(57)【要約】  過剰増殖性Ｂ系統細胞上の決定基を認識するIFN-γおよび治療用抗体の併用療法を提供する。標的化細胞をこれらの薬剤と局所的または全身的のいずれか(通常は全身的)で接触させる。本発明の方法は、過剰増殖障害の治療上の処置および研究に関する方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｂ細胞上に存在する抗原と特異的に結合する抗体、およびIFN-γ(ガンマインターフェロン)を有効用量で患者に投与することを含む、Ｂ細胞過剰増殖障害の治療方法。
【請求項２】
Ｂ細胞過剰増殖性疾患が非ホジキン性リンパ腫である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
抗体がモノクローナル抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
抗体がヒト化モノクローナル抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
Ｂ細胞上に存在する抗原がCD20である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
抗体を0.001〜30mg/kgの用量で投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
IFN-γがヒトIFN-γである、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
IFN-γを0.5μg/m2〜約500μg/m2の用量で投与する、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
IFN-γの投与が、抗体での治療開始の少なくとも１週間前に開始される、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
Ｂ細胞上に存在する抗原に結合する抗体、およびγインターフェロンを含有する組成物。
【請求項１１】
抗体がモノクローナル抗体である、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
抗体が抗CD20抗体である、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１３】
抗体が、約0.001〜30mg/kgの単位用量を送達するために十分な量で存在する、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１４】
γインターフェロンがヒトγインターフェロンである、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１５】
γインターフェロンが0.5μg/m2〜約500μg/m2の単位用量を送達するために十分な量で存在する、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１６】
Ｂ細胞増殖性障害の治療のための医薬としての請求項１０〜１５のいずれか１つに記載の組成物の使用。
【請求項１７】
障害が非ホジキン性リンパ腫である、請求項１６に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本出願は、InterMune,Inc.の名称の米国企業(米国を除く全ての国での出願人)および米国民であるEd Engleman (米国指定国についての出願人)により、2002年６月14日に全ての国を指定国としてPCT国際特許出願として出願されている。
【０００２】
発明の背景
Ｂ細胞腫瘍形成は、多様な疾患群 (急性リンパ性白血病(ALL)および広範なスペクトルの非ホジキン性リンパ腫(NHL)を含む) を示す。これらの疾患は、癌の死亡率に対する重要な一因である。処置に対する反応は入り混じっており、始めは反応しないか、または現在利用可能な治療の後に再発するかのいずれかの患者が多数存在する。Ｂ細胞悪性腫瘍の伝統的な治療方法(化学療法および放射線療法を含む)は、毒性の副作用が原因で用途が制限されている。
【０００３】
例えば、慢性リンパ性白血病のほとんどはＢ細胞系統のものである。このタイプのＢ細胞悪性腫瘍は、西欧諸国において最も一般的な白血病である。この疾患の初期は、痛みがなく、延長した寿命を有する、小型の成熟した機能的に不完全な悪性Ｂ細胞の蓄積により特徴付けられる。最終的には、悪性Ｂ細胞の倍化時間は減少し、患者はだんだんと症状を伴うようになる。治療は症状の緩和を提供し得るが、患者の全体的な生存は最小限にしか影響を受けない。後期慢性リンパ性白血病は重篤な貧血および/または血小板減少症により特徴付けられる。この時点での、中央値生存率は２年未満である。大変遅い細胞増殖速度に起因して、慢性リンパ性白血病は治療に対して抵抗性である。
【０００４】
近年、標的化治療を提供するための、抗体の治療薬剤としての使用に、実質的な関心がもたれている。このような熱意は、キメラおよびヒト化抗体の産生を可能とする組換え技術の進歩、結腸直腸癌、卵巣癌および前立腺癌の診断および病期段階分けでの放射免疫複合体の使用に対する食品医薬品局の認可、リンパ腫および乳癌での持続的な応答速度を実証する研究、および非ホジキン性リンパ腫の治療における放射標識型抗体の顕著な有効性を実証する試験から生じている。
【０００５】
血液悪性腫瘍の治療に関して研究されている非結合型モノクローナル抗体としては、抗イディオタイプ、CAMPATH-1およびリツキシマブ(rituximab)が挙げられる。リツキシマブは全体的な反応割合が48％、および反応期間11.7ヶ月の後の、再発性または難治性の低悪性または濾胞性Ｂ細胞非ホジキン性リンパ腫に対して米国で認可された最初の治療であった。
【０００６】
リツキシマブは、ヒトIgG1κ定常部をマウス可変領域と共に含有するキメラ抗CD-20モノクローナル抗体である。リツキシマブの抗リンパ腫効果は、おそらく、補体および抗体依存性の細胞媒介性細胞傷害毒性、ならびにアポトーシスの誘発に起因する。フェーズIIでの試験により、緩徐進行型Ｂ細胞非ホジキン性リンパ腫、特に濾胞性リンパ腫の患者におけるリツキシマブ単独の強い活性が示されている。さらに近年では、リツキシマブはびまん性大細胞型リンパ腫、マントル細胞リンパ腫および他のＢ悪性腫瘍にも活性であることが示されている。インビボパージング(in vivo purging)にリツキシマブを利用して良好な結果が得られている。しかしながら、リンパ組織増殖性障害の治療におけるリツキシマブの明確な位置は未だに見出されていない。
【０００７】
比較的低用量の抗体の反復投与を可能とし、かなり長期の治療反応を達成するために有毒な薬剤を加える必要性により制限されない、Ｂ細胞悪性腫瘍に対する免疫療法を開発する必要性がある。
【０００８】
関連文献
リツキシマブの使用に対する概説は、Hainsworth (2000)、The Oncologist 5: 376-384に見出すことができる。治療の説明は、Byrdら、(2000) J. Clin. Oncol. 19: 2153-2164；McLaughlinら、(2000) Semin. Oncol. 27: 37-41；Davisら、(2000) Clin. Cancer Res. 6: 2644-2652により提供されている。リタキサン(Rituxan)を用いる形質細胞異常症の治療は、Treonら、(1999) Semin. Oncol. 26 (5 Suppl 14): 97-106に記載されている。
【０００９】
対象の特許としては、米国特許番号6,171,586、5,776,456、6,224,866および6,183,744が挙げられる。
【００１０】
発明の要旨
Ｂ細胞過剰増殖障害を治療するための併用療法として、γ-インターフェロン(IFN-γ)と組合せたＢ細胞特異的抗体の使用に関する組成物および方法を提供する。標的化細胞を、これらの化合物と局所的または全身的に接触させる。相乗的な組合せは、例えば、有害な副作用を低下させる可能性を有すると同時に、反応速度の増加(部分的または完全な反応と定義)、再発期間の延長、または疾患進行に対する時間の増加に対し、同等または改善された治療効果を提供し得る。
【００１１】
態様の詳細な説明
過剰増殖性Ｂ系統細胞(Ｂ細胞起源の白血病およびリンパ腫等)上の決定基を認識する治療用抗体は、併用療法としてIFN-γと組合せて投与される。単独で投与した場合に抗体はいくらかの利点を提供するが、IFN-γの免疫変調効果は治療を強化する。特に目的の抗体としては、抗CD20抗体(例えば、リタキサン(rituxan)。これはＢ細胞悪性腫瘍に有効であることが示されている)が挙げられる。標的化細胞をこれらの薬剤と局所的または全身的のいずれかで(通常は全身的に)接触させる。本発明の方法は、過剰増殖障害の治療的処置および研究に関する方法を提供する。動物モデル(特にマウス、ウサギ等のような小型哺乳動物)は実験研究に対する対象物(of interest)である。
【００１２】
本発明の方法は、予防目的または治療目的のために使用される。本明細書中で用いる用語「治療(処置)」は、被検体の症状の減少または緩和、症状の悪化または進行の予防、原因物質の阻害または排除、あるいは治癒している患者における障害の予防を意味する。例えば、癌患者の処置は、腫瘍サイズの減少、悪性細胞の排除、転移の予防、または最初は治療に対して反応性であった患者の再発の予防を生じ得る。患者の臨床的症状を安定または改善するための進行中の疾患の治療は、特に対象のものである。このような治療は、望ましくは、罹患組織の機能を完全に損失する前に行なわれる。
【００１３】
腫瘍抗原を認識する抗体の抗増殖性効果は、補体および抗体依存性細胞媒介性細胞傷害毒性(ADCC)およびアポトーシスの誘発に起因すると考えられている。本発明の方法は、これらの殺傷機構を増強し得る。例えば、INF-γは血中単球および多形核細胞(好中球および好酸球等)(これらの細胞はADCCに関連している)上のFcレセプターの発現を上昇させることが公知である。好ましい実施態様において、IFN-γは免疫変調活性を開始するために抗体の投与前に投与される。ADCCを強化する他の免疫変調薬剤もまた、IFN-γ(G-CSF、GM-CSF、IL-10およびTGF-β等) と組合せて投与され得る。
【００１４】
語句の定義
本発明は、本明細書中に記載する新規な組成物および方法を提供する。通常、本明細書中で用いる技術用語および化学用語は全て、特記しない限り、本発明が属する分野の当業者により一般的に理解される意味と同一の意味を有する。明確さのため、本発明を説明するために本明細書中で用いた特定の用語に関する定義を以下に列挙する。これらの定義は、はっきりと特記する場合を除き、本明細書を通じて用いられる用語に対して当てはめられる。
【００１５】
本明細書中で用いられる単数形態の語句「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈がはっきりとそうではないことを示す以外は、複数を含む。例えば、「化合物」は、化合物１種以上を意味し、他方、「(ある)タンパク質」は特定のタンパク質および当業者に公知の他のファミリーメンバーおよびそれらの等価物を意味する。
【００１６】
［インターフェロン-γ］
IFN-γポリペプチドをコードする核酸配列は、Genbank、雑誌刊行物(journal publications)等の公共のデータベースからアクセスすることができる。種々の哺乳動物IFN-γポリペプチドがヒト疾患の治療に関して対象のものであるが、通常、ヒトタンパク質が使用される。ヒトIFN-γをコードする配列は、Genbankに見つけることができる(Accession No.X13274；V00543およびNM_000619）。対応するゲノム配列は、Genbankに見つけることができる(Accession No. J00219；M37265およびV00536）。例えば、Grayら、(1982) Nature 295：501 (Genbank X13274)およびRinderknechtら、(1984) J.B.C. 259：6790を参照のこと。
【００１７】
本発明の組成物に用いるIFN-γは、それらがIFN-γ活性、特にヒトIFN-γ活性を有する限り、任意の天然のIFN-γ、組換えIFN-γおよびそれらの誘導体であってよい。ヒトIFN-γは、インターフェロンの特徴である抗ウィルスおよび抗増殖特性、ならびに当該分野において公知の多数の他の免疫変調活性を示す。IFN-γは上記の配列に基づくが、タンパク質産生およびタンパク質分解的処理によりそれらのプロセシング変異体を生じ得る。Grayら(上記)により提供されるプロセシングされていない配列は166アミノ酸からなる。大腸菌内で産生された組換えIFN-γは本来は146アミノ酸であると考えられたが、(20位のアミノ酸で始めて)ネイティブなヒトIFN-γは23位の後で切断されて143aaタンパク質または144aaタンパク質(細菌内での発現のために必要とされる、末端メチオニンが存在する場合)を生じることがその後見出された。精製の間に、成熟タンパク質はさらに162位の後のＣ末端で切断され(Grayらの配列と称する)、139アミノ酸または140アミノ酸(例えば、細菌での発現に必要とされる場合等の最初のメチオニンが存在する場合)のタンパク質が生じる。大腸菌の発現が処理されない特定の場合において、Ｎ末端メチオニンはmRNA翻訳「開始」シグナルAUGによりコードされる人工物である。他の細菌系または真核生物発現系ではメチオニンは取り除かれ得る。
【００１８】
本発明の方法での使用のために、ネイティブなIFN-γペプチド、その改変体および変異体、１種以上のペプチドの組換え物のいずれかが使用され得る。本発明のIFN-γペプチドはフラグメントを含み、全長配列と比較してカルボキシ末端で様々に短縮され得る。このようなフラグメントは、24位〜149位のアミノ酸(未処理のポリペプチドの残基から番号付ける)が存在する限りはヒトγインターフェロンの特徴的な性質を示しつづける。本質的ではない配列は、活性の損失を伴わずに155位のアミノ酸以下のアミノ酸配列を置きかえることができる。例えば、米国特許番号5,690,925(本明細書中に参照して組み込む)を参照。ネイティブなIFN-γ部分としては、24-150、24-151、24-152、24-153、24-155および24-157位のアミノ酸残基にわたる、種々にわたる分子が挙げられる。これらの任意の変異体および当該分野において公知であり、そしてIFN-γ活性を有する他の変異体が、本発明の方法で用いられ得る。
【００１９】
IFN-γポリペプチドの配列は、配列中に標的化変化を作製するために当該分野において公知の様々な方法で変更され得る。変異体ポリペプチドは通常、本明細書中に提供される配列と実質的に類似である。すなわち、少なくとも１つのアミノ酸で異なり、少なくとも２個以上10個未満のアミノ酸で異なってもよい。配列の変化は置換、挿入または欠失であり得る。計画的にアラニンまたは他の残基を導入するスキャニング変異を、鍵となるアミノ酸を決定するために用いることができる。本発明の具体的なアミノ酸置換としては。保存的変化および火保存的変化が挙げられる。保存的アミノ酸置換としては、代表的には、以下のグループ内での置換が挙げられる：(グリシン、アラニン)；(バリン、イソロイシン、ロイシン)；(アスパラギン酸、グルタミン酸)；(アスパラギン、グルタミン)；(セリン、スレオニン)；(リシン、アルギニン)または(フェニルアラニン、チロシン)。
【００２０】
１次配列を変更しない本発明の修飾としては、ポリペプチドの化学的誘導体化(アセチル化またはカルボキシル化等)が挙げられる。合成およびプロセシングの間にポリペプチドのグリコシル化パターンを修飾することにより作製される修飾、またはさらなるプロセシング工程、例えば、グリコシル化に影響をあたえる酵素(哺乳動物グリコシル化または脱グリコシル化酵素等)にポリペプチドを曝すことによる修飾等のグリコシル化の修飾もまた含まれる。ホスホリル化アミノ酸残基(ホスホチロシン、ホスホセリンまたはホスホスレオニン等)を有する配列もまた含まれる。
【００２１】
通常の化学技術を用いて、タンパク質分解的消化に対する抵抗性を改善するため、溶解性特性を最適化するため、または治療薬剤としてより適切にするために修飾されているポリペプチドが本発明の範囲内に含まれる。例えば、ペプチド骨格を環状にして安定性を上昇させることができる(Friedlerら、(2000) J. Biol. Chem. 275：23783-23789）。天然に存在するL-アミノ酸以外の残基(例えば、D-アミノ酸または天然に存在しない合成アミノ酸)を含む類似体を用いることができる。タンパク質は安定性を上昇させるためにペグ化(pegylate)することができる。
【００２２】
ポリペプチドは、当該分野において公知の従来方法を用いるインビトロ合成、組換え方法により製造することができるか、またはタンパク質を誘導した細胞、またはタンパク質を自然に産生する細胞から単離することができる。特定の配列および製造様式は、簡便性、経済性、必要とする純度などにより決定する。望ましい場合、合成の間または発現の間に種々の基をポリペプチドに導入することができ、これは他の分子または表面への連結を可能とする。したがって、チオエーテルを作製するためのシステイン、金属イオン錯体への連結のためのヒスチジン、アミドまたはエステル形成のためのカルボキシル基、アミドを形成するためのアミノ基等を用いることができる。
【００２３】
また、通常の組換え合成方法にしたがって、ポリペプチドを単離または精製することができる。溶解物を発現宿主から製造し、溶解物をHPLCを用いてクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、アフィニティクロマトグラフィーまたは他の精製技術をを用いることなく精製し得る。大部分では、用いられる組成物は、生成物の製造方法およびその精製に関連した筴雑物に対して少なくとも20重量％の所望の生成物を含有し、より一般的には少なくとも75重量％(好ましくは少なくとも約95重量％)で含有し、治療目的のためには通常は少なくとも約99.5重量％で含有する。通常、割合は全タンパク質に基づく。
【００２４】
［Ｂ細胞特異的抗体］
本発明の目的に関して、本発明の抗体は、Ｂ細胞、特に過剰増殖性Ｂ細胞(Ｂ系統リンパ腫および白血病等)等に存在する抗原に特異的に結合する。用語「抗体」は最も広い意味で用いられ、具体的には、それらが所望の生物学的活性を示す限り、モノクローナル抗体(全長モノクローナル抗体を含む)、ポリクローナル抗体、多特異的抗体(二特異的抗体等)および抗体フラグメントを含む。フラグメントは全長抗体の一部を含み、通常、その抗原結合領域または可変領域を含む。抗体フラグメントの例としては、Fab、Fab'、F(ab')2およびFvフラグメント、二重特異性抗体(diabody)、線状抗体、１本鎖抗体分子および抗体フラグメントから形成される多特異的抗体が挙げられる。本発明のいくつかの局面において、１種以上の抗体の、単独の抗原のエピトープまたは複数の抗原のいずれかに関する異なる特異性との組合せが使用され得る。
【００２５】
Ｂ細胞上で特異的に見出されるマーカーとしては、B220エピトープ(CD45R)(これは、基本的には全てのＢ細胞上で見出されるエキソン特異的エピトープであり、Ｂ細胞の発達を通じて維持される)(Coffman ら、(1982)Immunol. Rev. 69：5-23)が挙げられる。Ｂ細胞マーカーであるCD19、CD20、CD22、CD23はＢ細胞上で選択的に発現され、Ｂ細胞悪性腫瘍と関連している(KalilおよびCheson (2000) Drugs Aging 16(1)：9-27；米国特許番号6,183,744、これは本明細書中に参照して組み込む)。表面免疫グロブリン(定常部またはイディオタイプ決定基上に存在するエピトープを含む)はＢ細胞に特異的なマーカーであり、免疫療法に利用されている (Casparら、(1997) Blood 90 (9)：3699-706)。MB-1抗原は全ての正常な免疫グロブリン(Ig)発現細胞で見出されるが、Ｔ細胞、胸腺細胞、顆粒球または血小板で見出され、事実上全てのIg発現Ｂ細胞抗原腫瘍で発現される(Linkら、(1986) J Immunol 137 (9)：3013-8)。非ホジキン性リンパ腫上などで発現されることが知られている対象となる他のＢ細胞抗原としては、Muc-1、B5、BB1およびT9である(Freedmanら、(1987)Leukemia 1 (1)：9-15)。
【００２６】
特に興味深いものとしては、CD20抗原(Bp35としても公知)がある。CD20は、初期前Ｂ細胞発達の間に発現され、血漿細胞分化まで維持されるヒトＢ細胞マーカーである。CD20分子は細胞サイクル開始および分化に必要とされる活性化プロセスでの工程を調節し、通常、新生物Ｂ細胞上で非常に高レベルで発現される。したがって、CD20表面抗原は、Ｂ細胞リンパ腫を治療するために標的化することができる。米国特許番号5,736,137(本明細書中に参照して組み込む)は、CD20抗原に結合するキメラ抗体「C2B8」およびＢ細胞リンパ腫を治療するためのその使用を記載する。
【００２７】
好ましい態様において、抗体はモノクローナル抗体である。モノクローナル抗体は個々の抗原部位に対して指向的であるので非常に特異的であり、各モノクローナル抗体は抗原上の個々の決定基に対して指向的である。例えば、本発明で用いるモノクローナル抗体はハイブリドーマ法(最初にKohlerら (1975) Nature 256：495により記載された)により製造するか、または組換えDNA法 (例えば、米国特許番号4,816,567参照)により製造することができる。また、モノクローナル抗体は、Clacksonら(1991) Nature 352：624-628 (1991)およびMarksら(1991) J. Mol. Biol. 222：581-597 (1991)等に記載の技術を用いてファージ抗体ライブラリーから単離することもできる。臨床用途のためには、モノクローナル抗体は非ヒト抗体のヒト化形態であってもよい。これらはヒトおよび非ヒト免疫グロブリンの両方に由来する配列を含むキメラ抗体である。大部分に関しては、ヒト化抗体は、患者の超可変領域由来残基が所望の特異性、親和性および効力(capacity)を有する非ヒト種の超可変領域由来の残基で置きかえられているヒト免疫グロブリンである。
【００２８】
本明細書中で用いる特異性とは、抗体の親和性および他の抗原との交差反応性を意味する。抗体相互作用が「特異的」であるとみなすためには、目的のエピトープに対して親和性は少なくとも約10-7Mであり、通常、約10-8〜10-9Mであり、10-11まで、またはそれ以上であるかもしれない。当業者であれば、用語「特異性」はこのような高親和性結合を意味し、抗体が他の分子に同様に結合できないことを意味するものではないことを理解する。抗原配列または構造の関連性、または、抗体結合ポケット自体の構造などに起因する、異なるエピトープとの交差反応性を見出すことができる。このような交差反応性を示す抗体は、やはり本発明において特異的であるとみなされる。
【００２９】
［Ｂ細胞過剰増殖障害］
過剰増殖障害または悪性腫瘍は、無秩序な細胞増殖が存在する状態である。本発明の方法は、Ｂ細胞系統の細胞 (代表的には、Ｂ系統マーカーを発現する前造血前駆細胞、前(pro-)Ｂ細胞、前駆(pre-)Ｂ細胞、Ｂ細胞および記憶Ｂ細胞、ならびに通常このようなＢ系統細胞上で見出されるマーカーを発現するものを含む) に由来する過剰増殖障害に関する。本発明に関して、通常、血漿細胞悪性腫瘍は除外される。
【００３０】
特に重要なものは、非ホジキン性リンパ腫 (NHL)であり、これは治療に対して異なるパターンの挙動および反応を有する、多様な群のリンパ組織増殖性悪性腫瘍である。ホジキン病と同様に、通常、NHLはリンパ系組織を起源とし、他の組織に播種し得るが、NHLはホジキン病ほど予想可能ではなく、節外部位に転移するかなり高い選択性を有する。NHLは２種類の予後群、緩徐進行型リンパ腫および急速進行型リンパ腫に分けることができる。無症候性NHL型は、比較的良好な予後を有し、10年もの長い中央値生存を有するが、進行期の臨床段階では通常は治癒可能ではない。急速進行型NHLはより短い自然歴を有する。これらの患者の多数は、集中的併用化学療法レジメを用いて治癒することができるが、かなりの数の再発(特に治療後最初の２年以内)がある。
【００３１】
NHLの中でも、種々のＢ細胞新生物が存在する(前駆B-リンパ芽球白血病/リンパ腫；末梢B-細胞新生物(Ｂ細胞慢性リンパ性白血病等)；前リンパ球性白血病(prolymphocytic leukemia)；小型リンパ球性リンパ腫；マントル細胞型リンパ腫；濾胞中心細胞性リンパ腫；辺縁層Ｂ細胞リンパ腫；脾辺縁層リンパ腫；有毛細胞白血病；びまん性大型Ｂ細胞性リンパ腫；バーキットリンパ腫；高悪性度Ｂ細胞リンパ腫(バーキット様)；等)。
【００３２】
濾胞性リンパ腫は、米国および欧州での臨床試験で報告されている緩徐進行型リンパ腫の70％を構成する。濾胞性リンパ腫を有する患者のほとんどは50歳以上であり、診断時に広範に広がった疾患を示す。節性転移(involvement)は非常に一般的であり、しばしば、脾臓および骨髄の疾患を伴っている。進行期の濾胞性リンパ腫を有する患者のほとんど大部分は現在の治療選択肢では治癒せず、患者が治療に対して完全な反応を有した場合でさえ、かなり一貫して再発割合がある。サブタイプには、濾胞性(核に切れ込みを有する小細胞型(follicular small cleaved cell))(１期)および濾胞性混合細胞型(小型の核に切れ込みを有する細胞と大細胞)(follicular mixed small cleaved and large cell)(２期)が挙げられる。
【００３３】
辺縁層リンパ腫は、これまでびまん性小細胞型リンパ腫に含まれていた。辺縁層リンパ腫が節に転移している場合、単球様Ｂ細胞性リンパ腫とよばれ、節外部位(胃腸管、甲状腺、肺、胸部、皮膚)に転移している場合には粘膜関連リンパ組織(MALT)リンパ腫と呼ばれる。多数の患者は自己免疫疾患(橋本甲状腺炎またはシェーグレン症候群)またはヘリコバクター胃炎の病歴が有る。ほとんどの患者はＩ期またはII期の節外疾患を示し、ほとんどは胃におけるものである。リンパ節、骨髄または血液に播種した場合、これは他の低悪性度リンパ腫と同様に挙動する。MALT部位のＢ細胞性大細胞型リンパ腫は、びまん性大細胞型リンパ腫と分類され、治療される。
【００３４】
脾辺縁層リンパ腫は、巨大脾腫(massive splenomegaly)および末梢血および骨髄転移により特徴付けられるが、リンパ節腫脹を伴わない緩徐進行型リンパ腫である。このタイプのリンパ腫は、Ｂ細胞性慢性リンパ性白血病の異常変異体である絨毛リンパ球を有する脾リンパ腫として公知である。治療管理(management)は他の低悪性度リンパ腫と同様であるが、このリンパ腫は、通常は慢性リンパ性白血病に有効である化学療法に対する反応性があまり良くない。
【００３５】
急速進行型NHLのなかにびまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫があり、これは非ホジキン性リンパ腫の中で最も一般的であり新規診断症例の30％を構成する。ほとんどの患者は急速に巨大化する腫瘤(mass)を示し、しばしば、局所症状および全身症状の両方を示す。治療後の再発は珍しいことではなく、種々の危険因子の存在に依存する。別の急速進行型は、濾胞性大細胞型リンパ腫である。
【００３６】
リンパ腫様肉芽腫症は、EBV陽性の大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫であり、背景にＴ細胞の増加を伴う。組織学的には、血管浸潤(angioinvasion)および脈管炎が共に示され、通常、肺の病変または副鼻腔転移として現れる。患者は、びまん性大細胞型リンパ腫を有する患者と同様に治療管理する。
【００３７】
縦隔原発Ｂ細胞性リンパ腫は、組織学的に重篤な線維症により特徴付けられるびまん性大細胞型リンパ腫のうちの１つである。患者は通常若い女性である。患者は、呼吸器症状または上大静脈症候群を引き起こすかもしれない局所的な浸潤性前縦隔腫瘤を示す。治療および予後診断は、胸水を伴う進行期患者(この患者はきわめて予後診断がよくない。滲出の細胞学的な陽性または陰性にかかわらず、無進行生存率は20％未満である）を除いてびまん性大細胞型リンパ腫を有する他の同等のステージ型の患者に関するものと同一である。
【００３８】
マントル細胞リンパ腫は、リンパ節、脾臓、骨髄、血液およびしばしば胃腸管系(リンパ腫性ポリポーシス)に見出される。マントル細胞型リンパ腫は、CD5陽性型濾胞性マントルＢ細胞、第11および14染色体の転座およびサイクリンD1タンパク質の過剰発現により特徴付けられる。生存中央値は他のリンパ腫よりも有意に短く(３〜５年)、この組織学は現在、急速進行型リンパ腫であるとみなされている。びまん型および芽球様細胞変異体はより短い生存期間の急速進行型の経過を有するが、一方マントル辺縁型はおそらくもっと緩徐進行型の経過を有する。化学療法に対する不応期が一般的な特徴である。
【００３９】
リンパ芽球性リンパ腫は非常に急速進行型のNHLである。しばしば若い患者で生じるが、これに限らない。通常、縦隔の巨大腫瘤を伴い、骨髄および中枢神経系(CNS)に播種する傾向が高い。治療は、通常、急性リンパ芽球白血病(ALL)に準じたものである。これらの型のNHLは進行は非常に急速であるため、診断確定後の併用化学療法は迅速に開始される。病理標本、骨髄穿刺および骨髄生検、脳脊髄液細胞診およびリンパ球マーカーの注意深い検討が、治療前の病期決定に最も重要である。
【００４０】
バーキットリンパ腫/びまん性核に切れ込みを有しない小細胞型リンパ腫は、通常、若い患者に関するものであり、小児非ホジキン性リンパ腫で最も頻度の高い型を示す。この急速進行型節外性Ｂ細胞リンパ腫は、第８染色体上のc-myc遺伝子の転座および異常発現(deregulation)により特徴付けられる。c-mycおよびbcl-2の２重転座を有する患者群は、強力な治療にもかかわらず結果はかなり良くない。バーキットリンパ腫/びまん性核に切れ込みを有しない小細胞型リンパ腫の治療には、進行期の急速進行性リンパ腫に使われるのと同じ強力な多剤併用化学療法が含まれる。
【００４１】
心臓、肺、肝臓、腎臓または膵臓の移植を受けた患者は、通常、生涯にわたって免疫陽抑制を必要とする。このため、移植後リンパ増殖障害(これは急速進行性リンパ腫として発現する)を生じる可能性が有る。病理医は、多クローン性Ｂ細胞増殖症を単クローン性Ｂ細胞リンパ腫を区別することができるが、両方ともほとんどがEBVが関与している。場合によっては、通常多クローン性の疾患に関してだが、免疫抑制剤の中止がリンパ腫の消滅を生じる。これが奏功しないか、または可能ではない場合には、併用療法が行なわれる。EBV陰性の移植後リンパ増殖性障害は後になってから生じ、予後は特に不良である。
【００４２】
慢性リンパ性白血病（CLL）は、形態学的には成熟しているが免疫学的には成熟度が低いリンパ球の障害であり、血、骨髄およびリンパ組織にこのような細胞が進行的に蓄積することによって発症する。通常、血中のリンパ球数は１立方ミリメートルあたり10,000以上である。現在、治癒可能な治療法は存在しない。CLLは主に中年で発症し、長い人生にわたって個体の年齢が上がれば上がるほど、頻度が上昇する。この疾患の臨床経過は、この他の明らかな疾患を伴わない緩徐進行性リンパ球増加症から、同時に汎血球減少症を伴う全身性のリンパ組織腫大へと進行する。汎血球減少症(出血および感染を含む)の合併症がこれらの患者の主な死因である。クームス陽性の溶血性貧血、免疫性血小板減少症および免疫グロブリン値の低下を含む免疫学的異常はいずれも、CLLの管理を複雑にする可能性がある。CLLリンパ球はＢ細胞抗原であるCD19およびCD20をＴ細胞抗原であるCD5と同時に発現する。CLLのB細胞は、（正常な末梢血Ｂ細胞と比較して）比較的低いレベルの膜表面免疫グロブリンおよび１種の軽鎖（κまたはλ）を発現する。CLLは、リンパ球増加症での明白な増加、および/または形態学的特徴および免疫表現型の特徴を伴う骨髄浸潤により診断される。
【００４３】
AIDS関連リンパ腫は、狭い範囲の病理学的な型からなり、そのほとんどが急速進行型のB細胞腫瘍である。これらには以下が含まれる：びまん性大細胞型リンパ腫、B免疫芽球性リンパ腫および核に切れ込みのない小細胞型リンパ腫（バーキット型またはバーキット様）。HIV関連リンパ腫は、以下のように分類し得る：原発性中枢神経系リンパ腫（PCNSL）、全身性リンパ腫および原発性滲出性リンパ腫。これらのリンパ腫はすべて、分子的特徴、病因の推定メカニズム、治療および臨床結果の点で非HIV関連リンパ腫とは異なる。病理型３つは全て等しく分布しており、急速進行型疾患を示す。一般に、AIDS関連リンパ腫の患者の臨床条件および治療に対する反応は非HIV性のリンパ腫患者とは非常に異なる。急速進行型リンパ腫を有するHIV感染患者は通常、しばしばリンパ節外の進行期疾患を伴う。臨床経過はより急速進行型であり、疾患はさらに広範囲にわたり、化学療法に対する反応性がより低い。初期症状(initial presentation)時のこれらの患者に共通する免疫不全や血球減少症は、化学療法の投与により悪化する。したがって、悪性腫瘍の治療は日和見感染の危険性を上昇させ、次いで適切な治療の送達をさらに危険に曝す。
【００４４】
急性リンパ球性白血病(ALL)は、部分的にはフィラデルフィア(Philadelphia)(Ph)染色体の存在に依存して、通常、急速進行型の経過を有する。Ph染色体ポジティブのALLを有する患者は化学療法ではほとんど治癒しない。Ph染色体を特徴とするbcr-abl融合遺伝子の分子学的証拠を有する患者のほとんどは、細胞遺伝学による異常染色体の証拠を有さない。
【００４５】
本発明の方法は主にNHLに適用されるが、処置がホジキン性リンパ腫(悪性多核巨細胞を伴う多形態性リンパ球浸潤により特徴付けられるリンパ腫)で用いられる場合もある。ほとんどの場合のホジキン病は、おそらく免疫グロブリンを合成することができない胚中心Ｂ細胞から生じる。開発途上国の症例のほとんど、および米国での約１／３は、リード・シュテルンベルグ細胞中のエプスタインバーウィルスの存在に関連している。治療ストラテジーは、Ｂ症候群の存在、組織学的サブタイプ、性別および性的成熟を含む多数の因子に依存する。
【００４６】
［医薬製剤］
活性成分の生物学的活性を明白に有効にするような形態であり、製剤を投与する被検体に対して毒性である成分は含有しない製剤。製薬上許容される賦形剤(ビヒクル、添加物)は、被検体に対して合理的に投与することができて用いられる活性成分を有効な用量で提供し得るものである。Ｂ細胞障害は血中またはリンパ節中で頻繁に見出されるので、被検体の併用治療の投与経路は、好ましくは非経口経路である。本明細書中で用いる用語「非経口」は、静脈内、筋肉内、皮下、経直腸、経膣または腹膜内投与を含む。
【００４７】
安定製剤は、基本的にはその中のタンパク質が、保存の際に物理的安定性および／または化学的安定性および／または生物学的活性を保持するものである。タンパク質の安定性を測定するための種々の分析学的な技術が当該分野において利用可能である。安定性は、選択した温度で選択した期間について測定することができる。好ましくは、製剤は室温で少なくとも１ヶ月安定であるか、および／または約２〜８℃で少なくとも１年、好ましくは少なくとも２年安定である。さらに、好ましくは製剤は、製剤の凍結および融解の後に安定である。
【００４８】
免疫学的に活性なＢ細胞に特異的な抗体およびγインターフェロンは、通常、個別に、薬学的に許容される緩衝剤(滅菌生理食塩水、滅菌緩衝水、プロピレングリコール、上記の組合せ等)中に標準的技術により処方される。非経口投与用薬剤の製造方法は、Pharmaceutical Carriers＆Formulations, Martin, Remington's Pharmaceutical Sciences, 第15版 (Mack Pub. Co., Easton, Pa. 1975)(これを本明細書中に参照して組み込む)に記載されている。さらに具体的には、本発明の化合物を、適切な薬学的に許容されるキャリアまたは希釈剤との組合せにより医薬組成物に製剤化し、固体、半個体、液体またはガス状形態(錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、軟膏、液剤、坐剤、注射剤、吸入剤、ゲル剤、マイクロスフェアおよびエアロゾル等) で製剤中に処方することができる。
【００４９】
医薬投薬形態では、化合物は製薬上許容される塩の形態で投与され得る。これらはまた、他の薬学的に活性な化合物と適切に関連して使用され得る。化合物は、水性または非水性溶媒(植物性油または他の類似する油、合成脂肪酸グリセリド、高級脂肪酸またはプロピレングリコールのエステル等)中で、望ましい場合には通常の添加剤(可溶化剤、等張化剤、懸濁剤、乳化剤、安定化剤および保存剤)と共に、溶解、懸濁または乳化することにより注射用製剤に処方することができる。
【００５０】
本明細書中で用いる用語「単位投薬形態」は、ヒトおよび動物被検体用の単位投薬として適した物理的に別個の単位を示し、各単位は、所望の効果を生じるに十分な量と計算されている、所定の量の本発明の化合物を、製薬上許容される希釈剤、キャリアまたはビヒクルとともに含有する。本発明の単位投薬形態に関する詳細は、用いる具体的な化合物、達成すべき効果、ならびに宿主中の各化合物に関る薬力学に依存する。
【００５１】
使用方法
IFN-γおよびＢ細胞特異的抗体の併用療法は、過剰増殖性Ｂ細胞傷害に罹患した宿主に投与される。化合物は、副作用を最小にすると同時に細胞増殖を実質的に減少させるために適した期間にわたって、有効な併用用量で投与される。インビボでの使用に関して医師の指導のもとで組成物を入手し、使用することが意図される。
【００５２】
IFN-γおよび抗体は、同時、または短時間のうちに、同一かまたは異なる経路で送達することができる。好ましい実施態様では、２成分を個別に処方する。全投与量の１部を異なる経路で投与してもよい。
【００５３】
抗体およびIFN-γのこれらの投薬範囲内での導入は、１回の治療として、または一連の治療にわたって行なうことができる。好ましい態様において、IFN-γを抗体の前、通常少なくとも約１週間前に投与するが、２〜４週間前であってもよい。この方法では、IFN-γの免疫変調活性を抗体治療の前に開始する。次いで、一連の抗体治療の間、通常、IFN-γを維持する。また、ADCCを増強する他の免疫変調薬剤をIFN-γ(G-CSF、GM-CSF、IL-10およびTGF-β等)と組み合わせて投与することができる。抗体に関しては、一連の治療にわたり投薬を行なうことが好ましく、この好ましいアプローチはこれらの疾患に関連した治療方法に基づくものである。１回の投薬により効果を得、疾患治療／治療管理に関して有効に用いることができるが、好ましい治療経過は数段階にわたるものであり、約２〜10週間、最も好ましくは約４週間にわたって最も好ましくは週に１回患者に導入することである。
【００５４】
抗体の有効範囲は約0.001〜約30 mg/体重kg、より好ましくは約0.01〜約25mg/体重kg、最も好ましくは約0.4〜約20.0mg/体重kgの範囲にわたる。他の投薬が実行可能である。投薬に影響を与える因子としては、以下のものが挙げられるがこれらに限定されない。疾患の重篤度、以前の治療アプローチ、患者の全体的な健康、存在する他の疾患等。当業者であれば、特定の患者を簡単に評価し、範囲内の、必要であれば範囲外の適切な投薬量を決定できる。
【００５５】
IFN-γの有効な投薬量は、患者のサイズに依存して約0.5μg/m2〜約500μg/m2の範囲にわたり、通常、約1.5μg/m2〜100μg/m2の範囲にわたる。この活性は、タンパク質50μgあたり106国際単位(IU)に基づく。
【００５６】
当業者であれば、投薬量レベルが特定の化合物、症状の重篤度および患者の副作用に対する感受性の関数として変化し得ることを認識する。所定の化合物に対する好ましい投薬量を、当業者は種々の方法により簡単に決定する。好ましい方法は、所定の化合物の生理学的効力を測定することである。
【００５７】
特定の腫瘍細胞の併用療法を用いた殺傷に対する感受性は、インビトロ試験により決定することができる。例えば、腫瘍細胞の培養物を、併用物を用いて種々の濃度で、活性薬剤が細胞殺傷を誘発し得るために十分な時間の間、合わせる。インビトロ試験に関しては、腫瘍の生検サンプル由来の培養細胞を用いることができる。次いで、処置後に残った生存細胞を計測する。
【００５８】
本発明は特定の方法、プロトコル、細胞株、動物種または属、ならびに記載の薬剤に限定されず、変更され得ることが理解されるべきである。また、本明細書中で用いた用語は特定の態様を説明するためだけのものであり、特許請求の範囲によってのみ限定される本発明の範囲を制限しないこともまた理解される。
【００５９】
本明細書中に記載の刊行物は全て、説明および開示(例えば、刊行物中に記載されている、現在記載されている発明と関連して使用され得る細胞株、構築物および方法)のために参照して本明細書中に組み込む。上記、および文章中の刊行物は、本出願の出願日より前の開示に関してのみ提供するものである。本明細書中の記載は、本発明者らが先行発明による以前の開示に権利を有さないことを認めるものではない。
【国際調査報告】
2005515161.tif 000002
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