(57)【要約】  フェンレチニドなどのレチニドと、前記レチニドの分散または可溶化を可能にする溶媒とを含む非経口送達用の医薬組成物。前記溶媒は、エタノールなどのアルコールと、ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標）ＥＬなどのアルコキシル化ヒマシ油との組み合わせを含むか、あるいは、水相に分散したリポイドと、安定化量の非イオン界面活性剤と、任意に溶媒と、任意に等張性物質とを含むエマルジョン中のフェンレチニドなどのレチニドを含む。さらに、癌などの過増殖性疾患の治療方法も開示する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
レチニドと、該レチニドを分散または可溶化することができる溶媒とを含む非経口送達用の医薬組成物であって、
該溶媒はアルコキシル化ヒマシ油とアルコールとを含み、
該溶媒１ｍｌあたりに少なくとも１ｍｇの量のレチニドが存在するように、該レチニドが該組成物中に分散または可溶化されている医薬組成物。
【請求項２】
前記レチニドがフェンレチニドである請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記アルコキシル化ヒマシ油がポリエトキシル化ヒマシ油である請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記アルコールがエタノールである請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記アルコキシル化ヒマシ油が３０〜７０体積％の範囲の量で前記溶媒中に含まれ、前記アルコールが３０〜７０体積％の範囲の量で前記溶媒中に含まれる請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
水をさらに含む請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
過増殖性疾患の治療に有効な量の請求項１に記載の組成物を被験者に非経口投与するステップを含む、治療を必要とする被験者における過増殖性疾患の治療方法。
【請求項８】
前記投与するステップの前に、薬学的に許容可能な水性担体で前記組成物を希釈するステップをさらに含む請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記投与するステップが、静脈内投与ステップである請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記被験者がヒト被験者である請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
非経口送達用の医薬エマルジョン組成物であって、
（ａ）親水性相と、
（ｂ）２〜４０％（体積／体積）の、該親水性相に粒子として分散されている疎水性相としての薬理学的に許容可能なリポイドと、
（ｃ）０．０１〜２％（重量／体積）のレチニドと、
（ｄ）０〜１０％（体積／体積）の溶媒と、
（ｅ）０．０１〜１０％（重量／体積）の、該エマルジョンの安定化のための非イオン性界面活性剤と、
（ｆ）０〜１０％（重量／体積）の等張性物質と
の組み合わせを含み、ｐＨが約５〜１０である組成物。
【請求項１２】
前記レチニドがフェンレチニドである請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記フェンレチニドが約０．１〜０．５％（重量／体積）で存在する請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記溶媒が、少なくとも０．０１％（体積／体積）の量で存在し、該溶媒が、エタノール、ジメチルスルホキサミド（ＤＭＳＯ）、およびエチルアセトアミド（ＤＭＡ）からなる群より選択される請求項１１に記載の組成物。
【請求項１５】
前記溶媒が約０．０１〜５．０％（体積／体積）のエタノールである請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記リポイドが、ダイズ油、ベニバナ油、ヒマワリ油、ルリヂサ油、トウモロコシ油、オリーブ油、アマニ油、ゴマ油、パーム核油、綿実油、ココヤシ油蒸留物から得られる中鎖トリグリセリド類、クロフサスグリ油、およびこれらの混合物からなる群より選択される請求項１１に記載の組成物。
【請求項１７】
前記リポイドが１０〜３０％（体積／体積）のダイズ油である請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記非イオン性界面活性剤が、卵リン脂質類、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル類、またはポリオキシプロピレンとポリオキシエチレンとのブロックコポリマー類からなる群より選択される請求項１１に記載の組成物。
【請求項１９】
前記非イオン性界面活性剤が約２％（重量／体積）の卵リン脂質である請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
前記等張性物質が約１〜３％（重量／体積）の量で存在する請求項１１の組成物。
【請求項２１】
前記等張性物質が約１％（重量／体積）のグリセリンである請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
レチニドの量が約０．１〜０．５％（重量／体積）であり、前記溶媒が０．０〜５．０％（体積／体積）の無水エタノールであり、前記リポイドの量が約１０〜３０％（体積／体積）であり、卵リン脂質類の量が約１〜５％（重量／体積）であり、前記等張性物質が約１％（重量／体積）のグリセリンであり、前記ｐＨが５．０〜１０．０である請求項１１に記載の組成物。
【請求項２３】
前記粒子の粒径が５〜１０００ｎｍである請求項１に記載の組成物。
【請求項２４】
前記粒子の粒径が５０〜４００ｎｍである請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
過増殖性疾患の治療に有効な量の請求項１１に記載の組成物を被験者に非経口投与するステップを含む、治療を必要とする被験者における過増殖性疾患の治療方法。
【請求項２６】
前記投与するステップの前に、薬学的に許容可能な水性担体で前記組成物を希釈するステップをさらに含む請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記投与するステップが、静脈内投与ステップである請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
前記被験者がヒト被験者である請求項２５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［関連出願］
本出願は、仮出願第６０／２５１，４６３号（２０００年１２月５日出願、引用することにより本明細書の一部をなすものとする）の利益を主張する。
【０００２】
［発明の分野］
本発明は、フェンレチニドなどのレチニドの非経口送達のための医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
フェンレチニド［ＨＰＲ、オールトランス−Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）レチンアミド；ＣＡＳ登録番号６５６４６−６８−６］は、構造：
【化１】
2005510447.tif 000002
を有する合成レチノイン酸誘導体である。フェンレチニドの水溶液に対する溶解性はわずかである。Ｇｉｂｂｓ（ギブス）の米国特許第４，６６５，０９８号には、乳癌および膀胱癌の治療に有用なフェンレチニドの経口医薬組成物が記載されている。しかし、この経口フェンレチニド組成物のバイオアベイラビリティは制限されており、血漿中で高い薬物濃度を得るためにフェンレチニドを静脈内投与できるのであれば、より大きな抗癌作用が得られる可能性がある。したがって、十分な溶解性と血漿および組織に対するバイオアベイラビリティとの両方を併せ持つ非経口（特に静脈内）投与用のフェンレチニドの新規医薬組成物が現在必要とされている。
【発明の開示】
【０００４】
［本発明の要約］
本発明は、Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）レチンアミド（４−ＨＰＲ）またはその類似体（すなわちレチニド）の医薬組成物を含み、これらは有効成分（レチニド）のバイオアベイラビリティが増加しうる。これらの組成物によって、有意により多くの量の有効物質を患者に投与することが可能となり、現在使用可能な経口製剤（ギブス）で同量の薬物を投与した場合と比較すると血漿および組織における薬物量が多くなり、一種類の薬物および他の抗癌剤との組み合わせで、より大きな抗癌作用を得ることができる。
【０００５】
本発明の第一の態様によると、アルコキシル化ヒマシ油中のレチニドの医薬組成物が提供される（好ましくは、ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標）ＥＬなどのポリオキシエトキシル化ヒマシ油）。好ましくは、この組成物は、エタノールなどのアルコールも含む。この組成物は、凍結乾燥したレチニド（好ましくは４−ＨＰＲ）、または凍結乾燥していない４−ＨＰＲから調製することができる。
【０００６】
本発明の第二の態様は、非経口送達のための医薬エマルジョン組成物である。この組成物は、（ａ）親水性相（残分となる量で含まれる）と、（ｂ）該親水性相中に粒子として分散する、疎水性相としての薬理学的に許容されるリポイド（すなわち油）（通常は、前記組成物中に２〜４０％（体積／体積）の量で含まれる）と、（ｃ）フェンレチニドなどのレチニド（通常は、前記組成物中に０．０１〜２％（重量／体積）の量で含まれる）と、（ｄ）任意に溶媒（通常は、前記組成物中に０〜１０％（体積／体積）の量で含まれる）と、（ｅ）前記エマルジョンの安定化に十分な量の０．０１〜１０％（重量／体積）の非イオン界面活性剤（通常は、前記組成物中に約０．０１〜１０％（重量／体積））と、（ｆ）任意に等張性物質（通常は、前記組成物中に０〜１０％（重量／体積）の量で含まれる）との組み合わせを含む。
【０００７】
このような組成物を非経口投与することによる過増殖性疾患に罹患した被験者の治療方法も開示する。
【０００８】
本発明の上記およびその他の目的および態様は、図面および明細書でより詳細に説明する。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
［好ましい実施態様の詳細な説明］
［１．レチニド］
本発明を実施するために使用されるレチニドは、一般にセラミド形成性のレチノイドまたはレチノイン酸誘導体である。このような化合物としてはガンダー（Ｇａｎｄｅｒ）に付与された米国特許第４，１９０，５９４号に記載の化合物が挙げられる（本明細書に引用されるすべての特許の開示は、引用することにより本明細書の一部をなすものとする）。セラミド形成性レチノイドとしては、オールトランスレチノイン酸（ＡＴＲＡ）およびレチノイン酸誘導体が挙げられる。例えば、
（Ａ）式：
【化２】
2005510447.tif 000003
（式中、Ｘは、
【化３】
2005510447.tif 000004
２−シクロヘキシルエチル、１０−カルボメトキシデシル、４−ヒドロキシブチル、コレステリル、ｍ−ビニルベンジルとｐ−ビニルベンジルとの混合物、および４−ブロモベンジルからなる群から選択される）を有するオールトランスレチノイン酸のエステル、
（Ｂ）式：
【化４】
2005510447.tif 000005
（式中、Ｙは、コレステリルオキシ、フェニル、４−ブロモフェニル、４−メトキシフェニル、４−ニトロフェニル、４−ヒドロキシフェニル、４−メチルフェニル、４−シアノフェニル、４−エトキシフェニル、４−アセトキシフェニル、２−ナフチル、４−ビフェニル、２，５−ジメトキシフェニル、２，４−ジクロロフェニル、２，４−ジメチルフェニル、３，４−ジアセトキシフェニル、３，４，５−トリメトキシフェニル、および２，４，６−トリメチルフェニルからなる群より選択される）を有するオールトランスレチノイン酸のエステル、ならびに
（Ｃ）式：
【化５】
2005510447.tif 000006
（式中、Ｚは、ｎ−プロピルアミノ、ｔｅｒｔ−ブチルアミノ、１，１，３，３−テトラメチルブチルアミノ、１−モルホリノ、４−ヒドロキシフェニルアミノ、４−カルボメトキシ−２−ヒドロキシフェニルアミノ、β−（３，４−ジメトキシフェニル）−エチルアミノ、２−ベンゾチアゾリルアミノ、１−イミダゾリル、１−（２−ニコチノイルヒドラゾリル）、１−ベンゾトリアゾリル、１−（１，２，４−トリアゾリル）、
【化６】
2005510447.tif 000007
からなる群より選択される）を有するオールトランスレチノイン酸のアミドが挙げられるが、これらに限定するものではない。
【００１０】
特に好ましいものは、フェンレチニドとも呼ばれるオールトランス−Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）レチンアミドである。これはＣＡＳ登録番号６５６４６−６８−６であり、構造：
【化７】
2005510447.tif 000008
を有する。上述の化合物は、既知の技術によって調製可能である。例えば、ガンダーらに付与された米国特許第４，１９０，５９４号、ギブスに付与された米国特許第４，６６５，０９８号を参照されたい。
【００１１】
本発明の実施に使用可能な別のレチノイン酸誘導体としては、Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）レチンアミド−Ｏ−グルクロニドのＣ−グルコシド類似体が挙げられる。このような化合物およびそれらの調製については既知であり、カーリー（Ｃｕｒｌｅｙ）らに付与された米国特許第５，６６３，３７７号および第５，５９９，９５３号（引用することにより本明細書の一部をなすものとする）に記載されている。このような化合物は一般式：
【化８】
2005510447.tif 000009
で表すことができ、式中、ＲはＣＯＯＨ、ＣＨ2ＯＨ、またはＨであり、ｎは０または１である。
【００１２】
このような化合物の具体例としては、４−（レチンアミド）フェニル−Ｃ−グルクロニド、４−（レチンアミド）フェニル−Ｃ−グルコシド、４−（レチンアミド）フェニル−Ｃ−キシロシド、４−（レチンアミド）ベンジル−Ｃ−グルクロニド、４−（レチンアミド）ベンジル−Ｃ−グルコシド、４−（レチンアミド）ベンジル−Ｃ−キシロシド、１−（β−Ｄ−グルコピラノシル）レチンアミド、および１−（Ｄ−グルコピラノシルウロノシル）レチンアミドが挙げられる。
【００１３】
［２．アルコキシル化ヒマシ油および組成物］
アルコキシル化ヒマシ油は既知であり、例えば、アガルカル（Ａｇｈａｒｋａｒ）らに付与された米国特許第５，８２７，５２２号および米国特許第５，５０４，１０２号に記載されている。本出願人らは特に、本明細書に引用されるすべての米国特許を引用することにより本明細書の一部をなすものとする。ポリエトキシル化ヒマシ油が好ましい。
【００１４】
ポリエトキシル化ヒマシ油は、例えばナジ（Ｎａｇｙ）に付与された米国特許第４，９６０，７９９号およびニコラエフ（Ｎｉｋｏｌａｙｅｖ）らに付与された米国特許第５，９２５，７７６号に記載されている。
【００１５】
本発明の実施のために特に好ましいポリエトキシル化ヒマシ油は、鹸化価が６３〜７２であり、ヒドロキシル価が６５〜７８であり、酸価が＜２である市販のポリオキシル３５ヒマシ油であり、例えばＢＡＳＦ  Ｃｏｒｐ．（３０００コンチネンタル・ドライブ（Ｃｏｎｔｉｎｅｎｔａｌ  Ｄｒｉｖｅ）−ノース（Ｎｏｒｔｈ），マウント・オリーブ（Ｍｏｕｎｔ  Ｏｌｉｖｅ），ニュージャージー（Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ），０７８２８−１２３４  ＵＳＡ）製のＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標）ＥＬ（ＣＴＦＡ／ＩＮＣ：ＰＥＧ−３５ヒマシ油）（ＣＡＳ番号６１７９１−１２−６）が挙げられる。
【００１６】
溶媒中に使用されるアルコールは、任意の好適なアルコールであってよいが、好ましくはエタノールである。一般に、溶媒は、３０、４０、または４５体積％から最高５５、６０、または７０体積％のアルコキシル化ヒマシ油と、３０、４０、または４５体積％から最高５５、６０、または７０体積％のアルコールとを含む。あるいは溶媒は、約３．８〜３．９％（体積／体積）で使用される無水エタノールであってもよい。現在好ましい実施態様の１つでは、溶媒は、５０体積％のアルコキシル化ヒマシ油と、５０体積％のアルコールとを含む。レチニドは任意の好適な量で溶媒中に分散または可溶化されるが、好ましくは、溶媒１ｍｌ当たり少なくとも０．１ｍｇ、１ｍｇ、２ｍｇ、または５ｍｇのレチニドから溶媒１ｍｌ当たり最高１５ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、または４０ｍｇのレチニド、またはそれを超える量で分散または可溶化される。
【００１７】
上記組成物は非水性であってもよく水性であってもよい。少量の水を含有してもよく、食塩溶液またはデキストロース溶液などの薬学的に許容可能な担体の形態の組成物に加えたりこれと混合したりする場合もあり、これらの複合組成物（combined composition）が患者に投与される。例えば、溶媒に可溶化させた１０ｍｇ／ｍｌのレチニドを含む本発明の組成物は、１ｍｇ／ｍｌのレチニド溶液として患者に投与するために、生理食塩溶液または５％のデキストロース溶液と混合することができる。
【００１８】
［３．エマルジョン組成物］
前述したように、本発明のさらに別の態様は、非経口送達のための医薬エマルジョン組成物である。一般に、このような組成物は、（ａ）親水性相（残分となる量で含まれる）と、（ｂ）前記親水性相中に粒子として分散する疎水性相としての２〜４０％（体積／体積）の薬理学的に許容されるリポイドと、（ｃ）０．０１または０．１〜０．５、２、または５％（重量／体積）のレチニドと、（ｄ）０〜１０％（体積／体積）の溶媒と、（ｅ）前記エマルジョンを安定化させるための０．０１〜１０％（重量／体積）の非イオン界面活性剤と、（ｆ）０、０．０１、または０．１〜３、６、または１０％（重量／体積）の等張性物質との組み合わせを含む。
【００１９】
この組成物は、好ましくはｐＨが約５〜１０であり、組成物中の粒子は好ましくは粒径が約５ｎｍまたは５０ｎｍ〜約４００ｎｍまたは１０００ｎｍである。
【００２０】
任意の好適な薬学的に許容可能なリポイド（または油）を本発明の実施のために使用することができる。例えば、ダイズ油、ベニバナ油、ヒマワリ油、ルリヂサ油、トウモロコシ油、オリーブ油、アマニ油、ゴマ油、パーム核油、綿実油、ココヤシ油蒸留物からの中鎖トリグリセリド、クロフサスグリ油、およびこれらの混合物が挙げられるが、これらには限定されない。一般に、リポイドは約１０〜３０％（体積／体積）の量で混入されることが好ましく、好ましくはダイズ油である。
【００２１】
一般に、溶媒は存在しないか、あるいは少なくとも０．０１％（体積／体積）の量で存在する。油への溶解性を増加させる目的で、油に加える前にレチニドを溶解させるために溶媒が使用される。次に、レチニド含有油は水相と均質化される。その時点で、溶媒の大部分は油のミセル（またはその他の分散相粒子）から離れて水相に入り、油のミセル中にレチニドが残留する（水は油よりもはるかに極性が高く、エタノールは極性であるため）と考えられる。任意の好適な溶媒を使用することができ、例えば、エタノール、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、およびエチルアセトアミド（ＤＭＡ）を使用することができるが、これらには限定されない。好ましい実施態様では、溶媒はエタノールであり、約０．０１〜５．０％（体積／体積）で混入される。レチニドを油に添加した後で、溶媒を揮発させて溶媒を除去することができる。
【００２２】
好適な非イオン界面活性剤としては、卵リン脂質類、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル類（トゥイーン（Ｔｗｅｅｎ））、ポリオキシプロピレンとポリオキシエチレンのブロックコポリマー類（ポロキサマーとしても知られており、プルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）としても知られている）、およびそれらの組み合わせなどが挙げられるが、これらには限定されない。好ましい実施態様では、非イオン界面活性剤は約２％（重量／体積）の卵リン脂質である。
【００２３】
任意の好適な等張性物質を使用することができる。等張性物質が使用される場合、等張性物質は通常約０．８〜８％（重量／体積）の量で使用される。これらの物質は、浸透圧を調節することによって、エマルジョンを対象患者の血液と等張にする。等張性物質の例としては、グリセリン、ならびにキシリトール、ソルビトール、およびマンニトールなどの糖アルコールが挙げられる。等張性物質のその他の例としては、アラニンなどの非極性アミノ酸、ヒスチジンなどの塩基性アミノ酸、および／またはグリシンなどの電荷をもたない極性アミノ酸が挙げられる。約１％（重量／体積）のグリセリンが現在のところ好ましい。
【００２４】
前述の特定の実施態様では、レチニドは組成物中に約０．１〜０．５％（重量／体積）含まれ、溶媒は０．０または０．０１〜５．０％（体積／体積）の無水エタノールであり、前記リポイドの量は約１０〜３０％（体積／体積）であり、卵リン脂質の量は約１〜５％（重量／体積）、等張性物質は約１％（重量／体積）のグリセリンであり、ｐＨは５〜１０である。
【００２５】
前述の種々の成分は、既知の技術で混合してエマルジョンを調製することができ、既知の技術によって後の投与のために滅菌容器またはバイアルに入れることができる。これらについては後に詳細に説明する。
【００２６】
［４．治療および投与］
本発明の組成物は、腫瘍、癌、および新生物性疾患などの過増殖性疾患、ならびに前癌および非新生物性または良性の過増殖性疾患を治療するために投与することができる。
【００２７】
本明細書に記載の組成物および方法によって治療が行われる被験者は、一般に、ヒト被験者、および獣医学のためのイヌ、ネコ、ウマなどの動物被験者の両方を含む哺乳動物被験者である。
【００２８】
本発明によって治療可能な腫瘍、癌、および新生物組織の例としては、悪性疾患、例えば乳癌、骨肉腫、血管肉腫、線維肉腫および他の肉腫、白血病、リンパ腫、洞腫瘍、卵巣、尿管、膀胱、前立腺、およびその他の性尿器の癌、大腸、食道、および胃の癌、ならびにその他の消化管の癌、肺癌、骨髄腫、膵臓癌、肝癌、腎癌、内分泌腺癌、皮膚癌、ならびに神経膠腫や神経芽細胞腫などの悪性または良性の脳および末梢神経（ＣＮＳ）系の腫瘍などが挙げられるが、これらには限定されない。
【００２９】
前癌および非新生物性または良性の過増殖性疾患の例としては、脊髄形成異常症、正常位置の子宮頚癌、ガードナー症候群などの家族性腸ポリポーシス、口腔白板、組織球増殖症、ケロイド、血管腫、過増殖性動脈狭窄、炎症性関節炎、過角化症、および関節炎を含む丘疹鱗屑性発疹が挙げられる。いぼなどのウイルス性過増殖性疾患、ＥＢＶ性疾患（すなわち感染性単核球症）、および瘢痕形成なども含まれるが、これらには限定されない。本明細書に開示される治療方法は、本明細書で規定される過増殖性疾患に罹患したことが分かったかその疑いがあるか、あるいは発病の危険性のある任意の被験者に使用することができる。
【００３０】
本明細書で使用される場合、「過増殖性疾患の治療」は、過増殖性細胞または腫瘍の本体または集団の殺滅、または増殖肥大の阻害あるいは遅延、癌性増殖の阻害あるいは遅延、過増殖性細胞数の減少、または他の解剖学的部位への拡散の防止、ならびに過増殖性細胞の過増殖の程度および数の軽減のための方法を意味する。本明細書で使用される場合、「治療」は、必ずしも過増殖の治癒または完全な消滅を意味するものではない。本明細書で使用される場合、治療有効量は、過増殖性細胞の殺滅増殖速度の低下、過増殖性細胞体の大きさの減少、および／または過増殖性細胞数の減少に有効な量である。
【００３１】
任意の一種類の有効物質の治療的有効投与量、本発明の範囲内でのその使用は、化合物や患者によって幾分変動し、患者の症状や送達経路などの要因に依存する。このような投与量は、特に本発明の開示を参照しながら、当業者には既知の日常的な薬理学的手順に従って決定することができる。フェンレチニドの場合、約１μＭ〜１０μＭまたは５０μＭまたはそれを超える血漿中濃度が達成される投与量が使用される。
【００３２】
本明細書に記載の組成物は、静脈内、動脈内、鞘内、筋肉内、皮下、および腹腔内の注射または輸液などの任意の好適な技術によって非経口投与が可能である。
【００３３】
本明細書に記載の組成物は、Ｂ．マウレル（Ｍａｕｒｅｒ）らＰＣＴ出願ＷＯ００／００２０７号（２０００年１月６日）、Ｂ．マウレル（Ｍａｕｒｅｒ）ら米国特許出願第０９／４７１，９４４号（１９９９年１２月２３日出願）（これらの記載内容全体を引用することにより本明細書の一部をなすものとする）などに記載される併用療法に使用することができる。
【実施例】
【００３４】
以下の非限定的な実施例によって、本発明をより詳細に説明する。
【００３５】
［実施例１］
［希釈剤１２中の製剤］
希釈剤１２は、無水アルコール（エタノール）とクレモホールＥＬポリエトキシル化ヒマシ油（ＵＳＰ）の５０：５０（体積／体積）混合物である。薬物は、希釈剤１２中に１０ｍｇ／ｍｌの濃度で容易に溶解可能である。５０／５０エタノール／クレモホールＥＬ（希釈剤１２）を使用して最高で１５ｍｇ／ｍｌの溶液を調製することができる。エタノールのクレモホールＥＬに対する比率をより高くすることによって（例えば、５５％エタノール：４５％クレモホールＥＬ）、よりフェンレチニド濃度の高い溶液を調製することもできる。
【００３６】
５０：５０（体積／体積）のエタノール／クレモホールＥＬ（希釈剤１２）の薬物溶液は、必要な体積のアルコールに撹拌しながらフェンレチニドを溶解し、適切な量のクレモホールＥＬを加えることによって調製される。得られる溶液は、有意な効力の低下または不純物の形成が起こらずに最長３か月間は冷凍保存または室温保存で安定である。４０℃などの高温でも薬物の効力の低下は最小限であり、３か月後で約３％の低下である。
【００３７】
上記製剤は、適宜０．９％の塩化ナトリウム溶液（正常食塩溶液、ＵＳＰ）または５％デキストロース溶液（ＵＳＰ）で希釈して１ｍｇ／ｍｌ溶液にすることができ、４日間は溶液の抗力が低下せず安定である。
【００３８】
フェンレチニド製剤をｔ−ブタノール／水溶液から凍結乾燥することもできる。ｔ−ブタノールの濃度は５％〜９５％で変動させることができる。得られる無水粉末は、希釈剤１２を使用して再構成して、輸液に通常使用される正常食塩溶液や５％のデキストロースなどでさらに希釈することができる。凍結乾燥した粉末は室温で安定である。
【００３９】
［実施例２］
［フェンレチニドのエマルジョン製剤］
フェンレチニドの水中油型エマルジョン製剤を、リン脂質を使用して調製した。製剤化の手順は以下の通りである。
【００４０】
薬物をアルコールに溶解しエマルジョンの油相に加える。別のビーカー中でバッチ品質の卵リン脂質を水−グリセリン溶液に分散させて水相を調製する。水酸化ナトリウムを使用して水相のｐＨを５〜７に調整する。撹拌しながらこの水相を油相に加える。得られたエマルジョンを均質化して、最終的なフェンレチニド濃度が１ｍｇ／ｍｌ（０．１％）または２ｍｇ／ｍｌ（０．２％）で、最終的なエタノールがそれぞれ３．９％または３．８％であり、最終的な卵リン脂質濃度が２％であり、最終的なグリセリン濃度が１％であり、ｐＨが７．２〜７．４であり、粒径が５０〜４００ｎｍの範囲である油／水エマルジョンが得られる。
【００４１】
これらのエマルジョンの安定性をモニターすると、エマルジョン冷凍温度で１か月間、効力および粒径が変化せず安定であることが分かった。室温などの高温での粒径および効力の変化は最小限である。
【００４２】
［実施例３］
［フェンレチニドの分析］
この分析は、フォルメリ（Ｆｏｒｍｅｌｌｉ）ら（Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ，１１：２０３６−２０４２，１９９３）の方法を改良したものである。４−ＨＰＲ濃度を、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で測定する。すべての手順は、間接黄色光の下で実施される。ＭｅＯＨ：ＡＣＮ（１：１）中でストック標準物質を調製し、−７０℃で保管する。品質保証標準物質は正常ヘパリン添加血漿中で調製し、−７０℃で保管する。標準物質およびＱＡ、ならびに動物試料は、シラン処理したコハク製マイクロチューブ中で調製し、できる限り冷暗所に維持する。血漿および組織試料は、経口使用されるフェンレチニド（ギブスの製剤）または腹腔内投与される乳化フェンレチニドの場合、ＭｅＯＨ：ＣＡＮで抽出される。乳化フェンレチニドを腹腔内投与して治療した動物から採取した血漿試料は、ＭｅＯＨ：クロロホルム：水で抽出して、エマルジョンを破壊し、フェンレチニドを放出させた。検量線試料は、内部標準のＮ−（４−エトキシフェニル）レチンアミド（４−ＥＰＲ）を含有する５００μｌの正常ヘパリン添加血漿に適切な量のストック標準物質を加えることによって調製される。１００μｌの氷冷飽和リン酸カリウムと９００μｌの氷冷アセトニトリルを加えることによってタンパク質が沈殿する。遠心分離後、上澄みをコハク色の自動注入バイアルに入れ、分析するまで室温で暗所に保管する。５０μｌの上澄みを、フェノメネックス・ルナ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ）Ｃ１８（２）カラムとブラウンリー（Ｂｒｏｗｎｌｅｅ）ＲＰ−１８プレカラムを取り付けた島津製の液体クロマトグラフシステムに注入する。移動相はアセトニトリル：水：氷酢酸（８０：１８：２、ｖ／ｖ／ｖ）からなり、１ｍｌ／分の流速で圧送される。検出は波長３４０ｎｍで行われ、これによって対象となるレチノイドに関して良好な感度が得られる。品質保証試料および患者血漿試料も同じ方法で分析する。正常血漿中のレチノールの内因性濃度は分析が複雑であるため、レチノールの検量線を５％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）中で調製し、血漿試料の分析を行う。
【００４３】
［実施例４〜１０］
［薬力学および細胞毒性の研究］
実施例４〜１０は、それぞれ表１〜３、図１、および表４〜６に示される。これらの実施例は、上記の実施例３に記載の一般手順に従って実施した。実施例４〜７は、実施例１に記載のようにクレモホール中で安定化したフェンレチニドの投与を、ギブスの方法によるフェンレチニドの投与と比較しており、実施例８〜１０は、実施例２に記載されるようなフェンレチニド含有エマルジョンの投与を、ギブスの製剤によるフェンレチニドの投与と比較している。
【００４４】
表１は、本明細書で開示されるようにクレモホール／エタノール（５０／５０）で安定化したフェンレチニドを２日間または４日間マウスに腹腔内投与した場合、５日間フェンレチニドを同じ投与量で経口投与した場合（ギブスの製剤）よりも血漿中濃度が高くなったことを示している。マウスには、１．５ｍｇのフェンレチニドを２日間または４日間１日２回で腹腔内投与（無胸腺／ヌードマウス）するか、あるいは１．５ｍｇのフェンレチニドを５日間にわたって１日２回で経口投与した（Ｂａｌｂ／Ｃマウス）。最終投与から４時間後にマウスを屠殺し、分析を行った。薬物の血漿中濃度は前述のように分析した。フェンレチニドを投与する前に、免疫無防備状態（無胸腺）のヌードマウスに、５００万個のＣ６ラット神経膠腫腫瘍細胞、５０００万個のＫＣＮＲヒト神経芽細胞腫腫瘍細胞、または５０００万個のＳＫ−Ｎ−ＭＣヒト未分化神経外胚葉性腫瘍（ＰＮＥＴ）細胞を皮下注入し、マウス腫瘍異種移植片を形成させた。皮下注入した腫瘍異種移植片は、フェンレチニド注入開始時の大きさが約２００〜４００ｍｍ3であった。クレモホール／エタノール（５０／５０）中のフェンレチニドを注入したヌードマウス（それぞれ５または６匹）は、４回注入（２日間）または８回注入（４日間）の後に屠殺した。腹腔内注入の場合は、０．１ｍｌのクレモホール／エタノール（５０／５０）中のフェンレチニド（１５ｍｇ／ｍｌ）を０．３ｍｌのＮＳで希釈してから使用した（体積０．４ｍｌ中フェンレチニド１．５ｍｇ）。マウスに経口投与する場合、現在入手可能な経口フェンレチニド含有カプセル（ギブスの方法で調剤）を投与し、前述のようにフェンレチニド濃度を分析した。次に、０．１ｇのピーナッツバター中の１．５ｍｇのフェンレチニドを１日２回、５日間マウスに与えた後、屠殺した。これらのマウスの組織および／または腫瘍異種移植片中の薬物濃度を以下の表２および表３（実施例５および６）に示す。フェンレチニドの齧歯類における半減期は約１２〜１６時間であると報告されている（ケロッフ（Ｋｅｌｌｏｆｆ），Ｇ．Ｊ．，ら、（１９９４）「臨床開発計画（Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｐｌａｎ）：Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）レチンアミド」、Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｕｐｐｌ  ２０：１７６−９６）。平均値は、±１標準偏差として記載される。マイクロソフト（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ（著作権））エクセル（Ｅｘｃｅｌ）９７ソフトウェアを使用し、不等分散を仮定した対応のない片側のステューデントｔ検定によって、平均の差の統計的有意性を評価した。すべてのＰ値は片側である。
【００４５】
表２は、本明細書で開示されるようにクレモホール／エタノール（５０／５０）で安定化したフェンレチニドを２日間または４日間マウスに腹腔内投与した場合、５日間マウスにフェンレチニドを同じ投与量で経口投与した場合（ギブスの製剤）よりも組織中濃度が高くなったことを示している。マウスには、１．５ｍｇのフェンレチニドを２日間または４日間にわたり１日２回で腹腔内投与（無胸腺／ヌードマウス）するか、あるいは１．５ｍｇのフェンレチニドを５日間にわたり１日２回で経口投与した（Ｂａｌｂ／Ｃマウス）。最終投与から４時間後にマウスを屠殺し、分析を行った。薬物の組織中濃度は前述のように分析した。フェンレチニドを投与する前に、免疫無防備状態（無胸腺）のヌードマウスに、５００万個のＣ６ラット神経膠腫腫瘍細胞、５０００万個のＫＣＮＲヒト神経芽細胞腫腫瘍細胞、または５０００万個のＳＫ−Ｎ−ＭＣヒト未分化神経外胚葉性腫瘍（ＰＮＥＴ）細胞を皮下注入し、マウス腫瘍異種移植片を形成させた。皮下注入した腫瘍異種移植片は、フェンレチニド注入開始時の大きさが約２００〜４００ｍｍ3であった。薬物送達の詳細は上記の表１（実施例４）に示している。組織および腫瘍異種移植片データは、上記の表１（実施例４）に記載の血漿データを得たマウスと同じマウスから得ている。フェンレチニドの齧歯類における半減期は約１２〜１６時間であると報告されている（ケロッフ（Ｋｅｌｌｏｆｆ），Ｇ．Ｊ．，ら、（１９９４）「臨床開発計画：Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）レチンアミド」、Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｕｐｐｌ  ２０：１７６−９６）。平均値は、±１標準偏差として記載される。マイクロソフト（著作権）エクセル９７ソフトウェアを使用し、不等分散を仮定した対応のない片側ステューデントｔ検定によって、平均の差の統計的有意性を評価した。すべてのＰ値は片側である。
【００４６】
表３は、本明細書で開示されるようにクレモホール／エタノール（５０／５０）で安定化したフェンレチニドを２または４日間マウスに腹腔内投与した場合に得られた腫瘍異種移植片中の濃度を示している。マウスには、１．５ｍｇのフェンレチニドを２日間または４日間、１日２回、腹腔内注入（無胸腺／ヌードマウス）した。最終投与から４時間後にマウスを屠殺し、分析を行った。薬物の組織中濃度は前述のように分析した。フェンレチニドを投与する前に、免疫無防備状態ヌードマウスに、５００万個のＣ６ラット神経膠腫腫瘍細胞、５０００万個のＫＣＮＲヒト神経芽細胞腫腫瘍細胞、または５０００万個のＳＫ−Ｎ−ＭＣヒト未分化神経外胚葉性腫瘍（ＰＮＥＴ）細胞を皮下注入し、マウス腫瘍異種移植片を形成させた。皮下注入した腫瘍異種移植片は、フェンレチニド注入開始時の大きさが約２００〜４００ｍｍ3であった。薬物送達の詳細は上記の表１（実施例４）に示している。組織および腫瘍異種移植片データは、上記の表１（実施例４）に記載の血漿データを得たマウスと同じマウスから得ている。フェンレチニドの齧歯類における半減期は約１２〜１６時間であると報告されている（ケロッフ（Ｋｅｌｌｏｆｆ），Ｇ．Ｊ．，ら、（１９９４）「臨床開発計画：Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）レチンアミド」、Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｕｐｐｌ  ２０：１７６−９６）。平均値は、±１標準偏差として記載される。
【００４７】
本明細書で開示されるようにクレモホール／エタノール（５０／５０）で安定化したフェンレチニドは、図１に示されるように腹腔内投与した場合に、マウス体内で増殖するヒト腫瘍異種移植片の増殖の遅延に効果的である。免疫無防備状態（無胸腺）ヌードマウス（１０匹）に、マウス腫瘍異種移植片を形成させるために、第３回目の継代の５０００万個のＳＭＳ−ＬＨＮヒト神経芽細胞腫腫瘍細胞を皮下注入した。皮下注入した腫瘍異種移植片は、フェンレチニド注入開始時に＜１７５ｍｍ3の大きさであった。ヌードマウス（５匹）に、実施例１のように調剤したフェンレチニドを腹腔内に注入した。使用前に０．３ｍｌのＮＳで希釈した０．１ｍｌのフェンレチニド（１５ｍｇ／ｍｌ）のクレモホール／エタノール（５０／５０）溶液（体積０．４ｍｌ中１．５ｍｇのフェンレチニド）のマウスへの注入を、０日に開始して５日間は１日２回、そして１４日ごとに４つの経路で行った。対照群のマウス（５匹）に、フェンレチニドを含有しない同体積のクレモホール／エタノールを同じ投与計画にしたがって注入した。定期的に腫瘍異種移植片を測定し、０．５×高さ×幅×長さ、として腫瘍体積を計算した。腫瘍異種移植片が＞３５００ｍｍ3となった日、あるいは腫瘍が壊死した場合にマウスを屠殺した。平均体積を±１標準偏差としてグラフ化する。マイクロソフト（著作権）エクセル９７ソフトウェアを使用し、不等分散を仮定した対応のない片側ステューデントｔ検定によって、平均の差の統計的有意性を評価した。Ｐ値は両側である。平均腫瘍体積（処理群対対照群）＞２０００ｍｍ3となるまでＴ／Ｃ値を計算した。Ｔ／Ｃ＞２００％は、許容される基準に対して治療が非常に有効であることを示す。
【００４８】
表４は、本明細書に記載のフェンレチニド含有エマルジョンを腹腔内投与した場合、より多い投与量でフェンレチニドを経口投与した場合（ギブスの製剤）よりも血漿中濃度が高くなったことを示している。マウス（無胸腺／ヌードマウス）に実施例２のフェンレチニド含有エマルジョン（２ｍｇ／ｍｌ）を腹腔内注入（ｉ．ｐ．）するか（１．０ｍｇのフェンレチニド、ｉ．ｐ．、１日２回、２日間または４日間）、あるいはマウス（Ｂａｌｂ／Ｃマウス）にギブスの経口フェンレチニド製剤を与えた（１．５ｍｇ、経口、１日２回、５日間）。最終投与から４時間後にマウスを屠殺し、分析を行った。フェンレチニドの血漿中濃度は前述のように分析した。乳化フェンレチニドを注入したマウスは４回の注入（２日間）または８回の注入（４日間）の後に屠殺した。経口投与したマウスの場合、ギブスの方法で調剤したフェンレチニド含有カプセルの内容物を投与し、前述のようにフェンレチニド濃度を分析した。次に、０．１ｇのピーナッツバター中の１．５ｍｇのフェンレチニドを１日２回で５日間マウスに与えた後、屠殺した。実施例２の乳化フェンレチニドおよびギブスの経口製剤の投与によって得られたフェンレチニドの血漿中濃度を表４で比較している。これらのマウスの組織中濃度は下記の表５（実施例９）に示される。フェンレチニドの齧歯類における半減期は約１２〜１６時間であると報告されている（ケロッフ（Ｋｅｌｌｏｆｆ），Ｇ．Ｊ．，ら、（１９９４）「臨床開発計画：Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）レチンアミド」、Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｕｐｐｌ  ２０：１７６−９６）。マイクロソフト（著作権）エクセル９７ソフトウェアを使用し、不等分散を仮定した対応のない片側ステューデントｔ検定によって、平均の差の統計的有意性を評価した。Ｐ値は片側である。
【００４９】
表５は、本明細書に記載のフェンレチニド含有エマルジョンを腹腔内投与した場合、より多い投与量でフェンレチニドを経口投与した場合（ギブスの製剤）よりも組織中濃度が高くなったことを示している。マウス（無胸腺／ヌードマウス）に実施例２のフェンレチニド含有エマルジョン（２ｍｇ／ｍｌ）を腹腔内注入するか（１．０ｍｇのフェンレチニド、ｉ．ｐ．、１日２回、２または４日間）、あるいはマウス（Ｂａｌｂ／Ｃマウス）にギブスの経口フェンレチニド製剤を与えた（１．５ｍｇ、経口、１日２回、５日間）。最終投与から４時間後にマウスを屠殺し、分析を行った。フェンレチニドの組織中濃度は前述のように分析した。乳化フェンレチニドを注入したマウスは４回の注入（２日間）または８回の注入（４日間）の後に屠殺した。経口投与したマウスの場合、ギブスの方法で調剤したフェンレチニド含有カプセルの内容物を投与し、前述のようにフェンレチニド濃度を分析した。次に、０．１ｇのピーナッツバター中の１．５ｍｇのフェンレチニドを１日２回で５日間マウスに与えた後、屠殺した。実施例２の乳化フェンレチニドおよびギブスの経口製剤の投与によって得られたフェンレチニドの組織中濃度を表５で比較している。フェンレチニドの齧歯類における半減期は約１２〜１６時間であると報告されている（ケロッフ（Ｋｅｌｌｏｆｆ），Ｇ．Ｊ．，ら、（１９９４）「臨床開発計画：Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）レチンアミド」、Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｕｐｐｌ  ２０：１７６−９６）。マイクロソフト（著作権）エクセル９７ソフトウェアを使用し、不等分散を仮定した非対片側のステューデントのｔ検定によって、平均の差の統計的有意性を評価した。Ｐ値は片側である。
【００５０】
表６は、本明細書に記載のフェンレチニド含有エマルジョンを腹腔内投与した場合のマウス癌異種移植片中の薬物濃度を示している。フェンレチニド投与の５日前に、免疫無防備状態（無胸腺）ヌードマウスに、５００万個のＣ６ラット神経膠腫腫瘍細胞を皮下注入した。皮下注入した腫瘍異種移植片は、フェンレチニド注入開始時の大きさが約３００〜４００ｍｍ3であった。マウス（無胸腺／ヌードマウス）に実施例２のフェンレチニド含有エマルジョン（２ｍｇ／ｍｌ）を腹腔内注入した（１．０ｍｇフェンレチニド、ｉ．ｐ．、１日２回、２または４日間）。最終投与から４時間後にマウスを屠殺し、分析を行った。薬物の腫瘍異種移植片中の濃度を前述のように分析し、それらを表６に示す。腫瘍異種移植片データは、上記のｃ４および表５（実施例８および実施例９）に記載の血漿および組織データを得たマウスと同じマウスから得ている。フェンレチニドの齧歯類における半減期は約１２〜１６時間であると報告されている（ケロッフ（Ｋｅｌｌｏｆｆ），Ｇ．Ｊ．，ら、（１９９４）「臨床開発計画：Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）レチンアミド」、Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｕｐｐｌ  ２０：１７６−９６）。
【００５１】
【表１】
2005510447.tif 000010
【００５２】
【表２】
2005510447.tif 000011
【００５３】
【表３】
2005510447.tif 000012
【００５４】
【表４】
2005510447.tif 000013
【００５５】
【表５】
2005510447.tif 000014
【００５６】
【表６】
2005510447.tif 000015
【００５７】
以上は本発明の説明であって、本発明を限定するために構成されたものではない。本発明は、請求項、および請求項の均等物によって規定される。
【図面の簡単な説明】
【００５８】
【図１】図１は本明細書で開示されるようにクレモホール／エタノール（５０／５０）中で安定化させたフェンレチニドを腹腔内に投与した場合に、マウスで増殖させたヒト腫瘍異種移植片の増殖遅延に有効であることを示している。免疫無防備状態（無胸腺）ヌードマウス（１０匹）に、マウス腫瘍異種移植片を形成させるために、第３回目の継代の５０００万個のＳＭＳ−ＬＨＮヒト神経芽細胞腫腫瘍細胞を皮下注入した。皮下注入した腫瘍異種移植片は、フェンレチニド注入開始時に＜１７５ｍｍ3の大きさであった。ヌードマウス（５匹）に、実施例１のように調剤したフェンレチニドを腹腔内に注入した。使用前に０．３ｍｌのＮＳで希釈した０．１ｍｌのフェンレチニド（１５ｍｇ／ｍｌ）のクレモホール／エタノール（５０／５０）溶液（体積０．４ｍｌ中１．５ｍｇのフェンレチニド）のマウスへの注入を、０日に開始して５日間は１日２回、そして１４日ごとに４つの経路で行った。対照群のマウス（５匹）に、フェンレチニドを含有しない同体積のクレモホール／エタノールを同じ計画にしたがって注入した。定期的に腫瘍異種移植片を測定し、０．５×高さ×幅×長さ、として腫瘍体積を計算した。腫瘍異種移植片が＞３５００ｍｍ3となった日か、あるいは腫瘍が壊死した場合にマウスを屠殺した。平均体積を±１標準偏差としてグラフ化する。マイクロソフト（著作権）エクセル（Ｅｘｃｅｌ）９７ソフトウェアを使用し、不等分散を仮定した対応のない片側ステューデントｔ検定によって、平均の差の統計的有意性を評価した。Ｐ値は両側である。平均腫瘍体積（処理群対対照群）が＞２０００ｍｍ3となるまでＴ／Ｃ値を計算した。Ｔ／Ｃ＞２００％は、許容される基準に対して治療が非常に有効であることを示す。
【図１】
2005510447.tif 000016
【国際調査報告】
2005510447.tif 000017