(57)【要約】  硫酸化エストロゲンの混合物を含む安定した組成物を生産するための方法。硫酸化エストロゲンの混合物には、Δ8,9−デヒドロエストロン、エストロン、およびそれらの誘導体またはその他のエストロゲンの硫酸化アルカリ金属塩が含まれてもよい。この方法は、Δ8,9−デヒドロエストロン、エストロン、およびそれらの誘導体のアルカリ金属塩のこのような混合物を、三酸化硫黄複合体で硫酸化する工程、ならびにトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを添加する工程を含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
硫酸化エストロゲンの混合物を含む安定した組成物を生産するための方法であって、前記方法は、
ａ）三酸化硫黄複合体をエストロゲンのアルカリ金属塩の混合物と反応させて、エストロゲンのアルカリ金属塩の硫酸化物の混合物を得る工程；
ｂ）安定化させる量のトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを添加する工程；ならびに
ｃ）硫酸化エストロゲンの混合物およびトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを含む安定した組成物を回収する工程
を含む方法。
【請求項２】
エストロゲンが、Δ8,9−デヒドロエストロン、エストロン、エキリンまたはそれらの誘導体のうちの少なくとも二つを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
三酸化硫黄複合体が三酸化硫黄−ピリジンおよび三酸化硫黄−トリメチルアミンからなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
アルカリ金属塩がリチウム、ナトリウムおよびカリウムからなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
無極性の非プロトン溶媒中で工程ａ）および工程ｂ）が行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
溶媒がテトラヒドロフランである、請求項５の方法。
【請求項７】
一つの反応容器中で全ての工程が行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
Δ8,9−デヒドロエストロン、エストロン、エキリンまたはそれらの誘導体のうちの少なくとも二つを特定の比率で開始することによって、特定の比率の硫酸化エストロゲンの混合物を生産する、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
無極性の非プロトン溶媒中でエストロゲンの混合物を水素化アルカリ金属と反応させて、エストロゲンのアルカリ金属塩の混合物を得る工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
三酸化硫黄複合体が三酸化硫黄−ピリジンおよび三酸化硫黄−トリメチルアミンからなる群より選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
アルカリ金属塩がリチウム、ナトリウムおよびカリウムからなる群より選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
無極性の非プロトン溶媒がテトラヒドロフランである、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
一つの反応容器中で全ての工程が行われる、請求項９に記載の方法。
【請求項１４】
Δ8,9−デヒドロエストロン、エストロン、およびそれらの誘導体を特定の比率で開始することによって、特定の比率の硫酸化エストロゲンを生産する、請求項９に記載の方法。
【請求項１５】
硫酸化エストロゲンの混合物を含む安定した組成物を生産するための方法であって、
ａ）無極性の非プロトン溶媒中でエストロゲンの混合物を水素化ナトリウムと反応させて、エストロゲンのアルカリ金属塩の混合物を得る工程；
ｂ）無極性の非プロトン溶媒中で三酸化硫黄−トリメチルアミンをエストロゲンのアルカリ金属塩の混合物と反応させて、エストロゲンのアルカリ金属塩の硫酸化物の混合物を得る工程；
ｃ）安定化させる量のトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを添加する工程；ならびに
ｄ）硫酸化エストロゲンの混合物およびトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを含む安定した組成物を回収する工程
を含む方法。
【請求項１６】
エストロゲンの混合物が、Δ8,9−デヒドロエストロン、エストロン、エキリンまたはそれらの誘導体のうちの少なくとも二つを含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
無極性の非プロトン溶媒がテトラヒドロフランである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
一つの反応容器中で全ての工程が行われる、請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
Δ8,9−デヒドロエストロン、エストロン、エキリンまたはそれらの誘導体のうちの少なくとも二つを特定の比率で開始することによって、特定の比率の硫酸化エストロゲンを生産する、請求項１５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、たとえば硫酸化Δ8,9−デヒドロエストロン、エストロン、エキリン、およびそれらの誘導体などを含んでもよい硫酸化エストロゲンの混合物の合成のための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
天然のエストロゲン組成物は、エストロゲンが足りない女性における更年期症候群および骨粗鬆症／骨減少症の症状を緩和するための、男性および女性における心血管疾患を予防するための、ならびにホルモンに関係するその他の疾患を治療するための内科的治療に用いられている。天然のエストロゲン組成物のエストロゲン成分としては、米国特許第２，８３４，７１２号に開示されたような、エストロンの硫酸エステルが挙げられる。
【０００３】
硫酸化エストロゲンの合成は過去の刊行物に記載されている。たとえば、Ｒａｖｅｅｎｄｒａｎａｔｈ  ｅｔ  ａｌ．による米国特許第５，２８８，７１７号（アルカリ金属８，９−デヒドロエストロンの硫酸エステル）では、８，９−デヒドロエストロン（Δ8,9−ＤＨＥ）のアルカリ金属塩およびその他の共役エステルとは無関係なその硫酸エステルを合成する方法が教示されており、ここで、その他の共役エステルは、自然源のエステルの混合物中に見られる原料中に存在するものである。Ｒａｖｅｅｎｄｒａｎａｔｈの方法においては、Δ8,9−ＤＨＥのアルカリ金属塩を最初に生産し、次いでテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）などの無極性の非プロトン溶媒中の穏やかな条件下で、安定剤としてのトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（トリス）を同時に添加しつつ、またはその後に添加して、三酸化硫黄−トリメチルアミン複合体（ＳＯ3−ＴＭＡ）を用いて硫酸化させる。Δ8,9−ＤＨＥの最初の中間体の生産に用いられるアルカリの基剤としては、水素化物の形態のナトリウムまたはカリウムおよびｎ−ブチルリチウムとしてのリチウムが好ましい。この方法からは、その他の共役エステルがない産物が生産され、同時にいくつもの化合物が生産されるという教示はなされていない。
【０００４】
Ｒａｉｊｍａｋｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．による米国特許第５，９９８，６３９号（エストロゲン混合物の硫酸化）では、Δ8,9−ＤＨＥまたはその誘導体を含む硫酸化エストロゲンの混合物を調製するための方法が教示されている。Ｒａｉｊｍａｋｅｒｓの方法においては、エチレンジアミンのリチウム塩を用いるエキリンまたはその誘導体の異性化によって、エストロゲンの混合物を得る。硫酸／無水酢酸／ピリジンを用いて、この混合物を硫酸化する。この粗ピリジン硫酸塩の混合物を、メタノール中の水酸化ナトリウムで処理して、Δ8,9−ＤＨＥ硫酸ナトリウムならびに一種以上のエキリン硫酸ナトリウム、１７α−ジヒドロエキリン硫酸ナトリウム、１７β−ジヒドロエキリン硫酸ナトリウム、１７α−エストラジオール硫酸ナトリウム、および１７β−エストラジオール硫酸ナトリウムなどが特定の比率の状態にある混合物を得る。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
硫酸化エストロゲンの混合物の安定した組成物を効率的に生産する必要性が、依然として残っている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、硫酸化エストロゲンの複雑な混合物を含む安定した組成物を生産するための方法を提供する。以前の合成方法は、前駆体の合成からエストロゲン、またはエストロゲンの混合物の合成を必要としてきた。本発明は、前駆体の混合物に関して同時に行われる合成方法によって、複雑なエストロゲンの合成を提供する。
【０００７】
一つの態様において、エストロゲンは、Δ8,9−ＤＨＥ、エストロン、エキリン、またはそれらの誘導体のうちの少なくとも二つを含むことができる。硫酸化エストロゲンの混合物は、対応するΔ8,9−ＤＨＥ、エストロン、エキリン、またはそれらの誘導体のアルカリ金属塩の硫酸化物を含むだろう。これらの化合物は、個々に合成されて得られた比率で得られるのではない。この方法は、三酸化硫黄複合体をエストロゲンのアルカリ金属塩の混合物と反応させる工程；安定化させる量のトリスを添加する工程；ならびに硫酸化エストロゲンおよびトリスの混合物を含む安定した組成物を回収する工程を含む。この方法は、エストロゲンの混合物を水素化アルカリ金属と反応させて、エストロゲンのアルカリ金属塩の混合物を得る工程をさらに含んでもよい。無極性の非プロトン溶媒中で、この方法を行ってもよい。方法の全ての工程を、一つの反応容器中で行ってもよい。
【０００８】
本発明の一つの利点は、この方法では一つの反応容器中で硫酸化エストロゲンの混合物が生産できることである。この点で、Δ8,9−ＤＨＥ、エストロン、エキリン、および／または関連する物質のアルカリ金属塩の混合物を同時に硫酸化して、硫酸化エストロゲンのアルカリ金属塩の複雑な混合物を得る。この複雑な混合物は、エストロゲン組成物に変化するかもしれないものであり、個別に合成したなら得られたかもしれない三種の主要なエストロゲンの比率とはならない。さらに、中間産物の単離を行うことなく、一つの反応容器中でこの方法の全体の反応手順を実行してもよい。
【０００９】
本発明の別の態様において、この方法によって特定の比率の硫酸化エストロゲンの混合物が生産される。一例として、特定の比率のΔ8,9−ＤＨＥ、エストロン、エキリンおよびそれらの誘導体を含むエストロゲンの混合物が得られる。エストロゲンのこの混合物に関して本発明の方法を実施し、そして出発時のエストロゲンとほぼ同じ比率の硫酸化エストロゲンの混合物を生産する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明に従えば、硫酸化エストロゲンの混合物が生産され、好ましくは一つの容器を用いる。本発明の方法においては、エストロゲンの最初の混合物からエストロゲンのアルカリ金属塩の混合物を調製してもよい。通常では、最初の混合物はエストロゲンの少なくとも二種を含むことになる。エストロゲンとしては、Δ8,9−ＤＨＥ、エストロン、エキリン、１７α−エストラジオール、１７β−エストラジオール、１７α−ジヒドロエキリン、１７β−ジヒドロエキリン、エキレニン、１７α−ジヒドロエキレニン、１７β−ジヒドロエキレニン、１７α−Δ8,9−デヒドロエストラジオール、１７β−Δ8,9−デヒドロエストラジオール、６−ＯＨエキレニン、６−ＯＨ  １７α−ジヒドロエキレニン、６−ＯＨ  １７β−ジヒドロエキレニン、エチニルエストラジオール、および吉草酸エストラジオール、ならびにそれらの誘導体を含む任意のエストロゲン化合物であってよい。本明細書で用いられるそれらの誘導体としては、本明細書にて指定されたエストロゲン化合物に由来する、またはそれに関連する任意の化合物が挙げられる。
【００１１】
無極性の非プロトン溶媒中でエストロゲンの混合物を水素化アルカリ金属と反応させることによって、エストロゲンのアルカリ金属塩の混合物を調製してもよい。無極性の非プロトン溶媒中で、三酸化硫黄複合体を用いて、エストロゲンのアルカリ金属塩の混合物を硫酸化してもよい。安定化のために、ある量のトリスを硫酸化エストロゲンの混合物に添加してもよい。
【００１２】
その結果、本発明のエストロンおよびΔ8,9−ＤＨＥに適用されるような一般的な合成スキームは、次のとおりである。
【化１】
2005515222.tif 000002
【００１３】
本発明の一般的な合成スキームに従って、エストロゲンの混合物を水素化アルカリ金属（ＭＨ）、たとえば、ＮａＨ、ＫＨ、ＬｉＨなど、と反応させる。無極性の非プロトン溶媒、たとえば、ＴＨＦ、ジオキサン、ジエチルエーテルなど、の中で、この反応を行ってもよい。エストロゲンの混合物がΔ8,9−ＤＨＥ、エストロン、およびそれらの誘導体を含む場合、この反応によって、Δ8,9−ＤＨＥ、エストロン、およびそれらの誘導体のアルカリ金属塩を含むエストロゲンのアルカリ金属塩の混合物が生産される。
【００１４】
エストロゲンのアルカリ金属塩の混合物を、三酸化硫黄複合体、たとえば、ＳＯ3−ＴＭＡ、ＳＯ3−ピリジンなど、と反応させる。この反応も、無極性の非プロトン溶媒、たとえば、ＴＨＦ、ジオキサン、ジエチルエーテルなど、の中で行ってもよい。エストロゲンの混合物がΔ8,9−ＤＨＥ、エストロン、およびそれらの誘導体を含む場合、この反応によって、Δ8,9−ＤＨＥ、エストロン、およびそれらの誘導体のアルカリ金属塩を含むエストロゲンのアルカリ金属塩の硫酸化物の混合物が生産される。
【００１５】
硫酸化エストロゲンの混合物に、安定化させる量のトリスを添加する。一つの反応容器内で、中間産物を単離することなくこれらの三つの反応工程を連続して行ってもよい。硫酸化エストロゲンおよびトリスの混合物を含む組成物を回収する。当業者であれば、たとえばろ過、抽出などを含むいくつもの方法によって、組成物を回収できることを容易に認識できるだろう。たとえば、再結晶、クロマトグラフィーなどの当分野で周知の精製技術によって、得られる産物を精製してもよい。
【００１６】
本発明の合成スキームを、エストロゲンまたはそれらの誘導体の任意の混合物に適用してもよい。通常、これらの混合物は、エストロゲンまたはそれに対応するエストロゲンのアルカリ金属塩の少なくとも二種を含むことになる。
【００１７】
［実施例］
説明のための、制限を意図しない次の実施例によって本発明をさらに説明したい。
【実施例１】
【００１８】
水素化ナトリウム（ＮａＨ）（０．７７ｇ、約０．０３０４モル）およびＴＨＦ（６０ｍＬ）を、窒素雰囲気下で、空気冷却器、１００ｍＬの添加用漏斗、および磁気撹拌子を備えた乾燥状態の５００ｍＬの三つ口の丸底フラスコに添加した。懸濁液を撹拌し、そして０〜５℃に冷却した。次に、７５ｍＬのＴＨＦに溶解させたΔ8,9−ＤＨＥ（５．１１ｇ、約０．０１８７モル）と固体のエストロン（１．２７ｇ、約０．００４６モル）とを、窒素雰囲気下、０〜５℃にて添加した。３０分後、冷却槽を取り外して反応混合物が室温に到達できるようにし、そしてこの混合物を２〜２．５時間、２０〜２２℃で撹拌した。三酸化硫黄−ピリジン複合体（ＳＯ3−ピリジン）（４．０５ｇ、約０．０２５モル）を小分けにして反応混合物に添加した。３０分間撹拌した後、トリス（２．８２ｇ、約０．０２３３モル）を添加し、そして２０〜２２℃の窒素雰囲気下で一晩撹拌を続けた。この混合物を１Ｌの丸底フラスコ内に移した。２０℃の高真空下（０．１５ｍｍ水銀圧）で溶媒を乾固させ、次いで２９〜３０℃でピリジンを除去した。２０ｍＬの新しいＴＨＦを残留物に添加して、この工程を繰り返した。残留物を１３０ｍＬの脱イオン水に溶解させ、そしてこの水溶液を５０ｍＬのジエチルエーテルで９回抽出して、反応しなかったΔ8,9−ＤＨＥとエストロンとを除去した。１３０ｍＬの水溶液に９０ｍＬの脱イオン水と１．６ｇの活性炭「Ｄａｒｃｏ」とを添加した。このものを３０分間撹拌し、ろ過助剤「Ｃｅｌｉｔｅ−５２１」を用いてガラスろ過器を介してろ過した。１．６ｇの「Ｄａｒｃｏ」を添加し、さらに３０分間撹拌し、そしてろ過助剤「Ｃｅｌｉｔｅ−５２１」を用いてガラスろ過器を介してろ過することによって、活性炭処理を繰り返した。この溶液のＴＬＣ（薄層クロマトグラフィー）［ＣＨＣｌ3：ＭｅＯＨ：ＮＨ4ＯＨ（２５：５：１）］からは、Δ8,9−ＤＨＥに相当するスポットは示されなかった。ろ液を凍結乾燥して９．１ｇの淡い黄褐色の固体を得た。このサンプルをＨＰＬＣ（高性能液体クロマトグラフィー）によって分析し、方法の重量％を得た。
【００１９】
結果
収量＝９．１ｇ
ＨＰＬＣの重量％測定：
ＤＨＥＳ％＝４２．８％
ＥＳ％＝１２．２％
ＨＰＬＣの総重量％の測定％（ＤＨＥＳ＋ＥＳ）＝５５．０
ＤＨＥＳ：ＥＳのモル比＝１：０．２９
（ＤＨＥＳ＋ＥＳ）：トリスのモル比＝１：１．７３
カールフィッシャー法による水分含量＝３．２％
【実施例２】
【００２０】
ＳＯ3−ＴＭＡをＳＯ3−ピリジンに代えたことを除いて、実施例１に記載の一般的な方法に従った。その結果、ピリジンではなくトリメチルアミンを除去した。
【００２１】
出発材料および試薬：
【表１】
2005515222.tif 000003
【００２２】
結果
収量＝８．１ｇ
ＨＰＬＣの重量％測定：
ＤＨＥＳ％＝４４．７０％
ＥＳ％＝９．５４％
ＨＰＬＣの総重量％の測定値（ＤＨＥＳ＋ＥＳ）＝５４．２４
ＤＨＥＳ：ＥＳのモル比＝１：０．２１
（ＤＨＥＳ＋ＥＳ）：トリスのモル比＝１：１．９６
【実施例３】
【００２３】
実施例２に記載の一般的な方法に従った。
【００２４】
出発材料および試薬：
【表２】
2005515222.tif 000004
【００２５】
結果
収量＝２３．７９ｇ
ＨＰＬＣの重量％測定：
ＤＨＥＳ％＝３１．５％
ＥＳ％＝９．１％
ＨＰＬＣの総重量％の測定値（ＤＨＥＳ＋ＥＳ）＝４０．６
ＤＨＥＳ：ＥＳのモル比＝１：０．３０
（ＤＨＥＳ＋ＥＳ）：トリスのモル比＝１：２．６９
【００２６】
【表３】
2005515222.tif 000005
【実施例４】
【００２７】
本明細書で教示された方法と、一度に一種のエストロゲン化合物しか生産できない方法との間の違いを明らかにするために、クロマトグラムを比較した。同一のクロマトグラフ手法を用いて、それぞれのクロマトグラムを得た。表１の下部に、クロマトグラムを詳述しており、ここでは、エストロン、エキリン、Δ8,9−ＤＨＥ（Δ−８，９）のそれぞれの生産、および本発明の方法によって生産されたこれらの化合物の組み合わせ（３−Ｃｏｍｂｉ）についての、長時間に亘るピーク当りの数が提供されている。この表では、本明細書にて教示されたようにして調製したエストロゲンの組み合わせに対してそれぞれの個々の化合物を比較しての、示された各時点における比率も提供している。これらの相対的な比率から、個別の方法の結果対、組み合わせ方法の結果における明確な違いが示される。表にて明らかなように、本発明の方法によって、エストロゲン化合物を個別に調製することで得ることができるエストロゲン産物の比率とは異なる比率で、エストロゲン産物の生産が可能となる。
【００２８】
【表４】
2005515222.tif 000006
【００２９】
本発明の種々の修正および改変は、本発明の範囲および精神から逸脱することなく当業者にとっては自明であろう。
【国際調査報告】
2005515222.tif 000007