(57)【要約】本発明は、脈絡膜新生血管形成の治療のための医薬の製造のための７Ｓ免疫グロブリンあるいはその活性画分の使用、本質的に薬学的に活性な組成物として７Ｓ免疫グロブリンの活性画分からなる医薬組成物、および、７Ｓ免疫グロブリンの製剤を患者に投与することを含む脈絡膜新生血管形成の治療のための方法に関する。
2005522451.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
脈絡膜新生血管形成の治療のための医薬の製造のための、７Ｓ免疫グロブリンまたはその活性画分の使用。
【請求項２】
前記７Ｓ免疫グロブリンまたは前記活性画分が、下記からなる群から選択される１またはそれ以上の活性阻害能力を有する、請求項１の使用。
ａ）脈絡膜新生血管形成
ｂ）脈絡膜内皮細胞の増殖
ｃ）脈絡膜内皮細胞の遊走
ｄ）脈絡膜内皮細胞の管形成
【請求項３】
前記活性画分が、７Ｓ免疫グロブリンＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3、ＩｇＧ4およびこれらの混合物のＩｇＧ画分からなる群から選択される、請求項１または２の使用。
【請求項４】
前記７Ｓ免疫グロブリンが、前記医薬中に、少なくとも５０％（w/ｗ）、好ましくは少なくとも８０％（w/ｗ）、さらに好ましくは少なくとも９５％（w/ｗ）のγ−免疫グロブリンを含む組成物として存在する、請求項１〜３のいずれか１項の使用。
【請求項５】
前記７Ｓ免疫グロブリンの活性画分が、前記医薬中に、少なくとも５０％（w/ｗ）、好ましくは少なくとも８０％（w/ｗ）、さらに好ましくは少なくとも９５％（w/ｗ）の量で存在する、請求項１〜３のいずれか１項の使用。
【請求項６】
前記活性画分が、γ−免疫グロブリンの断片から構成される、請求項１〜３および５のいずれかの１項の使用。
【請求項７】
γ−免疫グロブリンの断片が、γ−免疫グロブリンのF（ａｂ’）2、Ｆａｂ’、ＦａｂおよびＦｃからなる群から選択される、請求項６の使用。
【請求項８】
前記７Ｓ免疫グロブリンまたは前記その活性画分が、前記医薬中に、脈絡膜新生血管形成の阻害に有効な量で存在する、請求項１〜７のいずれか１項の使用。
【請求項９】
前記７Ｓ免疫グロブリンまたは前記その活性画分が、前記医薬中に、目の新生血管の成長を阻害するのに有効な量で存在する、請求項１〜８のいずれか１項の使用。
【請求項１０】
前記７Ｓ免疫グロブリンまたは前記その活性画分が、前記医薬中に、脈絡膜内皮細胞の増殖阻害に有効な量で存在する、請求項１〜９のいずれか１項の使用。
【請求項１１】
前記７Ｓ免疫グロブリンまたは前記その活性画分が、前記医薬中に、脈絡膜内皮細胞の遊走阻害に有効な量で存在する、請求項１〜１０のいずれか１項の使用。
【請求項１２】
前記７Ｓ免疫グロブリンまたは前記その活性画分が、前記医薬中に、脈絡膜内皮細胞の管形成の阻害に有効な量で存在する、請求項１〜１１のいずれか１項の使用。
【請求項１３】
薬学的に活性な化合物として、７Ｓ免疫グロブリンの活性画分から本質的になる医薬組成物。
【請求項１４】
前記活性画分が、下記からなる群から選択される１またはそれ以上の活性の阻害能力を有する、請求項１３の医薬組成物。
ａ）脈絡膜新生血管形成
ｂ）脈絡膜内皮細胞の増殖
ｃ）脈絡膜内皮細胞の遊走
ｄ）脈絡膜内皮細胞の管形成
【請求項１５】
前記活性画分が、７Ｓ免疫グロブリンのＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3およびＩｇＧ4のＩｇＧ画分からなる群から選択される１つ、２つまたは３つの成分である、請求項１３または１４の医薬組成物。
【請求項１６】
前記活性画分が、ＩｇＧ1である、請求項１３または１４の医薬組成物。
【請求項１７】
前記活性画分が、ＩｇＧ2である、請求項１３または１４の医薬組成物。
【請求項１８】
前記活性画分が、ＩｇＧ3である、請求項１３または１４の医薬組成物。
【請求項１９】
前記活性画分が、ＩｇＧ4である、請求項１２または１３の医薬組成物。
【請求項２０】
前記７Ｓ免疫グロブリンの活性画分が、前記医薬組成物中に、少なくとも５０％（w/ｗ）、好ましくは少なくとも８０％（w/ｗ）、さらに好ましくは少なくとも９５％（w/ｗ）の量で存在する、請求項１３〜１９のいずれかの医薬組成物。
【請求項２１】
前記活性画分が、γ−免疫グロブリンの断片から構成される、請求項１３〜２０のいずれかの医薬組成物。
【請求項２２】
前記γ−免疫グロブリンの断片が、γ−免疫グロブリンのF（ａｂ’）2、Ｆａｂ’、ＦａｂおよびＦｃからなる群から選択される、請求項２１の医薬組成物。
【請求項２３】
前記活性画分が、脈絡膜新生血管形成の阻害に有効な量で含まれる、請求項１３〜２２のいずれか１項の医薬組成物。
【請求項２４】
前記活性画分が、前記医薬中に、目の新血管の成長を阻害するのに有効な量で存在する、請求項１２〜２３のいずれか１項の医薬組成物。
【請求項２５】
前記活性画分が、前記医薬中に、脈絡膜内皮細胞の増殖を阻害するのに有効な量で存在する、請求項１２〜２４のいずれか１項の医薬組成物。
【請求項２６】
前記活性画分が、前記医薬中に、脈絡膜内皮細胞の遊走を阻害するのに有効な量で存在する、請求項１２〜２５のいずれか１項の医薬組成物。
【請求項２７】
前記活性画分が、前記医薬中に、脈絡膜内皮細胞の管形成を阻害するのに有効な量で存在する、請求項１２〜２６のいずれか１項の医薬組成物。
【請求項２８】
脈絡膜新生血管形成の治療のための医薬の製造のための７Ｓ免疫グロブリンの使用。
【請求項２９】
脈絡膜新生血管形成の治療のための医薬の製造のための７Ｓ免疫グロブリン活性画分の使用。
【請求項３０】
７Ｓ免疫グロブリンが、下記からなる群から選択される１またはそれ以上の活性阻害能力を持つ、脈絡膜新生血管形成の治療のための医薬の製造のための前記７Ｓ免疫グロブリンの使用。
ａ）脈絡膜新生血管形成
ｂ）脈絡膜内皮細胞の増殖
ｃ）脈絡膜内皮細胞の遊走
ｄ）脈絡膜内皮細胞の管形成
【請求項３１】
７Ｓ免疫グロブリン活性画分が、下記からなる群から選択される１またはそれ以上の活性阻害能力を持つ、脈絡膜新生血管形成の治療のための医薬の製造のための前記７Ｓ免疫グロブリン活性画分の使用。
ａ）脈絡膜新生血管形成
ｂ）脈絡膜内皮細胞の増殖
ｃ）脈絡膜内皮細胞の遊走
ｄ）脈絡膜内皮細胞の管形成
【請求項３２】
脈絡膜新生血管形成を阻害するために有効な量での、脈絡膜新生血管形成の治療のための医薬の製造のための７Ｓ免疫グロブリンの使用。
【請求項３３】
７Ｓ免疫グロブリンの活性画分が、医薬中に、脈絡膜新生血管形の阻害に有効な量で存在する、脈絡膜新生血管形成の治療のための医薬の製造のための７Ｓ免疫グロブリンの前記活性画分の使用。
【請求項３４】
７Ｓ免疫グロブリンが、下記からなる群から選択される１またはそれ以上の活性阻害能力を有し、前記７Ｓ免疫グロブリンが、前記医薬中に、脈絡膜新生血管形成を阻害するのに有効な量で存在する、脈絡膜新生血管形成の治療のための医薬の製造のための、前記７Ｓ免疫グロブリンの使用。
ａ）脈絡膜新生血管形成
ｂ）脈絡膜内皮細胞の増殖
ｃ）脈絡膜内皮細胞の遊走
ｄ）脈絡膜内皮細胞の管形成
【請求項３５】
７Ｓ免疫グロブリンの活性画分が、下記からなる群から選択される１またはそれ以上の活性阻害能力を有し、前記７Ｓ免疫グロブリンが、前記医薬中に、脈絡膜新生血管形成を阻害するのに有効な量で存在する、脈絡膜新生血管形成の治療のための医薬の製造のための、前記７Ｓ免疫グロブリン活性画分の使用。
ａ）脈絡膜新生血管形成
ｂ）脈絡膜内皮細胞の増殖
ｃ）脈絡膜内皮細胞の遊走
ｄ）脈絡膜内皮細胞の管形成
【請求項３６】
７Ｓ免疫グロブリンが、下記からなる群から選択される１またはそれ以上の活性阻害能力を有し、
前記７Ｓ免疫グロブリンは、前記医薬中に、脈絡膜内皮細胞の増殖の阻害に有効な量で存在する、
脈絡膜新生血管形成の治療のための医薬の製造のための、前記７Ｓ免疫グロブリンの使用。
ａ）脈絡膜新生血管形成
ｂ）脈絡膜内皮細胞の増殖
ｃ）脈絡膜内皮細胞の遊走
ｄ）脈絡膜内皮細胞の管形成
【請求項３７】
７Ｓ免疫グロブリンの活性画分が、下記からなる群から選択される１またはそれ以上の活性阻害能力を有し、前記７Ｓ免疫グロブリンの活性画分は、前記医薬中に、脈絡膜内皮細胞の増殖の阻害に有効な量で存在する、脈絡膜新生血管形成の治療のための医薬の製造のための、前記７Ｓ免疫グロブリン活性画分の使用。
ａ）脈絡膜新生血管形成
ｂ）脈絡膜内皮細胞の増殖
ｃ）脈絡膜内皮細胞の遊走
ｄ）脈絡膜内皮細胞の管形成
【請求項３８】
７Ｓ免疫グロブリンが、下記からなる群から選択される１またはそれ以上の活性阻害能力を有し、
前記７Ｓ免疫グロブリンは、前記医薬中に、脈絡膜内皮細胞の遊走の阻害に有効な量で存在する、脈絡膜新生血管形成の治療のための医薬の製造のための、前記７Ｓ免疫グロブリンの使用。
ａ）脈絡膜新生血管形成
ｂ）脈絡膜内皮細胞の増殖
ｃ）脈絡膜内皮細胞の遊走
ｄ）脈絡膜内皮細胞の管形成
【請求項３９】
７Ｓ免疫グロブリンの活性画分が、下記からなる群から選択される１またはそれ以上の活性阻害能力を有し、前記７Ｓ免疫グロブリンの活性画分は、前記医薬中に、脈絡膜内皮細胞の遊走の阻害に有効な量で存在する、脈絡膜新生血管形成の治療のための医薬の製造のための、前記７Ｓ免疫グロブリン活性画分の使用。
ａ）脈絡膜新生血管形成
ｂ）脈絡膜内皮細胞の増殖
ｃ）脈絡膜内皮細胞の遊走
ｄ）脈絡膜内皮細胞の管形成
【請求項４０】
７Ｓ免疫グロブリンの活性画分が、ＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3、ＩｇＧ4およびこれらの混合物からなる群から選択される、脈絡膜新生血管形成の治療のための医薬の製造のための、７Ｓ免疫グロブリンの活性画分の使用。
【請求項４１】
前記活性画分が、γ−免疫グロブリンのF（ａｂ’）2、Ｆａｂ’、ＦａｂおよびＦｃからなる群から選択されるγ−免疫グロブリンの断片から構成される、請求項４０の使用。
【請求項４２】
７Ｓ免疫グロブリンの活性画分が、下記からなる群から選択される１またはそれ以上の活性阻害能力を有し、前記７Ｓ免疫グロブリンの活性画分が、ＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3、ＩｇＧ4およびそれらの混合物からなる群から選択される、脈絡膜新生血管形成の治療のための医薬の製造のための前記７Ｓ免疫グロブリンの活性画分の使用。
ａ）脈絡膜新生血管形成
ｂ）脈絡膜内皮細胞の増殖
ｃ）脈絡膜内皮細胞の遊走
ｄ）脈絡膜内皮細胞の管形成
【請求項４３】
前記活性画分が、F（ａｂ’）2、Ｆａｂ’、ＦａｂおよびＦｃからなる群から選択される、γ−免疫グロブリンの断片から構成される、請求項４２の使用。
【請求項４４】
７Ｓ免疫グロブリンの活性画分が、ＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3、ＩｇＧ4およびそれらの混合物からなる群から選択され、かつ、脈絡膜新生血管形成の阻害に有効な量での、脈絡膜新生血管形成の治療のための医薬の製造のための前記７Ｓ免疫グロブリンの活性画分の使用。
【請求項４５】
前記活性画分は、F（ａｂ’）2、Ｆａｂ’、ＦａｂおよびＦｃからなる群から選択される、γ−免疫グロブリンの断片から構成される、請求項４４の使用。
【請求項４６】
７Ｓ免疫グロブリンの活性画分が、下記からなる群から選択される１またはそれ以上の活性阻害能力を有し、前記活性画分が、脈絡膜新生血管形成の阻害に有効な量で、医薬中に存在し、前記活性画分が、ＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3、ＩｇＧ4およびそれらの混合物からなる群から選択される、脈絡膜新生血管形成の治療のための医薬の製造のための前記７Ｓ免疫グロブリンの活性画分の使用。
ａ）脈絡膜新生血管形成
ｂ）脈絡膜内皮細胞の増殖
ｃ）脈絡膜内皮細胞の遊走
ｄ）脈絡膜内皮細胞の管形成
【請求項４７】
前記活性画分が、F（ａｂ’）2、Ｆａｂ’、ＦａｂおよびＦｃからなる群から選択される、γ−免疫グロブリンの断片から構成される、請求項４６の使用。
【請求項４８】
７Ｓ免疫グロブリンの製剤を患者に投与することを含む脈絡新生血管形成の治療のための方法。
【請求項４９】
７Ｓ免疫グロブリンの活性画分の製剤を患者に投与することを含む脈絡新生血管形成の治療のための方法。
【請求項５０】
脈絡膜新生血管形成の阻害に有効な量で、７Ｓ免疫グロブリンの製剤を患者に投与することを含む脈絡新生血管形成の治療のための方法。
【請求項５１】
脈絡膜新生血管形成の阻害に有効な量で、７Ｓ免疫グロブリンの活性画分の製剤を患者に投与することを含む脈絡新生血管形成の治療のための方法。
【請求項５２】
７Ｓ免疫グロブリンが、下記からなる群から選択される１またはそれ以上の活性阻害能力を有する、７Ｓ免疫グロブリンの製剤を患者に投与することを含む脈絡新生血管形成の治療のための方法。
ａ）脈絡膜新生血管形成
ｂ）脈絡膜内皮細胞の増殖
ｃ）脈絡膜内皮細胞の遊走
ｄ）脈絡膜内皮細胞の管形成
【請求項５３】
７Ｓ免疫グロブリンの活性画分が、下記からなる群から選択される１またはそれ以上の活性阻害能力を有する、７Ｓ免疫グロブリンの活性画分の製剤を患者に投与することを含む脈絡新生血管形成の治療のための方法。
ａ）脈絡膜新生血管形成
ｂ）脈絡膜内皮細胞の増殖
ｃ）脈絡膜内皮細胞の遊走
ｄ）脈絡膜内皮細胞の管形成
【請求項５４】
７Ｓ免疫グロブリンが、下記からなる群から選択される１またはそれ以上の活性阻害能力を有し、前記７Ｓ免疫グロブリンが、脈絡膜新生血管形成の阻害に有効な量で医薬中に存在する、７Ｓ免疫グロブリンの製剤を患者に投与することを含む脈絡新生血管形成の治療のための方法。
ａ）脈絡膜新生血管形成
ｂ）脈絡膜内皮細胞の増殖
ｃ）脈絡膜内皮細胞の遊走
ｄ）脈絡膜内皮細胞の管形成
【請求項５５】
７Ｓ免疫グロブリンの活性画分が、下記からなる群から選択される１またはそれ以上の活性阻害能力を有し、前記活性画分が、脈絡膜新生血管形成の阻害に有効な量で医薬中に存在する、７Ｓ免疫グロブリンの活性画分の製剤を患者に投与することを含む脈絡新生血管形成の治療のための方法。
ａ）脈絡膜新生血管形成
ｂ）脈絡膜内皮細胞の増殖
ｃ）脈絡膜内皮細胞の遊走
ｄ）脈絡膜内皮細胞の管形成
【請求項５６】
７Ｓ免疫グロブリンが、下記からなる群から選択される１またはそれ以上の活性阻害能力を有し、前記７Ｓ免疫グロブリンが、脈絡膜内皮細胞の増殖の阻害に有効な量で医薬中に存在する、７Ｓ免疫グロブリンの製剤を患者に投与することを含む脈絡新生血管形成の治療のための方法。
ａ）脈絡膜新生血管形成
ｂ）脈絡膜内皮細胞の増殖
ｃ）脈絡膜内皮細胞の遊走
ｄ）脈絡膜内皮細胞の管形成
【請求項５７】
７Ｓ免疫グロブリンの活性画分が、下記からなる群から選択される１またはそれ以上の活性阻害能力を有し、前記活性画分が、脈絡膜内皮細胞の増殖の阻害に有効な量で医薬中に存在する、７Ｓ免疫グロブリンの活性画分の製剤を患者に投与することを含む脈絡新生血管形成の治療のための方法。
ａ）脈絡膜新生血管形成
ｂ）脈絡膜内皮細胞の増殖
ｃ）脈絡膜内皮細胞の遊走
ｄ）脈絡膜内皮細胞の管形成
【請求項５８】
７Ｓ免疫グロブリンが、下記からなる群から選択される１またはそれ以上の活性阻害能力を有し、前記７Ｓ免疫グロブリンが、脈絡膜内皮細胞の遊走の阻害に有効な量で医薬中に存在する、７Ｓ免疫グロブリンの製剤を患者に投与することを含む脈絡新生血管形成の治療のための方法。
ａ）脈絡膜新生血管形成
ｂ）脈絡膜内皮細胞の増殖
ｃ）脈絡膜内皮細胞の遊走
ｄ）脈絡膜内皮細胞の管形成
【請求項５９】
７Ｓ免疫グロブリンの活性画分が、下記からなる群から選択される１またはそれ以上の活性阻害能力を有し、前記活性画分が、脈絡膜内皮細胞の遊走の阻害に有効な量で医薬中に存在する、７Ｓ免疫グロブリンの活性画分の製剤を患者に投与することを含む脈絡新生血管形成の治療のための方法。
ａ）脈絡膜新生血管形成
ｂ）脈絡膜内皮細胞の増殖
ｃ）脈絡膜内皮細胞の遊走
ｄ）脈絡膜内皮細胞の管形成
【請求項６０】
７Ｓ免疫グロブリンの活性画分が、ＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3、ＩｇＧ4およびそれらの混合物からなる群から選択される、７Ｓ免疫グロブリンの活性画分の製剤を患者に投与することを含む脈絡新生血管形成の治療のための方法。
【請求項６１】
前記活性画分が、F（ａｂ’）2、Ｆａｂ’、ＦａｂおよびＦｃからなる群から選択される、γ−免疫グロブリンの断片から構成される、請求項６０の方法。
【請求項６２】
７Ｓ免疫グロブリンの活性画分が、下記からなる群から選択される１またはそれ以上の活性阻害能力を有し、前記活性画分が、ＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3、ＩｇＧ4およびこれらの混合物からなる群から選択される、７Ｓ免疫グロブリンの活性画分の製剤を患者に投与することを含む脈絡新生血管形成の治療のための方法。
ａ）脈絡膜新生血管形成
ｂ）脈絡膜内皮細胞の増殖
ｃ）脈絡膜内皮細胞の遊走
ｄ）脈絡膜内皮細胞の管形成
【請求項６３】
前記活性画分が、F（ａｂ’）2、Ｆａｂ’、ＦａｂおよびＦｃからなる群から選択される、γ−免疫グロブリンの断片から構成される、請求項６２の方法。
【請求項６４】
７Ｓ免疫グロブリンの活性画分が、ＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3、ＩｇＧ4およびそれらの混合物からなる群から選択され、かつ、脈絡膜新生血管形成の阻害に有効な量で、７Ｓ免疫グロブリンの活性画分の製剤を患者に投与することを含む脈絡新生血管形成の治療のための方法。
【請求項６５】
前記活性画分が、F（ａｂ’）2、Ｆａｂ’、ＦａｂおよびＦｃからなる群から選択される、γ−免疫グロブリンの断片から構成される、請求項６４の方法。
【請求項６６】
７Ｓ免疫グロブリンの活性画分が、下記からなる群から選択される１またはそれ以上の活性阻害能力を有し、前記活性画分が、脈絡膜新生血管形成の阻害に有効な量で医薬中に存在し、前記活性画分が、ＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3、ＩｇＧ4およびそれらの混合物からなる群から選択される、７Ｓ免疫グロブリンの活性画分の製剤を患者に投与することを含む脈絡新生血管形成の治療のための方法。
ａ）脈絡膜新生血管形成
ｂ）脈絡膜内皮細胞の増殖
ｃ）脈絡膜内皮細胞の遊走
ｄ）脈絡膜内皮細胞の管形成
【請求項６７】
前記活性画分が、F（ａｂ’）2、Ｆａｂ’、ＦａｂおよびＦｃからなる群から選択される、γ−免疫グロブリンの断片から構成される、請求項６６の方法。
【請求項６８】
薬学的活性化合物として、７Ｓ免疫グロブリンの活性画分から本質的になる、医薬組成物。
【請求項６９】
脈絡膜新生血管形成の阻害に有効な量で、薬学的活性化合物として、７Ｓ免疫グロブリンの活性画分から本質的になる、医薬組成物。
【請求項７０】
７Ｓ免疫グロブリンの活性画分が、下記からなる群から選択される１またはそれ以上の活性阻害能力を有する、薬学的活性化合物として、７Ｓ免疫グロブリンの活性画分から本質的になる、医薬組成物。
ａ）脈絡膜新生血管形成
ｂ）脈絡膜内皮細胞の増殖
ｃ）脈絡膜内皮細胞の遊走
ｄ）脈絡膜内皮細胞の管形成
【請求項７１】
７Ｓ免疫グロブリンの活性画分が、下記からなる群から選択される１またはそれ以上の活性阻害能力を有し、前記活性画分が、医薬中に、脈絡膜新生血管形成の阻害に有効な量で存在する、薬学的活性化合物として、７Ｓ免疫グロブリンの活性画分から本質的になる、医薬組成物。
ａ）脈絡膜新生血管形成
ｂ）脈絡膜内皮細胞の増殖
ｃ）脈絡膜内皮細胞の遊走
ｄ）脈絡膜内皮細胞の管形成
【請求項７２】
７Ｓ免疫グロブリンの活性画分が、下記からなる群から選択される１またはそれ以上の活性阻害能力を有し、前記活性画分が、医薬中に、脈絡膜内皮細胞の増殖の阻害に有効な量で存在する、脈絡膜新生血管形成の治療のための医薬のための、７Ｓ免疫グロブリンの活性画分から本質的になる、医薬組成物。
ａ）脈絡膜新生血管形成
ｂ）脈絡膜内皮細胞の増殖
ｃ）脈絡膜内皮細胞の遊走
ｄ）脈絡膜内皮細胞の管形成
【請求項７３】
７Ｓ免疫グロブリンの活性画分が、下記からなる群から選択される１またはそれ以上の活性阻害能力を有し、前記活性画分が、医薬中に、脈絡膜内皮細胞の遊走の阻害に有効な量で存在する、薬学的活性化合物として、７Ｓ免疫グロブリンの活性画分から本質的になる、医薬組成物。
ａ）脈絡膜新生血管形成
ｂ）脈絡膜内皮細胞の増殖
ｃ）脈絡膜内皮細胞の遊走
ｄ）脈絡膜内皮細胞の管形成
【請求項７４】
７Ｓ免疫グロブリンの活性画分が、ＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3およびＩｇＧ4からなる群から選択される１つ、２つまたは３つの成分である、薬学的活性化合物として、７Ｓ免疫グロブリンの活性画分から本質的になる、医薬組成物。
【請求項７５】
前記活性画分が、F（ａｂ’）2、Ｆａｂ’、ＦａｂおよびＦｃからなる群から選択される、γ−免疫グロブリンの断片から構成される、請求項４７の医薬組成物。
【請求項７６】
７Ｓ免疫グロブリンの活性画分が、ＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3およびＩｇＧ4からなる群から選択される１つ、２つまたは３つの成分である、脈絡膜新生血管形成の阻害に有効な量で薬学的活性化合物として、７Ｓ免疫グロブリンの活性画分から本質的になる、医薬組成物。
【請求項７７】
前記活性画分が、F（ａｂ’）2、Ｆａｂ’、ＦａｂおよびＦｃからなる群から選択される、γ−免疫グロブリンの断片から構成される、請求項７６の医薬組成物。
【請求項７８】
７Ｓ免疫グロブリンの活性画分が、下記からなる群から選択される１またはそれ以上の活性阻害能力を有し、かつ、前記活性画分は、ＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3およびＩｇＧ4からなる群から選択される１つ、２つまたは３つの成分である、薬学的活性化合物として、７Ｓ免疫グロブリンの活性画分から本質的になる、医薬組成物。
ａ）脈絡膜新生血管形成
ｂ）脈絡膜内皮細胞の増殖
ｃ）脈絡膜内皮細胞の遊走
ｄ）脈絡膜内皮細胞の管形成
【請求項７９】
前記活性画分が、F（ａｂ’）2、Ｆａｂ’、ＦａｂおよびＦｃからなる群から選択される、γ−免疫グロブリンの断片から構成される、請求項７７の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の技術分野
本発明は、脈絡膜新生血管形成の治療のための医薬を製造するための免疫グロブリンの使用、医薬組成物および脈絡膜新生血管形成の治療方法に関する。
【０００２】
発明の背景
脈絡膜新生血管形成は、新しい毛細管や血管が、目の脈絡膜においてコントロールできない態様で形成される症状である。
【０００３】
目の網膜下の新生血管形成（脈絡膜新生血管形成（ＣＮＶ））は、急激な視力低下やクオリティオブライフ（quality of life）の喪失を招く。現在、ＣＮＶ発生のメカニズムの病因論は正確には知られていない。ＣＮＶの治療は、今なお、解決されるべき、重要な眼科医学的問題である。加齢性黄斑変性は、西洋の６０歳以上の人々における、法的盲の主な原因である（Kirchhof B. , Deutsches Arzteblatt 97 （21）, （2000）A-1458-A-1462 ； Klaver etal., Arch.Ophthalmol. 116 （5） （1998） 653- 658; Pauleikhoff, praktische Augenheilkunde 21 （2000） 59-65）。ＡＭＤにおける重症かつ進行性の視力喪失の主な理由は、中心窩ＣＮＶの発生である（湿性または滲出性ＡＭＤとも呼ばれる）（Ferris, Arch. Ophthalmol. 102 （11） （1984） 1640-1642; Klaver etal., Arch. Ophthalmol. 116 （5） （1998） 653-658）。異常近視、目のヒストプラズマ症症候群、トラウマ的体験のような症状、または不適切なレーザー治療さえ、若年患者においてＣＮＶを引き起こす（Cohen etal., Ophthalmology 102 （8） （1996） 1241-1244; Derosa etal., Doc. Ophthalmol. 91 （3） （1995） 207-222）。網膜下の新生血管形成疾患は、また、特発性ＣＮＶとして、明らかな理由なしに起こりうる（Cleasby, Am. J. Ophthalmol. 81 （5） （1976） 590-599）。現在、幾つかの血管由来の因子が、潜在的危険因子として認識されているが、ＣＮＶ発生のメカニズムの病因は正確には知られていない（Campochiaro, Mol. Vis. 5 （1999） 34;D'Amato, Ophthalmology 102 （9） （1995） 1261-1262; Zarbin, Eur. J. Ophthalmol. 8 （4） （1998） 199-206）。
【０００４】
ＣＮＶの治療は、今なお、解決されるべき、重要な眼科医学的問題である。目的は、症状の自然の過程において現わされるような期待的な進行を避けることである。視力機能の改善は、２、３のケースにおいてだけ達成された。
【０００５】
技術水準
技術水準において、以下の脈絡膜新生血管形成の治療が議論されてきた。
【０００６】
光療法
光療法（ＰＤＴ）の主なメカニズムは、光受容体や網膜色素上皮のような重層網膜構造の維持を伴う血管結合組織の脈絡膜組織への選択的ダメージである。ＰＤＴのプロセスは、光感受体として用いられる光活性化薬の静脈内投与と非熱ダイオードレーザーデバイスを用いた光の特定波長によるその活性化を包含する（Schmidt-Erfurth, Ophtalmologe 95 （10） （1998） 725- 731; Scott, Drugs Aging 16 （2） （2000） 139-146）。バートポルフィン（verteporfin）は光活性化薬であり、ＰＤＴのために指摘された活性化学成分である（VIP Study Group 2001 （a） Ophthalmology 108: 841-852; VIP Study Group 2001 （b）, Am. J. Ophthalmol. 131: 541-560）。
日光照射によるバートポルフィン療法後、増加された感光性反応の危険因子は、たった２日間だけ持続することが公表されている（CIBAVision （1999） Visudyne product information CIBA Vision AG. 2-12-1999）。
【０００７】
大部分の標準的なＣＮＶを持つＡＭＤ患者におけるＰＤＴの効能は、ＴＡＰ研究グループによる、制御され、ランダム化された研究の長期にわたる結果において、証明された（TAP Study Group （1999）, Arch.Ophthalmol. 117 （10） : 1329-1345; TAP Study Group （2001） Arch.Ophthalmol. 119 （2）: 198-207, Bressler, IOVS 41 （5） （2000） 624-628）。薦められた効能は、これら３未満の処方された患者において、それぞれ、偽薬と比較し、６ラインの視力の喪失、または偽薬と比較して平均２ラインの視力と２セグメントの対照感度の保持をもたらした。
【０００８】
レーザー治療
アルゴンまたはクリプトンレーザを用いたレーザー光凝固術の熱効能の結果として、網膜の光受容体と色素上皮の局所的なダメージが認められる（Gloor, Schweiz. Rundsch. Med. Prax. 78 （16） （1989）467-470 ; Wu, Cur. Opin. Ophthalmol. 10 （3） （1999） 217-220）。レーザー光凝固術は、糖尿病による、小さく、はっきりと区別された網膜微小血管異常を示す糖尿病患者において用いることに成功している。中心窩ＣＮＶを持った患者において、約２５％の患者だけが、レーザー凝固の適格治療基準を満たしている（MPS group, Arch.Ophthalmol. 109 （9） （1991） 1220-1241; Arch. Ophthalmol. 111 （9） （1993） 1220-1241; Arch. Ophthalmol. 112 （4） （1994） 489- 499）。ドイツ眼科学会（German Society）は、中心窩ＣＮＶのためのレーザー光凝固術における声明を出しており、この方法は、中心窩ＣＮＶの治療としての世界中の承認を見出さなかったと述べている（Gabel,, Arztliche Behandlung".13-7-2000）。
【０００９】
放射線療法
ドイツ眼科学会によると、ＡＭＤのための放射線療法は、制御された臨床研究では効能が証明されなかった（Gabel,, Arztliche Behandlung". 13-7-2000）。幾つかの制御された研究は、放射線療法の後の視力機能に対しては、全くまたは不十分な効能を示した（RAD Study, Ophthalmology 12 （1999） 2239-2247; Anders etal., Ophthalmologe 11 （1998） 760-764; Tholen, Ophthalmologe 95 （10） （1998）691-698）。さらに、有効な放射線のために用いられるべきタイプや投与量は、まだ、知られていない。それゆえ、ＡＭＤにおける放射線療法に関する、さらに制御され、ランダム化された研究が必要である（Archambeau etal., Int. J. Radiat.Oncol. Biol. Phys. 40 （5） （1998） 1125-1136; Berson, Semin. Radiat. Oncol. 9 （2） （1999） 155-162）。
【００１０】
薬理学的療法
中心窩ＣＮＶのための薬理学的治療で証明されたものは全く知られていない。ステロイドに関しても（Challa, Aust. N. Z. J Ophthalmol 26 （4） （1998） 277-281）、インターフェロンα−２ａの適用に関しても（PTMD Study Group, Arch.Ophthalmol. 122 （5） （1997） 663-671）、効能は証明されない。ＡＭＤにおいて、銀杏（Clostre, Ann. Pharm. Fr. 5７Ｓuppl 1 （1999） 18-88）やフェノキシフィリン（Kruger etal., Arch. Ophthalmol. （1） （1998） 27-30）を用いた新しい治療へのアプローチも試みられてきた。
【００１１】
ＣＮＶの治療における新しいアプローチ
さらに、長期間の結果と制御された研究が、ＡＭＤにおける黄斑外科、網膜転座および網膜移植のような新しい治療へのアプローチの有効性を証明することが求められている（Ciulla etal., Surv. Ophthalmol. 43 （2） （1998） 134-146; Joffe, Int. Ophthalmol. Clin. 36 （2） （1996） 99-116）。
【００１２】
７Ｓ免疫グロブリンに関する技術水準
静脈内免疫グロブリン（ＩＶＩｇ）は、７Ｓ免疫グロブリンとも呼ばれ、脈管炎（vasculitides）やカワサキ病を含む、自己免疫性および炎症性の疾患の治療に、益々、利用されるようになっている。
静脈内γ−グロブリン（７Ｓ免疫グロブリン）は、主として、一次または二次免疫不全状態を持ったものの予防のために、１９８１年から使用されている。有益な効果は、小児期の特発性血小板減少性紫斑の治療、骨髄移植ＣＭＶ（サイトメガロウィルス）予防、ＧＶＨＤ（移植片対宿主病）の回復および他の自己免疫性疾患において報告されている。ＩＶＩｇ（７Ｓ免疫グロブリン）は、数多の自己抗体（すなわち、抗抗核抗体および抗抗好中球細胞質抗体）に対する抗イディオタイプの抗体活性を含むことが知られている。ＩＶＩｇ（７Ｓ免疫グロブリン）は、正確なメカニズムは知られていないけれども、生体内でおよび生体外で抗体応答を遮断することが知られている。ＩＶＩｇ（７Ｓ免疫グロブリン）は、無反応性の患者における、改善された輸血後（post transfusion）の血小板加量を得るために用いることに成功している。
【００１３】
静脈内の免疫グロブリン（７Ｓ免疫グロブリン）は、数千人の健康な血液提供者の血漿のプールから準備された療法効果のある免疫グロブリン（Ig）である。一次または二次抗体欠損のための代替療法としての使用に加えて、ＩＶＩｇ（７Ｓ免疫グロブリン）は、自己抗体によって仲介される症状および、ヒトや実験用動物における自己攻撃性T細胞によると主として考えられている症状において、免疫調節（immunomodulatory）効果を示す。ＩＶＩｇ（７Ｓ免疫グロブリン）は、自己免疫血球減少、急性ギラン・バレー症候群、重症筋無力症および抗因子VIII自己免疫疾患の治療において、効果的に用いられてきた。皮膚筋炎、特に、カワサキ症候群のような全身炎症性状況を患っている患者は、ＩＶＩｇ治療によって大いに恩恵を受けている。ＩＶＩｇ（７Ｓ免疫グロブリン）は、抗好中球細胞質抗原に関連した全身脈管炎（anti-neutrophil cytoplasmic antigen-associated systemic vasculitis）の治療にも用いられてきた。いくつかの互いに非排他的な仮説が提唱されているけれども、ＩＶＩgの作用のメカニズムは、まだ、あまり理解されていない。これらは、食細胞におけるＦｃＹレセプターの障害、サイトカイン及びそれらの阻害剤の産生と放出の活性化された補体調節を伴う干渉、Ｔリンパ球およびＢリンパ球機能の調節、自己抗体産生の抑制、および、免疫レパートリの選択を含む。
【００１４】
米国特許５，５６２，９０２号公報は、静脈内γ−グロブリン（ＩＶＩｇ）の製剤を、患者に投薬することを含む、腫瘍移転を阻害、および、初期腫瘍の治療のための療養的方法を開示している。
米国特許６，１７１，５８５号公報は、組織不適合性提供者を含む様々な提供者から得られる提供臓器を用いた移植に適合する、移植の方法および潜在的な移植受容者の免疫反応を抑制する方法に関する。患者に同種移植を行う方法は、本質的に静脈内免疫グロブリンである、抗ＨＬＡ抗体枯渇剤の有効な量を移植する前の患者に投薬することを含む。
ドイツ特許出願ＤＥ１９９００５０３Ａ１号公報は、表皮融解、移植片体宿主病、肝炎、自己免疫性甲状腺炎、癌またはヒト免疫不全ウイルスの治療のための薬剤の製造のための組成物の使用を開示している。
【００１５】
細胞レベルにおける、新生血管形成の誘発、すなわち、新血管毛細管の形成は、次のように説明できる可能性がある。血管系の２つの主要な細胞成分は、内皮細胞と平滑筋細胞である。内皮細胞は、すべての血管の内表面の内面を形成し、血液と組織の間の非凝血性界面を構成する。加えて、内皮細胞は、新しい毛細管や血管の発達のための重要な成分である。それゆえ、内皮細胞は、様々な腫瘍性ではない病気や疾患と同様に、腫瘍の成長や転移と結び付けられる脈管形成や新生血管生成の間に増殖する。管形成または新生血管生成の間、内皮細胞は、増殖し、移動し、将来の血管や毛細管の管形成の要因となる。
脈管の内皮は、循環血液と脈管の平滑筋細胞の間に、戦略的に位置する。循環血液によって輸送された、種々の作動薬（agonist）や刺激物は、強い弛緩剤（一酸化窒素、プロスタサイクリン、内皮由来の過分極因子）または収縮因子（エンドセリン、ニクロキシゲナーゼ）を放出して内皮を誘発できる。これらの内皮由来の血管作用因子は、血液の流れを局所的に調節できる（Haefliger et al. ; Prog Retin. Eye Res. 20, （2001） 209-225）。
【００１６】
異質性は、内皮由来の血管作用因子の放出を刺激できる作動薬中に、１つの脈管床から他の脈管床まで、血管の間さえも存在する。目の血行において、一酸化窒素とエンドセリンは、強力な血管作用調整物質である。眼科学において重要なものである、多くの脈管の症状（高コレステロール血症、動脈硬化症、高血圧症、糖尿病、血管痙症候群、虚血や再潅流、脈絡膜や網膜新生血管形成、加齢黄斑変性症、糖尿病性網膜症）において、内皮の機能は、損なわれる可能性がある。内皮細胞（ＥＣｓ） は、異なった臓器の機能的ホメオスタシスのために重要である特殊化された特性の獲得や維持が異なる、きわめて不均一な細胞である（Garlanda C, Dejana E:"Heterongenity of 内皮細胞s. Specific markers."InArterioscler. Thromb. Vasc.Biol. 17, （1997） pp 1193-1202）。
【００１７】
内皮細胞は、また、細胞損傷に対する感度において、部位特異的相違を有する（Murphy et al. 脈管内皮細胞の異質性：好中球薬剤損傷に対する感受性の相違；Microvasc. Res. 56, （1998）, pp 203- 211）。特に目において、血液網膜関門の変更は、目の機能的統合性において、重要な影響を持つ。目でさえ、ＥＣと網膜や脈絡膜からの血管は、大きく異なる。例えばラットにおいて、脈絡膜細動脈は、網膜細動脈よりも直径が極めて大きく、それは、両組織の血行動態の違いを説明する（Ninomiya H, Kuno H; Vet. Ophthalmol. 4, （2001） pp 55-59）。加えて、脈絡膜毛細管からのＥＣは有窓であるが、網膜のＥＣは有窓ではない。脈絡膜における有窓の毛細管は、低い分子量の物質に対する浸透性に極めて優れている；脈絡膜中のナトリウム透過性は、骨格筋における浸透性のおよそ５０倍である。（Tornquist P, Alm A, Bill A; Eye 4 （Pt2）, （1990） pp 303-309）。これらは、脈絡膜の血管外コンパートメントにおける、栄養源の高い濃度と迅速なターンオーバー数という結果となる。内皮細胞の間の密接な接合を有する網膜毛細管も、脈絡膜毛細管とは対照的に、ナトリウムに対してさえ、非常に低い浸透性を有している。
【００１８】
イオンチャンネル、コネキシンサブタイプ、二次メッセンジャーカスケードの他の重要な成分の発現のような生化学的変化は、体の異なった部分における平滑筋や内皮細胞において立証されてきた（Hill CE, Philips JK, Sandow SL （2001）: Med. Res. Rev. 21 （2001）, 1- 60）。解剖の変動は、また、平滑筋細胞間や内皮細胞間のギャップ結合の存在や頻度において、および、心筋ギャップ結合で、および、２つの細胞層間で述べられてきた。これらの因子は、局所的かつ導かれた応答における異質性に対しさらに貢献する（Hill CE, Philips JK, Sandow SL; Med. Res. Rev. 21, （2001）, pp 1-60）。
脈管内皮の血管作用機能を調節できる異なった薬が存在する。言い換えれば、脈管内皮は、血流の調整の生理学および病態生理学の両方において、重要な役割を果たすように見える。異なる薬によるこの調節システムの調節作用は、眼科学において、脈管障害を治療する、新しい治療のアプローチを開くかもしれない。免疫グロブリンは、インビトロにおけるヒトの臍静脈内皮細胞における増殖という、新生血管形成の１つのパラメータを阻害できることが示されてきた（Xu C. et al. :正常な多種族のヒト静脈内免疫グロブリンによる内皮細胞機能の調整  Am. J. Pathol. 153, （1998）, 1257-1266）。Ｘｕ らは、標的細胞として、ヒトの臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を用いることにより、異なった販売元からのＩＶＩｇ（７Ｓ免疫グロブリン）が内皮細胞（ＥＣｓ）の機能を調整することを述べている。彼らの研究によると、ＩＶＩｇ（７Ｓ免疫グロブリン）は、投与量と時間に依存した態様でＥＣ増殖を阻害する。ＩＶＩｇは、主要な癒着分子、ケモカインおよびいくつかの炎症性疾患において観察される白血球補充(recruitment)に著しく関与している前炎症性サイトカインをエンコードするｍＲＮＡの、ＴＮＦ−αまたはＩＬ−１β誘導発現をダウンレギュレート（down-regurate）したこともまた示された。しかしながら、これらの細胞（ヒトの臍静脈内皮細胞）は、老化寸前で、低酸素のおそらく活性化された脈管から培養されたものであるため、理想的なモデルではない（Garlanda C, Dejana E;Arterioscler. Thromb. Vasc.Biol. 17, （1997）, pp 1193-1202）。それゆえ、標的器官の微細血管からの内皮を培養し、管内で特殊化された特性を維持することが好ましい。
【００１９】
異常な新生血管形成は、増殖によって特徴づけられるのみならず、内皮細胞の遊走および管形成によっても特徴づけられる。 免疫グロブリンによる内皮細胞の遊走および管形成に対する影響は、まだ、知られていない。目からの内皮細胞に対する免疫グロブリンの効能は、全く知られていない。
技術水準の観点から、脈絡膜内皮細胞および脈絡膜新生血管形成に対する阻害活性を示す物質の必要性が存在する。また、脈絡膜新生血管形成（ＣＮＶ）の治療のための医薬および方法に関する必要性も存在する。
それゆえ、本発明の技術的目的は、脈絡膜新生血管形成の治療のための医薬を提供することである。
【００２０】
発明の要約
本発明は、概して、脈絡膜新生血管形成の治療のための医薬の製造のための７Ｓ免疫グロブリンまたはその活性画分の使用において提供することにより上述の問題を解決する。
特に、脈絡膜新生血管形成の治療のための医薬の製造のための７Ｓ免疫グロブリンまたはその活性画分の使用で、前記７Ｓ免疫グロブリンまたは前記その活性画分が、ａ）脈絡膜新生血管形成、ｂ）脈絡膜内皮細胞の増殖、ｃ）脈絡膜内皮細胞の遊走、ｄ）脈絡膜内皮細胞の管形成からなる群から選択される１またはそれ以上の活性を阻害する能力を有しているものを提供する。
【００２１】
発明の詳細な記述
定義
本書で用いられる、「γ−グロブリン」または「７Ｓ免疫グロブリン」は、主としてＩｇＧ分子から構成される血清グロブリン画分である。
本書で用いられる、「ＩＶＩｇ」または「静脈内免疫グロブリン」または「７Ｓ免疫グロブリン」は、幾つかの出所から商業的に入手できる７Ｓ−γ−免疫グロブリン製剤のような、ヒトの血漿からアルコール分別沈殿（Cohn-Oncley-法のような）によって調製することができるγ−免疫グロブリン画分をいう。７Ｓ免疫グロブリン画分はまた、免疫グロブリンＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3およびＩｇＧ4から本質的になる。
本書で用いられる、７Ｓ免疫グロブリンの「活性」画分は、脈絡膜新生血管形成の治療において、有効なものとなるという点での薬剤的活性をいう。「活性」という語は、また、脈絡膜新生血管形成を阻害すること、脈絡膜内皮細胞の増殖を抑制すること、脈絡膜内皮細胞の遊走を阻害すること、脈絡膜内皮細胞の管形成を阻害することにおいて有効である、生物学的（または、医薬的）活性をいう。
静脈内免疫グロブリン（７Ｓ免疫グロブリン）は、６０００人を越える健康な血液提供者の血漿プールから得られた、正常な多特異性ＩｇＧの治療製剤である。現在使われている製剤は、正常血清のそれに相当するサブクラス分布を持った完全なＩｇＧからなり、ＩｇＧ1、ＩｇＧ2およびＩｇＧ4に関してはインビボで３週間の半減期を持ち、ＩｇＧ3に関しては多少短い半減期を持つ。多くの製剤は、ＩｇＡ、ＩｇＭおよび、Ｆｃ−依存ＩｇＧ凝集体を微量のみ含んでいる（Kaveri etal., in Clin. Exp. Immunol. 86 （1991） 192-198  参照）。
【００２２】
本書に使用されるＩＶＩｇまたはγ−グロブリンまたは７Ｓ免疫グロブリンの「断片」は、Ｆｃ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、F（ａｂ’）2、および単鎖免疫グロブリンのような完全な免疫グロブリンの一部である。
７Ｓ免疫グロブリン製剤は、サイズ排除クロマトグラフィと電子顕微鏡検査によって判定した場合、３０％（ｗ/ｗ）までのＦ（ａｂ’） 2−F（ａｂ’）2二量体を含む。二量体は、プールにおける免疫グロブリン間のＶ−領域相補性の結果である（Roux & Tankersley, in J. Immunol. 134 （1990）1387参照）。多くの提供者のおかげで、ＩＶＩｇ（７Ｓ免疫グロブリン）は、外的抗原に対する抗体、自己反応性抗体および抗−抗体を含む、発現された正常なヒトＩｇＧレパートリーの幅広い範囲を表す。
市販のＩＶＩｇ（７Ｓ免疫グロブリン）製剤、例えば、アベンティス・ベーリング（Aventis Behring）,カッター（Cutter）研究所, メドムアー（Medlmmune） ; ノバルティス・ファーマ（Novartis Pharma） （ナーンブルグ（Nrnberg）, ドイツ）, オクタファルマ（Octapharma）, ベノグロブリン（Venoglobulin）, マイルズ社（Miles Inc.） （ウェストヘブン，コン（WestHaven, Conn.））, N.V.バクスターS.A. （N. V. Baxter S. A.） （レッシーネス（Lessines）,  ベルギー）, サンド・ファーマ社（Sandoz Pharma Ltd.） （バスレ（Basle）, スイス）, インスティテュート  シエロバッキノゲノ  イタリアーノ（Instituto Sierovaccinogeno Italiano） （イシベン（Isiven）, イタリア） および ジャクソン  イムノリサーチ  ラボラトリーズ社（Jackson Immunoresearch Laboratories, Inc.）（ウエスト  グローブ （West Grove, Pa.）， ペンシルバニア州）から得られるものが広く利用可能である。商業的に入手可能なＩＶＩｇ（７Ｓ免疫グロブリン）製剤は、主としてＩｇＧ分子を、マルトースまたはグリシンキャリア中に含む。また、ここでの使用のために予期されるものは、約２５％（ｗ/ｗ）〜７５％（ｗ/ｗ）のような、高濃度のＩＶＩｇ（７Ｓ免疫グロブリン）を含む水溶液である。「ＩＶＩｇのＩｇＧ画分」の実質的に純粋な製剤も、ここでの使用に適している。実質的に純粋なＩｇＧ画分は、典型的には、５０％（ｗ/ｗ）より多く、好ましくは７５％（ｗ/ｗ）より多く、最も好ましくは、９５％（ｗ/ｗ）より多く、ＩｇＧ画分を含む。そのような実質的に純粋なＩｇＧ画分は、幾つかの出所から、商業的に入手可能である。
【００２３】
国立衛生研究所（ＮＩＨ）コンセンス会議報告によると、本発明によって考察されたものに匹敵する投薬摂生法で使用された、ヒトにおけるＩＶＩｇの使用に伴う副作用の発生率は、「穏やかに自己制限」しているこれらの反応の多くで、通常、５％未満である。報告は、「激しい反応は、極めて稀に発生し、通常はさらなるＩＶＩｇ治療に禁忌を示さない」ことを付け加えている。ＮＩＨ報告はまた、「ＨＩＶ感染もＢ肝炎感染も、米国で、現在許可された製品の受容者に、移らなかった」ことにも言及している。ＮＩＨコンセンス会議，「静脈内免疫グロブリン：病気の予防と治療」，JAMA, 264, pp. 3189-3193（1990）。
本発明に従って用いることができる７Ｓ免疫グロブリン製剤は、商業的に利用可能な、完全な７Ｓ免疫グロブリンの製剤および７Ｓ免疫グロブリンのＦ（ａｂ’）2断片の製剤を含む。組み換え生産したγ−グロブリンおよびそれらの断片も、本発明によって用いてもよい。組み換え単鎖抗体の使用も、また、想定される。
７Ｓ免疫グロブリンの投薬量および投与の方法は、治療される特定の状態の重症度、治療期間、用いられる補助治療、治療の対象者の年齢や身体条件、治療する医師の専門知識や技能の範囲内のと要因等によって変わりうる。しかしながら、それぞれの静脈内投薬や腔内投与のための一回の投与量は、典型的に、体重１キログラムあたり、４００ｍｇから２ｇ、好ましくは、２ｇ／ｋｇの範囲で行える（他に示されない限り、ここで用いられる「ｍｇ／ｋｇ」または「ｇ／ｋｇ」で示された単位は、体重１キログラムあたりのミリグラムまたはグラムのことをいう。）。より好ましい投薬摂生法は、１ヵ月あたり連続した５日間で、４００ｍｇ／ｋｇ／日、または、１ヵ月に１回で、２ｇ／ｋｇ／日である。本発明によると、７Ｓ免疫グロブリンは、５００〜１０００ｍｇ／ｋｇ／週の服用範囲内で静脈内または腹腔内注射によって投与されたとき、脈絡膜新生血管形成の治療において効果的であることが分かった。
【００２４】
この発明の他の実施例において、７Ｓ免疫グロブリン製剤は、皮下ルートを経由して投与される。皮下投与のための標準的な投薬量は、体重１ｋｇあたり、４ｍｇ〜２０ｍｇの範囲内である。本発明によると７Ｓ免疫グロブリンは、５００〜１０００ｍｇ／ｋｇ／週の服用量の範囲内で皮下に投与した、脈絡膜新生血管形成の治療において効果的であることが分かった。
本発明によると、７Ｓ免疫グロブリンは、薬学的に許容可能なキャリアを含む医薬組成物として投与することができる。キャリアは、物理的に耐性のものでなければならず、活性成分と適合可能でなくてはならない。好適なキャリアは、滅菌水、生理食塩水、デキストロース、グリセロールなどを含む。加えて、本組成物は、少量の安定剤またはｐＨ緩衝化剤などを含んでいてもよい。本組成物は、非経口的ルートで投与することが好都合であり、静脈内、腔内または皮下注射が好ましい。
驚くべきことに、静脈内７Ｓ免疫グロブリンは、脈絡膜新生血管形成の治療において、効果的であることが見出された（図４から８）。静脈内７Ｓ免疫グロブリンの投与は、視力の顕著な改善という結果となった。
本発明の発明者は、若年患者（診断、例えば、特発ＣＮＶ、推定目ヒストプラスマ症症候群（ＰＯＨＳ））や老齢患者（診断、例えば、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ））におけるＣＮＶの治療のために７Ｓ免疫グロブリンを用いることにより、研究を行った。治療は、繰り返される治療周期で行われ、７Ｓ免疫グロブリンは、静脈内投与された。効能は、ＥＴＤＲＳ−チャート（Early 治療 Diabetic Retinopathy Study, Lighthouse, New York）を用いた視力の変化によって証明された。視力の変化は、ＥＤＴＲＳ−チャート上の線において従って測定され、ここで、一ラインの変化は、０，１ＬｏｇＭＡＲ単位の変化に相当する。ＥＴＤＲＳ−チャートは、特に、黄斑を持つ患者のために、開発されてきた（Ferris etal. 1982）。
【００２５】
静脈内７Ｓ免疫グロブリンは、細胞培養において、脈絡膜内皮細胞の増殖（図１および２）遊走および管形成も、阻害する。
Ｘｕら（Am. J.Pathol. 153 （4）（1998）, pp. 1257-1266）は、ＩＶＩｇが、内皮細胞の増殖を阻害したことを見出したが、これらの結果は、脈絡膜内皮細胞に移されなかった。Ｘｕらは、ヒトの臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）におけるこの効能を示した。しかしながら、異なった組織の内皮細胞が強い異質性を示すことが当該技術において知られている。
ガーランド  シー．（Garland C.）およびデジャバ  イー（Dejana E.）は、彼らの総論、動脈硬化症、血栓症および脈管生物学における「内皮細胞の異質性」（１９９７；１７：１１９３−１２０２）において、内皮細胞の異質性においてなされた観察を要約している。彼らの総論において、著者は、内皮が、特殊化された機能の複雑な配列を働かせるためのその巨大な伸張と能力のために、薄い器官系であると考えられると述べている。内皮細胞（ＥＣｓ）の独特の特徴は、それらは、多くの共通する機能的または形態的特徴を提示するけれども、それらは、また、異なった器官において、注目すべき異質性を表すことである。同じ器官においてさえ、大小の脈管、静脈および動脈の内皮は、顕著な異質性を示す。極端なケースは、腎臓であり、腎臓は、ＥＣの異なったタイプ：尿細管周りの毛細管における有窓ＥＣの、糸球体毛細管における不連続なＥＣ、および、他の領域における連続したＥＣを含む。胚ＥＣは、特に、「可塑性（plastic）」である。ＥＣの特殊化された特性の多くは、発達の間に誘発されるが、成人内皮は、分化因子に対し、同様に影響を受けやすくない。その安定な構造上の特性にもかかわらず、成人内皮は、活性化において、その機能を、可塑的に変えることができる。成人ＥＣは、生体の一過性必要に従って、作り変えられる。例えば、ＩＬ−１や腫瘍壊死因子のような炎症性のサイトカインに対する、または、ＶＥＧＦやＦＧＦのような成長因子にＥＣを露出すると、複雑な機能的変換を誘発し、これらは幾つかの遺伝子の新合成や他の抑制を示す。ＥＣは、それらのライフスパンの間に、異なったサイトカインの同種のものによって、数回、活性化され、その結果、異なった可逆的な表現型を表すことができる。
【００２６】
上記のとおり、内皮細胞（ＥＣｓ）は、異なった器官および同じ器官においてさえも、顕著な異質性を表し、大小脈管、静脈および動脈の内皮は、顕著な異質性を示す。本発明の発明者は、ヒトの臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）、網膜内皮細胞および脈絡膜内皮細胞を用いて研究を行った。７Ｓ免疫グロブリンは、脈絡膜内皮細胞およびＨＵＶＥＣに対して、阻害効能を示した。しかしながら、網膜内皮細胞においては全く効能を示さなかった（図３参照）。同じ器官からの内皮細胞（それぞれ、網膜および脈絡膜からの）は、７Ｓ免疫グロブリンに対して、極めて異なった感受性を示すので、その技術分野における当業者は、７Ｓ免疫グロブリンが脈絡膜新生血管形成の治療のための医薬として用いられうることを、予期しなかったであろう。
好ましい実施態様において、前記活性画分は、７Ｓ免疫グロブリンＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3、ＩｇＧ4およびこれらの混合物のＩｇＧ画分からなる群から選択される。
医薬における７Ｓ免疫グロブリンのサブクラスの分布は、健康な人の血清における分布に相当することができる。好ましくは、医薬におけるＩｇＧサブクラスの分布は、次のとおりである。
ＩｇＧ1：６０〜７０％（ｗ/ｗ）
ＩｇＧ2：２５〜３０％（ｗ/ｗ）
ＩｇＧ3：３〜８％（ｗ/ｗ）
ＩｇＧ4：０．５〜３％（ｗ/ｗ）
さらに好ましい実施態様において、前記７Ｓ免疫グロブリンは、医薬中に、少なくとも５０％（w/ｗ）、好ましくは少なくとも８０％（w/ｗ）、さらに好ましくは少なくとも９５％（w/ｗ）のγ−免疫グロブリンを含む組成物として存在する。
さらに好ましい実施態様において、前記７Ｓ免疫グロブリンの活性画分は、医薬中に、少なくとも５０％（w/ｗ）、好ましくは少なくとも８０％（w/ｗ）、さらに好ましくは少なくとも９５％（w/ｗ）の量で存在する。
好ましくは、前記活性画分は、γ−免疫グロブリンの断片から構成される。脈絡膜新生血管形成の治療のために用いられる医薬は、γ−免疫グロブリンのF（ａｂ’）2、Ｆａｂ’、ＦａｂおよびＦｃからなる群から選択される、γ−免疫グロブリンの断片を含むことができる。
【００２７】
さらにもうひとつの実施態様において、医薬は、脈絡膜新生血管形成の阻害に有効な量で、γ−免疫グロブリンを含む。特に、γ−免疫グロブリンは、医薬中に、目における新生血管の成長の阻害に有効な量で存在する。さらに好ましい実施態様において、γ−グロブリンは、医薬中に、脈絡膜内皮細胞の増殖の阻害に有効な量で存在する。さらに好ましい実施態様において、γ−グロブリンは、医薬中に、脈絡膜内皮細胞の遊走の阻害に有効な、および、新生血管が発達するとき、脈絡膜内皮細胞によって先導される管形成の阻害に有効な量で存在する。
本発明はまた、薬学的活性化合物として、７Ｓ免疫グロブリンの活性画分から本質的になる、医薬組成物を提供することによって、上記で言及した問題を解決する。
好ましくは、医薬組成物における、前記活性画分は、ａ）脈絡膜新生血管形成、ｂ）脈絡膜内皮細胞の増殖、ｃ）脈絡膜内皮細胞の遊走、ｄ）脈絡膜内皮細胞の管形成からなる群から選択される１またはそれ以上の活性の阻害能力を有する。
さらに好ましい実施態様において、前記活性画分は、７Ｓ免疫グロブリンＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3およびＩｇＧ4のＩｇＧ画分からなる群から選択される１つ、２つまたは３つの成分である。
他の好ましい実施態様において、前記７Ｓ免疫グロブリンの活性画分は、医薬組成物中に、少なくとも５０％（w/ｗ）、好ましくは少なくとも８０％（w/ｗ）、さらに少なくとも好ましくは９５％（w/ｗ）の量で存在する。
活性画分は、好ましくは、γ−免疫グロブリンの断片から構成され、より好ましくは、γ−免疫グロブリンの断片は、γ−免疫グロブリンのF（ａｂ’）2、Ｆａｂ’、ＦａｂおよびＦｃからなる群から選択される。
本発明の医薬組成物に含まれる活性画分は、脈絡膜新生血管形成や目における新生血管の成長の阻害に有効な量で含まれる。さらに、活性画分は、脈絡膜内皮細胞の増殖、脈絡膜内皮細胞の遊走、および、脈絡膜内皮細胞によって先導される管形成の阻害に有効な量で含まれる。
本発明は、また、７Ｓ免疫グロブリンまたはその活性画分の製剤を患者に投与することを含む、脈絡膜新生血管形成の治療のための療法的方法を提供することによって、上記で言及した問題を解決する。
好ましくは、前記７Ｓ免疫グロブリンまたは７Ｓ免疫グロブリンの前記活性画分は、脈絡膜新生血管形成の阻害に有効な量で、投与される。さらに好ましい脈絡膜新生血管形成の治療のための方法においては、前記７Ｓ免疫グロブリンまたはその活性画分は、ａ）脈絡膜新生血管形成、ｂ）脈絡膜内皮細胞の増殖、ｃ）脈絡膜内皮細胞の遊走、ｄ）脈絡膜内皮細胞の管形成からなる群から選択される１またはそれ以上の活性の阻害能力を有する。
本発明の方法のさらなる実施態様は、脈絡膜新生血管形成の治療のための医薬の製造のための７Ｓ免疫グロブリンの使用に関連する上記で言及した特徴を含む。
本発明は、次の実施例と、図１から８を参照して、さらに詳しく説明される。これらは、いかなる意味によっても、本発明の範囲を限定するものとして、解釈されることはない。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
図の説明
【図１】図１は、４８時間後の２つの独立した実験からの、ＩｇＧ（７Ｓ免疫グロブリン）による脈絡膜内皮細胞増殖の阻害を示す。増殖は濃度に依存した態様で、阻害される。この実験は、有効な投薬量の範囲を見出すために行われた。
【図２】図２は、４つの独立した実験からの、ＩｇＧ（７Ｓ免疫グロブリン）による脈絡膜内皮細胞増殖の阻害を示す。これは、未処理のコントロールとの比較において、４８時間後に、図１で表された実験と異なっている。増殖は、濃度に依存した態様で、阻害される。
【図３】図３は、細胞起源に依存した、８時間後のＥＣ遊走における、４０ｍｇ／ｍｌのＩｇＧ（７Ｓ免疫グロブリン）の効能を示す。遊走は、脈絡膜ＥＣにおいて５６％、ＨＵＶＥｓにおいて３５％、阻害される。ＩｇＧの阻害は、網膜ＥＣにおいては存在していない。
【図４】図４は、７Ｓ免疫グロブリンを用いた治療の後、１８ヶ月間に渡る、特発性ＣＮＶまたはＰＯＨＳを持つ、１０人の患者における視力変化を示す。１２ヵ月後には９／１０の目、および１８ヵ月後には８／１０の目は、視力が向上した。
【図５】図５は、７Ｓ免疫グロブリンを用いた治療の後の、対応する平均値を備えたボックスプロットとして表された３ヶ月および１８ヶ月後のこれらの目の視力の変化を示す。この改善は顕著なものである。
【図６】図６は、右目（ＯＤ）に、特発性ＣＮＶを持った若い男性患者における視力の変化を示す。７Ｓ免疫グロブリンを用いた治療の期間は、矢印によって示される。
【図７】図７は、両目にＰＯＨＳを持った若い女性の患者における、視力の変化を示す（右目：ＯＤ、左目：ＯＳ）。７Ｓ免疫グロブリンを用いた治療の期間は、矢印（治療）によって示される。
【図８】図８は、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）によって起こったＣＮＶを持った７０歳の老いた患者における、７Ｓ免疫グロブリンを用いた治療の後の、視力の変化を示す。星印は、治療周期前の視力の変化を示す。治療前、良い方の右目の視力（ＯＤ）は、０．１２５だった。
【００２９】
実施例
方法
一次ヒト脈絡膜または網膜内皮細胞の準備
ヒトの目は、提供者から死後３０時間以内に得た。これらは、既知の目の病気はない。目を解剖し、前方のセグメント、ガラス体および網膜を分離した。網膜色素上皮層を有する脈絡膜または網膜をアキュターゼ（Accutase（PAA））を用いて、３７℃、３０分、インキュベートした。それから、網膜色素上皮細胞を薬さじで取り除いた。脈絡膜から強膜を剥ぎ取り、ハンクス緩衝塩水（ＨＢＳＳ）で洗浄し、それから、０．２５％トリプシン、０．０２％ＥＤＴＡを用い、３７℃、１時間、インキュベートした。さらに、脈絡膜または網膜断片を、コラゲナーゼ４０００Ｕ／ｍｌ（ＨＢＳＳ中に１：４）を含むＨＢＳＳを用いて、３７℃、３０分、インキュベートし、ＨＢＳＳで２回洗浄し、さらに、コラゲナーゼを用いて、３７℃、２時間、インキュベートした。それから、脈絡膜または網膜断片を滅菌メッシュ（７０μｍ孔サイズ）に通し、その懸濁液を遠心分離にかけ（１５００ｒｐｍ、５分）、上澄みを除去した。ペレットを、１％ＢＳＡを含むＨＢＳＳを用いて洗浄し、再度、遠心分離にかけた。細胞ペレットを１ｍｌのＨＢＳＳ（１％ＢＳＡ）に再懸濁し、１．５ｍｌエッペンドルフチューブに移した。内皮細胞の分離のために、ヒトＣＤ３１細胞表面抗原に特異的なＩｇＧ１モノクローナル抗体（clone9G11）で予め被覆したマグネチッグビーズ（magnetic beads） （Dynabeads CD-31, dynal, Cat. N 111.28）を用いた。マグネチックビーズを１％ＢＳＡを含むＨＢＳＳを用いて数回洗浄し、それから、細胞懸濁液に１０μｌのビーズ溶液（１ｍｌ細胞懸濁液あたり、１×１０7ビーズ）を添加し、室温で、２時間ゆっくりと混合した。その後、チューブを、ダニエルマグネチックパーティクルコンセントレーター（Dynal Magnetic particle Concentrator）（DynalMPC（登録商標））に設置し、２分間、沈殿させた。上澄みを取り除き、マグネチックビードに付着した細胞を、１％ＢＳＡを含むＨＢＳＳで洗浄し、０．４％ＥＣＧＳ／Ｈ、５％ＦＣＳ、１０ｎｇ／ｍｌＥＧＦ、１ｎｇ／ｍｌヒドロコルチゾン、５０ｎｇ／ｍｌアムホテリシンＢおよび５０μｇ／ｍｌゲンタマイシンを含む内皮細胞成長培地（プロモセル（Promocell）カタログ.Ｎ２２０２０）に再懸濁し、培養皿に蒔いた。
ヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）は、プロモセル（ハイデルベルグ、ドイツ）から購入した。
【００３０】
免疫細胞化学
細胞調製物の純度は、内皮細胞に特異的な抗体によって測定した。免疫細胞化学のために、細胞を免疫チャンバー（immunochambre）に５×１０3セル／チャンバーの濃度で蒔き、内皮細胞成長培地で５日間培養した。４℃、２０分間、４％ｐ−ホルムアルデヒドで固定した後、細胞をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で３回洗浄した。非特異的結合を阻止するため、細胞を５％ＢＳＡを含むＰＢＳを用いて１時間インキュベートした。洗浄後、細胞を抗ヒトブォン・ヴィレブランド（Von Willebrand）因子抗原（ウサギポリクローナル、５％ウサギ血清を用いて、ＰＢＳで、１：２００に希釈（ダコ（Dako）、カタログ、ＮＡ００８２））と４℃で、一晩、反応させた。細胞をＰＢＳを用いて５回洗浄し、それから、アルカリフォスファターゼに結合した、二次抗体（抗ウサギＩｇＧ、１％ヒツジ血清を、ＰＢＳで、１：４００に希釈、Ｓｉｇｍａ）を用いて室温で、２〜３時間、インキュベートし、ＰＢＳで４回洗浄し、５分間、新しいフクシンにさらした。ヘラマム対比染色を行なった。それから、細胞を洗浄し、カイザーズ  グリセリン  ゼラチン（Kaisers Glyceringelatine）に封入し、光学顕微鏡検査によって観察した。ネガティブコントロールとして、正常なウサギ血清（ＰＢＳで１：７００に希釈）を一次抗体の代わりに用いた。
統計学的分析
統計学的分析のために、ステューデントt検定を採用した。
【００３１】
実施例１：細胞増殖分析
脈絡膜内皮細胞を９６−ウェル培養プレート（Ｎｕｎｃ）に１０００細胞／ウェルの濃度で蒔き、内皮細胞成長培地（５％ＦＣＳ）で２４時間培養した。培地を除去し、細胞をＰＢＳで３回洗浄し、基底内皮細胞培地（コントロール）と、５０ｎｇ／ｍｌＶＥＧＦを含む培地（ポジティブコントロール）にさらした。細胞は、それぞれ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇおよび４０ｍｇ免疫グロブリンにさらした（Sandoglobulin（登録商標）, Novartis Pharma, ナーンベルグ, ドイツ）。
ＷＳＴ−１分析を用いて、製造メーカーの指示（ベーリンガー・マンハイム（Boehringer Mannheim））に従って、内皮細胞の増殖速度を決定した。比色増殖分析は、生細胞のミトコンドリアデヒドロゲナーゼによるテトラゾリウム塩ＷＳＴ−１の切断に基づく。ＶＥＧＦの最も有効な投与量は、内皮細胞の平板培養後１、３および５日目における試験的研究における増殖分析によって決定した。
結果：ＣＥＣ増殖におけるＶＥＧＦ（５０ｎｇ／ｍｌ）の刺激効果は、２０または４０ｍｇのＩＧ／ｍｌ（ｎ＝４）に細胞を露出することによって、３３％（ｐ＝０．００４）または４５％（ｐ＝０．００００４）まで濃度に依存した態様で、４８時間後、有意に抑制された。その結果を図１および図２に示す。
【００３２】
実施例２：遊走分析
脈絡膜、網膜および臍静脈ＥＣの遊走は、製造メーカー指示（ファルコン（Falcon））に従って、フルオロブロックインサート（Fluoro Block Inserts）を用いて分析した。分析は、インサート下で標識された細胞や分子の蛍光を特異的に検出することによって構築される、軽−密着（light-tight）ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）微孔性膜（８μｍ  孔サイズ ）による。膜をゼラチン（０．１ＭのＰＢＳに０．１％）で、３７℃、１時間、コートした。それからインサートを、１）培地＋５０ｎｇ／ｍｌのＶＥＧＦ（ポシティブコントロール）；２）培地＋４０ｍｇ／ｍｌの免疫グロブリンを含む５０ｎｇ／ｍｌのＶＥＧＦ；にさらした。ＥＣ（継代２から４）を、３時間、血清−飢餓させ（ＤＭＥＭ、０．５％ＦＣＳ）、０．０２％ＥＤＴＡで回収し、インサートの膜の中に装着した（５×１０3細胞／膜あたり）。３７℃で、８時間のインキュベーションした後、フィルターを除去し、０．１％ＰＢＳで洗浄し、室温で、３０分間、（０．１％ＰＢＳ中の）４％ｐ−ホルムアルデヒドで固定した。フィルターは、再度、ＰＢＳで洗浄し、細胞核は、青色蛍光（４６０ｎｍ）を発する、４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）で染色した。さらに、フィルターを、ガラススライド上で、ベクタシェルド  マウンティング（Vectashield Mounting）培地（Vector Lab製）の底側で、マウント（mount）した。３つの異なった顕微鏡視野（×１０  対物レンズ）における細胞の数を数えた。移動した細胞の総数は、ケモアトラクタント（chemoatractant）の不在下において移動した細胞の数を、そのような刺激物の存在下における細胞の数から、差し引くことによって得た。
結果：８時間後のＥＣ遊走におけるＩＧの効果は、異なっており、細胞源に依存した。遊走は、脈絡膜ＥＣにおいて５６％阻害され、ＨＵＶＥＣにおいて３５％、阻害された。ＩＧによる阻害は、網膜ＥＣでは、なかった（図３）。
【００３３】
実施例３：インビトロにおける管形成分析
マトリゲル（Matrigel）（ハーバー細胞外（Harborextracellular）マトリックス基底膜、Tebu, cat. N 2001）を除去した成長因子を、２４−ウェル組織培養プレート（４００μＩ／ウェル）に適用し、インビトロ基底膜を形成させた。マトリゲルの重合（３７℃、１時間）の後、一次のヒト脈絡膜内皮細胞を、１００００細胞／ウェルの濃度で、ゲルの表面に蒔き、５％ＦＣＳを含む内皮細胞成長培地で、２４時間、培養した。それから、培地を吸引し、細胞を、１）基底内皮細胞培地（成長因子を含まない、２％ＦＣＳ、Promocell cat. N 22210を含む）（コントロール）；２）５０ｎｇ／ｍｌＶＥＧＦを含む基底内皮細胞培地；３）ＰＥＤＦ−感染一次ラットＩＰＥ細胞を追加した条件培地（ＣＭ）（ケラチノサイトＳＦ、Gibco Cat. N）；４）ＰＥＤＦ−感染ラットＩＰＥ細胞＋５０ｎｇ／ｍｌＶＥＧＦを追加したＣＭ；５）ｅＧＦＰ−感染ラットＩＰＥ細胞を追加したＣＭ；６）ｅＧＦＰ−感染ラットＩＰＥ細胞＋５０ｎｇ／ｍｌＶＥＧＦを追加したＣＭ；７）非感染ラットＩＰＥ細胞からのＣＭ：にさらした。プレートを、３７℃、２４時間、インキュベートし、それから、培地を吸引し、細胞を中性緩衝１０％ホルマリン中に固定した。ゲルタンパク質は、細胞整列および管形成を許す。それらは、倒立光学顕微鏡の下で見ることができる。代表的な写真が、×１０倍で得られた。
結果：ＣＥＣによる管形成は、すべての実験群において認められたが、４０ｍｇ／ｍｌＩＧの存在下では、それほど顕著ではなかった。
結論：細胞の増殖、遊走、管形成の阻害は、以下の実施例４に述べた脈絡膜新生血管形成において、７Ｓ免疫グロブリンによる治療の効果を説明し確認するものである。
【００３４】
実施例４：
ＣＮＶを患う患者の治療
若年患者（診断、例えば、特発ＣＮＶ、推定目ヒストプラスマ症症候群（ＰＯＨＳ））および老齢患者におけるＣＮＶ（診断、例えば、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ））の治療のために、７Ｓ免疫グロブリンを用いて研究を行った。
臨床過程において繰り返し行われる、３〜５日間にわたる治療周期で治療を行なった。合計量が５０〜１００ｇの７Ｓ免疫グロブリンを、治療周期で静脈内に投与した。心臓や血行パラメータは、注入の最中および後に測定した。ＥＴＤＲＳ−チャートを用いた視力の変化によって、有効な結果が証明された（Early Treatment Diabetic Retinopathy Study, Lighthouse, ニューヨーク）。視力の変化は、ＥＤＲＴＳ−チャートに従って測定した。ここで、一列の変化は、０．１ＬｏｇＭＡＲ単位の変化に相当する。ＥＴＤＲＳ−チャートは、特に、糖尿病黄斑症（Ferris et al. New visual acuity charts for clinical research; Am. J. Ophthalmol. ; 94 （1982） pp 91-96）を持つ患者のために開発されたものである。さらに、証明資料のために、網膜眼底撮影およびフルオレセイン−血管造影の臨床評価を行った。
特発性ＣＮＶまたはＰＯＨＳを持つ１０人の若年患者に平均１８ヶ月間に渡って静脈内７Ｓ免疫グロブリンの繰り返し静脈注入を行って治療した。患者の平均年齢は、３８．５歳だった。３〜６週毎に処置を個々毎に適用した。合計５０〜１００ｇの量を治療周期の間に投与した。研究の臨床的終点は、ＥＴＤＲＳチャートによって測定した視力であった。結果を、図４〜８に要約する。
試験後、１０人中９人の患者について、視力の改善が見られた。平均の改良は、３ヵ月後で、２．３ライン（ｐ＜０．０１）、１８ヵ月後で、３．２ライン（ｐ＝０．０２）であった。フルオレセイン−血管造影によって、ＣＮＶの部分的衰退および傷跡が観察された。この研究によって、特発性ＣＮＶの自然の経過における、静脈内７Ｓ免疫グロブリンの有益な効果が実証された。繰り返し治療によって、機能や形態の改善が導かれた。結果を図５に要約する。
例えば、老齢患者のように、図８は、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）によって起こるＣＮＶを持った７０歳の患者における視力の変化を示すことにより治療の結果を要約する。
治療は、一般に、よく容認された。眼科臨床過程は、一様に、滲出の減退、ＣＮＶの進行の減退および傷の非活性期への転移を示した。
結論：臨床結果は、ＣＮＶの自然の過程における、７Ｓ免疫グロブリンを用いた治療の正の効果を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【手続補正書】
【提出日】平成16年11月25日(2004.11.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩｇＧ分子または静脈内免疫グロブリンまたはそれらの活性画分から主として構成される、脈絡膜新生血管形成の治療のための医薬の製造のための、７Ｓ免疫グロブリンまたはγ−グロブリンまたは血清グロブリン画分の使用。
【請求項２】
前記７Ｓ免疫グロブリンまたはγ−グロブリンまたは血清グロブリン画分が、ＩｇＧ分子または静脈内免疫グロブリンまたはそれらの活性画分から主として構成され、下記からなる群から選択される１またはそれ以上の活性阻害能力を有する、請求項１の使用。
ａ）脈絡膜新生血管形成
ｂ）脈絡膜内皮細胞の増殖
ｃ）脈絡膜内皮細胞の遊走
ｄ）脈絡膜内皮細胞の管形成
【請求項３】
前記活性画分は、ＩｇＧ分子または静脈内免疫グロブリン：ＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3、ＩｇＧ4およびこれらの混合物から主として構成される、７Ｓ免疫グロブリンまたはγ−グロブリンまたは血清グロブリン画分のＩｇＧ画分からなる群から選択される、請求項１または２の使用。
【請求項４】
前記７Ｓ免疫グロブリンまたはγ−グロブリンまたは血清グロブリン画分は、ＩｇＧ分子または静脈内免疫グロブリンから主として構成され、前記医薬中に、少なくとも５０％（ｗ/ｗ）、好ましくは少なくとも８０％（ｗ/ｗ）、さらに好ましくは少なくとも９５％（ｗ/ｗ）のγ−免疫グロブリンを含む組成物として存在する、請求項１〜３のいずれか１項の使用。
【請求項５】
前記７Ｓ免疫グロブリンまたはγ−グロブリンまたは血清グロブリン画分の活性画分が、ＩｇＧ分子または静脈内免疫グロブリンから主として構成され、前記医薬中に、少なくとも５０％（ｗ/ｗ）、好ましくは少なくとも８０％（ｗ/ｗ）、さらに好ましくは少なくとも９５％（ｗ/ｗ）の量で存在する、請求項１〜３のいずれか１項の使用。
【請求項６】
前記活性画分が、γ−免疫グロブリンの断片から構成される、請求項１〜３および５のいずれか１項の使用。
【請求項７】
前記γ−免疫グロブリンの断片が、γ−免疫グロブリンのF（ａｂ’）2、Ｆａｂ’、ＦａｂおよびＦｃからなる群から選択される、請求項６の使用。
【請求項８】
前記７Ｓ免疫グロブリンまたはγ−グロブリンまたは血清グロブリン画分は、ＩｇＧ分子または静脈内免疫グロブリンまたはそれらの活性画分から主として構成され、前記医薬中に、脈絡膜新生血管形成の阻害に有効な量で存在する、請求項１〜７のいずれか１項の使用。
【請求項９】
前記７Ｓ免疫グロブリンまたはγ−グロブリンまたは血清グロブリン画分は、ＩｇＧ分子または静脈内免疫グロブリンまたはそれらの活性画分から主として構成され、前記医薬中に、目の新血管の成長の阻害に有効な量で存在する、請求項１〜８のいずれか１項の使用。
【請求項１０】
前記７Ｓ免疫グロブリンまたはγ−グロブリンまたは血清グロブリン画分は、ＩｇＧ分子または静脈内免疫グロブリンまたはそれらの活性画分から主として構成され、前記医薬中に、脈絡膜内皮細胞の増殖の阻害に有効な量で存在する、請求項１〜９のいずれか１項の使用。
【請求項１１】
前記７Ｓ免疫グロブリンまたはγ−グロブリンまたは血清グロブリン画分は、ＩｇＧ分子または静脈内免疫グロブリンまたはそれらの活性画分から主として構成され、前記医薬中に、脈絡膜内皮細胞の遊走の阻害に有効な量で存在する、請求項１〜１０のいずれか１項の使用。
【請求項１２】
前記７Ｓ免疫グロブリンまたはγ−グロブリンまたは血清グロブリン画分は、ＩｇＧ分子または静脈内免疫グロブリンまたはそれらの活性画分から主として構成され、前記医薬中に、脈絡膜内皮細胞の管形成の阻害に有効な量で存在する、請求項１〜１１のいずれか１項の使用。
【請求項１３】
薬学的に活性な化合物として、ＩｇＧ分子または静脈内免疫グロブリンから主として構成される７Ｓ免疫グロブリンまたはγ−グロブリンまたは血清グロブリン画分の活性画分から本質的になる医薬組成物。
【請求項１４】
前記活性画分が、下記からなる群から選択される１またはそれ以上の活性の阻害能力を有する、請求項１３の医薬組成物。
ａ）脈絡膜新生血管形成
ｂ）脈絡膜内皮細胞の増殖
ｃ）脈絡膜内皮細胞の遊走
ｄ）脈絡膜内皮細胞の管形成
【請求項１５】
前記活性画分は、ＩｇＧ分子または静脈内免疫グロブリン：ＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3、ＩｇＧ4から主として構成される、７Ｓ免疫グロブリンまたはγ−グロブリンまたは血清グロブリン画分のＩｇＧ画分からなる群から選択される、１つ、２つまたは３つの成分である、請求項１３または１４の医薬組成物。
【請求項１６】
前記活性画分が、ＩｇＧ1である、請求項１３または１４の医薬組成物。
【請求項１７】
前記活性画分が、ＩｇＧ2である、請求項１３または１４の医薬組成物。
【請求項１８】
前記活性画分が、ＩｇＧ3である、請求項１３または１４の医薬組成物。
【請求項１９】
前記活性画分が、ＩｇＧ4である、請求項１２または１３の医薬組成物。
【請求項２０】
前記７Ｓ免疫グロブリンまたはγ−グロブリンまたは血清グロブリン画分の活性画分がＩｇＧ分子または静脈内免疫グロブリンから主として構成され、前記医薬組成物中に、少なくとも５０％（ｗ/ｗ）、好ましくは少なくとも８０％（ｗ/ｗ）、さらに好ましくは少なくとも９５％（ｗ/ｗ）の量で存在する、請求項１３〜１９のいずれかの医薬組成物。
【請求項２１】
前記活性画分が、γ−免疫グロブリンの断片から構成される、請求項１３〜２０のいずれか１項の医薬組成物。
【請求項２２】
前記γ−免疫グロブリンの断片が、γ−免疫グロブリンのF（ａｂ’）2、Ｆａｂ’、ＦａｂおよびＦｃからなる群から選択される、請求項２１の医薬組成物。
【請求項２３】
前記活性画分が、脈絡膜新生血管形成の阻害に有効な量で含まれる、請求項１３〜２２のいずれか１項の医薬組成物。
【請求項２４】
前記活性画分が、前記医薬中に、目の新血管の成長を阻害するのに有効な量で存在する、請求項１２〜２３のいずれか１項の医薬組成物。
【請求項２５】
前記活性画分が、前記医薬中に、脈絡膜内皮細胞の増殖を阻害するのに有効な量で存在する、請求項１２〜２４のいずれか１項の医薬組成物。
【請求項２６】
前記活性画分が、前記医薬中に、脈絡膜内皮細胞の遊走を阻害するのに有効な量で存在する、請求項１２〜２５のいずれか１項の医薬組成物。
【請求項２７】
前記活性画分が、前記医薬中に、脈絡膜内皮細胞の管形成を阻害するのに有効な量で存在する、請求項１２〜２６のいずれか１項の医薬組成物。                                                                                
【国際調査報告】
2005522451.tif 000011
2005522451.tif 000012
2005522451.tif 000013