【手続補正書】
【提出日】令和2年6月10日(2020.6.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
自動血液分析装置を用いて白血球（ＷＢＣ）分析を実施する方法であって、
（ａ）ＷＢＣ分析試薬を用いて全血の試料を希釈することであって、前記ＷＢＣ分析試薬が、
前記試料中の複数の核含有細胞を標識する膜透過性蛍光色素と、
前記血液分析装置を用いて分析した場合に複数のＷＢＣ亜集団を互いに分離するモル浸透圧濃度調整成分と、を含み、このときモル浸透圧濃度調整成分が約０．１％〜約０．５％の濃度の塩化アンモニウムである、希釈することと、
（ｂ）ステップ（ａ）の前記希釈された血液試料を一定時間インキュベートすることと、
（ｃ）ステップ（ｂ）からの前記インキュベートされた試料を前記血液分析装置内のフローセルに送達することと、
（ｄ）ステップ（ｃ）からの前記インキュベートされた試料を励起源で励起させることと、
（ｅ）前記励起した試料から複数の光散乱信号及び少なくとも１つの蛍光放射信号を収集することと、
（ｆ）前記少なくとも１つの蛍光放射信号に基づいて、蛍光閾値を満たさない前記希釈された血液試料内のいずれの粒子も、血液分析装置内に構成された蛍光閾値のみを用いて、考慮から除去しつつ、ステップ（ｅ）で収集される全ての前記信号に基づいてＷＢＣ差異分析を実施することと、を含む、方法。
【請求項２】
前記励起源が、約３５０ｎｍ〜約７００ｎｍの波長を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記蛍光放射信号が、バンドパスフィルタまたはロングパスフィルタによって約３６０ｎｍ〜約７５０ｎｍの波長で収集される、請求項１または２のいずれかに記載の方法。
【請求項４】
前記膜透過性蛍光色素が、アクリジンオレンジ、ヨウ化ヘキシジウム、ＳＹＴＯ  ＲＮＡ  Ｓｅｌｅｃｔ、ＳＹＴＯ  １２、またはＳＹＴＯ  １４である、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記試薬中の前記膜透過性蛍光色素の濃度が、約０．０００１％〜約０．０００５％の範囲である、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記試薬中の前記膜透過性蛍光色素の濃度が、約０．０１μＭ〜約１５μＭの範囲である、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記モル浸透圧濃度調整成分が、塩化ナトリウムをさらに含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記塩化ナトリウムの濃度が、約０．１％〜約０．５％である、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記試薬が、ＷＢＣ保護剤をさらに含む、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＷＢＣ保護剤が、ホルムアルデヒド、グルタルアルデヒド、ブトキシエタノール、フェノキシエタノール、またはイソプロピルアルコールである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＷＢＣ保護剤の濃度が、約０．１％〜約１．０％の範囲である、請求項９または１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＷＢＣ分析試薬が、界面活性剤をさらに含む、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記界面活性剤が、サポニンである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記界面活性剤の濃度が、約０．０１％〜約０．０５％の範囲である、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記試薬が、ｐＨ緩衝成分をさらに含む、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記ｐＨ緩衝成分が、酢酸ナトリウムまたは重炭酸ナトリウムである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記ｐＨ緩衝成分の濃度が、約０．０１％〜約０．５％の範囲である、請求項１５または１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記試薬が、抗菌剤をさらに含む、請求項１から１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記抗菌剤の濃度が、約０．０１％〜約０．１％の範囲である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＷＢＣ分析試薬のｐＨが、約２．５〜約１２．５ｐＨ単位の範囲である、請求項１から１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記ＷＢＣ分析試薬の前記モル浸透圧濃度が、約２５〜約３５０ｍＯｓｍである、請求項１から２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
全血の試料に白血球（ＷＢＣ）差異分析を行うためのシステムであって、前記システムが、
（ａ）血液分析装置であって、
前記血液試料内の粒子を励起させるように位置付けられた励起源と、
（１）前記励起された血液試料から軸方向光損失を測定するように位置付けられた軸方向光損失検出器、（２）前記励起された血液試料から中間角度散乱を測定するように位置付けられた中間角度散乱検出器、（３）前記励起された血液試料から大角度偏光側方散乱を測定するように位置付けられた偏光側方散乱検出器、（４）前記励起された血液試料から大角度偏光解消側方散乱を測定するように位置付けられた偏光解消側方散乱検出器、及び（５）前記励起された血液試料から放射された蛍光を測定するように位置付けられた蛍光検出器、を含む、複数の検出器と、
プロセッサであって、
（Ｉ）前記複数の検出器から（１）軸方向光損失、（２）中間角度散乱、（３）大角度偏光側方散乱、（４）大角度偏光解消側方散乱、及び（５）蛍光の測定値を受け取ることと、
（ＩＩ）５つすべての測定値に基づいて、蛍光閾値を超える蛍光を放射する粒子について、前記血液試料のＷＢＣ差異分析を実施することと、を行うように構成されるプロセッサと、を備える、血液分析装置と、
（ｂ）前記試料内のＷＢＣを分析するための試薬であって、
前記試料中の一又は複数の核含有細胞を標識する膜透過性蛍光色素と
約０．１％〜約０．５％の濃度の塩化アンモニウムであるモル浸透圧濃度調整成分と、を含む、試薬と、を含み、
前記モル浸透圧濃度調整成分の濃度が、前記血液分析装置を用いて、前記試料内のＷＢＣの複数の亜集団の識別を容易にするのに十分である、システム。
【請求項２３】
前記膜透過性蛍光色素が、アクリジンオレンジ、ヨウ化ヘキシジウム、ＳＹＴＯ  ＲＮＡ  Ｓｅｌｅｃｔ、ＳＹＴＯ  １２、またはＳＹＴＯ  １４である、請求項２２に記載のシステム。
【請求項２４】
前記試薬中の前記膜透過性蛍光色素の濃度が、約０．０００１％〜約０．０００５％の範囲である、請求項２２または２３に記載のシステム。
【請求項２５】
前記試薬中の前記膜透過性蛍光色素の濃度が、約０．０１μＭ〜約１５μＭの範囲である、請求項２２から２４のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項２６】
前記モル浸透圧濃度調整成分が、塩化ナトリウムをさらに含む、請求項２２から２５のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項２７】
前記塩化ナトリウムの濃度が、約０．１％〜約０．５％である、請求項２２から２６のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項２８】
前記試薬が、ＷＢＣ保護剤をさらに含む、請求項２２から２７のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項２９】
前記ＷＢＣ保護剤が、ホルムアルデヒド、グルタルアルデヒド、ブトキシエタノール、フェノキシエタノール、またはイソプロピルアルコールである、請求項２８に記載のシステム。
【請求項３０】
前記ＷＢＣ保護剤の濃度が、約０．１％〜約１．０％の範囲である、請求項２８または２９に記載のシステム。
【請求項３１】
前記試薬が、界面活性剤をさらに含む、請求項２２から３０のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項３２】
前記界面活性剤が、サポニンである、請求項３１に記載のシステム。
【請求項３３】
前記界面活性剤の濃度が、約０．０１％〜約０．０５％の範囲である、請求項３１または３２に記載のシステム。
【請求項３４】
前記試薬が、ｐＨ緩衝成分をさらに含む、請求項２２から３３のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項３５】
前記ｐＨ緩衝成分が、酢酸ナトリウムまたは重炭酸ナトリウムである、請求項３４に記載のシステム。
【請求項３６】
前記ｐＨ緩衝成分の濃度が、約０．０１％〜約０．５％の範囲である、請求項３４または３５に記載のシステム。
【請求項３７】
前記試薬が、抗菌剤をさらに含む、請求項２２から３６のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項３８】
前記抗菌剤の濃度が、約０．０１％〜約０．１％の範囲である、請求項３７に記載のシステム。
【請求項３９】
前記試薬のｐＨが、約２．５〜約１２．５ｐＨ単位の範囲である、請求項２２から３８のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項４０】
前記試薬の前記モル浸透圧濃度が、約２５〜約３５０ｍＯｓｍである、請求項２２から３９のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項４１】
前記プロセッサが、前記蛍光閾値を満たさないいずれの粒子も考慮から除去するように前記受け取られた測定値を事前選別するようにさらに構成される、請求項２２から４０のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項４２】
前記軸方向光損失検出器が、０°散乱で軸方向光損失を測定する、請求項２２から４１のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項４３】
前記中間角度散乱検出器が、約３°〜約１５°で光角度散乱を測定する、請求項２２から４２のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項４４】
前記複数の検出器が、１つ以上の光電子増倍管を含む、請求項２２から４３のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項４５】
前記励起源が、レーザである、請求項２２から４４のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項４６】
前記レーザが、前記蛍光色素に対応する波長で光を放射する、請求項４５に記載のシステム。
【請求項４７】
前記蛍光色素が、前記励起源に対応するように選択される、請求項２２から４６のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項４８】
前記試薬を用いて前記血液試料を希釈するためのインキュベーションサブシステムをさらに含む、請求項２２から４７のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項４９】
前記インキュベーションサブシステムが、約２５秒未満である時間にわたり前記試薬を用いて前記血液試料をインキュベートするように構成される、請求項４８に記載のシステム。
【請求項５０】
前記インキュベーションサブシステムが、約１７秒未満である時間にわたり前記試薬を用いて前記血液試料をインキュベートするように構成される、請求項４８または４９に記載のシステム。
【請求項５１】
前記インキュベーションサブシステムが、約９秒未満である時間にわたり前記試薬を用いて前記血液試料をインキュベートするように構成される、請求項４８から５０のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項５２】
前記インキュベーションサブシステムが、約３０℃〜約５０℃の範囲の温度で前記試薬を用いて前記血液試料をインキュベートするように構成される、請求項４８から５１のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項５３】
前記インキュベーションサブシステムが、約４０℃の温度で前記試薬を用いて前記血液試料をインキュベートするように構成される、請求項４８から５２のいずれか一項に記載のシステム。