(57)【要約】本発明は、痴呆に関連した神経学上の障害の進行を診断しおよび観察する方法であって、そのような疾病を持つ疑いのある患者の痴呆に関連した神経学上の障害の進行を少なくとも１つの細胞接着分子のレベルを決定することによって診断しおよび観察する方法に関するものである。本発明は、また、神経の細胞接着分子に対する抗体に関するものである。【特許請求の範囲】
【請求項１】
痴呆に関連する神経学上の障害の症状を示す患者、および痴呆に関連する神経学上の障害を持つ疑いをかけられた患者における前記痴呆に関連した神経学上の障害を診断する方法において、
ａ）前記患者からサンプルを得、
ｂ）Ｌ１および神経の細胞接着分子（ＮＣＡＭ）から成るグループから選択された少なくとも１つの細胞接着分子のレベルを判断し、
ｃ）前記症状を示す患者における前記痴呆に関連した神経学上の障害を診断する、
工程を有し、前記診断の基礎は、前記判断する工程における前記少なくとも１つの細胞接着分子の判断されたレベルが、前記痴呆に関連する前述の神経学上の障害の症状を示さず、また、前記痴呆に関連する神経学上の傷害を持つ疑いをかけられない患者における前記少なくとも１つの細胞接着分子のレベルより大きいことであることを特徴とする診断方法。
【請求項２】
Ｌ１のレベルが判断されることを特徴とする請求項１に記載の診断方法。
【請求項３】
前記痴呆に関連する神経学上の障害は、血管性痴呆および混合タイプの痴呆から成るグループから選ばれることを特徴とする請求項２に記載の診断方法。
【請求項４】
ＮＣＡＭのレベルが判断されることを特徴とする請求項１に記載の診断方法。
【請求項５】
前記痴呆に関連する神経学上の障害は、アルツハイマー病（ＡＤ）および多発性硬化症（ＭＳ）から成るグループから選ばれることを特徴とする請求項４に記載の診断方法。
【請求項６】
ＬｌとＮＣＡＭの両方のレベルが判断されることを特徴とする請求項１に記載の診断方法。
【請求項７】
前記痴呆に関連する神経学上の障害は、アルツハイマー病（ＡＤ）および多発性硬化症（ＭＳ）から成るグループから選ばれることを特徴とする請求項６に記載の診断方法。
【請求項８】
前記ＮＣＡＭのレベルを判断する工程は、ＮＣＡＭ１４．２抗体を含むことを特徴とする請求項１、４または６に記載の診断方法。
【請求項９】
前記Ｌ１のレベルを判断する工程は、ニューロ４．１抗体を含むことを特徴とする請求項１、２または６に記載の診断方法。
【請求項１０】
痴呆に関連する神経学上の障害の症状を示す患者、および痴呆に関連する神経学上の障害を持つ疑いをかけられた患者における前記痴呆に関連した神経学上の障害の進行を診断する方法において、
ａ）前記患者から第１のサンプルを得、
ｂ）前記第１のサンプルにおいてＬ１および神経の細胞接着分子（ＮＣＡＭ）から成るグループから選択された少なくとも１つの細胞接着分子のレベルを判断し、
ｃ）前記患者から第２のサンプルを得、
ｄ）前記第２のサンプルにおいてＬ１および神経の細胞接着分子（ＮＣＡＭ）から成るグループから選択された少なくとも１つの細胞接着分子のレベルを判断し、
ｅ）前記第１のサンプルにおいてレベルを判断する工程で判断されたレベルを前記第２のサンプルにおいてレベルを判断する工程で判断されたレベルと比較して、前記判断されたレベルの違いを明らかにする、
工程を有し、前記違いが前記患者における前記痴呆に関連した神経学上の障害の進行を示すことを特徴とする診断方法。
【請求項１１】
Ｌ１のレベルが判断されることを特徴とする請求項１０に記載の診断方法。
【請求項１２】
前記痴呆に関連する神経学上の障害は、血管性痴呆および混合タイプの痴呆から成るグループから選ばれることを特徴とする請求項１１に記載の診断方法。
【請求項１３】
ＮＣＡＭのレベルが判断されることを特徴とする請求項１０に記載の診断方法。
【請求項１４】
前記痴呆に関連する神経学上の障害は、アルツハイマー病（ＡＤ）および多発性硬化症（ＭＳ）から成るグループから選ばれることを特徴とする請求項１３に記載の診断方法。
【請求項１５】
ＬｌとＮＣＡＭの両方のレベルが判断されることを特徴とする請求項１０に記載の診断方法。
【請求項１６】
前記痴呆に関連する神経学上の障害は、アルツハイマー病（ＡＤ）および多発性硬化症（ＭＳ）から成るグループから選ばれることを特徴とする請求項１５に記載の診断方法。
【請求項１７】
前記ＮＣＡＭのレベルを判断する工程は、ＮＣＡＭ１４．２抗体を含むことを特徴とする請求項１０、１３または１５に記載の診断方法。
【請求項１８】
前記Ｌ１のレベルを判断する工程は、ニューロ４．１抗体を含むことを特徴とする請求項１０、１１または１５に記載の診断方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、痴呆に関連した神経学上の障害の進行を診断しおよび観察する方法であって、そのような疾病を持つ疑いのある患者の痴呆に関連した神経学上の障害の進行を少なくとも１つの細胞接着分子のレベルを決定することによって診断しおよび観察する方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
アルツハイマー病や他の痴呆の患者数の増加は、一部は人口の全体的な高齢化によっているものの、その病気に冒された個人、それらの介護人、また、健康保険にとって重要な保健上の問題である。これらの疾病は、現在は経験を積んだ臨床医によって診断され、また、治療されているが、それらの発病や重症度を、死ぬ以前に生化学的に測定するものはほとんどない。明らかに、これらの疾病にアクセスするためのより客観的なツールは貴重なものとなりうる。
【０００３】
細胞粘着および認識の分子は、神経系の適切な発達と機能に極めて重要である。これらは総ての脊椎の種において見られ、また、高度に保存されるものである。これらの分子のうちの２つは、ＬｌおよびＮＣＡＭであり、多くのタイプのニューロンおよび膠細胞において見いだされる細胞表面糖タンパク質である。両方の分子とも多数のイソ型を含み、それは、例えば、細胞表面へ付着する仕方、細胞内領域の構造、また、メッセンジャーＲＮＡの代替スプライシングによって生じる、特定のアミノ酸配列の存在あるいは欠如において異なっている。さらに、両方の分子とも、共有結合した炭水化物の量を変化させ、これは立ち代って、それらの結合活性や細胞表面上の他の分子との相互作用に影響を及ぼす。例えば、ＮＣＡＭ分子の中には、高水準の特異な炭水化物、ポリシアル酸を含んだものがあり、それらはＰＳＡ  ＮＣＡＭと呼ばれている。細胞結合の仲介に加え、Ｌ１とＮＣＡＭの両方とも、外的影響からの信号を細胞内の信号伝達路へ伝えることもできる。
【０００４】
それらの生物学上の重要性の故に、Ｌ１およびＮＣＡＭの量および種類は、特に、人間の神経学上の疾病に関係することがある。例えば、Ｌｌの変異は、（ＭＡＳＡ症候群、Ｌｌの中の変位に関連し精神遅滞を特徴とする遺伝病、内転させられた親指、引きずり歩行、失語症と呼ばれている）一般的な発育障害や精神遅滞に関連しており、制度化された人の間の「特発性の」精神遅滞の最も一般的な原因となり得る。Ｌ１、ＮＣＡＭあるいはこれに代わる、ＮＣＡＭのイソ型である組み換えＶＡＳＥ（変異性代替エクソン）のレベルが、統合失調症の人において異なることが見出されている。このレベルは、脳脊髄液（ＣＳＦ）と死後の組織の両方において異なることがある。これらの観察のため、本出願人は、ＣＳＦにおけるＬ１やＮＣＡＭに対する細心で詳細な量的分析を開発してきており、様々な神経学上の疾病におけるそれらの濃度を分析して来ている。両方の分子のレベルは、アルツハイマー病やあるタイプの痴呆で高くなり、多発性硬化症の患者において減少するように見える。
【発明の開示】
【０００５】
本発明は、痴呆に関連する神経学上の障害の進行を診断しおよび／または観察する方法であって、そのような疾病を持つ症状を示し、また、そのような疾病を持っている疑いをかけられた患者における上記障害の進行を診断しおよび／または観察する方法を提供する。この方法は、患者からサンプルを得ること、Ｌｌおよび神経の細胞接着分子（ＮＣＡＭ）から成るグループから選ばれた少なくとも１つの細胞接着分子のレベルを判断すること、および正常な患者と比較しつつ、これら判断したレベルに基づいて診断することを含むものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】
本発明は、痴呆に関連する神経学上の障害を持つ症状を示し、また、そのような疾病を持っている疑いをかけられた患者における痴呆に関連する神経学上の障害を診断する方法を提供する。この方法は、患者からサンプルを得ること、Ｌｌおよび神経の細胞接着分子（ＮＣＡＭ）から成るグループから選ばれた少なくとも１つの細胞接着分子のレベルを判断すること、および正常な患者と比較しつつ、これら判断したレベルに基づいて診断することを含むものである。
【０００７】
本明細書で使用する場合、痴呆に関連した神経学上の障害は、痴呆の存在によって特徴づけられる疾病である。本明細書で使用する場合、「痴呆」は、簡易心理機能検査（ＭＭＳＥ）の点数で定められる痴呆の程度とともに普通の臨床手続きを用いて決定される。簡易心理機能検査は、ホルスタインＭ．Ｆ．、ホルスタインＳ．Ｅ．およびマッキューＰ．Ｒ．、Ｊ.ＰｓｙｃｈｉａｔｒｙＲｅｓ．、１２：１８９−１９８（１９７５）に詳しい。本明細書で使用する場合、痴呆は、軽度から中程度さらに深刻な痴呆に至る、臨床上の痴呆の総ての程度を含む。例えば、ＭＭＳＥの３０から２７点は非痴呆に分類され、２６から２０までの点は軽度の痴呆と判断され、１９から１０までの点は中程度の痴呆と判断され、また、９から０までの点は深刻な痴呆と判断される。痴呆は、本明細書で使用する場合、もちろん非痴呆と分類される点を除いて、ＭＭＳＥの点の範囲の総てを含む。しかし、本明細書で使用する場合の「痴呆」は、ＭＭＳＥの点が存在するか欠如するかによって制限されるものではない。
【０００８】
診断されまたは観察される痴呆に関連した神経学上の障害は、中枢神経系または末梢神経系を侵し、あるいはこれらの神経系によって侵されるあらゆる疾病あるいは状態である。神経学上の障害は、変性的なものか、あるいは非変性的なものである。変性的な神経学上の障害は、中枢神経系あるいは末梢神経系の細胞のあらゆる変性を意味するように用いられる。中枢および末梢神経系の細胞の種類には、それらに制限されないが、ニューロン細胞と膠細胞が含まれる。ニューロンの種類には、それらに制限されないが、後根神経節細胞、双極細胞、錐状体細胞、脊柱の運動神経細胞およびプルキンエ細胞が含まれる。膠細胞の種類には、それらに制限されないが、乏枝神経膠細胞、シュワン細胞および星状細胞が含まれる。さらに、神経系の細胞の変性には、細胞の代謝活性の完全停止（細胞死）または部分的な停止が含まれる。この停止は、自然界におけるアポートシス、すなわち、プログラム化された細胞の死とすることができ、あるいは、変性は、毒性によるあるいは生物学上の細胞の損傷を原因とするような自然界における壊死とすることができる。神経組織変成の疾病の例には、それらには制限されないが、アルツハイマー病、混合タイプの痴呆、パーキンソン病、びまん性レヴィー小体痴呆、多系統萎縮症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、進行性核上麻痺、およびピック病が含まれる。非変性の神経学上の障害の例には、それらに制限されないが、血管性痴呆、多発性硬化症、てんかん、多発性神経障害、正常圧水頭症、精神病、アルコール中毒、大うつ病、腫瘍随伴症の脳症、関節リウマチ、硬膜外血腫、水痘ゾスター神経炎および脊柱の筋萎縮が含まれる。
【０００９】
本明細書で使用される場合、「被検者」もしくは「患者」という用語は、同義的に用いられ、人間を含む動物、好ましくは哺乳動物を意味することを意図したものである。さらに、「患者」は、痴呆に関連した神経学上の障害の症状を示す被検者を含むことをも意図している。症状は、遺伝学的に、表現型の上で、および／または行動的に表現することができる。例えば、痴呆に関連する神経学上の障害を持つ疑いのある被検者は、痴呆に関連する神経学上の障害に遺伝学的に関係している遺伝子突然変異あるいは障害を有することがある。同様に、患者は、神経学上の病気の診断において示すか、あるいはしばしば用いられる、特定のタンパク質あるいは他の合成物を異常なレベルで有することがある。同様に、患者は、神経学上の病気の診断において示すか、あるいはしばしば用いられる、規定された行動上の症状を示すことがある。
【００１０】
本発明の方法は、患者からサンプルを取得することを含む。サンプルには脳脊髄液（ＣＳＦ）が含まれる必要がある。従って、サンプルには、自然に生じているか合成の追加の成分または添加物が含まれていてもよい。または、サンプルは純粋なＣＳＦとすることもできる。ＣＳＦは、それが得られた後、処理することができる。そのような処理の例には、それらには制限されないが、得られたＣＳＦを濃縮すること、薄めること、浄化すること、または混ぜることが含まれる。
【００１１】
本明細書で使用される場合、「取得する」は、それによってサンプルが手に入るあらゆる手段とすることができる。従って、取得するは、患者からのサンプルを収集することおよび／または患者からサンプルを除くことを意味するように用いられる。患者からサンプルを取得する例は、容易に見出すことができ、これには、それらには制限されないが腰椎穿刺処理（脊髄穿刺）が含まれる。さらに、「取得する」は、それ以前にサンプルを有していた別のものからサンプルを受け取ることを意味するように用いることもできる。
【００１２】
本発明は、少なくとも１つの細胞接着分子のレベルを判断することを含む。本明細書で使用される場合、細胞接着分子は、細胞同士の一方から他方への接着に影響を与える分子、すなわち、細胞−細胞接着分子（ＣＡＭｓ）であり、あるいは基板もしくは表面に対する細胞の接着、すなわち、細胞−基板接着分子（ＳＡＭｓ）である。細胞接着分子の主な種類には、インテグリン、セレクチン、カドヘリン、および免疫グロブリン（Ｉｇ）超分子群の一部が含まれる。細胞接着分子の種類のそれぞれには、この技術分野で広く認識された周知のメンバーが含まれる。さらに、新しい細胞接着分子は、いくつかの方法の１つによって特定することができる。この方法には、それらに限定されないが、細胞接着を分離するものとして知られる抗体との相互作用、免疫沈殿、発現ライブラリーから推定されるＣＡＭあるいはＳＡＭのクローニング、タンパク結合測定あるいはタンパク競合測定、小球に対する推定上の細胞接着分子の結合、付着測定、遠心力測定、およびトランスフェクション実験が含まれる。公知の細胞接着分子の例には、それらには制限されないが、Ｅ−カドヘリン、Ｐ−カドヘリン、Ｎ−カドヘリン、Ｂ−カドヘリン、Ｒ−カドヘリン、ＥＰ−カドヘリン、ＯＢ−カドヘリン、Ｍ−カドヘリン、カドヘリン−５、カドヘリン−１２、プロトカドヘリン４３、デスモコリン１、デスモグレイン１、αｌβｌインテグリン、α２βｌインテグリン、α３βｌインテグリン、α４βｌインテグリン、α５βｌインテグリン、αＶβｌインテグリンαＬβ２インテグリン、αＭβ２インテグリン、αＶβ３インテグリン、Ｐ−セレクチン、Ｅ−セレクチン、細胞間にある接着分子１（ＩＣＡＭ１）、ＩＣＡＭ２、神経の細胞接着分子（ＮＣＡＭ）、血小板内皮細胞接着分子（ＰＥＣＡＭ）、血管の接着分子（ＶＣＡＭ）、癌胎児性の接着分子、およびＬ１が含まれる。
【００１３】
本発明の１つの実施形態では、Ｌ１のレベルが、痴呆に関連した神経学上の障害を診断する目的で判断される。他の実施形態では、神経の細胞接着分子（ＮＣＡＭ）のレベルが、痴呆に関連する神経学上の障害を診断する目的で判断される。本発明は、ＮＣＡＭの総てのイソ型について検査することを包み、これには、それらに制限されないが、ＮＣＡＭ１０５−１１５、ＮＣＡＭ−１２０、ＮＣＡＭ−１４０およびＮＣＡＭ−１８０が含まれる。さらに他の実施形態では、Ｌ１とＮＣＡＭ両方のレベルが、痴呆に関連する神経学上の障害を診断する目的で判断される。
【００１４】
少なくとも１つの細胞接着分子のレベルは、本発明の方法で判断される。本明細書で使用される場合、「レベルを判断する」は、量的分析を行なって分析されている特定の細胞接着分子の量を明らかにすることを意味するように使用される。この量は、生の数、絶対的または相対的な量、測定された細胞接着分子の量の間の比率、および内部標準または他の細胞接着分子あるいは分析されるサンプルの他の成分のような測定される値とすることができる。さらに、生データは、「判断されるレベル」に至るより複雑なアルゴリズムにおいて用いられてもよい。さらに、判断されたレベルは、データ点の平均（算術平均、中間値、最頻値）とすることができる。あるいは、判断されたレベルは、ｎ＝ｌから導かれるものとすることもできる。
【００１５】
本発明の方法では、判断されたレベルと他の組みのデータとの比較を必要とする。この追加のデータの組みは、一般に、痴呆に関連する神経学上の障害を持つ症状を示していない、あるいは本明細書に記載されるようなその障害のどのような様相をも持つことが疑われない少なくとも１人の「正常な」個人から導かれる。データの追加の組を、そのとき痴呆に関連する神経学上の障害を持つ疑いをかけられた同じ個人から導いてもよい。あるいは、追加のデータを、異なる正常な個人から導いてもよい。追加のデータは、一人、または２人以上の正常な個人の個体群で判断されるレベルの平均（算術平均、中間値、最頻値）とすることができる。
【００１６】
本明細書に記載の方法を用いて、痴呆に関連する神経学上の障害を持つ疑いをかけられた被検者を診断するために、細胞接着分子の判断されたレベルは正常な個人で見出されるレベルより大きくなければならない。
【００１７】
本発明は、さらに痴呆に関連する神経学上の障害の進行を観察する方法であって、そのような疾病を持つ症状を示し、また、そのような疾病を持つ疑いをかけられた患者におけるその進行を観察する方法を提供する。この方法には、少なくとも２つのサンプルを痴呆に関連する神経学上の障害を持つ疑いをかけられた患者から取得すること、および少なくとも２つのサンプルの各々における、Ｌ１および神経の細胞接着分子（ＮＣＡＭ）から成る群から選択された少なくとも１つの細胞接着分子のレベルを判断することが含まれる。判断されたレベルは相互に比較され、判断された少なくとも２つのレベルのどのような違いも、痴呆に関連する神経学上の障害の進行を示すものとなる。
【００１８】
本明細書で使用される場合、「進行」は、痴呆に関連する神経学上の障害の症状の悪化を意味するように使用される。あるいは、「進行」は、痴呆に関連する神経学上の障害の症状の緩和を意味する場合があり得る。換言すれば、「進行」は本来一時的なものであり、従って、患者の症状の悪化または持続はもとより、患者の症状の改善にも用いられる。
【００１９】
従って、本明細書に記述された、痴呆に関連する神経学上の障害の進行の観察の方法は、痴呆に関連する神経学上の障害の症状または原因に効くようにされた特別の治療規制の効果を観察するために用いることができる。あるいは、この方法は、治療を受けない患者における進行を観察するために用いられてもよい。
【００２０】
痴呆に関連する神経学上の障害の進行の観察には、少なくとも２つの取得されたサンプル中の細胞粘着分子の判断されたレベルを比較することが含まれる。細胞接着分子の判断されたレベルに違いがないことは、患者の状態ないし症状が前回の判断から悪化していないことを示している。しかしながら、時間とともに細胞接着分子の判断されたレベルが増加することは、患者の状態ないし症状が時間とともに悪化しているかもしれないことを示している。あるいは、時間とともに細胞接着分子の判断されたレベルが減少することは、患者の状態ないしは症状が時間とともに改善しているかもしれないことを示している。
【００２１】
判断されたレベルの比較は様々な方法で行うことができる。この方法には、それらに制限されないが、演算減法、判断されたレベルの比率を生成すること、または、より複雑なアルゴリズムで判断されたレベルを用いることが含まれる。比較の方法は、判断されたレベルに存在するどのような違いも強調するものであればよい。
【００２２】
少なくとも１つの実施形態では、本発明は、人のＮＣＡＭに対する単クローン抗体；ＮＣＡＭ１４．２を用いることを含み、それは本発明のどのような方法でも使用することができる。ＮＣＡＭ１４．２抗体は、α２、８−ポリシアル酸を含むＮＣＡＭ（ＰＳＡ−ＮＣＡＭ）のポリペプチドのみならずＮＣＡＭ１０５−１１５、ＮＣＡＭ−１２０、ＮＣＡＭ−１４０、ＮＣＡＭ−１８０を含む、ＮＣＡＭの公知のイソ型の総てを認識することができる。
【００２３】
少なくとも１つの実施形態では、本発明は、人のＬ１に対する単クローン抗体；ニューロ４．１を用いることを含み、それは本発明のどのような方法でも使用することができる。ニューロ４．１抗体は、Ｌ１および蛋白質分解により分割された通常のＬ１の断片を認識することができる。
【００２４】
ＮＣＡＭ１４．２および／またはニューロ４．１抗体は、完全な単クローン抗体あるいはその機能的な断片になることができる。抗体の機能的な断片には、目標抗原を拘束することができる抗体のどのような部分も含まれる。本明細書で使用される場合、「抗体の断片」は、機能的な断片を意味するように使用される。抗体断片は、特に、Ｆ（ａｂ´）２、Ｆａｂ、Ｆaｂ´およびＦｖ断片を含む。これらの断片は、どのような種類の抗体からも生成できるが、典型的にはＩｇＧまたはＩｇＭから生成される。それらは従来の組み換えＤＮＡ技術によって生成でき、あるいはパパインまたはペプシンを備えた蛋白質分解による古典的方法を使用して生成することができる。これは、免疫学における現在の手順、第２章、Ｃｏｌｉｇａｎ等編集（ジョン・ワイリー・アンド・サンズ１９９１−９２）において参照することができる。
【００２５】
本明細書で使用される場合、ＮＣＡＭ１４．２抗体は、抗体あるいはその断片であり、それは、完全に無傷の単クローンＮＣＡＭ１４．２抗体の少なくとも１つのＶＬおよび少なくとも１つのＶＨの鎖を持つ。換言すれば、「ＮＣＡＭ１４．２抗体」には、多重特効抗体あるいは多価抗体の結合部位の少なくとも１つが、短縮していない、ＮＣＡＭ１４．２抗体のＶＬとＶＨの鎖を備えるという条件で、多重特効抗体や多価抗体だけでなくそれらの無傷の抗体およびその断片が含まれる。
【００２６】
本明細書で使用される場合、ニューロ４．１抗体は、抗体あるいはその断片であり、それは、完全に無傷の単クローンニューロ４．１抗体の少なくとも１つのＶＬおよび少なくとも１つのＶＨの鎖を持つ。換言すれば、「ニューロ４．１抗体」には、多重特効抗体あるいは多価抗体の結合部位の少なくとも１つが、短縮していない、ニューロ４．１抗体のＶＬとＶＨの鎖を備えるという条件で、多重特効抗体や多価抗体だけでなくそれらの無傷の抗体およびその断片が含まれる。
【００２７】
「多重特効」が意味するところは、抗体またはそれの断片が、２つの異なる構造を持つ標的の少なくとも２つを同時に拘束することができることである。「多価抗体」が意味するところは、抗体あるいはその断片が１つ以上の標的を拘束することであり、それらは同じ異なる構造を持つものもあれば異なる構造を持つものもある。このように、従って、本発明における抗体には、ＮＣＡＭとＬ１を同時に拘束する抗体またはその断片が含まれる。
【００２８】
Ｆ（ａｂ´）２断片は、典型的には、約１１０ｋＤａ（ＩｇＧ）あるいは約１５０ｋＤａ（ＩｇＭ）であって、ジスルフィド結合によるちょうつがいで結合する２つの抗原結合部位を含んでいる。事実上、Ｆｃ断片の総ては、総てとはいかないまでも、これらの抗原結合部位を持っていない。Ｆａｂ´断片は、典型的には、約５５ｋＤａ（ＩｇＧ）または約７５ｋＤａ（ＩｇＭ）であり、例えば、Ｆ（ａｂ´）２断片のジスルフィド結合を減らすことによって形成することができる。結果として生じる自由なスルフヒドリル基は、Ｆａｂ´断片を検出用試薬（例えば、酵素）や他のＦａｂ´もしくはＦａｂ断片のような、他の分子に結合させるために用いることもできる。
【００２９】
Ｆａｂ断片は、１価で、通常、（どのような出所からのものでも）約５０ｋＤａである。Ｆａｂ断片は、軽い（Ｌ）および重い（Ｈ）鎖を含んでおり、これらの鎖は抗体の抗原結合部分の可変部位（それぞれＶＬおよびＶＨ）と一定部位（それぞれＣＬおよびＣＨ）である。分子内のジスルフィド架橋は、Ｈ部分とＬ部分を連結する。
【００３０】
Ｆｖ断片は、典型的には（出所にかかわらず）約２５ｋＤａであり、軽い鎖および重い鎖（それぞれＶＬおよびＶＨ）の両方の可変部位を含んでいる。通常、ＶＬ鎖とＶＨ鎖は非共有相互作用によってのみ結合する。従って、これらの鎖は容易に分離する。ＶＬおよびＶＨの鎖は、しかしながら、サイズが小さいという利点を持ち、また、同じでないにしても、より大きなＦａｂ断片に類似した結合特性を保持することができる。従って、方法の発展により、例えば、グルタルアルデヒド（あるいは他の化学的架橋剤）、分子間の（システインの取り込みによる）ジスルフィド結合、ペプチド結合物を用いて、ＶＬ鎖とＶＨ鎖は相互に連結される。これによって生じるＦｖは、従って単一の鎖Ｆｖ断片（すなわち、ＳＣＦｖ）である。
【００３１】
あるいは、ＳＣＦｖｓは、組み換え方法によって生成されてもよく、これによって、抗体の異なる出所からの可変鎖を混合し、また、組み合わせることによる、新たな特異性を持ったＦｖｓの生成が可能となる。典型的な方法では、組み換えベクターが規定され、これはカセット部位の発現を進める適切な調節要素を具えたものである。このカセット部位は、融合タンパク質を生成するためのリンカーにの５´および３´末端の両方における都合のよい部位とともに、ペプチドリンカーをコード化するＤＮＡを含むことができる。関係する可変部をコード化するＤＮＡはベクターで複製されて、リンカーを備えた融合タンパク質を形成する。このようにして、ＳＣＦｖを生成することができる。
【００３２】
１つの実施形態では、２つのＦｖｓをコード化するＤＮＡは、リンカーをコード化するＤＮＡにくくることができ、また、これによって生じる三者間の融合は、従来の発現ベクターに直接くくられることもできる。これらの方法のいずれかによって生成されたＳＣＦｖＤＮＡは、選ばれたベクターに応じて、原核細胞または真核細胞で発現するようにすることができる。
【００３３】
本明細書に示される例は、本発明の実施形態のうちのいくつかを示すことを意図したものであり、どのような方法によっても特許請求の範囲が示す範囲を制限することを意図したものではない。
【実施例】
【００３４】
実施例１−患者および脳脊髄液の収集
アルツハイマー疾病（ＡＤ）、血管性痴呆（ＶＤ）、混合タイプ（ＭＴ）の痴呆、びまん性レヴィー小体体痴呆（ＤＬＢＤ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、パーキンソン病（ＰＤ）、大、小のうつ病、多発性硬化症（ＭＳ）、てんかん、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、多発性神経障害（ＰＮＰ）、進行性核上麻痺（ＰＳＰ）、ピック疾病、水頭症、統合失調症、偏執病、硬膜外血腫、頚部の骨軟骨症、帯状ヘルペス感染、脊髄筋萎縮症および腫瘍随伴脳症を含む異なる神経学上の疾病を持った２１８人の患者が、この検討で調べられた。さらに、確認されているどのような神経学上または神経精神病学的な疾病のない正常な対照についても検討した。
【００３５】
臨床診断は、公表されている基準：アルツハイマー疾病および混合タイプの痴呆（ｌ）、血管性痴呆（ｌ６）、多発性硬化症（ｌ７）、多系統萎縮症（ｌ８）、パーキンソン病（ｌ９）、びまん性レヴィー小体痴呆（２０）、または、一般的な神経学上の慣習、例えば、てんかん、筋萎縮性側索硬化症あるいは多発性神経障害に従ってなされた。
【００３６】
痴呆は、標準の臨床手続きおよび簡易心理機能検査（ＭＭＳＥ）（２１）の点数で定まる程度によって診断された。３０から２７点の点数は非痴呆に分類され、２６から２０は軽度の痴呆と分類され、１９から１０は中程度の痴呆と分類され、また、９から０点は深刻な痴呆と分類した。
【００３７】
正常な対照は腰椎せん刺を受け、診断のための脳脊髄液（ＣＳＦ）を収集した。その目的は、例えば、くも膜下出血を除外するためであり、また、中枢神経系または末梢神経系の疾病のどのような兆候もないことを明らかにするためである。また、正常な対照は、タンパク質レベル、アルブミン指数、細胞数、オリゴクローナルバンド、免疫グロブリン、グルコース、乳酸塩、リゾチーム、神経特異エノラーゼおよび銅に関して目立ったところはなかった。
【００３８】
ＣＳＦを、Ｌ４とＬ５の間の腰椎せん刺によって集めた。患者は、せん刺の前２時間は仰臥位にあった。ＣＳＦは、ポリプロピレン・チューブに１ｍｌのごく少量取得され、直ちに冷凍され生化学的診断が行なわれるまで−８０℃で格納された。腰椎せん刺の前には、ヘルシンキ宣言に従いインフォームド・コンセントを得た。また、この検討はハンブルク市の倫理委員会によって承認されたものである。
【００３９】
実施例２−Ｌ１およびＮＣＡＭレベルの測定
本出願人が開発し最適化した、敏感なキャプチャーＥＬＩＳＡは以下のとおりである。：Ｌ１、ＮＣＡＭまたはＰＳＡに対する、浄化された単クローンの「キャプチャー」抗体（１０ｐｇ／ｍｌ）ニューロ４．１．１．３．３、１４．２あるいは７３５は、それぞれピペットで９６−ウエルマイクロプレート（ＮＵＮＣ・Ｉｍｍｕｎｏ・Ｍａｘｉｓｏｒｐ・ＦＢ、ロスキレ、デンマーク）の各々の容器に移され、また、４℃で夜通し培養した。プレートは、その後、ｐＨ７．４で、０．０５％のＴｗｅｅｎ２０を含むリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で５回洗われ、また、ｐＨ７．４のＰＢＳにおける５％の脂肪を含まない粉ミルク（Ｆｌｕｋａ、Ｄｅｉｓｅｎｈｏｆｅｎ、ドイツ）の溶液で、３７℃、１．５時間、遮蔽が行われた。タンパク質基準は、人のＬｌ−Ｆｃ（２から６４ｎｇ／ｍｌ）、人のＮＣＡＭ−Ｆｃ（９から３００ｎｇ／ｍｌ）およびマウスのＰＳＡ−ＮＣＡＭ（１から５０ｎｇ／ｍｌ）であり、一連の２倍稀釈液中の売れ残り溶液から各テストのために新たに準備した。各々の容器には、その後、標準のまたはＣＳＦの（Ｌ１、ＮＣＡＭあるいはＰＳＡそれぞれについて、希釈していない、１：８に希釈された、または１：１５に希釈された）試験サンプルを入れ、室温で１．５時間培養した。「検出用」抗体（１．５μｇ／ｍｌ）（ＮＣＡＭおよびＰＳＡ−ＮＣＡＭの両方を検出するための、Ｌ１の場合の多クーロン性の反ヒトＬ１または多クーロン性の反ヒトＮＣＡＭ３７３１）を、各々の容器に入れ、室温で２０時間培養した。洗浄の後、ペルオキシダーゼ標識が付されたヤギの反ウサギＩｇＧ抗体（０．１６μｇ／ｍｌ）を、各々の容器に加え、室温で１．５時間培養した。ＡＢＴＳ（ロッシュ診断法、マンハイム、ドイツ）は比色定量検知のために加えた。酵素の反応は１．２５％のフッ化ナトリウムで停止され、また、吸光度は４０５ｎｍに測定された。それぞれのＣＳＦサンプルを、光を遮る方法で三重に実施した。標準タンパク質（Ｌｌ−Ｆｃ、ＮＣＡＭ−ＦｃおよびＰＳＡ−ＮＣＡＭ）の対照の組は、総てのマクロタイタープレートに含ませた。ＣＳＦサンプルを総てそれぞれの抗原に対してテストした。
【００４０】
ＥＬＩＳＡで使用されたキャプチャー抗体は、多クローン性の反ヒトＮＣＡＭ抗体３７３１と同様に、単クローンの反ヒトＬ１抗体であるニューロ４．１．１．３、単クローンの反ヒトＮＣＡＭ抗体であるＮＣＡＭ１４．２であり、これらは、ＢＤテクノロジーズ（リサーチ・トライアングルパーク、ノースカロライナ、アメリカ）によって提供されるものである。多クーロン性の反ヒトＬｌ抗体は、ウサギの反ヒトＬｌ−Ｆｃ（Ａｓ研究所株式会社、タルトゥ、エストニア）内に準備した。反−Ｆｃ抗体は、人のＩｇＧセファロースカラム（２２）上の吸収によってウサギの血清から分離した。人のＬｌ−Ｆｃタンパク質および人のＮＣＡＭ−Ｆｃタンパク質を、上述したように生成した（２３、２４）。α２、８−ポリシアル酸（ＰＳＡ）（２５）に対するマウスの単クローン抗体７３５は、リタ・ジェラルディ−シャーン博士（Ｍｅｄｉｚｉｎｉｓｃｈｅ・Ｈｏｃｈｓｃｈｕｌｅ、ハノーバー、ドイツ）から贈られたものである。マウスのＰＳＡ−ＮＣＡＭ−Ｆｃ（２６）は、Ｇ．Ｒｏｕｇｏｎ博士（Ｌａｂｏｒａｔｏｉｒｅ・ｄｅ・Ｇｅｎｅｔｉｑｕｅ・ｅｔ・Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｅ・ｄｕ・Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、ＣＮＲＳ、マルセイユ，フランス）によって提供される、安定して核酸が取り込まれたＴＥ６７１細胞系を用いて生成した。ペルオキシダーゼ標識が付されたヤギの反ウサギＩｇＧ抗体は、Ｄｉａｎｏｖａ（ハンブルク、ドイツ）から得たものである。
【００４１】
実施例３−統計的分析
異なるグループ間の比較は、ノンパラメトリック検定であるクラスカル−ヴァリス・テストを用いて行なった。統計的有意水準はｐ＜０．０５に設定した。痴呆／非痴呆グループおよび神経変性／非神経変性グループ用のＣＳＦパラメータの正規分布は、コルモゴロフ・スミルノフ検定を用いて確認した。不連続な変数におけるグループ間の差は、独立したグループ用スチューデントｔ検定によって診断した。相関性はピアソン積率相関によって分析した。共同変量としての年齢に伴うＡＮＯＶＡは、値が特に年齢によって影響を受けた範囲まで調査するのに用いた。ポスト−ホック分析は、シェフェの方法とともに行った。さらに、本出願人は、独立変数の偏相関の測定を含む多重回帰分析による、Ｌ１、ＮＣＡＭおよびポリシアル酸に対する痴呆、神経変性、性別および年齢の存在の影響を評価した。結果は中間値±標準誤差として表した。
【００４２】
結果
正常な対照（１２．２±０．６ｎｇ／ｍｌ、ｎ＝４６）（図１）と比較した場合、統計分析は、アルツハイマー病（ＡＤ）の患者（１８．２±０．７ｎｇ／ｍｌ、ｎ＝７６）の脳脊髄液（ＣＳＦ）中のＬ１の中間値の増加（ｐ＜０．０００１）を示す。図１Ａでは、水平線はそれぞれ、Ｌ１濃度の中間値を表わしている。図１Ｂは、Ｌ１濃度±標準誤差の中間値を示している。（年齢の相関性を伴った）統計分析は、正常な対照で見出されるレベルと比較して、ＡＤ患者のＣＳＦ中でより高いレベルのＬ１（＊＊＊ｐ＜０．０００１）を示す。同様に、正常な対照と比較された、血管性痴呆（ＶＤ）（１９．６±２．７ｎｇ／ｍｌ、ｎ＝９）および混合タイプの痴呆（ＭＴ）（１７．８±１．８ｎｇ／ｍｌ、ｎ＝８）の患者におけるＬ１レベルが増加（ｐ＜０．０１およびｐ＜０．０５、それぞれ）がある。これらのグループのＣＳＦ中の高いＬ１レベルは、年齢と性別に関係なく観察された。他のグループ：多系統萎縮症（ｎ＝４）、パーキンソン病（ｎ＝６）、びまん性レヴィー小体痴呆（ｎ＝４）、てんかん（ｎ＝１５）、筋萎縮症側索硬化（ｎ＝７）、多発性神経障害（ｎ＝１０）、多発性硬化症（ｎ＝９）は、正常な対照グループと比較して少しの違いも示さなかった。
【００４３】
統計分析は、正常な対照（５５１．３±３３．３ｎｇ／ｍｌ、ｎ＝４６）と比較したとき、ＡＤ患者（８４５．４±３９．７ｎｇ／ｍｌ、ｎ＝７６）のＣＳＦ中におけるＮＣＡＭの中間値（ｐ＜０．０００１）の増加を示す。さらに、ＮＣＡＭのレベルは、正常な対照（図２）と比較して、血管性痴呆（８５２．１±１４６．２、ｎ＝９）および混合タイプの痴呆（９３７．５±１７７．４、ｎ＝８）の患者においてより高かった（ｐ＜０．０５）。図２Ａで、水平線はそれぞれＮＣＡＭ濃度の中間値を表わす。図２Ｂは、ＮＣＡＭ濃度±標準誤差の中間値を示している。ＮＣＡＭ濃度は性別に依存しないが、年齢に相関する。共変数としての年齢について修正されるとき、ＡＤを持った患者のより高いＮＣＡＭ濃度の相関は有意な（ｐ＜０．０５）ままであった。しかしながら、血管性痴呆（ＶＤ）および混合タイプ（ＭＴ）の痴呆の患者を正常な対照と比較した場合、年齢の修正によって、違いはもはや有意なものとはならなかった。ＮＣＡＭのレベルは、正常な対照と比較して、多発性硬化症（３４２．２±１６．７ｎｇ／ｍｌ、ｎ＝９）の患者からのＣＳＦ中で減少した（ｐ＜０．０５）。また、違いは年齢の修正の後でも有意なままであった。
【００４４】
ＣＳＦ中のＰＳＡ−ＮＣＡＭのレベルは、グループ間で異ならなかった（図３）。図３Ａで、水平線はそれぞれ、ＰＳＡ−ＮＣＡＭ濃度の中間値を表わす。図３Ｂは、ＰＳＡ−ＮＣＡＭ濃度±標準誤差の中間値を示している。正常な対照グループ中のＰＳＡ−ＮＣＡＭの濃度の平均は、５６．９±２．８ｎｇ／ｍｌ（ｎ＝４６）であった。
【００４５】
接着分子のレベルが痴呆の総ての形態に関係しているかどうか調査するため、本出願人は、患者が痴呆または非痴呆のグループのどちらかに割り当てられた後に、患者の中のＬ１、ＮＣＡＭおよびＰＳＡ−ＮＣＡＭの濃度をさらに分析した。統計分析で明らかにされたことは、非痴呆グループ（１３．２±０．５ｎｇ／ｍｌ、ｎ＝１０１）と比較したとき、痴呆（１７．２±０．５ｎｇ／ｍｌ、ｎ＝１１７）を持った患者のＣＳＦにおけるＬ１の中間値の増加（ｐ＜０．０００００１）があった（図４Ａ）。これらのグループ中のＬ１濃度は、性別に依存しないが、年齢（ｒ＝０．２８；ｐ＜０．０５）に相関した。しかしながら、共変数（ｐ＜０．００００１）としての年齢について修正した場合、総ての形態の痴呆を持った患者におけるより高いＬ１濃度の相関はそのままであった。
【００４６】
痴呆患者のグループ内で年齢について修正された場合、不連続の変数（段階的回帰）として簡易心理機能検査（ＭＭＳＥ）によって定まるような痴呆の重症度、あるいは患者を、軽度（ｎ＝６８）、中程度（ｎ＝４２）、および重症（ｎ＝７）の痴呆患者のグループに割り当てることと、Ｌ１濃度との相関はなかった（データは不図示）。
【００４７】
しかしながら、非痴呆グループ（６０３．５±２６．０ｎｇ／ｍｌ、ｎ＝１０１）（図４Ｂ）と比較して、痴呆（８３０．３±３３．３ｎｇ／ｍｌ、ｎ＝１１７）を持った患者のＣＳＦにおけるＮＣＡＭ濃度はより高かった（ｐ＜０．００００１）。ＮＣＡＭ濃度は性別に依存しないが、年齢（ｒ＝０．３７；ｐ＜０．０５）に相関した。共変数（ｐ＜０．０５）としての年齢について修正された場合でも、痴呆のより高いＮＣＡＭ濃度の相関がまだ存在した。
【００４８】
痴呆患者のグループ内で年齢について修正が行われた場合、不連続の変数（段階的回帰）としてＭＭＳＥによって定められるような痴呆の程度、また、患者を、軽度（ｎ＝７１）、中程度（ｎ＝４２）、および重症（ｎ＝７）の痴呆患者のグループに割り当てることと、ＮＣＡＭ濃度との相関はなかった。
【００４９】
統計分析によって、痴呆および非痴呆の患者のＣＳＦ中のＰＳＡ−ＮＣＡＭ濃度の違いは明らかにならなかった（図４Ｃ）。痴呆のない患者のＰＳＡ−ＮＣＡＭの平均濃度は、５７．３±１．９ｎｇ／ｍｌ（ｎ＝１０２）であった。一方、痴呆を持った患者の中のＰＳＡ−ＮＣＡＭの平均濃度は、５５．７±１．３ｎｇ／ｍｌ（ｎ＝１１６）であった。ＰＳＡ−ＮＣＡＭの濃度は、性別に依存せず、年齢と関連しなかった。
【００５０】
大多数の患者において、痴呆は神経変性に関係している。従って、本出願人は、中枢神経系中の神経組織変成のプロセスが、高いＬｌおよびＮＣＡＭ濃度と相関するかどうについて調べた。この検討において神経組織変成のものとして分類された条件のグループには、ＡＤ（ｎ＝７６）、混合タイプの痴呆（ｎ＝８）、パーキンソン病（ｎ＝６）、びまん性レヴィー小体痴呆（ｎ＝４）、多系統萎縮症（ｎ＝４）、筋萎縮性側索硬化症（ｎ＝７）、進行性核上麻痺（ｎ＝ｌ）、ピック病（ｎ＝２）が含まれた。また、この検討において非変性的なものとして分類された条件のグループには、血管性痴呆（ｎ＝９）、多発性硬化症（ｎ＝９）、てんかん（ｎ＝１５）、多発性神経障害（ｎ＝１０）、正常圧水頭症（ｎ＝２）、精神病（ｎ＝３）、アルコール中毒（ｎ＝３）、大うつ病（ｎ＝６）、腫瘍随伴脳症（ｎ＝ｌ）、リウマチ関節（ｎ＝ｌ）、硬膜外血腫（ｎ＝２）、水痘ゾスター神経炎（ｎ＝２）、脊柱の筋萎縮（ｎ＝ｌ）および正常な対照（ｎ＝４６）が含まれた。神経組織変成の疾病を持った患者は、非神経組織変成病の患者（１３．５±０．５ｎｇ／ｍｌ、ｎ＝１１０）（図５Ａ）のグループと比較して、ＣＳＦ（１７．３±０．５ｎｇ／ｍｌ、ｎ＝１０８）中の有意なより高いＬ１濃度（ｐ＜０．０００００１）を有していた。この違いは、年齢（ｐ＜０．００１）について修正された場合も有意なままであった。しかしながら、神経組織変成の疾病を持った患者だけを、痴呆のない非神経組織変成病の患者のグループと比較した場合は、違いはもはや有意なものではなかった（データは不図示）。
【００５１】
ＮＣＡＭのレベルは、正常な対照（６０６．９±２６．３ンｇ／ｍｌ、ｎ＝１１０）を含む非神経組織変成病の患者と比較して、神経組織変成の障害（８３７．８±３３．１ｎｇ／ｍｌ、ｎ＝１０８）を持った患者のＣＳＦ中でより高かった（ｐ＜０．０００００１）（図５Ｂ）。この違いは、年齢について修正された場合も、有意な（ｐ＜０．０５）ままであった。示したように、Ｌ１、ＮＣＡＭの値は、神経組織変成の疾病を持った非痴呆の患者と非神経組織変成病の非痴呆患者との間で異なることはなかった。（データは不図示）。
【００５２】
神経組織変成の疾病（５７．３±１．４ｎｇ／ｍｌ）を持った患者のＰＳＡ−ＮＣＡＭの平均濃度は、対照（５５．８±１．９ｎｇ／ｍｌ）を含む非神経組織変成の患者とは統計的に異なっていなかった（図５Ｃ）。
【００５３】
さらに、本出願人は、従属変数としてのＬ１および独立変数としての、年齢、性別、痴呆および神経組織変成の病因に関して逐次重回帰分析を行なった。この逐次分析によって、Ｌｌのレベルに対する、痴呆（ベータ値０．１７５、相関性０．３０）および神経変性（ベータ値０．１６５、相関性０．２９）の有意な影響が確認された（データ不図示）。しかしながら、この分析によって、年齢（ベータ値０．０８５、相関性０．２６）および性別（ベータ値−０．０１、相関性０．０５）がＬ１のレベルに対して有意な影響がないことも示された（データ不図示）。偏相関は、Ｌ１が痴呆（ベータ値０．１４、ｐ＝０．０４９）および神経変性（ベータ値０．１４、ｐ＝０．０４７）によって、ほとんど等しく影響を受ける一方、年齢（ベータ値０．０７、ｐ＝０．３４）および性別（ベータ値−０．０１、相関性０．０５、ｐ＝０．９）の影響を受けないことを示している（データ不図示）。
【００５４】
ＮＣＡＭに関する逐次重回帰分析によって、年齢（ベータ値０．２３、相関性０．３５）および神経変性（ベータ値０．１８、相関性０．３３）の有意な影響が確認された（データ不図示）。しかし、この逐次分析によって、痴呆（ベータ値０．１１２、相関性０．３０）および性別（ベータ値−０．０７、相関性０．０１）がＮＣＡＭのレベルに影響しないことも明らかになった（データ不図示）。この偏相関は、年齢（ベータ値０．２１、ｐ＝０．００４）と神経変性（ベータ値０．１７、ｐ＝０．０２）の方が、痴呆（ベータ値０．１０、ｐ＝０．１８）と性別（ベータ値−０．０７、ｐ＝０．３２）よりもＮＣＡＭに影響を及ぼすことを示している（データ不図示）。
【００５５】
逐次重回帰分析によって、ＰＳＡ−ＮＣＡＭのレベルに対する、年齢、性別、痴呆または神経変性の影響は明らかにならなかった（データ不図示）。
【００５６】
実施例４  ＮＣＡＭ１４．２抗体の生成
坑ＮＣＡＭ単クローン抗体であるＬｅｕｌ９（ベクトン・ディキンソン・アドバンスド・セルラー・バイオロジー、サンホセ、カリフォルニア）を、免疫親和性カラムを用意するのに用いた。人の成人の脳から得たＮＣＡＭを、Ｌｅｕｌ９の親和性カラムを用いた標準的な技術によって浄化した。単クローン抗体を用意するための従来の技術を用いて、ハツカネズミは免疫親和性の浄化されたＮＣＡＭで免疫が与えられ、また、続いてそれらの脾臓細胞はマウス髄腫細胞で浄化され融合された。これによって生じるハイブリドーマは、ＥＬＩＳＡ分析における反応性のためにＮＣＡＭで覆われ、また、ＮＣＡＭの様々な免疫グロブリンドメインを表わす合成ペプチドで再び覆われた。ＮＣＡＭ１４．２を生成するハイブリドーマを、その強い反応性に基づき免疫原でさらに特徴付けるために選択された。ＮＣＡＭ１４．２抗体は、ラニアー、Ｌ．Ｌ等、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１４６：４４２１−４４２６（１９９１）に記戴されており、それは参照によって本明細書に組込まれる。
【００５７】
実施例５  ニューロ４１抗体の生成
単クローン抗体の準備に使用する従来の技術を用いて、ハツカネズミは天然のままの人の脳抽出物によって免疫が与えられ、また、続いて、それらの脾臓細胞はマウス髄腫細胞で浄化され、融合された。これによって生じるハイブリドーマは、ＥＬＩＳＡ分析における反応性ためにＬｌで覆われ、また、Ｌ１の様々な免疫グロブリンドメインを表わす合成ペプチドで再び覆われた。ニューロ４．１を生成するハイブリドーマは、その強い反応性に基づき免疫原でさらに特徴付けるために選択された。ニューロ４．１抗体は、ポルトラック、Ｍ等、実験の神経病学、１３１：２６６−２７２（１９９５）に記戴されており、それは参照によって本明細書にて組込まれる。
【図面の簡単な説明】
【００５８】
【図１】Ａは本明細書で記述された方法を用いて、様々な形の痴呆と診断された人において測定されたＬｌ濃度の範囲を説明するグラフである。具体的には、値（○印）は、アルツハイマー疾病（ＡＤ）、血管性痴呆（ＶＤ）、混合タイプ（ＭＴ）の痴呆、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、パーキンソン病（ＰＤ）、びまん性レヴィー小体痴呆（ＤＬＢＤ）、てんかん、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、多発性神経障害（ＰＮＰ）、多発性硬化症（ＭＳ）および正常な対照（ＮＣ）を持った患者の脳脊髄液（ＣＳＦ）中のＬ１濃度を表わす。それぞれの水平線は、Ｌ１濃度の中間値を示す。ＢはＬ１の濃度±標準誤差の中間値を表している。
【図２】Ａは本明細書で記述された方法を用いて、様々な形の痴呆と診断された人において測定されたＮＣＡＭ濃度の範囲を説明するグラフである。具体的には、値（○印）は、アルツハイマー疾病（ＡＤ）、血管性痴呆（ＶＤ）、混合タイプ（ＭＴ）の痴呆、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、パーキンソン病（ＰＤ）、びまん性レヴィー小体痴呆（ＤＬＢＤ）、てんかん、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、多発性神経障害（ＰＮＰ）、多発性硬化症（ＭＳ）および正常な対照（ＮＣ）を持った患者の脳脊髄液（ＣＳＦ）中のＮＣＡＭ濃度を表わす。それぞれの水平線は、ＮＣＡＭ濃度の中間値を示す。ＢはＮＣＡＭの濃度±標準誤差の中間値を表している。
【図３】Ａは本明細書で記述された方法を用いて、様々な形の痴呆と診断された人において測定されたＰＳＡ−ＮＣＡＭ濃度の範囲を説明するグラフである。具体的には、値（○印）は、アルツハイマー疾病（ＡＤ）、血管性痴呆（ＶＤ）、混合タイプ（ＭＴ）の痴呆、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、パーキンソン病（ＰＤ）、びまん性レヴィー小体痴呆（ＤＬＢＤ）、てんかん、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、多発性神経障害（ＰＮＰ）、多発性硬化症（ＭＳ）および正常な対照（ＮＣ）を持った患者の脳脊髄液（ＣＳＦ）中のＰＳＡ−ＮＣＡＭ濃度を表わす。それぞれの水平線は、ＰＳＡ−ＮＣＡＭ濃度の中間値を示す。ＢはＰＳＡ−ＮＣＡＭの濃度±標準誤差の中間値を表している。
【図４】Ａは痴呆グループおよび非痴呆グループ中のＬ１濃度±標準誤差の中間値を表している。Ｂは痴呆グループおよび非痴呆グループ中のＮＣＡＭ濃度±標準誤差の中間値を表している。Ｃは痴呆グループおよび非痴呆グループ中のＰＳＡ−ＮＣＡＭ濃度±標準誤差の中間値を表している。
【図５】Ａは神経変成障害および非変成疾患の患者のＬ１濃度±標準誤差の中間値を表している。Ｂは神経変成障害および非変成疾患の患者のＮＣＡＭ濃度±標準誤差の中間値を表している。Ｃは神経変成障害および非変成疾患の患者のＰＳＡ−ＮＣＡＭ濃度±標準誤差の中間値を表している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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