(57)【要約】ＵＬＢＰファミリーの新規メンバーである、ＵＬＢＰ４を単離し、そして特徴付けている。ＵＬＢＰ４は、免疫エフェクター細胞、特にＮＫ細胞の有用な活性化因子である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号２のアミノ酸３２〜２０７に少なくとも９２％同一のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含んでなり、
該ポリペプチドがＮＫＧ２Ｄに結合可能である、
単離ＵＬＢＰ４タンパク質。
【請求項２】
アミノ酸配列がアルファ−１ドメインおよびアルファ−２ドメインをコードする、請求項１のＵＬＢＰ４タンパク質。
【請求項３】
アミノ酸配列が配列番号２のアミノ酸３２〜２０７に少なくとも９５％同一である、請求項１のＵＬＢＰ４タンパク質。
【請求項４】
アミノ酸配列が配列番号２のアミノ酸３２〜２０７に少なくとも９９％同一である、請求項１のＵＬＢＰ４タンパク質。
【請求項５】
可溶性である、請求項１のＵＬＢＰ４タンパク質。
【請求項６】
配列番号２のアミノ酸３２〜２０７を含んでなる、請求項１のＵＬＢＰ４タンパク質。
【請求項７】
配列番号２のアミノ酸３１〜２１７を含んでなる、請求項６のＵＬＢＰ４タンパク質。
【請求項８】
配列番号２を含んでなる、請求項７のＵＬＢＰ４タンパク質。
【請求項９】
さらに異種ペプチドを含んでなる、請求項１のＵＬＢＰ４タンパク質。
【請求項１０】
異種ペプチドがペプチドタグである、請求項９のＵＬＢＰ４タンパク質。
【請求項１１】
異種ペプチドが、オリゴマー化を促進するペプチド部分である、請求項９のＵＬＢＰ４タンパク質。
【請求項１２】
配列番号１の残基９４〜６２１に少なくとも９５％同一のヌクレオチド配列からなる核酸を含んでなり、該核酸がＮＫＧ２Ｄに結合可能なポリペプチドをコードする、単離ＵＬＢＰ４ポリヌクレオチド。
【請求項１３】
ポリペプチドがアルファ−１ドメインおよびアルファ−２ドメインを含んでなる、請求項１２のＵＬＢＰ４ポリヌクレオチド。
【請求項１４】
ヌクレオチド配列が配列番号１の残基９４〜６２１に少なくとも９９％同一である、請求項１２のＵＬＢＰ４ポリヌクレオチド。
【請求項１５】
配列番号１の残基９４〜６２１を含んでなる、請求項１２のＵＬＢＰ４ポリヌクレオチド。
【請求項１６】
ポリペプチドがさらに異種ペプチドを含んでなる、請求項１２のＵＬＢＰ４ポリヌクレオチド。
【請求項１７】
ポリペプチドが配列番号２のアミノ酸３１〜２１７を含んでなる、請求項１２のＵＬＢＰ４ポリヌクレオチド。
【請求項１８】
請求項１２のＵＬＢＰ４ポリヌクレオチドを含んでなるベクター。
【請求項１９】
請求項１８のベクターを含有する宿主細胞。
【請求項２０】
ＵＬＢＰ４ポリペプチドを産生する方法であって、ＵＬＢＰ４ポリヌクレオチドの発現を可能にする条件下で、請求項１９の宿主細胞を培養することを含んでなる、前記方法。
【請求項２１】
請求項１７のＵＬＢＰ４ポリヌクレオチドを発現するように遺伝子操作された宿主細胞。
【請求項２２】
哺乳動物細胞である、請求項２１の宿主細胞。
【請求項２３】
ＵＬＢＰ４タンパク質を産生する方法であって、ＵＬＢＰ４ポリヌクレオチドの発現を可能にする条件下で、請求項２１の宿主細胞を培養することを含んでなる、前記方法。
【請求項２４】
宿主細胞または培地からＵＬＢＰ４タンパク質を単離することをさらに含んでなる、請求項２３の方法。
【請求項２５】
請求項２３の方法によって産生されるＵＬＢＰ４タンパク質。
【請求項２６】
配列番号２のアミノ酸３２〜２０７に少なくとも９２％同一のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含んでなり、該ポリペプチドがＮＫＧ２Ｄに結合可能である、ＵＬＢＰ４タンパク質をコードする、単離ＵＬＢＰ４ポリヌクレオチド。
【請求項２７】
請求項１のＵＬＢＰ４タンパク質を含んでなる薬剤組成物。
【請求項２８】
請求項５のＵＬＢＰ４タンパク質を含んでなる薬剤組成物。
【請求項２９】
配列番号２からなるタンパク質に特異的に結合する単離抗体。
【請求項３０】
配列番号２のアミノ酸３２〜２０７からなるタンパク質に特異的に結合する、請求項２９の抗体。
【請求項３１】
ヒト抗体またはヒト化抗体である、請求項２９の抗体。
【請求項３２】
細胞毒性剤または放射性剤に融合している、請求項２９の抗体。
【請求項３３】
請求項２９の抗体を含んでなる薬剤組成物。
【請求項３４】
ＮＫＧ２Ｄを発現する細胞を活性化する方法であって、請求項１のＵＬＢＰ４タンパク質の有効量と細胞を合わせることを含んでなる、前記方法。
【請求項３５】
細胞の細胞毒性が増進される、請求項３４の方法。
【請求項３６】
細胞によるサイトカインまたはケモカインの産生が刺激される、請求項３４の方法。
【請求項３７】
細胞がＮＫ細胞である、請求項３４の方法。
【請求項３８】
細胞がＴ細胞である、請求項３４の方法。
【請求項３９】
免疫反応を下方調節する方法であって、療法的に有効な量の請求項２９の抗体を患者に投与することを含んでなる、前記方法。
【請求項４０】
患者が自己免疫疾患を患っている、請求項３９の方法。
【請求項４１】
タンパク質を検出するかまたは定量化する方法であって、請求項２９の抗体とＵＬＢＰ４タンパク質をインキュベーションし、そして抗体−ＵＬＢＰ４タンパク質複合体の量を解析し、それによって、試料中のタンパク質を検出するかまたは定量化することを含んでなる、前記方法。
【請求項４２】
腫瘍増殖を阻害する方法であって、療法的に有効な量の請求項１のＵＬＢＰ４タンパク質を患者に投与することを含んでなる、前記方法。
【請求項４３】
腫瘍除去後、患者に残存する腫瘍細胞の増殖を阻害する方法であって、除去した腫瘍から培養した腫瘍細胞を患者に再導入することを含んでなる、
ここで、請求項１のＵＬＢＰ４タンパク質が、培養した腫瘍細胞の表面上に発現され、そして
培養した腫瘍細胞が非分裂性である
前記方法。
【請求項４４】
請求項１のＵＬＢＰ４タンパク質をコードする核酸が、培養した腫瘍細胞内に導入されている、請求項４３の方法。
【請求項４５】
培養した腫瘍細胞が放射線照射されている、請求項４３の方法。
【請求項４６】
療法的に有効な量の請求項１のＵＬＢＰ４タンパク質を患者に投与することを含んでなる、感染を治療する方法。
【請求項４７】
感染がウイルス感染である、請求項４６の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願へのクロス・リファレンス
本出願は、米国仮出願第６０／３２７，２５２号、２００１年１０月４日提出の優先権を主張する。
【０００２】
発明の分野
本発明は、一般的に、ＵＬ１６結合タンパク質（ＵＬＢＰ）ファミリーの新規メンバー、ＵＬＢＰ４に関する。より具体的には、本発明は、精製され、そして単離されたＵＬＢＰ４ポリペプチド、該ポリペプチドをコードする核酸分子、およびＵＬＢＰポリペプチドを産生し、そして使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
背景
ＵＬＢＰ類（ＵＬ１６結合タンパク質）は、ヒトＭＨＣクラスＩ関連細胞表面タンパク質の新規ファミリーである。ＵＬＢＰ１は、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）糖タンパク質、ＵＬ１６に結合するポリペプチドとして同定された（Ｃｏｓｍａｎら，  ２００１，  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １４：１２３−１３３）。ＵＬＢＰ２およびＵＬＢＰ３が続いて発見され、そしてこれらはＵＬＢＰ１とある程度の相同性を有する（同上）。ＵＬＢＰポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩタンパク質の特徴を、すべてではないが、いくつか共有する。ＵＬＢＰ類はＭＨＣクラスＩタンパク質に特徴的なアルファ−１およびアルファ−２ドメインを有するが、アルファ−３ドメインを欠き、そしてベータ−２ミクログロブリンと会合しない。同上。
【０００４】
ヒトの非古典的ＭＨＣクラスＩタンパク質の別のファミリーのいくつかのメンバー、ＭＩＣ類もまた、ＵＬ１６に結合する。Ｇｒｏｈら（１９９６）ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ９３：１２４４５．ＭＩＣＡおよびＭＩＣＢポリペプチドは、以下に論じるように、ＵＬＢＰ類と類似の特性をいくつか共有する。
【０００５】
ＵＬＢＰ類およびＭＩＣ類は、自然免疫系の重要な成分であるナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の重要な活性化因子である。活性化されたＮＫ細胞は、ウイルスに感染した細胞および新生物細胞などの、ターゲティングされる細胞を認識し、そして溶解させる。
【０００６】
ＮＫ細胞は、標的細胞上のＭＨＣクラスＩ分子に特異的な受容体を介して、細胞標的からのシグナルを認識する。これらのＮＫ細胞受容体には、キラー細胞Ｉｇ様受容体（ＫＩＲ）、Ｌｙ４９、およびＮＫＧ２受容体ファミリーが含まれる。受容体の構造に応じて、特異的リガンドとの結合は、ＮＫ細胞に活性化シグナルまたは阻害性シグナルのいずれかを搬送するであろう。Ｌａｎｉｅｒ（１９９８），  Ａｎｎ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６：３５９．最近まで、阻害性ＮＫ細胞受容体（ＫＩＲ類）に生成されるシグナルは、いかなる活性化受容体に生成されるシグナルより優勢であり、したがってＭＨＣクラスＩレベルが下方制御されている細胞は、「自己喪失（ｍｉｓｓｉｎｇ−ｓｅｌｆ）」仮説にしたがって、殺されると考えられていた。Ｌｊｕｎｇｇｒｅｎら（１９９０），  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  １１：２３７．しかし、活性化リガンドであるＵＬＢＰ類またはＭＩＣ類が、ＮＫ細胞耐性でＭＨＣクラスＩを発現している標的細胞上に発現されると、細胞はＮＫ細胞殺傷に感受性になる。Ｃｏｓｍａｎら、上記；Ｂａｕｅｒら（１９９９），  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８５：７２７−２９．さらに、現在、ＵＬＢＰ類の可溶性組換え型をヒトＮＫ細胞に投与すると、該分子がＮＫ細胞に結合し、そして腫瘍標的に対するＮＫ細胞毒性を刺激することが見出されている。Ｋｕｂｉｎら（２００１），  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ３１：１４２８−３７．ＵＬＢＰ類およびＭＩＣ類は、活性化シグナルをＮＫ細胞に伝達し、この活性化シグナルは、ＭＨＣクラスＩ抗原の阻害性受容体の結合によって生成される負のシグナルを無効にする（ｏｖｅｒｒｉｄｅ）ことが可能である。
【０００７】
ＵＬＢＰ類は、ＮＫ細胞がサイトカインＩＦＮ−ガンマ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ−アルファ、およびＴＮＦ−ベータ、並びにケモカインＭＩＰ１−アルファ、ＭＩＰ１−ベータ、およびＩ−３０９を産生するのを誘導することが見出されている。ＩＬ−１２でＮＫ細胞を同時刺激すると、これらの因子の産生をさらに追加する効果を有する。Ｃｏｓｍａｎら、上記；Ｋｕｂｉｎら、上記。
【０００８】
ＭＩＣＡ発現は、特定の上皮腫瘍で、ＨＣＭＶ感染細胞で、そしてストレスに反応して、上方制御される。Ｇｒｏｈら（１９９６），  ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ９３：１２４４５−５０；Ｇｒｏｈら（１９９９），  ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ９６：６８７９−８４．ＭＩＣ類と対照的に、ＵＬＢＰメッセージは、広範囲の細胞、組織、および腫瘍によって、そして多様な細胞株上で発現される（Ｃｏｓｍａｎら、上記）。したがって、いくつかの種類の細胞が、ＵＬＢＰが仲介するシグナルをＮＫ細胞に潜在的に搬送可能であり、そしてＵＬＢＰが仲介する殺傷の標的でありうる。
【０００９】
ＵＬＢＰ類およびＭＩＣ類のアミノ酸配列には遠い関連しかないが、どちらのタンパク質ファミリーも、ＮＫＧ２Ｄ／ＤＡＰ１０ヘテロ複合体への結合によって、ＮＫ細胞に活性化シグナルを搬送する。ＮＫＧ２Ｄはホモ二量体Ｃ型レクチンであり、ヒトＮＫ細胞上のみでなく、ヒトＣＤ８+αβＴ細胞およびγδＴ細胞上にも発現される。ＮＫＧ２Ｄ発現はまた、ネズミＮＫ細胞上で、そして活性化されたネズミＣＤ８+αβＴ細胞およびマクロファージ上でも報告されている。Ｂａｕｅｒ、上記；Ｄｉｅｆｅｎｂａｃｈら（２０００），  Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １：１１９−１２６．Ｔ細胞では、ＮＫＧ２ＤはＣＤ２８と類似の方式の同時刺激受容体として作用する。Ｇｒｏｈら（２００１），  Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２：２５５．ＮＫＧ２Ｄの細胞質ドメインは短く、そしてシグナル伝達は、ＤＡＰ１０膜アダプタータンパク質との会合を通じて仲介される。Ｗｕら（１９９９），  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８５：７３０−３２．ＤＡＰ１０はＰＩ３−キナーゼのｐ８５サブユニットおよびアダプタータンパク質Ｇｒｂ２に結合可能である。Ｗｕら、上記；Ｃｈａｎｇら（１９９９），  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６３：４６５１−５４．
ＵＬＢＰ１、２、および３ポリペプチドは、組換え発現させたＮＫＧ２Ｄ／ＤＡＰ１０ヘテロ二量体に結合する。抗ＮＫＧ２Ｄ抗体は、ＮＫ細胞へのＵＬＢＰ１、２、および３の結合を遮断する。Ｃｏｓｍａｎら、上記；Ｓｕｔｈｅｒｌａｎｄら（２００２），  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６８（２）：６７１−７９．この証拠によって、ＮＫＧ２Ｄが、初代ヒトＮＫ細胞上に発現される受容体であり、ＵＬＢＰを認識するという結論が裏付けられる。
【００１０】
ＮＫ細胞、Ｔ細胞、またはマクロファージが、ケモカインおよびサイトカインの細胞産生を誘導し、そして標的細胞に対する細胞毒性を誘導する活性を活性化するのに有効な剤は、標的細胞溶解に、特に病原体に感染した細胞および腫瘍細胞の溶解に有用である。ＮＫ細胞、Ｔ細胞、マクロファージを、特にＮＫＧ２Ｄ／ＤＡＰ１０受容体複合体を介して活性化する能力を有する新規リガンドは、例えばＮＫ細胞および／またはＴ細胞殺傷、並びに他のＮＫ細胞および／またはＴ細胞依存療法を誘発することによって、免疫エフェクター細胞からの療法反応を活性化する剤として有用である。ＮＫＧ２Ｄ／ＤＡＰ１０受容体は、γδＴ細胞、ＣＤ８+Ｔ細胞、およびマクロファージ上に発現される。Ｂａｕｅｒら（１９９９），  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８５：７２７−２９；Ｄｉｅｆｅｎｂａｃｈら（２０００），  Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １（２）：１１９−２６．これらの受容体の結合は、Ｔ細胞増殖、細胞毒性、およびサイトカイン産生を刺激することが可能である。Ｇｒｏｈら（２００１），  Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２：２５５；Ｄａｓら（２００１），  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １５：８３−９３．
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
発明の概要
本発明は、ＵＬＢＰタンパク質ファミリーの新規メンバーであるＵＬＢＰ４を提供する。本発明のＵＬＢＰ４ポリペプチドには、配列番号２に示すアミノ酸配列を有するものとともに、配列番号２のアミノ酸配列に実質的なアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドおよびその有用な断片が含まれる。有用な断片には、ＮＫＧ２Ｄに結合可能なものが含まれる。こうしたＵＬＢＰ４ポリペプチドは、ＮＫ細胞およびＴ細胞を含む、ＮＫＧ２Ｄを発現する免疫エフェクター細胞を活性化する能力を有することが可能である。
【００１２】
本発明はまた、ＵＬＢＰ４ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド分子も提供する。本発明のポリヌクレオチド分子には、以下が含まれる：配列番号１に示すような核酸配列を有する分子；高ストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件下（例えば４２℃、６ＸＳＳＣ、５０％ホルムアミド）で、配列番号１の核酸配列にハイブリダイズするもの；配列番号２に実質的な配列同一性を有する、ＵＬＢＰ４タンパク質をコードするもの；および配列番号１の核酸配列と実質的な核酸配列同一性を有するもの。
【００１３】
本発明には、ＵＬＢＰ４ポリペプチドの変異体および誘導体が含まれ、可溶性型および融合タンパク質が含まれる。ＵＬＢＰタンパク質の可溶性型は、水性溶液中で可溶性であり、そして例えば細胞外ドメインを含み、そして膜貫通領域またはＧＰＩアンカーを欠くことが可能である。本発明の融合タンパク質には、所望の機能を与える異種タンパク質またはペプチドに融合したＵＬＢＰ４ポリペプチドが含まれる。異種タンパク質またはペプチドは、例えば、ＵＬＢＰ４ポリペプチドの精製、オリゴマー化、安定、分泌、またはターゲティングを容易にすることが可能である。本発明の融合タンパク質は、例えば、異種タンパク質をコードするポリヌクレオチド分子とインフレームで、ＵＬＢＰ４ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド分子を含有する発現構築物から産生可能である。本発明はまた、本発明のＵＬＢＰ４ポリヌクレオチド分子を含有する、ベクター、プラスミド、発現系、宿主細胞等も提供する。本発明のＵＬＢＰ４ポリペプチドを産生する遺伝子操作法には、既知の方法にしたがった、細胞不含発現系における、細胞宿主における、組織における、そして動物モデルにおけるポリヌクレオチド分子の発現が含まれる。
【００１４】
本発明には、本発明の実質的に精製されたＵＬＢＰポリペプチドおよび薬学的に許容しうるキャリアーを含有する、薬剤組成物がさらに含まれる。こうした薬剤組成物を、例えば、ＮＫ細胞、Ｔ細胞、および活性化マクロファージを含む、ＮＫＧ２Ｄ／ＤＡＰ１０発現細胞の活性を誘導するため；サイトカインおよびケモカインの産生を誘導するため；ＮＫＧ２Ｄ／ＤＡＰ１０発現細胞の細胞毒性を増進することによって、腫瘍細胞、およびウイルスに感染した細胞などの感染した細胞の溶解を誘導するため；そして例えば癌、ウイルス感染、および細菌感染の療法的治療のため、細胞、組織、または患者に投与する。
【００１５】
抗ＵＬＢＰ４抗体もまた提供する。ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＢＬＰ３、および／またはＵＬＢＰ４に結合するものを含む、抗ＵＬＢＰ抗体を用いて、例えばＵＬＢＰ発現細胞に療法剤をターゲティングし、ＵＬＢＰ発現細胞に対して、抗体に依存する細胞仲介型細胞毒性を誘導し、免疫反応を下方調節し、そして／またはＵＬＢＰタンパク質を精製するか、同定するか、または該タンパク質の品質を保証することが可能である。こうした抗体は、多様な特性を有する可能性がある：ＵＬＢＰポリペプチドに結合可能であり；ヒト抗体またはヒト化抗体であることが可能であり；アンタゴニスト性である、すなわちＵＬＢＰタンパク質およびＮＫＧ２Ｄの相互作用によるＮＫＧ２Ｄ発現細胞の活性化を防止または阻害することが可能であり；ＮＫＧ２ＤへのＵＬＢＰタンパク質の結合を阻害する可能性も、また、しない可能性もあり；そして／または細胞毒性剤または放射性剤に融合させることが可能である。
【００１６】
本発明はまた、ＮＫＧ２Ｄ発現細胞活性の解析に；ＮＫＧ２Ｄ受容体結合および活性化の解析に；そして感染および新生物細胞に対する自然免疫系反応に関与するシグナル分子の阻害性／刺激性の影響の解析に有用な、試薬、組成物、および方法も提供する。
【００１７】
本発明の療法には、多くのありうる適用の中で：腫瘍細胞がＵＬＢＰタンパク質を発現している可能性も、またはしていない可能性もある、腫瘍の治療；ウイルス感染および／または細菌感染を含む感染の治療；例えば自己免疫疾患、移植、または炎症性腸疾患を経験している患者における免疫反応の下方調節を含む、多数の適用における、ＵＬＢＰポリペプチドおよび／または抗ＵＬＢＰ抗体の使用が含まれる。
【００１８】
本発明は、腫瘍再増殖に対して患者に予防接種する方法であって：腫瘍を外科的に除去し；除去した腫瘍から腫瘍細胞を培養し；培養した腫瘍細胞に、請求項１のＵＬＢＰ４タンパク質をコードする核酸をトランスフェクションし；培養した腫瘍細胞に放射線照射し；そして放射線照射したトランスフェクション腫瘍細胞を患者に再導入することを含む、前記方法をさらに提供する。
【００１９】
本発明のこれらおよび多様な他の特徴および利点は、以下の詳細な説明を読み、そして付随する請求項を再検討すれば明らかであろう。
配列の簡単な説明
配列番号１はＵＬＢＰ４をコードする核酸配列である。
【００２０】
配列番号２は配列番号１にコードされるアミノ酸配列である。
配列番号３はＵＬＢＰ１のアミノ酸配列である。
配列番号４はＵＬＢＰ２のアミノ酸配列である。
【００２１】
配列番号５はＵＬＢＰ３のアミノ酸配列である。
配列番号６はＷＯ  ９９３１２３６に開示されるｃＤＮＡに関して予測されるアミノ酸配列である。
【００２２】
配列番号７は核酸プライマーである。
配列番号８は核酸プライマーである。
配列番号９は配列番号１の３’セグメントである。
【課題を解決するための手段】
【００２３】
発明の詳細な説明
定義：
以下の定義は、本明細書に頻繁に使用される特定の用語の理解を容易にするために提供され、そして本開示の範囲を限定することを意味しない。
【００２４】
ＮＫ細胞またはＴ細胞などの免疫エフェクター細胞の「活性化」は、炎症反応に関与するように細胞を刺激することを意味し、該反応には、例えば標的細胞の溶解（または免疫エフェクター細胞の細胞毒性の増進）並びに／あるいは炎症性サイトカインおよび／またはケモカインの分泌が含まれる可能性がある。免疫エフェクター細胞は、「ｉｎ  ｖｉｔｒｏ」（すなわち細胞培養中）、「ｉｎ  ｖｉｖｏ」（すなわち細胞が生存哺乳動物の一部である間）、および／または「ｅｘ  ｖｉｖｏ」（すなわち培養中に活性化されるが、後に生存哺乳動物に戻される）で活性化されることが可能である。
【００２５】
「Ａｋｔ」は、細胞内で抗アポトーシス・シグナル伝達に関与するセリン／スレオニン・プロテインキナーゼを指す。Ｂｌｕｍｅ−Ｊｅｎｓｅｎら（２００１），  Ｎａｔｕｒｅ  ４１１（６８３５）：３５５−３６５．セリン／スレオニン・プロテインキナーゼ活性を測定する、実例となる技術は、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ａｕｓｕｂｅｌら監修（Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  ニューヨーク（１９８８）および四半期の改訂）に示される。Ａｋｔの活性化は、タンパク質の活性化されたリン酸化型に関してイムノブロットすることによって、アッセイ可能である。Ａｋｔに対する抗体（Ｓｅｒ４７３）はＣｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（マサチューセッツ州ビバリー）から入手可能である。さらに、Ａｋｔの活性化を評価するためのキットがＵｐｓｔａｔｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ニューヨーク州レークプラシッド）から入手可能である。
【００２６】
「アミノ酸」は、２０の天然存在アミノ酸いずれかとともに、修飾アミノ酸配列いずれかも指す。修飾には、翻訳後プロセシングなどの天然プロセスが含まれることも可能であるし、または当該技術分野に知られる化学的修飾が含まれることも可能である。修飾には、限定されるわけではないが：リン酸化、ユビキチン化、アセチル化、アミド化、グリコシル化、フラビンの共有結合、ＡＤＰリボシル化、架橋、ヨウ素化、メチル化等が含まれる。
【００２７】
「抗体」は、本明細書において、最も広い意味で用いられ、そして具体的に、天然および遺伝子操作、モノクローナルおよびポリクローナル、一本鎖および二本鎖、キメラ、ヒト化、二特異性、ディアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、および抗原結合活性を保持するこれらの断片が含まれる。断片にはＦａｂ、ＦｃおよびＦｖが含まれる。
【００２８】
「アンチセンス」は、標的「センス」ポリヌクレオチド配列に相補的なポリヌクレオチド配列を指す。
「細胞ターゲティング部分」は、細胞にポリペプチドをターゲティングするのに用いる、天然存在であるか、または遺伝子操作したか、いずれかのポリペプチド上のシグナルいずれかを指す。ターゲティング部分には、抗体および受容体リガンドなどの、細胞抗原または受容体に結合するリガンドが含まれる。リガンド／受容体対の具体的な例には、上皮増殖因子（ＥＧＦ）およびＥＧＦ受容体、抗ＰＳ１抗体および前立腺癌細胞上に存在するＰＳ１抗原などが含まれる。多くのこうした細胞特異的リガンド／受容体対が知られ、そして本発明において、例えばＵＬＢＰポリペプチドを標的細胞に搬送するため、融合タンパク質において有用である。
【００２９】
「相補的」または「相補性」は、ポリヌクレオチド分子中のポリヌクレオチドが、第二のポリヌクレオチド分子中の別のポリヌクレオチドと塩基対形成する能力を指す。例えば、配列Ａ−Ｇ−Ｔは、配列Ｔ−Ｃ−Ａに相補的である。相補性は、部分的であることが可能であり、この場合、塩基対形成にしたがって、ポリヌクレオチドのいくつかのみがマッチし、あるいは、相補性は完全であることも可能であり、この場合、塩基対形成にしたがって、ポリヌクレオチドのすべてがマッチする。
【００３０】
「発現」は、宿主細胞内で起こる転写を指し、そして場合によって、翻訳を指す。宿主細胞におけるポリヌクレオチド分子の発現レベルは、細胞内に存在する、対応するｍＲＮＡの量、または宿主細胞に産生される、ＤＮＡ分子がコードするタンパク質の量のいずれかに基づいて測定可能である（Ｓａｍｂｒｏｏｋら，  １９８９，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  １８．１−１８．８８）。
【００３１】
「Ｆｃ」または「Ｆｃポリペプチド」は、Ｆｃ領域のＣHドメインを１以上含有する抗体のＦｃ領域の天然型および突然変異型両方を指し、二量体化促進ヒンジ領域を含有するＦｃポリペプチドの一部切除（ｔｒｕｎｃａｔｅｄ）型が含まれる。例えば、本発明の融合タンパク質には、限定されるわけではないが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、およびＩｇＧ３抗体を含む、ヒトＩｇＧ抗体由来のＦｃポリペプチドが使用可能である。ＰＣＴ出願ＷＯ  ９３／１０１５１（本明細書に援用される）に記載される１つの適切なＦｃポリペプチドは、ヒトＩｇＧ１抗体のＦｃ領域のＮ末端ヒンジ領域から天然Ｃ末端に渡る一本鎖ポリペプチドである。別の有用なＦｃポリペプチドは、米国特許第５，４５７，０３５号およびＢａｕｍら（（１９９４），  ＥＭＢＯ  Ｊ．  １３：３９９２−４００１）に記載されるＦｃ突然変異タンパク質（ｍｕｔｅｉｎ）である。この突然変異タンパク質のアミノ酸配列は、アミノ酸１９がＬｅｕからＡｌａに変化し、アミノ酸２０がＬｅｕからＧｌｕに変化し、そしてアミノ酸２２がＧｌｙからＡｌａに変化していることを除けば、ＷＯ  ９３／１０１５１に示される天然Ｆｃ配列のものと同一である。該突然変異タンパク質は、Ｆｃ受容体に対し、減少した親和性を示す。
【００３２】
「融合タンパク質」は、第二の異種タンパク質に連結された第一のタンパク質を指す。好ましくは、異種タンパク質は、第一のタンパク質および第二のタンパク質がインフレームで発現されるように、遺伝子操作技術を介して融合される。異種タンパク質は、融合タンパク質に、所望の特性、例えば検出シグナル、細胞におけるタンパク質の安定性増進または安定化、タンパク質のオリゴマー化の促進、融合タンパク質精製の促進、所望の細胞または組織へのターゲティング、あるいは例えば免疫エフェクター細胞の活性化などのさらなる生物学的活性を与えることが可能である。本発明の融合タンパク質に有用な異種タンパク質の例には、免疫グロブリン分子およびその一部、ヒスチジンタグ（６−Ｈｉｓ）などのペプチドタグ、ロイシンジッパー、サイトカイン、増殖因子、細胞ターゲティング部分、シグナルペプチド、療法剤等が含まれる。
【００３３】
「遺伝子操作された」は、標的タンパク質を、上昇したレベルで、低下したレベルで、または突然変異型で発現する真核宿主細胞を生成するのに用いられる組換えＤＮＡ法またはＲＮＡ法いずれかを指す。言い換えると、組換えポリヌクレオチド分子が宿主細胞に導入され、それによって所望のタンパク質の発現を改変するように細胞が改変されている。宿主細胞を遺伝子操作する方法およびベクターが当該技術分野に周知であり；例えば多様な技術が、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ａｕｓｕｂｅｌら監修（Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  ニューヨーク，  １９８８，  および四半期の改訂）に例示されている。遺伝子操作技術には、限定されるわけではないが、発現ベクター、ターゲティング化相同組換えおよび遺伝子活性化（例えばＣｈａｐｐｅｌに対する米国特許第５，２７２，０７１号を参照されたい）および操作した転写因子によるトランス活性化（例えばＳｅｇａｌら，  １９９９，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９６（６）：２７５８−６３を参照されたい）が含まれる。
【００３４】
「相同性」は、ポリヌクレオチド分子間のハイブリダイゼーションの有効性および強度に対して有意な影響を有する、ポリヌクレオチド間の相補性の度合いを指す。
単数または複数の「宿主細胞」は、異種ポリヌクレオチド分子を発現している細胞を指す。本発明の宿主細胞は、ＵＬＢＰ４をコードするポリヌクレオチドを発現するか、または細胞がＵＬＢＰ４に反応するのを可能にする受容体を発現する。本発明で有用な適切な宿主細胞の例には、限定されるわけではないが、昆虫および哺乳動物細胞が含まれる。こうした細胞の特定の例には、ＳＦ９昆虫細胞（ＳｕｍｍｅｒｓおよびＳｍｉｔｈ，  １９８７，  Ｔｅｘａｓ  Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ  Ｓｔａｔｉｏｎ  Ｂｕｌｌｅｔｉｎ，  １５５５）、ヒト胚性腎細胞（２９３細胞）、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（Ｐｕｃｋら，  １９５８，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ６０：１２７５−１２８１）、ヒト子宮頚癌細胞（ＨＥＬＡ）（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ２）、ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２）（ＡＴＣＣ  ＨＢ８０６５）、ヒト乳癌細胞（ＭＣＦ−７）（ＡＴＣＣ  ＨＴＢ２２）、ヒト結腸癌細胞（ＤＬＤ−１）（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ２２１）、Ｄａｕｄｉ細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２１３）、ＣＶ−１細胞等が含まれる。
【００３５】
「ハイブリダイゼーション」は、アニーリング期中の相補的ポリヌクレオチドの対形成を指す。２つのポリヌクレオチド分子間のハイブリダイゼーション強度は、２つの分子間の相同性、関与する条件のストリンジェンシー、形成されるハイブリッドの融解温度、およびポリヌクレオチド内のＧ：Ｃ比によって影響を受ける。
【００３６】
ハイブリダイゼーション条件の選択に影響を与える基本的なパラメーターおよび適切な条件を考案するための手引きは、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，  Ｊ．，  Ｅ．Ｆ．  Ｆｒｉｔｓｃｈ，  およびＴ．  Ｍａｎｉａｔｉｓ（（１９８９），  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  ニューヨーク州コールドスプリングハーバー，  第９章および第１１章）およびＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．  Ａｕｓｕｂｅｌら監修，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ，  セクション２．１０および６．３−６．４）に示されている。これらのパラメーターおよび適切な条件は、例えばポリヌクレオチドの長さおよび／または塩基組成に基づいて、当業者によって容易に決定可能である。ハイブリダイゼーション条件は、中程度のまたは高いストリンジェンシーのものであることが可能である。例えば、ストリンジェントな条件には、５ｘＳＳＣ、０．５％  ＳＤＳ、１．０ｍＭ  ＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）を含有する前洗浄溶液、約５０％ホルムアミド、６ｘＳＳＣのハイブリダイゼーション緩衝液、およびＲＮＡ−ＲＮＡハイブリダイゼーションには、約５５℃のハイブリダイゼーション温度（またはＤＮＡ−ＤＮＡハイブリダイゼーションには、約４２℃のハイブリダイゼーション温度を伴う、約５０％ホルムアミド）、並びに約６０℃、０．５ｘＳＳＣ、０．１％  ＳＤＳ中の洗浄条件が含まれることが可能である。一般的に、高ストリンジェントな条件は、上記のようなハイブリダイゼーション条件であるが、およそ６８℃、０．２ｘＳＳＣ、０．１％  ＳＤＳでの洗浄を伴うと定義される。ハイブリダイゼーションおよび洗浄緩衝液において、ＳＳＰＥ（１ｘＳＳＰＥは、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  ＮａＨ2ＰＯ4、および１．２５ｍＭ  ＥＤＴＡ，ｐＨ７．４である）をＳＳＣ（１ｘＳＳＣは、０．１５Ｍ  ＮａＣｌおよび１５ｍＭクエン酸ナトリウムである）の代わりに使用することが可能である；洗浄はハイブリダイゼーション完了後、１５分間行う。当業者に知られるように、そして以下にさらに記載するように、必要に応じて、所望の度合いの反応および二重鎖安定性を達成するよう、洗浄温度および洗浄塩濃度を調整可能であることを理解すべきである。
【００３７】
核酸が、未知の配列の標的ポリヌクレオチドにハイブリダイズする場合。既知の配列の核酸がハイブリダイズする場合、ハイブリッド長は、核酸の配列を並列し、そして最適配列相補性の単数または複数の領域を同定することによって、決定可能である。長さ５０塩基対未満であると予測されるハイブリッドのハイブリダイゼーション温度は、該ハイブリッドの融解温度（Ｔｍ）より５〜１２℃低くあるべきであり、Ｔｍは、以下の等式にしたがって決定する。長さ１８塩基対未満のハイブリッドに関しては、Ｔｍ（℃）＝２（Ａ＋Ｔ塩基数）＋４（Ｇ＋Ｃ塩基数）である。長さ１８塩基対を越えるハイブリッドに関しては、Ｔｍ（℃）＝８１．５＋１６．６（ｌｏｇ10［Ｎａ＋］）＋０．４１（％Ｇ＋Ｃ）−（６００／Ｎ）であり、式中、Ｎはハイブリッド中の塩基数であり、そして［Ｎａ＋］はハイブリダイゼーション緩衝液中のナトリウムイオン濃度である（１ｘＳＳＣの［Ｎａ＋］＝０．１６５Ｍ）。
【００３８】
「同一性」は、核酸またはアミノ酸分子の対間の比較を指す。配列同一性を決定する方法が知られる。典型的な好ましいコンピュータプログラムは、遺伝学コンピュータグループ（ＧＣＧ；ウィスコンシン州マディソン）ウィスコンシンパッケージ、バージョン１０．０プログラム、「ＧＡＰ」（Ｄｅｖｅｒｅｕｘら，  １９８４，  Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  １２：３８７；ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ，  １９８１，  Ａｄｖ．  Ａｐｐｌ．  Ｍａｔｈ．  ２：４８２−４８９）である。「ＧＡＰ」プログラムの好ましいデフォルトパラメーターには：（１）ヌクレオチドに関する単一（ｕｎａｒｙ）比較マトリックス（同一に対し１および非同一に対し０の値を含む）のＧＣＧ実行、およびＳｃｈｗａｒｔｚおよびＤａｙｈｏｆｆ監修，  Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，  ｐｐ．３５３−３５８，  １９７９に記載されるような、ＧｒｉｂｓｋｏｖおよびＢｕｒｇｅｓｓ，  Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  １４：６７４５，  １９８６の加重アミノ酸比較マトリックス；または他の匹敵する比較マトリックス；（２）アミノ酸配列の各ギャップに対する３０のペナルティおよび各ギャップ中の各記号に対しさらに１のペナルティ、またはヌクレオチド配列の各ギャップに対する５０のペナルティおよび各ギャップ中の各記号に対しさらに３のペナルティ；（３）末端ギャップに対するペナルティなし；および（４）長いギャップに対する最大ペナルティなし、が含まれる。
【００３９】
「単離された」は、通常会合している、少なくとも１つの混入物質（ポリヌクレオチドまたはポリペプチド）から分離されているポリヌクレオチドまたはポリペプチドを指す。例えば、単離ポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、天然に見られるものとは異なる背景にあるか、または異なる形である。
【００４０】
「ＪＡＫ２」は、とりわけ、サイトカイン受容体サブユニットと複合体を形成し、転写のシグナル伝達物質および活性化因子（ＳＴＡＴ）のシグナル伝達経路を調節し、そして標的細胞内の代謝事象を制御するのに関与することが知られる、チロシンキナーゼのヤヌス・ファミリー（Ｊａｎｕｓ  ｆａｍｉｌｙ）のメンバーを指す（Ｃａｒｔｅｒ−Ｓｕら，  １９９８，  Ｒｅｃｅｎｔ  Ｐｒｏｇ．  Ｈｏｒｍ．  Ｒｅｓ．  ５３：６１−８３）。チロシンキナーゼ活性を測定するための実例となる技術は、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ａｕｓｕｂｅｌら監修（Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  ニューヨーク，  １９８８，  および四半期の改訂）に見られる。
【００４１】
「核酸配列」は、デオキシリボ核酸の鎖に沿ったデオキシリボヌクレオチドの順序または配列を指す。これらのデオキシリボヌクレオチドの順序は、ポリペプチド鎖に沿ったアミノ酸の順序を決定する。したがって、デオキシリボヌクレオチド配列は、アミノ酸配列をコードする。
【００４２】
「ポリヌクレオチド」は、ヌクレオチドの直鎖配列を指す。ヌクレオチドは、リボヌクレオチド、またはデオキシリボヌクレオチド、あるいは両方の混合物であることが可能である。本発明の背景におけるポリヌクレオチドの例には、一本鎖および二本鎖ＤＮＡ、一本鎖または二本鎖ＲＮＡ、並びに一本鎖および二本鎖ＤＮＡおよびＲＮＡの混合物を有するハイブリッド分子が含まれる。本発明のポリヌクレオチドは、１以上の修飾ヌクレオチドを含有することが可能である。
【００４３】
「タンパク質」、「ペプチド」、および「ポリペプチド」は交換可能に用いられ、アミノ酸ポリマー、あるいは２以上の相互作用するかまたは結合するアミノ酸ポリマーの組を示す。
【００４４】
「精製する」、または「精製された」は、混入タンパク質を少なくとも５〜１０％含まない標的タンパク質を指す。混入タンパク質からのタンパク質の精製は、硫酸アンモニウムまたはエタノール沈殿、陰イオンまたは陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、およびレクチンクロマトグラフィーを含む、既知の技術を用いて達成可能である。多様なタンパク質精製技術がＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ａｕｓｕｂｅｌら監修（Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  ニューヨーク，  １９８８，  および四半期の改訂）に例示される。
【００４５】
「選択可能マーカー」は、組換えＤＮＡまたはＲＮＡ事象を経験している細胞を同定するマーカーを指す。選択可能マーカーには、例えば、メトトレキセートに対する耐性を与えるＤＨＦＲタンパク質（Ｗｉｇｌｅｒら（１９８０），  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ７７：３５６７−３５７０；Ｏ’Ｈａｒｅら（１９８１），  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，  ７８：１５２７−１５３１）、ミコフェノール酸に対する耐性を与えるＧＰＴタンパク質（Ｍｕｌｌｉｇａｎ  ＆  Ｂｅｒｇ（１９８１），  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，  ７８：２０７２−２０７６）、アミノ配糖体Ｇ−４１８に対する耐性を与えるネオマイシン耐性マーカー（Ｃａｌｂｅｒｒｅ−Ｇａｒａｐｉｎら（１９８１），  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  １５０：１−１４）、ハイグロマイシンに対する耐性を与えるＨｙｇｒｏタンパク質（Ｓａｎｔｅｒｒｅら（１９８４），  Ｇｅｎｅ  ３０：１４７−１５６）、およびゼオシンTM耐性遺伝子マーカー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）などの代謝拮抗剤耐性をコードする遺伝子が含まれる。さらに、単純疱疹ウイルス・チミジンキナーゼ、ヒポキサンチン−グアニン・ホスホリボシルトランスフェラーゼおよびアデニン・ホスホリボシルトランスフェラーゼ遺伝子を、それぞれ、ｔｋ-、ｈｇｐｒｔ-およびａｐｒｔ-細胞で使用することが可能である。
【００４６】
「ＳＴＡＴ５」は、ＪＡＫキナーゼによって活性化され、核に転位置し、そして特定のＤＮＡ部位への結合によって転写制御に関与することが知られる転写因子の、転写のシグナル伝達物質および活性化因子（ＳＴＡＴ）ファミリーのメンバーを指す。ＳＴＡＴ５活性を測定するための実例となる技術は、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ａｕｓｕｂｅｌら監修（Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  ニューヨーク，  １９８８，  および四半期の改訂）に例示されるような、ＤＮＡ結合アッセイ、ＳＴＡＴ５依存レポーターアッセイ、ＳＴＡＴ５の32Ｐ標識等を含む、いくつかの周知の技術のいずれかを通じて達成可能である。
【００４７】
「ストリンジェンシー」は、ポリヌクレオチド間のハイブリダイゼーションが起こる条件（温度、イオン強度、溶媒など）を指す。高ストリンジェンシー条件下で行われるハイブリダイゼーション反応は、高い度合いの相補的塩基対形成（８５％〜１００％同一性）を有するポリヌクレオチド分子間でのみ起こるであろうものである。中程度のストリンジェンシー条件下で行われるハイブリダイゼーション反応は、中程度の度合いの相補的塩基対形成（５０％〜８４％同一性）を有するポリヌクレオチド分子間で起こるであろうものである（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，  Ｊ．，  Ｅ．Ｆ．  Ｆｒｉｔｓｃｈ，  およびＴ．  Ｍａｎｉａｔｉｓ，  １９８９，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  ニューヨーク州コールドスプリングハーバー，  第９章および第１１章；およびＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｆ．Ｍ．  Ａｕｓｕｂｅｌら監修，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ，  セクション２．１０および６．３−６．４）。
【００４８】
「ＵＬＢＰ」は、Ｎ末端シグナル配列、中央に位置するアルファ−１およびアルファ−２ドメイン、並びにＣ末端細胞膜会合ドメインを含む特徴的な編成を有するＭＨＣクラスＩ関連分子のファミリーを指す（表３）。ＵＬＢＰファミリーメンバーは、エフェクター細胞受容体、ＮＫＧ２Ｄ／ＤＡＰ１０のリガンドであり、そしてＮＫ細胞を活性化することが知られる。本明細書において、「ＵＬＢＰポリペプチド」には、活性変異体およびＮＫ細胞活性化活性を有する断片が含まれる。ＵＬＢＰファミリーメンバーは、ＪＡＫ２、ＳＴＡＴ５、ＥＲＫ  ＭＡＰキナーゼ、およびＡｋｔ／ＰＫＢを活性化することによって、ＮＫ細胞に対するその影響の少なくともある程度を誘発するようである（Ｓｕｔｈｅｒｌａｎｄら，  Ｊｕｎｅ  ２００１，  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｒｅｖ．  １８１：１８５−１９２）。
【００４９】
「変異体」は本明細書において、参照分子と異なるポリヌクレオチドまたはポリペプチド分子を意味する。変異体には、参照ポリペプチドと比較した際、生じる変異体ポリペプチド中にアミノ酸置換、欠失、融合、または一部切除を生じるヌクレオチド変化が含まれることが可能である。本明細書において、「スプライシング変異体」は、前駆体ポリヌクレオチドの選択的スプライシングを通じて産生されて、前駆体ポリヌクレオチド配列の別個の部分が除去された転写物を生じるポリヌクレオチドを指す。
【００５０】
「ベクター」、「染色体外ベクター」または「発現ベクター」は、第二のポリヌクレオチド分子、例えば外来（ｆｏｒｅｉｇｎ）ポリヌクレオチドまたは異種ポリヌクレオチドが挿入されていることも可能である、通常、二本鎖の、第一のポリヌクレオチド分子を指す。異種ポリヌクレオチド分子は、宿主細胞中に天然に見られる可能性もあるし、または見られない可能性もあり、そして例えば宿主ゲノムに天然に存在する異種ポリヌクレオチドの１以上のさらなるコピーであることも可能である。ベクターは、外来ポリヌクレオチド分子を適切な宿主細胞に輸送するために適応させる。ひとたび宿主細胞に入ると、ベクターは、宿主細胞染色体に組み込み可能でありうる。ベクターは、場合によって、組み込まれたポリヌクレオチド分子とともに、トランスフェクションＤＮＡからｍＲＮＡの転写を促進する要素およびｍＲＮＡからタンパク質の翻訳を促進する要素を含有する、細胞を選択するためのさらなる要素を含有することが可能である。本発明の方法に有用なベクターの例には、限定されるわけではないが、プラスミド、バクテリオファージ、コスミド、レトロウイルス、および人工染色体が含まれる。
【００５１】
ＵＬＢＰファミリー
ＵＬＢＰリガンドファミリーは、腫瘍組織および免疫組織を含む、広い範囲の細胞、組織、および腫瘍上に発現される、細胞表面受容体群である（Ｃｏｓｍａｎら、２００１、上記）。ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、およびＵＬＢＰ３は、５５％〜６０％のアミノ酸配列同一性を共有し、そして他のＭＨＣクラスＩ関連細胞表面タンパク質同様、アルファ−１およびアルファ−２構造ドメインを所持する。伝統的なＭＨＣクラスＩ関連細胞表面タンパク質とは異なり、ＵＬＢＰは、アルファ−３ドメインを欠き、そしてしたがって、ベータ−２ミクログロブリンと会合しない。膜を貫通して結合したＭＨＣクラスＩタンパク質と比較すると、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、およびＵＬＢＰ３は各々、細胞膜にグリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）連結されている。ＵＬＢＰは、免疫エフェクター細胞活性、特にＮＫ細胞およびＴ細胞活性の修飾に関与する、ＭＨＣクラスＩ関連リガンドファミリーである。ＵＬＢＰタンパク質は、すべてではないが、多くの腫瘍細胞株および多様な組織由来の細胞上に発現されている。Ｃｏｓｍａｎら、上記。感染によって、ＮＫＧ２Ｄリガンドの発現が上方制御されうる。例えば、細菌感染によって、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＭＩＣＡの発現が上方制御されうる。Ｄａｓら（２００１），  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １５：８３−９３；Ｔｉｅｎｇら（２００２），  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ９９（５）：２９７７−８２．ＵＬＢＰ類は、ＭＨＣクラスＩ抗原に類似であるが、非伝統的ＭＨＣクラスＩ関連抗原、ＭＩＣＡおよびＭＩＣＢに類似の、免疫監視における機能を有する。可溶性三量体型のＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、またはＵＬＢＰ３でＮＫ細胞を処理すると、ＮＫ細胞によるＩＦＮ−ガンマ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ−アルファ、ＴＮＦ−ベータ、並びにケモカインＭＩＰ１−アルファ、ＭＩＰ１−ベータ、およびＩ−３０９の産生が刺激される（Ｃｏｓｍａｎ（２００１），  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １４：１２３−１３３、Ｋｕｂｉｎら、上記）。さらに、ＵＬＢＰファミリーメンバーとＩＬ−１２を組み合わせると、ＧＭ−ＣＳＦおよびＴＮＦ−ベータ産生をさらに追加する効果、並びにＩ−３０９産生に対する強い相乗効果を有する。
【００５２】
ＵＬＢＰファミリーメンバーは、ＮＫ細胞に優勢な刺激シグナルを伝達し、ＮＫが発現するＫＩＲ類へのＭＨＣクラスＩの結合によって生成される阻害性シグナルを克服する。ＵＬＢＰファミリーメンバーは、ＮＫ細胞活性化の中心的な作用因子であり、そしてＮＫＧ２Ｄ／ＤＡＰ１０受容体複合体を有する他の免疫細胞、例えばＴ細胞および活性化マクロファージを刺激するのに関与する。最終的に、ＵＬＢＰタンパク質は、免疫エフェクター細胞、例えばＮＫ細胞を刺激して、細菌、ウイルスに感染した細胞、および腫瘍細胞を排除するとともに、ＮＫ細胞を刺激して、他の免疫系のエフェクター細胞を活性化するサイトカインおよびケモカインを産生することを標的とする療法および治療に有用である。例えば抗ＵＬＢＰ抗体、非活性ＵＬＢＰ断片、ＵＬＢＰオリゴマー、またはＵＬＢＰの阻害性類似体（ａｎａｌｏｇ）による、ＵＬＢＰ発現またはＮＫＧ２Ｄ受容体の結合の阻害は、ＮＫ細胞活性化を阻害可能である。ＮＫ細胞活性化の阻害は、例えば臓器移植に対する免疫反応を減少させるのに、そして自己免疫疾患の治療に療法的に有用である。
【００５３】
ＵＬＢＰ４
以下の実施例により完全に記載されるように、新規ＵＬＢＰファミリーメンバーであるＵＬＢＰ４が、今や、単離され、そして精製されてた。ＵＬＢＰ４の予測されるアミノ酸配列（配列番号２）は、ＵＬＢＰタンパク質ファミリーに特徴的な編成を有する。ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、およびＵＬＢＰ３同様、ＵＬＢＰ４ポリペプチドは、シグナル配列、中央に位置するアルファ−１およびアルファ−２ドメイン、並びにＣ末端膜会合モチーフを所持する。天然ＵＬＢＰ４は、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、およびＵＬＢＰ３に見られるＧＰＩドメインでなく、膜貫通結合ドメインを含有する。ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、およびＵＬＢＰ３同様、ＵＬＢＰ４ポリペプチドは、伝統的なＭＨＣクラスＩ分子に見られるアルファ−３ドメインを欠く。ＵＬＢＰ４は、以下に示すように、既知のＵＬＢＰリガンドにも結合する（実施例３を参照されたい）。これらの構造的特徴および機能的特徴によって、ＵＬＢＰ４はＵＬＢＰタンパク質ファミリーメンバーと同定される。
【００５４】
ＵＬＢＰポリペプチドは、多くの標的細胞上に発現され、そしてＮＫ細胞とともに、ＣＤ８+αβＴ細胞およびγδＴ細胞などの他の免疫系のエフェクター細胞上に位置するＮＫＧ２Ｄ／ＤＡＰ１０受容体複合体に結合し、そして該複合体を活性化する。ＮＫＧ２Ｄ／ＤＡＰ１０複合体にＵＬＢＰが結合すると、ＪＡＫ２、ＳＴＡＴ５、ＥＲＫ  ＭＡＰキナーゼ、およびＡｋｔシグナル伝達経路が活性化される（Ｓｕｔｈｅｒｌａｎｄら（２００１）、上記）。これらの経路の活性化の結果、ＮＫ細胞が活性化される。最終的に、ＵＬＰＢがＮＫ細胞を活性化すると、ＵＬＢＰ発現細胞に対するＮＫ細胞の細胞毒性が刺激される。さらに、ＵＬＢＰがＮＫ細胞を刺激してサイトカインおよびケモカインを産生させ、これによってウイルス感染に対する免疫反応および腫瘍監視が増強される（Ｃｏｓｍａｎら、２００１、上記）。ＵＬＢＰファミリーの他のメンバー同様、本発明の新規ＵＬＢＰ４は、ＮＫ細胞刺激性受容体複合体であるＮＫＧ２Ｄ／ＤＡＰ１０に結合する。ＵＬＢＰ４は、ＮＫ細胞、Ｔ細胞、およびマクロファージを含む、免疫エフェクター細胞上のＮＫＧ２Ｄ受容体への結合を介して、エフェクター細胞に刺激シグナルを提供して、サイトカインおよびケモカインの産生を誘導し、そして特に腫瘍細胞および感染した細胞の、標的細胞殺傷を誘導する。
【００５５】
ＵＬＢＰ４ポリペプチド
本発明のＵＬＢＰ４ポリペプチドには、以下の実施例１に示すようなアミノ酸配列（配列番号２）を有する単離ポリペプチドとともに、配列番号２のアミノ酸配列に実質的な同一性を有し、そしてＵＬ１６および／またはＮＫＧ２Ｄ受容体に対する結合などの、ＵＬＢＰタンパク質の機能活性のいずれかを保持する、断片を含む変異体および誘導体が含まれる。ＵＬＢＰポリペプチド活性は、例えば、以下の実施例３に記載するように、ＵＬＢＰの変異体、誘導体、または断片を結合アッセイに供することによって、容易に測定可能である。
【００５６】
以下の実施例２、表３に示すように、単離ＵＬＢＰ４ポリペプチドには、Ｍｅｔ１で始まり、そしてＡｌａ２３〜Ｓｅｒ３２の範囲のアミノ酸、場合によってＧｌｙ３０で終結すると予測されるアミノ酸配列を有する、シグナルペプチドとして機能する、Ｎ末端疎水性領域が含まれる。タンパク質の残りは、配列番号２のほぼＨｉｓ３１、または配列番号２のＬｅｕ２４〜Ｓｅｒ３２の別のアミノ酸で始まり、そしてほぼＡｓｐ１１６まで伸長するアミノ酸配列を有するアルファ−１ドメイン；その後、ほぼアミノ酸Ｐｒｏ１１７で始まり、そしてほぼＴｈｒ２０７まで伸長するアルファ−２ドメイン；そしてその後、ほぼアミノ酸Ｔｒｐ２２７で始まり、そしてほぼアミノ酸Ｔｒｐ２４８まで伸長する膜貫通ドメイン、その後、Ｃ末端テールを含有する。ＵＬＢＰ１〜３は、予測される膜貫通ドメインを持たないが、その代わり、結合したＧＰＩを介して、これらの分子を細胞膜に連結する、グリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカーシグナルモチーフを有する。ＵＬＢＰ４の誘導体には、例えば、グリコシル基、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）基、脂質、リン酸、アセチル基等の他の化学部分との共有結合または凝集結合によって修飾されたＵＬＢＰ４ポリペプチド、および末端欠失を有するＵＬＢＰ４ポリペプチドが含まれる。
【００５７】
本発明のＵＬＢＰ４ポリペプチドのアミノ酸配列は、上記の表１および配列番号２に示すＵＬＢＰ４アミノ酸配列に、場合によって、少なくとも約９２％同一、少なくとも約９３％同一、少なくとも約９４％同一、少なくとも約９５％同一、少なくとも約９６％同一、少なくとも約９７％同一、少なくとも約９８％同一、または少なくとも約９９％同一である。相同性（上記定義を参照されたい）とも称する同一性パーセントは、例えばＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ，  １９８１，  Ａｄｖ．  Ａｐｐｌ．  Ｍａｔｈ．  ２：４８２−４８９のアルゴリズムを用いる、ＧＡＰプログラム（ウィスコンシン配列解析パッケージ、ＵＮＩＸ（登録商標）用バージョン８、遺伝学コンピュータグループ（ＧＣＧ），  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐａｒｋ、ウィスコンシン州マディソン）などの、この目的に一般的に使用されるコンピュータプログラムいずれかを用いて、２つのポリペプチド配列を比較することによって、容易に決定可能である。「ＧＡＰ」プログラムの好ましいデフォルトパラメーターには：（１）ＳｃｈｗａｒｔｚおよびＤａｙｈｏｆｆ監修，  Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，  ｐｐ．３５３−３５８，  １９７９に記載されるような、ＧｒｉｂｓｋｏｖおよびＢｕｒｇｅｓｓ，  Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  １４：６７４５，  １９８６の加重アミノ酸比較マトリックス、または他の匹敵する比較マトリックス；（２）アミノ酸配列の各ギャップに対する３０のペナルティおよび各ギャップ中の各記号に対しさらに１のペナルティ；（３）末端ギャップに対するペナルティなし；および（４）長いギャップに対する最大ペナルティなし、が含まれる。配列比較の当業者に用いられる他のプログラムもまた、使用可能である。
【００５８】
本発明のＵＬＢＰポリペプチドは、好ましくは、単離型、そして好ましくは実質的に精製された型で提供される。例えば、硫酸アンモニウムまたはエタノール沈殿、陰イオンまたは陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、レクチンクロマトグラフィー、および／または高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を含む、既知の方法によって、組換え細胞培養からポリペプチドを回収し、そして精製することが可能である。
【００５９】
変異体
本発明の範囲内のＵＬＢＰポリペプチド変異体は、保存的置換アミノ酸を含有することが可能であり、つまり、ポリペプチドの二次構造および／または三次構造を改変しないアミノ酸によって、１以上のアミノ酸を交換可能である。こうした置換には、１つの脂肪族残基（Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＡｌａ）の別のものでの置換、または塩基性残基ＬｙｓおよびＡｒｇ、酸性残基ＧｌｕおよびＡｓｐ、アミド残基ＧｌｎおよびＡｓｎ、ヒドロキシル残基ＳｅｒおよびＴｙｒ、または芳香族残基ＰｈｅおよびＴｙｒ間の置換などの、類似の物理化学特性を有する残基による、アミノ酸の交換が含まれることが可能である。表現型的にサイレントであるアミノ酸交換は、Ｂｏｗｉｅら（（１９９０），  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４７：１３０６−１３１０）により完全に記載される。さらに、機能するＵＬＢＰ４ポリペプチド変異体には、タンパク質の機能領域の外、例えばアルファ−１およびアルファ−２ドメインの外に、アミノ酸置換、欠失、またはアミノ酸配列への付加を有するものが含まれる。
【００６０】
ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、およびＵＬＢＰ４を並列させ、４つのタンパク質すべてに共通のアミノ酸を明らかにすることが可能である。以下の表３を参照されたい。当業者は、類似の生物学的機能および類似の全体構造を持つタンパク質の間で保存されるアミノ酸は、保存されないアミノ酸よりも生物学的機能のために重要である可能性がより高いと認識するであろう。こうした保存アミノ酸の例には、例えば、ＵＬＢＰ４配列の４４、４９、５０、６１、６２、６４、７７、８４、８７、および９４位が含まれる。以下の表３を参照されたい。したがって、非保存残基の改変、特に保存的改変は、保存残基の改変よりも、生物学的に機能する変異体を産生する可能性がより高い。さらに、実質的にＵＬＢＰ４の三次元構造の障害となると予測される改変はまた、生物学的機能の障害となる可能性も高いであろう。したがって、実質的にＵＬＢＰ４の予測される三次元構造の障害とならない、非保存アミノ酸の改変は、生物学的に機能する変異体を産生する可能性が最も高い。三次元構造は、タンパク質データバンクの構造的代表上にクエリーアミノ酸配列を重ねるタンパク質スレッディングプログラムを用いてアミノ酸配列を解析することによって、評価可能である。Ｊａｒｏｓｚｅｗｓｋｉら（１９９８），  Ｐｒｏ．  Ｓｃｉ．  ７：１４３１−４０．こうしたタンパク質スレッディングプログラムの１つがＧｅｎｅＦｏｌｄ（Ｔｒｉｐｏｓ，  Ｉｎｃ．、ミズーリ州セントルイス；Ｂｅｒｍａｎら（２０００），  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２８：２３５−４２）である。
【００６１】
ＵＬＢＰ４ポリペプチドのアミノ酸配列の修飾は、いくつかの既知の技術のいずれによっても達成可能である。例えば、オリゴヌクレオチド指示突然変異誘発によって、特定の位置に突然変異を導入可能である（Ｗａｌｄｅｒら（１９８６），  Ｇｅｎｅ  ４２：１３３−１３９；Ｂａｕｅｒら（１９８５），  Ｇｅｎｅ  ３７：７３−８１；Ｓｍｉｔｈら，  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ，  Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，  （１９８１）；並びに米国特許第４，５１８，５８４号；および米国特許第４，７３７，４６２号）。
【００６２】
ＵＬＢＰ４ポリペプチドは、変異体および断片を含めて、長さ少なくとも２０アミノ酸、場合によって、長さ少なくとも３０、４０、５０、６０、７０、８０、１００、１２０、１３０、１４０、１６０、１８０、２００、または２２０アミノ酸であることが可能である。
【００６３】
ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、および／またはＵＬＢＰ４断片、変異体、および／または融合タンパク質を含むＵＬＢＰタンパク質のいくつかの型は、ＵＬＢＰアンタゴニストでありうる可能性がある。こうしたＵＬＢＰアンタゴニストは、正常な活性化するＵＬＢＰタンパク質の影響を遮断または阻害することが可能である。例えば、ＵＬＢＰタンパク質のアンタゴニスト型は、ＮＫ細胞を活性化可能なＵＬＢＰタンパク質による、免疫エフェクター細胞の活性化を遮断または阻害可能である。こうしたアンタゴニストは、ＮＫＧ２Ｄへの結合から通常生じる炎症性シグナルが発生しないような方式で、ＮＫＧ２Ｄに結合することによって、機能しうる。こうした結合したアンタゴニスト性ＵＬＢＰタンパク質は、ＮＫＧ２Ｄへの他の活性化リガンドのアクセスを遮断し、こうしてこれらのリガンドの影響の阻害を生じる。あるいは、ＵＬＢＰタンパク質のアンタゴニスト型は、ＮＫＧ２Ｄに結合し、そしてそれによって免疫エフェクター細胞を活性化することなく、ＮＫＧ２Ｄのインターナリゼーションを引き起こすことによって、ＵＬＢＰタンパク質による免疫エフェクター細胞活性化を遮断または阻害することが可能である。
【００６４】
融合タンパク質
ＵＬＢＰ４ポリペプチドの変異体および誘導体には、例えば可溶性ＵＬＢＰ４ポリペプチドとともに、ＵＬＢＰ４ポリペプチド（ＵＬＢＰ４断片および変異体を含む）および異種ポリペプチドで形成される融合タンパク質が含まれる。異種ポリペプチドには、ＵＬＢＰ４ポリペプチドの精製、オリゴマー化、安定、または分泌を容易にするものが含まれる。他の異種ポリペプチドには、細胞または組織へのＵＬＢＰ４の搬送を促進するターゲティング部分、および例えば免疫エフェクター細胞を誘引または活性化することによって、免疫エフェクター細胞反応を促進するポリペプチド部分が含まれる。
【００６５】
本発明の融合タンパク質は、異種ポリペプチドに連結されたＵＬＢＰポリペプチドを含有する。異種ポリペプチドは、安定、検出、ターゲティング等の機能的特性を融合タンパク質に与えることが可能である。
【００６６】
ＵＬＢＰ４ポリペプチドを異種ポリペプチドに融合させて、精製を容易にすることが可能である。入手しうる多くの異種ペプチド（ペプチドタグ）が、結合パートナーへの融合タンパク質の選択的結合を可能にする。ペプチドタグの限定されない例には、６−Ｈｉｓ、チオレドキシン、赤血球凝集素、ＧＳＴ、およびＯｍｐＡシグナル配列タグが含まれる。異種ペプチドを認識し、そして該ペプチドに結合する結合パートナーは、いかなる分子または化合物であることも可能であり、これらには、金属イオン（例えば金属アフィニティーカラム）、抗体、抗体断片、あるいは異種ペプチドに優先的に結合して融合タンパク質の精製を可能にするタンパク質またはペプチドいずれかが含まれる。
【００６７】
ＵＬＢＰ４ポリペプチドを修飾して、ＵＬＢＰ４オリゴマーの形成を促進することが可能である。例えば、ＵＬＢＰ４ポリペプチドを、例えばロイシンジッパーなどのオリゴマー化を促進するペプチド部分、および特定の抗体断片ポリペプチド、例えばＦｃポリペプチドに融合させることが可能である。ペプチド部分は、別のタンパク質と融合させた際に、二量体、三量体、および／またはより高次のオリゴマーの形成を引き起こすならば、オリゴマー化を促進する。これらの融合タンパク質を調製するための技術が知られ、そして例えばＷＯ  ９９／３１２４１およびＣｏｓｍａｎら（（２００１）．  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １４：１２３−１３３）に記載される。Ｆｃポリペプチドへの融合は、プロテインＡまたはプロテインＧカラム上のアフィニティークロマトグラフィーによる精製を容易にするというさらなる利点を提供する。ロイシンジッパー（ＬＺ）、例えばしばしば４または５のロイシン残基に他のアミノ酸残基が点在している反復７アミノ酸反復への融合が、Ｌａｎｄｓｃｈｕｌｔｚら（（１９８８），  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２４０：１７５９）に記載されている。
【００６８】
ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、および／またはＵＬＢＰ４を含むＵＬＢＰポリペプチドは、ターゲティング化細胞搬送のために修飾可能である。例えば、ＵＬＢＰポリペプチドを、Ｈｅｒ２、ＣＥＡ、ＭＵＣ−１等の特異的腫瘍細胞抗原、またはＣＤなどのウイルスに感染した細胞の特異的抗原に結合するリガンドに融合させることが可能である。リガンドは、例えば、細胞抗原に特異的に結合する抗体、例えば抗Ｈｅｒ２抗体等であることが可能である。ＵＬＢＰ１、ＵＢＬＰ２、ＵＬＢＰ３、またはＵＬＢＰ４ポリペプチドなどのＵＬＢＰポリペプチド、および特異的腫瘍細胞抗原に結合するリガンドを含んでなる分子は、ＮＫＧ２Ｄを発現している細胞の化学誘引物質および／または活性化因子として作用しうるサイトカインを、さらに含んでなることが可能である。こうした分子は、腫瘍細胞にＮＫＧ２Ｄ発現細胞を誘引して、そしてＮＫＧ２Ｄ発現細胞の細胞溶解活性を増加させることが可能である。例えば、ＵＬＢＰポリペプチド、腫瘍細胞特異的抗原に結合する抗体、およびＩＬ−１５を含んでなる融合タンパク質は、ＵＬＢＰポリペプチドおよびＩＬ−１５両方を介して、ＮＫ細胞を刺激して、腫瘍細胞を殺すことが可能である。
【００６９】
本発明の融合タンパク質にはまた、療法剤に連結された抗ＵＬＢＰ抗体（本明細書に定義されるようなもの）を含有するものも含まれる。この態様において、抗ＵＬＢＰ抗体は、ＵＬＢＰを発現している細胞に、付着した療法剤を搬送する細胞ターゲティング部分として働く。こうした融合タンパク質は、例えば、細胞毒等を、腫瘍細胞およびウイルスに感染した細胞に搬送するのに有用である。
【００７０】
断片
ＵＬＢＰ４を含むＵＬＢＰの有用な断片は、ＮＫＧ２Ｄ受容体に結合する能力および／またはＮＫ細胞を活性化する能力など、十分なＵＬＢＰ活性を有するポリペプチドである。例えば、膜貫通ドメインを欠く断片は、ＵＬＢＰポリペプチドを可溶性にし、そして活性を保持する。可溶性ＵＬＢＰ４ポリペプチドは、例えば、膜貫通ドメイン、表２および配列番号２に示すアミノ酸配列Ｔｒｐ２２７〜Ｔｒｐ２４８のすべてまたは一部を欠失させることによって、産生可能である。こうした断片は、配列番号２のアミノ酸１〜アミノ酸３５の位で始まり、そして配列番号２のアミノ酸２０７〜アミノ酸２２４の間で終わる可能性がある。場合によって、こうした断片は、アミノ酸２０７〜２１８の間で、場合によってアミノ酸２１７で終わる。断片は、配列番号２のほぼアミノ酸３１または３２で始まり、そして配列番号２のほぼアミノ酸２１７で終わる可能性がある。こうした断片の組換え産生のため、ＵＬＢＰ４シグナル配列を使用して、または異種シグナル配列を使用して、分泌を促進することが可能である。
【００７１】
ＵＬＢＰ４ポリペプチドの断片を用いて、例えば、特異的抗ＵＬＢＰ４抗体を生成可能である。既知の選択技術を用いて、特異的エピトープを選択し、そしてこれを用いて、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体を生成することが可能である。こうした抗体は、ＵＬＢＰ４活性をアッセイするのに有用性を有するとともに、ＵＬＢＰ４がＮＫＧ２Ｄ受容体を活性化し、そしてＮＫＧ２Ｄを発現している細胞の免疫エフェクター細胞活性を活性化するのを遮断または阻害するのに有用性を有する。こうした抗ＵＬＢＰ抗体を用いて、細胞毒または放射性同位体などの療法剤を、腫瘍細胞などのＵＬＢＰ４発現細胞にターゲティングすることが可能である。
【００７２】
抗体
本発明のポリペプチドを、全体でまたは部分的に用いて、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体を作成することが可能であり、該抗体は、ＵＬＢＰ４ポリペプチド発現を検出するための診断アッセイにおいて、ＵＬＢＰ４ポリペプチドの分子作用を特徴付ける試薬ツールとして、ＵＬＢＰ４タンパク質を産生する商業的過程の品質管理アッセイにおいて、および／または療法剤として有用である。抗ＵＬＢＰ４抗体は、ＵＬＢＰ４タンパク質に特異的に結合可能である。結合特異性は、競合的置換を含むいくつかの方法で試験可能である。例えば、非放射性ＵＬＰＢ４タンパク質は、特異的に結合する抗ＵＬＢＰ４抗体に結合した放射性ＵＬＢＰ４を置換することが可能であるが、ＵＬＢＰ４に特異的に結合する抗ＵＬＢＰ４抗体に特異的に結合しない非放射性タンパク質は、該放射性ＵＬＢＰ４を置換不能である。対照的に、放射性ＵＬＢＰ４タンパク質と組み合わせた関連しないタンパク質は、特異的に結合する抗ＵＬＢＰ４抗体が結合した放射性ＵＬＢＰ４の量にほとんど影響を持たない可能性がある。ＵＬＢＰ４を含むＵＬＢＰポリペプチドに対する抗体は、例えば自己免疫疾患、腫瘍、感染、および炎症性腸疾患などの不適切な炎症によって特徴付けられる疾患の治療のための療法剤として有用である可能性がある。ＵＬＢＰポリペプチドの全体または一部を用いて、抗体を生成することが可能である。特に、ＵＬＢＰポリペプチドのユニークなエピトープを含有するポリペプチド、例えばＵＬＢＰ４のＣ末端の１５アミノ酸を、慣用的な技術を用いた抗体調製に使用することが可能である。ペプチドエピトープの選択法および抗体産生法が知られる。例えばＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｄ（監修），  １９８８，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  ニューヨーク州コールドスプリングハーバー；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ：Ａ  Ｎｅｗ  Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎａｌｙｓｅｓ，  Ｋｅｎｎｅｔら（監修），  １９８０，  Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，  ニューヨークを参照されたい。１つの態様において、抗ＵＬＢＰ抗体を療法剤（例えば毒素および／または放射性化合物など）に融合させて、ＵＬＢＰ発現細胞への剤の搬送を促進することが可能である。いくつかの抗ＵＬＢＰ４抗体は、ＵＬＢＰ４およびＮＫＧ２Ｄ間の相互作用に干渉するか、またはこうした相互作用をアンタゴナイズすることが可能である。こうした抗体は、例えば、ＵＬＢＰ４を発現する細胞によるかまたは可溶性ＵＬＢＰポリペプチドによる、ＮＫ細胞、Ｔ細胞、および／またはマクロファージが仲介する細胞毒性の増進を阻害することが可能である。こうした抗体を、本明細書において、アンタゴニスト性抗体と称する。こうした抗体は、自己免疫疾患を治療する療法剤として特に適切である可能性がある。他の抗ＵＬＢＰ４抗体は、ＵＢＬＰ４およびＮＫＧ２Ｄ間の相互作用と干渉することなく、ＵＬＢＰ４に結合しうる。
【００７３】
エピトープが単離されていてもまたはポリペプチドの一部のままであっても、本発明のポリペプチドのエピトープによって、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体がどちらも誘発可能であり、そして慣用的技術によって、調製可能である。例えば、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ：Ａ  Ｎｅｗ  Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎａｌｙｓｅｓ，  Ｋｅｎｎｅｔら（監修），  （１９８０）Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，  ニューヨーク；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｄ（監修），  （１９８８）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  ニューヨーク州コールドスプリングハーバー；ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ、米国特許第４，３７６，１１０号；「ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術」（Ｋｏｚｂｏｒら（１９８４），  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １３３：３００１−０５；Ｃｏｌｅら（１９８３），  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８０：２０２６−３０；および「ＥＢＶハイブリドーマ技術」（Ｃｏｌｅら，  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，  Ａｌａｎ  Ｒ．  Ｌｉｓｓ．  Ｉｎｃ．，  ｐｐ．７７−９６（１９８５））を参照されたい。本発明のポリペプチドに特異的なモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞株もまた、本明細書に意図される。こうしたハイブリドーマは、慣用的技術によって産生しそして同定することが可能である。本発明のｍＡｂを産生するハイブリドーマは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで培養可能である。こうしたモノクローナル抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびそのいかなるサブクラスも含む、いかなる免疫グロブリンクラスのものであることも可能である。
【００７４】
さらに、適切な生物学的活性のヒト抗体分子由来の遺伝子と、適切な抗原特異性のマウス抗体分子由来の遺伝子を共にスプライシングすることによる、「キメラ抗体」の産生のために開発された技術（Ｔａｋｅｄａら（１９８５），  Ｎａｔｕｒｅ  ３１４：４５２−４５４；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら（１９８４），  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８１：６８５１−６８５５；Ｂｏｕｌｉａｎｎｅら（１９８４），  Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：６４３−６４６；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら（１９８５），  Ｎａｔｕｒｅ  ３１４：２６８−７０）を用いることが可能である。キメラ抗体は、異なる部分が異なる動物種に由来する分子であり、ブタｍＡｂに由来する可変領域およびヒト免疫グロブリン定常領域を有するものなどである。
【００７５】
本発明のモノクローナル抗体にはまた、ネズミモノクローナル抗体のヒト化型も含まれる。こうしたヒト化抗体は、既知の技術によって調製可能であり、そして抗体をヒトに投与した際、減少した免疫原性という利点を提供する。キメラおよびさらなる操作モノクローナル抗体の産生法には、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら（（１９８８），  Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３）、Ｌｉｕら（（１９８７），  ＰＮＡＳ  ８４：３４３９）、Ｌａｒｒｉｃｋら（（１９８９），  ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ７：９３４）、並びにＷｉｎｔｅｒおよびＨａｒｒｉｓ（（１９９３），  ＴＩＰＳ  １４：１３９）に記載されるものが含まれる。抗体をヒト化するのに有用な技術はまた、米国特許第６，０５４，２９７号に論じられる。
【００７６】
トランスジェニック的に抗体を生成する方法、特にトランスジェニック非ヒト動物において生成されるヒト抗体は、ＧＢ  ２，２７２，４４０、米国特許第５，５６９，８２５号および第５，５４５，８０６号、並びに関連特許に見出すことが可能である。好ましくは、ヒトで使用するため、抗体はヒトのものであるかまたはヒト化されており；こうしたヒト抗体またはヒト化抗体を生成する技術もまた周知であり、そして例えばＭｅｄａｒｅｘ  Ｉｎｃ（ニュージャージー州プリンストン）およびＡｂｇｅｎｉｘ  Ｉｎｃ．（カリフォルニア州ファーモント）から商業的に入手可能である。別の好ましい態様において、ヒト抗体可変ドメインのファージディスプレーライブラリーをスクリーニングすることによって、ヒトで使用するための完全なヒト抗体を産生する。Ｖａｕｇｈａｎら（１９９８），  Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  １６（６）：５３５−５３９；および米国特許第５，９６９，１０８号。
【００７７】
特異的エピトープを認識する抗原結合抗体断片は、既知の技術によって生成可能である。例えば、抗体断片には、限定されるわけではないが、抗体分子のペプシン消化によって産生可能なＦ（ａｂ’）2断片、およびＦ（ａｂ’）2断片のジスルフィド架橋を還元することによって生成可能な抗体断片が含まれる。あるいは、Ｆａｂ発現ライブラリーを構築し（Ｈｕｓｅら（１９８９），  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：１２７５−１２８１）、所望の特異性を持つモノクローナルＦａｂ断片の迅速で、有用で、そして容易な同定を可能にしうる。用語「抗体」は、本明細書において、最も広い意味で用いられ、そして具体的に、天然型および突然変異型両方の、一本鎖モノクローナル抗体、ポリエピトープ特異性を持つ抗体組成物とともに、所望の生物学的活性を示す抗体断片（例えばＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）2、Ｆｖ、Ｆｃ）が含まれる。１以上のＦｃ領域のＣHドメインを含有する抗体のＦｃ領域の型は、二量体化促進ヒンジ領域（ＦｃまたはＦｃポリペプチド）を含有するＦｃポリペプチドの一部切除型、および特に、ヒトＩｇＧ１抗体由来のＦｃポリペプチドを含めて、本発明のＵＬＢＰ融合タンパク質において有用である。
【００７８】
一本鎖抗体の産生に関して記載される技術（米国特許第４，９４６，７７８号；Ｂｉｒｄ（１９８８），  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６；Ｈｕｓｔｏｎら（１９８８），  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３；およびＷａｒｄら（１９８９），  Ｎａｔｕｒｅ  ３３４：５４４−５４６）を適応させ、ＵＬＢＰ遺伝子タンパク質に対する一本鎖抗体を産生することもまた可能である。一本鎖抗体は、アミノ酸架橋を介してＦｖ領域の重鎖および軽鎖断片を連結して、一本鎖ポリペプチドを生じることによって形成する。こうした一本鎖抗体はまた、細胞内でも有用である（すなわち細胞内発現抗体（ｉｎｔｒａｂｏｄｉｅｓ）として）可能性があり、例えば、Ｍａｒａｓｃｏら（（１９９９），  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２３１：２２３−２３８）に記載されるように、ＨＩＶ感染の遺伝子治療に有用である可能性がある。さらに、その後、当業者に周知の技術を用いて、ＵＬＢＰポリペプチドに対する抗体を利用して、ＵＬＢＰポリペプチドを「模倣」し、そしてＵＬＢＰポリペプチドの結合パートナーに結合することが可能な抗イディオタイプ抗体を生成することが可能である（例えばＧｒｅｅｎｓｐａｎ  ＆  Ｂｏｎａ（１９９３），  ＦＡＳＥＢ  Ｊ  ７（５）：４３７−４４４；およびＮｉｓｓｉｎｏｆｆ（１９９１），  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １４７（８）：２４２９−２４３８を参照されたい）。こうした抗体はまた、抗ＵＬＢＰ４抗体を検出し、そして定量化する方法にも使用を見出しうる。さらに、こうした抗イディオタイプ抗体は、例えば、ＮＫＧ２Ｄに結合可能であり、そしてＮＫＧ２Ｄを発現している免疫エフェクター細胞を活性化する可能性も、また、しない可能性もある。したがって、こうした抗体は、ＮＫ細胞、Ｔ細胞、および／またはマクロファージを含む、ＮＫＧ２Ｄを発現している免疫エフェクター細胞を活性化する可能性があるし、あるいはＮＫＧ２Ｄを介した、こうした細胞の活性化を遮断または阻害する可能性もある。
【００７９】
本発明のポリペプチドと特異的に結合する抗体には、二特異的抗体（すなわち第一の抗原結合ドメインを介して本発明のポリペプチドと免疫反応性であり、そしてまた、第二の抗原結合ドメインを介して異なるポリペプチドとも免疫反応性である抗体）が含まれる。多様な二特異性抗体が調製されており、そしてｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏ両方で有用であることが見出されている（例えば米国特許第５，８０７，７０６号；並びにＣａｏおよびＳｕｒｅｓｈ（１９９８），  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ  ９：６３５−６４４を参照されたい）。さらに、米国特許第５，９５９，０８３号に記載されるように、抗体のＦ（ａｂ’）2断片の重鎖をコードするＤＮＡと、第二のＦ（ａｂ’）2分子の重鎖（ＣH１ドメインがＣH３ドメインで交換されているもの）をコードするＤＮＡ、または抗体の一本鎖ＦＶ断片をコードするＤＮＡいずれかを融合させることによって、四価二特異性分子が調製可能である。二特異性抗体はまた、米国特許第５，８０７，７０６号に記載されるように産生可能である。さらに、２つの可変ドメインを共有結合することによって一本鎖可変断片（ｓＦｖ）が調製されてきており；生じた抗体断片は、２つの可変ドメイン間の柔軟なリンカーの長さに応じて、二量体または三量体を形成することが可能である。Ｋｏｒｔｔら（１９９７），  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  １０：４２３−４３３．
ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、およびＵＬＢＰ４を含むＵＬＢＰタンパク質に結合するペプチボディ（ｐｅｐｔｉｂｏｄｙ）などのペプチボディを、本明細書に論じる抗体に関する療法的使用のいずれにおいても、抗体の代わりに使用することが可能である。ペプチボディはＷＯ  ０１／８３５２５およびＷＯ  ００／２４７８２に記載される。
【００８０】
ポリヌクレオチド配列
本発明はまた、上に論じるＵＬＢＰ４ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド分子も提供する。本発明のＵＬＢＰポリヌクレオチド分子には、以下の分子が含まれる：表１および配列番号１に示す核酸配列を有するポリヌクレオチド分子；表１および配列番号１の核酸配列に、非常にまたは中程度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチド分子；並びに、表１および配列番号１の核酸配列であって、特に、Ｌｅｕ２４、Ｈｉｓ３１、Ｓｅｒ３２、またはＬｅｕ２４〜Ｓｅｒ３２の間のアミノ酸いずれかで始まり、そしてほぼＴｈｒ２０７、Ｈｉｓ２１７またはＴｈｒ２０７〜Ｈｉｓ２１７のアミノ酸まで伸長するアミノ酸配列を有するＵＬＢＰ４ポリペプチドのアルファ−１およびアルファ−２ドメインをコードする核酸を含む前記核酸配列と、実質的な核酸配列同一性を有するポリヌクレオチド分子。こうしたポリヌクレオチドには、配列番号１の残基７０〜残基９４で開始し、そして配列番号１の残基６２１〜残基６５１で終わる領域が含まれる。
【００８１】
本発明の有用なＵＬＢＰ４ポリヌクレオチド分子は、好ましくは、表１および配列番号２に示すようなアミノ酸配列を有するＵＬＢＰ４ポリペプチドをコードする単離分子、並びに、ＵＬＢＰ４ポリヌクレオチドの誘導体、変異体、および有用な断片である。ＵＬＢＰ４ポリヌクレオチド配列には、表１および配列番号１の核酸配列に対する欠失、置換、または付加が含まれることが可能である。
【００８２】
本発明のＵＬＢＰ４ポリヌクレオチド分子は、ｃＤＮＡ、化学的に合成したＤＮＡ、ＰＣＲによって増幅したＤＮＡ、ＲＮＡ、またはそれらの組み合わせであることが可能である。遺伝暗号の縮重のため、２つのＤＮＡ配列が異なり、そしてなお同一のアミノ酸配列をコードする可能性がある。したがって、本発明は、ＵＬＢＰ４ポリペプチドをコードする核酸配列を有する単離ポリヌクレオチド分子であって、該核酸配列が、表１および配列番号２に示すような完全アミノ酸配列を有するＵＬＢＰ４ポリペプチド、またはその変異体、誘導体、および断片をコードする、前記単離ポリヌクレオチド分子を提供する。
【００８３】
本発明のＵＬＢＰ４ポリヌクレオチドは、表１および配列番号１に示す核酸配列に、少なくとも９２％同一である核酸配列を有する。場合によって、核酸配列は、表１および配列番号１に示す核酸配列に、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である。２つの核酸配列の同一性パーセントを、視覚的検査および数学的計算によって決定することが可能であり、またはより好ましくはコンピュータプログラムを用いて配列情報を比較することによって、比較を行う。典型的な好ましいコンピュータプログラムは、遺伝学コンピュータグループ（ＧＣＧ；ウィスコンシン州マディソン）、ウィスコンシンパッケージ、バージョン１０．０プログラム、「ＧＡＰ」（Ｄｅｖｅｒｅｕｘら，  １９８４，  Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  １２：３８７）である。「ＧＡＰ」プログラムの好ましいデフォルトパラメーターには：（１）ヌクレオチドに関する単一比較マトリックス（同一に対し１および非同一に対し０の値を含む）のＧＣＧ実行または他の匹敵する比較マトリックス；（２）ヌクレオチド配列の各ギャップに対する５０のペナルティおよび各ギャップ中の各記号に対しさらに３のペナルティ；（３）末端ギャップに対するペナルティなし；および（４）長いギャップに対する最大ペナルティなし、が含まれる。配列比較の当業者に使用される他のプログラム、例えばＢＬＡＳＴＮプログラム、バージョン２．０．９またはＵＷ−ＢＬＡＳＴ２．０アルゴリズムも使用可能である。あるいは、既知の方法によって、例えばＧｒｅｇ  Ｓｃｈｕｌｅｒが作成したＭＡＣＡＷプログラム（Ｓｃｈｕｌｅｒら，  １９９１  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ９：１８０−１９０）などのソフトウェアプログラム中で２つの配列を並列させることによって、核酸配列同一性を決定する。
【００８４】
本発明のＵＬＢＰ４ポリヌクレオチド分子にはまた、高ストリンジェンシー条件下（上に定義するようなもの）で、表１および配列番号１に示す核酸配列にハイブリダイズする核酸配列を有する、単離ポリヌクレオチド分子も含まれる。ポリヌクレオチドのハイブリダイゼーションは、表１および配列番号１に示す核酸配列の、少なくとも１５の隣接するヌクレオチド、好ましくは少なくとも２０の隣接するヌクレオチド、そしてより好ましくは少なくとも３０の隣接するヌクレオチド、そしてさらにより好ましくは少なくとも１００の隣接するヌクレオチドに対するものである。
【００８５】
本明細書に記載する、ＵＬＢＰ４をコードするポリヌクレオチド分子の有用な断片には、プローブおよびプライマーが含まれる。こうしたプローブおよびプライマーは、例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＵＬＢＰ４ポリヌクレオチドを増幅して、そして該ポリヌクレオチドの存在を検出するため、ＰＣＲ法において、並びに、ＵＬＢＰ４の解析のため、サザンブロットおよびノーザンブロットにおいて、使用可能である。本発明のＵＬＢＰ４ポリヌクレオチド分子を発現している細胞もまた、こうしたプローブの使用によって同定可能である。こうしたプライマーおよびプローブを産生し、そして使用する方法が知られる。ＰＣＲのため、ＵＬＢＰ４ポリヌクレオチド分子の末端領域に対応する、５’および３’プライマーを使用し、慣用的な技術を用いて、ＵＬＢＰ４ポリヌクレオチドを単離し、そして増幅することが可能である。１つの典型的なハイブリダイゼーションプローブまたはプライマーは、ＵＬＢＰ４のユニークな３’膜貫通領域から取った、９以上の隣接核酸を含んでなる：
ＧＡＧ  ＴＧＧ  ＣＡＧ  ＧＣＴ  ＧＧＴ  ＣＴＣ  ＴＧＧ  ＣＣＣ  ＴＴＧ  ＡＧＧ  ＡＣＧ  ＴＣＴ  ＴＡＧ（配列番号９）。
【００８６】
ＵＬＢＰ４ポリヌクレオチドの他の有用な断片には、標的であるＵＬＢＰ４  ｍＲＮＡ（センス鎖を用いる）、またはＤＮＡ（アンチセンス鎖を用いる）配列に結合可能な、一本鎖核酸配列を含んでなる、アンチセンスまたはセンスオリゴヌクレオチドが含まれる。
【００８７】
さらに他の有用な核酸には、ＵＬＢＰタンパク質の発現を阻害可能な、干渉するＲＮＡ（ＵＬＢＰ  ｍＲＮＡ由来の配列を含む、二本鎖ＲＮＡであることが可能なもの）、または干渉するＲＮＡをコードする配列（ＵＬＢＰ  ｍＲＮＡ由来の配列を含んでなるＲＮＡヘアピンをコードするＤＮＡを含むもの）が含まれる。例えばＢｏｓｈｅｒおよびＬａｂｏｕｅｓｓｅ（２０００），  Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．  ２：Ｅ３１−Ｅ３６；Ｆｊｏｓｅら（２００１），  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  Ａｎｎ．  Ｒｅｖ．  ７：３１−５７を参照されたい。
【００８８】
ベクターおよび宿主細胞
本発明はまた、本発明のポリヌクレオチド分子を含有するベクター、並びにこうしたベクターで形質転換された宿主細胞も提供する。ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、およびＵＬＢＰ４の１以上を含む、本発明のポリヌクレオチド分子いずれかは、一般的に、宿主における増殖のため、選択可能マーカーおよび複製起点を含むベクター内に含有されることが可能である。ベクターにはさらに、哺乳動物、微生物、ウイルス、または昆虫遺伝子由来のものなどの、適切な転写または翻訳制御配列が、所望によりＵＬＢＰポリヌクレオチド分子に連結されて、含まれる。こうした制御配列の例には、転写プロモーター、オペレーター、またはエンハンサー、ｍＲＮＡリボソーム結合部位、並びに転写および翻訳を調節する適切な配列が含まれる。ヌクレオチド配列は、制御配列が、標的タンパク質をコードするＤＮＡに機能的に関連する場合、機能可能であるように連結されている。したがって、プロモーターヌクレオチド配列がＵＬＢＰ配列の転写を指示する場合、プロモーターヌクレオチド配列は、ＵＬＢＰ  ＤＮＡ配列に機能可能であるように連結されている。
【００８９】
本発明の標的ＵＬＢＰ４ポリペプチドをコードするＵＬＢＰ４ポリヌクレオチド分子のクローニングに適したベクターの選択は、ベクターが形質転換されるであろう宿主細胞、および適用可能な場合、標的ポリペプチドを発現しようとする宿主細胞に応じるであろう。ＵＬＢＰ４ポリペプチドの発現に適した宿主細胞には、原核生物、酵母、およびより高次の真核細胞が含まれ、この各々を以下に論じる。
【００９０】
こうした宿主細胞において発現しようとするＵＬＢＰポリペプチドはまた、異種タンパク質由来の領域を含む融合タンパク質であることも可能である。上に論じるように、例えば、ＵＬＢＰポリペプチドの分泌、安定性改善、精製促進、ターゲティング、またはオリゴマー化を可能にするため、こうした領域を含むことが可能である。例えば、適切なシグナルペプチドをコードする核酸配列を発現ベクターに取り込むことが可能である。シグナルペプチド（分泌リーダー）をコードする核酸配列を、ＵＬＢＰ配列にインフレームで融合させて、ＵＬＢＰがシグナルペプチドを含んでなる融合タンパク質として翻訳されるようにすることが可能である。意図する宿主細胞において機能するシグナルペプチドは、ＵＬＢＰポリペプチドの細胞外分泌を促進する。異種シグナルペプチドで天然シグナル配列を交換することが可能である。哺乳動物宿主細胞で機能するシグナルペプチドの例には、米国特許第４，９６５，１９５号に記載されるインターロイキン−７（ＩＬ−７）のシグナル配列、Ｃｏｓｍａｎら（（１９８４），  Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：７６８）に記載されるインターロイキン−２受容体のシグナル配列；ＥＰ特許第０  ３６７  ５６６号に記載されるインターロイキン−４受容体シグナルペプチド；米国特許第４，９６８，６０７号に記載されるＩ型インターロイキン−１受容体シグナルペプチド；ＥＰ特許第０  ４６０  ８４６号に記載されるＩＩ型インターロイキン−１受容体シグナルペプチド；ヒトＩｇＫのシグナル配列（ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧ）；およびヒト成長ホルモンのシグナル配列（ＭＡＴＧＳＲＴＳＬＬＬＡＦＧＬＬＣＬＰＷＬＱＥＧＳＡ）が含まれる。好ましくは、シグナル配列は、細胞からＵＬＢＰが分泌される際にＵＬＢＰポリペプチドから切断されるであろう。本発明を実施するのに使用可能な他のシグナル配列には、酵母α因子およびＳｆ９昆虫細胞中のミツバチ（ｈｏｎｅｙｂｅｅ）メラチン・リーダーが含まれる。Ｂｒａｋｅ（１９８９），  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １３：２６９−２８０；Ｈｏｍａら（１９９５），  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐ．  Ｐｕｒｉｆ．  ６１４１−１４８；Ｒｅａｖｙら（２０００），  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐ．  Ｐｕｒｉｆ．  ６：２２１−２２８．
本発明の標的ポリペプチドの発現に適した宿主細胞には、原核生物、酵母、およびより高次の真核細胞が含まれる。これらのポリペプチドの発現に使用するのに適した原核宿主には、エシェリキア属（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、およびサルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）の細菌とともに、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、ストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）、およびブドウ球菌属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）のメンバーが含まれる。原核細胞における、例えば大腸菌（Ｅ．  ｃｏｌｉ）における発現のため、ＵＬＢＰポリペプチドをコードするポリヌクレオチド分子には、好ましくは、組換えポリペプチドの発現を促進するＮ末端メチオニン残基が含まれる。Ｎ末端Ｍｅｔは、場合によって、発現されたポリペプチドから切断されることが可能である。
【００９１】
細胞宿主で使用するための発現ベクターは、一般的に、１以上の表現型的に選択可能なマーカーを含んでなる。こうした遺伝子は、例えば抗生物質耐性を与えるタンパク質または独立栄養必要条件を供給するタンパク質をコードする。広い範囲のこうしたベクターは、商業的供給源から容易に入手可能である。例には、ｐＧＥＭベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ）、ｐＳＰＯＲＴベクター、およびｐＰＲＯＥＸベクター（ＩｎＶｉｔｒｏｇｅｎ、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カリフォルニア州カールスバッド）、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔベクター（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）、およびｐＱＥベクター（Ｑｉａｇｅｎ）が含まれる。
【００９２】
ＵＬＢＰはまた、サッカロミセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、ピキア属（Ｐｉｃｈｉａ）、およびクロイベロミセス属（Ｋｌｕｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）を含む属由来の酵母宿主細胞で発現可能である。好ましい酵母宿主は、Ｓ．セレビシエ（Ｓ．  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）およびＰ．パストリス（Ｐ．  ｐａｓｔｏｒｉｓ）である。酵母ベクターは、しばしば、２μ酵母プラスミド由来の複製起点配列、自律複製配列（ＡＲＳ）、プロモーター領域、ポリアデニル化のための配列、転写終結のための配列、および選択可能マーカー遺伝子を含有するであろう。酵母および大腸菌両方で複製可能なベクター（シャトルベクターと称する）もまた、使用可能である。酵母ベクターの上述の特徴に加え、シャトルベクターにはまた、大腸菌における複製および選択のための配列も含まれるであろう。酵母宿主で発現される標的ポリペプチドの直接分泌は、ＵＬＢＰをコードするヌクレオチド配列の５’端に、酵母α因子リーダー配列をコードするヌクレオチド配列を含むことによって達成可能である。Ｂｒａｋｅ（１９８９），  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １３：２６９−２８０．
ＵＬＢＰポリペプチドの発現のため、昆虫宿主細胞培養系も使用可能である。本発明の標的ポリペプチドは、好ましくは、例えばＬｕｃｋｏｗおよびＳｕｍｍｅｒｓ（（１９８８），  ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ６：４７）の概説に記載されるように、バキュロウイルス発現系を用いて発現される。
【００９３】
哺乳動物宿主細胞において、本発明のＵＬＢＰポリペプチドを発現可能である。適切な哺乳動物宿主細胞株の限定されない例には、サル腎臓細胞のＣＯＳ−７株（Ｇｌｕｚｍａｎら（１９８１），  Ｃｅｌｌ  ２３：１７５−１８２）、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（Ｐｕｃｋら（１９５８），  ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ６０：１２７５−１２８１）、ＣＶ−１（Ｆｉｓｃｈｅｒら（１９７０），  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  ５：２１−２７）およびヒト子宮頚癌細胞（ＨＥＬＡ）（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ２）が含まれる。
【００９４】
本発明のＵＬＢＰポリペプチドの発現に適した発現ベクターの選択は、用いようとする特定の哺乳動物宿主細胞に応じるであろう。適切な発現ベクターの例には、ｐｃＤＮＡ３．１／Ｈｙｇｒｏ+（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ｐＤＣ４０９（ＭｃＭａｈａｎら（１９９１），  ＥＭＢＯ  Ｊ．  １０：２８２１−２８３２）、およびｐＳＶＬ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）が含まれる。哺乳動物宿主細胞で使用するための発現ベクターには、ウイルスゲノム由来の転写および翻訳調節配列が含まれることが可能である。ＵＬＢＰ４を発現するのに使用可能な、一般的に用いられるプロモーター配列およびエンハンサー配列には、限定されるわけではないが、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、アデノウイルス２、ポリオーマウイルス、およびシミアンウイルス４０（ＳＶ４０）由来のものが含まれる。哺乳動物発現ベクターの構築法は、例えば、ＯｋａｙａｍａおよびＢｅｒｇ（（１９８２）Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２：１６１−１７０）、Ｃｏｓｍａｎら（（１９８６）Ｍｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２３：９３５−９４１）、Ｃｏｓｍａｎら（（１９８４）Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：７６８−７７１）、ＥＰ−Ａ−０３６７５６６、およびＷＯ  ９１／１８９８２に開示される。
【００９５】
特定のベクターへの挿入を促進する、ＵＬＢＰポリヌクレオチド分子の修飾（例えば制限部位を修飾することによる）、特定の発現系または宿主における使用を容易にすること（例えば好ましい宿主コドンを用いる）などが知られ、そして本発明における使用のため、意図される。ＵＬＢＰポリペプチドを産生するための遺伝子操作法には、既知の方法にしたがった、細胞不含発現系における、細胞宿主における、組織における、そして動物モデルにおける、ポリヌクレオチド分子の発現が含まれる。
【００９６】
薬剤組成物
本発明は、断片、変異体、および／または融合タンパク質、またはこうしたＵＬＢＰポリペプチドに免疫特異的に結合する抗体を含む、本発明の実質的に精製されたＵＬＢＰポリペプチド、並びに薬学的に許容しうるキャリアーを含有する、薬剤組成物を提供する。こうした薬剤組成物を：ＮＫ細胞、Ｔ細胞（αβＴ細胞およびγδＴ細胞を含む）、および活性化マクロファージを含むＮＫＧ２Ｄ／ＤＡＰ１０発現細胞の活性を誘導するため；サイトカインおよびケモカインの産生を誘導するため；腫瘍細胞、およびウイルスまたは細菌に感染した細胞などの感染した細胞に対する免疫エフェクター細胞の細胞毒性を誘導するため；そして例えば癌、ウイルス感染、および細菌感染の療法的治療のためを含む多様な目的のため、細胞、組織、または患者に投与する。ＵＬＢＰポリペプチドは、例えばターゲティング部分に融合させた、融合タンパク質であることが可能である。
【００９７】
本発明はまた、ＮＫ細胞および／またはＴ細胞活性の解析に；ＮＫＧ２Ｄ受容体結合および活性化の解析に；そして感染および新生物細胞に対する自然免疫系反応に関与するシグナル分子の阻害性／刺激性の影響の解析に有用な、試薬、組成物、および方法も提供する。
【００９８】
ＵＬＢＰを発現しているベクターを含む、本発明のＵＬＢＰポリヌクレオチドおよびポリペプチドを、薬剤組成物として処方し、そして選択した投与経路に適応させた多様な型で、宿主、好ましくはヒト患者を含む哺乳動物宿主に投与することが可能である。化合物は、好ましくは、薬学的に許容しうるキャリアーと組み合わせて投与され、そしてターゲティング抗体および／またはサイトカインを含む、特異的搬送剤と組み合わせるかまたは該搬送剤とコンジュゲート化することが可能である。
【００９９】
ＵＬＢＰは、経口、非経口などの既知の技術によって（皮下注射、静脈内、筋内、胸骨内（ｉｎｔｒａｓｔｅｒｎａｌ）または注入技術を含む）、吸入スプレーによって、局所的に、粘膜を通じた吸収によって、または直腸投与で、慣用的な非毒性の薬学的に許容しうるキャリアー、アジュバントまたはビヒクルを含有する投薬型単位処方で、投与可能である。本発明の薬剤組成物は、経口投与に適した懸濁物または錠剤、鼻スプレー、クリーム、無菌注射可能水性または油性（ｏｌｅａｇｅｎｏｕｓ）懸濁物または座薬などの無菌注射可能調製物の形であることが可能である。
【０１００】
懸濁物としての経口投与のため、薬剤処方の当該技術分野に周知の技術にしたがって、組成物を調製可能である。組成物は、塊を分割するための微結晶性セルロース、懸濁剤としてのアルギン酸またはアルギン酸ナトリウム、粘性増進剤としてのメチルセルロース、および甘味料またはフレーバー剤を含有することが可能である。即時放出型錠剤として、組成物は、当該技術分野に知られる、微結晶性セルロース、デンプン、ステアリン酸マグネシウムおよびラクトースまたは他の賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、希釈剤および潤滑剤を含有することが可能である。
【０１０１】
吸入またはエアロゾルによる投与のため、薬剤処方の当該技術分野に周知の技術にしたがって、組成物を調製可能である。組成物は、当該技術分野に知られる、ベンジルアルコールまたは他の適切な防腐剤、生物学的利用能を増進するための吸収促進剤、フルオロカーボンまたは他の可溶化剤または分散剤を用いて、生理食塩水の溶液として調製可能である。
【０１０２】
注射可能溶液または懸濁物として投与するため、当該技術分野に周知の技術にしたがって、合成モノまたはジグリセリドを含む無菌油、およびオレイン酸を含む脂肪酸などの、適切な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を用いて、組成物を処方可能である。
【０１０３】
座薬として直腸投与するため、周囲温度で固形であるが、直腸腔中で液化するかまたは溶解して薬剤を放出する、ココアバター、合成グリセリドエステルまたはポリエチレングリコールなどの適切な非刺激性賦形剤と混合することによって、組成物を調製可能である。
【０１０４】
好ましい投与経路には、経口、非経口とともに、静脈内、筋内または皮下経路が含まれる。より好ましくは、本発明の化合物は、非経口投与、すなわち注入または注射によって、静脈内、動脈内、筋内、病巣内、皮下、または腹腔内注射される。局所投与、すなわち疾患部位での投与が意図され、経皮搬送、および移植物または皮膚パッチからの徐放も同様である。本発明の１つの態様において、化合物は、注射によって、腫瘍に直接；または静脈内注射による全身搬送によって、投与可能である。他の代替法には、点眼薬、丸薬、ロゼンジ、シロップ、およびチューインガムなどの経口調製物、並びにローション、ゲル、スプレー、および軟膏などの局所調製物が含まれる。大部分の場合、ポリペプチドである療法分子は、局所投与、あるいは注射または吸入によって投与可能である。
【０１０５】
化合物の溶液または懸濁物は、水中、等張生理食塩水（ＰＢＳ）中で調製し、そして場合によって非毒性界面活性剤と混合することが可能である。グリセロール、液体ポリエチレングリコール、ＤＮＡ、植物油、トリアセチンおよびその混合物中で、分散物もまた調製可能である。これらの調製物は、貯蔵および使用の通常の条件下で、微生物の増殖を防止するための防腐剤を含有することが可能である。
【０１０６】
注射または注入使用に適した薬剤投薬型には、無菌、水性溶液または分散物、あるいは無菌注射可能または注入可能溶液または分散物の即時調製に適応させた、活性成分を含んでなる無菌粉末が含まれることが可能である。最終的な投薬型は、製造および貯蔵条件下で、無菌で、流動体であり、そして安定であるべきである。液体キャリアーまたはビヒクルは、溶媒または液体分散媒体であることが可能であり、例えば水、エタノール、グリセロール、プロピレングリコール、または液体ポリエチレングリコール等のポリオール、植物油、非毒性グリセロールエステル、およびその適切な混合物を含んでなる、溶媒または液体分散媒体であることが可能である。適切な流動性は、例えば、リポソームの形成によって、分散物の場合は必要な粒子サイズの維持によって、または非毒性界面活性剤の使用によって、維持可能である。微生物作用の防止は、多様な抗細菌剤および抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサル等によって達成可能である。多くの場合、等張剤、例えば糖、緩衝剤、または塩化ナトリウムを含むことが望ましいであろう。注射可能組成物の吸収延長は、吸収を遅延させる剤、例えばモノステアリン酸アルミニウムヒドロゲルおよびゼラチンを、組成物中に含むことによって、実行可能である。
【０１０７】
無菌注射可能溶液は、上に列挙するように、多様な他の成分を含む適切な溶媒中に、必要な量の化合物を取り込み、そしてその後、必要に応じてフィルター滅菌することによって調製される。無菌注射可能溶液の調製用の無菌粉末の場合、調製の好ましい方法は、真空乾燥および凍結乾燥技術であり、該技術は、活性成分に、先の無菌ろ過溶液に存在するさらなる所望の成分いずれかを加えた粉末を生じる。
【０１０８】
投薬量
患者治療に最も適切な療法投薬および療法措置は、治療しようとする疾患または状態によって、そして患者の体重および他のパラメーターにしたがって、多様であろう。ＵＬＢＰポリペプチドまたはＵＬＢＰポリペプチドに対する抗体の有用な用量は、全身投与される、約０．０１〜１００ｍｇ  ＵＬＢＰ／ｋｇ／日（またはそれ未満、以下を参照されたい）である可能性がある。より長い治療期間を用いると、はるかに少ない用量、例えば０．００１〜１ｍｇ  ＵＬＢＰ／ｋｇ／日の範囲でもまた、療法的に有用な結果が生じるであろうと期待される。
【０１０９】
用量は、適切な頻度いずれかで、そして適切な期間いずれかの間、投与可能である。例えば、用量は、多くのあり得る投薬措置のうちで、毎日、１日おき、３日ごと、週２回、週１回、１０日ごと、２週間ごと、３週間ごと、１ヶ月ごと、または２ヶ月ごとに投与可能である。各用量の頻度および／または量は、治療期間全体で一定である必要はない。治療は、１日以上から数年の間の、いかなる適切な期間、続けることも可能である。
【０１１０】
有効な投薬量および治療プロトコルは、慣用的な手段によって決定可能であり、実験動物において、低用量で開始し、そしてその後、効果を監視しながら投薬量を増加させ、そして体系的に投薬措置もまた変化させることによって決定可能である。臨床医学者は、既定の被験者に対する最適投薬量を決定する際に、多くの要因を考慮に入れることが可能である。要因には、患者の大きさ、患者の年齢、患者の全身状態、治療しようとする特定の疾患、疾患の重症度、患者における他の薬剤の存在などが含まれる。試験投薬量は、動物研究の結果および臨床的文献を考慮した後、選択されるであろう。
【０１１１】
アッセイ
ＮＫ細胞、またはＮＫＧ２Ｄを発現する他の細胞、例えばＣＤ８+αβＴ細胞、γδＴ細胞、またはマクロファージのＵＬＢＰ刺激を修飾する、例えば増加させるかまたは減少させる剤は、例えばＮＫＧ２Ｄ／ＤＡＰ１０受容体に対するＵＬＢＰ結合のアッセイおよび／またはＵＬＢＰ／ＮＫＧ２Ｄ複合体形成の解析、ＮＫ細胞またはＴ細胞が仲介する細胞毒性の解析、あるいはケモカインおよび／またはサイトカインのＮＫ細胞またはＴ細胞産生の解析によって、同定可能である。ＵＬＢＰ４ポリペプチドの存在下で、そして試験剤の存在下または非存在下で、ＮＫ細胞をインキュベーションし、そしてＵＬＢＰ４活性またはＵＬＢＰ４阻害と、ＵＬＢＰ／ＮＫＧ２Ｄ複合体形成、ＮＫ細胞またはＴ細胞が仲介する細胞毒性、あるいはケモカインおよび／またはサイトカインのＮＫ細胞またはＴ細胞産生を相関させると、こうした剤のスクリーニングが可能になる。こうしたアッセイにおいて、未処理対照に対して、ＵＬＢＰ処理細胞のＮＫＧ２Ｄ受容体仲介活性が不均衡に減少しているかまたは増加していると、試験剤によるＵＬＢＰ４活性の刺激または阻害と相互に関連付けられる。
【０１１２】
ＮＫＧ２Ｄ発現細胞（ＮＫ細胞、またはＴ細胞、またはマクロファージ）における、ＵＬＢＰ４を含むＵＬＢＰポリペプチドに対する特異的標的活性、例えば抗アポトーシス性セリン／スレオニンキナーゼＡｋｔ、ＰＫＢ、ＪＡＫ２チロシンキナーゼとともに、ＳＴＡＴ５転写因子、およびＥＲＫ  ＭＡＰキナーゼのＵＬＢＰ活性化もまた解析し、そして試験剤の阻害に対する活性と相関させることが可能である。
【０１１３】
好ましくは、ＵＬＢＰの可溶性型を用いて、ＮＫＧ２Ｄ発現細胞において、ＵＬＢＰ標的活性を刺激する。場合によって、ＮＫＧ２Ｄ発現細胞はＮＫ細胞であることが可能である。ＵＬＢＰ４に刺激された活性を、試験剤の存在下および非存在下で測定し、そしてその後、比較する。試験剤の非存在下よりも、試験剤の存在下で、ＵＬＢＰ４に活性化された試験活性が低いならば、試験剤がＵＬＢＰの活性を減少させることが示される。試験剤の非存在下よりも、試験剤の存在下で、ＵＬＢＰ４に活性化された試験活性が高いならば、試験剤がＵＬＢＰの活性を増加させたことが示される。ＵＬＢＰの刺激剤および阻害剤を用いて、ＵＬＢＰが仲介する活性を増大させるか、阻害するか、または修飾することが可能であり、そしてしたがって該剤は、潜在的な療法的使用を有することが可能である。例えば、ＵＬＢＰの阻害剤は、例えば自己免疫疾患において、または臓器移植を経験する患者において、ＮＫ細胞の細胞毒性を減少させるのに有用である可能性がある。
【０１１４】
療法適用
本発明のＵＬＢＰ４ポリペプチドを含むＵＬＢＰポリペプチドは、有効なＮＫ細胞、Ｔ細胞、および／またはマクロファージ活性化剤である。本発明の方法において、ＵＬＢＰポリペプチドの免疫エフェクター細胞活性化効果は、ピコモル〜ミリモル量のＵＬＢＰポリペプチドで、そして好ましくはナノモル〜マイクロモル量の可溶性ＵＬＢＰポリペプチドで免疫エフェクター細胞を処理することによって達成される。活性化ＮＫ細胞は、細菌を溶解し、ウイルスに感染した細胞を溶解し、そして腫瘍細胞の除去に関与することが示されている。例えば、Ｗｈｉｔｅｓｉｄｅら（１９９６），  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  １６（４Ｃ）：２５３７−６４；Ｙａｍａｕｅら（１９８９），  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．  ２９（２）：７９−８６を参照されたい。ＵＬＢＰがＮＫ細胞を刺激すると、免疫系の他の成分を活性化するサイトカインおよびケモカインが産生され、そしてしたがって、この刺激は、ウイルス感染または細菌感染における治療として、そして特定の種類の腫瘍細胞治療において、有用である。やはりＵＬＢＰ受容体ＮＫＧ２Ｄを発現するＮＫ細胞以外の細胞、例えばＣＤ８+αβＴ細胞およびγδＴ細胞もまた、ＮＫＧ２Ｄリガンドに活性化されることが可能である。Ｄｉｅｆｅｎｂａｃｈら（２０００），  Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １（２）：１１９−２６；Ｂａｕｅｒら（１９９９），  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８５：７２７−２９．
（１）サイトカイン／ケモカイン産生
ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、および／またはＵＬＢＰ４を含む、単離され、そして好ましくは精製されたＵＬＢＰポリペプチドを用いて、ＮＫ細胞、ＣＤ８+αβＴ細胞、マクロファージ、および／またはγδＴ細胞などの細胞からのサイトカインおよびケモカイン産生を刺激することも可能である。所望により、上に論じたように、この方法で用いるＵＬＢＰポリペプチドをＬＺまたはＦｃ部分に融合させ、三量体または二量体などの多量体であることが可能なＵＬＢＰ−ＬＺ融合タンパク質、または二量体などの多量体であることが可能なＵＬＢＰ−Ｆｃ融合タンパク質を生成する。初代ＮＫ細胞をＩＬ−１５または他の同様の物質で、ある期間、好ましくは１５〜２０時間、処理して、ＮＫ細胞へのＵＬＢＰ結合を最大にする。その後、処理した細胞を、好ましくは約０．０５〜約２０．０μｇ／ｍｌ、所望により約０．５〜約５．０μｇ／ｍｌまたは約０．８〜約３．０μｇ／ｍｌの濃度の可溶性ＵＬＢＰポリペプチドで刺激する。刺激した細胞を、ある期間、好ましくは約１５〜２０時間、さらにインキュベーションして、そして上清を収集する。慣用法によって上清からサイトカインおよびケモカインを単離し、そして精製する。ＵＬＢＰが誘導する、ＮＫ細胞などの細胞の活性化を介して産生されるサイトカインおよびケモカインには、ＧＭ−ＣＳＦ、インターフェロンγ、ＴＮＦ−アルファ、ＭＩＰＩ−アルファ、ＭＩＰＩ−ベータおよびＣＣケモカインＩ−３０９が含まれる。ＩＬ−１５で処理したＮＫ細胞を、場合によって、可溶性ＵＬＢＰ４およびＩＬ−１２の組み合わせで刺激して、さらにより高い収量を達成する。
【０１１５】
（２）腫瘍および感染の治療
ＵＬＢＰ４変異体、断片、および融合タンパク質を含むＵＬＢＰポリペプチドはまた、腫瘍および感染、例えば細菌感染またはウイルス感染治療用の療法剤としても、有用性を見出す。したがって、本発明は、腫瘍増殖を阻害するかまたは停止し、腫瘍細胞を殺し、または患者における腫瘍のサイズおよび／または数を減少させる方法を含む。本発明は、個体にＵＬＢＰポリペプチドを投与することによって、ウイルス感染または細菌感染を治療する方法をさらに含む。ウイルス感染または細菌感染、あるいは真核生物による感染であることが可能な感染の治療は：検出可能な感染性粒子または生物の量の減少；感染性ウイルスまたは生物の検出可能な核酸またはタンパク質の量の減少；および／または感染に関連する症状の減少を含む。
【０１１６】
可溶性ＵＬＢＰポリペプチドであって、変異体、断片、および／または融合タンパク質であることが可能であり、ＮＫＧ２Ｄに結合し、そしてＮＫＧ２Ｄを発現する細胞、好ましくはＮＫ細胞、Ｔ細胞、および／またはマクロファージを活性化することが可能な、前記可溶性ＵＬＢＰポリペプチドを投与することによって、癌または感染を治療可能である。あるいは、抗イディオタイプ抗体であって、抗ＵＬＢＰ抗体に結合可能であり、ＮＫＧ２Ｄに結合し、そしてＮＫＧ２Ｄを発現する細胞を活性化することが可能である、前記抗イディオタイプ抗体を投与することによって、こうした状態を治療可能である。癌または感染がＵＬＢＰタンパク質を発現する場合、ＵＬＢＰタンパク質に特異的に結合する抗体を用いて、癌または感染を治療可能である。癌性細胞または感染細胞に対する抗体の結合によって、抗体に依存する細胞仲介型細胞毒性が刺激され、癌性細胞または感染細胞の死を導くことが可能である。所望により、抗体を細胞毒性剤または放射性剤に融合させて、抗体結合の細胞毒性効果をさらに増進することが可能である。
【０１１７】
すべてではないが、いくつかの癌細胞はＵＬＢＰタンパク質を発現する。例えばＣｏｓｍａｎら、上記；Ｏｎｄａら（２００１），  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍ．  ２８５：２３５−４３を参照されたい。ＵＬＢＰタンパク質を発現している可能性も、また、していない可能性もある癌細胞近傍に局在するＵＬＢＰタンパク質の数を増加させるため、ＵＬＢＰ１、ＵＢＬＰ２、ＵＢＬＰ３、および／またはＵＬＢＰ４を含むＵＬＢＰタンパク質を、腫瘍特異的抗原に結合する抗体または他のポリペプチド（ｉｎ  ｖｉｔｒｏで腫瘍抗原に結合すると選択されたものなど）に融合させ、そして腫瘍を治療するのに用いることが可能である。さらに、こうしたＵＬＢＰ融合タンパク質は、さらに、サイトカイン、例えばＩＬ−１５、ＩＬ−２および／またはＩＬ−１２をさらに含むことが可能であり、そしてこの三重融合タンパク質を用いて、癌または感染を治療することが可能である。サイトカインおよび抗体がともに生物学的機能を保持する、腫瘍特異的抗体に融合させたサイトカインは、多様なセッティングで、有効な抗癌剤であることが見出されている。例えばＧｉｌｌｉｅｓら（２００２），  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．  ５１：４４９−６０；Ｒｕｅｈｌｍａｎｎら（２００１），  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６１：８４９８−５０３；Ｈｏｌｄｅｎら（２００１），  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ７：２８６２−６９を参照されたい。ＵＬＢＰタンパク質をサイトカイン：抗体融合体に付加すると、腫瘍細胞に対する免疫反応がさらに刺激される可能性がある。
【０１１８】
さらに別の態様において、腫瘍を除去する手術後に、患者に残存する腫瘍細胞の増殖を防止または阻害する方法を提供する。ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、および／またはＵＬＢＰ４、並びにその断片、変異体、および／または融合体を含むＵＬＢＰタンパク質をコードする核酸を、患者から外科的に除去した腫瘍から培養した腫瘍細胞に導入することが可能である。その後、例えば放射線照射することによって、さらなる増殖を防止するように、これらの細胞を処理することが可能である。表面上に発現されるＵＬＢＰタンパク質を有する、こうした非分裂細胞を、該細胞を除去した患者に再導入することが可能である。こうした細胞はワクチンとして働き、外科的に除去されたのと同じ種類の腫瘍細胞に対する免疫反応を上昇させることが可能である。こうした治療は、手術後に患者に残存する腫瘍細胞の増殖を防止または阻害可能である。
【０１１９】
（３）ターゲティング部分としての抗ＵＬＢＰ抗体
抗ＵＬＢＰ４抗体を含む抗ＵＬＢＰ抗体は、抗体に依存する細胞仲介型細胞毒性、補体結合、または他の機構を通じた、免疫系による破壊のため、腫瘍細胞または感染細胞を含む、ＵＬＢＰ発現細胞をターゲティングするのに療法的に有用でありうる。さらに、抗ＵＬＢＰ抗体を細胞毒性剤、細胞増殖抑制剤（ｃｙｔｏｓｔａｔｉｃ  ａｇｅｎｔ）、または放射性剤に融合させることが可能であり、こうした抗体は、腫瘍細胞、あるいはウイルス、細菌、または真核生物に感染した細胞などの、ＵＬＢＰ発現細胞に対して、これらの療法剤をターゲティングするのに、療法的に有用である可能性がある。あるいは、放射性剤または発光剤に融合させた抗ＵＬＢＰ４抗体を用いて、ＵＬＢＰ４発現細胞を検出することが可能である。多くの細胞毒性剤、細胞増殖抑制剤、発光剤、または放射性剤が当該技術分野に知られ、そしてこれらは他の抗体に融合され、細胞増殖を停止するか、細胞を殺すか、または特定の抗原を発現している細胞を検出してきた。こうした剤の例には：メイタンシン誘導体（ＤＭ１など）、エンテロトキシン（ブドウ球菌エンテロトキシンなど）、ヨウ素同位体（ヨウ素−１２５など）、テクネチウム同位体（Ｔｃ−９９ｍなど）、シアニン蛍光色素（Ｃｙ５．５．１８など）、またはリボソーム不活性化タンパク質（ボーガニン（ｂｏｕｇａｎｉｎ）、ゲロニン、またはサポリン−Ｓ６など）が含まれる。投与に際して、抗ＵＬＢＰ抗体および所望の細胞毒性剤、細胞増殖抑制剤、発光剤、または放射性剤を含有する融合タンパク質は、標的ＵＬＢＰ発現細胞に結合し、こうしてその検出を可能にするか、あるいは細胞を殺すかまたはその増殖を阻害するため、細胞に療法剤を運ぶ。腫瘍細胞がＵＬＢＰ４を発現する場合、例えばこうしたターゲティング部分を用いて、腫瘍細胞を殺すか、またはその増殖を防止することが可能である。
【０１２０】
（４）ＩＬ−１２との相乗効果
ＵＬＢＰタンパク質およびＩＬ−１２は、強く相乗作用して、ＩＬ−１５で前処理したＮＫ細胞からのインターフェロン−ガンマ産生を誘導する。ＵＬＢＰタンパク質はまた、ケモカインのｍＲＮＡレベルも上方制御する。特に、ケモカインＩ−３０９およびリンホタクチンがＵＬＢＰタンパク質に上方制御されることが示された。さらに、ＮＫ細胞において、ＧＭ−ＣＳＦ、リンホタクチン−アルファおよびＴＮＦ−アルファを含む、ＮＫ細胞活性化の既知のマーカーであるサイトカインが、ＵＬＢＰの投与に際して上方制御される。上に論じられるように、ＮＫ細胞は、多様な細胞種を溶解することによって、細胞毒性効果を発揮することが可能である。したがって、宿主系がＮＫ細胞を活性化し、そして活性化されたＮＫ細胞を、感染した細胞または腫瘍細胞にターゲティングする能力は、感染および腫瘍と戦う際の重要な特徴である。
【０１２１】
（５）ＮＫＧ２Ｄ／Ｄａｐ１０への結合
実施例として、以下に記載し、そして立証するように、ＵＬＢＰ４を含むＵＬＢＰポリペプチドは、ＮＫ細胞、ＣＤ８+αβＴ細胞、γδＴ細胞、およびいくつかのマクロファージに発現される抗原であるＮＫＧ２Ｄ／Ｄａｐ１０に結合する。ＮＫキラー細胞の活性化の結果、サイトカインが産生され、そしてＮＫ細胞殺傷が誘導される。ＵＬＢＰタンパク質が重要なサイトカインの産生と相乗作用する能力があることから、ＵＬＢＰタンパク質がＮＫ細胞の細胞溶解機能を活性化可能であることが示される。したがって、ＵＬＢＰタンパク質は、抗腫瘍療法剤として、そしてウイルス感染または細菌感染、あるいは原生動物を含む真核生物感染を含む感染を治療する療法剤として、有用性を見出す。
【０１２２】
さらに、ＮＫ細胞、マクロファージ、γδＴ細胞、またはＣＤ８+αβＴ細胞に結合し、そしてこれらの細胞を活性化することが可能であり、そしてまた、腫瘍細胞にも結合可能である、二機能性分子または多機能性分子が、本発明にしたがって有用である。適切な二機能性分子または多機能性分子は、少なくとも１つのＵＬＢＰタンパク質、またはＵＬＢＰタンパク質のＮＫＧ２Ｄ受容体結合断片、および例えば一本鎖抗体などの、腫瘍細胞抗原に結合するポリペプチドまたは他の部分を含む分子であることが可能である。こうした療法剤が、ＮＫ細胞、マクロファージ、γδＴ細胞、および／またはＣＤ８+αβＴ細胞に結合し、そしてこれらの細胞を活性化することが可能であり、そしてこれらのエフェクター細胞による溶解のため、腫瘍細胞をターゲティングすることが可能であることが認識可能されうる。
【０１２３】
（６）免疫抑制
さらに、ＵＬＢＰが免疫系を活性化する能力に干渉する剤は、免疫反応の下方制御が望ましい状況、例えば移植（Ｍａｎｉｌａｙら，  １９９８，  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １０：５３２−５３８）、移植片対宿主疾患、移植片拒絶、自己免疫疾患、遺伝子治療（Ｈａｃｋｅｔｔら，  ２０００，  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｍｏｌ．  Ｔｈｅｒａｐ．  ２：３７６−３８２）、炎症性腸疾患およびクローン病などの不適切な炎症によって特徴付けられる疾患などの状況において有用である。例えば、哺乳動物への遺伝子治療ベクターの投与、移植の前に、それとほぼ同時に（少し前または少し後いずれか）、またはそれと同時に、あるいは別の方式で、所望の免疫抑制に適したように、限定されるわけではないが、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３およびＵＬＢＰ４を含むＵＬＢＰに、特異的に結合するアンタゴニスト性抗体またはペプチボディを投与することが可能である。こうした治療にやはり適しているのは、ＮＫＧ２Ｄを介した活性化を遮断または阻害可能な、ＵＬＢＰポリペプチドのアンタゴニスト型（変異体、断片、および融合タンパク質を含む）または抗イディオタイプ抗体である。
【０１２４】
検出可能な自己抗体の数を減少させ、免疫エフェクター細胞の活性化を減少させ、そして／または自己免疫疾患の症状を減少させるかまたは除去するため、アンタゴニスト性抗ＵＬＢＰ抗体、あるいはＵＬＢＰポリペプチドまたは抗イディオタイプ抗体のアンタゴニスト型を、自己免疫疾患を患う患者に投与することが可能である。自己免疫疾患には、患者自身の組織が、患者の免疫系に引き起こされる有害な影響に供される、すべての状態が含まれる。こうした影響は、他の可能性の中でも、自己抗体によって、そして／または免疫エフェクター細胞の活性化によって、仲介されうる。免疫エフェクター細胞の活性化が、疾患病理に役割を果たしている場合、ＵＬＢＰタンパク質などのＮＫＧ２Ｄリガンドとの拮抗が特に有益である可能性がある。自己免疫疾患の原因は、通常、不明であるが、いくつかの症例で、多様な種類の感染の存在および多様な自己免疫疾患の間の相関が確立されており、そしてこれは科学的文献の考察にたびたび登場する主題である。例えばＣｏｒａｐｃｉｏｇｌｕら（２００２），  Ｔｈｙｒｏｉｄ  １２：６１３−１７；Ｓｅｗｅｌｌら（２００２），  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｌｅｔｔ．  ８２：１０１−１０；Ｒｏｓｅ（１９９８），  Ｓｅｍｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １０（１）：５−１３；Ｍａｔｓｉｏｔａ−Ｂｅｒｎａｒｄ（１９９６），  Ｃｌｉｎ．  Ｅｘｐ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １０４：２２８−３５；並びにＭｃＭｕｒｒａｙおよびＥｌｂｏｕｒｎｅ（１９９７），  Ｓｅｍｉｎ．  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．  ２６：６９０−７０１を参照されたい。
【０１２５】
当業者は、自己免疫疾患の症状が非常に多様であり、そして患者の免疫系によってどの組織がターゲティングされるのかに応じる可能性があることを認識するであろう。自己免疫疾患は、臓器特異的、または全身性であることが可能であり、例えば、とりわけ、アジソン病、インスリン依存性糖尿病（Ｉ型糖尿病）、多腺性内分泌病症候群、全身性エリテマトーデス、慢性活性肝炎、多様な型の甲状腺炎（橋本甲状腺炎、一過性甲状腺炎症候群、およびグレーブス病を含む）、リンパ球性腺下垂体炎、未成熟卵巣不全、特発性下垂体前葉甲状腺炎（ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ  ｐｈｙｏｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄｉｓｍ）、悪性貧血、糸球体腎炎、自己免疫好中球減少症、グッドパスチャー症候群、多発性硬化症、白斑、重症筋無力症、関節リウマチ、強皮症、原発性シェーグレン症候群、多発性筋炎、自己免疫溶血性貧血、自己免疫血小板減少性紫斑病、尋常性天疱瘡、急性リウマチ熱、混合本態性寒性グロブリン血症、および温式自己免疫溶血性貧血が含まれる。
【０１２６】
さらに、アンタゴニスト性抗ＵＬＢＰ抗体またはペプチボディ、あるいはアンタゴニスト性ＵＬＢＰポリペプチドまたは抗イディオタイプ抗体を、炎症性腸疾患およびクローン病などの炎症性疾患を患う患者に投与して、これらの疾患の症状を減少させるか、または除去することが可能である。
【０１２７】
さらに、ＵＢＬＰの上述の療法適用すべてにおいて、既知のまたはまだ発見されていないＮＫＧ２Ｄの他のリガンドをＵＬＢＰの代わりに使用することが可能である。これらのリガンドには、限定されるわけではないが、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、並びにＮＫＧ２Ｄに結合する抗体およびペプチボディが含まれる。
【０１２８】
本出願内で、別に言及しない限り、利用する技術は：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）；“Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，”  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，  Ｖｏｌ．  １８５，  Ｄ．  Ｇｏｅｄｄｅｌ監修，  （１９９１）  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  カリフォルニア州サンディエゴ；“Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ”  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ中，  Ｍ．Ｐ．  Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ，  ３ｄ．，  （１９９０）  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｉｎｃ．；ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｉｎｎｉｓら（１９９０）  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  カリフォルニア州サンディエゴ；Ｃｕｌｔｕｒｅ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌｓ：Ａ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｂａｓｉｃ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ，  第２版，  Ｒ．Ｉ．  Ｆｒｅｓｈｎｅｙ（１９８７）  Ｌｉｓｓ，  Ｉｎｃ．，  ニューヨーク州ニューヨーク；およびＧｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，  ｐｐ  １０９−１２８，  Ｅ．Ｊ．  Ｍｕｒｒａｙ監修，  Ｔｈｅ  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ  Ｉｎｃ．，  ニュージャージー州クリフトンなどのいくつかの周知の参考文献のいずれかに見出すことが可能である。
【実施例】
【０１２９】
本発明を一般的に記載してきたが、例示のために提供され、そして限定することを意図しない、以下の実施例を参照することによって、本発明は、より容易に理解されるであろう。
【０１３０】
（実施例１）
ヒトＵＬＰＢ４  ｃＤＮＡの分子クローニング
２つの関連特許、ＷＯ  ９９／０６５５４（’５５４）およびＷＯ  ９９／３１２３６（’２３６）に開示される、公表されたｃＤＮＡ配列は、本明細書において、ＵＬＢＰタンパク質ファミリーと、あり得る相同性を有すると同定された。ＷＯ  ’５５４は、分泌タンパク質をコードするようであると報告される、３７０ｂｐ  ＥＳＴ配列を開示するが、該ＥＳＴはいかなる特定のタンパク質もコードするとも、また、いかなる既知のタンパク質ファミリーに関連するいかなるタンパク質もコードするとも認識されなかった。ＷＯ  ’２３６は、ヒト分泌タンパク質の一部をコードすると考えられる、９８９塩基対配列の伸長したｃＤＮＡ（配列番号３２０）を挙げた。該配列は、いかなる特定のタンパク質もコードするとも、また、いかなる既知のタンパク質ファミリーに関連するいかなるタンパク質もコードするとも認識されなかった。
【０１３１】
ＷＯ  ’２３６出願の９８９ｂｐ  ｃＤＮＡ配列に相同性を有する配列に関して、公的なゲノムデータベース（ＮＣＢＩ／ＮＩＨ）を検索した。検索によって、ＤＮＡのゲノム伸長上の相同であるが同一でない配列が明らかになった（ＧｅｎＢａｎｋ寄託番号第ＡＬ３５５３１２号）。ＵＬＢＰ１、２、および３遺伝子のイントロン−エクソン構造の知識に基づいて、ＵＬＢＰ４遺伝子の構造を予測し、そして予測されるＵＬＢＰ４  ｃＤＮＡに特異的であろうＰＣＲプライマーを設計するのに用いた。２つのプライマー、順方向プライマー：５’ＴＡＴ  ＧＴＣ  ＧＡＣ  ＣＴＣ  ＣＡＣ  ＡＧＴ  ＡＴＧ  ＣＧＡ  ＡＧＡ  ＡＴＡ  ＴＣＣ  ＣＴＧ３’（配列番号７）および逆方向プライマー：５’ＡＴＡ  ＧＧＣ  ＧＧＣ  ＣＧＣ  ＡＧＡ  ＣＴＡ  ＡＧＡ  ＣＧＴ  ＣＣＴ  ＣＡＡ３’（配列番号８）を用いて、Ｎａｍａｌｗａ（ヒトＢ細胞リンパ腫）ｃＤＮＡライブラリー（ＡＴＣＣ、バージニア州マナサスから入手可能な細胞株ＣＲＬ−１４３２）から、ＰＣＲによって、全長ＵＬＢＰ４  ｃＤＮＡを増幅した。ｃＤＮＡをクローニングし、配列決定し、そして該ｃＤＮＡが７８９塩基対のオープンリーディングフレームを有することを見出した。ｃＤＮＡクローンの核酸配列（配列番号１）および推定されるアミノ酸配列（配列番号２）を表１に示す。
【０１３２】
表１
ＵＬＢＰ４
【０１３３】
【表１】
2005523681.tif 000002
【０１３４】
ｃＤＮＡによって予測されるアミノ酸配列は、以下の実施例２、表３に示すように、ＵＬＢＰポリペプチドに相同性を有すると決定された。新規ＵＬＢＰポリペプチド、ＵＬＢＰ４は、ＷＯ  ９９／３１２３６に開示されるｃＤＮＡ配列（配列番号３２０）から予測されるものと別個の、予測されるアミノ酸配列を有し、表２に示すように、２６３のうち、２６が非同一アミノ酸であった。異なるアミノ酸残基のうち８は、アルファ−１およびアルファ−２ドメインのほぼ１８３アミノ酸内に属する。これらのうち、ミスマッチしたアミノ酸のうちの、１２３位および１６６位の２つは、ＷＯ  ９９／３１２３６に開示されるｃＤＮＡ配列（配列番号３２０）の対応する位の、潜在的な停止コドンに相当する。
【０１３５】
表２
【０１３６】
【表２】
2005523681.tif 000003
【０１３７】
（実施例２）
ＵＬＢＰ４はＵＬＢＰファミリーのメンバーである
Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，  Ｉｎｃ（ＧＣＧ，  Ｉｎｃ．、ウィスコンシン州マディソン）のＰＩＬＥＵＰおよびＧＡＰプログラムを用いて、ＵＬＢＰ１、ＵＢＬＰ２、ＵＬＢＰ３、およびＵＬＢＰ４ポリペプチドのアミノ酸配列の配列並列および比較を用意した。ＵＬＢＰファミリーメンバーのアミノ酸配列並列を調べると、ＵＬＢＰ４のアミノ酸配列が、既知のＵＬＢＰファミリーメンバー、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、およびＵＬＢＰ３のアミノ酸配列に相同であることが示される（表３を参照されたい）。ＵＬＢＰ４に関して予測されるアミノ酸配列は、ＵＬＢＰ１にほぼ３５％同一であり、ＵＬＢＰ２にほぼ２８％同一であり、そしてＵＬＢＰ３にほぼ３３％同一である。
【０１３８】
特に、ＵＬＢＰ４は、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、およびＵＬＢＰ３のアルファ−１およびアルファ−２ドメインに相同な領域を有する。例えば、ＵＬＢＰ４ポリペプチドのアルファ−１ドメインは、アミノ酸残基Ｌｅｕ２４〜Ｈｉｓ３１からＡｓｐ１１６に伸長する。これは、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２およびＵＬＢＰ３のアルファ−１ドメインに緊密に一致する。ＵＬＢＰ４ポリペプチドのアルファ−２ドメインは、アミノ酸残基Ｐｒｏ１１７〜Ｔｈｒ２０７に伸長し、これはＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２およびＵＬＢＰ３のアルファ−２ドメインに緊密に一致する。アルファ−１およびアルファ−２ドメイン全体に、非常に保存されたアミノ酸残基が存在することは、ＵＬＢＰ４がＵＬＢＰファミリーのメンバーであることにさらなる裏付けを加える。並列データは、ＵＬＢＰ４がこのタンパク質ファミリーのメンバーであるという結論を裏付ける。
【０１３９】
新規ポリヌクレオチド分子および対応する推定上のポリペプチド、ＵＬＢＰ４は、本明細書において、ＵＬＢＰタンパク質ファミリーの新規メンバーと同定される。ＵＬＢＰ４のアミノ酸配列には、いくつかの興味深い特徴が存在し、この特徴には、シグナル配列、アルファ−１およびアルファ−２ドメイン、および短い細胞質テールを持つ、ユニークな膜貫通ドメインが含まれる。上に論じたように、この構造は、既知のＵＬＢＰポリペプチド、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、およびＵＬＢＰ３に特徴的である。新規のＵＬＢＰ４は、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、およびＵＬＢＰ３同様、アルファ−３ドメインを欠き、そしてしたがってベータ−２ミクログロブリンと会合不能である点で、伝統的なＭＨＣクラスＩ分子と異なる。
【０１４０】
表３
【０１４１】
【表３】
2005523681.tif 000004
【０１４２】
注：番号付けは、ＵＬＢＰ４のアミノ酸配列にしたがっている。
*ＵＬＢ４シグナル配列の潜在的な末端
（実施例３）
ＮＫ受容体へのＵＬＢＰ４の結合
ＮＫＧ２Ｄ細胞表面受容体は、ＮＫキラー細胞のＵＬＢＰによる活性化を仲介する（Ｃｏｓｍａｎら（２００１），  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １４：１２３−１３３）。Ｃｏｓｍａｎら、上記に記載される一般的な方法にしたがって、組換えＮＫＧ２Ｄ受容体を発現しているＣＶ−１細胞に結合する能力に関して、実施例１および２のＵＬＢＰ４ポリペプチドを解析した。
【０１４３】
ヒトおよびネズミＮＫＧ２Ｄ−Ｆｃを発現しているＦｃ融合タンパク質構築物を調製し、ＣＶ−１細胞で発現させ、そしてクロマトグラフィー（プロテインＡ−Ｐｏｒｏｓカラム、ＰｅｒＳｅｐｔｉｖｅ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）によって、培養上清から融合タンパク質を精製した。Ｆｃ融合タンパク質は、修飾ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域のヒンジ領域のアミノ末端に融合させた、目的のタンパク質の細胞外ドメインを含有し（Ｂａｕｍら（１９９４），  ＥＭＢＯ  Ｊ．  １３：３９９２−４００１）、そしてこのＦｃ融合タンパク質を哺乳動物発現ベクターｐＤＣ４０９（Ｇｉｒｉら（１９９４），  ＥＭＢＯ  Ｊ．  １３：２８２２−２８３０）内にサブクローニングした。
【０１４４】
ＵＬ１６−Ｆｃ融合タンパク質は、Ｆｃ領域にアミノ酸１８３の後で融合させたＵＬ１６の細胞外ドメインを含有した。ＮＫＧ２Ｄ−Ｆｃ融合タンパク質は、Ｆｃ領域にアミノ酸７４で融合させたＮＫＧ２Ｄの細胞外領域を含有した。これらの可溶性融合タンパク質を、記載されるように調製した（Ｃｏｓｍａｎら（２００１），  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １４：１２３−１３３）。
【０１４５】
全長ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、およびＵＬＢＰ４を発現しているｃＤＮＡを含有するｐＤＣ４０９ベクター、並びに、空ベクター対照を、ＣＶ−１細胞にトランスフェクションした。次いで、トランスフェクトされた細胞を、３％ウシ胎児血清を含有するリン酸緩衝生理食塩水中のヒトまたはネズミＮＫＧ２Ｄ−ＦｃまたはＵＬ１６−Ｆｃとインキュベーションした。示した融合タンパク質と、氷上で１時間インキュベーションした後、細胞を２回洗浄し、そしてフィコエリトリン（ＰＥ）にコンジュゲート化したヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ特異的）抗体（Ｓｉｇｍａ、ウィスコンシン州ミルウォーキー）とインキュベーションした。細胞を２回洗浄し、そしてＢｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ＦＡＣＳｃａｎ中、フローサイトメトリーによって結合に関して解析した。バックグラウンドを越えて１対数〜２対数の間の蛍光を生じる細胞（バックグラウンドは、第二の工程の試薬のみで染色した細胞から生じる蛍光の量として得た）を＋＋と特徴付けた。より強く蛍光を生じる細胞を＋＋＋とスコア付けした。バックグラウンドより高い蛍光を生じるが、バックグラウンドを越えて１対数未満である細胞を＋と特徴付けた。
【０１４６】
以下の表４に示すように、ＵＬＢＰ４は、ＵＬＢＰ３の結合活性と類似のパターンで、ヒトＮＫＧ２Ｄ−Ｆｃに強く、そして特異的に結合した。ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、およびＵＬＢＰ３各々と同様、新規タンパク質ＵＬＢＰ４は、ヒトＮＫキラー細胞受容体、ＮＫＧ２Ｄに結合した。この結合活性を、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、およびＵＬＢＰ３との構造的同一性が高い度合いであることと合わせて考慮すると、ＵＬＢＰ４が、ＮＫＧ２Ｄ受容体の結合を介して免疫エフェクター細胞を刺激するＵＬＢＰタンパク質ファミリーに属することが確かめられる。
【０１４７】
表４
結合結果
【０１４８】
【表４】
2005523681.tif 000005
【０１４９】
（実施例４）
ＮＫ細胞が仲介する細胞毒性の、ＵＬＢＰタンパク質による増進
この実験は、51Ｃｒ標識標的細胞の表面上のＵＬＢＰタンパク質の発現が、ＮＫエフェクター細胞による標的細胞の殺傷を増進可能であるかどうかを決定するために設計された、51Ｃｒ放出アッセイである。
【０１５０】
ヒトＮＫ細胞は、Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎら（（１９９６），  Ｅｘｐ．  Ｈｅｍａｔｏｌ．  ２４：４０６−１５）に記載されるヒトＮＫ細胞株ＮＫＬ由来である。ネズミＮＫ細胞は、以下のように、Ｃ５７／Ｂ６  ＳＣＩＤマウスから得た。マウスを屠殺し、そして脾臓を取り除き、そして押しつぶして細胞を放出させた。この細胞は、主に赤血球、Ｂ細胞、Ｔ細胞、およびＮＫ細胞からなった。１５５ｍＭ  ＮＨ4Ｃｌ、１６．５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．４中、放出させた細胞を室温で２分間インキュベーションし、そして赤血球を選択的に溶解して、他の細胞の大部分を損なわれない（ｉｎｔａｃｔ）ままにするため、培地中で迅速に洗浄した。ＮＫ細胞の拡大を刺激するため、１ミリリットルあたり２００ナノグラムの組換えヒトＩＬ−１５（米国特許第５，５７４，１３８号、該特許では、ＩＬ−１５は「上皮由来Ｔ細胞因子」と称される、およびＥＰ  ０  ７７２  ６２４に記載）を含有する培地１ミリリットルあたり２００万細胞で、残った細胞を３日間培養した。第３日、ネズミＮＫ細胞上で発現されるネズミＮＫＧ２Ｄに特異的に結合する抗体で細胞を染色して、細胞の何パーセントがＮＫ細胞であるかを決定した。少なくとも約８０％の細胞が、ネズミＮＫＧ２Ｄに対する抗体で染色される培養が、第４日の細胞毒性アッセイで使用するのに適している。
【０１５１】
標的細胞は、例えばアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションから入手可能なリンパ腫細胞株であるＥＬ４細胞であり、該細胞は、全長ヒトＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、またはＵＬＢＰ４タンパク質をコードする核酸でトランスフェクションされていないかまたはトランスフェクションされている。トランスフェクションされていないＥＬ４細胞は、ヒトヒトＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、またはＵＬＢＰ４タンパク質を発現しない。標的細胞には、培地中、51Ｃｒを約１時間与え、そして続いて洗浄した。
【０１５２】
総体積２００μｌ中、９６ウェルマイクロタイタープレート中でアッセイを行った。ヒトＮＫエフェクター細胞に関しては、以下のエフェクター：標的細胞比で、多様な数のＮＫ（すなわちエフェクター）細胞と１０4標的細胞を、５％ＣＯ2中、３７℃で２〜３時間インキュベーションした：５：１、２．５：１、１．２５：１、または０．６：１。ネズミヒトＮＫエフェクター細胞に関しては、以下のエフェクター：標的細胞比で、多様な数のＮＫ（すなわちエフェクター）細胞と５ｘ１０3標的細胞を、５％ＣＯ2中、３７℃で２〜３時間インキュベーションした：２０：１、１０：１、５：１、または２．５：１。陰性対照として、エフェクター細胞なしで標的細胞をインキュベーションした。陽性対照として、標的細胞を界面活性剤で溶解した。培地中に放出された放射能を、ガンマカウンター中で計測した。実験試料の放出放射能から陰性対照の放出放射能を減じて、陽性対照の放出放射能から陰性対照の放出放射能を減じたもので割り、１００を掛けて、細胞毒性パーセントを計算した。結果を図１および２に示す。
【０１５３】
図１は、標的細胞表面上にヒトＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、またはＵＬＢＰ４タンパク質が発現すると、ネズミＮＫ細胞の細胞毒性が増進可能であることを示す。図２は、標的細胞表面上にヒトＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、またはＵＬＢＰ４タンパク質が発現すると、ヒトＮＫ細胞の細胞毒性が増進可能であることを示す。
【０１５４】
（実施例５）
ＮＫ細胞へのＵＬＰＢ４の可溶性型の結合
以下の実験を行って、ヒトＵＬＢＰ４タンパク質の可溶性型がヒトＮＫ細胞に結合可能であるかどうかを決定した。
【０１５５】
ＵＬＢＰ４：Ｆｃ融合タンパク質をコードする２つの異なる構築物を生成した。一方は、配列番号２の１位から開始して、そして２１７位で終わるＵＬＢＰ４：Ｆｃタンパク質をコードした（ＵＬＢＰ４：Ｆｃ−Ｂ）。もう一方は、配列番号２の１位から開始して、そして２２４位で終わるＵＬＢＰ４タンパク質をコードした（ＵＬＢＰ４：Ｆｃ−Ａ）。これらのＵＬＢＰ４タンパク質をどちらも、そのカルボキシ末端で、ヒトＩｇＧ１抗体のＦｃ領域に融合させた。タンパク質をコードする構築物をトランスフェクションした哺乳動物細胞の培地から、これらのＵＬＢＰ４：Ｆｃ融合タンパク質、加えて対照として用いるＵＬＢＰ１：Ｆｃ融合タンパク質を、プロテインＡクロマトグラフィーによって精製した。これらのＵＬＢＰ４タンパク質のアミノ末端配列の解析によって、配列番号２のＨｉｓ３１が、これらのタンパク質の成熟型のアミノ末端であることが示された。
【０１５６】
２つの異なるドナーから、ヒトＮＫ細胞を単離し、そしてＫｕｂｉｎら（（２００１），  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ３１：１４２８−３７）に記載されるように、組換えヒトＩＬ−１５で一晩刺激した。約１００万のＮＫ細胞を１μｇのタンパク質（ＵＬＢＰ４：Ｆｃ−Ａ、ＵＬＢＰ４：Ｆｃ−Ｂ、またはＵＬＢＰ１：Ｆｃいずれか）と、０℃で３０分間プレインキュベーションした。ＮＫ細胞を続いて洗浄し、ヒトＩｇＧ抗体のＦｃ領域に特異的な蛍光標識抗体で染色し、そしてフローサイトメトリーによって解析した。陰性対照として、いかなるタンパク質ともプレインキュベーションしていないＮＫ細胞を、実験試料同様に洗浄し、染色し、そして解析した。一方のドナー由来のＮＫ細胞を用いた試料の平均蛍光強度を表５に示す。他方のドナー由来のＮＫ細胞を用いた値も同様である。
【０１５７】
表５
【０１５８】
【表５】
2005523681.tif 000006
【０１５９】
これらのデータによって、ＵＬＢＰ４：Ｆｃ−ＢがＮＫ細胞に結合可能であり、一方、ＵＬＢＰ４：Ｆｃ−Ａは、結合するとしてもより低い度合いで結合することが示される。
（実施例６）
ｉｎ  ｖｉｖｏでの野生型マウスにおける、ＵＬＢＰが仲介する腫瘍拒絶
以下の実験は、ネズミ腫瘍細胞表面上のＵＬＢＰタンパク質の発現が、ｉｎ  ｖｉｖｏで腫瘍拒絶に役割を果たす可能性があるかどうかを試験する。
【０１６０】
マウスに注射した際、ＥＬ４細胞は腫瘍を引き起こす可能性がある。ＥＬ４細胞は、ＮＫＧ２Ｄリガンドを発現しない。Ｄｉｅｆｅｎｂａｃｈら（２０００），  Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １（２）：１１９−２６．ＥＬ４細胞に、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＲＡＥ−１β（ネズミＮＫＧ２Ｄリガンド；Ｄｉｅｆｅｎｂａｃｈら、上記）、またはネズミＩＬ−４受容体の一部切除型（ＩＬ−４Ｒ）いずれかを、培養中にトランスフェクションした。ＩＬ−４Ｒは、ｉｎ  ｖｉｖｏで腫瘍拒絶を仲介するとは期待されず、そして陰性対照として意図された。第０日、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＲＡＥ−１β、またはＩＬ−４Ｒいずれかを発現している３ｘ１０5ＥＬ４腫瘍細胞を、Ｃ５７／Ｂ６マウスに皮下注射した。１５日の期間に渡って、腫瘍サイズを測定した。第１５日の腫瘍発生率を表６に示す。図３において、平均腫瘍サイズを時間に対してグラフにしている。
【０１６１】
表６
【０１６２】
【表６】
2005523681.tif 000007
【０１６３】
これらのデータによって、ＵＬＢＰ類またはＲＡＥ−１βを発現している細胞を含んでなるマウス中の腫瘍は、これらのＮＫＧ２Ｄリガンドを発現しない腫瘍に比較して、ｉｎ  ｖｉｖｏで優先的に拒絶されることが示される。
【０１６４】
（実施例７）
ｉｎ  ｖｉｖｏでのｓｃｉｄマウスにおける、ＵＬＢＰが仲介する腫瘍拒絶
以下の実験を設計して、上記の実施例６で観察される腫瘍拒絶が、Ｂ細胞および／またはＴ細胞の作用に依存するかどうかを決定した。
【０１６５】
ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、またはＲＡＥ−１βいずれかをトランスフェクションしないか、またはトランスフェクションした、約３ｘ１０5ＥＬ４細胞を、重症複合型免疫不全症を与える突然変異を所持するＣ５７／Ｂ６マウス（ｓｃｉｄマウス）に注射した。１０匹のマウスに各種類の細胞を注射した。ｓｃｉｄマウスは、発生中のリンパ球においてＤＮＡ再編成の欠失を示し、そして成熟Ｂ細胞およびＴ細胞を非常に少ししか持たない。Ｊａｎｅｗａｙら，  Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，  第５版，  パートＶ，  Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，  ニューヨークおよびロンドン（２００１）。第１日〜第２４日に腫瘍サイズを測定し、そして図４において、腫瘍サイズを時間に対してグラフにしている。これらのデータによって、ＲＡＥ−１βまたはＵＬＢＰのトランスフェクションに依存する腫瘍拒絶が、野生型マウスとともに、ｓｃｉｄマウスで起こることが示される。したがって、こうした腫瘍拒絶は、Ｂ細胞および／またはＴ細胞の作用に依存しないようである。
【０１６６】
本発明は、特定の実施例に言及して記載されてきている。これらの実施例は、いかなる点でも、本発明を限定することを意味しない。この開示の目的のため、十分に本発明の範囲内である、多様な変化および修飾を本発明に行うことが可能であると理解される。当業者に容易に思い浮かぶであろう、そして本明細書に開示する本発明の精神に含まれ、そして付随する請求項に定義されるような、多くの他の変化も行うことが可能である。
【０１６７】
本明細書は、特許、特許出願、および刊行物に対する数多くの引用を含有する。各々は、すべての目的のため、本明細書に援用される。
【図面の簡単な説明】
【０１６８】
【図１】図１は、エフェクター細胞：標的細胞比の関数として、51Ｃｒ標識非トランスフェクションＥＬ４細胞、または示したＵＬＢＰタンパク質をコードする核酸をトランスフェクションした51Ｃｒ標識ＥＬ４細胞いずれかの標的細胞と組み合わせた際の、ネズミＮＫ細胞（エフェクター細胞）の細胞毒性パーセントを示す。
【図２】図２は、エフェクター細胞：標的細胞比の関数として、51Ｃｒ標識非トランスフェクションＥＬ４細胞、または示したＵＬＢＰタンパク質をコードする核酸をトランスフェクションした51Ｃｒ標識ＥＬ４細胞いずれかの標的細胞と組み合わせた際の、ヒトＮＫ細胞（エフェクター細胞）の細胞毒性パーセントを示す。
【図３】図３は、野生型マウスに、示したタンパク質をコードする核酸をトランスフェクションしたＥＬ４細胞を注射した後の日数の関数としての平均腫瘍サイズを示す。
【図４】図４は、ｓｃｉｄマウスに、非トランスフェクションＥＬ４細胞、または示したタンパク質をコードする核酸をトランスフェクションしたＥＬ４細胞を注射した後の日数の関数としての腫瘍サイズを示す。
【配列表】
2005523681.tif 000008
2005523681.tif 000009
2005523681.tif 000010
2005523681.tif 000011
2005523681.tif 000012
2005523681.tif 000013
2005523681.tif 000014
2005523681.tif 000015
2005523681.tif 000016
【図１】
2005523681.tif 000017
【図２】
2005523681.tif 000018
【図３】
2005523681.tif 000019
【図４】
2005523681.tif 000020
【国際調査報告】
2005523681.tif 000021
2005523681.tif 000022
2005523681.tif 000023
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