(57)【要約】本発明は、生物学的活性物質を含むリポソーム組成物およびその製造方法を提供する。本発明は、ＮＳＡＩＤを含むリポソーム組成物を製造できる方法、および均一で安定なリポソームに非常に高い包含率を付与できる方法を提供する。抗ウイルス剤および抗真菌剤を含むリポソーム組成物をも提供する。本発明のリポソーム組成物は、例えば、痛みおよび炎症等の種々の症状、細菌感染およびウイルス感染の処置に有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
生物学的活性物質を含むリポソームを製造する方法であって、
水性組成物を提供すること、
生物学的活性物質を含むリン脂質の組成物を提供すること、および
水性組成物とリン脂質組成物とを混合して生物学的活性物質を包含するリポソームを製造することを含み、
混合するときに、前記リン脂質組成物が前記水性組成物の温度より少なくとも２℃高い温度であることを特徴とする、方法。
【請求項２】
前記水性組成物が水溶性防腐剤を含み、前記リン脂質組成物が脂溶性抗酸化剤を含み、前記生物学的活性物質が少なくとも２０％の包含率でリポソームに包含される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
包含率が少なくとも５０％である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
包含率が少なくとも９０％である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記生物学的活性物質が非ステロイド抗炎症剤である、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
前記非ステロイド抗炎症剤が、セレコキシブ、ジフルニサル、フェノプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、メクロフェナム酸、ナプロキセン、アシクロビル、フェニルブタゾン、ピロキシカム、サルサラート、スリンダク、トレクチン、ロフェコキシブ、バルデコキシブ、およびこれらの２以上の組み合わせからなる群より選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記非ステロイド抗炎症剤が、セレコキシブ、ナプロキセン、インドメタシン、ケトプロフェン、およびそれらの２以上の組み合わせからなる群より選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記生物学的活性物質が、抗ウイルス剤または抗真菌剤である、請求項２に記載の方法。
【請求項９】
前記抗ウイルス剤がアシクロビルであり、前記抗真菌剤がフルコナゾールまたはタービナフィンである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記リン脂質組成物と水性組成物とを混合するときに、前記リン脂質組成物の温度が前記水性組成物の温度より約８℃高く、前記組成物がさらに水溶性防腐剤および脂溶性抗酸化剤を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記水性組成物の温度が約５０℃であり、前記リン脂質組成物の温度が約５８℃である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
少なくとも２時間混合物を冷却することを更に含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
混合物が１時間当たり約６℃の速度で冷却される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記生物学的活性物質が非ステロイド抗炎症剤である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記非ステロイド抗炎症剤が、セレコキシブ、ジフルニサル、フェノプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、メクロフェナム酸、ナプロキセン、フェニルブタゾン、ピロキシカム、サルサラート、スリンダク、トレクチン、ロフェコキシブ、バルデコキシブ、およびこれらの２以上の組み合わせからなる群より選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記生物学的活性物質が非ステロイド抗炎症剤であり、前記水溶性防腐剤がベンゼトニウム塩であり、前記脂溶性抗酸化剤がビタミンＥである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１７】
非ステロイド抗炎症剤が、セレコキシブ、ナプロキセン、インドメタシン、ケトプロフェン、およびそれらの２以上の組み合わせからなる群より選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１８】
前記生物学的活性物質が抗ウイルス剤または抗真菌剤である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１９】
前記抗ウイルス剤がアシクロビルであり、前記抗真菌剤がフルコナゾールまたはタービナフィンである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
混合物が約２８℃に冷却される、請求項１１に記載の方法。
【請求項２１】
前記非ステロイド抗炎症剤が、セレコキシブ、ジフルニサル、フェノプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、メクロフェナム酸、ナプロキセン、フェニルブタゾン、ピロキシカム、サルサラート、スリンダク、トレクチン、ロフェコキシブ、バルデコキシブ、およびこれらの２以上の組み合わせからなる群より選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項２２】
前記非ステロイド抗炎症剤が、セレコキシブ、ナプロキセン、インドメタシン、ケトプロフェン、およびそれらの２以上の組み合わせからなる群より選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項２３】
リポソーム組成物であって、
生物学的活性物質、
水溶性防腐剤、および
脂溶性抗酸化剤
を含み、少なくとも７５％のリポソームが約１μｍから約１０μｍの直径であり、
組成物が少なくとも１０，０００センチポイズの粘度を有し、２％未満の増粘剤を含む、組成物。
【請求項２４】
前記脂溶性抗酸化剤がビタミンＥであり、前記生物学的活性物質が非ステロイド抗炎症剤である、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
前記非ステロイド抗炎症剤が、セレコキシブ、アセチルサリチル酸、サリチル酸コリン、ジフルニサル、フェノプロフェン、モトリン、インドメタシン、ケトプロフェン、メクロフェナム酸、ナプロキセン、フェニルブタゾン、ピロキシカム、サルサラート、スリンダク、トレクチン、ロフェコキシブ、バルデコキシブ、およびこれらの２以上の組み合わせからなる群より選択される、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
前記組成物が少なくとも３０，０００センチポイズの粘度を有する、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２７】
前記非ステロイド抗炎症剤が、セレコキシブ、ナプロキセン、インドメタシン、ケトプロフェン、およびそれらの２以上の組み合わせからなる群より選択され、前記水溶性防腐剤がベンゼトニウム塩である、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２８】
前記生物学的活性物質が、抗ウイルス剤または抗真菌剤である、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２９】
前記抗ウイルス剤がアシクロビルであり、前記抗真菌剤がフルコナゾールまたはタービナフィンである、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
哺乳動物における痛みまたは炎症を減少させる方法であって、
痛みまたは炎症を減少させる領域にリポソーム組成物を局所的に適用することを含み、
前記リポソーム組成物は、
非ステロイド抗炎症剤、
水溶性防腐剤、および
脂溶性抗酸化剤
を含み、少なくとも７５％のリポソームは約１μｍから約１０μｍの直径であり、
前記組成物は、少なくとも２０，０００センチポイズの粘度を有し、２重量％未満の増粘剤を含む、方法。
【請求項３１】
前記水溶性防腐剤がベンゼトニウム塩であり、前記脂溶性抗酸化剤がビタミンＥであり、
前記非ステロイド抗炎症剤が、セレコキシブ、アセチルサリチル酸、サリチル酸コリン、ジフルニサル、フェノプロフェン、モトリン、インドメタシン、ケトプロフェン、メクロフェナム酸、ナプロキセン、フェニルブタゾン、ピロキシカム、サルサラート、スリンダク、トレクチン、ロフェコキシブ、バルデコキシブ、およびこれらの２以上の組み合わせからなる群より選択される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記非ステロイド抗炎症剤が、セレコキシブ、ナプロキセン、インドメタシン、ケトプロフェン、およびそれらの２以上の組み合わせからなる群より選択され、前記組成物が少なくとも３０，０００センチポイズの粘度を有する、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
哺乳動物における痛みまたは炎症を減少させる方法であって、
痛みまたは炎症を減少させる領域にリポソーム組成物を局所的に適用することを含み、
前記リポソーム組成物は、
生物学的活性物質、
水溶性防腐剤、および
脂溶性抗酸化剤
を含み、少なくとも７５％のリポソームが約１μｍから約１０μｍの直径であり、
前記組成物は、少なくとも２０，０００センチポイズの粘度を有し、２重量％未満の増粘剤を含む、方法。
【請求項３４】
前記生物学的活性物質が、グルコサミン、メチルスルホニルメタン、プレグネノロン、Ｓ−アデノシルメチオネン、およびそれらの２以上の組み合わせからなる群より選択される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記水溶性防腐剤がベンゼトニウム塩であり、前記脂溶性抗酸化剤がビタミンＥである、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
眼におけるウイルス感染を処置する方法であって、
リポソーム組成物を眼に適用することを含み、
前記リポソーム組成物は、
抗ウイルス剤、
水溶性防腐剤、および
脂溶性抗酸化剤
を含み、前記組成物が少なくとも２０，０００センチポイズの粘度を有し、２重量％未満の増粘剤を含む、方法。
【請求項３７】
前記ウイルス感染がヘルペスであり、前記抗ウイルス剤がアシクロビルである、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
真菌感染を処置する方法であって、
リポソーム組成物を感染領域に局所的に適用することを含み、
前記リポソーム組成物は、
抗真菌剤、
水溶性防腐剤、および
脂溶性抗酸化剤
を含み、前記組成物が少なくとも２０，０００センチポイズの粘度を有し、２重量％未満の増粘剤を含む、方法。
【請求項３９】
前記抗真菌剤がフルコナゾールまたはタービナフィンである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
感染を処置する方法であって、
リポソーム組成物を感染領域に局所的に適用することを含み、
前記リポソーム組成物は、
抗ウイルス剤または抗真菌剤、
水溶性防腐剤、および
脂溶性抗酸化剤
を含み、前記組成物が少なくとも２０，０００センチポイズの粘度を有し、２重量％未満の増粘剤を含む、方法。
【請求項４１】
前記感染がウイルス性皮膚感染であり、前記抗ウイルス剤がアシクロビルである、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記感染が真菌性皮膚感染であり、前記抗真菌剤がフルコナゾールまたはタービナフィンである、請求項４０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、リポソーム組成物並びにそれらの製造方法および使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
リポソームは、生物学的活性物質を投与する有用な様式を提供する。非ステロイド抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）は、関節疾患により生じるような痛みと炎症を処置するために、一般的に経口投与により用いられてきた。炎症の処置は、一般的にステロイドまたは非ステロイド薬の経口投与を伴い、紅斑、腫脹、熱、痛み、および機能の損失という特徴を有する。いくつかの非ステロイド抗炎症剤が、経口薬、局所用のクリーム、軟膏およびゲルとして入手可能である。しかし、最も効果的な非ステロイド抗炎症剤は、効果がある局所投与組成物としては入手できない。さらに、経口投与されたＮＳＡＩＤは、胃のむかつき、さらにうっ血性心不全、腎不全、および胃腸管の内壁に毒性であるなどの副作用を生じうる。リポソーム組成物を製造し、調製する既存の方法では、最大の薬効で局所的に投与できるＮＳＡＩＤを包含するリポソームを含む組成物を、使用者が準備することはできない。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
本発明は、生物学的活性物質を含むリポソームの組成物およびそれらの製造方法を提供する。リポソームは、局所投与に適した多重層リポソームが好ましい。好ましい態様としては、リポソーム組成物は、水溶性防腐剤および脂溶性抗酸化剤を利用し、増粘剤がほとんど用いないか、または全く用いなくても、高い粘度を有する。本製造方法は、５０％、６０％、７０％、８０％。９０％またはさらに９５％の包含率のような、非常に高い包含率を付与できるものである。本方法は、１０リットル以上のレベルの、大容量のリポソーム組成物を製造できるものでもある。
【０００４】
本発明のリポソームは、生物学的活性物質および水溶性防腐剤を含む。好ましい態様としては、リポソーム組成物は、脂溶性抗酸化剤も含み、これは最も好ましくはビタミンＥである。他の態様としては、少なくとも７５％のリポソームが約１μｍから約１０μｍの直径であり、好ましくは約３μｍから約５μｍであり、１％までが直径２０μｍ程の大きさでも良い。更に他の態様では、本組成物は、約１重量％未満の増粘剤しか含まず、より好ましくは増粘剤をまったく含まない。にもかかわらず、リポソーム組成物は、好ましくは５８℃において少なくとも２０，０００センチポイズの粘度を有し、さらに好ましくは５８℃において３０，０００センチポイズの粘度を有する。好ましい態様において、生物学的活性物質は、非ステロイド抗炎症剤である。最も好ましい態様において、非ステロイド抗炎症剤は、ナプロキセン、ケトプロフェン、セレコキシブ、またはインドメタシンである。フルコナゾールおよびアシクロビルも、リポソーム組成物に用いるのに好ましい生物学的活性物質である。しかし、他の態様において、いずれの活性物質もリポソームに含ませることができる。
【０００５】
「リポソーム」は、規則正しい脂質二分子膜により仕切られ、水相を取り囲んだ球状ベシクルを意味する。リポソームの脂質二分子膜は、通常は天然または合成のリン脂質から作られるが、リン脂質以外から作ることもできる。例えば、脂質２分子膜は、コレステロールや他の脂質を含むこともできる。リポソームは、いくつかの固体粒子の一部を含むこともできるが、Ｈａｙｎｅｓによる米国特許第５，０９１，１８８に記載されたようなマイクロクリスタルからは区別される。ここで、マイクロクリスタルは、リン脂質の頭部および尾部が並んだ規則正しい２分子膜ではなく、むしろ不規則な被覆である脂質膜により被覆された固体結晶粒子である。本出願において、リポソームは、脂質ベシクル内の容積の２５％未満が固体（即ち、いずれかの型の結晶が形成された状態）である。リポソームの脂質２分子膜は、規則正しい２分子膜であり、脂質分子の「頭部」と「尾部」の構造がお互い横に並んだものである。
【０００６】
「薬理学的に活性な」化合物とは、ヒトや動物の身体に投与されたときに、痛みや炎症の減少や、抗ウイルスまたは抗真菌作用、または他の測定可能な生物学的性質などの、いくつかの測定可能な効果を有する化合物を意味する。「生物学的に活性な」化合物とは、ヒトや動物の身体に投与された場合に、化合物の効果を予測するように設計されたｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏアッセイにおいて、いくつかの測定可能な効果を有する化合物を意味する。多種類の化合物について、特定の活性や性質を試験するために、既存の多くのアッセイがあることが、当業者は分かるであろう。好ましいアッセイは、試験される活性を予測する意味において、科学的かつ統計的に意義があることを示せるものであり、好ましくは標準偏差の３倍以内の結果を生ずるアッセイである。このため、生物学的活性物質は、ｉｎ  ｖｉｖｏにおける薬理学的活性をも有してもよい。本発明に用いるのに適した生物学的活性物質としては、限定するものではないが、皮膚用剤、抗菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、抗痙攣薬、抗高血圧薬、抗癌剤、抗生物質、抗プセボリア薬（ａｎｔｉ−ｐｓｅｂｏｒｉａ  ａｇｅｎｔｓ）、抗乾癬薬、免疫調整剤、ホルモン、タンパク質、ペプチド、およびＮＳＡＩＤが挙げられる。「防腐剤」とは、処方中における微生物の実質的な成長や繁殖を防ぐために、リポソーム組成物に添加される成分を意味する。微生物の成長や繁殖は、組成物の粘度や安定性、または他の重要な性質が変化したときに、実質的といえる。組成物の物理的、化学的または治療の性質が不適切となるような負の影響を与えない限り、いくつかの微生物の成長は許容される。微生物としては、細菌、酵母、またはカビが挙げられる。「水溶性」とは、水に１００μｇ／ｍｌ（または０．０１％）を超える溶解性を有する成分を意味する。他の態様としては、この成分は水に１ｍｇ／ｍｌ（０．１％）を超える溶解性を有してもよい。
【０００７】
本発明のリポソームは、単層（１つの脂質２分子膜を有する）またはより好ましくは多層でもよい。「多層」のリポソームは、多重の層または膜を有している。この型のリポソームは、脂質２分子膜の間に位置する水溶性流体を保持する脂質２分子膜の層を有する。多層リポソームは、少なくとも２つの脂質層を有する。本発明のリポソームは、非常に多くの大きさがあるが、それぞれの製造バッチにおいて均一であることが好ましい。リポソームは、２０μｍ、２５μｍ、さらに３０μｍまででもよい。しかし、好ましい態様においては、リポソームの約９５％が、約１μｍから約１０μｍの直径である。１つの態様において、本発明の方法によって製造された組成物中のリポソームの大部分は、約３μｍから約５μｍであろう。リポソームの実際の直径は、撹拌またはボルテックスによる水和がリポソームの製造に用いられる場合に、それらの長さと激しさおよびその後の冷却曲線の関数となるであろう。更に他の態様においては、リポソームは、単一の大きなリポソームが１またはそれ以上の小さなリポソームを包含した多重層リポソームでもよい。
【０００８】
本発明はまた、上述のリポソームを製造する方法を提供する。本方法は、２，０００リットル、５，０００リットル、１０，０００リットル、２０，０００リットル、さらに５０，０００リットルまでのような、大量のリポソーム組成物を製造するのに適している。本方法は、水溶液を提供し、水溶液の温度より少なくとも２℃高い温度に生物学的活性物質を含むリン脂質の組成物を提供することを含む。水溶性組成物およびリン脂質組成物を混合し、生物学的活性物質を包含したリポソームを製造する。組成物同士を混合するとき、リン脂質組成物は、水溶性組成物の温度より少なくとも２℃高い温度である。種々の態様において、生物学的活性物質は、少なくとも２０％、少なくとも５０％、少なくとも７０％、少なくとも９０％、更に少なくとも９５％の包含率でリポソームに包含される。いくつかの態様において、２つの組成物が混合されるとき、リン脂質組成物の温度は、水溶性組成物の温度より約６℃または約１０℃高い。好ましい態様において、２つの組成物が混合されるとき、リン脂質組成物の温度は約５８℃またはそれ以下であり、水溶性組成物の温度は８〜１０℃低く、例えば、６０℃と５２℃若しくは５０℃、６０℃と５０℃、５９℃と５１℃若しくは５０℃、５８℃と５０℃若しくは４９℃若しくは４８℃である。すべての温度は、±２℃である。「約」の語は、±５％を意味する。リン脂質組成物は、好ましくは決して約６０℃〜約６５℃を超える温度にさらされず、中の成分が分解しないようにし、最適なリポソーム形成が行えるようにされる。
【０００９】
最も好ましい態様において、水溶性組成物の温度は約５０℃±２℃であり、リン脂質組成物の温度は約５８℃±２℃である。混合物は少なくとも２時間をかけて冷却することができ、好ましくは１時間に約６℃の速度で冷却される。好ましい態様において、生物学的活性物質は、非ステロイド抗炎症剤であり、より好ましくはナプロキセン、ケトプロフェン、インドメタシン、またはセレコキシブである。他の好ましい態様において、生物学的活性物質はアシクロビルまたはフルコナゾールである。最も好ましい態様において、混合物は、１時間に約６℃の速度で約２８℃まで冷却される。非ステロイド抗炎症剤としては、限定されないが、セレコキシブ、ロフェコキシブ、ナプロキセン、ケトプロフェン、ジフルニサル、フェノプロフェン、インドメタシン、メクロフェナム酸、フェニルブタゾン、ピロキシカム、サルサラート、スリンダク、トレクチン、アセチルサリチル酸、イブプロフェン、およびサリチル酸コリンが挙げられる。しかし、他の態様において、生物学的活性物質は、抗ウイルス化合物または抗真菌物質のような、ＮＳＡＩＤ以外の物質でもよい。
【００１０】
「包含率」とは、包含の方法に利用可能な活性物質の量に関して、本方法によりリポソームに包含された活性物質の量を指す。包含率は、次式によりよく表される：Ｅｃ＝（全包含薬剤×１００）／全薬剤、ここでＥｃは包含率である。包含率は、特定の用途のための脂質の適切な型の選択、従来技術によるリポソームの製造工程を用いる場合に、製造を行う容器の形と大きさ、固体の接触物体の量と大きさ、蒸発工程における真空度、ボルテックスによる水和、および製造工程の間の温度により影響を受ける。本方法の有利な点は、接触物体の存在や真空蒸発のような特定の要件を削除することにより、包含率に影響を与える可能性のある変数の数を減らすことにある。
【００１１】
他の見地において、本発明は、炎症や痛みを減少させる領域に上述の組成物の１つを局所的に適用することにより、哺乳動物における炎症や痛みを減少させる方法を提供する。１つの態様において、生物学的活性物質は、リポソーム中に少なくとも約０．５重量％の濃度で提供される。「局所的」な適用とは、組成物が処置される対象の皮膚外側に適用されることを意味する。皮膚は、傷ついていても傷ついていなくてよく、局所適用は、皮膚上の損傷に適用することを含む。局所的は、眼の角膜への適用である「眼への適用」は指さない。「内的適用」には、口、喉、耳、鼻、肺、気管支、膣、または直腸のようないずれの体腔への適用をも含む。内的適用はまた、吸入される（例えば、肺や気管支を処置するために）組成物、または移植工程における臓器への適用を含む。
【００１２】
他の見地において、本発明は、上述の組成物の１つを含む医薬組成物を提供する。本発明はまた、本発明の組成物を提供することにより、医薬または医薬組成物を製造する方法を提供する。
【００１３】
また他の見地において、本発明は、ウイルス、真菌、および細菌感染を処置する方法を提供する。本方法は、本発明のリポソーム組成物を、処置される領域に、局所的、外的、または内的に適用することを含む。ウイルス感染としてはヘルペスを挙げることができ、組成物がヘルペスウイルスにより生じた損傷に適用される。他の態様において、感染としては、感染領域に組成物を適用することにより処置される真菌感染を挙げることができる。更に他の態様において、皮膚、眼、または体腔の細菌感染を、本発明の組成物を局所的または外的に適用することにより処置することができる。
【００１４】
また他の見地において、本発明は、眼のウイルス感染を処置する方法を提供する。本方法は、抗ウイルス剤を含む本発明のリポソーム組成物を眼に適用することを含む。好ましい態様として、ウイルス感染はヘルペスであり、抗ウイルス剤はアシクロビルである。
【００１５】
また他の見地として、本発明は、真菌感染を処置する方法を提供する。本方法は、抗真菌剤を含む本発明の組成物を、感染領域に局所的に適用することを含む。好ましい態様として、抗真菌剤は、フルコナゾールまたはタービナフィンである。
【００１６】
上述した発明の概要は限定するものではなく、本発明の他の特徴および有利な点は、特許請求の範囲とともに、以下の好ましい態様の詳細な説明から明らかとなる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
本発明は、ＮＳＡＩＤ、抗ウイルス剤、および抗真菌剤のような生物学的活性物質を含むリポソームの組成物を提供する。本発明者らは、驚くべきことに、ナプロキセン、ケトプロフェン、インドメタシン、およびセレコキシブのようなＮＳＡＩＤや、抗真菌剤および抗ウイルス剤のような他の生物学的活性物質をリポソーム中に包含することにより、筋肉や骨格の関節に好ましく用いられる、痛みと炎症を処置するのに有用な組成物が得られることを見出したものである。本組成物はまた、ウイルスおよび真菌の感染を処置するのにも有用である。また、当業者は、本発明の組成物が種々の生物学的活性物質を用いて種々の病気の処置に利用できることを認識しうる。例えば、生物学的活性物質がＮＳＡＩＤの場合、組成物は筋肉の捻挫や稔傷、背痛、歯痛、高熱、関節痛、または筋骨格組織に関連したいずれもの痛みのような、多くの型の痛みの処置に有用である。本組成物は、好ましくはキャリアとしてのリポソーム組成物そのものとともに投与されるが、種々の態様として、リポソームは、キャリアゲルや他の適当なキャリア中で投与されても良い。本発明のリポソームは、好ましくは多重層であり、これは生物学的活性物質の局所的な経皮送達による皮膚への適用に非常に適している。本発明のリポソームは、生物学的活性物質を遅延放出で経皮送達させることもできる。本発明のリポソームは、投与の様式として注射が望まれる態様においては、単層リポソームとして製造することもできる。単層リポソームは、リポソームを濾過すること、フレンチプレスを用いること、リポソームの大きさを小さくする他の高シェア方法、または単層リポソームをスクリーニングすることにより製造することができる。
【００１８】
本発明の組成物および方法を用いることにより、組成物が適用される局所部位において生物学的活性物質の投与ができることを見出した。処置される部位の生物学的活性物質の濃度が、物質を経口投与することにより達成される既存の方法を用いるのとほぼ同等であることを見出した。しかし、全身的な生物学的活性物質の濃度は、物質が経口投与された場合の約１／１０である。したがって、本発明は、経口投与で生ずる望ましくない全身的な影響を受けることなく、生物学的活性物質の治療的濃度の投与が可能となる。
【００１９】
Ｍｅｚｅｉによる米国特許第４，７６１，２８８および第４，８９７，２６９は、ともに参照することにより、すべてのチャートおよび図面を含んで、そのすべてが本明細書に取り込まれるものとする。本発明のリポソームは、従来のリポソームに見られるような脂溶性の防腐剤を含んでいない。むしろ、本発明のリポソームは、抗菌剤として機能しうる水溶性防腐剤を用いるものであり、これは好ましくは塩化ベンゼトニウムのようなベンゼトニウム塩である。また、塩化ベンジルコニウムなどのベンジルコニウム塩、および安息香酸のような、他の水溶性防腐剤を本発明に用いてもよい。驚くべきことに、脂溶性防腐剤は、微生物の増殖によりリポソーム構造を脆弱かつ不安定にし、粘度低下による不安定な組成物をもたらすものであり、防腐剤の選択は安定なリポソームとするために重要であることが判明した。他の水溶性防腐剤を用いることもでき、これらは組成物のｐＨにおいて活性となるように適宜選択される。
【００２０】
好ましい態様において、本組成物はまた、脂溶性抗酸化剤としてビタミンＥを含む。抗酸化剤は、フリーラジカル補足剤として作用し、リポソームの最大の安定性の達成を容易にする。メチルセルロースや他の増粘剤がリポソーム組成物に含まれ、充分な粘度を有して流動性の組成物となることを避けて、皮膚に適用できるようにされる。最も好ましい態様において、本組成物は、抗酸化剤としてビタミンＥを含み、２重量％未満、１．５％未満、１．０％未満、０．５％未満、または０．２５％未満の増粘剤を含む。より好ましくは、組成物はメチルセルロースや他の増粘剤をまったく含まない。これは、活性物質の最大の経皮浸透をもたらすのに最も望ましい。１つの態様として、リポソームの脂質２分子膜に少なくとも５０％のビタミンＥが存在する。他の態様として、リポソームの脂質層に、少なくとも７０％、８０％、９０％、または９５％のビタミンＥが存在する。
【００２１】
「増粘剤」とは、組成物に添加して粘度を増加させる剤を意味する。増粘剤は、２５℃において少なくとも１０，０００センチポイズに組成物の粘度を増加させうる。増粘剤としては、限定されないが、メチルセルロース、アルギン酸、ゼラチン、アカシア（アラビアゴム）カルボマー、およびセトステアリルアルコールが挙げられる。リン脂質は、この定義においては、増粘剤とは見なされない。増粘剤は、これがない場合に対して少なくとも１０，０００センチポイズ粘度を増加させ、他の態様においては、組成物にそれがない場合に対して２０，０００または３０，０００センチポイズ（さらに４０，０００または５０，０００センチポイズ）粘度を増加させうる。したがって、種々の態様において、本発明のリポソーム組成物は、２重量％未満、１％未満、０．５％未満、さらには０％の増粘剤を含む。例えば、種々の態様において、本組成物は、塩酸、硝酸、硫酸、リン酸、炭酸、臭化水素酸、またはヨウ化水素酸の塩のような無機塩、あるいは有機塩を、これらの量より少なく含む。本組成物はまた、好ましくは、２重量％未満、１％未満、さらに０％の臭化カリウム、塩化カリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸水素二カリウム、硫酸カリウム、ヨウ化カリウム、硝酸カリウム、臭化リチウム、塩化リチウム、ヨウ化リチウム、硝酸リチウム、硫酸リチウム、臭化アンモニウム、塩化アンモニウム、炭酸アンモニウム、炭酸水素アンモニウム、リン酸二水素アンモニウム、リン酸水素二アンモニウム、ヨウ化アンモニウム、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、臭化ナトリウム、炭酸ナトリウム、塩化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、硝酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、および硫酸ナトリウムを含む。２重量％未満、１％未満、さらに０％で本組成物に好ましく存在する他の塩としては、塩化アルカノールアミン、硫酸塩、リン酸塩、安息香酸、酢酸、サリチル酸、シュウ酸、フタル酸、グルコン酸、１−ナフタレンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、酒石酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、プロピオン酸、アスコルビン酸、マンデル酸、リンゴ酸、クエン酸の塩、塩化トリエタノールアンモニウム、リン酸二水素トリエタノールアンモニウム、硫酸トリエタノールアンモニウム、安息香酸ナトリウム、安息香酸カリウム、安息香酸アンモニウム、酢酸ナトリウム、酢酸カリウム、酢酸アンモニウム、サリチル酸ナトリウム、サリチル酸カリウム、サリチル酸アンモニウム、シュウ酸ナトリウム、シュウ酸カリウム、シュウ酸アンモニウム、フタル酸ナトリウム、フタル酸カリウム、フタル酸アンモニウム、グルコン酸ナトリウム、グルコン酸カリウム、グルコン酸アンモニウム、１−ナフタレンスルホン酸アンモニウム、２−ナフタレンスルホン酸カリウム、２−ナフタレンスルホン酸アンモニウム、２−ナフタレンスルホン酸ナトリウム、酒石酸カリウム、マレイン酸ナトリウム、マレイン酸カリウム、マロン酸ナトリウム、コハク酸ナトリウム、フマル酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム、プロピオン酸トリエタノールアンモニウム、アスコルビン酸ナトリウム、アスコルビン酸トリエタノールアンモニウム、アスコルビン酸カリウム、マンデル酸ナトリウム、リンゴ酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、クエン酸カリウム、およびクエン酸トリエタノールアンモニウムが挙げられる。
【００２２】
驚くべきことに、本発明のリポソーム組成物は、高い粘度を有する安定なリポソーム組成物をもたらすことが判明した。種々の態様において、本組成物は、メチルセルロースや他の増粘剤をまったく含まなくても、５８℃において、少なくとも１０，０００センチポイズ、少なくとも２０，０００センチポイズ、少なくとも３０，０００センチポイズ、少なくとも４０，０００センチポイズ、少なくとも５０，０００センチポイズ、少なくとも６０，０００センチポイズ、または少なくとも７０，０００センチポイズの粘度を有する。メチルセルロースや他の増粘剤が処方中に存在しないので、経皮透過性が実質的に増加する。１つの態様として、オレイルアルコールを添加することにより、組成物中にあるがリポソームの外側に存在する生物学的活性物質の経皮透過性が増強されうる。特定の理論に束縛されることを望むものではないが、水溶性防腐剤と脂溶性抗酸化剤の組み合わせによりリポソームの安定性が提供されるものと考えられる。これにより、リポソームが安定でかつ高い粘度を有することができる。リポソーム組成物がほとんど、またはまったく増粘剤を含んでいないとしても、高い粘度が可能となる。増粘剤は、活性物質が皮膚を横切る動きを害すると考えられる。本組成物は、充分な粘度を保持したまま、活性物質の投与において、最大の皮膚透過性という優れた性質を提供する。本組成物は、組成物の化学的または物理的性質を変化させることなく、少なくとも６ヶ月、１年、または２年間保存できるという意味において「安定」である。これは、組成物の性能、安定性、または安全性に影響する程度の細菌の増殖が起こらないことを意味する。安定な組成物の生物学的アッセイでは、元々評価された値の１０％または５％以内の同様の結果となりうる。種々の態様において、５０〜６０％のリポソームは、約３μｍから約５μｍの直径であり、残る２０〜２５％のリポソームが３μｍ未満の直径を有し、他の２０〜２５％のリポソームが約５μｍを超える直径を有する。「約」の語は、プラスまたはマイナス５％を意味する。他の態様において、少なくとも９５％のリポソームが、１０μｍ未満の直径である。
【００２３】
本発明は、本発明のリポソーム組成物を製造する方法を提供する。本発明者らは、驚くことに、本方法により非常に高い包含率を達成できることを見出した。本方法は、優れた包含率をもたらし、リポソーム組成物を商業的な量での大規模な製造を可能にする独特の工程を伴う。本方法は、温度間隔の利用を伴うものである。「温度間隔」とは、出発原料の水相および脂質相が混合されるときに異なる温度であり、典型的には脂質相が水相より高い温度であることを意味する。好ましい態様としては、２つの相を混合するとき、脂質相は、水相の温度より少なくとも２℃、より好ましくは約６℃、最も好ましくは７℃、８℃、９℃、または１０℃高い温度を維持する。最も好ましい態様として、脂質相は、約５８℃±２℃を維持し、水相は約５０℃±２℃を維持する。他の態様においては、脂質相は約６０℃±２℃を維持し、水相は約５２℃±２℃を維持し、または上記の基準を満たす限りにおいては、脂質相は約５９℃、５７℃、５６℃、５５℃、５４℃、５３℃、または５２±２℃のいずれかの温度を維持しても良く、水相は約５８℃、５７℃、５６℃、５５℃、５４℃、５３℃、５２℃、５１℃、５０℃、４８℃、４７℃、４６℃、または４５℃で、すべて±２℃のいずれかの温度を維持してもよい。利用される実際の温度は、使用される特定の処方に依存することとなる。使用する脂質の正確な組成に依存して、好ましくは異なる脂質処方を維持し、水相と混合することができる。温度が高すぎる場合（例えば、約６５℃より大きい場合）、脂質成分が変性し、さもなければ分解することがある。このため、リポソームを形成することがより困難となり、（たとえ得られるとしても）得られる組成物は不安定となりうる。したがって、実際に用いる脂質組成に依存して、異なる温度となることが望ましいであろう。
【００２４】
本方法は、ボルテックスによる水和と温度ショックにより２つの相を迅速に混合することを伴う。これは、好ましくは規則的に並んだティー（ｔｅｅ）を備えた容器を使い、２つの相を一緒に引く分散ポンプを用いて行う。水相および脂質相を混合するとき、リポソームが形成される。リポソームの形成は、好ましくはほぼその瞬間に起こり、例えば、用いる原料の体積に依存して、１０秒、１５秒、２０秒、または３０秒以内である。混合物は、メッシュを通してリポソームの塊を除去し、水和とその後のリポソームの形成を促進してもよい。脂質相の完全な水和の後、組成物を冷却段階に移す。冷却工程は、好ましくはゆっくりとした工程であり、最大冷却速度は、好ましく１時間当たり約６℃である。他の態様としては、冷却は１時間に４〜８℃、好ましくは約６℃の速度でもよく、また静置して１日かけて自然に冷却してもよい。好ましい態様としては、本工程は、温度が２８℃に達した時点で完了する。種々の態様において、冷却曲線を変化させることが望ましく、例えば、利用される特定の活性物質に依存して、組成物を早くまたは遅く冷却してもよい。
【００２５】
本発明は、痛みや炎症が存在または発達する皮膚に本組成物を適用することにより、痛みと炎症を処置する方法を提供する。本組成物は、炎症を抑え、痛みを和らげる高い効果を有することが分かった。例えば、関節痛は、数百万人に影響を与える最も一般的な軽症の痛みである。ＮＳＡＩＤを含む本組成物は、関節の皮膚に適用された場合、劇的に関節痛と炎症を抑えることが分かった。特に好ましい態様として、ＮＳＡＩＤは、ケトプロフェンまたはナプロキセンである。本組成物は、経口投与に関連したリスクを負うことなく、処置される人がＮＳＡＩＤを受けることができるという有利な点を有する。
【００２６】
ＮＳＡＩＤは、プロスタグランジンおよびロイコトリエンの合成を阻害する効果を有し、抗ブラジキニン作用を有し、また、リソソームの膜安定化作用を有することが示されている。他のいくつかのＮＳＡＩＤ化合物のように、ケトプロフェンは、以前からリポソームにうまく包含できなかった。しかし、驚くべきことに、本発明者らは、ここで記載した方法を用いることにより、痛みと炎症を処置するのに有用な、ナプロキセン、ケトプロフェン、インドメタシン、およびセレコキシブを包含したリポソームの組成物を製造することができた。ナプロキセンは、化学名を（Ｓ）−６−メトキシ−アルファ−メチル−２ナフチレン酢酸という、ＮＳＡＩＤ薬のアリル酢酸群の１つである。ケトプロフェンの化学名は、２−（３−ベンゾイルフェニル）プロピオン酸である。本方法により製造されるケトプロフェンリポソーム組成物は、リューマチ性関節炎、変形性関節症、強直性脊椎炎、若年性関節炎、腱炎、滑液包炎、および急性痛風のような痛みと炎症を生じる種々の障害を処置するのに有用である。
【００２７】
ＣＯＸ−２阻害剤は、シクロオキシゲナーゼ２の酵素活性を遮断する。この分類の薬剤には、セレコキシブおよびロフェコキシブが含まれ、痛みと炎症の経路に関連する酵素であるＣＯＸ−２を選択的に阻害する一方、胃を保護することに関連する酵素であるＣＯＸ−１を阻害しないように作用するので、古典的なＮＳＡＩＤより明らかに有利である。本発明は、セレコキシブ、ロフェコキシブおよびバルデコキシブ等のＣＯＸ−２阻害剤を含むリポソームを提供する。これらのリポソームは、処置される局所領域に局所的に適用でき、ＣＯＸ−２阻害剤の経口投与による有害な作用を除去できるので、古典的なＣＯＸ−２阻害剤より明らかな有利な点を提供する。したがって、本発明は、これら新しい薬が明らかな有利な点を提供し、また投与に関する安全性への懸念を除去するものである。本発明が局所的に適用されるものであるため、本発明を用いることにより、以前から可能であった方法より非常に安全で新規な方法によりＮＳＡＩＤを摂取し、投与できることとなる。この投与の様式は、消化系を回避し、傷害および処置の部位に薬剤の効果を局在化するものである。ＣＯＸ−２阻害剤の経口投与が胃腸管の刺激、心不全、腎不全、および髄膜炎に関係するので、これは本発明の明らかに有利な点である。
【００２８】
他の生物学的活性物質も、本発明に有用であろう。例えば、アシクロビル、フルコナゾールまたはタービナフィンを本発明に用いて、ウイルス感染および真菌感染を処置してもよい。したがって、本発明は、Ｉ型ヘルペス、ＩＩ型ヘルペス、または帯状疱疹により生じる外傷のような、ヘルペス感染により生じる外傷を処置する方法を提供する。本発明は、皮膚におけるヘルペス感染の処置に適用でき、そこでは抗ウイルス剤を含む本発明の組成物が外傷に適用される。本発明は、眼のウイルス感染の処置に適用でき、そこでは本組成物が眼の角膜に適用される。同様に、本発明は、抗真菌剤（例えば、フルコナゾールまたはタービナフィン）を含む本発明の組成物を感染領域に適用することにより、真菌感染の処理に適用することができる。
【００２９】
ＮＳＡＩＤおよび抗真菌リポソーム組成物の特定の態様をここで記載しているが、本発明は、目的とするいずれの生物学的活性物質にも適用できる。生物学的活性物質は、リポソームを形成する前に脂質成分に添加するために、脂溶性であることが好ましいが、水溶性化合物または脂質および水溶液環境の両方に溶解する化合物を、ここで用いてもよい。本発明に適用できる他の有用な化合物としては、ピレトリン、ピレスロイド、カルバメート、水溶性有機リン化合物、ベンゾイル尿素、ホルムアミジン、トリアジン、アベルメクチン、ミルベマイシン、他の標準的な外部寄生生物撲滅薬、およびこれらの誘導体、類似体、混合物が挙げられる。サイハロトリン、サイパーメトリン、フルメトリン、アルファメトリン、デルタメトリン、およびパーメトリンは、特に好ましいピレスロイドである。カルバリルおよびプロマシルのようなカルバメートもまた、有用である。効果的なホルムアミジンはアミトラズであり、効果的なトリアジンはクリオマジンである。ジアジノン、ピリムフォスメチル、およびピリムフォスエチルは、特に効果的な水不溶性有機リン化合物である。水不溶性内部寄生生物撲滅剤も、本発明により効果的に投与され、例えば、チアゾールおよび他の標準的な駆虫薬およびそれらの誘導体、類似体、混合物が挙げられる。効果的なチアゾールとしては、レバミソール、デキサミゾール、およびテトラミゾールが挙げられる。
【００３０】
いくつかの態様において、本発明のリポソーム組成物は、１以上の生物学的活性物質を含む。組み込まれる物質の数については理論的な制限はない。例えば、２またはそれ以上の成分を同じベシクルに包含することもでき、または活性物質同士が配合禁忌の場合は、物質を別々に包含してリポソーム組成物を混合し、２またはそれ以上の症状に用いる組成物として提供してもよく、または、複数の活性物質により単一の症状を処置するものとして提供してもよい。あるいは、１つの活性物質をベシクルに包含し、他の物質を包含しない形態としてまわりの水相に分散させることもできる。
【００３１】
好ましい態様として、本発明に用いられる脂質は、ホスホリポン９０Ｈであり、これは、大豆レシチンから採取、精製され、化学名は１，２−ジアシル−５Ｎ−グリセロ−３−ホスファチジルコリンである。これは、少なくとも９０％がホスファチジルコリンであり、完全に水素添加されている。しかし、当業者であれば、他の脂質も本発明に使用できることを理解するであろう。例えば、ホスファチジルコリンは純度が低くてもよく、または、例えばプロピレングリコール／エタノール、中鎖トリグリセライド、油／エタノール、ホスファチジン酸、コレステロール、およびホスファチジルイノシトールのような他の脂質やキャリア物質を含んでいてもよい。リン脂質は、天然または合成いずれのリン脂質でもよく、例えば、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、リゾリン脂質、卵若しくは大豆リン脂質、またはこれらの組み合わせでもよい。リン脂質は、塩を添加されていても脱塩されていてもよく、水素添加されあるいは部分的に水素添加されていてもよく、天然、合成、半合成でもよい。市販のリン脂質の例としては、限定されないが、卵リン脂質  Ｐ１２３（ファンスティール、ワウケジェン、イリノイ州）、Ｌｉｐｏｉｄ  Ｅ８０（リポイド、ルードヴィッヒシャーフェン、ドイツ）；水素添加大豆リン脂質  Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｏｎ  ８０Ｈ（登録商標）、８０Ｇ（登録商標）、９０Ｈ（登録商標）および１００Ｈ（登録商標）（ナッターマン、ミュンヘン、ドイツ）および９９％純粋大豆ホスファチジルコリン（アヴァンティポーラーリピッド、アラバスター、アラバマ州）を挙げることができる。
【００３２】
脱水したアルコールおよびプロピレングリコールを、脂質相の補助溶媒として用いてもよく、酢酸ビタミンＥを抗酸化剤として含んでもよい。種々の態様において、セラミド、レシチン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、カルジオリピン、トリリノレイン等のような他の脂質や脂質様物質が、本発明に用いられる。非リン脂質を、本発明に用いてもよい。例えば、有用な非リン脂質物質としては、脂質ベシクルを形成するポリオキシエチレン脂肪エステル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ジエタノールアミン、長鎖アシルアミド、長鎖アシルアミノ酸アミド、長鎖アシルアミド、ポリオキシエチレンソルビタンオレート、ポリオキシエチレングリセロールモノステアレート、グリセロールモノステアレート、およびそれらの混合物、類似物、誘導体を挙げることができる。これらのベシクルは、ステロイド、電荷を発生する物質を含んでもよい。好ましいステロイドとしては、コレステロール、ヒドロコルチゾン、およびこれらの類似物、誘導体、混合物を挙げることができる。好ましい負電荷発生物質としては、オレイン酸、ジセチルリン酸、パルミチン酸、セチル硫酸、レチノイン酸、ホスファチジン酸、ホスファチジルセリン、およびこれらの混合物である。正味の正電荷をベシクルに付与する必要がある場合は、ステアリルアミンやオレイルアミン等の長鎖アミン、塩化セチルピリジニウム等の長鎖ピリジニウム化合物、４級アンモニウム化合物、またはこれらの混合物を用いることができる。好ましい正電荷発生物質としては、有効な殺菌剤である臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウムがある。ベシクルに正電荷を発生させる物質としてこの殺菌剤を使用することは、ベシクルが崩壊すると、これらが徐放性殺菌剤キャリアとして作用するという、副次的な有利な点を提供する。充分な量の水相を保持できるいずれの型の脂質ベシクルも使用できる。
【００３３】
あるいは、ここで述べた防腐剤は、リポソーム処方において唯一の生物学的活性物質として機能しながら、殺菌剤としても作用しうる。このような態様において、殺菌剤（例えば、塩化ベンゼトニウムのようなベンゼトニウム塩）は、約０．０１％から約１％、より好ましくは約０．１〜０．５％、最も好ましくは約０．２％で、脂質殺菌処方に含めてもよく、これらは適用される表面に、持続性の効果を示すように留まることとなる。
【実施例１】
【００３４】
＜処方例Ａ＞
この節では、ケトプロフェンを含む本発明のリポソーム組成物を製造するための出発物質の例を示す。ケトプロフェンリポソーム組成物は、重量パーセントで示された以下の成分を含む。
ＰＨＯＳＰＨＯＬＩＰＯＮ（登録商標）９０Ｈ    １０．００
脱水アルコール、ＵＳＰ                        ５．００以下
プロピレングリコール、ＵＳＰ                  ５．００
酢酸ビタミンＥ                                １．００
塩化ベンゼトニウム                            ０．０２
ケトプロフェン                                １．００
精製水                                        ７６．９８
【実施例２】
【００３５】
＜製造方法例Ａ＞
この節では、ケトプロフェンを含む本発明のリポソーム組成物の製造方法の例を示す。
【００３６】
水相：この製法は、２つのジャケット付きステンレススチール製ボルテックス水和チャンバを用いて行われるのが好ましい。２つのチャンバの大きい方に、精製水と塩化ベンゼトニウムを、泡や表面のあぶくを形成しないようにゆっくりと混合した。水相の目標温度である５０℃±２℃となるように、加熱した。チャンバは、水の蒸発を防ぐように蓋がされ、容器からの物質の流れを制御するように、底面に排出口とバルブを備えていた。
【００３７】
脂質相：第２のジャケット付きステンレススチール製混合容器を、第１の容器のごく近くで用いた。この第２のチャンバでは、まず、脱水アルコールとプロピレングリコールを、泡や表面のあぶくを形成しないようにゆっくりと混合した。オーバーヘットミキサーを作動させ、目標温度５８℃として５８±２℃となるように加熱した。溶液が目標温度に達したとき、ケトプロフェンを加え、完全に溶解した。そして、ＰＨＯＳＰＨＯＬＩＰＯＮ（登録商標）９０Ｈと酢酸ビタミンＥを加え、溶解／融解するまで脂質相と混合した。工程が完了するまで、アルコールの蒸発を防ぐためにチャンバに蓋をした。
【００３８】
脂質相の水和：チャンバ底部の排出口のバルブを開き、両方の容器の流れを制御した。水相と油相が流れて一列に規則的に並んだティー（ｔｅｅ）で合流し、分散ポンプにより２相がともに引かれた。混合物は、６０メッシュの分散スクリーンを通して循環され、脂質相の水和を最適化した。そして、混合物は、チャンバ頂部に導かれ、ポンプを通じてチャンバに戻され、全行程が１０分間循環された。
【００３９】
冷却期：循環後、ゆっくり混合を続けながら、生成物の温度が２８℃になるまで、チャンバのジャケットを冷却し、工程を完了した。物質の混合は、表面の泡やあぶくの形成を生じることなく、完全に混合するのに充分な速さであることが好ましい。冷却工程は、好ましくはゆっくりと、最も好ましくは１時間当たり約６℃の冷却速度である。
【実施例３】
【００４０】
＜処方例の処置への使用＞
この例は、種々の問題を処置するための本発明の種々のリポソーム組成物の実際の使用歴を示す。すべての患者は、本発明のリポソーム組成物により、ここに記載された方法に従って、処置された。
【００４１】
ケース１：患者は４８歳の男性で、左足親指に急性痛風を患い、２５年来急性発症が起きていた。この患者は、この期間中インドメタシン錠（５日間）により痛みの処置を行っていた。錠剤は、７５ｍｇの徐放性カプセルであり、１日２回であった。インドメタシン錠を用いることにより、患者は、３〜５日で痛みが５から０に落ちたと報告した（５が最高の痛み、０がまったく痛みがないことを示す１〜５スケールに基づく）。
【００４２】
患者は、インドメタシン（１％）を含む本発明のリポソーム組成物により、足指に１日２回、１グラムの処方薬で処置した。患者は、３日で痛みが５から０になったと報告した。
【００４３】
ケース２：患者は、３０歳の男性で、３年来、右足親指に急性痛風の発症を起こしていた。この間、この患者は、インドメタシン錠（１日２回７５ｍｇ徐放性カプセル）で処置していた。患者は、１％インドメタシンを含む本発明のリポソーム処方で処置した。患者は、１日２回足指に１グラムのリポソーム処方を、３日間用いた。患者は、痛みが５から０になったと報告した。
【００４４】
ケース３：患者は、４９歳の女性で、数年来両手首に偶発性の痛みがあった。栄養薬（例えば、プライムローズ）を除き、痛みを処置する薬は用いたことがなった。患者は、１％ナプロキセンを含む本発明のリポソーム処方を使用した。毎日必要に応じ、通常１日に１回、１グラムを両手首に適用した。痛みは１〜２時間で５から０になった。
【００４５】
ケース４：患者は、４８歳の男性で、運動傷害に起因する偶発性の肘痛と筋および骨格痛がある。患者は、１％ナプロキセンを含む本発明のリポソーム処方１グラムで、１日２回７日間処置した。患者は、痛みが緩和されたと報告した。
【００４６】
ケース５：患者は、４８歳の男性で、顔面に再発性の皮膚感染を患っており、医師から酵母感染と診断された。患者は、市販の抗真菌クリームとＳＰＯＲＡＮＯＸ（登録商標）（イトラコナゾール）錠を使用していた。感染は時々なくなるが、結果として再発した。患者は、１％フルコナゾールを含む本発明のリポソーム処方を、１日１回０．５グラムを１４日間使用して処置した。患者は、感染がなくなり、９０日後でも再発しなかったと報告した。
【００４７】
ケース６：患者は、４８歳の女性で、単純ヘルペスウイルスにより生じたと考えられる唇の潰瘍があった。患者は、潰瘍の処置を受けずに、自然に消えるまで、通常発生後約８〜９日間、潰瘍を我慢していた。患者は、１％アシクロビルを含む本発明のリポソーム処方を、１日２回０．５グラムを３日間使用して処置した。患者は、３日で潰瘍が消えたと報告した。
【００４８】
ケース７：患者は女性で、臀部の右側に痛みがあり、少なくもと２ヶ月間患っている。患者は、１．５％ナプロキセンを含む本発明のリポソーム処方を、１日３回７日間、痛みの領域に１．５グラム適用して、自分で処置した。患者は、７日の終わりには、痛みのレベルが４または５から０になったと報告した。
【００４９】
ケース８：患者は、１６歳の男性で、脚、ふくらはぎおよび大腿に痛みがあり、これらは筋骨格の運動傷害に起因するものである。患者は、１％ナプロキセンを含む本発明のリポソーム処方を、１日２回必要に応じ傷害の領域に１グラム適用して、自分で処置した。患者は、初期の４または５の痛みが、処置の１日後に０になったと報告した。
【００５０】
ケース９：患者は、４１歳の男性で、左手首骨折で、処置の直前にギプス包帯を取り除いた。患者は、１％ナプロキセンを含む本発明のリポソーム処方を、手首の頂部と底部に１日当たり全２グラム１４日間使用して、自分で処置した。患者は、１４日間のうち何回かは適用を行わず、処方を使用しなかった時は痛みが４または５であったと報告した。処方を適用したときは、５−スケールにおいて痛みが２であったと、患者は報告した。
【００５１】
ケース１０：患者は、５３歳の男性で、右足親指、右膝、および左肘が急性痛風であると医師に診断され、３年間患っている。患者は、１日２〜３回のインドメタシン錠による処置を受けていた。患者は、１％インドメタシンを含む本発明のリポソーム処方により、インドメタシン錠の補助療法として、自分で処置した。患者は、１０が最も激しい痛みとして、１〜１０スケールで報告した。
【００５２】
患者は、１０として始まった足指の痛みが、インドメタシン錠の投与で４に減ったと報告した。リポソーム処方による局所適用を行った場合、痛みは２〜３までさらに減少した。
【００５３】
患者は、８として始まった膝の痛みが、インドメタシン錠の投与で２に減ったと報告した。そして、３〜４時間後には、痛みは７〜８に上昇した。リポソーム処方による局所適用により、痛みは２〜３まで減少したと、患者が報告した。
【００５４】
患者は、肘痛が、腫脹を伴って４から始まったと報告した。インドメタシン錠の経口投与により痛みは０に下がったが、３〜４時間後に再び３に上昇した。本発明のリポソーム処方を適用した場合、痛みは０に減少した。
【実施例４】
【００５５】
＜処方例Ｂ＞
【表１】
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この節では、種々の生物学的活性成分を含む本発明のリポソーム組成物の製造方法の例を提供する。ここでの特定の成分は、リポソーム処方による痛みの対処に最大の治療効果を伝えるように選択された。
【００５６】
メチルスルホニルメタン（ＭＳＭ）は、体内で天然に見られる有機硫化物であり、コラーゲンの産生に寄与すると考えられる。
【００５７】
プレグネノロンは、脳や他の神経系組織に高濃度で見出されるコレステロール代謝物の天然産物である。これは、次に、一連のステロイドホルモン形成における前駆体となる。
【００５８】
Ｓ−アデノシルメチオネン（ＳＡＭ−ｅ）は、アミノ酸メチオニンの天然代謝産物である。これは、硬直、痛み、腫脹を和らげ、特に変形性関節症の場合に有用な効果を示すことが知られている。関節組織におけるＳＡＭ−ｅ欠損は、軟骨のゲル様の弾力のある性質を失う原因となる。
【００５９】
グルコサミンは、関節および結合組織において相対的に高濃度で見出され、軟骨の修復と維持に関連する。グルコサミンは、関節炎の処置に認可されており、痛みと炎症を抑えることが示され、可動範囲を増加させ、老化と膝および臀部における損傷した関節の修復を助ける。
【００６０】
ビタミンＥは、第１に、毒性化合物および体内のフリーラジカル代謝物によるような、細胞損傷から保護する抗酸化剤として機能する。これは親油性なので、細胞膜およびキャリア分子の脂質部分に容易に取り込まれる。
【００６１】
ＴＥＮＯＸ４（登録商標）は、ブチル化ヒドロキシアニゾール（ＢＨＡ）およびブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）の双方を含む食品グレードの抗酸化剤／防腐剤である。
【実施例５】
【００６２】
＜製造方法例Ｂ＞
この節では、ケトプロフェンを含む本発明のリポソーム組成物の製造方法の例を提供する。
【００６３】
水相：蒸留水（２１，７６１．６０ｇ）を３２．００リットルのアルミニウム容器に移した。以下の成分をゆっくりと容器に添加した；塩化ベンゼトニウム、ＵＳＰ（５．６０ｇ）、グルコサミンＨＣＬ（１４．００ｇ）、およびＳ−アデノシルメチオネン（１４．００ｇ）。各々の成分を、個々に溶解するまで加え、混合物を１０分間続けて撹拌した。そして、混合物をホットプレートで約５２℃〜５４℃に暖めた。容器に蓋をして、水の蒸発を防いだ。
【００６４】
脂質相：エタノール（１９０）（１６８０．００ｇ）およびプロピレングリコール、ＵＳＰ（１４００．００ｇ）を、７．５リットルのステンレススチール容器に加えた。そして、混合物を約５８℃〜６０℃に加熱した。容器に蓋をして、アルコールの蒸発を防いだ。暖めた混合物を４”のプロペラ羽根つきのオーバーヘッドミキサーで撹拌する。そして、プレグネノロン（１００．８０ｇ）およびＭＳＭ（８４．００ｇ）をゆっくり加えた。これらの成分を完全に溶解した後、混合物を濾過した。そして、酢酸ビタミンＥ、ＵＳＰ（２８０．００ｇ）、ＰＨＯＳＰＨＯＬＩＰＯＮ（登録商標）８０Ｈ（２６３２．００ｇ）、およびＴＥＮＯＸ４（登録商標）（２８．００ｇ）をゆっくり加えた。約１０〜３０分間、これらの全成分が融解または溶解するまで、ミキサーの速度を、充分な混合が得られるのに必要なものに調整し、容器の温度を５８℃と６０℃の間に維持した。
【００６５】
脂質相の水和：水相を５”のアンカー羽根つきのオーバーヘッドミキサーを用いて撹拌した。水相の渦に脂質相を即座に加えた時点で、水相と脂質相両方の加熱をやめた。ミキサーの速度を、脂質相の最適な水和がなされるのに必要なものに調整した。
【００６６】
冷却段階：氷浴を用いて生成物を冷却した。最終生成物の温度が約３０℃〜３５℃になるまで、撹拌を続けた。冷却中は、生成物への空気の巻き込みを防ぐのに必要な程度にミキサーの速度を落とした。
【実施例６】
【００６７】
＜処方例Ｂの処置への使用＞
この例では、本発明の実施例４のリポソーム処方Ｂを、痛みの処置に使用した実際の履歴を示す。
【００６８】
患者は、２４歳の女性で、左膝の軟骨が断裂し、足首と膝に痛みがあった。リポソーム処方Ｂ（約１〜２グラム）を、１週間１日２回、足首と膝のそれぞれに適用した。患者は、痛みが顕著に少なくなり、動きがより柔軟になったと報告し、処置前のレベルの痛みもなく、ある程度のジョギングを再開した。
【００６９】
ここで例示的に記載された発明は、ここで特に記載しなかった１またはそれ以上の要素や、１またはそれ以上の限定なしに、実施することができる。用いられた用語や表現は、記述のための用語として使用され、限定するためのものではなく、このような用語や表現の使用は、示され、記載された特徴またはそれらの部分のいずれの均等物をも排除するものでもなく、特許請求の範囲に記載された発明の範囲内における種々の変更が可能であることが認識される。したがって、本発明は好ましい態様および最適な特徴により特に開示されたが、ここに開示された概念の変更や変形が当業者によりなされ、これらの変更や変形が添付された特許請求の範囲により定義される本発明の範囲内にあるとみなされることを、理解すべきである。
【００７０】
ここで言及または引用された文献、特許、特許出願、他のすべての文書および電子的に利用可能な情報の内容は、参照することにより各々の個々の公表が取り込まれると具体的かつ個別に示されているのと同様の範囲で、参照することによりそれらの全体が本明細書に取り込まれる。出願人は、これらの文献、特許、特許出願、または他の文書からのいずれかおよびすべての内容および情報をこの出願に物理的に取り込む権利を保有する。
【００７１】
ここに例示的に記載された発明は、ここに特に開示されていない１またはそれ以上の要素や、１またはそれ以上の限定なしに、適切に実施することができる。したがって、例えば、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」等の用語は、拡張して限定なしに読むべきである。さらに、ここで用いられる用語および表現は、限定のためではなく記述のための用語として用いられており、このような用語や表現の使用は、示され、記載された特徴またはそれらの部分のいずれの均等物をも排除するものでもなく、特許請求の範囲に記載された発明の範囲内における種々の変更が可能であることが認識される。したがって、本発明は好ましい態様および最適な特徴により特に開示されたが、ここに開示されそこで具体化された発明の変更や変形が当業者によりなされ、これらの変更や変形が本発明の範囲内にあるとみなされることを、理解すべきである。
【００７２】
本発明は、ここで広く一般的に記載された。一般的な開示の範囲内に収まる狭い種や亜種の群の各々も、本発明の一部を形成する。これには、除去された内容がここで具体的に再び引用されているか否かに関係なく、属からいずれかの内容を除去することによる消極的限定や条件付けを伴う本発明の一般的な記載を含む。
【００７３】
さらに、本発明の特徴や見地がマーカッシュグループの用語で記載されている場合、当業者は、マーカッシュグループのいずれかの個々のメンバー、またはメンバーのいずれかの個々のサブグループの用語として、ここにそこに記載されているものと認識するであろう。
【００７４】
他の態様は、以下の特許請求の範囲に示される。
【国際調査報告】
2005536481.tif 000003
2005536481.tif 000004