(57)【要約】カンプトテシンのハロアルキルエステルが記載される。これらの化合物を製造する方法およびこれらを癌治療に使用する方法も記載される。【化１】2005536464.tif 000013
2005536464.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式Ｉの化合物：
【化１】
2005536464.tif 000012
式中、ＲがＨ、−ＯＨ、ＮＯ２、ＮＨ２、Ｎ３、ハロゲン、カルボキシル、Ｃ１−１６アルキル基、Ｃ１−１６アルケニル基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ１−８アルコキシル基、アロキシル基、ＣＮ、ＳＯ３Ｈ、Ｃ１−８ハロゲン化アルキル基、（ＣＨ２）ｎＮＲ２７、ヒドロキシル、ＳＨ、ＳＲ８、カルボニル基、ＳｉＲ３１０；Ｃ１−１２アルケニル基、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ＣＨ２Ｆ、ＣＨ２Ｃｌ２、ＣＨＦ２、ＣＨＣｌ２、ＯＨ、またはＯＲ１２である；ここで、Ｒ基がそれぞれＡ環の９、１０、１１または１２位に位置する；Ｒ１２がＣ１−８アルキル基、Ｃ１−８アルケニル基、または芳香族基である；Ｒ７がＨまたはＣ１−８アルキル基である；ｎが１〜８の整数である；Ｒ８がＣ１−８アルキル基または置換または未置換フェニル基である；Ｒ１０がＣ１−４アルキル基である；ＸがＨ、Ｃ１−８アルキル基、Ｃ１−８アルケニル基、Ｃ１−８アルコキシル基、アロキシル基、ＳｉＲ３１１基またはＣＨ２ＮＺＹである；ｎが１〜１８である；およびＸ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４およびＸ５が同じまたは異なっていて、水素、ハロゲン、置換または未置換アルキル基、芳香族基、ニトロ基、シアノ基、アミノ基、ヒドロキシル基、カルボニル基、カルボキシル基であり、ただし、Ｘ１〜Ｘ５の少なくとも１つがハロゲン原子またはハロゲン含有基である。
【請求項２】
Ｘ１、Ｘ３およびＸ４が水素であり、かつ、Ｘ２およびＸ５が同じまたは異なっていて、ハロゲンである、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｘ１およびＸ２が水素であり、かつ、Ｘ３、Ｘ４およびＸ５が同じまたは異なっていて、ハロゲンである、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
Ｘ１、Ｘ２およびＸ３が水素であり、かつ、Ｘ４およびＸ５が同じまたは異なっていて、ハロゲンである、請求項１記載の化合物。
【請求項５】
Ｘ３およびＸ４が水素であり、かつ、Ｘ１、Ｘ２およびＸ５が同じまたは異なっていて、ハロゲンである、請求項１記載の化合物。
【請求項６】
Ｘ２およびＸ５が同じまたは異なっていて、フッ素または塩素である、請求項２記載の化合物。
【請求項７】
Ｘ３、Ｘ４およびＸ５が同じまたは異なっていて、フッ素または塩素である、請求項３記載の化合物。
【請求項８】
Ｘ４およびＸ５が同じまたは異なっていて、フッ素または塩素である、請求項４記載の化合物。
【請求項９】
Ｘ１、Ｘ２およびＸ５が同じまたは異なっていて、フッ素または塩素である、請求項５記載の化合物。
【請求項１０】
Ｘ１がハロゲンであり、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４およびＸ５が水素である、請求項１記載の化合物。
【請求項１１】
Ｘ３がハロゲンであり、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ４およびＸ５が水素である、請求項１記載の化合物。
【請求項１２】
Ｘ１が塩素である、請求項１０記載の化合物。
【請求項１３】
Ｘ１がフッ素である、請求項１０記載の化合物。
【請求項１４】
Ｘ３がフッ素である、請求項１１記載の化合物。
【請求項１５】
Ｘ３が塩素である、請求項１１記載の化合物。
【請求項１６】
請求項１記載の前記化合物の有効量を含む組成物を投与することを含む哺乳動物の腫瘍または癌を治療する方法であって、前記腫瘍または癌が前記組成物に反応性を有する方法。
【請求項１７】
請求項２記載の前記化合物の有効量を含む組成物を投与することを含む哺乳動物の腫瘍または癌を治療する方法であって、前記腫瘍または癌が前記組成物に反応性を有する方法。
【請求項１８】
請求項３記載の前記化合物の有効量を含む組成物を投与することを含む哺乳動物の腫瘍または癌を治療する方法であって、前記腫瘍または癌が前記組成物に反応性を有する方法。
【請求項１９】
請求項４記載の前記化合物の有効量を含む組成物を投与することを含む哺乳動物の腫瘍または癌を治療する方法であって、前記腫瘍または癌が前記組成物に反応性を有する方法。
【請求項２０】
請求項５記載の前記化合物の有効量を含む組成物を投与することを含む哺乳動物の腫瘍または癌を治療する方法であって、前記腫瘍または癌が前記組成物に反応性を有する方法。
【請求項２１】
請求項６記載の前記化合物の有効量を含む組成物を投与することを含む哺乳動物の腫瘍または癌を治療する方法であって、前記腫瘍または癌が前記組成物に反応性を有する方法。
【請求項２２】
請求項７記載の前記化合物の有効量を含む組成物を投与することを含む哺乳動物の腫瘍または癌を治療する方法であって、前記腫瘍または癌が前記組成物に反応性を有する方法。
【請求項２３】
請求項８記載の前記化合物の有効量を含む組成物を投与することを含む哺乳動物の腫瘍または癌を治療する方法であって、前記腫瘍または癌が前記組成物に反応性を有する方法。
【請求項２４】
請求項９記載の前記化合物の有効量を含む組成物を投与することを含む哺乳動物の腫瘍または癌を治療する方法であって、前記腫瘍または癌が前記組成物に反応性を有する方法。
【請求項２５】
請求項１０記載の前記化合物の有効量を含む組成物を投与することを含む哺乳動物の腫瘍または癌を治療する方法であって、前記腫瘍または癌が前記組成物に反応性を有する方法。
【請求項２６】
請求項１１記載の前記化合物の有効量を含む組成物を投与することを含む哺乳動物の腫瘍または癌を治療する方法であって、前記腫瘍または癌が前記組成物に反応性を有する方法。
【請求項２７】
請求項１２記載の前記化合物の有効量を含む組成物を投与することを含む哺乳動物の腫瘍または癌を治療する方法であって、前記腫瘍または癌が前記組成物に反応性を有する方法。
【請求項２８】
請求項１３記載の前記化合物の有効量を含む組成物を投与することを含む哺乳動物の腫瘍または癌を治療する方法であって、前記腫瘍または癌が前記組成物に反応性を有する方法。
【請求項２９】
請求項１４記載の前記化合物の有効量を含む組成物を投与することを含む哺乳動物の腫瘍または癌を治療する方法であって、前記腫瘍または癌が前記組成物に反応性を有する方法。
【請求項３０】
請求項１５記載の前記化合物の有効量を含む組成物を投与することを含む哺乳動物の腫瘍または癌を治療する方法であって、前記腫瘍または癌が前記組成物に反応性を有する方法。
【請求項３１】
前記腫瘍または癌が肺、乳房、大腸、前立腺、膵臓、胃、肝臓、脳、腎臓、子宮、頚部、卵巣、尿管、直腸管に存在するか、あるいは黒色腫または白血病である、請求項１６に記載の方法。
【請求項３２】
前記腫瘍または癌が肺、乳房、大腸、前立腺、膵臓、胃、肝臓、脳、腎臓、子宮、頚部、卵巣、尿管、直腸管に存在するか、あるいは黒色腫または白血病である、請求項１７に記載の方法。
【請求項３３】
前記腫瘍または癌が肺、乳房、大腸、前立腺、膵臓、胃、肝臓、脳、腎臓、子宮、頚部、卵巣、尿管、直腸管に存在するか、あるいは黒色腫または白血病である、請求項１８に記載の方法。
【請求項３４】
前記腫瘍または癌が肺、乳房、大腸、前立腺、膵臓、胃、肝臓、脳、腎臓、子宮、頚部、卵巣、尿管、直腸管に存在するか、あるいは黒色腫または白血病である、請求項１９に記載の方法。
【請求項３５】
前記腫瘍または癌が肺、乳房、大腸、前立腺、膵臓、胃、肝臓、脳、腎臓、子宮、頚部、卵巣、尿管、直腸管に存在するか、あるいは黒色腫または白血病である、請求項２０に記載の方法。
【請求項３６】
前記腫瘍または癌が肺、乳房、大腸、前立腺、膵臓、胃、肝臓、脳、腎臓、子宮、頚部、卵巣、尿管、直腸管に存在するか、あるいは黒色腫または白血病である、請求項２１に記載の方法。
【請求項３７】
前記腫瘍または癌が肺、乳房、大腸、前立腺、膵臓、胃、肝臓、脳、腎臓、子宮、頚部、卵巣、尿管、直腸管に存在するか、あるいは黒色腫または白血病である、請求項２２に記載の方法。
【請求項３８】
前記腫瘍または癌が肺、乳房、大腸、前立腺、膵臓、胃、肝臓、脳、腎臓、子宮、頚部、卵巣、尿管、直腸管に存在するか、あるいは黒色腫または白血病である、請求項２３に記載の方法。
【請求項３９】
前記腫瘍または癌が肺、乳房、大腸、前立腺、膵臓、胃、肝臓、脳、腎臓、子宮、頚部、卵巣、尿管、直腸管に存在するか、あるいは黒色腫または白血病である、請求項２４に記載の方法。
【請求項４０】
前記腫瘍または癌が肺、乳房、大腸、前立腺、膵臓、胃、肝臓、脳、腎臓、子宮、頚部、卵巣、尿管、直腸管に存在するか、あるいは黒色腫または白血病である、請求項２５に記載の方法。
【請求項４１】
前記腫瘍または癌が肺、乳房、大腸、前立腺、膵臓、胃、肝臓、脳、腎臓、子宮、頚部、卵巣、尿管、直腸管に存在するか、あるいは黒色腫または白血病である、請求項２６に記載の方法。
【請求項４２】
前記腫瘍または癌が肺、乳房、大腸、前立腺、膵臓、胃、肝臓、脳、腎臓、子宮、頚部、卵巣、尿管、直腸管に存在するか、あるいは黒色腫または白血病である、請求項２７に記載の方法。
【請求項４３】
前記腫瘍または癌が肺、乳房、大腸、前立腺、膵臓、胃、肝臓、脳、腎臓、子宮、頚部、卵巣、尿管、直腸管に存在するか、あるいは黒色腫または白血病である、請求項２８に記載の方法。
【請求項４４】
前記腫瘍または癌が肺、乳房、大腸、前立腺、膵臓、胃、肝臓、脳、腎臓、子宮、頚部、卵巣、尿管、直腸管に存在するか、あるいは黒色腫または白血病である、請求項２９に記載の方法。
【請求項４５】
前記腫瘍または癌が肺、乳房、大腸、前立腺、膵臓、胃、肝臓、脳、腎臓、子宮、頚部、卵巣、尿管、直腸管に存在するか、あるいは黒色腫または白血病である、請求項３０に記載の方法。
【請求項４６】
請求項１の前記化合物を含む組成物を哺乳動物へ投与することによって、生物学的条件下にてカンプトテシンのラクトン環を加水分解する原因となる酵素を阻害する方法。
【請求項４７】
請求項１の前記化合物を含む組成物を哺乳動物へ投与することによって、生物学的条件下にカンプトテシンのラクトン環を加水分解する原因となる酵素を阻害する方法であって、該酵素がトポイソメラーゼＩである方法。
【請求項４８】
カンプトテシン、溶媒、アシル化剤および塩基をいかなる順序でも混合することを含む、請求項１記載のハロアルキルエステルを製造する方法。
【請求項４９】
前記溶媒が前記カンプトテシンを溶解することができるが、前記アシル化剤と反応できない、請求項４８記載の方法。
【請求項５０】
前記溶媒がヒドロキシ基を含まない、請求項４８記載の方法。
【請求項５１】
前記溶媒がジメチルホルムアミドである、請求項４８記載の方法。
【請求項５２】
前記アシル化剤が、前記カンプトテシンを前記溶媒と混合する前、最中または後に前記溶媒と混合する、請求項４８記載の方法。
【請求項５３】
前記アシル化剤が有機無水物である、請求項４８記載の方法。
【請求項５４】
カンプトテシン、ハロゲン化アシル、および酸をいかなる順序でも混合することを含む、請求項１記載のハロアルキルエステルを製造する方法。
【請求項５５】
前記酸が硫酸である、請求項５４記載の方法。
【請求項５６】
さらに、前記カンプトテシン、ハロゲン化アシルおよび酸の混合物を約８０℃〜約１２０℃で不活性雰囲気下に加熱することを含む、請求項５４記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はカンプトテシンのハロアルキルエステルに関し、かつ、投与システムにおけるカンプトテシンのハロアルキルエステル誘導体、好ましくは、低毒性および低副作用を有する誘導体を含む組成物に関する。本発明はまた、哺乳動物の癌または腫瘍治療におけるこれらの誘導体の使用に関する。本明細書において参照する全資料の記載を参考としてその全体を本明細書中に導入する。
【背景技術】
【０００２】
ウォール(Wall)およびその共同研究者によってカレンボク（Camptotheca Acuminata）(ニッサ科（Nyssaceae）)の木および樹皮から最初に単離された細胞毒性アルカロイド、カンプトテシン(J. Am. Chem. Soc. 88, 3888, 1966（非特許文献１）)は、マウス白血病Ｌ１２１０系に対して、抗腫瘍活性を有することが示された。カンプトテシンの構造、一般的に生成するインドールアルカロイド基を有するアルカロイド（ヘッケンドルフ(Heckendorf)ら、J. Org. Chem.41, 2045, 1976（非特許文献２））は、以下の式（Ｘ）として示される。
【０００３】
【化１】
2005536464.tif 000003
【０００４】
この化合物（「ＣＰＴ」）は２０（Ｓ）配置を有する環Ｅに唯一の非対照中心を有する五環性環系を有する。五環性環系はピロール[３，４−ｂ]キノリン部分（Ａ、ＢおよびＣ環）、共役ピリドン（Ｄ環）、およびα−ヒドロキシル基を有する六員環ラクトン（Ｅ環）を含む。カンプトテシンはマウス白血病Ｌ１２１０系における顕著な活性により最初に単離されたときから大きな関心がもたれていた。カンプトテシンの抗腫瘍活性についての初期のデータは、マウスの白血病Ｌ１２１０またはラットのウォーカー(Walker)２５６腫瘍などの実験的に移植された悪性腫瘍を使用して得られた(Chem. Rev. 23, 385, 1973, Cancer Treat. Rep. 60, 1007, 1967（非特許文献３）)。続いての臨床研究では、この化合物はその高い毒性ゆえにインビボ(in vivo)で抗癌剤として使用できないことが示された。カンプトテシンはそれ自体、水に不溶性である。したがって、カンプトテシンは初期には水可溶性カルボン酸ナトリウム塩として臨床的に評価されていた。この形態のカンプトテシンは重度の毒性を呈し、抗癌活性を欠いているようであった（ゴットリーブ(Gottlieb)ら、Cancer Chemother. Rep. 54, 461, 1970および56, 103, 1972（非特許文献４及び５）、ムッジア(Muggia)ら、Cancer Chemother. Rep. 56, 515, 1972（非特許文献６）、メーテル(Moertel)ら、Cancer Chemother. Rep. 56, 95, 1972（非特許文献７）およびシェッピ(Schaeppi)ら、Cancer Chemother. Rep. 5:25, 1974（非特許文献８））。これらの結果はフェーズＩＩ試験中止の原因となった。この薬剤の続いての評価では、カルボン酸ナトリウム塩は、完全なままの閉鎖ラクトン環を有する天然カンプトテシンのたった１０％の効果しか有さないことが示された（ウォール(Wall)ら、In International Symposium on Biochemistry And Physiology of The Alkaloids、モーテス（Mothes）ら編、Academie - Verlag, Berlin, 77, 1969（非特許文献９）、ジョバネッラ(Giovanella)ら、Cancer res. 51, 3052, 1991（非特許文献１０））。さらに、カンプトテシンファミリーの抗腫瘍活性における重要なパラメーターが確立されてきた（ウォール(Wall)ら、Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 17, 117, 1977（非特許文献１１））。これらの結果は、完全なままのラクトンＥ環およびα−ヒドロキシル基が抗腫瘍活性において必須であることを示す。
【０００５】
１９８９年にジョバネッラ(Giovanella)らはカンプトテシンの水不溶性誘導体のいくつかが、ヒト腫瘍の異種移植片に対して高い抗腫瘍活性を有することを見出した（ジョバネッラ(Giovanella)ら、Science, 246, 1046, 1989（非特許文献１２））。閉鎖ラクトン環を有するカンプトテシンの投与は水可溶性カルボン酸塩の注射より優れていることも示されている（ジョバネッラ(Giovenella)ら、Cancer Res. 51, 3052, 1991（非特許文献１３））。さらに、これらの知見により生物活性に対する完全なままのラクトン環の重要性が確認された。
【０００６】
２０（Ｓ）−カンプトテシン（「ＣＰＴ」）の開環は、ヒトよりもマウスで、より強力な抗癌活性を導く。事実、筋肉内（「i.m.」）、皮下（「s.c.」）および胃内（「i.s.」）投与されたＣＰＴは、マウス内のヒト腫瘍に対して、すなわちヌードマウスの異種移植片として成長した場合に、非常に強力な抗癌剤であることが立証された（ジョバネッラ(Giovanella)ら、Cancer Res. 51:3052, 1991（非特許文献１３））。しかしながら、腫瘍がヒトにおいてＣＰＴで治療されたとき、マウスよりもヒトで、より低度の抗癌活性を示した(ステーリン(Stehlin)ら、In Camptothecins: New Anticancer Agents, 1995, CRC Press, pp. 59-65（非特許文献１４）)。
【０００７】
同じ現象は他のＣＰＴ誘導体でも観察された。マウスでは、９−ニトロカンプトテシン（「９ＮＣ」）がヒト腫瘍異種移植片に対してＣＰＴよりも２〜３倍も強くて、治療されたヒト悪性腫瘍の全ての全体的根絶を生じることが立証されている（パンタジス(Pantazis)ら、Cancer Res. 53:1577, 1993（非特許文献１５）; パンタジス(Pantazis)ら、Int. J. Cancer 53:863, 1995（非特許文献１６））。
【０００８】
薬理学的研究により、i.s.投与後に血漿中に存在する９ＮＣ薬の大部分（５７％）が、閉鎖ラクトン型であることが実証された。フェーズＩ臨床試験患者へ経口投与した後の９ＮＣの血漿濃度についての薬理学的研究は、平均で、存在する薬の３％以下しか閉鎖ラクトン型でないことを示している。
【０００９】
このような知見と完全に一致して、このグループの患者での臨床的反応は、ＣＰＴで得られたものよりは高いが、なおもマウスで得られた結果よりかなり低いものである（完全腫瘍退行がマウスでは３２／３２であるのに対して、ヒトでは２／３２である）。血液循環中へ導入したときに、ラクトン環開環をゆっくりと遅らせるような修飾が緊急に必要であることは明らかである。
【００１０】
開環には、カンプトテシンが下記平衡式に示されるように、生理学的ｐＨ、すなわち７またはそれ以上で、２つの異なった形態で存在するという特別な問題がある：
【００１１】
【化２】
2005536464.tif 000004
【００１２】
カンプトテシンの生物活性ラクトン環の、より高いｐＨでの水による加水分解反応は、生物学的に不活性な開環型を生じる。さらに、大部分の血清アルブミンが優先的にカルボン酸塩型に結合し、ラクトン／カルボン酸塩平衡を不活性型に変化させるから、ＣＰＴおよびその類似体による加水分解問題は、ヒト血液中で増悪される（J. Biochem., 212, 285-287, 1993（非特許文献１７）; Biochemistry, 33, 10325-10336,1994（非特許文献１８）; Biochemistry, 33, 12540-12545, 1994（非特許文献１９）。したがって、腫瘍細胞がＳ期中を一巡りするのに十分な時間、分子のラクトン環を持続することは大きな挑戦であり、かつ、相当な量の研究の的であった。
【００１３】
より高い生物活性と増強された安定性を有するカンプトテシン誘導体を提供するために、いくつかの試みがなされている。これらの化合物の多くは、分子のＡ，Ｂ，およびＣ環を修飾した生成物であるが、これらの修飾のいくつかは生理学的条件下でのラクトン環の安定性を増強している。他のアプローチはさらに成功している。例えば、２０−ＯＨ基のアシル化はラクトンＥ環の保護のための有用な手段となる。ウォール(Wall)らの米国特許第４，９４３，５７９号（特許文献１）は、生理学的条件下ではラクトンが完全なまま残存しないけれども、水可溶性を有する数種のアシル化カンプトテシン化合物を記載する。カオ(Cao)らの米国特許第５，９６８，９４３号（特許文献２）は有効な抗腫瘍剤であるＣＰＴ誘導体を記載する。残念ながら、哺乳動物の生理学的条件は、公知の全てのＣＰＴ誘導体を破壊するから、医療目的において新規なＣＰＴ誘導体および関連した投与システムが、なおも必要である。
【００１４】
特に、抗腫瘍活性のために構造的要素、すなわち２０−ヒドロキシルとラクトンＥ環を保持しながら、正常な生理学的条件でラクトン環を完全なままに残存させることができるように、２０（Ｓ）−カンプトテシンを修飾する必要性がなおも存在する。したがって、本発明は母類似体、ＣＰＴに比べて抗腫瘍活性を増強し、かつ延長させる、ラクトン環Ｅの開環を遅延させる新規なＣＰＴ−誘導体を記載する。
【特許文献１】米国特許第４，９４３，５７９号
【特許文献２】米国特許第５，９６８，９４３号
【非特許文献１】J. Am.Chem. Soc. 88, 3888, 1966（非特許文献１）
【非特許文献２】Heckendorfら、J. Org. Chem.41, 2045, 1976
【非特許文献３】Chem. Rev. 23, 385, 1973, Cancer Treat. Rep. 60, 1007, 1967
【非特許文献４】Gottliebら、Cancer Chemother. Rep. 54, 461, 1970
【非特許文献５】Gottliebら、Cancer Chemother. Rep. 56, 103, 1972
【非特許文献６】Muggiaら、Cancer Chemother. Rep. 56, 515, 1972
【非特許文献７】Moertelら、Cancer Chemother. Rep. 56, 95, 1972
【非特許文献８】Schaeppiら、Cancer Chemother. Rep. 5:25, 1974
【非特許文献９】Wallら、InInternational Symposium on Biochemistry And Physiology of The Alkaloids、Mothesら編、Academie - Verlag, Berlin, 77, 1969
【非特許文献１０】Giovanellaら、Cancer res.51, 3052, 1991
【非特許文献１１】Wallら、Ann. Rev.Pharmacol. Toxicol. 17, 117, 1977
【非特許文献１２】Giovanellaら、Science, 246,1046, 1989
【非特許文献１３】Giovenellaら、Cancer Res.51, 3052, 1991
【非特許文献１４】Stehlinら、In Camptothecins: New Anticancer Agents,1995, CRC Press, pp. 59-65
【非特許文献１５】Pantazisら、Cancer Res.53:1577, 1993
【非特許文献１６】Pantazisら、Int. J. Cancer 53:863, 1995
【非特許文献１７】J. Biochem., 212, 285-287, 1993
【非特許文献１８】Biochemistry, 33, 10325-10336,1994
【非特許文献１９】Biochemistry, 33, 12540-12545, 1994
【発明の開示】
【００１５】
（発明の概要）
したがって、本発明の目的は哺乳動物の体、特に人体において完全なままより長く残存するカンプトテシンのハロアルキルエステルを提供することにある。
本発明の他の目的は抗腫瘍または抗癌活性において重要であるラクトンＥ環および２０−ヒドロキシル基を完全なまま保持する新規なＣＰＴ誘導体を提供することにある。
本発明のなおも他の目的は、生存する哺乳動物におけるリポソーム投与系に、これらの化合物を使用することにある。
本発明のさらなる目的および利点は、以下の説明において部分的に開示され、かつ、これらの説明から部分的に明白になるか、あるいは本発明の実施により知られ得るであろう。本発明の目的および利点は添付される特許請求の範囲に特に指摘される要件およびその組合せによって実現され、かつ、達成される。
【００１６】
これらの目的を達成するために、かつ、本発明の目的により、ここに具体化され、かつ広く記載されるように、本発明は下記一般式の化合物に関する：
【００１７】
【化３】
2005536464.tif 000005
【００１８】
この式で、Ｒ基は上記構造式の１つの環の１つまたはそれ以上の置換基を示す。特に、ＲはＨ、ＮＯ２、ＮＨ２、Ｎ３、−ＯＨ、ハロゲン（例えば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、カルボキシル（ＣＯＯＨ）、Ｃ１−１６アルキル基、Ｃ１−１６アルキレニル基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ１−８アルコキシル基、アロキシル基、ＣＮ、ＳＯ３Ｈ、Ｃ１−８ハロゲン化アルキル基、（ＣＨ２）ｎＮＲ２７（ここで、Ｒ７はＨ、またはＣ１−８アルキル基であることができ、ｎは１〜約８の整数でありうる）、ヒドロキシル、ＳＨ、ＳＲ８（ここで、Ｒ８はＣ１−８アルキル基、または未置換フェニル基または置換フェニル基でありうる）、カルボニル基（例えば、ＣＯＲ９、ここでＲ９はＣ１−８アルキル基、またはフェニル基、または置換フェニル基でありうる）、ＳｉＲ３１０（ここで、Ｒ１０はＣ１−４アルキル基でありうる）を示す。Ｒ基はそれぞれ、Ａ環の９、１０、１１、または１２位に位置しうる。Ｒはまた、二置換１０，１１−Ｏ−（ＣＨ２）−Ｏ−基（ここで、ｙは１〜３の整数でありうる）でもあり得る。ＲはＣ１−１２アルケニル基、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ＣＨ２Ｆ、ＣＨ２Ｃｌ、ＣＨＦ２、ＣＨＣｌ２、ＯＨ、ＯＲ１２、（ここで、Ｒ１２はＣ１−８アルキル基、またはＣ１−８アルケニル基、または芳香族基でありうる）、ＮＲ２１３（ここで、Ｒ１３はＨ、またはＣ１−４アルキル基でありうる）でもあり得る。ＸはＨ、Ｃ１−８アルキル基、Ｃ１−８アルケニル基、Ｃ１−８アルコキシル基、アロキシル基、ＳｉＲ３１１基（ここで、Ｒ１１はＣ１−４アルキル基でありうる）、またはＣＨ２ＮＺＹ（ここで、ＺおよびＹは独立して、Ｈ、Ｃ１−４アルキル、またはＣ１−４ハロゲン化アルキル基である）を示す。好ましくは、ＲはＨ、ハロゲン、ハロゲン含有基、アルキル基（例えば、Ｃ１〜Ｃ１５アルキル基）、−ＯＨ、アルコキシ、ＮＨ２またはＮＯ２でありうる、ｎ＝０〜１８である；およびＸ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４およびＸ５は同じまたは異なっていて、Ｈ、置換または未置換アルキル基、またはハロゲン原子、ニトロ基、シアノ基、アミノ基、ヒドロキシル基、カルボニル基、またはカルボキシル基でありうるが、ただし、Ｘ１〜Ｘ５の少なくとも１つはハロゲン原子またはハロゲン含有基である。
【００１９】
本発明はまた、哺乳動物の癌および／または悪性腫瘍を治療し、かつ、投与システムまたは他の治療手段を含む、上記ＣＰＴ誘導体の１つまたはそれ以上の有効量を投与することを含む方法に関する。
【００２０】
また、本発明は、本発明の化合物を製造する方法に関し、哺乳動物の体、特に人体で完全なまま、より長く残存するカンプトテシンのハロアルキルエステルを提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
（発明の詳細な説明）
最も一般的な意味では、本発明はカンプトテシンのハロアルキルエステルおよびその医薬品目的におけるその使用に関する。カンプトテシン（「ＣＰＴ」）は顕著な抗腫瘍および抗癌活性を有するが、これらの化合物は正常な生理学的条件下で分解を受けやすく、かつ、生成した代謝産物はしばしば毒性を示す。したがって、本発明は哺乳動物の体、特に人体中で完全なまま、より長く残存するＣＰＴ類似体を提供し、それによって望ましくない副作用を生じることなく、抗腫瘍および抗癌効果を増強する。他の実施態様では、本発明はラクトンＥ環および２０−ヒドロキシル基を完全なまま保持する新規なＣＰＴ誘導体を提供するが、これは先の研究はこれらの構造的態様は抗腫瘍および抗癌活性において重要であることを示しているからである。本発明の化合物は生理活性を有し、および／または生理活性化合物を生じるプロドラッグである。
【００２２】
研究室内で実施したヒト血漿中のカンプトテシンの代謝研究は、検出された唯一の代謝産物は毒性を有し、かつ不活性である開環カルボン酸ナトリウム塩であることを示した。ヒト血漿中のＣＰＴの薬物動態測定は、ラクトンを完全なまま有する医薬の半減期が３０分であることを示す。これらの結果は、患者がそれを取得した後、非常に短時間でこの医薬がその活性の９０％を失い、多くの毒性または副作用を生じることを意味する。
【００２３】
マウスおよびヒトでの比較薬物動態学研究は、マウスでは胃内投与後に血漿中に存在するＣＰＴの大部分が閉鎖ラクトン型のものであり、曲線下の領域の約５４％であることを示した。ヒトでは、反対に、ＣＰＴの経口投与後、曲線下の領域のたった約０．４％が閉鎖ラクトン環の形態である。
【００２４】
マウスとヒトのこの相違は、マウスとヒトの血液ｐＨが同じ、すなわち７．４であるけれども、ＣＰＴのそのナトリウム塩への変換を触媒するヒトアルブミンがマウスアルブミンよりもこの過程で最大１００倍も効果的であるという事実によって生じる（ミ(Mi)およびバーク(Burke)、Biochem. 33:12540, 1994）。
【００２５】
先に説明したように、マウスおよびヒトで抗癌剤または抗腫瘍剤としてＣＰＴ類似体を使用して得た異なった成功率から見て、生物学的条件下にてラクトン環の開環を遅延させることがＣＰＴの有益な性質を増強させ、そして代謝産物のマイナスの副作用を避けるために必須であることが明らかである。従って、これらの目的を達成するために、本発明は所望の生物学的性質を有する新規なＣＰＴ類似体を形成するＣＰＴのＣ−２０ヒドロキシルを提供する。好ましくは、本発明は下記一般構造を有するハロアルキルエステルに関する。
【００２６】
【化４】
2005536464.tif 000006
【００２７】
この式で、Ｒ基は上記構造式の環の１つの置換基を示す。特に、ＲはＨ、ＮＯ２、ＮＨ２、Ｎ３、−ＯＨ、ハロゲン（例えば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、カルボキシル（ＣＯＯＨ）、Ｃ１−１６アルキル基、Ｃ１−１６アルキレニル基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ１−８アルコキシル基、アロキシル基、ＣＮ、ＳＯ３Ｈ、Ｃ１−８ハロゲン化アルキル基、（ＣＨ２）ｎＮＲ２７（ここで、Ｒ７はＨ、またはＣ１−８アルキル基であることができ、ｎは１〜約８の整数である）、ヒドロキシル、ＳＨ、ＳＲ８（ここで、Ｒ８はＣ１−８アルキル基、またはフェニル基または置換フェニル基でありうる）、カルボニル基（例えば、ＣＯＲ９、ここでＲ９はＣ１−８アルキル基、またはフェニル基、または置換フェニル基でありうる）、ＳｉＲ３１０（ここで、Ｒ１０はＣ１−４アルキル基でありうる）を示す。Ｒ基はそれぞれ、Ａ環の９、１０、１１、または１２位に位置しうる。Ｒはまた、二置換１０，１１−Ｏ−（ＣＨ２）ｙ−Ｏ−基（ここで、ｙは１〜３の整数でありうる）でもありうる。ＲはＣ１−１２アルケニル基、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ＣＨ２Ｆ、ＣＨ２Ｃｌ、ＣＨＦ２、ＣＨＣｌ２、ＯＨ、ＯＲ１２、（ここで、Ｒ１２はＣ１−８アルキル基、Ｃ１−８アルケニル基または芳香族基でありうる）、ＮＲ２１３（ここで、Ｒ１３はＨ、またはＣ１−４アルキル基でありうる）でもありうる。ＸはＨ、Ｃ１−８アルキル基、Ｃ１−８アルケニル基、Ｃ１−８アルコキシル基、アロキシル基、ＳｉＲ３１１基（ここで、Ｒ１１はＣ１−４アルキル基でありうる）、またはＣＨ２ＮＺＹ（ここで、ＺおよびＹは独立して、Ｈ、Ｃ１−４アルキル、またはＣ１−４ハロゲン化アルキル基である）を示す。好ましくは、ＲはＨ、ハロゲン、ハロゲン含有基、アルキル基（例えば、Ｃ１〜Ｃ１５アルキル基）、ＮＨ２、ＯＨ、アルコキシ、またはＮＯ２であることができ、ｎ＝０〜１８である；Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４およびＸ５は同じまたは異なっていて、Ｈ、置換または未置換アルキル基、芳香族基、またはハロゲン原子である。Ｘ１、Ｘ２およびＸ５の少なくとも１つは、ニトロ基、シアノ基、アミノ基、ヒドロキシル基、カルボニル基、またはカルボキシル基を含みうる。本発明の目的には、好ましくは、Ｘ１〜Ｘ５の少なくとも１つはハロゲンまたはハロゲン含有基（例えば、ハロアルキル基またはハロ芳香族基）である。好ましいハロゲンはＣｌまたはＦである。好ましくは、Ｘ１〜Ｘ５の全てが同じまたは異なりうるハロゲンである。
【００２８】
ここに記載される種々の置換体は鎖状、分岐、環状またはこれらの組合せであってもよい。アルキル基の例としては、Ｃ２〜Ｃ１５アルキル基が挙げられる。アルケニル基の例としてはＣ２〜Ｃ１５アルケニル基が挙げられる。エポキシ基の例としてはＣ２〜Ｃ１５エポキシ化アルケニル基が挙げられる。シクロアルキル基の例としてはＣ３〜Ｃ８シクロアルキル基が挙げられる。
【００２９】
使用可能であるアルキル基のいくつかの具体的な例としては、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２−、ＣＨ３（ＣＨ２）３−、ＣＨ３（ＣＨ２）４−、ＣＨ３（ＣＨ２）５−、およびＣＨ３（ＣＨ２）６−１７−、（ＣＨ３）２ＣＨ−、ＣＨ３−ＣＨ３−ＣＨ２ＣＨ−ＣＨ３、（ＣＨ３ＣＨ２）２ＣＨ−、（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２）２ＣＨ−、（ＣＨ３）３Ｃ−、ＣＨ３（ＣＨ３ＣＨ２）２Ｃ−がある。
【００３０】
使用可能であるアルキレニル基のいくつかの具体的な例としては、ＣＨ２＝ＣＨ−、ＣＨ３ＣＨ＝ＣＨ−、ＣＨ３ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）−、ＣＨ３ＣＨ＝ＣＨＣＨ２−、ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２−、ＣＨ３（ＣＨ２）３−１５ＣＨ＝ＣＨ−、ＣＨ３ＣＨ＝ＣＨ−（ＣＨ２）３−１５ＣＨ２、ＣＨ２＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−、ＣＨ３ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−、ＣＨ３（ＣＨ２）３−６−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−（ＣＨ２）３−６−ＣＨ２−がある。
【００３１】
使用可能なシクロアルコキシル基のいくつかの具体的な例としては、以下のものがある。
【００３２】
【化５】
2005536464.tif 000007
【００３３】
使用可能なアルコキシル基のいくつかの具体的な例としては、ＭｅＯ−、ＥｔＯ−、ｎ−Ｃ３Ｈ７−、ｉ−Ｃ３Ｈ７−Ｏ−、ｎ−Ｃ４Ｈ９−Ｏ−、ｉ−Ｃ４Ｈ９−Ｏ−、ｔ−Ｃ４Ｈ４−Ｏ−、ｎ−Ｃ５−Ｈ１１Ｏ−、（ＣＨ３）２ＣＨＣＨ２ＣＨ２Ｏ−、
【００３４】
【化６】
2005536464.tif 000008
【００３５】
（ＣＨ３Ｃ２）２ＣＨ−Ｏ−、ｎ−ＣＨ６Ｈ１３−Ｏ−、ｎ−Ｃ７Ｈ１５−Ｏ−、ｎ−Ｃ８Ｈ１７−Ｏ−がある。
【００３６】
使用可能なアロキシル基のいくつかの具体的な例としては、ｐ−ＣＨ３ＯＣ６Ｈ４−、ｍ−ＣＨ３Ｏ−Ｃ６Ｈ４−、ｏ−ＣＨ３ＯＣ６Ｈ４−、ｏ，ｐ−ジメトキシルフェニル−、ｍ，ｍ−ジメトキシルフェニル−、ｍ，ｐ−ジメトキルシフェニル−、ｏ−ＣＨ３ＣＨ２ＯＣ６Ｈ４−、ｍ−ＣＨ３ＣＨ２ＯＣ６Ｈ４−、ｐ−ＣＨ３ＣＨ２Ｏ−Ｃ６Ｈ４−がある。
【００３７】
使用可能なシクロアルキル基のいくつかの具体的な例としては、シクロ−Ｃ３、シクロ−Ｃ４、シクロ−Ｃ５、シクロ−Ｃ６、シクロ−Ｃ７、シクロ−Ｃ８、アルキル置換シクロ−Ｃ３、アルキル置換シクロ−Ｃ４、アルキル置換シクロ−Ｃ５、アルキル置換シクロ−Ｃ６、アルキル置換シクロ−Ｃ７およびアルキル置換シクロ−Ｃ８（ここで、アルキルは好ましくは、上記したアルキル基を含む）がある。
【００３８】
使用可能な置換および未置換フェニル基のいくつかの具体的な例としては、Ｃ６Ｈ５−、（ｏ，ｍ，ｐ）ＣＨ３Ｃ６Ｈ４−、ハロゲン置換フェニル基（ＸＣ６Ｈ４、ここでＸ＝Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、（ｏ，ｐ，ｍ）ＣＨ３ＯＣ６Ｈ４−、（ｏ，ｍ，ｐ）ＮＯ２Ｃ６Ｈ４−、（ｏ，ｍ，ｐ）ＮＨ２Ｃ６Ｈ４−、（ｏ，ｍ，ｐ）ＣＮＣ６Ｈ４−がある。
【００３９】
使用可能なカルボニル基のいくつかの具体的な例としては、以下のものがある。
【００４０】
【化７】
2005536464.tif 000009
【００４１】
本発明の化合物は、有機合成化学の当業者にとって、そして本願明細書に照らして明白である種々の合成経路によって生成されるであろう。これらの化合物を製造する２つの代表的な方法を以下に示し、直接に検討する。
【００４２】
【化８】
2005536464.tif 000010
【００４３】
所望の生成物を製造する１つの方法は、ＣＰＴを少なくとも１つの溶媒、少なくとも１つのアシル化剤および少なくとも１つの塩基と反応させることを含む。適当な成分を添加する順序は、重要ではないが、まず溶媒、ＣＰＴおよびアシル化剤を一緒に混合し、次いで塩基を添加して生成物と反応させることが好ましい。
【００４４】
ＣＰＴの純度および濃度は重要ではない。いかなる溶媒も無水物と反応しうるヒドロキシ基を含まないかぎり、使用することができる。すなわち、ＣＰＴを溶解することができるが、有機無水物と反応しない、いかなる溶媒も使用することができる。好適な溶媒の例としては、クロロホルム、さらに好ましくはジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）がある。
【００４５】
この反応で使用する溶媒は商業的に入手可能であり、純粋である必要はない（例えば、工業用グレードの溶媒であってもよい）。しかしながら、有機反応のために高度に精製された溶媒を使用することが好ましい。さらに、溶媒はＣＰＴを分解しないｐＨを有することができる。好ましくは溶媒は塩基性でなく、より好ましくは溶媒は中性である。
【００４６】
本発明のアシル化剤は本発明のアシル基を提供するいかなるアシル化剤であってもよい。好ましくは、アシル化剤は有機無水物である。一般的には有機無水物は一般式[Ｘ３Ｘ４Ｘ５ＣＣＸ１Ｘ２（ＣＨ２）ｎＣＯ]２Ｏを有しうる。ここで、ｎ＝０〜１８；Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４およびＸ５は同じまたは異なりうり、Ｈ、置換または未置換アルキル基、芳香族基またはハロゲン原子である。Ｘ１〜Ｘ５の少なくとも１つはニトロ基、シアノ基、アミノ基、ヒドロキシル基、カルボニル基またはカルボキシル基であるか、あるいはそれらを含みうる。本発明の目的では、好ましくはＸ１〜Ｘ５の少なくとも１つはハロゲンまたはハロゲン含有基（例えば、ハロアルキル基またはハロ芳香族基）でありうる。好ましいハロゲンはＣｌまたはＦである。好ましくは、Ｘ１〜Ｘ５の全てがハロゲンであり、これらは同じまたは異なっていてもよい。本発明の有機無水物としては、Aldrich Chemical Co., Milwaukee, WIなどから商業的に入手可能であるものがある。使用可能である有機無水物の一例としては、市販されているクロロ酢酸無水物がある。アシル化剤のｐＨは重要でないが、一般的には有機無水物などのアシル化剤は酸性である。
【００４７】
塩基はＣＰＴと有機無水物などのアシル化剤との生成物と反応できるいかなる塩基であってもよい。しかしながら、塩基はＣＰＴに対して不活性であることが好ましい。ＣＰＴに対して不活性な塩基のいくつかの例としては、ピリジンおよびトリエチルアミンがある。
【００４８】
好ましい生成物を製造する一例では、ＣＰＴは好ましくはＤＭＦである溶媒へ添加され得る。ＣＰＴに対する溶媒の割合は、ＣＰＴ約１ｇ当たり溶媒約１０ｍｌ以下からＣＰＴ約１ｇ当たり溶媒約１０００ｍｌでありうる。しかしながら、ＣＰＴ１ｇに対して溶媒１０００ｍｌの割合では、より長い反応時間が必要であろう。好ましくは、ＣＰＴはＮ２などの不活性雰囲気中、室温および大気圧下にて溶媒へ添加され得る。
【００４９】
クロロ酢酸無水物などの式[Ｘ５Ｘ４Ｘ３ＣＸ１Ｘ２（ＣＨ２）ｎＣＯ]２Ｏを有する有機無水物であるアシル化剤は商業的に入手可能であり、いつでも溶媒に添加され得る。例えば、溶媒にＣＰＴを添加する前に、溶媒にＣＰＴを添加する間に、あるいは溶媒にＣＰＴを添加した後に、それは溶媒に添加され得る。ＣＰＴおよび／または溶媒に対する有機無水物などのアシル化剤の割合は、ＣＰＴと溶媒の混合物の全てを第一生成物に変換するために十分なアシル化剤が存在する限り重要ではない。すなわち、アシル化剤を過剰に有することが好ましい。溶媒、ＣＰＴおよびアシル化剤の混合物を攪拌する必要はないけれども、短時間、混合物を攪拌することが好ましい。好ましくは、混合物は１００ｒｐｍなどの中程度の速度で混合物をかき混ぜながら攪拌され得る。
【００５０】
一旦、ＣＰＴ、溶媒およびアシル化剤が互いに混合されると、塩基が溶液に好ましくは添加される。溶媒に対する塩基の割合は、好ましくは約１：５０〜約１：２０（容量％）の範囲である。所望の生成物を形成するためには、十分な攪拌速度でＮ２などの不活性雰囲気中で溶液を攪拌することが好ましい。好ましくは、１００ｒｐｍなどの中程度の攪拌速度が使用される。反応温度は反応中に上昇して、例えば約１００℃程度の温度にまで達することが一般的である。
【００５１】
例えば、溶液の色変化によって決定され得る反応の終了後に、溶媒は蒸発法または真空法などの一般的に公知である分離法によって除去され得る。溶媒の除去後に残存する残渣は、好ましくはカラムクロマトグラフィーによって濾過され得る。残渣は溶出溶媒混合物として、好ましくは１：１５の割合のＴＨＦ−塩化メチレンを使用して、シリカ上でクロマトグラフィーにて分離され得る。溶出溶媒混合物の割合は化合物によって変化され得る。最終生成物は適当な画分を蒸発したとき、結晶体として得られる。
【００５２】
あるいは、少量の適当な酸の存在下にハロゲン化アシル、好ましくは置換ハロゲン化アシルに親ＣＰＴを反応させることによって、本発明の化合物を製造してもよい。この方法では、ハロゲン化アシルを上述した方法の有機無水物と置換する。
【００５３】
この方法で使用する酸はいかなる酸であってもよいが、好ましい酸は硫酸である。酸のｐＨ、濃度および純度は、酸の不純物がＣＰＴまたはハロゲン化アシルと反応しない限り重要ではない。
【００５４】
一般的には、ハロゲン化アシルは一般式Ｘ３Ｘ４Ｘ５ＣＣＸ１Ｘ２（ＣＨ２）ｎＣＯＺを有し、ここで、ＺはＣｌなどのハロゲン基であり、ｎ＝０〜１８；Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４およびＸ５は同じまたは異なりうり、Ｈ、置換または未置換アルキル基、芳香族基またはハロゲン原子である。Ｘ１〜Ｘ５の少なくとも１つは、ニトロ基、シアノ基、アミノ基、ヒドロキシル基、カルボニル基、またはカルボキシル基でありうる。本発明の目的では、好ましくはＸ１〜Ｘ５の少なくとも１つは、ハロゲンまたはハロゲン含有基（例えば、ハロアルキル基またはハロ芳香族基）でありうる。好ましいハロゲンはＣｌまたはＦである。好ましくは、Ｘ１〜Ｘ５の全ては同じまたは異なっているハロゲンである。本発明のハロゲン化アシルはAldrich Chemical Co., Milwaukee, WIから商業的に入手可能である。使用可能であるハロゲン化アシルの２つの例としては、商業的に入手可能であるクロロプロピオン酸および２−クロロブチリル塩化物がある。
【００５５】
この方法では、ＣＰＴとハロゲン化アシルが互いに混合される。ハロゲン化アシルに対するＣＰＴの割合はＣＰＴの全てがハロゲン化アシルに溶解する限り重要でない。好ましくは、ＣＰＴに対するハロゲン化アシルの量は過剰であると、ＣＰＴの全てが溶解することを確実にする。
【００５６】
一旦、ＣＰＴおよびハロゲン化アシルが互いに添加されると、混合物はＣＰＴとハロゲン化アシルが均一に混合するように、十分な時間、かつ十分な攪拌速度（好ましくは約１００ｒｐｍである中程度の攪拌）でかき混ぜられる。
【００５７】
酸、好ましくは硫酸がこの混合物に添加され得る。好ましくは、混合物がかき混ぜられている間に、酸がＣＰＴとハロゲン化アシルの混合物に添加される。好ましくは、混合物に添加され得る酸の量は、酸が触媒として作用するに十分な量である。好ましくは、ガラスピペットで約４〜約８滴の酸が約７０〜１００ｍｌのハロゲン化アシルに添加され得る。しかしながら、必要であれば好ましくは混合物がかき混ぜられている間に、ＣＰＴとハロゲン化アシルの混合物に幾分かの酸が添加され得る。
【００５８】
ＣＰＴ、ハロゲン化アシルおよび酸の混合物は、好ましくはＮ２などの不活性雰囲気を含む反応容器中に入れ、約８０℃〜約１２０℃まで加熱され得る。好ましくは、混合物は約９０℃〜約１１０℃まで加熱され、より好ましくは反応容器は約１００℃まで加熱される。
【００５９】
好ましくは、反応は所望する生成物が形成されるまで続くであろう。反応時間は短くて数時間から長くて数日間である。好ましくは、反応時間はＮ２などの不活性雰囲気下に約１５時間である。
【００６０】
溶液の色変化によって決定されうる反応の終了後、溶液は室温まで冷却され得る。溶媒は蒸発法または真空法などの一般的に公知である分離法によって除去され得る。溶媒を除去した後に残存する残渣は、溶出溶媒混合物として好ましくは１：１５の割合のＴＨＦ−塩化メチレンを使用してシリカ上でクロマトグラフィーにて分離され得る。最終生成物は適当な画分を蒸発したとき、結晶体で得られる。
【００６１】
上記したように、合成経路での最終生成物の収量は正確な反応条件、出発物質の純度、アシル化剤の性質、酸または塩基のタイプ、および有機合成化学で一般的な他の因子またはパラメーターに依存して、通常、１０〜９０％の範囲である。上記したように、本発明の化合物を製造する方法は、独占的または限定的であることを意味せず、むしろ、単なる例であり、かつ、これらの化合物を生成するか、または反応条件を至適化するための他の手段が当業者には実施可能である。
【００６２】
本発明の化合物は哺乳動物の悪性腫瘍または癌を治療することにおいて有効である。ここで使用するように、「悪性腫瘍」との用語は、低度に分化した、中程度に分化した、かつ、十分に分化した形態で生じるヒト癌腫、肉腫および黒色腫の全ての形態を含むことを意図する。
【００６３】
より具体的には、本発明の化合物および本発明の処方剤は、ヒトの肺、乳房、大腸、前立腺、黒色腫、膵臓、胃、肝臓、脳、腎臓、子宮、頚部、卵巣、尿管、胃腸の癌、および血流以外の解剖学的部位で成長する他の固形腫瘍、ならびに白血病などの血液由来腫瘍を含む多くの腫瘍および／または癌の治療に使用することができるが、これらに限定されない。他の固形腫瘍は大腸癌および直腸癌を含むが、これらに限定されない。本発明の化合物はまた、酵素トポイソメラーゼＩの阻害剤としても有用である。
【００６４】
本発明の化合物は経口、筋肉内、経皮、静脈内、吸引器または他の空気投与システムによるものなどを含む許容された経路から投与することができるが、これらに限定されない。好ましくは、本発明の化合物および処方剤は経口、筋肉内、または経皮によって投与され、最も好ましくは経口にて投与される。経皮投与システムの例は、例えば米国特許第５，５５２，１５４号および第５，６５２，２４４号に見ることができ、これらはその全体を参考として本明細書中に導入する。本発明の化合物および処方剤はまた、米国特許第５，８８２，６７９号、第５，８３４，０１２号、第５，７８３，２１１号、第５，７１８，９１４号、第５，６３１，２３７号、第５，５５２，１５６号、第５，０５９，４２１号、第５，０００，９５８号、第５，８７４，１０５号、第５，５６７，４３４号、第５，５４９，９１０号、第５，０４３，１６５号、第５，７３６，１５６号、第５，５６７，４３３号および第４，６６３，１６１号に記載されるものなどのリポソーム系によって患者に投与することもでき、これら全てはその全体を参考として本明細書中に導入する。他の一般的に使用する方法としては、例えば経口投与用ゼラチンカプセルならびに液体および液状乳化液（例えばIntralipid 20、綿実油および落花生油）の筋肉内投与用リポソームプロドラッグの微小懸濁液および皮下長期投与用コレステロールペレット中の封入体が挙げられる。
【００６５】
本発明の化合物はリポソーム投与系中に導入または被包されるか、包囲または包括されるか、または抑制されて、本発明の化合物を使用する「リポソームプロドラッグ」を形成する。患者が経口摂取したとき、プロドラッグは患者の血流中に急速に導入されて、体内で親化合物に容易に変換される。プロドラッグの親化合物、ＣＰＴへの変換はヒトを含む多くの動物の血液中に存在するエステラーゼと呼ばれる１群の酵素によって仲介される。プロドラッグは投与後、短時間で急速に体内に分布されるから、これらの化合物は親化合物への酵素的加水分解を受ける間、非常に低濃度で存在し、ＣＰＴが血流中に沈殿することを防ぐ。
【００６６】
本発明の組成物を投与する他の方法としては、経皮性または経皮的経路による方法がある。このような実施態様の一例としてはパッチの使用がある。特にパッチは例えばジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）またはＤＭＳＯと綿実油との混合物中の本願のプロドラッグの微細な懸濁液でもって調製し、皮膚窩内側の腫瘍位置から離れた腫瘍担持哺乳動物の皮膚と接触させることができる。他の媒体および他の溶媒とのその混合物および固体支持体は、プロドラッグを投与するとき同じように等しく作用するであろう。パッチは溶液または懸濁液の形態で本発明のＣＰＴ誘導体含有プロドラッグを含むことができる。次いで、パッチは例えばステッチ、クリップまたは他の保持装置を用いて互いに皮膚を折りたたんだ状態とすることによって形成した患者の皮膚窩中に挿入することによって、患者の皮膚へ投与され得る。この窩は皮膚との連続接触が哺乳動物の障害なくして確保されるような方法に使用されるべきである。皮膚窩を使用することのほかに、皮膚と接触するパッチの安定した位置を確実にする他の装置を使用することができる。例えば、皮膚上の所定位置にパッチを保持するために接着性包帯を使用することができる。
【００６７】
さらに、本発明の化合物及び処方剤はタキソール、タキソテールまたはそれらの誘導体ならびにシスプラチンおよびその誘導体などの癌治療のための他の医薬および処方剤と組み合わせて使用することができる。
【００６８】
ここで使用するように、本発明の化合物および処方剤の「有効量」とは、癌の成長を阻止または遅延させるか、または悪性腫瘍細胞を殺し、かつ悪性腫瘍の退行および緩和を生じ、すなわちこのような腫瘍の容積または大きさを減少させるか、あるいは腫瘍を全く除去する化合物の量を意味することを意図する。
【００６９】
ヒトを含む哺乳動物では、有効量は体表面積をもとに投与され得る。用量との相互関係は種々の大きさや種類の動物において異なり、ヒトでは（ｍｇ／体表面Ｍ２に基づく）、E.J.フライライヒ（Freireich）ら、Cancer Chemother. Rep., 50(4):219(1966)に記載される。体表面積は個人の伸長および体重からほぼ決定すればよい（例えば、Scientific Tables, Geigy Pharmaceuticals, Ardsley, N.Y. pp.537-538 (1970)参照）。本発明のカンプトテシン化合物の好ましい有効量は、1日当たり約１２．５〜約３１．３ｍｇ／体表面ｍ２であり、プロドラッグの有効量はプロドラッグおよび投与系の重量に基づいて、１日当たり約１２．５〜３０００ｍｇ／体表面ｍ２の範囲であり得る。
【００７０】
マウスにおける本発明のプロドラッグの好ましい有効量および用量は、筋肉内経路では１週間当たり２回、体重１ｋｇにつきプロドラッグ約１〜約４００ｍｇであり、経口経路ではプロドラッグは約０．７５〜約１５０ｍｇ／ｋｇ／日である。マウスにおける本発明のプロドラッグの有効量または用量は、例えば経皮経路ではプロドラッグは約１．５ｍｇ／ｋｇ／週〜約１０００ｍｇ／ｋｇ／週である。投与経路の全てにおいて、用量の正確な投与時間は至適結果を達成するために異なりうる。一般的に、ＣＰＴ誘導体のためのリポソーム担体として、Intralipid 20を使用する場合、患者に到達するＣＰＴ誘導体の実際の用量はより少ないであろう。これはIntralipid 20懸濁液とともに一般に使われるシリンジ、針および調製容器の壁にＣＰＴ誘導体のいくらかが失われることによる。一般的には、約１ｍｇ〜約４ｍｇのＣＰＴ誘導体が約０．１ｍｌ〜約１ｍｌの脂質担体に添加される。
【００７１】
本発明の化合物は、リポソーム投与系に導入、被包、包囲または包括あるいは拘束される前に、まず、Intaralipid 10または20または天然油、または親油性化合物のための他の好適な乳化剤などの薬学的に許容される担体または希釈剤と組み合わせてもよい。
【００７２】
リポソームは癌患者に薬剤を投与するのに有効に使用されていて、ドキソルビシン、ダウノルビシン、およびシスプラチン複合体などの抗癌剤の投与において臨床的に有用であることが示されている。フォッセン(Forssen)ら、Cancer Res. 1992, 52: 3255-3261; ペレス−ソラー(Perez-Soler)ら、Cancer Res. 1990, 50: 4260-4266; およびコクハー(Khokhar)ら、J. Med. Chem. 1991, 34:325-329、これらの全てを参考としてその全体を本明細書中に導入する。
【００７３】
リポソームを含む投与としては、例えばコレステロールなどの脂質、リン脂質、または例えばドデシル硫酸ナトリウム、オクチルフェノールポリオキシエチレングリコール、またはモノオレイン酸ソルビタンなどの界面活性剤からなるミセルが挙げられる。通常、プロドラッグは高親和性を有するリポソームの脂質二層膜に結合する。プロドラッグに結合したリポソームは好ましくは脂質のアシル鎖の間に挿入することができる。カンプトテシン誘導体のラクトン環によって、膜結合プロドラッグはリポソームの内側および外側の水性環境から除去され、加水分解から保護される。リポソーム結合医薬が加水分解から保護されるから、この医薬の抗腫瘍活性は保存される。リポソーム膜に対して低親和性を有し、リポソーム膜から解離してリポソーム内部に存在するカンプトテシンプロドラッグでは、リポソーム内部のｐHが低下して、このようなカンプトテシン誘導体プロドラッグの加水分解を阻止する。
【００７４】
同様に、ミセルもまた患者へ薬剤を投与するために使用されていて（ブロディン（Brodin）ら、Acta Pharm. Suec. 19, 267-284 (1982)）、ミセルは医薬担体として、また癌薬物療法（ファング(Fung)ら、Biomater.Artif. Cells, Artif. Organs 16: 439 et. seq. (1988);およびヨコヤマ(Yokoyama)ら、Cancer Res. 51: 3229-3236 (1991)）を含む標的薬剤投与（D.D. ラジック(Lasic), Nature 335: 279-280(1992)およびスーパーサクソ(Supersaxo)ら、Pharm. Res.8:1286-1291 (1991)）において使用されている。これらの全ては参考としてその全体を本明細書中に導入する。
【００７５】
カンプトテシン誘導体プロドラッグを含むリポソームおよび／またはミセルは癌患者に投与することができる。リポソームおよび／またはミセルは癌細胞へ循環系によって運ばれ、そこで小胞膜が癌細胞膜と融合し、癌細胞へカンプトテシ誘導体プロドラッグを放出するか、またはリポソームおよび／またはミセルは癌細胞に隣接して残存し、カンプトテシン誘導体プロドラッグはリポソームおよび／またはミセルから拡散して癌細胞に吸収される。
【００７６】
リポソームおよび／またはミセルを形成する脂質または脂質混合物が本発明で使用するには好適である。リポソームおよび／またはミセルはポリエチレングリコールまたは粒子が細網内皮系を避けることを助けるＧＭ１タンパク質によって被覆されていてもよい。さらに、ミセルはリン脂質などの脂質および脂質混合物から構成されていてもよい。また、ミセルは脂質と好適な界面活性剤の両者から構成されていてもよい。
【００７７】
多くのリポソームおよびミセルの調製は米国特許第５，５５２，１５６号および第５，７３６，１５６号に記載され、これらは参考としてその全体を本明細書中に導入する。本発明で使用する好ましいリポソーム投与系群は、米国特許第５，５５２，１５６号および第５，７３６，１５６号に記載されるものを含み、これらは参考としてその全体を本明細書中に導入する。本発明で使用する他のリポソーム投与系としては、米国特許第５，８２７，５３３号および第５，８８２，６７９号に記載される脂質または界面活性剤で凝集する活性剤を含むリポソーム；米国特許第５，８７４，１０５号に記載されるアルキルアンモニウム脂肪酸塩でもって形成された脂質小胞；米国特許第５，７８３，２１１号に記載される活性剤乾燥粉末組成物を被包するリポソーム；米国特許第５，７１８，９１４号に記載される局所パッチ用リポソーム医薬投与系；米国特許第５，６３１，２３７号に記載されるリポソーム；米国特許第５，５４９，９１０号および第５，０７７，０５７号に記載されるリポソームおよび脂質複合体組成物；米国特許第５，０４３，１６５号に記載されるステロイド系医薬の放出を持続するために使用されるリポソーム；米国特許第５，０１３，５５６号に記載されるリポソーム；米国特許第４，６６３，１６１号に記載されるリポソームが挙げられ、これらは全て参考としてその全体を本明細書中に導入する。
【００７８】
本発明はまた、例えば上記した量を使用する上記特定化合物の１つの有効量を投与することによって、哺乳動物中のトポイソメラーゼＩを阻害する。最後に、本発明がもたらす最も重要な利点の１つは、本明細書の教示に従って投与された化合物の相対的に低いまたは、はっきりとではない全体的毒性に関する。全体的毒性は種々の基準で判断され得る。例えば、最初に記録された体重（すなわち治療前）の１０％以上の対象の体重減少は、毒性の１つの徴候とみなされ得る。さらに、全体的移動性および活性の喪失、および対象の下痢または膀胱炎の徴候もまた毒性の証拠と解釈され得る。この点で、本発明の化合物および処方剤の低毒性は、先行技術を超えた有意な利点を示す。
【００７９】
本発明は以下の実施例によってさらに明確になるであろう。これらは本発明の単なる例に過ぎないことを意図する。
【実施例】
【００８０】
実施例中で参照する全てのガラス容器は使用する前に最低２時間、８０〜１００℃で焼成した。融点はＭＥＬ−ＴＥＭＰ融点装置を使用して得て修正しなかった。１Ｈおよび１３ＣＮＭＲスペクトルはＪＥＯＬ  ＧＸ−２７０ＷＢ  ＮＭＲスペクトロメーターを使用し、２７０．０５ＭＨＺで得た。化学シフトは、内部標準としてテトラメチルシランを使用し、百万分の幾つか（parts per million）（δスケール）で記録した。ＮＭＲデータを記録するには、下記略号を使用する：結合定数ヘルツ（Ｊ）、一重項（ｓ）、二重項（ｄ）、三重項（ｔ）、広一重項（ｂｒｓ）、多重項（ｍ）など。質量分析は、解像度１００００のＶＧＺＡＢ−ＳＥＱ質量分析計（VG Analytical Co., England）を使用して記録した。カンプトテシンの炭素骨格に使用した番号は、式（Ｘ）に示される。
【００８１】
代表的な側鎖の番号は、以下に示され、かつ、より長いまたは短い炭素鎖を有する他の誘導体は、この図式に従って番号付けされ、最も小さい番号を有する炭素はカルボニル炭素に結合している：
【００８２】
【化９】
2005536464.tif 000011
【００８３】
実施例１
９−ニトロカンプトテシン−２０−クロロ酢酸塩（ＣＺ２３６）の調製：クロロ酢酸無水物（５ｇ、０．０２９２モル）、９−ニトロカンプトテシン（４ｇ、純度７５％以下）、および２ｍｌのトリエチルアミン（Aldrich Chemical Co., Milwaukee, WI）を、機械的攪拌子を備えた三つ首丸底フラスコ中の１００ｍｌＤＭＦに添加した。混合物を７２時間、室温下に攪拌した。次いで、残渣を溶離剤としてＴＨＦ−塩化メチレン（割合：１：１５）を使用してクロマトグラフィーにて分離した。溶媒をロータリーエバポレーターを用いて除去した。純粋な生成物が収率２５％の褐色粉末として得られた。
【００８４】
実施例２
カンプトテシン２０−Ｏ−（３’−クロロ）プロピオネート（ＣＺ２８０）の調製：カンプトテシン（５ｇ、０．０１４７１モル、中国および他の地にて市販されていて、研究室で精製されたもの）およびクロロプロピオン酸塩化物（７５ｍｌ、Aldrich Chemical Co.）を、磁性攪拌子を備えた２００ｍｌ丸底フラスコ中に添加した。この混合物へ濃縮硫酸４〜６滴を添加した。混合物を１５時間、１００±１０℃で攪拌した。室温に冷却後、ロータリーエバポレーターを用いて溶媒を除去した。残渣は溶離剤としてＴＨＦ−塩化メチレン溶媒系を用いてクロマトグラフィーにて分離した。純粋な生成物が収率４７％、融点２５５℃の黄色結晶として得られた。１ＨＮＭＲ（ＣＨＣｌ３）：０．８６０（５Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２５０Ｈｚ，Ｃ１９−メチルプロトン）、２．０９１−２．３３８（２Ｈ，ｍ，Ｃ１８−メチレンプロトン）、３．０００（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２８５Ｈｚ，Ｃ２３−メチレンプロトン）、３．７７５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２６１Ｈｚ，Ｃ２４−メチレンプロトン）、５．２８０（２Ｈ，ｓ，Ｃ５−メチレンプロトン）、５．３５０−５．７２０（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１７．１２０，１７．１２５Ｈｚ，Ｃ１７−メチレンプロトン）、７．２４０（１Ｈ，ｓ，Ｃ１４−Ｈ），７．６５８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝９．０２５Ｈｚ，Ｃ１０−Ｈ）、７．８１０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝９．１０２Ｈｚ，Ｃ１１−Ｈ）、７．９０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．３８０Ｈｚ，Ｃ９−Ｈ）、８．２００（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．３６８Ｈｚ，Ｃ１２−Ｈ）、８．３８５（１Ｈ，ｓ，Ｃ７−Ｈ）。１３Ｃ；７．５６８（Ｃ１９）、３２．０００（Ｃ１８）、３７．８００、３８．５３５（Ｃ２３，Ｃ２４）、５０．１２５（Ｃ５）、６７．１５５（Ｃ１７）、９６．８８（Ｃ１４）、１２０．２５０、１２７．１２０、１７８．２５０、１７８、５００、１２９．６２５、１３０．７５０、１３１．２５２、１３２．９１２、１４５．５１０、１４６．４５２、１４９．００１、１５２．５００、１５７．５１２（Ｃ２、Ｃ３、Ｃ６−Ｃ１６ａ）、１６７．１００、１６９．４５０（Ｃ２１，Ｃ２２）、溶媒ピークの領域内に埋もれたＣ２０。
【００８５】
実施例３
カンプトテシン２０−Ｏ−（４’−クロロ）ブチレート（ＣＺ２８１）の調製：ＣＺ２８０の調製と同じ方法を用い、かつ、アシル化剤として４−クロロブチリル塩化物を使用して、収率８２％、融点２６５℃の白色結晶として純粋なＣＺ２８１を得た。１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．９８９（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２１０Ｈｚ，Ｃ１９−メチルプロトン）、２．０５１−２．３５（４Ｈ，ｍ，Ｃ１８−およびＣ２４−メチレンプロトン）、２．６００−２．８００（２Ｈ，ｍ，Ｃ２３−メチレンプロトン）、３．６０５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２２３Ｈｚ，Ｃ２４−メチレンプロトン）、５．３０１（２Ｈ，ｓ，Ｃ５−メチレンプロトン）、５．３５０−５．７６０（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１７．０９８，１７．１２３Ｈｚ，Ｃ１７−メチレンプロトン）、７．２２０（１Ｈ，ｓ，Ｃ１４−Ｈ）、７．６６８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．９８０Ｈｚ，Ｃ１０−Ｈ）、７．８３５（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．８９９Ｈｚ，Ｃ１１−Ｈ）、７．９７５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０１２Ｈｚ，Ｃ９−Ｈ）、８．２５０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０７５Ｈｚ，Ｃ１２−Ｈ）、８．４００（１Ｈ，ｓ，Ｃ７−Ｈ）。１３Ｃ：７．５２０（Ｃ１９）、２７．６１０、３０．７５０、３２．０００、４３．８５０（Ｃ１８，Ｃ２３，Ｃ２４およびＣ２５）、５０，０００（Ｃ５）、６７．０１０（Ｃ１７）、７６．１２５（Ｃ２０）、９５．９８８（Ｃ１４）、１２０．１８０、１２８．４４０、１２８．５．５、１２９．８９１、１３０．７５０、１３１．１８０、１４５．６５０、１４６．２００、１４８．７６０、１５２．２５６、１８７．２１２（Ｃ２，Ｃ３，Ｃ６−Ｃ１６ａ）、１６７．４８８、１７１．６５０（Ｃ２１，Ｃ２２）。
【００８６】
実施例４
９−ニトロカンプトテシン２０−Ｏ−３’−クロロプロピオネート（ＣＺ２８５）の調製：出発原料として９−ニトロカンプトテシンを使用し、実施例２に記載された方法と同じ方法を用いて、純粋なＣＺ２８５を収率７１％、融点２００℃の黄色粉末として得た。１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１．０５３（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２１０Ｈｚ，Ｃ１９−メチルプロトン）、２．１２０−２．３１０（２Ｈ，ｍ，Ｃ１８−メチレンプロトン）、３．０５１（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０１５Ｈｚ，Ｃ２３−メチレンプロトン）、３．７５０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．１２３Ｈｚ，Ｃ２４−メチレンプロトン）、５．４６８（２Ｈ，ｓ，Ｃ５−メチレンプロトン）、５．４７０−５．７６５（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１７．２５０，１７．２８６Ｈｚ，Ｃ１７−メチレンプロトン）、７．３０５（１Ｈ，ｓ，Ｃ１４−Ｈ）、７．９３０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝９．０１２Ｈｚ，Ｃ１１−Ｈ）、８．４８５−８．５５０（２Ｈ，ｍ，Ｃ９−ＨおよびＣ１２−Ｈ）、９．２８０（１Ｈ，ｓ，Ｃ７−１１）。１３ＣＮＭＲ：７．６７０（Ｃ１９）、３２．０１０（Ｃ１８）、３７．６１０（Ｃ２３）、３８．８９９（Ｃ２４）、５０．５０１（Ｃ５）、６７．３１５（Ｃ１７）、９７．１２０（Ｃ１４）、１２１．５１０、１２５．９１５、１２７．４９６、１２８．６６８、１３１．７５１、１３６．６１５、１４５．００５、１４５．６１０、１４６．０１０、１４９．００５、１５７．２５０（Ｃ２，Ｃ３，Ｃ６−Ｃ１６ａ）、１６７．１００、１６９．２３０（Ｃ２１、Ｃ２２）、溶媒ピークの領域内に埋もれたＣ２０。
【００８７】
実施例５
９−ニトロカンプトテシン２０−Ｏ−４’クロロブチレート（ＣＺ２８８）の調製：実施例２に記載された方法と同じ方法を用い、アシル化剤として４−クロロブチリル塩化物を用いて純粋なＣＺ２８８を、収率５０％、融点２５４℃の黄色粉末として得た。１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：０．９５０（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２３８Ｈｚ，Ｃ１９−メチルプロトン）、１．９８７−２．２０５（４Ｈ，ｍ，Ｃ１８−およびＣ２２−メチレンプロトン）、２．７５８（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．１５０Ｈｚ，Ｃ２３−メチレンプロトン）、４．７８０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２１３Ｈｚ，Ｃ２５−メチレンプロトン）、５．３４０（２Ｈ，ｓ，Ｃ５−メチレンプロトン）、５．５２８（２Ｈ，ｓ，Ｃ１７−メチレンプロトン）、７．１５０（１Ｈ，ｓ，Ｃ１４−Ｈ）、８．０７５（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．６８９Ｈｚ，Ｃ１１−Ｈ）、８．４８０−８．５５０（２Ｈ，ｍ，Ｃ１０−およびＣ１２−Ｈｓ）、９．１６０（１Ｈ，ｓ，Ｃ７−Ｈ）。１３ＣＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：７．６００（Ｃ１９）、２８．００１（Ｃ２４）、３０．５００、３０．６５５（Ｃ１８，Ｃ２３）、４４．１２５（Ｃ２５）、５１．５００（Ｃ５）、６７．１００（Ｃ１７）、７６．１５５（Ｃ２０）、９５．８９８（Ｃ１４）、１２０．０１２、１２０．５００、１２５．５１２、１２６．６００、１２０．４１２、１３３．０００、１３５．６９８、１４５．０１２、１４５．０４５、１４６．０１０、１４７．９９８、１５３．８５０、１５６．５０５（Ｃ２，Ｃ３，Ｃ６−Ｃ１６ａ）、１６７．００５、１７１．５８６（Ｃ２１，Ｃ２２）。
【００８８】
実施例６
分析のために提供されたＣＺ２８１の試料を顕微鏡で観察して、組成物として可視的に均質であると判断した。数種の十分に形成された試料片を粉砕して、大きさ０．１〜０．４ｍｍの結晶を得た。３つの試料片を高粘度ミネラルオイルとともに微細なガラス繊維上に載置し、−１００℃に冷却した。３つの結晶全てが同じ大きさの単位胞と斜方晶系回折対称を生じた。キラル空間群Ｐ２１２１２１を回折データの系統的欠如から独自に決定した。実験パラメーターの詳細を表１に示す。
【００８９】
高感度ＣＣＤ検出計とＭｏＫα放射と結合したシーメンス(Siemens)四軸型回折計を使用して、約２つのオクタントのデータを−１００℃で収集した。これらのデータから３７２９対称独立反射を取得した。構造は直接法によって解析され、全て非水素原子における異方性熱パラメーターでもって微調整された(refined)。水素原子は理想的な寄与（idealized contribution）として処理された。絶対的配置に感受性を有するパラメーターが微調整された(refined)；その最終値から報告された鏡像異性体が９９．９％信頼値より良い値に補正されることを確信した。
【００９０】
データプロセッシングに使用されたソフトウェアの全ては、SHELXTLライブラリー（version 5.1, G. Sheldrick, Brucker AXS, Madison, WI）に含まれている。
本発明の他の実施態様は、本明細書を検討し、かつ、ここに記載される発明を実施することから、当業者には明白であろう。本明細書および実施例は単なる例として検討されることが意図され、本発明の真の範囲および真髄は下記請求項およびそれらの均等物によって示される。
【国際調査報告】
2005536464.tif 000014
2005536464.tif 000015
2005536464.tif 000016
2005536464.tif 000017