヘテロ原子は当業者には明らかであり、好適なヘテロ原子には、例えば、イオウ、窒素および酸素が含まれる。ヒドロカルビル基の非限定的な例としては、アシル基がある。
【００８８】
典型的なヒドロカルビル基は炭化水素基である。本明細書中において、用語「炭化水素」は、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基（これらの基は直鎖状または分枝状または環状であり得る）、またはアリール基のいずれか１つを意味する。炭化水素の用語にはまた、任意選択的に置換されている基が含まれる。炭化水素が、置換基を有する分枝状構造である場合、置換基は炭化水素骨格上または分枝上のいずれかに存在し得る。あるいは、置換基は炭化水素骨格上および分枝上に存在し得る。
【００８９】
１つの好ましい態様において、少なくとも１つの任意のリンカー基が存在しない。１つの好ましい態様において、任意のリンカー基は存在しない。
【００９０】
１つ以上またはすべての任意のリンカーが存在しないとき、極性の頭部基が由来する基／化合物は、典型的には、１つ以上の−ＯＨ基を有するように選ばれる。これらは、非極性成分と極性成分との間における単純なエステル結合が提供されることを可能にする。
【００９１】
任意のリンカーが存在するとき、２つ以上のＷ基がリンカーの同じ原子に結合してもよいこと、または２つ以上のＷ基がリンカーの同じ原子に結合しなくてもよいことが当業者によって理解される。いくつかの態様では、そのような２つ以上のＷ基はリンカーの異なる原子に結合することが考えられる。
【００９２】
［Ｗ］
−Ｗ−リンカー−ＨＧのＷは、ＣＨ2、Ｏ、ＮＲ1およびＳから選択されるが、この場合、Ｒ1はＨまたはヒドロカルビル基である。
【００９３】
１つの好ましい態様において、ＷはＯまたはＮＲ1である。
【００９４】
Ｒ1は、好ましくは、Ｈまたは炭化水素基である。
【００９５】
Ｒ1は、好ましくは、Ｈ、Ｃ1〜30ヒドロカルビル基、Ｃ1〜25ヒドロカルビル基、Ｃ1〜20ヒドロカルビル基、Ｃ1〜15ヒドロカルビル基、Ｃ1〜10ヒドロカルビル基、Ｃ1〜5ヒドロカルビル基またはＣ5〜15ヒドロカルビル基である。
【００９６】
Ｒ1は、好ましくは、Ｈ、Ｃ1〜30炭化水素基、Ｃ1〜25炭化水素基、Ｃ1〜20炭化水素基、Ｃ1〜15炭化水素基、Ｃ1〜10炭化水素基、Ｃ1〜5炭化水素基またはＣ5〜15炭化水素基である。
【００９７】
Ｒ1は、好ましくは、Ｈ、または任意選択的に置換されたＣ1〜30アルキル基、Ｃ1〜25アルキル基、Ｃ1〜20アルキル基、Ｃ1〜15アルキル基、Ｃ1〜10アルキル基、Ｃ1〜5アルキル基もしくはＣ5〜15アルキル基である。
【００９８】
Ｒ1は、好ましくは、Ｈ、非置換Ｃ1〜30アルキル基、非置換Ｃ1〜25アルキル基、非置換Ｃ1〜20アルキル基、非置換Ｃ1〜15アルキル基、非置換Ｃ1〜10アルキル基、非置換Ｃ1〜5アルキル基または非置換Ｃ5〜15アルキル基である。
【００９９】
［非極性成分］
［Ｘ］
上記で議論されたように、Ｘはヒドロカルビル基である。「ヒドロカルビル鎖」により、直鎖状のヒドロカルビル基が意味される。
【０１００】
鎖長の下記の定義では、成分Ｘ内の直接結合している原子の最長鎖が意味される。鎖には、環状置換基または末端炭素の置換基の原子が含まれないことが理解される。
【０１０１】
１つの好ましい態様において、Ｘは、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアルケニル、および任意選択的に置換されたアルキニルから選択される基である。
【０１０２】
１つの好ましい態様において、アセチレン性ヒドロカルビル基は３個〜３０個の炭素原子を含有し、例えば、１０個〜２５個の炭素原子、１５個〜２０個の炭素原子、１５個の炭素原子、１６個の炭素原子、１７個の炭素原子、または１８個の炭素原子を含有する。
【０１０３】
好ましくは、アセチレン性ヒドロカルビル基は、下記の脂肪酸：
【化１５】
2005505521.tif 000017
から選択される脂肪酸に由来する。
【０１０４】
１つの好ましい態様において、Ｘは、任意選択的に置換されたＣ6〜Ｃ24アルキニル基から選択される基である。
【０１０５】
１つの好ましい態様において、Ｘは、鎖長が６原子〜２４原子である、任意選択的に置換されたアルキニル基から選択される基である。
【０１０６】
１つの好ましい態様において、Ｘは、鎖長が１０原子〜１８原子である、任意選択的に置換されたアルキニル基から選択される基である。
【０１０７】
１つの好ましい態様において、Ｘは、鎖長が１６原子または１７原子である、任意選択的に置換されたアルキニル基から選択される基である。
【０１０８】
１つの好ましい態様において、Ｘは、非置換アルキニル基から選択される基である。
【０１０９】
１つの好ましい態様において、Ｘは、非置換のＣ6〜Ｃ24アルキニル基から選択される基である。
【０１１０】
１つの好ましい態様において、Ｘは、鎖長が６原子〜２４原子である非置換アルキニル基から選択される基である。
【０１１１】
１つの好ましい態様において、Ｘは、非置換のＣ10〜Ｃ18アルキニル基から選択される基である。
【０１１２】
１つの好ましい態様において、Ｘは、鎖長が１０原子〜１８原子である非置換アルキニル基から選択される基である。
【０１１３】
１つの好ましい態様において、Ｘは、非置換のＣ16アルキニル基またはＣ17アルキニル基から選択される基である。
【０１１４】
１つの好ましい態様において、Ｘは、鎖長が１６原子または１７原子である非置換アルキニル基から選択される基である。
【０１１５】
１つの好ましい態様において、Ｘは炭化水素鎖である。「炭化水素鎖」により、直鎖状の炭化水素基が意味される。
【０１１６】
Ｘが１つ以上の二重結合を含有するとき、好ましくは少なくとも１つがシス配置であり、より好ましくはそれぞれがシス配置である。
【０１１７】
１つの好ましい態様において、アセチレン性ヒドロカルビル基のＣ≡Ｃは、２個〜１５個の炭素によって該アセチレン性ヒドロカルビル基の末端から隔てられている。
【０１１８】
１つの好ましい態様において、アセチレン性ヒドロカルビル基のＣ≡Ｃは、２個の炭素によって該アセチレン性ヒドロカルビル基の末端から隔てられている。
【０１１９】
１つの好ましい態様において、アセチレン性ヒドロカルビル基のＣ≡Ｃは、３個の炭素によって該アセチレン性ヒドロカルビル基の末端から隔てられている。
【０１２０】
１つの好ましい態様において、アセチレン性ヒドロカルビル基のＣ≡Ｃは、７個の炭素によって該アセチレン性ヒドロカルビル基の末端から隔てられている。
【０１２１】
１つの好ましい態様において、アセチレン性ヒドロカルビル基のＣ≡Ｃは、１３個の炭素によって該アセチレン性ヒドロカルビル基の末端から隔てられている。
【０１２２】
［Ｙ］
上記で議論されたように、ＹはＯまたはＣＨ2である。
【０１２３】
１つの好ましい態様において、ＹはＣＨ2である。
【０１２４】
１つの好ましい態様において、ＹがＣＨ2であるとき、鎖Ｘ−Ｙ−Ｚは偶数個の原子を含有する。Ｘ−Ｙ−Ｚの鎖長は、成分Ｘ−Ｙ−Ｚ内の直接結合している原子の最長の鎖であることが理解される。鎖には、環状置換基または末端炭素の置換基の原子が含まれないことが理解される。
【０１２５】
１つの好ましい態様において、鎖Ｘ−Ｙ−Ｚは偶数個の原子を含有する。
【０１２６】
［Ｚ］
上記で議論されたように、Ｚは任意のヒドロカルビル基である。
【０１２７】
１つの好ましい態様において、Ｚはアルキル基である。
【０１２８】
１つの好ましい態様において、ＺはＣ1〜Ｃ10アルキル基であり、好ましくはＣ1〜Ｃ6アルキル基であり、好ましくはＣ1〜Ｃ3アルキル基である。好ましくは、Ｚは−ＣＨ2−である。
【０１２９】
［化合物］
１つの態様において、化合物は下記の式を有する。
【化１６】
2005505521.tif 000018
（式中、ｐは少なくとも１であり、例えば、１〜１００００、１〜１０００、１〜１００、１〜５０、１〜２０、１〜１０、好ましくは１〜５、好ましくは１または２または３であり、そして、Ｗ、Ｘ、ＹおよびＺはそれぞれが互いに独立して選択される）。
【０１３０】
ｐの所与の値について、極性の頭部基が由来し得る好適な化合物の例には、下記のような化合物が挙げられる。
【表１】
2005505521.tif 000019
【０１３１】
１つの態様において、化合物は下記の式を有する。
【化１７】
2005505521.tif 000020
（式中、ｐは１〜１０であり、好ましくは１〜５、好ましくは１、２または３であり、そして、Ｗ、Ｘ、ＹおよびＺはそれぞれが互いに独立して選択される）。
【０１３２】
１つの態様において、化合物は下記の式を有する。
【化１８】
2005505521.tif 000021
【０１３３】
１つの態様において、化合物は下記の式を有する。
【化１９】
2005505521.tif 000022
【０１３４】
好ましくは、化合物は、式Ｘ−Ｙ−Ｚ−の非極性成分から独立してそれぞれが選択される少なくとも２つの非極性成分を含む。
【０１３５】
１つの好ましい態様において、化合物は下記の式を有する。
【化２０】
2005505521.tif 000023
（式中、Ｗ、Ｘ、ＹおよびＺはそれぞれが互いに独立して選択される）。
【０１３６】
１つの好ましい態様において、化合物は下記の式を有する。
【化２１】
2005505521.tif 000024
（式中、Ｗ、Ｘ、ＹおよびＺはそれぞれが互いに独立して選択される）。
【０１３７】
１つの態様において、化合物は、式、Ｘ−Ｙ−Ｚ−の非極性成分から独立してそれぞれが選択される少なくとも３つの非極性成分を含む。
【０１３８】
１つの好ましい態様において、化合物は下記の式を有する。
【化２２】
2005505521.tif 000025
（式中、Ｗ、Ｘ、ＹおよびＺはそれぞれが互いに独立して選択される）。
【０１３９】
１つの好ましい態様において、化合物は下記の式を有する。
【化２３】
2005505521.tif 000026
（式中、Ｗ、Ｘ、ＹおよびＺはそれぞれが互いに独立して選択される）。
【０１４０】
好ましい態様において、本発明は、下記の式の化合物：
【化２４】
2005505521.tif 000027
（式中、Ｒは、Ｈおよびヒドロカルビルから独立して選択され、ｎは１〜１０であり、ｍは１〜１０である）
を提供する。さらに、本発明は、
・ヌクレオチド配列と混合されているか、またはヌクレオチド配列を伴う化合物、
・治療において使用される化合物、
・遺伝的な障害または状態または疾患を治療するための医薬品の製造における使用のための化合物、
・化合物から形成されるカチオン性リポソーム、
・化合物からカチオン性リポソームを形成することを含む、カチオン性リポソームの調製方法、
・カチオン性リポソームおよびその使用、
・化合物を、医薬品と混合し、そして任意選択的に薬学的に許容可能な希釈剤またはキャリアまたは賦形剤と混合して含む医薬組成物、
・ＳまたはＲの異性体形態での化合物、好ましくは、Ｒの異性体形態での化合物
を提供する。
【０１４１】
好ましくは、−ＺＹＸは式ＣpＨ2p-3の基（式中、ｐは３〜３０であり、好ましくは１０〜２５、好ましくは１５〜２０であり、好ましくは１５個、１６個、１７個または１８個の炭素原子である）である。
【０１４２】
本発明のさらなる非常に好ましい態様が下記に記載される。本発明は、
・下記の式の化合物：
【化２５】
2005505521.tif 000028
（式中、Ｘ2およびＸ3は独立して、非置換Ｃ10〜Ｃ18アルキニルから選択される）
【０１４３】
・下記の式の化合物：
【化２６】
2005505521.tif 000029
（式中、Ｘ2およびＸ3は独立して、非置換Ｃ14アルキニルおよび非置換Ｃ15アルキニルから選択される）
【０１４４】
・下記の式の化合物：
【化２７】
2005505521.tif 000030
（式中、Ｘ2およびＸ3は独立して、ＣＨ3（ＣＨ2）12Ｃ≡Ｃ−、ＣＨ3ＣＨ2ＣＨ2Ｃ≡Ｃ（ＣＨ2）10−、ＣＨ3（ＣＨ2）7Ｃ≡Ｃ（ＣＨ2）5−、ＣＨ3（ＣＨ2）6Ｃ≡Ｃ（ＣＨ2）5−、およびＣＨ3ＣＨ2Ｃ≡Ｃ（ＣＨ2）10−から選択される）
【０１４５】
・下記の式の化合物：
【化２８】
2005505521.tif 000031
（式中、Ｘ2およびＸ3は独立して、非置換Ｃ10〜Ｃ18アルキニルから選択され、そして、極性の頭部基はリン脂質の極性の頭部基に由来する）
【０１４６】
・下記の式の化合物：
【化２９】
2005505521.tif 000032
（式中、Ｘ2およびＸ3は独立して、非置換Ｃ14アルキニルおよび非置換Ｃ15アルキニルから選択され、そして、極性の頭部基はリン脂質の極性の頭部基に由来する）
【０１４７】
・下記の式の化合物：
【化３０】
2005505521.tif 000033
（式中、Ｘ2およびＸ3は独立して、ＣＨ3（ＣＨ2）12Ｃ≡Ｃ−、ＣＨ3ＣＨ2ＣＨ2Ｃ≡Ｃ（ＣＨ2）10−、ＣＨ3（ＣＨ2）7Ｃ≡Ｃ（ＣＨ2）5−、ＣＨ3（ＣＨ2）6Ｃ≡Ｃ（ＣＨ2）5−、およびＣＨ3ＣＨ2Ｃ≡Ｃ（ＣＨ2）10−から選択され、極性の頭部基は、リン脂質の極性の頭部基に由来する）
【０１４８】
・下記の式の化合物：
【化３１】
2005505521.tif 000034
（式中、Ｘ2およびＸ3は独立して、非置換Ｃ10〜Ｃ18アルキニルから選択され、そして、極性の頭部基は、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン−１，２−ジオール（ＤＡＰ）、および３−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニオプロパン−１，２−ジオール（ＴＡＰ）から選択される脂質の極性の頭部基に由来する）
【０１４９】
・下記の式の化合物：
【化３２】
2005505521.tif 000035
（式中、Ｘ2およびＸ3は独立して、非置換Ｃ14アルキニルおよび非置換Ｃ15アルキニルから選択され、そして、極性の頭部基は、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン−１，２−ジオール（ＤＡＰ）、および３−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニオプロパン−１，２−ジオール（ＴＡＰ）から選択される脂質の極性の頭部基に由来する）
【０１５０】
・下記の式の化合物：
【化３３】
2005505521.tif 000036
（式中、Ｘ2およびＸ3は独立して、ＣＨ3（ＣＨ2）12Ｃ≡Ｃ−、ＣＨ3ＣＨ2ＣＨ2Ｃ≡Ｃ（ＣＨ2）10−、ＣＨ3（ＣＨ2）7Ｃ≡Ｃ（ＣＨ2）5−、ＣＨ3（ＣＨ2）6Ｃ≡Ｃ（ＣＨ2）5−、およびＣＨ3ＣＨ2Ｃ≡Ｃ（ＣＨ2）10−から選択され、そして、極性の頭部基は、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン−１，２−ジオール（ＤＡＰ）、および３−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニオプロパン−１，２−ジオール（ＴＡＰ）から選択される脂質の極性の頭部基に由来する）
を提供し得る。
【０１５１】
［さらなる態様］
好ましくは、組成物の治療剤はヌクレオチド配列である。好ましくは、化合物は、ヌクレオチド配列と混合されているか、またはヌクレオチド配列を伴う。
【０１５２】
ヌクレオチド配列は、遺伝子治療などの治療において有用であり得る発現システムの一部またはすべてであり得る。
【０１５３】
好ましい態様において、本発明の化合物は、非ウイルス核酸送達ベクターを提供するために、濃縮されたポリペプチド／核酸複合体と混合されている。濃縮されたポリペプチド／核酸複合体には、好ましくは、国際特許出願公開ＷＯ０１／４８２３３に開示される複合体が含まれる。国際特許出願公開ＷＯ０１／４８２３３は、濃縮されたポリペプチド／核酸複合体と、カチオン性脂質とを含む非ウイルス核酸送達ベクターに関連する。この場合、複合体は、（ａ）関心ある核酸配列（ＮＯＩ）、および（ｂ）（ｉ）ＮＯＩに結合することができ、かつ（ｉｉ）ＮＯＩを濃縮することができる１つ以上のウイルス核酸パッケージングポリペプチドまたはその誘導体を含み、そしてＮＯＩはポリペプチドに対して異種である。
【０１５４】
好ましくは、ポリペプチドまたはその誘導体は核酸複合体に結合することができる。好ましくは、ポリペプチドまたはその誘導体は核酸複合体を濃縮することができる。好ましくは、核酸複合体はポリペプチドまたはその誘導体に対して異種である。
【０１５５】
本発明の化合物は、国際特許出願公開ＷＯ０１／４８２３３のカチオン性脂質の部分的な代替物または完全な代替物として使用することができる。従って、好ましい態様において、本発明は、
・濃縮されたポリペプチド／核酸複合体と、カチオン性脂質と、本発明による化合物とを含む非ウイルス核酸送達ベクターであって、複合体が、（ａ）目的とする核酸配列（ＮＯＩ）、および（ｂ）（ｉ）ＮＯＩに結合することができ、かつ（ｉｉ）ＮＯＩを濃縮することができる１つ以上のウイルス核酸パッケージングポリペプチドまたはその誘導体を含み、ＮＯＩがポリペプチドに対して異種である、非ウイルス核酸送達ベクター、
・濃縮されたポリペプチド／核酸複合体と、本発明による化合物とを含む非ウイルス核酸送達ベクターであって、複合体が、（ａ）目的とする核酸配列（ＮＯＩ）、および（ｂ）（ｉ）ＮＯＩに結合することができ、かつ（ｉｉ）ＮＯＩを濃縮することができる１つ以上のウイルス核酸パッケージングポリペプチドまたはその誘導体を含み、ＮＯＩがポリペプチドに対して異種である、非ウイルス核酸送達ベクター
を提供する。
【０１５６】
本発明の化合物は、投与を助けるために、リポソームと組み合わせることができ、またはミセル形態に配合することができる。
【０１５７】
さらなる態様において、本発明の化合物はコクリアート（cochleate）送達ビヒクルに配合することができる。コクリアート送達ビヒクルは、薬物を経口送達するための新しい技術基盤である。コクリアートは、天然に存在する単純な物質、例えば、ホスファチジルセリンおよびカルシウムから構成される安定なリン脂質カチオン沈殿物である。コクリアートは、疎水性成分、両親媒性成分、負荷電成分または正荷電成分を封入することができる潜在的なナノサイズ化されたシステムである。
【０１５８】
１つの態様において、本発明の化合物は、単離された形態または精製された形態である。例えば、化合物は、インビボなどでの生物学的システムにおいて見出される形態または純度とは異なる形態または純度であってもよい。
【０１５９】
本発明の化合物は、本発明の化合物を、薬学的に許容可能なキャリア、希釈剤、賦形剤またはアジュバントと任意選択的に混合されて含む医薬組成物を提供するために配合することができる。
【０１６０】
［医薬組成物］
本発明はまた、治療に有効な量の本発明の薬剤と、薬学的に許容可能なキャリアまたは希釈剤または賦形剤（それらの組合せを含む）とを含む医薬組成物を提供する。
【０１６１】
本発明の医薬組成物は、治療に有効な量の薬学的に活性な薬剤を含む組成物、または治療に有効な量の薬学的に活性な薬剤からなる組成物である。本発明の医薬組成物は、好ましくは、薬学的に許容可能なキャリアまたは希釈剤または賦形剤（それらの組合せを含む）を含む。治療的に使用される受容可能なキャリアまたは希釈剤は、製薬分野では広く知られており、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ編、１９８５年）に記載される。好適な薬学的に許容可能なキャリアまたは希釈剤または賦形剤は、意図された投与経路および標準的な薬学的実施に関して選択することができる。医薬組成物は、キャリア、賦形剤もしくは希釈剤として、またはキャリア、賦形剤もしくは希釈剤に加えて、任意の好適な結合剤、滑剤、懸濁化剤、コーティング剤、可溶化剤を含むことができる。
【０１６２】
本発明の医薬組成物は、望ましくは、無菌形態で提供される。本発明の医薬組成物は単位投薬量形態で提供されることがあり、一般には密封容器において提供される。多数の単位投薬量形態物が提供され得る。
【０１６３】
本発明の範囲に含まれる医薬組成物は下記の１つ以上を含むことができる。保存剤、可溶化剤、安定化剤、湿潤化剤、乳化剤、甘味剤、着色剤、香味料、着臭剤、塩類（本発明の化合物はそれ自体、薬学的に許容可能な塩の形態で提供され得る）、緩衝剤、コーティング剤、抗酸化剤、懸濁化剤、アジュバント、賦形剤および希釈剤。保存剤の例には、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸、およびｐ−ヒドロキシ安息香酸のエステルが含まれる。
【０１６４】
本発明の医薬組成物はまた、本発明の化合物に加えて、他の治療活性な薬剤を含有することができる。２つ以上の治療剤が使用される場合、それらは別々に（例えば、異なる時間で、かつ／または異なる経路によって）投与することができ、従って、必ずしも常に単一の組成物に存在する必要はない。従って、複合治療は本発明の範囲内である。
【０１６５】
［投与経路］
本発明の範囲に含まれる医薬組成物は、任意の適切な経路による投与のために適合させることができる。例えば、医薬組成物は、経口経路（口内経路または舌下経路を含む）、直腸経路、鼻腔経路、局所的経路（口内経路、舌下経路または経皮経路を含む）、膣経路、または非経口的経路（皮下経路、筋肉内経路、静脈内経路または皮内経路を含む）によって投与することができる。そのような組成物は、製薬の分野で知られている任意の方法によって、例えば、１以上の有効成分を好適なキャリアと混合することによって調製することができる。
【０１６６】
種々の薬物送達システムを、所望の投与経路に依存して、本発明の医薬組成物を投与するために使用することができる。様々な薬物送達システムが、例えば、Ｌａｎｇｅｒ（Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４９：１５２７〜１５３３（１９９１））によって、そしてＩｌｌｕｍおよびＤａｖｉｓ（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２：２５４〜２５９（１９９１））によって記載されている。次に、薬物送達のための種々の投与経路をさらに詳しく検討する。
【０１６７】
本発明の薬剤は単独で投与することができるが、一般には、医薬組成物として投与される。例えば、薬剤が、意図された投与経路および標準的な製薬的な手法に関して選択された好適な薬学的な賦形剤、希釈剤またはキャリアと混合されているときには、医薬組成物として投与される。
【０１６８】
例えば、薬剤は、即時放出適用、遅延放出適用、修飾放出適用、持続放出適用、パルス放出適用または制御放出適用のために、矯味矯臭剤または着色剤を含有し得る、錠剤、カプセル、腔坐剤、エリキシル剤、溶液剤または懸濁剤の形態で（例えば、経口的または局所的に）投与することができる。
【０１６９】
錠剤は、賦形剤（例えば、微結晶セルロース、ラクトース、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、第二リン酸カルシウムおよびグリセリンなど）、崩壊剤（例えば、デンプン（好ましくは、トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプンまたはタピオカデンプン）、ナトリウムデンプングリコラート、クロスカルメロースナトリウムおよびある種の複合ケイ酸塩など）、および造粒結合剤（例えば、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、スクロース、ゼラチンおよびアラビアゴムなど）を含有することができる。さらに、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ベヘン酸グリセリルおよびタルクなどの滑剤を含めることができる。
【０１７０】
類似するタイプの固体組成物もまた、ゼラチンカプセルにおける増量剤として用いることができる。これに関する好ましい賦形剤には、ラクトース、デンプン、セルロース、乳頭または高分子量ポリエチレングリコールが含まれる。水性の懸濁物および／またはエリキシル剤の場合、薬剤は、様々な甘味剤または香味料、着色物または色素と、乳化剤および／または懸濁化剤と、そして希釈剤（例えば、水、エタノール、プロピレングリコールおよびグリセリン、ならびにそれらの組み合わせ）と組み合わせることができる。
【０１７１】
投与（送達）経路には、経口（例えば、錠剤、カプセルとして、または摂取可能な溶液剤として）、局所的、粘膜的（例えば、吸入用の鼻スプレーまたはエアロゾルとして）、鼻腔、非経口的（例えば、注射可能な形態によって）、胃腸、髄腔内、腹腔内、筋肉内、静脈内、子宮内、眼内、皮内、頭蓋内、気管内、膣内、脳室内、脳内、皮下、眼（硝子体内または房室内を含む）、経皮的、直腸的、口内、ペニス経由、膣経由、硬膜外経由、舌下経由の１つ以上が含まれるが、これに限定されない。
【０１７２】
すべての薬剤が同じ経路によって投与される必要がないことを理解しなければならない。同様に、組成物が２つ以上の有効成分を含む場合、それらの成分は異なる経路によって投与することができる。
【０１７３】
本発明の薬剤が非経口投与される場合、そのような投与の例には、静脈内、動脈内、腹腔内、鞘内、心室（脳室）内、尿道内、胸骨内、頭蓋内、筋肉内もしくは皮下に薬剤を投与すること、および／または注入技術を使用することによって薬物を投与することの１つ以上が含まれる。
【０１７４】
（Ｉ）経口投与
経口投与のために適合化された医薬組成物は、カプセルまたは錠剤として、粉末剤または顆粒として、（水性または非水性の液体における）溶液剤またはシロップまたは懸濁剤として、食用の泡状物またはホイップとして、あるいはエマルションとして提供され得る。錠剤または硬ゼラチンカプセルは、ラクトース、トウモロコシデンプンまたはその誘導体、ステアリン酸またはその塩を含むことができる。軟ゼラチンカプセルは、植物油、ワックス、脂肪、半固体または液体のポリオールなどを含むことができる。溶液剤およびシロップは、水、ポリオールおよび糖を含むことができる。懸濁物を調製する場合、オイル（例えば、植物油）を、水中油型または油中水型の懸濁物を提供するために使用することができる。経口投与を目的とする活性な薬剤は、活性な薬剤の胃腸管における崩壊および／または吸収を遅らせる物質でコーティングされ得るか、またはそのような物質と混合され得る（例えば、グリセリルモノステアラートまたはグリセリルジステアラートを使用することができる）。従って、活性な薬剤の持続した放出を長時間にわたって達成することができ、そして必要な場合には、活性な薬剤を胃内での分解から保護することができる。経口投与される医薬組成物は、特異的なｐＨ条件または酵素条件のために、特定の胃腸位置における活性な薬剤の放出を容易にするために配合することができる。
【０１７５】
（ＩＩ）経皮投与
経皮投与のために適合化された医薬組成物は、受容者の表皮との密接な接触状態を長期間にわたって維持することを目的とする個別のパッチとして提供され得る。例えば、有効成分をイオン導入によってパッチから送達することができる（イオン導入は、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、３（６）：３１８（１９８６）に記載される）。
【０１７６】
（ＩＩＩ）局所的投与
あるいは、本発明の薬剤は、坐薬もしくはペッサリーの形態で投与することができ、またはゲル、ヒドロゲル、ローション、溶液剤、クリーム、軟膏もしくは散布剤の形態で局所的に適用することができる。本発明の薬剤はまた、例えば、皮膚パッチの使用によって皮膚的または経皮的に投与することができる。本発明の薬剤はまた、肺経路または直腸経路によって投与することができる。本発明の薬剤はまた、眼経路によって投与することができる。眼に使用される場合、化合物は、任意選択的に、塩化ベンザルコニウム（benzylalkonium chloride）などの保存剤と組み合わせて、等張性で、ｐＨ調節された無菌の生理的食塩水における微細化懸濁物として、または好ましくは、等張性で、ｐＨ調節された無菌の生理的食塩水における溶液として配合することができる。あるいは、化合物は、ワセリンなどの軟膏で配合することができる。
【０１７７】
皮膚への局所的な適用の場合、本発明の薬剤は、例えば、鉱油、液体ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン化合物、乳化性ワックスおよび水の１つ以上との混合物に懸濁または溶解された活性な化合物を含有する好適な軟膏として配合することができる。あるいは、本発明の薬剤は、例えば、鉱油、ソルビタンモノステアラート、ポリエチレングリコール、流動パラフィン、ポリソルベート６０、セチルエステルのワックス、セテアリルアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコールおよび水の１つ以上の混合に懸濁または溶解された好適なローションまたはクリームとして配合することができる。
【０１７８】
（ＩＶ）直腸投与
直腸投与のために適合化された医薬組成物は坐薬または浣腸剤として提供することができる。
【０１７９】
（Ｖ）鼻腔投与
鼻腔投与のために適合化された医薬組成物では、固体のキャリア、例えば、粉末（好ましくは、粒子サイズが２０ミクロン〜５００ミクロンの範囲にある粉末）を使用することができる。粉末は、かぎタバコが吸われる様式で、すなわち、鼻の近くに保たれた粉末容器から鼻を介した迅速な吸入によって投与することができる。あるいは、鼻腔投与のために適合化された組成物では、液体のキャリア、例えば、鼻スプレーまたは点鼻薬を使用することができる。これらは有効成分の水溶液またはオイル溶液を含むことができる。
【０１８０】
吸入によって投与される組成物は、特別に適合化されたデバイスにおいて、例えば、加圧エアロゾル、ネブライザーまたは吸入器において供給することができる。これらのデバイスは、所定の投薬量の有効成分を提供するように構築することができる。
【０１８１】
（ＶＩ）膣投与
膣投与のために適合化された医薬組成物は、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォームまたはスプレー配合物として提供することができる。
【０１８２】
（ＶＩＩ）非経口投与
本発明の薬剤が非経口投与される場合、そのような投与の例には、静脈内、動脈内、腹腔内、鞘内、心室（脳室）内、尿道内、胸骨内、頭蓋内、筋肉内もしくは皮下に薬剤を投与すること、および／または注入技術を使用することによって薬物を投与することの１つ以上が含まれる。
【０１８３】
非経口投与の場合、薬剤は、他の物質、例えば、溶液を血液と等張性にするための十分な塩またはグルコースを含有し得る無菌の水溶液の形態で最もよく使用される。必要な場合には、水溶液は、（好ましくは３〜９のｐＨに）好適に緩衝化されなければならない。無菌条件下での好適な非経口用配合物の調製は、当業者に周知の標準的な製薬技術によって容易に達成される。
【０１８４】
［経皮的］
「経皮的」は、皮膚を介して血流内に通過させることによる化合物の送達を示す。
【０１８５】
［経粘膜的］
「経粘膜的」は、粘膜組織を介して化合物を血流内に通過させることによる化合物の送達を示す。
【０１８６】
［経尿道的または尿道内］
「経尿道的」または「尿道内」は、薬物が尿道の壁と接触し、尿道の壁を通り抜けて、血流内に進入するように薬物を尿道内に送達することを示す。
【０１８７】
［浸透増強または透過増強］
「浸透増強」または「透過増強」は、化合物が皮膚または粘膜組織を透過する速度が増大するように、選択された薬理学的に活性な化合物に対する皮膚または粘膜組織の透過性を増大させることを示す。
【０１８８】
透過増強剤には、例えば、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、デシルメチルスルホキシド（ＣｌＯＭＳＯ）、ポリエチレングリコールモノラウラート（ＰＥＧＭＬ）、グリセラルモノラウラート、レシチン、１−置換アザシクロヘプタノン（特に、１−Ｎ−ドデシルシクロアザシクロヘプタノン類、これはＮｅｌｓｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ＆Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｃｏ．（Ｉｒｖｉｎｅ、ＣＡ）からＡｚｏｎｅ（商標）の商標で入手することができる）、アルコールなどを挙げることができる。
【０１８９】
［キャリアまたはビヒクル］
「キャリア」または「ビヒクル」は、化合物の投与のために好適なキャリア物質を示し、これらには、非毒性であり、かつ有害な様式で組成物のどの成分とも相互作用しない、当分野で知られている任意のそのような物質、例えば、任意の液体、ゲル、溶媒、液体希釈剤または可溶化剤などが含まれる。
【０１９０】
薬学的に許容可能なキャリアの例には、例えば、水、塩溶液、アルコール、シリコーン、ワックス、ワセリン、植物油、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、糖、ゼラチン、ラクトース、アミロース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、界面活性剤、ケイ酸、粘性パラフィン、香油、脂肪酸のモノグリセリドおよびジグリセリド、石油エーテル脂肪酸エステル、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドンなどが含まれる。
【０１９１】
［表皮薬物送達（トランスファーソーム）］
トランスファーソーム（「輸送体」）は、バリアを越えることができ、かつ適用部位と目的部位との間で物質を輸送することができる複雑な、大抵の場合には小胞状の二成分または多成分の凝集体である。トランスファーソームは、ＩＤＥＡ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｍｕｎｉｃｈ、ドイツ）によって販売されており、ＴＲＡＮＳＦＥＲＳＯＭＥはその企業の商標である。トランスファーソーム経皮薬物送達技術を、代謝酵素のアンタゴニストおよび／または本発明の薬物を含む小分子の改善された送達のためだけでなく、広範囲の様々な大きな分子の制御可能な非侵襲的送達のために使用することができる。
【０１９２】
トランスファーソームは、極めて柔軟かつ自己調節性の膜を得るために最適化することができる。トランスファーソームは、従って変形可能であり、その結果、利用可能な通路が平均凝集体サイズよりもはるかに小さいときでさえ、ミクロポアのバリアを効率的に越えることができる。トランスファーソーム配合物は、典型的には、生体適合性の界面活性剤を任意選択的に含有する水系溶液に懸濁された天然の両親媒性化合物から構成される。小胞状のトランスファーソームは、水性のコアを取り囲む脂質二重層からなり、そして膜を柔軟にすることができる少なくとも１つの成分をさらに含有する。その結果、トランスファーソームの二重層はリポソーム膜よりも柔軟であり、準安定でさえある。従って、トランスファーソーム小胞は、周囲の応力に対して局所的に調節することによってその形状を容易に変化させる。
【０１９３】
皮膚は、最も良好な生物学的バリアの１つである。その最も外側の部分（すなわち、角質層）は皮膚の深さの１０％未満であるが、皮膚透過性バリアに対して８０％以上寄与している。この身体保護層は、円柱状クラスターで組織化され、そして細胞膜に共有結合的に結合し、かつ非常に強固に充填される多重ラメラ状脂質シートで塞がれた、重なる柔弱な角質細胞からなる。一般に、細胞間脂質ラメラの平均数および細胞間脂質ラメラにおける秩序度は皮膚表面に向かって増大する。これには、表面付近の局所的な水分含有量の連続するが、非直線的な減少が伴う。これにもかかわらず、最大の皮膚バリアが、細胞間の脂質シールが既に形成されているが、皮膚細胞の剥離によって未だ損なわれていない角質層の内側半分のところに存在する。
【０１９４】
皮膚を横断するトランスファーソーム凝集体の通路は、小胞膜の柔軟性、親水性、および小胞の一体性を保持する能力の関数であり、同時に、凝集体は形状の著しい変化を受ける。トランスファーソーム小胞の懸濁物が皮膚の表面に置かれたとき、水が、比較的乾いた皮膚表面から蒸発し、小胞が乾燥し始める。主要なトランスファーソーム成分（膜上における非常に多数の親水性基）の強い極性のために、膜の柔軟性によって助けられて、小胞は、皮膚バリア内の隣接細胞間の狭い隙間における、水分含有量がより大きい領域に引き寄せられ、これにより、小胞の皮膚透過が可能になる。これは、小胞の極めて大きい変形能と一緒になって、トランスファーソーム凝集体が、水が通常的に皮膚から蒸発する非常に小さい「裂け目」を一時的に開口させることを可能にする。このようにして皮膚細胞間の溝（これは幅が元のミクロポアよりも２桁大きい）が生じる。そのような新しく活性化された通路は、十分に変形し得る小胞を受け入れることができ、このとき、小胞はその一体性を維持しているが、溝に収まるためにその形状を変化させている。角質層における生じる「実質上の通路」または「実質上の溝」に沿って、トランスファーソームは、より深い皮膚層における高水分含有量の領域に到達する。その領域において、小胞は（再）分配される。トランスファーソームは、大きすぎて、血管に局所的に進入することができないので、毛細血管床を迂回して、皮下組織に到達し、そこに蓄積する。
【０１９５】
皮膚の角質性層（角質層）を越えた小さい分子は、通常、血液循環を介して皮膚から除かれるが、トランスファーソーム小胞による薬物の送達は、皮膚の深いところでの薬物の蓄積を可能にする。そのサイズが大きいため、小胞は皮膚からゆっくり除かれ、付随する薬物がその部位に蓄積することができる。従って、高分子量薬物のトランスファーソーム媒介投与は、薬物分布を適用部位の下の深い組織に向かって変化させる傾向を有する。
【０１９６】
［血液脳関門（ＢＢＢ）］
医薬組成物は、血液脳関門（ＢＢＢ）を通過するように設計することができる。例えば、ＢＢＢを透過することができるキャリア（例えば、脂肪酸、イノシトールまたはコレステロールなど）を選択することができる。キャリアは、脳の内皮細胞における特異的な輸送システムを介して脳内に進入する物質であり得る（例えば、インスリン様増殖因子ＩまたはＩＩなど）。キャリアは、活性な薬剤に結合させることができ、または活性な薬剤を含有することができる／活性な薬剤と混合することができる。リポソームを、ＢＢＢを越えるために使用することができる。国際特許出願公開ＷＯ９１／０４０１４には、活性な薬剤をカプセル化／埋め込むことができ、そしてＢＢＢを横断して通常的に輸送される分子（例えば、インスリンまたはインスリン様増殖因子ＩもしくはＩＩ）がリポソームの外側表面に存在するリポソーム送達システムが記載される。様々なリポソーム送達システムが米国特許第４７０４３５５号にも議論されている。
【０１９７】
［ポリマー送達／治療薬］
薬剤はさらに、ポリマーに結合されて送達することができる。ポリマーに基づく治療薬は、効果的な送達システムであることが提案されており、一般には、キャリアとして作用するポリマー分子に結合されて送達される１つ以上の薬剤を含む。従って、薬剤は、ポリマー骨格上に配置され、ポリマーと一緒に標的細胞内に運ばれる。
【０１９８】
薬剤は、ポリマーに対して結合、融合、混合、組み合わせることができ、またはそうでなければ一緒にすることができる。薬剤とポリマーとの間における結合などは永続的または一時的であってもよく、そして共有結合的相互作用または非共有結合的相互作用（イオン相互作用、疎水性力、ファンデルワールス相互作用などを含む）を伴うことができる。結合の正確な様式は、薬剤がポリマーと一緒に実質的に標的細胞内に取り込まれる限り、重要ではない。簡略化のために、ポリマーキャリアに結合した薬剤を含む実体は、本明細書では「ポリマー・薬剤コンジュゲート」として示される。
【０１９９】
任意の好適なポリマー（例えば、天然ポリマーまたは合成ポリマー）を使用することができ、好ましくは、キャリアポリマーは、ＰＥＧなどの合成ポリマーである。より好ましくは、キャリアポリマーは生物学的に不活性な分子である。ポリマーの具体的な例には、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド（ＨＰＭＡ）共重合体、ポリアミドアミン（ＰＡＭＡＭ）デンドリマー、ＨＥＭＡ、直鎖状のポリアミドアミンポリマーなどが含まれる。薬剤をポリマーに結合させるための好適なリンカーはどれも使用することができる。好ましくは、リンカーは生分解性リンカーである。生分解性リンカーの使用により、細胞外環境または細胞内環境にさらされたときの薬剤の制御された放出が可能になる。分子量が大きい高分子は、細胞内に能動的に拡散することができず、その代わり、膜に濃縮された小胞として封入される。小胞の内部に入ると、細胞内酵素がポリマー・薬剤コンジュゲートに作用して、薬剤の放出を行わせることができる。制御された細胞内放出により、多くの薬物に伴う毒性副作用が回避される。
【０２００】
さらに、薬剤は、任意の好適なポリマーに対して、当分野で知られている方法によるコンジュゲート、結合などを行うことができ、そして送達することができる。薬剤は、特に、本節において下記に記載されるように、ポリペプチド、核酸、高分子などの「第２の薬剤」として示される分子のいずれかを含むことができる。特に、薬剤は、どこかに記載されるようなプロドラッグを含むことができる。
【０２０１】
出発ポリマーを選ぶことができることにより、望ましい性質を求めてポリマー・薬剤コンジュゲートを操作することが可能になる。ポリマー（従って、ポリマー・薬剤コンジュゲート）の分子量ならびにその電荷および疎水性の特性を精密に調節することができる。ポリマー・薬剤コンジュゲートを使用することの利点には、製造の経済性、安定性（より長い貯蔵安定性）、そして免疫原性および副作用の軽減が含まれる。さらに、成長中の腫瘍は、循環している高分子および大きな粒子がより「漏入」し易く、これにより、それらが容易に腫瘍の内部に入ることを可能にする増強された透過性および保持（ＥＰＲ）作用のため、ポリマー・薬剤コンジュゲートは、腫瘍細胞を標的化するために特に有用である。増大した蓄積および低い毒性（典型的には、遊離薬剤の毒性の１０％〜２０％）もまた認められている。非常に分岐したデンドリマー（例えば、ＰＡＭＡＭデンドリマー）の使用は、単分散組成物を作製することを可能にし、（デンドリマーの内部または外側における）結合部位の柔軟性を可能にするという点で特に好都合である。ポリマー・薬剤コンジュゲート（例えば、ポリアミドアミンポリマーにコンジュゲートされたポリマー・薬剤コンジュゲート）のｐＨ応答性を特定の細胞内環境のために調節することができる。これは、ポリマー治療薬が特定のｐＨまたはｐＨ範囲に遭遇したときにだけ、すなわち、特定の細胞内区画の内部において、薬物が放出されることを可能にする。ポリマー・薬剤コンジュゲートはさらに、標的（例えば、特定の抗原）を含む特定の組織、器官または細胞にポリマー・薬剤コンジュゲートを向かわせる標的化手段、例えば、免疫グロブリンまたは抗体などを含むことができる。他の標的化手段が、本明細書中のどこかに記載されており、そしてまた、当分野では知られている。
【０２０２】
ポリマー・薬剤コンジュゲートの具体的な例には、スチレン−ｃｏ−無水マレイン酸と抗腫瘍タンパク質のネオカルジノスタチンとのコンジュゲート、および白血病を治療するためのＬ−アスパラギナーゼとのＰＥＧ（ポリエチレングリコール）のコンジュゲートを含む「Ｓｍａｎｃｓ」；ＰＫ１（抗ガン薬ドキソルビシンとのＨＰＭＡ共重合体のコンジュゲート）；ＰＫ２（これはＰＫ１に類似するが、原発性および二次的な肝臓ガンを標的化するためにガラクトース基をさらに含む）；抗ガン薬カプトテシンとのＨＰＭＡ共重合体のコンジュゲート；抗ガン薬パクリタキセルとのＨＰＭＡ共重合体のコンジュゲート；ＨＰＭＡ共重合体−白金酸塩などが含まれる。これらのポリマー・薬剤コンジュゲートはどれも、本発明の遺伝子導入細胞への同時負荷のために適している。
【０２０３】
［用量レベル］
典型的には、医師により、個々の対象について最も好適である実際の投薬量が決定される。任意の特定の患者に対する投薬の具体的な用量レベルおよび投薬頻度は変化させることができ、用いられる具体的な化合物の活性、その化合物の代謝安定性および作用の長さ、年齢、体重、全体的な健康状態、性別、食事、投与様式および投与回数、排出速度、薬物の組合せ、特定の状態の重篤度、ならびに個体の受けている治療を含む様々な要因に依存する。本発明の薬剤および／または医薬組成物は、１日あたり１回〜１０回、例えば、１日に１回または２回などの投薬計画に従って投与することができる。
【０２０４】
ヒト患者に対する経口投与および非経口投与の場合、薬剤の１日の投薬量レベルは単回用量または分割用量にすることができる。
【０２０５】
必要性に依存して、薬剤は、０．０１ｍｇ／ｋｇ体重〜３０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で、例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ体重〜１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で、より好ましくは０．１ｍｇ／ｋｇ体重〜１ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与することができる。明らかなことではあるが、本明細書中で述べられた投薬量は平均的な場合の例示である。当然のことではあるが、より大きい投薬量範囲またはより少ない投薬量範囲が利益をもたらす場合が個々に存在し得る。
【０２０６】
［治療に有効な量］
「治療に有効な量」は、その意図された目的を達成するために効果的である治療剤の量を示す。個々の患者の必要量は異なり得るが、それぞれの一酸化窒素付加物の効果的な量に対する最適な範囲の決定は当業者の範囲内である。一般に、本発明の化合物および／または組成物を用いて状態を治療するための投薬法は、患者のタイプ、年齢、体重、性別、食事および医学的状態、機能障害の重篤度、投与経路、薬理学的検討（使用される特定の化合物の活性、効力、薬物動態学的プロフィルおよび毒学的プロフィルなど）、薬物送達システムが使用されるか否か、ならびに化合物が薬物の組合せの一部として投与されるか否かを含む様々な要因に従って選択され、そして当業者によって調節することができる。従って、実際に用いられる投薬法は広範囲に変化させることができ、従って、本明細書中に示される好ましい投薬法から外れることがある。
【０２０７】
［個体］
本明細書中で使用される用語「個体」は脊椎動物を示し、特に、哺乳動物種のメンバーを示す。この用語には、家畜動物、競技動物、霊長類およびヒトが含まれるが、これらに限定されない。
【０２０８】
［薬学的組合せ］
一般に、薬剤は、１つ以上の他の薬学的に活性な薬剤と組み合わせて使用することができる。他の薬剤は、ときには、助剤であるとして示されることがある。
【０２０９】
［患者］
「患者」は動物を示し、好ましくは哺乳動物を示し、より好ましくはヒトを示す。
【０２１０】
［薬学的に許容可能な塩］
薬剤は、薬学的に許容可能な塩（酸付加塩または塩基塩など）またはその溶媒和物（その水和物を含む）の形態であってもよく、かつ／または薬学的に許容可能な塩（酸付加塩または塩基塩など）またはその溶媒和物（その水和物を含む）として投与することができる。好適な塩に対する総説については、Ｂｅｒｇｅら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，１９７７、６６、１〜１９を参照のこと。
【０２１１】
典型的には、薬学的に許容可能な塩は、所望する酸または塩基を適するように使用することによって容易に調製することができる。塩は、溶液から沈殿させ、ろ過によって集めることができ、または溶媒を蒸発させることによって回収することができる。
【０２１２】
好適な酸付加塩が、非毒性の塩を形成する酸から形成され、その例には、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、リン酸水素塩、酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、グルコン酸塩、コハク酸塩、サッカラート、安息香酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩およびパモ酸塩の塩がある。
【０２１３】
好適な塩基塩が、非毒性の塩を形成する塩基から形成され、その例には、ナトリウム塩、カリウム塩、アルミニウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、亜鉛塩およびジエタノールアミン塩がある。
【０２１４】
［疾患状態］
本発明の化合物または組成物は、国際特許出願公開ＷＯ−Ａ−９８／０５６３５に列記される障害を治療することにおいて有用であり得る。参照を容易にするために、その列挙の一部が下記に示される。ガン、炎症または炎症性疾患、皮膚科学的障害、発熱、心臓血管の作用、出血、凝固および急性期応答、悪液質、食欲不振、急性感染、ＨＩＶ感染、ショック状態、移植片対宿主反応、自己免疫疾患、再灌流傷害、髄膜炎、片頭痛およびアスピリン依存性抗血栓症；腫瘍増殖、侵入および広がり、血管形成、転移、悪性、腹水症および悪性の胸膜滲出；脳虚血、虚血性心疾患、変形性関節症、慢性関節リウマチ、骨粗鬆症、喘息、多発性硬化症、神経変性、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化、発作、脈管炎、クローン病および潰瘍性大腸炎；歯周炎、歯肉炎；乾癬、アトピー性皮膚炎、慢性潰瘍、表皮水疱症；角膜潰瘍形成、網膜症および外科的傷害治癒；鼻炎、アレルギー性結膜炎、湿疹、アナフィラキシー；再狭窄症、鬱血性心不全、子宮内膜症、アテローム性動脈硬化または内膜硬化症（endosclerosis）。
【０２１５】
さらに、または代替において、本発明の化合物または組成物は、国際特許出願公開ＷＯ−Ａ−９８／０７８５９に列記される障害を治療することにおいて有用であり得る。参照を容易にするために、その列挙の一部が下記に示される。サイトカインおよび細胞増殖／分化の活性；免疫抑制活性または免疫刺激活性（例えば、ヒト免疫不全ウイルスによる感染を含む免疫不全の治療；リンパ球増殖の調節；ガンおよび多くの自己免疫疾患の治療のために、そして移植片拒絶の防止または腫瘍免疫性の誘導のために）；造血の調節、例えば、骨髄性疾患またはリンパ性疾患の治療；骨、軟骨、腱、靱帯および神経組織の増殖を、例えば、傷害の治癒、火傷、潰瘍および歯周病および神経変性の治療のために促進させること；卵胞刺激ホルモンの阻害または活性化（受精の調節）；走化活性／化学運動活性（例えば、特異的な細胞タイプを傷害部位または感染部位に可動化するために）；止血活性および血栓溶解活性（例えば、血友病および発作を治療するために）；抗炎症活性（例えば、敗血症ショックまたはクローン病を治療するために）；抗菌剤として；例えば、代謝または行動の調節剤；鎮痛剤として；特異的な欠損障害の治療；例えば、乾癬の治療において；ヒト医療または動物医療において。
【０２１６】
さらに、または代替において、本発明の組成物は、国際特許出願公開ＷＯ−Ａ−９８／０９９８５に列記される障害を治療することにおいて有用であり得る。参照を容易にするために、その列挙の一部が下記に示される。マクロファージ阻害活性および／またはＴ細胞阻害活性、従って、抗炎症活性；抗免疫活性、すなわち、炎症を伴わない応答を含む細胞免疫応答および／または液性免疫応答に対する阻害作用；マクロファージおよびＴ細胞が細胞外マトリックス成分およびフィブロネクチンに接着する能力を阻害すること、ならびにＴ細胞におけるアップレギュレーションされたｆａｓ受容体発現を阻害すること；望ましくない免疫反応および炎症を阻害すること、例えば、慢性関節リウマチを含む関節炎、過敏性に関連する炎症、アレルギー反応、喘息、全身性エリテマトーデス、膠原病および他の自己免疫疾患、アテローム性動脈硬化に関連する炎症、動脈硬化、アテローム硬化性心疾患、再灌流傷害、心停止、心筋梗塞、血管炎症障害、呼吸窮迫症候群または他の心臓肺疾患、消化性潰瘍に関連する炎症、潰瘍性大腸炎、および胃腸管の他の疾患、肝線維症、肝硬変または他の肝臓疾患、甲状腺炎または他の腺疾患、糸球体腎炎または他の腎臓疾患および泌尿器学的疾患、耳炎または他の耳鼻咽頭学的疾患、皮膚炎または他の皮膚疾患、歯周病または他の歯疾患、精巣炎または精巣上体精巣炎、不妊症、精巣外傷または他の免疫関連精巣疾患、胎盤機能不全、胎盤不全、習慣性流産、子癇、子癇前症ならびに他の免疫関連婦人科疾患および／または炎症関連婦人科疾患、後ブドウ膜炎、中間ブドウ膜炎、前ブドウ膜炎、結膜炎、脈絡網膜炎、ブドウ膜網膜炎、視神経炎、眼内炎症、例えば、網膜炎または嚢胞様黄斑浮腫、交感性眼炎、強膜炎、色素性網膜炎、変性フォンダス（fondus）疾患の免疫成分および炎症性成分、眼外傷の炎症性成分、感染によって引き起こされる眼炎症、増殖性硝子体網膜症、急性虚血性視神経障害、過度な瘢痕形成（例えば、緑内障ろ過手術の後）、眼内インプラントに対する免疫反応および／または炎症反応ならびに他の免疫関連眼疾患および炎症関連眼疾患、自己免疫性の疾患または状態または障害に関連する炎症（中枢神経系（ＣＮＳ）または任意の他の器官の両方において、免疫および／または炎症の抑制が有益である場合）、パーキンソン病、パーキンソン病の治療に由来する合併症および／または副作用、ＡＩＤＳ関連痴呆複合ＨＩＶ関連脳障害、デビック病、シドナム舞踏病、アルツハイマー病およびＣＮＳの他の変性疾患または変性状態または変性障害、発作の炎症性成分、ポリオ後症候群、精神医学的障害の免疫成分および炎症性成分、脊髄炎、脳炎、亜急性硬化性汎脳症、脳脊髄炎、急性神経障害、亜急性神経障害、慢性神経障害、ギラン−バレー症候群、シドナム舞踏病、重症筋無力症、偽脳腫瘍、ダウン症候群、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、ＣＮＳ圧迫またはＣＮＳ外傷またはＣＮＳ感染症の炎症性成分、筋萎縮症および筋ジストロフィーの炎症性成分、そして中枢神経および末梢神経の免疫関連および炎症関連の疾患または状態または障害、外傷後炎症、敗血症性ショック、感染性疾患、手術の炎症性合併症または炎症性副作用、骨髄移植または他の移植の合併症および／または副作用、遺伝子治療の炎症性および／または免疫性の合併症および副作用（例えば、ウイルスキャリアによる感染のために）、ＡＩＤＳに関連する炎症、液性免疫応答および／または細胞性免疫応答を抑制または阻害すること、単球または白血球の量を減らすことによって単球または白血球の増殖性疾患（例えば、白血病）を治療または改善すること、天然または人工の細胞および組織および器官（角膜、骨髄、器官、レンズ、ペースメーカー、天然または人工の皮膚組織など）を移植する場合における移植片拒絶の防止および／または治療のために。
【０２１７】
［治療］
治療には、ヒトまたは非ヒト動物に利益をもたらし得る任意の治療的適用が含まれる。哺乳動物の治療が特に好ましい。ヒトの治療および獣医学的治療はともに本発明の範囲内である。
【０２１８】
治療は、現在の状態に関してであり得るか、または予防的であり得る。治療は、成体、若年者、新生児、胎児、または前記のいずれかの一部（例えば、器官、組織、細胞または核酸分子）の治療であり得る。
【０２１９】
治療において使用される活性な薬剤は、任意の適切な経路によって、そして任意の適切な投薬量で投与され得る。投薬量は、治療の性質、治療される個体の年齢および状態などに依存して範囲内で変化し得るが、医師により、使用される適切な投薬量が最終的には決定される。しかし、何らかの特定の投薬量によってとらわれることなく、１μｇ／ｋｇ体重〜１ｍｇ／ｋｇ体重の本発明の化合物の１日投薬量が好適であり得る。投薬は、適する毎に繰り返すことができる。副作用が現れる場合、投薬量および／または投薬頻度を、良好な診療活動に従って減らすことができる。
【０２２０】
［多型形態／不斉炭素］
本発明の薬剤は多型形態で存在し得る。
【０２２１】
本発明の薬剤は、不斉炭素原子を１つ以上含有することがあり、従って、２つ以上の立体異性形態が存在する。薬剤がアルケニル基またはアルケニレン基を含有するとき、シス（Ｅ）およびトランス（Ｚ）の異性現象もまた存在し得る。本発明には、そのような薬剤の個々の立体異性体、および適する場合には、その個々の互変異性形態が、それらの混合物と一緒に含まれる。
【０２２２】
ジアステレオ異性体またはシス異性体およびトランス異性体の分離を、従来の技術によって、例えば、薬剤またはその好適な塩もしくは誘導体の立体異性体混合物の分別結晶化またはクロマトグラフィーまたはＨ．Ｐ．Ｌ．Ｃ．によって達成することができる。薬剤の化合物の個々のエナンチオマーはまた、対応する光学的に純粋な中間体から調製することができ、あるいは分割によって、例えば、好適なキラル担体を使用して対応するラセミ体をＨ．Ｐ．Ｌ．Ｃ．によって、または対応するラセミ体を好適な光学活性な酸もしくは塩基と適するように反応することにより形成されるジアステレオ異性体の塩の分別結晶化によって調製することができる。
【０２２３】
［同位体の変形］
本発明にはまた、薬剤またはその薬学的に許容可能な塩の好適な同位体の変形のすべてが含まれる。本発明の薬剤またはその薬学的に許容可能な塩の同位体の変形は、少なくとも１つの原子が、同じ原子番号を有するが、自然界において通常的に見出される原子量とは異なる原子量を有する原子によって置換される変形として定義される。薬剤およびその薬学的に許容可能な塩に取り込まれ得る同位体の例には、水素、炭素、窒素、酸素、リン、イオウ、フッ素および塩素の同位体、例えば、それぞれ、2Ｈ、3Ｈ、13Ｃ、14Ｃ、15Ｎ、17Ｏ、18Ｏ、31Ｐ、32Ｐ、35Ｓ、18Ｆおよび36Ｃｌが含まれる。薬剤およびその薬学的に許容可能な塩のある種の同位体の変形、例えば、3Ｈまたは14Ｃなどの放射性同位体が取り込まれる同位体の変形は、薬物および／または基質の組織分布研究において有用である。トリチル化（すなわち、3Ｈ）および炭素−１４（すなわち、14Ｃ）同位体は、その容易な調製および検出性のために特に好ましい。さらに、重水素（すなわち、2Ｈ）などの同位体による置換は、代謝安定性がより大きいことに由来するいくつかの治療的利点、例えば、インビボ半減期の増大または投薬要件の低下をもたらすことができ、従って、いくつかの状況では好ましいと考えられる。本発明の薬剤および本発明のその薬学的に許容可能な塩の同位体の変形は、一般には、好適な試薬の適切な同位体の変形を使用する従来の手法によって調製することができる。
【０２２４】
［プロドラッグ］
本発明の薬剤はプロドラッグに由来し得ることが当業者によって理解される。プロドラッグの例には、ある種の保護された基を有する実体で、それ自体では薬理学的活性を有しなくてもよいが、任意選択的に、（経口または非経口的に）投与することができ、その後、体内で代謝されて、薬理学的に活性である本発明の薬剤を形成する実体が含まれる。
【０２２５】
［プロ成分］
「プロ成分」として知られているある種の成分、例えば、「Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ」（Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、１９８５年；その開示は引用することにより本明細書の一部をなすものとする）に記載されるような成分が薬剤の適切な官能基上に設置され得ることがさらに理解される。そのようなプロドラッグもまた本発明の範囲に含まれる。
【０２２６】
［誘導体］
本明細書中で使用される用語「誘導体」または用語「誘導体化（された）」には、薬剤の化学的修飾が含まれる。そのような化学的修飾の例示として、ハロ基、アルキル基、アシル基またはアミノ基による水素の置換がある。
【０２２７】
［化学的修飾］
本発明の１つの実施形態において、薬剤は、化学的に修飾された薬剤である。
【０２２８】
本発明の薬剤の化学的修飾は、薬剤と標的との間における水素結合相互作用、電荷相互作用、疎水性相互作用、ファンデルワールス相互作用または双極子相互作用の増強または低下のいずれかをもたらし得る。
【０２２９】
１つの態様において、同定された薬剤は、他の化合物を開発するためのモデル（例えば、テンプレート）として作用し得る。
【０２３０】
次に、本発明は、添付された図面を参照して、例示のためだけに、さらに詳細に記載される。
【実施例１】
【０２３１】
ＤＯＰＥ、ＤＳＰＥおよびＤＳＰＣをＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｐｏｏｌｅ、Ｄｏｒｓｅｔ、英国）から直接購入した。ＤＯ（１４−イン）ＰＥおよびＤＯ（１４−イン）ＰＣを、スキーム４（図７および図２）に記載されるように合成した。１：１のモル比のヘルパー脂質：ＤＣ−Ｃｈｏｌのカチオン性リポソームでのこれらの化合物のトランスフェクション特性を測定した。これらの研究から得られた結果が図９にグラフにより表される。
【０２３２】
［モノアセチレン性脂肪酸の合成］
５つのモノアセチレン性脂肪酸を合成した（下記参照）：すなわち、三重結合の位置が異なる３つのＣ１８脂肪酸（５、６および７）（それぞれ、４位、９位および１４位）、そして２つのＣ１７脂肪酸（８および９、それぞれ、９位および１４位に三重結合）。
【化３４】
2005505521.tif 000037
【０２３３】
その後、下記脂質のそれぞれのモノアセチレン性類似体を、これらの５つの脂肪酸を用いて調製した。
【化３５】
2005505521.tif 000038
【０２３４】
これにより、合計で２０個の脂質からなるシリーズが得られた。
【化３６】
2005505521.tif 000039
【化３７】
2005505521.tif 000040
【化３８】
2005505521.tif 000041
【化３９】
2005505521.tif 000042
【０２３５】
［オクタデカ−４−イン酸（５）、オクタデカ−９−イン酸（６）およびヘプタデカ−９−イン酸（８）の合成］
オクタデカ−４−イン酸（５）を下記のように調製した（スキーム１、図４）。最初に、ペンタ−４−イン−１−オールのＴＨＰ保護誘導体（１０）を、ＰＰＴＳを用いた穏和な酸触媒のもとでのＤＨＰとの反応によって９１％の収率で作製した。一方、１−ブロモトリデカンを、周知のＦｉｎｋｅｌｓｔｅｉｎハロゲン交換反応によって、反応性がより大きいそのヨード類似体に変換した（１１；８０％の収率）。
【０２３６】
ＨＭＰＡの存在下でのＢｕＬｉによる末端アルキン１０の脱プロトン化は、１−ヨードトリデカンに対するＳN２反応のために必要とされるアルキンアニオンを生じさせた。この工程は適度な収率（４９％）で進行した。酸触媒による１２の加水分解により、一級アルコール基が脱保護され、これは、続いて、アセトン中でＪｏｎｅｓ試薬（ＣｒＯ3、濃Ｈ2ＳＯ4）で酸化され、オクタデカ−４−イン酸（５）が６９％の収率で得られた。
【０２３７】
オクタデカ−９−イン酸が同様にして合成された（スキーム２、図５）。最初に、８−ブロモオクタン−１−オールのヒドロキシ基を、ＤＨＰおよびＰＰＴＳを使用して、ほぼ定量的収率（９１％）でＴＨＰ−エーテルとして保護した。反応性がより大きい１５（１４と比較）に１−デシンをカップリングすることにより、内部アルキン生成物（１６）が良好な収率（７２％）で得られた。ＭｅＯＨ中でのＴｓＯＨによるＴＨＰの加水分解により、アルキノール１７が９２％の収率で得られ、その後、Ｊｏｎｅｓ試薬を使用した酸化により、酸６が白色粉末として得られた（７６％）。
【０２３８】
ヘプタデカ−９−イン酸（８）の合成（スキーム３、図６）が、オクタデカ−９−イン酸の合成とほぼ同一であるが、内部Ｃ−Ｃ三重結合を導入するための試薬として（１−デシンとは対照的に）１−ノニンを使用することだけが異なる様式で達成された。
【０２３９】
オクタデカ−１４−イン酸（７）およびヘプタデカ−１４−イン酸（９）の合成
前節の合成の場合のように、オクタデカ−１４−イン酸（７）を調製するための出発物質は１２−ブロモドデカン−１−オールであった（スキーム４、図７）。一級アルコール基のＴＨＰ保護が定量的に進行して、２２が得られた。再度ではあるが、Ｆｉｎｋｅｌｓｔｅｉｎ交換反応を用いて、反応性がより大きいヨード類似体（２３）を作製した。
【０２４０】
ペンタ−１−インを本発明者らの改善されたアルキン脱プロトン化アルキル化手法のもとで２３と反応させて、２４を良好な収率（５９％）で得た。ＴＨＰ−エーテル官能基をＰＰｈ3Ｂｒ2／ＰＰｈ3で臭化物（２５）に直接変換した（７６％）。得られたブロモアルキン（２５）を、その後、ＣＮ-とのＳN２反応に供して、脂肪アシル鎖の同族体化を行った。ニトリル基（２６）の塩基加水分解を行うことにより、カルボン酸基の導入がもたらされ、これにより、オクタデカ−１４−イン酸（７）が優れた収率（９４％）で得られた。
【０２４１】
ヘプタデカ−１４−イン酸（９）が、ほとんど類似する様式で調製された（スキーム５、図８）。唯一の違いは、出発物質の入手性のために、内部アルキン官能基を（１段階とは対照的に）２段階で導入しなければならないということであった。そして、ＴＨＰ−エーテル官能基は２段階で臭化物に変換された（酸触媒による加水分解は一級アルコール基をもたらし、これは、その後、ＣＢｒ4およびＰＰｈ3を用いたＳN２反応を受けて、所望する臭化物をもたらした）。
【０２４２】
［ＤＯＰＣ類似体、ＤＯＰＥ類似体、ＤＯＤＡＰ類似体およびＤＯＴＡＰ類似体の合成］
ＤＯＰＣ類似体（例えば、３３）の合成には、脂肪酸（例えば、６）をアシルイミダゾリドとして活性化し、その後、ＤＢＵの存在下でｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＧＰＣ）と反応することが伴った。収率は平均して約６０％であった。ＤＯＰＥ類似体（例えば、３８）の合成は、エタノールアミンを用いたＤＯＰＣ類似体の二相（クロロホルム／水）での酵素的トランスホスファチジル化によって約９０％の収率で達成された（スキーム６、図９）。
【０２４３】
類似する様式で、ＤＯＤＡＰ類似体（例えば、４３）が定量的収率で合成された。ＤＯＤＡＰ化合物を硫酸ジメチルで処理することにより、ＤＯＴＡＰ類似体（例えば、４８）が７０％〜８０％の間の収率でメチルスルファート塩として得られた（スキーム７、図１０）。
【０２４４】
［トランスフェクションデータ］
［イントロダクション］
ＤＯＰＣ、ＤＯＰＥ、ＤＯＤＡＰおよびＤＯＴＡＰのモノアセチレン性類似体を上記に記載されるように合成した。比較用の基準脂質（ＤＯＰＣ、ＤＯＰＥおよびＤＯＴＡＰ（塩化物塩））を、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｐｏｏｌｅ、Ｄｏｒｓｅｔ、英国）から購入した。本発明者らの発明であるコレステロール型カチオン性脂質のＮ1−コレステリルオキシカルボニル−３，７−ジアザノノナン−１，９−ジアミン（ＣＤＡＮ）−正味荷電＝＋１．６（ｐＨ７．４において）。ＣＤＡＮ（下記）は、以前には本発明者らのグループによって合成された22が、現在では、Ｔｒｏｊｅｎｅ（商標）（Ａｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓ，Ｉｎｃ．，Ａｌａｂａｓｔｅｒ、ＡＬ、米国）として、ＤＯＰＥとの１：１のモル比の配合物で入手することができる。
【化４０】
2005505521.tif 000043
【０２４５】
脂質の純度をＴＬＣまたはＨＰＬＣによって調べた。すべての脂質は、５ｍｇ／ｍｌまたは１０ｍｇ／ｍｌのいずれかの濃度の無水ＣＨ2Ｃｌ2でのストック溶液として、Ａｒ下、−８０℃で保存された。カチオン性リポソームを調製するために、脂質を、Ａｒ下、シリンジを介して丸底フラスコに加え、そして、必要な場合には、約２．５ｍｇ／ｍｌの濃度を得るために、新しく蒸留されたＣＨ2Ｃｌ2をさらに加えた。その後、４ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．０）（１ｍｌ）を加えて、二相系をゆすって混合した。リポソーム懸濁物を、有機溶媒を減圧下において２５℃で除き、その後、２分間〜５分間の超音波処理を水浴超音波処理器において行うことによって作製した。必要な場合には、総容量を１ｍｌに戻すために、２回蒸留水を加えた。リポソーム溶液はすべて、５ｍｇ／ｍｌの最終濃度で調製された。リポソーム懸濁物のｐＨをｐＨボーイ（Ｃａｍｌａｂ  Ｌｔｄ．，Ｏｖｅｒ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅｓｈｉｒｅ、英国）によって調べ、ＨＣｌおよびＮａＯＨの高濃度水溶液でｐＨ７．０±０．１に調節した。
【０２４６】
リポソームを、２枚の１００ｎｍポリカーボネートフィルター（Ｉｓｏｐｏｒｅ（商標）メンブランフィルター、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（ＵＫ）Ｌｔｄ．，Ｗａｔｆｏｒｄ、Ｈｅｒｔｆｏｒｄｓｈｉｒｅ、英国）に１０回通すことによって押し出した（Ｅｘｔｒｕｄｅｒ、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ  Ｌｉｐｉｄｓ，Ｉｎｃ．，Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ、ＢＣ、カナダ）。それぞれの調製物について、リポソームのサイズ分布を光子相関分光法（ＰＣＳ）（Ｃｏｕｌｔｅｒ（登録商標）Ｎ４  Ｐｌｕｓサブミクロン粒子サイズ測定器、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ、Ｈｉｇｈ  Ｗｙｃｏｍｂｅ、Ｂｕｃｋｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ、英国）によって測定した。リン脂質含有リポソームについては、リン脂質の濃度をＳｔｅｗａｒｔアッセイ23によって調べた。それぞれの場合において、４．７±０．１ｍｇ／ｍｌの最終的な脂質濃度が観測された。リン脂質非含有リポソームについては、脂質の喪失もまた、押出し時には避けられなかった。早く押し出されるリポソ−ム懸濁物のすべてについて、総脂質濃度は４．７ｍｇ／ｍｌであると推定された。より遅い押出し物については、総脂質濃度は４．３ｍｇ／ｍｌであると推定された。非常に遅く押し出されるリポソームは、３回押し出されるだけであり、４．７ｍｇ／ｍｌであると推定された。
【０２４７】
［ＬＭＤ（リポソーム：Ｍｕ：ＤＮＡ）の配合］
β−ガラクトシダーゼ遺伝子を含有するプラスミドＤＮＡ（ｐＮＧＶＬ１−ｎｔ−β−ｇａｌ；７．５３ｋｂ）は、１．２ｍｇ／ｍｌの濃度で、−８０℃で凍結小分け物として保存された。μ（ｍｕ）ペプチド（アデノウイルスのコアペプチド［Ｈ2Ｎ−Ｍｅｔ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｍｅｔ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＣＯ2Ｈ］は以前の記載7のように合成され、１ｍｇ／ｍｌの小分け物で４℃において維持された。Ｍｕ−ＤＮＡ複合体を、４ｍＭのＨＥＰＥＳにおいて、激しく撹拌しながら１：０．６（ｗ／ｗ）の比率でプラスミドＤＮＡをｍｕに加えることによって作製した。ＬＭＤを、すべての配合物に対するすべてのＬＭＤが実質的にカチオン性であるように、ｍｕ−ＤＮＡ粒子を（上記で調製された）カチオン性リポソームと１：１２（ｗ／ｗ）の比率で複合体化することによって調製した。それぞれの調製物について、ＬＭＤのサイズ分布をＰＣＳによって測定した。
【０２４８】
［細胞のトランスフェクション］
Ｐａｎｃ−１細胞は、ＲＰＭＩ／１０％ＦＣＳ／１％ペニシリン−ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ（商標）、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｐａｉｓｌｅｙ、Ｓｃｏｔｌａｎｄ、英国）で、加湿雰囲気中、３７℃／５％ＣＯ2で維持された。トランスフェクションの２４時間前に、ウエルあたり３００００個の細胞を４８ウエルマイクロタイタープレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｏｓｔａｒ、Ｍｅｒｃｋ  Ｌｔｄ．，Ｌｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈ、Ｌｅｉｃｅｓｔｅｒｓｈｉｒｅ、英国）において５００μｌの培地に播種した。コントロールとして、プラスミドＤＮＡ（０．５μｇ／２００μｌ培地）をウエルに加えた。陽性のコントロールとして、２００μｌの培地において１．５μｌのＴｒａｎｓｆａｓｔ（商標）（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ、米国；供給者のプロトコルに従って調製）をプラスミドＤＮＡ（０．５μｇ）と複合体化して、ウエルに加えた。ＬＭＤ配合物の５μｌ（０．５μｇのＤＮＡ）を各ウエルに加えた。実験はすべて、四連で行われた。プレートを３０秒間ゆすり、そして３７℃で１時間インキュベーションした。その後、培地を除き、５００μｌの新鮮な培地を加えた。細胞を３７℃でさらに２４時間インキュベーションした。
【０２４９】
ＣＯＳ−７細胞は、ＤＭＥＭ／１０％ＦＣＳ／１％ペニシリン−ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ（商標））で、加湿雰囲気中、３７℃／５％ＣＯ2で維持された。トランスフェクションの２４時間前に、ウエルあたり１００００個の細胞を４８ウエルマイクロタイタープレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｏｓｔａｒ）において５００μｌの培地に播種した。プラスミドＤＮＡのコントロールおよびＴｒａｎｓｆａｓｔ（商標）のコントロールを上記のように調製した。ＬＭＤ配合物の５μｌ（０．５μｇ）を各ウエルに加えた。実験はすべて、四連で行われた。プレートを３０秒間ゆすり、そして３７℃で１時間インキュベーションした。その後、培地を除き、５００μｌの新鮮な培地を加えた。細胞を３７℃でさらに２４時間インキュベーションした。
【０２５０】
［β−ガラクトシダーゼアッセイおよび総タンパク質測定］
培地をウエルから吸引し、細胞層をリン酸塩緩衝化生理的食塩水（ＰＢＳ）（Ｇｉｂｃｏ（商標））で洗浄した。各ウエルの細胞を、室温で３０分間、１５０μｌの溶解試薬（供給者のプロトコルに従って調製；β−Ｇａｌレポーター遺伝子アッセイ、Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  ＧｍｂＨ、Ｄ−６８３０５  Ｍａｎｎｈｅｉｍ、ドイツ）において溶解した。溶解後、各細胞懸濁物の等量（５０μｌおよび２０μｌ）を、β−ガラクトシダーゼ活性の測定のために、そして（結果を正規化するための）総細胞タンパク質の測定のためにそれぞれ使用した。
【０２５１】
β−ｇａｌアッセイでは、１００μｌの基質試薬が白色９６ウエルマイクロプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｏｓｔａｒ）において５０μｌの細胞懸濁物に加えられた。プレートを室温で３０分間インキュベーションした。自動的開始（基質試薬を添加したときに生じる酵素活性の増強）を、５０μｌの開始試薬を注入するマイクロプレートルミノメーター（Ａｎｔｈｏｓ  Ｌｕｃｙ１、Ｌａｂｔｅｃｈ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｌｔｄ．，Ｒｉｎｇｍｅｒ、Ｅａｓｔ  Ｓｕｓｓｅｘ、英国）によって行い、酵素活性を続く３０秒間にわたって測定した。
【０２５２】
細胞タンパク質の量を、２０μｌの細胞溶解物または内部校正標準としてのウシ血清アルブミンを使用し、そして２００μｌのＢＣＡ試薬（提供者のプロトコルに従う）を加えるＢＣＡアッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ、米国）で定量した。室温で３０分のインキュベーション期間の後、比色測定をマイクロプレート読み取り装置（Ａｎｔｈｏｓ  Ｌｕｃｙ１）により５７０ｎｍで行った。β−ガラクトシダーゼ活性をＲＬＵ／μｇタンパク質として表した。コントロールおよびヘルパー脂質またはカチオン性脂質（図の表題に示される）が下記の図においてｘ軸に示される。
【０２５３】
［ＤＯＰＣ類似体］
カチオン性リポソーム配合物において、ＤＯＰＣは、ＤＯＰＥと比較して、トランスフェクションを排除するか、またはひどく弱めることが一般には観測される24。ＣＤＡＮ：ヘルパー脂質の１：１（モル／モル）リポソームのＬＭＤのトランスフェクション結果（Ｐａｎｃ−１細胞）が下記に示される（図１２）。トランスフェクションレベルはすべて非常に低い。ＤＯＰＣをＤＯ（４−イン）ＰＣに置換すると、トランスフェクション能力のほぼ完全な喪失が生じる。しかし、ＤＯ（９−イン）ＰＣおよびＤＯ（１４−イン）ＰＣは、ＤＯＰＣよりも良好ではないとしても、ＤＯＰＣと同様なトランスフェクションをもたらす。
【０２５４】
ＣＯＳ−７細胞を用いた同一ＬＭＤのトランスフェクション結果が図１３に示される。ＤＯＰＣおよびＴｒａｎｓｆａｓｔは同等に良好なトランスフェクションをもたらす。再度ではあるが、ＤＯＰＣをＤＯ（４−イン）ＰＣで置換すると、トランスフェクション能力の低下が生じる。ＤＯ（１４−イン）ＰＣは、ＤＯＰＣよりも少し良好なトランスフェクションをもたらすが、ＤＯ（９−イン）ＰＣは、ＤＯＰＣの約２倍良好なトランスフェクションをもたらす。ＤＯ（９−イン）ＰＣは、２つの細胞株（Ｐａｎｃ−１細胞およびＣＯＳ−７細胞）において、ＤＯＰＣよりも良好ではないとしても、ＤＯＰＣと同様なトランスフェクションをもたらすことが実証された。
【０２５５】
［ＤＯＰＥ類似体］
図１４には、ＣＤＡＮ：ヘルパー脂質の１：１リポソームのＬＭＤのトランスフェクションデータ（ＣＯＳ−７細胞）が示される。ヘルパー脂質がＤＯＰＥまたはＤＯ（９−イン）ＰＥのいずれかであるとき、トランスフェクションレベルは高く、ほぼ同じである。しかし、ＤＯ（４−イン）ＰＥまたはＤＯ（１４−イン）ＰＥのいずれかによる置換は、トランスフェクションの約６７％の低下をもたらす。
【０２５６】
下記には、ＣＤＡＮ：ヘルパー脂質の３：２リポソームから構成されるＬＭＤを使用してＰａｎｃ−１細胞で得られた１組の結果が示される（図１５）。ＤＯＰＥは、絶対値レベルはかなり低いが、最も近いアセチレン性類似体（ＤＯ（９−イン）ＰＥ）の約２倍良好なトランスフェクションをもたらす。ＤＯ（４−イン）ＰＥおよびＤＯ（１４−イン）ＰＥはともに非常に悪いトランスフェクションをもたらす。これらのアセチレン性類似体における同じパターンが、図１４の場合のように観測されることには留意すること。
【０２５７】
ＣＤＡＮ：ヘルパー脂質の１：１リポソームのＬＭＤのトランスフェクション結果がＰａｎｃ−１細胞について下記に示される（図１６）。誤差バーの範囲内で、ＤＯＰＥ、ＤＯ（４−イン）ＰＥおよびＤＯ（９−イン）ＰＥは、良好で、ほぼ同じ程度のトランスフェクションをもたらす。ＤＯ（１４−イン）ＰＥは、ＤＯＰＥと同様に約１／２のトランスフェクションをもたらす。
【０２５８】
ＣＤＡＮ：ヘルパー脂質の比率を低下させ、それにより、リポソームおよびＬＭＤの正荷電を減少させることにおける傾向を続けたとき、下記（図１７）に示される結果は、ＣＤＡＮ：ヘルパー脂質が２：３のモル比のリポソームのＬＭＤに対するものである（Ｐａｎｃ−１細胞）。ＤＯＰＥのトランスフェクションレベルは、このとき、Ｔｒａｎｓｆａｓｔのレベルよりも低い。興味深いことに、これらのモノアセチレン性類似体はすべて、ＤＯＰＥよりも良好なトランスフェクションをもたらす。ＤＯ（４−イン）ＰＥおよびＤＯ（９−イン）ＰＥは、最も良く、ＤＯＰＥよりも、最大で５倍、良好なトランスフェクションをもたらす。ＤＯ（１４−イン）ＰＥは、これらのモノアセチレン性類似体の中で最も低いトランスフェクションをもたらす。
【０２５９】
図１８には、前記実験の繰り返しが示される（再び、Ｐａｎｃ−１細胞）。リポソームは新しく調製されなかったが、ＬＭＤは新しく調製された。ＤＯ（４−イン）ＰＥのトランスフェクションレベルがほぼＴｒａｎｓｆａｓｔのトランスフェクションレベルに低下したこと以外に、類似するパターンが認められることには留意すること。また、ＤＯＰＥをＤＯ（９−イン）ＰＥで置換したときのトランスフェクションの相対的な増大は約６倍の改善をもたらしている。実験毎の絶対値を比較することは、細胞周期の段階などの要因のために困難である。従って、本発明者らは、ＣＤＡＮ：ＤＯＰＥの１：１リポソームのＬＭＤの「コントロール」を含めた。これらのＬＭＤは、ＣＤＡＮ：ＤＯ（９−イン）ＰＥの２：３リポソームから構成されるＬＭＤと同様なトランスフェクションをもたらす。
【０２６０】
［ＤＯＴＡＰ類似体］
図１９には、ＤＯＴＡまたはＤＯＴＡＰＰ類似体のリポソームからもっぱら構成されるＬＭＤのＰａｎｃ−１細胞に対するトランスフェクションデータが示される。すべての類似体（基準のＤＯＴＡＰを含む）は、ＤＯ（１４−イン）ＴＡＰの場合を除き、陽性コントロールのＴｒａｎｓｆａｓｔよりも低いトランスフェクションをもたらす。類似体はすべて、ＤＯＴＡＰよりも良好なトランスフェクションをもたらし、ＤＯ（１４−イン）ＴＡＰは基準のＤＯＴＡＰに対して６倍の改善である。
【０２６１】
ＣＯＳ−７細胞を用いたＤＯＴＡＰリポソームのＬＭＤのトランスフェクションデータが下記に示される（図２０）。誤差バーの範囲内で、ＴｒａｎｓｆａｓｔおよびＤＯＴＡＰは類似するトランスフェクションをもたらす。ＤＯＴＡＰをＤＯ（４−イン）ＴＡＰに置換すると、トランスフェクションの約４０％の低下が生じ、ＤＯ（１４−イン）ＴＡＰで置換すると、トランスフェクション活性のほぼ完全な喪失が生じる。ＤＯ（９−イン）ＴＡＰは、基準ＤＯＴＡＰよりも約１．５倍良好なトランスフェクションをもたらす。ＤＯ（４−イン）ＴＡＰから、ＤＯ（９−イン）ＴＡＰに、ＤＯ（１４−イン）ＴＡＰに進めたときにこれらのモノアセチレン性類似体に関して認められるこのパターンは、ＤＯＰＥ類似体に関して認められるパターンを連想させる。
【０２６２】
下記（図２１）は、ＤＯＰＥ：カチオン性脂質の１：１リポソームのＬＭＤのトランスフェクションデータである（Ｐａｎｃ−１細胞）。すべてが、Ｔｒａｎｓｆａｓｔよりも悪いトランスフェクションをもたらし、しかし、すべてが、ＤＯＴＡＰのＬＭＤ単独よりも良好なトランスフェクションをもたらす。トランスフェクションレベルは非常に低い。ＤＯＴＡＰをＤＯ（４−イン）ＴＡＰまたはＤＯ（９−イン）ＴＡＰで置換することにより、トランスフェクションの小さい増大が生じるが、７倍の増大が、ＤＯＰＥ：ＤＯＴＡＰリポソームにおいてＤＯＴＡＰをＤＯ（１４−イン）ＴＡＰで置換したときに観測される。
【０２６３】
ＤＯＰＥをコレステロールで置換することにより、下記の結果が得られた（図２２）。低いトランスフェクションレベルが再び観測される（Ｐａｎｃ−１細胞）。ＤＯＴＡＰをＤＯ（４−イン）ＴＡＰで置換すると、トランスフェクションがほとんどもたらされず、そして、ＤＯ（１４−イン）ＴＡＰで置換すると、約３０％のトランスフェクション活性の喪失が生じる。しかし、ＤＯ（９−イン）ＴＡＰは、ＤＯＴＡＰと同様なトランスフェクションをもたらす。
【０２６４】
最後の組のトランスフェクションデータは、ＤＯＰＥ：カチオン性脂質（１：１）（図２３）またはコレステロール：カチオン性脂質（１：１）（図２４）のいずれかからそのリポソームが構成されるＬＭＤに対するものである（ＣＯＳ−７細胞）。純粋なＤＯＴＡＰリポソーム（１００％ＤＯＴＡＰ）は、ＤＯＴＡＰ：ＤＯＰＥよりも良好なトランスフェクションをもたらすＤＯＴＡＰ：Ｃｈｏｌよりも良好なトランスフェクションをもたらす。ＤＯＴＡＰ類似体はすべて、ＤＯＴＡＰ：ＤＯＰＥ（１：１）として配合されたとき、それほど良好でないトランスフェクションまたはほぼ同じ程度のトランスフェクションをもたらす。
【０２６５】
ＤＯ（４−イン）ＴＡＰ：コレステロール（１：１）リポソームおよびＤＯ（１４−イン）ＴＡＰ：コレステロール（１：１）リポソームは、純粋なＤＯＴＡＰリポソームと同様なトランスフェクションをもたらす。ＤＯＴＡＰ：コレステロール（１：１）リポソームおよびＤＯ（９−イン）ＴＡＰ（１：１）リポソームは、ＣＯＳ−７細胞において、ＤＯ（４−イン）ＴＡＰ：コレステロール（１：１）リポソームと同様にわずかに１／２のトランスフェクションをもたらすだけである。
【０２６６】
［要約および結論］
・ＤＯ（９−イン）ＰＣおよびＤＯ（１４−イン）ＰＣは、ＣＤＡＮ：ヘルパー脂質の１：１（モル比）リポソームとして配合されたとき、Ｐａｎｃ−１細胞においてＤＯＰＣと同様なトランスフェクションをもたらす。ＤＯ（９−イン）ＰＣは、ＣＯＳ−７細胞において、ＤＯＰＣの２倍良好なトランスフェクションをもたらす。
・ＤＯＰＥおよびＤＯ（９−イン）ＰＥは、非常に良好に、そしてＣＤＡＮ：ヘルパー脂質の１：１リポソームと類似する程度でＣＯＳ−７細胞のをトランスフェクションをもたらす。ＤＯ（４−イン）ＰＥおよびＤＯ（１４−イン）ＰＥは、ＤＯＰＥと同様に約１／３のトランスフェクションをもたらす。
・モル比が３：２のＣＤＡＮ：ヘルパー脂質から構成されるリポソームを用いた場合、ＤＯＰＥは、モノアセチレン性類似体のすべてよりも良好なトランスフェクションをもたらす（Ｐａｎｃ−１細胞）。最も良好な類似体はＤＯ（９−イン）ＰＥであり、これはＤＯＰＥと同様に１／２のトランスフェクションをもたらす。しかし、すべてのトランスフェクションレベルは低い。
・誤差バーの範囲内で、ＤＯＰＥ、ＤＯ（４−イン）ＰＥおよびＤＯ（９−イン）ＰＥはすべて、Ｐａｎｃ−１細胞に関して、ＣＤＡＮ：ヘルパー脂質の１：１リポソームにおいて同等に良好なトランスフェクションをもたらす。
・ＬＭＤの正荷電をさらに減少させたとき、ＣＤＡＮ：ヘルパー脂質の２：３リポソームは、ヘルパー脂質がＤＯＰＥであるときは別として、対応する１：１リポソームと同様なトランスフェクションをもたらす。ＤＯ（４−イン）ＰＥおよびＤＯ（９−イン）ＰＥは、ＤＯＰＥよりも、最大で５倍、良好なトランスフェクションをもたらす。
・ＣＤＡＮ：ＤＯ（９−イン）ＰＥの２：３リポソームは、ＣＤＡＮ：ＤＯＰＥの１：１リポソームと同様なトランスフェクションをもたらす。
・ＤＯＴＡＰリポソームおよびＤＯＴＡＰ：ＤＯＰＥの１：１リポソームは、ＣＤＡＮ：ＤＯＰＥの１：１リポソームよりも悪いトランスフェクションをもたらす。ＤＯＴＡＰに関するトランスフェクションレベルは一般に悪い。
・純粋なＤＯＴＡＰ類似体のリポソームは、純粋なＤＯＴＡＰのリポソームよりも良好なトランスフェクションをもたらす。ＤＯ（４−イン）ＴＡＰのリポソームは、ＤＯＴＡＰよりも、最大で６倍、良好なトランスフェクションをもたらす（Ｐａｎｃ−１細胞）。
・純粋なＤＯ（９−イン）ＴＡＰのリポソームだけは、ＣＯＳ−７細胞において、ＤＯＴＡＰのリポソームと同様なトランスフェクションをもたらす。ＤＯ（１４−イン）ＴＡＰはトランスフェクションをほぼ全く示さない。
・純粋なＤＯＴＡＰまたはＤＯＴＡＰ類似体のリポソーム、および対応するＤＯＴＡＰ：ＤＯＰＥの１：１リポソームまたはＤＯＴＡＰ類似体：ＤＯＰＥの１：１リポソームは、トランスフェクション能力の類似するパターンを示す。ＤＯＰＥを配合物に含めることはトランスフェクションを損なうようである。ＤＯ（１４−イン）ＴＡＰ：ＤＯＰＥの１：１リポソームは、ＤＯＴＡＰ：ＤＯＰＥの１：１リポソームよりも約７倍良好なトランスフェクションをもたらす（Ｐａｎｃ−１細胞）。
・ＤＯＴＡＰ：コレステロールの１：１リポソームを用いた場合、ＤＯ（９−イン）ＴＡＰは、ＤＯＴＡＰと同様なトランスフェクションをもたらす（Ｐａｎｃ−１細胞）。
・ＤＯＴＡＰ：ＤＯＰＥまたはＤＯＴＡＰ類似体：ＤＯＰＥの１：１リポソームはすべて、ＣＯＳ−７細胞において、純粋なＤＯＴＡＰのリポソームと同様に１／２よりも低いトランスフェクションをもたらす。ＤＯＴＡＰ：ＤＯＰＥの１：１リポソームはすべて、類似するトランスフェクションをもたらす。
・ＤＯＴＡＰ：コレステロールの１：１リポソームおよびＤＯ（９−イン）ＴＡＰ：コレステロールの１：１リポソームは、純粋なＤＯＴＡＰのリポソームと同様に１／２のトランスフェクションをもたらす（ＣＯＳ−７細胞）。ＤＯ（４−イン）ＴＡＰ：コレステロールの１：１リポソームおよびＤＯ（１４−イン）ＴＡＰ：コレステロールの１：１リポソームは、純粋なＤＯＴＡＰのリポソームと同様なトランスフェクションをもたらす。
【０２６７】
本発明者らは、知られているオレオイル脂質の一連のモノアセチレン性類似体を合成し、それらのインビトロでのトランスフェクション能力を調べた。トランスフェクションに対するこれらの脂質の力を生物学的に評価しているとき、本発明者らは、対応する基準のオレオイル脂質よりも良好ではないとしても、対応する基準のオレオイル脂質と同様なトランスフェクションをもたらす少なくとも１つのモノアセチレン性脂肪アシル類似体を、（ＤＯＤＡＰシリーズとは別に）それぞれの脂質シリーズにおいて同定している。三重結合が二重結合よりも酸化に対して安定であるという前提のもとで、これらの結果は、基準と同様なトランスフェクションをもたらすそのような類似体はインビトロでの好適な代用物であることを示唆している。さらに、三重結合は、より大きい剛直性をリポソームにもたらすはずであり、従って、これらのリポソームのインビボでの循環半減期を延ばすはずである。安定性の両方の態様は明らかに望ましい。
【０２６８】
ＤＯ（９−イン）ＰＣ（３３）およびＤＯ（９−イン）ＰＥ（３８）は最も良好なリン脂質類似体であり、このことは、二重結合を三重結合に直接置換することにより、インビトロでのトランスフェクションは損なわれないことを示唆している。さらに、これらの脂質は良好なトランスフェクションをもたらすだけでなく、ＤＯＰＥ類似体：ＣＤＡＮリポソームの調製は、対応するＤＯＰＥ：ＣＤＡＮリポソームの任意選択的にも容易であることが認められた。これは、ＤＯＰＥの脂肪アシル鎖（流動性を増大させる）と、コレステロールに基づく剛直なＣＤＡＮ（剛直性を増大させる）とにおける実質的なねじれの相反する作用の結果である考えられる；ＤＯＰＥの二重結合を三重結合で置換したとき、このねじれ度合いが大きく減少する。これは、ＣＤＡＮの取り込みに対する抵抗をより小さくし、従って、リポソームのより容易な形成をもたらし得る。同様に、ＣＤＡＮに対してＤＯＰＥ類似体の量を増大させることを含むことがより容易であると考えられる。
【０２６９】
より重要なことではあるが、ＣＤＡＮに対して中性ＤＯＰＥ類似体の程度を増大すること（それにより、カチオン性リポソームおよびＬＭＤの正荷電を減少させること）は、基準のＤＯＰＥの場合とは異なり、トランスフェクションを損なわないことが示されている。より少ない正荷電を有するこれらのＬＭＤは第３の安定性度を提供する。血液中のアニオン性化学種は、ＬＭＤに静電的に引き寄せられ得るが、これにより、潜在的には、ＬＭＤを分解のために標識し得るか、またはより単純には、ｍｕ−ＤＮＡ複合体を置換し得る。電荷がより少ないＬＭＤは、より長い循環半減期を有し、これにより、粒子には、その標的組織／細胞に到達するための機会が与えられる。
【０２７０】
ＤＯＴＡＰに対するトランスフェクションデータ：ＤＯ（１４−イン）ＴＡＰは、Ｐａｎｃ−１細胞に関して、ＤＯＴＡＰよりも良好なトランスフェクションをもたらし、一方、ＤＯ（９−イン）ＴＡＰは、ＣＯＳ−７細胞に関して、より良好なトランスフェクションをもたらす。異なる結果が、異なるヘルパー脂質に関して得られている。
【０２７１】
上記の明細書において言及された刊行物はすべて、引用することにより本明細書の一部をなすものとする。本発明の記載された方法およびシステムの様々な改変および変化が、本発明の範囲および精神から逸脱することなく、当業者には明らかである。本発明は、具体的な好ましい実施形態に関連して記載されているが、特許請求される発明は、そのような具体的な実施形態に不当に限定されるべきではないことを理解しなければならない。実際、化学または関連する分野における当業者には自明である、本発明を実施するための記載された様式の様々な改変は、下記の請求項の範囲内であることが意図される。
【０２７２】
［参考文献］
【表２】
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【０２７３】
【表３】
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【０２７４】
【表４Ａ】
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【０２７５】
【表４Ｂ】
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【図面の簡単な説明】
【０２７６】
【図１】概略図を示す。
【図２】スキームを示す。
【図３】構造およびグラフを示す。
【図４】スキームを示す。
【図５】スキームを示す。
【図６】スキームを示す。
【図７】スキームを示す。
【図８】スキームを示す。
【図９】スキームを示す。
【図１０】スキームを示す。
【図１１】グラフを示す。
【図１２】グラフを示す。
【図１３】グラフを示す。
【図１４】グラフを示す。
【図１５】グラフを示す。
【図１６】グラフを示す。
【図１７】グラフを示す。
【図１８】グラフを示す。
【図１９】グラフを示す。
【図２０】グラフを示す。
【図２１】グラフを示す。
【図２２】グラフを示す。
【図２３】グラフを示す。
【図２４】グラフを示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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