(57)【要約】本発明は、新規フェニトイン誘導化合物およびナトリウムチャンネル遮断剤としてのかかる化合物の使用を指向する。かかる組成物は、抗ガン剤として利用し、ＰＣａ増殖および/または転移を制限または防止するために使用され得る。【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般構造式
【化１】
2005523314.tif 000050
［式中、
Ｒは、Ｃ１-Ｃ１２アルキル、Ｃ２-Ｃ９アルケニル、Ｃ２-Ｃ９アルキニル、-(ＣＨ２)ｍＣＯＯＨ、-(ＣＨ２)ｍＮＨ２、-(ＣＨ２)ｍＣＯＮＨ２、-(ＣＨ２)ｎＣ３-Ｃ６ シクロアルキル、-(ＣＨ２)ｎアリール、-(ＣＨ２)ｎ置換されたアリール、-(ＣＨ２)ｐＮＣＨ３(ＣＨ２)ｐ置換されたアリールおよび-(ＣＨ２)ｎ−置換された複素環（式中、ｍは３-８の範囲の整数であり、ｎは０−４の範囲の整数であり、ｐは１-４の範囲の整数である。）からなる群から選択され、
Ｒ２は、-(ＣＨ２)ｎＣＯＯＨ、-(ＣＨ２)ｎＮＨ２および-(ＣＨ２)ｎＣＯＮＨＲ１０からなる群から選択され、
Ｒ３は、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１-Ｃ４アルコキシ、-ＣＨ２ＯＨおよび-ＣＯＮＨ２からなる群から選択されるか、または
Ｒ２およびＲ３は、それらが結合している原子と一体となって、所望により置換された複素環式環を形成し、
Ｒ４およびＲ５は、独立して、Ｈ、ハロ、Ｃ１-Ｃ４アルキル、Ｃ２-Ｃ４アルケニル、Ｃ２-Ｃ４アルキニルおよびＣ１-Ｃ４アルコキシからなる群から選択され、そして
Ｒ６は、Ｈ、Ｃ１-Ｃ８アルキル、
【化２】
2005523314.tif 000051
（式中、
Ｒ７およびＲ８は、独立して、Ｈ、Ｃ１-Ｃ４アルキル、Ｃ２-Ｃ４アルケニルおよびＣ２-Ｃ４アルキニルからなる群から選択され、
Ｒ９はＨであるか、または
Ｒ８およびＲ９が、それらが結合している原子と一体となって、所望により置換された複素環式環を形成する。）からなる群から選択され、そして
Ｒ１０は、Ｈ、ベンジルおよびＣ１-Ｃ４アルキルからなる群から選択される、但し、Ｒ２およびＲ３が、一体となって複素環式環を形成する場合、Ｒは-(ＣＨ２)ｎアリールはでない。］によって示されるナトリウムチャンネル遮断化合物。
【請求項２】
Ｒ２が、-(ＣＨ２)ｎＣＯＮＨ２であり、Ｒ３がヒドロキシである、請求項１記載の該化合物。
【請求項３】
Ｒ２およびＲ３が、それらが結合している原子と一体となって、次の構造、
【化３】
2005523314.tif 000052
［式中、Ｘは、-ＣＨＲ１２-、-Ｏ−および-ＮＲ１２-（式中、Ｒ１１およびＲ１２は、独立して、Ｈ、ベンジルおよびＣ１-Ｃ４アルキルからなる群から選択される。）からなる群から選択される。］を有する複素環式環を形成する、請求項１記載の該化合物。
【請求項４】
Ｒが、Ｃ１-Ｃ１２アルキル、Ｃ２-Ｃ８アルケニルおよびＣ２-Ｃ８アルキニルからなる群から選択される、請求項２または３記載の該化合物。
【請求項５】
Ｒ４およびＲ５が、独立して、Ｈ、ハロおよびＣ１-Ｃ４アルキルからなる群から選択され、そして
Ｒ６が、Ｈ、
【化４】
2005523314.tif 000053
（式中、ｎは０−２の範囲の整数である。）からなる群から選択される、請求項２または３記載の該化合物。
【請求項６】
Ｒ４およびＲ６が共にＨであり、Ｒ５がＣｌまたはＦである、請求項５記載の該化合物。
【請求項７】
Ｒ４およびＲ５が共にＨであり、Ｒ６が、
【化５】
2005523314.tif 000054
（式中、ｎは０−２の範囲の整数である。）である、請求項５記載の該化合物。
【請求項８】
Ｒ４およびＲ５が共にＣ１-Ｃ４アルキルであり、Ｒ６が
【化６】
2005523314.tif 000055
（式中、ｎは０−２の範囲の整数である。）である、請求項５記載の該化合物。
【請求項９】
Ｒが、
【化７】
2005523314.tif 000056
であり、
Ｒ４およびＲ５が、独立して、Ｈ、ハロおよびＣ１-Ｃ４アルコキシからなる群から選択され、そして、
Ｒ６がＨである、請求項２または３記載の該化合物。
【請求項１０】
一般構造式
【化８】
2005523314.tif 000057
［式中、
Ｒは、Ｃ１-Ｃ１２アルキル、Ｃ２-Ｃ８アルケニル、Ｃ２-Ｃ８アルキニル、-(ＣＨ２)ｎＣ３-Ｃ６シクロアルキル、
【化９】
2005523314.tif 000058
（式中、ｎは０−４の範囲の整数である。）からなる群から選択され、
Ｒ２は、Ｈであるか、またはＣ１-Ｃ４アルキルであり、
Ｒ４およびＲ５は、独立して、Ｈ、ハロ、Ｃ１-Ｃ４アルキル、Ｃ２-Ｃ４アルケニル、Ｃ２-Ｃ４アルキニル、-ＣＯＲ１１および(Ｃ１-Ｃ４)アルコキシからなる群から選択され、
Ｒ６は、Ｈ、ハロ、
【化１０】
2005523314.tif 000059
（式中、Ｒ１１は、Ｈ、Ｃ１-Ｃ４アルキル、ＮＨ２およびＯＨからなる群から選択される。）からなる群から選択される。］によって示される化合物、および医薬的に許容し得る担体を含む医薬組成物。
【請求項１１】
抗腫瘍剤をさらに含む、請求項１０記載の該組成物。
【請求項１２】
該抗腫瘍剤が化学療法剤である、請求項１１記載の該組成物。
【請求項１３】
Ｒが、Ｃ１-Ｃ１２アルキルからなる群から選択され、
Ｒ４およびＲ５が、独立して、Ｈ、ハロおよびＣ１-Ｃ４アルキルからなる群から選択され、
Ｒ６が、Ｈ、
【化１１】
2005523314.tif 000060
（式中、ｎは０−４の範囲の整数である。）からなる群から選択される、請求項１０記載の該組成物。
【請求項１４】
電位依存性ナトリウムチャンネル群を特異的に阻害する方法であって、
一般構造式
【化１２】
2005523314.tif 000061
［式中、
Ｒは、Ｃ１-Ｃ１２アルキル、Ｃ２-Ｃ８アルケニル、Ｃ２-Ｃ８アルキニル、-(ＣＨ２)ｎＣ３-Ｃ６シクロアルキル、
【化１３】
2005523314.tif 000062
からなる群から選択され、
Ｒ４およびＲ５は、独立して、Ｈ、ハロ、Ｃ１-Ｃ４アルキル、Ｃ２-Ｃ４アルケニル、Ｃ２-Ｃ４アルキニル、-ＣＯＲ１１および(Ｃ１-Ｃ４)アルコキシからなる群から選択され、
Ｒ６は、Ｈ、ハロ、
【化１４】
2005523314.tif 000063
（式中、Ｒ１１は、Ｈ、Ｃ１-Ｃ４アルキル、ＮＨ２およびＯＨからなる群から選択され、ｎは０−４の範囲の整数である。）からなる群から選択される。］によって示される化合物と該ナトリウムチャンネルを接触させる過程を含む該方法。
【請求項１５】
Ｒが、Ｃ１-Ｃ１２アルキルからなる群から選択され、
Ｒ４およびＲ５が、独立して、Ｈ、ハロおよびＣ１-Ｃ４アルキルからなる群から選択され、
Ｒ６が、Ｈ、
【化１５】
2005523314.tif 000064
（式中、ｎは０−４の範囲の整数である。）からなる群から選択される、請求項１４記載の該方法。
【請求項１６】
新生物疾患を処置するための方法であって、
一般構造式
【化１６】
2005523314.tif 000065
［式中、
Ｒは、Ｃ１-Ｃ１２アルキル、Ｃ２-Ｃ８アルケニル、Ｃ２-Ｃ８アルキニル、-(ＣＨ２)ｎＣ３-Ｃ６シクロアルキル、
【化１７】
2005523314.tif 000066
（式中、ｎは０−４の範囲の整数である。）からなる群から選択され、
Ｒ４およびＲ５は、独立して、Ｈ、ハロ、Ｃ１-Ｃ４アルキル、Ｃ２-Ｃ４アルケニル、Ｃ２-Ｃ４アルキニル、-ＣＯＲ１１および(Ｃ１-Ｃ４)アルコキシからなる群から選択され、そして
Ｒ６は、Ｈ、ハロ、
【化１８】
2005523314.tif 000067
（式中、Ｒ１１は、Ｈ、Ｃ１-Ｃ４アルキル、ＮＨ２およびＯＨからなる群から選択される。）からなる群から選択される。］によって示される化合物を含む組成物をそれを必要とする患者に投与する過程を含む該方法。
【請求項１７】
Ｒが、Ｃ１-Ｃ１２アルキルからなる群から選択され、
Ｒ４およびＲ５が、独立して、Ｈ、ハロおよびＣ１-Ｃ４アルキルからなる群から選択され、
Ｒ６が、Ｈ、
【化１９】
2005523314.tif 000068
（式中、ｎは０−４の範囲の整数である。）からなる群から選択される、請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
Ｒ４およびＲ５が、独立して、Ｈおよびハロからなる群から選択され、Ｒ６がＨである、
請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
一般構造式
【化２０】
2005523314.tif 000069
［式中、
Ｒ４およびＲ５は、独立して、Ｈ、ハロおよびＣ１-Ｃ４アルキルからなる群から選択され、
Ｒ６は、Ｈ、
【化２１】
2005523314.tif 000070
（式中、ｎは０−４の範囲の整数である。）
からなる群から選択され、
Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、Ｈおよびハロからなる群から選択されるか、または
Ｒ１４およびＲ１５は、それらが結合している原子と一体となって、所望により置換されたＣ５-Ｃ６アリールを形成する。］によって示されるナトリウムチャンネル遮断化合物。
【請求項２０】
Ｒ４、Ｒ５およびＲ６が、独立して、Ｈまたはハロであり、そして
Ｒ１４およびＲ１５が、各々Ｈであるか、それらが結合している原子と一体となってフェニル環を形成する、請求項１９記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
関連出願
本出願は、３５ＵＳＣ§１９９(e)の下で、２００２年４月１８日に提出した米国仮出願番号６０／３７３４４０および２００２年４月１９日に提出した米国仮出願番号６０／３７３７８４の優先権を主張し、その記載を本明細書の一部とする。
【０００２】
本発明の分野
本発明は、新規化合物およびかかる化合物のナトリウムチャンネル遮断剤としての使用を指向するものである。当該組成物は、不適当なナトリウムチャンネル活性に関連のある疾患群の処置において有用性を示し、そして抗ガン剤としてのこれらの化合物の使用を包含する。
【０００３】
本発明の従来技術
細胞の、その形態を変化させ、移動する能力は、ガン細胞の転移に必須のものである。転移中の細胞形態を形づくる精密な生物学的メカニズムは解明されていないが、このような変化には、細胞マトリクス相互作用(cell-matrix interactions)および細胞骨格要素が含まれることが知られている。細胞形態を形づくる際のＮａ＋チャンネルの関与が、ニューロンについて説明されてきた（Mattei et al., Journal of Neuroscience Research、55(6):666 73、1999)。まだ今のところ、Ｎａ＋チャンネル活性がガン細胞の形態を制御する細胞内メカニズムは明らかではないが、イオンチャンネルが、転移の様々な段階に関連し得るいくつかのタイプの細胞挙動に関係しているとされてきた。これらには、増殖、移動および細胞マトリクスとの接着/相互作用が包含される。
【０００４】
電位依存性イオンチャンネル（Voltage-gated ion channel）は、古典的には、興奮性組織におけるインパルス伝導と関連づけられたものであるが、様々な上皮細胞型においても見いだされ、それらの機能はよく知られていない。９つの哺乳類ナトリウムチャンネル遺伝子が同定されており、発現され、かつ機能性であることがわかった。これらの遺伝子は、膜内外および細胞外ドメイン中のアミノ酸配列の同一性が５０％を超える。近年、数種の電位依存性イオンチャンネルが、ラットおよびヒト前立腺ガン細胞において発見された。幾つかの独立して行われた研究が、前立腺の電位依存性ナトリウム(Ｎａ＋)チャンネルのαサブユニットを、ＬＮＣａＰおよびＰＣ-３を包含するヒト前立腺細胞系の侵襲性と関連づけた(参照、Diss、et al.,The plostate,48:165-178、2001およびSmith et al., FEBS Letters,423:19-24,1998.)。さらに、全細胞のパッチ・クランプを用いる電気生理学試験から、その同定された前立腺細胞ナトリウムチャンネルが、６００ｎＭでのテトラドトキシン(ＴＴＸ)に感受性であることが示唆され、該チャンネルを電位依存性のＴＴＸ感受性Ｎａ＋チャンネルタンパク質として同定した。
【０００５】
けっ歯類とヒトの前立腺ガン細胞系の比較により、Ｎａ＋チャンネルの発現レベルが、イン・ビトロの前立腺ガン細胞の侵襲性と正の相関があるという結論が導かれた。有望なことには、タンパク質および機能的試験の両方は、ＰＣａ細胞阻害に対して成立し得るメカニズムとしてのナトリウムチャンネル遮断を強く支持するものである。近年、ヒト前立腺ガン細胞系(ＬＮＣａＰ、ＤＵ−１４５およびＰＣ-３）による前立腺-特異的抗原(ＰＳＡ)およびインターロイキン-６(ＩＬ−６)の分泌に対する４種類の抗痙攣薬の効果が、各タンパク質についてのＥＬＩＳＡの特異性を用いて測定された。該結果は、電位依存性ナトリウムチャンネル群(ＮＶＳＣ)を不活性にするフェニトインおよびカルバマゼピンの両方が、ＬＮＣａＰおよびＩＬ−６、ＤＵ−１４５およびＰＣ-３細胞系(Abdul,M.およびHoosein, N., Anticancer Research,21(3B):2045-8,2001 May-Jun)によるＰＳＡの分泌を阻害するということを示した。さらに、該著者は、フェニトインによる処置後に、マトリゲル（Matrigel）中でコロニーを形成する能力が低下することを明らかにした。これらのデータは、ナトリウムチャンネル遮断がＰＣａの有効な処置のための強力な候補であることをさらに示唆する。
【０００６】
トリチウム化したバトラコトキシン(ＢＴＸ)を用いる実験から、脳組織中のＢＴＸとフェニトイン結合部位との間のアロステリックな関係が明らかとなった。この関連性から、出願人は、脳内のニューロンヒダントイン受容体のコンフォメーションおよび脂肪親和性特性について研究することとなった。ＮＶＳＣ上のフェニトイン結合部位についての構造的データがほとんどないために、特定された一連の化合物が、設計、合成および評価され、新規Ｎａ＋チャンネル遮断化合物を同定した。かかる化合物は、高ナトリウムチャンネル活性と関連した疾患の処置に有用性を示し、これは、癲癇、疼痛、双極性障害、鬱病、筋萎縮性側索硬化症(ＡＬＳ)および新生物（neoplastic）疾患、例えば、アンドロゲン感受性およびアンドロゲン非依存性前立腺ガンの処置を包含する。
【０００７】
前立腺新生物は、最も一般的なガンの要因、アメリカ合衆国人のガンによる死亡に関する第２の主要原因である。２００２年においては、約１８９０００の人は、前立腺ガンとして診断されており、約３００００人がこの疾患により死亡している。ヒト前立腺ガン細胞は、電位依存性ナトリウムチャンネル、ニューロンのサブタイプと類似する２６０Ｋｄの膜内外タンパク質を発現する。全細胞のパッチクランプ実験は、前立腺電位ナトリウムチャンネル(ＰＶＳＣ)が、ニューロンのサブタイプと類似した機能であることを示唆する。顕著に、前立腺ガン細胞におけるＮａ＋チャンネルの発現は、高度な転移性の細胞系ＭＡＴ−ＬｙＬｕ(ラット)における侵襲性に対して正の相関を示していた。ＰＶＳＣは、テトラドトキシン（ＴＴＸ)に感受性であることが見いだされ、ＴＴＸがＰＣ-３細胞（ヒト)の侵襲性を３１％（Ｐ＝０.０２）阻害することを報告された（Laniado, et al. American Journal of Pathology,150(4):1213 21,1997）。さらに、ＴＴＸ（６ｍＭ）は、前立腺ガン細胞形態（細胞突起長および場直径の低下、細胞体直径および突起高の増加を包含する）の変化を生じた［S.P. Fraser,Y. Ding, A. Liu,C.S. Foster M.B.A. Djamgoz. Cell Tissue Research. 295: 505 512,1999およびGrimes JA. Djamgoz MB. Journal of Cell Physiology. 175(1):50 8,1998］。そのため、ＰＶＳＣは、潜在的な前立腺ガン治療のための有効な標的となり、そのため、このナトリウムチャンネルの新規阻害剤に対する必要性を示す。
【０００８】
（本発明の要旨）
本発明は、新規電位依存性ナトリウムチャンネル(ＶＧＳＣ)および前立腺電位ナトリウムチャンネル(ＰＶＳＣ)阻害化合物の設計および合成を目的とする。このような阻害化合物を含む組成物は、過剰なまたは高活性のＶＧＳＣ／ＰＶＳＣを特徴とする疾患を処置する際の有用性を示す。ひとつの実施態様において、前立腺において過剰なまたは高活性のＶＧＳＣを選択的に標的とするナトリウムチャンネル結合化合物／遮断化合物が、ＰＣａ増殖および／または転移を制限または防止するために使用される。
【０００９】
（図面の簡単な説明）
図１：ｒＮａｖ１.２に対するフェニトイン(ＤＨＰ)およびアナログ１、５および４４の効果。電流は、１５secのインターバルで５０msecの間に、保持電位１００ｍＶから＋１０ｍＶへの脱分極過程によって誘発される。各実施例において、対照のトレースは、最も高い薬物作用で記録されたものと重ね合わされる。全ての化合物は、１００μＭの濃度で試験された。
【００１０】
（本発明の詳細な説明）
定義
本発明を説明し、請求する際に、次の専門用語を下記定義のとおりに使用する。
【００１１】
本明細書中で使用される用語「精製される（された）」および類似の用語は、自然環境におけるその分子または化合物と普通に関連のある他の成分を実質的に含まない(少なくとも６０％含まない、好ましくは７５％含まない、そして最も好ましくは９０％含まない)形で存在する分子または化合物の単離に関する。
【００１２】
本明細書中で使用される用語「医薬的に許容し得る担体」は、任意の標準的な医薬担体、例えば、リン酸緩衝生理食塩水溶液、水、エマルジョン、例えば、油／水または水／油型エマルジョン、および様々な型の湿潤剤を包含する。該用語は、ＵＳ連邦政府の規制機関によって承認されているか、またはヒトを含む動物において使用するためにＵＳ薬局法に掲載されている、いずれかの薬剤を包含する。
【００１３】
本明細書中で使用される「有効量」とは、選択された効果を生み出すために十分な量を意味する。例えば、有効量のナトリウムチャンネル遮断化合物は、ナトリウムチャンネル活性の検出し得る阻害を起こさせるために十分な量の遮断化合物である。
【００１４】
本発明の化合物の説明において使用される一般的な技術用語は、それらの通常の意味を示す。例えば、用語「アルキル」は、それ自身、または他の置換基の一部として、記載した数の炭素原子を有する直鎖または分枝脂肪族鎖を意味する。
【００１５】
用語「ハロ」は、臭素、塩素、フルオロおよびヨウ素を包含する。
本明細書中で使用されるように、用語「ハロアルキル」は、少なくとも１つのハロゲン置換基をもつアルキル基、例えば、塩化メチル、フルオロエチルまたはトリフルオロメチルおよび類似物を指す。
【００１６】
本明細書中で使用される用語「Ｃ１-Ｃｎアルキル（式中、ｎは整数である。）」は、１〜特定数の炭素原子を有する分枝または直鎖アルキル基を指す。一般的に、Ｃ１-Ｃ６アルキル基には、これらに限定されないが、メチル、エチル、n-プロピル、イソ-プロピル、ブチル、イソ-ブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、ペンチル、ヘキシルおよび類似物が包含される。
【００１７】
本明細書中で使用される用語「Ｃ２-Ｃｎアルケニル（式中、ｎは整数である。）」は、２〜特定数の炭素原子および少なくとも１つの二重結合を有するオレフィン化した不飽和の分枝または直鎖の基を指す。かかる基の例には、これらに限定されないが、１-プロペニル、２-プロペニル、１,３-ブタジエニル、１-ブテニル、ヘキセニル、ペンテニルおよび類似物が含まれる。
【００１８】
用語「Ｃ２-Ｃｎアルキニル（式中、ｎは整数である。）」は、２〜特定数の炭素原子および少なくとも１つの三重結合を有する不飽和の分枝または直鎖の基を指す。このような基の例には、これらに限定されないが、１-プロピニル、２-プロピニル、１-ブチニル、２-ブチニル、１-ペンチニルおよび類似物が含まれる。
【００１９】
本明細書中で使用される用語「所望により置換された」は、０〜４つの置換基を指し、該置換基は独立して各々選択される。より好ましくは、該用語は、０〜３つの独立して選択される置換基を指す。
【００２０】
本明細書中で使用される用語「アリール」は、これらに限定されないが、フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダニル、インデニルおよび類似物を包含する１または２つの芳香環を有する一または二環式炭素環式環系を指す。アリール基（二環型のアリール基群を包含する)は、低級アルキル、ハロアルキル、アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヒドロキシ、ハロ、およびニトロから独立して選択される１、２または３つの置換基によって、置換されていてもよい。用語(アルキル)アリールは、アルキル基を介して親部分と結合される全てのアリール基を指す。
【００２１】
用語「Ｃ３-Ｃｎシクロアルキル（式中、ｎは４−８である。）」は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルおよびシクロオクチルを指す。
【００２２】
用語「複素環式基」は、１〜３つのヘテロ原子を含有するＣ３−Ｃ８シクロアルキル基を指し、ここでヘテロ原子は酸素、硫黄および窒素からなる群から選択される。
【００２３】
用語「二環式」は、不飽和または飽和で安定な７〜１２員の架橋または縮合した二環式の炭素環のいずれかを指す。該二環式の環は、安定な構造を提供し得る任意の炭素原子で結合されてもよい。該用語は、これらに限定されないが、ナフチル、ジシクロヘキシル、ジシクロヘキセニルおよび類似物を含む。
【００２４】
本明細書中で使用される用語「低級アルキル」は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、n-ブチル、t-ブチル、ネオペンチルおよび類似物を包含する１〜８つの炭素原子を含む分枝または直鎖アルキル群を指す。
【００２５】
用語「非経腸」は、消化管を通らずに、いくつかの他の経路、例えば、皮下、筋肉内、髄腔内または静脈内を通ることを意味する。 
【００２６】
本明細書中で使用される用語「処置」は、特異的な疾患また病状と関連のある症状を緩和することおよび／または該症状の防止または除去することを包含する。
【００２７】
本明細書中で使用される用語「抗腫瘍剤」は、新生物疾患を処置するための有用性を持つことが証明された、当業者に既知の薬剤に関する。例えば、抗腫瘍剤には、これらに限定されないが、抗体、毒素群、化学療法剤、酵素、サイトカイン、放射性核種、光力学的剤および血管形成阻害剤が包含される。毒素には、レシチンＡ鎖、変異Pseudomonas菌体外毒素、ジフテリア変性毒素、ストレプトニグリン、ボアマイシン（boamycin）、サポリン（saporin）、ゲロニンおよびヨウシュヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質が包含される。化学療法剤には、５-フルオロウラシル(５-ＦＵ)、ダウノルビシン、シスプラチン、ブレオマイシン、メルファラン、タキソール、タモキシフェン、マイトマイシン-Ｃおよびメトトレキサートが包含される。放射性核種には、放射性金属（radiometal）が包含される。光力学的薬剤は、ポルフィリンおよびそれらの誘導体を包含する。血管形成阻害剤は、当業者には既知であり、天然および合成バイオ分子、例えば、パクリタキセル、Ｏ−(クロロアセチル-カルボミル)フマジロール（fumagillol）(「ＴＮＰ−４７０」または「ＡＧＭ １４７０」)、トロンボスポンジン-１、トロンボスポンジン-２、アンギオスタチン、血管形成のヒト軟骨細胞-誘導阻害剤（塗ＣＨＩＡＭＰ  、軟骨誘導性血管新生阻害剤、血小板ファクター−４、グロベータ、ヒトインターフェロン誘導性タンパク質１０(「ＩＰ１０」)、インターロイキン１２、Ｒｏ318220、トリシクロデカン-９-イル、キサンタン(「Ｄ６０９」)、イルソグラジン（irsogladine）、８,９-ジヒドロキシ-７-メチル-ベンゾ[ｂ]キノリジウム臭化物(「ＧＰＡ １７３４」)、メドロキシプロゲステロン、ヘパリンおよびコルチゾンの組合せ、グルコシダーゼ阻害剤、ゲニステイン、サリドマイド、ジアミノ-アントラキノン、ハービマイシン（herbimycin）、ウルソール酸（ursolic acid）およびオレアノール酸を包含する。
【００２８】
本発明の新規ＶＧＳＣ遮断化合物は、該分子中に１以上の不斉中心を含有する。本発明において、該立体異性を指定しない構造は、全ての各種光学アイソマーに加えてそれらのラセミ混合物を含むものであると解されるべきである。
【００２９】
本願発明
本発明は、新規ナトリウムチャンネル遮断化合物の発見および過度の電位依存性ナトリウムチャンネル活性と関連した疾患を処置するためのそれらの化合物の使用に関する。本発明により、電位依存性ナトリウムチャンネル群のモジュレーターが提供され、該モジュレーターは、一般構造式
【化１】
2005523314.tif 000002
［式中、
Ｒは、Ｃ１-Ｃ１２アルキル、Ｃ２-Ｃ８アルケニル、Ｃ２-Ｃ８アルキニル、-(ＣＨ２)ｍＣＯＯＨ、-(ＣＨ２)ｍＮＨ２、-(ＣＨ２)ｍＣＯＮＨ２、-(ＣＨ２)ｎＣ３-Ｃ６シクロアルキル、-(ＣＨ２)ｐ（ＣＨＯＨ）ＣＯＮＨ２、-(ＣＨ２)ｎ置換されたアリール、-(ＣＨ２)ｐＮＣＨ３(ＣＨ２)ｐ置換されたアリール、-(ＣＨ２)ｎアリールおよび-(ＣＨ２)ｎ−置換された複素環式（式中、ｍは３−８の範囲の整数であり、ｎは０−４の範囲の整数であり、ｐは１-４の範囲の整数である。）からなる群から選択される、
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１-Ｃ８アルキル、-(ＣＨ２)ｎＣＯＯＨ、-(ＣＨ２)ｎＮＨ２、-(ＣＨ２)ｎＮＨ３および-(ＣＨ２)ｎＣＯＮＨＲ１０からなる群から選択され、
Ｒ３は、Ｈ、ヒドロキシ、アミノ、（Ｃ１-Ｃ４）アルコキシ、-ＣＨ２ＯＨおよび-ＣＯＮＨ２、からなる群から選択されるか、または
Ｒ２およびＲ３は、それらが結合している原子と一体となって、所望により置換されたアリールまたは所望により置換された複素環式環を形成し、
Ｒ４およびＲ５は、独立して、Ｈ、ハロ、Ｃ１-Ｃ４アルキル、Ｃ２-Ｃ４アルケニル、Ｃ２-Ｃ４アルキニル、ＣＯＲ１１および（Ｃ１-Ｃ４）アルコキシからなる群から選択され、そして
Ｒ６は、Ｈ、ハロ、Ｃ１-Ｃ８アルキル、アミノ、ヒドロキシ、Ｃ１-Ｃ８アルコキシ、
【化２】
2005523314.tif 000003
（式中、
Ｒ７およびＲ８は、独立して、Ｈ、Ｃ１-Ｃ４アルキル、Ｃ２-Ｃ４アルケニルおよびＣ２-Ｃ４アルキニルからなる群から選択され、そして
Ｒ９はＨであるか、または
Ｒ８およびＲ９は、それらが結合している原子と一体となって、所望により置換された複素環式環を形成する。）からなる群から選択され、そして
Ｒ１０は、ＨおよびＣ１-Ｃ４アルキルからなる群から選択され、
Ｒ１１は、Ｈ、Ｃ１-Ｃ４アルキル、ＮＨ２およびＯＨからなる群から選択される、
但し、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６が、各々Ｈであり、Ｒ２およびＲ３が一体となって複素環式環形成する場合、Ｒは-(ＣＨ２)ｎアリールでない。］によって示される。
【００３０】
ひとつの実施態様において、該化合物は、式Ｉの一般構造式を有し、
式中、Ｒ２およびＲ３は、それらが結合している原子と一体となって、次の構造
【化３】
2005523314.tif 000004
［式中、Ｘは、-ＣＨＲ１２-、-Ｏ−および-ＮＲ１２-からなる群から選択され、
Ｒ１１およびＲ１２は、独立して、Ｈ、ベンジルおよびＣ１-Ｃ４アルキルからなる群から選択される、但し、Ｘが-ＮＨ２-であり、Ｒ１１がＨである場合、Ｒはフェニルでない。］を有する複素環式環を形成する。ある好ましい実施態様において、Ｘは-ＮＲ１２-である。
【００３１】
ひとつの実施態様において、該化合物は、式Ｉの一般構造式を有し、
式中、ＲはＣ１-Ｃ１２アルキル、Ｃ２-Ｃ８アルケニル、Ｃ２-Ｃ８アルキニルからなる群から選択され、Ｒ２およびＲ３は、それらが結合している原子と一体となって、次の構造
【化４】
2005523314.tif 000005
（式中、ｑは１〜２の整数である。）を有する環を形成する。ある好ましい実施態様において、ＲはＣ１-Ｃ１２アルキルであり、qは１であり、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、独立して、Ｈおよびハロからなる群から選択される。
【００３２】
ひとつの実施態様に従って、ナトリウムチャンネル遮断化合物が提供され、該遮断化合物は、次の一般構造式
【化５】
2005523314.tif 000006
［式中、
Ｒは、Ｃ１-Ｃ１２アルキル、Ｃ２-Ｃ８アルケニル、Ｃ２-Ｃ８アルキニル、-(ＣＨ２)ｎＣ３-Ｃ６ シクロアルキル、
【化６】
2005523314.tif 000007
（式中、ｎは０−４の範囲の整数である。）からなる群から選択され、
Ｒ２はＨまたはＣ１-Ｃ４アルキルであり、
Ｒ４およびＲ５は、独立して、Ｈ、ハロ、Ｃ１-Ｃ４アルキル、Ｃ２-Ｃ４アルケニル、Ｃ２-Ｃ４アルキニル、-ＣＯＲ１０および(Ｃ１-Ｃ４)アルコキシからなる群から選択され、
Ｒ６は、Ｈ、ハロ、Ｃ１-Ｃ８アルキル、アミノ、ヒドロキシ、Ｃ１-Ｃ８アルコキシおよび
【化７】
2005523314.tif 000008
（式中、Ｒ７およびＲ８は、独立して、Ｈ、Ｃ１-Ｃ４アルキル、Ｃ２-Ｃ４アルケニルおよびＣ２-Ｃ４アルキニルからなる群から選択され、
Ｒ９はＨであるか、または
Ｒ８およびＲ９が、それらが結合している原子と一体となって、所望により置換された複素環式環を形成する。）からなる群から選択され、そして
Ｒ１０は、Ｈ、Ｃ１-Ｃ４アルキル、ＮＨ２およびＯＨからなる群から選択される。］を有する。
【００３３】
ひとつの実施態様において、ナトリウムチャンネル活性を調節する化合物が提供され、該化合物は、一般構造式：
【化８】
2005523314.tif 000009
［式中、
Ｒは、Ｃ３-Ｃ１０アルキル、
【化９】
2005523314.tif 000010
からなる群から選択され、
Ｒ４およびＲ５は、独立して、Ｈ、ハロ、Ｃ１-Ｃ４アルキルおよび-ＯＣＨ３からなる群から選択され、
Ｒ６は、Ｈ、
【化１０】
2005523314.tif 000011
（式中、ｎは０−４の範囲の整数である。）からなる群から選択される。］によって示される。
【００３４】
ひとつの実施態様に従って、該化合物は式ＩＩＩまたはＩＶの一般構造式を有し、式中、ＲはＣ３−Ｃ９アルキルであり、Ｒ４およびＲ５は、独立してＨまたはメチルであり、Ｒ６は
【化１１】
2005523314.tif 000012
からなる群から選択される。
【００３５】
本発明のひとつの実施態様に従って、一般構造式：
【化１２】
2005523314.tif 000013
［式中、
Ｒは、Ｃ３−Ｃ９アルキル、Ｃ２-Ｃ９アルケニルおよびＣ２-Ｃ９アルキニルからなる群から選択され、
Ｒ４およびＲ５は、独立して、Ｈ、ハロ、Ｃ１-Ｃ４アルキル、Ｃ２-Ｃ４アルケニル、Ｃ２-Ｃ４アルキニルおよび-ＯＣＨ３からなる群から選択され、および
Ｒ６は、Ｈ、ハロ、Ｃ１-Ｃ８アルキル、アミノ、ヒドロキシおよび
【化１３】
2005523314.tif 000014
（式中、ｎは０−４の範囲の整数である。）からなる群から選択される。］によって示される化合物が提供される。ひとつの実施態様に従って、該化合物は、式ＩＩＩまたはＩＶの一般構造式を有し、式中、ＲはＣ３-Ｃ１２アルキルであり、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、独立して、Ｈおよびハロからなる群から選択される。別の実施態様において、該化合物は、式ＩＩＩまたはＩＶの一般構造式を有し、式中、Ｒは、Ｃ３-Ｃ１２アルキルであり、Ｒ４およびＲ５は、独立して、ＨまたはＣ１-Ｃ４アルキルであり、およびＲ６は、
【化１４】
2005523314.tif 000015
からなる群から選択される。
【００３６】
本発明の別の実施態様に従って、一般構造式ＩＩＩまたはＩＶの化合物が提供され、
式中、
Ｒは、
【化１５】
2005523314.tif 000016
であり、Ｒ４およびＲ５は、独立して、Ｈ、ハロ、Ｃ１-Ｃ４アルキルおよび-ＯＣＨ３からなる群から選択され、Ｒ６はＨである。
【００３７】
別の実施態様に従って、本発明の該ナトリウムチャンネル遮断化合物は、一般構造式
【化１６】
2005523314.tif 000017
［式中、
Ｒは、Ｃ１-Ｃ１２アルキル、Ｃ２-Ｃ９アルケニルおよびＣ２-Ｃ９アルキニルからなる群から選択され、
Ｒ３は、ヒドロキシ、アミノ、(Ｃ１−Ｃ４)アルコキシ、-ＣＨ２ＯＨまたは-ＣＯＮＨ２であり、
Ｒ４およびＲ５は、独立して、Ｈおよびハロからなる群から選択され、そして
Ｒ６は、Ｈ、ハロおよび
【化１７】
2005523314.tif 000018
（式中、ｎは０−４の範囲の整数であり、ひとつの実施態様においてｎは１または２である。）からなる群から選択される。］を有する。ある好ましい実施態様において、式ＩＩによって示されるナトリウムチャンネル遮断化合物が提供され、式中、Ｒは、Ｃ１-Ｃ１２アルキルであり、Ｒ３は、ヒドロキシルであり、Ｒ４は、ハロであり、およびＲ５およびＲ６は共にハロまたはＨであり、さらに好ましい実施態様において、該ハロ置換基は、ＦまたはＣｌのいずれかである。別の実施態様において、式ＩＩの一般構造式の化合物が提供され、式中、ＲはＣ５-Ｃ９であり、Ｒ３はヒドロキシルであり、Ｒ４およびＲ５は共にＨであり、Ｒ６はハロであり、より好ましくはＦまたはＣｌである。ひとつの好ましい実施態様において、本発明は、式ＩＩの一般構造式の化合物を指向し、式中、Ｒは-(ＣＨ２)６ＣＨ３であり、Ｒ３はヒドロキシルであり、Ｒ４およびＲ５は共にＨであり、Ｒ６はパラ-Ｆまたはメタ-Ｃｌである。
【００３８】
本発明のひとつの態様は、新生物細胞を標的とし、また転移を阻害する新規方法として、電位依存性ナトリウムチャンネル群の阻害を指向する。いくつかの研究が、前立腺ガン細胞においてナトリウムチャンネルアイソタイプの存在を同定した。２つの高転移性前立腺上皮腫瘍細胞系ＭＡＴ Ｌｙ Ｌｕ(ラット)およびＰＣ-３(ヒト)由来のナトリウムチャンネルｍＲＮＡが完全長の骨格筋型１(ＳｋＭ１)として同定された。イン・シチュ・ハイブリダイゼーションデータから、ｒＳｋＭ１ ｍＲＮＡ発現のレベルおよびパターンは、著しく異なる転移可能性を示すDunning 細胞において違っていることが示唆された。興味深いことに、ｍＲＮＡの同じ型が、ＡＴ ２(ラット)およびＬＮＣａＰ(ヒト)ｐＣａ細胞の低転移性対応細胞においても検出された。Dissら(The Prostate, 48:165-178、2001)は、いくつかの前立腺ガン(ＰＣａ)細胞系におけるナトリウムチャンネルｍＲＮＡの発現プロファイルを決定するために半定量的逆転写ポリメラーゼ連鎖反応法(ＲＴ ＰＣＲ)を用いた。これらの結果は、ＬＮＣａＰ細胞において、４種の異なるＶＧＳＣ遺伝子が９種類の組換え変異体を発現し、一方ＰＣ-３が同じｍＲＮＡの１１種の組換え変異体を有するということを示す。これらの組換え変異体の多くは、ＶＧＳＣの胎児形態をコードする。最近、前立腺ガン細胞が、電位依存性ナトリウムチャンネル（ＶＧＳＣ）を発現し、そして該チャンネルタンパク質の活性が細胞の侵襲性と相関するということが報告された。
【００３９】
ウエスタンブロッティングおよびフローサイトメトリーによるＬＮＣａＰおよびＰＣ-３のヒト前立腺ガン細胞系におけるＶＧＳＣの研究から、このチャンネルがαサブユニットの代表的な２６０ｋｄのタンパク質であることが明らかとなった(Komuro, et al., Science,257:806-809,1992)。全細胞のパッチクランプ技術を用いた電気生理学試験で、このチャンネルによって励起された電流が、６００nmol/Lでテトラドトキシン(ＴＴＸ)によって阻害されたことが示され、このことから、Ｎａ＋チャンネルとして該サブユニットが同定された。さらに、ラット前立腺ガンのDunningモデルから誘導された高転移性（ラット)ｍＡＴ ＬｙＬｕのＰＣ細胞系はＶＧＳＣを発現し、一方低転移性(ラット)ＡＴ ２ＰＣ細胞系では発現しないことが報告された。ＴＴＸによるＮａ＋電流の遮断は、イン・ビトロでのＭＡＴ ＬｙＬｕ細胞の侵襲性を顕著に低下させ、そのことは発現されたチャンネルが転移において機能的役割を果たすことを示唆している。さらに、イン・ビトロでのＭＡＴ ＬｙＬｕ細胞の侵襲性は、特異的なＶＧＳＣ阻害剤であるＴＴＸ６μＭによって５０％まで阻害された。ＴＴＸ暴露(２４時間、６μＭ ＴＴＸ、ＭＡＴ ＬｙＬｕ のインキュベーション)は、また、攻撃的または大きな運動性表現型と関連のあるいくつかの形態的特徴を変化させた（特に、ＴＴＸへの暴露は、細胞突起長および場直径を低下させ、細胞体直径および突起高を増加させた）。
【００４０】
ＴＴＸを用いて得られた結果は、該Ｎａ＋チャンネルがＭＡＴ ＬｙＬｕ細胞の転移可能性を増強するような態様で、それらの形態学的展開を決定づける際に重要な役割を果たし得ることを示唆する。全細胞パッチクランプを用いて、これらチャンネルの電流についてのさらなる特性分析が行われ、該測定電流が多様な他の組織に見いだされるＮａ＋電流と比較された。ＭＡＴ ＬｙＬｕ細胞の流入電流は完全に阻止されたが、Ｎａ＋を含まない溶液において、可逆的であることが示された。このことから、Ｎａ＋が実際に浸透性イオンであったことを確認した。類似データがヒトＰＣａ細胞系から得られた。Boyden chamber アッセイを用いて、ＴＴＸで処理したＰＣ-３細胞は３１％(Ｐ=０.０２)のイン・ビトロの侵襲性の低下を示した。ＰＣ-３細胞の侵襲性におけるＴＴＸ媒介性の低下は、イオンチャンネル・モジュレーターがヒト腫瘍侵襲において重要な機能的役割を果たすことを強く示唆する。しかし、ＴＴＸ(フグ由来)は、生物に対して非常に有毒であるので、医薬組成物のための適当な候補ではない。
【００４１】
近年、Abdulらは、ＰＣａ試料が正常な前立腺と比較して非常に高レベルのナトリウムチャンネル発現を有することを示した(参照、Anticancer Research, 21(3B):2045-8, 2001)。さらに、彼らは、ＶＧＳＣ開放剤［ベラトリン]が増殖を増加させるのに対して、ＶＧＳＣ遮断剤［フルナリジンおよびリルゾール］がマイクロモル範囲でＰＣａ細胞増殖の用量依存的阻害を起こすことも示した。まとめると、これらの研究は、ラットおよびヒト由来の両方のＰＣ細胞系が、これらの細胞系の腫瘍発生挙動の一部分であるＶＧＳＣを発現することを確立している。
【００４２】
本発明のひとつの実施態様に従って、新生物疾患、例えば、前立腺ガンによる苦痛を受けているヒトを包含する恒温脊椎動物対象を処置するための方法を提供するものである。該方法は、一般構造式:
【化１８】
2005523314.tif 000019
［式中、Ｒが、Ｃ１-Ｃ１２アルキル、Ｃ２-Ｃ８アルケニル、Ｃ２-Ｃ８アルキニル、-(ＣＨ２)ｎＣ３-Ｃ６シクロアルキル、
【化１９】
2005523314.tif 000020
（式中、ｎは０−４の範囲の整数である。）からなる群から選択され、
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１-Ｃ８アルキル、-(ＣＨ２)ｎＣＯＯＨ、-(ＣＨ２)ｎＮＨ２、-(ＣＨ２)ｎＮＨＣＨ３および-(ＣＨ２)ｎＣＯＮＨ２からなる群から選択され、
Ｒ４およびＲ５は、独立して、Ｈ、ハロ、Ｃ１-Ｃ４アルキル、Ｃ２-Ｃ４アルケニル、Ｃ２-Ｃ４アルキニル、-ＣＯＲ１１および(Ｃ１-Ｃ４)アルコキシからなる群から選択され、そして
Ｒ６は、Ｈ、ハロ、
【化２０】
2005523314.tif 000021
（式中、Ｒ１１は、Ｈ、Ｃ１-Ｃ４アルキル、ＮＨ２およびＯＨからなる群から選択される。）からなる群から選択される。］によって示されるナトリウムチャンネル遮断化合物を含む、有効量の組成物を、そのような患者に投与する過程を含む。ひとつの好ましい実施態様において、該患者は、式ＩＩＩまたはＩＶの一般構造式［式中、Ｒは、Ｃ１-Ｃ１２アルキルからなる群から選択され、Ｒ２はＨであり、Ｒ４およびＲ５は、独立して、Ｈ、ハロおよびＣ１-Ｃ４アルキルからなる群から選択され、そしてＲ６は、Ｈ、ハロ、
【化２１】
2005523314.tif 000022
（式中、ｎは１または２である。）
からなる群から選択される。］によって示される化合物で処置される。
【００４３】
これらのナトリウムチャンネル遮断化合物は、ガン患者を効果的に処置するために、その他既知の抗腫瘍剤または治療法、例えば化学療法剤または照射治療と組合せ得るか、または連続（conjunction）させて使用され得る。
【００４４】
本発明のひとつの実施態様に従って、不適当なナトリウムチャンネル活性に関連した疾患を処置する手段として、患者における電位依存性ナトリウムチャンネル活性を阻害するための方法が提供される。不適当な活性とは、通常、チャンネル高活性を構成しているものか、または正常にそのチャンネルを発現しない細胞/組織における電位チャンネル変異体の発現を示し得る。現存するナトリウムチャンネル遮断剤は、癲癇、双極性障害、鬱病、疼痛、筋萎縮性側索硬化症および不整脈を包含する多くの疾患を処置するために使用されてきた。本発明のナトリウムチャンネル遮断剤は、神経保護剤(初期障害後の２次的なニューロンの死を防止することを包含する)としてだけでなく、さらにナトリウムチャンネル遮断剤で以前に処理された全ての疾患状態を処置するようなものとして、有用性を持つことが予想される。
【００４５】
ひとつの実施態様に従って、不適当なナトリウムチャンネル活性を特徴とする疾患状態を処置する方法は、次の一般構造式：
【化２２】
2005523314.tif 000023
［式中、Ｒは、Ｃ１-Ｃ１２アルキル、Ｃ２-Ｃ８アルケニル、Ｃ２-Ｃ８アルキニル、-(ＣＨ２)ｎＣ３-Ｃ６シクロアルキル、
【化２３】
2005523314.tif 000024
からなる群から選択され、
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１-Ｃ８アルキル、-(ＣＨ２)ｎＣＯＯＨ、-(ＣＨ２)ｎＮＨ２、-(ＣＨ２)ｎＮＨＣＨ３および-(ＣＨ２)ｎＣＯＮＨ２からなる群から選択され、
Ｒ４およびＲ５は、独立して、Ｈ、ハロ、Ｃ１-Ｃ４アルキル、Ｃ２-Ｃ４アルケニル、Ｃ２-Ｃ４アルキニル、-ＣＯＲ１１および(Ｃ１-Ｃ４)アルコキシからなる群から選択され、そして
Ｒ６は、Ｈ、ハロ、
【化２４】
2005523314.tif 000025
（式中、ｎは０−４の範囲の整数である。）
からなる群から選択され、そして、
Ｒ１１は、Ｈ、Ｃ１-Ｃ４アルキル、ＮＨ２およびＯＨからなる群から選択される。］によって示される化合物を含む組成物を投与する過程を含む。
【００４６】
本明細書中に開示しているように、２つのクラスのナトリウムチャンネル遮断剤は、前立腺ガン細胞増殖の有効な阻害剤であると示されてきた。一般構造式ＩＩＩのヒドロキシアミドおよび一般構造式ＩＶのヒダントインの両方は、イン・ビトロで、アンドロゲン依存性および非依存性細胞系を阻害することが示された。ヒダントインアナログ４４を使用したＰＣ-３細胞中のトリチウム化したチミジン取込みアッセイは、４０μＭ(参照、実施例４に記載の表３)でＤＮＡ合成５５％の阻害を示した。さらに、これらのアナログは、処置２４時間後の細胞生存性に対して、単に微小な影響を示したにすぎなかった(実施例４中の表４)。本発明のナトリウムチャンネル化合物は、数種以上の細胞系で長期増殖アッセイにおいて選択的な増殖阻害も示した。前立腺新生物の発達において、腫瘍初期時から侵襲性癌腫への転換期は、人生の４０および５０代の男性で開始することが多く、何十年にもわたって展開する。この疾患の遷延性進行のため、化学的予防ストラテジーまたは細胞増殖抑制ストラテジーは前立腺ガンの処置において理想的であろう。
【００４７】
本発明のひとつの実施態様に従って、新生物細胞、より具体的にはひとつの実施態様において前立腺ガン細胞、の増殖を阻害するための方法が提供される。該方法は、該細胞を一般構造式
【化２５】
2005523314.tif 000026
［式中、
Ｒは、Ｃ１-Ｃ１２アルキル、Ｃ２-Ｃ８アルケニルおよびＣ２-Ｃ８アルキニルからなる群から選択され、
Ｒ４およびＲ５は、独立して、Ｈ、ハロ、Ｃ１-Ｃ４アルキル、-ＣＯＲ１１および(Ｃ１-Ｃ４)アルコキシからなる群から選択され、
Ｒ６は、Ｈ、ハロ、
【化２６】
2005523314.tif 000027
（式中、Ｒ１１は、Ｈ、Ｃ１-Ｃ４アルキル、ＮＨ２およびＯＨからなる群から選択される。）からなる群から選択される。］によって示される化合物と接触することを含む。ひとつの実施態様において、Ｒは、Ｃ１-Ｃ１２アルキルからなる群から選択され、Ｒ４およびＲ５は、独立して、Ｈ、ハロおよびＣ１-Ｃ４アルキルからなる群から選択され、そして
Ｒ６は、Ｈ、
【化２７】
2005523314.tif 000028
からなる群から選択される。
【００４８】
別の実施態様において、Ｒは、Ｃ１-Ｃ１２アルキル、Ｃ２-Ｃ８アルケニル、Ｃ２-Ｃ８アルキニルからなる群から選択され、Ｒ４およびＲ５は、独立して、Ｈおよびハロからなる群から選択され、そしてＲ６はＨである。これらの化合物は、さらに医薬的に許容し得る担体および他の治療用化合物(例えば、抗腫瘍剤)を組合せて、乳癌、神経膠腫および前立腺ガンを包含する新生物疾患を処置するための治療用医薬組成物を提供することが可能である。
【００４９】
本発明の該ナトリウムチャンネル遮断剤組成物は、経口または非経腸のいずれかで投与されうる。ひとつの実施態様において、該組成物は、注射または移植し得る徐放性型デバイスによって局所投与される。経口的投与の場合、該化合物は、液体溶液、粉末、錠剤、カプセルまたはロゼンジとして投与され得る。該化合物は、１以上の従来の医薬添加物や、錠剤、カプセル、ロゼンジおよび他の経口投与し得る形態の製造の際に使用される賦形剤を組合せて使用され得る。非経腸、より好ましくは静脈注射によって投与される場合、本発明の該ナトリウムチャンネル遮断剤は、生理食塩水溶液および/または従来のＩＶ溶液と混合され得る。
【００５０】
本発明のひとつの実施態様は、本発明の化合物および医薬的に許容し得る担体を含む医薬組成物を目的とする。該医薬的に許容し得る担体は、賦形剤、崩壊剤、結合剤および滑沢剤からなる群の中から選択され得る。投与に適当な医薬剤の量は、標準的な臨床的実務に従う。さらに、該医薬組成物は、既知の抗腫瘍剤をさらに組合せ、また既知の抗腫瘍治療法と連続的に、使用され得る。
【００５１】
実施例１
目的化合物の有機合成 
【化２８】
2005523314.tif 000029
ヒドロキシアミド化合物１−５を、文献の方法に従い、スキームＩに概略を示したように合成した。一般的に、対応するニトリルを、グリニャール試薬の添加によってケトンに変換し、続いて該ケトンを、ＴＭＳＣＮを用いてＴＭＳエーテルに変換した。該ＴＭＳエーテルを、１％のＨＣlを用いてシアノヒドリンに開裂し、対応するシアノヒドリンを濃ＨＣl/ＨＣlガスを用いて、最終生成物に加水分解し、最終化合物を生成させた。ヒダントインアナログ４４および６６を、市販入手し得るケトンからのBucherer Berg反応によって製造した。
【００５２】
スキームＩ
【化２９】
2005523314.tif 000030
【化３０】
2005523314.tif 000031
【００５３】
Sharplessジヒドロキシル化ストラテジーを用いるヒドロキシアミドのエナンチオ選択的合成
本発明の多くの化合物はキラルであり、そのため活性なアナログの多量の各エナンチオマーを製造するためのスキームが望ましい。そのことに留意して、一般的な合成スキーム(スキームＩＩ)を準備し、Ｓ（−)-２を首尾よく合成した。エナンチオ選択的Sharplessジヒドロキシル化ストラテジーを用いて、該アルケン１０９を、ＡＤ mixαまたはβの存在下でジオール１１０に変換した。該キラルジオール１１０を、キラルヒドロキシ酸１１１に酸化し、立体異性を保持したままキラルエナンチオマーに変換した。この方法が、前立腺ガン細胞増殖およびナトリウムチャンネル活性に対して有効性を有することが立証され、この試験において提案されているラセミヒドロキシアミドの全ての他のエナンチオマーを合成するのに適合し得る。
【００５４】
スキームＩＩ
【化３１】
2005523314.tif 000032
【００５５】
Jacobsen Catalyst strategyを用いるヒダントインアナログのエナンチオ選択的合成
ほとんどのヒダントイン化合物もキラルでもあり、そのため、多量の活性なアナログの各エナンチオマーを製造するためのスキームが望ましい。そのことに留意しながら、一般的な合成スキーム(スキームＩＩＩ)を、Ｒ(＋)４４を合成するために準備した。Jacobsen触媒９７を用いて、出発物質としてイミン１３６を用いてキラルヒダントインを合成した。キラルヒダントインアナログを製造するためにJacobsenの触媒を準備するための合成経路およびその触媒の使用を、スキームＩＩＩに示した。この方法が、前立腺ガン細胞増殖およびナトリウムチャンネル活性に対する有効性を有することが立証され、この試験において提案されているラセミヒダントインの全ての他のエナンチオマーを合成するのに適合し得る。
スキームＩＩＩ
【化３２】
2005523314.tif 000033
【化３３】
2005523314.tif 000034
【００５６】
次いで、Jacobsen触媒９７を用いて、キラルヒダントイン(例えばcmp44)を合成した。出発物質はイミン１３６である。
【化３４】
2005523314.tif 000035
ＨＣＮを、Jacobsen触媒(９７)の存在下でエナンチオ選択的にイミン１３６に添加し、続いて１３７の加水分解および脱保護により、キラルアミノ酸１３８を得た。キラルアミノ酸１３８の保護は、Ｆｍｏｃ保護されたアミノ酸１３９を生成する。化合物１３９を、Ｗａｎｇ樹脂上に供し、１４０を得た。ＤＭＦ中でピペリジンによる脱保護およびＫＣＮＯの添加により、ウレイド１４１を生成した。該樹脂からの解離および閉環をＥｔ３Ｎとの反応によって促進し、（＋)または(−)４４を形成する。
【００５７】
さらなる化合物は、次のスキームに従って製造した:
スキームＩＶ
【化３５】
2005523314.tif 000036
【化３６】
2005523314.tif 000037
【００５８】
【化３７】
2005523314.tif 000038
【００５９】
スキームＶＩ
【化３８】
2005523314.tif 000039
【化３９】
2005523314.tif 000040
【００６０】
スキームＶＩＩ
【化４０】
2005523314.tif 000041
【００６１】
本発明において使用するのに適当なさらなる化合物には、次の化合物が包含される。
【化４１】
2005523314.tif 000042
【化４２】
2005523314.tif 000043
(式中、Ｒ３はＨまたはハロであり、ＲはＣ１-Ｃ９アルキルである。)
【００６２】
実施例２
３Ｈ ＢＴＸ Ｂ結合に対する合成化合物の効果
ナトリウムチャンネル活性のモジュレーターのための、化合物のスクリーニングに使用したアッセイは、放射性リガンド３[Ｈ］ＢＴＸ-Ｂアッセイの使用に基づく。ＢＴＸは、チャンネルタンパク質上のサイト２に結合し、その結果、ナトリウムチャンネルに結合するＢＴＸと競合するか、阻害し得る化合物が、潜在的なナトリウムチャンネル阻害剤である。このアッセイは、より厳格な機能的アッセイ、例えば電気生理学により化合物を評価する前にナトリウムチャンネルの結合をプレスクリーンするための有用な手段である。化合物２および４４は、フェニトインと比べて、３Ｈ-ＢＴＸ-Ｂ結合の効果的な阻害を示す (表１を参照する)。
表１：３Ｈ-ＢＴＸ-Ｂ阻害データ
【表１】
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【表２】
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【００６３】
実施例３
電気泳動：ナトリウム電流に対する合成化合物の効果 
いくつかの合成化合物の機能的ナトリウムチャンネル遮断能力を、電気生理学的に測定した。ナトリウムチャンネルアイソフォームを安定に発現するチャイニーズハムスターの卵巣細胞(ＣＨＯ細胞)を用いて、Ｎａｖ１.５、ナトリウム電流を、２５ｍｓ、５ｍＶの過程で、−１２０ｍＶの保持電位から−８０ｍＶ〜＋６０ｍＶの連続した電圧の範囲に励起した。これらの電流−電圧の記録を、薬物の非存在下および存在下および洗浄後において行った。全ての効果は、洗浄で完全に可逆的であり、これは、該化合物が細胞に毒性でなかったことを示唆するものである。表２に、全ての試験化合物について得られたＩＣ５０を列記した。これらの試験結果は、本発明の化合物がＮａチャンネル電流を遮断することを直接的に示すものである。
表２
【表３】
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【００６４】
実施例４
アンドロゲン依存性および非依存性細胞系に対するナトリウムチャンネル遮断剤の効果
該新規ナトリウムチャンネル遮断剤を、転移可能性増大細胞系、ＰＣ-３およびＰＣ-３Ｍ(すでにアンドロゲン非依存性、ＡＩ)、またはアンドロゲン非依存性が増強された転移可能性増大のＬＮＣａＰおよびＣ４-２の対をなす細胞系に対する活性についてアッセイした。ＬＮＣａＰ系およびＰＣ-３誘導体の中間的腫瘍特性を持つ、別のＡＩ細胞系を提供するためにＤＵ１４５を含めた。このストラテジーは、薬剤効果を比較するために、少なくとも３つの異なる遺伝子型の試験を可能にする。幾つかの生物学的アッセイが、これらのナトリウムチャンネルアナログの最初のスクリーニングに使用された。これらの化合物のスクリーニングに使用した最初のアッセイは、ＰＣ-３細胞における３Ｈチミジンの取込みであった。該細胞を、トリプシン処理し、同数の細胞を各ウェルに置き、終夜放置回復させた。次の日に該培地を交換し、該アナログを表３に示した濃度で添加した。アナログ２および該ヒダントインアナログ４４は、試験した全ての用量でフェニトインよりも良好にＤＮＡ合成を阻害した。実際、高濃度のフェニトインでは、試験した全ての用量でアナログ４と同様に刺激性であった。これらのデータから、上記概説した受容体を標的としたスキームによって導き出されたこの設計ストラテジーの期待された成功を確認した。
【００６５】
表３
ＰＣ-３細胞の阻害
【表４】
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【００６６】
新規ナトリウムチャンネル遮断剤が細胞増殖抑制性または細胞毒性阻害剤であるかを決定するために、ＭＴＴを用いて該アナログによるＰＣ-３細胞処置後に試験を行った。これらアッセイにおいて、該ＭＴＴ化合物は、培養物中の生存細胞に取り込まれ、機能的呼吸ミトコンドリアによって不溶性ホルマザン結晶に変換された。次いで、これらの結晶を、ＤＭＳＯまたは酸ＥｔＯＨ中に溶解し、該吸収を５７０ｎＭで測定し、培養物中の生存細胞の相対数を決定した。これらの試験の結果は、該化合物が、２４時間の処置後の細胞の生存に対して殆ど影響しないことを示した。生存性の低下は、試験した最も高い用量の１００μＭで唯一見られた。この用量は、阻害性化合物に対する３０μＭの見かけのＩＣ５０を大幅に超えている。
【００６７】
長期増殖アッセイ(薬物処理７日間)は、観察した効果が安定か一過性かどうかを決定するために開始した。Ｃ４−２細胞を前もって確立された細胞密度に播種し、７日目で飽和に達した。該細胞を、該アナログ(全て４０μＭで)を有する培地交換の前に一晩回復するに任せた。該アッセイを、１、３、５および７日目で停止した。培地交換を、０、２、４および６日目に各時点で添加した新しいアナログを用いて行った。次いで、該細胞を、グルタルアルデヒドで固定し、クリスタルバイオレットで染色した。次いで、該染色を、Sorenson溶液中に溶出し、該吸収を５４０ｎＭで読んだ。Ｃ４−２細胞について代表的な増殖アッセイの結果を図１０に示した。これらの結果は、ヒドロキシアミド化合物１による増殖に関する顕著な阻害を示す。ヒダントインアナログ５は中間的効力を示したが、類似のアナログ６６は対照と効力が識別されず、リドカインの対照について観察されるような穏やかな刺激性であった。ＡＩ、ヒト前立腺ガン細胞系、Ｃ４−２によるこれらの結果は、Ｃ４−２に制限されたものではなかった。これらアッセイを、ＤＵ１４５、ＰＣ-３および対をなす転移細胞系ＰＣ-３Ｍで繰り返した。該データを、直接に細胞：細胞の比較ができるように各細胞系についての７日目のＤＭＳＯ対照について標準化した。これらのデータは、２つの重要な点を示した。第一に、該ヒドロキシアミドアナログ１は、細胞増殖を阻害する日まで試験した全てのＰＣａ細胞系の増殖を、対照の最高値の２０〜２５％まで非常に有効に阻害した。第二に、該ヒダントインクラスのアナログ４４および６６は、増殖の細胞選択的阻害を示す。該ＩＣ５０を、ＰＣａ細胞系(表４)のマッチパネルに対していくつかの我々のチャンネル遮断剤について、５日目の化合物１、２、５および４４について測定した。驚くべきことに、該データは、最も活性なナトリウムチャンネル遮断(化合物１および２対５および４４)を示した化合物が、前立腺ガン細胞増殖の最良の阻害化合物であることを示した。
【００６８】
表４：前立腺ガン細胞増殖に対するナトリウムチャンネル遮断化合物の効果(５日目）
【表５】
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【００６９】
実施例５
ＰＳＡ分泌および細胞移動に対するナトリウムチャンネル遮断の効果
ＰＳＡレベルは、腫瘍進行および負荷を追跡する際に臨床的に重要である。ナトリウムチャンネル遮断化合物１、２および４４(４０μＭで)およびフェニトイン(１００μＭで)を、ＰＣａＣ４−２細胞によってＰＳＡ分泌を抑制する能力について調べた。化合物１および２は、細胞あたり、各々４２.５％および４１.８％、顕著にＰＳＡ分泌を低下させた。フェニトインは、ＰＳＡ分泌（１００μＭで１７.８％)の阻害には有効性は低く、化合物４４は４０μＭで分泌を１４.９％阻害した。驚くべきことに、この傾向は、ナトリウムチャンネルを遮断する能力と細胞増殖に対する効果を反映するものである。さらに、ＰＳＡの低下について化合物１の用量応答曲線から、約１０μＭのＩＣ５０が明らかになり、これは１４.７μＭのナトリウムチャンネルＥＣ５０と一致する。これは、ＰＳＡ分泌経路に対するイオンチャンネルの役割について非常に新しく興味深い問題を提起している。
【００７０】
ソフトアガロースコロニー形成(ＳＡＣＦ)は、３次元(３Ｄ)の半固体培地中に懸濁した細胞を増殖するための技術である。アガロースを用いるこの方法においては、増殖する単層細胞は、接着する基底から剥がれる。ガン細胞の１つの特徴は、基底非依存性の態様で増殖能力である。ソフトアガロース上のコロニー形成は、３Ｄの、基底非依存性の腫瘍増殖をシミュレートする。正常細胞を類似条件下で増殖させた場合、それらは急速なアポトーシスを起こす。これら化合物の腫瘍形成を阻害する潜在的な効果を測定するために、いくつかの化合物をＳＡＣＦによりスクリーニングした。該ナトリウムチャンネル遮断化合物は、フェニトインＩＣ５０のモル等量を用いて試験した場合に、２Ｄ増殖アッセイに見られるものに比べて３Ｄ増殖における阻害活性が増加した。２Ｄ増殖アッセイ(６６.３％および４２.３％阻害)において最良の化合物であった化合物１および２は、フェニトインと比較した場合、３Ｄ増殖において同濃度で約８７.２％および６２％の阻害に増加した。フェニトインと比較した場合に、試験化合物プレートよりも、形成するコロニーが小さいことを強調すべきであろう。ゆえに、コロニー形成の低下は、剪断数（shear numbers）単独で示されるよりも劇的であった。第二に、２Ｄにおいて細胞増殖に対する限界的影響を示した化合物、すなわち化合物２は、ＳＡＣＦを用いると、阻害(フェニトインの４１.５％)が劇的に増強した。これらのデータは、いくつかの化合物が、イン・ビボでの腫瘍増殖を阻害する可能性を示す。興味深いことに、フェニトインそれ自身は、これらの３Ｄアッセイにおいてある意味で阻害剤である。フェニトインは、ＤＭＳＯ／ＥｔＯＨ対照プレートと比較して２５.７％のＳＡＣＦを阻害した。
【００７１】
マウスにおける化合物１の毒性評価
ＮＩＨ（国立衛生研究所）の神経学的疾患および卒中部門との共同研究において、化合物１を、マウスでの急性毒性(表５）について評価した。該データは、化合物１が、この高用量で、短時間（０.５ hrs）のバランス障害を示す３／４の動物を用いて、３００mg/kgまで耐容性があることを明らかにした。化合物１の腹腔内投与による死亡、痙攣または呼吸窮迫症候群の報告はなかった。
【００７２】
まとめると、チミジン取込み、ＭＴＴ、クリスタルバイオレットアッセイ、ＰＳＡ、ソフトアガーコロニー形成およびパッチクランプ法を今日まで用い、本発明の化合物の活性に関する洞察的情報を提供する。さらに、マウスで得られた予備的毒性データから、化合物１は、３０分のバランス障害を伴って３００mg/kgまで耐容性があることが明らかとなった。急性の毒性効果［死亡、心臓発作、運動失調、心筋梗塞（cardiac arrest）または呼吸活動の喪失］は見られなかった。あわせて考えると、これらの予備試験は、２つのクラスの化合物、すなわちヒドロキシアミドおよびヒダントインに向けられ、これらはＰＣａ細胞増殖を活発に阻害する。
【００７３】
表５：回転棒（Rotorod）上のバランス障害についてのマウスにおける化合物１のＮＩＨ評価
【表６】
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ａ．回転棒上でバランス障害を伴うマウス／試験動物の全数＃の数。死亡、痙攣または呼吸障害の報告はない。
ｂ．静脈投与
【図面の簡単な説明】
【００７４】
【図１】図１は、ｒＮａｖ１.２に対するフェニトイン(ＤＨＰ)およびアナログ１、５および４４の効果を示す。
【図１】
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【国際調査報告】
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