(57)【要約】  本発明に係るピロリ菌の除菌剤は、アンモニア又はアンモニウムイオンの吸着材を含むものであり、本発明に係るピロリ菌の除菌方法は、ピロリ菌に感染した胃内に本発明に係る除菌剤を導入するものである。ピロリ菌が胃内の強酸性環境で棲息できるのは、尿素からアンモニアを生成し、胃酸を中和しているためである。そこで、本発明では、アンモニア又はアンモニウムイオンの吸着材（活性炭、シリカゲル、アルミナ、ゼオライト、陽イオン交換材等）を含む除菌剤を胃内に導入し、アンモニア又はアンモニウムイオンを吸着することで、ピロリ菌が棲息し難い環境とし、ピロリ菌を除菌する。
2011034039.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アンモニア又はアンモニウムイオンの吸着材を含むヘリコバクター・ピロリの除菌剤。
【請求項２】
前記アンモニア又はアンモニウムイオンの吸着材が、活性炭、シリカゲル、アルミナ、ゼオライト、及び陽イオン交換材からなる群から選択される少なくとも１種である請求項１記載の除菌剤。
【請求項３】
ヘリコバクター・ピロリに感染した胃内に請求項１又は２記載の除菌剤を導入するヘリコバクター・ピロリの除菌方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ；以下、適宜「ピロリ菌」という。）の除菌剤及びそれを用いた除菌方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ピロリ菌は、慢性胃炎、胃及び十二指腸潰瘍の慢性化因子又は再発因子であり、世界の人口の５０％が感染していると言われている。このピロリ菌は、自然環境においては動物の胃内のみで増殖可能であり、ヒト、サル、ネコ、ブタ、イヌに感染することが明らかになっている。ピロリ菌はウレアーゼ活性を有し、尿素からアンモニアを生成することで、胃酸を中和して胃内の強酸性環境で棲息していると考えられている。【０００３】
現在、ピロリ菌の除菌には、抗生物質（アモキシシリン、クラリスロマイシン）とプロトンポンプ阻害剤とを組み合わせた３投与剤併用療法が行われているが、抗生物質に対する耐性菌の出現により、この方法で完全に除菌することは難しくなりつつある（非特許文献１）。このため、新たな抗生物質（メトロニダゾール、レボフロキサン）を用いた２次、３次除菌法も試みられている。しかし、これらの除菌方法は人体にとって有用な腸内細菌の働きにも影響するため、下痢等の副作用を伴うといった問題がある。【０００４】
そこで、最近になり、副作用の少ない除菌方法として、３投与剤併用療法に加えて糖とタンパク質の褐色反応生成物投与剤を併用する方法（特許文献１）、ピロリ菌の胃壁への定着を阻害するフコイダンを投与する方法（特許文献２）、ピロリ菌の増殖を抑制するβ１−４結合を有する糖類を投与する方法（特許文献３）、等が提案されている。また、プロバイオティクス（乳酸菌等）との併用治療も報告されている（非特許文献２）。しかし、これらの作用メカニズムは必ずしも明確になっているとは言い難く、また、除菌方法としても未だ確立されてはいない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００８−０２４６６２号公報
【特許文献２】特開平０７−１３８１６６号公報
【特許文献３】特開２００８−１２０７８９号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】「Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ感染の診断と治療のガイドライン」（日本ヘリコバクター学会発行）
【非特許文献２】「医学のあゆみ」，  ｖｏｌ．２２８，  Ｎｏ．３，  ２００９，  ｐｐ．２１３−２１６
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
そこで、本発明は、副作用の少ない新規なピロリ菌の除菌剤及びそれを用いた除菌方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、ピロリ菌が胃内の強酸性環境で棲息できるのは、尿素からアンモニアを生成し、胃酸を中和しているためであるという点に着目して鋭意研究を行った。その結果、アンモニア又はアンモニウムイオンの吸着剤を胃内に導入し、ピロリ菌が棲息し難い環境とすることで、ピロリ菌の除菌が可能であることを見出し、本発明を完成するに至った。具体的には、本発明は以下のとおりである。【０００９】
（１）  アンモニア又はアンモニウムイオンの吸着材を含むヘリコバクター・ピロリの除菌剤。
（２）  前記アンモニア又はアンモニウムイオンの吸着材が、活性炭、シリカゲル、アルミナ、ゼオライト、及び陽イオン交換材からなる群から選択される少なくとも１種である上記（１）記載の除菌剤。
（３）  ヘリコバクター・ピロリに感染した胃内に上記（１）又は（２）記載の除菌剤を導入するヘリコバクター・ピロリの除菌方法。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、副作用の少ない新規なピロリ菌の除菌剤及びそれを用いた除菌方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】ピロリ菌をＰＢＳで混釈して寒天培地に植菌し、３日間培養したときのコロニー形成の様子を示す図である。
【図２Ａ】ピロリ菌をＰＢＳで混釈して寒天培地に植菌し、１日間培養した後に０．１Ｍ塩酸を散布し、さらに３日間培養したときのコロニー形成の様子を示す図である。
【図２Ｂ】ピロリ菌をＰＢＳで混釈して寒天培地に植菌し、１日間培養した後に活性炭粉末Ａ（１０００℃焼成）を分散させた０．１Ｍ塩酸を散布し、さらに３日間培養したときのコロニー形成の様子を示す図である。
【図２Ｃ】ピロリ菌をＰＢＳで混釈して寒天培地に植菌し、１日間培養した後に活性炭粉末Ｂ（５００℃焼成）を分散させた０．１Ｍ塩酸を散布し、さらに３日間培養したときのコロニー形成の様子を示す図である。
【図３】図２Ａ〜図２Ｃにおけるコロニー面積（ｍｍ２）を示す図である。
【図４】ピロリ菌をＰＢＳで混釈して寒天培地に植菌し、１日間培養した後に４隅に穴を設け、その中に、活性炭粉末を分散させた０．１Ｍ塩酸（同図（１）〜（３））、又は０．１Ｍ塩酸（同図（４））を満たし、さらに３日間培養したときの増殖阻止域の様子を示す図である。
【図５】図４の（１）〜（３）における増殖阻止域の幅（ｍｍ）と、（１）〜（３）で用いた活性炭粉末のアンモニア吸着能（ｐｐｍ）とを示す図である。
【図６Ａ】ピロリ菌をＰＢＳで混釈して寒天培地に植菌し、１日間培養した後にセルロースを分散させた０．１Ｍ塩酸を散布し、さらに３日間培養したときのコロニー形成の様子を示す図である。
【図６Ｂ】ピロリ菌をＰＢＳで混釈して寒天培地に植菌し、１日間培養した後にシリカゲルを分散させた０．１Ｍ塩酸を散布し、さらに３日間培養したときのコロニー形成の様子を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明に係るピロリ菌の除菌剤は、アンモニア又はアンモニウムイオンの吸着材を含むものである。また、本発明に係るピロリ菌の除菌方法は、ピロリ菌に感染した胃内に本発明に係る除菌剤を導入するものである。
【００１３】
前述したように、ピロリ菌が胃内の強酸性環境で棲息できるのは、尿素からアンモニアを生成し、胃酸を中和しているためである。そこで、本発明に係るピロリ菌の除菌方法では、アンモニア又はアンモニウムイオンの吸着材を含む除菌剤を胃内に導入し、アンモニア又はアンモニウムイオンを吸着することで、ピロリ菌が棲息し難い環境とし、ピロリ菌を除菌する。言い換えれば、本発明に係る除菌方法は、胃酸の中和を妨害することによってピロリ菌を除菌するものである。これは、抗生物質による直接的な除菌方法とは対照的に、間接的な除菌方法と言える。
【００１４】
特に、ピロリ菌は胃粘膜表面にのみ棲息しており、胃深部粘膜では発見されていない。その理由は、胃深部粘膜に存在する特異な糖タンパク質の糖鎖末端部分のｃｉｓ−Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミンがピロリ菌の増殖を抑制するためとされている（Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ｖｏｌ．３０５，  ２００４，  ｐｐ．１００３−１００６）。このようにピロリ菌は胃粘膜表面に棲息していることから、胃内に導入するのみで、除菌剤がピロリ菌の周囲まで到達すると考えられる。
【００１５】
上記アンモニア又はアンモニウムイオンの吸着材としては、アンモニア又はアンモニウムイオンに対する吸着能を有するものであれば特に限定されない。例えば、活性炭、シリカゲル、アルミナ、ゼオライト、及び陽イオン交換材からなる群から選択される少なくとも１種を用いることができる。これらの吸着材は、胃粘膜への付着性やアンモニア又はアンモニウムイオンに対する吸着能を高める観点から、粉末状又は微粒子状であることが好ましい。
【００１６】
上記活性炭の原料となる炭素原料としては、オガ屑、木材、ヤシ穀、オイルカーボン、フェノール樹脂、セルロース、アクリロニトリル、石炭ピッチ、石油ピッチ等の公知の原料を用いることができる。
【００１７】
この中でも、純度９０％以上の高純度セルロースが好ましく、純度９５％以上の高純度セルロースがより好ましい。高純度セルロースの素材としては、銅アンモニアレーヨン、ビスコースレーヨン、コットン、パルプ、リンター、ポリノジック、リヨセル（テンセル）等の公知の素材を用いることができる。
【００１８】
活性炭を製造するには、上記の炭素原料を電気炉等により焼成する。焼成温度としては３００〜１５００℃が好ましく、５００〜１０００℃がより好ましい。なお、焼成温度の低い方がアンモニアの吸着能が高まる傾向がある。
【００１９】
なお、この活性炭は、賦活化処理を行ったものであっても賦活化処理を行っていないものであってもよい。
【００２０】
上記シリカゲル、アルミナ、ゼオライトとしては、従来からアンモニア又はアンモニウムイオンの吸着材として用いられているものを特に限定されずに用いることができる。
上記陽イオン交換材としては、強酸性陽イオン交換樹脂（官能基として−ＳＯ３Ｈを有する）、弱酸性陽イオン交換樹脂（官能基として−ＣＯＯＨを有する）等を用いることができる。
【００２１】
これらの吸着材は、セルロース、ニトロセルロース、ゼラチン、ポリアクリロアミド、ポリメタクリレート等の親水性のポーラスポリマーで被覆されていてもよい。このように被覆することにより、胃粘膜細胞の損傷を防ぐことができる。
【００２２】
本発明に係る除菌剤を胃内に導入する方法としては、経口投与や内視鏡で観察しながら直接投与する方法等が挙げられる。
特に、経口投与する場合には、必要に応じて、散剤、顆粒剤、錠剤、糖衣錠、カプセル剤、液剤等への加工を行ってもよい。また、食品（ガム、キャンディー、ゼリー、ヨーグルト等）や飲料に混入させ、通常の飲食品と同様に摂取することも可能である。
【００２３】
本発明に係る除菌剤は、胃で消化されたり吸収されたりすることがなく、かつ、胃粘膜に損傷を与えることがない。したがって、継続的に一定期間、かつ、適量を胃内に導入することによって、副作用の心配なく、ピロリ菌を徐々に減らすことができる。特に、食品や医療用として用いられている材料を用いれば、安全で安価な除菌剤を提供することができる。
さらに、本発明に係る除菌剤のメカニズムから、抗生物質耐性（非感受性）菌に対しても除菌効果が期待できる。
【００２４】
なお、本発明に係る除菌方法は単独で実施してもよいが、従来公知の除菌方法と併用するようにしても構わない。例えば、本発明に係る除菌方法で除菌した後に３投与剤併用療法による除菌を行うことで、抗生物質の使用量を減らす効果も期待できる（Ｈｅｒｉｃｏｂａｃｔｏｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  ｖｏｌ．８，  Ｎｏ．１，  ２４，  ｐｐ．８６−８７）。
【実施例】
【００２５】
以下、本発明の実施例について説明する。なお、本発明は下記の実施例に限定して解釈すべきではなく、特許請求の範囲における記載の範囲内で種々の変更が可能である。【００２６】
［実施例１］
ピロリ菌の除菌効果を評価するために、以下の実験を行った。
本実験で使用したピロリ菌は、理化学研究所バイオリソースセンターより提供された菌株（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ  ｓｕｂｓｐ．  ｐｙｌｏｒｉ、ＪＣＭ  Ｎｏ．１２０９３）である。
培養ディッシュとしては以下（ａ），（ｂ）の２種類を用いた。
（ａ）トリプチケースソイＩＩ  ５％ヒツジ血液寒天培地（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ製、ｃａｔ２５１２３９）
（ｂ）ピロリ寒天培地（極東製薬製、ｃｏｄｅ０５５６１）
上記（ａ）の培養ディッシュは、ピロリ菌株をストックするための増殖に使用した。
また、上記（ｂ）の培養ディッシュは、上記（ａ）の培養ディッシュで増殖されたピロリ菌に対し、以下に述べる各々の処理をした後で菌体（コロニー形成）の様子を観察するために使用した。このピロリ寒天培地は、培地に添加されている選択剤により、ピロリ菌以外の発育が抑制され、また、テトラゾリウムバイオレッドの添加によりピロリ菌のコロニーが紫色に着色するため確認が容易であるといった特徴がある。【００２７】
まず、ピロリ菌を０．７ｍＬのＰＢＳで混釈し、ピロリ寒天培地に植菌後、アネロパック微好気パウチ用セット（微好気培養、酸素濃度６〜１２％、炭酸ガス濃度５〜８％；三菱ガス化学製、ＭＧＣ  Ａ−１８）を使用して、３７℃で３日間培養した。培養後のコロニー形成の様子を図１に示す。【００２８】
次に、ピロリ菌を０．７ｍＬのＰＢＳで混釈し、３つのピロリ寒天培地にそれぞれ植菌後、上記のアネロパック微好気パウチ用セットを使用して、３７℃で１日間培養した。そして、１つのピロリ寒天培地には０．１Ｍ塩酸０．５ｍＬを散布し、残り２つのピロリ寒天培地には、賦活化処理を行っていない活性炭粉末Ａ又は活性炭粉末Ｂ（いずれも１０ｍｇ）を分散させた０．１Ｍ塩酸０．５ｍＬを散布して、さらに３日間培養した。
なお、活性炭粉末Ａは１０００℃で焼成したものであり、アンモニア吸着能が低く、活性炭粉末Ｂは５００℃で焼成したものであり、アンモニア吸着能が高い。【００２９】
培養後のコロニー形成の様子を図２Ａ〜図２Ｃに示す。図２Ａは活性炭粉末を分散させていないものであり、図２Ｂは活性炭粉末Ａを分散させたものであり、図２Ｃは活性炭粉末Ｂを分散させたものである。図２Ｂ、図２Ｃにおいては、コロニーを丸で囲んでいる。また、それぞれにおけるコロニー面積（ｍｍ２）の総和を図３に示す。【００３０】
図１〜図３から分かるように、ＰＢＳや０．１Ｍ塩酸を散布した場合にはピロリ菌が増殖したが、活性炭粉末Ａ，Ｂを分散させた０．１Ｍ塩酸を散布した場合にはコロニーの数や面積が減少した。また、この減少割合はアンモニア吸着能と正に相関していた。この結果から以下のことが示唆される。すなわち、ピロリ菌が塩酸中で繁殖するためには、尿素をウレアーゼで分解してアンモニアを発生させ、塩酸を中和する必要があるが、活性炭の存在下ではアンモニアが吸着されてしまうため、塩酸を中和できず、塩酸に晒し続けられることになり、繁殖が阻害される。【００３１】
次に、培養条件を同一にするために、１つのピロリ寒天培地のみを用いて同様の実験を行った。
ピロリ菌を０．７ｍＬのＰＢＳで混釈し、１つのピロリ寒天培地に植菌後、上記のアネロパック微好気パウチ用セットを使用して、３７℃で１日間培養した。そして、ピロリ寒天培地の４隅に直径７ｍｍの穴を設け、その中に、市販品又は試作品の活性炭粉末５ｍｇを分散させた０．１Ｍ塩酸０．２ｍＬ、又は０．１Ｍ塩酸０．２ｍＬを満たし、さらに３日間培養した。【００３２】
培養後の増殖阻止域の様子を図４に示す。図４の（１）は高純度セルロースを５００℃で焼成した活性炭粉末（試作品）を分散させたものであり、（２）は高純度セルロースを１０００℃で焼成した活性炭粉末（試作品）を分散させたものであり、（３）は呉羽化学工業製の「クレメジン」を分散させたものであり、（４）は活性炭粉末を分散させていないものである。また、図４の（１）〜（３）における増殖阻止域の幅（ｍｍ）と、（１）〜（３）で用いた活性炭粉末のアンモニア吸着能（ｐｐｍ）とを図５に示す。【００３３】
図４，図５から分かるように、穴の周辺にはコロニーの増殖阻止域が観察され、その幅はアンモニア吸着能と正に相関していた。なお、図４の（４）にも大きな増殖阻止域が観察されるが、これは、活性炭粉末５ｍｇの容積に相当する分だけ塩酸量が多く、過剰な塩酸に晒され続けるためである。【００３４】
次に、活性炭以外の吸着材として、シリカゲルを用いて同様の実験を行った。コントロールとしてはセルロースを用いた。
ピロリ菌を０．７ｍＬのＰＢＳで混釈し、３つのピロリ寒天培地にそれぞれ植菌後、上記のアネロパック微好気パウチ用セットを使用して、３７℃で１日間培養した。そして、各ピロリ寒天培地にセルロース（旭化成製、セオラス１０１）１０ｍｇ、又はシリカゲル（ケムコ製、ＬＣ−ＳＯＲＢ  ＳＰＷ−Ｂ−Ｓｉ）１０ｍｇを分散させた０．１Ｍ塩酸０．５ｍＬを散布して、さらに３日間培養した。【００３５】
培養後のコロニー形成の様子を図６Ａ，図６Ｂに示す。図６Ａはセルロースを分散させたものであり、図６Ｂはシリカゲルを分散させたものである。【００３６】
図６Ａ，図６Ｂから分かるように、アンモニア又はアンモニウムイオンの吸着能を有さないセルロースでは増殖阻止効果が確認されなかったが、シリカゲルでは増殖阻止効果が確認された。これは、シリカゲルはアンモニア吸着能が低いが、アンモニアが塩酸と反応して生じるアンモニウムイオンを静電的相互作用により吸着できるためと考えられる。したがって、陽イオン交換材においても同様の効果が期待できる。【００３７】
［実施例２］
活性炭による除菌効果を調べるため、ピロリ菌の感染者２名の同意のもとで尿素呼気試験（ＵＢＴ）を行った。
まず、試験協力者２名について尿素呼気試験を行い、呼気中の１３Ｃを含む炭酸ガス濃度の比率から、胃中のピロリ菌量（ＵＢＴ値：Δ１３Ｃ（‰））を算出した。その後、高純度セルロースを１０００℃で焼成した活性炭粉末（試作品）のカプセル２錠（１錠あたり１８０ｍｇの活性炭粉末を含む）を１日３回、食後に経口摂取させ、３週間摂取後における呼気中の１３Ｃを含む炭酸ガス濃度の比率から、胃中のピロリ菌量（ＵＢＴ値：Δ１３Ｃ（‰））を算出した。呼気試験装置としては、炭酸ガス同位体比分析装置（大塚電子製、ＰＯＣ  ｏｎｅ）を用いた。呼気のサンプリング及び操作はメーカの取扱説明書に従って行った。結果を下記表１に示す。【００３８】
【表１】
2011034039.tif 000003
【００３９】
表１から分かるように、活性炭を３週間摂取することによりＵＢＴ値が摂取前の５４〜２７％に減少している。このことから、活性炭に有意な除菌効果があることが分かる。
【図３】
2011034039.tif 000004
【図５】
2011034039.tif 000005
【図１】
2011034039.tif 000006
【図２Ａ】
2011034039.tif 000007
【図２Ｂ】
2011034039.tif 000008
【図２Ｃ】
2011034039.tif 000009
【図４】
2011034039.tif 000010
【図６Ａ】
2011034039.tif 000011
【図６Ｂ】
2011034039.tif 000012
【手続補正書】
【提出日】平成24年2月22日(2012.2.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アンモニア又はアンモニウムイオンの吸着材を含むヘリコバクター・ピロリの除菌剤。
【請求項２】
前記アンモニア又はアンモニウムイオンの吸着材が、活性炭、シリカゲル、アルミナ、ゼオライト、及び陽イオン交換材からなる群から選択される少なくとも１種である請求項１記載の除菌剤。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００１】
本発明は、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ；以下、適宜「ピロリ菌」という。）の除菌剤に関する。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
そこで、本発明は、副作用の少ない新規なピロリ菌の除菌剤を提供することを目的とする。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
（１）  アンモニア又はアンモニウムイオンの吸着材を含むヘリコバクター・ピロリの除菌剤。
（２）  前記アンモニア又はアンモニウムイオンの吸着材が、活性炭、シリカゲル、アルミナ、ゼオライト、及び陽イオン交換材からなる群から選択される少なくとも１種である上記（１）記載の除菌剤。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
本発明によれば、副作用の少ない新規なピロリ菌の除菌剤を提供することができる。
【国際調査報告】
2011034039.tif 000013
2011034039.tif 000014
2011034039.tif 000015
2011034039.tif 000016
2011034039.tif 000017