【手続補正書】
【提出日】令和1年12月9日(2019.12.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
核外輸送配列を含むＨＳＶ−ＴＫポリヌクレオチドを含む遺伝子療法レトロウイルス粒子を含む組成物であって、病変を有し、遺伝子療法治療から恩恵を受けることができる患者を同定するために用いられる組成物において、ＨＳＶ−ＴＫポリヌクレオチドは、アミノ酸残基３２および３３において、ならびにアミノ酸残基２５、２６または１６８の少なくとも一残基において突然変異を含むＨＳＶ−ＴＫの突然変異形態をコードし、アミノ酸残基は配列番号２の３２位、３３位、２５位、２６位および１６８位に対応し、アミノ酸残基３２および３３はそれぞれ独立して、グリシン、セリンおよびグルタミン酸からなる群から選択されるアミノ酸に突然変異し、該同定が、
ａ）患者に、核外輸送配列を含むＨＳＶ−ＴＫポリヌクレオチドを含む遺伝子療法レトロウイルス粒子を投与すること、
ｂ）患者に、放射活性トレーサーに付着しているＨＳＶ−ＴＫの基質を投与すること、
ｃ）患者中に存在する放射活性シグナルの相対量および位置を測定することと、および
ｄ）患者における病変の位置を決定すること
を含み、（ｉ）放射活性シグナルの位置が、患者の工程（ｄ）において測定された病変の位置と相関し、（ｉｉ）特定の閾値を上回る放射活性シグナルを有する患者が、遺伝子療法治療から恩恵を受けることができると同定され、ＨＳＶ−ＴＫの突然変異形態をコードするＨＳＶ−ＴＫポリヌクレオチドを含む遺伝子療法レトロウイルス粒子が病変を治療することを含む、組成物。
【請求項２】
核外輸送配列を含むＨＳＶ−ＴＫポリヌクレオチドを含む遺伝子療法レトロウイルス粒子を含む組成物であって、病変の治療を必要とし、遺伝子療法治療から恩恵を受けることができる患者を同定するために用いられる組成物において、ＨＳＶ−ＴＫポリヌクレオチドは、アミノ酸残基３２および３３において、ならびにアミノ酸残基２５、２６または１６８の少なくとも一残基において突然変異を含むＨＳＶ−ＴＫの突然変異形態をコードし、アミノ酸残基は配列番号２の３２位、３３位、２５位、２６位および１６８位に対応し、アミノ酸残基３２および３３はそれぞれ独立して、グリシン、セリンおよびグルタミン酸からなる群から選択されるアミノ酸に突然変異し、該同定が、
ａ）患者に、核外輸送配列を含むＨＳＶ−ＴＫポリヌクレオチドを含む遺伝子療法レトロウイルス粒子を投与し、患者から得た細胞を、ＨＳＶ−ＴＫをコードするポリヌクレオチドを用いて形質導入すること、
ｂ）細胞を、放射活性トレーサーに付着しているＨＳＶ−ＴＫの基質を用いて処理すること、
ｃ）標的組織中に存在する放射活性トレーサーからのシグナルの相対量および位置を測定すること、
ｄ）放射活性トレーサーからのシグナルのレベルが、閾値を上回るかを同定すること、
ｅ）患者における病変の位置を決定すること、および
ｆ）工程（ａ）のＨＳＶ−ＴＫの突然変異形態をコードするＨＳＶ−ＴＫポリヌクレオチドを含む遺伝子療法レトロウイルス粒子を患者に再投与することにより、測定された放射活性シグナルが、閾値を上回り、工程（ｅ）において測定された病変の位置に位置する病変の細胞を殺すこと
を含む、組成物。
【請求項３】
核外輸送配列を含むＨＳＶ−ＴＫポリヌクレオチドを含む遺伝子療法レトロウイルス粒子を含む組成物であって、形質導入されたＨＳＶ−ＴＫの酵素活性を測定するために用いられる組成物において、ＨＳＶ−ＴＫポリヌクレオチドは、アミノ酸残基３２および３３において、ならびにアミノ酸残基２５、２６または１６８の少なくとも一残基において突然変異を含むＨＳＶ−ＴＫの突然変異形態をコードし、アミノ酸残基は配列番号２の３２位、３３位、２５位、２６位および１６８位に対応し、アミノ酸残基３２および３３はそれぞれ独立して、グリシン、セリンおよびグルタミン酸からなる群から選択されるアミノ酸に突然変異し、該測定が、
ａ）患者に、核外輸送配列を含むＨＳＶ−ＴＫポリヌクレオチドを含む遺伝子療法レトロウイルス粒子を投与し、患者から得た細胞を、ＨＳＶ−ＴＫをコードするポリヌクレオチドを用いて形質導入すること、
ｂ）細胞を、放射活性トレーサーに付着しているＨＳＶ−ＴＫの基質を用いて処理すること、および
ｃ）標的組織中に存在する放射活性トレーサーからのシグナルの相対量を測定すること、ここで、該標的組織は閾値を上回る放射活性シグナルを有する、
を含む、組成物。
【請求項４】
ＨＳＶ−ＴＫの基質が、ＦＨＢＧ（９−［４−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル］グアニン）、ＦＨＰＧ（９−（［３−フルオロ−１−ヒドロキシ−２−プロポキシ］メチル）グアニン）、ＦＧＣＶ（フルオロガンシクロビル）、ＦＰＣＶ（フルオロペンシクロビル）、ＦＩＡＵ（１−（２’−デオキシ−２’−フルオロ−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−ヨードウラシル）、ＦＥＡＵ（フルオロ−５−エチル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルウラシル）、ＦＭＡＵ（フルオロ−５−メチル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルウラシル）、ＦＨＯＭＰ（６−（（１−フルオロ−３−ヒドロキシプロパン−２−イルオキシ）メチル）−５−メチルピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン）、ガンシクロビル、バルガンシクロビル、アシクロビル、バラシクロビル、ペンシクロビル、放射標識された、Ｎ−１に４−ヒドロキシ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル側鎖を有するピリミジン（ＨＨＧ−５−ＦＥＰ）、および２，３−ジヒドロキシプロピル、アシクロビル−、ガンシクロビル−またはペンシクロビル−様側鎖を有する、５−（２−ヒドロキシエチル）−または５−（３−ヒドロキシプロピル）置換ピリミジン誘導体からなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
ＨＳＶ−ＴＫの基質が、ＦＨＢＧ（９−（４−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル］グアニン）である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
放射活性トレーサーが、１８Ｆ、６４Ｃｕ、９９ｍＴｅ、１１Ｃ、１４Ｃ、１２４Ｉ、１２３Ｉ、１３１Ｉ、１５Ｏ、１３Ｎおよび／または８２ＲｂＣｌである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
放射活性トレーサーが１８Ｆである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
ＨＳＶ−ＴＫ基質が、［１８Ｆ］ＦＨＢＧ（９−［４−１８Ｆ−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル］グアニン）である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
放射活性トレーサーシグナルが、陽電子放射型断層撮影（ＰＥＴ）スキャニングを使用して測定される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
陽電子放射型断層撮影（ＰＥＴ）スキャニングを使用して放射活性シグナルが測定されたときに、閾値レベルが、少なくとも２．０ＳＵＶ（標準化取り込み値）を上回るか、またはバックグラウンドを少なくとも２０％上回る、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
陽電子放射型断層撮影（ＰＥＴ）スキャニングを使用して放射活性シグナルが測定されたときに、閾値レベルが、１．０ＳＵＶと３．０ＳＵＶの間であるか、またはバックグラウンドを２０％〜４０％の間上回る、請求項９に記載の組成物。
【請求項１２】
さらに病変を有する患者を治療するために用いられる、請求項１または３に記載の組成物。
【請求項１３】
遺伝子療法レトロウイルス粒子が、第２の治療用ポリヌクレオチドを含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項１４】
突然変異が、Ａ１６８Ｈである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
核外輸送配列（ＮＥＳ）が、発現されるＨＳＶ−ＴＫの突然変異形態のアミノ末端にかまたはその付近に位置する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１６】
ＨＳＶ−ＴＫポリヌクレオチドが、配列番号１８である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
遺伝子療法レトロウイルス粒子が、ウイルスエンベロープで発現されるターゲッティングタンパク質をコードするポリヌクレオチドをさらに含む、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
ターゲッティングタンパク質が、コラーゲン、ラミニン、フィブロネクチン、エラスチン、グリコサミノグリカン、プロテオグリカンまたはＲＧＤと結合する、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
ターゲッティングタンパク質が、コラーゲンと結合する、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２０】
ターゲッティングタンパク質が、配列番号２５である、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
ＨＳＶ−ＴＫポリヌクレオチドは、アミノ酸残基３２および３３において、ならびにアミノ酸残基２５または２６の少なくとも一残基において突然変異を含むＨＳＶ−ＴＫの突然変異形態をコードし、アミノ酸残基は配列番号２の３２位、３３位、２５位、および２６位に対応する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２２】
ＨＳＶ−ＴＫポリヌクレオチドは、アミノ酸残基３２、３３および１６８の突然変異を含むＨＳＶ−ＴＫの突然変異形態をコードし、アミノ酸残基は配列番号２の３２位、３３位、および１６８位に対応する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２３】
アミノ酸残基２５および２６は、グリシン、セリンおよびグルタミン酸からなる群から選択されるアミノ酸に突然変異する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２４】
アミノ酸残基１６８は、ヒスチジン、リシン、システイン、セリンおよびフェニルアラニンからなる群から選択されるアミノ酸に突然変異する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
いくつかの実施形態では、ＨＳＶ−ＴＫの基質は、ＦＨＢＧ（９−［４−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル］グアニン）、ＦＨＰＧ（９−（［３−フルオロ−１−ヒドロキシ−２−プロポキシ］メチル）グアニン）、ＦＧＣＶ（フルオロガンシクロビル）、ＦＰＣＶ（フルオロペンシクロビル）、ＦＩＡＵ（１−（２’−デオキシ−２’−フルオロ−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−ヨードウラシル）、ＦＥＡＵ（フルオロ−５−エチル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルウラシル）、ＦＭＡＵ（フルオロ−５−メチル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルウラシル）、ＦＨＯＭＰ（６−（（１−フルオロ−３−ヒドロキシプロパン−２−イルオキシ）メチル）−５−メチルピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン）、ガンシクロビル、バルガンシクロビル、アシクロビル、バラシクロビル、ペンシクロビル、放射標識された、Ｎ−１に４−ヒドロキシ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル側鎖を有するピリミジン（ＨＨＧ−５−ＦＥＰ）、および２，３−ジヒドロキシプロピル、アシクロビル−、ガンシクロビル−またはペンシクロビル−様側鎖を有する、５−（２−ヒドロキシエチル）−または５−（３−ヒドロキシプロピル）置換ピリミジン誘導体からなる群から選択される。なお他の実施形態では、ＨＳＶ−ＴＫの基質は、ＦＨＢＧ（９−（４−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル］グアニン）である。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
なお他の実施形態では、チミジンキナーゼ遺伝子療法コンストラクトの投与後に、対象または患者において放射性トレーサーシグナルのレベルを決定し、トレーサーシグナルのレベルが指定の閾値を上回る場合に、遺伝子療法コンストラクトを用いる治療のための対象または患者を選択するための方法および組成物が、本明細書において提供される。いくつかの実施形態では、トレーサーは、放射活性トレーサーである。他の実施形態では、放射活性トレーサー元素は、１８Ｆ、６４Ｃｕ、９９ｍＴｅ、１１Ｃ、１４Ｃ、１２４Ｉ、１２３Ｉ、１３１Ｉ、１５Ｏ、１３Ｎおよび／または８２ＲｂＣｌである。なお他の実施形態では、放射活性トレーサー元素は、ヌクレオシドまたは合成ヌクレオシド標的と連結されて、放射活性標識を形成する。いくつかの実施形態では、ヌクレオシド標的は、ＦＨＢＧ（９−［４−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル］グアニン）、ＦＨＰＧ（９−（［３−フルオロ−１−ヒドロキシ−２−プロポキシ］メチル）グアニン）、ＦＧＣＶ（フルオロガンシクロビル）、ＦＰＣＶ（フルオロペンシクロビル）、ＦＩＡＵ（１−（２’−デオキシ−２’−フルオロ−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−ヨードウラシル）、ＦＥＡＵ（フルオロ−５−エチル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルウラシル）、ＦＭＡＵ（フルオロ−５−メチル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルウラシル）、ＦＨＯＭＰ（６−（（１−フルオロ−３−ヒドロキシプロパン−２−イルオキシ）メチル）−５−メチルピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン）、ガンシクロビル、バル−ガンシクロビル、アシクロビル、バル−アシクロビル（val-acivlovir）、ペンシクロビル、放射標識された、Ｎ−１に４−ヒドロキシ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル側鎖を有するピリミジン（ＨＨＧ−５−ＦＥＰ）、および２，３−ジヒドロキシプロピル、アシクロビル−、ガンシクロビル−またはペンシクロビル−様側鎖を有する、５−（２−ヒドロキシエチル）−または５−（３−ヒドロキシプロピル）置換ピリミジン誘導体である。好ましくは、放射活性標識は、［１８Ｆ］ＦＨＢＧ（９−（４−１８Ｆ−フルオロ−３−［ヒドロキシメチル］ブチル）グアニン）である。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
ＨＳＶ−ＴＫ−ＦＨＢＧ（９−［４−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル］グアニン）、ＦＨＰＧ（９−（［３−フルオロ−１−ヒドロキシ−２−プロポキシ］メチル）グアニン）、ＦＧＣＶ（フルオロガンシクロビル）、ＦＰＣＶ（フルオロペンシクロビル）、ＦＩＡＵ（１−（２’−デオキシ−２’−フルオロ−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−ヨードウラシル）、ＦＥＡＵ（フルオロ−５−エチル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルウラシル）、ＦＭＡＵ（フルオロ−５−メチル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルウラシル）、ＦＨＯＭＰ（６−（（１−フルオロ−３−ヒドロキシプロパン−２−イルオキシ）メチル）−５−メチルピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン）、ガンシクロビル、バル−ガンシクロビル、アシクロビル、バル−アシクロビル（val-acivlovir）、ペンシクロビル、放射標識された、Ｎ−１に４−ヒドロキシ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル側鎖を有するピリミジン（ＨＨＧ−５−ＦＥＰ）、および２，３−ジヒドロキシプロピル、アシクロビル−様、ガンシクロビル−様またはペンシクロビル−様側鎖を有する、５−（２−ヒドロキシエチル）−または５−（３−ヒドロキシプロピル）置換ピリミジン誘導体媒介性バイスタンダー効果を測定する方法が本明細書において提供され、方法は、ａ）ＨＳＶ−ＴＫおよび第１の蛍光タンパク質をコードするポリヌクレオチドを用いて細胞を形質導入することと、ｂ）第１の蛍光または生物発光タンパク質と光学的に識別可能である、第２のまたは生物発光タンパク質をコードするポリヌクレオチドを用いて細胞を形質導入することと、ｃ）ＨＳＶ−ＴＫによってリン酸化されていると細胞傷害性になる薬剤を用いて細胞を処理することと、ｄ）第１の蛍光タンパク質と第２の蛍光タンパク質の発現の相対量を測定することとを含む。一実施形態では、工程ｄ）は、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｐｌａｔｅリーダー、蛍光光度計、蛍光活性化セルソーター（ＦＡＣＳ）、セロメーターまたは分光光度計を含む。別の実施形態では、工程ｄ）は、対象においてインビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）で第２の蛍光または生物発光タンパク質の蛍光結果を測定することを含む。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３４】
なお他の実施形態では、チミジンキナーゼ遺伝子療法ベクターの投与後に、対象または患者において放射性トレーサーシグナルのレベルを決定し、トレーサーシグナルのレベルが指定の閾値を上回る場合に、遺伝子療法ベクターを用いる治療のための対象または患者を選択するための方法および組成物が、本明細書において提供される。いくつかの実施形態では、トレーサーは、放射活性トレーサーである。他の実施形態では、放射活性トレーサー元素は、１８Ｆ、６４Ｃｕ、９９ｍＴｅ、１１Ｃ、１４Ｃ、１２４Ｉ、１２３Ｉ、１３１Ｉ、１５Ｏ、１３Ｎおよび／または８２ＲｂＣｌである。なお他の実施形態では、放射活性トレーサー元素は、ヌクレオシドまたは合成ヌクレオシド標的と連結されて、放射活性標識を形成する。いくつかの実施形態では、ヌクレオシド標的は、ＦＨＢＧ（９−［４−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル］グアニン）、ＦＨＰＧ（９−（［３−フルオロ−１−ヒドロキシ−２−プロポキシ］メチル）グアニン）、ＦＧＣＶ（フルオロガンシクロビル）、ＦＰＣＶ（フルオロペンシクロビル）、ＦＩＡＵ（１−（２’−デオキシ−２’−フルオロ−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−ヨードウラシル）、ＦＥＡＵ（フルオロ−５−エチル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルウラシル）、ＦＭＡＵ（フルオロ−５−メチル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルウラシル）、ＦＨＯＭＰ（６−（（１−フルオロ−３−ヒドロキシプロパン−２−イルオキシ）メチル）−５−メチルピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン）、ガンシクロビル、バルガンシクロビル、アシクロビル、バラシクロビル、ペンシクロビル、放射標識された、Ｎ−１に４−ヒドロキシ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル側鎖を有するピリミジン（ＨＨＧ−５−ＦＥＰ）、および２，３−ジヒドロキシプロピル、アシクロビル−、ガンシクロビル−またはペンシクロビル−様側鎖を有する、５−（２−ヒドロキシエチル）−または５−（３−ヒドロキシプロピル）置換ピリミジン誘導体である。好ましくは、放射活性標的は、［１８Ｆ］ＦＨＢＧ（９−（４−１８Ｆ−フルオロ−３−［ヒドロキシメチル］ブチル）グアニン）である。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３８】
ＨＳＶ−ＴＫ媒介性ＦＨＢＧ（９−［４−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル］グアニン）、ＦＨＰＧ（９−（［３−フルオロ−１−ヒドロキシ−２−プロポキシ］メチル）グアニン）、ＦＧＣＶ（フルオロガンシクロビル）、ＦＰＣＶ（フルオロペンシクロビル）、ＦＩＡＵ（１−（２’−デオキシ−２’−フルオロ−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−ヨードウラシル）、ＦＥＡＵ（フルオロ−５−エチル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルウラシル）、ＦＭＡＵ（フルオロ−５−メチル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルウラシル）、ＦＨＯＭＰ（６−（（１−フルオロ−３−ヒドロキシプロパン−２−イルオキシ）メチル）−５−メチルピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン）、ガンシクロビル、バルガンシクロビル、アシクロビル、バラシクロビル、ペンシクロビル、放射標識された、Ｎ−１に４−ヒドロキシ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル側鎖を有するピリミジン（ＨＨＧ−５−ＦＥＰ）、および２，３−ジヒドロキシプロピル、アシクロビル−、ガンシクロビル−またはペンシクロビル−様側鎖を有する、５−（２−ヒドロキシエチル）−または５−（３−ヒドロキシプロピル）置換ピリミジン誘導体媒介性バイスタンダー効果を測定する方法が本明細書において提供され、方法は、ａ）ＨＳＶ−ＴＫおよび第１の蛍光タンパク質をコードするポリヌクレオチドを用いて細胞を形質導入することと、ｂ）第１の蛍光または生物発光タンパク質と光学的に識別可能である、第２の蛍光または生物発光タンパク質をコードするポリヌクレオチドを用いて細胞を形質導入することと、ｃ）ＨＳＶ−ＴＫによってリン酸化されていると細胞傷害性になる薬剤を用いて細胞を処理することと、ｄ）第１の蛍光タンパク質および第２の蛍光タンパク質の発現の相対量を測定することとを含む。一実施形態では、工程ｄ）は、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｐｌａｔｅリーダー、蛍光光度計、蛍光活性化セルソーター（ＦＡＣＳ）、セロメーターまたは分光光度計を含む。別の実施形態では、工程ｄ）は、対象においてインビボで第２の蛍光または生物発光タンパク質の蛍光結果を測定することを含む。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１７５】
ＨＳＶ−ＴＫタンパク質を含めたチミジンキナーゼによって標的とされる基質の他の例として、ＦＨＰＧ（９−（［３−フルオロ−１−ヒドロキシ−２−プロポキシ］メチル）グアニン）、ＦＧＣＶ（フルオロガンシクロビル）、ＦＰＣＶ（フルオロペンシクロビル）、ＦＩＡＵ（１−（２’−デオキシ−２’−フルオロ−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−ヨードウラシル）、ＦＥＡＵ（フルオロ−５−エチル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルウラシル）、ＦＭＡＵ（フルオロ−５−メチル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルウラシル）、ＦＨＯＭＰ（６−（（１−フルオロ−３−ヒドロキシプロパン−２−イルオキシ）メチル）−５−メチルピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン）、ガンシクロビル、バルガンシクロビル、アシクロビル、バラシクロビル、ペンシクロビル、放射標識された、Ｎ−１に４−ヒドロキシ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル側鎖を有するピリミジン（ＨＨＧ−５−ＦＥＰ）、および２，３−ジヒドロキシプロピル、アシクロビル−、ガンシクロビル−またはペンシクロビル−様側鎖を有する、５−（２−ヒドロキシエチル）−または５−（３−ヒドロキシプロピル）置換ピリミジン誘導体が挙げられる。チミジンキナーゼなどの治療用タンパク質が、本明細書において記載されるチミジンキナーゼ遺伝子療法ベクターを用いて治療された個人において発現されるか否かを調べるために使用され得る放射性トレーサーの例はまた、１８Ｆ、６４Ｃｕ、９９ｍＴｅ、１１Ｃ、１４Ｃ、１２４Ｉ、１２３Ｉ、１３１Ｉ、１５Ｏ、１３Ｎおよび／または８２ＲｂＣｌを含み得る。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１７８】
したがって、ＦＨＢＧ（９−［４−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル］グアニン）、ＦＨＰＧ（９−（［３−フルオロ−１−ヒドロキシ−２−プロポキシ］メチル）グアニン）、ＦＧＣＶ（フルオロガンシクロビル）、ＦＰＣＶ（フルオロペンシクロビル）、ＦＩＡＵ（１−（２’−デオキシ−２’−フルオロ−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−ヨードウラシル）、ＦＥＡＵ（フルオロ−５−エチル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルウラシル）、ＦＭＡＵ（フルオロ−５−メチル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルウラシル）、ＦＨＯＭＰ（６−（（１−フルオロ−３−ヒドロキシプロパン−２−イルオキシ）メチル）−５−メチルピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン）、ガンシクロビル、バルガンシクロビル、アシクロビル、バラシクロビル、ペンシクロビル、放射標識された、Ｎ−１に４−ヒドロキシ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル側鎖を有するピリミジン（ＨＨＧ−５−ＦＥＰ）、および２，３−ジヒドロキシプロピル、アシクロビル−、ガンシクロビル−またはペンシクロビル−様側鎖を有する、５−（２−ヒドロキシエチル）−または５−（３−ヒドロキシプロピル）置換ピリミジン誘導体を含めた、ＨＳＶ−ＴＫを含めたチミジンキナーゼのタグが付けられた基質を測定するための方法および組成物が、本明細書において提供され、方法は、ａ）ＨＳＶ−ＴＫをコードするポリヌクレオチドを用いて細胞を形質導入することと、ｂ）放射活性トレーサーに付着しているＨＳＶ−ＴＫの基質を用いて細胞を処理することと、ｃ）標的組織中に存在する放射活性シグナルの相対量を測定することとを含む。一実施形態では、工程ｃ）は、ＰＥＴ（陽電子放射型断層撮影）スキャニングを使用して対象においてインビボで放射活性トレーサーの結果を測定することを含む。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１７９】
また、ＦＨＢＧ（９−［４−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル］グアニン）、ＦＨＰＧ（９−（［３−フルオロ−１−ヒドロキシ−２−プロポキシ］メチル）グアニン）、ＦＧＣＶ（フルオロガンシクロビル）、ＦＰＣＶ（フルオロペンシクロビル）、ＦＩＡＵ（１−（２’−デオキシ−２’−フルオロ−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−ヨードウラシル）、ＦＥＡＵ（フルオロ−５−エチル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルウラシル）、ＦＭＡＵ（フルオロ−５−メチル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルウラシル）、ＦＨＯＭＰ（６−（（１−フルオロ−３−ヒドロキシプロパン−２−イルオキシ）メチル）−５−メチルピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン）、ガンシクロビル、バルガンシクロビル、アシクロビル、バラシクロビル、ペンシクロビル、放射標識された、Ｎ−１に４−ヒドロキシ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル側鎖を有するピリミジン（ＨＨＧ−５−ＦＥＰ）、および２，３−ジヒドロキシプロピル、アシクロビル−、ガンシクロビル−またはペンシクロビル−様側鎖を有する、５−（２−ヒドロキシエチル）−または５−（３−ヒドロキシプロピル）置換ピリミジン誘導体を含めた、ＨＳＶ−ＴＫを含めたチミジンキナーゼタグが付けられた基質を測定することを含む、遺伝子療法治療から恩恵を受けることができる患者または対象を同定するための方法および組成物が本明細書において提供される。いくつかの実施形態では、方法は、ａ）ＨＳＶ−ＴＫポリヌクレオチドを含む遺伝子療法レトロウイルス粒子を投与し、細胞をＨＳＶ−チミジンキナーゼをコードするポリヌクレオチドを用いて形質導入することと、ｂ）放射活性トレーサーに付着しているＨＳＶ−ＴＫの基質を用いて細胞を処理することと、ｃ）標的組織中に存在する放射活性シグナルの相対量を測定することと、ｄ）放射活性標識されたＨＳＶ−ＴＫ基質のレベルが指定の閾値を上回る患者を同定することとを含む。一実施形態では、工程ｃ）は、ＰＥＴ（陽電子放射型断層撮影）スキャニングを使用して対象においてインビボで放射活性トレーサーの結果を測定することを含む。いくつかの実施形態では、遺伝子療法プロトコールから恩恵を受けることができる患者は、ＰＥＴスキャンで指定の閾値を上回るレベルを示す患者または対象を含む。いくつかの実施形態では、放射活性ＨＳＶ−ＴＫ基質のレベルは、少なくとも約２．０ＳＵＶであるかまたはＰＥＴスキャンでのバックグラウンドを少なくとも２０％上回る。いくつかの実施形態では、放射活性ＨＳＶ−ＴＫ基質のレベルは、少なくとも約１．９ＳＵＶであるかまたはＰＥＴスキャンでのバックグラウンドを少なくとも２０％上回る。なお他の実施形態では、放射活性ＨＳＶ−ＴＫ基質のレベルは、少なくとも約１．０ＳＵＶ、約１．５ＳＵＶ、約２．０ＳＵＶまたは約２．５ＳＵＶもしくはそれ以上であるかまたはＰＥＴスキャンでのバックグラウンドを少なくとも１０％上回る、バックグラウンドを少なくとも２０％上回る、バックグラウンドを少なくとも３０％上回る、バックグラウンドを少なくとも４０％上回るもしくはバックグラウンドを少なくとも５０％上回るもしくはそれ以上である。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８０】
いくつかの実施形態では、良性または転移性病変のための治療を必要とし、遺伝子療法治療から恩恵を受けることができる患者または対象を同定するための方法および組成物が、本明細書において提供される。いくつかの実施形態では、良性または転移性病変の治療のための遺伝子療法から恩恵を受けることができる患者を同定するための方法は、遺伝子療法治療の投与後に、ＦＨＢＧ（９−［４−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル］グアニン）、ＦＨＰＧ（９−（［３−フルオロ−１−ヒドロキシ−２−プロポキシ］メチル）グアニン）、ＦＧＣＶ（フルオロガンシクロビル）、ＦＰＣＶ（フルオロペンシクロビル）、ＦＩＡＵ（１−（２’−デオキシ−２’−フルオロ−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−ヨードウラシル）、ＦＥＡＵ（フルオロ−５−エチル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルウラシル）、ＦＭＡＵ（フルオロ−５−メチル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルウラシル）、ＦＨＯＭＰ（６−（（１−フルオロ−３−ヒドロキシプロパン−２−イルオキシ）メチル）−５−メチルピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン）、ガンシクロビル、バルガンシクロビル、アシクロビル、バラシクロビル、ペンシクロビル、放射標識された、Ｎ−１に４−ヒドロキシ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル側鎖を有するピリミジン（ＨＨＧ−５−ＦＥＰ）、および２，３−ジヒドロキシプロピル、アシクロビル−、ガンシクロビル−またはペンシクロビル−様側鎖を有する、５−（２−ヒドロキシエチル）−または５−（３−ヒドロキシプロピル）置換ピリミジン誘導体を含めた、ＨＳＶ−ＴＫを含めたチミジンキナーゼのタグが付けられた基質を測定することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、ａ）ＨＳＶ−ＴＫポリヌクレオチドを含む遺伝子療法レトロウイルス粒子を投与し、ＨＳＶ−チミジンキナーゼをコードするポリヌクレオチドを用いて細胞を形質導入することと、ｂ）細胞を、放射活性トレーサーに付着しているＨＳＶ−ＴＫの基質を用いて処理することと、ｃ）標的組織中に存在する放射活性シグナルの相対量を測定することと、ｄ）放射活性標識されたＨＳＶ−ＴＫ基質のレベルが指定の閾値を上回る患者を同定することと、ｅ）前記患者または対象を遺伝子療法レトロウイルス粒子を用いて治療することとを含む。一実施形態では、工程ｃ）は、ＰＥＴ（陽電子放射型断層撮影）スキャニングを使用して対象においてインビボで放射活性トレーサーの結果を測定することを含む。いくつかの実施形態では、遺伝子療法プロトコールから恩恵を受けることができる患者は、ＰＥＴスキャンで指定の閾値を上回るレベルを示す患者または対象を含む。いくつかの実施形態では、［１８Ｆ］ＦＨＢＧシグナルのレベルは、少なくとも約２．０ＳＵＶであるかまたはＰＥＴスキャンでのバックグラウンドを少なくとも２０％上回る。いくつかの実施形態では、放射活性ＨＳＶ−ＴＫ基質のレベルは、少なくとも約１．９ＳＵＶであるかまたはＰＥＴスキャンでのバックグラウンドを少なくとも２０％上回る。なお他の実施形態では、放射活性ＨＳＶ−ＴＫ基質のレベルは、少なくとも約１．０ＳＵＶ、約１．５ＳＵＶ、約２．０ＳＵＶまたは約２．５ＳＵＶもしくはそれ以上であるかまたはＰＥＴスキャンでのバックグラウンドを少なくとも１０％上回る、バックグラウンドを少なくとも２０％上回る、バックグラウンドを少なくとも３０％上回る、バックグラウンドを少なくとも４０％上回るまたはバックグラウンドを少なくとも５０％上回るもしくはそれ以上である。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８４】
また、蛍光イメージングシステムを使用して、ＨＳＶ−ＴＫによって媒介されるＦＨＢＧ（９−［４−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル］グアニン）、ＦＨＰＧ（９−（［３−フルオロ−１−ヒドロキシ−２−プロポキシ］メチル）グアニン）、ＦＧＣＶ（フルオロガンシクロビル）、ＦＰＣＶ（フルオロペンシクロビル）、ＦＩＡＵ（１−（２’−デオキシ−２’−フルオロ−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−ヨードウラシル）、ＦＥＡＵ（フルオロ−５−エチル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルウラシル）、ＦＭＡＵ（フルオロ−５−メチル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルウラシル）、ＦＨＯＭＰ（６−（（１−フルオロ−３−ヒドロキシプロパン−２−イルオキシ）メチル）−５−メチルピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン）、ガンシクロビル、バルガンシクロビル、アシクロビル、バラシクロビル、ペンシクロビル、放射標識された、Ｎ−１に４−ヒドロキシ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル側鎖を有するピリミジン（ＨＨＧ−５−ＦＥＰ）、および２，３−ジヒドロキシプロピル、アシクロビル−、ガンシクロビル−またはペンシクロビル−様側鎖を有する、５−（２−ヒドロキシエチル）−または５−（３−ヒドロキシプロピル）置換ピリミジン誘導体のリン酸化を測定する組成物および方法が、本明細書において提供される。いくつかの実施形態では、方法は、ａ）ＨＳＶ−ＴＫおよび第１の蛍光タンパク質をコードするポリヌクレオチドを用いて細胞を形質導入することと、ｂ）第１の蛍光または生物発光タンパク質と光学的に識別可能である、第２のまたは生物発光タンパク質をコードするポリヌクレオチドを用いて細胞を形質導入することと、ｃ）ＨＳＶ−ＴＫによってリン酸化されていると細胞傷害性になる薬剤を用いて細胞を処理することと、ｄ）第１の蛍光タンパク質と第２の蛍光タンパク質の発現の相対量を測定することとを含む。一実施形態では、工程ｄ）は、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｐｌａｔｅリーダー、蛍光光度計、蛍光活性化セルソーター（ＦＡＣＳ）、セロメーターまたは分光光度計を含む。別の実施形態では、工程ｄ）は、蛍光または生物発光イメージングシステムを使用して、対象においてインビボで第２の蛍光または生物発光タンパク質の蛍光結果を測定することを含む。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８８】
いくつかの実施形態では、ヌクレオシド類似体は、ＦＨＢＧ（９−［４−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル］グアニン）、ＦＨＰＧ（９−（［３−フルオロ−１−ヒドロキシ−２−プロポキシ］メチル）グアニン）、ＦＧＣＶ（フルオロガンシクロビル）、ＦＰＣＶ（フルオロペンシクロビル）、ＦＩＡＵ（１−（２’−デオキシ−２’−フルオロ−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−ヨードウラシル）、ＦＥＡＵ（フルオロ−５−エチル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルウラシル）、ＦＭＡＵ（フルオロ−５−メチル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルウラシル）、ＦＨＯＭＰ（６−（（１−フルオロ−３−ヒドロキシプロパン−２−イルオキシ）メチル）−５−メチルピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン）、ガンシクロビル、バルガンシクロビル、アシクロビル、バラシクロビル、ペンシクロビル、放射標識された、Ｎ−１に４−ヒドロキシ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル側鎖を有するピリミジン（ＨＨＧ−５−ＦＥＰ）、および２，３−ジヒドロキシプロピル、アシクロビル−、ガンシクロビル−またはペンシクロビル−様側鎖を有する、５−（２−ヒドロキシエチル）−または５−（３−ヒドロキシプロピル）置換ピリミジン誘導体である。いくつかの実施形態では、標識は、１８Ｆ、６４Ｃｕ、９９ｍＴｅ、１１Ｃ、１４Ｃ、１２４Ｉ、１２３Ｉ、１３１Ｉ、１５Ｏ、１３Ｎおよび／または８２ＲｂＣｌである。好ましくは、標識されたヌクレオシド類似体ＨＳＶ−ＴＫ基質は、［１８Ｆ］ＦＨＢＧ（（９−［４−１８Ｆ−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル］グアニン）である。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３２９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３２９】
本明細書において、好ましい実施形態が示され、記載されているが、このような実施形態は単に例として提供されるということは当業者には明らかであろう。多数の変法、変更および置換が、開示される実施形態から逸脱することなく当業者には自明であろう。実施形態の実施において、本明細書に記載される実施形態の種々の代替物が使用され得ることは理解されなくてはならない。以下の特許請求の範囲が、実施形態の範囲を規定し、これらの特許請求の範囲内の方法および構造ならびにその等価物がそれによって対象とされると意図される。
本明細書は以下の発明の態様を包含する。
［１］
遺伝子療法治療から恩恵を受けることができる患者を同定するための方法であって、
ａ）患者に、ＨＳＶ−ＴＫポリヌクレオチドを含む遺伝子療法レトロウイルス粒子を投与することと、
ｂ）患者に、放射活性トレーサーに付着しているＨＳＶ−ＴＫの基質を投与することと、
ｃ）患者中に存在する放射活性シグナルの相対量および位置を測定することと、
ｄ）患者における病変の位置を決定することと
を含み、特定の閾値を上回る放射活性シグナルを有し、放射活性シグナルの位置が、患者の工程（ｄ）において測定された病変と相関する患者が、遺伝子療法治療から恩恵を受けることができると同定される、方法。
［２］
ＨＳＶ−ＴＫの基質が、ＦＨＢＧ（９−［４−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル］グアニン）、ＦＨＰＧ（９−（［３−フルオロ−１−ヒドロキシ−２−プロポキシ］メチル）グアニン）、ＦＧＣＶ（フルオロガンシクロビル）、ＦＰＣＶ（フルオロペンシクロビル）、ＦＩＡＵ（１−（２’−デオキシ−２’−フルオロ−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−ヨードウラシル）、ＦＥＡＵ（フルオロ−５−エチル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルウラシル）、ＦＭＡＵ（フルオロ−５−メチル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルウラシル）、ＦＨＯＭＰ（６−（（１−フルオロ−３−ヒドロキシプロパン−２−イルオキシ）メチル）−５−メチルピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン）、ガンシクロビル、バルガンシクロビル、アシクロビル、バラシクロビル、ペンシクロビル、放射標識された、Ｎ−１に４−ヒドロキシ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル側鎖を有するピリミジン（ＨＨＧ−５−ＦＥＰ）、および２，３−ジヒドロキシプロピル、アシクロビル−、ガンシクロビル−またはペンシクロビル−様側鎖を有する、５−（２−ヒドロキシエチル）−または５−（３−ヒドロキシプロピル）置換ピリミジン誘導体からなる群から選択される、［１］に記載の方法。
［３］
ＨＳＶ−ＴＫの基質が、ＦＨＢＧ（９−（４−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル］グアニン）である、［１］に記載の方法。
［４］
放射活性トレーサーが、１８Ｆ、６４Ｃｕ、９９ｍＴｅ、１１Ｃ、１４Ｃ、１２４Ｉ、１２３Ｉ、１３１Ｉ、１５Ｏ、１３Ｎおよび／または８２ＲｂＣｌである、［１］に記載の方法。
［５］
放射活性トレーサーが１８Ｆである、［１］に記載の方法。
［６］
ＨＳＶ−ＴＫ基質が、［１８Ｆ］ＦＨＢＧ（９−（４−１８Ｆ−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル］グアニン）である、［１］に記載の方法。
［７］
放射活性トレーサーシグナルが、陽電子放射型断層撮影（ＰＥＴ）スキャニングを使用して測定される、［１］に記載の方法。
［８］
閾値レベルが、少なくとも２．０ＳＵＶ（標準化取り込み値）を上回るかまたはＰＥＴスキャンでのバックグラウンドを少なくとも２０％上回る、［７］に記載の方法。
［９］
閾値レベルが、約１．０ＳＵＶと約３．０ＳＵＶの間であるかまたはＰＥＴスキャンでのバックグラウンドを約２０％〜約４０％の間上回る、［７］に記載の方法。
［１０］
ＨＳＶ−ＴＫレトロウイルス粒子を用いて患者を治療することをさらに含む、［８］および［９］に記載の方法。
［１１］
コードされるＨＳＶ−ＴＫポリヌクレオチドのウイルス核局在性配列（ＮＬＳ）が突然変異している、［１］に記載の方法。
［１２］
チミジンキナーゼポリヌクレオチドが、発現されるチミジンキナーゼタンパク質のアミノ末端にかまたはその付近に核外輸送配列（ＮＥＳ）を含むように突然変異している、［１］に記載の方法。
［１３］
チミジンキナーゼポリヌクレオチドが、発現されるチミジンキナーゼタンパク質の基質結合を増大するように突然変異している、［１］に記載の方法。
［１４］
突然変異が、Ａ１６８Ｈである、［１３］に記載の方法。
［１５］
チミジンキナーゼポリヌクレオチドを、ウイルス核局在性配列（ＮＬＳ）を除去し、発現されるチミジンキナーゼタンパク質のアミノ末端にかまたはその付近に核外輸送配列（ＮＥＳ）を含むように突然変異させることをさらに含む、［１３］に記載の方法。
［１６］
ＨＳＶ−チミジンキナーゼポリヌクレオチドが、配列番号１８である、［１］に記載の方法。
［１７］
ウイルスエンベロープで発現されるターゲッティングタンパク質をさらに含む、［１６］に記載の方法。
［１８］
ターゲッティングタンパク質が、コラーゲン、ラミニン、フィブロネクチン、エラスチン、グリコサミノグリカン、プロテオグリカンまたはＲＧＤと結合する、［１７］に記載の方法。
［１９］
ターゲッティングタンパク質が、コラーゲンと結合する、［１７］に記載の方法。
［２０］
ターゲッティングタンパク質が、配列番号２５である、［１９］に記載の方法。
［２１］
病変の治療を必要とし、遺伝子療法治療から恩恵を受けることができる患者または対象を同定するための方法であって、
ａ）ＨＳＶ−ＴＫポリヌクレオチドを含む遺伝子療法レトロウイルス粒子を投与し、患者から得た細胞を、ＨＳＶ−チミジンキナーゼをコードするポリヌクレオチドを用いて形質導入することと、
ｂ）細胞を、放射活性トレーサーに付着しているＨＳＶ−ＴＫの基質を用いて処理することと、
ｃ）標的組織中に存在する放射活性シグナルの相対量を測定することと、
ｄ）放射活性標識されたＨＳＶ−ＴＫ基質のレベルが、閾値を上回る患者を同定することと、
ｅ）患者における病変の位置を決定することと、
ｅ）患者における測定された放射活性シグナルが、特定の閾値を上回り、測定された放射活性シグナルの位置が、患者の工程（ｅ）において測定された病変と相関する場合に、前記患者または対象を、ＨＳＶ−ＴＫポリヌクレオチドを含む遺伝子療法レトロウイルス粒子を用いて治療することと
を含む、方法。
［２２］
ＨＳＶ−ＴＫの基質が、ＦＨＢＧ（９−［４−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル］グアニン）、ＦＨＰＧ（９−（［３−フルオロ−１−ヒドロキシ−２−プロポキシ］メチル）グアニン）、ＦＧＣＶ（フルオロガンシクロビル）、ＦＰＣＶ（フルオロペンシクロビル）、ＦＩＡＵ（１−（２’−デオキシ−２’−フルオロ−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−ヨードウラシル）、ＦＥＡＵ（フルオロ−５−エチル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルウラシル）、ＦＭＡＵ（フルオロ−５−メチル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルウラシル）、ＦＨＯＭＰ（６−（（１−フルオロ−３−ヒドロキシプロパン−２−イルオキシ）メチル）−５−メチルピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン）、ガンシクロビル、バル−ガンシクロビル、アシクロビル、バル−アシクロビル（val-acivlovir）、ペンシクロビル、放射標識された、Ｎ−１に４−ヒドロキシ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル側鎖を有するピリミジン（ＨＨＧ−５−ＦＥＰ）、および２，３−ジヒドロキシプロピル、アシクロビル−、ガンシクロビル−またはペンシクロビル−様側鎖を有する、５−（２−ヒドロキシエチル）−または５−（３−ヒドロキシプロピル）置換ピリミジン誘導体からなる群から選択される、［２１］に記載の方法。
［２３］
ＨＳＶ−ＴＫの基質が、ＦＨＢＧ（３−（ヒドロキシメチル）ブチル］グアニン）である、［２１］に記載の方法。
［２４］
放射活性トレーサーが、１８Ｆ、６４Ｃｕ、９９ｍＴｅ、１１Ｃ、１４Ｃ、１２４Ｉ、１２３Ｉ、１３１Ｉ、１５Ｏ、１３Ｎおよび／または８２ＲｂＣｌである、［２１］に記載の方法。
［２５］
放射活性トレーサーが１８Ｆである、［２１］に記載の方法。
［２６］
ＨＳＶ−ＴＫ基質が、［１８Ｆ］ＦＨＢＧ（９−（４−１８Ｆ−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル］グアニン）である、［２１］に記載の方法。
［２７］
放射活性トレーサーシグナルが、陽電子放射型断層撮影（ＰＥＴ）スキャニングを使用して測定される、［２１］に記載の方法。
［２８］
閾値レベルが、少なくとも２．０ＳＵＶ（標準化取り込み値）を上回るかまたはＰＥＴスキャンでのバックグラウンドを少なくとも２０％上回る、［２７］に記載の方法。
［２９］
閾値レベルが、約１．０ＳＵＶと約３．０ＳＵＶの間である、［２７］に記載の方法。
［３０］
ＨＳＶ−ＴＫレトロウイルスベクター粒子が、第２の治療用ポリヌクレオチドを含む、［２８］および［２９］に記載の方法。
［３１］
コードされるＨＳＶ−ＴＫポリヌクレオチドのウイルス核局在性配列（ＮＬＳ）が突然変異している、［２１］に記載の方法。
［３２］
チミジンキナーゼポリヌクレオチドが、発現されるチミジンキナーゼタンパク質のアミノ末端にかまたはその付近に核外輸送配列（ＮＥＳ）を含むように突然変異している、［２１］に記載の方法。
［３３］
チミジンキナーゼポリヌクレオチドが、発現されるチミジンキナーゼタンパク質の基質結合を増大するように突然変異している、［２１］に記載の方法。
［３４］
突然変異が、Ａ１６８Ｈである、［２３］に記載の方法。
［３５］
チミジンキナーゼポリヌクレオチドを、ウイルス核局在性配列（ＮＬＳ）を除去し、発現されるチミジンキナーゼタンパク質のアミノ末端にかまたはその付近に核外輸送配列（ＮＥＳ）を含むように突然変異させることをさらに含む、［２３］に記載の方法。
［３６］
ＨＳＶ−チミジンキナーゼポリヌクレオチドが、配列番号１８である、［２１］に記載の方法。
［３７］
ウイルスエンベロープで発現されるターゲッティングタンパク質をさらに含む、［３６］に記載の方法。
［３８］
ターゲッティングタンパク質が、コラーゲン、ラミニン、フィブロネクチン、エラスチン、グリコサミノグリカン、プロテオグリカンまたはＲＧＤと結合する、［３７］に記載の方法。
［３９］
ターゲッティングタンパク質が、コラーゲンと結合する、［３７］に記載の方法。
［４０］
ターゲッティングタンパク質が、配列番号２５である、［３９］に記載の方法。
［４１］
形質導入されたＨＳＶ−チミジンの酵素活性を測定するための方法であって、
ａ）ＨＳＶ−ＴＫポリヌクレオチドを含む遺伝子療法レトロウイルス粒子を投与し、患者から得た細胞を、ＨＳＶ−チミジンキナーゼをコードするポリヌクレオチドを用いて形質導入することと、
ｂ）細胞を、放射活性トレーサーに付着しているＨＳＶ−ＴＫの基質を用いて処理することと、
ｃ）標的組織中に存在する放射活性シグナルの相対量を測定することと
を含む、方法。
［４２］
ＨＳＶ−ＴＫの基質が、ＦＨＢＧ（９−［４−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル］グアニン）、ＦＨＰＧ（９−（［３−フルオロ−１−ヒドロキシ−２−プロポキシ］メチル）グアニン）、ＦＧＣＶ（フルオロガンシクロビル）、ＦＰＣＶ（フルオロペンシクロビル）、ＦＩＡＵ（１−（２’−デオキシ−２’−フルオロ−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−ヨードウラシル）、ＦＥＡＵ（フルオロ−５−エチル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルウラシル）、ＦＭＡＵ（フルオロ−５−メチル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルウラシル）、ＦＨＯＭＰ（６−（（１−フルオロ−３−ヒドロキシプロパン−２−イルオキシ）メチル）−５−メチルピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン）、ガンシクロビル、バル−ガンシクロビル、アシクロビル、バルアシクロビル（val-ac
ivlovir）、ペンシクロビル、放射標識された、Ｎ−１に４−ヒドロキシ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル側鎖を有するピリミジン（ＨＨＧ−５−ＦＥＰ）、および２，３−ジヒドロキシプロピル、アシクロビル−、ガンシクロビル−またはペンシクロビル−様側鎖を有する、５−（２−ヒドロキシエチル）−または５−（３−ヒドロキシプロピル）置換ピリミジン誘導体からなる群から選択される、［４１］に記載の方法。
［４３］
ＨＳＶ−ＴＫの基質が、ＦＨＢＧ（３−（ヒドロキシメチル）ブチル］グアニン）である、［４１］に記載の方法。
［４４］
放射活性トレーサーが、１８Ｆ、６４Ｃｕ、９９ｍＴｅ、１１Ｃ、１４Ｃ、１２４Ｉ、１２３Ｉ、１３１Ｉ、１５Ｏ、１３Ｎおよび／または８２ＲｂＣｌである、［４１］に記載の方法。
［４５］
放射活性トレーサーが１８Ｆである、［４１］に記載の方法。
［４６］
ＨＳＶ−ＴＫ基質が、［１８Ｆ］ＦＨＢＧ（９−（４−１８Ｆ−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル］グアニン）である、［４１］に記載の方法。
［４７］
放射活性トレーサーシグナルが、陽電子放射型断層撮影（ＰＥＴ）スキャニングを使用して測定される、［４１］に記載の方法。
［４８］
閾値レベルが、少なくとも２．０ＳＵＶ（標準化取り込み値）を上回るかまたはＰＥＴスキャンでのバックグラウンドを少なくとも２０％上回る、［４７］に記載の方法。
［４９］
閾値レベルが、約１．０ＳＵＶと約３．０ＳＵＶの間であるかまたはＰＥＴスキャンでのバックグラウンドを約２０％〜約４０％の間上回る、［４７］に記載の方法。
［５０］
ＨＳＶ−ＴＫレトロウイルス粒子を用いて患者を治療することをさらに含む、［４８］および［４９］に記載の方法。
［５１］
コードされるＨＳＶ−ＴＫポリヌクレオチドのウイルス核局在性配列（ＮＬＳ）が突然変異している、［４１］に記載の方法。
［５２］
チミジンキナーゼポリヌクレオチドが、発現されるチミジンキナーゼタンパク質のアミノ末端にかまたはその付近に核外輸送配列（ＮＥＳ）を含むように突然変異している、［４１］に記載の方法。
［５３］
チミジンキナーゼポリヌクレオチドが、発現されるチミジンキナーゼタンパク質の基質結合を増大するように突然変異している、［４１］に記載の方法。
［５４］
突然変異が、Ａ１６８Ｈである、［５３］に記載の方法。
［５５］
チミジンキナーゼポリヌクレオチドを、ウイルス核局在性配列（ＮＬＳ）を除去し、発現されるチミジンキナーゼタンパク質のアミノ末端に核外輸送配列（ＮＥＳ）を含むように突然変異させることをさらに含む、［５３］に記載の方法。
［５６］
ＨＳＶ−チミジンキナーゼポリヌクレオチドが、配列番号１８である、［４１］に記載の方法。
［５７］
ウイルスエンベロープで発現されるターゲッティングタンパク質をさらに含む、［５６］に記載の方法。
［５８］
ターゲッティングタンパク質が、コラーゲン、ラミニン、フィブロネクチン、エラスチン、グリコサミノグリカン、プロテオグリカンまたはＲＧＤと結合する、［５７］に記載の方法。
［５９］
ターゲッティングタンパク質が、コラーゲンと結合する、［５７］に記載の方法。
［６０］
ターゲッティングタンパク質が、配列番号２５である、［５９］に記載の方法。
参考文献
【表８】
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【表９】
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【表１０】
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【表１１】
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【表１２】
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