(57)【要約】生物学的に活性なペプチドおよびタンパク質の逆向ターン領域の二次構造を模倣する立体配置的な束縛された化合物が開示されている。このような逆向ターンミメティック構造体は、広範囲の分野（診断薬および治療薬としての使用を含む）にわたって、有用性を有する。本発明の逆向ターンミメティック構造体を含むライブラリもまた、生物学的に活性なメンバーを同定するためにそれをスクリーニングする方法と同様に、開示されている。本発明はまた、Ｗｎｔシグナル伝達経路が変調した疾患（例えば、癌（特に、結腸直腸癌）、血管形成術に伴う再狭窄、腎多嚢胞病、異常血管形成疾患、関節リウマチまたは潰瘍性大腸炎）を阻止または治療するためにこのような化合物を使用することに関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の一般式（Ｉ）を有する化合物およびそれらの立体異性体であって：
【化１】
2005505596.tif 000077
ここで、Ａは、−（ＣＨＲ３）−または−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｂは、−（ＣＨＲ４）−、−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｄは、−（ＣＨＲ５）−または−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｅは、−（ＺＲ６）−、−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｇは、−（ＸＲ７）ｎ−、−（ＣＨＲ７）−（ＮＲ８）−、−（Ｃ＝Ｏ）−（ＸＲ９）−または−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｗは、−Ｙ（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−、−（ＳＯ２）−または存在せず、Ｙは、酸素またはイオウであり、ＸおよびＺは、独立して、窒素またはＣＨであり、ｎ＝０または１であり；そしてＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ９は、同一または異なり、アミノ酸側鎖部分またはその誘導体、該分子の残部、リンカーおよび固体支持体から独立して選択される、
化合物。
【請求項２】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ９が、アミノＣ２〜５アルキル、グアニジノＣ２〜５アルキル、Ｃ１〜４アルキルグアニジノＣ２〜５アルキル、ジＣ１〜４アルキルグアニジノ−Ｃ２〜５アルキル、アミジノＣ２〜５アルキル、Ｃ１〜４アルキルアミジノＣ２〜５アルキル、ジＣ１〜４アルキルアミジノＣ２〜５アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、フェニル、置換フェニル（ここで、該置換基は、アミノ、アミジノ、グアニジノ、ヒドラジノ、アミドラゾニル、Ｃ１〜４アルキルアミノ、Ｃ１〜４ジアルキルアミノ、ハロゲン、パーフルオロＣ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、ニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリルまたはヒドロキシルの１個以上から独立して選択される）、ベンジル、置換ベンジル（ここで、該ベンジル上の置換基は、アミノ、アミジノ、グアニジノ、ヒドラジノ、アミドラゾニル、Ｃ１〜４アルキルアミノ、Ｃ１〜４ジアルキルアミノ、ハロゲン、パーフルオロＣ１〜４アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、ニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリルまたはヒドロキシルの１個以上から独立して選択される）、ナフチル、置換ナフチル（ここで、該置換基は、アミノ、アミジノ、グアニジノ、ヒドラジノ、アミドラゾニル、Ｃ１〜４アルキルアミノ、Ｃ１〜４ジアルキルアミノ、ハロゲン、パーフルオロＣ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、ニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリルまたはヒドロキシルの１個以上から独立して選択される）、ビス−フェニルメチル、置換ビス−フェニルメチル（ここで、該置換基は、アミノ、アミジノ、グアニジノ、ヒドラジノ、アミドラゾニル、Ｃ１〜４アルキルアミノ、Ｃ１〜４ジアルキルアミノ、ハロゲン、パーフルオロＣ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、ニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリルまたはヒドロキシルの１個以上から独立して選択される）、ピリジル、置換ピリジル（ここで、該置換基は、アミノ、アミジノ、グアニジノ、ヒドラジノ、アミドラゾニル、Ｃ１〜４アルキルアミノ、Ｃ１〜４ジアルキルアミノ、ハロゲン、パーフルオロＣ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、ニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリルまたはヒドロキシルの１個以上から独立して選択される）、ピリジルＣ１〜４アルキル、置換ピリジルＣ１〜４アルキル（ここで、該ピリジン置換基は、アミノ、アミジノ、グアニジノ、ヒドラジノ、アミドラゾニル、Ｃ１〜４アルキルアミノ、Ｃ１〜４ジアルキルアミノ、ハロゲン、パーフルオロＣ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、ニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリルまたはヒドロキシルの１個以上から独立して選択される）、ピリミジルＣ１〜４アルキル、置換ピリミジルＣ１〜４アルキル（ここで、該ピリミジン置換基は、アミノ、アミジノ、グアニジノ、ヒドラジノ、アミドラゾニル、Ｃ１〜４アルキルアミノ、Ｃ１〜４ジアルキルアミノ、ハロゲン、パーフルオロＣ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜３アルコキシまたはニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリルまたはヒドロキシルの１個以上から独立して選択される）、トリアジン−２−イル−Ｃ１〜４アルキル、置換トリアジン−２−イル−Ｃ１〜４アルキル（ここで、該トリアジン置換基は、アミノ、アミジノ、グアニジノ、ヒドラジノ、アミドラゾニル、Ｃ１〜４アルキルアミノ、Ｃ１〜４ジアルキルアミノ、ハロゲン、パーフルオロＣ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、ニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリルまたはヒドロキシルの１個以上から独立して選択される）、イミダゾＣ１〜４アルキル、置換イミダゾＣ１〜４アルキル（ここで、該イミダゾール置換基は、アミノ、アミジノ、グアニジノ、ヒドラジノ、アミドラゾニル、Ｃ１〜４アルキルアミノ、Ｃ１〜４ジアルキルアミノ、ハロゲン、パーフルオロＣ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、ニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリルまたはヒドロキシルの１個以上から独立して選択される）、イミダゾリニルＣ１〜４アルキル、Ｎ−アミジノピペラジニル−Ｎ−Ｃ０〜４アルキル、ヒドロキシＣ２〜５アルキル、Ｃ１〜５アルキルアミノＣ２〜５アルキル、ヒドロキシＣ２〜５アルキル、Ｃ１〜５アルキルアミノＣ２〜５アルキル、Ｃ１〜５ジアルキルアミノＣ２〜５アルキル、Ｎ−アミジノピペリジニルＣ１〜４アルキルおよび４−アミノシクロヘキシルＣ０〜２アルキルからなる群から独立して選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
請求項１に記載の化合物であって、ここで、Ａが、−（ＣＨＲ３）−であり、Ｂが、−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｄが、−（ＣＨＲ５）−であり、Ｅが、−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｇが、−（ＸＲ７）ｎ−であり、そして該化合物は、以下の一般式（ＩＩ）：
【化２】
2005505596.tif 000078
を有し、ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ７、Ｗ、Ｘおよびｎは、請求項１で定義したとおりである、
化合物。
【請求項４】
請求項１に記載の化合物であって、ここで、Ａが、−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｂが、−（ＣＨＲ４）−であり、Ｄが、−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｅが、−（ＺＲ６）−であり、Ｇが、−（Ｃ＝Ｏ）−（ＸＲ９）−であり、そして該化合物は、以下の一般式（ＩＩＩ）：
【化３】
2005505596.tif 000079
を有し、ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ９、ＷおよびＸは、請求項１で定義したとおりであり、Ｚは、窒素またはＣＨである（ＺがＣＨであるとき、Ｘは、窒素である）、
化合物。
【請求項５】
請求項１に記載の化合物であって、ここで、Ａが、−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｂが、−（ＣＨＲ４）−であり、Ｄが、−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｅが、−（ＺＲ６）−であり、Ｇが、−（ＸＲ７）ｎ−であり、そして該化合物は、以下の一般式（ＩＶ）：
【化４】
2005505596.tif 000080
を有し、ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ７、Ｗ、Ｘおよびｎは、請求項１で定義したとおりであり、そしてＺは、窒素またはＣＨである（Ｚが窒素であるとき、ｎは、０であり、そしてＺがＣＨであるとき、Ｘは、窒素でありかつｎは、０ではない）、
化合物。
【請求項６】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８またはＲ９が、固体支持体または固体支持体誘導体に結合される、請求項２に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８またはＲ９が、固体支持体または固体支持体誘導体に結合される、請求項３に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８またはＲ９が、固体支持体または固体支持体誘導体に結合される、請求項４に記載の化合物。
【請求項９】
請求項５に記載の化合物であって、ここで、該化合物が、以下の一般式（ＩＶ）：
【化５】
2005505596.tif 000081
を有し、ここで、Ｒａは、８〜１１員の二環式アリール基であり、該二環式アリール基は、窒素、酸素またはイオウから選択される１〜３個のヘテロ原子を有し得、そしてＲｂは、５〜７員の一環式アリール基であり、該一環式アリール基は、窒素、酸素またはイオウから選択される１〜２個のヘテロ原子を有し得、そして該化合物中のアリール環は、ハライド基、水酸基、シアノ基、低級アルキル基および低級アルコキシ基からなる群から選択される１個以上の置換基を有し得る、
化合物。
【請求項１０】
Ｒａが、ナフチル基、キノリニル基またはイソキノリニル基であり、そしてＲｂが、フェニル、ピリジルまたはピペリジルであり、これらの全てが、ハライド基、水酸基、シアノ基、低級アルキル基および低級アルコキシ基からなる群から選択される１個以上の置換基で置換され得る、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒａが、ナフチルであり、そしてＲｂが、フェニルであり、これらが、ハライド基、水酸基、シアノ基、低級アルキル基および低級アルコキシ基からなる群から選択される１個以上の置換基で置換され得る、請求項９に記載の化合物。
【請求項１２】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の少なくとも１種の化合物を含む、化合物のライブラリ。
【請求項１３】
請求項１に記載の化合物および薬学的に受容可能なキャリアを含有する、薬学的組成物。
【請求項１４】
前記組成物が、請求項９に記載の化合物の安全有効量および薬学的に受容可能なキャリアを含有する、請求項１３に記載の薬学的組成物。
【請求項１５】
哺乳動物被験体における腫瘍細胞の成長を阻害する方法であって、腫瘍細胞に、請求項１、３、４および５のいずれか１項に記載の組成物の安全有効量を投与する工程を包含する、
方法。
【請求項１６】
哺乳動物被験体における腫瘍細胞の成長を阻害する方法であって、腫瘍細胞に、請求項９に記載の組成物の安全有効量を投与する工程を包含する、
方法。
【請求項１７】
前記腫瘍細胞が、結腸直腸細胞である、請求項１５または１６に記載の方法。
【請求項１８】
癌を治療する方法であって、他の抗悪性腫瘍薬（例えば、５−ＦＵ、タキソール、シスプラチン、マイトマイシンＣ、テガフール、ラルチトレキシド、カペシタビンおよびイリノテカン）と併用して、被験体に、請求項１、３、４、５、９の式（Ｉ）を有する化合物の安全有効量を投与する工程を包含する、
方法。
【請求項１９】
血管形成術に伴う再狭窄を治療または予防する方法であって、それが必要な被験体に、請求項１、３、４、５または９のいずれか１項に記載の化合物の安全有効量を投与する工程を包含する、
方法。
【請求項２０】
腎多嚢胞病を治療または予防する方法であって、それが必要な被験体に、請求項１、３、４、５または９のいずれか１項に記載の化合物の安全有効量を投与する工程を包含する、
方法。
【請求項２１】
異常血管形成疾患を治療または予防する方法であって、それが必要な被験体に、請求項１、３、４、５または９のいずれか１項に記載の化合物の安全有効量を投与する工程を包含する、
方法。
【請求項２２】
関節リウマチ疾患を治療または予防する方法であって、それが必要な被験体に、請求項１、３、４、５または９のいずれか１項に記載の化合物の安全有効量を投与する工程を包含する、
方法。
【請求項２３】
潰瘍性大腸炎を治療または予防する方法であって、それが必要な被験体に、請求項１、３、４、５または９のいずれか１項に記載の化合物の安全有効量を投与する工程を包含する、
方法。
【請求項２４】
生物学的に活性な化合物を同定する方法であって、請求項１２に記載のライブラリを標的とを接触させて、該生物学的に活性な化合物を検出またはスクリーニングする工程を包含する、
方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般に、逆向ターンミメティック構造体およびそれに関連した化学ライブラリに関する。本発明はまた、癌疾患を治療する際の適用およびそれらを含有する薬学的組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
治療薬としての潜在的な活性について分子をランダムにスクリーニングすることは、長年にわたって行われており、その結果、多数の重要な薬剤が発見されている。分子生物学および計算機化学の進歩により、「合理的薬剤設計」と称することに関心が高まっているものの、このような技術は、初期に予測された程には、高速ではなく、または信頼できないことが判明している。それゆえ、最近では、ランダム薬剤スクリーニングに関心が戻っている。この目的のために、組合せ化学ライブラリの発展に基づく新しい技術および生物学的に活性なメンバーの探索においてこのようなライブラリをスクリーニングすることが特に進歩している。
【０００３】
一般に、組合せ化学ライブラリは、単に、分子の収集物である。このようなライブラリは、そのライブラリ内の化学種ごとに変わるだけでなく、それらのライブラリメンバーを作成しかつどのメンバーが対象生体標的と相互作用するかを同定するために使用される方法ごとにも、変わる。この分野は、依然として未成熟であるのに対して、ライブラリを作成しスクリーニングする方法は、既に、極めて多様で精巧になっている。例えば、種々の組合せ化学ライブラリの最近の概説では、多数のこのような技術を同定しており（Ｄｏｌｌｅ，Ｊ．Ｃｏｍ．Ｃｈｅｍ．，２（３）：３８３〜４３３，２０００）、これには、タグ化および未タグ化のライブラリメンバーの使用が挙げられる（Ｊａｎｄａ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：１０７７９〜１０７８５，１９９４）。
【０００４】
初期には、組合せ化学ライブラリは、一般に、ペプチドまたはヌクレオチド起源のメンバーに限られていた。この目的のために、Ｈｏｕｇｈｔｅｎらの技術は、「二重規定反復」方法と呼ばれるものの一例を説明しており、この方法は、スプリット合成技術によって、可溶性組合せペプチドライブラリを編集する（Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ）３５４：８４〜８６，１９９１；Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １３：４１２〜４２１，１９９２；Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．３：４０５〜４１２，１９９３）。この技術により、何千万ものメンバーを含む可溶性ペプチドライブラリが得られた。このようなライブラリは、オピオイドペプチド、例えば、メチオニン−およびロイシン−エンケファリン（Ｄｏｏｌｅｙ  ａｎｄ  Ｈｏｕｇｈｔｅｎ，Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．５２，１５０９〜１５１７，１９９３）の同定で有効であることが明らかとなっており、また、Ｎ−アシル化ペプチドライブラリは、アセタリン（これは、強力なオピオイドアンタゴニストである）を同定するのに使用されている（Ｄｏｏｌｅｙら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：１０８１１〜１０８１５，１９９３）。さらに最近では、全てのＤ−アミノ酸オピオイドペプチドライブラリが構築されており、ミュー（「μ」）オピオイドレセプタに対する鎮痛活性についてスクリーニングされている（Ｄｏｏｌｅｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６６：２０１９〜２０２２，１９９４）。
【０００５】
ペプチドおよびヌクレオチド起源のメンバーを含む組合せライブラリは、非常に有益であるのに対して、依然として、当該技術分野において、異なる起源のメンバーを含むライブラリが必要とされている。例えば、伝統的なペプチドライブラリは、大体において、ライブラリメンバーを作成するために、単に、そのアミノ酸配列を変える。ペプチドの二次構造が生物学的活性に重要であることがよく知られているのに対して、このようなペプチドライブラリは、そのライブラリメンバーに対して、束縛二次構造を与えない。
【０００６】
この目的のために、一部の研究者は、さらに束縛された二次構造を提供しようとして、ジスルフィド架橋でペプチドを環化した（Ｔｕｍｅｌｔｙら、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０６７−６８，１９９４；Ｅｉｃｈｌｅｒら、Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｒｅｓ．７：３００〜３０６，１９９４）。しかしながら、このような環化ペプチドは、一般に、依然として、極めて可撓性であり、生体利用能に乏しく、それゆえ、成功が限られている。
【０００７】
さらに最近では、生物学的に活性なタンパク質またはペプチドで見られる逆向ターンの二次構造を非常によく模倣した非ペプチド化合物が開発されている。例えば、Ｋａｈｎの米国特許第５，４４０，０１３号およびＫａｈｎの公開ＰＣＴ  ＷＯ９４／０３４９４、ＰＣＴ  ＷＯ０１／００２１０Ａ１およびＰＣＴ  ＷＯ０１／１６１３５Ａ２は、逆向ターンの三次元構造を模倣する立体配置的に束縛された非ペプチド化合物を開示している。
【０００８】
立体配置的に束縛された逆向ターンミメティックの合成および同定は、著しく進歩しているのものの、当該技術分野において、ペプチドの二次構造を模倣する小分子が依然として必要とされている。また、当該技術分野において、このようなメンバーを含むライブラリだけでなく、生物学的に活性なライブラリメンバーを同定するために、これらのライブラリメンバーを合成し、対象標的（特に、生物標的）に対してスクリーニングする技術が必要とされている。例えば、Ｋａｈｎの米国特許第５，９２９，２３７号およびその部分継続出願である米国特許第６，０１３，４５８号はまた、生物学的に活性なペプチドおよびタンパク質の逆向ターン領域の二次構造を模倣する立体配置的に束縛された化合物を開示している。立体配置的に束縛された逆向ターンミメティックの合成および同定およびそれらを疾患に適用することは、Ｏｂｒｅｃｈｔにより、十分に検討されている（Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４，１〜６８，１９９９）。
【０００９】
本発明はまた、これらの要求を満たし、さらに、生物学的に活性なペプチドおよびタンパク質の逆向ターン領域の二次構造を模倣する立体配置的に束縛された化合物を提供することにより、関連した利点を与える。
【００１０】
Ｗｎｔシグナル伝達経路は、細胞増殖、発癌および発生を含めた種々のプロセスを調節する（Ｍｏｏｎら、１９９７，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｇｅｎｅｔ．１３，１５７〜１６２：Ｍｉｌｌｅｒら、１９９９，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １８，７８６０〜７８７２：Ｎｕｓｓｅ  ａｎｄ  Ｖａｒｍｕｓ，１９９２，Ｃｅｌｌ  ６９，１０７３〜１０８７：Ｃａｄｉｇａｎ  ａｎｄ  Ｎｕｓｓｅ，１９９７，Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．１１，３２８６〜３３０５：Ｐｅｉｆｅｒ  ａｎｄ  Ｐｏｌａｋｉｓ，２０００  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８７，１６０６〜１６０９：Ｐｏｌａｋｉｓ  ２０００，Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．１４，１８３７〜１８５１）。Ｗｎｔシグナル伝達経路は、種々の生物体において、極めてよく研究されている。Ｗｎｔシグナル変換によるＴＣＦ４／β−カテニン媒介転写の活性化は、その生物学的機能において、重要な役割を果たすことが見出されている（Ｍｏｌｅｎａａｒら、１９９６，Ｃｅｌｌ  ８６，３９１〜３９９：Ｇａｔら、１９９８  Ｃｅｌｌ  ９５，６０５〜６１４：Ｏｒｆｏｒｄら、１９９９  Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１４６，８５５〜８６８）。
【００１１】
Ｗｎｔシグナルなしでは、癌抑制遺伝子である腺腫様結腸ポリポシス（ＡＰＣ）は、セリンキナーゼグリコーゲン合成酵素キナーゼ（ＧＳＫ）−３βおよびβ−カテニンと同時に相互作用する（Ｓｕら、１９９３，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６２，１７３４〜１７３７：Ｙｏｓｔら、１９９６  Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．１０，１４４３〜１４５４：Ｈａｙａｓｈｉら、１９９７，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９４，２４２〜２４７：Ｓａｋａｎａｋａら、１９９８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９５，３０２０〜３０２３：Ｓａｋａｎａｋａ  ａｎｄ  Ｗｉｌｌｉａｍ，１９９９，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ  ２７４，１４０９０〜１４０９３）。ＧＳＫ−３βによるＡＰＣのホスホリル化は、ＡＰＣとβ−カテニンとの相互作用を調節し、これは、順に、β−カテニンのシグナル伝達機能を調節し得る（Ｂ．Ｒｕｂｉｎｆｅｌｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７２，１０２３，１９９６）。Ｗｎｔシグナル伝達は、β−カテニンを安定化し、これにより、それは、核に転位でき、この場所で、リンパ増大因子（ＬＥＦ１）／Ｔ細胞因子（ＴＣＦ４）ファミリーの転写因子のメンバーと相互作用する（Ｂｅｈｒｅｎｓら、１９９６  Ｎａｔｕｒｅ  ３８２，６３８〜６４２：Ｈｓｕら、１９９８，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１８，４８０７〜４８１８：Ｒｏｏｓｅら、１９９９  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８５，１９２３〜１９２６）。
【００１２】
最近では、ｃ−ｍｙｃ（公知の発癌遺伝子）は、β−カテニン／ＴＣＦ４−媒介転写の標的遺伝子であることが明らかとなっている（Ｈｅら、１９９８  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８１  １５０９〜１５１２：Ｋｏｌｌｉｇｓら、１９９９  Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１９，５６９６〜５７０６）。多くの他の重要な遺伝子は、サイクリンＤ１およびメタロプロテイナーゼ（これらもまた、発癌に関与している）を含めて、ＴＣＦ４／β−カテニン転写経路により調節されることが確認されている（Ｃｒａｗｆｏｒｄら、１９９９，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １８，２８８３〜２８９１：Ｓｈｔｕｔｍａｎら、１９９９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．，１１，５５２２〜５５２７：Ｔｅｔｓｕ  ａｎｄ  ＭｃＣｏｎｎｉｃｋ，１９９９  Ｎａｔｕｒｅ，３９８，４２２〜４２６）。
【００１３】
さらに、Ｗｎｔシグナル伝達のいくつかの下流メディエータの過剰発現は、アポトーシスを調節することが発見されている（Ｍｏｒｉｓら、１９９６，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９３，７９５０〜７９５４：Ｈｅら、１９９９，Ｃｅｌｌ  ９９，３３５〜３４５：Ｏｒｆｏｒｄら、１９９９  Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１４６，８５５〜８６８：Ｓｔｒｏｖｅｌ  ａｎｄ  Ｓｕｓｓｍａｎ，１９９９，Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ．Ｒｅｓ．，２５３，６３７〜６４８）。ヒトの結腸直腸癌細胞におけるＡＰＣの過剰発現は、アポトーシスを誘発し（Ｍｏｒｉｓら、１９９６，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．，９３，７９５０〜７９５４）、β−カテニンの異所発現は、細胞外マトリックスへの付着の損失に関連したアポトーシスを阻害した（Ｏｒｆｏｒｄら、１９９９，Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１４６，８５５〜８６８）。ＴＣＦ４の優性ネガティブ変異体の発現によるＴＣＦ４／β−カテニン転写の阻害は、Ｗｎｔ−１媒介の細胞生存を阻止し、細胞をアポトーシス刺激（例えば、抗癌剤）に感受性にした（Ｓｈａｏｑｉｏｎｇ  Ｃｈｅｎら、２００１，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１５２，１，８７〜９６）、また、ＡＰＣ変異は、構成的なｓｕｒｖｉｖｉｎの発現（周知の抗アポトーシスタンパク質）を可能にすることにより、アポトーシスを阻害する（Ｔａｏ  Ｚｈａｎｇら、２００１，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，６２，８６６４〜８６６７）。
【００１４】
Ｗｎｔ遺伝子の変異は、ヒトの癌では発見されていないものの、ＡＰＣまたはβ−カテニンの変異は、大部分の結腸直腸癌の場合と同様に、ＴＣＦ４の不適当な活性化、ｃ−ｍｙｃの過剰発現および新生物成長の発生を引き起こす（Ｂｕｂｉｎｆｅｌｄら、１９９７，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２７５，１７９０〜１７９２：Ｍｏｒｉｎら、１９９７，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２７５，１７８７−１７９０：Ｃａｓａら、１９９９，Ｃｅｌｌ．Ｇｒｏｗｔｈ．Ｄｉｆｆｅｒ．１０，３６９−３７６）。直腸結腸癌の８５％では、癌抑制遺伝子（ＡＰＣ）は、失われるか不活性化され、種々の他の癌でも、同様である（Ｋｉｎｚｌｅｒ  ａｎｄ  Ｖｏｇｅｌｓｔｅｉｎ，１９９６，Ｃｅｌｌ  ８７，１５９〜１７０）。ＡＰＣの主要な役割は、Ｗｎｔシグナル変換カスケードの負の調節因子という役割である。この経路の中心的な特徴は、大きいＡｘｉｎベースの複合体（これは、ＡＰＣを含む）との相互作用によるβ−カテニンの細胞質ゾルプールの安定性および局在性の変調を含む。この相互作用により、β−カテニンのホスホリル化が起こり、それにより、それを分解について標的化する。
【００１５】
ＣＲＥＢ結合タンパク質（ＣＢＰ）／ｐ３００は、初期には、まず、転写因子ＣＲＥＢとの関連によって（Ｃｈｒｉｖｉａら、１９９３，Ｎａｔｕｒｅ，３６５，８５５〜８５９）、後に、アデノウイルス形質転換タンパク質Ｅ１Ａとの相互作用によって（Ｓｔｅｉｎら、１９９０，Ｊ．Ｖｉｏｌ．，６４，４４２１〜４４２７：Ｅｃｋｎｅｒら、１９９４，Ｇｅｎｅｓ．Ｄｅｖ．，８，８６９〜８８４）、タンパク質相互作用アッセイで同定された。ＣＢＰは、転写性活性化補助因子機能を含めた種々の細胞機能に関与している可能性があった（Ｓｈｉｋａｍａら、１９９７，Ｔｒｅｎｄｓ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，７，２３０〜２３６：Ｊａｎｋｎｅｃｈｔ  ａｎｄ  Ｈｕｎｔｅｒ，１９９６，Ｎａｔｕｒｅ，３８３，２２〜２３）。ＣＢＰ／ｐ３００は、ｓｉａｍｏｉｓプロモーター（公知のＷｎｔ標的）のβ−カテニン媒介活性化を増強する（Ｈｅｃｈｔら、２０００，ＥＭＢＯ  Ｊ．１９，８，１８３９〜１８５０）。β−カテニンは、ＣＢＰのＣＲＥＢ結合ドメインと直接相互作用し、そしてβ−カテニンは、ＣＢＰと相乗作用して、ＴＣＦ４／β−カテニンの転写性活性化を刺激する（Ｋｅｎ−Ｉｃｈｉ  Ｔａｋｅｍａｒｕ  ａｎｄ  Ｒａｎｄａｌｌ  Ｔ．Ｍｏｏｎ，２０００  Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１４９，２，２４９〜２５４）。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
この背景から、Ｗｎｔ経路のＴＣＦ４／β−カテニンおよびＣＢＰ複合体は、細胞増殖、発癌および細胞アポトーシスなどを調節する標的分子として、取り出すことができる。すなわち、ＣＢＰを阻害することにより、ＴＣＦ４／β−カテニン転写経路を阻止する化合物（従って、これは、癌（特に、結腸直腸癌）の治療に使用できる）が必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
（発明の開示）
本発明は、生物学的ペプチドおよびタンパク質の逆向ターン領域の二次構造を模倣する立体配置的に束縛された化合物（これはまた、本明細書中にて、「逆向ターンミメティック」とも呼ばれている）およびそれに関連した化学ライブラリに関する。本発明はまた、このような化合物を含有するライブラリだけでなく、その合成およびスクリーニングを開示している。
【００１８】
本発明の逆向ターンミメティック構造体は、生物学的に活性な薬剤として有用であり、これには、診断薬、予防薬および／または治療薬としての使用が挙げられる（が、これらに限定されない）。本発明の逆向ターンミメティック構造体ライブラリは、このような生物学的に活性な薬剤の同定に有用である。本発明を実施する際に、これらのライブラリは、数十から数百、数千（またはそれ以上）の個々の逆向ターン構造体（これはまた、本明細書中にて、「メンバー」とも呼ぶ）を含有し得る。
【００１９】
本発明の化合物は、以下の一般式（Ｉ）を有する：
【００２０】
【化６】
2005505596.tif 000002
ここで、Ａは、−（ＣＨＲ３）−または−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｂは、−（ＣＨＲ４）−または−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｄは、−（ＣＨＲ５）−または−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｅは、−（ＺＲ６）−または−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｇは、−（ＸＲ７）ｎ−、−（ＣＨＲ７）−（ＮＲ８）−、−（Ｃ＝Ｏ）−（ＸＲ９）−または−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｗは、−Ｙ（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−、−（ＳＯ２）−または存在せず、Ｙは、酸素またはイオウであり、ＸおよびＺは、別個に、窒素またはＣＨであり、ｎ＝０または１である；そしてＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ９は、同一または異なり、アミノ酸側鎖部分またはその誘導体、該分子の残部、リンカーおよび固体支持体、ならびにそれらの立体異性体から別個に選択される。
【００２１】
１実施形態では、Ａが、−（ＣＨＲ３）−であり、Ｂが、−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｄが、−（ＣＨＲ５）−であり、Ｅが、−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｇが、−（ＸＲ７）ｎ−であり、そして本発明の化合物が、以下の一般式（ＩＩ）を有する：
【００２２】
【化７】
2005505596.tif 000003
ここで、Ｗ、Ｙおよびｎは、上で定義したとおりであり、そしてＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５およびＲ７は、以下の詳細な説明で定義したとおりである。
【００２３】
Ａが、−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｂが、−（ＣＨＲ４）−であり、Ｄが、−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｅが、−（ＺＲ６）−であり、Ｇが、−（Ｃ＝Ｏ）−（ＸＲ９）−である実施形態において、本発明の化合物が、以下の一般式（ＩＩＩ）を有する：
【００２４】
【化８】
2005505596.tif 000004
ここで、Ｗ、Ｙおよびｎは、上で定義したとおりであり、そしてＺは、窒素またはＣＨであり（ＺがＣＨであるとき、Ｘは、窒素である）、そしてＲ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ６およびＲ９は、以下の詳細な説明で定義したとおりである。
【００２５】
Ａが、−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｂが、−（ＣＨＲ４）−であり、Ｄが、−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｅが、−（ＺＲ６）−であり、Ｇが、（ＸＲ７）ｎ−である実施形態において、本発明の化合物が、以下の一般式（ＩＶ）を有する：
【００２６】
【化９】
2005505596.tif 000005
ここで、Ｗ、Ｙおよびｎは、上で定義したとおりであり、Ｚは、窒素またはＣＨであり（Ｚが窒素であるとき、ｎは、０であり、そしてＺがＣＨであるとき、Ｘは、窒素であり、そしてｎは、０ではない）、そしてＲ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ６およびＲ７は、以下の詳細な説明で定義したとおりである。
【００２７】
本発明はまた、上記式（Ｉ）の化合物を含むライブラリだけでなく、このようなライブラリを合成する方法およびそれをスクリーニングして生体活性化合物を同定する方法に関する。本発明の化合物を含有する組成物もまた、薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤と組み合わせて、開示されている。
【００２８】
特に、本発明は、それらを含有する薬学的組成物に関し、これは、Ｗｎｔシグナル伝達経路に関連した癌を含めた障害を治療する。それは、さらに、Ｗｎｔシグナル伝達経路に関連した癌を含めた障害を処置する方法に関する。
【００２９】
本発明のこれらの局面および他の局面は、添付の図面および以下の詳細な説明を参照すると、明らかとなる。この目的のために、本明細書中では、種々の参考文献が述べられており、これらは、特定の手順、化合物および／または組成物をさらに詳細に記述しており、その内容は、本明細書中で参考として援用されている。
【００３０】
以下では、本発明を詳細に説明する。
【００３１】
本発明の１局面では、以下の式（Ｉ）を有する逆向ターンミメティック構造体が開示されている：
【００３２】
【化１０】
2005505596.tif 000006
ここで、Ａは、−（ＣＨＲ３）−または−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｂは、−（ＣＨＲ４）−、−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｄは、−（ＣＨＲ５）−または−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｅは、−（ＺＲ６）−、−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｇは、−（ＸＲ７）ｎ−、−（ＣＨＲ７）−（ＮＲ８）−、−（Ｃ＝Ｏ）−（ＸＲ９）−または−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｗは、−Ｙ（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−、−（ＳＯ２）−または存在せず、Ｙは、酸素またはイオウであり、ＸおよびＺは、別個に、窒素またはＣＨであり、ｎ＝０または１である；そしてＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ９は、同一または異なり、アミノ酸側鎖部分またはその誘導体、該分子の残部、リンカーおよび固体支持体、ならびにそれらの立体異性体から別個に選択される。
【００３３】
さらに特定すると、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ９は、別個に、アミノＣ２〜５アルキル、グアニジノＣ２〜５アルキル、Ｃ１〜４アルキルグアニジノＣ２〜５アルキル、ジＣ１〜４アルキルグアニジノ−Ｃ２〜５アルキル、アミジノＣ２〜５アルキル、Ｃ１〜４アルキルアミジノＣ２〜５アルキル、ジＣ１〜４アルキルアミジノＣ２〜５アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、フェニル、置換フェニル（ここで、該置換基は、別個に、アミノ、アミジノ、グアニジノ、ヒドラジノ、アミドラゾニル、Ｃ１〜４アルキルアミノ、Ｃ１〜４ジアルキルアミノ、ハロゲン、パーフルオロＣ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、ニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリルまたはヒドロキシルの１個またはそれ以上から選択される）、ベンジル、置換ベンジル（ここで、該ベンジル上の置換基は、別個に、アミノ、アミジノ、グアニジノ、ヒドラジノ、アミドラゾニル、Ｃ１〜４アルキルアミノ、Ｃ１〜４ジアルキルアミノ、ハロゲン、パーフルオロＣ１〜４アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、ニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリルまたはヒドロキシルの１個またはそれ以上から選択される）、ナフチル、置換ナフチル（ここで、該置換基は、別個に、アミノ、アミジノ、グアニジノ、ヒドラジノ、アミドラゾニル、Ｃ１〜４アルキルアミノ、Ｃ１〜４ジアルキルアミノ、ハロゲン、パーフルオロＣ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、ニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリルまたはヒドロキシルの１個またはそれ以上から選択される）、ビス−フェニルメチル、置換ビス−フェニルメチル（ここで、該置換基は、別個に、アミノ、アミジノ、グアニジノ、ヒドラジノ、アミドラゾニル、Ｃ１〜４アルキルアミノ、Ｃ１〜４ジアルキルアミノ、ハロゲン、パーフルオロＣ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、ニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリルまたはヒドロキシルの１個またはそれ以上から選択される）、ピリジル、置換ピリジル（ここで、該置換基は、別個に、アミノ、アミジノ、グアニジノ、ヒドラジノ、アミドラゾニル、Ｃ１〜４アルキルアミノ、Ｃ１〜４ジアルキルアミノ、ハロゲン、パーフルオロＣ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、ニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリルまたはヒドロキシルの１個またはそれ以上から選択される）、ピリジルＣ１〜４アルキル、置換ピリジルＣ１〜４アルキル（ここで、該ピリジン置換基は、別個に、アミノ、アミジノ、グアニジノ、ヒドラジノ、アミドラゾニル、Ｃ１〜４アルキルアミノ、Ｃ１〜４ジアルキルアミノ、ハロゲン、パーフルオロＣ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、ニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリルまたはヒドロキシルの１個またはそれ以上から選択される）、ピリミジルＣ１〜４アルキル、置換ピリミジルＣ１〜４アルキル（ここで、該ピリミジン置換基は、別個に、アミノ、アミジノ、グアニジノ、ヒドラジノ、アミドラゾニル、Ｃ１〜４アルキルアミノ、Ｃ１〜４ジアルキルアミノ、ハロゲン、パーフルオロＣ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜３アルコキシまたはニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリルまたはヒドロキシルの１個またはそれ以上から選択される）、トリアジン−２−イル−Ｃ１〜４アルキル、置換トリアジン−２−イル−Ｃ１〜４アルキル（ここで、該トリアジン置換基は、別個に、アミノ、アミジノ、グアニジノ、ヒドラジノ、アミドラゾニル、Ｃ１〜４アルキルアミノ、Ｃ１〜４ジアルキルアミノ、ハロゲン、パーフルオロＣ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、ニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリルまたはヒドロキシルの１個またはそれ以上から選択される）、イミダゾＣ１〜４アルキル、置換イミダゾＣ１〜４アルキル（ここで、該イミダゾール置換基は、別個に、アミノ、アミジノ、グアニジノ、ヒドラジノ、アミドラゾニル、Ｃ１〜４アルキルアミノ、Ｃ１〜４ジアルキルアミノ、ハロゲン、パーフルオロＣ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、ニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリルまたはヒドロキシルの１個またはそれ以上から選択される）、イミダゾリニルＣ１〜４アルキル、Ｎ−アミジノピペラジニル−Ｎ−Ｃ０〜４アルキル、ヒドロキシＣ２〜５アルキル、Ｃ１〜５アルキルアミノＣ２〜５アルキル、ヒドロキシＣ２〜５アルキル、Ｃ１〜５アルキルアミノＣ２〜５アルキル、Ｃ１〜５ジアルキルアミノＣ２〜５アルキル、Ｎ−アミジノピペリジニルＣ１〜４アルキルおよび４−アミノシクロヘキシルＣ０〜２アルキルからなる群から選択される。
【００３４】
１実施形態では、ＥのＲ１、Ｒ２、Ｒ６、およびＧのＲ７、Ｒ８およびＲ９は、同一または異なり、前記化合物の残部を表わし、そしてＡのＲ３、ＢのＲ４またはＤのＲ５は、アミノ酸側鎖部分またはその誘導体から選択される。本明細書中で使用する「前記化合物の残部」との用語は、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８および／またはＲ９位置で逆向ターンミメティック構造体に共有結合した任意の部分、試薬、化合物、支持体、分子、リンカー、アミノ酸、ペプチドまたはタンパク質を意味する。この用語はまた、アミノ酸側鎖部分およびそれらの誘導体を含む。
【００３５】
本明細書中で使用する「アミノ酸側鎖部分」との用語は、天然に生じるタンパク質中で存在しているアミノ酸側鎖部分を表わし、これには、表１で確認した天然に存在するアミノ酸側鎖部分が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の他の天然に存在するアミノ酸側鎖部分には、３，５−ジブロモチロシン、３，５−ジヨードチロシン、ヒドロキシリジン、γ−カルボキシグルタメート、ホスホチロシンおよびホスホセリンが挙げられるが、これらに限定されない。それに加えて、本発明を実施する際には、グリコシル化アミノ酸側鎖もまた使用され得、これには、グルコシル化スレオニン、セリンおよびアスパラギンが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３６】
【化１１】
2005505596.tif 000007
2005505596.tif 000008
天然に存在するアミノ酸側鎖部分に加えて、本発明のアミノ酸側鎖部分には、また、それらの種々の誘導体が挙げられる。本明細書中で使用するアミノ酸側鎖部分の「誘導体」には、天然に存在するアミノ酸側鎖部分の改変体および／または変形体が挙げられる。例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシンおよびフェニルアラニンのアミノ酸側鎖部分は、一般に、低鎖アルキル、アリールまたはアリールアルキル部分として、分類され得る。アミノ酸側鎖部分の誘導体には、他の直鎖または分枝、環式または非環式の置換または非置換で飽和または不飽和の低鎖アルキル、アリールまたはアリールアルキル部分が挙げられる。
【００３７】
本明細書中で使用する「低級鎖アルキル部分」は、１〜１２個の炭素原子を含有し、「低級鎖アリール部分」は、６〜１２個の炭素原子を含有し、そして「低級鎖アラルキル部分」は、７〜１２個の炭素原子を含有する。それゆえ、１実施形態では、このアミノ酸側鎖誘導体は、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ６〜１２アリールおよびＣ７〜１２アリールアルキルから選択され、好ましい１実施形態では、Ｃ１〜７アルキル、Ｃ６〜１０アリールおよびＣ７〜１１アリールアルキルから選択される。
【００３８】
本発明のアミノ側鎖誘導体は、さらに、低級鎖アルキル、アリールおよびアリールアルキル部分の置換誘導体を含有し、ここで、この置換基は、以下の化学部分の１個またはそれ以上から選択されるが、これらに限定されない：−ＯＨ、−ＯＲ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＲ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＨ２、−ＮＨＲ、−ＮＲＲ、−ＳＨ、−ＳＲ、−ＳＯ２Ｒ、−ＳＯ２Ｈ、−ＳＯＲおよびハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、ＢｒおよびＩを含めて）であって、ここで、Ｒの各出現例は、別個に、直鎖または分枝、環式または非環式の置換または非置換で飽和または不飽和の低級鎖アルキル、低級鎖アリールおよび低級鎖アラルキル部分から選択される。さらに、本発明の環式の低級鎖アルキル、低級鎖アリールおよび低級鎖アリールアルキル部分には、ナフタレンだけでなく、複素環化合物（例えば、チオフェン、ピロール、フラン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、ピラゾール、３−ピロリン、ピロリジン、ピリジン、ピリミジン、プリン、キノリン、イソキノリンおよびカルバゾール）が挙げられる。アミノ酸側鎖部分誘導体には、さらに、低級鎖アルキルおよび低級鎖アラルキル部分のアルキル部分のヘテロアルキル誘導体が挙げられ、これには、アルキルホスホネートおよびアラルキルホスホネートならびにアルキルシランおよびアラルキルシランが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３９】
代表的なＲ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ９部分には、具体的には、−ＯＨ、−ＯＲ、−ＣＯＲ、−ＣＯＯＲ、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＲ、−ＣＯＮＲＲ、−ＮＨ２、−ＮＨＲ、−ＮＲＲ、−ＳＯ２Ｒおよび−ＣＯＳＲが挙げられるが、これらに限定されず、ここで、Ｒの各出現例は、上で定義したとおりである。
【００４０】
さらに他の実施形態では、アミノ酸側鎖部分またはその誘導体（またはＲ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ９の場合、その化合物の残部）に加えて、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ９は、この化合物と他の部分または化合物との連結を促進するリンカーであり得る。例えば、本発明の化合物は、診断アッセイまたはスクリーニングアッセイで使用するために、１種またはそれ以上の公知化合物（例えば、ビオチン）と結合され得る。さらに、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ９は、その化合物を固体支持体（例えば、固相ペプチド合成で使用される支持体）と接合するリンカーであり得、あるいは、その支持体それ自体であり得る。この実施形態では、他の部分または化合物との連結または固体支持体との連結は、好ましくは、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ７およびＲ８位置であり、さらに好ましくは、Ｒ１またはＲ２位置である。
【００４１】
Ａが、−（ＣＨＲ３）−であり、Ｂが、−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｄが、−（ＣＨＲ５）−であり、Ｅが、−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｇが、−（ＸＲ７）ｎ−である実施形態において、本発明の逆向ターンミメティック化合物が、以下の一般式（ＩＩ）を有する：
【００４２】
【化１２】
2005505596.tif 000009
ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ７、Ｗ、Ｘおよびｎは、上で定義したとおりである。好ましい実施形態では、Ｒ１、Ｒ２およびＲ７は、化合物の残部であり、そしてＲ３またはＲ５は、アミノ酸側鎖部分から選択される。
【００４３】
Ａが、−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｂが、−（ＣＨＲ４）−であり、Ｄが、−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｅが、−（ＺＲ６）−であり、Ｇが、−（Ｃ＝Ｏ）−（ＸＲ９）−である実施形態において、本発明の逆向ターンミメティック化合物が、以下の一般式（ＩＩＩ）を有する：
【００４４】
【化１３】
2005505596.tif 000010
ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ９、ＷおよびＸは、上で定義したとおりであり、そしてＺは、窒素またはＣＨである（ＺがＣＨであるとき、Ｘは、窒素である）。好ましい実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ６およびＲ９は、化合物の残部であり、そしてＲ４は、アミノ酸側鎖部分から選択される。さらに特定の実施形態では、Ａが、−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｂが、−（ＣＨＲ４）−であり、Ｄが、−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｅが、−（ＺＲ６）−であり、Ｇが、−（ＸＲ７）ｎ−であり、そして本発明の逆向ターンミメティック化合物が、以下の一般式（ＩＶ）を有する：
【００４５】
【化１４】
2005505596.tif 000011
ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ７、Ｗ、Ｘおよびｎは、上で定義したとおりであり、そしてＺは、窒素またはＣＨである（Ｚが窒素であるとき、ｎは、０であり、そしてＺがＣＨであるとき、Ｘは、窒素であり、そしてｎは、０ではない）。好ましい実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ６およびＲ７は、化合物の残部であり、そしてＲ４は、アミノ酸側鎖部分から選択される。この場合、Ｒ６またはＲ７は、ＺおよびＸがＣＨのとき、それぞれ、アミノ酸側鎖部分から選択される。
【００４６】
本発明の逆向ターンミメティック構造体は、適当な出発成分分子（以下、「成分片」と呼ぶ）を利用することにより、調製され得る。要約すると、式（ＩＩ）を有する逆向ターンミメティック構造体の合成では、第一および第二成分片がカップリングされて、化合第一−第二中間体を形成し、もし必要なら、第三および／または第四成分片がカップリングされて、化合第三−第四中間体を形成し（または、もし市販されているなら、単一の第三中間体が使用され得る）、化合第一−第二中間体および第三−第四中間体（または第三中間体）は、次いで、カップリングされて、例えば、第一−第二−第三−第四中間体（または、第一−第二−第三中間体）を形成し、これは、環化されて、本発明の逆向ターンミメティック構造体が得られる。あるいは、式（ＩＩ）の逆向ターンミメティック構造体は、個々の成分片を、溶液中にて段階的に、または固相ペプチド合成で一般的に実施されているような固相合成により、いずれかで連続的にカップリングすることにより、調製され得る。
【００４７】
本発明の状況では、「第一成分片」は、以下の式Ｓ１を有する：
【００４８】
【化１５】
2005505596.tif 000012
ここで、Ｒ２は、上で定義したとおりであり、そしてＲは、ペプチド合成で使用するのに適当な保護基である。適当なＲ基には、アルキル基が挙げられ、好ましい実施形態では、Ｒは、メチル基である。このような第一成分片は、ＣＨ（ＯＲ）２−ＣＨＯまたはＣＨ（ＯＲ）２−ＣＨ２−Ｈａｌ（ここで、Ｈａｌは、ハロゲン原子を意味する）からＨ２Ｎ−Ｒ２を置換することによって、還元アミノ化または置換反応により、容易に合成され得る。
【００４９】
本発明の「第二成分片」は、以下の式Ｓ２を有する：
【００５０】
【化１６】
2005505596.tif 000013
ここで、Ｌ１は、カルボキシル活性化基（例えば、ハロゲン原子）であり、Ｒ４は、上で定義したとおりであり、そしてＰは、ペプチド合成で使用するのに適当なアミノ保護基である。好ましい保護基には、ｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、ｔ−ブチルオキシカルボニル（ＢＯＣ）、メチルオキシカルボニル（ＭＯＣ）、９Ｈ−フルオレニルメチルオキシカルボニル（ＦＭＯＣ）およびアリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）が挙げられる。Ｌが−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲであるとき、−ＮＨＲは、カルボニル保護基であり得る。Ｎ−保護アミノ酸は、市販されている。例えば、ＦＭＯＣアミノ酸は、種々の供給源から入手できる。これらの化合物の本発明の第二成分片への変換は、そのＮ−保護アミノ酸のカルボン酸基を活性化することにより、容易に達成され得る。適当な活性化カルボン酸には、酸ハロゲン化物（ここで、Ｘは、ハロゲン化物（例えば、塩化物または臭化物）である）、酸無水物（例えば、ここで、Ｘは、アシル基（例えば、アセチル）である）、反応性エステル（例えば、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルおよびペンタフルオロフェニルエステル）および他の活性化中間体（例えば、カルボジイミド（例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ））を使用するカップリング反応で形成される活性中間体）が挙げられる。
【００５１】
アミノ酸のアジド誘導体を第二成分片として供する場合、このような化合物は、Ｚａｌｏｏｍら（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．４６：５１７３−７６，１９８１）で開示された反応により、対応するアミノ酸から調製され得る。
【００５２】
あるいは、本発明の第一片は、以下の式Ｓ１’を有し得る：
【００５３】
【化１７】
2005505596.tif 000014
ここで、Ｒは、上で定義したとおりであり、そしてＬ２は、脱離基（例えば、ハロゲン原子またはトシル基）であり、そして本発明の第二片は、以下の式Ｓ２’を有し得る：
【００５４】
【化１８】
2005505596.tif 000015
ここで、Ｒ２、Ｒ３およびＰは、上で定義したとおりである。
【００５５】
本発明の「第三成分片」は、以下の式Ｓ３ａまたはＳ３ｂを有する：
【００５６】
【化１９】
2005505596.tif 000016
ここで、Ｇ、Ｅ、Ｌ１およびＬ２は、上で定義したとおりである。適当な第三成分片は、種々の供給源から市販されているか、または有機化学における任意の公知方法により調製できる。
【００５７】
さらに具体的には、式（ＩＩ）の本発明の逆向ターンミメティック構造体は、第一成分片を第二成分片と反応させて化合第一−第二中間体を形成することにより、続いて、化合第一−第二中間体を順次に第三成分片と反応させて化合第一−第二−第三−第四中間体を提供することにより、第２成分片２と結合させて、次いで、この中間体を環化して、この逆向ターンミメティック構造体を得ることにより、合成される。
【００５８】
構造Ｉ’を有する逆向ターンの一般的な合成は、以下の技術により、合成され得る。第一成分片１は、以下で図示しているように、カップリング試薬（例えば、ホスゲン）を使用することにより、Ｎ−脱保護後、化合第一−第二中間体１−２が得られる：
【００５９】
【化２０】
2005505596.tif 000017
ここで、Ｒ、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ７、Ｆｍｏｃ、ＭｏｃおよびＸは、上で定義したとおりであり、そしてＰｏｌは、重合体支持体を表わす。
【００６０】
本発明の代表的な成分片の合成は、調製実施例および加工実施例で記述されている。
【００６１】
式（ＩＩＩ）および（ＩＶ）の逆向ターンミメティック構造体は、それらの成分片を適当に修飾すること以外は、上で開示したモジュラー成分合成と類似の技術により、製造され得る。
【００６２】
上述のように、Ｋａｈｎらの米国特許第６，０１３，４５８号の逆向ターンミメティックは、生物学的に活性な薬剤（例えば、診断薬、予防薬および／または治療薬）として有用である。代表的な逆向ターンミメティックのオピエートレセプタ結合活性は、該米国特許第６，０１３，４５８号の実施例９で提示されており、ここで、本発明の逆向ターンミメティックは、δおよびμオピエートに対する放射標識エンケファリン誘導体の結合を有効に阻害することが発見され、そのデータは、レセプタアゴニストおよび潜在的鎮痛薬としてのこれらの逆向ターンミメティックの有用性を立証している。
【００６３】
本発明の逆向ターンミメティック構造体は、生物学的に活性な薬剤（例えば、診断薬、予防薬および治療薬）として有用である。
【００６４】
従って、本発明による化合物は、逆向ターンミメティック構造体を有するので、温血動物において細胞シグナル伝達転写因子関連ペプチドを調節するのに有用であり得、これは、この動物に、式（Ｉ）の化合物の有効量を投与する工程を包含する。
【００６５】
さらに、本発明の逆向ターンミメティック構造体はまた、温血動物のＰＴＢドメインにペプチドが結合するのを阻害するのに、温血動物のＧタンパク質共役レセプタ（ＧＰＣＲ）およびイオンチャンネルを変調するのに、温血動物のサイトカインを変調するのに、有効でもあり得る。
【００６６】
ところで、式（Ｉ）の化合物（特に、式（ＶＩ）の化合物）は、Ｗｎｔシグナル伝達経路により変調された疾患（例えば、癌、特に、直腸結腸癌）を阻止または治療するのに有効であることが見出される。
【００６７】
【化２１】
2005505596.tif 000018
ここで、Ｒａは、８〜１１個の環員を有する二環式アリール基であり、これは、窒素、酸素またはイオウから選択される１〜３個のヘテロ原子を有し得、そしてＲｂは、５〜７個の環員を有する一環式アリール基であり、これは、窒素、酸素またはイオウから選択される１〜２個のヘテロ原子を有し得、その化合物中のアリール環は、ハロゲン化物基、水酸基、シアノ基、低級アルキル基および低級アルコキシ基からなる群から選択される１個以上の置換基を有し得る。
【００６８】
従って、本発明の目的は、一般式（ＶＩ）を有する化合物の安全かつ有効な量および薬学的に受容可能なキャリアを含有する薬学的組成物を提供することにあり、Ｗｎｔシグナル伝達経路（特に、ＴＣＦ４−β−カテニン−ＣＢＰ複合体）により変調される障害を処置するのに使用できる。
【００６９】
さらに、本発明は、本発明の上記組成物を使用することにより腫瘍細胞の増殖を阻止する方法；本発明の上記組成物を使用することにより腫瘍細胞のアポトーシスを誘発する方法；本発明の上記組成物を使用することによりＴＣＦ４−β−カテニン−ＣＢＰ複合体により変調される疾患を処置する方法；ならびに他の抗癌剤（例えば、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、タキソール、シスプラチン、マイトマイシンＣ、テガフール、ラルチトレキシド、カペシタビンおよびイリノテカンなど）と共に本発明の組成物を投与することにより癌（例えば、直腸結腸癌）を処置する方法を提供することにある。
【００７０】
本発明の好ましい実施形態では、本発明の化合物は、以下のような（６Ｓ，１０Ｒ）−立体配置を有する：
【００７１】
【化２２】
2005505596.tif 000019
ここで、ＲａおよびＲｂは、上で定義した同じ意味を有する。
【００７２】
本発明の別の局面では、本発明の逆向ターンミメティック構造体を含むライブラリが開示されている。本発明のライブラリは、一旦、組み立てられると、生体活性を有する個々のメンバーを識別するために、スクリーニングされ得る。これらのライブラリの生体活性メンバーについてのこのようなスクリーニングは、例えば、そのライブラリのメンバーの結合活性を評価する工程またはライブラリメンバーが機能アッセイに対して有する効果を評価する工程を包含し得る。スクリーニングは、通常、これらのライブラリメンバー（またはライブラリメンバーのサブセット）を目的の標的（例えば、抗体、酵素、レセプタまたは細胞株）と接触させることにより、達成される。ライブラリメンバー（これらは、目的の標的と相互作用できる）は、本明細書中にて、「生体活性ライブラリメンバー」または「生体活性ミメティック」と呼ばれている。例えば、生体活性ミメティックは、抗体またはレセプタに結合できるライブラリメンバーであり得、これは、酵素を阻害できるか、例えば、細胞系に関連した機能応答を誘発またはアンタゴナイズできる。言い換えれば、本発明のライブラリのスクリーニングは、どのライブラリメンバーが１個以上の目的の生物学的標的と相互作用できるかを決定する。さらに、相互作用が起こるとき、その生体活性ミメティックは、次いで、それらのライブラリメンバーから同定され得る。このライブラリから単一（または限定数）の生体活性ミメティックを同定すると、逆向ターンミメティック構造体が得られ、これらは、それ自体、生体活性であり、それゆえ、診断薬、予防薬または治療薬として有用であり、さらに、これらの分野でのリード化合物の同定を著しく促進するのに使用され得る。
【００７３】
本発明のライブラリのペプチドミメティックの合成は、本発明の第一、第二および第三成分片と組み合わせて、公知のペプチド合成技術を使用して、達成され得る。さらに具体的には、立体配置的に束縛された逆向ターンミメティックのＮ−末端および／またはＣ−末端には、アミノ酸配列が付加され得る。この目的のために、これらのミメティックは、固体支持体（例えば、ＰＡＭ樹脂）上で、公知技術（例えば、Ｊｏｈｎ  Ｍ．Ｓｔｅｗａｒｔ  ａｎｄ  Ｊａｎｉｓ  Ｄ．Ｙｏｕｎｇ，Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，１９８４，Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ．を参照）により、またはシリル連結樹脂上にて、アルコール結合（Ｒａｎｄｏｌｐｈら、Ｊ．Ａｍ  Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１７：５７１２−１４，１９９５を参照のこと）により、合成され得る。
【００７４】
それに加えて、溶液合成技術および固相合成技術の両方の組合せは、本発明のペプチドミメティックを合成するのに利用され得る。例えば、固体支持体は、この配列に立体配置的に束縛された逆向ターンを加える点まで、その直鎖ペプチド配列を合成するのに利用され得る。固相合成技術により以前に合成された適当な立体配置的に束縛された逆向ターンミメティック構造体は、次いで、その固相合成の次の「アミノ酸」として加えられ得る（すなわち、この立体配置的に束縛された逆向ターンミメティックは、Ｎ−末端およびＣ−末端の両方を有するが、その直鎖ペプチドに加えられる次のアミノ酸として、利用され得る）。この配列に、この立体配置的に束縛された逆向ターンミメティック構造体を取り込むと、次いで、追加アミノ酸が加えられ得、その固体支持体に結合されたペプチドが完成する。あるいは、これらの直鎖Ｎ−末端およびＣ−末端保護ペプチド配列は、固体支持体上で合成され、その支持体から除去され、次いで、公知の溶液カップリング技術を使用して、溶液中にて、この立体配置的に束縛された逆向ターンミメティック構造体にカップリングされ得る。
【００７５】
本発明の他の局面では、これらのライブラリを構成する方法が開示されている。伝統的な組合せ化学技術（例えば、Ｇａｌｌｏｐら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：１２３３〜１２５１，１９９４を参照）により、基本分子足場に試薬を連続的に組み合わせることで、膨大な数の化合物を迅速に調製することが可能となる。組合せ技術は、天然に生じるアミノ酸から誘導されたペプチドライブラリを構築するのに使用され得る。例えば、２０種の適当に保護した異なるアミノ酸の２０種の混合物を取り出すことにより、そして各々を２０種のアミノ酸のうちの１種とカップリングすることにより、４００種（すなわち、２０２）のジペプチドのライブラリが作り出される。この手順を７回繰り返すと、約２６０億（すなわち、２０８）のオクタペプチドから構成されるペプチドライブラリが調製される。
【００７６】
具体的には、本発明のライブラリのペプチドミメティックの合成は、公知のペプチド合成技術（例えば、以下のような［４，４，０］逆向ターンミメティックライブラリの一般図式）を使用して、達成され得る：
【００７７】
【化２３】
2005505596.tif 000020
本発明のライブラリのペプチドミメティックの合成は、公知技術により、ＦｌｅｘＣｈｅｍ  Ｒｅａｃｔｏｒ  Ｂｌｏｃｋ（これは、９６ウェルプレートを有する）を使用して、達成した。上記図式では、「Ｐｏｌ」は、ブロモアセタール樹脂（Ａｄｖａｎｃｅｄ  ＣｈｅｍＴｅｃｈ）を表わし、詳細な手順は、以下で説明する。
【００７８】
（工程１）
ブロモアセタール樹脂（３７ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ／ｇ）およびＲ２−アミンのＤＭＳＯ溶液（１．４ｍＬ）を、９６ウェルプレートを有するＲｏｂｂｉｎｓブロック（ＦｌｅｘＣｈｅｍ）に入れた。その反応混合物を、回転オーブン［Ｒｏｂｂｉｎｓ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ］を使用して、６０℃で、１２時間振盪した。この樹脂を、ＤＭＦ、ＭｅＯＨで洗浄し、次いで、ＤＣＭで洗浄した。
【００７９】
（工程２）
この樹脂に、市販のＦｍｏｃＡｍｉｎｏ  Ａｃｉｄｓ（４当量）、ＰｙＢｏｂ（４当量）、ＨＯＡｔ（４当量）およびＤＩＥＡ（１２当量）のＤＭＦ溶液を加えた。その反応混合物を、室温で、１２時間振盪した後、この樹脂を、ＤＭＦ、ＭｅＯＨで洗浄し、次いで、ＤＣＭで洗浄した。
【００８０】
（工程３）
反応前にＤＭＦで膨潤した樹脂に、ＤＭＦ中の２５％ピペリジンを加え、その反応混合物を、室温で、３０分間振盪した。この脱保護工程を再度繰り返し、この樹脂をＤＭＦ、ＭｅＯＨで洗浄し、次いで、ＤＣＭで洗浄した。この樹脂に、ヒドラジン酸（４当量）、ＨＯＢｔ（４当量）およびＤＩＣ（４当量）のＤＭＦ溶液を加え、その反応混合物を、室温で、１２時間振盪した。この樹脂を、ＤＭＦ、ＭｅＯＨで洗浄し、次いで、ＤＣＭで洗浄した。
【００８１】
（工程４ａ（この場合、ヒドラジン酸は、ＭＯＣカーバメートである））
工程３で得た樹脂を、室温で、１８時間にわたって、ギ酸（各ウェルに１．２ｍＬ）で処理した。この樹脂を濾過で除去した後、その濾液を、ＳｐｅｅｄＶａｃ［ＳＡＶＡＮＴ］を使用して、減圧下にて縮合し、オイルとして、その生成物を得た。この生成物を５０％水／アセトニトリルで希釈し、次いで、凍結後に凍結乾燥した。
【００８２】
（工程４ｂ（この場合、Ｆｍｏｃヒドラジン酸を使用して、イソシアネートによって尿素を製造する））
反応前にＤＭＦで膨潤した樹脂に、ＤＭＦ中の２５％ピペリジンを加え、その反応混合物を、室温で、３０分間振盪した。この脱保護工程を再度繰り返し、この樹脂をＤＭＦ、ＭｅＯＨで洗浄し、次いで、ＤＣＭで洗浄した。反応前にＤＣＭで膨潤した樹脂に、ＤＣＭ中のイソシアネート（５当量）を加えた。その反応混合物を、室温で、１２時間振盪した後、この樹脂を、ＤＭＦ、ＭｅＯＨで洗浄し、次いで、ＤＣＭで洗浄した。その樹脂を、室温で、１８時間にわたって、ギ酸（各ウェルに１．２ｍＬ）で処理した。この樹脂を濾過で除去した後、その濾液を、ＳｐｅｅｄＶａｃ［ＳＡＶＡＮＴ］を使用して、減圧下にて縮合し、オイルとして、その生成物を得た。この生成物を５０％水／アセトニトリルで希釈し、次いで、凍結後に凍結乾燥した。
【００８３】
（工程４ｃ（この場合、Ｆｍｏｃヒドラジン酸を使用して、活性カーバメートによって尿素を製造する））
反応前にＤＭＦで膨潤した樹脂に、ＤＭＦ中の２５％ピペリジンを加え、その反応混合物を、室温で、３０分間振盪した。この脱保護工程を再度繰り返し、この樹脂をＤＭＦ、ＭｅＯＨで洗浄し、次いで、ＤＣＭで洗浄した。反応前にＤＣＭで膨潤した樹脂に、ＤＣＭ中のｐ−ニトロフェニルクロロホルメート（５当量）およびジイソプロピルエチルアミン（５当量）を加えた。その反応混合物を、室温で、１２時間振盪した後、この樹脂を、ＤＭＦ、ＭｅＯＨで洗浄し、次いで、ＤＣＭで洗浄した。この樹脂に、室温で、１２時間にわたって、ＤＣＭ中の第一級アミドを加え、その樹脂を、ＤＭＦ、ＭｅＯＨで洗浄し、次いで、ＤＣＭで洗浄した。その樹脂を、室温で、１８時間にわたって、ギ酸（各ウェルに１．２ｍＬ）で処理した。この樹脂を濾過で除去した後、その濾液を、ＳｐｅｅｄＶａｃ［ＳＡＶＡＮＴ］を使用して、減圧下にて縮合し、オイルとして、その生成物を得た。この生成物を５０％水／アセトニトリルで希釈し、次いで、凍結後に凍結乾燥した。
【００８４】
これらのブロックライブラリを作成するために、調製実施例で説明した手順に従って、重要な中間体ヒドラジン酸を合成した。
【００８５】
表２は、本発明に従って調製できる［４，４，０］逆向ターンミメティックライブラリを示し、その代表的な調製は、実施例４で示す。
【００８６】
【化２４】
2005505596.tif 000021
2005505596.tif 000022
2005505596.tif 000023
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2005505596.tif 000031
2005505596.tif 000032
それに加えて、本発明のライブラリのペプチドミメティックの合成は、以下のような［４，３，０］逆向ターンミメティックライブラリの一般的スキームを使用して、達成され得る：
【００８７】
【化２５】
2005505596.tif 000033
本発明の二環式テンプレートライブラリのペプチドミメティックの合成は、公知技術により、ＦｌｅｘＣｈｅｍ  Ｒｅａｃｔｏｒ  Ｂｌｏｃｋ（これは、９６ウェルプレートを有する）を使用して、達成した。上記図式では、「Ｐｏｌ」は、ブロモアセタール樹脂（Ａｄｖａｎｃｅｄ  ＣｈｅｍＴｅｃｈ）を表わし、詳細な手順を、以下で説明する。
【００８８】
（工程１）
ブロモアセタール樹脂（１．６ｍｍｏｌ／ｇ）およびＲ１アミンのＤＭＳＯ溶液（２Ｍ溶液）を、９６ウェルＲｏｂｂｉｎｓブロック（ＦｌｅｘＣｈｅｍ）に入れた。その反応混合物を、回転オーブン［Ｒｏｂｂｉｎｇ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ］を使用して、６０℃で、１２時間振盪した。この樹脂を、ＤＭＦ、ＭｅＯＨで洗浄し、次いで、ＤＣＭで洗浄した。
【００８９】
（工程２）
この樹脂に、市販のＦｍｏｃ−Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄｓ（４当量）、ＰｙＢｏｂ（４当量）、ＨＯＡｔ（４当量）およびＤＩＥＡ（１２当量）のＤＭＦ溶液を加えた。その反応混合物を、室温で、１２時間振盪した後、この樹脂を、ＤＭＦ、ＭｅＯＨで洗浄し、次いで、ＤＣＭで洗浄した。
【００９０】
（工程３）
反応前にＤＭＦで膨潤した樹脂に、ＤＭＦ中の２５％ピペリジンを加えた。その反応混合物を、室温で、３０分間振盪した後、この脱保護工程を再度繰り返し、次いで、ＤＭＦ、メタノールで洗浄し、次いで、ＤＣＭで洗浄した。この樹脂に、ヒドラジンカルバモイルクロライド（４当量）、ＨＯＢｔ（４当量）およびＤＩＣ（４当量）のＤＭＦ溶液を加えた。その反応混合物を、室温で、１２時間振盪した後、この樹脂を、ＤＭＦ、ＭｅＯＨで洗浄し、次いで、ＤＣＭで洗浄した。
【００９１】
（工程４）
反応前にＤＭＦで膨潤した樹脂に、ＤＭＦ中の２５％ピペリジンを加えた。その反応混合物を、室温で、３０分間振盪した後、この脱保護工程を再度繰り返し、次いでこの樹脂をＤＭＦ、メタノールで洗浄し、次いで、ＤＣＭで洗浄した。反応前にＤＣＭで膨潤した樹脂に、ＤＣＭ中のＲ１イソシアネート（５当量）を加えた。その反応混合物を、室温で、１２時間振盪した後、この樹脂を、ＤＭＦ、ＭｅＯＨで洗浄し、次いで、ＤＣＭで洗浄した。
【００９２】
（工程５）
その樹脂を、室温で、１８時間にわたって、ギ酸（各ウェルに１．２ｍＬ）で処理した。この樹脂を濾過で除去した後、その濾液を、ＳｐｅｅｄＶａｃ［ＳＡＶＡＮＴ］を使用して、減圧下にて縮合し、オイルとして、その生成物を得た。これらの生成物を５０％水／アセトニトリルで希釈し、次いで、凍結後に凍結乾燥した。
【００９３】
表３は、本発明に従って調製され得る［４，３，０］逆向ターンミメティックライブラリを示し、その代表的な調製は、実施例５で示す。
【００９４】
［表３］  ［４，３，０］逆向ターンミメティックライブラリ
【００９５】
【化２６】
2005505596.tif 000034
2005505596.tif 000035
2005505596.tif 000036
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本発明のさらに他の局面では、生体活性についてライブラリをスクリーニングし、生体活性ライブラリメンバーを単離する方法が開示されている。本発明のライブラリは、種々の技術および方法により、生体活性についてスクリーニングした。一般に、このスクリーニングアッセイは、（１）ライブラリのミメティックを目的の生体標的（例えば、レセプタ）と接触させて、そのライブラリのミメティックと標的との間の結合を起こすことにより、そして（２）適当なアッセイ（例えば、Ｌａｍら（Ｎａｔｕｒｅ  ３５４：８２〜８４，１９９１）またはＧｒｉｍｉｎｓｋｉら（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １２：１００８〜１０１１，１９９４）により開示された熱量測定アッセイ）により、その結合事象を検出することにより、実行され得る（これらの両方は、本明細書中で参考として援用される）。好ましい実施形態では、これらのライブラリメンバーは、溶液中にあり、その標的は、固相に固定化される。あるいは、このライブラリは、固相に固定化され得、それを溶液中で標的と接触させることにより、証明され得る。
【００９６】
以下の表４は、本発明のライブラリから選択された生体活性試験用化合物およびそれらのＩＣ５０値（これらは、実施例６で記述したように、Ｒｅｐｏｒｔｅｒ遺伝子アッセイで測定される）を示す。
【００９７】
［表４］  選択したライブラリ化合物のＩＣ５０（μＭ）
【００９８】
【化２７】
2005505596.tif 000039
2005505596.tif 000040
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本発明では、一般式（Ｉ）の化合物（特に、一般式（ＶＩ）の化合物）は、それがＣＢＰに特異的に結合するために、癌細胞におけるＣＢＰ媒介転写活性を阻害することが発見されており、それは、ＳＷ４８０のＣＢＰを本発明の化合物で免疫沈降することにより、裏付けられる。
【００９９】
本発明の化合物はまた、ＳＷ４８０細胞でのサルビビン発現を阻害でき、従って、癌細胞の発癌活性を阻害できる。本発明の化合物は、癌細胞を阻害するのに使用でき、それゆえ、細胞増殖を調節するのに有用となる。このような結果を支持して、本発明の化合物は、さらに、ＳＷ４８０細胞でのカスパーゼ−３活性を誘発でき、従って、細胞においてアポトーシス活性を誘発できることを示す。本発明の化合物はまた、細胞においてアポトーシスを誘発するのに有利に使用できる。
【０１００】
癌細胞での発癌活性を確認するために、以下の方法により、インビトロＭＴＳ細胞毒性アッセイを試験した。
【０１０１】
（細胞毒性試験）
ＳＷ４８０細胞またはＨＣＴ１１６細胞を９６ウェルマイクロプレート（１０４個の細胞／ウェル）に入れ、そして３７℃で、２４時間インキュベートした。これらの細胞を、２４時間にわたって、種々の濃度のＴＣＦ４化合物で処理した。各ウェルに２０μｌのＭＴＳ溶液（Ｐｒｏｍｅｇａ）を加え、そして３７℃で、２時間インキュベートした。マイクロプレート読み取り装置（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅ）を使用して、４９０ｎｍの吸光度を読み取ることにより、細胞生存度を測定し、各濃度での化合物の細胞毒性を算出した。
【０１０２】
（成長阻害アッセイ）
ＳＷ４８０細胞またはＨＣＴ１１６細胞を９６ウェルマイクロプレート（１０４個の細胞／ウェル）に入れ、そして３７℃で、２４時間インキュベートした。各ウェルに、２０μｌの［３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−５−（３−カルボキシフェニル）−２−（４−スルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム、内部塩］（ＭＴＳ）溶液（Ｐｒｏｍｅｇａ）を加え、３７℃で２時間インキュベーションした後の吸光度（ネガティブコントロール）を読み取った。次いで、これらの細胞を、４８時間にわたって、種々の濃度のＴＣＦ化合物で処理した。各ウェルに、２０μｌのＭＴＳ溶液（Ｐｒｏｍｅｇａ）を加え、そして３７℃で、２時間インキュベートした。マイクロプレート読み取り装置（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅ）を使用して、４９０ｎｍの吸光度を読み取ることにより、細胞生存度を測定し、各濃度での化合物の細胞毒性を算出した。
【０１０３】
選択したライブラリ化合物についての発癌活性の結果を表５に示した。
【０１０４】
［表５］  選択したライブラリ化合物についてのＭＴＳまたはＳｕｌｆｏｒｈｏｄａｍｉｎｅ  Ｂアッセイによる発癌活性
【０１０５】
【化２８】
2005505596.tif 000049
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本発明の別の局面では、一般式（Ｉ）を有する化合物（特に、一般式（ＶＩ）の化合物）を含有する薬学的組成物が開示されている。本発明の化合物を含有する薬学的組成物を調製するために、当業者は、一般に公知の知見および当該技術分野で公知の技術を使用できる。本発明の組成物を調製するには、一般に公知の種々のキャリアおよび他の添加剤が使用される。本発明の薬学的組成物は、治療するのが望ましい疾患状態に標準的な様式（例えば、経口投与、直腸投与または非経口投与）で、投与され得る。
【０１０６】
これらの目的のために、本発明の化合物は、当該技術分野で公知の手段により、例えば、錠剤、カプセル剤、水性または油性の溶液または懸濁液、（脂質）乳濁液、分散性粉末、座剤、軟膏、クリーム、点滴薬、および無菌で注射可能な水性または油性の溶液または懸濁液の形状に処方され得る。
【０１０７】
本発明の適当な薬学的組成物は、単位剤形で経口投与に適切なもの（例えば、約１ｍｇ〜約１ｇの本発明の化合物を含有する錠剤またはカプセル剤）である。
【０１０８】
別の局面では、本発明の薬学的組成物は、静脈内注射、皮下注射または筋肉内注射に適当なものである。患者は、例えば、約１μｇ／ｋｇ〜約１ｇ／ｋｇの本発明の化合物の静脈内用量、皮下用量または筋肉内用量を受け得る。この静脈内用量、皮下用量および筋肉内用量は、ボーラス注射により、与えられ得る。あるいは、この静脈内用量は、一定時間にわたる連続注入により、与えられ得る。
【０１０９】
あるいは、患者は、毎日非経口用量にほぼ等しい毎日経口用量を受け、その組成物は、１日あたり、１〜４回で、投与される。
【０１１０】
以下の表は、ヒトにおける治療用途または予防用途のために、この化合物またはそれらの薬学的に受容可能な塩を含有する代表的な製薬剤形を示す。
【０１１１】
【化２９】
2005505596.tif 000055
一般式（Ｉ）の化合物（特に、一般式（ＶＩ）の化合物）を含有する薬学的組成物は、Ｗｎｔシグナル伝達が変調した障害（特に、癌、さらに特定すると、結腸直腸癌）を処置するのに使用できる。
【０１１２】
本発明の別の局面では、被験体における腫瘍細胞の成長を阻止する方法が開示され、該方法は、腫瘍細胞に、本発明の化合物の安全有効量を投与する工程を包含する。このような化合物を含有する組成物もまた、腫瘍細胞を阻害するのに使用できる。それゆえ、この方法は、哺乳動物被験体における癌を処置するのに有用であり得る。それは、有利なことに、結腸直腸癌を処置するのに使用できる。
【０１１３】
本発明の別の局面では、Ｗｎｔシグナル伝達経路が変調した障害を処置する方法が開示され、該方法は、患者に、一般式（Ｉ）を有する化合物（特に、一般式（ＶＩ）の化合物）の安全有効量を投与する工程を包含する。本発明の化合物を含有する薬学的組成物もまた、この目的に使用できる。このことに関連して、本発明では、一般式（Ｉ）を有する化合物（特に、一般式（ＶＩ）の化合物）またはそれらを含有する薬学的組成物が、ＴＣＦ４−β−カテニン−ＣＢＰ複合体（これは、Ｗｎｔシグナル伝達経路に関連した癌細胞の過剰発現を開始する原因となると考えられている）が変調した障害を処置するのに使用できる。それゆえ、一般式（Ｉ）を有する化合物（特に、一般式（ＶＩ）の化合物）を使用して、ＴＣＦ４−β−カテニン−ＣＢＰ複合体が変調した障害を処置する方法を提供することは、本発明の別の局面である。
【０１１４】
さらに、癌の治療はまた、被験体において癌細胞のアポトーシスを誘発することに密接に関連しているので、本発明はまた、一般式（Ｉ）を有する化合物（特に、一般式（ＶＩ）の化合物）を使用して、癌細胞でアポトーシスを誘発する方法に関する。
【０１１５】
従来技術から、５−ＦＵ［フルオロウラシル；５−フルオロ−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ピリミジンジオン］は、培養した口腔癌細胞においてアポトーシスを誘発できることが知られている（Ｄ．Ｔｏｎｇら、Ｏｒａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ３６，２０００  ２３６〜２４１）。さらに、直腸癌は、５−ＦＵに感受性であることもまた、知られている（Ｄ．Ａｒａｎｇｏら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ６１，２００１  ４９１０〜４９１５）。従って、本発明では、５−ＦＵ（その抗癌活性は立証されている）および本発明の式（Ｉ）の化合物（特に、一般式（ＶＩ）の化合物）の組合せが調製され、そしてＳＷ４８０細胞系に対して試験される。結果として、５−ＦＵと本発明の化合物（特に、ＴＣＦ４化合物）との組合せは、癌細胞（例えば、ＳＷ４８０）の増殖を阻害するのに著しい効果を有することが発見されている。
【０１１６】
従って、癌を治療する方法を提供することは、本発明のさらに他の局面であり、該方法は、被験体に、他の抗癌剤（例えば、５−ＦＵ）と共に、請求項１の式（Ｉ）を有する化合物（特に、一般式（ＶＩ）の化合物）の安全有効量を投与する工程を包含する。
【０１１７】
本発明の化合物は、サルビビンの発現を阻害することが明らかとなっている。Ｂｌａｎｃ−Ｂｒｕｄｅら、Ｎａｔ．Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ８：９８７（２００２）は、サルビビンが平滑筋細胞アポトーシスの重要な制御因子であり、これは、病理学的血管壁再構築で重要であることを明らかにしている。従って、本発明の他の局面は、血管形成術に関連した再狭窄を治療または予防する方法を提供し、該方法は、それが必要な被験体に、本発明の逆向ターンミメティックの安全有効量を投与する工程を包含する。１実施形態では、本発明は、再狭窄を治療し、すなわち、再狭窄に罹った被験体に本発明の逆向ターンミメティックを投与すると、再狭窄の重症度、範囲または程度などが少なくなる。他の実施形態では、本発明は、再狭窄を予防し、すなわち、新規または追加の再狭窄を発症すると予測されている被験体に本発明の逆向ターンミメティックを投与すると、予想される再狭窄の重症度、範囲または程度などが少なくなる。必要に応じて、この被験体は、哺乳動物被験体である。
【０１１８】
本発明の化合物は、ＴＣＦ／β−カテニン転写を阻害することが明らかとなっている。Ｒｏｄｏｖａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２９５７７（２００２）は、ＰＫＤ−１プロモータがβ−カテニン／ＴＣＦ経路の標的であることを明らかにしている。従って、本発明の他の局面は、腎多嚢胞病を治療または予防する方法を提供し、該方法は、それが必要な被験体に、本発明の逆向ターンミメティックの安全有効量を投与する工程を包含する。１実施形態では、本発明は、腎多嚢胞病を治療し、すなわち、腎多嚢胞病に罹った被験体に本発明の逆向ターンミメティックを投与すると、腎多嚢胞病の重症度、範囲または程度などが少なくなる。他の実施形態では、本発明は、腎多嚢胞病を予防し、すなわち、新規または追加の腎多嚢胞病を発症すると予測されている被験体に本発明の逆向ターンミメティックを投与すると、予想される腎多嚢胞病の重症度、範囲または程度などが少なくなる。必要に応じて、この被験体は、哺乳動物被験体である。
【０１１９】
本発明の化合物は、Ｗｎｔシグナル伝達の発現を阻害することが明らかとなっている。Ｈａｎａｉら、Ｊ：Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏ．１５８：５２９（２００２）は、公知の抗血管原性因子であるエンドスタチンがＷｎｔのシグナル伝達を阻害することを明らかにしている。従って、本発明の他の局面は、異常血管形成疾患を治療または予防する方法を提供し、該方法は、それが必要な被験体に、本発明の逆向ターンミメティックの安全有効量を投与する工程を包含する。１実施形態では、本発明は、異常血管形成疾患を治療し、すなわち、異常血管形成疾患に罹った被験体に本発明の逆向ターンミメティックを投与すると、異常血管形成疾患の重症度、範囲または程度などが少なくなる。他の実施形態では、本発明は、異常血管形成疾患を予防し、すなわち、新規または追加の異常血管形成疾患を発症すると予測されている被験体に本発明の逆向ターンミメティックを投与すると、異常血管形成疾患の予想される重症度、範囲または程度などが少なくなる。必要に応じて、この被験体は、哺乳動物被験体である。
【０１２０】
本発明の化合物は、Ｗｎｔシグナル伝達の発現を阻害することが明らかとなっている。Ｓｅｎら、Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．（ＵＳＡ）９７：２７９１（２０００）は、関節リウマチ疾患に罹った哺乳動物がＲＡ滑膜組織においてＷｎｔおよびＦｚの高い発現を示すことを明らかにしている。従って、本発明の他の局面は、関節リウマチを治療または予防する方法を提供し、該方法は、それが必要な被験体に、本発明の逆向ターンミメティックの安全有効量を投与する工程を包含する。１実施形態では、本発明は、関節リウマチ疾患を治療し、すなわち、関節リウマチ疾患に罹った被験体に本発明の逆向ターンミメティックを投与すると、関節リウマチ疾患の重症度、範囲または程度などが少なくなる。他の実施形態では、本発明は、関節リウマチ疾患を予防し、すなわち、新規または追加の関節リウマチ疾患を発症すると予測されている被験体に本発明の逆向ターンミメティックを投与すると、関節リウマチ疾患の予想される重症度、範囲または程度などが少なくなる。必要に応じて、この被験体は、哺乳動物被験体である。
【０１２１】
本発明の化合物は、Ｗｎｔシグナル伝達の発現を阻害することが明らかとなっている。Ｕｔｈｏｆｆら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｏｎｃｏｌ．１９：８０３（２００１）は、（クローン病患者と比較して）潰瘍性大腸炎では、乱れたおよびｆｚ（Ｗｎｔ経路分子）の差次的上方制御が起こることを明らかにしている。従って、本発明の他の局面は、潰瘍性大腸炎を治療または予防する方法を提供し、該方法は、それが必要な被験体に、本発明の逆向ターンミメティックの安全有効量を投与する工程を包含する。１実施形態では、本発明は、潰瘍性大腸炎を治療し、すなわち、潰瘍性大腸炎に罹った被験体に本発明の逆向ターンミメティックを投与すると、潰瘍性大腸炎の重症度、範囲または程度などが少なくなる。他の実施形態では、本発明は、潰瘍性大腸炎を予防し、すなわち、新規または追加の潰瘍性大腸炎を発症すると予測されている被験体に本発明の逆向ターンミメティックを投与すると、潰瘍性大腸炎の予想される重症度、範囲または程度などが少なくなる。必要に応じて、この被験体は、哺乳動物被験体である。
【０１２２】
（発明を実施する最良の形態）
以下の非限定的な実施例は、本発明の化合物、組成物および使用方法を説明する。
【実施例】
【０１２３】
（調製実施例１：（Ｎ−Ｆｍｏｃ−Ｎ’−Ｒ３−ヒドラジノ）−酢酸の調製）
（１）Ｎ−Ｆｍｏｃ−Ｎ’−メチルヒドラジンの調製
【０１２４】
【化３０】
2005505596.tif 000056
２Ｌの二ッ口丸底フラスコに、ガラス製ストッパーおよびカルシウムチューブを取り付けた。硫酸メチルヒドラジン（２０ｇ、１３９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３００ｍＬ）溶液を加え、ＤｉＢｏｃ（３３ｇ、１５３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液を加えた。激しく攪拌しつつ、２時間にわたって、滴下漏斗を経由して、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（５００ｍＬ）を滴下した。６時間後、Ｆｍｏｃ−Ｃｌ（３９ｇ、１５３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液をゆっくりと加えた。得られた懸濁液を、０℃で、６時間攪拌した。その混合物をＥＡ（５００ｍＬ）で抽出し、その有機層を保持した。この溶液を硫酸ナトリウムで乾燥し、そして減圧中にて蒸発させた。精製することなく、次の工程に進んだ。
【０１２５】
１Ｌの二ッ口丸底フラスコに、ガラス製ストッパーおよびカルシウムチューブを取り付けた。反応混合物のＭｅＯＨ（３００ｍＬ）溶液を加え、氷浴中にて磁気攪拌しつつ、滴下漏斗を経由して、濃ＨＣｌ（３０ｍＬ、１２Ｎ）をゆっくりと加え、そして一晩攪拌した。その混合物をＥＡ（１０００ｍＬ）で抽出し、その有機層を保持した。この溶液を硫酸ナトリウムで乾燥し、そして減圧中にて蒸発させた。その残留物をｎ−ヘキサンおよびＥＡで結晶化して精製して、生成物（３２．２ｇ、８３％）を得た。
【０１２６】
【化３１】
2005505596.tif 000057
（２）（Ｎ−Ｆｍｏｃ−Ｎ’−メチル−ヒドラジノ）−酢酸ｔ−ブチルエステルの調製
【０１２７】
【化３２】
2005505596.tif 000058
１Ｌの二ッ口丸底フラスコに、ガラス製ストッパーおよび還流冷却器（これは、カルシウムチューブに接続されている）を取り付けた。Ｎ−Ｆｍｏｃ−Ｎ’−メチル−ヒドラジン（２０ｇ、７５ｍｍｏｌ）のトルエン（３００ｍＬ）溶液を加えた。ブロモ酢酸ｔ−ブチル（２２ｇ、１１１ｍｍｏｌ）のトルエン（５０ｍＬ）溶液をゆっくりと加えた。ＣＳ２ＣＯ３（４９ｇ、１４９ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。激しく攪拌しつつ、ＮａＩ（１１ｇ、７４ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。その反応混合物を、還流温度で、１日にわたって攪拌した。混合物を濾過し、その有機層を酢酸エチル［ＥＡ］（５００ｍＬ）で抽出した。この溶液を硫酸ナトリウムで乾燥し、そして減圧中にて蒸発させた。その生成物をクロマトグラフィー（これは、ヘキサン：ＥＡ＝２：１の溶液を使う）で精製して、生成物（１９．８ｇ、７０％）を得た。
【０１２８】
【化３３】
2005505596.tif 000059
（３）（Ｎ−Ｆｍｏｃ−Ｎ’−メチル−ヒドラジノ）−酢酸の調製
【０１２９】
【化３４】
2005505596.tif 000060
１Ｌの二ッ口丸底フラスコに、ガラス製ストッパーおよび還流冷却器（これは、カルシウムチューブに接続されている）を取り付けた。（Ｎ−Ｆｍｏｃ−Ｎ’−メチル−ヒドラジノ）−酢酸ｔ−ブチルエステル（２０ｇ、５２ｍｍｏｌ）を加えた。氷水浴中にて激しく攪拌しつつ、ＨＣｌ溶液（１５０ｍＬ、ジオキサン中の４Ｍ溶液）をゆっくりと加えた。その反応混合物を、室温で、１日間攪拌した。その溶液を、減圧下にて、４０℃で、完全に濃縮した。飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１００ｍｌ）を加え、その水層をジエチルエーテル（１００ｍＬ）で洗浄した。０℃で、濃ＨＣｌをゆっくりと滴下した（ｐＨ２〜３）。その混合物を抽出し、その有機層を保持した（５００ｍＬ、ＭＣ）。この溶液を硫酸ナトリウムで乾燥し、そして減圧中にて蒸発させた。その残留物をｎ−ヘキサンおよび酢酸エチルで再結晶化して精製して、生成物（１２ｇ、７２％）を得た。
【０１３０】
【化３５】
2005505596.tif 000061
（調製実施例２：Ｎ−Ｍｏｃ−Ｎ’−Ｒ７−ヒドラジノ）−酢酸の調製）
（１）（Ｎ’−メトキシカルボニル−ヒドラジノ）−酢酸エチルエステルの調製
【０１３１】
【化３６】
2005505596.tif 000062
このメチルカルバザート（５０ｇ、０．５５ｍｏｌ）をＤＭＦ（３００ｍｌ）に溶解し、次いで、その反応容器に、ブロモ酢酸エチル（６８ｍｌ、０．５５５ｍｏｌ）、炭酸カリウム（７７ｇ、０．５５５ｍｏｌ）を加えた。その混合物を、５０℃で、５時間暖めた。その反応が完結した後、この混合物を濾過し、そしてＥｔＯＡｃで希釈し、ブラインで洗浄した（３回）。その粗生成物をカラム（溶離液：ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝４／１）で精製した。Ｐｄｔ：７２ｇ（無色オイル）。
【０１３２】
（２）［Ｎ−Ｒ７−Ｎ’−メトキシカルボニル−ヒドラジノ］−酢酸エチルエステルの調製
【０１３３】
【化３７】
2005505596.tif 000063
このエチルエステル（１０ｇ、０．０５ｍｏｌ）、炭酸カリウム（６．９ｇ、０．０５ｍｏｌ）およびＲ３−ブロマイド（１４．１ｇ、０．０６ｍｏｌ）をＤＭＦ（２００ｍｌ）に溶解し、その混合物を、５０℃で、５時間暖めた。その反応が完結した後、この混合物を濾過し、そしてＥＡで希釈し、そしてブラインで洗浄した（３回）。その粗生成物をクロマトグラフィー（溶離液：ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝４／１）で精製した。
【０１３４】
（３）［Ｎ−Ｒ７−Ｎ”−メトキシカルボニル−ヒドラジノ］−酢酸
【０１３５】
【化３８】
2005505596.tif 000064
このアルキル化エチルエステル（９．５ｇ、０．０３ｍｏｌ）をＴＨＦ／水（１／１、ｍｌ）に溶解し、そして０℃で、２Ｎ  ＮａＯＨ（２８．３ｍｌ）溶液を加えた。その混合物を、室温で、２時間攪拌した。出発物質のエステルがＵＶで検出されなくなった後、この溶液をＥＡで希釈し、次いで、分離した。その水層を１Ｎ  ＨＣｌでｐＨ３〜４まで酸性化し、その化合物をＤＣＭで抽出した（３回）。合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、そして蒸発させて、黄色固形物を得た。
【０１３６】
（実施例１）
（１）Ｎβ−Ｍｏｃ−Ｎα−ベンジル−ヒドラジノグリシンの調製：
【０１３７】
【化３９】
2005505596.tif 000065
この化合物は、文献手順に従って調製した。（Ｃｈｅｇｕｉｌｌａｕｍｅら、Ｓｙｎｌｅｔｔ  ２０００，３，３３１）。
【０１３８】
（２）１−メトキシカルボニル−２，８−ジベンジル−６−メチル−４，７−ジオキソ−ヘキサヒドロ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジンの調製
【０１３９】
【化４０】
2005505596.tif 000066
このブロモアセタール樹脂（６０ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ／ｇ）およびベンジルアミンのＤＭＳＯ（２．５ｍＬ、２Ｍ）溶液を、ネジキャップ付きバイアルに入れた。その反応混合物を、回転オーブン［Ｒｏｂｂｉｎｇ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ］を使用して、６０℃で、１２時間振盪した。その樹脂を濾過により集め、そしてＤＭＦで洗浄し、次いで、ＤＣＭで洗浄した。
【０１４０】
この樹脂に、Ｆｍｏｃ−アラニン（４当量）、ＨＡＴＵ［ＰｅｒＳｅｐｔｉｖｅ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ］（４当量）およびＤＩＥＡ（４当量）のＮＭＰ（Ａｄｖａｎｃｅｄ  ＣｈｅｍＴｅｃｈ）溶液を加えた。その反応混合物を、室温で、４時間振盪した後、その樹脂を濾過により集め、ＤＭＦ、ＤＣＭで洗浄し、次いで、ＤＭＦで洗浄した。
【０１４１】
この樹脂に、ＤＭＦ中の２０％ピペリジンを加えた。この反応混合物を、室温で、８分間振盪した後、その樹脂を濾過により集め、ＤＭＦ、ＤＣＭで洗浄し、次いで、ＤＭＦで洗浄した。
【０１４２】
上で調製した樹脂に、Ｎβ−Ｍｏｃ−Ｎα−ベンジル−ヒドラジノグリシン（４当量）、ＨＯＢＴ［Ａｄｖａｎｃｅｄ  ＣｈｅｍＴｅｃｈ］（４当量）およびＤＩＣ（４当量）のＤＭＦ溶液を加えた。その反応混合物を、室温で、３時間振盪した後、その樹脂を濾過により集め、ＤＭＦ、ＤＣＭで洗浄し、次いで、ＭｅＯＨで洗浄した。この樹脂を、室温で、減圧中にて乾燥した。
【０１４３】
この樹脂を、室温で、１８時間にわたって、ギ酸（２．５ｍｌ）で処理した。この樹脂を濾過で除去した後、その濾液を減圧下にて濃縮して、オイルとして、生成物を得た。
【０１４４】
【化４１】
2005505596.tif 000067
（実施例２）
（１）Ｎ’−Ｆｍｏｃ−Ｎ−メチル−ヒドラジノカルボニルクロライドの調製
【０１４５】
【化４２】
2005505596.tif 000068
ＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍｌ）中のＮ−メチルヒドラジンカルボン酸９Ｈ−Ｆｌｕｏｒｅｎ−９−イルメチルエステル（１０７ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）とＮａＨＣＯ３飽和水溶液１５ｍｌとの氷冷二相混合物を、単一部分としてトルエン（１．０３ｍｌ、２ｍｍｏｌ）中のホスゲン１５ｍｌを加えつつ、迅速に攪拌した。この反応混合物を３０分間攪拌し、その有機相を集め、その水相をＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、そして減圧下にて濃縮して、泡沫状固形物として、カルバモイルクロライド１２８ｍｇ（９７％）を得た。［注意：ホスゲン蒸気は、非常に毒性である。フード内で使用すべし］。この生成物を、さらに精製することなく、以下の固相合成で使用した。
【０１４６】
（２）２，５−ジメチル−７−ベンジル−３，６−ジオキソ−ヘキサヒドロ−［１，２，４］トリアゾロ［４，５−ａ］ピラジン−１−カルボン酸ベンジルアミンの調製
【０１４７】
【化４３】
2005505596.tif 000069
このブロモアセタール樹脂（３０ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ／ｇ）およびベンジルアミンのＤＭＳＯ（１．５ｍＬ、２Ｍ）溶液を、ネジキャップ付きバイアルに入れた。その反応混合物を、回転オーブン［Ｒｏｂｂｉｎｓ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ］を使用して、６０℃で、１２時間振盪した。その樹脂を濾過により集め、そしてＤＭＦで洗浄し、次いで、ＤＣＭで洗浄した。
【０１４８】
この樹脂に、Ｆｍｏｃ−アラニン（３当量）、ＨＡＴＵ［ＰｅｒＳｅｐｔｉｖｅ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ］（３当量）およびＤＩＥＡ（３当量）のＮＭＰ（Ａｄｖａｎｃｅｄ  ＣｈｅｍＴｅｃｈ）溶液を加えた。その反応混合物を、室温で、４時間振盪した後、その樹脂を濾過により集め、ＤＭＦ、ＤＣＭで洗浄し、次いで、ＤＭＦで洗浄した。
【０１４９】
この樹脂に、ＤＭＦ中の２０％ピペリジンを加えた。この反応混合物を、室温で、８分間振盪した後、その樹脂を濾過により集め、ＤＭＦ、ＤＣＭで洗浄し、次いで、ＤＭＦで洗浄した。
【０１５０】
上で調製した樹脂に、工程（１）で得たＮ’−Ｆｍｏｃ−Ｎ−メチル−ヒドラジノカルボニルクロライド（５当量）、ＤＩＥＡ（５当量）のＤＣＭ溶液を加えた。その反応混合物を、室温で、４時間振盪した後、その樹脂を濾過により集め、ＤＭＦ、ＤＣＭで洗浄し、次いで、ＤＭＦで洗浄した。
【０１５１】
この樹脂に、ＤＭＦ（樹脂１ｇに対して１０ｍｌ）中の２０％ピペリジンを加えた。この反応混合物を、室温で、８分間振盪した後、その樹脂を濾過により集め、ＤＭＦ、ＤＣＭで洗浄し、次いで、ＤＭＦで洗浄した。
【０１５２】
この樹脂を、室温で、４時間にわたって、ＤＣＭ中のイソシアン酸ベンジル（４当量）およびＤＩＥＡ（４当量）の混合物で処理した。次いで、その樹脂を濾過により集め、ＤＭＦ、ＤＣＭで洗浄し、次いで、ＭｅＯＨで洗浄した。この樹脂を、室温で、減圧中にて乾燥した。
【０１５３】
この樹脂を、室温で、１４時間にわたって、ギ酸で処理した。この樹脂を濾過で除去した後、その濾液を減圧下にて濃縮して、オイルとして、生成物を得た。
【０１５４】
【化４４】
2005505596.tif 000070
（実施例３）
（２，５，７−トリメチル−３，６−ジオキソ−ヘキサヒドロ−［１，２，４］トリアゾロ［４，５−ａ］ピラジン−１−カルボン酸ベンジルアミドの調製）
実施例２と同じ手順に従って、表題化合物を調製する。
【０１５５】
【化４５】
2005505596.tif 000071
（実施例４）
（２−メチル−５−（ｐ−ヒドロキシフェニルメチル）−７−ナフチルメチル−３，６−ジオキソ−ヘキサヒドロ−［１，２，４］トリアゾロ［４，５−ａ］ピラジン−１−カルボン酸ベンジルアミドの調製）
ブロモアセタール樹脂（３０ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ／ｇ）およびナフチルメチルアミンのＤＭＳＯ（１．５ｍＬ、２Ｍ）溶液を、ネジキャップ付きバイアルに入れた。その反応混合物を、回転オーブン［Ｒｏｂｂｉｎｓ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ］を使用して、６０℃で、１２時間振盪した。その樹脂を濾過により集め、そしてＤＭＦで洗浄し、次いで、ＤＣＭで洗浄した。
【０１５６】
この樹脂に、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ＯＢｕｔ）−ＯＨ（３当量）、ＨＡＴＵ［ＰｅｒＳｅｐｔｉｖｅ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ］（３当量）およびＤＩＥＡ（３当量）のＮＭＰ（Ａｄｖａｎｃｅｄ  ＣｈｅｍＴｅｃｈ）溶液を加えた。その反応混合物を、室温で、４時間振盪した後、その樹脂を濾過により集め、ＤＭＦ、ＤＣＭで洗浄し、次いで、ＤＭＦで洗浄した。
【０１５７】
この樹脂に、ＤＭＦ中の２０％ピペリジンを加えた。この反応混合物を、室温で、８分間振盪した後、その樹脂を濾過により集め、ＤＭＦ、ＤＣＭで洗浄し、次いで、ＤＭＦで洗浄した。
【０１５８】
上で調製した樹脂に、Ｎ’−Ｆｍｏｃ−Ｎ−メチル−ヒドラジノカルボニルクロライド（５当量）、ＤＩＥＡ（５当量）のＤＣＭ溶液を加えた。その反応混合物を、室温で、４時間振盪した後、その樹脂を濾過により集め、ＤＭＦ、ＤＣＭで洗浄し、次いで、ＤＭＦで洗浄した。
【０１５９】
この樹脂に、ＤＭＦ（樹脂１ｇに対して１０ｍｌ）中の２０％ピペリジンを加えた。この反応混合物を、室温で、８分間振盪した後、その樹脂を濾過により集め、ＤＭＦ、ＤＣＭで洗浄し、次いで、ＤＭＦで洗浄した。
【０１６０】
この樹脂を、室温で、４時間にわたって、ＤＣＭ中のイソシアン酸ベンジル（４当量）およびＤＩＥＡ（４当量）で処理した。次いで、その樹脂を濾過により集め、ＤＭＦ、ＤＣＭで洗浄し、次いで、ＭｅＯＨで洗浄した。この樹脂を、室温で、減圧中にて乾燥した。
【０１６１】
この樹脂を、室温で、１４時間にわたって、ギ酸で処理した。この樹脂を濾過で除去した後、その濾液を減圧下にて濃縮して、オイルとして、生成物を得た。
【０１６２】
【化４６】
2005505596.tif 000072
（実施例５）
（２−メチル−６−（ｐ−ヒドロキシフェニルメチル）−８−ナフチル−４，７−ジオキソ−ヘキサヒドロ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボン酸ベンジルアミドの調製）
このブロモアセタール樹脂（６０ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ／ｇ）およびナフチルアミンのＤＭＳＯ（２．５ｍＬ、２Ｍ）溶液を、ネジキャップ付きバイアルに入れた。その反応混合物を、回転オーブン［Ｒｏｂｂｉｎｓ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ］を使用して、６０℃で、１２時間振盪した。その樹脂を濾過により集め、そしてＤＭＦで洗浄し、次いで、ＤＣＭで洗浄した。
【０１６３】
この樹脂に、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ＯＢｕｔ）−ＯＨ（４当量）、ＨＡＴＵ［ＰｅｒＳｅｐｔｉｖｅ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ］（４当量）およびＤＩＥＡ（４当量）のＮＭＰ（Ａｄｖａｎｃｅｄ  ＣｈｅｍＴｅｃｈ）溶液を加えた。その反応混合物を、室温で、４時間振盪した後、その樹脂を濾過により集め、ＤＭＦ、ＤＣＭで洗浄し、次いで、ＤＭＦで洗浄した。
【０１６４】
この樹脂に、ＤＭＦ中の２０％ピペリジンを加えた。この反応混合物を、室温で、８分間振盪した後、その樹脂を濾過により集め、ＤＭＦ、ＤＣＭで洗浄し、次いで、ＤＭＦで洗浄した。
【０１６５】
上で調製した樹脂に、Ｎβ−Ｆｍｏｃ−Ｎα−ベンジル−ヒドラジノグリシン（４当量）、ＨＯＢＴ［Ａｄｖａｎｃｅｄ  ＣｈｅｍＴｅｃｈ］（４当量）およびＤＩＣ（４当量）のＤＭＦ溶液を加えた。その反応混合物を、室温で、３時間振盪した後、その樹脂を濾過により集め、ＤＭＦで洗浄し、次いで、ＤＣＭで洗浄した。この樹脂に、ＤＭＦ（樹脂１ｇに対して１０ｍｌ）中の２０％ピペリジンを加えた。この反応混合物を、室温で、８分間振盪した後、その樹脂を濾過により集め、ＤＭＦ、ＤＣＭで洗浄し、次いで、ＤＭＦで洗浄した。
【０１６６】
この樹脂を、室温で、４時間にわたって、ＤＣＭ中のイソシアン酸ベンジル（４当量）およびＤＩＥＡ（４当量）で処理した。次いで、その樹脂を濾過により集め、ＤＭＦ、ＤＣＭで洗浄し、次いで、ＭｅＯＨで洗浄した。この樹脂を、減圧中にて、室温で、乾燥し、その樹脂を、室温で、１８時間にわたって、ギ酸（２．５ｍｌ）で処理した。この樹脂を濾過で除去した後、その濾液を減圧下にて濃縮して、オイルとして、生成物を得た。
【０１６７】
【化４７】
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（実施例６）
以下の方法により、ＳＷ４８０細胞に対するＩＣ５０の測定およびその細胞株での細胞毒性試験についてバイオアッセイを行った：
試験化合物は、実施例４で調製した。
【０１６８】
【化４８】
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（レポーター遺伝子アッセイ）
ＳＷ４８０細胞を、Ｓｕｐｅｒｆｅｃｔ（登録商標）トランスフェクト試薬（Ｑｉａｇｅｎ，３０１３０７）を使って、トランスフェクトした。トランスフェクトの前日に、細胞を簡単にトリプシン処理し、そしてトランスフェクトの日に５０〜８０％集密になるように、６ウェルプレート（５×１０５個の細胞／ウェル）にプレートした。
【０１６９】
４マイクログラム（ＴＯＰＦｌａｓｈ）および１マイクログラム（ｐＲＬ−ｎｕｌｌ）のＤＮＡを、無血清培地１５０μｌで希釈し、Ｓｕｐｅｒｆｅｃｔ（商標）トランスフェクト試薬３０μｌを加えた。このＤＮＡ−Ｓｕｐｅｒｆｅｃｔ混合物を、室温で、１５分間インキュベートし、次いで、さらに３時間のインキュベーション中にて、この複合体に、１０％ＦＢＳ  ＤＭＥＭ（１ｍｌ）を加えた。複合体が形成している間にて、細胞を抗体なしでＰＢＳで２回洗浄した。
【０１７０】
このＤＮＡ−Ｓｕｐｅｒｆｅｃｔ（商標）トランスフェクト試薬の複合体を細胞に適用した後、３７℃で、５％ＣＯ２で、３時間インキュベートした。インキュベーション後、１０％ＦＢＳを有する回収培地を加えて、最終容量を１．１８ｍｌにした。３時間のインキュベーション後、これらの細胞を収集し、そして９６ウェルプレート（３×１０４個の細胞／ウェル）に再び播種した。３７℃で、５％ＣＯ２で、一晩インキュベーションした後、これらの細胞を、２４時間にわたって、この試験化合物で処理した。最後に、その活性をルシフェラーゼアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｅ１９６０）で検査した。
【０１７１】
図１は、ＳＷ４８０細胞に対する上記化合物のＩＣ５０の測定結果を図示している。
【０１７２】
（スルホローダミンＢ（ＳＲＢ）アッセイ）
以下で列挙した細胞に対する上記化合物の成長阻害効果を、スルホローダミンＢアッセイにより測定した。９６ウェルプレートの各ウェルに、１００μｌの培地中のＳＷ４８０細胞をプレートし、そして２４時間付着させた。これらのウェルに化合物を加えて、所望の最終濃度にし、それらのプレートを、３７℃で、４８時間インキュベートした。次いで、各ウェルに冷（４℃）１０％トリフルオロ酢酸１００μｌを穏やかに加えることにより、これらの細胞を固定し、続いて、４℃で、１時間インキュベートした。プレートを脱イオン水で５回洗浄し、そして風乾した。次いで、１５分間にわたって、ウェルに、ＳＲＢ溶液（１％酢酸（ｖ／ｖ）中で０．４％のＳＲＢ（ｗ／ｖ））１００μｌを加えることにより、これらの細胞を染色した。染色後、これらのプレートを、１％酢酸で５回、素早く洗浄して、未結合染料を除去し、そして風乾させた。結合した染料を、これらのプレートを読み取る前に、１０ｍｍｏｌ／ＬのＴｒｉｓ塩基（ｐＨ１０．５）で可溶化した。Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅを使って、５１５ｎｍの波長で、プレート読み取り装置にて、その光学密度（ＯＤ）を読み取った。成長の阻害は、相対生存度（対照の％）で表わし、そしてＧＩ５０は、ログ／プロビット形質変換後の濃度応答曲線から計算した。
【０１７３】
［表６］  実施例４で得た化合物のインビトロ細胞毒性（ＳＲＢ）アッセイ
【０１７４】
【化４９】
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本発明の特定の実施形態は、例示の目的のために、本明細書中で記述されているものの、本発明の精神および範囲を逸脱することなく、種々の改良を行い得ることが認められる。従って、本発明は、添付の請求の範囲によるのを除いて限定されない。
【０１７５】
（産業上の利用可能性）
生体活性ペプチドおよびタンパク質の逆向ターン領域の二次構造を模倣する本発明の化合物は、サルビビンの発現、ＴＣＦ／β−カテニンの転写、およびＷｎｔシグナル伝達の発現を阻害できる。従って、本発明は、哺乳動物被験体において腫瘍細胞の成長を阻止し、他の抗悪性腫瘍薬と組み合わせて癌を治療し、血管形成術に伴う再狭窄、腎多嚢胞病、異常血管形成疾患、関節リウマチおよび潰瘍性大腸炎のような疾患を治療または予防する薬学的組成物および／または方法だけでなく、生体活性化合物および化合物ライブラリを同定する方法を提供できる。
【図面の簡単な説明】
【０１７６】
【図１】図１は、ＳＷ４８０細胞について本発明の化合物のＩＣ５０を測定したグラフであり、ここで、ＳＷ４８０細胞に対する細胞増殖阻害は、そのＩＣ５０値を得るために、実施例４で調製された化合物の種々の濃度で、測定される。具体的には、該試験化合物によるホタルおよびレニラルシフェラーゼ活性の阻害の程度を決定した。結果として、ＳＷ４８０細胞増殖に対する該試験化合物のＩＣ５０は、表４で開示されているように、見出された。詳細な手順は、実施例６で開示されたものと同じである。
【図１】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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