【手続補正書】
【提出日】令和2年10月15日(2020.10.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
野生型黄色ブドウ球菌α溶血素（Ｈｌａ）のアミノ酸残基２０５、２１３、または２０９〜２１１の１つまたは複数において突然変異を含む、α溶血素（Ｈｌａ）変種。
【請求項２】
等しい力価の野生型Ｈｌａよりも低い溶血活性を有する、請求項１記載のＨｌａ変種。
【請求項３】
等しい力価の野生型Ｈｌａより少なくとも２０％低い溶血活性を有する、請求項２記載のＨｌａ変種。
【請求項４】
野生型黄色ブドウ球菌Ｈｌａにおける以下の突然変異：
（ｉ）残基２０５  Ｗ→Ａ；
（ｉｉ）残基２１３  Ｗ→Ａ；または
（ｉｉｉ）残基２０９〜２１１  ＤＲＤ→ＡＡＡ
のうち少なくとも１つを含む、請求項１〜３のいずれか一項記載のＨｌａ変種。
【請求項５】
配列番号：２３、配列番号：２４、または配列番号：２５のアミノ酸配列を含む、請求項１〜４のいずれか一項記載のＨｌａ変種。
【請求項６】
突然変異が、野生型黄色ブドウ球菌α溶血素タンパク質のアミノ酸残基２０５、２１３、または２０９〜２１１のうち１つまたは複数に存在している、野生型黄色ブドウ球菌α溶血素タンパク質のアミノ酸残基２７〜３１９からなる野生型黄色ブドウ球菌Ｈｌａを含む、請求項１〜５のいずれか一項記載のＨｌａ変種。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか一項記載のＨｌａ変種を含む、融合タンパク質。
【請求項８】
ビオチン結合タンパク質をさらに含む、請求項７記載の融合タンパク質。
【請求項９】
前記ビオチン結合タンパク質が、リズアビジンまたはその誘導体であるか、またはそれを含む、請求項７または８記載の融合タンパク質。
【請求項１０】
請求項１〜６のいずれか一項記載のＨｌａ変種または請求項７〜９のいずれか一項記載の融合タンパク質を含む、組成物。
【請求項１１】
免疫原性組成物である、請求項１０記載の組成物。
【請求項１２】
抗原をさらに含み、任意で、該抗原が、（ｉ）病原生命体もしくは腫瘍抗原に由来するか、および/または（ｉｉ）糖タンパク質である、請求項１１記載の組成物。
【請求項１３】
抗原性多糖をさらに含み、任意で、該抗原性多糖が糖タンパク質を含む、請求項１１または１２記載の組成物。
【請求項１４】
前記抗原性多糖が、分岐鎖多糖または直鎖多糖である、請求項１３記載の組成物。
【請求項１５】
前記抗原性多糖が、デキストラン、Ｖｉ多糖、肺炎球菌莢膜多糖、肺炎球菌細胞壁多糖、ヘモフィルス・インフルエンザｂ型多糖、髄膜炎菌多糖、ウイルス、原核生物、または真核生物起源の多糖、合成多糖、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１３または１４記載の組成物。
【請求項１６】
請求項１〜６のいずれか一項記載のＨｌａ変種または請求項７〜９のいずれか一項記載の融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、ポリヌクレオチド。
【請求項１７】
請求項１６記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
【請求項１８】
請求項１７記載の発現ベクターを含む細胞。
【請求項１９】
細菌細胞である、請求項１８記載の細胞。
【請求項２０】
対象において免疫応答を誘発するための医薬の製造における、請求項１１〜１５のいずれか一項記載の免疫原性組成物の使用。
【請求項２１】
前記免疫応答が抗体応答またはＢ細胞応答である、請求項２０記載の使用。
【請求項２２】
前記免疫応答が細胞媒介免疫応答である、請求項２０記載の使用。
【請求項２３】
前記免疫応答がＴ細胞応答である、請求項２２記載の使用。
【請求項２４】
前記Ｔ細胞応答が、ＣＤ４＋Ｔ細胞応答および/またはＣＤ８＋Ｔ細胞応答を含む、請求項２３記載の使用。
【請求項２５】
前記ＣＤ４＋Ｔ細胞応答が、Ｔｈ１応答、Ｔｈ２応答、またはＴｈ１７応答を含む、請求項２４記載の使用。
【請求項２６】
前記免疫応答が、
抗体応答；または
Ｂ細胞応答およびＴ細胞応答
である、請求項２０記載の使用。
【請求項２７】
（ｉ）配列番号：１または配列番号：１５に対して少なくとも８５％同一性を有するアミノ酸配列を含む可溶性ビオチン結合タンパク質；および（ｉｉ）抗原性ポリペプチドまたはペプチドを含む融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、ポリヌクレオチドであって、該融合タンパク質が、野生型リズアビジンタンパク質のアミノ酸１〜４４を含まない、前記ポリヌクレオチド。
【請求項２８】
前記可溶性ビオチン結合タンパク質が、配列番号：１に対して少なくとも８５％同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ前記融合タンパク質が、前記抗原性ポリペプチドまたはペプチドと前記ビオチン結合タンパク質との間にペプチドリンカーを含む、請求項２７記載のポリヌクレオチド。
【請求項２９】
前記ペプチドリンカーが、配列番号：２２のアミノ酸配列を含む、請求項２８記載のポリヌクレオチド。
【請求項３０】
前記抗原性ポリペプチドまたはペプチドがグリコシル化されている、請求項２７〜２９のいずれか一項記載のポリヌクレオチド。
【請求項３１】
前記抗原性ポリペプチドまたはペプチドが、肺炎球菌抗原、結核抗原、炭疽菌抗原、ＨＩＶ抗原、季節性または流行性インフルエンザ抗原、インフルエンザ抗原、百日咳抗原、黄色ブドウ球菌（ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）抗原、髄膜炎菌抗原、ヘモフィルス抗原、ＨＰＶ抗原、大腸菌（Ｅ．  ｃｏｌｉ）抗原、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）抗原、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）抗原、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）抗原、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）抗原、シトロバクター（Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ）抗原、クロストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａ）抗原、腸内病原体抗原、癌もしくは腫瘍抗原、トキソイド、毒素、もしくは毒素の部分、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される抗原である、請求項２７〜３０のいずれか一項記載のポリヌクレオチド。
【請求項３２】
前記抗原性ポリペプチドまたはペプチドが、等しい力価の野生型Ｈｌａより低い溶血活性を有する黄色ブドウ球菌Ｈｌａ変種を含む、請求項２７〜３０のいずれか一項記載のポリヌクレオチド。
【請求項３３】
前記黄色ブドウ球菌Ｈｌａ変種が、
ａ．野生型黄色ブドウ球菌α溶血素のアミノ酸残基２０５、２１３、または２０９〜２１１の１つまたは複数における突然変異を含む；または
ｂ．野生型黄色ブドウ球菌α溶血素における以下の突然変異：
ｉ．残基２０５  Ｗ→Ａ、
ｉｉ．残基２１３  Ｗ→Ａ、または
ｉｉｉ．残基２０９〜２１１  ＤＲＤ→ＡＡＡ
のうちの少なくとも１つを含む；または
ｃ．配列番号：２３、配列番号：２４、または配列番号：２５のアミノ酸配列を含む；または
ｄ．黄色ブドウ球菌の野生型α溶血素のアミノ酸２７〜３１９のアミノ酸配列から成る
、請求項３２記載のポリヌクレオチド。
【請求項３４】
前記融合タンパク質が、等しい力価の野生型α溶血素（Ｈｌａ）より少なくとも２０％低い溶血活性を有する、請求項３２または３３記載のポリヌクレオチド。
【請求項３５】
前記融合タンパク質が、Ｎ末端において細菌シグナル配列を含む、請求項２７〜３４のいずれか一項記載のポリヌクレオチド。
【請求項３６】
前記融合タンパク質が、配列番号：２６、配列番号：２７、または配列番号：２８のアミノ酸配列を含む、請求項３２〜３５のいずれか一項記載のポリヌクレオチド。
【請求項３７】
前記融合タンパク質が、配列番号：２６、または配列番号：２７、または配列番号：２８に対して少なくとも９０％同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３２〜３５のいずれか一項記載のポリヌクレオチド。
【請求項３８】
前記融合タンパク質が、配列番号：２６、または配列番号：２７、または配列番号：２８に対して少なくとも９５％同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３２〜３５のいずれか一項記載のポリヌクレオチド。
【請求項３９】
前記融合タンパク質が、配列番号：２６、または配列番号：２７、または配列番号：２８に対して少なくとも９８％同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３２〜３５のいずれか一項記載のポリヌクレオチド。
【請求項４０】
前記融合タンパク質が、配列番号：２６、または配列番号：２７、または配列番号：２８に対して少なくとも９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３２〜３５のいずれか一項記載のポリヌクレオチド。
【請求項４１】
前記可溶性ビオチン結合タンパク質が、配列番号：１または配列番号：１５に対して少なくとも９０％同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２７〜４０のいずれか一項記載のポリヌクレオチド。
【請求項４２】
前記可溶性ビオチン結合タンパク質が、配列番号：１または配列番号：１５に対して少なくとも９５％同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２７〜４０のいずれか一項記載のポリヌクレオチド。
【請求項４３】
前記可溶性ビオチン結合タンパク質が、配列番号：１または配列番号：１５に対して少なくとも９８％同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２７〜４０のいずれか一項記載のポリヌクレオチド。
【請求項４４】
前記可溶性ビオチン結合タンパク質が、配列番号：１または配列番号：１５に対して少なくとも９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２７〜４０のいずれか一項記載のポリヌクレオチド。
【請求項４５】
前記可溶性ビオチン結合タンパク質が、配列番号：１または配列番号：１５に対して１００％同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２７〜４０のいずれか一項記載のポリヌクレオチド。
【請求項４６】
前記可溶性ビオチン結合タンパク質が、配列番号：１に対して少なくとも９０％同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ前記融合タンパク質が、前記抗原性ポリペプチドまたはペプチドと前記可溶性ビオチン結合タンパク質との間にペプチドリンカーを含む、請求項２７〜４０のいずれか一項記載のポリヌクレオチド。
【請求項４７】
前記可溶性ビオチン結合タンパク質が、配列番号：１に対して少なくとも９５％同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ前記融合タンパク質が、前記抗原性ポリペプチドまたはペプチドと前記可溶性ビオチン結合タンパク質との間にペプチドリンカーを含む、請求項２７〜４０のいずれか一項記載のポリヌクレオチド。
【請求項４８】
前記可溶性ビオチン結合タンパク質が、配列番号：１に対して少なくとも９８％同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ前記融合タンパク質が、前記抗原性ポリペプチドまたはペプチドと前記可溶性ビオチン結合タンパク質との間にペプチドリンカーを含む、請求項２７〜４０のいずれか一項記載のポリヌクレオチド。
【請求項４９】
前記可溶性ビオチン結合タンパク質が、配列番号：１に対して少なくとも９９％同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ前記融合タンパク質が、前記抗原性ポリペプチドまたはペプチドと前記可溶性ビオチン結合タンパク質との間にペプチドリンカーを含む、請求項２７〜４０のいずれか一項記載のポリヌクレオチド。
【請求項５０】
前記可溶性ビオチン結合タンパク質が、配列番号：１に対して１００％同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ前記融合タンパク質が、前記抗原性ポリペプチドまたはペプチドと前記可溶性ビオチン結合タンパク質との間にペプチドリンカーを含む、請求項２７〜４０のいずれか一項記載のポリヌクレオチド。
【請求項５１】
請求項２７〜５０のいずれか一項記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
【請求項５２】
請求項５１記載の発現ベクターを含む細胞。
【請求項５３】
細菌細胞である、請求項５２記載の細胞。