(57)【要約】本発明はテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン３，３’−ジガレートの混合物、上記テアフラビン混合物の医薬組成物および上記テアフラビン混合物のダイエットサプリメント組成物の製法であって様々な疾患を治療または防止するための上記テアフラビン混合物およびそれらの医薬組成物の使用法を開示する。本発明はまた、各々、別個の化合物としての、テアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン３，３’−ジガレート、上記化合物の医薬組成物、上記化合物のダイエットサプリメント組成物の製法であって、様々な疾患を治療または防止するための上記化合物の使用法を開示する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
テアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン３，３’−ジガレートの混合物の製法であって、
緑茶葉を水性緩衝液と接触させて反応混合物を形成させる工程；
反応混合物を酸素と接触させて発酵を開始させる工程；
テアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン３，３’−ジガレートを形成するのに十分な時間反応混合物を発酵させる工程；
発酵を終了する工程；および
テアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン３，３’−ジガレートの混合物から反応混合物を分離する工程：
を含む、方法。
【請求項２】
分離工程がさらに、
反応混合物を有機溶媒と接触させてテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン３，３’−ジガレートの混合物を溶かす工程；
溶媒を希釈水性塩基と接触させる工程；
溶媒を塩基から分離する工程；
溶媒をクロマトグラフィ媒質と接触させる工程；および
テアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン３，３’−ジガレートの混合物をクロマトグラフィ媒質から溶出させる工程：
を含むところの、請求項１記載の方法。
【請求項３】
有機溶媒と接触させる前に固体を反応混合物から除去するところの、請求項２記載の方法。
【請求項４】
媒質がシリカゲルであるところの、請求項２記載の方法。
【請求項５】
緑茶葉の水性緩衝液に対する比率が約１：０．５ないし約１：２０（キログラム／リットル）であるところの、請求項１記載の方法。
【請求項６】
水性緩衝液がｐＨ６．４の０．１５Ｍリン酸緩衝液であるところの、請求項１記載の方法。
【請求項７】
反応混合物を約１５℃ないし約８０℃で発酵させるところの、請求項１記載の方法。
【請求項８】
反応混合物を約３０℃で発酵させるところの、請求項７記載の方法。
【請求項９】
反応混合物を発酵の間振動させるところの、請求項１記載の方法。
【請求項１０】
反応混合物を攪拌するところの、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
時間が約０．５時間ないし約１．５時間であるところの、請求項１記載の方法。
【請求項１２】
時間が約１時間であるところの、請求項１記載の方法。
【請求項１３】
テアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートの混合物またはそれらの医薬上利用可能な塩、水和物または溶媒和物および医薬上許容されるビヒクルを含む医薬組成物。
【請求項１４】
テアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートまたはそれらの医薬上利用可能な塩、水和物または溶媒和物および適当なダイエットサプリメントビヒクルを含むダイエットサプリメント組成物。
【請求項１５】
高脂血症を治療または防止する方法であって、治療有効量のテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートを含む混合物またはそれらの医薬上利用可能な塩、水和物または溶媒和物をこのような治療または防止を必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項１６】
高脂血症を治療または防止する方法であって、治療有効量の請求項１３の医薬組成物をこのような治療または防止を必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項１７】
容器と、請求項１３の医薬組成物と、高脂血症の治療を必要とする患者に治療有効量の医薬組成物を投与することで高脂血症を治療または防止することに関する当該容器に添付した使用説明書とを含む製品。
【請求項１８】
冠状動脈性心疾患を治療または防止する方法であって、治療有効量のテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートを含む混合物またはそれらの医薬上利用可能な塩、水和物または溶媒和物をこのような治療または防止を必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項１９】
冠状動脈性心疾患を治療または防止する方法であって、治療有効量の請求項１３の医薬組成物をこのような治療または防止を必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項２０】
卒中を治療または防止する方法であって、治療有効量のテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートを含む混合物またはそれらの医薬上利用可能な塩、水和物または溶媒和物をこのような治療または防止を必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項２１】
卒中を治療または防止する方法であって、治療有効量の請求項１３の医薬組成物をこのような治療または防止を必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項２２】
アテローム動脈硬化性心臓血管疾患を治療または防止する方法であって、治療有効量のテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートを含む混合物またはそれらの医薬上利用可能な塩、水和物または溶媒和物をこのような治療または防止を必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項２３】
アテローム動脈硬化性心臓血管疾患を治療または防止する方法であって、治療有効量の請求項１３の医薬組成物をこのような治療または防止を必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項２４】
ＡＩＤＳを治療または防止する方法であって、治療有効量のテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートを含む混合物またはそれらの医薬上利用可能な塩、水和物または溶媒和物をこのような治療または防止を必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項２５】
ＡＩＤＳを治療または防止する方法であって、治療有効量の請求項１３の医薬組成物をこのような治療または防止を必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項２６】
糖尿病を治療または防止する方法であって、治療有効量のテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートを含む混合物またはそれらの医薬上利用可能な塩、水和物または溶媒和物をこのような治療または防止を必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項２７】
糖尿病を治療または防止する方法であって、治療有効量の請求項１３の医薬組成物をこのような治療または防止を必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項２８】
血漿における酸化−低比重リポ蛋白レベル増加を治療または防止する方法であって、治療有効量のテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートを含む混合物またはそれらの医薬上利用可能な塩、水和物または溶媒和物をこのような治療または防止を必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項２９】
血漿における酸化−低比重リポ蛋白レベル増加を治療または防止する方法であって、治療有効量の請求項１３の医薬組成物をこのような治療または防止を必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項３０】
フォン・ヴィレブランド病の増加を治療または防止する方法であって、治療有効量のテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートを含む混合物またはそれらの医薬上利用可能な塩、水和物または溶媒和物をこのような治療または防止を必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項３１】
フォン・ヴィレブランド病の増加を治療または防止する方法であって、治療有効量の請求項１３の医薬組成物をこのような治療または防止を必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項３２】
白血球減少を治療または防止する方法であって、治療有効量のテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートを含む混合物またはそれらの医薬上利用可能な塩、水和物または溶媒和物をこのような治療または防止を必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項３３】
白血球減少を治療または防止する方法であって、治療有効量の請求項１３の医薬組成物をこのような治療または防止を必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項３４】
脂肪肝を治療または防止する方法であって、治療有効量のテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートを含む混合物またはそれらの医薬上利用可能な塩、水和物または溶媒和物をこのような治療または防止を必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項３５】
脂肪肝を治療または防止する方法であって、治療有効量の請求項１３の医薬組成物をこのような治療または防止を必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項３６】
脳梗塞を治療または防止する方法であって、治療有効量のテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートを含む混合物またはそれらの医薬上利用可能な塩、水和物または溶媒和物をこのような治療または防止を必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項３７】
脳梗塞を治療または防止する方法であって、治療有効量の請求項１３の医薬組成物をこのような治療または防止を必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項３８】
痴呆ならびに心臓および脳血管疾患により誘発される身体障害を治療または防止する方法であって、治療有効量のテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートを含む混合物またはそれらの医薬上利用可能な塩、水和物または溶媒和物をこのような治療または防止を必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項３９】
痴呆ならびに心臓および脳血管疾患により誘発される身体障害を治療または防止する方法であって、治療有効量の請求項１３の医薬組成物をこのような治療または防止を必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項４０】
テアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートのその各々の別個の化合物としての製法であって、以下の工程：
茶ポリフェノールを水性緩衝液およびポリフェノールオキシダーゼと接触させて反応混合物を形成させる工程；
反応混合物を酸素と接触させて発酵を開始させる工程；
テアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートを形成するのに十分な時間反応混合物を発酵させる工程；
発酵を終了する工程；および
反応混合物を分離して、その各々の別個の化合物としてのテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートまたはテアフラビン−３，３’−ジガレートを得る工程：
を含む方法。
【請求項４１】
分離工程がさらに
反応混合物を有機溶媒と接触させる工程；
溶媒を希釈水性塩基と接触させる工程；
溶媒を塩基から分離する工程；
溶媒をクロマトグラフィ媒質と接触させる工程；および
テアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートを、各々単一化合物として、クロマトグラフィ媒質から溶出する工程：
を含む請求項４０記載の方法。
【請求項４２】
固体が有機溶媒と接触させる前に反応混合物から除去される請求項４１記載の方法。
【請求項４３】
媒質がシリカゲルである、請求項４１記載の方法。
【請求項４４】
テアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートまたはテアフラビン−３，３’−ジガレートが、各々、純度約９７％より大きい、請求項４０記載の方法。
【請求項４５】
茶ポリフェノールのポリフェノールオキシダーゼに対する比率が重量対重量に基づいて約１：０．１ないし約１：２である、請求項４０記載の方法。
【請求項４６】
茶ポリフェノールの緩衝液に対する比率がキログラム対リットルに基づいて約１：０．５ないし約１：２０である、請求項４０記載の方法。
【請求項４７】
緩衝液がｐＨ６．４の０．１５Ｍリン酸緩衝液である、請求項４０記載の方法。
【請求項４８】
反応混合物を約１５℃ないし約８０℃で発酵させる、請求項４０記載の方法。
【請求項４９】
反応混合物を約３５℃で発酵させる、請求項４８記載の方法。
【請求項５０】
反応混合物を発酵の間振動させる、請求項４０記載の方法。
【請求項５１】
反応混合物を攪拌する、請求項５０記載の方法。
【請求項５２】
時間が約０．５時間ないし約１．５時間である、請求項４０記載の方法。
【請求項５３】
時間が約４０分である、請求項５２記載の方法。
【請求項５４】
テアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートまたはそれらの医薬上利用可能な塩、溶媒和物または水和物および医薬上許容されるビヒクルを含む医薬組成物。
【請求項５５】
高脂血症を治療または防止する方法であって、治療有効量のテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートまたはテアフラビン−３，３’−ジガレートあるいはそれらの医薬上利用可能な塩、溶媒和物または水和物をこのような治療または防止を必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項５６】
高脂血症を治療または防止する方法であって、治療有効量の請求項５４の医薬組成物をこのような治療または防止を必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項５７】
テアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートおよびそれらの医薬上利用可能な塩、溶媒和物または水和物から成る群から選択される２つまたは３つのいずれかの化合物および医薬上許容されるビヒクルを含む医薬組成物。
【請求項５８】
高脂血症を治療または防止する方法であって、治療有効量のテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートまたはそれらの医薬上利用可能な塩、溶媒和物または水和物から成る群から選択される２つまたは３つのいずれかの化合物を含む混合物をこのような治療または防止を必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項５９】
高脂血症を治療または防止する方法であって、治療有効量の請求項５７の医薬組成物をこのような治療または防止を必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項６０】
テアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートまたはそれらの医薬上利用可能な塩、溶媒和物または水和物および適当なダイエットサプリメントビヒクルを含むダイエットサプリメント組成物。
【請求項６１】
テアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートおよびそれらの医薬上利用可能な塩、溶媒和物または水和物から成る群から選択される２つまたは３つのいずれかの化合物および適当なダイエットサプリメントビヒクルを含むダイエットサプリメント組成物。
【請求項６２】
容器、請求項５４または５７のいずれか１つに記載の医薬組成物と、高脂血症の治療を必要とする患者に治療有効量の医薬組成物を投与することで高脂血症を治療または防止することに関する当該容器に添付した使用説明書とを含む製品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートの混合物、上記テアフラビン混合物の医薬組成物および上記テアフラビン混合物のダイエットサプリメント組成物の製法であって様々な疾患を治療または防止するための上記テアフラビン混合物およびそれらの医薬組成物の使用法を開示する。本発明はまた、各々、別個の化合物としての、テアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン３，３’−ジガレートの製法、上記化合物の医薬組成物、上記化合物のダイエットサプリメント組成物、および様々な疾患を治療または防止するための上記化合物の使用法を開示する
【背景技術】
【０００２】
茶は、水以外で世界で最も広く消費される飲料であり、Camellia Sinensisの葉から製造され、それは大量のフラバノイド化合物を含有する。テアフラビンは、テアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートを含むが、図１に記載されるように、典型的には緑茶の紅茶への発酵の間に緑茶ポリフェノール（すなわち、フラバノイド）が重合して形成される。典型的には、紅茶内のテアフラビン濃度は重量で約０．４％ないし１．８％で緑茶内のテアフラビン濃度はずっと少ない。
テアフラビンは紅茶の特徴的な色（すなわち、明瞭）および芳香（すなわち、爽快）に関与している。フラバノイドは有効な抗酸化剤（Leungら、J Nutr 2001、131（9）：2248-51；Sarkarら、Biochem Biophys Res Commun 2001、284（1）：173-8；Yoshinoら、Biol.Pharm Bull.1994、17（1）146-149）であって癌、心臓血管および脳血管疾患、糖尿病、などのような様々な疾患に対して有効であるだろう。さらに、フラバノイドは有意の抗炎症、抗微生物および抗ウイルス活性を有するだろう。
【０００３】
しかしながら、様々な疾患を治療または防止するためにテアフラビンを使用する上での有意な問題は、経済的な方法を使用して天然源から、混合物または個々の化合物のいずれかとして、十分な量の、テアフラビンを単離することである。それ故、必要とされるのはテアフラビンが、混合物または個々の化合物のいずれかとして、様々な疾患を治療または防止するために使用されるために費用的に有効な方法で、混合物または個々の化合物のいずれかとして、十分な量の、テアフラビンを単離する方法である。
【発明の詳細な説明】
【０００４】
本発明はテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン３，３’−ジガレートの混合物の製法および分離化合物としての、テアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン３，３’−ジガレートの製法および様々な疾患を治療または防止するためのテアフラビン混合物または個々のテアフラビンのいずれかの使用法を提供することによってこれらおよび他の必要性を満足する。重要なことに、上記方法は大規模に最小の費用で有効に行われる。
ある態様において、本発明はテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン３，３’−ジガレートの製法を提供する。緑茶葉を水性緩衝液に接触させて反応混合物を形成する。反応混合物を酸素と接触させて発酵を開始してテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン３，３’−ジガレートの混合物を形成するのに十分な時間発酵させる。発酵を終了して反応混合物をテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン３，３’−ジガレートの混合物から分離する。
【０００５】
別の態様において、本発明はテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン３，３’−ジガレートまたはそれらの医薬上利用可能な塩、水和物または溶媒和物の混合物を含む医薬組成物を提供する。医薬組成物は一般にテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン３，３’−ジガレートまたはそれらの医薬上利用可能な塩、水和物または溶媒和物の混合物および適当な賦形剤、担体または希釈剤を含む。該組成物は家畜使用またはヒトにおける使用のために処方されるだろう。
さらに別の態様において、本発明はテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン３，３’−ジガレートを含むダイエットサプリメント組成物を提供する。ダイエットサプリメント組成物は一般にテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートまたはそれらの医薬上利用可能な塩、水和物または溶媒和物の混合物および適当なダイエットサプリメントビヒクルを含む。
【０００６】
さらに別の態様において、本発明は高脂血症、冠状動脈性心疾患、卒中、アテローム動脈硬化性心臓血管疾患、糖尿病、白血球減少、脳梗塞および痴呆または身体障害を含むが、それらに制限されない、様々な疾患を治療および防止する方法を提供する。該方法はこのような治療または防止を必要とする患者に治療有効量のテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートまたはそれらの医薬上利用可能な塩、水和物または溶媒和物の混合物を投与することを含むだろう。別法として、該方法はこのような治療または防止を必要とする患者に治療有効量の上記テアフラビン混合物の医薬組成物を投与することを含むだろう。
【０００７】
さらに別の態様において、本発明は、各々、別個の化合物としての、テアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートの製法を提供する。茶ポリフェノールを水性緩衝液およびポリフェノールオキシダーゼと接触させて反応混合物を形成する。反応混合物を酸素と接触させて発酵を開始してテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートの混合物を形成するのに十分な時間発酵させる。発酵を終了して反応混合物を分離して、分離化合物としてのテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートを提供する。
さらに別の態様において、本発明はテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートまたはテアフラビン−３，３’−ジガレートを含む医薬組成物を提供する。医薬組成物は一般にテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレート、テアフラビン−３，３’−ジガレートまたはそれらの医薬上利用可能な塩、水和物または溶媒和物の混合物および適当な賦形剤、担体または希釈剤を含む。医薬組成物は家畜使用またはヒトにおける使用のために処方されるだろう。
【０００８】
さらに別の態様において、本発明はテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートまたはテアフラビン−３，３’−ジガレートを含むダイエットサプリメント組成物を提供する。ダイエットサプリメント組成物は一般にテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレート、テアフラビン−３，３’−ジガレートまたはそれらの医薬上利用可能な塩、水和物または溶媒和物の混合物および適当なダイエットサプリメントビヒクルを含む。
さらに別の態様において、本発明は高脂血症、冠状動脈性心疾患、卒中、アテローム動脈硬化性心臓血管疾患、糖尿病、白血球減少、脳梗塞および痴呆または身体障害を含むが、それらに制限されない、様々な治療適応を治療および防止する方法を提供する。該方法はこのような治療または防止を必要とする患者に治療有効量のテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートまたはそれらの医薬上利用可能な塩、水和物または溶媒和物の混合物を投与することを含むだろう。別法として、該方法はこのような治療または防止を必要とする患者に治療有効量の上記テアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレート、テアフラビン−３，３’−ジガレートの医薬組成物を投与することを含むだろう。
【０００９】
（図面の簡単な記載）
図１はテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレート、テアフラビン−３，３’−ジガレートの化学構造を示す；および
図２はエピカテキン、エピカテキンガレート、エピガロカテキンおよびエピガロカテキンガレートの化学構造を示す。
【００１０】
（発明の詳細な記載）
定義
「緩衝液」とは水素イオンと可逆的に結合して結果的に酸または塩基付加によるｐＨの変化を抑える物質のことを言う。緩衝液の例は蛋白、重炭酸塩、炭酸塩、カルボン酸塩（例えば、酢酸塩、プロピオン酸塩、など）、スルホン酸塩、リン酸塩（例えば、リン酸ナトリウム）、クエン酸塩、ホウ酸塩、アミノ酸（例えば、グリシン、アラニン、など）およびアミン（例えば、メチルアミン、エチルアミン、トリス、など）を含むが、それらに制限されない。
「本発明の化合物」とは個々のテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレート、テアフラビン−３，３’−ジガレートと同様にテアフラビンのいずれの混合物のことも言う。本発明の化合物はそれらの化学構造および／または化学名のいずれかによって同定されるだろう。化学構造および化学名が矛盾する場合、化学構造が化合物の性質を決定する。本発明の化合物はまたエノール体、ケト体およびそれらの混合物を含むいくつかの互変異性体で存在するだろう。従って、本明細書に記載される化学構造は示された化合物のあらゆる可能な互変異性体を包含する。本発明の化合物はまた１つまたはそれ以上の原子が従来自然に見出される原子量と異なる原子量を有する同位体標識化合物を含むだろう。本発明の化合物の一部である同位体の例は２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１８Ｏおよび１７Ｏを含むが、それらに制限されない。本発明の化合物は水和形態を含む、溶媒和形態と同様に非溶媒物形態で存在するだろう。一般に、水和および溶媒和形態は本発明の範疇である。本発明のある化合物は多様な結晶または非結晶形態で存在するだろう。一般に、あらゆる物理形態は本発明で考慮される使用に関して同等であって本発明の範疇であることを主張する。
【００１１】
「緑茶葉」とは枯れて、酸化（すなわち、発酵）過程を防止するために加熱して（例えば、煎るまたは蒸す）および自然乾燥させた常緑種の葉Camellia Sinensisのことを言う。
「医薬上許容される塩」とは医薬上許容されて親化合物の所望の薬理活性を有する本発明の化合物の塩のことを言う。このような塩は（１）塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、等のような無機酸で形成する；または酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、シクロペンタンプロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、３−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１，２−エタン−ジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４−クロロベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、ショウノウスルホン酸、４−メチルビシクロ［２．２．２］−オクト−２−エン−１−カルボン酸、グルコヘプトン酸、３−フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、第三級ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、ムコン酸等のような有機酸で形成する酸付加塩；または（２）本化合物に存在する酸性プロトンがアンモニウムイオン、金属イオン、例えば、アルカリ金属イオン（例えば、ナトリウムまたはカリウム）、アルカリ土類イオン（例えば、カルシウムまたはマグネシウム）、またはアルミニウムイオンで置換される場合形成する塩；またはエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、Ｎ−メチルグルカミン、モルホリン、ピペリジン、ジメチルアミン、ジエチルアミン等のような有機塩基と同等物：を含む。またアルギニン誘導体等のようなアミノ酸塩、およびグルクルミン酸またはガラクトノリン酸等のような有機酸塩を含む（例えば、Bergeら、1977、J.Pharm.Sci 66：1-19、を参照）。
【００１２】
「医薬上許容されるビヒクル」とは本発明の化合物と共に投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤または担体のことを言う。
「患者」とはヒトおよび他の哺乳動物のことを言う。
「防止する」または「防止」とは疾患または障害を罹患する危険性を軽減する（すなわち、疾患に曝されるまたは罹患しやすいがまだ疾患の諸症状を経験または示唆していない患者において疾患の少なくとも１つの臨床症状が進行しないようにする）ことを言う。
【００１３】
「テアフラビン」とはカテキンキノン（例えば、エピカテキン）およびガロカテキンキノン（例えば、エピガロカテキン）酸化圧縮、酵素ポリフェノールオキシダーゼによって触媒される反応によって形成する化合物のことを言う。テアフラビンはテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレート、テアフラビン３，３’−ジガレートを含む。テアフラビンは湯、酢酸エチル、ブタノールおよびメタノール、などに溶解して典型的には塩基性溶液内で酸化に感受性が高い。
「茶ポリフェノール」とは混合物の約９０％を構成するカテキンと共に緑茶葉から抽出されるポリフェノール混合物のことを言う。茶ポリフェノールは市販品（例えば、Wuzhou International Co.、LTD.、Ningbo Free Trade Zone、Ningbo、China）から入手可能である。カテキンはガロカテキン、エピカテキン（「ＥＣ」）、エピガロカテキン（「ＥＧＣ」）、エピカテキンガレート（「ＥＣＧ」）、エピガロカテキンガレート（「ＥＧＣＧ」）を含む。典型的にはＥＧＣＧはカテキン内容物の約５０％ないし約６０％を構成する。
【００１４】
いずれの疾患または障害を「治療する」またはその「治療」とは、ある具体例において、疾患または障害を改善する（すなわち、疾患またはその少なくとも１つの臨床症状の進行を停止または軽減する）ことを言う。別の具体例において、「治療する」または「治療」とは患者に認識不可能な、少なくとも１つの身体指標を改善することを言う。さらに別の具体例において、「治療する」または「治療」とは疾患または障害を、身体的（例えば、認識可能な症状の安定化）、生理学的（例えば、身体指標の安定化）のいずれか、または両方で阻害することを言う。さらに別の具体例において、「治療する」または「治療」とは疾患または障害の兆候を遅らせることを言う。
「治療有効量」とは、疾患を治療または防止するために患者に投与する場合、このような疾患の治療または防止を有効にするのに十分な化合物量のことを意味する。「治療有効量」は化合物、疾患およびその重症度および治療される患者の年齢、体重、などによって変化するだろう。
【００１５】
テアフラビン混合物および個々のテアフラビンの製法
ある態様において、本発明はテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートの混合物の製法を提供する。最初に、緑茶葉を、水性緩衝液と接触させて反応混合物を形成する。緑茶葉を市販品（例えば、Far Tea Leaves、Berkeley、CA；SOTA Instant Japanese Green Tea、Reno、Nevada；FML Tea Trading Co.、Ltd.、Xiamen、China）から購入して販売元によって提供されるように使用しても緩衝液と接触させる前に断片化して使用してもよい。
好ましくは、水性緩衝液は約５．０ないし約７．０（より好ましくは、約６．３ないし約６．５）のｐＨを有する。緩衝液のモル量は水溶液を緩衝するのに十分であって当業者によって容易に近づけられるだろう。ある具体例において、緩衝液は約０．１Ｍないし約０．３である。緩衝液は所望の反応混合物のｐＨに調整可能であるいずれの緩衝剤からも選択されるだろう。適当な緩衝剤の選択法は当業者に公知である。好ましい緩衝液はリン酸塩である。ある具体例において、緩衝剤はｐＨ６．４の０．５Ｍリン酸塩である。別の具体例において、緑茶葉の水性緩衝液に対する比率はキログラム対リットルに基づいて約１：０．５ないし約１：２０である。
【００１６】
いくつかの場合で、緑茶葉はカテキンをテアフラビンに転換させるのに十分なポリフェノールオキシダーゼ残渣を含有するだろう。他の条件では、ポリフェノールオキシダーゼ（Worthington、Biochemical Corporation、Lakewood、NJ）を反応混合物に加えてカテキンからテアフラビンへの形成を促進してもよい。典型的には、ポリフェノールオキシダーゼの緑茶葉に対する比率は約０．１：１ないし約２：１（ｗ／ｗ）で変化するだろう。
反応混合物を酸素と接触させて発酵を開始する。典型的には反応は振動させて好ましくは、攪拌する。反応混合物内の酸素量は約２０％ないし約２５％（ｗ／ｖ）で変化するだろう。反応混合物を通る適当な酸素流量は反応体積で変化して当業者によって容易に決定されるだろう。ある具体例において、反応混合物内の酸素量は約２２％（ｗ／ｖ）である。反応混合物の温度は約１５℃ないし約８０℃で変化するだろう。ある具体例において、温度は約３０℃である。別の具体例において、反応混合物内の酸素量は約２２％（ｗ／ｖ）であって、反応混合物を通る酸素流量は約２０Ｌ／秒であり、反応混合物の体積は約１０００Ｌないし１２００Ｌであって、温度は約３０℃であり反応混合物を攪拌する。
【００１７】
反応混合物を発酵させてテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートの混合物を形成する。典型的には、反応混合物を約０．５時間ないし約１．５時間発酵させる。ある具体例において、反応混合物を約１時間発酵させる。反応混合物の温度および酸素濃度を発酵の間大体一定に維持する。好ましくは、反応混合物を発酵の間振動させて、より好ましくは、反応混合物を発酵の間攪拌する。
最後に、反応混合物をテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートの混合物から分離する。好ましくは、反応混合物のいずれかの固体を除去する。反応混合物を濾過して固体を除去する。より好ましくは、反応混合物を遠心分離して固体を除去する。さらにより好ましくは、反応混合物を遠心分離および濾過して固体を除去する。
【００１８】
濾過した反応混合物を有機溶媒と接触させて、発酵を終了する。有機溶媒は多少の量のテアフラビンを溶かすはずであり（すなわち、テアフラビンは選択された溶媒に僅か以上で溶けるはずであり）、水溶液と少なくとも部分的に不混和性であるはずである（すなわち、水相および有機相は混合後２相を形成するはずである）。有機溶媒は上記基準を満たす当業者のものによって過度の実験なしに選択されるだろう。好ましい具体例において、有機溶媒は酢酸エチルである。有機溶媒の混合物を、溶媒混合物が上記基準を満足する場合、抽出法において使用可能であることは着目すべきである。
テアフラビンを水溶液から抽出するのに必要な有機溶媒の容量を計算することは当業者の能力の範囲内である。好ましくは、水溶液からテアフラビンを抽出するのに使用される有機溶媒の容量は水溶液の約１／３ないし水溶液の約３倍である。より好ましくは、水溶液からテアフラビンを抽出するのに使用される有機溶媒の容量は水溶液の容量にほとんど等しい。
【００１９】
実質的に全てのテアフラビンを有機相に抽出するのに必要な有機溶媒の多くの部分と水溶液とを接触させてもよい。水溶液から完全にテアフラビンを抽出するのに必要な有機溶媒の部分の数は過度の実験なしに当業者によって容易に決定されるだろう。
一般に、分離漏斗内で有機溶媒および水溶液を接触させることは水溶液から有機溶媒にテアフラビンを抽出するのに十分である。しかしながら、いくつかの条件では、磁気攪拌、機械的攪拌、音波破砕、などのような当業者に公知の他の方法で有機溶媒および水溶液を接触させてもよい。
【００２０】
テアフラビンを含有する有機溶媒を希釈水性塩基と接触させる。好ましくは、塩基は希釈水酸化物、炭酸塩または重炭酸塩である。ある具体例において、希釈水性塩基は５％ＮａＨＣＯ３であって、分離漏斗内で有機溶媒と接触させる。理論に拘束されることを意図するものではないが、おそらく有機溶媒を希釈塩基と接触させることはテアフラビン混合物から塩基可溶性不純物を除去する。溶媒を希釈塩基水溶液から、好ましくは分離漏斗を使用して、再度分離する。
ある具体例において、抽出作業後のテアフラビン混合物の反応混合物中濃度は不揮発性物質の総質量の約５％ないし約９０％である。別の具体例において、抽出作業後のテアフラビン混合物の反応混合物中濃度は不揮発性物質の総質量の約１０％ないし約８０％である。別の具体例において、抽出作業後のテアフラビン混合物の反応混合物中濃度は不揮発性物質の総質量の約２０％ないし約７０％である。
【００２１】
分離した有機溶媒をクロマトグラフィ媒質と接触させてテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートの混合物を提供する。好ましくは、クロマトグラフィ媒質と接触させる前に有機溶液を濃縮する。クロマトグラフィ媒質は当業者に公知のいずれのクロマトグラフィ支持体でもよい。ある具体例において、クロマトグラフィ媒質はシリカゲルである。好ましくは、テアフラビン混合物を含有する有機溶媒をクロマトグラフィ媒質上に負荷して、カラム内に封入して別の有機溶媒で溶出させてテアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートの混合物を提供する。ある具体例において、テアフラビン混合物を含有する有機溶媒をシリカゲルカラム上に負荷して、ヘキサン中４０％酢酸エチルで溶出させる。いくつかの条件では、クロマトグラフィ媒質のバッチ使用が好ましいだろう。クロマトグラフィ媒質の型および量の選択、溶出溶媒の選択、カラムの長さ、などは当業者の範囲内である。
【００２２】
ある具体例において、テアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートの混合物はクロマトグラフィ媒質から溶出させた後は実質的に純粋である（すなわち、他の物質がない）。好ましくは、テアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートの混合物は当業者に公知の通常の分析法で純度９５％以上、より好ましくは、純度９７％以上および最も好ましくは、純度９９％以上である。
テアフラビン混合物中の個々のテアフラビンの割合は緑茶葉中の個々のテアフラビンの割合を反映し、従って、原料の緑茶葉で変化するだろう。ある具体例において、テアフラビン混合物は約４０％ないし約５０％のテアフラビン、約１５％ないし約２５％のテアフラビン−３−ガレート、約１０％ないし約１４％のテアフラビン−３’−ガレートおよび約１５％ないし約２５％のテアフラビン３，３’−ジガレートから成る。別の具体例において、混合物は約４７％のテアフラビン、約１９％のテアフラビン−３−ガレート、約１４％のテアフラビン−３’−ガレートおよび約２０％のテアフラビン３，３’−ジガレートから成る。
【００２３】
第２の態様において、本発明は、各々分離化合物としての、テアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートの混合物を提供する。最初に、茶ポリフェノールを、水性緩衝液と接触させて反応混合物を形成する。茶ポリフェノールを商業的供給源（Yuan Xiang Biopharm Company、Ltd.、Shanghai、China）から購入し、その供給者によって提供されるように使用してもよい。ポリフェノールオキシダーゼ（Worthington Biochemical Corporation、Lakewood、NJ）を反応混合物に加える。典型的には、ポリフェノールオキシダーゼの茶ポリフェノールに対する比率はｗ／ｗに基づいて約０．５：１ないし約１：１で変化するだろう。緑茶葉からのテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートの混合物を形成する残りの反応は最後のクロマトグラフィ媒質上の純化を除いて上記の通り行うことができる。好ましくは、テアフラビン混合物をいくつもの異なる部分に分割して、クロマトグラフィ媒質カラムに個々に加えテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートを、化合物の混合物というよりむしろ各々単一化合物として得る。テアフラビン混合物を各々単一化合物としてのテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートに分離するのに必要なパラメータの選択（すなわち、部分数、クロマトグラフィ媒質の型および量の選択、溶出溶媒の選択、カラムの長さ、など）は当業者の範囲内である。
【００２４】
治療的使用
本発明の化合物は高脂血症、冠状動脈性心疾患、卒中、アテローム動脈硬化性心臓血管疾患、ＡＩＤＳ、糖尿病、酸化−低比重リポ蛋白レベル、フォン・ヴィレブランド病、白血球減少、脳梗塞、痴呆および身体障害、脂肪肝を含むがそれらに制限されない、様々な疾患および障害を治療するのに用いることができる。これらの疾患および障害の症状の記述は、例えば、the Merck Manual、第１６版に見ることができる。好ましい具体例において、本発明の化合物および／またはその医薬組成物は高脂血症を罹患している、患者、好ましくはヒトに投与される。
【００２５】
さらに、ある具体例において、本発明の化合物および／またはその医薬組成物は上記疾患または障害に対する防止策として患者、好ましくはヒトに投与される。それ故、本発明の化合物および／またはその医薬組成物はいずれの上記疾患または障害に対する前処置を有する患者に防止策として投与することができる。従って、本発明の化合物および／またはその医薬組成物はある疾患または障害を治療または防止すると同時に別のものを治療または防止する（例えば、脳梗塞を治療する一方で高脂血症を防止する）のに用いることができる。
上記に列挙した様々な疾患または障害を治療または防止する際の本発明の化合物および／またはその医薬組成物の適用は当該分野に記載の方法によって決定されるだろう。従って、上記疾患または障害を治療または防止するために本発明の化合物および／またはその医薬組成物をアッセイまたは使用することは当業者の能力の範疇にある。
【００２６】
治療的／防止的投与
本発明の化合物および／またはその医薬組成物はヒトおよび家畜医薬において有利に使用されるだろう。上記４．３項に前記されるように、本発明の化合物および／またはその医薬組成物は上記に列挙した様々な疾患または障害を治療または防止するのに有用である。
上記疾患または障害を治療または防止するのに使用される場合、本発明の化合物および／またはその医薬組成物は単一で、または他の薬剤と組み合わせて投与または服用することができる。本発明の化合物および／またはその医薬組成物はまた単一で、または本発明の他の化合物および／またはその医薬組成物を含む他の医薬活性剤と組み合わせて投与または服用することができる。
【００２７】
本発明は治療有効量の本発明の化合物および／またはその医薬組成物を患者に投与する治療または防止法を提供する。患者は好ましくは哺乳動物および最も好ましくは、ヒトである。
本発明の化合物および／またはその医薬組成物は好ましくは経口投与されて、それが血流への本発明の化合物および／またはその医薬組成物の放出に至る。本発明の化合物および／またはその医薬組成物は経口持続放出系を介して供給可能である。ある具体例において、ポリマー物質は経口持続放出デリバリーで使用される。好ましいポリマーはナトリウムカルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよびヒドロキシエチルセルロース（最も好ましくは、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）を含む。他の好ましいセルロースエーテルが記載されている（Alderman、Int.J.Pharm.Tech.&Prod.Mfr.1984、5（3）1-9）。薬物放出に影響する因子は当業者に公知であって当該分野に記載される（Bambaら、Int.J.Pharm.1979、2、307）。
【００２８】
別の具体例において、腸溶性製剤が経口持続放出投与で使用可能である。好ましいコーティング物質はｐＨ依存性安定能を有する（すなわち、ｐＨ制御放出）ポリマー、遅延またはｐＨ依存性の膨張、溶解または浸透率を有する（すなわち、時間制御放出）ポリマー、酵素によって分解される（すなわち、酵素制御放出）ポリマーおよび圧力上昇によって崩壊する堅固な層を形成する（すなわち、圧力制御放出）ポリマーを含む。
さらに別の具体例において、浸透デリバリー系が経口持続放出投与で使用される（ヴェルマら、Drug Dev.Ind.Pharm.、2000、26：695-708）。さらに別の具体例において、ＯＲＯＳＴＭ浸透デリバリーが経口持続放出デリバリー法で使用される（テーベスら、米国特許第3,845,770号；テーベスら、米国特許第3,916,899号）。
【００２９】
医薬組成物
本医薬組成物は典型的には治療有効量の本発明の化合物を、好ましくは純形態で、患者に適した投与形態を提供するような適量の医薬上許容されるビヒクルと共に、含有する。本発明の化合物は医薬組成物中約５％ないし約５０％（ｗ／ｗ）、好ましくは約１１％のレベルで存在するだろう。投与量当たりの本発明の化合物の総量は約７０ｍｇないし約２１０ｍｇとすることができる。
患者に投与する場合、本発明の化合物および医薬上許容されるビヒクルは滅菌であるのが好ましい。水、食塩水および水性デキストロースおよびグリセロール溶液が液体ビヒクルとして使用可能である。他の適当な医薬ビヒクルはスターチ、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアリン酸塩、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノール等のような賦形剤を含む。本医薬組成物はまた、要すれば、最小量の湿潤剤または乳化剤またはｐＨ緩衝剤を含有可能である。加えて、補助剤、安定化剤、増粘剤、潤沢剤および着色料を使用してもよい。医薬組成物の調製の一般的な議論はレミントン、「The Science and Practice of Pharmacy」、第１９版に見ることができる。
【００３０】
本発明の化合物を含む医薬組成物は従来の混合、溶解、顆粒化、糖衣付加、破砕、乳化、カプセル化、トラップまたは乾燥凍結方法によって製造することができる。医薬組成物は本発明の化合物の医薬で使用可能な製剤への処理を容易にする、１つまたはそれ以上の生理学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤または補助剤を使用して従来の方法で処方できる。
本発明の医薬組成物は溶液、懸濁液、エマルション、錠剤、ピル、丸剤、カプセル、液体含有カプセル、散剤、持続放出処方、エマルション形態または経口使用に適した他のいずれの形態をとることが可能である。ある具体例において、医薬上許容されるビヒクルはカプセルである（例えば、グロスワードら、米国特許第５６９８１５５号を参照）。他の適当な医薬ビヒクルの例は当該分野に記載されている（レミントン、「The Science and Practice of Pharmacy」、第１９版、1995を参照）。経口投与される医薬組成物は医薬上味のある製剤を提供するために、１つまたはそれ以上の任意の薬剤、例えば、フルクトース、アスパルテームまたはサッカリンのような甘味料；ペパーミント、冬緑油、または紅色着色料のような芳香剤および保存料を含有してもよい。さらに、錠剤またはピル形態の場合、医薬組成物をコーティングして胃腸管での崩壊および吸収を遅らせ、それによって長期間にわたって徐放性を提供することができる。浸透活性作用のある化合物周囲の選択的透過膜もまた経口投与される本発明の化合物に適している。これらの最近の理論では、カプセル周囲の環境からの液体が活性のある化合物によって吸収されて、孔を通して薬剤または薬剤組成物を排除するために膨張する。これらのデリバリー理論は即時放出処方のスパイクプロフィールとは反対に必要不可欠なゼロオーダーデリバリープロフィールを提供可能である。またモノステアリン酸グリセロールまたはステアリン酸グリセロールなどの時間遅延物質を使用することもできる。経口組成物はマンニトール、ラクトース、スターチ、ステアリン酸マグネシウム、ナトリウムサッカリン、セルロース、炭酸マグネシウムなどの標準的ビヒクルを含むことが可能である。このようなビヒクルは医薬等級にあるのが好ましい。
【００３１】
例えば、懸濁液、エリキシルおよび溶液のような経口液体製剤では、適当な担体、賦形剤または希釈剤は水、食塩水、アルキレングリコール（例えば、プロピレングリコール）、ポリアルキレングリコール（例えば、ポリエチレングリコール）油、アルコール、ｐＨ４ないしｐＨ６の弱酸性緩衝液（例えば、約５．０ｍＭないし約５０．０ｍＭの酢酸塩、クエン酸塩、アスコルビン酸塩）などを含む。加えて、芳香剤、保存料、着色料、胆汁酸塩、アシルカルニチン等を加えてもよい。バッカル投与では、医薬組成物は従来の方法で処方される錠剤、ロゼンジなどの形態をとるだろう。
本発明の化合物が酸性または塩基性である場合、遊離酸または遊離塩基、医薬上許容される塩、溶媒和物または水和物として上記の処方のいずれかに含まれるだろう。医薬上許容される塩は遊離酸または塩基の活性を本質的に維持し、塩基または酸との反応によって調製されて対応する遊離酸または塩基形態に比べて水性および他のプロトン性溶媒により溶けやすくなる。
【００３２】
治療投与量
本発明の化合物および／またはその医薬組成物は、一般に意図した目的を達成するのに有効な量で使用される。上記疾患または障害を治療または防止するための使用では本発明の化合物および／またはその医薬組成物は、治療有効量で投与または服用される。
本明細書で開示される特定の障害または状態の治療に有効であるだろう本発明の化合物および／またはその医薬組成物の量はその障害または状態の性質に依り、当業者に公知の標準的な臨床技術および特定の疾患または障害を治療または防止するのに長けた医師によって決定可能である。加えて、インビトロまたはインビボアッセイは任意に使用されて最良の投与範囲を同定するのに役立つ。投与される本発明の化合物および／またはその医薬組成物の量は、もちろん、他の因子、治療を受ける対象、その対象の体重、疾患の重症度、投与法および処方する内科医の判断に依るだろう。
【００３３】
例えば、投与量は単回投与、多様な方法または制御放出によって医薬組成物としてデリバリーすることができる。ある具体例において、本発明の化合物は経口持続放出投与でデリバリーされる。好ましくは、本発明の具体例において、本発明の化合物は１日２回（より好ましくは、１日１回）投与される。投与は間欠的に繰り返されて、単独でまたは他の薬物と組み合わせて提供されて病状または障害の有効な治療として必要とされる限り継続することができる。
経口投与に適した投与量の範囲は投与される本発明の化合物の性質（テアフラビンが一緒に投与されるのか、あるいはテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートが、各々、別個の化合物として投与されるのか）に依るが、一般に、体重１キログラム当たり本発明の化合物を約０．００１ｍｇないし約２００ｍｇ投与する。ある具体例において、投与量の範囲は約０．１ｍｇ／ｋｇないし約５ｍｇ／ｋｇである。投与量の範囲は通常の技術として当業者に公知の方法によって容易に決定されるだろう。有効量はインビトロまたは動物実験試験系由来の投与量−反応曲線から推定されるだろう。このような動物実験および系は当業者に公知である。
【００３４】
本発明の化合物はヒトに使用する前に、所望の治療または防止活性に関して、インビトロまたはインビボでアッセイされるのが好ましい。例えば、インビトロアッセイは本発明の特異的化合物の投与が好ましいのか本発明の化合物の組み合わせが好ましいのかを決定するのに用いることができる。本発明の化合物はまた動物実験系を使用して有効および安全であることが証明される。
好ましくは、本明細書に記載の治療有効量の本発明の化合物および／またはその医薬組成物は本質的毒性を引き起こすことなく治療利益を提供する。本発明の化合物および／またはその医薬組成物の毒性は標準的な医薬法を使用して決定されて当業者によって容易に確かめられる。毒性効果および治療効果間の投与量比率が治療指標となる。本発明の化合物および／またはその医薬組成物は疾患および障害を治療する際に特定の高治療指標を示すのが好ましい。本明細書に記載の本発明の化合物および／またはその医薬組成物は毒性がほとんどないまたは全くない有効量を含む循環濃度の範囲内であるのが好ましい。
【００３５】
組み合わせ療法
本発明のある具体例において、本発明の化合物および／またはその医薬組成物は少なくとも他の１つの治療薬との組み合わせ療法として用いることができる。本発明の化合物および／またはその医薬組成物および治療薬は付加的に作用して、より好ましくは、相乗的に作用するだろう。好ましい具体例において、本発明の化合物および／またはその医薬組成物は別の治療薬の投与と同時に投与される。別の具体例において、本発明の化合物および／またはその医薬組成物は別の治療薬の前または後に投与される。
特に、ある好ましい具体例において、本発明の化合物および／またはその医薬組成物は
高脂血症、冠状動脈性心疾患、卒中、アテローム動脈硬化性心臓血管疾患、ＡＩＤＳ、糖尿病、酸化−低比重リポ蛋白レベル、フォン・ヴィレブランド病、白血球減少、脳梗塞、痴呆および身体障害および脂肪肝を治療または防止するために使用される他の１つの薬剤との組み合わせ療法として使用可能である。
【００３６】
ダイエットサプリメント組成物
本発明のダイエットサプリメント組成物は、典型的には、１つまたはそれ以上の本発明の化合物を、好ましくは純形態で、使用者に適した投与形態を提供するような適量のダイエットサプリメントビヒクルと共に含有する。
【００３７】
実施例
本発明はさらに、本発明の化合物の調製および生物学的活性に関するアッセイ法を、詳細に記載する以下の実施例を参照して定義される。物質および方法の両方への多くの修飾は、本発明の範疇から外れることなく行われることは当業者には明白だろう。
【００３８】
実施例１：テアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’ジガレートの混合物の調製および単離
FML Tea Trading Co.、Ltd.、Xiamen、Chinaから購入した緑茶葉（１００ｋｇ）および０．１５Ｍリン酸緩衝液（１０００Ｌ、ｐＨ６．４）を３０℃で維持したスラリー発酵器に加えた。流量２０Ｌ／秒で総酸素濃度が２２％になるまで酸素を加えて、発酵を開始した。反応混合物を攪拌して２２％酸素環境下で約１時間発酵させた。
反応混合物を遠心分離して上清をデカントした。上清を濾過して固体を除去した。約１０００Ｌの酢酸エチルを水性濾液に加え、発酵を終了して層を分離した。有機層を１０００Ｌの５％ＮａＨＣＯ３で３回洗浄して酢酸エチルを真空下で除去した。さらに、残渣を少量の４０％酢酸エチル／ヘキサン中に溶解して、１５０ｋｇのシリカゲルを含有するカラム上に負荷し、４０％酢酸エチル／ヘキサンで抽出してテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’ジガレートの混合物（典型的には、約５０ｋｇないし６０ｋｇ）を逆相クロマトグラフィ、例えば高圧逆相クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）で定量した場合に９９．３％の純度で得た。テアフラビン混合物はＨＰＬＣ−ＭＳで定量した場合に４６．８％のテアフラビン、１８．５％のテアフラビン−３−ガレート、１３．７％のテアフラビン−３’−ガレートおよび２０．３％のテアフラビン−３，３’ジガレートを含む。
【００３９】
実施例２：テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’ジガレートの、各々分離化合物としての調製および単離
９８．６％の、カテキン（４５．６％のエピガロカテキンガレート）を含有する、茶ポリフェノール（１００ｋｇ）、（Yuan Xiang Biopharm Company、Ltd.、Shanghai、China）、１０００Ｌの０．１５Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ６．４）および１０ｋｇのポリフェノールオキシダーゼをスラリー発酵器に加えて２５℃で攪拌した。流量２０Ｌ／秒で総酸素濃度が２２％になるまで酸素を加えて、発酵を開始した。反応混合物を攪拌して２２％酸素環境下で約４０分間発酵させた。
反応混合物を遠心分離して上清をデカントした。上清を濾過して固体を除去した。約１０００Ｌの酢酸エチルを水性濾液に加え、発酵を終了して層を分離した。有機層を１０００Ｌの５％ＮａＨＣＯ３で３回洗浄して酢酸エチルを真空下で除去した。さらに、残渣を少量の４０％酢酸エチル／ヘキサン中に溶解して２０個に別々に分配した。各部分を１５０ｋｇのシリカゲルを含有するカラム上に載せて４０％酢酸エチル／ヘキサンで抽出してテアフラビン（２５ｋｇ）、テアフラビン−３−ガレート（９ｋｇ）、テアフラビン−３’−ガレート（６ｋｇ）およびテアフラビン−３，３’ジガレート（１０ｋｇ）を各々別個の化合物として得た。さらにテアフラビンをエタノールから再結晶に付して精製した。テアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’ジガレートの最終純度は、ＨＰＬＣ−ＭＳで定量した場合で、各々、９９．１％、９８．７％、９７．８％および９９．３％であった。テアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’ジガレートの構造をＨＰＬＣ−ＭＳで定量した。
【００４０】
実施例３：テアフラビンソフトゲルの調製
ビーズワックス（２ｋｇ）をオリーブ油（５００ｋｇ）に加えて８０℃で３０分間攪拌して４０℃まで冷却した。実施例１の方法で調整した、テアフラビン混合物（１００ｋｇ）を、上記ビーズワックスおよびオリーブ油に完全に混合した。得られたテアフラビン、ビーズワックスおよびオリーブ油の混合物をゼラチン粉末から成るゲルに移してソフトゲルカプセルを調製した。各ソフトゲルカプセルは約７００ｍｇでそのうち約７５ｍｇがテアフラビン混合物である。
【００４１】
実施例４：ラットにおける高脂質特性に対するテアフラビンの使用
体重１００ｇないし１３０ｇのオスのスプラーク−ドーリーラットを一群１０匹の９群に分割した。動物を遮蔽板を敷いたステンレス鋼の檻の中で室内を２２℃ないし２４℃で維持して個々に飼育した。当該動物は表１に記載の通り常備の栄養素および水を摂取した。加えてＴＦ１−１、ＴＦ１−２またはＴＦ１−３群におけるラットは各々、１ｍｇ／ｋｇ／日、２ｍｇ／ｋｇ／日および４ｍｇ／ｋｇ／日の投与量で純粋なテアフラビンを摂取した。ＴＦ２Ａ−２、ＴＦ２Ｂ−２またはＲＦ３−２群における動物は２ｍｇ／ｋｇ／日の投与量で各々、純粋なテアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートを摂取した。ＣＡ−１およびＣＡ−２群における動物は各々、１ｍｇ／ｋｇ／日または２ｍｇ／ｋｇ／日の投与量でカテキンを摂取した。
【００４２】
【表１】
2005523242.tif 000002
【００４３】
スプラークドーリーラットはサンプリング前の８週間上記食餌を摂取した。ラットはサンプリング前の１２時間何も摂取しなかった。ラットにテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレート、テアフラビン−３，３’−ジガレートまたはカテキンを採血の１時間前に与えた。
【００４４】
【表２】
2005523242.tif 000003
１Ｐ＜０．０１、対照群との比較
２Ｐ＜０．０５、対照群との比較
３対照および治療群との間に有意差なし
【００４５】
表２に示されるように、テアフラビン群におけるラットは対照群と比較した場合に、用量依存性総コレステロール、（「ＴＣ」）、低比重リポ蛋白−コレステロール（「ＬＤＬ−Ｃ」）およびトリグリセリド（「ＴＧ」）の血漿レベルを大きく低下させた。テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートはカテキンに比べてＴＣ、ＬＤＬ−ＣおよびＴＧの血漿レベルを低下させるのに有効であった。
【００４６】
実施例５：低度ないし中等度高脂血症を有する対象におけるテアフラビン混合物の効果
コレブＴＭは表１に記載の通り調製したテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３’−ガレートおよびテアフラビン−３，３’−ジガレートの混合物である。治験は二重盲検、ランダム化試験、プラセボ−対照試験、平行−群試験であって、１２週間続く。
患者は低脂肪食を摂取し低度ないし中等度高脂血症（ＬＤＬ−Ｃ１３０−１９０ｍｇ／ｄＬ）を有する１９歳以上であって中国の６つの病院の外来診察室から募集した。トリグリセリド基本値が３５０ｍｇ／ｄＬ以上であるまたは未制御の高血圧（≧１６０／９５ｍｍＨｇ）を有する患者を除外した。また活動性の肺、血液、肝、消化管または腎疾患、前悪性または悪性疾患、糖尿病、甲状腺機能不全、冠状動脈性心疾患または他のアテローム動脈硬化性疾患の既往を有する患者を除外した。また通常の臨床化学または血液学的パラメータにおいて病理学的評価を有するすなわち脂質から１日のエネルギーの＞３２％を消費するまたはボディマス指数≧３５を有する患者を除外した。また脂質代謝を干渉するいずれかの脂質低下製剤または薬物、抗高血圧薬を含む循環器または他の血管作用性製剤、甲状腺ホルモン、経口避妊薬、環状ホルモン置換療法、ダイエットサプリメント（例えば、魚油、＞４００ｍｇ／日の投与量のナイアシン、食物繊維サプリメント）、または抗酸化剤を摂取していて本研究中これらの製剤を摂取することを禁止されている対象を除外した。患者は１２週間の研究中安定した食事および身体活動のレベルを維持することを必要とされた。
【００４７】
２４０人の患者に適応および除外基準を照合した。ランダム化の後、４、８、および１２週の朝に１２時間絶食後に臨床検査を行った。各検査で体重、血圧および心拍数を含むパラメータを測定した。対象に研究カプセル摂取、共同性製剤、およびいずれかの副作用を対象の個人記録帳に記録するように要求した。研究カプセルを開始、４週、および８週に投与した。開始前および治療８週後に対象によって作成された３日間の食物記録を使用して栄養摂取を評価した。脂質およびリポ蛋白濃度を−２週、０週、４週および１２週に測定した。標準の実験室的方法を使用して酵素的に脂質およびリポ蛋白を分析した。結果を、血清化学および血液学的試験を含む、自動生化学装置（Sybchron Clinical System LX 20、Beckman Coulter, Inc.、Shanghai Representative Office Room 3203-3205、Hong Kong Plaza、South Building、283 Huai Hai Zhong Road、Shanghai、China 200021）で試験した。血小板凝集がアデノシン二リン酸によって誘発されて９１５ｎｍの光学的密度測定によって血小板凝集率を定量した。
【００４８】
２４０人の対象をランダムに実験に付し、２２０人の対象が治験を終了した。基線特性を表１に示す。対象は全てアジア系で治療群の９５％およびプラセボ群の８８％が研究を終了した。１４人の対象が戻ってこず、５人の対象が彼らの要望で当該実験を断念して１人の対象はプロトコルの激しさに終了した。
コレブＴＭの経口投与４週および１２週後、対象における血清ＬＤＬ−Ｃレベルは開始時の基準（Ｐ＝０．０００１）と比較して９．６％（４．０８ｍｍｏｌ／ｌ−３．６８ｍｍｏｌ／Ｌ）および１６．４％（４．０８ｍｍｏｌ／ｌ−３．４０ｍｍｏｌ／ｌ）低下した（表３および４を参照）。同時に、コレブＴＭは血清ＴＣレベル（Ｐ＝０．０００１）において６．７％および１１．３％の低下を引き起こした。他方、プラセボ群におけるＬＤＬ−ＣおよびＴＣレベルは４週および１２週後の有意差を示さなかった。しかしながら、１２週の治療後コレブＴＭおよびプラセボ群間にＴＧおよび高比重リポ蛋白（「ＨＤＬ」）レベルにおいて有意差はなかった。
【００４９】
【表３】
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１Ｔ＝ＳＤ
２Ｐ＝０．０００１基準との比較
３Ｐ−０．００１基準と比較、基準値
４、５活性およびプラセボ群間に有意差なし
【００５０】
【表４】
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１（Ｘ＝ＳＥＭ
２、３Ｐ＝０．０００１基準との比較
４、５活性およびプラセボ群間に有意差なし
【００５１】
表５はコレブＴＭが血小板凝集に無効であることを示す。
【００５２】
【表５】
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【００５３】
コレブＴＭの経口投与１２週後、上記の通り、血清総コレステロールおよびＬＣＬ−Ｃを各々、１１．３％および１６．３％低下させ、コレブＴＭの冠状動脈性心疾患の治療および防止能を示す。本治験の間コレブＴＭに関する副作用は全く生じず、これはコレブＴＭの安全性を証明する。
【図面の簡単な説明】
【００５４】
（原文に記載なし）
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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