(57)【要約】本発明は、胃不全麻痺を治療するためのGLP-1化合物の使用に関する。通常、胃不全麻痺を有する患者は胃排出の遅延をうける。これらの患者における胃排出を調節するためにGLP-1化合物を用いることができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
GLP-1化合物を有効量で胃不全麻痺に罹患した患者に投与することを含む、患者の胃不全麻痺を治療する方法。
【請求項２】
該患者が糖尿病にも罹患している請求項１に記載の方法。
【請求項３】
該患者が２型糖尿病に罹患している、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
GLP-1化合物がGLP-1(7-36)アミド、GLP-1(7-37)、GLP-1アナログおよびGLP-1誘導体からなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
GLP-1化合物がExendin-4、Exendin-4アナログおよびExendin-4誘導体からなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
GLP-1化合物がGLP-1レセプターのアゴニストである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
GLP-1化合物がDPP-IV耐性アナログである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
GLP-1化合物が22位にグルタミン酸を有するGLP-1アナログまたは誘導体である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
GLP-1化合物が８位にバリンまたはグリシンを有するGLP-1アナログである、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
GLP-1化合物がGLP-1誘導体である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
GLP-1誘導体がアシル化GLP-1アナログである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
GLP-1誘導体がArg34Lys26-(N-ε-(γ-Glu(N-α-ヘキサデカノイル)))-GLP-1(7-37)である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
GLP-1化合物が皮下注射により投与される、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
GLP-1化合物が経口投与される、請求項１〜12のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
GLP-1化合物が口腔内投与される、請求項１〜12のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
胃不全麻痺の治療用医薬の製造におけるGLP-1化合物の使用。
【請求項１７】
請求項１〜15のいずれか１項に記載の方法のための医薬の製造におけるGLP-1化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、胃不全麻痺を治療するためのグルカゴン様ペプチド（GLP-1）化合物の使用に関する。胃が弱っていることを意味する胃不全麻痺は、胃腸管（GI）系の麻痺である。これは自律神経系の停止または不正確な活動を引き起こす神経障害の一種であり、食事摂取後の胃排出の遅延を生じる。胃は２つの部分を有する。近位胃または胃底と称される上部は、飲み込まれた食物および液体が集められる場所である。遠位胃または幽門と称される下部は、食物が小さい断片に破砕され、次いで小腸の最初の部分である十二指腸へと追い出されるまで食物を往復させて攪拌する場所である。幽門の強力な収縮輪により固体相の排出が促される。正常個体では胃の収縮を引き起こす固形食の摂取後に、協調した活動波が約３回/分で幽門を通過する。胃不全麻痺の個体では電気信号が遅延し、胃の収縮回数が減少し、そして食物の胃での滞留を引き起こすぐらい弱い力で収縮することが多い。
【背景技術】
【０００２】
胃不全麻痺が完全な衰弱性である場合もある。症状としては、吐き気、嘔吐、早期満腹感、腹部膨満、心窩部疼痛または灼熱感および食欲不振が挙げられる。胃不全麻痺は糖尿病ではない患者でも起こるが、１型および２型糖尿病の患者で発症することが一般的である。糖尿病患者の約75％が何らかのタイプの胃腸の機能不全を経験しており、糖尿病患者の約25〜35％が胃不全麻痺を有している。なぜ、この疾患の有病率が糖尿病集団においてこのように高いのかは明らかではない。しかし、高血糖症は胃排出の遅延を引き起こし、疾患に関連する症状を悪化させるので、糖コントロールが重要と思われる。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
現在利用可能な治療は十分には効果的でなく、望ましくない副作用を随伴することが多い。例えば、運動促進薬および制吐剤は、胃排出の遅延を処置するために投与され得る。McCallum, R.ら、Diabetic and nondiabetic gastroparesis: current treatment options 1 Gastroenterology 1-7 (1998)。エリスロマイシンの静脈内注射は、疾患の重篤度または他の問題が原因で経口的に投薬をうけることができない患者に最適な治療法であることが多い。しかし、エリスロマイシンはGI毒性、中毒性難聴、偽膜性大腸炎および細菌耐性株の誘発を引き起こしうる。経口投薬をうけることができる患者には、おそらくシサプリドが最も有効である。シサプリドの副作用としては、腹部不快感および便通回数の増加が挙げられる。さらに、心臓不整脈を引き起こし得る重大な薬物相互作用が存在する。従って、合衆国ではこの薬物の入手可能性を厳しく制限している。この疾患の治療に関する医学的ニーズが満たされていないことは明らかである。
【０００４】
糖尿病患者では、胃不全麻痺の重篤度および付随する症状は、血糖コントロールの改善を生じる厳格なインスリン治療レジメにより、ある程度は改善され得る。しかしながら、胃不全麻痺および関連する胃排出の遅延は、インスリンまたは経口投薬で処置されている糖尿病患者における低血糖および高血糖両方の危険性を上昇させる。胃不全麻痺が原因で食物の小腸への送達が中断されると、低血糖の危険性が上昇する。食後の正常な血糖の上昇が遅延し、その結果として食事前に投与したインスリンは血糖レベルがまだ低いときにピーク濃度に達する。最終的には血糖レベルは数時間後に上昇するが、この時点ではインスリン濃度はすでに下降し始めているので、もはやインスリンはこの高血糖症を中和するのに十分ではない。それゆえ、中程度〜重篤な胃不全麻痺を有する糖尿病患者では、食事の後、何時血糖レベルが上昇するかを予測することができないので有効な血糖コントロールがほぼ不可能となる。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
GLP-1化合物を用いる胃不全麻痺の治療により、効力が無く、重篤な副作用を有する化合物投与に関連した問題が解決される。さらに、GLP-1はインスリン作用性の活性を有するが、低血糖は引き起こさない。従って、GLP-1は糖尿病患者の胃不全麻痺を治療するだけではなく、インスリンまたはこれらの患者における経口薬剤での処置後の効果のない糖コントロールに付随する問題をも克服する。
【０００６】
GLP-1アナログおよび誘導体は主に２型糖尿病を治療するために開発されてきた。GLP-1のインスリン作用性効果は良く文献に記載されているが、このペプチドはさらなる興味深い生理学的効果（ラットにおける胃排出の遅延の発生および小腸運動性の阻害を含む）を有する[Imeryuz, N.ら、Glucagon-like peptide-1 inhibits gastric emptying via vagal afferent-mediated central mechanisms, 273 Am. J. Physiol., G920-G927 (1997); Willms, B.ら、Gastric emptying, glucose responses, and insulin secretion after a liquid test meal: Effects of exogenous glucagons-like peptide-1 (GLP-1)-(7-36) Amide in type 2 (noninsulin dependent) diabetic patients, 81 J. Clin. Endocrinology, 327-332 (1996);  Wettergren, A.ら、The inhibitory effect of glucagons-like peptide-1 (GLP-1)7-36 amide on gastric acid secretion in humans depends on an intact vagal innervation, 40 Gut 597-601 (1997)、Tolessa, T.ら、Inhibitory effect of glucagons-like peptide-1 on small bowel motility, 102 J. Clin. Invest., 764-774 (1998)］。さらに、GLP-1は過敏性腸症候群（IBS）および機能性消化不良の治療剤として示唆されている。米国特許第6,348,447（B1)号を参照。
【０００７】
IBSおよびいくつかのタイプの機能的消化不良は、胃不全麻痺とは明らかに異なっている。通常、機能的消化不良は腹部に集中した慢性または再発性の疼痛を伴う。IBSは結腸の異常収縮から生じ、これは排便の推進に影響を及ぼし、混和および水の吸収を促進する。小腸の運動亢進症もまた見出され、突発的な痙攣が主な痛みの原因である。胃腸運動機能にはいくつかの事象間での完全には理解されていない複雑な相互関係が関与しているが、IBSおよびおそらくいくつかのタイプの機能的消化不良は下部GI管の問題と関連し、胃不全麻痺は胃排出の遅延に起因する上部GIの問題と関連すると思われる。GLP-1が実際に胃排出の遅延を引き起こし、平滑筋収縮を阻害することが示されているので、収縮性の減少および胃排出の遅延により引き起こされると考えられている障害の胃不全麻痺を治療するために、このペプチドを用いることができるということは、驚くべきことである。GLP-1のインスリン作用性の作用がグルコース依存性であると仮定すると、これは特に興味深い発見である。インスリン投与とは異なり、GLP-1の投与は低血糖症の危険性を伴わない。従って、GLP-1化合物（GLP-1アナログ、GLP-1誘導体およびGLP-1レセプターのアゴニストを含む）は、糖尿病患者において血糖を正常にするため、ならびに糖尿病患者および非糖尿病患者において胃不全麻痺を治療するために用いることができる。
【０００８】
本発明は、胃不全麻痺に罹患した患者にGLP-1化合物を有効量で投与することを含む該患者の胃不全麻痺を治療する方法、または胃不全麻痺の治療用医薬の製造のためのGLP-1化合物の使用に関する。胃不全麻痺を有する患者は、糖尿病患者ではないかもしれないし、糖尿病患者であるかもしれない。GLP-1化合物は当業者に公知の任意の方法により投与され得る。好ましくは、GLP-1化合物は皮下注射、経口により投与されるか、または周口膜を介して吸収される。
【発明の効果】
【０００９】
GLP-1化合物を用いる方法および組成物は胃不全麻痺の治療に有効である。胃不全麻痺は、胃の調節不全（dysregulation）および幽門収縮性に関連する胃排出の欠陥に関連する。GLP-1化合物は胃および／または幽門収縮性を調節して胃排出の遅延を減らす、または取り除くように働く。
【００１０】
症例の40％においては、胃不全麻痺の原因はわかっていない。しかし、この疾患は糖尿病患者の約25％〜35％で発生し、ある研究の結論ではこの障害の有病率は59％もの高さである[Soykan, I.ら、Demography, clinical characteristics, psychological and abuse profile, treatment and long term follow-up of patients with gastroparesis, 11 Dig. Dis. Sci. 2398-2404 (1998);  Hiba, R.,  Is there a difference in the prevalence of gastrointestinal symptoms between type 1 and type 2 diabetics? 4 Gastroenterology A79 (1999)]。
【００１１】
胃不全麻痺の症状としては、吐き気、嘔吐、食後膨満感、心窩部疼痛、食欲不振および早期満腹感が挙げられる。より重篤な症例では、患者は数時間前に食べた消化されていない食べ物を嘔吐するかもしれないし、体重減少、脱水症状および栄養失調の徴候と共に急激な振水打診音陽性（positive percussion splash）の徴候を示しうる。胃不全麻痺の全身的な原因は、患者を真性糖尿病、甲状腺機能低下症、コルチゾール欠乏症、高カルシウム血症および妊娠について検査することにより判断する。食道造影、内視鏡検査および上部消化管X線撮影により、消化性潰瘍疾患および胃幽門部閉塞を除外することができる。バリウムの胃からの排出が良くないことにより、胃排出の遅延を示すことができる。しかし、胃シンチグラフィーが胃不全麻痺の正確な診断の判断基準である。この試験では、患者に99-Mテクネチウム(TC)硫黄コロイドまたは他の放射性リガンドで標識した食物を摂取してもらう。次いで、γカメラを用いて胃領域における放射活性を測定する。液体食の排出は実際の胃の排出を示さないので、上記の食物は固形であるべきである。試験の結果は、食物の50％を排出する時間、または特定の間隔後の時点での排出割合として報告することができる[Thomforde, G.M.ら、Evaluation of an inexpensive screening scintigraphic test of gastric emptying, 36 J. Nucl. Med. 93 (1995)]。13-炭素で標識した食事を用いる呼気試験も胃排出を測定するために用いることができる。C13は小腸に達した時点で吸収され、呼気中の測定値により胃排出を示し得る［Ghoos, Y.S.ら、104 Gastroenterology 1640-1647 (1993)］。心電図で用いるものと類似の皮膚電極を用いて電気的活動を測定する胃筋電図記録(EGG)もまた、胃不全麻痺を診断するために使用することができる[Stern, R.N.ら、EGG: Common issues in validation and methodology, 24 Psychophysiology 55-64 (1987)]。
【００１２】
正常な機能の胃においては、固形食が胃に到達した時点で胃底が弛緩して摂取した食物を受け入れる。胃収縮は前庭中の食物を混合し、粉砕する。食物粒子が３mm未満のサイズになるまで、前庭収縮により食物粒子を混合および攪拌する（30〜40分かかるプロセス（滞留期））。前庭収縮と調和されている幽門収縮により、この粒子を十二指腸へと動かす。この複雑な順番の調和的な事象は、脳および脊髄、胃腸管壁内の複雑な神経ネットワーク、およびアミンおよびペプチドのような平滑筋細胞の興奮性を変化させる局所的に放出された神経伝達因子の影響からの、外因性神経支配により制御されている。これらのネットワークのいずれかにおける異常は、異常な胃排出および胃不全麻痺を導きうる。
【００１３】
GLP-1化合物の胃不全麻痺を処置し得る能力は、ネイティブなGLP-1をヒトに投与した時点で生じる胃排出の遅延を記録した大量の文献からみて驚くべきことである[例えば、Willms, B.ら、Gastric emptying, glucose responses, and insulin secretion after a liquid test meal: effects of exogenous glucagons-like peptide (GLP-1)-(7-36) amide in type 2 (noninsulin dependent) diabetic patients, 81 J. Clin. Endocrinology Metabolism, 327-332 (1996)を参照]。図１および２に示す研究は、胃不全麻痺の症状を示さない２型糖尿病患者へのGLP-1化合物の投与が、プラセボと比較して胃排出を遅延させないことを示唆する。固形食摂取後のグルコースピーク濃度までの時間は、各群（コントロール群を含む）と同じであった。GLP-1化合物は胃排出を遅延させず、むしろ胃排出を正常化することができるので胃不全麻痺に関する１つまたはそれ以上の症状をもはや被らない。
【００１４】
一酸化窒素(NO)は胃および前庭の両方の機能に影響を与える神経伝達物質として関与している。さらに、胃腸に問題を伴う糖尿病患者で神経型NO合成酵素(nNOS。これは、NO産生の原因となる酵素である)の調節不全が起こることを動物試験は示唆している[Watkinsら、Insulin restores neuronal nitric oxide synthase expression and function that is lost in diabetic gastropathy, 106 J. Clin. Invest. 373-384 (2000)]。nNOSの発現に関与する分子メカニズムは解明されていない。しかし、GLP-1化合物は一酸化窒素(NO)の発現を間接的に調節することにより胃不全麻痺の治療で作用しうる。さらに、迷走神経を切断したヒト（vagotomized human）においてGI機能に対するGLP-1の影響がいくらか失われていることから、GLP-1は神経経路を介して作用している。このことは、迷走神経求心性神経、中枢神経部位または迷走神経遠心性神経の神経伝達と関連したGLP-1レセプターと関係している。さらに、GLP-1レセプターはGI管（主に胃および小腸）において同定されている。
【００１５】
GLP-1化合物は非糖尿病患者における胃不全麻痺を治療するために使用することができるが、この化合物は特に糖尿病患者における胃不全麻痺の治療に適する。GLP-1化合物は、インスリン分泌の上昇およびインスリン感受性の増加により、低血糖を引き起こすことなく血糖レベルを調節することができる。それゆえ、GLP-1化合物は胃不全麻痺を有する糖尿病患者の胃排出を調節するだけでなく、胃不全麻痺に関連する胃排出の望ましくない遅延による低血糖の危険性の上昇に患者を曝さない（この化合物は低血糖を引き起こさないからである）ので、胃不全麻痺を有する糖尿病患者の血糖レベルの正常化においてより有効である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
本発明での使用に適したGLP-1化合物としては、ネイティブなGLP-1、GLP-1アナログ、GLP-1誘導体、Exendin-4、Exendin-4アナログ、Exendin-4誘導体およびGLP-1レセプターの他のアゴニストが挙げられる。
【００１７】
本発明に含まれるGLP-1アナログはGLP-1(7-37)OHまたはGLP-1(7-37)OHのフラグメントと十分なホモロジーを有しているので、化合物はGLP-1レセプターに結合し、胃不全麻痺の症状１つ以上の改善を生じるシグナル伝達経路を開始する能力を有する。GLP-1化合物が本発明の方法に適しているかどうかを決定するために、インビトロシグナル伝達アッセイを使用することができる。実施例３に、GLP-1レセプターシグナル伝達を検出するアッセイにより測定したインビトロ活性を有する多数のGLP-1アナログを列挙する表を示す。具体的には、GLP-1化合物が生産的にGLP-1レセプターに結合した場合、第２メッセンジャーであるcAMPが活性化される。次いで、cAMPレベルの誘導の程度をレポーター遺伝子（例えば、ルシフェラーゼまたはβラクタマーゼ）の発現を作動させるcAMP応答エレメントを用いて測定することができる。
【００１８】
このアッセイは、単回投与−応答実験において50％の活性を生じるGLP-1化合物の有効濃度であるEC50効力を測定するために用いることができる。このアッセイは、ヒトGLP-1レセプターを安定に発現するHEK-293 Aurora CRE-BLAM細胞を用いて行う。これらのHEK-293細胞は、β-ラクタマーゼ (BLAM)遺伝子の発現を作動するcAMP応答エレメント(CRE)を有するDNAベクターが安定に組み込これている。GLP-1アゴニストのレセプターとの相互作用は、cAMP応答エレメントの活性化および続いてのβラクタマーゼの発現を生じるシグナルを開始する。次いで、β−ラクタマーゼ (Aurora Biosciences Corp.)により切断されると蛍光を発するβ-ラクタマーゼCCF2/AM基質を、特定量のGLP-1アゴニストに暴露した細胞に添加してGLP-1アゴニスト効力の測定値を得る。このアッセイはさらにZlokarnikら、(1998) Science 279:84-88 (実施例３もまた参照)に記載されている。
【００１９】
本発明のGLP-1化合物はVal8-GLP-1(7-37)OHの1/10以上のインビトロ効力、好ましくは1/5以上、およびより好ましくは1/3以上のインビトロ効力を有することが好ましい。GLP-1化合物は、Val8-GLP-1(7-37)OHのインビトロ効力以上のインビトロ効力を有することが最も好ましい。
【００２０】
生物学的に活性な形態のネイティブなGLP-1は、GLP-1(7-37)OHおよびGLP-1(7-36)アミドとして公知の２種の短縮型ペプチドである。これら２つの天然に存在する短縮型GLP-1ペプチドは式Ｉ配列番号１に表されている。
【数１】
2005530732.tif 000002
（配列中、37位のXaaはGlyまたは-NH2である。）
【００２１】
好ましくは、GLP-1化合物は配列番号１のアミノ酸配列を有するか、または配列番号１とは１、２、３、４または５個のアミノ酸が異なるように修飾されている。
【００２２】
当該分野において公知のいくつかのGLP-1化合物としては、例えば、GLP-1(7-34)およびGLP-1(7-35)、GLP-1(7-36)、Gln9-GLP-1(7-37)、D-Gln9-GLP-1(7-37)、Thr16-Lys18-GLP-1(7-37)およびLys18-GLP-1(7-37)が挙げられる。GLP-1(7-34)およびGLP-1(7-35)のようなGLP-1化合物は米国特許番号5,118,666に開示されている。他の公知の生物学的に活性なGLP-1アナログは、米国特許番号5,977,071、5,545,618、5,705,483、5,977,071、6,133,235、Adelhorstら、J. Biol. Chem. 269:6275 (1994)およびXiao, Q.ら、(2001)、Biochemistry 40:2860-2869に開示されている。
【００２３】
GLP-1化合物はまた、１つまたはそれ以上のアミノ酸がGLP-1(7-37)OHのＮ末端および／またはＣ末端に追加されているポリペプチドまたはそれらのフラグメントまたはアナログを含む。１〜８個のアミノ酸がGLP-1(7-37)OHのＣ末端に付加されていることが好ましい。このタイプのGLP-1化合物は約39個までのアミノ酸を有することが好ましい。「延長型」GLP-1化合物中のアミノ酸は、GLP-1(7-37)OHの対応するアミノ酸と同じ番号により示す。例えば、GLP-1(7-37)OHのN末端に２個のアミノ酸を追加することにより得られるGLP-1化合物のN末端アミノ酸は５位であり、GLP-1(7-37)OHのＣ末端に１個のアミノ酸を追加することにより得られたGLP-1化合物のＣ末端アミノ酸は38位である。延長型GLP-1化合物の38〜45位のアミノ酸は、好ましくはExendin-3またはExendin-4の対応する位置のアミノ酸と同じであるかまたは保存的置換物である。Exendin-3およびExendin-4のアミノ酸配列を、式II配列番号２に示す。
【数２】
2005530732.tif 000003
（配列中、８位のXaaはSerまたはGlyであり、
９位のXaaはAspまたはGluであり、
45位のSerはSerまたはSer-NH2である。）
【００２４】
Exendin-3は8位にSerを有し、9位にAspを有する。Exendin-4は8位にGlyを有し、9位にGluを有する。
【００２５】
最も好ましいGLP-1化合物はGLP-1アナログを含み、このようなアナログまたはフラグメントの骨格は8位にアラニン以外のアミノ酸を含む（８位アナログ）。８位に好ましいアミノ酸は、グリシン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、トレオニンまたはメチオニンであり、より好ましくはバリンまたはグリシンである。
【００２６】
他の好ましいGLP-1化合物は、８位のアミノ酸が、好ましくはグリシン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、トレオニンまたはメチオニンであり、さらにより好ましくはバリンまたはグリシンであり、22位のアミノ酸がグルタミン酸、リジン、アスパラギン酸またはアルギニンであり、より好ましくはグルタミン酸またはリジンであることを除いては、GLP-1(7-37)OHの配列を有するGLP-1アナログである。
【００２７】
他の好ましいGLP-1化合物は、８位のアミノ酸が、好ましくはグリシン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、トレオニンまたはメチオニンであり、さらにより好ましくはバリンまたはグリシンであり、30位のアミノ酸がグルタミン酸、アスパラギン酸、セリンまたはヒスチジンであり、より好ましくはグルタミン酸であることを除いては、GLP-1(7-37)OHの配列を有するGLP-1アナログである。
【００２８】
他の好ましいGLP-1化合物は、８位のアミノ酸が、好ましくはグリシン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、トレオニンまたはメチオニンであり、さらにより好ましくはバリンまたはグリシンであり、37位のアミノ酸がヒスチジン、リジン、アルギニン、トレオニン、セリン、グルタミン酸、アスパラギン酸、トリプトファン、チロシン、フェニルアラニンであり、より好ましくはヒスチジンであることを除いては、GLP-1(7-37)OHの配列を有するGLP-1アナログである。
【００２９】
他の好ましいGLP-1化合物は、８位のアミノ酸が、好ましくはグリシン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、トレオニンまたはメチオニンであり、さらにより好ましくはバリンまたはグリシンであり、22位のアミノ酸がグルタミン酸、リジン、アスパラギン酸またはアルギニンであり、より好ましくはグルタミン酸またはリジンであり、27位のアミノ酸はアラニン、リジン、アルギニン、トリプトファン、チロシン、フェニルアラニンまたはヒスチジンであり、より好ましくはアラニンであることを除いては、GLP-1(7-37)OHの配列を有するGLP-1アナログである。
【００３０】
GLP-1化合物を記載するために本明細書中で用いる命名法では、置換するアミノ酸およびその位置を親構造の前に記載する。例えば、Val8-GLP-1(7-37)OHは、GLP-1(7-37)OH（式Ｉ配列番号１）中の８位で通常、見出されるアラニンがバリンで置き換えられているGLP-1化合物を示す。
【００３１】
他の好ましいGLP-1化合物としては以下のものが挙げられる。
【数３】
2005530732.tif 000004
【００３２】
さらに好ましいGLP-1化合物は以下のものである。
【数４】
2005530732.tif 000005
【００３３】
他の好ましいGLP-1化合物としては以下のものが挙げられる。
【数５】
2005530732.tif 000006
【００３４】
GLP-1化合物はまた、ネイティブなGLP-1、Exendin-4のアミノ酸配列、またはGLP-1またはExendin-4アナログのアミノ酸配列を有し、さらに１ヶ所以上のアミノ酸側鎖基、α−炭素原子、末端アミノ基または末端カルボン酸基の化学修飾を有する分子として定義されている「GLP-1誘導体」を含む。化学修飾としては、化学的部分の追加、新たな結合の作製および化学的部分の除去が挙げられるが、これらに制限されない。
【００３５】
アミノ酸側鎖基の修飾としては、リジンε−アミノ基のアシル化、アルギニン、ヒスチジンまたはリジンのＮ−アルキル化、グルタミン酸またはアスパラギン酸のカルボン酸基のアルキル化、およびグルタミンまたはアスパラギンの脱アミド化が挙げられるが、これらに限定されない。末端アミノ基の修飾としては、脱アミノ、Ｎ−低級アルキル、Ｎ−ジ−低級アルキルおよびＮ−アシル修飾が挙げられるが、これらに限定されない。末端カルボキシ基の修飾としては、アミド、低級アルキルアミド、ジアルキルアミドおよび低級アルキルエステル修飾が挙げられるが、これらに限定されない。さらに、１つ以上の側鎖基または末端基を、タンパク質化学の当業者に公知の保護基により保護してもよい。アミノ酸のα-炭素は、モノ−またはジメチル型であってもよい。
【００３６】
好ましいGLP-1誘導体は、アシル化を介して達成される。脂肪酸誘導体化の原則を用いて、血中および末梢組織中のアルブミン上の脂肪酸結合部位に対する脂肪酸残基の会合を介して血漿アルブミンへの結合を容易化させることにより、GLP-1作用を長期化させる。好ましいGLP-1誘導体はArg34Lys26-(N-ε-(γ-Glu(N-α-ヘキサデカノイル)))-GLP-1(7-37)である。GLP-1誘導体およびそのような誘導体の製造方法は、Knudsenら、(2000) J. Med. Chem. 43:1664-1669に開示されている。さらに、多数の公開されている出願は、GLP-1、GLP-1アナログ、Exendin-4およびExendin-4アナログの誘導体を記載する。米国特許第5,512,540号、米国特許第6,268,343号、WO96/29342、WO98/08871、WO99/43341、WO99/43708、WO99/43707、WO99/43706およびWO99/43705参照。
【００３７】
内因性プロテアーゼジペプチジルペプチダーゼIV（DPP-IV）による分解から保護されているGLP-1化合物が最も好ましい。DPP-IVは天然の短縮型GLP-1のN末端ヒスチジン残基の後ろを切断し、この分子を不活性化する。DPP-IVによる迅速な不活性化が原因で、天然のGLP-1は約５〜10分の半減期を有する。特定のGLP-1化合物のDPP-IVに対する耐性は、GLP-1化合物をヒト血漿中でインキュベートすることにより決定することができる。例えば、ヒト血漿を37℃で300pモル濃度のGLP-1化合物溶液と共に最大６時間インキュベートする。次いで、溶液をDeaconら、80 J. Clin. Endocrinol. Metab. 952-957 (1995)に従って、逆相HPLCおよびRIAにかける。８位アナログは、いくつかのGLP-1誘導体（例えば、かさだかいアシル基がDPP-IVがアナログのＮ末端に結合するのを防ぐアシル化GLP-1アナログ）の場合のように、DPP-IV活性から保護されている。
【００３８】
GLP-1化合物は、固相合成化学反応、天然の供給源からのGLP-1分子の精製、組換えDNA技術またはこれらの方法の組合せのような当該分野において公知の種々の方法により製造されうる。例えば、GLP-1化合物の製造方法は以下の米国特許公報に記載されている：5,118,666、5,120,712、5,512,549、5,977,071および6,191,102。
【００３９】
本発明のGLP-1化合物は製薬上許容される組成物として処方することができる。「製薬上許容される」とは、ヒトへの投与に適切であることを意味する。製薬上許容される製剤は、毒性の成分、望ましくない夾雑物などを含有せず、その中の活性化合物の活性を干渉しない。本発明の製薬上許容される組成物は、種々の形態、例えば、散剤、顆粒剤、錠剤、糖衣錠、カプセル剤、シロップ剤、坐剤、注射用液剤、吸入用製剤、鼻内投与用製剤、または口腔内適用のための製剤等を取りうる。GLP-1化合物からなる製薬上許容される組成物の形態に依存して、このような組成物は種々の経路（例えば、経口、経鼻投与、口腔内投与、吸入または非経口投与）により投与することができる。非経口投与としては、例えば、筋肉内、静脈内、皮下、または腹腔内注射のような全身投与を挙げることができる［Gutniakら、GLP-1 tablet in type 2 diabetes in fasting and postprandial conditions, 20 Diabetes Care 1874-1879 (1997)、Gutniakら、Potential therapeutic levels of glucagon-like peptide I achieved in humans by a buccal tablet, 19 Diabetes Care 843-848 (1996)を参照］。
【００４０】
製薬上許容される医薬製品は、製薬上許容される緩衝剤（pHは非経口投与に適しており、許容できる安定性および可溶性特性を提供するように調節されている）と組み合わせたGLP-1化合物を含有する。製薬上許容される抗菌剤も添加されうる。メタ−クレゾールおよびフェノールは好ましい製薬上許容される抗菌剤である。１またはそれ以上の製薬上許容される塩もまた、イオン強度または張力を調節するために添加されうる。製剤の等張性をさらに調節するために、１またはそれ以上の賦形剤を添加しうる。グリセリンは、等張化賦形剤（isotonicity-adjusting excipient）の１例である。
【００４１】
GLP-1化合物は必要に応じて投与され、慢性的（長期的）に投与されうる。必要に応じてとは、緊急時、または要求時の投与を意味する。例えば、特に胃不全麻痺を有する糖尿病ではない患者の場合、胃不全麻痺に関連する症状を軽減または排除するために、比較的短時間で作用するGLP-1化合物を食事の直前または直後に投与することが好ましいかもしれない。さらに、胃不全麻痺および関連する症状は１日の特定の時点で悪化するか、または疾患および関連する症状の重篤度は毎日、週毎、または月毎に変化するかもしれない。従って、患者に必要時（例えば、症状が不愉快である場合のみ）にGLP-1化合物を施してもよい。
【００４２】
胃不全麻痺を有する糖尿病患者に関しては、GLP-1化合物を長期的に投与することが好ましいかもしれない。「長期的（慢性的）」とは、通常、好ましくは１日４回以下、最も好ましくは１日２又は３回以下、さらにより好ましくは１日１回以下の頻度での長期間にわたる定期的な投与を意味する。しかしながら、本明細書中で用いる慢性的投与は日々の投与に加えて他のレジメを含みうる。例えば、長期的投与は、治療上十分な血漿レベルを提供する徐放製剤の定期的な投与を含む。このような投与は、週に１回、月に１回、またはそれらより低い頻度での投与を含みうる。
【００４３】
特に長期的治療に関しては、GLP-1化合物が長期型作用プロフィールを有するように誘導体化するか、または製剤化することが好ましい。例えば、８位アナログのようなGLP-1アナログはDPP-IV切断に対して抵抗性であり、長期型作用プロフィールを有する。さらに、アシル化GLP-1誘導体はそのアルブミン結合特性に起因して長期型作用プロフィールを有する。GLP-1アナログは亜鉛および／またはプロタミンと複合体化することができ、懸濁剤として製剤化して長期型作用プロフィールを提供することができる。例えば、GLP-1化合物結晶化条件を記載しているWO99/30731を参照。
【００４４】
GLP-1化合物の「有効量」は、被検体に投与した場合に許容できない副作用を引き起こすことなく所望の効果を生じる量である。所望の効果としては、胃不全麻痺と関連する症状の改善を挙げることができる。特に、所望の効果は胃不全麻痺が取り除かれるような胃排出の調節である。長期投与に関して、副作用を最小にしながら有効性を達成するために、一旦定常状態のレベルが得られた後は治療の経過の間はGLP-1化合物の血漿レベルは顕著に変動するべきではない。治療経過にわたり、一旦定常状態レベルが達成された後に本明細書中に記載の範囲内のレベルが維持されるならば、このレベルは顕著には変動しない。最も好ましくは、Val8-GLP-1(7-37)OHの効力と同等または２倍以内の効力を有するGLP-1化合物の血漿レベルは、一旦定常状態レベルが得られた後は治療経過にわたり約30ピコモル濃度〜約200ピコモル濃度、好ましくは約60ピコモル濃度〜約150ピコモル濃度の範囲内で維持される。
【００４５】
Val8-GLP-1(7-37)OHおよび類似する効力のGLP-1化合物に特有の最適な血漿レベルの範囲は、他のGLP-1化合物（異なる効力を有するExendin-3およびExendin-4を含む）に適用されうる。類似する効力のGLP-1化合物としては、実施例３に記載のインビトロ効力アッセイにより測定した場合にVal8-GLP-1(7-37)OHの活性の２倍以内の効力を有する化合物が挙げられる。
【００４６】
Exendin-4はVal8-GLP-1(7-37)OHより約５倍高い効力を有する。従って、Exendin-4の最適血漿レベルはVal8-GLP-1(7-37)OHおよび類似する効力の化合物に適したレベルの約５分の１である。これは、約６ピコモル濃度〜約40ピコモル濃度、好ましくは約12ピコモル濃度〜約30ピコモル濃度の間の範囲内の血漿レベルに対応する。上昇した効力を有するGLP-1化合物の別の例は、Val8-GLP-1(7-37)OHよりも約３倍高い効力を有するVal8-Glu22-GLP-1(7-37)OHである。従って、本発明の化合物の最適な血漿レベルは、Val8-GLP-1(7-37)OHに関して測定したレベルの約３分の１である。
【００４７】
本発明はまた、一定量のGLP-1化合物（例えば、GLP-1アナログまたは誘導体）を含む投薬形態、および投薬形態の投与が胃不全麻痺に関連する症状の改善または胃不全麻痺の有効な処置を生じることを示す添付文書を備えた容器を含むヒト医薬用途用の製造物品を含む。
【００４８】
「容器」は、医薬製品の保存、輸送、分配および／または取り扱いに適した任意の入れ物および密閉道具を意味する。
【００４９】
「パッケージング」は、投与を簡便にする客にとって便利なデバイス、および／または輸送、教育（education）および／または投与を助ける付属デバイスを意味する。パッケージングは患者へのGLP-1化合物の投与を改良し、患者に対する教育指導時間を軽減または改善し、医薬品の経済性評価の改善のための基盤を提供し、および／または流通経路の作業負荷を制限することができる。また、パッケージングには、紙ベースのパッケージ、収縮包装のパッケージ、上部がシースルーのパッケージ、試供品クーポン（trial-use coupons）、教育材料、付属供給品、および／または送達デバイスを挙げることができるが、これらに制限されない。
【００５０】
「添付文書」は製品に付随する情報を意味し、これは医師、薬剤師および患者が製品の使用に関して十分な情報に基づき判断するために必要な安全性及び有効性データと共に、投与方法の説明を提供し、患者教育情報を提供する。通常、添付文書は医薬製品に対する「ラベル」と見なされる。
【００５１】
それゆえ、本発明は添付文書および容器を含むヒト医薬用途のための製造品を含み、この添付文書には胃不全麻痺を治療するための投薬形態を投与することを含む治療レジメが記載されている。胃不全麻痺の有効な治療は、胃不全麻痺と関連する症状１つ以上の緩解または除去、または胃不全麻痺と関連する全ての症状の除去を含む。胃不全麻痺の有効な治療は、胃の機能（食事の後の胃排出を含みうる）の正常化もまた含む。
【００５２】
本発明の物品の製造の際に用いられる容器は、医薬分野において従来的な物である。通常、容器はバイアル又はカートリッジであり、通常はガラスからなり、キャップ、栓（closure）、ビーズ、プランジャー、隔壁および／またはシール、または患者又は薬剤師が用いるために適した他のこのような物品を備えていている。あるいは、容器は、乾燥粉末を含むカートリッジ、および予め適切な希釈剤を充填したシリンジからなるキットの一部である。他の選択肢としては、液体希釈剤および乾燥粉末を再構築が望ましい時点まで互いに分離させておくバイパスを備えた二重チャンバカートリッジからなる容器が挙げられる。再構築の時に、二重チャンバカートリッジは液体希釈剤を乾燥粉末側に流入させる。好ましくは、容器を0.1〜100mL、好ましくは0.5〜25mL、より好ましくは５〜10mL、さらにより好ましくは1.5〜３mLの体積に適合するようなサイズにする。あるいは、容器は発泡剤、カプセル又は発泡ディスクである。容器に関する他の選択肢としては、経皮貼布、埋込み型デバイス、ミクロスフィアキャリアおよび他のデポー送達系が挙げられる。
【００５３】
添付文書はGLP-1化合物の具体的な血漿レベルを生じるいくつかの用量の選択肢を医師に提供しうる。好ましい範囲は本明細書中に記載する。好ましくは、添付文書は、本明細書中に記載の範囲内のGLP-1化合物の血漿レベルを生じる単回用量を医師に提供する。
【００５４】
添付文書は、医師、薬剤師および患者が医薬製品の使用に関して十分な情報に基づき判断するために必要な安全性及び有効性データと共に、製品の投与方法の説明を提供する。通常、添付文書は医薬製品のラベルであると見なされている。
【００５５】
添付文書は、以下の指示またはラベルの記載のいくつか又は全てを示すかもしれない。ａ）胃不全麻痺を有する患者での使用。ｂ）胃不全麻痺を有する糖尿病患者での使用。ｃ）胃不全麻痺を有する糖尿病患者における血糖コントロールの改善。およびｄ）胃不全麻痺に関連する１またはそれ以上の症状の重篤度を排除又は軽減するために有効な用量では低血糖の症状を示さない。
【実施例】
【００５６】
実施例１  −  ２型糖尿病における臨床試験
各群に８人の２型糖尿病患者を有する４群を、Val8-GLP-1(7-37)OHの長期作用型製剤で処置した。まず、３つの群には、2.5、3.5または4.5mgのいずれかで６日間１日１回皮下注射を施した。４番目の群には4.5mgで21日間１日１回皮下注射を施した。試験の前日に、各患者にプラセボとして生理食塩水を施した。13時間、血糖を追跡した。評価日の間は全ての食事を厳密に画一化した。６日目と21日目の評価日の24時間を除いて、患者は外来患者とした。１日目の注射の後、４時間にわたるグルコースおよびVal8-GLP-1(7-37)OH血漿レベルに関して血液サンプルを採取した。患者には毎朝投薬した。投薬６日目（および４群目に関しては21日目）に、血糖およびVal8-GLP-1(7-37)OH血漿レベルの測定のために、投与後最大26時間目までサンプルを回収した。グルコースレベルを図１および２に示す。
【００５７】
実施例２  −  Val8-GLP-1(7-37)OH血漿レベルの測定
天然のGLP-1ペプチド及び分解産物（例えば、DPP-IVによるGLP-1 (9-37)OH）が内因性の濃度で存在するので、インタクトなVal8-GLP-1(7-37)OHの濃度は、非分解型全長Val8-GLP-1(7-37)OHを特異的に認識するELISAアッセイを用いて測定した。マイクロタイタープレートに固定したＮ末端抗Val8-GLP-1(7-37)OH特異的抗血清により、血漿から免疫反応性のVal8-GLP-1(7-37)OHを捕捉する。この抗血清はVal8-GLP-1(7-37)OHのＮ末端に非常に特異的である。GLP-1のＣ末端に特異的なアルカリホスファターゼ結合型抗体を添加して「サンドイッチ」を完了させる。アルカリホスファターゼの発色基質（colormetric substrate）であるpNPPを用いて検出を完了させる。生じた色の量は、サンプル中に存在する免疫反応性のVal8-GLP-1(7-37)OHの濃度に正比例する。ヒト血漿中のVal8-GLP-1(7-37)OHの量は、Val8-GLP-1(7-37)OHを参照標準品として用いた検量線で内挿することができる。重み付き４パラメーターロジスティックアルゴリズムを用いるコンピュータープログラムによりデータを分析した。試験サンプル中の免疫反応性Val8-GLP-1(7-37)OHの濃度を、検量線を用いて測定する。
【００５８】
実施例３  −  インビトロ効力アッセイ
ヒトGLP-1レセプターを発現するHEK-293 Aurora CRE-BLAM細胞を、96ウェルブラッククリア底面プレートに、20,000〜40,000細胞/ウェル/100μlで播種する。播種した翌日に、培地を無血漿培地と取り換える。播種後３日目に、異なる濃度のGLP-1アゴニストを含む無血漿培地20μlを各ウェルに加えて用量応答曲線を作成する。通常、３ナノモル濃度〜30ナノモル濃度のGLP-1化合物を含む14倍希釈物を用いて用量応答曲線を作成し、これからEC50値を決定することができた。GLP-1化合物とともに５時間インキュベーションした後、β-ラクタマーゼ基質（CCF2-AMAurora Biosciences−製品コード100012）を20μｌ添加し、インキュベーションを１時間つづけ、この時点で蛍光をサイトフロア（cytoflour）で測定した。
【表１−１】
2005530732.tif 000007
【表１−２】
2005530732.tif 000008
【図面の簡単な説明】
【００５９】
【図１】２型糖尿病の患者にプラセボ（基底値）、Val8-GLP-1(7-37)OH 2.5mg（１群）およびVal8-GLP-1(7-37)OH 3.5mg（２群）を１日１回投与した後の平均(+/- SEM)グルコース濃度を示すグラフである。
【図２】２型糖尿病の患者にプラセボ（基底値）およびVal8-GLP-1(7-37)OH 4.5mg（３群および４群）を１日１回投与した後の平均(+/- SEM)グルコース濃度を示すグラフである。
【配列表】
2005530732.tif 000009
2005530732.tif 000010
【手続補正書】
【提出日】平成16年12月13日(2004.12.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
2005530732000001.app
【国際調査報告】
2005530732.tif 000011