【手続補正書】
【提出日】令和2年1月24日(2020.1.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（a）次式：V1-L1-V2-L2-V3-L3-V4-L4-Fcを有するアミノ酸配列を含むポリペプチド鎖であって、式中、FcはヒトIgG Fcポリペプチド鎖であり；V1、V2、V3、およびV4のうちの2つは免疫グロブリン重鎖可変（VH）領域であり、その他の2つは免疫グロブリン軽鎖可変（VL）領域であり；L1、L2、L3、およびL4はリンカーであり；かつ、L2および／もしくはL4は存在してもよいし、もしくは存在しなくてもよい、ポリペプチド鎖；または
（b）次式：Fc-L4-V1-L1-V2-L2-V3-L3-V4を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド鎖であって、式中、FcはヒトIgG Fcポリペプチド鎖であり；V1、V2、V3、およびV4のうちの2つはVH領域であり、その他の2つはVL領域であり；L1、L2、L3、およびL4はリンカーであり；かつ、L2および／もしくはL4は存在してもよいし、もしくは存在しなくてもよい、ポリペプチド鎖
を含む、Bi-Fcであって、
Bi-Fcが、標的細胞および免疫エフェクター細胞に結合し、かつ／または免疫エフェクター細胞による標的細胞の細胞溶解を媒介し、かつ単量体であり、
Bi-FcのFcポリペプチド鎖が、位置384と385との間にSEQ ID NO:36〜47のいずれかのアミノ酸配列の挿入を含み、これらの位置番号が、EUナンバリング方式に従って割り当てられる、
Bi-Fc。
【請求項２】
（a）または（b）のFcポリペプチド鎖が、以下の改変：K392D、K392E、N392D、N392E、R409D、R409E、K409D、K409E、D399K、D399R、E356R、E356K、D356R、D356K、Y349T、L351T、L368T、L398T、F405T、Y407T、およびY407Rの1つまたは複数を含む、請求項1に記載のBi-Fc。
【請求項３】
（a）または（b）のFcポリペプチド鎖が、IgG1 Fcポリペプチド鎖、IgG2 Fcポリペプチド鎖、またはIgG4 Fcポリペプチド鎖であり、改変K392D、K409D、およびY349Tを含む、請求項2に記載のBi-Fc。
【請求項４】
ヒトCD33、ヒトHER2、またはヒトFOLR1を発現している細胞に結合する、請求項1〜3のいずれか一項に記載のBi-Fc。
【請求項５】
(a) SEQ ID NO:48のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1；
SEQ ID NO:49のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2；
SEQ ID NO:50のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3；
SEQ ID NO:51のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1；
SEQ ID NO:52のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2；および
SEQ ID NO:53のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3；または
(b) SEQ ID NO:54のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1；
SEQ ID NO:55のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2；
SEQ ID NO:56のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3；
SEQ ID NO:57のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1；
SEQ ID NO:58のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2；および
SEQ ID NO:59のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3
を含む、請求項1〜4のいずれか一項に記載のBi-Fc。
【請求項６】
（a）L2が存在し、L2が約12アミノ酸長以下である、
（b）L1およびL3が、それぞれ少なくとも約14アミノ酸長である、ならびに／または
（c）L1およびL3が、それぞれ少なくとも約15アミノ酸長である、
請求項1〜5のいずれか一項に記載のBi-Fc。
【請求項７】
V1がVH領域でありかつV2がVL領域であるか、またはその逆であり、
V3がVH領域でありかつV4がVL領域であるか、またはその逆である、
請求項1〜6のいずれか一項に記載のBi-Fc。
【請求項８】
（a）（i）次式：V1-L1-V2-L2-V3-L3-V4-L4-Fcを有するアミノ酸配列を含む第1のポリペプチド鎖であって、式中、FcはヒトIgG Fcポリペプチド鎖であり；V1、V2、V3、およびV4はそれぞれ免疫グロブリン可変領域であり；L1、L2、L3、およびL4はリンカーであり；かつ、L2および／もしくはL4は存在してもよいし、もしくは存在しなくてもよい、第1のポリペプチド鎖；ならびに
（ii）ヒトIgG Fcポリペプチド鎖を含む第2のポリペプチド鎖；または
（b）（i）次式：Fc-L4-V1-L1-V2-L2-V3-L3-V4を有する第1のポリペプチド鎖であって、式中、FcはヒトIgG Fcポリペプチド鎖であり；V1、V2、V3、およびV4はそれぞれ免疫グロブリン可変領域であり；L1、L2、L3、およびL4はリンカーであり；かつ、L2および／もしくはL4は存在してもよいし、もしくは存在しなくてもよい、第1のポリペプチド鎖；ならびに
（ii）ヒトIgG Fcポリペプチド鎖を含む第2のポリペプチド鎖
を含む、Bi-Fcであって、
Bi-Fcが、標的細胞および免疫エフェクター細胞に結合し、かつ／または免疫エフェクター細胞による標的細胞の細胞溶解を媒介し、
L1およびL3が、少なくとも15アミノ酸長であり、
L2が、存在するならば、12アミノ酸長未満であり、
V1がVH領域でありかつV2がVL領域であるか、またはその逆であり、
V3がVH領域でありかつV4がVL領域であるか、またはその逆であり、
Bi-Fcが、ヒトCD3εに結合し、
Bi-FcのFcポリペプチド鎖が、位置384と385との間にSEQ ID NO:36〜47のいずれかのアミノ酸配列の挿入を含み、これらの位置番号が、EUナンバリング方式に従って割り当てられ、
Bi-Fcが、それぞれSEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49、およびSEQ ID NO:50のアミノ酸配列を含むCDR1、CDR2、およびCDR3を含むVH領域、ならびにそれぞれSEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52、およびSEQ ID NO:53のアミノ酸配列を含むCDR1、CDR2、およびCDR3を含むVL領域を含む、
Bi-Fc。
【請求項９】
ヒトCD33またはヒトFOLR1を発現している細胞に結合する、請求項8に記載のBi-Fc。
【請求項１０】
（a）SEQ ID NO:72のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1、
SEQ ID NO:73のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、
SEQ ID NO:74のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、
SEQ ID NO:75のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1、
SEQ ID NO:76のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、および
SEQ ID NO:77のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、
（b）SEQ ID NO:60のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1、
SEQ ID NO:61のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、
SEQ ID NO:62のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、
SEQ ID NO:63のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1、
SEQ ID NO:64のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、および
SEQ ID NO:65のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、または
（c）SEQ ID NO:66のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1、
SEQ ID NO:67のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、
SEQ ID NO:68のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、
SEQ ID NO:69のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1、
SEQ ID NO:70のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、および
SEQ ID NO:71のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、
を含む、請求項9に記載のBi-Fc。
【請求項１１】
第1のポリペプチド鎖中のFcポリペプチド鎖が、ヘテロ二量体化改変を含み、第2のポリペプチド鎖中のFcポリペプチド鎖が、別のヘテロ二量体化改変を含む、請求項8〜10のいずれか一項に記載のBi-Fc。
【請求項１２】
第1のポリペプチド鎖中のヘテロ二量体化改変が電荷対置換（charge pair substitution）であり、第2のポリペプチド鎖中のヘテロ二量体化改変が電荷対置換である、請求項11に記載のBi-Fc。
【請求項１３】
第1のポリペプチド鎖が、電荷対置換R409D、R409E、K409D、もしくはK409Eと、N392D、N392E、K392D、もしくはK392Eとを含み、かつ第2のポリペプチド鎖が、電荷対置換D399KもしくはD399Rと、E356K、E356E、D356K、もしくはD356Rとを含むか；または
第2のポリペプチド鎖が、電荷対置換R409D、R409E、K409D、もしくはK409Eと、N392D、N392E、K392D、もしくはK392Eとを含み、かつ第1のポリペプチド鎖が、電荷対置換D399KもしくはD399Rと、E356K、E356E、D356K、もしくはD356Rとを含む、
請求項12に記載のBi-Fc。
【請求項１４】
第1および第2のポリペプチド鎖のFcポリペプチド鎖が、L234A、L235A、およびN297における任意の置換からなる群より選択される、FcγRの結合を阻害する1つまたは複数の改変を含む、請求項8〜13のいずれか一項に記載のBi-Fc。
【請求項１５】
（i）次式：V1-L1-V2-L2-V3-L3-V4-L4-Fcを有する第1のポリペプチド鎖であって、式中、FcはヒトIgG Fcポリペプチド鎖であり、V1、V2、V3、およびV4は、それぞれ、異なるアミノ酸配列を有する免疫グロブリン可変領域であり、L1、L2、L3、およびL4はリンカーであり、かつ、L2および／またはL4は存在してもよいし、または存在しなくてもよい、第1のポリペプチド鎖；ならびに
（ii）ヒトIgG Fcポリペプチド鎖を含む第2のポリペプチド鎖
を含む、Bi-Fcであって、
Bi-Fcが、標的細胞および免疫エフェクター細胞に結合し、かつ／または免疫エフェクター細胞による標的細胞の細胞溶解を媒介し、
L1およびL3が、少なくとも15アミノ酸長であり、L2が、存在するならば、12アミノ酸長未満であり、
V1およびV3がVH領域であり、V2およびV4がVL領域であり、
第1および第2のポリペプチド鎖のそれぞれのFcポリペプチド鎖が、ヘテロ二量体化改変を含有し、
Bi-Fcが、それぞれSEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49、およびSEQ ID NO:50のアミノ酸配列を含むCDR1、CDR2、およびCDR3を含むVH領域、ならびにそれぞれSEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52、およびSEQ ID NO:53のアミノ酸配列を含むCDR1、CDR2およびCDR3を含むVL領域を含み、
Bi-FcのFcポリペプチド鎖が、位置384と385との間にSEQ ID NO:36〜47のいずれかのアミノ酸配列の挿入を含み、これらの位置番号が、EUナンバリング方式に従って割り当てられ、
第1のポリペプチド鎖が、電荷対置換K409D、K409E、R409D、もしくはR409Eと、K392D、K392E、N392D、もしくはN392Eとを含み、かつ第2のポリペプチド鎖が、電荷対置換D399KもしくはD399Rと、D356K、D356R、E356K、もしくはE356Rとを含むか；または第2のポリペプチド鎖が、電荷対置換K409D、K409E、R409D、もしくはR409Eと、K392D、K392E、N392D、もしくはN392Eとを含み、かつ第1のポリペプチド鎖が、電荷対置換D399KもしくはD399Rと、D356K、D356R、E356K、もしくはE356Rとを含む、
Bi-Fc。
【請求項１６】
（a）次式：V1-L1-V2-L2-V3-L3-V4-L4-Fcを有するアミノ酸配列を含むポリペプチド鎖であって、式中、FcはヒトIgG Fcポリペプチド鎖であり；V1およびV3はVH領域であり、V2およびV4はVL領域であり；L1、L2、L3、およびL4はリンカーであり；かつ、L2および／もしくはL4は存在してもよいし、もしくは存在しなくてもよい、ポリペプチド鎖；または
（b）次式：Fc-L4-V1-L1-V2-L2-V3-L3-V4を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド鎖であって、式中、FcはヒトIgG Fcポリペプチド鎖であり；V1およびV3はVH領域であり、V2およびV4はVL領域であり；L1、L2、L3、およびL4はリンカーであり；かつ、L2および／もしくはL4は存在してもよいし、もしくは存在しなくてもよい、ポリペプチド鎖
を含む、Bi-Fcであって、
Bi-Fcが、標的細胞および免疫エフェクター細胞に結合し、かつ／または免疫エフェクター細胞による標的細胞の細胞溶解を媒介し、
V1およびV2が、IgGおよび／またはscFv抗体の一部である場合に、それらががん細胞抗原に結合し、
V3およびV4が、IgGおよび／またはscFv抗体の一部である場合に、それらがヒトCD3εに結合することができ、かつV3およびV4が、SEQ ID NO:48のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1、SEQ ID NO:49のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、SEQ ID NO:50のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、SEQ ID NO:51のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1、SEQ ID NO:52のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2およびSEQ ID NO:53のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3を含み、
V3が、SEQ ID NO:7または29と少なくとも95%同一のアミノ酸配列を含み、同一性領域が少なくとも80アミノ酸長であり、
V4が、SEQ ID NO:8または31と少なくとも95%同一のアミノ酸配列を含み、同一性領域が少なくとも80アミノ酸長であり、
Bi-FcのFcポリペプチド鎖が、位置384と385との間にSEQ ID NO:36〜47のいずれかのアミノ酸配列の挿入を含み、これらの位置番号が、EUナンバリング方式に従って割り当てられ、
Bi-Fcが単量体である、
Bi-Fc。
【請求項１７】
V3が、SEQ ID NO:7または29のアミノ酸配列を含み、V4が、SEQ ID NO:8または31のアミノ酸配列を含む、請求項15または16に記載のBi-Fc。
【請求項１８】
標的細胞ががん細胞である、請求項1〜17のいずれか一項に記載のBi-Fc。
【請求項１９】
標的細胞が、病原体に感染している細胞または疾患を媒介する細胞である、請求項1〜3、8および15〜17のいずれか一項に記載のBi-Fc。
【請求項２０】
（a）病原体が、ヒト免疫不全ウイルス、肝炎ウイルス、ヒトパピローマウイルス、もしくはサイトメガロウイルスを含むウイルス、またはリステリア（Listeria）属、ミコバクテリウム（Mycobacterium）属、スタフィロコッカス（Staphylococcus）属、もしくはストレプトコッカス（Streptococcus）属の細菌である、または
（b）疾患を媒介する細胞が、線維性疾患を媒介する線維細胞である、
請求項19に記載のBi-Fc。
【請求項２１】
請求項1〜20のいずれか一項に記載のBi-Fcおよび生理学的に許容される賦形剤を含む、薬学的製剤。
【請求項２２】
請求項1〜20のいずれか一項に記載のBi-Fcをコードする、1種または複数種の核酸。
【請求項２３】
請求項22に記載の核酸を含む、1種または複数種のベクター。
【請求項２４】
請求項22に記載の核酸および／または請求項23に記載のベクターを含有する、宿主細胞。
【請求項２５】
核酸が発現されるような条件下で請求項24に記載の宿主細胞を培養する段階、および
細胞集団または培地からBi-Fcを回収する段階
を含む、Bi-Fcを作製する方法。
【請求項２６】
請求項1〜18のいずれか一項に記載のBi-Fcを含む、がん、感染症、自己免疫疾患または炎症性疾患または線維性疾患の処置のための薬学的組成物。