(57)【要約】  本発明は、特に現在疾患の徴候あるいは症状のない個人間のおよび非喫煙者間の心筋梗塞および卒中などの心血管障害の危険を決定するための、診断テストの新しい使用に関する。さらに、本発明は、医師がどの危険性がある個人の心血管障害を予防あるいは処置するためにデザインされたある処置から、優先的に利益を受けるかを決定する手助けをするための、診断テストの新しい使用について記述する。処置方法についてもまた記述する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
個人が将来心血管障害を発病するリスクプロファイルを特徴付ける方法であって、
前記個人のｓＣＤ４０Ｌレベルの入手、
前記ｓＣＤ４０Ｌレベルと規定値との比較、および
規定レベルと比較した前記ｓＣＤ４０Ｌレベルにもとづく、個人が将来心血管障害を発病する前記リスクプロファイルの特徴付け、
を含む、前記方法。
【請求項２】
規定値が、複数個の規定されたｓＣＤ４０Ｌレベルの範囲であり、比較する段階が前記規定されたｓＣＤ４０Ｌレベルの範囲のいずれに個人のｓＣＤ４０Ｌレベルが含まれるかの決定を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
個人が、見かけ上健康な、非喫煙の個人である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
個人が、他には心筋梗塞または卒中の危険性が高くなっていない個人である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
心血管障害が、アテローム硬化症と関連している、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
心血管障害が、致命的な心筋梗塞以外のものである、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
規定値が、約２．９ｎｇ／ｍＬ血液以上である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
規定値が、約３．２ｎｇ／ｍＬ血液以上である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
規定値が、約５．５ｎｇ／ｍＬ血液以上である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
規定値が、複数個の規定されたｓＣＤ４０Ｌレベルの範囲であり、前記複数個のうちの一つは約２．９ｎｇ／ｍＬ血液以下で、そして前記範囲の他方は約２．９ｎｇ／ｍＬ血液であり、比較する段階が、個人のｓＣＤ４０Ｌレベルが、前記複数個の規定されたｓＣＤ４０Ｌレベル範囲とのいずれかに含まれるかの決定を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
心血管障害が、卒中である、請求項１〜１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
アテローム硬化症と関連する個人が将来心血管障害を発病するリスクプロファイルを特徴付ける方法であって、
前記個人のｓＣＤ４０Ｌレベルの入手、
第一の危険値を確立するために、前記ｓＣＤ４０Ｌレベルと第一の規定値を比較すること、
前記個人のコレステロールあるいはＣ−反応性タンパク質（ＣＲＰ）レベルの入手、
第二の危険値を確立するために、コレステロールあるいはＣ−反応性タンパク質（ＣＲＰ）レベルと第二の規定値とを比較すること、および
第一の危険値および第二の危険値の組み合わせにもとづく、前記心血管障害を発病する前記個人のリスクプロファイルの特徴付けであって、前記第一の危険値および第二の危険値の組み合わせは前記の第一のおよび第二の危険値とは異なる第三の危険値を確立する、前記特徴付け、
を含む、前記方法。
【請求項１３】
個人が、見かけ上健康な、非喫煙の個人である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
第一の規定値が、約２．９ｎｇ／ｍＬ血液である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
第一の規定値が、約３．２ｎｇ／ｍＬ血液である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１６】
第一の規定値が、約５．５ｎｇ／ｍＬ血液である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１７】
第一の規定値が、複数個の規定されたｓＣＤ４０Ｌレベルの範囲であり、前記複数個のうちの一つは約２．９ｎｇ／ｍＬ血液以下であり、そして前記範囲の他方は約２．９ｎｇ／ｍＬ血液であり、比較する段階が、個人のｓＣＤ４０Ｌレベルが前記複数個の規定されたｓＣＤ４０Ｌレベル範囲のいずれに含まれるかの決定を含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１８】
心血管障害が、卒中である、請求項１２〜１７のいずれかに記載の方法。
【請求項１９】
心血管障害が、致命的でない心筋梗塞である、請求項１２〜１７のいずれかに記載の方法。
【請求項２０】
第三の危険値は、第一のおよび第二の危険値のいずれかより大きい値である、請求項１２〜１７のいずれかに記載の方法。
【請求項２１】
個人がアテローム硬化症に関連する心血管障害の危険を減らすための剤による処置から恩恵を受ける可能性を評価する方法であって、前記剤は、抗炎症剤、抗血栓剤、抗血小板剤、繊維素溶解剤、脂質減少剤、トロンビン直接阻害剤、および糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体阻害剤からなる群から選ばれた剤であり、
前記個人のｓＣＤ４０Ｌレベルの入手、
ｓＣＤ４０Ｌレベルと規定値の比較であって、ＣＤ４０Ｌレベルは規定値と比較して、前記個人が前記の剤を使用した治療から恩恵を受けるかどうか示す前記比較、および
前記個人が、前記治療から恩恵を受ける可能性の、前記比較にもとづく特徴付け、
を含む、前記方法。
【請求項２２】
規定値が、複数個の規定されたｓＣＤ４０Ｌレベルの範囲であり、前記比較する段階が、規定ｓＣＤ４０Ｌレベル範囲のいずれに前記個人レベルが含まれるかの決定を含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記の個人が、見かけ上健康な、非喫煙個人である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
規定値が、約２．９ｎｇ／ｍＬ血液以上である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】
規定値が、約３．２ｎｇ／ｍＬ血液以上である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２６】
規定値が、約５．５ｎｇ／ｍＬ血液以上である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２７】
規定値が、複数個の規定されたｓＣＤ４０Ｌレベルの範囲であり、前記複数個のうちの一つは約２．９ｎｇ／ｍＬ血液以下で、そして前記範囲の他方は約２．９ｎｇ／ｍＬ血液であり、比較する段階が、個人のｓＣＤ４０Ｌレベルが、前記複数個の規定されたｓＣＤ４０Ｌレベル範囲とのいずれかに含まれるかの決定を含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２８】
心血管障害が、卒中である、請求項２１〜２７のいずれかに記載の方法。
【請求項２９】
心血管障害が、心筋梗塞である、請求項２１〜２７のいずれかに記載の方法。
【請求項３０】
心血管障害の危険を減らすために対象を処置する方法であって、
通常レベルより高いｓＣＤ４０Ｌレベルを有することが知られている対象に、前記対象が、将来心血管障害を発病する危険を減らすために有効な量の、心血管障害の危険を減らす剤の選択および投与、
を含み、前記剤が、抗炎症剤、抗血栓剤、抗血小板剤、繊維素溶解剤、脂質減少剤、トロンビン直接阻害剤、糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体阻害剤、細胞接着分子に結合し、該分子に白血球が付着する能力を阻害する剤、カルシウムチャンネルブロッカー、ベータアドレナリン受容体ブロッカー、シクロオキシゲナーゼ−２阻害剤、またはアンギオテンシン系阻害剤である、前記方法。
【請求項３１】
対象が、剤による処置が要求される症状が他にはない、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
対象が、見かけ上健康であり、対象が、有害な心血管事象のより高い危険がない、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
対象が、高脂血症ではない請求項３０に記載の方法。
【請求項３４】
剤が、非アスピリン抗炎症剤である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３５】
剤が、抗炎症剤であり、該抗炎症剤は、アルクロフェナック、ジプロピオン酸アルクロメタゾン、アルゲストンアセトニド、アルファアミラーゼ、アンシナファル、アンシナフィド、アムフェナックナトリウム、塩酸アミプリローズ、アナキンラ、アニロラック、アニトラザフェン、アパゾン、バルサラジドジナトリウム ベンダザック、ベノキサプロフェン、塩酸ベンジダミン、ブロメライン、ブロペラモール、ブデソニド、カルプロフェン、シクロプロフェン、シンタゾン、クリプロフェン、プロピオン酸クロベタゾール、ブチル酸クロベタゾン、クロピラック、プロピオン酸クロチカゾン、酢酸コルメタゾン、コルトドキソン、デフラザコート、デソニド、デソキシメタゾン、ジプロピオン酸デキサメタゾン、ジクロフェナックカリウム、ジクロフェナックナトリウム、酢酸ジフロラゾン、ジフルミドンナトリウム、ジフルニザル、ジフルプレドナート、ジフタロン、ジメチルスルフォキシド、ドロシノニド、エンドリゾン、エンリモマブ、エノリカムナトリウム、エピリゾール、エトドラク、エトフェナメート、フェルビナク、フェナモル、フェンブフェン、フェンクロフェナク、フェンクロラック、フェンドサル、フェンピパロン、フェンチアザク、フラザロン、フルアザコート、フルフェナム酸、フルミゾール、酢酸フルニソリド、フルニキシン、フルニキシンメグルミン、フルオコルチンブチル、酢酸フルオロメトロン、フルクアゾン、フルルビプロフェン、フルレトフェン、プルピオン酸フルチカゾン、フラプロフェン、フロブフェン、ハルシノニド、プロピオン酸ハロベタゾール、酢酸ハロプレドン、イブフェナク、イブプロフェン、イブプロフェンアルミニウム、イブプロフェンピコノール、イロニダップ、インドメタシン、インドメタシンナトリウム、インドプロフェン、インドキソール、イントラゾール、酢酸イソフルプレドン、イソキセパック、イソキシカム、ケトプロフェン、塩酸ロフェミゾール、ロルノキシカム、ロテプレドノールエタボネート、メクロフェナマートナトリウム、メクロフェナム酸、ブチル酸メクロリゾン、メフェナム酸、メサラミン、メセクラゾン、メチルプレドニゾロンスレプタナート、モルニフルマート、ナブメトン、ナプロキセン、ナプロキセンナトリウム、ナプロクソール、ニマゾン、オルサラジンナトリウム、オルゴテイン、オルパノキシン、オキサプロジン、オキシフェンブタゾン、塩酸パラニリン、ポリ硫酸ペントサンナトリウム、グリセリン酸フェンブタゾンナトリウム、ピルフェニドン、ピロキシカム、ケイ皮酸ピロキシカム、ピロキシカムオラミン、ピルプロフェン、プレドナザート、プリフェロン、プリドリン酸、プロクアゾン、プロキサゾール、クエン酸プロキサゾール、リメクソロン、ロマザリット、サルコレックス、サルナセジン、サルサラート、塩化サンジナリウム、セクラゾン、セルメタシン、スドキシカム、スリンダック、スプロフェン、タルメタシン、タルニフルマート、タロサラート、テブフェロン、テニダップ、テニダップナトリウム、テノキシカム、テシカム、テシミド、テトリダミン、チオピナック、ピバル酸チクソコルトール、トルメチン、トルメチンナトリウム、トリクロニド、トリフルミダート、ジドメタシン、糖質コルチコ��ドまたはゾメピラックナトリウムからなる群から選択される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３６】
剤が、非アスピリン抗炎症剤である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３７】
剤が、非アスピリン抗炎症剤である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３８】
剤が、非アスピリン抗炎症剤である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３９】
剤が、脂質減少剤である、請求項３０に記載の方法。
【請求項４０】
脂質減少剤が、ゲムフィブロジル、コリスチラミン、コレスチポール、ニコチン酸、プロブコールロバスタチン、フルバスタチン、シムバスタチン、アトルバスタチン、プラバスタチン、またはセリバスタチンである、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
脂質減少剤が、プラバスタチンである、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
剤が、脂質減少剤である、請求項３１に記載の方法。
【請求項４３】
脂質減少剤が、ゲムフィブロジル、コリスチラミン、コレスチポール、ニコチン酸、プロブコールロバスタチン、フルバスタチン、シムバスタチン、アトルバスタチン、プラバスタチン、またはセリバスタチンである、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
脂質減少剤が、プラバスタチンである、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
剤が、脂質減少剤である、請求項３２に記載の方法。
【請求項４６】
脂質減少剤が、ゲムフィブロジル、コリスチラミン、コレスチポール、ニコチン酸、プロブコールロバスタチン、フルバスタチン、シムバスタチン、アトルバスタチン、プラバスタチン、またはセリバスタチンである、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
脂質減少剤が、プラバスタチンである、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
剤が、脂質減少剤である、請求項３３に記載の方法。
【請求項４９】
脂質減少剤が、ゲムフィブロジル、コリスチラミン、コレスチポール、ニコチン酸、プロブコールロバスタチン、フルバスタチン、シムバスタチン、アトルバスタチン、プラバスタチン、またはセリバスタチンである、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
脂質減少剤が、プラバスタチンである、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
剤が、細胞接着分子に結合し、該分子に白血球が付着する能力を阻害する剤である、請求項３０に記載の方法。
【請求項５２】
対象が、見かけ上健康である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
対象が、高脂血症ではない、請求項５１に記載の方法。
【請求項５４】
対象が、剤による処置が要求される症状が他にはない、請求項５１に記載の方法。
【請求項５５】
剤が、カルシウムチャンネルブロッカーである、請求項３０に記載の方法。
【請求項５６】
対象が、見かけ上健康である、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
対象が、高脂血症ではない、請求項５５に記載の方法。
【請求項５８】
対象が、剤による処置が要求される症状が他にはない、請求項５５に記載の方法。
【請求項５９】
剤が、ベータアドレナリン受容体ブロッカーである、請求項３０に記載の方法。
【請求項６０】
対象が、見かけ上健康で、有害心血管事象のより高い危険がない、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
対象が、高脂血症ではない、請求項５９に記載の方法。
【請求項６２】
対象が、剤による処置が要求される症状が他にはない、請求項５９に記載の方法。
【請求項６３】
剤が、シクロオキシゲナーゼ−２阻害剤である、請求項３０に記載の方法
【請求項６４】
対象が、見かけ上健康である、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
対象が、高脂血症ではない、請求項６３に記載の方法。
【請求項６６】
対象が、剤による処置が要求される症状が他にはない、請求項６３に記載の方法。
【請求項６７】
剤が、アンギオテンシン系阻害剤である、請求項３０に記載の方法。
【請求項６８】
対象が、見かけ上健康で、有害心血管事象のより高い危険がない、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
対象が、高脂血症ではない、請求項６７に記載の方法。
【請求項７０】
対象が、剤による処置が要求される症状が他にはない、請求項６７に記載の方法。
【請求項７１】
有害な心血管障害の危険を低減するために、対象のｓＣＤ４０Ｌレベルを減らす方法であって、
より高いレベルのｓＣＤ４０Ｌを有する前記対象に、前記対象のｓＣＤ４０Ｌレベルを減らすために有効な量のｓＣＤ４０Ｌレベルを減らす剤の、選択および投与、
を含む、前記方法。
【請求項７２】
剤が、脂質減少剤である、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
対象が、見かけ上健康である、請求項７１に記載の方法。
【請求項７４】
対象が、見かけ上健康で、有害心血管事象のより高い危険がない、請求項７１に記載の方法。
【請求項７５】
対象が、より高いＣ−反応性タンパク質（ＣＲＰ）レベルを有する、請求項７１に記載の方法。
【請求項７６】
対象が、脂質減少剤による処置が要求される症状が他にはない、請求項７１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、特に現在疾患の徴候あるいは症状のない個人間のおよび非喫煙者間の心筋梗塞および卒中などの心血管障害の危険を決定するための、診断テストの新しい使用について記載する。さらに、本発明は、医師がどの危険性がある個人の心血管障害を予防あるいは処置するためにデザインされたある処置から、優先的に利益を受けるかを決定する手助けをするための、診断テストの新しい使用について記述する。処置方法についてもまた記載する。
技術背景
【０００２】
治療法における有意な進歩にもかかわらず、心血管疾患は、先進国世界で疾病率および死亡率の単一の最も共通の原因のままである。したがって、心筋梗塞および卒中などの心血管障害の予防は、大衆の健康における、最も重要な部分である。近年、将来の心血管障害のいくつかの危険因子が記載され、高い危険にある個人の検出において広く臨床的に用いられている。このようなスクリーニングテストは、全コレステロールレベルおよびＨＤＬコレステロールレベルの評価を含む。しかしながら、心血管障害の大多数は、リスクプロファイルが見かけ上、低から中程度の個人に生じ、このような患者を同定する可能性は制限される。さらに、蓄積したデータは、心血管障害の危険があるかまたは有することが知られている患者に対するある予防および処置処置の有益な効果が、異なる患者群の間で大きく異なることを示唆する。しかしながら、同時に、ある処置がより大きなあるい小さな効果を期待できるか否かを決定するための診断テストを記載しているデータが欠けている。
【０００３】
心筋梗塞および虚血性能卒中などのある心血管障害は、アテローム性動脈硬化症を含む。アテローム性動脈硬化症のメカニズムはよく理解されていない。ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ１５４および／またはｇｐ３９としても知られている）は、２６１アミノ酸タイプＩＩ 膜貫通タンパク質である。分子の１または２以上の生物活性可溶性の形、ｓＣＤ４０Ｌと総称され、細胞内または細胞表面で生じ得る全長型に対するタンパク質分解切断により産生される。
【０００４】
ＣＤ４０Ｌは、多能な免疫調整剤で、その受容体ＣＤ４０と共に、血管内皮（ＥＣ）および平滑筋細胞（ＳＭＣ）、単核食細胞（ＭＯ）ならびに血小板を含む多様な細胞において発現される。
【０００５】
前記の細胞型のいずれにもあるＣＤ４０受容体の関与は、報告によれば、凝血原組織因子のみならず、サイトカインＩＬ１、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＴＮＦαまたはＩＦＮγ、ケモカインＩＬ−８、ＭＣＰ−１またはＲＡＮＴＥＳ、接着分子ＩＣＡＭ−１またはＶＣＡＭ−１、マトリックスメタロプロテイナーゼＭＭＰ−１／−２／−３／−７／−８／−９／−１０／−１１／−１２／−１３などの様々な前炎症伝達物質の発現を誘導する。これらの前炎症伝達物質の発現は、報告によれば、in vitroにおいて広範な前アテロール発生機能の促進と結びつく。これらの見解は、ＣＤ４０Ｌのアテロール発生の様々な段階における関与を意味する。
【０００６】
より高いレベルのｓＣＤ４０Ｌが、不安定な狭心症を有する患者間で述べられている。さらに、血清または他の体液中のｓＣＤ４０Ｌ濃度は、人間の患者の免疫、炎症、または悪性の状態を評価するのに使われていた。このような患者は、全身性自己免疫または炎症、血管疾患、ウィルス性疾患、あるいは悪性腫瘍にかかっている患者、あるいは免疫抑制治療中の患者を含む。これらの患者は、健康な個人ではない。ｓＣＤ４０Ｌレベルは炎症中に増加するため、急性疾患あるいは危険度の高い集団のこれらの先行研究で観察された統計上の結び付きは、因果関係があるか、短期間の炎症性変化によるものか、または他の危険因子、特に喫煙および高脂血症との相互関係によるものなのか否かは不明確だった。
【０００７】
炎症マーカーレベルの上昇が、将来の有害な心血管障害を予測させるものとしてこれまで示されてきた。このことは、炎症の全身性マーカーとは従来みなされていないが、炎症のある局面における伝達物質であるｓＣＤ４０Ｌについては、これまでに実証されたことがない。
発明の要約
【０００８】
本発明は、一面において、（１）心筋梗塞および卒中ならびに抹消動脈疾患などの将来の心血管障害の危険の予測、および（２）ある個人が、心血管障害を予防および／または処置するためにデザインされたある処置の使用によって、多少なりとも利益を受ける可能性の決定を広く含む、新しい診断テストについて記載する。これらの新規な実験方法は、部分的に下記発見に基づく。
【０００９】
より高いレベルのｓＣＤ４０Ｌが、将来の心血管障害の予測因子であることが発見された。例えば、見かけ上健康な非喫煙者中のより高いレベルのｓＣＤ４０Ｌは、心筋梗塞の危険増加の予測因子である。別の例としては、より高いレベルのｓＣＤ４０Ｌは、将来の卒中の可能性増加の予測因子である。
【００１０】
ある個人が将来の心血管障害の危険を減らすためのある処置剤の使用から多かれ少なかれ利益を受ける可能性は、個人中ｓＣＤ４０Ｌベースラインレベルから決められることもまた、発見された。本発明は、将来の心血管障害の他の予測因子から独立した予測値を有するという驚くべき発見が一部もとになっている。特に、ｓＣＤ４０Ｌは、全身性炎症マーカーＣ−反応性タンパク質（ＣＲＰ）から独立した将来の有害な心血管障害を予測させる。したがって、ｓＣＤ４０Ｌは、将来の有害な心血管障害の予測因子として単独で、またはコレステロールおよびＣＲＰなどの先行技術の予測因子の組み合わせにより使ってよい。よって、本発明は、他の予測因子を使って以前行うことができた測定を単純に再現することを伴わない。それよりむしろ、ｓＣＤ４０Ｌレベルは、先行技術の予測因子に付加されるものである。
【００１１】
上に述べたように、これらの発見は新規な診断テストへと導いた。
【００１２】
本発明の一面によると、方法として、将来の心血管障害を発病する個人のリスクプロファイルを特徴付けるためのものが提供される。本方法は、個人のｓＣＤ４０Ｌレベルを得ることを含む。ｓＣＤ４０Ｌレベルはそれから、規定値と比較され、および将来の心血管障害を発病する個人のリスクプロファイルはそれから、ｓＣＤ４０Ｌレベルをもとに規定値と比較して特徴付けられる。
【００１３】
規定値は、単一値、複数値、単一範囲または複数範囲になり得る。したがって、一つの態様では、規定値は、規定マーカーレベル範囲の複数個、そして比較段階は、規定マーカーレベル範囲と個人レベルのいずれに含まれるかの決定を含む。好ましい態様では、好ましい規定ｓＣＤ４０Ｌ値は、約２．９ｎｇ／ｍＬ血液またはそれ以上である。別の好ましい規定ｓＣＤ４０Ｌ値は、３．２ｎｇ／ｍＬ血液またはそれ以上である。さらなる好ましい規定ｓＣＤ４０Ｌ値は、約５．５ｎｇ／ｍＬ血液またはそれ以上である。範囲を採用するとき、範囲の複数個の一つが約２．９ｎｇ／ｍＬ血液および別の範囲が約２．９ｎｇ／ｍＬ血液以上であることが好ましい。
【００１４】
ある態様では、個人は、見かけ上健康な、非喫煙の個人である。いくつかの態様では、個人は、特に心筋梗塞または卒中の高い危険性はない。
【００１５】
本発明のこの面のいくつかの態様では、心血管障害は、アテローム硬化症と関連する。いくつかの態様では、心血管障害は、致命的な心筋梗塞以外である。いくつかの態様では、心血管障害は、卒中である。
【００１６】
本発明のさらに別の面によると、方法として、アテローム硬化症と関連する将来の心血管障害を発病する個人のリスクプロファイルを特徴付けるものが提供される。個人のｓＣＤ４０Ｌレベルが得られる。ｓＣＤ４０Ｌレベルは、規定値と比較される。アテローム硬化症と関連する将来の心血管障害を発病する個人のリスクプロファイルはそれから、ｓＣＤ４０Ｌレベルをもとに規定値と比較して特徴付けられる。規定値は、上記のようになり得る。特徴付けられた個人は、いかなる個人でよいが、好ましいのは、見かけ上健康な個人である。見かけ上健康な個人は、喫煙者または非喫煙者であり得る。ある態様で、対象は、特に有害な心血管障害の高い危険性がない。ある態様では、アテローム硬化症と関連する将来の心血管障害は、致命的な心筋梗塞を含まない。好ましいマーカーおよび規定値は、上記のとおりである。一つの重要な態様では、心血管障害は、卒中である。別の重要な態様では、心血管障害は、心筋梗塞である。別の重要な態様では、心血管障害は、末梢動脈疾患である。さらなる重要な態様では、心血管障害は、致命的でない心筋梗塞である。
【００１７】
本発明の別の面によると、方法は、将来の心筋梗塞を発病する、見かけ上健康な、非喫煙である個人のリスクプロファイルを特徴付けるために提供される。方法は、個人のｓＣＤ４０Ｌレベルの入手を含む。ｓＣＤ４０Ｌレベルはそれから、規定値と比較され、そして将来の心筋梗塞を発病する個人のリスクプロファイルはそれから、ｓＣＤ４０Ｌレベルをもとに規定値と比較して特徴付けられる。ある態様では、個人は、特に有害な心血管事象のより高い危険性を有しない。
【００１８】
本発明の以前の面にあるように、規定値は、単一値、値の複数個、単一範囲または範囲の複数個でよい。一つの態様では、規定値は、規定マーカーレベル範囲の複数個、そして比較段階は、個人のレベル規定マーカーレベル範囲のいずれかに含まれるかの決定を含む。ｓＣＤ４０Ｌの好ましい規定値等は、上記のとおりである。
【００１９】
本発明の別の面によると、方法として、アテローム硬化症と関連する将来の心筋梗塞を発病する個人のリスクプロファイルを特徴付けるためのものが提供される。個人のｓＣＤ４０Ｌレベルが得られる。ｓＣＤ４０Ｌレベルは、規定値と比較をされる。アテローム硬化症と関連する将来の心筋梗塞を発病する個人のリスクプロファイルはそれから、規定値と比較したｓＣＤ４０Ｌレベルをもとに特徴付けられる。本発明の以前の面にあるように、規定値は、単一値、値の複数個、単一範囲または範囲の複数個でよい。一つの態様では、規定値は、規定マーカーレベル範囲の複数個、そして比較段階は、個人のレベルがいずれの規定マーカーレベル範囲に含まれるかの決定を含む。ｓＣＤ４０Ｌの好ましい規定値および同類は、上記のとおりである。
【００２０】
特徴付けられた個人は、いかなる個人でもいいが、好ましいのは、見かけ上健康な個人である。見かけ上健康な個人は、喫煙者または非喫煙者であり得る。ある態様で、対象は、特に有害な心血管事象の高い危険性を有しない。ある態様では、アテローム硬化症と関連する将来の心血管障害は、致命的な心筋梗塞を含まない。好ましいマーカーおよび規定値は、上記のとおりである。一つの重要な態様では、心血管障害は、卒中である。別の重要な態様では、心血管障害は、心筋梗塞である。別の重要な態様では、心血管障害は、末梢動脈疾患である。さらなる重要な態様では、心血管障害は、致命的でない心筋梗塞である。
【００２１】
本発明のさらに別の面によると、アテローム硬化症と関連する将来の心血管障害を発病する個人のリスクプロファイルを特徴付けるために、コレステロール比またはＣ−反応性タンパク質（ＣＲＰ）と共に血中ｓＣＤ４０Ｌレベルを使用する方法が、提供される。個人のｓＣＤ４０Ｌレベルが得られる。ｓＣＤ４０Ｌレベルは、第一の危険値を確立するために、第一の規定値と比較される。個人コレステロールレベルまたはＣＲＰもまた得られる。個人中コレステロールレベルまたはＣＲＰは、第二の危険値を確立するために、第二の規定値と比較される。心血管障害を発病する個人のリスクプロファイルはそれから、第一の危険値および第二の危険値の組み合わせが第一および第二の危険値と異なる第三の危険値を確立する、第一の危険値および第二の危険値の組み合わせをもとに、特徴付けられる。特に重要な態様では、第三の危険値は、第一および第二の危険値のいずれかよりも大きい。試験、マーカーおよび規定値に好ましい個人は、上記のとおりである。ある重要な態様では、心血管障害は、致命的でない心筋梗塞または虚血性能卒中であるが、心血管障害は、アテローム硬化症と関連するあらゆる心血管障害である。
【００２２】
本発明のまた別の面によると、方法として、個人が心血管障害、および特にアテローム硬化症と関連する心血管障害の危険を減らす剤での処置から利益を受ける可能性を評価するものが提供される。剤は、抗炎症剤、抗血栓剤、抗血小板剤、繊維素溶解剤、脂質減少剤、直接トロンビン阻害剤、および糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体阻害剤、ならびに細胞接着分子に結合し、このような分子に白血球が付着する能力を阻害する剤（例えば、反細胞接着分子抗体）からなる群から選ばれ得る。方法を実際に行うために、個人のｓＣＤ４０Ｌレベルが得られる。このレベルはそれから規定値と比較されるが、ここにおいて規定値と比較したｓＣＤ４０Ｌレベルは、個人が剤による処置から利益を受ける可能性を示す。個人はそれから、剤による処置から得られうる純利益（net benefit）という形で特徴付けられ得る。
【００２３】
上に述べたように、本発明は特に、どの個人が将来の卒中または致命的でない心筋梗塞を含む将来の心筋梗塞などの心血管障害の個人の危険を減らすための剤による処置から優先的に利益を受けるかを決定するために適合されている。本発明はまた、例えば、新しい処置または有害な副作用の高いリスクプロファイルでの既知の処置からもっとも利益を受けると思われる個人を特定することにより、臨床試験および候補薬での処置のための候補集団の選択を可能にする。すなわち、本発明は、候補患者へのある処置の見込みある純利益の評価のための情報を与える。
【００２４】
本発明はまた、将来の心血管障害を発病する危険または上記のように他の患者の特徴と、アッセイにより決定したｓＣＤ４０Ｌレベルを相関させるためのｓＣＤ４０Ｌアッセイ器具（assay）および説明書、ならびに任意でナンバーまたはカラーチャートなどの関係資料を含むパッケージを含むキットを考慮する。重要な態様では、キットはまた、コレステロールアッセイ器具を含む。
【００２５】
本発明の別の面では、心血管障害の危険を減らすために対象を処置する方法が提供される。方法は、通常より高いレベルのｓＣＤ４０Ｌを有することが知られている対象への心血管障害の危険を減らすための剤の選択および投与を含む。剤は、抗炎症剤（アスピリンおよび非アスピリン抗炎症剤を含む）、抗血栓剤、抗血小板剤、繊維素溶解剤、脂質減少剤、直接トロンビン阻害剤、糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体阻害剤、細胞接着分子に結合し、このような分子に白血球が付着する能力を阻害する剤、カルシウムチャンネルブロッカー、ベータアドレナリン受容体ブロッカー、シクロオキシゲナーゼ−２阻害剤、アンギオテンシン系阻害剤、および／またはその組み合わせになり得る。剤は、対象が将来の心血管障害を発病する危険を下げるのに有効な量が投与される。好ましい対象は、他にいかなる剤または前記剤の組み合わせによる現在処置の必要性がない見かけ上健康な対象である。さらに重要な態様では、処置対象は、高脂血症のない(nonhyperlipidemic)対象である。別の態様では、対象は、より高いレベルのｓＣＤ４０Ｌを有する以外は、有害な心血管事象のより高い危険がない(例、このような事象の家族歴がない対象、非喫煙者の対象、高脂血症のない対象、全身性炎症マーカーが通常レベルの対象）。
【００２６】
ある態様では、剤とは、アルクロフェナック、ジプロピオン酸アルクロメタゾン、アルゲストンアセトニド(Algestone Acetonide)、アルファアミラーゼ、アンシナファル(Amcinafal)、アンシナフィド(Amcinafide)、アムフェナックナトリウム、塩酸アミプリローズ(Amiprilose Hydrochloride) 、アナキンラ、アニロラック(Anirolac)、アニトラザフェン(Anitrazafen)、アパゾン、バルサラジドジナトリウム、ベンダザック、ベノキサプロフェン(Benoxaprofen)、塩酸ベンジダミン、ブロメライン、ブロペラモール(Broperamole)、ブデソニド、カルプロフェン、シクロプロフェン(Cicloprofen)、シンタゾン(Cintazone)、クリプロフェン(Cliprofen)、プロピオン酸クロベタゾール(Clobetasol Propionate)、ブチル酸クロベタゾン(Clobetasone Butyrate)、クロピラック(Clopirac)、プロピオン酸クロチカゾン(Cloticasone Propionate)、酢酸コルメタゾン(Cormethasone Acetate)、コルトドキソン、デフラザコート、デソニド、デソキシメタゾン(Desoximetasone)、ジプロピオン酸デキサメタゾン、ジクロフェナックカリウム、ジクロフェナックナトリウム、酢酸ジフロラゾン、ジフルミドンナトリウム(Diflumidone Sodium)、ジフルニザル、ジフルプレドナート、ジフタロン(Diftalone)、ジメチルスルフォキシド、ドロシノニド(Drocinonide)、エンドリゾン(Endrysone)、エンリモマブ(Enlimomab)、エノリカムナトリウム(Enolicam Sodium)、エピリゾール、エトドラク、エトフェナメート(Etofenamate)、フェルビナク、フェナモル(Fenamole)、フェンブフェン、フェンクロフェナク(Fenclofenac)、フェンクロラック(Fenclorac)、フェンドサル(Fendosal)、フェンピパロン(Fenpipalone)、フェンチアザク、フラザロン(Flazalone)、フルアザコート(Fluazacort)、フルフェナム酸(Flufenamic Acid)、フルミゾール(Flumizole)、酢酸フルニソリド、フルニキシン、フルニキシンメグルミン、フルオコルチンブチル(Fluocortin Butyl)、酢酸フルオロメトロン、フルクアゾン、フルルビプロフェン、フルレトフェン(Fluretofen)、プルピオン酸フルチカゾン、フラプロフェン(Furaprofen)、フロブフェン(Furobufen)、ハルシノニド、プロピオン酸ハロベタゾール、酢酸ハロプレドン、イブフェナク、イブプロフェン、イブプロフェンアルミニウム、イブプロフェンピコノール、イロニダップ、インドメタシン、インドメタシンナトリウム、インドプロフェン、インドキソール、イントラゾール、酢酸イソフルプレドン、イソキセパック、イソキシカム、ケトプロフェン、塩酸ロフェミゾール(Lofemizole Hydrochloride)、ロルノキシカム(Lornoxicam)、ロテプレドノールエタボネート(Loteprednol Etabonate)、メクロフェナマートナトリウム(Meclofenamate Sodium)、メクロフェナム酸(Meclofenamic Acid)、ブチル酸メクロリゾン(Meclorisone Dibutyrate)、メフェナム酸(Mefenamic Acid)、メサラミン(Mesalamine)、メセクラゾン(Meseclazone)、メチルプレドニゾロンスレプタナート(Methylprednisolone Suleptanate)、モルニフルマート(Morniflumate)、ナブメトン(Nabumetone)、ナプロキセン(Naproxen)、ナプロキセンナトリウム(Naproxen Sodium)、ナプロクソール(Naproxol)、ニマゾン(Nimazone)、オルサラジンナトリウム(Olsalazine Sodium)、オルゴテイン(Orgotein)、オルパノキシン(Orpanoxin)、オキサプロジン(Oxaprozin)、オキシフェンブタゾン(Oxyphenbutazone)、塩酸パラニリン(Paranyline Hydrochloride)、ポリ硫酸ペントサンナトリウム、グリセリン酸フェンブタゾンナトリウム(Phenbutazone Sodium Glycerate)、ピルフェニドン(Pirfenidone)、ピロキシカム、ケイ皮酸ピロキシカム(Piroxicam Cinnamate)、ピロキシカムオラミン(Piroxicam Olamine)、ピルプロフェン(Pirprofen)、プレドナザート(Prednazate)、プリフェロン(Prifelone)、プリドリン酸(Prodolic Acid)、プロクアゾン(Proquazone)、プロキサゾール(Proxazole)、クエン酸プロキサゾール(Proxazole Citrate)、リメクソロン(Rimexolone)、ロマザリット(Romazarit)、サルコレックス(Salcolex)、サルナセジン(Salnacedin)、サルサラート(Salsalate)、塩化サンジナリウム(Sanguinarium Chloride)、セクラゾン (Seclazone)、セルメタシン(Sermetacin)、スドキシカム(Sudoxicam)、スリンダック(Sulindac)、スプロフェン(Suprofen)、タルメタシン(Talmetacin)、タルニフルマート(Talniflumate)、タロサラート(Talosalate)、テブフェロン(Tebufelone)、テニダップ(Tenidap)、テニダップナトリウム(Tenidap Sodium)、テノキシカム(Tenoxicam)、テシカム(Tesicam)、テシミド(Tesimide)、テトリダミン(Tetrydamine)、チオピナック(Tiopinac) 、ピバル酸チクソコルトール(Tixocortol Pivalate)、トルメチン(Tolmetin)、トルメチンナトリウム(Tolmetin Sodium)、トリクロニド(Triclonide)、トリフルミダート(Triflumidate)、ジドメタシン(Zidometacin)、糖質コルチコイド、またはゾメピラックナトリウム(Zomepirac Sodium)からなる群から選択された抗炎症剤である。
【００２７】
本発明はまた、心血管障害を防ぐため、対象を脂質減少剤により処置する方法を含む。このような剤は、通常レベル以上のｓＣＤ４０Ｌを有することを理由に選ばれた対象に投与される。剤は、対象が将来の心血管障害を発病する危険を下げるのに有効な量が投与される。一つの態様では、対象は、既に心臓発作または血管形成などの心血管事象になったことがある。この態様では、脂質減少剤がさらなる損傷を制限すること、あるいは心筋梗塞後損傷または血管形成術後損傷を防ぐ助けになることができる。別の重要な態様では、対象は、特に現在脂質減少剤による処置の必要性がない、見かけ上健康な対象である。重要な態様では、対象は、より高いレベルのｓＣＤ４０Ｌを有する以外、有害な心血管事象のより高い危険がない。さらに重要な態様では、処置対象は、高脂血症のない対象である。前記のどの態様でも、脂質減少剤は、ゲムフィブロジル、コリスチラミン、コレスチポール、ニコチン酸、プロブコールロバスタチン、フルバスタチン、シムバスタチン、アトルバスタチン、プラバスタチン、またはセリバスタチンであるが、それらに限定されない。好ましい態様では、脂質減少剤はプラバスタチンである。
【００２８】
本発明はまた、心血管障害を防ぐため、細胞接着分子に結合し、このような分子に白血球が付着する能力を阻害する剤により対象を処置する方法を含む。このような剤は、通常レベル以上のｓＣＤ４０Ｌを有することを理由に選ばれた対象に投与される。剤は、対象が将来の心血管障害を発病する危険を下げるのに有効な量が投与される。一つの態様では、対象は、既に心臓発作または血管形成などの心血管事象があった。この態様では、細胞接着分子に結合し、このような分子に白血球が付着する能力を阻害する剤が、さらなる損傷を制限すること、あるいは心筋梗塞後損傷または血管形成術後損傷を防ぐ助けになるかもしれない。別の重要な態様では、対象は、特に細胞接着分子に結合し、このような分子に白血球が付着する能力を阻害する剤での処置の必要性がない見かけ上健康な対象である。重要な態様では、対象は、より高いレベルのｓＣＤ４０Ｌを有する以外、有害な心血管事象のより高い危険がない。さらに重要な態様では、処置対象は、高脂血症のない対象である。
【００２９】
本発明はまた、心血管障害を防ぐため、カルシウムチャンネルブロッカーにより対象を処置する方法を含む。このような剤は、通常レベル以上のｓＣＤ４０Ｌを有することを理由に選ばれた対象に投与される。剤は、対象が将来のに心血管障害を発病する危険を下げるのに有効な量が投与される。一つの態様では、対象は、既に心臓発作または血管形成などの心血管事象がある。この態様では、カルシウムチャンネルブロッカーがさらなる損傷を制限することあるいは心筋梗塞後損傷または血管形成術後損傷を防ぐ助けになることができる。別の重要な態様では、対象は、特にカルシウムチャンネルブロッカーでの処置の必要性がない見かけ上健康な対象である。重要な態様では、対象は、より高いレベルのｓＣＤ４０Ｌを有する以外、有害な心血管事象のより高い危険がない。さらに重要な態様では、処置対象は、高脂血症のない対象である。前述のどの態様でも、カルシウムチャンネルブロッカーは、ジヒドロピリジン、フェニルアルキルアミン、および／またはベンゾジアゼピンであるが、それらに限定されない。好ましい態様では、本発明によると有用であるカルシウムチャンネルブロッカーは、アムリノン、アムロジピン、ベンシクラン、ジルチアゼム、フェロジピン、フェンジリン(fendiline)、フルナリジン、イスラジピン、ニカルジピン、ニフェジピン、ニモジピン、ペルヘキシレン(perhexilene)、ガロパミル、チアパミル(tiapamil)およびチアパミル類似物(1993RO-11-2933など)、ベラパミル、フェニトイン、バルビタール酸塩、およびペプチド類ダイノルフィン、オメガコノトキシン、およびオメガアガトキシならびに同類および／またはそれらの薬学的に許容し得る塩を含むが、それらに限定されない。
【００３０】
本発明はまた、心血管障害を防ぐため、ベータアドレナリン受容体ブロッカーにより対象を処置する方法を含む。このような剤は、通常レベル以上のｓＣＤ４０Ｌを有することを理由に選ばれた対象に投与される。剤は、対象が将来の心血管障害を発病する危険を下げるのに有効な量が投与される。一つの態様では、対象は、既に心臓発作または血管形成などの心血管事象がある。この態様では、ベータアドレナリン受容体ブロッカーがさらなる損傷を制限することあるいは心筋梗塞後損傷または血管形成術後損傷を防ぐ助けになるかもしれない。別の重要な態様では、対象は、特にベータアドレナリン受容体ブロッカーでの処置の必要性がない見かけ上健康な対象である。重要な態様では、対象は、より高いレベルのｓＣＤ４０Ｌを有する以外、有害な心血管事象のより高い危険がない。さらに重要な態様では、処置対象は、高脂血症のない対象である。前述のどの態様でも、ベータアドレナリン受容体ブロッカーは、アテノロール、アセブトロール、アルプレノール、ベフノロール、ベタキソロール、ブニトロロール、カルテオロール、セリプロロール、ヘドロキサロール(hedroxalol)、インデノロール、ラベタロール、レボブノロール、メピンドロール(mepindolol)、メチプラノール(methypranol)、メチンドール(metindol)、メトプロロール、メトリゾラノロール(metrizoranolol)、オクスプレノロール、ピンドロール、プロプラノロール、プラクトロール、プラクトロール、ソタロルナドロール（sotalolnadolol）、チプレノロール（tiprenolol）、トマロロール(tomalolol)、チモロール、ブプラノロール、ペンブトロール、トリメプラノール（trimepranol）、2-(3-(1,1-ジメチルエチル)-アミノ-2-ヒドロキシプロポキシ)-3-ピリデンカルボニトリル（pyridenecarbonitril）HCl、1-ブチルアミノ-3-(2,5-ジクロロフェノキシ)-2-プロパノール、1-イソプロピルアミノ-3-(4-(2-シクロプロピルメトキシエチル)フェノキシ)-2-プロパノール、3-イソプロピルアミノ-1-(7-メチルインダン-4-イルオキシ)-2-ブタノール、2-(3-t-ブチルアミノ-2-ヒドロキシプロピルチオ（hydroxy-propylthio）)-4-(5-カルバモイル-2-チエニル)チアゾール、7-(2-ヒドロキシ-3-t-ブチルアミンプロポキシ（butylaminpropoxy）)フタリドであるが、それらに限定されない。
【００３１】
本発明はまた、心血管障害を防ぐため、シクロオキシゲナーゼ−２阻害剤により対象を処置する方法を含む。このような剤は、通常レベル以上のｓＣＤ４０Ｌを有することを理由に選ばれた対象に投与される。剤は、対象が将来のに心血管障害を発病する危険を下げるのに有効な量が投与される。一つの態様では、対象は、既に心臓発作または血管形成などの心血管事象がある。この態様では、シクロオキシゲナーゼ−２阻害剤がさらなる損傷を制限することあるいは心筋梗塞後損傷または血管形成術後損傷を防ぐ助けになるかもしれない。別の重要な態様では、対象は、特にシクロオキシゲナーゼ−２阻害剤での処置の必要性がない見かけ上健康な対象である。重要な態様では、対象は、より高いレベルのｓＣＤ４０Ｌを有する以外、有害な心血管事象のより高い危険がない。さらに重要な態様では、処置対象は、高脂血症のない対象である。前述のどの態様でも、シクロオキシゲナーゼ−２阻害剤は、フェニル複素環、ジアリル二環性複素環、アリル置換５，５融合芳香族窒素化合物、N-ベンジルインドール-3-イルプロパノン酸および／またはその誘導体、5-メタンスルホンアミド-1-インダノン、N-ベンジルインドール-3-イルブタン酸および／またはその誘導体、ジフェニル-1,2-3-チアジアゾール、ジアリル-5-酸化-2-(5H)-フラノン、3,4-ジアリル-2-ヒドロキシ-2,5-ジヒドロフラン、スチルベンおよび／またはその誘導体、ジフェニルスチルベン、アルキル化スチレン、ビサリルシクロブテンおよび／またはその誘導体、置換されたピリジン、ピリジニル-2-シクロペンテン-l-オンおよび／または置換されたスルホニルフェニル複素環であるが、それらに限定されない。
【００３２】
本発明はまた、心血管障害を防ぐため、アンギオテンシン系阻害剤により対象を処置する方法を含む。このような剤は、通常レベル以上のｓＣＤ４０Ｌを有することを理由に選ばれた対象に投与される。剤は、対象が将来の心血管障害を発病する危険を下げるのに有効な量が投与される。一つの態様では、対象は、既に心臓発作または血管形成などの心血管事象がある。別の重要な態様では、対象は、特にアンギオテンシン系阻害剤での処置の必要性がない、見かけ上健康な対象である。重要な態様では、対象は、より高いレベルのｓＣＤ４０Ｌを有する以外、有害な心血管事象のより高い危険がない。さらに重要な態様では、処置対象は、高脂血症のない対象である。前述のどの態様でも、アンギオテンシン系阻害剤は、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、アンギオテンシンＩＩ拮抗剤、アンギオテンシンＩＩ受容体拮抗剤、アンギオテンシン ＩＩの異化を活性する剤および／またはアンギオテンシンＩの合成を防ぐ剤であるが、それらに限定されない。
【００３３】
本発明のさらに別の面によると、方法は、アテローム硬化症と関連する心血管障害の危険を減らす剤による処置から利益を受ける可能性を評価するために提供される。剤は、抗炎症剤、抗血栓剤、抗血小板剤、繊維素溶解剤、脂質減少剤、トロンビン直接阻害剤、糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体阻害剤、細胞接着分子に結合し、このような分子に白血球が付着する能力を阻害する剤(例、反細胞接着分子抗体)、カルシウムチャンネルブロッカー、ベータアドレナリン受容体ブロッカー、シクロオキシゲナーゼ−２阻害剤、アンギオテンシン系阻害剤からなる群、および／または前述のその剤の組み合わせから選ばれ得る。方法を実際に行うために、個人のｓＣＤ４０Ｌレベルが得られる。このレベルはそれから、規定値と比較してｓＣＤ４０Ｌレベルが、個人が剤による処置から利益を受ける可能性を示す規定値と比較される。個人はそれから、剤による処置から得られうる純利益という形で特徴付けられる。
【００３４】
規定値は、上記のとおりでよい。
【００３５】
上に述べたように、本発明は特に、どの個人が将来の卒中または致命的でない心筋梗塞を含む将来の心筋梗塞などの心血管障害の個人の危険を減らすための剤による処置から優先的に利益を受けるかを決定するために適合している。本発明はまた、例えば、新しい処置または有害な副作用の高いリスクプロファイルを伴う既知の処置からもっとも利益を受けると思われる個人を同定することにより、臨床試験および候補薬による処置のための候補集団の選択を可能にする。よって、本発明は、候補患者へのある処置の見込みある純利益の評価のための情報を提供する。
【００３６】
本発明の別の面によると、有害な心血管障害の危険を下げるために対象のｓＣＤ４０Ｌレベルを減らすための方法が、提供される。本方法は、より高いレベルのｓＣＤ４０Ｌを有する対象への対象中ｓＣＤ４０Ｌレベルを減らすために有効な量のｓＣＤ４０Ｌレベルを減らす剤の選択および投与を含む。一つの態様では、剤は、脂質減少剤である。好ましい対象は、見かけ上健康な対象である。いくつかの態様では、対象は、特に有害な心血管事象のより高い危険性を有しない。ある態様では、対象は、より高いＣ−反応性タンパク質(ＣＲＰ)レベルを有する。本発明のこの面のいくつかの態様では、対象は、特に脂質減少剤での処置を要求する兆候がない。
【００３７】
本発明のさらなる形態によると、心血管障害を発病する危険のある個人の血管プラーク内脂質蓄積の可能性を評価するための方法が、提供される。該方法は、個人のｓＣＤ４０Ｌレベルの入手、ｓＣＤ４０Ｌレベルと規定値との比較、および予定レベルと比較したｓＣＤ４０Ｌレベルをもとにした血管プラーク内脂質蓄積の個人のリスクプロファイルの特徴付けを含む。規定値は、規定ｓＣＤ４０Ｌレベル範囲の複数個、そして前記比較段階は、前記個人のｓＣＤ４０Ｌレベルが前記規定ｓＣＤ４０Ｌレベル範囲のいずれに含まれるかの決定からなる。ある態様では、規定値は、約２．５ｎｇ／ｍＬ血液である。いくつかの態様では、規定値は、約３．０ｎｇ／ｍＬ血液またはそれ以上である。重要な態様では、規定値は、規定ｓＣＤ４０Ｌレベル範囲の複数個で、前記複数個の一つは約２．５ｎｇ／ｍＬ血液以下、および前記範囲の別のものは、約２．５ｎｇ／ｍＬ血液、ならびに前記の比較段階は、前記個人のｓＣＤ４０Ｌレベルが前記規定ｓＣＤ４０Ｌレベル範囲の複数個のいずれに含まれるかの決定からなる。さらなる重要な態様では、血管プラーク内脂質蓄積は、頸動脈で生じる。他の好ましい範囲および重要な態様は、上記および下記のとおりである。
【００３８】
本発明のさらなる面によると、心血管障害の処置に有用な薬物を準備する方法が、提供される。
【００３９】
本発明のこれらのおよび他の面は、本発明の詳細な説明に関連して、以下に詳細を記述する。
発明の詳細な説明
【００４０】
本発明の主要な根拠は、心血管疾患またはガンの病歴がない28,263人の中年アメリカ人女性へのビタミンＥおよび低用量アスピリンの効果を評価する現在進行中の一次予防試験Women's Health Study (WHS)において、患者間の予想ネスティドケースコントロール分析からの証拠である。本試験では、炎症伝達物質、ｓＣＤ４０Ｌのベースラインレベルが、大きな一連の脂質および非脂質危険因子から独立した、および全身性炎症マーカーを含む他の予測因子から独立した、心筋梗塞および卒中の将来の危険を決定することが分かった（参照、例えば、米国特許第6,040,147号)。具体的に言うと、ｓＣＤ４０Ｌの最も高いベースラインレベルのある個人は、将来の心血管事象を発病する危険が最低３倍あると分かった(図1)。
【００４１】
さらに、Women's Health Studyからのデータでは、ｓＣＤ４０Ｌと関連する将来の心筋梗塞および卒中の危険は、総コレステロールおよびＨＤＬコレステロールの通常の査定により決定できる以外の付加になりそうである。この試験では、ｓＣＤ４０Ｌの予測値は、致命的のみならず致命的でない事象にあり、長期間安定し、および喫煙者のみならず非喫煙者にもあった。さらに、この試験からのデータは、見かけ上健康な個人がアテローム硬化症の予防および処置のために使われた治療剤から期待できる利益の度合いを示している。
【００４２】
一面において本発明は、現在疾患の証拠がない個人間で心筋梗塞および卒中などのアテローム性動脈硬化症と関連する心血管障害の危険を予測するためのｓＣＤ４０Ｌの使用について記載する。したがって、これらのデータは、既に危険性が高いと確認された集団間または不安定狭心症の患者などの症候性虚血患者間で危険を予測するｓＣＤ４０Ｌの使用についての先行観察を大いに伸ばす。実際に、ｓＣＤ４０Ｌレベルが急性虚血後に増えることから、急性疾患または危険度の高い集団の先行研究で観察された統計上の結び付きが、偶然なのかあるいは短期間の炎症変化または他の危険因子との相関、特に喫煙および高脂血症によるものなのどうか不明確だった。
【００４３】
極めて対極的に、Women's Health Studyからのデータは、初めて、現在健康なおよびそうでなければ危険度の低い個人間で危険を予測するため、致命的のみならず致命的でない事象を予測するため、非喫煙者間の危険を予測するため、ならびに総およびＨＤＬコレステロールのスクリーニングと関連する予想以上の危険を予測するために、ｓＣＤ４０Ｌの有用性を示す。Women's Health Studyからのデータはまた、初めて、心筋梗塞および卒中などのアテローム事象の危険を減らすためにデザインされた診療の効果の可能性は、ｓＣＤ４０Ｌ血漿／血液レベルの測度をもとに、規模が異なることを示している。本発明は、以下の用語の簡単な説明を参考にするとより良く理解できるだろう。
【００４４】
「心血管心筋虚血疾患」は、心筋梗塞、卒中、心筋虚血、狭心症および末梢動脈血管疾患を含む。心血管障害は、静脈血栓症を含まない。
【００４５】
ここで「見かけ上健康な」とは、心筋梗塞などの急性の有害な心血管事象が過去にない個人(すなわち、最初の有害な心血管事象による、第二の有害な心血管事象のより高い危険性がない個人)を意味する。見かけ上健康な個人はまた、特に疾患の症状を示さない。別の言葉で言い換えれば、このような個人は、医療専門家が診察した場合、健康で、疾患症状がないと特徴付けられる。
【００４６】
重要な態様では、対象は、特に有害な心血管事象のより高い危険がない。より高い危険を有する対象は、心血管障害、より高い脂質、喫煙者、先行の急性心血管事象などの家族歴のある者も含む(例えば、Harrison's Principles of Experimental Medicine, 15th Edition, McGraw-Hill、Inc., N. Y.−以下「Harrison's」という)。本発明の一つの重要な形態によると、心血管障害の危険を減らすために対象を処置する方法が提供されている。方法は、通常レベル以上のｓＣＤ４０Ｌを有することが分かっている対象への心血管障害の危険を減らすための剤の選択および投与を含む。剤は、抗炎症剤、抗血栓剤、抗血小板剤、繊維素溶解剤、脂質減少剤、直接トロンビン阻害剤、糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体阻害剤、細胞接着分子に結合し、このような分子に白血球が付着する能力を阻害する剤、カルシウムチャンネルブロッカー、ベータアドレナリン受容体ブロッカー、シクロオキシゲナーゼ−２阻害剤、アンギオテンシン系阻害剤、および／またはその組み合わせになり得る。剤は、対象が将来の心血管障害を発病する危険を下げるのに有効な量が投与される。
【００４７】
好ましい対象は、本発明により処方された剤による処置の現在必要性が他にはない見かけ上健康な対象である。さらに重要な態様では、処置対象は、高脂血症のない(nonhyperlipidemic)対象である。例えば、より高いsＣＤ４０レベルをもとに特定の剤での処置が生じる場合、それなら、好ましい対象は、より高いレベルのｓＣＤ４０Ｌを有する症状以外は、その剤(または前記剤が当てはまる剤の部類)での処置を要求する症状がない。いくつかの態様では、対象は、剤の前述部類のどの組み合わせのまたは全てでの処置を要求する症状が他にはない。例えば、抗炎症剤に関しては、リュウマチ性関節炎、慢性背痛、自己免疫疾患、血管疾患、ウィルス性疾患、悪性腫瘍、および同類の症状がない。さらなる重要な態様では、処置対象は、高脂血症のない対象である。別の態様では、対象は、より高いレベルのｓＣＤ４０Ｌを有するよりは、有害な心血管事象のより高い危険がない(例、このような事象の家族歴がない対象、非喫煙者の対象、高脂血症のない対象、全身性炎症マーカーがより高いレベルではない対象)。いくつかの態様では、対象は、剤の前記部類のどの組み合わせのまたは全てでの処置を要求する症状が他にはない。
【００４８】
いくつかの態様では、対象は、特に剤の前述部類のどの組み合わせのまたは全てでの処置を要求する症状がない。さらなる重要な態様では、対象とは、高脂血症のない対象である。「高脂血症のない」とは、対象が、高コレステロール症のない(nonhypercholesterolemic)および／または高中性脂肪症のない(nonhypertriglyceridemic)対象である。「高コレステロール症のない」対象とは、高コレステロール症の(hypercholesterolemic)対象用に確立された現在の基準に当てはまらない対象のことである。高中性脂肪症のない対象とは、高中性脂肪症の(hypertriglyceridemic)対象用に確立された現在の基準に当てはまらない対象のことである(例えば、Harrison's Principles of Experimental Medicine, 15th Edition, McGraw-Hill, Inc., N. Y.−以下「Harrison's」という)。高コレステロール症の対象および高中性脂肪症の対象は、早期冠状動脈性心臓病の増加罹患率と関連する。高コレステロール症の対象は、１６０ｍｇ／ｄＬより高いまたは１３０ｍｇ／ｄＬより高いＬＤＬレベルならびに、男性、早期冠状動脈性心臓病、タバコの喫煙（１日あたり１０本以上）、高血圧症、低ＨＤＬ（３５ｍｇ／ｄＬ未満）、糖尿病、高インスリン血症、腹部肥満症、高リポタンパク質（ａ）の家族歴、および脳血管疾患または閉塞性末梢血管疾患の個人歴からなる群から選ばれた少なくとも２つの危険因子を有する。高中性脂肪症の対象は、２５０ｍｇ／ｄＬより多い中性脂肪（ＴＧ）レベルを有する。したがって、高脂血症のない対象は、コレステロールおよび中性脂肪レベルが、高コレステロール症および高中性脂肪症の対象両方に上記のように設定された限界値以下である者と定義される。
【００４９】
いくつかの態様では、対象は、全身性炎症マーカーの通常レベルを有する。この用途の目的のために、平均のこのようなレベルとは、より高いレベルがないのと同じことを意味する。通常レベルは、特定の全身性炎症マーカーによる(米国特許第6,040,147号参照、本明細書に全て参考文献として組み込まれる)。
【００５０】
ここで「非喫煙」とは、評価時に喫煙者ではない個人である。これには、過去に喫煙したことはあるが、もはや喫煙しない個人のみならず、一度も喫煙したことがない個人を含む。
【００５１】
心血管障害の危険を減らす剤は、抗炎症剤、抗血栓剤、抗血小板剤、繊維素溶解剤、脂質減少剤、直接トロンビン阻害剤、糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体阻害剤、細胞接着分子に結合し、このような分子に白血球が付着する能力を阻害する剤(例えば、反細胞接着分子抗体)、カルシウムチャンネルブロッカー、ベータアドレナリン受容体ブロッカー、シクロオキシゲナーゼ−２阻害剤、アンギオテンシン系阻害剤および／またはその組み合わせからなる群から選ばれた剤を含むが、それらに限定されない。
【００５２】
「抗炎症」剤は、アルクロフェナック、ジプロピオン酸アルクロメタゾン、アルゲストンアセトニド、アルファアミラーゼ、アンシナファル、アンシナフィド、アムフェナックナトリウム、塩酸アミプリローズ、アナキンラ、アニロラック、アニトラザフェン、アパゾン、バルサラジドジナトリウム、ベンダザック、ベノキサプロフェン、塩酸ベンジダミン、ブロメライン、ブロペラモール、ブデソニド、カルプロフェン、シクロプロフェン、シンタゾン、クリプロフェン、プロピオン酸クロベタゾール、ブチル酸クロベタゾン、クロピラック、プロピオン酸クロチカゾン、酢酸コルメタゾン、コルトドキソン、デフラザコート、デソニド、デソキシメタゾン、ジプロピオン酸デキサメタゾン、ジクロフェナックカリウム、ジクロフェナックナトリウム、酢酸ジフロラゾン、ジフルミドンナトリウム、ジフルニザル、ジフルプレドナート、ジフタロン、ジメチルスルフォキシド、ドロシノニド、エンドリゾン、エンリモマブ、エノリカムナトリウム、エピリゾール、エトドラク、エトフェナメート、フェルビナク、フェナモル、フェンブフェン、フェンクロフェナク、フェンクロラック、フェンドサル、フェンピパロン、フェンチアザク、フラザロン、フルアザコート、フルフェナム酸、フルミゾール、酢酸フルニソリド、フルニキシン、フルニキシンメグルミン、フルオコルチンブチル、酢酸フルオロメトロン、フルクアゾン、フルルビプロフェン、フルレトフェン、プルピオン酸フルチカゾン、フラプロフェン、フロブフェン、ハルシノニド、プロピオン酸ハロベタゾール、酢酸ハロプレドン、イブフェナク、イブプロフェン、イブプロフェンアルミニウム、イブプロフェンピコノール、イロニダップ、インドメタシン、インドメタシンナトリウム、インドプロフェン、インドキソール、イントラゾール、酢酸イソフルプレドン、イソキセパック、イソキシカム、ケトプロフェン、塩酸ロフェミゾール、ロルノキシカム、ロテプレドノールエタボネート、メクロフェナマートナトリウム、メクロフェナム酸、ブチル酸メクロリゾン、メフェナム酸、メサラミン、メセクラゾン、メチルプレドニゾロンスレプタナート、モルニフルマート、ナブメトン、ナプロキセン、ナプロキセンナトリウム、ナプロクソール、ニマゾン、オルサラジンナトリウム、オルゴテイン、オルパノキシン、オキサプロジン、オキシフェンブタゾン、塩酸パラニリン、ポリ硫酸ペントサンナトリウム、グリセリン酸フェンブタゾンナトリウム、ピルフェニドン、ピロキシカム、ケイ皮酸ピロキシカム、ピロキシカムオラミン、ピルプロフェン、プレドナザート、プリフェロン、プリドリン酸、プロクアゾン、プロキサゾール、クエン酸プロキサゾール、リメクソロン、ロマザリット、サルコレックス、サルナセジン、サルサラート、塩化サンジナリウム、セクラゾン、セルメタシン、スドキシカム、スリンダック、スプロフェン、タルメタシン、タルニフルマート、タロサラート、テブフェロン、テニダップ、テニダップナトリウム、テノキシカム、テシカム、テシミド、テトリダミン、チオピナック、ピバル酸チクソコルトール、トルメチン、トルメチンナトリウム、トリクロニド、トリフルミダート、ジドメタシン、糖質コルチコイドまたはゾメピラックナトリウムを含むが、それらに限定されない。
【００５３】
「抗血栓」および／または「繊維素溶解」剤は、プラスミノーゲン（プレカリクレイン、キニノーゲン、第ＸＩＩ、第ＸＩＩＩａ因子、プラスミノーゲンプロアクチベーター、および組織プラスミノーゲン活性化因子「ＴＰＡ」を介してプラスミンに至る）ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、アニソイル化プラスミノーゲン‐ストレプトキナーゼ活性化因子複合体、プロ‐ウロキナーゼ、（Ｐｒｏ−ＵＫ）、ｒＴＰＡ（アルテプラーゼまたはアクチバーゼ（activase）；ｒは組換え（recombinant）を表す）、ｒＰｒｏ−ＵＫ、アボキナーゼ、エミナーゼ（Eminase）、塩酸スレプターゼアナグレリド（Sreptase Anagrelide Hydrochloride）、ビバリルジン（Bivalirudin）、ダルテパリンナトリウム（Dalteparin Sodium）、ダナパロイドナトリウム（Danaparoid Sodium）、塩酸ダゾキシベン（Dazoxiben Hydrochloride）、硫酸エフェガトラン（Efegatran Sulfate）、エノキサパリンナトリウム（Enoxaparin Sodium）、イフェトロバン（Ifetroban）、イフェトロバンナトリウム（Ifetroban Sodium）、チンザパリンナトリウム（Tinzaparin Sodium）、レタプラーゼ（retaplase）、トリフェナグレル（Trifenagrel）、ワルファリン、デキストランを含むが、それらに限定されない。 
【００５４】
「抗血小板」剤は、クロプリドグレル(Clopridogrel)、スルフィンピラゾン(Sulfinpyrazone)、アスピリン、ジピリダモール、クロフィブラート（Clofibrate）、カルバミン酸ピリジノール（Pyridinol Carbamate）、ＰＧＥ、グルカゴン、抗セロトニン薬、カフェイン、テオフィリンペントキシフィリン、チクロピジン(Ticlopidine)、アナグレリド(Anagrelide)を含むが、それらに限定されない。
【００５５】
「脂肪減少」剤は、ゲムフィブロジル、コリスチラミン、コレスチポール、ニコチン酸、プロブコールロバスタチン、フルバスタチン、シムバスタチン、アトルバスタチン、プラバスタチン、セリバスタチンおよび他のＨＭＧ−ＣｏＡリダクターゼ阻害剤を含むが、それらに限定されない。 
【００５６】
ＨＭＧ−ＣｏＡ（3-ヒドロキシ-3-メチルグルタリル補酵素Ａ）リダクターゼは、コレステロール生物合成の律速反応を触媒するミクロソーム酵素である(ＨＭＧ−ＣｏＡ６メバロン酸)。ＨＭＧ−ＣｏＡリダクターゼ阻害剤は、ＨＭＧ−ＣｏＡリダクターゼを阻害し、およびその結果、コレステロール合成を阻害する。多くのＨＭＧ−ＣｏＡリダクターゼ阻害剤が、高コレステロール症の個人の処置に使われている。より最近では、ＨＭＧ−ＣｏＡリダクターゼ阻害剤は、卒中の処置に有益であると示されている(Endres M、et al.、Proc Natl cad Sci USA、1998、95:8880-5)。
【００５７】
本発明により有用とされているＨＭＧ−ＣｏＡリダクターゼ阻害剤は、シムバスタチン(米国特許第4、444,784号)、ロバスタチン(米国特許第4,231,938号)、プラバスタチンナトリウム(米国特許第4,346,227号)、フルバスタチン(米国特許第4,739,073号)、アトルバスタチン(米国特許第5,273,995号)、セリバスタチン、および特許の開示が本明細書に参考文献として組込まれる米国特許第5,622,985号、米国特許第5,135,935号、米国特許第5,356,896号、米国特許第4,920,109号、米国特許第5,286,895号、米国特許第5,262,435号、米国特許第5,260,332号、米国特許第5,317,031号、米国特許第5,283,256号、米国特許第5,256,689号、米国特許第5,182,298号、米国特許第5,369,125号、米国特許第5,302,604号、米国特許第5,166,171号、米国特許第5,202,327号、米国特許第5,276,021号、米国特許第5,196,440号、米国特許第5,091,386号、米国特許第5,091,378号、米国特許第4,904,646号、米国特許第5,385,932号、米国特許第5,250,435号、米国特許第5,132,312号、米国特許第5,130,306号、米国特許第5,116,870号、米国特許第5,112,857号、米国特許第5,102,911号、米国特許第5,098,931号、米国特許第5,081,136号、米国特許第5,025,000号、米国特許第5,021,453号、米国特許第5,017,716号、米国特許第5,001,144号、米国特許第5,001,128号、米国特許第4,997,837号、米国特許第4,996,234号、米国特許第4,994,494号、米国特許第4,992,429号、米国特許第4,970,231号、米国特許第4,968,693号、米国特許第4,963,538号、米国特許第4,957,940号、米国特許第4,950,675号、米国特許第4,946,864号、米国特許第4,946,860号、米国特許第4,940,800号、米国特許第4,940,727号、米国特許第4,939,143号、米国特許第4,929,620号、米国特許第4,923,861号、米国特許第4,906,657号、米国特許第4,906,624号および米国特許第4,897,402号、に記載されたその他多数のものを含むが、それらに限定されない。
【００５８】
「直接トロンビン阻害剤」は、ヒルジン、ヒルゲン、ヒルログ、アガトロバン（agatroban）、ＰＲＡＣＫ、トロンビンアプタマーを含むが、それらに限定されない。
【００５９】
「糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体阻害剤」は、抗体および非抗体の両方、およびＲｅｏＰｒｏ（アブシクサマブ(abcixamab)）、ラミフィバン（lamifiban）、チロフィバン(tirofiban)を含むが、それらに限定されない。
【００６０】
「カルシウムチャンネルブロッカー」は、高血圧症、狭心症および心不整脈などのいくつかの心血管障害を含む様々な疾患の制御に重要な治療価値を有する化合物の化学的に多様な種類である (Fleckenstein、Cir. Res. v. 52、(suppl. 1)、p. 13-16 (1983)、Fleckenstein、Experimental Facts and Therapeutic Prospects、John Wiley、New York (1983)、McCall、D.、Curr Pract Cardiol、v. 10、p. 1-11 (1985))。カルシウムチャンネルブロッカーは、細胞カルシウムチャンネルを調節することにより、細胞へのカルシウム流入を防ぐまたはゆっくりさせる薬の異種群である（Remington、The Science and Practice of Pharmacy、Nineteenth Edition、Mack Publishing Company、Eaton、PA、p. 963 (1995)）。現在入手可能で、本発明によると有用なカルシウムチャンネルブロッカーのほとんどは、ニフェジピンなどのジヒドロピリジン、ベラパミルなどのフェニルアルキルアミン、およびジルチアゼムなどのベンゾジアゼピンの薬の３主要化学群の一つに属する。本発明によると、有用な他のカルシウムチャンネルブロッカーは、アムリノン、アムロジピン、ベンシクラン、フェロジピン、フェンジリン、フルナリジン、イスラジピン、ニカルジピン、ニモジピン、ペルヘキシレン、ガロパミル、チアパミルおよびチアパミル類似物(1993RO-11-2933など)、フェニトイン、バルビタール酸塩、ならびにペプチド類ダイノルフィン、オメガコノトキシン、およびオメガアガトキシンおよび同類および／またはそれらの薬学的に許容し得る塩を含むが、それらに限定されない。
【００６１】
「ベータアドレナリン受容体ブロッカー剤」は、狭心症、高血圧症、および心不整脈におけるカテクラミンの心血管効果を拮抗する薬の種類である。ベータアドレナリン受容体ブロッカーは、アテノロール、アセブトロール、アルプレノール、ベフノロール、ベタキソロール、ブニトロロール、カルテオロール、セリプロロール、ヘドロキサロール(hedroxalol)、インデノロール、ラベタロール、レボブノロール、メピンドロール(mepindolol)、メチプラノール(methypranol)、メチンドール(metindol)、メトプロロール、メトリゾラノロール(metrizoranolol)、オクスプレノロール、ピンドロール、プロプラノロール、プラクトロール、プラクトロール、ソタロルナドロール（sotalolnadolol）、チプレノロール（tiprenolol）、トマロロール(tomalolol)、チモロール、ブプラノロール、ペンブトロール、トリメプラノール（trimepranol）、2-(3-(1,1-ジメチルエチル)-アミノ-2-ヒドロキシプロポキシ)-3-ピリデンカルボニトリル（pyridenecarbonitril）HCl、1-ブチルアミノ-3-(2,5-ジクロロフェノキシ)-2-プロパノール、1-イソプロピルアミノ-3-(4-(2-シクロプロピルメトキシエチル)フェノキシ)-2-プロパノール、3-イソプロピルアミノ-1-(7-メチルインダン-4-イルオキシ)-2-ブタノール、2-(3-t-ブチルアミノ-2-ヒドロキシプロピルチオ（hydroxy-propylthio）)-4-(5-カルバモイル-2-チエニル)チアゾール、7-(2-ヒドロキシ-3-t-ブチルアミンプロポキシ（butylaminpropoxy）)フタリドを含むが、それらに限定されない。上記に定義された化合物は、異性体の混合物として、またはそれらのそれぞれの左旋性または右旋性で用いることができる。
【００６２】
シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）は最近同定された新しい形のシクロオキシゲナーゼである。「シクロオキシゲナーゼ」は、アラキドン酸から様々なプロスタグランジンおよびトロンボキサンを産生する、ほとんどの組織に存在する酵素複合体である。非ステロイド、抗炎症薬は、シクロオキシゲナーゼ阻害を通じて、抗炎症、鎮痛および解熱作用およびホルモン誘導子宮収縮およびある種のガン成長を阻害するほとんどに用いる（プロスタグランジンＧ／Ｈシンターゼおよび／またはプロスタグランジンエンドペルオキサイドシンターゼとして知られている）。当初は、ただ一つのシクロオキシゲナーゼの形「構成酵素」またはシクロオキシゲナーゼ−１（ＣＯＸ−１）のみ知られていた。これは、もともとウシの精嚢で同定された。
【００６３】
シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）は、最初ニワトリ、マウスおよびヒトの試料からクローニングされ、配列決定され、キャラクタライズされた（例えば1996年8月6日にCromlish、et alに発行され、Merck Frosst Canada、Inc.、Kirkland、CAに譲渡された「ヒトシクロオキシゲナーゼ−２ｃＤＮＡおよびシクロオキシゲナーゼ−２活性評価のためのアッセイ（Human cyclooxygenase-2 cDNA and assays for evaluating cyclooxygenase-2 activity）」という名称の米国特許第5,543,297号を参照)。この酵素はＣＯＸ−１とははっきり区別される。ＣＯＸ−２は、マイトージェン、エンドトキシン、ホルモン、サイトカインおよび成長因子を含む多くの剤で迅速かつ容易に誘導できる。プロスタグランジンは、生理的役割および病理的役割の両方を有しているため、構成酵素であるＣＯＸ−１は、その大部分が、プロスタグランジンの内因性の基礎放出に寄与しており、したがって、胃腸の健全性および腎血流の維持などの生理学的機能において重要である。これに対し、誘導形態であるＣＯＸ−２は、炎症剤、ホルモン、成長因子、およびサイトカインなどの剤に応答して迅速な酵素誘導が生じた場合のプロスタグランジンの病理学的効果に、主に寄与していると思われる。したがって、ＣＯＸ−２の選択的阻害剤は、従来の非ステロイド抗炎症薬と同様の抗炎症、解熱および鎮痛特性を有し、そしてさらにホルモン誘導性の子宮収縮を阻害し、また、潜在的な抗癌効果を有するが、副作用は小さいと思われる。特に、このようなＣＯＸ−２阻害剤は、胃腸毒性の潜在力が軽度で、腎への副作用の潜在力が軽度で、出血時間への効果が軽度であり、アスピリン感受性喘息対象における喘息発作を誘導する潜在力が低い可能性があり、したがって、本発明に関して有用である。
【００６４】
多くの選択「ＣＯＸ−２阻害剤」が、当該技術分野において周知である。これらは、それら全てがMerck Frosst Canada、Inc. (Kirkland、CA)に共通に譲渡された、米国特許第5,474,995号「cox-2阻害剤としてのフェニル複素環（Phenyl heterocycles as cox-2 inhibitors）」、米国特許第5,521,213号「シクロオキシゲナーゼ−２阻害剤としてのジアリル二環性複素環（Diaryl bicyclic heterocycles as inhibitors of cyclooxygenase-2）」、米国特許第5,536,752号「ＣＯＸ−２阻害剤としてのフェニル複素環（Phenyl heterocycles as COX-2 inhibitors）」、米国特許第5,550,142号「ＣＯＸ−２阻害剤としてのフェニル複素環（Phenyl heterocycles as COX-2 inhibitors）」、米国特許第5,552,422号「抗炎症剤としてのアリル置換５，５縮合芳香族窒素化合物（Aryl substituted 5,5 fused aromatic nitrogen compounds as anti-inflammatory agents）」、米国特許第5,604,253号「シクロオキシゲナーゼ阻害剤としてのN-ベンジルインドル-3-イルプロパン酸誘導体（N-benzylindol-3-yl propanoic acid derivatives as cyclooxygenase inhibitors）」、米国特許第5,604,260号「シクロオキシゲナーゼ−２の阻害剤としての5-メタンスルホンアミド-1-インダノン（5-methanesulfonamido-1-indanones as an inhibitor of cyclooxygenase-2）」、米国特許第5,639,780号「シクロオキシゲナーゼ阻害剤としてのN-ベンゾイルインドール-3-イルブタン酸誘導体（N-benzyl indol-3-yl butanoic acid derivatives as cyclooxygenase inhibitors）」、米国特許第5,677,318号「抗炎症剤としてのジフェニル-1,2-3-チアジアゾール（Diphenyl-1,2-3-thiadiazoles as anti-inflammatory agents）」、米国特許第5,691,374号「ＣＯＸ−２阻害剤としてのジアリル-5-酸化-2-(5H)-フラノン（Diaryl-5-oxygenated-2-(5H)-furanones as COX-2 inhibitors）」、米国特許第5,698,584号「ＣＯＸ−２阻害剤のプロドラッグとしての3,4-ジアリル-2-ヒドロキシ-2,5-ジヒドロフラン（3,4-diaryl-2-hydroxy-2,5-dihydrofurans as prodrugs to COX-2 inhibitors）」、米国特許第5,710,140号「ＣＯＸ−２阻害剤としてのフェニル複素環（Phenyl heterocycles as COX-2 inhibitors）」、米国特許第5,733,909号「ＣＯＸ−２阻害剤のプロドラッグとしてのジフェニルスチルベン（Diphenyl stilbenes as prodrugs to COX-2 inhibitors）」、米国特許第5,789,413号「ＣＯＸ−２阻害剤のプロドラッグとしてのアルキル化スチレン（Alkylated styrenes as prodrugs to COX-2 inhibitors）」、米国特許第5,817,700号「シクロオキシゲナーゼ阻害剤としてのビスアリールシクロブテン誘導体（Bisaryl cyclobutenes derivatives as cyclooxygenase inhibitors）」、米国特許第5,849,943号「シクロオキシゲナーゼ−２阻害剤として有用なスチルベン誘導体（Stilbene derivatives useful as cyclooxygenase-2 inhibitors)」、米国特許第5,861,419号「選択的シクロオキシゲナーゼ−２阻害剤としての置換ピリジン（Substituted pyridines as selective cyclooxygenase-2 inhibitors」、米国特許第5,922,742号「シクロオキシゲナーゼ−２阻害剤としてのピリジニル-2-シクロペンテン-1-オン（Pyridinyl-2-cyclopenten-1-ones as selective cyclooxygenase-2 inhibitors」、米国特許第5,925,631号「ＣＯＸ−２阻害剤のプロドラッグとしてのアルキル化スチレン（Alkylated styrenes as prodrugs to COX-2 inhibitors）」に記載されたＣＯＸ−２阻害剤を含むが、それらに限定されない。また、さらなるＣＯＸ−２阻害剤がG. D. Searle & Co. (Skokie、IL)に譲渡された「シクロオキシゲナーゼ−２および5‐リポキシゲナーゼ阻害剤としての置換スルホニルフェニル複素環（Substituted sulfonylphenylheterocycles as cyclooxygenase-2 and 5-lipoxygenase inhibitors）」の名称の米国特許第5,643,933号に記載されている。
【００６５】
上記ＣＯＸ−２阻害剤の多くは、選択的ＣＯＸ−２阻害剤のプロドラッグであり、in vivoで活性がありかつ選択的なＣＯＸ−２阻害剤に変換されてその作用を発揮する。上記ＣＯＸ−２阻害剤のプロドラッグから形成された活性がありかつ選択的なＣＯＸ−２阻害剤は、1995年1月5日公開のWO 95/00501、1995年6月13日公開のWO 95/18799および1995年12月12日に公表された米国特許第5,474,995号に詳しく記載されている。「ヒトシクロオキシゲナーゼ−２ｃＤＮＡおよびシクロオキシゲナーゼ−２活性の評価のためのアッセイ」という名称の米国特許第5,543,297号の教示により、当業者は、剤が選択的ＣＯＸ−２阻害剤であるのか、ＣＯＸ−２阻害剤の前駆体であるのか、したがって、本発明の部分であるのかを決定することが可能になる。
【００６６】
「アンギオテンシン系阻害剤」とは、アンギオテンシンＩＩの機能、合成または異化を妨げる剤である。これらの剤は、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、アンギオテンシンＩＩ拮抗剤、アンギオテンシンＩＩ受容体拮抗剤、アンギオテンシンＩＩの異化を活性化する剤、およびアンギオテンシンＩＩが最終的に得られるアンギオテンシンＩの合成を防ぐ剤を含むが、それらに限定されない。レニン−アンギオテンシン系は、血行ならびに水および電解質のバランスの調節を含む。これらのパラメータを上げる因子は、その機能を下げる傾向にあるのと同時に、血量、腎血流圧、または血漿中Ｎａ濃度を下げる因子は、系統の活性化をする傾向にある。
【００６７】
アンギオテンシンＩおよびアンギオテンシンＩＩは、酵素的レニン−アンギオテンシン経路により合成される。合成過程は、酵素レニンが、偽グロブリンであるアンギオテンシノーゲンに作用し、デカペプチドであるアンギオテンシンＩを産生するときに開始される。アンギオテンシンIは、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）によりアンギオテンシンＩＩ（アンギオテンシン-[1-8]-オクタペプチド）に変換される。後者は、活性な昇圧物質であり、原因剤として、様々な哺乳類種、例えばヒトにおける多数の形態の高血圧に関与している。
【００６８】
アンギオテンシン（レニン‐アンギオテンシン）系阻害剤は、アンギオテンシノーゲンまたはアンギオテンシンIからのアンギオテンシンＩＩの産生を妨げ、または、アンギオテンシンＩＩの活性を妨げるように作用する化合物である。このような阻害剤は、当業者によく知られており、最終的なアンギオテンシンＩＩの産生に関する、レニンおよびACEを含む酵素を阻害するように作用する化合物を含む。それらはまた、一度産生されたアンギオテンシンＩＩの活性を妨げる化合物も含む。このような化合物のクラスの例は、抗体（例えばレニンに対する）、アミノ酸およびその類縁体（より大きな分子に複合したものを含む）、ペプチド（アンギオテンシンおよびアンギオテンシンIの類似ペプチドを含む）、プロ-レニン関連類縁体（pro-renin related analogs）などを含む。最も強力で有用なレニン‐アンギオテンシン系阻害剤は、レニン阻害剤、ACE阻害剤およびアンギオテンシンII拮抗剤である。本発明の好ましい態様において、レニン‐アンギオテンシン系阻害剤は、レニン阻害剤、ACE阻害剤およびアンギオテンシンII拮抗剤である。
【００６９】
「アンギオテンシンＩＩ拮抗剤」は、アンギオテンシンＩＩ受容体に結合し、その活性に干渉することによりアンギオテンシンＩＩの活性に干渉する化合物である。アンギオテンシンＩＩ拮抗剤はよく知られており、ペプチド化合物および非ペプチド化合物を含む。多くのアンギオテンシンＩＩ拮抗剤はわずかに修飾された同族体であり、作動活性が、第8位のフェニルアラニンを何らかの他のアミノ酸で置換することにより緩和されており、安定性は、in vivoでの分解を遅延する他の置換により向上することができる。アンギオテンシンＩＩ拮抗剤の例は、ペプチド化合物(例えば、サララシン、[(San1)(Val5)(Ala8)]アンギオテンシン-(1-8)オクタペプチドおよび関連する類似物)、N-置換イミダゾール-2-オン(米国特許第 5,087,634号)、2-N-ブチル-4-クロロ-1-(2-クロロベンジル)イミダゾール-5-酢酸(Long et al.、J. Pharmacol. Exp. Ther. 247(1)、1-7 (1988)を参照)を含むイミダゾール酢酸誘導体、4，5，6，7-テトラヒドロ-1H-イミダゾ[4,5-c]ピリジン-6-カルボキシル酸およびその類縁誘導体 (米国特許第 4,816,463号)；N2-テトラゾールベータ-グルクロニド類縁体(米国特許第 5,085,992号)；置換ピロール、ピラゾール、およびトリヤゾール（tryazole）(米国特許第 5,081,127号)；1、3-イミダゾールなどのフェノールおよび複素環誘導体(米国特許第 5,073,566号)；イミダゾ‐フューズド七員複素環(米国特許第 5,064,825号)；ペプチド(例えば、米国特許第 4,772,684号)；アンギオテンシンＩＩに対する抗体(例えば、米国特許第 4,302,386号)；およびビフェニル‐メチル置換イミダゾールなどのアラルキルイミダゾール化合物(例えば、EP第253,310号、１９８８年１月２０日)；ES8891(N-モルホリノアセチル-(-1-ナフチル)-L-アラニル-(4，チアゾリル)-L-アラニル(35，45)-4-アミノ-3-ヒドロキシ-5-シクロ-ヘキサペンタノイル-N-ヘキシルアミド、Sankyo Company、Ltd.、Tokyo、Japan)；SKF108566 (E-アルファ-2-[2-ブチル-1-(カルボキシフェニル)メチル] 1H-イミダゾール-5-イル[メチラン]-2-チオフェンプロピオン酸、Smith Kline Beecham Pharmaceuticals、PA)；ロザルタン（Losartan）(DUP753/MK954、DuPont Merck Pharmaceutical Company)；レミキリン（Remikirin）(RO42-5892、F. Hoffman LaRoche AG)；A2作動剤(Marion Merrill Dow)およびある非ペプチド複素環 (G.D.Searle and Company)を含む。
【００７０】
「アンギオテンシン変換酵素 （ＡＣＥ）は、アンチオテンシンＩのアンギオテンシンＩＩへの変換を触媒する酵素である。ＡＣＥ阻害剤は、アミノ酸およびその誘導体、ジペプチドおよびトリペプチドを含むペプチド、およびＡＣＥに対する抗体を含み、ＡＣＥの活性を阻害することでレニン‐アンギオテンシン系に干渉し、それにより、昇圧物質であるアンギオテンシンＩＩの形成を減少または排除する。ＡＣＥ阻害剤は、高血圧、先天性心不全、心筋梗塞および腎疾患の処置に対し医療的に用いられてきた。ＡＣＥ阻害剤として有用と知られている化合物の種類は、カプトプリル(米国特許第4,105,776号)およびゾフェノプリル(米国特許第4,316,906号)などのアシルメルカプトおよびメルカプトアルカノイルプロリン、エナラプリル(米国特許第4,374,829号)、リシノプリル(米国特許第 4,374,829号)、キナプリル(米国特許第4,344,949号)、ラミプリル(米国特許第 4,587,258号)、およびペリンドプリル(米国特許第4,508,729号)などのカルボキシアルキルジペプチド、シラザプリル(米国特許第4,512,924号)およびベナザプリル(米国特許第4,410,520号)などのカルボキシアルキルジペプチド模倣体、フォシノプリル(米国特許第4,337,201号)およびトランドロプリル（trandolopril）などのホスフィニルアルカノイルプロリンを含む。
【００７１】
「レニン阻害剤」は、レニンの活性に干渉する化合物である。レニン阻害剤は、アミノ酸およびその誘導体、ペプチドおよびその誘導体、およびレニンに対する抗体を含む。米国特許の対象となるレニン阻害剤の例は次の通りである：ペプチドの尿素誘導体(米国特許第5,116,835号)；非ペプチド結合により連結したアミノ酸(米国特許第5,114,937号)；ジ‐およびトリ‐ペプチド誘導体(米国特許第5,106,835号)；アミノ酸およびその誘導体(米国特許第5,104,869号および第5,095,119号)；ジオールスルホンアミドおよびスルフィニル（diol sulfonamides and sulfinyls）(米国特許第5,098,924号)；修飾ペプチド(米国特許第5,095,006号)；ペプチジルベータ‐アミノアシルアミノジオールカルバメート（peptidyl beta-aminoacyl aminodiol carbamates）(米国特許第5,089,471号)；ピロルイミダゾロン（pyrolimidazolones）(米国特許第5,075,451号)；フルオリンおよびクロリンスタチンまたはスタトン（fluorine and chlorine statine or statone）を含むペプチド (米国特許第5,066,643号)；ペプチジルアミノジオール（peptidyl amino diols）(米国特許第5,063,208号および第4,845,079号)；N-モルホリノ誘導体(米国特許第5,055,466号)；ペプスタチン（pepstatin）誘導体 (米国特許第4,980,283号)；N-複素環アルコール (米国特許第4,885,292号)；レニンに対するモノクローナル抗体 (米国特許第 4,780,401号)；および様々なその他ノペプチドおよびその類似体 (米国特許第5,071,837号、第5,064,965号、第5,063,207号、第5,036,054号、第5,036,053号、第5,034,512号および第4,894,437号)。
【００７２】
細胞接着分子に結合し、このような分子に白血球が付着する能力を阻害する剤は、ポリペプチド剤を含む。このようなポリペプチドは、従来の方法論により準備されたポリクローナルおよびモノクローナル抗体を含む。このような抗体は、当技術分野で周知のように、他のこのような抗体のみならず抗ＩＣＡＭ１抗体を含む。重要なのは、当技術分野で周知のように、抗体分子の小さい部分、パラトープ（paratope）だけが、抗体の結合においてそのエピトープに含まれることである（一般的には、Clark, W.R. (1986) The Experimental Foundations of Modern Immunology Wiley & Sons, Inc., New York; Roitt, I. (1991) Essential Immunology, 7th Ed., Blackwell Scientific Publications, Oxford参照）。例えばＦｃ’およびＦｃ領域は、補体カスケードのエフェクターであるが、抗原結合において含まれない。ｐＦｃ’領域から酵素的に切断されたか、またはｐＦｃ’領域を用いないで産生されＦ（ａｂ’）２断片を設計された抗体は、両方の完全な抗体の抗原結合部位を保持する。同様に、Ｆｃ領域が酵素的に切断されたか、またはＦｃ領域を用いないで産生されＦａｂ断片を設計された抗体は、完全な抗体分子の１つの抗原結合部位を保持する。続けてさらに、Ｆａｂ断片は、共有結合している抗体軽鎖およびＦｄを示す抗体重鎖の一部からなる。Ｆａｂ断片は抗体の特異性（単一のＦｄ断片は、抗体特異性を変えることなく１０までの異なる軽鎖と関連し得る）の主要な決定基であり、Ｆｄ断片は溶液中でエピトープ結合能力を保持する。
【００７３】
抗体の抗原結合部分内で、当技術分野では周知のように、抗原のエピトープと直接相互に作用し合う相補性決定領域（ＣＤＲｓ）と、パラトープの三次構造を維持するフレームワーク領域（Ｆｒｓ）がある(一般的にClar, 1986; Roitt, 1991参照)。重鎖Ｆｄ断片およびＩｇＧ免疫グロブリン軽鎖両方には、それぞれ３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１からＣＤＲ３）で分かれている４つのフレームワーク領域（ＦＲ１からＦＲ４）がある。ＣＤＲ、特にＣＤＲ３領域、およびさらには重鎖ＣＤＲ３が、抗体特異性に対する大きく支配している。
【００７４】
当該技術では、哺乳類抗体の非ＣＤＲ域は、原抗体のエピトープ特異性のままにしておきながら、非特異的または異種特異的抗体の似た領域と交換できることが、良く立証されている。これは、機能的抗体を産生するためにおよび非ヒトＣＤＲｓがヒトＦＲおよび／またはＦＣ／ｐＦｃ’域に共有結合する「ヒト化」抗体の開発と使用で最も明白になっている。したがって、例えば、PCT International Publication Number WO 92/04381は、少なくともマウスＦＲ域の一部がヒト由来のＦＲ域によって交換されたヒト化マウスＲＳＶ抗体の産生および使用を教示している。抗原結合能力を備えた完全な抗体の断片を含むこのような抗体は、しばしば「キメラ」抗体と言われる。
【００７５】
したがって、当業者に明らかになるように、本発明はまた、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ、ＦｖおよびＦｄ断片;Ｆｃおよび／またはＦＲおよび／またはＣＤＲ１および／またはＣＤＲ２および／または軽鎖ＣＤＲ３領域が相同性のヒトまたは非ヒト配列で置換されているキメラ抗体；ＦＲおよび／またはＣＤＲ１および／またはＣＤＲ２および／または軽鎖ＣＤＲ３領域が相同性のヒトまたは非ヒト配列で置換されているキメラＦ（ａｂ’）２断片抗体；ＦＲおよび／またはＣＤＲ１および／またはＣＤＲ２および／または軽鎖ＣＤＲ３領域が相同性のヒトまたは非ヒト配列で置換されているキメラＦａｂ断片抗体;並びにＦＲおよび／またはＣＤＲ１および／またはＣＤＲ２領域が相同性のヒトまたは非ヒト配列で置換されているキメラＦｄ断片抗体を提供する。本発明はまた、いわゆる単鎖抗体も含む。
【００７６】
したがって、本発明は、特別に細胞接着分子に結合する多くのサイズと型のポリペプチドを含む。これらのポリペプチドは、抗体技術以外のソース由来でもよい。例えば、このようなポリペプチド結合剤は、固定された状態でまたはファージディスプレイライブラリとして、ペプチドライブラリを変質させることにより提供される。組み合わせのライブラリもまた１または２以上のアミノ酸を含むペプチドから合成できる。ライブラリはさらに、ペプトイドおよび非ペプチド合成部分から合成され得る。
【００７７】
ファージディスプレイは、本発明によると有用な結合ペプチドを同定するのに特に効果的である。簡単に述べると、従来の手法を使って４から約８０個のアミノ酸残基を挿入物を表示しながら、ファージライブラリ(例えば、ｍｌ３、ｆｄ、またはラムダファージ)を準備する。挿入物は、例えば、完全に変質したまたは偏ったアレイである。それから、細胞接着分子に結合するファージ運搬インサートを選ぶことができる。この過程は、細胞接着分子に結合するファージの再選択のいくつかのサイクルを通じて繰り返すことができる。反復ラウンドは、ファージ付特別配列の向上につながる。ＤＮＡ配列分析は、発現ポリペプチドの配列を同定するために行うことができる。細胞接着分子に結合する配列の最小直線部を決定することができる。最小直線部の全部分の一部とその上流または下流の１または２以上の追加変質残基を含む挿入物を含む偏向ライブラリを使った手法を繰り返すことができる。酵母二種混合スクリーニング方法もまた、細胞接着分子に結合するポリペプチドを同定するのに使われることもある。したがって、細胞接着分子、またはその断片は、細胞接着分子のペプチド結合相手を同定および選択するため、ファージディスプレイライブラリを含むペプチドライブラリをスクリーニングするのに使うことができる。
【００７８】
本発明の方法を実行するには、個人のｓＣＤ４０Ｌレベルを得ることが必要である。可溶性ＣＤ４０Ｌは、当事者にはよく知られている。個人のｓＣＤ４０Ｌレベルは、当該技術分野で認められているどの方法でも得ることができる。通常、レベルは、例えば、血液、リンパ液、唾液、尿および同類の体液のマーカーレベルを測って決定する。レベルは、ELISA、またはイムノアッセイあるいはマーカーの存在を決定する他の従来技術により決定することもできる。従来の方法とは、測定のために民間の研究期間に患者の体液サンプルを送ることも含む。
【００７９】
本発明はまた、規定値と個人のｓＣＤ４０Ｌレベルとの比較を含む。規定値は、様々な形に取り得る。規定値は、中央値または平均値などの単一のカットオフ値になり得る。規定値は、一つの同定群の危険は、別の同定群の危険の２倍であるなどの比較群をもとに、確立することができる。規定値は、例えば、テスト集団は、低危険度の群、中危険度の群および高危険度の群、または四分割して、最低部は最も低い危険度の個人および最高部は最も高い危険度の個人など、平等に(または不平等に)群に分割されたような範囲にもできる。
【００８０】
規定値は、選ばれた特定の集団による。例えば、検出可能な疾患および過去に心血管障害の病歴がない、見かけ上健康な、非喫煙者の集団は、喫煙集団または過去に心血管障害のあるメンバーの集団とは異なる「通常の」範囲のｓＣＤ４０Ｌを有するだろう。その結果、選ばれた規定値は、個人が当てはまる分類を考慮に入れることもある。適切な範囲および部類は、当業者による定期検査程度から選ぶことができる。
【００８１】
好ましい体液は、血液である。ｓＣＤ４０Ｌについては、見かけ上健康な、非喫煙者集団の一つの重要なカットオフは、２．９ｎｇ／ｍＬ以下である。ｓＣＤ４０Ｌの他の重要なカットオフは、３．０，３．１，３．２，３．３，３．４，３．５，３．６，３．７，３．８，３．９，４．０，４．１，４．２，４．３，４．４，４．５，４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５，５．６，５．７，５．８，５．９，６．０，６．５，７．０，７．５，８．０，８．５，９．０，９．５，１０．０，１０．５または１１．０ｎｇ／ｍＬである。危険を特徴付けるために、多くの規定値を確立できる。
【００８２】
現在、ｓＣＤ４０Ｌのアッセイ用試薬を生産する商業的供給源がある。これらは、BenderMedSystems (Vienna、Austria)、およびAbbott Pharmaceuticals (Abbott Park、Illinois)を含むが、それらに限定されない。
【００８３】
好ましい態様では、本発明は、本発明を理由に選ばれた規定値に特異的な、およびその規定値に関して適切な感度を有する新しいキットまたはアッセイを提供する。好ましいキットは、よって、アッセイの結果をもとに危険を特徴付けている説明書または他の印刷物のみならず、異なるカットオフ、特定のカットオフでの異なる感度を含み、現在市販されているものとは異なるだろう。
【００８４】
上に述べたように、本発明は、個人が将来の心血管障害の危険を減らすための剤による処置から利益を受ける可能性を評価するための方法を準備している。この方法は、患者の処置および新しい治療の臨床開発にもまた、重要な関係がある。医師は患者への予想純利益をもとに、患者の処置について治療計画を選ぶ。純利益は、危険と利益を受ける比率から来ている。本発明では、発明によって恩恵をより受けやすい個人の選択を許可しており、それにより、治療計画の選択の際に医師を助けている。これは、予想純利益の可能性が高くなったより高いリスクプロファイルの薬の使用を含むかもしれない。同様に、臨床研究者は、臨床試験のために、純利益を受ける高い可能性のある集団を選びたいと望んでいる。本発明は、臨床研究者が、このような個人を選ぶのを助けることができる。臨床研究者は今後、エントリー規準を決めるために本発明を使用することが予想される。
【００８５】
本発明の別の驚くべき面では、ｓＣＤ４０Ｌは、将来の有害な心血管障害の他の周知の予測因子から独立した予測値を有することが発見されている。したがって、本発明は、以前他の予測因子を使って作られた測定方法をただ単に繰り返すことは含まない。代わりに、ｓＣＤ４０Ｌレベルは、先行技術の予測因子に付加される。先行技術予測因子は、Ｃ−反応性タンパク質、サイトカイン、および細胞接着分子などの全身性炎症マーカーを含む。サイトカイニンは、当業者に周知で、ヒトインターロイキン１〜１７を含む。細胞接着分子は、当業者に周知で、インターグリン、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−３、ＢＬ−ＣＡＭ、ＬＦＡ−２、ＶＣＡＭ−１、ＮＣＡＭおよびＰＥＣＡＭを含む。先行技術の予測因子はまた、コレステロールも含む。
【００８６】
本発明のさらなる驚くべき面では、ｓＣＤ４０Ｌは、心血管障害を発病するより高い危険にある個人中血管プラーク内脂質蓄積の存在の予測値を有することが発見されている。ここで使われているように、「心血管障害を発病する危険のある」個人とは、従来の医療行為により決定した対象の分類である（例えば、Harrison's Principles of Experimental Medicine, 15th Edition, McGraw-Hill, Inc., NewYork参照）。通常、心血管障害を発病する危険のある個人は、心血管障害と関連する１または２以上の危険因子を有する。このような危険因子は、心血管障害、高血圧症、高コレステロール症、糖尿病、喫煙、アテローム性動脈硬化症などの家族歴を含む。加えて、心房細動または最近の卒中および／または心筋梗塞は、重要な危険因子である。以前、心血管障害を発病するより高い危険のある個人中血管プラーク内脂質蓄積の決定は、高価で、ある場合では限界のある技術(例えば、ＭＲＩ)を使って達成されていた。
【００８７】
冠状動脈血栓症を発症させる主な因子は、アテローム硬化性プラークの崩壊であることは、当該技術分野では周知である。本明細書の他所で説明しているように、心血管障害を発病するより高い危険のある個人の血管プラーク内脂質蓄積の決定は、プラークの脆弱性を決定する(すなわち、崩壊の危険性のあるプラーク)、したがって血栓事象の将来の発生の危険性を評価する重要な段階である。完全な崩壊プラークを比較する研究は、脆弱なプラークの特徴を同定するために使われてきた。特徴は、全プラーク量の５０％以上を占めている脂質コア、薄いプラークキャップ、大きな絶対値およびマクロファージ密度、ならびにプラークの平滑筋含有量の減少である。したがって、本発明方法により、心血管障害を発病するより高い危険のある個人の血管プラーク内脂質蓄積の決定後、当業者は、プラークが脆弱なのか、そして個人の続いて起こる血栓事象の発生を防ぐための治療／診療計画に適切な装置を評価することができる。
【００８８】
本発明はまた、心血管障害を防ぐための処置対象を治療する方法を含む。抗炎症剤、抗血栓剤、抗血小板剤、繊維素溶解剤、脂質減少剤、直接トロンビン阻害剤、糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体阻害剤、または細胞接着分子に結合し、このような分子に白血球が付着する能力を阻害する剤および／またはその組み合わせからなる群から選ばれた剤は、通常レベル以上の全身性炎症マーカーを有する対象に投与される。剤は、対象が将来の心血管障害を発病する危険を下げるのに有効な量が投与される。いくつかの態様では、剤は、非アスピリン抗炎症剤である。剤は、本明細書の他所に記述される。
【００８９】
有効な量とは、例えば、危険を減らすなどの医療的に望ましい結果を提供するのに十分な剤の用量のことである。有効な量は、処置している特定の状態、処置している対象の年齢および体調、状態の重症度、処置期間、併用治療の性質（もしあれば）、医療関係者の知識と専門範囲内の投与の特別な経路および同類因子により様々である。例えば、有効量は、異常に高いレベルのｓＣＤ４０Ｌを有する個人の程度にもよる。本発明によると、使用剤は、心血管障害の危険を下げる目的のもので、すなわち、予防的であることを理解すべきである。したがって、有効量とは、心血管障害の発病の危険を下げ、遅らせ、あるいはすべてまとめて防ぐことができる量である。
【００９０】
一般的に、活性化合物の投与量は、１日あたり約０．０１ｍｇ／ｋｇから１０００ｍｇ／ｋｇである。５０〜５００ｍｇ／ｋｇの範囲の量で、できれば経口、および１日１〜数回の投与が、適していると予想される。静脈内投与などの他の形の投与によって、投与量が下がる。最初の使用投与量では対象の反応が不十分である事象では、より多い投与量(異なった、より局地的な輸送経路による、効果的なより多い投与量)が、患者の耐性が許す範囲で使われることもある。１日あたりの複数回投与は、化合物の適切な全身性レベルを達成するために検討される。
【００９１】
投与時、本発明の医薬製剤は、薬学的に許容しうる量および薬学的に許容しうる組成で使用する。このような製剤は、通常、塩、緩衝剤、保存料、適合キャリア、および任意で他の治療剤を含むことがある。医療で使われる場合、塩は、薬学的に許容しうるべきでえあるが、薬学的に許容し得ない塩は、その薬学的に許容し得る塩を準備するのに適宜使われることもあり、本発明の範囲から除外されない。このような薬理学的におよび薬学的に許容し得る塩は、以下の酸から処理されたものも含むが、それらに限定されない：塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、クエン酸、ギ酸、マロン酸、コハク酸等。また、薬学的に許容しうる塩は、ナトリウム、カリウムまたはカルシウム塩などのアルカリ金属またはアルカリ土類塩として調整することもできる。
【００９２】
抗炎症剤は、任意で薬学的に許容し得るキャリアと組み合わせることがある。ここで使われる用語「薬学的に許容し得るキャリア」とは、ヒトに投与するのに適した、１または２以上の適合固体または液体充填剤、希釈剤あるいはカプセル物質の意味である。用語「キャリア」は、有機または無機原料、活性成分が使用を簡単にするために組み合わせられる自然または合成原料を意味する。製剤組成の成分もまた、望ましい製剤の有効性を大幅に低下させる相互作用なく、本発明の分子およびお互いと混ざり合う能力がある。
【００９３】
医薬組成物は、塩としての酢酸、塩としてのクエン酸、塩としてのホウ酸および塩としてのリン酸を含む、適した緩衝剤を含むことがある。
【００９４】
組成物はまた、任意で、塩化ベンザルコニウム(benzalkonium chloride)、クロロブタノール、パラベンおよびチメロサールなどの適した保存料を含むこともある。
【００９５】
非経口投与に適した組成物は、適宜、服用者の血液と等浸透圧なのが好ましい抗炎症剤の無菌水性製剤を含む。この水性製剤は、適切な分散剤または加湿剤および懸濁剤を使った周知の方法により製剤化されてよい。無菌注射製剤もまた、例えば、1,3-ブタンジオール溶液のように、無毒で非経口的に許容できる希釈剤または溶剤の無菌注射剤あるいは懸濁液である。許容できる賦形剤および溶液の中で、使用できるのは、水、リンガー液、および等浸透圧の塩化ナトリウム液である。加えて、無菌不揮発性油が、溶液または懸濁媒質として従来通り使用できる。この目的のために、どのブランドの不揮発性油でも、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含め、使用できる。加えて、オレイン酸などの脂肪酸も注射液を準備するのに使える。経口、皮下、静脈内、筋肉内などの投与に適したキャリアの製剤は、Remington's Pharmaceutical Sciences、Mack Publishing Co. 、Easton、PAで見つけることができる。
【００９６】
様々な投与経路がある。特定の選択方式は、もちろん特定の選択薬、処置している状態の重症度および治療の有効性に必要な投与量による。本発明の方法は、一般的に言えば、医療的に許容できるいかなる投与方式、つまり、臨床的に許容し得ない有害な効果をもたらすことなく活性化合物の効果的なレベルを生み出すどの方式を使っても実施できる。用語「非経口」とは、皮下、静脈内、筋肉内、または輸液を含む。静脈内または筋肉内経路は、特に長期治療および予防には適しているものではない。これらは、しかしながら、緊急の場合に好ましい。経口投与が、投与計画のみならず、患者にとっても都合が良いため、予防処置に好ましい。
【００９７】
医薬組成物は、投与単位で適宜発現し、薬学技術分野で周知のどの方法により準備される。全方法は、抗炎症剤を１または２以上の補助原料を構成するキャリアと関連するに至らせる段階を含む。一般的に、組成は、抗炎症剤が液体キャリア、細かく分割された固体キャリア、または両方と均一におよび密接に関連するように至らせ、そして必要であれば、製品を形成して準備する。
【００９８】
経口投与に適している組成物は、カプセル、タブレット、トローチなど、それぞれ規定量の抗炎症剤が含まれている不連続単位である。他の組成は、水溶液またはシロップ、エリキシル、乳液などの非水溶液の懸濁液を含む。
【００９９】
他の輸送系統は、持続放出(time-release)、遅延放出、または持続放出輸送系統を含み得るこのような系統は、本発明の剤の反復投与を避けることができ、対象および医師の都合を良くする。たくさんの種類の放出輸送系統があり、当業者に周知である。これらは、ポリ(ラクチドグリコリド)、コポリオキサレート(copolyoxalates)、ポリカプロラクトン、ポリエステルアミド、ポリオルソエステル、ポリヒドロキシブチル酸および多無水物(polyanhydrides)などのポリマー主成分系統を含む。前記のポリマー含有薬のマイクロカプセルは、例えば、米国特許第5,075,109号に記載されている。輸送系統はまた、コレステロール、コレステロールエステルなどの脂肪含有ステロールおよびモノグリセリド、ジグリセリドおよびトリグリセリドなどの脂肪酸または中性脂肪、ヒドロゲル放出系統、シラスチック(sylastic)系統、ペプチド主成分系統、ワックス被覆、従来の結合剤および賦形剤を使った圧縮タブレット、部分融合移植、および同類の非ポリマー系統を含む。具体例は、（a）本発明の剤が米国特許第4,452,775号、4,675,189号および5,736,152号などに述べられているマトリックス内の形で含まれている浸食系統、および（b）活性成分が米国特許第3,854,480号、5,133,974号および5,407,686号などに述べられているポリマーから制御された割合で浸透する拡散系統を含むが、それらに限定されない。加えて、ポンプベースのハードウェア輸送系統が使え、そのうちいくつかは、移植に適している。
【０１００】
長期持続放出移植の使用は、特に慢性症状の処置に適しているかもしれない。ここで長期放出とは、移植が、最低30日間、できれば60日間、活性成分が送達治療レベルに構築されおよび調整されることを意味する。長期持続放出移植は、当業者には周知であり、上記に述べた放出系統のいくつかを含む。
【０１０１】
本発明は、以下の例を参考にするとより完全に理解できるだろう。この例は、しかしながら、本発明の態様をただ単に説明するためのものであって、本発明の範囲を限定するものであるとは解釈されない。
例１
【０１０２】
ｓＣＤ４０Ｌの高血漿濃度は、見かけ上健康な女性の血管における危険の増加と関係がある。
【０１０３】
心血管障害またはガンの病歴がない28,263人の中年アメリカ人女性へのビタミンEおよび低用量アスピリンの効果を評価する現在進行中の一次予防試験Women's Health Study (WHS)にて、参加者間の予想ネスティドケースコントロール分析が行われた。11 血液サンプルはＥＤＴＡに集められ、分析まで液体窒素中で保管された。この研究のために、最初の４年のフォローアップ期間中に、後で致命的でない心筋梗塞または卒中のいずれか、あるいは急性心血管事象を発病した130人の女性が、「症例」対象として選ばれた。医師委員会が、標準手法を使って評価項目を分類した。各確認症例、同じ年齢（±２歳）で、似たような喫煙状態（過去、現在、一度もない）、そして心血管障害の報告がない「対照」参加者が選ばれた。
【０１０４】
ベースライン血漿ｓＣＤ４０Ｌ濃度の測定には、ELISA (BenderMedSystems 、Vienna、Austria)を使った。簡単に述べると、希釈（１：５）血漿サンプルは、ホースラディシュペルオキシダーゼ標識二次マウス抗ヒトＣＤ４０Ｌ抗体（２時間）と混合した（１：２）マウス抗ヒトＣＤ４０Ｌ抗体コーティング96穴プレートに３連にて適用された。その後、プレートを洗浄し、抗体結合を、ＴＭＢ基質を使った比色分析により決定した。吸光度を、６５０ｎｍで読み、ｓＣＤ４０Ｌの血漿濃度を、組み替えヒトＣＤ４０Ｌの連続希釈との比較により決定した。分析は、盲検法により行われた。全サンプルの３連間のアッセイ内変動は、１５％より低かった。脂肪レベルは、Centers for Disease Control Standardizationに参加している研究所で測定した。
【０１０５】
本研究参加者のベースラインの臨床的特徴の平均と比率は、スチューデントの T-検定またはカイ２乗検査のどちらかを使って計算および比較した。ベースラインでのｓＣＤ４０Ｌレベル増加と関連する将来の心血管事象を発病する相対的危険性は、それから、ｓＣＤ４０Ｌの対照分布の５０、７５、９０、９５および９９パーセンタイル値カットポイントにより本研究を分けた一連のロジスティック回帰分析にて計算した。全ｐ値は、両側(two-tailed)で、全信頼区間は９５％レベルで計算されている。
【０１０６】
結果
表１は、本研究参加者のベースライン臨床特徴を示す。予想したとおり、フォローアップ中に心血管障害を発病した女性は、疾患のないままの女性と比べて、研究開始時に、肥満、高血圧、糖尿である傾向があり、または早期アテローム性動脈硬化症の家族歴を有していた。ＬＤＬコレステロールおよび中性脂肪レベルは、発症群においてベースラインにてより高かったのに比べて、ＨＤＬコレステロールレベルはより低かった（全てｐ≦０．０１）。ホルモン補充療法使用は、２群間で有意な差はなかった。
【０１０７】
全体としては、発症群のベースラインでのｓＣＤ４０Ｌの血漿レベルは、対照のそれを上回った（２．８６±０．３５対２．０９±０．１９ｎｇ／ｍＬ、ｐ≦０．０２）。この違いは、ほぼ完全に、発症した対象における極めて高い値の過剰分が原因である。発症および対照対象の大部分は、研究開始時に、似たレベルのｓＣＤ４０Ｌを有した（図1）。しかしながら、１１発症例は、対照群においてはたった１つの研究対象であったのとは対照的に、対照分布の９９パーセンタイル値カットポイントを越えたｓＣＤ４０Ｌベースラインレベルを有していた（ｐ≦０．０１）。
【０１０８】
将来の心血管事象を発病する相対的危険性は、本研究対照の分布により定義された前もって特定されたカットポイントによると、ｓＣＤ４０Ｌ濃度の増加と共に上がり、９５および９９パーセンタイル値カットポイントを越えたｓＣＤ４０Ｌレベルで統計的に有意であった(ＲＲ：それぞれ３．２９（ｐ≦０．０２）および１１．８３（ｐ≦０．０１））（表ＩＩ）。
【０１０９】
追加ポストホック分析として、９９パーセンタイル値カットポイントを越えたｓＣＤ４０Ｌレベルの１２人の参加者とより低いレベルの２４８人の参加者との間の臨床特徴比較が行われた。年齢、喫煙、体格指数、ＬＤＬおよびＨＤＬコレステロールレベルおよびホルモン補充療法は、これら２つの研究群間で似ていた(表ＩＩＩ)。特により高いレベルのｓＣＤ４０Ｌの研究参加者は、高血圧症および早期冠状動脈疾患の家族歴の割合がやや高めだったが、これらのどの違いも、統計的有意性に達していなかった。目立ってより高いｓＣＤ４０Ｌベースラインレベルの１２人の女性のいずれも糖尿病ではなかった。さらに、極端なｓＣＤ４０Ｌレベルの１１症例および残りのより低いｓＣＤ４０Ｌの症例間で、ランダム化の時間から心血管事象の時間までには有意な差がなかった（１５．９ヶ月対１９．５ヶ月、ｐ＝０．３）。１２人の対象が最高ｓＣＤ４０Ｌ濃度を示した群内で、６人にはランダムにアスピリンを、６人は偽薬を割り当てられていたことから、アスピリン対偽薬の割り当てもおそらく我々の見解に影響を与えなかった。加えて、ｓＣＤ４０Ｌアッセイ用血液は、ランダム化前に採取されたものであった。
【０１１０】
このコホートについての以前のレポートは、Ｃ−反応性タンパク質の血漿レベル、ＩＬ−６、血清アミロイドＡおよびＩＣＡＭ−１間と心血管の危険の増加との間の関連性を指摘している。12 しかしながら、これらパラメータおよびｓＣＤ４０Ｌの間に、有意な相関関係は見られなかった。
【０１１１】
考察
見かけ上健康な中年女性のこの予想的ネスティドケースコントロール研究では、ベースライン(≧５．５ｎｇ／ｍＬ)でのｓＣＤ４０Ｌの明らかにより高い血漿濃度が、将来の心血管事象が著しく増加する危険を予告した。以前の研究は、不安定な狭心症の患者は、安定した狭心症の患者および対照と比較して、ｓＣＤ４０Ｌの血清レベルを著しく上げたことを実証した。この状況で、活性化された血小板および／またはＴリンパ球は、二次的にｓＣＤ４０Ｌを放出するかもしれない。本研究は、しかしながら、急性血栓症の結果生じるかもしれない事象前に、ｓＣＤ４０Ｌ濃度が上昇する女性がいることを実証している。
【０１１２】
ＣＤ４０Ｌの可溶性の形の放出をもたらす仕組みについてほとんど分かっていない。血漿内中のｓＣＤ４０Ｌの潜在的な源は、単核食細胞および内皮細胞のみならず、血小板およびＴリンパ球含む。１〜５ 心血管障害の家族歴と増加ｓＣＤ４０Ｌ血漿レベルとが相関性を有する傾向にあることは、遺伝因子が我々の見解に寄与し得ることを示唆している。ｓＣＤ４０ＬおよびＣ−反応性タンパク質、ＩＬ−６ならびにＩＣＡＭ−１レベルの関連性は分かっていない。よって、このことは、ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌとは独立したメカニズムが、低ｓＣＤ４０Ｌレベルにもかかわらず、血管合併症を発病する女性に関与している可能性があることを意味している。我々の発見は、ｓＣＤ４０Ｌの高血漿濃度が他の炎症マーカーで評価したものと明確に異なる危険性の側面を反映するものであることを示唆する。
【０１１３】
例１で引用された参考文献
【表１】
2005515407.tif 000002
【０１１４】
図面の詳細な説明
図１．心血管事象のない（対照、ｎ＝１３０）または発病した（症例、ｎ＝１３０）中年の健康な女性間のｓＣＤ４０Ｌのベースライン血清濃度。サンプルは、３連にて分析し、平均値を示した。点線は、対照分布の９９パーセンタイル値カットポイントを描いている。
【０１１５】
表Ｉ  研究参加者のベースラインの特徴。
【表２】
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【０１１６】
表ＩＩ  研究参加者のベースライン特徴。
【表３】
2005515407.tif 000004
【０１１７】
表ＩＩＩ  対照分布の９９パーセンタイル値カットポイントを越えたｓＣＤ４０Ｌ濃度の参加者の臨床上の特徴（ｓＣＤ４０Ｌ≧５．５４ｍｇ／ｍＬ）
【表４】
2005515407.tif 000005
例２
【０１１８】
ＨＭＧ−ＣｏＡリダクターゼ阻害剤が、ヒト血管細胞内でのＣＤ４０およびＣＤ４０Ｌの発現を阻害する。
【０１１９】
本研究は、ＨＭＧ−ＣｏＡリダクターゼ阻害剤(スタチン類)は、in vivoでのｓＣＤ４０Ｌ血漿レベルのみならず、in vitroでのこれらの細胞の受容体／リガンドダイアドの発現を軽減することができ、酸化変性ＬＤＬは、アテローム性動脈硬化症、すなわちＭＯのみならずヒト血管ＥＣおよびＳＭＣに関係する細胞上のＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌの発現を誘導する、という仮説を検証した。
【０１２０】
材料と方法
材料
天然および酸化（５μＭ ＣｕＳＯ４、３７℃、２４時間）ＬＤＬ（ＴＢＡＲＳ：それぞれ０．４および８．３ｎＭ ＭＤＡ／ｍｇタンパク質)をBiomedical Technologies、Inc (Stoughton、MA)より得た。ヒト組み替え型ＩＬ−ｌβ、ＴＮＦαおよびＩＦＮγは、Endogen (Woburn、MA)より得た。
【０１２１】
細胞の崩壊と培養
前述のように、ヒト血管ＥＣおよびＳＭＣを、伏在静脈から単離し、培養した。４、２６ 単核食細胞（ＭＯ）は、白血球濃縮からリンパ球崩壊媒体(Organon-Teknika、Durham、NC)を使って密度勾配遠心崩壊法により単離し、２％ヒト血清(Sigma、St. Louis、MO)を含むRPMI 1640 (BioWhittaker、Walkersville、MD)内で（１０日間）培養した。26 全細胞型は、血清が欠乏している培地で実験前および実験中２４時間培養した。培地の生存は、オリゴヌクレオソーム形成アッセイ (Cell Death Detection ELISA、Boehringer Mannheim、Germany)のみならず、トリパンブルー(Sigma、St. Louis、MO)生細胞計測(exclusion count)により決定された除去計算により決定した。
【０１２２】
逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）
ＲＮＡｚｏｌ(Tel-Test、Friendswood、TX)を使った培養ＥＣ、ＳＭＣまたはＭＯから単離した総ＲＮＡの、分光光度法(2100 Bioanalyzer, Agilent Technologies、Wilmington、DE)により純度性と収出量を調査し、Superscript II逆転写酵素 (LifeTechnologies、Carlsbad、CA)を使って逆転写した(総ＲＮＡ量２μｇ、５０分、４２℃)。ＰＣＲは、前述のＣＤ４０またはＣＤ４０Ｌ用プライマーを使って、ホットスタート後、９５℃(１２０秒)、６２℃(１２０秒)、７２℃（１８０秒、サイクル毎に２秒延長）で３５サイクル行った。4 ２０、２５、３０、３５および４０サイクル使った半定量ＰＣＲ研究により、使用条件が、増幅指数範囲内でＰＣＲ生成物を産出し、信号対バックグラウンド比のため最適化されたことを確認した。ＰＣＲ生成物は、臭化エチジウム含有１．３％アガロースゲルにて分析され、ＵＶ透光により目に見えるようにした。等しいテンプレート量が担持されたことは、ＧＡＰＤＨ用ＲＴ−ＰＣＲにより確認した。逆転写酵素が欠乏しているかまたはテンプレートとしてＨ２Ｏを使った模擬ＲＴ反応により、シグナルの特異性を実証した。
【０１２３】
ウェスタンブロット
培養溶解物（５０μｇ総タンパク質／レーン)および上清をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより崩壊し、半乾性転写装置（３ｍＡ／ｃｍ２、３０分、Bio-Rad、Hercules、CA)を使ってポリフッ化ビニリデン膜(Bio-Rad、Hercules、CA)に転写した。転写物をブロックし、一次の（マウス抗ヒトＣＤ４０またはＣＤ４０Ｌ、共に１：１，０００、PharMingen、San Diego、CA）抗体を、５％脱脂乾燥乳／ＰＢＳ／０．１％Ｔｗｅｅｎ２０中にて添加した。１時間後、転写物を回洗浄し(ＰＢＳ／０．１％Ｔｗｅｅｎ２０)、ペルオキシダーゼ共役抗マウス（ヤギ）二次抗体(Jackson Immunoresearch、West Grove、PA)を添加した（１時間）。最後に、転写物を洗い、免疫反応タンパク質を、ウェスタンブロット化学蛍光システム(NENTM、Boston、MA)を使って目に見えるようにした。データは、Santa Cruz (Santa Cruz、CA)からの抗ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ抗体を使って確認した。
【０１２４】
フローサイトメトリー
ヒト血液ＥＣ、ＳＭＣ、またはＭＯを、氷冷ＰＢＳで洗い、トリプシン処理によって集め、固定した（ＰＢＳ／４％パラホルムアルデヒド、１５分）。その後、バッファーのみまたはＦＩＴＣ共役対照ＩｇＧ、マウス抗ヒトＣＤ４０、あるいはマウス抗ヒトＣＤ４０Ｌ抗体（マウス）（１μｇ／ｍｌ、PharMingen、San Diego、CA）により培養（１時間、４℃）する前に、細胞を一度ＰＢＳ／２％ＢＳＡで洗った。最後に、細胞はＰＢＳ／２％ＢＳＡで洗い、CELLQUEST(R)ソフトウェア(Becton Dickinson、San Jose、CA)を使ったBecton Dickinson FACSCAN(R)フローサイトメーターにて分析した。温度条件に対して少なくとも20,000の生存細胞を分析された。
【０１２５】
患者の研究
冠動脈造影を示す一つの冠状動脈に少なくとも３０％狭窄を有する２７人の患者から、全血液（１０ｍｌ）をＥＤＴＡに集めた。コホートは、カテーテル検査時にいかなるスタチンで処置を受けたまたは受けなかった患者に分類した。血液はベースライン時（０月）および最終フォローアップ訪問時（６月）に採取し、血漿は、−７０℃で保管した。全対象は、絶食状態で研究された。書面でのインフォームド・コンセントが全対象から得られ、本研究は、Human Research Committee of BrighamおよびWomen's Hospitalにより承認された。ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＴＮＦα、ＩＦＮYγ、ｓＶＣＡＭ、Ｃ−反応性タンパク質（ＣＲＰ）、およびｓＣＤ４０Ｌのみならず血漿中脂質を、ELISA (Sigma、St. Louis、MO；Endogen、Woburn、MA；BenderMedSystems、Vienna、Austria)により測定した。２つの群は、年齢、性別、糖尿病、禁煙、トリグリセリド、またはＨＬＤに著しい差はなかった（表I）。スタチン処置群は、予想通り、著しく低い総コレステロールおよびＬＤＬを有した。
【０１２６】
Ex vivoフィブリン塊形成
血液を、非コートキャピラリーチューブを使って、０．１３Ｍクエン酸三ナトリウムの０．１容積への眼窩後出血により、マウスから集められた。多血小板血漿（ＰＲＰ）を、遠心崩壊法（５００ｘｇ、５分、２０℃)で調整し、前述のように、フィブリン塊形成を、マイクロタイタープレート塊溶解アッセイの改良版を使って試験した。27 塊は２．９４μＭフィブリノゲン、０．２４μＭプラスミノゲン、３６ｐＭ ｔ−ＰＡ、３．８ｎＭトロンビン、および５．３ｍＭ ＣａＣｌ２（全て最終濃度）で準備した。ＰＲＰ（１０％（ｖ／ｖ）最終濃度）は、塊に組み込んだ。塊形成は、４０５ｎｍで最大１５分監視した。
【０１２７】
統計分析
データは、平均±ＳＤで示し、群は、スチューデントの T-検査を使って比較した。ｐ≦０．０５の値を、有意差ありとみなした。
【０１２８】
結果
ＨＭＧ−ＣｏＡリダクターゼ阻害剤は、in vitroのマクロファージのみならず、ヒトの血管内皮および平滑筋細胞のＣＤ４０およびＣＤ４０Ｌの発現を軽減する。
ＨＭＧ−ＣｏＡリダクターゼ阻害剤への露出は、ヒト血管ＥＣ、ＳＭＣ、およびＭＯのＣＤ４０およびＣＤ４０Ｌ両方の発現を濃度に依存して軽減した。≧２ｎＭ濃度で、セリバスタチンは、ＥＣ内の受容体のＩＬ−１β／ＴＮＦα／ＩＦＮγ誘導発現のみならず、構造発現も軽減した。最大の阻害は、１０〜５０ｎＭセリバスタチンで達成された。メバロン酸は、スタチンによる、ＣＤ４０およびＣＤ４０Ｌの発現の軽減を逆にした。ｏｘＬＤＬを刺激剤として、あるいはＳＭＣまたはＭＯを細胞型として使った平行して行われた研究は、似たような結果を生みだした。ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ発現の変調は、他のスタチンまで拡大されるか否かを決めるため、平行して行われた実験でアトルバスタチンまたはシムバスタチンを使用した。これらのＨＭＧ−ＣｏＡリダクターゼ阻害剤は、同様にＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ発現を縮小したが、より高い濃度（１００ｎＭ）を必要とした。転写物間において、近似のバンド強度が提示され抗ヒトＧＡＰＤＨ抗体（マウス）によるウェスタンブロットの再展開により、レーン間の等しい担持が保証され、また、スタチン処置自体はウェスタンブロット分析に影響を及ぼさないことが示唆された。注目すべきは、どのスタチンも、分析濃度(２５０ｎＭまで)にて、モノ／オリゴヌクレオソーム形成のみならず、トリパンブルー生細胞計測により決定されたように、細胞の数または生死に影響を及ぼさなかった。
【０１２９】
ＨＭＧ−ＣｏＡリダクターゼ阻害剤はさらに、前炎症サイトカイン（ＩＬ−１β／ＴＮＦα／ＩＦＮγ）またはｏｘＬＤＬにて刺激されたヒト血管ＥＣおよびＭＯのＣＤ４０およびＣＤ４０Ｌ ｍＲＮＡの発現を軽減した。アトルバスタチンまたはシムバスタチンは、似たような結果を生みだした。メバロン酸は、ＣＤ４０およびＣＤ４０Ｌ転写物の発現の軽減を逆にした。ＧＡＰＤＨ転写の発現を分析する平行研究は、各反応への等量の逆転写ｍＲＮＡの応用を実証し、なおその上、スタチンとの処置は、本質的にＲＴ−ＰＣＲに影響を及ぼさなかったことを示唆した。
【０１３０】
全細胞溶解物に対する発見と符合し、セリバスタチンは、ＭＯのみならず、ヒト血管ＥＣのＣＤ４０およびＣＤ４０Ｌ両方の細胞表面の発現を濃度に依存して軽減した。とりわけ、ＣＤ４０およびＣＤ４０Ｌ表面発現の最小および最大減少に必要なセリバスタチン濃度は、ＲＴ−ＰＣＲ研究のみならずウェスタンブロットでの全細胞溶解物にみられるものと近似していた。３種のスタチンは、全て似たように作用したが、ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ発現の等しい減少を達成するのに異なる濃度を必要とした（セリバスタチン＞シムバスタチン＝アトルバスタチン）。
【０１３１】
ＣＤ４０Ｌは、生物学的に活性な可溶形、ｓＣＤ４０Ｌ、に縮小する（shed）ことができるので、ＨＭＧ−ＣｏＡリダクターゼ阻害剤とのＥＣ、ＳＭＣおよびＭＯの処置は、ｓＣＤ４０Ｌの分泌に影響を及ぼすかをテストした。確かに、培養では、セリバスタチン処置はｓＣＤ４０Ｌ濃度を顕著に下げた。
【０１３２】
まとめて言えば、ＲＴ−ＰＣＲ、ウェスタンブロットおよびＦＡＣＳ研究は、細胞内転位ではなく遺伝子活性を制御することにより、ＣＤ４０またはＣＤ４０Ｌの細胞表面発現および／または放出を、ｏｘＬＤＬ は誘導し、スタチンは軽減することを示唆している。
【０１３３】
ＨＭＧ−ＣｏＡリダクターゼ阻害剤はヒトのｓＣＤ４０Ｌ血漿レベルを軽減する
これらのin vitroでの発見の潜在的臨床関連性を調査するため、ＨＭＧ−ＣｏＡリダクターゼ阻害剤での患者の処置がｓＣＤ４０Ｌ血漿レベルを軽減するかどうか決めるためのパイロット研究を行った。スタチン処置アテローム硬化症対象の血漿は、無処置患者と比べ、著しく低いｓＣＤ４０Ｌレベルを有していた（８．３±３．１ｎｇ／ｍｌ（ｎ＝１１）対１３．１±２．５ｎｇ／ｍｌ（ｎ＝１６）；ｐ＜０．０５）。個人ｓＣＤ４０Ｌレベルは、ベースラインおよび６月フォローアップ時の患者の処置状態が変わらなかった場合は、著しく異ならなかった。しかしながら、６月フォローアップ時のｓＣＤ４０Ｌ血漿レベルは、スタチン処置に変更した患者内では、目立って減少した（１３．１±５．７４ｎｇ／ｍＬ対５．２１±２．３６ｎｇ／ｍＬ（ｎ＝４）；ｐ＜０．０５）。ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＴＮＦα、ＩＦＮγおよびｓＶＣＡＭ−１の血漿レベルは、スタチン処置で変わらなかった。統計的な有意性は達成しなかったが、Ｃ−反応性タンパク質(ＣＲＰ)の血漿濃度は、スタチン処置群でより低かった。
【０１３４】
酸化ＬＤＬは、ヒト血管細胞のＣＤ４０およびＣＤ４０Ｌ発現を誘発する
酸化変性ＬＤＬ(ｏｘＬＤＬ)は、ヒト血管ＥＣおよびＭＯのＣＤ４０およびＣＤ４０Ｌタンパク質の微細な構成発現を濃度に依存して増した。いずれの細胞型のベースＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ発現の増大にも、１〜３μｇ ｏｘＬＤＬ／ｍｌを必要とした。ＣＤ４０(無刺激対照の５．１±１．１倍以上、ｎ＝４）およびＣＤ４０Ｌ（４．２±２．２倍、ｎ＝３）免疫反応タンパク質の最大発現は、１０〜３０μｇ ｏｘＬＤＬ／ｍｌで達成された。天然型ＬＤＬも、より少ない程度ではあったが、受容体（２．８±１．１倍、ｎ＝２）およびリガンド（２．２±０．８倍、ｎ＝２）の発現を誘導した。なおその上、ｏｘＬＤＬは、ヒト血管ＥＣまたはＭＯのＣＤ４０およびＣＤ４０ＬｍＲＮＡの発現を濃度に依存して増大させた。ＧＡＰＤＨ転写の発現を分析する平行研究は、各反応への等量の逆転写ｍＲＮＡの適用は各反応を生ぜしめ、なおその上、ｏｘＬＤＬによる刺激自体はＲＴ−ＰＣＲに影響を及ぼさないことを示唆した。
【０１３５】
ＣＤ４０Ｌの欠乏は、ex vivoでのマウス血液の凝固時間を延長する
血栓症のＣＤ４０Ｌおよび血漿ｓＣＤ４０Ｌレベルのスタチン媒介による低下に関係する最近のデータを踏まえ、さらに、ＣＤ４０Ｌの軽減発現は、血液凝固に影響を及ぼすという仮説をテストした。確かに、野生のマウス製剤と比べたとき、ＣＤ４０Ｌ欠乏マウスからの多血小板血漿は、フィブリン塊形成アッセイ凝固の遅れを示し、血液凝固においてのＣＤ４０Ｌの役割を支持している。血液凝固性におけるＣＤ４０Ｌの役割についてのこれらの知見は、アテローム性動脈硬化症の血栓合併症を減らす可能性がある、ＨＭＧ−ＣｏＡリダクターゼ阻害剤を用いたＣＤ４０信号の減少による、経路（pathway）を提供する。
【０１３６】
考察
一貫した一連の以前の臨床試験において、ＬＤＬ低下度から独立した、平均のまたは平均以下のＬＤＬレベルおよび縮小心血管危険の患者の臨床における利益は、スタチンの推定「多面的」効果の、潜在的な臨床関連性を明らかにした。21〜24、28 スタチンの脂質低下効果に加えて、多くの臨床および実験研究が、一酸化窒素の発現の増大のみならず、ケモカイン、主要組織適合性複合体ＩＩ分子、マトリックス分解酵素、および凝血原組織因子発現の軽減などのスタチンの抗炎症経路を示唆してきた。２２，２３，２５，２８ さらに、渡辺の遺伝性高脂血症ウサギのＨＭＧ−ＣｏＡリダクターゼ阻害剤での処置は、in vivoでの多くの早期アテローム炎症伝達物質の発現を軽減する。29、30 スタチンは、これらのＬＤＬ受容体を欠乏しているウサギの脂質を穏やかにのみ下げるのにもかかわらず、これらのin vivoでの見解は、リポタンパク質へのどの効果が観察された抗炎症効果の原因となるのかの度合いを最終的にも分けることができなかった。本報告書は、スタチン脂質低下に依存しておよび独立して作用することのある新しい抗炎症経路の証拠を提供する。この薬の種類の３員（セリバスタチン、アトルバスタチン、またはシムバスタチン）は、アテローム性動脈硬化症に関係する細胞型のＣＤ４０およびＣＤ４０Ｌタンパク質のサイトカイン誘発のみならず構成発現が、すなわち、スタチンの脂質低下独立機能を主張するヒト血管ＥＣ、ＳＭＣ、およびＭＯが著しく軽減させた。しかしながら、ｏｘＬＤＬのこれらの細胞型のＣＤ４０およびＣＤ４０Ｌの誘発剤として同定はさらに、スタチンは、少なくとも一部は、そしてそれらの脂質低下特性によって、ＣＤ４０/ＣＤ４０Ｌ発現に影響を及ぼすかもしれないことを示唆する。注目すべきは、以前の研究は、ｏｘＬＤＬを初期のヒトアテローム硬化性病変内でＣＤ４０およびＣＤ４０Ｌと同一場所に限定しているが、31 かかる発見はｏｘＬＤＬがアテローム硬化性血小板のＣＤ４０受容体／リガンドダイアドの発現のための最初のシグナルを提供するという我々の仮説を軌を一にするものである。
【０１３７】
スタチンで処置した患者はｓＣＤ４０Ｌレベルが軽減したというパイロット的見解は、現在のin vitroでの見解の臨床的関連性を支持する。いくつかの細胞型は、ｓＣＤ４０Ｌを生じさせ得る。血小板は、in vivoで血栓形成においてのみならず、in vitroでトロンビン受容体の結紮において放出ｓＣＤ４０Ｌを放出する。32、33 しかしながら、本発明者ら自身のおよび他の以前の研究で示唆されたように、ＥＣ、ＭＯ、およびＴリンパ球を含む他の細胞型もまた、ｓＣＤ４０Ｌを生じることもある。11、12、17、18
【０１３８】
ＣＤ４０Ｌ欠乏多血小板血漿は、野生型マウスからの個製物よりゆっくり凝固するという現在の見解は、ＣＤ４０Ｌが、その膜結合性および／または可溶性の形で、心血管危険の重大な決定因子である血栓症を調節することを示唆する。αIIbβ3リガンドとして機能することにより血小板を活性化することができるという発見は、この仮説をさらに支持する。35
【０１３９】
例２で引用された参考文献
【表５】
2005515407.tif 000006
【０１４０】
【表６】
2005515407.tif 000007
【０１４１】
例３
可溶性ＣＤ４０リガンドレベルは頸動脈アテローム内の脂質蓄積を示す
【０１４２】
冠状動脈血栓を引き起こす主な因子は、アテローム硬化性プラークの崩壊（disruption）である。無傷なプラークと崩壊したプラークとを比較する研究が、脆弱なプラーク、すなわち、崩壊の危険性のあるものの特徴を特定するために使われている。その特徴は、全プラーク量の５０％以上を占めている脂質コア、薄いプラークキャップ、大きな絶対数、およびマクロファージの密度、ならびにプラークの平滑筋含有量の減少である。このような脆弱なプラークは、ほとんどの個人に存在する全プラークの小さな一部分を占めている。血管造形狭窄は、しかしながら、コアの大きさまたはプラークの大きさと狭窄の間に関係はないので、脆弱性の予知には無益である。血栓は虚血の原因となるほど内腔に十分に侵入しないため、崩壊エピソードの大部分は臨床において発見されない。しかしながら、これらの無症状エピソードは、プラーク成長を引き起こすこととなる。プラークの崩壊の後には、血管形成後に生じる反応に類似した平滑筋増殖性修後反応が続く。いずれの状況下においても、盛んな修後は、事象後狭窄につながる。剖検での冠状動脈病変を構成すると、７０％の高度狭窄（血管造形＞５０％径）が、崩壊が治癒したエピソードを有することを示す。このようなデータは、急性臨床事象が生じたか否かに関係なく、進行性狭窄病変の世代のプラーク崩壊の役割を明示するものである。
【０１４３】
要約すると、狭窄の重症度よりアテロームの構成および生物学的動態の方が、心血管事象を決めるところが大きい。厚い脂肪組織および薄い線維性被膜は脆弱なプラークを特徴付け、炎症の仕組みは、プラークの安定性を決定するのに極めて重要な役割を果たす。1,2 不安定なアテロームに関する我々の知識のほとんどは死後の検証試験から得られており、in vivoでの炎症の仕組みと病変構造との関係についてはほとんど知られていない。
【０１４４】
動物研究からの証拠は、アテローム性動脈硬化しやすいマウスのＣＤ４０信号の阻害が、大動脈病変の大きさおよび脂質含有量を縮小し、平滑筋含有量および線維性コラーゲンの相対的増加を生み出したことから、ＣＤ４０リガンドの重要性を支持する。9 さらに、本明細書の他所で記述があるように（例１参照）、ベースラインでの可溶性ＣＤ４０リガンドのより高い血漿レベルは、見かけ上健康な女性の間の心血管事象を先を見越して予測させる。
【０１４５】
磁気共鳴映像(ＭＲＩ)の最近の進歩は、頸動脈プラーク組成の非侵襲的評価を可能にした。11〜13 特に、特注型の位相配列頸動脈コイルの使用は、頸動脈血管内膜切除術を受ける２２人の患者の間において、頸動脈ＭＲＩによる所発見および組織学的結果の間の一致が高レベルであることを実証した(８９％において一致、カッパ＝０．８３、９５％信頼区間０．６７〜１．０）。14 さらにその上、高解像度頸動脈ＭＲＩは、正確にプラーク内多脂質コアを検出する。12、13、15、16
【０１４６】
本研究は、可溶性ＣＤ４０リガンドのより高い血漿レベルが、高解像度頸動脈ＭＲＩにおいて多脂質コアを示唆する特徴と相関関係にあるという仮説をテストする。
【０１４７】
方法
２００１年１月から２００２年１月に本研究に参加するため、頸動脈超音波検査により内形動脈または総頸動脈に３０％と同等またはそれ以上の狭窄のある男性および女性を招待した。この２ヶ月間に手術用クリップまたは冠動脈ステントを植え込んだ患者のみならず、ペースメーカーまたは植え込み型除細動器を着けている患者は、除外した。全身性炎症状態に全身性コルチコステロイドが必要な患者もまた除外された。本研究集団は、本研究に参加するための書面でのインフォームド・コンセントを提出した４９人の連続患者を含む。本研究は、Human Research Committee of BrighamおよびWomen's Hospitalにより承認された。
【０１４８】
過去の心血管歴、危険因子、および医薬品使用を含む詳細な病歴は、各参加者について研究医師が記録した。血液サンプルは、非外傷性静脈穿刺により採取し、遠心崩壊し、血漿は−８０℃にて保管した。
【０１４９】
ＭＲＩプロトコル:患者は、1.5T Signa CV／i ＭＲＩスキャナ (GE Medical Systems、Milwaukee、WI)に専用位相配列頸動脈コイル(IGC、Inc.)を使った頸動脈の高解像ＭＲＩを受けた。３Ｄタイム・オブ・フライト画像（3D time-of-flight images）、プロトン中程度密度強調画像（moderately proton density weighted images）、および脂質抑制Ｔ２中程度強調画像（fat-suppressed moderately T2-weighted images）が得られた。３Ｄタイム・オブ・フライト配列については、パラメータは以下のようにし得た:エコー時間（ＴＥ）３．５ｍｓ、反復時間（ＴＲ）３３〜４０ｍｓ、フリップ角２５度、バンド幅１５．６３ｋＨｚ、視界１２〜１４ｃｍ、１ｍｍに補間したスライス厚み２ｍｍ、３２スライス、獲得マトリックス２５６×２５６、励起が１つある再現マトリックス５１２×５１２。プロトン中程度強調配列については、２１〜２２ｍｓのＴＥが使用され、Ｔ２中程度強調については、５３〜５８ｍｓのＴＥが、化学選択的脂肪抑制と共に使われた。これらのスキャンのためのパラメータは:ＴＲ ２ Ｒ−Ｒ 間隔、エコー列長１６、バンド幅６２．５ｋＨｚ、視界１４ｃｍ、スライス厚み３ｍｍ、獲得マトリックス２５６×２５６、励起が１つある再現マトリックス５１２×５１２である。スライスレベルは、各患者の頸動脈分岐を中心とした。他の全情報に左右されない２名の広く認定されたＸ線技師は、陽子密度加重画像および３Ｄ飛行時間画像での等光度信号がある脂質抑制Ｔ２中程度強調高速スピンエコー画像との間の信号の損失をもとに、プラーク内の脂質の存在の有無を決定した。15 狭窄径パーセントは、３Ｄタイム・オブ・フライト軸位画像での、狭窄径とレファレンス径との間の差をレファレンス径で割り、１００をかけて計算された。画像は、オフラインで独立して読んだ。観察者間のばらつきは、１０％未満だった。
【０１５０】
以前述べたように、ベースライン血漿可溶性ＣＤ４０リガンド濃度は、ELISAにて測定した。10 簡単に述べると、希釈（１：５）血漿サンプルは、ホースラディシュペルオキシダーゼ標識二次マウス抗ヒトＣＤ４０Ｌ抗体と２時間混合した（１：２）マウス抗ヒトＣＤ４０Ｌ抗体コーティング96穴プレートに３連にて塗布された。プレートをその後洗浄し、抗体結合を、3.3'〜5.5'テトラメチルベンジジン基質を使った比色分析により決定した。吸収は、６５０ｎｍで読み、ＣＤ４０の血漿濃度は、組み替えヒトＣＤ４０の連続希釈との比較により決定した。全サンプルの３連間のアッセイ内変動は、１０％より低く、アッセイ間変動は７．４％だった。
【０１５１】
本研究参加者は、頸動脈ＭＲＩにてプラーク間脂質の証拠があった者、およびプラーク間脂質の証拠がなかった者の２つの群に分けられた。可溶性ＣＤ４０リガンドの中間レベルを計算し、Wilcoxon順位和検定を使って２群を比較した。より高い可溶性ＣＤ４０リガンドレベルと関連するプラーク内脂質を有する相対的な危険性は、プラーク内脂質の証拠がない者の間での可溶性ＣＤ４０リガンドの中間レベルにより、本研究サンプルを分けたロジスティック回帰モデルの使用により計算した。
【０１５２】
結果
登録４９患者中、閉所恐怖症のため、３患者の頸動脈ＭＲＩ画像が得られなかった。残り４６患者の見解を分析に使用した。患者のベースライン臨床特徴（表ＩＶ）は、全体研究コホート内で、高血圧症、糖尿病、および高コレステロール症歴の高い有病率があることを明らかにした。４６患者中１３人（２８．３％）が、一過性虚血性発作（ＴＩＡ）（ｎ＝８）または卒中（ｎ＝６）歴があり、１人はＴＩＡおよび卒中両方に罹ったことがあった。残り３３患者（７１．７％）は、無症状だった。
【０１５３】
１４患者は、プラーク内脂質の証拠を有し、３２患者は有さなかった。プラーク内脂質の証拠がある患者は、プラーク内脂質の証拠がない患者よりも、糖尿病である可能性が高かった（ｐ＝０．０２）。プラーク内脂質のある群内で、女性（ｐ＝０．１）、高血圧症歴のある患者（ｐ＝０．１６）、および現喫煙者（ｐ＝０．１３）の割合の増加傾向もあった。平均頸動脈径狭窄パーセント（５８％±２０対５６％±２４）は、プラーク内脂質の証拠の有無間で差はなかった。
【０１５４】
プラーク内脂質のある対象は、可溶性ＣＤ４０リガンドベースラインレベルが脂質蓄積のない者の間より高かった（中央値２．５４ｎｇ／ｍｌ［四分位範囲（ＩＱＲ）１．８５〜３．５２］対中央値１．５８ｎｇ／ｍｌ［ＩＱＲ１．２１〜２．３９］、ｐ＝０．０２）。それに比べ、可溶性ＣＤ４０リガンドレベルは、径狭窄パーセントと相関関係がなかった（ｒ＝−０．１９、ｐ＝０．２１）。中央値以上の可溶性ＣＤ４０リガンドレベルと関連するプラーク内脂質の相対的な危険性は、６．０（９５％信頼区間１．１５〜３１．２３、ｐ＝０．０３）であった。この予測効果の重要性は、性別、糖尿病、高血圧症、現喫煙、狭窄パーセント、およびコレステロール対高密度リポタンパク質コレステロールの比率（相対危険５．１２、９５％信頼区間０．７８〜３３．７３、ｐ＝０．０９）の効果を制御する多変量モデルを分析したときも実質的に変わらなかった。
【０１５５】
表ＩＶ  研究集団のベースライン臨床特徴
【表７】
2005515407.tif 000008
【０１５６】
考察
本明細書の他所で記述があるように（例１）、可溶性ＣＤ４０リガンドのベースライン血漿レベルは、見かけ上健康な女性の間の心血管事象を事前に予測させる。本データは、ヒトの将来の心血管における危険を反映し得るより高いレベルの可溶性ＣＤ４０リガンドを通じての、メカニズムに関する新規的な洞察を提供する。本発明者らは、可溶性ＣＤ４０リガンドのより高い血漿レベルおよび頸動脈プラークと狭窄の、重症度に関係なく、高い危険性との間に関係があることを見出した。これらのデータは、ＣＤ４０シグナルの阻害は、アテローム性動脈硬化症になりやすいマウスの大動脈病変の大きさおよび脂質含有量を縮小したことを示す研究における証拠と一致する。9
【０１５７】
以前の研究では、似た位相配列頸動脈コイルを使った高解像度頸動脈ＭＲＩは、頸動脈血管内膜切除術後の脂肪組織の組織学的発見を、正確に予測することができることが見出されたが、15 我々のＭＲＩプロトコルは、他の研究が正確に脂肪組織を区別することができることを示しているＴ２強調プロトコルをより多用している。12、13、16 可溶性ＣＤ４０リガンド予測効果は、旧来の心血管危険因子についての調節後も続き、調節された分析においては信頼区間は広がったが、このことは、形成の一般的に原因となる経路であることを示しているようなＣＤ４０結紮が脂質プールの形成を生ぜしめる通常の原因となる経路を表すことから予想し得たことである。
【０１５８】
結論として、本発明者らは、本研究が、ＣＤ４０リガンドの血漿レベルとプラーク脆弱性の潜在的に重要なマーカーの一つを表している、プラーク内脂質との間の関連性を立証すると信じている。
【０１５９】
例３で引用された参考文献
【表８】
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【０１６０】
均等物
当業者は、通常の実験以上のものを使わずに、ここに述べた本発明の特別な態様と同等の多くを認識するまたは確認できるだろう。このような均等物は、下記特許請求の範囲に包含されることが意図されている。
【０１６１】
本明細書にに開示のすべての文献は、参考文献としてその全体が組み込まれる。
【図面の簡単な説明】
【０１６２】
【図１】心血管事象のない（対照、ｎ＝１３０）または発病した（症例、ｎ＝１３０）中年の健康な女性間のｓＣＤ４０Ｌのベースライン血清濃度。サンプルは、３連にて分析し、平均値を示した。点線は、対照分布の９９パーセンタイル値カットポイントを描いている。
【図１】
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【国際調査報告】
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