(57)【要約】本発明は、敗血症の根底にある免疫応答を阻害する方法、敗血症を予防する方法、敗血症を治療する方法、及びそのような方法において有用な薬学組成物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｉ）Ｖｐｒ蛋白質；
ｉｉ）Ｖｐｒ蛋白質の機能性断片；
ｉｉｉ）制御要素に作動可能に連結されたＶｐｒ蛋白質をコードする核酸；及び
ｉｖ）制御要素に作動可能に連結されたＶｐｒ蛋白質の機能性断片をコードする核酸
からなる群から選択される一つ又は複数の成分を含む治療上有効な量の免疫変調薬学組成物を個体に投与する工程を含む、ＳＩＲＳ又は敗血症を有すると診断された個体を治療する方法。
【請求項２】
制御要素に作動可能に連結されたＶｐｒ蛋白質又はその機能性断片をコードする核酸が個体に投与される、請求項１記載の方法。
【請求項３】
核酸が１から５００マイクログラムの核酸の核酸の用量にて投与される、請求項２記載の方法。
【請求項４】
核酸が２５から２５０マイクログラムの核酸の核酸の用量にて投与される、請求項２記載の方法。
【請求項５】
核酸が約１００マイクログラムの核酸の核酸の用量にて投与される、請求項２記載の方法。
【請求項６】
制御要素に作動可能に連結されたＶｐｒ蛋白質又はその機能性断片をコードする核酸がプラスミドに含まれる、請求項２記載の方法。
【請求項７】
制御要素に作動可能に連結されたＶｐｒ蛋白質又はその機能性断片をコードする核酸がウイルスベクターに含まれる、請求項２記載の方法。
【請求項８】
ウイルスベクターがレトロウイルスベクター及びアデノウイルスベクターからなる群から選択される、請求項７記載の方法。
【請求項９】
免疫変調薬学組成物を投与する工程を少なくとも１回繰り返す、請求項１記載の方法。
【請求項１０】
免疫変調薬学組成物を投与する工程を１日あたり１回から６回企てる（undertaken）、請求項１記載の方法。
【請求項１１】
さらに、治療上有効な量の抗感染剤を個体に投与する一工程を少なくとも含む、請求項１記載の方法。
【請求項１２】
抗感染剤が、アミカシン、トブラマイシン、ネチルマイシン、ゲンタマイシン、セファロスポリン、セフタジジム、マクサラクタム、カーボペンネム、イミペンネム、アズトレオナム；アンピシリン、ペニシリン、ウレイドペニシリン、アウグメンチニン、アンオテリシン、ファムビル及びアシクロビルからなる群から選択される、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
抗感染剤を個体に投与する工程が免疫変調薬学調製物を投与する工程と同時に実施される、請求項１１記載の方法。
【請求項１４】
前炎症性サイトカイン及び敗血症マーカー蛋白質の濃度／個体の血液血漿の状態を監視し、免疫変調薬学組成物の追加用量の必要性を決定し、そして追加用量の免疫変調薬学組成物を投与する追加の工程を含む、請求項１記載の方法。
【請求項１５】
ＴＮＦａの血液血漿レベルを監視し、そして免疫変調薬学組成物の追加用量の必要性を約２５ｐｇ／ｍｌより高い血液血漿レベルのＴＮＦａにより決定する、請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
免疫変調薬学組成物を投与する工程が連続投与を含む、請求項１記載の方法。
【請求項１７】
個体がＶｐｒ蛋白質又はその機能性断片を投与される、請求項１記載の方法。
【請求項１８】
Ｖｐｒ態様又はその機能性断片を、１日あたり体重ｋｇあたり０．１から１００ｍｇにて投与する、請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
Ｖｐｒ態様又はその機能性断片を、１日あたり体重ｋｇあたり０．５から５０ｍｇにて投与する、請求項１７記載の方法。
【請求項２０】
Ｖｐｒ態様又はその機能性断片を、又は１日あたり体重ｋｇあたり１．０から１０ｍｇにて投与する、請求項１７記載の方法。
【請求項２１】
ｉ）Ｖｐｒ蛋白質；
ｉｉ）Ｖｐｒ蛋白質の機能性断片；
ｉｉｉ）制御要素に作動可能に連結されたＶｐｒ蛋白質をコードする核酸；及び
ｉｖ）制御要素に作動可能に連結されたＶｐｒ蛋白質の機能性断片をコードする核酸
からなる群から選択される一つ又は複数の成分を含む予防上有効な量の免疫変調薬学組成物を個体に投与する工程を含む、敗血症にかかる危険性が高いと同定された個体において敗血症を予防する方法。
【請求項２２】
制御要素に作動可能に連結されたＶｐｒ蛋白質又はその機能性断片をコードする核酸が個体に投与される、請求項２１記載の方法。
【請求項２３】
核酸が１から５００マイクログラムの核酸の核酸の用量にて投与される、請求項２２記載の方法。
【請求項２４】
核酸が２５から２５０マイクログラムの核酸の核酸の用量にて投与される、請求項２２記載の方法。
【請求項２５】
核酸が約１００マイクログラムの核酸の核酸の用量にて投与される、請求項２２記載の方法。
【請求項２６】
制御要素に作動可能に連結されたＶｐｒ蛋白質又はその機能性断片をコードする核酸がプラスミドに含まれる、請求項２２記載の方法。
【請求項２７】
制御要素に作動可能に連結されたＶｐｒ蛋白質又はその機能性断片をコードする核酸がウイルスベクターに含まれる、請求項２２記載の方法。
【請求項２８】
ウイルスベクターがレトロウイルスベクター及びアデノウイルスベクターからなる群から選択される、請求項２７記載の方法。
【請求項２９】
免疫変調薬学組成物を投与する工程を少なくとも１回繰り返す、請求項２１記載の方法。
【請求項３０】
免疫変調薬学組成物を投与する工程を１日あたり１回から６回企てる（undertaken）、請求項２１記載の方法。
【請求項３１】
さらに、治療上有効な量の抗感染剤を個体に投与する一工程を少なくとも含む、請求項２１記載の方法。
【請求項３２】
抗感染剤が、アミカシン、トブラマイシン、ネチルマイシン、ゲンタマイシン、セファロスポリン、セフタジジム、マクサラクタム、カーボペンネム、イミペンネム、アズトレオナム；アンピシリン、ペニシリン、ウレイドペニシリン、アウグメンチニン、アンオテリシン、ファムビル及びアシクロビルからなる群から選択される、請求項３１記載の方法。
【請求項３３】
抗感染剤を個体に投与する工程が免疫変調薬学調製物を投与する工程と同時に実施される、請求項３１記載の方法。
【請求項３４】
前炎症性サイトカイン及び敗血症マーカー蛋白質の濃度／個体の血液血漿の状態を監視し、免疫変調薬学組成物の追加用量の必要性を決定し、そして追加用量の免疫変調薬学組成物を投与する追加の工程を含む、請求項２１記載の方法。
【請求項３５】
ＴＮＦａの血液血漿レベルを監視し、そして免疫変調薬学組成物の追加用量の必要性を約２５ｐｇ／ｍｌより高い血液血漿レベルのＴＮＦａにより決定する、請求項３４記載の方法。
【請求項３６】
免疫変調薬学組成物を投与する工程が連続投与を含む、請求項２１記載の方法。
【請求項３７】
個体がＶｐｒ蛋白質又はその機能性断片を投与される、請求項２１記載の方法。
【請求項３８】
Ｖｐｒ態様又はその機能性断片を、１日あたり体重ｋｇあたり０．１から１００ｍｇにて投与する、請求項３７記載の方法。
【請求項３９】
Ｖｐｒ態様又はその機能性断片を、１日あたり体重ｋｇあたり０．５から５０ｍｇにて投与する、請求項３７記載の方法。
【請求項４０】
Ｖｐｒ態様又はその機能性断片を、又は１日あたり体重ｋｇあたり１．０から１０ｍｇにて投与する、請求項３７記載の方法。
【請求項４１】
抗感染剤、及び
ｉ）Ｖｐｒ蛋白質；
ｉｉ）Ｖｐｒ蛋白質の機能性断片；
ｉｉｉ）制御要素に作動可能に連結されたＶｐｒ蛋白質をコードする核酸；及び
ｉｖ）制御要素に作動可能に連結されたＶｐｒ蛋白質の機能性断片をコードする核酸
からなる群から選択される一つ又は複数の成分を含む、敗血症を予防及び治療するための薬学組成物。
【請求項４２】
抗感染剤が、アミカシン、トブラマイシン、ネチルマイシン、ゲンタマイシン、セファロスポリン、セフタジジム、マクサラクタム、カーボペンネム、イミペンネム、アズトレオナム；アンピシリン、ペニシリン、ウレイドペニシリン、アウグメンチニン、アンオテリシン、ファムビル及びアシクロビルからなる群から選択される、請求項４１記載の薬学組成物。
【請求項４３】
薬学組成物が、さらに、ＳＩＲＳ／敗血症の治療における少なくとも一つの添加物を含む、請求項４０記載の薬学組成物。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
発明の分野
本発明は、ＳＩＲＳ／敗血症の基礎となる免役応答を阻害する方法、ＳＩＲＳ／敗血症を予防する方法、ＳＩＲＳ／敗血症を治療する方法、及びそのような方法において有用な薬学組成物に関する。
発明の背景
細菌感染及び他の強い刺激は、全身性の炎症又は全身性の炎症性応答症候群（ＳＩＲＳ）をもたらし得る免役応答を起こす（Ｂｕｒｎｅｌｌ  Ｒ．，１９９４，Ｃｉｒｃ．Ｓｈｏｃｋ  ４３：１３７；Ｂａｈｒａｎｉ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｐｒｏｇ．Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｓ．３９２：１９７；引用により本明細書に編入される）。重度のＳＩＲＳは「多臓器不全症候群」（ＭＯＤＳ）を導き、発熱温度の変化、低中毒症（hypotoxemia）、強呼吸（trachypnea）、頻脈（tachycardia）、内皮の炎症、心筋不全、癒合亢進（hyperfusion）、精神状態の変質、血管の衰弱、及び最終的な臓器の損傷、例えば急性呼吸障害症候群、凝血異常、心不全、腎不全、ショック及び／又は昏睡を伴う。（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌａｇｅ  ｏｆ  Ｃｈｅｓｔ  Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ／Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ，Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．，１９９２，２０：８６４；及びＢｏｎｅ，１９９５，ＪＡＭＡ  ２７３：１５５，引用により本明細書に編入される）
ＳＩＲＳが感染により引き起こされる場合、それを敗血症（sepsis）と呼ぶ。敗血症は、重度の敗血症の臨床段階に進行し、最終的には敗血症ショックに進行する。臨床上の敗血症は、細菌が感染の臨床上の出現に付随するような状況を意味することとして広く定義される。ＳＩＲＳ及び敗血症の臨床上の兆候は、限定ではないが、（１）３８℃を超えるか又は３６℃未満の体温；（２）１分あたり９０を超える心拍数；（３）１分あたり２０を超えるか又はＰａＣＯ2＜３２ｍｍ  Ｈｇの呼吸速度；（４）１２０００／ｃｕ  ｍｍを超えるか、４，０００／ｃｕ  ｍｍ未満か又は１０％を超える非成熟（帯状）形態の白血球数カウント；（５）臓器不全、癒合亢進又は高血圧を含む（Ｂｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｃｈｅｓｔ  １０１：１６４４，引用により本明細書に編入される）。敗血症のショックは不十分な組織の潅流により特徴付けされ、組織への不十分な酸素の供給、低血圧及び乏尿を導く。
【０００２】
感染が起こったら、感染部位のマクロファージが活性化されてＴＮＦ−ａ及びＩＬ−１を分泌して、血漿蛋白質の組織への放出の増加、食細胞及び白血球の組織への移動の増加、及び血管壁への血小板の接着の増加を導く。この様式において、局部の脈管は閉塞されて、病原体が感染部位に局在する。しかしながら、敗血症においては、感染が全身性になり、そしてＴＮＦ−ａ誘導性の血管の閉塞は悲劇となる。ＴＮＦ−ａの全身性の放出は血管の透過性の増加のために血管拡張を血漿の容量の損失を引き起こし、ショックを導く。敗血症のショックにおいて、ＴＮＦ−ａはさらに散在性の血管内凝固（血液クロッティング）を誘発して、小さな脈管内のクロットの精製及びクロッティング蛋白質の大量の消費を導く。血液を凝固させる患者の能力が損失するにつれ、生命維持に必要な器官、例えば、腎臓、肝臓、心臓及び肺は、通常の潅流の不全により、危険にさらされる。敗血症のショックは８１％ほどの死亡率をもたらす。
【０００３】
エシェリヒアコリは敗血症の多くのケースの病原体であるが、しかしながら、他のグラム陽性細菌、例えばクレブシエラ−エンテロバクター−セラチア群及びシュードモナスも症状を起こし得る。グラム陽性微生物、例えばスタフィロコッカス、及び全身性感染及び真菌感染も少数のケースにおいて症状を起こし得る。尿生殖路、胃腸管、及び呼吸管は、敗血症を導く、もっとも共通の感染部位である。他の敗血症関連感染部位は、創傷、火傷及び骨盤感染、及び感染された血管内カテーテルを含む。
【０００４】
敗血症は、血管侵入に感染性とさせる疾患又は症状を有する入院患者、又は火傷においては外傷の患者又は外科の患者にもっとも共通である。患者を血管侵入に対して感染性とさせる要因は、一般に弱った免役系、例えば新生児又は老人に見られるもの、及び感染に対しての局所感染性の増加をもたらす症状又は疾患、例えば、機能が低下した循環系、糖尿病及びＡＩＤＳを含む。最終的には、ＩＬ−１遺伝子の特定の対立遺伝子の存在の為に起こるかもしれないように、誇張した免役応答の傾向を有する被験者も、敗血症を発症する高い危険性にある（米国特許番号６，２５１，５９８、引用により本明細書に編入される）。
【０００５】
敗血症の患者の予後は感染の重度には依存しないが患者のＳＩＲＳ／敗血症反応の重度に依存するので（Ｐｉｌｚ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｋｒａｎｋｅｎｐｆｌｅｇｅ−Ｊｏｕｒｎａｌ  ２９：４８３，引用により本明細書に編入される）、多くの診断アッセイは免役性の応答の側面に焦点を絞っている。Ｃｅｎｔｏｃｏｒ社のＴＮＦ−ａの免役計量アッセイ（ＷＯ  ９０／０６３１４，引用により本明細書に編入される）は、患者の血液中のこの炎症性媒介物質を測定するための２つの抗体を用いる。Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｅｒｏｎａｕｔｉｃｓ及びＳｐａｃｅ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎにより開発されたアッセイはＡｚｕｒｉｎの抽出により患者血液中のシュードモナス細菌を検出し、そしてその検出はモノクローナル抗体による（米国特許番号５，２１０，０１９，引用により本明細書に編入される）。ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ（Ｗａｌｋｅｒｖｉｌｌｅ，Ｍｄ）からの敗血症アッセイ及びＳｅｉｋａｇａｋｕ  Ｋｙｏｔｏ社（東京、日本）からのＬｉｍｕｌｕｓ  Ａｍｅｂｏｃｙｔｅ  Ｌｙｓａｔｅ  Ａｓｓａｙは患者血液中のエシェリヒアコリの存在を検出する。他の敗血症診断アッセイは、敗血症の応答の間の白血球細胞により生成された酸化物の存在（米国特許番号５，８０４，３７０、引用により本明細書に編入される）、敗血症マーカーペプチドのプロカルシトニンの存在（米国特許番号５，６３９，６１７、引用により本明細書に編入される）、白血球高親和性Ｆｃ因子の存在（ＣＤ６４）の発現（Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  １：３，編入される本明細書に編入される）；血清Ｃ−反応性蛋白質（ＣＲＰ）（Ｄｒｅｗｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ａｎｎ．ＮＹ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７６２：３９８；Ｋａｗａｍｕｒａ  ａｎｄ  Ｎｉｓｈｉｄａ，１９９５，Ａｃｔａ  Ｐａｅｄｉａｔｒ．８４：１０，共に引用により本明細書に編入される）；好中球表面ＣＤ１１ｂレベル（米国特許番号６，０７７，６６５、引用により本明細書に編入される）、及び選択された未飽和遊離脂肪酸の飽和した遊離脂肪酸に対する比率（米国特許番号５，７８０，２３７，引用により本明細書に編入される）を検出する。
【０００６】
ＨＩＶ−アクセサリー遺伝子ｖｐｒは、増殖、分化、アポトーシス、サイトカイン生成、及びＮＦ−？Ｂ媒介性転写を含む多くの宿主細胞の事象の制御において暗示されてきたウイルス蛋白質Ｒ（Ｖｐｒ）をコードする（Ｌｅｖｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｃｅｌｌ  ７２：５４１−５５０；Ａｙｙａｖｏｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ３：１１１７−１１２３；Ｓｔｅｗａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７１：５５７９−５５９２）。ＮＦ−？Ｂ活性化は、抗原特異的免役応答を特に広げるいくつかのサイトカイン及びケモカインの誘導に重要である。ＮＦ−？Ｂ活性化は、ＣＤ２８同時刺激経路により誘発された前炎症性サイトカイン、特にＴＮＦａの誘導において重要な役割も担う（Ｍｏｒｉｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５８：３４８３−３４９１；Ｆｒａｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１２：４３５７−４３６３）。サイトカインの発現パターンは、炎症の応答の性質及び持続性に影響する。例えば、ＩＦＮ−？及びＴＮＦの生成は増強された細胞免疫性を誘導するのにうってつけであるが、ＩＬ−４とＩＬ−１０はＢ細胞が抗体産生細胞に分化することを補助することに関係する（Ｐａｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｃｅｌｌ  ７６：２４１−２５１）。変異性ＮＦ−？Ｂ結合部位及び及びＩｋ？を用いた研究は、競合が、ＮＦ−？ＢとＳＰ−１を含む転写因子がＲＡＮＴＳＥ（Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｎ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，Ｎｏｒｍａｌ  Ｔ  Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ａｎｄ  Ｓｅｃｒｅｔｅｄ）の遺伝子発現に重要であることを示す（Ｍｏｒｉｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５８：３４８３−３４９１）。
【０００７】
ＣＤ８+Ｔ細胞はＣＴＬ誘導を通してＨＩＶ感染を制御するのに重要な役割を担うと信じられている。さらに、ＣＤ８+Ｔ細胞は、β−ケモカインＲＡＮＴＥＳ，ＭＩＰ−１ａ，ＭＩＰ−１β，及びＭＤＣを含むいくつかの因子の分泌に関与する（Ｂｒｉｎｃｈｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１４：２９６１−２９６６；Ｃｏｃｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７０：１８１１−１８１５；Ｐａｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７８：６９５−６９８）。ＣＤ８+ＣＴＬは、ウイルス感染に対する重要な免役性防御である。
【０００８】
ケモカインは感染における白血球の補充の制御及び免役活性化に重要である（Ｓｃｈａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：８６５−８７３）。Ｔ細胞の活性化は、抗原特異的Ｔヘルパー細胞並びに細胞障害性エフェクター細胞の増殖（expansion）に必要な特定のケモカイン／サイトカインの合成をもたらす（Ｗｅｉｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｃｅｌｌ  ７６：２６３−２７４）。それらのＴ細胞トラフィッキング及び免役活性化における役割に加えて、β−サイトカインは、確立されたマクロファージ細胞系並びに第一期の（primary）白血球において、侵入に必要なウイルスコアレセプターの干渉を通してＨＩＶ感染を阻害し得る（Ｆｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７２：８７２−８７７；Ｄｏｒｎａｚ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｃｅｌｌ  ８５：１１４９−１１５８）。例えば、ケモカインは、ＴＮＦ細胞レセプター（ＴＣＲ）とＣＤ２８／ＣＴＬＡ−４の同時ライゲーションの後にＴ細胞のいくつかのサブセットにより生成される（Ｔａｕｂ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５６：２０９５−２１０３；Ｈｅｒｏｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５９：４１５０−４１５３）。
【０００９】
Ｔ細胞増殖の誘導、ＣＴＬ誘導及びサイトカイン分泌は、各々、抗原提示細胞（ＡＰＣｓ）上に存在するそれらのリガンドＣＤ８０又はＣＤ８６によるか又はＣＤ４０／ＣＤ４０リガンドを通してＴＣＲ複合体の連動状態（engagement）及びＣＤ２８／ＣＴＬＡ−４同時刺激分子の相互作用を共に必要とし、Ｔ細胞の活性化を誘導するのに必要な第２のシグナルを提供する（Ｆｒａｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  １４：３５７−３６２；Ｃｒａｂｔｒｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４３：３５５−３６１；Ｌｉｎｓｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１：１９１−２１２；Ｊｕｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  １５：３２１−３３１）。研究が示したことは、ＣＤ２８を通したＴ細胞の活性化がβ−ケモカインの生成を増強し、抗ウイルス効果を生じたことであった（Ｃａｒｒｏｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７６：２７３−２７６；Ｌｅｖｉｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７２：１９３９−１９４３；Ｂｉｓｓｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，ＡＩＤＳ  １１：４８５−４９１）。炎症部位におけるＣＤ８+細胞の補充と活性化は、特定のＣＴＬ前駆体の頻度を増加させる（Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：３２５９−３２６８；Ｄｏｈｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖｉｅｗｓ  １５９：１０５−１１７）。ケモカインの合成をブロックすることは、免役応答に必須の細胞を補充するためにケモカインの合成をあてにする炎症性疾患の兆候を改善させるかもしれない。
【００１０】
細胞の免疫性、特にＭＨＣ−制限されたＣＴＬ応答は、多数のウイルス感染の防御及び浄化において固有の役割を担うと考えられる。ＨＩＶ−１感染した個体内のＣＤ８+細胞の数の低下は、免疫系の悪化と平行して、低下した抗ウイルス効果及び疾患の進行に相関してきた（Ｍａｃｋｅｗｉｃｚ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８７：１４６２−１４６６；Ｐａｎｔａｌｅｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９４：９８４８−９８５３）。ＨＩＶ−１感染したが長期間進行しなかった者、ＨＩＶ感染した母親から生まれた非感染の子供、及び繰り返し暴露されたがまだ未感染である血清上は陰性の個体の研究からの情報は、ウイルス負荷を制御すること、及びおそらくは疾患の進行を制限することにおけるＣＴＬ応答の役割を支持してきた（Ｂｏｒｒｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６８：６１０３−６１１０；Ｒｏｗｌａｎｄ−Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １：５９−９４）。
【００１１】
全身性炎症、例えばＳＩＲＳ及びより特定すれば敗血症及び敗血症ショックを治療するための方法及び薬学組成物に関する要求が残されている。そのような方法は、症状を発症する危険のある患者においてＳＩＲＳ／敗血症を予防して、ＳＩＲＳ／敗血症と診断された患者を有効に治療するのに、特に必要である。
発明の概要
発明は、一つ又は複数の以下の成分：Ｖｐｒ蛋白質；Ｖｐｒ蛋白質の機能性断片；制御要素に作動可能に連結されたＶｐｒ蛋白質をコードする核酸；及び制御要素に作動可能に連結されたＶｐｒ蛋白質の機能性断片をコードする核酸を含む治療上有効な量の免疫変調薬学組成物を個体に投与する工程を含む、ＳＩＲＳ又は敗血症を有すると診断された個体を治療する方法に関する。好ましくは、免疫変調薬学組成物を投与する工程は、少なくとも１日に１回、好ましくは１回から６回繰り返される。別の好ましい態様において、免疫変調薬学組成物を投与する工程は、連続投与を含む。
【００１２】
ＳＩＲＳ又は敗血症を有すると診断された個体を治療する方法のいくつかの態様において、個体は、制御要素に作動可能に連結されたＶｐｒ蛋白質又はその機能性断片をコードする核酸を投与される。当該核酸は、好ましくは、１から５００マイクログラムの核酸、２５から２５０マイクログラムの核酸又は約１００マイクログラムの核酸の用量にて投与される。制御要素に作動可能に連結されたＶｐｒ蛋白質又はその機能性断片をコードする核酸は、好ましくは、プラスミド又はウイルスベクター内に含まれる。ウイルスベクターは、好ましくは、レトロウイルスベクター及びアデノウイルスベクターである。
【００１３】
ＳＩＲＳ又は敗血症を有すると診断された個体を治療する方法のいくつかの態様において、個体は、Ｖｐｒ蛋白質又はその機能性断片を投与される。当該Ｖｐｒ態様又はその機能性断片は、好ましくは、１日あたり体重ｋｇあたり０．１から１００ｍｇ、１日あたり体重ｋｇあたり０．５から５０ｍｇ又は１日あたり体重ｋｇあたり１．０から１０ｍｇにて投与される。
【００１４】
別の態様において、ＳＩＲＳ又は敗血症を有すると診断された個体を治療する上記の方法は、さらに、治療上有効な量の抗感染剤を個体に投与する一工程を少なくとも含む。当該抗感染剤は、好ましくは、アミカシン、トブラマイシン、ネチルマイシン、ゲンタマイシン、セファロスポリン、セフタジジム、マクサラクタム、カーボペンネム、イミペンネム、アズトレオナム；アンピシリン、ペニシリン、ウレイドペニシリン、アウグメンチニン、アンオテリシン、ファムビル又はアシクロビルである。抗感染剤を投与する工程は、好ましくは、免疫変調薬学調製物を投与する工程と同時に実施される。
【００１５】
別の態様において、ＳＩＲＳ又は敗血症を有すると診断された個体を治療する上記の方法は、前炎症性サイトカイン及び敗血症マーカー蛋白質の濃度／個体の血液血漿の状態を監視し、免疫変調薬学組成物の追加用量の必要性を決定し、そして追加用量の免疫変調薬学組成物を投与する追加の工程を含む。好ましくは、ＴＮＦａの血液血漿レベルを監視し、そして免疫変調薬学組成物の追加用量の必要性を約２５ｐｇ／ｍｌの血液血漿レベルのＴＮＦａにより決定する。
【００１６】
発明の別の側面は、ＳＩＲＳ又は敗血症にかかった危険性が高いと同定された個体においてＳＩＲＳ又は敗血症を予防する方法であり、一つ又は複数の以下の成分：Ｖｐｒ蛋白質；Ｖｐｒ蛋白質の機能性断片；制御要素に作動可能に連結されたＶｐｒ蛋白質をコードする核酸；及び制御要素に作動可能に連結されたＶｐｒ蛋白質の機能性断片をコードする核酸を含む治療上有効な量の免疫変調薬学組成物を個体に投与する工程を含む。好ましくは、免疫変調薬学組成物を投与する工程は、少なくとも１日に１回、好ましくは１回から６回繰り返される。別の好ましい態様において、免疫変調薬学組成物を投与する工程は、連続投与を含む。
【００１７】
ＳＩＲＳ又は敗血症にかかった危険性が高いと同定された個体においてＳＩＲＳ又は敗血症を予防する方法のいくつかの態様において、個体は、制御要素に作動可能に連結されたＶｐｒ蛋白質又はその機能性断片をコードする核酸を投与される。当該核酸は、好ましくは、１から５００マイクログラムの核酸、２５から２５０マイクログラムの核酸又は約１００マイクログラムの核酸の用量にて投与される。制御要素に作動可能に連結されたＶｐｒ蛋白質又はその機能性断片をコードする核酸は、好ましくは、プラスミド又はウイルスベクター内に含まれる。ウイルスベクターは、好ましくは、レトロウイルスベクター及びアデノウイルスベクターである。
【００１８】
ＳＩＲＳ又は敗血症にかかった危険性が高いと同定された個体においてＳＩＲＳ又は敗血症を予防する方法のいくつかの態様において、個体は、Ｖｐｒ蛋白質又はその機能性断片を投与される。当該Ｖｐｒ態様又はその機能性断片は、好ましくは、１日あたり体重ｋｇあたり０．１から１００ｍｇ、１日あたり体重ｋｇあたり０．５から５０ｍｇ又は１日あたり体重ｋｇあたり１．０から１０ｍｇにて投与される。
【００１９】
別の態様において、ＳＩＲＳ又は敗血症にかかった危険性が高いと同定された個体においてＳＩＲＳ又は敗血症を予防する上記の方法は、さらに、治療上有効な量の抗感染剤を個体に投与する一工程を少なくとも含む。当該抗感染剤は、好ましくは、アミカシン、トブラマイシン、ネチルマイシン、ゲンタマイシン、セファロスポリン、セフタジジム、マクサラクタム、カーボペンネム、イミペンネム、アズトレオナム；アンピシリン、ペニシリン、ウレイドペニシリン、アウグメンチニン、アンオテリシン、ファムビル又はアシクロビルである。抗感染剤を投与する工程は、好ましくは、免疫変調薬学調製物を投与する工程と同時に実施される。
【００２０】
別の態様において、ＳＩＲＳ又は敗血症にかかった危険性が高いと同定された個体においてＳＩＲＳ又は敗血症を予防する上記の方法は、前炎症性サイトカイン及び敗血症マーカー蛋白質の濃度／個体の血液血漿の状態を監視し、免疫変調薬学組成物の追加用量の必要性を決定し、そして追加用量の免疫変調薬学組成物を投与する追加の工程を含む。好ましくは、ＴＮＦａの血液血漿レベルを監視し、そして免疫変調薬学組成物の追加用量の必要性を約２５ｐｇ／ｍｌの血液血漿レベルのＴＮＦａにより決定する。
【００２１】
発明の別の側面は、敗血症を予防及び治療するのに有用な薬学組成物であって、抗感染剤及びＶｐｒ蛋白質；Ｖｐｒ蛋白質の機能性断片；制御要素に作動可能に連結されたＶｐｒ蛋白質をコードする核酸；及び制御要素に作動可能に連結されたＶｐｒ蛋白質の機能性断片をコードする核酸からなる群から選択される一つ又は複数の成分を含む。好ましくは、抗感染剤は、アミカシン、トブラマイシン、ネチルマイシン、ゲンタマイシン、セファロスポリン、セフタジジム、マクサラクタム、カーボペンネム、イミペンネム、アズトレオナム；アンピシリン、ペニシリン、ウレイドペニシリン、アウグメンチニン、アンオテリシン、ファムビル及びアシクロビルからなる群から選択される。好ましくは、薬学組成物は、さらに、ＳＩＲＳ／敗血症の治療における少なくとも一つの添加物を含む。
【００２２】
発明の別の側面は、敗血症を予防及び治療するのに有用な薬学組成物であって、予防上又は治療上有効な量の、Ｖｐｒ蛋白質；Ｖｐｒ蛋白質の機能性断片；制御要素に作動可能に連結されたＶｐｒ蛋白質をコードする核酸；及び制御要素に作動可能に連結されたＶｐｒ蛋白質の機能性断片をコードする核酸からなる群から選択される一つ又は複数の成分を含む。いくつかの態様において、上記薬学組成物は連続の点滴のために製剤化される。いくつかの態様において、上記薬学組成物は、分割した用量に関して製剤化される。
発明の好ましい態様の記載
Ｉ．定義
本明細書にて使用される、用語「蛋白質」及び「ポリペプチド」は、交換可能なように使用されて、蛋白質、ポリペプチド及びペプチドを含む蛋白質様化合物を意味することを意図する。
【００２３】
本明細書にて使用される、用語「個体（individual）」は、本発明の用途を標的とした脊椎動物を意味する。本発明により意図される「個体」の例は、限定ではないが、ヒト、高等霊長類、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、鳥類及び他の哺乳類を含む。
【００２４】
本明細書にて使用される、用語「投与」は、ポリペプチドの個体への送達を意味する。「投与」は、ポリペプチドをコードする核酸の送達も意味する。当該用語は、限定ではないが、経口、筋肉内、静脈内、鼻内、腹膜内、皮膚内、鞘内（intrathecally）、心室内、皮下、経皮、局所又は洗浄によることを含む。この発明により意図される投与の様式は、限定ではないが、シリンジ、静脈内ライン、経皮パッチ、又は針無しの注入器の使用を含む。
【００２５】
本明細書にて使用される、Ｖｐｒの機能性断片は、個体又は細胞培養中において免疫応答を停止させる能力を有するＶｐｒの断片である。Ｖｐｒの機能性断片は、ベータケモカイン、例えばＭＩＰ−１ａ．ＭＩＰ−１β及びＲＡＮＴＥＳのヒトマクロファージ及び第一期白血球内での生産に対するＶｐｒ断片の効果を測定するアッセイにおいて測定することができる（Ｍｕｔｈｕｍａｎｉ  Ｋ，ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．６８，３６６−３７２，引用により本明細書に編入される）。ヒトマクロファージ及び第一期白血球内でベータケモカインの生成を低下させるＶｐｒの断片は、本発明に関してＶｐｒの機能性断片であると考えられる。あるいは、機能性断片は、Ｖｐｒの核局在及び細胞周期停止活性に必要な機能性ドメインの存在により決定してよい（Ｍａｈａｌｉｎｇａｍ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７１，６３３９−６３４７；Ｍａｃｒｅａｄｉｅ，Ｉ．Ｇ．ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，９２，２７７０−２７７４；共に引用により本明細書に編入される）。一般的に、機能性断片は、５アミノ酸より長い、好ましくは１０アミノ酸より長い、そしてもっとも好ましくは２０アミノ酸より長いＶｐｒからのアミノ酸の長さを含む。いくつかの態様において、上記機能性断片は、Ｖｐｒのアミノ末端配列のもっとも３０のアミノ残基の５−３０残基断片を含む。いくつかの態様において、上記機能性断片は、Ｖｐｒのカルボキシ末端配列のもっとも３０のカルボキシ残基の５−３０残基断片を含む。
【００２６】
本明細書にて使用される、ＳＩＲＳ／敗血症の治療は、ＳＩＲＳ及び敗血症に付随した臨床上の兆候及びＭＯＤＳ，例えば、発熱温度の変化、低中毒症（hypotoxemia）、強呼吸（trachypnea）、頻脈（tachycardia）、内皮の炎症、心筋不全、癒合亢進（hyperfusion）、精神状態の変質、血管の衰弱、及び最終的な臓器の損傷、例えば急性呼吸障害症候群、凝血異常、心不全、腎不全、ショック及び／又は昏睡に付随した臨床上の兆候の軽減、改善又は排除を意味する。
ＩＩ．発明の好ましい態様の説明
本発明は、（全身性炎症応答症候群）（ＳＩＲＳ）をそのような症状を発症する危険のある個体において予防する方法、及び発症したＳＩＲＳを有する個体を治療する方法を提供する。ＳＩＲＳの予防及び治療の方法は、ＨＩＶウイルスが感染した個体の免疫系を逃れてむしばむために用いる武器：Ｖｐｒ蛋白質及び／又はそれをコードする核酸分子の一つを用いる。このＨＩＶに由来する武器により武装された、敗血症の予防及び治療は、ＳＩＲＳの直接の病理である個体の免疫応答の過剰刺激を低下させることにより、より有効になされ得る。さらに、本発明は、Ｖｐｒ蛋白質又はそれをコードする核酸を、敗血症を有する個体又は敗血症を発症する危険のある個体を治療するために使用する。
【００２７】
本発明は、Ｖｐｒポリペプチドの送達がＳＩＲＳ及び敗血症に付随したものを含む細胞性免疫応答を抑圧するとの驚くべき発見から生まれる。発明を如何なる一つの機構にも限定しないが、Ｖｐｒは、ＴＮＦ−ａを含む、プロタイプの（protypic）Ｔｈ１タイプのサイトカインの合成を阻害して、抗体応答性をＴｈ２タイプの偏りの方へシフトさせる。さらに、Ｖｐｒは、ＣＣケモカインを抑圧して、ＣＤ８+Ｔ細胞エフェクター機能を傷つける（compromise）。データは、Ｖｐｒが免疫活性化に関与する同時刺激分子を干渉するという結論を支持する。従って、ＳＩＲＳ／敗血症の個体又はＳＩＲＳ／敗血症を発症する危険性のある個体に送達された場合に、Ｖｐｒは、全身性ＴＮＦａ放出を導く免疫応答性を弱める。敗血症を有する個体に送達された場合に、Ｖｐｒは、最終的に敗血症ショックを導く全身性免疫応答を弱める。特に驚くことは、敗血症に関して有効に治療されたなら、本発明の方法は、ＳＩＲＳ／敗血症の再発又はのちの出来事を予防して防御する。
【００２８】
Ｖｐｒのアミノ酸配列及びそれをコードするＤＮＡ配列は、１９９９年２月２３日に発行された米国特許番号５，８７４，２２５に記載されており、その中で引用されている特許及び刊行物を含めて引用により本明細書に編入される。Ｖｐｒの断片は、１９９４年２月２２日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ９４／０２１９１、１９９５年９月２１日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ９５／１２３４４、及び１９９８年８月１４日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ９８／１６８９０に記載されており、それらに対して優先権主張した各々の対応する米国国内段階の出願と共に引用により本明細書に編入され、そして１９９８年６月９日に出願された米国特許番号５，７６３，１９０に記載されており、引用により本明細書に編入される。引用により本明細書に編入される、１９９３年１２月１５日に出願された米国連続番号０８／１６７，６０８及び１９９４年１月２６日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ９４／００８９９は、ウイルス粒子の一部としてＶｐｒ蛋白質の機能性断片を含む組換えウイルス粒子を記載する。Ｖｐｒ蛋白質の変異分析は、Ｖｐｒの核局在及び細胞周期の停止に必要な別の機能性ドメインを同定した（Ｍａｈａｌｉｎｇａｍ，Ｓ，ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７１，６３３９−６３４７；Ｍａｃｒｅａｄｉｅ，Ｉ．Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，９２，２７７０−２７７４，共に引用により本明細書に編入される）。
Ａ．ＳＩＲＳ／敗血症を予防するための方法
本発明は、ＳＩＲＳにかかる危険性が高いと同定された個体においてＳＩＲＳを予防する方法を提供する。好ましい態様においては、上記個体は、敗血症を発症する危険性が高いと同定される。発明によれば、過剰な全身性免疫応答を発症する危険性のある個体を治療する方法は、個体に対して、予防上有効な量のＶｐｒ蛋白質を、Ｖｐｒ蛋白質として、又はその機能性断片として、又はＶｐｒ蛋白質及びその機能性断片をコードする核酸として、又は２つ又はそれより多いそれらの混合物として、投与することを含む。Ｖｐｒ蛋白質又はその機能性断片をコードする核酸を個体に送達する場合、コーディング配列を作動可能なように制御要素に連結させる。個体に送達されたなら、Ｖｐｒ蛋白質をコードする核酸が発現されて、Ｖｐｒ蛋白質が個体の中で合成される。いくつかの態様においては、Ｖｐｒ及び／又はその機能性断片を蛋白質として送達する。個体に送達されたなら、蛋白質として送達されたか又はそれをコードする核酸の発現により生成されたＶｐｒ蛋白質の存在が不所望な免疫応答を阻害する。
【００２９】
別の態様においては、ＳＩＲＳ／敗血症を予防する方法は、前炎症性サイトカイン及び敗血症マーカー蛋白質の濃度／個体の血液血漿の状態を監視し、監視されたサイトカイン／マーカーが患者がＳＩＲＳ／敗血症を有することを示すか否かを決定し、そして追加用量の、Ｖｐｒ態様及び／又はその機能性断片、及び／又はＶｐｒ態様又はその機能性断片をコードする核酸を投与する追加の工程を含む。監視するために適した、前炎症性サイトカイン及び敗血症マーカー蛋白質／条件は、限定ではないが、サイトカイン、例えば、ＴＮＦａ，ＩＬ−１，ＩＬ−６，ＩＬ−８，ＩＬ−１２；ケモカイン、例えばＩＬ−８，ＰＢＰ，β−ＴＧ，ＮＡＰ−２，ＧＲＯａ，ＧＲＯβ、ＧＲＯ？，ＩＰ−１０，ＳＤＦ−１，ＭＩＰ−１ａ，ＭＩＰ−１β、ＭＣＰ−１，ＲＡＮＴＥＳ、エオタキシン、リンフォタクチン、フラタルカイン；及びマーカー蛋白質／条件、例えばアズリン、エシェリヒアコリ及び他のグラム陽性細菌のエンドトキシン、白血球細胞により生成された酸化物、プロカルシトニン、白血球高親和性Ｆｃ因子（ＣＤ６４）；血清Ｃ−反応性蛋白質（ＣＲＰ）；好中球表面ＣＤ１１ｂのレベル、及び選択された未飽和遊離脂肪酸の飽和遊離脂肪酸に対する比率を含む。好ましい態様においては、血液血漿中のＴＮＦ−ａの濃度を監視する。好ましい態様においては、血液血漿中のＴＮＦ−ａの濃度が約１００ｐｇ／ｍｌより上、より好ましくは約５０ｐｇ／ｍｌより上、そしてもっとも好ましくは約２５ｐｇ／ｍｌより上の場合に、個体がＳＩＲＳ／敗血症を有すると決定される。
【００３０】
ＳＩＲＳ／敗血症の危険性が高い個体は、限定ではないが、ＩＬ−１遺伝子の特定の対立遺伝子の存在の為に起こるかもしれないように、誇張した免役応答の傾向を有する被験者を含む（米国特許番号６，２５１，５９８、引用により本明細書に編入される）。敗血症の危険性が高い個体は、限定ではないが、個体を血流侵入に対して感受性とさせる根源的な疾患又は症状を有する個体、特に入院患者、火傷の患者、外傷性障害の患者、創傷の患者又は外科の患者を含む。患者を血流侵入になりやすくさせる因子は、限定ではないが、一般に弱った免役系、例えば新生児又は老人に見られるもの、及び感染に対しての局所感染性の増加をもたらす症状又は疾患、例えば、機能が低下した循環系、糖尿病及び尿毒症を含む。
【００３１】
「予防上有効な量」なる句は、ＳＩＲＳ／敗血症の危険性が高い個体においてＳＩＲＳ／敗血症に付随した兆候の開始を予防するのに十分な量を意味するように本明細書においては使用される。予防上有効な量は、好ましくは、少なくとも約３０パーセント、より好ましくは少なくとも約５０パーセント、もっとも好ましくは少なくとも約９０パーセント、ＴＮＦａの血液血漿レベルの臨床上顕著な増加を低下させる。ＴＮＦａの血漿レベルの臨床上顕著な増加は、約２５ｐｇ／ｍｌ血液血漿を超え、好ましくは約５０ｐｇ／ｍｌ血液血漿を超え、そしてもっとも好ましくは約１００ｐｇ／ｍｌを超えるまでの増加である。血漿のＴＮＦａレベルを測定する方法は当業界においてよく知られている（米国特許番号６，１６８，７９０；米国特許番号６，０６３，７６４；Ｃｒｅａｓｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｉｒｃ．Ｓｈｏｃｋ  ３３：８４−９；引用により本明細書に編入される）。
【００３２】
正常な健康なヒト又は実験室の動物のＴＮＦａレベルは約１０ｐｇ／ｍｌを超えないと見積もられることに注目するべきである（Ｍｉｃｈｉｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇ  Ｊ．Ｍｅｄ．，３１８：１４８１−１４８６，１９８８；Ｍａｔｈｉｓｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，８１：１９２５，１９８８；及びＷａａｇｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ，１：３５５−３５７，１９８７，引用により本明細書に編入される）。敗血症を引き起こす感染におけるグラム陰性細菌のリポポリサッカライド（ＬＰＳ）エンドトキシンへの暴露の後に、ＴＮＦａのレベルが４００ｐｇ／ｍｌ血漿へと、レベルを１０−２０倍上昇させたことがわかった。グラム陰性のＬＰＳ含有髄膜炎菌性細菌による感染において、血清ＴＮＦａレベルと致命的な結果の間に良好な相関が示された（Ｗａａｇｅ，ｅｔ  ａｌ．，前記、１９８７）。さらに、ヒトに近い霊長類による敗血症の動物モデルにおいては、ＴＮＦａの類似の増加が記録され、そしてこれらの変化は直接致死性に相関した（Ｔｒａｃｅｙ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３０：６６２−６６４，１９８７，引用により本明細書に編入される）。
【００３３】
Ｖｐｒ蛋白質及び／又はその機能性断片の予防上有効な１日の用量は、体重のキログラムあたり約０．１から１００ミリグラムであり得る。通常は体重のキログラムあたり０．５から５０、そして好ましくは１から１０ミリグラムである。Ｖｐｒ蛋白質及び／又はその機能性断片をコードする核酸を上記のとおり同時に投与することができる。Ｖｐｒ蛋白質及び／又はその機能性断片をコードする核酸の予防上有効な用量は約１ｎｇから１０ｍｇの核酸の用量である；いくつかの態様においては、約０．１から約２０００マイクログラムのＤＮＡである。いくつかの好ましい態様において、治療上活性な用量は約１から約１０００マイクログラムのＤＮＡである。いくつかの好ましい態様において、治療上活性な用量は約１から約５００マイクログラムのＤＮＡである。いくつかの好ましい態様において、治療上活性な用量は約２５から約２５０マイクログラムのＤＮＡである。もっとも好ましいのは、治療上活性な用量は約１００マイクログラムのＤＮＡである。
【００３４】
個体においてＳＩＲＳ／敗血症を予防するための用量の管理は、１用量又はそれ以上の用量においてＶｐｒ蛋白質及び又はその機能性断片をコードする核酸、及びＶｐｒ蛋白質及び／又はその機能性断片の一つ又は複数を投与することを含んでよい。Ｖｐｒの１日の用量は、１日に分割した用量にて１から６回にて与えてよく、あるいは徐放性形態が所望の結果を得るのに有効である。Ｖｐｒ蛋白質及び／又はその機能性断片及び／又はＶｐｒ及び／又はその機能性断片をコードする核酸の投与は、１日に１回から６回、数日間又は数週間、又はＳＩＲＳ／敗血症の危険性を導く因子が減るまで、繰り返してよい。好ましい態様において、Ｖｐｒ蛋白質及び／又はその機能性断片及び／又はそれらをコードする核酸は、Ｖｐｒ蛋白質の連続注入（infusion）により投与される。好ましい態様において、Ｖｐｒ蛋白質及び／又はその機能性断片及び／又はそれらをコードする核酸は、丸薬投与にて投与され、次にＶｐｒ蛋白質及び／又はその機能性断片及び／又はそれらをコードする核酸は、Ｖｐｒ蛋白質の連続注入が続く。
【００３５】
別の態様において、ＳＩＲＳ／敗血症を予防する方法は、治療上有効な量の抗感染剤、典型的にはアミノグリコシド、例えばアミカシン、トブラマイシン、ネチルマイシン、及びゲンタマイシン、セファロスポリン、例えばセフタジジム、関連するベータ−ラクタム剤、例えばマクサラクタム、カーボペンネム、例えばイミペンネム、モノバクタム剤、例えばアズトレオナム；アンピシリン及び広いスペクトルのペニシリン、（例えば、ペニシリナーゼ−耐性ペニシリン、ウレイドペニシリン又は抗シュードモナスペニシリン又はアウグメンチニン）であって、Ｐ．エルギノーサ、エンテロバクター種、インドール陽性プロテウス種、及びセラチア種を投与する追加の工程を含む。
【００３６】
「治療上有効な量の抗感染剤」なる句は、本明細書においては、細菌又は真菌を殺傷する血液濃度を達成するのに十分な量、又は処置を受ける個体においてウイルスの複製を遅延させるのに十分な量を意味するように使用される。ヒトへの投与に関して安全と一般的に認識される抗感染剤の治療上有効な量は、当業界においてよく知られた量であって、よく知られているとおり、抗生物質、殺菌剤又は抗ウイルス剤、及び処置される感染の種類により変動する。本発明を実施するのに有用な抗生物質は、引用により本明細書に編入される、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓＤｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，Ｈｕｆｆ，Ｂ．Ｂ．編纂、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ社、Ｏｒａｄｅｌｌ，Ｎ．Ｊ．（１９８９）に記載された処方を有する抗生物質、抗細菌剤及び殺菌剤（antiseptic）を含む。
【００３７】
さらに、ＳＩＲＳ／敗血症を治療することにおける様々な薬剤は、この発明の成分と化合して使用してもよい。それらは、交感神経興奮作用のアミン（昇圧剤）、例えばノルエピネフリン、エピネフリン、イソプロテレノール、ドーパミン、及びドブタミン；抗炎症剤、例えばメチルプレドニゾロン、インドメタシン及びフェニルブタゾン；及びコルチコステロイド、例えばベータメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、又はデキサメタゾン；抗凝血剤、例えばヘパリン、抗トロンビンＩＩＩ又は特定の症状又はスケジュールのためにはクマリンタイプの薬剤；利尿剤、例えばフロセミド又はエタクリン酸；及びアヘン剤及びベータ−エンドルフィンのアンタゴニスト、例えばナルオキサン；腫瘍壊死因子又はインターロイキン−１の特別の（additional）アンタゴニスト；フェノチアジン；抗ヒスタミン；グルカゴン；アドレナリン様のブロッキング剤、血管拡張神経薬；血漿増量剤（plasma expanders）；パックされた赤血球細胞；血小板；寒冷沈殿物；新鮮な凍結血漿；細菌透過性蛋白質；クリンダマイシン；及びエンドトキシンコアグリコリピッドに対する抗体（リピッドＡ）又はエシェリヒアコリのＪ５変異体を含む。そのような添加物を調製する方法は文献に広く記載されている。
【００３８】
抗感染剤は、Ｖｐｒ組成物と同時か又は単独で投与することができる。好ましい態様においては、ＳＩＲＳ／敗血症を治療するために使用される抗感染剤を、Ｖｐｒ蛋白質又はその機能性断片、及び／又はＶｐｒ又はその機能性断片をコードする核酸と共に投与することもできる。上記添加剤は、単独か又はＶｐｒ蛋白質及び／又はＶｐｒコーディング核酸と同じ製剤中で投与することができる。好ましい態様においては、上記添加剤をＶｐｒ蛋白質又はその機能性断片、及び／又はＶｐｒ又はその機能性断片をコードする核酸と共に投与する。
Ｂ．ＳＩＲＳ／敗血症を治療する方法
発明の別の側面は、ＳＩＲＳを有すると診断された個体を処置するための治療する方法を提供する。好ましい態様において、個体は敗血症を有すると診断された個体である。発明によれば、過剰な全身性免疫応答の個体を治療する方法は、当該個体に、Ｖｐｒ蛋白質をＶｐｒ蛋白質又はその機能性断片としてか、又はＶｐｒ蛋白質又はその機能性断片をコードする核酸、又はそれらの２つ又は２つより多くの組み合わせを投与する。Ｖｐｒ蛋白質又はその機能性断片をコードする核酸を個体に送達させる場合、コーディング配列は制御配列に作動可能なように連結させる。個体に送達されたなら、Ｖｐｒ蛋白質をコードする核酸を発現させて、Ｖｐｒ蛋白質を個体内で合成させる。いくつかの態様において、Ｖｐｒは、Ｖｐｒ蛋白質及び／又はその機能性断片のコーディング配列を有する核酸分子として送達させる。いくつかの態様において、Ｖｐｒ及び／又はその機能性断片は蛋白質として送達させる。個体に送達させたなら、蛋白質として送達されたか又はそれをコードする核酸分子の発現により生成されたＶｐｒ蛋白質の存在が不所望の免疫応答を阻害するか又はダウン制御する。
【００３９】
別の態様において、ＳＩＲＳ／敗血症を治療する方法は、前炎症性サイトカイン及び敗血症マーカー蛋白質の濃度／個体の血液血漿の状態を監視し、免疫変調薬学組成物の追加用量の必要性を決定し、監視されたサイトカイン／マーカーが個体がＳＩＲＳ／敗血症を有することを示すか否かを決定し、そして追加用量のＶｐｒ態様又はその機能性断片及び／又はＶｐｒ態様及び／又はその機能性断片をコードする核酸を投与する追加の工程を含む。監視するために適した、前炎症性サイトカイン及び敗血症マーカー蛋白質／条件は、限定ではないが、サイトカイン、例えば、ＴＮＦａ，ＩＬ−１，ＩＬ−６，ＩＬ−８，ＩＬ−１２；ケモカイン、例えばＩＬ−８，ＰＢＰ，β−ＴＧ，ＮＡＰ−２，ＧＲＯａ，ＧＲＯβ、ＧＲＯ？，ＩＰ−１０，ＳＤＦ−１，ＭＩＰ−１ａ，ＭＩＰ−１β、ＭＣＰ−１，ＲＡＮＴＥＳ、エオタキシン、リンフォタクチン、フラタルカイン；及びマーカー蛋白質／条件、例えばアズリン、エシェリヒアコリ及び他のグラム陽性細菌のエンドトキシン、白血球細胞により生成された酸化物、プロカルシトニン、白血球高親和性Ｆｃ因子（ＣＤ６４）；血清Ｃ−反応性蛋白質（ＣＲＰ）；好中球表面ＣＤ１１ｂのレベル、及び選択された未飽和遊離脂肪酸の飽和遊離脂肪酸に対する比率を含む。好ましい態様においては、血液血漿中のＴＮＦ−ａの濃度を監視する。好ましい態様においては、血液血漿中のＴＮＦ−ａの濃度が約１００ｐｇ／ｍｌより上、より好ましくは約５０ｐｇ／ｍｌより上、そしてもっとも好ましくは約２５ｐｇ／ｍｌより上の場合に、個体がＳＩＲＳ／敗血症を有すると決定される。
【００４０】
個体は、例えば、（１）３８℃を超えるか又は３６℃未満の体温；（２）１分あたり９０を超える心拍数；（３）１分あたり２０を超えるか又はＰａＣＯ2＜３２ｍｍ  Ｈｇの呼吸速度；（４）１２０００／ｃｕ  ｍｍを超えるか、４，０００／ｃｕ  ｍｍ未満か又は１０％を超える非成熟（帯状）形態の白血球数カウント；（５）臓器不全、癒合亢進又は高血圧を含む（Ｂｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｃｈｅｓｔ  １０１：１６４４，引用により本明細書に編入される）のような臨床上の兆候又は当業界でよく知られた他の方法によりＳＩＲＳ及び敗血症を有すると診断されてよい。個体は、限定ではないが、以下を含む当業界で知られた多くの診断アッセイの一つを利用することにより敗血症を有すると診断されてよい。Ｃｅｎｔｏｃｏｒ社のＴＮＦ−ａの免役計量アッセイ（ＷＯ  ９０／０６３１４，引用により本明細書に編入される）は、患者の血液中のこの炎症性媒介物質を測定するための２つの抗体を用いる。Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｅｒｏｎａｕｔｉｃｓ及びＳｐａｃｅ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎにより開発されたアッセイはＡｚｕｒｉｎの抽出により患者血液中のシュードモナス細菌を検出し、そしてその検出はモノクローナル抗体による（米国特許番号５，２１０，０１９，引用により本明細書に編入される）。ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ（Ｗａｌｋｅｒｖｉｌｌｅ，Ｍｄ）からの敗血症アッセイ及びＳｅｉｋａｇａｋｕ  Ｋｙｏｔｏ社（東京、日本）からのＬｉｍｕｌｕｓ  Ａｍｅｂｏｃｙｔｅ  Ｌｙｓａｔｅ  Ａｓｓａｙは患者血液中のエシェリヒアコリの存在を検出する。他の敗血症診断アッセイは、敗血症の応答の間の白血球細胞により生成された酸化物の存在（米国特許番号５，８０４，３７０、引用により本明細書に編入される）、敗血症マーカーペプチドのプロカルシトニンの存在（米国特許番号５，６３９，６１７、引用により本明細書に編入される）、白血球高親和性Ｆｃ因子の存在（ＣＤ６４）の発現（Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  １：３，編入される本明細書に編入される）；血清Ｃ−反応性蛋白質（ＣＲＰ）（Ｄｒｅｗｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ａｎｎ．ＮＹ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７６２：３９８；Ｋａｗａｍｕｒａ  ａｎｄ  Ｎｉｓｈｉｄａ，１９９５，Ａｃｔａ  Ｐａｅｄｉａｔｒ．８４：１０，共に引用により本明細書に編入される）；好中球表面ＣＤ１１ｂレベル（米国特許番号６，０７７，６６５、引用により本明細書に編入される）、及び選択された未飽和遊離脂肪酸の飽和した遊離脂肪酸に対する比率（米国特許番号５，７８０，２３７，引用により本明細書に編入される）を検出する。
【００４１】
「治療上有効な量」なる句は、本明細書において、敗血症又はＳＩＲＳに付随した兆候の重度を改善するか又は軽減させるのに十分な量を意味するように使用される。一般的に、治療上有効な量は、好ましくは、少なくとも約３０パーセント、より好ましくは少なくとも約５０パーセント、もっとも好ましくは少なくとも約９０パーセント、ＴＮＦａの血液血漿レベルの臨床上顕著な増加を低下させる。ＴＮＦａの血漿レベルの臨床上顕著な増加は、約２５ｐｇ／ｍｌ血液血漿を超え、好ましくは約５０ｐｇ／ｍｌ血液血漿を超え、そしてもっとも好ましくは約１００ｐｇ／ｍｌを超えるまでの増加である。血漿のＴＮＦａレベルを測定する方法は当業界においてよく知られている（米国特許番号６，１６８，７９０；米国特許番号６，０６３，７６４；Ｃｒｅａｓｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｉｒｃ．Ｓｈｏｃｋ  ３３：８４−９；引用により本明細書に編入される）。
【００４２】
正常な健康なヒト又は実験室の動物のＴＮＦａレベルは約１０ｐｇ／ｍｌを超えないと見積もられることに注目するべきである（Ｍｉｃｈｉｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇ  Ｊ．Ｍｅｄ．，３１８：１４８１−１４８６，１９８８；Ｍａｔｈｉｓｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，８１：１９２５，１９８８；及びＷａａｇｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ，１：３５５−３５７，１９８７，引用により本明細書に編入される）。敗血症を引き起こす感染におけるグラム陰性細菌のリポポリサッカライド（ＬＰＳ）エンドトキシンへの暴露の後に、ＴＮＦａのレベルが４００ｐｇ／ｍｌ血漿へと、レベルを１０−２０倍上昇させたことがわかった。グラム陰性のＬＰＳ含有髄膜炎菌性細菌による感染において、血清ＴＮＦａレベルと致命的な結果の間に良好な相関が示された（Ｗａａｇｅ，ｅｔ  ａｌ．，前記、１９８７）。さらに、ヒトに近い霊長類による敗血症の動物モデルにおいては、ＴＮＦａの類似の増加が記録され、そしてこれらの変化は直接致死性に相関した（Ｔｒａｃｅｙ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３０：６６２−６６４，１９８７，引用により本明細書に編入される）。
【００４３】
Ｖｐｒ蛋白質及び／又はその機能性断片の治療上有効な１日の用量は、体重のキログラムあたり約０．１から１００ミリグラムであり得る。通常は体重のキログラムあたり０．５から５０、そして好ましくは１から１０ミリグラムである。Ｖｐｒ蛋白質及び／又はその機能性断片をコードする核酸を上記のとおり同時に投与することができる。Ｖｐｒ蛋白質及び／又はその機能性断片をコードする核酸の治療上有効な用量は約１ｎｇから１０ｍｇの核酸の用量である；いくつかの態様においては、約０．１から約２０００マイクログラムのＤＮＡである。いくつかの好ましい態様において、治療上有効な用量は約１から約１０００マイクログラムのＤＮＡである。いくつかの好ましい態様において、治療上有効な用量は約１から約５００マイクログラムのＤＮＡである。いくつかの好ましい態様において、治療上有効な用量は約２５から約２５０マイクログラムのＤＮＡである。もっとも好ましいのは、治療上有効な用量は約１００マイクログラムのＤＮＡである。
【００４４】
個体においてＳＩＲＳ／敗血症を予防するための用量の管理は、１用量又はそれ以上の用量においてＶｐｒ蛋白質及び又はその機能性断片をコードする核酸、及びＶｐｒ蛋白質及び／又はその機能性断片の一つ又は複数を投与することを含んでよい。Ｖｐｒの１日の用量は、１日に分割した用量にて１から６回にて与えてよく、あるいは徐放性形態が所望の結果を得るのに有効である。Ｖｐｒ蛋白質及び／又はその機能性断片及び／又はＶｐｒ及び／又はその機能性断片をコードする核酸の投与は、１日に１回から６回、数日間又は数週間、又はＳＩＲＳ／敗血症の危険性を導く因子が減るまで、繰り返してよい。好ましい態様において、Ｖｐｒ蛋白質及び／又はその機能性断片及び／又はそれらをコードする核酸は、Ｖｐｒ蛋白質の連続注入（infusion）により投与される。好ましい態様において、Ｖｐｒ蛋白質及び／又はその機能性断片及び／又はそれらをコードする核酸は、丸薬投与にて投与され、次にＶｐｒ蛋白質及び／又はその機能性断片及び／又はそれらをコードする核酸は、Ｖｐｒ蛋白質の連続注入が続く。
【００４５】
別の態様において、ＳＩＲＳ／敗血症を治療する方法は、治療上有効な量の抗感染剤、典型的にはアミノグリコシド、例えばアミカシン、トブラマイシン、ネチルマイシン、及びゲンタマイシン、セファロスポリン、例えばセフタジジム、関連するベータ−ラクタム剤、例えばマクサラクタム、カーボペンネム、例えばイミペンネム、モノバクタム剤、例えばアズトレオナム；アンピシリン及び広いスペクトルのペニシリン、（例えば、ペニシリナーゼ−耐性ペニシリン、ウレイドペニシリン又は抗シュードモナスペニシリン又はアウグメンチニン）であって、Ｐ．エルギノーサ、エンテロバクター種、インドール陽性プロテウス種、及びセラチア種を投与する追加の工程を含む。また、抗感染剤の定義には、抗真菌剤、アンフォテリシン等、並びに抗ウイルス剤、例えばファンビル及びアシクロビルが含まれる。
【００４６】
「治療上有効な量の抗感染剤」なる句は、本明細書においては、細菌又は真菌を殺傷する血液濃度を達成するのに十分な量、又は処置を受ける個体においてウイルスの複製を遅延させるのに十分な量を意味するように使用される。ヒトへの投与に関して安全と一般的に認識される抗感染剤の治療上有効な量は、当業界においてよく知られた量であって、よく知られているとおり、抗生物質、殺菌剤又は抗ウイルス剤、及び処置される感染の種類により変動する。本発明を実施するのに有用な抗生物質は、引用により本明細書に編入される、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓＤｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，Ｈｕｆｆ，Ｂ．Ｂ．編纂、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ社、Ｏｒａｄｅｌｌ，Ｎ．Ｊ．（１９８９）に記載された処方を有する抗生物質、抗細菌剤及び殺菌剤（antiseptic）を含む。
【００４７】
さらに、ＳＩＲＳ／敗血症を治療することにおける様々な薬剤は、この発明の成分と化合して使用してもよい。それらは、交感神経興奮作用のアミン（昇圧剤）、例えばノルエピネフリン、エピネフリン、イソプロテレノール、ドーパミン、及びドブタミン；抗炎症剤、例えばメチルプレドニゾロン、インドメタシン及びフェニルブタゾン；及びコルチコステロイド、例えばベータメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、又はデキサメタゾン；抗凝血剤、例えばヘパリン、抗トロンビンＩＩＩ又は特定の症状又はスケジュールのためにはクマリンタイプの薬剤；利尿剤、例えばフロセミド又はエタクリン酸；及びアヘン剤及びベータ−エンドルフィンのアンタゴニスト、例えばナルオキサン；腫瘍壊死因子又はインターロイキン−１の特別の（additional）アンタゴニスト；フェノチアジン；抗ヒスタミン；グルカゴン；アドレナリン様のブロッキング剤、血管拡張神経薬；血漿増量剤（plasma expanders）；パックされた赤血球細胞；血小板；寒冷沈殿物；新鮮な凍結血漿；細菌透過性蛋白質；クリンダマイシン；及びエンドトキシンコアグリコリピッドに対する抗体（リピッドＡ）又はエシェリヒアコリのＪ５変異体を含む。そのような添加物を調製する方法は文献に広く記載されている。
【００４８】
抗生物質は、Ｖｐｒ組成物と同時か又は単独で投与することができる。好ましい態様においては、ＳＩＲＳ／敗血症を治療するために使用される抗生物質を、Ｖｐｒ蛋白質又はその機能性断片、及び／又はＶｐｒ又はその機能性断片をコードする核酸と共に投与することもできる。上記添加剤は、単独か又はＶｐｒ蛋白質及び／又はＶｐｒコーディング核酸と同じ製剤中で投与することができる。好ましい態様においては、上記添加剤をＶｐｒ蛋白質又はその機能性断片、及び／又はＶｐｒ又はその機能性断片をコードする核酸と共に投与する。
【００４９】
発明の予防方法及び治療方法のいくつかの態様においては、Ｖｐｒ、その機能性断片、Ｖｐｒをコードする核酸、又はＶｐｒの機能性断片をコードする核酸の一つ又は一つより多くの組み合わせを、患者に投与する。いくつかの態様においては、Ｖｐｒ又はその機能性断片を、Ｖｐｒをコードする核酸との同じ製剤中にて個体に投与する。他の態様においては、Ｖｐｒ又はその機能性断片をＶｐｒをコードする核酸とは別の製剤中にて個体に投与する。
Ｃ．Ｓｉｒｓ／敗血症を予防及び治療する方法のプロトコル
蛋白質、例えばＶｐｒを細胞へ直接のＤＮＡ投与により送達させるための組成物及び方法は、様々なプロトコルを用いて報告されてきた。そのような方法の例は、米国特許番号５，５９３，９７２，米国特許番号５，７３９，１１８，米国特許番号５，５８０，８５９，米国特許番号５，５８９，４６６，米国特許番号５，７０３，０５５，米国特許番号５，６２２，７１２，米国特許番号５，４５９，１２７，米国特許番号５，６７６，９５４，米国特許番号５，６１４，５０３，及びＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ９５／１２５０２において記載されており、各々、引用により本明細書に編入される。蛋白質を細胞へ直接のＤＮＡ投与により送達させるための組成物及び方法は、ＰＣＴ／ＵＳ９０／０１５１５，ＰＣＴ／ＵＳ９３／０２３３８，ＰＣＴ／ＵＳ９３／０４８１３１，及びＰＣＴ／ＵＳ９４／００８９９にも記載されており、各々、引用により本明細書に編入される。それらの出願に記載された送達プロトコルに加えて、別のＤＮＡ送達方法が米国特許番号４，９４５，０５０及び５，０３６，００６に記載されており、引用により本明細書に編入される。核酸分子も、引用により本明細書に編入される、米国特許番号４，２３５，８７１，米国特許番号４，２４１，０４６及び米国特許番号４，３９４，４４８に記載されたようにリポソーム媒介性ＤＮＡ転移を用いて送達することもできる。
【００５０】
Ｖｐｒをコードする配列を有する核酸を含む製剤は、投与の様式及び部位に従い作成される。そのような製剤は当業者の範囲で容易である。核酸及び任意にはポリペプチドに加えて、上記製剤はバッファー、賦形剤、安定剤、担体及び希釈剤を含んでもよい。
Ｄ．ＳＩＲＳ／敗血症を予防及び治療する薬剤組成物
Ｖｐｒ蛋白質又はその機能性断片及び薬学上受容可能な担体又は希釈剤を含む薬剤組成物は、選択された投与様式に依存して選択された組成物を用いて、当業者により製剤化してよい。適切な薬学上の担体は、引用により本明細書に編入されるこの分野の標準の引用テキストである、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ａ．Ｏｓｏｌの最新版に記載される。
【００５１】
非経口投与に関しては、Ｖｐｒ蛋白質又はその機能性断片を、例えば、溶液、懸濁液、エマルジョン又は凍結可能した粉末として、薬学上受容可能な非経口媒体と共に製剤化することができる。そのような媒体の例は、水、塩水、リンゲル液、デキストロース溶液、及び５％ヒト血清アルブミンである。リポソーム及び非水性媒体、例えば固定油を使用してもよい。上記媒体又は凍結可能した粉末は、等張性（例えば、塩化ナトリウム、アニトール）及び化学的安定性（例えば、バッファー及び保存剤）を維持する添加物を含んでよい。上記製剤は普通に使用される技術により滅菌される。例えば、注射による投与に適した非経口組成物を０．９％塩化ナトリウム溶液に１．５重量％の活性成分を溶解することにより調製する。
【００５２】
Ｖｐｒ蛋白質又はその機能性断片を含む薬学組成物は、活性剤が、哺乳類の体内の薬剤の作用部位に到達するのを可能にさせる何れかの手段により投与してよい。経口、非経口投与、即ち静脈内、皮下、筋肉内投与された場合蛋白質が消化に供されるため、吸収を最適化するように使用されるのが普通のはずである。
【００５３】
投与される用量は、因子、例えば：薬力学特性；その投与様式及び経路；レシピエントの年齢、健康状態、及び体重；兆候の性質及び範囲；併用治療の種類；及び治療の頻度に依存して変更される。通常、Ｖｐｒ蛋白質の１日の用量は、体重のキログラムあたり約０．１から１００ミリグラムであり得る。通常は体重のキログラムあたり０．５から５０、そして好ましくは１から１０ミリグラムであり、１日に分割した用量にて１から６回にて与え、あるいは徐放性形態が所望の結果を得るのに有効である。
【００５４】
本発明の別の側面は、Ｖｐｒ蛋白質をコードする核酸分子及び薬学上受容可能な担体又は希釈剤を含む薬学組成物に関する。本発明によれば、Ｖｐｒ蛋白質をコードする遺伝物質を、発現可能な形態にて個体に送達する。遺伝物質、ＤＮＡ又はＲＮＡは、個体の細胞に受け取られて発現される。それにより生成されたＶｐｒは免疫応答を阻害することができるが、免疫原性応答ベクターにおいて指示されるか又は別の不所望な免疫応答、例えば自己免疫疾患及び炎症性疾患及び症状及び移植処置に付随した免疫応答の何れかである。即ち、Ｖｐｒをコードする遺伝物質を含む薬学組成物は、Ｖｐｒ蛋白質を含む薬学組成物と同じ様式において有用である。
【００５５】
個体の細胞内での発現に必要な制御要素に作動可能に連結されたＶｐｒ蛋白質をコードするヌクレオチド配列は、多数の戦略を用いて薬学組成物として送達してよく、限定ではないが、ウイルスベクター、例えばアデノウイルス又はレトロウイルス、又は直接核酸転移を含む。ウイルスベクターを用いる目的の蛋白質をコードする核酸の送達方法は、広く報告されている。組換えウイルスベクター、例えばレトロウイルスベクター又はアデノウイルスベクターは日常的な方法と出発物質を用いて用意される。組換えウイルスベクターはＶｐｒをコードする配列を含む。そのようなベクターは薬学上受容可能な担体又は希釈剤と化合される。結果として生じる薬学上の調製物を個体に投与してよい。個体が上記ウイルスベクターに感染したら、Ｖｐｒが感染細胞内で生産される。
【００５６】
あるいは、Ｖｐｒをコードするヌクレオチド配列を含む分子を感染性ベクターの使用なしに薬学組成物として投与することができる。上記核酸分子はＤＮＡ又はＲＮＡであってよく、好ましくはＤＮＡである。上記ＤＮＡ分子は直鎖状又は環状であってよく、それは好ましくはプラスミドである。上記核酸分子は薬学上受容可能な担体又は希釈剤と化合される。
【００５７】
発明によれば、Ｖｐｒ蛋白質をコードする核酸配列を含む薬学組成物は、個体へ直接投与するか、又は投与後に再度移植される個体の取り出された細胞へエクスビボにて送達してよい。何れかの経路により、遺伝物質を個体の体内に存在する細胞に導入する。好ましい投与経路は、筋肉内、静脈内、皮膚内及び皮下注射を含む。あるいは、薬学組成物は個体から取り出された細胞へ、様々な手段により導入してよい。そのような手段は、例えば、トランスフェクション、エレクトロポレーション及びマイクロ放射衝撃を含む。核酸が細胞により取り入れられた後に、それらを個体へ再移植する。
【００５８】
本発明のこの側面による薬学組成物は、約１ｎｇから１０ｍｇのＤＮＡを含む；いくつかの態様においては約０．１から約２０００マイクログラムのＤＮＡである。いくつかの好ましい態様において、上記薬学組成物は、約１から約１０００マイクログラムのＤＮＡを含む。いくつかの好ましい態様において、上記薬学組成物は、約１から約５００マイクログラムのＤＮＡを含む。いくつかの好ましい態様において、上記薬学組成物は、約２５から約２５０マイクログラムのＤＮＡを含む。もっとも好ましくは、上記薬学組成物は、約１００マイクログラムのＤＮＡを含む。
【００５９】
本発明のこの側面による薬学組成物は、使用される投与の様式に従い製剤化される。当業者は、Ｖｐｒをコードする核酸分子を容易に製剤化することができる。注射が選択された投与様式である場合、滅菌され、等張性の、非発熱性の製剤を使用する。通常、等張性のための付加物は、塩化ナトリウム、デキストロース、マニトール、ソルビトール及びラクトースを含む。等張性溶液、例えばリン酸緩衝塩が好ましい。安定剤はゼラチン及びアルブミンを含む。
【００６０】
核酸の発現のための制御要素は、プロモーター、開始コドン、停止コドン、及びポリアデニレーションシグナルを含む。これらの制御要素は、所望のポリペプチド及び任意にはＶｐｒポリペプチドをコードする配列に対して作動可能なように連結されることが必要であり、そして制御要素は核酸が投与される個体内で作動可能であることが必要である。例えば、開始コドン及び停止コドンはコーディング配列とフレームを合わせる。使用されるプロモーター及びポリアデニレーションシグナルは、個体の細胞内でも機能しなければならない。
【００６１】
本発明を実施するために有用なプロモーターの例は、限定ではないが、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）由来のプロモーター、マウス乳癌ウイルス（ＭＭＴＶ）プロモーター、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）例えばＨＩＶのロングターミナルリピート（ＬＴＲ）プロモーター、モロニーウイルス、ＡＬＶ，サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）例えばＣＭＶ最初期プロモーター、エプスタインバールウイルス（ＥＢＶ）、ラウスザルコーマウイルス（ＲＳＶ）並びにヒト遺伝子、例えばヒトアクチン、ヒトミオシン、ヒトヘモグロビン、ヒト筋肉クレアチン及びヒトメタロチオネイン由来のプロモーターを含む。
【００６２】
本発明を実施するために有用なポリアデニレーションシグナルの例は、限定ではないが、ＳＶ４０ポリアデニレーションシグナル及びＬＴＲポリアデニレーションシグナルを含む。特に、ＳＶ４０ポリアデニレーションシグナルとも呼ばれるｐＣＥＰ４プラスミド（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，サンディエゴ  ＣＡ）中のＳＶ４０ポリアデニレーションシグナルを使用する。
【００６３】
他の態様において、上記薬学組成物は、治療上有効な量の抗感染剤、典型的にはアミノグリコシド、例えばアミカシン、トブラマイシン、ネチルマイシン、及びゲンタマイシン、セファロスポリン、例えばセフタジジム、関連するベータ−ラクタム剤、例えばマクサラクタム、カーボペンネム、例えばイミペンネム、モノバクタム剤、例えばアズトレオナム；アンピシリン及び広いスペクトルのペニシリン、（例えば、ペニシリナーゼ−耐性ペニシリン、ウレイドペニシリン又は抗シュードモナスペニシリン又はアウグメンチニン）であって、Ｐ．エルギノーサ、エンテロバクター種、インドール陽性プロテウス種、及びセラチア種を投与する追加の工程を含む。
【００６４】
「治療上有効な量の抗感染剤」なる句は、本明細書においては、細菌又は真菌を殺傷する血液濃度を達成するのに十分な量、又は処置を受ける個体においてウイルスの複製を遅延させるのに十分な量を意味するように使用される。ヒトへの投与に関して安全と一般的に認識される抗感染剤の治療上有効な量は、当業界においてよく知られた量であって、よく知られているとおり、抗生物質、殺菌剤又は抗ウイルス剤、及び処置される感染の種類により変動する。本発明を実施するのに有用な抗生物質は、引用により本明細書に編入される、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓＤｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，Ｈｕｆｆ，Ｂ．Ｂ．編纂、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ社、Ｏｒａｄｅｌｌ，Ｎ．Ｊ．（１９８９）に記載された処方を有する抗生物質、抗細菌剤及び殺菌剤（antiseptic）を含む。
【００６５】
さらに、ＳＩＲＳ／敗血症を治療することにおける様々な補助薬剤は、この発明の薬学組成物と化合して使用してもよい。それらは、交感神経興奮作用のアミン（昇圧剤）、例えばノルエピネフリン、エピネフリン、イソプロテレノール、ドーパミン、及びドブタミン；抗炎症剤、例えばメチルプレドニゾロン、インドメタシン及びフェニルブタゾン；及びコルチコステロイド、例えばベータメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、又はデキサメタゾン；抗凝血剤、例えばヘパリン、抗トロンビンＩＩＩ又は特定の症状又はスケジュールのためにはクマリンタイプの薬剤；利尿剤、例えばフロセミド又はエタクリン酸；及びアヘン剤及びベータ−エンドルフィンのアンタゴニスト、例えばナルオキサン；腫瘍壊死因子又はインターロイキン−１の特別の（additional）アンタゴニスト；フェノチアジン；抗ヒスタミン；グルカゴン；アドレナリン様のブロッキング剤、血管拡張神経薬；血漿増量剤（plasma expanders）；パックされた赤血球細胞；血小板；寒冷沈殿物；新鮮な凍結血漿；細菌透過性蛋白質；クリンダマイシン；及びエンドトキシンコアグリコリピッドに対する抗体（リピッドＡ）又はエシェリヒアコリのＪ５変異体を含む。そのような添加物を調製する方法は文献に広く記載されている。
【００６６】
前記の態様は、発明を例示するつもりであり、如何なる意味においても発明を限定することを意図しない。当業者は、発明の精神及び範囲内の修飾を認識する。本明細書において引用された全ての文献は、それの全体を引用により編入する。
【国際調査報告】
2005523879.tif 000002
2005523879.tif 000003