(57)【要約】本発明は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスポリメラーゼの阻害剤であるヌクレオシド化合物およびその或る種の誘導体を提供する。それら化合物はＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス複製の阻害剤であり、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染の治療に有用である。それらは特に、Ｃ型肝炎ウィルス（ＨＣＶ）ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤として、ＨＣＶ複製の阻害剤として、および／またははＣ型肝炎感染の治療に有用である。本発明はさらに、単独あるいはＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染、特にＨＣＶ感染に対して活性な他の薬剤との組み合わせで、そのようなヌクレオシド化合物を含む医薬組成物に関するものでもある。本発明のヌクレオシド化合物を用いたＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼの阻害方法、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス複製の阻害方法、および／またはＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染の治療方法も開示されている。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記構造式Ｉ：
【化１】
2005530843.tif 000023
［式中、
Ｂは
【化２】
2005530843.tif 000024
であり；
ＷはＯまたはＳであり；
Ｒ１はフルオロメチル、ジフルオロメチルまたはトリフルオロメチルであり；
Ｒ２は水素、フッ素、アミノ、ヒドロキシ、メルカプト、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−８アルキルカルボニルオキシまたはＣ１−４アルキルであり；
Ｒ３およびＲ４はそれぞれ独立に、水素、シアノ、アジド、ハロゲン、ヒドロキシ、メルカプト、アミノ、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−８アルキルカルボニルオキシ、Ｃ２−４アルケニル、Ｃ２−４アルキニルおよびＣ１−４アルキルからなる群から選択され、ここでアルキルは未置換であるかヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルキルチオまたは１〜３個のフッ素原子で置換されており；
Ｒ５は水素、Ｃ１−１０アルキルカルボニル、Ｐ３Ｏ９Ｈ４、Ｐ２Ｏ６Ｈ３またはＰ（Ｏ）Ｒ１２Ｒ１３であり；
Ｒ６およびＲ７はそれぞれ独立に、水素、メチル、ヒドロキシメチルまたはフルオロメチルであり；
Ｒ８は水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルキニル、ハロゲン、シアノ、カルボキシ、Ｃ１−４アルキルオキシカルボニル、アジド、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルチオ、Ｃ１−６アルキルスルホニルまたは（Ｃ１−４アルキル）０−２アミノメチルであり；
Ｒ９およびＲ１０はそれぞれ独立に、水素、ヒドロキシ、メルカプト、ハロゲン、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルキルチオ、Ｃ１−８アルキルカルビニルオキシ、Ｃ３−６シクロアルキルカルボニルオキシ、Ｃ１−８アルキルオキシカルボニルオキシ、Ｃ３−６シクロアルキルオキシカルボニルオキシ、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＳＣ（＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、−ＯＣＨ２Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、−ＯＣＨ（Ｃ１−４アルキル）Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、Ｃ３−６シクロアルキルアミノ、ジ（Ｃ３−６シクロアルキル）アミノ、または下記構造式：
【化３】
2005530843.tif 000025
を有するアミノアシル残基であり；
ｎは０、１または２であり；
Ｒ１１は水素、ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−４アルコキシ、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、Ｃ３−６シクロアルキルアミノまたはジ（Ｃ３−６シクロアルキルアミノ）であり；
Ｒ１５、Ｒ１６およびＲ１７はそれぞれ独立に水素またはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ１２およびＲ１３はそれぞれ独立にヒドロキシ、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＳＣ（＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、−ＯＣＨ２Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＯＣ１−４アルキル、−ＮＨＣＨＭｅＣＯ２Ｍｅ、−ＯＣＨ（Ｃ１−４アルキル）Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、
【化４】
2005530843.tif 000026
であり；
Ｒ１４は水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ１−４アルキルアミノ、ＣＦ３またはハロゲンであり；および
Ｒ１８は、水素、Ｃ１−４アルキルまたはフェニルＣ０−２アルキルである］の化合物または該化合物の製薬上許容される塩。
【請求項２】
下記構造式ＩＩ： 
【化５】
2005530843.tif 000027
［式中、
Ｒ１はフルオロメチルまたはジフルオロメチルであり；
Ｒ２はヒドロキシ、フルオロまたはＣ１−３アルコキシであり；
Ｒ３は水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノまたはＣ１−３アルコキシであり；
Ｒ５は水素、Ｐ３Ｏ９Ｈ４、Ｐ２Ｏ６Ｈ３またはＰＯ３Ｈ２であり；
Ｒ８は水素、アミノまたはＣ１−４アルキルアミノであり；および
Ｒ９およびＲ１１はそれぞれ独立に、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノまたはＣ３−６シクロアルキルアミノである］を有する請求項１に記載の化合物または該化合物の製薬上許容される塩。
【請求項３】
Ｒ１がフルオロメチルまたはジフルオロメチルであり；
Ｒ２がヒドロキシ、フルオロまたはメトキシであり；
Ｒ３が水素、フルオロ、ヒドロキシ、アミノまたはメトキシであり；
Ｒ５が水素またはＰ３Ｏ９Ｈ４であり；
Ｒ８が水素またはアミノであり；および
Ｒ９およびＲ１１がそれぞれ独立に、水素、フルオロ、ヒドロキシまたはアミノである請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
６−アミノ−９−（２−Ｃ−フルオロメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリン；
６−アミノ−９−（２−Ｃ−フルオロメチル−β−Ｄ−アラビノフラノシル）プリン；
２−アミノ−９−（２−Ｃ−フルオロメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−３，９−ジヒドロプリン−６−オン；
２−アミノ−９−（２−Ｃ−フルオロメチル−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−３，９−ジヒドロプリン−６−オン；
２−アミノ−９−（２−Ｃ−フルオロメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−３，９−ジヒドロプリン−６−チオン；
２，６−ジアミノ−９−（２−Ｃ−フルオロメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリン；
９−（２−Ｃ−フルオロメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−６−メチルアミノプリン；
２′−Ｃ−（フルオロメチル）シチジン；
２′−Ｃ−（フルオロメチル）−５−メチルシチジン；
２′−Ｃ−（フルオロメチル）ウリジン；
２′−Ｃ−（フルオロメチル）−５−メチルウリジン；
およびその対応する５′−三リン酸からなる群から選択される請求項１に記載の化合物；あるいは
該化合物の製薬上許容される塩。
【請求項５】
２−アミノ−９−（２−Ｃ−フルオロメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−３，９−ジヒドロプリン−６−オンである請求項４に記載の化合物、またはそれの製薬上許容される塩。
【請求項６】
６−アミノ−９−（２−Ｃ−フルオロメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリンである請求項４に記載の化合物、またはそれの製薬上許容される塩。
【請求項７】
請求項１に記載の化合物および製薬上許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項８】
ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染の治療方法であって、そのような治療を必要とする哺乳動物に対して、治療上有効量の請求項１に記載の化合物を投与することを包含する方法。
【請求項９】
前記ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染がＣ型肝炎ウィルス（ＨＣＶ）感染である請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
治療上有効量のＨＣＶに対して活性な別の薬剤と併用する請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＨＣＶに対して活性な薬剤が、単独またはリバビリンもしくはレボビリンとの組合せでの２′−Ｃ−Ｍｅ−リボヌクレオシド；リバビリン；レボビリン；チモシンα−１；インターフェロン−β；ＮＳ３セリンプロテアーゼの阻害剤；イノシンモノリン酸デヒドロゲナーゼの阻害剤；インターフェロン−αまたはＰＥＧ化インターフェロン−αである請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＨＣＶに対して活性な薬剤が、単独またはリバビリンとの組合せでのインターフェロン−αまたはＰＥＧ化インターフェロン−αである請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
哺乳動物でのＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染の治療のための請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項１４】
前記ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染がＨＣＶ感染である請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
哺乳動物でのＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染の治療のための医薬製造における請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項１６】
前記ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染がＨＣＶ感染である請求項１５に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヌクレオシド化合物およびその或る種の誘導体、それらの合成、ならびにＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスポリメラーゼ阻害剤としてのそれらの使用に関する。本発明の化合物は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス複製の阻害剤であり、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染の治療に有用である。それは、Ｃ型肝炎ウィルス（ＨＣＶ）ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤として、ＨＣＶ複製の阻害剤として、ならびにＣ型肝炎感染の治療において特に有用である。
【背景技術】
【０００２】
Ｃ型肝炎ウィルス（ＨＣＶ）感染は、世界の人口の２〜１５％と推定される感染者のかなりの数において、肝硬変および肝細胞癌などの慢性肝臓疾患に至る主要な健康上の問題となっている。米国疾病管理センターによると、米国のみで感染者数は４５０万人と推定されている。世界保健機構によれば、世界的には感染者は２億人であり、毎年少なくとも３〜４００万人が感染している。感染すると、感染者の約２０％がウィルスを排除するが、それ以外の感染者では以後の生涯にわたってＨＣＶが常在することになる。慢性感染者の１０〜２０％が、最終的に肝臓破壊性の肝硬変または癌を発症する。このウィルス疾患は、汚染された血液および血液製品、汚染された針によって非経口的に、あるいは性的に、および感染した母親またはキャリアの母親から子供へと垂直に伝染する。組換えインターフェロン−α単独またはヌクレオシド類縁体であるリバビリンと併用したものを用いた免疫療法に制限される現行のＨＣＶ感染治療は、臨床的利点が限定されたものである。さらに、ＨＣＶには確立されたワクチンがない。従って、慢性ＨＣＶ感染と効果的に戦う改良された治療薬が緊急に必要とされている。ＨＣＶ感染治療における最新技術について総説が出されており、各種刊行物が参照される（B. Dymock, et al., ″Novel approaches to the treatment of hepatitis C virus infection″, Antiviral Chemistry & Chemotherapy, 11: 79-96 (2000); H. Rosen, et al., ″Hepatitis C virus: current understanding and prospects for future therapies″, Molecular Medicine Today, 5: 393 399 (1999); D. Moradpour, et al., ″Current and evolving therapies for hepatitis C″, European J. Gastroenterol. Hepatol., 11: 1189-1202 (1999); R. Bartenschlager, ″Candidate Targets for Hepatitis C Virus-Specific Antiviral Therapy″, Intervirology, 40: 378-393 (1997); G. M. Lauer and B. D. Walker, ″Hepatitis C Virus Infection″, N. Engl. J. Med., 345: 41-52 (2001); B. W. Dymock, ″Emerging therapies for hepatitis C virus infection″, Emerging Drugs, 6: 13-42 (2001); and C. Crabb, ″Hard-Won Advances Spark Excitement about Hepatitis C″, Science: 506-507 (2001)；これらの内容はいずれも、その全体が本明細書中に参考として援用されている）。
【０００３】
ＨＣＶ療法に向けて各種アプローチが行われており、それにはウィルスセリンプロテイナーゼ（ＮＳ３プロテアーゼ）、ヘリカーゼおよびＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＮＳ５Ｂ）の阻害、ならびにワクチンの開発などがある。
【０００４】
ＨＣＶビリオンは、約３０１０アミノ酸のポリ蛋白をコードする約９６００塩基の単一のオリゴリボヌクレオチドゲノム配列を有するエンベロープ正鎖（positive-strand）ＲＮＡウィルスである。ＨＣＶ遺伝子の蛋白産生物は、構造蛋白Ｃ、Ｅ１およびＥ２、ならびに非構造蛋白ＮＳ２、ＮＳ３、ＮＳ４ＡおよびＮＳ４Ｂ、そしてＮＳ５ＡおよびＮＳ５Ｂからなる。非構造（ＮＳ）蛋白は、ウィルス複製の触媒機構を提供するものと考えられている。ＮＳ３プロテアーゼは、ポリ蛋白鎖から、ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼであるＮＳ５Ｂを放出する。ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼは、ＨＣＶの複製サイクルにおける鋳型として作用する１本鎖ウィルスＲＮＡから二本鎖ＲＮＡを合成するのに必要である。従ってＮＳ５Ｂポリメラーゼは、ＨＣＶ複製複合体において必須の構成要素であると考えられる［K. Ishi, et al., ″Expression of Hepatitis C Virus NS5B Protein: Characterization of Its RNA Polymerase Activity and RNA Binding″, Hepatology, 29: 1227-1235 (1999) and V. Lohmann, et al., ″Biochemical and Kinetic Analyses of NS5B RNA-Dependent RNA Polymerase of the Hepatitis C Virus″, Virology, 249: 108-118 (1998)参照］。ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害は、二本鎖ＨＣＶ  ＲＮＡの形成を防止することから、ＨＣＶ特異的抗ウィルス療法開発に向けた注目すべきアプローチである。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明のヌクレオシド化合物およびその或る種の誘導体がＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス複製、特にＨＣＶ複製の強力な阻害剤であることが認められた。これらのヌクレオシド化合物の５′−三リン酸誘導体は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスポリメラーゼ、特にＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤である。本発明のヌクレオシド化合物およびその誘導体は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染、特にＨＣＶ感染を治療する上で有用である。
【０００６】
従って本発明の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスポリメラーゼの阻害剤として、特にＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤として有用なヌクレオシド化合物およびその或る種の誘導体を提供することにある。
【０００７】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスの複製の阻害剤として、特にＣ型肝炎ウィルスの複製の阻害剤として有用なヌクレオシド化合物およびその誘導体を提供することにある。
【０００８】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染の治療、特にＨＣＶ感染の治療において有用なヌクレオシド化合物およびその或る種の誘導体を提供することにある。
【０００９】
本発明の別の目的は、製薬上許容される担体とともに本発明のヌクレオシド化合物を含む医薬組成物を提供することにある。
【００１０】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスポリメラーゼの阻害剤として、特にＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤として使用される本発明のヌクレオシド化合物およびその誘導体を含む医薬組成物を提供することにある。
【００１１】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス複製の阻害剤として、特にＨＣＶ複製の阻害剤として使用される本発明のヌクレオシド化合物およびその誘導体を含む医薬組成物を提供することにある。
【００１２】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染の治療において、特にＨＣＶ感染の治療において使用される本発明のヌクレオシド化合物およびその誘導体を含む医薬組成物を提供することにある。
【００１３】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスに対して、特にＨＣＶに対して活性な他の薬剤と組み合わせて、本発明のヌクレオシド化合物およびその誘導体を含む医薬組成物を提供することにある。
【００１４】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスポリメラーゼの阻害方法、特にＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害方法を提供することにある。
【００１５】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス複製の阻害方法、特にＨＣＶ複製の阻害方法を提供することにある。
【００１６】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染の治療方法、特にＨＣＶ感染の治療方法を提供することにある。
【００１７】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスに対して活性な他の薬剤との併用でＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染を治療する方法、特にＨＣＶに対して活性な他の薬剤と併用してＨＣＶ感染を治療する方法を提供することにある。
【００１８】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス複製の阻害および／またはＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染の治療用、特にＨＣＶ複製の阻害および／またはＨＣＶ感染の治療用の医薬として用いられるヌクレオシド化合物およびその或る種の誘導体ならびにその医薬組成物を提供することにある。
【００１９】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス複製の阻害および／またはＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染の治療、特にＨＣＶ複製の阻害および／またはＨＣＶ感染の治療用の医薬の製造における、本発明のヌクレオシド化合物およびその或る種の誘導体ならびにその医薬組成物の使用を提供することにある。
【００２０】
上記および他の目的は、以下の詳細な説明から容易に明らかになろう。
【課題を解決するための手段】
【００２１】
本発明は、立体化学配置が以下のように示される構造式Ｉ：
【００２２】
【化６】
2005530843.tif 000002
［式中、
Ｂは
【００２３】
【化７】
2005530843.tif 000003
であり；
ＷはＯまたはＳであり；
Ｒ１はフルオロメチル、ジフルオロメチルまたはトリフルオロメチルであり；
Ｒ２は水素、フッ素、アミノ、ヒドロキシ、メルカプト、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−８アルキルカルボニルオキシまたはＣ１−４アルキルであり；
Ｒ３およびＲ４はそれぞれ独立に、水素、シアノ、アジド、ハロゲン、ヒドロキシ、メルカプト、アミノ、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−８アルキルカルボニルオキシ、Ｃ２−４アルケニル、Ｃ２−４アルキニルおよびＣ１−４アルキルからなる群から選択され、ここでアルキルは未置換であるかヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルキルチオまたは１〜３個のフッ素原子で置換されており；
Ｒ５は水素、Ｃ１−１０アルキルカルボニル、Ｐ３Ｏ９Ｈ４、Ｐ２Ｏ６Ｈ３またはＰ（Ｏ）Ｒ１２Ｒ１３であり；
Ｒ６およびＲ７はそれぞれ独立に、水素、メチル、ヒドロキシメチルまたはフルオロメチルであり；
Ｒ８は水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルキニル、ハロゲン、シアノ、カルボキシ、Ｃ１−４アルキルオキシカルボニル、アジド、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルチオ、Ｃ１−６アルキルスルホニルまたは（Ｃ１−４アルキル）０−２アミノメチルであり；
Ｒ９およびＲ１０はそれぞれ独立に、水素、ヒドロキシ、メルカプト、ハロゲン、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルキルチオ、Ｃ１−８アルキルカルビニルオキシ、Ｃ３−６シクロアルキルカルボニルオキシ、Ｃ１−８アルキルオキシカルボニルオキシ、Ｃ３−６シクロアルキルオキシカルボニルオキシ、ＯＣＨ２ＣＨ２ＳＣ（＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、ＯＣＨ２Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、ＯＣＨ（Ｃ１−４アルキル）Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、Ｃ３−６シクロアルキルアミノ、ジ（Ｃ３−６シクロアルキル）アミノ、または下記構造式：
【００２４】
【化８】
2005530843.tif 000004
を有するアミノアシル残基であり；
ｎは０、１または２であり；
Ｒ１１は水素、ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−４アルコキシ、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、Ｃ３−６シクロアルキルアミノまたはジ（Ｃ３−６シクロアルキルアミノ）であり；
Ｒ１５、Ｒ１６およびＲ１７はそれぞれ独立に水素またはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ１２およびＲ１３はそれぞれ独立にヒドロキシ、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＳＣ（＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、−ＯＣＨ２Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＯＣ１−４アルキル、−ＮＨＣＨＭｅＣＯ２Ｍｅ、−ＯＣＨ（Ｃ１−４アルキル）Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、
【００２５】
【化９】
2005530843.tif 000005
であり；
Ｒ１４は水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ１−４アルキルアミノ、ＣＦ３またはハロゲンであり；および
Ｒ１８は、水素、Ｃ１−４アルキルまたはフェニルＣ０−２アルキルである］で示される化合物またはその化合物の製薬上許容される塩に関する。
【００２６】
式Ｉの化合物は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスポリメラーゼ、特にＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤として有用である。それら化合物は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス複製、特にＨＣＶ複製の阻害剤でもあり、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染の治療、特にＨＣＶ感染の治療において有用である。
【００２７】
本発明の範囲には、前記化合物を単独でまたはＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス、特にＨＣＶに対して活性な他の薬剤との組み合わせで含む医薬組成物、ならびにＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス複製の阻害方法およびＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染の治療方法も包含される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２８】
本発明は、立体化学配置が以下のように示される構造式Ｉの化合物またはその化合物の製薬上許容される塩に関する。
【００２９】
【化１０】
2005530843.tif 000006
式中、
Ｂは
【００３０】
【化１１】
2005530843.tif 000007
であり；
ＷはＯまたはＳであり；
Ｒ１はフルオロメチル、ジフルオロメチルまたはトリフルオロメチルであり；
Ｒ２は水素、フッ素、アミノ、ヒドロキシ、メルカプト、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−８アルキルカルボニルオキシまたはＣ１−４アルキルであり；
Ｒ３およびＲ４はそれぞれ独立に、水素、シアノ、アジド、ハロゲン、ヒドロキシ、メルカプト、アミノ、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−８アルキルカルボニルオキシ、Ｃ２−４アルケニル、Ｃ２−４アルキニルおよびＣ１−４アルキルからなる群から選択され、ここでアルキルは未置換であるかヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルキルチオまたは１〜３個のフッ素原子で置換されており；
Ｒ５は水素、Ｃ１−１０アルキルカルボニル、Ｐ３Ｏ９Ｈ４、Ｐ２Ｏ６Ｈ３またはＰ（Ｏ）Ｒ１２Ｒ１３であり；
Ｒ６およびＲ７はそれぞれ独立に、水素、メチル、ヒドロキシメチルまたはフルオロメチルであり；
Ｒ８は水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルキニル、ハロゲン、シアノ、カルボキシ、Ｃ１−４アルキルオキシカルボニル、アジド、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルチオ、Ｃ１−６アルキルスルホニルまたは（Ｃ１−４アルキル）０−２アミノメチルであり；
Ｒ９およびＲ１０はそれぞれ独立に、水素、ヒドロキシ、メルカプト、ハロゲン、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルキルチオ、Ｃ１−８アルキルカルビニルオキシ、Ｃ３−６シクロアルキルカルボニルオキシ、Ｃ１−８アルキルオキシカルボニルオキシ、Ｃ３−６シクロアルキルオキシカルボニルオキシ、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＳＣ（＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、−ＯＣＨ２Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、−ＯＣＨ（Ｃ１−４アルキル）Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、Ｃ３−６シクロアルキルアミノ、ジ（Ｃ３−６シクロアルキル）アミノ、または下記構造式：
【００３１】
【化１２】
2005530843.tif 000008
を有するアミノアシル残基であり；
ｎは０、１または２であり；
Ｒ１１は水素、ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−４アルコキシ、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、Ｃ３−６シクロアルキルアミノまたはジ（Ｃ３−６シクロアルキルアミノ）であり；
Ｒ１５、Ｒ１６およびＲ１７はそれぞれ独立に水素またはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ１２およびＲ１３はそれぞれ独立にヒドロキシ、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＳＣ（＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、−ＯＣＨ２Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＯＣ１−４アルキル、−ＮＨＣＨＭｅＣＯ２Ｍｅ、−ＯＣＨ（Ｃ１−４アルキル）Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、
【００３２】
【化１３】
2005530843.tif 000009
であり；
Ｒ１４は水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ１−４アルキルアミノ、ＣＦ３またはハロゲンであり；および
Ｒ１８は、水素、Ｃ１−４アルキルまたはフェニルＣ０−２アルキルである。
【００３３】
式Ｉの化合物は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスポリメラーゼの阻害剤として有用である。それら化合物は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス複製の阻害剤でもあり、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染の治療において有用である。
【００３４】
構造式Ｉの化合物の１つの実施形態では、下記構造式ＩＩの化合物またはそれの製薬上許容される塩がある。
【００３５】
【化１４】
2005530843.tif 000010
式中、
Ｒ１はフルオロメチルまたはジフルオロメチルであり；
Ｒ２はヒドロキシ、フルオロまたはＣ１−３アルコキシであり；
Ｒ３は水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノまたはＣ１−３アルコキシであり；
Ｒ５は水素、Ｐ３Ｏ９Ｈ４、Ｐ２Ｏ６Ｈ３またはＰＯ３Ｈ２であり；
Ｒ８は水素、アミノまたはＣ１−４アルキルアミノであり；および
Ｒ９およびＲ１１はそれぞれ独立に、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノまたはＣ３−６シクロアルキルアミノである。
【００３６】
構造式Ｉの化合物の第２の実施形態では、
Ｒ１がフルオロメチルまたはジフルオロメチルであり；
Ｒ２がヒドロキシ、フッ素またはメトキシであり；
Ｒ３が水素、フルオロ、ヒドロキシ、アミノまたはメトキシであり；
Ｒ５が水素またはＰ３Ｏ９Ｈ４であり；
Ｒ８が水素またはアミノであり；
Ｒ９およびＲ１１がそれぞれ独立に、水素、フルオロ、ヒドロキシまたはアミノである、構造式ＩＩの化合物がある。
【００３７】
ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスポリメラーゼの阻害剤として有用な構造式Ｉの本発明の化合物の例としては、
６−アミノ−９−（２−Ｃ−フルオロメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリン；
６−アミノ−９−（２−Ｃ−フルオロメチル−β−Ｄ−アラビノフラノシル）プリン；
２−アミノ−９−（２−Ｃ−フルオロメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−３，９−ジヒドロプリン−６−オン；
２−アミノ−９−（２−Ｃ−フルオロメチル−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−３，９−ジヒドロプリン−６−オン；
２−アミノ−９−（２−Ｃ−フルオロメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−３，９−ジヒドロプリン−６−チオン；
２，６−ジアミノ−９−（２−Ｃ−フルオロメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリン；
９−（２−Ｃ−フルオロメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−６−メチルアミノプリン；
２′−Ｃ−（フルオロメチル）シチジン；
２′−Ｃ−（フルオロメチル）−５−メチルシチジン；
２′−Ｃ−（フルオロメチル）ウリジン；および
２′−Ｃ−（フルオロメチル）−５−メチルウリジン；
およびその対応する５′−三リン酸；または
それらの製薬上許容される塩があるが、これらに限定されない。
【００３８】
本発明の１実施形態において、本発明のヌクレオシド 化合物は、正センス一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスポリメラーゼの阻害剤として、正センス一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス複製の阻害剤として、ないしは正センス一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染の治療に有用である。この実施形態のある群では、前記正センス一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスは、フラビウィルスまたはピコルナウイルスである。この群の１小群では、前記ピコルナウイルスは、ライノウィルス、ポリオウィルスまたはＡ型肝炎ウィルスである。この群の第２の小群では、前記フラビウィルスは、Ｃ型肝炎ウィルス、黄熱病ウィルス、デング熱ウィルス、西ナイルウィルス、日本脳炎ウィルス、バンジウィルスおよびウシウイルス性下痢ウイルス（ＢＶＤＶ）からなる群から選択される。この小群の１小群では、前記フラビウィルスはＣ型肝炎ウィルスである。
【００３９】
本発明の別の態様は、ＲＮＡ依存性 ＲＮＡウィルスポリメラーゼの阻害方法； ＲＮＡ依存性 ＲＮＡウィルス複製の阻害方法；および／または 処置を必要とする哺乳動物でのＲＮＡ依存性 ＲＮＡウィルス感染の治療方法であって、その哺乳動物に対して 治療上有効量の構造式Ｉの化合物を投与する段階を有する方法に関するものである。 
本発明のこの態様の１実施形態では、前記ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスポリメラーゼは、正センス一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスポリメラーゼである。この実施形態のある群では、前記正センス一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスポリメラーゼは、フラビウィルスポリメラーゼまたはピコルナウイルスポリメラーゼである。この群の１小群では、前記ピコルナウイルスポリメラーゼは、ライノウィルスポリメラーゼ、ポリオウィルスポリメラーゼまたはＡ型肝炎ウィルスポリメラーゼである。この群の第２の小群では、前記フラビウィルスポリメラーゼは、Ｃ型肝炎ウィルスポリメラーゼ、黄熱病ウィルスポリメラーゼ、デング熱ウィルスポリメラーゼ、西ナイルウィルスポリメラーゼ、日本脳炎ウィルスポリメラーゼ、バンジウィルスポリメラーゼおよびウシウイルス性下痢ウイルス（ＢＶＤＶ）ポリメラーゼからなる群から選択される。この小群の１小群では、前記フラビウィルスポリメラーゼはＣ型肝炎ウィルスポリメラーゼである。
【００４０】
本発明のこの態様の第２の実施形態では、前記ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス複製は、正センス一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス複製である。この実施形態のある群では、前記正センス一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス複製は、フラビウィルス複製またはピコルナウイルス複製である。この群の１小群では、前記ピコルナウイルス複製は、ライノウィルス複製、ポリオウィルス複製またはＡ型肝炎ウィルス複製である。この群の第２の小群では、前記フラビウィルス複製は、Ｃ型肝炎ウィルス複製、黄熱病ウィルス複製、デング熱ウィルス複製、西ナイルウィルス複製、日本脳炎ウィルス複製、バンジウィルス複製およびウシウイルス性下痢ウイルス複製からなる群から選択される。この小群の１小群では、前記フラビウィルス複製はＣ型肝炎ウィルス複製である。
【００４１】
本発明のこの態様の第３の実施形態では、前記ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染は、正センス一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染である。この実施形態のある群では、前記正センス一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染は、フラビウィルス感染またはピコルナウイルス感染である。この群の１小群では、前記ピコルナウイルス感染は、ライノウィルス感染、ポリオウィルス感染またはＡ型肝炎ウィルス感染である。この群の第２の小群では、前記フラビウィルス感染は、Ｃ型肝炎ウィルス感染、黄熱病ウィルス感染、デング熱ウィルス感染、西ナイルウィルス感染、日本脳炎ウィルス感染、バンジウィルス感染およびウシウイルス性下痢ウイルス感染からなる群から選択される。この小群の１小群では、前記フラビウィルス感染はＣ型肝炎ウィルス感染である。
【００４２】
本願を通じて、以下の用語は下記に示した意味を有する。
【００４３】
上記で記載のアルキル基は、直鎖または分岐形状を有する指定長さのアルキル基を含むものである。そのようなアルキル基の例には、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ヘキシル、イソヘキシルなどがある。
【００４４】
「アルケニル」という用語は、合計炭素数２〜６個またはその範囲内のいずれかの数字である直鎖または分岐のアルケンを意味するものとする（例：エテニル、プロペニル、ブテニル、ペンテニルなど）。
【００４５】
「アルキニル」という用語は、合計炭素数２〜６個またはその範囲内のいずれかの数字である直鎖または分岐のアルキンを意味するものとする（例：エチニル、プロピニル、ブチニル、ペンチニルなど）。
【００４６】
「シクロアルキル」という用語は、合計炭素数３〜８個またはその範囲内のいずれかの数字であるアルカンの環状部分を意味するものとする（すなわち、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルまたはシクロオクチル）。
【００４７】
「シクロヘテロアルキル」という用語は、窒素、酸素および硫黄から選択される１個または２個のヘテロ原子を有する非芳香族複素環を含むものである。４〜６員シクロヘテロアルキルの例には、アゼチジニル、ピロリジニル、ピペリジニル、モルホリニル、チアモルホリニル、イミダゾリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオフェニル、ピペラジニルなどがある。
【００４８】
「アルコキシ」という用語は、指定数（例えば、Ｃ１−４アルコキシ）またはその範囲内のいずれかの数の炭素原子［すなわち、メトキシ（ＭｅＯ−）、エトキシ、イソプロポキシなど］の直鎖または分岐のアルコキシドを指す。
【００４９】
「アルキルチオ」という用語は、指定数（例えば、Ｃ１−４アルキルチオ）またはその範囲内のいずれかの数の炭素原子［すなわち、メチルチオ（ＭｅＳ−）、エチルチオ、イソプロピルチオなど］の直鎖または分岐のアルキルスルフィドを指す。
【００５０】
「アルキルアミノ」という用語は、指定数（例：Ｃ１−４アルキルアミノ）またはその範囲内のいずれかの数の炭素原子［すなわち、メチルアミノ、エチルアミノ、イソプロピルアミノ、ｔ−ブチルアミノなど］の直鎖または分岐のアルキルアミンを指す。
【００５１】
「シクロアルキルアミノ」という用語は、指定数（例：Ｃ３−６シクロアルキルアミノ）またはその範囲内のいずれかの数の炭素原子［すなわち、シクロプロピルアミノ、シクロブチルアミノ、シクロペンチルアミノおよびシクロヘキシルアミノ］の１個の環を有する飽和アミノ炭化水素を指す。
【００５２】
「アルキルスルホニル」という用語は、指定数（例：Ｃ１−６アルキルスルホニル）またはその範囲内のいずれかの数の炭素原子［すなわち、メチルスルホニル（ＭｅＳＯ２−）、エチルスルホニル、イソプロピルスルホニルなど］の直鎖または分岐のアルキルスルホンを指す。
【００５３】
「アルキルオキシカルボニル」という用語は、指定数（例：Ｃ１−４アルキルオキシカルボニル）またはその範囲内のいずれかの数の炭素原子［すなわち、メチルオキシカルボニル（ＭｅＯＣＯ−）、エチルオキシカルボニルまたはブチルオキシカルボニル］の本発明のカルボン酸誘導体の直鎖または分岐のエステルを指す。
【００５４】
「アリール」という用語は、フェニル、ナフチルおよびピリジルの両方を含む。アリール基は、独立にＣ１−４アルキル、ハロゲン、シアノ、ニトロ、トリフルオロメチル、Ｃ１−４アルコキシおよびＣ１−４アルキルチオから選択される１〜３個の基で置換されていても良い。
【００５５】
「ハロゲン」という用語は、ハロゲン原子であるフッ素、塩素、臭素およびヨウ素を含むものである。
【００５６】
「置換（された）」という用語は、指定された置換基による複数置換を含むものとする。複数の置換基部分が開示または特許請求されている場合、置換化合物は独立に、１以上の開示または特許請求された置換基部分によって１個または複数個置換されていることができる。
【００５７】
「アミノアシル残基」という用語は、下記構造式のα−、β−またはγ−アミノアシル基を指す。
【００５８】
【化１５】
2005530843.tif 000011
式中、ｎは０、１または２であり；Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７およびＲ１８は上記で定義の通りである。Ｒ１8が水素でない場合、前記アミノアシル残基は不斉中心を有し、個々のＲ−およびＳ−エナンチオマーならびにＲＳ−ラセミ混合物を含むものである。
【００５９】
「５′−三リン酸エステル」という用語は、下記一般構造式ＩＩＩを有する本発明のヌクレオシド化合物の５′−水酸基の三リン酸エステル誘導体を指す。
【００６０】
【化１６】
2005530843.tif 000012
式中、ＢおよびＲ１〜Ｒ１１は上記で定義の通りである。本発明の化合物は、その三リン酸エステルの製薬上許容される塩ならびにそれぞれ下記構造式ＩＶおよびＶの５′−モノリン酸エステルおよび５′−二リン酸エステルの製薬上許容される塩をも含むものとする。
【００６１】
【化１７】
2005530843.tif 000013
【００６２】
「５′−（Ｓ−アシル−２−チオエチル）リン酸エステル」または「ＳＡＴＥ」という用語は、それぞれ構造式ＶＩおよびＶＩＩの本発明の５′−モノリン酸ヌクレオシド誘導体のモノエステルもしくはジエステル誘導体、ならびに製薬上許容されるモノエステルの塩を指す。
【００６３】
【化１８】
2005530843.tif 000014
【００６４】
「医薬組成物」での場合のような「組成物」という用語は、有効成分および担体を構成する不活性成分を含むもの、ならびに２以上の成分の組み合わせ、複合体化もしくは凝集、または１以上の成分の溶解、または１以上の成分の他の種類の反応もしくは相互作用によって直接または間接に得られるものを包含するものとする。従って本発明の医薬組成物は、本発明の化合物と製薬上許容される担体とを混合することで得られるあらゆる組成物を包含する。
【００６５】
化合物の「投与」という用語は、本発明の化合物または本発明の化合物のプロドラッグを、必要とする個体に提供することを意味するものと理解すべきである。
【００６６】
本発明の別の態様は、ＨＣＶ感染の治療に有用な１以上の薬剤と併用した本発明の化合物によって、ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼを阻害する方法、ＨＣＶ複製を阻害する方法、あるいはＨＣＶ感染を治療する方法に関する。そのようなＨＣＶに対して活性な薬剤には、リバビリン、レボビリン（levovirin）、ビラミジン（viramidine）、チモシンα−１、インターフェロン−β、インターフェロン−α、ＰＥＧ化インターフェロン−α（ＰＥＧインターフェロン−α）、インターフェロン−αとリバビリンの組み合わせ、ＰＥＧインターフェロン−αとリバビリンの組み合わせ、インターフェロン−αとレボビリンの組み合わせ、ＰＥＧインターフェロン−αとレボビリンの組み合わせなどがあるが、これらに限定されるものではない。インターフェロン−αには、組換えインターフェロン−α２ａ（ホフマン−ラロッシュ社（Hoffmann-LaRoche, Nutley, NJ）から入手可能なロフェロン（Roferon）インターフェロンなど）、ＰＥＧ化インターフェロン−α２ａ（Pegasys（商標名））、インターフェロン−α２ｂ（シェリング社（Schering Corp., Kenilworth, NJ）から入手可能なイントロン（Intron）−Ａインターフェロンなど）、ＰＥＧ化インターフェロン−α２ｂ（PegIntron（商標名））、組換えコンセンサスインターフェロン（インターフェロン・アルファコン（alphacon）−１など）および精製インターフェロン−α製品などがあるが、これらに限定されるものではない。アムゲン社（Amgen）の組換えコンセンサスインターフェロンは、インフェルゲン（Infergen；登録商標）の商品名を有する。レボビリンはリバビリンのＬ−エナンチオマーであり、リバビリンと同様の免疫調節活性が示されている。ビラミジンは、ＷＯ  ０１／６０３７９（ICN Pharmaceuticalsに譲渡）に開示のリバビリンの類縁体を表す。本発明のこの方法によれば、組み合わせの個々の成分は、分割または単一の組み合わせの形態で、治療の過程における異なる時点で別個に、または同時に投与することができる。従って本発明は、そのような全ての同時または交互の投与法を包含するものと理解すべきであり、「投与」という用語はそれに準じて解釈すべきである。本発明の化合物とＨＣＶ感染の治療に有用な他の薬剤との組み合わせの範囲には基本的に、ＨＣＶ感染治療用のあらゆる医薬組成物とのあらゆる組み合わせが含まれることは明らかであろう。本発明の化合物またはそれの製薬上許容される塩をＨＣＶに対して活性な第２の治療剤と併用する場合、各化合物の用量は、その化合物を単独で使用する場合と同じであるか、異なっていることができる。
【００６７】
ＨＣＶ感染の治療においては、本発明の化合物は、ＨＣＶ  ＮＳ３セリンプロテアーゼの阻害剤である薬剤と併用して投与することもできる。ＨＣＶ  ＮＳ３セリンプロテアーゼは必須のウィルス酵素であり、ＨＣＶ複製阻害の良好な標的であることが報告されている。ＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼ阻害剤の基質性および非基質性の両方の阻害剤が、ＷＯ  ９８／２２４９６、ＷＯ  ９８／４６６３０、ＷＯ  ９９／０７７３３、ＷＯ  ９９／０７７３４、ＷＯ  ９９／３８８８８、ＷＯ  ９９／５０２３０、ＷＯ  ９９／６４４４２、ＷＯ  ００／０９５４３、ＷＯ  ００／５９９２９およびＧＢ２３３７２６２に開示されている。ＨＣＶ複製阻害剤の開発およびＨＣＶ感染治療の標的としてのＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼについては、ディモックの報告に記載されている（B. W. Dymock, ″Emerging therapies for hepatitis C virus infection″, Emerging Drugs, 6: 13-42 (2001)）。
【００６８】
リバビリン、レボビリンおよびビラミジンは、細胞内酵素であるイノシンモノホスフェートデヒドロゲナーゼ（ＩＭＰＤＨ）の阻害を介して、グアニンヌクレオチドの細胞内蓄積を調節することで、抗ＨＣＶ効果を発揮することができる。ＩＭＰＤＨは、デ・ノボのグアニンヌクレオチド生合成における生合成経路に対する速度抑制酵素である。リバビリンは細胞内で容易にリン酸エステル化され、モノリン酸エステル誘導体がＩＭＰＤＨの阻害剤である。そこでＩＭＰＤＨの阻害は、ＨＣＶ複製阻害剤を発見する上での別の有用な標的を代表するものである。従って本発明の化合物は、ＷＯ  ９７／４１２１１およびＷＯ  ０１／００６２２（Vertexに譲渡）に開示のＶＸ−４９７などのＩＭＰＤＨの阻害剤；ＷＯ  ００／２５７８０（Bristol-Myers Squibbに譲渡）に開示のものなどの別のＩＭＰＤＨ阻害剤；またはミコフェノレート・モフェチル（mofetil）［A. C. Allison and E. M. Eugui, Agents Action, 44 (Suppl.) : 165 (1993)参照］と併用して投与することもできる。
【００６９】
ＨＣＶ感染治療の場合、本発明の化合物は抗ウィルス剤であるアマンタジン（１−アミノアダマンタン）［この薬剤についての詳細な説明については、J. Kirschbaum, Anal. Profiles Drug Subs. 12: 1-36 (1983)参照］との併用で投与することもできる。
【００７０】
本発明の化合物は、ＨＣＶ感染の治療を目的として、文献（R. E. Harry-O′Kuru, et al., J. Org. Chem., 62: 1754-1759 (1997)；M. S. Wolfe, et al., Tetrahedron Lett., 36: 7611-7614 (1995)；米国特許第３４８０６１３号（１９６９年１１月２５日）；国際特許公開番号ＷＯ  ０１／９０１２１（２００１年１１月２９日）；国際特許公開番号ＷＯ  ０１／９２２８２（２００１年１２月６日）；および国際特許公開番号ＷＯ  ０２／３２９２０（２００２年４月２５日）；これらそれぞれの内容は、その全体が本明細書中に参考として援用されている）に開示の抗ウィルス性２′−Ｃ−分岐リボヌクレオシド類と組み合わせることもできる。そのような２′−Ｃ−分岐リボヌクレオシド類には、２′−Ｃ−メチル−シチジン、２′−Ｃ−メチル−ウリジン、２′−Ｃ−メチル−アデノシン、２′−Ｃ−メチル−グアノシンおよび９−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−２，６−ジアミノプリンなどがあるが、これらに限定されるものではない。
【００７１】
「製薬上許容される」とは、担体、希釈剤または賦形剤が、製剤の他の成分と適合性でなければならず、それの被投与者に対して有害であってはならないことを意味する。
【００７２】
製薬上許容される担体とともに、本発明のヌクレオシド化合物およびそれの誘導体を含む医薬組成物も、本発明の範囲に含まれる。本発明の別の例には、上記のいずれかの化合物と製薬上許容される担体とを組み合わせることで製造される医薬組成物がある。本発明の別の例には、上記のいずれかの化合物および製薬上許容される担体とを組み合わせる段階を有する医薬組成物の製造方法がある。
【００７３】
本発明の範囲には、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスポリメラーゼ、特にＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害に有用な医薬組成物であって、有効量の本発明の化合物および製薬上許容される担体を含む組成物も含まれる。ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染、特にＨＣＶ感染の治療に有用な医薬組成物も本発明に含まれ、さらにはＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスポリメラーゼ、特にＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害方法およびＲＮＡ依存性ウィルス複製、特にＨＣＶ複製の治療方法も含まれる。さらに本発明は、治療上有効量のＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス、特にＨＣＶに対して活性である別の薬剤と組み合わせて、治療上有効量の本発明の化合物を含む医薬組成物に関するものでもある。ＨＣＶに対して活性な薬剤には、リバビリン、レボビリン、ビラミジン、チモシンα−１、ＨＣＶ  ＮＳ３セリンプロテアーゼの阻害剤、インターフェロン−α、ＰＥＧ化インターフェロン−α（ＰＥＧインターフェロン−α）、インターフェロン−αとリバビリンの組み合わせ、ＰＥＧインターフェロン−αとリバビリンの組み合わせ、インターフェロン−αとレボビリンの組み合わせ、ならびにＰＥＧインターフェロン−αとレボビリンの組み合わせなどがあるが、これらに限定されるものではない。インターフェロン−αには、組換えインターフェロン−α２ａ（ホフマン−ラロッシュ社（Hoffmann-LaRoche, Nutley, NJ）から入手可能なロフェロン（Roferon）インターフェロンなど）、インターフェロン−α２ｂ（シェリング社（Schering Corp., Kenilworth, NJ）から入手可能なイントロン（Intron）−Ａインターフェロンなど）、コンセンサスインターフェロンおよび精製インターフェロン−α製品などがあるが、これらに限定されるものではない。リバビリンおよびそれのＨＣＶに対する活性についての議論は、サンダースらの報告（J. O. Saunders and S. A. Raybuck, ″Inosine Monophosphate Dehydrogenase: Consideration of Structure, Kinetics, and Therapeutic Potential″, Ann. Rep. Med. Chem., 35: 201-210 (2000)）を参照する。
【００７４】
本発明の別の態様は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス複製、特にＨＣＶ複製の阻害、および／またはＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染、特にＨＣＶ感染の治療用の医薬製造における、ヌクレオシド化合物およびそれの誘導体ならびにそれの医薬組成物の使用を提供する。本発明のさらに別の態様は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス複製、特にＨＣＶ複製の阻害、および／またはＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染、特にＨＣＶ感染の治療用の医薬としての、ヌクレオシド化合物およびそれの誘導体ならびにそれの医薬組成物を提供する。
【００７５】
本発明の医薬組成物は、有効成分としての構造式Ｉの化合物またはそれの製薬上許容される塩を含有し、製薬上許容される担体および適宜に他の治療成分を含むこともできる。
【００７６】
その組成物には、経口、直腸、局所、非経口（皮下、筋肉および静脈）、眼球（眼科）、肺（経鼻もしくは口腔吸入）または経鼻投与に好適な組成物などがある。ただし、ある場合における最も好適な経路は、治療対象となる状態の性質および重度、ならびに有効成分の性質によって決まる。その組成物は簡便には、単位製剤で提供することができ、製薬業界で公知の方法によって製造することができる。
【００７７】
実際の使用において構造式Ｉの化合物は、従来の医薬配合法に従って、医薬担体と十分に混和して有効成分として組み合わせることができる。担体は、経口または非経口（静脈投与を含む）などの投与に望まれる剤型に応じて、非常に多様な形態を取り得る。経口製剤用組成物の製造においては、通常の医薬媒体を用いることができ、それには例えば、懸濁液、エリキシル剤および液剤のような経口液体製剤の場合には、水、グリコール類、オイル類、アルコール類、香味剤、保存剤、着色剤などがあり；あるいは例えば粉剤、硬および軟カプセルおよび錠剤などの経口固体製剤の場合には、デンプン類、糖類、微結晶セルロース、希釈剤、造粒剤、潤滑剤、結合剤、崩壊剤などの担体があり、液体製剤より固体製剤の方が好ましい。
【００７８】
投与が容易であることから、錠剤およびカプセルが最も有利な経口単位製剤を代表するものであり、その場合には固体の医薬担体を用いることは明らかである。所望に応じて、錠剤を標準的な水系もしくは非水系法によってコーティングすることができる。そのような組成物および製剤は、少なくとも０．１％の活性化合物を含むものでなければならない。当然のことながら、その組成物注の活性化合物のパーセントは変動し得るものであり、簡便にはその単位の重量の約２％〜約６０％とすることができる。そのような治療上有用な組成物における活性化合物の量は、有効な用量が得られる程度のものである。活性化合物はまた、例えば液体滴剤または噴霧剤として経鼻投与することもできる。
【００７９】
錠剤、丸薬、カプセルなどは、トラガカントガム、アカシア、コーンスターチもしくはゼラチンなどの結合剤；リン酸二カルシウムなどの賦形剤；コーンスターチ、ジャガイモデンプン、アルギン酸などの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤；ショ糖、乳糖もしくはサッカリンなどの甘味剤も含むことができる。単位製剤がカプセルである場合にそれは、上記の種類の材料以外に、脂肪油などの液体担体を含むことができる。
【００８０】
各種の他の材料が、コーティング剤として、あるいは単位製剤の物理形状を変えるために存在していても良い。例えば錠剤は、シェラック、糖またはその両方によってコーティングすることができる。シロップまたはエリキシル剤は、有効成分以外に、甘味剤としてのショ糖、保存剤としてのメチルおよびプロピルパラベン、色素およびチェリーもしくはオレンジ香味などの香味剤を含むことができる。
【００８１】
構造式Ｉの化合物は、非経口投与することもできる。これら活性化合物の液剤または懸濁液は、ヒドロキシ−プロピルセルロースなどの界面活性剤と好適に混合して水で調製することができる。グリセリン、液体ポリエチレングリコール類およびオイル中でのそれの混合物で、分散液を調製することもできる。通常の保管および使用条件下では、これらの製剤は、微生物の増殖を防止するために保存剤を含有する。
【００８２】
注射に好適な医薬剤型には、無菌の水溶液または分散液ならびに無菌注射溶液もしくは分散液の即時調製用の無菌粉剤などがある。いずれの場合も、その製剤は無菌でなければならず、容易に注射できる程度の流動性を有するものでなければならない。それは、製造および保管条件下で安定でなければならず、細菌および真菌などの微生物の汚染作用に対して防腐しなければならない。担体は、例えば水、エタノール、多価アルコール（例：グリセリン、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコール）、それらの好適な混合物ならびに植物油を含む溶媒または分散媒体であることができる。
【００８３】
哺乳動物、特にヒトに対して、有効な用量の本発明の化合物を提供するため、いずれかの好適な投与経路を用いることができる。例えば、経口、直腸、局所、非経口、眼球、肺、経鼻投与などを用いることができる。製剤には、錠剤、トローチ、分散液、懸濁液、液剤、カプセル、クリーム、軟膏、エアロゾルなどがある。好ましくは式Ｉの化合物は、経口投与する。
【００８４】
ヒトへの経口投与の場合に用量範囲は、分割投与で０．０１〜１０００ｍｇ／ｋｇである。１実施形態において用量範囲は、分割投与で０．１〜１００ｍｇ／ｋｇである。別の実施形態では用量範囲は、分割投与で０．５〜２０ｍｇ／ｋｇである。経口投与の場合、組成物は好ましくは、有効成分１．０〜１０００ｍｇ、特には治療対象患者への用量を症状に応じて調節するために、１、５、１０、１５、２０、２５、５０、７５、１００、１５０、２００、２５０、３００、４００、５００、６００、７５０、８００、９００および１０００ｍｇ含む錠剤またはカプセルの形態で提供される。
【００８５】
使用される有効成分の有効な用量は、用いられる特定の化合物、投与形態、治療される状態ならびに治療される状態の重度に応じて変動し得る。そのような用量は、当業者であれば容易に確認することができる。その投与法を調節して、至適な治療応答を得ることができる。
【００８６】
本発明の化合物は１以上の不斉中心を有することから、ラセミ体およびラセミ混合物、単独のエナンチオマー、ジアステレオマー混合物および個々のジアステレオマーとして得られる場合がある。本発明は、下記の構造式で示したような５員フラノース環についてβ−Ｄ−立体化学配置を有するヌクレオシド化合物、すなわち、５員フラノース環のＣ−１およびＣ−４での置換基がβ−立体化学配置（太字線によって示した「上」向き）を有するヌクレオシド化合物を包含するものである。
【００８７】
【化１９】
2005530843.tif 000015
【００８８】
本明細書に記載の化合物の一部はオレフィン二重結合を有するものであり、別段の断りがない限り、ＥおよびＺの両方の幾何異性体を含むものである。
【００８９】
本明細書に記載の化合物の一部は、ケト−エノール互変異体などの互変異体として存在する場合がある。個々の互変異体ならびにそれらの混合物は、構造式Ｉの化合物に包含される。本発明の化合物に包含されるケト−エノール互変異体の例には、以下のものなどがある。
【００９０】
【化２０】
2005530843.tif 000016
【００９１】
構造式Ｉの化合物は、例えばメタノールもしくは酢酸エチルまたはそれらの混合物のような好適な溶媒からの分別結晶によって、あるいは光学活性固定相を用いるキラルクロマトグラフィーによって、個々のジアステレオマーに分離することができる。
【００９２】
別法として、構造式Ｉの化合物の立体異性体は、光学的に純粋な原料または配置が既知の試薬を用いる立体特異的合成によって得ることができる。
【００９３】
構造式Ｉの本発明の化合物のフラノース環のＣ−２位およびＣ−３位にある置換基の立体化学は、置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４が互いに独立に、α（置換基「下向き」）またはβ（置換基「上向き」）のいずれかの配置を取り得ることを意味する波線によって示してある。フラノース環のＣ−１およびＣ−４でのように太線によって立体化学を示している場合、その置換基がβ−配置（置換基「上向き」）を有することを意味している。
【００９４】
【化２１】
2005530843.tif 000017
【００９５】
本発明の化合物は、製薬上許容される塩の形で投与することができる。「製薬上許容される塩」という用語は、無機もしくは有機塩基および無機もしくは有機酸などの製薬上許容される無毒性の塩基または酸から製造される塩を指す。「製薬上許容される塩」に包含される塩基性化合物の塩は、一般に遊離塩基を好適な有機もしくは無機酸と反応させることで製造される本発明の化合物の無毒性塩を指す。本発明の塩基性化合物の代表的な塩には、酢酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重炭酸塩、重硫酸塩、重酒石酸塩、ホウ酸塩、臭化物、カムシル酸塩、炭酸塩、塩化物、クラブラン酸塩、クエン酸塩、二塩酸塩、エデト酸塩、エジシル酸塩、エストル酸塩（estolate）、エシル酸塩（esylate）、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリルアルサニル酸塩、ヘキシルレゾルシン酸塩、ヒドラバミン、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、ヨウ化物、イソチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メチルブロマイド、メチル硝酸塩、メチル硫酸塩、粘液酸塩、ナプシル酸塩、硝酸塩、Ｎ−メチルグルカミンアンモニウム塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩（エンボネート（embonate））、パルミチン酸塩、パントテン酸塩、リン酸塩／二リン酸塩、ポリガラクツロン酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、硫酸塩、塩基性酢酸塩、コハク酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクレート（teoclate）、トシル酸塩、トリエチオジドおよび吉草酸塩などがあるが、これらに限定されるものではない。さらに、本発明の化合物が酸性部分を有する場合、それの好適な製薬上許容される塩には、アルミニウム、アンモニウム、カルシウム、銅、第二鉄、第一鉄、リチウム、マグネシウム、第二マンガン、第一マンガン、カリウム、ナトリウム、亜鉛の塩などの無機塩基から誘導される塩などがあるが、これらに限定されるものではない。特に好ましいものは、アンモニウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、カリウム塩およびナトリウム塩である。製薬上許容される有機無毒性塩基から誘導される塩には、１級、２級および３級アミン、環状アミン、ならびに塩基性イオン交換樹脂の塩などがあり、例えばアルギニン、ベタイン、カフェイン、コリン、Ｎ，Ｎ−ジベンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、２−ジエチルアミノエタノール、２−ジメチルアミノエタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−エチルモルホリン、Ｎ−エチルピペリジン、グルカミン、グルコサミン、ヒスチジン、ヒドラバミン、イソプロピルアミン、リジン、メチルグルカミン、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ポリアミン樹脂、プロカイン、プリン類、テオブロミン、トリエチルアミン、トリメチルアミン、トリプロピルアミン、トロメタミンなどの塩がある。
【００９６】
さらに、本発明の化合物にカルボン酸（−ＣＯＯＨ）基またはアルコール基が存在する場合、メチル、エチルもしくはピバロイルオキシメチルなどのカルボン酸誘導体の製薬上許容されるエステル、あるいは酢酸エステル、オクタン酸エステルもしくはマレイン酸エステルなどのアルコールのアシル誘導体を用いることができる。徐放製剤またはプロドラッグ製剤として使用するために、溶解度もしくは加水分解特性を変える上で当業界で公知のエステルおよびアシル基などがある。
【００９７】
本発明のヌクレオシド化合物および誘導体の製造
本発明のヌクレオシド化合物および誘導体は、ヌクレオシドおよびヌクレオチドの化学の実施において確立された合成法に従って製造することができる。本発明の化合物の製造において用いられる合成方法についての説明に関しては、タウンゼントの編著（″Chemistry of Nucleosides and Nucleotides″, L. B. Townsend, ed., Vols. 1-3, Plenum Press, 1988；その全内容が本明細書中に参考として援用されている）が挙げられる。
【００９８】
以下の実施例では、最終化合物あるいは本発明の最終化合物の製造で用いられる中間体の製造に関する詳細が記載された刊行物を引用している。下記の実施例に詳細に記載された手順に従って、本発明のヌクレオシド化合物を製造した。これらの実施例は、いかなる形でも本発明の範囲を限定するものではなく、そのように解釈すべきではない。ヌクレオシドおよびヌクレオチド合成の当業者には、下記の製造手順の条件および工程において公知の変更を行って、上記および他の本発明の化合物を製造可能であることは明らかであろう。別段の断りがない限り、温度は全て℃単位である。
【００９９】
【化２２】
2005530843.tif 000018
2005530843.tif 000019
【実施例１】
【０１００】
２−アミノ−９−（２−Ｃ−フルオロメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−３，９−ジヒドロプリン−６−オン（１−１０）
段階Ａ：３，５−ビス−Ｏ−（２，４−ジクロロベンジル）−１−Ｏ−メチル−α−Ｄ−リボフラノース（１−２）
２−Ｏ−アセチル−３，５−ビス−Ｏ−（２，４−ジクロロベンジル）−１−Ｏ−メチル−α−Ｄ−リボフラノース（１−１）［製造については、Helv. Chim. Acta 78: 486 (1995)参照］（５２．４ｇ、０．１０ｍｏｌ）のメタノール性Ｋ２ＣＯ３（５００ｍＬ、室温で飽和）中、混合物を室温で４５分間撹拌し、減圧下に濃縮した。油状残留物をＣＨ２Ｃｌ２（５００ｍＬ）に懸濁させ、水（３００ｍＬ＋２００ｍＬで５回）およびブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮して標題化合物（４９．０ｇ）を無色油状物として得た。それをそれ以上精製せずに下記の段階Ｂで用いた。
【０１０１】
【化２３】
2005530843.tif 000020
【０１０２】
段階Ｂ：３，５−ビス−Ｏ−（２，４−ジクロロベンジル）−１−Ｏ−メチル−α−Ｄ−エリスロ−ペントフラノース−２−ウロース（１−３）
デス−マーチンペルヨージナン（５０．０ｇ、１１８ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（３５０ｍＬ）懸濁液をアルゴン（Ａｒ）下で氷冷し、それに段階Ａからの化合物（３６．２ｇ、７５ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（２００ｍＬ）溶液を０．５時間かけて滴下した。反応混合物を０℃で０．５時間撹拌し、室温で３日間撹拌した。混合物を無水Ｅｔ２Ｏ（６００ｍＬ）で希釈し、Ｎａ２Ｓ２Ｏ３・５Ｈ２Ｏ（１８０ｇ）の飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１４００ｍＬ）中混合物を氷冷したものに投入した。層を分離し、有機層を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（６００ｍＬ）、水（８００ｍＬ）およびブライン（６００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒留去して、標題化合物（３４．２ｇ）を無色油状物として得た。それをそれ以上精製せずに、下記の段階Ｃで用いた。
【０１０３】
【化２４】
2005530843.tif 000021
2005530843.tif 000022
【０１０４】
段階Ｃ：３，５−ビス−Ｏ−（２，４−ジクロロベンジル）−２−Ｃ−ビニル−１−Ｏ−メチル−α−Ｄ−リボフラノース（１−４）
塩化セリウム・７水和物（５０ｇ、１３４．２ｍｍｏｌ）を予熱しておいた乳鉢で微粉砕し、撹拌機を取り付けた丸底フラスコに移した。フラスコを高真空下に１６０℃で終夜加熱した。真空をアルゴン下に解除し、フラスコを冷却して室温とした。無水ＴＨＦ（３００ｍＬ）をフラスコにカニューレで入れた。得られた懸濁液を室温で４時間撹拌し、冷却して−７８℃とした。ビニルマグネシウムブロマイド（１Ｍ  ＴＨＦ溶液、１２０ｍＬ、１２０ｍｍｏｌ）を加え、撹拌を−７８℃で２時間続けた。その懸濁液に、３，５−ビス−Ｏ−（２，４−ジクロロフェニルメチル）−１−Ｏ−メチル−α−Ｄ−エリスロ−ペントフラノース−２−ウロース（１４ｇ、３０ｍｍｏｌ）［実施例２段階Ｂから］の無水ＴＨＦ（１００ｍＬ）溶液を一定の撹拌下に滴下した。反応液を−７８℃で４時間撹拌した。飽和塩化アンモニウム溶液で反応停止し、室温とした。混合物をセライト層で濾過し、残留物をＥｔ２Ｏで洗浄した（５００ｍＬで２回）。有機層を分液し、水層をＥｔ２Ｏで抽出した（２００ｍＬで２回）。合わせた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して粘稠黄色油状物を得た。その油状物を、フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製した。標題化合物（６．７ｇ、１３．２ｍｍｏｌ）を淡黄色油状物として得た。
【０１０５】
段階Ｄ：２−アミノ−６−クロロ−９−［３，５−ビス−Ｏ−（２，４−ジクロロベンジル）−２−Ｃ−ビニル−β−Ｄ−リボフラノシル］−９Ｈ−プリン（１−５）
段階Ａからの化合物（１−４）（６．４ｇ、１２．６ｍｍｏｌ）の無水塩化メチレン（１５０ｍＬ）溶液に−２０℃で、３０％ＨＢｒのＡｃＯＨ溶液（２０ｍＬ、７５．６ｍｍｏｌ）を滴下する。得られた溶液を−１０℃〜０℃で４時間撹拌し、減圧下に留去し、無水トルエンと共留去する（４０ｍＬで３回）。油状残留物を無水アセトニトリル（１００ｍＬ）に溶かし、２−アミノ−６−クロロ−９Ｈ−プリン（３当量）のナトリウム塩のアセトニトリル溶液（２−アミノ−６−クロロ−９Ｈ−プリン（３当量）および水素化ナトリウム（３当量）からin situで発生）に−２０℃で加える。得られた混合物を室温とし、室温で２４時間撹拌する。混合物を溶媒留去して乾固させ、水に取り、ＥｔＯＡｃで抽出する（３００ｍＬで２回）。合わせた有機抽出液をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、留去する。粗生成物を、１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを溶離液とするシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物１−５を得る。
【０１０６】
段階Ｅ：２−（イソブチリルアミノ）−６−クロロ−９−［３，５−ビス−Ｏ−（２，４−ジクロロベンジル）−２−Ｃ−ビニル−β−Ｄ−リボフラノシル］−９Ｈ−プリン（１−６）
段階Ｄからの化合物（１−５）を無水ピリジンに溶かし、冷却して０℃とする。イソブチリルクロライド（１．５当量）の無水塩化メチレン溶液を加え、反応液を室温でアルゴン下に２４時間撹拌する。反応混合物を濃縮し、残留物についてシリカゲルクロマトグラフィーを行って、標題化合物１−６を得る。
【０１０７】
段階Ｆ：２−（イソブチリルアミノ）−６−クロロ−９−［３，５−ビス−Ｏ−（２，４−ジクロロベンジル）−２−Ｃ−ヒドロキシメチル−β−Ｄ−リボフラノシル］−９Ｈ−プリン（１−７）
段階Ｅからの化合物の１，４−ジオキサン溶液に、Ｎ−メチルモルホリン−Ｎ−オキサイド（３当量）および四酸化オスミウム（４％水溶液、０．１当量）を加える。混合物を暗所で１４時間撹拌する。沈殿をフィルター助剤による濾過によって除去し、水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出する。ＥｔＯＡｃ層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下に濃縮する。油状残留物を塩化メチレンに取り、ＮａＩＯ４／シリカゲル（１ｇ／原料１００ｍｇ）と１２時間撹拌する。シリカゲルを濾去し、残留物を留去し、純粋エタノールに取る。溶液を氷浴で冷却し、水素化ホウ素ナトリウム（５当量）を少量ずつ加える。得られた混合物を室温で４時間撹拌し、ＥｔＯＡｃで希釈する。有機層を水、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥する。溶媒を留去によって除去し、残留物をシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物１−７を得る。
【０１０８】
段階Ｇ：２−（イソブチリルアミノ）−６−クロロ−９−［３，５−ビス−Ｏ−（２，４−ジクロロベンジル）−２−Ｃ−フルオロメチル−β−Ｄ−リボフラノシル］−９Ｈ−プリン（１−８）
段階Ｆからの化合物の無水塩化メチレン溶液にアルゴン下で、４−ジメチルアミノピリジン（０．１当量）およびトリエチルアミン（３当量）を加える。溶液を冷却して−１０℃とし、無水トリフルオロメタンスルホン酸（１．２当量）を加える。反応液を冷却下に１時間撹拌し、氷冷飽和ＮａＨＣＯ３溶液、氷水、氷冷ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下に濃縮する。残留物を無水ＴＨＦ（５ｍＬ）に溶かし、氷浴で冷却する。テトラブチルアンモニウムフルオライド（１Ｍ  ＴＨＦ溶液、１０当量）を加え、混合物を室温で４時間撹拌する。溶媒を減圧下に留去し、残留物を塩化メチレンに取り、飽和ＮａＨＣＯ３溶液、水およびブラインで洗浄する。塩化メチレン層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下に濃縮し、残留物についてシリカゲルでのクロマトグラフィーを行って標題化合物１−８を得る。
【０１０９】
段階Ｈ：２−アミノ−９−［３，５−ビス−Ｏ−（２，４−ジクロロベンジル）−２−Ｃ−フルオロメチル−β−Ｄ−リボフラノシル］−３，９−ジヒドロプリン−６−オン（１−９）
段階Ｇからの化合物を最少量の１，４−ジオキサンに溶かす。４Ｎ  ＮａＯＨ（１，４−ジオキサンに対して同容量）を加え、反応液を４時間還流する。反応液を冷却して室温とし、４Ｎ  ＨＣｌで中和する。溶媒を減圧下に留去し、残留物をシリカゲルカラムに加える。標題化合物をメタノールおよび塩化メチレンの組合せで溶離する。適当な分画を合わせ、減圧下に留去して標題化合物１−９を得る。
【０１１０】
段階Ｉ：２−アミノ−９−（２−Ｃ−フルオロメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−３，９−ジヒドロプリン−６−オン（１−１０）
段階Ｈからの化合物を１：１メタノール／塩化メチレンに取り、混合物を１０％Ｐｄ／Ｃ（１重量当量）の存在下に１２時間水素化する。触媒をフィルター助剤での濾過によって除去し、フィルターを多量のメタノールで洗浄する。合わせた濾液および洗浄液を減圧下に留去し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して標題化合物１−１０を得る。
【０１１１】
生物学的アッセイ
ＨＣＶ  ＮＳ５ＢポリメラーゼおよびＨＣＶ複製の阻害を測定するのに用いたアッセイについて、以下に説明する。
【０１１２】
本発明の化合物のＨＣＶ  ＮＳ５ＢＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＲｄＲｐ）阻害剤としての有効性を、以下のアッセイで測定した。
【０１１３】
Ａ．ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼ阻害アッセイ
このアッセイを用いて、本発明のヌクレオシド誘導体がヘテロメリックＲＮＡ鋳型上のＣ型肝炎ウィルス（ＨＣＶ）のＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＮＳ５Ｂ）の酵素活性を阻害する能力を測定した。
【０１１４】
手順
アッセイ緩衝液条件：（５０μＬ−総量／反応）
２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．５
５０μＭ  ＥＤＴＡ
５ｍＭ  ＤＴＴ
２ｍＭ  ＭｇＣｌ２
８０ｍＭ  ＫＣｌ
０．４Ｕ／μＬ  ＲＮＡｓｉｎ（Promega、原液は４０単位／μＬである）
０．７５μｇ  ｔ５００（Ｃ型肝炎ゲノムのＮＳ２／３領域からの配列によるＴ７流出（runoff）転写を用いて得た５００−ｎｔＲＮＡ）
１．６μｇ  精製Ｃ型肝炎ＮＳ５Ｂ（Ｃ−末端切断した２１アミノ酸で形成）
１μＭＡ、Ｃ、Ｕ、ＧＴＰ（ヌクレオシド三リン酸混合物）
［α−３２Ｐ］−ＧＴＰまたは［α−３３Ｐ］−ＧＴＰ。
【０１１５】
化合物については、最終濃度１００μＭまでの各種濃度で試験を行った。
【０１１６】
酵素および鋳型ｔ５００を含む適切な容量の反応緩衝液を調製した。本発明のヌクレオシド誘導体をピペットを用いて９６ウェルプレートのウェルに入れた。放射能標識したＧＴＰを含むヌクレオシド三リン酸（ＮＴＰ）の混合物を調製し、ピペットで９６ウェルプレートに入れた。酵素−鋳型反応溶液を加えることで反応開始し、室温で１〜２時間反応を進行させた。
【０１１７】
０．５Ｍ  ＥＤＴＡ、ｐＨ８．０  ２０μＬを加えることで反応を停止した。反応停止溶液をＮＴＰに加えてから反応緩衝液を加えるブランク反応を含めた。
【０１１８】
反応停止した反応液５０μＬをＤＥ８１フィルター円板（ワットマン（Whatman））にスポット添加し、３０分間乾燥させた。フィルターを０．３Ｍギ酸アンモニウムｐＨ８で洗浄した（洗浄液１ｍＬ中のｃｐｍが１００未満となるまで１５０ｍＬ／洗浄で実施する。通常は６回の洗浄）。フィルターについて、シンチレーションカウンターにおいて５ｍＬシンチレーション液中でのカウンティングを行った。
【０１１９】
阻害パーセントを、阻害％＝［１−（試験反応でのｃｐｍ−ブランクでのｃｐｍ）／（対照反応でのｃｐｍ−ブランクでのｃｐｍ）］×１００という式に従って計算した。
【０１２０】
ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼアッセイで調べた代表的化合物は、１００μＭ未満のＩＣ５０値を示した。
【０１２１】
Ｂ．ＨＣＶ  ＲＮＡ複製阻害アッセイ
本発明の化合物について、サブゲノムＨＣＶレプリコンを含む培養肝癌（ＨｕＨ−７）細胞におけるＣ型肝炎ウィルスＲＮＡの複製に影響する能力も評価した。このアッセイの詳細について、以下に説明する。このレプリコンアッセイは、ローマンらの報告に記載の方法の変法である（V. Lohmann, F. Korner, J-O. Koch, U. Herian, L. Theilmann, and R. Bartenschlager, ″Replication of a Sub-genomic Hepatitis C Virus RNAs in a Hepatoma Cell Line″, Science 285: 110 (1999)）。
【０１２２】
プロトコール
このアッセイは、in situでのリボヌクレアーゼ保護、シンチレーション近似に基づくプレートアッセイ（ＳＰＡ）であった。細胞１００００〜４００００個を、９６ウェルのサイトスター（cytostar）プレート（Amersham）で、０．８ｍｇ／ｍＬのＧ４１８を含む培地１００〜２００μＬ中で平板培養した。０〜１８時間の時点で、１％ＤＭＳＯ中１００μＭまでの各種濃度で化合物を細胞に加え、次に２４〜９６時間培養を行った。細胞を固定し（２０分、１０％ホルマリン）、浸透性とし（２０分、０．２５％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００／ＰＢＳ）、ＲＮＡウィルスゲノムに含まれている（＋）鎖ＮＳ５Ｂ（または他の遺伝子）に対して相補性である一本鎖３３Ｐ  ＲＮＡプローブでハイブリダーゼーションを行った（終夜、５０℃）。細胞を洗浄し、ＲＮＡｓｅで処理し、洗浄し、加熱して６５℃とし、トップカウント（Top-Count）でカウンティングを行った。複製の阻害を、毎分カウント数（ｃｐｍ）における低下として読み取った。
【０１２３】
サブゲノムレプリコンを含むように選択したヒトＨｕＨ−７肝癌細胞は、ＨＣＶ５′非翻訳領域（ＮＴＲ）、ネオマイシン選択可能マーカー、ＥＭＣＶ  ＩＲＥＳ（内部リボソーム侵入部位）およびＨＣＶ非構造蛋白ＮＳ３〜ＮＳ５Ｂからなる細胞質ＲＮＡとそれに続く３′ＮＴＲを有する。
【０１２４】
複製アッセイで調べた代表的な化合物は、１００μＭ未満のＥＣ５０値を示した。
【０１２５】
本発明のヌクレオシド誘導体について、以下に記載のカウンタースクリーニング（counterscreen）で、細胞傷害性および抗ウィルス特異性の評価も行った。
【０１２６】
Ｃ．カウンタースクリーニング
本発明のヌクレオシド誘導体がヒトＤＮＡポリメラーゼを阻害する能力を、以下のアッセイで測定した。
【０１２７】
ａ．ヒトＤＮＡポリメラーゼαおよびβの阻害
反応条件
反応容量５０μＬ。
【０１２８】
反応緩衝液成分
２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５
２００μｇ／ｍＬウシ血清アルブミン
１００ｍＭ  ＫＣｌ
２ｍＭ  ｐ−メルカプトエタノール
１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２
１．６μＭ  ｄＡ、ｄＧ、ｄＣ、ｄＴＴＰ
α−３３Ｐ−ｄＡＴＰ。
【０１２９】
酵素および鋳型
０．０５ｍｇ／ｍＬギャップ化（gapped）魚精子ＤＮＡ鋳型
０．０１Ｕ／μＬ  ＤＮＡポリメラーゼαまたはβ。
【０１３０】
ギャップ化魚精子ＤＮＡ鋳型の製造
活性化魚精子ＤＮＡ（ＵＳＢ７００７６）５００μＬに、１Ｍ  ＭｇＣｌ２  ５μＬを加える。
【０１３１】
昇温させて３７℃とし、６５Ｕ／μＬのエキソヌクレアーゼＩＩＩ（ギブコＢＲＬ（GibcoBRL）１８０１３−０１１）３０μＬを加える。
【０１３２】
３７℃で５分間インキュベートする。
【０１３３】
６５℃で１０分間加熱することで、反応を終了させる。
【０１３４】
２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５で平衡としたバイオ−スピン（Bio-spin）６クロマトグラフィーカラム（バイオ−ラッド（Bio-Rad）７３２−６００２）に小分けサンプル５０〜１００μＬを負荷する。
【０１３５】
１０００×ｇで４分間遠心することで溶離を行う。
【０１３６】
溶出液を合わせ、２６０ｎｍでの吸光度を測定して、濃度を求める。
【０１３７】
ＤＮＡ鋳型を適切な容量の２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５で希釈し、酵素を２ｍＭ  β−メルカプトエタノールおよび１００ｍＭ  ＫＣｌを含む適切な容量の２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌで希釈した。鋳型および酵素をピペットで微量遠心管または９６ウェルプレートに入れた。酵素を含まないブランク反応液および被験化合物を含まない対照反応液も、それぞれ酵素希釈緩衝液および被験化合物溶媒を用いて調製した。上記のような成分を含む反応緩衝液によって、反応を開始した。反応液を３７℃で１時間インキュベートした。０．５Ｍ  ＥＤＴＡ  ２０μＬを加えることで反応停止した。反応停止した反応液５０μＬをワットマンＤＥ８１フィルター円板にスポット添加し、風乾させた。洗浄液１ｍＬが＜１００ｃｐｍとなるまで、フィルター円板を０．３Ｍギ酸アンモニウム１５０ｍＬで繰り返し洗浄した。円板を純粋エタノール１５０ｍＬで２回、無水エーテル１５０ｍＬで１回洗浄し、乾燥し、シンチレーション液５ｍＬ中でカウンティングした。
【０１３８】
阻害％＝［１−（試験反応でのｃｐｍ−ブランクでのｃｐｍ）／（対照反応でのｃｐｍ−ブランクでのｃｐｍ）］×１００という式に従って、阻害パーセントを計算した。
【０１３９】
ｂ．ヒトＤＮＡポリメラーゼγの阻害
２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ８，２ｍＭメルカプトエタノール、５０ｍＭ  ＫＣｌ、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２および０．１μｇ／μＬ  ＢＳＡを含む緩衝液中で０．５ｎｇ／μＬ酵素；１０μＭ  ｄＡＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＣＴＰおよびＴＴＰ；２μＣｉ／反応［α−３３Ｐ］−ｄＡＴＰおよび０．４μｇ／μＬ活性化魚精子ＤＮＡ（US Biochemicalから購入）を含む反応で、ヒトＤＮＡポリメラーゼγ阻害の能力を測定した。反応を３７℃で１時間進行させ、最終濃度１４２ｍＭまで０．５Ｍ  ＥＤＴＡを加えることで停止した。アニオン交換フィルター結合およびシンチレーションカウンティングによって、生成物形成を定量した。化合物について、５０μＭまで試験を行った。
【０１４０】
阻害％＝［１−（試験反応でのｃｐｍ−ブランクでのｃｐｍ）／（対照反応でのｃｐｍ−ブランクでのｃｐｍ）］×１００という式に従って、阻害パーセントを計算した。
【０１４１】
本発明のヌクレオシド誘導体がＨＩＶ感染力およびＨＩＶ伝播を阻害する能力を、以下のアッセイで測定した。
【０１４２】
ｃ．ＨＩＶ感染力アッセイ
低バックグラウンドβ−ガラクトシダーゼ（β−ｇａｌ）発現に関して選択したＣＸＣＲ４およびＣＣＲ５の両方を発現するＨｅＬａ  Ｍａｇｉ細胞の変異株を用いてアッセイを行った。細胞を４８時間感染させ、組み込まれたＨＩＶ−１  ＬＴＲプロモーターからのβ−ｇａｌ産生を、化学発光基質（Galactolight Plus, Tropix, Bedfordm, MA）を用いて定量した。１００μＭから開始する２倍連続希釈で、阻害剤の力価測定を行った（２連で）。各濃度での阻害パーセントを、対照感染との関連で計算した。
【０１４３】
ｄ．ＨＩＶ伝播の阻害
本発明の化合物がヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）の伝播を阻害する能力を、米国特許第５４１３９９９号（１９９５年５月９日）およびバッカらの報告（J. P. Vacca, et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 91: 4096-4100 (1994)）（これらは、その全内容が本明細書中に参考として援用されている）に記載の方法によって測定した。
【０１４４】
本発明のヌクレオシド誘導体については、下記のアッセイに記載の方法に従って、ＭＴＳ細胞に基づくアッセイでサブゲノムＨＣＶレプリコンを含む培養肝癌（ＨｕＨ−７）細胞に対する細胞傷害性のスクリーニングも行った。ＨｕＨ−７細胞系については、ナカバヤシらの報告（H. Nakabayashi, et al., Cancer Res., 42: 3858 (1982)）に記載されている。
【０１４５】
ｅ．細胞傷害性アッセイ
３日間のインキュベーションでの懸濁培養用には細胞約１．５×１０５個／ｍＬ、３日間のインキュベーションでの付着培養用には細胞５．０×１０４個／ｍＬの濃度で、細胞培養物を適切な培地中で製造した。細胞培養物９９μＬを９６ウェル組織培養液処理プレートのウェルに移し入れ、１００倍最終濃度の被験化合物のＤＭＳＯ溶液１μＬを加えた。プレートを、所定の期間にわたって３７℃および５％ＣＯ２でインキュベートした。インキュベーション期間終了後、アッセイ試薬（CellTiter 96 Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay reagent）（ＭＴＳ）（Promega）２０μＬを各ウェルに加え、さらに３時間までの期間にわたって、プレートを３７℃および５％ＣＯ２でインキュベートした。プレートを撹拌して十分に混和し、４９０ｎｍでの吸光度をプレート読取装置を用いて読み取った。懸濁培養細胞の標準曲線を、ＭＴＳ試薬添加直前の既知細胞数で作成した。代謝活性細胞は、ＭＴＳをホルマザンに還元する。ホルマザンは、４９０ｎｍで吸収を示す。化合物存在下での４９０ｎｍでの吸光度を、化合物を添加しなかった細胞での吸光度と比較した。
【０１４６】
参考文献：Cory, A. H. et al., ″Use of an aqueous soluble tetrazolium/formazan assay for cell growth assays in culture″, Cancer Commun. 3: 207 (1991)。
【０１４７】
以下のアッセイを用いて、他のＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスに対する本発明の化合物の活性を測定した。
【０１４８】
ａ．ライノウィルスに対する化合物のin vitro抗ウィルス活性の測定（細胞障害効果阻害アッセイ）
アッセイ条件は、シドウェルおよびハフマンによる論文（Sidwell and Huffman, ″Use of disposable microtissue culture plates for antiviral and interferon induction studies″, Appl. Microbiol. 22: 797-801 (1971)）に記載されている。
【０１４９】
ウィルス
シドウェルおよびハフマンの参考文献に記載の方法に従って、ライノウィルス２型（ＲＶ−２）ＨＧＰ株を、ＫＢ細胞および培地（０．１％ＮａＨＣＯ３、抗生物質なし）とともに用いた。ＡＴＣＣから入手したウィルスは、軽度の急性熱性上気道病の成人男性の咽頭スワブからのものであった。
【０１５０】
ライノウィルス９型（ＲＶ−９）２１１株およびライノウィルス１４型（ＲＶ−１４）Ｔｏｗ株も、ＡＴＣＣ（American Type Culture Collection, Rockville, MD）から入手した。ＲＶ−９は、ヒト咽頭うがい液からのものであり、ＲＶ−１４は気道病の成人男性の咽頭スワブからのものであった。これらのウィルスはいずれも、ヒト頸部類上皮癌細胞であるＨｅＬａ  Ｏｈｉｏ−１細胞（Dr. Fred Hayden, Univ. of VA）とともに用いた。５％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）および０．１％ＮａＨＣＯ３を含むＭＥＭ（イーグル最小必須培地）を、増殖培地として用いた。
【０１５１】
これら３種類のウィルスについての抗ウィルス試験培地は、５％ＦＢＳ、０．１％ＮａＨＣＯ３、５０μｇゲンタマイシン／ｍＬおよび１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２を含むＭＥＭとした。
【０１５２】
本発明の化合物のアッセイを行う上での最高濃度は、２０００μｇ／ｍＬとした。被験化合物から約５分後に、アッセイプレートにウィルスを加えた。適切な対照についても行った。アッセイプレートを、加湿空気および５％ＣＯ２で３７℃にてインキュベートした。形態学的変化に関して顕微鏡観察にて、対照細胞で細胞傷害性をモニタリングした。ウィルスＣＰＥデータおよび細胞傷害性対照データの回帰分析によって、ＥＤ５０（５０％有効用量）およびＣＣ５０（５０％細胞傷害性濃度）を得た。ＳＩ＝ＣＣ５０÷ＥＤ５０という式によって、選択性指数（ＳＩ）を計算した。
【０１５３】
ｂ．デング熱ウィルス、バンジウィルスおよび黄熱病ウィルスに対する化合物のin vitro抗ウィルス活性の測定（ＣＰＥ阻害アッセイ）
アッセイの詳細については、上記のシドウェルおよびハフマンの参考文献に記載されている。
【０１５４】
ウィルス
デング熱ウィルス２型ニューギニア株を、疾病対策センターから入手した。２系統のアフリカミドリザル腎臓細胞を用いて、ウィルスを培養し（ベロ）、抗ウィルス試験を行った（ＭＡ−１０４）。感染マウス脳から得た黄熱病ウィルス１７Ｄ株および南アフリカの発熱した少年の血清から単離したバンジウィルスＨ３３６株のいずれも、ＡＴＣＣから入手した。ベロ細胞を、これら両方のウィルスとともに用い、アッセイに供した。
【０１５５】
細胞および培地
ＭＡ−１０４細胞（BioWhittaker, Inc., Walkersville, MD）およびベロ細胞（ＡＴＣＣ）を、５％ＦＢＳおよび０．１％ＮａＨＣＯ３を含み、抗生物質を含まない培地１９９中で用いた。デング熱ウィルス、黄熱病ウィルスおよびバンジウィルス用のアッセイ培地は、ＭＥＭ、２％ＦＢＳ、０．１８％ＮａＨＣＯ３および５０μｇゲンタマイシン／ｍＬとした。
【０１５６】
本発明の化合物の抗ウィルス試験を、シドウェルおよびハフマンの参考文献に従い、上記のライノウィルス抗ウィルス試験と同様にして行った。これら各ウィルスについて、５〜６日後に十分な細胞障害効果（ＣＰＥ）読取が行われた。
【０１５７】
ｃ．西ナイルウィルスに対する化合物のin vitro抗ウィルス活性の測定（ＣＰＥ阻害アッセイ）
アッセイの詳細については、上記で引用のシドウェルおよびハフマンの参考文献に記載されている。カラス脳由来の西ナイルウィルスニューヨーク単離株を、疾病対策センターから入手した。上記の方法に従って、ベロ細胞を増殖させ、使用した。試験培地は、ＭＥＭ、１％ＦＢＳ、０．１％ＮａＨＣＯ３および５０μｇゲンタマイシン／ｍＬとした。
【０１５８】
ライノウィルス活性についてのアッセイに用いたものと同様であるシドウェルおよびはハフマンの方法に従って、本発明の化合物の抗ウィルス試験を行った。５〜６日後に、十分な細胞障害効果（ＣＰＥ）読取が行われた。
【０１５９】
ｄ．ライノウィルス、黄熱病ウィルス、デング熱ウィルス、バンジウィルスおよび西ナイルウィルスに対する化合物のin vitro抗ウィルス活性の測定（ニュートラルレッド取り込みアッセイ）
上記のＣＰＥ阻害アッセイを行った後、文献（″Microtiter Assay for Interferon: Microspectrophotometric Quantitation of Cytopathic Effect″, Appl. Environ. Microbiol. 31: 35-38 (1976)）に記載の別の細胞障害検出法を用いた。ＥＬ３０９型微量プレート読取装置（Bio-Ｔek Instruments Inc.）を用いて、アッセイプレートの読取を行った。ＥＤ５０およびＣＤ５０を上記の方法に従って計算した。
【０１６０】
医薬製剤の例
本発明の化合物の経口組成物の具体的な実施形態として、実施例１の化合物５０ｍｇを、十分に微粉砕した乳糖とともに製剤して総量５８０〜５９０ｍｇを得て、サイズＯ硬ゼラチンカプセルに充填する。
【０１６１】
以上、本発明の具体的な実施形態を参照しながら、本発明についての説明を行ったが、当業者には、本発明の精神および範囲を逸脱しない限りにおいて、各種の変更、修正および置き換えが可能であることは明らかであろう。例えば、ＨＣＶ感染の重篤度に関して治療対象のヒトの応答における変動の結果として、上記のような好ましい用量以外の有効な用量が適用可能な場合がある。同様に、認められる薬理応答は、選択される特定の活性化合物または医薬担体の有無、ならびに製剤の種類および用いられる投与形態に応じて変動し得るものであり、結果におけるそのような予想される変動もしくは差異は、本発明の目的および実務に従って想到されるものである。従って、本発明は添付の特許請求の範囲によってのみ限定され、そのような特許請求の範囲は妥当な限り広く解釈すべきものである。
【国際調査報告】
2005530843.tif 000028