(57)【要約】本発明は、リンパ系組織誘導剤および免疫調節剤を用いて、被験者の免疫系を調節することが有益である疾患の１以上の症状を予防し、治療し、または改善する方法を提供する。特に、本発明は、増殖性疾患、感染性疾患、心血管疾患、自己免疫疾患、もしくは炎症性疾患、またはこれらの１以上の症状を予防し、治療し、または改善する方法であって、それが必要な被験者に、1種以上のリンパ系組織誘導剤および１種以上の免疫調節剤を投与することを含む、上記方法を提供する。本発明はまた、被験者の免疫系を調節することが有益である疾患（増殖性疾患、感染性疾患、心血管疾患、自己免疫疾患、および炎症性疾患を含むが、これらに限らない）と関連する１以上の症状を予防し、治療し、または改善するために用いる組成物および製品を提供する。本発明はさらに、リンパ系組織誘導剤および／または免疫調節剤をスクリーニングして同定する方法も提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療に有効な量の1種以上の微小管安定化剤および治療に有効な量の1種以上の熱ショックタンパク質(HSP)誘導剤を含む組成物。
【請求項２】
治療に有効な量の1種以上の微小管安定化剤および治療に有効な量の1種以上のケモカイン受容体誘導剤を含む組成物。
【請求項３】
治療に有効な量の1種以上の微小管安定化剤および治療に有効な量の1種以上のICAM誘導剤を含む組成物。
【請求項４】
微小管安定化剤の少なくとも1種がタキサン、エポシロン(epothilone)、ディスコダーモリド(discodermolide)、エリューテロビン(eleutherobin)、タッカロノリド(taccalonolide)、サルコジクチイン(sarcodictyin)、またはこれらの誘導体もしくは類縁体である、請求項1、2または3に記載の組成物。
【請求項５】
タキサンがパクリタキセルまたはドキソタキセルである、請求項4に記載の組成物。
【請求項６】
HSP誘導剤の少なくとも1種がプロスタグランジンJ2、ゲラニル-ゲラニル-アセトン、5-フルオロウラシル、シクロスポリンA、酪酸ナトリウム、アスピリン、ハービマイシンA、亜ヒ酸、三酸化ヒ素、またはゲルダナマイシンである、請求項1に記載の組成物。
【請求項７】
HSP誘導剤の少なくとも1種がHSP60、HSP70、HSP72、HSP80またはHSP90の発現を誘導するかまたは増加させる、請求項1に記載の組成物。
【請求項８】
ケモカイン受容体誘導剤の少なくとも1種がリンホトキシンα、CpG7909、CpG8916またはCpG8954である、請求項2に記載の組成物。
【請求項９】
ICAM誘導剤の少なくとも1種がトリブチリン、OK-432、レチノイン酸、酪酸ナトリウムまたはリンホトキシンαである、請求項3に記載の組成物。
【請求項１０】
ICAM誘導剤の少なくとも1種がICAM-1の発現を誘導するかまたは増加させる、請求項3に記載の組成物。
【請求項１１】
過増殖性疾患またはその1以上の症状を治療する方法であって、それを必要とする被験者に、治療に有効な量の請求項1、2または3に記載の組成物の適用量を投与することを含んでなる上記方法。
【請求項１２】
感染性疾患、自己免疫疾患もしくは炎症性疾患を治療し、またはその1以上の症状を改善する方法であって、それを必要とする被験者に、治療に有効な量の請求項1、2または3に記載の組成物の適用量を投与することを含んでなる、上記方法。
【請求項１３】
増殖性疾患を治療し、またはその1以上の症状を改善する方法であって、それを必要とする被験者に、治療に有効な量の1種以上の微小管安定化剤の適用量および治療に有効な量の1種以上の熱ショックタンパク質(HSP)誘導剤の適用量を投与することを含んでなり、前記HSP誘導剤が5-フルオロウラシル、シクロスポリンA、アスピリン、グルタミン、またはハービマイシンAではない、上記方法。
【請求項１４】
増殖性疾患を治療し、またはその1以上の症状を改善する方法であって、それを必要とする被験者に、治療に有効な量の1種以上の微小管安定化剤の適用量および治療に有効な量の1種以上のケモカイン受容体誘導剤の適用量を投与することを含んでなる、上記方法。
【請求項１５】
増殖性疾患を治療し、またはその1以上の症状を改善する方法であって、それを必要とする被験者に、治療に有効な量の1種以上の微小管安定化剤の適用量および治療に有効な量の1種以上のICAM誘導剤の適用量を投与することを含んでなる、上記方法。
【請求項１６】
感染性疾患、自己免疫疾患もしくは炎症性疾患を治療し、またはその1以上の症状を改善する方法であって、それを必要とする被験者に、治療に有効な量の1種以上の微小管安定化剤の適用量および治療に有効な量の1種以上の熱ショックタンパク質(HSP)誘導剤、1種以上のケモカイン受容体誘導剤、または1種以上のICAM誘導剤の適用量を投与することを含んでなる、上記方法。
【請求項１７】
微小管安定化剤の少なくとも1種がタキサン、エポシロン(epothilone)、ディスコダーモリド(discodermolide)、エリューテロビン(eleutherobin)、タッカロノリド(taccalonolide)、サルコジクチイン(sarcodictyin)、またはこれらの誘導体もしくは類縁体である、請求項13、14、15または16に記載の方法。
【請求項１８】
タキサンがパクリタキセルまたはドキソタキセルである、請求項17に記載の方法。
【請求項１９】
HSP誘導剤の少なくとも1種がプロスタグランジンJ2、ゲラニル-ゲラニル-アセトン、酪酸ナトリウム、ハービマイシンA、亜ヒ酸、三酸化ヒ素、またはゲルダナマイシンである、請求項13に記載の方法。
【請求項２０】
HSP誘導剤の少なくとも1種がプロスタグランジンJ2、ゲラニル-ゲラニル-アセトン、5-フルオロウラシル、シクロスポリンA、酪酸ナトリウム、アスピリン、ハービマイシンA、亜ヒ酸、三酸化ヒ素、またはゲルダナマイシンである、請求項16に記載の方法。
【請求項２１】
HSP誘導剤の少なくとも1種がHSP60、HSP70、HSP72、HSP80またはHSP90の発現を誘導するかまたは増加させる、請求項13または16に記載の方法。
【請求項２２】
ケモカイン受容体誘導剤の少なくとも1種がリンホトキシンα、CpG7909、CpG8916またはCpG8954である、請求項14または16に記載の方法。
【請求項２３】
ICAM誘導剤の少なくとも1種がトリブチリン、OK-432、レチノイン酸、酪酸ナトリウムまたはリンホトキシンαである、請求項15または16に記載の方法。
【請求項２４】
ICAM誘導剤の少なくとも1種がICAM-1の発現を誘導するかまたは増加させる、請求項15または16に記載の方法。
【請求項２５】
前記被験者に、治療に有効な量の、HSP誘導剤以外の1種以上の免疫調節剤の適用量を投与することをさらに含んでなる、請求項13に記載の方法。
【請求項２６】
免疫調節剤の少なくとも1種がケモカイン受容体誘導剤またはICAM誘導剤である、請求項25に記載の方法。
【請求項２７】
前記被験者に、治療に有効な量の、ケモカイン受容体誘導剤以外の1種以上の免疫調節剤の適用量を投与することをさらに含んでなる、請求項14に記載の方法。
【請求項２８】
免疫調節剤の少なくとも1種がHSP誘導剤またはICAM誘導剤である、請求項27に記載の方法。
【請求項２９】
前記被験者に、治療に有効な量の、ICAM誘導剤以外の1種以上の免疫調節剤の適用量を投与することをさらに含んでなる、請求項15に記載の方法。
【請求項３０】
免疫調節剤の少なくとも1種がHSP誘導剤またはケモカイン受容体誘導剤である、請求項29に記載の方法。
【請求項３１】
前記被験者に、治療に有効な量の1種以上のICAM誘導剤の適用量を投与することをさらに含んでなり、前記ICAM誘導剤が前記HSP誘導剤とは異なるものである、請求項13に記載の方法。
【請求項３２】
前記被験者に、治療に有効な量の1種以上のICAM誘導剤の適用量を投与することをさらに含んでなる、請求項14に記載の方法。
【請求項３３】
前記被験者に放射線療法を施すことをさらに含んでなる、請求項13、14または15に記載の方法。
【請求項３４】
微小管安定化剤の治療に有効な量が約0.000001g/m2から10g/m2までの範囲である、請求項13、14、15または16に記載の方法。
【請求項３５】
HSP誘導剤の治療に有効な量が約0.000001g/m2から10g/m2までの範囲である、請求項13に記載の方法。
【請求項３６】
ケモカイン受容体誘導剤の治療に有効な量が約0.000001g/m2から1g/m2までの範囲である、請求項14に記載の方法。
【請求項３７】
ICAM誘導剤の治療に有効な量が約0.000001g/m2から1g/m2までの範囲である、請求項15に記載の方法。
【請求項３８】
治療に有効な量の1種以上の微小管安定化剤の前記適用量が静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、経口的または腫瘍内に投与される、請求項13、14または15に記載の方法。
【請求項３９】
治療に有効な量の1種以上の微小管安定化剤の前記適用量が静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内または経口的に投与される、請求項16に記載の方法。
【請求項４０】
治療に有効な量の1種以上のHSP誘導剤の前記適用量が静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、経口的または腫瘍内に投与される、請求項13に記載の方法。
【請求項４１】
治療に有効な量の1種以上のHSP誘導剤の前記適用量が静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内または経口的に投与される、請求項16に記載の方法。
【請求項４２】
治療に有効な量の1種以上のケモカイン受容体誘導剤の前記適用量が静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、経口的または腫瘍内に投与される、請求項14に記載の方法。
【請求項４３】
治療に有効な量の1種以上のケモカイン受容体誘導剤の前記適用量が静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内または経口的に投与される、請求項16に記載の方法。
【請求項４４】
治療に有効な量の1種以上のICAM誘導剤の前記適用量が静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、経口的または腫瘍内に投与される、請求項15に記載の方法。
【請求項４５】
治療に有効な量の1種以上のICAM誘導剤の前記適用量が静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内または経口的に投与される、請求項16に記載の方法。
【請求項４６】
過増殖性疾患が癌または乾癬である、請求項13、14または15に記載の方法。
【請求項４７】
前記の癌が白血病、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、骨膜腫、中皮腫、ユーイング腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原生癌、腎細胞癌、肝癌、胆管癌、絨毛癌、セミノーマ、胎生期癌、ウィルムス腫、子宮頸癌、精巣癌、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫、メラノーマ、神経芽細胞腫、または網膜芽細胞腫である、請求項46に記載の方法。
【請求項４８】
感染性疾患がウイルス感染性疾患、細菌感染性疾患、または真菌感染性疾患である、請求項16に記載の方法。
【請求項４９】
前記被験者がヒトである、13、14、15または16に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
１．発明の技術分野
本発明は、リンパ系組織誘導剤および免疫調節剤を用いて、被験者の免疫系を調節することが有益である疾患の１以上の症状を予防し、治療し、または改善する方法を提供する。特に、本発明は、増殖性疾患、感染性疾患、心血管疾患、自己免疫疾患、もしくは炎症性疾患、またはこれらの１以上の症状を予防し、治療し、または改善する方法であって、それが必要な被験者に、1種以上のリンパ系組織誘導剤および１種以上の免疫調節剤を投与することを含む、上記方法を提供する。本発明はまた、被験者の免疫系の調節が有益である疾患と関連する１以上の症状を予防、治療または改善するために用いる組成物および製品を提供する。このような症状として、限定するものではないが、増殖性疾患、感染性疾患、心血管疾患、自己免疫疾患、または炎症性疾患が挙げられる。本発明はさらに、リンパ系組織誘導剤および／または免疫調節剤をスクリーニングして同定する方法も提供する。
【背景技術】
【０００２】
２．発明の背景
高等脊椎動物における免疫系は、脊椎動物の体内に侵入しうる様々な抗原（例えば、多様な疾患を引き起こす病原因子である細菌、真菌およびウイルスなどの微生物を含む）に対する第一の防御系である。さらに、免疫系はまた、その他の多様な疾患または障害（自己免疫または免疫疾患、免疫不全症候群、アテローム性動脈硬化を含む）、並びに様々な新形成性疾患（米国での死因の第２位である癌を含む）にも関与している。これらの疾患の治療に利用できる方法はあるが、現在の治療法の多くは望ましい結果をもたらしていない。
【０００３】
２．１．癌
米国で暮らす人の約三人に一人は、一生の間に何らかの形態の癌を発症し、その結果、これら患者の約半数がその疾患のために死亡する。2000年の米国における癌の直接医療費の総額は１億ドルを超え、さらに生産性の損失による間接的費用（すべての主要疾患のうち最高額）として１億ドルが加わると推定されている。現在の癌治療法は、次の４つのカテゴリーに分けることができる：外科手術、放射線療法、化学療法および「生物学的」療法（遺伝子、タンパク質、または細胞に基づく治療を含む広範なカテゴリー）。
【０００４】
外科手術は癌の最も有効な治療形態であるが、これには多くの問題点がある。癌が身体の他の領域に転移している患者の場合には、手術を行うことが制限され、腫瘍への到達が不可能であるか、または腫瘍が身体の敏感な領域に位置する（例えば、脳深部にある腫瘍、心臓付近の腫瘍、または大動脈を取り巻く腫瘍など）患者には手術を施すことができない。このような状況（特に、腫瘍または転移が脳内に位置するとき）では、放射線療法の方が手術より有利である。しかし、放射線療法は、少数の癌しか治癒させることができず、ほとんどの腫瘍を構成する腫瘍細胞の異質性により、典型的には、多様な細胞のサブ集団が発生し、これらのサブ集団は放射線の効果に非応答性であるか、あるいは、電離放射線に対して耐性を生じる。
【０００５】
従って、化学療法がほとんどの癌の標準的な治療法である。細胞傷害性の抗癌剤は主として細胞の複製を妨害することにより癌細胞を死滅させる。しかし、化学療法は通常全身投与であり、ほとんどの化学療法薬が正常細胞と異常細胞とを識別しないため、正常細胞に悪影響を与える可能性がある。この選択性の欠如のために、投与量を制限するような様々な副作用（吐気や嘔吐、神経毒性、血液毒性、腎毒性、心臓毒性および肝毒性など）が起こる。さらに、ほとんどの癌細胞型は最終的に化学療法抵抗性となるため、長期の治療法としての化学療法の効果が期待できない。
【０００６】
多剤療法の使用にもかかわらず、薬剤耐性は依然として克服するのが困難である。
【０００７】
生物学的療法としては、モノクローナル抗体、生得的免疫系を活性化する非特異的免疫ブースター（例：コレイ（Coley）毒素のような細菌／真菌抗原；インターフェロンαおよびγのようなサイトカイン）、獲得免疫または「標的」免疫系を活性化する特異的免疫ブースター（例：ワクチン）並びにホルモンが挙げられる。
【０００８】
最も直接的な免疫治療法は、腫瘍抗原に対するモノクローナル抗体で患者を治療することである。例えば、ハーセプチン（Herceptin）は、全乳癌患者の約25％で過剰発現される増殖因子受容体をターゲッティングし、腫瘍増殖の抑制に有望な結果を示している。この受容体の機能を阻止すると考えられるのはハーセプチンだけではなく、ハーセプチン-受容体複合体も腫瘍部位にナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を動員する役割を果たすことができる。しかし、抗体による治療は理想にはほど遠い。抗体と化学療法薬または放射性同位元素をコンジュゲートして、抗体による免疫治療の効果を高めるための改善はなされているが、腫瘍の突然変異や、腫瘍塊への抗体の不十分な浸透のために、腫瘍細胞の死滅に十分な効果が得られないと考えられる。
【０００９】
癌ワクチンは、もう一つの有望な免疫療法の手法である。初期の試みでは、患者の被照射腫瘍細胞と細菌性アジュバントの混合物が用いられていた。しかし、免疫応答の生物学への理解が深まったことから、さらに高度なワクチン療法が達成されている。一つの戦略は、抗原提示細胞によりエフェクター細胞に抗原ペプチドを提示するために熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）を利用するものである。ＨＳＰペプチド複合体を個々の患者の腫瘍から採取し、これをワクチンとして用いる。別の戦略は、腫瘍由来の抗原をパルスしておいた樹状細胞を注射することにより、Ｔ細胞応答を活性化させようとするものである。
【００１０】
これらの近年開発された免疫療法の手法は、モデル実験において、また、いくつかのケースではヒトに対する治験において試験中である。従来の手法に対する上記戦略の利点にもかかわらず、腫瘍細胞の適応性および突然変異性が、全腫瘍細胞を除去するのに十分な免疫応答を生成させる上でネックとなると考えられる。従って、完全な腫瘍の除去を達成するために独創的で、新規な免疫療法戦略が強く求められている。
【００１１】
２．２．感染性疾患
広範な免疫感作プログラムにもかかわらず、インフルエンザウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（HIV）、単純ヘルペスウイルス（HSV、１または２型）、ヒトパピローマウイルス（HPV、16または18型）、ヒトサイトメガロウイルス（CMV）またはヒト肝炎ウイルス（HCV、Ｃ型）感染などのウイルス感染は、依然として世界中で相当の罹患率および死亡率を発生させており、加齢または様々な病状に関連する免疫不全を有する患者の疾患および死亡の大きな原因でもある（例えば、Hughes-Fulfordら、1992, Antimicrob. Agents Chemother. 36: 2253-2258を参照）。アマンタジンおよびリマンタジンのような化合物を用いる抗ウイルス化学療法は、臨床上の感染（すなわち、インフルエンザ感染）の症状の持続時間を短縮することがわかっているが、深刻な副作用および薬剤耐性変異体の出現が記載されている（例えば、Couchら、1997, N. Engl. J. Med. 337: 927-928およびHughes-Fulfordら、1992、前掲を参照）。インフルエンザノイラミニダーゼのような特定のウイルスタンパク質をターゲッティングするのに設計された新しいクラスの抗ウイルス剤が開発されている。しかし、標的タンパク質を突然変異させるウイルスの能力が、特定のウイルスポリペプチドの機能を選択的に阻害する分子による有効な治療の障害となっている。従って、ウイルス感染を予防および治療する新規の治療戦略が求められる。
【００１２】
加えて、細菌感染、特に、多剤耐性菌により引き起こされる細菌感染の予防および治療の新規治療が求められている。現在、細菌感染は各種の抗生物質で治療されている。抗生物質は様々な細菌感染の治療に効果があり有効であると考えられるが、抗生物質の有効性および安全性に対しては多くの制限がある。例えば、特定の抗生物質に対するアレルギー反応を示す個体もいれば、深刻な副作用に苦しむ個体もいる。さらには、細菌感染を治療するための抗生物質を継続的に使用していると、抗生物質耐性菌株の発生につながる。
【００１３】
２．３．自己免疫疾患
自己免疫疾患は、細菌、ウイルスおよびその他の外来物質から身体を防御するはずの身体の免疫系が機能不全に陥り、健康な組織、細胞および器官に対して抗体を産生するとき起こる。抗体、Ｔ細胞およびマクロファージは有益な保護をもたらすが、有害もしくは破壊的な免疫応答を生じさせることもある。
【００１４】
自己抗体が自己免疫疾患を引き起こす主なメカニズムは、標的細胞の補体依存性溶解破壊、オプソニン作用、免疫複合体の形成、生理学的リガンドのための受容体部位の遮断、細胞表面受容体の刺激である。自己抗体は、細胞表面受容体と結合して、細胞の専門化した機能を阻害したり刺激したりすることができる（Paul, W.E.編、1989, Fundamental Immunology, Raven Press, New York、第31章、p.839）。
【００１５】
自己免疫疾患は器官特異的または全身性のいずれの可能性もあり、様々な病理学的機構によって引き起こされる。器官特異的な自己免疫疾患は、Ｔ細胞コンパートメント内の寛容と抑制、主要組織適合性（MHC）抗原の異常発現、抗原擬態、並びにMHC遺伝子における対立遺伝子変異を特徴とする。全身性の自己免疫疾患には、ポリクローナルＢ細胞活性化、並びに免疫調節Ｔ細胞、Ｔ細胞受容体およびMHC遺伝子の異常が関与している。器官特異的自己免疫疾患の例として、糖尿病、甲状腺機能亢進症、自己免疫性副腎不全症、赤芽球ろう、多発性硬化症およびリウマチ性心臓炎が挙げられる。代表的な全身性自己免疫疾患として、全身性エリテマトーデス、慢性関節リウマチ、慢性炎症、シェーグレン症候群、多発性筋炎、皮膚筋炎および強皮病が挙げられる。
【００１６】
自己免疫疾患の現在の治療は、コルチゾン、アスピリン誘導体、ヒドロキシクロロキン、メトトレキセート、アザチオプリンおよびシクロホスファミドなどの免疫抑制剤、またはこれらの組合せを投与することを含んでなる。しかし、免疫抑制剤を投与する場合に直面するジレンマは、自己免疫疾患の治療が有効であればあるほど、患者の防御能力が低下し、感染からの攻撃にさらされることである。従って、自己免疫疾患を治療するための新規の治療法が求められる。
【００１７】
２．４．炎症性疾患
炎症は、身体の白血球および化学物質が、細菌やウイルスなどの外来物質による感染から我々の身体を保護する過程である。炎症は通常、患部の痛み、腫脹、熱および赤みを特徴とする。サイトカインやプロスタグラジンとして知られる化学物質がこの過程を抑制し、これらの物質は血液または患部組織に規則正しくかつ自己制限的カスケードで放出される。この化学物質の放出により、損傷または感染部位への血流が増加し、赤みや熱が生じる場合もある。化学物質の中には、組織への液体の漏出を引き起こし、腫脹を生じさせるものもある。この保護過程は、神経を刺激して、痛みの原因になると考えられる。これらの変化は、患部における発生期間が限られている場合には、身体に有益に働く。
【００１８】
慢性関節リウマチ（RA）および若年性関節リウマチは、炎症性関節炎に属する。関節炎は、関節における炎症を意味する一般的用語である。すべてではないが、関節炎には、誤って指令された（misdirected）炎症の結果として起こる種類もある。慢性関節リウマチ以外に、炎症を伴う関節炎の種類として、以下のものが挙げられる：乾癬性関節炎、ライター症候群、強直性脊椎炎、および痛風関節炎。慢性関節リウマチは、身体の両側（両手、両手首または両膝など）の関節におこる慢性関節炎の一種である。この対称性は、他の種類の関節炎から慢性関節リウマチを識別するのに役立つ。関節への影響に加え、慢性関節リウマチは皮膚、眼、肺、心臓、血液または神経に影響する場合もある。
【００１９】
慢性関節リウマチは、世界人口の約１％が罹患しており、ほとんどが障害を引き起こしている。米国での慢性関節リウマチの発生数は約290万件である。女性の患者は男性の２〜３倍多い。慢性関節リウマチを発症する典型的年齢は25〜50歳である。若年性関節リウマチには71,000人の米国若年層（18歳以下）が罹患しており、女子の罹患者は男子の６倍である。
【００２０】
慢性関節リウマチは、身体の免疫系が関節に滑液を分泌する滑膜を誤って非自己（foreign）と識別する自己免疫疾患である。炎症が起こり、関節内および周囲の軟骨および組織が損傷を受けたり、破壊されたりする。重度の場合には、この炎症は他の関節組織および周囲の軟骨にまで及び、骨と軟骨を侵食または破壊して、関節変形を引き起こすこともある。身体は、損傷を受けた組織を瘢痕組織と置き替えるため、関節内の正常な空間が狭くなり、骨同士が融合してしまう。慢性関節リウマチは、硬直、腫脹、疲労、貧血、体重減少、発熱を生じさせ、さらには、往々にして肢体不自由の痛みを引き起こす。慢性関節リウマチの一般的症状には、目覚め時の関節のこわばり（１時間以上続く）；特定の指または手首関節の腫脹；関節周囲の軟組織における腫脹；並びに関節両側での腫脹がある。腫脹は、痛みを伴うことも伴わないこともあり、次第に悪化する場合もあれば、同じ状態が何年か続いた後悪化する場合もある。
【００２１】
慢性関節リウマチの診断は、以下に挙げる要因の組合せに基づいて行なわれる：痛みのある関節の特定位置および対称性、午前中の関節硬直の存在、皮下の瘤および小節（リウマチ小節）の存在、慢性関節リウマチを示唆するＸ線検査の結果、および／またはリウマチ因子と呼ばれる血液検査の陽性結果。すべてではないが、慢性関節リウマチ患者の多くはその血液中にリウマチ因子抗体を有する。リウマチ因子は、慢性関節リウマチ患者ではない人にも存在することがある。また、別の疾患がリウマチ因子を血液中に生成する可能性もある。そのために、慢性関節リウマチの診断は、血液中のリウマチ因子の存在だけではなく、複数の要因の組合せに基づいて行なわれる。
【００２２】
この疾患の典型的経過は、持続的ではあるが変動する関節症状の一つであり、約10年後に90％の患者が骨および軟骨に構造的な損傷を示すことになる。わずかな比率の患者は罹患期間が短く、完全に治癒するが、わずかな比率の患者は、多くの関節変形を伴って疾患が非常に重症となり、この疾患の別の症状が発現する場合もある。炎症の過程は関節における骨および軟骨の侵食または破壊を引き起こす。慢性関節リウマチには、持続的な抗原提示、Ｔ細胞刺激、サイトカイン分泌、滑膜細胞活性化および関節破壊の自己免疫サイクルがある。この疾患は、個体および社会の両方に大きな影響を及ぼし、相当な痛み、機能の損傷および障害を引き起こすと同時に、費やされる医療費および賃金損失が何百万ドルにも達する（例えば、NIHウェブサイトおよびNIAIDウェブサイトを参照されたい）。
【００２３】
現在利用可能な関節炎の治療は、抗炎症薬または免疫抑制薬を用いて関節の炎症を抑制することに重点が置かれている。あらゆる関節炎の第１系列の治療薬は、一般に、抗炎症薬（例えば、アスピリン、イブプロフェン）、並びにCox-2阻害剤（例えば、セレコキシブおよびロフェコキシブ）である。「第２系列の薬剤」としては、金、メトトレキセートおよびステロイドが挙げられる。これらは関節炎のための十分に確立された治療薬ではあるが、上記系列の治療薬だけで症状が改善する患者は非常に少ない。近年、慢性関節リウマチの病因論の理解が進んだことから、サイトカインに対する抗体または組換え可溶性受容体と組み合わせたメトトレキセートが使用されるに至った。関節炎の治療に、例えば、腫瘍壊死因子（TNF）αの組換え可溶性受容体がメトトレキセートと組み合わせて使用されている。しかし、メトトレキセートとTNFα剤（例えば、TNFαの組換え可溶性受容体）との組合せで治療した患者の約50％にしか臨床的に有意な改善がみられない。多くの患者は治療にも拘わらず治療不応性のままである。慢性関節リウマチの患者には困難な治療の課題が依然として残っている。多くの現在の治療薬は、高い発生率で副作用があるか、あるいは、疾患の進行を完全に阻止することができない。これまでのところ、理想的な治療法（薬）はなく、治癒も皆無である。従って、炎症性疾患を治療するための新規の治療法が求められる。
【００２４】
本明細書に参考文献の引用または記載があっても、この参考文献が本発明の先行技術であることを承認するものとして解釈されるべきではない。
【発明の開示】
【００２５】
３．発明の概要
本発明は、被験者の免疫応答を調節することが有益である疾患（例えば、増殖性疾患、感染性疾患、心血管疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患を含むが、これらに限定されない）に現在利用されている単剤療法と比べて、良好な予防および治療プロファイルをもたらす治療プロトコルを包含する。本発明は、被験者における増殖性疾患、感染性疾患、心血管疾患、炎症性疾患、または自己免疫疾患と関連した1以上の症状を予防し、治療し、または改善するための組合せ療法を提供し、前記組合せ療法は、前記被験者に、1種以上のリンパ系組織誘導剤と1種以上の免疫調節剤を投与することを含んでなる。
【００２６】
特定の実施形態において、本発明は、増殖性疾患、感染性疾患、心血管疾患、炎症性疾患、または自己免疫疾患の1以上の症状を予防し、治療し、または改善する方法を提供し、前記方法は、かかる処置が必要な被験者に、予防または治療に有効な量の1種以上のリンパ系組織誘導剤の適用量および予防または治療に有効な量の1種以上の免疫調節剤の適用量を投与することを含んでなる。この実施形態によると、リンパ系組織誘導剤は微小管安定化剤、TNF誘導剤または小分子とすることができ、免疫調節剤はHSP誘導剤、ICAM誘導剤、ケモカイン受容体誘導剤、抗体または細菌剤とすることができる。本発明によれば、本発明の組合せ療法で利用されるリンパ系組織誘導剤と免疫調節剤は異なるものである。
【００２７】
別の実施形態においては、本発明は、増殖性疾患、感染性疾患、心血管疾患、炎症性疾患、または自己免疫疾患の1以上の症状を予防し、治療し、または改善する方法を提供し、前記方法は、かかる処置が必要な被験者に、予防または治療に有効な量の1種以上の微小管安定化剤の適用量および予防または治療に有効な量の1種以上の免疫調節剤の適用量を投与することを含んでなる。この実施形態によると、微小管安定化剤はタキサン（例えば、タキソテール(taxotere)またはパクリタキセル）、エポシロン(epothilone)、ディスコダーモリド(discodermolide)、エリューテロビン(eleutherobin)、タッカロノリド(taccalonolide)、またはサルコジクチイン(sarcodictyin)であり得る。特定の実施形態において、増殖性疾患の被験者に微小管安定化剤タキソールと共に投与される免疫調節剤に、1種以上の以下の免疫調節剤は含まれない： 5-FU、アシスプラチン、ロイコボリン、ミトキサントロン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、カルボプラチン、アンスラサイクリン、ゲムシタビン、エピルビシン、カペシタビン、イソファミド、エダトレキセート、ビノレルビン、ベラプラミル、エトポシド、ヒドロキシウレア、フォリニック酸(folinic acid)、タキソテレ、エストラムスチン、GM-CSF、TNF-α誘導剤、ラルチトレキシド(raltitrexid)、フラゾロアクリジン(phrazoloacridine)、アミフォスチン、PS-341、ビンフルイニン(vinfluinine)、スクアラミン、メルファラン、クリプトフィセンス(cryptophycens)、ポリアミン類、ハーセプチン、TFN-α、グルタミン、ゲルデナマイシン、PDGFアンタゴニスト、オレオチド(oreotide)、EGF、ハービマイシンA、ゲニステイン(genistein)、アジ化ナトリウム、デキサメタゾン、ジフェンヒドラミン、ラニチジニ(ranitidini)、および非ステロイド系の抗炎症剤。別の実施形態において、増殖性疾患の被験者に微小管安定化剤タキソテレと共に投与される免疫調節剤に、1種以上の以下の免疫調節剤は含まれない： 5-FU、ドキソルビシン、カペシタビン、およびcyt P450 Cyplインヒビター。
【００２８】
他の実施形態において、本発明は、増殖性疾患、感染性疾患、心血管疾患、炎症性疾患、または自己免疫疾患の1以上の症状を予防し、治療し、または改善する方法を提供し、前記方法は、かかる処置が必要な被験者に、リンパ系組織誘導剤としての、予防または治療に有効な量の1種以上の小分子または1種以上のTNF誘導剤の適用量、および予防または治療に有効な量の1種以上の免疫調節剤の適用量を投与することを含んでなる。
【００２９】
本発明の組合せ療法は、本明細書に記載の疾患を予防または治療するために免疫調節剤と共に利用されるリンパ系組織誘導剤の投与量を比較的低くすることができ、かつ／また、予防または治療効果を達成するために本明細書に記載の疾患を有する被験者に前記薬剤を投与する回数を比較的少なくすることができる。本発明の組合せ療法は、本明細書に記載の疾患のための最新の単剤療法および／または既存の組合せ療法に伴う望ましくないまたは有害な副作用を軽減したり回避し、ひいては治療プロトコルに対する患者のコンプライアンス（服薬遵守）を改善する。さらに、本発明の組合せ療法は、本明細書に記載の疾患を有する被験者への1種以上のリンパ系組織誘導剤の投与量の投与回数、あるいは1種以上の免疫調節剤の投与量の投与回数を減らすことにより、前記被験者のクオリティー・オブ・ライフ（生活の質）を改善する。
【００３０】
本発明の組合せ療法のリンパ系組織誘導剤と免疫調節剤は被験者に同時にまたは逐次的に投与することができる。本発明の組合せ療法のリンパ系組織誘導剤と免疫調節剤を周期的に投与してもよい。周期的療法は、前記薬剤の一方に対する耐性の発生を抑制するために、前記薬剤の一方の副作用を回避したり軽減するために、そして／または、治療の効力を改善するために、ある期間にわたり第1の予防薬または治療薬（例えば、リンパ系組織誘導剤）を投与し、続いてある期間にわたり第2の予防薬または治療薬（例えば、免疫調節剤）を投与し、この逐次的投与（すなわち、周期）を繰り返すことを含む。
【００３１】
本発明の組合せ療法のリンパ系組織誘導剤と免疫調節剤は被験者に同時に投与することができる。「同時に」という用語は、リンパ系組織誘導剤と免疫調節剤を厳密に同時に投与することに限定されず、むしろ、リンパ系組織誘導剤と免疫調節剤をある時間間隔内で順に被験者に投与することを意味する。その結果、リンパ系組織誘導剤を免疫調節剤と一緒に作用させることができ、それらを他の方法で投与したときと比べて増大した効果が得られるようになる。例えば、リンパ系組織誘導剤と免疫調節剤は同時にまたは任意の順序で異なる時点に逐次的に投与することができるが、同時に投与しない場合は、所望の治療または予防効果が得られるように時間的に十分接近させてそれらを投与すべきである。リンパ系組織誘導剤と免疫調節剤は、別々に、任意の適切な形態で、任意の適当な経路により投与することも可能である。種々の実施形態においては、リンパ系組織誘導剤と免疫調節剤を、15分以内に、30分以内に、1時間未満の間隔をおいて、約1時間の間隔をおいて、約1時間から約2時間の間隔をおいて、約2時間から約3時間の間隔をおいて、約3時間から約4時間の間隔をおいて、約4時間から約5時間の間隔をおいて、約5時間から約6時間の間隔をおいて、約6時間から約7時間の間隔をおいて、約7時間から約8時間の間隔をおいて、約8時間から約9時間の間隔をおいて、約9時間から約10時間の間隔をおいて、約10時間から約11時間の間隔をおいて、約11時間から約12時間の間隔をおいて、24時間の間隔をおいて、48時間の間隔をおいて、72時間の間隔をおいて、または1週間の間隔をおいて投与する。好ましい実施形態では、患者が来院したその日のうちに、1種のリンパ系組織誘導剤と2種以上の免疫調節剤を投与する。別の好ましい実施形態では、患者が来院したその日のうちに、2種のリンパ系組織誘導剤と1種、2種またはそれ以上の免疫調節剤を患者に投与する。
【００３２】
組合せ療法のリンパ系組織誘導剤と免疫調節剤は同一の医薬組成物で被験者に投与することができる。あるいはまた、組合せ療法のリンパ系組織誘導剤と免疫調節剤は別個の医薬組成物で同時に被験者に投与することができる。リンパ系組織誘導剤と免疫調節剤は同一の投与経路で被験者に投与しても、異なる投与経路で投与してもよい。
【００３３】
本発明は、1種以上のリンパ系組織誘導剤と製薬上許容される担体を含有する医薬組成物を提供する。本発明はまた、1種以上の免疫調節剤と製薬上許容される担体を含有する医薬組成物を提供する。本発明はさらに、1種以上のリンパ系組織誘導剤、1種以上の免疫調節剤、および製薬上許容される担体を含有する医薬組成物を提供する。特定の実施形態において、本発明は、治療に有効な量の1種以上の微小管安定化剤、治療に有効な量の1種以上のHSP誘導剤、および製薬上許容される担体を含有する医薬組成物を提供する。別の実施形態では、本発明は、治療に有効な量の1種以上の微小管安定化剤、治療に有効な量の1種以上のケモカイン受容体誘導剤、および製薬上許容される担体を含有する医薬組成物を提供する。さらに別の実施形態では、本発明は、治療に有効な量の1種以上の微小管安定化剤、治療に有効な量の1種以上のICAM誘導剤、および製薬上許容される担体を含有する医薬組成物を提供する。
【００３４】
本発明の医薬組成物は、本明細書に記載の疾患またはその1以上の症状を予防し、治療し、または改善するために本発明の方法に従って使用される。好ましくは、本発明の医薬組成物は、無菌であり、増殖性疾患、感染性疾患、心血管疾患、自己免疫疾患、または炎症性疾患を有する被験者への特定の投与方法に適する形態をしている。
【００３５】
本発明は、1種以上のリンパ系組織誘導剤および／または1種以上の免疫調節剤を被験者に投与するための持続放出製剤を包含する。持続放出製剤は被験者への前記薬剤の投与量および／または投与回数を少なくする。
【００３６】
本明細書に記載の組成物および方法は増殖性疾患を予防し、治療し、または改善するのに有用である。かかる増殖性疾患としては、限定するものではないが、肺癌、例えば、小細胞肺癌および非小細胞肺癌；胃腸の癌、例えば、食道癌、胃癌、膵臓癌、肝細胞癌、結腸直腸癌、肛門癌；尿生殖器の癌、例えば、前立腺癌、精巣癌、膀胱癌、腎細胞癌、卵巣癌、子宮内膜癌、子宮頸癌；乳癌、甲状腺および副甲状腺を含む内分泌器官の新生物、褐色細胞腫のような副腎髄質の腫瘍、および神経芽細胞腫；および多発性内分泌腺腫症（1〜3型など）；血液の癌、例えば、白血病、多発性骨髄腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫；脳癌、例えば、頭蓋咽頭腫、下垂体新生物、星状細胞腫、髄膜腫、脊髄腫瘍のような中枢神経系の癌、および神経鞘腫や聴神経腫のような末梢神経系の癌；皮膚癌、例えば、メラノーマ、基底細胞癌、扁平上皮癌；心臓の腫瘍、例えば、心房粘液腫；および乾癬がある。本明細書に記載の組成物および方法は感染性疾患を予防し、治療し、または改善するのに有用である。かかる感染性疾患としては、限定するものではないが、ウイルス、細菌、真菌および寄生生物による感染性疾患が含まれる。
【００３７】
本明細書に記載の組成物および方法は心血管疾患を予防し、治療し、または改善するのに有用である。かかる心血管疾患としては、限定するものではないが、アテローム硬化症、脳卒中、脳梗塞、内皮機能障害（特に、血管の弾力性に影響する機能障害）、虚血性心疾患（例えば、狭心症、心筋梗塞、慢性虚血性心疾患）、高血圧性心疾患、肺性心疾患、冠状心疾患、弁膜性心疾患（例えば、リウマチ熱、リウマチ性心疾患、心内膜炎、僧帽弁逸脱症、再狭窄、大動脈球狭窄症）、先天性心疾患（例えば、弁膜性および脈管性閉塞障害、心房または心室中隔欠損、動脈管開存症）、および心筋性疾患（例えば、心筋炎、うっ血性心筋症、肥大性心筋症）が含まれる。
【００３８】
本明細書に記載の組成物および方法は自己免疫疾患を予防し、治療し、または改善するのに有用である。かかる自己免疫疾患としては、限定するものではないが、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、自己免疫性アジソン病、副腎の自己免疫疾患、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性卵巣炎および精巣炎、自己免疫性血小板減少症、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、セリアックスプルー皮膚炎(celiac sprue-dermatitis)、慢性疲労免疫不全症候群(CFIDS)、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー、チャーグ-ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、CREST症候群、寒冷凝集素病、クローン病、円板状紅斑、必須混合クリオグロブリン血症、線維素血症-線維筋炎、糸球体腎炎、グレーヴズ病、ギヤン-バレー症候群、橋本甲状腺炎、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病(ITP)、IgAニューロパシー、若年性関節炎、扁平苔癬、メニエール病、混合結合組織病、多発性硬化症、1型または免疫媒介性糖尿病、重症筋無力症、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多発性軟骨炎、多腺症候群(polyglandular syndromes)、リウマチ性多発性筋痛、多発性筋炎および皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、乾癬性関節炎、レイノー現象、ライター症候群、慢性関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、進行性全身性硬化症、シェーグレン症候群、グッドパスチャー症候群、スティッフマン症候群、全身性エリテマトーデス、エリテマトーデス、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、脈管炎、例えば、疱疹状皮膚炎脈管炎、白斑、およびヴェーゲナー肉芽腫症が挙げられる。
【００３９】
本明細書に記載の組成物および方法は炎症性疾患を予防し、治療し、または改善するのに有用である。かかる炎症性疾患としては、限定するものではないが、喘息、脳炎、炎症性腸疾患（例えば、クローン病、潰瘍性大腸炎）、慢性閉塞性肺疾患(COPD)、炎症性骨溶解、アレルギー疾患、敗血症性ショック、肺線維症（例えば、特発性肺線維症）、炎症性脈管炎（例えば、結節性多発動脈炎、ヴェーゲナー肉芽腫症、高安動脈炎、側頭動脈炎、およびリンパ腫様肉芽腫症）、外傷後血管形成（例えば、血管形成後の再狭窄）、未分化脊椎関節症、未分化関節症、関節炎、炎症性骨溶解、慢性肝炎、および慢性ウイルス感染または慢性細菌感染から生じる慢性炎症が挙げられる。特に、本明細書に記載の組成物および方法は、T細胞活性化の増加および／または異常な抗原提示を特徴とする炎症性疾患を予防し、治療し、または改善するのに有用である。また、本明細書に記載の組成物および方法は、炎症性骨溶解、異常な骨再吸収を特徴とする他の疾患、または骨損失を特徴とする疾患（例えば、骨粗鬆症）と関連した1以上の症状を予防し、治療し、または改善するのに使用される。
【００４０】
本発明は、包装材料と、その包装材料内に収容された、被験者に投与するのに適した形態の本発明の医薬組成物と、を含んでなる製品を提供する。特に、本発明は、包装材料と、その包装材料内に収容された、被験者に投与するのに適した形態の本発明の医薬組成物と、を含んでなる製品を提供し、前記医薬組成物は、1種以上のリンパ系組織誘導剤、1種以上の免疫調節剤、および製薬上許容される担体を含有するものである。本発明の製品は、医薬組成物の使用もしくは投与に関する説明書、あるいは、対象の疾患・障害の適切な予防または治療の仕方を医師、技師または患者に指示する他の情報を含んでいてもよい。
【００４１】
３．１．用語の説明
本明細書で用いる用語「活性化された免疫細胞」および類似用語は、特定のマーカー（抗原）を発現するか、または特定のサイトカインを産生する免疫細胞を意味し、免疫細胞として、限定するものではないが、以下のものが挙げられる：リンパ系細胞（例えば、Ｔ細胞、NK細胞およびＢ細胞）、骨髄性細胞（例えば、マクロファージ、単球、好酸球、好中球、好塩基球、マスト細胞、顆粒球および血小板）、樹状細胞、並びに抗原提示細胞。活性化マーカーおよびサイトカインの発現は、当業者には公知の様々な方法により確認することができ、そのような方法として、限定するものではないが、免疫蛍光、蛍光活性化セルソーター（FACS）、ウエスタンブロット分析、ノーザンブロット分析およびRT-PCRが挙げられる。
【００４２】
本明細書で用いる用語「付加の」および「一緒に」は、「組み合わせて」または「組合せの」と置き換え可能に用いられる。
【００４３】
本明細書で用いる用語「アゴニスト性抗体」および類似用語は、免疫細胞により発現された抗原（例えば、サイトカイン受容体または共刺激分子）と免疫特異的に結合する抗体を意味し、このような抗原と関連するシグナル伝達経路の活性化を誘導する。好ましくは、アゴニスト性抗体は、活性化免疫細胞により選択的に発現された抗原と免疫特異的に結合し、免疫細胞の活性化を増強する。
【００４４】
本明細書で用いる用語「脂肪族基」とは、完全に飽和しているか、あるいは、１以上の不飽和単位を含む直鎖、分枝鎖または環状の非芳香族炭化水素である。典型的には、直鎖または分枝鎖脂肪族基は、１〜約20個、好ましくは１〜約10個の炭素原子を有し、環状脂肪族基は３〜約10個、好ましくは３〜約８個の炭素原子を有する。脂肪族基は、好ましくは直鎖または分枝鎖アルキル基であり、例として、以下のものが挙げられる：メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、ペンチル、ヘキシル、オクチル、または３〜約８個の炭素原子を有するシクロアルキル基。また、C1〜C20直鎖もしくは分枝鎖アルキル基またはC3〜C8環状アルキル基も「低級アルキル」基と呼ぶ。
【００４５】
本明細書で、タンパク質性物質（例えば、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、融合タンパク質および抗体）に関して用いる用語「類似体」は、第２タンパク質性物質と類似したまたは同じ機能を有するが、第２タンパク質性物質と類似したまたは同じアミノ酸配列を必ずしも含んでいないか、あるいは、第２タンパク質性物質と類似したまたは同じ構造を有するタンパク質性物質を意味する。類似したアミノ酸配列を有するタンパク質性物質は、以下に挙げるうちの少なくとも１つを満たす第２タンパク質性物質を意味する：（ａ）第２タンパク質性物質のアミノ酸配列に対して、少なくとも30％、少なくとも35％、少なくとも40％、少なくとも45％、少なくとも50％、少なくとも55％、少なくとも60％、少なくとも65％、少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％または少なくとも99％同一であるアミノ酸配列を有するタンパク質性物質；（ｂ）ストリンジェントな条件下で、少なくとも５個連続したアミノ酸残基、少なくとも10個連続したアミノ酸残基、少なくとも15個連続したアミノ酸残基、少なくとも20個連続したアミノ酸残基、少なくとも25個連続したアミノ酸残基、少なくとも40個連続したアミノ酸残基、少なくとも50個連続したアミノ酸残基、少なくとも60個連続したアミノ酸残基、少なくとも70個連続したアミノ酸残基、少なくとも80個連続したアミノ酸残基、少なくとも90個連続したアミノ酸残基、少なくとも100個連続したアミノ酸残基、少なくとも125個連続したアミノ酸残基、少なくとも150個連続したアミノ酸残基の第２タンパク質性物質をコードするヌクレオチド配列とハイブリダイズするヌクレオチド配列によりコードされるタンパク質性物質；並びに（ｃ）第２タンパク質性物質をコードするヌクレオチド配列に対して、少なくとも30％、少なくとも35％、少なくとも40％、少なくとも45％、少なくとも50％、少なくとも55％、少なくとも60％、少なくとも65％、少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％または少なくとも99％同一であるヌクレオチド配列によりコードされるタンパク質性物質。第２タンパク質性物質と類似した構造を有するタンパク質性物質とは、第２タンパク質性物質と類似した二次、三次または四次構造を有するタンパク質性物質を意味する。タンパク質性物質の構造は、当業者には公知の方法により決定することができ、そのような方法として、限定するものではないが、ペプチド配列決定、Ｘ線結晶学、核磁気共鳴、円二色性、並びに結晶学電子顕微鏡検査が挙げられる。
【００４６】
２つのアミノ酸配列または２つの核酸配列の同一性パーセントを決定するためには、最適な比較目的に応じて配列のアラインメントを実施する（例えば、第２アミノ酸または核酸配列との最適アラインメントの場合、第１アミノ酸または核酸配列の配列にギャップを導入することができる）。次に、対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置のアミノ酸残基またはヌクレオチドを比較する。第１配列の位置に、第２配列の対応する位置と同じアミノ酸残基またはヌクレオチドがある場合には、これらの分子はその位置で同一である。２つの配列の同一性パーセントは、両配列が有する同一位置の数の関数である（すなわち、同一性％＝同一の重なり合う位置の数／位置の総数×100％）。一実施形態では、２つの配列は長さが同じである。
【００４７】
また、２つの配列間の同一性パーセントの決定は、数学的アルゴリズムを用いて達成することもできる。２つの配列の比較に用いられる数学的アルゴリズムの好ましい非制限的例として、KarlinおよびAltschul, 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90: 5873-587に記載されるように改良された、KarlinおよびAltschul, 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 87: 2264-2268のアルゴリズムがある。このようなアルゴリズムは、Altschulら、1990, J. Mol. Biol. 215: 403のNBLASTおよびXBLASTプログラムに組み込まれている。NBLASTヌクレオチドプログラムパラメーターセット（例：スコア＝100、ワード長＝12）を用いて、BLASTヌクレオチド検索を実行することにより、本発明の核酸分子と相同のヌクレオチド配列を得ることができる。また、XBLASTプログラムパラメーターセット（例：スコア＝50、ワード長＝３）を用いて、BLASTタンパク質検索を実行することにより、本発明のタンパク質分子と相同のアミノ酸配列を得ることができる。比較を目的とするギャップ付きアラインメントを得るためには、Altschulら、1997, Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402に記載されているように、ギャップ付きBLASTを用いることができる。あるいは、PSI-BLASTを用いて、分子間の遠い関係を検出する反復検索を実行することも可能である（同著）。BLAST、ギャップ付きBLASTおよびPSI-Blastプログラムを用いる場合には、それぞれのプログラム（例えば、XBLASTおよびNBLAST）のデフォルトパラメーターを用いることができる（例えば、NCBIウェブサイトを参照）。配列比較に用いられる数学的アルゴリズムの別の好ましい非制限的例として、MyersおよびMiller, 1988, CABIOS 4: 11-17に記載されるアルゴリズムがある。このようなアルゴリズムは、GCG配列アラインメントソフトウエアパッケージの一部であるALIGNプログラム（2.0バージョン）に組み込まれている。アミノ酸配列を比較するのにALIGNプログラムを用いる場合には、PAM 120加重残基表、ギャップ長ペナルティー＝12、並びにギャップペナルティー＝４を用いることができる。
【００４８】
２つの配列間の同一性パーセントの決定は、前記と同様の方法を用いて、ギャップを導入し、あるいは、導入せずに決定することができる。同一性パーセントを計算する際には、典型的には、厳密なマッチだけを数える。
【００４９】
本明細書で、非タンパク質性類似体に関して用いる用語「類似体」とは、第１有機または無機分子と類似したまたは同じ機能を有し、かつ第１有機または無機分子と構造的に類似している第２有機または無機分子を意味する。
【００５０】
本明細書で用いる用語「抗体」とは、モノクローナル抗体、多重特異的抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、camelised抗体、キメラ抗体、単一ドメイン抗体、一本鎖Fvs（scFv）、一本鎖抗体、Fabフラグメント、F(ab1)フラグメント、ジスルフィド結合Fvs（sdFv）、および抗イディオタイプ（抗Id）抗体、並びにこれらいずれかのエピトープ結合性フラグメントを意味する。特に、抗体は、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性のフラグメント、すなわち、抗原結合部位を含む分子を含む。免疫グロブリン分子は、どのようなタイプ（例えば、IgG、IgE、IgM、IgD、IgAおよびIgY）、クラス（例えば、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1およびIgA2）またはサブクラスのものであってもよい。
【００５１】
本明細書で用いる用語「芳香族基」とは、炭素環式芳香族基（例えば、フェニル、ナフチル、およびアントラシル）、並びにヘテロアリール基（例えば、イミダゾリル、チエニル、フラニル、ピリジル、ピリミジル、ピラニル、ピラゾリル、ピロイル、ピラジニル、チアゾール、オキサゾリル、およびテトラゾール）を意味する。
【００５２】
芳香族基には、炭素環式芳香環またはヘテロアリール環が１個以上の別のヘテロアリール環に縮合している縮合多環式芳香族環系も含まれる。例としては、ベンゾチエニル、ベンゾフラニル、インドリル、キノリニル、ベンゾチアゾール、ベンゾオキサゾール、ベンズイミダゾール、キノリニル、イソキノリニルおよびイソインドリルが挙げられる。
【００５３】
本明細書で用いる用語「アリール」とは、５〜10個の環炭素原子を有する芳香族炭素環、または芳香族複素環を意味する。芳香族複素環は、５〜10個の環炭素原子を有する芳香族炭素環であって、炭素環原子の１〜４個がＮ、ＯまたはＳ原子で置換されている。
【００５４】
本明細書で用いる用語「ベンジル」とは、-CH2-フェニル基を意味する。
【００５５】
本明細書で用いる用語「サイトカイン受容体モジュレーター」とは、サイトカイン受容体のリン酸化、サイトカイン受容体に関連するシグナル伝達経路の活性化、および／またはサイトカイン受容体に関連するシグナル伝達経路の活性化により誘導されるサイトカインなど特定のタンパク質の発現をモジュレートする物質をさす。このような物質は、サイトカイン受容体のリン酸化、サイトカイン受容体に関連するシグナル伝達経路の活性化、および／またはサイトカイン受容体に関連するシグナル伝達経路の活性化により誘導されるサイトカインなど特定のタンパク質の発現を直接または間接的にモジュレートする。サイトカイン受容体モジュレーターの非制限的例を以下に挙げる：これらの活性を有するタンパク質性物質（例えば、サイトカイン、ペプチド模擬物、および抗体）、小分子、有機化合物、無機化合物、並びに核酸分子（例えば、タンパク質、ポリペプチド、および抗体をコードする核酸分子）。特定の実施形態では、サイトカイン受容体モジュレーターは、サイトカイン受容体の１以上のサブユニットと免疫特異的に結合または会合して、サイトカイン受容体に関連するシグナル伝達経路の活性化を誘導するタンパク質、ポリペプチドまたはペプチドである。別の実施形態では、サイトカイン受容体モジュレーターは、サイトカイン受容体の１以上のサブユニットと免疫特異的に結合または会合して、サイトカイン受容体に関連するシグナル伝達経路の活性化を誘導するタンパク質、ポリペプチドまたはペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子である。他の実施形態では、サイトカイン受容体モジュレーターは、融合タンパク質、または融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子であり、この融合タンパク質は、サイトカイン受容体の１以上のサブユニットと免疫特異的に結合または会合して、異種タンパク質、ポリペプチドまたはペプチドと融合したサイトカイン受容体に関連するシグナル伝達経路の活性化を誘導するタンパク質、ポリペプチドまたはペプチドを含む。
【００５６】
好ましい実施形態では、サイトカイン受容体モジュレーターは、サイトカイン、サイトカインをコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子、サイトカイン受容体の１以上のサブユニットと免疫特異的に結合するアゴニスト性抗体、あるいは、サイトカイン受容体の１以上のサブユニットと免疫特異的に結合するアゴニスト性抗体をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子である。サイトカインの非制限的例を以下に挙げる：インターフェロン（IFN）-α、IFN-β、IFN-γ、腫瘍壊死因子（TNF）-α、Flt3リガンド、インターロイキン（IL）-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-12、IL-15、IL-18、コロニー刺激因子（CSF）-1、顆粒球コロニー刺激因子（G-CSF）、マクロファージコロニー刺激因子（M-CSF）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（GM-CSF）、並びにケモカイン類、例えば、マクロファージ炎症タンパク質（MIP）-1、γインターフェロン誘導タンパク質（IP-10）およびINF-γにより誘導されるモノカイン（MIG）。
【００５７】
本明細書で、タンパク質性物質に関連して用いられる用語「誘導体」とは、アミノ酸残基の置換、欠失もしくは付加の導入により改変されたアミノ酸配列を含むタンパク質性物質を意味する。本明細書で用いられる用語「誘導体」はまた、修飾された（すなわち、タンパク質性物質といずれかのタイプの分子との共有結合により修飾された）タンパク質性物質も意味する。例として、限定するものではないが、抗体は、例えばグリコシル化、アセチル化、peg化、リン酸化、アミド化、公知の保護基／遮断基による誘導体化、タンパク質分解切断、細胞リガンドもしくはその他のタンパク質との連結などによって修飾することができる。タンパク質性物質の誘導体は、当業者には公知の方法を用いた化学的修飾により製造することができるが、このような方法として、限定するものではないが、特異的化学的切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝的合成などが挙げられる。さらに、タンパク質性物質の誘導体は１個以上の非古典的アミノ酸を含んでいてもよい。好ましい実施形態では、タンパク質性誘導体は、それが誘導されたタンパク質性物質と類似または同一の機能を有する。
【００５８】
本明細書で、非タンパク質性物質に関連して用いられる用語「誘導体」とは、第１有機または無機分子の構造に基づいて形成される第２有機または無機分子を意味する。有機分子の誘導体としては、限定するものではないが、例えば、ヒドロキシル、メチル、エチル、カルボキシルもしくはアミン基の付加または欠失により、修飾された分子が挙げられる。有機分子はまた、エステル化、アルキル化および／またはリン酸化することができる。好ましい実施形態では、非タンパク質性誘導体は、それが誘導された有機または無機分子と類似または同一の機能を有する。
【００５９】
本明細書で用いられる用語「障害」および「疾患」は、置き換え可能に用いられ、被験者の状態を意味する。特に、用語「自己免疫疾患」は、用語「自己免疫障害」と置き換え可能に用いられ、被験者自身の細胞、組織および／または器官に対する被験者の免疫反応によって起こる細胞、組織および／または器官の損傷を特徴とする被験者の状態を意味する。用語「炎症性疾患」は、用語「炎症性障害」と置き換え可能に用いられ、炎症、好ましくは、慢性炎症を特徴とする被験者の状態を意味する。自己免疫障害は、炎症を伴う場合もあれば、伴わない場合もある。さらに、炎症は、自己免疫障害に起因するもの、または起因しないものも含む。従って、障害には、自己免疫障害と炎症性障害の両方を特徴とするものもある。
【００６０】
本明細書で用いる用語「ドセタキセル」とは、一般に「タキソテール（taxotere）」と呼ばれるタキサンを意味する。このように、用語「ドセタキセル」と「タキソテール」は置き換え可能に用いられる。
【００６１】
本明細書で用いる用語「エピトープ」とは、動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトにおける抗原もしくは免疫原活性を有するポリペプチドまたはタンパク質の断片を意味する。免疫原活性を有するエピトープは、動物における抗体応答を誘発するポリペプチドまたはタンパク質の断片である。抗原活性を有するエピトープは、抗体が免疫特異的に結合するポリペプチドまたはタンパク質の断片であり、かかる結合は、当業者には公知のいずれかの方法、例えば、イムノアッセイにより測定される。抗原エピトープは必ずしも免疫原性である必要はない。
【００６２】
本明細書で用いる用語「断片」とは、あるポリペプチドのアミノ酸配列の少なくとも５個連続したアミノ酸残基、少なくとも10個連続したアミノ酸残基、少なくとも15個連続したアミノ酸残基、少なくとも20個連続したアミノ酸残基、少なくとも25個連続したアミノ酸残基、少なくとも40個連続したアミノ酸残基、少なくとも50個連続したアミノ酸残基、少なくとも60個連続したアミノ酸残基、少なくとも70個連続したアミノ酸残基、少なくとも80個連続したアミノ酸残基、少なくとも90個連続したアミノ酸残基、少なくとも100個連続したアミノ酸残基、少なくとも125個連続したアミノ酸残基、少なくとも150個連続したアミノ酸残基、少なくとも175個連続したアミノ酸残基、少なくとも200個連続したアミノ酸残基、少なくとも250個連続したアミノ酸残基のアミノ酸配列を含むペプチドまたはポリペプチドを意味する。特定の実施形態では、ポリペプチドの断片は該ポリペプチドの少なくとも１つの機能を保持している。
【００６３】
本明細書で用いる用語「機能的断片」とは、第２の異なるポリペプチドのアミノ酸配列の少なくとも５個連続したアミノ酸残基、少なくとも10個連続したアミノ酸残基、少なくとも15個連続したアミノ酸残基、少なくとも20個連続したアミノ酸残基、少なくとも25個連続したアミノ酸残基、少なくとも40個連続したアミノ酸残基、少なくとも50個連続したアミノ酸残基、少なくとも60個連続したアミノ酸残基、少なくとも70個連続したアミノ酸残基、少なくとも80個連続したアミノ酸残基、少なくとも90個連続したアミノ酸残基、少なくとも100個連続したアミノ酸残基、少なくとも125個連続したアミノ酸残基、少なくとも150個連続したアミノ酸残基、少なくとも175個連続したアミノ酸残基、少なくとも200個連続したアミノ酸残基、少なくとも250個連続したアミノ酸残基のアミノ酸配列を含むペプチドまたはポリペプチドを意味し、その際、上記ペプチドまたはポリペプチドは上記第２の異なるポリペプチドの少なくとも１つの機能を保持している。
【００６４】
本明細書で用いる用語「融合タンパク質」とは、第１のタンパク質、またはその機能的断片、類似体もしくは誘導体のアミノ酸配列と、異種タンパク質（すなわち、第１タンパク質、またはその機能的断片、類似体もしくは誘導体とは異なる第２のタンパク質、またはその機能的断片、類似体もしくは誘導体）のアミノ酸配列を含むポリペプチドを意味する。一実施形態では、融合タンパク質は、異種のタンパク質、ポリペプチドもしくはペプチドに融合した予防薬または治療薬を含む。この実施形態によれば、異種のタンパク質、ポリペプチドもしくはペプチドは、予防薬または治療薬と異なるタイプでも、そうでなくてもよい。例えば、免疫調節活性を有する２つの異なるタンパク質、ポリペプチドもしくはペプチドを一緒に融合させることにより、融合タンパク質を形成することができる。
【００６５】
本明細書で用いる用語「宿主細胞」とは、核酸分子でトランスフェクトされた特定の対象細胞、並びにそのような細胞の子孫または潜在的子孫を意味する。このような細胞の子孫は、後続世代に起こりうる突然変異または環境の影響、あるいは、宿主細胞ゲノムへの核酸分子の組込みのために、核酸分子でトランスフェクトされた親細胞と同じでなくてもよい。
【００６６】
本明細書で用いる用語「ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする」とは、典型的には、互いに少なくとも30％（好ましくは、少なくとも35％、少なくとも40％、少なくとも45％、少なくとも50％、少なくとも55％、少なくとも60％、少なくとも65％、少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％または少なくとも95％）同一のヌクレオチド配列が相互にハイブリダイズした状態のままで存在する、ハイブリダイゼーションおよび洗浄条件を表すものである。このようなストリンジェントな条件は、当業者には公知であり、Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N. Y.（1989）, 6.3.1-6.3.6にみいだすことができる。一つの非制限的例では、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、約45℃にて６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（SSC）でハイブリダイゼーションを実施した後、約68℃で0.1×SSC、0.2％SDSにおいて１回以上洗浄するものである。好ましい非制限的例では、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、約45℃にて６×SSCでハイブリダイゼーションを実施した後、50〜65℃で0.2×SSC、0.1％SDSにおいて１回以上洗浄する（すなわち、50℃、55℃、60℃または65℃で１回以上洗浄する）。本発明の核酸には、上記条件下で、ＡまたはＴヌクレオチドのみからなるヌクレオチド配列にだけハイブリダイズする核酸分子は含まれないことが理解されよう。
【００６７】
本明細書で用いる用語「免疫調節剤」、「免疫系調節物質」、並びにそれらの変形（限定するものではないが、免疫調節剤、免疫調節因子または免疫調節薬）は、被験者の免疫応答の１以上の様相をモジュレートする物質を意味する。免疫応答の様相としては、限定するものではないが、炎症性応答、補体カスケード、体液性免疫応答、並びに細胞性免疫応答が挙げられる。具体的実施形態では、免疫調節剤は、被験者の免疫応答の１つの様相をシフトする物質、例えば、Th1からTh2応答に免疫応答をシフトする物質である。別の実施形態では、免疫調節剤は、免疫応答の２以上の様相をモジュレートする。一実施形態では、免疫調節剤は免疫抑制剤である。好ましい実施形態では、免疫調節剤は免疫刺激剤または免疫系エンハンサーである。場合によっては、リンパ系組織誘導剤も免疫調節剤として分類することができる。従って、本発明によれば、本発明の組合せ療法に用いられる免疫調節剤は、その組合せ療法に用いられるリンパ系組織誘導剤とは異なる物質である。
【００６８】
本明細書で用いる用語「免疫刺激剤」および「免疫系エンハンサー」は、被験者の免疫応答を増強、活性化、あるいは、増大する物質を意味する。特に、免疫系エンハンサーは、被験者の体液性および／または細胞性免疫応答を増強、活性化、あるいは、増大する物質である。免疫系エンハンサーは、１以上の免疫細胞（例：Ｔ細胞（例えば、Ｔヘルパー細胞および細胞傷害性Ｔ細胞）、ナチュラルキラー（NK）細胞、並びに抗原提示細胞（例：マクロファージ、樹状細胞、およびＢ細胞））の１以上の生物学的活性（例：増殖、分化、初回免疫、エフェクター機能、サイトカインの産生、または抗原の発現）を活性化する物質である。例えば、免疫刺激分子は、抗体分子の合成を刺激または増大するか、サイトカイン（例：IL-2）の発現または放出を増大するか、あるいは、サイトカイン受容体の発現を増大するか、あるいはまた、免疫細胞の増殖を増大することができる。具体的実施形態では、免疫刺激剤は、免疫刺激剤の非存在下での免疫細胞の生物学的活性と比較して、免疫細胞の生物学的活性を１〜５倍、５〜10倍、10〜20倍、または20倍以上活性化させる。免疫刺激剤により活性化される免疫細胞は、疾患の特定部位、またはリンパ系組織誘導剤により誘導されたリンパ系組織まで移動すると考えられる。
【００６９】
本明細書で用いる用語「免疫抑制剤」とは、免疫系の１以上の生物学的活性を阻害または抑制する物質を意味する。免疫抑制剤は、１以上の免疫細胞（例：Ｔ細胞（例えば、Ｔヘルパー細胞および細胞傷害性Ｔ細胞）、ナチュラルキラー（NK）細胞、並びに抗原提示細胞（例：マクロファージ、樹状細胞、およびＢ細胞））の１以上の生物学的活性（例：増殖、分化、初回免疫、エフェクター機能、サイトカインの産生、または抗原の発現）を阻害または抑制する物質である。
【００７０】
本明細書で用いる用語「免疫特異的に抗原と結合する」および類似用語は、特定の抗原または断片と特異的に結合して、他の抗原には特異的に結合しないペプチド、ポリペプチド、融合タンパク質、および抗体またはそのフラグメントを意味する。抗原と特異的に結合するペプチドまたはポリペプチドは、より低い親和力でもって他のペプチドまたはポリペプチドと結合してもよく、この結合は、例えば、イムノアッセイ（例：競合的ELISAおよびラジオイムノアッセイ）、BIAcore、または当業者には公知のその他のアッセイにより測定される。抗原と免疫特異的に結合する抗体またはフラグメントは、関連する抗原と交差反応しうる。好ましくは、抗原と免疫特異的に結合する抗体またはフラグメントは、他の抗原とは免疫特異的に結合しない。特定の実施形態では、ペプチド、ポリペプチド、または抗体が免疫特異的に結合する抗原は、サイトカイン、サイトカイン受容体、共刺激分子またはＴ細胞受容体である。
【００７１】
本明細書で用いる用語「組み合わせて」とは、２種以上の予防薬および／または治療薬の使用を意味する。「組み合わせて」という用語の使用は、増殖性疾患、感染性疾患、心血管疾患、炎症性疾患または自己免疫疾患などの疾患を有する被験者に予防薬および／または治療薬を投与する順序を限定するわけではない。第１の予防薬または治療薬（例：リンパ系組織誘導剤）は、第２の予防薬または治療薬（例：免疫調節剤）の投与より前（例：５分、15分、30分、45分、１時間、２時間、４時間、６時間、12時間、24時間、48時間、72時間、96時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間または12週間前）、投与と同時、または投与後（例：５分、15分、30分、45分、１時間、２時間、４時間、６時間、12時間、24時間、48時間、72時間、96時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間または12週間後）に、増殖性疾患、感染性疾患、心血管疾患、炎症性疾患または自己免疫疾患を有する被験者に投与することができる。
【００７２】
本明細書で、タンパク質性物質（すなわち、ペプチド、ポリペプチド、融合タンパク質または抗体）に関して用いられる用語「単離された」とは、その起源となる細胞または組織からの細胞材料もしくは汚染タンパク質を実質的に含まないか、あるいは、化学的に合成された場合には、化学的前駆体もしくはその他の化学物質を実質的に含まないペプチド、ポリペプチド、融合タンパク質または抗体を意味する。「細胞材料を実質的に含まない」という表現は、ペプチド、ポリペプチド、融合タンパク質または抗体が細胞（この細胞から単離されるか、または組換えにより産生される）の細胞成分から分離されているペプチド、ポリペプチド、融合タンパク質または抗体の調製物を包含する。従って、細胞材料を実質的に含まないペプチド、ポリペプチド、融合タンパク質または抗体は、約30％、20％、10％、もしくは５％（乾燥重量）以下の異種タンパク質（本明細書では「汚染タンパク質」とも呼ばれる）を含むペプチド、ポリペプチド、融合タンパク質または抗体の調製物を包含する。また、ペプチド、ポリペプチド、融合タンパク質または抗体を組換えにより産生する場合には、実質的に培地を含まないのが好ましい。すなわち、培地は、タンパク質調製物の約20％、10％、または５％以下を占める。ペプチド、ポリペプチド、融合タンパク質または抗体を化学的合成により製造する場合には、化学的前駆体またはその他の化学物質を実質的に含まない、すなわち、ペプチド、ポリペプチド、融合タンパク質または抗体の合成に関連する化学的前駆体もしくはその他の化学物質から分離するのが好ましい。従って、このようなペプチド、ポリペプチド、融合タンパク質または抗体の調製物が含有する、目的のペプチド、ポリペプチド、融合タンパク質または抗体以外の化学的前駆体もしくは化合物は30％、20％、10％、５％（乾燥重量）以下である。
【００７３】
本明細書で核酸分子に関して用いられる用語「単離された」とは、核酸分子の天然供給源に存在する他の核酸分子から分離されている核酸分子を意味する。さらに、cDNA分子のような「単離された」核酸分子は、他の細胞材料、または組換え法により産生した場合には培地、あるいは、化学的に合成した場合には化学的前駆体またはその他の化学物質を実質的に含まないと考えられる。
【００７４】
本明細書で核酸ではない非タンパク質性化合物（例えば、リンパ系組織誘導剤または免疫調節剤）に関して用いられる用語「単離された」とは、化学的に合成された場合には、化学的前駆体またはその他の化学物質を実質的に含まない化合物を意味する。具体的実施形態では、その化合物は、他の異なる化合物を60％、65％、75％、80％、85％、90％、95％または99％含まない。
【００７５】
本明細書で用いる用語「低級アルコキシ」、「低級アシル」、「（低級アルコキシ）メチル」および「（低級アルキル）チオメチル」はそれぞれ、-O-(低級アルキル)、-C(O)-(低級アルキル)、-CH2-O-(低級アルキル)および-CH2-S-(低級アルキル)基を意味する。
【００７６】
本明細書で用いる用語「置換低級アルコキシ」および「置換低級アシル」はそれぞれ、-O-(置換低級アルキル)基および-C(O)-(置換低級アルキル)基を意味する。
【００７７】
「置換低級アルキル」、「置換低級アルコキシ」、「置換低級フェニル」、「置換低級アリール」、「置換低級アシル」基、または置換非芳香族複素環に好適な置換基として、限定するものではないが、以下のものを挙げることができる：-OH、ハロゲン(-Br、-Cl、-Iおよび-F)、-ORa、-O-CORa、-CORa、-CN、-NO2、-COOH、-SO3H、-NH2、-NHRa、-N(RaRb)、-COORa、-CHO、-CONH2、-CONHRa、-CON(RaRb)、-NHCORa、-NRCORa、-NHCONH2、-NHCONRaH、-NHCON(RaRb)、-NRcCONH2、-NRcCONRaH、-NRCCON(RaRb)、-C(=NH)-NH2、-C(=NH)-NHRa、-C(=NH)-N(RaRb)、-C(=NRc)-NH2、-C(=NRc)-NHRa、-C(=NRc)-N(RaRb)、-NH-C(=NH)-NH2、NH-C(=NH)-NHRa、-NH-C (=NH)-N(RaRb)、-NH-C(=NRc)-NH2、-NH-C(=NRc)-NHRa、-NH-C(=NRc)-N(RaRb)、-NRdH-C(=NH)-NH2、-NRd-C(=NH)-NHRa、-NRd-C(=NH)-N(RaRb)、-NRd-C(=NRc)-NH2、-NRd-C(=NRc)-NHRa、NRd-C(=NRc)-N(RaRb)-NHNH2、-NHNHRa、-NHRaRb、SO2NH2、-SO2NHRa、-SO2NRaRb、-CH=CHRa、-CH=CRaRb、CRc=CRaRb、-CRc=CHRa、-CRc=CRaRb、-C≡CRa、-SH、-SOkRa (kは０、１または２)および-NH-C(=NH)-NH2。Ra〜Rdは各々独立に、脂肪族、置換脂肪族、ベンジル、置換ベンジル、芳香族または置換芳香族基、好ましくはアルキル、ベンジルまたはアリール基である。さらに、-NRaRdは、一緒になって、置換された、または置換されていない非芳香族複素環式基を形成することもできる。非芳香族複素環式基、ベンジル基またはアリール基は、置換基として脂肪族または置換脂肪族基を有することもある。また、置換脂肪族基は、置換基として非芳香族複素環式基、置換非芳香族複素環式基、ベンジル、置換ベンジル、アリールまたは置換アリール基を有してもよい。置換低級アルキル基、非芳香族複素環式基、置換アリール、置換アシルまたは置換フェニル基は２個以上の置換基を持ちうる。
【００７８】
本明細書で用いる用語「リンパ系組織誘導剤」および「リンパ系組織誘導物質」とは、リンパ系組織の生産に関与する１以上の遺伝子の発現を増大し、このような遺伝子によりコードされる１以上のタンパク質の活性を、リンパ系組織の生産を誘導するのに十分なほどに増大し、あるいは、ある部位（例えば、腫瘍部位）にリンパ系細胞を動員する物質を意味する。好ましい実施形態では、リンパ系組織誘導剤は、二次リンパ系組織（例：リンパ節、脾臓、扁桃、および粘膜関連のリンパ系組織）のような組織学的に識別可能なリンパ系組織を誘導する物質、あるいは、二次リンパ系組織の様々な特徴を有するか、または二次リンパ系組織との類似性を有するリンパ系組織を誘導する物質を包含する。例えば、生産された組織は、１以上のタイプの免疫細胞（例えば、Ｔ細胞（例：Ｔヘルパー細胞または細胞傷害性Ｔリンパ球（CTL））、NK細胞、および抗原提示細胞（例：マクロファージ、樹状細胞およびＢ細胞）が集合しているか、あるいは、局在、閉込めまたは封鎖されている明確に区別できる領域を有している。これらの明確に区別できる領域は、例えば、胚中心、白脾髄または他の二次リンパ系組織構造と類似していると考えられる。リンパ系組織のその他の顕著な特徴には高内皮性後毛細管小静脈（HEV）が含まれる。
【００７９】
本明細書で用いる用語「微小管安定化剤」とは、チューブリンの重合を誘発し、かつ／または解重合に対して微小管を安定化させる化合物を意味する。好ましい実施形態では、微小管安定化剤は、有糸分裂の間、解重合に対して微小管を安定化させる。微小管安定化剤の例としては、限定するものではないが、以下のものが挙げられる：タキソールおよびタキソテールなどのタキサン；エポシロンＡ〜Ｄなどのエポシロン(epothilone)；ディスコダーモリド(discodermolide)；エリューテロビン(eleutherobin)；タッカロノリドＡのようなタッカロノリド(taccalonolide)；ラウリマリド(laulimalide)；およびサルコジクチイン(sarcodictyin)。
【００８０】
本明細書で用いる用語「非芳香族複素環式基」とは、環の中に１個以上のへテロ原子（例えば、窒素、酸素または硫黄）を含む非芳香族炭素環を意味する。この環は５、６、７または７員環でありうる。例として、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフェニル、モルホリノ、チオモルホリノ、ピロリジニル、ピペラジニル、ピペリジニルおよびチアゾリジニルを挙げることができる。
【００８１】
本明細書で用いる用語「非応答性」および「治療不応性」とは、増殖性疾患、感染性疾患、心血管疾患、炎症性疾患、または自己免疫疾患などの疾患に対して現在利用可能な予防薬または治療薬で治療している患者において、このような疾患または障害に関連する１以上の症状を改善するのが臨床的に不適な患者を意味する。典型的に、このような患者は、重症で、持続的に活動している疾患に罹患し、その疾患に関連する症状を改善するためにさらなる治療を必要とする。
【００８２】
本明細書で用いる用語「核酸」および「ヌクレオチド配列」は、DNA分子（例：cDNAまたはゲノムDNA）、RNA分子（例：mRNA）、DNAとRNA分子の組合せまたはハイブリッドDNA／RNA分子、並びにDNAまたはRNA分子の類似体を包含する。このような類似体は、例えば、ヌクレオチド類似体（限定するものではないが、イノシンまたはトリチル化塩基など）を用いて作製することができる。また、このような類似体は、分子に有益な特性（例えば、ヌクレアーゼ耐性、または細胞膜を通過する増強された能力）を賦与する修飾バックボーンを含んでなるDNAまたはRNA分子を含んでいてもよい。核酸またはヌクレオチド配列は、一本鎖、二本鎖でよく、また、一本鎖および二本鎖部分の両方を含んでいても、三本鎖部分を含んでいてもよいが、二本鎖DNAであるのが好ましい。
【００８３】
本明細書で用いる用語「パクリタキセル」とは、一般に「タキソール」と呼ばれるタキサンを意味する。このように、用語「パクリタキセル」および「タキソール」は置き換え可能に用いられる。
【００８４】
本明細書で用いる表現「薬学的に許容される塩」とは、予防薬または治療薬の薬学上許容される有機または無機塩を意味する。少なくとも１つのアミノ基を含む予防薬または治療薬の薬学的に許容される塩は、このアミノ基への酸付加により形成することができる。好ましい塩として、限定するものではないが、以下のものを挙げることができる：硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルカロン酸塩、サッカリン酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、p-トルエンスルホン酸塩、並びにパモ酸塩（すなわち、1,1’-メチレン-ビス-(2-ヒドロキシ-3-ナフトエート)）。薬学的に許容される塩には、酢酸イオン、コハク酸イオンまたはその他の対イオンのような別の分子を包含させることも含まれる。対イオンは、親化合物の電荷を安定化させるものであれば、どのような有機または無機成分であってもよい。さらに、薬学的に許容される塩は、その構造中に１以上の荷電原子を含んでいてもよい。多数の荷電原子が薬学的に許容される塩に含まれる場合には、複数の対イオンを有する可能性もある。従って、薬学的に許容される塩は、１以上の荷電原子および／または１以上の対イオンを有していてもよい。
【００８５】
本明細書で用いる表現「薬学的に許容される溶媒和物」とは、１以上の溶媒分子と予防薬または治療薬との会合を意味する。薬学的に許容される溶媒和物を形成する溶媒の例として、限定するものではないが、水、イソプロパノール、エタノール、メタノール、DMSO、酢酸エチル、酢酸、およびエタノールアミンが挙げられる。
【００８６】
本明細書で用いる用語「フェニル」とは、一価のベンゼン基を意味する。フェニル基は非置換であってもよいし、場合に応じて置換されていてもよい。
【００８７】
本明細書で用いる用語「予防薬」とは、免疫系を調節することが有益である疾患（限定するものではないが、増殖性疾患、感染性疾患、心血管疾患、炎症性疾患、または自己免疫疾患など）の予防に用いることができるあらゆる薬剤を意味する。特定の実施形態では、「予防薬」とは、リンパ系組織誘導剤および／または免疫調節剤を意味する。他の特定の実施形態では、「予防薬」は、リンパ系組織誘導剤および／または免疫調節剤を意味しない。
【００８８】
本明細書で用いる用語「予防する」、「予防すること」および「予防」とは、患者において、免疫系を調節することが有益である疾患（限定するものではないが、増殖性疾患、感染性疾患、心血管疾患、炎症性疾患、または自己免疫疾患など）の１以上の症状の再発または発症の、予防薬または治療薬の組合せの投与による予防を意味する。
【００８９】
本明細書で用いる用語「予防に有効な量」とは、別の予防薬の予防効果を増大または向上させるのに十分な、あるいは、免疫系を調節することが有益である疾患（限定するものではないが、増殖性疾患、心血管疾患、感染性疾患、炎症性疾患または自己免疫疾患など）の１以上の症状の再発または発症を予防するのに十分な、予防薬の量を意味する。
【００９０】
本明細書で用いる用語「予防プロトコル」とは、１種以上の予防薬を投与する際の用量およびタイミングに関する計画を意味する。
【００９１】
本明細書で用いる用語「プロトコル」には、投薬スケジュールおよび投薬レジメが含まれる。本明細書でのプロトコルは使用方法であり、予防および治療プロトコルを含むものである。
【００９２】
本明細書で用いる用語「副作用」とは、予防薬または治療薬の望ましくない有害作用を包含する。有害作用は常に望まれないが、望まれない作用が必ずしも有害であるとは限らない。予防薬または治療薬から生じる有害作用は、有害または不快または危険な場合がある。例えば、リンパ系組織誘導剤または免疫調節剤の投与によって起こりうる副作用として、限定するものではないが、以下のものが挙げられる：虚弱、頭痛、傾眠、吐気、嘔吐、口の乾き、筋肉痛、骨痛、好中球減少、粘膜炎、貧血、血小板減少、徐脈、下痢、金属味、多渇症、多尿、便秘、減量、膵炎、光恐怖症、かゆみ、腎不全、アミノトランスフェラーゼ上昇、高血圧、精神病、並びに様々な神経学的症状。
【００９３】
本明細書で用いる用語「小分子」および類似用語は、限定するものではないが、以下のものを包含する：ペプチド、ペプチド模擬物、アミノ酸、アミノ酸類似体、ポリヌクレオチド、ポリヌクレオチド類似体、ヌクレオチド、ヌクレオチド類似体、分子量が約10,000ｇ／モル以下の有機または無機化合物（すなわち、へテロ有機および有機金属化合物など）、分子量が約5,000ｇ／モル以下の有機または無機化合物、分子量が約1,000ｇ／モル以下の有機または無機化合物、分子量が約500ｇ／モル以下の有機または無機化合物、分子量が約100ｇ／モル以下の有機または無機化合物、並びにこのような化合物の塩、エステル、および薬学的に許容される形態。また、上記化合物の塩、エステル、およびその他の薬学的に許容される形態も包含される。
【００９４】
本明細書で用いる用語「被験者」および「患者」は置き換え可能に用いられる。本明細書で用いる用語「被験者」は、動物、好ましくは、以下のものを含む哺乳動物：非霊長類（例：ウシ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ラット、およびマウス）および霊長類（例：マカクザルのようなサル、およびヒト）、さらに好ましくは、ヒトを意味する。一実施形態では、被験者は免疫無防備状態または免疫抑制状態の哺乳動物、好ましくはヒト（例：HIV患者）ではない。別の実施形態では、被験者は家畜（例：ウマ、ウシ、ブタなど）またはペット（例：イヌまたはネコ）である。好ましい実施形態では、被験者はヒトである。
【００９５】
本明細書で用いる用語「相乗作用」とは、リンパ系組織誘導剤と免疫調節剤の組合せであって、これらの薬剤の相加作用より有効な組合せを意味する。リンパ系組織誘導剤と免疫調節剤の組合せの相乗作用によって、被験者の免疫系を調節することが有益である疾患（増殖性疾患、心血管疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患、または感染性疾患など）の患者に対する、１種以上の薬剤の投与量および／または投与頻度を少なくすることができる。リンパ系組織誘導剤および／または免疫調節剤の投与量および／または投与頻度を少なくすることができれば、被験者の免疫系を調節することが有益である疾患（増殖性疾患、炎症性疾患、心血管疾患、自己免疫疾患、または感染性疾患など）の予防または治療において、薬剤の効力を低下することなく、被験者への薬剤の投与に伴う毒性を低減させることができる。加えて、相乗作用により、増殖性疾患、心血管疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患、または感染性疾患の予防または治療における薬剤の効力を高めることができる。最後に、リンパ系組織誘導剤と免疫調節剤の組合せの相乗作用により、いずれかの薬剤を単独で用いた場合に伴う有害なまたは望ましくない副作用を回避したり低減したりすることも可能である。
【００９６】
本明細書で用いる用語「Ｔ細胞受容体モジュレーター」とは、Ｔ細胞受容体のリン酸化、Ｔ細胞受容体に関連するシグナル伝達経路の活性化、および／またはＴ細胞受容体に関連するシグナル伝達経路の活性化に応答して誘導される特定のタンパク質（例：サイトカインなど）の発現をモジュレートする物質を意味する。このような物質は、Ｔ細胞受容体のリン酸化、Ｔ細胞受容体に関連するシグナル伝達経路の活性化、および／または特定のタンパク質（例：サイトカインなど）の発現を直接または間接的にモジュレートすることができる。Ｔ細胞受容体モジュレーターの例として、限定するものではないが、以下のものが挙げられる：タンパク質性物質（例：サイトカイン、ペプチド模擬物、または抗体）、小分子、有機化合物、無機化合物、並びにタンパク質、ポリペプチド、またはペプチド（例：サイトカイン、ペプチド模擬物、または抗体）をコードする核酸分子。特定の実施形態では、Ｔ細胞受容体モジュレーターは、Ｔ細胞受容体のリガンドと免疫特異的に結合するペプチド、ポリペプチド、融合タンパク質もしくは抗体、またはそれらの断片である。別の実施形態では、Ｔ細胞受容体モジュレーターは、Ｔ細胞受容体のリガンドと免疫特異的に結合するペプチド、ポリペプチド（例：可溶性Ｔ細胞受容体）、融合タンパク質もしくは抗体、またはそれらの断片である。
【００９７】
本明細書で用いる用語「治療薬」とは、被験者の免疫系を調節することが有益である疾患（限定するものではないが、増殖性疾患、心血管疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患、または感染性疾患など）の１以上の症状の予防、治療、管理または改善に用いることができるあらゆる薬剤を意味する。特定の実施形態では、用語「治療薬」はリンパ系組織誘導剤および／または免疫調節剤を意味する。別の実施形態では、用語「治療薬」はリンパ系組織誘導剤および／または免疫調節剤ではない。
【００９８】
本明細書で用いる用語「治療に有効な量」とは、疾患の１以上の症状を改善し、疾患の進行を阻止し、疾患を後退させ、または、別の治療薬の治療効果を増大または向上させるのに十分な治療薬の量を意味する。例えば、癌の治療に関しては、治療に有効な量は、癌細胞の増殖を阻害または抑制し、腫瘍細胞の拡大（転移）を阻害または抑制し、癌に関連する１以上の症状の発症、発現または進行を阻害または抑制し、あるいは、腫瘍のサイズを縮小する治療薬の量を意味する。好ましくは、治療に有効な量の治療薬により、癌細胞の増殖または腫瘍のサイズが少なくとも５％、好ましくは少なくとも10％、少なくとも15％、少なくとも20％、少なくとも25％、少なくとも30％、少なくとも35％、少なくとも40％、少なくとも45％、少なくとも50％、少なくとも55％、少なくとも60％、少なくとも65％、少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、または少なくとも100％低減する。感染性疾患の治療の場合、治療に有効な量は、病原体（例：細菌、ウイルス、または真菌）の複製を低減または阻害し、病原体を死滅させ、他の組織または被験者への病原体の拡大を阻害または低減し、あるいは、感染性疾患に関連する１以上の症状を改善するのに十分な治療薬の量を意味する。好ましくは、治療に有効な量の治療薬により、病原体の複製または拡大が少なくとも５％、好ましくは少なくとも10％、少なくとも15％、少なくとも20％、少なくとも25％、少なくとも30％、少なくとも35％、少なくとも40％、少なくとも45％、少なくとも50％、少なくとも55％、少なくとも60％、少なくとも65％、少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、または少なくとも100％低減する。乾癬の治療の場合には、治療に有効な量とは、ヒトの乾癬面積および重症度指数（Psoriasis Area and Severity Index: PASI）スコアを少なくとも20％、少なくとも35％、少なくとも30％、少なくとも40％、少なくとも45％、少なくとも50％、少なくとも55％、少なくとも60％、少なくとも65％、少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、または少なくとも85％低減する治療薬の量を意味する。あるいはまた、乾癬の治療に関して治療に有効な量とは、ヒトの総合評価スコアを少なくとも25％、少なくとも35％、少なくとも30％、少なくとも40％、少なくとも45％、少なくとも50％、少なくとも55％、少なくとも60％、少なくとも65％、少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、または少なくとも95％向上させる治療薬の量を意味する。炎症性疾患、または炎症を特徴とする自己免疫疾患の治療に関して、治療に有効な量とは、関節、器官または組織の炎症を少なくとも５％、好ましくは少なくとも10％、少なくとも15％、少なくとも20％、少なくとも25％、少なくとも30％、少なくとも35％、少なくとも40％、少なくとも45％、少なくとも50％、少なくとも55％、少なくとも60％、少なくとも65％、少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、または少なくとも100％低減する治療薬の量を意味する。
【００９９】
本明細書で用いる用語「治療プロトコル」とは、１種以上の治療薬の投与量および投与タイミングに関する計画を意味する。
【０１００】
本明細書で用いる用語「治療する」、「治療」および「治療すること」とは、予防薬または治療薬の組合せの投与により、増殖性疾患、心血管疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患、または感染性疾患などの疾患に関連する１以上の症状が改善されることを意味する。特定の実施形態では、この用語は、癌細胞の増殖の阻害または抑制、腫瘍細胞の拡大（転移）の阻害または抑制、癌に関連する１以上の症状の発症、発現または進行の阻害または抑制、腫瘍のサイズの縮小を意味する。別の実施形態では、前記用語は、病原体（例：細菌、ウイルス、または真菌）の複製の低減または阻害、病原体の死滅、他の組織または被験者への病原体の拡大の阻害または抑制、あるいは、感染性疾患に関連する１以上の症状の改善を意味する。別の実施形態では、前記用語は、疾患を有する被験者に対する１種以上のリンパ系組織誘導剤および１種以上の免疫調節剤の投与により、１以上の関節の腫脹が軽減したり、または炎症性疾患に関連する痛みが軽減することを意味する。別の実施形態では、この用語は、ヒトのPASIスコアの低減を意味する。さらに別の実施形態では、前記用語は、ヒトの総合評価スコアの向上を意味する。
【０１０１】
４．図面の簡単な説明
図１は、MDA-435ヒト異種移植ヌードマウスモデルにおけるパクリタキセルおよびAs2O3治療の抗腫瘍効果を示す。
【０１０２】
５．発明の詳細な説明
本発明は、被験者の免疫系を調節することが有益である疾患（限定するものではないが、増殖性疾患、感染性疾患、心血管疾患、自己免疫疾患、および炎症性疾患など）のための現在の単剤療法または組合せ療法より優れた予防または治療プロファイルを提供する治療プロトコルを包含する。本発明は、増殖性疾患、感染性疾患、心血管疾患、自己免疫疾患、および炎症性疾患、またはこれら疾患の１以上の症状を予防、治療または改善するための、リンパ系組織誘導剤および免疫調節剤に基づく方法を提供する。特に、本発明は、増殖性疾患、感染性疾患、心血管疾患、自己免疫疾患、または炎症性疾患、またはこれら疾患の１以上の症状を予防、治療または改善するための予防および治療プロトコルであって、予防または治療に有効な量の1種以上のリンパ系組織誘導剤と、予防または治療に有効な量の１種以上の免疫調節剤を、それが必要な被験者に投与することを含む、上記プロトコルを提供する。
【０１０３】
本発明は、増殖性疾患、感染性疾患、心血管疾患、自己免疫疾患、または炎症性疾患、またはこれら疾患の１以上の症状を予防、治療または改善するのに用いるための１種以上のリンパ系組織誘導剤と1種以上の免疫調節剤（好ましくは、免疫刺激剤）を含んでなる、医薬組成物および製品を提供する。本発明はまた、増殖性疾患、心血管疾患、感染性疾患、自己免疫疾患、または炎症性疾患、またはこれら疾患の１以上の症状を予防、治療または改善するのに用いられる１種以上のリンパ系組織誘導剤と1種以上の免疫調節剤（好ましくは、免疫刺激剤）をスクリーニングして同定する方法も提供する。
【０１０４】
５．１．リンパ系組織誘導剤
リンパ系組織誘導剤としては、限定するものではないが、以下のものが挙げられる：リンパ系組織の生産に関与する１以上の遺伝子の発現を誘発または増大するか、あるいは、上記遺伝子によりコードされる１以上のタンパク質の生物学的活性を十分高めることによりリンパ系組織の生産を誘発する、小分子、合成薬物、タンパク質性物質（例：ペプチド、ポリペプチド、タンパク質および抗体）、核酸（例：DNAおよびRNAヌクレオチド、例えば、限定するものではないが、生物学的に活性のタンパク質、ポリペプチドまたはペプチドをコードするヌクレオチド配列、アンチセンスヌクレオチド配列および三重らせんなど）、合成または天然無機分子、模擬物質、並びに合成または天然有機分子。具体的実施形態では、リンパ系組織誘導剤は、以下に挙げる１種以上のタンパク質の発現または１以上の生物学的活性を増大するものである：腫瘍壊死因子（TNF；カケクチンとしても知られるTNF-αを含む）、リンホトキシン（例：リンホトキシンαおよびリンホトキシンβ）、NIK、NF-κβ、Ｂリンパ球ケモカイン（BLC；CXCR5としても知られる）、IL-2、IL-7、IL-12、LT-β、VCAM-1、ICAM-1、並びに二次リンパ系器官ケモカイン（SLC；CCR7としても知られる）。この実施形態によれば、リンパ系組織誘導剤は、このリンパ系組織誘導剤が存在しない場合の発現または生物学的活性と比較して、上記タンパク質の発現または１以上の生物学的活性を２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、10倍、15倍、20倍以上増大させる。好ましい実施形態では、リンパ系組織誘導剤は、１種以上の下記タンパク質：TNF-α、リンホトキシンαおよびリンホトキシンβの発現を増大させる。
【０１０５】
具体的実施形態では、リンパ系組織誘導剤は、限定するものではないが、以下のものを包含する：明確に区別できる領域、好ましくは、疾患部位（例えば、腫瘍）において、１以上のタイプの免疫細胞、例えば、Ｔ細胞（例：Ｔヘルパー細胞または細胞傷害性Ｔリンパ球（CTL））、NK細胞、並びに抗原提示細胞（例：マクロファージ、樹状細胞およびＢ細胞））の集合を誘発または増大する、小分子、合成薬物、タンパク質性物質（例：ペプチド、ポリペプチド、タンパク質および抗体）、核酸（例：DNAおよびRNAヌクレオチド、例えば、限定するものではないが、生物学的に活性のタンパク質、ポリペプチドまたはペプチドをコードするヌクレオチド配列、アンチセンスヌクレオチド配列、および三重らせんなど）、合成または天然無機分子、模擬物質、並びに合成または天然有機分子。この実施形態によれば、リンパ系組織誘導剤は、疾患部位において、約10個の免疫細胞／mm3〜約100,000個の免疫細胞／mm3、好ましくは約1,000個の免疫細胞／mm3〜約100,000個の免疫細胞／mm3、さらに好ましくは約10,000個の免疫細胞／mm3〜約100,000個の免疫細胞／mm3の集合を増大または誘発する。具体的実施形態では、リンパ系組織誘導剤は、少なくとも約10個の免疫細胞／mm3、好ましくは少なくとも約50個の免疫細胞／mm3、少なくとも約100,000個の免疫細胞／mm3、少なくとも約100個の免疫細胞／mm3、少なくとも約500個の免疫細胞／mm3、少なくとも約1,000個の免疫細胞／mm3、少なくとも約5,000個の免疫細胞／mm3、少なくとも約10,000個の免疫細胞／mm3、少なくとも約25,000個の免疫細胞／mm3、少なくとも約50,000個の免疫細胞／mm3、少なくとも約75,000個の免疫細胞／mm3、または少なくとも約100,000個の免疫細胞／mm3の集合を増大または誘発する。
【０１０６】
好ましい実施形態では、リンパ系組織誘導剤は、限定するものではないが、以下のものを包含する：二次リンパ系組織（例：リンパ節、脾臓、扁桃、および粘膜関連のリンパ系組織）のような組織学的に識別可能なリンパ系組織、または二次リンパ系組織の様々な特徴を有する、または二次リンパ系組織との類似性を有するリンパ系組織を誘導する、小分子、合成薬物、タンパク質性物質（例：ペプチド、ポリペプチド、タンパク質および抗体）、核酸（例：DNAおよびRNAヌクレオチド、例えば、限定するものではないが、生物学的に活性のタンパク質、ポリペプチドまたはペプチドをコードするヌクレオチド配列、アンチセンスヌクレオチド配列、および三重らせんなど）、合成または天然無機分子、模擬物質、並びに合成または天然有機分子。この実施形態によれば、リンパ系組織誘導剤は、約0.05 mm〜約10mm、好ましくは約0.5mm〜約10mm、さらに好ましくは約１mm〜約10mmのリンパ系組織を誘導する。具体的実施形態では、リンパ系組織誘導剤は、約0.05mm、好ましくは約0.5mm、約１mm、約1.5mm、約２mm、約2.5mm、約３mm、約3.5mm、約４mm、約4.5mm、約５mm、約5.5mm、約６mm、約７mm、約８mm、約９mmまたは約10mmのリンパ系組織を誘導する。好ましくは、リンパ系組織誘導剤は、疾患部位でリンパ系組織を誘導する。
【０１０７】
本発明によれば、リンパ系組織誘導剤はその特性に応じて、微小管安定化剤、TNF誘導剤および小分子などのグループに区分することができる。リンパ系組織誘導剤のこのような区分の結果として、特定のリンパ系組織誘導剤を、例えば、TNF誘導剤および小分子の両方とみなすことができる。本発明によれば、このような状況下で、例えば、リンパ系組織誘導剤がTNF誘導剤と小分子の両方とみなされる場合、本明細書に記載した疾患を有する被験者に投与されるリンパ系組織誘導剤は異なるものである。
【０１０８】
別の実施形態では、リンパ系組織誘導剤は、微小管安定化剤である。別の実施形態では、リンパ系組織誘導剤は微小管安定化剤ではない。別の実施形態では、リンパ系組織誘導剤は、タキソール、パクリタキセル、エポシロン、ディスコダーモリド、エリューテロビン、ラウリマリド、タッカロノリド、またはサルコジクチインまたはタキソテールである。別の実施形態では、リンパ系組織誘導剤は以下に挙げる薬剤：タキソール、パクリタキセル、エポシロン、ディスコダーモリド、エリューテロビン、ラウリマリド、タッカロノリド、またはサルコジクチインまたはタキソテールのうちの１種以上ではない。別の実施形態では、リンパ系組織誘導剤は、組換えTNF-αまたはTNF誘導剤、特に、TNF-α誘導剤またはTNF-β誘導剤である。さらに別の実施形態では、リンパ系組織誘導剤は、組換えTNF-αまたはTNF誘導剤ではない。特定の実施形態では、リンパ系組織誘導剤は小分子である。
【０１０９】
５．１．１．微小管安定化剤
本発明によれば、微小管安定化剤をリンパ系組織誘導剤として用いることができる。本発明で有用な微小管安定化剤としては、限定するものではないが、表１に記載した薬剤、その誘導体または類似体、並びにその薬学的に許容される塩、溶媒和物または水和物が挙げられる。
【０１１０】
表１
タキサン類
タキソール
タキソテール
パクリタキセル
エポシロン類
エポシロンＡ
エポシロンＢ
エポシロンＣ
エポシロンＤ
エポシロンＥ
エポシロンＦ
デソキシエポシロンＢ
デソキシエポシロンＦ
アザ-エポシロンＢ
BMS-247550
ディスコダーモリド類
エリューテロビン類
エルトシドＡ
エルトシドＢ
タッカロノリド類
タッカロノリドＡ
ラウリマリド類
サルコジクチイン類
サルコジクチインＡ
サルコジクチインＢ
【０１１１】
特定の実施形態では、微小管安定化剤は式(I)または(II)のタキサンである。
【化１】
2005518366.tif 000002
【０１１２】
[式中、
Ｒ10は、低級アルキル基、置換された低級アルキル基、フェニル基、置換されたフェニル基、-SR19、-NHR19または-OR19であり；
Ｒ11は、低級アルキル基、置換された低級アルキル基、アリール基または置換されたアリール基であり；
Ｒ12は、-H、-OH、低級アルキル、置換された低級アルキル、低級アルコキシ、置換された低級アルコキシ、-O-C(O)-(低級アルキル)、-O-C(O)-(置換された低級アルキル)、-O-CH2-O-(低級アルキル)-S-CH2-O-(低級アルキル)であり；
Ｒ13は、-Hまたは-CH3であるか、あるいは、Ｒ13とＲ14は、それらが結合する炭素原子と一緒になって、シクロプロピル基を形成し；
Ｒ14は、-H、-OH、低級アルコキシ、-O-C(O)-(低級アルキル)、置換された低級アルコキシ、-O-C(O)-(置換された低級アルキル)、-O-CH2-O-P(O)(OH)2、-O-CH2-O-(低級アルキル)または-O-CH2-S-(低級アルキル)であるか、あるいは、Ｒ14はＲ20と一緒になって、二重結合を形成し；
Ｒ15は、-H、低級アシル、低級アルキル、置換された低級アルキル、アルコキシメチル、アルキルチオメチル、-OC(O)-O(低級アルキル)、-OC(O)-O(置換された低級アルキル)、-OC(O)NH(低級アルキル)または-OC(O)-NH(置換された低級アルキル)であり；
Ｒ16は、フェニルまたは置換されたフェニルであり；
Ｒ17は、-H、低級アシル、置換された低級アシル、低級アルキル、置換された低級アルキル、(低級アルコキシ)メチルまたは(低級アルキル)チオメチルであるか、あるいは、Ｒ17とＲ18は、それらが結合している原子と一緒になって、５または６員の非芳香族複素環を形成し；
Ｒ18は、-Hまたは-CH3であり；
Ｒ19は、低級アルキル基、置換された低級アルキル基、フェニル基または置換されたフェニル基であり；
Ｒ20は、-H、-F、-Cl、-Brまたは-Iであり；
Ｒ21は、-H、低級アルキル、置換された低級アルキル、低級アシルまたは置換された低級アシルである]。
【０１１３】
好ましくは、構造式(I)および(II)の可変記号は次のように定義される：
Ｒ10は、フェニル、tert-ブトキシ、-S-CH2-CH-(CH3)2、-S-CH(CH3)3、-S-(CH2)3CH3、-O-CH(CH3)3、-NH-CH(CH3)3、-CH=C(CH3)2、またはp-クロロフェニル；であり
Ｒ11は、フェニル、(CH3)2CHCH2-、-2-フラニル、シクロプロピルまたはp-トルイルであり；
Ｒ12は、-H、-OH、CH3CO-または-(CH2)2-N-モルホリノであり；
Ｒ13は、メチルであるか、あるいは、Ｒ13とＲ14は一緒になって-CH2-を形成し；
Ｒ14は、-H、-CH2SCH3、または-CH2-O-P(O)(OH)2であり；
Ｒ15は、CH3CO-であり；
Ｒ16は、フェニルであり；
Ｒ17は、-Hであるか、あるいは、Ｒ17とＲ18は一緒になって-O-CO-O-を形成し；
Ｒ18は、-Hであり；
Ｒ20は、-Hまたは-Fであり；
Ｒ21は、-H、-C(O)-CHBr-(CH2)13-CH3または-(C(O)-CH2)14-CH3；-C(O)-CH2-CH(OH)-COOH、-C(O)-CH2-O-C(O)-CH2CH(NH2)-CONH2、-C(O)-CH2-O-CH2CH2OCH3、または-C(O)-O-C(O)-CH2CH3である。
【０１１４】
一実施形態では、微小管安定化剤はタキソールまたはタキソテールである。別の実施形態では、微小管安定化剤はタキソールまたはタキソテールではない。
【０１１５】
本明細書で使用および定義される「タキサン」は、限定するものではないが、ポリアクリミドなどの薬学上許容されるポリマーに結合された式(I)および(II)の化合物も包含する。
【０１１６】
微小管安定化剤は、市販のものを入手したり、天然源から単離したり、または当業者には公知の方法で合成することができる。例えば、タキソールは、パシフィックユー(Pacific Yew)から単離するか、Holton, R.A.ら、1994, J. Am. Chem. Soc. 116: 1597-1599に記載されているように合成することができる。エポシロンは、当業者には公知の方法により、ソランギウム属(Sorangium)の粘液細菌(Myxobacteria)から単離することができる。あるいは、エポシロンおよびその類似体は、Chou, T.C.ら、2001, PNAS 98(14): 8113-8118；Danishefskyらの米国特許第6,300,355号；並びにLee, F.Y.F.ら、2001, Clin. Cancer Res. 7(5): 1429-1437に記載されているように合成することができる。本発明での使用に適したディスコダーモリドは、公知の方法で海綿から単離するか、あるいは、Gunasekeraらの米国特許第4,939,168号および第5,010,099号；Longleyらの米国特許第5,681,847号および第5,840,750号；並びにHung, D.T., 1996, J. Am. Chem. Soc. 118: 11054-11080に記載のように合成することができる。ラウリマリドは、海綿から取得することができ、さらに詳しくはCorley, D.J.ら、1988, J. Org. Chem. 53(15): 3644-3646に記載されている。
【０１１７】
エリューテロビンおよびサルコジクチインは、Nicolaou, K.C.ら、1997, J. Am. Chem. Soc. 119: 11353-11354に記載の方法によりソフトコーラル（軟質珊瑚）から単離することができる。各種のエリューテロビンを合成する方法は、Nicolaouら、1997, J. Am. Chem. Soc. 120(34): 8674-8680にみいだすことができる。サルコジクチインおよびその類似体は、Nicolaouらの米国特許第5,965,718号に記載のように調製することができる。
【０１１８】
５．１．２．TNF誘導剤
本発明によれば、組換えTNF-αまたはTNF誘導剤をリンパ系組織誘導剤として用いることができる。TNF誘導剤は、TNFコード化遺伝子（例：TNF-αコード化遺伝子およびTNF-βコード化遺伝子）の発現を誘導または増大するか、またはTNF（例：TNF-αおよびTNF-β）の活性を増大する物質である。TNF誘導剤の例として、限定するものではないが、以下のものが挙げられる：サイトカイン（例：IL-19）断片サイトカイン、フラボン酢酸（FAA）、OK-432、PSK、グリシリジン、プロスタグランジンE2およびJ2、ロムルチド、シメチジン、LPS、ペプチドグリカン、リポテイコ酸、並びにその誘導体および類似体。特定の実施形態では、TNF誘導剤は、該物質が存在しない場合の発現または生物学的活性と比較して、TNF-αまたはTNF-βの発現または１以上の生物学的活性を２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、9倍、10倍、15倍、20倍またはそれ以上増大する。
【０１１９】
５．１．３．小分子
本発明によれば、リンパ系組織の生産に関与する１以上の遺伝子の発現を誘導または増大するか、あるいは、このような遺伝子によりコードされる１以上のタンパク質の１以上の生物学的活性を十分増大することにより、リンパ系組織の生産を誘導する、小分子をリンパ系組織誘導剤として用いることができる。特定の実施形態では、小分子は、以下に挙げるタンパク質：TNF、リンホトキシン、NIK、NF-κβ、Ｂリンパ球ケモカイン（BLC、CXCR5としても知られる）、IL-2、IL-7、IL-12、LT-β、VCAM-1、ICAM-1、並びに二次リンパ系器官ケモカイン（SLC；CCR7とも呼ばれる）の発現または１以上の生物学的活性を増大する。この実施形態によれば、小分子は、この小分子が存在しない場合の発現または生物学的活性と比較して、前記タンパク質の発現または１以上の生物学的活性を２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、9倍、10倍、15倍、20倍またはそれ以上増大するのが好ましい。このような小分子の例として、限定するものではないが、リンホトキシン発現を誘導するペントキシフィリン；およびNF-kBを活性化するカンプトテシンが挙げられる。
【０１２０】
５．２．免疫調節剤
本発明の方法および組成物では、当業者には公知のどのような免疫調節剤を用いてもよい。免疫調節剤は、被験者における１以上または全ての様相の免疫応答に影響を及ぼすことができる。免疫応答の様相として、限定するものではないが、以下のものが挙げられる：炎症性応答、補体カスケード、白血球およびリンパ球分化、増殖および／またはエフェクター機能、単球および／または好塩基球数、並びに免疫系の細胞性連絡。本発明の特定の実施形態では、免疫調節剤は、免疫応答の１つの様相をモジュレートする。別の実施形態では、免疫調節剤は、２以上の様相の免疫応答をモジュレートする。
【０１２１】
免疫調節剤は、CD4+および／またはCD8+Ｔ細胞の増殖、分化、活性および／または機能を改変（例えば、増大）するように選択することができる。例えば、Ｔ細胞に特異的な抗体を免疫調節剤として用いることにより、CD4+および／またはCD8+Ｔ細胞の増殖、分化、活性および／または機能を誘導することができる。具体的実施形態では、免疫調節剤は、Th1および／またはTh2の増殖、分化および／またはエフェクター機能を改変する。
【０１２２】
免疫調節剤の非制限的例を以下に挙げる：タンパク質性物質（例：サイトカイン、ペプチド模擬物、および抗体｛例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体、camelised抗体、キメラ抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、単一ドメイン抗体、Fvs、ScFv、FabまたはF(ab)2フラグメント、またはエピトープ結合フラグメント｝）、核酸分子（例：ペプチド、ポリペプチド、タンパク質および抗体をコードする核酸分子、アンチセンス核酸分子、および三重らせん）、小分子、有機化合物、並びに無機化合物。特に、免疫調節剤としては、限定するものではないが、以下のものを挙げることができる：メトトレキセート、レフルノミド、シクロホスファミド（Cytoxan）、アザチオプリン（Immuran）、シクロスポリン、ミノシクリン、抗生物質、タクロリムス（FK506）、メチルプレドニゾロン（MP）、コルチコステロイド、ステロイド、ミコフェノール酸モフェチル（CellCept）、ラパマイシン（シロリムス）、クロラムブシル、ミゾリビン、デオキシスペルグアリン、ブレキナール、マロノニトリロアミド（例、レフルナミド）、Ｔ細胞受容体モジュレーター、サイトカイン受容体モジュレーター、並びにビス［チオ-ヒドラジドアミド］化合物。Ｔ細胞受容体モジュレーターおよびサイトカイン受容体モジュレーターについてさらに詳しくは、第３．１節を参照されたい。Ｔ細胞受容体モジュレーターの例としては、限定するものではないが、以下のものが挙げられる：抗Ｔ細胞受容体抗体（例えば、抗CD4抗体（例：cM-T412（Boeringer）、IDEC-CE9.1（登録商標）（IDECおよびSKB）、mAB4162W94、オルトクロンおよびOKTcdr4a（Jassen-Cilag））、抗CD3抗体（例：Nuvion（Product Design Labs）、OKT3（Johnson & Johnson）、またはRituxan（IDEC））、抗CD5抗体（例：抗CD5リシン結合イムノコンジュゲート）、抗CD7抗体（例：CHH-380（Novartis））、抗CD8抗体、抗CD40リガンドモノクローナル抗体（例：IDEC-131（IDEC））、抗CD52抗体（例：CAMPATH 1H（Ilex））、抗CD2抗体、抗CD11a抗体（例：Xanelim（Genentech））、および抗B7抗体（例：IDEC-114）（IDEC）））並びにCTLA4-免疫グロブリン（CTLA4-Ig）。
【０１２３】
サイトカイン受容体モジュレーターの非制限的例を以下に挙げる：可溶性サイトカイン受容体（例：TNF-α受容体の細胞外ドメインまたはその断片、インターロイキン（”IL”）-1α受容体の細胞外ドメインまたはその断片、並びにIL-6受容体の細胞外ドメインまたはその断片）、サイトカインまたはその断片（例：IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-15、TNF-α、TNF-β、インターフェロン（IFN）-α、IFN-β、IFN-γ、およびGM-CSF）、抗サイトカイン受容体抗体（例：抗IFN受容体抗体、抗IL-2受容体抗体（例：ゼナパクス（Zenapax）（Protein Design Labs））、抗IL-4受容体抗体、抗IL-6受容体抗体、抗IL-10受容体抗体、および抗IL-12受容体抗体）、抗サイトカイン抗体（例：抗IFN抗体、抗TNF-α抗体、抗IL-1α抗体、抗IL-6受容体抗体、抗IL-8抗体（例：ABX-IL-8（Abgenix））、抗IL-9抗体および抗IL-12抗体）。具体的実施形態では、サイトカイン受容体モジュレーターは、IL-4、IL-10、またはそれらの断片である。別の実施形態では、サイトカイン受容体モジュレーターは、抗IL-1α抗体、抗IL-6受容体抗体、抗IL-12受容体抗体、または抗TNF-α抗体である。別の実施形態では、サイトカイン受容体モジュレーターは、TNF-α受容体の細胞外ドメインまたはその断片である。特定の実施形態では、サイトカイン受容体モジュレーターは、TNF-α受容体の細胞外ドメインまたはその断片ではない。
【０１２４】
特定の実施形態では、免疫調節剤は、以下に挙げるような化学療法剤を含む：メトトレキセート、シクロスポリンＡ、レフルノミド、シスプラチン、イホスファミド、パクリタキセル、タキサン、トポイソメラーゼＩ阻害剤（例：CPT-11、トポテカン、9-AC、およびGG-211）、ゲムシタビン、ビノレルビン、オキサリプラチン、5-フルオロウラシル（5-FU）、ロイコボリン、ビノレルビン、テモダール、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、1-デヒドロテストステロン、メルファラン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシン相同体、並びにサイトキサン。別の実施形態では、以下に挙げるような１以上の化学療法剤を含まない：メトトレキセート、シクロスポリンＡ、レフルノミド、シスプラチン、イホスファミド、パクリタキソル、タキサン、トポイソメラーゼＩ阻害剤（例：CPT-11、トポテカン、9-AC、およびGG-211）、ゲムシタビン、ビノレルビン、オキサリプラチン、5-フルオロウラシル（5-FU）、ロイコボリン、ビノレルビン、テモダール、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、1-デヒドロテストステロン、メルファラン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシン相同体、並びにサイトキサン。
【０１２５】
本発明の好ましい実施形態では、免疫調節剤は免疫系エンハンサーである。本発明の方法および組成物には、当業者には公知のどのような免疫系エンハンサーを用いてもよい。
【０１２６】
免疫系エンハンサーは、CD4+および／またはCD8+Ｔ細胞の増殖、分化、活性および／または機能を増大するように選択することができる。例えば、Ｔ細胞に特異的な抗体を免疫系エンハンサーとして用いることにより、CD4+および／またはCD8+Ｔ細胞の増殖、分化、活性および／または機能を誘導することができる。具体的実施形態では、免疫系エンハンサーは、１種以上の下記タンパク質：熱ショックタンパク質（”HSP”、例：HSP70およびHSP90）、ICAM（例：ICAM-１）、CCR7、BLCおよびSLCの発現または１以上の生物学的活性を誘導または増大する。好ましい実施形態では、免疫系エンハンサーは、例えば、細胞傷害性Ｔ細胞、樹状細胞およびナチュラルキラー（NK）細胞を誘導することができる１種以上の熱ショックタンパク質（例えば、HSP70）の発現または１以上の生物学的活性を誘導または増大する。これらの実施形態によれば、免疫系エンハンサーは、この免疫系エンハンサーが存在しない場合の発現または生物学的活性と比較して、1種以上の前記タンパク質の発現または１以上の生物学的活性を２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、9倍、10倍、15倍、20倍またはそれ以上増大するのが好ましい。
【０１２７】
免疫系エンハンサーの非制限的例を以下に挙げる：タンパク質性物質（例えば、サイトカイン、ペプチド模擬物、および抗体（例：ヒト抗体、ヒト化抗体、camelised抗体、キメラ抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、単一ドメイン抗体、Fv、scFv、FabまたはF(ab)2フラグメント、またはエピトープ結合フラグメント）、核酸分子（例：ペプチド、ポリペプチド、および抗体をコードする核酸分子、アンチセンス核酸分子、および三重らせん）、小分子、有機化合物、並びに無機化合物。特に、免疫系エンハンサーとして、限定するものではないが、以下のものを挙げることができる：ICAM誘導剤（例：トリブチリン、OK-432、レチノイン酸／ビタミンＡ、酪酸ナトリウム、リンホトキシン-αおよびシスプラチン）、HSP誘導剤（例：クルクミン、亜ヒ酸塩、プロスタグランジン、プロスタグランジン様分子、ゲラニル−ゲラニル−アセトン、シクロスポリンＡ、グルタミン、アスピリン、ハービマイシンＡおよびビス［チオ−ヒドラジドアミド］化合物）、BLC誘導剤（例：CpGオリゴヌクレオチドおよびリンホトキシン-α）、SLC誘導剤（例：リンホトキシン-α）、コレイ毒素(Coley's toxin)、Ｔ細胞受容体モジュレーター、並びにサイトカイン受容体モジュレーター。Ｔ細胞受容体モジュレーターおよびサイトカイン受容体モジュレーターについてさらに詳細には、第３．１節を参照されたい。
【０１２８】
免疫系エンハンサーの中には特定の状況下で好都合なものもある。乳癌の治療に好ましい免疫系エンハンサーは、例えば、抗体による癌細胞死滅を促進する（例えば、そのような死滅を補体結合反応、抗体依存性細胞傷害反応（ADCC）、C5a好中球死滅、並びにオプソニン−マクロファージ死滅により促進する）能力に基づいて選択することができる。乳癌の治療に好ましいエンハンサーとして、以下のものが挙げられる：HSP70を誘導するプロスタグランジンJ2、各種の癌遺伝子産物に対するモノクローナル抗体（例えば、Her-2-neu）、表皮成長因子（EGF）受容体、上皮細胞接着分子（EpCAM）およびOK-432。
【０１２９】
特定の状況下では、免疫調節剤（例えば、免疫系エンハンサー）がリンパ系組織誘導剤として区分されることもある。従って、本発明によれば、本発明で用いる免疫調節剤は、リンパ系組織誘導剤とは異なるものである。
【０１３０】
本発明によれば、免疫調節剤は、その特性に応じて、HSP誘導剤、抗体、ケモカイン受容体誘導剤およびICAM誘導剤のようなグループに分類することもできる。このような分類によって、特定の免疫調節剤は、例えば、HSP誘導剤とICAM誘導剤の両方とみなされる場合もある。本発明に従い、このような状況下では、本明細書に記載した疾患の被験者に投与される免疫調節剤は、例えば、免疫調節剤がHSP誘導剤とICAM誘導剤の両方とみなされる場合、それぞれ異なるものである。
【０１３１】
具体的実施形態では、免疫調節剤は抗体である。別の実施形態では、免疫調節剤は抗体ではない、別の実施形態では、免疫調節剤はHSP誘導剤である。別の実施形態では、免疫調節剤はHSP誘導剤ではない。別の実施形態では、免疫調節剤はICAM誘導剤である。免疫調節剤はICAM誘導剤ではない。免疫調節剤はケモカイン受容体誘導剤である。さらに別の実施形態では、免疫調節剤はケモカイン受容体誘導剤ではない。
【０１３２】
別の実施形態では、免疫調節剤は、Koyaらの"Taxol Enhancer Compounds"、または"Synthesis of Taxol Enhancer"と題する以下の出願に示される化合物Ｉ〜VIの化学構造を有しない：米国特許出願番号10/193,075、10/193,639および10/193,076；並びにPCT出願番号PCT/US02/21717、PCT/US02/21714および PCT/US02/21716（これら文献の各々は参照により本明細書にその全文を組み込まれる）。
【０１３３】
５．２．１．免疫調節剤としての抗体
免疫調節剤（好ましくは、免疫系増強剤）として用いることができる抗体は、治療しようとする疾患の性質に基づいて選択することができる。例えば、特定の新生物症状を治療する場合には、必要な抗体は新生物の性質に応じて変わってくる。抗体は既知の抗原（例えば、腫瘍細胞の表面に存在する腫瘍特異的細胞表面受容体）に対してターゲッティングされ、従って、抗体を用いることにより、免疫系による腫瘍細胞の認識をさらに効果的に可能にすることができる。前記のように、このような抗体は、新生物の性質に応じて変わるが、このような抗体として、例えば、以下に挙げる抗原に対して誘導された抗体がある：CD8+リンパ球により認識されるクラスＩ制限抗原（例：メラノーマ-メラノサイト分化抗原、例えば、Melan-A、チロシナーゼ、メラノサイト刺激ホルモン受容体など）；突然変異した抗原（例：MUM-1、CDK-4、カスパーゼ-8、KIA0205など）；癌精巣抗原（例：MACE-1、MACE-2、MACE-3、MACE-12、BAGE、GAGEなど）；並びに、突然変異していない共有抗原（αフェトプロテイン、テロメラーゼ触媒タンパク質、G-250、MUC-1、ｐ53およびHer-2/neu）。これ以外の抗原として、CD4+リンパ球により認識されるクラスII制限抗原（例：gp100、MACE-1、CDC-27およびNY-LSO-1）、並びに、当業者には公知のもので、例えば、Rosenberg, S.A., 2001, Nature 111: 380-384に記載されているものがある。その他の好適な抗原として、以下のものが挙げられる：癌胎児性抗原および血管上皮細胞接着分子（VCAM）（例：VCAM-1など）、細胞内接着分子（ICAM）（例：ICAM-1など）；接着分子（例：上皮細胞接着分子（EpCAM）、ペリオスチン、インテグリン、およびカドヘリンなど）；エンドグリン；細胞表面受容体、例えば、成長因子受容体（例：表皮成長因子受容体、インスリン様成長因子受容体、血小板由来内皮細胞増殖因子受容体、およびトランスフォーミング増殖因子受容体）；APO-1；プロトオンコジーン産物受容体（例：c-kitなど）；葉酸受容体；腫瘍内血管細胞表面受容体（例：血管内皮成長因子／血管透過因子（VEGF/VPF）受容体、繊維芽細胞増殖因子（FGF）受
容体）；並びに前立腺特異的膜抗原（PSMA）。
【０１３４】
具体的な実施形態では、癌の治療または予防のための公知の抗体を本発明の組成物および方法に従って用いる。癌の治療に利用できる抗体の非制限的例を以下に挙げる：転移性乳癌患者の治療用のヒト化抗HER2モノクローナル抗体（Stebbingら、2000, Cancer Treat Rev. 26: 287-90）であるハーセプチン(HERCEPTIN)（トラツズマブ（Trastuzumab）；Genentech, CA）；非ホジキンリンパ腫患者の治療用のキメラ抗CD20モノクローナル抗体であるリツキサン(RITUXAN)（リツキシマブ；Genetech）；卵巣癌の治療用のマウス抗体であるオバレックス(OvaRex)（Altra Corporation, MA）；結腸直腸癌の治療用のマウスIgG2a抗体であるパノレックス(Panorex)（Glaxo Wellcome, NC）；肺癌治療用のマウスIgG抗体であるBEC2（ImClone Systems Inc., NY）；頭部頚部癌治療用のキメラIgG抗体であるIMC-C225（ImClone Systems Inc., NY）；慢性リンパ性白血病（CLL）治療用のヒト化IgG1抗体であるCampath I/H（Leukosite, MA）；急性骨髄性白血病（AML）治療用のヒト化IgG抗体であるSmart MI95（Protein Design Labs, Inc., CA）；非ホジキンリンパ腫治療用のヒト化IgG抗体であるLymphoCide（Immunomedics, Inc., NJ）；非ホジキンリンパ腫治療用のヒト化抗体であるSmart ID10（Protein Design Labs, Inc., CA）；非ホジキンリンパ腫治療用のマウス抗体であるOncolym（Techniclone, Inc., CA）；ホジキン病または非ホジキンリンパ腫治療用のヒト化抗CD2 mAbであるAllomune（BioTransuplant, CA）；肺および結腸直腸癌治療用のヒト化抗体である抗VEGF（Genentech, Inc., CA）；結腸直腸癌治療用のヒト化抗CEA抗体であるCEAcide（Immunomedics, NJ）；結腸直腸癌、肺癌、およびメラノーマの治療用の抗KDRキメラ抗体であるIMC-1C11（ImClone Systems, NJ）；並びに表皮成長因子陽性癌の治療用の抗EGFRキメラ抗体であるCetuximab（ImClone, NJ）。
【０１３５】
癌の治療に有用なその他の抗体として、限定するものではないが、下記の抗原に対する抗体が挙げられる：CA125（卵巣）、CA15-3（癌）、CA19-9（癌）、L6（癌）、ルイス（Lewis）Ｙ（癌）、ルイスＸ（癌）、αフェトプロテイン（癌）、CA 242（結腸直腸）、胎盤アルカリ性ホスファターゼ（癌）、前立腺特異的抗原（前立腺）、前立腺酸性ホスファターゼ（前立腺）、上皮成長因子（癌）、MAGE-1（癌）、MAGE-2（癌）、MAGE-3（癌）、MAGE-4（癌）、抗トランスフェリン受容体（癌）、p97（黒色腫）、MUC1-KLH（乳癌）、CEA（結腸直腸）、gp100（黒色腫）、MART1（黒色腫）、PSA(前立腺)、IL-2受容体（Ｔ細胞白血病およびリンパ腫）、CD20（非ホジキンリンパ腫）、CD52（白血病）、CD33（白血病）、CD22（白血病）、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（癌）、CD38（多発性骨髄腫）、CD40（リンパ腫）、ムチン（癌）、P21（癌）、MPG（黒色腫）、並びにNeuオンコジーン産物（癌）。限定するものではないが、いくつかの有用な抗体の具体例を以下に挙げる：BR96mAb（Trailら、1993, Science 261: 212-215）、BR64（Greenfieldetら、1997, Cancer Research 57：100-105）、CD40抗原に対するmAb 、例えば、S2C6 mAb（Franciscoら、2000, Cancer Res. 60: 3225-3231）、並びにCD30抗原に対するmAb、例えば、AC10（Bowenら、1993, J. Immunol. 151: 5896-5906）。腫瘍結合抗原に結合するその他多数のインターナライジング抗体を本発明で用いることもできる（詳しくは、例えば、Frankeら、2000, Cancer Biother Radiopharm. 15: 459-76；Murray, J. L., 2000, Semin Oncol. 27: 64-70；並びにBreitling, F.およびDubel, S., Recombinant Antibodies, John Wiley, and Sons, New York,1998を参照のこと）。
【０１３６】
感染性疾患の場合には、免疫調節剤として用いることができる抗体は、微生物抗原に免疫特異的に結合するものを包含する。本明細書で用いる用語「微生物抗原」とは、限定するものではないが、免疫応答を誘発することができる微生物ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、サッカリド、多糖、または脂質分子（例えば、細菌、真菌、病原性原生動物、または酵母のポリペプチド（例：LPSおよび莢膜多糖5/8など））を包含する。
【０１３７】
細菌感染性疾患の場合には、免疫調節剤として用いることができる抗体は、非常に多様な細菌細胞壁および細胞表面成分に対して誘導されるもの、例えば、当分野では公知のリピドＡ、ペプチジルグリカン、テイコ酸、リポテイコ酸、Ｄ-ロイシン含有成分および様々な細菌特異的多糖、糖コンジュゲート、糖脂質、リポ多糖、並びにポリペプチドを包含する。本発明において細菌感染性疾患の治療に有用なその他の抗体として、限定するものではないが、以下に挙げる病原性細菌株由来の抗原に対する抗体がある：化膿連鎖球菌（Streptococcus pyogenes）、肺炎連鎖球菌（Streptococcus pneumoniae）、淋菌（Neisseria gonorrheae）、髄膜炎菌（Neisseria meningitidis）、ジフテリア菌（Corynebacterium diphtheriae）、ボツリヌス菌（Clostridium botulinum）、ウェルチ菌（Clostridium perfringens）、破傷風菌（Clostridium tetani）、インフルエンザ菌（Hemophilus influenzae）、肺炎桿菌（Klebsiella pneumoniae）、臭鼻菌（Klebsiella ozaenas）、鼻硬腫菌（Klebsiella rhinoscleromotis）、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）、コレラ菌（Vibrio colerae）、大腸菌（Escherichia coli）、緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）、カンピロバクター・フェータス（Campylobacter (Vibrio) fetus）、アエロモナス・ヒドロフィラ（Aeromonas hydrophila）、バチルス・アエレウス（Bacillus aereus）、エドワードシエラ・タルダ（Edwardsiella tarda）、エルシニア・エンテロコリチカ（Yersinia enterocolitica）、ペスト菌（Yersinia pestis）、偽結核エルシニア菌（Yersinia pseudotuberculosis）、志賀下痢菌（Shigella dysenteriae）、フレクスナー下痢菌（Shigella  flexneri）、ゾンネ下痢菌（Shigella sonnei）、ネズミチフス菌（Salmonella typhimurium）、梅毒トレポネーマ（Treponema pallidum）、フランベジア・トレポネーマ（Treponema pertenue）、ピンタ・トレポネーマ（Treponema carateneum）、ヴァンサン・スピロヘータ（Borrelia vincentii）、ライム病ボレリア（Borrelia burgdorferi）、黄疸出血性レプトスピラ（Leptospira icterohemorrhagiae）、ヒト結核菌（Mycobacterium tuberculosis）、ニューモシスティス・カリニ（Pneumocystis carinii）、野兎病菌（Francisella tularensis）、ウシ流産菌（Brucella abortus）、ブタ流産菌（Brucella suis）、 マルタ熱菌（Brucella melitensis）、マイコブラズマ種（Mycoplasma spp. ）、発疹チフスリケッチア（Rickettsia prowazeki）、ツツガムシリケッチア（Rickettsia tsutsugumushi）、およびクラジミア種（Chlamydia spp.）。
【０１３８】
真菌または寄生生物感染性疾患の場合には、免疫調節剤として用いることができる抗体は、真菌／寄生生物の非常に多様な真菌／寄生生物成分に対して誘導される、当分野では公知の抗体を包含する。真菌または寄生生物感染性疾患の治療に有用な抗体として、限定するものではないが、下記生物由来の抗原に対する抗体を挙げることができる：病原性真菌（例：コクシジオイデス・イミチス（Coccidioides immitis）、煙色コウジ菌（Aspergillus fumigatus）、鷲口瘡カンジダ（Candida albicans）、ブラストミセス・デルマチチディス（Blastomyces dermatitidis）、 クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Cryptococcus neoformans）、およびヒストプラズマ・カプラスラーツム（Histoplasma capsulatum））；原生動物 (例：エントモエバ・ヒストリチカ（Entomoeba histolytica）、トキソプラズマ（Toxoplasma gondii）、口腔トリコモナス（Trichomonas tenas）、腸トリコモナス（Trichomonas hominis）、膣トリコモナス（Trichomonas vaginalis）、ガンビアトリパノソーマ（Tryoanosoma gambiense）、ローデシアトリパノソーマ（Trypanosoma rhodesiense）、クルーズ・トリパノソーマ（Trypanosoma cruzi）、ドノバンリーシュマニア（Leishmania donovani）、熱帯リーシュマニア（Leishmania tropica）、ブラジルリーシュマニア（Leishmania braziliensis）、ニューモシスティス・ニューモニア（Pneumocystis pneumonia）、三日熱マラリア原虫（Plasmodium vivax）、熱帯熱マラリア原虫（Plasmodium falciparum）、および四日熱マラリア原虫（Plasmodium malaria）)；または蠕虫 (例：ギョウチュウ（Enterobius vermicularis）、ヒト鞭虫（Trichuris trichiura）、回虫（Ascaris lumbricoides）、旋毛虫（Trichinella spiralis）、糞線虫（Strongyloides stercoralis）、日本住血吸虫（Schistosoma japonicum）、マンソン住血吸虫（Schistosoma mansoni）、ビルハルツ住血吸虫（Schistosoma haematobium）、および鉤虫)。
【０１３９】
ウイルス感染の場合には、免疫調節剤として用いることができる抗体はウイルス抗原に免疫特異的な、当分野では公知のものが含まれる。本明細書で、用いる用語「ウイルス抗原」とは、限定するものではないが、免疫応答を誘発することができるあらゆるウイルスペプチド、ポリペプチドおよびタンパク質（例：HIV gp120、HIV nef、RSV F糖タンパク質、インフルエンザウイルスノイラミニダーゼ、インフルエンザウイルス血球凝集素、HTLV tax、単純ヘルペルウイルス糖タンパク質（例：gB、gC、gD、およびgE）並びにＢ型肝炎表面抗原）を包含する。本発明においてウイルス感染治療に有用な抗体として、限定するものではないが、病原性ウイルスの抗原に対する抗体があり、このような病原性ウイルスの非制限的例を以下に挙げる：ポックスウイルス科、ヘルペスウイルス科、ヘルペス１型ウイルス、ヘルペス２型ウイルス、アデノウイルス科、パポバウイルス科、エンテロウイルス科、ピコルナウイルス科、パルボウイルス科、レオウイルス科、レトロウイルス科、インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、流行性耳下腺炎、麻疹、RSウイルス、風疹、アルボウイルス科、ラブドウイルス科、アレナウイルス科、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、非Ａ／非Ｂ型肝炎ウイルス、ライノウイルス科、コロナウイルス科、ロタウイルス科、並びにヒト免疫不全ウイルス。
【０１４０】
ウイルス感染性疾患の治療に利用可能で、有用な抗体の具体的例として、限定するものではないが、以下のものを挙げることができる：HIV感染の治療に有用なCD4融合抗体であるPRO542（Progenics）；Ｂ型肝炎ウイルスの治療に有用なヒト抗体であるOSTAVIR（Protein Design Labs, Inc., CA）；並びにサイトメガロウイルス（CMV）の治療に有用なヒト化IgG1抗体であるPROTOVIR（Protein Design Labs, Inc., CA）。
【０１４１】
５．２．２．熱ショックタンパク質誘導剤
免疫調節剤（好ましくは、免疫系エンハンサー）として、HSP誘導剤を本明細書に記載の疾患の治療に用いることができる。HSP誘導剤（本明細書ではHSP誘導物質とも呼ぶ）は、当分野では公知の１種以上の熱ショックタンパク質（HSP60、HSP70、HSP72、HSP80およびHSP90など）の発現または１以上の生物学的活性を誘導または増大する。本発明において有用なHSP70誘導物質として、限定するものではないが、以下のものが挙げられる：プロスタグランジンJ2、ゲラニル−ゲラニル−アセトン、ゲルダナマイシン、5-フルオロウラシル、シクロスポリンＡ、酪酸ナトリウム、グルタミン、アスピリン、ハービマイシンＡ、並びに多様な形態のヒ素化合物（例えば、亜ヒ酸および三酸化ヒ素（Trisenox（商標））など）。具体的な実施形態では、HSP誘導剤は、この薬剤が存在しない場合の発現または生物学的活性と比較して、1種以上のHSP（好ましくは、HSP70）の発現または１以上の生物学的活性を２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、9倍、10倍、15倍、20倍以上誘導または増大する。
【０１４２】
特定の実施形態では、以下に挙げる1種以上のHSP70誘導物質を免疫調節剤として用いない：プロスタグランジンJ2、ゲラニル−ゲラニル−アセトン、ゲルダナマイシン、5-フルオロウラシル、シクロスポリンＡ、酪酸ナトリウム、グルタミン、アスピリン、ハービマイシンＡ、亜ヒ酸および三酸化ヒ素（Trisenox（商標））。
【０１４３】
別の実施形態では、HSP誘導剤は、Koyaらの"Taxol Enhancer Compounds"、または"Synthesis of Taxol Enhancer"と題する以下の出願に示されている化合物Ｉ〜VIの化学構造を有しない：米国特許出願番号10/193,075、10/193,639および 10/193,076；並びにPCT出願番号PCT/US02/21717、PCT/US02/21714およびPCT/US02/21716（これら文献の各々は参照により本明細書にその全文を組み込むものとする）。
【０１４４】
５．２．３．ICAM誘導剤
免疫調節剤（好ましくは、免疫系エンハンサー）として、ICAM誘導剤を本明細書に開示した疾患の治療に用いることができる。ICAM誘導剤は、当分野では公知の１種以上のICAM（ICAM-1など）の発現または１以上の生物学的活性を誘導または増大する。本発明において有用なICAM-1誘導剤として、限定するものではないが、トリブチリン、OK-432、レチノイン酸／ビタミンＡ、酪酸ナトリウム、リンホトキシンαおよびシスプラチンが挙げられる。具体的な実施形態では、ICAM誘導剤は、この薬剤が存在しない場合の発現または生物学的活性と比較して、1種以上のICAM（好ましくは、ICAM-1）の発現または１以上の生物学的活性を２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、9倍、10倍、15倍、20倍またはそれ以上誘導または増大する。
【０１４５】
特定の実施形態では、以下に挙げる1種以上のICAM誘導剤を免疫調節剤として用いない：トリブチリン、OK-432、レチノイン酸／ビタミンＡ、酪酸ナトリウム、リンホトキシンαおよびシスプラチン。
【０１４６】
５．２．４．ケモカイン受容体誘導剤
免疫調節剤（好ましくは、免疫系エンハンサー）として、ケモカイン受容体誘導剤（例：CCR-7誘導剤およびCXCR5誘導剤）を本明細書に開示した疾患の治療に用いることができる。ケモカイン受容体誘導剤は、当分野で知られる１種以上のケモカイン受容体、例えば、SLC（CCR7とも称する）およびBCL（CXCR5とも称する）などの発現または１以上の生物学的活性を誘導または増大する（例：BCL誘導剤およびSCL誘導剤）。BCL誘導剤の非制限的例として、リンホトキシンα並びにCpG含有オリゴヌクレオチド、例えば、限定するものではないが、CpG7909、CpG8916およびCpG8954（Coley Pharmaceutical Group; Wellesley, MA）を挙げることができる。SCL誘導剤の非制限的例として、リンホトキシンαが挙げられる。具体的な実施形態では、ケモカイン受容体誘導剤は、この薬剤が存在しない場合の発現または生物学的活性と比較して、1種以上のケモカイン受容体（好ましくは、SCLまたはBCL）の発現または１以上の生物学的活性を２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、9倍、10倍、15倍、20倍またはそれ以上誘導または増大する。
【０１４７】
特定の実施形態では、以下に挙げる1種以上のケモカイン受容体誘導剤を免疫調節剤として使用しない：リンホトキシンα、CpG7909、CpG8916およびCpG8954。
【０１４８】
５．２．５．細菌剤
本発明において数種の細菌または細菌産物を免疫調節剤として用いることができる。代表的例として、限定するものではないが、リポテイコ酸、OK-432（連鎖球菌製剤）およびカルメット−ゲラン桿菌（BCG）ワクチンが挙げられる。特定の実施形態では、免疫調節剤はOK-432またはBCGワクチンではない。
【０１４９】
５．３．リンパ系組織誘導剤および免疫調節剤のスクリーニングおよび同定
本明細書に記載した組成物および方法に有利に含まれるリンパ系組織誘導剤または免疫調節剤はin vivoおよびin vitroスクリーニング方法を用いて同定することができる。従って、本発明の別の形態では、リンパ系組織誘導剤および免疫調節剤のスクリーニングが提供される。
【０１５０】
一実施形態では、本発明は、リンパ系組織誘導剤のスクリーニング方法であって、培養中の細胞または組織を試験化合物で処理することを含む上記方法を提供する。細胞および／または組織は、最初に単離するか、あるいは、所望のように取得することもできる。この方法は、リンパ系組織の誘導に関与するタンパク質をコードする遺伝子（本明細書に記載したものなど）の公知の誘導方法によりアッセイすることを含んでもよい。例えば、酵素結合イムノソルベントアッセイ（ELISA）を用いて、このような遺伝子が産生したタンパク質を検出することができる。さらに、当分野では公知のノーザンブロッティング方法によって、このような遺伝子をコードするRNAを検出またはアッセイすることも可能である。加えて、当分野では公知であり、例えば、Lockhartらの米国特許第6,040,138号に記載されているバイオチップ法を用いて、上記遺伝子をコードするRNA、またはそれから誘導された核酸を検出することもできる。このようなチップを製造する方法は当分野では公知であり、例えば、Goldbergらの米国特許第6,309,831号に記載されている。かかるスクリーニング方法は自動化してもよいし、あるいは、有望な誘導物質のハイスループットスクリーニング用に改変してもよい。
【０１５１】
別の実施形態では、本発明は、リンパ系組織誘導剤をスクリーニングまたは同定するin vivo方法であって、試験化合物を被験者に投与し、前記のようにリンパ系組織またはその誘導剤の生産または存在をアッセイすることを含む上記方法を提供する。リンパ系組織は、当分野では公知の様々な方法、例えば、当分野では公知の適切な菌株および好適な顕微鏡を用いて、このような組織を組織学的に観察する方法などによりアッセイすることもできる。
【０１５２】
別の実施形態では、本発明は、免疫調節剤（免疫系エンハンサーなど）をスクリーニングする方法であって、試験化合物を被験者に投与し、免疫系の活性化をアッセイすることを含む方法を提供する。様々なアッセイを用いて、免疫系が活性化されているかどうかを決定することができる。このような方法として、示差式白血球計数および抗体力価の定量がある。
【０１５３】
本明細書に記載したin vitroスクリーニング方法には、多種多様な細胞および／または組織を用いることができる。例えば、リンパ系組織の形成に関与するタンパク質をコードする遺伝子の誘導をアッセイすることを含む方法では、好適な細胞として、例えば、癌細胞系、特にヒト癌細胞系が挙げられる。癌細胞系の例としては、MCF-7、MDA-435、DU-145、CX-1、MX-1、LX-1、U937、EJ、CRL-1420またはその他の好適な癌細胞系が挙げられる。その他の好適な細胞として、他の異常な表現型を有する細胞（例えば、子宮フィブロイド由来の細胞および子宮内膜炎を有する個体由来の子宮内膜細胞など）がある。
【０１５４】
５．４．治療用途
本発明は、疾患に関連する１以上の症状を予防、治療または改善する方法であって、予防もしくは治療に有効な量の１種以上のリンパ系組織誘導剤、または予防もしくは治療に有効な量の１種以上の免疫調節剤を、治療が必要な被験者に投与することを含む、上記方法を提供する。本明細書に記載した方法により、多様な疾患を治療することができる。これらの疾患は、典型的には、被験者における免疫系成分の作用によりその症状を改善または軽減することができるか、あるいは、その予後結果を改善することができる疾患である。このような疾患には、患者に無効な免疫応答が存在するとさらに拡大しうる疾患が含まれる。このような疾患として、増殖性疾患、感染性疾患、心血管疾患、炎症性疾患、および自己免疫疾患が挙げられる。
【０１５５】
５．４．１．癌の治療
本発明は、増殖性疾患に関連する１以上の症状を予防、治療または改善する方法であって、予防または治療に有効な量の１種以上のリンパ系組織誘導剤と、予防または治療に有効な量の１種以上の免疫調節剤を、治療が必要な被験者に投与することを含んでなる、上記方法を提供する。特に、本発明は、増殖性疾患に関連する１以上の症状を予防、治療または改善する方法であって、予防または治療に有効な量の１種以上の微小管安定化剤と、予防または治療に有効な量の１種以上の免疫調節剤を、治療が必要な被験者に投与することを含んでなる、上記方法を提供する。本発明はまた、増殖性疾患に関連する１以上の症状を予防、治療または改善する方法であって、予防または治療に有効な量の１種以上の小分子または１種以上のTNF誘導剤と、予防または治療に有効な量の１種以上の免疫調節剤を、治療が必要な被験者に投与することを含んでなる、上記方法を提供する。
【０１５６】
具体的実施形態では、本発明は、増殖性疾患に関連する１以上の症状を予防、治療または改善する方法であって、予防または治療に有効な量のタキサン（例えば、タキソール）と、予防または治療に有効な量の１種以上の免疫調節剤を、治療が必要な被験者に投与することを含んでなる、上記方法を提供する。特定の実施形態では、本発明は、増殖性疾患に関連する１以上の症状を予防、治療または改善する方法であって、予防または治療に有効な量のタキソールと、予防または治療に有効な量の１種以上の下記免疫調節剤を治療が必要な被験者に投与することを含んでなる、上記方法を含まない：5-フルオロウラシル（5-FU）またはその類似体、シスプラチン、ロイコボリン、ミトキサントロン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、カルボプラチン、アントラサイクリン、ゲムシタビン、エピルビシン、カペシタビン、イソファミド、エダトレキセート、ビノレルビン、ベラプラミル、エトポシド、ヒドロキシウレア、フォリン酸、タキソテール、エストラムスチン、GM-CSF、TNFα誘導物質、ラルチトレキシド、ピラゾロアクリジン、アミフォスチン、PS-341（プロテアソーム阻害剤）、ビンフルイニン、スクアラミン、メルファラン、クリプトフィシン、ポリアミン、ハーセプチン、INFα、グルタミン、ゲルデナマイシンまたはその類似体、PDGFアンタゴニスト、オクレオチド、EGF、ハービマイシンＡ、ゲニステイン、アジ化ナトリウム、デキサメタゾン、ジフェンヒドラミン、ラニチジンおよび非ステロイド抗炎症薬。別の実施形態では、本発明は、増殖性疾患に関連する１以上の症状を予防、治療または改善する方法であって、予防または治療に有効な量のタキソテールと、予防または治療に有効な量の１種以上の下記免疫調節剤を、治療が必要な被験者に投与することを含んでなる、上記方法を含まない： 5-FU、ドキソルビシン、カペシタビンおよびCyt P450 Cyp1阻害剤。
【０１５７】
好ましい実施形態では、本発明は、増殖性疾患に関連する１以上の症状を予防、治療または改善する方法であって、予防または治療に有効な量の１種以上の微小管安定化剤、予防または治療に有効な量の三酸化ヒ素、場合により、三酸化ヒ素以外の１種以上の免疫調節剤を、治療が必要な被験者に投与することを含んでなる、上記方法を提供する。
【０１５８】
本発明の方法に従い治療することができる増殖性疾患（すなわち、異常な、あるいは、制御不能な細胞増殖を伴う疾患）の非制限的例を以下に挙げる：肺癌、例えば、小細胞および非小細胞肺癌；胃腸の癌、例えば、食道癌、胃癌、膵臓癌、肝細胞癌、結腸直腸癌および肛門癌；尿生殖器の癌、例えば、前立腺癌、精巣癌、膀胱癌、腎臓癌、卵巣癌、子宮内膜癌および子宮頚癌；乳癌、内分泌器官の新生物、例えば、甲状腺および副甲状腺、副腎髄質の腫瘍（例：クロム親和細胞腫および神経芽腫）；並びに多発性内分泌腫瘍（例：１〜３型）；血液学的癌、例えば、白血病、多発性骨髄腫、ホジキン病および非ホジキンリンパ腫；脳腫瘍、例えば、中枢神経癌（例：頭蓋咽頭腫）、下垂体腫瘍、星状細胞腫、髄膜腫および脊髄腫瘍；並びに末梢神経系癌、例えば、神経鞘腫および聴音神経腫；皮膚癌、例えば、黒色腫、基底細胞癌および扁平上皮癌；並びに心臓の腫瘍、例えば、心房粘膜腫など。これ以外の増殖性疾患の例を以下の表２に挙げる。本発明の方法は、本明細書に記載した腫瘍の良性および悪性の形態、並びにその転移の治療に適用することができる。本発明の方法はまた、乾癬、子宮フィブロイド、子宮内膜炎および良性前立腺過形成などの増殖性疾患の治療にも適用可能である。
【０１５９】
表２
固形腫瘍、ただし、以下のものに限定するものではない：
繊維肉腫
粘液肉腫
脂肪肉腫
軟骨肉腫
骨原性肉腫
脊索腫
血管肉腫
内皮肉腫
リンパ管肉腫
リンパ管内皮肉腫
骨膜腫
中皮腫
ユーイング腫
平滑筋肉腫
横紋筋肉腫
結腸癌
結腸直腸癌
腎臓癌
膵臓癌
骨癌
乳癌
卵巣癌
前立腺癌
食道癌
胃癌
口腔癌
鼻癌
咽喉癌
扁平上皮癌
基底細胞癌
腺癌
汗腺癌
皮脂腺癌
乳頭状癌
乳頭状腺癌
嚢胞腺癌
髄様癌
気管支原生癌
腎細胞癌
肝癌
胆管癌
絨毛癌
セミノーマ（精上皮腫）
胎生期癌
ウィルムス腫
子宮頚癌
子宮癌
精巣癌
小細胞肺癌
膀胱癌
肺癌
上皮癌
神経膠腫（グリオーマ）
多形グリア芽腫
星状細胞腫
髄芽細胞腫
頭蓋咽頭腫
上皮細胞腫
松果体腫
血管芽細胞腫
聴神経腫
希突起神経膠腫
髄膜腫
皮膚癌
メラノーマ
神経芽細胞腫
網膜芽細胞腫
血液由来の癌、ただし、以下のものに限定するものではない：
急性リンパ芽球性白血病 ”ALL”
急性リンパ芽球性Ｂ細胞白血病
急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病
急性骨髄芽球性白血病 ”AML”
急性前骨髄性白血病 ”APL”
急性単球性白血病
急性赤白血病性白血病
急性巨核球性白血病
急性髄膜単球性白血病
急性非リンパ性白血病
急性未分化白血病
慢性骨髄性白血病 “CML”
慢性リンパ性白血病 “CLL”
ヘアリーセル白血病
多発性骨髄腫
急性および慢性白血病：
リンパ芽球性
骨髄性
リンパ性
骨髄性白血病
リンパ腫：
ホジキン病
非ホジキンリンパ腫
多発性骨髄腫
バルデンストレームマクログロブリン血症
Ｈ鎖病
真性赤血球増加症
【０１６０】
特定の実施形態では、１以上の化学療法剤または放射線療法に不応性の増殖性疾患（癌など）を有する被験者に、本発明の組合せ療法を施す。別の実施形態では、本発明の組合せ療法を、外科手術および放射線療法（例：Ｘ線の投与；具体的には、深部の腫瘍には高エネルギーメガボルト（１MeVエネルギーを超える放射線）を使用することができ、皮膚癌には電子ビームおよび正中電圧Ｘ線を用いることができる）を含むがこれらに限定されない別のタイプの癌治療と一緒に用いることができる。この実施形態によれば、本発明の組合せ療法は、放射線療法や外科手術のような他の癌治療を施す前、同時または後のいずれに用いてもよい。
【０１６１】
５．４．２．ウイルス性疾患の治療
本発明は、ウイルス性疾患に関連する１以上の症状を予防、治療または改善する方法であって、予防または治療に有効な量の１種以上のリンパ系組織誘導剤と、予防または治療に有効な量の１種以上の免疫調節剤を、治療が必要な被験者に投与することを含んでなる、上記方法を提供する。特に、本発明は、ウイルス性疾患に関連する１以上の症状を予防、治療または改善する方法であって、予防または治療に有効な量の１種以上の微小管安定化剤と、予防または治療に有効な量の１種以上の免疫調節剤を、治療が必要な被験者に投与することを含んでなる、上記方法を提供する。本発明はまた、ウイルス性疾患に関連する１以上の症状を予防、治療または改善する方法であって、予防または治療に有効な量の１種以上の小分子または１種以上のTNF誘導剤と、予防または治療に有効な量の１種以上の免疫調節剤を、治療が必要な被験者に投与することを含んでなる、上記方法を提供する。具体的な実施形態では、ウイルス性疾患を治療するために本発明の方法で用いられる免疫調節剤は、Th1および／またはTh2応答をシフトする。
【０１６２】
具体的な実施形態では、本発明は、ウイルス性疾患に関連する１以上の症状を予防、治療または改善する方法であって、予防または治療に有効な量のタキサン（例えば、タキソール）と、予防または治療に有効な量の１種以上の免疫調節剤を、治療が必要な被験者に投与することを含んでなる、上記方法を提供する。別の実施形態では、本発明は、ウイルス性疾患に関連する１以上の症状を予防、治療または改善する方法であって、予防または治療に有効な量の１種以上の微小管安定化剤と、予防または治療に有効な量の三酸化ヒ素と、場合により、予防または治療に有効な量の、三酸化ヒ素以外の１種以上の免疫調節剤と、を治療が必要な被験者に投与することを含んでなる、上記方法を提供する。
【０１６３】
本発明の方法によって、あらゆるウイルス（例えば、DNAまたはRNA含有ウイルス）を原因とするウイルス性疾患を治療することができる。ウイルス性疾患を引き起こしうるウイルスの非制限的例を以下に挙げる：ピコルナウイルス、例えば、ライノウイルス、エコーウイルスおよびコクサッキーウイルス；オルトミクソウイルス；パラミクソウイルス；アデノウイルス；ブンヤウイルス；トガウイルス；ラブドウイルス；コロナウイルス；ヘルペスウイルス；水痘−帯状疱疹ウイルス；サイトメガロウイルス；レトロウイルス；パポバウイルス；アルボウイルス；アレナウイルス；フラビウイルス；ハンタウイルス；マルブルクウイルス；並びにエボラウイルス。このようなウイルスを原因とするウイルス性疾患の例として、限定するものではないが、以下のものが挙げられる：呼吸器ウイルス性疾患（例：一般的感冒、インフルエンザ、および急性発熱性呼吸器疾患）、風疹、流行性耳下腺炎、麻疹、狂犬病、結膜炎、ヘルペス、鶏痘、肝炎、中枢神経ウイルス性疾患（例：狂犬病、進行性多病巣性白質脳障害、局所痙性不全対麻痺、並びにプリオン病、例えば、クロイツフェルト−ヤコブ病、クールー、ゲルストマン−シュトライスラー−シャインカー病のような海綿状脳症、並びに致命的な家族性不眠）、１型および２型を含むヒトＴリンパ球向性ウイルス（HTLV）、脳炎、黄熱、デング、並びにリンパ球性脈絡髄膜炎。
【０１６４】
具体的な実施形態では、１種以上の抗ウイルス剤に対して不応性のウイルス性疾患を有する被験者に、本発明の組合せ療法を施す。別の実施形態では、別のタイプの抗ウイルス治療薬（限定するものではないが、アシクロビル、AZT、インターフェロン、およびアマンタジンなど）と一緒に、本発明の組合せ療法を用いる。この実施形態によれば、本発明の組合せ療法は、アシクロビル、AZT、インターフェロン、およびアマンタジンのような別の抗ウイルス治療薬を投与する前、同時または後のいずれに用いてもよい。さらに、この実施形態によれば、上記別の抗ウイルス治療薬は、本明細書でリンパ系組織誘導剤および／または免疫調節剤として分類された物質を包含しない。
【０１６５】
５．４．３．細菌性疾患の治療
本発明は、細菌性疾患に関連する１以上の症状を予防、治療もしくは改善する方法であって、予防または治療に有効な量の１種以上のリンパ系組織誘導剤と、予防または治療に有効な量の１種以上の免疫調節剤を、治療が必要な被験者に投与することを含んでなる、上記方法を提供する。特に、本発明は、細菌性疾患に関連する１以上の症状を予防、治療もしくは改善する方法であって、予防または治療に有効な量の１種以上の微小管安定化剤と、予防または治療に有効な量の１種以上の免疫調節剤を、治療が必要な被験者に投与することを含んでなる、上記方法を提供する。本発明はまた、細菌性疾患に関連する１以上の症状を予防、治療もしくは改善する方法であって、予防または治療に有効な量の１種以上の小分子または１種以上のTNF誘導剤と、予防または治療に有効な量の１種以上の免疫調節剤を、治療が必要な被験者に投与することを含んでなる、上記方法を提供する。具体的実施形態では、細菌性疾患を治療するために本発明の方法で用いられる免疫調節剤は、Th1および／またはTh2応答をシフトする。
【０１６６】
具体的実施形態では、本発明は、細菌性疾患に関連する１以上の症状を予防、治療もしくは改善する方法であって、予防または治療に有効な量のタキサン（例えば、タキソール）と、予防または治療に有効な量の１種以上の免疫調節剤を治療が必要な被験者に投与することを含んでなる、上記方法を提供する。別の実施形態では、本発明は、細菌性疾患に関連する１以上の症状を予防、治療もしくは改善する方法であって、予防または治療に有効な量の１種以上の微小管安定化剤と、予防または治療に有効な量の三酸化ヒ素、並びに、場合に応じて、予防または治療に有効な量の、三酸化ヒ素以外の１種以上の免疫調節剤を治療の必要な被験者に投与することを含んでなる、上記方法を提供する。
【０１６７】
本発明の方法によって、あらゆる細菌（例えば、限定するものではないが、グラム陽性球菌、グラム陰性球菌、グラム陽性桿菌、グラム陰性桿菌、スピロヘータもしくは微小細菌）を原因とする細菌性疾患を治療することができる。このような細菌として、限定するものではないが、以下に示す属のものが挙げられる：ブドウ球菌、連鎖球菌、ナイセリア、バチルス、ノカルジアサルモネラ、赤痢菌、シュードモナス、放線菌、大腸菌、クレイブシエラ、エンテロバクター、セラチア、プロテウス、モルガネラ、プロビデンシア、エルシニア、クロストリジウム、ブルセラ、フランシセラ、トレポネーマ、ストレプトバチルス、結核菌、マイコプラズマ、クラジミア、コキシエラ、リステリア、リケッチア、およびエリシペロスリックス。 細菌の非制限的例を以下に挙げる：髄膜炎菌（Neisseria meningitidis）、淋菌（Neisseria gonorrhoeae）、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）、化膿連鎖球菌（Streptococcus pyogenes）、肺炎連鎖球菌（Streptococcus pneumoniae）、大腸菌（Escherichia coli）、肺炎桿菌（Klebsiella pneumoniae）、チフス菌（Salmonella typhi）、ネズミチフス菌（Salmonella typhimurium）、志賀赤痢菌（Shigella dysenteriae）、インフルエンザ菌（Haemophilus influenzae）、ウシ流産菌（Brucella abortus）、野兎病菌（Francisella tularensis）、緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）、ウェルチ菌（Clostridium perfringens）、破傷風菌（Clostridium tetani）、イスラエル放線菌（Actinomyces israelii）、ライム病ボレリア（Borrelia burgdorferi）、ヒト結核菌（Mycobacterium tuberculosis）、らい菌（Mycobacterium leprae）、炭疽菌（Bacillus anthracis）、トラコーマクラジミア（Chlamydia trachomatis）、Ｑ熱病原体（Coxiella burnetti）、斑点熱リケッチア(Rickettsia rickettsii)、肺炎マイコプラズマ（Mycoplasma pneuomoniae）、リステリア菌（Listeria monocytogenes）および豚丹毒菌 （Erysipelothrix rhusiopathiae）。このような細菌が引き起こす細菌性疾患の例として、限定するものではないが、以下のものを挙げることができる：性感染病（例：淋病、梅毒、子宮頚炎、および骨盤腹膜炎）、肺炎、心内膜炎、Ｑ熱、くる病、骨髄炎、トキシックショック症候群、しょう紅熱、髄膜炎、菌血症、腹膜炎、胃腸炎および食中毒全般、細菌性赤痢、ブルセラ症、ツラレミア、コレラ、腺ペスト、尿路感染（尿道炎など）；破傷風、放線菌症、ロッキー山熱、ライム病、結核、炭疽、らい病およびエリシペロトリックス症（erysipelothricosis）。
【０１６８】
具体的実施形態では、１種以上の抗菌剤に対して不応性の細菌性疾患を有する被験者に、本発明の組合せ治療薬を投与する。別の実施形態では、限定するものではないが、以下に挙げる別のタイプの抗菌治療薬と一緒に本発明の組合せ治療薬を用いる；ペニシリン、セファロスポリン、イミペネム、アクストレオナム、バンコマイシン、シクロセリン、バシトラシン、クロラムフェニコール、エリスロマイシン、クリンダマイシン、テトラサイクリン、ストレプトマイシン、トブラマイシン、ゲンタマイシン、アミカシン、カナマイシン、ネオマイシン、スペクチノマイシン、トリメトプリム、ノルフロキサシン、リファンピン、ポリミキシン、アンホテリシンＢ、ナイスタチン、ケトコナゾール、イソニアジド、メトロニダゾール、およびペンタミジン。この実施形態によれば、本発明の組合せ治療は、別の抗菌療法実施の前、同時もしくは後のいずれに用いてもよい。さらに、この実施形態によれば、上記別の抗菌療法は、本明細書でリンパ系組織誘導剤および／または免疫調節剤として定義した薬剤を包含しない。
【０１６９】
５．４．４．真菌性疾患の治療
本発明は、真菌性疾患に関連する１以上の症状を予防、治療もしくは改善する方法であって、予防または治療に有効な量の１種以上のリンパ系組織誘導剤と、予防または治療に有効な量の１種以上の免疫調節剤を治療が必要な被験者に投与することを含んでなる、上記方法を提供する。特に、本発明は、真菌性疾患に関連する１以上の症状を予防、治療もしくは改善する方法であって、予防または治療に有効な量の１種以上の微小管安定化剤と、予防または治療に有効な量の１種以上の免疫調節剤を治療が必要な被験者に投与することを含んでなる上記方法を提供する。本発明はまた、真菌性疾患に関連する１以上の症状を予防、治療もしくは改善する方法であって、予防または治療に有効な量の１種以上の小分子または１種以上のTNF誘導剤と、予防または治療に有効な量の１種以上の免疫調節剤を治療が必要な被験者に投与することを含んでなる、上記方法を提供する。具体的実施形態では、真菌性疾患を治療するために本発明の方法で用いられる免疫調節剤は、Th1および／またはTh2応答をシフトする。
【０１７０】
具体的実施形態では、本発明は、真菌性疾患に関連する１以上の症状を予防、治療もしくは改善する方法であって、予防または治療に有効な量のタキサン（例えば、タキソール）と、予防または治療に有効な量の１種以上の免疫調節剤を治療が必要な被験者に投与することを含んでなる、上記方法を提供する。別の実施形態では、本発明は、真菌性疾患に関連する１以上の症状を予防、治療もしくは改善する方法であって、予防または治療に有効な量の１種以上の微小管安定化剤と、予防または治療に有効な量の三酸化ヒ素、並びに、場合に応じて、予防または治療に有効な量の、三酸化ヒ素以外の１種以上の免疫調節剤を治療の必要な被験者に投与することを含んでなる、上記方法を提供する。
【０１７１】
本発明の方法によって、あらゆる真菌を原因とする真菌性疾患を治療することができる。このような疾患として、限定するものではないが、コクシジオデス真菌症、ブラストミセス症、スポルトリクス症、クリプトコッカス症、アスペルギルス症、クロモミコーシス、フェオヒフォミコーシス、菌腫およびムコール症が挙げられる。これらの疾患を引き起こす因子として、限定するものではないが、以下に挙げる属の真菌がある：ブラストマイセス属、例えば、ブラストマイセス・デルマチチディス（Blastomyces dermatitidis）；パラコクシジオデス属、例えば、ブラジルパラコクシジオデス（Paracoccidioides brasiliensis）； スポロトリクス属、例えば、スポロトリクス・シェンキー（Sporothrix schenckii）；クリプトコックス属、カンジダ属、例えば、鷲口瘡カンジダ（Candida albicans）、カンジダ・トロピカリス（Candida tropicalis）およびカンジダ・グラブララ（Candida glabrala）； アスペルギルス属、例えば、煙色コウジ菌（Aspergillus fumigarus）および黄色アスペルギルス（Aspergillus flavus）；ヒストプラズマ属、例えば、ヒストプラズマ・カプスラツーム（Histoplasma capsulatum）；クリプトコッカス、例えば、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Cryptococcus neoformans）；ビポーラリス属、クラドフィアロフォラ属、クラドスポリウム属、ドレクスレラ属、エクソフィアラ属、フォンセセア属、フィアロフォラ属、ザイロハイファ属、オルクロコニス属、リノクラディア属、スコレコバシジウム属、およびワンギエラ属。
【０１７２】
具体的実施形態では、１種以上の抗真菌剤に対して不応性の真菌性疾患を有する被験者に、本発明の組合せ治療薬を投与する。別の実施形態では、限定するものではないが、以下に挙げる別のタイプの抗真菌療法と一緒に、本発明の組合せ治療薬を用いる；アンフォテリシンＢ、ナイスタチン、ケトコナゾール、フルコナゾール、およびミコナゾール。この実施形態によれば、本発明の組合せ治療薬は、別の抗真菌治療薬投与の前、同時もしくは後のいずれに用いてもよい。
【０１７３】
さらに、この実施形態によれば、このような抗真菌療法は、リンパ系組織誘導剤および／または免疫調節剤として本明細書に定義した薬剤を包含しない。
【０１７４】
５．４．５．心血管疾患の治療
本発明は、心血管疾患に関連する１以上の症状を予防、治療もしくは改善する方法であって、予防または治療に有効な量の１種以上のリンパ系組織誘導剤と、予防または治療に有効な量の１種以上の免疫調節剤を治療が必要な被験者に投与することを含んでなる、上記方法を提供する。特に、本発明は、心血管疾患に関連する１以上の症状を予防、治療もしくは改善する方法であって、予防または治療に有効な量の１種以上の微小管安定化剤と、予防または治療に有効な量の１種以上の免疫調節剤を治療が必要な被験者に投与することを含んでなる、上記方法を提供する。本発明はまた、心血管疾患に関連する１以上の症状を予防、治療もしくは改善する方法であって、予防または治療に有効な量の１種以上の小分子または１種以上のTNF誘導剤と、予防または治療に有効な量の１種以上の免疫調節剤を治療が必要な被験者に投与することを含んでなる、上記方法を提供する。
【０１７５】
具体的実施形態では、本発明は、心血管疾患に関連する１以上の症状を予防、治療もしくは改善する方法であって、予防または治療に有効な量のタキサン（例えば、タキソール）と、予防または治療に有効な量の１種以上の免疫調節剤を治療が必要な被験者に投与することを含んでなる、上記方法を提供する。別の実施形態では、本発明は、心血管疾患に関連する１以上の症状を予防、治療もしくは改善する方法であって、予防または治療に有効な量の１種以上の微小管安定化剤と、予防または治療に有効な量の三酸化ヒ素、並びに、場合に応じて、予防または治療に有効な量の、三酸化ヒ素以外の１種以上の免疫調節剤を治療の必要な被験者に投与することを含んでなる、上記方法を提供する。
【０１７６】
本発明の方法によって、あらゆる心血管疾患を治療することができる。このような心血管疾患の非制限的例を以下に挙げる：アテローム性動脈硬化、発作、脳梗塞、内皮機能不全（特に、血管弾力に影響する機能不全）、虚血性心臓疾患（例：狭心症、心筋梗塞、および慢性虚血性心臓疾患）、高血圧心臓疾患、肺性心臓疾患、冠動脈心臓疾患、弁性心臓疾患（例：リウマチ性熱およびリウマチ性心臓疾患、心内膜炎、僧帽弁逸脱、再狭窄および動脈弁狭窄）、先天性心臓疾患（例：弁および血管閉塞性病変、心房もしくは心室中隔欠損、および開存性動脈管）、並びに心筋疾患（例：心筋炎、うっ血性心筋症、および肥大型心筋症）。
【０１７７】
具体的実施形態では、１種以上の心血管薬に対して不応性の心血管疾患を有する被験者に、本発明の組合せ治療を実施する。別の実施形態では、限定するものではないが、以下に挙げる別のタイプの心血管薬と一緒に、本発明の組合せ治療薬を用いる；末梢抗アドレナリン作用薬、中枢作用性抗高血圧薬（例：メチルドーパ、メチルドーパHCl）、抗高血圧直接血管拡張薬（例：ジアゾキシド、塩酸ヒドララジン）、レニン−アンギオテンシン系に作用する薬剤、末梢血管拡張薬、フェントラミン、抗狭心症薬、強心配糖体、強心薬（例：アムリノン、ミルリノン、エノキシモン、フェノキシモン、イマゾダン、スルマゾール）、抗不整脈薬、カルシウム流入遮断薬、ラニチン、ボセンタン、およびレズリン。この実施形態によれば、本発明の組合せ治療薬は、このような心血管薬投与の前、同時もしくは後のいずれに用いてもよい。さらに、この実施形態によれば、このような心血管薬は、リンパ系組織誘導剤および／または免疫調節剤として本明細書に定義した薬剤を包含しない。
【０１７８】
５．４．６．炎症性疾患の治療
本発明は、炎症性疾患に関連する１以上の症状を予防、治療もしくは改善する方法であって、予防または治療に有効な量の１種以上のリンパ系組織誘導剤と、予防または治療に有効な量の１種以上の免疫調節剤を治療が必要な被験者に投与することを含んでなる、上記方法を提供する。特に、本発明は、炎症性疾患に関連する１以上の症状を予防、治療もしくは改善する方法であって、予防または治療に有効な量の１種以上の微小管安定化剤と、予防または治療に有効な量の１種以上の免疫調節剤を治療が必要な被験者に投与することを含んでなる、上記方法を提供する。本発明はまた、炎症性疾患に関連する１以上の症状を予防、治療もしくは改善する方法であって、予防または治療に有効な量の１種以上の小分子または１種以上のTNF誘導剤と、予防または治療に有効な量の１種以上の免疫調節剤を治療が必要な被験者に投与することを含んでなる、上記方法を提供する。具体的実施形態では、炎症性疾患を治療するために本発明の方法で用いられる免疫調節剤は、Th1および／またはTh2応答をシフトし、さらに好ましくは、Th2応答をTh1応答にシフトする。
【０１７９】
具体的実施形態では、本発明は、炎症性疾患に関連する１以上の症状を予防、治療もしくは改善する方法であって、予防または治療に有効な量のタキサン（例えば、タキソール）と、予防または治療に有効な量の１種以上の免疫調節剤を治療が必要な被験者に投与することを含んでなる、上記方法を提供する。別の実施形態では、本発明は、炎症性疾患に関連する１以上の症状を予防、治療もしくは改善する方法であって、予防または治療に有効な量の１種以上の微小管安定化剤と、予防または治療に有効な量の三酸化ヒ素、並びに、場合に応じて、予防または治療に有効な量の、三酸化ヒ素以外の１種以上の免疫調節剤を治療が必要な被験者に投与することを含んでなる、上記方法を提供する。
【０１８０】
本発明の方法によって、あらゆる炎症性疾患を治療することができる。このような炎症性疾患の非制限的例を以下に挙げる：喘息、脳炎、炎症性腸疾患（例：クローン病および潰瘍性大腸炎）、慢性閉塞性肺疾患（COPD）、炎症性骨溶解、アレルギー性疾患、敗血症性ショック、肺繊維症（例：特発性肺繊維症）、炎症性脈管炎（inflammatory vasculitide）（例：結節性多発動脈炎、ヴェーゲナー肉芽腫症、高安動脈炎、側頭動脈炎、およびリンパ腫様肉芽腫症）、外傷後空胞性血管形成（例：血管形成後の再狭窄）、未分化脊椎アントロパシー、未分化アントロパシー、関節炎、炎症性骨溶解、慢性肝炎、並びに慢性ウイルスまたは細菌感染による慢性炎症。
【０１８１】
具体的実施形態では、１種以上の抗炎症剤に対して不応性の炎症性疾患を有する被験者に、本発明の組合せ治療薬を投与する。別の実施形態では、限定するものではないが、以下に挙げる別のタイプの抗炎症剤と一緒に本発明の組合せ治療薬を用いる；非ステロイド性抗炎症薬（NSAID）、ステロイド性抗炎症薬、βアゴニスト、抗コリン作用剤、並びにメチルキサンチン。NSAIDの非制限的例を以下に挙げる：イブプロフェン、セレコキシブ（CELEBREX）、ジクロフェナク（VOLTAREN）、エトドラク（LODINE（商標））、フェノプロフェン（NALFON）、インドメタシン（INDOCIN）、ケトララク（TORADOL）、オキサプロジン（DAYPRO）、ナブメントン（RELAFEN）、スリンダク（CLINORIL）、トルメンチン（TOLECTIN）、レフェコキシブ（VIOXX）、ナプロキセン（ALEVE、NAPROSYN）、ケトプロフェン（ACTRON）およびナブメトン（RELAFEN）。このようなNSAIDは、シクロオキシゲナーゼ酵素（例：COX-1および／またはCOX-2）を阻害することにより機能する。ステロイド性抗炎症薬の例として、限定するものではないが、以下のものが挙げられる：グルココルチコイド、デキサメタゾン（DECADRON）、コルチゾン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン（DELTASONE）、プレドニゾロン、トリアンシノロン、アズルフィジン、並びにトロンボキサンおよびロイコトリエンのようなエイコサノイド。この実施形態によれば、本発明の組合せ治療薬は、上記抗炎症剤投与の前、同時もしくは後のいずれに用いてもよい。さらに、このような抗炎症剤は、リンパ系組織誘導剤および／または免疫調節剤として本明細書に定義した薬剤を包含しない。
【０１８２】
５．４．７．自己免疫疾患の治療
本発明は、自己免疫疾患に関連する１以上の症状を予防、治療もしくは改善する方法であって、予防または治療に有効な量の１種以上のリンパ系組織誘導剤と、予防または治療に有効な量の１種以上の免疫調節剤を治療が必要な被験者に投与することを含んでなる、上記方法を提供する。特に、本発明は、自己免疫疾患に関連する１以上の症状を予防、治療もしくは改善する方法であって、予防または治療に有効な量の１種以上の微小管安定化剤と、予防または治療に有効な量の１種以上の免疫調節剤を治療が必要な被験者に投与することを含んでなる、上記方法を提供する。本発明はまた、自己免疫疾患に関連する１以上の症状を予防、治療もしくは改善する方法であって、予防または治療に有効な量の１種以上の小分子または１種以上の微小管安定化剤と、予防または治療に有効な量の１種以上の免疫調節剤を治療が必要な被験者に投与することを含んでなる、上記方法を提供する。具体的実施形態では、自己免疫疾患を治療するために本発明の方法で用いられる免疫調節剤は、Th1および／またはTh2応答をシフトし、好ましくは、Th1応答をTh2応答にシフトする。
【０１８３】
具体的実施形態では、本発明は、自己免疫疾患に関連する１以上の症状を予防、治療もしくは改善する方法であって、予防または治療に有効な量のタキサン（例えば、タキソール）と、予防または治療に有効な量の１種以上の免疫調節剤を治療が必要な被験者に投与することを含んでなる、上記方法を提供する。別の実施形態では、本発明は、自己免疫疾患に関連する１以上の症状を予防、治療もしくは改善する方法であって、予防または治療に有効な量の１種以上の微小管安定化剤と、予防または治療に有効な量の三酸化ヒ素、並びに、場合に応じて、予防または治療に有効な量の、三酸化ヒ素以外の１種以上の免疫調節剤を治療が必要な被験者に投与することを含んでなる、上記方法を提供する。
【０１８４】
本発明の方法によって、あらゆる自己免疫疾患を治療することができる。このような自己免疫疾患の非制限的例を以下に挙げる：円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、自己免疫アジソン病、副腎腺の自己免疫疾患、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性卵巣炎および精巣炎、自己免疫性血小板減少、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、セリアックスプルーによる皮膚炎、慢性疲労免疫不全症候群（CFIDS）、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー、チャーグ−ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、CREST症候群、寒冷凝集素病、クローン病、円板状狼瘡、本態性混合性クリオグロブリン血症、繊維筋痛性繊維筋炎、糸球体腎炎、グレーブス病、ギャン−バレー症候群、橋本甲状腺炎、特発性肺繊維症、特発性血小板減少性紫斑（ITP）、IgAニューロパシー、若年性関節炎、扁平苔癬、メニエール病、混合性結合組織疾患、多発性硬化症、１型または免疫媒介性糖尿病、重症筋無力症、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多発軟骨炎、多腺症候群、リウマチ様多筋痛、多発筋炎および皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、乾癬性関節炎、レーノー現象、ライター症候群、慢性関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮病、進行性全身性硬化症、シェーグレン症候群、グッドパスチャー症候群、ステッフマン症候群、全身性エリテマトーデス、エリテマトーデス、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、脈管炎（vasutilides）、例えば、皮膚炎疱疹状脈管炎、白斑およびヴェーゲナー肉芽腫症。
【０１８５】
具体的実施形態では、１種以上の自己免疫治療薬に対して不応性の自己免疫疾患を有する被験者に、本発明の組合せ治療薬を投与する。別の実施形態では、別のタイプの自己免疫治療薬と一緒に、本発明の組合せ治療薬を用いる。この実施形態によれば、本発明の組合せ治療薬は、このような自己免疫治療薬投与の前、同時もしくは後のいずれに用いてもよい。さらに、このような自己免疫療法は、リンパ系組織誘導剤および／または免疫調節剤として本明細書に定義した薬剤を包含しない。
【０１８６】
５．５．組成物および治療薬の投与方法
本発明は、被験者の免疫系を調節することが有益である疾患（例えば、増殖性疾患、感染性疾患、心血管疾患、炎症性疾患、および自己免疫疾患）に関連する１以上の症状を治療、予防および改善するための組成物を提供する。具体的実施形態では、本組成物は、1種以上のリンパ系組織誘導剤（例：１種以上の微小管安定化剤、１種以上のTNF誘導剤、もしくは１種以上の小分子）を含む。別の実施形態では、本組成物は、1種以上の免疫調節剤（好ましくは、免疫系エンハンサー）を含む。別の実施形態では、本組成物は、1種以上の微小管安定化剤と1種以上の免疫調節剤（好ましくは、免疫系エンハンサー）を含む。別の実施形態では、本組成物は、リンパ系組織誘導剤と、２種以上（所望であれば、場合に応じて、３、４種もしくはそれ以上）の免疫調節剤（好ましくは、免疫系エンハンサー）を含んでもよい。
【０１８７】
好ましい実施形態では、本発明の組成物は医薬組成物である。このような組成物は、予防または治療に有効な量の１種以上の予防薬または治療薬と、製薬上許容される担体を含む。具体的実施形態では、用語「製薬上許容される」とは、動物、さらに具体的にはヒトにおける使用について、連邦もしくは州政府の取締り機関に承認されている、または米国薬局方もしくはその他の一般に認識されている薬局方に記載されていることを意味する。用語「担体」とは、希釈剤、アジュバント（例：フロイント完全および不完全アジュバント）、賦形剤、もしくは治療薬を投与する手段であるビヒクルを意味する。このような医薬担体は、無菌液体、例えば、水および油でよく、油には石油、動物、植物もしくは合成由来のもの（例：ラッカセイ油、ダイズ油、鉱油、ゴマ油など）も含まれる。水は、医薬組成物を静脈内投与する場合に好ましい担体である。食塩水および水性デキストロースおよびグリセロール溶液も液状担体（特に注射液用）として使用することができる。好適な医薬賦形剤として、以下のものが挙げられる：デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、コメ、コムギ、白亜、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥脱脂乳、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノールなど。所望であれば、上記組成物に、微量の湿潤もしくは乳化剤、またはpH緩衝剤を含有させてもよい。これらの組成物は、溶液剤、懸濁液剤、乳濁液剤、錠剤、丸薬、カプセル剤、粉末剤、持続放出製剤などの剤形であってもよい。経口製剤は、標準的担体、例えば、医薬グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、ナトリウムサッカリン、セルロース、炭酸マグネシウムなどを含有させることができる。好適な医薬担体の例は、E. W. Martinによる"Remington’s Pharmaceutical Sciences"に記載されている。このような組成物は、患者へ適正な投与をするための形態をもたらすのに適した量の担体と共に、好ましくは精製された形態で、予防または治療に有効な量の予防薬または治療薬を含む。製剤は投与方法に合わせなければならない。好ましい実施形態では、医薬組成物は無菌であり、被験者、好ましくは動物被験者、さらに好ましくは哺乳動物被験者、最も好ましくはヒト被験者への投与に適した形態をしている。
【０１８８】
１種以上の予防薬または治療薬を投与するための様々な送達系が知られており、これらを用いることができるが、その例を以下にあげる：製薬上許容される担体を用いた製剤化、リポソームへの被包、マイクロパーティクル、マイクロカプセル、予防薬または治療薬を発現することができる組換え細胞、受容体媒介によるエンドサイトーシス（例えば、WuおよびWu, J. Biol. Chem. 262: 4429-4432（1987））、レトロウイルスまたはその他のベクターの部分としての核酸の構築。予防薬または治療薬、もしくは予防薬または治療薬を含む医薬組成物を投与する方法として、限定するものではないが、非経口投与（例：皮内、筋内、腹腔内、静脈内および皮下）、硬膜外、局所、粘膜（例：鼻内および経口経路）および直腸を挙げることができる。具体的実施形態では、リンパ系組織誘導剤および／または免疫調節剤（好ましくは、免疫系エンハンサー）、あるいは、医薬組成物を筋内、皮下、経口もしくは静脈内投与する。組成物は、好適な経路、例えば、注入もしくはボーラス注射により、上皮または粘膜皮膚内膜（例：口腔粘膜、直腸粘膜および腸粘膜など）を介した吸収により、並びにその他の生物学的に活性な薬剤と一緒に投与してもよい。投与は全身でも局所でもよい。
【０１８９】
特定の実施形態では、本発明の医薬組成物を治療が必要な患部に局所投与するのが望ましい。これは、例えば、限定するものではないが、局所注入、注射、またはインプラントにより達成することができ、このインプラントは、多孔性、非多孔性、またはゼラチン質の材料からなり、例えば、シアラスチック（sialastic）膜のような膜、もしくは繊維が挙げられる。好ましくは、予防薬または治療薬を投与する際、予防薬または治療薬が吸収されない材料を用いるよう注意しなければならない。
【０１９０】
別の実施形態では、組成物を小胞、特にリポソームを用いて送達する（Langer, Science 249: 1527-1533（1990）；Treatら、in Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer, Lopez-BeresteinおよびFidler（編）、Liss, New York, pp. 353-365（1989）；Lopez-Berestein、同上、pp.317-327；概要は同書参照）。
【０１９１】
さらに別の実施形態では、制御された放出または持続的放出系を用いて組成物を送達する。一実施形態では、ポンプを用いて、制御された放出または持続的放出を達成する（Langer、前掲；Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14: 20；Buchwaldら、1980, Surgery 88: 507；Saudekら、1989, N. Engl. J. Med. 321: 574参照）。別の実施形態では、ポリマー材料を用いて、本発明の抗体もしくはそのフラグメントの制御された放出または持続的放出を達成する（例えば、以下を参照のこと：Medical Applications of Controlled Release, Langerおよび Wise (編), CRC Pres., Boca Raton、フロリダ (1974)；Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, SmolenおよびBall (編)、Wiley, ニューヨーク(1984)；RangerおよびPeppas, 1983, J. , Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23: 61；Levyら、1985, Science 228: 190；Duringら、1989, Ann. Neurol. 25: 351；Howard ら、1989, J. Neurosurg. 7 1: 105）；米国特許第5,679, 377号； 米国特許第5,916, 597号；米国特許第5,912, 015号；米国特許第5,989, 463号；米国特許第5,128, 326号；PCT公開番号WO 99/15154；並びにPCT公開番号WO 99/20253）。持続的放出製剤に用いられるポリマーの例として、限定するものではないが、以下のものが挙げられる：ポリ（メタクリル酸2-ヒドロキシエチル）、ポリ（メタクリル酸メチル）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（エチレン−コ−酢酸ビニル）、ポリ（メタクリル酸）、ポリグリコリド（PLG）、多無水物、ポリ（N-ビニルピロリドン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリアクリルアミド）、ポリ（エチレングリコール）、ポリラクチド（PLA）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（PLGA）、並びにポリオルトエステル。好ましい実施形態では、持続放出製剤に用いられるポリマーは不活性で、浸出しうる不純物を含まず、貯蔵時に安定で、無菌かつ生物分解性である。さらに別の実施形態では、制御または持続放出系は、治療標的（例えば、腫瘍）の近傍に配置することができるため、全身用量のほんの一部しか必要としない（例えば、Goodson, in Medical Applications of Controlled Release, 前掲、第２巻、pp. 115-138（1984）参照）。
【０１９２】
制御放出系については、Langerによる論文（1990, Science 249: 1527-1533）に記載されている。当業者に公知のあらゆる方法を用いて、本発明の１種以上の抗体もしくはそのフラグメントを含む持続的放出製剤を調製することができる。例えば、以下の文献を参照にされたい：米国特許第4,526, 938号、PCT公開番号WO 91/05548、PCT公開番号WO 96/20698、Ning ら、1996, "Intratumoral Radioimmunotheraphy of a Human Colon Cancer Xenograft Using a Sustained-Release Gel," Radiotherapy & Oncology 39: 179-189, Song ら、1995, "Antibody Mediated Lung Targeting of Long-Circulating Emulsions," PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 50: 372-397、Cleek ら、1997, "Biodegradable Polymeric Carriers for a bFGF Antibody for Cardiovascular Application, "Pro. Int'l. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater. 24: 853-854、並びにLam et al.、1997, "Microencapsulation of Recombinant Humanized Monoclonal Antibody for Local Delivery,"  Proc.Int'l. Symp. Control Rel. Bioact. Mater. 24: 759-760。これらの各々は引用によりその全文を本明細書に組み込む。
【０１９３】
本発明の組成物が予防薬または治療薬をコードする核酸である特定の実施形態では、該核酸をin vivoで投与することにより、コードされた予防薬または治療薬の発現を促進することができ、これは下記の方法：核酸を適切な核酸発現ベクターの一部として構築し、細胞内となるように核酸を投与することにより、例えば、レトロウイルスベクター（米国特許第4,980,286号参照）を使用することにより、または直接注射することにより、もしくはマイクロパーティクルボンバードメントを使用すること（例えば、遺伝子ガン；Biolistic, Dupont）により、あるいは、脂質もしくは細胞表面受容体またはトランスフェクション剤と共にコーティングすることにより、または細胞核に流入することがわかっているホメオボックス様ペプチドに連結させて核酸を投与する（例えば、Joliotら、1991, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:1864-1868参照）ことなどにより促進することができる。あるいは、相同組換えにより発現させるために核酸を細胞内に導入し、宿主細胞DNA内に組み込むことができる。
【０１９４】
本発明の医薬組成物は、意図する投与経路と適合可能となるように製剤化する。投与経路の例として、限定するものではないが、非経口、例えば、静脈内、皮内、皮下、経口（例：吸入）、鼻内、経皮（局所）、経粘膜、並びに直腸投与が挙げられる。具体的実施形態では、ヒトへの静脈内、皮下、筋内、経口、鼻内または局所投与に適した医薬組成物として、上記組成物を通常の手順に従って製剤化する。典型的には、静脈内投与のための組成物は無菌等張水性バッファー中の溶液である。必要であれば、上記組成物には、注射部位での痛みを軽減するために、可溶化剤や、リグノカインのような局所麻酔薬を含有させてもよい。
【０１９５】
本発明の組成物を局所投与する場合には、組成物を例えば、軟膏剤、クリーム剤、経皮パッチ剤、ローション剤、ゲル剤、シャンプー、スプレー剤、エーロゾル剤、溶液剤、乳濁液剤の形態、もしくは、当業者には周知のその他の形態に製剤化することができる。例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences and Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms、第4版、Lea & Febiger, フィラデルフィア、PA (1985)を参照されたい。噴霧不可能な局所投薬形態の場合には、局所適用に適合する担体または１種以上の賦形剤を含み、かつ好ましくは水より高い動力学的粘度を有する、粘質から半固体、または固体形態が典型的に用いられる。好適な製剤としては、限定するものではないが、溶液剤、懸濁液剤、乳濁液剤、クリーム剤、軟膏剤、粉末剤、リニメント剤などを挙げることができ、これらは、所望であれば、滅菌したり、あるいは、様々な特性（例えば、浸透圧）に影響を与える補助剤（例：防腐剤、安定剤、湿潤剤、バッファー、もしくは食塩）と混合させたりする。その他の好適な局所投薬形態としては噴霧可能な製剤であり、活性成分（好ましくは、固体または液体の不活性担体と組み合わせて）を、加圧した揮発物（例：フレオンのようなガス噴射剤）との混合物中、あるいは、スクイーズボトル中にパッケージングする。適宜、湿潤賦与剤または湿潤剤を医薬組成物および投薬形態に添加してもよい。このような添加成分の例は当分野で周知である。
【０１９６】
本発明の組成物を鼻腔内投与する場合には、エアロゾル、スプレー、噴霧状、または液滴の形態で製剤化することができる。特に、本発明に従う用途のための予防薬または治療薬は、適切な噴射剤（例：ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素、もしくはその他の好適なガス）を用いて、加圧パックまたはネブライザーからのエアロゾルスプレーの形態で送達するのが好適である。加圧エアロゾルの場合には、定量を送達する弁を設けることにより、単位用量を決定することができる。吸入器または注入器に使用するためのカプセルおよびカートリッジ（例えば、ゼラチン製）は、化合物と好適な粉末基剤（例：ラクトースまたはデンプン）の粉末混合物を含有させて製剤化することができる。
【０１９７】
本発明の組成物を経口投与する場合には、例えば、錠剤、カプセル、カシェ剤、ゲルキャップ、溶液、懸濁液などの形態で経口用に製剤化することができる。錠剤またはカプセルは、以下に挙げるような製薬上許容される賦形剤を用いた通常の手段により、調製することができる：結合剤（例：予めゼラチン化したトウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドンもしくはヒドロキシプロピルメチルセルロース）；充填剤（例：ラクトース、微晶質セルロースまたはリン酸水素カルシウム）；滑沢剤（例：ステアリン酸マグネシウム、タルクまたはシリカ）；崩壊剤（例：ジャガイモデンプンまたはグリコール酸ナトリウムデンプン）；もしくは湿潤剤（例：ラウリル硫酸ナトリウム）。錠剤は、当分野では周知の方法によりコーティングすることができる。経口投与のための液体製剤は、例えば、溶液、シロップもしくは懸濁液の形態をしているか、あるいは、使用前に水その他の好適なビヒクルで用時調製するよう乾燥製品の形態として存在してもよい。このような液体製剤は、以下に挙げるような製薬上許容される添加剤を用いた通常の手段により、調製することができる：懸濁化剤（例：ソルビトールシロップ、セルロース誘導体もしくは水素添加した食用脂肪）；乳化剤（例：レシチンもしくはアカシア）；非水性ビヒクル（例：アーモンド油、油状エステル、エチルアルコールもしくは精留した植物油）；並びに防腐剤（例：メチルもしくはプロピル-p-ヒドロキシベンゾエートまたはソルビン酸）。製剤には、必要に応じて、緩衝塩、香味、着色および甘味料を含有させてもよい。経口投与のための製剤は、予防薬または治療薬の遅延放出、制御放出もしくは持続放出用に製剤化するのが好適である。
【０１９８】
本発明の組成物は、注射、例えば、ボーラス注射または連続注入による非経口的投与のために製剤化することができる。注射用の製剤は、添加防腐剤を含む単位用量形態（例えば、アンプルまたは複数回の容器）の形態で存在してもよい。組成物は、油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液もしくは乳濁液のような形態であってもよいし、懸濁、安定および／または分散剤などの配合剤を含んでもよい。あるいは、活性成分は、使用前に、好適なビヒクル、例えば、発熱物質を含まない滅菌水で構成するための粉末形態であってもよい。
【０１９９】
本発明の組成物は、例えば、通常の座薬基剤（例：カカオ脂もしくはその他のグリセリド）を含む座薬または停留浣腸のような直腸用組成物として製剤化することもできる。
【０２００】
上記製剤以外に、本発明の組成物は、貯留製剤として製剤化してもよい。このような長時間作用する製剤は植込み（例えば、皮下もしくは筋内に）または筋内注射により投与することができる。従って、例えば、好適なポリマーまたは疎水性材料（例：許容され得るオイル中、エマルジョンとして）またはイオン交換樹脂と一緒に、あるいは、低可溶性誘導体、例えば、低可溶性塩として製剤化することができる。
【０２０１】
本発明の組成物は、中性または塩の形態として製剤化することができる。薬学的に許容される塩には、アニオン（塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などから誘導されたものなど）およびカチオン（ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、2-エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどから誘導されたものなど）と一緒に形成されるものが含まれる。
【０２０２】
一般に、本発明の組成物の成分は単位投与形態、例えば、活性薬剤の量を示すアンプルもしくは小袋のような密封容器中の凍結乾燥粉末または無水濃縮物として、個別に、もしくは一緒に混合して供給することができる。組成物を注入により投与する場合には、無菌の医薬グレード水または塩水を含有する注入瓶を用いて投薬することができる。組成物を注射により投与する場合には、注射用の無菌水または塩水のアンプルを提供することにより、投与前に成分を混合することができる。
【０２０３】
特に、本発明は、本発明の１種以上の予防薬または治療薬、もしくは医薬組成物を、活性薬剤量を示すアンプルまたは小袋のような密封容器中にパッケージングすることを提供する。一実施形態では、本発明の１種以上の予防薬または治療薬、もしくは医薬組成物を密封容器中の滅菌した凍結乾燥粉末または無水濃縮物として供給し、例えば、被験者に投与する際、適切な濃度まで水または塩水で再形成することができる。好ましくは、本発明の１種以上の予防薬または治療薬、もしくは医薬組成物は、少なくとも５mg、さらに好ましくは少なくとも10mg、少なくとも15mg、少なくとも25mg、少なくとも35mg、少なくとも45mg、少なくとも50mg、少なくとも75mg、あるいは、少なくとも100mgの単位用量で、密封容器中、滅菌凍結乾燥粉末として供給する。凍結乾燥した本発明の予防薬または治療薬、もしくは医薬組成物は、当初の容器に２〜８℃で保存され、かつ、本発明の予防薬または治療薬、もしくは医薬組成物は、再形成から１週間以内、好ましくは５日以内、72時間以内、48時間以内、24時間以内、12時間以内、６時間以内、５時間以内、３時間以内、もしくは１時間以内に投与しなければならない。別の実施形態では、本発明の１種以上の予防薬または治療薬、もしくは医薬組成物を、活性薬剤の量および濃度を示す密封容器中、液状として供給する。好ましくは、投与する組成物の液状は、少なくとも0.25mg／ml、さらに好ましくは少なくとも0.5mg／ml、少なくとも1 mg／ml、少なくとも2.5mg／ml、少なくとも５mg／ml、少なくとも８mg／ml、少なくとも10mg／ml、少なくとも15mg／ml、少なくとも25mg／ml、少なくとも50mg／ml、少なくとも75mg／ml、もしくは少なくとも100mg／mlで密封容器中に供給される。液状は当初の容器に２℃〜８℃で保存しなければならない。
【０２０４】
５．５．１．遺伝子治療
具体的実施形態では、１種以上の予防薬または治療薬をコードする配列を含む核酸、もしくは医薬組成物を投与して、炎症性または自己免疫疾患に関連する１以上の症状を遺伝子治療により治療、予防もしくは改善する。遺伝子治療とは、発現したまたは発現可能な核酸を被験者に投与することにより実施される治療を意味する。本発明のこの実施形態では、核酸が予防または治療効果を媒介するコードされた予防薬または治療薬をもたらす。
【０２０５】
本発明によれば、当分野で利用可能なあらゆる遺伝子治療の方法を用いることができる。このような方法の例を以下に挙げる。
【０２０６】
遺伝子治療方法の全般については、以下の文献を参照されたい：Goldspielら、1993, Clinical Pharmacy 12: 488-505；WuおよびWu、1991, Biotherapy 3: 87-95；Tolstoshev, 1993, Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 32: 573-596；Mulligan, Science 260: 926-932 (1993)；並びにMorganおよびAnderson, 1993, Ann. Rev. Biochem. 62: 191-217；May, 1993, TIBTECH 11 (5): 155-215。用いることができる組換えDNA 技術の分野で公知の方法は、以下の文献に記載されている：Ausubelら (編)、Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (1993)；並びにKriegler, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY (1990)。
【０２０７】
好ましい形態では、本発明の組成物は、予防薬または治療薬をコードする核酸を含み、該核酸は、好適な宿主において予防薬または治療薬を発現させる発現ベクターの一部である。特に、このような核酸は、抗体コード領域と機能的に結合したプロモーター、好ましくは異種プロモーターを有し、このプロモーターは、誘導性または構成的で、場合によっては、組織特異的である。別の具体的実施形態では、予防薬または治療薬コード配列とその他の所望の配列が、ゲノム内の所望の部位で相同組換えを促進する領域と隣接し、これにより、抗体コード核酸の染色体内発現を達成する核酸分子を用いる（KollerおよびSmithies, 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 8932-8935；Zijlstraら、1989, Nature 342: 435-438）。特定の実施形態では、予防薬または治療薬を発現させる。
【０２０８】
被験者への核酸の送達は、直接（この場合、被験者を核酸または核酸担持ベクターに直接暴露する）、または間接的（この場合、in vitroで細胞をまず核酸で形質転換してから、被験者に移植する）のいずれでもよい。これら２つの手法は、in vivoまたはex vivo遺伝子治療としてそれぞれ知られている。
【０２０９】
具体的実施形態では、核酸配列をin vivoで直接投与し、そこで発現させることにより、コードされた産物を産生させる。これは、当分野で公知の複数の方法のどれによっても達成することができ、このような方法の例を以下に挙げる：上記核酸を適切な核酸発現ベクターの一部として構築し、それが細胞内になるように投与する；欠陥または弱毒化したレトロウイルスその他のウイルスベクターを用いた感染（米国特許第4,980,286号）により；または、ネイキッドDNAの直接注射により；またはマイクロパーティクルボンバードメント（例：遺伝子銃；Biolisitic, Dupont）の使用により；または、核酸配列が含まれるin situスカフォールディングを用いたマトリックスにより（例えば、欧州特許第0 741 785 B1および米国特許第5,962,427号）；または、脂質もしくは細胞表面受容体またはトランスフェクション剤でのコーティング、リポソーム、マイクロパーティクルもしくはマイクロカプセルへの封入；あるいは、受容体媒介によるエンドサイトーシスを起こしやすいリガンドに連結した状態で核酸を被験者に投与すること（例えば、WuおよびWu, 1987, J. Biol. Chem. 262: 4429-4432参照）（受容体を特異的に発現する細胞型をターゲッティングするのに用いることができる）などにより達成することができる。別の実施形態では、核酸−リガンド複合体を形成するが、その際、リガンドは、エンドソームを破壊する融合誘導ウイルスペプチドを含み、これによって、核酸によるリソソーム分解の阻止が可能になる。さらに別の実施形態では、特定の受容体をターゲッティングすることにより、細胞特異的取込みおよび発現のために上記核酸をin vivoでターゲッティングすることができる（例えば、PCT公開番号WO 92/06180、WO 92/22635、WO 92/20316、WO 93/14188および WO 93/20221参照）。あるいは、相同組換えにより、上記核酸を発現させる細胞内に導入し、宿主細胞DNA内に組み込むこともできる（例えば、KollerおよびSmithies, 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 8932-8935；およびZijlstraら、1989, Natu
re 342: 435-438参照）。
【０２１０】
具体的実施形態では、予防薬または治療薬をコードする核酸配列を含むウイルスベクターを用いる。例えば、レトロウイルスベクターを用いることができる（例えば、Millerら、1993, Meth. Enzymol. 217: 581-599）。これらのレトロウイルスベクターは、ウイルスゲノムの適正なパッケージングと、宿主細胞DNAへの組み込みに必要な成分を含んでいる。遺伝子治療に用いようとする予防薬または治療薬をコードする核酸配列を１以上のベクターにクローン化し、これによって、被験者への遺伝子の送達を促進する。レトロウイルスに関してさらに詳しくは、Boesenら、1994, Biotherapy 6:291-302に見出すことができ、ここには、化学療法に対して耐性の高い幹細胞を構築する目的で、mdr 1遺伝子を造血幹細胞に送達するためのレトロウイルスベクターの使用が記載されている。遺伝子治療におけるレトロウイルスの使用を示すその他の参照文献を以下に挙げる：Clowesら、1994, J. Clin. Invest. 93:644-651；Kleinら、1994, Blood 83：1467-1473； SalmonsおよびGunzberg、1993、Human Gene Therapy 4：129-141；並びに GrossmanおよびWilson, 1993, Curr. Opin. in Genitics and Devel. 3: 110-114。
【０２１１】
遺伝子治療で用いることができるその他のウイルスベクターとして、アデノウイルスがある。アデノウイルスは気道上皮に遺伝子を送達するのに特に魅力的な運搬体である。アデノウイルスは、気道上皮に自然に感染し、そこで軽度の疾患を引き起こす。アデノウイルスに基づく送達系に対するその他の標的は、肝臓、中枢神経系、内皮細胞、並びに筋肉である。アデノウイルスは、未分化細胞に感染することができるという利点がある。KozarskyおよびWilson, 1993, Current Opinion in Genetics and Development 3: 499-503は、アデノウイルスに基づく遺伝子治療について記載している。Boutら、1994, Human Gene Therapy 5: 3-10 には、アカゲザルの気道上皮に遺伝子を導入するためにアデノウイルスベクターを使用することが論証されている。遺伝子治療におけるアデノウイルスの使用に関するその他の例は、以下の文献に見出すことができる：Rosenfeldら、 1991, Science 252: 431-434；Rosenfeldら、1992, Cell 68: 143-155； Mastrangeliら、 1993, J. Clin. Invest. 91: 225-234；PCT公開番号 W094/12649；並びにWangら、1995, Gene Therapy 2: 775-783。好ましい実施形態では、アデノウイルスベクターを用いる。
【０２１２】
アデノ随伴ウイルス（AAV）も遺伝子治療に用いるのに提案されている（Walsh ら、1993, Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 204: 289-300；および 米国特許第5,436, 146号）。
【０２１３】
遺伝子治療に対する別の手法は、エレクトロポレーション、リポフェクション、リン酸カルシウム媒介トランスフェクション、もしくはウイルス感染などの方法により、遺伝子を組織培養下の細胞に導入することを含む。通常、導入方法は、細胞への選択マーカーの導入を含む。次に、細胞を選択下に置き、導入遺伝子を取りこみ、かつそれを発現している細胞を単離する。そして、これらの細胞を被験者に送達する。
【０２１４】
この実施形態では、核酸を細胞に導入した後、得られた組換え細胞をin vivoで投与する。このような導入は、当分野で知られるいずれの方法でも実施することができ、そのような方法として、限定するものではないが、以下のものが挙げられる：トランスフェクション、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、核酸配列を含むウイルスもしくはバクテリオファージベクターの感染、細胞融合、染色体媒介の遺伝子導入、マイクロセル媒介の遺伝子導入、スフェロプラスト融合など。当分野では、外来遺伝子を細胞に導入する多数の方法（例えば、LoefflerおよびBehr, 1993, Meth. Enzymol. 217: 599-618；Cohen ら、1993, Meth. Enzymol. 217: 618-644；Clin.Pharma. Ther. 29: 69-92 (1985)参照）が知られており、受容細胞の必要な発達および生理学的機能を破壊するものでない限り、本発明で用いることができる。上記の方法は、細胞への核酸の安定した導入を与え、これによって、細胞により核酸が発現可能となり、好ましくは、その細胞子孫により遺伝可能および発現可能となるようにする。
【０２１５】
得られた組換え細胞は、当分野で公知の様々な方法により被験者に送達することができる。組換え血液細胞（例：造血幹細胞または前駆細胞）は静脈内投与するのが好ましい。予想される細胞の使用量は、所望する効果、患者の状態などに応じて変動し、当業者が決定することができる。
【０２１６】
遺伝子治療を目的として、核酸を導入することができる細胞には、あらゆる所望の、入手可能な細胞型が含まれ、限定するものではないが、以下のものが挙げられる：上皮細胞、内皮細胞、ケラチノサイト、繊維芽細胞、筋肉細胞、肝細胞；血液細胞、例えば、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、ナチュラルキラー（NK）細胞、単球、マクロファージ、神経網、好酸球、巨核球、顆粒球；様々な幹細胞または前駆細胞、特に、造血幹細胞または前駆細胞、例えば、骨髄、臍帯血、末梢血液、胎児肝臓などから取得したもの。
【０２１７】
好ましい実施形態では、遺伝子治療に用いる細胞は被験者にオートロガス（自己由来）である。
【０２１８】
組換え細胞を遺伝子治療に用いる実施形態では、予防薬または治療薬をコードする核酸配列を細胞に導入して、それらが細胞またはその子孫により発現可能となるようにした後、予防または治療効果を得るために組換え細胞をin vivoで投与する。具体的実施形態では、幹細胞または前駆細胞を用いる。本発明のこの実施形態では、単離し、かつin vitroで維持することができるあらゆる幹細胞および／または前駆細胞を用いることができると考えられる（例えば、PCT公開番号WO 94/08598； Stempleおよび Anderson, 1992, Cell 7 1: 973-985；Rheinwald, 1980, Meth. Cell Bio. 21A: 229；並びにPittelkowおよびScott, 1986, Mayo Clinic Proc. 61: 771参照）。
【０２１９】
具体的実施形態では、遺伝子治療を目的として導入しようとする核酸は、コード領域に機能的に連結した構成的かつ組織特異的プロモーター、または誘導性プロモーターを含む。好ましい実施形態では、遺伝子治療を目的として導入しようとする核酸は、コード領域に機能的に連結した誘導性プロモーターを含み、適切な転写誘導剤の有無を制御することにより、核酸の発現が制御可能になる。
【０２２０】
５．６．用量および頻度
疾患（例：増殖性疾患、感染性疾患、心血管疾患、炎症性疾患または自己免疫疾患）に関連する１以上の症状の治療、予防もしくは改善に有効な本発明の組成物の予防または治療に有効な量は、標準的臨床方法により決定することができる。用量、投与頻度、もしくはその両方は、患者の年齢、体重、応答、病状の重症度、および病歴、並びに投与経路、予防または治療の薬物動態学的または薬力学的効果に応じて変動し、医師の判断、およびそれぞれの患者の状況に応じて決定しなければならない。有効な用量は、in vitroまたは動物モデル試験系から得られる用量−応答曲線から推定することができる。
【０２２１】
小分子の用量の例として、被験者の体重またはサンプル重量１キログラム当たりの小分子の量（ミリグラムまたはマイクログラム）が挙げられる（例えば、約１マイクログラム／キログラム〜約500ミリグラム／キログラム、約100マイクログラム／キログラム〜約５ミリグラム／キログラム、約１マイクログラム／キログラム〜約50ミリグラム／キログラム）。
【０２２２】
本発明に含まれる抗体、タンパク質、ポリペプチド、ペプチドおよび融合タンパク質については、患者に投与される用量は、典型的に、患者の体重に関して、0.0001mg／kg〜100 mg／kgである。好ましくは、患者の体重に関して、0.0001mg／kg〜20 mg／kg、0.0001mg／kg〜10 mg／kg、0.0001mg／kg〜５mg／kg、0.0001mg／kg〜２mg／kg、0.0001mg／kg〜１mg／kg、0.0001mg／kg〜0.75 mg／kg、0.0001mg／kg〜0.5 mg／kg、0.0001mg／kg〜0.25 mg／kg、0.0001mg／kg〜0.15 mg／kg、0.0001mg／kg〜0.10 mg／kg、0.001mg／kg〜0.5 mg／kg、0.01mg／kg〜0.25 mg／kgもしくは0.01mg／kg〜0.10 mg／kgである。一般に、ヒト抗体は、外来ポリペプチドに対する免疫応答のために、他の種由来の抗体と比較して、ヒト生体における半減期が長い。従って、多くの場合、ヒト抗体の用量を少なく、かつ投与頻度も低くすることが可能である。さらに、脂質化のような改変によって抗体の取込みおよび組織透過を高めることにより、本発明の抗体もしくはそのフラグメントの投与量および頻度を低減することもできる。
【０２２３】
一般に、リンパ系組織誘導剤は、リンパ系組織を誘導するのに十分な、もしくは有効な量ではあるが、患部組織を形成する細胞における細胞分裂過程に作用して細胞死を引き起こす、もたらす、もしくは促進するには不十分な量で組成物中に存在する。例えば、リンパ系組織誘導剤が微小管安定化剤である組成物では、微小管安定化剤は、有糸分裂の1以上の段階を妨害して細胞死を引き起こすほどの微小管の安定化には不十分な量で存在する。有糸分裂の1以上の段階を妨害することによりある程度の細胞死は起こりうるが、微小管安定化剤の量は、有糸分裂の1以上の段階を妨害して細胞死を引き起こすほどの微小管の安定化による細胞死が約50％以下（すなわち、有糸分裂の妨害をもたらす微小管安定化により死滅する細胞の量を死滅した細胞の総数で割ったもの）、好ましくは約45％以下、約40％以下、約35％以下、約30％以下、あるいは、約25％以下、約20％以下、約15％以下、約10％以下、約５％以下となるように選択する。
【０２２４】
一般に、リンパ系組織誘導剤の予防または治療に有効な量は、典型的には、体重／容量百分率（リンパ系組織誘導剤ｇ／100ml組成物）に基づいて、約0.00001％〜約５％、好ましくは約0.00001％〜約１％、最も好ましくは約0.0001％〜約0.1％である。あるいは、組成物中のリンパ系組織誘導剤の量は、身体表面積１ｍ2当たり、0.0000001ｇ／ｍ2〜10ｇ／ｍ2、好ましくは0.0000001ｇ／ｍ2〜５ｇ／ｍ2、並びに最も好ましくは0.0000001ｇ／ｍ2〜１ｇ／ｍ2である。具体的実施形態では、リンパ系組織誘導剤の予防または治療に有効な量は、身体表面積１ｍ2当たり、0.0000001ｇ／ｍ2、0.000001ｇ／ｍ2、0.00001ｇ／ｍ2、0.0001ｇ／ｍ2、0.001ｇ／ｍ2、0.01ｇ／ｍ2、0.1ｇ／ｍ2、0.25ｇ／ｍ2、0.5ｇ／ｍ2、0.75ｇ／ｍ2、１ｇ／ｍ2、２ｇ／ｍ2もしくは５ｇ／ｍ2である。別の実施形態では、タキソールもしくはタキソール類似体の予防または治療に有効な量は、１日当たり、約１mg／mm2〜1000mg／mm2、好ましくは約10mg／mm2〜500mg／mm2である。
【０２２５】
一般に、免疫調節剤の予防または治療に有効な量は、典型的には、体重／容量百分率（免疫調節剤ｇ／100ml組成物）に基づいて、約0.00001％〜約５％、好ましくは約0.00001％〜約１％、最も好ましくは約0.0001％〜約0.1％である。あるいは、免疫調節剤の予防または治療に有効な量は、身体表面積１ｍ2当たり、0.0000001ｇ／ｍ2〜10ｇ／ｍ2、好ましくは0.0000001ｇ／ｍ2〜５ｇ／ｍ2、および最も好ましくは0.0000001ｇ／ｍ2〜１ｇ／ｍ2である。具体的実施形態では、免疫調節剤の予防または治療に有効な量は、身体表面積１ｍ2当たり、0.0000001ｇ／ｍ2、0.000001ｇ／ｍ2、0.00001ｇ／ｍ2、0.0001ｇ／ｍ2、0.001ｇ／ｍ2、0.01ｇ／ｍ2、0.1ｇ／ｍ2、0.25ｇ／ｍ2、0.5ｇ／ｍ2、0.75ｇ／ｍ2、１ｇ／ｍ2、２ｇ／ｍ2もしくは５ｇ／ｍ2である。
【０２２６】
組成物中のリンパ系組織誘導剤と免疫調節剤の比は、上に詳述したように、状況に応じて変動する。しかし、一般に、リンパ系組織誘導剤と免疫調節剤の重量比は、約１：１〜約１：100、さらに好ましくは約１：１〜約１：10であるのが好ましい。１以上のリンパ系組織誘導剤を用いる場合には、リンパ系組織誘導剤と免疫調節剤の重量比は、約１：0.1〜約１：１、さらに好ましくは約１：0.3〜約１：0.5であるのが好ましい。
【０２２７】
一般に、様々な形態の新生物形成疾患の場合、組成物中のリンパ系組織誘導剤の量は、重量／体重kg百分率（すなわち、誘導剤ｇ／体重kg）に基づいて、約0.00001％〜約１％、さらに好ましくは約0.0001％〜約0.1％の範囲を変動する。投与する組成物中の免疫調節剤（例えば、免疫系エンハンサー）の量は、重量／体重kg百分率（すなわち、モジュレーターｇ／体重kg）に基づいて、約0.00001％〜約１％、さらに好ましくは約0.0001％〜約0.1％の範囲内にある。用いるリンパ系組織誘導剤の量は、リンパ系組織の形成を誘導するのに有効であるが、患部組織の細胞の細胞分裂、あるいはその形成に作用して細胞死を引き起こすには不十分な量である。このような製剤は、１回の治療につき、約0.1時間〜約48時間にわたり投与するのが好ましい。治療回数、並びに治療間隔は患者に応じて変動し、当業者が決定することができる。あるいは、リンパ系組織誘導剤は、身体表面積１ｍ2当たり、約0.00001ｇ／ｍ2〜約0.1ｇ／ｍ2、好ましくは約0.001ｇ／ｍ2〜約0.1ｇ／ｍ2の量を投与することができる。また、免疫調節剤は、身体表面積１ｍ2当たり、約0.00001ｇ／ｍ2〜約0.1ｇ／ｍ2、さらに好ましくは約0.001ｇ／ｍ2〜約0.1ｇ／ｍ2の量を投与することができる。
【０２２８】
一般に、細菌を原因とする様々な疾患の場合、投与されるリンパ系組織誘導剤の量は、重量／体重kg百分率（すなわち、誘導剤ｇ／体重kg）に基づいて、約0.00001％〜約１％、さらに好ましくは約0.001％〜約0.1％の範囲を変動する。投与される組成物中の免疫調節剤の量は、重量／体重kg百分率（すなわち、モジュレーターｇ／体重kg）に基づいて、約0.00001％〜約１％、さらに好ましくは約0.001％〜約0.1％である。このような製剤は、１回の治療につき、約0.1時間〜約48時間にわたり投与するのが好ましい。あるいは、リンパ系組織誘導剤は、身体表面積１ｍ2当たり、約0.0001ｇ／ｍ2〜約0.1ｇ／ｍ2、好ましくは約0.001ｇ／ｍ2〜約0.01ｇ／ｍ2の量を投与することができる。また、免疫調節剤は、身体表面積１ｍ2当たり、約0.0001ｇ／ｍ2〜約0.1ｇ／ｍ2、さらに好ましくは約0.001ｇ／ｍ2〜約0.1ｇ／ｍ2の量を投与することができる。
【０２２９】
ウイルスを原因とする様々な疾患の場合、投与されるリンパ系組織誘導剤の量は、重量／体重kg百分率（すなわち、誘導剤ｇ／体重kg）に基づいて、約0.00001％〜約１％、さらに好ましくは約0.0001％〜約0.1％の範囲を変動する。投与される組成物中の免疫調節剤の量は、重量／体重kg百分率（すなわち、モジュレーターｇ／体重kg）に基づいて、約0.0001％〜約１％、さらに好ましくは約0.001％〜約0.1％である。このような製剤は、１回の治療につき、約0.1時間〜約48時間にわたり投与するのが好ましい。あるいは、リンパ系組織誘導剤は、身体表面積１ｍ2当たり、約0.00001ｇ／ｍ2〜約0.1ｇ／ｍ2、好ましくは約0.001ｇ／ｍ2〜約0.01ｇ／ｍ2の量を投与することができる。また、免疫調節剤は、身体表面積１ｍ2当たり、約0.00001ｇ／ｍ2〜約0.1ｇ／ｍ2、さらに好ましくは約0.001ｇ／ｍ2〜約0.1ｇ／ｍ2の量を投与することができる。
【０２３０】
真菌を原因とする様々な疾患の場合、投与されるリンパ系組織誘導剤の量は、重量／体重kg百分率（すなわち、誘導剤ｇ／体重kg）に基づいて、約0.00001％〜約１％、さらに好ましくは約0.001％〜約0.1％の範囲を変動する。投与される組成物中の免疫調製剤の量は、重量／体重kg百分率（すなわち、モジュレーターｇ／体重kg）に基づいて、約0.00001％〜約１％、さらに好ましくは約0.001％〜約0.1％である。このような製剤は、１回の治療につき、約0.1時間〜約48時間にわたり投与するのが好ましい。あるいは、リンパ系組織誘導剤は、身体表面積１ｍ2当たり、約0.00001ｇ／ｍ2〜約0.1ｇ／ｍ2、好ましくは約0.001ｇ／ｍ2〜約0.01ｇ／ｍ2の量を投与することができる。また、免疫調節剤は、身体表面積１ｍ2当たり、約0.00001ｇ／ｍ2〜約0.1ｇ／ｍ2、さらに好ましくは約0.001ｇ／ｍ2〜約0.1ｇ／ｍ2の量を投与することができる。
【０２３１】
別の実施形態では、予防または治療に有効な量のリンパ系組織誘導剤の１以上の用量を被験者に投与するが、その際、予防または治療に有効な量は、各用量について同じではない。別の実施形態では、予防または治療に有効な量のリンパ系組織誘導剤の１以上の用量を被験者に投与するが、その際、予防または治療に有効な量のリンパ系組織誘導剤の用量は、治療が進行するにつれて、例えば、0.01μg／kg、0.02μg／kg、0.04μg／kg、0.05μg／kg、0.06μg／kg、0.08μg／kg、0.1μg／kg、0.2μg／kg、0.25μg／kg、0.5μg／kg、0.75μg／kg、1μg／kg、1.5μg／kg、２μg／kg、４μg／kg、５μg／kg、10μg／kg、15μg／kg、20μg／kg、25μg／kg、30μg／kg、35μg／kg、40μg／kg、45μg／kg、もしくは50μg／kgずつ増加する。別の実施形態では、予防または治療に有効な量のリンパ系組織誘導剤の１以上の用量を被験者に投与するが、その際、予防または治療に有効な量のリンパ系組織誘導剤の用量は、治療が進行するにつれて、例えば、0.01μg／kg、0.02μg／kg、0.04μg／kg、0.05μg／kg、0.06μg／kg、0.08μg／kg、0.1μg／kg、0.2μg／kg、0.25μg／kg、0.5μg／kg、0.75μg／kg、1μg／kg、1.5μg／kg、２μg／kg、４μg／kg、５μg／kg、10μg／kg、15μg／kg、20μg／kg、25μg／kg、30μg／kg、35μg／kg、40μg／kg、45μg／kg、もしくは50μg／kgずつ減少する。
【０２３２】
別の実施形態では、予防または治療に有効な量の免疫調節剤の１以上の用量を被験者に投与するが、その際、予防または治療に有効な量は、各用量について同じではない。別の実施形態では、予防または治療に有効な量の免疫調節剤の１以上の用量を被験者に投与するが、その際、予防または治療に有効な量の免疫調節剤の用量は、治療が進行するにつれて、例えば、0.01μg／kg、0.02μg／kg、0.04μg／kg、0.05μg／kg、0.06μg／kg、0.08μg／kg、0.1μg／kg、0.2μg／kg、0.25μg／kg、0.5μg／kg、0.75μg／kg、1μg／kg、1.5μg／kg、２μg／kg、４μg／kg、５μg／kg、10μg／kg、15μg／kg、20μg／kg、25μg／kg、30μg／kg、35μg／kg、40μg／kg、45μg／kg、もしくは50μg／kgずつ増加する。別の実施形態では、予防または治療に有効な量の免疫調節剤の１以上の用量を被験者に投与するが、その際、予防または治療に有効な量の免疫調節剤の用量は、治療が進行するにつれて、例えば、0.01μg／kg、0.02μg／kg、0.04μg／kg、0.05μg／kg、0.06μg／kg、0.08μg／kg、0.1μg／kg、0.2μg／kg、0.25μg／kg、0.5μg／kg、0.75μg／kg、1μg／kg、1.5μg／kg、２μg／kg、４μg／kg、５μg／kg、10μg／kg、15μg／kg、20μg／kg、25μg／kg、30μg／kg、35μg／kg、40μg／kg、45μg／kg、もしくは50μg／kgずつ減少する。
【０２３３】
以下に挙げる例は、当業者によって設計されることが考えられる投与計画を説明する目的で示すに過ぎない。一例では、６ヶ月にわたり毎月最初の２週間は２または３日毎にリンパ系組織誘導剤および／または免疫調節剤を投与する。６ヶ月の休息後、上記と同じまたは異なるスケジュールでリンパ系組織誘導剤および／または免疫調節剤を投与する。別の例では、３ヶ月にわたり毎週１回リンパ系組織誘導剤および／または免疫調節剤を投与する。３ヶ月の休息後、上記と同じまたは異なるスケジュールでリンパ系組織誘導剤および／または免疫調節剤を投与する。別の例では、１年にわたり３週間毎にリンパ系組織誘導剤および／または免疫調節剤を投与する。２ヶ月の休息後、上記と同じまたは異なるスケジュールでリンパ系組織誘導剤および／または免疫調節剤を投与する。好ましい例では、４週間サイクルで３週間にわたり毎週１回リンパ系組織誘導剤および／または免疫調節剤を投与する。１週間の休息後、上記と同じまたは異なるスケジュールでリンパ系組織誘導剤および／または免疫調節剤を投与する。
【０２３４】
好ましい実施形態では、被験者におけるリンパ球数、好ましくは、Ｔリンパ球数を、特定数の用量のリンパ系組織誘導剤および／または免疫調節剤の投与前、投与中および／または投与後モニタリングする。これらの実施形態に従い、被験者へのリンパ系組織誘導剤および／または免疫調節剤の投与量は、被験者をモニタリングして得られた結果に基づき調節することができる。さらに、この実施形態によれば、特定数の用量は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、10、11、12もしくはそれ以上の用量である。リンパ球数を評価する方法は当技術分野で周知であり、本明細書では第５．７節に記載している。
【０２３５】
投与する組成物の量は、特定の疾患の予後結果にプラスの影響を与えるのに十分なものでもよい。プラスの結果を確認するために観察することができる終点（エンドポイント）は、疾患に応じて異なる。例えば、異常細胞増殖、または癌、腫瘍、もしくはその他の新生物の場合には、プラスの結果として、患者における罹患組織の量の減少（腫瘍サイズの縮小など）、転移の減少、患者が罹患している疾患の症状および／もしくは疾患の特徴の軽減、またはこれらの組合せが挙げられる。ウイルス、細菌または真菌性疾患の場合には、プラスの結果として、患者における微生物の量の減少、疾患の症状の軽減、非罹患組織への微生物拡散の低減、罹患組織の量の減少、もしくはこれらの組合せが挙げられる。炎症性疾患の場合には、プラスの結果として、関節、組織もしくは器官の腫脹の縮小がある。
【０２３６】
５．７．組合せ治療の予防または治療有用性の特性解析と証明
本発明の医薬組成物または予防もしくは治療薬のいくつかの形態は、ヒトへの使用の前に、in vitro、細胞培養系、そして動物モデル生物（げっ歯動物モデル系など）で所望の治療活性について試験するのが好ましい。例えば、リンパ系組織誘導剤および免疫調節剤の特定の医薬組成物もしくは特定の組合せ物の投与の必要を示しているか否かを決定するのに用いることができるアッセイとしては、患者の組織サンプルを培養物中に増殖させ、医薬組成物に暴露または接触させ、組織サンプルに対する組成物の効果を観察するアッセイがある。組織サンプルは、患者からの生検により取得することができる。この試験により、個々の患者について治療的に最も有効な予防または治療分子を同定することができる。様々な具体的実施形態では、疾患に関与する細胞型（例えば、免疫細胞または癌細胞）の代表的細胞を用いて、in vitroアッセイを実施することにより、本発明の医薬組成物が該細胞型に所望の効果をもたらすかどうかを決定することができる。
【０２３７】
様々な免疫細胞型（Ｔ細胞、Ｂ細胞、NK細胞、マクロファージ、および樹状細胞）の活性化を調節する能力について、本発明の組合せ治療薬をアッセイすることができる。免疫細胞の活性化は、例えば、サイトカインおよび／または細胞表面マーカーの発現レベルの変化を測定することにより決定することができる。当業者には公知の方法（限定するものではないが、免疫沈降後のウエスタンブロット分析、ELISA、フローサイトメトリー、ノーザンブロット分析、およびRT-PCRなど）を用いて、免疫細胞の活性化を示すサイトカインおよび細胞表面マーカーの発現を測定することができる。
【０２３８】
免疫細胞におけるシグナル伝達を誘導する能力について、本発明の組合せ治療薬をアッセイすることができる。免疫細胞へのシグナル伝達経路の導入は、当業者には公知の方法（例えば、キナーゼアッセイおよび電気泳動移動度変位アッセイなど）によりアッセイすることができる。また、免疫細胞の増殖をモジュレートする能力について、本発明の組合せ治療薬をアッセイすることができる。当業者には公知の方法として、限定するものではないが、3Hチミジン取込み、トリパンブルー細胞数カウント、および蛍光活性化セルソーティング（FACS）分析などが挙げられる。さらに、細胞溶解を誘導する能力についても本発明の組合せ治療薬をアッセイすることができる。細胞溶解は、限定するものではないが、51CR放出アッセイなど、当業者には公知の方法により評価することができる。
【０２３９】
本発明の組合せ治療は、ヒトへの使用の前に、好適な動物モデル系で試験することができる。このような動物モデル系として、限定するものではないが、ラット、マウス、ニワトリ、ウシ、サル、ブタ、ウサギなどが挙げられる。当分野でよく知られるどんな動物系を用いてもよい。本発明の具体的実施形態では、本発明の組合せ治療薬をマウスモデル系で試験する。このようなモデル系は、広範に使用されており、当業者にはよく知られている。リンパ系組織誘導剤および／または免疫調節剤は繰り返し投与することができる。いくつかの態様では手順が変動するものもある。かかる態様には、リンパ系組織誘導剤および／または免疫調節剤を投与する時間的計画や、薬剤を個別に、または混合物として投与するかどうか、などが含まれる。
【０２４０】
本発明の組合せ治療薬の抗癌活性は、あらゆる好適な動物モデル（限定するものではないが、腫瘍を有する、もしくは悪性細胞を注射したSCIDマウスなど）を用いて決定することができる。本発明の組合せ治療薬の抗炎症活性は、当業者には公知で、Crofford L. J. およびWilder R. L., "Arthritis and Autoimmunity in Animals", in Arthritis and Allied Conditions: A Textbook of Rheumatology, McCartyら （編）、第30章 （LeeおよびFebiger, 1993）に記載されている炎症性関節炎の各種実験動物モデルを用いて、決定することができる。炎症性関節炎および自己免疫性リウマチ疾患の実験および自然発生動物モデルを用いて、本発明の組合せ治療薬の抗炎症活性を評価することができる。以下に、非制限的な例としていくつかのアッセイを示す。
【０２４１】
当業者には公知で、しかも広く用いられている関節炎または炎症性疾患用の主な動物モデルとして以下のものが挙げられる：アジュバントにより誘発される関節炎ラットモデル、コラーゲン誘発関節炎ラットおよびマウスモデル、並びに抗原誘発関節炎ラット、ウサギおよびハムスターモデルであり、これらはすべて以下に記載されている：Crofford L. J.およびWilder R. L. ,"Arthritis and Autoimmunity in Animals", in Arthritis and Allied Conditions: A Textbook of Rheumatology, McCartyら （編）、第30章（LeeおよびFebiger, 1993）（参照として、全文を本明細書に組み込む）。
【０２４２】
本発明の組合せ治療薬の抗炎症活性は、カラゲニン誘発関節炎ラットモデルを用いて、評価することができる。カラゲニン誘発関節炎は、慢性関節炎または炎症の研究においてウサギ、イヌおよびブタでも用いられている。定量的組織形態計測評価を用いて、治療効果を決定することができる。このようなカラゲニン誘導の関節炎モデルを用いる方法は、Hansra P.ら、"Carrageenan-Induced Arthritis in the Rat", Inflammation, 24 (2): 141-155,（2000）に記載されている。また、当分野で知られ、記載されているように、ザイモサン誘発炎症動物モデルもよく用いられている。
【０２４３】
本発明の組合せ治療薬の抗炎症活性は、ラットにおけるカラゲニン誘発脚水腫の阻害を測定することにより評価することができ、これには、下記の文献に記載された方法を改変したものを用いる：Winter C. A.ら、"Carrageenan-Induced Edema in Hind Paw of the Rat as an Assay for Anti-inflammatory Drugs", Proc. Soc. Exp. Biol Med. 111, 544-547,（1962）。このアッセイは、ほとんどのNSAIDの抗炎症活性の一次in vivoスクリーンとして用いられており、ヒトに対する効果を推定できるものと考えられる。試験予防薬または治療薬の抗炎症活性は、ビヒクルを投与した対照グループに対する試験グループの後脚重量増加の阻害率（％）として表す。
【０２４４】
用いる実験動物モデルがアジュバント誘発関節炎ラットモデルである本発明の具体的実施形態では、体重を測定して対照グループと比較することにより、本発明の組合せ治療薬の抗炎症活性を決定することができる。あるいは、骨喪失を測定するアッセイを用いて、本発明の組合せ治療薬の効果を評価することもできる。骨形成の動的パラメーターを得るのに当分野では、卵巣摘出により誘発される骨吸収マウス、ラットおよびウサギのような動物モデルが知られている。Yositakeら、またはYamamotoらにより記載されているような方法を用いて、マイクロコンピューター連動断層撮影分析および骨組織形態計測分析により、骨量をin vivoで測定する。Yoshitakeら、"Osteopontin-Deficient Mice Are Resistant to Ovariectomy-Induced Bone Resorption", Proc. Natl. Acad. Sci. 96: 8156-8160, (1999)；Yamamotoら、"The Integrin Ligand Echistatin Prevents Bone Loss in Ovariectomized Mice and Rats", Endocrinology 139 (3): 1411-1419, (1998) （両文献とも、参照として全文を本明細書に組み込む）。
【０２４５】
加えて、炎症性腸疾患用の動物モデルを用いて、本発明の組合せ治療薬の効果を評価することもできる（Kimら、1992, Scand. J. Gastroentrol. 27: 529-537；Strober, 1985, Dig. Dis. Sci. 30 (12 Suppl): 3S-lOS）。潰瘍性大腸炎およびクローン病は動物に誘発することができるヒト炎症性腸疾患である。硫酸化多糖（限定するものではないが、アミロペクチン、カラゲニン、硫酸アミロペクチン、および硫酸デキストランなど）または化学的刺激原（限定するものではないが、トリニトロベンゼンスルホン酸（TNBS）および酢酸など）を動物に経口投与して、炎症性腸疾患を誘発することができる。
【０２４６】
また、喘息用の動物モデルを用いて、本発明の組合せ治療薬の効果を評価することもできる。このようなモデルの一例として、マウス養子免疫伝達モデルがあり、ここでは、TH1またはTH2受容マウスのエアロアレルゲン誘発により、THエフェクター細胞の気道への移動が起こり、これに強度の好中球（TH1）および好酸球（TH2）肺粘膜炎症応答が伴う（Cohnら、1997, J. Exp. Med. 1861737-1747）。
【０２４７】
自己免疫疾患用の動物モデルを用いて、本発明の組合せ治療薬の効果を評価することもできる。I型糖尿病、甲状腺自己免疫、全身性エリテマトーデス、および糸球体腎炎などの自己免疫疾患用の動物モデルが開発されている（例えば、Flandersら、1999, Autoimmunity 29: 235-246；Kroghら、1999, Biochimie 81: 511-515；Foster, 1999, Semin. Nephrol. 19: 12-24を参照）。
【０２４８】
乾癬用の動物モデルを用いて、本発明の組合せ治療薬の効果を評価することもできる。乾癬用の動物モデルが開発されている（例えば、Schon, 1999, J. Invest. Dermatol. 112: 405-410）。
【０２４９】
さらに、当業者には公知のアッセイを用いて、本明細書に開示した疾患に対する本発明の組合せ治療薬の予防および／または治療有用性を評価することができる。
【０２５０】
当業者には公知の標準的方法を用いて、末梢血液リンパ球数に対する本発明の組合せ治療薬の効果をモニタリングおよび／または評価することができる。被験者における末梢血液リンパ球数は、例えば、該被験者から末梢血液のサンプルを採取して、フィコール−ハイパック（Ficoll-Hypaque）（Pharmacia）勾配遠心分離を用いて、末梢血液の他の成分（血漿など）からリンパ球を分離し、トリパンブルーを用いてリンパ球をカウントすることにより、決定することができる。被験者における末梢血液Ｔ細胞数は、例えば、フィコール−ハイパック（Ficoll-Hypaque）（Pharmacia）勾配遠心分離を用いて、末梢血液の他の成分（血漿など）からリンパ球を分離し、FITCまたはフィコエリトリンに結合したＴ細胞抗原（CD3、CD4およびCD8）に対する抗体でＴ細胞を標識し、FACSによりＴ細胞の数を測定することにより、決定することができる。
【０２５１】
本発明の予防および／または治療プロトコルの毒性および／または効果は、細胞培養物または実験動物における標準的な薬学的方法、例えば、LD50（集団の50％までの致死用量）およびED50（集団の50％において治療に有効な用量）の決定する方法により決定することができる。有毒作用と治療効果との用量比が治療指数であり、比：LD50／ED50で表すことができる。大きな治療指数を呈示するリンパ系組織誘導剤および免疫調節剤が好ましい。有毒な副作用を示すリンパ系組織誘導剤および免疫調節剤を用いる場合には、非感染細胞に対する潜在的損傷を最小限にし、副作用を低減するように、患部組織の部位に薬剤をターゲッティングする送達系を設計する上で注意を払わなければならない。
【０２５２】
細胞培養アッセイおよび動物研究から得られたデータは、ヒトに使用するためのリンパ系組織誘導剤および免疫調節剤の投与量の範囲を決定するのに用いることができる。このような薬剤の投与量は、毒性がほとんどまたは全くないED50を含む循環濃度の範囲内にあることが好ましい。用量は、用いられる剤形および投与経路に応じて、この範囲内で変動しうる。本発明の方法で用いられるあらゆる薬剤について、初めに細胞培養アッセイから、治療に有効な用量を推定することができる。細胞培養で決定したIC50（すなわち、症状の最大阻害の半分を達成する試験化合物の濃度）を含む循環血漿濃度を達成するように、動物モデルで用量を決定することができる。このような情報を用いて、ヒトにおいて有用な用量をより正確に決定することができる。血漿レベルは、例えば、高性能液体クロマトグラフィー（HPLC）および放射線免疫測定法（RIA）により測定することができる。予防または治療の薬物動態学は、例えば、以下のパラメーター：最高血漿中濃度（Ｃmax）、血中薬物濃度時間曲線下面積（AUC：薬剤の血漿中濃度を時間に対してグラフ化することにより測定され、バイオアベイラビリティーを示す）、化合物の半減期（ｔ1/2）、並びに最大濃度時点を測定することにより、決定することができる。
【０２５３】
癌などの増殖性疾患を予防または治療する効果は、例えば、本発明の組合せ治療薬が、増殖性疾患の１以上の症状を軽減する、癌細胞の増殖を低減する、癌細胞の拡大を抑制する、もしくは腫瘍のサイズを縮小する能力を検定することにより証明することができる。感染性疾患を予防または治療する効果は、例えば、本発明の組合せ治療薬が、感染性疾患の１以上の症状を軽減する、感染因子の複製を低減する、もしくは感染因子の拡大を抑制する能力を検定することにより証明することができる。心血管疾患を予防または治療する効果は、例えば、本発明の組合せ治療薬が、心血管疾患の１以上の症状を軽減する、血管の閉塞を低減する、もしくは呼吸を改善する能力を検定することにより証明することができる。
【０２５４】
自己免疫疾患を予防または治療する効果は、例えば、本発明の組合せ治療薬が、自己免疫疾患の１以上の症状を軽減する、平均絶対リンパ球数を変化させる、Ｔ細胞増殖を低減する、自己抗体を低減する、もしくは１以上の特定のサイトカインプロファイルをモジュレートする能力を検定することにより証明することができる。炎症性疾患を予防または治療する効果は、例えば、本発明の組合せ治療薬が、炎症性疾患の１以上の症状を軽減する、Ｔ細胞活性化を低減する、Ｔ細胞増殖を低減する、１以上のサイトカインプロファイルをモジュレートする、サイトカイン産生を抑制する、関節、器官もしくは組織の炎症を軽減する、あるいは、クオリティ・オブ・ライフを改善する能力を検定することにより証明することができる。炎症性疾患活性の変化は、圧痛および腫脹のある関節の数、患者および医師による痛みおよび疾患活性の総合スコア、並びにESR/CRPにより評価することができる。構造的関節損傷の進行は、手、手首、および足のＸ線の定量的スコアリング（シャープ法）により評価することができる。炎症性疾患を有するヒトの機能的状態の変化は、健康評価質問表（Health Assement Questionnaire：HAQ）を用いて評価し、クオリティオブライフの変化はSF-36で評価することができる。
【０２５５】
５．８．抗体の作製方法
免疫特異的に抗原に結合する抗体は、当分野で知られるどの抗体合成方法（特に、化学的合成、または好ましくは組換え発現方法）でも作製することができる。
【０２５６】
抗原に免疫特異的なポリクローナル抗体は、当分野で公知の様々な方法により作製することができる。例えば、ヒト抗原を様々な宿主動物（限定するものではないが、ウサギ、マウス、ラットなど）に投与することにより、ヒト抗原に特異的なポリクローナル抗体を含む血清の生産を誘発することができる。各種アジュバントを用いることにより、宿主種に応じて、免疫応答を高めることができ、このようなアジュバントとして、限定するものではないが、以下のものが挙げられる：フロイント（完全および不完全）アジュバント、無機ゲル（水酸化アルミニウムなど）、界面活性物質（リソレシチンなど）、プルロニックポリオール、ポリアニオン、ペプチド、油性乳濁液、キーホールリンペットヘモシアニン、ジニトロフェノール、並びに潜在的に有用なヒトアジュバント、例えば、BCG（カルメット−ゲラン桿菌）および挫瘡菌（Corynebacterium parvum）。このようなアジュバントは当分野ではよく知られている。
【０２５７】
モノクローナル抗体は、当分野で知られる非常に多様な方法（ハイブリドーマ、組換え体、ファージ展示法の使用、もしくはこれらの組合せ）を用いて、作製することができる。例えば、当分野では公知であり、例えば、Harlowら、Antibodies : A Laboratory Manual,（Cold Spring Harbor Laboratory Press, 第2版1988）；Hammerlingら、in: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681（Elsevier, N. Y. , 1981）（これらの文献は参照としてその全文を本明細書に組み込む）に教示されているものを含むハイブリドーマ方法を用いて、モノクローナル抗体を作製することができる。本発明で用いる「モノクローナル抗体」という用語は、ハイブリドーマ法により作製された抗体に限定されるわけではない。用語「モノクローナル抗体」は、単一のクローン（真核、原核、もしくはファージクローンなど）に由来する抗体を意味するのであって、該抗体を作製する方法ではない。
【０２５８】
ハイブリドーマ法を用いて特定の抗体を作製およびスクリーニングする方法は常用であり、当分野ではよく知られている。簡単に説明すると、マウスを非マウス抗原で免疫感作し、免疫応答を検出する、例えば、マウス血清中に抗原に特異的な抗体を検出したら、マウスの脾臓を摘出し、脾細胞を単離する。次に、公知の方法により脾細胞を好適な骨髄腫細胞（例えば、ATCCから入手可能な細胞系SP20由来の細胞）と融合させる。限界希釈によりハイブリドーマを選択およびクローン化する。続いて、本発明のポリペプチドと結合することができる抗体を分泌する細胞について、当分野で公知の方法によりハイブリドーマクローンをアッセイする。陽性ハイブリドーマクローンでマウスを免疫感作することにより、通常、高レベルの抗体を含む腹水を作製することができる。
【０２５９】
従って、本発明は、本明細書に開示した抗体を分泌するハイブリドーマ細胞を培養することを含む方法により作製されるモノクローナル抗体および抗体を作製する方法であって、その際、上記ハイブリドーマは、非マウス抗原で免疫感作したマウスから単離した脾細胞を骨髄腫細胞と融合させた後、融合により得られたハイブリドーマをスクリーニングすることにより、抗原と結合することができる抗体を分泌するハイブリドーマクローンを得る、上記方法を提供する。
【０２６０】
特定のエピトープを認識する抗体フラグメントは、当分野で知られるどの方法でも作製することができる。例えば、本発明のFabおよびF(ab’)2フラグメントは、パパイン（Fabフラグメントを作製する場合）またはペプシン（F(ab’)2フラグメントを作製する場合）のような酵素を用いて、免疫グロブリン分子のタンパク質分解切断により作製することができる。F(ab’)2フラグメントは、可変領域、軽鎖定常領域および重鎖のCH1ドメインを含む。さらに、当分野では公知の様々なファージ展示法を用いて抗体を作製することもできる。
【０２６１】
ファージ展示法では、機能的抗体ドメインは、これらをコードするポリヌクレオチド配列を担持するファージ粒子の表面に展示される。特に、VHおよびVLドメインをコードするDNA配列は動物cDNAライブラリー（例：患部組織のヒトまたはマウスcDNAライブラリー）から増幅する。VHおよびVLドメインをコードするDNAをPCRによりscFvリンカーと一緒に組み換えた後、ファージミドベクターにクローン化する。ベクターを大腸菌にエレクトロポレーションし、この大腸菌をヘルパーファージに感染させる。これらの方法で用いるファージは、典型的には、fdおよびM13などの繊維状ファージであり、VHおよびVLドメインは通常、ファージ遺伝子IIIまたは遺伝子VIIIのいずれかと、組換えにより融合させる。特定の抗原と結合する抗原結合ドメインを発現するファージは、抗原を用いて、例えば、標識した抗原、または固体表面もしくはビーズに結合または捕捉された抗原を用いて、選択または同定することができる。本発明の抗体を作製するのに用いることができるファージ展示法の例として、以下の文献に開示されているものが挙げられる：Brinkmanら、1995, J. Immunol. Methods 182: 41-50；Amesら、1995, J. Immunol. Methods 184: 177-186；Kettleborough ら、1994, Eur. J. Immunol. 24: 952-958；Persicら、1997, Gene 187: 9-18；Burtonら、1994, Advances in Immunology 57: 191-280；PCT出願番号PCT/GB91/O1 134；PCT公開番号WO 90/02809、WO 91/10737、WO 92/01047、WO 92/18619、WO 93/1 1236、WO 95/15982、WO 95/20401、およびW097/13844；並びに米国特許第5,698,426号、第5,223,409号、第5,403,484号、第5,580,717号、第5,427,908号、第5,750,753号、第5,821,047号、第5,571,698号、第5,427,908号、第5,516, 637号、第5,780,225号、第5,658,727号、第5,733,743号および第5,969,108号（これらの各々は、参照としてその全文を本明細書に組み込む）。
【０２６２】
前記参照文献に記載されているように、ファージ選択の後、ファージから抗体コード領域を単離し、全抗体（ヒト抗体、もしくはその他の所望の抗原結合フラグメントなど）を作製し、例えば、以下に示すように、これらを所望の宿主（哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母、および細菌など）に発現させることができる。Fab、Fab’およびF(ab’)2フラグメントを組換えにより作製する方法は、以下の文献に開示されたものなど当分野では公知の方法を用いて実施することができる：PCT公開番号WO 92/22324；Mullinaxら、1992, BioTechniques 12 (6): 864-869；Sawaiら、1995, AJRI 34: 26-34；並びに Betterら、1988, Science 240: 1041-1043（これらの各々は、参照としてその全文を本明細書に組み込む）。
【０２６３】
全抗体を作製するために、PCRプライマー（VHまたはVLヌクレオチド配列、制限部位、制限部位を保護するための隣接配列など）を用いて、scFvクローン中にVHまたはVL配列を増幅することができる。当業者には公知のクローニング法を用いて、PCR増幅VHドメインは、VH定常領域（例：ヒトγ4定常領域）を発現するベクターにクローン化し、PCR増幅VLドメインは、VL定常領域（例：ヒトκまたはλ定常領域）を発現するベクターにクローン化することができる。好ましくは、VHまたはVLドメインを発現するベクターは、EF-1αプロモーター、分泌シグナル、可変ドメインのクローニング部位、定常ドメイン、並びにネオマイシンのような選択マーカーを含む。また、必要な定常領域を発現する１つのベクターにVHおよびVLドメインをクローン化することも可能である。当業者には公知の方法を用いて、重鎖変換ベクターおよび軽鎖変換ベクターを細胞系に共トランスフェクションすることにより、全長抗体（例：IgG）を発現する安定または一過性細胞系を作製する。
【０２６４】
特定の用途（ヒトにおける抗体のin vivo使用およびin vitro検出アッセイなど）では、ヒトまたはキメラ抗体を用いるのが好ましいこともある。完全にヒトの抗体は、ヒト被験者の治療に特に望ましい。ヒト抗体は、当分野では公知の様々な方法（例えば、ヒト免疫グロブリン配列からの抗体ライブラリーを用いた前記のファージ展示方法など）により作製することができる。また、米国特許第4,444, 887号および4,716,111号；並びに PCT公開番号WO 98/46645、WO 98/50433、WO 98/24893、W098/16654、WO 96/34096、WO 96/33735および WO 91/10741も参照のこと（これらの各々は、参照としてその全文を本明細書に組み込む）。
【０２６５】
ヒト抗体は、機能的内性免疫グロブリンを発現することはできないが、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現することができるトランスジェニックマウスを用いて作製することもできる。例えば、ヒト重鎖および軽鎖免疫グロブリン遺伝子複合体をランダムに、または相同組換えによりマウス胚性幹細胞に導入することができる。あるいは、ヒト重鎖および軽鎖遺伝子に加えて、ヒト可変領域、定常領域、および多様性領域をマウス胚性幹細胞に導入してもよい。相同組換えにより、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の導入で、マウス重鎖および軽鎖免疫グロブリン遺伝子を別々または同時に機能しなくさせることができる。特に、JH領域の同型接合欠失により、内性抗体産生が阻止される。改変された胚性幹細胞を増殖させ、胚盤胞にマイクロインジェクションすることにより、キメラマウスを作出する。次に、このキメラマウスを飼育して、ヒト抗体を発現する同型接合子孫を作出する。このトランスジェニックマウスを、通常の方法により、選択した抗原（例えば、本発明のポリペプチドの全部または一部）で免疫感作する。この抗原に対するモノクローナル抗体は、通常のハイブリドーマ法を用いて、免疫感作済トランスジェニックマウスから得ることができる。トランスジェニックマウスに含まれるヒト免疫グロブリントランスジーンは、Ｂ細胞分化の間再構成し、その後、クラススイッチおよび体細胞突然変異を経る。従って、このような方法を用いて、治療に有用なIgG、IgA、IgMおよびIgE抗体を作製することができる。このヒト抗体を作製する方法の概要については、LonbergおよびHuszar（1995, Int, Rev. Immunol. 13: 65-93）を参照されたい。ヒト抗体およびヒトモノクローナル抗体を作製する方法、並びにこのような抗体を作製するプロトコルについてさらに詳しくは、例えば、PCT公開番号WO98/24893、WO96/34096および WO96/33735；米国特許第5,413,923号、第5,625,126号、第5,633,425号、第5,569,825号、第5,661,016号、第5,545,806号、第5,814,318号、および第5,939,598号を参照されたい（これらは、参照としてその全文を本明細書に組み込む）。加えて、Abgenix, Inc.（フリーモント、CA
）およびGenpharm（サンホセ、CA）のような会社は、前述したものと類似した方法を用いて、選択した抗原に対するヒト抗体を提供することができる。
【０２６６】
キメラ抗体は、抗体の各部分が、それぞれ異なる免疫グロブリン分子に由来する分子であり、例えば、ヒト抗体由来の可変領域および非ヒト免疫グロブリン定常領域を有する抗体がある。キメラ抗体の作製方法は当分野では公知である。例えば、Morrison, 1985, Science 229: 1202；Oiら、1986, BioTechniques 4: 214；Gilliesら、1989, J. Immunol. Methods 125: 191-202；並びに米国特許第5,807, 715号、第4,816,567号、および第4,816,397号を参照されたい（これらは、参照としてその全文を本明細書に組み込む）。ヒト種由来の１以上のCDRと、非ヒト免疫グロブリン分子由来のフレームワーク領域を含むキメラ抗体は、当分野では公知の様々な方法を用いて作製することができ、このような方法として、例えば、以下のものが挙げられる：CDR移植（欧州特許第239,400号； PCT 公開番号WO 91/09967；および米国特許第5,225,539号、第5,530,101号、および第5,585,089号）、ベニアリングまたは表面再形成（欧州特許第592,106号、欧州特許第519,596号； Padlan, 1991, Molecular Immunology 28 (4/5): 489-498； Studnickaら、1994, Protein Engineering 7 (6): 805-814；並びにRoguskaら、1994, PNAS 91: 969-973）並びにチェーン・シャッフリング（米国特許第5,565, 332号）。多くの場合、フレームワーク領域におけるフレームワーク残基をCDRドナー抗体からの対応残基で置換することにより、抗原結合を改変、好ましくは、改善する。これらフレームワーク置換物は、当分野でよく知られる方法、例えば、CDRとフレームワーク残基の相互作用をモデル化して、抗原結合に重要なフレームワーク残基を識別し、配列の比較によって特定位置の稀なフレームワーク残基を識別することにより、同定することができる（例えば、Queenら、米国特許第5,585,089号；およびRiechmannら、1988, Nature 332: 323を参照されたい。尚、これらは、参照としてその全文を本明細書に組み込む）。
【０２６７】
さらに、当業者には公知の方法により、抗原と免疫特異的に結合する抗体を用いて、抗原を「模倣」する抗イディオタイプ抗体を作製することもできる（例えば、Greenspanおよび Bona, 1989, FASEB J. 7 (5): 437- 444；およびNissinoff, 1991, J. Immunol. 147 (8): 2429-2438を参照）。
【０２６８】
５．８．１．抗体をコードするポリヌクレオチド配列
本発明は、抗原と免疫特異的に結合する抗体もしくはそのフラグメントをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを提供する。本発明はまた、高いストリンジェンシー、中間もしくは低いストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件（すでに定義した通り）下で、本発明の抗体をコードするポリヌクレオチドとハイブリダイズするポリヌクレオチドも包含する。
【０２６９】
ポリヌクレオチドの取得、およびポリヌクレオチドのヌクレオチド配列の決定は、当業者には公知のどの方法でも実施することができる。抗原に免疫特異的な抗体のヌクレオチド配列は、例えば、文献もしくはデータベース（GenBankなど）から取得することができる。特定のアミノ酸をコードするのが知られているヌクレオチドコドンを集合させて、抗体をコードする核酸を作製することもできる。このような抗体をコードするポリヌクレオチドは、化学的に合成したオリゴヌクレオチドから集合させることができる（例：Kutmeierら、1994, Bio Techniques 17:242）が、これは簡単にいうと、抗体をコードする配列部分を含む重複オリゴヌクレオチドを合成し、該オリゴヌクレオチドをアニーリングおよび連結させた後、連結させたオリゴヌクレオチドをPCRにより増幅することを含んでなる。
【０２７０】
あるいは、抗体をコードするポリヌクレオチドを好適な供給源由来の核酸から作製することもできる。特定の抗体をコードする核酸を含むクローンは入手できないが、抗体分子の配列がわかっている場合には、免疫グロブリンをコードする核酸を化学的に合成するか、あるいは、好適な供給源（例：抗体cDNAライブラリー、または、抗体を発現する組織または細胞（例えば、本発明の抗体を発現するように選択されたハイブリドーマ細胞）から作製したcDNAライブラリー、もしくはそれらから単離した核酸、好ましくは、ポリＡ＋RNA）から取得することができ、これは、該配列の3’および5’末端にハイブリダイズ可能な合成プライマーを用いたPCR増幅、あるいは、特定の遺伝子配列に特異的なオリゴヌクレオチドを用いたクローニングにより例えば、抗体をコードするcDNAライブラリーからのcDNAクローンを同定することによって、達成される。PCRにより作製される増幅核酸は、当分野ではよく知られるいずれかの方法を用いて、複製可能なクローニングベクターにクローン化することができる。
【０２７１】
抗体のヌクレオチド配列が決定されたら、ヌクレオチド配列を操作する当業界では公知の方法を用いて、該抗体のヌクレオチド配列を操作することにより、様々なアミノ酸配列を有する抗体を作製する、例えば、アミノ酸置換、欠失、および／または挿入を形成させることができ、このような方法として、例えば、組換えDNA法、部位特異的突然変異誘発、PCRなどがある（例えば、下記文献に記載される方法を参照されたい：Sambrook ら、1990, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 第２版、Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY、およびAusubelら編、1998, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY；両文献共に、参照としてその全文を本明細書に組み込む）。
【０２７２】
具体的実施形態では、通常の組換えDNA法を用いて、１以上のCDRをフレームワーク領域内に挿入する。フレームワーク領域は天然に存在するものまたはコンセンサスフレームワーク領域のいずれでもよく、好ましくは、ヒトフレームワーク領域である（ヒトフレームワーク領域の一覧については例えば、Chothiaら、1998, J. Mol. Biol. 278: 457-479を参照）。好ましくは、フレームワーク領域とCDRの組合せにより作製されたポリヌクレオチドは、特定の抗原（例えば、癌細胞抗原）と特異的に結合する抗体をコードする。また、すでに述べたように、１以上のアミノ酸置換をフレームワーク領域内で形成させるのが好ましく、また、該アミノ酸置換が抗体とその抗原との結合を改善するのが好ましい。加えて、このような方法を用いて、鎖内ジスルフィド結合に関与する１以上の可変領域システイン残基のアミノ酸置換または欠失を形成させることにより、１以上の鎖内ジスルフィド結合を有しない抗体分子を取得することができる。ポリヌクレオチドに対する上記以外の改変も本発明に包含され、当業者には公知である。
【０２７３】
５．８．２．抗体の組換え発現
免疫特異的に抗原に結合する抗体の組換え発現は、該抗体をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターの構築を必要とする。本発明の抗体分子をコードするポリヌクレオチドが得られたら、当業者には公知の方法を用いた組換えDNA法により、抗体分子の生産のためのベクターを作製することができる。例えば、米国特許第6,331,415号（この文献は、参照としてその全文を本明細書に組み込む）を参照されたい。従って、ヌクレオチド配列をコードする抗体を含むポリヌクレオチドを発現させることによりタンパク質を作製する方法を本明細書に記載する。当業者には公知の方法を用いて、抗体コード配列と適切な転写および翻訳制御シグナルを含む発現ベクターを構築することができる。このような方法として、例えば、in vitro組換えDNA法、合成方法、並びにin vivo遺伝子組換えがある。従って、本発明は、プロモーターに機能的に連結された、本発明に開示の抗体分子、抗体の重鎖または軽鎖、抗体もしくはその一部の重鎖もしくは軽鎖可変ドメイン、または重鎖もしくは軽鎖CDRをコードするヌクレオチド配列を含む、複製可能なベクターを提供する。このようなベクターは、抗体分子の定常領域をコードするヌクレオチド配列（例えば、PCT公開番号WO 86/05807；PCT 公開番号WO 89/01036；および米国特許第5,122, 464号を参照）も含み、抗体の可変ドメインは、全重鎖または全軽鎖、あるいは、全重鎖および軽鎖の両方を発現させるためのベクターにクローン化することができる。
【０２７４】
通常の方法により発現ベクターを宿主細胞に転移させた後、このトランスフェクションした細胞を通常の方法で培養することにより、本発明の抗体を作製する。このように、本発明は、異種プロモーターに機能的に連結された、抗体またはそのフラグメント、その重鎖または軽鎖、その部分、あるいは、一本鎖抗体をコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞を包含する。二本鎖抗体の発現に好ましい実施形態では、以下に詳細に説明するように、重鎖または軽鎖の両方をコードするベクターを宿主細胞に共発現させることにより、全免疫グロブリン分子を発現させることができる。
【０２７５】
様々な宿主発現ベクター系を用いて、抗体分子を発現させることができる（例えば、米国特許第5,807,715号参照）。このような宿主発現系は、目的のコード配列が生産され、そして精製されるビヒクルを意味するが、適切なヌクレオチドコード配列で形質転換またはトランスフェクションされると、本発明の抗体分子をin situで発現しうる細胞も意味する。これらの非制限的例を以下に挙げる：抗体コード配列を含む、組換えバクテリオファージDNA、プラスミドDNAまたはコスミドDNA発現ベクターで形質転換した細菌（例：大腸菌および枯草菌）などの微生物；抗体コード配列を含む、組換え酵母発現ベクターで形質転換した酵母（例：サッカロミセス・ピキア）；抗体コード配列を含む組換えウイルス発現ベクター（例：バキュロウイルス）に感染させた昆虫細胞系；抗体コード配列を含む、組換えウイルス発現ベクター（例：カリフラワーモザイクウイルス、CaMV；タバコモザイクウイルス、TMV）に感染させた、または組換えプラスミド発現ベクター（例：Tiプラスミド）で形質転換した植物細胞系；或いは、哺乳動物細胞のゲノム由来のプロモーター（例：メタロチオネインプロモーター）または哺乳動物ウイルス由来のプロモーター（例：アデノウイルス後期プロモーター；ワクシニアウイルス7.5Kプロモーター）を含む組換え発現構築物を保有する哺乳動物細胞系（例：COS、CHO、BHK、293、NS0、および3T3細胞）。組換え抗体分子の発現には、好ましくは大腸菌のような細菌細胞、さらに好ましくは真核生物細胞（特に全組換え抗体分子の発現の場合）を用いる。例えば、ヒトサイトメガロウイルス由来の主要即時型初期遺伝子プロモーターエレメントのようなベクターと組み合わせた、チャイニーズハムスター卵巣細胞（CHO）などの哺乳動物細胞が、抗体の有効な発現系である（Foeckingら、1986, Gene 45: 101；およびCockettら、1990, Bio/Technology 8:2）。具体的実施形態では、１以上の抗原に免疫特異的に結合する抗体をコードするヌクレオチド配列の発現は、構成性プロモーター、誘導性プロモーターもしくは組織特異的プロモーターにより調節される。
【０２７６】
細菌系では、発現ベクターの数は、発現させる抗体分子の意図する用途に応じて選択するのが有利である。例えば、抗体分子の医薬組成物調製のために、大量のタンパク質を作製したい場合には、容易に精製される高レベルの融合タンパク質産物の発現を指令するベクターが望ましい。このようなベクターとして、限定するものではないが、以下のものが挙げられる：大腸菌発現ベクターpUR278（Rutherら、1983, EMBO 12:1791）（この場合、lacZコード領域を含むフレーム内のベクターに、抗体コード配列を個別に連結させることにより、融合タンパク質を作製することができる）；pINベクター（InouyeおよびInouye, 1985, Nucleic Acids Res. 13: 3101-3109；Van HeekeおよびSchuster, 1989, J. Biol. Chem. 24: 5503-5509）など。pGEXベクターを用いて、グルタチオンS-トランスフェラーゼ（GST）を含む融合タンパク質として外来ポリペプチドを発現させることもできる。一般に、このような融合タンパク質は可溶性であり、マトリックスグルタチオンアガロースビーズへの吸着および結合の後、遊離グルタチオンの存在下での溶離により、溶解した細胞から容易に精製することができる。pGEXベクターは、トロンビンまたはXa因子プロテアーゼ切断部位を含むように設計し、これにより、クローン化した標的遺伝子産物をGST部分から切り離すことができる。
【０２７７】
昆虫系では、オートグラファ・カリフォルニカ核多角体病ウイルス（AcNPV）をベクターとして用いて外来遺伝子を発現させる。ウイルスは、スポドプテラ・フルギペルダ（Spodoptera frugiperda）細胞で増殖させる。抗体コード配列をウイルスの非必須領域（例えば、ポリヘドリン遺伝子）に個別にクローン化し、AcNPVプロモーター（例えば、ポリヘドリンプロモーター）の制御下に置くことができる。
【０２７８】
哺乳動物の宿主細胞では、多数のウイルス発現系を用いることができる。アデノウイルスを発現ベクターとして用いる場合には、目的の抗体コード配列をアデノウイルス転写／翻訳制御複合体（例えば、後期プロモーターおよび三部分(tripartite)リーダー配列に連結させる。次に、このキメラ遺伝子をin vitroまたはin vivo組換えによりアデノウイルスゲノムに挿入する。ウイルスゲノムの非必須領域（例：領域E１またはE3）への挿入により、生存能があり、かつ被感染宿主において抗体分子を発現させることができる組換えウイルスが得られる（例えば、LoganおよびShenk, 1984, Proc., Natl. Acad. Sci. USA 8 1: 355-359参照）。また、挿入した抗体コード配列の効率的な翻訳のために、特定の開始シグナルが必要なこともある。これらのシグナルは、ATG開始コドンと隣接配列を含む。さらに、全挿入片の翻訳を確実にするために、開始コドンは、所望のコード配列のリーディングフレームと同じ位相でなければならない。これらの外因性翻訳制御シグナルおよび開始コドンは、天然および合成の様々な起原に由来するものでよい。発現の効率は、適切な転写エンハンサーエレメント、転写ターミネーターなどを含ませることにより高めることができる（例えば、Bittnerら、1987, Methods in Enzymol. 153: 51-544参照）。
【０２７９】
加えて、挿入した配列の発現をモジュレートする、または所望する特定の様式で遺伝子産物を改変およびプロセッシングする宿主細胞株を選択することもできる。タンパク質産物のこのような改変（例：グリコシル化）およびプロセッシング（例：切断）は、該タンパク質の機能に重要であると考えられる。それぞれの宿主細胞は、タンパク質および遺伝子産物の翻訳後プロセッシングおよび改変について特有かつ特殊な機構をもっている。適切な細胞系または宿主系を選択することより、発現される外来タンパク質の正確な改変およびプロセッシングを確実にすることができる。このためには、一次転写産物の適正なプロセッシング、グリコシル化、および遺伝子産物のリン酸化のための細胞機構を有する真核生物宿主を用いることができる。このような哺乳動物宿主細胞として、限定するものではないが、以下のものが挙げられる：CHO、VERY、BHK、Hela、COS、MDCK、293、3T3、W138、BT483、Hs578T、HTB2、BT20およびT47D、NSO（免疫グロブリン鎖をまったく内在生産しないマウス骨髄腫細胞系）、CRL7030およびHsS78Bst細胞。
【０２８０】
組換えタンパク質の長期高収率生産のためには、安定した発現が好ましい。例えば、抗体分子を安定して発現する細胞系を作製することができる。ウイルスの複製起点を含む発現ベクターを用いるのではなく、適切な発現制御エレメント（例：プロモーター、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位など）により制御されたDNAや、選択マーカーで宿主細胞を形質転換することができる。外来DNAの導入後、作製した細胞を濃縮培地中で１〜２日増殖させてから、選択培地に移す。組換えプラスミド中の選択マーカーは、選択に対する耐性を賦与し、これによって、細胞はプラスミドをその染色体に安定に組み込み、増殖してフォーカスを形成するが、このフォーカスを細胞系にクローン化し、増殖させることができる。この方法を用いて、抗体分子を発現させる細胞系を作製すれば有利である。このように作製された細胞系は、特に、抗体分子と直接または間接的に相互作用する組成物のスクリーニングおよび評価に有用である。
【０２８１】
限定するものではないが、以下に挙げるようないくつかの選択系を使用することができる：単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ遺伝子（Wiglerら、1977, Cell 11: 223）、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ遺伝子（SzyblaskaおよびSzyblaski、1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 48: 202）、並びにアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ遺伝子（Lowyら、1980, Cell 22:8-17）を、それぞれ、tk-、hgprt-またはaprt-細胞に使用することができる。また、代謝拮抗物質耐性を下記の遺伝子の選択基準として用いるができる：メトトレキセートに耐性を賦与するdhfr（Wiglerら、1980, Natl. Acad. Sci. USA 77:357；O'Hareら、1981, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78: 1527）；ミコフェノール酸に耐性を賦与するgpt（MulliganおよびBerg, 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78: 2072）；アミノグリコシドG-418に耐性を賦与する neo (WuおよびWu, 1991, Biotherapy 3: 87-95；Tolstoshev, 1993, Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 32: 573-596；Mulligan, 1993, Science 260: 926-932；並びにMorganおよびAnderson, 1993, Ann. Rev. Biochem. 62: 191-217；May, 1993, TIB TECH 11 (5): 155-2 15)；並びにヒグロマイシンに耐性を賦与する hygro（Santerreら、1984, Gene 30: 147）。組換えDNA法において一般に知られる方法を常用のように用いて、所望の組換えクローンを選択することができ、このような方法は、例えば、以下の文献に記載されている：Ausubelら(編), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (1993)；Kriegler, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY (1990)；並びに、第12および13章、 Dracopoliら(編)、Current Protocols in Human Genetics, John Wiley & Sons, NY (1994)；Colberre-Garapinら、1981, J. Mol. Biol. 150: 1（これらは、参照としてその全文を本明細書に組み込む）。
【０２８２】
抗体分子の発現レベルは、ベクター増幅により高めることができる（詳しくは、BebbingtonおよびHentschel, The use of vectors based on gene amplification for the expression of cloned genes in mammalian cells in DNA cloning, 第3巻. (Academic Press, ニューヨーク1987)参照）。抗体を発現するベクター系におけるマーカーが増幅可能である場合には、宿主細胞の培養物に存在する阻害剤のレベルが増大すれば、マーカー遺伝子のコピー数も増加する。増幅された領域は抗体遺伝子を伴うため、抗体の生産も増加する（Crouseら、1983, Mol. Cell. Biol. 3: 257）。
【０２８３】
宿主細胞は、本発明の２つの発現ベクター：重鎖由来のポリペプチドをコードする第１のベクターと、軽鎖由来のポリペプチドをコードする第２のベクターで共トランスフェクションすることができる。これら２つのベクターは、重鎖および軽鎖ポリペプチドの等しい発現を可能にする同一の選択マーカーを含んでいてもよい。あるいは、重鎖および軽鎖ポリペプチドの両方をコードし、かつ、発現することができる単一のベクターを用いてもよい。このような場合、重鎖の前に軽鎖を配置することにより、有毒な遊離(toxic free)重鎖の過剰状態を防止しなければならない（Proudfoot, 1986, Nature 322: 52；およびKohler, 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77: 2 197）。重鎖および軽鎖のコード配列はcDNAまたはゲノムDNAを含んでいてもよい。
【０２８４】
組換え発現により抗体を生産したら、当分野で知られる免疫グロブリン分子の精製方法：例えば、クロマトグラフィー（例：イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、特に、プロテインAアフィニティークロマトグラフィー後の特定の抗原に対するアフィニティークロマトグラフィー、およびサイジングカラムクロマトグラフィー）、遠心分離、示差可溶性、もしくはその他の標準的なタンパク質精製方法のいずれによっても、この抗体を精製することができる。さらに、本明細書に記載した、もしくは当分野では公知の異種ポリペプチド配列に、抗体もしくはそのフラグメントを融合させることにより、精製を促進することも可能である。
【０２８５】
５．８．３．半減期が長い抗体
本発明は、in vivoでの半減期が長い、抗原に免疫特異的に結合する抗体を包含する。特に、本発明は、動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトにおいて、３日以上、７日以上、10日以上、好ましくは15日以上、25日以上、30日以上、35日以上、40日以上、45日以上、２ヶ月以上、３ヶ月以上、４ヶ月以上、もしくは５ヶ月以上の半減期を有する、抗原に免疫特異的に結合する抗体を包含する。
【０２８６】
in vivoで抗体（例：モノクローナル抗体、一本鎖抗体およびFabフラグメント）の血清循環を延長するためには、例えば、抗体のN-またはC-末端との部位特異的な結合により、あるいは、リシン残基に存在するイプシロン−アミノ基を介してのいずれかにより、高分子量ポリエチレングリコール（PEG）のような不活性のポリマー分子を、多機能リンカーを含むもしくは含まない抗体に結合させることができる。生物学的活性の喪失が最小限に抑えられる直鎖状もしくは分枝鎖状ポリマー誘導体化を用いる。結合度をSDS-PAGEおよび質量分析法によって厳密にモニタリングすることにより、PEG分子と抗体との適正な結合を確実なものにする。サイズ排除またはイオン交換クロマトグラフィーにより、抗体−PEGコンジュゲートから未反応PEGを分離することができる。当業者には公知の方法、例えば、本明細書に記載する免疫アッセイにより、PEG誘導体化抗体を結合活性およびin vivo効率について試験することができる。
【０２８７】
in vivoでの半減期が長い抗体はまた、１以上のアミノ酸改変（すなわち、置換、挿入もしくは欠失）をIgG定常ドメイン、もしくはそのFcRn結合断片（好ましくは、Fcまたはヒンジ-Fcドメイン断片）に導入して、作製することも可能である。例えば、国際公開番号WO98/23289；国際公開番号WO97/34631；および米国特許第6,277, 375号（これらの各々は、参照としてその全文を本明細書に組み込む）を参照のこと。
【０２８８】
５．８．４．抗体コンジュゲート
本発明は、融合タンパク質を作製するための、異種ポリペプチド（もしくはその断片、好ましくは、該ポリペプチドの少なくとも５、少なくとも10、少なくとも20、少なくとも30、少なくとも40、少なくとも50、少なくとも60、少なくとも70、少なくとも80、少なくとも90、もしくは少なくとも100個の連続したアミノ酸）と、組換えにより融合したまたは化学的に結合した（共役および非共役結合の両方を含む）抗原に免疫特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合フラグメントを包含する。融合は必ずしも直接である必要はなく、リンカー配列を介するものであってもよい。例えば、抗体を用いて、該抗体を特定の細胞表面受容体（例：CD4およびCD8）に特異的な抗体と融合またはコンジュゲートすることにより、in vitroもしくはin vivoのいずれかで、特定の細胞型（例：Ｔ細胞）に異種ポリペプチドをターゲッティングすることができる。
【０２８９】
本発明はまた、精製を容易にするための、ペプチドのようなマーカー配列と融合した抗原に免疫特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合フラグメントを包含する。好ましい実施形態では、マーカーアミノ酸配列は、ヘキサ−ヒスチジンペプチド、中でも、pQEベクターに付与されるタグ（QIAGEN, Inc., 9259 Eton Avenue, Chatsworth, CA, 91311）であり、それらの多くは市販されている。Gentzら、1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 821-824に記載されているように、例えば、ヘキサ−ヒスチジンは、融合タンパク質の簡便な精製を可能にする。精製に有用なその他のペプチドタグとして、限定するものではないが、血球凝集素”HA”タグ（インフルエンザ血球凝集素タンパク質由来のエピトープに対応する）（Wilsonら、1984, Cell 37: 767）および「フラグ」タグが挙げられる。
【０２９０】
さらに、本発明は、治療利益を有することが見込まれる物質と結合した抗原に免疫特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合フラグメントを包含する。抗原に免疫特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、治療成分（細胞毒、例えば、静細胞または細胞致死因子、治療利益を有することが見込まれる物質、あるいは、放射性金属イオン、例えば、α線放射体）と結合することができる。細胞毒または細胞傷害性因子には、細胞に有害なあらゆる因子が含まれる。細胞毒または細胞傷害性因子の非制限的例を以下に挙げる：パクリタキセル、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルチシン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、マイトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、1-デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、プロマイシン並びにそれらの類似体もしくは相同体。治療利益を有することが見込まれる薬剤として、限定するものではないが、以下のものが挙げられる：代謝拮抗物質（例：メトトレキセート、6-メルカプトプリン、6-チオグアニン、シタラビン、5-フルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化剤（例：メクロレタミン、チオエパクロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（BSNU）およびロムスチン（CCNU）、シクロトスファミド、ブスルファン、ジブロモマニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、並びにシスジクロロジアミン白金（II）（DDP）シスプラチン）、アントラサイクリン（例：ダウノルビシン（以前はダウノマイシン）およびドキソルビシン）、抗生物質（例：ダクチノマイシン（以前はアクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、並びにアントラマイシン（AMC））、並びに細胞分裂抑制剤（例：ビンクリスチンおよびビンプラスチン）。
【０２９１】
さらに、抗原に免疫特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、所与の生体応答を改変する治療薬または薬物成分と結合させることもできる。治療利益を有することが見込まれる薬剤または薬物成分が、伝統的な化学治療薬に限定されると解釈すべきではない。例えば、薬物成分は、所望の生物学的活性を有するタンパク質もしくはポリペプチドでもよい。このようなタンパク質として、例えば、以下のものが挙げられる：毒素、例えば、アブリン、リシンＡ、シュードモナス外毒素、もしくはジフテリア毒素；タンパク質、例えば、腫瘍壊死因子、インターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγ、神経増殖因子（NGF）、血小板由来増殖因子（PDGF）、組織プラスミノーゲン活性化因子（TPA）、アポトーシス因子（例：TNF-α、TNF-β、AIM I（国際公開番号WO97/33899参照）、AIM II（国際公開番号WO97/34911参照）、Fasリガンド（Takahashiら、1994, J. Immunol., 6: 1567-1574）、並びにVEGF（国際公開番号WO99/23105参照）、血栓因子または抗血管形成因子（例：アンギオスタチンまたはエンドスタチン）；あるいは、生体応答改変物質、例えば、リンホカイン（例：IL-1、IL-2、IL-6、IL-10、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（GM-CSF））、並びに、顆粒球コロニー刺激因子（G-CSF）、もしくは成長因子（例：成長ホルモン（GH））。
【０２９２】
このような治療成分を抗体に結合させる方法はよく知られており、例えば、以下を参照されたい：Arnonら、"Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy", in Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy, Reisfeldら (編), pp. 243-56 (Alan R. Liss, Inc. 1985)；Hellstromら、"Antibodies For Drug Delivery", in Controlled Drug Delivery (第2版), Robinsonら(編), pp. 623-53 (Marcel Dekker, Inc. 1987)；Thorpe, "Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review", in Monoclonal Antibodies'84: Biological And Clinical Applications, Pincheraら (編), pp. 475-506(1985)；"Analysis, Results, And Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy", in Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy, Baldwinら (編), pp. 303-16 (Academic Press 1985)；並びにThorpeら、1982, Immunol. Rev. 62: 119-58。
【０２９３】
Segalにより米国特許第4,676, 980号（本明細書に参照として全文を組み込む）に記載されているように、抗原に免疫特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合フラグメントを第２の抗体と結合させることにより、抗体ヘテロコンジュゲートを形成させることができる。
【０２９４】
抗原に免疫特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合フラグメントを固体支持体に結合させてもよく、このことは、Ｔ細胞のような免疫細胞の精製に特に有用である。このような固体支持体としては、限定するものではないが、ガラス、セルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニルもしくはポリプロピレンが挙げられる。
【０２９５】
５．９．ポリペプチドもしくは融合タンパク質の作製方法
ポリペプチドおよび融合タンパク質は、標準的組換えDNA法またはタンパク質合成法、例えば、ペプチド合成装置の使用により調製することができる。例えば、ポリペプチドもしくは融合タンパク質をコードする核酸分子を通常の方法（自動化DNA合成装置を含む）により合成することができる。あるいは、アンカープライマーを用いて遺伝子断片のPCR増幅を実施することにより、２つの連続した遺伝子断片の間に、相補的突出部分を形成した後、これらをアニーリングおよび再増幅することにより、キメラ遺伝子配列を作製することができる（例えば、Current Protocols in Molecular Biology, Ausubelら編、John Wiley & Sons, 1992参照）。さらに、第１ポリペプチドをコードする核酸を、第２ポリペプチドを含む発現ベクターにクローン化して、第１ポリペプチドをフレーム内で第２ポリペプチドに連結させることも可能である。
【０２９６】
ポリペプチドを抗体の定常領域に融合または結合する方法は、当分野では公知である。例えば、以下の文献を参照されたい：米国特許第5,336,603号、第5, 622,929号、第5,359,046号、第5, 349,053号、第5,447,851号、第5,723,125号、第5,783,181号、第5,908,626号、第5,844,095号、第5,112,946号；欧州特許第307,434号；欧州特許第367,166号；欧州特許第394,827号；PCT公開番号WO91/06570、WO96/04388、WO96/22024、WO97/34631、およびWO99/04813；Ashkenaziら、1991, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88：10535-10539；Trauneckerら、1988, Nature, 331: 84-86；Zhengら、1995, J. Immunol. 154: 5590-5600；並びにVil ら、1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 11337-11341（これらは、参照としてその全文を本明細書に組み込む）。
【０２９７】
ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、当業者が利用可能ないかなる情報からも（すなわち、Genbankから、文献から、もしくは、常用のクローニングにより）取得することができる。ポリペプチドまたは融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列は、適切な発現ベクター、すなわち、挿入されたタンパク質コード配列の転写および翻訳に必要なエレメントを含むベクターに挿入することができる。本発明では様々な宿主ベクター系を用いて、タンパク質コード配列を発現させることができる。このような宿主ベクター系として、限定するものではないが、以下のものが挙げられる：ウイルス（例：ワクシニアウイルス、アデノウイルスなど）に感染させた哺乳動物細胞系；ウイルス（例：バキュロウイルス）に感染させた昆虫細胞系；微生物、例えば、酵母ベクターを含む酵母など；または、バクテリオファージ、DNA、プラスミドDNA、もしくはコスミドDNAで形質転換した細菌。ベクターの発現エレメントは、その強度および特異性が異なっている。使用する宿主ベクター系に応じて、多数の好適な転写および翻訳エレメントのいずれか１つを用いることができる。
【０２９８】
ポリペプチドまたは融合タンパク質の発現は、当業者に知られているどのプロモーターまたはエンハンサーエレメントでも制御することができる。融合タンパク質をコードする遺伝子の発現を制御するのに用いることができるプロモーターとして、限定するものではないが、以下のものが挙げられる：SV40初期プロモーター領域（BernoistおよびChambon,1981, Nature 290:304-310）、ラウス肉腫ウイルスの3’長末端反復に含まれるプロモーター（Yamamotoら、1980, Cell 22: 787- 797）、ヘルペスチミジンキナーゼプロモーター（Wagnerら、1981, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 78: 1441-1445）、メタロチオネイン遺伝子の調節配列（Brinsterら、1982, Nature 296: 39-42）、テトラサイクリン（Tet）プロモーター（Gossenら、1995, Proc. Nat. Acad. Sci. USA 89: 5547-5551）；原核細胞ベクター（例えば、βラクタマーゼプロモーターなど）（Villa-Kamaroffら、1978, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 75: 3727-3731）、もしくはtacプロモーター（DeBoerら、1983, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 80: 21-25；また、"Useful proteins from recombinant bacteria" in Scientific American, 1980, 242 : 74-94も参照）；ノパリンシンテターゼプロモーター領域を含む植物発現ベクター（Herrera-Estrellaら、Nature 303: 209-213）、またはカリフラワーモザイクウイルス35S RNAプロモーター（Gardnerら、1981, Nucl. Acids Res. 9: 2871）、および光合成酵素リブロースビスリン酸カルボキシラーゼのプロモーター（Herrera-Estrellaら、1984, Nature 310: 115-120）；酵母もしくはその他の真菌由来のプロモーターエレメント、例えば、Gal 4プロモーター、ADC（アルコールデヒドロゲナーゼ）プロモーター、PGKプロモーター（ホスホグリセロールキナーゼ）プロモーター、アルカリホスファターゼプロモーター、並びに、組織特異性を示し、トランスジェニック動物に使用されている下記の動物転写制御領域：膵臓の腺房細胞で活性のエラスターゼＩ遺伝子制御領域（Swiftら、1984, Cell 38: 639-646；Ornitzら、1986, Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 50: 399-409；MacDonald, 1987, Hepatology 7: 425- 515）；膵臓のβ細胞で活性のインスリン遺伝子制御領域（Hanahan, 1985, Narure 315: 115-122）、リンパ系細胞で活性の免疫グロブリン遺伝子制御領域（Grosschedlら、1984, Cell 38: 647-658；Adamesら、1985, Nature 318: 533-538；Alexanderら、1987, Mol. Cell. Biol. 7: 1436-1444）、精巣、乳房、リンパ系およびマスト細胞で活性のマウス乳腺癌ウイルス制御領域（Lederら、1986, Cell 45: 485-495）、肝臓で活性のアルブミン遺伝子制御領域（Pinkertら、1987, Genes and Devel. 1: 268-276）、肝臓で活性のαフェトプロテイン遺伝子制御領域（Krumlaufら、1985, Mol. Cell. Biol. 5: 1639-1648；Hammerら、1987, Science 235: 53- 58）；肝臓で活性のα1-アンチトリプシン遺伝子制御領域（Kelseyら、1987, Genes and Devel. 1: 161-171）、骨髄細胞で活性のβグロビン遺伝子制御領域（Mogramら、1985, Nature 315: 338-340；Kolliasら、1986, Cell 46: 89-94）；脳の希突起膠細胞で活性のミエリン塩基性タンパク質遺伝子制御領域（Readheadら、1987, Cell 48: 703-712）；骨格筋で活性のミオシン軽鎖-2遺伝子制御領域（Sani, 1985, Nature 314: 283-286）；ニューロン細胞で活性のニューロン特異的エノラーゼ（NSE）（Morelliら、1999, Gen. Virol. 80: 571-83）；ニューロン細胞で活性の脳由来神経栄養因子（BDNF）遺伝子制御領域（Tabuchiら、1998, Biochem. Biophysic. Res. Com. 253: 818-823）；星状細胞で活性のグリア繊維性酸性タンパク質（GFAP）プロモーター（Gomesら、1999, Braz J Med Biol Res 32 (5):619-631；Morelliら、1999, Gen. Virol. 80: 571-83）並びに視床下部で活性の性腺刺激ホルモン放出ホルモン遺伝子制御領域（Masonら、1986, Science 234: 1372-1378）。
【０２９９】
具体的実施形態では、ポリペプチドまたは融合タンパク質の発現は、構成性プロモーターにより調節する。別の実施形態では、ポリペプチドまたは融合タンパク質の発現は、誘導性プロモーターにより調節する。別の実施形態では、ポリペプチドまたは融合タンパク質の発現は、組織特異的プロモーターにより調節する。
【０３００】
具体的実施形態では、ポリペプチドまたは融合タンパク質をコードする核酸に機能的に連結されたプロモーター、１以上の複製起点、並びに場合に応じて、１以上の選択マーカー（例：抗生物質耐性遺伝子）を含むベクターを用いる。
【０３０１】
哺乳動物宿主細胞では、ウイルスに基づく多数の発現系を用いることができる。アデノウイルスを発現ベクターとして用いる場合には、ポリペプチドもしくは融合タンパク質コード配列をアデノウイルス転写／翻訳制御複合体（例：後期プロモーターおよび三部分リーダー配列）に連結させることができる。このキメラ遺伝子をin vitroまたはin vivo組換えによりアデノウイルスゲノムに挿入することができる。ウイルスゲノムの非必須領域（例：E1またはE3領域）への挿入によって、感染した宿主において生存能があり、かつそこで抗体分子を発現することができる組換えウイルスが得られる（例えば、Logan & Shenk, 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 355-359参照）。挿入した融合タンパク質コード配列の効率的な翻訳には、特定の開始シグナルが必要なこともある。これらのシグナルは、ATG開始コドンと隣接配列を含む。さらに、挿入片全体の翻訳を確実にするために、開始コドンは、所望のコード配列のリーディングフレームと同じ位相でなければならない。これらの外性翻訳制御シグナルおよび開始コドンは、天然および合成いずれの様々な起原のものでよい。発現効率は、適切な転写エンハンサーエレメント、転写ターミネーターなどの含有により高めることができる（Bittnerら、1987, Methods in Enzymol. 153: 51-544参照）。
【０３０２】
ポリペプチドまたは融合タンパク質をコードする遺伝子の挿入片を含む発現ベクターは、次の３つの一般的手法により識別することができる：（ａ）核酸ハイブリダイゼーション、（ｂ）「マーカー」遺伝子機能の存在または非存在、並びに（ｃ）挿入された配列の発現。第１の手法では、発現ベクターにおけるポリペプチドまたは融合タンパク質をコードする遺伝子の存在は、ポリペプチドまたは融合タンパク質をコードする挿入遺伝子にそれぞれ相同的な配列を含むプローブを用いて、核酸ハイブリダイゼーションにより検出することができる。第２の手法では、ポリペプチドまたは融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列のベクターへの挿入により生じる特定の「マーカー」遺伝子機能（例：チミジンキナーゼ活性、抗生物質耐性、形質転換表現型、バキュロウイルスにおける封入体の形成等）の存在または非存在に基づいて、組換えベクター／宿主系を同定および選択することができる。例えば、融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列をベクターのマーカー遺伝子配列内に挿入すると、融合タンパク質挿入片をコードする遺伝子を含む組換え体は、マーカー遺伝子機能の非存在により同定することができる。第３の手法では、組換え体が発現した遺伝子産物（例：融合タンパク質）をアッセイすることにより、組換え発現ベクターを識別することができる。このようなアッセイは、例えば、in vitroアッセイ系における融合タンパク質の物理的もしくは機能的特性（例：抗体との結合）に基づいて実施することができる。
【０３０３】
加えて、挿入された配列の発現をモジュレートする、または遺伝子産物を所望の特定の様式で改変およびプロセッシングする宿主細胞株を選択してもよい。特定のプロモーターからの発現は、特定の誘導剤の存在下で増強することができ；このように、遺伝子工学的に作製した融合タンパク質の発現を制御することができる。さらに、様々な宿主細胞が、翻訳時および翻訳後プロセッシングおよび改変（例：タンパク質のグリコシル化、リン酸化）のための特有かつ特殊な機構を有する。適切な細胞系または宿主系を選択することにより、発現した外来タンパク質の所望の改変およびプロセッシングを確実にすることができる。例えば、細菌系での発現により非グリコシル化産物が得られ、酵母での発現では、グリコシル化産物が得られる。一次転写産物の適正なプロセッシング、遺伝子産物のグリコシル化およびリン酸化のための細胞機構を有する真核宿主細胞を用いることができる。このような哺乳動物宿主細胞として、限定するものではないが、以下のものが挙げられる：CHO、VERY、BHK、Hela、COS、MDCK、293、3T3、WI38、NS0、特に、ニューロン細胞系、例えば、SK-N-AS、SK-N-FI、SK-N-DZヒト神経芽腫（Sugimotoら、1984, J. Natl. Cancer Inst. 73: 51-57）、SK-N-SHヒト神経芽腫（Biochim, Biophys. Acta, 1982, 704: 450-460）、ダオイ（Daoy）ヒト脳髄芽腫（Heら、1992, Cancer Res. 52: 1144-1148）、DBTRG-05MGグリア芽腫（Kruseら、1992, In Vitro Cell. Dev. Biol. 28A: 609-614）、IMR-32神経芽腫（Cancer Res., 1970, 30: 2110-2118）、1321N1ヒト星状細胞腫（Proc. Natl Acad. Sci. USA, 1977, 74: 4816）、MOG-G-CCMヒト星状細胞腫（Br. J. Cancer, 1984, 49: 269）、U87MGヒトグリア芽腫−星状細胞腫（Acta Pathol. Microbiol. Scand., 1968, 74: 465-486）、A172ヒトグリア芽腫（Olopadeら、1992, Cancer Res. 52: 2523-2529）、C6ラットグリオーマ細胞（Bendaら、1968, Science 161: 370-371）、Neuro-2aマウス神経芽腫（Proc. Natl Acad. Sci. USA, 1970, 65: 129-136）、NB41A3マウス神経芽腫（Proc. Natl Acad. Sci. USA, 1962, 48: 1184-1190）、SCPヒツジ脈絡叢（Bolinら、1994, J. Virol. Methods 48: 211-221）、G355-5、PG-4ネコ正常星状細胞（Haapalaら、1985, J. Virol. 53: 827-833）、Mpfケナガイタチ脳（Trowbridgeら、1982, In Vitro 18: 952-960）、並びに正常細胞系、例えば、CTX TNA2ラット正常皮質脳（Radanyら、1992, Proc. Natl Acad. Sci. USA 89: 6467-6471）（例：CRL7030およびHs578Bst）。さらに、異なるベクター／宿主発現系は、異なる程度にプロセッシング反応に影響し得る。
【０３０４】
組換えタンパク質の長期高収率生産のためには、安定した発現が好ましい。例えば、ポリペプチドまたは融合タンパク質を安定して発現する細胞系を作製してもよい。ウイルス複製起点を含む発現ベクターを用いるのではなく、適切な発現制御エレメント（例：プロモーター、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位など）により制御されるDNAや、選択マーカーで宿主細胞を形質転換することができる。外来DNAの導入後、作製した細胞を濃縮培地中で１〜２日増殖させてから、選択培地に移す。組換えプラスミド中の選択マーカーは、選択に対する耐性を賦与し、これによって、細胞はプラスミドをその染色体に安定して組み込み、増殖してフォーカスを形成できるようになるが、このフォーカスを細胞系にクローン化して、増殖させることができる。この方法を用いて、ポリペプチドもしくは融合タンパク質を発現させる細胞系を作製すれば有利である。このように作製された細胞系は、特に、ポリペプチドまたは融合タンパク質の活性に影響を与える化合物のスクリーニングおよび評価に有用である。
【０３０５】
限定するものではないが、以下に挙げるようないくつかの選択系：単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（Wiglerら、1977, Cell 11: 223）、ヒポキサンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（SzybalskaおよびSzybalski、1962, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 48: 2026）、並びにアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Lowyら、1980, Cell 22:817）遺伝子を用いることができ、これらは、それぞれ、tk-、hgprt-またはaprt-細胞で使用することができる。また、代謝拮抗物質耐性を下記の遺伝子の選択基準として用いることができる：メトトレキセートに対する耐性を賦与するdhfr（Wiglerら、1980, Natl. Acad. Sci. USA 77:3567；O'Hareら、1981, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78: 1527）；ミコフェノール酸に対する耐性を賦与するgpt（MulliganおよびBerg, 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78: 2072）；アミノグリコシドG-418に対する耐性を賦与する neo (Colberre-Garapinら、1981, J. Mol. Biol. 150:1)；並びに、ヒグロマイシンに対する耐性を賦与する hygro（Santerreら、1984, Gene 30: 147）。
【０３０６】
組換え発現によりポリペプチドまたは融合タンパク質を生産したら、当分野で知られているタンパク質精製方法：例えば、クロマトグラフィー（例：イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、特に、プロテインAアフィニティークロマトグラフィー後の特定の抗原に対するアフィニティークロマトグラフィー、およびサイジングカラムクロマトグラフィー）、遠心分離、示差可溶性、もしくはその他の標準的なタンパク質精製方法のいずれによっても、精製することができる。
【０３０７】
５．１０．製品
本発明は、完成品としてのパッケージングおよびラベル付けされた医薬製品も包含する。この製品は、密封した好適な容器（例えば、ガラスバイアルもしくはその他の容器）中の適切な単位投与形態を含む。非経口投与に適した投与形態の場合には、予防薬または治療薬（例：リンパ系組織誘導剤および／または免疫調節剤（好ましくは、免疫系エンハンサー））は、粒子を含まない無菌溶液として投与するのに適している。すなわち、本発明は、非経口溶液と凍結乾燥させた粉末の両方を包含し、いずれも無菌であり、後者は注射の前に再構成するのに適している。あるいは、単位投与形態は経口、経皮、局所もしくは粘膜送達に適した固体でもよい。
【０３０８】
好ましい実施形態では、単位投与形態は静脈内、筋内、経口もしくは皮下送達に適している。従って、本発明は、それぞれの送達経路に適した、好ましくは無菌の溶液を含む。
【０３０９】
すべての医薬製品について、パッケージング材料および容器は、保存および輸送中の製品の安定性を保護するように設計する。さらに、本発明の製品は、使用上の指示もしくはその他の情報事項を含んでおり、これらは、問題の疾患または障害をどのように適切に予防または治療すべきかについて、医師、専門家もしくは患者にアドバイスを与えるものである。すなわち、製品は、限定するものではないが、実際の用量、モニタリング方法、合計リンパ球およびＴ細胞カウント、並びにその他のモニタリング情報を含む投薬計画を示すまたは提案する指示手段を含む。
【０３１０】
具体的には、本発明は、パッケージング材料、例えば、箱、瓶、管、バイアル、容器、噴霧器、注入器、静脈内（i.v.）バッグ、エンベロープなど；および、このパッケージング材料内に含まれる各医薬剤の少なくとも１単位投与形態を含む製品であって、１つの医薬剤がリンパ系組織誘導剤を含み、他の医薬剤が免疫調節剤（好ましくは、免疫エンハンサー）を含み、かつ、上記パッケージング材料が、本明細書に記載したように、特定の用量を投与し、特定の投薬計画を用いることにより、上記薬剤を用いて、本明細書に記載した疾患の１以上の症状を治療、予防もしくは改善することができることを示す指示手段を含む、上記製品を提供する。
【０３１１】
本発明はまた、パッケージング材料、例えば、箱、瓶、管、バイアル、容器、噴霧器、注入器、i.v.バッグ、エンベロープなど；および、このパッケージング材料内に含まれる医薬剤の少なくとも１単位投与形態を含む製品であって、上記医薬剤がリンパ系組織誘導剤と免疫調節剤（好ましくは、免疫系エンハンサー）を含み、かつ、上記パッケージング材料が、本明細書に記載したように、特定の用量を投与し、特定の投薬計画を用いることにより、上記薬剤を用いて、記載された疾患の１以上の症状を治療、予防もしくは改善することができることを示す指示手段を含む、上記製品を提供する。
【０３１２】
特定の実施形態では、製品に封入される上記指示手段は、投薬前および／または投薬後にリンパ球またはＴ細胞数をモニタリングするように指示する。例えば、製品に封入される上記指示手段は、最初の投薬前と、それに続く１回以上の投薬後に、リンパ球数を測定するように指示する。好適な指示手段として、印刷されたラベル、印刷されたパッケージ挿入物、タグ、カセットテープなどが挙げられる。
【０３１３】
本発明では、増殖性疾患、感染性疾患、心血管疾患、自己免疫疾患、もしくは炎症性疾患などの疾患に関連する１以上の症状を予防、治療もしくは改善するのに用いるための製品に封入される情報資料に、本発明の方法により軽減または防止することができる有害な作用が記載されている。本発明の方法により軽減または防止することができる有害な作用として、限定するものではないが、以下のものが挙げられる：生命徴候の異常（例：熱、頻拍、徐脈、高血圧および低血圧）、高カルシウム血症、血液病学的事象（例：貧血、リンパ球減少、白血球減少および血小板減少）、頭痛、悪寒、めまい感、吐気、無力症、背中の痛み、胸の痛み（例：胸部圧）、下痢、筋肉痛、痛み、かゆみ、乾癬、鼻炎、発汗、注射部位の反応、並びに血管拡張。
【０３１４】
さらに、疾患に関連する１以上の症状を予防、治療もしくは改善するのに用いるための製品に封入される情報資料には、外来タンパク質により、アレルギー反応、例えば、アナフィラキシー、もしくはシトシン放出症候群も起こる可能性があることを記載することができる。情報資料には、アレルギー反応が軽度のかゆみ性発疹として現れるだけか、あるいは、紅皮症、スティーブン−ジョンソン症候群、脈管炎、もしくはアナフィラキシーのように重症となりうることを示さなければならない。さらに情報資料には、アナフィラキシー反応（アナフィラキシー）が重症であり、場合によっては致死性の過敏性反応であることも示さなければならない。アナフィラキシーなどのアレルギー反応は、外来タンパク質を身体に注入すると起こる可能性がある。このような反応は、じんま疹または発疹のような軽症の発現から致死性の全身反応まで多様である。アナフィラキシー反応は、暴露後間もなく、通常、10分以内に起こる。患者は、感覚異常、低血圧、咽頭水腫、精神状態の変化、顔面または咽頭血管神経性水腫、気道閉塞、気管支痙攣、じんま疹およびかゆみ、血清疾患、関節炎、アレルギー性腎炎、糸球体腎炎、一過性関節炎、もしくは好酸球増加症を起こすことがある。
【０３１５】
情報資料には、サイトカイン放出症候群が、特定の活性化抗Ｔ細胞抗体の投与に一時的に伴う急性の臨床的症候群であることも示すことができる。サイトカイン放出症候群は、活性化したリンパ球または単球によるサイトカインの放出に起因するとされている。サイトカイン放出症候群の臨床徴候は、より頻繁に報告される、軽度で、自己制限的な「インフルエンザ様」疾患から、稀に報告される、重篤な、生命を脅かすようなショック様反応（重症の心血管、肺および中枢神経系の徴候を含む場合がある）まで様々であった。この症候群は、通常、投与から約30〜60分後（それより遅いこともある）に始まり、数時間持続する。この症候群の頻度および重症度は、一般に、最初の投薬時が最大である。投薬を続ける毎に、症候群の発生率および重症度は低下する傾向がある。用量を増加するかもしくは中断していた治療を再開すると、上記症候群が再発することがある。前述したように、本発明は、本明細書に記載した１以上の有害な作用を防止または軽減する治療および予防方法を包含する。
【０３１６】
５．１１．具体的実施形態
具体的実施形態において、乳癌を治療する治療計画は、それが必要な被験者に、タキソール（80〜160mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）；4783（50〜500mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）；ハーセプチン抗体（２〜100mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）；並びにOK-432（0.5〜５mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）を投与することを含む。
【０３１７】
具体的実施形態において、前立腺癌を治療する治療計画は、それが必要な被験者に、タキソール（80〜160mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）；4783（50〜500mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）；PSMA抗体（２〜100mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）；並びにCpG（0.5〜５mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）を投与することを含む。
【０３１８】
具体的実施形態において、結腸直腸癌を治療する治療計画は、それが必要な被験者に、タキソテール（80〜160mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）；プロスタグラジンJ2（５〜50mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）；EpCAM抗体（２〜100mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）；並びにBCG（0.5〜５mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）を投与することを含む。
【０３１９】
具体的実施形態において、非小細胞肺癌を治療する治療計画は、それが必要な被験者に、エポチロンＡ、Ｂ、ＣもしくはＤ（80〜160mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）；ゲラニル−ゲラニル−アセトン（50〜500mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）；EGF受容体抗体（２〜100mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）；並びにリポタイコ酸（0.5〜５mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）を投与することを含む。
【０３２０】
具体的実施形態において、小細胞肺癌を治療する治療計画は、それが必要な被験者に、タキソール（80〜160mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）；4783（50〜500mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）；カルボプラチン（50〜500mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）；並びにOK-432（0.5〜５mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）を投与することを含む。
【０３２１】
具体的実施形態において、性器いぼを治療する治療計画は、それが必要な被験者に、タキソール（８〜16mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）；プロスタグランジンJ2（50〜500mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）；並びにOK-432（0.5〜５mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）を投与することを含む。
【０３２２】
具体的実施形態において、帯状ヘルペスを治療する治療計画は、それが必要な被験者に、タキソール（80〜160mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）；ゲラニル−ゲラニル−アセトン（50〜500mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）；並びにCpG（0.5〜５mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）を投与することを含む。
【０３２３】
具体的実施形態において、子宮繊維症を治療する治療計画は、それが必要な被験者に、タキソテール（80〜160mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）；4783（50〜500mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）；EpCAM抗体（２〜100mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）；並びにOK-432（0.5〜５mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）を投与することを含む。
【０３２４】
具体的実施形態において、卵巣嚢胞を治療する治療計画は、それが必要な被験者に、タキソール（80〜160mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）；4783（50〜500mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）；EGF受容体抗体（２〜100mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）；並びにCpG（0.5〜５mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）を投与することを含む。
【０３２５】
具体的実施形態において、子宮内膜症を治療する治療計画は、それが必要な被験者に、タキソール（80〜160mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）；プロスタグラジンJ2（50〜500mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）；EpCAM抗体（２〜100mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）；並びにリポタイコ酸（0.5〜５mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）を投与することを含む。
【０３２６】
具体的実施形態において、良性前立腺過形成を治療する治療計画は、それが必要な被験者に、タキソール（60〜100mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）；ゲラニル−ゲラニル−アセトン（50〜500mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）；PSMA抗体（２〜100mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）；並びにCpG（0.5〜５mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）を投与することを含む。
【０３２７】
具体的実施形態において、アテローム性動脈硬化を治療する治療計画は、それが必要な被験者に、タキソテール（８〜16mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）；4783（５〜50mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）；泡沫細胞抗体（２〜50mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）；並びにOK-432（0.5〜２mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）を投与することを含む。
【０３２８】
具体的実施形態において、持続性細胞感染を治療する治療計画は、それが必要な被験者に、タキソール（40〜100mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）；4783（50〜500mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）；抗細菌抗体（２〜100mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）；並びにCpG（0.5〜５mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）を投与することを含む。
【０３２９】
具体的実施形態において、持続性ウイルス感染を治療する治療計画は、それが必要な被験者に、タキソール（40〜100mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）；4783（50〜500mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）；抗ウイルス抗体（２〜100mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）；並びにOK-432（0.5〜５mg／m2、毎週、隔週もしくは毎月の投与を２〜６サイクル）を投与することを含む。
【実施例】
【０３３０】
６．実施例
実施例１：リンパ系組織誘導剤を同定する方法
この実施例では、リンパ系組織誘導剤を同定する方法を説明する。この方法を用いて、様々なリンパ系組織誘導剤、特に、リンホトキシンα、Ｂリンパ球ケモカイン（BLC）および二次リンパ系器官ケモカイン（SLC）の発現を誘導するものを同定することができる。一例として、in vitroスクリーニングにより、リンホトキシンα、BLCおよびSLCの小分子誘導剤を同定するのに用いることができる方法を記載する。これまで、リンホトキシン発現を誘導することが報告されているのは２種の小分子だけであり、これらは、ペントキシフィリン（LT-X、Clerici ら、J Infect. Dis. 175(5): 1210-1215 (1997)）と、シメチジン（LT-β、 Takahashi ら、Biochem. Biophys. Res. comm. 281(5): 1113-1119 (2001)）である。LT-α発現は、BLCおよびSLC の発現を誘導することが明らかにされている（Hjelmstromら、Am. J. Pathol., 156(4): 1133-1138 (2000)）。
【０３３１】
細胞およびアッセイ系
上記方法の一形態では、本明細書に記載した癌細胞系を用いて、化学ライブラリーをスクリーニングする。細胞を単層として維持し、目的の化合物に暴露する。24時間の培養後、上清を回収し、ELISAによりアッセイする。ELISAプレートは、LT-α（ヒト、BD Biosciences）、BLCもしくは SLC （ヒト、R&D Systems）の捕捉抗体で作製する。培養上清を１ウェル当たり150μL添加する。組換えLT-α、BLCおよびSLCを用いて、標準曲線を作成することにより、タンパク質値（pg／mL）を測定する。
【０３３２】
小分子によるin vivo誘導の試験
小分子を同定したら、それらが、リンパ系組織の形成を誘導する分子（例えば、タンパク質）の生産を誘導することを確認するために、あるいは、それらがリンパ系組織の形成を誘導することを確認するために、スクリーニングすることができる。この実施例では、タンパク質コード遺伝子（遺伝子LT-α、BLCおよび／またはSLC）の産生を確認するためにスクリーニングを実施する。従って、腫瘍を有するマウスを、in vitroでLT-α、BLCおよび／またはSLCを誘導する小分子で処理する。定量的in situハイブリダイゼーションおよび免疫組織化学により、上記遺伝子の発現について腫瘍組織、脾臓およびリンパ節を分析する。
【０３３３】
in vivo腫瘍形成
生後６週間のC57BL/6Jマウス（Charles River Laboratories）を病原体のない条件下で収容し、餌と水は自由に取らせる。正常で、健康なマウスだけを用いなければならない。マウスを用いた実験はすべて、動物の取扱いに関するNIH/ICOC指針に従って実施しなければならない。腫瘍は、2.5×106個のB78-D14黒色腫細胞の皮下注射により誘発することができ、その結果、14日以内に40μLの腫瘍が生じる（Schramaら、Immunity14(2): 111-121（2001））。
【０３３４】
小分子注射
腫瘍を有するマウスに、３日毎に、ほぼ決定用量の候補の小分子（マウスの体重20ｇ当たり0.2ｍL、水中の45％エンカプシンHPB（ヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリン；American Maise-Products Co.））を腹腔内注射する。
【０３３５】
in situハイブリダイゼーションおよび免疫組織化学
マウスの死亡後、遺伝子発現レベルの分析を実施する。B78-D14黒色腫を有するマウスの平均生存時間は47日である（Schrama, Dら、Immunity 14 (2): 111-121, (2001)）。この生存時間は、処理済マウスでは長くなる可能性があるが、分析は処理および対照マウスともに同じ日に実施してよい。in situハイブリダイゼーションのために、同一腫瘍組織の複数の10μm凍結切片（−80℃で保存）をLT-α、BLCおよびSLCのジゴキシゲニン標識アンチセンスプローブとハイブリダイズさせる（Ansel, K. M.ら、Nature 406 (6793): 309-314 (2000)に記載の通り）。アルカリホスファターゼ結合抗ジゴキシゲニンとのインキュベーション後、該切片をヌクレアーファーストレッド（Nuclear Fast Red）で対比染色し、マウンティングする。LT-α、BLCおよびSLC についてmRNAを発現する細胞の頻度を、グリッドカウント装置およびツァイス（Zeiss）顕微鏡を用いてマスク方式で決定する。また、LT-α1β2に対するマウスモノクローナル抗体（ラットモノクローナル抗マウス、Pharmingen）や、ヤギ抗マウスBLCおよびSLC（Lutherらにより用いられる：R&D Systems、ミネアポリス、MN）を用いて、免疫組織化学を実施することもできる。陽性細胞の頻度をマスク方式で決定する。
【０３３６】
実施例２：腫瘍関連リンパ系組織新生および腫瘍後退の評価方法
一旦、候補小分子もしくはその他のリンパ系組織誘導剤を同定したら、例えば、腫瘍形成の被験者モデルを用いて上記物質を動物に投与し、この実施例に記載されているように、腫瘍関連リンパ系組織新生および腫瘍後退を観察する。
【０３３７】
腫瘍関連リンパ系組織新生のアッセイ
リンパ系組織の顕著な特徴について腫瘍切片を免疫組織化学により分析する。CD4、CD8およびL-セレクチン（CD62L）抗体（Pharmingen、サンディエゴ、CA）を用いて、Ｔ細胞による腫瘍浸潤をアッセイすることができる。CD45R/B220モノクローナル抗体（Pharmingen）を用いて、Ｂ細胞の存在およびそれらの分離を評価する。ＴおよびＢ細胞浸潤を呈示する腫瘍については、さらなる分析を実施する。
【０３３８】
抗原提示細胞による浸潤は、樹状細胞特異的、マクロファージ特異的もしくはＢ細胞特異的抗体（ATCC、ロックビル、MD）を用いて、分析することができる。高内皮性小静脈の形成は、末梢リンパ節アドレシン（PNAd）に対する抗体（Pharmingen）を用いて確認し、PNAd+腫瘍の場合には、切片をSLC抗体（R&D Systems）で染色することができる。
【０３３９】
実施例３：MDA-435ヒト乳癌ヌードマウスモデルに対するパクリタキセルと三酸化ヒ素の組合せ治療のin vivo抗腫瘍効果
この実施例では、腫瘍増殖阻害アッセイを用いて、腫瘍を有するマウスにおけるパクリタキセルと三酸化ヒ素の組合せのin vivo抗腫瘍効果を明らかにする。
【０３４０】
材料および方法
ヒト乳癌ヌードマウスモデル
50%DMEM／ダルベッコ改変イーグル培地（High Glucose）、50％RPMI 1640、10％FBS／ウシ胎児血清（ハイブリドーマ試験済；滅菌ろ過済）、１％L-グルタミン、１％ペニシリン−ストレプトマイシン、１％MEM ピルビン酸ナトリウムおよび１％MEM非必須アミノ酸から補充培地を調製した。FBSは、Sigma Chemical Co.から取得し、その他の成分は、Invitrogen Life Technologies（USA）から取得した。補充培地を37℃まで温め、50mlの培地を175cm2組織培養フラスコに添加した。
【０３４１】
アッセイに用いられる細胞は、American Type Culture CollectionからのMDA-435ヒト乳癌であった。液体窒素凍結細胞ストックから１バイアルのMDA-435細胞を取り出した。凍結細胞のバイアルをただちに37℃の水浴に置き、解凍するまで穏やかに攪拌した。凍結バイアルを70％エタノールで拭いた後、補充培地を含む175cm2組織培養フラスコに、細胞を直ちにピペットで移した。細胞を一晩インキュベートし、翌日、培地を除去して新鮮な補充培地と取り替えた。フラスコが約90％密集になるまでインキュベートした。これには概して５〜７日かかった。
【０３４２】
フラスコを10mlの無菌で室温のリン酸緩衝食塩水（PBS）で洗浄した。フラスコの細胞に、５mlの温めたトリプシン−EDTA（Invitrogen）を添加することにより、細胞をトリプシン処理した。次に、細胞がフラスコの表面から脱離し始めるまで、細胞を２〜３分37℃にてインキュベートした。等量（５ml）の補充培地をフラスコに添加した。細胞すべてを50mlの試験管に回収し、20℃にて1,000RPMで５分遠心分離した。上清を吸引し、細胞ペレットを10mlの補充培地中に再懸濁させ、細胞を数えた。100〜300万細胞／フラスコを５〜７個の組織培養フラスコ（175cm2）に接種した。各フラスコは50mlの補充培地を含んでいた。フラスコを約90％密集になるまでインキュベートした。腫瘍移植に十分な細胞が増殖されるまで細胞の継代を繰り返した。
【０３４３】
続いて、細胞のトリプシン処理および遠心分離の前記手順を実施した。上清を吸引し、細胞ペレットを10mlの無菌PBS中に再懸濁させ、細胞を数えた。細胞を遠心分離した後、腫瘍移植に必要な正確な数の細胞を注射するのに適切な量の無菌PBSを用いて再懸濁させた。MDA-435の場合には、１億個の細胞を2.0mlの無菌PBSを用いて懸濁させ、マウス１匹当たり0.1ml中500万個の細胞を注射するために、最終濃度を5,000万細胞／mlとした。
【０３４４】
マウス（CD-1 nu／nu）はCharles River Laboratoriesから取得した（学名：Crl:CD-1-nuBR；生後６〜８週間）。実験に用いる前に、マウスを１週間馴化させた。
【０３４５】
雌CD-1 nu／nu マウスの脂肪体にMDA-435腫瘍細胞懸濁液の移植を実施した。この脂肪体はマウスの背側腹部内臓に位置する。寛骨（骨盤）と大腿（大腿骨）の連結部での腹の右四分円に位置する脂肪体中に腫瘍細胞を皮下移植した。27G（1/2インチ）針を用いて、0.1mlの無菌PBS中500万個のMDA-435細胞を注射した。MDA-435腫瘍は、移植から２〜３週間後に成長した。
【０３４６】
パクリタキセルおよび三酸化ヒ素の調製
パクリタキセル投与のための投与溶液の調製：20％クレモフォルRH40でパクリタキセルDMSO原液を１：10に希釈した。パクリタキセル投与溶液の最終調製物は、10％DMSO、18％クレモフォルRH40および72％水であった。
【０３４７】
MDA-435ヒト乳癌を有するマウスに、投与溶液（投与量：0.01ml／グラム＝10ml／kg）を静脈内注射した。
【０３４８】
三酸化ヒ素（As2O3）を0.9％塩化ナトリウム（Abbott Laboratories, 米国）中に調製した。マウスは５mg／kgの投与を受けた。この化合物は、腹腔内（IP）投与経路により投与した。腹腔内注射は、マウスの尾側左腹四分円中に実施した。このようにするのは、尾側右腹四分円にある盲腸を避けるためである。As2O3１ml当たり0.5 mgの投与溶液を0.9％NaCl中に調製し、注射１回当たりの投与量は10 ml／kgであった。
【０３４９】
プロトコル
製剤：パクリタキセル：パクリタキセル10％DMSO、18％CrRH40、72％H2O
As2O3：0 .9％塩化ナトリウム
投与経路：静脈内ボーラス注射（パクリタキセル）
腹腔内注射（As2O3）
投与スケジュール：３×／週×３週間
2005518366.tif 000003
三酸化ヒ素とパクリタキセルによる腫瘍の治療は、腫瘍が樹立されて（容積は約200mm3）から開始した。マウスに複数回注射スケジュールを実施し、これによって、化合物をIVまたはIP投与経路で投与した。1週間に２回腫瘍を測定した。このアッセイの実施中、毒性の徴候（体重減少など）についてマウスを毎日モニタリングした。
【０３５０】
結果
図１は、As2O3およびパクリタキセル単独の治療と比較して、As2O3とパクリタキセルの組合せ治療の抗腫瘍効果を示している。図１からわかるように、As2O3とパクリタキセルの組合せ治療は、この腫瘍モデルにおいてAs2O3単独またはパクリタキセル単独よりも有意に高い抗腫瘍効果を発揮する。
【０３５１】
均等物
当業者であれば、本明細書に記載した本発明の特定の実施形態に対する多くの均等物を認識し、あるいは、常用実験で確認することができるであろう。このような均等物は、添付の特許請求の範囲に含まれることを意図するものである。
【０３５２】
本明細書に記載されるすべての刊行物、特許および特許出願は、それぞれの刊行物、特許および特許出願を明確かつ個別に本明細書に参照として組み込むことが示されるのと同程度に、本明細書に参照として組み込むものとする。
【図面の簡単な説明】
【０３５３】
【図１】MDA-435ヒト異種移植ヌードマウスモデルにおけるパクリタキセルおよびAs2O3治療の抗腫瘍効果を示す。
【図１】
2005518366.tif 000004
【国際調査報告】
2005518366.tif 000005