(57)【要約】本発明は、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3の新規16-エン-C25-オキシムおよび16-エン-C25-オキシムエーテル類似体、これらの化合物を含む組成物、ならびにCYP24の阻害剤としてこれらの化合物を使用する方法を提供する。詳細には、式Iの化合物は、例えば細胞増殖性障害のような1α,25-ジヒドロキシビタミンD3のレベルの調節から利益を得る疾患を治療するために有用である。
2005536444.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式I:
2005536444.tif 000046
(式中、
R1およびR2はOH、OC1-6アルキル、およびハロからなる群より独立して選択され;
R3はC1-6アルキルであり;
R4はH、C1-6アルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択され、C1-6アルキルは未置換、またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、OH、ハロ、NH2、NHC1-4アルキルおよびN(C1-4アルキル)(C1-4アルキル)から独立して選択される1〜4個の基と置換されており、かつアリールおよびヘテロアリールは未置換、またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、OH、CF3、OCF3、ハロ、SH、SC1-4アルキル、NH2、NHC1-4アルキル、N(C1-4アルキル)(C1-4アルキル)、CN、C(O)OH、C(O)OC1-4アルキル、C(O)NHC1-4アルキル、NHC(O)C1-4アルキル、OC(O)C1-4アルキル、SOC1-4アルキル、SO2C1-4アルキル、SO2NHC1-4アルキルおよびSO2NH2から独立して選択される1〜5個の基と置換されており;
R5はC1-6アルキル、シクロ(C3-C6)アルキル、アリール、ヘテロアリール、アリール-C1-6アルキルおよびヘテロアリール-C1-6アルキルからなる群より選択され、C1-6アルキルは未置換、またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、OH、ハロ、NH2、NHC1-4アルキルおよびN(C1-4アルキル)(C1-4アルキル)から独立して選択される1〜4個の基と置換されており、かつシクロ(C3-C6)アルキル、アリール、ヘテロアリール、アリール-C1-6アルキルおよびヘテロアリール-C1-6アルキルは未置換、またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、OH、CF3、OCF3、ハロ、SH、SC1-4アルキル、NH2、NHC1-4アルキル、N(C1-4アルキル)(C1-4アルキル)、CN、C(O)OH、C(O)OC1-4アルキル、C(O)NHC1-4アルキル、NHC(O)C1-4アルキル、OC(O)C1-4アルキル、SOC1-4アルキル、SO2C1-4アルキル、SO2NHC1-4アルキルおよびSO2NH2から独立して選択される1〜5個の基と置換されており;および
R6はどちらもHであるか、または一緒に＝CH2を形成する)の化合物、ならびにそれらの薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、およびプロドラッグ。
【請求項２】
R1およびR2がOH、OCH3、およびフルオロからなる群より独立して選択される、請求項1記載の化合物。
【請求項３】
R1およびR2がどちらもHである、請求項2記載の化合物。
【請求項４】
R3がCH3である、請求項1〜3のいずれか一項記載の化合物。
【請求項５】
R4がH、フェニル、およびC1-4アルキルからなる群より選択される、請求項1〜4のいずれか一項記載の化合物。
【請求項６】
R4がH、フェニル、アリル、およびCH3からなる群より選択される、請求項5記載の化合物。
【請求項７】
R5がイソプロピル、s-ブチル、t-ブチル、およびネオペンチルからなる群より選択される、請求項1〜6のいずれか一項記載の化合物。
【請求項８】
R5がt-ブチルである、請求項7記載の化合物。
【請求項９】
オキシムのC＝N二重結合についての幾何学的形状がトランスである、請求項1〜8のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１０】
両方のR6がHである、請求項1記載の化合物。
【請求項１１】
以下に示す相対立体化学:
2005536444.tif 000047
を有する、請求項1記載の化合物。
【請求項１２】
2005536444.tif 000048
2005536444.tif 000049
2005536444.tif 000050
からなる群より選択される、請求項1記載の化合物。
【請求項１３】
化合物I(a)、I(c)、I(e)、I(g)、I(i)、およびI(k)からなる群より選択される、請求項11記載の化合物。
【請求項１４】
式II:
2005536444.tif 000051
(式中、
R1およびR2はOH、OC1-6アルキル、OPG、およびハロからなる群より独立して選択され;
PGは保護基であり;
R3はC1-6アルキルであり;
R5はC1-6アルキル、シクロ(C3-C6)アルキル、アリール、ヘテロアリール、アリール-C1-6アルキルおよびヘテロアリール-C1-6アルキルからなる群より選択され、C1-6アルキルは未置換、またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、OH、ハロ、NH2、NHC1-4アルキルおよびN(C1-4アルキル)(C1-4アルキル)から独立して選択される1〜4個の基と置換されており、かつシクロ(C3-C6)アルキル、アリール、ヘテロアリール、アリール-C1-6アルキルおよびヘテロアリール-C1-6アルキルは未置換、またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、OH、CF3、OCF3、ハロ、SH、SC1-4アルキル、NH2、NHC1-4アルキル、N(C1-4アルキル)(C1-4アルキル)、CN、C(O)OH、C(O)OC1-4アルキル、C(O)NHC1-4アルキル、NHC(O)C1-4アルキル、OC(O)C1-4アルキル、SOC1-4アルキル、SO2C1-4アルキル、SO2NHC1-4アルキル、およびSO2NH2から独立して選択される1〜5個の基と置換されており;および
R6はどちらもHであるか、または一緒に＝CH2を形成する)の化合物、ならびにその塩、水和物、および溶媒和物。
【請求項１５】
R1およびR2がOHおよびOPGからなる群より独立して選択される、請求項14記載の化合物。
【請求項１６】
R4がC1-4アルキルである、請求項14〜15のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１７】
R5がイソプロピル、s-ブチル、t-ブチル、およびネオペンチルからなる群より選択される、請求項14〜16のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１８】
2005536444.tif 000052
からなる群より選択される、請求項14記載の化合物。
【請求項１９】
請求項1〜13のいずれか一項記載の化合物および薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物。
【請求項２０】
それを必要とする細胞または動物へ有効量の請求項1〜13のいずれか一項記載の化合物を投与する段階を含む、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3のレベルの調節から利益が得られる疾患を治療するための方法。
【請求項２１】
それを必要とする細胞または動物へ有効量の請求項1〜13のいずれか一項記載の化合物を投与する段階を含む、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3の異化作用の阻害から利益が得られる疾患を治療するための方法。
【請求項２２】
疾患が癌、皮膚障害、および骨障害からなる群より選択される、請求項19〜21のいずれか一項記載の方法。
【請求項２３】
疾患が癌、乾癬、および骨粗鬆症からなる群より選択される、請求項22記載の方法。
【請求項２４】
それを必要とする細胞または動物へ有効量の請求項1〜13のいずれか一項記載の化合物を投与する段階を含む、細胞増殖を阻害する方法。
【請求項２５】
細胞が癌細胞である、請求項24記載の方法。
【請求項２６】
癌が乳癌、肺癌、および前立腺癌から選択される、請求項25記載の方法。
【請求項２７】
有効量の請求項1〜13のいずれか一項記載の化合物を投与することにより細胞内のCYP24活性を阻害する方法。
【請求項２８】
1α,25-ジヒドロキシビタミンD3のレベルを調節するための、請求項1〜13のいずれか一項記載の化合物の使用。
【請求項２９】
1α,25-ジヒドロキシビタミンD3の異化作用を阻害するための、請求項1〜13のいずれか一項記載の化合物の使用。
【請求項３０】
1α,25-ジヒドロキシビタミンD3のレベルを調節する医薬品を調製するための、請求項1〜13のいずれか一項記載の化合物の使用。
【請求項３１】
1α,25-ジヒドロキシビタミンD3の異化作用を阻害する医薬品を調製するための、請求項1〜13のいずれか一項記載の化合物の使用。
【請求項３２】
細胞増殖を阻害するための、請求項1〜13のいずれか一項記載の化合物の使用。
【請求項３３】
細胞増殖を阻害する医薬品を調製するための、請求項1〜13のいずれか一項記載の化合物の使用。
【請求項３４】
CYP24活性を阻害するための、請求項1〜13のいずれか一項記載の化合物の使用。
【請求項３５】
CYP24活性を阻害する医薬品を調製するための、請求項1〜13のいずれか一項記載の化合物の使用。
【請求項３６】
ビタミンD受容体アゴニストの有効性を上昇させる方法であって、有効量の請求項1〜13のいずれか一項記載の化合物と有効量のビタミンD受容体アゴニストとを同時投与する段階を含む方法。
【請求項３７】
ビタミンD受容体アゴニストが1α,25-ジヒドロキシビタミンD3(カルシトリオール)である、請求項36記載の方法。
【請求項３８】
ビタミンD受容体アゴニストの有効性を上昇させるための、請求項1〜13のいずれか一項記載の化合物の使用。
【請求項３９】
ビタミンD受容体アゴニストの有効性を上昇させる医薬品を調製するための、請求項1〜13のいずれか一項記載の化合物の使用。
【請求項４０】
ビタミンD受容体アゴニストが1α,25-ジヒドロキシビタミンD3(カルシトリオール)である、請求項38〜39のいずれか一項記載の使用。
【請求項４１】
式Iの化合物を調製する方法であって、請求項14〜18のいずれか一項記載の化合物と式III:
NH2-OR4
III、
(式中、R4はH、C1-6アルキル、アリール、およびヘテロアリールからなる群より選択され、C1-6アルキルは未置換、またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、OH、ハロ、NH2、NHC1-4アルキル、およびN(C1-4アルキル)(C1-4アルキル)から独立して選択される1〜4個の基と置換されており、かつアリールおよびヘテロアリールは未置換、またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、OH、CF3、OCF3、ハロ、SH、SC1-4アルキル、NH2、NHC1-4アルキル、N(C1-4アルキル)(C1-4アルキル)、CN、C(O)OH、C(O)OC1-4アルキル、C(O)NHC1-4アルキル、NHC(O)C1-4アルキル、OC(O)C1-4アルキル、SOC1-4アルキル、SO2C1-4アルキル、SO2NHC1-4アルキル、およびSO2NH2から独立して選択される1〜5個の基と置換されている)の化合物、またはその塩、水和物、もしくは溶媒和物とを非求核性アミンの存在下で反応させ、その後に存在する場合はあらゆる保護基を除去する段階を含む方法。
【請求項４２】
アミンがピリジンである、請求項41記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、米国政府の支援を受けＮＩＨ(米国国立保健研究所)助成金番号第ＣＡ４４５３０号の下で為された。米国政府は、本発明に一定の権利を有する。
【０００２】
発明の分野
本発明は、特に癌、皮膚障害、骨障害、甲状腺障害、創傷治癒および骨粗鬆症の治療および/または予防における、酵素CYP24の選択的阻害を示し、低カルシウム血症性および抗増殖性であるホルモン1α,25-ジヒドロキシビタミンD3の新規類似体、それらを含有する薬学的組成物および診断用組成物、ならびにそれらの医学的使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
ビタミンD代謝経路は、一定段階で高度に調節される肝要な内分泌系の一部であり、副甲状腺ホルモンの分泌を制御する代謝産物を産生する(Beckman M.,and DeLuca H.(1997),Methods in Enzymol.282,200-223;Jones G.,Strugnell S.,and DeLuca H.(1998),Physiol.Rev.78,1193-1231)。ビタミンD経路において産生するホルモンである、カルシトリオール(下記参照)としても知られる1α,25-ジヒドロキシビタミンD3は、血中のリン酸塩およびカルシウムレベルを調節し、順に骨量、骨の状態を制御し、そして皮膚および免疫系における細胞分化に影響を及ぼす(Armbrecht H.J.,Okuda  K.,Wongsurawat N.,Nemani R.,Chen M.,and Boltz M.,(1992),J.Steroid Biochem.Molec.Biol.43,1073-1081)。ビタミンD経路では、シトクロムP450は、通常はビタミンD3の1、25および24位で、ヒドロキシル化によって官能基を誘導する酵素である(Beckman M.,and DeLuca H.(1997),Methods in Enzymol.282,200-223)。
【０００４】
2005536444.tif 000003
1α,25-ジヒドロキシビタミンD3は、CYP24として知られるミトコンドリアP450によって1α,24,25-トリヒドロキシ-D3へ転換される(Bell N.H.(1998),J.Bone Miner.Res.13,350-35211)。CYP24は、1α,25-ジヒドロキシ-D3によって誘導され、腎臓、ならびに副甲状腺細胞、ケラチノサイト(角化細胞)、骨芽細胞、および腸細胞等の他のビタミンD標的組織中で見いだされる(Jones G.,Strugnell S.and DeLuca H.(1998)Physiol.Rev.78,1193-1231)。1α,25-ジヒドロキシビタミンD3(1,25-D3)は、正常および新生細胞(例えば、前立腺癌細胞)への抗増殖作用および成長調節作用において重要な役割を有する。有効な薬物としての1,25-D3の臨床的使用には、抗増殖活性および前分化活性を必要とする。そこで選択的に所望の薬学的活性を阻害するが、高カルシウム血症性およびその他の望ましくない活性は示さない1α,25-ジヒドロキシビタミンD3の合成類似体に対して継続的な必要がある。
【発明の開示】
【０００５】
発明の概要
酵素CYP24の選択的阻害、抗増殖性および低カルシウム血症性を示す1α,25-ジヒドロキシビタミンD3の新規16-エン-25-オキシムおよび16-エン-25-オキシムエーテル類似体が調製されている。
【０００６】
そこで本発明は式I:
2005536444.tif 000004
(式中、
R1およびR2はOH、OC1-6アルキル、およびハロからなる群より独立して選択される;
R3はC1-6アルキルである;
R4はH、C1-6アルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択され、C1-6アルキルは未置換、またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、OH、ハロ、NH2、NHC1-4アルキルおよびN(C1-4アルキル)(C1-4アルキル)から独立して選択される1〜4個の基と置換されており、そしてアリールおよびヘテロアリールは未置換、またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、OH、CF3、OCF3、ハロ、SH、SC1-4アルキル、NH2、NHC1-4アルキル、N(C1-4アルキル)(C1-4アルキル)、CN、C(O)OH、C(O)OC1-4アルキル、C(O)NHC1-4アルキル、NHC(O)C1-4アルキル、OC(O)C1-4アルキル、SOC1-4アルキル、SO2C1-4アルキル、SO2NHC1-4アルキルおよびSO2NH2から独立して選択される1〜5個の基と置換されている;
R5はC1-6アルキル、シクロ(C3-C6)アルキル、アリール、ヘテロアリール、アリール-C1-6アルキルおよびヘテロアリール-C1-6アルキルからなる群より選択され、C1-6アルキルは未置換、またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、OH、ハロ、NH2、NHC1-4アルキルおよびN(C1-4アルキル)(C1-4アルキル)から独立して選択される1〜4個の基と置換されており、そしてシクロ(C3-C6)アルキル、アリール、ヘテロアリール、アリール-C1-6アルキルおよびヘテロアリール-C1-6アルキルは未置換、またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、OH、CF3、OCF3、ハロ、SH、SC1-4アルキル、NH2、NHC1-4アルキル、N(C1-4アルキル)(C1-4アルキル)、CN、C(O)OH、C(O)OC1-4アルキル、C(O)NHC1-4アルキル、NHC(O)C1-4アルキル、OC(O)C1-4アルキル、SOC1-4アルキル、SO2C1-4アルキル、SO2NHC1-4アルキルおよびSO2NH2から独立して選択される1〜5個の基と置換されている;および
R6はどちらもHであるか、または一緒に＝CH2を形成する)の化合物、ならびにそれらの薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、およびプロドラッグを提供する。
【０００７】
好ましくは、本発明の化合物は天然1α,25-ジヒドロキシビタミンD3の立体化学を有する。このため、好ましい態様では、本発明は以下に示す式I:
2005536444.tif 000005
(式中、
R1〜R6は上記で定義した通りである)の化合物、ならびにそれらの薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、およびプロドラッグを提供する。
【０００８】
本発明の別の局面によると、式Iの化合物および薬学的に許容される担体または希釈剤を含む薬学的組成物が提供される。
【０００９】
1α,25-ジヒドロキシビタミンD3を代謝する酵素であるCYP24を選択的に調節することにより、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3のレベルもまた調節される。このため1α,25-ジヒドロキシビタミンD3のレベルの調節から利益を得る疾患は、CYP24の調節因子を使用して治療できる。CYP24へ優先的に作用することにより、他の酵素および受容体との相互作用によって誘発される副作用は減少するであろう。したがって、本発明は1α,25-ジヒドロキシビタミンD3のレベルの調節から利益を得る疾患を治療する方法であって、それを必要とする細胞または動物へ有効量の式Iの化合物を投与する段階を含む方法を提供する。本発明にはさらにまた、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3のレベルを調節するための式Iの化合物の使用が含まれる。さらに、本発明には、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3のレベルを調節する薬剤を調製するための式Iの化合物の使用が含まれる。
【００１０】
CYP24の阻害は、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3の異化作用を阻害するので、その結果としてこのホルモンの生物学的寿命を延長させ、したがって有効な疾患治療のために使用すべき量を低下させるであろう。このような少量の投与は、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3(カルシトリオール)の医学的使用に関連する高カルシウム血症性毒性を回避する、または少なくとも最小限に抑えるであろう。このため、ある態様では、本発明は1α,25-ジヒドロキシビタミンD3の異化作用を阻害することから利益が得られる疾患を治療するための方法であって、それを必要とする細胞または動物へ有効量の式Iの化合物を投与する段階を含む方法を提供する。本発明には、さらにまた1α,25-ジヒドロキシビタミンD3の異化作用を阻害するための式Iの化合物の使用が含まれる。さらに、本発明には1α,25-ジヒドロキシビタミンD3の異化作用を阻害する薬剤を調製するための式Iの化合物の使用が含まれる。
【００１１】
1α,25-ジヒドロキシビタミンD3のレベルを調節することから利益が得られる可能性がある疾患には、
(i)副甲状腺では-副甲状腺機能亢進症、副甲状腺機能低下症、偽性副甲状腺機能低下症、続発性副甲状腺機能亢進症;
(ii)膵臓では-糖尿病;
(iii)甲状腺では-髄様癌
(iv)皮膚では-乾癬、創傷治癒;
(v)肺では-サルコイドーシスおよび結核;
(vi)腎臓では-慢性腎疾患、低リン酸血症性VDRR、ビタミンD依存性くる病;
(vii)骨では-抗痙攣療法、骨線維形成不全、膿嚢性線維性骨炎、骨軟化症、骨粗鬆症、骨減少症、骨硬化症、腎性骨ジストロフィ、くる病;
(viii)腸では-グルココルチコイド拮抗作用、特発性高カルシウム血症、吸収不良症候群、脂肪便症、熱帯性スプルー、が含まれるがそれらに限定されない。
【００１２】
式Iの化合物、またはその塩、溶媒和物、水和物もしくはプロドラッグは、単独で、またはCYP24活性を調節する他の物質と組み合わせて、または1α,25-ジヒドロキシビタミンD3のレベルにおける調節および/または1α,25-ジヒドロキシビタミンD3の異化作用の阻害から利益が得られる細胞増殖性障害もしくはその他の障害のための他のタイプの治療(CYP24を調節できる場合、または調節できない場合がある)と組み合わせて使用できる。好ましくは、式Iの化合物は、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3(カルシトリオール)またはその他のビタミンD受容体アゴニストと組み合わせて投与される。このため本発明は、ビタミンD受容体アゴニスト、好ましくは1α,25-ジヒドロキシビタミンD3(カルシトリオール)の有効性を上昇させる方法であって、有効量の式Iの化合物と有効量のビタミンD受容体アゴニスト、好ましくは1α,25-ジヒドロキシビタミンD3(カルシトリオール)とを同時投与する段階を含む方法を提供する。さらに、本発明には、ビタミンD受容体アゴニスト、好ましくは1α,25-ジヒドロキシビタミンD3(カルシトリオール)の有効性を上昇させるための式Iの化合物の使用、およびビタミンD受容体アゴニスト、好ましくは1α,25-ジヒドロキシビタミンD3(カルシトリオール)の有効性を上昇させる薬剤を調製するための式Iの化合物の使用が含まれる。
【００１３】
本発明のまた別の局面によると、細胞増殖を調節するための、好ましくは細胞増殖を阻害するための方法であって、それを必要とする細胞または動物へ有効量の式Iの化合物を投与する段階を含む方法が提供される。本発明には、さらにまた細胞増殖を調節するための、好ましくは細胞増殖を阻害するための式Iの化合物の使用が含まれる。本発明にはさらに、細胞増殖を調節する、好ましくは細胞増殖を阻害する薬剤を調製するための式Iの化合物の使用が含まれる。
【００１４】
ある態様では、本発明は、癌細胞の増殖を阻害する方法であって、それを必要とする細胞または動物へ有効量の式Iの化合物を投与する段階を含む方法を提供する。本発明にはさらにまた、癌細胞の増殖を阻害するための式Iの化合物の使用が含まれる。本発明にはさらに、癌細胞の増殖を阻害する薬剤を調製するための式Iの化合物の使用が含まれる。
【００１５】
また別の局面では、本発明は有効量の式Iの化合物を投与する段階によって細胞または動物内のCYP24活性を調節する方法を提供する。また別の局面では、本発明は、それを必要とする細胞または動物へ有効量の式Iの化合物を投与する段階によって、CYP24活性を調節する、好ましくはCYP24活性を阻害する方法を提供する。本発明は、さらにまたCYP24活性を調節する、好ましくは阻害するための式Iの化合物の使用も提供する。本発明は、さらにまたCYP24活性を調節する、好ましくはCYP24活性を阻害する薬剤を調製するための式Iの化合物の使用も提供する。本発明の化合物による細胞増殖の阻害を他の機構によって実行できる可能性があることは理解されている。
【００１６】
本発明はさらにまた、式Iの化合物の調製において有用である新規化合物を提供する。このため、本発明はさらに式II:
2005536444.tif 000006
(式中、
R1およびR2はOH、OC1-6アルキル、OPGおよびハロからなる群より独立して選択される;
PGは保護基である;
R3はC1-6アルキルである;
R5はC1-6アルキル、シクロ(C3-C6)アルキル、アリール、ヘテロアリール、アリール-C1-6アルキルおよびヘテロアリール-C1-6アルキルからなる群より選択され、C1-6アルキルは未置換、またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、OH、ハロ、NH2、NHC1-4アルキルおよびN(C1-4アルキル)(C1-4アルキル)から独立して選択される1〜4個の基と置換されており、そしてシクロ(C3-C6)アルキル、アリール、ヘテロアリール、アリール-C1-6アルキルおよびヘテロアリール-C1-6アルキルは未置換、またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、OH、CF3、OCF3、ハロ、SH、SC1-4アルキル、NH2、NHC1-4アルキル、N(C1-4アルキル)(C1-4アルキル)、CN、C(O)OH、C(O)OC1-4アルキル、C(O)NHC1-4アルキル、NHC(O)C1-4アルキル、OC(O)C1-4アルキル、SOC1-4アルキル、SO2C1-4アルキル、SO2NHC1-4アルキルおよびSO2NH2から独立して選択される1〜5個の基と置換されている;および
R6はどちらもHであるか、または一緒に＝CH2を形成する)の化合物、およびその塩、水和物および溶媒和物も提供する。
【００１７】
さらに、本発明は式Iの化合物を調製する方法であって、式IIの化合物、またはその塩、水和物もしくは溶媒和物と式III:
NH2-OR4
III、
(式中、R4はH、C1-6アルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択され、C1-6アルキルは未置換、またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、OH、ハロ、NH2、NHC1-4アルキルおよびN(C1-4アルキル)(C1-4アルキル)から独立して選択される1〜4個の基と置換されており、そしてアリールおよびヘテロアリールは未置換、またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、OH、CF3、OCF3、ハロ、SH、SC1-4アルキル、NH2、NHC1-4アルキル、N(C1-4アルキル)(C1-4アルキル)、CN、C(O)OH、C(O)OC1-4アルキル、C(O)NHC1-4アルキル、NHC(O)C1-4アルキル、OC(O)C1-4アルキル、SOC1-4アルキル、SO2C1-4アルキル、SO2NHC1-4アルキルおよびSO2NH2から独立して選択される1〜5個の基と置換されている)の化合物、またはその塩、水和物もしくは溶媒和物とを非求核性アミンの存在下で反応させ、その後に存在する場合はあらゆる保護基を除去する段階を含む方法を提供する。
【００１８】
本発明のその他の特徴および利点は、以下の詳細な説明から明白になるであろう。しかしながら、本発明の好ましい態様を示している詳細な説明および特定の実施例は、例示することを目的にのみ提供されていることが理解されなければならないが、それは本発明の精神および範囲内の様々な変更および修飾はこの詳細な説明から当業者には明白になるからである。
【００１９】
発明の詳細な説明
I.定義
本明細書で使用する用語「C1-6アルキル」は1〜6個の炭素原子を含有する直鎖状および/または分枝状の飽和もしくは未飽和アルキルラジカルを意味しており、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、s-ブチル、t-ブチル、ネオペンチル、ビニル、アリル、ブテニル等を含む。
【００２０】
本明細書で使用する用語「C1-6アルコキシ」は、1〜6個の炭素原子を含有する直鎖状および/または分枝状の飽和もしくは未飽和アルコキシラジカルを意味しており、メトキシ、エトキシ、プロピオキシル、イソプロピルオキシ、t-ブトキシ等を含む。
【００２１】
本明細書で使用する用語「シクロ(C3-C6)アルキル」は、3〜6個の炭素原子を含有する飽和もしくは未飽和の非芳香族環状アルキルラジカルを意味しており、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル等を含む。
【００２２】
本明細書で使用する用語「C1-4アルキル」は、1〜4個の炭素原子を含有する直鎖状および/または分枝状の飽和もしくは未飽和アルキルラジカルを意味しており、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、s-ブチル、t-ブチル等を含む。
【００２３】
本明細書で使用する用語「C1-4アルコキシ」は1〜4個の炭素原子を含有する直鎖状および/または分枝状の飽和もしくは未飽和アルコキシラジカルを意味しており、メトキシ、エトキシ、プロピオキシル、イソプロピルオキシ、t-ブトキシ等を含む。
【００２４】
本明細書で使用する用語「アリール」は、6〜10個の炭素原子を含有する未置換または置換の、単環式または二環式芳香族ラジカルを意味しており、フェニルおよびナフチル等を含む。
【００２５】
本明細書で使用する用語「ヘテロアリール」は、それらの原子中1〜3個の原子はS、OおよびNからなる群より選択されたヘテロ原子であってよい5〜10個の原子を含有する未置換または置換の単環式または二環式ヘテロ芳香族ラジカルを意味しており、フラニル、チエニル、ピロロ、ピリジル、インドール、ベンゾフラニル等を含む。
【００２６】
本明細書で使用する用語「アリール-C1-6アルキル」は、1〜6個の炭素原子を含有する分枝状もしくは非分枝状アルキレンラジカルを介して本発明の化合物へ付加された6〜10個の炭素原子を含有する未置換または置換の単環式もしくは二環式芳香族ラジカルを意味しており、このとき前記アルキレンラジカルは飽和または未飽和および未置換またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、OH、ハロ、NH2、NHC1-4アルキル、およびN(C1-4アルキル)(C1-4アルキル)からなる群より独立して選択された1〜4個の基と置換されており、そしてPh-C(CH3)2-、ナフチルメチル、ベンジル等を含む。
【００２７】
本明細書で使用する用語「ヘテロアリール-C1-6アルキル」は、それらの原子中1〜3個の原子は1〜6個の炭素原子を含有する分枝状もしくは非分枝状アルキレンラジカルを介して本発明の化合物へ付加されたS、OおよびNからなる群より選択されたヘテロ原子であってよい5〜10個の原子を含有する未置換または置換の単環式または二環式ヘテロ芳香族ラジカルを意味しており、このとき前記アルキレンラジカルは飽和または未飽和および未置換またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、OH、ハロ、NH2、NHC1-4アルキル、およびN(C1-4アルキル)(C1-4アルキル)からなる群より独立して選択された1〜4個の基と置換されており、そしてチエニル-CH2-、ピリジル-CH2-、インドール-CH2-等を含む。
【００２８】
本明細書で使用する用語「ハロ」は、ハロゲンを意味しており、クロロ、フルオロ、ブロモ、ヨード等を含む。
【００２９】
本明細書で使用する用語「溶媒和物」は、本発明の化合物、または適切な溶媒の分子が結晶格子に組み込まれている本発明の化合物の塩を意味している。適切な溶媒は投与された用量で生理学的に容認できる。適切な溶媒の例はエタノール、水等である。水が溶媒である場合、前記分子は「水和物」と呼ばれる。
【００３０】
本明細書で使用する用語「本発明の化合物」は、式IおよびIIの化合物、ならびにそれらの塩、水和物、溶媒和物およびプロドラッグを意味する。
【００３１】
用語「薬学的に許容される塩」は、患者を治療するために適切である、または適合する酸付加塩もしくは塩基付加塩を意味する。
【００３２】
本明細書で使用する用語「薬学的に許容される酸付加塩」は、本発明のいずれかの塩基化合物、またはいずれかの中間物のあらゆる非毒性有機もしくは無機塩を意味する。酸付加塩を形成できる本発明の塩基化合物には、例えばR4および/またはR5のアリール、ヘテロアリールおよび/またはC1-6アルキル基が例えばNH2およびNHC1-4アルキルのような塩基性窒素を有する基と置換されている塩基化合物が含まれる。適切な塩を形成する実例となる無機酸には、塩化水素酸、臭化水素酸、硫酸およびリン酸、ならびにオルトリン酸一水素ナトリウムおよび硫酸水素カリウムのような金属塩が含まれる。適切な塩を形成する実例となる有機酸にはグリコール酸、乳酸、ピルビン酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、マレイン酸、安息香酸、フェニル酢酸、桂皮酸およびサリチル酸、ならびに例えばp-トルエンスルホン酸およびメタンスルホン酸等のスルホン酸のようなモノ-、ジ-およびトリカルボン酸が含まれる。一酸塩もしくは二酸塩のいずれも形成することができ、そしてそのような塩は水和形、溶媒和形、または実質的無水形のいずれかで存在していてよい。一般に、本発明の化合物の酸付加塩は水および様々な親水性有機溶媒中により可溶性であり、そして一般にはそれらの遊離塩基形と比較して高い融点を示す。適切な塩の選択は当業者には周知であろう。その他の例えばシュウ酸塩のような非薬学的に許容される酸付加塩は、例えば実験的使用のため、または薬学的に許容される酸付加塩へ引き続いて転換させるために本発明の化合物の単離において使用できる。
【００３３】
本明細書で使用する用語「薬学的に許容される塩基付加塩」は、本発明のいずれかの酸性化合物、またはその中間物のいずれかのあらゆる非毒性有機もしくは無機塩基付加塩を意味する。塩基付加塩を形成できる本発明の酸性化合物には、例えばC(O)OHのような酸性水素を有する基とアリールおよび/またはヘテロアリールが置換されている酸性化合物が含まれる。適切な塩を形成する実例となる無機塩基にはリチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムまたは水酸化バリウムが含まれる。適切な塩を形成する実例となる有機塩基には、メチルアミン、トリメチルアミンおよびピコリンもしくはアンモニアのような脂肪族、脂環式もしくは芳香族の有機アミンが含まれる。適切な塩の選択は当業者には周知であろう。その他の非薬学的に許容される塩基付加塩は、実験的使用のために、または例えば薬学的に許容される酸付加塩へ引き続いて転換させるための本発明の化合物の単離において使用できる。
【００３４】
本明細書で使用する物質の用語「有効量」または「十分量」は、臨床的結果を含む有益もしくは所望の結果をもたらすために十分な量であり、したがって、「有効量」はそれが投与されている状況に左右される。例えば、CYP24活性を調節する物質を投与する状況において、物質の有効量は、例えば前記物質を投与せずに入手される反応に比較してCYP24活性におけるそのような調節を達成するために十分な量である。
【００３５】
本明細書で使用される、そして当技術分野において周知である「治療」は臨床的結果を含む有益もしくは所望の結果をもたらすためのアプローチである。有益なまたは所望の臨床的結果には、検出可能か検出不能かにかかわらず、1つまたは2つ以上の症状または状態の軽減もしくは改善、疾患の程度の減少、疾患の安定した(すなわち、悪化していない)状態、疾患の拡大の予防、疾患進行の遅延化もしくは緩徐化、疾患状態の改善もしくは緩和、および寛解(部分的であっても完全であっても)を含むことができるが、それらに限定されない。「治療」は、さらにまた治療を受けない場合の予想生存期間に比較した生存期間の延長を意味することもできる。
【００３６】
疾患または障害を「緩和すること」は、その障害を治療しない場合に比較して、障害または疾患状態の程度および/または望ましくない臨床症状が減少させられる、および/または進行の時間的経過が緩徐化もしくは延長されることを意味する。
【００３７】
本明細書で使用する用語「調節する」には、機能もしくは活性(CYP24活性等)の阻害または抑制ならびに機能もしくは活性の強化が含まれる。
【００３８】
CYP24活性等の機能もしくは活性を「阻害する」または「抑制する」または「低下させる」ことは、当該の状態もしくはパラメータについて以外の他の点では同一条件と比較したときに、または他の条件と比較して機能もしくは活性を低下させることである。
【００３９】
本明細書で使用する用語「動物」には、ヒトを含む動物界の全メンバーが含まれる。動物は、好ましくはヒトである。
【００４０】
本明細書で使用する用語「細胞」には、複数の細胞が含まれる。細胞へ化合物を投与する段階には、インビボ、エックスビボおよびインビトロ治療が含まれる。
【００４１】
本明細書で使用する用語「癌細胞」には、癌または腫瘍性疾患のあらゆる形態が含まれる。
【００４２】
本明細書で使用する用語「異化作用」とは、それにより生体が物質を排泄するための化合物へ転換させる代謝プロセスを意味する。
【００４３】
本明細書で使用する用語「1α,3β-立体化学」とは、基R1およびR2の相対配置を意味するが、このときR2はページ面の上方にあり、そしてR1はページ面の下方にある。本明細書で使用する用語「1β,3α-立体化学」とは、基R1およびR2の相対配置を意味するが、このときR1はページ面の上方にあり、そしてR2はページ面の下方にある。
【００４４】
II.本発明の化合物
酵素CYP24の選択的阻害、抗増殖活性を示し、そして低カルシウム血症性である新規化合物が調製されている。そこで本発明の化合物は、癌等の細胞増殖性疾患を治療するために有用である。
【００４５】
したがって、本発明は式I:
2005536444.tif 000007
(式中、
R1およびR2はOH、OC1-6アルキル、およびハロからなる群より独立して選択される;
R3はC1-6アルキルである;
R4はH、C1-6アルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択され、C1-6アルキルは未置換、またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、OH、ハロ、NH2、NHC1-4アルキルおよびN(C1-4アルキル)(C1-4アルキル)から独立して選択される1〜4個の基と置換されており、そしてアリールおよびヘテロアリールは未置換、またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、OH、CF3、OCF3、ハロ、SH、SC1-4アルキル、NH2、NHC1-4アルキル、N(C1-4アルキル)(C1-4アルキル)、CN、C(O)OH、C(O)OC1-4アルキル、C(O)NHC1-4アルキル、NHC(O)C1-4アルキル、OC(O)C1-4アルキル、SOC1-4アルキル、SO2C1-4アルキル、SO2NHC1-4アルキルおよびSO2NH2から独立して選択される1〜5個の基と置換されている;
R5はC1-6アルキル、シクロ(C3-C6)アルキル、アリール、ヘテロアリール、アリール-C1-6アルキルおよびヘテロアリール-C1-6アルキルからなる群より選択され、C1-6アルキルは未置換、またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、OH、ハロ、NH2、NHC1-4アルキルおよびN(C1-4アルキル)(C1-4アルキル)から独立して選択される1〜4個の基と置換されており、そしてシクロ(C3-C6)アルキル、アリール、ヘテロアリール、アリール-C1-6アルキルおよびヘテロアリール-C1-6アルキルは未置換、またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、OH、CF3、OCF3、ハロ、SH、SC1-4アルキル、NH2、NHC1-4アルキル、N(C1-4アルキル)(C1-4アルキル)、CN、C(O)OH、C(O)OC1-4アルキル、C(O)NHC1-4アルキル、NHC(O)C1-4アルキル、OC(O)C1-4アルキル、SOC1-4アルキル、SO2C1-4アルキル、SO2NHC1-4アルキルおよびSO2NH2から独立して選択される1〜5個の基と置換されている;および
R6はどちらもHであるか、または一緒に＝CH2を形成する)の化合物、およびその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、およびプロドラッグを提供する。
【００４６】
式Iの化合物には、R1およびR2がOH、OC1-6アルキル、およびハロからなる群より独立して選択される化合物が含まれる。本発明の態様では、R1およびR2がOH、OCH3、およびフルオロからなる群より独立して選択される。また別の態様では、R1およびR2がどちらもOHである。
【００４７】
本発明には、さらにまたR3がC1-6アルキルである式Iの化合物が含まれる。本発明のある態様では、R3はC1-4アルキルである。また別の態様では、R3はCH3である。
【００４８】
本発明には、式I(式中、R4はH、C1-6アルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択され、C1-6アルキルは未置換、またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、OH、ハロ、NH2、NHC1-4アルキルおよびN(C1-4アルキル)(C1-4アルキル)から独立して選択される1〜4個の基と置換されており、そしてアリールおよびヘテロアリールは未置換、またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、OH、CF3、OCF3、ハロ、SH、SC1-4アルキル、NH2、NHC1-4アルキル、N(C1-4アルキル)(C1-4アルキル)、CN、C(O)OH、C(O)OC1-4アルキル、C(O)NHC1-4アルキル、NHC(O)C1-4アルキル、OC(O)C1-4アルキル、SOC1-4アルキル、SO2C1-4アルキル、SO2NHC1-4アルキルおよびSO2NH2から独立して選択される1〜5個の基と置換されている)の化合物が含まれる。本発明の態様では、R4はH、C1-4アルキル、およびフェニルからなる群より選択され、C1-4アルキルは未置換、またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、OH、ハロ、NH2、NHC1-4アルキルおよびN(C1-4アルキル)(C1-4アルキル)から独立して選択される1〜2個の基と置換されており、そしてフェニルは未置換、またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、OH、CF3、OCF3、ハロ、SH、SC1-4アルキル、NH2、NHC1-4アルキル、N(C1-4アルキル)(C1-4アルキル)、CN、C(O)OH、C(O)OC1-4アルキル、C(O)NHC1-4アルキル、NHC(O)C1-4アルキル、OC(O)C1-4アルキル、SOC1-4アルキル、SO2C1-4アルキル、SO2NHC1-4アルキルおよびSO2NH2から独立して選択される1〜3個の基と置換されている。また別の態様では、R4はH、フェニルおよびC1-4アルキルからなる群より選択される。さらにまた別の態様では、R4はH、フェニル、アリルおよびCH3からなる群より選択される。
【００４９】
本発明には式I(式中、R5はC1-6アルキル、シクロ(C3-C6)アルキル、アリール、ヘテロアリール、アリール-C1-6アルキルおよびヘテロアリール-C1-6アルキルからなる群より選択され、C1-6アルキルは未置換、またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、OH、ハロ、NH2、NHC1-4アルキルおよびN(C1-4アルキル)(C1-4アルキル)から独立して選択される1〜4個の基と置換されており、そしてシクロ(C3-C6)アルキル、アリール、ヘテロアリール、アリール-C1-6アルキルおよびヘテロアリール-C1-6アルキルは未置換、またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、OH、CF3、OCF3、ハロ、SH、SC1-4アルキル、NH2、NHC1-4アルキル、N(C1-4アルキル)(C1-4アルキル)、CN、C(O)OH、C(O)OC1-4アルキル、C(O)NHC1-4アルキル、NHC(O)C1-4アルキル、OC(O)C1-4アルキル、SOC1-4アルキル、SO2C1-4アルキル、SO2NHC1-4アルキルおよびSO2NH2から独立して選択される1〜5個の基と置換されている)の化合物が含まれる。本発明の態様では、R5はC1-4アルキル、フェニル、およびフェニル-C1-6アルキルからなる群より選択され、C1-4アルキルは未置換、またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、OH、ハロ、NH2、NHC1-4アルキルおよびN(C1-4アルキル)(C1-4アルキル)から独立して選択される1〜2個の基と置換されており、そしてフェニルおよびフェニル-C1-6アルキルは未置換、またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、OH、CF3、OCF3、ハロ、SH、SC1-4アルキル、NH2、NHC1-4アルキル、N(C1-4アルキル)(C1-4アルキル)、CN、C(O)OH、C(O)OC1-4アルキル、C(O)NHC1-4アルキル、NHC(O)C1-4アルキル、OC(O)C1-4アルキル、SOC1-4アルキル、SO2C1-4アルキル、SO2NHC1-4アルキルおよびSO2NH2から独立して選択される1〜3個の基と置換されている。また別の態様では、R5はC1-4アルキル、フェニルおよびフェニル-C1-4アルキルからなる群より選択され、C1-4アルキルは未置換、またはC1-2アルキル、OC1-2アルキル、OH、ハロ、NH2、NHC1-2アルキルおよびN(C1-2アルキル)(C1-2アルキル)から独立して選択される1〜2個の基と置換されており、そしてフェニルおよびフェニル-C1-4アルキルは未置換、またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、OH、CF3、OCF3、ハロ、NH2、NHC1-4アルキル、N(C1-4アルキル)(C1-4アルキル)、およびCNなる群から独立して選択される1〜3個の基と置換されている。さらにまた別の態様では、R5はイソプロピル、s-ブチル、t-ブチル、ネオペンチルから選択される。
【００５０】
本発明には、さらにまた式Iの化合物(式中、R6はどちらもHであるか、または一緒に＝CH2を形成する)が含まれる。本発明の態様では、R6はどちらもHである。
【００５１】
式Iの化合物はすべて、2つ以上の不斉中心を有する。本発明による化合物が2つ以上の不斉中心を有する場合、それらはジアステレオマーとして存在する可能性がある。そのような異性体およびあらゆる比率でのその混合物はすべてが本発明の範囲内に含まれると理解されなければならない。さらに、本発明は本発明のすべての幾何異性体に及ぶ。例えば、本発明の化合物中に二重結合が存在する場合は、シスおよびトランス(ZおよびEとしても知られている)異性体等の幾何異性体が存在する可能性がある。本発明の化合物の立体化学は、好ましくは1α,25-ジヒドロキシビタミンD3の立体化学である。このため、ある好ましい態様では、本発明は以下に示す相対的立体化学を備える式I：
2005536444.tif 000008
(式中、R1〜R6は上記で定義した通りである)の化合物、およびその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物およびプロドラッグを提供する。式Iの化合物の相対的立体化学は好ましくは上記に示した通りであるが、そのような式Iの化合物は代替立体化学を有する一定量(例えば、20％未満、好ましくは10％未満、より好ましくは5％未満)の式Iの化合物を含有する可能性があると理解されなければならない。例えば、上記に示した天然1α,25-ジヒドロキシビタミンD3の1α,3β-立体化学を有する式Iの化合物は、非天然1β,3α-立体化学を有する20％未満、好ましくは10％未満、より好ましくは5％未満の式Iの化合物を含有する可能性がある。
【００５２】
本発明の特定の態様では、本発明の化合物には、
2005536444.tif 000009
2005536444.tif 000010
2005536444.tif 000011
およびその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物およびプロドラッグが含まれる。本発明の好ましい化合物には、上記のようなI(a)、I(c)、I(e)、I(g)、I(i)およびI(k)の化合物、およびその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物およびプロドラッグが含まれる。
【００５３】
本発明は、さらにまた式Iの化合物の調製において有用な新規化合物を提供する。このため、本発明はさらにまた式II:
2005536444.tif 000012
(式中、
R1およびR2はOH、OC1-6アルキル、OPGおよびハロからなる群より独立して選択される;
PGは保護基である;
R3はC1-6アルキルである;
R5はC1-6アルキル、シクロ(C3-C6)アルキル、アリール、ヘテロアリール、アリール-C1-6アルキルおよびヘテロアリール-C1-6アルキルからなる群より選択され、C1-6アルキルは未置換、またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、OH、ハロ、NH2、NHC1-4アルキルおよびN(C1-4アルキル)(C1-4アルキル)から独立して選択される1〜4個の基と置換されており、そしてシクロ(C3-C6)アルキル、アリール、ヘテロアリール、アリール-C1-6アルキルおよびヘテロアリール-C1-6アルキルは未置換、またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、OH、CF3、OCF3、ハロ、SH、SC1-4アルキル、NH2、NHC1-4アルキル、N(C1-4アルキル)(C1-4アルキル)、CN、C(O)OH、C(O)OC1-4アルキル、C(O)NHC1-4アルキル、NHC(O)C1-4アルキル、OC(O)C1-4アルキル、SOC1-4アルキル、SO2C1-4アルキル、SO2NHC1-4アルキルおよびSO2NH2から独立して選択される1〜5個の基と置換されている;および
R6はどちらもHであるか、または一緒に＝CH2を形成する)の化合物、およびその塩、水和物および溶媒和物を提供する。
【００５４】
式IIの化合物には、R1およびR2がOH、OC1-6アルキル、OPGおよびハロからなる群より独立して選択される化合物が含まれる。本発明の態様では、R1およびR2はOH、OCH3、OPGおよびフルオロからなる群より独立して選択される。また別の態様では、R1およびR2はどちらもOHまたはOPGである。さらに、PGは、式Iの化合物中のR1および/またはR2の遊離OH基を式IIの化合物から式Iの化合物への転換中の望ましくない副反応から保護し、そして前記分子上の他の官能基との望ましくない副反応を誘発しない条件下で取り除くことのできるあらゆる保護基を含むことが意図されている。適切な保護基にはt-ブチルジメチルシリル等のトリアルキルシリル基が含まれる。
【００５５】
本発明には、さらにまたR3がOC1-6アルキルである式IIの化合物が含まれる。本発明の態様では、R3はC1-4アルキルである。また別の態様では、R3はCH3である。
【００５６】
本発明にはさらにまた、式II(式中、R5はC1-6アルキル、シクロ(C3-C6)アルキル、アリール、ヘテロアリール、アリール-C1-6アルキルおよびヘテロアリール-C1-6アルキルからなる群より選択され、C1-6アルキルは未置換、またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、OH、ハロ、NH2、NHC1-4アルキルおよびN(C1-4アルキル)(C1-4アルキル)から独立して選択される1〜4個の基と置換されており、そしてシクロ(C3-C6)アルキル、アリール、ヘテロアリール、アリール-C1-6アルキルおよびヘテロアリール-C1-6アルキルは未置換、またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、OH、CF3、OCF3、ハロ、SH、SC1-4アルキル、NH2、NHC1-4アルキル、N(C1-4アルキル)(C1-4アルキル)、CN、C(O)OH、C(O)OC1-4アルキル、C(O)NHC1-4アルキル、NHC(O)C1-4アルキル、OC(O)C1-4アルキル、SOC1-4アルキル、SO2C1-4アルキル、SO2NHC1-4アルキルおよびSO2NH2から独立して選択される1〜5個の基と置換されている)の化合物が含まれる。本発明の態様では、R5はC1-4アルキル、フェニル、およびフェニル-C1-6アルキルからなる群より選択され、C1-4アルキルは未置換、またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、OH、ハロ、NH2、NHC1-4アルキルおよびN(C1-4アルキル)(C1-4アルキル)から独立して選択される1〜2個の基と置換されており、そしてフェニルおよびフェニル-C1-6アルキルは未置換、またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、OH、CF3、OCF3、ハロ、SH、SC1-4アルキル、NH2、NHC1-4アルキル、N(C1-4アルキル)(C1-4アルキル)、CN、C(O)OH、C(O)OC1-4アルキル、C(O)NHC1-4アルキル、NHC(O)C1-4アルキル、OC(O)C1-4アルキル、SOC1-4アルキル、SO2C1-4アルキル、SO2NHC1-4アルキルおよびSO2NH2から独立して選択される1〜3個の基と置換されている。また別の態様では、R5はC1-4アルキル、フェニルおよびフェニル-C1-4アルキルからなる群より選択され、C1-4アルキルは未置換、またはC1-2アルキル、OC1-2アルキル、OH、ハロ、NH2、NHC1-2アルキルおよびN(C1-2アルキル)(C1-2アルキル)から独立して選択される1〜2個の基と置換されており、そしてフェニルおよびフェニル-C1-4アルキルは未置換、またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、OH、CF3、OCF3、ハロ、NH2、NHC1-4アルキル、N(C1-4アルキル)(C1-4アルキル)、およびCNなる群から独立して選択される1〜3個の基と置換されている。さらにまた別の態様では、R5はイソプロピル、s-ブチル、t-ブチル、ネオペンチルから選択される。
【００５７】
本発明には、さらにまた式I(式中、R6はどちらもHであるか、または一緒に＝CH2を形成する)の化合物が含まれる。本発明の態様では、R6はどちらもHである。
【００５８】
本発明の特定の態様では、式II:
2005536444.tif 000013
の化合物、およびその塩、水和物および溶媒和物が含まれる。好ましい式IIの化合物は、上記のように化合物II(a)およびII(c)、ならびにその塩、水和物および溶媒和物である。
【００５９】
III.本発明の化合物の調製方法
本発明の別の態様によると、本発明の化合物は当技術分野において確立された工程に類似する工程によって調製できる。このため、本発明の化合物は、例えばスキーム1に示した反応順序によって調製できる。
【００６０】
スキーム1
2005536444.tif 000014
このため、式Iの化合物は、式II(式中、R1〜R3、R5およびR6は式IIで定義された通りである)の化合物と式III(式中、R4は式Iで定義された通りである)の試薬とを、好ましくは非求核性アミンの存在下において、約0℃〜約40℃の範囲内の温度、適切には室温で反応させ、その後に(存在する場合は)あらゆる保護基を除去することによって調製できる。非求核性アミンは、例えばピリジンのようなあらゆる第3級芳香族または脂肪族アミンであってよく、好ましくは過剰な量で存在する。ピリジンが非求核性アミンである場合は、それを式IIの化合物から式Iの化合物へ転換させるための溶媒としても使用するのが好ましい。このオキシム誘導段階は式IIの化合物の酸感受性共役トリエン単位を破壊することなく進行するので、そのようなオキシム化段階が新規および様々な25-オキシムエーテル類似体のライブラリーを生成する際に有用であろうことを示唆している。主として式IのE-オキシムアルキルエーテルが入手されるのは、対応するZ-オキシムアルキルエーテルでは強度に不都合である立体的過密が存在するためである(Hawkes G.E.and Herwig K.;Roberts,J.D.J.Org.Chem.1974,39,1017-1028を参照)。
【００６１】
したがって、本発明は式Iの化合物を調製するための方法であって、式II:
2005536444.tif 000015
(式中、
R1およびR2はOH、OC1-6アルキル、OPGおよびハロからなる群より独立して選択される;
PGは保護基である;
R3はC1-6アルキルである;
R5はC1-6アルキル、シクロ(C3-C6)アルキル、アリール、ヘテロアリール、アリール-C1-6アルキルおよびヘテロアリール-C1-6アルキルからなる群より選択され、C1-6アルキルは未置換、またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、OH、ハロ、NH2、NHC1-4アルキルおよびN(C1-4アルキル)(C1-4アルキル)から独立して選択される1〜4個の基と置換されており、そしてシクロ(C3-C6)アルキル、アリール、ヘテロアリール、アリール-C1-6アルキルおよびヘテロアリール-C1-6アルキルは未置換、またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、OH、CF3、OCF3、ハロ、SH、SC1-4アルキル、NH2、NHC1-4アルキル、N(C1-4アルキル)(C1-4アルキル)、CN、C(O)OH、C(O)OC1-4アルキル、C(O)NHC1-4アルキル、NHC(O)C1-4アルキル、OC(O)C1-4アルキル、SOC1-4アルキル、SO2C1-4アルキル、SO2NHC1-4アルキルおよびSO2NH2から独立して選択される1〜5個の基と置換されている;および
R6はどちらもHであるか、または一緒に＝CH2を形成する)の化合物、またはその塩、水和物および溶媒和物と式III:
NH2-OR4
III、
(式中、R4はH、C1-6アルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択され、C1-6アルキルは未置換、またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、OH、ハロ、NH2、NHC1-4アルキルおよびN(C1-4アルキル)(C1-4アルキル)から独立して選択される1〜4個の基と置換されており、そしてアリールおよびヘテロアリールは未置換、またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、OH、CF3、OCF3、ハロ、SH、SC1-4アルキル、NH2、NHC1-4アルキル、N(C1-4アルキル)(C1-4アルキル)、CN、C(O)OH、C(O)OC1-4アルキル、C(O)NHC1-4アルキル、NHC(O)C1-4アルキル、OC(O)C1-4アルキル、SOC1-4アルキル、SO2C1-4アルキル、SO2NHC1-4アルキルおよびSO2NH2から独立して選択される1〜5個の基と置換されている)の化合物、またはその塩、水和物もしくは溶媒和物とを非求核性アミンの存在下で反応させ、その後に存在する場合はあらゆる保護基を除去する段階を含む方法を提供する。
【００６２】
式II(式中、R1〜R3、R5およびR6は式Iで定義された通りである)のケトンは、例えばスキーム2:
【００６３】
スキーム2
2005536444.tif 000016
に示した通りに調製できる。式V(式中、R3およびR5は式Iで定義された通りである)のケトンは、式VI(式中、R1、R2およびR6は式Iで定義された通りである)の酸化ホスフィンを用いてC-8(C-25での立体障害のため)で、標準Horner-Wadsworth-Emmons(HWE)結合条件下において化学特異的に(chemospecifically)モノオレフィン化することができる(Posner G.H.ら,J.Org.Chem.1997,62,3299-3314を参照)。このため、酸化ホスフィンVIは、例えばフェニルリチウム等のアルキルリチウムのような強塩基を用いて、不活性大気および例えばテトラヒドロフラン(THF)等の溶媒中の無水条件下で、約-60℃〜約-90℃の範囲内の温度、適切には約-78℃で処理される。結果として生じる中間物イリドには、無水条件を維持しながらTHF等の不活性溶媒に溶解された低温の、好ましくは約-78℃のケトンVの溶液が添加される。(必要であれば)標準化学反応を使用することによってあらゆる保護基を除去した後、式IIの化合物を入手できる。
【００６４】
式V(式中、R3およびR5は式Iで定義された通りである)のケトンは、例えばスキーム3:
スキーム3
2005536444.tif 000017
に示したように調製できる。適切に保護された式VII(式中、R3およびR5は式Iで定義された通りであり、PGは適切な保護基である)の化合物は最初に脱保護基化され、その後ケトンVを生成させるために酸化される。例えば、PGがトリエチルシリル等のトリアルキルシリルである場合は、脱保護基化はTHF等の不活性溶媒中および不活性大気中において、適切には約室温で式VIIの化合物をフッ化テトラブチルアンモニウム(TBAF)と反応させることによって実行できる。結果として生じるアルコールの酸化は、例えば4-メチルモルホリン-N-オキシド(NMO)またはその他の適切な酸化剤を使用して、塩化メチレン等の不活性溶媒中において標準条件下で実施できる。
【００６５】
式VII(式中、R3およびR5は式Iで定義された通りであり、PGは適切な保護基である)の化合物は、例えばスキーム4:
スキーム4
2005536444.tif 000018
に示したように調製できる。式VIII(式中、R3は式Iで定義された通りであり、PGは適切な保護基である)の化合物は、式IX(式中、R5は式Iで定義された通りである)の化合物のアニオンと、無水条件下、約-60℃〜約-90℃の範囲内の温度、適切には約-78℃で反応させることができる。式IXの化合物のアニオンは、式IXの化合物を例えばn-ブチルリチウムまたはリチウムジイソプロピルアミド(LDA)等のアルキルリチウムのような強塩基により、不活性条件下、および例えばN1,N,N1,N1-テトラメチルエチレンジアミン(TMEDA)のようなヘキサメチルホスホルアミド(HMPA)の存在下で処理することによって調製できる。
【００６６】
式IX(式中、R5は式Iで定義された通りである)の化合物は市販で入手できる、または例えばスキーム5:
スキーム5
2005536444.tif 000019
に示されたような対応するアルコールの酸化によって調製できる。酸化剤の例には、重クロム酸ピリジウム(PDC)、m-クロロ過安息香酸(mCPBA)および二酸化マンガンが含まれる。
【００６７】
式VIII(式中、R3は式Iで定義された通りであり、PGは適切な保護基である)の化合物の調製は、当技術分野において知られている。このため、式VIIIの化合物は、Posner G.H.ら,J.Med Chem.1999,42,3425-3435に記載された通りに調製できる。
【００６８】
式VI(式中、R1、R2およびR6は式Iで定義された通りである)の化合物の調製は、当技術分野において知られている。このため、式VIの化合物はその内容が本明細書に参照として組み入れられるPosner G.H.ら,J.Med.Chem.1992,35,3280-3287に記載された通りに調製できる。
【００６９】
式Iおよび/またはIIの鏡像異性的に純粋な化合物の調製は、スキーム2に示された反応において式VおよびVIの鏡像異性的に純粋な化合物を使用することによって実施できる。この反応では、典型的には主要生成物として1α、3βジアステレオマーを含む1α、3βおよび1β,3αジアステレオマーの混合物が入手される。これらのジアステレオマーは、例えば高性能液体クロマトグラフィー(HPLC)のようなクロマトグラフィーを使用して分離できる。
【００７０】
場合によっては、上記に略述した化学反応は、置換基として取り付けられた反応性基等の反応性基を原因とする副反応を防止するために、例えば保護基の使用によって修飾しなければならないことがある。これは、例えば「Protective Groups in Organic Chemistry」、McOmie J.F.W.eds,Plenum Press,1973およびGreene T.W.およびWuts P.G.M.,「Protective Groups in Organic Synthesis」、John Wiley ＆ Sons,1991に記載された通りに従来型保護基によって達成できる。
【００７１】
所望の化合物塩の生成は、標準技術を使用して達成される。例えば、中性化合物は適切な溶媒中で酸または塩を用いて処理され、形成された塩は濾過、抽出またはその他の適切な方法によって単離される。
【００７２】
本発明の化合物の溶媒和物の生成は、前記化合物および前記溶媒和物に依存して変動する。一般に、溶媒和物は前記化合物を適切な溶媒中へ溶解し、前記溶媒和物を冷却または抗溶媒(antisolvent)を使用して単離することによって生成される。前記溶媒和物は、典型的には周囲条件下で乾燥または共沸される。
【００７３】
式Iの化合物のプロドラッグは、例えば利用できるヒドロキシ基、チオール基、アミノ基またはカルボキシル基を用いて形成された従来型エステルであってよい。例えば、前記プロドラッグは、R1および/またはR2がOHである場合、塩基の存在下で、そして選択的に、不活性溶媒(例、ピリジン中の酸塩化物)中で活性化酸を使用してアシル化できる。プロドラッグとして利用されてきたいくつかの一般的エステルは、フェニルエステル、脂肪族(C8-C24)エステル、アシルオキシメチルエステル、カルバミン酸塩およびアミノ酸エステルである。
【００７４】
本発明の放射性標識化合物は、当技術分野において知られている標準方法を使用して調製できる。例えば、トリチウムは、例えばトリチウムガスおよび触媒を使用しての本発明の化合物への適切な前駆物質の水素添加によってのように、標準技術を使用して本発明の化合物に組み込むことができる。または、放射性ヨードを含有する本発明の化合物は、ジメチルホルミアミド等の適切な溶媒中においてクロラミン-Tの存在下で［125I］ヨウ化ナトリウム等の標準ヨウ化条件を使用して対応するトリアルキルスズ(適切にはトリメチルスズ)誘導体から調製できる。トリアルキルスズ化合物は、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(O)の存在下で、ジオキサン等の不活性溶媒中において、および適切には50〜100℃の高温で、標準パラジウム触媒スタンニル化条件、例えばヘキサメチルジチン(hexamethylditin)を使用して、対応する非放射性ハロ、適切にはヨード化合物から調製できる。
【００７５】
IV.使用
上記で言及したように、式IおよびIIの新規化合物が調製されている。したがって、本発明には、細胞増殖を調節するための治療方法および組成物におけるそれらの使用、診断アッセイ法におけるそれらの使用、ならびに他の化学実体の調製における研究用ツールおよび出発物質および/または中間物としてのそれらの使用を含む本発明の化合物のすべての使用が含まれる。
【００７６】
カルシトリオールの異化作用を阻害することは、このホルモンの生物学的寿命を延長させ、したがって有効なヒト化学療法のために使用すべき量の低下を可能にする;そのような少量の投与により、カルシトリオールの医学的使用に関連する高カルシウム血症性毒性が回避される、または少なくとも最小限に抑えられる。それを通してカルシトリオールが(主としてC-24ヒドロキシル化を介して)異化されるシトクロムP450酵素経路を選択的に阻害することは、このホルモンの寿命を延長させる1つの重要な方法である。このため、式Iの化合物は、標準プロトコールを使用することでそれらがカルシトリオールの24-ヒドロキシル化に責任を負うCYP24を特異的に阻害する能力についてインビトロで試験した。ヒト前立腺癌の化学療法のために臨床的に使用される抗真菌症薬であるケトコナゾール(Trachtenberg,J.ら,J.Urol.1984,J32,61-63)をCYP24の阻害のための対照標準物質として使用した。選択された式Iの化合物は、CYP24活性を阻害することに関してケトコナゾールより効力が高かった。これらの化合物は、酵素CY627A1およびCYP27B1の阻害をほとんどまたは全く示さなかったので、これはそれらがCYP24活性を選択的に阻害することを指示した。
【００７７】
選択された式Iの化合物はさらにまた、マウスケラチノサイト中でインビトロ抗増殖活性を有することも証明されている。さらに、標準高カルシウム血症アッセイ法において、選択された式Iの化合物はそれらをラットへ1週間にわたり毎日経口投与した後にラット尿中カルシウムレベルを上昇させなかった。カルシトリオールは、類似の用量で尿中カルシウムレベルの重大な増加を引き起こす。
【００７８】
式Iの化合物はCYP24調節因子であり、細胞増殖障害等の様々な状態を治療するためにCYP24活性の阻害を含むCYP24活性を調節する際に有用である。したがって、本発明はそれを必要とする細胞または動物へ有効量の式Iの化合物を投与することによってCYP24活性を調節する方法を提供する。また別の局面では、本発明はそれを必要とする細胞または動物へ有効量の式Iの化合物を投与することによってCYP24活性を阻害する方法を提供する。本発明にはさらにまた、CYP24活性を調節するため、好ましくは阻害するための式Iの化合物の使用、ならびにCYP24活性を調節するため、好ましくは阻害する薬剤を調製するための式Iの化合物の使用が含まれる。
【００７９】
1α,25-ジヒドロキシビタミンD3を代謝する酵素であるCYP24を選択的に調節することによって、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3のレベルが調節される。このため1α,25-ジヒドロキシビタミンD3のレベルの調節から利益が得られる疾患は、CYP24の調節因子を使用して治療できる。CYP24へ優先的に作用することによって、他の酵素および受容体との相互作用によって誘発された副作用が減少させられる。したがって本発明は、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3のレベルの調節から利益が得られる疾患を治療する方法であって、それを必要とする細胞または動物へ有効量の式Iの化合物を投与する段階を含む方法を提供する。本発明にはさらにまた、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3のレベルを調節するための式Iの化合物の使用が含まれる。さらに、本発明には、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3のレベルを調節する薬剤を調製するための式Iの化合物の使用が含まれる。
【００８０】
CYP24の阻害は、このホルモンの生物学的寿命を延長させる1α,25-ジヒドロキシビタミンD3の異化作用を阻害するので、したがって有効な疾患治療のために使用すべき量の低下を可能にする。そのような少量の投与により、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3(カルシトリオール)の医学的使用に関連する高カルシウム血症性毒性が回避される、または少なくとも最小限に抑えられる。このためある態様では、本発明は1α,25-ジヒドロキシビタミンD3の異化作用を阻害することから利益が得られる疾患を治療するための方法であって、それを必要とする細胞または動物へ有効量の式Iの化合物を投与する段階を含む方法を提供する。本発明はまた、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3の異化作用を阻害するための式Iの化合物の使用が含まれる。さらに、本発明には1α,25-ジヒドロキシビタミンD3の代謝を阻害する薬剤を調製するための式Iの化合物の使用が含まれる。
【００８１】
1α,25-ジヒドロキシビタミンD3のレベルの調節から利益が得られる可能性がある疾患には、
(i)副甲状腺では-副甲状腺機能亢進症、副甲状腺機能低下症、偽性副甲状腺機能低下症、続発性副甲状腺機能亢進症;
(ii)膵臓では-糖尿病;
(iii)甲状腺では-髄様癌
(iv)皮膚では-乾癬、創傷治癒;
(v)肺では-サルコイドーシスおよび結核;
(vi)腎臓では-慢性腎疾患、低リン酸血症性VDRR、ビタミンD依存性くる病;
(vii)骨では-抗痙攣療法、骨線維形成不全、膿嚢性線維性骨炎、骨軟化症、骨粗鬆症、骨減少症、骨硬化症、腎性骨ジストロフィ、くる病;
(viii)腸では-グルココルチコイド拮抗作用、特発性高カルシウム血症、吸収不良症候群、脂肪便症、熱帯性スプルー、が含まれるがそれらに限定されない。
【００８２】
一つの局面では、本発明は細胞増殖を調節する方法であって、それを必要とする細胞または動物へ有効量の式Iの化合物を投与する段階を含む方法を提供する。好ましくは、本発明は細胞増殖を阻害する方法であって、それを必要とする細胞または動物へ有効量の式Iの化合物を投与する段階を含む方法を提供する。本発明にはさらに、細胞増殖を調節するため、好ましくは阻害するための式Iの化合物の使用が含まれる。本発明にはまた、細胞増殖を調節するため、好ましくは阻害する薬剤を調製するための式Iの化合物の使用が含まれる。特に、本発明の方法は、正常な細胞の増殖を阻害せずに異常な細胞の増殖を阻害する際に有用である。異常な細胞には、疾患もしくは状態の原因となる、または関係する、そして前記疾患もしくは状態を治療するために異常な細胞の増殖を調節または阻害することが望ましい場合のあらゆるタイプの細胞が含まれる。異常な細胞の例には、悪性または癌性細胞および乾癬等の炎症性状態において過剰増殖する細胞が含まれる。本発明のある態様では、細胞増殖性障害は、癌、特別には乳癌、前立腺癌および肺癌である。
【００８３】
本発明の化合物はCYP24活性を調節することによって作用できるが、当業者であれば式Iの化合物に対する他の作用様式または作用機序が可能であることを理解するであろう。
【００８４】
当業者であれば、どの式Iの化合物が例えばいずれかのタイプの癌または細胞増殖性障害における細胞増殖を阻害する際に治療的有用性を有するかを決定できる。化合物は、それらが本明細書の実施例13に記載されたマウスケラチノサイト細胞(細胞系PE)の増殖の阻害等の細胞増殖アッセイ法における細胞増殖を阻害する際の有効性について、およびそれらの内容は参照として本明細書に組み入れられる米国特許第5,830,885号に記載されたTPA誘発性オルニチンデカルボキシラーゼ(ODC)活性の阻害について試験できる可能性がある。式Iの化合物は、さらにまた本明細書の実施例14に記載された方法を使用して高カルシウム血症を誘発する傾向についてスクリーニングすることもできる。高カルシウム血症を示す化合物は望ましくない。
【００８５】
癌に加えて、式Iの化合物は異所性または異常な細胞増殖に関連する他の状態を治療する際に有用である。本発明によって治療できるその他の細胞増殖性障害には炎症性疾患、アレルギー、自己免疫疾患、移植片拒絶反応、乾癬、再狭窄、アテローム動脈硬化症、および細胞増殖を阻害、防止または抑制するのが望ましいあらゆる他の障害が含まれる。式Iの化合物は、当業者に周知のアッセイ法および技術を使用して、特定細胞増殖性障害におけるそれらの有効性について試験することができる。例えば、次の参考文献は様々な状態についてのアッセイ法を提供する：関節リウマチ：C.S.Kasyapaらによる、"Regulation of IL-15 - Simulated TNF-α Production by Rolipram"、Journal of Immunology（1999）、第163巻、8236ページ；アレルギー：T.Adachiらによる、"A novel Lyn-Binding Peptide Inhibitor Blocks Eosinophil Differentiation, Survival, and Airway eosinophilic inflammation"、Journal of Immunology（1999）、第163巻、939ページ；乾癬：R.Uchertによる、Journal of Immunology（2000）、第165巻、224ページ、"Inhibition of Keratinocyte apoptosis by IL-15：a new parameter in the pathegenosis of psoriasis"；ならびに、乾癬：A.H.Enkによる、International Archives of allergy and Immunology（2000）、第123巻、275ページ、"T-cell receptor mimic peptides and their potential application in T-cell mediated desease"。
【００８６】
式Iの化合物は、好ましくはインビボで投与するために適切な生物学的に適合する形状でヒト被検者へ投与するための薬学的組成物へ調製される。したがって、また別の局面では、本発明は薬学的組成物であって、適切な希釈剤または担体を備える混合物中に式Iの化合物、またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物またはプロドラッグを含む薬学的組成物を提供する。
【００８７】
式Iの化合物を含有する組成物は、有効量の有効成分が混合物中で薬学的に許容される賦形剤と結合されるように、対象へ投与できる薬学的に許容される組成物を調製するための知られている方法によって調製できる。適切な賦形剤は、例えばRemington’s Pharmaceutical Sciences(Remington’s Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Company,Easton,Pa.,USA 1985)に記載されている。これに基づくと、組成物には、排他的ではないが、1つまたは2つ以上の薬学的に許容される賦形剤または希釈剤と関連する、そして適切なpHおよび生理学的液体との等浸透圧性を備える緩衝液中に含有される物質の溶液が含まれる。
【００８８】
式Iの化合物は、遊離塩基の形状、塩、溶媒和物および水和物としての形状で薬学的に使用できる。すべての形状は本発明の範囲内に含まれる。酸付加塩および塩基付加塩は、例えば塩が精製および同定の目的のためだけに生成される場合のように、特定の塩自体が中間生成物としてのみ所望である場合でさえ、遊離塩基形の起源として使用するために本発明の化合物(すなわち、式IおよびIIの化合物)を用いて生成できる。このため本発明の化合物を用いて生成できるすべての塩は、本発明の範囲内に含まれる。
【００８９】
本発明の方法によると、記載された式Iの化合物、またはその塩、溶媒和物、水和物またはプロドラッグは、当業者にはよく理解されるように、選択された投与経路に依存する様々な形状で患者へ投与することができる。式Iの化合物は、例えば、経口、非経口、口腔内、舌下、鼻腔内、直腸内、パッチ、ポンプもしくは経皮的投与によって投与することができ、薬学的組成物はそれにしたがって処方できる。非経口投与には、静脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、経上皮的、鼻腔内、肺内、髄腔内、直腸内および局所的投与様式が含まれる。非経口投与は、選択された期間にわたる持続的注入によってでよい。
【００９０】
式Iの化合物は、例えば不活性希釈剤もしくは同化性食用担体を用いて経口投与できる、または硬質もしくは軟質殻ゼラチンカプセルに封入できる、または錠剤に圧縮できる、またはダイエット食品と直接的に組み合わせることができる。治療的経口投与のためには、式Iの化合物は賦形剤と組み合わせて、摂取できる錠剤、口腔錠、トローチ錠、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、カシェ剤等の形状で使用できる。
【００９１】
式Iの化合物は、さらにまた非経口投与することもできる。式Iの化合物の溶液は、ヒドロキシプロピルセルロース等の界面活性剤と適切に混合した水中で調製できる。分散液は、アルコールを備える、もしくは備えないグリセロール、液状ポリエチレングリコール、DMSOおよびそれらの混合物中、および油中でも調製できる。通常の保存および使用条件下で、これらの調製物は、微生物増殖を防止するための保存料を含有している。当業者であれば、適切な製剤を調製する方法を知っているであろう。適切な製剤を選択および調製するための従来型方法および成分は、例えばRemington’s Pharmaceutical Sciences(1990-18th edition)および1999年に発行されたThe United States Pharmacopeia:The National Formulary(USP 24NF19)に記載されている。
【００９２】
注射剤として使用するために適切な薬学的形状には、無菌注射液もしくは分散液の即時調製物用の無菌水溶液もしくは分散液および無菌粉剤が含まれる。すべての場合に、前記形状は無菌でなければならず、容易な注射可能性が存在する程度まで液状でなければならない。
【００９３】
鼻腔内投与用組成物は、便利にもエアゾール剤、点滴剤、ゲル剤および粉剤として処方できる。エアゾール製剤は、典型的には生理学的に許容される水性もしくは非水性溶媒中の有効成分の溶液または微細懸濁液を含んでおり、通例は、噴霧容器を用いて使用するためのカートリッジもしくはリフィルの形状を取ることができる密封容器中の無菌形状にある単回投与量もしくは複数回投与量で提示される。または、密封容器は、使用後に廃棄することが意図されている計量弁を装備した単回投与用鼻腔内吸入器またはエアゾールディスペンサー等の単位分注装置であってよい。投与形状がエアゾールディスペンサーを含む場合、それは圧縮空気等の圧縮ガスまたはフルオロクロロヒドロカーボン等の有機噴射剤を含有するであろう。エアゾール投与形状は、さらにまたポンプ式噴霧器の形状を取ることもできる。
【００９４】
口腔内もしくは舌下投与に適切な組成物には、錠剤、トローチ剤、および香錠が含まれるが、このとき有効成分は糖、アカシア、トラガカント、またはゼラチンおよびグリセリン等の担体を用いて調製できる。直腸投与のための組成物は、便利にもカカオ脂等の従来型坐剤用基剤を含有する坐剤の形状にある。
【００９５】
式Iの化合物、またはその塩、溶媒和物、水和物もしくはプロドラッグは、単独で、または上記のような薬学的に許容される担体と組み合わせて動物へ投与でき、担体の比率は前記化合物の溶解度および化学的性質、選択された投与経路ならびに標準の薬学的実践によって決定される。
【００９６】
式Iの化合物および/または本発明の組成物の用量は、化合物の薬理学的特性、投与様式、レシピエントの年齢、健康状態および体重、症状の性質および程度、治療の頻度およびもしあれば併用療法のタイプ、ならびに治療される動物内での化合物のクリアランス速度等の多数の因子に依存して変動する可能性がある。当業者であれば、上記の因子に基づいて適切な用量を決定できる。式Iの化合物は、最初は、臨床反応に依存して必要に応じて調整できる適切な用量で投与することができる。例えば30秒間〜1時間以上の短期間にわたる細胞のエックスビボ治療のためには、インビボ療法での長期間に対してより高用量の化合物を使用することができる。
【００９７】
式Iの化合物、またはその塩、溶媒和物、水和物もしくはプロドラッグは、単独で、またはCYP24活性を調節する他の物質と組み合わせて、または細胞増殖性障害もしくは1α,25-ジヒドロキシビタミンD3のレベルにおける調節および/または1α,25-ジヒドロキシビタミンD3の異化作用の阻害から利益が得られる他の障害のための他のタイプの治療(CYP24を調節できる場合、または調節できない場合がある)と組み合わせて使用できる。好ましくは、式Iの化合物は、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3(カルシトリオール)もしくはその他のビタミンD受容体アゴニストと組み合わせて投与される。ビタミンD受容体アゴニストの異化作用の阻害は、生物学的寿命またはこれらの治療の有効性を延長させ、したがって有効なヒト化学療法のために使用すべき量を低下させることができるであろう。このような少量の投与は、カルシトリオールもしくはその他のビタミンD受容体アゴニストの医学的使用に関連する高カルシウム血症性毒性を回避する、または少なくとも最小限に抑えるであろう。このため、本発明はビタミンD受容体アゴニスト、好ましくは1α,25-ジヒドロキシビタミンD3(カルシトリオール)の有効性を上昇させる方法であって、有効量の式Iの化合物および有効量のビタミンD受容体アゴニスト、好ましくは1α,25-ジヒドロキシビタミンD3(カルシトリオール)を投与する段階を含む方法を提供する。さらに本発明には、ビタミンD受容体アゴニスト、好ましくは1α,25-ジヒドロキシビタミンD3(カルシトリオール)の有効性を上昇させるための式Iの化合物の使用、およびビタミンD受容体アゴニスト、好ましくは1α,25-ジヒドロキシビタミンD3(カルシトリオール)の有効性を上昇させる薬剤を調製するための式Iの化合物の使用が含まれる。
【００９８】
本発明のまた別の局面では、式Iの化合物、またはその塩、溶媒和物、水和物もしくはプロドラッグは、皮膚障害、骨障害、甲状腺障害、創傷治癒および骨粗鬆症を治療するための他の治療および治療薬と組み合わせて使用できる。
【００９９】
上記の治療的使用に加えて、本発明の化合物はさらにまた診断アッセイ法、スクリーニングアッセイ法および研究用ツールとしても有用である。
【０１００】
診断アッセイ法では、本発明の化合物(同様にCYP24を阻害することが証明されているがカルシウム血症性である式IIの化合物を含む)は、細胞増殖性障害を同定または検出する際に有用なことがある。そのような態様では、本発明の化合物を(上記で記載したように)放射標識し、細胞集団と接触させることができる。細胞上の放射標識の存在は細胞増殖性障害を示すことができる。
【０１０１】
スクリーニングアッセイ法では、本発明の化合物(式IIの化合物を含む)を使用すると、細胞増殖またはCYP24活性を調節する他の化合物を同定することができる。研究用ツールとして、本発明の化合物は、受容体結合アッセイ法およびCYP24の局在化を試験するためのアッセイ法において使用できる。そのようなアッセイ法では、化合物を放射標識することもできる。
【０１０２】
以下の非限定的実施例は、本発明を例示するものである。
【０１０３】
実施例
材料および方法
他に特別に言及しない限り、すべての反応は超高純度アルゴンの大気下で撹拌されるオーブン乾燥ガラス容器中で実施した。THFはNa/ベンゾフェノンケチルから蒸留し、CH2Cl2は使用直前にCaH2から蒸留した。オルガノリチウムは、以下のよく知られた方法によって使用前に滴定した(Suffert J.J.Org.Chem.1989,54,509-510)。塩化メチレン(CH2Cl2)およびトリエチルアミン(Et3N)は、使用前に水素化カルシウムから蒸留した。その他すべての試薬は、民間供給業者から受領したままで使用した。分析的TLC分析は、プリコートされたガラス裏張りシリカゲルプレート(Merck Kieselgel 60 F254、厚さ250mm)上で実施し、p-アニスアルデヒドもしくはKMnO4色素を用いて可視化した。カラムクロマトグラフィーは、ショートパス・シリカゲル(粒径＜230メッシュ)またはフラッシュシリカゲル(粒径230〜400メッシュ)を使用して実施した。分取プレートクロマトグラフィは、シリカゲルをコートしたAnaltech社のガラス製分取プレート(500〜1,000μm)を使用して実施し、UVにより分析した。高性能液体クロマトグラフィー(HPLC)は、C-18化学結合シリカとしての60Åシリカゲル(孔径8μm)が装填されたRainin Dynamax 10mm×250mm(セミ分取)カラムおよび265mmに設定したRainin Dynamax UV-Cデュアル・ビーム可変波長検出器を使用する2つの25mL/min分取ポンプヘッドを装備したRainin HPLXシステムを使用して実施した。収率は、純粋生成物(クロマトグラフィーおよび分光法でのそれらの均質性に基づくと＞95％)について報告しており、最適化されていない。旋光度は、Perkin-Elmer  141旋光計を使用してNaラインで測定した。核磁気共鳴(NMR)スペクトルは、1Hに対しては400MHz、および13Cに対しては100MHzで作動するVarian XL-400分光計上で入手した。化学シフトはppm(δ)で報告し、CDCl3(1Hに対しては7.26ppm、および13Cに対しては77.0ppm)、およびテトラメチルシラン(TMS、1Hに対して0.00ppm)へ関連付けた。紫外線(UV)スペクトルは、周囲温度でCary Bio 400分光計を使用して入手した。赤外線スペクトル(IR)は、Perkin-Elmer 1600シリーズのFT-IR機器を使用して入手した。吸収バンドは波数(cm-1)で報告した。低分解能および高分解能質量スペクトル(LRMSおよびHRMS)は、オハイオ州立大学の質量分析法研究施設において、Micromass QTOFエレクトロスプレー質量分析計上で電子イオン化または化学イオン化(EIまたはCI)を用いて入手した。
【０１０４】
実施例１：t-ブチルケトンVIIの調製(R3＝CH3、R5＝t-ブチル、PG＝TES)
15mLの丸底フラスコにトリイソプロピルアミン(42mg、0.41mmol、7.4当量-使用前に水素化カルシウムの上方で蒸留した)および2mLの蒸留THFを装填した。この溶液を-78℃へ冷却し、シリンジを介してn-ブチルリチウム(250μLの1.6M溶液、0.43mmol、7.2当量)を添加した。ピナコロン(IX、R5＝t-ブチル)(39mg、0.39mmol、7.0当量-使用直前の24時間に炭酸カリウムおよび活性化モレキュラーシーブの上方で乾燥した)を1mLの蒸留THF中に溶解し、-78℃へ冷却し、その時点にカニューラを介して反応フラスコへ添加した。この反応液を30分間攪拌した。その後、シリンジを介してヘキサメチルホスホルアミド(HMPA、250μL)を添加し、さらに15分間攪拌し続けた。1mLのTHF中に溶解したヨウ化物(-)-VIII(R3＝CH3、PG＝トリエチルシリル(TES))(25mg、0.06mmol)を-78℃へ冷却し、カニューラを介して反応混合液へ添加した。この反応混合液を-78℃で2時間攪拌し、ドライアイス/アセトニトリル浴中で-41℃へ加温し、その時点から2時間にわたって室温へ加温するに任せ、さらに6時間攪拌し続けた。結果として生じた黄色溶液を水2mLで急冷し、酢酸エチル(3×25mL)によって抽出し、MgSO4の上方で乾燥し、濃縮し、そしてシリカゲル・カラムクロマトグラフィー(0〜20％酢酸エチル/石油エーテル)によって精製し、無色油(18mg、76％)を得た。
2005536444.tif 000020
【０１０５】
実施例２：CD環状ケトンVの調製(R3＝CH3、R5＝t-ブチル)
15mLの丸底フラスコへ5mLの蒸留THF中に溶解したtert-ブチルケトンVII(R3＝CH3、R5＝t-ブチル、PG＝TES)(18mg、0.4mmol)を装填した。この反応フラスコへフッ化水素化テトラブチルアンモニウム(TBAF、112mg、10当量)および4Åモレキュラーシーブ(100mg)を添加し、この溶液を環流させながら4時間攪拌し続けた。分析用薄層クロマトグラフィー(TLC)で出発物質を視認できなくなるまで、追加部分のTBAFおよびモレキュラーシーブを4時間毎に添加した。過剰なTBAFおよびモレキュラーシーブを取り除くために、溶離剤として酢酸エチルを使用してこの反応液をシリカゲル栓に通して濾過した。この溶液を濃縮し、結果として生じた物質を5mLの蒸留ジクロロメタン(CH2Cl2)中に溶解して10mLの丸底フラスコへ装填した。この溶液に4Åモレキュラーシーブ(20mg)、4-メチルモルホリン-N-オキシド(NMO、10mg、0.09mmol、2当量)および触媒量の過ルテニウム酸テトラプロピルアンモニウム(TPAP)を添加した。1時間の攪拌後に、TLCにより出発物質の完全な消費が証明された。TPAPおよびモレキュラーシーブを取り除くために、溶離剤として酢酸エチルを使用することによりこの反応液をシリカゲルのプラグに通して濾過した。この反応溶液を濃縮し、シリカゲル・カラムクロマトグラフィー(20％酢酸エチル/石油エーテル)によって精製して無色油(9mg、71％)を得た。
2005536444.tif 000021
【０１０６】
実施例３：II(a)およびII(b)の調製
無水酸化ホスフィン(±)-VI(R1,R2＝O-t-ブチルジメチルシリル(OTBDMS))(79mg、0.14mmol、1.4当量)を2.5mLの蒸留THF中に溶解し、-78℃へ冷却した。シリンジを介してフェニルリチウム(シクロヘキサン-エーテル中の1.7M溶液88μL、0.15mmol、1.5当量)を滴下法で添加すると深紅色になった。この溶液を20分間攪拌し続けた。無水CD環状ケトン(＋)-V(R3＝CH3、R5＝t-ブチル)(31mg、0.10mmol)を1.5mLの蒸留THF中に溶解し、-78℃へ冷却した。カニューラを介してこの溶液を反応混合液へ添加すると、赤色が持続した。この溶液を暗所の-78℃で7時間攪拌し、その時点で飽和炭酸カリウム(1mL)および酒石酸カリウムナトリウム(2mLの2M溶液)によって急冷した。生成物を酢酸エチル(4×60mL)によって抽出し、MgSO4を使用して乾燥し、濾過し、濃縮し、シリカゲル・カラムクロマトグラフィー(1％Et3Nを用いて緩衝した3〜10％酢酸エチル/ヘキサン)によって精製して無色油を得た。2.5mLのTHF中に溶解したこの油を5mLの丸底フラスコに装填し、TBAF水和物(241mg、0.92mmol、14当量)、4Åモレキュラーシーブ(100mg)、および3滴のEt3Nを連続的に装填した。この溶液を室温の暗所で8時間攪拌し続けた。シリカゲル・カラムクロマトグラフィー(1％Et3Nを用いて緩衝した99％酢酸エチル)によってこの反応混合液を直接的に精製するとジアステレオマーの混合物(1:3.5)としてII(a)およびII(b)(15mg、38％)が得られ、順相HPLCクロマトグラフィー(1％Et3Nを用いて緩衝した90％酢酸エチル/ヘキサン)によってこの混合物を分離すると、2mg(5％、全体では3％)の天然A環異性体II(b)が得られた。II(a)(1β,3α):
2005536444.tif 000022
順相HPLCクロマトグラフィーを使用するとジアステレオマーを分離することはできたが、最高分離は極少量(〜200μg以下)の注入を使用した場合にのみ達成できた。
【０１０７】
実施例４：化合物I(a)およびI(b)の調製
無水酸化ホスフィン(±)-VI(R1,R2＝O-OTBDMS)(89mg、0.15mmol、2当量)を2.5mLの蒸留THF中に溶解し、-78℃へ冷却した。シリンジを介してフェニルリチウム(シクロヘキサン-エーテル中の1.8M溶液93μL、0.17mmol、2.2当量)を滴下法で添加すると深紅色が生じた。この溶液を20分間攪拌し続けた。無水CD環状ケトン(＋)-II(R3＝CH3、R5＝t-ブチル)(23mg、0.08mmol)を1.5mLの蒸留THF中に溶解し、-78℃へ冷却した。カニューラを介してこの溶液を反応混合液へ添加すると、赤色が持続した。この溶液を-78℃の暗所で7時間攪拌し、その時点で飽和炭酸カリウム(1mL)および酒石酸カリウムナトリウム(2mLの2M溶液)によって急冷した。この生成物を酢酸エチル(4×60mL)によって抽出し、MgSO4を使用して乾燥し、濾過し、濃縮し、シリカゲル・カラムクロマトグラフィー(1％Et3Nを用いて緩衝した3〜10％酢酸エチル/ヘキサン)を用いて精製して無色油を得た。2mLの無水ピリジン中に溶解したこの物質(27mg、0.04mmol)を5mLの丸底フラスコに装填した。塩酸ヒドロキシルアミン(III、R4＝H)(51mg、0.74mmol、20当量)を添加し、この反応液を室温の暗所で24時間攪拌し続けると、その時点にTLC分析で出発物質の完全な消費および新規のより極性生成物の外観が明らかになった。シリカゲル・カラムクロマトグラフィー(1％Et3Nを用いて緩衝した10％酢酸エチル/ヘキサン)を用いてこの物質を直接的に精製して無色油を得た。5mLの丸底フラスコへ、2.5mLのTHF中に溶解したこの油、TBAF水和物(135mg、0.52mmol、14当量)、4Åモレキュラーシーブ(60mg)、および3滴のEt3Nを連続的に装填した。この溶液を室温の暗所で8時間攪拌し続けた。この反応混合液をシリカゲル・カラムクロマトグラフィー(1％Et3Nを用いて緩衝した99％酢酸エチル)によってジアステレオマー(1:3.5)の混合物としてのI(a)およびI(b)(14mg、61％)へ直接に精製し、逆相HPLCクロマトグラフィー(38％H2O/アセトニトリル)によって分離すると2.3mg(16％、全体では5％)のI(a)および4.0mg(29％、全体では10％)のI(b)が得られた。I(a)(1β,3α):
2005536444.tif 000023
【０１０８】
実施例５：化合物I(c)およびI(d)の調製
無水酸化ホスフィン(±)-VI(R1,R2＝OTBDMS、R6＝＝CH2)(89mg、0.15mmol、2当量)を2.5mLの蒸留THF中に溶解し、-78℃へ冷却した。シリンジを介して滴下法でフェニルリチウム(シクロヘキサン-エーテル中の1.8M溶液93μL、0.17mmol、2.2当量)を添加すると深紅色になった。この溶液を20分間攪拌し続けた。無水CD環状ケトン(＋)-II(R3＝CH3、R5＝t-ブチル)(23mg、0.08mmol)を1.5mLの蒸留THF中に溶解し、-78℃へ冷却した。カニューラを介してこの溶液を反応混合液へ添加すると、赤色が持続した。この溶液を-78℃の暗所で7時間攪拌し、その時点で飽和炭酸カリウム(1mL)および酒石酸カリウムナトリウム(2M溶液2mL)によって急冷した。酢酸エチル(4×60mL)によってこの生成物を抽出し、MgSO4を使用して乾燥し、濾過し、濃縮し、シリカゲル・カラムクロマトグラフィー(1％Et3Nを用いて緩衝した3〜10％酢酸エチル/ヘキサン)を用いて精製して無色油を得た。1.5mLの無水ピリジン中に溶解したこの物質の1部分(12mg、0.02mmol)を5mLの丸底フラスコに装填した。塩酸ヒドロキシルアミン(III、R4＝CH3)(27mg、0.33mmol、20当量)を添加し、この反応液を室温の暗所で攪拌し続けた。追加部分のメトキシルアミンのを添加し(総計、60当量)、この反応液を計36時間攪拌した。この出発物質および生成物は極性が極めて類似していたので、TLC分析はこの反応の追跡に特に有用ではなかった。この物質をシリカゲル・カラムクロマトグラフィー(1％Et3Nを用いて緩衝した3％酢酸エチル/ヘキサン)によって直接的に精製して無色油を得た。5mLの丸底フラスコへ、2mLのTHF中に溶解したこの油、TBAF水和物(59mg、0.22mmol、14当量)、4Åモレキュラーシーブ(60mg)、および1滴のEt3Nを連続的に装填した。この溶液を室温の暗所で24時間攪拌し続けた。この反応混合液をシリカゲル・カラムクロマトグラフィー(1％Et3Nを用いて緩衝した99％酢酸エチル)によってジアステレオマー(1:3.5)の混合物としてのI(c)およびI(d)(6mg、59％)へ直接に精製し、逆相HPLCクロマトグラフィー(15％H2O/アセトニトリル)によって分離すると1.4mg(19％、全体では6％)のI(c)および2.8mg(37％、全体では12％)のI(d)が得られた。I(c)(1β,3α):
2005536444.tif 000024
同様の方法で、以下の追加の化合物を調製した。
【０１０９】
化合物I(e)およびI(f)：塩酸メトキシルアミン(III、R4＝CH3)をO-塩酸エチルヒドロキシルアミン(III、R4＝Et)と置換することによる。粗反応生成物を1％トリエチルアミンの存在下で99％酢酸エチルにより溶離するカラムクロマトグラフィーによって精製すると、ジアステレオマーI(e)(1α,3β)およびI(f)(1β,3α)の混合物4.8mgが収率各々63％および1.8:1の比率で得られた。このジアステレオマー混合物を15％アセトニトリル水溶液により溶離するHPLC(Phenomenex Lunaカラム、逆相、3mL/min)によって分離すると、収率各々16％および8％で1.2mgのI(e)(1α,3β)および0.6mgのI(f)(1β,3α)が得られた。I(e)(1α,3β)の保持時間は55.48分間、I(f)(1β,3α)の保持時間は53.23分間であった。I(e)(1α,3β)についてのデータ:
2005536444.tif 000025
I(f)(1β,3α)についてのデータは、化合物の量が不十分であったため入手しなかった。
【０１１０】
化合物I(g)およびI(h)：塩酸メトキシルアミン(III、R4＝CH3)をO-塩酸アリルヒドロキシルアミン(III、R4＝アリル)と置換することによる。1％トリエチルアミンの存在下で99％酢酸エチルにより溶離するフラッシュカラムクロマトグラフィーによって粗反応生成物を精製すると、ジアステレオマーI(g)(1α,3β)およびI(h)(1β,3α)の混合物6.1mgが収率各々73％および2.0:1の比率で得られた。このジアステレオマー混合物を15％アセトニトリル水溶液により溶離するHPLC(Phenomenex Lunaカラム、逆相、3mL/min)によって分離すると、収率各々13％および6％で1.1mgのI(g)(1α,3β)および0.53mgのI(h)(1β,3α)が得られた。I(g)(1α,3β)の保持時間は55.55分間、I(h)(1β,3α)の保持時間は53.19分間であった。I(g)(1α,3β)MK-1625(NOAII)-TB-2についてのデータ:
2005536444.tif 000026
I(h)(1β,3α)MK-1625(NOAII)-TB-1についてのデータは、化合物の量が不十分であったため入手しなかった。
【０１１１】
化合物I(i)およびI(j)：塩酸メトキシルアミン(III、R4＝CH3)をO-塩酸フェニルヒドロキシルアミン(III、R4＝フェニル)と置換することによる。1％トリエチルアミンの存在下で99％酢酸エチルにより溶離するフラッシュカラムクロマトグラフィーによって粗反応生成物を精製すると、ジアステレオマーI(i)(1α,3β)およびI(j)(1β,3α)の混合物11.8mgが収率各々83％および1.8:1の比率で得られた。15％アセトニトリル水溶液により溶離するHPLC(Phenomenex Lunaカラム、逆相、3mL/min)によってこのジアステレオマー混合物を分離すると、収率各々37％および20％で5.3mgのI(i)(1α,3β)および2.8mgのI(j)(1β,3α)が得られた。I(i)(1α,3β)の保持時間は67.86分間、I(j)(1β,3α)の保持時間は64.85分間であった。I(i)(1α,3β)についてのデータ:
2005536444.tif 000027
I(j)(1β,3α)についてのデータ
2005536444.tif 000028
【０１１２】
実施例６：化合物I(k)の調製
2.0mLの無水THF中に溶解した53mg(0.094mmol)の19-ノル-酸化ホスフィンVI(R1,R2＝OTBDMS,R6＝H)の溶液を-78℃へ冷却し、59μL(0.094mmol、ヘキサン中の1.6M)のn-BuLiを用いてアルゴン大気下で処理した。この混合液は深紅色へ変色し、-78℃で15分間撹拌した。この溶液へカニューラを介して1.5mLの無水THF中に溶解した10mg(0.031mmol)のCD環状ケトンV(R3＝CH3、R5＝t-ブチル、実施例2を参照)の前もって冷却した(-78℃)溶液を滴下法で添加した。赤みがかった橙色が黄色へ色あせするまでこの反応を持続させた(約2時間)。-78℃で1.0mLのpH7バッファーを添加することによってこの反応液を急冷し、その後室温へ加温し、EtOAc(20mL×2)によって抽出し、食塩液により洗浄し、MgSO4の上方で乾燥し、濃縮した。溶離剤としてEtOAc/ヘキサン(1/15)を用いるカラムクロマトグラフィーにこの残留物をかけると、無色油として11mg(52％)の結合生成物が得られた。
【０１１３】
結合した生成物(10mg、0.015mmol)を1.0mLの無水ピリジン中に溶解し、この溶液にO-塩酸エチルヒドロキシルアミン(26mg、20当量)および4Å粉末化モレキュラーシーブ(10mg)を室温で添加した。この混合液を室温で20時間攪拌した。反応はTLCにより監視した。溶離剤としてEtOAc/ヘキサン(1/15)を用いるカラムクロマトグラフィーにこの反応混合液をかけると、無色油として10mg(97％)のオキシム生成物が得られた。
【０１１４】
オキシム生成物(8.9mg、0.013mmol)は2mLの無水THF中に溶解し、この溶液へTHF中に溶解したTBAFの1.0M溶液0.19mL(0.19mmol)を添加した。結果として生じる混合液を室温で一晩攪拌し、水2mLにより急冷した。EtOAc(20mL×3)を用いてこの溶液を抽出し、食塩液を用いて洗浄し、MgSO4の上方で乾燥し、濃縮した。溶離剤としてEtOAcを使用するカラムクロマトグラフィーに残留物をかけると、無色油として5.6mg(94％)の(-)-I(k)の粗生成物が得られた。この粗生成物(5.6mg中4mg)を逆相HPLC(C-18セミ分取カラム、MeCN中の18％H2O、3mL/min)によって精製して2.5mgの(-)-I(k)(1α,3β、tR＝38.7min)が得られた。
2005536444.tif 000029
【０１１５】
実施例７：CYP24酵素アッセイ法(誘導されたKPK1A-ras細胞)
(i)材料および試薬:
1,25(OH)2D3  10-5M
［3H］-1,25(OH)2D3  25,000CPM/μL
HPK1A-ras細胞
48ウェルプレート
メタノール
ジクロロメタン
飽和KCl:KCl  30g、H2O  400mL
【０１１６】
(ii)方法:
1.HPK1A-ras細胞の誘導(アッセイ前日)
HPK1A-ras細胞が80〜90％コンフルエントである場合は、プレート内の1mL培地へ1μLの10-5Mの1,25(OH)2D3を添加した(最終濃度は10-8Mである)。
2.細胞懸濁液の調製
18〜20時間の誘導後、培地を除去し、PBSを用いて細胞を2回洗浄した。その後プレートからの細胞をトリプシン化し、遠心し(2,000rpm、5分間)、細胞ペレットをDMEM培地＋1％BSA中へ懸濁させた。
細胞を計数し、細胞密度を250,000/150μLへ調整し、48ウェルプレート内の各ウェルへ150μLの細胞懸濁液を添加した(細胞無含有対照としての3ウェル、および対照としての薬剤もしくは阻害剤を含まない3ウェルの細胞を含む)。
3.指定された各ウエル内に25μLのケトコナゾール(最終濃度10-5M、10-6M、10-7M、10-8M)または薬剤を添加した。このプレートを37℃で10分間維持した。
4.基質の調製
一定量のDMEM＋1％BSA培地(25＊ウェル数＋200)μLを試験管へ入れ、一定量の3H-1,25(OH)2D3(ウェル数＋2)μLおよび一定量の100mM DPPD(ウェル数/5)μLを添加し、それらをボルテックスミキサーで混合した。
5.インキュベーション
各ウェルに25μLを添加し、このプレートを37℃で3時間インキュベートした。総計数として計数プレート(2ウェル)へ25μLの基質を添加した。
6.脂質の抽出および計数
各ウェルへ500μLのメタノールを添加して反応を停止させ、それらを試験管へ移した。
250μLのジクロロメタンを添加し、ボルテックスミキサーで混合した。
250μLのジクロロメタンおよび250μLの飽和KClを添加し、ボルテックスミキサーで混合した。
4,000rpmで5分間遠心した。
100μLの水相(上相)をプラスチック製計数プレートへ移した。各ウェルに600μLのシンチレーション液を添加した。このプレートをシンチレーション計数管で計数した。
7.酵素活性の計算
NCCのCPMを差し引いた後の細胞対照のCPMが100％酵素活性である。
酵素活性＝(試験化合物ウェル中のCPM-NCCウェル中のCPM)/(細胞対照中のCPM-NCCウェル中のCPM)＊100％
ケトコナゾールの希釈
ストック溶液10-2M
2005536444.tif 000030
試験化合物の希釈
ストック溶液10-3M
2005536444.tif 000031
【０１１７】
(iii)結果:
式I(a)、I(c)、I(e)、I(g)、I(i)およびI(k)の化合物はケトコナゾールに比較してCYP24の有意に大きな阻害を示した。ケトコナゾールと比較して化合物I(a)およびI(c)(各々BH1625(NOH)-(CTA062)TB-2およびBH-1625(NOMe)-TB-2(CTA065)として示した)によるCYP24活性の阻害を示したグラフは図1Aに示した。
【０１１８】
(iv)参考文献:
2005536444.tif 000032
【０１１９】
実施例８：CYP1-αヒドロキシラーゼのアッセイ法(トランスフェクトされたCOS-1細胞を使用する)
(A)一過性トランスフェクション
(i)試薬および材料
1.COS-1細胞(50〜80％コンフルエント)
2.FuGene  6トランスフェクション試薬
3.CYP-1αヒドロキシラーゼcDNA(1μg/μL)を含有するPcDNAベクター
4.DMEM培地＋10％FCS
5.DMEM培地(血清無含有)
6.6ウェルプレート
【０１２０】
(ii)トランスフェクションカクテルの調製(量はトランスフェクトされるウェル数に依存した)
1.無菌試験管へ血清無含有培地(1ウェル当たり100μL)を添加し、さらにFuGene  6試薬(1ウェル当たり3μL)を添加した。混合するために軽くたたいた。順番に注意を払った。FuGene  6試薬を培地へ直接に添加し、未希釈FuGene  6試薬はピペットチップ以外のプラスチック表面と接触させなかった。
2.段階2からの事前に希釈したFuGene  6試薬へDNA溶液(1ウェル当たり1μg)を添加した。
3.内容物が混合するように試験管を軽くたたいた。ボルテックスミキサーにはかけなかった。室温で15分間インキュベートした(45分間を超えずに)。
【０１２１】
(iii)細胞の調製
1.COS-1細胞をトリプシン化し、細胞懸濁液を遠心し、DMEM培地＋10％FCS中へ細胞ペレットを懸濁させた。
2.細胞懸濁液を750,000cell/mL(75cell/平方)へ希釈した。
【０１２２】
(iv)トランスフェクション
1.1.7mLのDMEM培地＋10％FCSを6ウェルプレートの各ウェルへ添加した。
2.正確な容量の細胞懸濁液(200μL/ウェル)をトランスフェクションカクテルへ移した。静かに混合した。
3.この混合液0.3mLを各ウェルへ添加した。各ウェルへ確実に同一量の細胞が添加されるようにした。確実に一様に分散するようにウェルを回転させた。
4.酵素活性アッセイ法を実施するまで、細胞を37℃、5％CO2で24時間インキュベートした。
【０１２３】
(B)酵素活性アッセイ法
(i)試薬および材料
DMEM培地＋1％BSA
PBS
［3H-26,27］-25(OH)D3
DPPD  100mM
【０１２４】
(ii)方法
1.細胞をPBSにより1回洗浄した。付着した細胞を傷害しないように注意を払った。
2.各ウエルに0.55mLの培地(DMEM＋1％BSA)を添加した。
3.試験化合物を含有する0.025mLの培地を添加した。
4.細胞を10分間インキュベートした。
5.［3H-26,27］-25(OH)D3(50,000CPM)およびDPPD(0.6μLストック溶液)を含有する0.025mLの培地を添加した。
6.細胞を2時間インキュベートした。
7.1.5mLのメタノールを添加して反応を停止させた。
8.内部標準物質を添加した。
9.培地をラベル表示した試験管へ移した。
10.0.75mLのジクロロメタンを添加し、ボルテックスミキサーにかけ、室温で15分間維持した。
11.0.75mLのジクロロメタンおよび0.75mLの飽和KClを添加した。
12.ボルテックスミキサーにかけ、遠心した。
13.上相を除去し、Speed-Vac内で下相を乾燥した。
14.110μLの移動相を添加し、ボルテックスミキサーにかけ、5分間遠心した。
15.HPLCバイアル内のインサートへ105μLを移した。
16.HPLC分析条件:
溶媒:ヘキサン/イソプロパノール/メタノール(91/7/2)
カラム:SIL  3μLカラム
流量:2mL/min
検出器:UV検出器および放射性検出器
【０１２５】
(C)結果:
式I(a)、I(c)、I(e)、I(g)、I(i)およびI(k)の化合物はCYP27B1の阻害をほとんどないし全く示さなかった(IC50＞10,000nM)。化合物I(a)およびI(c)(各々BH1625(NOH)-(CTA062)TB-2およびBH-1625(NOMe)-TB-2(CTA065)として示した)によるCYP27B1活性の阻害をケトコナゾールと比較して示したグラフは図1Bに示した。
【０１２６】
(D)参考文献:
2005536444.tif 000033
【０１２７】
実施例９：CYP27A1酵素アッセイ法
(A)方法:
以下に記載されている通り:
2005536444.tif 000034
【０１２８】
(B)結果:
式I(a)、I(c)、I(e)、I(g)、I(i)およびI(k)の化合物はCYP27A1の阻害をほとんどないし全く示さなかった(IC50＞10,000nM)。化合物I(a)およびI(c)(各々BH1625(NOH)-(CTA062)TB-2およびBH-1625(NOMe)-TB-2(CTA065)として示した)によるCYP27B1活性の阻害をケトコナゾールと比較して示したグラフは図1Cに示した。
【０１２９】
実施例１０：VDR結合アッセイ法
(A)試薬および材料
1.VDR  9.3pmol/μL(ヒト、組換え、Biomol)
2.エタノール中の［3H］-1,25(OH)2D3
3.エタノール中の1,25(OH)2D3
4.TEK300
トリス-HCl  50mM
EDTA  1.5mM
KCl    300mM
pHを7.4へ調整した(25℃)
5.TEDK300
TEK300
DTT(ジチオトレイトール)    10mM(分子量154.24)
6.トリスバッファー
トリス-HCl  22.50g
H2O  500mL
トリスベース  13.25g
H2O  500mL
4℃で維持した
7.デキストラン-T70(分子量70,000)  Pharmacia
8.活性炭(中性炭素脱色用、Norit)  Fishery
9.ゼラチン(G-2625  Sigma)
【０１３０】
(B)試薬の調製
1.活性炭デキストラン溶液
(1)  トリスバッファー
等量のトリス-HClおよびトリスベースを混合した。
(2)  Norit中性脱色用活性炭  2.0g
トリスバッファー    150mL
攪拌した
(3)  デキストラン-T-70  0.2g
トリスバッファー  50mL
(4)  懸濁させたデキストランを活性炭溶液内に攪拌しながら緩徐に滴下した。
冷蔵庫に一晩保管した。
使用前の30分間、持続的に混合しながら氷上に保管した。
【０１３１】
2.TEK300/ゼラチン溶液
ブタゼラチン  50mg
TEDK300溶液  5mL
加熱し、攪拌し、その後4℃へ冷却した。
5mLのTEDK300溶液
【０１３２】
3.エタノール中の1,25(OH)2D3および試験化合物の調製
1,25(OH)2D3:125、250、500、1,000、2,000、4,000pg/25μL(ストック溶液10-5M/25μL＝100,000pg/25μL)
試験化合物:12,500、25,000、50,000、100,000、200,000および400,000pg/25μL(4＊10-5M/25μL＝400,000pg/25μL)
2005536444.tif 000035
【０１３３】
4.VDRの希釈:
2.5mLのTEDK300/ゼラチン液(500μL/試験管)(氷上で保管した)中の1μLのストック溶液VDR
【０１３４】
(C)  アッセイ法:
2005536444.tif 000036
【０１３５】
(D)計算:
VDRからの50％の［3H］-1,25(OH)2D3を置換するための1,25(OH)2D3の量は、1,25(OH)2D3に対するB50として計算した。他の化合物のVDR結合は、1,25(OH)2D3に対する数値1に比較したB50として計算した。
【０１３６】
1,25(OH)2D3の希釈
2005536444.tif 000037
【０１３７】
試験化合物の希釈
2005536444.tif 000038
【０１３８】
(E)結果:
トランスポーターDタンパク質(DBP)への化合物I(a)およびI(c)(各々BH-1625(NOH)-(CTA062)TB-2およびBH-1625(NOMe)-TB-2(CTA065)として示した)の結合を1α,25-ジヒドロキシビタミンD3および25-ジヒドロキシビタミンD3と比較して示したグラフは図2に示した。
【０１３９】
(F)参考文献:
2005536444.tif 000039
【０１４０】
実施例１１：転写活性アッセイ法
(A)試薬および材料:
Mark Haussler博士およびKerr Whitfield博士(アリゾナ大学、トゥーソン、アリゾナ州)からのpSG5-hVDR1/3;Mark Haussler博士およびKerr Whitfield博士(アリゾナ大学、トゥーソン、アリゾナ州)からのpSG5ベクター(CT4)4TKGHのEcoRI部位に挿入されたhVDR1/3 DNA;ヒトGH遺伝子へ連結されたチミジンプロモーターを有するpTKGHベクター内へライゲーションかつアニーリングされたCT4合成ラットオステオカルシンVDREの4コピー
hGH  ELISAキット    Boehringer  Mannheim
Fugene  6トランスフェクション試薬
COS-1細胞
DMEM培地およびDMEM培地＋10％FCS
1,25(OH)2D3および試験化合物
【０１４１】
(B)トランスフェクション:
1.トランスフェクション1日前に24ウェルプレート(5,000cell/プレート)内へCOS細胞を継代培養した。
2.カクテルの調製(量はトランスフェクトするウェル数に依存した)
(1)無菌試験管へ血清無含有培地(1ウェル当たり100μL)を添加し、さらにFuGene  6試薬(1ウェル当たり0.6μL)を添加した。混合するために軽くたたいた。順番に注意を払った。FuGene  6試薬を培地へ直接に添加し、未希釈FuGene  6試薬はピペットチップ以外のプラスチック表面と接触させなかった。
(2)段階2からの事前に希釈したFuGene  6試薬へDNA溶液(pSG5-hVDR1/3および(CT4)4TKGHベクター)(1ウェル当たり0.1μg)を添加した。
(3)内容物が混合するように試験管を軽くたたいた。ボルテックスミキサーにはかけなかった。室温で15分間インキュベートした(45分間は超えずに)。
3.培地を取り除き、0.4mLの新鮮培地と取り替えた。
4.滴下法で各ウェルへ100μLのカクテルを添加した。
【０１４２】
(C)様々な濃度の1,25(OH)2D3および試験化合物を用いてトランスフェクトされた細胞の処理:
トランスフェクションの30分間〜1時間後、1,25(OH)2D3(対照として)および試験化合物を20μL培地中の培地へ添加した。1,25(OH)2D3の濃度範囲は10-1〜10-8M(10-10、3＊10-9、10-9、3＊10-8、10-8M)であり、試験化合物の濃度範囲は3＊10-9M〜10-7M(3＊10-9、10-9、3＊10-8、10-8、3＊10-8、10-7M)であった。インキュベーションは24時間継続した。
【０１４３】
(D)培地中のGH含量の測定:
24時間のインキュベーション後、ヒトGH測定のために培地の200μLの希釈アリコート(20〜50倍の希釈)を使用した。サンプルはhGH ELISAキットの取扱説明書によってアッセイした。
【０１４４】
(E)結果:
ビタミンD転写アッセイ法における化合物I(a)およびI(c)(各々BH1625(NOH)-(CTA062)TB-2およびBH-1625(NOMe)-TB-2(CTA065)として示した)の活性を1α,25-ジヒドロキシビタミンD3に比較して示したグラフは図3に示した。
【０１４５】
(F)参考文献:
2005536444.tif 000040
【０１４６】
実施例１２：DBP結合アッセイ法(ヒト血漿)
(A)試薬:
1.トリスバッファー:
トリス-HCL  22.50g
H2O  500mL
2.トリスベース  13.25g
H2O  500mL
4℃で維持した。
3.デキストラン-T70(分子量70,000)  Pharmacia
4.活性炭(中性炭素脱色用、norit)  Fishery
5.DBP(ビタミンD結合タンパク質)(ヒト血漿)
6.［3H］25(OH)D3
7.ゼラチン(G-2625  Sigma)
【０１４７】
(B)試薬の調製:
1.トリスバッファー
等量の2種のトリスバッファーを混合した。
2.デキストランをコートした活性炭溶液
(1)活性炭溶液の調製
Norit中性脱色用活性炭    2.0g
トリスバッファー    150mL
撹拌した
(2)デキストラン溶液の調製
デキストランT-70  0.2g
トリスバッファー  50mL
(3)デキストランをコートした活性炭溶液の調製
デキストラン溶液を撹拌しながら活性炭溶液へ緩徐に滴下した。
冷蔵庫で一晩保存した。
使用前の30分間、継続的に撹拌しながら氷上で保管した。
この溶液を2ヵ月間、4℃で保管した。
3.トリスバッファー/ゼラチン溶液
ブタゼラチン  250mg
トリスバッファー  50mL
加熱し、撹拌し、氷上で冷却した。
使用直前に調製した。
4.DBP溶液
ヒト血漿はトリスバッファー/ゼラチン溶液を用いて1:5,000へ希釈した。
5.標準物質25(OH)D3の希釈
ストック溶液  10,000pg/50μL
エタノールを用いて0、62.5、125、250、500、750、1,000、10,000pg/50μLへ希釈した。
6.標準物質1,25(OH)2D3の希釈
ストック溶液  200,000pg/50μL(10-5M/50μL)
エタノールを用いて0、6,250、12,500、25,000、50,000、100,000、200,000pg/50μLへ希釈した。
7.試験化合物の希釈
ストック溶液  200,000pg/50μL(10-3M)
エタノールを用いて12,500、25,000、50,000、100,000、200,000および400,000pg/50μLへ希釈した。
8.［3H-26,27］-25(OH)2D3溶液
このストック溶液はトリスバッファー中で希釈した(20,000CPM/50μL)。
【０１４８】
(C)  アッセイ法
2005536444.tif 000041
【０１４９】
(D)計算:
50％の［3H］-25(OH)D3を置換するための25(OH)D3の量は25(OH)D3DBP結合に対するB50として計算した。他の化合物のDBP結合は25(OH)D3に対する数値1に比較したB50として計算した。
【０１５０】
(E)25(OH)D3の希釈
2005536444.tif 000042
【０１５１】
(F)1,25(OH)D3の希釈
2005536444.tif 000043
【０１５２】
(G)試験化合物の希釈
2005536444.tif 000044
【０１５３】
(H)結果:
ビタミンD受容体(VDR)結合アッセイ法における化合物I(a)およびI(c)(各々BH-1625(NOH)-(CTA62)TB-2およびBH-1625(NOMe)-TB-2(CTA65)として示した)の活性を1α,25-ジヒドロキシビタミンD3に比較して示したグラフは図4に示した。
【０１５４】
(I)参考文献:
2005536444.tif 000045
【０１５５】
実施例１３：ケラチノサイトの増殖
式I(a)およびI(c)の化合物は、標準プロトコール(Posner G.H.ら,J.med.Chem.1992,35,3280-3287)を使用してマウスケラチノサイト中での抗増殖活性についてインビトロでアッセイした。ケラチノサイト増殖に化合物I(a)およびI(c)が及ぼす用量反応作用を1α,25-ジヒドロキシビタミンD3もしくはカルシトリオールに比較した示したグラフは図5に示した。
【０１５６】
実施例１４：カルシウムの排出
動物におけるそれらの安全性の尺度として、以前に記載された方法(Posner G.H.ら,J.Med.Chem.1999,42,3425-3435)を使用して、式I(a)の化合物をカルシトリオールへの類似用量(0.5μg/kg(体重))で1週間にわたり毎日、ラットへ経口投与した。ラット尿中のカルシウムレベルに式I(a)の化合物が及ぼす作用をカルシトリオール(1α,25-ジヒドロキシビタミンD3)と比較して示したグラフは図6に示した。
【０１５７】
本発明を現時点において好ましい実施例と見なされる実施例を参照しながら説明してきたが、本発明は開示される実施例に限定されないと理解されなければならない。それとは反対に、本発明は添付の特許請求の範囲の精神および範囲内に含まれる様々な変形および同等の配置に及ぶことが意図されている。
【０１５８】
すべての出版物、特許および特許出願は、各個別出版物、特許および特許出願が特別にその全体が参照として組み入れられると特別かつ個別に指示されているかのように、同程度にそれらの全体が本明細書に参照として組み入れられる。
【図面の簡単な説明】
【０１５９】
図面に関連付けながら本発明について説明する。
【図１Ａ】化合物I(a)およびI(c)(各々、BH1625(NOH)-TB-2-(CTA062)およびBH-1625(NOMe)-TB-2-(CTA065)と表示した)によるCYP24活性の阻害をケトコナゾールと比較して示したグラフである。
【図１Ｂ】化合物I(a)およびI(c)(各々、BH1625(NOH)-TB-2-(CTA062)およびBH-1625(NOMe)-TB-2-(CTA065)と表示した)によるCYP27B1活性の阻害をケトコナゾールと比較して示したグラフである。
【図１Ｃ】化合物I(a)およびI(c)(各々、BH1625(NOH)-TB-2-(CTA062)およびBH-1625(NOMe)-TB-2-(CTA065)と表示した)によるCYP27A1活性の阻害をケトコナゾールと比較して示したグラフである。
【図２】化合物I(a)およびI(c)(各々、BH-1625(NOH)-TB-2-(CTA62)およびBH-1625(NOMe)-TB-2-(CTA65)と表示した)のトランスポーターDタンパク質(DBP)への結合を1α,25-ジヒドロキシビタミンD3および25-ヒドロキシビタミンD3と比較して示したグラフである。
【図３】ビタミンD転写アッセイ法における化合物I(a)およびI(c)(各々、BH1625(NOH)-TB-2-(CTA62)およびBH-1625(NOMe)-TB-2-(CTA65)と表示した)の活性を1α,25-ジヒドロキシビタミンD3と比較して示したグラフである。
【図４】ビタミンD受容体(VDR)結合アッセイ法における化合物I(a)およびI(c)(各々、BH-1625(NOH)-TB-2-(CTA62)およびBH-1625(NOMe)-TB-2-(CTA65)と表示した)の活性を1α,25-ジヒドロキシビタミンD3と比較して示したグラフである。
【図５】ケラチノサイト増殖に及ぼす化合物I(a)およびI(c)の用量反応作用を1α,25-ジヒドロキシビタミンD3もしくはカルシトリオールに比較して示したグラフである。
【図６】ラット尿中のカルシウムレベルへ化合物I(a)(BH1625(NOH)と表示した)が及ぼす作用をカルシトリオール(1α,25-ジヒドロキシビタミンD3)に比較して示したグラフである。
【図１】
2005536444.tif 000053
【図２】
2005536444.tif 000054
【図３】
2005536444.tif 000055
【図４】
2005536444.tif 000056
【図５】
2005536444.tif 000057
【図６】
2005536444.tif 000058
【国際調査報告】
2005536444.tif 000059
2005536444.tif 000060
2005536444.tif 000061
2005536444.tif 000062