【手続補正書】
【提出日】令和2年8月17日(2020.8.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記のドメイン：
（１） 癌抗原結合ドメイン（ただし癌抗原はCD3ではない）、
（２） 配列番号：23、24、25、または26に記載のヒトFc領域において変異を有するヒトFc領域変異体を含むドメインであって、当該変異体を有するポリペプチド会合体が、同じアイソタイプの抗体のヒトFc領域を有するポリペプチド会合体と比較して、ヒトFcγ受容体に対する結合活性が低下している、ドメイン、及び、
（３） T細胞受容体複合体結合ドメイン
を含むポリペプチド会合体であって、
癌抗原結合ドメイン、及び、T細胞受容体複合体結合ドメインは各々一価のFabであり、
癌抗原結合ドメインを構成するFabの重鎖Fv断片がCH1領域を介してFc領域を構成する一方のポリペプチドに連結され、当該Fabの軽鎖Fv断片がCL領域と連結され、T細胞受容体結合ドメインを構成するFabの重鎖Fv断片がCH1領域を介してFc領域を構成する他方のポリペプチドに連結され、当該Fabの軽鎖Fv断片がCL領域と連結された、
ポリペプチド会合体。
【請求項２】
癌抗原がＦｃＲＨ５ではない、請求項１に記載のポリペプチド会合体。
【請求項３】
下記のドメイン：
（１） 癌抗原結合ドメイン（ただし癌抗原はCD3ではない）、
（２） 配列番号：23、24、25、または26に記載のヒトFc領域において変異を有するヒトFc領域変異体を含むドメインであって、当該変異体を有するポリペプチド会合体が、同じアイソタイプの抗体のヒトFc領域を有するポリペプチド会合体と比較して、ヒトFcγ受容体に対する結合活性が低下している、ドメイン、及び、
（３） T細胞受容体複合体結合ドメイン
を含むポリペプチド会合体であって、
癌抗原結合ドメイン、及び、T細胞受容体複合体結合ドメインは各々一価のFabであり、
癌抗原結合ドメインを構成するFabの重鎖Fv断片がCH1領域を介してFc領域を構成する一方のポリペプチドに連結され、当該Fabの軽鎖Fv断片がCL領域と連結され、T細胞受容体結合ドメインを構成するFabの軽鎖Fv断片がCH1領域を介してFc領域を構成する他方のポリペプチドに連結され、当該Fabの重鎖Fv断片がCL領域と連結された、
ポリペプチド会合体。
【請求項４】
下記のドメイン：
（１） 癌抗原結合ドメイン（ただし癌抗原はCD3ではない）、
（２） 配列番号：23、24、25、または26に記載のヒトFc領域において変異を有するヒトFc領域変異体を含むドメインであって、当該変異体を有するポリペプチド会合体が、同じアイソタイプの抗体のヒトFc領域を有するポリペプチド会合体と比較して、ヒトFcγ受容体に対する結合活性が低下している、ドメイン、及び、
（３） T細胞受容体複合体結合ドメイン
を含むポリペプチド会合体であって、
癌抗原結合ドメイン、及び、T細胞受容体複合体結合ドメインは各々一価のFabであり、
癌抗原結合ドメインを構成するFabの重鎖Fv断片がCH1領域を介してFc領域を構成する一方のポリペプチドに連結され、当該Fabの軽鎖Fv断片がCL領域と連結され、T細胞受容体結合ドメインを構成するFabの重鎖Fv断片がCL領域を介してFc領域を構成する他方のポリペプチドに連結され、当該Fabの軽鎖Fv断片がCH1領域と連結された、
ポリペプチド会合体。
【請求項５】
下記のドメイン：
（１） 癌抗原結合ドメイン（ただし癌抗原はCD3ではない）、
（２） 配列番号：23、24、25、または26に記載のヒトFc領域において変異を有するヒトFc領域変異体を含むドメインであって、当該変異体を有するポリペプチド会合体が、同じアイソタイプの抗体のヒトFc領域を有するポリペプチド会合体と比較して、ヒトFcγ受容体に対する結合活性が低下している、ドメイン、及び、
（３） T細胞受容体複合体結合ドメイン
を含むポリペプチド会合体であって、
癌抗原結合ドメイン、及び、T細胞受容体複合体結合ドメインは各々一価のFabであり、
T細胞受容体結合ドメインを構成するFabの重鎖Fv断片がCH1領域を介してFc領域を構成する一方のポリペプチドに連結され、当該Fabの軽鎖Fv断片がCL領域と連結され、癌抗原結合ドメインを構成するFabの軽鎖Fv断片がCH1領域を介してFc領域を構成する他方のポリペプチドに連結され、当該Fabの重鎖Fv断片がCL領域と連結された、
ポリペプチド会合体。
【請求項６】
下記のドメイン：
（１） 癌抗原結合ドメイン（ただし癌抗原はCD3ではない）、
（２） 配列番号：23、24、25、または26に記載のヒトFc領域において変異を有するヒトFc領域変異体を含むドメインであって、当該変異体を有するポリペプチド会合体が、同じアイソタイプの抗体のヒトFc領域を有するポリペプチド会合体と比較して、ヒトFcγ受容体に対する結合活性が低下している、ドメイン、及び、
（３） T細胞受容体複合体結合ドメイン
を含むポリペプチド会合体であって、
癌抗原結合ドメイン、及び、T細胞受容体複合体結合ドメインは各々一価のFabであり、
T細胞受容体結合ドメインを構成するFabの重鎖Fv断片がCH1領域を介してFc領域を構成する一方のポリペプチドに連結され、当該Fabの軽鎖Fv断片がCL領域と連結され、癌抗原結合ドメインを構成するFabの重鎖Fv断片がCL領域を介してFc領域を構成する他方のポリペプチドに連結され、当該Fabの軽鎖Fv断片がCH1領域と連結された、
ポリペプチド会合体。
【請求項７】
ヒトFc領域変異体において、配列番号：23、24、25、または26に記載のヒトFc領域を構成するアミノ酸のいずれかが置換されている、請求項１から６のいずれかに記載のポリペプチド会合体。
【請求項８】
同じアイソタイプの抗体のヒトFc領域を有するポリペプチド会合体と比較して、ヒトFcγ受容体に対する結合活性が、表面プラズモン共鳴（SPR）システムで測定して、50％以下に低下している、請求項１から７のいずれかに記載のポリペプチド会合体。
【請求項９】
前記結合活性が20％以下に低下している、請求項８に記載のポリペプチド会合体。
【請求項１０】
前記結合活性が10％以下に低下している、請求項８又は９に記載のポリペプチド会合体。
【請求項１１】
ヒトFc領域変異体が、ヒトFcγI、ヒトFcγIIA、ヒトFcγIIB、ヒトFcγIIIA及び／又はヒトFcγIIIBのいずれかのFcγ受容体に対する結合活性が低下している、請求項１から１０のいずれかに記載のポリペプチド会合体。
【請求項１２】
ヒトFc領域変異体が、ヒトFcγI、ヒトFcγIIIA及びヒトFcγIIIBに対する結合活性が低下している、請求項１から１０のいずれかに記載のポリペプチド会合体。
【請求項１３】
ヒトFc領域変異体が、ヒトFcγI、ヒトFcγIIA、ヒトFcγIIB、ヒトFcγIIIA及びヒトFcγIIIBのすべてに対する結合活性が低下している、請求項１から１１のいずれかに記載のポリペプチド会合体。
【請求項１４】
T細胞受容体複合体結合ドメインがT細胞受容体結合ドメインである、請求項１から１３のいずれかに記載のポリペプチド会合体。
【請求項１５】
T細胞受容体複合体結合ドメインがCD3結合ドメインである、請求項１から１４のいずれかに記載のポリペプチド会合体。
【請求項１６】
CD3結合ドメインがヒトCD3を構成するε鎖配列に存在するエピトープに結合する、請求項１５に記載のポリペプチド会合体。
【請求項１７】
CD3結合ドメインがヒトCD3複合体のε鎖の細胞外領域に存在するエピトープに結合する、請求項１５に記載のポリペプチド会合体。
【請求項１８】
Fc領域を構成するアミノ酸のうちEUナンバリングに従って特定される下記のいずれかのアミノ酸： 220位、226位、229位、231位、232位、233位、234位、235位、236位、237位、238位、239位、240位、264位、265位、266位、267位、269位、270位、295位、296位、297位、298位、299位、300位、325位、327位、328位、329位、330位、331位、332位、が変異しているヒトFc領域変異体である、請求項１から１７のいずれかに記載のポリペプチド会合体。
【請求項１９】
Fc領域を構成するアミノ酸が、ヒトIgG1抗体のFc領域（配列番号：23）を構成するアミノ酸である、請求項１から１８のいずれかに記載のポリペプチド会合体。
【請求項２０】
Fc領域を構成するアミノ酸のうちEUナンバリングに従って特定される下記のいずれかのアミノ酸： 220位、226位、229位、231位、232位、237位、238位、239位、240位、264位、265位、266位、267位、269位、270位、295位、296位、300位、325位、328位、329位、332位、が変異しているヒトFc領域変異体である、請求項１８又は１９に記載のポリペプチド会合体。
【請求項２１】
下記のいずれかのアミノ酸：234位、235位、297位が変異しているヒトFc領域変異体である、請求項１８又は１９に記載のポリペプチド会合体。
【請求項２２】
234位のアミノ酸がアラニン、235位のアミノ酸がアラニン、及び／又は、297位のアミノ酸がアラニンに置換されているヒトFc領域変異体である、請求項２１に記載のポリペプチド会合体。
【請求項２３】
234位、235位、329位が置換されているヒトFc領域変異体である、請求項１８又は１９に記載のポリペプチド会合体。
【請求項２４】
297位が置換されているヒトFc領域変異体である、請求項１８又は１９に記載のポリペプチド会合体。
【請求項２５】
ヒトIgG1抗体のFc領域（配列番号：23）を構成するアミノ酸のうちEUナンバリングに従って特定される下記のいずれかの置換又は欠失：
（a） L234F、L235E、P331S、
（b） C226S、C229S、P238S、
（c） C226S、C229S、
（d） C226S、C229S、E233P、L234V、L235A
（e） L234A、L235A、N297A、又は
（f） 231位から238位のアミノ酸配列が欠失したFc領域
を含むヒトFc領域変異体である、請求項１から１９のいずれかに記載のポリペプチド会合体。
【請求項２６】
ヒトIgG2抗体のFc領域（配列番号：24）を構成するアミノ酸のうちEUナンバリングに従って特定される下記のいずれかの置換：
（a） H268Q、V309L、A330S、P331S
（b） V234A
（c） G237A
（d） V234A、G237A
（e） A235E、G237A
（f） V234A、A235E、G237A
を含むヒトFc領域変異体である、請求項１から１８のいずれかに記載のポリペプチド会合体。
【請求項２７】
ヒトIgG3抗体のFc領域（配列番号：25）を構成するアミノ酸のうちEUナンバリングに従って特定される下記のいずれかの置換：
（a） F241A
（b） D265A
（c） V264A
を含むヒトFc領域変異体である、請求項１から１８のいずれかに記載のポリペプチド会合体。
【請求項２８】
ヒトIgG4抗体のFc領域（配列番号：26）を構成するアミノ酸のうちEUナンバリングに従って特定される下記のいずれかの置換：
（a） L235A、G237A、E318A
（b） L235E
（c） F234A、L235A
を含むヒトFc領域変異体である、請求項１から１８のいずれかに記載のポリペプチド会合体。
【請求項２９】
Fc領域を構成するアミノ酸のうちEUナンバリングに従って特定される下記のいずれかのアミノ酸： 118位から260位のアミノ酸配列が配列番号：２４に記載の配列； 261位から447位のアミノ酸配列が配列番号：２６に記載の配列であるFc領域変異体である、請求項１から１７のいずれかに記載のポリペプチド会合体。
【請求項３０】
Fc領域を構成するアミノ酸のうちEUナンバリングに従って特定される下記のいずれかのアミノ酸：233位、234位、235位、236位、237位、327位、330位、331位、が対応するIgG2またはIgG4においてそのEUナンバリングが対応するアミノ酸に置換されたFc領域変異体である、請求項１８又は１９に記載のポリペプチド会合体。
【請求項３１】
癌抗原非依存的なサイトカインストームが誘導されないか、又は、誘導が低下される、請求項１から３０のいずれかに記載のポリペプチド会合体。
【請求項３２】
抗がん剤である有機化合物がコンジュゲートされていない、請求項１から３１のいずれかに記載のポリペプチド会合体。
【請求項３３】
癌抗原結合ドメイン中の重鎖Fv断片と軽鎖Fv断片、またはT細胞受容体結合ドメイン中の重鎖Fv断片と軽鎖Fv断片が会合するようにCH1領域とCL領域の電荷が制御されている、請求項１、２、又は、７から３２のいずれかに記載のポリペプチド会合体。
【請求項３４】
T細胞受容体複合体結合ドメイン中の重鎖Fv断片に連結されたCH1領域のアミノ酸残基および癌抗原結合ドメイン中の軽鎖Fv断片に連結されたCL領域のアミノ酸残基が互いに同種の電荷を有する、請求項３３に記載のポリペプチド会合体。
【請求項３５】
癌抗原結合ドメイン中の重鎖Fv断片に連結されたCH1領域のアミノ酸残基およびT細胞受容体複合体結合ドメイン中の軽鎖Fv断片に連結されたCL領域のアミノ酸残基が互いに同種の電荷を有する、請求項３３に記載のポリペプチド会合体。
【請求項３６】
T細胞受容体複合体結合ドメイン中の重鎖Fv断片に連結されたCH1領域のアミノ酸残基および癌抗原結合ドメイン中の軽鎖Fv断片に連結されたCL領域のアミノ酸残基が互いに同種の電荷を有し、癌抗原結合ドメイン中の重鎖Fv断片に連結されたCH1領域のアミノ酸残基およびT細胞受容体複合体結合ドメイン中の軽鎖Fv断片に連結されたCL領域のアミノ酸残基が互いに同種の電荷を有する、請求項３３に記載のポリペプチド会合体。
【請求項３７】
T細胞受容体複合体結合ドメイン中の重鎖Fv断片に連結されたCH1領域のアミノ酸残基およびT細胞受容体結合ドメイン中の軽鎖Fv断片に連結されたCL領域のアミノ酸残基が互いに異種の電荷を有する、請求項３４又は３６に記載のポリペプチド会合体。
【請求項３８】
癌抗原結合ドメイン中の重鎖Fv断片に連結されたCH1領域のアミノ酸残基および癌抗原結合ドメイン中の軽鎖Fv断片に連結されたCL領域のアミノ酸残基がともに異種の電荷を有する、請求項３５又は３６に記載のポリペプチド会合体。
【請求項３９】
CH1領域のアミノ酸残基およびCL領域のアミノ酸残基が、以下の（ａ）〜（ｆ）に示される1組又は2組以上のアミノ酸残基の組からなる群：
（ａ）ＣＨ１領域のアミノ酸残基であってEUナンバリング147位のアミノ酸残基、及びＣＬ領域のアミノ酸残基であってEUナンバリング180位のアミノ酸残基、
（ｂ）CH1領域のアミノ酸残基であってEUナンバリング147位のアミノ酸残基、及びCL領域のアミノ酸残基であってEUナンバリング131位のアミノ酸残基
（ｃ）CH1領域のアミノ酸残基であってEUナンバリング147位のアミノ酸残基、及びCL領域のアミノ酸残基であってEUナンバリング164位のアミノ酸残基
（ｄ）CH1領域のアミノ酸残基であってEUナンバリング147位のアミノ酸残基、及びCL領域のアミノ酸残基であってEUナンバリング138位のアミノ酸残基
（ｅ）CH1領域のアミノ酸残基であってEUナンバリング147位のアミノ酸残基、及びCL領域のアミノ酸残基であってEUナンバリング123位のアミノ酸残基
（ｆ）CH1領域のアミノ酸残基であってEUナンバリング175位のアミノ酸残基、及びCL領域のアミノ酸残基であってEUナンバリング160位のアミノ酸残基
より選択され、ＣＨ１領域のアミノ酸残基とＣＬ領域のアミノ酸残基とが互いに異種の電荷を有するアミノ酸残基である、請求項３７又は３８に記載のポリペプチド会合体。
【請求項４０】
さらに、以下の（ｇ）に示されるアミノ酸残基の組を含む群より選択される、請求項３９に記載のポリペプチド会合体：
（ｇ）CH1領域のアミノ酸残基であってEUナンバリング213位のアミノ酸残基、及びCL領域のアミノ酸残基であってEUナンバリング123位のアミノ酸残基。
【請求項４１】
前記異種の電荷を有するアミノ酸残基が、以下の（X）または（Y）のいずれかの群：
（X）グルタミン酸（E）、アスパラギン酸（D）；
（Y）リジン（K）、アルギニン（R）、ヒスチジン（H）；
に含まれるアミノ酸残基から選択される、請求項３９又は４０に記載のポリペプチド会合体。
【請求項４２】
前記異種の電荷を有するアミノ酸残基が、CH1領域のアミノ酸残基であってEUナンバリング175位のアミノ酸残基がＬｙｓ、CL領域のアミノ酸残基であってEUナンバリング180位、131位及び160位のアミノ酸残基がいずれもＧｌｕである、請求項３９から４１のいずれかに記載のポリペプチド会合体。
【請求項４３】
前記異種の電荷を有するアミノ酸残基が、CH1領域のアミノ酸残基であってEUナンバリング147位及び175位のアミノ酸残基がＧｌｕ、CL領域のアミノ酸残基であってEUナンバリング180位、131位及び160位のアミノ酸残基がいずれもＬｙｓである、請求項３９から４１のいずれかに記載のポリペプチド会合体。
【請求項４４】
さらに、CH1領域のアミノ酸残基であってEUナンバリング213位のアミノ酸残基がＧｌｕであり、CL領域のアミノ酸残基であってEUナンバリング123位のアミノ酸残基がＬｙｓである、請求項４３に記載のポリペプチド会合体。
【請求項４５】
Fc領域を構成する二つのポリペプチドの配列が互いに異なる配列を有する、請求項１から４４のいずれかに記載のポリペプチド会合体。
【請求項４６】
Fc領域を構成する二つのポリペプチドの一方のポリペプチドのアミノ酸残基のうちEUナンバリングに従って特定される349位のアミノ酸がシステイン、366位のアミノ酸がトリプトファンに、他方のポリペプチドのアミノ酸残基のうちEUナンバリングに従って特定される356位のアミノ酸がシステイン、366位のアミノ酸がセリンに、368位のアミノ酸がアラニンに、407位のアミノ酸がバリンに変異していることを特徴とする、請求項１から４５のいずれかに記載のポリペプチド会合体。
【請求項４７】
Fc領域を構成する二つのポリペプチドの一方のポリペプチドのアミノ酸残基のうちEUナンバリングに従って特定される356位のアミノ酸がリジンに、他方のポリペプチドのアミノ酸残基のうちEUナンバリングに従って特定される439位のアミノ酸がグルタミン酸に変異し、いずれか一方のポリペプチドのアミノ酸残基のうちEUナンバリングに従って特定される435位のアミノ酸がアルギニンに変異している、請求項１から４６のいずれかに記載のポリペプチド会合体。
【請求項４８】
Fc領域を構成する二つのポリペプチドのカルボキシ末端に存在する配列GKが欠失している、請求項１から４７のいずれかに記載のポリペプチド会合体。
【請求項４９】
請求項１から４８のいずれかに記載のポリペプチド会合体を有効成分として含む医薬組成物。
【請求項５０】
癌抗原非依存的なサイトカインストームを誘導しないか、又は、誘導を低下するための、請求項４９に記載の医薬組成物。
【請求項５１】
細胞傷害誘導治療剤である、請求項４９又は５０に記載の医薬組成物。
【請求項５２】
癌治療剤である、請求項４９から５１のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項５３】
癌が肝癌又は肺癌である、請求項５２に記載の医薬組成物。
【請求項５４】
請求項１から４８のいずれかに記載のポリペプチド会合体をコードするポリヌクレオチド。
【請求項５５】
請求項５４に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項５６】
請求項５５に記載のベクターを保持する細胞。
【請求項５７】
請求項５６に記載の細胞を培養し培養上清からポリペプチド会合体を回収することを含むポリペプチド会合体の製造方法。
【請求項５８】
細胞が真核細胞である、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
真核細胞が哺乳類細胞である、請求項５８に記載の方法。