(57)【要約】【課題】 細胞内に存在するグルタチオンを増加させる。【解決手段】 低下した肝臓機能のためグルタチオンが欠乏している哺乳類に、以下の各成分の少なくとも１つを含む組成物を投与して、低下した肝臓機能を治療又は予防することを含む、細胞内に存在するグルタチオンを増加させる方法及び相当する食餌又は薬物組成物である。ａ）システイン及び該アミノ酸を含む機能的同等物からなる群より選択されるグルタチオンの前駆体、ｂ）グルタチオン生合成のエンハンサー、及びｃ）リグナン類又はｃ１）グルタチオン再生のエンハンサー及びｃ２）グルタチオン仲介抱合のエンハンサーの組合せから選択される第三成分【特許請求の範囲】
【請求項１】
低下した肝臓機能のためグルタチオンが欠乏している哺乳類に、以下の各成分の少なくとも１つを含む組成物を投与して、低下した肝臓機能を治療又は予防することを含む、細胞内に存在するグルタチオンを増加させる方法。
ａ）システイン及び該アミノ酸を含む機能的同等物からなる群より選択され、遊離アミノ酸として計算して、少なくとも１日当り100mgの量のシステインを含むグルタチオンの前駆体、
ｂ）グルタチオン生合成のエンハンサー、及び
ｃ）リグナン類又はｃ１）グルタチオン再生のエンハンサー及びｃ２）グルタチオン仲介抱合のエンハンサーの組合せから選択される第三成分
【請求項２】
ｂ）グルタチオン生合成のエンハンサーが、アポシニン又は類似体を含み、ｃ１）グルタチオン再生のエンハンサーが、シリマリン及びリグナン類からなる群より選択される活性成分を含み、そして、ｃ２）グルタチオン仲介抱合のエンハンサーが、イリドイド配糖体及びリグナン類からなる群より選択される活性成分を含む組成物を投与して、細胞内に存在するグルタチオンを増加させる請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ｂ）グルタチオン生合成のエンハンサーが、Picrorhiza種から得られた調製物であり、ｃ１）グルタチオン再生のエンハンサーが、Silybum marianumの調製物及びSchisandra種の調製物からなる群より選択され、そして、ｃ２）グルタチオン仲介抱合のエンハンサーが、Picrorhiza種の調製物及びSchisandra種の調製物からなる群より選択される組成物を投与して、細胞内に存在するグルタチオンを増加させる請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
ａ）グルタチオンの前駆体が、１日当り100−2000mgの量のシステインを含み、ｂ）グルタチオン生合成のエンハンサーが、Picrorhiza kurrooaの抽出物及びPicrorhiza schrophulariifloraの抽出物からなる群より選択され、該抽出物は、１日当り0.01−100mgのアポシニン又は類似体を含み、ｃ１）グルタチオン再生のエンハンサーが、１日当り10−1000mgのシリマリンを含むSilybum marianumの抽出物、及び１日当り0.1−100mgのスキサンドリン類を含むSchisandra chinensis又はSchisandra phenantheraの抽出物からなる群より選択され、そして、ｃ２）グルタチオン仲介抱合のエンハンサーが、１日当り１−100mgのピクロシド類を含み、Picrorhiza kurrooa又はPicrorhiza schrophulariiflora又は両方のPicrorhiza種から得られる抽出物、及び１日当り0.1−100mgのスキサンドリン類を含み、Schisandra chinensis又はSchisandra phenanthera又は両方のSchisandra種から得られる抽出物からなる群より選択される組成物を投与して、細胞内に存在するグルタチオンを増加させる請求項１に記載の方法。
【請求項５】
メチオニン、該アミノ酸を含む機能的類似体、葉酸、ビタミンB12、ビタミンB6、セレン酵母、亜鉛塩、銅塩、及びマンガン塩からなる群より選択されるｄ）活性成分をさらに添加した組成物を投与して、細胞内に存在するグルタチオンを増加させる請求項１又は４に記載の方法。
【請求項６】
ｄ）活性成分が、遊離アミノ酸として計算して、１日当り100−1000mgのメチオニン、１日当り10−200mcgのセレン酵母、１日当り0.1−30mgの酸化亜鉛、１日当り0.1−８mgの酸化銅、及び１日当り0.1−20mgのグルコン酸マンガンからなる群より選択される、細胞内に存在するグルタチオンを増加させる請求項５に記載の方法。
【請求項７】
低下した肝臓機能の予防又は治療する目的を含む、細胞内に存在するグルタチオンを増加させるための食餌又は薬物組成物であって、該組成物が以下の各成分の少なくとも１つからなる組合せを含み、かつ、ａ）グルタチオンの前駆体として、システインが、遊離アミノ酸として計算して、該組成物の固形物量100ｇ当り、少なくとも1.5ｇ占めることを特徴とする組成物。
ａ）システイン及び該アミノ酸を含む機能的同等物からなる群より選択されるグルタチオンの前駆体、
ｂ）グルタチオン生合成のエンハンサー、及び
ｃ）リグナン又はｃ１）グルタチオン再生のエンハンサー及びｃ２）グルタチオン仲介抱合のエンハンサーの組合せから選択される第三成分
【請求項８】
ｂ）グルタチオン生合成のエンハンサーが、アポシニン又は類似体を含み、ｃ１）グルタチオン再生のエンハンサーが、シリマリン及びリグナン類からなる群より選択される活性成分を含み、そして、ｃ２）グルタチオン仲介抱合のエンハンサーが、イリドイド配糖体及びリグナン類からなる群より選択される活性成分を含むことを特徴とする請求項７に記載の食餌又は薬物組成物。
【請求項９】
ｂ）グルタチオン生合成のエンハンサーが、Picrorhiza種から得られた調製物であり、ｃ１）グルタチオン再生のエンハンサーが、Silybum marianumの調製物及びSchisandra種の調製物からなる群より選択され、そして、ｃ２）グルタチオン仲介抱合のエンハンサーが、Picrorhiza種の調製物及びSchisandra種の調製物からなる群より選択されることを特徴とする請求項７又は８に記載の食餌又は薬物組成物。
【請求項１０】
ｂ）グルタチオン生合成のエンハンサーが、Picrorhiza kurrooaの抽出物及びPicrorhiza schrophulariifloraの抽出物からなる群より選択され、該抽出物は、本組成物の固形物量100ｇ当り、少なくとも５mgのアポシニン又は類似体を含み、ｃ１）グルタチオン再生のエンハンサーが、本組成物の固形物量100ｇ当り、少なくとも150mgのシリマリンを含むSilybum marianumの抽出物、及び本組成物の固形物量100ｇ当り、少なくとも1.5mgのスキサンドリン類を含むSchisandra chinensis又はSchisandra phenantheraの抽出物からなる群より選択され、そして、ｃ２）グルタチオン仲介抱合のエンハンサーが、本組成物の固形物量100ｇ当り、少なくとも15mgのピクロシド類を含み、Picrorhiza kurrooa又はPicrorhiza schrophulariiflora又は両方のPicrorhiza種から得られる抽出物、及び本組成物の固形物量100ｇ当り、少なくとも1.5mgのスキサンドリン類を含み、Schisandra chinensis又はSchisandra phenanthera又は両方のSchisandra種から得られる抽出物からなる群より選択されることを特徴とする請求項７に記載の食餌又は薬物組成物。
【請求項１１】
メチオニン、該アミノ酸を含む機能的類似体、葉酸、ビタミンB12、ビタミンB6、セレン酵母、亜鉛塩、銅塩、及びマンガン塩からなる群より選択されるｄ）活性成分をさらに添加した組成物であることを特徴とする請求項７又は１０のいずれか１項に記載の食餌又は薬物組成物。
【請求項１２】
ｄ）成分が、遊離アミノ酸として計算して、本組成物の固形物量100ｇ当り、1.5−15ｇのメチオニン、本組成物の固形物量100ｇ当り、150−3000mcgのセレン酵母、本組成物の固形物量100ｇ当り、1.5−450mgの酸化亜鉛、本組成物の固形物量100ｇ当り、1.5−120mgの酸化銅、及び本組成物の固形物量100ｇ当り、1.5−300mgのグルコン酸マンガンからなる群より選択されることを特徴とする請求項１１に記載の食餌又は薬物組成物。
【請求項１３】
ａ）グルタチオンの前駆体として、システインが、遊離アミノ酸として計算して、本組成物の固形物量100ｇ当り、少なくとも3.0ｇ占めることを特徴とする請求項７又は１０に記載の食餌又は薬物組成物。
【請求項１４】
低下した肝臓機能の予防又は治療する目的を含む、細胞内に存在するグルタチオンを増加させるための食餌又は薬物組成物であって、以下の各成分の少なくとも１つからなる組合せを含むことを特徴とする組成物。
ａ）システイン及び該アミノ酸を含む機能的同等物からなる群より選択され、遊離アミノ酸として計算して、少なくとも１日当り0.1gの量のシステインを含むグルタチオンの前駆体、
ｂ）グルタチオン生合成のエンハンサー、そして、
ｃ）リグナン又はｃ１）グルタチオン再生のエンハンサー及びｃ２）グルタチオン仲介抱合のエンハンサーの組合せから選択される第三成分
【請求項１５】
ｂ）グルタチオン生合成のエンハンサーが、アポシニン又は類似体を含み、ｃ１）グルタチオン再生のエンハンサーが、シリマリン及びリグナン類からなる群より選択される活性成分を含み、そして、ｃ２）グルタチオン仲介抱合のエンハンサーが、イリドイド配糖体及びリグナン類からなる群より選択される活性成分を含むことを特徴とする請求項１４に記載の食餌又は薬物組成物。
【請求項１６】
ｂ）グルタチオン生合成のエンハンサーが、Picrorhiza種から得られた調製物であり、ｃ１）グルタチオン再生のエンハンサーが、Silybum marianumの調製物及びSchisandra種の調製物からなる群より選択され、そして、ｃ２）グルタチオン仲介抱合のエンハンサーが、Picrorhiza種の調製物及びSchisandra種の調製物からなる群より選択されることを特徴とする請求項１４又は１５に記載の食餌又は薬物組成物。
【請求項１７】
ｂ）グルタチオン生合成のエンハンサーが、Picrorhiza kurrooaの抽出物及びPicrorhiza schrophulariifloraの抽出物からなる群より選択され、該抽出物は、１日当り0.01−100mgのアポシニン又は類似体を含み、ｃ１）グルタチオン再生のエンハンサーが、１日当り10−1000mgのシリマリンを含むSilybum marianumの抽出物、及び１日当り0.1−100mgのスキサンドリン類を含むSchisandra chinensis又はSchisandra phenantheraの抽出物からなる群より選択され、そして、ｃ２）グルタチオン仲介抱合のエンハンサーが、１日当り１−100mgのピクロシド類を含み、Picrorhiza kurrooa又はPicrorhiza schrophulariiflora又は両方のPicrorhiza種から得られる抽出物、及び１日当り0.1−100mgのスキサンドリン類を含み、Schisandra chinensis又はSchisandra phenanthera又は両方のSchisandra種から得られる抽出物からなる群より選択されることを特徴とする請求項１４に記載の食餌又は薬物組成物。
【請求項１８】
組成物が、メチオニン、該アミノ酸を含む機能的類似体、葉酸、ビタミンB12、ビタミンB6、セレン酵母、亜鉛塩、銅塩、及びマンガン塩からなる群より選択されるｄ）活性成分をさらに含むことを特徴とする請求項１４又は１７に記載の食餌又は薬物組成物。
【請求項１９】
ｄ）成分が、遊離アミノ酸として計算して、１日当り100−1000mgのメチオニン、１日当り10−200mcgのセレン酵母、１日当り0.1−30mgの酸化亜鉛、１日当り0.1−８mgの酸化銅、及び１日当り0.1−20mgのグルコン酸マンガンからなる群より選択されることを特徴とする請求項１８に記載の食餌又は薬物組成物。
【請求項２０】
低下した肝臓機能の予防又は治療する目的を含む、細胞内に存在するグルタチオンを増加させるための食餌又は薬物組成物であって、該組成物は、剤形の単位を示し、以下の各成分の少なくとも１つからなる組合せを含み、かつ、ａ）グルタチオンの前駆体として、システインが、遊離アミノ酸として計算して、剤形の単位当り、少なくとも30mgの量のシステインが存在することを特徴とする組成物。
ａ）システイン及び該アミノ酸を含む機能的同等物からなる群より選択されるグルタチオンの前駆体、
ｂ）グルタチオン生合成のエンハンサー、そして、
ｃ）リグナン又はｃ１）グルタチオン再生のエンハンサー及びｃ２）グルタチオン仲介抱合のエンハンサーの組合せから選択される第三成分
【請求項２１】
ｂ）グルタチオン生合成のエンハンサーが、アポシニン又は類似体を含み、ｃ１）グルタチオン再生のエンハンサーが、シリマリン及びリグナン類からなる群より選択される活性成分を含み、そして、ｃ２）グルタチオン仲介抱合のエンハンサーが、イリドイド配糖体及びリグナン類からなる群より選択される活性成分を含むことを特徴とする請求項２０に記載の食餌又は薬物組成物。
【請求項２２】
ｂ）グルタチオン生合成のエンハンサーが、Picrorhiza種から得られた調製物であり、ｃ１）グルタチオン再生のエンハンサーが、Silybum marianumの調製物及びSchisandra種の調製物からなる群より選択され、そして、ｃ２）グルタチオン仲介抱合のエンハンサーが、Picrorhiza種の調製物及びSchisandra種の調製物からなる群より選択されることを特徴とする請求項２０又は２１に記載の食餌又は薬物組成物。
【請求項２３】
ａ）グルタチオンの前駆体が、30−333mgの量のシステインを含み、ｂ）グルタチオン生合成のエンハンサーが、Picrorhiza kurrooaの抽出物及びPicrorhiza schrophulariifloraの抽出物からなる群より選択され、該抽出物は、0.0033−33mgのアポシニン又は類似体を含み、ｃ１）グルタチオン再生のエンハンサーが、3.3−333mgのシリマリンを含むSilybum marianumの抽出物、及び0.033−33mgのスキサンドリン類を含むSchisandra chinensis又はSchisandra phenantheraの抽出物からなる群より選択され、そして、ｃ２）グルタチオン仲介抱合のエンハンサーが、0.33−33mgのピクロシド類を含み、Picrorhiza kurrooa又はPicrorhiza schrophulariiflora又は両方のPicrorhiza種から得られる抽出物、及び0.033−33mgのスキサンドリン類を含み、Schisandra chinensis又はSchisandra phenanthera又は両方のSchisandra種から得られる抽出物からなる群より選択されることを特徴とする請求項２０に記載の食餌又は薬物組成物。
【請求項２４】
組成物が、メチオニン、該アミノ酸を含む機能的類似体、葉酸、ビタミンB12、ビタミンB6、セレン酵母、亜鉛塩、銅塩、及びマンガン塩からなる群より選択されるｄ）活性成分をさらに含むことを特徴とする請求項２０又は２３に記載の食餌又は薬物組成物。
【請求項２５】
ｄ）成分が、遊離アミノ酸として計算して、33―333mgのメチオニン、3.3−66mcgのセレン酵母、0.033−10mgの酸化亜鉛、0.033−2.4mgの酸化銅、及び0.033−6.6mgのグルコン酸マンガンからなる群より選択されることを特徴とする請求項２４に記載の食餌又は薬物組成物。
【請求項２６】
低下した肝臓機能の予防又は治療する目的を含む、細胞内に存在するグルタチオンを増加させるための食餌又は薬物組成物であって、以下の各成分の少なくとも１つからなる組合せを含み、かつ、ａ）グルタチオンの前駆体として、システインが、遊離アミノ酸として計算して、活性成分ａ）〜ｃ２）の合計の固形物量100ｇ当り、少なくとも25ｇ占めることを特徴とする組成物。
ａ）システイン及び該アミノ酸を含む機能的同等物からなる群より選択されるグルタチオンの前駆体、
ｂ）グルタチオン生合成のエンハンサー、そして、
ｃ）リグナン又はｃ１）グルタチオン再生のエンハンサー及びｃ２）グルタチオン仲介抱合のエンハンサーの組合せから選択される第三成分
【請求項２７】
ｂ）グルタチオン生合成のエンハンサーが、アポシニン又は類似体を含み、ｃ１）グルタチオン再生のエンハンサーが、シリマリン及びリグナン類からなる群より選択される活性成分を含み、そして、ｃ２）グルタチオン仲介抱合のエンハンサーが、イリドイド配糖体及びリグナン類からなる群より選択される活性成分を含むことを特徴とする請求項２６に記載の食餌又は薬物組成物。
【請求項２８】
ｂ）グルタチオン生合成のエンハンサーが、Picrorhiza種から得られた調製物であり、ｃ１）グルタチオン再生のエンハンサーが、Silybum marianumの調製物及びSchisandra種の調製物からなる群より選択され、そして、ｃ２）グルタチオン仲介抱合のエンハンサーが、Picrorhiza種の調製物及びSchisandra種の調製物からなる群より選択されることを特徴とする請求項２６又は２７に記載の食餌又は薬物組成物。
【請求項２９】
ｂ）グルタチオン生合成のエンハンサーが、Picrorhiza kurrooaの抽出物及びPicrorhiza schrophulariifloraの抽出物からなる群より選択され、該抽出物は、成分ａ）〜ｃ２）の合計の固形物量100ｇ当り、70mg−40ｇのアポシニン又は類似体を含み、ｃ１）グルタチオン再生のエンハンサーが、活性成分ａ）〜ｃ２）の合計の固形物量100ｇ当り、少なくとも150mgのシリマリンを含むSilybum marianumの抽出物、及び活性成分ａ）〜ｃ２）の合計の固形物量100ｇ当り、少なくとも1.5mgのスキサンドリン類を含むSchisandra chinensis又はSchisandra phenantheraの抽出物からなる群より選択され、そして、ｃ２）グルタチオン仲介抱合のエンハンサーが、活性成分ａ）〜ｃ２）の合計の固形物量100ｇ当り、少なくとも15mgのピクロシド類を含み、Picrorhiza kurrooa又はPicrorhiza schrophulariiflora又は両方のPicrorhiza種から得られる抽出物、及び活性成分ａ）〜ｃ２）の合計の固形物量100ｇ当り、少なくとも1.5mgのスキサンドリン類を含み、Schisandra chinensis又はSchisandra phenanthera又は両方のSchisandra種から得られる抽出物からなる群より選択されることを特徴とする請求項２６に記載の食餌又は薬物組成物。
【請求項３０】
組成物が、メチオニン、該アミノ酸を含む機能的類似体、葉酸、ビタミンB12、ビタミンB6、セレン酵母、亜鉛塩、銅塩、及びマンガン塩からなる群より選択されるｄ）活性成分をさらに含むことを特徴とする請求項２６又は２９に記載の食餌又は薬物組成物。
【請求項３１】
ｄ）成分が、遊離アミノ酸として計算して、活性成分ａ）〜ｃ２）の合計の固形物量100ｇ当り、1.5−15ｇのメチオニン、成分ａ）〜ｃ２）の合計の固形物量100ｇ当り、150−3000mcgのセレン酵母、成分ａ）〜ｃ２）の合計の固形物量100ｇ当り、1.5−450mgの酸化亜鉛、成分ａ）〜ｃ２）の合計の固形物量100ｇ当り、1.5−120mgの酸化銅、及び成分ａ）〜ｃ２）の合計の固形物量100ｇ当り、1.5−300mgのグルコン酸マンガンからなる群より選択されることを特徴とする請求項３０に記載の食餌又は薬物組成物。
【請求項３２】
活性成分ａ）〜ｃ２）からなる固形物量100ｇ当り、ａ）グルタチオンの前駆体として、システインが少なくとも30ｇ占めることを特徴とする請求項７又は１０に記載の食餌又は薬物組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、低下した肝臓機能のためグルタチオンが欠乏している哺乳類に、食餌又は薬物組成物を投与して、低下した肝臓機能を治療又は予防することを含む、細胞内に存在するグルタチオンを増加させる方法及び相当する食餌又は薬物組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
肝臓は、蛋白質、糖質、及び脂質の代謝に関与する主要な器官であるが、解毒にとって主要な器官でもある。毒性の可能性がある化合物は、フェーズＩ代謝酵素によって不活性な代謝物に変換され、排泄される。あるいは、代謝物は、さらにフェーズII代謝酵素によって抱合を受け、最終的には排泄される。
【０００３】
多くの薬物及び毒物は、グルタチオン抱合によって解毒化され得る。しかしながら、これらの薬物及び毒物のレベルが、肝臓の還元型グルタチオンの濃度を超えると、それらの成分は、急性の肝臓毒となる。いくつかの種類の肝臓障害においては、グルタチオンレベルの低下が顕著である。例えば、肝炎に感染した場合、該肝臓疾患の進行の程度は、急性の肝臓中毒、例えば、アセトアミノフェン中毒や肝不全を伴うアルコール中毒、におけるGSHの還元と相関している。
【０００４】
Ｃ型肝炎や肝臓毒への曝露のいずれも、恐らく、内毒素又は外毒素のいずれかの毒素に応答する肝臓が不能になるのと同様の機構を経由して、肝臓癌を引き起こし得る。
【０００５】
還元型グルタチオン（GSH）は、グルタチオンペルオキシダーゼ（GPX）の基質であり、そういうものとして、抗酸化防御機構にも寄与している。
【０００６】
酵素グルタチオンレダクターゼは、主に、酸化的ペントースリン酸回路等によって供給されるNADPHの存在下、GSSGを還元してGSHに戻す。肝臓において、グルタチオン機構がH2O2を処理する能力は、GPXとグルタチオンレダクターゼの活性、NADPH供給の速度、及びGSH含量に依存している。GSHは、過酸化水素への効果を除き、in vitroで、例えば、・OH、HOCl、ペルオキシニトリル、RO・、及びRO2・と反応することもできる。フリーラジカルと反応すると、チイルラジカル（GS・）が産生され、これはスーパーオキシドを発生させる。さらに、スーパーオキシドは、GSHの不在下、GPXを不活化することもできる。それゆえ、スーパーオキシドジスムターゼ（SOD）又は抗酸化物は、GSHと協同して、in vivoで、フリーラジカルを除去することができる。
【０００７】
生物体に侵入する多くの生体異物は、GSHと抱合して代謝される。この過程は、酵素グルタチオン−S−トランスフェラーゼ（GST）で触媒される。
【０００８】
GSHは２つのステップで合成され、２つの異なる酵素が触媒する。最初のステップの間は、γ−グルタミルシステインシンテターゼ（GCS）が、グルタメートとシステインから、Ｌ−γ−グルタミル−Ｌ−システインの形成を触媒する。第二のステップは、グルタチオンシンテターゼの影響の下、グリシンを取り込み、GSHを産生する。
【０００９】
肝臓において、還元型グルタチオンの濃度を減少させることが可能な薬物の１例は、一般的に使用される鎮静剤であるアセトアミノフェン（パラセタモール）である。アセトアミノフェンは、例えば、自殺を試みたり、子供が誤ったりして、大量に摂取されると、重篤な肝臓の壊疽を招く。アセトアミノフェンの肝臓毒性は、肝細胞のチトクロームＰ450混合機能酸化酵素系で、親化合物から形成される毒性活性代謝物によって仲介されている。該代謝物は、その後、グルタチオン抱合で解毒される。もしも過剰量が形成されると、肝臓のグルタチオン保有量は減少し、該キノンイミンは肝細胞の構成物と反応して壊疽を招く。肝臓の損傷は、アルコール又は他の薬物によって増強されることがあり、また、肝臓のグルタチオンが少ない状態である飢餓や健康不良状態は、該効果を高めることがある。
【００１０】
オオアザミ、すなわち、Silybum marianum (L.) Gaertn.（Compositae）は、西洋諸国では、その肝臓保護機能がよく知られている。その主要な成分は、フラバノリグナン類であり、総称的にシリマリンとして知られている。肝臓の保護、治療及び修復のための、オオアザミを含む組成物の例が、WO 99／43336に記載されている。
【００１１】
ラットにシリマリン（200mg／kg）を腹腔内投与すると、合計のグルタチオン含量は増加し、肝臓、腸及び胃の還元型グルタチオン／酸化型グルタチオン比は改善され、一方、腎臓、肺、及び脾臓のレベルには影響がなかった（Valenzuelaら、Selectivity of silymarin on the increase of glutathione content in different tissues of the rat、Planta Medica 55、420−２（1989））。シリマリンの主要成分であるシリビンは、ヒトの好中球でのスーパーオキシド及び過酸化水素の産生に対して抑制効果を発揮し、また、ヒト赤血球のスーパーオキシドジスムターゼ及びグルタチオンペルオキシダーゼ両方の活性を増加した。シリマリンは、in vitroで、アセトアミノフェン誘導によるGSHの減少を防ぎ、肝芽腫Hep G２細胞の細胞毒性から保護する。
シリマリン及びシリビンは、ラットにおいて、エタノール及びパラセタモールによって誘導される肝臓グルタチオンの減少から、in vivoにおいて保護する。シリビンは、アセトアミノフェンによって誘導されるGSHの減少を低下させるが、分離したラットの細胞において、ブチオニンスルホキシイミドによるGSHの減少には影響しないことが示された。このことは、ブチオニンスルホキシイミドが、グルタミルシステインシンテターゼ又はGSHの合成に影響を与えることなく、GSHの酸化又は抱合を増加させることを示唆している（Garridoら、Pharmacology and Toxicology 69、９−12（1991））。
【００１２】
さらに、シリビンは、グルタチオン−S−トランスフェラーゼの強力な、無毒性の阻害剤であることが発見された（Bartholomeusら、Xenobiotica 24、17−24、（1994））。この知見によって、シリマリンは、肝臓保護薬として有効かもしれないが、GSH−トランスフェラーゼによって触媒されるGSHの抱合による第二の解毒化を阻害するという結論が導かれる。
【００１３】
二重盲検偽薬コントロール試験において、慢性アルコール肝臓疾患の患者に対して、シリマリン治療（レガロン、420mg、６か月）を行うと、フリーの−SH基の血清レベルとGSHペルオキシダーゼ活性が増加した。他の臨床試験により、標準的なSilybum抽出物の肝臓保護効果が確認されている。
【００１４】
RO 102689（Intr．Medicamente Biofarm）は、armurariu fruitからのシリマリンの抽出について開示している。該抽出物は、活性慢性肝炎、肝硬変の治療、及び肝毒性薬物の投与中における肝細胞の保護に有用であり得る。
【００１５】
Picrorhiza kurrooa Royle（Scrophulariaceae）は、主として肝不全の治療において使用されている。イリドイド配糖体は、その活性成分であると考えられている。しかし、アセトフェノン類のような他の化合物も、そのような役割を果たし得る。
【００１６】
いくつかのイリドイド配糖体は、P．kurrooaから単離され、それらの大部分は、ベンゾイル基又はシンナモイル基から誘導した側鎖を有するカタルポールの複合体である。
【００１７】
Picrolivは、イリドイド配糖体ピクロシドＩとクトコシドを１：1.5−1.2（50−70％）及びククルビタシン配糖体の混合物（4−5％）を含むPicrorhiza kurrooaの標準的な分画である（US-A 5145955）。ピクロシドIIも、Picrorhiza kurrooaから単離されており、CCl4と共にマウスに50mg／kg p.o.処理することにより、肝臓保護活性を示した（DE-A 2203884）。
【００１８】
Picrolivは、in vitro及びin vivoの肝臓損傷モデルで試験されている。これれの研究は、Picrolivの抗肝臓毒性、肝臓再生性、胆汁分泌性、及び抗高脂血症活性を示している（Dhawanによる総説、Medicinal Chemistry Research 5、595−605、（1995））。肝臓再生効果は、部分的肝切除又は四塩化炭素誘導による肝臓損傷後におけるPicroliv処理ラットの肝臓の抗酸化系の増加回復と関連していた。さらに、Picrolivは、ラット（６及び12mg／kg）に７日間経口投与した後、いくつかの肝臓細胞マーカーにおいて、パラセタモール誘導の生化学的変化を著しく逆方向に変えた。ラットへの四塩化炭素の注入は、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼのようないくつかの薬物代謝酵素、及び還元型グルタチオンによって示されるように、肝臓オキシダーゼ系の重篤な損傷を誘導した。Picroliv（６mg／kg）を７日間投与すると、肝臓損傷を著しく防いだ（Rastogiら、Drug Development Research 41、44−47、（1997））。45日間アルコールに曝したラットに、Picrolivを最後の15日間（12mg／kg／日、p.o.）与えると、スーパーオキシドジスムターゼ、カタラーゼ、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、及び還元型グルタチオンのレベルの低下を防いだ（Rastogiら、1196）。Picroliv（６mg／kg／日、p.o.）は、Plasmodium berghei．を感染させたマウスの肝臓の還元型グルタチオンレベルの減少と、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、グルタチオンレダクターゼ、及びグルタチオンペルオキシダーゼ活性の抑制を回復させた。さらに、Picrolivは、Plasmodium berghei．を感染させたマウスのγ−グルタミルトランスペプチダーゼの増大した活性を抑制することによって、システイン、及びグルタチオンの合成の低下レベルを回復させた。Picrorhiza kurrooa（50mg／kg／日、p.o.）のエタノール抽出物による前処理は、グルタチオンペルオキシダーゼとグルタチオントランスフェラーゼ活性の減少、及びガラクトサミン誘導の肝臓傷害をもったラットにおける還元型グルタチオンの減少を防止した。
【００１９】
P．kurrooaから単離されるアセトフェノンであるアポシニンは、転写因子AP−１の活性化を通じて増加したγ−GCS mRNAの発現及び酵素活性を介することにより、細胞内のGSH合成を増大させる（Lapperreら、Febs Letters 443、235−９、（1999））。
【００２０】
Schisandra chinensis（Turcz.）Baill（Schisandraceae）は、極東で発見された曲がりくねった薬用植物である。その果実は、世界の中のこの地域で、伝統的な薬に長い間使用されている。その主要な活性成分は、リグナン類、例えば、スキサンドリン類（ゴミシン類）である。これらの化合物は、強力な肝臓保護薬であることが示された（Hanckeら、Fitoterapia 70、451−471（1999））。それらは、肝臓細胞のミトコンドリアにあるGSH量を増加させて、GSH／GSSG比とGSHレダクターゼ活性を増大させることができる。さらに、それらは、チトクロームP450を介した肝臓毒の代謝を高めて、GSH−S−トランスフェラーゼを介する抱合の誘導を引き起こすことにより、解毒化を強めることができる。
【００２１】
Schisandra chinensis（1.6g／kg p.o.）のリグナン富化抽出物を用いた前処理は、肝臓のグルタチオン含量を増加させ、ラットの肉体的運動で誘導される筋肉損傷を保護した（Koら、Phytotherapy Research 10、450−452、（1996））。ラットをSchisandra chinensis（1.6g／kg／日 p.o.）の抽出物で処理すると、肝臓のGSHレベルとGSHレダクターゼ、G6PDHの活性を増加させ、ペルオキシド誘導GSHの減少に対する肝臓組織のホモジネートの感受性を減少させた。これらの抽出物（0.2−3.2g／kg p.o.）をラットに前処理すると、CCl4誘導のGSH減少と酸化的肝臓細胞の損傷から投与量依存的に保護した。これらのデータは、他の実験によって確認されており、Schisandra chinensis抽出物（1.6g／kg／日 p.o.）が、肝臓のGSHレベル、GSHレダクターゼ及びGSH−トランスフェラーゼ活性を増加させ、アフラトキシン及びカルシウムで誘導された肝臓損傷をもつラットにおいて、肝臓の損傷を防止することが示されている。エタノールで誘導した肝臓の過酸化を有するマウスに、スキサンヘノールとスキザンドリンB（200 mg／kg）で前処理すると、ジスムターゼ及びカタラーゼの活性を増加させ、一方、GSH−ペルオキシダーゼの活性には、影響を与えなかった。スキザンドリンB（３ mmol／kg／日 p.o.）で処理すると、ミトコンドリアのGSHレベルを増加させ、その代わりにGSSGレベルを減少させて、GSH／GSSG比を上げて、ミトコンドリアのGSHレダクターゼ活性を増加させた。これらの効果は、CCl4中毒のマウスで、肝臓損傷を保護することから一層強調された。しかしながら、GSHレダクターゼの特異的阻害剤であるBCNUは、GSHレダクターゼ活性を阻害したが、保護活性には影響を与えず、スキサンドリンBによるGSHレダクターゼ活性の増加は、肝臓保護の主要な要因ではないことを示唆している。
【００２２】
直接的な抗酸化剤は、その化学組成によれば、ラジカルスカベンジャーであり、酸素ラジカルの形成を阻害する。この機能が最も一般的に知られている抗酸化剤は、ビタミンC、ビタミンE、及びフラボノイド類である。緑茶のカテキン類及びクルクミンは、同様の効果をもち、抗酸化活性を増大させる。
【００２３】
セレンは、赤血球及び他の組織におけるグルタチオンペルオキシダーゼの構成成分である。グルタチオンペルオキシダーゼは、過酸化水素を水に還元する。セレンは、無機セレン塩及び有機セレン化合物の両方いずれの形でも、よく吸収されると考えられている。アルコール中毒のセレン欠乏患者に、２か月間、200μg／日補給すると、著しく血漿中のセレンレベル及びグルタチオンペルオキシダーゼを改善したが、過酸化パラメーターには影響はなかった。
【００２４】
亜鉛は、酸素ラジカルによる損傷から保護する役割があり、細胞質スーパーオキシドジスムターゼの必須構成成分である。亜鉛イオンは、又、蛋白質中のスルフヒドリル基と結合し、その酸化を防いでいる。大部分（80−85％）の血漿中の亜鉛は、アルブミンに結合し、15％はアルファ２−マクログロブリン及び２％未満がRBPに結合している。血漿中の亜鉛レベルは、感染及び他のストレッサーで低下する。その理由は、恐らくは、メタロチオネインを介した組織的再分布と、血漿アルブミンレベルがストレスで減少することによる。
【００２５】
銅は、フリーラジカルによる損傷からの保護に関与する多くの酵素の必須部分であり、該酵素としては、例えば、チトクロームオキシダーゼ、リシルオキシダーゼ、Zn／Cuスーパーオキシドジスムターゼが挙げられる。食餌から摂取される銅の約30％は吸収され、欠乏した場合には、この数字が増加することを示すいくつかの証拠がある。食餌において欠乏することは非常に稀である。血漿中の銅の80％以上は、セルロプラスミン（炎症状態で増加する陽性急性フェーズ蛋白質）に結合している。遊離の銅イオン（通常の状態ではほとんどないが、銅が過剰の場合に起こり得る）は、酸素ラジカルの主要な供給源である。
【００２６】
マンガンは、ミトコンドリアのピルビン酸カルボキシラーゼ、スーパーオキシドジスムターゼ及びアセチルCoAカルボキシラーゼを含むいくつかの金属酵素の一部分である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２７】
本発明の第一の目的は、ある成分の組合せを哺乳類に投与して、低下した肝臓機能の予防又は治療を含む、細胞内に存在するグルタチオンを増加させる方法を提供することである。
【００２８】
さらに、本発明は、低下した肝臓機能の予防又は治療する目的を含む、細胞内に存在するグルタチオンを増加させるための改良された組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００２９】
驚くべきことに、肝臓の損傷に好適な保護を与えるためには、ある成分の組合せが必要であることが発見された。この目的のためには、細胞のグルタチオンを増加させる成分の組合せが必要であることが発見された。このことを達成するため、内因性のグルタチオンを産生する前駆体からなる成分を投与する。それと共に、内因性のグルタチオン生合成、酸化型グルタチオンの再生、及び／又はグルタチオン仲介の抱合を増加させる成分を投与する。
【００３０】
本発明は、低下した肝臓機能の予防又は治療を含む、細胞内に存在するグルタチオンを増加させる方法を提供することであり、また、上記目的のための新規な食餌又は薬物組成物を含むものであり、少なくとも、ａ）システイン及び該アミノ酸を含む機能的同等物からなる群から選択されたグルタチオンの１つの前駆体、ｂ）グルタチオン生合成の１つのエンハンサー、ｃ）リグナン又はｃ１）グルタチオン再生のエンハンサー及びｃ２）グルタチオン仲介抱合のエンハンサーの組合せから選択した第三成分の組合せからなる。
【００３１】
一般的に、肝臓の健康には、解毒能力が極めて重要であることが見出された。もしも、解毒能力が減少すると、肝臓自体は、通常は中和される全ての内毒素及び該毒素によって毒化される。
【００３２】
上で既に指摘したように、多くの薬物及び毒物は、グルタチオン抱合によって解毒され得る。もしも、体（肝臓）のGSHを介した解毒能力を超えると、他の解毒経路が最大限利用される。しかしながら、あまりにひどく曝露した体の部分が損傷を受けると、全クリアランスは遅くなる。上記部分は、例えば、肝臓、気管、胃腸管、及び皮膚である。このことは、COPD、気腫、CARAのような呼吸器系疾患、癌、及び脂肪肝、肝硬変、肝炎及び肝癌のような肝臓疾患を引き起こし得る。
【００３３】
さらに付け加えると、多くの人は、適当なグルタチオン代謝を必要とする毒性化合物に曝されている。このことは、例えば、汚染地域（放射線、いろいろなハロゲン化、窒化の化学物質）に住んでいる人々、危険化学物質（有機リン酸殺虫剤又はハロゲン化溶媒）を用いて働く人々、及び煙草を吸う人々に当てはまる。また、組織の慢性的な炎症の間は、関節炎又は炎症性の腸疾患が起こるおそれがあり、炎症組織のグルタチオンレベルは、しばしば低下する。また、この場合は、内因性のグルタチオンを産生させる更なる刺激は有益である。
【発明の効果】
【００３４】
本発明の方法及び組成物は、上記疾患を治療及び／又は予防をすることができる。本発明によれば、細胞内のグルタチオンの存在、又はグルタチオンの状態は、それぞれ増加又は改良される。このことは、特に低下した肝臓機能の治療及び／又は予防に適する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３５】
本発明は、ヒト及び動物（例えば、鳥）を含む哺乳類に適用できる。ここで述べたいくつかの疾患は、アンバランスな飼料を消費することにより、集中的な動物の飼育を行う間に起こり得る。肝臓の問題は、過剰な量の劣化した脂肪又はヒト食品業界の廃物製品を消費することによって起こる。この製品は、ある理由によって、極めて高いレベルの抗栄養因子で汚染されているか、極めて高いレベルの抗栄養因子を含んでいる。このことは、圧倒的に、ブタ及び家禽類の飼育で起こる。
【００３６】
本発明では、ａ）グルタチオンの前駆体を、ある最小量を投与する。該ａ）前駆体は、システインあるいは該アミノ酸システインを含む１又は２以上の機能性類似体あるいは両方の組合せである。該機能性類似体は、例えば、システイン、特に、L−アイソマーの塩及び通常のエステル、N−アセチルシステイン（NAC）のようなシステインのN−アルキル誘導体、ホエイ又は卵の蛋白質のようなシステインに富む蛋白質及びペプチド、及びシスタチオニンであり、還元型又は酸化型の両方である。
還元型又は酸化型のグルタチオン自体は、グルタチオンの組織レベルを増加させることもできる。メチオニン又はS−アデノシルメチオニン（SAM）をシステイン類似体として使用すると、増加したシステインレベルに対する危険が、低下した肝臓機能を持つヒトを含む動物において高い。該化合物をシステイン類似体として使用する場合は、少なくとも葉酸、ビタミンB6及び／又は亜鉛を追加して含めるべきである。３つの化合物の全てが、奨励される１日摂取量を超える量だけ存在していることが好ましい。
【００３７】
本発明において使用される該グルタチオン前駆体は、単一種又はそれぞれ異なる成分又は種の混合物であり得る。該ａ）前駆体の１日当りの最小投与量は、遊離のアミノ酸として計算して、少なくとも100mgのシステインである。該最小投与量は、好ましくは、１日当り少なくとも200mgである。システインの最大量は、2000 mgを超えるべきではない。同等物の絶対量は、上記アミノ酸のモル分子量を用いて、容易に計算できる。
【００３８】
ａ）グルタチオン前駆体は、ｂ）グルタチオン生合成のエンハンサー、及び、以下に述べるｃ）第三成分と共に投与する。本発明の簡単な例では、上記した成分ａ）、ｂ）、及びｃ）は、投与されるか、本発明の組成物に含まれる。
【００３９】
投与されるｃ）第三成分は、１又は２以上のリグナン類又はｃ１）グルタチオン再生のエンハンサー及びｃ２）グルタチオン仲介抱合のエンハンサーの組合せである。本明細書では、リグナン類は、ｃ２）グルタチオン仲介抱合のエンハンサーとしてだけでなく、ｃ１）グルタチオン再生のエンハンサーとしても作用することができることを明記する。結果的に、本発明の第一の例は、ｃ）第三成分は、１つのリグナン単独又は異なるリグナン類の混合物からなる。本発明の第二の例では、ｃ）第三成分は、１又は２以上のリグナン類と、リグナンとは異なる１又は２以上のｃ１）グルタチオン再生のエンハンサー、又はリグナンとは異なる１又は２以上のｃ２）グルタチオン仲介抱合のエンハンサーとの組合せである。本発明の第三の例では、ｃ）第三成分は、リグナンとは異なる１又は２以上のｃ１）グルタチオン再生のエンハンサーと、リグナンとは異なる１又は２以上のｃ２）グルタチオン仲介抱合のエンハンサーとの組合せである。本発明の第四の例では、ｃ）第三成分は、ｉ）リグナンとは異なる１又は２以上のｃ１）グルタチオン再生のエンハンサー、ii）リグナンとは異なる１又は２以上のｃ２）グルタチオン仲介抱合のエンハンサー、及びiii）１つのリグナン又は２以上のリグナン類、の組合せである。
【００４０】
好ましい態様は、ｂ）グルタチオン生合成のエンハンサーは、アポシニン又は類似体を含む。
【００４１】
アポシニンは、アイリス種（Iridaceae）等の植物又はApocynam cannabinumあるいは他のApocynaceaeの根茎から単離することができる。
【００４２】
より好ましくは、ｂ）グルタチオン生合成のエンハンサーは、Picrorhiza種から採取した調製物であり、さらに好ましくは、ｂ）グルタチオン生合成のエンハンサーは、Picrorhiza kurrooaの抽出物及びPicrorhiza schrophulariifloraの抽出物からなる群より選択されるものであり、該抽出物は、最も好ましくは、１日当り0.01〜100mgのアポシニン又は類似体を含む。
【００４３】
ｃ１）グルタチオン再生のエンハンサーは、好ましくは、Silybum marianum又はarmurariu果実の抽出物のようなシリマリンが豊富な調製物、及びSchisandra種の抽出物のようなスキサンドリン類が豊富な調製物からなる群より選択されるものである。また、ｃ２）グルタチオン仲介の解毒過程のエンハンサーは、好ましくは、イリドイド配糖体、特にPicrorhiza種の抽出物が豊富な調製物、及びSchisandra種の抽出物のようなスキサンドリン類が豊富な調製物からなる群より選択されたものである。
【００４４】
Picrorhiza種の調製物は、好ましくは、Picrorhiza kurrooa又はPicrorhiza scrophulariiflora（Neopicrorhiza scrophulariifloraとしても知られる）の抽出物であり、好ましくは、全イリドイド配糖体が１−100mg、特に１−100mgのピクロシド類、より好ましくは１−50 mgのピクロシドII、例えば、６mgのピクロシドII、及び0.01−100 mgのアポシニンを含むものである。
【００４５】
本発明では、アポシニンの類似体は、アポシニンの代わりに、又はアポシニンと共に使用することができる。このような類似体は、特には、４−ヒドロキシ基がエーテル化されているものであり、特に糖部分を有するものである。糖部分がβ−D−グルコースである類似体は、一般にアンドロシンとして知られている。
【００４６】
Silybum marianumの調製物は、好ましくは、10−1000mgのシリマリンを含む抽出物であり、より好ましくは、140mgのシリマリンを含む175 mgの抽出物である。
【００４７】
Schisandra種の調製物は、好ましくは、Schisandra chinensis又はSchisandra sphenantheraの抽出物であり、0.1−100 mgのリグナン類、特に0.1−100 mgのスキサンドリン類、より好ましくは、11−70 mgのスキサンドリン類、例えば、約５mgのスキサンドリン類である。
【００４８】
異なる成分ａ）、ｂ）、ｃ）、ｃ１）、及びｃ２）は知られており、上で記述した。いくつかの伝統的に使用されるハーブ類、例えば、オオアザミ、Picrorhiza、及びSchisandraを使用することができる。これらは、肝臓保護活性を呈し、内因性のグルタチオンの産生を誘導又は増加させることが知られている。この内因性の抗酸化剤は、毒物の代謝及び除去において中心的役割を果たしている。本発明によれば、肝臓のGSHは増加し、さらに、GSH合成に必要な酵素γ−グルタミルシステインシンテターゼも増加する。
【００４９】
そのため、本発明は、グルタチオンの合成に重要な前駆体と補因子、グルタチオンの再生を増大させる化合物、及びグルタチオン仲介の解毒過程を誘導する化合物を含む。
【００５０】
本発明では、好ましくは、肝臓の抗酸化活性を増大させるビタミンC、E、及びフラボノイド類のような直接的な抗酸化剤、及びセレン、亜鉛、銅及びマンガンのような酵素的抗酸化剤を付加的に使用することができる。このことは、毒物の一部が、酸素ラジカルを形成して、酸化的損傷をもたらすことから好ましい。
【００５１】
酵素的抗酸化剤は、特にグルタチオンペルオキシダーゼ又はスーパーオキシドジスムターゼの活性を向上させる成分である。セレンは、セレン塩、好ましくは１日当りの量が10−200mcgのセレンを供給するセレン酵母として使用することができる。亜鉛は、好ましくは１日当りの量が0.1−30mgの亜鉛を供給するZnOのような、無機又は有機亜鉛塩として存在することができる。銅は、好ましくは１日当りの量が0.1−８mgの銅を供給する銅塩として存在することができる。マンガンは、好ましくは１日当りの量が0.1−20 mgのマンガンを供給するマンガン塩として存在することができる。
【００５２】
その上、該組成物は、グルタチオンの前駆体の生合成で使用される補因子のように、肝臓のグルタチオンをさらに増加させる少なくとも１つの化合物を含めることができる。そのような化合物は、リボフラビン、好ましくは0.1−200mgのリボフラビン、ビタミンB6、好ましくは0.1−200mgのビタミンB6、ビタミンB12、好ましくは0.1−3000mcgのビタミンB12、及び葉酸又は葉酸エステル、好ましくは10−1000 mcgの葉酸からなる群より選択される。ビタミンB6とビタミンB12の好ましい供給源は、それぞれ、ピリドキシン及びシアノコバラミンである。
【００５３】
さらに、該組成物は、直接的に活性酸素種を捕捉するか、その形成を妨害する抗酸化機能を増大させる少なくとも１つの成分を含めることができる。そのような成分は、ビタミンC、好ましくは10−1000mgのビタミンC、ビタミンE、好ましくは１−800 mgのα−TE、フラボノイド類、好ましくは１−100mgのアピゲニン、カテキン類を含むMatricaria recutitaの抽出物、好ましくは１−500mgのカテキン類、クルクミノイド類を含むCamellia sinensisの抽出物、好ましくは１−1000mgのクルクミンを含むCurcuma longaの抽出物からなる群より選択される。
【００５４】
既に上で指摘したように、本発明は、動物にも適用され、特に豚及び家禽類の飼育に適用される。この場合、本発明で使用される成分は、動物飼料の中に好ましく使用される植物の抽出物中に存在してもよい。上記成分は、通常の動物飼料に混合するために、プレ混合物中に含めることもできる。プレ混合物は、好ましくは、ａ）グルタチオンの前駆体の供給源として、ホエイ蛋白質を主原料とするものである。
【００５５】
本発明の組成物は、食品又は食品サプリメントを投与する場合に通常使用される形態とすることができる。例えば、カートン、缶、小袋、瓶、バッグ（ティーバッグ）で包装される粉末、液体、エマルジョン、棒状物、錠剤、及びカプセルとし、公知方法で調製することができる。
【００５６】
本発明では、錠剤の形態の組成物は、例えば、300mgのグルタチオン、20 mgのアポシニン、及び５mgのスキサンドリン類を含む。
【実施例】
【００５７】
本発明は、さらに以下の非限定的な実施例で説明される。
【００５８】
実施例１
以下の組成物を混合して、錠剤の形に調製した。
【表１】
2005520787.tif 000002
３つの錠剤は、失われた肝臓機能を治療するために、好ましくは、追加のマルチビタミンと共に、毎日投与した。
【００５９】
実施例２
【表２】
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【００６０】
実施例３
【表３】
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【００６１】
実施例４
【表４】
2005520787.tif 000005
【００６２】
実施例５
【表５】
2005520787.tif 000006
【００６３】
実施例６
【表６】
2005520787.tif 000007
【国際調査報告】
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2005520787.tif 000010
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