(57)【要約】  本発明は農薬に関する。より詳細には、本発明は植物性農薬に関する。特に、本発明は植物抽出物、特にアカザ種植物材料由来のオイル抽出物を含む組成物による植物感染害虫のコントロールのための組成物および方法に関する。本発明はさらに、農薬組成物としてかかる抽出物を含み、組成物に対する抵抗性の最小限の発達、動物に対する最小限の毒性、最小限の残留活性および環境適合性という利点を提供する組成物に関する。本発明の農薬組成物は、α−テルピネン、ρ−シメン、リモネン、カルバクロール、カルベオール、ネロール、チモール、およびカルボンを含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
α−テルピネン、ρ−シメン、リモネン、カルバクロール、カルベオール、ネロール、チモール、およびカルボンを含み、アカザ種由来である、殺ダニ活性を有する精油抽出物。
【請求項２】
殺虫活性を有する、請求項１に記載の精油抽出物。
【請求項３】
殺菌活性を有する、請求項１または２に記載の精油抽出物。
【請求項４】
総合コントロールプログラムの一般的な推奨基準を満たす残効性を有する、請求項１に記載の精油抽出物。
【請求項５】
植物材料が、Chenopodium ambrosioidesからのものである、請求項１に記載の精油抽出物。  
【請求項６】
請求項１に記載の精油抽出物を有効量および適した乳化剤、スプレッダーおよび／または固着剤、およびキャリアを含む、農薬組成物。  
【請求項７】
精油抽出物０．１２５体積％〜１０体積％を含む、請求項６に記載の農薬組成物。
【請求項８】
精油抽出物０．２５体積％〜５体積％を含む、請求項７に記載の農薬組成物。
【請求項９】
組成物が、精油抽出物体積５％〜５０体積％を含む、請求項６に記載の農薬組成物。
【請求項１０】
精油抽出物１０体積％〜２５体積％を含む、請求項９に記載の農薬組成物。
【請求項１１】
適した乳化剤１体積％〜１５体積％、および適したキャリアまたは溶剤５０体積％〜７０体積％を含む、請求項１０に記載の農薬組成物。
【請求項１２】
適したスプレッダーおよび／または固着剤２体積％〜２０体積％を含む、請求項１１に記載の農薬組成物。
【請求項１３】
請求項１に記載の精油抽出物３０体積％〜５０体積％、適した乳化剤０．５体積％〜２５体積％、および水１０体積％〜５０体積％を含む、農薬組成物。
【請求項１４】
コントロールが望ましい場所への請求項６に記載の農薬組成物の殺ダニに有効な量の適用を含む、植食性のダニ類をコントロールする方法。
【請求項１５】
コントロールが望ましい場所への請求項６に記載の農薬組成物の殺虫に有効な量の適用を含む、植食性の昆虫をコントロールする方法。
【請求項１６】
コントロールが望ましい場所への請求項６に記載の農薬組成物の殺菌に有効な量の適用を含む、植食性の菌類をコントロールする方法。
【請求項１７】
場所が、土壌である、請求項１４、１５、または１６のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
場所が、植物である、請求項１４、１５、または１６のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の分野
本発明は、植物寄生害虫をコントロールするための農薬(pesticide)の分野に関する。
【０００２】
発明の背景
植物摂食ダニは、作物に対する最も大食の植食性害虫の一種である。これらの害虫と戦うために、合成農薬が開発されてきた。これらの合成化学的農薬は、しかしながら、しばしばヒトおよび他の動物に有害である不利益な環境に対する影響を有し、したがってほとんどの総合防除(Integrated Pest Management)プログラムにより開発されたガイドラインを満たしていない。
さらに、これらの製品への抵抗性が、市場に出た多くの新製品について発達することが見出された（Georghiou, 1990; Nauen et al., 2001）。
【０００３】
抵抗性は、極めて複雑な遺伝的および生化学的プロセスをたどるにもかかわらず、合成製品の有効成分は同じ部類の１又は２以上の分子に頼るため、一般に合成製品と共に急速に発達することができる。したがって、生物は分子の効果を中和するために、生理的、行動的または形態的防御機構を発達させることにより、毒素に対応することができる（Roush and MacKenzie, 1987）。
【０００４】
ハダニなどのダニ類は、特に、農薬によりコントロールするのは極めて難しい。
Tetranychus urticae（ナミハダニ）は、例えば、殺ダニ剤のすべての主要な部類への抵抗性を与える相当数の遺伝子を蓄積してきた。多くの登録殺ダニ剤への抵抗性が報告されており、例えば、ヘキシチアゾクス、アバメクチン、およびクロフェンテジンへの抵抗性が報告されている。さらに、これら農薬の多くは、ダニの天敵を滅ぼすことにより、害虫感染を悪化させることが見出された（米国特許5,839,224号）。
さらに、多くの合成殺虫剤は、ダニの生殖を刺激することが見出された。例えば、ダニは、実験室内で、カルバリル、メチルパラチオン、またはジメトエートに暴露されたとき、無処理の個体群より何倍も速く増殖することが見出された（Flint, 1990）。 
【０００５】
結果として、ハダニに対して効果的な農薬は、ほとんど残っていない（Georghiou, 1990）。Farm Chemical Handbook（Meister, 1999）中には、例えば、２，０５０製品のリストされた殺ダニ剤および殺虫剤中、たった４８製品（または２．４％）が、殺ダニ剤として認定され、これらの製品のうちたった６９製品（または３．４％）が、殺ダニ剤および殺虫剤の両方として認定された。
【０００６】
昆虫感染のコントロールもまた、難しいことが証明されている。例えば、昆虫European chafer、Rhizotrogus majalis Razoumowsky（コウチュウ目：コガネムシ科）は、カナダおよびアメリカ合衆国においては外来種であり、普通Scarab beetlesとして知られている。Scarab beetleが定着するようになった北東部にわたり、R. majalisは、都会のレクリエーション地域およびゴルフコースのみならず家庭の芝生の根も食し、芝への主要な損害の原因となっている。この種の幼虫は、従来の殺虫剤を用いてコントロールすることが、極めて難しく、費用がかかる。アメリカ合衆国のいくつかの地域では、殺虫剤抵抗性は既に個体群内で発達している。
【０００７】
植物に発生する菌類のコントロールは、懸念の高まる別の原因である。植物または植物の一部における菌類の成長が、根、茎、葉、果実または種子の生産、および栽培作物の全体的な品質を抑制することから、植物病原菌類は、大きな経済的重要性がある。農業および園芸における全菌類病の約２５パーセントは、ウドンコ病の植物病原体が原因である（米国特許5,882,689号および5,496,568号）。キュウリ作物では、例えば、植物病原菌、Erysiphe cichoracearumおよびSphaerotheca fuligineaが原因のウドンコ病が、最も問題のある病気の一つである。
【０００８】
灰色カビ病に関与する菌類、Botrytis cinereaは、２００種以上の栽培植物、特に温室環境にて成長している栽培植物を攻撃することができる。これは、死んだまたは老いた植物組織を攻撃する腐生菌である。B. cinereaは低位置の葉の剪定により残された傷に侵入するとき、特に茎に損害を与える（菌核病の原因となる）。攻撃に次いで、植物は死に、栽培者への深刻な経済的損失の原因となる。菌核病のコントロールは、葉の剪定後に葉の傷を処理することにより試みられる。ベノミルが現在用いられているが、間もなく市場から排除されるだろう。さらに、イプロジオン（別の農薬）は、菌類の耐性の発達のため、効果が弱い。
【０００９】
これらの強力な殺菌効果にもかかわらず、必要量が、標的の植物病原菌の耐性が増加するにつれてどんどん増えているため、現在用いられている農業用殺菌剤が、問題の原因となっている。さらに、多くの殺菌剤が、使用時に、ヒト、動物および環境への生じうる不都合を引き起こす合成剤である。したがって、環境およびヒトに対する安全性の問題への注意を考慮しつつ、環境に広がる合成化学薬品の用量を減少させる（作物への菌類の攻撃と戦うための）効果的な商品が必要である。
【００１０】
合成剤に代わるものとして、植物性農薬は、ヒトおよび環境の両方に安全な天然由来の化合物である利点を提供する。特に、植物性農薬は、本質的に従来の農薬より毒性が低いという利点を提供し、一般に標的の害虫および近縁種である生物のみに影響を与え、しばしば非常に少量で効果的である。さらに、植物性農薬はしばしば素早く分解するので、したがって、総合防除（ＩＰＭ）プログラムの成分として用いるには理想的である。
【００１１】
植物性農薬の殺ダニ特性についての公開報告書は、ほとんどない。例えば、米国特許4,933,371号は、さまざまな植物（すなわち、ユッカ、キラヤ、アガベ、タバコおよび甘草）から抽出したサポニン類の殺ダニ剤としての使用について記述している。該特許はまた、セイロンニッケイ、ササフラス、オレンジフラワー、ベルガモット、Artemisia balchanorum、イランイラン、ローズウッドなどのさまざまな植物のオイルから抽出したリナロールおよび他のオイル抽出物の殺ダニ剤としての使用について記述している。 
しかしながら、これらの方法は、しばしばダニ類に関して所望のレベルの毒性を満たさない植物からの１種類の活性物質の抽出を必要とする。
【００１２】
植物精油は、化合物の複雑な混合物であり、多くは昆虫およびダニ害虫に対して生物的に活性であることができ、化合物は単独で活性があるかまたは互いに相互活性があり、接触により害虫を撃退または殺す。これらの成分は、植物摂食害虫に対する防御機構として植物により生産される植物の二次性代謝産物またはアレロケミカルである（Ceske and Kaufman, 1999）。混合物の複雑性のため、害虫が、単一の活性化合物を含む合成農薬または植物性農薬のようにはこれら製品への抵抗性を簡単には発達させないことが観察されている。この点において、FengおよびIsman（1995）は、モモアカアブラムシに対するニームオイルの主要な活性構成物質である純アザディラクチンの反復処理は、４０世代後に９倍の抵抗性を導くことを立証した。しかしながら、精製していないニーム抽出物への４０世代中の反復暴露は、抵抗性を導かなかった。
【００１３】
当該技術分野で既知の製品の欠点を克服する新しく効果的な農薬(pesticidal)製品を提供する必要性が残る。例えば、害虫が農薬製品に対して抵抗性を発達させることができる可能性が低い広範囲の組成物の必要性が残る。また、動物、特に哺乳動物、ならびにいかなる有益な捕食者／捕食寄生昆虫に対しても有毒でない組成物を用いて、いかなる場所においても害虫と戦う方法を提供する必要性も残る。
【００１４】
発明の概要
本発明は、α−テルピネン、ρ−シメン、リモネン、カルバクロール、カルベオール、ネロール、チモール、およびカルボンを含む精油抽出物由来のアカザ(Chenopodium)種を提供し、これら抽出物は、殺ダニ、農薬、殺虫、および殺菌活性の群から選ばれた１種類または２種類以上の活性を有する。これら抽出物の１種または２種以上は、植物、土壌、動物および建築物などの異なる環境へのそれらの適用を可能にする組成物へ製剤化することができる。
本発明の別の側面に従って、組成物を含む１種または２種以上のアカザ種由来の精油抽出物を提供し、ここで前記抽出物は、α−テルピネン、ρ−シメン、リモネン、カルバクロール、カルベオール、ネロール、チモール、およびカルボンを含み、乳化剤、キャリア、スプレッダーおよび／または固着剤と組み合わせて、特定の環境への組成物の適用を可能にし、組成物は、殺ダニ、殺有害生物、殺虫、および殺菌活性の群から選ばれた１種類または２種類以上の活性を有する。
【００１５】
発明の詳細な説明
定義
他に定義がない限り、本明細書において用いられるすべての技術および科学用語は、本発明が属する分野で通常の技術を有する者により普通に理解される意味と同じである。
【００１６】
「場所」は、ダニ類、昆虫、菌類,または他の害虫が感染したまたは感染し得る位置を意味し、家庭、都市、農業、園芸、および森林環境を含むが、これらに限定されない。
「精油抽出物」は、植物材料の蒸気蒸留または水蒸留(hydro-distillation)により得られる揮発性の、芳香オイルを意味し、テルペン類およびそれらの酸化誘導体から主として構成され、これらを含むが、限定されない。精油は、例えば、例えば、花、葉、種子、根、茎、樹皮、木質部などを含む植物の一部から得ることができる。 
【００１７】
「活性構成物質」は、農薬、殺ダニ、殺虫、および／または殺菌活性を引き起こす精油抽出物の構成物質を意味する。本発明の精油抽出物は一般に、α−テルピネン、ρ−シメン、リモネン、カルバクロール、カルベオール、ネロール、チモール、およびカルボンを含有する活性構成物質を含む。
用語「部分的に精製された」は、精油抽出物に関して用いられるとき、抽出物が、植物内において天然に結びつくタンパク質、核酸、脂質、炭水化物または他の材料を比較的含まない形状であることを意味する。本明細書に開示されたように、本発明の精油抽出物は、部分的に精製されたと考えられる。さらに、精油抽出物の個々の成分を、本明細書に提供されたように通常のおよび周知の方法を用いてさらに精製することができる。
【００１８】
本明細書中の他の化学用語は、参考文献として本明細書に組み込まれたThe McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (ed. Parker, S., 1985), McGraw-Hill, San Franciscoにより例示されたように、当該技術分野における従来の使用に従って用いられる。
【００１９】
本発明は、α−テルピネン、ρ−シメン、リモネン、カルバクロール、カルベオール、ネロール、チモール、およびカルボンを含むアカザ種由来の精油抽出物を提供する。これらの抽出物は、殺ダニ、殺有害生物、殺虫、および殺菌活性の群から選ばれた１または２以上の活性を有する。
本発明はまた、組成物を準備するための１種または２種以上のこれら精油抽出物の使用を提供し、植物、土壌、動物および建築物などの異なる環境へのこれらの適用を可能にする組成物を調製する。
【００２０】
１．精油抽出物
植物材料
本発明において用いてもよい植物材料は、個々にまたは群で採取したアカザ種由来の植物材料を含み、葉、花、根、種子、および茎を含んでもよいが、限定されることはない。当業者に既知のように、精油抽出物の化学組成および有効性は、植物の生物季節学的年齢(phenological age)（Jackson et al., 1994）、収穫された材料のパーセント湿度（Chialva et al., 1983）、抽出のため選ばれた植物部位（Jackson et al., 1994; and Chialva et al., 1983）、および抽出方法（Perez-Souto, 1992）と共に変化する。当該技術分野で周知の方法は、本発明の精油抽出物の所望の収率および品質を達成するために、当業者により採用され得る。１つの態様において、植物材料は、Chenopodium ambrosioides由来である。
【００２１】
植物材料の前処理
植物の生物季節学的年齢、収穫された材料のパーセント湿度、抽出のため選ばれた植物部位、および抽出方法などのパラメータに加え、精油抽出物の化学組成および有効性が、植物材料の前処理に影響されるだろう。例えば、植物がストレスを受けるとき、数種類の生化学的プロセスが活性化され、構成的に発現した化合物に加え、多くの化合物が、反応として合成される。害虫、菌類、および他の病原性にかかる攻撃に加え、ストレス因子は、干ばつ、熱、水および機械的損傷を含む。さらに、当業者はまた、ストレス因子の組み合わせが用いられてもよいことを認識するだろう。例えば、機械的損傷の効果は、ストレスを受けたとき植物により天然に合成される化合物の追加により増加され得る。かかる化合物は、ジャスモン酸（ＪＡ）を含む。さらに、昆虫の口腔分泌物の類似体もまた、この方法で用いられ、ストレス因子への植物の反応を高める。
【００２２】
１つの態様において、本発明の精油抽出物は、植物材料の収集および抽出前に、例えば、化学的または機械的損傷、干ばつ、熱、または寒さ、あるいはこれらの組み合わせにより植物にストレスを与えることによって、前処理された植物材料由来である。
【００２３】
抽出および随意的保管処理のための植物材料の収穫
植物材料は、収穫直後に使用してよい。１つの態様において、＞７５％の湿度レベルを有する新鮮な植物材料が使用される。そうでなければ、抽出手順を行う前に、しばらくの間植物材料を保管するのが望ましいだろう。別の態様において、４０〜６０％の湿度レベルを有するしおれた植物材料が使用される。別の態様において、＜２０％の湿度レベルを有する乾燥植物材料が使用される。さらなる態様において、植物材料は、保管前に処理される。かかる場合、処理は、乾燥、冷凍、凍結乾燥、またはこれらのいくつかの組み合わせを含んでもよい。
【００２４】
精油抽出物の抽出および構成物質の実証
精油抽出物は、当該技術分野で既知の標準的な技術により、植物材料から抽出することができる。
植物材料から精油を抽出するために、様々な戦略があり、戦略の選択は、本発明の抽出物中の構成物質を抽出するための方法の能力に依存する。精油抽出物を抽出するために適した方法の例としては、水蒸留、直接水蒸気蒸留（Duerbeck, 1997）、溶剤抽出、およびMicrowave Assisted Process（MAP（登録商標））（Belanger et al., 1991）を含むが、これらに限定されない。
【００２５】
１つの態様において、植物材料を、水中で植物材料を煮沸することにより処理し、揮発性の構成物質を蒸留および冷却の後に回収することができる水中に放出する。別の態様において、植物材料を、蒸気により処理し、細胞膜内の精油を拡散し、水蒸気と共に混合物を形成することを引き起こす。そして蒸気および揮発物を濃縮し、オイルを収集する。別の態様において、有機溶剤を、精油中に見出される有機的に可溶な化合物を抽出するために使用する。かかる有機溶剤の非限定的な例は、メタノール、エタノール、ヘキサン、および塩化メチレンを含む。さらなる態様において、マイクロ波を使用して、植物組織中の水分子を励起させ、細胞を破裂させ、植物材料の細胞外組織に捕らえられた精油の放出を引き起こす。 
【００２６】
精油抽出物中の本発明の構成物質の存在を確認するために、当業者に周知の分析技術を用いてもよい。かかる技術は、例えば、有機分子のクロマトグラフ分離（例、ガスクロマトグラフィー）または本発明の範囲内に収まる分子を確認するのに有用な他の分析技術（例、質量分析）を含む。
【００２７】
本発明は、α−テルピネン、ρ−シメン、リモネン、カルバクロール、カルベオール、ネロール、チモール、およびカルボンを含むアカザ種由来の精油抽出物を提供する。
１つの態様において、精油抽出物は、少なくともα−テルピネン３０％、ρ−シメン８％、リモネン５％、微量のカルバクロール、カルベオール０．１％、ネロール０．１％、微量のチモール、および微量のカルボンを含む。
【００２８】
１つの態様において、精油抽出物は、各化合物について少なくともα−テルピネンを３０％、３２％、３４％、３８％、４０％、４４％、４８％、５０％、５５％、６０％、６５％；ρ−シメンを８％、１０％、１２％、１４％、１６％、１８％、２０％、２２％、２４％、２６％、リモネンを５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１２％、１４％、１６％、１８％、２０％、２２％、２４％、カルバクロールを微量、０．０４％、０．０８％、０．１０％、０．１２％、０．１４％、０．２％、０．５％、０．８％、１．０％、カルベオールを０．１％、０．２％、０．４％、０．６％、０．８％、１．０％、１．４％、１．６％、１．８％、２．０％、ネロールを０．１％、０．２％、０．４％、０．６％、０．８％、１．０％、１．４％、１．６％、１．８％、２．０％、チモールを微量、０．０４％、０．０８％、０．１０％、０．１２％、０．１４％、０．２％、０．５％、０．８％、１．０％、１．４％、１．６％、１．８％、２．０％、およびカルボンを微量、０．０４％、０．０８％、０．１０％、０．１２％、０．１４％、０．２％、０．５％、０．８％、１．０％の範囲から選ばれた少なくとも１つの各化合物を含む。
【００２９】
２．精油抽出物の活性
本発明の精油抽出物の抽出に続き、殺ダニ、農薬、殺虫、および殺菌活性についての抽出物の有効性を試験することが望ましい。当業者によく知られたあらゆる試験を、本発明の抽出物、組成物、および製剤の活性を試験するために用いてよい。
【００３０】
精油抽出物の殺ダニ活性の決定
精油抽出物の殺ダニ活性を、当該技術分野で既知の様々なバイオアッセイを用いて評価してよい（Ebeling and Pence, 1953; Ascher and Cwilich, 1960; Dittrich, 1962; Lippold, 1963; Foot and Boyce, 1966; and Busvine, 1980）。
【００３１】
ａ）成虫期への接触効果
用いてもよい１つの例示的な方法は、精油抽出物またはその製剤のダニ種の成虫期への接触有効性を試験する。例えば、成虫のダニを、ラクダの毛のブラシを用いて、９ｃｍのペトリ皿に接着させた両面粘着テープの上にそれらの背面を乗せてもよい。そして精油抽出物および／または製剤を、スタンドに置かれ、３ｐｓｉに設定された圧力ゲージに接続されたポッタースプレータワー(Potter Spray Tower)のスプレーノズルを用いてスプレーすることにより、被験体に適用してよい。足、口吻または腹部の動作で細かいラクダの毛のブラシを用いた突く行為に反応しないダニは、死んでいるとみなす。
１つの態様において、精油抽出物またはそれらの製剤の接触有効性は、成虫期のナミハダニ（Tetranychus urticae）をモデル被験体として用いて決定される。しかしながら、当業者は、ダニ類の他の種を用いることができることを容易に理解するだろう。
【００３２】
ｂ）殺卵活性
殺卵効果は、精油抽出物の集合物またはそれらの製剤によりダニの卵を処理することにより決定することができる。例えば、成虫の雌のT. urticaeを、ライマメ(lima bean)の葉から切り取った２ｃｍ径のリーフディスクへ移し、産卵のために４時間放置してよい。少なくとも２０個の卵／ディスクを産卵したとき、成虫のダニを取り除いてよい。精油抽出物および／または製剤を、被験体にスプレーすることにより適用してよい。孵化率を、毎日そして処理後１０日間、リーフディスクに残っている卵の数および存在する生きたおよび死んだ若虫の数を数えることにより、評価する。パーセント孵化率を、生きた若虫のみについて決定する。若虫は、単毛のブラシを用いて、静かに突く行為を反復した後に動作が観察されない場合に死んでいるとみなす。 
１つの態様において、精油抽出物またはそれらの製剤の殺卵活性は、ナミハダニ（Tetranychus urticae）のダニの卵をモデル被験体として用いて決定される。当業者は、しかしながら、ダニ類の他の種を用いることができることを容易に理解するだろう。
【００３３】
精油抽出物の殺虫活性の決定
類似のバイオアッセイを、昆虫モデルを利用することにより、精油抽出物またはそれらの製剤の殺虫活性を評価するために行うことができる。１つの態様において、オンシツコナジラミ（Trialeurodes vaporariorum (Westw.））を、殺虫剤バイオアッセイにおいてモデル被験体として使用する。
例えば、コナジラミの成虫を、Tangle-Trap（登録商標）（Gemper's Co.）をスプレーした黒い５ｃｍ×７．５ｃｍのプラスチックカードに接着し、カード毎少なくとも２０個体の活動的な成虫を得てもよい。各カードを、精油抽出物、組成、または製剤でスプレーし、乾燥させる。底に湿った発泡体を置いた閉じられた５Ｌ容量の透明なプラスチック容器内の発泡スチロールの棚に横に置き、湿度を高く保つ（相対湿度＞９０％）。プラスチック容器を、２４℃および１６Ｌ：８Ｄ光周期の成長室内で保管する。死亡率を、処理の２０時間後、双眼顕微鏡下で単毛のブラシを用いてコナジラミを静かに突くことにより評価する。突いた後に、動作（触角、足、羽）の欠如を、死亡と記録する。当業者は、しかしながら、他の昆虫種を用いることができることを容易に理解するだろう。
【００３４】
精油抽出物の殺菌活性の決定
当該技術分野で既知の様々なバイオアッセイを用いて評価した菌類モデルを利用することにより、精油抽出物またはそれらの製剤の殺菌活性もまた評価することができる。かかる既知のバイオアッセイの例は、以下のものを含む。
【００３５】
実験室試験
精油の殺菌効果は、数種類の方法を用いて実験室において行なうことができる。１つの方法は、ペトリ皿中の寒天重層に試験サンプルを組み込む。２番目の方法は、試験サンプルで飽和させ、未処理の寒天の上に置かれたフィルターディスクを使用する。両方のシステムを、同じ成長期の指示生物の芝生から切り取られた菌類のこぶ(plug)について試験を行う。プレートを３０℃で目視観察しながら５〜１０日間培養し、阻止域を測定および記録する。ポジティブコントロール、つまり市販の殺菌剤、およびネガティブコントロール、つまり水を、同じ方法で試験する。
【００３６】
温室試験
温室試験もまた、殺菌有効性を評価するために用いてよい。例えば、精油抽出物またはそれらの製剤の効果を、例えば、Botrytis cinerea、Erysiphe cichoracearumまたはSphaerotheca fuliginea、Rhizoctonia solani、およびPhytophthora infestansなどの病原体に感染した宿主植物について、処理後に、対照に対して、宿主植物のパーセント損傷または病斑の存在を観察することにより、試験してよい。
【００３７】
Botrytis cinerea。トマト植物を播種し、温室トマト生産のための現在の商業的慣行に従って生育する。播種後約２ヶ月、病斑を葉および茎に作り（５病斑／植物）、３×１０６個のB. cinereaの胞子の懸濁液、病斑あたり２ｍｌを用いて、接種する。処理を、植物に適用する。ポジティブコントロール、つまり市販の殺菌剤、およびネガティブコントロール、つまり水もまた試験され、およびすべての処理は、乱塊法にて行なわれる。
病斑の長さを、３ヶ月の期間、２週間毎に測定し、果実の数、果実の合計重量および果実の平均重量を、植物の全生産期間中計算する。本実験は繰り返され、処理の効果は、分散分析（ＡＮＯＶＡ）の対象となり、平均をＬＳＤ検定で比較する。
【００３８】
Erysiphe cichoracearumまたはSphaerotheca fuliginea。これらの病原体は、宿主なしでは生き残る能力がない完全寄生性である。したがって、本試験のための接種材料を提供するために、キュウリ葉を、感染された温室から採取する。これら葉に存在する分生子を、1ヶ月または２ヶ月前に実験のために育てられたキュウリ植物に移す。新しい植物を、接種材料を増加させるためにこのような具合で定期的に感染する。
そして、処理を使用殺菌剤の種類に依存して接種の前または後に植物に適用する。ポジティブコントロール、つまり市販の殺菌剤、およびネガティブコントロール、つまり水もまた試験され、すべての処理は、乱塊法にて行なわれる。
病気の効果を、０〜５（０＝傷なしおよび５＝８０〜１００％の葉の表面に傷あり）の感染指数を用いてすべての植物の個々の葉について評価する。感染度を、接種の３、７、および１４日後に評価し、植物毎の平均を報告する。本実験は繰り返され、処理の効果は、分散分析（ＡＮＯＶＡ）の対象となり、平均をＬＳＤ検定で比較する。
【００３９】
Rhizoctonia solani。Rhizoctonia solaniの単離体を培地（ＰＤＡ）上で接種前３日間生産し、そして病気のこぶを、ＹＭＧブロスを満たした三角フラスコに５日間移す。菌糸体を濾過し、蒸留水中に懸濁させ、混合する。トマトの種を使用し、およびエタノール７０％、漂白剤および蒸留水の溶液を続けて用いて表面を滅菌する。鉢植え用の土壌１００ｇあたり６０ｍｇの混合菌糸体を接種した、適した滅菌鉢植え用の土壌ミックスを使用する。
試験は、７２セル／箱を有する苗床用箱において行われ、処理あたり３箱を使用する。該箱は、以下の条件の管理された雰囲気の成長室中でランダム化した配置に広げられる：昼間２０℃および夜１６℃、光１６時間、光強度１６２μｍｏｌおよび湿度６０％。該箱を、成長室中で３週間培養する。
【００４０】
そして、処理を使用殺菌剤の種類に依存して接種の前または後に若い植物に適用する。ポジティブコントロール、つまり市販の殺菌剤、およびネガティブコントロール、つまり水もまた試験され、すべての処理は、乱塊法にて行なわれる。
植物を各週調査し、病気の発生や感染度を、０〜５（０＝感染なしおよび５＝８０〜１００％の葉の表面への攻撃）の尺度を用いて測定する。本実験は繰り返され、処理の効果は、分散分析（ＡＮＯＶＡ）の対象となり、平均をＬＳＤ検定で比較する。
【００４１】
Phytophthora infestans。トマト植物において。トマト植物を播種し、温室トマト生産のための現在の商業的慣行に従って生育する。播種の約２ヶ月後、葉および茎を、植物の表面を完全に覆うまで、１×１０４個のP. infestansの胞子の懸濁液を用いて接種する。そして処理を適用する。ポジティブコントロール、つまり市販の殺菌剤、およびネガティブコントロール、つまり水もまた試験され、すべての処理は、乱塊法にて行なわれる。
事前に確認された葉（植物あたり１５〜３０枚の葉）における損傷または病斑の存在パーセントを、２週間の期間、３〜４日毎に評価する。本実験は繰り返され、処理の効果は、分散分析（ＡＮＯＶＡ）の対象となり、平均をＬＳＤ検定で比較する。
【００４２】
バレイショ植物において。バレイショの塊茎を６〜８インチの鉢に植え付け、生育する。播種の約１．５ヶ月後、植物の葉および茎を、植物の表面を完全に覆うまで、１×１０４個のP. infestansの胞子の懸濁液を用いて接種する。そして処理を適用する。ポジティブコントロール、つまり市販の殺菌剤、およびネガティブコントロール、つまり水もまた試験され、およびすべての処理は、乱塊法にて行なわれる。
事前に確認された葉（植物あたり１５〜３０枚の葉）における損傷または病斑の存在パーセントを、２週間の期間、３〜４日毎に評価する。本実験は繰り返され、処理の効果は、分散分析（ＡＮＯＶＡ）の対象となり、平均をＬＳＤ検定で比較する。
【００４３】
３．精油抽出物の製剤
本発明の精油抽出物含有の製剤は、乳液、エアゾール、スプレー、または他の液体調製物、粉末、パウダーまたは固体の調製物を形成するための既知の技術により、調製することができる。これらの種類の製剤は、例えば、当該技術分野で既知の農薬を分散可能な液体のキャリアおよび／または分散可能な固体のキャリアと共に、および随意にキャリアビヒクル助剤、例えば、乳化剤および／または分散剤を含む従来の農薬の界面活性剤と共に組み合わせて、調製することができる。分散剤および乳化剤の選択および組み合わせる量は、精油抽出物の農薬、殺ダニ、殺虫、および／または殺菌活性を著しく弱めることなく、製剤の性質、特定の環境（例えば、植物、動物、土壌、建築物）への製剤の適用の対象とする形状、および本発明の精油抽出物の分散を容易にする剤の能力により決定される。
【００４４】
従来のキャリアの非限定の例は、フロンなどの、通常の温度および圧力で気体である、エアゾール噴射剤を含む液体キャリア；芳香炭水化物類（例えば、ベンゼン、トルエン、キシレン、アルキルナフタレン類）、ハロゲン化特に塩素化された、芳香炭水化物類（例えば、クロロベンゼン類）、シクロアルカン類（例えば、シクロヘキサン）、パラフィン類（例えば、石油または鉱物油の分留物）、塩素化脂肪族炭水化物類（例えば、塩化メチレン、クロロエチレン類）、アルコール類（例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、グリコール）、そしてそれらのエーテル類およびエステル類（例えば、グリコールモノメチルエーテル）、アミン類（例えば、エタノールアミン）、アミド類（例えば、ジメチルホルムアミド）、スルホキシド類（例えば、ジメチルスルホキシド）、アセトニトリル、ケトン類（例えば、アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、シクロヘキサノン）などの不活性有機溶剤、および／または水を含む不活性で分散可能な液体希釈キャリア；さらに、粉末の天然鉱物（例えば、カオリン、粘土、バーミキュライト、アルミナ、シリカ、白亜、すなわち、炭酸カルシウム、タルク、アパタルガイト、モンモリロナイト、珪藻土）、および粉末の合成鉱物（例えば、高分散性のケイ酸、ケイ酸塩類）などの、不活性で分散可能な、細かく分解した固体のキャリアを含む。
【００４５】
界面活性剤、すなわち、本発明において用いることができる従来のキャリアビヒクル助剤は、限定されることなく、非イオン性および／または陰イオン性の乳化剤（例えば、脂肪酸類のポリエチレンオキシドエステル類、脂肪アルコール類のポリエチレンオキシドエーテル類、アルキル硫酸塩類、アルキルスルホン酸塩、アリールスルホン酸塩、アルブミン加水分解物、および特にアルキルアリールポリグリコールエーテル類、ステアリン酸マグネシウム、オレイン酸ナトリウム）などの乳化剤；および／またはリグニン、亜硫酸パルプ廃液、メチルセルロースなどの分散剤を含む。
【００４６】
本発明の精油抽出物を水に可溶性にするために用いることができる乳化剤は、陰イオン性および非イオン性の乳化剤の混合物を含む。使用可能な市販の陰イオン性乳化剤の例は、以下のものを含むが、これらに限定されない：Rhodacal（登録商標）DS-10、Cafax（登録商標）DB-45、Stepanol（登録商標）DEA、Aerosol（登録商標）OT-75、Rhodacal（登録商標）A246L、Rhodafac（登録商標）RE-610、およびRhodapex（登録商標）CO-436、Rhodacal（登録商標）CA、Stepanol（登録商標）WAC。
【００４７】
使用可能な市販の非イオン性乳化剤の例は、以下のものを含むが、これらに限定されない：Igepal（登録商標）CO-887、Macol（登録商標）NP-9.5、Igepal（登録商標）CO-430、Rhodasurf（登録商標）ON-870、Alkamuls（登録商標）EL-719、Alkamuls（登録商標）EL-620、Alkamide（登録商標）L9DE、Span（登録商標）80、Tween（登録商標）80、Alkamuls（登録商標）PSMO-5、Atlas（登録商標）G1086、およびTween（登録商標）20、Igepal（登録商標）CA-630、Toximul（登録商標）R、Toximul（登録商標）S、Polystep（登録商標）A7およびPolystep（登録商標）B1。
【００４８】
所望の場合、無機色素、例えば、酸化鉄、酸化チタン、およびプルシアンブルー、ならびにアリザリン染料、アゾ染料または金属フタロシアニン染料などの有機染料、ならびに鉄、マンガン類、ホウ素、銅、コバルト、モリブデンおよび亜鉛の塩類などの微量元素などの着色剤を使用してもよい。
【００４９】
カルボキシメチルセルロース、天然および合成ポリマー類（例えば、アラビアゴム、ポリビニルアルコール類、および酢酸ビニル）などのスプレッダーおよび固着剤もまた、製剤に使用することができる。
製剤において用いることのできる市販のスプレッダーおよび固着剤の例は、Schercoat（登録商標）P110、Pemulen（登録商標）TR2、およびCarboset（登録商標）514H、Umbrella（登録商標）、Toximul（登録商標）858およびLatron（登録商標）CS-7を含むが、それらに限定されない。
持続放出製剤もまた、本発明により意図される。例えば、カプセル化および／またはペレット化された製剤である。
【００５０】
１つの態様において、製剤は、様々な環境における適用のための、フォギング、エアゾールスプレー、およびポンプスプレー方法による送達に適した、スプレー可能なそのままで使用可能な（ＲＴＵ）製剤である。
【００５１】
さらなる態様において、製剤はまた、使用前に希釈することができる乳剤（ＥＣ）として調製することができる。１つの態様において、乳剤は、特定の環境への製剤の適用を可能にするために、適切な乳化剤、キャリア、およびスプレッダーおよび／または固着剤と組み合わせて、アカザ由来の精油抽出物５％〜５０％（容量）を含む。別の態様において、乳剤は、特定の環境への製剤の適用を可能にするために、適切な乳化剤、キャリア、およびスプレッダーおよび／または固着剤と組み合わせて、アカザ由来の精油抽出物１０％〜２５％（容量）を含む。さらなる態様において、乳剤は、特定の環境への製剤の適用を可能にするために、適した乳化剤１％〜１５％（容量）、適したキャリアまたは溶剤５０％〜７０％（容量）と組み合わせて、アカザ由来の精油抽出物１０％〜２５％（容量）を含む。別の態様において、乳剤はまた、適したスプレッダーおよび／または固着剤２％〜２０％（容量）を含んでもよい。当業者は、しかしながら、これらの濃度は、製剤が、殺ダニ、殺虫、および／または殺菌用であるが、植物毒素ではないよう、特別なニーズに従って修正することができることを理解するだろう。  
【００５２】
本発明の乳剤の調製に用いることのできる適した乳化剤の非限定の例は、以下のものを含む：Rhodapex（登録商標）C0-436、Rhodapex（登録商標）C0-433、Igepal（登録商標）CO-430、Igepal（登録商標）CA-630、Igepal（登録商標）CO-887、イソプロパノール、菜種油、Alkamuls（登録商標）EL-719、Rhodacal（登録商標）DS-10、Macol（登録商標）NP-9.5、Tergitol（登録商標）TMN-3、Tergitol（登録商標）TMN-6、Tergitol（登録商標）TMN-10、Morwet（登録商標）D425、およびTween（登録商標）80。
【００５３】
使用してもよい適したキャリアまたは溶剤は、Isopar（登録商標）M、THFA（登録商標）、乳酸エチル、乳酸ブチル、Soygold（登録商標）1000、M-Pyrol、プロピレングリコール、Agsolex（登録商標）12、Agsolex（登録商標）BLO、軽油、Polysolve（登録商標）TPM、およびFinsolv（登録商標）TNを含むが、それらに限定されない。
【００５４】
適したスプレッダーおよび／または固着剤の例は、ラテックス乳液、Umbrella（登録商標）、Adsee（登録商標）775、Witconol（登録商標）14、Toximul（登録商標）858、Latron（登録商標）B-1956、Latron（登録商標）CS-7、Latron（登録商標）AG-44M、T-Mulz（登録商標）AO-2、T-Mulz（登録商標）1204、Silwet（登録商標）L-774を含むが、それらに限定されない。
本発明の精油抽出物を含む製剤は、特定の環境への適用を可能にする既知の技術により、調製することができる。
【００５５】
植物用製剤
製剤を、植物および植物の環境、例えば、家庭用植物、温室植物、農業用植物、および園芸植物への適用のために調製することができる。１つの態様において、製剤は、植物へのスプレー可能な適用を可能にするために、適した乳化剤、キャリア、およびスプレッダーおよび／または固着剤と組み合わせて、アカザ由来の精油抽出物の最終濃度０．１２５％〜１０％（容量）を含む。別の態様において、製剤は、植物へのスプレー可能な適用を可能にするために、適切な乳化剤、キャリア、およびスプレッダーおよび／または固着剤と組み合わせて、アカザ由来の精油抽出物０．２５％〜５％（容量）を含む。
【００５６】
閉ざされたおよび／または開かれた環境用の燻蒸製剤
製剤はまた、屋外ならび屋内、例えば、温室、動物納屋または小屋、ヒトの住居、および他の建築物などの閉ざされた環境の両方への燻蒸剤としての適用のために調製することができる。当業者は、かかる燻蒸剤、例えば、フォギング濃縮物および煙発生剤などを調製する様々な方法を正しく評価するだろう。
フォギング濃縮物は一般に、閉ざされたおよび／または開かれた環境中に分配することができる細かい霧を作り出すフォギング装置を介しての適用のための液体製剤である。かかるフォギング濃縮物は、フォギング装置を介しての適用を可能にする既知の技術を用いて、調製することができる。例えば、製剤は、以下の一般的な組成を有してよい。
【００５７】
【表１】
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【００５８】
煙発生剤は、一般的にパウダー製剤であり、煙燻蒸剤を作り出すために燃やされる。かかる煙発生剤もまた、既知の技術を用いて調製することができる。例えば、製剤は、以下の一般的な組成を有してよい。
【表２】
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【００５９】
動物用製剤
製剤は、動物および納屋または小屋などの動物環境への適用に適した形状に調製することができる。１つの態様において、製剤を、昆虫、ダニ類、害虫および菌類をコントロールするための動物への局所適用に適した形状に調製する。当業者は、かかる局所用製剤、例えばパウダーまたはスプレー可能な製剤などを調製する様々な方法を正しく評価するだろう。１つの態様において、局所用製剤は、エアゾールであり、以下の一般的な組成を有してよい。
【００６０】
【表３】
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【００６１】
別の態様において、製剤は、水ベースのポンプスプレー製剤であり、以下の一般的な組成を有する。
【表４】
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【００６２】
さらなる態様において、製剤は、納屋または小屋などの動物環境への適用のためのエアゾール製剤であり、以下の一般的な組成を有する。
【表５】
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【００６３】
ヒト用製剤
製剤は、例えば忌避剤として、ヒトへの局所適用に適した形状に調製することができる。当業者は、かかる局所用製剤、例えばローションまたはスプレー可能な製剤などを調製する様々な方法を正しく評価するだろう。１つの態様において、製剤は、溶剤ベースのスプレー可能な製剤であり、以下の一般的な組成を有する。
【００６４】
【表６】
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【００６５】
別の態様において、製剤は、水ベースのスプレー可能な製剤であり、以下の一般的な組成を有する。
【表７】
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【００６６】
さらなる態様において、製剤は、局所用ローション製剤であり、以下の一般的な組成を有する。
【表８】
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【００６７】
土壌用製剤
さらなる態様において、本発明の製剤は、マイクロエマルジョンとして調製することができる。マイクロエマルジョンは、低粘度で、２種類の非混和性の液体の光学的に透明な分散液であり、該液は、少なくとも１種類のイオン性または非イオン性界面活性剤により安定している。マイクロエマルジョンの場合、粒子径は約５〜１００ｎｍの範囲で、連続相中に懸濁している。２相間の界面張力は極めて低い。多くの水中油型（Ｏ／Ｗ）のマイクロエマルジョンの粘度は、水の粘度と同程度である。
【００６８】
マイクロエマルジョンに比べ、「マクロエマルジョン」は高い粘度を有し、それらの粒子径は、１０〜１００μｍの範囲である。マクロエマルジョンは、乳白色で、加熱すると、相の分離または分散物質の沈殿の傾向がある。
農薬マイクロエマルジョンは、同レベルの有効成分を有するマクロエマルジョンの処方に比べ、優れた有効性を提供することができると一般的に信じられている。小さなサイズの乳液の液滴は、細胞膜（植物および昆虫）を通して農薬のより良い透過を可能にし、よって有効性の増大という結果になるだろうと信じられている。マイクロエマルジョンは、無限に安定であり、よって旧来のマクロエマルジョンシステム以上に改善された安定性を提供すると考えられる。したがって、本発明のマイクロエマルジョン製剤は、ある適用、例えば土壌送達に特に適しているだろう。  
【００６９】
本発明のマイクロエマルジョン製剤は、既知の当該技術分野で知られた、様々な既知の方法を用いて調製することができる。１つの態様において、本発明の精油抽出物は、マイクロエマルジョンを作り出すために乳化剤の合剤と組み合わせることができる。例えば、マイクロエマルジョンは、３段階のプロセスにおいて調製することができる。
【００７０】
段階１：乳化剤の選択
潜在的な可能性を有する第一の乳化剤の選択を、有効成分との混和性について試験する。
可溶性を、澄んで安定した溶液を目視で評価することにより評価する。各農薬／乳化剤の混合物を、必要量の水と共に混合し、作り出した乳液／マイクロエマルジョンの品質を記録する。最良の乳液を作り出す乳化剤を、段階２へと移行させる。
乳液／マイクロエマルジョンの品質を、目視評価により決定する。透明なマイクロエマルジョンが最良で、青みがかった白い乳液が２番目に良く、白単色の乳液が次で、および相の分離を示している乳液のいずれもが最後である。
【００７１】
段階２：第二のおよび第三の乳化剤の選択
段階１の完了時点で、最も有望な第一の乳化剤システムを、どの乳化剤混合物が所望の物理特性を提供するかを確認するまで、他の乳化剤と共に、様々な比率で混合する。最適化されたシステムは一般に、１種の主要乳化剤および２種または３種以上の補助乳化剤／補助溶剤からなる。これらの補助乳化剤／補助溶剤は、マイクロエマルジョンシステムの熱的相安定範囲を拡大する傾向がある。三元状態図は、乳化剤比の選択を助けるために、開発のこの段階で用いられる。この段階での最良の製剤はしばしば、１種の陰イオン性乳化剤および異なる種類の２種の非イオン性乳化剤を含むものである。マイクロエマルジョンの特性を評価する基準は、この場合も先と同様に、時間および温度に応じた物理的外観である。
【００７２】
段階３：乳化剤レベルの最適化
最良の乳化剤の組み合わせを確立したら、最終段階にて、システム中の各乳化剤成分のレベルおよび比率を最適化する。
１つの態様において、マイクロエマルジョンは、アカザ由来の精油抽出物３０％〜５０％（容量）、適した乳化剤０．５％〜２５％（容量）、および水１０％〜５０％を含む。本発明のマイクロエマルジョンの調製に用いることのできる乳化剤の非限定の例は、以下のものを含む:Igepal（登録商標）CA-630、Rhodasurf（登録商標）ON-870、Alkamuls（登録商標）EL-719、Tween（登録商標）80、Alkamuls（登録商標）PSMO-5、Rhodapex（登録商標）CO-436、Rhodafac（登録商標）RE-610、Rhodacal（登録商標）CA、Ammonyx（登録商標）CO、Aerosol（登録商標）OT-S、Ammonyx（登録商標）LO、Stepanol（登録商標）WAC、Soprophor（登録商標）BSU、およびRhodacal（登録商標）IPAM。
【００７３】
精油抽出物の製剤は、生物活性剤を持続放出するために、放出制御送達システムと組み合わせられ得ることを意図する。
かかる制御放出送達システムは、当該技術分野で既知の、カプセル化、溶解、または有効成分の取り込みの方法を含む。本発明の製剤は、栄養物（肥料）または除草剤と組み合わせて調製され得ることが、さらに意図される。したがって、当業者は、本発明はさらに、様々な溶解率を提供するためにさらに製剤化されてもよいおよび／または栄養物（肥料）または除草剤と組み合わせて調製してもよいことを、正しく評価するだろう。
【００７４】
４．精油抽出物製剤の使用
本発明の精油抽出物を、保護される場所への農薬的有効量の本発明の精油抽出物および／または製剤の適用により、害虫をコントロールするために用いることができる。精油抽出物製剤は、例えば、スプレー、噴霧、気化、散乱、散粉、散水、噴出、散布、注入、燻蒸、および同様のものなど、当該技術分野で既知の適した方法で適用することができる。
【００７５】
精油抽出物またはそれらの製剤の適用のための場所は、農業、園芸、森林、プランテーション、果樹園、苗床、有機栽培作物、芝および都市環境を含むが、それらに限定されない。具体的には、精油抽出物またはそれらの製剤は、土壌または葉、葉柄、茎、種子、根、花、球果、樹皮、木質部または塊茎を含む植物／木の１または数種類の部位に適用してもよい。精油抽出物を、保管または播種のための前処理として、種子の処理のために製剤化してもよいことが、さらに意図される。例えば、種子は、ペレット化した組成物の一部を形成してもよく、または、代わりに、本発明の製剤により、浸水、スプレー、散粉または燻蒸してもよい。精油抽出物およびそれらの製剤は、土壌表面または土壌に生息する害虫をコントロールするために、土壌の表面に適用することができる。
【００７６】
本発明の精油抽出物はまた、有機生産システムおよび総合コントロールプログラムの一部として使用することもできる。例えば、有益な昆虫およびダニの増加と併せて使用することができる。精油抽出物およびそれらの製剤は、「滴下施肥法」、すなわち温室中の植物の灌漑システム経由の肥沃化に適用され得ることが、さらに意図される。例えば、精油マイクロエマルジョンを、低濃度（ＡＩ０．１〜０．５％）で水に添加することができ、および個々の植物に水をやり、後に土壌に生息する害虫（昆虫および病気の病原菌）のために、前記製剤が処理される。 
【００７７】
５．益虫およびダニへの精油抽出物または製剤の効果
植食性の害虫の天敵は、捕食性のものおよび捕食寄生性のものの両方を含む。捕食性のものは一般に、食料にする獲物と同等またはそれ以上に大きい。それらは、自身の食料を捜し出すために動き回るかなりの能力があり、通常、一生のうちに多くの害虫を消費する。捕食寄生性のもの、または寄生虫は、自身の獲物よりも小さい。１匹または２匹以上の捕食寄生者が、単一の宿主の中または上において生育および発達する。宿主は、寄生幼虫が食し、成熟するにつれて、ゆっくり破壊される。かかる有益な昆虫およびダニは、害虫をコントロールするために必要な農薬の数を減少させることにより、農薬抵抗性の発達を防ぐかまたは遅らせるのを助けることができる。それらはまた、農薬の適用に対して生き残った抵抗性害虫も食すこととなる。
【００７８】
総合防除（ＩＰＭ）プログラムは、天敵を保護または増加することにより、有益な昆虫およびダニにより提供される生物害虫コントロールを巧みに利用する。化学コントロールがＩＰＭプログラムにおいて必要な場合、推奨される農薬は、天然に生じる利益への影響を抑えるものである。
本発明の精油抽出物、およびそれらの製剤を、益虫およびダニ、すなわち、捕食者および捕食寄生者へのそれらの効果を、ＩＰＭプログラムへの統合のために例ＸＩＶに説明したように、標準化ＩＯＢＣ（International Organization for Biologicial Control）試験方法の方法により、試験してもよい。
【００７９】
ここで、一般的に記載された本発明は、以下の例を参考により簡単に理解されるだろう。かかる例は、説明のみの目的で含まれており、明記されていない限り、本発明を限定するものではない。
【００８０】
例
例１：Chenopodium ambrosioides由来の精油抽出物の植物化学プロファイル
Chenopodium ambrosioides全草を収穫した。抽出目的のために使用した植物材料は、根より上の全草を含む。精油抽出物を、水蒸気蒸留、すなわち、水蒸留（ＤＷ）および／または直接水蒸気蒸留（ＤＳＤ）により、植物材料から抽出した。
【００８１】
水蒸留は、約２０ｋｇの植物材料を処理する能力を有する３８０Ｌ蒸留装置中で行なわれた。ＤＷ処理中、植物材料を、蒸留器本体の基部に位置する蒸気コイルを用いた熱の適用により沸騰させた適切な量の水に完全に浸した。ＤＳＤ中、植物材料は、蒸留器本体内で支えられ、該材料を通る蒸気の円滑な通過を提供するために、均一におよびゆるく詰められた。
蒸気を外部発生器により作り出し、タンク底部から植物材料を通して拡散させた。蒸気の進入率は、（３００ｍｌ／分）に設定された。両方の方法により、オイルの構成物質が植物材料から水蒸気と共に放出され、冷却器中で冷却され、オイルおよび水の２成分に分離される。
【００８２】
精油抽出物は、水素炎イオン化検出器（ＦＩＤ）搭載のキャピラリーガスクロマトグラフィー（ＧＣ）により分析された。ＧＣをVarian 6000 series Vistaを用いて行い、Varian DS 654積分器によりピーク面積を計算した。ＳＰＢ−１（３０ｍ×０．２５ｍｍφ、０．２５μｍ）およびSupelcowax（３０ｍ×０．２５ｍｍφ、０．２５μｍ）溶融石英カラムを使用した。サンプル中の化合物がカラムを数分以内に異なる時間に出るので（Ｒｔ’ｓまたは保持時間）、これらを既知の基準と比較し、および化合物を確認することができる。ＧＣ−ＦＩＤからある化合物のあいまいな識別が出た場合、質量分析法（ＭＳ）を用いて、化合物のマススペクトルを既知のスペクトルのデータベースと比較した。
【００８３】
精油抽出物の各成分の相対量を、様々なC. ambrosioidesの異なるロットについて決定した。各ロットは、一収穫日内の作物から採取したプール(pooled)抽出を表す。図１は、３種類の異なるロットから採取された精油抽出物の植物化学プロファイルを示す。ロット番号００ＭＣ−２１Ｐは、アスカリドール含有量９．８６％を示す；ロット番号００ＭＣ−２４Ｐは、アスカリドール含有量６．３９％を有し、００ＭＣ−２９Ｐは、アスカリドール含有量３．６％を有する。
抽出物の活性は、これらのロットによるバイオアッセイからの結果が提案するように、アスカリドールの相対量の変動に明らかに影響されない。
【００８４】
例ＩＩ：精油抽出物の活性構成物質の決定
広範囲におよぶ試験が、精油抽出物の活性構成物質を決定するために行なわれた。
ｔｒａｎｓ−ρ−メンタ−２，８−ジエン−１−オールおよびｃｉｓ−ρ−メンタ−２，８−ジエン−１−オールは入手できなかったので、これら以外のオイル中に存在する全化合物について試験した。全試験化合物は、Laboratoires LaSeve、Chicoutimi Qcにより我々の抽出物のサンプルから単離されたアスカリドールおよびイソアスカリドール以外は、商業的に（Sigma-Aldrich）得られた。
【００８５】
殺ダニ活性
ナミハダニ（ＴＳＳＭ：Tetranychus urticae）を用いた試験
殺ダニ活性を試験するために、成虫の雌ダニ３０匹を、ラクダの毛のブラシを用いて、９ｃｍのペトリ皿に接着させた両面粘着テープの上にそれらの背面を乗せた。３個の皿を、処理日および処理あたり合計９０匹のダニについて、各試験化合物の各濃度および対照（例えば、水）について調製した。
【００８６】
１ｍｌの各調製物および対照としてマイクロフィルターで濾過した水を、スタンドに置かれ、３ｐｓｉに設定された圧力ゲージに接続されたポッタースプレータワーのスプレーノズルの容器にGilson Pipetman（登録商標）P-1000を用いて添加した。ペトリ皿の重量を各適用前および直後に量り、各試験サンプルに堆積させたオイルの量（ｍｇ／ｃｍ２）を計算した。全手順を３回行い、各処理により試験した合計２７０匹のダニを得た。  
ダニの死亡率を、処理の２４および４８時間後に評価した。足、口吻または腹部の動作で細かいラクダの毛のブラシを用いて突いても反応しないダニは、死んでいるとみなした。
【００８７】
個々の化合物を、ナミハダニ（ＴＳＳＭ：Tetranychus urticae）について、０．１２５、０．５０、１．０および２．０％濃度で試験した。結果を、図２で説明する。比較は、１％濃度の各化合物により得られた死亡率データに対してなされ、カルバクロールは、最も活性な化合物（ＴＳＳＭの死亡率９０％）であり、カルベオール（死亡率８２％）、ネロール（死亡率８２％）、チモール（死亡率７８％）、カルボン（死亡率７８％）およびα−テルピネオール（死亡率７１％）が続く。他の化合物は、死亡率４０％未満を示した。死亡率は、１％アスカリドールでは記録されなかった。死亡率３％が、０．１２５％アスカリドールの溶液により得られたにもかかわらず、死亡率が記録されなかった該化合物のより高い濃度でより多い個体数を用いた試験（０．５％および１．０％でそれぞれｎ＝３００）と比較して、試験した個体数が少なすぎ（ｎ＝１２５）および標準偏差が高すぎる（１３）ため、我々は、これが誤りまたは当てにならない結果だと信じる。
【００８８】
個々の化合物について得られた結果は、オイル中に大量に存在する化合物、すなわちα−テルピネン、ρ−シメン、リモネン、アスカリドール、イソアスカリドールが、抽出物の生物活性に多大な影響を与えることを示唆しない。１％濃度で試験したこれらの化合物それぞれから得られた死亡率は、１７％以下だった。１％濃度のアスカリドールおよびイソアスカリドールは、ハダニへの効果がなかった（死亡率０％）。
一方、カルバクロール、カルベオール、ネロール、チモールおよびカルボンは、これら化合物のそれぞれは比較的少量（＜１％）で存在するにもかかわらず、オイルの活性により多大な影響を及ぼすだろう（１％濃度にて＞７０％のＴＳＳＭ）。
【００８９】
殺虫活性
オンシツコナジラミ（ＧＷＦ：Trialeurodes vaporariorum）を用いた試験
試験をまた、我々のモデルバイオアッセイにおいてオンシツコナジラミ（Trialeurodes vaporariorum）についてより高い度合いの活性が立証された化合物、すなわちカルバクロール、ネロールおよびチモールを用いて行なった。
【００９０】
コナジラミの成虫を、少なくとも２０匹の成虫がTangle-Trap（登録商標）（Gemper's Co.）をスプレーした黒い５ｃｍ×７．５ｃｍの各プラスチックカードに降りるように、該カードを温室コロニーのかごに直接置くことにより、接着させた。カードをスプレーする前に、死亡したおよび不動のコナジラミを除去するために双眼顕微鏡下で観察した。活性なコナジラミのみを実験のために保持した。処理あたり４枚のカードを用いた。各カードを、排出チャンバーのスプレーノズルから１４．５ｃｍの距離のフレームに載せたBADGER 100-F（登録商標）（Omer DeSerres Co.、Montreal、Canada）ペイントブラシスプレーヤーを用いて、３００μ１の乳液を６ｐｓｉでスプレーした。カードをスプレー直前および直後に量り、堆積させた有効成分量をｍｇ／ｃｍ２で計算した。カードを排出チャンバー下で乾燥させ、底に湿った発泡体を置いた閉じられた５Ｌ容量の透明なプラスチック容器内の発泡スチロールの棚に横に置き、湿度を高く保った（相対湿度９０％）。プラスチック容器を、２４℃および１６Ｌ：８Ｄ光周期の成長室内で保管した。この手順を３回繰り返した。
【００９１】
死亡率を、処理の２０時間後、双眼顕微鏡下で単毛のブラシを用いてコナジラミを静かに突くことにより評価する。突いた後に、動作（触角、足、羽）の欠如を死亡と記録する。化合物の相対有効性を、死亡率データをａｒｃｓｉｎ√ｐに変換し、そしてＡＮＯＶＡ分析の対象にすることにより、SAS（登録商標）ソフトウェア（SAS Institute 1988）を用いて比較した。
図３に示したＧＷＦについての結果によって、これら３種類の化合物の重要な生物活性が確認される。
【００９２】
例ＩＩＩ：そのままで使用可能な殺ダニ製剤
有効成分としてアカザ抽出物を有するそのままで使用可能な（ＲＴＵ）スプレー可能な殺虫製剤を調製した。１つの態様において、この製剤は、０．１２５％〜１０％（容量）の精油抽出物、乳化剤、スプレッダーおよび固着剤、およびキャリアを含有する。
【００９３】
基本ＲＴＵ製剤の例は、以下の通りである。
【表９】
2005536495.tif 000010
【００９４】
付加残留効果のための付加ポリマー類を有する製剤の例は、以下の通りである。
【表１０】
2005536495.tif 000011
【００９５】
例ＩＶ：精油抽出物（ＲＴＵ製剤）の殺ダニ活性
活性試験を、本発明のそのままで使用可能な（ＲＴＵ）製剤を用いて行なう。該製剤は以下のものを含む：精油抽出物１．００％；Rhodacal IPAM ０．８３％；Igepal CA-630 ０．５０％；Pemulen TR2 ０．０５％；プロピレングリコール２．００％；および水９５．６２％。
成虫の雌ダニ３０匹を、ラクダの毛のブラシを用いて、９ｃｍのペトリ皿に接着させた両面粘着テープの上にそれらの背面を乗せた。３個の皿を、処理日および処理あたり合計９０匹のダニについて、各試験製剤または製品の各濃度および対照（例えば、水）について調製した。
【００９６】
１ｍｌの各調製物および対照としてマイクロフィルターで濾過した水を、スタンドに置かれ、３ｐｓｉに設定された圧力ゲージに接続されたポッタースプレータワーのスプレーノズルの容器にGilson Pipetman（登録商標）P-1000を用いて添加した。ペトリ皿の重量を各適用前および直後に量り、各試験サンプルに堆積させたオイルの量（ｍｇ／ｃｍ２）を計算した。
そのままで使用可能な製剤を、このＲＴＵ製剤および現在市場に出回っている他の殺ダニ製品（合成および天然）の相対有効性を比較するために、異なる濃度（００．１２５、０．２５、０．５、０．７５、および１％）で所望の死亡率（＞９５％）に必要な最低濃度を確認するために、上記方法に従って試験した。
全手順を３回行い、各処理により試験した合計２７０匹のダニを得た。  
【００９７】
ダニの死亡率を、処理の２４および４８時間後に評価した。足、口吻または腹部の動作により、細かいラクダの毛のブラシを用いた突く行為に反応しないダニは、死んでいるとみなした。ＬＣ５０値を得るため（ｍｇ／ｃｍ２での致死濃度が、５０％の試験生物を殺すのに必要な製品の量；したがってＬＣ５０値が低いほど、製品がより有毒である）、４８時間後の計数の結果が、ＰＯＬＯコンピュータープログラム（LeOra Software, 1987）を用いたプロビット解析の対象とした。死亡率の入力は、対応する量った用量（ｍｇ／ｃｍ２）と共に行って、適用率の変動を考慮に入れた。
これらのバイオアッセイにより得られた結果を、図４に示す。
【００９８】
本明細書に示した毒性試験は、雌ダニについて行なわれたが、当業者には、これらの結果が、雄ダニについて観察されたであろう死亡率は同じであるか、そうでなければ、雄ダニは雌より小さいことを知っているため、高かったであろうことを示すことは、明らかだろう。
【００９９】
例Ｖ：ハダニの卵および若虫期への効果（ＲＴＵ製剤）
ＲＴＵ製剤（精油抽出物１．００％；Rhodacal IPAM ０．８３％；Igepal CA-630 ０．５０％；Pemulen TR2 ０．０５％；プロピレングリコール２．００％；および水９５．６２％を含む）もまた、ハダニの卵および若虫期について試験した。殺卵効果を、ＲＴＵ製剤濃度による処理後に、ナミハダニの卵について決定した。成虫の雌のT. urticaeを、ライマメの葉から切り取った２ｃｍ径のリーフディスクへ移し、産卵のために４時間放置する。少なくとも２０個の卵／ディスクを産卵したとき、成虫のダニを取り除いく。リーフディスクを湿らせ、そしてスプレーし、ペトリ皿を処理前および後に量り、および処理後保管する。孵化率を、毎日そして処理後１０日間、リーフディスクに残っている卵の数および存在する生きたおよび死んだ若虫の数を数えることにより評価する。パーセント孵化率を、生きた若虫のみについて決定する。若虫は、動作が単毛のブラシを用いた反復の優しい突く行為の後に観察されない場合、死んでいるとみなす。
【０１００】
卵期での試験の結果（図５）は、０．５％溶液のオイルを用いて死亡率３０％であり、ＲＴＵ製剤が卵にいくらか効果を有することを示す。より高い濃度のオイルは、卵により多大な有効性を示すであろうことが予想される。
若虫期へのＲＴＵ製剤の効果も同様に、０．５％の濃度でさえも、ＲＴＵは、Avid（８０．１％）またはSafer Soap（６１．７％）のどちらかの既存の市販の調製物よりも高い結果（９５．８％）をもたらした（図６）。
【０１０１】
例ＶＩ：本発明のＲＴＵ製剤の残留効果と、それと市販の殺ダニ製品との比較
ＲＴＵ製剤（精油抽出物１．００％；Rhodacal IPAM ０．８３％；Igepal CA-630 ０．５０％；Pemulen TR2 ０．０５％；プロピレングリコール２．００％；および水９５．６２％を含む）の残留効果もまた、ハダニについて試験し、既に市場に出回っている天然および合成製品（すなわちKelthane（登録商標）、Avid（登録商標）、Safer's（登録商標）SoapおよびWilson's dormant oil）と比較した。この試験の手順は、個々のソラマメの葉を入れた栄養溶液含有のバイアルの調製物を伴った。１８枚の葉を、各試験濃度について調製し、およびそれぞれを指示濃度で流出するまでスプレーし、乾燥させた。１０匹のハダニを、スプレーの１時間後に９枚の葉の上に置き、１０匹を、処理の１日後に他の９枚の葉の上に置いた。死亡率を、葉へのダニ導入の２４および４８時間後に観察した。この操作を３回繰り返した。
【０１０２】
処理の１時間後にダニを植物へ導入した場合の異なる製品の残留効果の結果を、図７に示す。これらの結果は、ＲＴＵの残留効果があり、この効果は、Safer製品より多大であることを示す。しかしながら、KelthaneおよびAvidなどの合成製品の残留効果には劣る。
【０１０３】
これらの結果は、環境でのＲＴＵ製剤の非常に低い持続性を示す（害虫が、製品での処理の１時間後に植物に導入された場合、ハダニの死亡率は約２３％）。ＲＴＵ製剤は、したがって天敵の個体群に害を与えないコントロール方法を指示する総合コントロールプログラムの勧告に適合し、作業者および消費者への安全を保証しながら、試験区域への作業者の迅速な再入場および途切れのない収穫時期を可能にする。
【０１０４】
例ＶＩＩ：他のダニへの抽出物の殺ダニ活性（ＲＴＵ製剤）
一般的な植物寄生ダニ類への本発明の製剤の有効性を確認するために、あるバイオアッセイを、別の植物寄生ダニであり、T. urticaeと近い分類学的関係を示す、リンゴハダニ、Panonychus ulmiについて行なった。  
【０１０５】
すなわち、ＲＴＵ製剤（精油抽出物１．００％；Rhodacal IPAM ０．８３％；Igepal CA-630 ０．５０％；Pemulen TR2 ０．０５％；プロピレングリコール２．００％；および水９５．６２％を含む）を、殺ダニ剤としての幅広い効果を確認するために、リンゴ果樹園の害虫であるリンゴハダニ、Panonychus ulmiを、成虫のハダニへの接触有効性のために記載された同じ手順に従って試験した。その結果、T. urticaeのみに活性ではない、接触殺ダニ剤としての精油抽出物の効力が確認された（図８）。
【０１０６】
例ＶＩＩＩ：精油抽出物の殺虫有効性（ＲＴＵ製剤）
同様の有効性試験もまた、栽培植物の重要な害虫である数種類の昆虫種について行なった。試験した種は、オンシツコナジラミ、Trialeurodes vaporariorum；ミカンキイロアザミウマ、Frankliniella occidentalis；モモアカアブラムシ、Myzus persicae；およびシルバーリーフコナジラミ、Bermisia argentifoliiであり、以下の例ＸＩ（Ｃ）に記載した同じ手順に従った。 
【０１０７】
図９に提示した結果は、ＲＴＵ製品（精油抽出物１．００％；Rhodacal IPAM ０．８３％；Igepal CA-630 ０．５０％；Pemulen TR2 ０．０５％；プロピレングリコール２．００％；および水９５．６２％を含む）は、試験した生物すべてに対して有毒であることを示す。ＬＣ５０を、オンシツコナジラミおよびモモアカアブラムシについて計算することができ、および結果（ＬＣ５０がそれぞれ０．００１３１ｍｇ／ｃｍ２および０．０００９ｍｇ／ｃｍ２）は、製品がこれらの昆虫に対して、ハダニに対してと同様にまたはそれ以上に効果的であることを示す。
【０１０８】
例ＩＸ：乳剤製剤
Chenopodium ambrosioides抽出物含有の乳剤製剤もまた、調製した。濃縮物は、１０〜２５％の精油抽出物、乳化剤、スプレッダー／スティッカー、およびキャリアを含有する。
【０１０９】
乳剤製剤の例は、以下の通りである。
【表１１】
2005536495.tif 000012
【０１１０】
例Ｘ：精油抽出物の殺ダニ有効性（乳剤製剤）
接触および残留バイオアッセイを、本発明の精油抽出物の有効性を試験するために、実験室において行なった。オイルの２５％乳剤（ＥＣ２５％）製剤を、ナミハダニおよびリンゴハダニの成虫および卵に対して試験した。試験ＥＣ２５％製剤は、以下のものを含む：精油抽出物２５％；Rhodopex CO-436 ２．５％；Igepal CO-430 ２．５％；およびTHFA７０％。
【０１１１】
ナミハダニを、ライマメ植物（Phaseolus種）にて飼育し、リンゴハダニを、McIntosh品種（Malus domestica Borkhausen）のリンゴの葉にて飼育した。
【０１１２】
成虫期における接触効果
成虫に用いた方法論は、両方の種について同じだった。ナミハダニの成虫を、北米の草本植物の４種類の濃度のオイル（有効成分（ＡＩ）０．１２５、０．２５、０．５および１．０％のＥＣ２５％；Urgel Delisle et Associes、Saint-Charles-sur-Richelieu、QC、Canada）、ＡＩ０．７％のニームオイル（Neem Rose Defense（登録商標）ＥＣ９０％; Green Light, San Antonio TX, USA）、ＡＩ１％の殺虫石鹸（０．２％ピレトリン含有の脂肪酸のSafer's Trounce（登録商標）EC 20% カリウム塩; Safer Ltd. Scaborough, ON, Canada）および水（対照）で処理した。リンゴハダニの成虫を、５種類の濃度（０．０３１２、０．０６２５、０．１２５、０．２５および０．５％）のＥＣ２５％、ＡＩ０．００６％のアバメクチン（Avid（登録商標）ＥＣ１．９％; Novartis, Greensboro, NC, USA）および水（対照）で処理した。
【０１１３】
２５匹の成熟した雌ダニを、顕微鏡用スライドガラスに接着させた１枚の１ｃｍ２の両面粘着テープの上にそれらの背面を乗せた。各処理期間のために、４枚のスライドを、上記に定義したように各処理または殺ダニ剤適用のために調製した。各処理用の溶液を処理日に調製し、各スライドを、スライドから１５ｃｍの距離のフレームに載せたBadger 100-F（登録商標）ペイントブラシスプレーヤー（Badger Air-Brush Co., Franklin Park, IL, USA）を用いて、２５０ｍｌ溶液の排出チャンバー下０．４２ｋｇ／ｃｍ２の圧力でスプレーした。スライドを、スプレー直前および直後に量り、表面積あたり堆積させた有効成分量（ｍｇ／ｃｍ２）を計算した。この量は、スライド間で１５％未満の変化だった。スプレー後、スライドを、底に湿った発泡体を置いた閉じられた５Ｌ容量の透明なプラスチック容器内の発泡スチロールの棚に横に置き、湿度を高く保った（相対湿度９０％）。プラスチック容器を、２４℃および１６Ｌ：８Ｄ光周期の成長室内で保管した。この実験手順を、処理期間をブロックとみなす完備型ブロックデザイン法で３連続日繰り返した。
【０１１４】
死亡率を、処理の４８時間後（ナミハダニ）および２４時間後（リンゴハダニ）、双眼顕微鏡下で評価した。対照群での４８時間のリンゴハダニの死亡率は高かったため、統計的評価には不適当であると判断した。ダニは、動作が単毛のブラシを用いた反復の穏やかな突き行為後に観察されない場合、死んでいるとみなした。データをSAS（登録商標）ソフトウェア（SAS Institute 1988）を用いてａｒｃｓｉｎ√ｐに変換し、そしてＡＮＯＶＡ統計分析の対象にした。ＥＣ２５％のＬＣ５０およびＬＣ９０（ｍｇ／ｃｍ２のＡＩ）を、POLO-PC（登録商標） ソフトウェア（LeOra Software, 1987）を用いてプロビット解析により計算した。
【０１１５】
１％濃度のＥＣ２５％および１％の殺虫石鹸は、成虫のナミハダニのコントロールにおいて最も効果的であり、それぞれ９９．２および１００％の死亡率をもたらした（図１０）。０．５、０．２５および０．１２５％のＥＣ２５％は、それぞれ９４．７、７６．８および６８％の死亡率という結果となった。最も効果の低い処理は、ニームオイルであり、推奨用量で僅か２２．１％の死亡率をもたらした。ナミハダニについてのＥＣ２５％のＬＣ５０およびＬＣ９０は、それぞれ０．００９ｍｇ／ｃｍ２（９９％信頼区間が０．００８２〜０．００９９ｍｇ／ｃｍ２）および０．０２９２ｍｇ／ｃｍ２（９９％信頼区間が０．０２６８〜０．０３２１ｍｇ／ｃｍ２）であった（Ｐ＝０．０１で有意）。これに比べ、殺虫石鹸のＬＣ５０は、製造元により、０．０１６ｍｇ／ｃｍ２であると決定された。
【０１１６】
０．５％濃度で、ＥＣ２５％は、P. ulmiの成虫に対し、アバメクチン（８２．４％）よりも、著しくより有毒であった（死亡率９７．１％）（図１１）。０．０６２５〜０．２５％の範囲の濃度のＥＣ２５％による処理は、アバメクチンと統計的に同じコントロールレベルとなった。リンゴハダニについてのＥＣ２５％のＬＣ５０およびＬＣ９０は、０．００２９ｍｇ／ｃｍ２（９９％信頼区間は０．００１９〜０．００３８ｍｇ／ｃｍ２）および０．０１４ｍｇ／ｃｍ２（９９％信頼区間は０．０１０８〜０．０２０３ｍｇ／ｃｍ２）であった。ＥＣ２５％は、低用量で２種類のダニ種の成虫期に対して、＜８０％のコントロールとなった。
【０１１７】
殺卵活性
以下の製品の殺卵効果を、ナミハダニおよびリンゴハダニの卵について決定した：６種類の濃度のＥＣ２５％（０．０６２５、０．１２５、０．２５、０．５、１および２％）、ＡＩ０．７％のニームオイル、ＡＩ１％の殺虫石鹸および０．００６％のアバメクチンおよび水（対照）。
２０匹の成虫の雌のT. urticaeを、ライマメの葉から切り取った２ｃｍ径のリーフディスクへ移し、産卵のために４時間放置した。雌のP. ulmiを、産卵のために２ｃｍ径のリンゴの葉のリーフディスク上に２４時間放置した。少なくとも２０個の卵／ディスクを産卵したとき、成虫のダニを柔らかいブラシで取り除いた。リーフディスクを小さな（４ｃｍ径）プラスチック製ペトリ皿に置いた湿った柔らかい消毒綿の上に保持した。３枚のリーフディスクを、各処理または殺ダニ剤適用のために調製した。リーフディスクをスプレーし、ペトリ皿を処理前および後に量り、および処理後成虫についてのバイオアッセイで用いたスライドについても保管した。この実験手順を、処理期間をブロックとみなす完備型ブロックデザイン法で３連続日繰り返した。
【０１１８】
孵化率を、毎日そして処理後１０日間、リーフディスクに残っている卵の数および存在する生きたおよび死んだ若虫の数を数えることにより、評価した。パーセント孵化率を、生きた若虫のみについて決定した。若虫は、動作が単毛のブラシを用いた反復の優しい精査後に観察されない場合、死んでいるとみなす。すべての若虫（生きたおよび死んだ）を、リーフディスクから毎日除去した。パーセント孵化率（リーフディスク上の若虫の数／卵の合計数×１００）をSAS（登録商標）ソフトウェア（SAS Institute, 1988）を用いてａｒｃｓｉｎ√ｐに変換し、そしてＡＮＯＶＡ統計分析の対象にした。
【０１１９】
ナミハダニについての孵化率は、アバメクチン（孵化率８．０％）およびニームオイル（２．１％）により、著しく減少した（図１２）。孵化率は、それぞれ１．０および２．０％濃度のＥＣ２５％で６７および４０％に減少し、殺虫石鹸で６１．３％に減少した。リンゴハダニについての孵化率は、殺虫石鹸（孵化率２７．２％）、アバメクチン（１１．０％）およびニームオイル（１４．２％）の推奨用量による対照処理と比較して、著しく減少した（図１３）。
【０１２０】
成虫のナミハダニを用いた残効バイオアッセイ
径が２ｃｍあるマメの葉のリーフディスクを、VEGA 2000スプレーヤー（Thayer & Chandler Co., Lake Bluff, Illinois, USA）を用いて、以下の各溶液６．２５ｍｌを流出するまで０．４２ｍｇ／ｃｍ２で両面スプレーした：２、４、８、および１６％の99B-245、推奨用量のＡＩ０．０３７％のジコホル(dicofol)（Kelthane（登録商標）35WP、Rohm and Haas Co., Philadelphia, PA, USA） および水（対照）。各処理は、８枚のディスクからなった。処理の１時間後、１０匹のハダニを各ディスクに移した。死亡率を、リーフディスクにダニを移した４８時間後に評価した。手順を３連続日に３回繰り返した。  
【０１２１】
２、４、８および１６％濃度のＥＣ２５％は、処理の１時間後にダニをマメの葉に導入した場合、成虫のハダニにそれぞれ２３．０、１８．３、１３．９および３２．５％の死亡率をもたらした（図１４）。ジコホルの残効性は、ＥＣ２５％濃度のどれよりも著しく高かった（死亡率９９．５％）。
【０１２２】
ＥＣ２５％は、成虫のナミハダニおよびリンゴハダニをコントロールするために、殺虫石鹸および合成殺ダニ剤アバメクチンと同様に効果的であった。ＥＣ２５％は、孵化率を減少させたが、アバメクチンまたはニームオイル程効果的ではなかった。しかしながら、ニーム混合物などの植物から採った薬品が、様々な害虫に対して成長抑制特性を示し（Rembald, 1989）、およびプレゴンがsouthern armyworm、Spodoptera eridaniaの幼虫の成長を減少させた（Grunderson et al., 1985）ことから、精油製品により処理された発生した若虫の生存能力を決定するために、これらの調査を続けることが重要であろう。
我々はさらに、成虫のダニを処理の１時間後導入した場合、死亡率は対照の死亡率と統計的に同程度であったことを確認した（図１４）。ＥＣ２５％などの植物から採った薬品は、より有毒なまたは不適合な製品の代替物であってもよい。低い残効性を有する接触殺ダニ剤は、天敵個体群の予定された導入前または天敵のいないとき、すなわち昼行性捕食寄生者または捕食者がいない夜間における処理として、局所的な発生に対する処理に用いることができる。
【０１２３】
植物精油は植物毒素であってもよい（Isman, 1999）。ＥＣ２５％のために用いたオイルを、数種類の食用および観賞用植物についてその植物毒性効果について評価し、結果は、推奨用量で、すなわち０．５％で、被験植物の葉および花への観察可能な効果が無かったことを示す（H. Chiasson, 未公開結果）。
【０１２４】
例ＸＩ：精油抽出物の殺虫有効性（乳剤製剤）
有効性試験（実験室および小規模温室試験）を、以下の生物について、本発明の乳剤製剤（２５％のＥＣのアカザオイルは以下のものを含む：精油抽出物２５％；Rhodopex CO-436 ２．５％；Igepal CO-430 ２．５％；およびTHFA ７０％）を用いて行なった：モモアカアブラムシ（Myzus persicae）、ミカンキイロアザミウマ（Frankliniella occidentalis）、オンシツコナジラミ（Trialeurodes vaporariorium）ならびに捕食寄生者オンシツツヤコバチ（Encarsia formosa）。
【０１２５】
すべてのバイオアッセイを、カナダ、ケベック州Saint-Jean-sur-RichelieuのHorticultural Research and Development Center（HRDC）of Agriculture and Agri-food Canadaの実験室にて行なった。
【０１２６】
Ａ．モモアカアブラムシ（Myzus persicae (Sulz.））についてＥＣ２５％および市販の生物殺虫剤を用いた実験室および温室における接触バイオアッセイ
実験室バイオアッセイ
５種類の濃度（０．１２５、０．２５、０．５、１および２％）のＥＣ２５％製剤を、市販の調製物である０．５％のNeem Rose Defense（登録商標）（ＥＣ９０％の疎水性ニームオイル）、１％のSafer's Trounce（０．２％ピレトリンを含むＥＣ２０％）および水（対照）と比較した。各処理を１２回繰り返し、各反復は、１０ｍｌの水で満たしたプラスチック製Aqua-Pick（登録商標）（切り花の茎を湿らせておくために花屋が使うチューブ）に入れられたVerbena speciosa「イマジネーション（Imagination）」の２月齢の芽（１０〜１５ｃｍ）からなった。アクアピックを、換気を可能にするために網かけの側面および上面に改造した１Ｌ容量の透明なプラスチック容器の底に置かれた発泡スチロールのブロックに固定した。
【０１２７】
モモアカアブラムシ（Myzus persicae（Sulz.））を、温室コロニー内で維持している飼育用かごから、プラスチック容器に収集し、１０匹の成虫を各Verbenaの芽に移した。芽を、２０ｍｌ容器搭載のVEGA 2000（登録商標）ペイントブラシスプレーヤー（Thayer & Chandler Co., Lake Bluff, Illinois, USA）を用いて、排出チャンバー下８ｐｓｉで約１５秒間（芽全体を被うのに十分な長さ）スプレーした。各芽およびプラスチック容器を、２４℃、相対湿度６５％および１６Ｌ：８Ｄ光周期の生育チャンバで保管した。全手順を４回繰り返した。
【０１２８】
死亡率を、処理の４８時間後、小さなブラシを用いてアブラムシを突くことにより動作について評価した。動作がない場合、死亡と記録した。ＥＣ２５％、Neem Rose Defense（登録商標）およびSafer's Trounce（登録商標）の相対的な有効性を評価するため、パーセンテージ死亡率のデータをSAS（登録商標）ソフトウェア（SAS Institute 1988）を用いてａｒｃｓｉｎ√ｐに変換し、そしてＡＮＯＶＡ統計分析の対象にした。ＬＣ５０およびＬＣ９０（ｍｇ／ｃｍ２のＡＩ）を、POLO-PC（登録商標）ソフトウェア（LeOra Software, 1994）を用いてプロビット解析により、死亡率の結果を用いて計算した。堆積した活性物質の量についてのデータが入手できなかったため、製品濃度（％）を使用した。
【０１２９】
結果は、２．０％濃度のＥＣ２５％が、モモアカアブラムシコントロールにおいて、有意差はなかったが、１％濃度のＥＣ２５％（７１．７％）およびSafer's Trounce（５５．２％）よりも、より効果的（死亡率９２．３％）であることを示した（図１５）。この処理間の明確な差異の欠如は、被験アブラムシ数（ｎ）が少なかったためであろう。０．５％以下の濃度のＥＣ２５％およびNeem Rose Defense（登録商標）による処理は、アブラムシの死亡率＜５０％という結果になり、結果は、水（対照）により得られた結果と有意差はなかった。 
【０１３０】
モモアカアブラムシについてのＥＣ２５％のＬＣ５０およびＬＣ９０は、それぞれ０．６３（％濃度）（信頼区間０．４７％〜０．７９％）および１．８４％（信頼区間１．３９％〜２．９５％）であった（図１６）。
【０１３１】
温室バイオアッセイ
３種類の濃度（０．２５、０．５および１％）のＥＣ２５％製剤、０．５％のNeem Rose Defense（登録商標）（ＥＣ９０％の疎水性ニームオイル）、１％のSafer's Trounce（登録商標）（０．２％ピレトリンを含むＥＣ２０％）および水（対照）を、モモアカアブラムシ（Myzus persicae (Sulz.））について試験した。Pro-Mix BX（登録商標）で満たした小さなプラスチック製挿入(insertions)セル（鉢植え用の植物に用いられる）で成長させた２月齢のVerbena speciosa「イマジネーション」（１０〜１５ｃｍ）植物１５体（反復）を、各処理に使用した。各挿入セルを、換気を可能にするために網かけの側面および上面がある１Ｌ容量の透明なプラスチック容器の底に接着した。
【０１３２】
モモアカアブラムシを、ＨＲＤＣ温室内で維持している飼育用かごから、プラスチック容器に収集し、１０匹の成虫を各植物に移した。植物全体を、２０ｍｌ容器搭載のVEGA 2000（登録商標）ペイントブラシスプレーヤー（Thayer & Chandler Co., Lake Bluff, Illinois, USA）を用いて、排出チャンバー下８ｐｓｉで平均１５秒間スプレーした。スプレーは、実験期間中３回、すなわち０、７および１４日目に行なわれた。スプレーした植物入りの容器を、実験期間中温室内の日陰で保持した。
【０１３３】
計数を、７、１４日（スプレー前）および２１日目に、各処理中、１５本のうち５本を解体することにより行なった。アブラムシは、数が少ない場合（＜５０）、個々に数えた。
多数の場合、植物を、白黒のグリッド上のせっけん水を満たした透明な２５０ｍｌ容器の上で振り、存在するアブラムシの数を評価した。植物の葉の表面（ｃｍ２）をエリアメーターLI-3100（LI-COR Inc., Lincoln, Nebraska, USA）で測定し、総数を、各処理についてアブラムシ数／ｃｍ２に平均化し、異なる処理の有効性を評価するために、SAS（登録商標）ソフトウェアを用いて、ＡＮＯＶＡ分析のために平方根（ｘ＋０．５）に変換した。処理内の総数は、サンプル日間で有意差はなかった（Ｐ＝０．３６４７）ので、処理内の結果を、全実験のためにプールしおよび平均化した。
【０１３４】
すべての濃度のＥＣ２５％およびSafer's Trounce（登録商標）は、水（対照）よりも、アブラムシのコントロールにおいてより効果的だった（図17）。０．５％および１．０％のＥＣ２５％およびSafer's Trounceは、Neem Rose Defenseおよび０．２５％のＥＣ２５％よりも、アブラムシの数/ｃｍ２を減少させるのに著しくより効果的だった。０．５％および１．０％濃度のＥＣ２５％は両方、有意差はないが、Safer's Trounce（登録商標）（アブラムシ０．９匹／ｃｍ２）よりも効果的だった（それぞれアブラムシ０．５匹／ｃｍ２およびアブラムシ０．０匹／ｃｍ２）。
【０１３５】
Ｂ．ＥＣ２５％製剤および２種類の市販の生物殺虫剤を用いたミカンキイロアザミウマ（Frankliniella occidentalis（Perg.））についての実験室および温室内での接触バイオアッセイ
実験室バイオアッセイ
６種類の濃度（０．０５、０．１８、０．１２５、０．２５、０．５および１％）のＥＣ２５％製剤、０．７％のNeem Rose Defense（登録商標）（ＥＣ９０％の疎水性ニームオイル）、１％のSafer's Trounce（０．２％ピレトリンを含むＥＣ２０％）および水（対照）を、ミカンキイロアザミウマ（ＷＦＴ：Frankliniella occidentalis（Perg.））について試験した。ＷＦＴを、感染されたライマメの葉を白い紙の上で軽くたたくことにより、プラスチック容器に収集した。１０匹のＷＦＴ（成虫または第３または第４齢の若虫）を、閉じた２５０ｍｌ容量の透明なプラスチック容器に移した。濡らした歯科用綿を、水源として用いるために、ふたを通じて挿入した。４個の反復を各処理について用意した。
【０１３６】
容器を、２０ｍｌ容器搭載のVEGA 2000（登録商標）ペイントブラシスプレーヤー（Thayer & Chandler Co., Lake Bluff, Illinois, USA）を用いて、排出チャンバー下６ｐｓｉで１５秒間スプレーした。容器を、スプレー直前および直後に量り、堆積させた有効成分の量をｍｇ／ｃｍ２で計算した。容器を、２４℃、相対湿度６５％および１６Ｌ：８Ｄ光周期の成長室内で保管した。全手順を４回繰り返した。
【０１３７】
死亡率を、処理の２４時間後、双眼顕微鏡下で小さなブラシを用いたＷＦＴを突くことにより評価した。動作がない場合、死亡と記録した。ＥＣ２５％の有効性を、Neem Rose Defense（登録商標）およびSafer's Trounce（登録商標）と比較し、データをSAS（登録商標）ソフトウェア（SAS Institute 1988）を用いてａｒｃｓｉｎ√ｐに変換し、そしてＡＮＯＶＡ統計分析の対象にした。ＬＣ５０およびＬＣ９０（ｍｇ／ｃｍ２の有効成分で）を、POLO-PC（登録商標）ソフトウェア（LeOra Software, 1987）を用いてプロビット解析により、死亡率の結果を用いて計算した。
【０１３８】
０．５％および１．０％のＥＣ２５％製剤は、ＷＦＴのコントロールにおいて、Safer's Trounce（登録商標）（死亡率８２．７％）を除くすべての他の処理よりも、著しくより効果的だった（それぞれ死亡率９８．８％および９５．８％）（図１８）。０．２５％のＥＣ２５％は、対照（１０．８％）よりも著しく高い死亡率（６３．７％）をもたらしたが、残りすべての処理はそうではなかった。アザミウマについてのＥＣ２５％のＬＣ５０およびＬＣ９０は、それぞれ０．００３４ｍｇ／ｃｍ２（信頼区間：０．００２７〜０．００３９ｍｇ／ｃｍ２）および０．００７９ｍｇ／ｃｍ２（信頼区間：０．００６７〜０．００９９ｍｇ／ｃｍ２）と決定された（図１９）。
【０１３９】
温室バイオアッセイ
２種類の濃度（０．２５％および１％）のＥＣ２５％製剤、０．７％のNeem Rose Defense（登録商標）（ＥＣ９０％の疎水性ニームオイル）、１％のSafer's Trounce（登録商標）（０．２％ピレトリンを含むＥＣ２０％）および水（対照）を、温室設定内で、ミカンキイロアザミウマ（ＷＦＴ：Frankliniella occidentalis（Perg.））のコントロールにおける相対有効性を評価するために使用した。１０日齢のライマメ植物（Phaseolus種）を、各処理について調製した。各植物の葉１枚および子葉を除去し、網かけの側面および上面がある透明なプラスチック容器（１Ｌ容量）の底に接着したPro-Mix BX（登録商標）入りのプラスチック製挿入セル（鉢植え用の植物に用いられる）で生育した植物あたり葉１枚に保持した。
【０１４０】
ＷＦＴを、感染されたライマメの葉を白い紙の上で軽くたたき、小さなブラシで持ち上げることにより、プラスチック容器に収集した。１０匹の成虫のアザミウマ（第３または第４齢の幼虫）を、各植物の葉各１枚／挿入セルに移し、２０ｍｌ容器搭載のVEGA 2000（登録商標）ペイントブラシスプレーヤー（Thayer & Chandler Co., Lake Bluff, Illinois, USA）を用いて、排出チャンバー下６ｐｓｉで滴下点までスプレーした。スプレーは、０、８および１４日目に行なわれた。各反復／プラスチック容器を、実験期間中温室内の日陰で保持した。
【０１４１】
計数を、８および１４日（スプレー前）ならびに２１および２８日目に行なった。植物全体に存在するすべての生存期ステージについて、双眼顕微鏡下で計数を行い、葉の表面積を、一連の前もって測った手作りの葉のサイズのパターンと比較することにより測定した。実験最終日（28日目）に葉を切断し、その表面積をエリアメーターLI-3100（LI-COR Inc., Lincoln, Nebraska, USA）で測定した。総数は、各処理についてアザミウマの平均数／ｃｍ２として計算した。処理を比較するために、平均計数を、対照植物に存在するアザミウマのパーセンテージとして、計算した：
（処理した植物におけるｎ／ｃｍ２  ／  対照植物におけるｎ／ｃｍ２）×１００
【０１４２】
対照処理はしたがって、ゼロの値を有し、および他の処理は、正または負の値を有し、対照処理に関して、より多数のまたはより少数のアザミウマがそれぞれ存在したことを示すものとした。  
【０１４３】
２８日目の実験の最後に、１．０％濃度のＥＣ２５％で処理した葉は、対照で処理した葉よりＷＦＴが６９．３％少なかったのに対し、Safer's Trounce（登録商標）で処理した葉は、ＷＦＴが１０１．１％多かった（図２０）。Neem Rose Defense（登録商標）で処理した葉は、２８日目に対照よりもアザミウマがわずかに多かった（１９．３％）。０．２５％濃度のＥＣ２５％で処理した葉は、２８日目に対照よりもアザミウマが５２．３％多かった。  
【０１４４】
Ｃ．ＥＣ２５％および市販の殺虫剤を用いたオンシツコナジラミ（Trialeurodes vaporariorium（Westw.））についての実験室における接触バイオアッセイ
実験室バイオアッセイ
５種類の濃度（０．０６２５、０．１２５、０．２５、０．５および１％）のＥＣ２５％製剤、０．７％のNeem Rose Defense（登録商標）（ＥＣ９０％の疎水性ニームオイル）、１％のSafer's Trounce（登録商標）（０．２％ピレトリンを含むＥＣ２０％）、０．０４４％のThiodan（登録商標）（50WP）および水（対照）を、オンシツコナジラミ（Trialeurodes vaporariorium（Westw.））のコントロールにおける相対的な有効性を評価するために使用した。コナジラミの成虫を、ＨＲＤＣ温室から昆虫吸引器を用いて収集し、カードあたり少なくとも２０匹の成虫を得るために、吸引器をカード上で空にすることにより、Tangle-Trap（登録商標）（Gemper's Co.）をスプレーした黒い５ｃｍ×７．５ｃｍのプラスチックカードに接着させた。カードをスプレー前にすべての死亡したおよび不動のコナジラミを除去するために、双眼顕微鏡下で観察した。活性のコナジラミのみを実験のために保持した。処理あたり４枚のカードを使用した。
【０１４５】
各カードを、排出チャンバーのスプレーノズルから１４．５ｃｍの距離のフレームに載せたBADGER 100-F（登録商標）（Omer DeSerres Co., Montreal, Canada）ペイントブラシスプレーヤーを用いて、３００μ１の乳液を６ｐｓｉでスプレーした。カードをスプレー直前および直後に量り、堆積した有効成分量をｍｇ／ｃｍ２で計算した。カードを排出チャンバー下で乾燥させ、底に湿った発泡体を置いた閉じられた５Ｌ容量の透明なプラスチック容器内の発泡スチロールの棚に横に置き、湿度を高く保った（相対湿度＞９０％）。プラスチック容器を、２４℃および１６Ｌ：８Ｄ光周期の成長室内で保管した。この手順を３回繰り返した。
【０１４６】
死亡率を、処理の２０時間後、双眼顕微鏡下で単毛のブラシを用いてコナジラミを静かに精査することにより、評価した。突いた後の動作（触角、足、羽）の欠如を、死亡と記録した。ＥＣ２５％および２種類の市販の生物殺虫剤、Neem Rose Defense（登録商標）およびSafer's Trounce（登録商標）および合成殺虫剤Thiodan（登録商標）の相対有効性を、死亡率データをａｒｃｓｉｎ√ｐに変換し、そしてＡＮＯＶＡ分析の対象にすることにより、SAS（登録商標）ソフトウェア（SAS Institute 1988）を用いて比較した。ＬＣ５０およびＬＣ９０（ｍｇ／ｃｍ２の有効成分で）を、POLO-PC（登録商標）ソフトウェア（LeOra Software, 1987）を用いてプロビット解析により計算した。
【０１４７】
０．５％および１．０％のＥＣ２５％製剤は、オンシツコナジラミのコントロールにおいて、Safer's Trounce（登録商標）（死亡率９８．０％）を除くすべての他の処理よりも、著しくより効果的だった（それぞれ死亡率９８．９％および１００．０％）（図２１）。０．１２５％濃度のＥＣ２５％製剤およびNeem Rose Defense（登録商標）は、対照処理よりも著しく効果的だったが、０．２５、０．５および１．０％濃度のＥＣ２５％およびSafer's Trounce（登録商標）よりも著しく効果が低かった。Thiodanおよび０．０６２５％濃度のＥＣ２５％は、対照処理と同様に効果的だった。
ＬＣ５０およびＬＣ９０は、それぞれ０．００６６ｍｇ／ｃｍ２（信頼区間：０．００５４〜０．００７６ｍｇ／ｃｍ２）および０．０１４１ｍｇ／ｃｍ２（信頼区間：０．０１２１〜０．０１７２ｍｇ／ｃｍ２）だった（図２２）。
【０１４８】
Ｄ．ＥＣ２５％および市販の生物殺虫剤を用いた捕食寄生者オンシツツヤコバチ（Encarsia formosa）についての実験室における接触バイオアッセイ
実験室バイオアッセイ
４種類の濃度（０．０６２５、０．１２５、０．２５および０．５％）のＥＣ２５％製剤、０．７％のNeem Rose Defense（登録商標）（ＥＣ−９０％）、１．０％のSafer's Trounce（登録商標）（ＥＣ２０．２％）および水（対照）を、捕食寄生者Encarsia formosa（ＥＦ）（Koppert Co. Ltdから入手）について試験した。ＥＦを、２４℃および１６Ｌ：８Ｄ光周期の成長室内に発生するまで保持した。
【０１４９】
６０匹の新しく発生した成虫のＥＦを、口吸引器で、２０ｍｌ容量のプラスチック製Solo（登録商標）カップへと移した。カップを、１４．５ｃｍの固定距離のフレームに載せたBADGER 100-F（登録商標）ペイントブラシスプレーヤー（Omer DeSerres Co., Montreal, Canada）を用いて、２５０ｍ１の乳液を６ｐｓｉでスプレーした。Solo（登録商標）カップをスプレー直前および直後に量り、堆積した有効成分量をｍｇ／ｃｍ２で計算した。スプレーしたら、ＥＦを小さなブラシでSolo（登録商標）カップから食料源として５％砂糖溶液で湿らせたフィルターペーパーで内側を覆った小さな透明のプラスチック製ペトリ皿（１０匹のＥＦ／ペトリ皿）へ静かに移した。各処理について４個の反復を調製した。そしてペトリ皿をトレイに載せ、２４℃、相対湿度６５％および１６Ｌ：８Ｄ光周期の成長室内で保管した。全手順を３回繰り返した。
【０１５０】
死亡率を、処理の２４時間後、双眼顕微鏡下でＥＦを観察することにより評価した。
動作の欠如を、死亡と記録した。ＥＣ２５％の効果を、ａｒｃｓｉｎ√ｐに変換し、そしてSAS（登録商標）ソフトウェア（SAS Institute 1988）を用いてＡＮＯＶＡ分析の対象にした死亡率データを用いて、Neem Rose DefenseおよびSafer's Trounceと比較した。 
【０１５１】
０．０６２５〜０．５％の範囲の濃度のすべてのＥＣ２５％製剤は、１％のSafer's Trounce（登録商標）よりも著しく効果が低かった（７１．９％）（図２３）。ＥＣ２５％のすべての濃度およびNeem Rose Defense（登録商標）製剤からの結果は、対照と有意差はなかった。
これらの結果は、ＥＣ２５％の推奨用量（０．５％）を、生物コントロール因子、Encarsia formosaと共に、安全に使用することができることを示す。
【０１５２】
例ＸＩＩ：精油抽出物の殺菌有効性（乳剤製剤）
Ａ．植物病原菌、Botrytis cinereaに起因する灰色かび病の温室トマトへの効果
トマト（品種Trust）を、温室トマトの生産に一般に用いられている慣行に従って、播種および生育した。播種の約２月後、病斑を、茎（５病斑／植物）に作製し、３×１０６個のB. cinerea胞子の懸濁液を、病斑あたり１ｍｌ接種した。
【０１５３】
以下の処理について評価した：１）水のみの対照（−）；２）B. cinereaとの対照（＋）；３）Nova（登録商標）（０．３ｇ／ｌ）；４）Iprodione（登録商標）（Rovral １．０ｇ／ｌ）、５）０．１２５％濃度のＥＣ２５％（精油抽出物２５％；Rhodopex CO-436 ２．５％；Igepal CO-430 ２．５％；およびTHFA ７０％を含む）；６）０．５０％濃度のＥＣ２５％；７）０．７５％濃度のＥＣ２５％；８）M. ochracea（P130A）（５×１０８胞子／ｍｌ）；９）Rootshield（登録商標）（０．６ｇ／ｌ）。実験デザインは、８ブロックを用いた乱塊法であった。処理を、B. cinereaの病斑の接種の１および８日後に適用した。
【０１５４】
病症を、以下の被害度指数にしたがって評価した：１＝症状なし、２＝病斑周辺の壊死（組織の褐変）、３＝進行した壊死および壊死帯における胞子の存在、４＝進行した壊死、壊死帯における胞子の存在および灰色かび病形成の開始、５＝よく発達した灰色かび病および植物の死。症状の被害度は、植物への接種の３および５週間後に評価した。実験を繰り返し、処理の効果を分散分析（ＡＮＯＶＡ）により分析し、および平均を最小有意差検定（ＬＳＤ）を用いて比較した。
【０１５５】
統計分析は、処理間の有効性に有意差があることを立証した（図２４）。対照植物は、３５の対照植物中２６における病気症状の平均被害度を立証した。すべての他の処理からの植物は、接種１日後または処理初日に、対照植物より著しく低いレベルの被害度を示した。２種類の微生物殺菌剤RootshieldおよびP1304は、処理の８日後、２５．３３〜２１．６７の平均被害度であり、病気を著しくコントロールしなかった（図２４）。植物性バイオ農薬ＥＣ２５％で処理した植物は、市販の製品、NovaおよびRovralよりも、病症のコントロールについて、より効果が低かった。しかしながら、全３種類の濃度のＥＣ２５％（ＡＩ０．１２５、０．２５および０．５％）は、病症を減少させ、被害度指数は、ＥＣ２５％で処理したそれぞれの植物について、対照植物よりも６０、４４および３７％低かった。被害度指数は、NovaおよびRovralそれぞれで３８および３２％減少した（図２５）。
【０１５６】
Ｂ．温室キュウリにおける植物病原菌、Erysiphe cichoracearumおよびSphaerotheca fuligineaに起因するウドンコ病に対するＥＣ２５％の効果
ウドンコ病に関与する菌類は、宿主がいなければ生存できない完全寄生虫である。接種に必要な接種材料を生産するために、感染されたキュウリの葉を、２００２年７月に、栽培者から収集した。これら葉に存在する分生子を、実験温室内で生育したキュウリ植物の葉に、キュウリ植物（品種Straight 8）の播種の１〜２月後に移した。
【０１５７】
以下の処理を評価した：１）水で処理したネガティブコントロール；２）病原体E. cichoracearumおよびS. fuligineaで処理したポジティブコントロール；３）Nova（登録商標）（０．３ｇ／１）；４）Benlate（登録商標）＋Manzate（登録商標）（１．２ｇ／ｌおよび４．ｇ／ｌ）；５）ＡＩ０．１２５％のＥＣ２５％（精油抽出物２５％；Rhodopex CO-436 ２．５％；Igepal CO-430 ２．５％；およびTHFA ７０％を含む）；６）ＡＩ０．５０％のＥＣ２５％；７）ＡＩ０．７５０％のＥＣ２５％；８）鉱物油。実験デザインは、７ブロックを用いたランダム化完備ブロック計画法であった。既知のまたは測定可能な量の接種材料の完全菌類寄生者を接種することはほとんど不可能であることから、常に植物の感染レベルの変動がある。ウドンコ病の最初の評価を、温室内の接種したすべての植物について行なった。感染のパーセンテージを分析し、同レベルの感染を示す８植物をグループ化した（ＳＥ＜１．５、図２６参照）。
【０１５８】
ウドンコ病の被害度もまた、各個々の葉について、被害度指数を用いて、処理の適用の７日後に評価し、各植物について平均被害度として報告した。全部の実験を数日後に繰り返した。処理の効果は分散分析（ＡＮＯＶＡ）により分析し、および平均を、最小有意差検定（ＬＳＤ）で比較した。
【０１５９】
統計分析は、処理間に効果の差異があることを立証した（図２７）。
実際、病気発生の４５および３９％の増加が、対照植物（水および病気）において観察された。様々な製品で処理したすべての植物は、対照植物と比較して、病気被害度のパーセンテージの著しくより低い増加を示した。植物性バイオ農薬ＥＣ２５％は、病気のコントロールについて、市販の殺菌剤Novaと同様に効果的であった。０．５０および０．７５％濃度のＥＣ２５％は、Novaよりも優れたコントロールを立証し、Novaについての４．５％と比較して、両方の濃度についてそれぞれ僅か２および２．５％の病気症状の増加を許した。 
しかしながら  植物毒性が、それら２種類の濃度のＥＣ２５％で処理した植物において観察された。  
【０１６０】
例ＸＩＩＩ：土壌生息害虫のコントロールにおける精油抽出物の効果
Ａ．ミカンキイロアザミウマの成虫の土壌発生における０．５％のＥＣ２５％による土壌処理の効果
レタス植物を、１２ｃｍ径のプラスチックポットに移植し、温室内で６週間生育した。植物は、全てのステージのアザミウマFrankliniella occidentalis Pergandeにひどく感染されたものであり、良好な管理慣行の要求どおりに水および肥料を与えた。次に、レタス植物を、地表面で切断し、ポットを、有効成分０．５濃度のＥＣ２５％の調製物（精油抽出物２５％；Rhodopex CO-436 ２．５％；Igepal CO-430 ２．５％；およびTHFA ７０％を含む）を適用した。
【０１６１】
５種類の容積、ポットあたり２５ｍｌ、１６．７ｍｌ、１３．３ｍｌ、１０ｍｌ、および６．６７ｍｌのＥＣ２５％を適用した。これらは、それぞれ１５００ｌ／ｈａ、１０００ｌ／ｈａ、８００ｌ／ｈａ、６００ｌ／ｈａおよび４００ｌ／ｈａの容積を表す。合計１０ポットを、容量あたりスプレーし、対照ポットを、２５ｍｌの水道水でスプレーした。適用は、農薬適用に必要な空気圧を提供するための空気の吹き出し口に接続したバジャー(badger)スプレーヤーを用いて行った。処理後直ちに、ポットを１４．５ｃｍ径のプラスチックペトリ皿のカバーで覆った。カバーの内側の表面に、薄層のタングルフット(tanglefoot)昆虫接着剤を塗り、結合部は、ポット内の土壌から発生した成虫の脱走またはペトリ皿への異物の導入を防ぐために、パラフィンで完全に封止をした。処理を２００２年７月７日に適用し、発生した成虫アザミウマを、処理の３、５、７、１０および１２日後に数えた。各観察時において、発生する成虫を接着剤から除去し、プラスチックポット上のカバーを交換し、そしてパラフィンで封止をした。  
【０１６２】
処理後２週間の期間にわたって、発生した成虫の総数を、ＡＮＯＶＡを用いて解析し、各処理についての平均を、フィッシャーのＬＳＤ検定を用いて分類した。  
ほとんどの成虫のアザミウマは、処理後１週間の間に発生し、これは、周囲温度に応じて２〜８日で変動するサナギの生存期間に対応する（図２８）。土壌から発生した成虫のアザミウマの合計数における処理の効果は、統計的に極めて有意である（Ｆ＝５．７１；ｄｌ＝５；Ｐ＜０．０００１）。すべての処理は、対照と比較して、アザミウマの発生を著しく減少させた。処理後３日目、すべての他の処理と比較して、発生する成虫のアザミウマの数の重要な減少が１５００ｌ／ｈａ処理において観察された。すべての他の日付において、１５００ｌ／ｈａ処理が最良の処理であり、成虫のアザミウマの発生において最も大きな減少をもたらした。
【０１６３】
Ｂ．芝の土壌生息害虫のコントロールのための、ＥＣ２５％およびマイクロエマルジョン製剤の使用
ｉ）European chafer、Rhizotrogus majalisについての、ＥＣ２５％を用いた実験室試験
ＥＣ２５％製剤（精油抽出物２５％；Rhodopex CO-436 ２．５％；Igepal CO-430 ２．５％；およびTHFA ７０％を含む）を、第３齢のR. majalisについて試験した。昆虫を、オンタリオ州アーンプライアー(Arnprior)から収集し、試験開始まで、４℃で土壌を入れた容器に保持した。草を、６区画に分けられたプラスチックの播種トレイで生育した。各区画内の土壌は、鉢植え用の土壌１部：砂１部からなり、深さは約５ｃｍである。草の混播用種子は、Kentucky Blue６５％、Annual Rye Grass２０％およびFescue１５％からなり、昆虫の添加２〜３週間前に、区画あたり１．５ｇを分配した。
【０１６４】
１０匹の第３齢のR. majalisを各区画に置き、トレイあたり合計６０匹の幼虫になるようにした。３反復のトレイを、２種類の別の実験に用いた。幼虫をトレイに加えてから１〜２日後、処理を開始した。各ＥＣ２５％処理濃度；０．０６２５、０．１２５、０．２５、０．５および１％を、１００ｍｌの水中に０．２５、０．５、１、２および４ｍｌの原料ＥＣをそれぞれ添加することにより調製した。対照は、精油を除いた、ＥＣ無添加(blank)の０．３７５ｍｌ製剤であった。トレイに、処理後７日の期間、１日１回水を与えた。１週間後、各区画から幼虫の生存を決定するためにサンプルを取った。土壌サンプルを、両方の試験後各区画から採取し、ｐＨ（ASTM, 1989）および有機物含有量（ASTM, 1987）の両方について分析した。
【０１６５】
プロビット解析を、ＥＣ２５％についてＬＣ５０値を決定するために、２種類のEuropean chafer試験からのデータと共に使用した。各試験内および各試験間のＬＣ５０値の比較を、Ｚ検定を用いて行った。
９０％のR. majalisの幼虫が０．０６２５％濃度のＥＣ２５％で生存し、１０％が１％のＥＣ２５％で生存した（図２９）。両方の試験からのパーセント死亡率を、ＬＣ５０値を計算するために使用した（図３０）。すべての幼虫が暴露期間終了時に占めていたわけではないため、２つの異なる値を各試験について計算した。
【０１６６】
各試験についての第一のＬＣ５０は、試験終了時に各処理の反復において見出された実際の幼虫の数内での死亡率が基となっている（図３０）。第二のＬＣ５０は、生物体の可能な劣化のために、確認または居場所を見つけることができなかったものについて、各処理の反復内で実験の開始時と終了時に１０匹の幼虫が存在したという仮定に基づき計算する。
【０１６７】
Ｚ検定を用いたＬＣ５０の比較は、各試験内において計算したＬＣ５０に有意差はなかったことを示す（ｚ＜０．８８５、ｚの臨界値＝１．９６）。試験間においては、第一のＬＣ５０（発見した実際の幼虫の数を基にした）を比較したとき、有意差（ｚ＝１．５８７、ｚの臨界値＝１．９６）はないことが判明した。処理あたり３０匹の幼虫を基にしたＬＣ５０を、試験間で比較したとき、有意差（ｚ＝２．２３３、ｚの臨界値＝１．９６）が見出された。２種類の試験についての平均ＬＣ５０および標準誤差を、試験１および試験２からの２つのＬＣ５０を平均化することにより、０．４６６±０．１２２％のＥＣ２５％として計算され、これらに、有意差はなかった。
土壌有機物含有量およびｐＨ。土壌有機物含有量は、８．９〜１１の範囲であり、第一の試験において平均９．１および第二の試験において平均１０．５であると決定された（図３１）。土壌ｐＨは、４．９〜５．０の範囲であり、第一の試験において平均４．９４および第二の試験において５．０２であった。これらの値は、先のR. majalis試験において測定された値と一致した。
【０１６８】
ｉｉ）European chafer、Rhizotrogus majalisについてマイクロエマルジョン製剤を用いた実地試験
この研究の目的は、European chafer、Rhizotrogus majalisの存在における、２種類のChenopodium ambrosioidesからの精油抽出物のマイクロエマルジョン製剤（ＭＥＦ）、ＭＥＦ１およびＭＥＦ２の散布適用の効果を測定することである。
【０１６９】
試験マイクロエマルジョン製剤は、以下のものを含む。
【表１２】
2005536495.tif 000013
【０１７０】
実験を、オンタリオ州のGuelph Turfgrass Institute（GTI）の芝生について行い、芝は週に１回刈り、および注水を与えた。実験デザインは、４個の反復および8種類の処理によるランダム化完備ブロック計画であった。プロットは、３ｍ×３ｍであった。また、試験した処理については、図３２に一覧表がある。処理を、２００２年８月２７日、European chaferの前処理評価直後、水０．２５Ｌ／ｍ２をスプレーヤーにより適用した。European chafersは、処理を適用したとき第２齢で、実験終了時までに第３齢になった。生きたEuropean chafersは、ゴルフコースホールカッター（１５．２ｃｍ、‘turf mender’）を用いて数えた。５個のこぶを各プロットから採取した。除去したら、こぶを壊し、chaferの数を記録した。最後のchafer計数は、ソッドカッター(sod-cutter)を用いて行った:各プロットの一方から反対側へ３枚の芝のストリップ（０．３ｍ×３ｍ）。芝を除去し、地面付近のchafersを数えた。計数は、処理後５、１５および２５日目、それぞれ２００２年９月２、１５、および２３日に行われた。
【０１７１】
生存European chafersの合計数における分散分析（ＡＮＯＶＡ）を、SAS統計ソフトウェア（SAS Institute 1990）の一般線形モデルプロシジャ(General Linear Model Procedure)により行った。フィッシャーの最小有意差検定（ＬＳＤ）は、Ｆ検定が有意（Ｐ＝０．０５）であったとき、処理平均の比較に用いられた。
【０１７２】
European chafersの数は、処理適用前に、プロット間で有意差はなかった。９月２３日に（適用の２５日後）、すべての殺虫剤処理は、処理ＭＥＦ１（１０．０ｍｌ／ｍ２）およびＭＥＦ２（２０．０ｍｌ／ｍ２）（Ｆ＝４．２５；Ｐ＜０．０００４６）を除いて、未処理の対照と比較してchafersの数を著しく減少させた（図３３）。両方の処理についてのEuropean chaferの総数は、SEVIN XLR PLUSで処理したプロットにおける総数より著しく高かった。
【０１７３】
９月２日（適用の５日後）および９月１５日（適用の１５日後）に、芝のプロットにおけるchafersの数について有意差は観察されなかった。両方の日について、すべての処理は、未処理の対照と比較してchafersをより低く減少させたが、主にこれら２日ではEuropean chafersをより小さい範囲で数えた事実により、統計モデルは有意ではなかった。
【０１７４】
ｉｉｉ）Hairy chinch bug、Blissus leucopterusについてマイクロエマルジョン製剤ＭＥＦ１およびＭＥＦ２を用いた圃場試験
実験を、オンタリオ州ゲルフ(Guelph)で市販の芝について行い、芝は週に１回刈り、および注水しなかった。実験デザインは、４個の反復および８種類の処理によるランダム完全ブロック計画法であった。プロットは、２ｍ×３ｍであった。また、試験した処理については、図３４に一覧表がある。処理を、２００３年７月３０日、ＨＣＢの前処理評価直後、水１Ｌ／ｍ２をスプレーヤーにより適用した。ほとんどのＨＣＢ個体群は、処理を適用したとき３齢だった。ＨＣＢを、浮遊法を用いて数えた。シリンダー（３４６ｃｍ２）を芝の約３または４インチの深さに挿入し、水をいっぱいになるまで注水した。５分後、表面に浮き上がっている生きたＨＣＢを数えた。プロットあたり３回の計数を行い（同一人物によって）、プロットあたりの合計ＨＣＢを、統計分析に使用した。ＨＣＢを、処理後５、１５および２５日目、それぞれ８月４、１２および２４日に数えた。  
【０１７５】
生存ＨＣＢの合計数における分散分析（ＡＮＯＶＡ）を、SAS統計ソフトウェア（SAS Institute 1990）の一般線形モデルプロシジャを用いて行った。フィッシャーの最小有意差検定（ＬＳＤ）は、Ｆ検定が有意（Ｐ＝０．０５）であったとき、処理平均の比較に用いられた。
【０１７６】
ＨＣＢの数は、処理適用前に、プロット間で有意差はなかった。適用１５日後の８月１２日に、すべての殺虫剤処理は、未処理の対照と比較してＨＣＢの数を著しく減少させた（Ｆ＝６．１３；Ｐ＜０．０００５）（図３５）。Diazinon処理についての結果および２種類の製剤についての結果の間で、差異はなかった。この日、処理ＭＥＦ２（２０．０ｍｌ／ｍ２）は、処理ＭＥＦ２（１０．０ｍｌ／ｍ２）よりも著しく多くの昆虫を有していた。８月４日（適用の５日後）および８月２４日（適用の２５日後）に、芝のプロットにおけるＨＣＢの数について有意差は観察されなかった。両方の日について、すべての処理は、未処理の対照と比較してＨＣＢを減少させた。
【０１７７】
例ＸＩＶ：有益な害虫への精油抽出物の効果
Ａ．捕食性ダニAmblyseius fallacisおよびPhytoseiulus persimilisにおける精油抽出物の直接毒性
この研究の目的は、２種類の捕食性ダニ、総合コントロール果樹におけるダニの天然調節因子であるAmblyseius fallacisおよびケベックおよびその他の地域において温室下で生育している野菜作物におけるナミハダニのコントロールのための既知のダニ捕食者であるPhytoseiulus persimilisについて、植物性バイオ農薬であるＥＣ２５％の直接毒性評価することである。したがって、温室作物のＩＰＭにおける主要なツールとしてのＥＣ２５％の適性を決定した。
【０１７８】
Tetranychus urticaeおよびAmblyseius fallacisの飼育
植食性のダニ、Tetranychus urticaeを、ケベック州St. Jean-sur-RichelieuのHorticultural Research and Development Centerにおいて数年間インゲンマメ植物（Phaseolus vulgare）上で飼育した。マメを、トレイ（３９ｃｍ×３０ｃｍ）あたり４０〜５０植物の高密度にて播種した。T. urticaeのコロニーを、２５℃、相対湿度７５％および１６Ｌ光周期に設定した成長チャンバ内に保持した。
捕食性ダニAmblyseius fallacisを、Tetranychus urticaeについて維持し、２５℃、相対湿度７５％および１６Ｌ光周期に設定した温室内に保持した。Amblyseius fallacisおよびナミハダニの両方を含有するかごの前に置いた扇風機により、コロニーに連続的な空気の流れを提供した。ナミハダニにより感染されたマメ植物を含有するトレイを、捕食者コロニーに十分な食料を提供するために定期的に加えた。
【０１７９】
Phytoseiulus persimilisの飼育
Phytoseiulus persimilisのコロニーをKoppert Canada社から購入し、A. fallacisについてと同じ条件で実験室にて飼育した。出荷品から生じたコロニーを、２５℃、相対湿度７０〜８５％および１６：８（明／暗）に設定した成長室内で２週間、維持し、順化させた。
【０１８０】
接触毒性アッセイ
バイオアッセイを、リーフディスク法を用いてペトリ皿内で行なった。濡れたスポンジをプラスチックペトリ皿（直径１４ｃｍ、高さ１．５ｃｍ）内に置き、リンゴ葉（品種McIntosh；直径３．５ｃｍ）を丸く切断し、水で飽和したスポンジの表面に上面を下にして置いた。
次に、十分な数の各期のナミハダニ Tetranychus urticae Kochを各リーフディスク上にブラシで載せた合計５枚のリーフディスクを、ペトリ皿に入れ、各ペトリ皿が１個の反復を表した。処理あたり１０個の反復を、３週間の期間にわたり調製した。
【０１８１】
Amblyseius fallacis（５）またはPhytoseiulus persimilis（９）の抱卵雌を、捕食者コロニーを飼育するために用いられた植物から採取した葉から立体顕微鏡下で無作為に取り上げた。
それらを、個々に細かいラクダの毛のブラシを用いて、インゲンマメ、Phaseolus vulgareの葉１枚を含有する小さなペトリ皿（直径５．５ｃｍ）に移した。それらを、処理部位上１４．５ｃｍに設置したペイントブラシスプレーヤー（VEGA 2000, Thayer & Chandler Co., Lake Bluff, Illinois, USA）を用いて、６ｐｓｉで０．３ｍｌの異なる用量の農薬溶液で、局所的に処理した。
農薬溶液を適用日に調製した。そして、処理した雌を、各リンゴリーフディスクに慎重におよび個々に移した。混入を避けるため、処理した雌をリーフディスクに移すために、各濃度について新しいラクダブラシを使用した。ペトリ皿を黒いトレイに入れ、透明なプラスチックカバーで覆い、および茶色の紙の細長い一片を上に載せ、まぶしい光を減少させ、リーフディスク域内にダニを保持した。水をトレイに追加し、高い相対湿度を維持した。トレイを、２５℃、相対湿度７５％および１６Ｌ光周期の成長室内で培養した。死亡率を、処理の２４および４８時間後に記録した。A. fallacisおよびP. persimilisそれぞれについて１日あたり１および２個の反復を設置し、１１種類の処理のみを、P. persimilisについて評価した。
【０１８２】
処理
ＥＣ２５％は、２５％の精油を有効成分として有するＥＣ製剤である。７種類の濃度のＥＣ２５％を以下のように調製した。１％濃度を、０．４ｍｌの製剤および９．６ｍｌの水道水を混合することにより調製し、一連の希釈を原液から作製した。
以下の市販の殺虫剤を、それらの推奨率で使用した：推奨濃度１％のTrounce（登録商標）（２０．２％の脂肪酸および０．２％ピレトリン）；０．０６５％の濃度昆虫成長調節因子Enstar（登録商標）（ｓ−キノプレン）；および０．００５７％および０．０００８５５％濃度のAvid（登録商標）（アバメクチン１．９％ＥＣ）。水処理を、合計で、A. fallaciesについて１２種類の処理およびP. persimilisについてEnstar処理をやめた１１種類の処理のために、対照として使用した。
【０１８３】
試験製品ＥＣ２５％を、最初により低濃度から始め、そしてより高濃度までスプレーした。
そして対照処理を、参照製品Avid、TrounceおよびEnstarに次いで適用した。
スプレー器具は、処理間に一連のエタノール９５％、アセトン、ヘキサン、蒸留水を用いて３回洗浄した。  
【０１８４】
統計分析
死亡率パーセンテージをロジットまたはプロビットに変換し、どちらの分析がRobertsonおよびPreisler（1992）により推奨されたようにより適しているか決定した。小さな個々のカイ二条（χ２）の最大数を表す分析を選択した。プロビット死亡率をＥＣ２５％について１＋ｌｏｇ１０（用量）で回帰した。濃度死亡率回帰線を決定し、POLO-PCプログラム（LeOra, 1987）を用いて捕食者の個体群の５０％を殺すための致死濃度を予測した。
ＬＣ５０、ＬＣ９０およびＬＣ９９の毒性値を、有効成分のパーセント（％）として示す。データを分散分析前にアークサイン(arcsine)に変換した。処理間の比較をＧＬＭ手順を用いて分析し、および平均をフィッシャー試験により５％の確率で分類した（SAS, 1996）。
【０１８５】
結果
Amblyseius fallacis
合計６６７匹の成虫の雌のAmblyseius fallacisを試験し、１２匹の雌のみ（１．７９％）がリーフディスク域から去った；行方不明個体数は、当初の合計から差し引いた。対照の死亡率は、２４時間で５．５６％であり、処理の４８時間後も変わらなかった（図３６）。処理間において２４時間（Ｆ＝３０．３２、ｄｆ＝１１、Ｐ＜０．００１）および４８時間（Ｆ＝３１．６４、ｄｆ＝１１、Ｐ＜０．００１）で高い有意差があった。４８時間後、０．１２５％濃度のＥＣ２５％での死亡はなく、０．２５％のＥＣ２５％、Enstarおよび０．５％のＥＣ２５％で死亡率３．１％、７％および２３％であり、およびこれら結果は対照と有意差がなかった。ここで、ＥＣ２５％の提案された商業的割合である濃度０．５％では、死亡率は２３．１１％であり、無害農薬についてのＩＯＢＣの５０％限界点よりも低いことに留意する。
【０１８６】
市販の製品のうち、Trounceが４８時間後に最も高い死亡率（８５．１１％）をもたらした。０．００５７％（死亡率９４．８％）および０．０００８５５％（死亡率８１．５％）濃度でのAvid処理が続き、結果は、有意差はなく、両製品がAmblyseius fallacisに対して同等に有毒であることが実証された。
４８時間でのＬＣ５０、ＬＣ９０およびＬＣ９９値（図３７）は、ハダニ害虫、Tetranychus urticaeをコントロールするために有効量として用いられる０．５％をはるかに上回る（それぞれ１．０１％、３．９１％および４．１２％）（Chiasson、未公開結果）。
【０１８７】
これらの結果は、ＥＣ２５％がAmblyseius fallacisについて低い残留毒性を有するかまたは有しないであろうことを示し、ＥＣ２５％処理の２４時間後生きた成虫の雌のほとんどが、生殖し続け、卵を産むのが観察された。 
【０１８８】
Phytoseiulus persimilis
５５５匹の成虫の雌の群を、ダニ捕食者、Phytoseiulus persimilisについてＥＣ２５％および市販のTrounceおよびAvidの毒性を評価するために使用した。このバイオアッセイにおいて、処理の２４時間および４８時間後それぞれ、卵を抱えた雌の合計数７．３５％および１３．１７％が、リーフディスクから逃げた。それらは、２４時間および４８時間それぞれにおいて記録された、合計死亡率１３．０６％および１８．３５％に貢献した。逃げた捕食者の最大数が、対照処理および２％より低い濃度でのＥＣ２５％処理において観察された。我々は、処理した合計数から行方不明の個体を差し引いて計算した死亡率についてのみ議論する（図３８の３列目）。
【０１８９】
最高死亡率（９９．７１％）は、Trounceによりもたらされ、０．００５７％濃度のAvidが続いた（９３．６９％）。最低死亡率は、０．１２５％濃度のＥＣ２５％による処理（１３．４３％）で観察された。０．１２５％、０．２５および０．５％のＥＣ２５％による死亡率は、対照処理と有意差がなかった。  
行方不明の雌を試験した成虫の最初の数から差し引くと、P. persimilisのＬＣ５０は、処理の２４時間および４８時間後それぞれで１．２％および０．８％だった（図３７）。
【０１９０】
Ｂ．アブラムシ内部捕食寄生者Aphidius colemani（ハチ目：コマユバチ科、アブラバチ亜科）における精油抽出物の直接毒性
本研究においては、成虫のAphidius colemaniハチをＥＣ２５％直接スプレーによる適用に暴露し、より悪い条件と考えられるバイオ農薬残留物との継続的に接触したままにし、このバイオ農薬がAphidius colemaniなどの有益なハチ目に対して有し得るかもしれない潜在的な副活性を試験した。 
【０１９１】
Aphidius colemaniの飼育
Aphidius colemaniハチを、２５０匹のマミーおよび成虫が混在したロットでPlant Product Quebecから購入した。発生したハチおよび残ったマミーを、空気で満たした５リットルのプラスチック製バッグに直接移し、ハチに、食料源としてショ糖およびハチミツの１０％溶液（ｗ／ｗ）ならびに水を提供した。
【０１９２】
直接接触バイオアッセイ
６〜１４匹の生後４８時間未満の成虫の捕食寄生者を、口吸引器で大きなSoloカップ（約５００ｍｌ）へと移した。Soloカップは、フィルターペーパー（Rothmans#1）で内側を覆われ、換気を提供するために側面に２個およびカバーに１個開けられた大きな開口部を有し、成虫のハチの逃亡および農薬の蒸気の凝縮を防ぐためにこれらの開口部を細かい網で覆った。フィルターペーパーを、ショ糖およびハチミツの１０％溶液で湿らせた。ハチを含有するSoloカップの重量を量り、長さ１５ｃｍの棒でカバーへの一連の打撃により、ハチSoloカップの底に引きずり落とした。ハチを、処理部位から１４．５ｃｍ上に設置したペイントブラシスプレーヤー（Vega 2000, Thayer & Chandler, Lake Bluff, Illinois, USA）を用いて、６ｐｓｉで０．３ｍｌの殺虫剤溶液で処理した。そしてSoloカップを覆い、再度重量を量って使用農薬重量を決定した。そして処理したハチを、１８℃〜２２℃および相対湿度６０〜６５％に設定した成長室で培養した。処理効果の評価を、処理の２４時間および４８時間後に行なった。
【０１９３】
残留バイオアッセイ
少なくとも５匹の雌を含む１０〜２０匹の成虫のハチを取り上げ、ガラス製のペトリ皿に入れ、覆った。カバーは、換気を可能にし、農薬の蒸気の凝縮を防ぐために網で覆われた開口部を有した。ペトリ皿を、直接毒性バイオアッセイと完全に同じ方法で、農薬溶液で前もって処理したが、ペトリ皿を覆う前およびハチを農薬残留物に暴露する前に、１時間乾燥させた。カバーに、２個の小さな円形の孔を開け、ハチに水およびハチミツおよびショ糖の溶液を提供するために使用した。死亡率を、２４時間および４８時間目に記録した。
【０１９４】
処理
２５％精油ＥＣ製剤である試験製品ＥＣ２５％を、Codena Incから入手した。７種類の濃度を以下のように調製した：８％のＥＣ２５％を３．２ｍｌのＥＣ２５％および６．４ｍｌの水道水を混合することにより調製し、４％、２％、１％、０．５％および０．１２５％の一連の希釈物を原液から作製した。市販の殺虫剤を、それぞれの推奨用量でポジティブコントロールとして使用した：推奨濃度１％のTrounce（登録商標）（２０．２％の脂肪酸, Safer Ltd, Scarborough, Ont.）、０．０６５％の濃度昆虫成長調節因子Enstar（登録商標）（ｓ−キノプレン）；０．００５７％および０．０００８５５％濃度のAvid（登録商標）e（アバメクチン１．９％ＥＣ）、および５％濃度のThiodan（登録商標）（エンドスルファン５０ＷＰ）。
【０１９５】
試験製品ＥＣ２５％を、最初に最低濃度から始め、そして最高濃度まで使用し、次いで水（対照）を、そして最後にAvid、Trounce、EnstarおよびThiodanを使用した。スプレー器具は、処理間に一連のエタノール９５％、アセトン、ヘキサン、蒸留水を用いて３回洗浄した。  
【０１９６】
統計分析
濃度を主な効果として分析し、適用農薬の重量を、適用農薬量の差異を補正するために共変量として試験した。この共変量は、有意でないと見出された場合、モデルから削除された。死亡率回帰直線を決定し、POLO-PCプログラム（LeOra, 1987）を用いて捕食寄生者の個体群の１０％、５０％および９０％を殺すための致死濃度を推定した。ＬＣ５０の毒性値を、有効成分のパーセント（％）として示す。データは分散分析前にアークサインに変換したが、実際の平均を示した。
処理間の比較をＧＬＭ手順を用いて分析し、および平均をフィッシャー試験により５％の確率で分類した（SAS, 1996）。
【０１９７】
マミーからのAphidius colemaniの発生への処理の効果
この試験において、キャベツ（品種Lennox）葉においてAphidius colemaniの雌に寄生されたMyzus persicaeのマミーを使用した。マミーを有する葉の部分を切断し、ペトリ皿内に置いた。ペトリ皿は、重量を量り、農薬溶液で処理し、直ちに再度重量を量って使用農薬重量を決定した。そして処理したペトリ皿を覆い、パラフィンで封止をした。ペトリ皿は、換気可能にし、発生したAphidius成虫の逃亡を防ぐために、網掛けした開口部を設けた。培養期間は、７日続き、成虫のハチとして発生しなかったすべてのマミーは、死んでいるとみなした。  
【０１９８】
生殖力評価
農薬の残効処理を生き残った雌について、アブラムシにより加害されたコムギ植物における生殖力について評価した。キャベツ植物（品種Lennox）において飼育したMyzus persicaeアブラムシを、６日齢のコムギ２５〜３０植物を含有するポットにブラシで載せた。すぐに、ブラシで載せたアブラムシがコムギ植物に登り、ポットあたり少なくとも１００匹のアブラムシの密度が必要であった。４８時間の残効処理を生き残った雌ハチを、吸引器で個々に試験区域から除去し、２４時間の期間、換気した透明なプラスチックシリンダーを用いてアブラムシで感染された植物のポットに閉じ込めた。そして雌を除去し、アブラムシが寄生した植物を、１８℃〜２２℃で１０日の期間培養した。培養の最後に、コムギ植物を切断し、ペトリ皿に入れた。寄生したアブラムシの数を数えた。
【０１９９】
結果
直接接触バイオアッセイ
６５７匹または５５．９％の雌の捕食寄生者を含む合計１１７４匹の成虫のハチをバイオアッセイにおいて試験した。
適用農薬溶液の平均量は、４．５８±１．３６ｍｇ／ｃｍ２であり、これは、代表的なバイオアッセイについて推奨された量２．０±０．２ｍｇ／ｃｍ２の２倍以上だった（Mead-Briggs et al., 2000）。
４８時間では、０．５％および１％濃度のＥＣ２５％処理による結果は、対照と有意差があったが、１％までの濃度のＥＣ２５％による死亡率は、２４時間後の水（対照）についての死亡率と、有意差はなかった（図３９）。圃場における処理に推奨されている０．５％濃度のＥＣ２５％では、死亡率は処理の２４時間および４８時間後それぞれで１８．６％〜３５．２％と様々であった。最高の死亡率は、０．００５７％および０．０００８５５％濃度のAvid処理および４％および８％の濃度のＥＣ２５％処理で観察された。
【０２００】
図４０の結果は、雌のハチは成虫の雄よりも、処理への感受性が、比較すると低かったことを示す。A. colemaniの雌におけるＥＣ２５％についてのＬＣ５０（図４１）は、１．２８％に等しく、これは、圃場における処理のための推奨濃度０．５％の２倍以上であった。A. colemaniの雄へのＥＣ２５％についてのＬＣ５０は、０．７７％と低かったが、それでもＥＣ２５％の圃場における処理のための推奨濃度０．５％より高かった。しかしながら、雄および雌両方についてのＬＣ５０％の９５％信頼限界（ＣＬ９５％）は重複しており、したがってそれらのＬＤ５０％は、有意に異なるものではなかった（Robertson and Presisler, 1992）。
【０２０１】
残効性アッセイ
結果を図４２および４３に示す。
【０２０２】
処理したマミーからのAphidius colemaniの発生への処理の効果
図４４は、処理したマミーからのAphidius colemani成虫の発生への処理の効果は、有意であったことを示した（Ｆ＝６．９４、ｄｌ＝１６、Ｐ＜０．０００１）。A. colemaniの発生率は、ＥＣ２５％濃度が増加したときに徐々に減少し、８％濃度では発生がなかった。圃場における処理についての推奨濃度、すなわち０．５％では、発生は８６．４％であり、およびこの結果は、対照において観察されたものと統計的に差異がなかった。試験参照用製品において、最大の発生が９６．１％のAvid処理で観察され、最小の発生がEnstarで発生され、３５％発生であった。
【０２０３】
生殖力評価
図４５の結果は、処理より生き残った雌はMyzus persicae宿主に寄生することができ、それらの生殖機能は影響を受けなかったようであることを示す。４％および８％濃度のＥＣ２５％については、試験するために十分な生き残った雌がいなかった。最低の生殖力の比率は、対照処理で記録された植物あたり２３．９匹のマミーと比較して、Avidの処理において植物あたり９．１匹のマミーが観察された。０．１２５〜２％の様々な濃度のＥＣ２５％処理で処理した雌から生じたマミーの数は、対照と有意差がなかった。
【０２０４】
Ｃ．捕食性minute bug、Orius insidiosus Sayにおける精油抽出物の直接毒性
Orius insidiosus Say（カメムシ目：ハナカメムシ科）を含む様々なヒメハナカメムシ(Orius)種は、ピーマン、キュウリおよび他の野菜および観賞作物におけるミカンキイロアザミウマ（ＷＦＴ）Frankliniella occidentallis Pergrande（アザミウマ目：アザミウマ科）の有効な生物コントロール剤である（Veire de van et al., 1996）。
本研究は、実験室条件下で捕食性昆虫、 Orius insidiosusにおけるＥＣ２５％の副活性を評価するために開始された。 
【０２０５】
Orius insidiosusの培養
Orius insidiosusの保存培養を、商業的供給業者（Plant Prod Quebec, 3370 Le Corbusier, Laval, Quebec）から得られた個体で開始し、実験室の成長チャンバ内で維持した。マダラメイガ(Ephestia)種の卵を食料源として、およびPhaseolus vulgarisのサヤインゲンを産卵基質として供給した。そして卵を含有するマメを折った茶色の紙の中で発生まで培養した。折った紙を共食いを減少させるために使用した。そして発生した若虫をマメの鞘を含有する１リットル瓶に移し、マダラメイガの卵を成虫期まで飼った。
保存培養は定期的に新しくした。
【０２０６】
直接接触バイオアッセイ
バイオアッセイを、リーフディスク方法を用いて小さなペトリ皿（５．５ｃｍ径）で行なった。寒天２％の薄層（２〜３ｍｍ）を各ペトリ皿に注ぎ、およびリング状のリンゴ（品種McIntosh、３．５ｃｍ径）を切断し、寒天の表面に上面を下にして置いた。
少なくとも１０匹のOrius insidiosusの２若虫齢または成虫を、リンゴリーフディスクの表面に吸引器を用いて慎重に移した。若虫または成虫の昆虫を含有するペトリ皿を、長さ１５ｃｍの棒でカバーへの一連の打撃により、ペトリ皿の底に引きずり落とした。すぐにペトリ皿の重量を量り、処理部位から１４．５ｃｍ上に設置したペイントブラシスプレーヤー（Vega 2000, Thayer & Chandler, Lake Bluff, Illinois, USA）を用いて、６ｐｓｉで０．３ｍｌの農薬溶液ですぐに処理した。そしてペトリ皿の重量を再度を量って適用農薬量を決定した。
【０２０７】
農薬溶液を処理日に調製した。そして処理した若虫または成虫を、マダラメイガ種の卵を食料源として含有するリンゴリーフディスクの表面に慎重に移した。混入を避けるため、処理した若虫または成虫をリーフディスクに移すために各濃度について新しいラクダブラシを使用する。ペトリ皿をトレイに入れ、２５℃、相対湿度６５％および１６Ｌ光周期に設定した成長チャンバで培養した。扇風機をトレイの前に置き、連続的な空気の流れを提供した。８０％以上の若虫が成虫になったとき、若虫の死亡率を、処理の１、２、５，７および９日後に記録した。成虫の捕食者の死亡率を、処理の２４時間および４８時間後に記録した。１０個の反復を処理あたり準備し、および１２種類の処理を第２齢の若虫および成虫について評価した。
【０２０８】
処理
試験製品ＥＣ２５％は２５％ＥＣ精油製剤であり、Codena Incから入手した。７種類の濃度を以下のように調製した：８％のＥＣ２５％を３．２ｍｌのＥＣ２５％および６．４ｍｌの水道水を混合することにより調製し、４％、２％、１％、０．５％および０．１２５％の一連の希釈物を原液から作製した。ＥＣ２５％を、以下の市販の殺虫剤の推奨用量と比較した：推奨濃度１％のTrounce（登録商標）（２０．２％の脂肪酸のカリウム塩および０．２％のピレトリン）、０．０６５％濃度の昆虫成長調節剤Enstar（登録商標）（ｓ−キノプレン）および０．０００８５５％濃度のAvide（アバメクチン１．９％ＥＣ）、５％濃度のThiodan（エンドスルファン５０ＷＰ）および４％濃度のCygon（登録商標）（ジメトエート）。水をネガティブコントロールとして使用した。
【０２０９】
試験製品ＥＣ２５％を、最初に最低濃度から始め、そして最高濃度までスプレーし、次いで水（対照）を、最後にAvid、Cygon、Enstar、ThiodanおよびTrounceをスプレーした。スプレーヤーは、処理間に一連のエタノール９５％、アセトン、ヘキサン、蒸留水を用いて３回洗浄した。  
【０２１０】
生殖力評価
Orius insidiosusの雌の生殖力におけるＥＣ２５％の潜在的なサブ・リーサルな効果をモニターした。
生殖力評価を、直接接触農薬処理の４８時間後生き残った雌について行なった。生き残った雌を雄から分離し、支持体として用いられる２ｍｍ層の寒天、および寒天の表面に上面を下にして置かれたリンゴの輪（５．５ｃｍ）を長さ３ｃｍの鞘のソラマメ（Phaseolus vulgare）で満たされたペトリ皿内に個々に入れた。リンゴリーフディスクおよびマメの鞘を産卵基質として使用した。ペトリ皿を対応するカバーで覆い、パラフィンで封止した。ペトリ皿のカバーは、換気および空気の交換のために細かいモスリンの織物で覆った開口部を有した。雌は産卵のため４８時間静置し、そして十分な数のマダラメイガ種の卵を与えた。そして４８時間の期間後、雌を第二の４８時間産卵試験のために別のペトリ皿に移した。両方の期間中、産まれた卵を数え、５日間孵化のため放置した。５日後孵化しない卵は、死んでいて、生存していないとみなした。
【０２１１】
統計分析
ＥＣ２５％のＬＣ５０値を、POLOソフトウェア（LeOra, 1987）によるプロビット解析を用いて決定した。
濃度を主な効果として分析し、適用農薬の重量を、適用農薬量の差異を補正するために共変量として試験した。この共変量は、有意でないと見出された場合、モデルから削除した。死亡率を、SAS（SAS, 1996）内の一般線形モデル（ＧＬＭ）プロシジャを用いて分析し、最初に導入した個体数を、共変量として試験した。平均を、適切なときには共変量について調節し、平均の比較のために、フィッシャー試験を用いて分類した。しかしながら、結果のセクションには、実際の平均を表した。
【０２１２】
結果
結果は、処理適用の９日後において、ヒメハナカメムシの若虫に対する、最も有毒な処理は、大きなものから順に、Trounce（死亡率９９．５％）、Cygon（死亡率９８％）、８％濃度のＥＣ２５％（死亡率８７．６％）、Avid（死亡率８２．５％）および４％濃度のＥＣ２５％（死亡率７９．６％）であったことを示す（図４６）。すべての結果は、対照処理のもの（死亡率３．６％）と有意差があった。５０％未満の死亡率が、他の処理について得られたが、Thiodan（４５．７％）およびＥＣ２５％（３５．１％）の結果のみが、対照と有意差があった。
０．５％の圃場における処理についての推奨濃度でのＥＣ２５％についての結果は、対照について得られた結果と有意差はなかった。
【０２１３】
結果は、成虫のパーセント死亡率として表現した１２種類の処理の効果は、処理の２４時間後（Ｆ＝５５．９、ｄｆ＝１１、ｐ＜０．０００１）および処理の４８時間後（Ｆ＝６３．２、ｄｆ＝１１、ｐ＜０．０００１）で有意差があったことを示す（図４７）。０．１２５％および０．２５％の濃度でのＥＣ２５％の最も低い有毒な処理は、対照処理と統計的に差異がなかった。０．５％の圃場における推奨濃度でのＥＣ２５％の処理は、２８％の死亡率をもたらした残りの処理のうち有毒性が最も低かった。最も有毒な群は、Cygon（死亡率１００％）、Trounce（死亡率９８．９％）、４および８％濃度のＥＣ２５％（それぞれ９４％および９４％）およびAvid（８７．８％）を含んだ。 
【０２１４】
生殖力評価
生殖力評価アッセイにおける結果（図４８）は、ほとんどすべての試験した雌が卵を産んだことを示した。Avid、Cygon、Trounceおよび２、４および８％濃度のＥＣ２５％による処理後、生殖力についての試験のために生き残った雌はほとんどいなかった。対照処理における１日および雌１匹あたりの平均産卵数は、７．６であり、これは、O. insidiosus種の近縁種であるOrius leavigatusについての生殖力のＩＯＢＣ基準により設定された１日および雌１匹あたりの最低数である２個の卵のほぼ４倍であった。最も低かった個数は、Thiodanによる処理において得られた１日および雌１匹あたり２．８個の卵であり、次いで０．５％濃度のＥＣ２５％による１日および雌１匹あたり３．６個の卵であり、両方は水（対照）（１日および雌１匹あたり卵７．６個）において得られた個数と有意差があった。０．２５％（卵５個）および０．５％（卵５．４個）濃度でＥＣ２５％処理における日あたりの産卵数は、対照における産卵数と有意差はなかった。羽化率は、Thiodan処理における２８．５％から対照における５３％まで様々であった。０．５％濃度でのＥＣ２５％処理において３３．９％の卵の羽化があった。  
【０２１５】
ヒメハナカメムシの若虫について、ＬＣ５０値はＥＣ２５％による処理の９日後、２．６５％であり（図４９）、成虫については、ＥＣ２５％での処理の２日後、１．１４％だった（図５０）。
【０２１６】
参考文献
【表１３】
2005536495.tif 000014
【０２１７】
【表１４】
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【図面の簡単な説明】
【０２１８】
【図１】根より上の全植物体から抽出した３つのロットまたはプールのオイルサンプルの化学物質の含有量を示す（００ＭＣ−２１Ｐ、００ＭＣ−２４Ｐおよび００Ｍ−２９Ｐ）図である。
【図２】Chenopodium ambrosioidesの精油に存在する個々の化合物の溶液により試験したときのナミハダニ（ＴＳＳＭ：Tetranychus urticae）の平均死亡率（％）を示す図である。結果は、Abbott's formulaにより対照の死亡率に応じて調整済である。
【図３】Chenopodium ambrosioidesの精油に存在する個々の化合物の溶液により試験したときのオンシツコナジラミ（ＧＷＦ；Trialeurodes vaporaiorum）の平均死亡率（％）を示す図である。結果は、Abbott's formulaにより対照の死亡率に応じて調整済である。
【０２１９】
【図４】Chenopodium ambrosioidesのＲＴＵ製剤ならびに天然および合成殺虫剤の市販の調製物を用いてバイオアッセイで得られた成虫のハダニ（Tetranychus urticae）の死亡率を示す図である。
【図５】Chenopodium ambrosioidesオイルのＲＴＵ製剤を用いたハダニ（Tetranychus urticae）の卵の死亡率を示す図である。
【図６】ＲＴＵアカザ抽出物の製剤ならびに合成および天然製品の市販の調製物を用いた、ハダニ（Tetranychus urticae）の若虫の死亡率を示す図である。
【０２２０】
【図７】ＲＴＵ製剤および選択した天然殺ダニ剤により１時間前に処理されたソラマメの葉への導入の４８時間後の成虫のハダニの死亡率を示す図である。
【図８】ＲＴＵ製剤を用いたリンゴハダニ、Panonychus ulmiの死亡率を示す図である。
【図９】Chenopodium ambrosioidesのＲＴＵ製剤を用いてバイオアッセイで得られた昆虫の死亡率（％）を示す図である。
【０２２１】
【図１０】適用の４８時間後の成虫の雌のナミハダニの死亡率を示す図である。
【図１１】適用の２４時間後の成虫の雌のリンゴハダニの死亡率を示す図である。
【図１２】適用の１０日後のナミハダニの孵化率（％）を示す図である。
【０２２２】
【図１３】適用の１０日後のリンゴハダニの孵化率（％）を示す図である。
【図１４】１時間前にＥＣ２５％およびジコホルにより処理されたリーフディスクへの導入の４８時間後の成虫の雌のナミハダニの死亡率を示す図である。
【図１５】０．１２５、０．２５、０．５、１．０および２．０％濃度のＥＣ２５％製剤および市販の生物殺虫剤、Neem Rose Defense（登録商標）およびSafer's Trounce（登録商標）の適用の４８時間後の、モモアカアブラムシ（Myzus persicae (Sulz.））の死亡率を示す図である。
【０２２３】
【図１６】４８時間後死亡率データにより計算し、モモアカアブラムシ（Myzus persicae (Sulz.)）のＥＣ２５％の致死濃度（ＬＣ５０およびＬＣ９０）を％で示す図である。
【図１７】０．２５、０．５０および１．０％濃度のＥＣ２５％および市販の生物殺虫剤、Neem Rose Defense（登録商標）およびSafer's Trounce（登録商標）の適用後のVerbena speciosaの芽１ｃｍ２あたりのモモアカアブラムシ（Myzus persicae (Sulz.））の平均個体数を示す図である。
【図１８】６種類の濃度（０．０５、０．１２５、０．１８、０．２５、０．５および１．０％）のＥＣ２５％製剤および市販の生物殺虫剤、Neem Rose Defense（登録商標）およびSafer's Trounce（登録商標）の適用の２４時間後の、ミカンキイロアザミウマ(Frankliniella occidentalis (Perg.))の死亡率を示す図である。
【０２２４】
【図１９】２４時間死亡率データにより計算し、ミカンキイロアザミウマ（Frankliniella occidentalis (Perg.））についてのＥＣ２５％の致死濃度（ＬＣ５０およびＬＣ９０）をｍｇ／ｃｍ２で示す図である。
【図２０】２種類の濃度（０．２５および１．０％）のＥＣ２５％および２種類の市販の生物殺虫剤、Neem Rose Defenses（登録商標）およびSafer's Trounce（登録商標）を用いて、温室バイオアッセイ中に対照で処理した葉に存在するミカンキイロアザミウマのパーセンテージとして、処理あたりのミカンキイロアザミウマ（ＷＦＴ：Frankliniella occidentalis (Perg.））／ｃｍ２の平均個体数を示す図である。
【図２１】５種類の濃度（０．０６２５、０．１２５、０．２５、０．５および１％）のＥＣ２５％製剤および市販の生物殺虫剤、Neem Rose Defense（登録商標）、Safer's Trounce（登録商標）およびThiodan（登録商標）の適用の２０時間後の、オンシツコナジラミ（Trialeurodes vaporariorum (Westw.））の死亡率を示す図である。
【０２２５】
【図２２】２０時間死亡率データにより計算された、オンシツコナジラミ（Trialeurodes vaporariorum (Westw.））のＥＣ２５％の致死濃度（ＬＣ５０およびＬＣ９０）をｍｇ／ｃｍ２で示す図である。
【図２３】４種類の濃度（０．０６２５、０．１２５、０．２５、０．５および１％）のＥＣ２５％製剤および市販の生物殺虫剤、Neem Rose Defense（登録商標）およびSafer's Trounce（登録商標）の適用の２４時間後の、Encarsia formosaの死亡率を示す図である。
【図２４】菌類Botrytis cinereaが原因のトマトの灰色かび病への３種類の濃度のＥＣ２５％の効果を示す図である。
【０２２６】
【図２５】Botrytis cinereaの接種の１および８日後における、選んだ製品による処理後のトマトの灰色かび病のパーセンテージコントロールを示す図である。
【図２６】ブロック間のウドンコ病のパーセンテージ（％）感染を示す図である。
【図２７】ウドンコ病へのＥＣ２５％およびレファレンス製品の効果を示す図である。
【０２２７】
【図２８】０．５％濃度にて異なる容積のＥＣ２５％により処理したアザミウマの成虫の土壌からの発生の日平均および合計を示す図である。
【図２９】ＥＣ２５％による処理の７日後の、R. majalisの生存パーセントを示す図である。
【図３０】R. majalisを用いた２回の７日試験についてのＥＣ２５％中央致死濃度（ＬＣ５０）、ｌｏｇＬＣ５０の標準誤差、９５パーセント信頼区間および勾配／ディスクの方程式を示す図である。
【０２２８】
【図３１】両方のR. majalisの７日試験において各トレイについて決定した、平均土壌有機物パーセントおよびｐＨ±標準誤差を示す図である。
【図３２】European chafer、Rhizotrogus majalisを用いて試験を行った処理について示す図である。
【図３３】芝のプロットにおける生きたEuropean chafersの総個体数を示す図である。
【０２２９】
【図３４】芝のプロットにおいてＨＣＢを用いて評価した処理について示す図である。
【図３５】芝のプロットにおける生きたＨＣＢの総個体数を示す図である。
【図３６】数種類の濃度のＥＣ２５％および市販の殺虫剤の直接適用後のAmblyseius fallacisの成虫の雌の平均死亡率（％）を示す図である。
【０２３０】
【図３７】Amblyseius fallacisの成虫の雌におけるＥＣ２５％オイル製剤の接触毒性を示す図である。プロビット解析。
【図３８】異なる殺虫剤処理についての、Phytoseiulus persimilisの成虫の雌の平均死亡率パーセントを示す図である。
【図３９】ＥＣ２５％および市販の殺虫剤の直接適用後の成虫のハチAphidius colemaniの全平均死亡率パーセントを示す図である。
【０２３１】
【図４０】ＥＣ２５％および市販の殺虫剤の直接適用後のハチAphidius colemaniの成虫の雄および雌の平均死亡率（％）を示す図である。
【図４１】成虫のハチAphidius colemaniにおけるＥＣ２５％オイル製剤の接触毒性を示す図である。プロビット解析。
【図４２】ＥＣ２５％および市販の殺虫剤の残留への暴露後の成虫のハチAphidius colemaniの死亡率を示す図である。
【０２３２】
【図４３】残留したＥＣ２５％への暴露の２４時間後および４８時間の成虫のハチAphidius colemaniのプロビット解析を示す図である。
【図４４】処理されたマミーからのAphidius colemaniの発生における処理の効果を示す図である。
【図４５】残留したＥＣ２５％との接触後の雌のAphidius colemaniの生殖力の評価を示す図である。
【０２３３】
【図４６】ＥＣ２５％および市販の殺虫剤の適用後のOrius insidiosusの第２齢の若虫の平均死亡率を示す図である。
【図４７】ＥＣ２５％および他の殺虫剤処理後のOrius insidiosusの成虫の平均死亡率を示す図である。
【図４８】殺虫剤処理後に生き残った雌のOrius insidiosusの生殖力を示す図である。
【０２３４】
【図４９】ＥＣ２５％の適用後のOrius insidiosusの第２齢の若虫のプロビット解析を示す図である。
【図５０】ＥＣ２５％の適用後のOrius insidiosusの成虫のプロビット解析を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６】
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【図４７】
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【図４８】
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【図４９】
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【図５０】
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【手続補正書】
【提出日】平成16年11月25日(2004.11.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
蒸留によって得られるアカザ種由来の農薬としての活性を有する精油抽出物であり、α−テルピネン、ρ−シメン、リモネン、カルバクロール、カルベオール、ネロール、チモール、カルボン、およびアスカリドールを含み、前記抽出物が殺ダニ、殺虫、および殺菌活性を有し、アスカリドールが９．８６％以下の比率であり、ただし、アスカリドールは６．７％の比率ではない、前記精油抽出物。
【請求項２】
アスカリドールが、６．３９％以下の比率である、請求項１に記載の精油抽出物。
【請求項３】
アスカリドールが、３．６３％以下の比率である、請求項１に記載の精油抽出物。
【請求項４】
蒸留によって得られるアカザ種由来の農薬としての活性を有する精油抽出物であり、３０％〜６５％のα−テルピネン、８％〜２６％のρ−シメン、５％〜２４％のリモネン、０．０４％〜１％のカルバクロール、０．１％〜２％のカルベオール、０．１％〜２．０％のネロール、０．０４％〜２％のチモール、および０．０４％〜１％のカルボンを含み、前記抽出物が殺ダニ、殺虫、および殺菌活性を有する、前記精油抽出物。
【請求項５】
殺菌活性を有する蒸留によって得られるアカザ種由来の農薬としての活性を有する精油抽出物であり、α−テルピネン、ρ−シメン、リモネン、カルバクロール、カルベオール、ネロール、チモール、カルボン、およびアスカリドールを含む、前記精油抽出物。
【請求項６】
アカザ種が、Chenopodium ambrosioidesである、請求項１〜５のいずれかに記載の精油抽出物。
【請求項７】
請求項１、４または５のいずれかに記載の精油抽出物を有効量、適した乳化剤、スプレッダーまたは固着剤、およびキャリアまたは溶剤を含む、農薬組成物。
【請求項８】
０．１２５体積％〜１０体積％の精油抽出物を含む、請求項７に記載の農薬組成物。
【請求項９】
０．２５体積％〜５体積％の精油抽出物を含む、請求項８に記載の農薬組成物。
【請求項１０】
組成物を徐放性送達システムと併用する、請求項７に記載の農薬組成物。
【請求項１１】
徐放性送達システムがカプセル化による、請求項１０に記載の農薬組成物。
【請求項１２】
組成物を栄養物または除草剤と併用する、請求項７に記載の農薬組成物。
【請求項１３】
組成物が乳剤（ＥＣ）であり、５体積％〜５０体積％の精油抽出物を含む、請求項７に記載の農薬組成物。
【請求項１４】
１０体積％〜２５体積％の精油抽出物を含む、請求項１３に記載の農薬組成物。
【請求項１５】
１体積％〜１５体積％の適した乳化剤、および５０体積％〜７０体積％の適したキャリアまたは溶剤をさらに含む、請求項１４に記載の農薬組成物。
【請求項１６】
２体積％〜２０体積％の適したスプレッダーおよび／または固着剤をさらに含む、請求項１５に記載の農薬組成物。
【請求項１７】
組成物が、屋内または屋外燻蒸用の、そのままで使用可能な（ＲＴＵ）製剤であって、１％〜１５％の請求項１、４または５のいずれかに記載の精油抽出物、１％〜５％のスプレッダーまたは固着剤、および有機溶剤を１００体積％になるように含む、農薬組成物。
【請求項１８】
組成物が、屋内または屋外燻蒸用の、そのままで使用可能な（ＲＴＵ）製剤であって、１体積％〜１０体積％の請求項１、４または５のいずれかに記載の精油抽出物、３体積％〜５体積％の吸収性シリカ、３体積％〜１０体積％の発火成分、１体積％〜５体積％のフリーフロー助剤および増量剤を１００体積％になるように含む、農薬組成物。
【請求項１９】
そのままで使用可能な（ＲＴＵ）製剤が、植物および植物環境の燻蒸用である、請求項１７または１８に記載の農薬組成物。
【請求項２０】
そのままで使用可能な（ＲＴＵ）製剤が、動物および動物環境の燻蒸用である、請求項１７または１８に記載の農薬組成物。
【請求項２１】
組成物が、屋内または屋外燻蒸用の、そのままで使用可能な（ＲＴＵ）製剤であって、１体積％〜５体積％の請求項１、４または５のいずれかに記載の精油抽出物、２体積％〜５体積％の皮膚軟化剤、０．１体積％〜１体積％の安定剤、０．１体積％〜０．５体積％の保存料、および有機溶剤を１００体積％になるように含む、農薬組成物。
【請求項２２】
そのままで使用可能な（ＲＴＵ）製剤が、エアゾールである、請求項２１に記載の農薬組成物。
【請求項２３】
組成物が、局所適用用の、そのままで使用可能な（ＲＴＵ）製剤であって、１体積％〜１０体積％の請求項１、４または５のいずれかに記載の精油抽出物、２体積％〜１０体積％の乳化剤、２体積％〜５体積％のコートコンディショナー、０．１体積％〜１体積％の安定剤、０．１体積％〜１体積％の保存料、０．１体積％〜０．５体積％の酸化防止剤、および水を１００体積％になるように含む、農薬組成物。
【請求項２４】
そのままで使用可能な（ＲＴＵ）製剤が、水ベースのスプレーである、請求項２３に記載の農薬組成物。
【請求項２５】
組成物が、局所適用の、そのままで使用可能な（ＲＴＵ）製剤であって、１体積％〜５体積％の請求項１、４または５のいずれかに記載の精油抽出物、２体積％〜５体積％の皮膚軟化剤、０．１体積％〜１体積％の安定剤、および有機溶剤を１００体積％になるように含む、農薬組成物。
【請求項２６】
そのままで使用可能な（ＲＴＵ）製剤が、スプレー可能な忌避剤として使用される、請求項２５に記載の農薬組成物。
【請求項２７】
そのままで使用可能な（ＲＴＵ）製剤が、ヒト適用用である、請求項２５に記載の農薬組成物。
【請求項２８】
組成物が、局所適用用の、そのままで使用可能な（ＲＴＵ）製剤であって、１体積％〜５体積％の請求項１、４または５のいずれかに記載の精油抽出物、１体積％〜５体積％の乳化剤、２体積％〜５体積％の皮膚用コンディショナー、０．１体積％〜１体積％の安定剤、０．１体積％〜１体積％の保存料、０．１体積％〜０．５体積％の酸化防止剤、および水を１００体積％になるように含む、農薬組成物。
【請求項２９】
そのままで使用可能な（ＲＴＵ）製剤が、水ベースのスプレーである、請求項２８に記載の農薬組成物。
【請求項３０】
そのままで使用可能な（ＲＴＵ）製剤が、ヒト適用用である、請求項２８に記載の農薬組成物。
【請求項３１】
組成物が、局所適用用の、そのままで使用可能な（ＲＴＵ）製剤であって、１体積％〜１０体積％の請求項１、４または５のいずれかに記載の精油抽出物、１体積％〜１０体積％の乳化剤、２体積％〜１０体積％の皮膚用コンディショナー、０．２体積％〜５体積％の増粘剤、０．１体積％〜１体積％の安定剤、０．１体積％〜１体積％の保存料、０．１体積％〜０．５体積％の酸化防止剤、および水を１００体積％になるように含む、農薬組成物。
【請求項３２】
そのままで使用可能な（ＲＴＵ）製剤が、ヒト適用用である、請求項３０に記載の農薬組成物。
【請求項３３】
組成物が、動物環境への適用のための、そのままで使用可能な（ＲＴＵ）製剤であって、３体積％〜１０体積％の請求項１、４または５のいずれかに記載の精油抽出物、０．１体積％〜１体積％の安定剤、０．１体積％〜０．５体積％の保存料、および有機溶剤を１００体積％になるように含む、農薬組成物。
【請求項３４】
組成物が、３０体積％〜５０体積％の請求項１、４または５のいずれかに記載の精油抽出物、０．５体積％〜２５体積％の適した乳化剤、および１０体積％〜５０体積％の水を含み、前記組成物がマイクロエマルジョンである、農薬組成物。
【請求項３５】
マイクロエマルジョンが、滴下施肥法による適用のためのものである、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３６】
マイクロエマルジョンが、土壌送達のためのものである、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３７】
請求項７〜３６のいずれかに記載の組成物の農薬的有効量のコントロールが望ましい場所への適用を含む、有害生物をコントロールする方法。
【請求項３８】
有害生物が、ダニ類、昆虫類、菌類を含む群から選択される、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
昆虫が、幼虫期である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
農薬組成物が、スプレー、噴霧、蒸発、散乱、散粉、散水、噴出、散布、注入、燻蒸、または灌漑により場所に適用される、請求項３７〜３９のいずれかに記載の方法。
【請求項４１】
場所が、農業、園芸、森林、プランテーション、果樹園、苗床、有機栽培作物、芝および都市を含む群から選択された環境である、請求項３７〜３９のいずれかに記載の方法。
【国際調査報告】
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2005536495.tif 000068
2005536495.tif 000069
2005536495.tif 000070
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2005536495.tif 000074
2005536495.tif 000075
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