(57)【要約】均一で多量の容易に消化可能である有機的に結合したセレンを含む、食品、栄養補助食品または薬剤に使用するためのセレン酵母製品であって、セレン化合物の含有量が１０００ｐｐｍと１６００ｐｐｍの間の範囲であり、製品中の１−セレノメチオニンの含有量が、合計セレン含有量の少なくとも５５％を常に構成し、製品中の無機セレン化合物のセレン含有量が、合計セレン含有量の１％を超えない、セレン酵母製品。さらに、食品、栄養補助食品または薬剤に使用するためのセレン酵母製品の調製法であって、前記酵母を最小培地において好気性条件下で培養し、酵母における前記栄養素の消費に対応する程度で、培養中に栄養素を酵母に加え；グルコースおよび／またはマルトースが供給培地中の唯一の炭素源である、調製法。【特許請求の範囲】
【請求項１】
食品、栄養補助食品または薬剤に使用するためのセレン酵母製品を調製する方法であって、前記酵母を最小培地において好気性条件下で培養し、
ａ）酵母を培養するステップであって、
ｉ）培養中に、酵母に栄養素を、酵母における栄養素の消費に対応する程度で与えること；
ii）グルコースおよび／またはマルトースが供給培地中の唯一の炭素源であること；
iii)培養中のエタノール濃度が１％、好ましくは０．５％、および最も好ましくは０．２％を超えないこと；
iv）培養中のｐＨ値を４．０と６．０の間、好ましくは４．４と５．７の間、最も好ましくは５．０などの４．７と５．４の間に保つこと；および
ｖ）セレンの水性塩を、酵母の乾燥状態で計算して、１０００ｐｐｍと１５００ｐｐｍの間のセレンに対応する量で供給培地に混合することを含むステップ；
ｂ）ステップ（ａ）で得た酵母を単離するステップを特徴とする方法。
【請求項２】
単離が遠心分離または濾過による採取を含むことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ｃ）ステップ（ｂ）からの酵母細胞を洗浄するステップ、
ｄ）ステップ（ｃ）からの酵母細胞を熱処理するステップ、
ｅ）ステップ（ｄ）からの生成物を場合によっては乾燥させるステップ、
をさらに含むことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項４】
最少培地が薬剤品質の原材料から構成されることを特徴とする請求項１から３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
酵母が、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｔａｃｅａｅ、好ましくはＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｂｏｕｌａｒｄｉｉ  ｓｅｑｕｅｌａおよび／またはＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｔｏｒｕｌａ属の種を含むことを特徴とする請求項１から４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
酵母がＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅであることを特徴とする請求項５に記載の方法。
【請求項７】
食品、栄養補助食品または薬剤に使用するためのセレン酵母製品であって、
ａ）有機セレン化合物の含有量が１０００ｐｐｍと１６００ｐｐｍの間のセレン、好ましくは１１００ｐｐｍと１５００ｐｐｍの間のセレン、最も好ましくは１２００ｐｐｍと１４００ｐｐｍの間のセレンの範囲に対応すること、
ｂ）１−セレノメチオニンの含有量が常に合計セレン含有量の少なくとも５５％を構成し、無機セレン化合物のセレン含有量が合計セレン含有量の１％を超えないこと、
ｃ）セレン酵母製品が、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．好ましくはＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓ．ｂｏｕｌａｒｄｉｉ  ｓｅｑｕｅｌａおよび／またはＳ．ｔｏｒｕｌａの純粋培養物とを接種した酵母培養物を、炭素、窒素およびセレンの源を、所定時間中に酵母に吸収されうる量に対応する、時間単位当たりの量で加えることによって培養することによって得られ、薬局方に記載されている精製され均一に定義された原材料の形の栄養素のみを含む最少培地で培養が行われること
を特徴とする、セレン酵母製品。
【請求項８】
請求項１から６のいずれかに記載の方法によって得られることを特徴とする請求項７に記載のセレン酵母製品。
【請求項９】
食品を調製するための請求項７または８に記載のセレン酵母製品の使用。
【請求項１０】
栄養補助食品を調製するための請求項７または８に記載のセレン酵母製品の使用。
【請求項１１】
薬剤を調製するための請求項７または８に記載のセレン酵母製品の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、食品、栄養補助食品または薬剤に使用するためのセレン酵母製品に関するものであり、その製品は均質で多量の、容易に消化可能で耐性がある、有機的に結合したセレンを含む。本発明は、セレン酵母製品を調製する方法、および食品、栄養補助食品または薬剤を調製するためのセレン酵母製品の使用にも関する。
【背景技術】
【０００２】
セレンは、ヒトの栄養に必要不可欠な元素である。セレンは食物を介して摂取されるが、しかしながら食物はさまざまなセレン含有量を有する。世界の大部分では、土壌中の前記元素の存在が少な目であるので、セレンのレベルが低い穀物が栽培されている。
【０００３】
ヒトに対するセレンの重要性は多数の試験によって実証されてきている。セレンは、特にアミノ酸を含めた、異なる有機分子中に取り込まれている。１−セレノメチオニン、セレノシステイン、セレノシスチン、セレノエチオニンは、最も重要な化合物である。したがって、セレンは身体にとって構造上重要なタンパク質の一部である。さらにセレンは、ヒトの代謝、生殖、癌の予防、免疫防御、精神に影響を与える、いくつかの酵素の重要な成分である。すなわち、Ｒａｙｍａｎ、Ｍ．、Ｔｈｅ  ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ  ｏｆ  ｓｅｌｅｎｉｕｍ  ｔｏ  ｈｕｍａｎ  ｈｅａｌｔｈ、Ｌａｎｃｅｔ  ３５６：２３３〜２４１（２０００）。
【０００４】
通常の食品中のセレンの含有量が不充分であることが多いために、栄養強化剤、栄養補助食品または薬剤の形で、セレンを加えることが有利である。これらは亜セレン酸塩などの無機セレンを含んでよく、あるいはこれらは、セレン酵母を含めた有機源を含んでよい。無機セレンと有機セレンの吸収と毒性の間には、大きな差が存在し、無機化合物は通常、有機源のセレンより大幅に遅く吸収され、また毒性も強い。しばしば使用される有機セレンの源は、セレンを含有する酵母である。
【０００５】
酵母を培養するとき、亜セレン酸ナトリウムとセレン酸ナトリウムを含めた無機化合物の形のセレンを、栄養培地に加えることができる。このようにして栄養培地に加えるセレンは、酵母によって大部分は吸収され、１−セレノメチオニンを含めた有機化合物中に取り込まれる。
【０００６】
セレン酵母は、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｂｏｕｌａｒｄｉｉ  ｓｅｑｕｅｌａおよびＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｔｏｒｕｌａを含めた、いくつかの酵母種を使用することによって、および異なる培養条件を使用することによって、調製することができる。結果として、酵母中に、さまざまな選択したセレンの有機化合物が形成される。知られている方法によって得られる再現性は、満足の行くものではない。再現性が乏しいため、権威者、研究者、消費者はセレン酵母を使用したがらない。Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｎ  Ｆｏｏｄｓ、すなわち、特定の栄養目的の食品の製造において使用するために提案されている栄養目的の物質に関する、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｎ  Ｆｏｏｄ、Ｏｐｉｎｉｏｎ、すなわち、「ＰＴＡＲＮＵＴＳ」、１９９９年５月１２日、５ページ、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｎ  Ｆｏｏｄ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ｔｏｌｅｒａｂｌｅ  Ｕｐｐｅｒ  Ｉｎｔａｋｅ  Ｌｅｖｅｌ  ｏｆ  Ｓｅｌｅｎｉｕｍ、２０００年１０月１１日、２ページは、セレン酵母中の１−セレノメチオニン含有量は、２０％と５０％の間で変わると述べている。栄養補助食品または薬剤における使用にとって、セレンの必須化合物、すなわち化学種が均一な濃度で存在することが非常に重要である。これによって、セレンの重要性に関する長期の研究を行うことが可能であり、製造毎の再現性は、これらの研究の結果を解釈し、使用するために非常に重要である。
【０００７】
市販品として、セレン酵母は一般に、さまざまな組成を有する糖蜜上での培養によって調製されている。異なる型のセレン酵母によって、さまざまな吸収レベル、したがって逸脱した応答が引き起こされることが、文献、すなわちＣｌａｕｓｅｎ、Ｊ．他、Ａ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｔｅｎ  ｓｅｌｅｎｉｕｍ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｓｅｌｅｎｉｕｍ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｗａｌｔｅｒ  ｄｅ  Ｇｒｕｙｔｅｒ  ＆  Ｃｏ  ３０５〜１４（１９８８）から知られている。いくつかの特許は、異なる濃度のセレンを含むセレン酵母の培養を記載している。したがって、米国特許第４，５３０，８４９号は、約１０００ｐｐｍのセレンを有するセレン酵母の培養を開示している。しかしながらこの特許は、酵母中でセレンがどのように結合するか、あるいはその方法をどの程度再現することができるかは開示していない。
【０００８】
特許出願ＷＯ  ９８／３７１７２も、セレン酵母の培養とその使用に関している。培養による方法は、セレンの水溶性の塩と栄養培地を混合させるステップと、次に酵母の水性懸濁液を加えるステップを含む。生成するセレン酵母は、一定の均一な化合物に分けられない、セレン含有量を有する。セレン化合物の均一な収率および組成を得る可能性は、いずれも記載されていない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
酵母および他の微生物を、最少レベルの栄養素を含む培地、いわゆる最少培地上で培養することができることは、知られている事実である。しかしながら、このような方法は、産業上は通常使用されていない。なぜなら、このような方法は、低い収率と望ましくない微生物の組成物をもたらす可能性があるからである。したがって、本発明に従った最少培地上での培養によって、ヒトの栄養において最適な、セレン酵母の良い収率と再現可能な組成物を得ることができることは驚きである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
したがって本発明は、多量で均一の、消化可能である、有機的に結合したセレンを含む、酵母製品を調製する方法に関する。生成する酵母は粉末であり、これは直接使用することができるか、あるいは従来の技法によって錠剤に圧縮することができる。これらの錠剤は、食品、栄養補助食品または薬剤として市場に出すことができる。
【００１１】
したがって第一の態様では、本発明は、食品、栄養補助食品または薬剤に使用するためのセレン酵母製品に関するものであり、その製品は、１０００ｐｐｍと１６００ｐｐｍの間、好ましくは１１００ｐｐｍと１５００ｐｐｍの間、最も好ましくは１２００ｐｐｍと１４００ｐｐｍの間のセレンに対応する有機セレン化合物の含有量を有すること、１−セレノメチオニンの含有量が常に合計セレン含有量の少なくとも５５％を構成すること、無機セレン化合物のセレン含有量が合計セレン含有量の１％を超えないことを特徴とする。
【００１２】
さらに、結果として生じる製品は、８５％を超えるヒトにおける吸収を特徴とする。
【００１３】
第二の態様では、本発明は、食品、栄養補助食品または薬剤に使用するためのセレン酵母製品を調製する方法に関するものであり、酵母を好気性条件下で培養し、本方法は、
ｉ）培養中に酵母に栄養素を、酵母における前記栄養素の消費に対応する程度で与えること；
ii）グルコースおよび／またはマルトースが供給培地中の唯一の炭素源であること；
iii)培養中のエタノール濃度が１％、好ましくは０．５％、および最も好ましくは０．２％を超えないこと；
iv）培養中のｐＨ値を４．０と６．０の間、好ましくは４．４と５．７の間、最も好ましくは４．７と５．４の間、５．０などに保つこと；および
ｖ）セレンの水性塩を、酵母の乾燥状態で計算して、１０００ｐｐｍと１５００ｐｐｍの間のセレンに対応する量で供給培地に混合することを特徴とする。
【００１４】
第三の態様では、本発明は、本発明の方法によって調製されるセレン酵母製品に関する。
【００１５】
第四の態様では、本発明は、本発明のセレン酵母製品を含む、食品、栄養補助食品または薬剤に関する。
【００１６】
第五の態様では、本発明は、食品、栄養補助食品または薬剤を調製するための、本発明のセレン酵母製品の使用に関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
本発明の異なる実施形態を詳細に記載する前に、本発明の主要な態様に特異的な、いくつかの関連する定義を以下に与える。
【００１８】
定義
最少培地：酵母の増殖を行うのに必要な、最少量の栄養素を含む培地。
【００１９】
薬剤品質：国の薬局方に記載された製品の特性。
【００２０】
出発培地：酵母と共に接種する、水と他の栄養素の混合物。
【００２１】
供給培地：酵母を植えつけた後に、出発培地／培養物に加える栄養素。
【００２２】
Ｚａｋ法：酵母を培養する方法である。前記酵母を出発培地に植えつけ、次に好気性条件下で供給培地を介して栄養素を加える方法。栄養素の添加は、酵母における前記栄養素の吸収速度に対応する速度で、好気性条件下において行う。正確に調節することによって、ごく少量のアルコールの生成がもたらされる。生成されたアルコールは、培養の最終段階で酵母によって消費される。この方法は従来のものであり、Ｚ法と呼ばれる。この方法は原則として、Ｓｏｒｅｎ  Ｓａｋ氏によって開発されており、デンマーク特許第２８５０７号（１９２１）に記載されている。
【００２３】
ヒトにおける吸収：摂取されたアイソトープの量と排便作用で排出されたアイソトープの量の間の差。ヒトにおける吸収は、摂取されたアイソトープの量の割合で計算する。
【００２４】
前述のように、これまで知られているセレン酵母製品の調製法は、炭素源として糖蜜を主に使用し、グルコース系培地を使用するとき、例えばＷＯ  ９８／３７１７２では、細胞増殖に対応する、栄養素とセレンの連続的な添加が確実ではないことによって、この方法は本発明の方法から逸脱する。さらに、セレンの混合は比較的短い時間で行われ、このことが、ヒトの栄養摂取において非常に重要である、セレンの有機化合物の形成を複雑にする。
【００２５】
本発明の酵母の培養用の栄養素には、炭素源や窒素源、さらにはビタミンとミネラルの形の微量栄養素がある。炭素は、培養中にすぐに摂取することができる形でなければならず、したがって炭素は水に非常に可溶でなければならず、酵母中に存在する酵素による消費が可能である組成を有していなければならない。これらの炭素源には、グルコースやマルトースがあり、これらは、微生物生成食品、栄養補助食品または薬剤の栄養素として使用することができるように、グルコース・シロップに精製することができる。窒素源として、充分高い純度レベルのアンモニアを含めた無機化合物を使用して、望ましくない化合物の毒性または形成を回避することができる。酵母の代謝は完全には知られておらず、したがって、薬局方に記載されている酵母抽出物の形の、微量栄養素を加えることが必要である。
【００２６】
したがって酵母製品は、本発明に従い、薬剤性質の原材料に基づいて調製し、増殖用に使用することができる最小レベルの栄養素を酵母が有するような形式で、構成することができる。酵母を培養する典型的な方法は、以下のステップを含む：
１）栄養培地の作製
２）植えつけ用酵母の接種
３）培養
４）採取
５）洗浄
６）熱処理
７）乾燥
【００２７】
栄養培地は、酵母の植えつけ前に、糖物質、ビタミン、ミネラルを水に溶かして、２４℃と３７℃の間、好ましくは２６℃と３４℃の間、最も好ましくは２８℃と３２℃の間に加熱することによって作製する。
【００２８】
植えつけ用酵母の接種は、１Ｈｚと２Ｈｚの間の周波数で攪拌しながら、酵母細胞を培地中に懸濁させることによって、完全な加熱した栄養培地に行う。セレン酵母は、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｂｏｕｌａｒｄｉｉ  ｓｅｑｕｅｌｓおよびＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｔｏｒｕｌａを含めた数種を使用することによって、調製することができる。前記種の中では、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅが、ヒトにおける摂取に適していると一般的に考えられており、これはパンやアルコールの調製用に広く使用されている。本発明のセレン酵母製品の調製に関しては、遺伝学的に安定しておりそれ故突然変異を受ける傾向が低い、製造用菌株を使用することが有利である。したがって本発明の一実施形態では、菌株ＡＴＣＣ  Ｎｏ７４３６６を使用するが、しかしながらこれは、本発明をそれだけに制限するものではない。
【００２９】
培養は栄養培地に基づいて行い、この培地は特定の最小培地として作製し、前述の植えつけ用酵母を接種する。さらに、追加の炭水化物を、グルコースおよび／またはマルトースの形で加える。アンモニアの水溶液を、窒素源として混合させる。最高な可能な限りの増殖を確実にするため、およびアルコールの生成を妨げるために、多量の空気、好ましくは充分な酸素を含む大気中の空気を導入する。大規模な調製では、完全な酸化を確実にすることは実際困難であり、酵母の栄養の必要性をわずかに変える可能性がある。栄養培地と酵母の合計含有量で計算して、約４重量％の酵母濃度で、培養を終了させる。栄養素の添加は、酵母における前記栄養素の吸収速度に対応する速度で、好気性条件下において行う。結果として、正確に調節することによって、ごく少量のアルコールが生成される。生成したアルコールは、培養の最終段階で酵母によって消費される。
【００３０】
実際に、正確な量の栄養素の添加は、増殖中に生成したエタノールの形であるアルコールの量を連続的に測定することによって調節される。栄養素をゆっくり加えすぎる場合、アルコールは生成せず、添加を速く行いすぎる場合は、多量のアルコールが生成する。したがって、任意の時間で存在するアルコールの量は、１％、好ましくは０．５％、最も好ましくは０．２％を超えてはならない。さらに、増殖培地のｐＨは、栄養素の消費と添加の間の的確な均衡を維持するための指標として使用することができ、したがって、ｐＨを増殖中に調節および調整して、４．０と６．０の間、好ましくは４．４と５．７の間、最も好ましくは４．７と５．４の間、５．０などにｐＨを保つ。
【００３１】
採取は、栄養培地からの培養した酵母の分離を含む。この分離は、約２０重量％の酵母を含む濃縮酵母クリームを生成する遠心分離によって行うのが最も良い。
【００３２】
洗浄の目的は、酵母クリーム中の過剰な栄養素を除去することである。洗浄は、水を加えること、次に遠心分離して酵母クリームを生成することによって行うことが最も有利である。このようにして、２〜６回、好ましくは４回酵母を洗浄し、ほぼすべての細胞外の栄養素を、酵母クリームから除去する。
【００３３】
熱処理の目的は、酵母細胞を殺して、その中に存在するセレンをヒトにおける消化のために利用可能にすることである。熱処理によって、酵母細胞の広範囲の分解ももたらされる。有利な熱処理は、プレート熱交換器中において８７℃の温度、および３０秒の放置時間で、低温殺菌として行うことができる。
【００３４】
酵母は、凍結乾燥、ドラム乾燥、トレー乾燥、またはスプレー乾燥を含めた、有機物を乾燥させる従来の方法、好ましくはスプレー乾燥によって乾燥させることができる。スプレー乾燥によって、１６０℃と２４０℃の間、好ましくは１８０℃と２２０℃の間、および最も好ましくは約２００℃の、空気の入力温度で水を除去する。この関係において出力温度は、７０℃〜９０℃、好ましくは８０℃〜９０℃、および最も好ましくは約８６℃であってよい。生成する粉末は、４％と９％の間、好ましくは６％と９％の間、最も好ましくは約８％の水含有量を有する。その後粉末を水で湿気を与えることによって処理し、次に乾燥させて、それによって後に水を吸収する能力を向上させることができる。
【００３５】
本発明のセレン酵母は、唯一のセレン源として、あるいは他のセレン含有成分と組み合わせて、食品、栄養補助食品または薬剤を調製するために使用することができる。
【００３６】
したがって本発明は、本発明のセレン酵母をセレン源として使用する食品、栄養補助食品または薬剤にも関する。
【００３７】
本発明の一実施形態では、本発明の使用は、崩壊剤、流動剤、およびセレン酵母を含む製品を含む。この混合物を、錠剤当たり２５μｇと８００μｇの間のセレン、特に４０μｇと３００μｇの間のセレン、特に５０μｇと２００μｇの間のセレンを含む錠剤に圧縮する。
【００３８】
しかしながら、前に記載した適用例の範囲以外に、本発明を、小麦粉などのセレンで栄養強化される他の型の食品、他の粉末食品および飲料用に使用することもできる。
【００３９】
以下の実施例を参照しながら、本発明を以下で詳細に説明する。
【実施例１】
【００４０】
１ａ）
この実施例では、０．０１４ｍ3の体積を有する発酵槽を使用する。
【００４１】
培養の最初に、以下の薬剤性質の原材料組成物で、栄養培地を作製する：
水                        ヨーロッパ薬局方        ５，４００ｇ
グルコース・シロップ      ヨーロッパ薬局方        ３１．８ｇ
ＫＨ2ＰＯ4                ヨーロッパ薬局方        ２５ｇ
アンモニア水２．５％      ヨーロッパ薬局方        １１４ｇ
ビオチン（０．０１％）    ヨーロッパ薬局方        ２．１ｍｌ
塩酸チアミン（１．０％）  ヨーロッパ薬局方        ２．５ｍｌ
パントテン酸カルシウム    ヨーロッパ薬局方        ０．０８ｇ
酵母抽出物                米国薬局方              ７５ｇ
硫化鉄                    ヨーロッパ薬局方        ０．１０ｇ
硫酸マグネシウム          ヨーロッパ薬局方        ５．０ｇ
硫酸マンガン              ヨーロッパ薬局方        ０．０３３ｇ
硫酸亜鉛                  ヨーロッパ薬局方        ０．０３３ｇ
【００４２】
温度を３０℃に調整した後、５ｇの植えつけ用酵母を混合する。接種済み栄養培地に、１分間当たり２０リットルの量で、滅菌した空気を吹き付ける。１７Ｈｚの周波数でスピンドルによって、攪拌を行う。硫酸を使用してｐＨを調整して、ｐＨを４．７と５．４の間に保つ。エタノールが０．２％を超えないように調節し、さらにエタノールの濃度は０に限りなく近く保つ。
【００４３】
培養中、栄養素を、以下の量で供給培地に加える：
グルコース・シロップ        ヨーロッパ薬局方      １，０６０．５ｇ
アンモニア水２．５％        ヨーロッパ薬局方      １，４５１ｇ
【００４４】
さらに亜セレン酸ナトリウムを、以下のように、アンモニア水２．５％に混合する：
亜セレン酸ナトリウム        ヨーロッパ薬局方      １．２７５８ｇ
【００４５】
グルコース・シロップ、アンモニア水、亜セレン酸ナトリウムは、酵母における物質の消費速度に対応する速度で加える。これは、アルコールの生成を連続的に測定することによって調節する。アルコールの濃度は、０近くに保つ。
【００４６】
アンモニア水（２．５％）の添加は、１８時間後に終了する。
１９時間後、培養を終了する。
【００４７】
酵母の採取は、酵母を含む培地を遠心分離に移し、酵母クリームを過剰な培地から５分以内に分離することによって行う。乾燥物質含有量約２０％の生成した酵母クリームを、５，０００ｇの水と混合させる。その後、酵母混合物を再度遠心分離にかける。洗浄水を除去し、生成した酵母クリームを、５，０００ｇの水と混合させる。このプロセスを４回繰り返して、培地から酵母細胞を分離する。
【００４８】
洗浄した酵母クリームを、プレート低温殺菌装置を通し、その中で静置時間３０秒の８７℃での熱処理を施す。熱処理の直後、酵母クリームを、プレート低温殺菌装置で４℃に冷却する。酵母クリームの量は、１，８９７．５ｇである。
【００４９】
酵母クリームを凍結乾燥機に移す。−４０℃での２４時間の凍結の後、１８時間以内に水を昇華させる。ここで０．２％の水含有量および乾燥状態で１，３８０ｐｐｍのセレン濃度を有する、３８０ｇの乾燥セレン酵母が得られる。調製した結果として生じたセレン酵母製品の栄養特性と再現性は、実施例２、４、５において以下で記載する方法で決定する。
【００５０】
１ｂ）
前述の実施例１ａに従って、酵母を調製する。しかしながら、１５０ｍ3の体積を有する発酵槽を使用する。栄養培地は、同じ相互比の対応する成分から構成され、５６，８４８ｋｇの合計重量を有する。
【００５１】
グルコース・シロップとアンモニア水２．５％を、実施例１ａと同じ方法で加える。この目的のために、１３，５００ｋｇのグルコース・シロップと１，４１０．５ｋｇのアンモニア水２．５％を使用する。亜セレン酸ナトリウムの形のセレンを、１５ｋｇの量混合する。アンモニア水の添加は１８時間後に終了させ、培養は１９時間後に終了させる。
【００５２】
酵母の洗浄と熱処理は、実施例１ａに記載した原則に従って行う。
【００５３】
酵母の乾燥は、回転スプレー・ホイールを有する乾燥塔において、スプレー乾燥によって行う。スプレー・ホイールの周波数は１６７Ｈｚに設定する。乾燥用の空気温度は、２００℃に設定する。その結果生じる出発温度は８６℃である。水含有量が７％である粉末の合計量は、５，０３５ｋｇである。セレンの濃度は、乾燥状態で１，３５５ｐｐｍである。結果として生じた調製セレン酵母製品の栄養特性と再現性は、以下の実施例２、４、５に記載する方法で決定する。
【実施例２】
【００５４】
セレン酵母の消化性と吸収性
２ａ）ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのセレンの消化性
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのセレン酵母の消化性を決定するための基礎として、ブタ、すなわちＥＦＯＳブタにおいて酵素により消化される有機物を決定するための、Ｔｈｅ  Ｄａｎｉｓｈ  Ｐｌａｎｔ  Ｄｉｒｅｃｔｏｒａｔｅの１９９４年１１月１５日の方法９．１の、さらなる発展形を使用する。ヒトにおける消化の条件に対応するように、この方法は変えられてきている。セルロースを分解することができる酵素は、したがってこのｉｎ  ｖｉｔｒｏの研究には含めない。
【００５５】
その原則は、ペプシンによる処理、次にパンクレアチンによる処理である。非溶解性サンプル物質は、濾過除去し乾燥させる。元のサンプル中のセレンの決定値と、濾過物と貯留物中の含有量を比較することによって、セレンの消化性を計算する。
【００５６】
このように、セレン酵母をｐＨ２．０でペプシンと混合させ、４０℃で７５分間インキュベートし、次にｐＨ６．８において４０℃で３時間３０分、パンクレアチンで処理する。その後、真空手段によって濾過を行い、濾過物と貯留物中のセレン含有量をそれぞれ決定する。サンプル中の合計セレン含有量のパーセントでの、濾過物中のセレン含有量は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのセレン酵母の消化性を表すものである。
【００５７】
以下の性質を有するセレン酵母を得る：
消化可能なセレン：９９％
【００５８】
２ｂ）
ｉｎ  ｖｉｖｏでのセレンの消化と貯留
ｉｎ  ｖｉｖｏでの消化性を決定するための基礎として、本発明のセレン酵母を与え、９９．３％というセレン−７７含有率を有する安定したアイソトープを培養用に使用する。天然に存在するセレンはＳｅ−７７を７．８％のみ含み、同時に４９．８２％のＳｅ−８０を含むので、ＩＣＰ−ＭＳ、すなわち誘導結合プラズマ質量分析装置によりこれらのアイソトープを測定することによって、このようなアイソトープの添加に由来する物質の割合を、ヒトにおいて決定することができる。
【００５９】
ｉｎ  ｖｉｖｏでの吸収、貯留、生体親和性の決定は、さらに以下のように行う：
【００６０】
２０〜５５才の１２人の男性参加者に、３００μｇのセレン−７７に相当する、１回用量のセレン酵母を投与する。参加者は５日間の間に便と尿を集め、１１個の血液サンプルを前記期間中に採取する。便と尿の回収を調節するために、尿と便の両方において採収物の対照として回収されるＰＡＢＡすなわちパラアミノ安息香酸とプラスチック・チューブがそれぞれ管理される。セレン−７７の吸収量は、セレン−７７の摂取と便からの抽出を比較することによって決定する。
【００６１】
貯留、すなわち貯留量は、投与した微量と比較した、投与した微量から便および尿を引いた値から排泄物として決定する。血液サンプルを使用して、薬理学的性質を記載する。
【００６２】
本発明のセレン酵母の吸収と貯留に関する、以下の性質を得る：
吸収は８９％である。貯留は７４％である。
【００６３】
２ｃ）長期の摂取におけるｉｎ  ｖｉｖｏでの用量／応答
ブランク実験を連続２年間行った。４９人の一群に、０、１００、２００または３００μｇの量の本発明のセレン酵母の形であるセレンを含む錠剤を毎日摂取させた。さらに、食物中に本来存在する量のセレン、すなわち約５０μｇ／１日を食品によって、参加者に摂取させた。吸収と排泄の間の均衡が得られた２年後、全血中のセレン含有量を決定した。
【００６４】
以下の結果を見出した：
【００６５】
【表１】
2005520515.tif 000002
【００６６】
前述の結果に基づいて、セレン酵母の摂取用量と全血中のセレン含有量の間の直線的関係を決定し、以下のように表すことができる：
全血中のセレン（μｇ／ｌ）＝１．１２×摂取量（μｇ／１日）＋３８
【００６７】
発見された本発明のセレン酵母の応答性は、従来技術、すなわちＳｃｈｒａｕｚｅｒ、Ｇ．Ｎ．、Ｓｅｌｅｎｉｕｍ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ、Ｂｉｏｉｎｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、８：３０３〜３１８（１９７８）のセレン酵母の記載に優るものである。
【００６８】
２ｄ）長期摂取における副作用の測定
１〜２．５年の期間の間、１００、２００または３００μｇの用量の本発明のセレン酵母、またはプラセーボを、４つの均等に分けた群の８０６人に投与した。この期間は、約１４００人−１年を含む。この期間中、耐性と副作用をすべての人間において試験し、２．６％、すなわち８０６人中２１人で副作用が報告された。無作為化を終える前に、副作用は軽度１７人、中等度４人、または重篤０人のいずれかに、分類された。
【００６９】
無作為化を明確にした後、副作用は、プラセーボで８、２００μｇのＳｅで８、および３００μｇのＳｅで６に無作為に分類されることが分かった。結論は、副作用は取るに足らないものであり、本発明のセレン酵母とは関係が無かったということであった。
【実施例３】
【００７０】
錠剤：
本発明のセレン酵母の錠剤の調製は、以下の成分によって行う：
本発明のセレン酵母
錠剤助剤：  微晶質セルロース
二酸化ケイ素
脂肪酸のマグネシウム塩
流れ調整剤：二リン酸カルシウム
表面処理剤：ヒドロキシプロピルメチルセルロース
タルク
着色剤：    二酸化チタン
【００７１】
これらの成分を従来の方法で混合し、それぞれの錠剤がセレン酵母に由来する１００μｇのセレンを含むように、錠剤に圧縮する。
【実施例４】
【００７２】
セレン酵母の種形成
糖蜜を使用することにより従来の方法で培養したセレン酵母、および２バッチの本発明のセレン酵母を、セレンのさまざまな化合物の含有率に関して調べた。これらのサンプルに、無酸素環境において安定剤としてチオグリコール酸を用いて、酸加水分解を施した。セレノメチオニンと亜セレン酸ナトリウムの含有率を、実験参照に対するＨＰＬＣにより次いで決定した。
【００７３】
糖蜜上で培養したセレン酵母は、抽出可能でＨＰＬＣ利用可能な部分の４９％のセレノメチオニン含有率を有しており、一方で２つの独立した生産バッチ中の本発明のセレン酵母は、抽出可能でＨＰＬＣ利用可能な部分のセレノメチオニンの、７２．８および７２．９％の含有率をそれぞれ示した。
【００７４】
セレン全体の抽出可能な部分は９５〜１０１％として存在し、その中で約８０％がＨＰＬＣによって試験することができる。セレン全体の１−セレノメチオニンの真の最少量は、したがって７２．８％×９５％×８０％＝５５．３％である。考えられる真の最高量は約９０％である。測定される亜セレン酸ナトリウムの量は１％未満である。Ｅｒｉｋ．Ｈ．Ｌａｒｓｅｎ他によって記載された方法、すなわちＬａｒ−ｓｅｎ、Ｅ．Ｈ．他、Ｊ．Ａｎａｌ．Ａｔ．Ｓｐｅｃｔｒｏｍ．、１６、１４０３〜１４０８、２０００を、セレンの種を決定するために使用することができる。
【００７５】
実施例中では、実際の真の量よりも再現性を重要視する。
【実施例５】
【００７６】
ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるセレン酵母および無機セレンの吸収
実施例２ｂの適用例と同じ方法で、本発明のセレン酵母、または無機セレン−７７のいずれかを、同じ１２人の試験者に投与した。２つのセレン源のヒトにおける吸収はそれぞれ、本発明のセレン酵母に関しては８９％で、無機セレンに関しては２３％であった。
【国際調査報告】
2005520515.tif 000003
2005520515.tif 000004
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