【手続補正書】
【提出日】令和2年11月2日(2020.11.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
1%〜20%の低分子量デキストラン及び化学的に定義された細胞培養培地を含む、造血幹細胞(HSC)の集団のプロセシングにおいて使用するための組成物であって、該組成物は、
(a)ウシ胎仔血清及び動物由来の脂質を含まず、かつ
(b)細胞生存度を改善し、かつプロセシングの間中HSCの細胞溶解を低下し、かつ
プロセシングは、該組成物中、該集団を凍結保存すること、解凍すること、及び培養することを含む、前記組成物。
【請求項２】
前記低分子量デキストランが、デキストラン-1、デキストラン-10、デキストラン-20、デキストラン-30、及びデキストラン-40からなる群より選択される、請求項1記載の組成物。
【請求項３】
1%〜10%の低分子量デキストランを含む、請求項1又は2記載の組成物。
【請求項４】
1%〜5%のHSAを含む、請求項1〜3のいずれか一項記載の組成物。
【請求項５】
前記化学的に定義された細胞培養培地が、イスコフ改変ダルベッコ培地(IMDM)、ダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)、ロズウェルパーク記念研究所培地(RPMI)1640培地、マッコイ5A培地、最小必須培地α培地(α-MEM)、基礎培地イーグル(BME)、フィッシャー培地、培地199、及びF-12K栄養混合物培地(Kaighn改変、F-12K)からなる群より選択される、請求項1〜4のいずれか一項記載の組成物。
【請求項６】
前記化学的に定義された培養培地が、flt3-リガンド(FLT3);トロンボポイエチン(TPO)、幹細胞因子(SCF)、上皮細胞増殖因子(EGF)、トランスフォーミング増殖因子-β(TGF-β)、塩基性線維芽細胞増殖因子(bFGF)、インターロイキン-3(IL3)、インターロイキン-6(IL6)、及びインターロイキン-9(IL9)からなる群より選択される1つ以上の増殖因子又はサイトカインを含む、請求項1〜5のいずれか一項記載の組成物。
【請求項７】
HSCを含む細胞の集団をさらに含む、請求項1〜6のいずれか一項記載の組成物。
【請求項８】
前記細胞の集団が、骨髄細胞(BMC)、臍帯血細胞(UCBC)、胎盤血細胞、動員末梢血細胞(mPBC)、及びCD34+細胞からなる群より選択される、請求項7記載の組成物。
【請求項９】
前記細胞の集団が、単離された造血幹細胞(HSC)、及びCD34+細胞のうちの少なくとも1つを含む、請求項7又は8記載の組成物。
【請求項１０】
造血幹細胞(HSC)の集団をプロセシングするための方法であって、該方法は、HSCを含む細胞集団を、1%〜20%の低分子量デキストラン及び化学的に定義された細胞培養培地を含む組成物と接触させることを含み、該組成物は、
(a)ウシ胎仔血清及び動物由来の脂質を含まず、かつ
(b)細胞生存度を改善し、かつプロセシングの間中HSCの細胞溶解を低下し、かつ
プロセシングは、該組成物中、該HSCの集団を凍結保存すること、解凍すること、及び培養することを含む、前記方法。
【請求項１１】
前記低分子量デキストランが、デキストラン-1、デキストラン-10、デキストラン-20、デキストラン-30、及びデキストラン-40からなる群より選択される、請求項10記載の方法。
【請求項１２】
前記培養培地が、1%〜5%のHSAをさらに含む、請求項10又は11記載の方法。
【請求項１３】
前記細胞集団が、凍結保存された細胞を含み、かつ前記方法が、前記培養培地中で該凍結保存された細胞を解凍することをさらに含む、請求項10〜12のいずれか一項記載の方法。
【請求項１４】
前記細胞集団が、前記細胞の集団を前記培養培地と接触させる前に、解凍された凍結保存された細胞を含む、請求項10〜13のいずれか一項記載の方法。
【請求項１５】
(a)前記接触させた細胞集団の細胞溶解が、前記培養培地と接触させていない細胞集団の細胞溶解と比較して、10%、20%、30%、40%又は50%低下する；
(b)前記細胞集団が造血細胞集団を含み、前記培養培地と接触させた該造血細胞集団からのTNCの回収が、前記培養培地と接触させていない造血細胞集団からのTNCの回収と比較して、10%、20%、30%、又は50%増大する；又は
(c)前記細胞集団が造血細胞集団を含み、該造血細胞集団がCD34+細胞の精製された集団であり、前記培養培地と接触させたCD34+細胞の該集団の生存度が、前記培養培地と接触させていない細胞集団のCD34+細胞生存度と比較して、10%、20%、30%、40%又は50%増大する、請求項10〜14のいずれか一項記載の方法。
【請求項１６】
前記細胞集団と、cAMPアナログ又はエンハンサー、Gα-s活性化因子、及びプロスタグランジン経路アゴニストからなる群より選択される少なくとも1つの作用剤とを生体外で接触させることにより、前記細胞を調節することをさらに含む、請求項10〜15のいずれか一項記載の方法。
【請求項１７】
前記プロスタグランジン経路アゴニストが
(a)選択的にPGE2 EP2又はPGE2 EP4受容体に結合する；
(b)PGE2、又はPGE2アナログもしくは誘導体である；
(c)PGE2、16,16-dmPGE2、15(S)-15-メチルPGE2、20-エチルPGE2、及び8-イソ-16-シクロヘキシル-テトラノルPGE2からなる群より選択される；又は
(d)16,16-dmPGE2である、請求項16記載の方法。
【請求項１８】
前記細胞集団を、前記少なくとも1つの作用剤と1時間〜24時間の間接触させる、請求項16又は17記載の方法。
【請求項１９】
前記細胞集団を、前記少なくとも1つの作用剤と25℃〜37℃の温度で接触させる、請求項16〜18のいずれか一項記載の方法。
【請求項２０】
前記細胞集団が、造血細胞を含み、かつ該造血細胞を10μMの16,16-dmPGE2と37℃で、2時間接触させることを含む、請求項10〜19のいずれか一項記載の方法。
【請求項２１】
25℃〜37℃の温度で1〜24時間、少なくとも1つのプロスタグランジン経路アゴニストにより調節している間に、解凍された全臍帯血サンプル中で少なくとも70%のTNCを維持するように機能する、請求項1から9のいずれか一項記載の組成物。
【請求項２２】
前記少なくとも1つの作用剤が、
(a)cAMPアナログ又はエンハンサー、Gα-s活性化因子、及びプロスタグランジン経路アゴニスト；
(b)選択的にPGE2 EP2又はPGE2 EP4受容体に結合する作用剤；
(c)PGE2、又はPGE2アナログもしくは誘導体を含む作用剤；
(d)PGE2、16,16-dmPGE2、15(S)-15-メチルPGE2、20-エチルPGE2、及び8-イソ-16-シクロヘキシル-テトラノルPGE2からなる群より選択される作用剤；又は
(e)16,16-dmPGE2を含む作用剤である、請求項21記載の組成物。
【請求項２３】
前記サンプルを、前記少なくとも1つの作用剤と、1時間〜24時間の間接触させる、請求項21又は22記載の組成物。
【請求項２４】
前記サンプルを、前記少なくとも1つの作用剤と25℃〜37℃の温度で接触させる、請求項21〜23のいずれか一項記載の組成物。
【請求項２５】
前記化学的に定義された細胞培養培地が、イスコフ改変ダルベッコ培地(IMDM)、ウシ血清アルブミン、インスリン、トランスフェリン、及びビタミン類を含む、請求項1記載の組成物。
【請求項２６】
前記培養培地が、無水塩化カルシウム；硫酸銅；硝酸第二鉄；硫酸第二鉄；塩化カリウム；塩化マグネシウム；硫酸マグネシウム；塩化ナトリウム；炭酸水素ナトリウム；第一リン酸ナトリウム；第二リン酸ナトリウム；硫酸亜鉛；D-グルコース(デキストロース)；フェノールレッド；4-(2-ヒドロキシエチル)-1-ピペラジンエタンスルホン酸(HEPES)；ヒポキサンチンナトリウム；リノール酸；DL-68-チオクト酸；プトレシンナトリウム；プトレシン8亜セレン酸ナトリウム；ピルビン酸ナトリウム；アラニン；アルギニン；アスパラギン；アスパラギン酸；システイン；システイン；グルタミン酸；グルタミン；グリシン；ヒスチジン；イソロイシン；ロイシン；リジン；メチオニン；フェニルアラニン；プロリン；セリン；トレオニン；トリプトファン；チロシン；バリン；ビオチン；D-パントテン酸カルシウム；塩化コリン；葉酸；i-イノシトール；ナイアシンアミド；ピリドキシン；リボフラビン；チアミン；チミジン；及びビタミンB12をさらに含む、請求項1記載の組成物。
【請求項２７】
前記培養培地が、無水塩化カルシウム；硫酸銅CuSO4 5H2O；0.0751mg/L 硝酸第二鉄9H2O；0.0209mg/L 硫酸第二鉄(FeSO4 7H2O);306.969 mg/L 塩化カリウム；14.418mg/L 塩化マグネシウム；63.237mg/L 硫酸マグネシウム；5021.73mg/L 塩化ナトリウム；1100mg/L 炭酸水素ナトリウム；93.964mg/L 第一リン酸ナトリウム；35.753mg/L 第二リン酸ナトリウム(Na2HPO4 7H2O)；0.217mg/L 硫酸亜鉛(ZnSO4 7H2O)；3836.3mg/L D-グルコース(デキストロース)；8.127mg/L フェノールレッド；3099.505mg/L HEPES；1.203mg/L ヒポキサンチンNa；0.0211mg/L リノール酸；0.0528mg/L DL-68-チオクト酸；0.0407mg/L プトレシンナトリウム2HCl；2.5×10-6mg/L プトレシン8亜セレン酸ナトリウム；40.1885mg/L ピルビン酸ナトリウム；3.24mg/L アラニン；116.255mg/L アルギニンHCl；4.19mg/L アスパラギン；3.347mg/L アスパラギン酸；9.445mg/L システインH2O；15.752mg/L システイン2HCl；3.7mg/L グルタミン酸；293.55mg/L グルタミン；24.439mg/L グリシン；36.847mg/L ヒスチジンHCl H2O；79.921mg/L イソロイシン；82.227mg/L ロイシン；118.937mg/L リジンHCl；23.679mg/L メチオニン；50.861mg/L フェニルアラニン；12.564mg/L プロリン；34.214mg/L セリン；74.408mg/L トレオニン；12.54mg/L トリプトファン；64.086mg/L チロシン2Na+2H2O；73.606mg/L バリン；0.00176mg/L ビオチン；3.127mg/L D-パントテン酸カルシウム；6.52mg/L 塩化コリン；3.334mg/L 葉酸；9.904mg/L i-イノシトール；3.079mg/L ナイアシンアミド；3.022mg/L ピリドキシンHCl；0.31mg/L リボフラビン；3.092mg/L チアミンHCl；0.183mg/L チミジン；及び0.512mg/L ビタミンB12をさらに含む、請求項1記載の組成物。