(57)【要約】  本発明は変更されたタンパク質キナーゼ活性により引き起こされる、および／または変更されたタンパク質キナーゼ活性に関連のある疾病を治療する方法であって、それを必要とする哺乳類に有効量の、式(I)：【化１】2005515209.tif 000245の、所望により置換されていてもよいo-ヒドロキシフェニル-ピラゾール-3-イル誘導体を投与することを含んでなる方法を提供する。本発明はまた、いくつかの新規な化合物、それらのうち少なくとも2種を含んでなるライブラリー、それらの製造方法、およびそれらを含有する医薬組成物(これらは、癌、細胞増殖性疾患、ウイルス感染、自己免疫疾患および神経変性疾患など、変更されたタンパク質キナーゼ活性により引き起こされる、および／または変更されたタンパク質キナーゼ活性に関連のある疾病の治療に有用である)を提供する。
2005515209.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
変更されたタンパク質キナーゼ活性により引き起こされる、および／または変更されたタンパク質キナーゼ活性に関連のある疾病を治療する方法であって、有効量の、式(I)：
【化１】
2005515209.tif 000131
［式中、R1〜R4は独立に
・水素またはハロゲン原子、ヒドロキシ、ニトロまたはNR8R9基(ここで、R8およびR9は独立に水素、またはC1-C6アルキル、アリール、アリールC1-C6アルキル、C3-C7シクロアルキルおよび飽和もしくは不飽和ヘテロシクリル基、または式COR10、CONHR10もしくはSO2R10の残基から選択される所望により置換されていてもよい基を表し、ここで、R10は水素原子、またはC1-C6アルキル、アリール、アリールC1-C6アルキル、飽和もしくは不飽和C3-C7シクロアルキル、または飽和もしくは不飽和ヘテロシクリル基から選択される所望により置換されていてもよい基を表す)、あるいは
・直鎖もしくは分枝C1-C6アルキル、アリール、アリールC1-C6アルキル、飽和もしくは不飽和C3-C7シクロアルキルもしくはシクロアルコキシ基、飽和もしくは不飽和ヘテロシクリル、C1-C6アルコキシ、アリールオキシ、アリールC1-C6アルコキシから選択される所望により置換されていてもよい基
を表し；
R5およびR6は独立に水素、またはC1-C6アルキル、アリール、アリールC1-C6アルキル、C3-C7シクロアルキルおよび飽和もしくは不飽和ヘテロシクリルから選択される所望により置換されていてもよい基を表し；
R7は式CONHR10、CSNHR10、SO2R10、COR10またはCOOR10(式中、R10は上記で定義された通りである)を有するピラゾール環の2つの窒素原子のうちの1つで結合された置換基である］
で示されるヒドロキシフェニル-ピラゾール誘導体またはその医薬上許容される塩をそれを必要とする哺乳類に投与することを含んでなる方法。
【請求項２】
変更されたタンパク質キナーゼ活性により引き起こされる、および／または変更されたタンパク質キナーゼ活性に関連のある疾病が癌、細胞増殖性疾患、アルツハイマー病、ウイルス感染、自己免疫疾患および神経変性疾患からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
癌が癌腫、扁平上皮細胞癌、骨髄系またはリンパ系の造血系腫瘍、間葉起源の腫瘍、中枢・末梢神経系の腫瘍、黒色腫、精上皮腫、奇形癌、骨肉腫、色素性乾皮症、ケラトアカントーマ、甲状腺濾胞癌およびカポジ肉腫から選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
細胞増殖性疾患が良性前立腺肥大、家族性腺腫、ポリープ症、神経繊維腫症、乾癬；アテローム性動脈硬化症、肺繊維症、関節炎、糸球体腎炎、ならびに術後狭窄および再狭窄に関連する血管平滑細胞増殖からなる群から選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
腫瘍の血管形成および転移阻害をもたらす、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
それを必要とする哺乳類に少なくとも1種の細胞増殖抑制剤または細胞傷害剤と組み合わせて放射線療法または化学療法を施すことをさらに含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
それを必要とする哺乳類がヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
式(I)の化合物においてR7置換基が1位の窒素原子で結合しており、下式(I')：
【化２】
2005515209.tif 000132
［式中、R1〜R4、R5、R6およびR7は請求項1で定義された通りである］
を有するか、またはその医薬上許容される塩である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
式(I)内でR7がCONHR10(ここで、R10は請求項１で定義された通りである)である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
式(I)内でR2およびR3の一方がNHCOR10またはNHCSR10基(ここで、R10は請求項１で定義された通りである)である、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
該キナーゼを式(I)で定義された有効量の化合物と摂食させることを含んでなる、タンパク質キナーゼ活性の阻害方法。
【請求項１２】
式(I)：
【化３】
2005515209.tif 000133
［式中、R1〜R4は独立に
・水素またはハロゲン原子、ヒドロキシ、ニトロまたはNR8R9基(ここで、R8およびR9は独立に水素、またはC1-C6アルキル、アリール、アリールC1-C6アルキル、C3-C7シクロアルキルおよび飽和もしくは不飽和ヘテロシクリル基、または式COR10、CONHR10もしくはSO2R10の残基から選択される所望により置換されていてもよい基を表し、ここで、R10は水素原子、またはC1-C6アルキル、アリール、アリールC1-C6アルキル、飽和もしくは不飽和C3-C7シクロアルキル、または飽和もしくは不飽和ヘテロシクリル基から選択される所望により置換されていてもよい基を表す)、あるいは
・直鎖もしくは分枝C1-C6アルキル、アリール、アリールC1-C6アルキル、飽和もしくは不飽和C3-C6シクロアルキルもしくはシクロアルコキシ基、飽和もしくは不飽和ヘテロシクリル、C1-C6アルコキシ、アリールオキシ、アリールC1-C6アルコキシから選択される所望により置換されていてもよい基
を表し；
R5およびR6は独立に水素、またはC1-C6アルキル、アリール、アリールC1-C6アルキル、C3-C7シクロアルキルおよび飽和もしくは不飽和ヘテロシクリルから選択される所望により置換されていてもよい基を表し；
R7は式CONHR10、CSNHR10、SO2R10、COR10またはCOOR10(式中、R10は上記で定義された通りである)を有するピラゾール環の2つの窒素原子のうちの1つで結合された置換基であり、ただし、以下の条件：
・R7がCONH2またはCSNH2であって、R5がHまたはCH3であるとき、R6はH、CH3またはフェニル基ではなく、
・R7がCO R'11(ここで、R'11は所望により置換されていてもよいC1-C6アルキル、フェニル、または飽和もしくは不飽和ヘテロシクリル基である)であって、R5がHまたはフェニル基であるとき、R6はH、CH3または所望により置換されていてもよいフェニルであり、
・R7がCO2C(CH3)3またはCO2CH3であって、R5がHであるとき、R6は所望により置換されていてもよいフェニル基である
を有する］
で示されるヒドロキシフェニル-ピラゾール誘導体またはその医薬上許容される塩。
【請求項１３】
式(I')：
【化４】
2005515209.tif 000134
［式中、R1、R4およびR5は水素原子であり、R2およびR3は独立に
・水素またはハロゲン原子、
・所望により置換されていてもよい直鎖または分枝C1-C6アルキルまたはC1-C6アルコキシ、および
・NR8R9基(ここで、R8およびR9は独立に水素原子、または式COR10の残基を表し、ここで、R10はアリールおよび飽和または不飽和ヘテロシクリル基から選択される所望により置換されていてもよい基である)
から選択される］
の請求項１２に記載のヒドロキシアリール-ピラゾール誘導体。
【請求項１４】
R2およびR3が水素、塩素もしくはフッ素原子、所望により置換されていてもよい直鎖または分枝C1-C6アルキルもしくはC1-C6アルコキシ、およびNR8R9基(ここで、R8およびR9は独立に水素原子または式COR10の残基を表し、ここで、R10はフェニル、1-ナフチル、2-ナフチル、ビフェニル、ピリジル、ピラゾリル、チエニル、イソキサゾリル、チアゾリル、ピラゾリル、フルオレン-9-イル、ピペリジンまたはテトラヒドロキノリンから選択される所望により置換されていてもよい基である)から選択される、請求項１３に記載の式(I')の化合物。
【請求項１５】
式(I')：
【化５】
2005515209.tif 000135
［式中、R6はC1-C6アルキル、アリール、C3-C7シクロアルキルおよび飽和または不飽和ヘテロシクリル基から選択される所望により置換されていてもよい基である］
の請求項１２に記載のヒドロキシアリール-ピラゾール誘導体。
【請求項１６】
R6が直鎖もしくは分枝C1-C6アルキル、C3-C7シクロアルキル、フェニル、1-ナフチル、2-ナフチル、ビフェニル、ピリジル、ピラゾリル、チエニル、イソキサゾリル、チアゾリル、ピラゾリル、フルオレン-9-イル、ピペリジンまたはテトラヒドロキノリンから選択される所望により置換されていてもよい基である、請求項１５に記載の式 (I')の化合物。
【請求項１７】
式 (I')：
【化６】
2005515209.tif 000136
［式中、R7は式CONHR10の基を表し、ここで、R10は水素原子、またはC1-C6アルキル、アリール、アリールC1-C6アルキル、C2-C8アルケニル、C3-C7シクロアルキルまたは飽和もしくは不飽和ヘテロシクリル基から選択される所望により置換されていてもよい基を表す］
の請求項１２に記載のヒドロキシアリール-ピラゾール誘導体。
【請求項１８】
R7が式CONHR10の基を表し、ここで、R10がC1-C6アルキル、フェニル、1-ナフチル、2-ナフチル、ビフェニル、ベンジル、アリル、またはフェネチル基である、請求項１７に記載の式(I')の化合物。
【請求項１９】
Ia. 5-シクロプロピル-3-[2-ヒドロキシ-4-(4-メトキシ-ベンゾイルアミノ)-フェニル]-ピラゾール-1-カルボン酸ブチルアミド；
Ib. N-エチル-3-(2-ヒドロキシフェニル)-5-ピリジン-4-イル-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Ic. 5-シクロプロピル-3-(2-ヒドロキシフェニル)-N-プロピル-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Id. N-{[5-シクロプロピル-3-(2-ヒドロキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-イル]カルボニル}グリシン酸エチル；
Ie. N-アリル-5-シクロプロピル-3-(2-ヒドロキシフェニル)-1H-ピラゾール-l-カルボキサミド；
If. N-シクロヘキシル-5-シクロプロピル-3-(2-ヒドロキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Ig. 5-シクロプロピル-N-エチル-3-(2-ヒドロキシ-4-{[3-(トリフルオロメチル)ベンゾイル]アミノ}フェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Ih. エチル-N-{[5-[2-(ジメチルアミノ)エチル]-3-(2-ヒドロキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-イル]カルボニル}グリシネート；
Ii. 5-シクロプロピル-N-エチル-3-(2-ヒドロキシ-4-メトキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Ij. エチル-N-{[5-シクロプロピル-3-(2-ヒドロキシ-4-メトキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-イル]カルボニル}グリシネート；
Ik. 5-シクロプロピル-N-エチル-3-(2-ヒドロキシ-5-メトキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Il. 5-シクロプロピル-N-エチル-3-(2-ヒドロキシ-5-メチルフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Im. エチル-N-{[5-シクロプロピル-3-(2-ヒドロキシ-5-メチルフェニル)-1H-ピラゾール-1-イル]カルボニル}グリシネート；
In. N-ブチル-5-シクロプロピル-3-(2-ヒドロキシ-4-メトキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Io. N-ブチル-5-シクロプロピル-3-(2-ヒドロキシ-5-メチルフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Ip. N-(3-{1-[(ブチルアミノ)カルボニル]-5-シクロプロピル-1H-ピラゾール-3-イル}-4- ヒドロキシフェニル)イソニコチンアミド；
Iq. N-(4-{1-[(ブチルアミノ)カルボニル]-5-シクロプロピル-1H-ピラゾール-3-イル}-3- ヒドロキシフェニル)イソニコチンアミド；
Ir. 3-{4-[(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルカルボニル)アミノ]-2-ヒドロキシフェニル}-N-ブチル-5-シクロブチル-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Is. 3-{4-[(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルカルボニル)アミノ]-2-ヒドロキシフェニル}-N-ブチル-5-シクロペンチル-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
It. N-アリル-5-シクロプロピル-3-(4-フルオロ-2-ヒドロキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Iu. 5-(3,4-ジメトキシフェニル)-N-エチル-3-(2-ヒドロキシ-5-メトキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Iv. N-アリル-5-[2-(ジメチルアミノ)エチル]-3-(2-ヒドロキシ-5-メチルフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Iw. 5-[2-(ジメチルアミノ)エチル]-3-(2-ヒドロキシ-5-メトシキフェニル)-N-(2-フェニルエチル)-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Ix. エチル-N-{[5-(3,4-ジメトキシフェニル)-3-(2-ヒドロキシ-5-メトキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-イル]カルボニル}グリシネート；
Iy. 5-シクロプロピル-N-エチル-3-(4-フルオロ-2-ヒドロキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Iz. エチル-N-{[3-(5-クロロ-2-ヒドロキシフェニル)-5-シクロプロピル-1H-ピラゾール-1-イル]カルボニル}グリシネート；
Iaa. 5-シクロプロピル-3-(2-ヒドロキシ-5-メトキシフェニル)-N-(2-フェニルエチル)-lH-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Ibb. 5-シクロプロピル-N-エチル-3-(2-ヒドロキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Icc. N-アリル-5-(3, 4-ジメトキシフェニル)-3-(2-ヒドロキシ-5-メトキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Idd. N-ベンジル-5-(3, 4-ジメトキシフェニル)-3-(2-ヒドロキシ-5-メチルフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Iee. N-アリル-5-シクロプロピル-3-(2-ヒドロキシ-5-メトキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Iff. N-ベンジル-5-[2-(ジメチルアミノ)エチル]-3-(2-ヒドロキシ-5-メトキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Igg. 5-シクロプロピル-3-(2-ヒドロキシ-5-メチルフェニル)-N-(2-フェニルエチル)-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Ihh. 5-[2-(ジメチルアミノ)エチル]-N-エチル-3-(2-ヒドロキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Iii. N-[(5-シクロブチル-3-{2-ヒドロキシ-4-[(3-メトキシベンゾイル)アミノ]フェニル}-1H-ピラゾール-1-イル)カルボニル]グリシン酸エチル；および
Ijj. N-[(5-シクロプロピル-3-{2-ヒドロキシ-4-[(3-メトキシベンゾイル)アミノ]フェニル}-1H-ピラゾール-1-イル)カルボニル]グリシン酸エチル
から選択される請求項１２に記載の式(I)の化合物またはその医薬上許容される塩。
【請求項２０】
以下より選択される請求項１２に記載の式(I)の化合物。
【表１】
2005515209.tif 000137
2005515209.tif 000138
2005515209.tif 000139
2005515209.tif 000140
2005515209.tif 000141
2005515209.tif 000142
2005515209.tif 000143
2005515209.tif 000144
2005515209.tif 000145
2005515209.tif 000146
2005515209.tif 000147
2005515209.tif 000148
2005515209.tif 000149
2005515209.tif 000150
2005515209.tif 000151
2005515209.tif 000152
2005515209.tif 000153
2005515209.tif 000154
2005515209.tif 000155
2005515209.tif 000156
2005515209.tif 000157
2005515209.tif 000158
2005515209.tif 000159
2005515209.tif 000160
2005515209.tif 000161
2005515209.tif 000162
2005515209.tif 000163
2005515209.tif 000164
2005515209.tif 000165
2005515209.tif 000166
2005515209.tif 000167
2005515209.tif 000168
2005515209.tif 000169
2005515209.tif 000170
2005515209.tif 000171
2005515209.tif 000172
2005515209.tif 000173
2005515209.tif 000174
2005515209.tif 000175
2005515209.tif 000176
2005515209.tif 000177
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2005515209.tif 000179
2005515209.tif 000180
2005515209.tif 000181
2005515209.tif 000182
2005515209.tif 000183
2005515209.tif 000184
2005515209.tif 000185
2005515209.tif 000186
2005515209.tif 000187
2005515209.tif 000188
2005515209.tif 000189
2005515209.tif 000190
2005515209.tif 000191
2005515209.tif 000192
2005515209.tif 000193
2005515209.tif 000194
2005515209.tif 000195
2005515209.tif 000196
2005515209.tif 000197
2005515209.tif 000198
2005515209.tif 000199
2005515209.tif 000200
2005515209.tif 000201
2005515209.tif 000202
2005515209.tif 000203
2005515209.tif 000204
2005515209.tif 000205
2005515209.tif 000206
2005515209.tif 000207
2005515209.tif 000208
2005515209.tif 000209
2005515209.tif 000210
2005515209.tif 000211
2005515209.tif 000212
2005515209.tif 000213
2005515209.tif 000214
2005515209.tif 000215
2005515209.tif 000216
2005515209.tif 000217
2005515209.tif 000218
2005515209.tif 000219
2005515209.tif 000220
2005515209.tif 000221
2005515209.tif 000222
2005515209.tif 000223
2005515209.tif 000224
2005515209.tif 000225
2005515209.tif 000226
2005515209.tif 000227
2005515209.tif 000228
2005515209.tif 000229
2005515209.tif 000230
2005515209.tif 000231
2005515209.tif 000232
2005515209.tif 000233
2005515209.tif 000234
2005515209.tif 000235
2005515209.tif 000236
2005515209.tif 000237
2005515209.tif 000238
2005515209.tif 000239
2005515209.tif 000240
2005515209.tif 000241
2005515209.tif 000242
【請求項２１】
請求項１２で定義された式(I)の化合物またはその医薬上許容される塩の製造方法であって、
a)式 (II)：
【化７−１】
2005515209.tif 000243
［式中、R1〜R7は請求項１２で定義された通りであり、Qはヒドロキシ-フェニル保護基またはその固相支持体である］
の化合物からQを除去して上記で定義された式(I)の化合物を得、所望により
b)得られた式(I)の化合物を式(I)の化合物の別の化合物および／またはその塩もしくは遊離形態へ変換する
ことを含んでなる方法。
【請求項２２】
式(I)：
【化７−２】
2005515209.tif 000244
(式中、R1〜R7は請求項１２で定義された通りである)
の2以上の化合物のライブラリー。
【請求項２３】
治療上有効量の請求項１２で定義された式(I)の化合物と少なくとも1種の医薬上許容される担体および／または希釈剤を含んでなる医薬組成物。
【請求項２４】
1種以上の化学療法剤をさらに含んでなる、請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
抗癌療法に同時、個別または逐次使用するための組合せ製剤として、請求項１２で定義された式(I)の化合物または請求項２３で定義されたその医薬組成物と1種以上の化学療法剤を含んでなる製品。
【請求項２６】
我々のための薬剤としての、請求項１２で定義された式(I)の化合物。
【請求項２７】
抗腫瘍活性を有する薬剤の製造における、請求項１２で定義された式(I)の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の分野】
【０００１】
本発明はキナーゼ阻害剤として活性のあるピラゾール誘導体、より詳しくはヒドロキシフェニル-ピラゾール誘導体、それらの製造方法、それらを含んでなる医薬組成物、および特に脱調節されたタンパク質キナーゼに関連する疾病の治療におけるそれらの治療薬としての使用に関する。
【背景の説明】
【０００２】
タンパク質キナーゼキナーゼ(PK)の機能不全は多くの疾病の特徴である。ヒト癌に関与する大部分のオンコジーンおよびプロトオンコジーンはPKをコードしている。PKの活性の上昇はまた、良性前立腺肥大、家族性腺腫、ポリープ症、神経繊維腫症、乾癬；アテローム性動脈硬化症、肺繊維症、関節炎、糸球体腎炎、ならびに術後狭窄および再狭窄に関連する血管平滑細胞増殖などの多くの非悪性疾患にも関連づけられている。
【０００３】
PKはまた、炎症症状ならびにウイルスおよび寄生虫の増殖にも関連づけられている。
【０００４】
PKはまた、神経変性疾患の病因および発症にも大きな役割を果たし得る。
【０００５】
PKの機能不全または脱調節の一般的な参照文献としては例えばCurrent Opinion in Chemical Biology 1999, 3, 459-465を参照。
【発明の概要】
【０００６】
本発明者らは今般、数種のヒドロキシフェニル-ピラゾールが多様なタンパク質キナーゼ阻害活性を付与することから、脱調節されたタンパク質キナーゼによって引き起こされる、および／または脱調節されたタンパク質キナーゼに関連する疾病の治療における療法で有用であることを発見した。
【０００７】
このように、本発明の一つの目的は脱調節されたタンパク質キナーゼ活性によって引き起こされる疾病の宿主に対して治療薬として有用な化合物を提供することである。
【０００８】
もう一つの目的は、多様なタンパク質キナーゼ阻害活性を付与する化合物を提供することである。
【０００９】
より詳しくは、本発明のヒドロキシフェニル-ピラゾールは、限定されるものではないが、膀胱癌、乳癌、結腸癌、腎臓癌、肝臓癌、肺癌(小細胞肺癌を含む)、食道癌、胆嚢癌、卵巣癌、膵臓癌、胃癌、子宮頚癌、甲状腺癌、前立腺癌、および皮膚癌(扁平上皮細胞癌を含む)などの癌；白血病、急性リンパ球性白血病、急性リンパ芽急性白血病、B細胞リンパ腫、T細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、毛様細胞性リンパ腫およびバーケットリンパ腫をはじめとするリンパ系の造血系腫瘍；急性および慢性骨髄性白血病、骨髄胃形成症候群および前骨髄性白血病をはじめとする骨髄系の造血系腫瘍；繊維肉腫および横紋筋肉腫をはじめとする間葉起源の腫瘍；星状細胞腫、神経芽腫、神経膠腫および神経鞘腫をはじめとする中枢・末梢神経系の腫瘍；黒色腫、精上皮腫、奇形癌、骨肉腫、色素性乾皮症、ケラトアカントーマ、甲状腺濾胞癌およびカポジ肉腫をはじめとするその他の腫瘍を含む種々の癌の治療に有用である。
【００１０】
細胞増殖の調節におけるPKの重要な役割もために、これらのヒドロキシフェニル-ピラゾールはまた、例えば良性前立腺肥大、家族性腺腫、ポリープ症、神経繊維腫、乾癬；アテローム性動脈硬化症、関節炎、糸球体腎炎、ならびに術後狭窄および再狭窄に関連する血管平滑細胞増殖などの種々の細胞増殖性疾患の治療にも有用である。
【００１１】
本発明の化合物は、cdk5がタウタンパク質のリン酸化に関与していることから示唆されるように(J. Biochem., 117, 741-749, 1995)、アルツハイマー病の治療にも有用であり得る。
【００１２】
本発明の化合物は、アポトーシスのモジュレーターとして、癌、ウイルス感染の治療、HIV感染者におけるエイズ発症、自己免疫疾患および神経変性疾患の予防にも有用であり得る。
【００１３】
本発明の化合物は腫瘍の血管形成および転移を阻害する際にも有用であり得る。
【００１４】
本発明の化合物はサイクリン依存性キナーゼ(cdk)阻害剤として、また、例えば種々のイソ型のタンパク質キナーゼC、Met、PAK-4、PAK-5、ZC-1、STLK-2、DDR-2、Aurora 1、Aurora 2、Bub-1、PLK、Chk1、Chk2、HER2、raf1、MEK1、MAPK、EGF-R、PDGF-R、FGF-R、IGF-R、VEGF-R、PI3K、weelキナーゼ、Src、Ab1、Akt、ILK、MK-2、IKK-2、Cdc7、Nekなどのその他のキナーゼの阻害剤としても有用であり、従って、その他のタンパク質キナーゼに関連する疾病の治療に効果的である。
【００１５】
よって、本発明は、変更されたタンパク質キナーゼ活性により引き起こされる、および／または変更されたタンパク質キナーゼ活性に関連のある疾病を治療する方法であって、有効量の、式(I)：
【化８】
2005515209.tif 000003
【００１６】
［式中、R1〜R4は独立に
水素またはハロゲン原子、ヒドロキシ、ニトロまたはNR8R9基(ここで、R8およびR9は独立に水素、またはC1-C6アルキル、アリール、アリールC1-C6アルキル、C3-C7シクロアルキルおよび飽和もしくは不飽和ヘテロシクリル基、または式COR10、CONHR10もしくはSO2R10の残基から選択される所望により置換されていてもよい基を表し、ここで、R10は水素原子、またはC1-C6アルキル、アリール、アリールC1-C6アルキル、飽和もしくは不飽和C3-C7シクロアルキル、または飽和もしくは不飽和ヘテロシクリル基から選択される所望により置換されていてもよい基を表す)、あるいは
直鎖もしくは分枝C1-C6アルキル、アリール、アリールC1-C6アルキル、飽和もしくは不飽和C3-C7シクロアルキルもしくはシクロアルコキシ基、飽和もしくは不飽和ヘテロシクリル、C1-C6アルコキシ、アリールオキシ、アリールC1-C6アルコキシから選択される所望により置換されていてもよい基
を表し；
R5およびR6は独立に水素、またはC1-C6アルキル、アリール、アリールC1-C6アルキル、C3-C7シクロアルキルおよび飽和もしくは不飽和ヘテロシクリルから選択される所望により置換されていてもよい基を表し；
R7は式CONHR10、CSNHR10、SO2R10、COR10またはCOOR10(式中、R10は上記で定義された通りである)を有するピラゾール環の2つの窒素原子のうちの1つで結合された置換基である］
で示されるヒドロキシフェニル-ピラゾール誘導体またはその医薬上許容される塩をそれを必要とする哺乳類に投与することを含んでなる方法を提供する。
【００１７】
上記の方法のある好ましい実施形態では、変更されたタンパク質キナーゼ活性により引き起こされる、および／または変更されたタンパク質キナーゼ活性に関連のある疾病は癌、細胞増殖性疾患、アルツハイマー病、ウイルス感染、自己免疫疾患および神経変性疾患からなる群から選択される。
【００１８】
本発明に従って治療し得る特定の種の癌としては、癌腫、扁平上皮細胞癌、骨髄系またはリンパ系の造血系腫瘍、間葉起源の腫瘍、中枢・末梢神経系の腫瘍、黒色腫、精上皮腫、奇形癌、骨肉腫、色素性乾皮症、ケラトアカントーマ、甲状腺濾胞癌およびカポジ肉腫が挙げられる。
【００１９】
上記の方法のもう一つの好ましい実施形態では、細胞増殖性疾患は良性前立腺肥大、家族性腺腫、ポリープ症、神経繊維腫症、乾癬；アテローム性動脈硬化症、肺繊維症、関節炎、糸球体腎炎、ならびに術後狭窄および再狭窄に関連する血管平滑細胞増殖からなる群から選択される。さらに本発明の対象となる方法は腫瘍の血管形成および転移の阻害を提供する。
【００２０】
本発明はまた、式(I)：
【化９】
2005515209.tif 000004
【００２１】
［式中、R1〜R4は独立に
水素またはハロゲン原子、ヒドロキシ、ニトロまたはNR8R9基(ここで、R8およびR9は独立に水素、またはC1-C6アルキル、アリール、アリールC1-C6アルキル、C3-C7シクロアルキルおよび飽和もしくは不飽和ヘテロシクリル基、または式COR10、CONHR10もしくはSO2R10の残基から選択される所望により置換されていてもよい基を表し、ここで、R10は水素原子、またはC1-C6アルキル、アリール、アリールC1-C6アルキル、飽和もしくは不飽和C3-C7シクロアルキル、または飽和もしくは不飽和ヘテロシクリル基から選択される所望により置換されていてもよい基を表す)、あるいは
直鎖もしくは分枝C1-C6アルキル、アリール、アリールC1-C6アルキル、飽和もしくは不飽和C3-C6シクロアルキルもしくはシクロアルコキシ基、飽和もしくは不飽和ヘテロシクリル、C1-C6アルコキシ、アリールオキシ、アリールC1-C6アルコキシから選択される所望により置換されていてもよい基
を表し；
R5およびR6は独立に水素、またはC1-C6アルキル、アリール、アリールC1-C6アルキル、C3-C7シクロアルキルおよび飽和もしくは不飽和ヘテロシクリルから選択される所望により置換されていてもよい基を表し；
R7は式CONHR10、CSNHR10、SO2R10、COR10またはCOOR10(式中、R10は上記で定義された通りである)を有するピラゾール環の2つの窒素原子のうちの1つで結合された置換基であり、ただし、以下の条件：
・R7がCONH2またはCSNH2であって、R5がHまたはCH3であるとき、R6はH、CH3またはフェニル基ではなく、
・R7がCO R'11(ここで、R'11は所望により置換されていてもよいC1-C6アルキル、フェニル、または飽和もしくは不飽和ヘテロシクリル基である)であって、R5がHまたはフェニル基であるとき、R6はH、CH3または所望により置換されていてもよいフェニルであり、
・R7がCO2C(CH3)3またはCO2CH3であって、R5がHであるとき、R6は所望により置換されていてもよいフェニル基である
を有する］
で示されるヒドロキシフェニル-ピラゾール誘導体またはその医薬上許容される塩も提供する。
【００２２】
本発明の対象となる式(I)のヒドロキシフェニル-ピラゾール誘導体は、常法に従って行われる周知の反応を含む合成法、ならびに新規で極めて用途の広い固相コンビナトリアル法によって得ることができ、両者とも本発明の範囲内に含まれる。
【００２３】
本発明はまた、式(I)のヒドロキシアリール-ピラゾール誘導体と少なくとも1種の医薬上許容される賦形剤、担体または希釈剤を含んでなる医薬組成物も提供する。
【００２４】
以下の詳細な説明により理解が深まるとともに、発明のより完全な理解および付随する多くの利点が容易に分かるであろう。
【発明の詳細な説明】
【００２５】
当技術分野では式(I)の化合物に構造上近いヒドロキシフェニル-ピラゾール誘導体がいくつか知られている。その中の一例として、抗菌剤として活性のある特定のピラゾールが研究されており(Mogilaiah et al, Indian J. Chem., B, 2001, 40B(1), p.43-48; Naik, S.M. et al. Asian J. Chem., 11(4), 1537-1539 and 1522-1524, 1999)、その他の誘導体の反応性は例えばHamed, Ashraf et al., An. Quim. (1994), 90(5-6), 359-64およびRampey, Mary E. et al. Photochem. Photobiol., 70(2), 176-183, 1999に論じられている。
【００２６】
本発明の対象となる式(I)の化合物は不斉炭素原子を有してもよく、従って、ラセミ混合物として、または個々の光学異性体として存在し得る。よって、式(I)の化合物の可能性のある異性体およびそれらの混合物の全て、さらに代謝産物および医薬上許容される生体前駆体(あるいはプロドラッグとも呼ばれる)、ならびにそれらの含む治療方法も本発明の範囲内にある。
【００２７】
容易に分かるであろうが、上述のように、ピラゾール環上のR7置換基は本発明の化合物の2つの窒素のうち一方の上にあればよい：
【化１０】
2005515209.tif 000005
【００２８】
(式中、R1〜R4、R5、R6およびR7は上記で定義された通りである)。
【００２９】
よって、本発明において特に断りのない限り、一般式Iは式(I')および他方の式(I")のの化合物の両方を含む。
【００３０】
本明細書において特に断りのない限り、直鎖もしくは分枝C1-C6アルキルとは、例えばメチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、イソブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、n-ペンチル、ネオペンチル、n-ヘキシル、イソヘキシルなどのような基を意図する。
【００３１】
アリールとは、例えばフェニル、ビフェニル、1-ナフチル、2-ナフチルなどのような芳香族炭素環を意図する。
【００３２】
飽和または不飽和C3-C7シクロアルキル基とは、例えばシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロペンテニル、シクロヘキセニルなどを意図する。
【００３３】
特に断りのない限り、飽和または不飽和シクロアルキル基はさらに1または2個のベンゼン環と縮合してもよく、例えば、1,2,3,4-テトラヒドロ-ナフタレン-2-イル、フルオレン-9-イルなどがある。
【００３４】
本明細書において「ヘテロシクリル」とは、O、SおよびNから選択される少なくとも1個のヘテロ原子を含む3〜7員の置換または非置換の飽和または不飽和ヘテロシクリル環をさし、環のいずれの炭素がカルボニルとして酸化されていてもよく、該ヘテロシクリル環は所望により第二の5員または6員の飽和または不飽和ヘテロシクリル環、あるいはC3-C7シクロアルキル環、あるいはベンゼンまたはナフタレン環と所望により縮合していてもよい。窒素、酸素または硫黄から選択される少なくとも1個のヘテロ原子を有する3〜7員の複素環とは、例えばチオフェン、フラン、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、チアゾール、イソチアゾール、オキサゾール、イソキサゾール、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、ピロリジン、ピロリン、イミダゾリジン、イミダゾリン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロピラン、テトラヒドロチオピランなどのような飽和、部分不飽和または完全不飽和の芳香族または非芳香族複素環を意図する。
【００３５】
所望により縮合していてもよい複素環とは、特に断りのない限り、利用可能な結合のいずれか一つを介して、または5または6員の飽和または不飽和ヘテロシクリル環と、またはC3-C7シクロアルキル環へ、または例えばキノリン、イソキノリン、クロマン、クロメン、チオナフテン、インドリンなどのようなベンゼンもしくはナフタレン環へさらに縮合している上記複素環のいずれかを意図する。
【００３６】
「アリールC1-C6アルキル」とは、例えばベンジル、フェニルエチル、ベンズヒドリル、ベンジルオキシなど、上記で定義されたように少なくとも一つのアリール基で置換された1〜6個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖アルキル部分をさす。
【００３７】
ハロゲン原子とは、フルオロ、ブロモ、クロロまたはヨード原子を意図する。
【００３８】
「所望により置換されていてもよい」とは、その基が置換されていても置換されていなくてもよく、R1-R10の上記定義のいずれかにおいてアルキル、シクロアルキル、アリール、アリールシクロアルキル、アルコキシ、アリールオキシ、シクロアルコキシ、アルケニル
・ハロ(すなわち、フルオロ、ブロモ、クロロまたはヨード)；
・ヒドロキシ；
・ニトロ；
・アジド；
・メルカプト(すなわち、-SH)、およびそのアセチルまたはフェニルアセチルエステル(すなわち、-SCOCH3および-SCOCH2C6H5)；
・アミノ(すなわち、-NH2または-NHRIまたは-NRIRII(ここで、RIおよびRIIは同一であっても異なっていてもよく、直鎖または分枝C1-C6アルキル、フェニル、ビフェニル(すなわち、-C6H4-C6H5)、またはベンジル基であり、所望によりヒドロキシ、メトキシ、メチル、アミノ、メチルアミノ、ジメチルアミノ、クロロまたはフルオロで置換されていてもよいか；あるいはRIおよびRIIはそれらが結合してる窒素原子とともにモルホリノ、ピロリジノ、ピペリジノ、ピペラジノまたはN-メチルピペラジノなどの複素環を形成する)；
・グアニジノ、すなわち、-NHC(=NH)NH2；
・ホルミル(すなわち、-CHO)；
・シアノ：
・カルボキシ(すなわち、-COOH)、またはそのエステル(すなわち、-COORI)、またはそのアミド(すなわち、-CONH2、-CONHRIまたは-CONHRIRIl)(ここで、RIおよびRIIは上記で定義された通りであり、モルホリノ-アミド、ピロリジノ-アミド、およびカルボキシメチルアミド-CONHCH2COOHを含む)；
・スルホ(すなわち、-SO3H)；
・アシル、すなわち、-C(O)RI(ここで、RIは上記で定義された通りであり、モノフルオロアセチル、ジフルオロアセチル、トリフルオロアセチルを含む)；
・カルバモイルオキシ(すなわち、-OCONH2)およびN-メチルカルバモイルオキシ；
・アシルオキシ、すなわち、-OC(O)RI(ここで、RIは上記で定義された通りであるか、またはホルミルオキシである)；
・アシルアミノ、すなわち、-NHC(O)RI、または-NHC(O)ORI(ここで、RIは上記で定義された通りであるか、または-(CH2)tCOOH基であり、tは1、2または3である)；
・ウレイド、すなわち、-NH(CO)NH2、-NH(CO)NHRI、-NH(CO)NRIRII(ここで、RIおよびRIIは上記で定義された通りであり、-NH(CO)-(4-モルホリノ)、-NH(CO)-(1-ピロリジノ)、-NH(CO)-(1-ピペラジノ)、-NH(CO)-(4-メチル-1-ピペラジノ)を含む)；
・スルホンアミド、すなわち、-NHSO2RI{ここで、RIは上記で定義された通りである)；
・-(CH2)tCOOH基、ならびにそのエステルおよびアミド、すなわち、-(CH2)tCOORIおよび-(CH2)tCONH2、-(CH2)tCONHRI、-(CH2)tCONRIRII(ここで、t、RIおよびRIIは上記で定義された通りである)}
・-NH(SO2)NH2、-NH(SO2)NHRI、-NH(SO2)NRIRII基(ここで、RIおよびRIIは上記で定義された通りであり、-NH(SO2)-(4-モルホリノ)、-NH(SO2)-(1-ピロリジノ)、-NH(SO2)-(1-ピペラジノ)、-NH(SO2)-(4-メチル-1-ピペラジノ)を含む)；
・-OC(O)ORI基(ここで、RIは上記で定義された通りである)；
・-ORI基(ここで、RIは上記で定義された通りであり、-OCH2COOHを含む)；
・-O-CH2-O-、メチレンジオキシ、または-O-CH2-CH2-O-、エチレンジオキシ基；
・-SRI基(ここで、RIは上記で定義された通りであり、-SCH2COOHを含む)；
・-S(O)RI基(ここで、RIは上記で定義された通りである)；
・-S(O2)RI基(ここで、RIは上記で定義された通りである)；
・-SO2NH2、-SO2NHRI、または-SO2NRIRII基(ここで、RIおよびRIIは上記で定義された通りである)；
・-C1-C6アルキルまたはC2-C6アルケニル；
・-C3-C7シクロアルキル；
・クロロメチル、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、アミノメチル、N,N-ジメチルアミノメチル、アジドメチル、シアノメチル、カルボキシメチル、スルホメチル、カルバモイルメチル、カルバモイルオキシメチル、ヒドロキシメチル、メトキシカルボニルメチル、エトキシカルボニルメチル、tert-ブトキシカルボニルメチルおよびグアニジノメチルから選択される置換メチル
が挙げられる。
【００３９】
最も好ましい置換基はメトキシ、トリフルオロメチル、メチレンジオキシ、ジメチルアミノ、およびエトキシカルボニル基である。
【００４０】
存在する場合、カルボキシ、ヒドロキシ、メルカプトおよびアミノ基は遊離型であっても保護された形態であってもいずれでもよい。該基の保護された形態は当技術分野で一般に公知のいずれのものであってもよい。カルボキシ基はそのエステル、特にメチル、エチル、tert-ブチル、ベンジル、および4-ニトロベンジルエステルとして保護するのが好ましい。ヒドロキシ基はそのシリル-エーテル、エーテルまたはエステル、特にトリメチル シリル、tert-ブチルジフェニルシリル、トリエチルシリル、トリイソプロピルシリルまたはtert-ブチルジメチルシリルエーテル、メトキシメチルエーテル、テトラヒドロピラニルエーテル、ベンジルエーテル、アセテート、またはベンゾエートとして保護するのが好ましい。メルカプト基はチオエーテルまたはチオエステル、特にtert-ブチルチオエーテル、チオアセテートまたはチオベンゾエートして保護するのが好ましい。アミノ基はカルバメート、例えばtert-ブトキシカルボニル誘導体、またはアミド、例えばアセトアミドおよびベンズアミドとして保護するのが好ましい。
【００４１】
さらに、式(I)の化合物の水和物、溶媒和物、および式(I)の化合物生理条件で加水分解可能な誘導体(すなわち、プロドラッグ)も本発明の範囲内に含まれる。
【００４２】
オキソとは、カルボニル(>C=O)基を意図する。
【００４３】
ペルフルオロ化アルキルとは、例えばトリフルオロメチル、2,2,2-トリフルオロエチル、1,1-ジフルオロエチルなど、2以上のフッ素原子で置換された、上記で定義されるようなアルキル基のいずれかを意図する。
【００４４】
上記の全てから、当業者には、例えばアリールアルキル、アルコキシ、シクロアルコキシ、アリールオキシ、アリールアルキルオキシなど、定義される基または置換基のいずれかがそれらが起源する基の名称から構成されていなければならないことが自明である。一例として、特に断りのない限り、いずれのアリールアルキル基も、そのアルキル部分が少なくとも1個のアリール(なお、アリールもアルキルも上記で定義された通りである)で置換されているアルキルオキシとして意図されなければならない。
【００４５】
式(I)の化合物の医薬上許容される塩としては、例えば無機または有機酸、例えば硝酸、塩酸、臭化水素酸、硫酸、過塩素酸、リン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、乳酸、シュウ酸、マロン酸、リンゴ酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、イセチオン酸、およびサリチル酸による酸付加塩、ならびに無機または有機塩基、例えば水酸化、炭酸または重炭酸アルカリまたはアルカリ土類金属、特にナトリウム、カリウム、カルシウムまたはマグネシウム、非環状または環状アミン、好ましくはメチルアミン、エチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミンまたはピペリジンによる塩がある。
【００４６】
本発明の対象となる式(I)の化合物では、R7基がピラゾール環の2つの窒素原子のうち一方の上に存在してよく、好ましくは該R7は上記式I'で示されたように、ヒドロキシ-フェニル環に対してメタ位にある窒素上に存在する。
【００４７】
好ましい式(I)の化合物はR1、R4およびR5が水素原子である化合物である。
【００４８】
その他の好ましい式(I)の化合物はR2およびR3が独立に
・水素またはハロゲン原子、
・所望により置換されていてもよい直鎖または分枝C1-C6アルキルまたはC1-C6アルコキシ、および
・NR8R9基(ここで、R8およびR9は独立に水素原子、または式COR10の残基を表し、ここで、R10はアリールおよび飽和または不飽和ヘテロシクリル基から選択される所望により置換されていてもよい基である)
から選択される化合物である。
【００４９】
このクラスの中では、R2およびR3が水素、塩素もしくはフッ素原子、所望により置換されていてもよい直鎖または分枝C1-C6アルキルもしくはC1-C6アルコキシ、およびNR8R9基(ここで、R8およびR9は独立に水素原子または式COR10の残基を表し、ここで、R10はフェニル、1-ナフチル、2-ナフチル、ビフェニル、ピリジル、ピラゾリル、チエニル、イソキサゾリル、チアゾリル、ピラゾリル、フルオレン-9-イル、ピペリジンまたはテトラヒドロキノリンから選択される所望により置換されていてもよい基である)から選択される、式(I)の化合物がいっそうより好ましい。
【００５０】
式(I)の化合物のもう一つの好ましいクラスとして、R6がC1-C6アルキル、アリール、C3-C7シクロアルキルおよび飽和または不飽和ヘテロシクリル基から選択される所望により置換されていてもよい基である化合物がある。
【００５１】
このクラスの中では、R6が直鎖もしくは分枝C1-C6アルキル、C3-C7シクロアルキル、フェニル、1-ナフチル、2-ナフチル、ビフェニル、ピリジル、ピラゾリル、チエニル、イソキサゾリル、チアゾリル、ピラゾリル、フルオレン-9-イル、ピペリジンまたはテトラヒドロキノリンから選択される所望により置換されていてもよい基である式(I)の化合物がいっそうより好ましい。
【００５２】
本発明のもう一つの好ましい実施形態によれば、式(I)の化合物は、R7が式CONHR10の基を表し、ここで、R10は水素原子、またはC1-C6アルキル、アリール、アリールC1-C6アルキル、C2-C8アルケニル、C3-C7シクロアルキルまたは飽和もしくは不飽和ヘテロシクリル基から選択される所望により置換されていてもよい基を表すピラゾール誘導体である。より好ましくは、R7が式CONHR10の基を表し、ここで、R10がC1-C6アルキル、フェニル、1-ナフチル、2-ナフチル、ビフェニル、ベンジル、アリル、またはフェネチル基である。
【００５３】
本発明の式(I)の化合物の特定の例(適当であれば医薬上許容される塩の形態)としては、限定されるものではないが、以下のものがある：
Ia. 5-シクロプロピル-3-[2-ヒドロキシ-4-(4-メトキシ-ベンゾイルアミノ)-フェニル]-ピラゾール-1-カルボン酸ブチルアミド；
Ib. N-エチル-3-(2-ヒドロキシフェニル)-5-ピリジン-4-イル-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Ic. 5-シクロプロピル-3-(2-ヒドロキシフェニル)-N-プロピル-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Id. N-{[5-シクロプロピル-3-(2-ヒドロキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-イル]カルボニル}グリシン酸エチル；
Ie. N-アリル-5-シクロプロピル-3-(2-ヒドロキシフェニル)-1H-ピラゾール-l-カルボキサミド；
If. N-シクロヘキシル-5-シクロプロピル-3-(2-ヒドロキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Ig. 5-シクロプロピル-N-エチル-3-(2-ヒドロキシ-4-{[3-(トリフルオロメチル)ベンゾイル]アミノ}フェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Ih. エチル-N-{[5-[2-(ジメチルアミノ)エチル]-3-(2-ヒドロキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-イル]カルボニル}グリシネート；
Ii. 5-シクロプロピル-N-エチル-3-(2-ヒドロキシ-4-メトキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Ij. エチル-N-{[5-シクロプロピル-3-(2-ヒドロキシ-4-メトキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-イル]カルボニル}グリシネート；
Ik. 5-シクロプロピル-N-エチル-3-(2-ヒドロキシ-5-メトキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Il. 5-シクロプロピル-N-エチル-3-(2-ヒドロキシ-5-メチルフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Im. エチル-N-{[5-シクロプロピル-3-(2-ヒドロキシ-5-メチルフェニル)-1H-ピラゾール-1-イル]カルボニル}グリシネート；
In. N-ブチル-5-シクロプロピル-3-(2-ヒドロキシ-4-メトキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Io. N-ブチル-5-シクロプロピル-3-(2-ヒドロキシ-5-メチルフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Ip. N-(3-{1-[(ブチルアミノ)カルボニル]-5-シクロプロピル-1H-ピラゾール-3-イル}-4- ヒドロキシフェニル)イソニコチンアミド；
Iq. N-(4-{1-[(ブチルアミノ)カルボニル]-5-シクロプロピル-1H-ピラゾール-3-イル}-3- ヒドロキシフェニル)イソニコチンアミド；
Ir. 3-{4-[(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルカルボニル)アミノ]-2-ヒドロキシフェニル}-N-ブチル-5-シクロブチル-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Is. 3-{4-[(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルカルボニル)アミノ]-2-ヒドロキシフェニル}-N-ブチル-5-シクロペンチル-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
It. N-アリル-5-シクロプロピル-3-(4-フルオロ-2-ヒドロキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Iu. 5-(3,4-ジメトキシフェニル)-N-エチル-3-(2-ヒドロキシ-5-メトキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Iv. N-アリル-5-[2-(ジメチルアミノ)エチル]-3-(2-ヒドロキシ-5-メチルフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Iw. 5-[2-(ジメチルアミノ)エチル]-3-(2-ヒドロキシ-5-メトシキフェニル)-N-(2-フェニルエチル)-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Ix. エチル-N-{[5-(3,4-ジメトキシフェニル)-3-(2-ヒドロキシ-5-メトキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-イル]カルボニル}グリシネート；
Iy. 5-シクロプロピル-N-エチル-3-(4-フルオロ-2-ヒドロキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Iz. エチル-N-{[3-(5-クロロ-2-ヒドロキシフェニル)-5-シクロプロピル-1H-ピラゾール-1-イル]カルボニル}グリシネート；
Iaa. 5-シクロプロピル-3-(2-ヒドロキシ-5-メトキシフェニル)-N-(2-フェニルエチル)-lH-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Ibb. 5-シクロプロピル-N-エチル-3-(2-ヒドロキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Icc. N-アリル-5-(3, 4-ジメトキシフェニル)-3-(2-ヒドロキシ-5-メトキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Idd. N-ベンジル-5-(3, 4-ジメトキシフェニル)-3-(2-ヒドロキシ-5-メチルフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Iee. N-アリル-5-シクロプロピル-3-(2-ヒドロキシ-5-メトキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Iff. N-ベンジル-5-[2-(ジメチルアミノ)エチル]-3-(2-ヒドロキシ-5-メトキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Igg. 5-シクロプロピル-3-(2-ヒドロキシ-5-メチルフェニル)-N-(2-フェニルエチル)-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Ihh. 5-[2-(ジメチルアミノ)エチル]-N-エチル-3-(2-ヒドロキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド；
Iii. N-[(5-シクロブチル-3-{2-ヒドロキシ-4-[(3-メトキシベンゾイル)アミノ]フェニル}-1H-ピラゾール-1-イル)カルボニル]グリシン酸エチル；および
Ijj. N-[(5-シクロプロピル-3-{2-ヒドロキシ-4-[(3-メトキシベンゾイル)アミノ]フェニル}-1H-ピラゾール-1-イル)カルボニル]グリシン酸エチル。
【００５４】
先に示したように、本発明のさらなる対象は、式(I)の化合物およびその医薬上許容される塩の製造方法であって、
a)式 (II)：
【化１１】
2005515209.tif 000006
【００５５】
［式中、R1〜R7は上記で定義された通りであり、Qはヒドロキシ-フェニル保護基またはその固相支持体である］
の化合物からQを除去して上記で定義された式(I)の化合物を得、所望により
b)得られた式(I)の化合物を式(I)の化合物の別の化合物および／またはその塩もしくは遊離形態へ変換する
ことを含んでなる方法である。
【００５６】
上記の方法は周知の方法に従って行うことができる類似の方法である。当業者には、上記の方法に従って調製される式(I)の化合物が異性体混合物として得られる場合、それらの式(I)の単一の異性体への分離は常法に従って行われ、これもやはり本発明の範囲内にある。
【００５７】
同様に式(I)の化合物の塩形成またはその塩の遊離化合物(I)への変換は周知の方法に従って行われ、これもやはり本発明の範囲内にある。
【００５８】
本方法の工程a)によれば、式(II)の化合物からの上記で定義されたQの除去は酸性条件下、すなわち例えば塩酸、トリフルオロ酢酸、メタンスルホン酸またはp-トルエンスルホン酸などの好適な酸の存在下であると同時に通常の酸性イオン交換樹脂を用いることにより行うのが好ましい。
【００５９】
反応は常法下、例えばジクロロメタン中10%〜100%(v/v)のトリフルオロ酢酸などのような酸の溶液を用い、約0℃から還流までの温度で、適当な時間、例えば約5分から約2時間行う。
【００６０】
上記から当業者には、式(I)の化合物の式(I)の別の化合物への任意の変換が常法により行えることが自明である。同様に、式(II)の化合物も脱保護を施す前に式(II)の別の化合物へ変換し得る。式IまたはIIの化合物の式IまたはIIの別の異なる化合物への変換は置換基の意味および分子中のその他の置換基の存在によっていくつかの方法で行える。
【００６１】
例えば、変換は加水分解、酸化、還元、適当な試薬との縮合、またはこれらの反応の組合せであり得る。
【００６２】
また、式(I)の化合物の任意の塩形成またはその塩の遊離化合物への変換、ならびに異性体混合物の単一の異性体への分離は全て常法により行える。
【００６３】
好適なヒドロキシ-フェニル保護基または固相支持体を伴う式(II)の化合物は
i)式(III)
【化１２】
2005515209.tif 000007
【００６４】
(式中、R1〜R5は上記で定義された通りである)
の化合物を好適なヒドロキシ-フェニル保護剤または固相支持体と反応させて式(IV)
【化１３】
2005515209.tif 000008
【００６５】
(式中、R1〜R5は上記で定義された通りであり、Qは該ヒドロキシ-フェニル保護基または固相支持体である)
の化合物を得；
ia)所望により、R1〜R4の一つがアミノ基である式(IV)の化合物を、式(V)、(VI)または(VII)：
R10-COX (V)；R10-N=C=O  (VI)；R10-SO2X' (VII)
(式中、R10は上記で定義された通りであり、Xはヒドロキシまたは好適な脱離基であり、X'は好適な脱離基である)
の化合物のいずれか一つと反応させることにより、R1〜R4の一つが式NHCOR10、NHCONHR10またはNHSO2R10(ここで、R10は上記で定義された通りである)の基である式(IV)の化合物へと変換し；
ii)この式(IV)の化合物を式(VIII)：
【化１４】
2005515209.tif 000009
【００６６】
(式中、RaはC1-C6アルキル基である)
の誘導体と反応させて式(IX)：
【化１５】
2005515209.tif 000010
【００６７】
(式中、Q、R1〜R6は上記で定義された通りである)
の化合物を得；
iii)式(IX)の化合物をヒドラジン水和物と反応させて式(X)：
【化１６】
2005515209.tif 000011
【００６８】
(式中、Q、R1〜R6は上記で定義された通りである)
の化合物を得；
iv)式(X)の化合物を式(V)、(VI)、(VII)、(XI)または(XII)：
R10-COX (V)；R10-N=C=O (VI)；R10-SO2X' (VII)；R10-N=C=S (XI)；R10-OCOX (XII)
(式中、R10、X'およびXは上記で定義された通りである)
の化合物のいずれか一つと反応させて上記で定義されたような式(II)の化合物を得ることにより製造できる。
【００６９】
本方法の工程i)によれば、式(III)の化合物を例えばベンジル基などの好適なヒドロキシ-フェニル保護剤と反応させるか、または例えばベンジルオキシ-ポリスチレン樹脂などの固相支持体と反応させる。
【００７０】
好ましくはこの酸素-フェノール保護剤または固相支持体はベンジルまたはベンジルオキシ-ポリスチレン樹脂から選択される。
【００７１】
この反応は約0℃から室温の温度で好適な時間、例えば約30分から約96時間、例えばN,N-ジメチルアセトアミドまたはN,N-ジメチルホルムアミドなどの好適な溶媒中、炭酸セシウムまたは炭酸カリウムなどの塩基、および炭酸塩の溶解度を高めるためにヨウ化テトラブチルアンモニウムまたはヨウ化ナトリウムなどの塩の存在下で行う。本方法の任意の工程ia)によれば、式(IV)の化合物は式(V)、(VI)または(VII)の化合物のいずれか一つと反応させて対応する異なる式(IV)の誘導体を得る。これに関して当業者には、R1〜R4の一つがNHCOR10である式(IV)のカルボキサミド誘導体が式(V)の化合物との反応から得られ；R1〜R4に一つがNHCONHR10である式(IV)のウレイド誘導体が式(VI)の化合物との反応から得られ；R1〜R4の一つがNHSO2R10である式(VIII)のスルホンアミド誘導体が式(VII)の化合物との反応により得られることが自明である。
【００７２】
先に示したように、式(V)の化合物では、Xはヒドロキシ基、または例えばハロゲン原子などの好適な脱離基である。好ましくは、式(V)の化合物との反応では、Xはヒドロキシ、塩素または臭素である。
【００７３】
式(IV)の化合物と、Xがヒドロキシ基である式(V)のカルボン酸誘導体との反応は、約-10℃から還流までの温度で、約30分から約96時間の範囲の好適な時間、例えばジクロロメタン、クロロホルム、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、1,4-ジオキサン、アセトニトリル、トルエンまたはN,N-ジメチルホルムアミドなどの好適な溶媒中、例えばベンゾトリアゾール-1-イルオキシトリス(ピロリジノ)ホスホニウムヘキサフルオロホスフェートカルボジイミド、1,3-ジシクロヘキシルカルボジイミド、ブロモ-トリス-ピロリジノ-ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート、1,3-ジイソプロピルカルボジイミド、o-ベンゾトリアゾール-1-イル-n,n,n',n'-テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート、1-(3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミド、N-シクロヘキシルカルボジイミド-N'-プロピルオキシメチルポリスチレンまたはN-シクロヘキシルカルボジイミド-N'-メチルポリスチレンなどのカップリングの存在下で行うことができる。
【００７４】
該反応は所望により好適な触媒、例えば4-ジメチルアミノピリジンの存在下、またはN-ヒドロキシベンゾトリアゾールなどのさらなるカップリング剤の存在下で行う。式(IV)の化合物と式(V)の化合物の反応はまた、約-30℃から室温までの温度で、トルエン、ジクロロメタン、クロロホルム、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、ジエチルエーテル、1,4-ジオキサンまたはN,N-ジメチルホルムアミドなどの好適な溶媒中、トリエチルアミン、N,N-ジイソプロピルエチルアミンまたはピリジンなどの第三級塩基の存在下でクロロ蟻酸エチル、イソブチル、またはイソプロピルなどのクロロ蟻酸アルキルを用いることによる混合無水物法により行うこともできる。
【００７５】
式(IV)の化合物と、Xが好適な脱離基、例えば塩素または臭素である式(V)の化合物の間の反応は約-10℃から還流までの温度で、トルエン、ジクロロメタン、クロロホルム、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、アセトニトリルまたはN,N-ジメチルホルムアミドなどの好適な溶媒中、トリエチルアミン、N,N-ジイソプロピルエチルアミンまたはピリジンなどの第三級塩基の存在下で行うことができる。
【００７６】
式(IV)の化合物と式(VI)のイソシアネート誘導体の反応は、約20℃から60℃の温度でトルエン、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、アセトニトリルまたはN,N-ジメチルホルムアミドなどの好適な溶媒中、好適な触媒、例えば4-ジメチルアミノピリジン、またはN,N-ジイソプロピルエチルアミンなどの第三級塩基の存在下で行うことができる。
【００７７】
本方法の工程ia)については、式(VII)の化合物では、X'は例えばハロゲン原子などの好適な脱離基である。好ましくはX'は塩素または臭素である。
【００７８】
式(IV)の化合物と式(VII)のスルホニル誘導体の反応は、約-10℃から還流までの温度で、トルエン、ジクロロメタン、クロロホルム、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、アセトニトリルまたはN,N-ジメチルホルムアミドなどの好適な溶媒中、トリエチルアミン、N,N-ジイソプロピルエチルアミンまたはピリジンなどの第三級塩基の存在下で行うことができる。
【００７９】
本方法の工程ii)によれば、式(VII)の化合物は塩基性条件下、例えば水素化ナトリウムまたはカリウムtert-ブトキシドなどの塩基の存在下で式(IV)の化合物と反応させる。
【００８０】
この反応は約70℃から100℃の温度で、好適な時間、例えば約30分から約5時間、例えばN,N-ジメチルホルムアミド、N,N-ジメチルアセトアミドなどの好適な溶媒中で行う。
【００８１】
本方法の工程iii)によれば、式(IX)とヒドラジン水和物の反応は、約60℃から90℃までの温度で、例えばテトラヒドロフラン、アセトニトリル、1,4-ジオキサン、N,N-ジメチルアセトアミドまたはN,N-ジメチルホルムアミドなどの好適な溶媒中で行う。
【００８２】
本方法の工程iv)によれば、式(X)と式(V)、(VI)または(VII)の誘導体の反応は上記工程ia)の詳細な反応説明に記載したようにして行うことができる。
【００８３】
式(X)の化合物と式(XI)のイソチオシアネート誘導体の反応は、約20℃から60℃までの温度で、トルエン、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、アセトニトリルまたはN,N-ジメチルホルムアミドなどの好適な溶媒中、好適な触媒、例えば4-ジメチルアミノピリジン、またはN,N-ジイソプロピルエチルアミンなどの第三級塩基の存在下で行うことができる。式(X)の化合物と式(XII)の誘導体の反応は、式(X)の化合物と式(V)の誘導体の反応と同様にして行うことができる。
【００８４】
当業者には容易に分かるであろうが、本発明の対象となる式(I)の化合物を製造する場合、望ましくない副反応を生じ得る出発材料またはその中間体双方内の任意の官能基は常法に従って適宜保護する必要がある。同様に、これらのものの遊離型の脱保護化合物への変換は公知の手順に従って行うことができる。
【００８５】
本方法の式(III)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)、(XI)および(XII)の化合物は公知であるか、公知の方法に従って製造することができる。
【００８６】
上記の他、当業者には、例えば固相合成(SPS)技術に従い、上記の反応をコンビナトリアル様式と組み合わせることで本発明の式(I)の化合物を遊離に製造し、式(I)の化合物のコンビナトリアル化学ライブラリーを得ることができることが自明である。
【００８７】
よって、本発明のさらなる対象は式(I)：
【化１７】
2005515209.tif 000012
【００８８】
(式中、R1〜R7は上記で定義された通りである)
の2以上の化合物のライブラリーである。
【００８９】
このように本発明のさらなる対象は、例えば以下のスキーム(PolおよびPol-Yはそれぞれ固相支持体およびその活性型であり、X、X'、Ra、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7およびR10は上記で定義された通りであり、これらの工程は好ましくは本明細書の上記で示された反応条件下で行われる)で示されるようなコンビナトリアル化学技術を介して得ることのできる式(I)の化合物である。より好ましくは、R2およびR3の一方は式NHCOR10、NHCONHR10またはNHSO2R10(ここで、R10は上記で定義された通りである)の基を表し、得られた化合物は下式：
【化１８】
2005515209.tif 000013
【００９０】
(式中、R6、R7およびR10は上記で定義された通りである)
の一つを有する。
【化１９】
2005515209.tif 000014
【００９１】
固相支持体と表Iに示されるような式(III)の誘導体の反応から得られる式(IV)の化合物はそれぞれ所望により表IIおよびIVの式(V)または(VI)の誘導体のいずれか一つと反応させた後、得られた式(IV)の誘導体のいずれか一つを表IIIで示される式(VIII)の誘導体のいずれか一つと反応させることにより本発明の方法に従って操作し、得られた化合物(IX)をヒドラジン水和物と反応させ、次いで、得られた化合物(X)を表IIおよびIVで示されるような式(V)または(VI)の誘導体のいずれか一つと反応させればよい。
【表２】
2005515209.tif 000015
【表３】
2005515209.tif 000016
【００９２】
例えば実施例において報告されているようなコンビナトリアル化学技術に従って、適当であれば医薬上許容される塩の形態で製造される式(I)の化合物は全て、本明細書では便宜に「方法による生成物」、すなわち所定の方法によって得ることができる式(I)の化合物と呼び、定義する。
【００９３】
このように本発明のさらなる対象は例えばコンビナトリアル化学技術により、表Iで示されるような式(III)の化合物から得られた各誘導体を表IIで示されるような式(VIII)のカルボン酸誘導体のいずれか一つと反応させ、次いで本発明の方法に従って操作することにより得ることができる式(I)の化合物である。
【００９４】
本発明のさらなる対象は、例えばコンビナトリアル化学技術により、R2またはR3がアミノ基である表Iで示されるような式(III)の化合物から得られた各誘導体を、表IIおよびIVで示されるような式(V)および(VI)のアシルクロリドまたはイソシアネート誘導体のいずれか一つと反応させ、次いで本発明の方法に従って操作することにより得ることができる式(I)の化合物である。
【００９５】
薬理学
式(I)の化合物はタンパク質キナーゼ阻害剤として有効であり、よって、例えば腫瘍細胞の調節されない増殖を制限するのに有用である。
【００９６】
療法では、それらは例えば癌腫、例えば乳癌、肺癌、膀胱癌、結腸癌、卵巣および子宮内膜癌、肉腫(例えば、軟組織および骨組織肉腫)などの種々の腫瘍、および例えば白血病などの血液性悪性疾患の治療に用い得る。
【００９７】
さらに式(I)の化合物はまた、乾癬、アテローム性動脈硬化症および術後狭窄および再狭窄に関連する血管平滑細胞増殖などのその他の細胞増殖性疾患の治療、ならびにアルツハイマー病の治療に有用である。
【００９８】
推定されるタンパク質キナーゼ阻害剤の阻害活性および選択された化合物の効力はホスホセルロース濾紙を各ウェルの底に敷き、洗浄/濾過工程の後に正電荷を有する基質の結合を可能としたMultiScreen-PH 96ウェルプレート(Millipore)の使用に基づくアッセイ方法によって測定した。
【００９９】
放射活性標識したリン酸部分がser/threoキナーゼにより、フィルターに結合されたヒストンに移された際の発光をシンチレーションカウンターで測定した。
【０１００】
cdk2/サイクリンA活性の阻害アッセイ
キナーゼ反応：最終量100μlのバッファー(TRIS HCl 10mM pH7.5, MgCl2 10mM、7.5mM DTT)中の1.5μMのヒストンH1基質、25μMのATP(0.2uCiP33γ-ATP)、30ngのバキュロウイルスにより同時発現されたcdk2/サイクリンA、10μMの阻害剤を96Uボトムウェルプレートの各ウェルに加えた。37℃で10分インキュベートした後、反応を20μlのEDTA 120mMにより停止させた。
【０１０１】
捕捉：各ウェルから100μlをMultiScreenプレートに移し、基質をホスホセルロースフィルターに結合させた。次にプレートを150μl/ウェルPBS Ca++/Mg++フリーで3回洗浄し、MultiScreen濾過システムにより濾過した。
【０１０２】
検出：フィルターを37℃で乾燥させた後、100μl/ウェルのシンチラントを加え、33Pで標識したヒストンH1をTop-Count装置で放射活性をカウントすることにより検出した。
【０１０３】
結果：データを分析し、酵素の全活性(=100%)に対する阻害%として表した。
【０１０４】
阻害率が50%以下を示す全ての化合物を効力(IC50)、ならびにKiの計算による阻害剤の動態プロフィールを検討および決定するためさらに分析した。
【０１０５】
IC50の決定：用いたプロトコールは上記と同じとし、阻害剤は0.0045〜10μMの範囲の種々の濃度で試験した。実験データは4パラメーターロジスティック方程式：
y = 下限値+(上限値-下限値)/(1+10^((logIC50-x)*傾き))
[式中、xは阻害剤濃度の対数であり、yは応答であり、yは下限値で始まり、S字曲線に沿って進む。
【０１０６】
Kiの計算：ATPかヒストンH1基質いずれかの濃度を変化させた。ATPは4.8、12、24、48μM(比例希釈したP33γ-ATPを含有)およびヒストンは0.4、0.8、1.2、2.4、4.8μMを2種の異なる適宜選択した阻害剤濃度の不在下および存在下で用いた。無作為二反応体系方程式：
【数１】
2005515209.tif 000017
【０１０７】
(式中、A=ATPおよびB=ヒストンH1)
を用い、Ki決定のためのコンピュータープログラム「SigmaPlot」により実験データを分析した。
【０１０８】
さらに、選択された化合物は細胞周期に厳格に関連するer/threoキナーゼ(cdk2/サイクリンE、cdk1/サイクリンB1、cdk4/サイクリンD1)のパネル上で、また、MAPK、PKA、EGFR、IGF1-R、Cdc7/dbf4およびaurora-2に対する特異性に関して同定されている。
【０１０９】
cdk2/サイクリンE活性の阻害アッセイ
キナーゼ反応：最終量100μlのバッファー(TRIS HCl 10mM pH7.5, MgCl2 10mM、7.5mM DTT+0.2mg/ml BSA)中の1.5μMのヒストンH1(Sigma #H-5505)基質、25μMのATP(0.2μCiP33γ-ATP)、バキュロウイルスにより同時発現されたcdk2/GST-サイクリンE 15ng、好適な濃度の阻害剤を96Uボトムウェルプレートの各ウェルに加えた。37℃で10分インキュベートした後、反応を20μlのEDTA 120mMにより停止させた。
【０１１０】
捕捉：各ウェルから100μlをMultiScreenプレートに移し、基質をホスホセルロースフィルターに結合させた。次にプレートを150μl/ウェルPBS Ca++/Mg++フリーで3回洗浄し、MultiScreen濾過システムにより濾過した。
【０１１１】
検出：フィルターを37℃で乾燥させた後、100μl/ウェルのシンチラントを加え、33Pで標識したヒストンH1をTop-Count装置で放射活性をカウントすることにより検出した。
【０１１２】
cdk1/サイクリンB1活性の阻害アッセイ
キナーゼ反応：最終量100μlのバッファー(TRIS HCl 10mM pH7.5, MgCl2 10mM、7.5mM DTT+0.2mg/ml BSA)中の1.5μMのヒストンH1(Sigma #H-5505)基質、25μMのATP(0.2μCiP33γ-ATP)、バキュロウイルスにより同時発現されたcdk1/サイクリンB1 30ng、好適な濃度の阻害剤を96Uボトムウェルプレートの各ウェルに加えた。37℃で10分インキュベートした後、反応を20μlのEDTA 120mMにより停止させた。
【０１１３】
捕捉：各ウェルから100μlをMultiScreenプレートに移し、基質をホスホセルロースフィルターに結合させた。次にプレートを150μl/ウェルPBS Ca++/Mg++フリーで3回洗浄し、MultiScreen濾過システムにより濾過した。
【０１１４】
検出：フィルターを37℃で乾燥させた後、100μl/ウェルのシンチラントを加え、33Pで標識したヒストンH1をTop-Count装置で放射活性をカウントすることにより検出した。
【０１１５】
cdk4/サイクリンD1活性の阻害アッセイ
キナーゼ反応：最終量50μlのバッファー(TRIS HCl 10mM pH7.5, MgCl2 10mM、7.5mM DTT+0.2mg/ml BSA)中の0.45μMのマウスGST-Rb(769-921)(# sc-4112, Santa Cruz製)基質、10μMのATP(0.5μCiP33γ-ATP)、バキュロウイルスにより発現されたGST-cdk4/GST-サイクリンD1 100ng、好適な濃度の阻害剤を96Uボトムウェルプレートの各ウェルに加えた。37℃で40分インキュベートした後、反応を20μlのEDTA 120mMにより停止させた。
【０１１６】
捕捉：各ウェルから60μlをMultiScreenプレートに移し、基質をホスホセルロースフィルターに結合させた。次にプレートを150μl/ウェルPBS Ca++/Mg++フリーで3回洗浄し、MultiScreen濾過システムにより濾過した。
【０１１７】
検出：フィルターを37℃で乾燥させた後、100μl/ウェルのシンチラントを加え、33Pで標識したRb断片をTop-Count装置で放射活性をカウントすることにより検出した。
【０１１８】
MAPK活性の阻害アッセイ
キナーゼ反応：最終量100μlのバッファー(TRIS HCl 10mM pH7.5, MgCl2 10mM、7.5mM DTT+0.1mg/ml BSA)中の10μMのMBP(Sigma #M-1891)基質、25μMのATP(0.2μCiP33γ-ATP)、細菌により発現されたGST-MAPK(Upstate Biotechnology #14-173)、好適な濃度の阻害剤を96Uボトムウェルプレートの各ウェルに加えた。37℃で15分インキュベートした後、反応を20μlのEDTA 120mMにより停止させた。
【０１１９】
捕捉：各ウェルから100μlをMultiScreenプレートに移し、基質をホスホセルロースフィルターに結合させた。次にプレートを150μl/ウェルPBS Ca++/Mg++フリーで3回洗浄し、MultiScreen濾過システムにより濾過した。
【０１２０】
検出：フィルターを37℃で乾燥させた後、100μl/ウェルのシンチラントを加え、33Pで標識したMBPをTop-Count装置で放射活性をカウントすることにより検出した。
【０１２１】
PKA活性の阻害アッセイ
キナーゼ反応：最終量100μlのバッファー(TRIS HCl 10mM pH7.5, MgCl2 10mM、7.5mM DTT+0.2mg/ml BSA)中の10μMのヒストンH1(Sigma #H-5505)基質、10μMのATP(0.2μCiP33γ-ATP)、1Uのウシ心臓PKA(Sigma #2645)、好適な濃度の阻害剤を96Uボトムウェルプレートの各ウェルに加えた。37℃で5分インキュベートした後、反応を20μlのEDTA 120mMにより停止させた。
【０１２２】
捕捉：各ウェルから100μlをMultiScreenプレートに移し、基質をホスホセルロースフィルターに結合させた。次にプレートを150μl/ウェルPBS Ca++/Mg++フリーで3回洗浄し、MultiScreen濾過システムにより濾過した。
【０１２３】
検出：フィルターを37℃で乾燥させた後、100μl/ウェルのシンチラントを加え、33Pで標識したヒストンH1をTop-Count装置で放射活性をカウントすることにより検出した。
【０１２４】
EGFR活性の阻害アッセイ
キナーゼ反応：最終量100μlのバッファー(Hepes 50mM pH7.5, MnCl2-MgCl2 3mM、1mM DTT+3μM  NaVO3、0.1mg/ml BSA)中の25μMのウマビオチニル化ポリGluTyr(Sigma #0275)基質、2.5μMのATP(0.3μCiP33γ-ATP)、バキュロウイルスにより発現されたGST-EGFR 80ng、好適な濃度の阻害剤を96Uボトムウェルプレートの各ウェルに加えた。37℃で5分インキュベートした後、反応を20μlのEDTA 120mMにより停止させた。
【０１２５】
捕捉：各ウェルから100μlをストレプトアビジン-フラッシュプレートに移し、ビオチニル化基質をプレートに結合させた。次にプレートを150μl/ウェルPBS Ca++/Mg++フリーで3回洗浄した。
【０１２６】
検出：Top-Count装置で放射活性をカウントした。
【０１２７】
IGF1-R活性の阻害アッセイ
IGF1-R活性の阻害アッセイは以下のプロトコールに従って行った。
【０１２８】
キナーゼ反応：最終量30μlのバッファー(50mM HEPES pH7.9, 3mM MnCl2 10mM、1mM DTT、3μM NaVO3)中の10μMのビオチニル化MBP(Sigma カタログ番号M-1891)基質、0〜20μMの阻害剤、6μMの冷ATP、2nMの33P-ATP、および22.5ngのIGF1-R(室温で30分間、60μMの冷ATPとともにプレインキュベーションしたもの)を96Uボトムウェルプレートの各ウェルに加えた。室温で35分インキュベートした後、反応を100μlのPBSバッファー(32mM EDTA、500μM冷ATP、0.1% Triton X100および10mg/mlストレプトアビジンコーティングSPAビーズを含有)を添加することにより停止させた。15分インキュベートした後、上清110μlを採取し、100μlの5M CsCLを含有する96ウェルOPTIPLATEに移した。4時間後、これらのプレートをPackard TOP-Count放射活性リーダーで2分間読みとった。
【０１２９】
結果：実験データはGraphPad Prizmプログラムで分析した。
【０１３０】
さらに、推定されるタンパク質キナーゼ阻害剤の阻害活性および選択された化合物の効力も、SPA(シンチレーション近接アッセイ)96ウェルプレートアッセイの使用に基づくアッセイ方法によって測定した。このアッセイはストレプトアビジンをコーティングしたSPAビーズがヒストンのリン酸化部位に由来するビオチニル化ペプチドを捕捉する能力に基づくものである。
【０１３１】
放射活性標識したリン酸部分がser/threoキナーゼによりビオチニル化ヒストンペプチドへ移された際の発光をシンチレーションカウンターで測定した。
【０１３２】
cdk5/p25活性の阻害アッセイ
cdk5/p25活性の阻害アッセイは以下のプロトコールに従って行った。
【０１３３】
キナーゼ反応：最終量100μlのバッファー(HEPES 20mM pH7.5、MgCl2 15mM、1mM DTT)中の1.0μMのビオチニル化ヒストンペプチド基質、0.25uCi P33γ-ATP、4nM cdk5/p25複合体、0〜100μMの阻害剤を96Uボトムウェルプレートの各ウェルに加えた。37℃で20分インキュベートした後、反応を、0.1% Triton X-100、50μM ATPおよび5mM EDTAを含有するリン酸緩衝生理食塩水中500μgのSPAビーズを添加することにより停止させた。ビーズを沈降させ、33P標識ペプチドに組み込まれた放射活性をTop Countシンチレーションカウンターで検出した。
【０１３４】
結果：データは下式：
100 X (1 - (未知 - Bkgd)/(酵素対照 - Bkgd)
を用い、阻害%として表した。
【０１３５】
IC50値は4パラメーターロジスティック方程式：
Y = 100/[1 + 10^((LogEC50 - X)*傾き)]
(式中、X=log(μM)、およびY=阻害%)
のバリエーションを用いて計算した。
【０１３６】
Cdc7/dbf4活性の阻害アッセイ
Cdc7/dbf4活性の阻害アッセイは以下のプロトコールに従って行った。
【０１３７】
ビオチン-MCM2基質をATPの存在下でCdc7/Dbf4複合体によってtransリン酸化し、γ33-ATPでトレースする。次にリン酸化されたビオチン-MCM2基質をストレプトアビジンでコーティングされたSPAビーズで捕捉し、リン酸化の程度をβカウントにより評価する。
【０１３８】
Cdc7/dbf4活性の阻害アッセイは以下のプロトコールに従い、96ウェルプレートで行った。
【０１３９】
プレートの各ウェルに次のものを加えた。
【０１４０】
・10μlの基質(ビオチニル化MCM2、最終濃度6μM)
・10μlの酵素(Cdc7/Dbf4、最終濃度12.5nM)
・10μlの試験化合物(用量応答曲線を作成するため、nM〜μMまで12段階で濃度を上昇)
・次に、冷ATP(最終濃度10μM)と放射活性ATP(冷ATPで1/2500モル比)の混合物10μを用いて反応を開始させた。なお、反応は37℃で行った。
【０１４１】
基質、酵素およびATPを50mM HEPES pH7.9(15mM MgCl2、2mM DTT、3μM NaV03、2mMグリセロホスフェートおよび0.2mg/ml BSAを含有)で希釈した。試験化合物の溶媒には10% DMSOも含めた。
【０１４２】
20分インキュベートした後、各ウェルに100μlのPBS pH7.4(50mM EDTA、1mM冷ATP、0.1% Triton X100およびストレプトアビジンでコーティングしたSPAビーズ10mg/mlを含有)を添加することにより反応を停止させた。
【０１４３】
室温で15分インキュベートしてビオチニル化MCM2-ストレプトアビジンSPAビーズの相互作用を行わせた後、このビーズを96ウェルフィルタープレート(Unifilter(登録商標)RF/B(商標))中でPackard Cell Harvester (Filtermate)を用いてトラップし、蒸留水で洗浄した後、Top Count (Packard)を用いてカウントした。
【０１４４】
数値からブランクの値を差し引いた後、実験データ(各点3反復)を非線形回帰分析(Sigma Plot)を用いてIC50の決定のため分析した。
【０１４５】
aurora-2活性の阻害アッセイ
選択された化合物の阻害活性および抗力は、96ウェルプレートにてストレプトアビジンシンチレーション近接アッセイビーズ(amershampharmacia biotech)を用いることに基づくアッセイ方法により測定した。反応が終わったところでビオチニル化ペプチド基質をビーズに捕捉した後、CsCl2を用いて層状化した。
【０１４６】
放射活性標識されたリン酸部分がキナーゼにより、ビーズに結合されたペプチドに移された際の発光をシンチレーションカウンターで測定した。
【０１４７】
Aurora-2活性の阻害アッセイは以下のプロトコールに従い、96ウェルプレートで行った。
【０１４８】
キナーゼ反応：最終量60μlのバッファー(HEPES 50mM pH7.0, MgCl2 10mM、1mM DTT、0.125mg/ml BSA、3μMオルトバナデート)中の8μMのビオチニル化ペプチド(LRRWSLGの4リピート)、10μMのATP(0.5μCiP33γ-ATP)、10nMのAurora2,10阻害剤を96Uボトムウェルプレートの各ウェルに加えた。室温で30分インキュベートした後、100μlのビーズ懸濁液を加えることにより反応を停止させ、ビオチニル化ペプチド捕捉した。
【０１４９】
層状化：100μlのCsCl2 7.5Mを各ウェルに加え、1時間放置した後、Top-Count装置で放射活性をカウントした。
【０１５０】
結果：データを分析し、酵素の全活性(=100%)に対する阻害%として表した。
【０１５１】
阻害60%以上を示す化合物を全て、IC50計算により阻害剤の効力を検討するためにさらに分析した。
【０１５２】
用いたプロトコールは、連続希釈の阻害剤を用いたこと以外は上記のものと同じであった。実験データは以下の方程式：
【数２】
2005515209.tif 000018
【０１５３】
[式中、vbはベースライン速度であり、vは観察された反応速度であり、voは阻害剤の不在下の速度であり、[I]は阻害剤濃度である]
を用いて非線形回帰に当てはめた。
【０１５４】
哺乳類、例えばヒトへの投与に好適な本発明の式(I)の化合物は通常の経路により投与することができ、用量レベルは年齢、体重、患者の状態および投与経路によって異なる。例えば式(I)の化合物の経口投与に適した好適な用量は1回当たり約10〜約500mgの範囲で、1日1〜5回である。
【０１５５】
本発明の化合物は種々の投与形、例えば錠剤、カプセル剤、糖衣またはフィルムコーティング錠、液剤または懸濁剤の形態で経口投与；坐剤の形態で直腸投与；非経口、例えば、筋肉内、または静脈内、および／または鞘内および／または髄腔内注射または点滴により非経口投与することができる。
【０１５６】
さらに、本発明の化合物は単独の薬剤として投与することもできるし、あるいは放射線療法、または細胞増殖抑制剤もしくは細胞傷害剤、抗生物質型薬剤、アルキル化剤、代謝阻害剤、ホルモン剤、免疫剤、インターフェロン型薬剤、シクロオキシゲナーゼ阻害剤(例えば、COX-2阻害剤)、メタロマトリックスプロテアーゼ阻害剤、テロメラーゼ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、抗増殖因子受容体剤、抗HER剤、抗EGFR剤、抗血管形成剤、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、ras-rafシグナル伝達経路阻害剤、細胞周期阻害剤、その他のcdks阻害剤、チューブリン結合剤、トポイソメラーゼI阻害剤、トポイソメラーゼI阻害剤II阻害剤と組み合わせた化学療法などの公知の抗癌治療と組み合わせて投与することもできる。
【０１５７】
一例として本発明の化合物は、例えばエキセメスタン、フォルメスタン、アナストロゾール、レトロゾール、ファドロゾール、タキサン、タキサン誘導体、カプセル封入タキサン、CPT-11、カンプトテシン誘導体、アントラサイクリングリコシド、例えばドキソルビシン、イダルビシン、エピルビシン、エトポシド、ナベルビシン、ビンブラスチン、カルボプラチン、シスプラチン、エストラムスチン、セレコキシブ、タモキシフェン、ラロキシフェン、Sugen SU-5416、Sugen SU-6668、ヘルセプチンなど1以上の化学療法剤と組み合わせて投与することができる。
【０１５８】
一定用量として調剤する場合、このような組合せ製剤では、上記の用量範囲内の本発明の化合物と認可された用量範囲内のその他の医薬上有効な薬剤を用いる。
【０１５９】
組合せ製剤が不適切である場合には、式(I)の化合物を既知の抗癌剤とともに逐次使用してもよい。
【０１６０】
よって、本発明のさらなる対象は、抗癌療法で、または細胞増殖製疾患の治療に同時、個別または逐次使用するための、本発明の式(I)の化合物と1以上の化学療法剤を含んでなる製品またはキットである。
【０１６１】
本発明はまた、有効量の式(I)の化合物またはその塩を医薬上許容される賦形剤、担体または希釈剤と組み合わせて含んでなる医薬組成物を含む。
【０１６２】
本発明の化合物を含有する医薬組成物は通常、常法に従って製造され、医薬上好適な形態で投与される。
【０１６３】
例えば、固形の経口投与形は有効化合物とともに希釈剤(例えば、ラクトース、デキストロース、サッカロース、スクロース、セルロース、コーンスターチまたはポテトスターチ)、滑沢剤(例えば、シリカ、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウムもしくはカルシウム、および／またはポリエチレングリコール)、結合剤(例えば、デンプン類、アラビアガム、ゼラチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースまたはポリビニルピロリドン)、崩壊剤(例えば、デンプン類、アルギン酸、アルギン酸塩、またはグリコール酸ナトリウムデンプン)、発泡混合物、色素、甘味剤、湿潤剤(レシチン、ポリソルベート、ラウリル硫酸塩など)、および一般に、医薬製剤で用いられる無毒で薬理学的に不活性な物質を含んでもよい。該医薬製剤は例えば混合、造粒、打錠、糖衣、またはフィルムコーティングプロセスの手段によるなど、公知の方法で製造すればよい。
【０１６４】
経口投与用の液体分散剤としては例えばシロップ剤、乳剤および懸濁剤がある。
【０１６５】
シロップ剤は担体として例えばサッカロース、またはサッカロースとグリセリンおよび／またはマンニトールおよび／またはソルビトールを含んでもよい。
【０１６６】
懸濁剤および乳剤としては担体として例えば天然ガム、寒天、アルギン酸ナトリウム、ペクチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、またはポリビニルアルコールを含んでもよい。
【０１６７】
筋肉内注射用の懸濁剤または液剤としては、有効化合物とともに、医薬上許容される担体、例えば無菌水、オリーブオイル、オレイン酸エチル、グリコール類(例えば、プロピレングリコール)および所望により好適な量の塩酸リドカインを含んでもよい。静脈注射または点滴用の液剤としては担体として例えば無菌水を含んでもよいし、あるいは好ましくは無菌水性等張食塩水溶液の形態であってもよく、または担体としてプロピレングリコールを含んでもよい。
【０１６８】
坐剤としては有効化合物とともに、医薬上許容される担体、例えばカカオ脂、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪エステル界面活性剤またはレシチンを含んでもよい。
【実施例】
【０１６９】
以下の実施例は本明細書において本発明をよりよく説明するためのものであり、何ら限定を意味するものではない。
【０１７０】
一般法
フラッシュクロマトグラフィーはシリカゲル(Merck グレード9385, 60Å)で行った。SPE(Solid Phase Extraction(固相抽出))はいくつかの業者から入手できるシリカゲル充填済みカートリッジを用いて行った。FT-IRはPerkin-Elmer分光光度計をマイクロペレットとともに用いて得た。HPLC/MSは996 Waters PDAデテクターおよびエレクトロスプレー(ESI)イオン源を備えたMicromass mod. ZQシングル四重極質量分析計を備えたWaters 2790 HPLCシステムを用い、Waters X Terra RP 18 (4.6x50mm, 3.5μm)カラムにて行った。移動相Aは酢酸アンモニウム5mMバッファー(pH5.5、酢酸/アセトニトリル95:5を含む)とし、移動相BはH2O/アセトニトリル(5:95)とした。8分で10〜90%Bのグラジェントとし、90%Bで2分維持した。UV検出は220nmと254nmで行った。流速は1ml/分とした。注入量は10μlとした。フルスキャンで質量範囲は100〜800amuとした。キャピラリー電圧は2.5KV、Sorce temp.は120℃、Coneは10Vとした。保持時間(HPLC r.t.)は220nmまたは254nmにて分で示す。質量はm/z比で示す。
【０１７１】
必要があれば、996 Waters PDAデテクターおよびMicromass mod. ZMDシングル四重極質量分析計を備えたWaters分取HPLC 600、エレクトロスプレーイオン化、ポジティブモードを用い、Waters Symmetry C18 (19x50 nun, 5μm)カラムによる分取HPLCにより化合物を精製した。移動相Aは水0.01%TFAとし、移動相Bはアセトニトリルとした。8分で10〜90%Bのグラジェントとし、90%Bで8分維持した。流速は20ml/分とした。
【０１７２】
1H-NMR分光光度測定は5mm二重共鳴プローブ(1H {15N-31P} ID_PFG Varian)を備えたMercury VX 400を400.45 MHzで作動させて行った。
【０１７３】
例１
1-[4-アミノ-2-(4-ベンジルオキシ-ベンジルオキシ)-フェニル]-エタノン
【化２０】
2005515209.tif 000019
【０１７４】
15mLのDMA中の0.83mmolの樹脂２(1g)に、6.64mmolの4-アミノ-2-ヒドロキシアセトフェノン(8当量，1.0g)、4.15mmolの炭酸セシウム(5当量，1.35g)、および0.83mmolのヨウ化テトラブチルアンモニウム(1当量，0.3g)を添加した。スラリを24時間室温で磁気撹拌に供し、次いで樹脂を濾過し、DMF(2x)、MeOH、THF、MeOH、DCM(3x)を用いて洗浄し、真空下で乾燥させて1.1gの樹脂を得た。FT-IR KBr マイクロペレット□cm-1：1675(C=O, s, st)。
【０１７５】
例２  N-[4-アセチル-3-(4-ベンジルオキシ-ベンジルオキシ-ポリスチレン)-フェニル]-4-メトキシ-ベンズアミド
【化２１】
2005515209.tif 000020
【０１７６】
1-[4-アミノ-2-(4-ベンジルオキシ-ベンジルオキシ)-フェニル]-エタノン(0.166mmol，0.2g)を0.5mLのDiPEA(過剰)、5mLのDCM中の10mgのDMAPを用いて懸濁させた。このスラリに、アルゴン下にて、0.49mmolの塩化p-アニソール(3等量，85mg)を添加した。この混合物を室温で18時間撹拌した。スラリを濾過し、樹脂をDMF、MeOH、DMF、MeOH、THF、MeOH、DCM(3x)を用いて洗浄した。樹脂を真空下で乾燥させて、0.22gの生成物を得た。FT-IR KBr マイクロペレット □cm-1：1679(C=O, s, b, st)。
【０１７７】
例３  N-[4-アセチル-3-(4-ベンジルオキシ-ベンジルオキシ-ポリスチレン)-フェニル]-4-メトキシ-ベンズアミド
【化２２】
2005515209.tif 000021
【０１７８】
N-[4-アセチル-3-(4-ベンジルオキシ-ベンジルオキシ-ポリスチレン)-フェニル]-4-メトキシ-ベンズアミド(0.166mmol，0.2g)を5mLのDMA中の3.32mmolのシクロプロピルカルボン酸エチル(20等量，568mg)の溶液中に懸濁させた。スラリに、窒素下にて4.98mmolの水素化ナトリウム(30等量，パラフィンオイル中の60％懸濁物で199mg)を添加した。この混合物を１時間撹拌しながら90℃で加熱した。スラリを濾過し、樹脂DMF、AcOH 20％、H2O、DMF、MeOH、THF、MeOH、DCM(3x)を用いて洗浄した。樹脂を真空下で乾燥させ、0.22gを得た。FT-IR KBr マイクロペレット□cm-1：1603(C=O, s, b, st)。
【０１７９】
例４  N-[3-(4-ベンジルオキシ-ベンジルオキシポリスチレン)-4-(3-シクロプロピル-3-オキソ-プロピオニル)-フェニル]-4-メトキシ-ベンズアミド
【化２３】
2005515209.tif 000022
【０１８０】
N-[3-(4-ベンジルオキシ-ベンジルオキシポリスチレン)-4-(3-シクロプロピル-3-オキソ-プロピオニル)-フェニル]-4-メトキシ-ベンズアミド(0.166mmol，0.2g)を、3mLのDMA中の16mmolのヒドラジン水和物(100当量)の溶液中で膨潤させた。この懸濁物を磁気撹拌しながら一晩80℃で加熱した。樹脂を濾過し、DMF(2x)、MeOH、THF、MeOH、DCM(3x)を連続して用いて洗浄した。樹脂真空下で乾燥させ、0.21gを得た。FT-IR KBr マイクロペレット □cm-1：3442(N-H, b, st)。
【０１８１】
さらなる分析的調査として、樹脂のアリクォートをTFA/DCM 50％ を用いて１時間インキュベートし、次いで濾過除去し、溶液を窒素下で乾燥するまで蒸発させた。5mgの樹脂(負荷0.83mMol/g)から0.76mgのN-[4-(5-シクロプロピル-1H-ピラゾール-3-イル)-3-ヒドロキシ-フェニル]-4-メトキシ-ベンズアミドが得られた。95％ HPLC 純度（220nmでのHPLC 分析による）を有する最終生成物を80％収率で得た。
【０１８２】
[M+H]+＝350[M]-＝348，HPLC r.t. 5.35。1H-NMR(DMSO-d6),(ppm)：10.06(s, 1H)，9.79(s, 1H)，7.94(d, 2H)，7.73(d, 1H)，7.55(s, 1H)，7.26(d, 1H)，7.04(d,2H)，6.60(s, 1H)，3.83(s, 3H),2. 82(m, 1H)，1.02(m, 2H)，0.74(m, 2H)。
【０１８３】
例５  3-[2-(4-ベンジルオキシ-ベンジルオキシポリスチレン)-4-(4-メトキシ-ベンゾイルアミノ)-フェニル]-5-シクロプロピル-ピラゾール-1-カルボン酸ブチルアミド
【化２４】
2005515209.tif 000023
【０１８４】
N-[3-(4-ベンジルオキシ-ベンジルオキシポリスチレン)-4-(5-シクロプロピル-1H-ピラゾール-3-イル)-フェニル]-4-メトキシ-ベンズアミド(0.124mmol，0.15g)を、3mLのトルエン中の0.124mmolのDiPEA(1等量，22μL)の溶液中に懸濁させ、この懸濁物に、1.2mmolのn-ブチルイソシアネート(10当量，100uL)を添加し、60℃で一晩撹拌した。樹脂を濾過し、DMF(2x)、MeOH、THF、MeOH、DCM(3x)を用いて洗浄し、真空下で乾燥させて0.124mgの樹脂を得た。FT-IR KBr マイクロペレット□cm-1：3442(N-H, b, st, ), 1745(C=O ウレア, s, st) 1679(C=O アミド, s, st,)。
【０１８５】
例６  5-シクロプロピル-3-[2-ヒドロキシ-4-(4-メトキシ-ベンゾイルアミノ) フェニル]-ピラゾール-1-カルボン酸ブチルアミド
【化２５】
2005515209.tif 000024
【０１８６】
0.124mmolの3-[2-(4-ベンジルオキシ-ベンジルオキシポリスチレン)-4-(4-メトキシ-ベンゾイルアミノ)-フェニル]-5-シクロプロピル-ピラゾール-1-カルボン酸ブチルアミド樹脂をDCM中の2mLの50％TFA中で膨潤させた。得られた懸濁物を、22℃で１時間、静かに撹拌または振とうした。樹脂を濾過し、DCMを用いて洗浄し、溶液を試験管内に回収して、窒素下で乾燥するまで蒸発させた、20mg(収率40％)の生成物が得られた。LC/MS分析は254nmで50％純度を示した。3mLカートリッジにパックされた250mgのシリカゲルを介して濾過した後、11.5mgを回収した。
【０１８７】
LC/MS分析は90％の純度 HPLC 室温 8.24[M+H]+＝449，[M-H]-＝447を示した。1H-NMR(DMSO-d6),(ppm)：10.06(s, 1H)，9.79(s, 1H)，8.56(t,1H)，7.94(d, 2H)，7.73(d,1H)，7.55(s, 1H)，7.26(d, 1H)，7.04(d, 2H)，6.60(s,1H)，3.83(s, 3H)，3.25(m,2H)，2.82(m,1H)，1.54(m, 2H)，1.33(m, 2H)，1.02(m, 2H)，0.91(t, 3H)，0.74(m, 2H)。
【０１８８】
同様の方法で作業することにより、また適切な2-ヒドロキシアセトフェノン誘導体、適切なカルボン酸エステル誘導体、および適切なイソシアネート誘導体を用いることにより、以下の化合物が調製された：
N-エチル-3-(2-ヒドロキシフェニル)-5-ピリジン-4-イル-1H-ピラゾール-1-カルボキシアミド
[M+H]+＝309。1H-NMR(DMSO d6) 特徴的信号(diagnostic signals)(ppm)：8.73(d, 2H)，7.20(dd, 1H)，6.92(d, 1H)，6.91(dd, 1H)，2.81(q, 2H)，1.12(t, 3H)。
【０１８９】
5-シクロプロピル-3-(2-ヒドロキシフェニル)-N-プロピル-1H-ピラゾール-1-カルボキシアミド
[M+H]+＝285。1H-NMR(DMSO d6) 特徴的信号(ppm)：9.78(s, 1H)，8.67(t, 1H)，7.78(d, 1H)，7.21(m, 1H)，6.84(m, 2H)，6.63(s, 1H)，3.22(m, 2H)，2.75(m, 1H)，1.58(m, 1H)，1.01(m, 2H)，0.89(t, 3H)，0.74(m, 2H)。
【０１９０】
N-{[5-シクロプロピル-3-(2-ヒドロキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-イル]カルボニル}グリシンエチル
[M+H]+＝330。1H-NMR(DMSO d6) 特徴的信号(ppm)：9.78(s,1H)，8.95(t, 1H)，7.8(d,1H)，7.22(dd,1H)，6.93(m, 2H)，6.68(s,1H)，4.15(q, 2H)，4.01(d,2H)，2.73(m,1H)，1.21(t, 3H)，1.01(m, 2H)，0.76(m, 2H)。
【０１９１】
N-アリール-5-シクロプロピル-3-(2-ヒドロキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキシアミド
[M+H]+＝284。1H-NMR(DMSO d6) 特徴的信号(ppm)：9.85(s, 1H)，8.82(t, 1H)，7.81(d, 1H)，7.2(dd, 1H)，6.92(m, 2H)，6.65(s, 1H)，5.92(m, 1H)，5.2(d, 1H)，5.12(d, 1H)，3.88(dd, 2H)，2.75(m, 1H)，1.02(m, 2H)，0.75(m, 2H)。
【０１９２】
N-シクロへキシル-5-シクロプロピル-3-(2-ヒドロキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキシアミド
[M+H]+＝326。1H-NMR(DMSO d6) 特徴的信号(ppm)：9.88(s, 1H)，8.23(d, 1H)，7.79(d, 1H)，7.2(dd, 1H)，6.91(d, 1H)，6. 87(dd, 1H)，6.62(s, 1H)，3.62(m, 1H)，2.75(m, 1H)，1.82-1.15(m, 10H)，1.02(m, 2H)，0.75(m, 2H)。
【０１９３】
5-シクロプロピル-N-エチル-3-(2-ヒドロキシ-4-{[3-(トリフルオロメチル)ベンゾイル]アミノ}フェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキシアミド
[M+H]+＝284。1H-NMR(DMSO d6) 特徴的信号(ppm)：9.85(s, 1H)，8.82(t, 1H)，7.81(d, 1H)，7.2(dd, 1H)，6.92(m, 2H)，6.65(s, 1H)，5.92(m, 1H)，5.2(d, 1H)，5.12(d, 1H)，3.88(dd, 2H)，2.75(m, 1H)，1.02(m, 2H)，0.75(m, 2H)。
【０１９４】
N-シクロへキシル-5-シクロプロピル-3-(2-ヒドロキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキシアミド
[M+H]+＝326。1H-NMR(DMSO d6) 特徴的信号(ppm)：9.88(s, 1H)，8.23(d, 1H)，7.79(d, 1H)，7.2(dd, 1H)，6.91(d, 1H)，6.87(dd, 1H)，6.62(s, 1H)，3.62(m, 1H)，2.75(m, 1H)，1.82-1.15(m, 10H)，1.02(m, 2H)，0.75(m, 2H)。
【０１９５】
5-シクロプロピル-N-エチル-3-(2-ヒドロキシ-4-{[3-(トリフルオロメチル)ベンゾイル]アミノ}フェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキシアミド
[M+H]+＝459。1H-NMR(DMSO d6) 特徴的信号(ppm)：10.41(s, 1H)，9.82(s, 1H)，8.57(t, 1H)，8.25(s, 1H)，8.22(d, 1H)，7.95(d, 1H)，7.80(d, 1H)，7.57(s, 1H)，7.27(d, 1H)，6.62(s, 1H)，3.28(m, 2H)，2.75(m, 1H)，1.16(t, 3H)，1.02(m, 2H)，0.75(m, 2H)。
【０１９６】
N-{[5-[2-(ジメチルアミノ)エチル]-3-(2-ヒドロキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-イル]カルボニル}グリシン酸エチル
[M+H]+＝361。1H-NMR(DMSO d6) 特徴的信号(ppm)：9.02(s, 1H)，9.05(t, 1H)，7.90(d, 1H)，7.22(dd, 1H)，6.97(s, 11H)，6.95(d, 1H)，6.9(dd, 1H)，4.13(q, 2H)，4.02(d, 2H)，3.41(bs, 4H)，2.83(s, 6H)，1.21(t, 3H)。
【０１９７】
5-シクロプロピル-N-エチル-3-(2-ヒドロキシ-4-メトキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキシアミド
[M+H]+＝302。1H-NMR(DMSO d6) 特徴的信号(ppm)：9.91(s, 1H)，8.55(t, 1H)，7.67(d, 1H)，6.56(s, 1H)，6.46(m, 2H)，3.74(s, 3H)，3.22(m, 2H)，2.75(m, 1H)，1.15(t, 3H)，1.02(m, 2H)，0.75(m, 2H)。
【０１９８】
N-{[5-シクロプロピル-3-(2-ヒドロキシ-4-メトキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-イル]カルボニル}グリシン酸エチル
[M+H]+＝360。1H-NMR(DMSO d6) 特徴的信号(ppm)：9.89(s, 1H)，8.94(t, 1H)，7.66(d, 1H)，6.61(s, 1H)，6.48(m, 2H)，4.13(q, 2H)，4.02(d, 2H)，3.74(s, 3H)，2.75(m, 1H)，1.21(t, 3H)，1.02(m, 2H)，0.75(m, 2H)。
【０１９９】
5-シクロプロピル-N-エチル-3-(2-ヒドロキシ-5-メトキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキシアミド
[M+H]+＝302。1H-NMR(DMSO d6) 特徴的信号(ppm)：9.33(s, 1H)，8.58(t, 1H)，7.34(d, 1H)，6.82(m, 2H)，6.68(s, 1H)，3.72(s, 3H)，3.22(m, 2H)，2.74(m, 1H)，1.15(t, 3H)，1.02(m, 2H)，0.75(m, 2H)。
【０２００】
5-シクロプロピル-N-エチル-3-(2-ヒドロキシ-5-メチルフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキシアミド
[M+H]+＝286。1H-NMR(DMSO d6) 特徴的信号(ppm)：9.33(s, 1H)，8.57(t, 1H)，7.34(d, 1H)，6.81(m, 2H)，6.68(s, 1H)，3.22(m, 2H)，2.74(m, 1H)，2.22(s, 3H)，1.15(t, 3H)，1.02(m, 2H)，0.75(m, 2H)。
【０２０１】
N-{[5-シクロプロピル-3-(2-ヒドロキシ-5-メチルフェニル)-1H-ピラゾール-1-イル]カルボニル}グリシン酸エチル
[M+H]+＝344。1H-NMR(DMSO d6) 特徴的信号(ppm)：9.52(s, 1H)，8.58(t, 1H)，7.59(d, 1H)，7.02(d, 1H)，6.81(d, 1H)，6.62(s, 1H)，3.22(m, 2H)，2.75(m, 1H)，2.23(s, 3H)，1.15(t, 3H)，1.02(m, 2H)，0.75(m, 2H)。
【０２０２】
N-ブチル-5-シクロプロピル-3-(2-ヒドロキシ-4-メトキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキシアミド
[M+H]+＝330。1H-NMR(DMSO d6) 特徴的信号(ppm)：9.82(s, 1H)，8.57(t, 1H)，7.67(d, 1H)，6.56(s, 1H)，6.47(m, 2H)，3.74(s, 3H)，3.25(m, 2H)，2.75(m, 1H)，1.55(m, 2H)，1.33(m, 2H)，1.02(m, 2H)，0.90(t, 3H)，0.75(m, 2H)。
【０２０３】
N-ブチル-5-シクロプロピル-3-(2-ヒドロキシ-5-メチルフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキシアミド
[M+H]+＝314。1H-NMR(DMSO d6) 特徴的信号(ppm)：9.55(s, 1H)，8.58(t, 1H)，7.58(d, 1H)，7.0(d, 1H)，6.81(d, 1H)，6.63(s, 1H)，3.25(m, 2H)，2.75(m, 1H)，2.23(s, 3H),1.56(m, 2H)，1.34(m, 2H)，1.01(m, 2H)，0.91(t, 3H)，0.75(m, 2H)。
【０２０４】
N-(3-{1-[(ブチルアミノ)カルボニル]-5-シクロプロピル-1H-ピラゾール-3-イル}-4-ヒドロキシフェニル)イソニコチンアミド
[M+H]+＝420。1H-NMR(DMSO d6) 特徴的信号(ppm)：9.68(s, 1H)，8.78(d, 1H)，8.52(t, 1H)，8.02(s, 1H)，7.86(d, 1H)，7.55(dd, 1H)，6.94(d, 1H)，6.51(s, 1H)，3.25(m, 2H)，2.75(m, 1H)，1.56(m, 2H)，1.34(m, 2H)，1.01(m, 2H)，0.87(t, 3H)，0.75(m, 2H)。
【０２０５】
N-(4-({1-[(ブチルアミノ)カルボニル]-5-シクロプロピル-1H-ピラゾール-3-イル}-3-ヒドロキシフェニル)イソニコチンアミド
[M+H]+＝420。1H-NMR(DMSO d5) 特徴的信号(ppm)：10.48(s, 1H)，9.87(s, 1H)，8.78(d, 1H)，8.55(t, 1H)，7.86(d, 2H)，7.78(d, 1H)，7.55(s, 1H)，7.27(dd, 1H)，6.61(s, 1H)，3.23(m, 2H)，2.76(m, 1H)，1.56(m, 2H)，1.34(m, 2H)，1.01(m, 2H)，0.91(t, 3H)，0.75(m, 2H)。
【０２０６】
3-{4-[(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルカルボニル)アミノ]-2-ヒドロキシフェニル}-N-ブチル-5-シクロブチル-1H-ピラゾール-1-カルボキシアミド
[M+H]+＝477。1H-NMR(DMSO d6) 特徴的信号(ppm)：10.0(s, 1H)，8.52(t, 1H)，7.61(d, 1H)，7.59(d, 1H)，7.56(d, 1H)，7.45(d, 1H)，7.27(d, 1H)，7.05(d, 1H)，6.65(s, 1H)，6.11(s, 2H)，3.58(m, 1H)，3.23(m, 2H)，2.31(m, 2H)，2.19(m, 2H)，1.97(m, 2H)，1.56(m, 2H)，1.34(m, 2H)，0.91(t, 3H)。
【０２０７】
3-{4-[(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルカルボニル)アミノ]-2-ヒドロキシフェニル}-N-ブチル-5-シクロペンチル-1H-ピラゾール-1-カルボキシアミド
[M+H]+＝491。1H-NMR(DMSO d6) 特徴的信号(ppm)：10.05(s, 1H)，8.52(t。1H)，7.60(d, 1H)，7.58(d, 1H)，7.48(d, 1H)，7.42,(s, 1H)，7.04(d, 1H)，6.58(s, 1H)，6.11(s, 2H)，3.23(m, 2H)，3.11(m, 1H)，2.1(m, 2H)，1.75(m, 2H)，1.6(m, 4H)，1.56(m, 2H)，1.34(m, 2H)，0.91(t, 3H)。
【０２０８】
N-アリール-5-シクロプロピル-3-(4-フルオロ-2-ヒドロキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキシアミド
[M+H]+＝302。HPLC r.t.＝6.21。
【０２０９】
5-(3,4-ジメトキシフェニル)-N-エチル-3-(2-ヒドロキシ-5-メトキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキシアミド
[M+H]+＝398。HPLC r.t.＝4.59。
【０２１０】
N-アリール-5-[2-(ジメチルアミノ)エチル}-3-(2-ヒドロキシ-5-メチルフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキシアミド
[M+H]+＝329。HPLC r.t.＝3.75。
【０２１１】
5-[2-(ジメチルアミノ)エチル]-3-(2-ヒドロキシ-5-メトキシフェニル)-N-(2-フェニルエチル)-1H-ピラゾール-1-カルボキシアミド
[M+H]+＝409。HPLC r.t.＝4.39。
【０２１２】
N-{[5-(3,4-ジメトキシフェニル)-3-(2-ヒドロキシ-5-メトキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-イル]カルボニル}グリシン酸エチル
[M+H]+＝456。HPLC r.t.＝4.69。
【０２１３】
5-シクロプロピル-N-エチル-3-(4-フルオロ-2-ヒドロキシフェニル(-1H-ピラゾール-1-カルボキシアミド
[M+H]+＝290。HPLC r.t.＝6.01。
【０２１４】
N-{[3-(5-クロロ-2-ヒドロキシフェニル)-5-シクロプロピル-1H-ピラゾール-1-イル]カルボニル}グリシン酸エチル
[M+H]+＝364。HPLC r.t.＝6.21。
【０２１５】
5-シクロプロピル-3-(2-ヒドロキシ-5-メトキシフェニル)-N-(2-フェニルエチル)-1H-ピラゾール-1-カルボキシアミド
[M+H]+＝377。HPLC r.t.＝6.55。
【０２１６】
5-シクロプロピル-N-エチル-3-(2-ヒドロキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキシアミド
[M+H]+＝271。HPLC r.t.＝5.76。
【０２１７】
N-アリール-5-(3,4-ジメトキシフェニル)-3-(2-ヒドロキシ-5-メトキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキシアミド
[M+H]+＝410。HPLC r.t.＝4.71。
【０２１８】
N-ベンジル-5-(3,4-ジメトキシフェニル)-3-(2-ヒドロキシ-5-メチルフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキシアミド
[M+H]+＝444。HPLC r.t.＝5.41。
【０２１９】
N-アリール-5-シクロプロピル-3-(2-ヒドロキシ-5-メトキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキシアミド
[M+H]+＝314。HPLC r.t.＝5.80。
【０２２０】
N-ベンジル-5-[2-(ジメチルアミノ)エチル]-3-(2-ヒドロキシ-5-メトキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキシアミド
[M+H]+＝394。HPLC r.t.＝4.20。
【０２２１】
5-シクロプロピル-3-(2-ヒドロキシ-5-メチルフェニル)-N-(2-フェニルエチル)-1H-ピラゾール-1-カルボキシアミド
[M+H]+＝362。HPLC r.t.＝6.90。
【０２２２】
5-[2-(ジメチルアミノ)エチル]-N-エチル-3-(2-ヒドロキシフェニル)-1H-ピラゾール-1-カルボキシアミド
[M+H]+＝302。HPLC r.t.＝3.24。
【０２２３】
N-[(5-シクロブチル-3-{2-ヒドロキシ-4-[(3-メトキシベンゾイル)アミノ]フェニル}-1H-ピラゾール-1-イル)カルボニル]グリシン酸エチル
[M+H]+＝493。HPLC r.t.＝7.27。
【０２２４】
N-[(5-シクロプロピル-3-{2-ヒドロキシ-4-[(3-メトキシベンゾイル)アミノ]フェニル}-1H-ピラゾール-1-イル)カルボニル]グリシン酸エチル
[M+H]+＝479。HPLC r.t.＝6.87。
【０２２５】
同様に操作し、以下の化合物も得られる：
【表４】
2005515209.tif 000025
【０２２６】
2005515209.tif 000026
【０２２７】
2005515209.tif 000027
【０２２８】
2005515209.tif 000028
【０２２９】
2005515209.tif 000029
【０２３０】
2005515209.tif 000030
【０２３１】
2005515209.tif 000031
【０２３２】
2005515209.tif 000032
【０２３３】
2005515209.tif 000033
【０２３４】
2005515209.tif 000034
【０２３５】
2005515209.tif 000035
【０２３６】
2005515209.tif 000036
【０２３７】
2005515209.tif 000037
【０２３８】
2005515209.tif 000038
【０２３９】
2005515209.tif 000039
【０２４０】
2005515209.tif 000040
【０２４１】
2005515209.tif 000041
【０２４２】
2005515209.tif 000042
【０２４３】
2005515209.tif 000043
【０２４４】
2005515209.tif 000044
【０２４５】
2005515209.tif 000045
【０２４６】
2005515209.tif 000046
【０２４７】
2005515209.tif 000047
【０２４８】
2005515209.tif 000048
【０２４９】
2005515209.tif 000049
【０２５０】
2005515209.tif 000050
【０２５１】
2005515209.tif 000051
【０２５２】
2005515209.tif 000052
【０２５３】
2005515209.tif 000053
【０２５４】
2005515209.tif 000054
【０２５５】
2005515209.tif 000055
【０２５６】
2005515209.tif 000056
【０２５７】
2005515209.tif 000057
【０２５８】
2005515209.tif 000058
【０２５９】
2005515209.tif 000059
【０２６０】
2005515209.tif 000060
【０２６１】
2005515209.tif 000061
【０２６２】
2005515209.tif 000062
【０２６３】
2005515209.tif 000063
【０２６４】
2005515209.tif 000064
【０２６５】
2005515209.tif 000065
【０２６６】
2005515209.tif 000066
【０２６７】
2005515209.tif 000067
【０２６８】
2005515209.tif 000068
【０２６９】
2005515209.tif 000069
【０２７０】
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【０２７１】
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【０２７２】
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【０２７３】
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【０２７４】
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【０２７５】
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【０２７６】
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【０３２８】
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【０３２９】
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【０３３０】
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【国際調査報告】
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