(57)【要約】水産養殖生物の給餌に必要な最近の使用に際して飼料価値が増大している線虫類を保存および貯蔵する方法。本法では必須脂肪酸、ワクチン、ホルモン、免疫刺激剤、誘引剤、栄養剤および色素などの添加物によって線虫が優化される。リポソームは線虫類に添加物を与える媒体として役立ち得る。優化された線虫類は次に、休眠無水生態（脱水）を誘導することにより乾燥し、必要な場合、出荷待機使用のために貯蔵する。給餌に必要な際に、この乾燥優化線虫類を再水和して水産養殖生物に給餌する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
水産養殖に利用するために飼料価値が増加している線虫類を保存する方法であって、
（ａ）水産養殖用飼料添加物により線虫類を優化させるステップと、
（ｂ）優化線虫類を乾燥するステップと
を含む方法。
【請求項２】
（ｃ）前記線虫類を培養するステップをさらに含む請求項１に記載の方法。
【請求項３】
（ｄ）前期乾燥優化線虫類を貯蔵するステップをさらに含む請求項１に記載の方法。
【請求項４】
線虫類が非寄生性線虫類である請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記非寄生性線虫類がパナグレラス種である請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記非寄生性線虫類がカエノラブディティス・エレガンス種である請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記線虫類を優化するステップが必須脂肪酸、ワクチン、ホルモン、免疫刺激剤、誘引物質、栄養剤および色素からなる群から選択される少なくとも１種の優化添加物を供給することを含む請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記線虫類を優化するステップが線虫の遺伝子操作を含む求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記優化線虫類を乾燥するステップが、休眠無水生態および浸透生態からなる群から選択される１項を導入することにより実施される請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記優化ステップが優化添加物を含有するリポソーム類を線虫類に与えることにより実施される請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
水産養殖の改良方法であって、
（ａ）水産養殖用飼料添加物により線虫類を優化するステップと、
（ｂ）優化線虫類を乾燥するステップと、
（ｃ）乾燥優化線虫類を貯蔵するステップと、
（ｄ）前記乾燥優化線虫類を再水和して蘇生するステップと、
（ｅ）再水和優化線虫類を水産養殖で育成中の生物に給餌するステップと
を含む方法。
【請求項１２】
前記線虫類が非寄生性線虫類である請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記非寄生性線虫類がパナグレラス種である請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記非寄生性線虫類がカエノラブディティス・エレガンス種である請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記線虫類を優化するステップが必須脂肪酸、ワクチン、ホルモン、免疫刺激剤、誘引物質、栄養剤および色素からなる群から選択される少なくとも１種の優化添加物を供給することを含む請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
前記優化線虫類を乾燥するステップが、休眠無水生態および浸透生態からなる群から選択される１項を導入することにより実施される請求項１１に記載の方法。
【請求項１７】
前記優化ステップが優化添加物を含有するリポソーム類を線虫類に与えることにより実施される請求項１１に記載の方法。
【請求項１８】
前記線虫類を優化するステップが線虫の遺伝子操作を含む請求項１１に記載の方法。
【請求項１９】
水産養殖の改良方法であって、
（ａ）線虫類を乾燥するステップと、
（ｂ）前記乾燥線虫類を貯蔵するステップと、
（ｃ）前記乾燥線虫類を再水和して蘇生するステップと、
（ｄ）線虫類を飼料添加物で優化するステップと、
（ｅ）再水和優化線虫類を水産養殖で育成中の生物に給餌するステップと
を含む方法。
【請求項２０】
前記線虫類を優化するステップが必須脂肪酸、ワクチン、ホルモン、免疫刺激剤、誘引物質、栄養剤および色素からなる群から選択される少なくとも１種の優化添加物を供給することを含む請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記線虫類を乾燥するステップが、休眠無水生態および浸透生態からなる群から選択される１項を導入することにより実施される請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
前記線虫類を優化するステップが線虫の遺伝子操作を含む請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
水産養殖に利用するために飼料価値が増加している線虫類を保持する方法であって、
（ａ）水産養殖用飼料添加物により線虫類を優化するステップと、
（ｂ）優化線虫類を保存するステップと
を含む方法。
【請求項２４】
前記優化線虫類を保存するステップが優化線虫類を乾燥することを含む請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記優化線虫類を保存するステップが、優化線虫類の温度を下げることによって優化線虫類の代謝を有意に減少させることを含む請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
（ｃ）前記線虫類を培養するステップをさらに含む請求項２３に記載の方法。
【請求項２７】
（ｄ）前記乾燥優化線虫類を貯蔵するステップをさらに含む請求項２３に記載の方法。
【請求項２８】
前記線虫類が非寄生性線虫類である２３に記載の方法。
【請求項２９】
前記非寄生性線虫類がパナグレラス種である請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記非寄生性線虫類がカエノラブディティス・エレガンス種である請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
前記線虫類を優化するステップが必須脂肪酸、ワクチン、ホルモン、免疫刺激剤、誘引物質、栄養剤および色素からなる群から選択される少なくとも１種の優化添加物を供給することを含む請求項２３に記載の方法。
【請求項３２】
前記線虫類を優化するステップが線虫の遺伝子操作を含む請求項２３に記載の方法。
【請求項３３】
前記優化線虫類を乾燥するステップが、休眠無水生態および浸透生態からなる群から選択される１項を導入することにより実施される請求項２３に記載の方法。
【請求項３４】
前記優化ステップが優化添加物を含有するリポソーム類を線虫類に与えることにより実施される請求項２３に記載の方法。
【請求項３５】
水産養殖の改良方法であって、
（ａ）水産養殖用飼料添加物により線虫類を優化するステップと、
（ｂ）優化線虫類を保存するステップと、
（ｃ）乾燥優化線虫類を貯蔵するステップと、
（ｄ）前記乾燥優化線虫類を再水和して蘇生するステップと、
（ｅ）再水和優化線虫類を水産養殖で育成中の生物に給餌するステップと
を含む方法。
【請求項３６】
前記優化線虫類を保存するステップが優化線虫類を乾燥させることを含む請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記優化線虫類を保存するステップが、優化線虫類の温度を下げることによって優化線虫類の代謝を有意に減少させることを含む請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
前記線虫類が非寄生性線虫類である請求項３５に記載の方法。
【請求項３９】
前記非寄生性線虫類がパナグレラス種である請求項３５に記載の方法。
【請求項４０】
前記非寄生性線虫類がカエノラブディティス・エレガンス種である請求項３５に記載の方法。
【請求項４１】
前記線虫類を優化するステップが必須脂肪酸、ワクチン、ホルモン、免疫刺激剤、誘引物質、栄養剤および色素からなる群から選択される少なくとも１種の優化添加物を供給することを含む請求項３５に記載の方法。
【請求項４２】
前記優化線虫類を乾燥するステップが、休眠無水生態および浸透生態からなる群から選択される１項を導入することにより実施される請求項３６に記載の方法。
【請求項４３】
前記優化ステップが優化添加物を含有するリポソーム類を前記線虫類に与えることにより実施される請求項３５に記載の方法。
【請求項４４】
前記線虫類を優化するステップが線虫の遺伝子操作を含む請求項３５に記載の方法。
【請求項４５】
水産養殖の改良方法であって、
（ａ）線虫類を保存するステップと、
（ｂ）前記乾燥線虫類を貯蔵するステップと、
（ｃ）前記乾燥線虫類を再水和して蘇生するステップと、
（ｄ）線虫類を飼料添加物で優化するステップと、
（ｅ）再水和優化線虫類を水産養殖で育成中の生物に給餌するステップと
を含む方法。
【請求項４６】
前記線虫類を保存するステップが線虫類を乾燥することを含む請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記線虫類を保存するステップが、線虫類の温度を下げることによって線虫類の代謝を有意に減少させることを含む請求項４５に記載の方法。
【請求項４８】
前記線虫類を優化するステップが必須脂肪酸、ワクチン、ホルモン、免疫刺激剤、誘引物質、栄養剤および色素からなる群から選択される少なくとも１種の優化添加物を供給することを含む請求項４５に記載の方法。
【請求項４９】
前記線虫類を乾燥するステップが、休眠無水生態および浸透生態からなる群から選択される１種を導入することにより実施される請求項４５に記載の方法。
【請求項５０】
前記線虫類を優化するステップが線虫の遺伝子操作を含む請求項４５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、水産養殖、より具体的には魚類や小エビ幼生などの水産養殖生物の給餌に使用される優化線虫類の出荷待機貯蔵法に関する。
【背景技術】
【０００２】
商業上の可能性を有する海洋魚類の生育を成功に導くための主な障害は、初期発育段階、すなわち幼生の飼育である。この期間、死亡率は約６０〜１００％の範囲になるが、これは、栄養不足または栄養の劣悪さによることが多い。例えば、孵化場は、ワムシ（ツボワムシ（Ｂｒａｃｈｉｏｎｕｓ  ｐｌｉｃａｔｉｌｉｓ）または他のツボワムシ種）や海洋性小エビ（ホウネンエビ種）などの幼生に対する、生餌すなわち動物プランクトンの供給に依存している。これらの動物プランクトンは自然食餌の代表ではないが、大量生育が比較的容易であり、幼生に受容され易い。一方、これら動物プランクトンの養殖にはインフラストラクチャー（タンク類、水ポンプや空気ポンプ、水処理）における相当な投資並びにエネルギーや人力を要する。さらに、生餌は貯蔵することができず、また、毎日２５〜５０％の相対成長率（ＲＧＲ）を示し得る幼生の急速な成長のための食餌に必要なドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）やエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）などの特定の長鎖多不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）が不足している（コーベン（Ｋｏｖｅｎ）Ｗ．）、タンドラー（Ｔａｎｄｌｅｒ）Ａ．、キシル（Ｋｉｓｓｉｌ）Ｇ．Ｗｍ．、スクラン（Ｓｋｌａｎ）Ｄ．、１９９２年「ｔｈｅ  Ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ  ｏｆ  ｎ−３  ｈｉｇｈｌｙ  ｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄｓ  ｆｏｒ  ｇｒｏｗｔｈ  ｉｎ  ｌａｒｖａｌ  Ｓｐａｒｕｓ  ａｕｒａｔａ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｎ  ｓｕｒｖｉｖａｌ，  ｌｉｐｉｄ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｓｉｚｅ  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ」，Ａｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ  １０４、９１〜１０４頁）。このことは、ストレス耐性の増大に中心的役割を演じているとして最近認められてきたアラキドン酸（ＡｒＡ）においても当てはまる（コーベン（Ｋｏｖｅｎ）Ｗ．、バール（Ｂａｒｒ）Ｙ．、ルツキー（Ｌｕｔｚｋｙ）Ｓ．、ベン−アチア（Ｂｅｎ−Ａｔｉａ）Ｉ．、ワイス（Ｗｅｉｓｓ）Ｒ．、ハレル（Ｈａｒｅｌ）Ｍ．、ベーレンス（Ｂｅｈｒｅｎｓ）Ｐ．、タンドラー（Ｔａｎｄｌｅｒ）Ａ．、２００１年、「Ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ  ａｃｉｄ（２０：４ｎ−６）ｏｎ  ｇｒｏｗｔｈ，ｓｕｒｖｉｖａｌ  ａｎｄ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ｈａｎｄｌｉｎｇ  ｓｔｒｅｓｓ  ｉｎ  ｇｉｌｔｈｅａｄ  ｓｅａｂｒｅａｍ（Ｓｐａｒｕｓ  ａｕｒａｔａ）ｌａｒｖａｅ」、Ａｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ  １９３、１０７〜１２２頁）。したがって、ワムシやホウネンエビは、その幼生への給餌前に市販のＤＨＡやＥＰＡ製剤を与えることにより、これらＰＵＦＡで優化する必要がある。
【０００３】
生餌養殖システムは、栄養含量が変化し易く、突然の集団崩壊に陥りやすい動物プランクトンの供給変動性にしばしば悩まされる。そのため、例えば、幼生への食餌供給の中断および／または食餌品質の変動により著しく幼生の成長速度が低下し、孵化場での滞留時間が延長するか、または小型で劣弱な幼生が養殖場に移されて成長や生存率が低下することになる。さらに、貧弱な給餌によりストレスが生じ、疾病への抵抗性が減少することになる。最近では、主に開発過剰によりホウネンエビシスト類の入手が世界的に急速に減少していることから、価格の変動とシスト品質の低下を招き、これら動物プランクトンの供給問題を複雑にしている。
【０００４】
線虫類を食餌に利用する明らかな利点は、線虫類を優化後、休眠乾燥状態で貯蔵できるということである。それらは、カプセル化され、後に幼生への給餌段階で蘇生させることができる。この「出荷待機利便性」により、供され得る幼生に対して従来の他の生餌種よりも少ない投資で信頼できる栄養の一定した給餌が提供される。
【０００５】
ドコサヘキサエン酸（２２：６ｎ−３）、エイコサペンタエン酸（２０：５ｎ−３）およびアラキドン酸（２０：４ｎ−６）など、海洋性幼生にとっての必須脂肪酸は種々の油性乳状液によって線虫類に与えることができる。幾つかの先行研究は、線虫類が油性乳状液のミセルを容易にろ過することを示している。最近の幾つかの研究は、線虫類への給餌にリポソームを利用することが、優化に使用できる添加物給餌の範囲を広げる有望な方法であることを示している。リポソームは、２枚の薄層リン脂質膜に囲まれた水性塊からなる小さな（０．０２５〜１μｍ）脂質ベシクルである。この水性塊中へ、水溶性ビタミン、ミネラル、蛋白質およびアミノ酸を、および／またはリポソームのリン脂質膜中へ脂質、ビタミンおよび色素などの脂溶性栄養物を組入れることは比較的容易である（コーベン（Ｋｏｖｅｎ）Ｗ．、バール（Ｂａｒｒ）Ｙ．、ハダス（Ｈａｄａｓ）Ｅ．、ベン−アチア（Ｂｅｎ−Ａｔｉａ）Ｉ．、チェン（Ｃｈｅｎ）Ｙ．、ワイス（Ｗｅｉｓｓ）Ｒ．、タンドラー（Ｔａｎｄｌｅｒ）Ａ．、１９９９年、「Ｔｈｅ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｏｆ  ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ａｓ  ａ  ｎｕｔｒｉｅｎｔ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  ｉｎ  ｆｉｒｓｔ−ｆｅｅｄｉｎｇ  ｍａｒｉｎｅ  ｆｉｓｈ  ｌａｒｖａｅ」、Ａｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  ５、２５１〜２５６頁）。
【０００６】
最近のある研究では、アルテミア・ナウプリイ（Ａｒｔｅｍｉａ、ｎａｕｐｌｉｉ）に対し遊離アミノ酸メチオニンで優化するためにリポソームを利用できたことを示している（トンハイム（Ｔｏｎｈｅｉｍ）Ｓ．Ｋ．、コーベン（Ｋｏｖｅｎ）Ｂ．、ルネスタッド（Ｒｕｎｎｅｓｔａｄ）Ｉ．、２０００年、「Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ  ｏｆ  Ａｒｔｅｍｉａ  ｗｉｔｈ  ｆｒｅｅ  ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ」、Ａｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ  １９０、２２３〜２３５頁）。この動物プランクトンは一般にアミノ酸が不足しており、その優化は、より効率的な蛋白質合成に寄与し得る。この方法の範囲は、最近拡大してコレシストキニン（ＣＣＫ）など、幼生の消化ホルモンを刺激するこのアミノ酸や他の遊離アミノ酸並びに遊離脂肪酸による線虫類の優化を含むようになった。ＣＣＫは膵臓酵素の放出における主要な要因であり、食餌栄養物の消化および同化を高める。さらに、免疫刺激物質、ワクチンおよび他の薬剤を含有するリポソームを線虫類に与えることによって、幼生の疾病抵抗性およびストレス抵抗性を刺激し、幼生および稚魚の品質を改良することができる。
【０００７】
ポピール（Ｐｏｐｉｅｌ）らに対する米国特許第５１８３９５０号明細書には、腸性（昆虫寄生性）線虫類の商業的貯蔵および輸送法を教示している。これは、線虫類の生存能力と昆虫への病原性を維持しつつ、大量および小量において昆虫寄生線虫類を乾燥、包装、貯蔵および輸送する方法に関するが、ポピール（Ｐｏｐｉｅｌ）の方法は、貯蔵前の線虫類優化には言及していない。
【０００８】
ベディング（Ｂｅｄｄｉｎｇ）に対する米国特許第５０４２４２７号明細書には、粘土を用いて線虫類を乾燥し、水に分散させて蘇生させる、エンテロ病原性線虫類の貯蔵および輸送法を記載しているが、ベディング（Ｂｅｄｄｉｎｇ）の方法は、貯蔵前の線虫類優化には言及していない。
【０００９】
線虫類の乾燥は、ソロモン（Ｓｏｌｏｍｏｎ）らによって、（ソロモン（Ｓｏｌｏｍｏｎ）Ａ．、パペルナ（Ｐａｐｅｒｎａ）Ｉ．、グレーザー（Ｇｌａｚｅｒ）Ｉ．、１９９９年「Ｄｅｓｉｃｃａｔｉｏｎ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｅｎｔｏｍｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ  ｎｅｍａｔｏｄｅ  Ｓｔｅｉｎｅｒｎｅｍａ  ｆｅｌｔｉａｅ：ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｈｙｄｒｏｂｉｏｓｉｓ」、Ｎｅｍａｔｏｌｏｇｙ  １（１），６１〜６８頁）並びにペリー（Ｐｅｒｒｙ）（ペリー（Ｐｅｒｒｙ）Ｒ．，１９９９年「Ｄｅｓｉｃｃａｔｉｏｎ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｏｆ  ｐａｒａｓｉｔｉｃ  ｎｅｍａｔｏｄｅｓ」、Ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ、１１９、Ｓ１９〜Ｓ３０頁）によっても教示されているが、ここでも乾燥前の線虫類優化には言及していない。
【００１０】
アグリカルチュラル・ジェネチックス・カンパニーＬＴＤ（Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ  ＬＴＤ）に対する国際特許公開第９５／１８５２７号明細書には、幼生用の生餌に使用する種々の油類および色素類などの種々の添加物で優化した線虫類を教示している。この方法は、幼生に優化線虫類を与える利点を説明しているが、線虫類の長期貯蔵への言及はない。
【００１１】
非寄生性線虫、カエノラブディティス・エレガンス（Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ  ｅｌｅｇａｎｓ）は、遺伝生物のモデルとして利用され、徹底的な分子分析および遺伝子分析の課題であった（ジョルジェンセン（Ｊｏｒｇｅｎｓｅｎ）ＥＭ）、およびマンゴー（Ｍａｎｇｏ）ＳＥ、２００２年「Ｔｈｅ  ａｒｔ  ａｎｄ  ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  ｇｅｎｅｔｉｃ  ｓｃｒｅｅｎｓ：Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ  ｅｌｅｇａｎｓ」、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ３：３５６〜３６９頁；「Ｔｈｅ  Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ  Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ  Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ．１９９８年  Ｇｅｎｏｍｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｎｅｍａｔｏｄｅ  Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ：ａ  ｐｌａｔｆｏｒｍ  ｆｏｒ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｎｇ  ｂｉｏｌｏｇｙ．」、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８２：２０１２〜２０１８頁；リッドル（Ｒｉｄｄｌｅ）Ｄ．Ｌ．、ブルメンタール（Ｂｌｕｍｅｎｔｈａｌ）Ｔ．、マイヤー（Ｍｅｙｅｒ）ＢＪ．、およびプリース（Ｐｒｉｅｓｓ）ＪＲ．、「Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ  ＩＩ」、（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、ニューヨーク、１９９７年）。しかし、水産養殖におけるＣ．エレガンスの出荷待機利用のための優化、保存または貯蔵についての言及はなかった。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
したがって、上記制限のない飼料価値を高めた保存および貯蔵法に対する必要性は広く認識されており、この方法を有することには高い利益があると考えられる。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明の一態様により、飼料価値を高めた線虫類の保存法が提供される。本法は水産養殖飼料添加物により線虫類を優化し、優化した線虫類を乾燥する段階を含む。
【００１４】
本発明の他の態様により、水産養殖の改良法が提供される。この方法は、水産養殖飼料添加物により線虫類を優化するステップと、優化した線虫類を乾燥するステップと、乾燥した優化線虫類を貯蔵するステップと、優化乾燥線虫類を脱水し蘇生するステップと、再水和した優化線虫類を水産養殖において育成中の生物に給餌するステップとを含む。
【００１５】
本発明の他の態様により、水産養殖の改良法が提供される。この方法は、線虫類を乾燥するステップと、乾燥線虫類を貯蔵するステップと、乾燥線虫類を再水和し蘇生するステップと、水産養殖飼料添加物により線虫類を優化するステップと、再水和した優化線虫類を水産養殖において育成中の生物に給餌するステップとを含む。
【００１６】
本発明の他の態様により、水産養殖に使用するために、飼料価値を高めた線虫類を保持する方法が提供される。この方法は、水産養殖飼料添加物により線虫類を優化するステップと、優化した線虫類を保存するステップとを含む。
【００１７】
さらに、本発明の他の態様により、水産養殖の改良法が提供される。この方法は、水産養殖飼料添加物により線虫類を優化するステップと、優化線虫類を保存するステップと、乾燥優化線虫類を貯蔵するステップと、前記乾燥線虫類を再水和し蘇生するステップと、再水和した優化線虫類を水産養殖において育成中の生物に給餌するステップとを含む。
【００１８】
さらにまた、本発明の他の態様により、水産養殖の改良法が提供される。この方法は、線虫類を保存するステップと、前記乾燥優化線虫類を貯蔵するステップと、前記乾燥線虫類を再水和し蘇生するステップと、飼料添加物により線虫類を優化するステップと、再水和した優化線虫類を水産養殖において育成中の生物に給餌するステップとを含む。
【００１９】
本発明の下記の好ましい実施形態におけるさらなる特徴によると、本法はさらに線虫類の培養段階を含む。
【００２０】
記載された好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、この方法はさらに、乾燥優化線虫類を貯蔵するステップを含む。
【００２１】
記載された好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、線虫類は非寄生性線虫類である。
【００２２】
記載された好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、前記非寄生性線虫類はパナグレラス（Ｐａｎａｇｒｅｌｌｕｓ）種である。
【００２３】
記載された好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、前記非寄生性線虫類はカエノラブディティス・エレガンス（Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ  ｅｌｅｇａｎｓ）種である。
【００２４】
記載された好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、前記線虫類を優化するステップは、必須脂肪酸、ワクチン、ホルモン、免疫刺激剤、誘引物質、栄養剤および色素からなる群から選択される少なくとも１種の優化添加物を供給することを含む。
【００２５】
記載された好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、前記優化線虫類を乾燥するステップは休眠無水生態および浸透性生物からなる群から選択される１項を導入することにより実施される。
【００２６】
記載された好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、前記線虫類を優化するステップが線虫の遺伝子操作を含む。
【００２７】
記載された好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、前記優化ステップが優化添加物を含有するリポソーム類を線虫類に与えることにより実施される。
【００２８】
記載された好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、線虫類を保存するステップが、線虫類を乾燥することを含む。
【００２９】
記載された好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、線虫類を保存するステップが、線虫類の温度を下げることにより、線虫類の代謝を有意に減少させることを含む。
【発明の効果】
【００３０】
出荷待機利便性の利点のうちには、
ａ）優化線虫類を貯蔵する能力により、幼生用の一定した食餌供給が保証される。幼生の毎日の成長速度（２５〜５０％のＲＧＲ）は急速であるため、装置の故障による食餌供給の中断、ワムシや藻類の培養における崩壊および品質の劣ったホウネンエビシストにおける孵化率の低さは、幼生の至適成長率や生産率に満たないという結果になる。
ｂ）優化した線虫類のバッチは、貯蔵前に栄養含量が試験できるため、幼生給餌前に、一定した栄養品質を保証し得る。
ｃ）貯蔵製品を生産できることから、十分な予備品を蓄えることができる。このことは有利である。そうでない場合、他の従来の食餌供給法に比して、より多くのインフラストラクチャーへの投資、労働およびエネルギーが必要である。
ｄ）優化線虫類を貯蔵する能力は、供給量の減少、品質の変動、時には殺虫剤による汚染によって変動し易い高価格に悩まされる資源であり。また非持続性資源であるホウネンエビシストと競合し得る商業製品の基盤である。
ｅ）孵化したてのホウネンエビの体組成は、ホウネンエビ種群が生息する環境中の自然過程のみを反映し得る。シストの産出は、自然の過程であり、孵化したノープリウスの体組成面での品質に対する制御は役立たない。一方、同じサイズの幼生は、そのカプセル化前に長期貯蔵のため優化することができる。
【００３１】
本発明は、水産養殖生物の給餌に最近必要とされる栄養価を高めた線虫類の保存と貯蔵のための方法を提供することにより、現在知られた構造的欠陥に取組んでいる。
【００３２】
本発明を本明細書中に添付の図面を参照させて、例としてのみ記載する。図面の内容に対して具体的に述べると、例として、また本発明の好ましい実施形態の考察説明を目的とするのみであって、本発明の原理とコンセプトの最も有用で理解し易い描写と考えられるものを提供するために示されていることを強調しておく。この点から、本発明の基本的理解に必要であること以上に詳細にわたって本発明の構造的な内容を示すことは企図されておらず、図面に添えた記述は、本発明の幾つかの形態が実施において形態化し得ることを当業者に対し明らかにしている。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３３】
本発明は、幼生の給餌に使用できる水産養殖の一方法である。特に本発明は、優化乾燥線虫類の保存、貯蔵に使用できるため、それらを「出荷待機」させることができ、必要時に使用の際再水和し、蘇生させ得る。この方法により、ホウネンエビ、ワムシ、カイアシ類などの水産養殖用生餌の必要性がなくなる。
【００３４】
本発明による水産養殖法の原理と操作は、図面とそれに添えられた記述を参照にすることで、より良く理解できる。
【００３５】
本発明の少なくとも一つの実施形態を詳細に説明する前に、本発明がその適用において以下の記述で挙げられた、または図面で示された構成や成分配合の内容に限定されないことを理解されたい。本発明は他の実施形態をとること、または種々の方法で実践または遂行することができる。また、本明細書中で用いられた語句や用語は説明の目的であって、限定と考えるべきではないことも理解されたい。
【００３６】
本明細書と添付の請求項に用いられる場合、用語の「線虫類」とは、あらゆる種類の線虫類を指す。本発明の方法は、あらゆる線虫類を用いて実施できるが、好ましくは、遊離生存（すなわち、非寄生性）線虫類を用いて実施し、より好ましくはパナグレルス（Ｐａｎａｇｒｅｌｌｕｓ）種並びにＣ・エレガンス（Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ）種を用いて実施する。
【００３７】
本明細書と添付の請求項に用いられる場合、用語の「乾燥」とは、蒸発により、浸透圧により、またはこの目的のために他の手段により生物から水を除去することを指す。
【００３８】
本明細書と添付の請求項に用いられる場合、用語の「水産養殖」とは、任意の水生生物の飼育および繁殖を指す。
【００３９】
本明細書と添付の請求項に用いられる場合、用語の「優化」とは、線虫を目標生物に給餌する前に、線虫体内の関心対象物質の濃度を高めるために、食事、媒体または他の方法によって線虫類に物質が供給されることを指し、限定しないが、必須脂肪酸、ワクチン、ホルモン、免疫刺激剤、誘引物質、栄養剤および色素を含み得る。
【００４０】
次に図面について述べるが、図１は、飼料価値を高めた線虫類の保存法１０を示すフローチャートである。方法１０は線虫類の培養ステップ１２を含む。線虫類の培養は線虫学業者に知られている。線虫類に食餌を運ぶ媒介体として働いている酵母や細菌を線虫類に与えることができる。その替わり、またはそれに加えて、線虫類は醗酵槽の使用によって工業的規模で成育できる。
【００４１】
本発明の方法１０によって、線虫類は収穫直前に、または収穫後に水産養殖飼料添加物により「優化」される１４。線虫類は、線虫類の飼料に添加される必須脂肪酸、ワクチン、ホルモン、免疫刺激剤、誘引物質、栄養剤および色素などの少なくとも１種の添加物で優化される。線虫類に添加物を与えるために、好首尾で使用されてきた媒介となるものは、添加物をリポソームに浸透させてから、そのリポソームを線虫類に与えることである。ドコサヘキサエン酸（２２：６ｎ−３）、エイコサペンタエン酸（２０：５ｎ−３）およびアラキドン酸（２０：４ｎ−６）などの海洋性幼生にとっての必須脂肪酸は種々の油性乳状液によって線虫類に与えることができる。さらに、免疫刺激剤やワクチンを含有するリポソームを線虫類に与えることができ、このことにより、それを餌とする幼生の疾病抵抗性を向上させることができる。さらにコレシストキニン（ＣＣＫ）など、幼生の消化ホルモンを刺激する特定の遊離アミノ酸（ＦＡＡ）や遊離脂肪酸（ＦＦＡ）を含有するリポソームを線虫類に与えることができる。ＣＣＫは膵臓酵素の放出における主要な要因であり、食餌栄養物の消化および同化を高める。よりバランスのとれたアミノ酸蘇生を与えることにより、他のＦＡＡをリポソームに組入れて、食欲を増進させたり、幼生の蛋白合成を増進させることができる。
【００４２】
他の好ましい実施形態において、水産養殖飼料添加物による線虫類の優化（１４）は、別の方法で達成される。これらの好ましい実施形態において、優化は線虫類ゲノムの遺伝子操作によって達成される。このような方法は、十分に研究された線虫であるＣ．エレガンスなどの線虫を用いて最も容易に促進される。Ｃ．エレガンスのゲノムは、配列決定が十分になされている（Ｃ．エレガンス配列決定協会、１９９８年、「Ｇｅｎｏｍｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｎｅｍａｔｏｄｅ  Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ：ａ  ｐｌａｔｆｏｒｍ  ｆｏｒ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｎｇ  ｂｉｏｌｏｇｙ」、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８２：２０１２〜２０１８）。種に固有な種々の栄養化合物や栄養成分の発現を増加させるために標準的な分子生物学技術を用いて、Ｃ．エレガンスにおける種々の遺伝子や遺伝配列を操作できる（調節因子および構造遺伝子の双方を含む）。他に、線虫の栄養含量を高めるため、または、限定しないが、必須脂肪酸、ワクチン、ホルモン成長因子、免疫刺激剤、誘引物質、栄養剤および色素などの、他の生物薬剤型化合物を産生するために、新規ゲノム配列を線虫のゲノム内へ導入できる。
【００４３】
形質転換線虫類の生産を目的とした遺伝子物質の導入には、非限定例として、選択的変異誘発および知られた転移因子（例えば、Ｔｃ１）の操作や動員などの種々の技術並びに微量注入、リッドル（Ｒｉｄｄｌｅ）Ｄ．Ｌ．、ブルメンタール（Ｂｌｕｍｅｎｔｈａｌ）Ｔ．、マイヤー（Ｍｅｙｅｒ）ＢＪ．、およびプリース（Ｐｒｉｅｓｓ）ＪＲ．、「Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ  ＩＩ」、（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、ニューヨーク、１９９７年）などのＣ．エレガンスへの遺伝子導入のために種々の標準的技術を利用することができる。
【００４４】
Ｃ．エレガンスの形質転換系は、外因性ＤＮＡによるＣ．エレガンスの形質転換によりＤＮＡ配列を担持するベクターを、両性動物成体の多核卵巣内へ微量注入することによって創製される。注入されたＤＮＡは準安定性の染色体外配列として担持された、または、宿主の染色体に組み込まれた微量注入ＤＮＡの縦列配列を形成し、安定した組み込み形質転換系を形成する。注入ＤＮＡと共に適切な遺伝子マーカーを含めることによって、導入遺伝子を担持している動物が同定できる。時には、導入ＤＮＡの染色体組み込みが生じることがあり、また既存の染色体外配列が形質転換系の照射後に組み込まれることがある。例えば、リッドル（Ｒｉｄｄｌｅ）Ｄ．Ｌ．、ブルメンタール（Ｂｌｕｍｅｎｔｈａｌ）Ｔ．、マイヤー（Ｍｅｙｅｒ）ＢＪ．、およびプリース（Ｐｒｉｅｓｓ）ＪＲ．、「Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ  ＩＩ」、（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、ニューヨーク、１９９７年）；ハシュミ（Ｈａｓｈｍｉ）Ｓ．、Ｇ．ハシュミ（Ｈａｓｈｍｉ）＆  Ｒ．ガウグラー（Ｇａｕｇｌｅｒ）、１９９５年、「Ｇｅｎｅｔｉｃ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎ  ｅｎｔｏｍｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ  ｎｅｍａｔｏｄｅ  ｂｙ  ｍｉｃｒｏｉｎｊｅｃｔｉｏｎ」、Ｊ．Ｉｎｖｅｒｔｅｂｒ．Ｐａｔｈｏｌ．６６：２９３〜６頁；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、４８巻、「Ｃａｅｎｏｒａｂｈｄｉｔｉｓ  ｅｌｅｇａｎｓ−Ｍｏｄｅｒｎ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ａｎ  ｏｒｇａｎｉｓｍ」、Ｅｐｓｔｅｉｎ（イプシュタイン）およびＳｈａｋｅｓ（シェイクス）編集、アカデミック・プレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）、１９９５年；クワ（Ｋｗａ）ＭＳ．、ビーンストラ（Ｖｅｅｎｓｔｒａ）ＪＧ．、バンディク（Ｖａｎ  Ｄｉｊｋ）Ｍ．およびルース（Ｒｏｏｓ）ＭＨ．、１９９５年、「Ｂｅｔａ−ｔｕｂｌｉｎ  ｇｅｎｅｓ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｐａｒａｓｉｔｉｃ  ｎｅｍａｔｏｄｅ  Ｈａｅｍｏｎｃｈｕｓ  ｃｏｎｔｏｒｔｕｓ  ｍｏｄｕｌａｔｅ  ｄｒｕｇ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｉｎ  Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ  ｅｌｅｇａｎｓ」、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ、２４６（４）：５００〜１０頁；ファイアー（Ｆｉｒｅ）Ａ．）１９８６年、「Ｉｎｔｅｇｒａｔｉｖｅ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ  ｅｌｅｇａｎｓ」、ＥＭＢＯ  Ｊ  ５：２６７３〜２６８０頁、
を参照されたい。
【００４５】
優化添加物を線虫類に給餌後、優化線虫類は、育成中の幼生給餌の準備状態におくか、または将来の「出荷待機」使用のために乾燥１６させる。幾つかの先行乾燥法が、上記序文において論じられ、また線虫学業者に知られている。好ましい乾燥法は休眠脱水生態または浸透生態の導入により実施される。線虫類の無水生態／浸透生態、すなわち脱水は最適には休眠無水生態である。休眠は、予知し得ない不都合な環境条件に対する自発的な可逆反応であり、好都合な条件が戻れば休眠からの解除が生じる。乾燥優化線虫類は、その後貯蔵され１８、将来必要時の使用のために脱水状態で入手できる。
【００４６】
本発明の方法の他の好ましい実施形態において、乾燥１６の代わりに、優化線虫類を保存するための他の方法を用いることができる。例えば、優化後、優化線虫類の代謝を停止または有意に減少させるために優化線虫類の温度を下げることにより、優化線虫類を将来の「出荷待機」使用のために保存することができる。使用前に、保存線虫類の温度を通常の温度へ上げることにより、線虫類を復活、蘇生させることができる。
【００４７】
図１は、さらに水産養殖の改良法１０を示す。この方法は、線虫類の培養ステップ１２を含む。線虫類の培養は、線虫学業者に知られている。線虫類に食餌を送達するために媒介体として働いている酵母や細菌を線虫類に与える。代替的にまたは追加的に、線虫類は醗酵槽を用いて工業規模で増殖できる。
【００４８】
本発明の方法１０により、ある期間を経てから、収穫前または収穫後の線虫類を水産養殖飼料添加物によって優化する１４。飼料添加物を線虫類の中に組入れる新規手段は、線虫類媒介物を用いることによる。線虫類ヘの飼料添加物給餌に首尾よく用いられてきた媒介物は、飼料添加物を含有しているリポソームである。その代わりに、または、それに加えて、この目的のために他の媒介物が利用できる。
【００４９】
線虫類に優化添加物を給餌後、優化線虫類を育成中の幼生へ給餌する準備状態におくか、または将来の使用のために乾燥１６させる。幾つかの先行乾燥法が、上記序文において論じられ、また線虫学業者に知られている。乾燥優化線虫類は次に貯蔵され１８、将来出荷待機使用のために脱水状態で入手できる。
【００５０】
使用前に、乾燥優化線虫類を再水和し蘇生させる２０。再水和後、再水和された優化線虫類を水産養殖で育成中の生物に給餌する２２。
【００５１】
本発明の他の実施形態において、養殖された線虫類を乾燥してから貯蔵する。使用前に乾燥線虫類を再水和して蘇生させてから線虫類を飼料添加物によって優化し、その後、水産養殖で育成中の生物に給餌する。
【００５２】
本発明の他の好ましい実施形態において、保存以前に水産養殖飼料添加物により線虫類を優化すること１４は、本明細書に前記した線虫類ゲノムの遺伝子操作によって達成される。さらに他の実施形態において、乾燥の代わりとして、優化線虫類の代謝を停止または有意に減少させるために優化線虫類の温度を下げることにより、優化線虫類を保存する。使用前に、保存線虫類の温度を通常の温度へ上げることにより、線虫類を復活、蘇生させることができ、その後、水産養殖で育成中の生物に給餌する。
【００５３】
一般に、本明細書中に使用されている命名法および本発明において利用された実験手順は、分子技術、生化学技術、微生物技術および組換えＤＮＡ技術を含む。このような技術は文献に十分に説明されている。例えば、以下を参照されたい：「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ」、サムブルック（Ｓａｍｂｒｏｏｋ）ら、（１９８９）；「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」、Ｉ〜ＩＩＩ巻、オースベル（Ａｕｓｕｂｅｌ）Ｒ．Ｍ．）編集、（１９９４）；オースベル（Ａｕｓｕｂｅｌ）ら、「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」、ジョン・ワイリー・アンド・サンズ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ）、メリーランド州ボルチモア（１９８９）；パーバル（Ｐｅｒｂａｌ）、「Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ」、ジョン・ワイリー・アンド・サンズ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ）、ニューヨーク（１９８８）；ワトソン（Ｗａｔｓｏｎ）ら、「Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＤＮＡ」、サイエンティフィック・アメリカン・ブックス（Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｂｏｏｋｓ）、ニューヨーク；ビレン（Ｂｉｒｒｅｎ）ら（編集）、「Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  Ｓｅｒｉｅｓ」、１〜４巻、（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、ニューヨーク、１９９８年）；米国特許第４，６６６，８２８号明細書；米国特許第４，６８３，２０２号明細書；米国特許第４，８０１，５３１号明細書；米国特許第５，１９２，６５９号明細書；および米国特許第５，２７２，０５７号明細書に記載された方法論；「Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ」、Ｉ〜ＩＩＩ巻、セリス（Ｃｅｌｌｉｓ）Ｊ．Ｅ．編集（１９９４）；「Ｃｕｌｔｕｒｅ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌｓ−Ａ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｂａｓｉｃ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ」、フレッシュニー（Ｆｒｅｓｈｎｅｙ）、ワイリー・リス（Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ）、ニューヨーク（１９９４）、第３版；「Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、ゲイト（Ｇａｉｔ）Ｍ．Ｊ．編集（１９８４）；「Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ」、ヘーメス（Ｈａｍｅｓ）Ｂ．Ｄ．およびヒギンス（Ｈｉｇｇｉｎｓ）Ｓ．Ｊ．編集（１９８５）；「Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ」、ヘーメス（Ｈａｍｅｓ）Ｂ．Ｄ．およびヒギンス（Ｈｉｇｇｉｎｓ）Ｓ．Ｊ．編集（１９８４）；「Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ」、フレッシュニー（Ｆｒｅｓｈｎｅｙ）Ｒ．Ｉ．編集（１９８６）；「Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  Ｅｎｚｙｍｅｓ」、ＩＲＬプレス（Ｐｒｅｓｓ）（１９８６）；「Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ」、パーバル（Ｐｅｒｂａｌ）Ｂ．、（１９８４）および「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ」、１〜３１７巻、アカデミック・プレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）；���ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ  Ｇｕｉｄｅ  Ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」、アカデミオ・プレス（Ａｃａｄｅｍｉｏ  Ｐｒｅｓｓ）、カリフォルニア州サンディエゴ（１９９０）；マーシャク（Ｍａｒｓｈａｋ）ら、「Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ−Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｃｏｕｒｓｅ  Ｍａｎｕａｌ」、ＣＳＨＬプレス（Ｐｒｅｓｓ）（１９９６）；リッドル（Ｒｉｄｄｌｅ）Ｄ．Ｌ．、ブルメンタール（Ｂｌｕｍｅｎｔｈａｌ）Ｔ．、マイヤー（Ｍｅｙｅｒ）ＢＪ．、およびプリース（Ｐｒｉｅｓｓ）ＪＲ．、「Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ  ＩＩ」、（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、ニューヨーク、１９９７年）；ハシュミ（Ｈａｓｈｍｉ）Ｓ．、Ｇ．ハシュミ（Ｈａｓｈｍｉ）＆  Ｒ．ガウグラー（Ｇａｕｇｌｅｒ）、１９９５年、「Ｇｅｎｅｔｉｃ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎ  ｅｎｔｏｍｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ  ｎｅｍａｔｏｄｅ  ｂｙ  ｍｉｃｒｏｉｎｊｅｃｔｉｏｎ」、Ｊ．Ｉｎｖｅｒｔｅｂｒ．Ｐａｔｈｏｌ．６６：２９３〜６頁；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、４８巻、「Ｃａｅｎｏｒａｂｈｄｉｔｉｓ  ｅｌｅｇａｎｓ−Ｍｏｄｅｒｎ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ａｎ  ｏｒｇａｎｉｓｍ」、Ｅｐｓｔｅｉｎ（イプシュタイン）およびＳｈａｋｅｓ（シェイクス）編集、アカデミック・プレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）、１９９５年；クワ（Ｋｗａ）ＭＳ．、ビーンストラ（Ｖｅｅｎｓｔｒａ）ＪＧ、バンディク（Ｖａｎ  Ｄｉｊｋ）Ｍおよびルース（Ｒｏｏｓ）ＭＨ．、１９９５年、「Ｂｅｔａ−ｔｕｂｕｌｉｎ  ｇｅｎｅｓ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｐａｒａｓｉｔｉｃ  ｎｅｍａｔｏｄｅ  Ｈａｅｍｏｎｃｈｕｓ  ｃｏｎｔｏｒｔｕｓ  ｍｏｄｕｌａｔｅ  ｄｒｕｇ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｉｎ  Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ  ｅｌｅｇａｎｓ」、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ、２４６（４）：５００〜１０頁；ファイアー（Ｆｉｒｅ）Ａ．、１９８６年、「Ｉｎｔｅｇｒａｔｉｖｅ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ  ｅｌｅｇａｎｓ」、ＥＭＢＯ  Ｊ  ５：２６７３〜２６８０頁；ジョルジェンセン（Ｊｏｒｇｅｎｓｅｎ）ＥＭ、およびマンゴー（Ｍａｎｇｏ）ＳＥ、２００２年「Ｔｈｅ  ａｒｔ  ａｎｄ  ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  ｇｅｎｅｔｉｃ  ｓｃｒｅｅｎｓ：Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ  ｅｌｅｇａｎｓ」、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ３：３５６〜３６９頁；「Ｔｈｅ  Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ  Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ  Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ．１９９８年  Ｇｅｎｏｍｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｎｅｍａｔｏｄｅ  Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ：ａ  ｐｌａｔｆｏｒｍ  ｆｏｒ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｎｇ  ｂｉｏｌｏｇｙ．」、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８２：２０１２〜２０１８頁。これらは全て、本明細書で十分に明らかになるように参照により組み込まれている。他の一般的な文献はこの文書を通して供されている。この中の手順は、当業界で知られていると考えられ、読者に便宜上提供されている。本明細書中に含まれている���報は全て、本明細書中に参照により組み込まれている。
【００５４】
本発明は、その具体的実施形態と合わせて記載されているが、多くの代替、修飾、変更は線虫学業者にとって明らかであろう。したがって、添付の請求項の精神と広範囲に入るこのような代替、修飾、変更の全てが包含されることが意図されている。
【００５５】
本明細書中に記載された出版物、特許、特許出願は、それらの全体を参照により本明細書に組み込まれている。同様に、個々の出版物、特許、特許出願は、参照により本明細書に組み込まれていることが具体的に、個々に示されている。また、本出願におけるいかなる文献の引用または確認も、このような文献が本発明の先行技術として利用できることを認めたものととして考えるべきではない。
【図面の簡単な説明】
【００５６】
【図１】水産養殖の改良法のフローチャートである。
【図１】
2005522983.tif 000002
【国際調査報告】
2005522983.tif 000003
2005522983.tif 000004