(57)【要約】  本発明は、高血小板凝集による病気の予防と治療に使用される医薬品の製造に適する化学式Ｉで表される化合物に関するものである。  【化１】2005510560.tif 000010
2005510560.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2005510560.tif 000008
で表される化合物、及び／又は式Ｉで表される化合物の全ての立体異性体、及び／又は比率の如何に関わらずそれらの混合物、及び／又は式Ｉで表される化合物の生理学的に許容され得る塩。
上記式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ８、Ｒ10及びＲ11は、それぞれ独立に、
１. 水素原子、
２. （Ｃ1−Ｃ6）−アルキル〔ここで、アルキルは直鎖又は有枝で、無置換又は以下の基：
２.１  −ＯＨ、
２.２  ＝Ｏ、
２.３  −Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル［ここで、アルキルは直鎖又は有枝で、無置換
又は以下の基：
２.３.１  −ＣＮ、
２.３.２  −ＮＨ2、
２.３.３  ＝Ｎ−ＯＨ又は
２.３.４  ＝Ｎ−Ｏ（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル（ここで、アルキルは直鎖又は有枝である）
でそれぞれ独立に１回、２回又は３回置換される］、
２.４  −Ｏ−（Ｃ2−Ｃ6）−アルケニル（ここで、アルケニルは直鎖又は有枝で、無
置換又は上記２.３.１から２.３.４記載の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換される）、
２.５  −Ｏ−（Ｃ2−Ｃ6）−アルキニル（ここで、アルキニルは直鎖又は有枝で、無
置換又は上記２.３.１から２.３.４記載の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換される）、
２.６  −アリール［ここで、アリールは無置換又は以下の基：
２.６.１  ハロゲン、
２.６.２  −（Ｃ1−Ｃ4）−アルキル（ここで、アルキルは直鎖又は有枝である）、
２.６.３  −Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル（ここで、アルキル基は直鎖又は有枝である）、
２.６.４  −ＯＨ、又は
２.６.５  −（Ｃ1−Ｃ4）−アルキル（ここで、アルキルは直鎖又は有枝で、ハロゲンにより１回、２回又は３回置換される）
でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換される］、
２.７  −Ｃ(Ｏ)−ＯＨ、
２.８  −Ｃ(Ｏ)−Ｏ−ＮＨ2、
２.９  −Ｃ(Ｏ)−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ4）−アルキル（ここで、アルキルは直鎖又は有枝で
ある）、
２.１０  −ＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル（ここで、アルキルは直鎖又は有枝で、無
置換又は上記２.３.１から２.３.４記載の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換される）、
２.１１  −ＮＨ−（Ｃ2−Ｃ6）−アルケニル（ここで、アルケニルは直鎖又は有枝で
、無置換又は上記２.３.１から２.３.４記載の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換される）、
２.１２  −ＮＨ−（Ｃ2−Ｃ6）−アルキニル（ここで、アルキニルは直鎖又は有枝で
、無置換又は上記２.３.１から２.３.４記載の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換される）、
２.１３  −ＮＨ2、又は
２.１４  ハロゲン
でそれぞれ独立に１回、２回又は３回置換される〕、
３. （Ｃ2−Ｃ6）−アルケニル（ここで、アルケニルは直鎖又は有枝で、無置換又は上記２.１から２.１４記載の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換される）、
４. （Ｃ2−Ｃ6）−アルキニル（ここで、アルキニルは直鎖又は有枝で、無置換又は上記２.１から２.１４記載の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換される）、
５. −Ｏ−Ｒ9［ここでＲ9は、
１. （Ｃ1−Ｃ6）−アルキル（ここで、アルキルは直鎖又は有枝で、無置換又は上記２.１から２.１４記載の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換される）、
２. （Ｃ2−Ｃ6）−アルケニル（ここで、アルケニルは直鎖又は有枝で、無置換又は上記２.１から２.１４記載の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換される）、又は
３. （Ｃ2−Ｃ6）−アルキニル（ここで、アルキニルは直鎖又は有枝で、無置換又は上記２.１から２.１４記載の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換される）］、
６. −ＮＨ−Ｒ9（ここで、Ｒ9は上記５で定義されたものである）、
７. −ＮＨ−Ｃ(Ｏ)−Ｈ、
８. −ＮＨ−Ｃ(Ｏ)−Ｒ9（ここで、Ｒ9は上記５で定義されたものである）、
９. −ＮＨ−アリール（ここで、アリールは無置換又はＲ9で１回、２回又は３回置換さ
れる）、
１０. ＝Ｎ−ＯＨ、
１１. ＝Ｎ−Ｏ−Ｒ9（ここで、Ｒ9は上記５で定義されたものである）、
１２. −Ｓ−Ｈ、
１３. −Ｓ−Ｒ9（ここで、Ｒ9は上記５で定義されたものである）、
１４. −Ｓ(Ｏ)−Ｒ9（ここで、Ｒ9は上記５で定義されたものである）、
１５. −Ｓ(Ｏ)2−Ｒ9（ここで、Ｒ9は上記５で定義されたものである)、
１６. −ＳＯ2、
であるか、又は
Ｒ４とＲ５又はＲ10とＲ11は、それぞれ結合している炭素原子と一緒に芳香族又は飽和であり、そして酸素、窒素及び硫黄の群から選択される１又は２個のヘテロ原子を含む３−、４−、５−又は６−員環系を形成し、
Ｒ７は上記２から１６に記載されたＲ１の意味を有し、そして
−Ｃ14−Ｃ15−間の結合は一重結合又は二重結合である。
【請求項２】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ６はそれぞれ−ＯＨであり、
Ｒ４及びＲ５は、それぞれ結合している炭素原子と一緒にエポキシドを形成し、
Ｒ７は、−Ｓ−ＣＨ2−ＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ基であり、
Ｒ８は、＝Ｏであり、
Ｒ10及びＲ11は、それぞれ水素原子であり、そして
−Ｃ14−Ｃ15−間の結合は一重結合である、
請求項１記載の式Ｉで表される化合物、及び／又は式Ｉで表される化合物の生理学的に許容され得る塩。
【請求項３】
式Ｉで表される化合物が、式II：
【化２】
2005510560.tif 000009
で表される化合物である、請求項１又は２記載の式Ｉで表される化合物。
【請求項４】
ａ）微生物ＤＳＭ１４４５２又はその変異種もしくは変種の液体栄養培地中での培養及び化合物チオペリレノールの単離及び精製、又は
ｂ）化学的誘導化によるチオペリレノールの式Ｉで表される化合物への変換、又は
ｃ）工程ａ）又は工程ｂ）で得られ、そしてその化学構造式のためエナンチオマー型である式Ｉで表される化合物を、エナンチオマー活性的に純粋な酸又は塩基と塩を形成することにより、キラル定常相でのクロマトグラフィー分画により、或いは、アミノ酸のようなキラル的にまたエナンチオマー的にも純粋な化合物と誘導体化することにより純粋なエナンチオマーにし、得られるジアステレオマーを分離し、そしてキラル補助グループの除去、又は
ｄ）工程ａ）、工程ｂ）又は工程ｃ）により調製された式Ｉで表される化合物を遊離型として単離、或いは酸性又は塩基性の基を有している場合は、それを生理学的に許容され得る塩への変換、
することから成る、請求項１〜３のいずれか一項に記載の式Ｉで表される化合物、及び／又は式Ｉで表される化合物の立体異性体、及び／又は比率の如何に関わらずそれらの混合物、及び／又は式Ｉで表される化合物の生理学的に許容され得る塩の製法。
【請求項５】
微生物ＤＳＭ１４４５２。
【請求項６】
請求項１〜３のいずれか一項に記載の式Ｉで表される化合物の少なくとも１つ、及び／又は式Ｉで表される化合物の生理学的に許容され得る塩、及び／又は式Ｉで表される化合物の任意な立体異性体の有効成分を、医薬的に適当でありかつ生理学的に許容され得る担体物質、又は添加剤、及び／又は他の活性化合物そして補助剤物質と共に含有する医薬品。
【請求項７】
高血小板凝集が引き起す疾患の予防と治療のための医薬品製造のための請求項１記載の式Ｉで表される化合物の少なくとも１つ、及び／又は式Ｉで表される化合物の全ての立体異性体、及び／又は比率の如何に関わらずそれらの混合物、及び／又は式Ｉで表される化合物の生理学的に許容され得る塩の使用であって、ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ10及びＲ11は、それぞれ独立に、
１. 水素原子、
２. （Ｃ1−Ｃ6）−アルキル〔ここで、アルキルは直鎖又は有枝で、無置換又は下の基：
２.１  −ＯＨ、
２.２  ＝Ｏ、
２.３  −Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル［ここで、アルキルは直鎖又は有枝で、無置換
又は以下の基：
２.３.１  −ＣＮ、
２.３.２  −ＮＨ2、
２.３.３  ＝Ｎ−ＯＨ、又は
２.３.４  ＝Ｎ−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル（ここで、アルキルは直鎖又は有枝である）
でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換される）］、
２.４  −Ｏ−（Ｃ2−Ｃ6）−アルケニル（ここで、アルケニルは直鎖又は有枝で、無
置換又は上記２.３.１から２.３.４記載の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換される）、
２.５  −Ｏ−（Ｃ2−Ｃ6）−アルキニル（ここで、アルキニルは直鎖又は有枝で、無
置換又は上記２.３.１から２.３.４記載の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換される）、
２.６  −アリール［ここで、アリールは無置換又は以下の基：
２.６.１  ハロゲン、
２.６.２  −（Ｃ1−Ｃ4）−アルキル（ここで、アルキルは直鎖又は有枝である）、
２.６.３  −Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル（ここで、アルキルは直鎖又は有枝である）、
２.６.４  −ＯＨ、又は、
２.６.５  −（Ｃ1−Ｃ4）−アルキル（ここで、アルキルは直鎖又は有枝で、ハロゲンで１回、２回又は３回置換される）
でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換される］、
２.７  −Ｃ(Ｏ)−ＯＨ
２.８  −Ｃ(Ｏ)−Ｏ−ＮＨ2、
２.９  −Ｃ(Ｏ)−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ4）−アルキル（ここで、アルキルは直鎖又は有枝で
ある）、
２.１０  −ＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル（ここで、アルキルは直鎖又は有枝で、無
置換又は上記２.３.１から２.３.４記載の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換される）、
２.１１  −ＮＨ−（Ｃ2−Ｃ6）−アルケニル（ここで、アルケニルは直鎖又は有枝で
、無置換又は上記２.３.１から２.３.４記載の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換される）、
２.１２  −ＮＨ−（Ｃ2−Ｃ6）−アルキニル（ここで、アルキニルは直鎖又は有枝で
、無置換又は上記２.３.１から２.３.４記載の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換される）、
２.１３  −ＮＨ2、又は
２.１４  ハロゲン
でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換される〕
３. （Ｃ2−Ｃ6）−アルケニル（ここで、アルケニルは直鎖又は有枝で、無置換又は上記２.１から２.１４記載の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換される）、
４. （Ｃ2−Ｃ6）−アルキニル（ここで、アルキニルは直鎖又は有枝で、無置換又は上記２.１から２.１４記載の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換される）、
５. −Ｏ−Ｒ9［ここで、Ｒ9は
１. （Ｃ1−Ｃ6）−アルキル（ここで、アルキルは直鎖又は有枝で、無置換又は上記２.１から２.１４記載の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換される）、
２. （Ｃ2−Ｃ6）−アルケニル（ここで、アルケニルは直鎖又は有枝で、無置換又は上記２.１から２.１４記載の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換される）、又は
３. （Ｃ2−Ｃ6）−アルキニル（ここで、アルキニルは直鎖又は有枝で、無置換又は上記２.１から２.１４記載の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換される）］、
６. −ＮＨ−Ｒ9（ここで、Ｒ9は上記５で定義されたものである）、
７. −ＮＨ−Ｃ(Ｏ)−Ｈ、
８. −ＮＨ−Ｃ(Ｏ)−Ｒ9（ここで、Ｒ9は上記５で定義されたものである）、
９. −ＮＨ−アリール（ここで、アリールは無置換又はＲ9で１回、２回又は３回置換さ
れる）、
１０. ＝Ｎ−ＯＨ、
１１. ＝Ｎ−Ｏ−Ｒ9（ここで、Ｒ9は上記５で定義されたものである）、
１２. −Ｓ−Ｈ、
１３. −Ｓ−Ｒ9（ここで、Ｒ9は上記５で定義されたものである）、
１４. −Ｓ(Ｏ)−Ｒ9（ここで、Ｒ9は上記５で定義されたものである）、
１５. −Ｓ(Ｏ)2−Ｒ9（ここで、Ｒ9は上記５で定義されたものである）、
１６. −ＳＯ2、
であるか、又は
Ｒ４とＲ５又はＲ10とＲ11は、それぞれ結合している炭素原子と一緒に芳香族又は飽和であり、そして酸素、窒素及び硫黄の群から選択される１又は２個のヘテロ原子を含む３−、４−、５−又は６−員環を形成し、そして
−Ｃ14−Ｃ15−間の結合は一重結合又は二重結合である、
上記の使用。
【請求項８】
高血小板凝集が引き起す疾患の予防と治療のための医薬品製造のための請求項７に記載の式Ｉで表される化合物の少なくとも１つの使用であって、ここで
Ｒ１、Ｒ３及びＲ８は、それぞれ独立に−ＯＨ又は＝Ｏであり、
Ｒ２は−ＯＨであり、
Ｒ４及びＲ５はそれぞれ独立に、−ＯＨ又は水素原子であるか、又は、
Ｒ４及びＲ５はそれぞれ結合している炭素原子と一緒にエポキシドを形成し、
Ｒ６、Ｒ10及びＲ11はそれぞれ独立に、−ＯＨ又は水素原子であるか、又は、
Ｒ10及びＲ11は、それぞれに結合している炭素原子と一緒にエポキシドを形成し、
Ｒ７は水素原子又は−Ｓ−ＣＨ2−ＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ基であり、そして
−Ｃ14−Ｃ15−間の結合は一重結合又は二重結合である、
上記の使用。
【請求項９】
式Ｉにおいて、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ６はそれぞれ−ＯＨ、Ｒ４及びＲ５はそれぞれ結合している炭素原子と一緒にエポキシドを形成し、Ｒ７は−Ｓ−ＣＨ2−ＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ基、Ｒ８は＝Ｏ、Ｒ10及びＲ11はそれぞれ水素原子、そして−Ｃ14−Ｃ15−間の結合は一重結合を示す化合物であるチオペリレノール、
式ＩにおいてＲ１、Ｒ２、Ｒ５及びＲ６はそれぞれ−ＯＨ、Ｒ３及びＲ８はそれぞれ＝Ｏ、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ10及びＲ11はそれぞれ水素原子、そして−Ｃ14−Ｃ15−間の結合は二重結合を示す化合物であるアルテルペリレノール、
式ＩにおいてＲ１、Ｒ２、Ｒ５及びＲ６はそれぞれ−ＯＨ、Ｒ３及びＲ８はそれぞれ＝Ｏ、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ10及びＲ11はそれぞれ水素原子、そして−Ｃ14−Ｃ15−間の結合は一重結合を示す化合物であるアルテルトキシンＩ、
式ＩにおいてＲ１、Ｒ２及びＲ６はそれぞれ−ＯＨ、Ｒ３及びＲ８はそれぞれ＝Ｏ、Ｒ４及びＲ５はそれぞれに結合している炭素原子と一緒にエポキシドを形成し、Ｒ７、Ｒ10及びＲ11はそれぞれ水素原子、そして−Ｃ14−Ｃ15−間の結合は一重結合を示す化合物であるアルテルトキシンII、或いは、
式ＩにおいてＲ１及びＲ３はそれぞれ＝Ｏ、Ｒ２及びＲ８はそれぞれ−ＯＨ、Ｒ４とＲ５及びＲ10とＲ11は、それぞれに結合している炭素原子と一緒にエポキシドを形成し、Ｒ６及びＲ７はそれぞれ水素原子、そして−Ｃ14−Ｃ15−間の結合は一重結合を示す化合物
であるアルテルトキシンIII
が使用される、請求項７又は８記載の使用。
【請求項１０】
高血小板凝集により引き起される病気が、心筋梗塞症、不安定狭心症、卒中発作、一過性虚血発作及び間欠性跛行症のような末梢動脈閉塞症である、請求項７〜９のいずれか一項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、真菌ＤＳＭ１４４５２のＳＴ００３３６７菌株の発酵により生成されるヒドロペリレン誘導体又はそれらの化学誘導体、それら誘導体の製法、並びに医薬品及び血小板阻害剤としての使用に係るものである。
【０００２】
ヘキサヒドロペリレン誘導体、又はオクタヒドロペリレン誘導体のようなヒドロペリレン誘導体は、種々の微生物によって生成される。既知のヒドロペリレン誘導体としては、以下のものがある。
【０００３】
アルテルトキシンＩ、II及びIII（M. E. Stark et al. J. Nat. Prod. 49, 866-871, 1986）、
アルテイチン（D. Robeson et al. Experientia, 40, 1248-1250, 1984）、
アルテルロシン類（A. Stierle et al. J. Nat. Prod. 52, 42-47, 1989）及び
アルテナリア種（Alternaria spp.）からのアルテルペリレノール（T. Okuno et al. Tetrahedron Lett. 24, 5653-5656, 1983）；
ステムフィリウムボツリオサム（Stemphylium botryosum）の培養菌から採取されたス
テムフィルトキシン類及びステムフィピレノール（A. Arnone et al. J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1, 1986, 525-530）。
【０００４】
アルテルトキシン類及びステムフィルトキシン類は、植物毒素であり、突然変異誘発の影響をもたらし、また、人の食料品の価値を低下させるものである。それ故、これらの化合物については、７０以上もの文献に記載がある（T. J. Schrader et al. Teratog., Carcinog., Mutagen. 21, 261-274, 2001）。
【０００５】
アルテルトキシン類及びステムフィルトキシン類に由来する危険性は、当然ながらこれらの化合物が含有しているエポキシド（オキシラン類）による癌誘発性効果という関連においてよく研究され広く知られている、加えて、アルテルペリレノールは、弱いながらもテロメラーゼ阻害効果を有しているとの報告がある（K.-I. Togashi et al. Oncol. Res.
10, 449-453, 1998）；しかしながら、ＩＣ50値は３０μMであり、酵素阻害特性として
は弱いものである。
【０００６】
血栓塞栓病は、特に西側先進国においては死に至る最も頻度の高い病気である。それ故、この病気の効果的な予防法及び治療法は、極めて重要度の高いものである。血栓は、静脈中及び脈管内で形成された血餅であることが知られている。血栓は、殊に動脈中での栓球の凝集に続いて形成される。血管壁の損傷、血流の遅滞、及び血餅化の促進はこれら全てが血栓を形成する方向に働く。
【０００７】
栓球（血小板）は、円盤状で無核の血球であり、損傷を受けたときには、止血及び血液凝固を確実に引き起こすように作用する。栓球は、複雑な過程を経る凝固という方法によって止血を引き起こすが、このように栓球の凝固は、恒常性維持にとっては必須の過程である。栓球の不全は、比較的小さな損傷であっても、重大な出血を引き起こす一方で、凝固が増大する方向での状態では、血栓症及び塞栓症の危険度を高めることとなる。殊に、血小板の不全は、しばしば致命的な結果となることがあり、数種の化合物が、既に栓球凝固阻害剤として使用されている。これらの中でよく知られているものとしては、アセチルサリチル酸（アスピリン（Aspirin(R)））、チクロピジン（チクリッド（Tiklyd(R)））及び類縁体のクロピドグレルがある。しかしながら、副作用のために、これら全ての調剤の使用は限定されている。それ故に、動脈血栓塞栓症の治療にまた長期間の予防薬として用いられる細胞内の血小板活性化阻害剤が強く望まれている。このような性質を有する剤は、例えば、心筋梗塞症、狭心症、或いは卒中発作のような症状に対しても用いることができる。
【０００８】
血液凝固症を阻害又は治療するのに有効な化合物の検索過程において、真菌ＤＳＭ１４４５２のＳＴ００３３６７株により生成されるチオペリレノール、及び他のヒドロペリレン誘導体が、血小板凝集を有効に阻止することができるということが見出された。
【０００９】
それ故本発明は、化学式Ｉ：
【化１】
2005510560.tif 000003
で表される化合物、及び／又は化学式Ｉで表される化合物の全ての立体異性体、及び／又は、比率の如何に関わらずそれらの混合物、及び／又は化学式Ｉで表される化合物の生理学的に許容され得る塩に関するものである。
【００１０】
式Ｉにおいて、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ８、Ｒ10及びＲ11は、それぞれ独立に、
１. 水素原子、
２. （Ｃ1−Ｃ6）−アルキル基で、アルキル基は直鎖又は有枝で、無置換又は以下の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換され、
２.１  −ＯＨ、
２.２  ＝Ｏ、
２.３  −Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル基で、アルキル基は直鎖又は有枝で、無置換又
は以下の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換され、
２.３.１  −ＣＮ、
２.３.２  −ＮＨ2、
２.３.３  ＝Ｎ−ＯＨ、又は
２.３.４  ＝Ｎ−Ｏ（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル基で、アルキル基は直鎖又は有枝で、
２.４  −Ｏ−（Ｃ2−Ｃ6）−アルケニル基で、アルケニル基は直鎖又は有枝で、無置
換又は上記２.３.１から２.３.４記載の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換され、
２.５  −Ｏ−（Ｃ2−Ｃ6）−アルキニル基で、アルキニル基は直鎖又は有枝で、無置
換又は上記２.３.１から２.３.４記載の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換され、
２.６  −アリール基で、アリール基は無置換又は以下の基でそれぞれ独立に、１回、
２回又は３回置換され、
２.６.１  ハロゲン、
２.６.２  −（Ｃ1−Ｃ4）−アルキル基で、アルキル基は直鎖又は有枝で、
２.６.３  −Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル基で、アルキル基は直鎖又は有枝で、
２.６.４  −ＯＨ、又は
２.６.５  −（Ｃ1−Ｃ4）−アルキル基で、アルキル基は直鎖又は有枝で、ハロゲンで１回、２回又は３回置換され、
２.７  −Ｃ(Ｏ)−ＯＨ、
２.８  −Ｃ(Ｏ)−Ｏ−ＮＨ2、
２.９  −Ｃ(Ｏ)−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ4）−アルキル基で、アルキル基は直鎖又は有枝で、
２.１０  −ＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル基で、アルキル基は直鎖又は有枝で、無置
換又は上記２.３.１から２.３.４記載の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換され、
２.１１  −ＮＨ−（Ｃ2−Ｃ6）−アルケニル基で、アルケニル基は直鎖又は有枝で、
無置換又は上記２.３.１から２.３.４記載の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換され、
２.１２  −ＮＨ−（Ｃ2−Ｃ6）−アルキニル基で、アルキニル基は直鎖又は有枝で、
無置換又は上記２.３.１から２.３.４記載の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換され、
２.１３  −ＮＨ2、又は
２.１４  ハロゲン、
【００１１】
３. （Ｃ2−Ｃ6）−アルケニル基で、アルケニル基は直鎖又は有枝で、無置換又は上記２.１から２.１４記載の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換され、
４. （Ｃ2−Ｃ6）−アルキニル基で、アルキニル基は直鎖又は有枝で、無置換又は上記２.１から２.１４記載の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換され、
５. −Ｏ−Ｒ9で、Ｒ9は
１. （Ｃ1−Ｃ6）−アルキル基で、アルキル基は直鎖又は有枝で、無置換又は上記２.
１から２.１４記載の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換され、
２. （Ｃ2−Ｃ6）−アルケニル基で、アルケニル基は直鎖又は有枝で、無置換又は上記２.１から２.１４記載の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換され、又は
３. （Ｃ2−Ｃ6）−アルキニル基で、アルキニル基は直鎖又は有枝で、無置換又は上記２.１から２.１４記載の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換され、
６. −ＮＨ−Ｒ9で、Ｒ9は上記５で定義されたものであり、
７. −ＮＨ−Ｃ(Ｏ)−Ｈ、
８. −ＮＨ−Ｃ(Ｏ)−Ｒ9で、Ｒ9は上記５で定義されたものであり、
９. −ＮＨ−アリール基、アリール基は無置換又はＲ9で１回、２回又は３回置換され、
１０. ＝Ｎ−ＯＨ、
１１. ＝Ｎ−Ｏ−Ｒ9で、Ｒ9は上記５で定義されたものであり、
１２. −Ｓ−Ｈ、
１３. −Ｓ−Ｒ9で、Ｒ9は上記５で定義されたものであり、
１４. −Ｓ(Ｏ)−Ｒ9で、Ｒ9は上記５で定義されたものであり、
１５. −Ｓ(Ｏ)2−Ｒ9で、Ｒ9は上記５で定義されたものであり、
１６. −ＳＯ2、又は
Ｒ４とＲ５又はＲ10とＲ11は、それぞれ互いに結合している炭素原子により、それぞれ３−、４−、５−又は６−員環を形成し、それらは酸素、窒素及び硫黄の群から選択される１又は２個の複素原子を含む芳香環又は飽和環であり、
Ｒ７は上記２から１６記載の通りに定義され、そして
−Ｃ14−Ｃ15−間の結合は一重結合又は二重結合である。
【００１２】
本発明は更に、化学式Ｉで表される化合物に関するものであり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ６はそれぞれ−ＯＨ、
Ｒ４及びＲ５は、それぞれ互いに結合している炭素原子によりエポキシドを形成し、
Ｒ７は、−Ｓ−ＣＨ2−ＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ基であり、
Ｒ８は、＝Ｏ、
Ｒ10及びＲ11は、それぞれ水素原子であり、そして−Ｃ14−Ｃ15−間の結合は一重結合であり、及び／又は化学式Ｉで表される化合物の生理学的に許容され得る塩である。
【００１３】
本発明は更に、化学式Ｉで表される化合物であって、光学活性的に純粋なもの及び比率の如何に関わらずエナンチオマー混合物やジアステレオマー混合物のような立体異性体の混合物にも関するものである。
【００１４】
「ハロゲン」とは、フッ素、塩素、臭素又はヨー素を意味する。「（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル基」とは、炭素鎖が直鎖又は有枝で、炭素原子１から６個を含む、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ｉ−プロピル基、ブチル基、第三ブチル基、ペンチル基、及びヘキシル基のような炭化水素基を意味する。「（Ｃ2−Ｃ6）−アルケニル基」とは、炭素鎖が直鎖又は有枝で、炭素原子２から６個を含み、１、２又は３個の二重鎖を有するものであり、例えば、アリル基、クロチル基、１−プロペニル基、ペンタ−１,３−ジエニル基、ペンテニル基、及びヘキセニル基のような炭化水素基を意味する。「（Ｃ2−Ｃ6）−アルキニル基」とは、炭素鎖が直鎖又は有枝で、炭素原子２から６個を含み、１又は２個の三重鎖を有する、例えば、プロピニル基、ブチニル基及びペンチニル基のような炭化水素基を意味する。
【００１５】
「アリール基」とは、フェニル基、ベンジル基、並びに１−ナフチル基、及び２−ナフチル基を意味する。
【００１６】
「Ｒ４及びＲ５は、それぞれ互いに結合する炭素原子により、それぞれ、３−、４−、５−又は６−員環を形成し、それらは酸素、窒素及び硫黄の群から選択される１又は２個の複素原子を含む芳香環又は飽和環である」との記載は、エポキシド、アジリジン、アゼチジン、アゼチン、ピロール、イミダゾリン、ピラゾリジン、イミダゾリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジン、ピペラジン、ピラン、オキサゾール、イソキサゾール、２−イソキサゾリン、イソキサゾリジン、モルホリン、オキソチオラン、チオピラン、チアゾール、イソチアゾール、２−イソチアゾリン、イソチアゾリジン、又はチオモルホリンを意味する。
【００１７】
本発明は更に、化学式II：
【化２】
2005510560.tif 000004
で表される化合物に関するものであり、化学式IIで表される化合物は、チオペリレノール（実験式Ｃ23Ｈ20ＮＯ9Ｓ；分子量４７２.４７）と命名されているが、生理学的に許容され得るそれぞれの塩にも関するものである。
【００１８】
更に本発明は、化学式Ｉで表される化合物、及び／又は化学式Ｉで表される化合物の立体異性体、及び／又は比率の如何に関わらずこれらの混合物、及び／又は化学式Ｉで表される化合物の生理学的に許容され得る塩の製法に関するものであり、これらの製法は、
ａ）微生物ＤＳＭ１４４５２又はその変異種または変種を液体栄養培地中で培養した後に、チオペリレノールを単離及び精製、又は
ｂ）化学的誘導化によるチオペリレノールの化学式Ｉで表される化合物への変換、又は
ｃ）工程ａ）又は工程ｂ）で得られた化学式Ｉで表される化合物は、その化学構造に由来するエナンチオマー型であるため、エナンチオマー活性的に純粋な酸又は塩基と塩を形成させた後にキラル定常相でのクロマトグラフィー分画により、或いは、アミノ酸のようなキラル的にまたエナンチオマー的に純粋な化合物との誘導体を合成して得られるジアステレオマーからキラルの異なるグループを除去する工程、又は
ｄ）工程ａ）、工程ｂ）又は工程ｃ）により調製された化学式Ｉで表される化合物の遊離型としての単離、或いは酸性又は塩基性の基を有している場合は、それを生理学的に許容され得る塩に変換する工程、
から成るものである。
【００１９】
微生物ＤＳＭ１４４５２（内部の識別番号ＳＴ００３３６７）は真菌に属し、白色の基底菌糸とわずかな気菌糸を有している。この菌株は、ブダペスト条約に基づいて２００１年８月３日に寄託し、受託番号はＤＳＭ１４４５２である。受託先は、DSMZ−Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen［German collection of microorganisms and cell cultures］GmbH, Mascheroder Weg 1b, D-38124 Braunschweig である。
【００２０】
ＤＳＭ１４４５２の表現形質の異なる細胞とは、ＤＳＭ１４４５２の培養中に、チオペリレノールを産生するコロニーを単離することにより得られたＤＳＭ１４４５２由来の菌株を意味する。ＤＳＭ１４４５２の変異種とは、突然変異を起こしたＤＳＭ１４４５２の培養菌のうち、チオペリレノールを産生するＤＳＭ１４４５２由来の菌株を意味する。ＤＳＭ１４４５２変異種は、従来既知の方法である、物理学的方法としては、例えば、紫外線やＸ線照射のような照射により、或いは化学突然変異誘発剤、例えば、エチルメタンスルホネート（ＥＭＳ）；２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン（ＭＯＢ）又はＮ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（ＭＮＮＧ）により誘発させることができる。
【００２１】
変異種は、例えば、培養液から標品を採取してチオペリレノール阻害活性を測定することにより検出することができる。
【００２２】
チオペリレノールは、ＤＳＭ１４４５２の培養により生成される。液体培地は、ショ糖、コーンスターチ、デキストロース、乳糖、Ｄ−マニトール、モラッセス、又は麦芽エキスのような炭素源、及び大豆粉、落花生粉、プロテイン、ペプトン、ペプチド、トリプトン、肉エキス、酵母エキス、又はアンモニア塩又は硝酸塩のような窒素源を含んでいる。
【００２３】
液体培地はまた、リン酸水素ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カルシウム、硫酸カルシウム、炭酸カルシウム、硫酸マグネシウム、又はリン酸水素カリウムのような無機塩類を含んでいる。更に、メチルオレイン酸や大豆油のような脂質を液体培地に添加することができる。その他に、鉄塩、マグネシウム塩、銅塩、亜鉛塩、若しくはコバルト塩又は他の金属塩のような微量元素を添加することもできる。
【００２４】
好適な液体培地は約０.０５％〜５％、好ましくは１％〜３％のポテトデキストロース
、及び約０.０５％〜３％、好ましくは０.０５％〜１％の酵母エキスを含んでいる。パーセントは、全液体培地に対する重量比である。
【００２５】
ＤＳＭ１４４５２は、１８℃〜３５℃、好ましくは２３℃〜２８℃の温度で、ｐＨは３〜１０、好ましくは５〜９、特に好ましくは、４〜６の範囲で培養することができる。培養は、初めは振とうフラスコ中で通気して行い、その後、ファーメンター中で空気又は純
酸素の通気攪拌培養で行った。微生物培養は、ファーメンター中で４８時間〜７２０時間、好ましくは７２時間〜１４４時間の時間で行うことができる。
【００２６】
チオペリレノールの産生量は、培養９６時間〜１４４時間後に最大に達する。真菌ＤＳＭ１４４５２株は、また液体培地において、化学式Ｉで表される数種の化合物の混合体を産生する。そしてその化学式Ｉで表される１又はそれ以上の化合物の定量比は、液体培地の組成に依存して変化し得るものである。
【００２７】
付言するに、化学式Ｉで表される化合物を全く産生しない微生物であっても、或いは、検出限界以下の量しか産生しない微生物であっても、化学式Ｉで表される個々の化合物の合成を促すために、同一の培地組成物を使用した。
【００２８】
チオペリレノールは、培養液から直接に単離することもでき、或いは、細胞を例えば遠心分離や濾過によって分離した後に単離することもできる。
【００２９】
チオペリレノールは、溶媒により抽出することにより、或いはXAD16、HP20、MCl Gel(R) CHP20P又はイオン交換樹脂のような樹脂に吸着させることによって単離することができる。その後、例えばDiaion(R) HP−20（三菱化成株式会社製）、Amberlite(R) XAD 7（Rohm and Haas, USA）又はAmberchrom(R) CG（Toso Haas, Philadelphia, USA）のような吸着樹脂を用いたクロマトグラフィーにより精製することができる。分画は、広範なｐＨ域で行うことができる。好適にはｐＨ１〜ｐＨ９の範囲で、また殊に好適には、ｐＨ２〜ｐＨ８の範囲で行うことができる。更に、これに加えて、逆相カラムを用いた高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で分画することも適している。他の精製法としては、Fractogel(R) TSK HW-40S又はSephadex(R) LH-20のようなモレキュラーシーブ（分子篩用粒子）を用いる方法も挙げられる。
【００３０】
微生物により生成されたチオペリレノールは、チオペリレノール誘導体の合成出発物質として用いられる。化学式Ｉで表される化合物は、既知の方法により、例えば、チオペリレンのエポキシド基を加水分解、又は加溶媒分解によりアルコール又はエステルに変換させることにより得られる。エポキシドは、水と酸を加え、更にアルコール、チオール、アミン及びグリニャール化合物のような求核試薬を加えることにより、酸又は塩基触媒の存在下で、極めて活性な化合物となる。更にシアン化水素を加えることにより、β−ヒドロキシプロピオニトリル誘導体に導くことができる。これに加えて、例えばルイス酸による触媒で転移反応が起こり、カルボニル誘導体を得ることができる。これらの反応は従来より知られており、例えば、Jerry March, Advanced Organic Chemistry, John Wiley & Sons, 4th Edition, 1992 に記載されている。
【００３１】
他の誘導体は、チオペリレノールの３−チオ−乳酸基を還元的に又は酸化的に反応させることにより得ることができる。文献中の既知の方法において脱離基と呼ばれ、それを他の適当な基で置換するために、硫化物を用いることは有利な方法と言える。また選択的反応を行うためには、従来既知の方法において、反応前にしかるべき保護基を誘導することも有利な方法である。この保護基は化学反応の後に除去し、その後反応生成物を精製することができる。
【００３２】
化学式Ｉで表される化合物の薬理学的に許容され得る塩としては、Remington's Pharmaceutical Sciences（17th edition, p. 1418(1985))に記載されているような有機塩又は無機塩の双方を挙げることができる。生理学的に許容され得る塩は、塩形成可能な立体異性体をも含めて化学式Ｉで表される化合物から、従来既知の方法により調製することができる。
【００３３】
水酸化物、炭酸塩、炭酸水素塩、アルコラート、及びアンモニアのような塩基試薬、或いは有機塩基、例えば、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エタノールアミン、トリエタノールアミン、或いはまた、塩基性アミノ酸、例えば、リシン、オルニチン、又はアルギニンのような塩基性試薬を用いて、カルボン酸は安定なアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、又は適当な場合はアンモニウム塩誘導体を形成する。化学式Ｉで表される化合物が塩基を有している場合は、強酸を用いて安定な酸付加塩を調製することができる。塩酸、臭酸、硫酸、ベンゼンスルホン酸、トリフルオロメチルスルホン酸、シクロヘキシルアミドスルホン酸、酢酸、蓚酸、酒石酸、コハク酸、及びトリフルオロ酢酸のような無機酸や有機酸は、いずれもこの目的に適している。
【００３４】
本発明はまた、化学式Ｉで表される化合物の少なくとも１つを有効成分として含有する、及び／又は、化学式Ｉで表される化合物の生理学的に許容され得る塩、及び／又は、化学式Ｉで表される化合物の任意な立体異性体で、薬理学的に適当でありかつ、生理学的に許容し得る担体、添加剤、及び／又は他の活性物質や補助剤と共に用いることができる医薬品に関するものである。
【００３５】
薬理学的特性として、化学式Ｉで表される化合物は、高血小板凝集が発生し、血栓又は塞栓によって引き起こされるような病気の予防及び治療に適するものである。これらの病気としては、例えば、心筋梗塞症、狭心症、卒中発作、一過性虚血発作、及び間欠性跛行症のような末梢動脈閉塞症（末梢血管病）が挙げられる。
【００３６】
本発明は更に、化学式Ｉで表される化合物のうち少なくとも１つの化合物、及び／又は化学式Ｉで表される化合物の全ての立体異性体、及び／又は比率の如何に関わらずこれらの混合物、及び／又は化学式Ｉで表される化合物の生理学的に許容され得る塩の高血小板凝集の発生に基づく種々の病気の予防と治療のための医薬品製造への使用で、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ10及びＲ11は、それぞれ独立に、
１. 水素原子、
２. （Ｃ1−Ｃ6）−アルキル基で、アルキル基は直鎖又は有枝で、無置換又は以下の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換され、
２.１  −ＯＨ、
２.２  ＝Ｏ、
２.３  −Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル基で、アルキル基は直鎖又は有枝で、無置換又
は以下の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換され、
２.３.１  −ＣＮ、
２.３.２  −ＮＨ2、
２.３.３  ＝Ｎ−ＯＨ、又は
２.３.４  ＝Ｎ−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル基で、アルキル基は直鎖又は有枝で、
２.４  −Ｏ−（Ｃ2−Ｃ6）−アルケニル基で、アルケニル基は直鎖又は有枝で、無置
換又は上記２.３.１から２.３.４記載の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換され、
２.５  −Ｏ−（Ｃ2−Ｃ6）−アルキニル基で、アルキニル基は直鎖又は有枝で、無置
換又は上記２.３.１から２.３.４記載の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換され、
２.６  −アリール基で、アリール基は無置換又は以下の基でそれぞれ独立に、１回、
２回又は３回置換され、
２.６.１  ハロゲン、
２.６.２  −（Ｃ1−Ｃ4）−アルキル基で、アルキル基は直鎖又は有枝で、
２.６.３  −Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル基で、アルキル基は直鎖又は有枝で、
２.６.４  −ＯＨ、又は、
２.６.５  −（Ｃ1−Ｃ4）−アルキル基で、アルキル基は直鎖又は有枝で、ハロゲンで１回、２回又は３回置換され、
２.７  −Ｃ(Ｏ)−ＯＨ、
２.８  −Ｃ(Ｏ)−Ｏ−ＮＨ2、
２.９  −Ｃ(Ｏ)−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ4）−アルキル基で、アルキル基は直鎖又は有枝で、
２.１０  −ＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル基で、アルキル基は直鎖又は有枝で、無置
換又は上記２.３.１から２.３.４記載の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換され、
２.１１  −ＮＨ−（Ｃ2−Ｃ6）−アルケニル基で、アルケニル基は直鎖又は有枝で、
無置換又は上記２.３.１から２.３.４記載の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換され、
２.１２  −ＮＨ−（Ｃ2−Ｃ6）−アルキニル基で、アルキニル基は直鎖又は有枝で、
無置換又は上記２.３.１から２.３.４記載の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換され、
２.１３  −ＮＨ2、又は
２.１４  ハロゲン、
【００３７】
３. （Ｃ2−Ｃ6）−アルケニル基で、アルケニル基は直鎖又は有枝で、無置換又は上記２.１から２.１４記載の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換され、
４. （Ｃ2−Ｃ6）−アルキニル基で、アルキニル基は直鎖又は有枝で、無置換又は上記２.１から２.１４記載の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換され、
５. −Ｏ−Ｒ9で、Ｒ9は
１. （Ｃ1−Ｃ6）−アルキル基で、アルキル基は直鎖又は有枝で、無置換又は上記２.
１から２.１４記載の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換され、
２. （Ｃ2−Ｃ6）−アルケニル基で、アルケニル基は直鎖又は有枝で、無置換又は上記２.１から２.１４記載の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換され、又は
３. （Ｃ2−Ｃ6）−アルキニル基で、アルキニル基は直鎖又は有枝で、無置換又は上記２.１から２.１４記載の基でそれぞれ独立に、１回、２回又は３回置換され、
６. −ＮＨ−Ｒ9で、Ｒ9は上記５で定義されたものであり、
７. −ＮＨ−Ｃ(Ｏ)−Ｈ、
８. −ＮＨ−Ｃ(Ｏ)−Ｒ9で、Ｒ9は上記５で定義されたものであり、
９. −ＮＨ−アリール基で、アリール基は無置換又はＲ9で１回、２回又は３回置換され
、
１０. ＝Ｎ−ＯＨ、
１１. ＝Ｎ−Ｏ−Ｒ9で、Ｒ9は上記５で定義されたものであり、
１２. −Ｓ−Ｈ、
１３. −Ｓ−Ｒ9で、Ｒ9は上記５で定義されたものであり、
１４. −Ｓ(Ｏ)−Ｒ9で、Ｒ9は上記５で定義されたものであり、
１５. −Ｓ(Ｏ)2−Ｒ9で、Ｒ9は上記５で定義されたものであり、
１６. −ＳＯ2、又は
Ｒ４とＲ５又はＲ10とＲ11は、それぞれ互いに結合している炭素原子によりそれぞれ３−、４−、５−又は６−員環を形成し、それらは酸素、窒素及び硫黄の群から選択される１又は２個の複素原子を含む芳香環又は飽和環であり、
そして−Ｃ14−Ｃ15−間の結合は一重結合又は二重結合である。
【００３８】
本発明は更に、高血小板凝集の発生に基づく種々の病気の予防と治療のための医薬品の製造のために、化学式Ｉで表される化合物のうち少なくとも１つの化合物の使用に関するものである。
【００３９】
ここで、Ｒ１、Ｒ３及びＲ８はそれぞれ独立に、−ＯＨ又は＝Ｏ、
Ｒ２は−ＯＨ、
Ｒ４及びＲ５は、それぞれ独立に、−ＯＨ、又は水素原子、或いはＲ４及びＲ５は、それぞれ互いに結合している炭素原子によりエポキシドを形成し、
Ｒ６、Ｒ10及びＲ11は、それぞれ独立に、−ＯＨ、又は水素原子、或いはＲ10及びＲ11は、それぞれ互いに結合している炭素原子によりエポキシドを形成し、
Ｒ７は、水素原子又は−Ｓ−ＣＨ2−ＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ基で、
そして−Ｃ14−Ｃ15−間の結合は一重結合又は二重結合である。
【００４０】
本発明は更に、高血小板凝集に基づく種々の病気の予防と治療のための医薬品製造のために、化学式Ｉで表される化合物のうち少なくとも１つの化合物の使用に関するものであり、
化学式Ｉにおいて、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ６はそれぞれ−ＯＨ、Ｒ４及びＲ５はそれぞれ互いに結合している炭素原子によりエポキシドを形成し、Ｒ７は−Ｓ−ＣＨ2−ＣＨ
ＯＨ−ＣＯＯＨ基であり、Ｒ８は＝Ｏであり、Ｒ10及びＲ11は、それぞれ水素原子であり、そして−Ｃ14−Ｃ15−間の結合は一重結合で表されるチオペリレノール、
或いは化学式Ｉにおいて、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５及びＲ６はそれぞれ−ＯＨ、Ｒ３及びＲ８はそれぞれ＝Ｏ、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ10及びＲ11はそれぞれ水素原子、そして−Ｃ14−Ｃ15−間の結合は二重結合で表されるアルテルペリレノール、
或いは、化学式Ｉにおいて、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５及びＲ６はそれぞれ−ＯＨ、Ｒ３及びＲ８はそれぞれ＝Ｏ、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ10及びＲ11はそれぞれ水素原子、そして−Ｃ14−Ｃ15−間の結合は一重結合で表されるアルテルトキシンＩ、
或いは、化学式Ｉにおいて、Ｒ１、Ｒ２及びＲ６はそれぞれ−ＯＨ、Ｒ３及びＲ８はそれぞれ＝Ｏ、Ｒ４及びＲ５はそれぞれ互いに結合している炭素原子によりエポキシドを形成し、Ｒ７、Ｒ10及びＲ11はそれぞれ水素原子、そして−Ｃ14−Ｃ15−間の結合は一重結合で表されるアルテルトキシンII、
或いは、化学式Ｉにおいて、Ｒ１及びＲ３はそれぞれ＝Ｏ、Ｒ２及びＲ８はそれぞれ−ＯＨ、Ｒ４とＲ５及びＲ10とＲ11は、それぞれ互いに結合している炭素原子によりエポキシドを形成し、Ｒ６及びＲ７はそれぞれ水素原子、そして−Ｃ14−Ｃ15−間の結合は一重結合で表されるアルテルトキシンIII
の使用に関するものである。
【００４１】
本発明はまた、薬理学的に適当でありかつ生理学的に許容され得る賦形剤、適当な他の活性物質、添加剤、又は補助剤と共に、化学式Ｉで表される化合物のうち少なくとも１つの化合物を含有する医薬品を投薬に適する剤に製剤する方法に関するものである。
【００４２】
固形剤又は生薬の調剤として適する例としては、粒剤、粉剤、ショ糖コーティング錠剤、錠剤、マイクロカプセル剤、坐剤、シロップ剤、液剤、懸濁剤、乳剤、ドロップ剤、又は、有効成分の放出制御能を有する注射可能な溶液及び調剤を挙げることができる。
【００４３】
使用法によっては、製剤中に通常用いられている担体、崩壊剤、結合剤、コーティング剤、膨化剤、滑沢剤、香味剤、甘味剤、可溶化剤等のような補薬を用いることができる。よく用いられる補助剤としては、炭酸マグネシウム、二酸化チタン、乳糖、マニトール及びその他の糖、タルク、乳タンパク質、ゲラチン、デンプン、セルロース及びその誘導体、動物性油、植物性油、タラ肝油、ヒマワリ油、落花生油又はゴマ油、ポリエチレングリコール、及びグリセロールのような単価又は多価アルコールや蒸留水のような溶媒を挙げることができる。
【００４４】
製薬は投薬量単位で製剤され、そして投薬されるのが好ましく、各投薬量単位は本発明に係る化学式Ｉで表される化合物を有効成分として含んでいる投薬単位で表示している。
【００４５】
錠剤、カプセル剤、ショ糖コーティング錠剤又は坐剤のような固形剤の投薬単位の場合は、投薬量は体重当り０.１mg／kg〜１０００mg／kg、好ましくは０.２mg／kg〜１００mg／kgである。化学式Ｉで表される化合物を１日当り最小限の有効量として含んでいる投薬量単位は、例えば１０００mgまでであり、好ましくは約５０mg〜３００mgであり、アンプル剤の注射用溶液の場合は３００mgまでであり、好ましくは約１０mg〜１００mgである。
【００４６】
１日当りの投薬量は、化学式Ｉで表される化合物の活性にもよるが、有効成分として約２０mg〜１０００mg、好ましくは約１００mg〜５００mgであるが、これは体重７０kgの成人患者の場合を標準としている。しかしながら、これらの値よりも適度に高く又は少ない１回当りの投薬量を使用することは可能である。１回当りの投薬量は、単一投薬又は複数回に分けた単位での単一投薬として投与することも、或いは、適当な間隔をおいた連続投薬の方法により投薬することもできる。
【００４７】
微生物ＤＳＭ１４４５２もまた本発明の対象とする題目の１つである。
【００４８】
以下の実施例は、本発明を明らかにするためのものであって、本発明の範囲はいかなる意味においても限定することを意図するものではない。
【００４９】
実施例１：真菌ＤＳＭ１４４５２のＳＴ００３３６７菌株のグリセロール培養の調製
滅菌した１００mlのエーレンマイヤーフラスコに、３０mlの液体培地（麦芽エキス２.
０％、酵母エキス０.２％、グルコース１.０％、(ＮＨ4)2ＨＰＯ4 ０.０５％、ｐＨ６.０）を入れ、真菌ＤＳＭ１４４５２のＳＴ００３３６７菌株を接種し、振とう培養機上で、２５℃で毎分１４０回転で６日間培養した。この培養液１.５mlを採取し、８０％グリセロール２.５mlで希釈し、−１３５℃で保存した。
【００５０】
実施例２：真菌ＤＳＭ１４４５２のＳＴ００３３６７菌株のエーレンマイヤーフラスコ中での初期培養の調製
滅菌した３００mlのエーレンマイヤーフラスコ中に１００mlの液体培地（麦芽エキス２.０％、酵母エキス０.２％、グルコース１.０％、(ＮＨ4)2ＰＯ4 ０.０５％、ｐＨ６）を入れ、真菌ＤＳＭ１４４５２のＳＴ００３３６７菌株を接種し、振とう培養機上で、２５℃で毎分１４０回転で４日間培養した。この初期培養液の２mlを採取し、主培養の調製に用いた。
【００５１】
実施例３：真菌ＤＳＭ１４４５２のＳＴ００３３６７菌株の培養によるチオペリレノールの生成
フラスコの場合：
ポテトデキストロース２.４％、酵母エキス０.２％、ｐＨ５.１の液体培地を含む滅菌
した３００mlのエーレンマイヤーフラスコに試験管斜面培養（上記培地に、寒天２％を含むもの）、又は実施例２において記載した初期培養液２mlを接種した後、振とう培養機上で２５℃で毎分１４０回転で培養した。化学式Ｉで表される１種又はそれ以上の化合物の最大生成は９６時間培養後に得られた。
ファーメンターの場合：
真菌ＤＳＭ１４４５２のＳＴ００３３６７菌株の初期培養は、２リットルのエーレンマイヤーフラスコ中で（フラスコ中の培養液量は５００ml）２５℃、毎分１４０回転で行い、７２時間後にファーメンターに接種した。菌の培養は８リットルのファーメンター中で行った。培養条件は次のように調整し、本発明に係るチオペリレノール化合物の生成を誘導した。
温度＝２５℃；通気＝０.５vvm；回転数＝２００〜２２０毎分回転数（rpm）；接種量
＝６％；培養時間＝９６時間
【００５２】
初期培養
麦芽エキス                  ２０ｇ／Ｌ
酵母エキス                    ２ｇ／Ｌ
グルコース                  １０ｇ／Ｌ
(ＮＨ4)2ＰＯ4                  ０.５ｇ／Ｌ
主培養
ポテトデキストロース汁      ２４ｇ／Ｌ
酵母エキス                    ２ｇ／Ｌ
デスモフェン                  １.２５mL／Ｌ
消泡剤として、エタノール様多価アルコール溶液の連続添加を用いることができた。最大生成は培養９６時間から１４４時間後に得られた。
【００５３】
実施例４：天然生成物チオペリレノールの単離
実施例３に記載の培養によって得られた培養液１５リットルを遠心分離して菌体を除去した。菌体（１.５リットル）を５リットルのエタノールで抽出した。得られた清澄なア
ルコール相を減圧下で約２リットルにまで濃縮した後、培養濾液と一緒にした。濁った水溶液は、吸着樹脂MCI Gel(R) CHP20Pを充填した。１リットル容量のカラム上に積載した
。カラムの直径は６cmで、高さは３５cmである。カラムは、２−プロパノールで溶出後、０.１％のアンモニウムとホルマートの水溶性緩衝液ｐＨ４.５の傾斜溶媒で展開した。展開速度は、毎分６０mlで、各分画は２２０mlごとに分画採集した。チオペリレノールを含有している画分２１及び２２をＨＰＬＣ分析法で検定して採集し、減圧下で濃縮した。カラムSP 250／21  NUCLEOSIL 100−7 C18 HD(R)（Macherey−Nagel, Dueren）を装着した
分画用ＨＰＬＣで、０.１％アンモニアとホルマートとの水溶液及び９５％アセトニトリ
ル水溶液からなる傾斜展開液を用いて精製チオペリレノールを得ることができた。展開速度は毎分２５mlで、チオペリレノールはアセトニトリル比率がおよそ２５％のカラム分画において採取された。減圧下で徐々に濃縮することにより１０mgのチオペリレノール結晶が得られた。
【００５４】
実施例５：チオペリレノールの高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）
カラム：YMC−Pack Pro C18(R)，AS−303，２５０×４.６mm，Ｓ−５μm；
展開相：０〜２分：０.０２％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）
２〜２０分：０.１％ＴＦＡ中０％から１００％のアセトニトリル
２０〜２５分：１００％アセトニトリル
展開速度：毎分１ml
検出は２１０nmにおける紫外線吸収
チオペリレノールの保持時間は、１２.１分に検出された。
【００５５】
実施例６：チオペリレノールの特性
チオペリレノールの物理化学的及びスペクトル分析の特性は以下のように要約される。
外観：
褐色を帯びた結晶で、極性又は半極性の有機溶媒及び中性の水溶性緩衝液に可溶性。中性及び弱酸性並びに非酸化培地では安定ではあるが、強酸及び強アルカリ性では不安定。
実験式：Ｃ23Ｈ20Ｏ9Ｓ
分子量：４７２.４７
プロトンＮＭＲ及びカーボンＮＭＲは表１を参照。
水／アセトニトリル（１対１）ｐＨ３.０中の紫外線最大吸収は、２１６nm、２５９nm
、２９２nm及び３８３nm。
【００５６】
【表１】
2005510560.tif 000005
【００５７】
実施例７：チオペリレノールの質量分析スペクトル特性
以下の検出結果に基づき、チオペリレノールの質量は４７２と決定された。ＥＳＩ+ス
ペクトルは４９０質量単位(Ｍ＋ＮＨ4)+及び９６２質量単位(２Ｍ＋ＮＨ4)+に弱いピークとして観察された。ＥＳＩ-スペクトルは、中でも４７１質量単位(Ｍ−Ｈ)-にピークが観察された。
【００５８】
ＦＴＩＣＲ型質量分析計を用いることにより、中でも、５６９.０５２５質量単位にＥ
ＳＩ-のピークを観察でき、更に、リン酸付加のピークが観察された。この測定値は、計
算値(Ｍ＋Ｈ2ＰＯ4)-＝Ｃ23Ｈ22Ｏ13ＰＳ＝５６９.０５２４質量単位によく一致する（０
.２ppm誤差）。
【００５９】
ＦＴＩＣＲ型質量分析計によるＭＳ／ＭＳ分析の結果、ＥＳＩ-の断片フラグメンテー
ションは、４７１から３４９質量単位（−Ｃ3Ｈ6Ｏ3Ｓ）、３３１質量単位（−Ｃ3Ｈ8Ｏ4Ｓ）、３１３質量単位（−Ｃ3Ｈ10Ｏ5Ｓ）、３０３質量単位（−Ｃ4Ｈ8Ｏ5Ｓ）、２８５
質量単位（−Ｃ4Ｈ10Ｏ6Ｓ）、２６１質量単位（−Ｃ6Ｈ10Ｏ6Ｓ）及び数種の微小断片であった。
【００６０】
薬理学的実施例
血小板凝集は、就中、Bornの文献（Born，GV，Nature, 1962, 194：927-929）に記載されている血小板凝集の濁度測定法により測定することができる。
【００６１】
検定原理：粒子懸濁の光学密度は、粒子数に依存するが、粒子の大きさには依存しないこと。血小板の懸濁が進むと血小板の凝集が開始すること。その結果、比較的大きな血小板凝集が現われ、光透過を増大させること。この増大が連続的に分光計に記録され、曲線状に表現される。栓球の凝集度又は凝集阻害度は、光透過における変化として測定することができる。カルセインによる細胞染色法は細胞毒性の測定に用いられるものである（Hollo, Z et al., Biochem Biophys Acta 11；1191(2)：384-8, 1994）。生細胞は基質であるカルセインアセトキシメチルエステル（Ｃ−ＡＭ）を取り込むことができ、それを細胞中で、非特異性エステラーゼにより加水分解する。Ｃ−ＡＭは無色で蛍光を発しない。生細胞中では、Ｃ−ＡＭが蛍光を発する加水分解物となることより、細胞の生存数を蛍光度（λex：４８５nm／λem：５３８nm）により測定することができる。
【００６２】
実施例として、ヒドロペリレン誘導体の阻害効果をＩＣ50値で表わした概要が表２に表示してある。ＩＣ50値とは、一定条件下で、栓球凝集を５０％阻止する濃度を意味している。
【００６３】
【表２】
2005510560.tif 000006
【００６４】
この表から明らかなように、栓球凝集の阻止に加えて、ある種のヒドロペリレノール誘導体は細胞毒性をかなりの程度現している。細胞毒性は、殊に、エポキシド基を有する化合物において顕著であった。それ故に、化学式Ｉで表される化合物で、血小板凝集阻止効果を有するもののうち、比較的細胞毒性を示さないものは特に利用価値の高いものである。結論として、エポキシド基を有さないヒドロペリレノール誘導体が望ましいものであるといえる。
【００６５】
実施例８：栓球凝集の阻止検定
栓球凝集検定を実施するために以下の試薬が必要である。
【表３】
2005510560.tif 000007
【００６６】
検定は以下のようにして行った。
タイロード緩衝液：
ＮａＣl                １２０mM
ＫＣｌ                  ２.６mM
ＮａＨＣＯ3             １２mM
ＮａＨ2ＰＯ4×Ｈ2Ｏ     ０.３９mM
ヘペス                  １０mM
グルコース              ５.５mM
ＢＳＡ                  ０.３５％
グルコースとＢＳＡは毎日新しく調製し添加する。
ｐＨは７.４に調整する。
カルセンＡＭ：１mlのＤＭＳＯ（１mM）中１mgのカルセンＡＭ
ヒトアルファトロンビン（保存液）：０.９％ＮａＣｌ １ml中に１０００単位
アクチベーターの最終濃度：１ml中トロンビン０.０５単位又は１ml中コラーゲン１μg
ウォルトマンニン保存液：ＤＭＳＯ（１０mM）の２３３.４３μl中ウォルトマンニン１mg
血小板凝集計（ＰＡＰ４）中の凝集
- 細胞数、μl当り３×１０5栓球
- シリコンガラスミクロチューブ中の粒子塊
- 総量はチューブ当たり４００μl
ミクロチューブ当たり：
- 栓球３２０μl
- １０mM  ＣａＣｌ2（最終濃度０.５mM）２０μl
- 検定に用いる基質  ２０μl
- アゴニスト  ４０μl
対照：
- ブランク（無添加対照）：緩衝液（タイロード、０.３５％BSA）４００μl
- 陰性コントロール：栓球３２０μl
５mM ＣａＣｌ2（最終濃度０.５mM）４０μl
緩衝液  ４０μl
- 陽性コントロール：緩衝液３２０μl
５mM ＣａＣｌ2（最終濃度０.５mM）４０μl
アクチベーター  ４０μl
【００６７】
血小板凝集計のチャンネルのブランク値は、最初に緩衝液を用いて調整した。栓球はピペットでミクロチューブへ移した後、血小板凝集計中で数分間３７℃で保温した。各反応チューブには、マグネティックスターラー（磁気攪拌子）を挿入した後、基質、及びＣａＣｌ2を添加し、血小板凝集計の曲線表示が記録され始めることで、検定開始とした。２
分間のインキュベーション後に、全コントロールに緩衝液を、そして陽性コントロールでは、アクチベーターを添加した。添加後６分で血小板凝集計の曲線表示の記録が開始された。インキュベーションは、３７℃で、攪拌速度は毎分１０５０回転で行った。
【手続補正書】
【提出日】平成15年6月24日(2003.6.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2005510560.tif 000011
［式中、
Ｒ１、Ｒ３及びＲ８は、それぞれ独立に、−ＯＨ又は＝Ｏであり、
Ｒ２は−ＯＨであり、
Ｒ４及びＲ５は、それぞれ独立に−ＯＨもしくは水素原子であるか、又は
Ｒ４及びＲ５は、それぞれ結合している炭素原子と一緒にエポキシドを形成し、
Ｒ６、Ｒ10及びＲ11は、それぞれ独立に、−ＯＨもしくは水素原子であり、又は
Ｒ10とＲ11はそれぞれ結合している炭素原子と一緒にエポキシドを形成し、
Ｒ７は、−Ｓ−ＣＨ2−ＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ基であり、
そして−Ｃ14−Ｃ15−間の結合は一重結合又は二重結合である］
で表される化合物、及び／又は式Ｉで表される化合物の全ての立体異性体、及び／又は比率の如何に関わらずそれらの混合物、及び／又は式Ｉで表される化合物の生理学的に許容され得る塩。
【請求項２】
式Ｉにおいて、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ６は、それぞれ−ＯＨであり、
Ｒ４及びＲ５は、それぞれ結合している炭素原子と一緒にエポキシドを形成し、
Ｒ７は、−Ｓ−ＣＨ2−ＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ基であり、
Ｒ８は、＝Ｏであり、
Ｒ10及びＲ11はそれぞれ水素原子であり、そして
−Ｃ14−Ｃ15−間の結合は一重結合である、
請求項１記載の式Ｉで表される化合物、及び／又は式Ｉで表される化合物の生理学的に許容され得る塩。
【請求項３】
式Ｉで表される化合物が、式II：
【化２】
2005510560.tif 000012
で表される化合物である請求項１又は２記載の式Ｉで表される化合物。
【請求項４】
ａ）微生物ＤＳＭ１４４５２又はその変異種もしくは変種の液体栄養培地中での培養、及び化合物チオペリレノールの単離及び精製、又は
ｂ）化学的誘導化によるチオペリレノールの式Ｉで表される化合物への変換、又は
ｃ）工程ａ）又は工程ｂ）で得られ、そしてその化学構造式のためエナンチオマー型である式Ｉで表される化合物を、エナンチオマー活性的に純粋な酸又は塩基と塩を形成することにより、キラル定常相でのクロマトグラフィー分画により、或いは、アミノ酸のようなキラル的にまたエナンチオマー的にも純粋な化合物と誘導体化することにより純粋なエナンチオマーにし、得られるジアステレオマーを分離し、そしてキラル補助グループの除去、又は
ｄ）工程ａ）、工程ｂ）又は工程ｃ）により調製された式Ｉで表される化合物を遊離型として単離、或いは酸性又は塩基性の基を有している場合は、それを生理学的に許容され得る塩への変換、
することから成る、請求項１〜３のいずれか一項に記載の式Ｉで表される化合物、及び／又は式Ｉで表される化合物の立体異性体、及び／又は比率の如何に関わらずそれらの混合物、及び／又は式Ｉで表される化合物の生理学的に許容され得る塩の製法。
【請求項５】
微生物ＤＳＭ１４４５２。
【請求項６】
請求項１〜３のいずれか一項に記載の式Ｉで表される化合物の少なくとも１つ、及び／又は式Ｉで表される化合物の生理学的に許容され得る塩、及び／又は式Ｉで表される任意な立体異性体の有効成分を、医薬的に適当でありかつ生理学的に許容され得る担体物質、又は添加剤、及び／又は他の活性化合物そして補助剤物質と共に含有する医薬品。
【請求項７】
高血小板凝集が引き起す疾患の予防及び治療用医薬の製造のための、請求項１記載の式Ｉで表される化合物の少なくとも１つ、及び／又は式Ｉで表される化合物の全ての立体異性体、及び／又は比率の如何に関わらずそれらの混合物、及び／又は式Ｉで表される化
合物の生理学的に許容され得る塩の使用であって、ここで、
Ｒ１、Ｒ３及びＲ８は、それぞれ独立に、−ＯＨ又は＝Ｏであり、
Ｒ２は−ＯＨであり、
Ｒ４及びＲ５は、それぞれ独立に−ＯＨ又は水素原子であるか、又は、
Ｒ４及びＲ５は、それぞれ結合している炭素原子と一緒にエポキシドを形成し、
Ｒ６、Ｒ10及びＲ11は、それぞれ独立に、−ＯＨ又は水素原子であるか、又は、
Ｒ10及びＲ11は、それぞれ結合している炭素原子と一緒にエポキシドを形成し、
Ｒ７は、水素原子又は−Ｓ−ＣＨ2−ＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ基であり、そして
−Ｃ14−Ｃ15−間の結合は一重結合又は二重結合である、
上記の使用。
【請求項８】
式Ｉにおいて、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ６はそれぞれ−ＯＨであり、Ｒ４及びＲ５はそれぞれ結合している炭素原子と一緒にエポキシドを形成し、Ｒ７は−Ｓ−ＣＨ2−ＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ基であり、Ｒ８は＝Ｏであり、Ｒ10及びＲ11はそれぞれ水素原子であり、そして、−Ｃ14−Ｃ15−間の結合は一重結合である式Ｉで示される化合物であるチオペリレノール、
式Ｉにおいて、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５及びＲ６はそれぞれ−ＯＨであり、Ｒ３及びＲ８はそれぞれ＝Ｏであり、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ10及びＲ11はそれぞれ水素原子であり、そして、−Ｃ14−Ｃ15−間の結合は二重結合である式Ｉで示される化合物であるアルテルペリレノール、
式Ｉにおいて、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５及びＲ６はそれぞれ−ＯＨであり、Ｒ３及びＲ８はそれぞれ＝Ｏであり、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ10及びＲ11はそれぞれ水素原子であり、そして、−Ｃ14−Ｃ15−間の結合は一重結合である式Ｉで示される化合物であるアルテルトキシンＩ、
式Ｉにおいて、Ｒ１、Ｒ２及びＲ６はそれぞれ−ＯＨであり、Ｒ３及びＲ８はそれぞれ＝Ｏであり、Ｒ４及びＲ５はそれぞれ結合している炭素原子と一緒にエポキシドを形成し、Ｒ７、Ｒ10及びＲ11はそれぞれ水素原子であり、そして−Ｃ14−Ｃ15−間の結合は一重結合である式Ｉで示される化合物であるアルテルトキシンII、又は
式Ｉにおいて、Ｒ１及びＲ３はそれぞれ＝Ｏであり、Ｒ２及びＲ８はそれぞれ−ＯＨであり、Ｒ４とＲ５及びＲ10とＲ11は、それぞれ結合している炭素原子と一緒にエポキシドを形成し、Ｒ６及びＲ７はそれぞれ水素原子であり、そして−Ｃ14−Ｃ15−間の結合は一重結合である式Ｉで示される化合物であるアルテルトキシンIII
が用いられる、請求項７記載の使用。
【請求項９】
高血小板凝集により引き起される病気が、心筋梗塞症、不安定狭心症、卒中発作、一過性虚血発作及び間欠性跛行症のような末梢動脈閉塞症である、請求項７又は８に記載の使用。
【国際調査報告】
2005510560.tif 000013
2005510560.tif 000014
2005510560.tif 000015
2005510560.tif 000016
2005510560.tif 000017
2005510560.tif 000018
2005510560.tif 000019
2005510560.tif 000020