(57)【要約】  炎症、特に肺の炎症（喘息およびアレルギーなどの喘息に関連する病変を含む）の治療に有益な化合物およびその組成を提供する。また、炎症を患った、あるいは炎症が悪化傾向にある患者を治療するために、本発明の化合物および組成を使用する方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
構造Ｉ中のＲ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６が、ＳＯ３−，ＰＯ３−あるいはＨのいずれかであり；且つ
（ａ）構造中のＲ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６はそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか；
（ｂ）構造中のＲ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも５つがそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか；あるいは
（ｃ）構造中のＲ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも４つがそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか；あるいは
（ｄ）構造中のＲ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも３つがそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか；あるいは
（ｅ）構造中のＲ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも２つがそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれかであり；および
（ｉ）Ｒ３およびＲ４双方がＳＯ３−である場合は、Ｒ１，Ｒ２，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも１つがＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか；あるいは
（ii）Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５がＳＯ３−である場合は、Ｒ１，Ｒ２，およびＲ６からなる群の少なくとも１つがＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか；あるいは
（iii）Ｒ１およびＲ４双方がＳＯ３−であり、且つＲ３がＳＯ３−でない場合は、Ｒ２，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも１つがＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれかであることを特徴とする、次の構造Ｉを持つ化合物。
【化１】
2005510453.tif 000032
【請求項２】
以下の構造II〜VIIIの化合物からなる群から選択される、請求項１に記載した化合物。
【化２】
2005510453.tif 000033
【請求項３】
以下の構造IX〜XVの化合物からなる群から選択される、請求項１に記載した化合物。
【化３】
2005510453.tif 000034
【請求項４】
構造中のＲ１，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６が、それぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれかである、次の構造XVIを持つ化合物。
【化４】
2005510453.tif 000035
【請求項５】
構造中のＲ１，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６が、それぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれかである、次の構造VIIIを持つ化合物。
【化５】
2005510453.tif 000036
【請求項６】
構造Ｉの前記化合物が、ヘパリン、ヘパラン硫酸、デルマタン硫酸、コンドロイチン硫酸、ペントサン多硫酸、ムコ多糖類、およびグリコサミノグリカンからなる群から生成されたものである、請求項１に記載した化合物。
【請求項７】
構造Ｉの前記化合物が、合成的に生成されたものである、請求項１に記載した化合物。
【請求項８】
薬学的に許容されるビヒクル中に構造Ｉを有する化合物を治療的有効量含む、哺乳類患者の炎症反応の症状を治療しあるいは軽減するための薬剤組成であって、
構造Ｉ中のＲ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６が、ＳＯ３−，ＰＯ３−あるいはＨのいずれかであり；且つ
（ａ）構造中のＲ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６はそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか；
（ｂ）構造中のＲ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも５つがそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか；あるいは
（ｃ）構造中のＲ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも４つがそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか；あるいは
（ｄ）構造中のＲ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも３つがそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか；あるいは
（ｅ）構造中のＲ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも２つがそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれかであり；および
（ｉ）Ｒ３およびＲ４双方がＳＯ３−である場合は、Ｒ１，Ｒ２，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも１つがＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか；あるいは
（ii）Ｒ１およびＲ４双方がＳＯ３−であり、且つＲ３がＳＯ３−でない場合は、Ｒ２，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも１つがＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれかであり；さらにまた、
Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５のみがＳＯ３−である場合は、前記化合物で強化されていることを特徴とする、薬剤組成。
【化６】
2005510453.tif 000037
【請求項９】
以下の構造II〜VIIIの化合物からなる群から選択される少なくとも一つの化合物を含む、請求項８に記載した薬剤組成。
【化７】
2005510453.tif 000038
【請求項１０】
以下の構造IX〜XVの化合物からなる群から選択される少なくとも一つの化合物を含む、請求項８に記載した薬剤組成。
【化８】
2005510453.tif 000039
【請求項１１】
構造中のＲ１，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６が、それぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれかである、次の構造XVIを持つ化合物を治療的有効量含む、哺乳類患者の炎症反応の症状を治療しあるいは軽減するための薬剤組成。
【化９】
2005510453.tif 000040
【請求項１２】
構造中のＲ１，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６が、ＳＯ３−である、次の構造VIIIを持つ化合物を治療的有効量含む、哺乳類患者の炎症反応の症状を治療しあるいは軽減するための薬剤組成。  
【化１０】
2005510453.tif 000041
【請求項１３】
前記炎症反応が、炎症性肺疾患、急性慢性気管支炎、および慢性閉塞性肺疾患からなる群から選択される肺の炎症である、請求項８に記載した薬剤組成。
【請求項１４】
前記肺の炎症が、喘息あるいは喘息に関連する病変である、請求項１３に記載した薬剤組成。
【請求項１５】
一回分につき、構造Ｉの前記化合物を患者の体重１ｋｇあたり約０．００５ｍｇ〜約１．０ｍｇ含む、請求項８に記載した薬剤組成。
【請求項１６】
一回分につき、構造Ｉの前記化合物を患者の体重１ｋｇあたり約０．０７５ｍｇ〜約０．７５ｍｇ含む、請求項８に記載した薬剤組成。
【請求項１７】
構造Ｉの前記化合物が、水性の薬学的に許容される吸入ビヒクル中に存在する、請求項８に記載した薬剤組成。
【請求項１８】
ポンプあるいは圧搾作動噴霧器による投与に好適な、請求項１５に記載した薬剤組成。
【請求項１９】
エアゾール噴霧剤をさらに含み、定量吸入器による投与に好適な、請求項１５に記載した薬剤組成。
【請求項２０】
気管支内投与に適した構造Ｉの前記化合物からなる薬学的に許容される粉末製剤を含む、請求項６に記載した薬剤組成。
【請求項２１】
エアゾールディスペンサーによる投与に好適な、請求項２０に記載した薬剤組成。
【請求項２２】
静脈内投与に適した構造Ｉの前記化合物からなる薬学的に許容される水性製剤を含む、請求項８に記載した薬剤組成。
【請求項２３】
筋肉内投与に適した構造Ｉの前記化合物からなる薬学的に許容される水性製剤を含む、請求項８に記載した薬剤組成。
【請求項２４】
経口投与に適した構造Ｉの前記化合物からなる薬学的に許容される経口製剤を含む、請求項８に記載した薬剤組成。
【請求項２５】
カプセル、キャプレット、ジェルキャップ、カシェ、ピル、およびタブレットからなる群から選択される手段による投与に好適な、請求項２４に記載した薬剤組成。
【請求項２６】
薬学的に許容されるビヒクル中に構造Ｉを有する化合物を治療的有効量含有する薬剤組成を患者に投与することを含む、哺乳類患者の炎症反応の症状を治療しあるいは軽減するための構造Ｉの化合物の使用。
（構造Ｉ中のＲ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６が、ＳＯ３−，ＰＯ３−あるいはＨのいずれかであり；且つ
（ｆ）構造中のＲ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６はそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか；
（ｇ）構造中のＲ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも５つがそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか；あるいは
（ｈ）構造中のＲ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも４つがそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか；あるいは
（ｉ）構造中のＲ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも３つがそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか；あるいは
（ｊ）構造中のＲ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも２つがそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれかであり；および
（iii）Ｒ３およびＲ４双方がＳＯ３−である場合は、Ｒ１，Ｒ２，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも１つがＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか；あるいは
（iv）Ｒ１およびＲ４双方がＳＯ３−であり、且つＲ３がＳＯ３−でない場合は、Ｒ２，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも１つがＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれかであり；さらにまた、
Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５のみがＳＯ３−である場合は、前記薬剤組成は前記化合物で強化されている）
【化１１】
2005510453.tif 000042
【請求項２７】
前記薬剤組成が、以下の構造II〜VIIIの化合物からなる群から選択される少なくとも一つの化合物を含む、請求項２６に記載した使用。
【化１２】
2005510453.tif 000043
【請求項２８】
前記薬剤組成が、以下の構造IX〜XVの化合物からなる群から選択される少なくとも一つの化合物を含む、請求項２２に記載した使用。
【化１３】
2005510453.tif 000044
【請求項２９】
前記薬剤組成が、次の構造XVIの化合物からなる群から選択される少なくとも一の化合物を含み、構造XVI中のＲ１，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６はそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれかである、請求項２６に記載した使用。
【化１４】
2005510453.tif 000045
【請求項３０】
構造中のＲ１，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６がＳＯ３−である、次の構造VIIIを持つ化合物を治療的有効量含む薬剤組成を患者に投与することを含む、哺乳類患者の炎症反応の症状を治療しあるいは軽減するための構造VIIIの化合物の使用。
【化１５】
2005510453.tif 000046
【請求項３１】
前記炎症反応が、炎症性肺疾患、急性慢性気管支炎、および慢性閉塞性肺疾患からなる群から選択される肺の炎症である、請求項２６に記載した使用。
【請求項３２】
前記肺の炎症が、喘息あるいは喘息に関連する病変である、請求項３１に記載した使用。
【請求項３３】
一投与量につき、構造Ｉの前記化合物が患者の体重１ｋｇあたり約０．００５ｍｇ〜約１．０ｍｇ含まれる、請求項２６に記載した使用。
【請求項３４】
一投与量につき、構造Ｉの前記化合物が患者の体重１ｋｇあたり約０．０７５ｍｇ〜約０．７５ｍｇ含まれる、請求項２６に記載した使用。
【請求項３５】
構造Ｉの前記化合物が、水性の薬学的に許容される吸入ビヒクル中に存在する、請求項２６に記載した使用。
【請求項３６】
前記投与が、ポンプあるいは圧搾作動噴霧器により行われる、請求項２６に記載した使用。
【請求項３７】
前記投与が定量吸入器により行われる、請求項２６に記載した使用。
【請求項３８】
前記投与が、気管支内投与である、請求項２６に記載した使用。
【請求項３９】
前記投与が、エアゾールディスペンサーにより行われる、請求項２６に記載した使用。
【請求項４０】
前記投与が、静脈内投与である、請求項２６に記載した使用。
【請求項４１】
前記投与が、筋肉内投与である、請求項２６に記載した使用。
【請求項４２】
構造Ｉの前記化合物が、薬学的に許容される経口ビヒクル中に含まれる、請求項２６に記載した使用。
【請求項４３】
経口投与が、カプセル、キャプレット、ジェルキャップ、カシェ、ピル、およびタブレットからなる群から選択される手段によって行われる、請求項４２に記載した使用
【請求項４４】
前記炎症反応が、肺以外の場所での遅発相反応および炎症反応である、請求項２６に記載した使用。
【請求項４５】
前記肺以外の場所が、アレルギー性鼻炎、アレルギー性皮膚炎、およびアレルギー性結膜炎からなる群から選択される、請求項４４に記載した使用。
【請求項４６】
前記炎症反応が、炎症性の肺外疾患である、請求項２６に記載した使用。
【請求項４７】
前記炎症性の肺外疾患が、感染性大腸炎、糸球体腎炎、炎症性皮膚疾患、サルコイドーシス、関節リウマチおよび他の膠原血管病からなる群から選択される、請求項４６に記載した使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、炎症の症状（例えば喘息など）を治療しあるいは軽減するための化合物、薬剤組成、及び方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
炎症は、細胞組織あるいは維管束組織の損傷に対する多源性宿主反応である。炎症反応に関連する疾患の例は、ハンセン病、喘息、肺炎から関節リウマチあるいは結核まで全範囲にわたる（TrowbridgeとEmlingによる「炎症：プロセスのレビュー」コロラド州 Quintessence出版社 1997年）。
【０００３】
最近の非特異的抗炎症治療は、反応カスケード内の別個のポイントで炎症反応を阻止する方向に向かっている。具体的な攻撃ポイントには、ａ）補体系の調節、ｂ）肥満細胞あるいは他の反応細胞による可溶性メディエーターの放出阻止、ｃ）炎症部分への免疫反応細胞の流入阻止、ｄ）血管壁への反応細胞の付着防止、およびｅ）損傷部分への免疫反応細胞の血管外流出阻止が含まれる（参照 TrowbridgeとEmlingの上記; RyanとMajno, Am.J.Pathol. 86:183-276, 1997年）;およびLilesとVan Voohis, J. Infect. Dis. 172:1574-1580, 1995）。
【０００４】
喘息は、肺の太い気道および細い気道の慢性疾患であり、人口の５％〜１０％が罹患している（PlautとZimmermanによる「アレルギーと過敏症のメカニズム」：基本免疫学第３版、W.E.Paul(ed.), Raven Press, ニューヨーク, 1993年, 1399-1425ページ）。喘息は小児期の最も発症率の高い慢性疾患であり、学校を欠席する主な原因である。大人の喘息は、推定2700万人の患者が来院し、600万人が仕事を休み、一年当たり活動が制限される日が9050万日に達するという結果をもたらす。喘息の罹患率および死亡率は世界的に増加している。喘息の一般評論は、Shefferらによる、国家喘息教育プログラム：喘息の診断と管理のための専門家パネルレポートガイドライン（Med. Care 31:MS20,1993年）に参照される。喘息反応は、人間の他に動物にとっても深刻さを増す問題となっている。例えば、喘息反応に苦しむ馬によって、競馬産業に影響が及んでいる。
【０００５】
喘息の最も顕著な特徴は、気管支痙攣あるいは気道の狭窄である。喘息患者は太い気道および細い気道の平滑筋が明らかに収縮しており、粘液産生が増加し、炎症が亢進している（PlautとZimmerman、上記）。Hoggによれば、喘息の炎症反応は粘膜で覆われた組織に特有であり、血管拡張、血漿滲出、炎症箇所への炎症細胞（好中球、単球、マクロファージ、リンパ球、および好酸球など）の漸増、および常在性組織細胞（例えば、肥満細胞）によるあるいは遊走性炎症細胞による炎症メディエーターの放出を特徴とする（炎症性疾患としての喘息、における、Hoggの「喘息の病理学」O'Byrne(ed.), Marcel Dekker, Inc., ニューヨーク, 1990年, 1-13ページ）。
【０００６】
Hargreaveらによれば、喘息はアレルギー反応、感染症に対する二次応答、産業あるいは職業暴露、ある種の化学物質あるいは薬剤の摂取、運動、および脈管炎などのような様々な原因によって誘発されうる（Hargreaveらによる、J.アレルギー臨床免疫.83：1013-1026, 1986年）。多くのケースで、アレルギー喘息の発作は、即時相と気管支刺激後４−６時間しておこる遅発相との２段階をもつ（Harrisonの内科学の原理, 第14版, Fruci他(eds.), McGraw-Hill, ニューヨーク, 1998年, 1419-1426ページ）。自然に治まる即時相には、肥満細胞からの細胞メディエーターの放出によって引き起こされる反応を含めた即時炎症反応が含まれる。遅発相反応は、数時間かけて徐々に出現し、多形核白血球の早期の流入と、好酸球の浸潤によってその後起こる線維素沈着により組織学的に特徴付けられる。
【０００７】
多くのアレルギー性喘息の患者は、「二重レスポンダー」であり、即時相（すなわち急性）と遅発相反応の両方を併発する。二重レスポンダーでは、急性反応の４−１２時間後に気道抵抗の二次的な増加が続く（「遅発相反応」またはLRP）。遅発相反応および、このような二重レスポンダーは臨床上重要である。なぜなら、遅発相反応は気道の炎症と相まって、長期気道過敏性（AHR）、喘息の悪化あるいは過敏性、症状の悪化をもたらし、そして一般に、積極的な治療を必要とする一部の患者に数日から数ヶ月に渡って続きうる、より重症型の臨床的喘息をもたらす。アレルギー動物における薬理学的研究により、二重レスポンダーと急性レスポンダーとでは、気管支収縮剤に対する反応だけでなく炎症性細胞の流入およびメディエーターの放出パターンも全く異なることが実証されている。
【０００８】
より重症型の喘息の特質である、気道過敏性（AHR）の増加は、抗原性および非抗原性の刺激の両方によって誘発されうる。遅発相反応でのアレルゲンに誘発された喘息および難治性の過敏性は、炎症を起こした肺組織への白血球、特に好酸球の漸増と関連している（Abraham他, Am. Rev. Respir. Dis. 138: 1565-157, 1988年）。好酸球は、15-HETE、ロイコトリエンC4、PAF、カチオン性タンパク質、好酸球ペルオキシダーゼを含む、複数種の炎症メディエーターを放出する。
【０００９】
一方、気道は遅発相反応（LPR's）によって影響を受ける臓器あるいは組織の単なるプロトタイプに過ぎないことが、知られている。二重レスポンダーの喘息患者において観察される、遅発相の気管支収縮および気道過敏性（AHR）は、喘息のみに見られる孤立した現象ではなく、肺疾患でも見られる。肺の症状に加えて、LPRに関連する皮膚、鼻、眼および全身の症状がある。LPRメカニズムの最新の知見によれば、アレルギーメカニズムに伴って生じると認識される臨床疾患（皮膚、肺、鼻、眼または他の器官にかかわらず）は、抗原チャレンジによって発生する即時のアレルギーあるいは過敏性反応の後に続く組織学的炎症コンポーネントを有すると考えられる。この連続した反応は、肥満細胞メディエーターに関係し、標的器官内の他の常在性細胞によって、または肥満細胞あるいは好塩基性脱顆粒のサイト内で強化された細胞によって増殖されると考えられる。
【００１０】
従来の喘息治療は、本質的に達成が困難である全てのアレルゲンの徹底的な回避、および、望ましくない副作用と最善ではない薬物動態学的性質を有する薬物による治療上の処方計画を基礎としていた。
【００１１】
例えば、喘息の治療で一般に使用されるβ２ー受容体作動薬は、気管支痙攣の治療には有効な薬であるが、気道の炎症あるいは気管支過敏性には効果がない。これに関し、Palmerらは、長時間作用型β２ー受容体作動薬であるサルメテロールを喘息管理における抗炎症治療の補助薬として用いることについて記述している（Palmer他、New Engl. J. Med. 331:1314-1319, 1994年）。しかしながら、Bhagatらは、β２ー受容体作動薬の定期的なあるいは長期の使用は、喘息の不十分なコントロール、アレルゲンに対する気道過敏性の増加、および運動、ヒスタミン、メタコリン、抗原チャレンジによって誘発される気管支収縮に対する防御の低下につながると主張する（Bhagat他、Chest 108:1235-1238、1995年）。さらに、β２ーアドレナリン作用薬単独の慢性的な使用は、β２ーアドレナリン作動性受容体のダウン・レギュレーションを引き起こし、気管支過敏性をより悪化させることが疑われている。
【００１２】
もう一つのよく処方される抗喘息薬であるテオフィリン（メチルキサンチン）の特徴として、その吸収度およびクリアランスの変動が大きいことが挙げられる。Woolockらは、遅発相および気道過敏反応を治療するためのコルチコステロイド剤の使用について記述しているが、大人の喘息患者では比較的安全であるものの、吸入コルチコステロイド剤は子どもに対しては非常に大きい毒性をもち、この毒性には副腎機能低下および骨密度の減少、骨成長の抑制が含まれると報告している（Woolock他、Am. Respir. Crit. Care Med. 153:1481-1488, 1996年）。Volcheckらは、クロモリンの使用が即時相および遅発相双方の喘息炎症反応を防ぐと記載している。しかしながらクロモリンは、喘息発作の前に投与された場合にのみ、喘息反応の防止に効果を示すことが分かっている（Volcheck他、Postgrad Med. 104(3):127-136, 1998）。
【００１３】
抗ヒスタミン薬は、ときにアレルギー喘息の症状を妨げあるいは中断するが（特に小児において）、ヒスタミンは数多くあるメディエーターの一つに過ぎないため、抗ヒスタミン薬は喘息に部分的に効果を示すだけである（Cussによる、「抗喘息薬の薬理学」：炎症性疾患としての喘息、O'Byrne, ed. (Marcel Dekker, Inc.; ニューヨーク 1990年, 199-250ページ)およびO'Byrneによる、「気道炎症と喘息」：炎症性疾患としての喘息、O'Byrne(ed.), Marcel Dekker, Inc., ニューヨーク, 1990年, 143-157ページ）。
【００１４】
Parishらは、WO88/05301において、抗炎症特性を示すと考えられる自然発生的な硫酸化多糖類を開示している。これらには、エンドグリコシダーゼ活性（例えば、ヘパリナーゼ）のインヒビターあるいはブロッカーとして、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、フコイダンおよびカラギーナンランバが含まれる。ヘパリンあるいは酸化、還元されたヘパリンの過ヨウ素酸塩のようなヘパリン誘導体によっても、同様の活性が実証されている。
【００１５】
ヒスタミン、ヘパリン、TNF-α、LTB4、プロテアーゼ、および反応細胞（例えば、肥満細胞）によって放出される多数のサイトカイン等の生物活性メディエーター物質が、潜在的に有用な抗炎症剤あるいはターゲットとして調査されている（GoodmanとGilmanによる「治療の薬理学的基礎」、Hardman他、eds., McGraw-Hill, １０版, 734ページ(2001年)；BuetlerとCerami、Ann. Rev. Immunol. 7:625-55;(1989年)）。
【００１６】
幾人かによって提唱されている基礎理論では、カスケード内の媒介化合物をアップあるいはダウン・レギュレーションすることによって、炎症反応を微調整、抑制、あるいは防止することができると考えられている。Cohenらは（WO92/19249；米国特許第5,474,987号；米国特許第5,686,431号、米国特許第5,908,837号）、低分子量のヘパリン（3kDa〜6kDaの分子量）が、TNF-α分泌を減少させることを明らかにした。しかしながら、Cohenらは、低分子量のヘパリンのモディフィケーションについては教示も示唆もしていない。
【００１７】
その後のCohenらの研究（WO94/11006；米国特許第5,861,382；および米国特許第6,020,323号参照）により、TNF-α分泌をダウン・レギュレーションする能力を持つと考えられ、それ故、あるコンディション下で抗炎症化合物として潜在的有用性があると考えられる特異的部分が同定された。Cohenにより報告されたコア化合物は、N-硫酸化4-デオキシ-4-エン-イズロノグルコサミンの４変異形あるいはN-アセチル化4-デオキシ-4-エン-イズロノグルコサミンである。注目すべきことに、別途試験された７つの硫酸置換変化体のうち、６つはTNF-αの活性を抑制する能力が「ニュートラル」であり、１の硫酸置換変異形は現にTNF-α活性を増加させることが見出された。
【００１８】
ヘパリンの硫酸化の度合いと炎症の関係は未解決のままである。従来技術は総じて、反応性部分の高硫酸化を示唆していない。Kennedy（米国特許第5,990,097号）は、選択的2-O，3-O-脱硫酸ヘパリンは、肺の炎症に関連した事象である、気道の平滑筋の増殖に有効なインヒビターであったことを開示する。さらに、Kilfeatherらは（Brit. J. Pharmacol., 114: 1442-1446, 1995年）、修正や脱離を行わない硫酸基を持つヘパリンあるいは低分子量ヘパリンが、インビトロ血清で牛の気管平滑筋細胞の増殖の誘発を阻害できることを教示する。KennedyとKilfeatherらは、硫酸化の問題だけでなく、Kilfeatherがさらに低分子量のヘパリンフラグメント（分子量＞3kDa）を使用し、Kennedyは使用しなかったという事実によっても、相互に区別できる。
【００１９】
従来技術では、そのままのヘパリン（例えば、Kennedy）あるいは低分子量へパリン（Cohen）を利用し、Ahmed（米国特許第5,690,910号；および米国特許第5,980,865）は超低分子量ヘパリン（分子量3kDaのヘパリンフラグメントより大きいCohenのものから区別できる、3kDaより小さい分子量を有するヘパリン）の使用を教示する。さらに、Cohenは低分子ヘパリンの非経口、経口、あるいは局所の投与ルートを教示し、Ahmedは超低分子量ヘパリンを吸入、眼内、鼻腔内、あるいは気管支内ルートによって投与することも可能であることを開示する。４つの活性変異形のみを生成することによる限定された成功を示す、N-硫酸化4-デオキシ-4-エン-イズロノグルコサミンあるいはN-アセチル化4-デオキシ-4-エン-イズロノグルコサミンの３箇所のみを硫酸置換した二糖類レベルでのCohenの研究以外には、高硫酸化の問題は扱われていない。従って、高硫酸化から離れ、脱硫酸化を重視する技術傾向がある。
【００２０】
このように、喘息治療に使用される現在の薬のモーダリティーは、多くの欠点を抱えている。一般に、従来の物質は作用持続時間が比較的短く、抗原チャレンジが起こった後に投与された場合は、部分的あるいは全体的に無効でありうる。さらに、β２ー受容体作動薬およびコルチコステロイドといった薬の使用に伴う深刻な副作用のため、このような薬の治療上の安全域は比較的狭く、これらを使用する患者は注意深くモニタリングされなければならない（WO94/06783, WO99/06025, US5,690,910, US5,980,865）。
【００２１】
それゆえ、炎症性疾患（アレルギー反応、喘息および喘息に関連する病変を含む）における炎症症状を治療しあるいは軽減するための改良された組成および方法を発見し発展させる必要性が残されている。そのような方法や組成は、従来の治療上のアプローチの欠点を解決しようとするものでなければならない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２２】
本発明は、哺乳類の炎症症状を治療しあるいは軽減するための化合物、薬剤組成および方法を提供することを課題とする。より具体的には、本発明は従来の喘息治療の欠点を克服する、喘息あるいは喘息に関連する病変（例えばアレルギー反応あるいは炎症性疾患）を含む肺の炎症の治療に関する。従って、本発明にかかる化合物、薬剤組成および方法は、喘息症状および喘息に関連する病変の症状、特に抗原刺激の後に続く喘息患者の遅発相反応を予防し、消滅させ及び／又は軽減するものである。
【課題を解決するための手段】
【００２３】
一面では、本発明は一般構造Iをもつ新規な二糖類化合物を提供する。
【００２４】
【化１６】
2005510453.tif 000002
【００２５】
構造中、Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６はＳＯ３−，ＰＯ３−あるいはＨのいずれかである。本発明のある実施形態においては、（ａ）Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６はそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか；または（ｂ）Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも５つがそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか；または（ｃ）Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも４つがそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか；または（ｄ）Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも３つがそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか；または（ｅ）Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも２つがそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれかである。上記実施形態（ａ）−（ｅ）全てに対し、（ｉ）Ｒ３およびＲ４双方がＳＯ３−である場合は、Ｒ１，Ｒ２，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも１つがＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか；または（ii）Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５がＳＯ３−である場合は、Ｒ１，Ｒ２，およびＲ６からなる群の少なくとも１つがＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか；または（iii）Ｒ１およびＲ４双方がＳＯ３−であり、且つＲ３がＳＯ３−でない場合は、Ｒ２，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも１つがＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれかであることが特に理解される。
【００２６】
本発明の一面に係るある実施形態においては、二糖類は構造II−VIIIをもつ化合物からなる群に含まれる。
【００２７】
【化１７】
2005510453.tif 000003
【００２８】
本発明の一面に係る別の実施形態においては、二糖類は構造IX−XVをもつ化合物からなる群に含まれる。
【００２９】
【化１８】
2005510453.tif 000004
【００３０】
本発明の一面に係る一実施形態では、本発明として構造XVIをもつ化合物が挙げられる。構造中、Ｒ１，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６はそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれかである。
【００３１】
【化１９】
2005510453.tif 000005
【００３２】
本発明の当該面に係る一実施形態では、前記二糖類は構造VIIIを有する。構造中、Ｒ１，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６はＳＯ３−である。
【００３３】
【化２０】
2005510453.tif 000006
【００３４】
もう一つの面では、本発明は、構造Iの化合物を治療的有効量含む、哺乳類の肺の炎症症状を治療しあるいは軽減するための薬剤組成に関する。
【００３５】
【化２１】
2005510453.tif 000007
【００３６】
構造中、Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６はＳＯ３−，ＰＯ３−あるいはＨのいずれかである。本発明のある実施形態においては、（ａ）Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６はそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか；または（ｂ）Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも５つがそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか；または（ｃ）Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも４つがそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか；または（ｄ）Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも３つがそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか；または（ｅ）Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも２つがそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれかである。上記実施形態（ａ）−（ｅ）全てに対し、（ｉ）Ｒ３およびＲ４双方がＳＯ３−である場合は、Ｒ１，Ｒ２，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも１つがＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか；または（ii）Ｒ１およびＲ４双方がＳＯ３−であり、且つＲ３がＳＯ３−でない場合は、Ｒ２，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも１つがＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか、および（iii）Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５のみがＳＯ３−である場合は、前記薬剤組成は前記化合物で強化されている（前記化合物を充分量含む）ことが特に理解される。
【００３７】
本発明のもう一つの面に係るある実施形態においては、前記薬剤組成の二糖類は、構造II−VIIIをもつ化合物からなる群に含まれる。
【００３８】
【化２２】
2005510453.tif 000008
【００３９】
本発明の当該面に係る別の実施形態においては、前記薬剤組成の二糖類は、構造IX−XVをもつ化合物からなる群に含まれる。
【００４０】
【化２３】
2005510453.tif 000009
【００４１】
本発明の当該面に係る一実施形態では、前記薬剤組成の二糖として構造XVIをもつ化合物が挙げられる。構造中、Ｒ１，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６はそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれかである。
【００４２】
【化２４】
2005510453.tif 000010
【００４３】
本発明の当該面に係る一実施形態では、前記薬剤組成の二糖として構造VIIIをもつ化合物が挙げられる。構造中、Ｒ１，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６はＳＯ３−である。
【００４４】
【化２５】
2005510453.tif 000011
【００４５】
別の面では、本発明は、本発明の当該面に従って薬剤組成を投与することを構成要件とする、哺乳類の炎症症状を治療しあるいは軽減する方法に関する。本発明のある実施形態においては、前記薬剤組成は肺の炎症を治療するのに有効である。肺の炎症の兆候に対し取りうる方法としては、当該分野で良く知られた手段（例えば、ポンプ、圧搾作動噴霧器、定量吸入器など）あるいはエアゾールディスペンサーによって、ここに記載された組成を気管支内に送達することが挙げられる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４６】
本発明は、哺乳類の炎症症状を治療しあるいは軽減するための新規な化合物、薬剤組成および方法を提供する。より具体的には、本発明は、喘息症状あるいは喘息が関連する病変（例えばアレルギー反応あるいは炎症性疾患）を含む肺の炎症の治療に関するものであって、従来の治療の欠点を克服するものである。本発明は、哺乳類の喘息症状あるいは喘息に関連する病変の症状を治療しあるいは軽減する薬剤組成を提供する。本発明はまた、喘息及び喘息に関連する病変を治療するためのそのような化合物および組成を使用する方法を提供する。本発明にかかる方法および組成は、喘息症状および喘息に関連する病変の症状、特に、抗原チャレンジに続く喘息患者の遅発相反応を予防し、治し、および／または低減するための治療手段として有用である。本発明はまた、副作用の発生をより少なくすると同時に、治療される症状に適合するよう操作および微調整できる方法および組成を提供する。
【００４７】
ここで使用される専門用語および科学用語は、特に定義しない限り、本発明が関連する分野の当業者によって、一般に理解される意味を有する。当業者にとって既知の様々な手順や物質が参照される。薬理学の一般的原則を示す標準的な参考資料には、Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10th Ed., McGraw Hill Companies Inc., NewYork(2001)(グッドマンとギルマンの治療学の薬理的基礎、10版、マグローヒル有限会社、ニューヨーク)が含まれる。本発明の実施に際しては、当業者に既知のいかなる適切な物質および/または方法も利用可能である。しかしながら、模範的な物質および方法を説明する。以下の説明および実施例において参照される物質、試薬およびこれと同等のものは、特に断りのない限り、市販品から得られる。
【００４８】
ここに参照される特許および科学論文は、当業者の知識を明確にし、それぞれが明確にかつ個々に参照により包含されると示されたのと同様に、その全体が参照によりここに包含される。ここに記載された参照と本明細書における具体的な教示の間に不一致がある場合は、後者を優先して適用すべきである。同様に、単語あるいは語句の一般的な定義と、本明細書中で具体的に示した単語あるいは語句の定義との間に不一致がある場合は、後者を優先して適用すべきである。
【００４９】
一面では、本発明は一般構造Iをもつ新規な二糖類化合物を提供する。
【００５０】
【化２６】
2005510453.tif 000012
【００５１】
構造中、Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６はＳＯ３−，ＰＯ３−あるいはＨのいずれかである。本発明のある実施形態においては、（ａ）Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６はそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか；または（ｂ）Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも５つがそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか；または（ｃ）Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも４つがそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか；または（ｄ）Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも３つがそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか；または（ｅ）Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも２つがそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれかである。上記実施形態（ａ）−（ｅ）全てに対し、（ｉ）Ｒ３およびＲ４双方がＳＯ３−である場合は、Ｒ１，Ｒ２，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも１つがＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか；または（ii）Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５がＳＯ３−である場合は、Ｒ１，Ｒ２，およびＲ６からなる群の少なくとも１つがＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか；または（iii）Ｒ１およびＲ４双方がＳＯ３−であり、且つＲ３がＳＯ３−でない場合は、Ｒ２，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも１つがＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれかであることが特に理解される。
【００５２】
本発明の一面に係るある実施形態においては、二糖類は構造II−VIIIをもつ化合物からなる群に含まれる。
【００５３】
【化２７】
2005510453.tif 000013
【００５４】
本発明の当該面に係る別の実施形態においては、二糖類は構造IX−XVをもつ化合物からなる群に含まれる。
【００５５】
【化２８】
2005510453.tif 000014
【００５６】
本発明の当該面に係る一実施形態では、二糖として構造XVIの化合物が挙げられる。構造中、Ｒ１，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６はそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれかである。
【００５７】
【化２９】
2005510453.tif 000015
【００５８】
本発明の当該面に係る一実施形態では、二糖として構造VIIIの化合物が挙げられる。。構造中、Ｒ１，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６はＳＯ３−である。
【００５９】
【化３０】
2005510453.tif 000016
【００６０】
当業者には、本発明の化合物が金属（例えば、Ｎａ，Ｋ，Ｃａ，ＭｇあるいはＢａ，またはＡｌ，Ｚｎ，Ｃｕ，Ｚｒ，Ｔｉ，Ｂｉ，Ｍｎ，またはＯｓなどのアルカリあるいはアルカリ土類金属）と、あるいは有機塩基（例えば、アミノ酸）と錯体を形成しあるいは塩を形成しうることが理解されるであろう。現在のところ好ましい塩は、ナトリウム塩およびカリウム塩である。
【００６１】
本発明の方法は、この方法によって恩恵を受けうる全ての哺乳類に使用される可能性がある。従って、本発明における「哺乳類」には人間だけでなく、人間以外の哺乳類、特に家畜も含まれる。
【００６２】
もう一つの面では、本発明は、構造Iの化合物を治療的有効量含む、哺乳類の肺の炎症症状を治療しあるいは軽減するための薬剤組成に関する。
【００６３】
【化３１】
2005510453.tif 000017
【００６４】
構造中、Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６はＳＯ３−，ＰＯ３−あるいはＨのいずれかである。本発明のある実施形態においては、（ａ）Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６はそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか；または（ｂ）Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも５つがそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか；または（ｃ）Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも４つがそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか；または（ｄ）Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも３つがそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか；または（ｅ）Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも２つがそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれかである。上記実施形態（ａ）−（ｅ）全てに対し、（ｉ）Ｒ３およびＲ４双方がＳＯ３−である場合は、Ｒ１，Ｒ２，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも１つがＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか；または（ii）Ｒ１およびＲ４双方がＳＯ３−であり、且つＲ３がＳＯ３−でない場合は、Ｒ２，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも１つがＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか、および（iii）Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５のみがＳＯ３−である場合は、前記薬剤組成が前記化合物で強化されていること（前記化合物を充分量含むこと）が特に理解される。
【００６５】
本発明の当該面に係るある実施形態においては、前記薬剤組成の二糖類は構造II−VIIIをもつ化合物からなる群に含まれる。
【００６６】
【化３２】
2005510453.tif 000018
【００６７】
本発明の当該面に係る別の実施形態においては、前記薬剤組成の二糖類は構造IX−XVをもつ化合物からなる群に含まれる。
【００６８】
【化３３】
2005510453.tif 000019
【００６９】
本発明の当該面に係る一実施形態では、前記薬剤組成の二糖として、構造XVIをもつ化合物が挙げられる。構造中、Ｒ１，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６はそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれかである。
【００７０】
【化３４】
2005510453.tif 000020
【００７１】
本発明の当該面に係る一実施形態では、前記薬剤組成の二糖として、構造VIIIをもつ化合物が挙げられる。
【００７２】
【化３５】
2005510453.tif 000021
【００７３】
構造中、Ｒ１，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６はＳＯ３−である。上述したように、本発明の化合物に関し、当業者には、本発明の化合物が金属（例えば、Ｎａ，Ｋ，Ｃａ，ＭｇあるいはＢａ，またはＡｌ，Ｚｎ，Ｃｕ，Ｚｒ，Ｔｉ，Ｂｉ，Ｍｎ，またはＯｓなどのアルカリあるいはアルカリ土類金属）と、あるいは有機塩基（例えば、アミノ酸）と錯体を形成しあるいは塩を形成しうることが正しく認識されるであろう。現在のところ好ましい塩は、ナトリウム塩およびカリウム塩である。
【００７４】
炎症の種類には、季節性あるいは通年性のくしゃみ、鼻水、鼻閉、およびしばしば結膜炎を特徴とするアレルギー性鼻炎および咽頭炎のような呼吸器疾患が含まれる。また、鼻粘膜の浮腫、鼻水および鼻閉塞を特徴とする急性鼻炎も含まれる。多くの場合、共通のウイルスによって引き起こされる。肺疾患としては、例えば、内因性あるいは外因性の喘息性気管支炎、炎症性肺疾患、急性慢性気管支炎、慢性気管支炎に続発する肺炎症反応、慢性閉塞性肺疾患、肺線維症、グッドパスチャー症候群および、白血球が関与しうるなんらかの肺の状態（特発性肺線維症およびその他の自己免疫性肺疾患を含むがこれに限定されるものではない）などがある。耳、鼻および咽頭の疾患としては、急性外耳炎、外耳のせつ腫症および耳真菌症などがある。本発明には、外傷性および伝染性鼓膜炎、急性耳管炎、急性漿液性中耳炎、および急性・慢性副鼻腔炎などの呼吸器疾患が含まれる。「肺の炎症」という言葉には、全ての炎症性肺疾患、急性慢性気管支炎、慢性気管支炎に続発する肺炎症反応、慢性閉塞性肺疾患、肺線維症、グッドパスチャー症候群および、白血球が関与しうるなんらかの肺の状態（特発性肺線維症およびその他の自己免疫性肺疾患を含むがこれに限定されるものではない）が含まれる。
【００７５】
ここで使用される「喘息」という言葉は、アレルギーに由来する状態であって、喘鳴、胸を締め付けられるような感じ、およびしばしば咳あるいは呼吸困難の発作を伴う持続的なまたは発作性の強制呼吸を含む症状を意味する。「喘息に関連する病変」とは主に、その症状が本質的に、関連する気管支攣縮を伴う炎症である状態を意味する。従って、喘息および喘息に関連する病変はどちらも、自然にあるいは治療の結果として短期間で変化する、気道の狭窄（平滑筋の収縮（痙攣）、粘膜の浮腫、気管支および細気管支のルーメン内の粘液の程度の変化を原因とする）を含む症状によって特徴付けられる。一般に、これらの症状は、アレルギー反応の過程で生じる、収縮因子および血管刺激物質（例えば、ヒスタミン、ある種のロイコトリエンあるいはある種のプロスタグランジン）の局所的リリースによって誘発される。「喘息に関連する病変」の代表例としては、気道過敏性を特徴とする非喘息性の状態（例えば、慢性気管支炎、気腫および嚢胞性線維症）があるが、これに限定されない。
【００７６】
さらに、高硫酸化二糖類の効果に関係する我々の発見に鑑みると、本発明は以下の症状の治療にも役立つはずである。（１）肺以外の場所での遅発相反応および炎症反応。例えば（ａ）アレルギー性鼻炎；（ｂ）アレルギー性皮膚炎；（ｃ）アレルギー性結膜炎；（２）炎症反応が主な役割を果たす肺外疾患：（ｉ）炎症性腸疾患；（ii）関節リウマチおよび他の膠原血管病；（iii）糸球体腎炎；（iv）炎症性皮膚疾患；および（v）サルコイドーシス。
【００７７】
ここで使用される、「症状を治療しあるいは軽減する」という言葉は、本発明の化合物を投与された固体の症状が、このような投与を受けない固体の症状と比較して、緩和され、予防され及び／又は回復されることを意味する。従って、喘息症状あるいは喘息に関連する病変の症状を治療しあるいは軽減する本発明の化合物は、二重レスポンダー個々における抗原チャレンジへの即時相喘息反応を緩和し、予防し及び／又は回復し、また好ましくは、二重レスポンダー個々における抗原チャレンジへの遅発相喘息反応を緩和し、予防し及び／又は回復し、またさらに好ましくは、二重レスポンダー個々における抗原チャレンジへの即時相及び遅発相喘息反応の両方を緩和し、予防し及び／又は回復する。当業者はここに記載した手順を用いて、喘息あるいは喘息に関連する病変に罹患しているか進行する傾向がある患者の症状に対する、本発明の化合物の薬効を判断することができるであろう。実施者は、ここに記載した化合物、組成および方法が、熟練した実施者（医者または獣医）によって継続的な臨床評価を伴って使用され、その後のステップに情報が与えられることを十分に理解するであろう。それ故、治療後に、実施者は標準的な手順に従い、肺の炎症の治療における改良を評価できるであろう。そのような評価により、続くステップへの援助、情報提供が可能になり、そして必要な場合には、本発明に従って投与される薬剤組成の量の適切な増加あるいは減少に関する情報が与えられるであろう。
【００７８】
「抗原」および「アレルゲン」という言葉はともに、喘息に罹患している固体にアレルギー反応を誘発し及び／又は喘息症状を誘発しうる、ほこりあるいは花粉のような微粒子を表すために使用される。従って、アレルゲンあるいは抗原で「チャレンジされた」喘息個体は、喘息反応を引き起こすのに充分な量のアレルゲンあるいは抗原に暴露される。
【００７９】
特に、本発明にかかる化合物及び組成は、動物実験において（ａ）気道過敏性（ＡＨＲ）とも呼ばれる、抗原で誘発される急性の気管支収縮反応（ＡＢＲ）および気管支過敏を防止すること、および（ｂ）治療された哺乳類の抗原チャレンジに続くＡＨＲを改良する点で効果を示すことが見出されている。
【００８０】
発明の化合物は、以下の実施例Ｉに記載するように、ヘパリンから生成してもよい。以下に記載されるプロセスではブタのヘパリンが使用されるが、本発明の化合物を生成するためにどのような哺乳類由来のヘパリンを使用してもよい。本発明の方法および組成に使用される硫酸化二糖類は、ここでは一般に、自然に分泌されるヘパリンから生成されたものであるが、本発明はヘパラン硫酸、デルマタン硫酸、コンドロイチン硫酸、ペントサン多硫酸及び／又は他のグリコサミノグリカン類およびムコ多糖類から生成された硫酸化多糖類の使用を含む。さらに、本発明の化合物は、標準的な有機化学技術によって人工的に合成されてもよい。
【００８１】
もし本発明に係る既定の化合物が、強化されていない製剤中で見られる量より高い量で存在するなら、薬剤組成はそのような化合物で強化されている。例えば、ある製剤が既定の化合物を１０％未満で含むことが知られていれば、組成中のその化合物の量を１０％以上に増量すれば、そのような組成はその化合物で「強化されている」といえる。本発明にかかる化合物は、希釈剤および賦形剤を含む、薬学的に許容される周知のキャリアのいずれかとともに「薬学的に許容されるビヒクル（vehicle）」中で任意で形成される(レミングトンの薬学、18版、ジェンナロ、マック出版社、イーストン、ペンシルバニア州1990年およびレミングトン：薬学のサイエンスとプラクティス、リッピンコット、ウィリアムズとウィルキンス  1995年  参照)。本発明の組成を生成するのに用いられる薬剤的に許容されるキャリア／ビヒクルの種類は、哺乳類へのその組成の投与形態によって変わりうるが、一般に「薬学的に許容されるキャリア」は生理的に不活性かつ非毒性である。本発明にかかる組成の製剤は、本発明の化合物を２種類以上（例えば、ＳＯ３−を５個有する二糖とＳＯ３−を６個有する二糖）、さらにその他の薬理活性を有する成分（例えば、ヘパリン）を含んでいてもよい。
【００８２】
本発明の化合物は、当業者に既知の製剤方法を用いて薬学的に許容されるビヒクル中で調製されてもよい。本発明の組成は標準的なルートで投与することができるが、好ましい投与は吸入ルートによるものである。本発明の組成には、経口、吸入、直腸、眼（硝子体内あるいは眼房内を含む）、鼻、局所（頬および舌下を含む）、膣、あるいは非経口（皮下、筋肉内、静脈内、皮内、および気管内を含む）に適したものが含まれる。さらに、既定の化合物を持続放出させるために、当該技術分野の標準的方法に従って、ポリマーを加えてもよい。
【００８３】
吸入による投与では、本発明の化合物は、食塩水あるいは水のような薬学的に許容されるキャリアとともに組成中に混合され、当業者に既知の吸入方法によって送達されうる。このような吸入方法および装置としては、ＣＦＣあるいはＨＦＡのようなエアゾール噴霧剤、あるいは生理的および環境的に許容される噴霧剤を含む定量吸入器が挙げられるが、これに限定されない。その他の装置としては、呼気操作吸入器、マルチドーズドライパウダー吸入器およびエアゾール噴霧器などがある。
【００８４】
一実施形態では、本発明の全ての面における組成の吸入投与は、ポンプまたは圧搾作動噴霧器によって行われる。本発明のいくつかの実施形態では、投与は定量吸入器（ＭＤＩ）あるいはエアゾールディスペンサーによって行われる。
【００８５】
本発明の組成の製剤は、好都合なことに剤形ごとに提供でき、上述したように従来の製剤技術により調製され得る。そのような技術には、本発明の化合物と、薬学的に許容されるキャリア（例えば、希釈剤あるいは賦形剤）とをかかわらせるステップが含まれる。一般に、製剤は、均一および緊密に有効成分を液体キャリアあるいは微粉化した固体キャリアまたはその両方とかかわらせ、そしてその後、必要であれば製品に成形することによって調製される。
【００８６】
吸入投与に適切な製剤には、当業者に既知の吸入装置によって投薬できる製剤が含まれる。そのような製剤には、粉剤および煙霧剤のようなキャリアが含まれていてもよい。本発明で使用される吸入組成は、噴霧および気管支内の使用に好適な有効成分を含有する液体または粉末組成、あるいは定量を投薬するエアゾールユニットによって投与されるエアゾール組成よりなってもよい。
【００８７】
本発明の好適な液体組成は、有効成分を「水性の薬学的に許容される吸入ビヒクル」（例えば、等張食塩水あるいは静菌性水および当該技術分野で周知の他の種類のビヒクルなど）中に含む。溶液は「ポンプ」あるいは「圧搾作動噴霧スプレー式ディスペンサー」によって、あるいは必要服用量の液体組成を患者の肺の中に吸入させることが可能な他の従来手段のいずれかによって投与される。
【００８８】
本発明の全ての面にかかる化合物を含有する適切な粉末組成としては、例えば、ラクトースあるいは気管支内投与に適用可能な他の不活性粉末と、有効成分とを十分に混合した、薬学的に許容される粉末製剤を挙げることができる。粉末組成はディスペンサーによって投与可能である。ディスペンサーには、エアゾールディスペンサー、あるいは粉末組成を破れやすいカプセル内に充填し、それを患者によって装置内に挿入し、装置によりカプセルに穴を開け、吸入に適した一定の流れで粉末を噴出するディスペンサーが含まれるが、これに限られない。
【００８９】
対象となる方法で使用される、本発明の全ての面にかかる化合物を含有する組成からなるエアゾール製剤は、典型的には噴霧剤、界面活性剤およびコソルベントを含み、適切な絞り弁で蓋をされた従来のエアゾール容器内に充填される。
【００９０】
肺の炎症を治療するために有益な、本発明の全ての面にかかる化合物を含む薬剤組成であって、経口投与に適するものとしては、粉末あるいは顆粒として；水性の液体または非水性の液体の溶液あるいは懸濁液として；あるいは水中油乳濁液または油中水乳剤としておよびボーラスなどとして、それぞれ所定量の有効成分を含有するカプセル、キャプレット、ジェルキャップ、カシェ（cachet）、ピル、あるいはタブレット等の個々のユニットがある。本発明の全ての面にかかる組成の投与は、溶液、懸濁剤あるいはエリキシル剤、散剤、トローチ剤、微粉粒子および浸透ディリバリーシステムによって、交互に行われてもよい。
【００９１】
タブレットは、状況に応じて１以上の補助的成分とともに、圧縮によりあるいは鋳型によって形成してもよい。圧縮錠は、適切な機械で、任意に結合材、滑剤、不活性希釈剤、防腐剤、界面活性剤または分散剤と混合された、粉末あるいは顆粒などの流動形態の有効成分を圧縮することによって、製造することができる。成形タブレットは、粉末化した化合物の混合物を、不活性の液体希釈剤で湿らせ、適切な機械で鋳型成形することによって製造することができる。タブレットは、任意にコーティングあるいは分割されてもよく、タブレット中の有効成分の徐放あるいは制御された放出を可能にするように形成してもよい。
【００９２】
口への局所投与に好適な本発明にかかる組成の製剤には、薬用キャンディー（成分を味付きの基剤、一般にサッカロースおよびアカシアあるいはトラガカント中に含む）；トローチ（有効成分をゼラチン及びグリセリン、あるいはサッカロースおよびアカシアのような不活性基剤中に含む）；およびうがい薬（投与するための成分を適切な液体キャリアー中に含む）が含まれる。
【００９３】
皮膚への局所投与に好適な本発明にかかる組成の製剤としては、投与するための有効成分を薬学的に許容されるキャリアー中に含む、軟膏、クリーム、ゲル、ローションおよびペーストなどが考えられる。考えられる局所用ディリバリーシステムとしては、投与する成分を含有する経皮貼布がある。
【００９４】
直腸投与用の本発明にかかる組成の製剤としては、例えば、カカオバターなどを含む好適な基剤を使用した坐剤がある。
【００９５】
経鼻投与に適した本発明にかかる組成の製剤には、キャリアーが個体の場合には、粒子大の粗末が含まれ、例えば、２０〜５００ミクロン範囲の粉末を、鼻から吸い込む方法で投与する。すなわち、鼻に当てて保持した粉末入り容器から、鼻孔を通じて急速に吸入することによって投与する。キャリアーが液体の場合、投与に適した製剤としては、例えば本発明にかかる化合物の水溶液あるいは油性溶液を含むスプレー式点鼻薬、エアゾール、あるいは点鼻薬などがある。
【００９６】
膣投与に適した本発明にかかる組成の製剤としては、本発明の化合物に加えて、当該技術分野で適切なものとして知られている薬学的に許容されるキャリアーを含む、ペッサリー、坐剤、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォームあるいはスプレー製剤などがある。
【００９７】
非経口投与に適した本発明にかかる組成の製剤には、酸化防止剤、安定剤、緩衝液、静菌剤および製剤を溶かして所定のレシピエントの血液と等張にする溶質などを含む水性及び非水性の無菌注射溶液と、懸濁化剤および増粘剤などを含む水性および非水性の無菌懸濁液が含まれる。製剤は、ユニット-ドーズ型またはマルチ-ドーズ型の容器、例えば、密封されたアンプルおよび水薬瓶などに入れられ、そして使用直前に、無菌の液体キャリアー（例えば、注射用蒸留水）を加えればよいだけの、フリーズドライ（凍結乾燥）状態で、保管してもよい。即時注射溶液および懸濁液は、前述したような無菌の散剤、顆粒剤および錠剤から調製してもよい。
【００９８】
別の面では本発明は、本発明にかかる薬剤組成を治療的有効量用いて、哺乳類の炎症症状を治療しあるいは軽減する方法に関する。本発明のある実施形態では、薬剤組成は肺の炎症治療に有用である。肺の炎症に適用される方法には、当該分野で良く知られた手段（例えば、ポンプ、圧搾作動噴霧器、定量吸入器など）によって、あるいはエアゾールディスペンサによって、ここに記載された組成を気管支内に送達することが含まれる。本発明の当該面に合致する組成に関しては、本発明の先の２面で述べたとおりである。
【００９９】
上述したように、本発明の当該面は、構造Iの化合物を含む薬剤組成を治療的有効量投与することを特徴とする、哺乳類の肺の炎症症状を治療しあるいは軽減するための方法に関する。
【０１００】
【化３６】
2005510453.tif 000022
【０１０１】
構造中、Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６はＳＯ３−，ＰＯ３−あるいはＨのいずれかである。本発明のある実施形態においては、（ａ）Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６はそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか；または（ｂ）Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも５つがそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか；または（ｃ）Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも４つがそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか；または（ｄ）Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも３つがそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか；または（ｅ）Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも２つがそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれかである。上記実施形態（ａ）−（ｅ）全てに対し、（ｉ）Ｒ３およびＲ４双方がＳＯ３−である場合は、Ｒ１，Ｒ２，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも１つがＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか；または（ii）Ｒ１およびＲ４双方がＳＯ３−であり、且つＲ３がＳＯ３−でない場合は、Ｒ２，Ｒ５，およびＲ６からなる群の少なくとも１つがＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれか、および（iii）Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５のみがＳＯ３−である場合は、前記薬剤組成が前記化合物を充分量含むことが特に理解される。
【０１０２】
治療的有効量の薬剤組成を投与するステップを含む、哺乳類の肺の炎症症状を治療しあるいは軽減するための方法を特徴とする、本発明の当該面に係るある実施形態では、前記薬剤組成の二糖類は構造II−VIIIをもつ化合物からなる群に含まれる。
【０１０３】
【化３７】
2005510453.tif 000023
【０１０４】
治療的有効量の薬剤組成の投与を必要とする、哺乳類の肺の炎症症状を治療しあるいは軽減するための方法を特徴とする、本発明の当該面に係る別の実施形態では、前記二糖類は構造IX−XVをもつ化合物からなる群に含まれる、
【０１０５】
【化３８】
2005510453.tif 000024
【０１０６】
本発明の当該面に係る一実施形態では、前記薬剤組成の二糖類として、構造XVIをもつ化合物が挙げられる。構造中、Ｒ１，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６はそれぞれ独自にＳＯ３−あるいはＰＯ３−のいずれかである。
【０１０７】
【化３９】
2005510453.tif 000025
【０１０８】
一実施形態では、前記薬剤組成の二糖類として、構造VIIIをもつ化合物が挙げられる。
【０１０９】
【化４０】
2005510453.tif 000026
【０１１０】
構造中、Ｒ１，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，およびＲ６はＳＯ３−である。当業者には、本発明の二糖類が薬学的に許容される形態をとるであろうということが、理解できる。従って、当業者には、本発明の方法において、金属（例えば、Ｎａ，Ｋ，Ｃａ，ＭｇあるいはＢａ，またはＡｌ，Ｚｎ，Ｃｕ，Ｚｒ，Ｔｉ，Ｂｉ，Ｍｎ，またはＯｓなどのアルカリあるいはアルカリ度類金属）とあるいは有機塩基（例えば、アミノ酸）と錯体を形成しあるいは塩を形成しうることが正しく認識される。現在のところ好ましい塩は、ナトリウム塩およびカリウム塩である。
【０１１１】
本発明の当該面に従って化合物を適用する場合（例えば、喘息治療のためなど）、哺乳類が抗原に曝露される前に投与しても、同時に投与しても、あるいは後に投与してもよい。当業者は、本発明にかかる化合物の投与と抗原曝露の具体的な順序が、選択された特定の化合物および抗原によって変わり得ることを正しく理解するであろう。さらに、抗原曝露に関して本発明にかかる化合物を投与するタイミングも、個々の状況に応じて哺乳類によって異なるであろう。熟練した実施者は、本発明にかかる化合物の投与のタイミング及び／又は順序を変えるに際し、患者を注意深くモニタリングすることによって投与を最適化するであろう。本発明にかかる治療の治療効果を判断するのに関連する臨床上の変化には、喘息および関連する病状に特有の症状および徴候（例えば、呼吸困難、喘鳴、咳、気管支過敏）の減少および肺機能検査における改善が含まれる。これらは患者の症状および治療者の観察を基礎とする。
【０１１２】
投与量は、治療しようとする状態、投与される本発明の特定の化合物、その哺乳類の年齢、体重および状態、そして投与ルートなどの他の臨床上のファクターによって決まるであろう。例えば、本発明にかかる化合物が硫酸基を５つあるいは６つ有する場合には、抗原チャレンジに対し薬効を生じさせるために使用される化合物の投与量は、より小さくなりうる。逆に言えば、本発明にかかる化合物が硫酸基を３つか４つしか有さない場合は、同じ薬効を達成する（すなわち、抗原チャレンジに対する即時相及び／又は遅発相反応を同じレベルまで低減させる）ために、より大きい投与量が必要となりうる。
【０１１３】
本発明の化合物を投与された哺乳類は、喘息あるいは喘息に関連する病変に苦しまなくて済むことが理解されるであろう。実際に、本発明の化合物は、喘息及び／又は喘息に関連する病変が悪化する傾向にある個体に、症状が何らかの形で悪化する前に、予防的に投与されてもよい。例えば、もしある患者が花粉シーズンに喘息症状が悪化することに気付いていれば、その個人に毎日及び／又は花粉の多い場所（例えば、庭）に行く前に、本発明の化合物を投与する（例えば、経口投与によって）ことが考えられる。同様に、ある患者が喘息発作を一度も起こしたことがなくても、家族の多くがそのような発作に苦しんでいれば、そのような喘息発作が始まるのを防止するために、その患者に本発明の化合物を予防的に投与することが考えられる。
【０１１４】
「治療的有効量」という言葉は、望まれる治療効果を有効に達成する投与量での治療を意味するために使用される。さらに、当業者には、本発明にかかる化合物の治療的有効量が、微調整によって及び／又は２以上の本発明の化合物を投与することによって、あるいは別の抗喘息化合物（例えば、コルチコステロイド）と本発明の化合物とを併用することによって、少なくなったり増えたりする可能性があることが理解されるであろう。本発明はそれゆえ、所定の哺乳類に独自の個々の要求に応じ、投与／治療を調整する方法を提供する。以下の実施例で説明するように、治療的有効量は、例えば実験的に、薬効（すなわち、抗原曝露に続く即時相及び／又は遅発相反応の減少）を同時に評価しながら、比較的低量で始め段階的に増加していくことによって容易に決定しうる。
【０１１５】
本発明のさらなる面では、有効な化合物を含有する組成は、抗原で誘発される遅発相喘息に苦しむ哺乳類患者、すなわち二重レスポンダーに対し、その患者が抗原チャレンジに曝露される前に、経口あるいは非経口で（例えば、IVまたはIM）投与される。
【０１１６】
当業者には、本発明にかかる化合物の投与回数が、その時々のその患者固有の医療状況によって、患者ごとに変更されうることが理解される。これに限定されるわけではないが、１日あたりの投与回数は、一般的に、１日あたり２〜４回と考えられる。
【０１１７】
以下の実施例は、本発明の特定の実施形態をさらに詳細に説明することを意図し、事実上限定を意味するものではない。ここに記載された具体的な物質および手順と均等な多数のものが、ごく普通の実験を通じて、当業者に認識され、あるいは解明され得るであろう。このような均等物は、この発明の範囲に含まれると見なされ、かつ請求の範囲に含まれる。
【実施例１】
【０１１８】
ヘパリン・ナトリウムの解重合
本発明にかかる代表的な高硫酸化化合物（下記の実施例２および３参照）の調製のための出発物質として用いられるとともに、対照試料としても用いられる硫酸化二糖類のフラクションの調製を説明するために、以下のプロトコルを使用する。以下の手順は、ヘパリン・ナトリウムの部分的な分解のために利用される、複数の取りうる方法の一つを記述するものである。室温で、250gの市販の（ブタの）ヘパリン-Na（SPL,Waunakee,WIから入手）を、３Ｌの水を入れたビーカーに加え、攪拌してスラリーにし、その時点で２Ｌの水を加え再び攪拌してヘパリン・ナトリウムを完全に溶解した。
【０１１９】
ヘパリン溶液のｐＨをその後5.98に調節した。ヘパリンの亜硝酸解重合を調節して行うために、この溶液に17.25gのNaNO2を加えた（0.25mmol、J.T.Baker、ACSグレード）。１０分間攪拌を続け、その間に約35.1ｍｌの37%HClをゆっくり加え（温度23℃の下）pHを3.00にした。放出されたNO2が泡立ち始め、溶液の色が黄緑色に変化した。時間０〜１２０分の間に記録されたｐＨ変化と温度変化は以下の通りであった。
【０１２０】
【表１】
2005510453.tif 000027
【０１２１】
溶液はその後、約22.5ｍｌの50%NaOHをゆっくり加えて冷まされ、ｐＨ＝6.75に調節された。
【実施例２】
【０１２２】
解重合されたヘパリンプレパレーションの限外ろ過
以下のプロトコルは、ろ過される（０＜3000Ｄａ）及びろ過されない（＞3000Ｄａ）本発明に係る代表的な二糖類を回収するためにとりうる方法の一つを説明するものである。代替方法は当該技術分野で周知であり、代わりに用いることができる。実施例１の記述に従って得られた、解重合されたヘパリン溶液は、dIＨ２Ｏで最終体積が８Ｌになるように希釈され、面積０．５ｍ２のPellicon2,3k,PLBC-C（カセット：Cat#P2PLBCC05）でろ過され（ミリポア(Bedford,MA)）（分子量３ｋＤａをカットオフ）、大きさが３ｋＤａ（3000ダルトン）未満のヘパリンオリゴ糖が回収され強化される（すなわち、ろ過されたものは3000ダルトン未満のオリゴ糖からなる）。
【０１２３】
【表２】
2005510453.tif 000028
【０１２４】
ろ過されなかったもの（すなわち、亜硝酸で処理したヘパリンのうち３ｋＤａより大きいもの）につき、ヘパリンの分解をさらに行うため、２０Ｍの溶液を用いて亜硝酸による二回目の解重合処理を行った。この二度目の処理を行ったオリゴ糖プレパレーションを、同じタイプのフィルター（すなわち、分子量３ｋＤａでカットオフ）を用いて、限外ろ過した後、ろ過されたもの（分子量が３ｋＤａ未満のもの）を、一回目の限外ろ過で得られたろ過物に加え、逆浸透により濃縮し、最終体積を２．５Ｌまで減じ、その後凍結乾燥した。
【実施例３】
【０１２５】
NaBH4によるオリゴ糖プレパレーションの還元
凍結乾燥したオリゴ糖プレパレーション（50g）を１Ｌの精製水に溶解し、氷浴で2-10℃まで冷却した。NaHCO３（21g）を冷却したオリゴ糖溶液に加え、完全に溶解するまで攪拌した。0.01ＭNaOH溶液400ｍＬ中の0.5ＭNaBH４溶液を調製し、冷却したオリゴ糖／NaHCO３溶液に６０分かけてゆっくり加えた。0.5ＭNaBH４溶液による処理により、オリゴミックス-CHOがオリゴミックス-CH2OHに還元される。反応プレパレーションを３時間2-10℃で攪拌し、その後濃塩酸を用いてｐＨ4.0にする。その後溶液のｐＨをNaOHで6.75に調節し、最終的に逆浸透により最小体積まで濃縮し、その後凍結乾燥して還元オリゴ糖を生成する。大きさが３ｋＤａ未満の還元オリゴ糖プレパレーションをその後、オリゴミックスの分別のため及び四糖類のNH4塩の回収のために、Bio-Rad Biogel P6樹脂を用いてサイズ排除クロマトグラフ（SEC）によって細分化する（0.2M NH4HCO3で溶離）。回収されたフラクションをカルバゾール・アッセイによって分析し、Abs530対フラクション数（Fraction Number）のプロットから回収フラクションのプロフィールを作成した。プロフィール上の類似のフラクションをプールし、その後、分離したフラクションをＮＨ４＋塩とするため及びNH4HCO3を除去するために凍結乾燥した。Amberlite IR120Plus イオン交換樹脂（Sigma-Aldrich）を用いた陽イオン交換により、塩をNa＋形に変換した。
【０１２６】
最終的に、凍結乾燥したフラクションをAmberlite IR120Plus 陽イオン交換樹脂（Sigma-Aldrichの市販品）で処理し、使用説明書に従ってアンモニウム（NH4＋）塩をナトリウム（Na＋）塩形に変換した。
【０１２７】
フラクションから、A.2.＋C.2.が得られた。
NMRによる二糖フラクションの分析により、フラクション中の約85%のオリゴ糖が次の構造を持つことが確認された。
【０１２８】
【化４１】
2005510453.tif 000029
【０１２９】
これに対しA.2.＋C.2.フラクション中の約３〜５％の分子は次の構造を持つ化合物である。
【０１３０】
【化４２】
2005510453.tif 000030
【実施例４】
【０１３１】
代表的な高硫酸化二糖類の調製
本発明にかかる代表的な高硫酸化二糖類を調製するために利用できる方法の一例を説明するために、２つの方法を用いた。
【０１３２】
方法１
水５０ｍＬ中の二糖ナトリウム塩（2.5g）のA.2.＋C.2.フラクション溶液を、使用説明書に従ってSigma-Aldrichから市販されているDowex500WX200酸性樹脂との反応を通じてプロトン形に変換した。酸性のろ過液をテトラブチルアンモニウム水酸化物で中和し、その溶液を凍結乾燥してテトラブチルアンモニウム（Ｂｕ４Ｎ＋）塩を綿状の固体として得た。その後、無水ＤＭＦ（５０ｍＬ）を二糖Ｂｕ４Ｎ＋塩と(CH3)3NSO3（5.22ｇ）の混合物に、アルゴン下で加えた。反応混合物を４８時間５０℃で加熱した。その後、この溶液を室温まで冷やした。冷えた後、エタノール中の飽和酢酸ナトリウム（NaOAc）溶液100ｍＬを加えて、前記混合物を室温で２０分間攪拌し、2.5ＬのＨ２Ｏで希釈し、その後500ダルトン（すなわち、0.5kDa）膜でろ過した。ろ過されなかったもの（すなわち、0.5kDaより大きいもの）は凍結乾燥した。凍結乾燥に続き、ろ過されなかったものを0.2MのNH4HCO3溶液中に再懸濁し、使用説明書に従いBio-Rad Biogel P6樹脂（Bio-Rad,Hercules,CA）でクロマトグラフにかけ、0.2MのNH4HCO3で溶離して高硫酸化二糖のＮＨ４＋塩（3.5g）を得た。ＮＨ４＋塩の一部（2.4g）をAmberlite IR 120 Plus陽イオン交換樹脂との反応を通じてNa＋形に変換した（Sigma-Aldrichの市販品、使用説明書に従って最終的にNa＋塩を白色固体として得た（2.31g））。
【０１３３】
方法２
アルゴン下で、DMF15mL中の、二糖Na＋塩0.5ｇ（実施例３で得られたA.2.＋C.2.フラクション）と(CH3)3NSO3  3ｇの混合物を、４８時間６０℃で加熱した。反応混合物をその後室温まで冷やし、１０％の酢酸ナトリウム（NaOAc）水溶液２０ｍＬで希釈し、室温で２０分攪拌した。エタノール１００ｍＬを加えて、反応混合物を高真空下で濃縮し固体の残留物を得た。残留物を５００ｍＬの水に溶解し、５００ダルトンの膜（５０ｍＬの水で３回洗浄）でろ過した。Na＋未ろ過物（すなわち、５００ダルトンより大きいサイズの分子）を凍結乾燥し、オフホワイトの個体生成物を得た。
【０１３４】
上記方法により、高硫酸化二糖が得られた。そのうち１つのフラクション（811-25-1と称する）が、以下の構造を持つことが、ＮＭＲ分析によって確認された（データは示さない）。
【０１３５】
【化４３】
2005510453.tif 000031
【実施例５】
【０１３６】
治療した羊の肺の評価
本発明にかかる代表的な二糖類の、炎症を治療／軽減する効果を例証するために、ブタ回虫抗原に対する急性気管支収縮反応のみが実証された６匹の羊が、全ての研究用のモデルとして用いられた。
【０１３７】
肺の気流抵抗を測定するために、胸郭のガス量をボディ・プレチスモグラフィーによって測定する一方、羊にカフス付き経鼻的気管内挿管用チューブを挿管して、肺の気流抵抗（ＲＬ）を食道のバルーン・カテーテル技術により測定した。これらの方法は一般に認めらた、文献中に見受けられる周知の方法である。データはスペシフィックＲＬ（「ＳＲＬ」，ＲＬ倍の胸郭ガス量（Ｖｔｇ）と定義する）として表した。
【０１３８】
気道の反応性を評価するために、緩衝生理食塩水の吸入前後および濃度を増加させたカルバコール（0.25，0.5，1.0，2.0,  4.0%wt/vol溶液）をそれぞれ１０呼吸投与した後のＳＲＬを測定することによって、吸入カルバコールに対する累積的用量反応曲線を描いた。気道反応性はＳＲＬを４００％の上位ベースラインまで増加させたカルバコール（ブレスユニットで）の累積的吸入誘発量（ＰＤ４００）を決定することによって測定した。一ブレスユニットは１％カルバコール溶液の一ブレスとして規定した。
【０１３９】
気道の研究のために、各動物のベースラインの気道反応性（ＰＤ４００）を決定し、その後異なる実験日に、実験羊の気道に対しブタ回虫で抗原チャレンジした。ＳＲＬをチャレンジ直後と、その後８時間について１時間ごとに測定した。チャレンジ後ＰＤ４００は抗原チャレンジ後２４時間測定した。データは（ａ）平均値±ＳＥ ＳＲＬの変化率；（ｂ）ベースライン率としてＰＤ４００；および（ｃ）急性気管支収縮反応（ＡＢＲ）の予防率および（ｄ）気道過敏性（ＡＨＲ）の予防率として表した。
【０１４０】
ＳＲＬ（変化率）＝
（チャレンジ後ＳＲＬ−ベースラインＳＲＬ）×１００／ベースラインＳＲＬ    （ａ）
ＰＤ４００（ベースライン率）＝
チャレンジ後ＰＤ４００×１００／ベースラインＳＲＬ                     （ｂ）
ＡＢＲ予防率＝
（対照△ＳＲＬ％−試験化合物△ＳＲＬ％）×１００／対照△ＳＲＬ％      （ｃ）
ＡＨＲ予防率＝
(試験化合物PD400−対照抗原PD400)×100／ベースラインPD400−対照抗原PD400 （ｄ）
【実施例６】
【０１４１】
二重レスポンダーのアレルギー羊に対する高硫酸化二糖類の静脈内投与
気道の反応性を評価するために、緩衝生理食塩水の吸入前後および濃度を増加させたカルバコール（0.25，0.5，1.0，2.0,  4.0%wt/vol溶液）をそれぞれ１０呼吸投与した後のＳＲＬを測定することによって、吸入カルバコール（Ｃ６Ｈ１５ＣｌＮ２Ｏ２）に対する累積的用量反応曲線を描いた。気道反応性はＳＲＬを４００％の上位ベースラインまで増加させたカルバコール（ブレスユニットで）の累積的吸入誘発量（ＰＤ４００）を決定することによって測定した。一ブレスユニットは１％カルバコール溶液の一ブレスとして規定した。このプロトコルは少なくとも１４日後に繰り返された。ただし、各動物は抗原チャレンジの一時間前に静脈注射によって、試験硫酸化二糖類あるいは高硫酸化二糖類の一つを規定用量投与された（対照動物には抗原チャレンジ前に静脈注射を行わなかった）。
【０１４２】
第一の研究では、硫酸化二糖A.2.＋C.2.フラクションによる前処置（すなわち、抗原チャレンジの一時間前に静脈注射を行った）が、喘息二重レスポンダー羊の抗原反応に与える効果を測定した。第一グループの６匹の羊には、時間＝０で抗原のみを与える一方、第二グループの６匹の羊には、時間＝−１（すなわち、抗原チャレンジの一時間前）に静脈注射によって0.25mg/kgのA.2.＋C.2.を投与し、時間＝０で抗原を与えた。硫酸化二糖A.2.＋C.2.フラクション0.25mg/kgを静脈注射した羊は、反応の即時相（抗原チャレンジ後３時間未満）において、抗原チャレンジに対する反応がわずかに減少した；一方、A.2.＋C.2.による前処置は、遅発相反応（抗原チャレンジ後３〜８時間）に対しては効果を示さなかった（データは示さない）。しかしながら、高硫酸化二糖の前処置は、抗原刺激に対する羊の反応に、劇的な改善効果を示した。時間＝−１に、静脈注射で高硫酸化二糖（811-25-1）0.25mg/kgの前処置を受けた６匹の羊は、時間＝０に抗原チャレンジのみを受けた６匹の対照羊と比較して、反応がはるかに低くなった。高硫酸化二糖で処置した動物における抗原誘発反応の低下は、対照と比較して、即時および遅発相反応の両方で明白であった。
【０１４３】
図１は、対照動物の他、A.2.＋C.2.（すなわち、実施例３で説明したようにして得られた）で前処置された動物および811-25-1（すなわち、実施例４で説明したようにして得られた高硫酸化二糖）の両方の結果を表すものであり、二重レスポンダー羊の抗原チャレンジに対する即時および遅発反応の両方に対する軽減／治療において、811-25-1による前処置が驚くほど有益な効果を示すことを表す。より多量の811-25-1の投与も、抗原のみの対照動物と比較して、二重レスポンダー羊の抗原チャレンジに対する即時および遅発反応の両方に対し、有益な効果を示すことが分かった。時間＝−１に静脈注射で高硫酸化二糖（811-25-1）0.5mg/kgによる前処置（抗原チャレンジ前の）を受けた６匹の羊は、時間＝０に抗原チャレンジのみを受けた６匹の対照羊と比較して反応がはるかに低くなった。
【０１４４】
抗原のみを投与した対照と比較して、A.2.＋C.2.二糖あるいは811-25-1高硫酸化二糖のいずれかによる前処置が、二重レスポンダー（抗原チャレンジへの）羊の即時相および遅発相反応に対して示す効果も研究した。即時相および遅発相の両方において、時間＝−１の静脈注射による811-25-1 0.25mg/kgの前処置は、抗原のみで処理した動物（対照動物）あるいは時間＝−１に静脈注射によるA.2.＋C.2. 0.25mg/kgの前処置を受けた動物のどちらと比較しても、抗原チャレンジに対する反応の低下に劇的な有効性を示した（データは示さない）。
【０１４５】
この実施例で記述した結果から、本発明の高硫酸化二糖を静脈投与によって前処置した動物の抗原誘発反応の低下は、対照と比較して、即時および遅発相反応の両方で明らかであることが実証された。
【実施例７】
【０１４６】
二重レスポンダーアレルギー羊への硫酸化二糖類の吸入投与
本発明の有効な代表的化合物および方法を、経口投与の場合で試験するために、前記実施例で示した手順を引き続き用いた。気道研究のためであるということを除いては、プロトコルはベースライン気道反応（ＰＤ４００）を決定した後少なくとも１４日間繰り返され、各動物は試験硫酸化二糖類あるいは高硫酸化二糖類の一つを、時間＝０のブタ回虫抗原でのチャレンジ前約３０分（すなわち、時間＝−０．５）あるいはチャレンジ後ＳＲＬ測定の直後に、吸入により規定の用量投与された。
【０１４７】
研究の第一セットにおいて、水に懸濁し、吸入により投与した高硫酸化二糖類の効果を分析した。図４〜７は、抗原チャレンジ（時間＝０）の前、時間＝−０．５に、水に溶かした高硫酸化二糖811-25-1をそれぞれ全量1，2.5，5.0および10.0吸入により投与した、複数の投与量による分析研究の結果を示す。図５〜７に示すように、811-25-1を全量2.5〜10ｍｇ前処置で投与した動物の全てにおいて、抗原チャレンジのみを受けた対照動物と比較して、抗原チャレンジに対する即時相および遅発相反応の減少が見られた。
【０１４８】
水に懸濁し、吸入により投与した各種投与量の811-25-1の、AHRに対する効果を図４Ａ〜７Ａに示す。
【０１４９】
総合すれば、これらのデータは、実施者が即時相反応と遅発相反応のどちらについてより顕著な減少を望むかにより、各患者に対し本発明の高硫酸化二糖類の投薬量範囲を選択して治療することができることを表す。
【０１５０】
研究の第２セットにおいて、高硫酸化二糖はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に溶解され、抗原チャレンジ前に吸入により投与された。ＰＢＳに懸濁した0.25mg/kgの811-25-1の二重レスポンダー羊への吸入投与による前処置は、抗原のみを受けた対照動物と比較して、抗原に対する即時および遅発相反応の両方の減少という結果を示した（データは示さず）。
【実施例８】
【０１５１】
二重レスポンダーアレルギー羊に対する硫酸化二糖類の経口投与
試験動物および評価方法に関する実施例３の手順を、引き続きこの実施例でも用いた。気道研究のためであるということを除いては、プロトコルはベースラインの気道反応（ＰＤ４００）を決定した後少なくとも１４日間繰り返され、各動物は、高硫酸化二糖811-25-1を0.5mg/kg、ブタ回虫抗原でのチャレンジ（時間＝０）前約９０分（すなわち、時間＝−１．５）に、経口投与された（対照動物では抗原チャレンジ前に二糖類の経口投与は行わなかった）。
【０１５２】
0.5mg/kgの811-25-1を経口投与により前処置した動物の、即時および遅発反応の両方におけるSRLの変化率を、対照動物と比較した。抗原チャレンジ９０分前の811-25-1の0.5mg/kg経口投与は、二重レスポンダー（抗原チャレンジに対し）羊の即時および遅発相反応の両方を減少させた（抗原のみの対照動物と比較して）（データは示さない）。
【実施例９】
【０１５３】
羊の即時相喘息における高硫酸化二糖類の効果
同じ炭素基本構造を持つが、ＳＯ３−基の数が異なる二糖類（化合物Ａ〜Ｄ。これらの化合物間の硫酸化の程度を簡単に表すと、Ａ＜Ｂ＜Ｃ＜Ｄとなる）について、静脈投与による投与が記載された上記実施例のプロトコルに従って、アレルギー羊で試験を行った。この実験は、本発明の高硫酸化二糖類が炎症（より具体的には、喘息の即時相の炎症）を阻害する効果を実証するために計画された。図２は、即時相反応の治療に対する、同じ炭素構造を持つ低硫酸化二糖類と比較した、二糖類の高硫酸化による有益な効果を示す棒グラフである（Ｂ＝化合物730-57、Ｃ＝化合物730-96、Ｄ＝化合物811-25）。比較はＡ＝A.2＋C.2.と行った。
【実施例１０】
【０１５４】
羊の遅発相喘息における高硫酸化二糖類の効果
同じ炭素基本構造を持つが、ＳＯ３−基の数が異なる二糖類（化合物Ａ〜Ｄ。これらの化合物間の硫酸化の程度を簡単に表すと、Ａ＜Ｂ＜Ｃ＜Ｄとなる）について、静脈投与による投与が記載された上記実施例のプロトコルに従って、アレルギー羊で試験を行った。この実験は、本発明の高硫酸化二糖類が炎症（より具体的には、喘息の遅発相の炎症）を阻害する効果を実証するために計画された。図３は、遅発相反応の治療に対する、同じ炭素構造を持つ低硫酸化二糖類と比較した、二糖類の高硫酸化による有益な効果を示す棒グラフである（Ｂ＝化合物730-57、Ｃ＝化合物730-96、Ｄ＝化合物811-25）。比較はＡ＝A.2＋C.2.と行った。
【０１５５】
請求の範囲に記載されている発明は、詳細に、そして具体的な実施例を参照して説明されているが、請求の範囲に記載されている発明に対する種々の変更および改良が、本発明の精神および範囲を逸脱することなくなされ得ることが、当業者にとって明白である。従って、例えば、当業者は、ここに記載した具体的な物質および手段と均等な多数のものを、通常の実験から認識し、あるいは解明できるであろう。そのような均等物は本発明の範囲内にあると見なされ、本発明の特許請求の範囲に含まれる。
【図面の簡単な説明】
【０１５６】
【図１】図１は、抗原のみ（●）、抗原プラスA.2.＋C.2.二糖の0.25mg/kg静脈内投与（■）あるいは抗原プラス811-25-1高硫酸化二糖の0.25mg/kg静脈内投与（▽）に対する抗原投与（時間＝０）後の表示時間に伴う羊のレスポンスの変化率（すなわち、ＳＲＬ）を比較するグラフである。示されたデータは、まず薬剤なしで抗原に曝され、それから数日後に再びA.2.＋C.2.二糖の前治療とともにあるいは811-25-1高硫酸化二糖の前治療とともに抗原に曝露された６匹の羊（ｎ＝６）における、ＳＲＬの抗原誘発による平均±ＳＥ変化率に関するものである。
【図２】図２は、Ａ＝A.2.＋C.2.硫酸化二糖と比較した、本発明に基づく各種の代表的化合物（Ｂ＝化合物730-57，Ｃ＝化合物730-96、Ｄ＝化合物811-25）の即時相反応に対する薬効を示す棒グラフである。化合物Ａ−Ｄは共に同じ炭素基本構造を有するが、ＳＯ３−基の数が異なる（これらの化合物間の硫酸化の程度は、Ａ＜Ｂ＜Ｃ＜Ｄとして表される）。
【図３】図３は、Ａ＝A.2.＋C.2.硫酸化二糖と比較した、本発明に基づく各種の代表的化合物（Ｂ＝化合物730-57，Ｃ＝化合物730-96、Ｄ＝化合物811-25）の遅発相反応に対する薬効を示す棒グラフである。化合物Ａ−Ｄは共に同じ炭素基本構造を有するが、ＳＯ３−基の数が異なる（これらの化合物間の硫酸化の程度は、Ａ＜Ｂ＜Ｃ＜Ｄとして表される）。
【図４】図４は、炎症反応を有効に減じる最適な投与量範囲を確立するために、本発明に基づく各種の代表的化合物について行った（アレルギー羊で）、複数の投与量検討実験のうちの１番目を表す、グラフと棒グラフである。図４Ａ：示されたデータは、薬剤なしで抗原に曝露されたものと、エアゾール化された811-25-1高硫酸化二糖（全量１ｍｇ）を投与されて抗原に曝露された５匹の羊（ｎ＝５）における、ＳＲＬの抗原誘発による平均±ＳＥ変化率に関するものである。図４Ｂ：アレルギー羊のＡＨＲに対する前処置の効果を表す棒グラフである。データは、まず薬剤なしで抗原に曝され、それから数日後にエアゾール化された811-25-1高硫酸化二糖（全量１ｍｇ）の前処置に続いて再び抗原に暴された羊（ｎ＝５）のグループについて、ベースライン、抗原チャレンジ後２４時間での平均±ＳＥ ＰＤ４００を、ブレスユニットで表したものである。
【図５】図５は、炎症反応を有効に減じる最適な投与量範囲を確立するために、本発明に基づく各種の代表的化合物について行った（アレルギー羊で）、複数の投与量検討実験のうちの２番目を表す、グラフと棒グラフである。図５Ａ：示されたデータは、薬剤なしで抗原に曝露されたものと、エアゾール化された811-25-1高硫酸化二糖（全量２．５ｍｇ）を投与されて抗原に曝露された５匹の羊（ｎ＝５）における、ＳＲＬの抗原誘発による平均±ＳＥ変化率に関するものである。図５Ｂ：アレルギー羊のＡＨＲに対する前処置の効果を表す棒グラフである。データは、まず薬剤なしで抗原に曝され、それから数日後にエアゾール化された811-25-1高硫酸化二糖（全量２．５ｍｇ）の前処置に続いて再び抗原に暴された羊（ｎ＝５）のグループについて、ベースライン、抗原チャレンジ後２４時間での平均±ＳＥ ＰＤ４００を、ブレスユニットで表したものである。
【図６】図６は、炎症反応を有効に減じる最適な投与量範囲を確立するために、本発明に基づく各種の代表的化合物について行った（アレルギー羊で）、複数の投与量検討実験のうちの３番目を表す、グラフと棒グラフである。図６Ａ：示されたデータは、薬剤なしで抗原に曝露されたものと、エアゾール化された811-25-1高硫酸化二糖（全量５ｍｇ）を投与されて抗原に曝露された５匹の羊（ｎ＝５）における、ＳＲＬの抗原誘発による平均±ＳＥ変化率に関するものである。図６Ｂ：アレルギー羊のＡＨＲに対する前処置の効果を表す棒グラフである。データは、まず薬剤なしで抗原に曝され、それから数日後にエアゾール化された811-25-1高硫酸化二糖（全量５ｍｇ）の前処置に続いて再び抗原に暴された羊（ｎ＝５）のグループについて、ベースライン、抗原チャレンジ後２４時間での平均±ＳＥ ＰＤ４００を、ブレスユニットで表したものである。
【図７】図７は、炎症反応を有効に減じる最適な投与量範囲を確立するために、本発明に基づく各種の代表的化合物について行った（アレルギー羊で）、複数の投与量検討実験のうちの４番目を表す、グラフと棒グラフである。図７Ａ：示されたデータは、薬剤なしで抗原に曝露されたものと、エアゾール化された811-25-1高硫酸化二糖（全量１０ｍｇ）を投与されて抗原に曝露された５匹の羊（ｎ＝５）における、ＳＲＬの抗原誘発による平均±ＳＥ変化率に関するものである。図７Ｂ：アレルギー羊のＡＨＲに対する前処置の効果を表す棒グラフである。データは、まず薬剤なしで抗原に曝され、それから数日後にエアゾール化された811-25-1高硫酸化二糖（全量１０ｍｇ）の前処置に続いて再び抗原に暴された羊（ｎ＝５）のグループについて、ベースライン、抗原チャレンジ後２４時間での平均±ＳＥ ＰＤ４００を、ブレスユニットで表したものである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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