(57)【要約】本発明は、電流あるいは電界治療で疾患を治療するための方法および装置に関する。本発明は、印加電流あるいは外部電界によって誘導された電流を用い、細胞膜を横切るイオンの動きを操作し、イオン濃度を変更する。本発明は、例えば過増殖・心臓血管疾患の治療や、ストレスの影響の改善に実益がある。
2005534461.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生物あるいはその一部の細胞におけるイオンの異常な集中を引き起こす疾患、あるいはその異常な集中によって引き起こされた疾患を治療または予防する方法であって、
前記細胞に正常のイオン濃度を回復させることによって前記疾患を治療または予防する方法であって、それには、前記生物の細胞膜上に約０．００１ｍＡ/ｍ２から約１５ｍＡ/ｍ２の平均誘導電流密度を生成させる外部電界をその生物またはその一部に加えることが含まれる。
【請求項２】
前記イオンはカルシウムイオンを含む、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
更に、前記生物またはその一部に、カルシウム・サプリメント、ビタミンＤ・サプリメント、レクチン・サプリメントまたはこれらの組合せを供給する、請求項1に記載の方法。
【請求項４】
前記イオンはカルシウムイオンを含む、請求項3に記載の方法。
【請求項５】
前記平均誘導電流密度は、約０．０１ｍＡ/ｍ２から約２ｍＡ/ｍ２である、請求項1ないし４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
前記生物は人間であり、前記電界は、その人間の細胞の細胞膜上に約１０分から約２４０分の間連続して前記平均誘導電流密度を生成する、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
更に、その後前記外部電界を前記人間またはその一部に繰り返し加えると共に、前記平均誘導電流密度を約３０分から約９０分の間の連続して追加発生させる、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
請求項１記載の方法を実行するための装置であって、該装置は電界治療機器であり、この電界治療機器は、
(a)  主電極および対向電極と、
(b)  前記電極対に電圧を印加するための電圧発生機と、
(c)  前記電圧を変化させることによって、あるいは前記対向電極と前記生物あるいはその一部との距離を変化させることによって、前記外部電界を制御する誘導電流発生機と、
(d)  前記電圧発生機を駆動するための電源と
を含む。
【請求項９】
前記主電極は前記生物あるいはその一部と接触しない、請求項８に記載の装置。
【請求項１０】
増殖細胞疾患を治療する方法であって、
生物あるいはその一部の細胞膜を横切るようにイオンのフラックスを変化させるようにする方法であって、それには、前記生物またはその一部に  前記細胞膜上に約０．１ｍＡ/ｍ２から約２ｍＡ/ｍ２の平均誘導電流密度を生成する外部電界を加えることが含まれる。
【請求項１１】
前記平均誘導電流密度は、約０．２ｍＡ/ｍ２から約１．２ｍＡ/ｍ２である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記平均誘導電流密度は、約０．２９ｍＡ/ｍ２から約１．１２ｍＡ/ｍ２である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記イオンはカルシウムイオンを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
更に、前記生物またはその一部に、カルシウム・サプリメント、ビタミンＤ・サプリメント、レクチン・サプリメントまたはこれらの組合せを供給する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
前記レクチン・サプリメントが供給され、該レクチン・サプリメントはコンカナバリンAまたは小麦胚芽凝集素を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記増殖細胞は分化した線維芽細胞を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１７】
前記生物は人間であり、前記電界は、その人間の細胞の細胞膜上に約10分から約240分の間連続して前記平均誘導電流密度を生成する、請求項１１または１４に記載の方法。
【請求項１８】
更に、その後前記外部電界を前記人間またはその一部に繰り返し加えると共に、前記平均誘導電流密度を約３０分から約９０分の間の連続して追加発生させる、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記人間は病院またはクリニックのベッドに配置される、請求項18に記載の方法。
【請求項２０】
請求項１１に記載の方法を実行するための装置であって、該装置は電界治療機器であり、この電界治療機器は、
(a)  主電極および対向電極と、
(b)  前記電極対に電圧を印加するための電圧発生機と、
(c)  前記電圧を変化させることによって、あるいは前記対向電極と前記生物あるいはその一部との距離を変化させることによって、前記外部電界を制御する誘導電流発生機と、
(d)  前記電圧発生機を駆動するための電源と
を含む。
【請求項２１】
前記主電極は前記生物あるいはその一部と接触しない、請求項２０に記載の装置。
【請求項２２】
電解質平衡異常を治療する方法であって、
生物あるいはその一部の細胞膜を横切るようにイオンのフラックスを変化させるようにする方法であって、それには、前記生物またはその一部に  前記細胞膜上に約０．４ｍＡ/ｍ２から約６．０ｍＡ/ｍ２の平均誘導電流密度を生成する外部電界を加えることが含まれる。
【請求項２３】
前記平均誘導電流密度は、約０．４ｍＡ/ｍ２から約５．６ｍＡ/ｍ２である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記平均誘導電流密度は、約０．４３ｍＡ/ｍ２から約５．５５ｍＡ/ｍ２である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記イオンはカルシウムイオンを含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
更に、前記生物またはその一部に、カルシウム・サプリメント、ビタミンＤ・サプリメント、レクチン・サプリメントまたはこれらの組合せを供給する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２７】
前記レクチン・サプリメントが供給され、該レクチン・サプリメントはコンカナバリンAまたは小麦胚芽凝集素を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記生物は人間であり、前記電界は、その人間の細胞の細胞膜上に約１０分から約２４０分の間連続して前記平均誘導電流密度を生成する、請求項２３または２６に記載の方法。
【請求項２９】
更に、その後前記外部電界を前記人間またはその一部に繰り返し加えると共に、前記平均誘導電流密度を約３０分から約９０分の間の連続して追加発生させる、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記人間は病院またはクリニックのベッドに配置される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
請求項２２に記載の方法を実行するための装置であって、該装置は電界治療機器であり、この電界治療機器は、
(a)  主電極および対向電極と、
(b)  前記電極対に電圧を印加するための電圧発生機と、
(c)  前記電圧を変化させることによって、あるいは前記対向電極と前記生物あるいはその一部との距離を変化させることによって、前記外部電界を制御する誘導電流発生機と、
(d)  前記電圧発生機を駆動するための電源と
を含む。
【請求項３２】
前記主電極は前記生物あるいはその一部と接触しない、請求項３１に記載の装置。
【請求項３３】
血清カルシウム濃度に関連した疾患を治療する方法であって、
生物あるいはその一部の細胞膜を横切るようにイオンのフラックスを変化させるようにする方法であって、それには、前記生物またはその一部に  前記細胞膜上に約０．３ｍＡ/ｍ２から約０．６ｍＡ/ｍ２の平均誘導電流密度を生成する外部電界を加えることが含まれる。
【請求項３４】
前記平均誘導電流密度は、約０．４ｍＡ/ｍ２から約０．５ｍＡ/ｍ２である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記平均誘導電流密度は、約０．４２ｍＡ/ｍ２である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
更に、前記生物またはその一部に、カルシウム・サプリメント、ビタミンＤ・サプリメント、レクチン・サプリメントまたはこれらの組合せを供給する、請求項３３に記載の方法。
【請求項３７】
前記レクチン・サプリメントが供給され、該レクチン・サプリメントはコンカナバリンAまたは小麦胚芽凝集素を含む、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記生物は人間であり、前記電界は、その人間の細胞の細胞膜上に約１０分から約２４０分の間連続して前記平均誘導電流密度を生成する、請求項３４または３６に記載の方法。
【請求項３９】
更に、その後前記外部電界を前記人間またはその一部に再び加えると共に、前記平均誘導電流密度を約３０分から約９０分の間の連続して追加発生させる、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記人間は病院またはクリニックのベッドに配置される、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
請求項３３に記載の方法を実行するための装置であって、該装置は電界治療機器であり、この電界治療機器は、
(a)  主電極および対向電極と、
(b)  前記電極対に電圧を印加するための電圧発生機と、
(c)  前記電圧を変化させることによって、あるいは前記対向電極と前記生物あるいはその一部との距離を変化させることによって、前記外部電界を制御する誘導電流発生機と、
(d)  前記電圧発生機を駆動するための電源と
を含む。
【請求項４２】
前記主電極は前記生物あるいはその一部と接触しない、請求項４１に記載の装置。
【請求項４３】
ACTHまたはコルチゾールのレベルを減じる方法であって、
生物あるいはその一部の細胞膜を横切るようにイオンのフラックスを変化させるようにする方法であって、それには、前記生物またはその一部に  前記細胞膜上に約０．０３ｍＡ/ｍ２から約１２ｍＡ/ｍ２の平均誘導電流密度を生成する外部電界を加えることが含まれる。
【請求項４４】
前記平均誘導電流密度は、約０．０３５ｍＡ/ｍ２から約１１．１ｍＡ/ｍ２である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記平均誘導電流密度は、約０．０３５から約０．５ｍＡ/ｍ２である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
更に、前記イオンはカルシウム・イオンを含み、前記方法は、更に前記生物またはその一部に、カルシウム・サプリメント、ビタミンＤ・サプリメント、レクチン・サプリメントまたはこれらの組合せを供給する、請求項４３に記載の方法。
【請求項４７】
前記レクチン・サプリメントが供給され、該レクチン・サプリメントはコンカナバリンAまたは小麦胚芽凝集素を含む、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記生物は人間であり、前記電界は、その人間の細胞の細胞膜上に約１０分から約２４０分の間連続して前記平均誘導電流密度を生成する、請求項４４または４６に記載の方法。
【請求項４９】
更に、その後前記外部電界を前記人間またはその一部に再び加えると共に、前記平均誘導電流密度を約３０分から約９０分の間の連続して追加発生させる、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記人間は病院またはクリニックのベッドに配置される、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
請求項４３に記載の方法を実行するための装置であって、該装置は電界治療機器であり、この電界治療機器は、
(a)  主電極および対向電極と、
(b)  前記電極対に電圧を印加するための電圧発生機と、
(c)  前記電圧を変化させることによって、あるいは前記対向電極と前記生物あるいはその一部との距離を変化させることによって、前記外部電界を制御する誘導電流発生機と、
(d)  前記電圧発生機を駆動するための電源と
を含む。
【請求項５２】
前記主電極は前記生物あるいはその一部と接触しない、請求項５１に記載の装置。
【請求項５３】
ストレスを治療する方法であって、生物あるいはその一部の細胞膜を横切るようにイオンのフラックスを変化させるようにする方法でり、それには、前記生物またはその一部に  前記細胞膜上に約０．０３ｍＡ/ｍ２から約１２ｍＡ/ｍ２の平均誘導電流密度を生成する外部電界を加えることが含まれる。
【請求項５４】
前記平均誘導電流密度は、約０．０３５ｍＡ/ｍ２から約１１．１ｍＡ/ｍ２である、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記イオンはカルシウムイオンを含む、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
更に、前記生物またはその一部に、カルシウム・サプリメント、ビタミンＤ・サプリメント、レクチン・サプリメントまたはこれらの組合せを供給する、請求項５３に記載の方法。
【請求項５７】
前記レクチン・サプリメントが供給され、該レクチン・サプリメントはコンカナバリンAまたは小麦胚芽凝集素を含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記生物は人間であり、前記電界は、その人間の細胞の細胞膜上に約１０分から約２４０分の間連続して前記平均誘導電流密度を生成する、請求項５４または５６に記載の方法。
【請求項５９】
更に、その後前記外部電界を前記人間またはその一部に再び加えると共に、前記平均誘導電流密度を約３０分から約９０分の間の連続して追加発生させる、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記人間は病院またはクリニックのベッドに配置される、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
請求項５３に記載の方法を実行するための装置であって、該装置は電界治療機器であり、この電界治療機器は、
(a)  主電極および対向電極と、
(b)  前記電極対に電圧を印加するための電圧発生機と、
(c)  前記電圧を変化させることによって、あるいは前記対向電極と前記生物あるいはその一部との距離を変化させることによって、前記外部電界を制御する誘導電流発生機と、
(d)  前記電圧発生機を駆動するための電源と
を含む。
【請求項６２】
前記主電極は前記生物あるいはその一部と接触しない、請求項６１に記載の装置。
【請求項６３】
関節炎を治療する方法であって、生物あるいはその一部の細胞膜を横切るようにイオンのフラックスを変化させるようにする方法であり、それには、前記生物またはその一部に  前記細胞膜上に約０．０２ｍＡ/ｍ２から約０．４ｍＡ/ｍ２の平均誘導電流密度を生成する外部電界を加えることが含まれる。
【請求項６４】
前記平均誘導電流密度は、約０．０２５ｍＡ/ｍ２から約０．３５ｍＡ/ｍ２である、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記平均誘導電流密度は、約０．０２６ｍＡ/ｍ２から約０．３２ｍＡ/ｍ２である、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記イオンはカルシウムイオンを含む、請求項６４に記載の方法。
【請求項６７】
更に、前記生物またはその一部に、カルシウム・サプリメント、ビタミンＤ・サプリメント、レクチン・サプリメントまたはこれらの組合せを供給する、請求項６３に記載の方法。
【請求項６８】
前記レクチン・サプリメントが供給され、該レクチン・サプリメントはコンカナバリンAまたは小麦胚芽凝集素を含む、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
前記生物は人間であり、前記電界は、その人間の細胞の細胞膜上に約１０分から約２４０分の間連続して前記平均誘導電流密度を生成する、請求項６４または６７に記載の方法。
【請求項７０】
更に、その後前記外部電界を前記人間またはその一部に再び加えると共に、前記平均誘導電流密度を約３０分から約９０分の間の連続して追加発生させる、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
前記人間は病院またはクリニックのベッドに配置される、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
請求項６３に記載の方法を実行するための装置であって、該装置は電界治療機器であり、この電界治療機器は、
(a)  主電極および対向電極と、
(b)  前記電極対に電圧を印加するための電圧発生機と、
(c)  前記電圧を変化させることによって、あるいは前記対向電極と前記生物あるいはその一部との距離を変化させることによって、前記外部電界を制御する誘導電流発生機と、
(d)  前記電圧発生機を駆動するための電源と
を含む。
【請求項７３】
前記主電極は前記生物あるいはその一部と接触しない、請求項７２に記載の装置。
【請求項７４】
過度の体重を治療する方法であって、生物あるいはその一部の細胞膜を横切るようにイオンのフラックスを変化させるようにする方法でり、それには、前記生物またはその一部に  前記細胞膜上に約０．０２ｍＡ/ｍ２から約１．５ｍＡ/ｍ２の平均誘導電流密度を生成する外部電界を加えることが含まれる。
【請求項７５】
前記平均誘導電流密度は、約０．０２ｍＡ/ｍ２から約１．２ｍＡ/ｍ２である、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
前記平均誘導電流密度は、約０．０２４ｍＡ/ｍ２から約１．１２ｍＡ/ｍ２である、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
前記イオンはカルシウムイオンを含む、請求項７５に記載の方法。
【請求項７８】
更に、前記生物またはその一部に、カルシウム・サプリメント、ビタミンＤ・サプリメント、レクチン・サプリメントまたはこれらの組合せを供給する、請求項７４に記載の方法。
【請求項７９】
前記レクチン・サプリメントが供給され、該レクチン・サプリメントはコンカナバリンAまたは小麦胚芽凝集素を含む、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
前記生物は人間であり、前記電界は、その人間の細胞の細胞膜上に約１０分から約２４０分の間連続して前記平均誘導電流密度を生成する、請求項７４または７８に記載の方法。
【請求項８１】
更に、その後前記外部電界を前記人間またはその一部に再び加えると共に、前記平均誘導電流密度を約３０分から約９０分の間の連続して追加発生させる、請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
前記人間は病院またはクリニックのベッドに配置される、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
請求項７３に記載の方法を実行するための装置であって、該装置は電界治療機器であり、この電界治療機器は、
(a)  主電極および対向電極と、
(b)  前記電極対に電圧を印加するための電圧発生機と、
(c)  前記電圧を変化させることによって、あるいは前記対向電極と前記生物あるいはその一部との距離を変化させることによって、前記外部電界を制御する誘導電流発生機と、
(d)  前記電圧発生機を駆動するための電源と
を含む。
【請求項８４】
前記主電極は前記生物あるいはその一部と接触しない、請求項８３に記載の装置。
【請求項８５】
疾患の治療のための外部電界曝露の最適のパラメータを決定する方法であて、
(i)   生存している生物において誘発する望ましい生物反応を識別すること;
(ii)  前記生物中あるいは組織サンプルまたは培養物中における、前記生物に由来した細胞の細胞膜上の平均誘導電流密度を選択しあるいは測定すること；
(iii)  前記生物、サンプルあるいは培養物から所定距離において前記選択されあるいは測定された誘導電流密度を生成する外部電界を選択または測定すること；
(iv)   前記細胞膜上の前記選択され又は測定された誘導電流密度を生成する継続的な期間を選択又は測定すること；
(v)   前記選択され又は測定された電界を、前記生物、サンプルあるいは培養物に印加して前記選択され又は測定された誘導電流密度を前記選択され又は測定された継続的な期間に亘って前記細胞膜上に生成させること；
(vi)   所望の生物学上の反応が生じる範囲を決定すること;
(vii)   ステップ(ii)〜(vi)のいずれかを適宜繰り返すこと;
(viii)   前記選択され又は測定された誘導電流密度の値、又は前記選択され又は測定された外部電界の値、又は前記所望生物学上の反応を好適に誘発する前記選択され又は測定された継続的な期間の値を特定すること、
を含む。
【請求項８６】
ステップ(viii)の前に、更に、前記選択され又は測定された誘導電流密度、又は前記選択され又は測定された外部電界、又は前記選択され又は測定された継続的な期間の機能としての用量作用曲線を生成する、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
ステップ(viii)の前に、更に、
前記ステップ(v)が繰り返される回数、
前記ステップ(v)の反復時間の間隔、
前記選択され又は測定された誘導電流密度が前記細胞膜上に生成された全体の時間
を選択しあるいは測定する請求項８５に記載の方法。
【請求項８８】
前記選択され又は測定された誘導電流密度は、約０．００１ｍＡ/ｍ２〜約１５ｍＡ/ｍ２である、請求項８５に記載の方法。
【請求項８９】
前記細胞は培養物中にある、請求項８５に記載の方法。
【請求項９０】
前記培養物中の細胞はヒト細胞である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
前記細胞は、生きている生物又はその一部にある、請求項８５に記載の方法。
【請求項９２】
前記生きている生物は人間である、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
前記誘導電流密度は、前記生きている生物又はその一部の所定のセクションに流れる前記誘導電流を測定し、前記測定された電流を電圧信号に変換し、前記電圧信号を光学信号に変換し、そして前記光学信号を電圧信号に再変換して、その波形と周波数を分析することによって、選択され又は測定される、請求項８５に記載の方法。
【請求項９４】
前記誘導電流密度は、Jによって表わされ、JはJ=I/Bで表わされる、請求項８５に記載の方法。
【請求項９５】
更に、前記生物、サンプルまたは培養物に、カルシウム・サプリメント、ビタミンＤ・サプリメント、レクチン・サプリメントまたはこれらの組合せを供給する、請求項８５に記載の方法。
【請求項９６】
前記レクチン・サプリメントが供給され、該レクチン・サプリメントはコンカナバリンAまたは小麦胚芽凝集素を含む、請求項９５に記載の方法。
【請求項９７】
請求項８５に記載の方法を実行するための装置であって、該装置は電界治療機器であり、この電界治療機器は、
(a)  主電極および対向電極と、
(b)  前記電極対に電圧を印加するための電圧発生機と、
(c)  前記電圧を変化させることによって、あるいは前記対向電極と前記組織あるいはその一部との距離を変化させることによって、前記外部電界を制御する誘導電流発生機と、
(d)  前記電圧発生機を駆動するための電源と
を含む。
【請求項９８】
前記主電極は前記生物あるいはその一部と接触しない、請求項９８の誤記）に記載の装置。
【請求項９９】
増殖細胞疾患を治療する方法であって、生物あるいはその一部の細胞膜を横切るようにイオンのフラックスを変化させるようにする方法であり、それには、前記生物またはその一部に、前記細胞膜上に約０．１ｍＡ/ｍ２から約２ｍＡ/ｍ２の平均印加電流密度を生成する電流を接触させることが含まれる。
【請求項１００】
前記イオンはカルシウム・イオンを含み、平均印加電流密度は、少なくとも約7日の実質的な継続的期間の間、前記細胞膜上に生成される、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０１】
更に、前記生物またはその一部に、カルシウム・サプリメント、ビタミンＤ・サプリメント、レクチン・サプリメントまたはこれらの組合せを供給する、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０２】
前記レクチン・サプリメントが供給され、該レクチン・サプリメントはコンカナバリンAまたは小麦胚芽凝集素を含む、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０３】
前記生物は人間である、請求項９９、１００又は１０１に記載の方法。
【請求項１０４】
請求項９９の方法を実行するための電流治療装置。
【請求項１０５】
ストレスに関連する疾患あるいは症状を治療する方法であって、生物あるいはその一部の細胞膜を横切るようにイオンのフラックスを変化させるようにする方法であり、それには、前記生物またはその一部に、前記細胞膜上に約６０ｍＡ/ｍ２から約６００ｍＡ/ｍ２の平均印加電流密度を生成する電流を接触させることが含まれる。
【請求項１０６】
前記イオンはカルシウムイオンを含む、請求項１０５に記載の方法。
【請求項１０７】
更に、前記生物またはその一部に、カルシウム・サプリメント、ビタミンＤ・サプリメント、レクチン・サプリメントまたはこれらの組合せを供給する、請求項１０５に記載の方法。
【請求項１０８】
前記レクチン・サプリメントが供給され、該レクチン・サプリメントはコンカナバリンAまたは小麦胚芽凝集素を含む、請求項１０７に記載の方法。
【請求項１０９】
前記生物は人間である、請求項１０７に記載の方法。
【請求項１１０】
請求項１０５の方法を実行するための電流治療装置。
【請求項１１１】
血清カルシウム濃度に関連した疾患を治療する方法であって、生物あるいはその一部の細胞膜を横切るようにカルシウムイオンのフラックスを変化させるようにする方法であり、それには、前記生物またはその一部に、前記細胞膜上に約６０ｍＡ/ｍ２から約２，０００ｍＡ/ｍ２の平均印加電流密度を生成する電流を接触させることが含まれる。
【請求項１１２】
前記イオンはカルシウムイオンを含む、請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１３】
更に、前記生物またはその一部に、カルシウム・サプリメント、ビタミンＤ・サプリメント、レクチン・サプリメントまたはこれらの組合せを供給する、請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１４】
前記レクチン・サプリメントが供給され、該レクチン・サプリメントはコンカナバリンAまたは小麦胚芽凝集素を含む、請求項１１３に記載の方法。
【請求項１１５】
前記生物は人間である、請求項１１１又は１１３に記載の方法。
【請求項１１６】
前記電流は、約1分から約２０分の継続的な期間の間、前記細胞膜上に前記平均印加電流密度を生成する、請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１７】
前記電流は、約２分から約１０分の継続的な期間の間、前記細胞膜上に前記平均印加電流密度を生成する、請求項１１６に記載の方法。
【請求項１１８】
請求項１１１の方法を実行するための電流治療装置。
【請求項１１９】
疾患の治療のための電流曝露の最適のパラメータを決定する方法であて、
(i)   生物又はその一部において誘発する望ましい生物反応を識別すること;
(ii)  前記生物中あるいは組織サンプルまたは培養物中における、それに由来した細胞の細胞膜上の平均印加電流密度を選択しあるいは測定すること；
前記平均印加電流密度は約１０ｍＡ/ｍ２から約２，０００ｍＡ/ｍ２である、
(iii)  前記選択されあるいは測定された印加電流密度を生成する電流を選択または測定すること；
(iv)   前記選択され又は測定された印加電流密度を生成する継続的な期間を選択又は測定すること；
(v)   前記選択され又は測定された電界を印加して前記選択され又は測定された印加電流密度を前記選択され又は測定された継続的な期間に亘って生成させること；
(vi)   所望の生物学上の反応が生じる範囲を決定すること;
(vii)  ステップ(ii)〜(vi)のいずれかを適宜繰り返して、ステップ(ii)のうちのいずれかを繰り返して、前記選択され又は測定された電流、前記選択され又は測定された印加電流密度、または前記選択され又は測定された継続的な期間の機能として用量作用曲線を生成すること;
(viii)  前記選択され又は測定された電流の値、又は前記選択され又は測定された印加電流密度の値、又は前記所望生物学上の反応を好適に誘発する前記選択され又は測定された継続的な期間の値を特定すること、
を含む。
【請求項１２０】
ステップ(viii)の前に、更に、
前記ステップ(v)が繰り返される回数、
前記ステップ(v)の反復時間の間隔、
前記印加電流密度が前記細胞膜上に生成された全体の時間
を選択しあるいは測定する請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２１】
前記細胞は培養物にある、請求項１２０に記載の方法。
【請求項１２２】
前記培養物中の細胞はヒト細胞である、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２３】
前記細胞は、生きている生物又はその一部にある、請求項１２０に記載の方法。
【請求項１２４】
前記生きている生物は人間である、請求項１２３に記載の方法。
【請求項１２５】
更に、前記生物、サンプルまたは培養物に、カルシウム・サプリメント、ビタミンＤ・サプリメント、レクチン・サプリメントまたはこれらの組合せを供給する、請求項１２０に記載の方法。
【請求項１２６】
前記レクチン・サプリメントが供給され、該レクチン・サプリメントはコンカナバリンAまたは小麦胚芽凝集素を含む、請求項１２６に記載の方法。
【請求項１２７】
請求項１２０の方法を実行するための電流治療装置。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の表示】
【０００１】
この出願は、2002年12月5日に公開された、2001年12月14日付出願に係る米国特許出願第10/017,105号の一部継続出願である。この出願は、2002年12月17日付出願に係る米国仮出願第60/433,766号および2002年7月30日付出願に係る米国仮出願第60/399,249号の利益をも請求する。前記出願はいずれもそっくりそのままここに組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
様々な電気的治療装置が知られている。通常、その装置の電極は患者に接触され、その場合、その電気的治療装置は印加電流を用いるものであって、電流治療装置と称されることがある。例えば、TENSまたはPENS等がある
【非特許文献１】アネスセシア．アナルゲシア（Anesth. Analg.）, 88:841-46 (1999)、ゴナメ、イ．エイ．（Ghoname, E.A.）,他著
【非特許文献２】ジャーナル・オブ・バーン・ケア＆リハビリテイション（J Burn Care Rehabil.）, 14:319-335 (1993)、リー、アール．シー．（Lee, R.C.）他著
【０００３】
電極を患者に接触させない場合、その電気的治療装置は外部電界(以下「ＥＦ」という)により患者に電流を誘導するものであって、電界ないしは電位治療装置と称されることがある。ＥＦは、動物または人間のボディーを含む、その内部のすべての導電性ボディー上に表面電荷を生成する。ＥＦが印加されると、正と負の電荷がボディの両側に現われる。その電界が交互に替わると、前記電荷の位置が交互に替わってボディ内で交流になる。
【非特許文献３】新潟メディカル（Niigata Med.）, 75:265-73 (1961)、原  エイチ．（Hara, H.）他著
【０００４】
１９７２年、日本国厚生省が電気刺激装置(承認番号第１４７００ＢＺＺ００９０４号)を承認した。１９７８年には、ＵＳＦＤＡ（米国食品医薬品局）が、骨疾患を治療するための電気刺激を承認した。しかしながら、その治療の文献は電気刺激に対する種々様々な生体応答を報告している。例えば、外部シヌソイド交番電界(交流ＥＦ)は、とりわけ、細胞形態学、線維芽細胞中のタンパク質合成、必須の膜蛋白の再分配、軟骨細胞中のＤＮＡ合成、細胞内のカルシウムイオン濃度、人間の肝臓癌細胞の微小繊維構造、血液中の電解質レベルを変えることが示されている。
【非特許文献４】バイオエレクトロマグネティクス, 19:366-376 (1998)、 キム、ワイ．ブイ．（Kim, Y.V.）他著、
【非特許文献５】フェイセブ  ジェイ（FASEB J.）, 13:677-682 (1999) 、チョー、エム．アール．（Cho, M.R.）他著
【非特許文献６】新潟メディカル, 75:265-73 (1961))、原  エイチ（Hara, H）他著  幾人かの研究者は、観察された多くの結果はＥＦに直接起因するものではなく、細胞膜受容器複合体およびイオン輸送チャンネルのような主要な細胞組織に対するＥＦの影響の副次的効果である、と考えている。
【０００５】
誘導電流の生物学上の影響は過去25年間に亘って研究されているが、ほとんどの研究は、高圧送電線およびその関連電気装置からの強い電界あるいは磁界に晒された人の安全性に動機づけられたものである。例えば、公益事業会社労働者は、５０〜５００ｋＶ／ｍの電界および５Ｇまでの磁界に日常的に晒されており、また、一般大衆は、通常、１〜１０ｋＶ／ｍの電界および２Ｇまでの磁界に晒されている。先行技術は、比較的低い電圧および弱い電界の影響に関する十分な研究を欠くものである。さらに、従来のＥＦ治療装置は高電圧を使用しており、身体の形態学の本質的に異なるエリア中のＥＦ強度の差異を説明するものではない。
【非特許文献７】送電線周波数電界および磁界への曝露からの健康効果の評価, NIEHS Publ. No. 98-3981 (国立環境健康科学研究所, 1998)、Portier,C.J. およびWolfe, M.S. (eds.)著
【０００６】
要するに、米国特許第5,387,231号でスポラー（Sporer）によって言及されているように、「先行技術は、真に有効な電気療法用電気的パラメータの適切かつ有効なコンビネーションを熟考していない。先行技術の装置は、一般に、高電圧あるいは高電流で作動し、それらいずれも治療されている組織にジアテルミー効果(diathermy effect)があり得る。多くの場合、先行技術は1つあるいは様々な電気的パラメータの別のものに言及しているかもしれないが、他のパラメータの重要性を考慮していない。」
【０００７】
先行技術は、異種の生体応答を示し、曖昧な測定に依存し、高電圧および高電流の影響に焦点を定めているので、電気的治療用、特に比較的低い電圧および電流を使用する、電気的治療用の特定のパラメータを明らかにする必要がある。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
発明者等は、特定の疾患を成功裏に治療するＥＦおよび印加電流のパラメータ値を割り出した。そのパラメータには、例えば、周波数(ヘルツ)および電圧(ボルト)、誘導電流密度(ｍＡ/ｍ2)、印加電流密度(ｍＡ/ｍ2)、曝露の個別継続的な時間(分、時間および日数)、曝露全体の時間(曝露の1つの継続的な期間あるいは曝露の複数の継続的な期間の合計のいずれか)がある。
【０００９】
ここに使用された「平均」印加電流密度および「平均」誘導電流密度とは、例えば人間、動物、植物あるいはその一部又はその細胞の少なくとも1つの組織の細胞膜上に生成された単位面積あたりの平均電流に言及するものである。例えば対象となる生体が人間であり、その一部が人間の手全体である場合、前記平均電流密度は手全体における平均値である。すなわち、前記平均電流密度は、それら面積の総和で割った手の各部分における電流密度の和である。後述する特定の公式および技術は、前記平均印加電流密度および平均誘導電流密度を推定するために用いられる。もし明示的に他の方法で述べられない限り、用語「生体(organism)」は人間および他の生命体の両方を意味する。
【００１０】
この発明の1つの実施例は、印加電流に依存する。好ましくは、前記印加電流密度は、約１０ないし約２，０００ｍＡ/ｍ2の範囲である。
【００１１】
発明の別の実施例は、細胞膜間のイオンの移動を制御するための特に少量の誘導電流に依存する。生命体の細胞中の異常なイオン濃度を引き起こし、あるいはそれによって引き起こされる疾患の治療のために、この誘導電流実施例は、約０．００１ｍＡ/ｍ2から約１５ｍＡ/ｍ2、好ましくは約０．００１ｍＡ/ｍ2から約１０ｍＡ/ｍ2、より好ましくは約０．０１ｍＡ/ｍ2から約２ｍＡ/ｍ2の平均誘導電流密度を細胞の細胞膜上に生成する外部電界に、生命体を晒している。好ましい実施例では、外部電界(E)は、式Ｅ＝Ｉ/εoωＳによって示される。ここに、Ｓは電界測定センサーの断面、εoは真空中の誘導速度、Iは電流、ωは2πf、fは周波数である。更に、式Ｊ＝Ｉ／Ｂで誘導電流(Ｊ)を測定することが望ましく、ここにI
は測定電流、ＢはＢ＝Ａ2／４πとして表現される円の面積、ＡはＡ＝２πｒとして表現される周囲長、ｒは半径である。本発明の追加の好適実施例では、前記誘導電流密度は約１０分ないし約２４０分に亘って継続的に細胞膜上に生成される。再適用では、平均誘導電流密度は好ましくは約３０分ないし約９０分の追加継続期間に生成され、好適には約１,５００分未満の全曝露継続時間となる。
【００１２】
本発明の印加電流および誘導電流の実施形態にいずれにおいても、全身あるいはそのほんの一部に適用することができる。その一部には、手足、器官、ある身体の細胞組織、胴体のような身体の部分、身体のシステムあるいはそのサブセクションを含んでも良い。熟練した者であれば、特定の疾患が本発明を全身あるいはその一部に適用することを必要とするかどうかを判断することができる。
【００１３】
本発明では、更に、カルシウム・サプリメント、ビタミンＤサプリメント、レクチン・サプリメントあるいはこれらのサプリメントの組合せを、前記生命体に供給するステップを含んでも良い。好ましくは、レクチン・サプリメントとして、コンカナバリン(concanavalin)Ａまたは小麦胚芽凝集素(wheat germ
agglutinin)を用いる。
【００１４】
好ましい実施例では、発明は細胞外のCa++の取り込みに関連する電気的に感受性の高いカルシウムレセプター（CaR）を活性化させる際に重要な役割を果たす細胞外液のカチオンの電解質およびタンパク質を含む、カルシウムあるいはその他のカチオンまたは多価カチオンの流動を変化させ、あるいはそうでなければそれらに影響する。
【００１５】
本発明の他の実施例は、ＥＦ治療に用られる装置に関する。好ましいＥＦ治療装置は電界治療装置であって、該装置は、主電極および対向電極と、前記電極に電圧を印加するための電圧発生機と、電圧あるいは対向電極と生命体あるいはその部分との間の距離を変えることによって、外部電界を制御する誘導電流発生機と、前記電圧発生機を駆動するための電源とを備えている。好ましくは、前記電圧発生機はブースター・コイルを備えており、該ブースター・コイルの中点あるいは一端でアースされる。
【００１６】
この発明の更に好ましい、１つの主電極とこれに対向する１つの電極を備えたＥＦ治療装置においては、前記対向電極は、人体の頭、肩、腹部、腰部あるいは臀部の近くに配置され、前記対向電極と人間の被験者の胴体領域の表面との間の距離は、約１〜２５ｃｍ、より好ましくは約１〜１５ｃｍである。他の方式においては、前記対向電極は、天井、壁、床、家具あるいは部屋にある他の物体や表面である。
【００１７】
別の他の実施例は、ＥＦあるいは印加電流治療のための最適のパラメータの決定に関する。ＥＦ治療用の最適パラメータを決定する好ましい方法は次のステップを含んでいる。すなわち、 (i)生体に誘発すべき所望の生体応答を特定するステップと、(ii) 生命体における、あるいは生命体に由来した細胞組織サンプルあるいは培養組織における細胞の細胞膜上の平均誘導電流密度を選択あるいは測定するステップと、(iii) 生命体、サンプルあるいは培養組織からの特定の距離で、前記選択されあるいは測定された誘導電流密度を生成する外部電界を選択あるいは測定するステップと、(iv) 細胞膜上の前記選択されあるいは測定された誘導電流密度を生成するために継続的な期間を選択あるいは測定するステップと、(v) 生命体、サンプルあるいは培養組織に前記選択されあるいは測定された電界を適用し、前記選択されあるいは測定された継続的な期間、細胞膜上に前記選択されあるいは測定された誘導電流密度を生成させるステップと、(vi)所望の生体応答が生じる範囲を決定するステップと、(vii)ステップ(ii)〜(vi)のいずれかを選択的に繰り返すステップと、かつ／または(viii)前記選択されあるいは測定された誘導電流密度の値、前記選択されあるいは測定された外部電界の値、あるいは所望の生体応答を最適に誘発する、前記選択されあるいは測定された継続的な期間の値を明らかにするステップとを含む。この実施例に関して、用語「測定」は、実験者がパラメータ値を、意識的、故意あるいは最初に前もって選択しない場合を包含する。例えば用語「測定」は、EF装置がランダムあるいは最初に未知の量の平均誘導電流密度を生成し、その後、研究者が、その量は何か直接あるいは間接的に決める場合を包含する。
【００１８】
本発明は、後述する図面および詳細な説明によって更に図示される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
イオンの不均衡は疾患あるいは体調に起因することもあり、あるいは内科療法やサプリメントの副作用であることもある。この発明は、細胞膜上に電流を生成することによって該細胞膜を横切るイオン・フラックスを変更するものである。この発明は、また膜貫通のタンパク質のような細胞膜の構成成分に影響を及ぼすものである。この発明は、細胞のイオンのホメオスタシスを回復させあるいは平衡に保ち、あるいは細胞膜の膜電位を変更することができる。而して、本発明は、カルシウム(Ｃａ２＋)、マグネシウム(Ｍｇ２＋)、ナトリウム(Ｎａ＋)、カリウム(Ｋ＋)および塩素(Ｃｌ−)の濃度のような細胞性イオン濃度に関連した疾患の予防あるいは処置のために有用である。
【００２０】
血清カルシウム濃度に関連した疾患の治療には、細胞膜上に生成された平均誘導電流密度は、好ましくは約０．３ｍＡ/ｍ２から約０．６ｍＡ/ｍ２であり、より好ましくは、約０．４ｍＡ/ｍ２〜約０．５ｍＡ/ｍ２、最も好ましくは、約０．４２ｍＡ/ｍ２である。血清カルシウム濃度に関連した疾患を治療するために印加電流を使用する場合、平均印加電流密度は、好ましくは約６０ｍＡ/ｍ２から約２,０００ｍＡ/ｍ２である。この平均印加電流密度は、約１分から約２０分、より好適には約２分から約１０分に亘る継続的な期間、胞膜上に生成される。
【００２１】
本発明の方法を適用し得る細胞組織には、例えば、筋骨格組織、中枢および末梢神経系組織、胃腸管系組織、生殖システム組織(雄性と雌性の両方)、肺性のシステム組織、心血管系組織、内分泌系組織、免疫系組織、リンパ系組織、また泌尿生殖系組織が含まれる。
【００２２】
形質膜（原形質膜）のような真核細胞の生体膜は、これらのイオンに選択的に透過性である。選択透過性は、細胞膜を横切る膜電位の確立を可能にする。細胞は、細胞膜を横切る分子の輸送の為に膜電位を利用する。膜電位の生成に関連するイオンの多くは、生体機能を奏する。例えば、筋細胞においてカルシウム・イオンの閾値濃度は収縮を開始させる。膵臓のシステムの外分泌腺の細胞では、カルシウム・イオンの閾値濃度は、消化酵素の分泌を引き起こす。同様に、ナトリウムとカリウムのイオンの様々な濃度は、神経軸索を通過する電気インパルスの導電にとって必要である。
【００２３】
電位作動性イオンチャネルと呼ばれるタンパク質の広いファミリーは、イオン濃度と膜電位を維持する。電位作動性イオンチャネルは、チャンネルの整合状態に応じてイオンが生体膜を横切って通過することを許容するイオン選択性の細孔を含む膜貫通型のタンパク質である。チャネルの高次構造的な状態は膜電位に反応する帯電したアミノ酸を含む電位感受性の部位によって影響を受ける。チャネルは伝導している（開いている／活性化されている）か伝導していない（閉じられている／非活性されている）かのどちらかである。
【００２４】
特定のイオン(つまりＣａ2+)と心血管の健康との関連に起因して、本発明は、心血管性の疾患の予防あるいは処置に有用である。これらには、例えば、心筋症、拡張型鬱血性心筋症、肥大型心筋症、口峡炎、異型狭心症、不安定狭心症、アテローム性動脈硬化症、動脈瘤、腹部大動脈瘤、末梢動脈障害、低血圧と高血圧のような血圧障害、起立性低血圧、慢性心膜炎、不整脈、心房細動と動揺、心臓病、左室肥大、右室肥大、頻脈、心房性頻脈、心室性頻拍、また高血圧症が含まれる。
【００２５】
さらに、本発明は、血液疾患の予防あるいは処置のためにも有用である。これらには、低ナトリウム血症と高ナトリウム血症、低カリウム血症、高カリウム血症、低カルシウム血症、高カルシウム血症、低リン酸塩血症、高リン酸塩血症、血中マグネシウム減少症、高マグネシウム血症、糖尿病のような血糖調整障害、成人発症性糖尿病、若年発症糖尿病が含まれるが、これらに制限されるものではない。
【００２６】
本発明の1つの実施例では、細胞膜を横切るＣａ２＋フラックスを増強するために、レクチンがＥＦと共同で適用される。本発明に有用なレクチンは、例えば、コンカナバリンA(ConA)および小麦胚芽凝集素を含んでいる。別の実施例では、本発明によって生成されたイオン・フラックスは、カルシウムサプリメントと共に生成される。別の実施例では、本発明によって生成されたイオン・フラックスは、ビタミンＤサプリメントと共に、あるいはカルシウムサプリメントおよびビタミンＤサプリメントの両方で生成される。本発明のビタミンＤサプリメントには、例えば、ビタミンＤ２(エルゴカルシフェロール)およびコレカルシフェロール(コレカルシフェロール)が含まれる。同様に、本発明の方法は、生体試料あるいは患者の表面へ施行される補助光源と共に実施することができる。光源は、約２２５ナノメーターから約７００ナノメーターまでの範囲における波長を放射するものであっても良い。本発明の1つの実施例においては、本発明の方法で共同適用された光源は、約２３０ナノメーターから約３１３ナノメーターまでの範囲における波長を放射する。
【００２７】
本発明の追加の実施例では、別の分子は、本発明によって生成されたイオン・フラックスと同時に細胞膜を横切って移りうる。そのイオン・フラックスと同時に移動する追加の分子は、身体で自然に生産されるかもしれず、あるいはサプリメンテイション（例えばビタミンなどを介して)経由で提供されるかもしれない。細胞のグルコースの取り込みは、例えば、細胞膜を横切るカルシウムイオン・フラックスによって増強されうる。本発明によって生成されたイオン・フラックスと同時に細胞膜を横切って運ばれるうる追加分子は、栄養補助食品（例えば病気および／またはコンティションの予防あるいは処理を援助するために設計され投薬された栄養剤）を含んでいる。さらに、本発明の方法は、高カロリー療法治療（例えば、昏睡、重いやけどや胃腸障害のような障害治療に通常要求される以上の栄養管理)と共に用いてもよい。
【００２８】
実施例１
６０Ｈｚの電界が、レクチンによって刺激されたマウス脾細胞における細胞質ゾル・カルシウム(Ｃａ２＋)レベルをアップレギュレートとする。
【００２９】
この実験に利用されたＥＦ曝露システムは、４つの部分からなる。すなわち、ポリカーボネートからなるＥＦフィールド曝露ディシュと、発振器(ＳＧ-４１０１、イワツ株式会社製、東京、日本)と、デジタル・マルチメーター(ＶＯＡＣ-７４１１ イワツ株式会社製、東京、日本)と、コントローラー(白寿社製、東京、日本)とで構成されている。図１はＥＦ曝露システムでフィールド曝露ディッシュを示す。フィールド曝露ディッシュは、蓋、ディッシュおよびドーナツ形のインサート（内部直径: １２ｍｍ）からなる。ＥＦは発振器によって、２つの円形白金電極（細胞培養スペース）間で生成され、コントローラーとデジタル・マルチメーターを使って微調整される。６０ＨｚのＥＦの強さは、フィールド曝露ディッシュの細胞培養スペース内で電流密度を測定することにより決定された。
【００３０】
電流密度の計算式は以下のとおりである。電流密度 =Ｉ／Ｓ、ただし、Ｉは、供給された電流(μＡ)、Ｓは細胞培養スペース(０．３６π)の面積(ｃｍ２)である。したがって、電流密度は、電流密度＝０．８８５Ｉ[μＡ/ｃｍ２]で計算できる。
【００３１】
ＥＦ曝露に先立って、約１．５ｍｌのアッセイバッファー（１３７ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＫＣｌ、１ｍＭ Ｎａ２ＨＰＯ４、５ｍＭグルコース、１ｍＭ ＣａＣｌ２、０．５ｍＭ ＭｇＣｌ２、０．１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡおよび１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４）を、電極室へ注いだ。細胞と下部電極との接触を回避するために、ポリカーボネート細胞膜（Ｉｓｏｐｏｒｅ、ＭＩＬＬＩＰＯＲＥ、マサチューセッツ州  アメリカ）をディッシュとインサートの間に配置した。約１ｍｌの細胞懸濁液を、培養ウエル／スペースに注ぎ、蓋で覆った。
【００３２】
細胞準備
【００３３】
クリーン空気濾過装置を装備した従来の飼育室で飼育されたＣＬＥＡ社(東京、日本)から入手した４〜７ 週の雌のＢＡＬＢ/ｃマウスが麻酔下で脾摘出され、脾細胞の細胞懸濁液を準備した。そして細胞生存率を検査するために、該細胞を、１０％のウシ胎児血清（ＦＳＢ）が追加されたＤｕｌｂｅｃｃｏの修正イーグルの培地（ＳＩＧＭＡ、ミズーリ州米国）において培養した。該細胞を、細胞準備後４時間以内に実行された[Ｃａ２＋]ｃの検査の間、ハンクス液(ＨＢＳＳ)(ＳＩＧＭＡ、ミズーリ州米国)中に維持した。細胞は使用に先立って４℃で保管した
【００３４】
ＥＦ曝露細胞の生存率の定量
【００３５】
マウス脾細胞（５ｘ１０６細胞／ｍｌ）を、５％ＣＯ２中にて３７°Ｃで、３０分および２４時間、６０Hzの６μＡ／ｃｍ２あるいは６０μＡ／ｃｍ２ ＥＦのいずれかで曝露した。偽物（対照）細胞を、フィールド曝露ディッシュ上で、ＥＦ曝露することなく、３０分および２４時間放置した。３０分および２４時間の曝露の終わりに電界曝露ディッシュから回収された細胞懸濁液を、４℃で、３０分間、２．５μｇ／ｍｌのプロピディウム（propidium）ヨウ化物で色付けした。また、死細胞率を流動細胞計測法で分析した。
【００３６】
[Ｃａ２＋]ｃ-ｈｉｇｈ 細胞および使用したレクチンの検定のための細胞準備
【００３７】
脾細胞（１０６個の細胞／ｍｌ）を、２．５μM のフルオ-３-アセトキシルメチル(fluo-3-acetoxylmethyl）を含むＨＢＳＳにおいて３７℃で２０分間培養した（モレキュラー  プローブス（Molecular Probes）, 米国） [バンデンベルゲ  他（Vandenberghe et al.）, 1990]。その後、細胞浮遊液を、１％ＦＢＳを含有するＨＢＳＳで５倍に希釈し、３７℃で４０分間培養し、アッセイバッファーで３回洗浄した。そして、その後、細胞を、１ｘ１０６／ｍｌの濃縮でアッセイバッファー中に保持した。細胞準備の全体を通じて、細胞浮遊液を静かに撹拌した。
【００３８】
ＥＭＦとマイトジェン（mitogen)(ウオレチェク（Walleczek）およびリバーディ（Liburdy）、1990年)の間の報告された相乗相互作用を考慮して、コンナバリンＡ(Con-A)(Seikagaku社、東京、日本)およびフィトヘムアグルチニン(ＰＨＡ)(ＳＩＧＭＡ、ミズーリ州米国)を使用した。
【００３９】
[Ｃａ２＋]c-high細胞の生成に対する６０Ｈｚ(６μＡ/ｃｍ２)のＥＦの効果を決定する実験計画法
【００４０】
以前に分析した曝露されたネズミ科の脾細胞の生死判別試験の結果を考慮して、我々は、次の５つの実験を実行する際に最適の培養および曝露条件（６０Ｈｚ、６μＡ/ｃｍ２ＥＦ)を使用することにした:
【００４１】
（１）ＨＥＰＥＳ緩衝食塩水（ＢＳ）+１ｍＭ ＣａＣｌ２においてサスペンドされた細胞を合計４０分ＥＦに曝露した。また、１２．５μｇ／ｍｌのコンカナバリンＡを曝露の最初の８分後に加えた。対照群は、コンカナバリンＡを含むＥＦ非曝露細胞およびコンカナバリンＡを含まないＥＦ曝露細胞とした。パーセント [Ｃａ２＋]ｃ-high 細胞を、ある曝露ポイントでチェックした。
【００４２】
（２）ＨＥＰＥＳ-ＢＳ  ＋  １ｍＭ ＣａＣｌ２の中の細胞を、合計１２分間曝露した。また、異なる濃縮(１ngないし１２．５μg/ml）のコンカナバリンＡを、曝露の最初の４分後に加えた。対照群は、本質的に実験群の同じであるが、ＥＦ曝露しなかった。
【００４３】
（３）ＨＥＰＥＳ-ＢＳ＋1 ｍＭ ＣａＣｌ２中の細胞を合計８分間曝露し、また５μg/mlのＰＨＡを曝露の最初の４分後に加えた。対照群は、ＰＨＡを含むＥＦ非曝露細胞およびＰＨＡのないＥＦ曝露細胞とした。
【００４４】
（４）ＣａＣｌ２のないＨＥＰＥＳ-ＢＳにサスペンドされた細胞を、合計１２分間曝露し、また、濃度の異なるコンカナバリンA（１ｎｇないし５μg/ml）を、曝露の最初の４分後に加えた。対照群は本質的に実験群と同じであるが、ＥＦ曝露なしとした。
【００４５】
（５）ＥＦ曝露の持続効果を評価するために、ＨＥＰＥＳ-ＢＳ  ＋  １ｍｌのＣａＣｌ２にサスペンドされた細胞を、合計４分間曝露し、その後、濃度の異なるコンカナバリンＡ（０．０２５から１２．５μｇ/ｍｌ）を加えた。また、ＥＦ曝露しないで次の８分間 [Ｃａ２＋]ｃ-ｈｉｇｈ細胞の生成を、流動細胞計測法でモニターした。その対照は、本質的に実験群と同じであるが、ＥＦ曝露なしとした。
【００４６】
統計分析
【００４７】
細胞生存率における統計分析はスチューデントt検定を用いて決定した。グループ中の[Ｃａ２＋]cにおけるＥＦ曝露による効果用データは、ＡＮＯＶＡ(グループ間のVArianceのANalysis)、スチューデントt検定およびペアードtテストによって分析した。統計分析のための計算はすべて、ＭＳ-ＥＸＣＥＬ(登録商標)の日本版(マイクロソフト・オフィス・ソフトウェア: Ver9.0.1、マイクロソフト日本社、東京、日本)で行った。
【００４８】
結果
【００４９】
図２は、ＥＦ曝露後の生細胞のパーセンテージを示す。３つの複製全てにおいて、細胞の９８％以上が６μＡ/ｃｍ２あるいは６０μＡ/ｃｍ２に曝露された後、生きていた。
【００５０】
[Ｃａ２＋]c-high細胞の数は、１２．５μｇ/ｍｌコンカナバリンＡ（図３）を含むＥＦ曝露および非曝露の双方の細胞懸濁液中で著しく増加した。図３では、円は、コンカナバリンＡのないサスペンションを示し、三角形は、ＥＦに曝露されたコンカナバリンＡを備えたサスペンションを示す。また、正方形は、ＥＦに曝露されなかったコンカナバリンAを備えたサスペンションを示す。コンカナバリンＡなしのＥＦ曝露細胞懸濁液におけるそれらは、実質的に変わらなかった。コンカナバリンＡ誘導反応はマイトジェンの追加後直ちに表れ、５〜８分以内に飽和点に達した。ＥＦ曝露および非ＥＦ曝露コンカナバリンＡ誘導細胞の差違は些細であった（Ｐ>０．０５）。
【００５１】
図４Ａおよび４Ｂは、ページ : 12
1ｍＭのＣａＣｌ２の存在、非存在で異なる濃度のＣｏｎＡを含むＥＦを曝露された細胞培養物での結果をまとめたものである。図４Ａは、１ｍＭのＣａＣｌ２での培養の結果を示す。図４Ａでは、ＥＦ曝露培養（黒棒）と非ＥＦ曝露培養（白棒）の両方は、１ｍＭのＣａＣｌ２を含み、各種濃度のコンカナバリンＡ（０．０１μｇ/ｍｌから５μｇ/ｍｌ)を含む。ＣａＣｌ２（図４Ａ）がある状態では、ＥＦは有意にコンカナバリンＡ依存[Ｃａ２＋]ｃ（Ｐ＜０．０１:ＡＮＯＶＡ）を増強した。[Ｃａ２＋]−ｈｉｇｈの増加は、０．６７５〜５．０μｇ/ｍｌコンカナバリンＡ刺激グループでより一層実質的であったが、１．２５μｇ/ｍｌおよび２．５μｇ/ｍｌコンカナバリンＡ誘導細胞だけが、有意差を示した（Ｐ＜０．０５:ペアードtテスト）。図４Ｂでは、ＥＦ曝露培養（黒棒)および非ＥＦ曝露対照培養（白棒）双方ともに、各種濃度のコンカナバリンＡを含むが、ＣａＣｌ２は含まない。コンカナバリンＡ依存の［Ｃａ２＋］ｃ上昇は、対照およびＥＦ曝露グループのいずれにおいてもＣａ２＋遊離細胞条件（図４Ｂ）で無視できるものであった。
【００５２】
ＥＦ依存の[Ｃａ２＋]ｃ アップレギュレーションがコンカナバリンＡに限定されたかどうかを決定するために、ＰＨＡ刺激細胞も分析した。ＰＨＡ含有ＥＦ曝露および非ＥＦ曝露細胞のいずれも、[Ｃａ２＋]ｃ−ｈｉｇｈ細胞の有意な増加を登録した（図５）。しかしながら、ＥＦ曝露細胞の増加は、非曝露グループと比べて有意であった（Ｐ＜０．０５:ペアードtテスト）。
【００５３】
３．１２５〜１２．５μｇ/ｍｌのコンカナバリンＡをＥＦ非曝露または４分間の初期ＥＦ曝露の細胞懸濁液へ追加すると、０．０２５μｇ/ｍｌのコンカナバリンＡ（図６）で刺激された細胞と比べて［Ｃａ２＋］ｃ-ｈｉｇｈ細胞が著しい増加を示した。３．１２５および６．２５μｇ/ｍｌのコンカナバリンＡで刺激された細胞は、［Ｃａ２＋］c-high細胞の継続的な増加を示しコンカナバリンＡ刺激の８分後に横ばいになった。一方、より高い濃度のコンカナバリンＡ（１２．５μｇ/ｍｌ）で刺激された細胞は、コンカナバリンＡ刺激のおよそ４分後に［Ｃａ２＋］−ｈｉｇｈ細胞の下落を示した。ＥＦ曝露の増強効果は、コンカナバリンＡが６．２５μｇ/ｍｌ存在する状態でのみ、２〜４分で著しく明確であった（Ｐ＜０．０５:ペアードtテスト）。
【００５４】
実施例２  人間の血管内皮細胞における血管作動性物質に誘発された細胞内カルシウム(Ｃａ２＋)応答に関する低周波電界の効果。
【００５５】
人間の血管内皮細胞（以下、ＨＵＶＥＣ）に関するＥＦ効果を評価するために、細胞内のカルシウム・レベルを、ＡＴＰとヒスタミンで刺激されたＨＵＶＥＣで検査した。ＨＵＶＥＣに関するＥＦ効果を評価するために、ＨＵＶＥＣを、５０Ｈｚ（３０，０００Ｖ／ｍ）のＥＦ、３，０００ボルトに曝露した。ＨＵＶＥＣ上のＥＦ誘導電流密度は０．４２ｍＡ/ｍ２だったと推測される。ＨＵＶＥＣを２４時間これらテスト・パラメータに曝露した。
【００５６】
曝露後、細胞質の自由なＣａ２＋濃度をフルオ３(fluo3)流動細胞計測法によって決定した。フルオ３イメージ強度の変化は共焦点形レーザー顕微鏡で確認した。結果は、ＥＦがＨＵＶＥＣ中のカルシウムの濃度を増加させたことを実証している。
【００５７】
Ｂ. 増殖細胞疾患を治療する方法
【００５８】
増殖細胞疾患、特に区別された線維芽細胞を含む疾患の治療のために、細胞膜上に生成された平均誘導電流密度は、好ましくは約０．１ｍＡ/ｍ２から約２ｍＡ/ｍ２、より好適には約０．２ｍＡ/ｍ２から１．２ｍＡ/ｍ２、更に好適には０．２９ｍＡ/ｍ２から１．１２ｍＡ/ｍ２である。印加電流で、細胞膜上に生成された平均印加電流密度は、好ましくは約１０ｍＡ/ｍ２から約１００ｍＡ/ｍ２である。
【００５９】
線維芽細胞は、胚の中胚葉組織に由来した細胞型である。線維芽細胞は、試験管内培養が可能で、ラミニン、フィブロネクチンおよびコラーゲンのようなマトリックス・タンパク質を分泌する。培養された線維芽細胞は、組織線維芽細胞の様に分化しない。しかしながら、適切に刺激すれば、線維芽細胞は、例えば、脂肪細胞、結合組織細胞、筋細胞、膠原線維のような多くのタイプの細胞に分化する能力を持っている。
【００６０】
線維芽細胞が、結合組織と筋骨格系に関連した多数の細胞型へ分化できれば、生体内あるいは生体外で未分化の線維芽細胞細胞の成長をコントロールする方法は、線維芽細胞に由来した分化細胞の成長をコントロールするのに役立つ。例えば、筋骨格系組織の過増殖の障害は抑制されるか、あるいは線維芽細胞細胞の成長を防ぐ方法によって防ぎうる。我々は、少なくとも約７日間、約２４時間/日の間、約１０、５０あるいは１００ｍＡ/ｍ２の印加電流密度の細胞膜上での生成が電流密度依存の方法で培養された線維芽細胞細胞の成長を抑制することを割り出した。
【００６１】
過増殖の障害は、例えば、線維肉腫、横紋筋肉腫、粘液肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫および脂肪肉腫のような接続と筋骨格系組織に関連した腫瘍を含んむ。発明方法を使用して、防止、改善あるいは治療可能な追加の過増殖の疾患には、例えば、腹、骨、頭脳、胸、結腸、消化器系、内分泌腺（副腎、副甲状腺、脳下垂体、睾丸、卵巣、胸腺、甲状腺）、目、頭およびネック、肝臓、リンパ系（神経系（中央および辺縁）にある腫瘍、膵臓、骨盤、腹膜、皮膚、軟部組織、ひ臓、胸部および尿生殖の地域、白血病（含、急性前骨髄球、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、骨髄芽球、前骨髄球、骨髄単球性、単球、赤白血症）、リンパ腫瘍(Hodgkinsおよび非Hodgkinsリンパ腫瘍を含む)、多発性骨髄腫、結腸癌、前立腺癌、肺癌、小細胞肺癌、気管支原生癌、睾丸癌、子宮頸癌、卵巣癌、乳癌、血管肉腫、リンパ管肉腫、エンドセリオサルコマ（endotheliosarcoma）、リンパニオエンドセリオサルコマ（lymphangioendotheliosarcoma）、滑膜腫、中皮腫、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫、扁平上皮癌、基底細胞癌、膵臓癌、腎癌、Wilmの腫瘍、肝臓癌、胆管がん、腺癌、上皮の癌腫、黒色腫、汗腺癌、脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、脳室上衣腫、松果体腫、エマンジオブラストマ（emangioblastoma）、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、膀胱癌、胎児性癌、嚢胞腺癌、髄様癌、絨毛膜癌、および精上皮腫、等の進行および／または悪性腫瘍（malignancies）の転移が含まれる。
【００６２】
実施例３    マウスの脾細胞および３Ｔ３/Ａ３１線維芽細胞細胞のCa2+濃度に関するＥＦ曝露の効果
マウスの脾細胞への効果
【００６３】
マウスの脾細胞のカルシウムイオン濃度についてのＥＦ効果を判断するために、６０Ｈｚの特定のＥＦ電界曝露をマウスの脾細胞に適用した。脾臓は麻酔下でマウスから摘出した。６０ｍｍのディッシュで、ひ臓に、ＰＢＳ（０．０８３％ＮＨ４Ｃｌを含む燐酸塩緩衝食塩水）を注入した。細胞を［Ｃａ２＋］ｃの検査中、ハンクス液（ＨＢＳＳ）（ＳＩＧＭＡ、ミズーリ州米国）中に再びサスペンドし、保持した。それは細胞準備後に４時間以内実行した。細胞は使用に先立って４℃で保管した。
【００６４】
脾細胞細胞への６０ＨｚのＥＦを適用すると、６、２０、６０および２００μＡ/ｃｍ２の印加電流密度が生成された。脾細胞細胞を、４分間これらの条件で曝露し、その曝露後、脾細胞サンプルをコンカナバリンＡ(ConA)で刺激した。ConAで脾細胞を刺激して、細胞質の自由Ｃａ２＋濃度をフルオ３と流動細胞計測法で測定した。
【００６５】
実験によって、ConAが脾細胞細胞のカルシウム濃度が増加したことが判明した。カルシウムイオン濃度は、６〜２００μＡ/ｃｍ２のＥＦで増加した。より重要なことは、カルシウムイオン濃度の増加は電流密度に依存するということである（図７参照、Ｙ軸はカルシウム濃度、Ｘ軸は分数を示す）。
【００６６】
ＢＡＬＢ ３Ｔ３に対する影響
【００６７】
マウス３Ｔ３/Ａ３１線維芽細胞細胞のカルシウムイオン濃度に対するＥＦ効果を測定するために、３Ｔ３細胞を６０ＨｚでＥＦに曝露した。３Ｔ３細胞株は日本の原虫病研究センターの細胞バンクから入手し、５％ＦＣＳおよび１０ｍＭＨＥＰＥＳを含むＤＭＥＭ中で３７℃で成長させた。
【００６８】
ＥＦは、２００μＡ/ｃｍ２の細胞上の印加電流密度を生成した。２分間曝露した後、細胞質の自由Ｃａ２＋濃度をフルオ３流動細胞計測法で測定した。それは、カルシウム濃度が細胞において増加したことを示した。フルオ３イメージ強度の変化は共焦点形レーザー顕微鏡使用で確認された。
【００６９】
実施例４    
カルシウムイオノホアおよびBALB 3T3中の膜電位上のＥＦ効果
【００７０】
図８は、カルシウムイオノホアがマウスのBALB 3T3/A31線維芽細胞/胚細胞の膜電位の変化させる事を示す。図８は、０．４ｍＭ Ａ２３１８７の終末濃度で刺激されたＢＡＬＢ  ３Ｔ３細胞のＤｉＢＡＣ強度の時間的経過変化を表示する。Ａ２３１８７は、可動性キャリヤーのカルシウムイオノホアの役割をするストレプトマイシーズ・チャータユーセンシス（chartreusensis）から抽出されたモノカルボン酸である。ＤｉＢＡＣは、細胞膜の電位が変化するとき、細胞膜に入る蛍光染料である。したがって、ＢＡＬＢ  ３Ｔ３細胞の細胞膜が脱分極する場合、ＤｉＢＡＣはそれらの細胞膜に入り、ＢＡＬＢ  ３Ｔ３細胞におけるＤｉＢＡＣ信号(Ｙ軸)の強度を増加させる。
【００７１】
図９は、約２００mA/cm2の電流密度を生成する、１００Ｈｚの電界（ＥＦ）のBALB 3T3における膜電位に対する効果を示す。流動細胞計測法の方法論は以下のとおりである。DMEM中の培養は、５％のＦＣＳ  １０ｍＭ ＨＥＰＥＳが追加された。その後、０．０２％のトリプシンおよび０．０２５％のＥＤＴＡで触れられた。その後、ＨＥＰＥＳ緩衝食塩水、１３７ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＫＣｌ、１ｍＭ   Ｎａ２ＨＰＯ４、５ｍＭグルコース、１ｍＭ ＣａＣｌ２、０．５ｍＭ ＭｇＣｌ２、０．１％（ｗ／ｖ）のＢＳＡおよび１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ  ７．４において再びサスペンドさせた。その後、２００ｎＭの終濃度にＤｉＢＡＣ４（３）をロードした。５分以上、３７℃で培養した。その後、流動細胞計測法で測定した。
【００７２】
図１０も、約２００mA/cm2の電流密度を生成する１００Ｈｚの電界(ＥＦ)のＢＡＬＢ  ３Ｔ３における膜電位に対する効果を示す。
【００７３】
実施例５  
細胞外電流は滑膜線維芽細胞におけるギャップジャンクション細胞間伝達を変化させる
【００７４】
我々は、コネキシン４３（connexin43）タンパク質が介在するギャップジャンクション細胞間伝達（ＧＪＩＣ）に対する低レベル電流の効果を検討した。滑膜線維芽細胞（ＨＩＧ−８２）および神経芽細胞腫細胞(5Y)のコンフルエントな単層を、０〜７５ｍＡ/ｍ２（０〜５６ｍＶ/ｍ、６０Ｈｚ）の浴溶液において曝露し、シングルチャネルコンダクタンス、細胞膜電流−電圧（I−V）曲線およびＣａ２＋流入を、ナイスタチンタブルおよびシングルパッチ法を使用して測定した。ＨＩＧ−８２細胞のギャップジャンクションチャンネルの閉および開状態の導電はそれぞれ、２０mA/m2（０．７６ｐＡおよび０．３９ｐＡによる)に曝露された細胞において著しく減じた。５Ｙ細胞間のギャップジャンクションチャンネルの導電については効果はなかった。１０ｍＡ/ｍ２の低い電流密度は、著しくＨＩＧ−８２細胞のＣａ２＋流入を増加させたが、５Ｙ細胞には効果がなかった。両タイプの細胞の原形質膜のＩ−Ｖ曲線は、０〜７５ｍＡ/ｍ２、６０Ｈｚの電流に依存しなかった。それは、ＨＩＧ−８２細胞のＧＪＩＣに対する６０Ｈｚの電流の効果が膜電位変化によって介在されなかったことを示している。
【００７５】
結論は、低レベルの細胞外電流が膜電位の変化に依存しないがＣａ２＋の流入に依存しうるメカニズムによって滑膜細胞におけるGJICを変更できたということであった。結果は、ＧＪＩＣが介在する滑膜細胞の応答が、例えばプロ炎症性サイトカインに対する分泌性反応、細胞外の低周波電流の適用によって相殺できたことを示唆している。
【００７６】
Ｃ. ストレスを減じる方法
【００７７】
本発明は、低減した免疫系機能、伝染病、高血圧症、粥状動脈硬化症およびインシュリン抵抗性異脂肪血症症候群などのストレスおよびストレス関連疾患の予防あるいは治療に役立つ。ストレス、免疫抑制性疾患を取り扱い、ＡＣＴＨまたはコルチゾールのレベルを低減するためには、細胞膜上に生成される平均誘導電流密度は、約０．０３ｍＡ/ｍ２〜約１２ｍＡ/ｍ２、より好ましくは０．０３５ｍＡ/ｍ２から約１１．１ｍＡ/ｍ２である。印加電流については、平均印加電流密度は、好ましくは約６０ｍＡ/ｍ２から約６００ｍＡ/ｍ２である。
【００７８】
ストレスは、高血圧症、じゅく状動脈硬化症、インシュリン抵抗性異脂肪血症症候群、および免疫機能（Vanitallie T.B.、代謝、51:40-5(2002)の特定の障害を含む多数の健康障害に関係している。研究者達は、ストレスがコルチゾールやコルチコステロンのような副腎皮質ホルモンの正常なホメオスタシスに影響を及ぼす場合があるとしている。ホルモン・コルチコステロンは副腎によって生産され、その変化はストレスの一般的な指標である。最大５０kV/m、６０Ｈｚの電界に曝露されたマウスに関する報告書では、血漿コルチコステロン濃度の減少が観察されたが、曝露期間の初期のみであった(ハックマン  アール．エム．（Hackman, R.M.） & グレイブス、エイチ．ビー．（Graves, H.B.）, ベハブ．  ニューラル  ビオロ．（Behav. Neural
Biol.） 32:201-213 (1981)。同様に、プロテット（Portet）とキャバネス（Cabanes）は、ラビットとラットが５０kV/m、５０Hzで曝露された時、低下するコルチゾール・レベルは、血中コルチゾール濃度ではなく副腎で見つかった、ことを報告している（プロテット、アール．（Portet, R.） & キャバネス、ジェイ（Cabanes, J.）, バイオ電磁気学9:95-104 (1988))。
【００７９】
ACTHは脳下垂体によって発現されるペプチドで、もっぱらコルチゾールの分泌を抑制する。ACTHは、主としてACTHがコルチゾール（例えば外傷性イベントに対するストレス反応には主要な抗炎症分子）の分泌を制御するために機能するため、肉体のストレス・レベルの強力な指標として身体機能を一様にする。面白いことに、研究者達は、30〜120日間の電界曝露後にACTHレベルの増加を見出さなかった（フリー、エム．ジェイ．他（Free, M.J., et al.）, バイオエレクトロマグネティクス 2:105-121
(1981)）.ラットを1〜3時間、100kV/m、60Hzに晒した研究では、血清ACTHの変化は見つからなかった（クイリアン、ダブリュ．ジェイ．（Quinlan, W.J.,
et al.）, バイオエレクトロマグネティクス 6:381-389 (1985)）。マウスが１０kV/m、５０Hzで露出された時、血清ACTH濃度は対照群よりも高かった（デブリュン、エル．（deBruyn, L.） & デェジャガ、エル．（deJager, L.）, エンビロン（Environ.） Res. 65:149-160 (1994)）。副腎皮質の領域で脂質は上昇したが、雄のみであった。著者等は、電界がストレッサーであると結論を下した。変化した血中ACTH濃度も、１５kV/m、３０日間、６０Hzの電界に曝露されたラットにおいて観察された（マリノ、エイ．エイ．他（Marino, A.A., et
al.）, Physiol. Chem. Phys.
9:433-441 (1977)）.
【００８０】
これに対して、我々は、試験動物の特別のパラメータで電界の適用がストレスを引き起こしたＡＣＴＨ濃度を減少させたことを測定した。例えば、１７，５００V/mの電界(５０Hz)、７，０００Vの電圧、および６０分間持続の約０．０３６〜０．５ｍＡ/ｍ２の誘導電流密度を適用すると、試験動物においてストレスを引き起こした血清ACTHレベルを減少させた。
【００８１】
実施例６    拘束されたラットの血漿ACTH、グルコース、乳酸およびピルビン酸濃度における５０Hzの電界効果
【００８２】
電界曝露システム
【００８３】
この実施例において使用されたＥＦ曝露システムは、３つの部分で構成される。すなわち、高電圧装置（商標名：ヘルストロン、最大出力電圧  ９，０００V、株式会社白寿生科学研究所、東京、日本）、定電圧電源（トーキョーセイデン（TOKYO SEIDEN）、東京、日本)、およびＥＦ曝露ケージ。曝露ケージは、円筒状のプラスチックケージ（直径: ４００mm、高さ: ４００mm)、および前記円筒状のケージの上下に配置されたステンレス鋼からなる２つの電極（１，２００×１，２００mm）からなる。ケージ中にＥＦ（５０Hz; １７，５００V/m）を形成するために、安定した交流（５０Hz、７，０００V）を上部電極に印加した。
【００８４】
実験動物
【００８５】
雌、７週齡のウィスターラット、体重３００〜３５０gを、チャールス・リバー・ジャパン（Charles River Japan）から購入し、空気浄化装置を装備した通常の動物室で維持した。
【００８６】
拘束ストレス
【００８７】
ラットを、薄いポリカーボネート・シートで各々を包んで拘束し、３０分間下部電極上に置いた。
【００８８】
実験計画法
【００８９】
以下に記述するように、拘束ストレスに対するＥＦ効果を測定した。薄いポリカーボネート・シートを使用した拘束手続きを評価するために、６匹のラットを、拘束だけのグループと、拘束およびジアゼパム治療との、２つのグループに分けた。ＥＦの曝露効果を検証するために、我々は正常で、卵巣を切除したラットを使用した。正常なラットは、拘束しただけのグループと、拘束プラスＥＦとの２つのグループに分けた。更に、卵巣を切除したラットも、以下のように４つのサブグループに分けた。疑似ＥＦ曝露（Ａ１）、拘束を伴う疑似ＥＦ曝露（Ａ２）、拘束を伴うＥＦ曝露（Ａ３）およびジアゼパム治療および拘束を伴う疑似ＥＦ曝露（Ａ４）である。
【００９０】
卵巣切除は実験作業の４週間前に行なった。この研究で適用したＥＦ曝露および拘束処置は以下のとおりである。ラットを、合計１時間、５０Hz、１７，５００V/mに晒した。ラットを、ＥＦ曝露期間の後半、薄いポリカーボネート敷布で拘束した。対照群における実験デザインは、ＥＦ曝露しなかった点を除いて実験群と同じにした。
【００９１】
血液サンプルの収集
【００９２】
血液１ｍｌを、実験開始前に鎖骨下静脈から採取し、４℃で１０分間、１，５００x ｇの遠心分離で血漿を準備した。血漿はホルモン測定に先立って-80℃で保管した。実験後、各ラットから全血の３mlを、麻酔下での心採血によって９mgのEDTAを含むガラス管へ収集した。血液の１mlを血液状態を分析するために用いた。他の２mlは遠心分離し（４℃、１０分間、１，５００x g）、上清を、ホルモン、グルコース、乳酸およびピルビン酸の測定まで−８０℃で保管した。
【００９３】
血液分析
【００９４】
赤血球数と白血球数、血小板数、ヘマトクリットおよびヘモグロビン・レベルを含む血液の分析を、自動マルチ血球計数器を使用して行なった(Sysmec CC-78、Sysmec inc  東京、日本 )。血漿グルコース、乳酸およびピルビン酸・レベルを自動アナライザーで測定した(7170 ヒタチ、ヒタチ（Hitachi, Hitachi Co. ltd.）, 東京  日本)。ACTHレベルを、ACTHラジオイムノアッセイ・キット(ACTH IRMA(三菱化学株式会社製))およびガンマ・カウンター(Auto-Gamma 5530
Gamma Counting System, Packard Instrument Co. ltd)を使用して測定した。血漿コルチコステロンレベルは商用キットを使用して測定した(ImmuChem Double
Antibody Corticosterone kit, ICN Biomedicals Inc)。
【００９５】
統計分析
【００９６】
結果は、手段の平均±標準誤差（Ｓ．Ｅ．）、すなわち中間、２５パーセント、７５パーセント、最小および極大値としてのデータセットとして表わした。ペアグループ間の違いの統計的意義はスチューデントt検定によって計算し、その有意差はＰ＜０．０５として定義した。統計分析の計算はすべてMS-EXCEL（日本語版（マイクロソフト・オフィス・ソフトウェア Ver.9.0.1、マイクロソフト日本社  東京、日本））で行った。
【００９７】
結果
【００９８】
拘束ストレスによって引き起こされた血漿ACTHレベルの変化
【００９９】
図１１は、血漿ACTHレベルへのストレスの影響を示す。ラットは、ジアゼパム(黒丸)あるいは食塩水(白抜き四角)の1mg/kgB.W.で腹腔内投与された。ジアゼパム投与を行なった３０分後に、ラットを、ストレス・レスポンス誘発のために拘束した。図１１は、拘束開始後３０分の個々のラットのACTHレベルを示す。拘束前および拘束後の期間の値(平均±S.E.)は、拘束のみのグループでは２３１±１３５および１１７７±３２５ｐｇ/ｍｌ、そして拘束とジアゼパムのグループでは３５８±７３および８１０±１２１ｐｇ/ｍｌであった。各グループにおいて、拘束ストレス前後のACTHレベルを比較すると、３０分の拘束で、拘束だけのグループおよび拘束＋ジアゼバムのグループにおいて、ACTHレベルがそれぞれ５．１倍および２．３倍高くなるように増加した。
【０１００】
拘束に起因する血漿ACTHレベル変化に対するＥＦ曝露の効果
【０１０１】
図１２Ａおよび１２Ｂは、正常なラット（Ａ）および卵巣切除ラット（Ｂ）における血漿ACTHレベルに対するＥＦ曝露の効果を示す。全てのラットを、ＥＦ曝露期間の後半拘束した。血漿ACTHレベルを、次のグループにおいてＥＦ曝露６０分前および後に測定した:非処理(ｎ＝６)、拘束だけ(疑似、ｎ＝６)、ＥＦ中拘束(ＥＦ、ｎ＝６)、疑似ＥＦ中拘束かつジアゼパム(疑似およびジアゼパム、ｎ＝６)。ジアゼパムの追加は、ＥＦセッションのスタート前３０分に行った。データはボックス箱に表され、各メインボックスを２つの小さな箱に分割するように見える水平線は、中央値を表わし、各メインボックスの底辺を形成する水平線は、２５パーセントを表わし、各メインボックスの上辺を形成する水平線は、７５パーセントを表わし、各メインボックスの上の水平線は極大値を表わし、また、各メインボックスの下に現われる水平線は最小値を表わす。Pre値は示されていない。* pre値からＰ＜０．０５、†:非処理グループからＰ<0.05。
【０１０２】
卵巣切除ラットでは、非拘束グループにおける血漿ACTHレベルは６０分の間変化を示さなかった。他の３つのグループでは、ACTHレベルは拘束期間上昇した(図１２Ｂ)。pre-セッションおよびポスト・セッションの間で比較すると、血漿・レベルは、「拘束のみ」のグループ、「拘束とＥＦ」のグループおよび「拘束とジアゼバム」のグループにおいて、１８．６倍、１３．４倍、および１３.７倍それぞれ上昇した。
【０１０３】
図１３は、正常なラット(ｎ＝６)における血漿ACTHレベルに対するＥＦ曝露の効果を示す。データは、中央値、２５パーセント値、７５パーセント値、最小および極大値として示した。図１２Ａおよび１３は、正常なラットにおけるACTHおよびコルチコステロンの血漿・レベルの変化を示す。「拘束のみ」のグループと、「拘束とＥＦ」のグループにおける、ACTHレベルは、それぞれ１５９５±３６５および１１５２±１８３（ｐｇ／ｍｌ）、およびコルチコステロン・レベルは、それぞれ８４５±４８および７８６±２４（ｐｇ／ｍｌ）であった。
【０１０４】
プラズマ・パラメータに対するＥＦ曝露の効果
【０１０５】
図１４Ａおよび１４Ｂは、正常(Ａ)および卵巣切除ラット(Ｂ)に関する拘束に起因する血漿グルコースレベル変化に対するＥＦ曝露の効果を示す。それらのレベルは、６０分(ｎ＝６)のセッション後に検査された。サンプル数はすべてのグループにおいて６であった。データは、中間値、２５パーセンテージ値、７５パーセンテイジ値、最小および極大値として示した。* :非処置グループからのＰ＜０．０５
【０１０６】
卵巣切除ラットでは、拘束が血漿グルコースレベルを増大させ(P<0.05:スチューデントt検定)、また、ＥＦまたはジアゼパムはこれらの増加を抑える傾向を持っていた（図１４Ｂ）。しかしながら、ＥＦグループにおける血漿グルコースレベル抑制の傾向は、卵巣切除しなかった正常なラットにおいて観察されなかった（図１４Ａ）。
【０１０７】
図１５Ａおよび１５Ｂは、正常(Ａ)および卵巣切除ラット(Ｂ)における拘束に起因するプラズマ乳酸塩レベルに対するＥＦ曝露効果を示す。レベルは、６０分のセッション(ｎ＝６)の後に測定された。データは、中央値、２５パーセンテイジ値、７５パーセンテイジ値、最小および極大値として示された。*:非処置グループからのP<0.05、†:疑似グループからのP<0.05．卵巣切除ラットにおいて、拘束のみのグループにおけるプラズマ乳酸塩レベルは、非処置グループと比較して、有意差を示さなかった（図１５Ｂ）。ＥＦ曝露グループとジアゼパム管理グループにおける血漿乳酸レベルは、拘束のみのグループより著しく低かった(P<0.05:スチューデントt検定)(図１５Ｂ)。正常なラットにおいて、ＥＦの存在および不存在時における血漿乳酸レベル（平均（(S.E.））は、２８．６±３．６および３８．１±３．７(ｍｇ/ｄｌ)であった（図１５Ａ）。統計分析の結果、ＥＦに曝露された動物における乳酸レベルは、拘束だけのグループより著しく低かった(P<0.05:スチューデントt検定)。
【０１０８】
図１６は、卵巣切除ラットにおいて拘束に起因する血漿・ピルビン酸・レベルに対するＥＦ曝露効果を示す。値は、６０分のセッション(ｎ＝６)の後に検査した。データは、中央値、２５パーセンテイジ値、７５パーセンテイジ値、最小および極大値として表示した。*:非処置グループからのP<0.05。卵巣切除ラットにおいて、拘束だけのグループにおけるプラズマ・ピルベート・レベルは、非処置グループのそれとは著しく異なっていなかったが、拘束によって減少する傾向が見られた。ＥＦ曝露あるいはジアゼパム処理のグループにおける値は、疑似ＥＦ曝露グループのそれらより著しく低かった(P<0.05:スチューデントt検定)(図１６）。
【０１０９】
図１７は、卵巣切除ラットにおいて拘束に起因する白血球(WBC)数に対するＥＦ曝露の効果を示す。レベルは、６０分のセッション(ｎ＝６)の後に検査された。データは、中央値、２５パーセンテイジ値、７５パーセンテイジ値、最小および極大値として示した。*:非処理グループからのP<0.05。一般に、観察された拘束依存の変化は、白血球(WBC)の数値に関するものであった。非処理グループ、拘束のみのグループ、ＥＦ曝露グループおよびジアゼパム投与グループにおけるWBC値は、７８、９９、９６および８５(x 102 細胞/μl)(図１７)を示した。統計分析の結果、拘束された動物におけるＷＢＣレベルは、卵巣切除ラットにおける非処理グループのそれら(P<0.05:スチューデントt検定)より著しく高かった。ＥＦ曝露グループまたはジアゼパム投与グループにおけるWBCレベルは、非処理グループより高い傾向があり、拘束のみのグループより低かった。 
【０１１０】
実施例7  脳波図研究
【０１１１】
６匹のラットを、７日間、１日当たり１５分間１７，５００V/mと見積もられた電界に曝露した。動物の電界曝露に使用した装置は、(前述した)ヘルストロン曝露ケージであった。６匹のラットを対照(疑似曝露)として使用した。以下のパラメータ(終了点)が観察された。 脳波異常検出、各ＥＥＧレベル・グループのパーセンテージ(覚醒、休止、徐波光睡眠、徐波深睡眠、速波睡眠 )、および前頭皮質ＥＥＧパワー・スペクトル・デルタ(１〜３．８７５Hz)、シータ(４〜１５．８７５Hz)、アルファ(８〜１２Hz)、ベータ1(１２．１２５〜１５．８７５Hz)およびベータ２(１６〜２５Hz)のパーセンテージ。７，０００Ｖ(１７，５００Ｖ／ｍ)で１５分間繰り返し曝露したところ、徐波軽睡眠レベルの著しい増加が初日の１〜２時間の間観察された。７日目においては、曝露後０〜３０分の休憩ステージおよび覚醒段階の著しい減少が観察された。覚醒段階の著しい減少および徐波軽睡眠段階の著しい増加は、曝露後０．５〜１時間の間観察された。覚醒段階の著しい減少および徐波深睡眠段階の著しい増加は、曝露後１〜２時間の間に観察された。さらに、徐波軽睡眠段階の著しい増加が、曝露後２〜４時間の間観察された。
【０１１２】
自発的ＥＥＧ波タイプあるいは行動異常は観察されなかった。電界への繰り返しの曝露が、ラットの前頭皮質の周波数解析に関する如何なる神経学上の心配を示すことを示唆するものはなかった。
【０１１３】
Ｄ. 追加疾患あるいは病気
【０１１４】
電解質平衡異常の治療のために、細胞膜上に生成される平均誘導電流密度は、好ましくは約０．４ｍＡ/ｍ２〜約６．０ｍＡ/ｍ２、より好ましくは約０．４ｍＡ/ｍ２〜約５．６ｍＡ/ｍ２、更に好ましくは約０．４３ｍＡ/ｍ２から約５．５５ｍＡ/ｍ２である。
【０１１５】
関節炎の治療のためには、細胞膜上に生成される平均誘導電流密度は、好ましくは約０．０２５ｍＡ/ｍ２〜約０．３５ｍＡ/ｍ２、より好ましくは０．０２５ｍＡ/ｍ２ないし０．３５ｍＡ/ｍ２、最も好ましくは約０．０２６ｍＡ/ｍ２から約０．３２ｍＡ/ｍ２である。
【０１１６】
過度な体重の治療のためには、細胞膜上に生成される平均誘導電流密度は、好ましくは約０．０２ｍＡ/ｍ２〜約１．５ｍＡ/ｍ２、より好ましくは０．０２ｍＡ/ｍ２いし１．２ｍＡ/ｍ２、最も好ましくは約０．０２４ｍＡ/ｍ２から約１．１２ｍＡ/ｍ２である。
【０１１７】
また、本発明は、筋骨格および結合組織障害の予防あるいは治療に役立つ。これらの障害には、例えば、骨粗しょう症(老年性、二次的、かつ特発性の若年性を含む)、骨薄障害、セリアック病、熱帯性下痢、粘液嚢炎、硬皮症、クレスト症候群、シャルコー関節、骨折の適切な修理、および断裂した靭帯および軟骨の適切な修復が含まれる。また、本発明は、関節リウマチ、免疫抑制障害、神経痛、不眠症、頭痛、顔面神経麻痺、神経症、関節炎、関節痛、アレルギー性鼻炎、ストレス、慢性膵炎、DiGeorge異常、子宮内膜症、尿路閉塞、偽性痛風、甲状腺障害、副甲状腺障害、下垂体前葉機能低下症、胆石、消化性潰瘍、唾液腺障害、食欲障害、悪心、嘔吐、口渇、過度の尿生産、眩暈、良性発作性頭位眩暈、無弛緩症また他の神経の障害、急性腎不全、慢性の腎不全、拡散した食道痙攣、および一過性脳虚血発作(ＴＩＡ)、にも役立つ。また、発明は、浸透圧重量モル濃度およびその維持、また浸透圧アンバランスに関する疾患あるいは障害を含む追加の腎障害の治療に役立つ。
【０１１８】
Ｅ.  ＥＦ治療装置
【０１１９】
ＥＦ装置は、個体が置かれる電界を生成するように設計される。図１８に示されるように、電界は対象全体を包含しうる。あるいはこれに代えて、電界を、対象の特定の領域あるいは器官だけを包含するようにしても良い。
【０１２０】
図１９は、本発明の実施形態を示す高電圧生成装置(１)の模式図である。すなわち、この電位治療装置(１)は、電位治療装置(２)、高電圧生成装置(３)および商用電源(４)からなる。電位治療装置(２)は、被治療者(５)が座る肘掛け(６)付き椅子(７)と、椅子の上端に付けられ、被治療者の頭(５)の上部に配置された対向電極としての頭部電極(８)と、被治療者(５)が上面にの足を置く主電極であるオットマン電極としての別の電極(９)とを備えている。第２電極(９)に対向する電極としての、主電極である頭部電極(８)は、天井、壁、床、家具あるいは部屋の他の物あるいは部分であっても良い。高電圧生成装置(３)は、頭部電極(８)および第２電極(９)の電圧を印加するために高電圧を生成する。高電圧生成装置(３)は、通常、椅子（７）の下、脚の間で床の上に、あるいは椅子(７)の近辺に配置される。第１すなわち頭部電極(８)と患者の頭の頂部との間の距離(ｄ)は変更可能である。絶縁材料で頭部電極(８)および第２電極(９)が囲まれている。この第２電極(９)は、電気コード(１１)によって、高電圧生成装置(３)の高電圧出力端子(１０)に接続されている。また、頭部電極(８)および第2電極(９)に電圧を印加するために、高電圧出力端子(１０)が備えられている。さらに、椅子(７)および第２電極(９)は、床と接触する部位に絶縁体(１２)(１２)’を有する。人体表面と第１電極(８ａ)の間の距離(ｄ)は、ベッド・ベース(３１)上に異なる厚さのクッションを置くことにより容易に変更できる。
【０１２１】
更に別の構造を備えた電位治療装置(２Ｃ)は、図２０Ａ[斜視図]および図２０Ｂ[黒で描かれた被治療者(5)およびそれぞれの電極の位置関係を図示する側面図]に示されるタイプの椅子を備えている。椅子(７ａ)は、被治療者(５)を覆う正面開放カバー本体(３４)を備えている。このカバー本体(３４)は、被治療者(５)の頭を受け入れる対向電極としての第１電極(８ｃ)、主電極としてのオットマン電極である第２電極(９ｃ)、および座った姿勢で肩から腰の位置に配置され、腰上部位置に配置される対向電極としての別の第１電極(８０ｃ)を備えている。別の第１電極(８０ｃ)は、側面から被治療者(５)の身体をカバーするように複数の側面電極(８０ｃ')を備えている。好ましくは、第１電極(８ｃ)は人体頭部分に沿って配置され、別の第１電極(８０ｃ)は両方の肩から腰まで長手方向に沿う複数の段階に配置される。これら第１電極(８ｃ)、別の第１電極(８０ｃ)、側面電極(８０ｃ')および第２電極(９ｃ)は、絶縁材(３５)内に配置されている。絶縁体で作られていた取り外し可能なクッション・部材が、カバー本体(３４)に取り付けられている。而して、厚さの異なる利用可能なクッション・メンバーを取り付けることによって、人体表面と第１電極(８ｃ)(８０ｃ)(８０ｃ')との間の距離を変更することができる。そのような電位治療装置(２ｃ)において、上述したように、誘導電流制御手段は、体表面電界を制御し、対向電極としての第１電極(８)(８０ｃ)(８０ｃ’)および第２電極（９ｃ）に印加される印加電圧および第１電極(８ｃ)(８０ｃ)(８０ｃ’)と人体主要部の表面との間の距離(ｄ)を可変し、あるいは第１電極(８ｃ)(８０ｃ)(８０ｃ')および第２電極（９ｃ）に印加される印加電圧を制御することによって、そしてさらに、第１電極(８ｃ)、(８０ｃ)、(８０ｃ')と人体表面との間の距離(ｄ)を変更することによって、人体の主要部のそれぞれの領域に極微量の誘導電流を流すことができる。
【０１２２】
別の構造を備えた電位治療装置(２Ａ)を、図２１Ａ[斜視図]および図２１Ｂ[側面図]に示す。この電位治療装置(２Ａ)はベッド・タイプである。被治療者(５)を覆うためのボックス(３２)はベッド・ベース(３１)上に配置されている。それぞれの電極がこのボックス(３２)に備えられている。要するに、対向電極としての第1電極(8a)と主電極として人体の脚部分に配置される第２電極(９ａ)を備えている。第２電極(８ａ)は、人体の頭、肩、腹、脚および臀部あるいは他の領域に配置される。また、好ましくは、第１電極(８ａ)は、人体の肩、腹および臀部にほぼ等しい形状、幅および面積を有する。これらの図面における空白の領域は、電極が配置されない地点を示す。電極は絶縁体(３３)内に配置される。絶縁体(図示略)からなるクッションが、ベッド・ベース(３１)上のそれぞれの電極上に配置されている。そこで、異なる厚さのクッションが準備されている。
【０１２３】
前述の図１９において、頭上の頭部電極(８)と被治療者(５)の人体主要部表面間の距離(ｄ)は約１〜２５ｃｍにセットされ、図２０Ａにおいて第１電極(８ｃ)(８０ｃ)(８０ｃ')と被治療者(5)人体主要部表面との間の距離(ｄ)は、１〜２５ｃｍ、好ましくは４〜２５ｃｍにセット、そして図２１Ａにおいて、第１電極(８ａ)(８ｂ)と被治療者(5)主要部表面との間の距離(ｄ)は、好ましくは３〜２５ｃｍセットされる。
【０１２４】
この高電圧生成装置(3)は、ブースター・コイル(Ｔ)の中間点(ｓ)がアースされ、接地電圧が昇圧電圧の半分にセットされる構成となっている。図示仮想線によって示されるように、ポイント(s’)を接地しても良い。図２２に示されるブロックダイヤグラムとして、高電圧側中間点(ｓ)が加減変圧機(Ｔ)によって接地された高電圧は、高電圧生成装置(３)の電圧コントローラー(１３)を通過する１００ＶのＡＣ電力源から得られる。また、さらに、それぞれの高電圧は、人体を保護するために電流制限抵抗器(Ｒ)(Ｒ’)を介して頭部電極(８)(８ｃ)等（下記参照）および第２電極(９)（９ｃ）等（下記参照）に接続される。また、電位治療装置(１)は誘導電流制御手段を備えている。この誘導電流制御手段は、頭部電極(８)および第２電極(９)に印加される印加電圧、頭部電極(８)と人体主要部表面との間の距離(ｄ)を変えることによって、あるいは、頭部電極(８)および第２電極(９)に印加される印加電圧を制御することによって、あるいは頭部電極(８)と人体主要部表面との間の距離(ｄ)を変えることによって、身体主要部電界を制御して極微量の誘導電流を被治療者(５)の人体主要部を構成するそれぞれの領域に流すようにすることができる。人体表面と第１電極(８ａ)との間の距離(ｄ)は、ベッド・ベース(３１)上に厚さの異なるクッションを置くことにより容易に変更できる。
【０１２５】
高電圧が電位治療装置(１)に印加された状態でさえ誘導電流を増加させれば、より高い治療効果が、従来方式と同等の時間で得られる。さらに、その治療は以前より短い時間内に終らせることができる。また、さらに、同じ治療効果を得るために、先行技術と同じ値の誘導電流を、より低い電圧で以前と同じ治療時間で得ることができる。
【０１２６】
本発明の電位治療装置(１)は、高出力電子雑音、ハイ・レベルの無線周波雑音および強磁界を、できるだけ除外するように設計されている。電位治療装置(１)と干渉する電磁界の影響を低減するため、電子部品、半導体、パワーコンポーネント(サイリスター、トライアック等)電子タイマー、あるいは設計、製造のためのＥＭＩ知覚マイクロコンピュータではなく、駆動機械スイッチ、リレー、および電動機あるいは、電気タイマーあるいは他の電気的コンポーネントを使用することが望ましい。しかしながら、電子機能部品として、光学エミッター・ダイオード電源用の電子シリアルバス・スイッチングレギュレーターは有効である。また、この光学エミッター・ダイオードは、本発明の電位治療装置がアクティブ状態であるかインアクティブ状態であるを被治療者やオペレーターへ通知するための光学ソースとして使用される。
【０１２７】
上述のとおり、図２３Ａ、２３Ｂおよび２３Ｃに示されるように、疑似人体(ｈ)がＥＦと誘導電流を測定するために使用されうる。この疑似人体(ｈ)はPVCで作られており、その表面は銀および塩化銀の混合溶液で被覆されている。これにより実際の人体の抵抗と同等の抵抗（１ＫΩ以下）になっている。疑似人体(ｈ)は、看護シミュレーターとして世界的に使用されており、その寸法は、平均的な人体、例えば身長１７４ｃｍ、に近似している。寸法は、表1に記述されている。
【０１２８】
【表１】
2005534461.tif 000003
【０１２９】
体表面電界は、疑似人体(ｈ)の測定領域へディスク形の電界測定センサー(ｅ)を付けることにより測定される。その測定が、115V/60Hzおよび120V/60Hzの状況下で生じる。
【０１３０】
誘導電流の測定方法およびその装置が図２４に示されている。誘導電流測定装置(２０)において、図２３Ａおよび２３Ｂに示されるように、疑似人体(ｈ)は通常の椅子（７）に座った状態におかれる。対向電極である、頭の上方の頭部電極(８)は、疑似人体(ｈ)の頭の上から１１cmとなるように調節されインストールされている。測定は、例えば図２４のｋ−ｋ’線部分のようなそれぞれの部分を測定し、光学トランスファーを介して誘導電流波形を移送し、そして、誘導電流測定装置(２０)の接地側でこの波形を観察することにより達成される。ここに印加電圧は１５，０００Ｖである。この測定法では、疑似人体(ｈ)の各領域のセクションで引き起こされた電流の測定は、２本のリード線を用いて疑似人体(ｈ)のセクションを横切って流れる電流の短絡回路(22)（図示略）を作ることによって誘導電流を得る。測定された誘導電流は、Ｉ／Ｖコンバーター(２３)(図２４)によって電圧信号に変換される。次に、この電圧信号は伝送側で光学アナログデータ・リンクによって光学信号に変換される。
【０１３１】
これら光学信号は光通信ケーブル(２５)によって、受付側の光学アナログデータ・リンク(２６)に運ばれ、電圧信号に変換される。その後、この電圧信号は、波形観察および分析レコーダーによる周波数解析用の周波数分析器(２７)によって処理される。バッファーと加算器は、送信側（図示略）でＩ／Ｖコンバーター(２３)と光学アナログデータリンク(２４)との間に配置される。而して、１１５V/６０Hzおよび１２０V/６０Hzで測定された電界値および誘導電流は、疑似人体(ｈ)のそれぞれの領域の位置で、表２に示される。電界値がこの表２と異なる場合、そこに流れる誘導電流値も異なることが知られている。したがって、懸念される各領域の電界を変更するによって、実際の人体主要部のそれぞれの領域で有効な誘導電流を得ることができることが明白であると思われる。
【０１３２】
【表２】
2005534461.tif 000004
【０１３３】
体表面電界Ｅは、次の方程式の使用により、図２４において示されるそれぞれの領域の誘導電流の測定法によって得られたそれぞれの領域の誘導電流値から得ることができる。すなわち、Ｅ=Ｉ/εｏωＳ。ここで、Sは電界測定センサーの断面であり、εoは真空における誘電率であり、Ｉは誘導電流であり、εは2πfであり、またfは周波数である。それぞれの領域の誘導電流が前述の方法によって得られる場合、それぞれの領域の誘導電流密度Jは次の式を使用して得ることができる。すなわち、Ａ=2πr、B=πr2、B=A2/4π、J=I/B、ただし、Ａは周囲長であり、Bは円の面積であり、rは半径であり、Ｉは、測定電流であり、また、Jは誘導電流密度である。
【０１３４】
前述の誘導電流制御手段は、電位治療が行なわれるときに、頭部電極(８)の電圧および第２電極（９）への印加電圧をコントロールすることによって、人体主要部のそれぞれの領域で非常に少量の誘導電流を流れさせることができる。表３は、次のものの中の関係を示す:(１) 鼻、首および胴の誘導電流(μA)、(２)鼻、首および胴の誘導電流密度(ｍＡ/ｍ２)および１２０V/６０Hzの印加電圧(kV)。同一印加電圧の下では、電流密度は、首が最も高く、次に高いのが胴であり、鼻が最も低くなる傾向がある。表３中の誘導電流密度が10mA/m2未満であり、１０ｍＡ/ｍ２以下の電流密度は非電離放射線保護の国際調査委員会によって安全であることが確立されたものであることにご注意頂きたい。
【０１３５】
【表３】
2005534461.tif 000005
【０１３６】
図２５は、鼻、首および胴における印加電圧(kV)と誘導電流(μA)の関係を示す。図２５に明らかなように、印加電圧と誘導電流は互いに比例する。
【０１３７】
表４は、頭部電極(８)と頭の頂部との間の距離(ｄ)の関数としての人間の首における誘導電流および誘導電流密度の変化を示す。
【０１３８】
【表４】
2005534461.tif 000006
【０１３９】
表４は、１５cm以上の距離で、誘導電流が３０μAで安定することを示している。従って、距離を変えることにより誘導電流を変えるためには、距離は１５cm以下にしなければならない。図２６は、距離(ｄ)に依存する誘導電流の変化を示す。
【０１４０】
人間の腰痛の３００のケースを含む実験において、我々は、ＥＦが腰痛を治療するのに有効であると判断した。また、我々は以下のように最適のドーズおよびパラメータを判断した。要するに、最適のドーズ量は、人体の胴を構成する領域に流れる誘導電流値および誘導電流流通時間をコントロールすることにより得られる。あるいは、それは、第１電極電圧および第２電極電圧の印加電圧合計と適用時間の乗積をコントロールすることにより得られる。腰痛については、ＥＦ治療効果は、約１０kVから約３０kV、好ましくは１５kVの電圧で約３０分間それを適用することによって最適化される。換言すると、約３００kV/分から約９００kV/分、好ましくは約４５０kV/分である。
【０１４１】
表５は、表１の疑似人体(ｈ)の次元を考慮して、疑似人体(ｈ)の胴を構成するそれぞれの領域のセクションで１１５V/５０Hzで測定された誘導電流値と、この誘導電流値から計算で得られた誘導電流密度とを示す。表５から、人体の胴を構成するそれぞれの領域における誘導電流(Ａ)の測定値と、誘導電流密度(ｍＡ/ｍ２)の計算値は、以下のとおりである。目;１８/０．８、鼻;１４／１．３、首;２７／３．１、胸;４４／０．９、胃の穴;８．６／１．６、また胴;９１／２．８。
【０１４２】
【表５】
2005534461.tif 000007
【０１４３】
さらに、前述の誘導電流および誘導電流密度に基づいて、１２０V/６０Hzでの誘導電流および誘導電流密度は、次の式１および式２によって計算される。
式１：
誘導電流；
Ｉ（６０Ｈｚ）＝Ｉ（５０Ｈｚ）ｘ６０／５０ｘ１２０／１１５
式２：
誘導電流密度；
Ｊ（６０Ｈｚ）＝Ｊ（５０Ｈｚ）ｘ６０／５０ｘ１２０／１１５
【０１４４】
表６は、１２０V/６０Hzでの人体胴であるそれぞれの領域の誘導電流および誘導電流密度の計算結果を示す。表６から、人体の胴を構成するそれぞれの領域における誘導電流(Ａ)の測定値および誘導電流密度(mA/m2)の計算値は以下のとおりである。目;２３／０．９、鼻;３０／１．７、首;３４／３．９、胸;５５／１．２、胃の穴;１１／２．３、また胴;１１４／３．６。
【０１４５】
【表６】
2005534461.tif 000008
【０１４６】
電極と人体領域の間の距離が固定される場合、前記印加電圧および人体の胴のそれぞれの領域を流れる前記誘導電流は比例関係にある。したがって、人体が椅子で治療される場合、最適のドーズ量は印加電圧と適用時間の乗積をコントロールすることにより得ることができる。というのは、人体のそれぞれの領域の電界強度は、電極と人体の間の距離が、最大公約数の方法で決定される場合、印加電圧によってほとんど決定されるからである。
【０１４７】
熟練した者であれば、印加電圧の大きさ、および電流密度もまた、ヘルストロン（Healthtron） HES-30TM装置(白寿社)のような、適切な電界装置を使用してコントロールされうる、ということを理解するであろう。例えば、生体試料がある状態で生成された誘導電流は、ＥＦが印加される電極のポテンシャルを上げることにより増加しうる。他の適切な装置は熟練した者に知られており、００２９８装置(白寿社)、ＨＥＦーＫ９０００装置(白寿社)、ＨＥＳ-１５Ａ装置(白寿社)、ＨＥＳ−３０装置(白寿社)、ＡＣ／ＤＣ発電機(Sankyo社)および関数発生器SG 4101(Iwatsu社)が含まれるが、これらに限定されるものではない。典型的な装置のいくつかの特徴はそれらの装置用の仕様書と共に表７において示す。
【０１４８】
本発明の方法に有用な追加の電界装置には、、米国特許第４，０９４，３２２号に開示された電界生成装置があり、上記特許の開示内容はそっくりそのまま参照としてこの明細書の開示内容として組み込まれる。この治療の装置は、装置上に横たわる患者の希望部位に電界を直接的に適用することが可能である。他の電界装置は、米国特許第４，０３３，３５６号、米国特許第４，２９２，９８０号、米国特許第４，８０２，４７０号およびどれが各々の参照によってその全体にここに組み入れられるかというイギリス特許第GB ２，２７４，５９３号に開示されており、上記特許の開示内容はそっくりそのまま参照としてこの明細書の開示内容として組み込まれる。
【０１４９】
表７は、本発明の方法と共に使用されうる選択されたＥＦ装置の特記仕様書を提供する。
【０１５０】
【表７】
2005534461.tif 000009
【０１５１】
均質だが不規則な形に作られた人間モデルにおける６０Hzの電界によって引き起こされた電流密度分布は、２段階有限差分手続きを使用して計算された(ハート、エフ．エックス．（Hart, F.X.）, バイオエレクトロマグネティクス 11:213-228
(1990))。１０kV/mの電界に曝露された非接地の人間のモデルの場合については、背中の下部の高さの胴を通る平面における誘導電流密度は、１．１４ｍＡ／ｍ２であった(図２７)。他の位置での電流密度は０．８〜３．５ｍＡ／ｍ２の範囲であった。正確な値は、モデルと土地の間の容量結合に依存したが、結合する病気の合理的な範囲は、計算された電流密度の2のファクター未満の変化に帰着した。同様の結果は他の者によって見い出された(ガンディ、オー．ピー．（Gandhi, O.P.） & チェン、ジェイ．ワイ．（Chen, J.Y.）, バイオエレクトロマグネティクス  サプリメント（Bioelectromagnetics
Suppl.） 1:43-60 (1992); キング、アール．ダブリュ．ピー．（King, R.W.P.）, IEEE Trans. Biomed. Eng.
45:520-530 (1998))。
【０１５２】
有限差分時間領域方法は人体の解剖学的に基づいたモデルにおける誘導電流を計算するために使用された(ファーセ、シー．エム．（Furse, C.M.） & ガンディ、オー．ピー．（Gandhi, O.P.）、 バイオエレクロトマグネティクス19:293-299
(1998))。その計算は以前に可能であったなよりはるかに大きな分解能を可能にした、スーパー・コンピューター上で行なわれた。モデルにおける特定の組織で引き起こされた電流密度のために得られた結果は、表８に示される。比較可能な結果は太った筋肉(バイオ医学のチャン、エイチ．アール．（Chuang, H.-R.） & チェン、ケー、エム．（Chen, K.-M.）, IEEE Trans.。Eng。36:628-634(1989))およびまた骨頭脳(ハート、エフ．エックス．（Hart, F.X.） & マリノ、エイ．エイ．（Marino, A.A.）, Med. Biol. Eng. Comp. 24:105-108 (1986))を含む組織の合成模型を使用する他のものによって見つかった。
【０１５３】
【表８】
2005534461.tif 000010
【０１５４】
実施例８    電場(EF)への曝露:  人間患者中のいくつかの臨床症状に対する緩和効果
【０１５５】
電界曝露装置(ヘルストロン(モデルHES、株式会社白寿生科学研究所、東京、日本))が使用された。ヘルストロンは昇圧器(回路における電圧を制御するための装置)、座席および電極を含む。２つの対向する電極のうちの1つに高電圧を印加して、２つの電極間のスペースにに一定の電位差を形成しＥＦを形成する。
【０１５６】
ユーザは、曝露期間中、快適に着席し、本を読んだり眠ることができた。電流の形成に起因する偶然の電気ショックを防ぐために、被治療者は、治療中、床あるいは誰か（オペレーターや電気にさらされた他の人）との肉体の接触のどんな形式も認められなかった。絶縁体被覆電極は、足を乗せることを許された床および各患者の頭に置かれた。３０，０００ボルト(５０あるいは６０HzのＥＬＦ（超低周波数）)の初期電力が、足に置かれた電極に印加され、足および頭に位置する電極間にＥＦを生成した。電気への曝露は１セッション当たり３０分間続き、曝露の頻度は、１日１回から１週間１回にばらついた。
【０１５７】
ヘルストロンの効能は、Yuichi Ishikawa医師の直接の監督の下で、東京港区の虎ノ門クリニックにて１９９４年８月１日から１９９７年６月３０日までのアンケート処理から得られた結果に基づいて評価された。合計１，２５３人の患者(４８９人の男性;７６４人の女性)がその装置を用い、そのうち５０５人(２０８人の男性、２９７人の女性)がクリニックを訪れて、ヘルストロン装置を使用し、少なくとも２回その装置を使用した。他のものは２度以上装置を使用したかもしれない。アンケートにおけるエントリーの主観性の範囲を減じるために、ヘルストロンの緩和効果の評価はこれらの505人の患者に制限された。
【０１５８】
すべてのヘルストロン・ユーザは医師によって世話され、以前の訪問中の装置の緩和効果についてインタビューされた。そのインタビューは、主な肉体の病訴(=徴候)、過去の病歴および治療、ヘルストロンの利用頻度およびその緩和効果を含む使用後の印象およびユーザがヘルストロンを個人的に持っているか、に関する問題を含んでいた。最初の病院受診時の徴候の厳しさを３とし、ヘルストロン治療の後の厳しさを５等級に分類された:すなわち、非常によい(５);よい(４);不変(３);悪化した(２);そして、高度に悪化した(１)。非常に良いおよび良いは、「軽減される」に分類された。また、曝露の頻度/間隔にかかわらず緩和の日数も、同様に記録された。
【０１５９】
結果
【０１６０】
患者の年齢は２０〜９０歳の間で、４０歳以上が８５．３％であった(表９)。２０８人の(４１%)男性および２９７人の(５９%)女性がいた。異なる５５の徴候が識別された。また、ヘルストロン治療で徴候毎の緩和を報告した患者の割合は、表９において要約される。少なくとも１０人の患者によって識別された徴候は、手足の冷え、疲労、頭痛、高血圧症、不眠症、関節痛、低腰背痛、手足の痛み、皮膚そう痒症、手足におけるしびれ感、肩/頸痛、およびこり。ヘルストロン治療の緩和効果は、熱を伴うことのない、また蜘蛛膜下あるいは脳出血の為の療法を用いていない、あるいは炎症の無い頭痛(９１．７％)、関節痛(６６．７％)、腰痛(５７．３％)、肩/頸痛およびこり(５６．０〜５７．８％)、疲労(５５．０%)の緩和、で明白だった。面白いことは、運動器官(頭、関節、肩、首、手足および腹)に影響する、痛みに関連する徴候に対する緩和効果は、２９９のケースのうちの１７５(５８．５％)を記録した。痛みに関連する徴候は、外傷に帰せられなかった。皮膚そう痒症を持った１０人の患者中、４人が軽減されたと主張したが、臨床徴候は最初の治療後に１人の患者において悪化した。
【０１６１】
【表９】
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【０１６２】
表10は、５０５人の患者において５５の識別された臨床症状の緩和割合を示す。
【０１６３】
【表１０】
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【０１６４】
図２８は、５０５人の患者において、ヘルストロン治療の頻度／間隔に関係なく1つの徴候当たりの緩和平均期間を示す。識別された徴候の多くの中の小サンプルサイズ、研究者がアンケートから生成されたデータに単に依存した本研究の固有の制限を考慮して、我々は、50%を越える緩和割合を示す少なくとも１０人の患者によって識別された徴候にのみ治療の緩和効果の持続性が正当に記述され得ると信じる。約５０日間続いた疲労の緩和；関節、背中下部および肩／頚部硬直は、１００日弱間軽減された。他の多くの徴候に記された緩和のより長い平均期間は、治療の真の効果ではなくサンプル・サイズの反映でありえる。
【０１６５】
F. 電気的治療パラメータを最適化する方法
【０１６６】
使用に起因しうる望まれない副作用を回避しながら、発明のパラメータ範囲の選択および選択は治療のツールとしてのＥＦの利用を可能にする。従って、その発明は、特定の生物学の結果を達成し、かつ望まれない副作用を回避する治療のツールとして、訓練された個人がＥＦを使用できるパラメータおよびそれらの使用の範囲を提供する。
【０１６７】
ＥＦ治療用の最適のパラメータを決定する好ましい方法は次のステップを含んでいる:
(ｉ)生体系に誘発するべき所定の生体応答を識別すること;
(ｉｉ) 生体物における、あるいは生体物に由来した組織サンプルあるいは培養における細胞の細胞膜上の平均の誘導電流密度の選択あるいは測定;
(ｉｉｉ) 生体物、サンプルあるいは培養からの特定の距離で選択され、測定された誘導電流密度を生成する外部電界の選択あるいは測定;
(ｉｖ) 細胞膜上の選択されあるいは測定された誘導電流密度を生成する連続的期間の選択あるいは測定;
(ｖ) 生体物、サンプルあるいは培養に、選択されあるいは測定された連続的な期間の細胞膜上の選択されあるいは測定された誘導電流密度を生成するために選択されあるいは測定された電界を適用すること;
(ｖｉ)所定の生体応答が起こる範囲を測定すること;
(ｖｉｉ)  (ｉｉ)から（ｖｉ）のいずれかのステップを任意に繰り返すこと;
(ｖｉｉｉ)選択されあるいは測定された外部電界のために、あるいは最良に希望の生体応答を誘発する選択されたか測定された連続的な期間、選択されあるいは測定された誘導電流密度に対する値を識別すること。
【０１６８】
好ましくは、当該方法はさらに、ステップ(ｖｉｉｉ)の前に、選択されあるいは測定された誘導電流密度、選択されあるいは測定された外部電界、選択されあるいは測定された連続的な期間のいずれかの関数としての用量反応曲線を生成するステップを含む。さらに好ましくは、当該方法は、ステップ(ｖｉｉｉ)の前に、下記を選択あるいは測定するステップをさらに含む:ステップ(ｖ)が繰り返される回数、ステップ(v)の反復の間隔、および選択されあるいは測定された誘導電流密度が細胞膜上に生成される全時間。
【０１６９】
より好ましい実施形態は、次の特徴の１つ以上を含む。選択されあるいは測定された誘導電流密度が、約０．００１ｍＡ/ｍ２から約１５ｍＡ/ｍ２である、誘導電流密度は、生体系あるいはその部分の所定のセクションに流れる誘導電流を測定することによって、測定電流を電圧信号に変換することによって、電圧信号を光学の信号を変換し、ついで光学信号を電圧信号に再変換し波形と周波数を分析することによって、選択されあるいは測定される、および／または、外部電界(Ｅ)は式Ｅ＝Ｉ／εｏωＳで選択されあるいは測定される。ただし、Sは電界測定センサーのセクション、oは真空の誘電率、Ｉは電流、εｏωＳは２πｆ、ｆは周波数である。
【０１７０】
印加電流処置の最適パラメータを決定する好ましい方法は次のステップを含む。
(ｉ)それの生体系あるいその部分に誘発すべき所定の生体応答を識別すること;
(ｉｉ) 生体物における、あるいは組織サンプルあるいは培養における細胞の細胞膜上の平均印加電流密度の選択しあるいは測定すること、平均印加電流密度は、約１０ｍＡ/ｍ２から約２，０００ｍＡ/ｍ２である;
(ｉｉｉ) 選択されあるいは測定された印加電流密度を生成する電流の選択あるいは測定、
(ｉｖ) 選択されあるいは測定された印加電流密度を生成するために連続的な期間の選択しあるいは測定すること、
(ｖ) 選択されあるいは測定された連続的な期間用の選択されあるいは測定された印加電流密度を生成するために選択されあるいは測定された電流を適用すること;
(ｖｉ)所定の生体応答が起こる範囲を測定すること;
(ｖｉｉ)選択されあるいは測定された電流、選択されあるいは測定された印加電流密度、あるいは選択されあるいは測定された連続的な期間の関数としてのドーズ-反応曲線を生成するためにステップ(ｉｉ)〜ステップ(ｖｉ)のいずれかを繰り返すこと、
(ｖｉｉｉ)選択されあるいは測定された印加電流密度のために、あるいは最良に所定の生体応答を誘発する選択されあるいは測定された連続的な期間のために、選択されあるいは測定された電流に対する値を識別すること。
好ましくは、当該方法はさらに、ステップ(ｖｉｉｉ)の前に以下を選択しあるいは測定する。ステップ(ｖ)が繰り返される回数、ステップ(ｖ)の反復時間の間隔、および印加電流密度が細胞膜上に生成される時の全面的な期間。
【０１７１】
発明者は、ある疾患を最適に治療するパラメータを割り出した。大まかにいうと、ＥＦ電圧(外因的)は、約５０kVと約３０kVの間の範囲において印加されうる。誘導電流密度は約０．００１ｍＡ/ｍ２から約１５ｍＡ/ｍ２の間の範囲において生成されうる。好ましくは、ＥＦ誘導電流密度は、約０．０１２から約１１．１ｍＡ/ｍ２、より好ましくは約０．０２６から約５．５５ｍＡ/ｍ２の範囲において生成される。
【０１７２】
印加電流密度は、約１０から約２，０００ｍＡ/ｍ２までの間の範囲において利用されうる。発明の別の実施例では、印加電流約５０から６００ｍＡ/ｍ２の間の範囲において生成される。発明の更に別の実施例では、ＥＦ印加電流は約６０から約１００ｍＡ/ｍ２の範囲において生成される。 
【０１７３】
表１１は疾患と病気の治療に好ましいパラメータ・セットを提供する。表１１は、パラメータ・セットが適用される特別の疾患、病気、器官あるいはシステムを提供する。値は近似であり、等価な範囲は発明によって予期されると理解されるが、表１１もまた特別のパラメータ値を提供する。
【０１７４】
【表１１】
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【０１７５】
本発明は、また、ＥＦ特性、曝露の誘導電流密度、印加電流密度および期間のような、パラメータの所定のセットを決定する方法に関し、最大の望ましい効果が動物実験主題中で得られる。
【０１７６】
本発明の好ましい実施形態では、最適化の方法は次のステップを含む。生体物あるいはその部分に誘発される所望の生物学の効果(例えば、筋細胞における内部のカルシウムイオン・フラックスを引き起こす効果)の同定、平均の印加電流密度に対する、あるいは生体物あるいはその部分の細胞膜の誘導電流密度に対する値の選択であって、該値は、好ましくは、印加電流の場合、１０ｍＡ/ｍ２から約２，０００ｍＡ/ｍ２の範囲内に、誘導電流の場合、約０．００１ｍＡ/ｍ２から約１５ｍＡ/ｍ２の範囲内にある、選択された電流密度を生成する印加電流あるいはＥＦに対する値(周波数およびEF電圧のような)の決定、印加電流密度を生成する個別の期間の選択であり、該期間は、約２分から連続あるいは不連続の１０，０８０分の範囲内にある、選択された電流密度を生成する印加電流あるいはＥＦの適用、所望の生物学的効果が起こる範囲の決定、および前記ステップのうちのいずれかの反復。好ましくは、最適化手続きは、選択された値の関数としてのドーズ-反応曲線の生成を引き起こす。別の好ましい実施形態では、印加電流あるいはＥＦに対する値は、生体物の身体形態学、重量、体脂肪率、および細胞膜上の電流の誘導に関連する他の要因を考慮して、決められる。
【０１７７】
本発明のいくつかの実施例では、細胞性膜を横切ってイオン・フラックスの生体内の調整に使用されたパラメータは、表12において示されたコンビネーションによって例証される。本発明の他の実施例では、細胞性膜を横切ってイオン・フラックスの生体外の調整に使用されたパラメータは、表13において示されたコンビネーションによって例証される。
【０１７８】
【表１２】
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【０１７９】
【表１３】
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【０１８０】
代替実施形態では、本発明は、個体が特定の疾患あるいは症状を被っているかどうか決定する為の診断のツールとして有用である。疾患あるいは症状の予防、改善および治療に関連した特定のパラメータは、同じ疾患あるいは症状の存在を検知するのに役立ちうる。それらパラメータは、症候、および反応性のためにモニターされた効果として適用できる。患者が、疾患に関連したパラメータの与えられたセットに反応しなければ、レスポンスの欠如は患者が特別の疾患あるいは症状を被っていないことを示唆する。あるいは、患者が、(疾病に関係した)パラメータの与えられたセットに反応すれば、レスポンスの存在は、特にその疾患および／または症状の存在を示す。本発明の診断の実施形態は、ＥＦパラメータの特定のセットが割り出されたすべての疾患および／または症状に使用されうる。
【０１８１】
前述の説明および実施例に特に記載されたことの他にも、本発明を実施しうること明らかである。本発明の多数の改良および変更は、上述の教示に照らして可能であり、したがって、添付クレームの範囲内である。
【０１８２】
発明の背景の欄、詳細な説明の欄および実施例の欄で引用された各ドキュメントの全ての開示(特許、特許出願、雑誌論文、要旨、実験マニュアル、書籍あるいは他の開示を含む)は、リファレンスとしてそっくりそのまま組み込まれてこの明細書の内容を構成する。
【０１８３】
電界を適用する電気的治療装置および方法は、２００１年１２月１４日出願にかかる、米国特許出願第１０／０１７，１０５号に開示されており、それらの内容はリファレンスとしてそっくりそのまま組み込まれてこの明細書の内容を構成する。
【図面の簡単な説明】
【０１８４】
【図１】図１はＥＦ曝露システムにおけるフィールド曝露ディシュを示す。
【図２】図２は、ＥＦ曝露直後の生存細胞のパーセンテージを示す。
【図３】図３は、[１２．５μｇ/ml Con-Aを含むＥＦを曝露されたおよびされていない細胞浮遊液における[Ｃａ２＋]ｃ−ｈｉｇｈ細胞の数の著しい増加を示す。
【図４】図４Ａおよび４Ｂは、ＣａＣｌ２の１ｍＭとあるいはそれなしで、Con-Ａの異なる濃度を含むＥＦ曝露された細胞における結果を要約する。
【図５】図５は、フィトヘムアグルチニン(ＰＨＡ)を含むＥＦ曝露されたあるいはされていない細胞において[Ｃａ２＋]Ｃ−ｈｉｇｈ細胞が著しく増加していることを示す。
【図６】図６は、０．０２５μｇ/ｍｌのCon-Aで刺激された細胞と比較した時、３．１２５〜１２．５ μｇ/ｍｌのCon-Aを追加された時、ＥＦを曝露した細胞あるいは曝露されない細胞のいずれの[Ｃａ２＋]Ｃ−ｈｉｇｈ細胞は著しく増加していることを示す。
【図７】図７は、脾細胞においてCon-Aが引き起こすカルシウムイオンの増加が上昇させた事を示す。
【図８】図８は、終濃度０．４μＭのＡ２３１８７で刺激されたＢＡＬＢ  ３Ｔ３マウス胚細胞のＤｉＢＡＣ染色強度の経時変化を示す。
【図９】図９は、およそ２００μＡ/ｃｍ２の電流密度を生成する１００Ｈｚでの電場(ＥＦ)のＢＡＬＢ  ３Ｔ３における膜電位に対する影響を示す。
【図１０】図１０もまた、およそ２００μＡ/ｃｍ２の電流密度を生成する１００Ｈｚでの電場(ＥＦ)のＢＡＬＢ  ３Ｔ３における膜電位に対する影響を示す。
【図１１】図１１は、血漿副腎皮質刺激ホルモン(以下「ＡＣＴＨ」)におけるストレスの影響を示す。
【図１２】図１２Ａおよび１２Ｂは、正常な(Ａ)および卵巣が切除されたラット(Ｂ)における血漿ＡＣＴＨレベルでのＥＦの曝露の効果を示す。
【図１３】図１３は、正常なラット(n=6)における血漿ＡＣＴＨレベルのＥＦ曝露の効果を示す。
【図１４】図１４Ａおよび１４Ｂは、正常な(A)および卵巣が切除されたラット(Ｂ)についての制約に引き起こされた血漿グルコースレベル変化に対するＥＦ曝露の効果を示す。
【図１５】図１５Ａおよび１５Ｂは、正常な(Ａ)および卵巣が切除されたラット(Ｂ)において拘束によって引き起こされた血漿乳酸レベルについてのＥＦ曝露の効果を示す。
【図１６】図１６は、卵巣が切除されたラットにおける拘束に引き起こされた血漿ピルビン酸レベルに対するＥＦ曝露の効果を示す。
【図１７】図１７は、卵巣が切除されたラットにおける拘束に引き起こされた白血球(ＷＢＣ)数に対するＥＦ曝露の効果を示す。
【図１８】図１８は、ＥＦ治療装置を用いて生成された電界の概念的輪郭を示すものであり、ここでは白寿生科学研究所から提供されたバイオニトロン（BioniTron）椅子を用いている。
【図１９】図１９は、本発明の好ましいＥＦ治療装置の概略図である。
【図２０】図２０Ａおよび２０Ｂは別の好ましいＥＦ治療装置を示す。
【図２１】図２１Ａおよび２１Ｂは別の好ましいＥＦ治療装置を示す。
【図２２】図２２は、ＥＦ治療装置の好ましい電気的構成図である。
【図２３】図２３Ａは模擬人体の正面図、図２３Ｂは斜視図、図２３Ｃは、ボディのネックに付けられたＥＦ測定センサーを示す図である。
【図２４】図２４は、ＥＦ治療装置によって生成された誘導電流の測定装置を示す。
【図２５】図２５は、印加電圧と誘導電流の関係を示す。
【図２６】図２６は、頭部電極の位置とネックに誘導された電流との関係を示す。
【図２７】図２７は、非接地状態にある人体の様々な位置における誘導電流密度(ｍＡ／ｍ２)を示す。
【図２８】図２８は、人間における各種徴候に対するＥＦ曝露の緩和効果を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【国際調査報告】
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