(57)【要約】本発明は、（ａ）Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓのＣ血清型に由来する莢膜糖類抗原、および（ｂ）キトサンアジュバントを含有する免疫原性組成物を提供する。この組成物は、好ましくは（ｃ）１つ以上のさらなる抗原および／または（ｄ）１つ以上のさらなるアジュバントを含有する。この組成物は、鼻腔内送達を含む粘膜送達に特に適する。本発明はまた、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓのＡ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹの血清型の少なくとも２種に由来する莢膜糖類を含有する、粘膜送達のための免疫原性組成物も提供する。本発明の組成物中の莢膜糖類は、キャリアタンパク質と結合するか、および／またはオリゴ糖であることが、好ましい。結合したオリゴ糖抗原が、特に好ましい。
2005525415.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓのＣ血清型に由来する莢膜糖類抗原、および（ｂ）キトサンアジュバントを含有する、免疫原性組成物。
【請求項２】
Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓのＡ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹの血清型の少なくとも２種に由来する莢膜糖類を含有する、粘膜送達のための免疫原性組成物。
【請求項３】
（ｃ）１つ以上のさらなる抗原および／または（ｄ）１つ以上のさらなるアジュバントを含有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記莢膜糖類が、キャリアタンパク質と結合するか、および／またはオリゴ糖である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
前記莢膜糖類が、キャリアタンパク質に結合したオリゴ糖である、請求項３に記載の組成物。
【請求項６】
Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓのＡ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹの血清型の少なくとも２種、３種または４種に由来する莢膜糖類を含有する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
Ａ＋Ｃ、Ａ＋Ｗ１３５、Ａ＋Ｙ，Ｃ＋Ｗ１３５、Ｃ＋Ｙ、Ｗ１３５＋Ｙ、Ａ＋Ｃ＋Ｗ１３５、Ａ＋Ｃ＋Ｙ、Ｃ＋Ｗ１３５＋ＹまたはＡ＋Ｃ＋Ｗ１３５＋Ｙの血清型に由来する糖類を含有する、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
鼻腔内投与のために適合し、そして／またはパッケージされた、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
経鼻スプレーまたは経鼻ドロップの形態である、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
キトサンアジュバントおよび／またはＥ．ｃｏｌｉ熱不安定性毒素の無毒化変異体を含有する、請求項１〜９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記キトサンが、三アルキル化キトサンである、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１２】
前記キトサンが、三メチルキトサンである、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１３】
前記Ｅ．ｃｏｌｉ熱不安定性毒素の無毒化変異体が、残基６３位におけるセリンからリジンへの置換を有する、請求項１０〜１２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記組成物が、（１）髄膜炎菌性糖類、（２）Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅに対する免疫応答を誘導する抗原、および（３）Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに対して免疫応答を誘導する抗原の３つ全ては含有しない、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記組成物が、（１）髄膜炎菌性糖類、（２）Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅに対する免疫応答を誘導する抗原、および（３）Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに対して免疫応答を誘導する抗原の３つ全て、およびキトサンのアルキル化誘導体を含有する、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１６】
（ａ）凍結乾燥形態の、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓのＡ血清型に由来する莢膜糖類抗原、および（ｂ）液体形態の、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓのＣ、Ｗ１３５およびＹの血清型の１種以上に由来する莢膜糖類抗原を含むキットであって、（ａ）および（ｂ）が、混合された場合、粘膜投与に適するように処方される、キット。
【請求項１７】
請求項１〜１５のいずれか１項に従う組成物を、患者に投与する工程を包含する、患者において免疫応答を誘発する方法。
【請求項１８】
Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓのＡ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹの血清型の少なくとも２種に由来する莢膜糖類の、免疫応答を誘発するための動物への粘膜送達のための医薬の製造における使用であって、該莢膜糖類が、キャリアタンパク質と結合するか、および／またはオリゴ糖である、使用。
【請求項１９】
（１）Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓのＡ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹの血清型の少なくとも１種に由来する莢膜糖類抗原であって、該莢膜糖類が、キャリアタンパク質と結合するか、および／またはオリゴ糖である、莢膜糖類抗原、および（２）キトサンの、免疫応答を誘発するための動物への粘膜送達のための医薬の製造における使用。
【請求項２０】
前記医薬が、鼻腔内送達のための医薬である、請求項１８または請求項１９に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本明細書中に記載されたすべての文献は、その全体が参考として援用される。
【０００２】
本発明は、ワクチンの分野、特に、髄膜炎菌性の感染症および疾患に対するワクチンの分野におけるものである。
【背景技術】
【０００３】
Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓは、細菌性髄膜炎を引き起こすグラム陰性のヒトの病原体である（例えば引用文献１の第２８章参照）。Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓは、Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅと近縁関係にあるが、髄膜炎菌（ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃｕｓ）と明らかに異なる１つの特徴は、すべての病原性の髄膜炎菌（ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃｉ）内に存在する多糖類の莢膜が存在することである。
【０００４】
生物体の莢膜多糖類に基づき、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの１２の血清型が同定されている（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、２９Ｅ、Ｗ１３５、Ｘ、ＹおよびＺ）。Ａ群は、サハラ以南のアフリカにおける流行性疾患の最も一般的な原因である。血清型ＢおよびＣは、先進国における大部分の症例の原因であり、残りの症例は、血清型Ｗ１３５およびＹによって引き起こされる。
【０００５】
分類に使用されるのと同様、莢膜多糖類は、ワクチン接種にも使用されてきている。血清型Ａ、Ｃ、ＹおよびＷ１３５に由来する莢膜多糖類の注射可能な４価のワクチンは、何年にもわたって知られており［２、３］、ヒトへの使用が認可されている。これは青年および成人において有効ではあるが、弱い免疫応答、未時間期間の保護を誘導し、乳児においては使用され得ない［例えば、４］。このワクチンにおける多糖類は結合体化されておらず、重量比が１：１：１：１で存在する［５］。ＭＥＮＣＥＶＡＸ  ＡＣＷＹＴＭおよびＭＥＮＯＭＵＮＥＴＭは、両方とも、凍結乾燥された形態から一旦再構成された、５０μｇのそれぞれ精製された多糖類を含有する。
【０００６】
結合体化された血清型Ｃのオリゴ糖は、ヒトへの使用が承認されている［例えばＭｅｎｊｕｇａｔｅＴＭ；引用文献６］。しかし、血清型Ａ、Ｗ１３５およびＹに対する結合体化ワクチン、および、それらの製造における改善の必要が依然としてある。その必要性は、引用文献８に開示された、生成物、過程および使用によって扱われているが、特に、送達および処方に関連して、更なる修正および改善の機会が残されている。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、（ａ）Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの血清型Ｃに由来する莢膜糖類抗原、および（ｂ）キトサンアジュバントを含む、免疫原性組成物を提供する。この組成物は、好ましくは、（ｃ）１つ以上の更なる抗原、および／または、（ｄ）１つ以上の更なるアジュバントを含む。
【０００８】
本発明はまた、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの血清型Ａ、Ｃ、Ｗｌ３５およびＹのうち少なくとも２つの血清型に由来する莢膜糖類を含む、粘膜送達のための免疫原性組成物も提供する。
【０００９】
本発明の組成物における莢膜糖類は、キャリアタンパク質に結合体化され、および／または、オリゴ糖であることが好ましい。結合体化オリゴ糖抗原（図１）が、特に、好ましい。
【００１０】
（髄膜炎菌の血清型Ｃに由来する莢膜糖類抗原）
Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの血清型Ｃの莢膜糖類は、抗原として広範に使用されている。例えば、ＭｅｎｊｕｇａｔｅＴＭの活性成分は、ＣＲＭ１９７キャリアタンパク質に結合体化された、莢膜多糖類のオリゴ糖フラグメントである。
【００１１】
本発明の組成物が、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの血清型Ｃに由来する莢膜糖類抗原を含む場合、莢膜多糖類のオリゴ糖フラグメントを使用すること、および／または、糖類抗原をキャリアタンパク質へ結合体化することが好ましい。特に好ましいＭｅｎＣ糖類抗原は、引用文献６および９に開示されている。
【００１２】
オリゴ糖の生成および結合体化の更なる詳細は、以下に記載される。
【００１３】
（糖類の混合物）
本発明の組成物は、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの血清型Ａ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹのうち少なくとも２つ（すなわち２、３、または４）の血清型に由来する、莢膜糖類を含み得る。
【００１４】
Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの１つより多い血清型に由来する糖類の混合物は、例えば、血清型Ａ＋Ｃ、Ａ＋Ｗ１３５、Ａ＋Ｙ、Ｃ＋Ｗ１３５、Ｃ＋Ｙ、Ｗ１３５＋Ｙ、Ａ＋Ｃ＋Ｗ１３５、Ａ＋Ｃ＋Ｙ、Ｃ＋Ｗ１３５＋Ｙ、Ａ＋Ｃ＋Ｗ１３５＋Ｙなどに由来する糖類を含む組成物などが好ましい。実際の免疫原性（例えばＥＬＩＳＡ力価）は減じられ得るが、個体の糖類抗原の予防効果が、結合することによって除去されないことが好ましい。
【００１５】
好ましい組成物は、血清型ＣおよびＹに由来する糖類を含む。その他の好ましい組成物は、血清型Ｃ、Ｗ１３５およびＹに由来する糖類を含む。
【００１６】
混合物が、血清型ＡおよびＣの両方に由来する莢膜糖類を含む場合、ＭｅｎＡ糖類：ＭｅｎＣ糖類の比率（ｗ／ｗ）は、１よりを超え得る（例えば、２：１、３：１、４：１、５：１、１０：１、またはそれよりも高い）。
【００１７】
混合物が、血清型Ｙ、ならびに、血清型ＣおよびＷ１３５のうちの１つまたは両方に由来する莢膜糖類を含む場合、ＭｅｎＹ糖類：ＭｅｎＷ１３５糖類の比率（ｗ／ｗ）は、１を超え得（例えば、２：１、３：１、４：１、５：１、１０：１、またはそれよりも高い）、そして／または、ＭｅｎＹ糖類：ＭｅｎＣ糖類の比率（ｗ／ｗ）は、１未満であり得る（例えば、１：２、１：３、１：４、１：５、またはそれよりも低い）。
【００１８】
血清型Ａ：Ｃ：Ｗ１３５：Ｙに由来する糖類の好ましい比率（ｗ／ｗ）は、１：１：１：１、１：１：１：２、２：１：１：１、４：２：１：１、８：４：２：１、４：２：１：２、８：４：１：２、４：２：２：１、２：２：１：１、４：４：２：１、２：２：１：２、４：４：１：２および２：２：２：１である。
【００１９】
（莢膜多糖類の精製）
髄膜炎菌性の莢膜多糖類は、代表的には、多糖類の沈降（例えば陽イオン洗剤を使用して）、エタノールによる分画、冷やしたフェノールによる抽出（タンパク質を除去するため）、および、超遠心分離法（ＬＰＳを除去するため）の各段階を含む過程によって調製される［例えば引用文献１０］。
【００２０】
しかし、より好ましい過程［８］は、多糖類の沈降の後に、低級アルコールを使用して、その沈降された多糖類を可溶性にすることを含む。沈降は、テトラブチルアンモニウムならびにセチルトリメチルアンモニウム塩（例えば臭化物塩）、または、ポリブレン（ｈｅｘａｄｉｍｅｔｈｒｉｎｅ  ｂｒｏｍｉｄｅ）ならびにミリスチルトリメチルアンモニウム塩などの陽イオン洗剤を使用して達成され得る。臭化セチルトリメチルアミン（「ＣＴＡＢ」）が、特に好ましい［１１］。沈降された物質の可溶化は、メタノール、プロパン−１−オール、プロパン−２−オール、ブタン−１−オール、ブタン−２−オール、２−メチル−プロパン−１−オール、２−メチル−プロパン−２−オール、ジオールなどの低級アルコールを使用して達成され得るが、エタノールが、ＣＴＡＢ多糖類の複合体の可溶化に特に好適である。エタノールが、好ましくは沈降された多糖類に加えられ、最終的なエタノール濃度（エタノールおよび水の総含有量に基づく）が、５０〜９５％とされる。
【００２１】
再可溶化後、これらの多糖類は、混入物を除去するために更に処理され得る。これは、微量の混入物さえも容認されない状況において特に重要である（例えばヒトのワクチンの生成）。これは、代表的に、例えば、活性炭を通して使用され得る閉塞濾過（ｄｅｐｔｈ  ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ）、サイズろ過、および／または限外ろ過などのろ過のうち１つ以上の工程を含む。
【００２２】
混入物を除去するために一旦ろ過されると、その多糖類は、更なる処置および／または処理のために沈降され得る。これは、陽イオン交換によって（例えばカルシウムまたはナトリウムの塩を加えることによって）都合よく達成され得る。
【００２３】
多糖類は、化学的に修飾され得る。例えば、修飾されて、１つ以上のヒドロキシル基をブロック基で置換し得る。これは、血清型Ａにおいて特に有用である［１２］。
【００２４】
（オリゴ糖）
莢膜糖類は、一般的にオリゴ糖の形態である。これらは、精製された莢膜多糖類の（例えば、弱酸中の加水分解または加熱による）フラグメント化（断片化）によって都合よく形成され、通常はその後に、所望の大きさのフラグメントが精製される。
【００２５】
多糖類のフラグメント化は、好ましくは、オリゴ糖における最終平均重合度（ＤＰ）を３０未満とするために実行される（例えば、血清型Ａにおいて１０〜２０、好ましくは約１０；血清型Ｗ１３５およびＹにおいて１５〜２５、好ましくは約１５〜２０；血清型Ｃにおいて１２〜２２；など）。ＤＰは、イオン交換クロマトグラフィーまたは比色アッセイによって都合よく測定される［１３］。
【００２６】
加水分解が実行されると、加水分解産物は、一般的に、短いオリゴ糖を除去するために、大きさで分類される。これは、限外ろ過の後にイオン交換クロマトグラフィーを行なうなどの、多様な方法で達成され得る。重合度が約６以下のオリゴ糖が、好ましくは血清型Ａのために除去され、約４未満のものが、好ましくは血清型Ｗ１３５およびＹのために除去される。
【００２７】
（共有結合による結合体化）
本発明の組成物における莢膜糖類は、通常はキャリアタンパク質に結合体化される。一般的に、結合体化は、胸膜糖類をＴ非依存性抗原からＴ依存性抗原に変換するので、糖類の免疫原性を強化し、従って、免疫記憶の初回刺激を可能にする。結合体化は、小児用ワクチンに特に有用であり［例えば引用文献１４］、周知の技術である［例えば引用文献１５〜２３などに記載］。
【００２８】
好ましいキャリアタンパク質は、ジフテリアまたは破傷風トキソイドなどの細菌毒素またはトキソイドである。ＣＲＭ１９７ジフテリアトキソイド［２４、２５，２６］が特に好ましい。その他の好適なキャリアタンパク質は、髄膜炎菌の外膜タンパク質［２７］、合成ペプチド［２８，２９］、熱ショックタンパク質［３０、３１］、百日咳タンパク質［３２，３３］、サイトカイン［３４］、リンフォカイン［３４］、ホルモン［３４］、成長因子［３４］、多様な病原体に由来する抗原に由来する複数のヒトＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含む人工タンパク質［３５］、インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）に由来するタンパク質Ｄ［３６］、内毒素原性細菌（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）に由来する毒素ＡまたはＢ［３７］などを含む。
【００２９】
本発明の組成物内において、１つより多いキャリアタンパク質の使用が可能である。従って、異なるキャリアタンパク質は、異なる血清型に使用され得る。例えば、血清型Ａ糖類は、ＣＲＭ１９７に結合体化され得、一方で、血清型Ｃ糖類は、破傷風トキソイドに結合体化され得る。１つより多いキャリアタンパク質を特定の糖類抗原に使用することも可能である。例えば、血清型Ａ糖類は、２つのグループに分けられ得、その中うち一方は、ＣＲＭ１９７に結合体化され、他方は、破傷風トキソイドに共役され得る。しかし、一般的に、すべての糖類に同じキャリアタンパク質を使用することが好ましい。
【００３０】
１つのキャリアタンパク質が、１つより多い糖類抗原を運び得る［３８］。例えば、１つのキャリアタンパク質が、血清型ＡおよびＣに由来する糖類を結合体化していることがあり得る。
【００３１】
糖類との結合体：タンパク質の比（ｗ／ｗ）が、０．５：１（すなわちタンパク質過剰）〜５：１（すなわち糖類過剰）であることが好ましく、１：１．２５〜１：２．５の比率を有するものがより好ましい。
【００３２】
結合体は、遊離するキャリアタンパク質と共に使用され得る［３９］。
【００３３】
任意の好適な結合体化反応が、必要に応じて任意の好適なリンカーと共に使用され得る。
【００３４】
糖類は、代表的に、結合体化前に活性化または機能付与される。活性化は、例えば、ＣＤＡＰなどのシアノ化（ｃｙａｎｙｌａｔｉｎｇ）試薬を含み得る（例えば、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレート（ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ  ｐｙｒｉｄｉｎｉｕｍ  ｔｅｔｒａｆｌｕｏｒｏｂｏｒａｔｅ［４０，４１など］）。その他の好適な技術は、カルボジイミド、ヒドラジド、活性エステル、ノルボラン（ｎｏｒｂｏｒａｎｅ）、ｐ−ニトロ安息香酸、Ｎ−ヒドロキシスクシニミド、Ｓ−ＮＨＳ、ＥＤＣ、ＴＳＴＵを使用する。引用文献２１の序文も参照のこと。
【００３５】
リンカー基による結合が、例えば、引用文献４２および４３に記載される手順などの、任意の公知の手順を使用して生成され得る。結合の１つのタイプは、多糖類の還元性アミノ化、得られたアミノ基とアジピン酸リンカー基の一端との結合、および、タンパク質とそのアジピン酸リンカー基ともう一方の端への結合を含む［１９，４４，４５］。その他のリンカーは、Ｂ−プロピオンアミド［４６］、ニトロフェニル−エチルアミン［４７］、ハロアシルハライド（ｈａｌｏａｃｙｌ  ｈａｌｉｄｅｓ）［４８］、グリコシド結合［４９］、６−アミノカプロン酸［５０］、ＡＤＨ［５１］、Ｃ４からＣ１２までの部分［５２］などを含む。リンカーを使用する代わりに、直接的な結合が使用され得る。タンパク質への直接結合は、例えば引用文献５３および５４に記載されるように、多糖類の酸化の後に、タンパク質との還元性アミノ化をすることを含み得る。
【００３６】
アミノ基の糖類への導入（例えば末端＝Ｏ基の−ＮＨ２への置換により）の後にアジピン酸ジエステル（ａｄｉｐｉｃ  ｄｉｅｓｔｅｒ）（例えば、アジピン酸  Ｎ−ヒドロキシスクシニミドジエステル）を用いて誘導体化をすること、および、キャリアタンパク質との反応を含む過程が好ましい。
【００３７】
結合体化後、遊離糖類および結合体化された糖類は分離され得る。これには、疎水性クロマトグラフィー、接線流れ方式（ｔａｎｇｅｎｔｉａｌ）限外濾過、ダイアフィルトレーションなどを含め、多数の好適な方法がある［引用文献５５および５６なども参照］。
【００３８】
本発明の組成物が結合体化されたオリゴ糖を含む場合、オリゴ糖の調製が結合体化に先立つことが好ましい。
【００３９】
（本発明の組成物の調製）
本発明の組成物が、莢膜糖類のタイプを１つより多く含む場合、それらは好ましくは別々に調製され（任意のフラグメント化、結合体化などを含む）、混合されて本発明の組成物を与える。
【００４０】
しかし、組成物が、血清型Ａに由来する莢膜糖類を含む場合、加水分解の可能性を最小にするために、使用の直前まで、血清型Ａの糖類が他の糖類と結合されないことが好ましい。これは、血清型Ａの成分を凍結乾燥された形態で、そして、その他の血清型の成分を液体の形態で有し、そして、使用する準備のときに、凍結乾燥された成分を再構成するように液体の成分を使用することによって、都合よく達成され得る。
【００４１】
従って、本発明の組成物は、以下を含むキットから調製され得る：（ａ）凍結乾燥形態のＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清型Ａ由来のカプセル化糖；および（ｂ）液体形態の一つ以上（例えば、一つ、二つ、三つ）のＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清型Ｃ、Ｗ１３５およびＹ由来のカプセル化糖。本発明はまた、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清型Ａ由来の凍結乾燥したカプセル化糖を、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清型Ｃ、Ｗ１３５およびＹの一つ以上由来のカプセル化糖と混合する工程（ここで、前記一つ以上の糖は、液体形態である）を含む、本発明の組成物を調製する方法を提供する。
【００４２】
本発明はまた、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清型Ｃ、Ｗ１３５およびＹ由来のカプセル化糖（ここで、糖は、液体形態である）を含む本発明の組成物を提供する。この組成物は、再構成のために凍結乾燥された血清型Ａ糖抗原とともにパッケージされ得るか、またはそれ自体で、組成物として使用され得る（例えば、血清型Ａに対する免疫化が所望されていない場合）。
【００４３】
（本発明の組成物の提示）
本発明の組成物は、種々の方法で提示およびパッケージされ得る。
【００４４】
組成物が注射用である場合、それらは、バイアルに入れて提示され得るかまたは予めシリンジにつめて提示され得る。シリンジは、針付きでまたは針なしで供給され得る。シリンジは、単回用量の組成物を含み、それに対して、バイアルは単回用量または複数回用量を含み得る。注射可能な組成物は通常、液状溶液または懸濁液である。あるいは、それらは注射前の液体ビヒクル中の溶液または懸濁液のための固体形態で提示され得る。
【００４５】
本発明の組成物が、使用前に準備なしに調製される場合（例えば、血清型Ａ糖が凍結乾燥形態で提示される場合）およびキットとして提示される場合、そのキットは、二つのバイアルを含み得るか、または注射の前にバイアルの内容物を再活性化するために使用されるシリンジの内容物とともに、一つの予めつめられたシリンジおよび一つのバイアルを含み得る。
【００４６】
しかし、好ましい組成物は、粘膜送達のためのものである。種々の利用可能な粘膜送達のための選択肢の内、鼻腔内経路は、既に大量生産されている比較的単純なデバイスを使用して容易なアクセスを提供するので最も実用的である。従って、本発明の組成物は、好ましくは、例えば、スプレー式点鼻薬、点鼻薬、ジェルまたは粉末によって、鼻腔内投与に適応される、および／または鼻腔内投与のためにパッケージされる［例えば、参考文献５７および５８］。
【００４７】
組成物の粘膜送達のための代替経路は、口、胃内、肺、腸、経皮、直腸、眼および膣による経路である。従って、本発明の組成物は、粘膜投与のために、適応される、および／またはパッケージされ得る［例えば、参考文献５９、６０および６１を参照のこと］。例えば、組成物が経口投与のためのものである場合、それは、錠剤またはカプセル（必要に応じて腸溶コート）、液体、遺伝子組換え植物材料、ドロップ、吸入器、エアゾール、腸溶コーティング、坐剤、ペッサリーなどの形態であり得る［参考文献６２および参考文献７３の１７章も参照のこと］。
【００４８】
いかなる送達経路であっても、本発明の組成物は好ましくは、単回用量形態でパッケージされる。有効用量は、慣用的に確立され得る。注射のため、または鼻腔内使用のための組成物のヒトの代表的な用量は、０．１〜０．５ｍｌの間の体積（例えば、一つの鼻腔当たり、１００μｌのスプレーを二回）を有する。
【００４９】
各用量内で、個々の糖抗原の量は、一般に１〜５０μｇ（糖の重量として計測した場合）の間であり、それぞれが約１０μｇであることが好ましい。
【００５０】
本発明の組成物は、好ましくは滅菌したものである。それらは、好ましくは発熱物質なしである。それらは好ましくは、ｐＨ６とｐＨ８との間、一般的にはｐＨ７周辺に緩衝される。組成物が、アルミニウムの水酸化物塩を含む場合、ヒスチジン緩衝液を使用することが好ましい［６３］。
【００５１】
（アジュバント）
組成物は、一般に１つまたはそれ以上のアジュバントを含む。アジュバントは、それらが混合される前、および／または後に本発明の組成物を形成するために糖に添加し得るが、異なる糖を混合する前にアジュバントと糖抗原が結合していることが好ましい。
【００５２】
しかしながら、必ずしもそれぞれの糖が混合前にアジュバント化されている必要はない。過剰のアジュバントは、さらなるアジュバント化されていない糖抗原を添加した場合、過剰なものは希釈され所望の最終濃度となるように１つの糖調製物に含まれ得る。本発明の組成物が凍結乾燥抗原（例えば、凍結乾燥血清型Ａ構成成分）から調製された、ある特定の実施形態においては、アジュバントを凍結乾燥物質に含まないことが好ましい。
【００５３】
粘膜送達に関して、粘膜アジュバントを使用することが好ましい。粘膜アジュバントは以下のものを含むが、これに限らない：（Ａ）Ｅ．ｃｏｌｉ熱不安定性エントロトキシン（「ＬＴ」）、またはその解毒化された変異体［例えば、参考文献６４の第５章］；（Ｂ）コレラ毒素（「ＣＴ」）、またはその解毒化した変異体［例えば、参考文献６４の第５章］；（Ｃ）必要に応じて表面に陰電荷を有するように（例えば、ＳＤＳで）、または正電荷を有するように（例えば、ＣＴＡＢのような、陽イオン性界面活性剤で）処理された、生分解性および無毒性物質（例えば、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリ無水物、（例えば、ポリ（ラクチド−コ−グリコリドなどのような）ポリカプロラクトンなど）から形成された、微粒子（すなわち、直径約１００ｎｍ〜約１５０μｍ、さらに好ましくは直径約２００ｎｍ〜約３０μｍ、最も好ましくは直径約５００ｎｍ〜約１０μｍの粒子）；（Ｄ）ポリオキシエチレンエーテルまたはポリオキシエチレンエステル［６５］；（Ｅ）オクトキシノールと組み合わせたポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤［６６］、またはオクトキシノールのような付加的な非イオン性界面活性剤を少なくとも１つ組み合わせた、ポリオキシエチレンアルキルエーテル界面活性剤またはポリオキシエチレンアルキルエステル界面活性剤［６７］；（Ｆ）キトサン［例えば、６８］；（Ｇ）免疫活性化オリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）およびサポニン［６９］；（Ｈ）リポソーム［参考文献７３の第１３章および第１４章］；（Ｉ）アミノアルキルグルコサミニドリン酸誘導体のような（例えば、ＲＣ−５２９）、モノホスホリル脂質Ａ擬似物質［７０］；（Ｊ）ポリホスファゼン（ＰＣＰＰ）；（Ｋ）エステル化されたヒアルロン酸ミクロスフェア［７２］のような生体接着性［７１］物質、またはポリ（アクリル酸）、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリサッカライドおよびカルボキシメチルセルロースの架橋誘導体からなる群から選択された粘膜付着性物質。他の粘膜アジュバントもまた使用し得る［例えば、参考文献７３の第７章参照］。
【００５４】
上記の粘膜アジュバントに加えて、本発明の組成物は、以下の群から選択された１つまたはそれ以上のさらなるアジュバントを含み得る：（Ａ）例えば、水酸化アルミニウム（オキシ水酸化物を含む）、リン酸アルミニウム（ヒドロキシリン酸塩を含む）、硫酸アルミニウムなどのようなアルミニウム塩（ミョウバン）［参考文献７３の第８章および第９章］；（Ｂ）例えば、（ａ）マイクロフリューダイザを用いてサブミクロン粒子に処方した、５％スクアレン、０．５％Ｔｗｅｅｎ  ８０、０．５％Ｓｐａｎ  ８５（必要に応じて、ＭＴＰ−ＰＥを含む）を含むＭＦ５９ＴＭ［参考文献７３の第１０章；参考文献７４，７５］、（ｂ）１０％スクアレン、０．４％Ｔｗｅｅｎ  ８０、５％ｐｌｕｒｏｎｉｃ−ｂｌｏｃｋｅｄポリマー  Ｌ１２１、およびサブマイクロ乳濁液にマイクロフリューダイズ化または大きい粒子サイズの乳濁液を生成するようにボルテックスしたｔｈｒ−ＭＤＰを含む、ＳＡＦ、および（ｃ）２％スクアレン、０．２％Ｔｗｅｅｎ  ８０、およびモノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコレート（ＴＤＭ）、および細胞壁骨格（ＣＷＳ）、好ましくはＭＰＬ＋ＣＷＳ（ＤｅｔｏｘＴＭ）からなる群由来の、細菌の細胞壁構成成分のうち１つまたはそれ以上を含むＲｉｂｉＴＭアジュバントシステム（ＲＡＳ）、（Ｒｉｂｉ  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ，Ｈａｍｉｌｔｏｎ，ＭＴ）のような、ｏ／ｗ乳濁液処方物（この処方物は、例えば、ムラミルペプチド［ムラミルペプチドは、Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン（ｎｏｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミン  ＭＴＰ−ＰＥ）などを含む］のような他の特定の免疫活性化薬剤、または細菌の細胞壁構成成分を有する、または有さない）；（Ｃ）単純な形態またはＩＳＣＯＭＳ（免疫活性化複合体；参考文献７３の第２３章）（このＩＳＣＯＭＳは、例えば参考文献７６のように、付加的な界面活性剤を欠いている可能性がある）のような単純な形態から生成された粒子形態のどちらかである、ＱＳ２１またはＳｔｉｍｕｌｏｎＴＭ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒ，ＭＡ）のようなサポニンアジュバント［参考文献７３の第２２章］；（Ｄ）フロイント完全アジュバント（ＣＦＡ）およびフロイント不完全アジュバント（ＩＦＡ）；（Ｅ）インターロイキン（例えば、ＩＬ−１，ＩＬ−２，ＩＬ−４，ＩＬ−５，ＩＬ−６，ＩＬ−７，ＩＬ−１２，［７７］など）、インターフェロン（例えばγインターフェロン）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）などのようなサイトカイン；（Ｆ）必要に応じて肺炎球菌糖と共に用いる場合には実質的にミョウバンを欠いた状態である（例えば、参考文献８０）、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）または３−Ｏ−脱アシル化ＭＰＬ（３ｄＭＰＬ）（例えば、参考文献７８および７９）；（Ｇ）例えば、ＱＳ２１および／またはｏ／ｗ乳濁液と、３ｄＭＰＬの組み合わせ（例えば、参考文献８１，８２および８３）；（Ｈ）ＣｐＧモチーフを構成するオリゴヌクレオチド（すなわち、必要に応じて、シトシンが５−メチルシトシンに置き換わっているＣＧジヌクレオチドを少なくとも１つ含むオリゴヌクレオチド）；（Ｉ）免疫賦活剤および金属塩粒子（例えば、参考文献８４）；（Ｊ）サポニンおよびｏ／ｗ乳濁液（例えば、参考文献８５）；（Ｋ）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋３ｄＭＰＬ＋ＩＬ−１２（必要に応じて、＋ステロール）（例えば、参考文献８６）；（Ｌ）二重鎖ＲＮＡ；（Ｍ）組成物の有効性を促進する免疫活性化薬剤として作用する他の物質［例えば、参考文献７３の第７章］。
【００５５】
リン酸アルミニウムを使用する場合、１つまたはそれ以上の糖をアルミニウム塩に吸着させることが可能であるが、そうしないことが好ましく、（例えば、リン酸緩衝液の使用などにより）溶液中には遊離のリン酸イオンが含まれていることが好ましい。水酸化アルミニウムを用いる場合、塩に糖を吸着することが好ましい。血清型Ａ由来の糖に対しては、アジュバントとしての水酸化アルミニウムの使用が好ましくあり得る。
【００５６】
好ましい粘膜アジュバントは、キトサンおよび細菌毒素を無毒化した変異体（特に、ＬＴ）である。これらのアジュバントは、単独で使用し得るか、または同時投与がより少ない用量の毒素の使用を許容し、それによって安全性が向上するため、組み合わせることで有利に使用され得る。
【００５７】
（キトサン）
キトサンは、アジュバントとしての使用が公知であり［例えば、参考文献８７〜９８］、特に粘膜（例えば、鼻腔内粘膜）に対する使用が公知である。キトサン（図１１）は、エキソ骨格のポリマーキチン（図１２）のＮ−脱アセチル化誘導体であるが、Ｎ−脱アセチル化はほとんど完了しない。脱アセチル化は、キチンとは異なりキトサンが希酢酸および希ギ酸に可溶であることを意味する。キトサンはまた、非ワクチン性の製薬分野における広範な適用性が見出されている［９９］。
【００５８】
キトサンのグルコサミンモノマーの繰り返しは、アミン基を含む。この基は、ポリマーの溶解性に影響するプロトン化のために、遊離のアミン基（−ＮＨ２）または陽イオン性のアミン基（−ＮＨ３＋）として存在し得る。アミン基は化学的に活性であり、置換され得る。特に本発明に関して、アミン基は１つまたはそれ以上のアルキル基（「Ａ」は例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチルなどであり、−ＮＨＡ，−ＮＨ２Ａ＋，−ＮＡ１Ａ２，−ＮＨＡ１Ａ２＋，−ＮＡ１Ａ２Ａ３＋）に置換し得る。好ましい誘導体はトリ−アルキル化体、および特に好ましい誘導体はトリメチル化体である（すなわち、トリメチルキトサン、または「ＴＭＣ」−図１３）。これらの誘導体は、広範なｐＨ領域で、未修飾のキトサンよりも非常に高い親水性を有する。
【００５９】
キトサンポリマー内の全てのアミンがこのようにして置換される必要はない。キトサン鎖の長さに沿った置換の程度は、１Ｈ−ＮＭＲにより決定され得、反応工程［１００］の数および持続時間により制御され得る。モノマーの少なくとも１０％（例えば、少なくとも、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％以上）が、置換アミンを有することが好ましい。
【００６０】
キトサン内のモノマーの１００％がアルキル化アミンを保有することが稀である理由は、主に２つある。第一に、置換反応は、通常１００％有効ではない。第二に、キチンの脱アセチル化は通常１００％有効でないため、１００％のモノマー単位がアミン群を保有するキトサンを見出すことは稀である。従って、本発明において使用されるアルキル化キトサン誘導体は、いくつかのモノマー単位上にアミドおよび／または非アルキル化群を有し得、キトサンはいくつかのアミド群を有し得る。本発明で使用されるキトサンおよび誘導体は、好ましくは、少なくとも７５％脱アセチル化される。
【００６１】
キトサンには、例えば、約５，０００〜１０，０００の分子量のオリゴ糖から高分子量（例えば、６００，０００〜１，０００，０００）のポリマーまで、種々の分子量のものがある。
【００６２】
カチオン性キトサンまたは誘導体が使用される場合は、例えば、塩素イオンまたは乳酸塩などの塩の形態である。
【００６３】
キトサンまたは誘導体は、例えば、溶液や粉末や粒子などの種々の物理的形状をとり得る。粒子形状（微粒子を含む）は、架橋されてもされなくてもよく、またスプレードライ［１０１、１０２］により適宜形成され得る粒子形状が、好ましい。その他の物理的形状としては、ゲル、ビーズ、フィルム、スポンジ、繊維、乳濁液などが挙げられる。
【００６４】
用語「キトサン」は、本発明の組成物、プロセス、方法および使用に関して用いられる場合、キトサンのこれらの形状および誘導体の全てを含む。
【００６５】
（無害化変異毒素）
ＡＤＰリボース単位のＮＡＤ＋から標的タンパク質への移動を触媒する、ＡＤＰリボシル化細菌性外毒素は、広く知られている。例としては、ジフテリア毒素（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）、外毒素Ａ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、コレラ毒素（ＣＴ；Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａ）、易熱性エンテロトキシン（ＬＴ；Ｅ．ｃｏｌｉ）および百日咳毒素（ＰＴ）などが挙げられる。さらなる例は、引用文献１０３および１０４に見られる。
【００６６】
毒素は、代表的に、２つの機能的に明白なドメイン、ドメインＡとドメインＢとに分類される。Ａサブユニットは、毒性酵素活性を担い、一方、Ｂサブユニットは、細胞結合を担う。サブユニットは、同一のポリペプチド鎖上のドメインまたは別のポリペプチド鎖上のドメインであり得る。サブユニットは、それ自体がオリゴマーになり得、例えば、ＣＴのＡサブユニットは、ジスルフィド結合により連結されているＡ１およびＡ２から成り、ＣＴのＢサブユニットは、ホモペンタマーである。代表的に、標的細胞との初期接触は、Ｂサブユニットにより仲介され、次いで、サブユニットＡのみが細胞内に入る。
【００６７】
毒素は、代表的に、免疫原性であるが、これらのワクチン内への封入はこれらの毒性により妨害される。免疫原性を失うことなく毒性を除去するために、毒素はゲルタルアルデヒドまたはホルムアルデヒドのような化学薬品により処理されてきた。より合理的なアプローチは、主要な活性部位残基の部位特異的変異誘発に依存し、免疫原性を保持したまま毒性酵素活性を除去する［例えば、引用文献１０５（ＣＴおよびＬＴ）、１０６（ＰＴ）、６４など］。現在の無細胞百日咳ワクチンとしては、２つのアミノ酸置換（Ａｒｇ９→ＬｙｓおよびＧｌｕ１２９→Ｇｌｙ；「ＰＴ−９Ｋ／１２９Ｇ」［１０７］）を有する百日咳毒素の形態が挙げられる。
【００６８】
その免疫原の特性と同様に、毒素は、アジュバントとして使用されてきた。非経口アジュバント活性は、１９７２年に初めて観察され［１０８］、粘膜アジュバント活性は、１９８４年に初めて観察された［１０９］。驚くべきことに、毒素の無害化された形態がアジュバント活性を保持することは、１９９３年に見出された［１１０］。
【００６９】
本発明の組成物としては、無害化ＡＤＰリボシル化毒素が挙げられる。毒素は、ジフテリア毒素やシュードモナス外毒素Ａや百日咳毒素であり得るが、好ましくは、コレラ毒素（ＣＴ）、または、より好ましくは、Ｅ．ｃｏｌｉ易熱性エンテロトキシン（ＬＴ）である。使用され得るその他の毒素は、引用文献１０４（配列番号１〜７およびその変異体）において開示されている毒素である。
【００７０】
免疫原性および／またはアジュバント活性の喪失を伴わないこれらの毒素の無害化は、任意の適切な手段により達成され得、変異誘発性を伴うものが好ましい。変異誘発性は、１つ以上の置換、欠失および／または挿入を含み得る。
【００７１】
好ましい無害化変異体は、残基Ａｒｇ−７（例えば、Ｌｙｓ置換）に変異を有するＬＴ、残基Ａｒｇ−７（例えば、Ｌｙｓ置換）に変異を有するＣＴ、残基Ａｒｇ−１１（例えば、Ｌｙｓ置換）に変異を有するＣＴ、Ｖａｌ−５３に変異を有するＬＴ、Ｖａｌ−５３に変異を有するＣＴ、残基Ｓｅｒ−６１（例えば、Ｐｈｅ置換）に変異を有するＣＴ、残基Ｓｅｒ−６３（例えば、ＬｙｓまたはＴｙｒ置換）に変異を有するＬＴ［例えば、引用文献１１１−Ｋ６３の第５章；引用文献１１２−Ｙ６３］、残基Ｓｅｒ−６３（例えば、ＬｙｓまたはＴｙｒ置換）に変異を有するＣＴ、残基Ａｌａ−７２（例えば、Ａｒｇ置換）に変異を有するＬＴ［１１３−Ｒ７２］、Ｖａｌ−９７に変異を有するＬＴ、Ｖａｌ−９７に変異を有するＣＴ、Ｔｙｒ−１０４に変異を有するＬＴ、Ｔｙｒ−１０４に変異を有するＣＴ、残基Ｐｒｏ−１０６（例えば、Ｓｅｒ置換）に変異を有するＬＴ、残基Ｐｒｏ−１０６（例えば、Ｓｅｒ置換）に変異を有するＣＴ、残基Ｇｌｕ−１１２（例えば、Ｌｙｓ置換）に変異を有するＬＴ、残基Ｇｌｕ−１１２（例えば、Ｌｙｓ置換）に変異を有するＣＴ、残基Ａｒｇ−１９２（例えば、Ｇｌｙ置換）に変異を有するＬＴ、残基Ａｒｇ−９（例えば、Ｌｙｓ置換）に変異を有するＰＴ、残基Ｇｌｕ−１２９（例えば、Ｇｌｙ置換）に変異を有するＰＴ、および引用文献１０５において開示される任意の変異である。
【００７２】
これらの変異は、組み合わされ得る（例えば、ＰＴにおけるＡｒｇ−９−Ｌｙｓ  ＋  Ｇｌｕ−１２９−Ｇｌｙ、またはＤ５３およびＫ６３の両方の変異を有するＬＴなど）。
【００７３】
残基６３または７２に変異を有するＬＴは、好ましい無害化毒素である。ＬＴ−Ｋ６３毒素およびＬＴ−Ｒ７２毒素が、特に好ましい［１１４］。
【００７４】
これらの残基の番号付けが、原型に基づいており、例えば、Ｓｅｒ−６３は、実際に所定のＬＴ改変体中の第６３アミノ酸であり得ないが、アミノ酸配列のアラインメントがＳｅｒ−６３に対応する位置を明らかにすることが、理解される。
【００７５】
（組成物のさらなる成分）
髄膜炎菌性糖類抗原に加えて、本発明の組成物としては、髄膜炎菌性タンパク質抗原が挙げられ得る。Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ［例えば、引用文献１１５〜１２０］またはＯＭＶ調製物［例えば、引用文献１２１〜１２４など］の血清型Ｂからのタンパク質を含むことが好ましい。
【００７６】
非髄膜炎菌性抗原および非ナイセリア抗原、好ましくは、髄膜炎菌性成分に対する免疫応答を減らさない抗原も含まれ得る。例えば、引用文献１２５は、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの血清型Ｂおよび血清型Ｃからのオリゴ糖とＨｉｂ糖類との組み合わせを開示する。肺炎球菌（Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、ジフテリア、破傷風、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ、ポリオおよび／またはＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）からの抗原が、好ましい。特に好ましい非ナイセリア抗原としては、以下のものが挙げられる。
−ＣａｇＡ［１２６〜１２９］、ＶａｃＡ［１３０、１３１］、ＮＡＰ［１３２、１３３、１３４］、ＨｏｐＸ［例えば、１３５］、ＨｏｐＹ［例えば、１３５］のようなＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉからの抗原および／またはウレアーゼ
−Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅからの糖類抗原［例えば、１３６、１３７、１３８］。  
−不活化ウイルスのようなＡ型肝炎ウイルスからの抗原［例えば、１３９、１４０］。  
−表面抗原および／またはコア抗原のようなＢ型肝炎ウイルスからの抗原［例えば、１４０、１４１］、および、それに伴う、好ましくはリン酸アルミニウム［１４２］上に吸着される表面抗原。
−Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ  Ｂからの糖類抗原［例えば、９］、好ましくは、リン酸アルミニウム上に吸着される糖類抗原、または吸収されない糖類抗原［１４３］。
−Ｃ型肝炎ウイルスからの抗原［例えば、１４４］。
−Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅからの抗原［例えば、１１５〜１１８］。
−Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅからの抗原［例えば、引用文献１４５〜１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１］。  
−Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓからの抗原［例えば、１５２］。
−Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓからの抗原［例えば、１５３］。
−ＩＰＶのようなポリオ抗原［例えば、１５４、１５５］。
−凍結乾燥不活化ウイルス［例えば、１５７、ＲａｂＡｖｅｒｔＴＭ］のような狂犬病抗原［例えば、１５６］。  
−はしか、おたふく風邪および／または風疹抗原［例えば、引用文献１の第１２章、第１３章、第１７章］。
−赤血球凝集素および／またはノイラミニダーゼ表面タンパク質のようなインフルエンザ抗原［例えば、引用文献１の第２１章］。  
−Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓからの抗原［例えば、１５８］。
−Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅからの抗原（Ｂ群レンサ球菌）［例えば、１５９、１６０］。
−Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓからの抗原（Ａ群レンサ球菌）［例えば、１６０、１６１、１６２］。  
−Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓからの抗原［例えば、１６３］。  
−ＲＳウイルス（ＲＳＶ  ［１６４、１６５］）のようなパラミクソウイルスからの抗原および／またはパラインフルエンザウイルス（ＰＩＶ３［１６６］）。
−Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓからの抗原［例えば、１６７、１６８、１６９］。  
−黄熱病ウイルス、日本脳炎ウイルス、デング熱ウイルスの４つの血清型、ダニ媒介性脳炎ウイルス、西ナイル熱ウイルスからのようなフラビウイルス科（フラビウイルス属）のウイルスからの抗原。
−古典的ブタ熱ウイルス、牛ウイルス性下痢症ウイルスおよび／またはボーダー病ウイルスからのようなペスチウイルス抗原。
−例えば、パルボウイルスＢ１９からの、パルボウイルス抗原。  
−破傷風トキソイド［例えば、引用文献１の第１８章］
−Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓからの、百日咳ｈｏｌｏｔｏｘｉｎ（ＰＴ）および線維状赤血球凝集素（ＦＨＡ）、必要に応じてペルタクチンならびに／または凝集原２および３と併用もされる［例えば、引用文献１７０および１７１］。  
−  細胞性百日咳抗原。
【００７７】
混合物は１つ以上のこれらのさらなる抗原を含有し得、必要な場合無害化され得る。（例えば、化学的および／または遺伝的手段による百日咳毒素の無害化）。  
【００７８】
ジフテリア抗原が混合物に含まれる場合、この混合物は、破傷風抗原および百日咳抗原も含むことが好ましい。同様に、破傷風抗原が混合物に含まれる場合、この混合物は、ジフテリア抗原および百日咳抗原も含むことが好ましい。同様に、百日咳抗原が混合物に含まれる場合、この混合物は、ジフテリア抗原および破傷風抗原も含むことが好ましい。
【００７９】
混合物内の抗原は、代表的に、各々、少なくとも１μｇ／ｍｌの濃度で存在する。概して、任意の所定の抗原の濃度は、その抗原に対する免疫応答を誘発するのに十分である。
【００８０】
以下の３つの抗原全てを、本発明の組成物に同時に含まないことが好ましい；（１）髄膜炎菌性糖類、（２）Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅに対する免疫応答を誘導する抗原、（３）Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに対する免疫応答を誘導する抗原。しかし、これら３つの抗原が同一の組成物に含まれる場合、その組成物がキトサンのアルキル化誘導体（例えば、トリメチルキトサン）をアジュバントとして含むことが好ましい。
【００８１】
混合物内のタンパク質抗原を用いる代替として、その抗原をコードする核酸が使用され得る。このようにして、混合物のタンパク質成分は、タンパク質をコード化する核酸（好ましくは、例えば、プラスミドの形態のＤＮＡ）により置換され得る。同様に、本発明の組成物は、糖類抗原を模倣するタンパク質（例えばｍｉｍｏｔｏｐｅ［１７２］）、または抗イディオタイプ抗体を含有し得る。これらは、個々の糖成分を置換し得るか、またはそれらを補充し得る。一例として、ワクチンは、糖類自体の代わりに、ＭｅｎＣ［１７３］莢膜多糖類またはＭｅｎＡ［１７４］莢膜多糖類を模倣するペプチドを、含有し得る。
【００８２】
本発明の組成物は、低レベルで（例えば、＜０．０１％）界面活性剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ８０のようなＴｗｅｅｎ）を含有し得る。本発明の組成物は、特に、それらが凍結乾燥される場合、または凍結乾燥された物質から再構成された物質を含む場合に、糖アルコール（例えば、マンニトール）またはトレハロースを、例えば、約１５ｍｇ／ｍｌで、含有し得る。
【００８３】
（免疫原性）
本発明の組成物は、免疫原性である。好ましい免疫原性組成物は、ワクチンである。本発明に従うワクチンは、予防的（すなわち、感染を防ぐため）または治療的（すなわち、感染後の疾患を治療するため）のどちらかであり得るが、一般的には、予防的である。
【００８４】
本発明の免疫原性組成物およびワクチンは、髄膜炎菌性糖類に加えて、代表的に、「薬剤的に受容可能なキャリア」を含有し、このキャリアは、それ自体がこの組成物を受ける個体に有害な抗体の生成を誘導しない、任意のキャリアを含む。適切なキャリアは、代表的に、大きく、ゆっくりと代謝される巨大分子であり、例えば、タンパク質、多糖類、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、高分子アミノ酸、アミノ酸コポリマー、トレハロース［１７５］、脂質凝集体（例えば、油滴またはリポソーム）、および不活化ウイルス粒子である。このようなキャリアは、当業者に周知である。ワクチンは、水、生理食塩水、グリセロールなどのような希釈液も含み得る。さらに、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝物質などのような補助物質が存在し得る。薬剤的に受容可能な賦形剤についての徹底的な議論は、引用文献１７６において見出され得る。
【００８５】
ワクチンとして用いられた免疫原性組成物は、免疫学的有効量の糖類抗原、および必要に応じて、他の任意の上述の組成物を含有する。「免疫学的有効量」は、単回投与または一連の投与の一部のどちらかで、個体への投与が治療または予防に有効である量を意味する。この量は、処置される個体の健康状態または身体状態、年齢、処置される個体の分類学的群（例えば、非ヒト霊長類、霊長類など）、抗体を合成する個体の免疫系の能力、所望の保護の程度、ワクチンの処方、医学的状態の処置医の評価、およびその他の関連要因により様々である。その量は、慣用的試験により決定され得る比較的広い範囲内であることが期待される。
【００８６】
本発明の組成物の免疫原性は、それらを試験被験体（例えば、１２〜１６月齢の小児または動物モデル）に投与し、次いで、総ての高結合活性抗カプセルＩｇＧの血清殺菌性抗体（ＳＢＡ）およびＥＬＩＳＡ滴定（ＧＭＴ）を含む標準パラメータを決定することにより、決定され得る。一般的に、これらの免疫応答は、組成物の投与から約４週間後に決定され、組成物の投与前に決定された値と比較される。少なくとも４倍または８倍のＳＢＡ上昇が好ましい。組成物が１用量より多く投与される場合、１回より多い投与の後で、決定が下され得る。
【００８７】
（本発明の組成物の投与）
上述のとおり、本発明の組成物は、非経口および粘膜を含む種々の経路により投与され得る。非経口投与の好ましい経路は注射である。注射は、皮下注射、腹腔内注射、静脈内注射または筋肉内注射であり得る。大腿への筋肉内投与が、好ましい。無針注射が、使用され得る。粘膜投与の好ましい経路は、鼻腔内である。経皮投与もまた、可能である（例えば、引用文献１７８を参照のこと）。
【００８８】
投与は、単回投与計画または多回投与計画であり得る。第一投与計画の後に追加免疫投与計画が続き得る。初回免疫（ｐｒｉｍｉｎｇ）と追加免疫との間の適切なタイミングは、定期的に決定され得る。
【００８９】
投与は、一般的に動物に対して行われ、特にヒト被験体が処置され得る。組成物は、小児およびティーンエイジャーのワクチン接種に特に有用である。
【００９０】
（医学的な方法および使用）
本発明は、患者において免疫応答を高める方法を提供し、この方法は、本発明の組成物を患者に投与する工程を包含する。免疫応答は、好ましくは、髄膜炎菌性疾患に対して保護性であり、体液性免疫応答および／または細胞性免疫応答を含み得る。免疫応答および／または投与は、両方とも粘膜性であることが好ましい。
【００９１】
患者は、好ましくは小児である。より好ましいクラスの患者は、成人女性であり、そして特に出産適齢期の女性もしくは妊婦である。本発明の組成物は、特に、母体経路を経由して小児を受動免疫させるために適する。
【００９２】
この方法は、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓに対して初回刺激を受けた患者において、ブースター応答を引き起こし得る。
【００９３】
本発明はまた、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの血清型Ａ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹの中の少なくとも２つに由来する莢膜糖類抗原（ここでこの莢膜糖類抗原は、キャリアタンパク質と結合されるか、および／またはオリゴ糖である）の、免疫応答を引き起こすための動物への鼻腔内送達のための薬物の製造における使用を、提供する。本発明はまた、（１）Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの血清型Ａ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹの中の少なくとも１つに由来する莢膜糖類抗原ならびに（２）キトサンの、免疫応答を引き起こすための動物への鼻腔内送達のための薬物の製造における、使用を提供し、ここでこの莢膜糖類抗原は、キャリアタンパク質と結合されるか、および／またはオリゴ糖である。
【００９４】
これらの薬物は、好ましくはＮｅｉｓｓｅｒｉａ（例えば、ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｓ、ｓｅｐｔｉｃａｅｍｉａ、ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａなど）に起因する疾患の予防および／または処置のためである。これらは、好ましくは鼻腔内投与のためである。これらは、好ましくはＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの血清型Ａ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹの中の少なくとも２つ（すなわち、２つ、３つもしくは４つ）に由来する莢膜糖類抗原を含む。
【００９５】
（定義）
用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」とは、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」および「から成る（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」を意味し、例えば、Ｘを「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」組成物は、排他的にＸから成り（ｃｏｎｓｉｓｔ）得るかまたはさらなる任意のもの、例えば、Ｘ＋Ｙを含み（ｉｎｃｌｕｄｅ）得る。
【００９６】
数値ｘについての用語「約」とは、例えば、ｘ±１０％を意味する。
【００９７】
単語「実質的に」は、「完全に」を排除しない、例えば、Ｙを「実質的に含まない」組成物は、Ｙを完全に含まなくあり得る。必要に応じ、単語「実質的に」は、本発明の定義から省略され得る。
【実施例】
【００９８】
（本発明を実施するための形態）
（髄膜炎菌性血清型Ｃワクチン）
ＣＲＭ１９７髄膜炎菌性Ｃオリゴ糖結合体［６、９］を、Ｎ−トリメチル塩化キトサン［１７９］アジュバントおよび／またはＬＴ−Ｋ６３アジュバントを用いて、１μｇ／用量で（糖類として測定）マウスに鼻腔内投与した。ＴＭＣは、８μｇ／用量として使用し、１８．９％置換のエビ殻（９４．５％アセチル化）からのキトサン（「Ｃｈｉｔｏｃｌｅａｒ」、Ｐｒｉｍｅｘ  ｅｈｆ、Ｉｃｅｌａｎｄ）から調製した。ＬＴ−Ｋ６３は、１μｇ／用量または０．１μｇ／用量で使用した。無麻酔のメスＢＡＬＢ／ｃを、１０μＬ容量（５μＬ／鼻孔）の処方物で、０日目、２１日目、３５日目に鼻腔内免疫した。血清サンプルは、各免疫の前後に採取した。鼻洗浄は、３回目の免疫後に１０日間行った。ＭｅｎＣに特異的なＩｇＧおよびＩｇＡ抗体価ならびにＬＴに特異的なＩｇＧおよびＩｇＡ抗体価を、ＥＬＩＳＡ［１８０］により決定した。
【００９９】
血清ＩｇＧ応答を図１４に示す：（Ａ）ＥＬＩＳＡおよび（Ｂ）殺菌性（対数比率）。図１５は、（Ａ）血清および（Ｂ）鼻洗浄におけるＩｇＡ力価を示す。図１６は、脾臓増殖アッセイの結果を示す。
【０１００】
データは、ＴＭＣが単独で免疫原性を上昇させること、また、ＴＭＣがＬＴ−Ｋ６３アジュバントと同時投与される場合に免疫原性を上昇させることを示す。１μｇのＬＴ−Ｋ６３およびＴＭＣを併用して投与されたマウスは、皮下免疫により得られるＩｇＧ力価に匹敵するＩｇＧ力価を達成した。さらに、混合型アジュバントは、両用量で、皮下免疫と同等または皮下免疫より良い血清殺菌性抗体応答を生じた。皮下免疫は、鼻洗浄においてＭｅｎＣ特異性ＩｇＡ応答を発生させなかった。  
【０１０１】
このように、ＴＭＣおよびＬＴＫ−６３は、単独または併用のどちらかで、ＭｅｎＣ糖抗原に対する有効な鼻腔内アジュバントである。有利な点として、ＴＭＣをＬＴ−Ｋ６３に追加することは、免疫原性の喪失なく、ＬＴ−Ｋ６３の用量を９０％低下させる。したがって、ＴＭＣにより、潜在残留毒性のある成分を、免疫原性の喪失なく、減少し得る。      
【０１０２】
同様の実験を、非メチル化「Ｃｈｉｔｏｃｌｅａｒ」キトサンをアジュバントとして用いて行った。同じ結合体抗原を、ＬＴ−Ｋ６３（１μｇ）および／またはキトサン（１０μｇまたは２０μｇ）を用いて、同じ経路で、２．５μｇ糖類／用量でマウスに投与した。６群のマウスを使用した。
【０１０３】
【表１】
2005525415.tif 000003
【０１０４】
図１７〜１９に示すように、ＬＴ−Ｋ６３およびキトサンを用いた鼻腔内投与は、ミョウバンを用いた皮下投与と比較して、同等のＩｇＧおよび血清殺菌性応答を与え、経鼻ＩｇＡ応答を引き起こした。  
【０１０５】
（混合ワクチン）
オリゴ糖結合体の混合ＡＣＷＹ組成物を、引用文献８に記載の物質を用いて調製した。組成物は、ｐＨ７．４でＰＢＳを用いて緩衝化した。各結合体の濃度は以下のとおりであった。
【０１０６】
【表２】
2005525415.tif 000004
【０１０７】
組成物を、マウスに１０μＬ容量で（５μＬ／鼻孔）、アジュバントを用いずに、または以下の粘膜アジュバントのうちの１つを用いて、鼻腔内投与した。  
【０１０８】
【表３】
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【０１０９】
比較のために、同一の抗原組成物を、水酸化アルミニウムアジュバントを用いて、皮下投与した。  
【０１１０】
コントロールとして、ＭｅｎＣ結合体を単独で、併用組成物におけるＭｅｎＣと同じアジュバントを用いて同じ経路で同等の濃度で投与した。
【０１１１】
このように、１０群のマウスに以下の組成物を投与した。
【０１１２】
【表４】
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【０１１３】
実験の第１セットにおいて、３回の鼻腔内投薬（ミョウバンでは皮下投与）後の血清ＩｇＧ値は、ＧＭＴ（ＭＥＵ／ｍｌ）±標準偏差（図２）として、以下のように表される：
【０１１４】
【表５】
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【０１１５】
同じ動物を、仔ウサギ補体の存在下で、血清殺菌性抗体について試験した。使用菌株は、Ａ−Ｆ６１２４、Ｃ−Ｃ１１、  Ｗ１３５−５５５４およびＹ−２４０５３９であった。
【０１１６】
結果は以下のとおりであった（図３）：
【０１１７】
【表６】
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【０１１８】
また、脾臓における細胞増殖を、同じ１０群について試験した。ＭｅｎＡＣＷＹ抗原を投与した奇数群の結果を図４Ａに、ＭｅｎＣのみを投与した偶数群の結果を図４Ｂに示す。
【０１１９】
実験の第２セットにおいて、皮下投与の群１を除いて、マウスに２０μＬの以下ＡＣＷＹ組成物（２μｇ糖類の各抗原）を鼻腔内投与した。  
【０１２０】
【表７】
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【０１２１】
３回の免疫後の血清ＩｇＧを図５に、血清ＢＣＡを図６に、および細胞増殖を図７Ａおよび７Ｂに示す。  
【０１２２】
同様の実験の第３セットにおいて、皮下投与の群１を除いて、マウスに２０μＬの以下のＡＣＷＹ組成物（２μｇ糖類の各抗原）を鼻腔内投与した。
【０１２３】
【表８】
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【０１２４】
３回の免疫後の血清ＩｇＧを図８に、血清ＢＣＡを図９に、および細胞増殖を図１０Ａおよび１０Ｂに示す。  
【０１２５】
このように、ＬＴＫ６３およびＴＭＣの両方（特にその組み合わせ）は、髄膜炎菌性血清型Ａ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹに対する混合ワクチンの鼻腔内送達に高い有効性を示すアジュバントである。
【０１２６】
本発明は、例示としてのみ記載されており、そして本発明の範囲および精神から逸脱することなく改変がなされ得ることが、理解される。
【０１２７】
【数１】
2005525415.tif 000011
【０１２８】
【数２】
2005525415.tif 000012
【０１２９】
【数３】
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【０１３０】
【数４】
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【０１３１】
【数５】
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【図面の簡単な説明】
【０１３２】
【図１】図１は、オリゴ糖結合体の調製を図示する。
【図２】図２は、実施例からの血清ＩｇＧのデータを示す。
【図３】図３は、実施例からの血清ＢＣＡのデータを示す。
【図４】図４は、実施例からの脾臓増殖のデータを示す。
【図５】図５は、実施例からの血清ＩｇＧのデータを示す。
【図６】図６は、実施例からの血清ＢＣＡのデータを示す。
【図７】図７は、実施例からの脾臓増殖のデータを示す。
【図８】図８は、実施例からの血清ＩｇＧのデータを示す。
【図９】図９は、実施例からの血清ＢＣＡのデータを示す。
【図１０】図１０は、実施例からの脾臓増殖のデータを示す。
【図１１】図１１は、キトサンの繰り返し構造を示す。
【図１２】図１２は、キチンの繰り返し構造を示す。
【図１３】図１３は、トリメチルキトサンの繰り返し構造を示す。
【図１４】図１４Ａは、ＴＭＣおよび／またはＬＴ−Ｋ６３を使用しての、ＩｇＧのＥＬＩＳＡでの力価を示す。図１４Ｂは、ＴＭＣおよび／またはＬＴ−Ｋ６３を使用しての、ＩｇＧの細菌での力価を示す。
【図１５】図１５Ａは、同様の試験についての血清の中のＩｇＡ力価を示す。図１５Ｂは、同様の試験についての鼻洗浄液の中のＩｇＡ力価を示す。
【図１６】図１６は、ＣＲＭ１９７濃度（μｇ／ｍｌ）とともに変化する脾臓増殖アッセイの結果を示す。
【図１７】図１７は、ＭｅｎＣ抗原とキトサンアジュバントの３回分の投与量の後に得られる血清のＩｇＧ力価を示す。
【図１８】図１８は、同様の試験についての鼻のＩｇＡ力価を示す。
【図１９】図１９は、同様の試験についての血清の細菌の抗体を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【手続補正書】
【提出日】平成16年11月30日(2004.11.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓのＣ血清型に由来する莢膜糖類抗原、および（ｂ）キトサンアジュバントを含有する、免疫原性組成物。
【請求項２】
Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓのＡ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹの血清型の少なくとも２種に由来する莢膜糖類を含有する、粘膜送達のための免疫原性組成物であって、該莢膜糖類はキャリアタンパク質と離されて結合されている、免疫原性組成物。
【請求項３】
（ｃ）１つ以上のさらなる抗原および／または（ｄ）１つ以上のさらなるアジュバントを含有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記莢膜糖類がオリゴ糖である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
前記莢膜糖類が、キャリアタンパク質に結合したオリゴ糖である、請求項３に記載の組成物。
【請求項６】
Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓのＡ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹの血清型の少なくとも２種、３種または４種に由来する莢膜糖類を含有する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
Ａ＋Ｃ、Ａ＋Ｗ１３５、Ａ＋Ｙ，Ｃ＋Ｗ１３５、Ｃ＋Ｙ、Ｗ１３５＋Ｙ、Ａ＋Ｃ＋Ｗ１３５、Ａ＋Ｃ＋Ｙ、Ｃ＋Ｗ１３５＋ＹまたはＡ＋Ｃ＋Ｗ１３５＋Ｙの血清型に由来する糖類を含有する、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
鼻腔内投与のために適合し、かつ／またはパッケージされた、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
経鼻スプレーまたは経鼻ドロップの形態である、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
キトサンアジュバントおよびＥ．ｃｏｌｉ熱不安定性毒素の無毒化変異体を含有する、請求項１〜９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記キトサンが、三アルキル化キトサンである、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記キトサンが、三メチルキトサンである、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記Ｅ．ｃｏｌｉ熱不安定性毒素の無毒化変異体が、残基６３位におけるセリンからリジンへの置換を有する、請求項１０〜１２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記組成物が、（１）髄膜炎菌性糖類、（２）Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅに対する免疫応答を誘導する抗原、および（３）Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに対して免疫応答を誘導する抗原の３つ全ては含有しない、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記組成物が、（１）髄膜炎菌性糖類、（２）Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅに対する免疫応答を誘導する抗原、および（３）Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに対して免疫応答を誘導する抗原の３つ全て、およびキトサンのアルキル化誘導体を含有する、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１６】
（ａ）凍結乾燥形態の、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓのＡ血清型に由来する莢膜糖類抗原、および（ｂ）液体形態の、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓのＣ、Ｗ１３５およびＹの血清型の１種以上に由来する莢膜糖類抗原を含むキットであって、（ａ）および（ｂ）が、混合された場合、粘膜投与に適するように処方される、キット。
【請求項１７】
請求項１〜１５のいずれか１項に従う組成物を、患者に投与する工程を包含する、患者において免疫応答を誘発する方法。
【請求項１８】
Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓのＡ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹの血清型の少なくとも２種に由来する莢膜糖類の、免疫応答を誘発するための動物への粘膜送達のための医薬の製造における使用であって、該莢膜糖類が、キャリアタンパク質と離れて結合されている、使用。
【請求項１９】
（１）Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓのＡ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹの血清型の少なくとも１種に由来する莢膜糖類抗原であって、該莢膜糖類が、キャリアタンパク質と結合するか、および／またはオリゴ糖である、莢膜糖類抗原、および（２）キトサンの、免疫応答を誘発するための動物への粘膜送達のための医薬の製造における使用。
【請求項２０】
前記医薬が、鼻腔内送達のための医薬である、請求項１８または請求項１９に記載の使用。
【国際調査報告】
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