(57)【要約】【課題】【解決手段】  本発明は貧血治療用の新規エリスロポエチン皮下注射療法を提供する。本発明の前記新規エリスロポエチン投与療法によって、少ない頻度の投与でヘモグロビンレベルが改善される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
エリスロポエチン治療用の療法であって、
ａ）約２ｇ／ｄＬのヘモグロビン増加が達成されるまで毎週一回薬剤として効果的な量のエリスロポエチンを皮下注射によって患者に投与する工程と、
ｂ）工程ａ）で投与された前記量よりも多いエリスロポエチン量を２週間に一回前記患者に投与する工程と、
を有する療法。
【請求項２】
エリスロポエチン治療用の療法であって、
ａ）約２ｇ／ｄＬのヘモグロビン増加が達成されるまで毎週一回薬剤として効果的な量のエリスロポエチンを皮下注射によって患者に投与する工程と、
ｂ）工程ａ）で投与された前記量よりも多いエリスロポエチン量を３週間に一回前記患者に投与する工程と、
を有する療法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、貧血の治療方法を提供するものであって、週１回の投与でヘモグロビンレベルが上昇した後、投与間隔を一週間以上にすることでヘモグロビンレベルを上昇および維持する代替投与療法である。
【背景技術】
【０００２】
エリスロポエチンは（ＥＰＯ）は、組織低酸素に反応して腎臓によって分泌される糖タンパク質ホルモンであり、骨髄における赤血球生産を刺激する（１）。ＥＰＯに対する遺伝子はチャイニーズハムスター卵巣細胞でクローニングされ発現する（２，３）。このリコンビナントされたヒトエリスロポエチン（エポエチンアルファ、ｒｈＥＰＯ）は、ヒト尿エリスロポエチンのアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を有しており、ｉｎ  ｖｉｖｏ有効性に影響を及ぼすタンパク質グリコシル化に関して違いが存在するが、この２つは機能的および免疫的アッセイベースでは区別することはできない（４，５）。
【０００３】
今までの臨床試験において、ｒｈＥＰＯはさまざまな貧血状態の患者と同様に正常被験者においても評価されている（６，７）。ＥＰＯは、ヘモグロビン合成の増加を補助できる十分な鉄の供給がある場合、正常なヒトボランティアで活発な血液反応を誘導する。（８）。治験の大部分は、透析で維持されている慢性腎不全の治療、および透析での維持がまだなされていない慢性腎不全の治療における、ｒｈＥＰＯの安全性と有効性を調査している。アメリカ合衆国で承認された他の効能（表示）には、癌の化学療法治療に伴う貧血およびヒト免疫不全ウイルス感染のジドブジン治療に関係した貧血を含む。世界的に、ＥＰＯは関節リウマチ、未熟児、骨髄線維症、鎌状赤血球貧血、骨髄移植、熱傷、β‐セラセミアに関係した貧血の治療に、術前の自己血液輸血の促進用として、さらに術前の補助（アジュバント）としても使用される（６，７）。
【０００４】
ｒｈＥＰＯは一般的に広く容認されているが、時折皮膚湿疹（ｓｋｉｎ  ｒａｓｈｅｓ）やじんましんが観察されており、エポエチンアルファ製剤のいくつかの成分、例えばヒト血清アルブミンなど、に対するアレルギー性過敏症が指摘されている。さらに、血液スクリーニングにも関わらず、ヒト血液産物を用いて医薬品が製造される際には、伝染性因子による感染の危険性が存在する。従って、安定で、例えばアルブミンが必要とされるヒト血液産物のないｒｈＥＰＯ医薬製剤が必要とされている。
【０００５】
エポエチンアルファは、標的に対して、ヘモグロビンを上昇させそれを維持するために、週１回の投与で効果的且つ安全に使用されている。最近の取り組みとして、前記投与レベルを増加することによって、および／若しくは血中半減期を増加させるようにエリスロポエチン（ＥＰＯ）を加減することによって、投与頻度を減少させる試みがされている。我々は非ヒト霊長類モデルシステムにおける以下の問題を解決しようと模索した。すなわち、１．）頻度を減らした高用量のＥＰＯ投与と比較して、週１回の投与療法で、標的ヘモグロビンレベルはより早く達成されるか？２）ヘモグロビンレベルが上昇した状態から開始しても、少ない投与間隔頻度でのヘモグロビンレベルの維持に、ｒＨｕＥＰＯは効果があるか？に関してである。霊長類カニクイザルのコホートにヘモグロビンが３〜４ｇ／ｄＬ増加するまで、週１回５０００ＩＵ／ｋｇ  ｓｃ（皮下）の量を投与した。次に、動物を、２週間毎若しくは３週間毎に与えられる二つの異なるＥＰＯ投与レベルグループ（１７，０００若しくは２５，０００ＩＵ／ｋｇ）に無作為に分けた。無作為に分ける際、２番目のコホートの霊長類には１７，０００ＩＵ／ｋｇ若しくは２５，０００ＩＵ／ｋｇのＥＰＯが２週間毎若しくは３週間毎に投与された。動物は１４５日間試験され、週２回ＣＢＣ分析が実行された。ＥＰＯが週１回５，０００ＩＵ／ｋｇ投与された場合、ヘモグロビンの３〜４ｇ／ｄＬ増加は２８日後に観察された。一方、２週間毎に１７，０００若しくは２５，０００ＩＵ／ｋｇ投与された場合、同様な増加は?５０日後に観察された。しかし、一旦標的ヘモグロビンレベルが基準以上の３〜４ｇ／ｄＬを達成すると、ＥＰＯが２若しくは３週間毎に投与された場合には、１ｇ／ｄＬの標的レベル内を維持した。少ない頻度で投与された場合の投与レベルの増加と比較して、週１回の投与処方で投与された場合の方が、標的ヘモグロビンの増加はより早く達成されたと我々は結論を下す。第二に、ｒＨｕＥＰＯは、上昇したヘモグロビンレベルで開始した場合、２若しくは３週間の投与療法で標的ヘモグロビンを維持するのに効果的である。我々の結果は、ヘモグロビンが週１回の投与療法によって増加後、２週間に一度若しくは３週間に一度の投与処方に切り替えるという代替投与療法は、効果的で安全なメカニズムであり、前記患者集団に対して便利性と有効性を提供することを示している。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本研究は、カニクイザルが長期エリスロポエチン研究のモデルとして用いられ得ることを示している。動物には有害な作用のない５，０００ＩＵ／ｋｇから２５，０００ＩＵ／ｋｇのさまざまな濃度が投与された。さらに、観察１５０日まで有害な作用は見られなかった。本研究は、一週間以上の間隔で投与される高用量投与処方に比べて、頻度が多い投与療法の方がヘモグロビン増加においてより効果的であると示している。プライミング（刺激を受けた）期間なしで高用量投与療法で開始された動物は、症例によっては６０日後に２〜３ｇ／ｄＬ増加に到達する。一方、上昇したヘモグロビンレベルで開始された場合、ヘモグロビンレベルの減少が現れることなく２若しくは３週間投与療法で増加したヘモグロビンレベルは維持された。投与量の増加および／若しくは２若しくは３週間療法での投与と比較した場合、ヘモグロビン上昇において高頻度投与療法はより効果的である。週一回の投与で達成された増加ヘモグロビンレベルの後に開始された場合、２若しくは３週間毎に一回のＥＰＯ投与療法はヘモグロビンレベル維持に効果的な療法となるであろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
エリスロポエチンの薬物動態／薬動力学の特性を明らかにするために、カニクイザルに対して、プライミング期間のある状態若しくはない状態で、４ヶ月以上、２週間に１回若しくは３週間に１回皮下注射投与した。
【０００８】
皮下注射用のエリスロポエチンの好ましい組成は、表Ａ若しくは表Ｂに記載されたものを含むが、これらに限定されるものではない。
【０００９】
【表Ａ】
2005530678.tif 000002
【００１０】
【表Ｂ】
2005530678.tif 000003
【００１１】
前記エリスロポエチンは薬剤として効果的な量で前記組成中に存在する。"エリスロポエチン"には、ヒトエリスロポエチンの生物学的活性を有しているそれらのタンパク質が含まれるべきである。また同様にエリスロポエチン類似体と、エリスロポエチンアイソフォームと、エリスロポエチン模倣型と、エリスロポエチン断片と、ハイブリッドエリスロポエチンタンパク質と、融合タンパク質と、上記のオリゴマーおよび多量体と、上記の相同体と、上記のグリコシル化パターン変異体と、上記の変異体とが含まれる。またこれに限定されるものではないが、同じ生物学的活性を問わず、およびそこでの合成方法若しくは製造方法に関わらず、ｃＤＮＡ若しくはゲノムＤＮＡと、合成と、トランスジェニックと、遺伝子活性化方法とから製造されたリコンビナントタンパク質も含まれる。エリスロポエチンの具体的な例としては、エポエチンアルファ（ＥＰＲＥＸ（登録商標）と、ＥＲＹＰＯ（登録商標）と、新規赤血球新生刺激タンパク質（ＮＥＳＰ若しくはダーベポエチン）（欧州特許出願（ＥＰ６４０６１９）に記載されているリコンビナントヒトエリスロポエチン（エポエチン）の過グリコシル化類似体）と、国際特許出願（ＷＯ９９／６６０５４）に記載されているヒトエリスロポエチン類似体‐ヒト血清アルブミン融合タンパク質と、国際特許出願（ＷＯ９９／３８８９０）に記載されているエリスロポエチン変異体と、米国特許（ＵＳ５，６８８，６７９）に記載されているヒトエリスロポエチン遺伝子のＡｐａＩ制限酵素断片から製造されるエリスロポエチンオメガと、国際特許出願（ＷＯ９９／１１７８１）に記載されている変質グリコシル化ヒトエリスロポエチンと、国際特許出願（ＷＯ９８／０５３６３）若しくは米国特許（５，６４３，５７５）に記載されているＰＥＧ共役エリスロポエチン類似体とが含まれる。内因性ヒトエリスロポエチンの発現用に修正された細胞株の具体的な例は国際特許出願（ＷＯ９９／０５２６８及びＷＯ９４／１２６５０）に記載されている。
【００１２】
エリスロポエチンの効果は、その標的血球容量３０から３３％の範囲でその血球容量（ヘマトクリット）を測定することによって観察される。投与調節は、前記血球容量の観察によって行える。エリスロポエチンのシングル使用（頓用）バイアルは一般的に、２，０００、３，０００、４，０００、１０，０００、４０，０００、８０，０００、１００，０００、１２０，０００、若しくはそれ以上のユニットのエリスロポエチン（１ＩＵは約８．４ナノグラム・リコンビナントエリスロポエチンと一致する）を含む。本発明の一実施例における前記処方が維持され、マルチ（複数）投与の利点を提供する場合、前記処方は好ましくはシングル使用（頓用）バイアルに存在するエリスロポエチンのユニット数の倍数倍のユニット数を含む。本発明には、バイアル当たり１，０００から１２０，０００ユニット若しくはそれ以上のエリスロポエチンを含む組成が含まれる。特に、エリスロポエチンを皮下に投与する場合、効果的な量は一般的に体重当たり約１から５００Ｉ．Ｕ．／ｋｇであり、より好ましく５０から３００Ｉ．Ｕ．／ｋｇであると考えられている。前記効果的な量はさらに、治療される被験者の種類やサイズと、治療される特定の状態若しくは病気およびその重症度と、投与手段とに依存する。どのような場合においても使用される前記投与は、前記被験者に対して非毒性であるべきである。
【００１３】
以下の例で本発明を説明している。しかし、それと同様なものに限定されるものではない。
【実施例１】
【００１４】
非ヒト霊長類研究は、２週間および３週間に一回、一連の負荷投与と共に若しくはそれなしでＥＰＯを皮下投与し、４ヶ月の期間評価する研究から始めた。この研究は、ＥＰＯの週１回若しくは週３回の投与療法の後、概念的に説明された。本研究の目的は、ヘモグロビンレベルが一連の週１回の投与によって上昇した場合、頻度を減らした投与療法に切り替えることができるという前記仮定を検証することであった。我々はプロトコルの設計を開始した、そこでは、動物のグループが２若しくは３週間毎に投与される高用量の投与療法（１７，０００若しくは２５，０００ＩＵ／ｋｇ）へ分けられる時点の、２から４ｇ／ｄＬのヘモグロビンの増加が得られるまで、前記動物は週１回（５０００ＩＵ／ｋｇ）投与される。前記"プライミングされた（刺激を受けた）"動物のグループは、通常のヘモグロビンレベルで開始された、同じ高用量投与を投与されたグループと一致した。この結果は、図１から図５に示されている。
【００１５】
【表Ｃ】
2005530678.tif 000004
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】６匹のカニクイザル（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）に、５，０００ＩＵ／ｋｇを１、８、１５、２２日目に投与した。動物は１５０日目まで試験された。血清中エリスロポエチンレベルおよび血液分析のために、末梢血が一週間に２回回収された。グラフに示されるように、ヘモグロビン濃度の３〜４ｇ／ｄＬ増加が２８日以内に観察される。ヘモグロビンレベルの下降が、７４日目までに投与を始めた基準まで戻っているのが観察される。有害な作用は１５０日目まで観察されなかった。この結果は、カニクイザルはエリスロポエチンのＰＫ／ＰＤパラメーターを評価するための長期間の試験に使用できることを証明している。
【図２】カニクイザルの２つのグループに、ヘモグロビンレベルを試験開始レベル以上の３〜４ｇ／ｄＬに上昇させるため、週１回（５，０００ＩＵ／ｋｇ）１、８、１５、２２日目に投与された。その後、１７，０００ＩＵ／ｋｇ若しくは２５，０００ＩＵ／ｋｇを２週間に一回の投与療法（２９、４３、５７、７１、８５、９９、１１３、１２７、１４１日目）に切り替えられた。前記ヘモグロビンレベルは、週１回投与療法で得られた前記レベルの１ｇ／ｄＬ以内に維持されている。３０，０００ＩＵ／ｋｇ投与の方が、１５，０００ＩＵ／ｋｇ投与より、上昇したヘモグロビンをより効果的に維持することができる。
【図３】カニクイザルの２つのグループに、ヘモグロビンレベルを試験開始レベル以上の３〜４ｇ／ｄＬに上昇させるため、週１回（５，０００ＩＵ／ｋｇ）１、８、１５、２２日目に投与された。その後、１７，０００ＩＵ／ｋｇ若しくは２５，０００ＩＵ／ｋｇを３週間に一回の投与療法（２９、５０、７１、９２、１１３、１３４日目）に切り替えられた。前記ヘモグロビンレベルは、週１回投与療法で得られた前記レベルの１ｇ／ｄＬ以内に維持されている。前記３週間に一回の投与療法では、標的ヘモグロビンレベルを前記２週間に一回の投与療法と同じように効果的に維持することができないが、１７，０００ＩＵ／ｋｇと２５，０００ＩＵ／ｋｇ投与の間に違いは観察されなかった。
【図４】カニクイザルのグループに、ヘモグロビンレベルを試験開始レベル以上の３〜４ｇ／ｄＬに上昇させるため、週１回（５，０００ＩＵ／ｋｇ）１、８、１５、２２日目に投与された。その後、１７，０００ＩＵ／ｋｇを２週間に一回の投与療法（２９、４３、５７、７１、８５、９９、１１３、１２７、１４１日目）に切り替えられた。２９日目に第二のグループの動物は、上に示された日から１７，０００ＩＵ／ｋｇを２週間に一回の投与療法で試験が開始された。グラフに示されるように、標準ヘモグロビンレベルで開始した前記グループは９５日目まで前記第一のグループと交差しない。これは試験開始後?６６日目でもそうである。
【図５】カニクイザルのグループに、ヘモグロビンレベルを試験開始レベル以上の３〜４ｇ／ｄＬに上昇させるため、週１回（５，０００ＩＵ／ｋｇ）１、８、１５、２２日目に投与された。その後、２５，０００ＩＵ／ｋｇを２週間に一回の投与療法（２９、４３、５７、７１、８５、９９、１１３、１２７、１４１日目）に切り替えられた。２９日目に第二のグループの動物は、上に示された日から１７，０００ＩＵ／ｋｇを２週間に一回の投与療法で試験が開始された。図４に示されるように、基準ヘモグロビンレベルから開始された前記グループから標的レベルへの前記ヘモグロビン上昇は、一週間に一回の投与療法で得られるヘモグロビン上昇と比べて長い期間がかかる。前記２５，０００ＩＵ／ｋｇの投与は、１７，０００ＩＵ／ｋｇの投与と比較して、より高い水平域（プラトー）ヘモグロビンレベルを維持する。
【図１】
2005530678.tif 000005
【図２】
2005530678.tif 000006
【図３】
2005530678.tif 000007
【図４】
2005530678.tif 000008
【図５】
2005530678.tif 000009
【国際調査報告】
2005530678.tif 000010
2005530678.tif 000011