(57)【要約】  本発明は、血管形成を抑制するために有用なペプチドを開示する。血管形成抑制組成物及び哺乳動物における血管形成の抑制方法をも開示する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−ＡＡ３−ＡＡ４−ＡＡ５−ＡＡ６−ＡＡ７−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＡＡ１０                                                                      （Ｉ）
［式中、
ＡＡ３は（１）グルタミニル、（２）フェニルアラニル、（３）バリル及び（４）アスパラギニルからなる群から選択され、
ＡＡ４は（１）Ｄ−イソロイシル、（２）イソロイシル、（３）Ｄ−ロイシル及び（４）Ｄ−アロイソロイシルからなる群から選択され、
ＡＡ５は（１）セリル、（２）メチオニル、（３）アロトレオニル、（４）トレオニル及び（５）チロシルからなる群から選択され、
ＡＡ６は（１）ノルバリル、（２）セリル、（３）トリプトフィル、（４）グルタミニル及び（５）プロリルからなる群から選択され、
ＡＡ７は（１）イソロイシル、（２）Ｄ−イソロイシル、（３）リシル（アセチル）及び（４）プロリルからなる群から選択され、
ＡＡ１０は（１）Ｄ−アラニルアミド、（２）エチルアミド及び（３）イソプロピルアミドからなる群から選択され、
ただしＡＡ４及びＡＡ７の１つはＤ−アミノ酸である］
を有する化合物、或いはその医薬的に許容され得る塩、エステル、プロドラッグまたは溶媒和物。
【請求項２】
ＡＡ４がＤ−Ｉｌｅである請求の範囲第１項に記載の化合物。
【請求項３】
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｎｖａ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｄ−ＡｌａＮＨ２、
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｎｖａ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｄ−ＡｌａＮＨ２、
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｉｌｅ−ａｌｌｏＴｈｒ−Ｎｖａ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３、
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｎｖａ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３、
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｎｖａ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３、
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｎｖａ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３、
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｉｌｅ−ａｌｌｏＴｈｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３、
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｄ−Ｉｌｅ−ａｌｌｏＴｈｒ−Ｎｖａ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３、
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｉｌｅ−ａｌｌｏＴｈｒ−Ｎｖａ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３、
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｇｌｎ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３、
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｍｅｔ−Ｎｖａ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｄ−ＡｌａＮＨ２、及び
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｉｌｅ−ａｌｌｏＴｈｒ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３
からなる群から選択される請求の範囲第２項に記載の化合物。
【請求項４】
ＡＡ４がＤ−Ｌｅｕである請求の範囲第１項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｎｖａ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３、及び
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３
からなる群から選択される請求の範囲第４項に記載の化合物。
【請求項６】
ＡＡ４がＤ−ａｌｌｏＩｌｅである請求の範囲第１項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３、
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅ−Ｔｙｒ−Ｎｖａ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３、
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅ−Ｔｈｒ−Ｎｖａ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｄ−ＡｌａＮＨ２、
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３、
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ（ＣＨ３）２、
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３、
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅ−ａｌｌｏＴｈｒ−Ｇｌｎ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３、及び
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｄ−ＡｌａＮＨ２
からなる群から選択される請求の範囲第６項に記載の化合物。
【請求項８】
請求の範囲第１項に記載の化合物、或いはその医薬的に許容され得る塩、エステル、プロドラッグまたは溶媒和物及び医薬的に許容され得る担体を含む医薬組成物。
【請求項９】
抗血管形成治療を要する患者に対して請求の範囲第１項に記載の化合物、或いはその医薬的に許容され得る塩、エステル、プロドラッグまたは溶媒和物を治療有効量投与することを含む前記患者の治療方法。
【請求項１０】
医薬的に許容され得る担体と共に請求の範囲第１項に記載のペプチド、或いはその医薬的に許容され得る塩、エステル、プロドラッグまたは溶媒和物を含む癌、関節炎、乾癬、感染または外科介入に関連する眼の血管形成、黄斑変性及び糖尿病性網膜症から選択される疾患の治療用組成物。
【請求項１１】
ペプチド受容体複合体を形成するように請求の範囲第１項に記載のペプチド、或いはその医薬的に許容され得る塩、エステル、プロドラッグまたは溶媒和物を受容体に結合し、前記受容体を精製することを含む内皮細胞からの受容体の単離方法。
【請求項１２】
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｎｖａ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｄ−ＡｌａＮＨ２、
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｎｖａ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｄ−ＡｌａＮＨ２、
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｎ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｎｖａ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３、
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｉｌｅ−ａｌｌｏＴｈｒ−Ｎｖａ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３、
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｎｖａ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３、
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｎｖａ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３、
Ｎ−（６−Ｍｅ−ニコチニル）−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｎｖａ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３、
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｎｖａ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３、
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３、
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｎｖａ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３、
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｎｖａ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３、
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅ−Ｔｙｒ−Ｎｖａ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３、
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅ−Ｔｈｒ−Ｎｖａ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｄ−ＡｌａＮＨ２、
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３、
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｉｌｅ−ａｌｌｏＴｈｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３、
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｄ−Ｉｌｅ−ａｌｌｏＴｈｒ−Ｎｖａ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３、
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｉｌｅ−ａｌｌｏＴｈｒ−Ｎｖａ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３、
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３、
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ（ＣＨ３）２、
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｇｌｎ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３、
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３、
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅ−Ｔｈｒ−Ｎｖａ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３、
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｍｅｔ−Ｎｖａ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｄ−ＡｌａＮＨ２、
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｉｌｅ−ａｌｌｏＴｈｒ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３、
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅ−ａｌｌｏＴｈｒ−Ｇｌｎ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３、及び
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｄ−ＡｌａＮＨ２
からなる群から選択される化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血管形成を生じたり、血管形成により悪化する状態を治療するために有用な活性を有する新規化合物、前記化合物を含む医薬組成物、前記化合物を用いる治療方法、及び血管形成の抑制方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
新しい血管が形成されるプロセスである血管形成は再生、発育及び創傷修復を含めた正常な身体活動のために必須である。前記プロセスは完全には理解されていないが、内皮細胞（毛細血管の一次細胞）の成長を調節する分子の複雑な相互作用を伴うと考えられている。正常な条件下で、前記分子は微小血管系を数週間または場合により数十年間続くかもしれない長期間静止状態（毛細管成長のない状態）に維持するようである。（例えば創傷修復中のように）必要ならば、前記細胞は突如成長及び迅速な増殖を受け得る（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６７：１０９３１−１０９３４（１９９２）及びＳｃｉｅｎｃｅ，２３５：４４２−４４７（１９８７））。
【０００３】
血管形成は通常調節されたプロセスであるが、（血管形成性疾患として特徴づけられる）多くの疾患は持続的な非調節血管形成により進行する。眼の新血管形成は盲目の最も一般的な原因として関与しており、約２０種類の眼病の原因である。関節炎のようなある状態では、新たに形成された毛細血管は関節を侵襲し、軟骨を破壊する。充実性主要の成長及び転移も血管形成に依存する（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，４６：４６７−４７３（１９８６）及びＪ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．，８２：４−６（１９８９））。新しい血管が形成されなければ充実性腫瘍は１〜２ｍｍ３以上成長し得ないことが分かっている。新しい血管が腫瘍中に埋没されるようになると、これらの血管により腫瘍細胞は循環に入り、肝臓、肺または骨のような遠い部位に転移する（Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３２４：１−８（１９９１）。
【０００４】
血管形成性疾患の治療に使用するために幾つかの血管形成抑制剤が現在開発中であるが、前記化合物には問題がある。真菌Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｉｓ ｆｒｅｓｅｎｉｕｓより分泌される化合物であるフマギリンが血管形成抑制効果を有することは立証されているが、長期間摂取後実験動物が劇的な体重減少を示したために臨床的には開発されていない。フマギリンの合成アナログであるＴＮＰ−４７０も内皮細胞成長を抑制するが、ヒトにおいて無力症及び神経皮質毒性を誘発し、よって許容可能な用量が制限されることが判明した（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，１７：２５４１（１９９９））。多数のペプチド血管形成抑制剤も公知である（例えば、国際特許出願公開第９９／６１４７６号パンフレット、米国特許第５，９３２，５４５号明細書、同第５，８４０，６９２号明細書、同第５，４２６，１００号明細書及び同第５，１９０，９１８号明細書参照）。しかしながら、血管形成性疾患を治療する際に使用される改良された活性プロフィールを有する化合物がなお要望されている。より具体的には、治療用途に対して安全であり、正常（すなわち、非癌性）細胞に毒性を全くまたは殆ど呈することなく例えば内皮細胞の増殖を選択的に抑制することにより病的状態に対して選択的毒性を示す血管形成抑制剤が要望されている。また、前記化合物は簡単に且つ費用効果的に製造されなければならない。
【０００５】
第１態様で、本発明は、式（Ｉ）：
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−ＡＡ３−ＡＡ４−ＡＡ５−ＡＡ６−ＡＡ７−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＡＡ１０                                                                      （Ｉ）
［式中、
ＡＡ３は（１）グルタミニル、（２）フェニルアラニル、（３）バリル及び（４）アスパラギニルからなる群から選択され、
ＡＡ４は（１）Ｄ−イソロイシル、（２）イソロイシル、（３）Ｄ−ロイシル及び（４）Ｄ−アロイソロイシルからなる群から選択され、
ＡＡ５は（１）セリル、（２）メチオニル、（３）アロトレオニル、（４）トレオニル及び（５）チロシルからなる群から選択され、
ＡＡ６は（１）ノルバリル、（２）セリル、（３）トリプトフィル、（４）グルタミニル及び（５）プロリルからなる群から選択され、
ＡＡ７は（１）イソロイシル、（２）Ｄ−イソロイシル、（３）リシル（アセチル）及び（４）プロリルからなる群から選択され、
ＡＡ１０は（１）Ｄ−アラニルアミド、（２）エチルアミド及び（３）イソプロピルアミドからなる群から選択され、
ただしＡＡ４及びＡＡ７の１つはＤ−アミノ酸である］
を有する化合物、或いはその医薬的に許容され得る塩、エステル、プロドラッグまたは溶媒和物を提供する。
【０００６】
別の態様で、本発明は、式（Ｉ）を有する化合物、或いはその医薬的に許容され得る塩、エステル、プロドラッグまたは溶媒和物及び医薬的に許容され得る担体を含む医薬組成物を提供する。
【０００７】
別の態様で、本発明は、抗血管形成治療を要する患者に対して式（Ｉ）を有する化合物、或いはその医薬的に許容され得る塩、エステル、プロドラッグまたは溶媒和物を治療有効量投与することを含む前記患者の治療方法を提供する。
【０００８】
別の態様で、本発明は、式（Ｉ）を有する化合物、或いはその医薬的に許容され得る塩、エステル、プロドラッグまたは溶媒和物と共に医薬的に許容され得る担体を含む癌、関節炎、乾癬、感染または外科介入に関連する眼の血管形成、黄斑変性及び糖尿病性網膜症から選択される疾患の治療用組成物を提供する。
【０００９】
別の態様で、本発明は、ペプチド受容体複合体を形成するように式（Ｉ）を有する化合物、或いはその医薬的に許容され得る塩、エステル、プロドラッグまたは溶媒和物を受容体に結合し、前記受容体を精製することを含む内皮細胞からの受容体の単離方法を提供する。
【００１０】
（発明の詳細説明）
用語の定義
本明細書で使用されている用語は以下の意義を有する。
【００１１】
本明細書中、「ニコチニル」はニコチン酸、すなわちピリジン−３−カルボン酸から誘導されるアシル基を指す。
【００１２】
本明細書中、「医薬的に許容され得るエステル」はインビボで加水分解するエステルを指し、ヒト身体で容易に分解して親化合物またはその塩を遊離するものが含まれる。好適なエステル基の例には、医薬的に許容され得る脂肪族カルボン酸、特にアルカン酸、アルケン酸、シクロアルカン酸及びアルカンジオン酸（いずれも、アルキルまたはアルケニル部分は有利には６個以下の炭素原子を有する）から誘導されるものが含まれる。好ましいエステルの例には、ホルメート、アセテート、プロピオネート、ブチレート、アクリレート及びエチルスクシネートが含まれる。
【００１３】
本明細書中、「医薬的に許容され得るプロドラッグ」は健全な医学的判断の範囲で過度の毒性、刺激、アレルギー反応等を生ずることなくヒト及び下級動物の組織と接触させて使用するのに適しており、合理的な損益比で釣り合い、所期用途に対して有効である本発明の化合物のプロドラッグ、並びに可能ならば本発明化合物の双イオン形態を指す。「プロドラッグ」は例えば血中での加水分解によりインビボで容易に変換されて、上記式を有する親化合物を生ずる化合物を指す。いずれも援用により本明細書に含まれるとするＴ．Ｈｉｇｕｃｈｉ及びＶ．Ｓｔｅｌｌａ，「新規デリバリーシステムとしてのプロドラッグ(Pro-drugs as Novel Delivery Systems)」，Ａ．Ｃ．Ｓ．Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓの第１４巻、及びＥｄｗａｒｄ  Ｂ．Ｒｏｃｈｅ編，「薬物設計における生体可逆性担体(Bioreversible Carriers in Drug Design)」，ＡｍｅｒｉｃａｎＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ（１９８７年）発行に詳しく記載されている。
【００１４】
本明細書中、「医薬的に許容され得る塩」は水または油に溶解乃至分散し得、過度の毒性、刺激及びアレルギー反応を呈することなく病気を治療するのに適しており、合理的な損益比で釣り合い、所期用途に対して有効である本発明の化合物の塩または双イオン性形態を指す。この塩は化合物の最終単離及び精製中に製造され得るかまたはアミノ基を好適な酸と反応させることにより別個に製造され得る。代表的な酸付加塩には、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、クエン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、ショウノウ酸塩、ショウノウスルホン酸塩、ジグルコン酸塩、グリセロリン酸塩、半硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩（イセチオン酸塩）、乳酸塩、マレイン酸塩、メシチレンスルホン酸塩、メタンスルホン酸塩、ナフチレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、トリクロロ酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、リン酸塩、グルタミン酸塩、重炭酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩及びウンデカン酸塩が含まれる。本発明の化合物中のアミノ基は塩化メチル，エチル，プロピル及びブチル、臭化メチル，エチル，プロピル及びブチル、ヨウ化メチル，エチル，プロピル及びブチル、硫酸ジメチル，ジエチル，ジブチル及びジアミル、塩化デシル，ラウリル，ミリスチル及びステアリル、臭化デシル，ラウリル，ミリスチル及びステアリル、ヨウ化デシル，ラウリル，ミリスチル及びステアリル、臭化ベンジル及び臭化フェネチルを用いて四級化され得る。治療上許容され得る付加塩を形成するために使用し得る酸の例には、無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸及びリン酸）及び有機酸（例えばシュウ酸、マレイン酸、コハク酸及びクエン酸）が含まれる。
【００１５】
本明細書中、「医薬的に許容され得る溶媒和物」は式（Ｉ）の化合物のような溶質の１つ以上の分子と１つ以上の溶媒分子からなる凝集物を指す。
【００１６】
本明細書中、「受容体」は特定化学基、分子またはウイルスに対して親和性を有する、細胞表面上または細胞内部の化学基または分子を指す。本発明のペプチドの抗血管形成活性に関連する受容体を単離すると、有用な診断ツールが提供され得る。
【００１７】
Ｄ−ＡｌａまたはＤ−Ｉｌｅのように接頭辞“Ｄ”が特記されていない限り、請求の範囲及び明細書中に記載されているペプチド中のアミノ酸及びアミノアシル残基のα−炭素の立体化学は天然、すなわち“Ｌ”配置である。Ｃａｈｎ−Ｉｎｇｏｌｄ−Ｐｒｅｌｏｇ“Ｒ”及び“Ｓ”呼称は、本発明のペプチドのＮ末端のアシル置換基中のキラル中心の立体化学を特定するために使用される。“Ｒ，Ｓ”は２つのエナンチオマーのラセミ混合物を指すことを意味する。この命名法は、Ｒ，Ｓ，Ｃａｈｎら，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，５：３８５−４１５（１９６６）に記載されている通りである。
【００１８】
多くの場合、本明細書中で使用した天然に存在する及び天然に存在しないアミノアシル残基の名前は、「α−アミノ酸の命名(Nomenclature of α-Amino Acids)（Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ，１９７４）」，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙｍ,１４（２），（１９７５）に記載されている有機化学の命名に関するＩＵＰＡＣ委員会及び生化学命名に関するＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ委員会(IUPAC Commision on the Nomenclature of Organic Chemistry and the IUPAC-IUB Commission on Biochemical Nomeuclature)が示唆している命名法に従っている。請求の範囲及び明細書で使用したアミノ酸及びアミノアシル残基の名前及び略号が上記示唆と異なる範囲まで読者には自明であろう。本発明を記載するために使用される幾つかの略語を下表１に定義する。
【００１９】
【表１】
2005510452.tif 000002
【００２０】
上表に挙げられていない命名及び略号は、「カタログ及びペプチド合成ハンドブック(Catalog and Peptide Synthesis Handbook)」，Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ−Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ  Ｃｏｒｐ．（１９９９年）発行または「ペプチド及び固相合成のためのツール(Tools for Peptide & Solid Phase Synthesis)，１９９８−１９９９カタログ」，Ｃｈｅｍ−Ｉｍｐｅｘ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．を参照することにより更に明らかとなり得る。
【００２１】
生物学的活性の測定
血管形成活性に関するインビトロアッセイ
ヒト微小血管内皮細胞（ＨＭＶＥＣ）遊走アッセイは、Ｓ．Ｓ．Ｔｏｌｓｍａ，Ｏ．Ｖ．Ｖｏｌｐｅｒｔ，Ｄ．Ｊ．Ｇｏｏｄ，Ｗ．Ｆ．Ｆｒａｚｉｅｒ，Ｐ．Ｊ．Ｐｏｌｖｅｒｉｎｉ及びＮ．Ｂｏｕｃｋ，Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，１２２：４９７−５１１（１９９３）に記載されている手順に従って実施した。
【００２２】
ＨＭＶＥＣ遊走アッセイはヒト微小血管内皮細胞−真皮（一人のドナー）及びヒト微小血管内皮細胞（新生児）を用いて実施した。ＢＣＥまたはＨＭＶＥＣ細胞を０．１％  ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含有するＤＭＥ中で一晩飢餓させた。次いで、細胞をトリプシンを用いて収集し、１．５×１０６細胞／ｍｌの濃度で０．１％  ＢＳＡ含有ＤＭＥ中に再懸濁させた。細胞を４８ウェルの改変Ｂｏｙｄｅｎチャンバ（メリーランド州キャビンジョンに所在のＮｕｃｌｅｏｐｏｒｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）の底部に加えた。前記チャンバを組立て、反転させ、０．１％ゼラチン中に一晩浸した後乾燥させたポリカーボネート走化性膜（孔径５μｍ）に前記細胞を３７℃で２時間付着させた。次いで、チャンバを再び反転させ、活性化剤（１５ｎｇ／ｍｌ  ｂＦＧＦ／ＶＥＧＦ）を含む試験物質（総容量５０μｌ）を上部チャンバのウェルに添加した。装置を３７℃で４時間インキュベートした。膜を回収し、固定し、染色し（Ｆｉｓｈｅｒ  ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃのＤｉｆｆ  Ｑｕｉｃｋ）、３ハイパワーフィールド当たりの上部チャンバに遊走した細胞の数をカウントした。ＤＭＥ＋０．１  ＢＳＡへのバックグラウンド遊走を差し引き、データを１０ハイパワーフィールド（４００×）当たりの遊走した細胞の数として報告するか、複数の実験の結果を合わせたときにはポジティブコントロールと比較した遊走の抑制％として報告した。
【００２３】
上記アッセイにおいて、本発明の化合物は１０ｎＭの濃度でヒト内皮細胞遊走を＞６８％抑制した。好ましい化合物は０．１ｎＭの濃度で＞５５％の抑制率、最も好ましい化合物は０．１ｎＭの濃度で＞７０％の抑制率を有していた。これらの結果が示すように、本発明の化合物は従来技術の抗血管形成ペプチドに比して高い力価を与える。
【００２４】
上記結果が示すように、本発明の化合物は、血管形成プロセスの最初の現象であるヒト内皮細胞の遊走を抑制する。本発明の化合物は血管形成抑制剤として原発性及び転移性充実性腫瘍、例えば乳、結腸、直腸、肺、口腔咽頭、下咽頭、食道、胃、膵臓、肝臓、胆嚢、胆管、小腸、尿管（腎臓、膀胱及び尿路上皮を含む）、女性生殖管（頸部、子宮及び卵巣の癌、絨毛癌及び妊娠性絨毛疾患を含む）、男性生殖管（前立腺、精のう、精巣及び生殖細胞の癌を含む）、内分泌腺（甲状腺、副腎及び下垂体を含む）及び皮膚の癌；血管腫；メラノーマ；肉腫（骨及び軟組織から生じた肉腫及びカポジ肉腫を含む）；脳、神経、眼及び髄膜の腫瘍（星状細胞腫、神経膠腫、グリア芽腫、網膜芽腫、神経腫、神経芽腫、神経鞘腫及び髄膜腫を含む）の治療において有用である。前記化合物は、白血病（すなわち、緑色腫、プラスマ細胞増加症、菌状息肉腫のプラーク及び腫瘍、皮膚Ｔ細胞リンパ腫／白血病）のような造血性悪性疾患に起因する充実性腫瘍の治療において、またリンパ腫（ホジキン及び非ホジキンリンパ腫）の治療においても有用である。更に、前記化合物は単独で使用したり放射線療法及び／または他の化学療法剤と併用したとき上記した腫瘍からの転移の予防において有用であり得る。
【００２５】
更なる用途には、自己免疫疾患（例えば、リウマチ、免疫及び変形性関節炎）；各種眼科疾患（例えば、糖尿病性網膜症、新生児網膜症、角膜移植拒絶、水晶体後線維増殖、血管新生緑内障、ルベオーシス、黄斑変性に起因する網膜血管新生、低酸素症、感染または外科介入を伴う眼の血管形成、及び眼の他の異常新生血管形成）；皮膚病（例えば、乾癬）；血管病（例えば、血管腫、及びアテローム性動脈硬化性プラーク内の毛細管増殖）；Ｏｓｌｅｒ−Ｗｅｂｂｅｒ症候群；心筋血管形成；プラーク新生血管形成；毛細管拡張症；出血性関節；血管線維腫；及び創傷顆粒化の治療及び予防が含まれる。他の用途には、内皮細胞の過剰または異常刺激により特徴づけられる疾患の治療が含まれ、この疾患の中には腸管癒着、クローン病、アテローム性動脈硬化症、強皮症及び肥厚性瘢痕（すなわち、ケロイド）が含まれる。排卵及び胎盤の形成を抑制することにより避妊薬としても使用される。本発明の化合物はネコ引っ掻き病（Ｒｏｃｈｅｌｅ ｍｉｎａｌｉａ ｑｕｉｎｔｏｓａ）及び潰瘍（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）のような病理学的結果として血管形成を有している病気の治療にも有用である。本発明の化合物は手術前に、特に切除可能な腫瘍を治療するために投与することにより出血を抑えるのにも有用である。
【００２６】
本発明の化合物は病気の治療のために他の組成物及び方法と組合せて使用され得る。例えば、腫瘍は通常本発明のペプチドと手術、放射線または化学療法を併用して治療され、その後微小転移巣の休止状態を延長させ、残りの原発腫瘍の成長を安定化し、阻止するために本発明のペプチドを投与してもよい。更には、本発明の化合物を医薬的に許容され得る賦形剤及び場合により徐放性マトリックス（例えば、生分解性ポリマー）と組合せることにより、治療用組成物を調製してもよい。
【００２７】
本明細書中、「徐放性マトリックス」は酵素または酸−塩基加水分解により、または溶解により分解され得る材料、通常はポリマーから構成されるマトリックスである。身体に挿入されると、マトリックスは酵素及び体液により影響される。徐放性マトリックスを生物親和性材料、例えばリポソーム、ポリラクチド（ポリ乳酸）、ポリグリコリド（グリコール酸のポリマー）、ポリラクチド−コ−グリゴリド（乳酸とグリコール酸のコポリマー）、ポリ無水物、ポリ（オルト）エステル、ポリペプチド、ヒアルロン酸、コラーゲン、コンドロイチンサルフェート、カルボン酸、脂肪酸、リン脂質、ポリサッカライド、核酸、ポリアミノ酸、アミノ酸（例えば、フェニルアラニン、チロシン、イソロイシン）、ポリヌクレオチド、ポリビニルプロピレン、ポリビニルピロリドン及びシリコーンから選択されることが望ましい。好ましい生分解性マトリックスはポリラクチド、ポリグリコリドまたはポリラクチド−コ−グリコリド（乳酸とグリコール酸のコポリマー）のいずれか１つの混合物である。
【００２８】
上記または他の治療に使用する際、本発明の１つの化合物の治療有効量を化合物そのものの形態で、または存在するならば医薬的に許容され得る塩の形態で使用され得る。本発明化合物の「治療有効量」は、医学的治療に適用され得る妥当な損益比で血管形成性疾患を治療するための（例えば、腫瘍成長を制限するかまたは腫瘍の転移を遅延または阻止するための）化合物の十分な量を意味する。しかしながら、本発明の化合物及び組成物の１日総容量は健全な医学的判断の範囲で担当医により決定され得る。特定患者に対する特定の治療有効量は、治療対象の疾患及び疾患の重篤度；使用する特定化合物の活性；使用する特定組成物；患者の年令、体重、全身健康状態、性別及び食事；使用する特定化合物の投与時期、投与ルート及び排泄率；治療期間；使用する特定化合物と組み合わせてまたは同時に使用される薬物；医学分野で公知の類似の因子を含めた各種因子に依存する。例えば、当業界の技術の範囲内で初めは所望の治療効果を得るのに必要な量よりも少ない量の化合物を投与し、その後所望の効果が得られるまで用量を漸増してもよい。
【００２９】
或いは、本発明の化合物は、当該化合物と共に１つ以上の医薬的に許容され得る賦形剤を含む医薬組成物として投与され得る。医薬的に許容され得る担体または賦形剤は、任意の種類の非毒性で固体、半固体または液体の充填剤、希釈剤、カプセル化材または製剤化助剤を指す。前記組成物は非経口、槽内、膣内、腹腔内、局所（例えば、散剤、軟膏剤、点眼剤または経皮パッチにより）、経腸または口腔内に投与され得る。本明細書中、「非経口」は、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨内、皮下及び動脈内注射及び注入を含めた投与モードを指す。
【００３０】
非経口注射用医薬組成物は、医薬的に許容され得る無菌の水性または非水性溶液、分散液、懸濁液または乳濁液、並びに使用直前に無菌の注射用溶液または分散液に再構築するための無菌粉末を含む。好適な水性及び非水性の担体、希釈剤、溶媒またはビヒクルの例には水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等）、カルボキシメチルセルロース及びその好適な混合物、植物油（例えば、オリーブ油）、注射可能な有機エステル（例えば、オレイン酸エチル）が含まれる。適当な流動性は、例えばレシチンのようなコーティング材を使用したり、分散液の場合には所要の粒径を維持したり、界面活性剤を使用することにより維持され得る。
【００３１】
前記組成物は、保存剤、湿潤剤、乳化剤及び分散剤のような助剤をも含み得る。微生物の作用は、各種抗菌剤及び抗真菌剤（例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸等）を配合することにより防止し得る。等張剤（例えば、糖、塩化ナトリウム等）を配合することも望ましいことがある。注射剤の吸収は吸収遅延剤（例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチン）を配合することにより延長させることができる。
【００３２】
注射用デポ剤は、薬物のマイクロカプセルマトリックスを生分解性ポリマー（例えば、ポリラクチド−ポリグリコリド、ポリ（オルトエステル）、ポリ（無水物）、及びＰＥＧのようなポリ（グリコール））中で形成することにより調製される。薬物／ポリマーの比及び使用する特定ポリマーの種類に応じて、薬物の放出速度はコントロールされ得る。注射用デポ剤は、薬物を身体組織と相容性のリポソームまたはマイクロエマルション中に捕捉することによっても調製される。
【００３３】
注射用製剤は、例えば細菌保持フィルターを用いて濾過したり、使用直前に滅菌水または他の滅菌注射用媒体に溶解または分散され得る滅菌固体組成物の形態で滅菌剤を配合することにより滅菌され得る。
【００３４】
局所投与には肺及び眼の表面を含めた皮膚または粘膜への投与が含まれる。吸入用を含めた局所投与用組成物は加圧されたり加圧されていない乾燥粉末として調製され得る。非加圧粉末組成物の場合、微粉砕形態の活性成分をあるサイズ（例えば、直径１００μｍまで）を有する粒子からなる大型の医薬的に許容され得る不活性担体と混合して使用され得る。好適な不活性担体には、ラクトースのような糖が含まれる。望ましくは、活性成分の粒子の少なくとも９５重量％が０．０１〜１０μｍの有効粒子サイズを有する。
【００３５】
或いは、前記組成物は圧縮されていてもよく、圧縮ガス（例えば、窒素）または液化ガス噴射剤を含み得る。その中に活性成分が実質的に溶解しないような液化噴射剤媒体、実際には全組成物が好ましい。圧縮組成物は界面活性剤（例えば、液体または固体のノニオン性界面活性剤または固体アニオン性界面活性剤）を含み得る。ナトリウム塩形態の固体アニオン性界面活性剤を使用することが好ましい。
【００３６】
局所投与の別の形態は眼への投与である。本発明の化合物は、該化合物が眼の角膜及び内部領域（例えば、前眼房、後眼房、硝子体、眼房水、硝子体液、角膜、虹彩／毛様体、水晶体、脈絡膜／網膜、及び強膜）に浸透させるのに十分に時間該化合物を眼の表面と接触させるように医薬的に許容され得る眼科用ビヒクルを用いてデリバリーされる。医薬的に許容され得る眼科用ビヒクルは、例えば軟膏、植物油またはカプセル化材であり得る。或いは、本発明の化合物を直接硝子体液または眼房水に注入してもよい。
【００３７】
経腸または経膣投与用組成物は好ましくは座剤であり、前記座剤は室温では固体であるが、体温では液体であり、よって直腸または膣において溶融して活性化合物を放出する好適な非刺激性賦形剤または担体（例えば、カカオ脂、ポリエチレングリコールまたは座薬ワックス）と混合することにより調製され得る。
【００３８】
本発明の化合物はリポソームの形態でも投与され得る。当業界で公知のように、リポソームは通常リン脂質または他の脂質物質から誘導される。リポソームは、水性媒体に分散される単層または多層水和液晶により形成される。リポソームを形成し得る非毒性で生理学的に許容され得且つ代謝可能な脂質を使用し得る。リポソーム形態の本発明の組成物は、本発明の化合物に加えて安定剤、保存剤、賦形剤等を含み得る。好ましい脂質は天然または合成のリン脂質及びホスファチジルコリン（レシチン）である。リポソームの形成方法は当業界で公知である。例えば、Ｐｒｅｓｃｏｔｔ編，「細胞学の方法(Methods in Cell Biology)」，ＸＩＶ巻，ｐ．３３以降，ニューヨーク州ニューヨークに所在のＡｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（１９７６）年発行を参照されたい。
【００３９】
本発明の化合物は単一の活性薬剤として投与され得るが、血管形成性疾患を治療するために患者に対して通常投与されている１つ以上の薬剤と組合せて使用してもよい。例えば、本発明の化合物は化学物質や放射線のような従来の細胞毒性治療に対して腫瘍をより感受性とするために短期間でも有効である。本発明の化合物は既存の細胞毒性補助的抗癌療法の有効性を高める。本発明の化合物は有効性を高めるために他の抗血管形成剤と組み合わせて、または他の抗血管形成剤と組合せ、他の細胞毒性剤と一緒に投与され得る。特に、充実性腫瘍の治療に使用する場合には、本発明の化合物はＩＬ−２、レチノイド、インターフェロン、アンジオスタチン、エンドスタチン、サリドマイド、トロンボスポンジン−１、トロンボスポンジン−２、カプトプリル、アンジオインヒビン、ＴＮＰ−４７０、ペントサンポリスルフェート、血小板因子４、ＬＭ−６０９、ＳＵ−５４１６、ＣＭ−１０１、テコガラン、プラスミノーゲン−Ｋ−５、バソスタチン、ビタキシン、バソクロスタチン、スクアラミン、マリマスタットまたは他のＭＭＰ阻害剤；α−インターフェロン、ＣＯＭＰ（シクロホスファミド、ビンクリスチン、メトトレキセート及びプレドニゾロン）、エトポジト、ｍＢＡＣＯＤ（メトトレキセート、ブレオマイシン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、ビンクリスチン及びデキサメタゾン）、ＰＲＯ−ＭＡＣＥ／ＭＯＰＰ（プレドニゾン、メトトレキセート（ｗ／ロイコビンレスキュー）、ドキソルビシン、シクロホスファミド、シスプラチン、タキソール、エトポシド／メクロルエタミン、ビンクリスチン、プレドニゾン及びプロカルバジン）、ビンクリスチン、ビンブラスチン等のような抗腫瘍剤、並びに放射線と共に投与され得る。
【００４０】
ヒトまたは他の哺乳動物宿主に対して１回または複数回に分けて投与される本発明の組成物の１日総容量は、例えば０．０００１〜３００ｍｇ／ｋｇ体重／日、より一般的には１〜３００ｍｇ／ｋｇ体重であり得る。
【００４１】
血管形成性疾患の抑制、治療または予防のために本発明の化合物と併用され得る薬剤は上記したものに限定されず、原則として血管形成性疾患の治療または予防のために有用な薬剤が含まれる。
【００４２】
本発明のペプチドは、例えば培養内皮細胞中の本発明のペプチドの抗血管形成活性に関連する受容体、例えばＴＳＰ−１受容体を単離するためにアフィニティーカラムを開発するために使用し得る。当業界で公知のように、受容体を単離、精製後、該受容体をコードするポリヌクレオチドを同定、単離するためにアミノ酸配列決定し得る。この受容体の組換え発現により、例えば他の血管形成抑制剤を同定するための高処理量スクリーニングアッセイで使用するために十分な量が得られるようにより高量の受容体を産生することができる。
【００４３】
ペプチドの合成
本発明のポリペプチドは当業者に公知の方法により合成され得る。固相ペプチド合成に関しては、多くの方法の要約がＪ．Ｍ．Ｓｔｅｗａｒｔ及びＪ．Ｄ．Ｙｏｕｎｇ，「固相ペプチド合成(Solid Phase Peptide Synthesis)」，サンフランシスコに所在のＷ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  Ｃｏ．（１９６３年）発行及びＪ．Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ，「ホルモンタンパク質及びペプチド(Hormonal Proteins and Peptides)」，第２巻，ｐ．４６，ニューヨークに所在のＡｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（１９７３年）発行に記載されている。古典的な溶液合成に関しては、Ｇ．Ｓｃｈｒｏｄｅｒ及びＫ．Ｌｕｐｋｅ，「ペプチド(The Peptides)」，第１巻，ニューヨークに所在のＡｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（１９６５年）発行を参照されたい。
【００４４】
試薬、樹脂、アミノ酸及びアミノ酸誘導体は市販されており、本明細書中に特記しない限り米国イリノイ州ウッドデルに所在のＣｈｅｍ−Ｉｍｐｅｘ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．または米国カリフォルニア州サンジェゴに所在のＣａｌｂｉｏｃｈｅｍ−Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ  Ｃｏｒｐ．から購可能である。
【００４５】
一般的に、上記方法は１つ以上のアミノ酸または適当に保護されているアミノ酸を成長ペプチド鎖に逐次付加することを含む。第１アミノ酸のアミノ基またはカルボキシル基を通常好適な保護基で保護する。次いで、保護または誘導化したアミノ酸は不活性固体支持体に結合させたり、適当に保護した相補（アミノまたはカルボキシル）基を有する配列中の次のアミノ酸をアミド結合を形成するのに適した条件下で付加することにより溶液状で使用され得る。次いで、こうして新しく付加したアミノ酸残基から保護基を除去し、（適当に保護した）次のアミノ酸を付加し、これを続ける。所望アミノ酸をすべて適切な配列で結合したら、残りの保護基（及び固体支持体）を順次または同時に除去すると、最終ポリペプチドが得られる。この一般的な手順を簡単に修飾することにより、１つ以上のアミノ酸を成長鎖に同時に付加すること、例えば（キラル中心をラセミ化しない条件下で）保護トリペプチドを適当に保護されたジペプチドとカップリングし、脱保護後ペンタペプチドを形成することができる。
【００４６】
本発明の化合物を製造するために特に好ましい方法には固相ペプチド合成が含まれる。
【００４７】
特に好ましい方法では、α−アミノ官能基を酸または塩基感受性基により保護する。前記保護基は、ペプチド結合形成の条件に対して安定であり且つ成長ペプチド鎖を分解したり鎖中に含まれているキラル中心をラセミ化することなく容易に除去し得るという性質を有していなければならない。好適な保護基は９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）、ビフェニルイソプロピル−オキシカルボニル、ｔ−アミルオキシカルボニル、イソボルニルオキシカルボニル、（α，α）−ジメチル−３，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、ｏ−ニトロフェニルスルフェニル、２−シアノ−ｔ−ブチルオキシカルボニル等である。９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）保護基が好ましい。
【００４８】
特に好ましい側鎖保護基は以下の通りである：アルギニン及びリシンに対してアセチル（Ａｃ）及び２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル（Ｐｍｃ）；アスパラギンに対してトリチル（Ｔｒｔ）；グルタミンに対してトリチル（Ｔｒｔ）；セリンに対してｔ−ブチル（ｔ−Ｂｕ）；トレオニン及びアロトレオニンに対してｔ−ブチル（ｔ−Ｂｕ）；トリプトファンに対してｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）；チロシンに対してｔ−ブチル（ｔ−Ｂｕ）。
【００４９】
固相ペプチド合成法では、Ｃ末端アミノ酸を好適な固体支持体または樹脂に結合させる。上記合成のために使用される好適な固体支持体は逐次縮合−脱保護反応の試薬及び反応条件に対して不活性であり、使用する媒体に溶解しない物質である。Ｃ末端カルボキシペプチドの合成のための好ましい固体支持体は４−ヒドロキシメチル−フェノキシメチル−コポリ（スチレン−１％ジビニルベンゼン）である。Ｃ末端アミドペプチドに対する好ましい固体支持体は、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓから入手可能な４−（２’，４’−ジメトキシフェニル−Ｆｍｏｃ−アミノメチル）フェノキシ−アセトアミドエチル樹脂である。
【００５０】
Ｃ末端アミノ酸を樹脂に対してＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）またはＯ−ベンゾトリアゾル−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）と場合により４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）、ベンゾトリアゾル−１−イルオキシ−トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）またはビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィンクロリド（ＢＯＰＣｌ）を用いるカップリングをジクロロメタンやＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）のような溶媒中１０〜５０℃の温度で約１〜２４時間実施することによりカップリングさせる。固体支持体が４−（２’，４’−ジメトキシフェニル−Ｆｍｏｃ−アミノメチル）−フェノキシアセトアミドエチル樹脂の場合、上記したようにＣ末端アミノ酸とカップリングさせる前にＦｍｏｃ基を第２級アミン（好ましくは、ピペリジン）を用いて除去する。脱保護４−（２’，４’−ジメトキシフェニル−Ｆｍｏｃ−アミノメチル）フェノキシアセトアミドエチル樹脂にカップリングさせるための好ましい方法はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中でＯ−ベンゾトリアゾル−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ，１当量）及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ，１当量）である。
【００５１】
保護アミノ酸の逐次カップリングは当業界で公知のように自動ペプチド合成装置を用いて実施し得る。好ましい実施態様では、成長ペプチド鎖のアミノ酸中のα−アミノ官能基をＦｍｏｃで保護する。成長ペプチドのＮ末端鎖からＦｍｏｃ保護基を除去するには、第２級アミン（好ましくは、ピペリジン）を用いて処理する。次いで、各保護アミノ酸を約３倍モル過剰量導入し、カップリングを好ましくはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中で実施する。カップリング剤は通常Ｏ−ベンゾトリアゾル−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ，１当量）及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ，１当量）である。
【００５２】
固相合成の最後に、ポリペプチドを順次または１回の操作で樹脂から除去し、脱保護する。ポリペプチドの除去及び脱保護は、樹脂結合ポリペプチドを開裂剤、例えばチアニソール、水、エタンジチオール及びトリフルオロ酢酸を用いて処理することにより１回の操作で実施され得る。
【００５３】
ポリペプチドのＣ末端がアルキルアミドである場合には、アルキルアミンを用いてアミノリシスすることにより樹脂を開裂させる。或いは、（例えばメタノールを用いて）エステル交換した後アミノリシスするかまたは直接アミド交換することによりペプチドを除去し得る。この時点で保護ペプチドを精製してもよく、または次ステップに直接送ってもよい。側鎖保護基は上記した開裂剤カクテルを用いて除去される。
【００５４】
完全に脱保護されたペプチドを以下のタイプのいずれかまたは全部を用いる一連のクロマトグラフィーステップにより精製する：酢酸塩形態の弱塩基性樹脂上でのイオン交換クロマトグラフィー；非誘導化ポリスチレン−ジビニルベンゼン（例えば、ＡＭＢＥＲＬＩＴＥ（登録商標）ＸＡＤ）上での疎水性吸着クロマトグラフィー；シリカゲル吸着クロマトグラフィー；カルボキシメチルセルロース上でのイオン交換クロマトグラフィー；例えばＳＥＰＨＡＤＥＸ（登録商標）Ｇ−２５、ＬＨ−２０または向流分配上での分配クロマトグラフィー；オクチル−またはオクタデシルシリル−シリカ結合相カラムパッキング上での高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、特に逆相ＨＰＬＣ。
【００５５】
下記実施例を参照すると、本発明がより深く理解されるであろう。下記実施例で使用した略号は次の通りである：
ＮＭＰ      Ｎ−メチルピロリジノン、
ＨＢＴＣ    ２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾル−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート、
ＤＭＦ      Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、
ＴＦＡ      トリフルオロ酢酸、及び
ＤＭＡ      Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド。
【実施例１】
【００５６】
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｎｖａ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｄ−ＡｌａＮＨ２
Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ４３３Ａペプチド合成装置の反応容器にＦｍｏｃ−Ｄ−Ａｌａ−Ｓｉｅｂｅｒアミド樹脂（０．１ｍＭ）を充填した。その後、１ｍＭ  アミノ酸のカートリッジを充填した。前ピークモニタリングプロトコルを有するＦａｓｔｍｏｃ  ０．１を以下の合成サイクルで使用した：
１．樹脂をＮＭＰで約５分間溶媒和する；
２．樹脂をＮＭＰで約５分間洗浄する；
３．ＮＭＰ中５０％  ピペリジン溶液を用いてＦｍｏｃ基を５分間除去し、樹脂を洗浄し、このシーケンスを３〜４回繰り返す；
４．Ｆｍｏｃ−アミノ酸をＤＭＦ中０．５Ｍ  ＨＢＴＵ（１ｍＭ）で活性化する；
５．活性化Ｆｍｏｃ−アミノ酸を反応容器に添加し、その後ＮＭＰ中２Ｍ  ジイソプロピルアミン（１ｍＭ）を添加する；
６．Ｆｍｏｃ−アミノ酸を２０分間カップリングする；
７．樹脂を洗浄し、Ｆｍｏｃ基をＮＭＰ中５０％  ピペリジンを用いて除去する。
【００５７】
上記プロトコルを用いて樹脂に対して以下の保護アミノ酸を順次カップリングさせた。
【００５８】
【表２】
2005510452.tif 000003
【００５９】
合成が完了したら、樹脂結合ペプチドをメタノールで３回洗浄し、真空中で乾燥した後室温において９５：５  ＴＦＡ／水溶液（３ｍｌ）で一晩処理した。この樹脂を濾過し、メタノールで３回洗浄した。濾液及び洗浄液を合わせ、真空中で濃縮した。残渣をジエチルエーテルで処理し、沈殿を濾過すると、粗ペプチドが非晶質粉末として生じた。これをＣ−１８カラムを用い、０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を５０分間で５％から１００％に漸増させる溶媒系で溶出させる分取ＨＰＬＣにより精製した。純粋分画を凍結乾燥させると、Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｎｖａ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｄ−ＡｌａＮＨ２がトリフルオロ酢酸塩として得られた。
Ｒｔ＝２．１５分（０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を３０分間で１０％から４０％）；
ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ＝１０６６（Ｍ＋Ｈ）＋；
アミノ酸分析：０．８９  Ｓａｒ，０．９４  Ｇｌｙ，０．９４  Ｇｌｕ，２．０６  Ｉｌｅ，０．５０  Ｔｈｒ，１．０８  Ｎｖａ，１．１１  Ａｒｇ，１．０３  Ｐｒｏ，１．０２  Ａｌａ。
【実施例２】
【００６０】
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｎｖａ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｄ−ＡｌａＮＨ２
実施例１においてＦｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）の代わりにＦｍｏｃ−Ｐｈｅを用いて所望化合物を製造した。合成が完了したら、ペプチドを樹脂から開裂し、保護基を除去し、ジエチルエーテルで沈殿させ、濾過すると、粗ペプチドが得られた。これをＣ−１８カラムを用い、０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を５０分間で５％から１００％に漸増させる溶媒系で溶出させるＨＰＬＣにより精製した。純粋分画を凍結乾燥させると、Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｎｖａ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｄ−ＡｌａＮＨ２がトリフルオロ酢酸塩として得られた。
Ｒｔ＝３．５６５分（０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を３０分間で１０％から４０％）；
ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ＝１０８５（Ｍ＋Ｈ）＋；
アミノ酸分析：０．８８  Ｓａｒ，１．０１  Ｇｌｙ，０．９１  Ｐｈｅ，１．９７  Ｉｌｅ，０．３１  Ｔｈｒ，０．８９  Ｎｖａ，１．０６  Ａｒｇ，１．０５  Ｐｒｏ，１．０３  Ａｌａ。
【実施例３】
【００６１】
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｎ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｎｖａ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３
Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ４３３Ａペプチド合成装置の反応容器にＦｍｏｃ−Ｐｒｏ−Ｓｉｅｂｅｒエチレンアミド樹脂（０．１ｍＭ）を充填した。その後、１ｍＭ  アミノ酸のカートリッジを充填した。前ピークモニタリングプロトコルを有するＦａｓｔｍｏｃ  ０．１を以下の合成サイクルで使用した：
１．樹脂をＮＭＰで約５分間溶媒和する；
２．樹脂をＮＭＰで約５分間洗浄する；
３．ＮＭＰ中５０％  ピペリジン溶液を用いてＦｍｏｃ基を５分間除去し、樹脂を洗浄し、このシーケンスを３〜４回繰り返す；
４．Ｆｍｏｃ−アミノ酸をＤＭＦ中０．５Ｍ  ＨＢＴＵ（１ｍＭ）で活性化する；
５．活性化Ｆｍｏｃ−アミノ酸を反応容器に添加し、その後ＮＭＰ中２Ｍ  ジイソプロピルアミン（１ｍＭ）を添加する；
６．Ｆｍｏｃ−アミノ酸を２０分間カップリングする；
７．樹脂を洗浄し、Ｆｍｏｃ基をＮＭＰ中５０％  ピペリジンを用いて除去する。
【００６２】
上記プロトコルを用いて樹脂に対して以下の保護アミノ酸を順次カップリングさせた。
【００６３】
【表３】
2005510452.tif 000004
【００６４】
合成が完了したら、樹脂結合ペプチドをメタノールで３回洗浄し、真空中で乾燥した後室温において９５：５  ＴＦＡ／水溶液（３ｍｌ）で一晩処理した。この樹脂を濾過し、メタノールで３回洗浄した。濾液及び洗浄液を合わせ、真空中で濃縮した。残渣をジエチルエーテルで処理し、沈殿を濾過すると、粗ペプチドが非晶質粉末として生じた。これをＣ−１８カラムを用い、０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を５０分間で５％から１００％に漸増させる溶媒系で溶出させるＨＰＬＣにより精製した。純粋分画を凍結乾燥させると、Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｎ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｎｖａ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３がトリフルオロ酢酸塩として得られた。
Ｒｔ＝３．０６分（０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を３０分間で１０％から４０％）；
ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ＝１０６５（Ｍ＋Ｈ）＋；
アミノ酸分析：０．９２  Ｓａｒ，０．９０  Ｇｌｎ，１．０１  Ｖａｌ，２．０７  Ｉｌｅ，０．５７  Ｔｈｒ，１．０３  Ｎｖａ，１．３６  Ａｒｇ，１．１０  Ｐｒｏ。
【実施例４】
【００６５】
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｉｌｅ−ａｌｌｏＴｈｒ−Ｎｖａ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３
実施例３においてＦｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）及びＦｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）の代わりにそれぞれＦｍｏｃ−Ｇｌｙ及びＦｍｏｃ−ａｌｌｏＴｈｒ（ｔ−Ｂｕ）を用いて所望化合物を製造した。合成が完了したら、ペプチドを樹脂から開裂し、保護基を除去し、ジエチルエーテルで沈殿させ、濾過すると、粗ペプチドが得られた。これをＣ−１８カラムを用い、０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を５０分間で５％から１００％に漸増させる溶媒系で溶出させるＨＰＬＣにより精製した。純粋分画を凍結乾燥させると、Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｉｌｅ−ａｌｌｏＴｈｒ−Ｎｖａ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３がトリフルオロ酢酸塩として得られた。
Ｒｔ＝３．５２分（０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を３０分間で１０％から４０％）；
ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ＝９９４（Ｍ＋Ｈ）＋；
アミノ酸分析：１．０１  Ｓａｒ，１．００  Ｇｌｙ，０．９７  Ｖａｌ，２．１０  Ｉｌｅ，０．５８  Ｔｈｒ，０．９８  Ｎｖａ，１．０  Ａｒｇ，１．０７  Ｐｒｏ。
【実施例５】
【００６６】
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｎｖａ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３
実施例３においてＦｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）及びＦｍｏｃ−Ｉｌｅの代わりにそれぞれＦｍｏｃ−Ｇｌｙ及びＦｍｏｃ−Ｄ−Ｉｌｅを用いて所望化合物を製造した。合成が完了したら、ペプチドを樹脂から開裂し、保護基を除去し、ジエチルエーテルで沈殿させ、濾過すると、粗ペプチドが得られた。これをＣ−１８カラムを用い、０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を５０分間で５％から１００％に漸増させる溶媒系で溶出させるＨＰＬＣにより精製した。純粋分画を凍結乾燥させると、Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｎｖａ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３がトリフルオロ酢酸塩として得られた。
Ｒｔ＝３．７３分（０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を３０分間で１０％から４０％）；
ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ＝９９４（Ｍ＋Ｈ）＋；
アミノ酸分析：１．０３  Ｓａｒ，０．９９  Ｇｌｙ，０．９７  Ｖａｌ，２．１１  Ｉｌｅ，０．４５  Ｔｈｒ，１．０４  Ｎｖａ，０．９７  Ａｒｇ，１．０４  Ｐｒｏ。
【実施例６】
【００６７】
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｎｖａ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３
実施例３においてＦｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｉｌｅ及びＦｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）の代わりにそれぞれＦｍｏｃ−Ｇｌｙ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｌｅｕ及びＦｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）を用いて所望化合物を製造した。合成が完了したら、ペプチドを樹脂から開裂し、保護基を除去し、ジエチルエーテルで沈殿させ、濾過すると、粗ペプチドが得られた。これをＣ−１８カラムを用い、０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を５０分間で５％から１００％に漸増させる溶媒系で溶出させるＨＰＬＣにより精製した。純粋分画を凍結乾燥させると、Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｎｖａ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３がトリフルオロ酢酸塩として得られた。
Ｒｔ＝２．７９８分（０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を３０分間で１０％から４０％）；
ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ＝９９５（Ｍ＋Ｈ）＋；
アミノ酸分析：０．９４  Ｓａｒ，０．９８  Ｇｌｙ，０．９９  Ａｓｐ，１．０５  Ｌｅｕ，０．２６  Ｓｅｒ，０．９４  Ｎｖａ，０．９５  Ｉｌｅ，１．０  Ａｒｇ，１．０９  Ｐｒｏ。
【実施例７】
【００６８】
Ｎ−（６−Ｍｅ−ニコチニル）−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｎｖａ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３
実施例３において酢酸及びＦｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）の代わりにそれぞれ６−メチルニコチン酸及びＦｍｏｃ−Ｇｌｙを用いて所望化合物を製造した。合成が完了したら、ペプチドを樹脂から開裂し、保護基を除去し、ジエチルエーテルで沈殿させ、濾過すると、粗ペプチドが得られた。これをＣ−１８カラムを用い、０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を５０分間で５％から１００％に漸増させる溶媒系で溶出させるＨＰＬＣにより精製した。純粋分画を凍結乾燥させると、Ｎ−（６−Ｍｅ−ニコチニル）−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｎｖａ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３がトリフルオロ酢酸塩として得られた。
Ｒｔ＝３．８２分（０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を３０分間で１０％から４０％）；
ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ＝１０７１（Ｍ＋Ｈ）＋；
アミノ酸分析：０．９８  Ｓａｒ，１．０２  Ｇｌｙ，１．０１  Ｖａｌ，２．０５  Ｉｌｅ，０．５１  Ｔｈｒ，１．０１  Ｎｖａ，１．００  Ａｒｇ，１．０８  Ｐｒｏ。
【実施例８】
【００６９】
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｎｖａ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３
実施例３においてＦｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｉｌｅ及びＦｍｏｃ−Ｉｌｅの代わりにそれぞれＦｍｏｃ−Ｇｌｙ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ及びＦｍｏｃ−Ｄ−Ｉｌを用いて所望化合物を製造した。合成が完了したら、ペプチドを樹脂から開裂し、保護基を除去し、ジエチルエーテルで沈殿させ、濾過すると、粗ペプチドが得られた。これをＣ−１８カラムを用い、０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を５０分間で５％から１００％に漸増させる溶媒系で溶出させるＨＰＬＣにより精製した。純粋分画を凍結乾燥させると、Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｎｖａ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３がトリフルオロ酢酸塩として得られた。
Ｒｔ＝３．６２分（０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を３０分間で１０％から４０％）；
ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ＝９９４（Ｍ＋Ｈ）＋；
アミノ酸分析：１．０３  Ｓａｒ，１．０３  Ｇｌｙ，０．９６  Ｖａｌ，２．１２  Ｉｌｅ，０．４３  Ｔｈｒ，１．０２  Ｎｖａ，１．０２  Ａｒｇ，１．０２  Ｐｒｏ。
【実施例９】
【００７０】
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３
実施例３においてＦｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｉｌｅ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）及びＦｍｏｃ−Ｎｖａの代わりにそれぞれＦｍｏｃ−Ｇｌｙ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）及びＦｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）を用いて所望化合物を製造した。合成が完了したら、ペプチドを樹脂から開裂し、保護基を除去し、ジエチルエーテルで沈殿させ、濾過すると、粗ペプチドが得られた。これをＣ−１８カラムを用い、０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を５０分間で５％から１００％に漸増させる溶媒系で溶出させるＨＰＬＣにより精製した。純粋分画を凍結乾燥させると、Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３がトリフルオロ酢酸塩として得られた。
Ｒｔ＝３．０８９分（０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を３０分間で１０％から４０％）；
ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ＝９８２（Ｍ＋Ｈ）＋；
アミノ酸分析：０．９５  Ｓａｒ，０．９６  Ｇｌｙ，０．９９  Ｖａｌ，１．０６  ａｌｌｏＩｌｅ，０．９７  Ｉｌｅ，０．５７  Ｔｈｒ，０．３１  Ｓｅｒ，１．０２  Ａｒｇ，１．０２  Ｐｒｏ。
【実施例１０】
【００７１】
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｎｖａ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３
実施例３においてＦｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ及びＦｍｏｃ−Ｉｌｅの代わりにそれぞれＦｍｏｃ−Ｇｌｙ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）及びＦｍｏｃ−Ｄ−Ｉｌｅを用いて所望化合物を製造した。合成が完了したら、ペプチドを樹脂から開裂し、保護基を除去し、ジエチルエーテルで沈殿させ、濾過すると、粗ペプチドが得られた。これをＣ−１８カラムを用い、０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を５０分間で５％から１００％に漸増させる溶媒系で溶出させるＨＰＬＣにより精製した。純粋分画を凍結乾燥させると、Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｎｖａ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３がトリフルオロ酢酸塩として得られた。
Ｒｔ＝２．８９分（０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を３０分間で１０％から４０％）；
ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ＝１０２３（Ｍ＋Ｈ）＋；
アミノ酸分析：１．００  Ｓａｒ，０．９７  Ｇｌｙ，０．９３  Ｇｌｕ，２．１５  Ｉｌｅ，０．５７  Ｔｈｒ，１．０２  Ｎｖａ，１．１１  Ａｒｇ，１．１０  Ｐｒｏ。
【実施例１１】
【００７２】
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｎｖａ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３
実施例３においてＦｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ及びＦｍｏｃ−Ｉｌｅの代わりにそれぞれＦｍｏｃ−Ｇｌｙ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）及びＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｃ）を用いて所望化合物を製造した。合成が完了したら、ペプチドを樹脂から開裂し、保護基を除去し、ジエチルエーテルで沈殿させ、濾過すると、粗ペプチドが得られた。これをＣ−１８カラムを用い、０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を５０分間で５％から１００％に漸増させる溶媒系で溶出させるＨＰＬＣにより精製した。純粋分画を凍結乾燥させると、Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｎｖａ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３がトリフルオロ酢酸塩として得られた。
Ｒｔ＝４．５８分（０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を３０分間で１０％から４０％）；
ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ＝１０６６（Ｍ＋Ｈ）＋；
アミノ酸分析：０．９８  Ｓａｒ，０．９６  Ｇｌｙ，０．９２  Ａｓｐ，１．０１  Ｉｌｅ，０．５２  Ｔｈｒ，１．０４  Ｎｖａ，１．０３  Ｌｙｓ，０．９５  Ａｒｇ，１．０６  Ｐｒｏ。
【実施例１２】
【００７３】
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅ−Ｔｙｒ−Ｎｖａ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３
実施例３においてＦｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｉｌｅ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）及びＦｍｏｃ−Ｉｌｅの代わりにそれぞれＦｍｏｃ−Ｇｌｙ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）、Ｆｍｏｃ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）及びＦｍｏｃ−Ｄ−Ｉｌｅを用いて所望化合物を製造した。合成が完了したら、ペプチドを樹脂から開裂し、保護基を除去し、ジエチルエーテルで沈殿させ、濾過すると、粗ペプチドが得られた。これをＣ−１８カラムを用い、０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を５０分間で５％から１００％に漸増させる溶媒系で溶出させるＨＰＬＣにより精製した。純粋分画を凍結乾燥させると、Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅ−Ｔｙｒ−Ｎｖａ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３がトリフルオロ酢酸塩として得られた。
Ｒｔ＝３．３５７分（０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を３０分間で１０％から４０％）；
ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ＝１０８５（Ｍ＋Ｈ）＋；
アミノ酸分析：０．９３  Ｓａｒ，０．９７  Ｇｌｙ，０．９９  Ｇｌｕ，２．０７  Ｉｌｅ，０．９３  Ｔｙｒ，１．０１  Ｎｖａ，０．９７  Ａｒｇ，１．００  Ｐｒｏ。
【実施例１３】
【００７４】
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅ−Ｔｈｒ−Ｎｖａ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｄ−ＡｌａＮＨ２
実施例１においてＦｍｏｃ−Ｄ−Ｉｌｅの代わりにＦｍｏｃ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅを用いて所望化合物を製造した。合成が完了したら、ペプチドを樹脂から開裂し、保護基を除去し、ジエチルエーテルで沈殿させ、濾過すると、粗ペプチドが得られた。これをＣ−１８カラムを用い、０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を５０分間で５％から１００％に漸増させる溶媒系で溶出させるＨＰＬＣにより精製した。純粋分画を凍結乾燥させると、Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅ−Ｔｈｒ−Ｎｖａ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｄ−ＡｌａＮＨ２がトリフルオロ酢酸塩として得られた。
Ｒｔ＝２．３８分（０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を３０分間で１０％から４０％）；
ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ＝１０６６（Ｍ＋Ｈ）＋；
アミノ酸分析：０．９９  Ｓａｒ，１．００  Ｇｌｙ，０．８３  Ｇｌｕ，２．０３  Ｉｌｅ，０．４７  Ｔｈｒ，１．０２  Ｎｖａ，１．０５  Ａｒｇ，１．０３  Ｐｒｏ，１．０３  Ａｌａ。
【実施例１４】
【００７５】
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３
実施例３においてＦｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｉｌｅ及びＦｍｏｃ−Ｎｖａの代わりにそれぞれＦｍｏｃ−Ｇｌｙ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｉｌｅ及びＦｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）を用いて所望化合物を製造した。合成が完了したら、ペプチドを樹脂から開裂し、保護基を除去し、ジエチルエーテルで沈殿させ、濾過すると、粗ペプチドが得られた。これをＣ−１８カラムを用い、０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を５０分間で５％から１００％に漸増させる溶媒系で溶出させるＨＰＬＣにより精製した。純粋分画を凍結乾燥させると、Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３がトリフルオロ酢酸塩として得られた。
Ｒｔ＝２．３７５分（０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を３０分間で１０％から４０％）；
ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ＝９９７（Ｍ＋Ｈ）＋；
アミノ酸分析：０．９３  Ｓａｒ，０．９８  Ｇｌｙ，０．９６  Ａｓｐ，１．０３  Ｌｅｕ，０．５４  Ｔｈｒ，０．２１  Ｓｅｒ，０．９７  Ｉｌｅ，１．０１  Ａｒｇ，１．０６  Ｐｒｏ。
【実施例１５】
【００７６】
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｉｌｅ−ａｌｌｏＴｈｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３
実施例３においてＦｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）及びＦｍｏｃ−Ｎｖａの代わりにそれぞれＦｍｏｃ−Ｇｌｙ、Ｆｍｏｃ−ａｌｌｏＴｈｒ（ｔ−Ｂｕ）及びＦｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）を用いて所望化合物を製造した。合成が完了したら、ペプチドを樹脂から開裂し、保護基を除去し、ジエチルエーテルで沈殿させ、濾過すると、粗ペプチドが得られた。これをＣ−１８カラムを用い、０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を５０分間で５％から１００％に漸増させる溶媒系で溶出させるＨＰＬＣにより精製した。純粋分画を凍結乾燥させると、Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｉｌｅ−ａｌｌｏＴｈｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３がトリフルオロ酢酸塩として得られた。
Ｒｔ＝３．１０４分（０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を３０分間で１０％から４０％）；
ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ＝９８２（Ｍ＋Ｈ）＋；
アミノ酸分析：０．９７  Ｓａｒ，１．００  Ｇｌｙ，０．７１  Ｖａｌ，１．６４  Ｉｌｅ，０．５４  Ｔｈｒ，０．２０  Ｓｅｒ，１．０８  Ａｒｇ，１．０２  Ｐｒｏ。
【実施例１６】
【００７７】
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｄ−Ｉｌｅ−ａｌｌｏＴｈｒ−Ｎｖａ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３
実施例３においてＦｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ及びＦｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）の代わりにそれぞれＦｍｏｃ−Ｇｌｙ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）及びＦｍｏｃ−ａｌｌｏＴｈｒ（ｔ−Ｂｕ）を用いて所望化合物を製造した。合成が完了したら、ペプチドを樹脂から開裂し、保護基を除去し、ジエチルエーテルで沈殿させ、濾過すると、粗ペプチドが得られた。これをＣ−１８カラムを用い、０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を５０分間で５％から１００％に漸増させる溶媒系で溶出させるＨＰＬＣにより精製した。純粋分画を凍結乾燥させると、Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｄ−Ｉｌｅ−ａｌｌｏＴｈｒ−Ｎｖａ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３がトリフルオロ酢酸塩として得られた。
Ｒｔ＝２．８３５分（０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を３０分間で１０％から４０％）；
ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ＝１０２３（Ｍ＋Ｈ）＋；
アミノ酸分析：０．９８  Ｓａｒ，０．９９  Ｇｌｙ，１．０５  Ｇｌｕ，１．９３  Ｉｌｅ，０．６４  Ｔｈｒ，０．９２  Ｎｖａ，１．１２  Ａｒｇ，１．１２  Ｐｒｏ。
【実施例１７】
【００７８】
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｉｌｅ−ａｌｌｏＴｈｒ−Ｎｖａ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３
実施例３においてＦｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）及びＦｍｏｃ−Ｉｌｅの代わりにそれぞれＦｍｏｃ−Ｇｌｙ、Ｆｍｏｃ−ａｌｌｏＴｈｒ（ｔ−Ｂｕ）及びＦｍｏｃ−Ｐｒｏを用いて所望化合物を製造した。合成が完了したら、ペプチドを樹脂から開裂し、保護基を除去し、ジエチルエーテルで沈殿させ、濾過すると、粗ペプチドが得られた。これをＣ−１８カラムを用い、０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を５０分間で５％から１００％に漸増させる溶媒系で溶出させるＨＰＬＣにより精製した。純粋分画を凍結乾燥させると、Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｉｌｅ−ａｌｌｏＴｈｒ−Ｎｖａ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３がトリフルオロ酢酸塩として得られた。
Ｒｔ＝３．１４９分（０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を３０分間で１０％から４０％）；
ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ＝９７８（Ｍ＋Ｈ）＋；
アミノ酸分析：０．９０  Ｓａｒ，０．９９  Ｇｌｙ，１．０３  Ｇｌｕ，０．８９  Ｉｌｅ，０．５９  Ｔｈｒ，０．８５  Ｎｖａ，１．１６  Ａｒｇ，２．１４  Ｐｒｏ。
【実施例１８】
【００７９】
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３
実施例３においてＦｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｉｌｅ及びＦｍｏｃ−Ｎｖａの代わりにそれぞれＦｍｏｃ−Ｇｌｙ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅ及びＦｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）を用いて所望化合物を製造した。合成が完了したら、ペプチドを樹脂から開裂し、保護基を除去し、ジエチルエーテルで沈殿させ、濾過すると、粗ペプチドが得られた。これをＣ−１８カラムを用い、０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を５０分間で５％から１００％に漸増させる溶媒系で溶出させるＨＰＬＣにより精製した。純粋分画を凍結乾燥させると、Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３がトリフルオロ酢酸塩として得られた。
Ｒｔ＝４．２０３分（０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を３０分間で１０％から４０％）；
ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ＝１０８１（Ｍ＋Ｈ）＋；
アミノ酸分析：０．９１  Ｓａｒ，０．９６  Ｇｌｙ，０．９９  Ｖａｌ，１．０４  ａｌｌｏＩｌｅ，０．６１  Ｔｈｒ，０．２１  Ｔｒｐ，１．０３  Ａｒｇ，１．０３  Ｐｒｏ。
【実施例１９】
【００８０】
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ（ＣＨ３）２
（樹脂の製造）
４−（４−ホルミル−３−メトキシフェノキシ）ブチリルＡＭ樹脂（０．５ｇ，０．５４ミリモル／ｇ置換）を９：１  ＤＭＡ／酢酸（４ｍｌ）を収容している固相合成反応容器に入れた。混合物を５分間振盪し、樹脂を脱水し、このプロセスを３回繰り返した。膨潤させた樹脂を活性化４Åモレシュラーシーブ（１０〜１５ｇ）、９：１  ＤＭＡ／酢酸（４ｍｌ）及びイソプロピルアミン（１０当量）で処理した。生じたスラリーを室温で１時間振盪させ、トリアセトキシホウ水素化ナトリウム（１０当量）で処理し、２時間振盪した。樹脂を脱水し、ＤＭＡで３回、メタノールで３回、ジクロロメタンで３回、ジエチルエーテルで３回洗浄し、真空中で１６時間乾燥した。乾燥樹脂をＤＭＡ（４ｍｌ）で処理し、５分間振盪し、このプロセスを２回繰り返した。
【００８１】
（Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏのカップリング）
上記樹脂をＤＭＡ（４ｍｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（１当量）、ＤＭＡ中Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ（３当量）、ＨＡＴＵ（３当量）及びジイソプロピルエチルアミン（３当量）で順次処理し、１６時間振盪した。樹脂を脱水し、ＤＭＡで３回、メタノールで３回、ジクロロメタンで３回、ジエチルエーテルで３回洗浄し、真空中で１６時間乾燥した。樹脂をＤＭＡ（４ｍｌ）で処理し、５分間振盪し、このプロセスを３回繰り返した。８：１：１  ＤＭＡ／ピリジン／無水酢酸溶液（５ｍｌ）を添加し、生じた混合物を１時間振盪した。樹脂を脱水し、ＤＭＡで３回、メタノールで３回、ジクロロメタンで３回、ジエチルエーテルで３回洗浄した。樹脂を真空中で室温で１６時間乾燥した。
【００８２】
（ペプチドの合成）
実施例３においてＦｍｏｃ−Ｐｒｏ−Ｓｉｅｂｅｒエチルアミド樹脂、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｉｌｅ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）及びＦｍｏｃ−Ｎｖａの代わりにそれぞれ上記樹脂、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）及びＦｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）を用いて所望化合物を製造した。合成が完了したら、ペプチド及び保護基を９５：５  ＴＦＡ／アニソール（３ｍｌ）を用いて３時間かけて開裂させた。樹脂を濾過し、メタノールで３回洗浄し、濃縮した。残渣をジエチルエーテルで処理し、生じた固体を濾過すると、粗ペプチドが得られた。これをＣ−１８カラムを用い、０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を５０分間で５％から１００％に漸増させる溶媒系で溶出させるＨＰＬＣにより精製した。純粋分画を凍結乾燥させると、Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ（ＣＨ３）２がトリフルオロ酢酸塩として得られた。
Ｒｔ＝２．８８分（０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を３０分間で１０％から４０％）；
ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ＝９８２（Ｍ＋Ｈ）＋；
アミノ酸分析：１．０３  Ｓａｒ，０．９７  Ｇｌｙ，０．９９  Ｖａｌ，２．０４  Ｉｌｅ，０．７８  Ｓｅｒ，１．００  Ａｒｇ，１．０６  Ｐｒｏ。
【実施例２０】
【００８３】
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｇｌｎ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３
実施例３においてＦｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）、Ｆｍｏｃ−Ｎｖａ及びＦｍｏｃ−Ｉｌｅの代わりにそれぞれＦｍｏｃ−Ｇｌｙ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）及びＦｍｏｃ−Ｄ−Ｉｌｅを用いて所望化合物を製造した。合成が完了したら、ペプチドを樹脂から開裂し、保護基を除去し、ジエチルエーテルで沈殿させ、濾過すると、粗ペプチドが得られた。これをＣ−１８カラムを用い、０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を５０分間で５％から１００％に漸増させる溶媒系で溶出させるＨＰＬＣにより精製した。純粋分画を凍結乾燥させると、Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｇｌｎ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３がトリフルオロ酢酸塩として得られた。
Ｒｔ＝３．０１分（０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を３０分間で１０％から４０％）；
ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ＝１０２３（Ｍ＋Ｈ）＋；
アミノ酸分析：１．００  Ｓａｒ，１．０２  Ｇｌｙ，１．０３  Ｖａｌ，２．１１  Ｉｌｅ，０．４９  Ｔｈｒ，０．９２  Ｇｌｕ，０．９３  Ａｒｇ，１．０４  Ｐｒｏ。
【実施例２１】
【００８４】
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３
実施例３においてＦｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｉｌｅ、Ｆｍｏｃ−Ｎｖａ及びＦｍｏｃ−Ｉｌｅの代わりにそれぞれＦｍｏｃ−Ｇｌｙ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）及びＦｍｏｃ−Ｄ−Ｉｌｅを用いて所望化合物を製造した。合成が完了したら、ペプチドを樹脂から開裂し、保護基を除去し、ジエチルエーテルで沈殿させ、濾過すると、粗ペプチドが得られた。これをＣ−１８カラムを用い、０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を５０分間で５％から１００％に漸増させる溶媒系で溶出させるＨＰＬＣにより精製した。純粋分画を凍結乾燥させると、Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３がトリフルオロ酢酸塩として得られた。
Ｒｔ＝４．４４分（０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を３０分間で１０％から４０％）；
ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ＝１０８１（Ｍ＋Ｈ）＋；
アミノ酸分析：１．０５  Ｓａｒ，０．９７  Ｇｌｙ，０．９６  Ｖａｌ，２．０５  Ｉｌｅ，０．５１  Ｔｈｒ，０．２８  Ｔｒｐ，１．０７  Ａｒｇ，１．０９  Ｐｒｏ。
【実施例２２】
【００８５】
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅ−Ｔｈｒ−Ｎｖａ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３
実施例３においてＦｍｏｃ−Ｐｒｏ−Ｓｉｅｂｅｒエチルアミド樹脂、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）及びＦｍｏｃ−Ｄ−Ｉｌｅの代わりにＦｍｏｃ−Ｄ−Ｐｒｏ−Ｓｉｅｂｅｒエチルアミド樹脂、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ及びＦｍｏｃ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅを用いて所望化合物を製造した。合成が完了したら、ペプチドを樹脂から開裂し、保護基を除去し、ジエチルエーテルで沈殿させ、濾過すると、粗ペプチドが得られた。これをＣ−１８カラムを用い、０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を５０分間で５％から１００％に漸増させる溶媒系で溶出させるＨＰＬＣにより精製した。純粋分画を凍結乾燥させると、Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅ−Ｔｈｒ−Ｎｖａ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３がトリフルオロ酢酸塩として得られた。
Ｒｔ＝３．５２分（０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を３０分間で１０％から４０％）；
ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ＝９９４（Ｍ＋Ｈ）＋；
アミノ酸分析：１．００  Ｓａｒ，１．０２  Ｇｌｙ，１．０１  Ｖａｌ，２．１０  Ｉｌｅ，０．５５  Ｔｈｒ，０．９９  Ｎｖａ，０．９２  Ａｒｇ，１．０１  Ｐｒｏ。
【実施例２３】
【００８６】
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｍｅｔ−Ｎｖａ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｄ−ＡｌａＮＨ２
実施例１においてＦｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）及びＦｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）の代わりにそれぞれＦｍｏｃ−Ｖａｌ及びＦｍｏｃ−Ｍｅｔを用いて所望化合物を製造した。合成が完了したら、ペプチドを樹脂から開裂し、保護基を除去し、ジエチルエーテルで沈殿させ、濾過すると、粗ペプチドが得られた。これをＣ−１８カラムを用い、０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を５０分間で５％から１００％に漸増させる溶媒系で溶出させるＨＰＬＣにより精製した。純粋分画を凍結乾燥させると、Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｍｅｔ−Ｎｖａ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｄ−ＡｌａＮＨ２がトリフルオロ酢酸塩として得られた。
Ｒｔ＝４．０５分（０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を３０分間で１０％から４０％）；
ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ＝１０６７（Ｍ＋Ｈ）＋；
アミノ酸分析：０．９２  Ｓａｒ，０．９６  Ｇｌｙ，１．０３  Ｖａｌ，２．０５  Ｉｌｅ，０．９１  Ｍｅｔ，１．０５  Ｎｖａ，１．０３  Ａｒｇ，１．０２  Ｐｒｏ。
【実施例２４】
【００８７】
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｉｌｅ−ａｌｌｏＴｈｒ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３
実施例３においてＦｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）及びＦｍｏｃ−Ｎｖａの代わりにそれぞれＦｍｏｃ−Ｇｌｙ、Ｆｍｏｃ−ａｌｌｏＴｈｒ（ｔ−Ｂｕ）及びＦｍｏｃ−Ｐｒｏを用いて所望化合物を製造した。合成が完了したら、ペプチドを樹脂から開裂し、保護基を除去し、ジエチルエーテルで沈殿させ、濾過すると、粗ペプチドが得られた。これをＣ−１８カラムを用い、０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を５０分間で５％から１００％に漸増させる溶媒系で溶出させるＨＰＬＣにより精製した。純粋分画を凍結乾燥させると、Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｉｌｅ−ａｌｌｏＴｈｒ−Ｎｖａ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３がトリフルオロ酢酸塩として得られた。
Ｒｔ＝３．５５１分（０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を３０分間で１０％から４０％）；
ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ＝９９２（Ｍ＋Ｈ）＋；
アミノ酸分析：０．９５  Ｓａｒ，０．９７  Ｇｌｙ，０．９９  Ｖａｌ，１．９６  Ｉｌｅ，０．９７  Ａｒｇ，２．０８  Ｐｒｏ。
【実施例２５】
【００８８】
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅ−ａｌｌｏＴｈｒ−Ｇｌｎ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３
実施例３においてＦｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｉｌｅ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）及びＦｍｏｃ−Ｎｖａの代わりにそれぞれＦｍｏｃ−Ｇｌｙ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅ、Ｆｍｏｃ−ａｌｌｏＴｈｒ（ｔ−Ｂｕ）及びＦｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）を用いて所望化合物を製造した。合成が完了したら、ペプチドを樹脂から開裂し、保護基を除去し、ジエチルエーテルで沈殿させ、濾過すると、粗ペプチドが得られた。これをＣ−１８カラムを用い、０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を５０分間で５％から１００％に漸増させる溶媒系で溶出させるＨＰＬＣにより精製した。純粋分画を凍結乾燥させると、Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅ−ａｌｌｏＴｈｒ−Ｇｌｎ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ２ＣＨ３がトリフルオロ酢酸塩として得られた。
Ｒｔ＝３．０８分（０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を３０分間で１０％から４０％）；
ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ＝１０２３（Ｍ＋Ｈ）＋；
アミノ酸分析：０．９５  Ｓａｒ，０．９１  Ｇｌｙ，１．００  Ｖａｌ，２．０２  Ｉｌｅ，０．９８  Ｇｌｕ，１．０１  Ａｒｇ，１．０５  Ｐｒｏ。
【実施例２６】
【００８９】
Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｄ−ＡｌａＮＨ２
実施例１においてＦｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｉｌｅ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）及びＦｍｏｃ−Ｎｖａの代わりそれぞれＦｍｏｃ−Ｖａｌ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）及びＦｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）を用いて所望化合物を製造した。合成が完了したら、ペプチドを樹脂から開裂し、保護基を除去し、ジエチルエーテルで沈殿させ、濾過すると、粗ペプチドが得られた。これをＣ−１８カラムを用い、０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を５０分間で５％から１００％に漸増させる溶媒系で溶出させるＨＰＬＣにより精製した。純粋分画を凍結乾燥させると、Ｎ−Ａｃ−Ｓａｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｄ−ａｌｌｏＩｌｅ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｄ−ＡｌａＮＨ２がトリフルオロ酢酸塩として得られた。
Ｒｔ＝２．８０分（０．０１％  ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル濃度を３０分間で１０％から４０％）；
ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ＝１０１１（Ｍ＋Ｈ）＋；
アミノ酸分析：１．０４  Ｓａｒ，０．９９  Ｇｌｙ，０．９２  Ｖａｌ，１．０１  ａｌｌｏＩｌｅ，０．４４  Ｓｅｒ，０．９５  Ａｒｇ，１．０５  Ｐｒｏ。
【国際調査報告】
2005510452.tif 000005