(57)【要約】本発明は、少なくとも１つのアミノアルキルグルコサミニドホスフェート化合物および少なくとも１つのサポニン化合物を含むアジュバント系を使用する、薬学的組成物（特に、ワクチン組成物）を提供する。このような組成物は、同時投与される抗原に対する哺乳動物における免疫応答を相乗的に増強する。種々のヒト疾患（癌、微生物感染および自己免疫障害を含む）の処置における組成物を使用する方法がまた、提供される。１つの実施形態において、免疫刺激組成物であって、以下：（ａ）少なくとも一種のアミノアルキルグルコサミニドホスフェート（ＡＧＰ）；および（ｂ）少なくとも一種のサポニン、を含む免疫刺激組成物が提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
免疫刺激組成物であって、以下：
（ａ）少なくとも一種のアミノアルキルグルコサミニドホスフェート（ＡＧＰ）；および
（ｂ）少なくとも一種のサポニン、
を含む免疫刺激組成物。
【請求項２】
請求項１に記載の組成物であって、前記ＡＧＰが、以下の構造：
【化１】
2005525344.tif 000047
を有する化合物、ならびにその薬学的に受容可能な塩および誘導体を包含し、ここで、Ｙは、−Ｏ−または−ＮＨ−であり；Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、飽和（Ｃ２〜Ｃ２４）脂肪族アシル基および不飽和（Ｃ２〜Ｃ２４）脂肪族アシル基から選択され；Ｒ８は、−Ｈまたは−ＰＯ３Ｒ１１Ｒ１２であり、ここで、Ｒ１１およびＲ１２は、各々独立して、−Ｈまたは（Ｃ１〜Ｃ４）脂肪族基であり；Ｒ９は、−Ｈ、−ＣＨ３または−ＰＯ３Ｒ１３Ｒ１４であり、ここで、Ｒ１３およびＲ１４は、各々独立して、−Ｈまたは（Ｃ１〜Ｃ４）脂肪族基から選択され；そしてここで、Ｒ８およびＲ９の少なくとも一つは、リン含有基であるが、Ｒ８およびＲ９は、両方ともリン含有基であることはなく；そしてＸは、以下の式：
【化２】
2005525344.tif 000048
から選択される基であり、ここで、下付き文字ｎ、ｍ、ｐ、ｑ、ｎ’、ｍ’，ｐ’およびｑ’は、各々独立して、０〜６の整数であり、但し、ｐ’およびｍ’の合計は、０〜６の整数であり；Ｒ３、Ｒ１１およびＲ１２は、独立して飽和または不飽和の、必要に応じて置換脂肪族（Ｃ２〜Ｃ２４）アシル基であり、但し、Ｘが式（Ｉａ）である場合、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３の一つは、必要に応じて水素であり；Ｒ４およびＲ５は、独立してＨおよびメチルから選択され；Ｒ６およびＲ７は、独立してＨ、ＯＨ、（Ｃ１〜Ｃ４）オキシ脂肪族基、−ＰＯ３Ｈ２、−ＯＰＯ３Ｈ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＯＳＯ３Ｈ、−ＮＲ１５Ｒ１６、−ＳＲ１５、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＣＨＯ、−ＣＯ２Ｒ１５、−ＣＯＮＲ１５Ｒ１６、−ＰＯ３Ｒ１５Ｒ１６、−ＯＰＯ３Ｒ１５Ｒ１６、−ＳＯ３Ｒ１５および−ＯＳＯ３Ｒ１５から選択され、ここで、Ｒ１５およびＲ１６は、各々独立して、Ｈおよび（Ｃ１〜Ｃ４）脂肪族基から選択され；Ｒ１０は、Ｈ、ＣＨ３、−ＰＯ３Ｈ２、ω−ホスホノオキシ（Ｃ２〜Ｃ２４）アルキル、およびω−カルボキシ（Ｃ１〜Ｃ２４）アルキルから選択され；Ｒ１３は、独立してＨ、ＯＨ、（Ｃ１〜Ｃ４）オキシ脂肪族基、−ＰＯ３Ｒ１７Ｒ１８、−ＯＰＯ３Ｒ１７Ｒ１８、−ＳＯ３Ｒ１７、−ＯＳＯ３Ｒ１７、−ＮＲ１７Ｒ１８、−ＳＲ１７、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＣＨＯ、−ＣＯ２Ｒ１７、および−ＣＯＮＲ１７Ｒ１８から選択され、ここで、Ｒ１７およびＲ１８は、各々独立して、Ｈおよび（Ｃ１〜Ｃ４）脂肪族基から選択され；そしてＺは、−Ｏ−または−Ｓ−である、
組成物。
【請求項３】
請求項２に記載の組成物であって、Ｘが式（Ｉａ）の基である、組成物。
【請求項４】
請求項２に記載の組成物であって、Ｘが式（Ｉｂ）の基である、組成物。
【請求項５】
請求項２に記載の組成物であって、Ｘが式（Ｉｃ）の基である、組成物。
【請求項６】
請求項２に記載の組成物であって、Ｘが式（Ｉａ）の基であり、そしてＲ１、Ｒ２およびＲ３のうちの１つが水素である、組成物。
【請求項７】
請求項２に記載の組成物であって、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ１１およびＲ１２が、各々アシルである、組成物。
【請求項８】
請求項３に記載の組成物であって、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、各々Ｃ７〜Ｃ１６脂肪族アシル基である、組成物。
【請求項９】
請求項３に記載の組成物であって、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、各々Ｃ８〜Ｃ１４脂肪族アシル基である、組成物。
【請求項１０】
請求項３に記載の組成物であって、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、各々Ｃ９〜Ｃ１４脂肪族アシル基である、組成物。
【請求項１１】
請求項３に記載の組成物であって、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、各々Ｃ１０〜Ｃ１４脂肪族アシル基である、組成物。
【請求項１２】
請求項３に記載の組成物であって、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、各々Ｃ１０〜Ｃ１４飽和脂肪族アシル基である、組成物。
【請求項１３】
請求項５に記載の組成物であって、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ１２は、各々Ｃ９〜Ｃ１４脂肪族アシル基である、組成物。
【請求項１４】
請求項５に記載の組成物であって、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ１２は、各々Ｃ１０〜Ｃ１４脂肪族アシル基である、組成物。
【請求項１５】
請求項５に記載の組成物であって、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、各々Ｃ１０〜Ｃ１４飽和脂肪族アシル基である、組成物。
【請求項１６】
請求項２に記載の組成物であって、Ｘは、酸素である、組成物。
【請求項１７】
請求項２に記載の組成物であって、Ｒ８は、リン含有基であり、そしてＲ９は、水素である、組成物。
【請求項１８】
請求項２に記載の組成物であって、Ｒ８またはＲ９は、リン含有基であり、そしてＲ１１およびＲ１２、またはＲ１３およびＲ１４は、それぞれ、両方とも水素である、組成物。
【請求項１９】
請求項３に記載の組成物であって、ｎ＋ｍの合計は、０、１、または２である、組成物。
【請求項２０】
請求項３に記載の組成物であって、ｐおよびｑは、独立して、０、１または２である、組成物。
【請求項２１】
請求項３に記載の組成物であって、Ｒ６は、水素、ヒドロキシおよびカルボキシから選択される、組成物。
【請求項２２】
請求項５に記載の組成物であって、ｎ’、ｍ’、ｐ’およびｑ’は、独立して、０、１または２である、組成物。
【請求項２３】
請求項５に記載の組成物であって、ｎ’は、１であり、ｍ’は、２であり、そしてｐ’およびｑ’は、０である、組成物。
【請求項２４】
請求項２３に記載の組成物であって、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ１２は、各々Ｃ１０〜Ｃ１４飽和脂肪族アシル基である、組成物。
【請求項２５】
請求項２４に記載の組成物であって、ＹおよびＺは、両方とも酸素であり；Ｒ１３は、水素であり；そしてＲ１、Ｒ２およびＲ１２は、各々Ｃ１０飽和脂肪族アシル基である、組成物。
【請求項２６】
請求項２４に記載の組成物であって、ＹおよびＺは、両方とも酸素であり；Ｒ１３は、水素であり；そしてＲ１、Ｒ２およびＲ１２は、各々Ｃ１２飽和脂肪族アシル基である、組成物。
【請求項２７】
請求項２４に記載の組成物であって、ＹおよびＺは、両方とも酸素であり；Ｒ１３は、水素であり；そしてＲ１、Ｒ２およびＲ１２は、各々Ｃ１４飽和脂肪族アシル基である、組成物。
【請求項２８】
請求項１に記載の組成物であって、前記ＡＧＰが、モノホスホリル脂質Ａである、組成物。
【請求項２９】
請求項３に記載の組成物であって、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３の全てが、ｎ−Ｃ１３Ｈ２７ＣＯであり；ＸおよびＹは、両方とも酸素であり；ｎ、ｍ、ｐ、およびｑは、各々０であり；Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ９は、各々水素であり；そしてＲ８は、ＰＯ３Ｈ２である、組成物。
【請求項３０】
請求項３に記載の組成物であって、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３の全てが、ｎ−Ｃ１１Ｈ２３ＣＯであり；ＸおよびＹは、両方とも酸素であり；ｎ、ｍ、およびｑは、各々０であり；ｐは、１であり；Ｒ４、Ｒ５、Ｒ７およびＲ９は、各々水素であり；Ｒ６は、ヒドロキシであり；そしてＲ８は、ＰＯ３Ｈ２である、組成物。
【請求項３１】
請求項１に記載の組成物であって、前記サポニンが、天然に得られるサポニン、合成的に得られるサポニン、サポニン結合体、サポニン誘導体、およびサポニン模倣物から選択される、組成物。
【請求項３２】
請求項１に記載の組成物であって、前記サポニンが、Ｑｕｉｌｌａｊａサポニンを含む、組成物。
【請求項３３】
請求項３２に記載の組成物であって、前記Ｑｕｉｌｌａｊａサポニンが、Ｑｕｉｌ  Ａ、ＱＳ−７、ＱＳ−１７、ＱＳ−１８またはＱＳ−２１を含む、組成物。
【請求項３４】
請求項１に記載の組成物であって、前記サポニンが、トリテルペンサポニン−親油性結合体を含み、該トリテルペンサポニン−親油性結合体は、３グルクロン酸残基を含む非アシル化または脱アシル化トリテルペンサポニン；および親油性部分を含み；ここで、該サポニンおよび該親油性部分は、直接またはリンカー基を介するかのいずれかで互いに共有結合し、そして該直接的な結合または該リンカーへの結合は、該３−グルクロン酸残基のカルボキシル炭素と親油性残基またはリンカー基上の適切な官能基との間の共有結合を介して生じる、組成物。
【請求項３５】
請求項３４に記載の組成物であって、前記トリテルペンサポニンが、（ａ）トリテルペンアグリコンコア構造を有し、分枝糖鎖が、３位および２８位に結合し、そしてアルデヒド基が、４位に連結または結合され；そして（ｂ）元々非アシル化であるか、またはトリテルペンアグリコンの２８位において糖に結合するアシル基またはアシルオイル基の除去を必要とするかのいずれかである、組成物。
【請求項３６】
請求項３４に記載の組成物であって、前記親油性部分は、脂肪酸、テルペノイド、脂肪族アミン、脂肪族アルコール、脂肪酸の脂肪族メルカプトンモノ−またはポリ−Ｃ２〜Ｃ４アルキレンオキシ誘導体、脂肪アルコールのモノ−またはポリ−Ｃ２〜Ｃ４アルキレンオキシ誘導体、グリコシル脂肪酸、糖脂質、リン脂質あるいはモノ−またはジ−アシルグリセロールのうちの１つ以上の残基を含む、組成物。
【請求項３７】
請求項１に記載の組成物であって、前記サポニンが、ＧＰＩ−０１００を含む、組成物。
【請求項３８】
請求項３４に記載の組成物であって、前記トリテルペンサポニンが、キラヤ酸またはジプソゲニンコア構造を有する、組成物。
【請求項３９】
請求項３８に記載の組成物であって、前記脱アシルサポニンまたは非アシル化サポニンが、Ｑｕｉｌｌａｊａ脱アシルサポニン、Ｓ．ｊｅｎｉｓｓｅｅｎｓｉｓ脱アシルサポニンＧｙｐｓｏｐｈｉｌａサポニン、ＳｐｏｎａｒｉａサポニンＡｃａｎｔｈｏｐｈｙｌｌｕｍサポニンおよびルシオシドＰサポニンからなる群より選択される、組成物。
【請求項４０】
請求項１に記載の組成物であって、前記サポニンが、サポニン／抗原共有結合体組成物を含む、組成物。
【請求項４１】
請求項１に記載の組成物であって、前記サポニンが、式：
【化３】
2005525344.tif 000049
によって示される化合物、またはその薬理学的に受容可能な塩を含み、
ここで、Ｒが、水素または−Ｃ（Ｏ）Ｈであり；Ｒ１は、水素、必要に応じて置換されたＣ１〜２０脂肪族基、サッカリル基、および式−Ｃ（Ｏ）−［Ｃ（Ｒ３）（Ｒ４）］ｋ−ＣＯＯＨによって表される基からなる群より選択されるメンバーであり、ここで、各々のＲ３およびＲ４が、独立して、水素および必要に応じて置換されたＣ１〜１０脂肪族基からなる群より選択されるメンバーであり、そしてｋは、１〜５の数字であり；Ｒ２は、水素、必要に応じて置換されたＣ１〜２０脂肪族基、および式−（ＣＨ２）ｒＣＨ（ＯＨ）（ＣＨ２）ｔＯＲ５によって表される基からなる群より選択されるメンバーであり、ここで、ｒおよびｔは、独立して、１または２であり、そしてＲ５は、必要に応じて置換されたＣ２〜２０脂肪族基、または式
【化４】
2005525344.tif 000050
によって表される基であり、ここで、ｊは、１〜５であり、そしてＲ６およびＲ７は、独立して、水素および必要に応じて置換されたＣ１〜２０脂肪基からなる群より選択される、組成物。
【請求項４２】
請求項４１に記載の組成物であって、Ｒ１は、モノサッカリドまたはジサッカリドである、組成物。
【請求項４３】
請求項４２に記載の組成物であって、Ｒ１は、グルクロン酸基である、組成物。
【請求項４４】
請求項４１に記載の組成物であって、Ｒ、Ｒ１およびＲ２が、水素である、組成物。
【請求項４５】
請求項４１に記載の組成物であって、Ｒは、水素であり；Ｒ１は、サッカリル基であり、ここで、該サッカリル基が、グルクロン酸基であり；そしてＲ２は、水素である、組成物。
【請求項４６】
請求項４１に記載の組成物であって、Ｒは、水素であり；Ｒ１は、式−Ｃ（Ｏ）−［Ｃ（Ｒ３）（Ｒ４）］ｋ−ＣＯＯＨによって表され、ここで、Ｒ３およびＲ４は、水素であり、そしてｋは、２であり；そしてＲ２は、水素である、組成物。
【請求項４７】
請求項４１に記載の組成物であって、Ｒは、水素であり；Ｒ１は、サッカリル基であり、ここで、該サッカリル基が、グルクロン酸基であり；そしてＲ２は、（ＣＨ２）ｒＣＨ（ＯＨ）（ＣＨ２）ｔＯＲ５であり、ここで、ｒおよびｔは、両方ともに１であり、そしてＲ５は、必要に応じて置換されたＣ２〜２０アシル基である、組成物。
【請求項４８】
請求項４５に記載の組成物であって、前記グルクロン酸基が、β−Ｄ−グルクロン酸基である、組成物。
【請求項４９】
請求項４７に記載の組成物であって、（ＣＨ２）ｒＣＨ（ＯＨ）（ＣＨ２）ｔＯＲ５が、１−Ｏ−アシル−ｓｎ−グリセリル基である、組成物。
【請求項５０】
請求項４９に記載の組成物であって、Ｒ５は、アセチル基、オクタノイル基、およびテトラデカノイル基からなる群より選択されるメンバーである、組成物。
【請求項５１】
請求項４１に記載の組成物であって、Ｒは、水素であり；Ｒ１は、サッカリル基であり、ここで、該サッカリル基が、グルクロン酸基であり；そしてＲ２は、式：
【化５】
2005525344.tif 000051
によって表される基であり、ここで、ｊは、１であり；Ｒ６は、必要に応じて置換されたＣ１〜２０脂肪基であり；そしてＲ７は、必要に応じて置換されたＣ１〜２０脂肪基である、組成物。
【請求項５２】
請求項５１に記載の組成物であって、Ｒ７は、必要に応じて置換されたＣ１１脂肪族基である、組成物。
【請求項５３】
請求項１に記載の組成物であって、少なくとも１つの抗原をさらに含む、組成物。
【請求項５４】
請求項５３に記載の組成物であって、前記抗原が、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、ヒトサイトメガロウイスル、ＨＩＶ、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、またはＥ型肝炎、ＲＳウイルス、ヒトパピローマウイルス、インフルエンザウイルス、結核、リーシュマニア症、Ｔ．Ｃｒｕｚｉ、エールリヒア、カンジタ、サルモネラ、ナイセリア、ボレリア、クラミジア、ボルデテラ、プラズモディウムおよびトキソプラズマからなる群より誘導される、組成物。
【請求項５５】
請求項５３に記載の組成物であって、前記抗原が、ヒト腫瘍抗原である、組成物。
【請求項５６】
請求項５５に記載の組成物であって、前記腫瘍抗原が、前立腺癌、結腸癌、乳癌、卵巣癌、膵臓癌、脳癌、頭頸部癌、黒色腫、白血病またはリンパ腫の癌から誘導される、組成物。
【請求項５７】
請求項５３に記載の組成物であって、前記抗原が、自己抗原である、組成物。
【請求項５８】
請求項５７に記載の組成物であって、前記自己抗原が、自己免疫疾患に関連する抗原である、組成物。
【請求項５９】
請求項５４に記載の組成物であって、前記自己免疫疾患が、１型糖尿病、多発性硬化症、重症筋無力症、慢性関節リウマチまたは乾癬である、組成物。
【請求項６０】
請求項１に記載の組成物であって、水性処方物を包含する、組成物。
【請求項６１】
請求項６０に記載の組成物であって、前記水性処方物が、一種以上の界面活性剤を含む、組成物。
【請求項６２】
請求項６１に記載の組成物であって、前記水性処方物が、一種以上のリン脂質界面活性剤を含む、組成物。
【請求項６３】
請求項６２に記載の組成物であって、前記界面活性剤が、ジアシルホスファチジルグリセロール、ジアシルホスファチジルコリン、ジアシルホスファチジン酸、およびジアシルホスファチジルエタノールアミンからなる群より選択される、組成物。
【請求項６４】
請求項６２に記載の組成物であって、前記界面活性剤が、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＭＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジステアロイルホスファチジルグリセロール（ＤＳＰＧ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＰＭＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）；ジミリストイルホスファチジン酸（ＤＰＭＡ）、ジパルミトイルホスファチジン酸（ＤＰＰＡ）、ジステアロイルホスファチジン酸（ＤＳＰＡ）；ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＭＥ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）およびジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）からなる群より選択される、組成物。
【請求項６５】
請求項１に記載の組成物であって、エマルジョン処方物を包含する、組成物。
【請求項６６】
請求項１に記載の組成物であって、固形処方物を包含する、組成物。
【請求項６７】
請求項１に記載の組成物であって、前記ＡＧＰおよびサポニンが、合成的に有効な量で存在する、組成物。
【請求項６８】
請求項１に記載の組成物であって、前記サポニンおよびＡＧＰが、約１０００：１〜約１：１０００のサポニン：ＡＧＰの重量比で存在する、組成物。
【請求項６９】
請求項１に記載の組成物であって、ワクチンをさらに含む、組成物。
【請求項７０】
請求項２に記載の組成物であって、前記サポニンが、天然に得られるサポニン、合成的に得られるサポニン、サポニン結合体、サポニン誘導体、およびサポニン模倣物から選択される、組成物。
【請求項７１】
請求項３に記載の組成物であって、前記サポニンが、キラヤサポニンである、組成物。
【請求項７２】
請求項７１に記載の組成物であって、前記サポニンが、ＱＳ−２１である、組成物。
【請求項７３】
請求項３に記載の組成物であって、前記サポニンが、サポニン親油性結合体である、組成物。
【請求項７４】
請求項７３に記載の組成物であって、前記サポニンが、ＧＰＩ−０１００である、組成物。
【請求項７５】
請求項４に記載の組成物であって、前記サポニンが、キラヤサポニンである、組成物。
【請求項７６】
請求項７５に記載の組成物であって、前記サポニンが、ＱＳ−２１である、組成物。
【請求項７７】
請求項４に記載の組成物であって、前記サポニンが、サポニン親油性結合体である、組成物。
【請求項７８】
請求項７７に記載の組成物であって、前記サポニンが、ＧＰＩ−０１００である、組成物。
【請求項７９】
請求項２５に記載の組成物であって、前記サポニンが、ＱＳ−２１である、組成物。
【請求項８０】
請求項２５に記載の組成物であって、前記サポニンが、ＧＰＩ−０１００である、組成物。
【請求項８１】
請求項２６に記載の組成物であって、前記サポニンが、ＱＳ−２１である、組成物。
【請求項８２】
請求項２６に記載の組成物であって、前記サポニンが、ＧＰＩ−０１００である、組成物。
【請求項８３】
請求項２７に記載の組成物であって、前記サポニンが、ＱＳ−２１である、組成物。
【請求項８４】
請求項２７に記載の組成物であって、前記サポニンが、ＧＰＩ−０１００である、組成物。
【請求項８５】
請求項２８に記載の組成物であって、前記サポニンが、キラヤサポニンである、組成物。
【請求項８６】
請求項８５に記載の組成物であって、前記サポニンが、ＱＳ−２１である、組成物。
【請求項８７】
請求項２８に記載の組成物であって、前記サポニンが、サポニン親油性結合体である、組成物。
【請求項８８】
請求項８７に記載の組成物であって、前記サポニンが、ＧＰＩ−０１００である、組成物。
【請求項８９】
病原性感染、癌または自己免疫障害に罹患しているかまたは病原性感染、癌または自己免疫障害を受けやすい哺乳動物を処置する方法であって、該哺乳動物に、有効量の請求項１に記載の組成物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項９０】
病原性感染、癌または自己免疫障害に罹患しているかまたは病原性感染、癌または自己免疫障害を受けやすい哺乳動物を処置する方法であって、該哺乳動物に、有効量の請求項２に記載の組成物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項９１】
病原性感染、癌または自己免疫障害に罹患しているかまたは病原性感染、癌または自己免疫障害を受けやすい哺乳動物を処置する方法であって、該哺乳動物に、有効量の請求項３１に記載の組成物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項９２】
動物において免疫応答を増強する方法であって、請求項１に記載の組成物を該動物に投与する工程を包含する、方法。
【請求項９３】
動物において免疫応答を増強する方法であって、請求項２に記載の組成物を該動物に投与する工程を包含する、方法。
【請求項９４】
動物において免疫応答を増強する方法であって、請求項３１に記載の組成物を該動物に投与する工程を包含する、方法。
【請求項９５】
動物において抗原に対する免疫応答を増強する方法であって、抗原とともに請求項１に記載の組成物を該動物に投与する工程を包含する、方法。
【請求項９６】
動物において抗原に対する免疫応答を増強する方法であって、抗原とともに請求項２に記載の組成物を該動物に投与する工程を包含する、方法。
【請求項９７】
動物において抗原に対する免疫応答を増強する方法であって、抗原とともに請求項３１に記載の組成物を該動物に投与する工程を包含する、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、一般的に、ワクチン、アジュバンドおよび免疫刺激性処方物、それらの産生についての方法ならびに予防的ワクチン接種および／または治療的ワクチン接種におけるそれらの使用に関する。特に、本発明は、アミノアルキルグルコサミニドホスフェートと組み合わせてサポニン化合物を含むアジュバンド系に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
体液性免疫および細胞媒介免疫は、哺乳動物免疫応答の２つの主要な分岐である。体液性免疫は、異種抗原に対する抗体の発生を包含する。抗体は、Ｂ−リンパ球によって産生される。細胞媒介免疫は、異種抗原を有する感染した細胞に対して作用するか、または感染した細胞に対して作用するように他の細胞を刺激するＴ−リンパ球の活性化を包含する。哺乳動物免疫系のこれらの分岐の両方は、疾患と戦う際において重要である。体液性免疫は、細菌病原体に対する防御の主要ラインである。ウイルス疾患の場合、細胞障害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の誘導が、防御免疫について決定的であるようである。従って、有効なワクチンは、好ましくは、疾患に対して保護するために免疫系の分岐の両方を刺激する。
【０００３】
ワクチンは、疾患誘発因子由来の異種抗原を宿主に提示し、その結果、この宿主は、防御免疫応答を生じ得る。しばしば、ワクチン抗原は、疾患を引き起こす微生物の死滅形態または弱毒形態である。これらの死滅ワクチンまたは弱毒ワクチンにおける非本質的成分および抗原の存在は、化学的技術および組換え技術を使用して、十分に確定された合成抗原開発することを含む、ワクチン成分を純化するための相当な努力を助長した。しかし、微生物ワクチンの純化および単純化は、同時に効力の欠乏に導いた。低分子量合成抗原は、潜在的に有害な不純物はないが、しばしば単独で十分に免疫原性でない。これらの観察は、研究者を、ワクチン成分の活性を増強するために、アジュバンドとして公知である免疫系刺激因子をワクチン組成物に加えるように導いた。
【０００４】
免疫アジュバントは、個体に投与されるかまたはインビトロで試験される場合、抗原が投与される本発明においてその抗原に対する免疫応答を増加するか、または免疫系からの細胞の特定の活性を増強する化合物である。アジュバント活性の変化する程度を示す多くの化合物が、調製され、そして試験された（例えば、Ｓｈｉｍｉｚｕら、１９８５、Ｂｕｌｕｓｕら、１９９２、Ｉｋｅｄａら、１９９３、Ｓｈｉｍｉｚｕら、１９９４、Ｓｈｉｍｉｚｕら、１９９５、Ｍｉｙａｊｉｍａら、１９９６を参照のこと）。しかし、これらおよび他の以前のアジュバント系は、しばしば毒性を示し、不安定であり、そして／または受容できない低い免疫刺激効果を有する。
【０００５】
先天性免疫系は、微生物によって排他的に合成された分子のクラスを同定するレセプターを介して自己と非自己との間を判別する系によって病原体に対する炎症性応答を調整する。これらのクラスは、時々、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）と言われ、そして例えば、リポ多糖類（ＬＰＳ）、ぺプチドグリカン、リポテイコ酸（ｌｉｐｏｔｅｃｈｏｉｃ  ａｃｉｄ）、および細菌リポタンパク質（ＢＬＰ）を含む。
【０００６】
ＬＰＳは、先天性免疫系によって認識されるグラム陰性細菌由来の豊富な外側の細胞壁構成物質である。ＬＰＳの化学的構造はかねてから公知であるが、血清タンパク質および／または細胞によるＬＰＳの認識の分子基礎は、近年になって解明され始めたばかりである。一連の最近の報告において、Ｔｏｌｌ様レセプター（ＴＬＲ）として呼ばれる、レセプターのファミリーは、ＬＰＳおよび他の微生物成分への強力な先天性免疫応答に関連付けられた。ＴＬＲファミリーの全てのメンバーは、単一膜内外ドメインを有する膜タンパク質である。細胞質ドメインは、約２００アミノ酸であり、そしてＩＬ−１レセプターの細胞質ドメインと類似性を共有する。Ｔｏｌｌファミリーのタンパク質細胞外ドメインは、比較的大きく（約５５０−９８０アミノ酸）、そして複数のリガンド結合部位を含み得る。
【０００７】
ＬＰＳへの免疫応答におけるＴＬＲの重要性は、少なくとも２つのＴｏｌｌ様レセプター、Ｔｌｒ２およびＴｌｒ４について特に示されている。例えば、胚の腎臓細胞を用いるトランスフェクションの研究は、ヒトＴｌｒ２が、ＬＰＳへの応答性を与えるために十分であることを明らかにした（Ｙａｎｇら、Ｎａｔｕｒｅ  ３９５：２８４−２８８（１９９８）；Ｋｉｒｓｃｈｎｉｎｇら、Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．１１：２０９１−９７（１９９８））。ＬＰＳによる強力な応答は、ＬＰＳ結合タンパク質（ＬＢＰ）および高い親和性でＬＰＳを結合するＣＤ１４の両方を必要とするようであった。Ｔｌｒ２へのＬＰＳの直接的な結合は、比較的低い親和性で観察され、補助的タンパク質が、インビボでＬＰＳによるＴｌｒ２の結合および／または活性化を促進し得ることを示唆する。
【０００８】
ＬＰＳへの免疫応答におけるＴｌｒ４の重要性は、ｌｐｓ変異体マウス菌株中の位置クローニングとの連結で示された。マウスｌｐｓ遺伝子の２つの変異体対立遺伝子が、同定されており、Ｃ３Ｈ／ＨｅＪ菌株中で生じた半優性対立遺伝子、およびＣ５７ＢＬ／１０ＳｃＮ菌株およびＣ５７ＢＬ／１０ＳｃＣｒ菌株中に存在する第二の谷性の対立遺伝子である。ｌｐｓの変異体対立遺伝子について同型接合であるマウスは、グラム陰性細菌による感染に感受性であり、そしてＬＰＳ誘導敗血症性ショックに対して抵抗性である。これらの菌株由来のｌｐｓ遺伝子は、クローニングされており、そして変異が、両方の例中でマウスＴｌｒ４遺伝子を変えることが示された（Ｐｏｒｔｏｒａｋら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８２：２０８５−２０８８（１９９８）；Ｑｕｒｅｓｈｉら、Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ４：６１５−６２５（１９９９））。Ｔｌｒ４が、ＬＰＳへの応答に必要とされることは、これらの報告から結論付けられた。
【０００９】
ＬＰＳの生物学的活性内毒素サブ構造部分は、リピドＡであり、これはグラム陰性細菌の外膜中で全構造を固定するように働く、リン酸化された、複数の脂肪酸でアシル化されたグルコサミン二糖類である。本発明者らは以前、リピドＡの毒性効果が、モノホスホリルリピドＡ化合物を生成するためのリピドＡの選択的化学的改変によって改善され得ることを報告した（ＭＰＬ（登録商標）免疫刺激薬；Ｃｏｒｉｘａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ；Ｓｅａｔｔｌｅ、ＷＡ）。ＭＰＬ（登録商標）免疫刺激薬構造的に同様の化合物を調製する方法およびワクチンアジュバント他の用途においてこれらを使用する方法は、記載されている（例えば、米国特許番号第４，４３６，７２７号；同第４，８７７，６１１号；同第４，８６６，０３４号および同第４，９１２，０９４号；同第４，９８７，２３７号；Ｊｏｈｎｓｏｎら、Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ４２：４６４０−４６４９（１９９９）；ＵｌｒｉｃｈおよびＭｙｅｒｓ，ｉｎ  Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ  Ｓｕｂｕｎｉｔ  ａｎｄ  Ａｄｊｕｖａｎｔ  Ａｐｐｒｏａｃｈ；Ｐｏｗｅｌｌ  ａｎｄ  Ｎｅｗｍａｎ編；Ｐｌｅｎｕｍ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、４９５−５２４、１９９５；これらの開示は、それらの全体に関し参考として本明細書中で援用される）。特に、これらおよび他の参考文献は、ＭＰＬ（登録商標）免疫刺激薬および関連化合物が、抗原に対する体液性免疫および／または細胞媒介免疫を増強するためにタンパク質および糖質抗原を有するワクチン処方物中で使用される場合、有意なアジュバント活性を有することを示した。
【００１０】
アミンアルキルグルコサミニドホスフェート（ＡＧＰ）と言われる、モノホスホリルリピドＡの合成単糖類および二糖類模倣体のクラスが、開示されており、例えば、米国特許番号第６，１１３，９１８号および同第６，３０３，３４７号、１９９８年５月７日に出願された米国特許出願０９／０７４，７２０ならびにＰＣＴ公開出願ＷＯ９８／５０３９９、この開示は、それら全体に関して参考として本明細書中で援用される。モノホスホリルリピドＡと同様に、これらの化合物は、ワクチン組成物中で抗原と処方される場合、有意なアジュバント特性を保持すること、そしてさらに、モノホスホリルリピドＡと比較される場合、類似のまたは改善された毒性プロフィールを有することが示された。ＡＧＰによって提供される有意な利点は、それらが、合成手段によって商業的スケールで容易に作製可能であることである。
【００１１】
有効なアジュバント系の発見および開発は、既存および未来のワクチンの効力および安定性を改良するために必須である。従って、合成ワクチンの次なる発生の開発をより良く容易にするため、新規なアジュバント系および改良されたアジュバント系、特に免疫系の両エフェクター腕を駆動するものについて、継続した必要性がある。本発明は、これらおよび他の必要性を満たす。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１２】
（発明の要旨）
本発明の一つの局面に従い、少なくとも一つのアミノアルキルグルコサミニドホスフェート（ＡＧＰ）および少なくとも一つのサポニン化合物を含む、免疫刺激性組成物が、提供される。
【００１３】
本発明の組成物中で使用されるＡＧＰ化合物は、単糖類化合物または二糖類化合物であり得る。従って、本発明は、以下の式：
【００１４】
【化６】
2005525344.tif 000002
を有する一つ以上のＡＧＰ化合物および薬学的に受容可能な塩およびそれらの誘導体を含む免疫刺激性組成物を提供し、ここで、Ｙは、−Ｏ−または−ＮＨ−であり；Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、飽和（Ｃ２−Ｃ２４）脂肪族アシル基および不飽和（Ｃ２−Ｃ２４）脂肪族アシル基から選択され；Ｒ８は、−Ｈまたは−ＰＯ３Ｒ１１Ｒ１２であり、ここで、Ｒ１１およびＲ１２は、各々独立して、−Ｈおよび（Ｃ１−Ｃ４）脂肪族基であり；Ｒ９は、−Ｈ、−ＣＨ３または−ＰＯ３Ｒ１３Ｒ１４であり、ここで、Ｒ１３およびＲ１４は、各々独立して、−Ｈおよび（Ｃ１−Ｃ４）脂肪族基から選択され；そしてここで、Ｒ８およびＲ９の少なくとも一つは、リン含有基であるが、Ｒ８およびＲ９の両方ともが、リン含有基ではない；そしてＸは、以下の式：
【００１５】
【化７】
2005525344.tif 000003
から選択される基であり、ここで、下付き文字ｎ，ｍ，ｐ，ｑ，ｎ’、ｍ’，ｐ’およびｑ’は、各々独立して、０〜６の整数であり、但しｐ’およびｍ’の合計が、０〜６の整数であり；Ｒ３、Ｒ１１およびＲ１２は、独立して、飽和または不飽和の必要に応じて置換された脂肪族（Ｃ２−Ｃ２４）アシル基であり、但しＸが式（Ｉａ）である場合、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３の一つは、必要に応じて水素であり；Ｒ４およびＲ５は、独立してＨおよびメチルから選択され；Ｒ６およびＲ７は、独立して、Ｈ、ＯＨ、（Ｃ１−Ｃ４）オキシ脂肪族基、−ＰＯ３Ｈ２、−ＯＰＯ３Ｈ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＯＳＯ３Ｈ、−ＮＲ１５Ｒ１６、−ＳＲ１５、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＣＨＯ、−ＣＯ２Ｒ１５、−ＣＯＮＲ１５Ｒ１６、−ＰＯ３Ｒ１５Ｒ１６、−ＯＰＯ３Ｒ１５Ｒ１６、−ＳＯ３Ｒ１５および−ＯＳＯ３Ｒ１５から選択され、ここで、Ｒ１５およびＲ１６は、各々独立して、Ｈおよび（Ｃ１−Ｃ４）脂肪族基から選択され；Ｒ１０は、Ｈ、ＣＨ３、−ＰＯ３Ｈ２、ω−ホスホノオキシ（Ｃ２−Ｃ２４）アルキル、およびω−カルボキシ（Ｃ１−Ｃ２４）アルキルから選択され；Ｒ１３は、独立して、Ｈ、ＯＨ、（Ｃ１−Ｃ４）オキシ脂肪族基、−ＰＯ３Ｒ１７Ｒ１８、−ＯＰＯ３Ｒ１７Ｒ１８、−ＳＯ３Ｒ１７、−ＯＳＯ３Ｒ１７、−ＮＲ１７Ｒ１８、−ＳＲ１７、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＣＨＯ、−ＣＯ２Ｒ１７、および−ＣＯＮＲ１７Ｒ１８から選択され、ここで、Ｒ１７およびＲ１８は、各々独立して、Ｈおよび（Ｃ１−Ｃ４）脂肪族基から選択され；そしてＺは、−Ｏ−または−Ｓ−である。
【００１６】
本発明の特定の実施形態において、免疫刺激性組成物中で使用されるＡＧＰ化合物は、例えば、米国特許番号第６，１１３，９１８号（これは、本明細書中で援用されている）に開示されたものであり、そして一般的に、以下の構造：
【００１７】
【化８】
2005525344.tif 000004
およびそれらの薬学的に受容可能な塩、誘導体および生物学的に活性なフラグメントに従い、ここで、Ｘは、酸素原子または硫黄原子を表し、Ｙは、酸素原子またはＮＨ基を表し、「ｎ」、「ｍ」、「ｐ」および「ｑ」は、独立して、０〜６から選択される整数であり、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、飽和、不飽和、および枝分かれアシル基を含み、７〜１６個の炭素原子を有する、脂肪アシル残基を表し、Ｒ４およびＲ５は、独立して、水素およびメチルから選択され、Ｒ６およびＲ７は、独立して、水素、ヒドロキシ、アルコキシ、ホスホノ、ホスホノオキシ、スルホ、スルホキシ（ｓｕｌｆｏｏｘｙ）、アミノ、メルカプト、シアノ、ニトロ、ホルミルまたはカルボキシならびにそれらのエステルおよびアミドから選択され；Ｒ８およびＲ９は、独立して、ホスホノまたは水素から選択され、ここで、Ｒ８およびＲ９の少なくとも一つは、ホスホノである。
【００１８】
本発明の他の組成物は、米国特許第６，３０３，３４７号（本明細書によって本明細書中に援用されている）に開示され、そして一般に、以下の構造：
【００１９】
【化９】
2005525344.tif 000005
に従うＡＧＰ化合物、ならびにそれらの薬学的に受容可能な塩、誘導体、および生物学的に活性なフラグメントを使用し、ここで構造式中、Ｘは、軸位置または赤道位置のいずれかでの酸素原子または硫黄原子を表し；Ｙは、酸素原子またはＮＨ基を表し；「ｎ」、「ｍ」、「ｐ」および「ｑ」は、独立して、０〜６から選択される整数であり；Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、１〜２０炭素原子を有する脂肪酸残基（飽和アシル基および不飽和アシル基、ならびに分枝アシル基を含む）を表し、ここでＲ１、Ｒ２またはＲ３の１つが、必要に応じて、水素であり；Ｒ４およびＲ５は、独立して、水素またはメチルから選択され；Ｒ６およびＲ７は、独立して、水素、ヒドロキシ、アルコキシ、ホスホノ、ホスホノオキシ、スルホ、スルホキシ（ｓｕｌｐｈｏｏｘｙ）、アミノ、メルカプト、シアノ、ニトロ、ホルミルまたはカルボキシ、ならびにそれらのエステルおよびアミドから選択され；Ｒ８およびＲ９は、独立して、ホスホノまたは水素から選択され、ここでＲ８およびＲ９の少なくとも１つは、ホスホノである。
【００２０】
本発明のなおさらなる例示の実施形態は、ＰＣＴ／ＵＳ０１／２４２８４（２００１年８月３日出願、この出願は、本明細書中に参考として援用されている）において開示され、そして一般に、以下の構造：
【００２１】
【化１０】
2005525344.tif 000006
に従うＡＧＰ化合物、ならびにそれらの薬学的に受容可能な塩を使用する免疫刺激組成物を提供し、ここで構造式中、Ｘは、−Ｏ−および−ＮＨ−からなる群から選択されるメンバーであり；Ｙは、−Ｏ−および−Ｓ−からなる群から選択されるメンバーであり；Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、各々が独立して、（Ｃ２−Ｃ２４）アシルからなる群から選択されるメンバーであり；Ｒ４は、−Ｈおよび−ＰＯ３Ｒ７Ｒ８からなる群から選択されるメンバーであり、ここでＲ７およびＲ８は、各々が独立して、−Ｈおよび（Ｃ１−Ｃ４）アルキルからなる群から選択されるメンバーであり；Ｒ５は、−Ｈ、−ＣＨ３および−ＰＯ３Ｒ９Ｒ１０からなる群から選択されるメンバーであり、ここでＲ９およびＲ１０は、各々が独立して、−Ｈおよび（Ｃ１−Ｃ４）アルキルからなる群から選択されるメンバーであり；Ｒ６は、Ｈ、ＯＨ、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、−ＰＯ３Ｒ１１Ｒ１２、−ＯＰＯ３Ｒ１１Ｒ１２、−ＳＯ３Ｒ１１、−ＯＳＯ３Ｒ１１、−ＮＲ１１Ｒ１２、−ＳＲ１１、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＣＨＯ、−ＣＯ２Ｒ１１、およびＣＯＮＲ１１Ｒ１２から選択され、ここでＲ１１およびＲ１２は、各々が独立してＨおよび（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから選択され、但し、Ｒ４およびＲ５の１つがリン含有基であり、そしてＲ４が−ＰＯ３Ｒ７Ｒ８である場合、Ｒ５は−ＰＯ３Ｒ９Ｒ１０以外であり；ここで「＊１」、「＊２」、「＊３」および「＊＊」は、キラル中心を表し；ここで添え字ｎ、ｍ、ｐおよびｑは、各々が独立して０〜６の整数であり、但し、ｐおよびｍの合計が０〜６である。特定の実施形態においては、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、各々が独立して、（Ｃ９−Ｃ１６）アシルからなる群から、または（Ｃ１０−Ｃ１４）アシルからなる群から、または（Ｃ１０−Ｃ１２）アシルからなる群から選択されるメンバーである。
【００２２】
本発明の別の実施形態に従って、本発明の組成物におけるＡＧＰは、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ（登録商標）、Ｃｏｒｉｘａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）である。ＭＰＬ（登録商標）は、米国特許第４，４３６，７２７号；同第４，８７７，６１１号；同第４，８６６，０３４号および同第４，９１２，０９４号；同第４，９８７，２３７号；Ｊｏｈｎｓｏｎら、Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ４２：４６４０−４６４９（１９９９）；ＵｌｒｉｃｈおよびＭｙｅｒｓ、「Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ  Ｓｕｂｕｎｉｔ  ａｎｄ  Ａｄｊｕｖａｎｔ  Ａｐｐｒｏａｃｈ；ＰｏｗｅｌｌおよびＮｅｗｍａｎ編；Ｐｌｅｎｕｍ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、４９５−５２４，１９９５；これらの開示内容は、その全体が本明細書中に参考として援用される、において記載されている。
【００２３】
本発明の組成物において使用され得るサポニンとしては、サポニン（天然または合成により得られた）、サポニン結合体、サポニン誘導体、およびサポニン模倣物が挙げられ、これらの全ては、本明細書中に記載されるとおりである。
【００２４】
本発明の一つの局面に従って、免疫刺激組成物において使用されるサポニンは、Ｑｕｉｌｌａｊａサポニン（例えば、ＱｕｉｌＡおよび／またはＱＳ−２１（Ａｑｕｉｌａ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒ，ＭＡ））を含む。本発明のこの局面の１つの好ましい実施形態において、Ｑｕｉｌｌａｊａサポニンは、ＱＳ−７、ＱＳ−１７、ＱＳ−１８および／またはＱＳ−２１を含む。
【００２５】
本発明の別の局面に従って、免疫刺激組成物において使用されるサポニンは、トリテルペンサポニン親油性結合体を含み、この結合体は、３−グルクロン酸残基を含む非アシル化または脱アシル化（ｄｅｓａｃｙｌａｔｅｄ）のトリテルペンサポニン；および親油性部分を含み；ここで当該サポニンおよび当該親油性部分は、直接またはリンカー基を介してのいずれかで、互いに共有結合されており、そしてここで当該直接結合または当該リンカーへの結合は、当該３−グルクロン酸残基のカルボキシル炭素と、親油性残基またはリンカー基上の適切な官能基との間の共有結合を通して生じる。本発明において有用ないくつかのサポニン−親油性結合体（ＧＰＩ−０１００（ｑｕｉｌａｊａサポニン−親油性結合体）を含む）は、米国特許第５，９７７，０８１号および同第６，０８０，７２５号（それらの各々は、その全体が本明細書中に参考として援用される）において開示されている。他のサポニン−親油性結合体は、米国特許第６，２６２，０１９号（これは、その全体が本明細書中に参考として援用される）において開示されている。
【００２６】
トリテルペンサポニンは、トリテルペンアグリコンコア構造を有し得、この構造は、３位および２８位に分枝糖鎖が結合され、そしてアルデヒド基が４位に連結または結合されており；そしてこのサポニンは、もともとアシル化されていないか、またはトリテルペンアグリコンの２８位の糖に結合されているアシル基またはアシロイル基の除去を必要とするかのいずれかである。トリテルペンサポニンは、キラヤ酸（ｑｕｉｌｌａｉｃ  ａｃｉｄ）またはジプソゲニン（ｇｙｐｓｏｇｅｎｉｎ）コア構造を有し得る。
【００２７】
脱アシルサポニン（ｄｅｓａｃｙｌｓａｐｏｎｉｎ）または非アシル化サポニンは、Ｑｕｉｌｌａｊａ脱アシルサポニン、Ｓ．ｊｅｎｉｓｓｅｅｎｓｉｓ脱アシルサポニン，Ｇｙｐｓｏｐｈｉｌａサポニン、Ｓａｐｏｎａｒｉａサポニン、Ａｃａｎｔｈｏｐｈｙｌｌｕｍサポニン、およびルシオシド（ｌｕｃｙｏｓｉｄｅ）Ｐサポニンからなる群から選択され得る。
【００２８】
親油性部分は、脂肪酸、テルペノイド、脂肪族アミン、脂肪族アルコール、脂肪族メルカプタン、脂肪酸のモノ−もしくはポリ−Ｃ２−Ｃ４アルキレンオキシ誘導体、脂肪アルコールのモノ−もしくはポリ−Ｃ２−Ｃ４アルキレンオキシ誘導体、グリコシル脂肪酸、糖脂質、リン脂質、またはモノ−またはジ−アシルグリセロールの１つ以上の残基を含み得る。
【００２９】
本発明の別の局面では、免疫刺激組成物において使用されるサポニンは、サポニン／抗原共有結合結合体組成物を含む。
【００３０】
本発明の別の局面では、免疫刺激組成物において使用されるサポニンは、式：
【００３１】
【化１１】
2005525344.tif 000007
により表されるサポニン模倣化合物を含み、ここで、記号Ｒは、水素または−Ｃ（Ｏ）Ｈを表す。記号Ｒ１は、水素、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ２０脂肪族基、サッカリル基（ｓａｃｃｈａｒｙｌ  ｇｒｏｕｐ）、および式−Ｃ（Ｏ）−［Ｃ（Ｒ３）（Ｒ４）］ｋ−ＣＯＯＨまたは−［Ｃ（Ｒ３）（Ｒ４）］ｋ−ＣＯＯＨにより表される基（ここで各Ｒ３およびＲ４は、独立して、水素または必要に応じて置換されたＣ１−１０脂肪族基から選択されたメンバーである）から選択されるメンバーを表す。記号「ｋ」は、１〜５の整数を表す。記号Ｒ２は、水素、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ２０脂肪族基、および式−（ＣＨ２）ｒＣＨ（ＯＨ）（ＣＨ２）ｔＯＲ５（ここで、ｒおよびｔは、独立して１または２であり、そしてＲ５は、Ｃ２−２０アシル基、または式
【００３２】
【化１２】
2005525344.tif 000008
（ここでｊは、１〜５の整数であり、そしてＲ６およびＲ７は、独立して、水素および必要に応じて置換されたＣ１−２０脂肪族基から選択される）によって表される基）から選択されるメンバーを表す；またはそれらの薬理学的に受容可能な塩である。本発明の別の局面では、上記の免疫刺激組成物は、少なくとも１つの抗原をさらに含む。
【００３３】
このタイプのサポニン模倣物は、米国特許出願０９／８１０，９１５（２００１年３月１６日出願、Ｄａｖｉｄ  Ａ．Ｊｏｈｎｓｏｎによる、発明の名称「Ｎｏｖｅｌ  Ａｍｐｈｉｐａｔｈｉｃ  Ａｌｄｅｈｙｄｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  Ｕｓｅｓ  ａｓ  Ａｄｊｕｖａｎｔｓ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｅｆｆｅｃｔｏｒｓ」）およびＰＣＴ出願（公開番号）ＷＯ０１／７０６６３（これらは共に、本発明明細書によって、その全体が本明細書中に援用される）において開示されている。
【００３４】
本発明の別の局面に従って、本発明の免疫刺激組成物は、固形処方物、安定乳化処方物または水性処方物中に処方される。
【００３５】
本発明の別の局面に従って、病原感染、癌、または自己免疫障害を罹患する哺乳動物またはその疑いのある哺乳動物を処置する方法が提供され、この方法は、当該哺乳動物に、本発明の免疫刺激組成物の有効量を投与する工程を包含する。
【００３６】
本発明の別の局面に従って、動物において免疫応答を増強する方法が提供され、この方法は、当該動物に、本発明の免疫刺激組成物を投与する工程を包含する。
【００３７】
本発明の別の局面に従って、抗原に対して、動物において免疫応答を増強する方法が提供され、この方法は、当該動物に、本発明の免疫刺激組成物を抗原と組み合わせて投与する工程を包含する。
【００３８】
（定義）
用語「アシル」とは、脂肪族有機酸から、この酸のヒドロキシ部分の除去によって誘導される基をいう。従って、アシルは、例えば、アセチル、プロピオニル、ブチリル、デカノイル、ピバロイルなどを包含することが意図される。従って、「Ｃ１−Ｃ２０アシル基」は、１〜２０個の炭素を有するアシル基である。
【００３９】
用語「脂肪族」は、他に述べられない限り、非芳香族の直鎖状または分枝の鎖、または環式の炭化水素部分を意味し、飽和またはモノ−もしくはポリ−不飽和であり、示した数の炭素原子を有する（すなわち、Ｃ１−Ｃ１０は、１〜１０個の炭素を有することを意味する）、環状（ｃｙｃｌｉｃａｌ）エレメントおよび鎖エレメントの両方を含むような部分を含む。飽和炭化水素ラジカル（ｒａｄｉｃａｌｓ）のタイプとしては、アルキル基、アルキレン基、シクロアルキル基またはシクロアルキル−アルキル基（例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、メチレン、エチレン、ｎ−ブチレン、シクロプロピル、およびシクロプロピルメチル）が挙げられる。
【００４０】
不飽和脂肪族基は、１つ以上の二重および／または三重結合を有する基である。不飽和脂肪族の例としては、ビニル、２−プロペニル、クロチル、２−イソペンテニル、２−（ブタジエニル）、２，４−ペンタジエニル、３−（１，４−ペンタジエニル）、エチニル、１−および３−プロピニル、３−ブチニル、シクロヘキシニル、およびシクロヘキサジエニルが挙げられる。
【００４１】
「Ｃ１−Ｃ２０脂肪族基」は、１〜２０個の炭素を有する、置換されたまたは置換されていない脂肪族基である。同様に、「Ｃ１１脂肪族基」は、１１個の炭素を有する置換されたまたは置換されていない脂肪族基である。
【００４２】
用語「オキシ脂肪族（ｏｘｙａｌｉｐｈａｔｉｃ）」とは、その分子の残りの部分に酸素原子を介して結合された脂肪族基をいう。
【００４３】
用語「ハロ」または「ハロゲン」は、単独にまたは別の置換基の一部として、他に述べられない限り、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子を意味する。ハロゲン置換基を有する化合物において、ハロゲンは、同じであってもまたは異なっていてもよい。
【００４４】
脂肪族基の置換基は、以下から選択される種々の基であり得る：−ＯＲ’、＝Ｏ、＝Ｓ、＝ＮＲ’、＝Ｎ−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ”、−ＳＲ’、−ハロゲン、−ＳｉＲ’Ｒ”Ｒ”’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＣＯ２Ｒ’、−ＣＯＮＲ’Ｒ”、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ”Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＮＲ’−Ｃ（Ｏ）ＮＲ”Ｒ”’、−ＮＲ”Ｃ（Ｏ）２Ｒ’、−ＮＲ−Ｃ（ＮＲＲ’Ｒ”）＝ＮＲ’’’、−ＮＲ’Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’）＝ＮＲ’’’、−ＮＲ−Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’）＝ＮＲ’’’，−Ｓ（Ｏ）Ｒ’，−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲＳＯ２Ｒ’、−ＣＮおよび−ＮＯ２（０から（２ｍ’＋１）の範囲の数で、ここでｍ’は、このようなラジカル中の炭素原子の総数であり、そしてＲ’、Ｒ”およびＲ”’は、各々独立して、水素または（Ｃ１−Ｃ４）脂肪族基をいう。本発明の化合物が１つより多くのＲ基を含む場合、例えば、これらＲ基の各々は、独立して選択され、１つより多くのＲ’基、Ｒ”基およびＲ”’基が存在する場合も、これらの各々の基は同様にされる。Ｒ’およびＲ”が同じ窒素原子に結合されている場合、これらは、窒素原子と、および必要に応じてさらなるヘテロ原子と合わされて、５員環、６員環、または７員環を形成し得る。例えば、−ＮＲ’Ｒ”は、１−ピロリジニルおよび４−モルホリニルを含むことが意図される。置換基の上記説明から、当業者は、用語「脂肪族」が、ハロ脂肪族のような基（例えば、−ＣＦ３、ＣＣｌＦ２、および−ＣＨ２ＣＦ３）を包含することが意図されることを理解する。
【００４５】
用語「サッカリル（ｓａｃｃｈａｒｙｌ）」とは、糖（ｓｕｇａｒ）、糖質（ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ）、糖類（ｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）、二糖類（ｄｉｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）およびオリゴ糖類（ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）、または多糖類（ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）分子から、水素またはヒドロキシル基の除去によって誘導される基をいう。従って、サッカリル基（例えば、グルコシル、マンノシルなど）は、以下を含む（しかし、これらに限定されない）分子から誘導され得る：グルクロン酸、ラクトース、スクロース、マルトース、アロース、アルトロース、グルコース、マンノース、イドース、ガラクトース、タロース、リボース、アラビノース、キシロース、リキソース、トレオース、エリスロース、β−Ｄ−Ｎ−アセチルガラクトサミン、β−Ｄ−Ｎ−アセチルグルコサミン、フコース、シアル酸など。「Ｃ６−Ｃ２０サッカリル基」は、６〜２０個の炭素を有する置換された（例えば、アシル化サッカリル、アルキル化サッカリル、アリール化サッカリルなど）または置換されていないサッカリル基である。サッカリル基の例は、式：
【００４６】
【化１３】
2005525344.tif 000009
によって表されるグルクロン酸のＣ１位のヒドロキシルの除去によって形成されるラジカルである。波線結合は、グルクロニドラジカル（すなわち、グルクロン酸基）が別の置換基（例えば、アグリコン単位）に結合される箇所を示す。従って、サッカリル基は、Ｃ１位のヒドロキシルが除去されている糖分子を含む。
【００４７】
用語「薬学的に受容可能な塩」は、本明細書中に記載される化合物において見出される特定の置換基に依存して、相対的に非毒性の酸または塩基を用いて調製された、問題の化合物の塩を含むことを意味する。本発明の化合物が相対的に酸性の官能基を含む場合、塩は、ニートまたは適切な不活性な溶媒のいずれかで、所望の塩基の添加によって得られ得る。薬学的に受容可能な塩基付加塩の例としては、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、アンモニウム塩、有機アミノ塩、またはマグネシウム塩などが挙げられる。本発明の化合物が相対的に塩基性の官能基を含む場合、塩は、ニートまたは適切な不活性な溶媒のいずれかで、所望の酸の添加によって得られ得る。薬学的に受容可能な酸付加塩の例としては、塩酸、臭化水素酸、硝酸、炭酸、一水素炭酸、リン酸、一水素リン酸、二水素リン酸、硫酸、一水素リン酸、ヨウ化水素酸、または亜リン酸などのような無機酸から誘導される塩基、ならびに酢酸、プロピオン酸、イソ酪酸、マレイン酸、マロン酸、安息香酸、コハク酸、スベリン酸、フマル酸、乳酸、マンデル酸、フタル酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トリルスルホン酸、クエン酸、酒石酸、メタンスルホン酸などのような比較的無毒性の有機酸に由来する塩が挙げられる。アルギン酸などのようなアミノ酸の塩、グルクロン酸またはガラクルロン酸（ｇａｌａｃｔｕｎｏｒｉｃ  ａｃｉｄ）などのような有機酸の塩もまた含まれる（例えば、Ｂｅｒｇｅら、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ」、Ｊｏｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９７７、６６、１−１９を参照のこと）。本発明のある特定の化合物は、化合物が、塩基付加塩または酸付加塩のいずれかに変化され得る、塩基性官能基および酸性官能基の両方を含む。
【００４８】
化合物の天然の形態は、好ましくは、塩を塩基または酸と接触させて、そして本発明の化合物を従来の様式で単離することによって再生される。化合物の親形態は、特定の物理特性（例えば、極性溶媒における溶解性）において種々の塩形態とは異なるが、それ以外、塩は、本発明の目的について化合物の親形態に等価である。
【００４９】
塩形態に加えて、サポニンまたはアミノアルキルグルコサミニドホスフェートのプロドラック形態である化合物は、本発明の組成物に含まれ得る。本明細書中に記載される化合物のプロドラッグは、生理学的状態下で化学的変化を容易に受けて、本発明の化合物を提供する化合物である。さらに、プロドラッグは、エキソビボ環境において、化学的方法または生化学方法によって、本発明の化合物に変換され得る。例えば、プロドラッグは、適切な酵素または化学試薬とともに経皮パッチレザバに配置される場合、本発明の化合物にゆっくり変換され得る。
【００５０】
本発明の組成物において使用可能な特定の化合物は、非溶媒和形態および溶媒和形態（水和形態を含む）で存在し得る。一般的に、溶媒和形態は、非溶媒和形態であり、そして本発明の範囲内に含まれる。本発明の組成物において使用可能な特定の化合物は、複数の結晶形態または無定型形態で存在し得る。一般的に、全ての物理的形態は、本発明によって意図される使用に等価であり、そして本発明の範囲内であることが意図される。
【００５１】
本発明の組成物において使用可能な特定の化合物は、不斉炭素原子（光学中心）または二重結合を有し；ラセミ化合物、ジアステレオマー、幾何異性体および個々の異性体は、本発明の範囲内に含まれる。
【００５２】
本発明の組成物の化合物は、（＋）形態および（−）形態、ならびにラセミ形態で存在し得る。ラセミ形態は、公知の方法および技術によって、光学的鏡像体（ａｎｔｉｐｏｄｅ）に分割され得る。ラセミ形態を分離する一つの方法は、ラセミ化合物を、光学的に活性な酸のジアステレオマー塩へ変換することによる、ラセミアミンの分離によって例示される。ジアステレオマー塩は、一つ以上の当該分野で認識される方法を使用して分割される。光学的に活性なアミンは、続いて、塩基を用いて分割されるアミンを処理することによって遊離される。ラセミ混合物を光学的鏡像体に分割するための別の方法は、光学的に活性なマトリクスのクロマトグラフィーに基づく。従って、本発明の組成物において使用されるラセミ化合物は、例えば、ｄ−またはｌ−の酒石酸、−マンデル酸、または−ショウノウスルホン酸の塩の分別結晶によって、それらの光学的鏡像体に分割され得る。
【００５３】
このような化合物はまた、光学的に活性なカルボン酸（例えば、（＋）または（−）フェニルアラニン、（＋）または（−）フェニルグリシン、（＋）または（−）カンファン酸などに由来するもの）との反応によって、ジアステレオマーアミドの形成によって分割され得る。あるいは、これらは、化合物と光学的に活性なクロロホルメートなどとの反応によって、ジアステレオマーカルバメートの形成によって分割され得る。
【００５４】
光学的異性体を分割するためのさらなる方法は、当該分野において公知である。このような方法としては、ＣｏｌｌｅｔおよびＷｉｌｅｎ，ＥＮＡＴＩＯＭＥＲＳ，ＲＡＣＥＭＡＴＥＳ，ＡＮＤ  ＲＥＳＯＬＵＴＩＯＮ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８１）によって記載されるもの挙げられる。
【００５５】
さらに、本発明の組成物において使用可能な化合物のいくつかは、二重結合の周りの置換基の配置に依存して、ｓｙｎ−形態およびａｎｔｉ−形態（Ｚ−形態およびＥ−形態）に存在し得る。従って、本発明の組成物の化合物は、ｓｙｎ−形態またはａｎｔｉ−形態（Ｚ−形態およびＥ−形態）であり得るか、またはその混合物であり得る。
【００５６】
これらの組成物において使用可能な化合物はまた、このような化合物を構成する一つ以上の原子において、原子同位体の非自然な特性を含み得る。例えば、化合物は、放射性同位体（例えば、トリチウム（３Ｈ）、ヨウ素−１２５（１２５Ｉ）または炭素−１４（１４Ｃ））で放射標識され得る。このような化合物の全ての同位体バリエーションは、放射性であるかないかに関わらず、本発明の範囲内に含まれることが意図される。
【００５７】
「有効免疫強化量」は、一つ以上の抗原に対する免疫応答を増強するのに有効である化合物または組成物の量である。免疫応答は、制限しないが、抗原（例えば、ＨＢｓＡｇなど）に対する抗体力価を測定することによって、疾患または抗原チャレンジなどに対して応答して宿主を免疫する、本発明の化合物を含むワクチンの能力を評価することによって測定され得る。好ましくは、被験体に対する化合物または組成物の「有効免疫強化量」を投与することは、非免疫コントロールよりも１０％以上、さらにより好ましくは、非免疫コントロールよりも２０％以上、そしてなおより好ましくは、非免疫コントロールよりも３０％以上、そして最も好ましくは、非免疫コントロールよりも１００％以上、一つ以上の抗体力価（例えば、ＩｇＧ１ａ、ＩｇＧ１ｂ、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂなど）を増加する。
【００５８】
（発明の詳細な説明）
（Ｉ．導入）
本発明は、少なくとも１つのアミノアルキルグルコサミニドリン酸（ＡＧＰ）および少なくとも１つのサポニン化合物（本明細書中で両方とも定義される）を含む組成物に関する。これらの化合物は、被験体に投与される場合、免疫刺激薬（ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌａｎｔ）として有用である。特定の実施形態において、これらの免疫刺激薬は、ワクチンとともに投与される。
【００５９】
（ＩＩ．アミノアルキルグルコサミニドリン酸（ＡＧＰ））
アミノアルキルグルコサミニドリン酸（ＡＧＰ）化合物は、一般的に、アミノアルキル（アグリコン）基を有するグルコシド結合中に２−デオキシ−２−アミノ−α−Ｄ−グルコピラノース（グルコサミニド）を含む。適切なＡＧＰ化合物およびそれらの合成および使用のための方法は、一般的に以下に記載される：米国特許第６，１１３，９１８号および同第６，３０３，３４７号、ＷＯ  ９８／５０３９９、米国特許出願番号０９／０７４，７２０（１９９８年５月７日に出願された）、国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ０１／２４２８４およびＪｏｈｎｓｏｎら（１９９９）Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．９：２２７３−２２７８（これらの開示は、それらの全体において、本明細書中に参考として援用される）。
【００６０】
本発明の組成物に使用されるＡＧＰ化合物は、単糖化合物または二糖化合物であり得る。従って、本発明は、以下：
【００６１】
【化１４】
2005525344.tif 000010
の式を有する１つ以上のＡＧＰ化合物を含む免疫刺激組成物ならびにその薬学的に受容可能な塩および誘導体を提供し、ここで、Ｙは、−Ｏ−または−ＮＨ−であり；Ｒ１およびＲ２は、飽和または不飽和の（Ｃ２−Ｃ２４）の脂肪族アシル基から各々独立して選択され；Ｒ８は、−Ｈまたは−ＰＯ３Ｒ１１Ｒ１２であり、ここで、Ｒ１１およびＲ１２は、各々独立して−Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ４）脂肪族基であり；Ｒ９は、−Ｈ、−ＣＨ３または−ＰＯ３Ｒ１３Ｒ１４であり、ここでＲ１３およびＲ１４は、−Ｈおよび（Ｃ１−Ｃ４）脂肪族基から各々独立して選択され；そしてここで少なくとも１つのＲ８およびＲ９は、リン含有基であるが、Ｒ８およびＲ９の両方ともが、リン含有基ではなく；そしてＸは、以下：
【００６２】
【化１５】
2005525344.tif 000011
の式から選択され；
ここで、添え字のｎ、ｍ、ｐ、ｑ、ｎ’、ｍ’、ｐ’およびｑ’は、各々独立して０〜６の整数であるが、但し、ｐ’およびｍ’の合計は、０〜６の整数であり；Ｒ３、Ｒ１１およびＲ１２は、独立して飽和または不飽和の必要応じて置換された脂肪族（Ｃ２−Ｃ２４）アシル基であるが、但し、Ｘが式（Ｉａ）である場合、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３のうちの１つは、必要に応じて水素であり；Ｒ４およびＲ５は、Ｈおよびメチルから独立して選択され；Ｒ６およびＲ７は、以下：Ｈ、ＯＨ、（Ｃ１−Ｃ４）オキシ脂肪族（オキシａｌｉｐｈａｔｉｃ）基、−ＰＯ３Ｈ２、−ＯＰＯ３Ｈ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＯＳＯ３Ｈ、−ＮＲ１５Ｒ１６、−ＳＲ１５、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＣＨＯ、−ＣＯ２Ｒ１５、−ＣＯＮＲ１５Ｒ１６、−ＰＯ３Ｒ１５Ｒ１６、−ＯＰＯ３Ｒ１５Ｒ１６、−ＳＯ３Ｒ１５および−ＯＳＯ３Ｒ１５から独立して選択され、ここで、Ｒ１５およびＲ１６は、Ｈおよび（Ｃ１−Ｃ４）脂肪族基から独立して選択され；Ｒ１０は、以下：Ｈ、ＣＨ３、−ＰＯ３Ｈ２、ω−ホスホノオキシ（Ｃ２−Ｃ２４）アルキルおよびω−カルボキシ（Ｃ１−Ｃ２４）アルキルから選択され；Ｒ１３は、以下：Ｈ、ＯＨ、（Ｃ１−Ｃ４）オキシ脂肪族基、−ＰＯ３Ｒ１７Ｒ１８、−ＯＰＯ３Ｒ１７Ｒ１８、−ＳＯ３Ｒ１７、−ＯＳＯ３Ｒ１７、−ＮＲ１７Ｒ１８、−ＳＲ１７、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＣＨＯ、−ＣＯ２Ｒ１７および−ＣＯＮＲ１７Ｒ１８から各独立して選択され、ここで、Ｒ１７およびＲ１８は、Ｈおよび（Ｃ１−Ｃ４）脂肪族基から各々独立して選択され；そしてＺは、−Ｏ−または−Ｓ−である。
【００６３】
本発明のＡＧＰ化合物ならびにその薬学的に受容可能な塩、誘導体および生物学的に活性なフラグメントの１つの型は、以下：
【００６４】
【化１６】
2005525344.tif 000012
の構造によって一般的に記載され得、ここで、Ｘは、酸素原子または硫黄原子を表し、Ｙは、酸素原子またはＮＨ基を表し、「ｎ」、「ｍ」、「ｐ」および「ｑ」は、０〜６から独立して選択される整数であり；Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、脂肪アシル残基（７〜１６の炭素原子を有する飽和、不飽和および分枝のアシル基を含む）を表し、；Ｒ４およびＲ５は、水素およびメチルから独立して選択され；Ｒ６およびＲ７は、以下：水素、ヒドロキシ、アルコキシ、ホスホノ、ホスホノオキシ、スルホ、スルホオキシ、アミノ、メルカプト、シアノ、ニトロ、ホルミルまたはカルボキシならびにそのエステルおよびアミドから独立して選択され；Ｒ８およびＲ９は、ホスホノまたは水素から独立して選択され、ここでＲ８およびＲ９の少なくとも１つは、ホスホノである。直鎖状脂肪アシル残基が結合される３’不斉炭素中心の立体配置は、ＲまたはＳであるが、Ｒが好ましい。Ｒ４またはＲ５が結合される炭素原子の立体化学は、ＲまたはＳであり得る。全ての立体異性体（エナンチオマーまたはジアステレオマーの両方およびそれらの混合物）は、本発明の範囲内であることが考慮される。米国特許第６，１１３，９１８号を参照のこと。
【００６５】
あるいは、免疫刺激組成物に使用されるＡＧＰ化合物ならびにその薬学的に受容可能な塩、誘導体および生物学的に活性なフラグメントは、一般に以下：
【００６６】
【化１７】
2005525344.tif 000013
の構造に従い得、ここで、Ｘは、軸位置またはエクアトリアルな位置での酸素原子または硫黄原子を表し；Ｙは、酸素原子またはＮＨ基を表し；「ｎ」、「ｍ」、「ｐ」および「ｑ」は、０〜６から独立して選択される整数であり；Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、脂肪アシル残基（１〜２０の炭素原子を有する飽和、不飽和および分枝のアシル基を含む）を表し、そしてＲ１、Ｒ２およびＲ３のうちの１つは、必要に応じて水素であり；Ｒ４およびＲ５は、水素およびメチルから独立して選択され；Ｒ６およびＲ７は、以下：水素、ヒドロキシ、アルコキシ、ホスホノ、ホスホノオキシ、スルホ、スルホオキシ、アミノ、メルカプト、シアノ、ニトロ、ホルミルまたはカルボキシならびにそのエステルおよびアミドから独立して選択され；Ｒ８およびＲ９は、ホスホノまたは水素から独立して選択され、ここでＲ８およびＲ９の少なくとも１つは、ホスホノである。米国特許第６，３０３，３４７を参照のこと。
【００６７】
なおさらなるＡＧＰ化合物およびその薬学的に受容可能な塩は、一般的に以下：
【００６８】
【化１８】
2005525344.tif 000014
の構造に従い、ここで、Ｘは、−Ｏ−および−ＮＨ−からなる群から選択されるメンバーであり；Ｙは、−Ｏ−および−Ｓ−からなる群から選択されるメンバーであり；Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、各々、（Ｃ２−Ｃ２４）アシルからなる群から独立して選択されるメンバーであり；Ｒ４は、−Ｈおよび−ＰＯ３Ｒ７Ｒ８からなる群から選択されるメンバーであり、ここでＲ７およびＲ８は、各々、−Ｈおよび（Ｃ１−Ｃ４）アルキルからなる群から独立して選択されるメンバーであり；Ｒ５は、−Ｈ、−ＣＨ３および−ＰＯ３Ｒ９Ｒ１０からなる群から選択されるメンバーであり、ここでＲ９およびＲ１０は、各々、−Ｈおよび（Ｃ１−Ｃ４）アルキルからなる群から独立して選択されるメンバーであり；Ｒ６は、以下：Ｈ、ＯＨ、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、−ＰＯ３Ｒ１１Ｒ１２、−ＯＰ３Ｒ１１Ｒ１２、−ＳＯ３Ｒ１１、−ＯＳＯ３Ｒ１１、−ＮＲ１１Ｒ１２、−ＳＲ１１、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＣＨＯ、−ＣＯ２Ｒ１１，および−ＣＯＮＲ１１Ｒ１２から選択され、ここで、Ｒ１１およびＲ１２は、各々、Ｈおよび（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから独立して選択されるが、但し、Ｒ４およびＲ５のうちの１つは、リン含有基であり、そしてＲ４が−ＰＯ３Ｒ７Ｒ８である場合、Ｒ５は、−ＰＯ３Ｒ９Ｒ１０以外であり；ここで、「＊１」、「＊２」、「＊３」および「＊＊」は、キラル中心を表し；ここで添え字のｎ、ｍ、ｐおよびｑは、各々独立して０〜６の整数であるが、但し、ｐおよびｍの合計は、０〜６である。ＰＣＴ／ＵＳ０１／２４２８４（２００１年８月３日に出願）を参照のこと。特定の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、各々、（Ｃ９−Ｃ１６）アシルからなる群から、または（Ｃ１０−Ｃ１４）アシルからなる群から、または（Ｃ１０−Ｃ１２）アシルからなる群から独立して選択されるメンバーである。ＡＧＰ化合物のヘテロ原子ＸおよびＹは、示されるような、酸素または硫黄あるいは−ＮＨであり得る。好ましい実施形態において、Ｘは、酸素であり、そして典型的にエクアトリアルな位置に存在する。分子の安定性はＸでの置換によって影響されるが、これらの置換を有する分子の免疫調節活性は、変更を予測されない。
【００６９】
ヘテロ原子Ｘとアグリコン窒素原子との間の炭素原子の数は、可変値「ｎ」および「ｍ」によって決定される。可変値「ｎ」および「ｍ」は、０〜６の整数であり得る。好ましい実施形態において、ヘテロ原子Ｘとアグリコン窒素原子との間の炭素原子の数は、約２〜約６であり、最も好ましくは約２〜約４である。
【００７０】
ＡＧＰは、例えば、グルコサミニド環上の４位または６位（式ＩａのＲ８またはＲ９）でリン酸化される。例えば、式（Ｉａ）の１つの例示的なＡＧＰにおいて、Ｒ８は、ホスホノであり、そしてＲ９は水素である。１つの実施形態において、ＡＧＰは、ヘキサアシル化される（すなわち、これらは全部で６つの脂肪酸残基を含む）。アミノアルキルグルコサミニド部分は、グルコサミニド単位の２−アミノ基および３−ヒドロキシル基で、および３−ヒドロキシアルカノイル残基を有するアグリコン単位のアミノ基でアシル化される。式（Ｉａ）において、３つの位置は、３−ヒドロキテトラデカノイル部分を用いてアシル化される。３−ヒドロキテトラデカノイル残基は、次いで、直鎖状脂肪酸（Ｒ１−Ｒ３）で置換され、全てで、３つの３−ｎ−アルカノイルオキシテトラデカノイル残基または６つの脂肪酸基を提供する。
【００７１】
別の実施形態において、ＡＧＰ化合物は、ペンタアシル化される（すなわち、これらは全部で５つの脂肪酸残基を含む）。より詳細に、式（Ｉａの）３−ヒドロキシテトラデカノイル残基は、Ｒ１位、Ｒ２位およびＲ３位の３つうちの２つで直鎖状脂肪酸で置換され、Ｒ１位、Ｒ２位およびＲ３位の３つが水素である。言い換えると、−ＯＲ１、−ＯＲ２および−ＯＲ３の少なくとも１つが、ヒドロキシルである。
【００７２】
ＡＧＰにおける直鎖状脂肪酸Ｒ１〜Ｒ３の鎖長は、２〜約２４の炭素であり得、そして典型的に、約７〜約１６の炭素である。好ましくは、Ｒ１〜Ｒ３は、約９〜約１４の炭素である。これらの直鎖状脂肪酸の鎖長は、同じかまたは異なり得る。直鎖状脂肪酸のみが記載されるが、本発明の化合物のＲ１〜Ｒ３で置換された不飽和脂肪酸（すなわち、脂肪酸部分が、二重結合または三重結合を有する）が、生物学的に活性な分子を提供することが予測される。さらに、３−ヒドロキシアルカノイル残基の鎖長におけるわずかな改変は、劇的に効果な生物学的活性を予測されない。
【００７３】
本発明の好ましい実施形態は、上記ＡＧＰ化合物を含む組成物およびこのような組成物の使用方法を含み、以下の一つ以上を有する：
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ１１およびＲ１２は、好ましくは、（Ｃ７〜Ｃ１６）脂肪族アシル基、より好ましくは、（Ｃ８〜Ｃ１４）脂肪族アシル基、さらにより好ましくは、（Ｃ９〜Ｃ１４）脂肪族アシル基、なおより好ましくは、（Ｃ１０〜Ｃ１４）脂肪族アシル基、最も好ましくは、（Ｃ１０〜Ｃ１４）飽和脂肪族アシル基である；
Ｘは、式（Ｉａ）であり、そしてＲ１、Ｒ２、およびＲ３は、全てアシル基である（すなわち、化合物は、ヘキサ−アシル化される）；
Ｘは、式（Ｉａ）であり、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３のうちの１つは、水素である（すなわち、化合物は、ペンタ−アシル化される）；
Ｚは、酸素である；
Ｒ８またはＲ９は、リン含有基である場合、このような基は、好ましくは、非置換ホスホロ基である（Ｒ１１およびＲ１２、またはＲ１３およびＲ１４は、それぞれ、両方水素である）；より好ましくは、Ｒ８は、リン含有基であり、そしてＲ９は、水素である；
ｎ＋ｍの合計は、０〜４の整数であり、最も好ましくは、０、１または２である；
ｐおよびｑは、独立して、０、１または２である；
ｎ’、ｍ’、ｐ’、およびｑ’は、好ましくは、独立して、０〜３の整数であり；より好ましくは、０、１、または２であり；そして最も好ましくは、ｎ’は、１であり、ｍ’は、２であり、そしてｐ’およびｑ’は、両方とも０である［すなわち、このタイプの化合物（Ｙは、式（Ｉｃ）である）は、２−ピロリジニルメチル構成を有する］。
【００７４】
本発明の組成物で使用可能な別のタイプのＡＧＰは、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ（登録商標））である。ＭＰＬ（登録商標）は、米国特許第４，４３６，７２７号；同第４，８７７，６１１号；同第４，８６６，０３４号および同第４，９１２，０９４号；同第４，９８７，２３７号；Ｊｏｈｎｓｏｎら、Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ４２：４６４０−４６４９（１９９９）；ＵｌｒｉｃｈおよびＭｙｅｒｓ、Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ  Ｓｕｂｕｎｉｔ  ａｎｄ  Ａｄｊｕｖａｎｔ  Ａｐｐｒｏａｃｈ；Ｐｏｗｅｌｌ  およびＮｅｗｍａｎ編；Ｐｌｅｎｕｍ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，４９５−５２４，１９９５（これらの開示は、本明細書中において、それらの全体が、参考として援用される）に記載される。ＭＰＬは、しばしば、ジサッカリドの混合物を含む化合物の混合物の形態であり、このいくつは、式（Ｉｂ）であり、そしてそのいくつかは、式（Ｉｂ）に類似の構造を有するが、より少ない程度のアシル化を有する。
【００７５】
以下は、式（Ｉａ）のＡＧＰ化合物の例示的なサブタイプである。
【００７６】
このようなＡＧＰの１つの例示的なクラスにおいて、Ｒ６は、カルボキシであり、Ｘは、Ｏである；Ｙは、Ｏである；ｎ、ｍ、ｐおよびｑは、０である；Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、１０個の炭素原子を有する直鎖状（ｎｏｒｍａｌ）脂肪アシル残基である；Ｒ４、Ｒ５およびＲ７は、Ｈである；Ｒ８は、ホスホノである；Ｒ９は、Ｈである；Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、Ｒ配置を有するステレオジエン中心（ｓｔｅｒｅｏｇｅｎｉｃ  ｃｅｎｔｅｒ）に各々結合される；そしてＲ５は、Ｓ配置を有するステレオジエン中心に結合される。
【００７７】
このようなＡＧＰの別の例示的なクラスにおいて、Ｒ６は、カルボキシであり、Ｘは、Ｏである；Ｙは、Ｏである；ｎ、ｍ、ｐおよびｑは、０である；Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、１２個の炭素原子を有する直鎖状脂肪アシル残基である；Ｒ４、Ｒ５およびＲ７は、Ｈである；Ｒ８は、ホスホノである；Ｒ９は、Ｈである；Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、Ｒ配置を有するステレオジエン中心に各々結合される；そしてＲ５は、Ｓ配置を有するステレオジエン中心に結合される。
【００７８】
このようなＡＧＰの別の例示的なクラスにおいて、Ｒ６は、カルボキシであり、Ｘは、Ｏである；Ｙは、Ｏである；ｎ、ｍ、ｐおよびｑは、０である；Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、１０個の炭素原子を有する直鎖状脂肪アシル残基である；Ｒ４、Ｒ５およびＲ７は、Ｈである；Ｒ８は、ホスホノである；Ｒ９は、Ｈである；Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、Ｒ配置を有するステレオジエン中心に各々結合される；そしてＲ５は、Ｒ配置を有するステレオジエン中心に結合される。
【００７９】
このようなＡＧＰの別の例示的なクラスにおいて、Ｒ６は、カルボキシであり、Ｘは、Ｏである；Ｙは、Ｏである；ｎ、ｍ、ｐおよびｑは、０である；Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、８個の炭素原子を有する直鎖状脂肪アシル残基である；Ｒ４、Ｒ５およびＲ７は、Ｈである；Ｒ８は、ホスホノである；Ｒ９は、Ｈである；Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、Ｒ配置を有するステレオジエン中心に各々結合される；そしてＲ５は、Ｓ配置を有するステレオジエン中心に結合される。
【００８０】
このようなＡＧＰの別の例示的なクラスにおいて、Ｒ６は、Ｈであり、Ｘは、Ｏである；Ｙは、Ｏである；ｎは、２である；ｍ、ｐおよびｑは、０である；Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、１４個の炭素原子を有する直鎖状脂肪アシル残基である；Ｒ４、Ｒ５およびＲ７は、Ｈである；Ｒ８は、ホスホノである；Ｒ９は、Ｈである；そしてＲ１、Ｒ２およびＲ３は、Ｒ配置を有するステレオジエン中心に各々結合される。
【００８１】
このようなＡＧＰの別の例示的なクラスにおいて、Ｒ６は、Ｈであり、Ｘは、Ｏである；Ｙは、Ｏである；ｎは、１である；ｍおよびｐは、０である；ｑは、１である；Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、１０個の炭素原子を有する直鎖状脂肪アシル残基である；Ｒ４およびＲ５は、Ｈである；Ｒ７は、カルボキシである；Ｒ８は、ホスホノである；Ｒ９は、Ｈである；そしてＲ１、Ｒ２およびＲ３は、Ｒ配置を有するステレオジエン中心に各々結合される。
【００８２】
このようなＡＧＰの別の例示的なクラスにおいて、Ｒ６は、Ｈであり、Ｘは、Ｏである；Ｙは、Ｏである；ｍ、ｎ、ｐおよびｑは、０である；Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、１４個の炭素原子を有する直鎖状脂肪アシル残基である；Ｒ４、Ｒ５およびＲ７は、Ｈである；Ｒ８は、ホスホノである；Ｒ９は、Ｈである；そしてＲ１、Ｒ２およびＲ３は、Ｒ配置を有するステレオジエン中心に各々結合される。
【００８３】
このようなＡＧＰの別の例示的なクラスにおいて、Ｒ６は、Ｈであり、Ｘは、Ｏである；Ｙは、Ｏである；ｍ、ｎ、ｐおよびｑは、０である；Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、１０個の炭素原子を有する直鎖状脂肪アシル残基である；Ｒ４、Ｒ５およびＲ７は、Ｈである；Ｒ８は、ホスホノである；Ｒ９は、Ｈである；そしてＲ１、Ｒ２およびＲ３は、Ｒ配置を有するステレオジエン中心に各々結合される。
【００８４】
このようなＡＧＰの別の例示的なクラスにおいて、Ｒ６は、Ｈであり、Ｘは、Ｏである；Ｙは、Ｏである；ｍ、ｐおよびｑは、０である；ｎは、１である；Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、１４個の炭素原子を有する直鎖状脂肪アシル残基である；Ｒ４、Ｒ５およびＲ７は、Ｈである；Ｒ８は、ホスホノである；Ｒ９は、Ｈである；そしてＲ１、Ｒ２およびＲ３は、Ｒ配置を有するステレオジエン中心に各々結合される。
【００８５】
このようなＡＧＰの別の例示的なクラスにおいて、Ｒ６は、ヒドロキシであり、Ｘは、Ｏである；Ｙは、Ｏである；ｍ、ｎおよびｑは、０である；ｐは、１である；Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、１２個の炭素原子を有する直鎖状脂肪アシル残基である；Ｒ４およびＲ５は、Ｈである；Ｒ７は、Ｈである；Ｒ８は、ホスホノである；Ｒ９は、Ｈである；Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、Ｒ配置を有するステレオジエン中心に各々結合される；そしてＲ５は、Ｓ配置を有するステレオジエン中心に結合される。
【００８６】
このようなＡＧＰの別の例示的なクラスにおいて、Ｒ６は、ヒドロキシであり、Ｘは、Ｏである；Ｙは、Ｏである；ｍおよびｑは、０である；ｎおよびｐは、１である；Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、１０個の炭素原子を有する直鎖状脂肪アシル残基である；Ｒ４、Ｒ５およびＲ７は、Ｈである；Ｒ８は、ホスホノである；Ｒ９は、Ｈである；Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、Ｒ配置を有するステレオジエン中心に各々結合される；そしてＲ５は、Ｓ配置を有するステレオジエン中心に結合される。
【００８７】
このようなＡＧＰの別の例示的なクラスにおいて、Ｒ６は、ヒドロキシであり、Ｘは、Ｏである；Ｙは、Ｏである；ｍ、ｎおよびｑは、０である；ｐは、２である；Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、１０個の炭素原子を有する直鎖状脂肪アシル残基である；Ｒ４、Ｒ５およびＲ７は、Ｈである；Ｒ８は、ホスホノである；Ｒ９は、Ｈである；Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、Ｒ配置を有するステレオジエン中心に各々結合される；そしてＲ５は、Ｓ配置を有するステレオジエン中心に結合される。
【００８８】
このようなＡＧＰの別の例示的なクラスにおいて、Ｒ６は、ヒドロキシであり、Ｘは、Ｏである；Ｙは、Ｏである；ｍ、ｎおよびｑは、０である；ｐは、１である；Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、１４個の炭素原子を有する直鎖状脂肪アシル残基である；Ｒ４、Ｒ５およびＲ７は、Ｈである；Ｒ８は、ホスホノである；Ｒ９は、Ｈである；Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、Ｒ配置を有するステレオジエン中心に各々結合される；そしてＲ５は、Ｒ配置を有するステレオジエン中心に結合される。
【００８９】
このようなＡＧＰの別の例示的なクラスにおいて、Ｒ６は、ヒドロキシであり、Ｘは、Ｏである；Ｙは、Ｏである；ｍ、ｎおよびｑは、０である；ｐは、１である；Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、１４個の炭素原子を有する直鎖状脂肪アシル残基である；Ｒ４、Ｒ５およびＲ７は、Ｈである；Ｒ８は、ホスホノである；Ｒ９は、Ｈである；Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、Ｒ配置を有するステレオジエン中心に各々結合される；そしてＲ５は、Ｓ配置を有するステレオジエン中心に結合される。
【００９０】
このようなＡＧＰの別の例示的なクラスにおいて、Ｒ６は、ヒドロキシであり、Ｘは、Ｏである；Ｙは、Ｏである；ｍ、ｎおよびｑは、０である；ｐは、１である；Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、１１個の炭素原子を有する直鎖状脂肪アシル残基である；Ｒ４、Ｒ５およびＲ７は、Ｈである；Ｒ８は、ホスホノである；Ｒ９は、Ｈである；Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、Ｒ配置を有するステレオジエン中心に各々結合される；そしてＲ５は、Ｓ配置を有するステレオジエン中心に結合される。
【００９１】
このようなＡＧＰの別の例示的なクラスにおいて、Ｒ６は、ヒドロキシであり、Ｘは、Ｏである；Ｙは、Ｏである；ｍ、ｎおよびｑは、０である；ｐは、１である；Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、１０個の炭素原子を有する直鎖状脂肪アシル残基である；Ｒ４、Ｒ５およびＲ７は、Ｈである；Ｒ８は、ホスホノである；Ｒ９は、Ｈである；Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、Ｒ配置を有するステレオジエン中心に各々結合される；そしてＲ５は、Ｓ配置を有するステレオジエン中心に結合される。
【００９２】
このようなＡＧＰの別の例示的なクラスにおいて、Ｘは、Ｏである；Ｙは、Ｏである；ｍ、ｎ、ｐおよびｑは、０である；Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、１０の炭素原子を有する直鎖状脂肪アシル残基である；Ｒ４およびＲ５は、Ｈである；Ｒ６は、アミノカルボニルである；Ｒ７は、Ｈである；Ｒ８は、ホスホノである；Ｒ９は、Ｈである；Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、Ｒ配置を有するステレオジエン中心に各々結合される；そしてＲ５は、Ｓ配置を有するステレオジエン中心に結合される。
【００９３】
本発明の１つの特定の好ましい実施形態において、ＡＧＰは、２−［（Ｒ）−３−テトラデカノイルオキシテトラデカノイルアミノ］エチル２−デオキシ−４−Ｏ−ホスホノ−３−Ｏ−［（Ｒ）−３−テトラデカノイルオキシテトラデカノイル］−２−［（Ｒ）−３−テトラデカノイルオキシテトラデカノイルアミノ］−β−Ｄ−グルコピラノシドトリエチルアンモニウム塩である。これは、式（Ｉａ）に記載される構造を有する化合物に対応し、ここで、Ｒ１＝Ｒ２＝Ｒ３＝ｎ−Ｃ１３Ｈ２７ＣＯ、Ｘ＝Ｙ＝Ｏ、ｎ＝ｍ＝ｐ＝ｑ＝０、Ｒ４＝Ｒ５＝Ｒ６＝Ｒ７＝Ｒ９＝Ｈ、そしてＲ８＝ＰＯ３Ｈ２であり、そして以下の「実施例」の節において、化合物Ｂ１９と呼ばれる。
【００９４】
本発明のさらなる実施形態において、式（Ｉａ）の好ましいＡＧＰ化合物は、以下を含む：
【００９５】
【化１９】
2005525344.tif 000015
【００９６】
【化２０】
2005525344.tif 000016
示される全ての化合物に関し：Ｘ＝Ｙ＝Ｏ；Ｒ４＝Ｒ５＝Ｈ；ｍ＝０；Ｒ８＝ホスホノ；Ｒ９＝Ｈ。
＊Ｒ５が結合される炭素原子の立体化学は、Ｓである。
＊＊Ｒ５が結合される炭素原子の立体化学は、Ｒである。
【００９７】
なお別の実施形態において、式（Ｉａ）のＡＧＰは：
【００９８】
【化２１】
2005525344.tif 000017
である。
【００９９】
（ＩＩＩ．サポニン）
「サポニン」は、その用語が本明細書中で使用される場合、天然および合成のグリコシドトリテルペノイド化合物および薬学的に受容可能な塩、誘導体、模倣物（例えば、イソツカレゾール（ｉｓｏｔｕｃａｒｅｓｏｌ）およびその誘導体）および／または免疫アジュバント活性を有する、それらの生物学的に活性なフラグメントを含む。
【０１００】
１つの例示的な実施形態において、本発明のワクチン組成物に使用されるサポニンは、米国特許第５，０５７，５４０号（その開示は、その全体が参考として本明細書中に援用される）に記載されるように、Ｑｕｉｌｌａｊａ  ｓａｐｏｎａｒｉａ  Ｍｏｌｉｎａ樹皮より精製され得る。
【０１０１】
サポニンのアジュバント性質は、１９３０年代に、フランスで最初に認識された（Ｂｏｍｆｏｒｄら、Ｖａｃｃｉｎｅ  １９９２、１０：５７２〜５７７を参照のこと）。２０年後、Ｑｕｉｌｌａｊａ  ｓａｐｏｎａｒｉａ  Ｍｏｌｉｎａ  ｔｒｅｅ樹皮に由来するサポニンは、獣医学における幅広い適用を見出されたが、これらの粗製調製物の可変性および毒性は、ヒトワクチンにおけるそれらの使用を妨げた（Ｋｅｎｓｉｌら、Ｉｎ  Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ  Ｓｕｂｕｎｉｔ  ａｎｄ  Ａｄｊｕｖａｎｔ  Ａｐｐｒｏａｃｈ；Ｐｏｗｅｌｌ，Ｍ．Ｆ．，Ｎｅｗｍａｎ，Ｊ．Ｊ．編；Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９５  ５２５〜５４１頁を参照のこと）。
【０１０２】
１９７０年代において、部分的に精製されたサポニン画分（Ｑｕｉｌ  Ａとして公知）は、減少した局所反応および増加した潜在力を与えることが示された（Ｋｅｎｓｉｌら、１９９５を参照のこと）。さらに、Ｑｕｉｌ  Ａ画分（ＨＰＬＣにより少なくとも２４個の化合物からなる）は、４つの最も一般的なサポニン（ＱＳ−７、ＱＳ−１７、ＱＳ−１８およびＱＳ−２１）は、強力なアジュバントであることを示した（Ｋｅｎｓｉｌ，Ｃ．Ｒ．Ｃｒｉｔ  Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒ．Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔ．１９９６，１３，１〜５５；Ｋｅｎｓｉｌら，１９９５を参照のこと）。ＱＳ−２１およびＱＳ−７は、それらのうち最も低い毒性であった。部分的に、その減少した毒性、非常に精製された状態（４つ以上の化合物の混合物をなお介して）（Ｓｏｌｔｙｓｉｋ，Ｓ．；Ｂｅｄｏｒｅ，Ｄ．Ａ．；Ｋｅｎｓｉｌ，Ｃ．Ｒ．Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１９９３，６９０：３９２〜３９５を参照のこと）およびより完全な構造の特徴づけのため、ＱＳ−２１（３）は、ヒト臨床試験に入るために選択された最初のサポニンであった（Ｋｅｎｓｉｌ，１９９６；Ｋｅｎｓｉｌら，１９９５を参照のこと）。
【０１０３】
ＱＳ−２１および他のＱｕｉｌｌａｊａサポニンは、可溶性Ｔ依存薬剤およびＴ非依存薬剤の両方に対する特異的な免疫応答を増加し、主にＩｇＧ１またはＩｇＭからＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂサブクラスへの、Ｂ細胞におけるＩｇサブクラススイッチを促進する（Ｋｅｎｓｉｌら、１９９５）。ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂイソタイプは、抗体依存細胞の細胞毒性および補体結合に関与すると考えられる（ＳｎａｐｐｅｒおよびＦｉｎｋｅｌｍａｎ，Ｉｎ  Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，第４版；Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．編：Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ：Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ．，１９９９，８３１〜８６１頁）。これらの抗体イソタイプはまた、Ｔｈ−１型応答ならびにＣＴＬ分化および成熟において役割を果たす、ＩＬ−２およびＩＦＮ−γ−サイトカインと関連する（ＣｏｎｓｔａｎｔおよびＢｏｔｔｏｍｌｙ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １９９７，１５：２９７〜３２２）。結果として、ＱＳ−２１および他のＱｕｉｌｌａｊａサポニンは、クラスＩ  ＭＨＣ制限ＣＤ８＋  ＣＴＬサブユニット抗原の強力なインデューサーである（Ｋｅｎｓｉｌ，１９９６；Ｋｅｎｓｉｌら，１９９５）。
【０１０４】
本発明の局面に従って、免疫賦活薬組成物に使用されるサポニンは、Ｑｕｉｌｌａｊａサポニンを含む。本発明のこの局面の１つの好ましい実施形態において、Ｑｕｉｌｌａｊａサポニンは、ＱＳ−７、ＱＳ−１７、ＱＳ−１８および／またはＱＳ−２１を含む。
【０１０５】
本発明の別の局面に従って、免疫賦活薬組成物に使用されるサポニンは、トリテルペンサポニン親油性結合体を含み、このトリテルペンサポニン親油性結合体は、３−グルクロン酸残基；および親油性部分を含む、非アシル化トリテルペンサポニンまたは脱アシル化トリテルペンサポニンを含む。ここで、前記サポニンおよび前記親油性部分は、お互いに、直接にかまたはリンカー基を介して共有結合し、そしてここで、前記直接結合または前記リンカーへの結合は、前記３−グルクロン酸残基のカルボキシル炭素と親油性残基またはリンカー基上の適切な官能基との間の共有結合を介して生じる。
【０１０６】
トリテルペンサポニンは、３位および２８位に結合する分枝糖鎖、および４位に連結するか、または結合するアルデヒド基を有するトリテルペンアグリコンコア構造を有し得；元々非アシル化であるか、またはトリテルペンアグリコンの２８位の糖類に結合するアシル基またはアシロイル基の除去を必要とするかのいずれかである。トリテルペンサポニンは、キラヤ酸（ｑｕｉｌｌａｉｃ  ａｃｉｄ）またはジプソゲニン（ｇｙｐｓｏｇｅｎｉｎ）コア構造を有し得る。本発明において有用な、いくつかのサポニン親油性結合体（ＧＰＩ−０１００、ｑｕｉｌａｊａサポニン親油性結合体を含む）は、米国特許第５，９７７，０８１号および同第６，０８０，７２５号（これらは、その全体が参考として本明細書中に援用される）において開示される。デスアシルサポニンまたは非アシル化サポニンは、Ｑｕｉｌｌａｊａデスアシルサポニン、Ｓ．ｊｅｎｉｓｓｅｅｎｓｉｓデスアシルサポニン、Ｇｙｐｓｏｐｈｉｌａサポニン、Ｓａｐｏｎａｒｉａサポニン、Ａｃａｎｔｈｏｐｈｙｌｌｕｍサポニンおよびルシオシドサポニンからなる群より選択され得る。
【０１０７】
親油性部分は、脂肪酸、テルペノイド、脂肪族アミン、脂肪族アルコール、脂肪酸の脂肪族メルカプトモノＣ２−Ｃ４アルキレンオキシ誘導体、脂肪酸の脂肪族メルカプトポリＣ２−Ｃ４アルキレンオキシ誘導体、脂肪アルコールのモノＣ２−Ｃ４アルキレンオキシ誘導体、脂肪アルコールのポリＣ２−Ｃ４アルキレンオキシ誘導体、グリコシル脂肪酸、糖脂質、リン脂質またはモノアシルグリセロールあるいはジアシルグリセロールの１つ以上の残基を含み得る。
【０１０８】
本発明の別の局面において、免疫賦活薬組成物に使用されるサポニンは、サポニン／抗原共有結合結合体組成物を含む。
【０１０９】
ＱＳ−２１および他のＱｕｉｌｌａｊａサポニンは、標準的な生化学的方法を用いて、Ｑｕｉｌｌａｊａ  ｓｐｏｎａｒｉａより精製され得る。簡潔に、Ｑｕｉｌｌａｊａ  ｓａｐｏｎａｒｉａ  Ｍｏｌｉｎａ樹皮の水性抽出物は、水に対して透析される。透析抽出物は、凍結乾燥されて乾燥し、メタノールで抽出され、そしてこのメタノール可溶抽出物をさらにシリカゲルクロマトグラフィー上および逆相高圧液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）により分画する。次いで各々のサポニンは、逆相ＨＰＬＣにより分離される。少なくとも２２個のピーク（ＱＡ−１〜ＱＡ−２２と称される、本明細書中でＱＳ−１〜ＱＳ−２１とも言われる）は、本アプローチを用いて分離可能であり、各ピークは、炭水化物のピークと一致し、そして逆相薄層クロマトグラフィー上で単一のバンドを示す。各々の化合物は、例えば、Ｃ４  ＨＰＬＣカラム上のそれらの保持時間により特別に同定され得る。
【０１１０】
好ましくは、本発明のこの実施形態に従って使用されるＱｕｉｌｌａｊａサポニンは、米国特許第５，０５７，５４０号に記載されるように、ピークＱＳ−７、ＱＳ−１７、ＱＳ−１８、および／またはＱ−２１に一致する。本発明の特定の実施形態において、ＱＳ−２１サポニンが、本開示に従って、使用される。
【０１１１】
実質的に純粋なＱＳ−７サポニンは、免疫アジュバント活性を有し、そして（アントロンによってアッセイされる場合に）乾燥重量あたり約３５％の炭水化物を含有すると特徴付けられる。ＱＳ−７は、２０５〜２１０ｎｍのＵＶ吸収極大、５μｍの粒子サイズを有するＶｙｄａｃ  Ｃ４カラムにおいて、３３０オングストロームの細孔、メタノール／水（５８／４２；ｖ／ｖ）中４０ｍＭの酢酸の溶媒中で、４．６ｍｍＩＤ×２５ｃｍＬ、１ｍｌ／分の流速で、ＲＰ−ＨＰＬＣの約９〜１０分の保持時間を有し、５μｍの粒子サイズを有するＶｙｄａｃ  Ｃ４カラムから、３３０オングストロームの細孔、５０〜８０％のメタノールの勾配溶出で４０ｍＭ酢酸の溶媒中で、１０ｍｍ  ＩＤ×２５ｃｍＬで５２〜５３％のメタノールで溶出し、水中約０．０６％およびリン酸緩衝化生理食塩水中０．０７％の臨界ミセル濃度を有し、２００μｇ／ｍｌ以下の濃度でヒツジ赤血球の検出可能な溶血を引き起こさず、そして単糖類残渣末端ラムノース、末端キシロース、末端グルコース、末端ガラクトース、３−キシロース、３，４−ラムノース、２，３−フコース、および２，３−グルクロン酸、ならびに脂肪を含む。
【０１１２】
実質的に純粋なＱＳ−１７サポニンは、アジュバント活性を有し、そして（アントロンによってアッセイされる場合に）乾燥重量あたり約２９％の炭水化物を含有すると特徴付けられる。ＱＳ−１７は、２０５〜２１０ｎｍのＵＶ吸収極大、５μｍの粒子サイズを有するＶｙｄａｃ  Ｃ４カラムにおいて、３３０オングストロームの細孔、メタノール−水（５８／４２；ｖ／ｖ）中４０ｍＭの酢酸の溶媒中で、４．６ｍｍＩＤ×２５ｃｍＬ、１ｍｌ／分の流速で、ＲＰ−ＨＰＬＣの約３５分の保持時間を有し、５μｍの粒子サイズを有するＶｙｄａｃ  Ｃ４カラムから、３３０オングストロームの細孔、５０〜８０％のメタノールの勾配溶出で４０ｍＭ酢酸の溶媒中で、１０ｍｍ  ＩＤ×２５ｃｍＬで６３〜６４％のメタノールで溶出し、水中０．０６％（ｗ／ｖ）およびリン酸緩衝化生理食塩水中０．０３％（ｗ／ｖ）の臨界ミセル濃度を有し、２５μｇ／ｍｌ以上でヒツジ赤血球の溶血を引き起こし、そして単糖類残渣末端ラムノース、末端キシロース、２−フコース、３−キシロース、３，４−ラムノース、２，３−グルクロン酸、末端グルコース、２−アラビノース、末端ガラクトースおよび脂肪を含む。
【０１１３】
実質的に純粋なＱＳ−１８サポニンは、免疫アジュバント活性を有し、そして（アントロンによってアッセイされる場合に）乾燥重量あたり約２５〜２６％の炭水化物を含有すると特徴付けられる。ＱＳ−１８は、２０５〜２１０ｎｍのＵＶ吸収極大、５μｍの粒子サイズを有するＶｙｄａｃ  Ｃ４カラムにおいて、３３０オングストロームの細孔、メタノール／水（５８／４２；ｖ／ｖ）中４０ｍＭの酢酸の溶媒中で、４．６ｍｍＩＤ×２５ｃｍＬ、１ｍｌ／分の流速で、ＲＰ−ＨＰＬＣの約３８分の保持時間を有し、５μｍの粒子サイズを有するＶｙｄａｃ  Ｃ４カラムから、３３０オングストロームの細孔、５０〜８０％のメタノールの勾配溶出で４０ｍＭ酢酸の溶媒中で、１０ｍｍ  ＩＤ×２５ｃｍＬで６４〜６５％のメタノールで溶出し、水中０．０４％（ｗ／ｖ）およびリン酸緩衝化生理食塩水中０．０２％（ｗ／ｖ）の臨界ミセル濃度を有し、２５μｇ／ｍｌ以上の濃度でヒツジ赤血球の溶血を引き起こし、そして単糖類残渣末端ラムノース、末端アラビノース、末端脂肪、末端キシロース、末端グルコース、末端ガラクトース、２−フコース、３−キシロース、３，４−ラムノース、および２，３−グルクロン酸を含む。
【０１１４】
実質的に純粋なＱＳ−２１サポニンは、免疫アジュバント活性を有し、そして（アントロンによってアッセイされる場合に）乾燥重量あたり約２２％の炭水化物を含有すると特徴付けられる。ＱＳ−２１は、２０５〜２１０ｎｍのＵＶ吸収極大、５μｍの粒子サイズを有するＶｙｄａｃ  Ｃ４カラムにおいて、３３０オングストロームの細孔、メタノール／水（５８／４２；ｖ／ｖ）中４０ｍＭの酢酸の溶媒中で、４．６ｍｍＩＤ×２５ｃｍＬ、１ｍｌ／分の流速で、ＲＰ−ＨＰＬＣの約５１分の保持時間を有し、５μｍの粒子サイズを有するＶｙｄａｃ  Ｃ４カラムから、３３０オングストロームの細孔、５０〜８０％のメタノールの勾配溶出で４０ｍＭ酢酸の溶媒中で、１０ｍｍ  ＩＤ×２５ｃｍＬで６９〜７０％のメタノールで溶出し、水中約０．０３％（ｗ／ｖ）およびリン酸緩衝化生理食塩水中０．０２％（ｗ／ｖ）の臨界ミセル濃度を有し、２５μｇ／ｍｌ以上の濃度でヒツジ赤血球の溶血を引き起こし、そして単糖類残渣末端ラムノース、末端アラビノース、末端脂肪、末端キシロース、４−ラムノース、末端グルコース、末端ガラクトース、２−フコース、３−キシロース、３，４−ラムノース、および２，３−グルクロン酸を含む。
【０１１５】
本発明の別の実施形態において、サポニンは、米国特許第５，５８３，１１２号（この開示は、その全体が本明細書中に参考として援用される）に記載されるように、サポニン／抗原結合体の形態であり得る。このアプローチにおいて、１つ以上のサポニンが抗原に連結され、その結果、この連結は、この結合体が投与される動物において、サポニンが免疫応答を刺激する能力を実質的に妨害しない。
【０１１６】
本発明の別の実施形態において、サポニンは、例えば、米国特許第５，２７３，９６５号、同第５，４４３，８２９号、および同第５，６５０，３９８号（これらの開示は、その全体が本明細書中に参考として援用される）に記載されるように、粘膜を横切るそれらの取り込みを増加させるように改変され得る。
【０１１７】
なお別の実施形態において、本発明のワクチン組成物において使用されるサポニンは、米国特許第５，９７７，０８１号および同第６，０８０，７２５号（これらの開示は、その全体が本明細書中に参考として援用される）に記載されるように、サポニン−脂質親和体結合体を含有する。このサポニン−脂質親和体結合体は一般に、以下を含有する：（１）３−Ｏ−グルクロン酸残基を有する非アシル化または脱アシル化トリテルペンサポニンであって：（２）親油性部分（例えば、１つ以上の脂肪酸、脂肪アミン、脂肪族アミン、脂肪族アルコール、脂肪族メルカプタン、テルペンまたはポリエチレングリコール）に結合した、トリテルペンサポニン。ここで、（２）は、トリテルペンサポニンの３−Ｏ−グルクロン酸残基上に存在するカルボキシル炭素原子を介して、直接的にかまたは適切な連結基を介してかのいずれかで、（１）に結合している。
【０１１８】
サポニン（例えば、Ｑｕｉｌｌａｊａ脱アシルサポニン、Ｓｉｌｅｎｅ  ｊｅｎｉｓｓｅｅｎｉｓ、Ｗｉｌｌｄ’ｓ脱アシルサポニン、ルシオシド（ｌｕｃｙｏｓｉｄｅ）Ｐ、およびＧｙｐｓｏｐｈｉｌａ  ＳａｐｏｎａｒｉａおよびＡｃａｎｔｈｏｐｈｙｌｌｕｍ  ｓｑｕａｒｒｏｓｕｍ’ｓサポニン）の３−Ｏ−グルクロン酸への、親油性部分の結合は、体液性免疫および細胞媒介性免疫に対するそれらのアジュバント効果を増強すると報告されている。さらに、非アシル化サポニンまたは脱アシル化サポニンの３−Ｏ−グルクロン酸残基への、親油性部分の結合は、精製がより容易であり、毒性が低く、そして／または化学的により安定であるサポニンアナログを生じ得、そしてこれらは、元のサポニン以上に良好なアジュバント特性を有し得る。
【０１１９】
従って、この実施形態によるサポニンは、広範に、改変されたサポニンを包含し、ここで、この改変されたサポニンは、（ａ）分枝糖鎖が位置３および位置２８に結合しており、そしてアルデヒド基が位置４に連結または結合している、トリテルペンアグリコンコア構造（例えば、キラヤ（ｑｕｉｌｌａｉｃ）酸、ジプソゲニン（ｇｙｐｓｏｇｅｎｉｎ）など）を有し；（ｂ）もともと非アシル化であるか、またはトリテルペンアグリコンの２８位置において糖に結合するアシル基もしくはアシロイル基の除去を必要とするかのいずれかであり；そして（ｃ）直接的にかまたはリンカー部分を介してのいずれかで、グルクロン酸のカルボン酸に、トリテルペンアグリコンの３位で共有結合した親油性部分を有する。このようなサポニンの例は、ＱＳ−２１（３）である：
【０１２０】
【化２２】
2005525344.tif 000018
語句「親油性部分」および「親油性分子の残基」とは、本明細書中で使用される場合、非極性であるかまたは非極性ドメインを有する１つ以上の化合物の適切な官能基の、サポニンの３−Ｏ−ｇｌｃＡ残基との共有結合相互作用によって結合した部分をいう。親油性部分は、両親媒性化合物の一部であり得る。両親媒性化合物とは、分子が極性ドメインと非極性ドメインとの両方を含む化合物である。界面活性剤は、両親媒性化合物の例である。界面活性剤は代表的に、しばしばアルキル構造、アリール構造、またはテルペン構造である、非極性部分を有する。さらに、界面活性剤は、アニオン性、カチオン性、両親媒性または非イオン性であり得る、極性部分を有する。アニオン性基の例は、カルボキシレート、ホスフェート、スルホネート、およびスルフェートである。カチオン性ドメインの例は、アミン塩および第四級アンモニウム塩である。両親媒性界面活性剤は、アニオン性ドメインとカチオン性ドメインとの両方を有する。非イオン性ドメインは、代表的に、脂肪酸カルボキシ基の誘導体であり、そして糖類およびポリオキシエチレン誘導体が挙げられる。
【０１２１】
親油性部分はまた、非極性ドメインを有する２つ以上の化合物を含有し得、これらの化合物の各々は、連結基に完全に結合しており、この連結基は、次に、３−Ｏ−グルクロン酸に共有結合している。
【０１２２】
いくつかの脂質親和体含有化合物（例えば、脂肪族アミンおよび脂肪族アルコール、脂肪酸、ポリエチレングリコールおよびテルペン）が、脱アシルサポニンの３−Ｏ−ｇｌｃＡ残基および非アシル化サポニンの３−Ｏ−ｇｌｃＡ残基に付加され得る。この脂質親和体は、飽和または不飽和であり得る、脂肪族構造または環状構造であり得る。例として、脂肪酸、テルペノイド、脂肪族アミン、脂肪族アルコール、脂肪族メルカプタン、グリコシル−脂肪酸、糖脂質、リン脂質、ならびにモノアシルグリセロールおよびジアシルグリセロールが、非アシル化サポニンまたは脱アシルサポニンに共有結合され得る。結合は、３−グルクロン酸部分の酸部分またはこの位置の活性化酸官能基のいずれかと共有結合的に反応する、親油性部分上の官能基を介し得る。あるいは、二官能性リンカーが、脂質親和体をサポニンの３−Ｏ−ｇｌｃＡ残基に結合体化させるために使用され得る。
【０１２３】
代表的な脂肪酸としては、Ｃ６〜Ｃ２４脂肪酸、好ましくは、Ｃ７〜Ｃ１８脂肪酸が挙げられる。有用な脂肪酸の例としては、飽和脂肪酸（例えば、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、ベヘン酸、およびリグノセリン酸）；ならびに不飽和脂肪酸（例えば、パルミトレイン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、およびアラキドン酸）が挙げられる。
【０１２４】
代表的な脂肪族アミン、脂肪族アルコールおよび脂肪族メルカプタンとしては、直鎖または分枝鎖の、飽和または不飽和の、約６〜約２４個の炭素原子、好ましくは、６〜２０個の炭素原子、より好ましくは、６〜１６個の炭素原子、そして最も好ましくは、８〜１２個の炭素原子を有する、脂肪族基を有する、アミンおよびアルコールおよびメルカプタン（ＲＳＨ）が挙げられる。有用な脂肪族アミンの例としては、オクチルアミン、ノニルアミン、デシルアミン、ドデシルアミン、ヘキサデシルアミン、スフィンゴシンおよびフィトスフィンゴシンが挙げられる。有用な脂肪族アルコールの例としては、オクタノール、ノナノール、デカノール、ドデカノール、ヘキサデカノール、チミル（ｃｈｉｍｙｌ）アルコールおよびセラチル（ｓｅｌａｃｈｙｌ）アルコールが挙げられる。
【０１２５】
代表的なテルペノイドとしては、レチノール、レチナール、ビスアボロール（ｂｉｓａｂｏｌｏｌ）、シトラール、シトロネラール、シトロネロールおよびリナロールが挙げられる。
【０１２６】
代表的なモノアシルグリセロールおよびジアシルグリセロールとしては、アシル基が８〜２０個の炭素原子、好ましくは８〜１６個の炭素原子を含む、モノエステル化グリセロールおよびジエステル化グリセロールが挙げられる。
【０１２７】
代表的なポリエチレングリコールは、式Ｈ−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｎ−ＯＨを有し、ここで、ｎ（エチレンオキシド単位の数）は、４〜１４である。有用なポリエチレングリコールの例としては、ＰＥＧ２００（ｎ＝４）、ＰＥＧ４００（ｎ＝８〜９）、およびＰＥＧ６００（ｎ＝１２〜１４）が挙げられる。
【０１２８】
代表的なポリエチレングリコール脂肪アルコールエーテルは、エチレンオキシド単位（ｎ）が１〜８の間であり、そしてアルキル基がＣ６〜Ｃ１８である。
【０１２９】
両親媒性特徴（すなわち、親水性機および疎水性基の非対称的分布）を有する側鎖は、（ａ）ミセルおよび抗原との会合の形成、ならびに（ｂ）トリテルペンアルデヒドの、細胞レセプターへのアクセス可能性を容易にする。このような側鎖における、負に荷電したカルボキシル基の存在が、トリテルペン基の反発に寄与し得、これによって、これらにより大きい回転の自由度を許容することもまた、可能である。この最後の要因は、イミン形成カルボニル基に対する細胞レセプターの接近可能性を増加させる。
【０１３０】
脱アシル化サポニンおよび非アシルサポニンは、親油性部分に直接連結され得るか、または連結基を介して連結され得る。用語「連結基」とは、脱アシルサポニン、非アシル化サポニンまたはこれらの混合物を、親油性分子に共有結合させるために使用され得る、１つ以上の二官能性分子を意図する。リンカー基は、トリテルペンコア構造上の３−Ｏ−グルクロン酸部分のカルボン酸基、および親油性分子上に存在する適切な官能基に共有結合する。
【０１３１】
サポニンおよび親油性分子を連結させるために使用され得る、リンカー基の代表的な例は、アルキレンジアミン（ＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ２）（ここで、ｎは、２〜１２である）；アミノアルコール（ＨＯ−（ＣＨ２）ｒ−ＮＨ２）（ここで、ｒは、２〜１２である）；および必要に応じてカルボキシ保護されたアミノ酸；エチレングリコールおよびポリエチレングリコール（Ｈ−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｎ−ＯＨ）（ここで、ｎは１〜４である）、アミノメルカプタンおよびメルカプトカルボン酸である。
【０１３２】
本発明のなお別の実施形態において、本発明の組成物において使用されるサポニンとしては、以下の式（ＩＩ）によって表されるサポニン模倣物が挙げられる：
【０１３３】
【化２３】
2005525344.tif 000019
ここで、記号Ｒは、水素または−Ｃ（Ｏ）Ｈを表す。記号Ｒ１は、水素、必要に応じて置換されたＣ１〜２０脂肪族基、サッカリル基、および式−Ｃ（Ｏ）−［Ｃ（Ｒ３）（Ｒ４）］ｋ−ＣＯＯＨまたは−［Ｃ（Ｒ３）（Ｒ４）］ｋ−ＣＯＯＨ（ここで、各Ｒ３およびＲ４は、独立して、水素、置換Ｃ１〜１０脂肪族基、または非置換Ｃ１〜１０脂肪族基から選択されるメンバーである）によって表される基から選択されるメンバーを表す。記号ｋは、１〜５の整数を表す。記号Ｒ２は、水素、必要に応じて置換されたＣ１〜２０脂肪族基、および式−（ＣＨ２）ｒＣＨ（ＯＨ）（ＣＨ２）ｔＯＲ５（ここで、ｒおよびｔは、独立して、１または２であり、そしてＲ５は、Ｃ２〜２０アシル基、または式
【０１３４】
【化２４】
2005525344.tif 000020
（ここで、ｊは、１〜５の整数であり、そしてＲ６およびＲ７は、独立して、水素、必要に応じて置換されたＣ１〜２０脂肪族基から選択される）によって表される基；またはその薬理学的に受容可能な塩である）によって表される基から選択されるメンバーを表す。
【０１３５】
好ましい実施形態において、Ｒ２は、１〜１０個の炭素原子、より好ましくは、１〜５個の炭素原子を有する、置換または非置換の脂肪族基である。
【０１３６】
別の好ましい実施形態において、Ｒ２は、式−（ＣＨ２）ｒＣＨ（ＯＨ）（ＣＨ２）ｔＯＲ５（ここで、ｒおよびｔは、独立して、１または２である）によって表される基である。記号Ｒ５は、好ましくは、アシル基であり、２〜１０個の炭素原子、好ましくは、１０〜２０個の炭素原子を有する。
【０１３７】
別の好ましい実施形態において、Ｒ５は、式（ＩＩＩ）（ここで、ｊは、１、２、または３である）によって表される基である。Ｒ６およびＲ７は、独立して、水素、および必要に応じて置換されたＣ１〜２０脂肪族基の群より選択される。
【０１３８】
Ｒ６およびＲ７は、分枝鎖または直鎖の、飽和または不飽和の、実質的に任意の長さの脂肪族基であり得るが、好ましい実施形態において、Ｒ６およびＲ７は、各々独立して、１〜１０個の炭素原子を有する脂肪族基である。さらに好ましい実施形態において、Ｒ６およびＲ７は、各々独立して、１０〜２０個の炭素原子を有する脂肪族基である。特に好ましい実施形態において、Ｒ６またはＲ７のうちの少なくとも１つは、置換または非置換のＣ１〜１１脂肪族基である。上に提供される化合物に加えて、本発明は、式（ＩＩ）による化合物の薬理学的に受容可能な塩を包含する。
【０１３９】
Ｒ１がサッカリル基である式（ＩＩ）の化合物の実施形態について、種々の単糖類、二糖類または多糖類が、有用である。１つの好ましい実施形態において、好ましい実施形態において、このサッカリル基は、単糖類グルクロン酸から誘導され、そしてこのサッカリル基のα形態またはβ形態のいずれかから選択される。以下に示されるように、分子の残りの部分へのサッカリル基の結合部位は、波線によって示されるように、サッカリル基の還元末端（すなわち、Ｃ１位）においてであり得る。
【０１４０】
【化２５】
2005525344.tif 000021
いくつかの実施形態において、サッカリル基は、Ｃ６〜５０サッカリル基、より好ましくは、Ｃ６〜３０サッカリル基、そしてなおより好ましくは、Ｃ６〜２０サッカリル基、そしてなおさらにより好ましくは、Ｃ６〜１０サッカリル基であることが好ましい。
【０１４１】
上記一般的記載において、式（ＩＩ）の化合物の多数の実施形態が、特に好ましい。１つの好ましい実施形態において、Ｒ、Ｒ１およびＲ２は、全て水素であり、そしてこの化合物は、式（ＩＶ）によって表されるイソツカレソール（ｉｓｏｔｕｃａｒｅｓｏｌ）である：
【０１４２】
【化２６】
2005525344.tif 000022
別の好ましい実施形態において、Ｒは、水素であり、Ｒ１は、β−Ｄ−グルクロン酸基であり、Ｒ２は、水素であり、そしてこの化合物は、式（Ｖ）によって表される：
【０１４３】
【化２７】
2005525344.tif 000023
１つの実施形態において、Ｒは、水素であり、Ｒ１は、スクシノイル基である（すなわち、Ｒ１＝−Ｃ（Ｏ）−［Ｃ（Ｒ３）（Ｒ４）］ｋ−ＣＯＯＨであり、ここで、Ｒ３およびＲ４は、水素であり；ｋは、２であり、そしてＲ２は、水素である）。この化合物は、式（ＶＩ）によって表される：
【０１４４】
【化２８】
2005525344.tif 000024
式（ＶＩ）の化合物の１つの実施形態において、Ｒは水素であり、Ｒ１はβ−Ｄ−グルクロン酸基であり、そしてＲ２は、１−Ｏ−アシル−ｓｎ−グリセリル基（ｓｎ＝立体特異的に数えられる；Ｃａｒｂ．Ｒｅｓ．１９９８，３１２，１６７を参照のこと）であり、そしてこの化合物は、式（ＶＩＩ）：
【０１４５】
【化２９】
2005525344.tif 000025
によって示される。
【０１４６】
１実施形態において、１−Ｏ−アシル−ｓｎ−グリセリル部分のアシル基は、アセチルであり（例えば、式ＶＩＩ中のＲ８は、メチルである；化合物６ａ）、別の実施形態においてはオクタノイルであり（Ｒ８はヘプチルである；化合物６ｂ）、そして１実施形態においてはテトラデカノイル（Ｒ８はトリデシルである；化合物６ｃ）。
【０１４７】
サポニン模倣物としての両親媒性アルデヒド（ＩＶ）〜（ＶＩ）は、親油性ドメインおよび／または親水性ドメインで置換されるキラヤ酸（ｑｕｉｌｌａｉｃ  ａｃｉｄ）（１）の開放鎖アナログとして、イソツカレゾール（ｉｓｏｔｕｃａｒｅｓｏｌ）（ＩＶ）を有する（これに基づく？）。１のファルマコフォアとしてのイソツカレゾールの設計は、サポニンが、最適なアジュバント効果に必要なものよりも構造的に複雑であるという仮定に基づく。ステロイドのように、キラヤ酸のＡＢＣ環接合点は全てトランスであり、この分子を比較的剛性かつ平坦にしており、従って、芳香族ｓｅｃｏ誘導体による分子模倣を受けやすくする。イソツカレゾールは、キラヤ酸の芳香族「ｔｒｉｓｅｃｏ」誘導体であり、ここで、トリテルペンの３つの環（Ｂ、Ｃ、Ｅ）の元素は除去されているが、重要な官能基の空間的関係は維持されている。
【０１４８】
【化３０】
2005525344.tif 000026
イソツカレゾールのＡ環上の２つの反応性アルデヒド部分を有することの重要性は、Ｔリンパ球上に存在するＣＤ２細胞表面糖タンパク質にクラスター化した、複数のリジルＥ−アミノ基を有するイミン形態（Ｗｙｓｓら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９５，２６９：１２７３−１２７８を参照のこと）で、両方のホルミル基の同時結合の可能性を提供する。ＣＤ２は、Ｔ細胞のシッフ塩基媒介性の同時刺激についての主なレセプターであると考えられている（Ｒｈｏｄｅｓ、１９９６）。多価リガンド−レセプター相互作用は、生物学的系において一般的であり、そしてＴ細胞活性化に関して、ＭＡＡ付加ペプチドの免疫原性だけでなく、ホルミル化ムチンを使用する最近の癌ワクチンストラテジー（Ａｐｏｓｔｏｌｏｐｏｕｌｏｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、Ｕ．Ｓ．Ａ．１９９５，９２：１０１２８−１０１３２を参照のこと）の成功をも説明することを補助し得る。
【０１４９】
別の局面において、本発明は、式ＩＩ（ａ）：
【０１５０】
【化３１】
2005525344.tif 000027
によって示される化合物を含み、Ｒ２およびＲ１０は、独立して選択され、そして記号Ｒ１０は、Ｒ２について上記されたようなメンバーを示す。式ＩＩ（ａ）の化合物は、式（Ｉａ）〜（Ｉｃ）の化合物について上記されたように、アジュバントおよび免疫エフェクターとして有用である。
【０１５１】
別の局面において、本発明は、式ＩＩ（ｂ）：
【０１５２】
【化３２】
2005525344.tif 000028
によって示される化合物を提供する。
【０１５３】
式ＩＩ（ｂ）の化合物は、式（Ｉａ）〜（１ｃ）の化合物について上記されたように、アジュバントおよび免疫エフェクターとして有用である。
【０１５４】
外因性アジュバント（免疫調節因子）（例えば、式（ＩＩ、ＩＩａまたはＩＩｂ）の化合物）に対する抗原の共有結合によって、２つの成分（すなわち、抗原および式（ＩＩ、ＩＩａまたはＩＩｂ）の化合物）の混合物中のように、このような共有結合の非存在下で達成可能なアジュバント効果よりも大きい、抗原に対して驚くほどに予測できない増強されたアジュバント効果を示す別個の分子が生成される。さらに増強されたアジュバント効果は、このような化合物と共に無機塩アジュバントを取り込むことによって、このような共有結合した抗原について達成され得る。無機塩アジュバントは、好ましくは、水酸化アルミニウムまたはリン酸アルミニウムを含むが、他の公知の無機塩アジュバント（例えば、リン酸カルシウム、水酸化亜鉛または水酸化カルシウム）が使用され得る。
【０１５５】
水溶性は、アジュバント活性化サポニンの所望の特徴であり、そしてワクチンの処方および効力に役立つ（Ｋｅｎｓｉｌ，１９９６）。抗原を変性し得、そして保護効果を防止し得る、油ベースのエマルジョンおよび無機塩アジュバントとは異なり、サポニンは、その高い水溶性に起因して、非変性アジュバントである。サポニンの高い水溶性はまた、エマルジョン型アジュバントに必要な大規模な均質化手順を排除し、免疫前の、水性のアジュバントおよび抗原の溶液の単純な混合を可能にする。サポニンは、キラヤ酸アグリコン単位のＣ−３およびＣ−２８に結合したグリコシドにおける大きな構造的可変性を示すが、アジュバント活性（および水溶性）についての最小の炭水化物要件は、単独かまたは（ＩＳＣＯＭ、ミョウバンなどとの）処方物中のいずれかで、Ｃ−３にてグリコシド結合したＤ−グルクロン酸（β−Ｄ−ＧｌｃＡ）部分であるようである（Ｂｏｍｆｏｒｄら、Ｖａｃｃｉｎｅ  １９９２，１０：５７２−５７７；Ｓｏら、１９９７を参照のこと）。従って、イソツカレゾールのフェノール基にグリコシド結合したＤ−グルクロン酸部分（それ自体は、生理学的ｐＨでやや溶けにくい）は、部分的に、第二のイオン化可能なカルボキシル基によって、水溶性およびアジュバント活性の両方を増強する。単純なヒドロキシベンズアルデヒドの水溶性Ｏ−グリコシド（例えば、ヘリシン（ｈｅｌｉｃｉｎ）（３１））は、天然には存在しないが、安定なシッフ塩基誘導体も容易に形成する（Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘ、第１２版；Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．，Ｉｎｃ．：Ｗｈｉｔｅｈｏｕｓｅ  Ｓｔａｔｉｏｎ，ＮＪ，１９９６を参照のこと）。コハク酸は、グルクロン酸部分についての単純な４−炭素アイソスターを構成し、そして水溶性を有するトリテルペンを与えるために使用されてきたので（ＧｏｔｔｆｒｉｅｄおよびＢａｘｅｎｄａｌｅ、米国特許第３，０７０，６２３号、１９６２を参照のこと）、合成的により単純なスクシネート（ＶＩ）もまた、有用である。
【０１５６】
ＱＳ−２１のグルクロン酸のカルボキシルの化学的改変は、アジュバント活性を有意に変更しない（Ｓｏｌｔｙｓｉｋら、１９９５）ことに留意することが重要である。従って、カルボキシル基は、親油性脂肪酸ドメインまたは免疫原性の乏しいペプチドの結合についての独自の部位を提供する。実際、脱アシル化Ｑｕｉｌｌａｊａサポニンまたは脂肪酸ドメインを欠くサポニンのグルクロン酸への、単純な親油性部分の結合は、体液性免疫および細胞媒介性免疫を増強することが最近示された（Ｍａｒｃｉａｎｉ、ＷＯ  ９８／５２５７３、１９９８；および米国特許第６，０８０，７２５号を参照のこと）。式Ｖの化合物（または化合物６ａ〜６ｃに従うより親油性の誘導体）のグルクロン酸のカルボキシルに結合したペプチド決定基はまた、好都合な可溶性特徴を付与し、そして内蔵された（ｂｕｉｌｔ  ｉｎ）アジュバント活性を有する合成ワクチンを提供する可能性がある。増大した免疫原性は、グルクロン酸のカルボキシルを介してペプチド抗原に共有結合した親油性Ｑｕｉｌｌａｊａサポニンについて観察された（Ｋｅｎｓｉｌら、Ｖａｃｃｉｎｅｓ  ９２；Ｂｒｏｗｎ，Ｆ．、Ｃｈａｎｏｃｋ，Ｒ．Ｍ．、Ｇｉｎｓｂｅｒｇ，Ｈ．Ｓ．、Ｌｅｎｅｒ，Ｒ．Ａ．編；Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ：Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，ＮＹ，１９９２；ｐｐ．３５−４０を参照のこと）。
【０１５７】
脂肪酸アシル基を欠く親水性シッフ塩基形成化合物（すなわち、式Ｖおよび式ＶＩに従う化合物）をアジュバントおよび免疫エフェクターとして使用することについて、理論にも原理にも束縛されることを望まないが、これらの化合物の使用は、さらなる解説を受けるに値する。ＱＳ−２１の場合、ＱＳ−１７およびＱＳ−１８にも共通する脂肪酸ドメインは、重要な役割を果たす：脱アシル（ｄｅｓａｃｙｌ）サポニン（３中の部位Ａにて切断可能）またはキラヤ酸誘導体（部位Ｂにて切断可能）のいずれかを生じる、制御されたアルカリ加水分解は、これら２つの加水分解産物のいずれも、インタクトな脂肪酸ドメインも、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）中に処方された場合、オボアルブミンに対する抗体力価も抗原特異的ＣＴＬも増強しない（Ｋｅｎｓｉｌら、１９９６；Ｋｅｎｓｉｌら、１９９２を参照のこと）。この証拠および他の証拠は、疎水性相互作用を介した抗原結合は、脂肪酸ドメインが存在しない場合、減少または除去されることを示唆する。しかし、非改変粗製Ｑｕｉｌｌａｊａ抽出物から単離したＱＳ−２１の「Ｂフラグメント」を用いた最近の研究は、このサポニン（ＱＳ−Ｌ１と称される、ＱＳ−２１の部分的構造を参照のこと）が、ミョウバン沈殿抗原の存在下で投与される場合、組換えＢ型肝炎表面抗原（ｒＨＢｓＡｇ）に対する体液性免疫応答および細胞媒介性免疫応答をブーストしたことを示した。実際、ＱＳ−Ｌ１は、マウスにおいて、ミョウバン沈殿ＨＢｓＡｇに対する、ＱＳ−２１よりも大きい総ＩｇＧ応答を誘導した（Ｓｏら、１９９７）。これらの結果は、ミョウバンとアニオン性アジュバントとペプチド抗原との間の、電荷相互作用の重要性を示唆する。
【０１５８】
サポニンのアジュバント活性に対する脂肪酸ドメインの重要性は、親水性サポニンＱＳ−７の最近の構造解明によって、さらに不明瞭にされている（Ｋｅｎｓｉｌら、１９９８）。ＱＳ−７は、ＱＳ−２１のキラヤ酸と類似のキラヤ酸のＣ−３およびＣ−２８において、分枝した糖単位を有するビスデスモシン性（ｂｉｓｄｅｓｍｏｓｉｄｉｃ）サポニンであるが、対照的に、フコース環上に大きい脂質ドメインの代わりにアセチル基を有する。ＱＳ−２１と同様に、ＱＳ−７は、種々の抗原に対する細胞媒介性応答および体液性応答の強力な誘導因子であるが、赤血球に対するサポニンの特徴的な溶血活性を欠く（Ｋｅｎｓｉｌ、１９９６；Ｋｅｎｓｉｌら、１９９８）。溶血活性（細胞膜に介在し、そしてコレステロール複合体化サポニン分子を含む細孔の六角配置を形成する、サポニンの能力に起因すると考えられる）は、アジュバント活性と相関しない。しかし、ＱＳ−７は非溶血性であり、一方で、ジギトニン（アジュバント不活化ステロイド性サポニン）は、高度に溶血性である（Ｋｅｎｓｉｌ、１９９６；Ｋｅｎｓｉｌら、１９９８；Ｋｅｎｓｉｌら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９１，１４６：４３１−４３７を参照のこと）。従って、外因性可溶性抗原によるＣＴＬ誘導は、サポニン誘導性細孔形成または複雑な親油性ドメインの存在のいずれとも密接に関連しないようである。
【０１５９】
ＱＳ−２１および他の親油性サポニンのより大きい毒性に寄与することに加えて、２つの３，５−ジヒドロキシ−６−メチル−オクタン酸（ＤＨＭＯ）残基を含む複雑な脂肪酸ドメインは、親油性サポニンにかなりの不安定性を付与する。例えば、ＤＨＭＯドメインの迅速な可逆的移動は、ＱＳ−２１中のフコースの３−ヒドロキシル基と４−ヒドロキシル基との間で生じ、精製および純度分析、ならびに構造／機能評価を困難にする（Ｃｌｅｌａｎｄら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．１９９６、８５：２２−２８を参照のこと）。
【０１６０】
この分子内エステル転移反応は、（例えば、３中の隣接ヒドロキシルによる求核攻撃に対する）β−ヒドロキシエステルの既知の不安定性が原因であり得る（Ｓａｄｅｖｏｋら、Ｒｕｓｓ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．（英訳）１９７０、３９：１７９−１９５を参照のこと）。同じ理由のために、塩基触媒脱アシル化は、水溶液中のＱＳ−２１についての有意な分解プロセスであり、従って、ＱＳ−２１が使用され得る処方物および保存条件を制限する（Ｋｅｎｓｉｌら、１９９５；Ｃｌｅｌａｎｄ、１９９６）。
【０１６１】
従って、親油性誘導体（化合物６ａ〜６ｃ）（ここで、ｓｎ−グリセロール単位（Ｄ−フコースと同じＣ−２相対立体化学）は、フコース環の解放鎖アナログとして選択され、そして単純な脂肪酸残基は、ＱＳ−２１の複雑なＤＨＭＯ残基についての安定な置換基として選択されている）；酢酸塩（化合物６ａ）は、より親水性かつより非毒性のＱＳ−７のアナログである。化合物６ａに従う化合物とＱＳ−２１との間の構造的関連性は、３において太字で示される。
【０１６２】
（ＡＧＰおよびサポニンの組み合わせ）
本明細書中に記載されるサポニンの全ての型および種は、本発明の組成物および方法において使用するために、本明細書中に記載されるサポニンの全ての型および種と組み合わせられ得る。好ましい組み合わせとしては、型（Ｉａ）、（Ｉｂ）および（Ｉｃ）のＡＧＰ（例えば、以前に言及された化合物Ｂ３、Ｂ９、Ｂ１４、Ｂ１５、Ｂ１９、Ｂ２２およびＢ２５）ならびにＭＰＬの、Ｑｕｉｌｌａｊａサポニン（例えば、Ｑｕｉｌ  ＡおよびＱＳ−７、ＱＳ−１７、ＱＳ−１８またはＱＳ−２１）との、サポニン−脂質親和体結合体（ＧＰＩ−０１００を含む）との、そしてツカレゾールおよび式（ＩＩ）の他のサポニン模倣物ならびにそれらの誘導体との組み合わせが挙げられる。
【０１６３】
式Ｖ〜ＶＩＩに従う化合物の合成は、スケールアップおよびアナログ調製の両方を受けやすいイソツカレゾール骨格への、効率的な経路を必要とする。ツカレゾールのＫｎｅｅｎ多工程合成（Ｋｎｅｅｎ、ＥＰ０５４９２４、１９８６；および米国特許第４，５３５，１８３号を参照のこと）に基づく、式ＩＶの化合物への元のアプローチは、ベンゾフラン出発物質およびオゾン分解工程を含んだ。以下に考察されるように、合成のための他の代替経路が存在する。
【０１６４】
（化合物の合成）
レトロ合成図（スキームＩ）から、親油性イソツカレゾール化合物は、以下の３つの主要なサブユニットへと分割され得る：グルクロン酸サッカリル単位、イソツカレゾール核、および３−Ｏ−アシル化−ｓｎ−グリセロール単位。式Ｖに従う化合物および化合物６ａ〜ｃは、グルクロン酸部分を共通して有するので、これら３つのサブユニットを組み立てる論理的方法は、イソツカレゾールｔ−ブチルエステル７の、８を生じる最初のグリコシル化（または式ＶＩに従う化合物の場合にはスクシニル化）、およびその後の先進中間体９の第一級ヒドロキシル基の選択的アシル化による。このアプローチは、最初の側鎖導入を含む分散型ストラテジー（化合物６ａ〜ｃ）と比較して、式Ｖ〜ＶＩＩの化合物を調製するために必要な工程の全体の数を減らし、そして他の親油性誘導体の合成のための、先進中間体９の潜在的な適用を可能にする。さらに、この経路は、合成の後期の、キラルシントン１０の組み込みを可能にする。この合成ストラテジーはまた、ペプチドを、親油性側鎖の存在ありまたはなしで、グルクロン酸のカルボキシルに結合体化するのに適切である。
【０１６５】
スキームＩに概説されるようなストラテジーは、好ましくは、芳香族および糖カルボキシル基の直交性の保護、ならびにｔ−ブチルエステル脱保護および１０によるエステル化の前の、８の糖ヒドロキシル基の保護を利用する。ｔ−ブチルエステルは、特定のｏ−ホルミル化方法（すなわち、１２→７）の塩基性条件に対するその安定性、およびグルクロニドのアリルベースの保護基の存在下での容易な酸性切断に起因して、ベンゾエート保護のために好ましい。アリルオキシカルボニル（ＡＯＣ）基は、糖に容易に導入され、そしてパラジウム（０）触媒を用いた中性条件下で、アリルエステル基と共に除去され得る（Ｈａｒａｄａら、Ｊ．Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｃｈｅｍ．１９９５、１４、１６５−１７０を参照のこと；Ｇｕｉｂｅ、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  １９９８、５４：２９６７−３０４２を参照のこと）。ミツノブ反応は、種々のフェノールおよび糖（アリルグルクロネート１１を含む）からの、アリール（ＲｏｕｓｈおよびＬｉｎ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９９５、１１７：２２３６−２２５０を参照のこと）および他の（Ｓｍｉｔｈら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．１９８６、２７：５８１３を参照のこと）β−グリコシドの立体選択的合成のために使用されてきたので（Ｊｕｔｅａｕら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．１９９７、３８：１４８１−１４８４を参照のこと）、化合物８（Ｒ＝Ｈ）は、ミツノブプロトコルを使用して、７および１１から直接構築され得る。イソツカレゾール環系７はまた、１４によるベンジル化およびｏ−ホルミル化を介してヒドロキノン（１３）から誘導され得るか、あるいはベンゾフラン誘導体１５および１６から、Ｋｎｅｅｎのイソツカレゾール合成２２と類似の経路を介して誘導され得る。
【０１６６】
イソツカレゾールの要の構築への代替のアプローチ（これは、スキームＩと類似の経路を介して（Ｖ）〜（ＶＩＩ）への、または分散型経路を介して化合物６ａ〜ｃへのいずれかの、容易な接近を可能にする）である、ｏ−メチル化ストラテジー（以下を参照のこと）はまた、ホルミル基を導入するのに有用である。既にｏ−ホルミル基を含む出発物質もまた、本発明の化合物を調製するために有用である。
【０１６７】
（スキームＩ．レトロ合成）
【０１６８】
【化３３】
2005525344.tif 000029
（イソツカレゾールｔ−ブチルエステル（７）の合成）
（ヒドロキノン経路）
フェノール１２のｏ−ホルミル化（スキームＩＩ）を含む、多数の経路が、ｔ−ブチルエステル７を構築するために利用可能である。１２の合成は、ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨまたはＭｅＯＨ中の炭酸カリウムの存在下での、臭化物１４でのヒドロキノン（１３）のモノベンジル化（ＳｃｈｍｉｄｈａｍｍｅｒおよびＢｒｏｓｓｉ，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９８３、４８：１４６９−１４７１を参照のこと）によって、またはジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中のＣｓ２ＣＯ３を使用する、最近報告されたモノベンジル化方法（Ｚａｃｈａｒｉｅら、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｔｒａｎｓ．１  １９９７、１９：２９２５−２９３０を参照のこと）によって、容易に達成され得る（ヒドロキノンのモノベンジル化はまた、標準的な条件（Ｋ２ＣＯ３／ＭｅＯＨ、室温；６０％）下で、遊離酸１７を用いても達成され得る）。公知のｔ−ブチルエステル１４は、市販の１７から、２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１，２−ジヒドロキノリン（ＥＥＤＱ）およびｔ−ＢｕＯＨを用いるＺａｃｈａｒｉｅの方法（Ｚａｃｈａｒｉｅら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９５、６０：７０７２−７０７４を参照のこと）に従って、またはｔ−ブチルエステル形成のための他の一般方法（例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド／ジメチルアミノピリジン（ＤＣＣ／ＤＭＡＰ）エステル化（ＮｅｉｓｅｓおよびＳｔｅｇｌｉｃｈ，Ｏｒｇ．Ｓｙｎｔｈ．１９８４、６３：１８３−１８７；ＧｒｅｅｎおよびＷｕｔｓ（１９９１）Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第２版、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．を参照のこと））の１つによって、調製され得る。
【０１６９】
ライマー−ティーマン反応はまた、ｏ−ホルミレートフェノール保有ｐ−置換基に対しても使用され得る（ＪｕｎｇおよびＬａｚａｒｏｖａ，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９７，６２：１５５３−１５５５ならびにそこに引用される参考文献を参照のこと）。従って、還流下での１２の固体水酸化ナトリウムおよび２当量のクロロホルム中の水での処理は、直接、イソツカレゾールｔ−ブチルエステル７を提供する。
【０１７０】
【化３４】
2005525344.tif 000030
第２の方法はまた、ｏ−ホルミル基をフェノール１２に導入するために利用可能である（スキームＩＩＩ）。最近、Ｙａｍａｇｕｃｈｉ（Ｙａｍａｇｕｃｈｉら，Ｊ  Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９８，６３：７２９８−７３０５を参照のこと）は、官能化フェノールが、ＳｎＣｌ４−Ｂｕ３Ｎ試薬の存在下で、アセチレンによりオルト位で効率的にビニル化され得ることを報告した。アリールオレフィン基は、種々の試薬（例えば、ＯｓＯ４／ＮａＩＯ４、ＲｕＯ２／ＮａＩＯ４）により高収率でベンズアルデヒドへと酸化的に開裂され得るので（ＳｉｎｇｈおよびＳａｍａｎｔａ，Ｂ．Ｓｙｎｔｈ．Ｃｏｍｍｕｎ．１９９７，２７：４２３５−４２４４を参照のこと；Ｈｕｄｌｉｃｋｙ，Ｍ．Ｏｘｉｄａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ；Ｍｏｎｏｇｒａｐｈ  Ｓｅｒｉｅｓ  １８６；Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ：Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ，１９９０；ｐｐ．７７−８１を参照のこと）−遊離のフェノールヒドロキシル基の存在下ですら（ＳｉｎｇｈおよびＳａｍａｎｔａ，１９９７）、フェノール１２は、１２がスタニルアセチレン媒介によりビニル化されて、１８を得て、引き続いて水性ジオキサン中のＯｓＯ４／ＮａＩＯ４により酸化されることを含む２工程のプロセスを介して、サリチルアルデヒド（ｓａｌｉｃａｌｄｅｈｙｄｅ）誘導体７へと転換され得る。あるいは、粗製１８は、ワークアップの間にアセチル化され得（ビニルフェノール安定性を改善することが公知の方策）、そして酸化後に脱アセチル化（Ｋ２ＣＯ３／ＭｅＯＨ，ｒｔ）され得る。
【０１７１】
【化３５】
2005525344.tif 000031
アセチレンでのｏ−ビニル化反応はまた、２，６−ジビニルフェノールを調製するために、Ｙａｍａｇｕｃｈｉの改変反応条件を使用して（Ｙａｍａｇｕｃｈｉら，１９９８）、１２のジビニル化／酸化を介して、対応するジカルボキシアルデヒド１９および本発明の関連するジホルミル誘導体に容易に接近するはずである。１９および置換誘導体のアジュバント活性は、本明細書中に記載される方法を使用して評価され得る。
【０１７２】
（７に対する指向性金属化アプローチ）
７のｏ−ヒドロキシベンズアルデヒド部分に対する代替的アプローチは、メトキシメチル（ＭＯＭ）保護フェノール２０のｏ−金属化（スキームＩＶ）である。ＭＯＭ基の強力なオルト指向性能力は、その容易な酸性開裂および塩基安定性と関連して、ＭＯＭ−エーテルを、芳香族化合物を官能化するために特に有用にする（Ｚａｃｈａｒｉｅら，１９９７を参照のこと；ＲｏｎａｌｄおよびＷｉｎｋｌｅ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  １９８３，３９：２０３１−２０４２を参照のこと）。従って、ヒドロキノン１３は、Ｃｓ２ＣＯ３の存在下でアセトン中のクロロメチルメチルエーテル、またはテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中のＮａＨで生成したフェノキシドを介して、選択的にモノ保護化されて（Ｚａｃｈａｒｉｅら，１９９７；Ｃｒｕｚ−Ａｌｍａｎｚａら，Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｓ  １９９４，３７：７５９−７７４を参照のこと）、公知の（Ｃｒｕｚ−Ａｌｍａｎｚａら，１９９４）ＭＯＭ保護化フェノール２１を得る。次いで、Ｋ２ＣＯ３の存在下での、２１の酸１７でのベンジル化により、２０を得る。２０の、添加されたテトラメチルエチレンジアミンありまたはなしの、−７８℃のＴＨＦ中、２当量のｎ−ブチルリチウムまたはｓ−ブチルリチウム（ＲＬｉ）での処理は、ジリシオ種が生じ、これは、ＤＭＦでの低温でのクエンチングの際に、水性ＮＨ４Ｃｌワークアップ後に、ＭＯＭ保護化イソツカレゾール２２を生じる。低温で、カルボキシル基の存在下での指向性金属化は、求核攻撃（ＲＬｉによる）なしで、カルボキシレート上で生じる（ＪｏｈｎｓｏｎおよびＧｒｉｂｂｌｅ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．１９８７，２８：５２５９−５２６２を参照のこと）。スキームＩＶに示されるプロトコルに従って、直列ＭＯＭ保護指向性金属化反応によって、ヒドロキシ酸２３を、２２へ直接転換することもまた可能である。同様に、２３のジリシオ塩の選択的メトキシメチル化は、ＭＯＭ−エーテル２０の代替的調製を提供する。
【０１７３】
【化３６】
2005525344.tif 000032
化合物７および２２は、正反対に保護されるので、親油性側鎖をまず結合するには、２２が好ましい。親油性ドメインおよび親水性ドメインの両方を含む化合物は、このようにして、わずか６工程ほど（アジュバント候補の大規模の化学合成に関して、潜在的に重要な考慮事項）で２２から構築され得る。
【０１７４】
化合物２２は、ｔ−ブチル以外の基を用いたカルボキシル官能基の保護を可能にする。なぜなら、塩基安定性（フェノールｏ−ホルミル化に対する）が、回避されるからである。ｔ−ブチルエステルの存在下での、Ｂ−ブロモカテコールボランまたはＭｇＢｒ２のような試薬を用いたＭＯＭ基の選択的脱保護が可能であり、ここでその除去は、隣接するカルボニルとのキレート化によって容易にされる（ＨａｒａｌｄｓｓｏｎおよびＢａｌｄｗｉｎ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ．１９９７，５３：２１５−２２４を参照のこと）。あるいは、インサイチュ生成イソブチレンを使用した、ＭＯＭ基の最初の脱保護および選択的ｔ−ブチルエステル形成（Ｗｒｉｇｈｔら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．１９９７，３８：７３４５−７３４８を参照のこと）が使用されて、中間体７が提供され得る。従って、２２は、これら２つのプロトコルのうちの１つによって７に転換され得るか、代わりにカルボジイミドエステル化、およびＴＦＡなどでのＭＯＭ除去によって２，２，２−トリクロロエチル（ＴＣＥ）エステル２４に転換され得る。ＴＣＥエステルは、ｔ−ブチルエステルよりグリコシル化条件のより大きな範囲に対して安定であるが、類似のｔ−ブチル基は、アリルベースの糖保護に対してオルト（ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ）である（ＧｒｅｅｎｅおよびＷｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；第２版：Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９１；ｐｐ．２４０−２４１を参照のこと）。
【０１７５】
（２，５−ジヒドロキシベンズアルデヒドからの（２５）化合物７の合成）
以下のベンゾフラン経路のように、完全に官能化されたＡ環で開始するヒドロキノンストラテジーに対する１つの変形は、より求核性の５−ヒドロキシル基に対する２，５−ジヒドロキシベンズアルデヒド（２５）の選択的ベンジル化である。従って、２，５−ジヒドロキシ系においてカルボニル基に対してメタのヒドロキシルを選択的にアルキル化することが既知の条件下での、市販の２５のブロミド１４での処理（Ｓａｄｅｋｏｖら，１９７０を参照のこと；ＶｙａｓおよびＳｈａｈ，Ｏｒｇ．Ｓｙｎｔｈ．，Ｃｏｌｌ．Ｖｏｌ．４  １９６３，ｐｐ．８３６−８３９を参照のこと）を使用して、中間体７をたった２工程で（スキームＶ）で提供し得る。同様に、２５の酸１７でのアルキル化により、一工程でイソツカレゾール（ＩＶ）が得られる。
【０１７６】
【化３７】
2005525344.tif 000033
（化合物７または（ＩＶ）を得るための芳香族カルボニル基に対してオルトの選択的ベンジル化）
７またはＩＶの式に従う化合物は、選択的脱ベンジル化によって作成され得る。例えば、スキームＶにおいて、７（またはＩＶ）の調製における副生成物として形成されるジベンジル化生成物は、ホルミル基に対してオルト位において、ＭｇＢｒ２を用いて、選択的に開裂され得る（ＨａｒａｌｄｓｓｏｎおよびＢａｌｄｗｉｎ，１９９７を参照のこと）。あるいは、２５の、１４または１７、あるいは他の適切な誘導体での定量的ジベンジル化、その後の選択的ｏ−脱ベンジル化はまた、（ＩＶ）およびその誘導体（例えば、化合物４０）への効率的な経路を提供する。これらの方法の扱いやすさは、ヒドロキノン１３と比較して、出発物質２５のより高い費用の埋め合わせになる。
【０１７７】
一般に、この反応スキームは、ルイス酸の存在下で行われて、スキームＶＩにおけるような選択的脱ベンジル化生成物を形成する：
【０１７８】
【化３８】
2005525344.tif 000034
Ｒ２およびＲ８は、同じであっても異なってもよい。いくつかの実施形態において、Ｒ２およびＲ８は、カルボン酸保護基のような当該分野で公知の部分から選択される。本発明の範囲内の化合物は、Ｒ２およびＲ８が、水素、置換されたＣ１〜２０アルキル基、置換されていないＣ１〜２０アルキル基、および式−（ＣＨ２）ｒＣＨ（ＯＨ）（ＣＨ２）ｔＯＲ５（ここでｒおよびｔは、独立して１または２である）を有する基から独立して選択され、Ｒ５は、置換されたＣ２〜２０アシル基または以下の式：
【０１７９】
【化３９】
2005525344.tif 000035
を有する基である実施形態を含む。
【０１８０】
記号ｊは、１〜５の整数を示す。置換基Ｒ６およびＲ７は、独立して、水素、置換されたＣ１〜２０アルキル基、または置換されていないＣ１〜２０アルキル基を示し得る。
【０１８１】
このｏ−脱ベンジル化は、式ＭＸｎを有するルイス酸によって達成され得る。Ｍは、Ａｌ３＋、Ａｓ３＋、Ｂ３＋、Ｆｅ２＋、Ｆｅ３＋、Ｇａ３＋、Ｍｇ２＋、Ｓｂ３＋、Ｓｂ５＋、Ｓｎ２＋、Ｓｎ４＋、Ｔｉ２＋、Ｔｉ３＋、Ｔｉ４＋、およびＺｎ２＋を含む群から選択される。Ｘは、Ｃｌ、Ｉ、Ｆ、およびＢｒからなる群より選択されるハライドである。当業者は、Ｍの価電子状態に依存して、ｎが２〜５の整数であることを認識する。いくつかの実施形態において、オルト−脱ベンジル化を達成するために使用され得るそのルイス酸としては、以下があげれらるが、これらに限定されない：ＡｌＣｌ３、ＡｌＩ３、ＡｌＦ３、ＡｌＢｒ３、Ｅｔ２ＡｌＣｌ２、ＥｔＡｌＣｌ２、ＡｓＣｌ３、ＡｓＩ３、ＡｓＦ３、ＡｓＢｒ３、ＢＣｌ３、ＢＢｒ３、ＢＩ３、ＢＦ３、ＢＣｌ３・ＳＭｅ２、ＢＩ３・ＳＭｅ２、ＢＦ３・ＳＭｅ２、ＢＢｒ３・ＳＭｅ２、ＦｅＣｌ３、ＦｅＢｒ３、ＦｅＩ３、ＦｅＦ３、ＦｅＣｌ２、ＦｅＢｒ２、ＦｅＩ２、ＦｅＦ２、ＧａＣｌ３、ＧａＩ３、ＧａＦ３、ＧａＢｒ３、ＭｇＣｌ２、ＭｇＩ２、ＭｇＦ２、ＭｇＢｒ２、ＭｇＣｌ２−ＯＥｔ２、ＭｇＩ２−ＯＥｔ２、ＭｇＦ２−ＯＥｔ２、ＭｇＢｒ２−ＯＥｔ２、ＳｂＣｌ３、ＳｂＩ３、ＳｂＦ３、ＳｂＢｒ３、ＳｂＣｌ５、ＳｂＩ５、ＳｂＦ５、ＳｂＢｒ５、ＳｎＣｌ２、ＳｎＩ２、ＳｎＦ２、ＳｎＢｒ２、ＳｎＣｌ４、ＳｎＩ４、ＳｎＦ４、ＳｎＢｒ４、ＴｉＢｒ４、ＴｉＣｌ２、ＴｉＣｌ３、ＴｉＣｌ４、ＴｉＦ３、ＴｉＦ４、ＴｉＩ４、ＺｎＣｌ２、ＺｎＩ２、ＺｎＦ２、およびＺｎＢｒ２。さらに、ｏ−脱ベンジル化は、ルイス酸（例えば、Ｅｔ２ＡｌＣｌ、ＥｔＡｌＣｌ２、モノアルキルホウ素ハライド、ジアルキルホウ素ハライド、およびモノアリールホウ素ハライド、ジアリールホウ酸ハライド）により達成され得る。Ｘは、Ｃｌ、Ｉ、Ｆ、およびＢｒであり得るが、これらに限定されない。その反応は、オルト脱ベンジル化生成物を形成するために十分な条件下で行われる。これらの条件は、反応パラメーターを最適化することによって、当業者により決定され得る。オルト脱ベンジル化反応において最適化され得る反応パラメーターとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：反応インキュベーションの長さ、温度、圧力、溶媒、溶媒  対  出発物質の比など。本発明の反応を最適化する方法は、有機化学の当業者の十分に技術範囲内である。
【０１８２】
いずれの特定の理論に束縛されることなく、これらのルイス酸とジベンジル化出発物質との反応は、多環式環（例えば、六員環）キレート化環中間体を形成すると考えられる。この多環式環キレート化環中間体は、次いで、（例えば、塩基、酸、ＨＣｌなどでの）加水分解に供されて、オルト−脱ベンジル化生成物を得る。塩基または酸の反応混合物への添加は、所望のオルト−脱ベンジル化生成物を形成するに十分な条件の部分を考慮し得る。
【０１８３】
いくつかの実施形態において、ｏ−脱ベンジル化は、条件Ａ、条件Ｂ、または条件Ｃ下で化合物３９を反応させて、メチル４−（３−ホルミル−４−ヒドロキシフェノキシメチル）安息香酸（イソツカレゾールメチルエステル；４０）を得ることによって行われる：
【０１８４】
【化４０】
2005525344.tif 000036
（ベンゾフラン経路）
イソツカレゾール（ＩＶ）の１つの合成において、市販の５−メトキシベンゾフラン（１６）を、三臭化ホウ素で脱メチル化して（ＷｉｌｌｉａｒｄおよびＦｒｙｈｌｅ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．１９８０，２１：３７３１−３７３４を参照のこと）２６を得、次いで、これを、４−（ブロモメチル）安息香酸メチルでベンジル化する。ｔ−ブチルエステル１４での２６の類似のベンジル化およびベンゾフラン中間体１５のオゾン分解（Ｋｎｅｅｎ，ＥＰ０５４９２４，１９８６；および米国特許第４，５３５，１８３号）は、化合物７を提供する（スキームＶＩＩ）。
【０１８５】
（スキームＶＩＩ）
【０１８６】
【化４１】
2005525344.tif 000037
（ヘミスクシネート（Ｖ）の合成）
フェノールおよびアルコールの、それらの対応するヘミスクシネート（その遊離酸またはアルカリ金属塩として単離される）への変換は、ステロイドおよび他の親油性薬物の水溶性を増強するための一般的な方策であり、結果として、一般的な方法が、スクシノイル化のために利用可能である（ＧｏｔｔｆｒｉｅｄおよびＢａｘｅｎｄａｌｅ，１９６２を参照のこと）。ｔ−ブチルエステル７のピリジン中の無水コハク酸での処理、続いて、ｔ−ブチルエステルのトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）での脱保護により、化合物（Ｖ）が得られる（スキームＶＩＩＩ）。四級カルボン酸基は、通常は、この反応を妨害しないので、イソツカレゾール（ＩＶ）の直接のスクシノイル化もまた、可能である。
【０１８７】
【化４２】
2005525344.tif 000038
（グルクロニド４の合成）
アリールβ−グリコシドおよびアシルβ−グルクロニドの高度に立体選択的な合成は、Ｍｉｔｓｕｎｏｂｕ反応を介して達成されてきた（ＲｏｕｓｈおよびＬｉｎ，１９９５を参照のこと；Ｓｍｉｔｈら，１９８６を参照のこと）。実際に、アリルグルクロネート１１は、アノマーヒドロキシル基のより高い反応性を利用することによって、５０％までの収率において、糖ヒドロキシル基を保護せずにＭｉｔｓｕｎｏｂｕ反応において使用されてきた（Ｊｕｔｅａｕら，１９９７を参照のこと）。Ｍｉｔｓｕｎｏｂｕプロトコルの完全に保護された糖への適用によって、アリールβ−グルコシドのさらに高い収率（７０〜９５％）が得られる（ＲｏｕｓｈおよびＬｉｎ，１９９５を参照のこと）。
【０１８８】
従って、Ｄ−グルクロン酸およびアリルブロミド（１，８−ジアゾビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）／ＤＭＦ，ｒｔ）から７５％収率で調製される公知の（Ｊｕｔｅａｕら，１９９７）アリルエステル１１は、０℃のＴＨＦ中のトリフェニルホスフィンおよびジイソプロピルアゾジカルボキシレート（ＤＩＡＤ）の存在下で、フェノール７または関連する誘導体と選択的にカップリングされて、スキームＩＸに示されるように、アリールβ−グリコシド２８（すなわち、８Ｒ＝Ｈ）が得られる。適切なアリルスカベンジャーの存在下でのエステル保護基のＴＦＡおよびＰｄ（０）での連続的脱保護（Ｈａｒａｄａら，１９９５を参照のこと；Ｇｕｉｂｅ，１９９８を参照のこと）は、次いで、化合物（Ｖ）を与える。
【０１８９】
【化４３】
2005525344.tif 000039
フェノールのグリコシル化に使用されていた代替的な方法は、銀塩の存在下でのピラノシルブロミドのＫｏｅｎｉｇｓ  Ｋｎｏｒｒ反応である（ＲｏｕｓｈおよびＬｉｎ、１９９５を参照のこと；ＲｏｂｅｒｔｓｏｎおよびＷａｔｅｒｓ，Ｒ．Ｂ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９３０，２７２９−２７３３を参照のこと）。ＡＯＣ基は、ピリジン中のＡＯＣ−Ｃｌを使用して（Ｈａｒａｄａら，１９９５を参照のこと）、グルクロニドの２位、３位、４位に高収率で導入されたので、１１を同様に保護し、次いで、酢酸中のＨＢｒで処理して、ブロミド２９を得る。銀により媒介される２９と７のカップリングは、次いで、アリール−グリコシド３０（すなわち、８Ｒ＝ＡＯＣ）を優先的に生じる。類似のグリコシル化が、酸化銀の存在下で、サリチルアルデヒドおよびＯ−テトラアセチル−４−Ｄ−グルコピラノシルブロミドから天然生成物ヘリチン（３１）を調製するために使用されてきた（ＲｏｂｅｒｔｓｏｎおよびＷａｔｅｒｓ，１９３０を参照のこと）。グリコシル供与体２９はまた、銀媒介性加水分解によって、ラクトール３２への接近を提供する（ＲｏｕｓｈおよびＬｉｎ，１９９５を参照のこと）。完全に保護された３２と７とのＭｉｔｓｕｎｏｂｕ反応はまた、３０を与えるはずである。次いで、これは、２８についての脱保護と同じ２工程の脱保護によって、４へと脱保護され得る。
【０１９０】
（グルクロニド６ａ〜６ｃの合成）
アリールグリコシド３０（上で議論されるようにして、２９または３２から直接調製したか、あるいは２８のＡＯＣ保護によって調製した）を、以下の順序によって、より進んだ（ａｄｖａｎｃｅｄ）中間体９に変換する：（１）ｔブチルエステルの加水分解、（２）１０でのエステル化、および（３）以下のスキームＸに示されるようなアセトニドの切断。最近、オーレオル酸（ａｕｒｅｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）抗生物質に対するアプローチにおいて、芳香族アグリコン上の電子吸引性置換基を有するアリールグリコシドが、ケタールおよび他の保護基の酸性脱保護に対して安定であることが示された（ＲｏｕｓｈおよびＬｉｎ，１９９５；Ｒｏｕｓｈら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９９９，１２１：１９９０−１９９１）。実際、アグリコン単位中のカルボニル基を有する特定のフェニルグリコシドは、酸性加水分解に対して著しい安定性を示した（Ｂａｒら，Ｗｉｓｓ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．１９９０，２３：３７１−３７６を参照のこと）。それにも関わらず、グリコシド結合がケタールおよび／またはｔ−ブチルエステルの切断に対して感受性である場合、ＴＣＥエステル２４（２２から調製、または７のエステル交換により調製）は、グルクロン化（ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｔｉｏｎ）のために使用され得、続いて緩衝化ＴＨＦ水溶液中の亜鉛を用いて、中性条件下で脱保護され得る（ＪｕｓｔおよびＧｒｏｚｉｎｇｅｒ，ＳＹＮＴＨＥＳＩＳ  １９７６，４５７−４５８を参照のこと）。グルクロニドの安定なアイソスター（偽糖（ｐｓｅｕｄｏｓｕｇａｒ）、Ｃ−グリコシド）が調製され得る。
【０１９１】
化合物９を、無水酢酸および適切な酸クロリドを用いて、標準的な条件下で、１級ヒドロキシル基上で選択的にアシル化して、３３ａ〜ｃを得る。アセチルクロリドを用いるアセチル化は、他の酸クロリドを用いる場合ほど選択的ではないが、ＣＨＣｌ３中のＡｃ２Ｏを用いて、ピリジンの存在下でアセチルを導入することは、反応を０℃未満で実施した場合、１級アルコールに対する良好な選択性を提供する（Ｓｔｏｒｋら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９７８，１００：８２７２−８２７３を参照のこと）。グリセロール誘導体の選択的アシル化に特異的に適用されている１つの方法は、０℃でのインサイチュで生成されるスタノキサン（ｓｔａｎｎｏｘａｎｅ）（共沸脱水によりトルエン中のＢｕ２ＳｎＯを用いて調製される）と酸クロリドとの反応である（Ａｒａｇｏｚｚｉｎｉら、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  １９８９，２２５−２２７を参照のこと）。これらの方法の１つにより調製されるアリルベースの保護基３３ａ〜ｃの脱保護が行われる（６ａ〜ｃ）
（スキームＸ）
【０１９２】
【化４４】
2005525344.tif 000040
（６ａ〜ｃの分枝（ｄｉｖｅｒｇｅｎｔ）合成）
上で議論されたように、ＭＯＭエーテル２３は、理想的には、アシル化グリセロール単位をフェノール性ヒドロキシル基のグルクロン化の前に合成するのに適している。従って、１０を用いる２３のエステル化、続くアセトニドの加水分解および上記のようなアシル化は、３４ａ〜ｃを生じるはずである（スキームＸＩ）。次いで、ＭＯＭの脱保護、および得られた３５ａ〜ｃと１１とのＭｉｔｓｕｎｏｂｕカップリングは、グルクロニド３６ａ〜ｃを提供し、これをＰｄ（０）で脱保護して、６ａ〜ｃを得ることができる。
【０１９３】
（スキームＸＩ）
【０１９４】
【化４５】
2005525344.tif 000041
最終生成物（ＩＶ〜ＶＩ）を、標準的な分光法（ＩＲ、１Ｈ  ＮＭＲおよび１３Ｃ  ＮＭＲ）および物理（元素およびＨＲＭＳ）データによって分析する。純度を、インタクトな分子または適切な誘導体（例えば、グルクロン酸のカルボキシル基のフェナシルエステル）の逆相ＨＰＬＣ分析によって評価する。
【０１９５】
（ＩＶ．化合物の評価）
ＡＧＰ化合物およびサポニンを含む組成物の、体液性応答および細胞媒介性応答に対するアジュバント効果を、２つの異なるマウスモデルにおいて、非働化インフルエンザウイルス（例えば、ＦｌｕＺｏｎｅインフルエンザワクチン（Ｃｏｎｎａｕｇｈｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｓｗｉｆｗａｔｅｒ，ＰＡ）中の血球凝集素タンパク質）であるｒＨＢｓＡｇ（組換えＢ型肝炎表面抗原）を抗原として使用して、決定し得る（以下の実施例の節もまた参照のこと）。ｒＨＢｓＡＧの場合、この化合物を、ミョウバン吸着抗原および可溶性抗原の両方を用いて処方し、ミョウバン吸着抗原コントロールと比較し得る。ｒＨＢｓＡｇに対する抗体力価（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂなど）を、ワクチン接種前の血清およびワクチン接種後の血清からのＥＬＩＳＡによって決定し得る。
【０１９６】
血清および粘膜のＣＴＬおよびＩｇＡの応答が、ワクチンが鼻腔内（ｉ．ｎ．）投与された場合にしばしば増大される場合（ＶａｎＣｏｔｔら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９８，１６０：２０００−２０１２；Ｉｍａｏｋａら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９８，１６１：５９５２−５９５８を参照のこと）、マウスのｉ．ｎ．免疫および皮下（ｓ．ｃ．）免疫の両方を、上記の処方物を用いて実施する。これらの化合物を、ＢＡＬＢ／ｃマウスにおいてｒＨＢｓＡｇ特異的抗体およびインフルエンザ血球凝集素特異的抗体を誘発し、Ｐ８１５Ｓ−ＨＢｓＡｇ標的細胞に対するＣＴＬを増大する能力について評価する（例えば、Ｍｏｏｒｅら（１９８８）Ｃｅｌｌ  ５５：７７７−７８５を参照のこと。Ｐ８１５Ｓ細胞株は、ＭＨＣ−Ｉ複合体においてＨＢｓＡｇ  ＣＴＬｓ２８−３９エピトープを発現するＰ８１５トランスフェクト体であり、ＣＴＬ応答が病原体クリアランスに重要であると考えられるＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）に対するヒト免疫応答との関連性を示す（Ｓｃｈｉｒｍｂｅｃｋら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９４，１５２：１１１０−１１１９を参照のこと；Ｓｃｈｉｒｍｂｅｃｋら，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．１９９４，６８：１４１８−１４２５を参照のこと）。
【０１９７】
（Ｖ．薬学的組成物）
（処方物）
ＡＧＰ（例えば、式Ｉａ、ＩｂまたはＩｃの化合物）とサポニン（例えば式ＩＩ、ＩＩａ、ＩＩｂ、ＱＳ−２１などの化合物）との組合せは、被験体への投与のための薬学的に受容可能なキャリアと共に処方され得る。当業者に公知の任意の適切なキャリアが、本発明の薬学的組成物に用いられ得るが、キャリアのタイプは、投与様式に依存して変わる。この薬学的組成物は、代表的に、ＡＧＰおよびサポニンが、併用有効免疫増強量または治療有効量（すなわち、疾患または状態の処置、または生物学的発症の点で所望の効果を達成するのに必要な化合物の量）で存在するように、処方される。本発明の一実施形態において、ＡＧＰおよびサポニンの各々は、治療的効果を個々に提供する量で存在し、組合せの全効果が相乗効果を個々に提供する、すなわち、任意の予測される付加的な効果を超える組合せ効果を提供する。しかし、本発明の組成物は、組合せ相乗効果を有するものを含むので、この組成物は、ＡＧＰおよびサポニンの一方または両方でさえ、個別に、治療効果を提供するのに必要な量より少ない量で提供される組成物および方法を包含する。しかし、この組合せは、驚くべきことに、治療的に有効である。
【０１９８】
一実施形態において、ＡＧＰおよびサポニンの有効量は、０．０００１〜約１．０ｍｇ／ｋｇ被験体哺乳動物の体重、より好ましくは０．００１〜約０．１ｍｇ／ｋｇ哺乳動物の体重の範囲である。一実施形態において、ＡＧＰおよびサポニンは、６ヶ月までの期間にわたって、１週間に１回〜１ヶ月に１回、より好ましくは、約２〜３ヶ月の期間にわたって、１ヶ月に１回、投与される。１つの局面において、本発明は、哺乳動物における疾患を処置または予防する方法を提供し、この方法は、この哺乳動物に、抗原および有効免疫増強量のＡＧＰおよびサポニンを含むワクチン組成物を投与する工程を包含する。この疾患としては、癌、自己免疫疾患、アレルギーおよび感染症（例えば、細菌感染およびウイルス感染）が挙げられる。
【０１９９】
本発明の薬学的組成物において使用されるＡＧＰおよびサポニンは、広範な活性を有する。いくつかのＡＧＰは、他のものよりはるかに活性が大きく、そして同様に、いくつかのサポニンは、他のものよりはるかに活性が大きい。所定の状況において使用するための特定のＡＧＰおよび特定のサポニンの選択は、一般に、多数の要因に基づき、薬学的活性はそのうちの１つに過ぎない。所定の場合において、比較的高い活性を有するＡＧＰと比較的中程度のレベルの活性しか有さないサポニンとの組合せを使用することが望ましくあり得る。従って、それぞれ、異なるＡＧＰおよび／またはサポニンの組合せを含む組成物は、異なる量のこれら２つの物質を含む可能性が高い。患者への直接投与のための液体組成物（すなわち、単回投薬処方物）は、一般に、約１００μｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬを含む。患者に投与されるＡＧＰの量は、約１ｎｇ／ｋｇ体重〜約１ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは約１０ｎｇ／ｋｇ体重〜約１００μｇ／ｋｇ体重の範囲である。患者に投与されるサポニンの量は、一般に、約１００ｎｇ／ｋｇ体重〜約１０ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは約１μｇ／ｋｇ体重〜約５ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である。ＡＧＰとサポニンの乾燥処方物またはより濃縮された液体処方物は、希釈された場合、またはそうでなければ調整された場合、上記の投薬量を提供する量の物質を含む。
【０２００】
同様に、比較的異なるレベルの活性のＡＧＰおよびサポニンの組合せは、所定の組成物または処方物において一緒に使用され得るので、本発明の組成物中のサポニンに対するＡＧＰの重量比は、広範に変化し得る。一般に、これら２つの成分は、約１：１０００〜約１０００：１、好ましくは約１００：１〜約１：１００のＡＧＰ  対  サポニンの重量比で、この組成物中に存在する組成物である。好ましくは、これらは、ＡＧＰとサポニンの組合せの使用の予想外の効果または相乗効果が達成される様な重量比である。
【０２０１】
従って、好ましい組成物は、ＡＧＰおよびサポニンが、相乗的に有効な量、すなわち、この組成物が被験体に投与された場合、個々のＡＰおよびサポニン単独の使用と比較して、相乗効果または他の予想外の効果を有する量で存在する。同様に、この組成物の使用方法は、好ましくは、この組成物がＡＧＰまたはサポニン単独の投与と比較して相乗効果または他の予想外の効果を提供するように、ＡＧＰおよびサポニンを含む組成物を投与する工程を包含する。
【０２０２】
本明細書中で記載される組成物および投与方法は、１種のＡＧＰおよび１種のサポニンを含むという点において記載されるが、この用語は単に簡便性のために使用されるにすぎないことに注意するべきである。実際、本発明に従う組成物および使用方法は、所定の処置のために適切であり得るように、１種以上のＡＧＰおよび／または１種以上のサポニンを含み得る。本明細書中で提供されるＡＧＰおよびサポニンの量および割合とは、成分のそれぞれのカテゴリーの全含有量または割合をいう。
【０２０３】
薬学的組成物の調製について、薬学的に受容可能なキャリアは、固体または液体のいずれかであり得る。固体形態の調製物としては、散剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、カシェ剤、坐剤および分散可能顆粒剤が挙げられる。固体キャリアは、１種以上の物質を含み得、この物質はまた、希釈剤、香味剤、結合剤、保存剤、錠剤崩壊剤またはカプセル化材料として働き得る。
【０２０４】
散剤において、キャリアは細かく分割された固体であり、これは、細かく分割された活性成分との混合物中に存在する。錠剤において、活性成分は、必要な結合特性を有するキャリアと、適切な割合で混合され、そして所望の形状および大きさに圧縮される。
【０２０５】
固体形態の組成物が、例えば、活性アジュバント（例えば、塩の形態にある）の水性処方物の噴霧乾燥によって、またはこれらを凍結乾燥し、そして賦形剤と共に製粉することによって、調製され得る。
【０２０６】
本発明の固体組成物に適切なキャリアとしては、例えば、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、デンプン、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、低融点ワックス、ココアバターなどが挙げられる。用語「調製物」は、カプセルを提供するキャリアとしてのカプセル化材料と、活性化合物との処方物を含むことを意図し、ここで、他のキャリアを含むかまたは含まない活性成分は、キャリアによって取り囲まれ、従って、このキャリアと会合している。同様に、カシェ剤およびロゼンジが含まれる。錠剤、散剤、カプセル剤、丸剤、カシェ剤およびロゼンジは、経口投与に適切な固体投薬形態として使用され得る。
【０２０７】
坐剤の調製に付いて、低融点ワックス（例えば、脂肪酸グリセリドまたはココアバターの混合物が、最初に融解され、そして活性成分が、撹拌によって、この中に均一に分散される。この融解された均一な混合物は、次いで、都合良い大きさの鋳型に注ぎ入れられ、冷却され、それにより固化される。
【０２０８】
液体形態調製物としては、溶液、懸濁液およびエマルジョン（例えば、水または水／プロピレングリコール溶液）が挙げられる。非経口注射について、液体調製物が、水性ポリエチレングリコール溶液中の溶液中で処方され得る。特定の実施形態において、この薬学的組成物は、安定なエマルジョン処方物（例えば、油中水型エマルジョンまたは水中油型エマルジョン）中で、または好ましくは１種以上の界面活性剤を含む水性処方物中で処方される。当業者に周知の適切な界面活性剤が、このようなエマルジョンで使用され得る。一実施形態において、ＡＧＰおよびサポニンを含む組成物は、少なくとも１種の適切な界面活性剤を含むミセル分散物の形態である。このようなミセル分散物において有用な界面活性剤としては、リン脂質が挙げられる。リン脂質の例としては、以下が挙げられる：ジアシルホスファチジルグリセロール（例えば、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＭＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、およびジステアロイルホスファチジルグリセロール（ＤＳＰＧ））；ジアシルホスファチジルコリン（例えば、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＰＭＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、およびジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ））；ジアシルホスファチジル酸（例えば、ジミリストイルホスファチジル酸（ＤＰＭＡ）、ジパルミトイルホスファチジル酸（ＤＰＰＡ）、およびジステアロイルホスファチジル酸（ＤＳＰＡ））；ならびにジアシルホスファチジルエタノールアミン（例えば、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＭＥ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、およびジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ））。他の例としては、エタノールアミンの誘導体（例えば、上記のホスファチジルエタノールアミンまたはセファリン）、セリン（例えば、ホスファチジルセリン）、および３’−Ｏ−リジルグリセロール（例えば、３’−Ｏ−リジル−ホスファチジルグリセロール）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２０９】
代表的に、水性処方物中の界面活性剤：アジュバントのモル比は、約１０：１〜約１：１０、より代表的には約５：１〜約１：５であるが、任意の有効量の界面活性剤が、目的の特定の目的に最も適するように、水性処方物において使用され得る。
【０２１０】
経口用途に適切な水溶液は、活性成分を水に溶解し、そして適切な着色剤、香味剤、安定剤および増粘剤を必要に応じて添加することによって調製され得る。経口用途に適切な水性懸濁液は、細かく分割された活性成分を、粘性材料（例えば、天然ゴムまたは合成ゴム、樹脂、メチルセルロール、カルボキシメチルセルロースナトリウムおよび他の周知の懸濁剤）と共に水中に分散させることによって作製され得る。
【０２１１】
使用直前に、経口投与のための液体形態調製物に変換することを意図された固体形態調製物もまた含まれる。このような液体形態としては、溶液、懸濁液およびエマルジョンが挙げられる。これらの調製物は、活性成分に加えて、着色剤、香味剤、安定剤、緩衝剤、人工甘味料および天然甘味料、分散剤、増粘剤、可溶化剤などを含み得る。
【０２１２】
薬学的調製物は、好ましくは、単位投薬形態である。このような形態では、この調製物は、適切な量の活性成分を含む単位用量に細分される。単位投薬形態は、パッケージングされた調製物であり得、このパッケージは別個の量の調製物を含む（例えば、バイアルまたはアンプル中にパッケージングされた錠剤、カプセル剤および散剤）また、単位投薬形態は、カプセル剤、錠剤、カシェ剤またはロゼンジ自体であり得るか、またはこの単位投薬形態は、適切な数の任意のこれらのパッケージング形態のいずれかであり得る。
【０２１３】
この薬学的組成物は、抗原の非存在下で、免疫増強組成物として投与され得る。このような組成物は、病原体感染、癌または自己免疫障害に罹患しているか、またはこれらに対して感受性である被験体（例えば、哺乳動物）を処置するために使用され得る。他の実施形態において、この組成物は、動物における免疫応答を増大するために投与され得る。
【０２１４】
（抗原およびワクチン処方物）
他の実施形態において、動物（例えば、ヒト）の免疫応答は、抗原と組み合わせて組成物を投与することによって増強され得る；本発明のアジュバント系は、同時投与される抗原なしに投与され得、特に、易免疫性患者において、慢性感染性疾患の処置のための免疫系を増強する。このアプローチが治療処置または予防処置のために使用され得る感染性疾患の例は、米国特許第５，５０８，３１０号に見出され得る。この場合における免疫系の増強はまた、予防措置として有用であり、院内感染および／または外科手術後感染の危険性を制限し得る。
【０２１５】
薬学的組成物は、抗原と同時投与される場合、アジュバントとして作用し得る。式Ｉ（ａ−ｃ）、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、ＩＶａ、およびＩＶｂの化合物ならびに本明細書中に示される他のサポニンおよびＡＧＰは、外因性アジュバントとして考えられ得る。アジュバントは、抗原の免疫原性を増強する免疫刺激剤であるが、免疫原性そのものには必ずしも必要とされない。内因性アジュバント（例えば、リポポリサッカリド）は、通常は、ワクチンとして使用される殺傷されたまたは減弱された細菌の成分である。外因性アジュバントは、免疫調節因子であり、代表的には、抗原に非共有結合され、宿主の免疫応答を増強するように処方される。１つの実施形態において、抗原は、腫瘍関連抗原（腫瘍特異的抗原）である。
【０２１６】
１つの実施形態において、本発明は、抗原ならびにサポニンおよびＡＧＰを含有するワクチン組成物を提供する。適切な抗原としては、微生物病原、細菌、ウイルス、タンパク質、糖タンパク質、リポタンパク質、ペプチド、糖ペプチド、リポペプチド、毒素、炭水化物、および腫瘍特異的抗原が挙げられる。２つ以上の抗原の混合物が、使用され得る。
【０２１７】
従って、本発明のアジュバント系は、哺乳動物（特に、ヒト）の抗原に対する活性な免疫性を誘導するような、疾患を処置または予防するためのワクチンおよび他の免疫刺激組成物を作製および使用することにおいて、特に有利である。ワクチン調製物は、良好に開発された分野であり、調製における一般的指針およびワクチンの処方物は、任意の種々の供給源から容易に入手可能である。このような例の１つは、Ｖｏｌｌｅｒらによって編集された、Ｎｅｗ  Ｔｒｅｎｄｓ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ  ｉｎ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ，  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐａｒｋ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍｄ．，Ｕ．Ｓ．Ａ．１９７８である。
【０２１８】
本発明のワクチン組成物はまた、他の化合物を含み得、これは、生物学的に活性であっても不活性であっても良い。例えば、他の腫瘍抗原の１つ以上の免疫原性部分が、ワクチン組成物内に存在し得、これは、融合ポリペプチドに組込まれるか、または別々の化合物として存在する。ポリペプチドはまた、例えば、米国特許第４，３７２，９４５号および同第４，４７４，７５７号に記載されるように、他の高分子に結合体化され得るが、その必要はない。ワクチン組成物は、一般的に、予防目的および治療目的のために使用され得る。
【０２１９】
１つの例示的な実施形態において、本発明のワクチン組成物内の抗原は、ペプチド、ポリペプチド、またはその免疫原性部分である。本明細書中で使用される場合、「免疫原性部分」は、Ｂ細胞および／またはＴ細胞表面抗原レセプターによって認識される（すなわち、特異的に結合される）タンパク質の部分である。これらの免疫原性部分は、一般的に、少なくとも５アミノ酸残基、より好ましくは少なくとも１０アミノ酸残基、そしてさらにより好ましくは少なくとも２０アミノ酸残基の、抗原性タンパク質またはその改変体を含む。
【０２２０】
抗原ポリペプチドの免疫原性部分は、一般的に、周知の技術（例えば、Ｐａｕｌ，Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，第３版、２４３−２４７（Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，１９９３）およびその中に引用される参考文献に概説される技術）を使用して同定され得る。このような技術としては、抗原特異的抗体、抗原特異的抗血清および／または抗原特異的Ｔ細胞株もしくはクローンと反応する能力に対するポリペプチドのスクリーニングが挙げられる。本明細書中で使用される場合、抗血清および抗体は、これらが、特異的に抗原に結合する場合（すなわち、これらが、ＥＬＩＳＡまたは他の免疫アッセイにおいてタンパク質と反応し、そして、関係のないタンパク質と検出可能に反応しない）、「抗原−特異的」である。このような抗血清および抗体は、本明細書中に記載されるように、そして周知の技術を使用して、調製され得る。タンパク質の免疫原性部分は、（例えば、ＥＬＩＳＡおよび／またはＴ細胞反応性アッセイにおいて）全長ポリペプチドの反応性よりも実質的に低くはないレベルで、このような抗血清および／またはＴ細胞と反応する部分である。このような免疫原性部分は、全長ポリペプチドの反応性と同程度かまたはより高いレベルでこのようなアッセイにおいて反応し得る。このようなスクリーンは、一般的に、当業者に周知の方法（Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９８８に記載されるような方法）を使用して実施され得る。例えば、ポリペプチドは、固体支持体上に固定化され得、患者の血清と接触され、血清内の抗体の固定化されたポリペプチドへの結合を可能にする。次いで、結合されない血清は、除去され得、そして、結合抗体を、例えば、１２５Ｉ−標識プロテインＡを使用して検出し得る。
【０２２１】
ペプチドおよびポリペプチド抗原を、任意の種々の周知の技術を使用して調製する。ＤＮＡ配列によってコードされる組換えポリペプチドは、当業者に公知の任意の種々の発現ベクターを使用して、単離されたＤＮＡ配列から容易に調製され得る。発現は、組換えポリペプチドをコードするＤＮＡ分子を含む発現ベクターで形質転換されるかまたはトランスフェクトされた、任意の適切な宿主細胞において達成され得る。適切な宿主細胞としては、原核生物細胞、酵母、および高等真核生物細胞（例えば、哺乳動物細胞および植物細胞）が挙げられる。好ましくは、使用される宿主細胞は、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞株、酵母細胞株または哺乳動物細胞株（例えば、ＣＯＳまたはＣＨＯ）である。
【０２２２】
約１００アミノ酸未満、そして一般的には約５０アミノ酸未満を有するタンパク質抗原の部分および他の改変体はまた、当業者に周知の技術を使用する、合成手段によって生成され得る。例えば、このようなポリペプチドは、任意の市販の固相技術（例えば、伸長するアミノ酸鎖に実質的に付加されるＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄ固相合成法）を使用して合成され得る。Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９−２１４６，１９６３を参照のこと。ポリペプチドの自動化合成のための装置は、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ／Ａｐｐｌｉｅｄ  ＢｉｏＳｙｓｔｅｍｓ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）のような供給元から市販され、製造業者の指示書に従って操作され得る。
【０２２３】
特定の特異的実施形態において、本発明のワクチン組成物において使用されるポリペプチド抗原は、２つ以上の異なるポリペプチドを含む融合タンパク質であり得る。融合パートナーは、例えば、Ｔヘルパーエピトープ（免疫学的融合パートナー）、好ましくはヒトによって認識されるＴヘルパーエピトープを提供するのを補助し得るか、またはネイティブな組換えタンパク質より高い収率でタンパク質（発現エンハンサー）を発現するのを補助し得る。特定の好ましい融合パートナーは、免疫学的融合パートナーおよび発現増強融合パートナーの両方である。他の融合パートナーは、タンパク質の可溶性を増大するように選択され得るか、またはタンパク質を所望の細胞内区画に標的化されるのを可能にする。なおさらなる融合パートナーとしては、アフィニティータグが挙げられ、タンパク質の精製を容易にする。
【０２２４】
融合タンパク質は、一般的に、標準的技術（化学的結合が挙げられる）を使用して調製され得る。好ましくは、融合タンパク質は、組換えタンパク質として発現され、発現系において非融合タンパク質に比べて、増大したレベルの産生を可能にする。簡単には、ポリペプチド成分をコードするＤＮＡ配列は、別々にアセンブルされ得、そして適切な発現ベクターに連結され得る。ペプチドリンカーを有するかまたは有さない、１つのポリペプチド成分をコードするＤＮＡ配列の３’末端は、第２のポリペプチド成分をコードするＤＮＡ配列の５’末端に連結され、その結果、配列のリーディングフレームが、インフェイズ（ｉｎ  ｐｈａｓｅ）になる。これは、両方のポリペプチド成分の生物学的活性を維持する単一の融合タンパク質に翻訳される。
【０２２５】
ペプチドリンカー配列は、各ポリペプチドが、その二次構造および三次構造に折りたたむことを保証するのに十分な距離まで、第１および第２のポリペプチド成分を分離するために使用され得る。このようなペプチドリンカー配列は、当業者に周知の標準的技術を使用して、融合タンパク質に組込まれる。適切なペプチドリンカー配列は、以下の因子に基づいて選択され得る：（１）可撓性の伸長したコンフォメーションを採用不能；（２）第１および第２のポリペプチド上の機能性エピトープと相互作用し得る二次構造を採用する能力；ならびに（３）ポリペプチド機能性エピトープと反応し得る疎水性残基または荷電性残基の欠損。好ましいペプチドリンカー配列は、Ｇｌｙ残基、Ａｓｎ残基およびＳｅｒ残基を含む。他のよく似た中性アミノ酸（例えば、ＴｈｒおよびＡｌａ）はまた、リンカー配列中に使用され得る。リンカーとして通常使用されるアミノ酸配列としては、Ｍａｒａｔｅａら、Ｇｅｎｅ  ４０：３９−４６，１９８５；Ｍｕｒｐｈｙら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８３：８２５８−８２６２，１９８６；米国特許第４，９３５，２３３号および米国特許第４，７５１，１８０号に開示されるようなリンカーが挙げられる。リンカー配列は、一般的に、１〜約５０アミノ酸長であり得る。第１および第２のポリペプチドが、機能的ドメインを分離し、立体的障害を防止するために使用され得る非必須Ｎ−末端アミノ酸領域を有する場合、リンカー配列は、必要とされない。
【０２２６】
好ましい実施形態において、免疫学的融合パートナーは、グラム陰性細菌Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  Ｂの表面タンパク質である、プロテインＤに由来する（例えば、ＷＯ９１／１８９２６，米国特許第６，１３９，８４６号、同第６，０２５，４８４号、同第５，９８９，８２８号、同第５，８８８，５１７号、および同第５，８５８，６７７号を参照のこと）。好ましくは、プロテインＤ誘導体は、タンパク質のほぼ１／３（例えば、第１のＮ−末端１００〜１１０アミノ酸）を含み、プロテインＤ誘導体は、脂質化され得る。特定の好ましい実施形態において、リポタンパク質Ｄ融合パートナーの第１の１０９残基は、Ｎ−末端に含まれ、さらなる外因性Ｔ細胞エピトープを有するポリペプチドを提供し、そしてＥ．ｃｏｌｉ中での発現レベルを増大する（従って、発現エンハンサーとして機能する）。脂質テイルは、抗原提示細胞に対する抗原の最適な提示を保証する。他の融合パートナーは、インフルエンザウイルス（ＮＳ１（赤血球凝集素））由来の非構造タンパク質を含む。代表的には、Ｎ−末端８１アミノ酸が使用されるが、Ｔ−ヘルパーエピトープを含む異なるフラグメントが、使用され得る。
【０２２７】
別の実施形態において、免疫学的融合パートナーは、ＬＹＴＡとして公知のタンパク質またはその部分（好ましくはＣ−末端部分）である。ＬＹＴＡは、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに由来し、これは、アミダーゼＬＹＴＡとして公知のＮ−アセチル−Ｌ−アラニンアミダーゼを合成する（ＬｙｔＡ遺伝子によってコードされる；Ｇｅｎｅ  ４３：２６５−２９２，１９８６）。ＬＹＴＡは、ペプチドグリカン骨格中の特定の結合を特異的に分解する自己溶解素である。ＬＹＴＡタンパク質のＣ−末端ドメインは、コリンまたは何らかのコリンアナログ（例えば、ＤＥＡＥ）に対する親和性を担う。この特性は、融合タンパク質の発現について有用なＥ．ｃｏｌｉ  Ｃ−ＬＹＴＡ発現プラスミドの開発のために活用されてきた。アミノ末端にＣ−ＬＹＴＡフラグメントを含むハイブリッドタンパク質の精製が、記載された（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７９５−７９８，１９９２を参照のこと）。好ましい実施形態において、ＬＹＴＡの反復部分は、融合タンパク質に組込まれ得る。反復部分は、残基１７８で開始するＣ−末端領域において見出される。特に好ましい反復部分は、残基１８８〜３０５に組込まれる。
【０２２８】
本発明の別の実施形態において、本明細書中に記載されるアジュバント系は、ＤＮＡ−ベースのワクチン組成物の調製に使用される。この型の例示的ワクチンは、１つ以上のポリペプチド抗原をコードするＤＮＡを含み、その結果、抗原は、インサイチュで生成される。ＤＮＡは、当業者に公知の種々の送達系のいずれかに存在し得、この送達系としては、核酸発現系、細菌発現系およびウイルス発現系が挙げられる。種々の遺伝子送達技術（例えば、Ｒｏｌｌａｎｄ，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒａｐ．Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  １５：１４３−１９８，１９９８およびその中に引用される参考文献に記載される技術）が当該分野で公知である。適切な核酸発現系は、患者における発現のために必要なＤＮＡ配列（例えば、適切なプロモーターおよび終結シグナル）を含む。細菌送達系は、その細胞表面上にポリペプチドの免疫原性部分を発現するか、またはそのようなエピトープを分泌するかする細菌（例えば、Ｂａｃｉｌｌｕｓ−Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｒｉｎ）の投与を含む。１つの好ましい実施形態において、ＤＮＡは、ウイルス発現系（例えば、ワクシニアもしくは他のポックスウイルス、レトロウイルス、またはアデノウイルス）を使用して導入され、これは、代表的に、非病原性（欠損）複製能のあるウイルスの使用を含む。例示的な系は、例えば、Ｆｉｓｈｅｒ−Ｈｏｃｈら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：３１７−３２１，１９８９；Ｆｌｅｘｎｅｒら、Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．５６９：８６−１０３，１９８９；Ｆｌｅｘｎｅｒら、Ｖａｃｃｉｎｅ  ８：１７−２１，１９９０；米国特許第４，６０３，１１２号、同第４，７６９，３３０号、同第および５，０１７，４８７号；ＷＯ８９／０１９７３；米国特許第４，７７７，１２７号；英国特許第２，２００，６５１号；欧州特許第０，３４５，２４２号；ＷＯ９１／０２８０５；Ｂｅｒｋｎｅｒ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ６：６１６−６２７，１９８８；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５２：４３１−４３４，１９９１；Ｋｏｌｌｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：２１５−２１９，１９９４；Ｋａｓｓ−Ｅｉｓｌｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：１１４９８−１１５０２，１９９３；Ｇｕｚｍａｎら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ８８：２８３８−２８４８，１９９３；ならびにＧｕｚｍａｎら、Ｃｉｒ．Ｒｅｓ．７３：１２０２−１２０７，１９９３に開示される。このような発現系にＤＮＡを組込むための技術は、当業者に周知である。
【０２２９】
あるいは、ＤＮＡは、例えば、Ｕｌｍｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５９：１７４５−１７４９，１９９３およびＣｏｈｅｎによって概説される，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５９：１６９１−１６９２，１９９３において記載されるように「裸の」ＤＮＡであり得る。裸のＤＮＡの取り込みは、細胞に効率的に輸送される生体分解性ビーズ上にＤＮＡをコーティングすることによって増大され得る。ワクチンが、所望される場合、ポリヌクレオチド成分およびポリペプチド成分の両方を含み得ることは明らかである。
【０２３０】
さらに、ワクチンが、所望のポリヌクレオチド抗原、ポリペプチド抗原および／または炭水化物抗原の薬学的に受容可能な塩を含み得ることは明らかである。例えば、このような塩は、薬学的に受容可能な非毒性塩基から調製され得、この非毒性塩基は、有機塩基（例えば、１級アミンの塩、２級アミンの塩、および３級アミンの塩、ならびに塩基性アミノ酸）および無機塩基（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、アンモニウム塩、カルシウム塩、およびマグネシウム塩）を含む。
【０２３１】
本発明のアジュバント系は、投与される場合、広い範囲の投薬量および広い範囲の割合にわたって強いアジュバント効果を示す。
【０２３２】
各ワクチン用量における抗原の量は、代表的なワクチンにおける、有意な有害な副作用のない、免疫保護応答を誘導する量として、一般的に選択される。このような量は、どのような特異的抗原が使用されるか、そして抗原がどのように提示されるかに依存して、変化する。一般的に、各用量は、約１〜１０００μｇのタンパク質、最も代表的には約２〜１００μｇのタンパク質、好ましく約５〜５０μｇのタンパク質を含むことが予想される。もちろん、投与される投薬量は、年齢、体重、現在の処置の種類、および、もしあれば、投与される抗原の性質に依存し得る。
【０２３３】
本発明の所定の量のワクチン組成物の免疫原性活性は、例えば、ワクチン組成物を使用して、抗原に対する抗体の力価の増加をモニタリングすることによって、容易に決定され得る（Ｄａｌｓｇａａｒｄ，Ｋ．Ａｃｔａ  Ｖｅｔｅｒｉｎｉａ  Ｓｃａｎｄｉｎａｖｉｃａ  ６９：１−４０（１９７８））。別の共通の方法は、種々の量のワクチン組成物を皮内的にＣＤ−１マウスに注射する工程、後にマウスから血清を回収する工程、および、例えばＥＬＩＳＡによって抗免疫原抗体に対して試験する工程を包含する。これらおよび他の類似のアプローチは、当業者に明らかである。
【０２３４】
抗原は、感染症、自己免疫疾患、状態、癌、病原、または所定のワクチン組成物で処置されるべき疾患に依存して、本質的に任意の所望の供給源に由来し、そして／または単離され得る。例として、抗原は、ウイルス供給源（例えば、インフルエンザウイルス、ネコ白血病ウイルス、ネコ免疫不全ウイルス、ヒトＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、２型単純ヘルペスウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、もしくはＥ型肝炎ウイルス、ＲＳウイルス、ヒトパピローマウイルス、狂犬病ウイルス、麻疹ウイルス、または口蹄疫ウイルス）に由来し得る。例示的な抗原はまた、細菌供給源（例えば、炭疽、ジフテリア、ライム病、マラリア、結核、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａｓｉｓ、Ｔ．ｃｒｕｚｉ、Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ、Ｃａｎｄｉｄａなど）または原生動物（例えば、Ｂａｂｅｏｓｉｓ  ｂｏｖｉｓまたはＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ）に由来し得る。抗原は、代表的に、天然アミノ酸または合成アミノ酸（例えば、ペプチド、ポリペプチド、もしくはタンパク質の形態）からなるか、ポリサッカリドからなり得るか、あるいはこれらの混合物からなり得る。例示的な抗原は、天然供給源から単離され得るか、固相合成の方法によって合成されるか、または組換えＤＮＡ技術の方法によって得られ得る。
【０２３５】
別の実施形態において、腫瘍抗原は、癌の予防および／または治療のために、本発明のワクチン組成物中で使用される。腫瘍抗原は、非腫瘍組織に比べて、腫瘍細胞において差示的に発現される表面分子である。腫瘍抗原は、正常細胞と免疫学的に異なる腫瘍細胞を作製し、ヒト癌に対する診断標的および治療標的を提供する。腫瘍抗原は、膜タンパク質または細胞表面上の糖タンパク質もしくは糖脂質の変更された炭水化物分子のいずれかとして、特徴付けられる。癌細胞は、しばしば、これらの表面上に特徴的な腫瘍抗原（例えば、短縮型上皮増殖因子、葉酸結合タンパク質、上皮ムチン、メラノフェリン、癌胎児抗原、前立腺特異的膜抗原、ＨＥＲ２−ｎｅｕ）を有し、これらは、治療的癌ワクチンにおける使用のための候補である。腫瘍抗原が正常であるかまたは体の正常な成分に関連するので、免疫系は、しばしば、これらの抗原に対する有効な免疫応答を増やし、腫瘍細胞を破壊するのを失敗する。これらの応答を達成するために、本明細書中に記載されるアジュバント系が、使用され得る。結果として、外因性タンパク質は、内因性抗原をプロセスするための経路に入り得、細胞分解性Ｔ細胞または細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）の産生を導く。このアジュバント効果は、抗原特異的ＣＴＬの産生を容易にする。この抗原特異的ＣＴＬは、免疫のために使用される腫瘍抗原を表面上に保持する腫瘍細胞を探し、そして破壊する。このアプローチが使用され得る例示的な癌の型としては、前立腺、結腸、胸部、卵巣、膵臓、脳、頭頚部、黒色腫、白血病、リンパ腫などが挙げられる。
【０２３６】
１つの実施形態において、ワクチン組成物中に存在する抗原は、異種抗原ではなく自己抗原である（すなわち、このワクチン組成物は、自己免疫疾患に指向される）。自己免疫疾患の例としては、１型糖尿病、従来の器官特異的自己免疫、神経疾患、リウマチ疾患／結合組織疾患、自己免疫性血球減少、および関連自己免疫疾患が挙げられる。このような従来の器官特異的自己免疫としては、甲状腺炎（グレーヴズ病および橋本甲状腺炎）、胃炎、副腎炎（アジソン病）、卵巣炎、原発性胆汁性肝硬変、重症筋無力症、性腺機能不全、上皮小体機能低下症、脱毛症、吸収不良症候群、悪性貧血、肝炎、抗レセプタ抗体疾患（ａｎｔｉ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｄｉｓｅａｓｅ）および白斑が挙げられる。このような神経疾患としては、精神分裂病、アルツハイマー病、うつ病、下垂体機能低下症、尿崩症、乾燥症候群、および多発性硬化症が挙げられ得る。このようなリウマチ疾患／結合組織疾患としては、慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）もしくは狼瘡、強皮症、多発性筋炎、炎症性腸疾患、皮膚筋炎、潰瘍性大腸炎、クローン病、脈管炎、乾癬性関節炎、剥脱性乾癬性皮膚炎、尋常性天疱瘡、サムター症候群が挙げられ得る。他の自己免疫性関連疾患としては、自己免疫性ぶどう膜網膜炎（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｕｖｏｒｅｔｉｎｉｔｉｓ）、糸球体腎炎、心筋梗塞心臓切開後症候群（ｐｏｓｔ  ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ  ｃａｒｄｉｏｔｏｍｙ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、肺ヘモジデリン沈着症、アミロイドーシス、サルコイドーシス、アフタ性口内炎、および他の免疫関連疾患（本明細書中に示され、そして関連分野において公知であるような疾患）が挙げられ得る。
【０２３７】
１つの実施形態において、この抗原は、アジュバント（例えば、式Ｉの化合物）と共有結合して分離した分子を生成し、この分子は、抗原に対して意外にも予想外に増強されたアジュバント効果を示し、このアジュバント効果は、成分（すなわち、抗原、ＡＧＰ、およびサポニン）の混合物の場合のような、共有結合の非存在下において達成可能なアジュバント効果よりも大きい。共有結合は、官能基を介する反応によって（例えば、式Ｉの化合物の場合、カルボン酸基、ヒドロキシル基またはアルデヒド官能性を介して）、達成され得る。このような化合物とともに鉱物塩アジュバントを組み込むことによって、このように共有結合した抗原について、さらに増強されたアジュバント効果が達成され得る。この鉱物塩アジュバントは、好ましくは、水酸化アルミニウムまたはリン酸アルミニウムを含むが、他の公知の鉱物塩アジュバント（例えば、リン酸カルシウム、水酸化亜鉛または水酸化カルシウム）が使用され得る。
【０２３８】
このアジュバントは、他のポリヌクレオチドおよび／またはポリペプチドを含み得る。ワクチンが、本明細書中に提供されたポリヌクレオチドおよびポリペプチドの薬学的に受容可能な塩を含み得ることは、明白である。このような塩は、有機塩基（例えば、一級アミン、二級アミン、三級アミンの塩および塩基性アミノ酸）ならびに無機塩基（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、アンモニウム塩、カルシウム塩およびマグネシウム塩）を含む、薬学的に受容可能な無毒性塩基から調製され得る。
【０２３９】
本発明のワクチン組成物は、任意の適切な投与の方法で処方され得、従って、例えば、局所投与、経口投与、経鼻投与、静脈内投与、膣内投与、皮膚上（ｅｐｉｃｕｔａｎｅｏｕｓ）投与、舌下投与、頭蓋内投与、皮内投与、腹腔内投与、皮下投与、筋内投与、または吸入を介する方法を包含して投与され得る。非経口的投与（例えば、皮下注射）のために、このキャリアは、好ましくは、水、生理食塩水、アルコール、脂肪、ワックスまたは緩衝液を含む。経口投与のために、任意の上記のキャリアまたは固体キャリア（例えば、マンニトール、乳糖、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、滑石粉、セルロース、グルコース、ショ糖、および炭酸マグネシウム）が使用され得る。生分解性ミクロスフェア（例えば、ポリラクテートポリグリコレート（ｐｏｌｙｌａｃｔａｔｅ  ｐｏｌｙｇｌｙｃｏｌａｔｅ））はまた、本発明の薬学的組成物のためのキャリアとして使用され得る。適切な生分解性ミクロスフェアは、例えば、米国特許第４，８９７，２６８号；同第５，０７５，１０９号；同第５，９２８，６４７号；同第５，８１１，１２８号；同第５，８２０，８８３号；同第５，８５３，７６３号；同第５，８１４，３４４号および同第５，９４２，２５２号に開示され、これらの開示内容は、その全体が、本明細書中に参考として援用される。改変Ｂ型肝炎コアタンパク質キャリア系（ｍｏｄｅｆｉｅｄ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｂ  ｃｏｒｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃａｒｒｉｅｒ  ｓｙｓｔｅｍ）もまた適切であり、例えばＷＯ９９／４０９３４に記載され、そしてその中に示される引用文献は、全てが本明細書中に参考として援用される。米国特許第５，９２８，６４７号（この開示内容は、その全体が、本明細書中に参考として援用される）に記載されるような、粒子−タンパク質複合体を含むキャリアもまた使用され得、これらのキャリアは、宿主における第Ｉ級−制限細胞毒性Ｔリンパ球応答を誘導可能である。
【０２４０】
１つの例示的な実施形態において、免疫応答を誘発するために、これらのワクチン処方物を、粘膜（特に口腔、そして好ましくは舌下部位）に投与する。多くの場合、口腔投与は、非侵襲性投与技術によって提供される容易性および利便性に起因して、従来の非経口的送達よりも好まれ得る。さらに、このアプローチは、粘膜免疫（これは、しばしば伝統的な非経口的送達による達成が困難であり得る）を誘発するための手段をさらに提供し、そして、空気伝搬性の病原体および／またはアレルゲンからの保護を提供し得る。口腔投与のさらなる利点は、特に小児の適用のために、またはアレルギー脱感作療法のような長期にわたって多数の注射を従来的に必要とする適用のために、舌下ワクチン送達を用いて患者のコンプライアンスが改善され得ることである。
【０２４１】
ワクチン組成物はまた、緩衝液（例えば、中性緩衝化生理食塩水またはリン酸緩衝化生理食塩水）、糖質（例えば、グルコース、マンノース、スクロースまたはデキストラン）、マンニトール、タンパク質、ポリペプチドまたはアミノ酸（例えば、グリシン）、抗酸化薬、静菌薬、キレート剤（例えば、ＥＤＴＡまたはグルタチオン）、アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）、処方物を、レシピエントの血液と、等張性、低張性もしくは弱い高張性にする溶質、懸濁剤、濃化剤および／または保存薬を含有し得る。あるいは、本発明のワクチン組成物は、凍結乾燥剤（ｌｙｏｐｈｉｌｉｓａｔｅ）として処方され得る。化合物はまた、周知の技術を使用して、リポソーム内にカプセル化され得る。
【０２４２】
本発明のワクチン組成物はまた、他のアジュバントまたは免疫エフェクター（ｉｍｍｕｎｏｅｆｆｅｃｔｏｒ）を含有し得る。適切なアジュバントは、例えば、以下として市販されている：フロイント不完全アジュバントおよびフロイント完全アジュバント（Ｄｉｆｃｏ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｄｅｔｒｏｉｔ、ＭＩ）；Ｍｅｒｃｋ  Ａｄｊｕｖａｎｔ  ６５（Ｍｅｒｃｋ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｉｎｃ．、Ｒａｈｗａｙ、ＮＪ）；ＡＳ−２（ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍ）；鉱塩（例えば、アルミニウム、シリカ、カオリンおよび炭素）；アルミニウム塩（例えば、水酸化アルミニウムゲル（ａｌｕｍ）、ＡｌＫ（ＳＯ４）２、ＡｌＮａ（ＳＯ４）２、ＡｌＮＨ４（ＳＯ４）、およびＡｌ（ＯＨ）３）；カルシウム塩（例えば、Ｃａ３（ＰＯ４）２）、鉄および亜鉛；アシル化チロシンの不溶性懸濁物；アシル化糖；カチオン性またはアニオン性の誘導体化多糖類；ポリヌクレオチド（例えば、ポリＩＣ酸およびポリＡＵ酸）；ポリホスファジン（ｐｏｌｙｐｈｏｓｐｈａｚｅｎｅ）；シアノアクリレート；ポリメラーゼ−（ＤＬ−ラクチド−ｃｏ−グリコシド）；生分解性ミクロスフェア；リポソーム；リピドＡおよびその誘導体；モノホスホリルリピドＡ；ヒト型結核菌由来のワックスＤ、ならびに挫瘡プロピオンバクテリウム、百日咳菌、およびブルセラ属のメンバーにおいて見出される物質）；ウシ血清アルブミン；ジフテリアトキソイド；テタヌストキソイド；エデスチン；キーホールリンペットヘモシアニン；Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｌ  Ｔｏｘｉｎ  Ａ；コレラゲノイド（ｃｈｏｌｅｒａｇｅｎｏｉｄ）；コレラ毒素；百日咳毒素；ウイルスタンパク質；ならびにＱｕｉｌ  Ａ。アミノアルキルグリコサミンホスフェート化合物もまた、使用され得る（例えば、ＷＯ  ９８／５０３９９、米国特許第６，１１３，９１８号（これは、ＵＳＳＮ０８／８５３，８２６から発行された）、およびＵＳＳＮ０９／０７４，７２０を参照のこと）。さらに、サイトカイン（例えば、ＧＭ−ＣＳＦまたはインターロイキン−２、インターロイキン−７もしくはインターロイキン−１２）、インターフェロン、または腫瘍壊死因子のようなアジュバントもまた、アジュバントとして使用され得る。タンパク質およびポリペプチドのアジュバントは、当業者に周知の方法に従って、天然の供給源から得られ得るか、または組換え供給源から得られ得る。組換え供給源から得られる場合、このアジュバントは、その分子の少なくとも免疫刺激性部分を含むタンパク質フラグメントを含み得る。本発明の実施において使用され得る他の公知の免疫刺激性高分子としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：多糖類、ｔＲＮＡ、非代謝性合成ポリマー（例えば、ポリビニルアミン、ポリメタクリル酸、ポリビニルピロリドン、４’，４−ジアミノジフェニルメタン−３，３’−ジカルボン酸と４−ニトロ−２−アミノ安息香酸との混合重縮合物（ｍｉｘｅｄ  ｐｏｌｙｃｏｎｄｅｎｓａｔｅ）（相対的に高い分子量を有する）（Ｓｅｌａ、Ｍ．、Ｓｃｉｅｎｃｅ  １６６：１３６５−１３７４（１９６９）を参照のこと）、または糖脂質、脂質もしくは糖類。
【０２４３】
本明細書中で提供されるワクチン組成物において、アジュバント組成物は、好ましくは、Ｔｈ１型に優性な免疫応答を誘導するように設計される。高レベルのＴｈ１型サイトカイン（例えば、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−２およびＩＬ−１２）は、投与される抗原に対する細胞媒介性免疫応答の誘導を支持する傾向がある。対照的に、高レベルのＴｈ２型サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６およびＩＬ−１０）は、体液性免疫応答の誘導を支持する傾向がある。本明細書中で提供されるようなワクチンの適用後、患者は、Ｔｈ１型応答およびＴｈ２型応答を誘導する免疫応答を支持する。応答が優性にはＴｈ１型である、好ましい実施形態において、Ｔｈ１型サイトカインのレベルは、Ｔｈ２型サイトカインのレベルよりも高い程度まで増加する。これらのサイトカインのレベルは、標準的なアッセイを使用して容易に評価され得る。サイトカインのファミリーの総説については、ＭｏｓｍａｎｎおよびＣｏｆｆｍａｎ、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９８９，７：１４５−１７３を参照のこと。
【０２４４】
本明細書中に記載される組成物は、徐放性処方物（すなわち、投与後に、化合物の遅い放出をもたらす、カプセル、スポンジまたはゲル（例えば、多糖類から構成される））の一部として投与され得る。このような処方物は、一般に、周知の技術を使用して調製され得（例えば、Ｃｏｏｍｂｅｓら、Ｖａｃｃｉｎｅ  １４：１４２９−１４３８，１９９６）、そして例えば、経口投与、直腸投与もしくは皮下移植投与され得るか、または所望の標的部位での移植によって投与され得る。徐放性処方物は、キャリアマトリクス中に分散され、そして／または速度制御膜によって囲まれたレザバ内に含まれる、ポリペプチド、ポリヌクレオチドまたは抗体を含有し得る。このような処方物内で使用するためのキャリアは、生体適合性であり、そしてまた、生分解性でもあり得る。好ましくは、この処方物は、相対的に一定レベルの活性成分の放出を提供する。このようなキャリアとしては、以下が挙げられる：ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）、ポリアクリレート、ラテックス、デンプン、セルロース、デキストランなどの高分子。他の遅滞放出性キャリアとしては、以下が挙げられる：超分子バイオベクター（ｓｕｐｒａｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｂｉｏｖｅｃｔｏｒ）（これは、非液体親水性コア（例えば、架橋多糖類または架橋オリゴ糖）、および必要に応じて、両親媒性化合物（例えば、リン脂質）を含む外側層を含む）（例えば、米国特許第５，１５１、２５４号およびＰＣＴ出願ＷＯ  ９４／２００７８、ＷＯ／９４／２３７０１およびＷＯ９６／０６６３８を参照のこと）。徐放性処方物内に含まれる活性化合物の量は、移植部位、放出速度および放出の予測持続時間、ならびに処置または防止されるべき状態の性質に依存して、変更される。
【０２４５】
任意の種々の公知の送達ビヒクルが、薬学的組成物およびワクチン内で用いられ、細胞を標的化する抗原特異的免疫応答の生成を促進し得る。送達ビヒクルとしては、抗原提示細胞（ＡＰＣ）（例えば、樹状細胞、マクロファージ、Ｂ細胞、単球および効率的なＡＰＣとなるように操作され得る他の細胞）が挙げられる。このような細胞は、抗原を掲示する能力を増加するように遺伝学的に改変され、Ｔ細胞応答の活性化および／もしくは維持を改善し、それ自体が抗標的効果を有し、そして／またはレシーバ（すなわち、一致したＨＬＡハプロタイプ）と免疫学的に適合性であり得るが、そのような必要はない。ＡＰＣは、一般に、種々の生物学的流体および器官（腫瘍および腫瘍周囲組織を含む）のいずれかから単離され得、これらは、自己細胞、同種異系細胞、同系細胞または異種細胞であり得る。
【０２４６】
本発明の特定の好ましい実施形態は、抗原提示細胞として、樹状細胞またはその前駆体を使用する。樹状細胞は、かなり強力なＡＰＣであり（ＢａｎｃｈｅｒｅａｕおよびＳｔｅｉｎｍａｎ、Ｎａｔｕｒｅ  ３９２：２４５−２５１，１９９８）、予防的または治療的な抗腫瘍免疫を誘発するための生理学的アジュバントとして有効であることが示されている（ＴｉｍｍｅｒｍａｎおよびＬｅｖｙ、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．５０：５０７−５２９，１９９９を参照のこと）。一般に、樹状細胞は、それらの代表的な形状（インサイチュにおいて星状であり：インビトロで可視の、顕著な細胞質プロセス（樹状突起））、高効率で抗原を取り込み、プロセスし、そして提示するそれらの能力、ならびに未処置のＴ細胞応答を活性化させるそれらの能力に基づいて同定され得る。もちろん、樹状細胞は、インビボにおいてもエキソビボにおいても樹状細胞について通常見出されない、特異的な細胞表面レセプターまたはリガンドを発現するように遺伝子操作され得、このように改変された樹状細胞は、本発明によて企図されている。樹状細胞の代替として、分泌されたビヒクルである抗原充填樹状細胞（エキソソーム（ｅｘｏｓｏｍｅ）と呼ばれる）が、ワクチン内で使用され得る（例えば、Ｚｉｔｖｏｇｅｌら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．４：５９４−６００，１９９８を参照のこと）。
【０２４７】
樹状細胞および前駆体は、末梢血、骨髄、腫瘍浸潤性細胞、腫瘍周囲（ｐｅｒｉｔｕｍｏｒａｌ）組織浸潤性細胞、リンパ節、脾臓、皮膚、臍帯血または任意の他の適切な組織もしくは流体から得られ得る。例えば、樹状細胞は、サイトカイン（例えば、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−４、ＩＬ−１３および／またはＴＮＦα）の組み合わせを、末梢血から収集された単球の培地に加えることによって、エキソビボで分化され得る。あるいは、末梢血、臍帯血または骨髄から収集されたＣＤ３４ポジティブ細胞は、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−３，ＴＮＦα、ＣＤ４０リガンド、ＬＰＳ、ｆｌｔ３リガンドならびに／または樹状細胞の分化、成熟および増殖を誘導する他の化合物を培養培地に加えることによって、樹状細胞に分化され得る。
【０２４８】
樹状細胞は、「未熟」細胞および「成熟」細胞として便宜的に分類され、これにより、２つの十分に特徴づけられた表現型の間を簡便に区別できる。しかし、この命名が、分化のあらゆる考えられる中間段階を除外するとみなされるべきではない。未熟樹状細胞は、抗原取り込みおよびプロセシングについて高い能力を有するＡＰＣとして特徴付けられ、これは、Ｆｃγレセプターおよびマンノースレセプターの高い発現と相関する。成熟表現型は、代表的には、これらのマーカーの発現がより低いが、Ｔ細胞活性化を担う細胞表面分子（例えば、クラスＩおよびクラスＩＩ  ＭＨＣ接着分子（例えば、ＣＤ５４およびＣＤ１１）ならびに共刺激分子（例えば、ＣＤ４０、ＣＤ８０、ＣＤ８６および４−１ＢＢ））の発現が高いことによって特徴付けられる。
【０２４９】
ＡＰＣは、一般に、抗原ポリペプチド（またはそれらの部分もしくは他の改変体）をコードするポリヌクレオチド）で、その抗原ポリペプチドまたはそれらの免疫原性部分が細胞表面上に発現されるようにトランスフェクトされ得る。このようなトランスフェクションは、エクスビボで生じ得、そしてこのようなトランスフェクトした細胞を含む組成物またはワクチン、および本明細書中に記載のアジュバントは、次いで、治療目的で使用され得る。あるいは、樹状細胞または他の抗原提示細胞を標的化する遺伝子送達ビヒクルが、患者に投与されて、インビボで生じるトランスフェクションを生じ得る。樹状細胞のインビボおよびエクスビボのトランスフェクションは、例えば、当該分野で公知の任意の方法（例えば、ＷＯ９７／２４４４７に記載の方法、またはＭａｈｖｉら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，ａｎｄ  ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ７５：４５６−４６０，１９９７によって記載の遺伝子銃アプローチ）を用いて一般に実施され得る。樹状細胞の抗原ローディングは、樹状細胞または前駆細胞を、抗原ポリペプチド、ＤＮＡ（裸のＤＮＡもしくはプラスミドベクター内のＤＮＡ）またはＲＮＡと；または抗原発現組換え細菌またはウイルス（例えば、ワクシニアベクター、鶏痘ベクター、アデノウイルスベクター、またはレンチウイルスベクター）とインキュベートすることによって達成され得る。ローディング前に、ポリペプチドは、Ｔ細胞ヘルプ（例えば、キャリア分子）を提供する免疫学的パートナーに共有結合され得る。あるいは、樹状細胞は、別個にまたはこのポリペプチドの存在下で、非共有結合免疫学的パートナーでパルスされ得る。
【０２５０】
１つの実施形態では、このワクチン組成物は、式Ｉの化合物を含むリポソーム小胞を含む。リポソームは、一般に、リン脂質または他の脂質物質から生成される。リポソームの調製のための手順は、当業者に周知である。式Ｉの化合物を含む小胞を形成し得る任意の脂質が使用され得る。臨床的適用のために、脂質は、非毒性であり、生理学的に受容可能であり、そして代謝可能であることが望ましい。臨床可能性を有する一般の二重層形成脂質は、リン脂質、脂肪酸、スフィンゴ脂質、糖スフィンゴ脂質、およびステロイドである。グリセロール含有リン脂質は、臨床有用性を有するリポソーム処方物の最も一般的に用いられる成分である。１つ一般的に用いられる例は、ホスファチジルコリンまたはレシチンである。ステロイドコレステロールおよびその誘導体は、しばしば、リポソーム膜の成分として含まれる。リポソームが凝集および融合する傾向は、処方物中に少量の酸性または塩基性の脂質を含有させることにより制御され得る。リン脂質を含有するリポソームの特性は、リン脂質の化学性によって決定される。重要な考慮条件は、炭化水素鎖長、炭化水素鎖の不飽和度、炭化水素鎖の分枝の程度、およびシステムの温度である。
【０２５１】
多重層リポソームは、減圧下でのエバポレーションによって脂質の混合物を薄層として堆積し、続いて有機溶媒を有するかまたは有さない抗原を含有する過剰容量の水性緩衝液を用いて分散させることによって作製され得る。別の方法は、小さな単層リポソームと抗原を含有する水相とを混合し、続いて凍結乾燥することである。多重層リポソームは、凍結乾燥生成物が、通常、少量の蒸留水で、再水和される場合に、形成される。このプロセスにおいて用いられるべき小さな単層リポソームは、水性媒体中で脂質を分散させ、続いて機械的分散手段（例えば、音波処理、高圧デバイスの使用、または溶媒注入法）を行うことによって生成される。大きなサイズおよび中間サイズの単層リポソームもまた、従来の技術（界面活性剤透析、高圧下で小さな孔サイズの膜を通した抽出、凍結融解およびその後の緩慢な膨潤、脱水およびその後の再水和および希釈、またはカオトロピックイオンの存在下での脂質の透析を含む）によって生成され得る。リポソームのサイズは、分画手順（例えば、遠心分離またはサイズ排除クロマトグラフィー）、ホモジナイゼーション、またはキャピラリー孔膜抽出によってより均一にされ得る。
【０２５２】
これらのワクチンは、哺乳動物における抗原の免疫原性を誘導または増強する方法において使用され得る。このような方法は、抗原ならびにＡＧＰ（例えば、式Ｉの化合物）およびサポニン（例えば、ＱＳ−２１、式ＩＩ、式ＩＩａ、または式ＩＩｂなどの化合物）を含有する有効量のワクチンアジュバント組成物を含むワクチン組成物を哺乳動物に投与する工程を包含する。この関係で使用される場合、「ワクチンアジュバント組成物」は、外因性抗原に対する免疫応答を増強する式Ｉの化合物を含む任意の組成物を含む。このような「ワクチンアジュバント組成物」としては、生物分解性のマイクロスフィア（例えば、ポリ乳酸ガラクチド）およびリポソームが挙げられる。例えば、Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ、米国特許第４，２３５，８７７号を参照のこと。ワクチン調製物は、一般的に、例えば、Ｍ．Ｆ．ＰｏｗｅｌｌおよびＭ．Ｊ．Ｎｅｗｍａｎ編，「Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｄｅｓｉｇｎ（ｔｈｅ  ｓｕｂｕｎｉｔ  ａｎｄ  ａｄｊｕｖａｎｔ  ａｐｐｒｏａｃｈ）」，Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ（ＮＹ，１９９５）に記載されている。ワクチンは、抗体免疫および／または細胞免疫を生成するために設計され得る。
【実施例】
【０２５３】
以下の実施例は、特許請求の範囲に記載の本願発明を限定するのではなく、例示するために提供される。
【０２５４】
（実施例１）
この実施例は、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ由来の組換えポリペプチド抗原（ｒＤＰＶ（ｒＭｔｂ８．４）と称する（Ｃｏｌｅｒら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１：２３５６−２３６４））に対する免疫応答の誘導を実証する。２％水中油エマルジョン中にｒＤＰＶ抗原を含むワクチンを用いて、Ｃ５７ＢＬ／６マウスをｉ．ｄ．（経皮）注射によりワクチン接種した。このアジュバントの用量は、１０μｇのＱｕｉｌ  Ａおよび５μｇのＭＰＬ、または上記の化合物Ｂ１９もしくはＢ３であった。ＳＥ（オイルエマルジョン）ビヒクルを用いて経皮的に、またはＤＰＶ  ＤＮＡを用いて筋内的に、コントロールマウスを免疫した。ＭＰＬ−ＳＥ、Ｂ１９−ＳＥ、またはＢ３−ＳＥとＱｕｉｌ  Ａとの各組み合わせは、標準的なクロム（５１Ｃｒ）放出アッセイ（例えば、Ｍｏｏｒｅら，（１９８８）Ｃｅｌｌ  ５５：７７７−７８５）において測定されるＣＴＬ活性（表１）の増強を媒介した。文字ＳＥは、オイルエマルジョン処方物を称する。
【０２５５】
ＣＴＬ活性をまた、フローサイトメトリにより分析し、そして細胞内ＩＦＮγ発現を評価した。ＥＬ４−ＤＰＶ標的細胞またはＤＰＶペプチドのいずれかで刺激したエフェクター細胞を比較した。両方の刺激方法は類似の結果を生じた。脾臓細胞の単細胞懸濁物を、ＥＬ４−ＤＰＶ標的細胞またはＤＰＶペプチドでインビトロ刺激した。１３日後、これらの細胞を、標準的なクロム放出技術によりＥＬ−４−ＤＰＶまたはＤＰＶペプチドに対するＣＴＬ活性についてアッセイした。この結果を表１に示す。
【０２５６】
このデータは、２０中１〜１５０中１の脾臓ＣＤ８＋リンパ球が、Ｑｕｉｌ  Ａ＋ＭＰＬまたは化合物Ｂ１９もしくは化合物Ｂ３でアジュバント化したワクチンでのワクチン接種の後の、ｒＤＰＶ抗原に特異的であることを示した。これらのデータは、クロム放出アッセイからの結果と相関する。細胞内サイトカイン染色とクロム放出アッセイの比較を表２に示す。ＩＦＮ−γアッセイを実施するために、新鮮な脾臓細胞をインビトロで５μｇ／ｍｌのｒＤＰＶで刺激し、３日後に上清を回収し、ＥＬＩＳＡでＩＦＮ−γについてアッセイした。３日目の上清のＩＦＮ−γ濃度を、ＥＬＩＳＡで測定し、４匹のマウスの脾臓の群の平均濃度として表す。
【０２５７】
（表１  Ｑｕｉｌ−ＡおよびＭＰＬ−ＳＥまたはＡＧＰ−ＳＥを含む処方物の評価：ＣＴＬ応答）
【０２５８】
【表１】
2005525344.tif 000042
ａ）雌性Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、０日目、１４日目、および２１日目に、皮内注入により１０μｇ  ｒＤＰＶ±１０μｇ  Ｑｕｉｌ−Ａ±５μｇ  ＭＰＬまたはＡＧＰでワクチン接種した。クロム放出アッセイの前に、照射したＤＰＶ−ＥＬ４細胞で、エフェクター細胞を４日間刺激した。
ｂ）％特異的溶解は、（ＤＰＶ−ＥＬ−４標的細胞からの％クロム放出）−（ＥＬ−４コントロール細胞（ＤＰＶを発現しない）からの％クロム放出）の測定値である。
【０２５９】
（表２  Ｑｕｉｌ−ＡおよびＭＰＬ−ＳＥまたはＡＧＰ−ＳＥを含む処方物の評価：細胞内サイトカイン染色によるＣＴＬ分析およびクロム放出アッセイとの比較）
【０２６０】
【表２】
2005525344.tif 000043
ａ）雌性Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、０日目、１４日目、および２１日目に、皮内注入により１０μｇ  ｒＤＰＶ±１０μｇ  Ｑｕｉｌ−Ａ±５μｇ  ＭＰＬまたはＡＧＰでワクチン接種した。クロム放出アッセイの前に、照射したＤＰＶ−ＥＬ４細胞で、エフェクター細胞を４日間刺激した。
ｂ）フローサイトメトリーのための染色の前に、照射したＤＰＶ−ＥＬ４細胞またはＤＰＶペプチドで、エフェクター細胞を５．５時間刺激した。値は、総ＣＤ８＋細胞あたりのＣＤ８＋ＩＦＮγ＋細胞の割合を示す。
ｃ）クロム放出アッセイの前に、照射したＤＰＶ−ＥＬ４細胞またはＤＰＶペプチドで、エフェクター細胞を４日間刺激した。５０：１  エフェクター：標的細胞の割合についての％特異的溶解を示す。
【０２６１】
（実施例２）
イソツカレソール（上記式（ＩＶ）の化合物）の、Ｂ１９−ＡＦ（２−［（Ｒ）−３−テトラデカノイルオキシテトラデカノイルアミノ］エチル２−デオキシ−４−Ｏ−ホスホノ−３−Ｏ−［（Ｒ）−３−テトラデカノイルオキシテトラデカノイル］−２−［（Ｒ）−３−テトラデカノイルオキシテトラデカノイルアミノ］−β−Ｄ−グルコピラノシドトリエチルアンモニウム塩の水性処方物）ありまたはなしでのアジュバント活性を分析した。ＢＡＬＢ／ｃマウスに、０日目および２１日目に、１μｇのｒＨＢｓＡｇ±１ｍｇのイソツカレソール±５μｇの化合物Ｂ１９のｓ．ｃ．投与によって、ワクチン接種した。この水性処方物は、ＤＰＰＣ界面活性剤を含有する。ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、およびＩｇＧ２ｂの抗体力価を、ＥＬＩＳＡを使用して決定した。イソツカレソールと化合物Ｂ１９とが一緒に処方された場合に、抗体力価に対する明らかな相乗作用が存在した。この相乗性は、ＩｇＧ１を除く、試験された全ての抗体アイソタイプを用いて見出された。１ｍｇの用量での独立型アジュバントとして、イソツカレソールは、上昇したレベルの抗体を媒介したが、Ｂ１９によって誘導される抗体よりかなり少なかった（表３）。イソツカレソールによって促進される抗体応答は、ＴＨ２サイトカインヘルプの指標である。なぜなら、ＩｇＧ２ａ／ＩｇＧ１の比は、抗原／ＰＢＳのコントロール群において観察されたものより低かったからである。特徴的に、Ｂ１９は、ＩｇＧ２ａ／ＩｇＧ１の比を上昇させ、そして２つのアジュバントの組み合わせは、応答をＩｇＧ２ａに圧倒的に偏らせた。ＣＴＬ活性を、ＭＣＨ拘束されたＨＢｓＡｇエピトープを発現するトランスフェクトされた標的細胞に対して、クロム放出アッセイによって決定した。２５：１〜６．２５：１のＥ：Ｔの比において、イソツカレソールおよび化合物Ｂ１９の組み合わせは、いずれかの化合物単独より高い特異性溶解の百分率を示した。
【０２６２】
【表３】
2005525344.tif 000044
ａ）雌性ＢＡＬＢ／ｃマウスに、１μｇのｒＨＢｓＡｇ±アジュバントを皮下注射によって、０日目および２１日目にワクチン接種した。
ｂ）ＨＢｓＡｇ特異的抗体についての幾何平均力価を、二回目のワクチン接種の２１日後に収集した血清から決定した。
【０２６３】
（実施例３）
３つのイソツカレゾール（ｉｓｏｔｕｃａｒｅｓｏｌ）誘導体（イソツカレゾールメチルエステル（「化合物Ｂ５」）、Ｏ−カルボキシルメチルイソツカレゾール（「化合物Ｂ６」）、およびＯ−カルボキシプロピルイソツカレゾール（「化合物Ｂ７」））を、この実験において評価した。この研究は、最適な用量を見つけ出すために、１０００μｇ／マウス、５００μｇ／マウスおよび２５０μｇ／マウスの用量で観察した。これらの用量は、約１ｍｇ／マウスの最適用量を有する、化学的に関連する薬物であるツカレゾールに基づいて選択された。抗体力価およびＣＴＬアッセイを、実施例２のように実施した。
【０２６４】
さらに、化合物Ｂ１９を、５００μｇのイソツカレゾール誘導体と組み合わせて、いかなる相乗効果がこの混合物から生じたか否かを決定した。イソツカレゾール自体と同様に、３つの誘導体全てが、ＩｇＧ１アイソタイプのより大きな増強を生じる、ＴＨ−２サイトカイン補助に特徴的な体液性応答を生じた。全体として、３つのアジュバントのうち、より少ないアジュバント用量（２５０μｇ／マウス）が、最も強力な抗体応答を刺激し、イソツカレゾールメチルエステル（Ｂ５）は、３つの化合物のうち最も強力な力価を誘導した（表４）。各場合において、イソツカレゾール誘導体を化合物Ｂ１９と混合することは、その誘導体自体が誘導するよりも高い力価を生じたが、Ｂ１９自体は、最も高い抗体応答を生じた。
【０２６５】
（表４）
（イソツカレゾールメチルエステル（Ｂ５）、Ｏ−カルボキシメチルイソツカレゾール（Ｂ６）およびＯ−カルボキシプロピルイソツカレゾール（Ｂ７）の評価：体液性応答）
【０２６６】
【表４】
2005525344.tif 000045
2005525344.tif 000046
ａ）雌性ＢＡＬＢ／ｃマウスを、０日目および２１日目に、皮下注射により１μｇ  ｒＨＢｓＡｇ±アジュバントをワクチン接種した。
【０２６７】
ｂ）ＨＢｓＡｇ特異的抗体についての幾何平均力価を、二次ワクチン接種の２１日後に収集された血清から決定した。
【０２６８】
２５０μｇのＢ５、イソツカレゾールメチルエステルを含むワクチンは、このモデルにおいて強力なＣＴＬ応答、５０：１のＥ：Ｔ比で６９％の特異的溶解を誘導した。ＣＴＬ活性は、Ｂ１９をそれと混合した場合よりもさらに増強させた。Ｂ６、Ｏ−カルボキシプロピルイソツカレゾールは、投与した用量とは独立して、わずかに低いレベルの活性、５０：１のＥ：Ｔ比で３０〜３５％の特異的溶解を媒介した。Ｂ１９およびＢ６が組み合わされた場合、より強力なＣＴＬ応答が誘発された。１ｍｇの用量の第３の化合物Ｂ７、Ｏ−カルボキシプロピルイソツカレゾールは、この実験において最も強力な応答を与え、５０：１のＥ：Ｔ比で７４％の特異的溶解を有した。
【０２６９】
（実施例４）
この実施例は、本発明のＡＧＰ（ＭＰＬ、Ｂ１９またはＢ３）と組み合わせた、半合成トリテルペノイドサポニン誘導体（ＧＰＩ−０１００）の効力を示す。これらの実験について、一群当たり６匹のマウスを、１用量当たり１０μｇでマイクロバクテリア抗原ＤＰＶを使用して、３回（一次免疫、二次免疫および三次免疫の間、２１日）、皮下的（ＳＣ）に免疫した。脾臓および末梢血を、二次免疫および三次免疫の二週間後に収集し、そして標準的アッセイを使用して、ＤＰＶ特定的血清ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ｂレベル、ｒＤＰＶ活性化脾細胞培養物からのＩＦＮγ放出、ＩＦＮγに対する細胞内サイトカイン（ＩＣＣ）およびＣＴＬ活性を測定することによって評価した。簡単に述べると、２つの皮下免疫に続いて試験したアジュバントの組み合わせのいずれを用いても、有意なＴ細胞免疫応答が検出されなかった。しかし、第三の免疫に続いて、ＣＤ８  Ｔ細胞免疫応答は、ＧＰＩ−０１００＋Ｂ１９およびＧＰＩ−０１００＋Ｂ３において観察された。血清ＩｇＧ１およびＩｇＧ２ｂ  ＤＰＶ特異的抗体を、全ての群において、二次免疫および三次免疫の両方の後に検出し、ＧＰＩ−０１００＋ＡＧＰで免疫した群において最も高い応答を有した。これらのデータに基づいて、ＧＰＩ−０１００およびＡＧＰの組合せが、相乗的な免疫応答を誘導することを決定した。
【０２７０】
（実施例５）
この実施例は、Ｂ１９−ＡＦと組み合わせたＧＰＩ−０１００が、ワクチン抗原特異的免疫を媒介することを示す。この実験について、一群あたり６匹のマウスを、５０μｇ、１００μｇまたは２５０μｇのＧＰＩ−０１００、１０μｇのＤＰＶおよび１０μｇのＢ１９を使用して、一次免疫、二次免疫および三次免疫の間、３〜４週間で、３回ＳＣで免疫した。マウスを、各ブーストの二週間後収集し、そしてＤＰＶ特定的血清ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ｂレベル、ｒＤＰＶ活性化脾細胞培養物からのＩＦＮγ放出、ＩＦＮγに対するＩＣＣおよびＣＴＬ活性を測定することによって評価した。２回の免疫または３回の免疫後、ｒＤＰＶ＋アジュバントの組み合わせのいずれに対しても、有意なＴ細胞免疫応答を検出しなかった。対照的に、血清抗−ｒＤＰＶ  ＩｇＧ１およびＩｇＧ２ｂ抗体レベルは、個々に使用したアジュバントと比較して、Ｂ１９＋ＧＰＩ−０１００で免疫したマウスで増強した。
【０２７１】
（実施例６）
この実施例は、ワクチン抗原特異的免疫を媒介することについて、個々におよびＢ１９−ＡＦとの組み合わせの両方で、ＧＰＩ−０１００の増加する用量を示す。この実施例について、一群あたり６匹のマウスを、５０μｇ、１００μｇまたは２５０μｇのＧＰＩ−０１００、１０μｇのＤＰＶおよび１０μｇのＢ１９を使用して、一次免疫、二次免疫および三次免疫の間、３〜４週間で、３回ＳＣで免疫した。マウスを、各ブーストの二週間後収集し、そしてＤＰＶ特定的血清ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ｂレベル、ｒＤＰＶ活性化脾細胞培養物からのＩＦＮγ放出、ＩＦＮγに対するＩＣＣおよびＣＴＬ活性を測定することによって評価した。２回の免疫または３回の免疫後、ｒＤＰＶ＋アジュバントの組み合わせのいずれに対しても、有意なＴ細胞免疫応答を検出しなかった（データを示さない）。対照的に、血清抗−ｒＤＰＶ  ＩｇＧ１およびＩｇＧ２ｂ抗体レベルは、全ての投薬レベルで、Ｂ１９＋ＧＰＩ−０１００で免疫したマウスで増強した。
【０２７２】
（実施例７）
この実施例は、肝炎ワクチンに対するワクチン抗原特異的免疫を媒介することについて、Ｂ１９−ＳＥ（５μｇ）との組み合わせで、２５μｇ、５０μｇ、１００μｇおよび２００μｇのＧＰＩ−０１００の効力を示す。この実施例について、一群あたり１０匹のマウスを、１μｇ  ｒＨＢｓＡｇで、０日目、２１日目、および５７日目に、三回ＳＣで免疫した。二次ワクチン接種後、有意なＣＴＬ活性を、ＧＰＩ−０１００群で観測した。しかし、ビヒクルコントロール群（アジュバント無し）はまた、実質的な活性を示した。第三のワクチン接種の後に、実質的なＣＴＬ活性は、いずれの群からも明らかではなかった。体液性応答をまた、第一のワクチン接種および第二のワクチン接種に続いて評価した。これらの結果は、ＧＰＩ−０１００が非常に強力な抗体応答を誘導したことを示した。Ｂ１９−ＳＥと組み合わせたＧＰＩ−０１００は、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂの産生に向かう抗体応答を分極する（ｐｏｌａｒｉｚｅｄ）。
【０２７３】
（実施例８）
この実施例は、ミコバクテリア抗原ＭＴＣＣ−２に対する細胞性応答および体液性応答を媒介することについて、ＭＰＬ−ＡＦ、Ｂ１９−ＡＦ、Ｎ９−ＡＦまたはＢ３−ＡＦと組み合わせたＧＰＩ−０１００（１００μｇ）の効力を示す。この実施例について、一群当たり４匹のマウスを、５μｇのｒＭＴＣＣ−２で、０日目、２１日目および４２日目に、三回、ＳＣで免疫した。三回目のワクチン接種の四週間後に、脾細胞および血清を、評価のために収集した。ＭＴＣＣ−２を用いて培養物で刺激された脾細胞からのインターフェロン産生を、ＧＰＩ−０１００およびＭＰＬ、Ｂ１９、Ｂ９またはＢ３の組み合わせでワクチン接種した群で、顕著に増強された。抗体応答は、Ｂ１９、Ｂ９またはＢ３単独で誘導された抗体応答よりも増強されなかった。
【０２７４】
本明細書中に記載される実施例および実施形態が、例示の目的のためのみであり、そしてそれを考慮して種々の改変または変更は、当業者に提示され、そして本出願の精神および範囲ならびに添付の特許請求の範囲の範囲内に含まれることが理解される。
【０２７５】
本明細書中に引用される全ての公開物、特許、および特許出願は、全ての目的について、これによって、その全体が、参考として援用される。
【手続補正書】
【提出日】平成17年1月31日(2005.1.31)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
免疫刺激組成物であって、以下：
（ａ）少なくとも一種のアミノアルキルグルコサミニドホスフェート（ＡＧＰ）；および
（ｂ）少なくとも一種のサポニン、
を含む免疫刺激組成物。
【請求項２】
請求項１に記載の組成物であって、前記ＡＧＰが、以下の構造：
【化１】
2005525344.tif 000052
を有する化合物、ならびにその薬学的に受容可能な塩および誘導体を包含し、ここで、Ｙは、−Ｏ−または−ＮＨ−であり；Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、飽和（Ｃ２〜Ｃ２４）脂肪族アシル基および不飽和（Ｃ２〜Ｃ２４）脂肪族アシル基から選択され；Ｒ８は、−Ｈまたは−ＰＯ３Ｒ１１Ｒ１２であり、ここで、Ｒ１１およびＲ１２は、各々独立して、−Ｈまたは（Ｃ１〜Ｃ４）脂肪族基であり；Ｒ９は、−Ｈ、−ＣＨ３または−ＰＯ３Ｒ１３Ｒ１４であり、ここで、Ｒ１３およびＲ１４は、各々独立して、−Ｈまたは（Ｃ１〜Ｃ４）脂肪族基から選択され；そしてここで、Ｒ８およびＲ９の少なくとも一つは、リン含有基であるが、Ｒ８およびＲ９は、両方ともリン含有基であることはなく；そしてＸは、以下の式：
【化２】
2005525344.tif 000053
から選択される基であり、ここで、下付き文字ｎ、ｍ、ｐ、ｑ、ｎ’、ｍ’，ｐ’およびｑ’は、各々独立して、０〜６の整数であり、但し、ｐ’およびｍ’の合計は、０〜６の整数であり；Ｒ３、Ｒ１１およびＲ１２は、独立して飽和または不飽和の、必要に応じて置換脂肪族（Ｃ２〜Ｃ２４）アシル基であり、但し、Ｘが式（Ｉａ）である場合、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３の一つは、必要に応じて水素であり；Ｒ４およびＲ５は、独立してＨおよびメチルから選択され；Ｒ６およびＲ７は、独立してＨ、ＯＨ、（Ｃ１〜Ｃ４）オキシ脂肪族基、−ＰＯ３Ｈ２、−ＯＰＯ３Ｈ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＯＳＯ３Ｈ、−ＮＲ１５Ｒ１６、−ＳＲ１５、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＣＨＯ、−ＣＯ２Ｒ１５、−ＣＯＮＲ１５Ｒ１６、−ＰＯ３Ｒ１５Ｒ１６、−ＯＰＯ３Ｒ１５Ｒ１６、−ＳＯ３Ｒ１５および−ＯＳＯ３Ｒ１５から選択され、ここで、Ｒ１５およびＲ１６は、各々独立して、Ｈおよび（Ｃ１〜Ｃ４）脂肪族基から選択され；Ｒ１０は、Ｈ、ＣＨ３、−ＰＯ３Ｈ２、ω−ホスホノオキシ（Ｃ２〜Ｃ２４）アルキル、およびω−カルボキシ（Ｃ１〜Ｃ２４）アルキルから選択され；Ｒ１３は、独立してＨ、ＯＨ、（Ｃ１〜Ｃ４）オキシ脂肪族基、−ＰＯ３Ｒ１７Ｒ１８、−ＯＰＯ３Ｒ１７Ｒ１８、−ＳＯ３Ｒ１７、−ＯＳＯ３Ｒ１７、−ＮＲ１７Ｒ１８、−ＳＲ１７、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＣＨＯ、−ＣＯ２Ｒ１７、および−ＣＯＮＲ１７Ｒ１８から選択され、ここで、Ｒ１７およびＲ１８は、各々独立して、Ｈおよび（Ｃ１〜Ｃ４）脂肪族基から選択され；そしてＺは、−Ｏ−または−Ｓ−である、
組成物。
【請求項３】
請求項２に記載の組成物であって、Ｘが式（Ｉａ）の基である、組成物。
【請求項４】
請求項２に記載の組成物であって、Ｘが式（Ｉｂ）の基である、組成物。
【請求項５】
請求項２に記載の組成物であって、Ｘが式（Ｉｃ）の基である、組成物。
【請求項６】
請求項２に記載の組成物であって、Ｘが式（Ｉａ）の基であり、そしてＲ１、Ｒ２およびＲ３のうちの１つが水素である、組成物。
【請求項７】
請求項２に記載の組成物であって、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ１１およびＲ１２が、各々アシルである、組成物。
【請求項８】
請求項３に記載の組成物であって、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、各々Ｃ７〜Ｃ１６脂肪族アシル基である、組成物。
【請求項９】
請求項３に記載の組成物であって、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、各々Ｃ８〜Ｃ１４脂肪族アシル基である、組成物。
【請求項１０】
請求項３に記載の組成物であって、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、各々Ｃ９〜Ｃ１４脂肪族アシル基である、組成物。
【請求項１１】
請求項３に記載の組成物であって、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、各々Ｃ１０〜Ｃ１４脂肪族アシル基である、組成物。
【請求項１２】
請求項３に記載の組成物であって、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、各々Ｃ１０〜Ｃ１４飽和脂肪族アシル基である、組成物。
【請求項１３】
請求項５に記載の組成物であって、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ１２は、各々Ｃ９〜Ｃ１４脂肪族アシル基である、組成物。
【請求項１４】
請求項５に記載の組成物であって、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ１２は、各々Ｃ１０〜Ｃ１４脂肪族アシル基である、組成物。
【請求項１５】
請求項５に記載の組成物であって、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、各々Ｃ１０〜Ｃ１４飽和脂肪族アシル基である、組成物。
【請求項１６】
請求項２に記載の組成物であって、Ｘは、酸素である、組成物。
【請求項１７】
請求項２に記載の組成物であって、Ｒ８は、リン含有基であり、そしてＲ９は、水素である、組成物。
【請求項１８】
請求項２に記載の組成物であって、Ｒ８またはＲ９は、リン含有基であり、そしてＲ１１およびＲ１２、またはＲ１３およびＲ１４は、それぞれ、両方とも水素である、組成物。
【請求項１９】
請求項３に記載の組成物であって、ｎ＋ｍの合計は、０、１、または２である、組成物。
【請求項２０】
請求項３に記載の組成物であって、ｐおよびｑは、独立して、０、１または２である、組成物。
【請求項２１】
請求項３に記載の組成物であって、Ｒ６は、水素、ヒドロキシおよびカルボキシから選択される、組成物。
【請求項２２】
請求項５に記載の組成物であって、ｎ’、ｍ’、ｐ’およびｑ’は、独立して、０、１または２である、組成物。
【請求項２３】
請求項５に記載の組成物であって、ｎ’は、１であり、ｍ’は、２であり、そしてｐ’およびｑ’は、０である、組成物。
【請求項２４】
請求項２３に記載の組成物であって、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ１２は、各々Ｃ１０〜Ｃ１４飽和脂肪族アシル基である、組成物。
【請求項２５】
請求項２４に記載の組成物であって、ＹおよびＺは、両方とも酸素であり；Ｒ１３は、水素であり；そしてＲ１、Ｒ２およびＲ１２は、各々Ｃ１０飽和脂肪族アシル基である、組成物。
【請求項２６】
請求項２４に記載の組成物であって、ＹおよびＺは、両方とも酸素であり；Ｒ１３は、水素であり；そしてＲ１、Ｒ２およびＲ１２は、各々Ｃ１２飽和脂肪族アシル基である、組成物。
【請求項２７】
請求項２４に記載の組成物であって、ＹおよびＺは、両方とも酸素であり；Ｒ１３は、水素であり；そしてＲ１、Ｒ２およびＲ１２は、各々Ｃ１４飽和脂肪族アシル基である、組成物。
【請求項２８】
請求項１に記載の組成物であって、前記ＡＧＰが、モノホスホリル脂質Ａである、組成物。
【請求項２９】
請求項３に記載の組成物であって、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３の全てが、ｎ−Ｃ１３Ｈ２７ＣＯであり；ＸおよびＹは、両方とも酸素であり；ｎ、ｍ、ｐ、およびｑは、各々０であり；Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ９は、各々水素であり；そしてＲ８は、ＰＯ３Ｈ２である、組成物。
【請求項３０】
請求項３に記載の組成物であって、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３の全てが、ｎ−Ｃ１１Ｈ２３ＣＯであり；ＸおよびＹは、両方とも酸素であり；ｎ、ｍ、およびｑは、各々０であり；ｐは、１であり；Ｒ４、Ｒ５、Ｒ７およびＲ９は、各々水素であり；Ｒ６は、ヒドロキシであり；そしてＲ８は、ＰＯ３Ｈ２である、組成物。
【請求項３１】
請求項１に記載の組成物であって、前記サポニンが、天然に得られるサポニン、合成的に得られるサポニン、サポニン結合体、サポニン誘導体、およびサポニン模倣物から選択される、組成物。
【請求項３２】
請求項１に記載の組成物であって、前記サポニンが、Ｑｕｉｌｌａｊａサポニンを含む、組成物。
【請求項３３】
請求項３２に記載の組成物であって、前記Ｑｕｉｌｌａｊａサポニンが、Ｑｕｉｌ  Ａ、ＱＳ−７、ＱＳ−１７、ＱＳ−１８またはＱＳ−２１を含む、組成物。
【請求項３４】
請求項１に記載の組成物であって、前記サポニンが、トリテルペンサポニン−親油性結合体を含み、該トリテルペンサポニン−親油性結合体は、３グルクロン酸残基を含む非アシル化または脱アシル化トリテルペンサポニン；および親油性部分を含み；ここで、該サポニンおよび該親油性部分は、直接またはリンカー基を介するかのいずれかで互いに共有結合し、そして該直接的な結合または該リンカーへの結合は、該３−グルクロン酸残基のカルボキシル炭素と親油性残基またはリンカー基上の適切な官能基との間の共有結合を介して生じる、組成物。
【請求項３５】
請求項３４に記載の組成物であって、前記トリテルペンサポニンが、（ａ）トリテルペンアグリコンコア構造を有し、分枝糖鎖が、３位および２８位に結合し、そしてアルデヒド基が、４位に連結または結合され；そして（ｂ）元々非アシル化であるか、またはトリテルペンアグリコンの２８位において糖に結合するアシル基またはアシルオイル基の除去を必要とするかのいずれかである、組成物。
【請求項３６】
請求項３４に記載の組成物であって、前記親油性部分は、脂肪酸、テルペノイド、脂肪族アミン、脂肪族アルコール、脂肪酸の脂肪族メルカプトンモノ−またはポリ−Ｃ２〜Ｃ４アルキレンオキシ誘導体、脂肪アルコールのモノ−またはポリ−Ｃ２〜Ｃ４アルキレンオキシ誘導体、グリコシル脂肪酸、糖脂質、リン脂質あるいはモノ−またはジ−アシルグリセロールのうちの１つ以上の残基を含む、組成物。
【請求項３７】
請求項１に記載の組成物であって、前記サポニンが、ＧＰＩ−０１００を含む、組成物。
【請求項３８】
請求項３４に記載の組成物であって、前記トリテルペンサポニンが、キラヤ酸またはジプソゲニンコア構造を有する、組成物。
【請求項３９】
請求項３８に記載の組成物であって、前記脱アシルサポニンまたは非アシル化サポニンが、Ｑｕｉｌｌａｊａ脱アシルサポニン、Ｓ．ｊｅｎｉｓｓｅｅｎｓｉｓ脱アシルサポニンＧｙｐｓｏｐｈｉｌａサポニン、ＳｐｏｎａｒｉａサポニンＡｃａｎｔｈｏｐｈｙｌｌｕｍサポニンおよびルシオシドＰサポニンからなる群より選択される、組成物。
【請求項４０】
請求項１に記載の組成物であって、前記サポニンが、サポニン／抗原共有結合体組成物を含む、組成物。
【請求項４１】
請求項１に記載の組成物であって、前記サポニンが、式：
【化３】
2005525344.tif 000054
によって示される化合物、またはその薬理学的に受容可能な塩を含み、
ここで、Ｒが、水素または−Ｃ（Ｏ）Ｈであり；Ｒ１は、水素、必要に応じて置換されたＣ１〜２０脂肪族基、サッカリル基、および式−Ｃ（Ｏ）−［Ｃ（Ｒ３）（Ｒ４）］ｋ−ＣＯＯＨによって表される基からなる群より選択されるメンバーであり、ここで、各々のＲ３およびＲ４が、独立して、水素および必要に応じて置換されたＣ１〜１０脂肪族基からなる群より選択されるメンバーであり、そしてｋは、１〜５の数字であり；Ｒ２は、水素、必要に応じて置換されたＣ１〜２０脂肪族基、および式−（ＣＨ２）ｒＣＨ（ＯＨ）（ＣＨ２）ｔＯＲ５によって表される基からなる群より選択されるメンバーであり、ここで、ｒおよびｔは、独立して、１または２であり、そしてＲ５は、必要に応じて置換されたＣ２〜２０脂肪族基、または式
【化４】
2005525344.tif 000055
によって表される基であり、ここで、ｊは、１〜５であり、そしてＲ６およびＲ７は、独立して、水素および必要に応じて置換されたＣ１〜２０脂肪基からなる群より選択される、組成物。
【請求項４２】
請求項４１に記載の組成物であって、Ｒ１は、モノサッカリドまたはジサッカリドである、組成物。
【請求項４３】
請求項４２に記載の組成物であって、Ｒ１は、グルクロン酸基である、組成物。
【請求項４４】
請求項４１に記載の組成物であって、Ｒ、Ｒ１およびＲ２が、水素である、組成物。
【請求項４５】
請求項４１に記載の組成物であって、Ｒは、水素であり；Ｒ１は、サッカリル基であり、ここで、該サッカリル基が、グルクロン酸基であり；そしてＲ２は、水素である、組成物。
【請求項４６】
請求項４１に記載の組成物であって、Ｒは、水素であり；Ｒ１は、式−Ｃ（Ｏ）−［Ｃ（Ｒ３）（Ｒ４）］ｋ−ＣＯＯＨによって表され、ここで、Ｒ３およびＲ４は、水素であり、そしてｋは、２であり；そしてＲ２は、水素である、組成物。
【請求項４７】
請求項４１に記載の組成物であって、Ｒは、水素であり；Ｒ１は、サッカリル基であり、ここで、該サッカリル基が、グルクロン酸基であり；そしてＲ２は、（ＣＨ２）ｒＣＨ（ＯＨ）（ＣＨ２）ｔＯＲ５であり、ここで、ｒおよびｔは、両方ともに１であり、そしてＲ５は、必要に応じて置換されたＣ２〜２０アシル基である、組成物。
【請求項４８】
請求項４５に記載の組成物であって、前記グルクロン酸基が、β−Ｄ−グルクロン酸基である、組成物。
【請求項４９】
請求項４７に記載の組成物であって、（ＣＨ２）ｒＣＨ（ＯＨ）（ＣＨ２）ｔＯＲ５が、１−Ｏ−アシル−ｓｎ−グリセリル基である、組成物。
【請求項５０】
請求項４９に記載の組成物であって、Ｒ５は、アセチル基、オクタノイル基、およびテトラデカノイル基からなる群より選択されるメンバーである、組成物。
【請求項５１】
請求項４１に記載の組成物であって、Ｒは、水素であり；Ｒ１は、サッカリル基であり、ここで、該サッカリル基が、グルクロン酸基であり；そしてＲ２は、式：
【化５】
2005525344.tif 000056
によって表される基であり、ここで、ｊは、１であり；Ｒ６は、必要に応じて置換されたＣ１〜２０脂肪基であり；そしてＲ７は、必要に応じて置換されたＣ１〜２０脂肪基である、組成物。
【請求項５２】
請求項５１に記載の組成物であって、Ｒ７は、必要に応じて置換されたＣ１１脂肪族基である、組成物。
【請求項５３】
請求項１に記載の組成物であって、少なくとも１つの抗原をさらに含む、組成物。
【請求項５４】
請求項５３に記載の組成物であって、前記抗原が、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、ヒトサイトメガロウイスル、ＨＩＶ、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、またはＥ型肝炎、ＲＳウイルス、ヒトパピローマウイルス、インフルエンザウイルス、結核、リーシュマニア症、Ｔ．Ｃｒｕｚｉ、エールリヒア、カンジタ、サルモネラ、ナ
イセリア、ボレリア、クラミジア、ボルデテラ、プラズモディウムおよびトキソプラズマからなる群より誘導される、組成物。
【請求項５５】
請求項５３に記載の組成物であって、前記抗原が、ヒト腫瘍抗原である、組成物。
【請求項５６】
請求項５５に記載の組成物であって、前記腫瘍抗原が、前立腺癌、結腸癌、乳癌、卵巣癌、膵臓癌、脳癌、頭頸部癌、黒色腫、白血病またはリンパ腫の癌から誘導される、組成物。
【請求項５７】
請求項５３に記載の組成物であって、前記抗原が、自己抗原である、組成物。
【請求項５８】
請求項５７に記載の組成物であって、前記自己抗原が、自己免疫疾患に関連する抗原である、組成物。
【請求項５９】
請求項５４に記載の組成物であって、前記自己免疫疾患が、１型糖尿病、多発性硬化症、重症筋無力症、慢性関節リウマチまたは乾癬である、組成物。
【請求項６０】
請求項１に記載の組成物であって、水性処方物を包含する、組成物。
【請求項６１】
請求項６０に記載の組成物であって、前記水性処方物が、一種以上の界面活性剤を含む、組成物。
【請求項６２】
請求項６１に記載の組成物であって、前記水性処方物が、一種以上のリン脂質界面活性剤を含む、組成物。
【請求項６３】
請求項６２に記載の組成物であって、前記界面活性剤が、ジアシルホスファチジルグリセロール、ジアシルホスファチジルコリン、ジアシルホスファチジン酸、およびジアシルホスファチジルエタノールアミンからなる群より選択される、組成物。
【請求項６４】
請求項６２に記載の組成物であって、前記界面活性剤が、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＭＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジステアロイルホスファチジルグリセロール（ＤＳＰＧ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＰＭＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）；ジミリストイルホスファチジン酸（ＤＰＭＡ）、ジパルミトイルホスファチジン酸（ＤＰＰＡ）、ジステアロイルホスファチジン酸（ＤＳＰＡ）；ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＭＥ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）およびジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）からなる群より選択される、組成物。
【請求項６５】
請求項１に記載の組成物であって、エマルジョン処方物を包含する、組成物。
【請求項６６】
請求項１に記載の組成物であって、固形処方物を包含する、組成物。
【請求項６７】
請求項１に記載の組成物であって、前記ＡＧＰおよびサポニンが、合成的に有効な量で存在する、組成物。
【請求項６８】
請求項１に記載の組成物であって、前記サポニンおよびＡＧＰが、約１０００：１〜約１：１０００のサポニン：ＡＧＰの重量比で存在する、組成物。
【請求項６９】
請求項１に記載の組成物であって、ワクチンをさらに含む、組成物。
【請求項７０】
請求項２に記載の組成物であって、前記サポニンが、天然に得られるサポニン、合成的に得られるサポニン、サポニン結合体、サポニン誘導体、およびサポニン模倣物から選択される、組成物。
【請求項７１】
請求項３に記載の組成物であって、前記サポニンが、キラヤサポニンである、組成物。
【請求項７２】
請求項７１に記載の組成物であって、前記サポニンが、ＱＳ−２１である、組成物。
【請求項７３】
請求項３に記載の組成物であって、前記サポニンが、サポニン親油性結合体である、組成物。
【請求項７４】
請求項７３に記載の組成物であって、前記サポニンが、ＧＰＩ−０１００である、組成物。
【請求項７５】
請求項４に記載の組成物であって、前記サポニンが、キラヤサポニンである、組成物。
【請求項７６】
請求項７５に記載の組成物であって、前記サポニンが、ＱＳ−２１である、組成物。
【請求項７７】
請求項４に記載の組成物であって、前記サポニンが、サポニン親油性結合体である、組成物。
【請求項７８】
請求項７７に記載の組成物であって、前記サポニンが、ＧＰＩ−０１００である、組成物。
【請求項７９】
請求項２５に記載の組成物であって、前記サポニンが、ＱＳ−２１である、組成物。
【請求項８０】
請求項２５に記載の組成物であって、前記サポニンが、ＧＰＩ−０１００である、組成物。
【請求項８１】
請求項２６に記載の組成物であって、前記サポニンが、ＱＳ−２１である、組成物。
【請求項８２】
請求項２６に記載の組成物であって、前記サポニンが、ＧＰＩ−０１００である、組成物。
【請求項８３】
請求項２７に記載の組成物であって、前記サポニンが、ＱＳ−２１である、組成物。
【請求項８４】
請求項２７に記載の組成物であって、前記サポニンが、ＧＰＩ−０１００である、組成物。
【請求項８５】
請求項２８に記載の組成物であって、前記サポニンが、キラヤサポニンである、組成物。
【請求項８６】
請求項８５に記載の組成物であって、前記サポニンが、ＱＳ−２１である、組成物。
【請求項８７】
請求項２８に記載の組成物であって、前記サポニンが、サポニン親油性結合体である、組成物。
【請求項８８】
請求項８７に記載の組成物であって、前記サポニンが、ＧＰＩ−０１００である、組成物。
【請求項８９】
病原性感染、癌または自己免疫障害に罹患しているかまたは病原性感染、癌または自己免疫障害を受けやすい哺乳動物を処置する薬学的組成物であって、有効量の請求項１に記載の組成物を含む薬学的組成物。
【請求項９０】
病原性感染、癌または自己免疫障害に罹患しているかまたは病原性感染、癌または自己免疫障害を受けやすい哺乳動物を処置する薬学的組成物であって、有効量の請求項２に記載の組成物を含む薬学的組成物。
【請求項９１】
病原性感染、癌または自己免疫障害に罹患しているかまたは病原性感染、癌または自己免疫障害を受けやすい哺乳動物を処置する薬学的組成物であって、有効量の請求項３１に記載の組成物を含む薬学的組成物。
【請求項９２】
動物において免疫応答を増強する薬学的組成物であって、請求項１に記載の組成物を含む薬学的組成物。
【請求項９３】
動物において免疫応答を増強する薬学的組成物であって、請求項２に記載の組成物を含む薬学的組成物。
【請求項９４】
動物において免疫応答を増強する薬学的組成物であって、請求項３１に記載の組成物を含む薬学的組成物。
【請求項９５】
動物において抗原に対する免疫応答を増強する薬学的組成物であって、抗原とともに請求項１に記載の組成物を含む薬学的組成物。
【請求項９６】
動物において抗原に対する免疫応答を増強する薬学的組成物であって、抗原とともに請求項２に記載の組成物を含む薬学的組成物。
【請求項９７】
動物において抗原に対する免疫応答を増強する薬学的組成物であって、抗原とともに請求項３１に記載の組成物を含む薬学的組成物。
【国際調査報告】
2005525344.tif 000057