(57)【要約】本発明は、このような処置を必要とする被験体に治療有効量のヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）インヒビターまたはその薬学的受容可能な塩もしくは水和物を投与することにより、チオレドキシン（ＴＲＸ）媒介性疾患および状態を、処置および／または予防するための、新規の方法を提供する。ＨＤＡＣインヒビターは、チオレドキシン結合タンパク質（例えば、ＴＢＰ−２）の発現を変え、次にこのチオレドキシン結合タンパク質が、変化したＴＲＸ／チオレドキシン結合タンパク質細胞性結合相互作用を導いて、細胞性ＴＲＸのレベルまたは活性（例えば、ＴＲＸの発現レベルまたは還元活性）の上昇または低下をもたらし得る。【特許請求の範囲】
【請求項１】
処置を必要とする被験体において、チオレドキシン（ＴＲＸ）媒介性疾患を処置する方法であって、該方法は、治療有効量の、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）インヒビターまたは該インヒビターの薬学的に受容可能な塩もしくは該インヒビターの薬学的受容可能な水和物を、該被験体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項２】
前記ＴＲＸ媒介性疾患が、炎症性疾患、アレルギー性疾患、自己免疫疾患、酸化的ストレスに関連する疾患、または細胞過剰増殖によって特徴付けられる疾患である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＴＲＸ媒介性疾患が、関節の炎症状態；慢性関節リウマチ（ＲＡ）；乾癬性関節炎；炎症性腸疾患；脊椎関節症；強皮症；乾癬；炎症性皮膚疾患；蕁麻疹；血管炎；好酸球性筋炎；好酸球性筋膜炎；皮膚または器官の白血球湿潤を伴う癌；虚血性損傷；脳虚血；ＨＩＶ；心不全；慢性肝臓疾患、急性肝臓疾患または悪性肝臓疾患；自己免疫性甲状腺炎；全身性エリテマトーデス；シェーグレン症候群；肺疾患；急性膵臓病；筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）；アルツハイマー病；悪液質／摂食障害；喘息；アテローム性動脈硬化症；慢性疲労症候群；発熱；糖尿病；糸球体腎炎；対宿主性移植片反応；出血性ショック；痛覚過敏；多発性硬化症；筋障害；骨粗鬆症；パーキンソン病；疼痛；早期分娩；乾癬；再潅流傷害；サイトカイン誘導性毒性；放射線治療からの副作用；側頭骨下顎骨結合疾患；腫瘍転移；挫傷、捻挫、軟骨損傷、外傷、整形外科手術、感染または他の疾患過程で生じる炎症状態；呼吸性アレルギー性疾患；全身性アナフィラキシー；過敏性反応；薬物アレルギーおよび昆虫刺創アレルギーからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記炎症性腸疾患が、クローン病または潰瘍性大腸炎である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記炎症性皮膚疾患が、皮膚炎、湿疹、アトピー性皮膚炎またはアレルギー性接触皮膚炎である、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記呼吸性アレルギー性疾患が、喘息、アレルギー性鼻炎、過敏性肺疾患、過敏性肺炎、好酸球性肺炎、遅延型過敏症または間質性肺炎（ＩＬＤ）である、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、ヒドロキサム酸誘導体、短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）、環式テトラペプチド、ベンズアミド誘導体、または求電子性ケトン誘導体である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下：
ＳＡＨＡ、ピロキサミド、ＣＢＨＡ、トリコスタチンＡ（ＴＳＡ）、トリコスタチンＣ，サリチルヒドロキサム酸（ＳＢＨＡ）、アゼラインビスヒドロキサム酸（ＡＢＨＡ）、アゼライン−１−ヒドロキサメート−９−アニリド（ＡＡＨＡ）、６−（３−クロロフェニルウレイド）カプロンヒドロキサム酸（３Ｃｌ−ＵＣＨＡ）、オクサムフラチン、Ａ−１６１９０６、スクリプタイド、ＰＸＤ−１０１、ＬＡＱ−８２４、ＣＨＡＰ、ＭＷ２７９６、およびＭＷ２９９６、
からなる群から選択されるヒドロキサム酸またはその誘導体である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下：
トラポキシンＡ、ＦＲ９０１２２８、ＦＫ  ２２８、デプシペプチド、ＦＲ２２５４９７、アピシジン、ＣＨＡＰ、ＨＣ毒素、ＷＦ２７０８２、およびクルアミドシン、
からなる群から選択される環式テトラペプチドである、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下：
酪酸ナトリウム、イソバレレート、バレレート、４フェニルブチラート（４−ＰＢＡ）、フェニルブチラート（ＰＳ）、プロピオネート、ブチラミド、イソブチラミド、フェニルアセテート、３−ブロモプロピオネート、トリブチリン、バルプロ酸およびバルプロエート、
からなる群から選択される短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）である、請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下：
ＣＩ−９９４、ＭＳ−２７−２７５およびＭＳ−２７−２７５の３’−アミノ誘導体、
からなるベンズアミド誘導体である、請求項７に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下：
トリフルオロメチルケトンおよびα−ケトアミド、
からなる群から選択される求電子性ケトン誘導体である、請求項７に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、デプデシンである、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下の構造：
【化１】
2005525345.tif 000054
で表されるか、または該構造の薬学的に受容可能な塩もしくは水和物である、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下の構造：
【化２】
2005525345.tif 000055
、または該構造の薬学的に受容可能な塩もしくは水和物で表される、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下：
【化３】
2005525345.tif 000056
、または該構造の薬学的に受容可能な塩もしくは水和物の構造で表される、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下の構造：
【化４】
2005525345.tif 000057
ここで、Ｒ１およびＲ２は、同一であるかまたは異なっており：
ここで、Ｒ１およびＲ２が同一である場合、Ｒ１およびＲ２は、置換もしくは非置換の、アリールアミノ基、シクロアルキルアミノ基、ピリジンアミノ基、ピペリジノ基、９−プリン−６−アミン基、またはチアゾールアミノ基であり；
ここで、Ｒ１およびＲ２が異なっている場合、Ｒ１はＲ３−Ｎ−Ｒ４であり、ここでＲ３およびＲ４はそれぞれ独立に、同一であるかまたは互いに異なっており、水素原子、ヒドロキシル基、置換または非置換の分枝鎖または非分枝鎖の、アルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、アリールアルキルオキシ基、アリールオキシ基、アリールアルキルオキシ基またはピリジン基であるか、またはＲ３とＲ４とが互いに結合してピペリジン基を形成し；Ｒ２は、ヒドロキシルアミノ基、ヒドロキシル基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基またはアルキルオキシ基であり；そして
ｎは、約４〜約８の整数であるような構造で表されるか、または該構造の薬学的に受容可能な塩もしくは水和物である、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下の構造：
【化５】
2005525345.tif 000058
ここでＲは、置換もしくは非置換のフェニル、ピペリジン、チアゾール、２−ピリジン、３−ピリジンまたは４−ピリジンであり；そして
ｎは、約４〜約８の整数であるような構造で表されるか、または該構造の薬学的に受容可能な塩もしくは水和物である、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下の構造：
【化６】
2005525345.tif 000059
ここで、
Ａは、アミド部分であり；
Ｒ１およびＲ２は、独立に、置換または非置換の、アリール、ナフサ、ピリジンアミノ、９−プリン−６−アミン、チアゾールアミノ、アリールオキシ、アリールアルキルオキシまたはピリジンから選択され；そして
Ｒ４は、水素、ハロゲン、フェニルまたはシクロアルキル部分であり；そして
ｎは、３〜１０の整数であるような構造で表されるか、または該構造の薬学的に受容可能な塩もしくは水和物である、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＴＲＸ媒介性疾患が、ＴＲＸのレベル変化または活性変化によって特徴付けられる、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
前記ＴＲＸ媒介性疾患が、ＴＲＸのレベル上昇または活性上昇によって特徴付けられる、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
前記被験体において、前記ＨＤＡＣインヒビターが、ＴＲＸのレベルまたは活性を調節する、請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
前記被験体において、前記ＨＤＡＣインヒビターが、ＴＲＸのレベルまたは活性を阻害する、請求項１に記載の方法。
【請求項２４】
前記被験体において、前記ＨＤＡＣインヒビターが、ＴＲＸの発現レベルを阻害する、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
前記被験体において、前記ＨＤＡＣインヒビターが、ＴＲＸの還元活性を阻害する、請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
前記被験体において、前記ＨＤＡＣインヒビターが、チオレドキシン結合タンパク質のＴＲＸへの結合を変えることにより、ＴＲＸのレベルまたは活性を調節する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２７】
前記被験体において、前記ＨＤＡＣインヒビターが、前記チオレドキシン結合タンパク質の発現レベルを変えることにより、該チオレドキシン結合タンパク質のＴＲＸへの結合を変える、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記被験体において、前記ＨＤＡＣインヒビターが、前記チオレドキシン結合タンパク質のＴＲＸへの結合を増加することにより、ＴＲＸのレベルまたは活性を上昇させる、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、前記チオレドキシン結合タンパク質の発現レベルを上昇させることにより、該チオレドキシン結合タンパク質のＴＲＸへの結合を増加する、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記チオレドキシン結合タンパク質が、チオレドキシン結合タンパク質−２（ＴＢＰ−２）である、請求項２６に記載の方法。
【請求項３１】
被験体において、チオレドキシン（ＴＲＸ）のレベルまたは活性を調節する方法であって、該方法は、該被験体におけるＴＲＸのレベルまたは活性を調節するために有効な量の、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）インヒビター、または該インヒビターの薬学的受容可能な塩もしくは水和物を、該被験体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項３２】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、ヒドロキサム酸誘導体、短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）、環式テトラペプチド、ベンズアミド誘導体、または求電子性ケトン誘導体である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下：
ＳＡＨＡ、ピロキサミド、ＣＢＨＡ、トリコスタチンＡ（ＴＳＡ）、トリコスタチンＣ，サリチルヒドロキサム酸（ＳＢＨＡ）、アゼラインビスヒドロキサム酸（ＡＢＨＡ）、アゼライン−１−ヒドロキサメート−９−アニリド（ＡＡＨＡ）、６−（３−クロロフェニルウレイド）カプロンヒドロキサム酸（３Ｃｌ−ＵＣＨＡ）、オクサムフラチン、Ａ−１６１９０６、スクリプタイド、ＰＸＤ−１０１、ＬＡＱ−８２４、ＣＨＡＰ、ＭＷ２７９６、およびＭＷ２９９６、
からなる群から選択されるヒドロキサム酸またはその誘導体である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下：
トラポキシンＡ、ＦＲ９０１２２８、ＦＫ  ２２８、デプシペプチド、ＦＲ２２５４９７、アピシジン、ＣＨＡＰ、ＨＣ毒素、ＷＦ２７０８２、およびクルアミドシン、
からなる群から選択される環式テトラペプチドである、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下：
酪酸ナトリウム、イソバレレート、バレレート、４フェニルブチラート（４−ＰＢＡ）、フェニルブチラート（ＰＳ）、プロピオネート、ブチラミド、イソブチラミド、フェニルアセテート、３−ブロモプロピオネート、トリブチリン、バルプロ酸およびバルプロエート、
からなる群から選択される短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３６】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下：
ＣＩ−９９４、ＭＳ−２７−２７５およびＭＳ−２７−２７５の３’−アミノ誘導体、
からなるベンズアミド誘導体である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３７】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下：
トリフルオロメチルケトンおよびα−ケトアミド、
からなる群から選択される求電子性ケトン誘導体である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３８】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、デプデシンである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３９】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下の構造：
【化７】
2005525345.tif 000060
で表されるか、または該構造の薬学的に受容可能な塩もしくは水和物である、請求項３１に記載の方法。
【請求項４０】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下の構造：
【化８】
2005525345.tif 000061
で表されるか、または該構造の薬学的に受容可能な塩もしくは水和物である、請求項３１に記載の方法。
【請求項４１】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下の構造：
【化９】
2005525345.tif 000062
で表されるか、または該構造の薬学的に受容可能な塩であるか、もしくは該構造の水和物である、請求項３１に記載の方法。
【請求項４２】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下の構造：
【化１０】
2005525345.tif 000063
ここで、Ｒ１およびＲ２は、同一であるかまたは異なっており：
ここで、Ｒ１およびＲ２が同一である場合、Ｒ１およびＲ２は、置換もしくは非置換の、アリールアミノ基、シクロアルキルアミノ基、ピリジンアミノ基、ピペリジノ基、９−プリン−６−アミン基、またはチアゾールアミノ基であり；
ここで、Ｒ１およびＲ２が異なっている場合、Ｒ１はＲ３−Ｎ−Ｒ４であり、ここでＲ３およびＲ４はそれぞれ独立に、同一であるかまたは互いに異なっており、水素原子、ヒドロキシル基、置換または非置換の分枝鎖または非分枝鎖の、アルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、アリールアルキルオキシ基、アリールオキシ基、アリールアルキルオキシ基またはピリジン基であるか、またはＲ３とＲ４とが互いに結合してピペリジン基を形成し；Ｒ２は、ヒドロキシルアミノ基、ヒドロキシル基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基またはアルキルオキシ基であり；そして
ｎは、約４〜約８の整数であるような構造で表されるか、または該構造の薬学的に受容可能な塩もしくは水和物である、請求項３１に記載の方法。
【請求項４３】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下の構造：
【化１１】
2005525345.tif 000064
ここでＲは、置換もしくは非置換のフェニル、ピペリジン、チアゾール、２−ピリジン、３−ピリジンまたは４−ピリジンであり；そして
ｎは、約４〜約８の整数であるような構造で表されるか、または該構造の薬学的に受容可能な塩もしくは水和物である、請求項３１に記載の方法。
【請求項４４】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下の構造：
【化１２】
2005525345.tif 000065
ここで、
Ａは、アミド部分であり；
Ｒ１およびＲ２は、独立に、置換または非置換の、アリール、ナフサ、ピリジンアミノ、９−プリン−６−アミン、チアゾールアミノ、アリールオキシ、アリールアルキルオキシまたはピリジンから選択され；  
Ｒ４は、水素、ハロゲン、フェニルまたはシクロアルキル部分であり；そして
ｎは、３〜１０の整数であるような構造、または該構造の薬学的に受容可能な塩もしくは水和物で表される、請求項３１に記載の方法。
【請求項４５】
前記被験体において、前記ＨＤＡＣインヒビターが、ＴＲＸのレベルまたは活性を阻害する、請求項３１に記載の方法。
【請求項４６】
前記被験体において、前記ＨＤＡＣインヒビターが、ＴＲＸの発現レベルを阻害する、請求項３１に記載の方法。
【請求項４７】
前記被験体において、前記ＨＤＡＣインヒビターが、ＴＲＸの還元活性を阻害する、請求項３１に記載の方法。
【請求項４８】
前記被験体において、前記ＨＤＡＣインヒビターが、チオレドキシン結合タンパク質のＴＲＸへの結合を変えることにより、ＴＲＸのレベルまたは活性を調節する、請求項３１に記載の方法。
【請求項４９】
前記被験体において、前記ＨＤＡＣインヒビターが、前記チオレドキシン結合タンパク質の発現レベルを変えることにより、該チオレドキシン結合タンパク質のＴＲＸへの結合を変える、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記被験体において、前記ＨＤＡＣインヒビターが、前記チオレドキシン結合タンパク質のＴＲＸへの結合を増加することにより、ＴＲＸのレベルまたは活性を上昇させる、請求項４８に記載の方法。
【請求項５１】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、前記チオレドキシン結合タンパク質の発現レベルを上昇させることにより、該チオレドキシン結合タンパク質のＴＲＸへの結合を増加する、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記チオレドキシン結合タンパク質が、チオレドキシン結合タンパク質−２（ＴＢＰ−２）である、請求項４８に記載の方法。
【請求項５３】
細胞において、チオレドキシン（ＴＲＸ）のレベルを調節する方法であって、該方法は、該細胞におけるＴＲＸのレベルを調節するために有効な量の、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）インヒビター、または該インヒビターの塩もしくは水和物に、該細胞を接触させる工程を包含する、方法。
【請求項５４】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、ヒドロキサム酸誘導体、短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）、環式テトラペプチド、ベンズアミド誘導体、または求電子性ケトン誘導体である、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下：
ＳＡＨＡ、ピロキサミド、ＣＢＨＡ、トリコスタチンＡ（ＴＳＡ）、トリコスタチンＣ，サリチルヒドロキサム酸（ＳＢＨＡ）、アゼラインビスヒドロキサム酸（ＡＢＨＡ）、アゼライン−１−ヒドロキサメート−９−アニリド（ＡＡＨＡ）、６−（３−クロロフェニルウレイド）カプロンヒドロキサム酸（３Ｃｌ−ＵＣＨＡ）、オクサムフラチン、Ａ−１６１９０６、スクリプタイド、ＰＸＤ−１０１、ＬＡＱ−８２４、ＣＨＡＰ、ＭＷ２７９６、およびＭＷ２９９６、
からなる群から選択されるヒドロキサム酸またはその誘導体である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下：
トラポキシンＡ、ＦＲ９０１２２８、ＦＫ  ２２８、デプシペプチド、ＦＲ２２５４９７、アピシジン、ＣＨＡＰ、ＨＣ毒素、ＷＦ２７０８２、およびクルアミドシン、
からなる群から選択される環式テトラペプチドである、請求項５４に記載の方法。
【請求項５７】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下：
酪酸ナトリウム、イソバレレート、バレレート、４フェニルブチラート（４−ＰＢＡ）、フェニルブチラート（ＰＳ）、プロピオネート、ブチラミド、イソブチラミド、フェニルアセテート、３−ブロモプロピオネート、トリブチリン、バルプロ酸およびバルプロエート、
からなる群から選択される短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５８】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下：
ＣＩ−９９４、ＭＳ−２７−２７５およびＭＳ−２７−２７５の３’−アミノ誘導体、
からなるベンズアミド誘導体である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５９】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下：
トリフルオロメチルケトンおよびα−ケトアミド、
からなる群から選択される求電子性ケトン誘導体である、請求項５４に記載の方法。
【請求項６０】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、デプデシンである、請求項５３に記載の方法。
【請求項６１】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下：
【化１３】
2005525345.tif 000066
、または該構造の薬学的に受容可能な塩もしくは水和物の構造で表される、請求項５３に記載の方法。
【請求項６２】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下：
【化１４】
2005525345.tif 000067
、または該構造の薬学的に受容可能な塩もしくは水和物の構造で表される、請求項５３に記載の方法。
【請求項６３】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下：
【化１５】
2005525345.tif 000068
、または該構造の薬学的に受容可能な塩もしくは水和物の構造で表される、請求項５３に記載の方法。
【請求項６４】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下の構造：
【化１６】
2005525345.tif 000069
ここで、Ｒ１およびＲ２は、同一であるかまたは異なっており：
ここで、Ｒ１およびＲ２が同一である場合、Ｒ１およびＲ２は、置換もしくは非置換の、アリールアミノ基、シクロアルキルアミノ基、ピリジンアミノ基、ピペリジノ基、９−プリン−６−アミン基、またはチアゾールアミノ基であり；
ここで、Ｒ１およびＲ２が異なっている場合、Ｒ１はＲ３−Ｎ−Ｒ４であり、ここでＲ３およびＲ４はそれぞれ独立に、同一であるかまたは互いに異なっており、水素原子、ヒドロキシル基、置換または非置換の分枝鎖または非分枝鎖の、アルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、アリールアルキルオキシ基、アリールオキシ基、アリールアルキルオキシ基またはピリジン基であるか、またはＲ３とＲ４とが互いに結合してピペリジン基を形成し；Ｒ２は、ヒドロキシルアミノ基、ヒドロキシル基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基またはアルキルオキシ基であり；そして
ｎは、約４〜約８の整数であるような構造、または該構造の薬学的に受容可能な塩もしくは水和物の構造で表される、請求項５３に記載の方法。
【請求項６５】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下の構造：
【化１７】
2005525345.tif 000070
ここでＲは、置換もしくは非置換のフェニル、ピペリジン、チアゾール、２−ピリジン、３−ピリジンまたは４−ピリジンであり；そして
ｎは、約４〜約８の整数であるような構造、または該構造の薬学的に受容可能な塩もしくは水和物の構造で表される、請求項５３に記載の方法。
【請求項６６】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下の構造：
【化１８】
2005525345.tif 000071
ここで、
Ａは、アミド部分であり；
Ｒ１およびＲ２は、独立に、置換または非置換の、アリール、ナフサ、ピリジンアミノ、９−プリン−６−アミン、チアゾールアミノ、アリールオキシ、アリールアルキルオキシまたはピリジンから選択され；そして
Ｒ４は、水素、ハロゲン、フェニルまたはシクロアルキル部分であり；そして
ｎは、３〜１０の整数であるような構造、または該構造の薬学的に受容可能な塩もしくは水和物の構造で表される、請求項５３に記載の方法。
【請求項６７】
前記細胞において、前記ＨＤＡＣインヒビターが、ＴＲＸのレベルまたは活性を阻害する、請求項５３に記載の方法。
【請求項６８】
前記細胞において、前記ＨＤＡＣインヒビターが、ＴＲＸの発現レベルを阻害する、請求項５３に記載の方法。
【請求項６９】
前記細胞において、前記ＨＤＡＣインヒビターが、ＴＲＸの還元活性を阻害する、請求項５３に記載の方法。
【請求項７０】
前記細胞において、前記ＨＤＡＣインヒビターが、チオレドキシン結合タンパク質のＴＲＸへの結合を変えることにより、ＴＲＸのレベルまたは活性を調節する、請求項５３に記載の方法。
【請求項７１】
前記細胞において、前記ＨＤＡＣインヒビターが、前記チオレドキシン結合タンパク質の発現レベルを変えることにより、該チオレドキシン結合タンパク質のＴＲＸへの結合を変える、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
前記細胞において、前記ＨＤＡＣインヒビターが、前記チオレドキシン結合タンパク質のＴＲＸへの結合を増加することにより、ＴＲＸのレベルまたは活性を上昇させる、請求項７０に記載の方法。
【請求項７３】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、前記チオレドキシン結合タンパク質の発現レベルを上昇させることにより、該チオレドキシン結合タンパク質のＴＲＸへの結合を増加する、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
前記チオレドキシン結合タンパク質が、チオレドキシン結合タンパク質−２（ＴＢＰ−２）である、請求項７０に記載の方法。
【請求項７５】
細胞において、チオレドキシン結合タンパク質のレベルを調節する方法であって、該方法は、該細胞におけるチオレドキシン結合タンパク質のレベルを調節するために有効な量の、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）インヒビター、または該インヒビターの薬学的受容可能な塩もしくは水和物に、該細胞を接触させる工程を包含する、方法。
【請求項７６】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、ヒドロキサム酸誘導体、短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）、環式テトラペプチド、ベンズアミド誘導体、または求電子性ケトン誘導体である、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下：
ＳＡＨＡ、ピロキサミド、ＣＢＨＡ、トリコスタチンＡ（ＴＳＡ）、トリコスタチンＣ，サリチルヒドロキサム酸（ＳＢＨＡ）、アゼラインビスヒドロキサム酸（ＡＢＨＡ）、アゼライン−１−ヒドロキサメート−９−アニリド（ＡＡＨＡ）、６−（３−クロロフェニルウレイド）カプロンヒドロキサム酸（３Ｃｌ−ＵＣＨＡ）、オクサムフラチン、Ａ−１６１９０６、スクリプタイド、ＰＸＤ−１０１、ＬＡＱ−８２４、ＣＨＡＰ、ＭＷ２７９６、およびＭＷ２９９６、
からなる群から選択されるヒドロキサム酸またはその誘導体である、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下：
トラポキシンＡ、ＦＲ９０１２２８、ＦＫ  ２２８、デプシペプチド、ＦＲ２２５４９７、アピシジン、ＣＨＡＰ、ＨＣ毒素、ＷＦ２７０８２、およびクルアミドシン、
からなる群から選択される環式テトラペプチドである、請求項７６に記載の方法。
【請求項７９】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下：
酪酸ナトリウム、イソバレレート、バレレート、４フェニルブチラート（４−ＰＢＡ）、フェニルブチラート（ＰＳ）、プロピオネート、ブチラミド、イソブチラミド、フェニルアセテート、３−ブロモプロピオネート、トリブチリン、バルプロ酸およびバルプロエート、
からなる群から選択される短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）である、請求項７６に記載の方法。
【請求項８０】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下：
ＣＩ−９９４、ＭＳ−２７−２７５およびＭＳ−２７−２７５の３’−アミノ誘導体、
からなる群から選択されるベンズアミド誘導体である、請求項７６に記載の方法。
【請求項８１】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下：
トリフルオロメチルケトンおよびα−ケトアミド、
からなる群から選択される求電子性ケトン誘導体である、請求項７６に記載の方法。
【請求項８２】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、デプデシンである、請求項７５に記載の方法。
【請求項８３】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下：
【化１９】
2005525345.tif 000072
、または該構造の薬学的に受容可能な塩もしくは水和物の構造で表される、請求項７５に記載の方法。
【請求項８４】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下の構造：
【化２０】
2005525345.tif 000073
、または該構造の薬学的に受容可能な塩もしくは水和物の構造で表される、請求項７５に記載の方法。
【請求項８５】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下の構造：
【化２１】
2005525345.tif 000074
、または該構造の薬学的に受容可能な塩もしくは水和物の構造で表される、請求項７５に記載の方法。
【請求項８６】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下の構造：
【化２２】
2005525345.tif 000075
ここで、Ｒ１およびＲ２は、同一であるかまたは異なっており：
ここで、Ｒ１およびＲ２が同一である場合、Ｒ１およびＲ２は、置換もしくは非置換の、アリールアミノ基、シクロアルキルアミノ基、ピリジンアミノ基、ピペリジノ基、９−プリン−６−アミン基、またはチアゾールアミノ基であり；
ここで、Ｒ１およびＲ２が異なっている場合、Ｒ１はＲ３−Ｎ−Ｒ４であり、ここでＲ３およびＲ４はそれぞれ独立に、同一であるかまたは互いに異なっており、水素原子、ヒドロキシル基、置換または非置換の分枝鎖または非分枝鎖の、アルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、アリールアルキルオキシ基、アリールオキシ基、アリールアルキルオキシ基またはピリジン基であるか、またはＲ３とＲ４とが互いに結合してピペリジン基を形成し；Ｒ２は、ヒドロキシルアミノ基、ヒドロキシル基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基またはアルキルオキシ基であり；そして
ｎは、約４〜約８の整数であるような構造、または該構造の薬学的に受容可能な塩もしくは水和物の構造で表される、請求項７５に記載の方法。
【請求項８７】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下の構造：
【化２３】
2005525345.tif 000076
ここでＲは、置換もしくは非置換のフェニル、ピペリジン、チアゾール、２−ピリジン、３−ピリジンまたは４−ピリジンであり；そして
ｎは、約４〜約８の整数であるような構造、または該構造の薬学的に受容可能な塩もしくは水和物の構造で表される、請求項７５に記載の方法。
【請求項８８】
前記ＨＤＡＣインヒビターが、以下の構造：
【化２４】
2005525345.tif 000077
ここで、
Ａは、アミド部分であり；
Ｒ１およびＲ２は、独立に、置換または非置換の、アリール、ナフサ、ピリジンアミノ、９−プリン−６−アミン、チアゾールアミノ、アリールオキシ、アリールアルキルオキシまたはピリジンから選択され；そして
Ｒ４は、水素、ハロゲン、フェニルまたはシクロアルキル部分であり；そして
ｎは、３〜１０の整数であるような構造、または該構造の薬学的に受容可能な塩もしくは水和物の構造で表される、請求項７５に記載の方法。
【請求項８９】
前記細胞において、前記ＨＤＡＣインヒビターが、前記チオレドキシン結合タンパク質のレベルを上昇させる、請求項７５に記載の方法。
【請求項９０】
前記チオレドキシン結合タンパク質が、チオレドキシン結合タンパク質−２（ＴＢＰ−２）である、請求項７５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願）  本出願は、２００２年２月１５日出願の米国仮特許出願第６０／３５７，３８３号の利益を主張する。上記出願の教示全体が、本明細書中で参考として援用される。
【０００２】
（政府支援）
本発明は、全体または一部で、ＮＩＨ助成金ＣＡ−０９７４８２３、同Ｕ０１  ＣＡ−８４２９２およびＮＣＩ主要助成金第０８７４８号に支援された。本発明において、政府は、特定の権利を有する。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
チオレドキシン（ＴＲＸ）は、１２ｋＤａの、遍在性の多機能タンパク質であり、保存的な活性部位配列を有する：酸化形態でジスルフィド結合を形成するか、または還元形態でジチオールを形成する−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−。ＴＲＸは、細胞内区画および細胞外区画の両方において、重要な生物学的役割を果たす。Ｎａｋａｍｕｒａらは、ＴＲＸが、細胞外サイトカイン様活性および細胞外ケモカイン様活性を有する、細胞内酸化還元（ｒｅｄｏｘ）タンパク質であることを報告している（Ｎａｋａｍｕｒａ，Ｈ．ら，ＰＮＡＳ，９８（５）：２６８８−２６９３，２００１）。この全身性タンパク質ジチオール−ジスルフィドオキシドレダクターゼは、広範な種々の細胞内プロセスにおいて、独立に作動するか、またはＴＲＸ−ＴＲ系の一部としてＮＡＤＰＨおよびチオレドキシンレダクターゼ（ＴＲ）と共に作動するかのどちらかであり得る。還元形態において、ＴＲＸは、リボヌクレオチドレダクターゼ（ＤＮＡ合成に必須である）の水素ドナーであり、そして、酸化還元調節に関わる全身性のタンパク質ジスルフィドレダクターゼである。ＴＲＸは、適切な細胞内還元／酸化（ｒｅｄｏｘ）平衡の維持に重要な役割を果たし、この還元／酸化平衡は、細胞の生存性、シグナル伝達、活性化、および増殖を含む正常な細胞機能に非常に重要である。例えば、ＴＲＸは、転写因子（例えば、ＮＦ−κＢおよびＡＰ−１）の酸化還元調節に関わることが、示されている。
【０００４】
ＴＲＸは、細胞内酸化還元反応において主要な生物学的役割を果たし、従って、このタンパク質の変化したレベルが、多くの病態生理学的状態および多くの疾患状態において、見出されている。例えば、ＴＲＸの発現は、種々の型のストレスによって増大され得、従って、ＴＲＸは、ストレス誘導性タンパク質である。ＴＲＸは、種々の酸化的ストレス状態により、誘導され、細胞から放出されることの証拠が、積み重ねられている（Ｎａｋａｓｈｉｍａら，Ｌｉｖｅｒ  ２００１，２１，２９５−２９９およびこの中の参考文献）。ＴＲＸは、反応性酸素中間体（ＲＯＩ）のスカベンジャーとして作用し得、従って、ＲＯＩの産生が細胞傷害性メカニズムにおいて役割を果たし得るような、細胞傷害性からの保護を提供し得る。近年、ラットにおけるＴＲＸ誘導が、ＲＯＩ過剰産生に関連すること、およびＴＲＸが、ＲＯＩの清掃においてだけでなく虚血の間のシグナル伝達においても重要な役割を果たすことが、報告された（Ｔａｋａｇｉら，Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｌｅｔｔｅｒｓ（１９９８），２５１，２５−２８）。
【０００５】
その上、酸化的ストレスの上昇は、心疾患の進行に関わると考えられる。近年、心不全を有する患者におけるＴＲＸの血清レベルが、コントロールの被験体より有意に高いことが示された。このことは、ＴＲＸレベルと心不全の重症度との間の関連の可能性を示す（Ｋｉｓｉｍｏｔｏら，Ｊｐｎ．  Ｃｉｒ．Ｊ．（２００１），６５（６），４９１−４９４）。
【０００６】
ＴＲＸのレベルの上昇もまた、慢性肝臓疾患および／または悪性肝臓疾患と関連している。Ｍｉｙａｚａｋｉらは、ＴＲＸの血清レベルが、肝細胞癌腫を有する患者において有意に上昇されることを報告した（Ｍｉｙａｚａｋｉら，Ｏｘｉｄ．Ｓｔｒｅｓｓ  Ｄｉｓ．（１９９９），３，２３５−２５０）。さらに、血清ＴＲＸレベルは、Ｃ型肝炎ウイルス感染を有する患者における酸化的ストレスを示すことが、見出されている（Ｊ．Ｈｅｐａｔｏｌ．（２０００）３３：６１６−６２２）。
【０００７】
ＴＲＸのレベルの上昇はまた、癌においても見出されている。すなわち、ＴＲＸは、種々の癌細胞株の増殖を刺激し得、そしてこのタンパク質を過剰発現する細胞におけるアポトーシスを阻害し得る。
【０００８】
さらに、近年、ＴＲＸは、他の公知のケモカインに匹敵する力価を有する、強力な走化性タンパク質であることが示されている。このことは、感染および炎症におけるＴＲＸの病原性の役割を示す（Ｂｅｒｔｉｎｉ，Ｒ．ら，Ｊ．ｏｆ  Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１８９（１１）：１７８３−１７８９，１９９９）。ＴＲＸ産生が、オキシダントによって誘導されるため、酸化的ストレスと炎症との間の関連は、確立される。実際、ＴＲＸは、種々の炎症性疾患および自己免疫疾患と結び付けられる。例えば、慢性関節リウマチ（ＲＡ）に苦しむ患者の滑液および滑膜組織におけるＴＲＸの濃度は、有意に高く、そして増殖促進特性およびサイトカイン様特性に基づき、ＴＲＸの発現の上昇は、ＲＡにおける疾患の活性に寄与し得ることが報告されている（Ｍａｕｒｉｃｅ，Ｍ．ら，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ，４２（１１）：２４３０−２４３９，１９９９）。さらに、ＴＲＸレベルの上昇は、ＨＩＶ疾患においても報告されている（Ｎａｋａｍｕｒａら，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８：６０３−６１１，１９９６）。
【０００９】
近年、チオレドキシン結合タンパク質−２と名付けられたＴＲＸ結合タンパク質（ＴＢＰ−２）が、同定された（Ｎｉｓｈｉｙａｍａ，Ａ．ら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７４（３１）：２１６４５−５０，１９９９）。ＴＢＰ−２は、ビタミンＤ（３）アップレギュレーションタンパク質１（ＶＤＵＰ１）と同一である。ＴＲＸとＴＢＰ−２／ＶＤＵＰ１との関連は、インビトロおよびインビボで観察され、ＴＲＸ−ＴＢＰ−２／ＶＤＵＰ１相互作用が、細胞のプロセスにおける酸化還元調節メカニズムに影響し得ることを示す。さらに、ＴＢＰ−２／ＶＤＵＰ１は、還元型ＴＲＸに結合するが、酸化型ＴＲＸには結合しないことが示された。重要には、ＴＲＸの還元活性および発現の両方が、ＴＢＰ−２に関連して阻害されることが示された。従って、ＴＢＰ−２の発現における誘導は、ＴＲＸの生物学的機能およびＴＲＸの発現の阻害の、両方に関連する。
【００１０】
ＴＲＸの、炎症誘導能力、アポトーシス阻害能力、および増殖因子として作用する能力、および種々の疾患状態（例えば、炎症性疾患および自己免疫疾患ならびに酸化的ストレスに関連する状態）におけるＴＲＸの関連は、ＴＲＸを、ＴＲＸレベルの変化によって特徴付けられる障害の処置のための魅力的な標的にする。従って、ＴＲＡの調節において有効な化合物を同定する必要が、当該分野に存在する。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１１】
（発明の要旨）
本発明は、チオレドキシン（ＴＲＸ）媒介性疾患およびチオレドキシン媒介性症状を、処置および／または予防するための新規の方法を提供し、この方法は、このような処置を必要とする患者に、治療有効量の、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）インヒビターまたはその薬学的に受容可能な塩もしくは水和物を投与する工程を包含する。ＨＤＡＣインヒビターは、チオレドキシン結合タンパク質（例えば、チオレドキシン結合タンパク質−２すなわちＴＢＰ−２）の発現を変え、次に、このチオレドキシン結合タンパク質は、変化したＴＲＸ／チオレドキシン結合タンパク質細胞性結合相互作用に導いて、細胞性ＴＲＸのレベル（例えば、発現レベル）または活性（例えば、還元活性）の上昇または低下をもたらし得る。従って、本発明は、種々のチオレドキシン（ＴＲＸ）媒介性疾患およびチオレドキシン媒介性状態（例えば、炎症性疾患、アレルギー性疾患、自己免疫疾患、酸化的ストレスに関連する疾患、または細胞過剰増殖によって特徴付けられる疾患）を予防および／または処置する方法における、ＨＤＡＣインヒビターの使用に関する。
【００１２】
本発明は、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）を阻害し得る化合物が、チオレドキシン結合タンパク質−２（ＴＢＰ−２）のようなチオレドキシン結合タンパク質の発現を誘導し得ることの予期せぬ発見に基づく。このチオレドキシン結合タンパク質の誘導は、チオレドキシン（ＴＲＸ）のレベルまたは活性の低下に関連し、この低下は、ＴＲＸとチオレドキシン結合タンパク質との相互作用から生じる。
【００１３】
このように、ヒストンデアセチラーゼを阻害し得る化合物（ＨＤＡＣインヒビター）は、ＴＲＸ媒介性疾患およびＴＲＸ媒介性状態（例えば、ＴＲＸの変化したレベルまたは活性によって特徴付けられる、ＴＲＸ媒介性疾患）の処置において、使用され得る。例えば、ＨＤＡＣインヒビターは、ＴＲＸ媒介性疾患を、ＴＲＸのレベルまたは活性を調節することによって処置することにおいて、有効であり得る（例えば、ＴＲＸのレベルまたは活性の低下または上昇を引き起こす）。例えば、ＴＲＸ媒介性疾患が、ＴＲＸのレベルまたは活性の上昇によって特徴付けられる場合、ＨＤＡＣインヒビターは、ＴＲＸのレベルまたは活性を低下させ得る。
【００１４】
「レベル」は、以下のうちの任意の１つ以上を意味する：発現レベル、遺伝子発現レベル（ｍ−ＲＮＡ）、タンパク質発現レベル、またはこれらの任意の組み合わせ（これらは、インビボまたはインビトロで観察され得る）。
【００１５】
「活性」は、以下のうちの任意の１つ以上を意味する：還元活性（すなわち、細胞酸化還元反応に関与する、ＴＲＸの能力）、酵素活性、またはこれらの任意の組み合わせ（これらは、インビボまたはインビトロで観察され得る）。
【００１６】
従って、１つの実施形態において、本発明は、チオレドキシン（ＴＲＸ）媒介性疾患およびチオレドキシン媒介性状態を、処置および／または予防する方法を提供し、この方法は、このような処置を必要とする被験体に、治療有効量のヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）インヒビターまたはその薬学的に受容可能な塩もしくは水和物を投与する工程を、包含する。
【００１７】
ＴＲＸ媒介性疾患の非限定の例は、炎症性疾患、アレルギー性疾患、自己免疫疾患、酸化的ストレスに関連する疾患または細胞過剰増殖によって特徴付けられる疾患である。このような疾患の特定の例としては、以下が挙げられるが、これらに限定はされない：関節の炎症状態；慢性関節リウマチ（ＲＡ）；乾癬性関節炎；クローン病および潰瘍性大腸炎のような炎症性腸疾患；脊椎関節症；強皮症；乾癬；皮膚炎、湿疹、アトピー性皮膚炎およびアレルギー性接触皮膚炎のような炎症性皮膚疾患；蕁麻疹；血管炎；好酸球性筋炎；好酸球性筋膜炎；皮膚または器官の白血球湿潤を伴う癌；虚血性損傷；脳虚血；ＨＩＶ；心不全；慢性肝臓疾患、急性肝臓疾患または悪性肝臓疾患；自己免疫性甲状腺炎；全身性エリテマトーデス；シェーグレン症候群；肺疾患；急性膵臓病；筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）；アルツハイマー病；悪液質／摂食障害；喘息；アテローム性動脈硬化症；慢性疲労症候群；発熱；糖尿病；糸球体腎炎；対宿主性移植片反応；出血性ショック（ｈｅｍｏｈｏｒｒａｇｉｃ  ｓｈｏｃｋ）；痛覚過敏；多発性硬化症；筋障害；骨粗鬆症；パーキンソン病；疼痛；早期分娩；乾癬；再潅流傷害；サイトカイン誘導性毒性；放射線治療からの副作用；側頭骨下顎骨結合疾患（ｔｅｍｐｏｒａｌ  ｍａｎｄｉｂｕｌａｒ  ｊｏｉｎｔ  ｄｉｓｅａｓｅ）；腫瘍転移；挫傷、捻挫、軟骨損傷、火傷のような外傷、整形外科手術、感染または他の疾患過程で生じる炎症状態；喘息、アレルギー性鼻炎、過敏性肺疾患、過敏性肺炎、好酸球性肺炎、遅延型過敏症および間質性肺炎（ＩＬＤ）のような呼吸性アレルギー性疾患；全身性アナフィラキシーまたは過敏性反応；薬物アレルギーおよび昆虫刺創アレルギー。別の実施形態において、本発明は、被験体において、チオレドキシン（ＴＲＸ）のレベルまたは活性を調節する方法を提供し、この方法は、被験体に、被験体においてＴＲＸのレベルまたは活性を調節するために有効な量の、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）インヒビターまたはその薬学的に受容可能な塩もしくは水和物を投与する工程を、包含する。用語「レベル」および「活性」は、上述の１つ以上の定義を有する。
【００１８】
別の実施形態において、本発明は、細胞において、チオレドキシン（ＴＲＸ）のレベルまたは活性を調節する方法を、提供する。この方法は、細胞におけるＴＲＸのレベルまたは活性を調節するために有効な量の、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）インヒビターまたはその塩もしくは水和物に、細胞を接触させる工程を、包含する。用語「レベル」および「活性」は、上述の１つ以上の定義を有する。
【００１９】
なお別の実施形態において、本発明は、細胞において、チオレドキシン結合タンパク質のレベルを調節する方法を、提供する。この方法は、細胞におけるチオレドキシン結合タンパク質のレベルを調節するために有効な量の、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）インヒビターまたはその塩もしくは水和物に、細胞を接触させる工程を包含する。用語「レベル」は、上述の１つ以上の定義を有する。
【００２０】
１つの特定の実施形態において、ＨＤＡＣインヒビターは、チオレドキシン結合タンパク質の遺伝子またはタンパク質の発現を誘導することにより、チオレドキシン結合タンパク質のレベルを上昇させる。チオレドキシン結合タンパク質のこの誘導は、ＴＲＸ／チオレドキシン結合タンパク質の増加した結合相互作用から生じる、ＴＲＸのレベルまたは活性の低下をもたらし得る。１つの特定の実施形態において、チオレドキシン結合タンパク質は、ＴＢＰ−２（チオレドキシン結合タンパク質−２）である。「レベル」および「活性」は、上述の１つ以上の定義を有する。
【００２１】
ＴＲＸ媒介性疾患の処置および／または予防おいて有効であり、かつ本発明の方法において使用され得るＨＤＡＣインヒビターとしては、以下が挙げられるが、これらに限定はされない：ヒドロキサム酸誘導体、短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）、環式テトラペプチド、ベンズアミド誘導体、または求電子性ケトン誘導体（本明細書中で定義される）。
【００２２】
本発明の方法における使用のために適切な、ＨＤＡＣインヒビターの特定の非限定の例は、以下である：
Ａ）ＳＡＨＡ、ピロキサミド、ＣＢＨＡ、トリコスタチンＡ（ＴＳＡ）、トリコスタチンＣ、サリチルヒドロキサム酸（ＳＢＨＡ）、アゼラインビスヒドロキサム酸（ＡＢＨＡ）、アゼライン−１−ヒドロキサメート−９−アニリド（ＡＡＨＡ）、６−（３−クロロフェニルウレイド）カプロン（ｃａｒｐｏｉｃ）ヒドロキサム酸（３Ｃｌ−ＵＣＨＡ）、オクサムフラチン（Ｏｘａｍｆｌａｔｉｎ）、Ａ−１６１９０６、スクリプタイド（Ｓｃｒｉｐｔａｉｄ）、ＰＸＤ−１０１、ＬＡＱ−８２４、ＣＨＡＰ、ＭＷ２７９６、およびＭＷ２９９６から選択されるヒドロキサム酸誘導体；
Ｂ）トラポキシン（Ｔｒａｐｏｘｉｎ）Ａ、ＦＲ９０１２２８（ＦＫ  ２２８、デプシペプチド）、ＦＲ２２５４９７、アピシジン（Ａｐｉｃｉｄｉｎ）、ＣＨＡＰ、ＨＣ毒素、ＷＦ２７０８２、およびクルアミドシン（Ｃｈｌａｍｙｄｏｃｉｎ）から選択される環式テトラペプチド；
Ｃ）酪酸ナトリウム、イソバレレート、バレレート、４フェニルブチラート（４−ＰＢＡ）、フェニルブチラート（ＰＢ）、プロピオネート、ブチラミド、イソブチラミド、フェニルアセテート、３−ブロモプロピオネート、トリブチリン、バルプロ酸およびバルプロエートから選択される短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）
Ｄ）ＣＩ−９９４、ＭＳ−２７−２７５（ＭＳ−２７５）およびＭＳ−２７−２７５の３’−アミノ誘導体から選択されるベンズアミド誘導体；
Ｅ）トリフルオロメチルケトンおよびα−ケトアミド（例えば、Ｎ−メチル−α−ケトアミド）から選択される求電子性ケトン誘導体；ならびに
Ｆ）デプデシン（ｄｅｐｕｄｅｃｉｎ）。
【００２３】
好ましいＨＤＡＣインヒビターとしては、以下が挙げられる：
スベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）またはその薬学的に受容可能な塩もしくは水和物であって、これは、以下の構造式：
【００２４】
【化２５】
2005525345.tif 000002
【００２５】
で表される。
【００２６】
ピロキサミドまたはその薬学的に受容可能な塩もしくは水和物であって、これは、以下の構造式：
【００２７】
【化２６】
2005525345.tif 000003
【００２８】
で表される。
【００２９】
ｍ−カルボキシケイ皮酸ビスヒドロキサメート（ＣＢＨＡ）またはその薬学的に受容可能な塩もしくは水和物であって、これは、以下の構造式：
【００３０】
【化２７】
2005525345.tif 000004
【００３１】
で表される。
【００３２】
本発明の方法における使用に適切な、ＨＤＡＣインヒビターの他の非限定の例は：
以下の構造：
【００３３】
【化２８】
2005525345.tif 000005
【００３４】
で表される化合物、またはその薬学的に受容可能な塩または水和物であって、ここで、Ｒ１およびＲ２は同一であるかまたは異なり得、Ｒ１およびＲ２が同一である場合、Ｒ１およびＲ２の各々は、置換もしくは非置換のアリールアミノ基、置換もしくは非置換のシクロアルキルアミノ基、置換もしくは非置換のピリジンアミノ基、置換もしくは非置換のピペリジノ基、置換もしくは非置換の９−プリン−６−アミン基、または置換もしくは非置換のチアゾールアミノ基であり；ここで、Ｒ１およびＲ２が異なっている場合、Ｒ１＝Ｒ３−Ｎ−Ｒ４であり、ここでＲ３およびＲ４はそれぞれ独立に、同一であるかまたは互いに異なっており、水素原子、ヒドロキシル基、置換または非置換の分枝鎖または非分枝鎖の、アルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、アリールアルキルオキシ基、アリールオキシ基、アリールアルキルオキシ基またはピリジン基であるか、またはＲ３とＲ４とが互いに結合してピペリジン基を形成し；Ｒ２は、ヒドロキシルアミノ基、ヒドロキシル基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基またはアルキルオキシ基であり；そしてｎは、約４〜約８の整数である。
【００３５】
以下の構造：
【００３６】
【化２９】
2005525345.tif 000006
【００３７】
で表される化合物、またはその薬学的に受容可能な塩または水和物であって、ここでＲは、置換もしくは非置換のフェニル、ピペリジン、チアゾール、２−ピリジン、３−ピリジンまたは４−ピリジンであり；そして
ｎは、約４〜約８の整数である。
【００３８】
以下の構造：
【００３９】
【化３０】
2005525345.tif 000007
【００４０】
で表される化合物、またはその薬学的に受容可能な塩または水和物であって、ここで、Ａは、アミド部分であり、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ、置換または非置換の、アリール、ナフサ、ピリジンアミノ、９−プリン−６−アミン、チアゾールアミノ、アリールオキシ、アリールアルキルオキシまたはピリジンから選択され、そしてＲ４は、水素、ハロゲン、フェニルまたはシクロアルキルの部分であり、そしてｎは、３〜１０の整数である。
【００４１】
従って、本発明は、広範な種々のチオレドキシン（ＴＲＸ）媒介性疾患およびチオレドキシン媒介性状態（特に、炎症性疾患、アレルギー性疾患、自己免疫疾患、酸化的ストレスに関連する疾患、または細胞過剰増殖によって特徴付けられる疾患のような、ＴＲＸの変化した細胞性のレベルまたは活性によって特徴付けられる疾患）を、予防および／または処置する、安全かつ有効な方法を提供する。この方法は、治療有効量の、本明細書中に記載されるような広範な選択肢のＨＤＡＣインヒビターの１種以上を投与する工程を包含する。
【００４２】
（発明の詳細な説明）
本発明の好ましい実施形態の説明は、以下である。本発明は、治療有効量の、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）インヒビターまたはその薬学的に受容可能な塩もしくは水和物を、このような処置を必要とする被験体に投与することにより、チオレドキシン（ＴＲＸ）媒介性疾患およびチオレドキシン（ＴＲＸ）媒介性状態を、処置および／または予防する新規の方法を提供する。ＨＤＡＣインヒビターは、チオレドキシン結合タンパク質（例えば、チオレドキシン結合タンパク質−２またはＴＢＰ−２）の発現を変えて、このチオレドキシン結合タンパク質は、変化したＴＲＸ／チオレドキシン結合タンパク質の細胞性結合相互作用を導き、細胞性ＴＲＸのレベル（例えば、発現レベル）または活性（例えば、酸化還元活性）の上昇または低下をもたらし得る。従って、本発明は、種々のチオレドキシン（ＴＲＸ）媒介性疾患およびチオレドキシン（ＴＲＸ）媒介性状態（例えば、炎症性疾患、アレルギー性疾患、自己免疫疾患、酸化的ストレスに関する疾患、または細胞過剰増殖によって特徴付けられる疾患）の予防および／または処置の方法におけるＨＤＡＣインヒビターの使用に関する。
【００４３】
本発明は、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）を阻害し得る化合物が、チオレドキシン結合タンパク質の発現を変え得る（すなわち、チオレドキシン結合タンパク質の発現を上昇または低下させる）という、予期せぬ発見に基づく。本明細書中で実証されるように、ヒストンデアセチラーゼを阻害し得る化合物が、ＴＢＰ−２遺伝子の発現を誘導し得ることは、予期せず、驚きをもって発見されている。このＴＢＰ−２遺伝子の誘導は、ＴＲＸとＴＢＰ−２との相互作用から生じる、ＴＲＸのレベルの低下をもたらし得る。特に、ヒストンデアセチラーゼインヒビターＳＡＨＡが、ＬＮＣａＰ前立腺細胞ならびにＭＣＦ−７胸部細胞およびＭＤＡ−ＭＢ−４６８胸部細胞において、チオレドキシン結合タンパク質−２（ＴＢＰ−２）の発現を誘導し得ることは、マイクロアレイ分析を使用して、決定されている。ＴＢＰ−２の誘導は、これらの細胞におけるチオレドキシン（ＴＲＸ）ｍＲＮＡレベルの低下に関連していた。
【００４４】
このように、ヒストンデアセチラーゼを阻害し得る化合物は、ＴＲＸ媒介性疾患およびＴＲＸ媒介性状態（例えば、ＴＲＸの変化したレベルまたは変化した活性によって特徴付けられる、ＴＲＸ媒介性疾患）の処置において使用され得る。いずれの特定の理論にも固定されることを望まないが、ＨＤＡＣインヒビターがＴＲＸ媒介性疾患の処置に有効であるような１つのメカニズムは、ＴＲＸのレベルまたは活性を調節する（すなわち、ＴＲＸのレベルまたは活性の低下または上昇をもたらす）ことによる。例えば、ＴＲＸ媒介性疾患が、ＴＲＸのレベルまたは活性の上昇によって特徴付けられる場合、ＨＤＡＣインヒビターは、ＴＲＸのレベルまたは活性を低下させる。
【００４５】
「レベル」は、以下のうちの任意の１つ以上を意味する：発現レベル、遺伝子発現レベル（ｍ−ＲＮＡ）、タンパク質発現レベル、またはこれらの任意の組み合わせ（これらは、インビボまたはインビトロで観察され得る）。
【００４６】
「活性」は、以下のうちの任意の１つ以上を意味する：還元活性（すなわち、細胞酸化還元反応に関与する、ＴＲＸの能力）、酵素活性、またはこれらの任意の組み合わせ（これらは、インビボまたはインビトロで観察され得る）。
【００４７】
従って、１つの実施形態において、本発明は、チオレドキシン（ＴＲＸ）媒介性疾患およびチオレドキシン媒介性状態を、処置および／または予防する新規の方法を提供し、この方法は、このような処置を必要とする被験体に、治療有効量のヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）インヒビターまたはその薬学的に受容可能な塩もしくは水和物を投与する工程を、包含する。
【００４８】
別の実施形態において、本発明は、被験体において、チオレドキシン（ＴＲＸ）のレベルまたは活性を調節する方法を提供し、この方法は、被験体におけるＴＲＸのレベルまたは活性を調節するために有効な量のヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）インヒビターまたはその薬学的に受容可能な塩もしくは水和物を、被験体に投与する工程を包含する。用語「レベル」および「活性」は、上述の１つ以上の定義を有する。
【００４９】
別の実施形態において、本発明は、細胞において、チオレドキシン（ＴＲＸ）のレベルまたは活性を調節する方法を、提供する。この方法は、細胞におけるＴＲＸのレベルを調節するために有効な量の、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）インヒビター、またはその塩もしくはその水和物に、細胞を接触させる工程を包含する。用語「レベル」および「活性」は、上述の１つ以上の定義を有する。
【００５０】
なお別の実施形態において、本発明は、細胞において、チオレドキシン結合タンパク質のレベルを調節する方法を、提供する。この方法は、細胞におけるチオレドキシン結合タンパク質のレベルを調節するために有効な量の、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）インヒビター、またはその塩もしくはその水和物に、細胞を接触させる工程を包含する。「レベル」は、上述の１つ以上の定義を有する。
【００５１】
１つの特定の実施形態において、ＨＤＡＣインヒビターは、チオレドキシン結合タンパク質の遺伝子またはタンパク質の発現を誘導することにより、チオレドキシン結合タンパク質のレベルを上昇させる。このチオレドキシン結合タンパク質の誘導は、ＴＲＸ／チオレドキシン結合タンパク質の結合相互作用の上昇から生じる、ＴＲＸのレベルまたは活性の低下をもたらし得る。１つの特定の実施形態において、チオレドキシン結合タンパク質は、ＴＢＰ−２（チオレドキシン結合タンパク質−２）である。「レベル」および「活性」は、上述の１つ以上の定義を有する。
【００５２】
（ヒストンデアセチラーゼおよびヒストンデアセチラーゼインヒビター）
ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）は、この用語が本明細書中で使用される場合、ヌクレオソームのコアヒストンのアミノ末端尾部におけるリジン残基からのアセチル基の除去を触媒する酵素である。従って、ＨＤＡＣとヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）とは共に、ヒストンのアセチル化状態を調節する。ヒストンのアセチル化は、遺伝子発現に影響を及ぼし、そしてＨＤＡＣのインヒビター（例えば、ヒドロキサム酸ベースのハイブリッド極性化合物であるスベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ））は、インビトロで、形質転換細胞の増殖停止、分化および／またはアポトーシスを誘導し、インビボで腫瘍増殖を抑制する。ＨＤＡＣは、構造的相同性に基づき、３つのクラスに分類され得る。クラスＩ  ＨＤＡＣ（ＨＤＡＣ  １、ＨＤＡＣ  ２、ＨＤＡＣ  ３およびＨＤＡＣ  ８）は、酵母ＲＰＤ３タンパク質に対する類似性を有し、核内に位置し、そして転写補抑制体と結合した複合体で見出される。クラスＩＩ  ＨＤＡＣ（ＨＤＡＣ  ４、ＨＤＡＣ  ５、ＨＤＡＣ  ６、ＨＤＡＣ  ７およびＨＤＡＣ  ９）は、酵母ＨＡＤ  １タンパク質に類似し、そして核および細胞質の両方の細胞下に局在する。クラスＩ  ＨＤＡＣおよびクラスＩＩ  ＨＤＡＣは、ヒドロキサム酸ベースのＨＤＡＣインヒビター（例えば、ＳＡＨＡ）によって阻害される。クラスＩＩＩ  ＨＤＡＣは、構造的に遠いクラスのＮＡＤ依存型酵素を形成し、これは、酵母ＳＩＲ２タンパク質に関与し、ヒドロキサム酸ベースのＨＤＡＣインヒビターによって阻害されない。
【００５３】
ヒストンデアセチラーゼインヒビターまたはＨＤＡＣインヒビターは、この用語が本明細書中で使用される場合、インビボ、インビトロまたはその両方において、ヒストンの脱アセチル化を阻害し得る化合物である。従って、ＨＤＡＣインヒビターは、少なくとも１つのヒストンデアセチラーゼの活性を阻害する。少なくとも１つのヒストンの脱アセチル化の阻害の結果として、アセチル化ヒストンの増加が生じ、そしてアセチル化ヒストンの蓄積は、ＨＤＡＣインヒビターの活性を評価するための適切な生物学的マーカーである。従って、アセチル化ヒストンの蓄積をアッセイし得る手順は、目的の化合物のＨＤＡＣ阻害活性を決定するために使用され得る。ヒストンデアセチラーゼ活性を阻害し得る化合物はまた、他の基質をも阻害し得、従って、他の生物学的に活性な分子（例えば、酵素）を阻害し得ることが、理解される。
【００５４】
例えば、ＨＤＡＣインヒビターを受ける患者において、ＨＤＡＣインヒビターで処理された末梢単核細胞およびＨＤＡＣインヒビターで処理された組織におけるアセチル化ヒストンの蓄積は、適切なコントロールに対して決定され得る。
【００５５】
特定の化合物のＨＤＡＣ阻害活性は、インビトロの使用（例えば、少なくとも１つのヒストンデアセチラーゼの阻害を示す酵素学的アッセイ）で決定され得る。さらに、特定の組成物で処理された細胞におけるアセチル化ヒストンの蓄積の検出は、化合物のＨＤＡＣ阻害活性を確認し得る。
【００５６】
アセチル化ヒストンの蓄積についてのアッセイは、文献において周知である。例えば、Ｍａｒｋｓ，Ｐ．Ａ．ら，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．，９２：１２１０−１２１５，２０００、Ｂｕｔｌｅｒ，Ｌ．Ｍ．ら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６０：５１６５−５１７０（２０００）、Ｒｉｃｈｏｎ，Ｖ．Ｍ．ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，９５：３００３−３００７，１９９８、およびＹｏｓｈｉｄａ，Ｍ．ら．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６５：１７１７４−１７１７９，１９９０を参照のこと。
【００５７】
例えば、ヒストンデアセチラーゼインヒビター化合物の活性を決定するための酵素学的アッセイは、以下のように行われ得る。簡潔には、アフィニティ精製したヒトエピトープタグ化（Ｆｌａｇ）ＨＤＡＣ１に対するＨＤＡＣインヒビター化合物の効果は、酵素調製物を、基質の非存在下で氷上で２０分間、示した量のインヒビター化合物と共にインキュベートすることによってアッセイされ得る。基質（［３Ｈ］アセチル標識化マウス赤白血病細胞由来のヒストン）が加えられ得、そしてサンプルは総容量３０ｍＬで、２０分間３７℃でインキュベートされ得る。次いで、反応は停止され、遊離のアセテートが抽出され得、そして放射活性放出の量が、シンチレーション計測によって決定される。ヒストンデアセチラーゼインヒビター化合物の活性の決定のために有用な代替のアッセイは、「ＨＤＡＣ蛍光活性アッセイ；薬物発見キット−ＡＫ−５００」（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｐｌｙｍｏｕｔｈ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，ＰＡから市販されるＢＩＯＭＯＬ（登録商標））である。
【００５８】
インビボ研究は、以下のように行われ得る。動物（例えば、マウス）は、ＨＤＡＣインヒビター化合物を、腹腔内注射され得る。選択された細胞（例えば、脳、脾臓、肝臓など）は、投与後の所定の時期に、単離され得る。ヒストンは、Ｙｏｓｈｉｄａら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５：１７１７４−１７１７９，１９９０に記載のように、基本的に組織から単離され得る。等量（約１ｍｇ）のヒストンが、１５％ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル上で電気泳動され得、そしてＨｙｂｏｎｄ−Ｐフィルター（Ａｍｅｒｓｈａｍから入手可能）に移動され得る。フィルターは、３％ミルクでブロックされ得、そしてウサギ精製ポリクローナル抗アセチル化ヒストンＨ４抗体（αＡｃ−Ｈ４）および抗アセチル化ヒストンＨ３抗体（αＡｃ−Ｈ３）（Ｕｐｓｔａｔｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．）でプローブ検出され得る。アセチル化ヒストンのレベルは、西洋ワサビペルオキシダーゼ結合ヤギ抗ウサギ抗体（１：５０００）およびＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ化学発光基質（Ｐｉｅｒｃｅ）を使用して可視化し得る。ヒストンタンパク質のローディングコントロールとして、平行のゲルが泳動され、クーマシーブルー（Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ  Ｂｌｕｅ）（ＣＢ）で染色され得る。
【００５９】
さらに、ヒドロキサム酸ベースのＨＤＡＣインヒビターが、ｐ２１ＷＡＦ１遺伝子の発現をアップレギュレートすることが示されている。ｐ２１ＷＡＦ１タンパク質は、２時間のＨＤＡＣインヒビターとの培養の間に、種々の形質転換細胞において、標準的方法を使用して誘導される。ｐ２１ＷＡＦ１遺伝子の誘導は、この遺伝子のクロマチン領域におけるアセチル化ヒストンの蓄積に関連する。従って、ｐ２１ＷＡＦ１の誘導は、形質転換細胞においてＨＤＡＣインヒビターによって引き起こされるＧ１細胞周期の停止に関連すると認識され得る。
【００６０】
代表的に、ＨＤＡＣインヒビターは、５つの一般的クラスに分類される：１）ヒドロキサム酸誘導体；２）短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）；３）環状テトラペプチド；４）ベンズアミド；および５）求電子性ケトン。
【００６１】
従って、本発明は、ＨＤＡＣインヒビターの、ＴＲＸ媒介性疾患を予防および／または処置のための使用の広範な範囲を含む。このインヒビターは、１）ヒドロキサム酸誘導体；２）短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）；３）環状テトラペプチド；４）ベンズアミド；および５）求電子性ケトン；および／またはヒストンデアセチラーゼを阻害し得る化合物の任意の他のクラスである。このようなＨＤＡＣインヒビターの例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：
Ａ．ヒドロキサム酸誘導体：例えば、スベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）（Ｒｉｃｈｏｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９５，３００３−３００７（１９９８））；Ｍ−カルボキシケイ皮酸ビスヒドロキサミド（ＣＢＨＡ）（Ｒｉｃｈｏｎら，前出）；ピロキサミド；ＣＢＨＡ；トリコスタチンアナログ（例えば、トリコスタチンＡ（ＴＳＡ）およびトリコスタチンＣ）（Ｋｏｇｈｅら，１９９８．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｍａｃｏｌ．５６：１３５９−１３６４）；サリチルヒドロキサム酸（ＳＢＨＡ）（Ａｎｄｒｅｗｓら，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊ．Ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ  ３０，７６１−７６８（２０００））；アゼラインビスヒドロキサム酸（ＡＢＨＡ）（Ａｎｄｒｅｗｓら，前出）；アゼライン−１−ヒドロキサメート−９−アニリド（ＡＡＨＡ）（Ｑｉｕら，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｃｅｌｌ  １１，２０６９−２０８３（２０００））；６−（３−クロロフェニルウレイド）カプロンヒドロキサム酸（３Ｃｌ−ＵＣＨＡ）、オクサムフラチン［（２Ｅ）−５−［３−［（フェニルスイブニル（ｐｈｅｎｙｌｓｕｉｂｎｙｌ））アミノフェニル］−ペント−２−エン−４−イノヒドロキサム酸（Ｋｉｍら，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，１８：２４６１  ２４７０（１９９９））；Ａ−１６１９０６、スクリプタイド（Ｓｕら，２０００  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，６０：３１３７−３１４２）；ＰＸＤ−１０１（Ｐｒｏｌｉｆｉｘ）；ＬＡＱ−８２４；ＣＨＡＰ；ＭＷ２７９６（Ａｎｄｒｅｗｓら，前出）；およびＭＷ２９９６（Ａｎｄｒｅｗｓら，前出）。
【００６２】
Ｂ．環状テトラペプチド：例えば、トラポキシンＡ（ＴＰＸ）−環状テトラペプチド（シクロ−（Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｄ−ピペコリニル（ｐｉｐｅｃｏｌｉｎｙｌ）−Ｌ−２−アミノ−８−オキソ−９，１０−エポキシデカノイル））（Ｋｉｊｉｍａら，Ｊ  Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８，２２４２９−２２４３５（１９９３））；ＦＲ９０１２２８（ＦＫ  ２２８，デプシペプチド）（Ｎａｋａｊｉｍａら，Ｅｘ．Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ．２４１，１２６−１３３（１９９８））；ＦＲ２２５４９７環状テトラペプチド（Ｈ．Ｍｏｒｉら，ＰＣＴ出願ＷＯ  ００／０８０４８（２０００年２月１７日））；アピシジン環状テトラペプチド［シクロ（Ｎ  Ｏ−メチル−Ｌ−トリプトファニル−Ｌ−イソロイシニル−Ｄ−ピペコリニル−Ｌ−２−アミノ−８オキソデカノイル）］（Ｄａｒｋｉｎ−Ｒａｔｔｒａｙら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３，１３１４３１３１４７（１９９６））；アピシジンＩａ、アピシジンＩｂ、アピシジンＩｃ、アピシジンＩＩａ、およびアピシジンＩＩｂ（Ｐ．Ｄｕｌｓｋｉら，ＰＣＴ出願ＷＯ  ９７／１１３６６）；ＣＨＡＰ、ＨＣ−毒素環状テトラペプチド（Ｂｏｓｃｈら，Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ  ７，１９４１−１９５０（１９９５））；ＷＦ２７０８２環状テトラペプチド（ＰＣＴ出願ＷＯ  ９８／４８８２５）；およびクラミドシン（Ｂｏｓｃｈら，前出）。
【００６３】
Ｃ．短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）誘導体：例えば、酪酸ナトリウム（Ｃｏｕｓｅｎｓら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５４，１７１６−１７２３（１９７９））；イソバレレート（ＭｃＢａｉｎら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．５３：１３５７−１３６８（１９９７））；バレレート（ＭｃＢａｉｎら，前出）；４フェニルブチラート（４−ＰＢＡ）（ＬｅａおよびＴｕｌｓｙａｎ，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１５，８７９−８７３（１９９５））；フェニルブチラート（ＰＢ）（Ｗａｎｇら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５９，２７６６−２７９９（１９９９））；プロピオネート（ＭｃＢａｉｎら，前出）；ブチラミド（ＬｅａおよびＴｕｌｓｙａｎ，前出）；イソブチラミド（ＬｅａおよびＴｕｌｓｙａｎ，前出）；フェニルアセテート（ＬｅａおよびＴｕｌｓｙａｎ，前出）；３−ブロモプロピオネート（ＬｅａおよびＴｕｌｓｙａｎ，前出）；トリブチリン（Ｇｕａｎら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，６０，７４９−７５５（２０００））；バルプロ酸およびバルプロエート。
【００６４】
Ｄ．ベンズアミド誘導体：例えば、ＣＩ−９９４；ＭＳ−２７−２７５［Ｎ−（２−アミノフェニル）−４−［Ｎ−（ピリジン−３−イルメトキシカルボニル）アミノメチル］ベンズアミド］（Ｓａｉｔｏら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９６，４５９２−４５９７（１９９９））；およびＭＳ−２７−２７５の３’−アミノ誘導体（Ｓａｉｔｏら，前出）。
【００６５】
Ｅ．求電子性のケトン誘導体：例えば、トリフルオロメチルケトン（Ｆｒｅｙら、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．（２００２）、１２、３４４３〜３４４７；米国６，５１１，９９０号）およびα−ケトアミド（例えば、Ｎ−メチル−α−ケトアミド）。
【００６６】
Ｆ．他のＨＤＡＣインヒビター：例えば、デプデシン（Ｋｗｏｎら  １９９８．ＰＮＡＳ  ９５：３３５６〜３３６１））。
【００６７】
好ましいヒドロキサム酸ベースのＨＤＡＣインヒビターは、スベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）、ｍ−カルボキシケイ皮酸ビスヒドロキサメート（ＣＢＨＡ）およびピロキサミドまたはこれらの薬学的に受容可能な塩もしくはそれらの水和物である。ＳＡＨＡは、ヒストンデアセチラーゼの触媒ポケットに直接結合することが示されている。ＳＡＨＡは、細胞周期の停止、培養中の形質転換細胞の分化および／またはアポトーシスを誘導し、そしてげっ歯類において腫瘍の増殖を阻害する。ＳＡＨＡは、固形腫瘍および血液癌の両方において、これらの効果を誘導する際に有効である。ＳＡＨＡは、動物に対する毒性を有さずに、動物における腫瘍の増殖を阻害する際に有効であることが示されている。ＳＡＨＡ誘導性の腫瘍増殖阻害は、腫瘍中へのアセチル化されたヒストンの蓄積に関連する。ＳＡＨＡは、ラットにおける発癌物質（Ｎ−メチルニトロソウレア）誘導性の乳癌の、進行および継続的増殖の阻害の際に有効である。ＳＡＨＡは、本研究の１３０日にわたって、ラットに食餌で投与された。従って、ＳＡＨＡは非毒性であり、経口で活性な抗腫瘍剤であり、その作用メカニズムは、ヒストンデアセチラーゼ活性の阻害に関与する。
【００６８】
ＳＡＨＡは、以下の構造式によって表され得る：
【００６９】
【化３１】
2005525345.tif 000008
【００７０】
ピロキサミドは、以下の構造式によって表され得る：
【００７１】
【化３２】
2005525345.tif 000009
【００７２】
ＣＢＨＡは、以下の構造式によって表され得る：
【００７３】
【化３３】
2005525345.tif 000010
【００７４】
１つの実施形態において、ＨＤＡＣインヒビターは、式Ｉ：
【００７５】
【化３４】
2005525345.tif 000011
【００７６】
によって表され得るか、あるいはこれらの薬学的に受容可能な塩もしくは水和物であって、ここで、Ｒ１およびＲ２は、同一であり得るかまたは異なり得る；Ｒ１およびＲ２が同一である場合、それぞれ置換または非置換のアリールアミノ基、シクロアルキルアミノ基、ピリジンアミノ基、ピペリジノ基、９−プリン−６−アミンまたはチアゾールアミノ基であり；Ｒ１およびＲ２が異なったＲ１＝Ｒ３−Ｎ−Ｒ４である場合、ここで、Ｒ３およびＲ４が、それぞれ独立に同一であるかまたは互いに異なり、そして水素原子、ヒドロキシル基、置換または非置換の、分枝鎖または非分枝鎖の、アルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、アリールアルキルオキシ基、アリールオキシ基、アリールアルキルオキシ基またはピリジン基であるか、あるいはＲ３とＲ４とが、互いに結合してピペリジン基を形成し、Ｒ２は、ヒドロキシルアミノ基、ヒドロキシル基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基またはアルキルオキシ基であり、そしてｎが、約４〜約８の整数である。
【００７７】
このように、別の実施形態において、本発明の方法において使用されるＨＤＡＣインヒビターは、式ＩＩ：
【００７８】
【化３５】
2005525345.tif 000012
【００７９】
によって表され得るか、あるいはこれらの薬学的に受容可能な塩もしくは水和物であって、ここで、Ｒ３およびＲ４が、それぞれ独立に同一であるかまたは互いに異なり、そして水素原子、ヒドロキシル基、置換または非置換の、分枝鎖または非分枝鎖の、アルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、アリールアルキルオキシ基、アリールオキシ基、アリールアルキルオキシ基またはピリジン基であるか、あるいはＲ３とＲ４とが、互いに結合してピペリジン基を形成し、Ｒ２は、ヒドロキシルアミノ基、ヒドロキシル基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基またはアルキルオキシ基であり、そしてｎは、約４〜約８の整数である。
【００８０】
式ＩＩの特定の実施形態において、Ｒ２は、ヒドロキシルアミノ基、ヒドロキシル基、アミノ基、メチルアミノ基、ジメチルアミノ基またはメチルオキシ基であり、ｎは６である。式ＩＩのさらに別の実施形態において、Ｒ４は水素原子であり、Ｒ３は、置換または非置換のフェニルであり、そしてｎは６である。式ＩＩのさらなる実施形態において、Ｒ４は水素原子であり、そしてＲ３は、α−ピリジン、β−ピリジン、またはγ−ピリジンである。
【００８１】
式ＩＩの他の特定の実施形態において、Ｒ４は水素原子であり、そしてＲ３は、シクロヘキシル基であり；Ｒ４は水素原子であり、そしてＲ３は、メトキシ基であり；Ｒ３とＲ４とは、互いに結合してピペリジン基を形成し；Ｒ４は水素原子であり、そしてＲ３は、ヒドロキシル基であり；Ｒ３およびＲ４は、両方メチル基であり、そしてＲ３はフェニルであり、そしてＲ４はメチルである。
【００８２】
さらに、本発明における使用のために適切であるＨＤＡＣインヒビターは、構造式ＩＩＩ：
【００８３】
【化３６】
2005525345.tif 000013
【００８４】
によって表され得るか、あるいはこれらの薬学的に受容可能な塩もしくは水和物であって、ここで、ＸおよびＹが、それぞれ独立に同一であるかまたは互いに異なり、そしてヒドロキシル基、アミノ基またはヒドロキシルアミノ基、置換または非置換のアルキルオキシ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、アリールアミノ基、アルキルアリールアミノ基、アルキルオキシアミノ基、アリールオキシアミノ基、アルキルオキシアルキルアミノ基またはアリールオキシアルキルアミノ基であり；Ｒは、水素原子、ヒドロキシル基、置換または非置換のアルキル基、アリールアルキルオキシ基、またはアリールオキシ基であり；そしてｍおよびｎが、それぞれ独立に同一であるかまたは互いに異なり、そしてそれぞれが約０〜約８の整数である。
【００８５】
特定の実施形態において、ＨＤＡＣインヒビターは、式ＩＩＩの化合物であり、ここで、Ｘ、ＹおよびＲは、それぞれヒドロキシルであり、そしてｍおよびｎの両方とも５である。さらに別の実施形態において、本発明の方法における使用のために適切であるＨＤＡＣインヒビター化合物は、構造式ＩＶ：
【００８６】
【化３７】
2005525345.tif 000014
【００８７】
によって表され得るか、あるいはこれらの薬学的に受容可能な塩もしくは水和物であって、ここで、ＸおよびＹが、それぞれ独立に同一であるかまたは互いに異なり、そしてヒドロキシル基、アミノ基またはヒドロキシルアミノ基、置換または非置換のアルキルオキシ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、アリールアミノ基、アルキルアリールアミノ基、アルキルオキシアミノ基、アリールオキシアミノ基、アルキルオキシアルキルアミノ基またはアリールオキシアルキルアミノ基であり；Ｒ１およびＲ２が、それぞれ独立に同一であるかまたは互いに異なり、そして水素原子、ヒドロキシル基、置換または非置換のアルキル基、アリール基、アルキルオキシ、またはアリールオキシ基であり；そしてｍ、ｎおよびｏが、それぞれ独立に同一であるかまたは互いに異なり、そしてそれぞれが約０〜約８の整数である。
【００８８】
本発明の方法における使用のために適切である他のＨＤＡＣインヒビターは、構造式Ｖ：
【００８９】
【化３８】
2005525345.tif 000015
【００９０】
を有する化合物か、あるいはこれらの薬学的に受容可能な塩もしくは水和物を含み、ここで、ＸおよびＹが、それぞれ独立に同一であるかまたは互いに異なり、そしてヒドロキシル基、アミノ基またはヒドロキシルアミノ基、置換または非置換のアルキルオキシ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、アリールアミノ基、アルキルアリールアミノ基、アルキルオキシアミノ基、アリールオキシアミノ基、アルキルオキシアルキルアミノ基またはアリールオキシアルキルアミノ基であり；Ｒ１およびＲ２が、それぞれ独立に同一であるかまたは互いに異なり、そして水素原子、ヒドロキシル基、置換または非置換のアルキル基、アリール基、アルキルオキシ、またはアリールオキシ基であり；そしてｍおよびｎが、それぞれ独立に同一であるかまたは互いに異なり、そしてそれぞれが約０〜約８の整数である。
【００９１】
さらなる実施形態において、本発明の方法における使用のために適切である他のＨＤＡＣインヒビターは、構造式ＶＩ：
【００９２】
【化３９】
2005525345.tif 000016
【００９３】
を有し得るか、あるいはこれらの薬学的に受容可能な塩もしくは水和物であり得、ここで、ＸおよびＹが、それぞれ独立に同一であるかまたは互いに異なり、そしてヒドロキシル基、アミノ基またはヒドロキシルアミノ基、置換または非置換のアルキルオキシ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、アリールアミノ基、アルキルアリールアミノ基、アルキルオキシアミノ基、アリールオキシアミノ基、アルキルオキシアルキルアミノ基またはアリールオキシアルキルアミノ基であり；そしてｍおよびｎが、それぞれ独立に同一であるかまたは互いに異なり、そしてそれぞれが約０〜約８の整数である。
【００９４】
なお別の実施形態において、本発明の方法において有用であるＨＤＡＣインヒビターは、構造式ＶＩＩ：
【００９５】
【化４０】
2005525345.tif 000017
【００９６】
を有し得るか、あるいはこれらの薬学的に受容可能な塩もしくは水和物であり得、ここで、ＸおよびＹが、それぞれ独立に同一であるかまたは互いに異なり、そしてヒドロキシル基、アミノ基またはヒドロキシルアミノ基、置換または非置換のアルキルオキシ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、アリールアミノ基、アルキルアリールアミノ基、アルキルオキシアミノ基、アリールオキシアミノ基、アルキルオキシアルキルアミノ基またはアリールオキシアルキルアミノ基であり；Ｒ１およびＲ２が、それぞれ独立に同一であるかまたは互いに異なり、そして水素原子、ヒドロキシル基、置換または非置換のアルキル基、アリールアルキルオキシ基またはアリールオキシ基であり；そしてｍおよびｎが、それぞれ独立に同一であるかまたは互いに異なり、そしてそれぞれが約０〜約８の整数である。
さらなる実施形態において、本発明の方法における使用のために適切である他のＨＤＡＣインヒビターは、構造式ＶＩＩＩ：
【００９７】
【化４１】
2005525345.tif 000018
【００９８】
を有し得るか、あるいはこれらの薬学的に受容可能な塩もしくは水和物であり得、ここで、ＸおよびＹが、それぞれ独立に同一であるかまたは互いに異なり、そしてヒドロキシル基、アミノ基またはヒドロキシルアミノ基、置換または非置換のアルキルオキシ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、アリールアミノ基、アルキルアリールアミノ基、またはアリールオキシアルキルアミノ基であり；そしてｎは約０〜約８の整数である。
本発明における使用のために適切であるさらなる化合物は、式ＩＸ：
【００９９】
【化４２】
2005525345.tif 000019
【０１００】
によって示されるか、あるいはこれらの薬学的に受容可能な塩もしくは水和物を含み、ここで、ＸおよびＹが、それぞれ独立に同一であるかまたは互いに異なり、そしてヒドロキシル基、アミノ基またはヒドロキシルアミノ基、置換または非置換のアルキルオキシ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、アリールアミノ基、アルキルアリールアミノ基、アルキルオキシアミノ基、アリールオキシアミノ基、アルキルオキシアルキルアミノ基またはアリールオキシアルキルアミノ基であり；Ｒ１およびＲ２が、それぞれ独立に同一であるかまたは互いに異なり、そして水素原子、ヒドロキシル基、置換または非置換のアルキル基、アリール基、アルキルオキシ基、アリールオキシ基、カルボニルヒドロキシルアミノ基またはフルオロ基であり；そしてｍおよびｎが、それぞれ独立に同一であるかまたは互いに異なり、そしてそれぞれが約０〜約８の整数である。
さらなる実施形態において、本発明における使用のために適切であるＨＤＡＣインヒビターは、構造式Ｘ：
【０１０１】
【化４３】
2005525345.tif 000020
【０１０２】
を有する化合物、またはこれらの薬学的に受容可能な塩もしくは水和物を含み、ここで、Ｒ１およびＲ２が、それぞれ独立に同一であるかまたは互いに異なり、そしてヒドロキシル基、アルキルオキシ基、アミノ基、ヒドロキシルアミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、アリールアミノ基、アルキルアリールアミノ基、アルキルオキシアミノ基、アリールオキシアミノ基、アルキルオキシアルキルアミノ基、またはアリールオキシアルキルアミノ基である。特定の実施形態において、ＨＤＡＣインヒビターは、構造式Ｘの化合物であり、ここで、Ｒ１およびＲ２は、両方ともヒドロキシルアミノである。
さらなる実施形態において、本発明における使用のために適切であるＨＤＡＣインヒビターは、構造式ＸＩ：
【０１０３】
【化４４】
2005525345.tif 000021
【０１０４】
を有するか、またはこれらの薬学的に受容可能な塩もしくは水和物であり、ここで、Ｒ１およびＲ２が、それぞれ独立に同一であるかまたは互いに異なり、そしてヒドロキシル基、アルキルオキシ基、アミノ基、ヒドロキシルアミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、アリールアミノ基、アルキルアリールアミノ基、アルキルオキシアミノ基、アリールオキシアミノ基、アルキルオキシアルキルアミノ基、またはアリールオキシアルキルアミノ基である構造式ＸＩを有する。特定の実施形態において、ＨＤＡＣインヒビターは、構造式ＸＩの化合物であり、ここでＲ１およびＲ２は、両方ともヒドロキシルアミノである。
【０１０５】
さらなる実施形態において、本発明における使用のために適切である他のＨＤＡＣインヒビターは、構造式ＸＩＩ：
【０１０６】
【化４５】
2005525345.tif 000022
【０１０７】
によって表される化合物か、またはこれらの薬学的に受容可能な塩もしくは水和物を含み、ここで、Ｒ１およびＲ２が、それぞれ独立に同一であるかまたは互いに異なり、そしてヒドロキシル基、アルキルオキシ基、アミノ基、ヒドロキシルアミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、アリールアミノ基、アルキルアリールアミノ基、アルキルオキシアミノ基、アリールオキシアミノ基、アルキルオキシアルキルアミノ基、またはアリールオキシアルキルアミノ基である。特定の実施形態において、ＨＤＡＣインヒビターは、構造式ＸＩＩの化合物であり、ここでＲ１およびＲ２は、両方ともヒドロキシルアミノである。
【０１０８】
本発明の方法における使用のために適切なさらなる化合物は、構造式ＸＩＩＩ：
【０１０９】
【化４６】
2005525345.tif 000023
【０１１０】
によって表される化合物、またはこれらの薬学的に受容可能な塩もしくは水和物を含み、ここで、Ｒは、置換または非置換のフェニル、ピペリジン、チアゾール、２−ピリジン、３−ピリジンまたは４−ピリジンであり、そしてｎは、約４〜約８の整数である。
【０１１１】
さらに別の実施形態において、本発明の方法における使用のために適切なＨＤＡＣインヒビターは、構造式（ＸＩＶ）：
【０１１２】
【化４７】
2005525345.tif 000024
【０１１３】
によって表され得るか、またはこれらの薬学的に受容可能な塩もしくは水和物であり、ここで、Ｒは、置換または非置換のフェニル基、ピリジン基、ピペリジン基またはチアゾール基であり、そしてｎは、約４〜約８の整数である。
【０１１４】
特定の実施形態において、Ｒはフェニルであり、そしてｎは５である。別の実施形態において、ｎは５であり、そしてＲは３−クロロフェニルである。
【０１１５】
構造式Ｉ〜構造式ＸＩＶにおいて、置換されたフェニルとは、以下で置換され得るフェニル基を言う：例えば、メチル基、シアノ基、ニトロ基、トリフルオロメチル基、アミノ基、アミノカルボニル基、メチルシアノ基、ハロゲン（例えば、クロロ基、フルオロ基、ブロモ基、ヨード基、２，３−ジフルオロ基、２，４−ジフルオロ基、２，５−ジフルオロ基、３，４−ジフルオロ基、３，５−ジフルオロ基、２，６−ジフルオロ基、１，２，３−トリフルオロ基、２，３，６−トリフルオロ基、２，３，４，５，６−ペンタフルオロ基）、アジド基、ヘキシル基、ｔ−ブチル基、フェニル基、カルボキシル基、ヒドロキシル基、メチルオキシ基、ベンジルオキシ基、フェニルオキシ基、フェニルアミノオキシ基、フェニルアミノカルボニル基、メチルオキシカルボニル基、メチルアミノカルボニル基、ジメチルアミノ基、ジメチルアミノカルボニル基またはヒドロキシアミノカルボニル基（これらに限定されない）。
【０１１６】
本発明において有用である他のＨＤＡＣインヒビターは、構造式ＸＶ：
【０１１７】
【化４８】
2005525345.tif 000025
【０１１８】
によって表され得るか、またはこれらの薬学的に受容可能な塩もしくは水和物であり、ここで、Ｒ１およびＲ２のそれぞれは、直接またはリンカーを介して結合される、置換または非置換の、アリール（例えば、ナフチル、フェニル）基、シクロアルキル基、シクロアルキルアミノ基、ピリジンアミノ基、ピペリジノ基、９−プリン−６−アミン基、チアゾールアミノ基、ヒドロキシル基、分枝鎖または非分枝鎖のアルキル基、アルケニル基、アルキルオキシ基、アリールオキシ基、アリールアルキルオキシ基、またはピリジン基であり；ｎは、約３〜約１０の整数であり、そしてＲ３は、ヒドロキサム酸、ヒドロキシルアミノ基、ヒドロキシル基、アミノ基、アルキルアミノ基またはアルキルオキシ基である。
【０１１９】
リンカーは、アミド部分、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−または−ＣＨ２−であり得る。
【０１２０】
特定の実施形態において、Ｒ１は、−ＮＨ−Ｒ４であり、ここでＲ４は、置換または非置換の、アリール（例えば、ナフチル、フェニル）基、シクロアルキル基、シクロアルキルアミノ基、ピリジンアミノ基、ピペリジノ基、９−プリン−６−アミン基、チアゾールアミノ基、ヒドロキシル基、分枝鎖または非分枝鎖のアルキル基、アルケニル基、アルキルオキシ基、アリールオキシ基、アリールアルキルオキシ基、またはピリジン基である。
【０１２１】
式ＸＶのさらなる、そしてより詳細なＨＤＡＣインヒビターは、式ＸＶＩ：
【０１２２】
【化４９】
2005525345.tif 000026
【０１２３】
によって表され得るインヒビター、またはこれらの薬学的に受容可能な塩もしくは水和物を含み、ここで、Ｒ１およびＲ２は、置換または非置換の、アリール（例えば、フェニル、ナフチル）基、シクロアルキル基、シクロアルキルアミノ基、ピリジンアミノ基、ピペリジノ基、９−プリン−６−アミン基、チアゾールアミノ基、ヒドロキシル基、分枝鎖または非分枝鎖のアルキル基、アルケニル基、アルキルオキシ基、アリールオキシ基、アリールアルキルオキシ基、またはピリジン基であり；Ｒ３は、ヒドロキサム酸、ヒドロキシルアミノ基、ヒドロキシル基、アミノ基、アルキルアミノ基またはアルキルオキシ基であり；Ｒ４は、水素部分、ハロゲン部分、フェニル部分またはシクロアルキル部分であり；そしてＡは、同一であり得るかまたは異なり得、そしてアミド部分、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ５−またはーＣＨ２−を示し、ここでＲ５は、置換または非置換のＣ１アルキル〜Ｃ５アルキルであり、そして３〜１０の整数である。
【０１２４】
例えば、式ＸＶＩの範囲内でより特定の構造を有するさらなる化合物は、構造式ＸＶＩＩ：
【０１２５】
【化５０】
2005525345.tif 000027
【０１２６】
によって表され得るか、あるいはこれらの薬学的に受容可能な塩もしくは水和物であり、ここで、Ａは、アミド部分であり、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ、置換または非置換の、アリール（例えば、フェニル、ナフチル）、ピリジンアミノ、９−プリン−６−アミン、チアゾールアミノ、アリールオキシ、アリールアルキルオキシまたはピリジンから選択され、そしてｎは、３〜１０の整数である。
【０１２７】
例えば、この化合物は、以下の式を有し得る：
【０１２８】
【化５１】
2005525345.tif 000028
【０１２９】
【化５２】
2005525345.tif 000029
【０１３０】
。
【０１３１】
別の実施形態において、ＨＤＡＣインヒビターは式ＸＶＩＩＩ：
【０１３２】
【化５３】
2005525345.tif 000030
【０１３３】
を有し得るか、またはこれらの薬学的に受容可能な塩もしくは水和物であり、ここで、Ｒ７は、置換または非置換の、アリール（例えば、フェニル、ナフチル）、ピリジンアミノ、９−プリン−６−アミン、チアゾールアミノ、アリールオキシ、アリールアルキルオキシまたはピリジンから選択され、そしてｎは、３〜１０の整数であり、そしてＹは、
【０１３４】
【化５４】
2005525345.tif 000031
【０１３５】
から選択される。
【０１３６】
さらなる実施形態において、ＨＤＡＣインヒビター化合物は、式ＸＩＸ：
【０１３７】
【化５５】
2005525345.tif 000032
【０１３８】
を有し得るか、またはこれらの薬学的に受容可能な塩もしくは水和物であり、ここで、ｎは、３〜１０の整数であり、そしてＹは、
【０１３９】
【化５６】
2005525345.tif 000033
【０１４０】
から選択され、そしてＲ７’は、
【０１４１】
【化５７】
2005525345.tif 000034
【０１４２】
から選択される。
【０１４３】
本発明における使用のためのさらなる化合物は、構造式ＸＸ：
【０１４４】
【化５８】
2005525345.tif 000035
【０１４５】
によって表され得るか、あるいはこれらの薬学的に受容可能な塩もしくは水和物であり、ここで、Ｒ２は、置換または非置換のアリール、置換または非置換のナフサ、ピリジンアミノ、９−プリン−６−アミン、チアゾールアミノ、置換または非置換のアリールオキシ、置換または非置換のアリールアルキルオキシまたはピリジンから選択され、そしてｎは、３〜１０の整数であり、Ｒ７’は、
【０１４６】
【化５９】
2005525345.tif 000036
【０１４７】
から選択される。
【０１４８】
本発明において有用なさらなるＨＤＡＣインヒビターは、構造式ＸＸＩ：
【０１４９】
【化６０】
2005525345.tif 000037
【０１５０】
によって表され得るか、またはこれらの薬学的に受容可能な塩もしくは水和物であり、ここで、Ａはアミド部分であり、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ、置換または非置換の、アリール、ナフサ、ピリジンアミノ、９−プリン−６−アミン、チアゾールアミノ、アリールオキシ、アリールアルキルオキシまたはピリジンから選択され、Ｒ４は、水素部分、ハロゲン部分、フェニル部分またはシクロアルキル部分であり、そしてｎは、３〜１０の整数である。
【０１５１】
例えば、式ＸＸＩの化合物は、以下の構造：
【０１５２】
【化６１】
2005525345.tif 000038
【０１５３】
によって表され得るか、または以下の構造：
【０１５４】
【化６２】
2005525345.tif 000039
【０１５５】
によって表され得、ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４およびｎは、式ＸＸＩの意味を有する式ＸＸＩの化合物であるか、あるいは薬学的に受容可能な塩であるかまたはそれらの水和物である。
【０１５６】
さらに、構造式ＸＸＩＩ：
【０１５７】
【化６３】
2005525345.tif 000040
【０１５８】
を有するＨＤＡＣインヒビター、またはこれらの薬学的に受容可能な塩もしくは水和物であって、ここで、Ｌは、−（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ＝ＣＨ）ｍ、フェニル、−シクロアルキル−、またはそれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるリンカーであり；そしてここで、Ｒ７およびＲ８は、それぞれ独立して置換または非置換の、アリール基、ナフサ基、ピリジンアミノ基、９−プリン−６−アミン基、チアゾールアミノ基、アリールオキシ基、アリールアルキルオキシ基、またはピリジン基であり、ｎは、３〜１０の整数であり、そしてｍは、０〜１０の整数である。
【０１５９】
例えば、式ＸＸＩＩの化合物は：
【０１６０】
【化６４】
2005525345.tif 000041
【０１６１】
であり得る。
【０１６２】
本発明における使用のために適切である他のＨＤＡＣインヒビターは、以下のより特定の式：
【０１６３】
【化６５】
2005525345.tif 000042
【０１６４】
において表されるインヒビターを含み、ここで、ｎは、３〜１０の整数であるインヒビターであるかまたは鏡像異性体であるか、あるいは
【０１６５】
【化６６】
2005525345.tif 000043
【０１６６】
であり、ここで、ｎは、３〜１０の整数であるインヒビターであるかまたは鏡像異性体であるか、あるいは
【０１６７】
【化６７】
2005525345.tif 000044
【０１６８】
であり、ここで、ｎは、３〜１０の整数であるインヒビターであるかまたは鏡像異性体であるか、あるいは
【０１６９】
【化６８】
2005525345.tif 000045
【０１７０】
であり、ここで、ｎは、３〜１０の整数であるインヒビターであるかまたは鏡像異性体であるか、あるいは
【０１７１】
【化６９】
2005525345.tif 000046
【０１７２】
であり、ここで、ｎは、３〜１０の整数であるインヒビターであるかまたは鏡像異性体であるか、あるいは上記の全ての薬学的に受容可能な塩もしくは水和物である。
【０１７３】
本発明における使用のために適切である、さらに特定のＨＤＡＣインヒビターとしては、
【０１７４】
【化７０−１】
2005525345.tif 000047
【０１７５】
【化７０−２】
2005525345.tif 000048
【０１７６】
であり、ここで、それぞれにおけるｎは、３〜１０の整数であるインヒビターか、あるいは上記の全ての薬学的に受容可能な塩またはもしくは水和物が挙げられ、そしてこの化合物は、
【０１７７】
【化７１】
2005525345.tif 000049
【０１７８】
である。
【０１７９】
このような化合物および他のＨＤＡＣインヒビターの他の例は、１９９４年１１月２９日に発行された米国特許第５，３６９，１０８号、１９９７年１２月２３日に発行された同第５，７００，８１１号、１９９８年６月３０日に発行された同第５，７７３，４７４号、１９９９年８月３日に発行された同第５，９３２，６１６号および２００３年１月２８日に発行された同第６，５１１，９９０号（全てＢｒｅｓｌｏｗらに対する）；１９９１年１０月８日に発行された米国特許第５，０５５，６０８号、１９９２年１２月２９日に発行された同第５，１７５，１９１号および１９９７年３月４日に発行された５，６０８，１０８号（全てＭａｒｋｓらに対する）；およびＹｏｓｈｉｄａ、Ｍ．ら、Ｂｉｏａｓｓａｙｓ  １７、４２３〜４３０（１９９５）；Ｓａｉｔｏ、Ａ．ら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ９６、４５９２〜４５９７、（１９９９）；Ｆｕｒａｍａｉ  Ｒ．ら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ９８（１）、８７〜９２（２００１）；Ｋｏｍａｔｓｕ、Ｙ．ら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６１（１１）、４４５９〜４４６６（２００１）；Ｓｕ、Ｇ．Ｈ．ら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６０、３１３７〜３１４２（２０００）；Ｌｅｅ、Ｂ．Ｉ．ら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６１（３）、９３１〜９３４；Ｓｕｚｕｋｉ、Ｔ．ら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４２（１５）、３００１〜３００３（１９９９）；公開ＰＣＴ出願ＷＯ  ０１／１８１７１（２００１年３月１５日に、Ｓｌｏａｎ−Ｋｅｔｔｅｒｉｎｇ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｔｈｅ  Ｔｒｕｓｔｅｅｓ  ｏｆ  Ｃｏｌｕｍｂｉａ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙに対して公開）；Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅに対する公開ＰＣＴ出願  ＷＯ  ０２／２４６１４４；Ｎｏｖａｒｔｉｓに対する公開ＰＣＴ出願ＷＯ  ０２／２２５７７；Ｐｒｏｌｉｆｉｘに対する公開ＰＣＴ出願  ＷＯ  ０２／３０８７９；公開ＰＣＴ出願ＷＯ  ０１／３８３２２（２００１年３月３１日公開）、ＷＯ  ０１／７０６７５（２００１年９月２７日公開）およびＷＯ  ００／７１７０３（２０００年１１月３０日公開）（全てＭｅｔｈｙｌｇｅｎｅ、Ｉｎｃ．に対する）；公開されたＰＣＴ出願ＷＯ  ００／２１９７９（Ｆｕｊｉｓａｗａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．に対し１９９９年１０月８日に公開）；公開されたＰＣＴ出願  ＷＯ  ９８／４００８０（Ｂｅａｃｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｌ．Ｌ．Ｃ．に対して１９９８年３月１１日に公開された）；およびＣｕｒｔｉｎ  Ｍ．（現在特許継続状態のヒストンデアセチラーゼインヒビター（Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｒｅｎｔｓ（２００２）１２（９）：１３７５〜１３８４および本明細書中で記載された参考文献））において見出され得る。
【０１８０】
ＨＤＡＣインヒビターの具体的で非限定的な例は、以下の表中で提供される。本発明が、以下に表される化合物と構造的に類似し、そしてヒストンデアセチラーゼを阻害し得る、任意の化合物を包含することが、留意されるべきである。
【０１８１】
【表１−１】
2005525345.tif 000050
【０１８２】
【表１−２】
2005525345.tif 000051
【０１８３】
【表１−３】
2005525345.tif 000052
【０１８４】
開示される活性化合物は、上記のように、その薬学的に受容可能な塩の形態で調製され得る。薬学的に受容可能な塩は、親化合物の所望の生物学的活性を維持し、そして所望でない毒物学的効果を与えない塩である。このような塩の例は、（ａ）無機酸で形成された酸付加塩（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸など；および有機酸で形成された塩（例えば、酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、グルコン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パルミチン酸、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、ポリガラクツロ酸など）；（ｂ）塩素、臭素およびヨウ素のような元素アニオンから形成された塩、ならびに（ｃ）塩基（例えば、アンモニウム塩）アルカリ金属塩（例えば、ナトリウムおよびカリウムのようなアルカリ金属塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウムおよびマグネシウムのようなアルカリ土類金属塩）および有機塩基（例えば、ジシクロヘキシルアミンおよびＮ−メチル−Ｄ−グルカミン）から誘導される塩。
【０１８５】
開示される活性化合物は、上記のように、その水和物（例えば、半水和物、一水和物、二水和物、三水和物、四水和物など）の形態で調製され得る。
【０１８６】
本明細書中で使用される場合、用語「治療的有効量」とは、所望の治療効果を誘発するために、処置の必要がある患者における生理学的に適合性のレベルのＴＲＸを調節（例えば、増加、減少または維持）する量をいう。治療効果は、処置される疾患に依存する。それなりに、治療効果は、疾患に関連する症状の重症度の軽減および／または疾患の進行の（部分的または完全な）阻害であり得る。治療応答を誘発するのに必要な量は、患者の年齢、健康状態、大きさおよび性別に基づいて決定され得る。最適な量はまた、処置に対する患者の応答のモニタリング（例えば、慢性関節リウマチを被る患者の滑液および／または滑膜組織中のＴＲＸレベルの測定）に基づいて決定され得る。
【０１８７】
本明細書中で使用される場合、用語「患者」または「被験体」とは、処置のレシピエントをいう。哺乳動物および非哺乳動物の患者が含まれる。特定の実施形態において、患者は、哺乳動物（例えば、ヒト、イヌ、マウス、ネコ、ウシ、ヒツジ、ブタまたはヤギ）である。好ましい実施形態にいて、患者はヒトである。
【０１８８】
（チオレドキシン（ＴＲＸ）媒介性疾患）
本明細書中に規定される場合、疾患または医学的状態は、自発性疾患もしくは実験的疾患または医学的状態が、異常なレベル（例えば、体液または組織中のＴＲＸの増加したレベルまたは抑制されたレベル）に関連する場合、または身体から取られる細胞または組織が、培養物中のＴＲＸの異常なレベルを生成する場合、「ＴＲＸ媒介性疾患」であると考えられる。多くの場合において、このようなＴＲＸ媒介性疾患はまた、以下のさらなる２つの状態によって認識され得る：（１）疾患または医学的状態に関連する病理学的知見は、ＴＲＸの投与または隔離によって動物中で実験的に模倣され得；そして（２）疾患または医学的状態の実験的動物モデルにおいて誘発された病理は、疾患または医学的状態に依存してＴＲＸの作用を増加するか、減少するか、または維持する試薬で処置することによって阻害され得るか、または消滅され得る。多くのＴＲＸ媒介性疾患において、３つの状態のうち少なくとも２つは対処され得、そして多くのＴＲＸ媒介性疾患において、３つの状態の全てが対処され得る。
【０１８９】
本明細書中で企図される場合、本発明のＨＤＡＣインヒビターは、ＴＲＸ媒介性疾患に苦しむ被験体の身体から取られた体液／組織中のまたは細胞培養物中のＴＲＸの異常なレベルによって特徴付けられるＴＲＸ媒介性疾患を処置するのに有効である。「異常なレベル」とは、ＴＲＸ媒介性疾患に悩まされない被験体の体液／組織中のＴＲＸレベルと比較して、増加したＴＲＸレベルまたは抑制されたＴＲＸレベルをいう。ＴＲＸレベルとは、１つの実施形態において、ＴＲＸの発現レベル（例えば、発現されるタンパク質の量または発現される遺伝子（ｍ−ＲＮＡ）の量）をいう。別の実施形態において、ＴＲＸレベルは、ＴＲＸまたはＴＲＸ関連タンパク質（例えば、チオレドキシンレダクターゼ（ＴＲ））の酵素活性（例えば、ＴＲＸまたはＴＲＸ−ＴＲの酵素活性の増加したレベルもしくは抑制したレベル）をいう。
【０１９０】
ＴＲＸ媒介性疾患であり得る急性疾患または慢性疾患の非排他的リストとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：炎症性疾患、自己免疫疾患、アレルギー性疾患、酸化的ストレスに関連する疾患および細胞の過剰増殖によって特徴付けられる疾患。非限定的な例は、関節の炎症性状態（慢性関節リウマチ（ＲＡ）および乾癬性関節炎を含む）；炎症性腸疾患（例えば、クローン病および潰瘍性大腸炎）；脊椎関節症；強皮症；乾癬（Ｔ細胞媒介乾癬を含む）ならびに炎症性皮膚病（例えば、皮膚炎、湿疹、アトピー性皮膚炎、アレルギー性接触皮膚炎、蕁麻疹）；脈管炎（例えば、壊死、皮膚血管炎および過敏性血管炎）；好酸球性筋炎、好酸球性筋膜炎；皮膚または器官の白血球浸潤を伴う癌、虚血性損傷（大脳虚血（例えば、外傷、てんかん、出血または脳卒中の結果としての脳損傷）（これらの各々は、神経変性を導き得る）を含む）；ＨＩＶ、心不全、慢性肝疾患、急性肝疾患または悪性の肝疾患、自己免疫性甲状腺炎；全身性エリテマトーデス、シェーグレン症候群、肺疾患（例えば、ＡＲＤＳ）；急性膵臓炎；筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）；アルツハイマー病；悪液質／食欲不振；喘息；アテローム性動脈硬化症；慢性疲労症候群、熱；糖尿病（例えば、インスリン糖尿病または若年性発症糖尿病（ｊｕｖｅｎｉｌｅ  ｏｎｓｅｔ  ｄｉａｂｅｔｅｓ））；糸球体腎炎；対宿主性移植片反応（例えば、移植中）；出血性ショック（ｈｅｍｏｈｏｒｒａｇｉｃ  ｓｈｏｃｋ）；痛覚過敏；炎症性腸疾患；多発性硬化症；ミオパシー（例えば、筋タンパク質代謝、特にセプシス中）；骨粗鬆症；パーキンソン病；疼痛；早期分娩；乾癬；再灌流障害；サイトトキシン誘導性毒性（例えば、敗血症性ショック、内毒素性ショック）；放射線治療由来の副作用、側頭骨下顎骨結合疾患、腫瘍転移；または挫傷、捻挫、軟骨損傷、火傷のような外傷、整形外科手術、感染または他の疾患プロセスから生じる炎症性状態。アレルギー性疾患およびアレルギー性状態としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：呼吸アレルギー性疾患（例えば、喘息）、アレルギー性鼻炎、敏感性肺疾患、過敏性肺臓炎、好酸球性肺炎（例えば、レフラー症候群、慢性好酸球性肺炎）、遅延型敏感症（ｄｅｌａｙｅｄ−ｔｙｐｅ  ｈｙｐｅｒｓｅｎｔｉｔｉｖｉｔｙ）、間質性肺疾患（ＩＬＤ）（例えば、特発性肺線維症または慢性関節リウマチに関連するＩＬＤ、全身性エリテマトーデス、強直性脊椎炎、全身性硬化症、シェーグレン症候群、多発性筋炎または皮膚筋炎）；全身アナフィラキシーまたは敏感性応答、薬物アレルギー（例えばペニシリン、セファロスポリンに対する）、昆虫刺創アレルギーなど。
【０１９１】
１つの実施形態において、ＴＲＸ媒介性疾患は、関節の炎症性状態（例えば、慢性関節リウマチ）である。関節の炎症性状態は、様々な程度で世界中の何百万もの人々を悩ませ、そして障害をもたらす慢性関節疾患である。ＲＡは、軟骨および骨がパンヌスと呼ばれる増殖性の侵襲性結合組織（これは、滑膜から誘導される）によってゆっくりと侵食される関節の連結のＴＲＸ媒介性疾患である。この疾患は、関節周囲の構造（例えば、嚢、腱鞘および腱）ならびに関節外組織（例えば、皮下組織、心血管系、肺、脾臓、リンパ節、骨格筋、神経系（中枢神経および末梢神経）および目）に関与し得る（Ｓｉｌｂｅｒｂｅｒｇ（１９８５），Ａｎｄｅｒｓｏｎ’ｓ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｋｉｓｓａｎｅ編，ＩＩ：１８２８）。
【０１９２】
ＲＡにおいて、滑膜組織は、単核細胞（マクロファージおよびＴ細胞を含む）で浸潤され、そしてＲＡの病因において重要な役割を果すと考えられるＢ細胞および樹状細胞で、より低い程度まで浸潤される。Ｍａｕｒｉｃｅら（Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ，４０：２４３０−２４３９，１９９９）は、同じ患者の血漿レベルと比較した場合、ＲＡを有する２２人の患者由来の滑液（ＳＦ）中で有意に増加したＴＲＸレベルを見出した（Ｐ＜０．００１）。
【０１９３】
特定の実施形態において、本発明の方法は、慢性関節リウマチの処置を必要とする患者において、慢性関節リウマチを処置する方法であって、この方法は、前記患者に治療有効量のヒストンデアセチラーゼインヒビターを投与する工程を包含する。特定の好ましい実施形態において、慢性関節リウマチの処置を必要とする患者において、慢性関節リウマチを処置する方法は、治療有効量のスベロイルアミリドヒドロキサム酸を投与する工程を包含する。別の好ましい実施形態において、慢性関節リウマチの処置を必要とする患者において、慢性関節リウマチを処置する方法は、治療有効量のプロキサミドを投与する工程を包含する。別の好ましい実施形態において、慢性関節リウマチの処置を必要とする患者において、慢性関節リウマチを処置する方法は、治療有効量のＣＢＨＡを投与する工程を包含する。
【０１９４】
特定の理論に固定されることなく、ＴＢＰ−２は、ヒストンデアセチラーゼインヒビターによって誘導され、そしてこのタンパク質レベルの減少を生じるＴＲＸの還元形態に結合し得ると考えられる。ＴＢＰ−２の誘導を使用して、前記患者に存在するＴＲＸレベルを減少することによって患者のＴＲＸ媒介炎症性疾患を処置し得る。このような場合、患者へのＨＤＡＣインヒビターの投与は、患者が慢性関節リウマチを被っている場合、例えば、関節の滑液および滑膜組織中のＴＲＸレベルの減少を生じ得る。
【０１９５】
（組み合せ処置）
ＨＤＡＣインヒビターは、単独またはＴＲＸ媒介性疾患の他の標準的な治療と組み合せて投与され得る。組み合せにおいて、本明細書中で使用される用語は、処置されるＴＲＸ媒介性疾患の標準的な治療に使用される治療有効量の薬剤と組み合せてのＨＤＡＣインヒビターの投与をいう。
【０１９６】
例えば、治療有効量のＨＤＡＣインヒビターは、慢性関節リウマチを治療するために、治療有効量のＣＯＸ２インヒビター（例えば、セレコキシブ（ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ））と組み合せて投与され得る。
【０１９７】
処置されるＴＲＸ媒介性疾患の標準的な治療に使用される薬剤と組み合せてＨＤＡＣインヒビターを含む薬学的組み合せは、ＨＤＡＣインヒビターおよび標準的な治療剤の両方を含む単一の薬学的投薬形態の投与、ならびに、その独自の別個の薬学的投薬形態での各活性剤の投与を含む。
【０１９８】
別個の投薬形態が使用される場合、ＨＤＡＣインヒビターおよび標準的な治療剤は、本質的に、同時（ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔｌｙ）にまたは別々のずらした時間（連続的）に投与され得る。薬学的組み合せは、すべてのこれらのレジメンを含むことが理解される。これらの種々の方法における投与は、ＨＤＡＣインヒビターおよび標準的な治療剤の有利な薬学的効果が、実質的に同時に患者によって自覚される限り、本発明に適切である。各活性薬物の標的血液レベルの濃度が、実質的に同時に維持される場合、好ましくは、このような有利な効果は、達成される。ＨＤＡＣインヒビターおよび標準的な治療剤は、１日１回の投薬スケジュールで同時に共投与されることが好ましい；しかし、種々の投薬スケジュールがまた、本明細書中に包含される。単一の投薬処方物は、患者に便利さを提供するので、ＨＤＡＣインヒビターおよび標準的な治療剤の両方から構成された、単一の経口投薬形態が好ましい。
【０１９９】
例えば、関節炎の標準的な治療剤としては、以下が挙げられる：鎮痛薬（例えば、アセトアミノフェン）；抗炎症性処置剤（例えば、非ステロイド抗炎症性薬物（例えば、アスピリン、イブプロフェン、インドメタシン、ピロキシカム）；および免疫抑制処置剤（例えば、グルココルチコイド、メトトレキサート、シクロホスファミド、シクロスポリン、アザチオプリン、ペニシルアミン、ヒドロキシクロロキン（ｈｙｄｒｏｘｙｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｅ）、有機金化合物、スルファサラジンおよびＣＯＸ２インヒビター（例えば、セレコキシブ）。従って、ＨＤＡＣインヒビター化合物は、関節炎の標準的な治療剤の任意の組み合せで投与され得る。
【０２００】
（薬学的組成物）
本発明のＨＤＡＣインヒビターは、錠剤、カプセル剤（その各々が徐放性処方物または時限放出処方物を含む）、丸剤、散剤、顆粒、エリキシル剤、チンキ剤、懸濁液、シロップ剤、および乳濁剤のような経口形態において投与され得る。同様に、ＨＤＡＣインヒビターは、静脈内形態（ボーラスまたは注入）、腹腔内形態、皮下形態、または筋肉内形態において投与され得、全て、薬学分野の当業者に周知の形態を用いる。
【０２０１】
ＨＤＡＣインヒビターは、活性成分の徐放を可能にする様な様式で処方され得る、デポー注射またはインプラント調製物の形態において投与され得る。その活性成分は、ペレットまたは小さな円筒形に圧縮され得、皮下または筋肉内に、デポー注射またはインプラントとして移植され得る。インプラントは、生分解性ポリマーまたは合成シリコーン（例えば、Ｓｉｌａｓｔｉｃ、シリコーンゴムまたはＤｏｗ−Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎによって製造された他のポリマー）のような不活性材料を使用し得る。
【０２０２】
ＨＤＡＣインヒビターはまた、リポソーム送達システム（例えば、小さなユニラメラ小胞、大きなユニラメラ小胞およびマルチラメラ小胞）の形態において投与され得る。リポソームは、種々のリン脂質（例えば、コレステロール、ステアリルアミンまたはホスファチジルコリン）から形成され得る。
【０２０３】
ＨＤＡＣインヒビターはまた、個々のキャリア（この個々のキャリアに対して、化合物分子がカップリングされる）としてのモノクローナル抗体の使用によって送達され得る。このＨＤＡＣインヒビターはまた、標的化可能な薬物キャリアとして可溶性ポリマーを用いて調製され得る。このようなポリマーとしては、以下が挙げられ得る：ポリビニルピロリドン、ピランコポリマー、ポリヒドロキシ−プロピル−メタクリルアミド−フェノール、ポリヒドロキシエチル−アスパルトアミド−フェノール、またはパルミトイル残基で置換されたポリエチレンオキシド−ポリリジン。さらに、ＨＤＡＣインヒビターは、薬物の制御放出の達成において有用な生分解性ポリマー（例えば、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ乳酸とポリグリコール酸のコポリマー、ポリεカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアクリレート、および架橋されたかまたは両親媒性のヒドロゲルブロックコポリマー）とともに調製され得る。
【０２０４】
ＨＤＡＣインヒビターを利用する投薬レジメンは、種々の因子（患者の型、種、年齢、体重、性別および処置されるＴＲＸ媒介性炎症疾患；処置される状態の重篤度；投与経路；腎機能および肝機能；ならびに使用される特定の化合物またはその塩が挙げられる）に従って、選択され得る。通常の知識を有する医師または獣医師は、処置（例えば、疾患の進行の予防、阻害（完全または部分的）、または停止）に必要とされる薬物の有効量を容易に決定し、処方し得る。
【０２０５】
ＨＤＡＣインヒビターの経口投薬量は、所望のＴＲＸ媒介性炎症疾患を処置するために使用される場合、約２ｍｇ〜約２０００ｍｇ／日、例えば、約２０ｍｇ〜約２０００ｍｇ／日、例えば、約２００ｍｇ〜約２０００ｍｇ／日の間の範囲であり得る。例えば、経口投薬量は、約２ｍｇ／日、約２０ｍｇ／日、約２００ｍｇ／日、約４００ｍｇ／日、約８００ｍｇ／日、約１２００ｍｇ／日、約１６００ｍｇ／日または約２０００ｍｇ／日であり得る。１日あたりの総量は、単一用量において投与され得るか、または複数回の投薬（例えば、１日あたり２回、３回または４回）において投与され得ることが理解され得る。
【０２０６】
例えば、患者は、約２ｍｇ／日〜約２０００ｍｇ／日、例えば、約２０〜２０００ｍｇ／日、例えば、約２００〜約２０００ｍｇ／日、例えば、約４００ｍｇ／日〜約１２００ｍｇ／日の間で受容し得る。従って、１日に１回の投与のために適切に調製された医薬品は、約２ｍｇと約２０００ｍｇとの間、例えば、約２０ｍｇ〜約２０００ｍｇ、例えば、約２００ｍｇ〜約１２００ｍｇ、例えば、約４００ｍｇ／日〜約１２００ｍｇ／日を含み得る。ＨＤＡＣインヒビターは、単一用量、または１日に２回、３回もしくは４回の分割用量で投与され得る。１日２回の投与については、適切に調製された医薬品は、従って、必要とされる一日用量の半分を含む。
【０２０７】
静脈内または皮下に、患者は、約３〜１５００ｍｇ／ｍ２／日の間、例えば、約３ｍｇ／ｍ２／日、３０ｍｇ／ｍ２／日、６０ｍｇ／ｍ２／日、９０ｍｇ／ｍ２／日、１８０ｍｇ／ｍ２／日、３００ｍｇ／ｍ２／日、６００ｍｇ／ｍ２／日、９００ｍｇ／ｍ２／日、１２００ｍｇ／ｍ２／日または１５００ｍｇ／ｍ２／日で送達するに十分な量でＨＤＡＣインヒビターを受容する。このような量は、多くの適切な様式、例えば、１回の長い時間の間または１日に数回の間に、大容量の低濃度ＨＤＡＣインヒビターにおいて投与され得る。その量は、１日以上の連続した日、周期的な日数で、または１週間（７日間の期間）あたりそれらの組み合わせで投与され得る。あるいは、短期間の間の小容量の高濃度ＨＤＡＣインヒビターは、（例えば、連続して、周期的にまたは１週間（７日間の期間）あたりそれらの組み合わせのいずれかで１日以上にわたって、１日１回）投与され得る。例えば、３００ｍｇ／ｍ２／日の用量は、計１５００ｍｇ／ｍ２／処置に関して連続日にわたって投与され得る。別の投薬レジメンにおいて、連続日数はまた、連続２週間または３週間持続する処置に関して、計３０００ｍｇ／ｍ２および４５００ｍｇ／ｍ２の合計処置であり得る。
【０２０８】
代表的には、約１．０ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬの間、例えば、２．０ｍｇ／ｍＬ、３．０ｍｇ／ｍＬ、４．０ｍｇ／ｍＬ、５．０ｍｇ／ｍＬ、６．０ｍｇ／ｍＬ、７．０ｍｇ／ｍＬ、８．０ｍｇ／ｍＬ、９．０ｍｇ／ｍＬおよび１０ｍｇ／ｍＬのＨＤＡＣインヒビター濃度を含む静脈内処方物が調製され得、上記の用量を達成する量で投与され得る。一例において、十分な容量の静脈内処方物は、１日の総用量が、約３００ｍｇ／ｍ２と約１５００ｍｇ／ｍ２との間であるように、１日に患者に投与され得る。
【０２０９】
ＨＤＡＣインヒビターの静脈内投与に受容可能なｐＨ範囲において合理的な緩衝能を有するグルクロン酸、Ｌ−乳酸、酢酸、クエン酸または任意の薬学的に受容可能な酸／共役塩基が、緩衝化剤として使用され得る。塩化ナトリウム溶液（ここでそのｐＨは、酸または塩基（例えば、塩酸または水酸化ナトリウム）のいずれかを用いて、所望の範囲に調節されている）もまた、使用され得る。代表的には、静脈内処方物のｐＨ範囲は、約５〜約１２の範囲内にあり得る。静脈内処方物に好ましいｐＨ範囲（ここでＨＤＡＣインヒビターは、ヒドロキサム酸部分を有する）は、約９〜約１２であり得る。濃度は、適切な賦形剤を選択するにあたって、ＨＤＡＣインヒビターの溶解性および化学的適合性に対して提供されるべきである。
【０２１０】
好ましくは、約５と約１２との間の範囲のｐＨで、当該分野で周知の手順に従って調製された皮下処方物はまた、適切な緩衝化剤および等張剤を含む。これら処方物は、１日に１回以上（例えば、各日に１回、２回または３回）の皮下投与で、１日用量のＨＤＡＣインヒビターを送達するために処方され得る。処方物の適切な緩衝化剤およびｐＨの選択は、投与されるＨＤＡＣインヒビターの溶解度に依存して、当業者によって容易に行われる。塩化ナトリウム溶液（ここでそのｐＨは、酸または塩基（例えば、塩酸または水酸化ナトリウム）のいずれかで所望の範囲に調節されている）もまた、皮下処方物において使用され得る。
【０２１１】
代表的には、皮下処方物のｐＨ範囲は、約５〜約１２の範囲内にあり得る。皮下処方物に好ましいｐＨ範囲（ここでＨＤＡＣインヒビターは、ヒドロキサム酸部分を有する）は、約９〜約１２であり得る。濃度は、適切な賦形剤を選択するにあたって、ＨＤＡＣインヒビターの溶解性および化学的適合性に対して提供されるべきである。
【０２１２】
ＨＤＡＣインヒビターはまた、適切な鼻孔内ビヒクルの局所的使用を介して鼻孔内の形態で、または経皮経路を介して、当業者に周知の経皮皮膚パッチの形態を使用して、投与され得る。経皮送達系の形態で投与されるために、投薬投与は、当然のことながら、投薬レジメン全体を通して、周期的というよりむしろ、連続的である。
【０２１３】
慢性関節リウマチの処置において、ＨＤＡＣインヒビターは、インヒビターの局所的効果が実現されるように、リウマチ関節の滑液および／または滑膜組織へと直接投与され得る。
【０２１４】
ＨＤＡＣインヒビターは、意図された投与形態（すなわち、経口錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、シロップ剤など）に関して適切に選択され、従来の製薬実務と一致して、適切な薬学的希釈剤、賦形剤またはキャリア（まとめて本明細書中で「キャリア」物質といわれる）と混合されている活性成分として投与され得る。
【０２１５】
例えば、錠剤またはカプセル剤の形態での経口投与については、ＨＤＡＣインヒビターは、経口の、非毒性の薬学的に受容可能な不活性キャリア（例えば、ラクトース、デンプン、スクロース、グルコース、メチルセルロース、微結晶セルロース、クロスカルメロースナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、マンニトール、ソルビトールなどまたはそれらの組み合わせ）とともに合わせられ得る；液体形態の経口投与については、経口薬物成分は、任意の経口の、非毒性の薬学的に受容可能な不活性キャリア（例えば、エタノール、グリセロール、水など）と合わせられ得る。さらに、所望であるかまたは必要な場合、適切な結合剤、滑沢剤、崩壊剤、および着色剤もまた、混合物中に組み込まれ得る。適切な結合剤としては、デンプン、ゼラチン、天然の糖（例えば、グルコースまたはβ−ラクトース、トウモロコシ甘味剤）、天然ガムもしくは合成ガム（例えば、アカシアガム、トラガカントガム）またはアルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、微結晶セルロース、クロスカルメロースナトリウム、ポリエチレングリコール、蝋などが挙げられる。これらの投薬形態に使用される滑沢剤としては、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどが挙げられる。崩壊剤としては、メチルセルロースデンプン、寒天、ベントナイト、キサンタンガムなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２１６】
本明細書中に記載され、本発明の方法における使用に適切なヒストンデアセチラーゼ化合物の適切な薬学的に受容可能な塩は、従来の非毒性の塩であり、無機塩基との塩（例えば、アルカリ金属塩（例えば、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩など）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウム塩、マグネシウム塩など）、アンモニウム塩）；有機塩基との塩（例えば、有機アミン塩（例えば、トリエチルアミン塩、ピリジン塩、ピコリン塩、エタノールアミン塩、トリエタノールアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩など）のような塩基付加塩または酸付加塩；無機酸付加塩（例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩など）；有機カルボン酸付加塩または硫酸付加塩（例えば、ギ酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩など）；塩基性アミノ酸または酸性アミノ酸（例えば、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸など）との塩などが挙げられ得る。
【０２１７】
細胞と、ヒストンデアセチラーゼを阻害し得る化合物またはその塩とを、ＴＲＸのレベルを減少させるに有効な量において接触させる工程を包含する、細胞中のＴＲＸのレベルまたは活性を低下させる方法において、ヒストンデアセチラーゼインヒビターが使用される場合、その細胞は、トランスジェニック細胞であり得る。別の実施形態において、その細胞は、被験体（例えば、哺乳動物（例えば、ヒト））中に存在し得る。
【０２１８】
特定の実施形態において、細胞においてチオレドキシンのレベルを低下させるに有効な量は、約１ｐＭ〜約５０μＭ、例えば、約１ｐＭ〜約５μＭ、例えば、約１ｐＭ〜約５００ｎＭ、例えば、約１ｐＭ〜約５０ｍＭ、例えば、１ｐＭ〜約５００ｐＭのＨＤＡＣインヒビターの接触濃度である。特定の実施形態において、その濃度は、約５．０μＭ未満である。別の実施形態において、その濃度は、約５００ｎＭである。
【０２１９】
本発明における使用に適切なＨＤＡＣインヒビターと組み合わせて投与され得る、標準的な治療剤は、ＨＤＡＣインヒビターについての上記の方法によって投与され得ることが理解される。しかし、薬剤の組み合わせは、同じ方法または異なる方法を使用して投与され得る。
【０２２０】
以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態をより十分に例示するために提示される。しかし、これらの実施例は、本発明の広範な範囲を限定するものとしては、如何様にも解釈されるべきではない。
【実施例】
【０２２１】
（実験的方法）
（概要）
ＬＮＣａＰ  前立腺細胞ならびにＭＣＦ−７胸部細胞およびＭＤＡ−ＭＢ−４６８胸部細胞において、ＳＡＨＡがチオレドキシン結合タンパク質−２（ＴＢＰ−２）遺伝子の発現を誘導することは、マイクロアレイ分析を使用して決定されている。ＴＢＰ−２の誘導は、これらの細胞におけるチオレドキシン（ＴＲＸ）ｍＲＮＡレベルの低下に関連した。ＴＢＰ−２  ｍＲＮＡレベルは、正常組織と一致するサンプルと比較して、ヒト胸部腫瘍組織および結腸腫瘍組織において低下することもまた決定されている。ＴＢＰ−２遺伝子のプロモーター領域はクローン化され、そしてＳＡＨＡに直接的に応答することが決定されている。
【０２２２】
（手順）
細胞培養：ＬＮＣａＰ前立腺癌腫細胞、Ｔ２４膀胱癌腫細胞、ＡＲＰ−１骨髄腫細胞、ＭＣＦ７乳癌腫細胞およびＭＤＡ−ＭＢ−４６８乳癌腫細胞を、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから得、示されたように培養した。ＳＡＨＡを、以前に記載のように合成し（Ｒｉｃｈｏｎ，Ｖ．Ｍ．，ら，ＰＮＡＳ  ９３（１２）：５７０５−５７０８，１９９６）、そしてジメチルスルホキシドに溶解し、希釈した。
【０２２３】
マイクロアレイ分析：ＬＮＣａＰヒト前立腺癌腫細胞（５×１０６）を、溶媒（ジメチルスルホキシド、ＤＭＳＯ）のみの存在下またはＳＡＨＡ（７．５μＭ）存在下で、０．５時間、２時間、６時間または２４時間培養し、そして全ＲＮＡを、Ｔｒｉｚｏｌ試薬（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）を用いて細胞から単離した。Ｏｌｉｇｏｔｅｘカラム（Ｑｉａｇｅｎ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）を用いて、全ＲＮＡからポリＡ＋ｍＲＮＡを単離した。ＵｎｉＧＥＭヒトｃＤＮＡアレイ（Ｉｎｃｙｔｅ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を用いて、ＳＡＨＡと共に培養した細胞からのポリＡ＋  ｍＲＮＡを、ＳＡＨＡなしで培養した細胞からのｍＲＮＡと比較した。２倍の変化を、遺伝子発現における相違を決定するための閾値とみなした。
【０２２４】
ノーザンブロッティング：全ＲＮＡ（１０ｍｇ）を、３２Ｐ標識した１．１ｋｂ  ＴＢＰ−２コード領域ｃＤＮＡプローブ、またはＡｕｓｕｂｅｌら（Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ａ．ら，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９８）に従うヒトＴＲＸの５００ｂｐ  ｃＤＮＡプローブを用いて、ノーザンブロッティングによって分析した。
【０２２５】
（正常組織および腫瘍組織におけるＴＢＰ−２の発現）
別々の正常ヒト組織のパネルから抽出したポリＡ＋  ｍＲＮＡを含むノーザンブロットを、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ、ＣＡ）から得た。ブロットを、まず、３２Ｐ標識化１．１ｋｂ  ＴＢＰ−２コード領域ｃＤＮＡプローブとハイブリダイズさせ、次いで、β−アクチンに対する３２Ｐ標識化２．０ｋｂ  ｃＤＮＡプローブ（ローディングコントロールとして）とハイブリダイズさせた。ヒト患者由来の正常組織および腫瘍組織の一致した対からのｃＤＮＡのドットブロットを、Ｃｌｏｎｔｅｃｈから得た。製造業者（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）は、３種のハウスキーピング遺伝子（ユビキチン、２３−ｋＤＡの非常に塩基性のタンパク質、およびリボゾームタンパク質Ｓ９）を用いて、ブロット上のｃＤＮＡの量を正規化した。このブロットを、製造業者の指示に従い、３２Ｐ標識化１．１ｋｂ  ＴＢＰ−２コード領域ｃＤＮＡプローブとハイブリダイズさせた。
【０２２６】
（ＴＢＰ−２遺伝子の５’調節領域のクローニング）
ｃＤＮＡ末端の迅速増幅（ＲＡＣＥ）を行い、製造業者の指示に従って、Ｍａｒａｔｈｏｎ−ｒｅａｄｙヒト脳ｃＤＮＡ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を用い、以下のプライマーを用いて、ＴＢＰ−２遺伝子の転写開始部位を決定した：ＴＢＰ−２特異的プライマー１：５’−ＧＴＴＧＧＴＴＴＴＡＡＧＡＧＴＴＡＧＡＡＡＴＧＡＣＧＧ−３およびネスティドプライマー２：５’−ＴＡＡＧＧＴＡＴＴＣＴＴＡＡＧＣＡＧＴＴＴＧＡＧＣ−３。およそ２００ｂｐの産物を増幅し、ゲル精製し、サブクローン化して、９個の独立したクローンを配列決定した。この配列から、２つのさらなるプライマー（５’ＣＣＡＡＴＴＧＣＴＧＧＡＧＡＡＡＡＧＡＴＣＣＧ−３’および５’ＡＡＧＡＴＣＣＧＡＴＣＴＣＣＡＣＡＡＧＣＡＣＴＣＣ−３’）を、設計した。これらの２つのプライマーを、Ｇｅｎｏｍｅ  Ｗａｌｋｅｒ  ｋｉｔ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を使用したゲノムウォーキングによってＴＢＰ−２遺伝子のプロモーターをクローニングするために使用した。約１２００〜１８００ｂｐの範囲にわたる産物を、３つのゲノムライブラリー（ＳｓｐＩ、ＰｖｕＩＩおよびＤｒａＩ）から増幅し、ゲル精製し、そして配列決定のためにサブクローン化した。配列決定を、Ｃｏｒｎｅｌｌ  ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙのＤＮＡ  Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ  Ｆａｃｉｌｉｔｙ（Ｉｔｈａｃａ，ＮＹ）で行った。３個のライブラリーのそれぞれから得た少なくとも２個のクローンを、配列決定し、ＴＢＰ−２遺伝子の５’ＵＴＲのすぐ上流の領域において、全てが実質的に同一であることが見出された。１７６３ｂｐ  ＳｓｐＩフラグメントの配列を、ＧｅｎＢａｎｋに登録した（登録番号ＡＦ４０８３９２）。この原稿の準備中に、ＴＢＰ−２遺伝子の配列は、ＧｅｎＢａｎｋデータベース（登録番号ＡＢ０５１９０１および登録番号ＡＦ３３３００１）およびヒトゲノムデータベース（登録番号ＮＴ−００４８８３．４）に登録された。
【０２２７】
（ＴＢＰ−２プロモーター活性の分析のためのルシフェラーゼアッセイ）
（ＴＢＰ−２／ＰＧＬ２−ＬＵＣベクターの構築）
１７６３ｂｐのＳｓｐＩフラグメントを、ｐＧＬ−２ルシフェラーゼレポーターベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）にサブクローン化し、ｐＴＢＰ−２−（−２０２６）−ルシフェラーゼ構築物を作製した。
【０２２８】
（ＴＢＰ−２プロモーターの欠失構築物）
ＴＢＰ−２プロモーター配列の欠失構築物を、ＰＣＲクローニングによって作製した。以下のプライマーと、翻訳開始部位から−２６４ｂｐにおける元のネスティドＴＢＰ−２特異的プライマー端とを使用し、−２０２６（１７６３ｂｐ）構築物からＴＢＰ−２プロモーターを増幅し、５’欠失変異体を作製した：
【０２２９】
【数１】
2005525345.tif 000053
【０２３０】
。上記のプライマーの全ては、クローニングを容易にするためＮｈｅＩ部位（下線で示す）を含んだ。全てのクローンを、分析の前に配列決定した。
【０２３１】
（逆方向ＣＣＡＡＴボックス中に変異を含むＴＢＰ−２プロモーター構築物の作製）
逆方向ＣＣＡＡＴボックス部位を破壊する点変異を、５’−ＡＡＣＡＧＣＡＣＡＧＧＣＡＣＧＣＡＧＣＣ−３’プライマーおよび５’−ＡＡＣＡＧＣＡＣＡＧＧＣＡＣＧＣＡＧＣＣ−３’プライマーを使用したＰＣＲ部位特異的変異誘発（Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ａ．ら，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９８）によって、導入した。変異を、ＤＮＡ配列決定によって確認した。
【０２３２】
（レポーター遺伝子アッセイ）
２９３Ｔ細胞を、２４ウェルプレート中に３連でプレートし、そしてＦｕＧＥＮＥ  ６トランスフェクション試薬（Ｒｏｃｈｅ）を製造業者の指示に従って使用して、ｐＧＬ−２ベクター構築物、ｐＧＬ−２  ＳＶ４０プロモーターベクター構築物（ＳＶ４０プロモーターを含むポジティブコントロール）またはｐＧＬ−２−ＴＢＰ−２プロモーター構築物のいずれか１００ｎｇでトランスフェクトした。細胞を、２４〜４８時間後に回収し、そしてルシフェラーゼ活性を、Ｄｕａｌ  Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  Ａｓｓａｙ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を製造業者の指示に従って使用して測定した。ＳＡＨＡまたは他のＨＤＡＣインヒビターを使用する実験のために、トランスフェクション１２時間後、トランスフェクション培地を、溶媒コントロール（ＤＭＳＯ）、ＳＡＨＡ、ｍ−カルボキシケイ皮酸ビスヒドロキシメート（ＣＢＨＡ、０．５μＭ、１μＭもしくは２μＭ）またはＴＳＡ（１００ｎｇ／ｍＬ）のいずれかを含む新鮮な培地と置換した。さらに１２〜２４時間後、細胞を回収し、そして溶解物を、ルシフェラーゼ活性について、上述のように分析した。
【０２３３】
（結果）
（実施例１）
（ＳＡＨＡは、形質転換細胞においてＴＢＰ−２の発現を誘導する）
ＳＡＨＡによって発現が調節される遺伝子を同定するため、ＬＮＣａＰヒト前立腺癌腫細胞を、ＤＭＳＯ（ビヒクルコントロール）または７．５μＭのＳＡＨＡのいずれか存在下で、０．５時間、２時間、６時間または２４時間培養し、ポリＡ＋  ｍＲＮＡを単離し、そしてｃＤＮＡマイクロアレイ（Ｉｎｃｙｔｅ）分析を行った。ＴＢＰ−２は、０．５時間後に培養中で２．０倍より高く誘導された、検出された唯一の遺伝子だった。ＳＡＨＡと共に少なくとも２４時間、培養したＬＮＣａＰ細胞において、この遺伝子の発現レベルは、増大したままであった。ＴＢＰ−２はまた、２種のヒト乳癌細胞株、ＭＣＦ７（エストロゲンレセプター陽性）およびＭＤＡ−ＭＢ−４６８（エストロゲンレセプター陰性）においても、マイクロアレイ技術により、培養６時間後に、ＳＡＨＡ（５μＭ）によって２倍より高く誘導された。
【０２３４】
マイクロアレイの結果を確認するため、ＴＢＰ−２  ｍＲＮＡレベルを、ＳＡＨＡと共に培養した幾つかの形質転換細胞株において、ノーザン分析によって分析した。ＳＡＨＡ（２．５μＭまたは７．５μＭ）は、ＴＢＰ−２  ｍＲＮＡレベルを、以下の試験した各形質転換細胞株において２時間以内に誘導した：Ｔ２４膀胱癌腫細胞株（図１）、ＡＲＰ−１ヒト骨髄腫細胞株、マウス赤白血病細胞株、２９３Ｔ腎臓癌腫細胞株およびＭＣＦ７乳癌細胞株（データは示さない）。
【０２３５】
（実施例２）
（正常組織および腫瘍組織におけるＴＢＰ−２の発現）
１６種の正常ヒト組織のパネルにおけるＴＢＰ−２ｍＲＮＡの発現のパターンを、試験した。最高レベルの発現は、骨格筋、腎臓および脾臓において見出され、最低レベルの発現は、脳において見出された（図２Ａ）。
【０２３６】
次いで、ＳＡＨＡによって形質転換細胞において発現が誘導される遺伝子が、腫瘍形成の間、ダウンレギュレートされるか否かを、正常組織および腫瘍組織におけるＴＢＰ−２の発現を分析することによって、調べた。結腸癌腫および乳癌腫におけるＴＢＰ−２  ｍＲＮＡ発現のハイブリダイゼーション（図２Ｂ）。
【０２３７】
（実施例３）
（ＳＡＨＡは、形質転換細胞においてＴＲＸ  ｍＲＮＡレベルを低下させる）
ＴＢＰ−２は、ＴＲＸの活性型（還元型）形態と関連するタンパク質である、ジチオール還元性酸化還元調節タンパク質として同定されている（Ｎｉｓｈｉｙａｍａ，Ａ．ら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４（３１）：２１６４５−５０  １９９９）。ＴＢＰ−２のＴＲＸへの結合は、チオール還元活性およびＴＲＸの発現レベルの両方を阻害する。ＳＡＨＡによるＴＢＰ−２の誘導が、低下したＴＲＸレベルと関連するか否かを決定するため、ＳＡＨＡ（２．５μＭおよび５μＭ）と共に培養したＴ２４から調製したＲＮＡのノーザンブロット分析を、全長ＴＲＸｃＤＮＡプローブを用いて行った。ＴＲＸ  ｍＲＮＡのレベルの低下が、ＳＡＨＡとの培養の１５時間以内に観察され、これは、同時に、ＴＢＰ−２  ｍＲＮＡのレベルの上昇を伴った（図３）。同様の、ＴＲＸ  ｍＲＮＡの減少およびＴＢＰ−２  ｍＲＮＡの増加は、ＡＲＰ−１細胞およびＭＣＦ７細胞において、ＳＡＨＡとの培養後に検出された（データは示さない）。
【０２３８】
（実施例４）
（ＳＡＨＡは、ＴＢＰ−２プロモーター活性を誘導する）
（ＴＢＰ−２プロモーターのクローニングおよび特徴付け）
ＳＡＨＡがＴＢＰ−２  ｍＲＮＡの発現を誘導するメカニズムを調べるため、ＴＢＰ−２プロモーター領域を、５’−ＲＡＣＥおよびゲノムウォーキングの組み合わせを使用してクローン化した（図４）。プロモーター配列を、ＭａｔＩｎｓｐｅｃｔｏｒ  Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ  ｐｒｏｇｒａｍ（ｈｔｔｐ：／／ｇｅｎｏｍａｔｉｘ．ｇｓｆ．ｄｅ）を使用して、古典的プロモーター特徴の存在について分析した。推定ＴＡＴＡボックスおよび転写因子（例えば、ＮＦ−Ｙ、Ｍｙｃ−Ｍａｘ、Ｅ２Ｆ、ビタミンＤレセプター／レチノイドＸレセプターおよびＮＦ−６Ｂ）の推定結合部位の存在を、同定した（図４）。Ｐｒｏｓｃａｎコンピュータープログラム（Ｖｅｒｓｉｏｎ  １．７、ｈｔｔｐ：／／ｂｉｍａｓ．ｄｃｒｔ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｍｏｌｂｉｏ／ｐｒｏｓｃａｎ／）は、ＭａｔＩｎｓｐｅｃｔｏｒによって予測したのと同じ位置に、ＴＡＴＡボックスが存在することを予測した。
【０２３９】
ゲノムウォーキングによって同定された配列が、プロモーター活性を有することを確認するため、得た配列を、プロモーター欠失ｐＧＬ−２ルシフェラーゼレポーターベクター内にクローン化し、ルシフェラーゼレポーターアッセイを行った。ｐＧＬ−２−ＴＢＰ−２構築物（−２０２６）の、２９３Ｔ細胞へのトランスフェクションは、ＳＶ４０ポジティブコントロールプロモーターと同等以上のレポーター遺伝子活性を生じた。一方、ｐＧＬ−２ベクターでのトランスフェクションは、検出可能なレポーター遺伝子活性をほとんど生じなかった（図５Ａ）。このことは、クローン化したＴＢＰ−２プロモーターが機能することを示す。
【０２４０】
（クローン化ＴＢＰ−２プロモーターに対するＳＡＨＡの効果）
ＳＡＨＡのクローン化ＴＢＰ−２プロモーター活性誘導能を決定するため、２９３Ｔ細胞を、レポーター構築物でトランスフェクトし、そしてＳＡＨＡと共に培養した。ＴＢＰ−２プロモーターフラグメントの活性は、ＳＡＨＡによって、用量依存的な様式で誘導された（図５Ｂ）。ＳＶ４０コントロールプロモーターの活性は、ＳＡＨＡによって誘導されたが、ＴＢＰ−２プロモーターと同程度ではなかった（図５Ｂ）。ＴＢＰ−２プロモーターの活性はまた、ｍ−カルボキシケイ皮酸ビスヒドロキサム酸（ＣＢＨＡ）（ＨＤＡＣ活性の、関連のヒドロキサム酸ベースのハイブリッド極性インヒビターである）によっても誘導された（データは示さない）。
【０２４１】
どの潜在的転写因子結合部位が、ＴＢＰ−２遺伝子の転写およびＳＡＨＡによる誘導に重要であるかを決定するため、一連の欠失構築物を作製した（図６Ａ）。一過的トランスフェクションアッセイは、−２０２６プロモーター構築物〜−４８２プロモーター構築物が、匹敵するルシフェラーゼ活性を有することを示した（図６Ｂ）。プロモーター領域のさらなる欠失により、プロモーター活性の損失が存在した（図６Ｂ）。トランスフェクトした細胞へのＳＡＨＡ（２μＭ）の添加は、培養の２４時間後、−２０２６プロモーター構築物〜−４８２プロモーター構築物について、１２〜２０倍のルシフェラーゼ活性の誘導を引き起こした（図６Ｃ）。しかし、−４４０プロモーター構築物〜−３４９プロモーター構築物は、ＳＡＨＡに応答して、誘導レベルの低下（１／２〜１／３）を示した（図６Ｃ）。このことは、プロモーター構築物−４８２とプロモーター構築物−４４０との間の、ＨＤＡＣインヒビターによる最適なＴＢＰ−２誘導に重要な部位の存在を、示唆した。プロモーターのこの領域は、推定Ｅボックス部位および逆方向ＣＣＡＡＴボックス部位を含む。ＮＦ−Ｙ（Ｍａｎｔｏｖａｎｉ，Ｒ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２６（５）：１１３５−  ４３，１９９８）を含む幾つかの転写因子は、逆方向ＣＣＡＡＴボックスに結合する。多剤耐性１遺伝子（ＭＤＲ１）（Ｊｉｎ，Ｓ．ら．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１８（７）：４３７７−８４，１９９８）プロモーターおよびＳＨＰ−１遺伝子（Ｘｕ，Ｙ．ら  Ｇｅｎｅ  ２６９（１−２）：１４１−５３，２００１）のプロモーターの、ＨＤＡＣインヒビターであるＴＳＡおよび／またはブチラートによる誘導は、機能的ＮＦ−Ｙ結合部位の存在を必要とする。本発明者らは、逆方向ＣＣＡＡＴボックス内に、２つの点変異を導入し（ＡＴＴＧＧ〜ＡＴＧＴＧ）、ｐＧＬ−２ルシフェラーゼ構築物を作製して、逆方向ＣＣＡＡＴボックス変異体プロモーターの活性およびＳＡＨＡ誘導能を試験した。変異逆方向ＣＣＡＡＴボックスからなる−４８２構築物は、野生型−４８２構築物（２１倍誘導される）より、ＳＡＨＡによるより低いレベルの誘導（３．７倍）を示した（図６Ｄ）。これらの結果は、ＴＢＰ−２プロモーター中の逆方向ＣＣＡＡＴボックスが、ＳＡＨＡによるＴＢＰ−２プロモーターの最適な誘導のために重要であることを示した。
【０２４２】
コントロールＴ２４細胞およびＳＡＨＡ処理Ｔ２４細胞から調製した核抽出物を用いた電気泳動移動度シフトアッセイを行い、ＮＦ−Ｙが、ＴＢＰ−２プロモーター中のこの逆方向ＣＣＡＡＴボックスを結合するか否かを決定した。特異的タンパク質−ＤＮＡ複合体を、検出した（図７Ａ、レーン２およびレーン８）。野生型非標識競合体は、複合体の形成をブロックしたが（図７Ａ、レーン３およびレーン９）、逆方向ＣＣＡＡＴボックス変異体競合体は、効果を有さなかった（図７Ａ、レーン４およびレーン１０）。次いで、スーパーシフト分析を行い、逆方向ＣＣＡＡＴボックスに結合したタンパク質を同定した。ＮＦ−ＹＡに対するポリクローナル抗体は、タンパク質−ＤＮＡ複合体のスーパーシフトをもたらし、一方で、別のＣＣＡＡＴボックス結合タンパク質Ｃ／ＥＢＰに対する抗体は、複合体の移動度を変えなかった。これらの結果は、ＴＢＰ−２プロモーター中の逆方向ＣＣＡＡＴボックス部位が、ＮＦ−Ｙに結合し得ることを示す。同様の結果が、無処理細胞（図７Ａ、レーン２〜レーン７）およびＳＡＨＡと共に培養した細胞（図７Ａ、レーン８〜レーン１３）の核抽出物から観察された。
【０２４３】
ＴＢＰ−２プロモーターのＳＡＨＡ誘導におけるＮＦ−Ｙの役割をさらに調べるため、ドミナントネガティブＮＦ−ＹＡ変異体発現ベクター（ＮＦ−ＹＡ２９）を、−２０２６  ｐＧＬ２−ＴＢＰ−２プロモーター構築物と共に、２９３Ｔ細胞内に同時トランスフェクトした。ＮＦ−Ｙ２９は、ＤＮＡ結合ドメイン中に３つのアミノ酸変異を有する、ＮＦ−ＹＡのドミナントネガティブ形態である。ＮＦ−Ｙ２９は、ＮＦ−ＹＢ（およびＮＦ−ＹＣ）と複合体を形成するが、ＣＣＡＡＴボックスに結合し得ない（２９）。ＮＦ−ＹＡ２９は、ＳＡＨＡによるＴＢＰ−２プロモーター誘導を減少させた（図７Ｂ）。まとめて、これらの結果は、ＳＡＨＡによるＴＢＰ−２転写の誘導におけるＮＦ−Ｙの役割を指示する。
【０２４４】
本明細書中で引用した全ての参考文献は、その全体が参考として援用される。本発明は、その好ましい実施形態に関して具体的に示され、そして記載されているが、添付の特許請求の範囲に包含される本発明の範囲から逸脱することなく、形態および細部における種々の改変がこれらの実施形態においてなされ得ることが、当業者によって理解される。
【図面の簡単な説明】
【０２４５】
上述のおよび他の、本発明の目的、特徴および有利性は、以下の、より詳細な本発明の好ましい実施形態の記載から、添付図面中で説明されるように、明らかである。
【図１】図１は、ＬＮＣａＰヒト前立腺細胞およびＴ２４膀胱癌腫細胞由来の、ＴＢＰ−２  ｍＲＮＡのノーザンブロット写真である。これらの細胞は、示した濃度のＳＡＨＡと共に、またはビヒクル単独（コントロール）で、０．５時間、２時間、４時間、６時間、１２時間および２４時間にわたって、培養した。１．１ｋｂの、３２Ｐ標識したＴＢＰ−２  ｃＤＮＡプローブを、使用した（各細胞株についての上側のパネル）。ブロットを、ｇ−３２Ｐ標識１８Ｓオリゴヌクレオチドプローブで再ハイブリダイズし、ＲＮＡローディングを示した。これを、各細胞株の下側のパネルに示す。この結果は、形質転換細胞中のＴＢＰ−２  ｍＲＮＡは、ＳＡＨＡによって誘導されることを示す。
【図２】図２Ａは、多組織ノーザンブロットの写真である。これは、１．１ｋｂの３２Ｐ標識ＴＢＰ−２  ｃＤＮＡプローブでハイブリダイズした、示した正常細胞由来のポリＡ＋ＲＮＡ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を、示す（上側のパネル）。このブロットを、ローディングコントロールとして、ｐ−アクチンについての２．０ｋｂプローブで、再ハイブリダイズした（下側のパネル）。この結果は、ＴＢＰ−２が、正常細胞で発現されることを示す。
【０２４６】
図２Ｂは、１．１  ｋｂの３２Ｐ標識ＴＢＰ−２  ｃＤＮＡプローブでハイブリダイズした、正常ヒト組織および腫瘍から抽出されたｃＤＮＡサンプル（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）の一致したサンプルを含むドットブロットの写真である。結腸腫瘍および乳癌（Ｔ）のサンプルを、正常組織（Ｎ）由来のｃＤＮＡ（対応する各腫瘍サンプルのすぐ上に示される）と共に示す。この結果は、ＴＢＰ−２が、腫瘍組織において、正常組織と比べてより低いレベルで発現されることを示す。
【図３】図３は、Ｔ２４ヒト膀胱癌腫細胞におけるＴＢＰ−２  ｍＲＮＡおよびチオレドキシンｍＲＮＡの発現を示す、ノーザンブロットの写真である。これらの細胞は、２．５μＭおよび５．０μＭのＳＡＨＡと共に、ならびにビヒクル単独（０）と共に、示した時間（ｈｒｓ）にわたって、培養した。５００ｂｐの３２Ｐ標識ｃＤＮＡプローブを、ＴＲＸを検出するために使用した（上側のパネル）。ブロットを、次に、１．１  ｋｂの３２Ｐ標識ＴＢＰ−２  ｃＤＮＡプローブで再ハイブリダイズし、ＴＢＰ−２（中段のパネル）の誘導を確認した。そしてγ−３２Ｐ標識１８Ｓオリゴヌクレオチドプローブで再ハイブリダイズし、ＲＮＡローディングを示した（下側のパネル）。この結果は、チオレドキシンの発現は、ＳＡＨＡと共に培養された形質転換細胞において低下することを示す。
【図４】図４は、ＴＢＰ−２遺伝子の５’非転写領域およびプロモーターのヌクレオチド配列である。転写開始コドンにおけるアデニン（太字および下線で示す）を、「＋１」と名付けた。ＴＡＴＡボックスを、太字および下線で示す。転写因子の推定結合部位は、太字および斜体で示す。レポーター遺伝子アッセイに使用した、プロモーターの１７６３ｂｐの「全長」領域は、−２６４〜−２０２６（この配列の転写開始コドンと比較して）のヌクレオチドを含む。
【図５】図５Ａは、１００ｎｇの空のＰＧＬ２ベクター、ｐＧＬ２−ＳＶ４０ポジティブコントロールベクターまたはＴＢＰ−２構築物（−２０２６）でトランスフェクトした２９３Ｔ細胞の、トランスフェクト２４時間後の発光を示すグラフである。この結果は、ＴＢＰ−２プロモーターが機能的であることを示す。図５Ｂは、１００ｎｇの空のＰＧＬ２ベクター、ｐＧＬ２−ＳＶ４０ポジティブコントロールベクターまたはＴＢＰ−２構築物（−２０２６）でトランスフェクトし、トランスフェクト後１２時間、ＤＭＳＯまたはＳＡＨＡ（０．５μＭ、１μＭまたは２μＭ）を含む培地でインキュベートした、２９３Ｔ細胞の誘導倍率（ｆｏｌｄ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ）を示すグラフである。トランスフェクト２４時間後に発光を測定し、そして各サンプルのタンパク質総濃度を基準化した。誘導倍率を、ＳＡＨＡ非存在下における発光値に対するＳＡＨＡ存在下における発光値の基準化から得た（図５Ａ）。この結果は、ＴＢＰ−２プロモーター活性が、ＳＡＨＡによって誘導されることを示す。
【図６−１】図６Ａは、推定ＴＢＰ−２プロモーター領域および欠失変異体の略図である。プロモーターにおける推定転写因子結合部位の位置を示す。１：ＮＦ−κＢ結合部位、２：ビタミンＤレセプター／レチノイドＸレセプター反応性エレメント、３：Ｅ２Ｆ結合部位、４：Ｅボックス、５：逆方向ＣＣＡＡＴボックス、６：ＣＣＡＡＴボックス、７：Ｅボックスおよび８：ＴＡＴＡボックス。図６Ｂは、異なった長さのヒトＴＢＰ−２遺伝子の５’隣接領域（ＰＣＲによって増幅し、ＰＧＬ−２ベクター内のルシフェラーゼ遺伝子の上流にクローン化した）から調製した構築物でトランスフェクトした、２９３Ｔ細胞のルシフェラーゼ活性のグラフである。示した結果（＋／−標準偏差）は、総タンパク質量に対して基準化した３回の独立したトランスフェクションの平均値である。図６Ｃは、２９３Ｔ細胞の誘導倍率を示すグラフである。２９３Ｔ細胞を、６Ｂで示したようにトランスフェクトし、トランスフェクト後１２時間、２μＭ  ＳＡＨＡと共にインキュベートした。ルシフェラーゼ活性を、総タンパク質量に対して基準化し、そして誘導倍率を、上記の図５Ｂに記載のように計算した。この結果は、ＳＡＨＡが、ＴＢＰ−２プロモーター活性を誘導することを示す。
【図６−２】図６Ｄは、変異体ＴＢＰ−２プロモーター（逆方向ＣＣＡＡＴボックスにおいて変異する。図４参照）から調製した構築物（ＰＧＬ−２内にクローン化し、１２時間にわたってトランスフェクトした）でトランスフェクトした２９３Ｔ細胞の誘導倍率を示すグラフである。１２時間後、細胞をＳＡＨＡ（２μＭ）と共に１２時間にわたってインキュベートしたか、または処理せずに１２時間維持した。誘導倍率を、上記の図５Ｂに記載のように計算した。この結果は、逆方向ＣＣＡＡＴボックスが、ＳＡＨＡ誘導能に必須であることを示す。
【図７−１】図７Ａは、ＴＢＰ−２の誘導におけるＮＦ−Ｙの役割を実証する、電気泳動移動度シフトゲットの写真である。ＮＦ−ＹのＴＢＰ−２プロモーター内の逆方向ＣＣＡＡＴボックスへの結合。電気泳動移動度シフトアッセイ（レーン１〜４およびレーン８〜１０）は、逆方向ＣＣＡＡＴボックスにおける特定の複合体形成を検出した。３２Ｐ標識化野生型プローブ（２０，０００ｃｐｍ、〜０．５ｎｇ；レーン１）を、以下の細胞からの１０ｍｇの核抽出物と共にインキュベートした：非処理Ｔ２４細胞（レーン２〜７）または７．５μＭ  ＳＡＨＡ処理（１２ｈ）Ｔ２４細胞（レーン８〜１３）、競合体非存在下（レーン２およびレーン８）または２５ｎｇ（×５０）野生型オリゴヌクレオチド競合体存在下（レーン３およびレーン９）もしくは２５ｎｇ（×５０）変異体オリゴヌクレオチド競合体存在下（レーン４およびレーン１０）。スーパーシフトアッセイのために、核抽出物を、以下と共にインキュベートした：２ｍｇのウサギ抗ＮＦ−ＹＡ（レーン５およびレーン１１）、２ｍｇのヤギ抗Ｃ／ＥＢＰ（レーン６およびレーン１２）、または２μｇの正常ウサギＩｇＧ（レーン７およびレーン１３）。ＷＴは、野生型プローブ競合体である；Ｍｕｔは、変異体プローブ競合体である；ＹＡは、抗ＮＦ−ＹＡである；Ｃ／Ｅは、抗Ｃ／ＥＢＰである。
【図７−２】図７Ｂは、ドミナントネガティブなＮＦ−Ｙ変異体（ＮＦ−ＹＡ２９）が、ＳＡＨＡによるプロモーター誘導を低下させることを示すグラフである。ｐＧＬ２−ＴＢＰ−２  −２０２６プロモーター構築物（１００ｎｇ）を、ＮＦ−ＹＡ２９発現ベクターと共に示すように同時トランスフェクトし、次いで、ＳＡＨＡ（２μＭ）含有または非含有で、２４時間処理した。
【図１】
2005525345.tif 000078
【図２】
2005525345.tif 000079
【図３】
2005525345.tif 000080
【図４】
2005525345.tif 000081
【図５】
2005525345.tif 000082
【図６−１】
2005525345.tif 000083
【図６−２】
2005525345.tif 000084
【図７−１】
2005525345.tif 000085
【図７−２】
2005525345.tif 000086
【手続補正書】
【提出日】平成17年2月8日(2005.2.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2005525345000001.app
【国際調査報告】
2005525345.tif 000087