【手続補正書】
【提出日】令和2年10月20日(2020.10.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
齧歯類EPO遺伝子座にある内在性齧歯類EPO遺伝子プロモーターに機能的に連結されたヒトEPOタンパク質（hEPO）をコードする核酸配列であって、該機能的連結が、齧歯類EPO遺伝子座における齧歯類EPO遺伝子のヌル変異をもたらす、核酸配列、
齧歯類M-csf遺伝子座にある内在性齧歯類M-csfプロモーターに機能的に連結されたヒトM-CSF（hM-CSF）タンパク質をコードする核酸配列であって、該齧歯類が、齧歯類M-csf遺伝子についてヘテロ接合性ヌルまたはホモ接合性ヌルである、核酸配列、
齧歯類IL-3遺伝子座にある内在性齧歯類IL-3プロモーターに機能的に連結されたヒトIL-3（hIL-3）タンパク質をコードする核酸配列であって、該齧歯類が、齧歯類IL-3遺伝子についてヘテロ接合性ヌルまたはホモ接合性ヌルである、核酸配列、
齧歯類Gm-csf遺伝子座にある内在性齧歯類Gm-csfプロモーターに機能的に連結されたヒトGM-CSF（hGM-CSF）タンパク質をコードする核酸配列であって、該齧歯類が、齧歯類Gm-csf遺伝子についてヘテロ接合性ヌルまたはホモ接合性ヌルである、核酸配列、
齧歯類TPO遺伝子座にある内在性齧歯類TPOプロモーターに機能的に連結されたヒトTPO（hTPO）タンパク質をコードする核酸配列であって、該齧歯類が、齧歯類TPO遺伝子についてヘテロ接合性ヌルまたはホモ接合性ヌルである、核酸配列、ならびに
ヒトSirpa（hSirpa）タンパク質をコードするSIRPaトランスジーンであって、該齧歯類がhSirpaタンパク質を発現する、SIRPaトランスジーン
を含み、かつ免疫不全である、遺伝子改変された齧歯類。
【請求項２】
hEPOをコードする核酸配列を含む対立遺伝子についてヘテロ接合性である、請求項1に記載の齧歯類。
【請求項３】
hEPOをコードする核酸配列を含む対立遺伝子についてホモ接合性である、請求項1に記載の齧歯類。
【請求項４】
hEPOをコードする核酸配列が、ヒトEPOゲノムのコード配列および非コード配列を含む、請求項1〜3のいずれか一項に記載の齧歯類。
【請求項５】
hEPOをコードする核酸配列がヒトEPO cDNA配列を含む、請求項1〜4のいずれか一項に記載の齧歯類。
【請求項６】
hTPOをコードする核酸、hM-csfをコードする核酸、hIL-3をコードする核酸、およびhGm-csfをコードする核酸についてホモ接合性である、請求項1〜5のいずれか一項に記載の齧歯類。
【請求項７】
ヒト造血細胞の生着をさらに含む、請求項1〜6のいずれか一項に記載の齧歯類。
【請求項８】
ヒト造血細胞が、ヒトCD34陽性細胞、ヒト造血幹細胞、ヒト骨髄系前駆細胞、ヒト赤血球前駆細胞、ヒト骨髄系細胞、ヒト樹状細胞、ヒト単球、ヒト顆粒球、ヒト赤血球、ヒト好中球、ヒトマスト細胞、ヒト胸腺細胞、およびヒトBリンパ球からなる群より選択される1種または複数種の細胞を含む、請求項7に記載の齧歯類。
【請求項９】
クロドロン酸を含む、請求項8に記載の齧歯類。
【請求項１０】
赤血球系統のヒト細胞を標的とする病原体による感染をさらに含む、請求項9に記載の齧歯類。
【請求項１１】
病原体が、マラリア原虫（Plasmodium）属の種、バベシア（Babesia）属の種、およびタイレリア（Theileri）属の種より選択される、請求項10に記載の齧歯類。
【請求項１２】
マウスである、請求項1〜11のいずれか一項に記載の齧歯類。
【請求項１３】
以下の工程を含む、赤血球系統のヒト細胞を標的とする病原体による感染を阻害する薬剤を同定する方法：
（a）遺伝子改変された齧歯類へ候補薬剤を投与する工程であって、該齧歯類が、以下：
齧歯類EPO遺伝子座にある内在性齧歯類EPO遺伝子プロモーターに機能的に連結されたヒトEPOタンパク質（hEPO）をコードする核酸配列であって、該機能的連結が、齧歯類EPO遺伝子座における齧歯類EPO遺伝子のヌル変異をもたらす、核酸配列、
齧歯類M-csf遺伝子座にある内在性齧歯類M-csfプロモーターに機能的に連結されたヒトM-CSF（hM-CSF）タンパク質をコードする核酸配列であって、該齧歯類が、齧歯類M-csf遺伝子についてヘテロ接合性ヌルまたはホモ接合性ヌルである、核酸配列、
齧歯類IL-3遺伝子座にある内在性齧歯類IL-3プロモーターに機能的に連結されたヒトIL-3（hIL-3）タンパク質をコードする核酸配列であって、該齧歯類が、齧歯類IL-3遺伝子についてヘテロ接合性ヌルまたはホモ接合性ヌルである、核酸配列、
齧歯類Gm-csf遺伝子座にある内在性齧歯類Gm-csfプロモーターに機能的に連結されたヒトGM-CSF（hGM-CSF）タンパク質をコードする核酸配列であって、該齧歯類が、齧歯類Gm-csf遺伝子についてヘテロ接合性ヌルまたはホモ接合性ヌルである、核酸配列、
齧歯類TPO遺伝子座にある内在性齧歯類TPOプロモーターに機能的に連結されたヒトTPO（hTPO）タンパク質をコードする核酸配列であって、該齧歯類が、齧歯類TPO遺伝子についてヘテロ接合性ヌルまたはホモ接合性ヌルである、核酸配列、
ヒトSirpa（hSirpa）タンパク質をコードするSIRPaトランスジーンであって、該齧歯類がhSirpaタンパク質を発現する、SIRPaトランスジーン、
ヒト造血細胞の生着、ならびに
赤血球系統のヒト細胞を標的とする病原体による感染
を含み、かつ該遺伝子改変された齧歯類が免疫不全である、工程；
（b）薬剤が、工程（a）の病原体に感染した齧歯類における病原体の量を低下させるか否かを決定する工程；ならびに
（c）病原体に感染した齧歯類における病原体の量を低下させる薬剤を、赤血球系統のヒト細胞を標的とする病原体による感染を阻害する薬剤として同定する工程。
【請求項１４】
以下の工程を含む、赤血球系統のヒト細胞を標的とする病原体による感染を防止する薬剤を同定する方法：
（a）遺伝子改変された齧歯類をクロドロン酸と接触させる工程であって、該齧歯類が、以下：
齧歯類EPO遺伝子座にある内在性齧歯類EPO遺伝子プロモーターに機能的に連結されたヒトEPOタンパク質（hEPO）をコードする核酸配列であって、該機能的連結が、齧歯類EPO遺伝子座における齧歯類EPO遺伝子のヌル変異をもたらす、核酸配列、
齧歯類M-csf遺伝子座にある内在性齧歯類M-csfプロモーターに機能的に連結されたヒトM-CSF（hM-CSF）タンパク質をコードする核酸配列であって、該齧歯類が、齧歯類M-csf遺伝子についてヘテロ接合性ヌルまたはホモ接合性ヌルである、核酸配列、
齧歯類IL-3遺伝子座にある内在性齧歯類IL-3プロモーターに機能的に連結されたヒトIL-3（hIL-3）タンパク質をコードする核酸配列であって、該齧歯類が、齧歯類IL-3遺伝子についてヘテロ接合性ヌルまたはホモ接合性ヌルである、核酸配列、
齧歯類Gm-csf遺伝子座にある内在性齧歯類Gm-csfプロモーターに機能的に連結されたヒトGM-CSF（hGM-CSF）タンパク質をコードする核酸配列であって、該齧歯類が、齧歯類Gm-csf遺伝子についてヘテロ接合性ヌルまたはホモ接合性ヌルである、核酸配列、
齧歯類TPO遺伝子座にある内在性齧歯類TPOプロモーターに機能的に連結されたヒトTPO（hTPO）タンパク質をコードする核酸配列であって、該齧歯類が、齧歯類TPO遺伝子についてヘテロ接合性ヌルまたはホモ接合性ヌルである、核酸配列、
ヒトSirpa（hSirpa）タンパク質をコードするSIRPaトランスジーンであって、該齧歯類がhSirpaタンパク質を発現する、SIRPaトランスジーン、ならびに
ヒト造血細胞の生着
を含み、該遺伝子改変された齧歯類が免疫不全である、工程；
（b）工程（a）の遺伝子改変された齧歯類へ候補薬剤を投与する工程；
（c）工程（a）の遺伝子改変された齧歯類へ、寄生された網状赤血球または赤血球を注入する工程；
（d）薬剤が、工程（a）の齧歯類の、ヒト網状赤血球および／または赤血球の感染を防止するか否かを決定する工程；ならびに
（e）工程（a）の齧歯類の、ヒト網状赤血球および／または赤血球の感染を防止する薬剤を、赤血球系統のヒト細胞を標的とする病原体による感染を防止する薬剤として同定する工程。
【請求項１５】
齧歯類が、hEPOをコードする核酸配列を含む対立遺伝子についてヘテロ接合性である、請求項13または14に記載の方法。
【請求項１６】
齧歯類が、hEPOをコードする核酸配列を含む対立遺伝子についてホモ接合性である、請求項13または14に記載の方法。
【請求項１７】
hEPOをコードする核酸配列が、ヒトEPOゲノムのコード配列および非コード配列を含む、請求項13〜16のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
hEPOをコードする核酸配列がヒトEPO cDNA配列を含む、請求項13〜16のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
齧歯類が、hTPOをコードする核酸、hM-csfをコードする核酸、hIL-3をコードする核酸、およびhGm-csfをコードする核酸配列についてホモ接合性である、請求項13〜18のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
ヒト造血細胞が、ヒトCD34陽性細胞、ヒト造血幹細胞、ヒト骨髄系前駆細胞、ヒト赤血球前駆細胞、ヒト骨髄系細胞、ヒト樹状細胞、ヒト単球、ヒト顆粒球、ヒト赤血球、ヒト好中球、ヒトマスト細胞、ヒト胸腺細胞、およびヒトBリンパ球からなる群より選択される1種または複数種の細胞を含む、請求項13〜19のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
病原体が、プラスモディウム属の種、バベシア属の種、およびタイレリア属の種より選択される、請求項13〜20のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
病原体がプラスモディウム属の種であり、プラスモディウム属の種が熱帯熱マラリア原虫（P.falciparum）および三日熱マラリア原虫（P.vivax）より選択される、請求項21に記載の方法。
【請求項２３】
齧歯類がマウスである、請求項13〜22のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
以下の工程を含む、ヒト造血系を含む齧歯類を作製する方法：
請求項1〜6のいずれか一項に記載の遺伝子改変齧歯類へ、ヒト造血始原細胞を含む細胞の集団を移植する工程。
【請求項２５】
移植する工程が、尾静脈注入、胎児肝臓注入、または後眼窩注入を含む、請求項24に記載の方法。
【請求項２６】
遺伝子改変齧歯類が、移植前に致死線量未満の照射を受ける、請求項24または25に記載の方法。
【請求項２７】
ヒト造血始原細胞がCD34+細胞である、請求項24〜26のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
ヒト造血始原細胞が、胎児肝臓、成人骨髄、または臍帯血に由来する、請求項24〜27のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
齧歯類がマウスである、請求項24〜28のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
以下の工程を含む、赤血球系統のヒト細胞を標的とするヒト病原体に感染した齧歯類を作製する方法：
請求項1〜6のいずれか一項に記載の遺伝的改変齧歯類へ、ヒト造血始原細胞を含む細胞の集団を移植する工程；
クロドロン酸を齧歯類へ注入する工程；および
寄生されたヒト赤血球（PRBC）を齧歯類へ注入する工程。
【請求項３１】
健常ヒト赤血球を齧歯類へ注入する工程をさらに含む、請求項30に記載の方法。
【請求項３２】
寄生虫が、プラスモディウム属の種、バベシア属の種、およびタイレリア属の種より選択される、請求項30に記載の方法。
【請求項３３】
寄生虫がプラスモディウム属の種であり、プラスモディウム属の種が熱帯熱マラリア原虫および三日熱マラリア原虫より選択される、請求項32に記載の方法。
【請求項３４】
齧歯類がマウスである、請求項30〜33のいずれか一項に記載の方法。