(57)【要約】要約書なし。【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳類の心臓疾患、その存在または患者の心電図において延長したＱＴ−ｃ間隔が認められることで検出できるその羅病性、の治療または予防方法であって、
体外で酸化ストレスおよび電磁放射に付された適合型の哺乳類血液のアリコートを、その疾患に羅患したまたはその羅病性を有する哺乳類患者に投与することからなる方法。
【請求項２】
該疾患が心臓の不安定性である請求項１の方法。
【請求項３】
該疾患が不整脈である請求項１の方法。
【請求項４】
該患者が突然の心臓死に羅病性を有する請求項１の方法。
【請求項５】
該哺乳類患者が乳幼児突然死症候群に羅病性の乳児である請求項１の方法。
【請求項６】
該哺乳類患者が該血液アリコートの投与の前に少なくとも０.４４０秒のＱＴ−ｃ間隔を示す、請求項１〜５のいずれかの方法。
【請求項７】
該電磁放射が紫外光である、請求項１〜６のいずれかの方法。
【請求項８】
該酸化ストレスが気体の酸素／オゾン混合ガスであり、紫外光に曝されると同時に血液アリコートにバブリングされる請求項７の方法。
【請求項９】
該血液アリコートが約４０〜５０℃の範囲の温度で維持される請求項８の方法。
【請求項１０】
該アリコートが約５〜１５ ｍｌの量の自己の血液であり、患者に筋肉内投与される請求項１〜９の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、医学的処置、医学的処置に有用な組成物、並びにかかる組成物の製造および使用の方法に関する。より詳しくは、哺乳類患者における心臓不整脈および心疾患による突然死のリスクおよび発症を減らすための処置および組成物に関する。
【０００２】
（背景技術）
北米で循環器疾患により毎年死亡する約百万人の内、約半分は心室不整脈（心室頻脈または細動）が原因で、「突然死」として定義される。かかる悪性不整脈に進行するハイリスクの患者の識別は、効果的な予防の方策が適用できるので、保健医療提供者にとっては主要な挑戦である。
【０００３】
重症の心室不整脈は、心臓細胞の電気的性質の不均質性のために進行する。心臓細胞は、脱分極といわれる心筋を覆って広がる電気の波によって、心臓の必要なポンプ運動を提供するように収縮する。該細胞が再度収縮できる前に、次の拍動のために再分極といわれる静止状態に回復しなければならない。心臓細胞における再分極の非均質な回復のために、重症の心室不整脈が進行することは一般的に知られている。このように心筋に近接する領域は電気活性の異なる持続時間を有し得る。もし一つの領域が完全に回復（再分極）され、その結果再度刺激されることができ、一方隣接する領域がなお一部脱分極しているなら、延長した回復（一部脱分極）の領域から全部が回復している領域への電流に電位差がある。この電流（リエントリー）は期外収縮を生じ、いくつかの条件下では持続した心室頻脈が生じ得る。
【０００４】
心臓の異なる領域からの心臓の電気的な回復時間の変化は、心臓の心電図（ＥＣＧ）におけるＱＴ間隔に反映される。ＱＴ間隔は、各心臓拍動中の心臓の電気的活性の全持続時間を表す。それは通常、例えば心拍数における公知の依存関係に補正するバゼット(Bazett)の式またはフリデリシア(Fridericia)式を用いて補正され、ＱＴ−ｃを得る。ＱＴ−ｃの正常値は約０.４４秒までである。電気活性の減少した均一性が生じて、不安定性、不整脈および突然死を導き得る心筋の異常は、ＱＴ間隔の延長としてしばしば検出され得る。
【０００５】
心臓の電気活性の不均質性を表現する別の方法は、ＱＴ分散、すなわちＱＴｄであり、心電図リードから拍動する心臓の異なる位置で決定したＱＴ間隔の変化、すなわち最短のＱＴ間隔から最長のＱＴ間隔を表す。
【０００６】
遅延したＱＴ間隔を示す哺乳類の患者における、ＱＴ間隔を減少させる方法を提供し、それによってかかる患者の突然の心臓死のリスクを減らすことが本発明の目的である。
【０００７】
哺乳類患者における不整脈を予防し、発症もしくは重症化を減らし、または治療するための方法および組成物を提供することもさらに本発明の目的である。
【０００８】
いずれかの医学的疾患、その存在または延長したＱＴ間隔で示される、もしくは延長したＱＴ間隔が関連する哺乳類患者における羅病性、の治療または予防方法を提供することが、本発明のさらなるより一般的な目的である。
【０００９】
（発明の概要）
本発明によれば、患者の血液のアリコートを取り出し、酸化ストレスおよび紫外光のような電磁放射のそれへの適用で体外にてストレスをかけ、次いで患者に再注入するプロセスによって、患者の不整脈および突然の心臓死の羅病性を示す哺乳類患者における延長したＱＴ−ｃ間隔が、減少し得ることを見出した。かかる処置で、患者におけるＱＴ−ｃ間隔が十分減少し、それは不整脈および突然の心臓死の羅病性の減少を示す。下記の実施例のセクションで記載した臨床試験において、ＱＴ−ｃ間隔におけるこの減少は、突然の心臓死の顕著な減少に関連していた。本発明に従った処置なしでは、患者がＱＴ−ｃ間隔の伸張を示したという示唆もある。
【００１０】
本発明によれば、血液のアリコートは、該血液、または分離した血液の細胞フラクション、または分離した細胞および血液の非細胞フラクションの混合物を、酸化ストレッサー(stressor)および電磁放射の組み合わせ（適宜熱ストレッサーと共に、同時または連続して）に曝すことで、体外で修飾される。
【００１１】
（発明の詳細な説明）
本発明の好ましいプロセスによれば、以下により詳しく記載されているように、血液のアリコートを延長したＱＴ間隔を示すヒト被験者から抽出し、血液のアリコートを或るストレッサーでエキソビボ処置する。本明細書で用いる用語「アリコート(aliquot)」、「血液のアリコート」または類似の用語には、全血、血小板を含む分離した血液の細胞フラクション、血漿を含む分離した血液の非細胞フラクション、およびそれらの組み合わせが含まれる。ストレッサーの効果は、アリコートに含まれる血液、および／またはそれの細胞もしくは非細胞フラクションを修飾する。修飾したアリコートは次いでワクチン接種に適したいずれかの経路で、好ましくは、動脈内注射、筋肉内注射、静脈内注射、皮下注射、腹腔内注射、および経口、経鼻または直腸投与から選択され、最も好ましくは筋肉内注射で、被験者の体内に再導入される。
【００１２】
血液のアリコートが本発明の方法に従いエキソビボで曝されるストレッサーは、温度ストレス（体温より上または下の血液温度）、酸化環境および電磁放射から選択され、個々にまたはいずれかと組み合わせて、同時にまたは連続して用いられる。適当に、ヒト被験者において、アリコートは、被験者の体内に再導入する際、異常なＱＴ間隔の十分な減少が被験者で得られる十分な量を有する。好ましくは、アリコートの量は、約４００ ｍｌまで、好ましくは約０.１から約１００ ｍｌ、より好ましくは約５から約１５ ｍｌ、さらにより好ましくは約８から約１２ ｍｌ、最も好ましくは約１０ ｍｌであり、抗凝血剤、例えば２ ｍｌのクエン酸ナトリウムと共に用いられる。
【００１３】
本発明によれば、血液に適当な修飾を確保するために、前述の３つのストレッサーのすべてを、治療中アリコートに同時に適用されることが好ましい。本発明のいくつかの態様においては、上記ストレッサーのいずれか２つを適用させること、例えば温度ストレスと酸化ストレス、温度ストレスと電磁放射、または電磁放射と酸化ストレスを適用させることも好ましい。ストレッサーの適当なレベルを用いて、それによって被験者のＱＴ間隔を減少させるよう血液を効果的に修飾することに注意すべきである。
【００１４】
温度ストレッサーは処理されるアリコートを通常の体温以上の温度に加温するか、またはアリコートを通常の体温以下に冷やす。温度は温度ストレッサーがアリコート中に含まれる血液で過度の溶血を起こさないように選択され、処理されるアリコートが被験者に注射されるとき、異常なＱＴ間隔が減少するように選択される。好ましくは、温度ストレッサーは、アリコートの全部または一部の温度が約５５℃まで、より好ましくは約−５℃から約５５℃の範囲になるように適用される。
【００１５】
本発明のいくつかの好ましい態様において、アリコートの温度は、アリコートの平均温度が約５５℃の温度を超えないように、より好ましくは約４０℃から約５０℃で、さらにより好ましくは約４０℃から約４４℃で、最も好ましくは約４２.５±１℃であるように、通常の体温以上に昇温される。
【００１６】
他の好ましい態様において、アリコートは、アリコートの平均温度が約−５℃から約３６.５℃の範囲で、より好ましくは約１０℃から約３０℃で、さらにより好ましくは約１５℃から約２５℃であるように、通常の体温以下に冷却される。
【００１７】
酸化環境のストレッサーは、固体、液体または気体の酸化剤のアリコートに適用され得る。好ましくは、アリコートを医療グレードの酸素およびオゾンガスの混合ガスに曝すことが含まれ、最も好ましくはアリコートに、前述の温度範囲で、少量の構成成分としてオゾンを含む医療グレードの酸素ガスの気流でバブリングすることである。気流のオゾン含量および気流の流速は、好ましくは血液アリコートに導入されるオゾンの量が、それ自身でまたは他のストレッサーと組み合わせて、治療が有効とならないような過度の細胞のダメージのレベルまで上がらないように選択される。都合よくは、気流は、約３００μｇ／ｍｌまでの、好ましくは約１００μｇ／ｍｌまでの、より好ましくは約３０μｇ／ｍｌの、さらにより好ましくは約２０μｇ／ｍｌまでの、特に好ましくは約１０μｇ／ｍｌから約２０μｇ／ｍｌの、最も好ましくは約１４.５±１.０μｇ／ｍｌのオゾン濃度を有する。気流は都合よくは、標準温度および標準圧力で、約２.０リットル／分までの、好ましくは約０.５リットル／分までの、より好ましくは約０.４リットル／分までの、さらにより好ましくは約０.３３リットル／分までの、最も好ましくは約０.２４±０.０２４リットル／分の速度で、アリコートに供給される。気流の流速の下限は、好ましくは０.０１リットル／分以上、より好ましくは０.１リットル／分以上、さらにより好ましくは０.２リットル／分以上である。
【００１８】
電磁放射ストレッサーは都合よくは、アリコートが前述の温度に維持され、酸素／オゾンの混合ガスがアリコートにバブリングされながら、処理中のアリコートに電磁放射源から照射して適用される。好ましい電磁放射は、光工学的放射、より好ましくはＵＶ、可視および赤外光で、さらにより好ましくはＵＶ光から選択される。最も好ましいＵＶ源はＵＶ−Ｃ帯波長を主として照射するＵＶランプ（複数）、すなわち約２８０ｎｍより短波長（複数）である。かかるランプはまたかなりの量の可視および赤外光も照射し得る。標準ＵＶ−Ａ（約３１５から約４００ｎｍの波長）およびＵＶ−Ｂ（約２８０から約３１５ｎｍの波長）源に対応する紫外光も用いられ得る。例えば、前述の温度および酸化環境のストレッサーと同時に適用されるかかるＵＶ光の適当な用量は、約１５から約２５ワットの組み合わせたパワー出力でランプから得られ、アリコートを入れたサンプル容器を取り囲むように並べられ、各ランプが１メートルの距離で、約４５〜６５ｍＷ／ｃｍ２の強度を出力される。サンプル瓶を取り囲む８個までのかかるランプは、１５〜２５ワットの２５３.７ｎｍで組み合わせた出力を伴い、約０.０２５から約１０ジュール／ｃｍ２、好ましくは約０.１から約３.０ジュール／ｃｍ２の血液表面での全ＵＶ光エネルギー伝達の強度で操作して、都合よく用いられ得る。好ましくは４個のかかるランプが用いられる。
【００１９】
アリコートがストレッサーに曝される時間は、通常約６０分までの時間範囲である。時間は、電磁放射の選択された強度、温度、酸化剤の濃度およびアリコートに供給される速度にある程度依存する。他のストレッサーレベルが定まれば、最適な時間を確立するいくつかの実験がオペレーターにおいて必要であり得る。ほとんどのストレッサー条件下、好ましい時間は約２分から約５分、より好ましくは約３または約３ １／３分のおよその範囲である。出発時の血液温度、およびあらかじめ決めた温度に加温または冷却される速度は、被験者により変化する傾向にある。かかる処置で、被験者に容易に注射できる修飾した血液アリコートが提供される。
【００２０】
本発明の好ましいプロセスの実行において、米国特許第4,968,483号(Mueller)に記載のタイプの装置を用いて、血液アリコートはストレッサーで処置し得る。アリコートは、適当な、無菌の、ＵＶ光−透過の容器に入れられ、機械にはめられる。ＵＶランプは、気流をアリコートに適用して酸化ストレスを提供する前に、定めた時間、スイッチを入れて、ＵＶランプの出力を安定化させる。アリコートの温度があらかじめ決められた値、例えば４２.５±１℃に調整されながら、ＵＶランプは一般的に付けられる。次いで組成がわかっており、流速がコントロールされた酸素／オゾンの混合ガスは、アリコートが３つのストレッサーすべてを同時に受けれるように、上述したような約６０分までのあらかじめ決めた時間、好ましくは２分〜５分、最も好ましくは約３分間アリコートに適用させる。このように、血液は目的の効果を得るために本発明に従って適当に修飾される。
【００２１】
被験者は好ましくは一連の処置、すなわち血液アリコートの取り出し、上述のようなそれの処置および被験者への処置されたアリコートの再投与からなる個々の処置を行う。一連のかかる処置は、長い連続する日の処置した血液アリコートの毎日の投与を含むか、または示された時間の最初の毎日の処置のコース、続いて間隔を置いて、次いで１またはそれ以上にさらに毎日の処置からなり得る。
【００２２】
一つの好ましい態様において、被験者は処置された血液の４〜６個のアリコートの投与からなる初期の処置のコースが提供される。別の好ましい態様において、被験者は、連続するアリコートのいずれかの１対を連日投与するか、またはアリコートを患者に投与しない１日から２１日の休薬期間、すなわち約３日から１５日である連続のアリコートの１つの選択された１対を分ける休薬期間で分けて投与して、処置された血液の２個から４個のアリコートの投与からなる治療の初期のコースが提供される。より特別で好ましい態様において、処置の初期のコースの投与計画は、第一および第二のアリコートが連日投与され、第二および第三のアリコートの投与の間に１１日の休薬期間が提供される、合計３つのアリコートからなる。
【００２３】
処置の初期のコースに続いて処置の付加のコースをその後に投薬することが好ましい。好ましくは、処置の続くコースは処置の初期のコースの終わりから少なくとも約３週間で投与される。一つの特に好ましい態様において、被験者は、処置の初期のコースの終わりに続いて３０日毎に６ヶ月間、処置された血液の１つのアリコートの投与からなる処置の第二のコースを受ける。
【００２４】
処置の連続するコースの間の間隔は、本発明の処置の正の効果が維持されるようなもので、個々の被験者の観察される応答の基づいて決定され得ることは認識されている。
【００２５】
突然の心臓死のリスクがある心臓疾患を有する多くの患者には、かかる患者を看護する現行の標準を含む様々な医薬品が投与される。本発明の方法は好ましくは突然の心臓死または不整脈の他の治療と組み合わせて補助的な処置として用いられ得る。かかる他の治療の好ましい例には、１つまたはそれ以上のＡＣＥ阻害剤、β−ブロッカー、アルドステロンアンタゴニスト、ジゴキシン、利尿薬が含まれる。
【００２６】
本発明は、さらに以下の特定の実施例の言及で説明され、記載される。
【００２７】
実施例
この実施例は、進行性の慢性うっ血性心不全の少数のヒト患者の治療を含む臨床試験を記載する。該患者は、４０％（平均２２％）未満の左心室駆出率（ＬＶＥＦ）で、３００ｍ未満の距離を６分で歩くような、ＮＹＨＡ分類ＩＩＩ〜ＩＶの慢性うっ血性心不全である。患者のすべては、ＡＣＥ阻害剤、β−ブロッカー、アルドステロンアンタゴニスト、ジゴキシン、利尿薬を含む、他のＣＨＦ(うっ血性心不全)の治療を受けていた。
【００２８】
プロトコール：
患者は２日連続の各々の日に処置した血液の１注射、続いて最初の注射後１４日間開始する月ごとの間隔で５ヶ月間単回の注射を受けた。各注射は１０ ｍｌの量であった。各個々の処置は以下の工程からなった：
１．患者自身の静脈の血液（１０ ｍｌ）を注射用クエン酸ナトリウム（ＵＳＰ，２ ｍｌ）に採血。クエン酸ナトリウムをサンプルに加え、処置の間血液を凝固から防いだ。
２．クエン酸で処理した血液サンプルを無菌のディスポーザブル容器に移す。
３．同時に以下に暴露して血液サンプルをエキソビボ処置する：
４２.５℃の昇温した温度；
２４０ ｍｌ／分の流速（標準の温度および圧力で）で血液サンプルにバブリングしたオゾン（１４.５μｇ／ｍｌ）を含む医療グレードの酸素の混合ガス；および
２５３.７ｎｍの波長の紫外光。
４．無菌の使い捨て容器から無菌のシリンジへ血液サンプルを移す。
５．ほとんどの場合同じ箇所への局所麻酔（２％ノボケインまたは同等薬１ｍｌ）に続く処置した血液サンプル（１０ ｍＬ）の同じ患者の臀部の筋肉への筋肉内注射。
【００２９】
上記工程（３）に記載の血液サンプルのエキソビボ処置は、米国特許第4,968,483号（Mueller et al）に一般的に記載されている器具で行われた。血液サンプルは３分間３つのストレッサーすべてに同時に暴露された。
【００３０】
患者は各往診の間有害な事象をモニターされた。なお、予後のフォローアップは、生存、入院および重厚な有害事象をモニターすることにした。
【００３１】
試験には７３人の進行性ＣＨＦ患者が含まれた。ＱＴ−ｃ間隔は、患者の心電図から、試験の開始時（ベースライン）および終了時（ファイナル）に、処置を受けた２０人およびプラセボを受けた１５人の３５人の患者で測定した。各群の２人の患者はＱＴ間隔を広げることが知られた薬物（アミオダロン）であった。β−ブロッカーを受けた患者（各群の５０％）は、試験を開始する前の少なくとも３ヶ月間は安定な投薬であった。残っている３８人の患者においては、ＱＴ−ｃ間隔は、心房細動、伝導異常、ペースメーカーの使用のため、または患者が死亡により完結しなかったため、両時間ポイントで信頼性のある測定ができなかった。
【００３２】
標準１２リードＥＣＧは、試験の開始時および終了時に得た。ＱＴｃは、リードＩＩおよびＶ４において３連続拍動からのＱＴ間隔を平均して決定した。
【００３３】
試験の開始時（ベースライン）、平均ＱＴ−ｃ間隔は活性処置群およびプラセボ群の両方にほとんど同じで、活性処置群が０.４６０秒およびプラセボ群が０.４５９秒であった（上記の正常範囲は上限が０.４４０秒である）。試験の終わりに（フォローアップ）、プラセボを受けている患者における平均ＱＴ−ｃ間隔はほとんど１５ミリ秒悪化して、０.４７４秒になったのに対し、本発明の好ましい態様に従った処置を受けた群では、平均ＱＴ−ｃ間隔が１７ミリ秒改善されて、０.４４３秒となった。試験終了時における３０ミリ秒の違いは、統計的な有意差と解釈された。さらに処置の６ヶ月後の平均ＱＴ−ｃ間隔の０.４４５秒は、正常範囲の上限の０.４４０秒に接近するものであった。これらの結果は表１、２および３に示す。
【００３４】
2005522493.tif 000002
2005522493.tif 000003
2005522493.tif 000004
【００３５】
正常範囲より長い試験の開始時のＱＴ−ｃ間隔を有する患者の活性処置のサブグループの結果（平均０.５０８秒，１０人の患者）が分離され、プラセボ患者（平均０.４９０秒，９人の患者）の対応するサブグループの結果と比較すると、処置した患者のＱＴ−ｃ間隔の減少はよりずっと顕著であった。活性処置のサブグループは処置のコース後０.４６２秒への平均ＱＴ−ｃ間隔の減少を示したが、プラセボサブグループによる減少は平均で０.４８３であり、統計的な有意差はなかった。
【００３６】
さらに、プラセボ群（７例死亡，すべて心臓に関係する）および活性処置群（１例死亡，心臓に関連しない）との間の死亡率の顕著な相異、すなわち、処置群における改善したＱＴ−ｃ間隔でよく説明ができる相異があった。
【００３７】
フリデリシア(Fridericia)式で補正された対応する図面は、試験の開始時（ベースライン）で処置群が０.４４７秒、プラセボ群が０.４５０秒であり；試験の終了時（フォローアップ）で処置群が０.４２９秒、プラセボ群が０.４６３秒であった。これらの結果は以下の表４、５および６に示され、２つの群の平均値は、ＱＴｃをミリ秒で垂直軸にプロットした図面の図に付随する棒グラフとして表される。
【００３８】
2005522493.tif 000005
2005522493.tif 000006
2005522493.tif 000007
【００３９】
ＱＴ分散（ＱＴｄ）はまた、各ＥＣＧリードにおける３連続の拍動からＱＴ間隔の平均値を出し、最短と最長の平均値の差を計算して、同じＥＣＧから決定した。
【００４０】
ＱＴｄは、処置群においては試験の間１６ミリ秒減少し、一方プラセボ群においては１９ミリ秒増加し、試験の終了時に群間で有意な差を示した（５９.７１±２２. ８５対８２.０８±３２.３５ミリ秒，分散分析ｐ＝０.０３５）。
【００４１】
延長した脱分極、並びに不均一再分極（ＱＴ分散）は、催不整脈に寄与する（Tomaselli et al,「Sudden cardiac death in heart failure. The rule of abnormal repolarization」, Circulation 1994; 90: 2534-9）。ＱＴｃおよびＱＴｄがプラセボで処置した患者において増加するが、本発明のプロセスの処置を受けた患者で減少した情報は、処置された患者における電気生理学的なリモデリングの反転を示唆する。このことは改善された全心臓の機能のマーカーでもあり得る。
【００４２】
これらの結果は、延長したＱＴ間隔に関連するまたは延長したＱＴ間隔に現れる様々な心疾患を治療するためにまたは徴候に対して予防的な効果を行うために、本発明のプロセスに潜在的可能性を示すものである。これらにはトルサード・ド・ポアンツ(torsade de pointes)のような心室不整脈、並びに心疾患からの突然死が含まれる。さらに、乳幼児突然死症候群（ＳＩＤＳ）は延長したＱＴ−ｃ間隔に関連している。したがって、本発明のプロセスは、直面するＳＩＤのリスクを低減して、延長したＱＴ−ｃ間隔を示す乳幼児の治療において潜在的な可能性を有する。
【００４３】
本発明は特定の好ましい態様に関して記載されているが、多くのバリエーションが本発明の精神または範囲から逸脱しないで本発明に成され得ることは認識されている。すべてのかかる修飾は以下の特許請求の範囲に含まれることが意図されている。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１】付随する図面は、特定の実施例に記載されているように、発明の好ましいプロセスによる処置の前後の患者のＱＴ間隔の棒グラフである。
【図１】
2005522493.tif 000008
【手続補正書】
【提出日】平成17年2月9日(2005.2.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳類の心臓疾患、その存在または哺乳類患者の心電図において延長したＱＴ−ｃ間隔が認められることで検出できるその羅病の治療薬または予防薬の製造における、
体外で酸化ストレスおよび電磁放射に付された適合型の哺乳類血液のアリコートの使用。
【請求項２】
心臓不安定の治療のための請求項１の使用。
【請求項３】
不整脈の治療のための請求項１の使用。
【請求項４】
突然の心臓死に羅病性を有する患者の治療のための請求項１の使用。
【請求項５】
乳幼児突然死症候群に羅病性の乳児の治療のための請求項１の使用。
【請求項６】
該哺乳類患者が該血液アリコートの投与の前に少なくとも０.４４０秒のＱＴ−ｃ間隔を示す、請求項１〜５のいずれかの使用。
【請求項７】
該電磁放射が紫外光である、請求項１〜６のいずれかの使用。
【請求項８】
該酸化ストレスが気体の酸素／オゾン混合ガスであり、紫外光に曝されると同時に血液アリコートにバブリングされる請求項７の使用。
【請求項９】
該血液アリコートが該体外で付される間約４０〜５０℃の範囲の温度で維持される請求項７または８の使用。
【請求項１０】
約５〜１５ ｍｌの量の自己の血液アリコートの、患者に筋肉内投与するのに適した請求項１〜９の使用。