(57)【要約】  コラーゲン切断剤を皮内または皮下に送達することによって、長期脱毛を実現する。これにより、毛嚢を真皮内に固定している微細なコラーゲン網が破壊され、さらに、毛嚢の基部にある毛乳頭細胞の正常な機能が変化することによると考えられる。この脱毛方法は、ヒツジの臀部を無毛状態に維持するなどの畜産方法に適用可能であり、ミュールズ処理に代わるものとしての用途がある。この方法は、美容脱毛にも適用可能である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ある皮膚領域の表面下にコラーゲン切断剤を送達するステップと、前記コラーゲン切断剤がコラーゲンを切断するための時間をとるステップと、前記皮膚領域内に存在する毛を除去するステップとを含む、哺乳動物生体の脱毛方法。
【請求項２】
前記コラーゲン切断剤がメタロプロテイナーゼである、請求項１に記載の脱毛方法。
【請求項３】
前記メタロプロテイナーゼがコラゲナーゼである、請求項２に記載の脱毛方法。
【請求項４】
前記コラゲナーゼが約０．００１％以上の濃度で存在する、請求項３に記載の脱毛方法。
【請求項５】
毛を落下させる、請求項１に記載の脱毛方法。
【請求項６】
前記コラーゲン切断剤を作用させた後に前記コラーゲン切断剤を不活性化するさらなるステップを含む、請求項１に記載の脱毛方法。
【請求項７】
皮膚を破断することなくコラゲナーゼを送達する、請求項３に記載の脱毛方法。
【請求項８】
前記コラゲナーゼが０．０５〜３０％ｗ／ｗの間の濃度である、請求項７に記載の哺乳動物の脱毛方法。
【請求項９】
前記コラーゲン切断剤を、熱を加えることによって送達する、請求項１に記載の脱毛方法。
【請求項１０】
前記コラーゲン切断剤が、皮膚の裂け目を通したものである、請求項３に記載の脱毛方法。
【請求項１１】
前記コラゲナーゼが０．００１〜０．１％ｗ／ｗの間の濃度で存在する、請求項１０に記載の脱毛方法。
【請求項１２】
毛を前記皮膚領域から確実に除去する、請求項１に記載の脱毛方法。
【請求項１３】
２価の陽イオンを前記コラゲナーゼと共に送達する、請求項１に記載の脱毛方法。
【請求項１４】
前記哺乳動物がヒトであり、脱毛が美容上の目的で行われる、請求項７に記載の哺乳動物の脱毛方法。
【請求項１５】
メタロプロテイナーゼを、ある皮膚領域の脱毛に有効な量で前記皮膚領域の表面下に送達するステップを含む、畜産方法。
【請求項１６】
前記メタロプロテイナーゼを、皮膚の穿孔を通して送達する、請求項１５に記載の畜産方法。
【請求項１７】
前記メタロプロテイナーゼを注射によって送達する、請求項１６に記載の畜産方法。
【請求項１８】
前記メタロプロテイナーゼがコラゲナーゼである、請求項１７に記載の畜産方法。
【請求項１９】
前記コラゲナーゼが０．００１〜０．１％の間の濃度である、請求項１８に記載の畜産方法。
【請求項２０】
前記皮膚領域が子ヒツジの臀部である、請求項１９に記載の畜産方法。
【請求項２１】
前記子ヒツジの臀部が少なくとも４カ月間無毛のままである、請求項２０に記載の畜産方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、哺乳動物の脱毛方法に関し、ある特定の態様では、畜産を目的とした方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ある種の動物の身体の特定領域から毛を除去することは、重要な畜産活動であると考えられる。メリノ種などの羊毛を得るためのヒツジは、羊毛生産量が高くなるように飼育されており、したがってヒツジから得られる羊毛が多ければ多いほど、経済的利益が大きくなる。飼育プロセスの一過程では、皮膚の弛緩特性を高めることによって、毛嚢の数、したがって羊毛の収量が増加するようにしている。皮膚を弛緩させることに限らず羊毛生産量を増加させることの副作用とは、適切に管理されていないヒツジの臀部が尿で汚れやすく、糞で汚れやすく、または糞が付きやすくなることである。皮膚の襞の間に過剰な湿分がある場合も細菌が増殖し、産卵期にあるクロバエのメスの産卵を誘発させる臭いが生じて蝿蛆症の率が高くなる。臀部の蝿蛆症は、知られているように、クロバエによる蝿蛆症の主な形態であり、クロバエによるすべての蝿蛆症の８０％を超える割合を占める。
【０００３】
１年のうち適切な時期にヒツジの臀部から毛を刈り取ることによって、臀部の蝿蛆症の発生率は低下するが、かなりの数のヒツジは依然としてこの領域が蝿蛆症になっている。臀部の皮膚の襞を除去し、臀部表面の羊毛の量を減少させ、それによってその領域の糞尿による汚れの量を減少させる、Ｊ  Ｈ  Ｗ  Ｍｕｌｅｓによって開発された手術が、１９３０年代にオーストラリアで導入された。このミュールズ（Ｍｕｌｅｓ）手術は、メリノ種ヒツジの生産者に広く採用された。およそ２千万頭の子ヒツジがオーストラリアでは毎年ミュールズ手術を受けている。
【０００４】
当初の手術では、Ｂｕｒｄｉｚｚｏ鉗子で会陰領域両側の皮膚の襞を挟み、ナイフでその襞を切り取っていた。この手術は当時、鉗子の圧力によって痛みのないものであると考えられていた。後にミュールズ手術は、尾部からの皮膚の除去にも適用され、これは「改良ミュールズ手術」と呼ばれた。手術を行うのに、ブレード剪断機が鉗子およびナイフにとって代わった。西オーストラリアでは、ミュールズ手術請負産業によって、皮膚除去領域が股部にまで拡大し、それと同様に尾部の皮膚全体の剥離も行うが、これがいわゆる「広範ミュールズ手術」である。
【０００５】
動物保護に関する問題はさておき、この広範ミュールズ手術では、創傷面積が広くなり、感染、二次関節感染、創収縮、尾部および会陰部の歪みの機会が増大するなどの二次的な問題が生じる。紫外線で誘発された、会陰領域の皮膚ガンの増加という長期にわたる問題も、明らかになった。
【０００６】
動物の福祉を向上させるという消費者および動物活動家の圧力が高まっていることから、メリノ種ヒツジ産業においては、ミュールズ手術に代わる手法が最優先事項と考えられているが、現在のところそのような代替策は存在しない。
【０００７】
脱毛は、他の活動分野、とりわけ化粧品産業でも重要であり、非常に広範にわたる方法が試みられている。主な難問は、美容上許容されると同時に長持ちし、かつ使いやすい方法を見出すことである。
【０００８】
体毛を美容上除去するための既知の方法は、２つの大きなカテゴリ、すなわち物理的な方法と化学的な方法に分類される。物理的な脱毛方法では、一般に、毛線維を毛嚢から引き離すこと、毛を皮膚表面で切断すること、または毛嚢全体を毛嚢管から引き出すことを行う。最後の方法だけが、永久脱毛を実現する。
【０００９】
一般的な物理的脱毛方法は、毛線維および／または毛嚢を物理的に除去するためにピンセットを使用すること、皮膚表面の毛線維を切断するためにカミソリなどを使用することを含む。別の一般的な方法は、いわゆる「ワックス脱毛」であり、この方法では、毛を除去する領域に加熱したワックスを塗布し、そのワックスで個々の毛線維を巻き込み、次いでそのワックスを冷却してわずかに硬化させ、その時点でワックスを除去すると、封じ込められた線維が毛嚢から物理的に引き離される。ワックス脱毛は、一般に毛嚢全体を除去しないものであり、したがって毛は最終的に元のように成長する。ワックス脱毛に類似する別の方法は、「砂糖脱毛」と呼ばれる。砂糖脱毛では、処置する皮膚の表面に温めた砂糖ペースト層を作り、木綿の布で覆い、そのペーストを硬化させ、包み込まれた毛線維と共に皮膚から引き離す。
【００１０】
いくつかの永久脱毛方法が知られており、あるものでは個々の毛嚢をレーザで焼く必要があるが、それによって毛線維が再生しないようにしている。ここに述べたような方法は、一般に非常に痛みがあり、毛嚢管に隣接した真皮でしばしば局所的な炎症が生じる（紅斑）。レーザ法では、毛嚢を永久に破壊するために反復して処理する必要があり、脱毛が永久的なものであるという証拠はあいまいである。個々の毛を物理的に除去するような技法は、個々の領域の処理に必要とされる時間が多いために、費用もかかる傾向にある。
【００１１】
毛が再生するには、毛嚢管内に真皮細胞と表皮細胞の組合せがあればよいと考えられる。したがってただ一つの表皮細胞または真皮細胞が生存し、それぞれが真皮細胞または表皮細胞に接触すれば、毛の再生が引き起こされることになる。したがって永久脱毛では、毛嚢管内に存在するすべての表皮細胞を破壊しまたは除去する必要がある。
【００１２】
従来の化学的脱毛方法では、一般に、毛線維のケラチンを破壊して、毛嚢からより容易に除去される「軟質」ケラチンにするために、チオール還元剤を使用していた。その結果これらの技法では、通常、毛嚢が除去されず、したがって毛線維の再生が引き起こされる。そのような処理の例は、ＭｃＧａｌｌｉａｒｄの米国特許第４，１５２，７８４号およびＳｃｈａｍｐｅｒの米国特許第４，１２１，９０４号に見出すことができる。
【００１３】
毛線維を再生させる能力が阻害されるように毛嚢を処理するための、二次的な作用因子も使用されている。これらの作用因子は、毛線維を機械的または化学的手段によって毛嚢から除去した後に、皮膚に施用する。したがって毛嚢は、毛線維の除去によって露出し、上記作用因子で処理される。そのような既知の作用因子には、光増感剤および光、毒素、または電流が含まれる（Ａｎｄｅｒｓｏｎの米国特許第５，６６９，９１６号参照）。
【００１４】
Ｍｕｅｌｌｅｒらの米国特許第３，７９４，０２８号は、その位置で毛が永久に成長しなくなるように、毛嚢に脱毛剤溶液を微量注入して再生を妨げることで、毛嚢全体の化学的除去に関する問題に対処している。特にこの方法は、水酸化ナトリウム溶液を個々の毛嚢に注入する必要がある。このようにこの方法は、刺激の強い溶液を使用し、また個々の毛嚢をそれぞれ処理する必要があるので時間がかかる。
【００１５】
したがって、毛嚢全体を除去するための比較的安価で容易な方法であって、周囲の真皮に対する損傷が最小限に抑えられる方法が求められている。
【発明の開示】
【００１６】
本発明は、長期脱毛のための簡単な手法をもたらした。この手法が畜産環境において容易に適用されることが示された。この方法は、脱毛効果をもたらす形での、哺乳動物生体の皮膚の表面下へのコラーゲン切断剤の送達を含む。
【００１７】
特に本発明は、コラーゲン切断剤の脱毛性、およびおそらくは育毛阻害性も利用する唯一の既知の方法である点で、本発明者が知る限りの、哺乳動物生体に使用されるすべての脱毛方法とは異なっている。
【００１８】
第１の態様では、本発明は、哺乳動物生体から毛を除去する方法であって、ある区域の皮膚の表面下にコラーゲン切断剤を送達するステップと、このコラーゲン切断剤がコラーゲンを切断するための時間を設けるステップと、その皮膚区域内に存在する毛を除去するステップとを含む方法であると言えよう。
【００１９】
第２の態様では、本発明は、ある区域の皮膚の表面下に、その皮膚区域を脱毛するのに有効な量のメタロプロテイナーゼを送達するステップを含む畜産方法であると言えよう。
【００２０】
さらに理解を深めるために、いくつかの実施例を参照しながら本発明について説明する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
実験によれば、ヒツジの股部の真皮に導入したときに０．０１％（ｗ／ｖ）程度またはそれ以上の濃度であるコラゲナーゼ水溶液０．１ｍｌを注射することによって、推定約５ｃｍ２相当の面積を脱毛する効果があることがわかった。コラゲナーゼは、注射点から真皮全体に広がり、皮膚への毛嚢の結合および正常な発毛プロセスにも重要と考えられるコラーゲン網を、破断すると考えられる。漿液性痂皮が脱毛部位に形成され、それが取れると、毛および毛嚢は漿液性痂皮と一緒になって、脱毛領域を離れる。今日までの試みでは、脱毛は、約４カ月間、屠殺されるまでの間、再生の徴候もなく有効であった。そのような脱毛手順は、ヒツジまたは処理すべきその他の哺乳動物の一生を通じて繰り返す必要はないが、周期的にその手順を繰り返す必要がある場合もあると考えられる。これは、ある程度、コラゲナーゼまたはその他の酵素の濃度によって左右されると考えられる。
【００２２】
例示された手順で、周囲組織への損傷が最小限に抑えられると共に脱毛作用が長期にわたって示されるという効果は、予期しなかったものである。
【００２３】
発毛に対するコラゲナーゼまたはその他のマトリックスメタロプロテイナーゼの作用には２つの面があると考えられ、その第１は、微細なコラーゲン網が毛嚢を真皮内に固定しており、したがってこの固定網の破断によって毛嚢全体が被覆から遊離することである。第２は、コラーゲンマトリックスが、毛嚢の基部に位置する毛乳頭細胞の正常な機能に関与していることである。マトリックスの破断によって、毛嚢球内の正常な線維生成プロセスが変化することになり、したがって線維成長は、おそらく永久に阻害される。
【００２４】
今日までの実験は、いくつかの系統のマトリックスメタロプロテイナーゼがコラーゲンを切断することができ、したがって効果があることを示している。これらにはＭＭＰ−３（ストロメライシンとも呼ぶ）が含まれるが、好ましいコラーゲン切断剤は、費用効率があることからコラゲナーゼの混合物を含んだ粗製コラゲナーゼである。利用可能な多数のコラゲナーゼおよびマトリックスメタロプロテイナーゼがあること、および、本発明はいずれか１つの特定のコラゲナーゼまたはマトリックスメタロプロテイナーゼに制約されないことが理解され、したがって、利用可能なコラゲナーゼおよびマトリックスメタロプロテイナーゼのすべてではないがほとんどを、本発明の実施に際して使用することができると考えられる。コラーゲン切断剤を選択する際の主な制約とは、毛嚢とその周囲の真皮との間に結合組織がもたらす接着力を、その周囲の真皮に対する損傷が最小限に抑えられる期間内に弱めることができることである。本発明の特に好ましい形態では、コラーゲン切断酵素は、ＩＶ型、ＩＩ型、ＸＩ型、Ｉ型、ＶＩＩＩ型、およびＶ型を含めた細菌性コラゲナーゼのリストから選択された少なくとも２種類のコラゲナーゼの混合物である。これらの酵素は、クロストロディウム・ヒストリチクム菌（Ｃｌｏｓｔｒｏｄｉｕｍ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃｕｍ）から得られたものであってもよく、また市販されているものでもよい。コラゲナーゼの混合物は、他のプロテアーゼを含有してもよい。コラゲナーゼまたはマトリックスメタロプロテイナーゼは、切断型、変異体、欠失体などの変性タンパク質でもよいことが理解されよう。
【００２５】
コラゲナーゼまたはその他のマトリックスメタロプロテイナーゼの場合、酵素は、Ｚｎ２＋やＣａ２＋などの２価の陽イオン源と併せて使用してもよい。
【００２６】
コラーゲン切断酵素は、プロテアーゼ、あるいはその切断型、変異体、または欠失体でもよい。しかし、多数の利用可能なプロテアーゼがあり、毛嚢とその周囲の真皮との間に結合組織がもたらす接着力を、その周囲の真皮と毛線維または毛嚢とに対する損傷が最小限に抑えられる期間内に弱めることが可能な、いくつかのプロテアーゼがある。
【００２７】
今日までの実験によれば、組成物中の酵素レベルは、少なくとも粗製コラゲナーゼを調製する場合、約０．０１％ｗ／ｗ以上とする必要があることが示されている。０．００１％は有効ではないように見えるが、適切な送達方法によって、または特異的活性がより高い酵素を使用することによって、そのようなレベルもまた有効なものにできることが知られている。経験的試行により、効果的な脱毛を行うために添加される酵素の適切なレベルが、容易に決定されることになる。同様に、そのような試行によれば、許容することのできない損傷が周囲組織にもたらされるかどうかを容易に決定できるようになる。今日まで実施されたヒツジの試験では、若干の軽微な瘢痕が生じたが、皮膚に対する損傷レベルは最小限に抑えられた。この処理では一過性の痂皮しか生じず、子ヒツジに不快感を与える特別な証拠はない。
【００２８】
今日まで、コラーゲン切断酵素をヒツジに導入していた手段は、注射器による注入によるものである。上記の場合、針を真皮に挿入し、約０．１ｍｌ量を送達する。送達される量および送達方法は、様々に変えることができることが理解されよう。現在の試験で得られるように、多量の酵素溶液を注入することによって、コラーゲン切断酵素が強制的に真皮全体に広がり、注入された量の圧力が酵素の広がり、したがって脱毛効果の広がりを助けるだろう。圧力を加えずに数マイクロリットルという最小限の量しか送達されない場合、真皮内の間質液が酵素をその導入部位から運ぶが、おそらくは同じ程度にまで酵素を分布させることはないと予測される。
【００２９】
送達部位は真皮であることが好ましいが、皮下送達もおそらくは効果的であり、処理することが望まれる領域の毛嚢に結合しているコラーゲン網に対して、十分な接触が得られると予測される。送達方法は、皮膚に裂け目を作ること（例えば注入や高圧エアロゾルによって）、あるいは、皮膚の保護層を通して酵素を送達させる性質を持つクリームまたはその他の皮膚用担体を塗布すること、あるいは、おそらくはイオントフォレーゼなどの電気的な同時移送（co-migration）技術によるものでよいことが理解されよう。
【００３０】
この方法は、現在実施されているヒツジのミュールズ処理に代わる、ヒツジの臀部の脱毛手段として、申し分なく適していることが理解されよう。この方法には、ヒツジの一生にわたって永久的な効果があるが、この方法は、プロセスを周期的に繰り返す必要がある場合も依然として有用であると考えられる。
【００３１】
本発明によれば、最小限の表面の損傷で長く続く脱毛作用が得られ、したがって畜産方法の領域を超えて、特に、例えば美容上の目的でのヒトの脱毛に適用可能と考えられる。
【００３２】
特に、美容上の目的で、送達は注射以外によるものであることが望ましい。いくつかの送達方法があると考えられ、作用部位に向けた酵素の送達は拡散によるものでよく、したがって上記送達は、単に酵素を皮膚表面に塗布することによって実現することが可能である。しかしこの方法は、酵素をその作用部位に送達するのを助ける浸透促進手段の使用を含むことが好ましい。浸透促進を実現するためのいくつかの手段を使用することができ、その手段には、超音波、熱、圧力波、イオントフォレーゼ、または界面活性剤の使用が含まれる。したがって本発明の１つの形態では、皮膚を柔らかくして酵素が毛嚢に浸透するのを助けるために、処理済みの領域を加熱することができる。熱源は、例えば赤外線ランプでよい。熱は、酵素を塗布する前および／または酵素を塗布している間に加えることができる。化学的浸透促進剤も知られており、これを使用して、皮膚内および毛嚢周囲への酵素の浸透を助けることができる。したがって、皮膚への拡散が促進されるように、酵素を、担体と皮膚との間の表面張力を低くする担体に担持させて使用することができる。酵素の浸透性の向上は、熱と化学的手段の組合せを使用して実現することもできる。
【００３３】
酵素は、この酵素と、適切な無毒性の皮膚用として許容される担体とを含んだ組成物の形で、局所的に塗布することができる。適切な担体には、水、エタノール、水／エタノール混合物、パラフィン油や石油、鉱油、シリコーン油、脂肪アルコール、グリセリン、軟質白色パラフィンなどの油が含まれる。組成物は、溶液、ゲル、ローション、クリーム、エアロゾル、油中水型または水中油型エマルジョンを含めた任意の適切な形態でよい。１つの好ましい形態で、担体は軟質白色パラフィンである。別の好ましい形態で、担体は水を主成分とする。
【００３４】
組成物は、浸透促進剤や染料、香料、着色剤、保存剤、充填剤、ゲル化剤または増粘剤、防腐剤、麻酔剤、乳化剤、皮膚軟化剤、安定剤などの１つまたは複数の添加剤を含んでもよい。適切な充填剤には、チョーク、タルク、酸化マグネシウム、炭酸マグネシウム、クレイ、酸化チタン、フュームドシリカ、またはこれらの混合物が含まれる。適切な乳化剤には陰イオン界面活性剤が含まれる。適切なゲル化剤には、トラガカント、キサンタン、カラヤおよびグアールガム、クレイ、メチルまたはヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、脂肪およびポリビニルアルコール、変性デンプンおよび糖が含まれる。
【００３５】
局所的に施用する化粧品用組成物中の酵素量は、０．０５％から３０％ｗ／ｗの間でよい。粗製コラゲナーゼ調剤を使用する好ましい形態では、酵素量が０．１％から１０％ｗ／ｗの間であり、１つの特に好ましい形態では、酵素量は０．５％から３％の間である。使用される酵素量は、ひとつには酵素のタイプおよび活性によって決定することができる。当然ながら酵素量は、周囲の真皮に実質的な損傷を引き起こすほど高くなく、さらに皮膚および毛と接触する時間を延ばす必要があるほど低くないことが好ましい。特に酵素の活性レベルは、ミリグラム当たり４００〜１８６０単位の間でよい。
【００３６】
美容上の目的では、周囲の真皮が処理による影響を実質的に受けないままであること、すなわち皮膚の過剰な火傷、膨潤、または斑点が生じないことが重要であると理解される。一般に、既存の処理では、その処理の後に皮膚の発赤や圧痛などの一過性の目に見える影響があり、外傷のレベルは使用者が許容することのできるものであるが、生じる外傷は少ないことが好ましい。今日まで実施されてきた実験によれば、毛嚢以外に対する永久的な損傷がないことの理由は、毛嚢を取り囲む結合組織膜の厚さとその周囲の真皮の厚さとが異なるために、関連するコラーゲン線維に作用するのにかかる時間が、酵素が周囲の真皮組織に対して著しいかまたは少なくとも長期にわたる損傷作用を発揮するのに不十分なためであるということが示唆される。
【００３７】
この方法の効果は、毛質にも左右され、したがって人によって様々である。したがって、ある人は、除去することが特に難しい毛嚢を有する可能性があり、したがって、より容易に除去される毛嚢を有する人よりも長い時間、酵素を皮膚に接触させることが必要になる。美容の専門家および脱毛を行うその他の者は、個人の脱毛の相対的な容易性を容易に評価することができ、したがって、酵素を皮膚に接触させる必要がある時間の長さに関して初期評価を行うことは、標準的な知識の範囲内にあることが理解される。
【００３８】
１つまたは複数の酵素を皮膚に接触させる時間の好ましい長さは、ひとつには使用される酵素のタイプ、活性、および濃度にも左右されると考えられる。今日まで実施されてきた実験では、周囲の真皮に実質的な損傷を与えることなく毛嚢を完全に除去するために、約１％（ｗ／ｗ）の酵素を含有する組成物を皮膚に約３０分間接触させてもよいことが示されている。その他の濃度および時間を使用することもでき、したがって１０％の酵素を含有する組成物を使用して皮膚に５分間接触させてもよいことが理解されよう。除去を行うのに必要とされる濃度および時間も被験体の毛質に左右され、したがって既定の酵素濃度では、必要とされる時間が人によって異なることが理解されよう。
【００３９】
所定の時間が経過した後、コラーゲン切断酵素の作用を停止させることが望ましいと考えられる。したがって、例えば酵素を塗布した後、コラーゲンクリームを塗布することができる。コラーゲンクリームは、浸透促進剤も同様に含んでよい。処理後、所定の時間にわたり、コラーゲンクリームを１回または複数回塗布することが望ましいと考えられる。
【００４０】
この方法は、処理によって生じたあらゆる創傷の治癒を助けることが可能な、１種または複数の創傷治癒剤を塗布することを含んでもよい。このような薬剤は、コラーゲン切断酵素による処理に必要な時間が経過した後に、塗布することができる。適切な創傷治癒剤には、アロエ、精油、抗生物質、ヒドロコルチゾン、ビタミンＫ、コロイド銀、レチノール、亜鉛、およびＥＧＦが含まれる。
【００４１】
一般に脱毛処理では、脱毛後に「発毛阻害剤」を塗布することが推奨され、本発明は、そのような阻害剤を処理後に使用することを包含する。
【００４２】
組成物は、この組成物を含有する感圧性マイクロカプセルの形にマイクロカプセル化してもよい。マイクロカプセル化の技法に関しては、ＭｃＧａｌｌｉａｒｄの米国特許第４，１５２，７８４号を参照することができる。このマイクロカプセルを絆創膏の面に分散させることができ、その結果、望ましくない毛を含む皮膚領域にその絆創膏を貼ることによってマイクロカプセルが破れ、それによって組成物が皮膚に送達されるようになる。毛線維は、ある時間が経過した後に絆創膏を剥がすことによって毛嚢が一緒に除去されるように、絆創膏に接着した状態になるようにすることも可能と考えられる。
【００４３】
実施例１−培養した毛嚢の成長はコラゲナーゼによって阻害される。
ヒツジの中央側の、麻酔をかけた領域から、薄い皮膚片を除去した。この皮膚片をすぐに培地（Ｗｉｌｌｉａｍｓ  Ｅ−Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．）上に置き、実験室に持って行った。毛嚢を、顕微鏡下で皮膚から切り取り、２４ウェルプレートの個々のウェルに入れた。各ウェルに、Ｗｉｌｌｉａｍｓ  Ｅ培地を加えた。様々な濃度のコラゲナーゼ（０．１％、０．０１％、０．００１％、および０．０００１％、および０％のコラゲナーゼ（Ｓｉｇｍａ粗製コラゲナーゼ  タイプ１Ａ  Ｓｉｇｍａ製品番号Ｃ９８９１））を各ウェルに加えた。線維の成長を、６日間にわたり毎日測定した。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養法の詳細な説明は、（Ｂａｔｅｓ、Ｈｙｎｄ、Ｐｅｎｎｏ、およびＮａｎｃａｒｒｏｗ  １９９７−Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ  １３７：４９８〜５０５）に記載されている。結果に関しては図１を参照されたい。
【００４４】
実施例２  ブタの皮膚の処理
方法
死んだ子ブタを得、その皮膚の表面を７０％エタノールを使用して清浄化した。軟質白色パラフィン（Ｐｒｏｓａｎａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｑｕｅｅｎｓｌａｎｄ、オーストラリア）に混合したコラゲナーゼ混合物（１％ｗ／ｗのタイプＩＶ、タイプＩＩ、タイプＸＩ、およびタイプＶコラゲナーゼ（Ｓｉｇｍａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ、オーストラリア））を、死んだブタの一方の中央側に塗布し、塗布した皮膚領域を、その皮膚表面から約２５ｃｍ離した赤外線ランプを使用して、３０分間加熱した。この後、ブタを回転させ、反対側の中央側に、コラゲナーゼを含有しない軟質白色パラフィンを塗布した。この皮膚表面も、前述のように赤外線ランプを使用して３０分間加熱した。約１０分間冷却した後、パラフィンとパラフィン／コラゲナーゼ混合物を、皮膚表面から擦り取った。
【００４５】
次いでピンセットを使用してそれぞれの側から線維を引き抜き、顕微鏡検査用のＤｅＰｅＸと共に顕微鏡用スライド上に載せた。次いで処理済みの両方の皮膚領域に、市販の家庭用ワックス処理剤（Ｎａｉｒ  Ｅａｓｉｗａｘ（登録商標）ストリップス）を使用してワックス処理した。皮膚の生検材料をこれらの毛のない皮膚部位から収集し、固定し、加工し、組織構造を得るために切断した。この皮膚切片をＳＡＣＰＩＣ染色により染色した。
【００４６】
結果
全体的な観察
コラゲナーゼ／パラフィンで処理した部位から抜き取った線維は、パラフィンで処理した部位、すなわちより大きい力を加えなければならずかつ線維の断裂が感じられた部位と比較して、非常に容易に皮膚から切り離された。
【００４７】
線維の顕微鏡検査
パラフィン処理した対照部位から引き抜いた線維：
外毛根鞘（ＯＲＳ）が結合している状態の線維はまったく観察されなかった。一部の線維は、通常なら毛乳頭および残った毛球細胞が存在する位置に残された隙間を有する、丸みの付いた中空の端部を有していた。残りの線維は、その線維が角質形成帯で破壊されている場所に、破断したブラシ状の端部を有していた。ところどころの線維は、内毛根鞘（ＩＲＳ）の切片と思われる波打った糸状の組織断片を線維軸に結合しており、毛乳頭と思われる、尖った組織断片を毛球端部に有していたが、それでもＯＲＳは存在しなかった。
【００４８】
コラゲナーゼで処理した部位から抜き取った線維：
抜き取ってスライドに載せた線維の１００％は、その全体が皮膚から除去されたものであった。これらの線維すべては明らかに、目に見える毛乳頭と、毛嚢を封じ込めたＯＲＳ全体を有していた。一部の毛嚢はまとめて引き抜かれたものであり、そこにはまだ表皮組織が結合したままであった。
【００４９】
皮膚切片の顕微鏡検査
パラフィン処理した部位からの皮膚：
明らかにワックス脱毛処理によって引き抜かれた一部の線維は、その線維が除去されているが、毛球端および毛乳頭が皮膚表面に向かって毛嚢管の途中まで残されていることを示している。線維は、角質形成帯で破断している。他の毛嚢管は、外見上かなり空胞化してまだ確認されていない最下部の細胞群以外は、空であるように見える。これらの場合、ＯＲＳも取り損なっていた。残りの毛嚢は、線維が表皮で破断した状態で皮膚内に完全に無傷のまま残されており、ワックス脱毛中に加えられた引張力が原因で、その外観はごくわずかしか変化していない。
【００５０】
コラゲナーゼ／パラフィンで処理した部位からの皮膚：
空の毛嚢管が、無傷の毛嚢が残されていない状態で組織内に見られた。これらの管は、その管の底部に大きい空胞化細胞も有する。真皮鞘は、組織内にまだ存在しているようであるが、毛嚢のすべての痕跡（線維、ＩＲＳ、ＯＲＳ、毛乳頭、毛球）は見えない。
【００５１】
結果
パラフィンと熱だけで処理した対照組織には、in situに残された毛乳頭およびＯＲＳおよび毛球の細胞の証拠が依然としてあり、これらの細胞には、新しい毛線維を形成する可能性がある。上述の結果および観察のすべては、コラーゲン／パラフィンおよび熱にかけたときに、毛嚢全体が皮膚から除去されたことを示している。新しい毛嚢および毛線維を生成する可能性があると考えられる細胞の痕跡はない。
【００５２】
実施例３  種々の酵素の試験
効果があると考えられる有望な一連の酵素を評価するために、一連の酵素の有効性を生体ヒツジの股部で試験した。
【００５３】
以下の酵素溶液を調製した：０．１％コラゲナーゼ（粗製コラゲナーゼ  タイプ１Ａ  Ｓｉｇｍａ製品番号Ｃ９８９１）、ＣａＣｌ２  ０．１３ｇ／ｌを含む生理食塩水中に溶解したもの；コラゲナーゼ  シグマブレンド  タイプＦ（Ｓｉｇｍａ製品Ｃ７９２６）、ＣａＣｌ２  ０．１３ｇ／ｌを含む生理食塩水中に溶解したもの；０．１％ディスパーゼＩ（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ａｕｓｔｒａｌｉａ製品番号２１０４５５）、ＣａＣｌ２を含まない生理食塩水中に溶解したもの；０．５％トリプシン／ＥＤＴＡ（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ製品番号１５４０５−０１２）、ＣａＣｌ２を含まない生理食塩水中に溶解したもの；０．１％ＭＭＰ３（ストロメリシン、トランシン、プロテオグリカナーゼ）（Ｓｉｇｍａ製品番号Ｍ１６７７）、ＣａＣｌ２  ０．１３ｇ／ｌを含む生理食塩水中に溶解したもの。各酵素ごとに、１ｍｌを経皮的に注射した。およそ２時間後、注射部位の羊毛繊維を、ピンセットを使用して手動で引き抜いた。引き抜いた繊維を、パラフィン油と共に顕微鏡用スライド上に置き、破壊された毛嚢端部に対する無傷の毛嚢の数をカウントした。
【００５４】
この抜取り実験の繰返しは、酵素の注入をより制御できるように、in vitroで行った。その結果は、in vivoで得られた結果を追認するものであった。すなわちコラゲナーゼによって、無傷の毛嚢全体を、コラゲナーゼ処理の後に皮膚から引き抜くことができたのである。トリプシンおよびディスパーゼではコラゲナーゼに比べて効果がなく、ＭＭＰ３では中間的な効果が得られた（図５）。
【００５５】
本発明者らは、脱毛に最も効果的な酵素群がマトリックスメタロプロテイナーゼであり、とりわけコラゲナーゼであると結論する。
【００５６】
Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ
収集した毛嚢における毛線維成長のｉｎ  ｖｉｖｏ試験については、各種濃度のコラゲナーゼ（０％、０．１％、０．０１％、０．００１％、および０．０００１％）を使用した。コラゲナーゼの濃度が０．００１％以上で、培養毛嚢での線維成長が阻害された。
【００５７】
実施例４  ヒツジのミュールズ処理の代替策−第１の実験
現在広く実施されているミュールズ処理の代替策として、羊毛を除去するための子ヒツジの臀部の処理の効果を決定するため、１２頭の子ヒツジを使用した実験を行った。コラゲナーゼの０．１％水性調剤  ０．１ｍｌを、臀部周囲の６カ所の異なる部位で、皮膚の表面から約１ｍｍ下に注射した。
【００５８】
単に手で注入するだけで効果的に作用し、子ヒツジに与える不快感が最小限に抑えられることがわかった。
６週間後、注射した部位を検査すると、薄い瘢痕が形成された後に痂皮がはがれた形跡が見られ、その皮膚領域の毛がなくなることがわかった。この無毛の皮膚は、表面下にわずかな瘢痕の隆線があり、健康で、ピンク色であり、柔らかいようである。
【００５９】
図６ａは、成体ヒツジの、治癒後のミュールズ処理領域を示す。図６ｂは、子ヒツジの臀部の、処理後６週間のコラゲナーゼ処理領域を示す。
注射後約４カ月で検査すると、その部位は無毛のままであった。
【００６０】
実施例５  ヒツジのミュールズ処理の代替策  第２の実験
カルシウム（０．１３ｇ  ＣａＣｌ２／ｌ）を含むリン酸緩衝生理食塩水にコラゲナーゼ（０．５％コラゲナーゼ（Ｓｉｇｍａ製品番号Ｃ７９２６））を溶かした溶液で、８頭のヒツジを処理した。コラゲナーゼ溶液０．１ｍｌを、尾部の両側の４カ所の部位と、尾部の最上部の２カ所の部位に注射した。おそらくはより少ない注射部位でよいことが予測される。
離乳時（１２週齢、および処理後約６週間）のこれらのヒツジの検査によれば、処理による有害な作用はないことが明らかになった。
【００６１】
本発明は、動物の脱毛に関する各種手順に適用可能であり、ミュールズ処理の単なる代替策に限定されるものではないことが理解されよう。例えば、オスのヒツジの陰茎垂下処理（ｐｉｚｚｌｅｄｒｏｐｐｉｎｇ）の代替策として使用することができる。ヒツジ以外の動物の脱毛も、本発明の意図するところである。例として、イヌ、ウマ、ネコ、およびその他の家畜の皮膚に入れ墨をすること、屠殺前にブタの皮膚を脱毛することが含まれる。
【図面の簡単な説明】
【００６２】
【図１】図１は、in vitroでの線維成長に対するコラゲナーゼの阻害効果を示す。コラゲナーゼの濃度が０．００１％以上で、in vitroでの線維成長が阻害された。
【図２】図２は、毛およびその毛嚢の概略図であり、結合組織（１）、毛線維（２）、内毛根鞘（３）、外毛根鞘（４）、毛球（５）、および毛乳頭（６）を示している。
【図３】図３は、以下の顕微鏡写真を示す。（ａ）コラゲナーゼで処理された皮膚の部位から引き抜かれた毛嚢。なお、線維（２）、毛球（５）、内毛根鞘（３）および外毛根鞘（４）を示す。（ｂ）コラゲナーゼで処理されていない対照部位から引き抜かれた線維。
【図４】図４は、以下の皮膚切片の顕微鏡写真を示す。（ａ）コラゲナーゼで処理されていない対照部位からの皮膚切片であって、線維（２）は除去されているが毛球および毛乳頭は皮膚表面（９）に向かって毛嚢管の途中（８）まで残されている毛嚢管（７）が示されている皮膚切片。（ｂ）コラゲナーゼで処理された部位からの皮膚切片であって、空の毛嚢管（７）が示されている皮膚切片。
【図５】図５は、脱毛に対する５種類の異なる酵素の有効性を示すヒストグラムである。Ｙ軸上の目盛りは、種々の酵素で処理された皮膚から引き抜いた後の、無傷の毛嚢球端の割合を指す（対照＝１に対して）。例えば値３は、コラゲナーゼ処理後の無傷の毛球端が、対照皮膚の場合に見られる量よりも３倍多いことを意味する。
【図６】図６は、ａ）ミュールズ法を施した成体ヒツジの治癒臀部の写真であり、ｂ）２カ所の部位をコラゲナーゼ処理してから６週間が経過した後の、子ヒツジの臀部の写真である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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