【手続補正書】
【提出日】令和2年8月14日(2020.8.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ガスクロマトグラフの排気流路に接続し、ガスクロマトグラフで分離された揮発性成分を口内に送る第１流路と、気体以外の流動性を有する流動性試料を入れる容器および前記流動性試料を口内に送る第２流路を備えたことを特徴とする装置。
【請求項２】
ガスクロマトグラフの排気流路に接続し、ガスクロマトグラフで分離された揮発性成分を口内に送る第１流路と、気体以外の流動性を有する流動性試料を入れる容器および前記流動性試料を口内に送る第２流路、並びに香気を有する気体を発する香気試料を入れる容器および該容器の中の香気試料が発する香気気体を口内に送る第３流路を備えたことを特徴とする装置。
【請求項３】
さらに、前記第１流路と第３流路とが合流し、揮発性成分及び香気気体を口内に送る第４流路を有する請求項２に記載の装置。
【請求項４】
さらに、各流路の排出端部が束ねられた、請求項１〜３のいずれかに記載の装置。
【請求項５】
請求項１または４に記載の装置を用いて、ガスクロマトグラフにより分離された揮発性成分と、流動性試料を、それぞれ連続的に口内へ直接送り込むことを特徴とする揮発性成分の評価方法。
【請求項６】
請求項２または４に記載の装置を用いて、ガスクロマトグラフにより分離された揮発性成分、流動性試料、および香気気体を、それぞれ連続的に口内へ直接送り込むことを特徴とする揮発性成分の評価方法。
【請求項７】
請求項３または４に記載の装置を用いて、ガスクロマトグラフにより分離された揮発性成分および香気気体の混合気体と、流動性試料を、それぞれ連続的に口内へ直接送り込むことを特徴とする揮発性成分の評価方法。
【請求項８】
前記流動性試料の排出流量が毎分０．５〜１０ｍｌである、請求項５〜７のいずれかに記載の評価方法。
【請求項９】
前記香気気体の排出流量が毎分５０〜１５００ｍｌである、請求項６または７に記載の評価方法。
【請求項１０】
前記流動性試料が呈味成分を有する試料である、請求項５〜９のいずれかに記載の評価方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】発明の名称
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の名称】揮発性成分の評価方法およびそれに用いる装置
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００１】
本発明は、香気を評価するための方法およびそれに用いる装置に関するものである。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
前記課題を解決する本願発明は、以下の（１）〜（１０）からなる。
（１）  ガスクロマトグラフの排気流路に接続し、ガスクロマトグラフで分離された揮発性成分を口内に送る第１流路と、気体以外の流動性を有する流動性試料を入れる容器および前記流動性試料を口内に送る第２流路を備えたことを特徴とする装置。
（２）  ガスクロマトグラフの排気流路に接続し、ガスクロマトグラフで分離された揮発性成分を口内に送る第１流路と、気体以外の流動性を有する流動性試料を入れる容器および前記流動性試料を口内に送る第２流路、並びに香気を有する気体を発する香気試料を入れる容器および該容器の中の香気試料が発する香気気体を口内に送る第３流路を備えたことを特徴とする装置。
（３）  さらに、前記第１流路と第３流路とが合流し、揮発性成分及び香気気体を口内に送る第４流路を有する前記（２）に記載の装置。
（４）  さらに、各流路の排出端部が束ねられた、前記（１）〜（３）のいずれかに記載の装置。
（５）  前記（１）または（４）に記載の装置を用いて、ガスクロマトグラフにより分離された揮発性成分と、流動性試料を、それぞれ連続的に口内へ直接送り込むことを特徴とする揮発性成分の評価方法。
（６）  前記（２）または（４）に記載の装置を用いて、ガスクロマトグラフにより分離された揮発性成分、流動性試料、および香気気体を、それぞれ連続的に口内へ直接送り込むことを特徴とする揮発性成分の評価方法。
（７）  前記（３）または（４）に記載の装置を用いて、ガスクロマトグラフにより分離された揮発性成分および香気気体の混合気体と、流動性試料を、それぞれ連続的に口内へ直接送り込むことを特徴とする揮発性成分の評価方法。
（８）  前記流動性試料の排出流量が毎分０．５〜１０ｍｌである、前記（５）〜（７）
のいずれかに記載の評価方法。
（９）  前記香気気体の排出流量が毎分５０〜１５００ｍｌである、前記（６）または（７）に記載の評価方法。
（１０）  前記流動性試料が呈味成分を有する試料である、前記（５）〜（９）のいずれかに記載の評価方法。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
本発明の装置を用いることで、ガスクロマトグラフにより分離された揮発性成分と流動性試料を、それぞれ連続的に口内へ直接送り込んで評価することが可能となり、上記課題の解決に至った。本発明の揮発性成分の評価方法は、香気成分が、飲食時の感覚にどのような影響を与えるかを簡便に評価することができる。また、どの香気成分が影響しているかどうかを、従来の手法より容易に特定できる。さらに、有用な成分のリテンションタイムの特定が容易であることから、当該成分の特定も容易となる。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
【図１】図１は本発明の評価方法で用いられる装置を例示する概念図の一例である。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
１  ガスクロマトグラフで分離された揮発性成分が通る流路（以下、「第１流路」とする）
２  流動性試料を入れる容器（以下、「流動性試料の容器」とする）
３  流動性試料が通る流路（以下、「第２流路」とする）
４  香気を有する気体を発する試料（以下、「香気試料」とする）を入れる容器（以下、「香気試料の容器」とする）
５  香気試料が発する気体（以下、「香気気体」とする）が通る流路（以下、「第３流路」とする）
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
本発明の装置は、ガスクロマトグラフにより分離された揮発性成分（以下、単に「揮発性成分」ということがある。）と、気体以外の流動性を有する流動性試料（以下、単に「
流動性試料」ということがある。）を、それぞれ連続的に口中へ直接送り込むことを特徴とする揮発性成分の口内評価用の装置である。図１を参照して装置の概要について説明する。装置は、ガスクロマトグラフの排気流路に接続し揮発性成分を口内に送る第１流路１と、流動性試料を入れる容器２およびその流動性試料を口内に送る第２流路３を備える。すなわち、各流路から揮発性成分および流動性試料がそれぞれ口中に直接送り込むことができる。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
本発明の装置は、流動性試料が含有する香気成分を補う等の目的で、上述した構成に加え、香気を有する気体を発する香気試料（以下、単に「香気試料」ということがある。）を入れる容器４および該容器４の中の香気試料が発する気体（以下、単に「香気気体」ということがある。）を口内に送る第３流路５を追加で備えてもよい。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
本発明の装置において、第１流路１と第３流路５は合流させ、第４流路を形成してもよい。また、これらの流路に第２流路３を合流させることもできる。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
本発明の装置においては、揮発性成分からなる気体成分或いは揮発性成分および香気気体からなる気体成分と流動性試料が必ずしも完全に溶解しないこと、気体成分と流動性試料を合流させることで気体成分が流路内滞留する可能性があること等を考慮すると、第２流路３は独立させ、気体成分と流動性試料がそれぞれ別個に口内へ直接送り込まれるようにするのがより好ましい。もし、第２流路３を合流させる場合、合流後の流路は短い方が好ましい。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
本発明において、有臭成分、動植物原材料から得られた微量芳香成分、多成分から成る精油等の評価対象試料がガスクロマトグラフに注入され、複数の揮発性成分に分離される。ガスクロマトグラフで分離された揮発性成分は、検知器への流路と第１流路１に分割して導かれ、第１流路１の端部より口内へ吐出する。第１流路１の口径は、太過ぎると口に
咥えて評価しづらく、また、揮発性成分が滞留する可能性もある。一方、細過ぎると、必要な流量を確保しようとすると気体が排出口から勢いよく吐出してしまい評価が困難になることから、口径は外径０．４〜１５ｍｍ程度が好ましい。また、第１流路１には、流量や温度の調節のためにエアーを送り込むこともできる。エアーの送気量は、評価作業に支障の無い範囲内で設定すればよいが、毎分５〜２００ｍｌ程度が好ましい。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
本発明で用いられる流動性試料は、容器２に投入され、重力落下式やポンプ式等の任意の方法で第２流路３に送り込まれ、第２流路３の端部より吐出する。第２流路３に送り込む量の制御がより簡便で正確に行えることから、ポンプを用いるのが好ましい。なお、流動性試料を口中に送り込む量は、評価作業に支障の無い範囲内で設定すればよいが、毎分０．５〜１０ｍｌ程度が好ましい。なお、第２流路３に用いるチューブは、耐熱性や耐酸性を備える素材が好ましく、口径は、太過ぎると口に咥えて評価しづらく、細過ぎると必要な流量を確保しようとすると流動性試料が排出口から勢いよく吐出してしまい評価が困難になることから、適切な線速度に収まるよう、外径０．４〜１５ｍｍ程度が好ましい。
【手続補正１４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２０】
本発明において用いられる香気試料は、容器４に投入される。該香気試料が発する香気気体は、容器４に注入されたキャリヤーガスにより第３流路５へ連続的に送気され、第３流路５の端部より吐出する。なお、香気気体の口中への送気量は、評価作業に支障の無い範囲内で設定すればよいが、毎分５０〜１５００ｍｌ程度が好ましい。また、第３流路５に用いる送気用チューブの口径は、太過ぎると口に咥えて評価しづらく、細過ぎると必要な流量を確保しようとすると気体が排出口から勢いよく吐出してしまい評価が困難になることから、適切な線速度に収まるよう、外径０．４〜１５ｍｍ程度が好ましい。
【手続補正１５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
本発明において用いられる香気試料は、香気気体を発するものであれば、固体、液体等の形態は何でもよい。なお、香気試料が液体の場合、容器４の中で公知の方法により撹拌するのが好ましく、必要に応じて、随時液体を補充する装置を備えてもよい。また、香気試料が気体の場合、該気体の入った気体捕集用袋等を第３流路５に接続し、ポンプ等を用い連続的に送り込むこともできる。
【手続補正１６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
本発明の装置においては、評価者がより評価し易いよう、各流路の排出端部を束ねるのが好ましく、取替可能なマウスピースを用い束ねるのがより好ましい。マウスピースは、呼吸や嚥下を阻害しないような構造がよく、管状のものが好ましい。なお、マウスピースの素材としては、ガラス、シリコン樹脂、ＰＴＦＥ等が用いられるが、弾力性のあるものがよく、シリコンチューブを用いるのが好ましい。また、管を長時間口に咥え続けて評価を行うことから、評価者に負荷がなるべくかからないよう、マウスピースの口径は外径３０ｍｍ以内が好ましい。
【手続補正１７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２３】
本発明において用いられる各試料は、必要に応じて加熱もしくは冷却することができる。各試料を入れる容器中の温度調節の方法は、容器外部にヒーターを設置する方法や、容器にジャケットを付して温度調節用の流体を通じる方法など公知の方法が使用できる。また、容器内部もしくは外表面に温度計測用の器具を設置することもでき、計測機器の出力によって温度調節をする手段を適用することもできる。各容器の材質としては、それ自体が臭気など揮発性成分を放出せず、かつ揮発性成分を吸着しないものが好ましく、通常はガラス製容器等が使用される。
【手続補正１８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２４】
本発明の揮発性成分の評価方法においては、前述の装置が用いられる。より具体的には、まず、多成分から成る精油等の評価対象試料をガスクロマトグラフの注入口から注入し、カラムで分離された揮発性成分を第１流路１に送り込む。他方、流動性試料は容器２に投入し、前述の方法で第２流路３に送り込む。これら第１流路１と第２流路３の排出端部を直接口に咥え、口中に揮発性成分と流動性試料をそれぞれ連続的に直接送り込むことにより、ガスクロマトグラフで分離された揮発性成分を、飲食時の感覚に近い条件下で連続的に官能評価することができ、同時にクロマトグラムにより、各成分とその評価を簡便に対応させることができる。
【手続補正１９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２５】
なお、上記方法を実施するにあたり、例えば、流動性試料から発される香気成分の量が少ない場合においては、容器４に流動性試料の香気を補う香気を含む香気試料を投入し、香気試料から発せられる香気気体を前述の方法で第３流路５に送り込み、この第３流路５の排出端部を、第１流路１および第２流路３の排出端部と一緒に口に咥えることで、流動
性試料の香気を補いながら評価を行うことができる。なお、本発明で用いる香気試料は、評価の目的に応じて、流動性試料の香気を補うもの以外のものも用いることができる。
【手続補正２０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２６】
（実施例１）
凍結粉砕したバニラビーンズをエーテルで抽出し溶剤回収により得た抽出物（以降、「バニラ香気抽出物」とする）をガスクロマトグラフに注入した。実験に用いたガスクロマトグラフは、アジレント社製７８９０Ａで、検出器はＦＩＤ、使用したカラムは極性キャピラリーカラム（長さ３０ｍ、内径０．５３ｍｍ、膜厚１０μｍ）、ガスクロマトグラフのキャリヤーガスは窒素ガスで１１０ｋＰａの圧力、昇温条件１２０℃から２５０℃まで毎分２℃昇温で行った。ガスクロマトグラフで分離された揮発性成分は、毎分４０ｍｌの速度でエアーを送り込みながら第１流路１に導いた。同時に、牛乳に対しグラニュー糖８％、バニラエキス０．２％添加して調製した流動性試料を容器２に投入し、マイクロポンプにより毎分４．０ｍｌの速度で第２流路３に送り込んだ。なお、第１流路１には外径１１ｍｍ、内径６ｍｍのガラス管、容器２にはガラス製の三角フラスコ、第２流路３には外径１．４ｍｍ、内径０．４ｍｍのＰＴＦＥチューブを用い、各流路の先端（排出端部）を外径１１ｍｍ、内径６ｍｍのシリコンチューブ製のマウスピースに接続した。このマウスピースを口に咥え、揮発性成分と流動性試料を連続的に口中へ直接送り込み、官能評価を行った。２名の専門パネリストが評価を行った結果、リテンションタイム３６．１分に、流動性試料にバニラエキスを増量したような、呈味感をエンハンスする成分をわずかに確認した。
【手続補正２１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２７】
また、口中に送り込まれる流動性試料の香気濃度を補助するため、上記方法に香気試料を追加で用いて同様に評価を行った。香気試料には、牛乳に対しグラニュー糖８％、バニラエキス１％を添加したものを用いた。香気試料は、上記方法で用いた装置に追加で備えた容器４に投入して容器内で連続撹拌し、香気試料から発生した香気気体をキャリヤーガスにより第３流路５に送り込んだ。なお、容器４にはガラス製の丸底フラスコ、第３流路５には外径１１ｍｍ、内径６ｍｍのシリコンチューブを用い、第３流路５は第１流路１の先端付近に合流させた。評価の結果、前述のリテンションタイム３６．１分に、流動性試料にバニラエキスを増量したような、呈味感をエンハンスする成分をはっきりと確認した。
【手続補正２２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２８】
上記のリテンションタイム３６．１分の成分は、ガスクロマトグラフのピークとしては
検出されなかったが、香調とＲＩから３−ヒドロキシ−４，５−ジメチル−２（５Ｈ）−フラノンと同定した。
【手続補正２３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２９】
（比較例１）
特許文献２に記載の方法で、上記３−ヒドロキシ−４，５−ジメチル−２（５Ｈ）−フラノンの同定が可能かどうか比較実験を行った。上記バニラ香気抽出物を、実施例１と同一条件のガスクロマトグラフに注入し、分離された揮発性成分を、ガスクロマトグラフの排出経路に接続した気体流路に導いた。同時に、ガスクロマトグラフの経路外に設けた試料容器にエタノールを投入し、定量ポンプを用い毎分０．５ｍＬの速度で試料容器から液体を通液する液体流路にエタノールを送り込んだ。気体流路と液体流路の合流する部分で、ガスクロマトグラフからの流出ガスとエタノールを接触させることで、ガスクロマトグラフで分離された揮発性成分とエタノールの混合物を得た。この混合物を、フラクションコレクターを用いて分取した。フラクションコレクターのサンプリングの切り替え時間は１分とし、０．５ｍＬずつ分取を行うことで、フラクションＮＯ．１〜８０の計８０本の分取物を得た。これら８０本の分取物を、牛乳に対しグラニュー糖８％、バニラエキス０．２％添加して調製した飲料ベースに１％添加することで評価用サンプルを８０本調製した。この評価用サンプルと無添加の飲料ベースを、６名の専門パネリストにより比較評価した。評価の結果、フラクションＮＯ．３８および３９の分取物を添加した評価用サンプルに、飲料ベースにバニラエキスを増量したような、呈味感をエンハンスする成分を確認した。
【手続補正２４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３０】
上記結果を受け、フラクションＮＯ．３８および３９に含まれる、飲料ベースにバニラエキスを増量したような、呈味感をエンハンスする成分を同定するため、フラクションＮＯ．３８および３９の分取物をＧＣ／ＭＳ分析に供したところ、フラクションＮＯ．３８の分取物については５４成分、フラクションＮＯ．３９の分取物については３９成分を同定できた。しかし、３−ヒドロキシ−４，５−ジメチル−２（５Ｈ）−フラノンの同定には至らなかった。
【手続補正２５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３１】
（実施例２）
流動性試料および香気試料として、牛乳に対しグラニュー糖８％、バニラエキス１％を添加した同じものを用いたことを除き、実施例１の方法と同様にして、検出された各成分の官能評価を行った。また、実施例２では、既知の検出時間を有する揮発性成分として、
３−ヒドロキシ−４，５−ジメチル−２（５Ｈ）−フラノン、けい皮酸エチル、酢酸、およびグアヤコールに着目し、それぞれの揮発性成分に関し、評価方法の違いによる官能評価結果の違いを調べた。比較のために、通常の匂いかぎＧＣを用い、ガスクロマトグラフから分離された揮発性成分のみを鼻で嗅いだ官能評価（比較例２）、実施例２の方法から流動性試料を除外した特許文献１に記載の方法を用い、ガスクロマトグラフから分離された揮発性成分と香気試料のみを鼻で嗅いだ官能評価（比較例３）、比較例３と同じ方法を用い、ガスクロマトグラフから分離された揮発性成分と香気気体を口中に含んだ官能評価（比較例４）をそれぞれ行った。評価の結果を表１に示す。
【手続補正２６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３２】
【表１】
2020134145.tif 000001
【手続補正２７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３３】
評価の結果、けい皮酸エチルは、比較例２の評価方法では松茸様という評価結果であったが、比較例３および４ではバニラのバルサム様の香調を強調した。一方、本発明の方法
である実施例２では、バニラエキスを増量したかのように呈味感をエンハンスすることが分かった。また、比較例３および４では好ましくない変化を与えた酢酸は、実施例２では変化が分からず、さらに、比較例３および４ではバニラのスパイシーな香調を強調したグアヤコールは、実施例２では高級感のあるバニラアイス調の香調を強調した等の結果から、本発明の方法を用いることにより、バニラ香気の個々の成分がバニラ風味飲料中で、飲食時に近い条件下で、どう影響するのかを評価できることが分かった。