(57)【要約】    本発明は、ＣＣＫ  Ａ型及び／もしくはＢ型コレシストキニン受容体並びに／又はＳＳＴＲ１〜５型ソマトスタチン受容体を過剰発現している原発ヒト腫瘍及びそれらの転移を同定及び位置決定するための、核磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）において使用するための造影剤の新規クラスに関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）：
【化１】
2005510461.tif 000033
〔式中：
Ｂは１個以上の一般式（II）又は（III）
【化２】
2005510461.tif 000034
〔式中：
ＡＡ0はＬ体又はＤ体の任意のアミノ酸であり；
ＡＡ1はＡｓｐ又はＧｌｕであり；
ＡＡ2はＴｙｒ又はＳＯ3Ｈ−Ｔｙｒであり；
ＡＡ3はＭｅｔ、Ｎｌｅ又はＬｅｕであり；
ＡＡ6はＭｅｔ、Ｎｌｅ又はＬｅｕであり；
ＡＡ8はＰｈｅ又はその対応するアミノアルコールであり；
ＡＡ′1、ＡＡ′3  ＡＡ′6及びＡＡ′8はＬ体又はＤ体の天然又は非天然いずれかの任意のアミノ酸であり；
ＡＡ′8はＬ体又はＤ体の天然又は非天然いずれかの任意のアミノ酸に由来するアミノアルコール誘導体であってもよく；
Ｒ2はヒドロキシ基、アミノ基又はＣ1〜Ｃ4アルコキシ基であり；
ｖは１〜５の整数であり；
ｗはゼロ又は１である〕の直鎖型、分岐型又は環式のペプチドを表し；
Ｐは、ｔ個のＡ単位と共有結合することができ、１個以上のＢの単位と共有結合により結合した直鎖型又は分岐型の重合体鎖を表し；
ｔは２〜１００の範囲の整数であり；
Ａは、Ｐと共有結合しており、かつアミノ基、ピリジノ基、カルボキシ基、ホスホン酸基、ホスフィン酸基、ヒドロキシル基及びカルボキサミド基より選択される配位部位６〜８個を含有している環式又は非環式のキレート化剤を表し、２１〜２９、４２、４４又は５７〜７１の範囲の原子番号を有する２〜３価金属をキレート化することができる〕の化合物。
【請求項２】
２１〜２９、４２、４４又は５７〜７１の範囲の原子番号を有する金属元素の２〜３価イオン、常磁性金属、特にＦｅ、Ｃｕ、Ｃｒ、Ｅｕ、Ｇｄ、Ｔｂ、Ｄｙ、Ｈｏ、Ｅｒ、Ｔｍ、Ｙｂ、Ｍｎとの錯体、及び生理学的に適合性の塩基又は酸とのそれらの塩の形態の、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｆｅ（２＋）、Ｆｅ（３＋）、Ｃｕ（２＋）、Ｃｒ（２＋）、Ｃｒ（３＋）、Ｅｕ（３＋）、Ｇｄ（３＋）、Ｔｂ（３＋）、Ｄｙ（３＋）、Ｈｏ（３＋）、Ｅｒ（３＋）、Ｙｂ（３＋）、Ｍｎ（２＋）、Ｍｎ（３＋）の２〜３価イオンとの錯体、及び生理学的に適合性の塩基又は酸とのそれらの塩の形態の、請求項２記載の化合物。
【請求項４】
Ｅｕ（３＋）、Ｇｄ（３＋）、Ｄｙ（３＋）、Ｍｎ（２＋）、Ｍｎ（３＋）の２〜３価イオンと共に得られた錯体、及び生理学的に適合性の塩基又は酸とのそれらの塩の形態の、請求項３記載の化合物。
【請求項５】
一般式（II）及び（III）のペプチド残基Ｂが、
【化３】
2005510461.tif 000035
より選択される、請求項１〜４のいずれかに記載の化合物。
【請求項６】
キレート化基Ａが、ポリアミノポリカルボン酸及びそれらの誘導体、ポリアミノホスホン酸及びそれらの誘導体、ポリアミノホスフィン酸及びそれらの誘導体、テキサフィリン、ポルフィリン、フタロシアニンの残基からなる群より選択される、請求項１〜５のいずれかに記載の化合物。
【請求項７】
キレート化基Ａが、エチレンジアミノ四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミノ五酢酸（ＤＴＰＡ）、１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）、１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン−１，４，７−三酢酸（ＤＯ３Ａ）、〔１０−（２−ヒドロキシプロピル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン−１，４，７−三酢酸（ＨＰＤ０３Ａ）、４−カルボキシ−５，８，１１−トリス（カルボキシメチル）−１−フェニル−２−オキサ−５，８，１１−トリアザトリデカン−１３−酸（ＢＯＰＴＡ）、Ｎ−〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕−３−（４−エトキシフェニル）プロピル〕−Ｎ−〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチルグリシン（ＥＯＢ−ＤＴＰＡ）、Ｎ，Ｎ−ビス〔２−（カルボキシメチル）〔（メチルカルバモイル）メチル〕アミノ〕エチル〕−グリシン（ＤＴＰＡ−ＢＭＡ）、２−メチル−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＭＣＴＡ）、（α，α′，α″，α″′）−テトラメチル−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＭＡ）；ポリアミノホスホン酸配位子及びそれらの誘導体、ポリアミノホスフィン酸及びそれらの誘導体、特にエチレンジニトリロテトラキス（メチルホスホン）酸（ＥＤＴＰ）；１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン−１，４，７，１０−テトラキス〔メチレン（メチルホスホン）〕酸並びに１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン−１，４，７，１０−テトラキス〔メチレン−  （メチルホスフィン）〕酸の残基からなる群より選択される、請求項６記載の化合物。
【請求項８】
Ａが、
【化４】
2005510461.tif 000036
からなる群より選択される、請求項１〜７のいずれかに記載の化合物。
【請求項９】
重合体Ｐ化合物が、ポリペプチド、ポリアミン、ポリエチレンイミノポリ酢酸エステル誘導体、ポリ（アルキレンオキシド）、アルファ（ポリアミノ）ポリ（アルキレンオキシド）、ポリ（エチレンオキシド）（ＰＥＯ）、ポリ（プロピレンオキシド）（ＰＰＯ）、ポリ（ブチレンオキシド）、ポリオキシプロピレングリコール、ポリオキシエチレングリコール、ポリオキシアルキレングリコール、ポリアルキルエステル、ポリアルキルシアノアクリレート、ポリメチルシアノアクリレート、ポリエチルシアノアクリレート、ポリブチルシアノアクリレート、ポリイソブチルシアノアクリレート、及びそれらの共重合体である、請求項１〜８のいずれかに記載の化合物。
【請求項１０】
重合体Ｐ化合物が、ポリリシン、又はポリＬ−Ｌｙｓ、又はＬｙｓ−β−Ａｌａ共重合体、又はＤａｐ−β−Ａｌａ共重合体である、請求項９記載の化合物。
【請求項１１】
【化５】
2005510461.tif 000037
より選択される、請求項１〜１０のいずれかに記載の化合物。
【請求項１２】
適切な担体と混和された請求項１〜１１の化合物を含有している医薬組成物及び診断用組成物。
【請求項１３】
器官及び／又は組織の画像化及びそれらの画像の記録のためのＭＲＩ検査において使用される診断用製剤の調製のための、請求項１〜１１の化合物及びそれらの塩の使用。
【請求項１４】
腫瘍又は原発腫瘍病理又は転移が存在している細胞、組織又は器官のｉｎ  ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ  ｖｉｖｏの画像化及びそれらの画像の記録のための、請求項１３記載の使用。
【請求項１５】
式：Ａ′−Ｄａｐ−Ｆｍｏｃ〔式中、Ａ′は、適切に保護されたカルボキシ部分又はホスホン酸部分を有する前記定義の式Ａの単位であり、Ｄａｐはジアミノ酸、特に２，３−ジアミノプロピオン酸であり、かつＦｍｏｃは（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニルである〕の化合物。
【請求項１６】
３−〔〔（４Ｓ）−４−〔ビス〔２−〔ビス〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕アミノ〕エチル〕アミノ〕−５−（１，１−ジメチルエトキシ）−１，５−ジオキソペンチル〕アミノ〕−Ｎ−〔（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル〕−Ｌ−アラニンである、請求項１５記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
開示
本発明は、ＣＣＫ  Ａ型及び／もしくはＢ型コレシストキニン受容体並びに／又はＳＳＴＲ１〜５型ソマトスタチン受容体を過剰発現している原発ヒト腫瘍及びそれらの転移を同定及び位置決定するための、核磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）において使用するための造影剤の新規クラスに関するものである。
【０００２】
臨床実務において強力な診断手法として認識されている磁気共鳴画像法を使用した医学的診断は、主に、２〜３価常磁性金属イオンのポリアミノポリカルボン酸及び／又はそれらの誘導体もしくは類似体との錯キレートを好ましくは含有している常磁性医薬組成物を利用している。
【０００３】
それらのうちのいくつかは、現在、Ｍ．Ｒ．Ｉ．用造影剤として臨床使用されている（Ｇｄ−ＤＴＰＡ、ジエチレントリアミノ五酢酸のガドリニウム錯体のＮ−メチルグルカミン塩、ＭＡＧＮＥVIＳＴ（登録商標）；Ｇｄ−ＤＯＴＡ、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸のガドリニウム錯体のＮ−メチルグルカミン塩、ＤＯＴＡＲＥＭ（登録商標）；Ｇｄ−ＨＰＤＯ３Ａ、１０−（２−ヒドロキシプロピル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−三酢酸のガドリニウム錯体、ＰＲＯＨＡＮＣＥ（登録商標）；Ｇｄ−ＤＴＰＡ−ＢＭＡ、ジエチレントリアミノ五酢酸ビス（メチルアミド）のガドリウム錯体、ＯＭＮＩＳＣＡＮ（登録商標））。
【０００４】
該造影剤及びそれらの誘導体は、欧州特許第７１５６４号、ＤＥ−Ａ−３４０１０５２、欧州特許第１３０９３４号、米国特許第４，６３９，３６５号、米国特許第４，６１５，８７９号、欧州特許第６５７２８号、欧州特許第２９９７９５号、欧州特許第２３０８９３号、ＷＯ８９０５８０２、欧州特許第２５８６１６号、米国特許第４，８２６，６７３号に開示されている。
【０００５】
前掲の商業的に入手可能な造影剤は、もっぱら一般的な使用のために設計されている。実際、ＭＲＩ造影剤は、投与後、身体の種々の部分の細胞外空間に分布した後に排泄される。この点で、それらは、Ｘ線医学的診断において使用されるヨード化化合物と同様の挙動を示す。
【０００６】
現在、特異的な器官を標的とした造影剤の必要性が増加しつつあるが、その必要性は現在市販されている製品によっては充分に満たされていない。
【０００７】
迅速で効率的な診断は、腫瘍学においてますます必要とされるようになってきており、これは、極初期の段階で病理を検出することができる極めて高感度の診断手法を使用しなければ入手され得ない。
【０００８】
これに関して、腫瘍細胞によって過剰発現された受容体と選択的に結合することができる適切に官能化（functionalized）された造影剤は、認識しうる程度に高感度であるＭＲＩ技術を利用した場合には特に、腫瘍学的調査に適した極めて高感度の診断を提供する。
【０００９】
ソマトスタチンは、中枢神経系、膵臓及び胃腸管に対して多数の活性を及ぼす、視床下部により産生されるテトラデカペプチドである。特に、ソマトスタチンは、膵臓からのインスリン及びグルカゴンの放出、視床下部による成長ホルモンの放出を阻害し、胃液分泌を減少させる。
【００１０】
【化６】
2005510461.tif 000002
【００１１】
ソマトスタチンは、１９７５年にギレミン（Guillemin）らによって最初に特徴決定され開示された（米国特許第３９０４５９４号参照）。このテトラデカペプチドは、それぞれペプチドの３位及び１４位にある２個のシステイン残基の２個のスルフィドリル基間の環形成結合を特徴とする。
【００１２】
ソマトスタチンは、膵臓、胃及び視床下部の腫瘍細胞の表面上にも発現している特異的受容体との結合を通して作用を及ぼす。従って、ソマトスタチンの該受容体との結合は、診断的及び治療的な目的のため活用され得る。
【００１３】
最近、少なくとも５個のソマトスタチン受容体のサブクラスが明らかになり、それらは全てＧタンパク質関連受容体のファミリーに属している（例えば、米国特許第５，４３６，１５５号；ＷＯ９７１４７１５；Biochemical and Biophysical Research Communications, 258, 689-694, 1999参照）。
【００１４】
さらに、ソマトスタチン受容体の過剰発現は、原発性又は転移性の神経内分泌腫瘍、下垂体、中枢神経系、胃腸膵臓、胸部の腫瘍、そしてホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫のような多数のヒト腫瘍において立証されている。
【００１５】
ソマトスタチンは広範な治療的適用を有するが、低いｉｎ  ｖｉｖｏ安定性及びペプチダーゼの存在下での迅速な分解が、その使用を限定している。結果として、ソマトスタチンのペプチド類似体のいくつかのクラス、主としてオクトレオチド（Octreotide）、バプレオチド（Vapreotide）及びランレオチド（Lanreotide）に関する精力的な研究が実施されている。
【００１６】
【化７】
2005510461.tif 000003
【００１７】
適切に官能化されＩｎ−１１１で標識されたオクトレオチドは、既に、腫瘍のシンチグラフィによる診断用に利用可能となっている（Octreoscan（登録商標））（例えば、J.Nucl.Med.41, 1704-1713, 2000;Current Medicinal Chemistry, 7, 971-994, 2000参照）。
【００１８】
コレシストキニン（ＣＣＫ）は、ホルモン及び神経伝達物質として生物学的作用が遂行されるペプチド分子のファミリーである。全てのＣＣＫが、１１５アミノ酸残基からなるプレホルモンに対して起こる断片化の過程、それに続くＣ末端フェニルアラニンのアルファ−アミド化（alpha-amidation）、そして時にはＣ末端部分に含まれるチロシン残基の硫酸化（sulfatation）という翻訳後過程により発生する。
【００１９】
従って、コレシストキニンは様々な分子形態で存在し、最も重要なものは５８、３９、３３又は８アミノ酸残基の配列を有するものであり、それらは全て、チロシン残基が硫酸化されていてもよい８アミノ酸残基の同一Ｃ末端配列：
Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−アミド
を有している。オクタペプチドはＣＣＫ８として既知である。
【００２０】
コレシストキニンの生物学的活性は、相互作用する受容体の型に依る。Ａ型（消化性（Alimentary）より）及びＢ型（脳（Brain）より）という二つの型の受容体が既知である。非病理学的状態において、Ａ型受容体は、胃、胆嚢、腸及び膵臓のような末梢器官の組織に存在する。ＣＣＫペプチドホルモンのＡ型受容体との相互作用による最も重要な生理学的作用は、胆嚢の収縮、膵酵素の分泌、分泌の制御及び胃腸管への吸収である。Ｂ型受容体は、主に中枢神経系に存在し、そこでのコレシストキニンとの相互作用は、鎮痛、満腹及び不安を引き起こし、ドーパミンの放出を制御する。
【００２１】
いずれのコレシストキニン受容体も、細胞外Ｎ末端腕部及び細胞内Ｃ末端部分を有する細胞内ループ及び細胞外ループにより接続された７回膜貫通ヘリックスを有する膜受容体であるＧタンパク質共役型受容体（ＧＰＣＲ）のクラスに属する。両受容体は、様々な型のコレシストキニンに対する高い親和性を有するが、Ａ型受容体は、硫酸化型コレシストキニン、即ちＴｙｒ２７残基上に硫酸基を含有しているものに対する比較的高い親和性を有し、Ｂ型受容体は、様々な型の非硫酸化コレシストキニン及びガストリンに対する高い親和性を有する。Ａ型及びＢ型の受容体に対するアゴニスト様又はアンタゴニスト様の活性を有する一連のペプチド性及び非ペプチド性のコレシストキニン類似体分子が既知である（P.De Tullio, Current Medicinal Chemistry, 6, 433, 1999;F.Noble, Progress in Neurobiology, 58, 349, 1999）。既知のいずれの分子に関しても、低いバイオアベイラビリティ及び低い溶解度又は高い酵素分解のため、薬理学的適用は見出されていない。
【００２２】
コレシストキニン受容体は、様々な腫瘍においてしばしば過剰発現している。Ｂ型受容体は、甲状腺髄様腫瘍、小細胞肺腫瘍、星細胞腫、間質性卵巣腫瘍において高頻度に過剰発現しており、程度は比較的低いが、胃腸−膵臓腫瘍（例えば、Ｗ０９８５１３３７及びＷＯ９８３５７０７参照）、胸部、子宮内膜、及び卵巣の腺癌においても過剰発現している。他方、Ａ型受容体は、胃腸−膵臓腫瘍、髄膜腫及びいくつかの神経芽腫において過剰発現している。
【００２３】
コレシストキニン受容体は、最近、原発ヒト腫瘍及び転移の両方で同定された（J.C.Reubi, Cancer Research, 57, 1377, 1997及びＷＯ９７３１６５７）。ヒト腫瘍を可視化するために核医学において使用される125Ｉ（Biochemical Journal, 89, 114-123, 1963）、111Ｉｎ  又は115Ｉｎのような放射性金属で標識された機能性ペプチドの使用も、この著者により記載されている。該ペプチドは、単一のキレート化部分によりキレート化された唯１個の常磁性金属により入手可能な緩和度は低いことを考慮すると、放射線治療的又は放射線診断的な適用には十分であるかもしれないが、ＭＲＩ適用にとっては十分でないであろう単一のキレート化単位によって標識されている。
【００２４】
前記引用の腫瘍の中でも特に、細胞のサイズの小ささ又は増殖の遅さを特徴とするものは、従来の診断技術ではほとんど検出されない。従って、医学の専門家は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏの両方で１個以上の受容体型に選択的であり、適切な結合を通して腫瘍の位置を決定し、その診断を行うことを可能にする、簡便な診断技術を必要としている。
【００２５】
従って、本発明は、ソマトスタチン又はコレシストキニンに由来するペプチドを、常磁性金属イオンを含む錯キレートとコンジュゲートさせることにより入手可能な、ｉｎ  ｖｉｖｏ診断、より具体的にはＭＲＩ画像化のための造影剤に関する。
【００２６】
本発明は、一般式（Ｉ）：
【化８】
2005510461.tif 000004
【００２７】
〔式中：
Ｂは、１個以上の一般式（II）又は（III）
【００２８】
【化９】
2005510461.tif 000005
【００２９】
〔式中：
ＡＡ0はＬ体又はＤ体の任意のアミノ酸であり；
ＡＡ1はＡｓｐ又はＧｌｕであり；
ＡＡ2はＴｙｒ又はＳＯ3Ｈ−Ｔｙｒであり；
ＡＡ3はＭｅｔ、Ｎｌｅ又はＬｅｕであり；
ＡＡ6はＭｅｔ、Ｎｌｅ又はＬｅｕであり；
ＡＡ8はＰｈｅ又はその対応するアミノアルコールであり；
ＡＡ′1、ＡＡ′3  ＡＡ′6及びＡＡ′8はＬ体又はＤ体の天然又は非天然いずれかの任意のアミノ酸であり；
ＡＡ′8はＬ体又はＤ体の天然又は非天然いずれかの任意のアミノ酸に由来するアミノアルコール誘導体であってもよく；
Ｒ2はヒドロキシ基、アミノ基又はＣ1〜Ｃ4アルコキシ基であり；
ｖは１〜５の整数であり；
ｗはゼロ又は１である〕の直鎖型、分岐型又は環式のペプチドを表し；
Ｐは、ｔ個のＡ単位と共有結合することができ、１個以上のＢの単位と共有結合により結合した直鎖型又は分岐型の重合体鎖を表し；
ｔは２〜１００の範囲の整数であり；
Ａは、Ｐと共有結合しており、かつアミノ基、ピリジノ基、カルボキシ基、ホスホン酸基、ホスフィン酸基、ヒドロキシル基及びカルボキサミド基より選択される配位部位６〜８個を含有している環式又は非環式のキレート化剤を表し、２１〜２９、４２、４４又は５７〜７１の範囲の原子番号を有する２〜３価金属をキレート化することができる〕の化合物に関する。
【００３０】
本発明は、２１〜２９、４２、４４又は５７〜７１の範囲の原子番号を有する金属元素の２〜３価イオン、常磁性金属、特にＦｅ、Ｃｕ、Ｃｒ、Ｅｕ、Ｇｄ、Ｔｂ、Ｄｙ、Ｈｏ、Ｅｒ、Ｔｍ、Ｙｂ、Ｍｎとの一般式（Ｉ）の化合物のキレート、及び生理学的に適合性の塩基又は酸とのそれらの塩にも関する。
【００３１】
Ｆｅ（２＋）、Ｆｅ（３＋）、Ｃｕ（２＋）、Ｃｒ（２＋）、Ｃｒ（３＋）、Ｅｕ（３＋）、Ｇｄ（３＋）、Ｔｂ（３＋）、Ｄｙ（３＋）、Ｈｏ（３＋）、Ｅｒ（３＋）、Ｙｂ（３＋）、Ｍｎ（２＋）及びＭｎ（３＋）のキレート、並びに生理学的に適合性の塩基又は酸とのそれらの塩が好ましい。
【００３２】
特に好ましいのは、Ｅｕ（３＋）、Ｇｄ（３＋）、Ｄｙ（３＋）、Ｍｎ（２＋）及びＭｎ（３＋）の２〜３価イオンの錯体、並びに生理学的に適合性の塩基又は酸とのそれらの塩である。
【００３３】
式（Ｉ）によると、ペプチドＢ、Ｐ及び配位子Ａは、場合により、受容体タンパク質とは異なる生物学的分子との結合に適したシントンを構造内に含有していてもよい。該シントンは、場合により、認識工程の後の段階で活性化されてもよく、例えば、ペプチドＢの場合、認識後、該受容体が過剰発現されている生物学的系に存在する細胞内及び／又は細胞外の酵素より部分的又は完全に除去される。
【００３４】
式（II）又は（III）のペプチドは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ  ｖｉｖｏで、動物又はヒトの組織又は器官に存在する特定の細胞型で過剰発現されているＳＳＴＲ１〜５型受容体として既知の１個以上のソマトスタチン受容体、及び／もしくはそれらのサブタイプ誘導体、並びに／又はＣＣＫ−Ａ及び／もしくはＣＣＫ−Ｂ受容体として既知の１個以上のコレシストキニン受容体及びそれらの誘導体と選択的に結合する。
【００３５】
本発明の化合物は、コレシストキニン（Ａ型及び／又はＢ型受容体）及び／又はソマトスタチン（ＳＳＴＲ１〜５型受容体）のアゴニスト及び／又はアンタゴニストとして、そして該受容体を過剰発現している原発腫瘍及びそれらの転移の位置決定及び検出のためのヒト又は動物の身体の器官、組織及び細胞のＭＲＩ診断剤として、使用され得る。
【００３６】
好ましいペプチドＢの例は、以下の通りである。
【化１０】
2005510461.tif 000006
【００３７】
該ペプチドは、固相又は溶液中でのペプチド合成法のような既知の方法を使用して調製される。
【００３８】
前述の「任意のアミノ酸」という用語は、天然ペプチドの合成類似体の調製のためペプチド化学において通常使用される天然アミノ酸及び「非タンパク質」アミノ酸両方のＬ体及びＤ体に関する。Ｌ体及びＤ体両方のアルファ−アミノ酸のアルファ位及びベータ位が置換されたもの及び置換されていないもの、並びにアルファ−ベータ不飽和アミノ酸は、非タンパク質アミノ酸と見なされる。ＡＡ0は、好ましくはグリシン残基である。
【００３９】
適切なキレート化基Ａの例は、特にエチレンジアミノ四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミノ五酢酸（ＤＴＰＡ）、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−三酢酸（ＤＯ３Ａ）、１０−（２−ヒドロキシプロピル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−三酢酸（ＨＰＤ０３Ａ）、４−カルボキシ−５，８，１１−トリス（カルボキシメチル）−ｌ−フェニル−２−オキサ−５，８，１１−トリアザトリデカン−１３−酸（ＢＯＰＴＡ）、Ｎ−〔２−〔ビス−（カルボキシメチル）アミノ〕−３−（４−エトキシフェニル）プロピル〕−Ｎ−〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕グリシン（ＥＯＢ−ＤＴＰＡ）、Ｎ，Ｎ−ビス〔２−（カルボキシメチル）〔（メチルカルバモイル）メチル〕アミノ〕エチル〕グリシン（ＤＴＰＡ−ＢＭＡ）、２−メチル−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＭＣＴＡ）、（α，α′，α″，α″′）−テトラメチル−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＭＡ）より選択されるポリアミノポリカルボン酸及びそれらの誘導体の残基；ポリアミノホスホン酸配位子及びそれらの誘導体、ポリアミノホスフィン酸及びそれらの誘導体、特にエチレンジニトリロテトラキス（メチルホスホン）酸（ＥＤＴＰ）の残基；１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−テトラキス〔メチレン（メチルホスホン）〕酸及び１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−テトラキス〔メチレン（メチルホスフィン）〕酸；テキサフィリン（texaphyrins）、ポルフィリン、フタロシアニンのような大環状キラント（chelants）の残基を含む。
【００４０】
ＷＯ０１／４６２０７に開示されている残基Ａのさらなる例は、以下の式により表される。
【化１１】
2005510461.tif 000007
【００４１】
特に好ましいキレート化基Ａの例は、スキーム１に示されるものであり、スキーム１において、それらは常磁性金属との錯体化において使用される「遊離酸」の形態で記述されており、Ｑは分子の残基との共有結合のための好ましい位置を意味する。
【００４２】
【化１２】
2005510461.tif 000008
【００４３】
式IV、Ｖ、VI及びVIIの非環式キレート化基が、特に好ましい。
【００４４】
キレート化部分Ａの数ｔは、好ましくは３〜１５、より好ましくは５〜１０である。
【００４５】
一般式（Ｉ）の化合物は、例えば調製中に単量体及び／又はオリゴマーの組成を変化させることにより、例えば粘性、溶解度及び固有安定性に関するそれらの化学物理的特徴に影響を与えること、並びに分子自体に多数の金属キレート化単位を供給することを可能にする重合体単位Ｐを含有している。
【００４６】
使用される重合体化合物は、実際、常磁性金属キレート化剤Ａとコンジュゲートし得るカルボキシル基、アミノ基、ヒドロキシ基のような繰り返し出現する官能単位を含む。
【００４７】
この型の化合物は、１分子単位当たりの比較的高い量の常磁性金属イオンを受容体部位へ輸送し、それにより比較的低いモル用量ですら高い強度の対応する特異的シグナルを誘導することを可能にするため、ＭＲＩにおいて特に有用である。
【００４８】
重合体化合物Ｐは、ポリリシン、ポリオルニチン、ポリアルギニン、ポリセリン、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸のようなポリペプチド；ポリアリルアミン、ポリエチレンイミンのようなポリアミン；ポリ−Ｎ−（２−アミノエチル）メタアクリルアミド、ポリ−Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタアクリルアミド（ＨＰＭＡ）のようなポリアクリル酸誘導体；ポリエチレンイミノポリ酢酸エステル誘導体、ポリ（アルキレンオキシド）、アルファ（ポリアミノ）ポリ−（アルキレンオキシド）、ポリ（エチレンオキシド）（ＰＥＯ）、ポリ（プロピレンオキシド）（ＰＰＯ）、ポリ（ブチレンオキシド）、ポリオキシプロピレングリコール、ポリオキシエチレングリコール、ポリオキシアルキレングリコール、ポリアルキルエステル、ポリアルキルシアノアルキレート、ポリメチルシアノアクリレート、ポリエチルシアノアクリレート、ポリブチルシアノアクリレート、ポリソブチルシアノアクリレート（polysobutylcyanoacrylates）より選択され得る。Ｐの意味は、既に引用された重合体に加え、例えば前記引用のものの組み合わせにより入手される共重合体も含む。重合体部分Ｐは、キレート化単位Ａとの結合を可能にするために官能化されており、かつペプチド化合物Ｂとコンジュゲートしている。１分子当たりのより多くのキレート化単位Ａとコンジュゲートした単位Ｐのうち、良好な水溶性を有し、さらに適切な粘性及び安定性を有するものが好ましい（該特性は、それらを、ペプチドＢとのコンジュゲーションに適したものとするため）。
【００４９】
好ましい重合体化合物は、例えば、キレート化単位Ａを遊離アミノ基に直接共有結合させるのに適したアミノ一次残基を含有している直鎖型又は分岐型のポリリシン、特にポリＬ−リシンである。
【００５０】
さらなる好ましいＰ基は、２個以上のアミノ酸の共重合体、特にＬｙｓ−β−Ａｌａ共重合体及びＤａｐ−β−Ａｌａ共重合体のようなベータ−アラニンとリシン又は２，３−ジアミノプロピオン酸（Ｄａｐ）との共重合体を含む。
【００５１】
好ましくは、重合体又は共重合体のＰ部分は、２〜１５個、より好ましくは３〜１個の単量体又は二量体の単位を含む。
【００５２】
重合体化合物Ｐが、β−Ａｌａ−Ｄａｐのようなジペプチド単位の反復である場合には、Ｆｍｏｃプロトコル及びスキーム２に記述されるサブユニットを使用した固相ペプチド合成により、キレート化サブユニットが既に組み込まれている最終化合物が調製される。
【００５３】
【化１３】
2005510461.tif 000009
【００５４】
これに関して、特に便利な構築ブロックは、α−Ｆｍｏｃで保護された（Ｄａｐのような）ジアミノ酸の、ＤＴＰＡ−ＧＬＵのペンタｔ−Ｂｕエステルとのカップリングにより得られる（実施例９参照）。このようにして得られた官能化されたＦｍｏｃ保護アミノ酸は、Ｆｍｏｃプロトコルによるアミノ酸のカップリング中に同時にキレート化サブユニットが導入されるという利点を提示する。式Ａ′−Ｄａｐ−Ｆｍｏｃ〔式中、Ａ′は、適切に保護されたカルボキシ部分又はホスホン酸部分を有している前記定義のような式Ａの単位であり、Ｄａｐはジアミノ酸、特に２，３−ジアミノ−プロピオン酸であり、かつＦｍｏｃは（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニルである〕により表され得る該構築ブロックは、有用な中間体であり、そして本発明のさらなる目的である。
【００５５】
式（Ｉ）の化合物の前記定義の金属イオンとの錯体は、既知の手法に従い、例えば１個以上のキレート化単位Ａを含有している化合物を、選択された金属イオンの酸化物又はハロゲン化物と反応させることにより調製される。
【００５６】
より具体的には、その過程は、２５〜１００℃、好ましくは２５〜８０℃の範囲の温度で水中又は適切な水／アルコール混合物中で実施される。
【００５７】
得られた錯体が反応溶媒に不溶性である場合には、固体生成物が濾過される。錯体が可溶性である場合には、ナノフィルトレーション又は適切な樹脂でのクロマトグラフィによる混合物の脱塩の後、例えば噴霧乾燥技術により、固体残さが得られるまで溶媒を留去することにより便利に回収され得る。
【００５８】
得られた錯体が遊離酸基を含有している場合、そのような基は、有機又は無機の塩基との反応により塩にされる。その後、得られた溶液は濃縮され得、得られた錯塩が不溶化又は結晶化の技術により適切に回収され得る。
【００５９】
金属イオン及び任意の中和イオンの選択は、意図された錯体の使用に密接に関係している。
【００６０】
下記スキーム３は、コンジュゲートさせられるペプチドが環式であり、かつ常磁性金属キレート化基として使用されるＤＴＰＡ−ＧＬＵ単位４個が分子内に存在する、実施例３に開示された化合物（ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）4（Ｌｙｓ）2Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−バプレオチドの調製を示す。
【００６１】
【化１４】
2005510461.tif 000010
【００６２】
一般式（Ｉ）の好ましい化合物の例は、後述される。
【００６３】
【化１５】
2005510461.tif 000011
【００６４】
本発明の化合物は、特にコレシストキニンＣＣＫ  Ａ型及び／又はＢ受容体、並びに／又はソマトスタチンＳＳＴＲ１〜５型受容体の過剰発現を特徴とする腫瘍病理及び非腫瘍病理両方のイメージングにとって有用なＭＲＩ造影剤であることが立証された。
【００６５】
本発明の化合物は、主に腫瘍細胞、好ましくはヒト腫瘍細胞のイメージングにおいて、ｉｎ  ｖｉｖｏ及びｉｎ  ｖｉｔｒｏの両方の診断法において使用される。
【００６６】
結合の後に取り込み過程が起こることが強調されるべきである。
【００６７】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏで使用される一般式（Ｉ）の化合物は、既知の商業的に入手可能なＭＲＩ造影剤と比較して高い緩和度値を特徴とする。細胞又は細胞内の間質空間における、造影剤の前記受容体との選択的結合、そして化合物が存在している周囲の媒体並びに／又は細胞外及び／もしくは細胞内の系に存在する巨大分子、例えば血漿タンパク質との結合が、高い緩和度の達成に寄与している。
【００６８】
巨大分子との相互作用は、造影剤の受容体結合と共に最初に起こるか、又は一般式（Ｉ）の化合物内に存在するＰ成分、Ｂ成分、及びＡ成分との相互作用の後、その後の相において起こり得る。この点で、造影剤と巨大分子との相互作用は、造影剤のｉｎ  ｓｉｔｕ修飾を引き起こし、従って巨大分子自体及び前記受容体との結合に影響する可能性のある、酵素及び／又は微生物（例えば、ヒドロラーゼ、ペプチダーゼ、プロテアーゼ、エステラーゼ、及び／又はウイルス、細菌、酵母）のｉｎ  ｖｉｖｏの存在によっても影響され得る。
【００６９】
この現象を特色とするタンパク質のさらなる例は、例えば、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ；比較的低濃度ではあるが血漿及び間質空間の両方に存在している）、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ又はリガンディン（ligandine））、脂肪酸結合タンパク質（ＦＡＢＰ、Ｚ−プロテイン）及びアルファ１酸性糖タンパク質（ＡＡＣ）である。造影剤の巨大分子との結合は、実際、結合状態における分子の柔軟性の減少を引き起こし、従って回転タンブリング時間（rotation tumbling time）又は回転相関時間としてＭＲＩにおいて既知のパラメータの減少を引き起こし、それが、緩和度の増加を誘導する。
【００７０】
造影剤と、例えば細胞表面（例えば前記引用の受容体）又は細胞内のタンパク質成分との相互作用は、ＭＲＩコントラストに典型的な緩和速度の増加を含み、それはＭＲＩ画像において可視化され得る組織コントラストを有意に増加させる。
【００７１】
式（Ｉ）の化合物のｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイにより得られた緩和度データは、原発腫瘍又は腫瘍病理又は転移が存在している細胞、組織又は器官のｉｎ  ｖｉｖｏ画像化のための磁気共鳴における造影剤としての、これらの化合物の可能性のある適用を構想することを可能にする。
【００７２】
本発明のさらなる目的は、例えば膵臓及び食道の腫瘍、及びコレシストキニンＡ型受容体を過剰発現しているその他の腫瘍、肺、結腸、胃腸管の小細胞腫瘍、甲状腺髄様癌、星細胞腫、間質性卵巣腫瘍、並びにコレシストキニンＢ型受容体を過剰発現しているその他の腫瘍の画像化、さらに神経内分泌、下垂体、中枢神経系の腫瘍、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫、胸部及び胃腸膵臓の腫瘍のようなソマトスタチンＳＳＴＲ１〜５型受容体を過剰発現している腫瘍（及びそれらの転移）の画像化のために適切に製剤化された一般式（Ｉ）の化合物の使用である。
【００７３】
本発明のさらなる目的は、例えば調査対象の器官の画像化及びその画像の記録のための、本発明に係る常磁性錯体を適切な量投与することを含むＭＲＩ手法である。
【００７４】
本発明の化合物は、経口又は経腸の投与に適している。
【００７５】
非経口投与の場合、それらは、優先的には、ｐＨが６．０〜８．５の範囲であり得る無菌の水性の溶液又は懸濁液として製剤化され得る。これらの水性の溶液又は懸濁液は、０．００２〜１．０Ｍの範囲の濃度で投与され得る。
【００７６】
これらの製剤は、使用直前に再生させるよう、凍結乾燥させ、そのまま供給することもできる。ＧＩ使用又は体腔への注射の場合、これらの薬剤は、例えば粘性を調節するための適切な添加剤を含有している溶液又は懸濁液として製剤化され得る。
【００７７】
経口投与の場合、それらは、医薬技術においてルーチンに使用されている調製法に従い、又は胃の酸性ｐＨからの付加的な防御を獲得し、従ってキレート化された金属イオンの放出を阻害するための被包製剤として、製剤化され得る。
【００７８】
本発明の製剤は、ミセル、コロイド分散液、水中油型乳濁液、リポソーム、ナノカプセル、ミクロビーズ、封入化合物、固形脂質ナノ粒子、又はプロドラッグのような非共有結合性凝集物を含み、それらの調製は、適切な防御系との共有結合による官能化を必要とする。
【００７９】
常磁性造影剤を含有し得るリポソームの調製は、参照によりここに組み込まれる欧州特許第３５４８５５号、米国特許第５０１３５５６号、ＷＯ０１１００７、米国特許第６０６００４０号、米国特許第５７０２７２２号、米国特許第５８３３９４８号、欧州特許第７５９７８５号に開示されている。
【００８０】
ここで、「プロドラッグ」とは、投与後に、酵素的加水分解又はｐＨの変化のような化学的及び／又は生理学的な過程を通して、生成物のｉｎ  ｖｉｖｏ放出を提供する造影剤前駆体を意味する。
【００８１】
プロドラッグの例は、カルボキシル官能がエステル基又はアミド基に置換されている化合物、アルコール官能がエステル又はエーテルを与えるよう誘導体化されている化合物、アミン官能が生成物のｉｎ  ｖｉｖｏ放出に適した適切な保護基で置換されている化合物である。プロドラッグのさらなる例は、ＰＥＧ誘導体の形態でのコンジュゲーションにより生じた化合物である（例えば、Biomaterials, 22, 405-417, 2001参照）。ペプチド又は一般式（Ｉ）の化合物内に存在する官能基と適切にコンジュゲートしたポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）は、受容体選択的結合、タンパク質分解酵素による酵素的分解に対する増加した安定性、化学物理的特性、体内分布特性、及び溶解度特性のような生物学的特性を維持しつつ、それらの特徴の変化を誘導する。
【００８２】
医薬調製物は、さらに甘味剤及び／又は芳香剤のような従来の賦形剤を含有していてもよい。
【００８３】
本発明の製剤は、いずれにせよ、毒性限界より充分に低い造影剤濃度を保証するべきであり、場合によっては、非共有結合性凝集物（ミセル、固形脂質ナノ粒子、リポソーム、封入化合物）及び適切な防御系との共有結合（例えば、ＰＥＧ化）を通して調製され得るプロドラッグの両方を含むであろう。
【００８４】
本発明の錯体を塩にするのに適した好ましい無機塩基の陽イオンは、特に、カリウム、ナトリウム、カルシウム、マグネシウムのようなアルカリ金属又はアルカリ土類金属のイオンを含む。
【００８５】
好ましい有機塩基の陽イオンは、エタノールアミン、ジエタノールアミン、モルホリン、グルカミン、Ｎ−メチルグルカミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルグルカミンのような第１級アミン、第２級アミン及び第３級アミンのものを含む。
【００８６】
本発明のキレート化された錯体を塩にするのに適した好ましい無機酸の陰イオンは、特に、塩化物イオン、臭化物イオン、ヨウ化物イオンのようなハロ酸（halo acids）のイオン、又は硫酸イオンのようなその他のイオンを含む。
【００８７】
前記目的のための好ましい有機酸の陰イオンは、酢酸、コハク酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸、シュウ酸のような塩基性物質を塩にするための医薬技術において従来使用されている酸のものを含む。
【００８８】
好ましいアミノ酸の陽イオン及び陰イオンは、例えばタウリン、グリシン、リシン、アルギニンもしくはオルニチンのもの、又はアスパラギン酸及びグルタミン酸のものを含む。
【００８９】
以下の実施例は、本発明をさらに例示する。
【００９０】
実験の部
ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−ピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢｏｐ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、全てのＦｍｏｃ−アミノ酸誘導体（Ｆｍｏｃ＝９−フルレニル（flurenyl）メチルオキシカルボニル）及びＲｉｎｋアミドＭＢＨＡ樹脂は、カルバイオケム（Calbiochem）−ノババイオケム（Novabiochem）（Laufelfingen, CH）より購入した。〔Ｏ−（７−アゾベンゾトリアゾール−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム〕ヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）は、アプライドバイオシステムズ（Applied Biosystem）より購入した。Ｎ，Ｎ−ビス〔２−〔ビス〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕アミノ〕エチル〕−Ｌ−グルタミン酸１−（１，１−ジメチルエチル）エステル（保護ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）は、以前に記載されたようにして調製した。他の全ての化学物質は、アルドリッチ（Aldrich）（Milwaukee, WI, USA）より入手し、特記しない限りさらに精製することなく使用した。
【００９１】
固相ペプチド合成は、完全に自動化された合成装置シマヅ（Shimadzu）ＳＰＰＳ−８（Kyoto, Japan）及びＡＢＩパーセプティブバイオシステム（Perseptive Biosystem）４３３で実施した。分析用ＲＰ−ＨＰＬＣの実行は、フェノメネックス（Phenomenex）（Torrance, CA, USA）Ｃ18カラム（４．６×２５０mm）を使用してシマヅ（Shimadzu）モデル１０Ａ−ＬＣ装置で実施し、１ml／分の流速で３０分で５％Ｂから７０％ＢまでというＨ2Ｏ／０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（Ａ）及びＣＨ3ＣＮ／０．１％ＴＦＡ（Ｂ）の直線勾配により溶出させた。調製用ＲＰ−ＨＰＬＣの実行は、バイダック（Ｖｙｄａｃ）（Hesperia, CA, USA）Ｃ18カラム（２２×２５０mm）を使用して、ＵＶラムダ（Lambda）−マックス（Ｍａｘ）モデル４８１検出器を装備したウォーターズ（Waters）（Milford, MA, USA）デルタプレップ（Delta Prep）４０００機で実施した。２０mL／分の流速で４０分で２０％Ｂから８０％Ｂまでという直線勾配を使用した。
【００９２】
質量スペクトルは、Ｍａｌｄｉ−Ｔｏｆ型ボイジャー（Vojager）−ＤＥ（Perseptive Biosystem, Foster City, CA, USA）装置で入手した。
【００９３】
実施例１
（ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）4（Ｌｙｓ）2Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−ＣＣＫ８のガドリニウム錯体の合成
【００９４】
【化１６】
2005510461.tif 000012
【００９５】
Ａ）（ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）4（Ｌｙｓ）2Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−ＣＣＫ８の合成
Ｇｌｙ−ＣＣＫ８（配列：Ｈ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ2）合成は、Ｆｍｏｃプロトコルを使用して標準的な条件下で固相で実施した。ＲｉｎｋアミドＭＢＨＡ樹脂（０．５４mmol/g、５４μmol規模、０．１００g）を使用した。各回にＰｙＢｏｐ及びＨＯＢｔにより活性化されたＮ保護アミノ酸４当量、並びにＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）８当量を含むＤＭＦを添加し、６０分間攪拌して、二重カップリングを実施した。ペプチドＧｌｙ−ＣＣＫ８合成が完了した時点で、混合物ＤＭＦ／ピペリジン７０／３０  １．５mLを２回使用することにより、Ｆｍｏｃ脱保護用の容器へ樹脂を移した。ＰｙＢｏｐ及びＨＯＢｔにより活性化されたＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）−ＯＨ  ４当量及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）８当量を含むＤＭＦを添加した。Ｆｍｏｃ脱保護後、同様にしてＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）−ＯＨの残基２個を２個のリシンアミノ官能へとカップリングし、完全に保護された（Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ））2Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−ＣＣＫ８−樹脂を得た。この生成物のうちの少量を、脱保護及び切断のため処理し、粗ペプチド（Ｌｙｓ）2Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−ＣＣＫ８を質量分析及びＨＰＬＣにより分析した。ペプチド同一性の確認後、完全に保護された（Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ））2Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−ＣＣＫ８−樹脂をＦｍｏｃ脱保護し、ＤＴＰＡ−ＧＬＵカップリングした。ＤＴＰＡ−ＧＬＵカップリングは、ＰｙＢｏｐ及びＨＯＢｔにより活性化されたＮ，Ｎ−ビス〔２−〔ビス〔２−（１，１−ジメチルメトキシ）−２−オキソエチル〕アミノ〕エチル〕−Ｌ−グルタミン酸１−（１，１−ジメチルエチル）エステル（保護ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）２当量及びＤＩＰＥＡ  ４当量を含むＤＭＦを使用して実施し；攪拌時間は単一カップリングで８時間であった。脱保護及び分解のため、完全に保護されたコンジュゲートペプチド樹脂をトリイソプロピルシラン（２．０％）、エタンジチオール（２．５％）及び水（１．５％）を含有しているＴＦＡで処理した。ジエチルエーテルを滴下にて添加することにより粗生成物を０℃で沈殿させた。粗混合物の精製を、ＲＰ−ＨＰＬＣにより実施し、２個の主生成物を得た。
【００９６】
【化１７】
2005510461.tif 000013
質量スペクトルは生成物の同一性を確認した。
【００９７】
【化１８】
2005510461.tif 000014
【００９８】
Ｂ）化合物（ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）4（Ｌｙｓ）2Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−ＣＣＫ８のガドリニウム錯体の合成
さらにＮａＯＨ溶液を添加して溶液ｐＨを絶えず調節しながら、上記工程Ａで得られた化合物の溶液にＧｄＣ１3の１mM溶液を室温で添加した。そのＭＳは、示された構造と一致した。
【００９９】
実施例２
（ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）3（Ｌｙｓ）2Ｌｙｓ−Ｇ１ｙ−ＣＣＫ８のガドリニウム錯体の合成
さらにＮａＯＨ溶液を添加して溶液ｐＨを絶えず調節しながら、（実施例１の工程Ａに示されたようにして調製された）（ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）3（Ｌｙｓ）2Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−ＣＣＫ８の溶液にＧｄＣ１3の１mM溶液を室温で添加した。そのＭＳは、示された構造と一致した。
【０１００】
実施例３
（ＤＴＰＡＧＬＵ）4（Ｌｙｓ）2Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−バプレオチドのガドリニウム錯体の合成
【０１０１】
【化１９】
2005510461.tif 000015
【０１０２】
Ａ）（ＤＴＰＡＧＬＵ）4（Ｌｙｓ）2Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−バプレオチドの合成
実施例１に記載されたのと同じ手法に従った。（バプレオチド配列：Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｒｐ−ＮＨ2，Ｃｙｓ2−Ｃｙｓ7Ｓ−Ｓ架橋）。システイン架橋の環化は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）の０．５mM水性溶液中で実施した。粗混合物の精製をＲＰ−ＨＰＬＣにより実施し、主生成物として（ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）4（Ｌｙｓ）2Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−バプレオチドを得た。（ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）4（Ｌｙｓ）2Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−バプレオチド  Ｒｔ＝２５．０分；ＭＷ＝３３３６（計算値３３３５）。そのＭＳは、示された構造と一致した。
【０１０３】
Ｂ）（ＤＴＰＡＧＬＵ）4（Ｌｙｓ）2Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−バプレオチドのガドリニウム錯体の合成
さらにＮａＯＨ溶液を添加して溶液ｐＨを絶えず調節しながら、実施例３Ａの化合物の溶液にＧｄＣ１3の１mM溶液を室温で添加した。そのＭＳは、示された構造と一致した。その錯体の緩和度は１５mM-1s-1であった。
【０１０４】
実施例４
（ＤＯ３Ａ−Ａｒ）4（Ｌｙｓ）2Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−バプレオチドのガドリニウム錯体の合成
【０１０５】
【化２０】
2005510461.tif 000016
〔式中：ＤＯ３Ａ−Ａｒ＝
【０１０６】
【化２１】
2005510461.tif 000017
【０１０７】
Ａ）１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−三酢酸トリス（１，１−ジメチルエチル）エステルの合成
【０１０８】
【化２２】
2005510461.tif 000018
【０１０９】
表記生成物は、ＷＯ９５／２７７０５に開示されたようにして得た。１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−三酢酸トリス（１，１−ジメチルエチル）エステルの１０−ホルミル誘導体（Inorg.Chemical 30, 1265-1269, 1991）を、還流無水ＥｔＯＨ中でヒドロキシルアミン塩酸塩で脱ホルミルして、Ｄ０３Ａトリス（ｌ，１−ジメチルエチル）エステル一塩酸塩を得た。
【０１１０】
この生成物を、ＣＨ2Ｃｌ2及びＫ2ＣＯ3水溶液に溶解させた。有機相を分離し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、蒸発させ、Ｄ０３Ａトリス（１，１−ジメチルエチル）エステルを遊離塩基として得た。
【０１１１】
Ｂ）１０−〔〔４−（カルボキシメチル）フェニル〕メチル〕−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−三酢酸トリス（１，１−ジメチルエチル）エステルの合成
【０１１２】
【化２３】
2005510461.tif 000019
【０１１３】
エタノール５mL中のＤ０３Ａトリス（１，１−ジメチルエチル）エステルの懸濁液を、ＫＯＨ  ４M ０．２３４mLを含有しているエタノール５mL中の４−（ブロモメチル）フェニル酢酸（０．９３４mmol、２１４mg）の溶液に添加した。ＫＯＨ  ４Mの添加によりｐＨを１０〜１１に維持し、その反応混合液を７０℃で１８時間加温した。真空下で溶媒を除去した後、ＣＨ2Ｃｌ2及びエタノールの混合物（９０：１０）を溶出液として使用することにより粗物質をシリカゲルで精製した。その生成物は、白色粉末として得られた（収率８０％）。そのＭＳ及び1Ｈ−ＮＭＲは、示された構造と一致した。
【０１１４】
Ｃ）（ＤＯ３Ａ−Ａｒ）4（Ｌｙｓ）2Ｌｙｓ−ＧＩｙ−バプレオチドのガドリニウム錯体の合成
キレート化化合物及び対応するガドリニウム錯体を、実施例３に記載された方法に従い得た。そのＭＳは、示された構造と一致した。
【０１１５】
実施例５
（Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）−βＡｌａ）4Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）−Ｇｌｙ−ＣＣＫ８のガドリニウム錯体の合成
【０１１６】
【化２４】
2005510461.tif 000020
【０１１７】
Ａ）（Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）−βＡｌａ）4Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）−Ｇｌｙ−ＣＣＫ８の合成
Ｇｌｙ−ＣＣＫ８（配列：Ｈ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ2）。その合成は、Ｆｍｏｃプロトコルを使用して標準的な条件下で固相で実施した。ＲｉｎｋアミドＭＢＨＡ樹脂（０．５４mmol/g、５４μmol規模、０．１００g）を使用した。各回に、ＰｙＢｏｐ及びＨＯＢｔにより活性化されたＮ保護アミノ酸４当量及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）８当量を含むＤＭＦを添加し、６０分間攪拌して、二重カップリングを実施した。ペプチドＧｌｙＣＣＫ８合成が完了した時点で、Ｆｍｏｃ脱保護用の容器に樹脂を移し、ＰｙＢｏｐ及びＨＯＢｔにより活性化されたＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）−ＯＨ  ４当量及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）８当量を含むＤＭＦを添加した。Ｍｔｔ  Ｌｙｓ側鎖保護基をＴＦＡ／トリイソプロピルシラン／ＣＨ2Ｃｌ2（１：５：９４）混合物による処理により除去し；次いでＨＡＴＵにより活性化されたＮ，Ｎ−ビス〔２−〔ビス〔２−（ｌ，ｌ−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕アミノ〕エチル〕−Ｌ−グルタミン酸１−（１，１−ジメチルエチル）エステル（保護ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）及びＤＩＰＥＡ  ４当量を、ＤＭＦ中でＬｙｓ  ε−アミノ基にカップリングした。Ｆｍｏｃ保護基を除去し、ＰｙＢｏｐ及びＨＯＢｔにより活性化されたＦｍｏｃβＡｌａ−ＯＨ  ４当量及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）８当量を含むＤＭＦを添加した。Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）−ＯＨから出発して同じ手法をそれぞれ４回繰り返し、完全に保護された生成物（Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）−βＡｌａ）4−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）−Ｇｌｙ−ＣＣＫ８を得た〔又は９回繰り返し、完全に保護された生成物（Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）−βＡｌａ）9−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）−Ｇｌｙ−ＣＣＫ８を得た。実施例６参照〕。脱保護及び分解のため、完全に保護されたコンジュゲートペプチド樹脂をトリイソプロピルシラン（２．０％）、エタンジチオール（２．５％）及び水（１．５％）を含有しているＴＦＡで処理した。ジエチルエーテルを滴下にて添加することにより、０℃で粗生成物を沈澱させた。粗混合物の精製を、記述された方法を使用してＲＰ−ＨＰＬＣにより実施した。化合物（Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）−βＡｌａ）4−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）−Ｇｌｙ−ＣＣＫ８が、良好な収率（ＨＰＬＣで精製された化合物に関しては４０％）及び高い純度（ＨＰＬＣにより９５％）で得られた。（Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）−βＡｌａ）4−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）−Ｇｌｙ−ＣＣＫ８  Ｒｔ＝２３．５分。そのＭＳは、示された構造と一致した。
【０１１８】
Ｂ）（Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）−βＡｌａ）4−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）−Ｇｌｙ−ＣＣＫ８のガドリニウム錯体の合成
実施例１に記載された方法に従い、ガドリニウム錯体の調製物を得た。そのＭＳは、示された構造と一致した。
【０１１９】
実施例６
（Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）−βＡｌａ）9Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）−Ｇｌｙ−ＣＣＫ８のガドリニウム錯体の合成
【０１２０】
【化２５】
2005510461.tif 000021
【０１２１】
（Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）−βＡｌａ）9−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）−Ｇｌｙ−ＣＣＫ８は、実施例５に詳細に与えられた手法に従い、収率２０％で調製された。（Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）−βＡｌａ）9Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）−Ｇｌｙ−ＣＣＫ８  Ｒｔ＝３２．０分。そのＭＳは、示された構造と一致した。
【０１２２】
実施例７
（Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）−βＡｌａ）4Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）−Ｇｌｙ−バプレオチドのガドリニウム錯体の合成
【０１２３】
【化２６】
2005510461.tif 000022
【０１２４】
キレート化化合物及び対応するガドリニウム錯体を、実施例５に詳細に与えられた手法に従い調製した。そのＭＳは、示された構造と一致した。
【０１２５】
実施例８
（Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）−βＡｌａ）9Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）−Ｇｌｙ−バプレオチドのガドリニウム錯体の合成
【０１２６】
【化２７】
2005510461.tif 000023
【０１２７】
キレート化化合物及び対応するガドリニウム錯体を、実施例５に詳細に与えられた手法に従い調製した。そのＭＳは、示された構造と一致した。
【０１２８】
実施例９
（Ｄａｐ（ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）−βＡｌａ）4−Ｄａｐ（ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）−Ｇｌｙ−ＣＣＫ８のガドリニウム錯体の合成
【０１２９】
【化２８】
2005510461.tif 000024
【０１３０】
Ａ）３−〔〔（４Ｓ）−４−〔ビス〔２−〔ビス〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）  −２−オキソエチル〕アミノ〕エチル〕アミノ〕−５−（１，１−ジメチルエトキシ）−１，５−ジオキソペンチル〕アミノ〕−Ｎ−〔（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル〕−Ｌ−アラニンの調製
【０１３１】
【化２９】
2005510461.tif 000025
【０１３２】
Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ′−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣＩ）（２．３０g；１２mmol）のＣＨ2Ｃｌ2溶液（４０mL）を、０〜５℃で攪拌されたＮ，Ｎ−ビス〔２−〔ビス〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕アミノ〕エチル〕−Ｌ−グルタミン酸１−（１，１−ジメチルエチル）エステル（７．４６g；１０mmol）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）（１．３８g；１２mmol）の溶液に添加した。室温で１８時間の後、その溶液をＨ2Ｏで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、蒸発させ、中間体の活性化エステルを得た。そのエステルを、ＤＭＦ（１００mL）に溶解させ、トリエチルアミン１．０１gを添加し、次いで反応混合物を１０〜１５℃に維持しながら、３−アミノ−Ｎ−〔（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル〕−Ｌ−アラニン（Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｄａｐ）（３．２６g；１０mmol）のＤＭＦ溶液（１００mL）を４０分かけて滴下にて添加した。室温で１８時間の後、その溶液をＣＨ2Ｃｌ2（３００mL）で希釈し、０．１M  ＨＣｌの溶液及びＨ2Ｏで洗浄し、次いでＨ2Ｏで洗浄した。
【０１３３】
乾燥後、その溶液を蒸発させ、粗物質を得、それをフラッシュ−クロマトグラフィーにより精製して、表記化合物（７．７６g；７．４mmol）をほぼ白色の固体として７４％の収率で得た。そのＩＲ、1Ｈ−ＮＭＲ及びＭＳは、示された構造と一致した。
【０１３４】
Ｂ）（Ｄａｐ（ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）−βＡｌａ）4−Ｄａｐ（ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）−Ｇｌｙ−ＣＣＫ８の合成
Ｆｍｏｃプロトコルを使用して、そして代わりに本実施例のＡ）で調製された化合物及びＦｍｏｃ−βＡｌａを使用して、実施例５に記載された戦略に従い、化合物を調製した。そのＭＳは、示された構造と一致した。
【０１３５】
Ｃ）（Ｄａｐ（ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）−βＡｌａ）4−Ｄａｐ（ＤＴＰＡ）−Ｇｌｙ−ＣＣＫ８のガドリニウム錯体の合成
実施例１に詳細に与えられた手法に従い、錯体を調製した。そのＭＳは、示された構造と一致した。
【０１３６】
実施例１０
（Ｄａｐ（ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）−βＡｌａ）9−Ｄａｐ（ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）−Ｇｌｙ−ＣＣＫ８のガドリニウム錯体の合成
【０１３７】
【化３０】
2005510461.tif 000026
【０１３８】
実施例９で使用された手法に従い、表記化合物を調製した。そのＭＳは、示された構造と一致した。
【０１３９】
実施例１１
（Ｄａｐ（ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）−βＡｌａ）4−Ｄａｐ（ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）−バプレオチドのガドリニウム錯体の合成
【０１４０】
【化３１】
2005510461.tif 000027
【０１４１】
実施例９に与えられた手法に従い、表記化合物を調製した。システイン架橋の環化は、実施例３に示された方法論に従い実施した。そのＭＳは、示された構造と一致した。
【０１４２】
実施例１２
（Ｄａｐ（ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）−βＡｌａ）9−Ｄａｐ（ＤＴＰＡ−ＧＬＵ）−バプレオチドのガドリニウム錯体の合成
【０１４３】
【化３２】
2005510461.tif 000028
【０１４４】
実施例９及び１１に与えられた手法に従い、表記化合物を調製した。そのＭＳは、示された構造と一致した。
【０１４５】
実施例１３
式
【化３３】
2005510461.tif 000029
のガドリニウム錯体の合成
【０１４６】
以下の保護されたキレート化化合物：
【化３４】
2005510461.tif 000030
【０１４７】
を使用して、実施例５に与えられた手法に従い、化合物を調製した。そのＭＳは、示された構造と一致した。
【０１４８】
実施例１４
式
【化３５】
2005510461.tif 000031
のガドリニウム錯体の合成
【０１４９】
以下の保護されたキレート化化合物：
【化３６】
2005510461.tif 000032
【０１５０】
を使用して、実施例５に与えられた手法に従い、化合物を調製した。そのＭＳは、示された構造と一致した。
【国際調査報告】
2005510461.tif 000038
2005510461.tif 000039
2005510461.tif 000040
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