(57)【要約】イオン組成が、定性的な観点からは海水の組成であり、かつ、定量的な観点からは、一方ではｐＨが４〜９、好ましくは７〜８であり、他方では浸透圧が１５０〜７００、好ましくは２５０〜３５０ｍＯｓｍ／ｋｇである、海水から得られる水性イオン溶液の、特に親水性材料から作られたコンタクトレンズを濯ぐための使用。【特許請求の範囲】
【請求項１】
イオン組成が、定性的な観点からは海水の組成であり、かつ、定量的な観点からは、一方ではｐＨが４〜９、好ましくは７〜８であり、他方では浸透圧が１５０〜７００、好ましくは２５０〜３５０ｍＯｓｍ／ｋｇである、海水から得られる水性イオン溶液の、特に親水性材料から作られたコンタクトレンズを濯ぐための使用。
【請求項２】
‐  好ましくは海水の最低ｐＨ値よりも低いか又はたかだか同じであるｐＨ値、
‐  海水の浸透圧よりも低い浸透圧、及び
‐  イオンの観点からは、定量的観点から一方ではカリウム濃度が海水のものよりも高く、かつ他方ではＮａ、Ｍｇ、Ｃａ、及びＣｌ濃度は海水のものよりも低いことを例外として、定性的及び定量的に海水の組成であり、前記濃度が、
・ Ｎａ＊については１３００〜１５００、好ましくは５００〜１０００ｍｇ／ｌ、
・ Ｋ＊については４５００〜６５００、好ましくは５０００〜６０００ｍｇ／ｌ、
・ Ｍｇ＊＊については５０〜１３００、好ましくは１００〜５００ｍｇ／ｌ、
・ Ｃａ＊＊については２０〜３５０、好ましくは４０〜２００ｍｇ／ｌ、
・  Ｃｌ＊については４０００〜６０００、好ましくは４５００〜５０００ｍｇ／ｌ、
であることを特徴とする、海水から得られる水性イオン溶液の、特に親水性材料から作られたコンタクトレンズを濯ぐための使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はコンタクトレンズのための濯ぎ用溶液に関する。
【背景技術】
【０００２】
市場にあるコンタクトレンズの中で、最も使用されているものは、親水性材料から作られているものである。
２回の連続使用の合間に、これらのコンタクトレンズは、溶液、特に水性溶液、を用いて濯がれる。これはコンタクトレンズを殺菌することを可能にし、夜通しで、これらのレンズは多湿媒体中に保存される。
【０００３】
この種の多くの濯ぎ用溶液が存在する。
それらの親水性のために、これらのレンズは、特にそれらがその溶液中に浸漬されている夜通しの間に、かなりの量のそれら濯ぎ用溶液を吸収する。
目の上におかれた場合、したがってレンズは、問題のその溶液を眼の表面に持ち込み、接触してそれらは塩析されうる。それらが眼を刺激する成分を含む場合、上記レンズを装着した患者は、そのコンタクトレンズの使用を中止しなければならないほど耐えられなくなることがある。
【０００４】
これは、まさに実際に観察されることである；コンタクトレンズに対する不寛容はますます多く、かつ、これらの不寛容のいくらかのパーセンテージは、まさに疑いがもたれる刺激成分の存在がおそらく原因である。
【特許文献１】フランス国特許出願第９９  １６８１４号明細書
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、したがって特に、従来技術の欠点を改善すること、及び、眼を刺激するいかなる成分も含まない、コンタクトレンズのための濯ぎ用溶液を使用者に入手可能にすることである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本出願人は、上で概要を示した要望に従う溶液が、海水から得られる水性イオン溶液であり、そのイオン組成は定性的に海水のものであり、かつ定量的には、一方ではそのｐＨが４〜９、好ましくは７〜８であり、他方ではその浸透圧が１５０〜７００、好ましくは２５０〜３５０ｍＯｓｍ／ｋｇであること、を発見した。
【０００７】
さらに詳しくは、それは海水から得られる水性イオン溶液であり、以下の：
‐  好ましくは、海水の最低ｐＨ値以下のｐＨ値、
‐  海水の浸透圧よりも低い浸透圧、及び
‐  定性的観点から、一方ではカリウム濃度が海水のものよりも高く、かつ他方ではＮａ、Ｍｇ、Ｃａ、及びＣｌ濃度は海水のものより低く、その濃度は、
・  Ｎａ＊については、１３００〜１５００、好ましくは５００〜１０００ｍｇ／ｌ、
・  Ｋ＊については、４５００〜６５００、好ましくは５０００〜６０００ｍｇ／ｌ、
・  Ｍｇ＊＊については、５０〜１３００、好ましくは１００〜５００ｍｇ／ｌ、
・  Ｃａ＊＊については、２０〜３５０、好ましくは４０〜２００ｍｇ／ｌ、
・  Ｃｌ＊については、４０００〜６０００、好ましくは４５００〜５０００ｍｇ／ｌ
であることを除いて、イオンの点からみると組成物は定性的及び定量的に海水の組成である、
によって特徴づけられる。
【０００８】
この水性イオン溶液は、１９９９年１２月３１日に出願されたフランス国特許出願第９９  １６８１４号の主題を形成している。
本発明はしたがって、上述した水性イオン溶液の、コンタクトレンズのための濯ぎ用溶液としての使用に関する。
【０００９】
既に存在するコンタクトレンズのための濯ぎ用溶液に関して本発明に従って使用される溶液の優位性は、後で説明される「インビトロ」試験によって示された。
これらの試験は、ウォン・キルボーン誘導結膜細胞（Wong Kilbourn Derivated Conjunctival Cell ）（ＷＫＤ、ＡＴＴＣＣ２０．２）として公知のヒト結膜細胞株を起源とする細胞を用いて実施された。
これらの細胞は、少なくとも１５分間、一方では本発明に従って用いられる溶液に、そして他方では、それぞれ、Ａｌｌｅｒｇａｎ、Ｃｉｂａ  Ｖｉｓｉｏｎ、Ａｌｃｏｎ、及びＢａｕｓｃｈ  ａｎｄ  Ｌｏｍｂ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓによって、「Ｃｏｍｐｌｅｔｅ」、「ＳｏｌｏＣａｒｅ」、「ＯｐｔｉＦｒｅｅ」、及び「Ｒｅｎｕ」の商標で市場に出されている４種の市販のコンタクトレンズ濯ぎ用溶液中に１００％接触、すなわち、浸漬された。
【００１０】
これらの結膜細胞に生じた影響は、「ＭＩＦＡＬＣ」（生細胞についてのミクロ滴定蛍光定量法）として公知の種々の試験によって評価されたが、これら試験においては、蛍光「プローブ」といわれるものが使用され、接着した生細胞に直接適用される。すなわち：
‐  ニュートラル・レッド試験、
‐  ヘキスト３３３４２又はＨＯ／ヨウ化プロピジウム又はＰＩ試験、
‐  Ｈ２ＤＣＦ‐ＤＡ試験、
‐  ヒドロエチジン試験、
‐  ローダミン１２３試験、
‐  ノニルアクリジンオレンジ（ＮＡＯ）試験、
であり、これらはそれぞれ以下の細胞マーカーについて、試験した溶液の影響を知ることを可能にする：
‐  細胞生死判別、
‐  染色体の凝縮化（アポトーシス）、
‐  反応性酸素種、
‐  スーパーオキサイドアニオン、
‐  ミトコンドリア膜間電圧、
‐  ミトコンドリア量。
【００１１】
ウォン・キルボーン誘導結膜細胞（ＷＫＤ、ＡＴＣＣ  ２０．２）は、５％の二酸化炭素を含む湿潤雰囲気下で３７℃にサーモスタット制御されたインキュベーターの中の７５ｃｍ３フラスコ中で培養される。
用いられる培養液は、ＳＶＫにつき１０％にエンリッチされたＤＭＥＭであり、１％のグルタミン及び抗生物質、特にアンピシリン／カナマイシン、を含んでいる。
上記培養液は２〜３日ごとに交換され、細胞は８０％集密度で、すなわち平均で週１回、トリプシン処理される。
【００１２】
試験は９６ウェルのミクロプレートで実施される。
種々の濯ぎ用溶液を使用して試験される細胞の処理の２４時間前に、９６ウェルのミクロプレートは１ウェル当り５０００細胞の割合で、ＷＫＤ細胞で播種される。
１試験あたり１つのプレート、すなわち、合計８プレートが使用される。
蛍光プローブがＵＶ領域で発光する場合は、黒い端部をもつ特別のミクロプレートを使用することが必要である（特に、ヘキスト３３３４２‐ＨＯ／ＩＰ試験において）。
【００１３】
播種後２４時間に、ミクロプレートは試験される溶液で処理される。
インキュベーションは１５分継続され、さらに列１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、及び１２、並びに行Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、及びＨを含む以下のプレート図にしたがって実施される。
【００１４】
【表１】
2005534440.tif 000002
【００１５】
表中、様々な略語は以下の：
Ｃｏｎ：コントロール＝ＢＢＳ、Ｃｏｍｐ：Ｃｏｍｐｌｅｔｅ、Ｒｅｎｕ：Ｒｅｎｕ、
Ｓｅｒｏ：本発明にしたがって用いられた溶液、Ｏｐｔｉ：ＯｐｔｉＦｒｅｅ、
Ｓｏｌｏ：ＳｏｌｏＣａｒｅ
を表す。
【００１６】
上記溶液は、純粋かつ無菌条件下で使用される。
試験は、この同じ手順で連続して３回繰り返される。
様々な試験において、得られた効果は多かれ少なかれ蛍光強度によって表される。
これ以後、及び先に言及した様々なＭＩＦＡＬＣ試験が実施される方法の序盤において、解説がなされる。
【００１７】
（１．ニュートラル・レッド試験）
この試験においては、細胞生存度、及び膜の完全性に対する試験溶液の影響が評価され、結果は対照（コントロール）に対する蛍光の％で表される。
これらの結果は、「ＳｉｇｍａＳｔａｔ  ３２」統計ソフトウェア・バージョン２（分散及びポストラックテストの解析、ＤＵＮＮＥＴ試験）を用いて解析することができる。
ニュートラル・レッド試験は、ボーレンフロイントの手法（Borenfreund’s protocol）（これは５０μｍｌ／３ｈについて与えられる）にしたがって実施される；この手法は、様々なヨーロッパの多数の中心的研究で使用され、かつ有効と確認されている；物質の細胞毒性の評価のための最も感度の高い１つと考えられている。
ニュートラル・レッドは生体包含染料であり、細胞内での染料の束縛は、細胞生存度及び膜の完全性の関数である。
したがってそれは、平均で接触の２４〜７２時間後での、化学薬品又は物理的変化を生じさせるものの細胞毒性効果を評価することを可能にする。
【００１８】
結果は、未処理対照に対する生存度のパーセンテージとして、通常の方法で表現される。
ニュートラル・レッド試験結果は、ＭｉＦＡＬＣ法（生細胞についてのミクロ滴定蛍光定量試験法）にしたがって、反応の特異性を大きくするために、蛍光定量的検出によって評価される。
これらの条件下でのナチュラル・レッドの検出の感度は、５０ｐｇ／ｍｌである（Rat P. ら、Cell Biol. Toxicol., 1994, 10, 329〜337；Rat P. ら、Methods in Enzymology, 1995, 252, 331〜340）。
【００１９】
（２．ヘキスト３３３４２／ヨウ化プロピジウム試験）
この試験によって、染色体の凝縮化（アポトーシス）、言い換えれば、細胞死メカニズム
（アポトーシス／ネクローシス‐  ＞  ヘキスト／ナチュラルレッド比）
が評価される。
用いられる「ヘキスト３３３４２」は、細胞のＤＮＡの成分であるアデニン又はチミンに対してプローブ特異的である。
ヨウ化プロピジウムでのカウンターラベリングは、正常細胞又はアポトーシスのみにおいて「ヘキスト」の結合を保障するが、なぜなら、ネクローシスにおいて細胞の核又はＤＮＡ細片は、インターカレートするヨウ化プロピジウムによって非常に速やかに染色され、これは次に続く「ヘキスト」の結合を防止するからである。
正常細胞のＤＮＡ上に「ヘキスト」が結合した後は、暗青色の蛍光が観測される。
正常細胞の数が減少する場合、「ヘキスト３３３４２」の蛍光が低下する。
しかし、アポトーシス現象に伴う染色体の凝縮化は、「ヘキスト」の蛍光の過剰発現を生じ、そしてそのためにシグナル／コントロールの蛍光の増加を生じる。
そのため、ＯｐｔｉＦｒｅｅ溶液での処理のわずか１５分後に、シグナルの着実な低下を観測することができる。
それとは対照的に、ＳＯＬＯＣＡＲＥ及びＲＥＮＵ溶液については、コントロールに対して蛍光シグナルは高くとどまり、かつコントロールに対して増加さえする。
このことから、我々が保持している細胞モデルに対するこれらの製品の細胞毒性におけるアポトーシス機構を推定することができる。
【００２０】
（３．ＤＣＦＨ‐ＤＡ（又はＨ２ＤＣＦ‐ＤＡ）及びヒドロエチジン試験）
これらの試験は、可能性のあるラジカルに似たもの（ラジカルライク）の生成、又はさらに正確には、過酸化水素の合成又はスーパーオキサイドアニオンの合成をそれぞれ評価することを可能にする。
ＤＣＦＨ‐ＤＡ又はヒドロエチジン蛍光発生プローブは、フリーラジカル（ＲＯＳ、Ｈ２Ｏ２、スーパーオキサイドアニオン）と接触して緑の蛍光を発する。
この非常に不安定なラジカルライクの生成は、通常の評価手法（細胞の、トリプシン処理、モノディスパージョン．．．．）の人為産物に非常に敏感であり、そのため  冷光細胞蛍光測定技術（ＭＣＣＭ）を用いることが重要で、この技術が、トリプシン処理及び細胞の単分散なしに、接着性生細胞に対してこれらのプローブを直接使用することを可能にする。
【００２１】
これらの人為産物を制限することは、シグナルの質をかなり改善すること及び高レベルの感度（ｐｇ−ｆｇ／ｍｌ）で標準の細胞（線維芽細胞、タン細胞、結膜細胞）に取り組むことを可能にするが、これらの細胞はフローサイトメトリーに用いられる特殊化した細胞（懸濁液中のマクロファージ又は多核細胞）よりも低い基礎ラジカルライクのレベルを有する。
【００２２】
さらに特に、ＤＣＦＨ−ＤＡ試験は、反応性酸素種、主として過酸化水素の評価を可能にする。
Ｈ２ＤＣＦ−ＤＡプローブは、細胞のエステラーゼによって細胞内部で切断される。
形成されるフルオレセイン誘導体であるＨ２ＤＣＦは蛍光性ではないが、緑の蛍光を出すジクロロフルオロセインを形成するため、反応性酸素種（例えば、過酸化水素）と接触して蛍光性になることができる。
したがって、インキュベーション時間（１５、３０、４５、６０分）の関数として、又は試験された様々な生成物の関数として、フリーラジカルの過剰生産を観測することができる。
【００２３】
ヒドロエチジン試験に関しては、蛍光性ではない後者が、スーパーオキサイドアニオンの影響下で蛍光性のエチジン（臭化エチジウム）に変化されることが指摘される。
スーパーオキサイドアニオンのこの特有な反応は、特定の細胞傷害機構におけるこのラジカルの役割を説明することを可能にする。
【００２４】
（４．ローダミン１２３及びＮＡＯ試験）
これらの試験は、合計のミトコンドリア量及び活性を評価することを可能にする。
ミトコンドリアは、多くの分子の細胞毒性機構において、早期の、かつ特別扱いの標的であるようにみえる。
これまで、ミトコンドリア活性の評価は困難であり、非常に扱いにくい装置（微小電極又はＣＭＦレーザー）を必要とした。
ミクロ滴定サイトフローメトリー（ミクロ滴定細胞蛍光測定法）（ＭＣＭ）の新しい方法は、冷光細胞蛍光測定技術（ＭＣＣＭ）を組み込み、生細胞に対して直接に特定プローブの使用を可能にする。
さらに特に、ローダミン１２３（Ｒｈ  １２３）試験は、ミトコンドリアとの特異的結合のため、フローサイトメトリー（ＣＭＩＦ）における周知のプローブである。
ローダミン１２３（Ｒｈ  １２３）蛍光プローブは、したがって、試験される溶液の作用に続く合計のミトコンドリア活性変化を評価するために、生細胞に適用される。
【００２５】
ローダミン１２３の蛍光は、ミトコンドリア膜間電圧に比例する。
ローダミン１２３は、ＭｉＦＡＬＣ（生細胞のミクロ滴定蛍光定量測定法）にしたがって、蛍光定量的検出（Ｅｘｃ．４９０ｎｍ、Ｅｍ．５３５ｎｍ）で評価される。
これらの条件下でのローダミン１２３の検出感度は、２０ｐｇ／ｍｌ（Rat Ｐ. ら、Cell Biol. Toxicol., 1994. 10, 329-3）である。結果の解釈は、対応するＮＡＯ（ノニルアクリジンオレンジ）試験の解析を必要とする。
【００２６】
（５．ノニルアクリジンオレンジ試験）
ノニルアクリジンオレンジ（ＮＡＯ）は、赤色蛍光プローブであり、その蛍光は膜間電圧と独立している。
実際に、ＮＡＯは、ミトコンドリア膜のカルジオリピドに結合する。ミトコンドリア量及び表面が大きいほど、ＮＡＯの固着はその分多くなり、その蛍光はその分強くなる。細胞ストレスの間、ミトコンドリアはその大きさを間接的に増大又は縮小することができ、ミトコンドリア膜間電圧の変化を生じる。
したがって、ローダミン１２３及びＮＡＯ試験の解析は、ミトコンドリア活性（ローダミン１２３試験）の詳細な評価を可能にし、これは、細胞ストレスに続くミトコンドリア量の変化（ＮＡＯ試験）によって評価可能である。
言い換えれば、それは、試験される溶液によって生じる影響の正確な知識をもつことを可能にする。
【００２７】
見てきたように、保有している試験は、蛍光シグナルの増加をもたらす。
そのため、これら蛍光シグナルの評価が必要である。
これを行うためには、冷光蛍光技術（ＭＣＣＭ：ミクロプレート冷光細胞数測定）を組み込んだミクロ滴定細胞蛍光測定法（ＭＣＭ）技術が用いられ、これはＲａｔ  Ｐ．らによって、Methods in Enzymology, 1995. 252, 331-340に記載されている。
この技術の検出限界は、ピコ〜フェムトグラムプローブ／ｍｌである。
検出スペクトルは、２８０〜８７０ｎｍである。
したがって、細胞内蛍光プローブ測定を、生細胞について、ミクロプレート中で直接実施することができる（ＭＩＦＡＬＣ試験：生細胞のミクロ滴定蛍光定量試験）。
【００２８】
この技術のおかげで、用いる細胞株が長時間にわたって安定な酵素装置をもち、これが原初培養で生じるものについて異なるときに、短時間及び長期間の細胞毒性、並びに連続的に反応速度論を研究することが可能になる；さらに、用いる技術は、接着細胞についての蛍光速度論の評価を可能にする。
【００２９】
それはさらに、免疫化学又はフローサイトメトリーにおいて、それらの使用を可能にするための細胞のトリプシン処理又は単分散化が、特定の不安定なマーカーの観測及び正確な解釈を変化させうる様々な人為生産物（例えば、フリーラジカル）を生じさせるという事実のため、接着性の生細胞について直接に細胞毒性を評価することを可能にする（ＭＩＦＡＬＣ‐生細胞についてのミクロ滴定蛍光定量試験）。
【００３０】
眼の細胞は、それらが支持体から分離された場合又はそれらが相互に分離された場合、特定の細胞内機能を失う接着性細胞である。
したがって、ＭｉＦＡＬＣ法を用いて接着性生細胞に取り組むことが好ましい。
【００３１】
最後に、ミクロプレート上での細胞蛍光測定技術の使用は、蛍光定量法の検出特異性、冷光技術の感度（ピコ‐フェムトグラム／ｍｌの検出されるプローブ）、及びミクロプレート上での方法の再現性、を結合することの利点を有する。
【００３２】
今まさに説明した試験結果の解釈は、以下の：
‐  誘発される細胞死のタイプを評価すること（ネクローシス又はアポトーシス）、
‐  生じるラジカル酸素種（Ｈ２Ｏ２）を評価すること、
‐  スーパーオキサイドアニオンの起こりうる過剰生産を評価すること、及び
‐  ミトコンドリア活性の強さを評価すること
を可能にする。
【００３３】
ａ）細胞死のタイプの評価（ネクローシス‐アポトーシス）
いくつかの蛍光ラベルの組み合わせが、ネクローシス及びアポトーシスタイプの細胞死メカニズムを同時に測定することを可能にする。
これを行うためには、プローブ、例えば、２つのＤＮＡプローブについての膜完全性を測定するためのニュートラルレッド、アポトーシス及び染色体凝縮メカニズムを測定するためのヘキスト３３３４２及びヨウ化プロピジウム、の組み合わせが用いられる。
コントロールに対する「ヘキスト」の顕著な増加は、一般にアポトーシスメカニズムの間の染色体凝縮のサインであり、このメカニズムはさらに蛍光顕微鏡観察によって確かめられる。
【００３４】
したがって、本発明に従って用いられる溶液が全体的に不活性であり、かつ、ネクローシスであれアポトーシスであれ、いかなる特別な細胞毒性も生じないことが観測されうる。
反対に、市販の溶液、例えばＲｅｎｕ（登録商標）又はＳｏｌｏｃａｒｅ（登録商標）は、「ヘキスト」の蛍光の顕著な増加を引き起こし、これはアポトーシスタイプの細胞ストレスのサインである。
Ｏｐｔｉｆｒｅｅ（登録商標）については、１５分未満で、ネクローシスタイプの細胞死が観察される；このネクローシスは、実際に、アポト−ネクローシスメカニズムである可能性があり、これは追加の試験でより明確にされうる。
製品Ｃｏｍｐｌｅｔｅ（登録商標）の場合、細胞ストレスが２つのマーカーの増加で観測され、そのメカニズムはその他の試験によって明らかにされうる。
【００３５】
したがって、この最初の一連の試験から２つのグループが観察されたように、一方では本発明にしたがって用いられた溶液はヒトの眼の結膜細胞に対して全体的に不活性であり、他方では、コンタクトレンズを濯ぐための様々な市販の多機能製品は全て、ネクローシスタイプ、アポト−ネクローシスタイプ、又はアポトーシスタイプの細胞ストレスを引き起こす。
【００３６】
ｂ）ラジカルライク形態の酸素の評価（１１２０）
ラジカルライク形態の酸素の見かけの反応速度が観測される。
これらの速度論は、Ｈ２ＤＣＦ−ＤＡプローブで実施される試験に対応し、このプローブは様々なラジカルライク形態の酸素、特に過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）と反応する。
本発明による溶液と市販製品との間に、非常に異なる振る舞いが観察される。
１５分間の接触の後で、様々な公知の市販溶液の間には顕著な差はなかった。
したがって、１５分の短い間にこれまでに観察される細胞ストレスを引き起こすことについて、ラジカルライク形態の酸素又はラジカル酸素種の特別の役割があるようには思われない。
反対に、これらのアポトーシス及びネクローシスメカニズムの引き金をひくことは、ラジカル形態の生成の変化を引き起こすことができる。
したがって、６０分間の接触の後、全ての市販の溶液は、細胞ストレス効果と細胞数の減少におそらく関連したラジカルライク形態の酸素の減少を引き起こすが、それは以前にニュートラルレッド及び「ヘキスト」試験で見られた、最初の１５分から観察される細胞死（ネクローシス及びアポトーシス）に起因する。
【００３７】
本発明にしたがって用いられる溶液の場合、細胞は活性であり、かつラジカルの過剰生産によってこの外因性薬剤に反応し、全体の細胞毒性試験（ニュートラルレッド試験）は妨げられないまま、細胞のいかなる顕著な変化を生じることもない。
【００３８】
ｃ）スーパーオキサイドアニオンの過剰生産の評価
スーパーオキサイドアニオンの過剰生産は、試験される様々な溶液による処理に続いて観察される。
実際には、対照に対していかなる顕著な違いもなく、しかもスーパーオキサイドアニオンのいかなる過剰生産も生産物が何であれ観測されない。本発明に従って用いられる溶液でインキュベートされた細胞中のスーパーオキサイドアニオンの生産は、大きな標準偏差のわりにはいかなる顕著な差を観測することもなく、試験された製品のなかの最低である傾向を有する。
全体として、したがってかなりの細胞ストレスが観測され、アポトーシスによる細胞死に向かう傾向であるが、顕著なラジカルライクなストレスと結びつけられることはない。
ミトコンドリアに対する追加の試験は、その他のアポトーシス誘起経路を調査することを可能にする。
【００３９】
ｄ）ミトコンドリア活性の評価
この評価のためには、２つの蛍光プローブが同時に結合される。
これらの第一のもの、すなわちローダミン１２３プローブは、ミトコンドリア膜間電圧を評価することを可能にし、その上、第二のもの、ＮＡＯ（ノニルアクリジンオレンジ）は、ミトコンドリア量の測定を可能にする。
したがって、わずか１５分間の接触後、Ｒｅｎｕ（登録商標）又はＳｏｌｏｃａｒｅ（登録商標）タイプの市販溶液に対して、顕著な減少がミトコンドリア膜間電圧において観測される。
ミトコンドリア膜間電圧のそのような低下は、アポトーシスの初期段階に現れ、１５分からすぐに観測され、かつ、「ヘキスト」などのプローブでの染色体凝縮の出現によって確かめられる。
さらに、ミトコンドリア量とミトコンドリア活性の乖離が、Ｃｏｍｐｌｅｔｅ（登録商標）及びＯｐｔｉｆｒｅｅ（登録商標）などの市販溶液に対して観測され、それは前に観測された細胞ストレスを確かなものにする。
【００４０】
本発明によって用いられる溶液は、それ自身、コンタクトレンズを濯ぐために用いられるその他の市販溶液を比較して、全体的な不活性を示す。
全体としてはそれゆえ、全ての市販製品は、顕著な細胞ストレスを引き起こすと思われる。
本発明によって用いられる溶液とは異なり、Ｓｏｌｏｃａｒｅ（登録商標）及びＲｅｎｕは、インキュベーションの１５分後すぐに、染色体凝縮及びミトコンドリア機能の変化を伴う非常に明確なアポトーシスメカニズムを引き起こす。
溶液Ｏｐｔｉｆｒｅｅ（登録商標）及びＣｏｍｐｌｅｔｅは、ミトコンドリア補償システムの引き金をひくこと、その量の減少、ミトコンドリア膜間電圧の増加、によって特徴づけられる細胞ストレスを引き起こし、それは、ストレスが持続する場合、アポトーシス−ネクローシスメカニズムへ導きうる。
【００４１】
上記記載及び結果の全ては、その無害性の長所によって、コンタクトレンズを濯ぐための既に存在する溶液と比較して、本発明によって用いられる溶液の優越性を非常に明確に示す。
これらの結論に導くことを可能にする、観測されかつ上に記載されたストレスが、問題の溶液とのわずか１５分間の接触後に観測されたために、このことはより一層当てはまる。実際には、これらの溶液は濯ぎの間にレンズ上にそれら自体を吸収させ、さらに患者の眼球と接触させられた後数時間にわたり塩析されうる。
実施の観点からは、コンタクトレンズを濯ぐための使用を目的とする範囲で、上記水性イオン溶液は、上に特定した本明細書中に示したように調製することができ、明細書にはそれらの特性に関する有用な詳細もまた発見される。
【国際調査報告】
2005534440.tif 000003
2005534440.tif 000004
2005534440.tif 000005
2005534440.tif 000006