(57)【要約】  本発明は、機械的損傷、例えば血管新成術後の過増殖性血管疾患を防止する血管内埋め込み体（インプラント）用治療用コーティングに関する。このコーティングは治療有効量のカルシウム非依存細胞経路に作用する第１の医薬、および治療有効量のカルシウム依存細胞経路に作用する第２の医薬を含む。例示的一実施の形態では、第１の医薬はラパマイシンであり、第２の医薬はサイクロスポリンＡである。これらの医薬はポリマー剤中に導入することができ、埋め込み体に直接提供することもできるし、埋め込み体上に置かれるプライマー層の頂部に適用することもできる。所望により、トップコートを治療用コーティングに適用することもできる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
血管内埋め込み体用コーティングであって、
治療有効量の、カルシウム非依存細胞経路に作用する第１の医薬、および
治療有効量の、カルシウム依存細胞経路に作用する第２の医薬、
を備え、
該第１のおよび第２の医薬の結合量により過増殖性血管疾患が治療または抑制されることを特徴とするコーティング。
【請求項２】
前記第１の医薬はマクロライド免疫抑制剤であることを特徴とする請求項１に記載のコーティング。
【請求項３】
前記第１の医薬はラパマイシンことを特徴とする請求項２に記載のコーティング。
【請求項４】
前記第２の医薬はＩＬ−２転写阻害剤であることを特徴とする請求項１に記載のコーティング。
【請求項５】
前記第２の医薬はサイクロスポリンＡであることを特徴とする請求項４に記載のコーティング。
【請求項６】
前記第１の医薬はラパマイシンであること、および前記第２の医薬はサイクロスポリンＡであることを特徴とする請求項１に記載のコーティング。
【請求項７】
前記コーティングはラパマイシンの量がサイクロスポリンＡの量よりも多いことを特徴とする請求項１に記載のコーティング。
【請求項８】
ラパマイシンのサイクロスポリンＡに対する比は少なくとも約０．５１であることを特徴とする請求項７に記載のコーティング。
【請求項９】
前記血管内埋め込み体はバルーンカテーテル、ステント、ステント移植片、医薬送達カテーテル、アテローム切除装置、フィルター、足場装置、吻合クリップ、吻合ブリッジおよび縫合材料よりなる群から選ばれることを特徴とする請求項１に記載のコーティング。
【請求項１０】
前記コーティングはポリマーマトリックスを含むことを特徴とする請求項１に記載のコーティング。
【請求項１１】
前記ポリマーマトリックスは再吸収可能なポリマーを含むことを特徴とする請求項１に記載のコーティング。
【請求項１２】
前記血管内埋め込み体は前記コーティングがその上に適用されるプライマー層を備えることを特徴とする請求項１に記載のコーティング。
【請求項１３】
前記プライマー層は再吸収可能なポリマーからなることを特徴とする請求項１２に記載のコーティング。
【請求項１４】
前記プライマー層は生体安定性ポリマーからなることを特徴とする請求項１２に記載のコーティング。
【請求項１５】
前記コーティングにトップコートが適用されていることを特徴とする請求項１に記載のコーティング。
【請求項１６】
前記トップコートは再吸収可能なポリマーからなることを特徴とする請求項１５に記載のコーティング。
【請求項１７】
血管内埋め込み体用コーティングであって、
治療有効量のラパマイシン、および
治療有効量のサイクロスポリンＡ
を含み、
ラパマイシンとサイクロスポリンＡの結合量により過増殖性血管疾患が治療または抑制されることを特徴とするコーティング。
【請求項１８】
さらに再吸収可能なポリマーマトリックスを含み、該再吸収可能なポリマーマトリックス内にラパマイシンとサイクロスポリンＡとが分散されていることを特徴とする請求項１７に記載のコーティング。
【請求項１９】
前記再吸収可能なポリマーマトリックスはポリ−α−ヒドロキシ酸、ポリグリコール、ポリチロシンカーボネート、澱粉、ゼラチン、セルロース、並びにこれらのブレンドおよび共重合体よりなる群から選ばれることを特徴とする請求項１８に記載のコーティング。
【請求項２０】
前記再吸収可能なポリマーマトリックスはポリラクチド、ポリグリコール酸、並びにこれらのブレンドおよび共重合体よりなる群から選ばれるポリ−α−ヒドロキシ酸を含むことを特徴とする請求項１９に記載のコーティング。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は血管内埋め込み体（インプラント）用治療用コーティングに関し、特に内膜平滑筋細胞過形成、再狭窄および血管閉塞を含む過増殖血管疾患を予防または治療するコーティングに関する。
【背景技術】
【０００２】
以下に詳細に説明するように、先行技術は血管内装置に適用された治療用コーティングの多くの例を開示している。治療用コーティングを適用することの背景にある目的は埋め込みの部位における組織の応答を緩和または抑制することである。例えば、血管内の状況において、異物を埋め込んだ場合に起きる自明な結果の一つは埋め込みの部位において強い反応が起きることである。この強い反応は埋め込み自体の結果生じるか、あるいは埋め込み後に発生するストレスによって生じるかのいずれかであり得る。この反応のせいで、一般に「障害による治癒」と呼ばれる組織に関連した一群の応答を生成することでこの障害を補償する、脈管壁による自明の相互作用が起きる。治療用コーティングが緩和、抑制または軽減を図るのはこの治癒プロセスである。ある場合にはこの治癒プロセスは過剰であり、内腔全体を閉塞してしまい、血管内に血流が提供されない。この再閉塞された血管も再狭窄血管と呼ばれる。
【０００３】
治療用コーティングの挙動は種々であることができる。例えば、使用される治療用医薬の種類によって、種々の細胞レベルのメカニズムが対象なる。治療用医薬のあるものは埋め込みまたは血管侵入の部位に生成される成長因子に作用する。他の治療用医薬のあるものは組織に作用してその組織の増殖反応を抑制する。他のものは平滑筋細胞の大部分を構成するコラーゲンマトリックスに作用する。治療用コーティングに関する先行技術の若干の例を以下に紹介する。
【０００４】
グレゴリー等（Ｇｒｅｇｏｒｙ  ｅｔ  ａｌ．）に付与された米国特許第５，２８３，２５７号公報明細書に記載の発明は、内膜肥厚を抑制するのに有効な量のミコフェノール酸を投与することにより哺乳類における過増殖性血管疾患を予防または治療する方法を提供する。この医薬は血管形成術後かまたはミコフェノール酸とともに埋め込まれた血管ステントを介してかのいずれかにより送達することができる。
【０００５】
ミッチェル等（Ｍｉｔｃｈｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．）に付与された米国特許第５，２８８，７１１号公報明細書に記載の発明は、抗過増殖有効量の、ラパマイシンとヘパリンの組合せを投与することにより哺乳類における過増殖性血管疾患を予防または治療する方法を提供する。この組合せは血管形成術後かまたはこの組合せとともに埋め込まれた血管ステントを介してか、のいずれかにより送達することができる。
【０００６】
モリス等（Ｍｏｒｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．）に付与された米国特許第５，５１６，７８１号公報および同第５、６４６、１６０号公報明細書に記載の発明は、抗過増殖有効量の、ラパマイシン単独またはラパマイシンとミコフェノール酸との組合せを投与することにより哺乳類における過増殖性血管疾患を予防または治療する方法を提供する。ラパマイシンまたはラパマイシン／ミコフェノール酸の組合せは血管ステントを介して送達することができる。
【０００７】
モリス等（Ｍｏｒｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．）に付与された米国特許５，５１９，０４２号公報明細書は、哺乳類に有効量のカルボンアミドを投与することから成る、哺乳類における過増殖性血管疾患を予防または治療する方法を教示している。これも血管ステントを介して血管内送達することが可能である。
【０００８】
モリス等（Ｍｏｒｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．）に付与された米国特許第５，６４６，１６０号公報明細書に記載の発明は、抗過増殖有効量の、ラパマイシン単独またはラパマイシンとミコフェノール酸との組合せを投与することにより哺乳類における過増殖性血管疾患を予防または治療する方法を提供する。ラパマイシンまたはラパマイシン／ミコフェノール酸の組合せは、血管ステントを介して送達することができる。これは血管ステントを介して血管内送達することが可能である。
【０００９】
上記の特許はそれぞれ免疫抑制剤を利用している。１９８０年代中頃以降、低分子量の天然物、半合成、または全合成由来のものが多数新たに同定されかつ移植片拒絶反応を抑制するために開発された。これらにはミゾリビン、デオキシスペルグアリン、サイクロスポリン、ＦＫ５０６、ミコフェノール酸（およびそのミコフェノレート・モフェチルのようなプロドラッグ）、ラパマイシン、およびブレキナールナトリウムが含まれる。これらの医薬のあるもののメカニズムを以下に簡単にまとめる。
【００１０】
サイクロスポリンＡとＦＫ５０６はともに、Ｔ細胞における選択されたサイトカイン遺伝子の転写を阻害することによりＴ細胞の活性化を抑制する。それらのいずれもＢ細胞に直接作用することは知られていない。インターロイキン２（ＩＬ−２）合成の抑制はこれら２種類の医薬の特に重要な作用である。その理由は、このサイトカインはＴ細胞が最初の活性化からＤＮＡ合成まで推移するのに必要とされるからである。サイクロスポリンＡとＦＫ５０６はともに細胞質タンパク質に結合する。最近の提案によれば、サイクロスポリンＡとＦＫ５０６は２つの機能を持つ。すなわち、免疫抑制薬分子の一つのセグメントはロータマーゼに結合する能力を有し、いったん結合すると、分子の別の部分が細胞質ホスファターゼ（カルシニューリン）と相互作用し、このホスファターゼを不活性化するかまたはその特異性を変える。従前開発されたすべての免疫抑制薬および最近の生体異物とさえも異なって、ＦＫ５０６は、免疫抑制薬開発の歴史において、同種異系移植片の拒絶反応を抑制するための改良された分子を同定するために特別に設計された医薬発見プログラムの産物である唯一の化合物である。他の過去のおよび「新しい」免疫抑制剤性の生体異物医薬はことごとく抗癌、抗炎症または抗生治療用の鉛化合物を同定するように組織された医薬発見プログラムの予期せぬ結果である。
【００１１】
サイクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシンその他の免疫抑制薬のいずれも現在それらが免疫抑制薬として使用されるに至った進化的圧力の産物ではない。これらの医薬は、純粋に偶然に符合した分子の相互作用により、リンパ球の増殖を抑制する真菌代謝物（サイクロスポリンＡ）または細菌代謝物（ＦＫ５０６、ラパマイシン）である。従って、特異的な血管内の機能を行う医薬を設計する我々の能力が向上するにつれて、悪い効果の重篤度を反比例的に低下する必要がある。
【００１２】
サイクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシンおよびミコフェノール酸をより安全貸したもの並びにより高い免疫抑制の効能を持つ類似体に対する需要がある。毒性のために、これらの医薬は最大免疫抑制薬用量で使用できない。これらの医薬の毒性効果の分子的基礎についての我々の理解はそれらのＴ細胞に対する作用メカニズムとして提案されているものと比べるとはるかに明瞭さを欠いている。医薬の免疫抑制作用とその毒性効果の双方を担うそれぞれの分子レベルのメカニズムの理解を組み合わせることができるまでは合理的医薬設計を用いて医薬の効果をＴ細胞活性化の抑制のみに限定することは困難であろう。
【００１３】
比較的高薬用量の医薬の送達を困難にしている別の大きな問題は、治療ウインドウが比較的狭いことである。この治療ウインドウが比較的に狭いことと毒性とにより、これらの医薬の使用が血管内送達用の単一治療用に限定されている。
【００１４】
例えば、ラパマイシンは特定のＩＬ−２応答細胞系統のＩＬ−２誘導増殖を阻害するが、サイクロスポリンも他の医薬もこの応答を抑制することができない。ラパマイシンはＴ細胞の活性化シーケンスの後期に作用するので、ラパマイシンは、また、最近記載されているカルシウム非依存経路より不活性化されるＴ細胞を有効に阻害する。この択一的ルートにより刺激されるＴ細胞はサイクロスポリンＡおよびＦＫ５０６による抑制に非感受性であるが、ラパマイシンはＴ細胞の増殖のみを阻害する。
【００１５】
ラパマイシンの毒性プロファイルはサイクロスポリンＡとＦＫ５０６に似ている。ラパマイシンはいくつかの種では体重損失と関連しており、高薬用量のラパマイシンを用いて治療するとラットに糖尿病を引き起こすが、人を除く霊長類では引き起こさない。初期の動物実験データからラパマイシンはサイクロスポリンＡよりも腎毒性が低いことが示唆されているが、機能障害を伴う腎臓に対するラパマイシンの効果は未だ評価されていない。ラパマイシンは高度に有効な薬用量では毒性が高く、その使用法としては他の免疫抑制剤と併用することが推奨される。サイクロスポリンＡと組み合わせると単独治療と比べると、血中の治療レベルが顕著に向上する。この組み合わせをより低い薬用量にすると単独治療でより高い薬用量を用いる場合よりも有効である。ラパマイシンとサイクロスポリンＡとを組み合わせて使用すると、ラパマイシンの薬用量は９分の１に低減することができるであろうし、サイクロスポリンＡの薬用量は５分の１に低減することができるであろう。さらに、この組み合わせはまた毒性がない。事実、米国食品医薬局（Ｕ．Ｓ．ＦＤＡ）はサイクロスポリンとの併用治療の際にのみ移植と同種異系移植片の拒絶反応用にラパマイシンを使用する用法に対して認可しています。
【００１６】
要約すると、免疫抑制薬に関連する問題点としては、これら医薬の治療ウインドウ、毒性ウインドウが狭いこと、効果がないこと、薬用量に関係する毒性があることが挙げられる。これらの問題点を克服するために、２つの医薬が関与する併用治療が使用され成功を納めている。驚くべきことに、ラパマイシンとサイクロスポリンＡとを用いた併用による免疫抑制の利点により、細胞の成長と成長遅延に対して非常に相乗的なアプローチがとれることである。さらに研究した結果、人を除く霊長類における心臓移植片の拒絶反応の抑制はラパマイシンと細胞Ａとを組み合わせると特に有効であることが示されている。併用治療の免疫抑制効果はいずれかの医薬を単独で使用する治療に勝っている。この効果は、ラパマイシンの同時投与によりサイクロスポリンＡの血中濃度が上昇することによって引き起こされるものではない。ラパマイシンとサイクロスポリンＡの併用治療は腎毒性を生じない。サイクロスポリンＡとラパマイシンとが別々の作用部位をもっていること（サイクロスポリンＡはカルシウム依存経路に作用し、ラパマイシンはカルシウム非依存経路に作用する）、およびそれらの毒性が比較的に重なっていないことによりこの組み合わせを血管内で使用して、血管形成術後の血管内部の損傷部位における細胞成長を防止することが可能になる。
【００１７】
いくつかの科学および技術に関する刊行物にラパマイシンとサイクロスポリンＡの「意外にも」「相乗的な」効果が言及されている。これらの例としては以下のものが挙げられる。
【００１８】
シュールマン等は、トランスプランテーション、第６４巻、第３２〜３５頁、第１号、１９９７年７月１５日（Ｓｈｕｕｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．  ｉｎ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  Ｖｏｌ  ６４，３２−３５，Ｎｏ．１，Ｊｕｌｙ１５，１９９７）において、ＳＤＺ−ＲＡＤ、すなわちサイクロスポリンとの相乗効果を有する新規なラパマイシン誘導体を記載している。シュールマン等は、両医薬は、インビトロおよびインビボのいずれにおいても免疫抑制において相乗性を示すと結論している。これらの医薬は同種異系移植における組み合わせ治療に有望であるとされている。
【００１９】
シューラー等は、トランスプランテーション、第６４巻、第３６〜４２頁、第１号、１９９７年７月１５日（Ｓｈｕｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  ｉｎ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  Ｖｏｌ  ６４，３６−４２，Ｎｏ．１，Ｊｕｌｙ１５，１９９７）において、医薬ラパマイシンはそれ自体非常に狭い治療ウインドウを持っているので、その臨床的有効性を減じていると報告されている。シューラー等はサイクロスポリンＡと併用すると、これらの医薬は相乗的に作用すると報告している。この相乗性は、人で証明されれば、これら２種の医薬を組み合わせることにより免疫抑制投薬計画の効果を向上させる機会を提供するものであり、それぞれの副作用を緩和する期待がもてる。著者は、また、サイクロスポリンＡとラパマイシンからなる医薬の組み合わせの免疫抑制効果が向上すると、ラパマイシンのＶＳＭＣ増殖を予防する能力と相まって、長期的な移植片の受容に対する期待を増す可能性がある。
【００２０】
モリス等は、トランスプランテーション・プロシーディングズ、第２３巻、第１号（２月）、１９９１年、第５２１〜５２４頁（Ｍｏｒｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．ｉｎ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  Ｖｏｌ２３，Ｎｏ．１（Ｆｅｂ），１９９１：ｐｐ５２１−５２４）において、インビボでの同種異系免疫反応を抑制するための、サイクロスポリンＡとラパマイシンの相乗作用を記載している。
【００２１】
シュールマン等は、トランスプランテーション、第６９巻、第７３７〜７４２頁、第５号、２０００年３月１５日（Ｓｈｕｕｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．  ｉｎ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  Ｖｏｌ  ６９，７３７−７４２，Ｎｏ．５，Ｍａｒｃｈ  １５，２０００）において、アカゲザルの一種であるサイノマルガス（Ｃｙｎｏｍａｌｇｕｓ）モンキーでの腎臓の同種異系移植におけるマクロライド免疫抑制薬ラパマイシンの経口効能、およびサイクロスポリン・マイクロエマルジョンの経口効能を記載している。著者はこれらの組み合わせの双方の相乗活性を記載し、ラパマイシンの単独治療の場合にこの動物モデルにおいて長期生存を保証できないことの説明として、サイクロスポリンと比べた場合にこの化合物の作用のモードが異なっていることが考えられるとのべている。サイクロスポリンはＴ細胞免疫応答に至る一連の事象の非常に初期に作用する。サイクロスポリンは、抗体に誘導されるＴ細胞の活性化を遮断し、抗原を認識した際にＴ細胞リセプタから発生される細胞内シグナルに干渉することにより初期のリンホカインの生成を阻害する。ラパマイシンはＴ細胞の活性化後の遅い時期に作用する。著者はラパマイシンのような医薬はサイクロスポリンのような免疫抑制薬と組み合わせて初期のＴ細胞活性化の事象を抑制する必要があると結論している。
【００２２】
ハウゼン等は、トランスプランテーション、第６９巻、第４８８〜４９６頁、第４号、２０００年２月２７日（Ｈａｕｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．  ｉｎ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  Ｖｏｌ  ６９，４８８−４９６，Ｎｏ．４，Ｆｅｂｒｕａｒｙ  ２７，２０００）において、人を除く霊長類の肺の移植片の移植者における急性の同種異系移植片拒絶反応を予防することを記載している。著者は、高薬用量のサイクロスポリンＡまたは高薬用量のラパマイシンのいずれかを用いて行う単独治療を、使用する薬用量を固定して行った研究では、初期の急性の同種異系移植片拒絶反応は予防されなかったものの、いずれかの医薬を用いた単独治療は耐えられたと述べている。固定された薬用量のこれら医薬は組み合わせて用いられているが、これによりラパマイシン単独で治療されたサルにおける濃度と比べるとラパマイシンの濃度は５倍増加している。この不都合な医薬−医薬間の相互作用を補償するために、ラパマイシンとサイクロスポリンＡの双方を一緒に使用するときは、ラパマイシン濃度とサイクロスポリンＡを顕著に低下するように濃度を制御した試行が企画される。この実例は拒絶反応の抑制に成功している。
【００２３】
１９９５年に、マーチン等（Ｍａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．）はジャーナル・オブ・インミュノロジー（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）に、「実験的ぶどう膜炎におけるラパマイシンとサイクロスポリンＡの相乗効果」と題する論文を発表した。著者は、自己免疫疾患の治療に現在利用可能な免疫抑制薬は効能と中毒性の副作用の間の治療ウインドウが狭いと結論している。相乗効果を有する医薬同士を組み合わせて用いると、このウインドウが広げられ、毒性の危険が低下することが考えられる。これらの検討により、ラパマイシンとサイクロスポリンＡとの間に相乗的関係があることが明かになり、この組み合わせにより、各医薬をより少ない薬用量で用いて治療効果を奏することが可能になる。用いる薬用量をより少なくすると、これらの医薬で自己免疫ブドウ膜炎を治療する際の毒性を低減することもできる。
【００２４】
ヘンダーソン等（Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ，ｅｔ  ａｌ．）は、インミュノロジー第７３巻第３１６〜３２１頁、１９９１年（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １９９１，７３：３１６−３２１）において、ＩＬ−２生成に対するラパマイシンとサイクロスポリンＡの効果を比較している。ラパマイシンはＩＬ−２遺伝子の発現に影響を与えなかったが、サイクロスポリンＡはＩＬ−２遺伝子の発現に影響を与えた。これにより、２つの医薬は作用経路が完全に異なることが判る。
【００２５】
ハウゼン等（Ｈａｕｓｅｎ，ｅｔ  ａｌ．）は、トランスプランテーション、第６７巻、第９５６〜９６２頁、第７号、１９９９年４月１５日（Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，Ｖｏｌ６７，９５６−９６２，Ｎｏ．７，Ａｐｒｉｌ  １５，１９９９）において、ニューラル（Ｎｅｕｒａｌ）（サイクロスポリンＡ）と新規なラパマイシン類縁体（ＳＤＺ−ＲＡＤ）とをラットの肺同種異系移植体に同時投与した例の報告を発表している。著者は２つの化合物の相乗効果について述べている−サイクロスポリンＡはＴ細胞活性化後の初期の事象を阻害し、ラパマイシンは成長因子に駆動される細胞増殖に影響する。サイクロスポリンAとラパマイシンを同時投与したところラパマイシンのトラフ(ｔｒｏｕｇｈ)(医薬の血中の濃度)は単独治療と比べて優位に上昇することが示された。前臨床試験および臨床試験において、免疫抑制戦略はサイクロスポリンAをラパマイシンと組み合わせた際の相乗的免疫抑制活性を利用するように企画されている。免疫抑制相乗性に加えて、動物実験では、サイクロスポリンAとラパマイシンを同時経口投与した後に顕著な薬物動態学的相互作用が得られることが見出されている。
【００２６】
ホワイティング等(Ｗｈｉｔｉｎｇ ｅｔ ａｌ．)は、トランスプランテーション、第５２巻、第２０３〜２０８頁、第２号、１９９１年８月（Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  Ｖｏｌ  ５２，２０３−２０８，Ｎｏ．２，Ａｕｇｕｓｔ  １９９１）において、ラットで免疫薬用量を用いて比較および組み合わせ試験を行った際のラパマイシンの毒性について記載している。  
【００２７】
イゼング・ツ等（Ｙｉｚｈｅｎｇ  Ｔｕ  ｅｔ  ａｌ．）は、トランスプランテーション、第５９巻、第１７７〜１８３頁第２号、１９９５年１月２７日（Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  Ｖｏｌ  ５９，１７７−１８３，Ｎｏ．２  Ｊａｎｕａｒｙ  ２７，１９９５）において、サイクロスポリン、シオリムス（Ｓｉｏｌｉｍｕｓ）（ラパマイシン）およびブレキナール（Ｂｒｅｑｕｉｎａｒ）のマウスでの心臓移植体の生存についての相乗効果に関する論文を発表している。
【００２８】
ヤキメツ等（Ｙａｋｉｍｅｔｓ  ｅｔ  ａｌ．）は、トランスプランテーション、第５６巻、第１２９３〜１２９８頁、第６号、１９９３年１２月（Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  Ｖｏｌ  ５６，１２９３−１２９８，Ｎｏ．６  Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，１９９３）において、「定薬用量におけるラパマイシンとサイクロスポリンの組み合わせによるイヌの膵臓島移植体の延命」を発表している。
【００２９】
バツァラ等（Ｖａｓｔｈｓａｌａ  ｅｔ  ａｌ．）は、トランスプランテーション、第４９巻、第４６３〜４７２頁、第２号、１９９０年２２月（Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  Ｖｏｌ  ４９，４６３−４７２，Ｎｏ．２  Ｆｅｂｒｕａｒｙ，１９９０）において、「ＤＮＡ増殖の阻害における免疫抑制薬とサイクロスポリンの相互作用の分析」を発表している。
【００３０】
種々の機構により送達されたラパマイシンとサイクロスポリンＡの組み合わせは、多くの疾患の治療に対して特許を付与されている。特許文献を以下に要約する。
【００３１】
カーン（Ｃａｌｎｅ）に付与された米国特許第５，１００，８９９号は、動物における器官または組織移植の拒絶反応を抑制する方法を提供する。この方法は哺乳類に移植拒絶反応抑制量のラパマイシンを投与することを含む。また、哺乳類における器官または組織移植の拒絶反応を抑制する方法も開示されており、この方法は（ａ）ある量のラパマイシンを、（ｂ）ある量の他の１種以上の移植拒絶反応抑制用化学治療薬、例えば、アザチプリン（ａｚａｔｈｉｐｒｉｎｅ）、コルチコステロイド、サイクロスポリンおよびＦＫ５０６と組み合わせて投与することを含む。（ａ）と（ｂ）の量を合わせると移植拒絶反応を抑制し、移植拒絶反応の抑制を維持するのに有効である。
【００３２】
カーン（Ｃａｌｎｅ）に付与された米国特許第５，２１２，１５５号は、移植拒絶反応を抑制するのに有効なラパマイシンとサイクロスポリンの組み合わせを請求している。
【００３３】
カーン（Ｃａｌｎｅ）に付与された米国特許第５，３０８，８４７号は、移植拒絶反応を抑制するラパマイシンとアキサチオプリン（ａｘａｔｈｉｏｐｒｉｎｅ）の組み合わせを記載している。
【００３４】
カーン（Ｃａｌｎｅ）に付与された米国特許第５，４０３，８３３号は、移植拒絶反応を抑制するラパマイシンとコルチコステロイドの組み合わせを記載している。
【００３５】
カーン（Ｃａｌｎｅ）に付与された米国特許第５，４６１，０５８号は、移植拒絶反応を抑制するラパマイシンとＦＫ５０６の組み合わせを記載している。
【００３６】
米国特許出願公開第ＵＳ２００１／０００８８８８号公報は、移植拒絶反応並びに一定の自己免疫および炎症疾患の治療および予防に有効な、ＩＬ−２転写阻害剤（例えばサイクロスポリンＡ）とラパマイシンの誘導体の相乗的組み合わせとともに、ＩＬ−２転写阻害剤とラパマイシンをと組み合わせて含む医薬組成物を記載している。
【００３７】
ゼンケ等（Ｚｅｎｋｅ  ｅｔ  ａｌ．）等に付与された米国特許第６，２３９，１２４号公報は、移植拒絶反応並びに一定の自己免疫および炎症疾患の治療および予防に有効な、ＩＬ−２転写阻害剤（例えばサイクロスポリンＡ）とラパマイシンの誘導体の相乗的組み合わせとともに、ＩＬ−２転写阻害剤とラパマイシンをと組み合わせて含む医薬組成物を記載している。
【００３８】
バッジャー等（Ｂａｄｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．）等に付与された米国特許第６，０５１，５９６号公報明細書は、非特異的サプレッサー細胞誘導化合物とサイクロスポリンＡとを製薬的に許容し得る担体中に含有する医薬組成物を記載している。この特許は、また、哺乳類に免疫抑制効果を誘導する方法であって、有効薬用量の非特異的サプレッサー細胞誘導化合物とサイクロスポリンＡとをそのような動物に投与することを含む方法を記載している。
【００３９】
ションハーティング等（Ｓｃｈｏｎｈａｒｔｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．）に付与された米国特許第６，０４６，３２８号公報明細書は、キサンチンとサイクロスポリンＡまたはＦＫ５０６の製剤および組み合わせを記載している。
【００４０】
コーフィールド（Ｃａｕｆｉｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．）に付与された米国特許第５，２８６，７３０号および同第５，２８６，７３１号公報明細書は、皮膚疾患に有効なラパマイシンとサイクロスポリンＡの組み合わせ、および上記化合物の経口、非経口、鼻腔内、気管支内、局所、経皮または直腸送達を記載している。
【００４１】
国際出願公開第ＷＯ９８／１８４６８号公報明細書はラパマイシンカルシトリオール（Ｃａｌｃｉｔｒｉｏｌ）の相乗性組成物を記載している。
【００４２】
ウィリアムズ（Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．）に付与された米国特許第５，６２４，９４６号及び同第５，６８８，８２４号公報明細書は、レフルノミド（Ｌｅｆｌｕｎｏｍｉｄｅ）を慢性同種異系移植片拒絶反応の抑制および逆転するのに使用することを記載している。
【００４３】
アームストロング等（Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．）に付与された米国特許第５，４９６，８３２号はラパマイシンを経口、非経口、血管内、鼻腔内、気管支内、経皮または直腸投与することを含む、心臓炎症疾患の治療方法を提供している。
【００４４】
この先行技術に説明されているように、ラパマイシンとサイクロスポリンＡの組み合わせを移植に使用することは公知である。開示された発明が移植におけるこの組み合わせの使用と異なる点は、同種異系移植片の拒絶反応は移植者の自己の血管に対する損傷を伴わないことである。拒絶反応型応答である。開示された発明は自己の血管に対する血管損傷に関する。得られた内膜平滑筋細胞増殖は免疫系を含まないが、成長因子に媒介される。
【００４５】
従って、血管内埋め込み体用の改良された治療用コーティングに対する需要が依然として存在する。
【発明の開示】
【００４６】
本発明は血管内埋め込み体用コーティングに関する。このコーティングは治療有効量のカルシウム非依存細胞経路に作用する第１の医薬、および治療有効量のカルシウム依存細胞経路に作用する第２の医薬を含む。第１のおよび第２の医薬の結合量により過増殖性血管疾患が治療または抑制される。
【００４７】
一実施の形態では、上記第１の医薬はマクロライド免疫抑制薬、例えばラパマイシンであり、上記第２の医薬はＩＬ−２転写阻害剤、例えばサイクロスポリンＡである。上記コーティングはサイクロスポリンＡよりも多い量のラパマイシンを含有することができる。
【００４８】
上記コーティングは任意のタイプの埋め込み体に使用可能である。これらの埋め込み体の例としてはバルーンカテーテル、ステント、ステント移植片、医薬送達カテーテル、アテローム切除装置、フィルター、足場装置、吻合クリップ、吻合ブリッジおよび縫合材料が挙げられる。
【００４９】
上記コーティングはポリマーマトリックスを含むことができ、このポリマーは再吸収可能であり、ポリ−α−ヒドロキシ酸、ポリグリコール、ポリチロシンカーボネート、澱粉、ゼラチン、セルロース、並びにこれらのブレンドおよび共重合体よりなる群から選ばれる。好適なポリ−α−ヒドロキシ酸の例としてはポリラクチド、ポリグリコール酸並びにこれらのブレンドおよび共重合体が挙げられる。
【００５０】
上記コーティングは埋め込み体に直接適用するか、またはその上にコーティングが適用されるプライマー層の頂部に適用される。プライマー層は再吸収性ポリマーまたは生体安定性ポリマーであってもよい。所望であれば、トップコートをコーティングの上に適用することができる。一実施の形態では、このトップコートは再吸収性ポリマーで作製されている。
【００５１】
本発明の好ましい特徴は添付の図面に開示されている。図面において、類似の参照符号はいくつかの図を通して同様の要素を示すものとする。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５２】
以下の説明において、向きまたは方向に言及されている場合は、主として説明の便宜のためであり、本発明の範囲をなんら限定するものではない。さらに、特定の生物学的応用または埋め込み体、例えば心臓血管用途のステントの使用に関する言及は本発明の可能性のある用途の一例として便宜的に使用されているに過ぎず本発明の範囲を限定するものではない。
【００５３】
本発明によれば、血管内埋め込み体用のコーティングが提供される。このコーティングは、単独で、または生体安定性でも生体再吸収性でもよいポリマーマトリックス内に容れて、血管内装置の表面に適用される。このコーティングは埋め込み体またはポリマー性基体、すなわち、プライマーの頂部に適用することができる。所望により、トップコートをこの治療用コーティングに適用することができる。
【００５４】
本発明の血管内埋め込み体用コーティングは治療有効量のカルシウム非依存細胞経路に作用する第１の医薬、および治療有効量のカルシウム依存細胞経路に作用する第２の医薬を含む。第１のおよび第２の医薬の結合量により過増殖性血管疾患が治療または抑制される。例示的一実施の形態では、第１の医薬はラパマイシンであり、第２の医薬はサイクロスポリンＡである。
【００５５】
図１はこれらの医薬および他の医薬の化学構造を示す。カルシウム非依存経路に作用するマクロライド系免疫抑制薬であるラパマイシンと、カルシウム依存経路に作用するＩＬ−２転写阻害剤であるサイクロスポリンＡの別個の作用部位とそれらの比較的重ならない毒性とにより、この組み合わせは血管形成術後に血管内で使用して、血管の内側の損傷部位における細胞成長を抑制することが可能になる。
【００５６】
血管内治療用の組み合わせ治療の根拠は少なくとも一部は次の通りである。２つの医薬を時差投与した後の同種異系移植片拒絶反応を抑制する免疫抑制効能は組み合わせ治療の同時投与で得られるものと同様であり、心臓同種異系移植片の拒絶反応の発症率を顕著に低下させた（図４）。
【００５７】
事実、臨床医師はサイクロスポリンＡと他の化合物、例えば「アゾール」の間の既知の相互作用を利用してサイクロスポリンＡの薬用量の要求を低下させることを学んでいる。特に、アゾール抗真菌剤は既知の臨床的に有意の免疫抑制性を持たず、この文脈で使用される薬用量では毒性がほとんどない。この文脈では、アゾール抗真菌剤は薬物動態学的効果を示されていないので、アゾール抗真菌剤の吸収量は重要ではない。サイクロスポリンＡとラパマイシンの同時投与の場合、両医薬は低い、可変可能な生体利用率並びに狭い治療指数を有する。さらに、この相互作用は薬用量に依存し、組み合わせ送達の低薬用量では完全に避けられる。
【００５８】
ある面では、同種異系移植片拒絶反応の過程は血管壁に対する損傷後の冠状動脈内の再閉塞の過程と類似している。動脈の損傷後、多重の分裂および増殖因子がＳＭＣ活性化に導くシグナル発生機構の引き金を引くことができることが突き止められた。抗血小板薬、抗凝固薬、ＡＣＥ阻害薬、および細胞毒性医薬を含む多数の薬物が血管形成術後の再閉塞を顕著に低下させなかった。しかしながら、サイクロスポリンＡとラパマイシンは、ＶＳＭＣにおける細胞周期の進行の多重調節因子を抑制するので、作用メカニズムがこれらの医薬の多くのものと異なる。ラパマイシンとサイクロスポリンの組み合わせは細胞成長の基礎的な調節因子を目的対象としているので、再閉塞を顕著に低下させる。
【００５９】
ラパマイシンとサイクロスポリンＡの組み合わせを含む、血管内埋め込み体用コーティングは細胞成長の媒介細胞周期のごく早期に起きることを確実にするのに役立つ。例えば、サイクロスポリンＡはＴ細胞活性化後の早期に作用し、それにより、早期Ｔ細胞特異遺伝子の転写活性化を阻止する。ラパマイシンは成長因子駆動細胞増殖を阻止することにより細胞周期の後期に作用する。これら２つの医薬は、ラパマイシンがサイクロスポリンＡよりも多量になるようにコーティング内に提供される。例えば、ラパマイシンのサイクロスポリンＡに対する比は約５１％以上にすることができよう。
【００６０】
図２および図３に示すように、ホスト耐性の誘導およびその結果の移植された器官の拒絶反応に重要であると思われる、Ｔ細胞の活性化は３つの相で生じる。第１の相は、Ｔ細胞が静止期（Ｇ０）から受容期（Ｇ１）に進行するのを可能にする即時および早期遺伝子（ＩＬ−２リセプタ）の転写活性化を引き起こす。第２の相では、Ｔ細胞は、サイトカインを刺激することにより引き金が引かれるシグナルを自己分泌方式および傍分泌方式の双方に変換し、細胞周期に入ることを可能にし、免疫応答の第３の相において、栄養系が拡大し、エフェクター機能が獲得される。サイクロスポリンＡはＴ細胞活性化の第１の相を抑制するが、ラパマイシンは第２の相を抑制する。第３の相に作用する医薬は今のところ得られない。ステント表面または任意の血管内表面がこれらの医薬の双方を確実に有するようにすることによって、動脈壁からの再閉塞応答を顕著に低減または完全に除去することが保証される。
【００６１】
これら２つの医薬は別々に使用することが可能であるが、双方の医薬が確実に必要な治療効果を有するようにするにはかなり過剰投与することが必要である。この過剰投与は副作用を生じる可能性があり、副作用としては血管の治癒が不十分であったり、内膜形成が不完全であったりすることが挙げられる。
【００６２】
これらの医薬を組み合わせることは、両医薬は低薬用量で組み合わせることができること、およびこの組み合わせが実際に治療濃度を単独治療の投与よりも増加することを意味する。これを、ラパマイシンとサイクロスポリンＡの相乗効果を示す図５および図６に示す。医薬の組み合わせの毒性は、両者を一緒に組み合わせたときに顕著に低下する。２つの異なる細胞周期に活性がある２つの医薬を提供して増殖を抑制することにより、医薬の治療ウインドウを広げられる。この組み合わせは、単独治療に比べて、実際に免疫抑制のレベルを向上する。
【００６３】
本発明は２種以上の医薬を任意の血管内埋め込み体にコーティングにより送達するための組み合わせ治療に関する。本明細書において用いられているように、埋め込み体は任意のタイプの医療用または外科用装置であって、一時的であるか、恒常的であるかは問わない。送達は介入手順の間か、後のいずれであってもよい。血管内埋め込み体の非限定的な例を以下に示す。
【００６４】
バルーンカテーテルの外表面を本発明の組み合わせでコーティングしてもよく、即時または時間依存方式で放出することができる。バルーンが膨張し、血管の壁がバルーンに接触すると、組み合わせの放出が開始する。医薬の小さなナノスフィア（nanosphere）はこのバルーンを用いて実際に血管壁内に輸送することが可能であり、これらのナノスフィアを確実に長期間にわたって送達する。
【００６５】
ステントの表面は医薬の組み合わせでコーティングすることができ、このステントを体内に埋め込む。ステントの支柱には数層の医薬、または単一の層を装荷することができる。医薬を表面に装荷するトランスポーターまたはベヒクルをステントに適用することもできる。ステント移植片の移植片材料も（ステントに加えてまたはステントの代わりに）コーティングして、この材料が血管内を輸送されて配置場所または損傷の部位に至るようにすることができる。
【００６６】
医薬を他の剤とともに血管内注入するのに用いられるこの医薬送達用カテーテルは医薬の組み合わせを送達するのにも使用することができる。それを通して送達することができる他の血管内装置としては、アテローム切除装置、フィルター足場装置、吻合装置、縫合糸等が挙げられる。
【００６７】
本発明は上記コーティングを直接血管内埋め込み体に提供することを構想している。しかしながら、上記コーティングはプライマー、すなわち他のコーティングをその上に適用する材料の層または膜に適用してもよい。さらに、第１および第２の医薬をポリマーマトリックスに導入することができる。ポリマーマトリックス（再吸収性および急いた安定性）を治療薬の送達に使用することができる。ある場合には、医薬が埋め込み体上に装荷されたときに、膨張過程の間、または埋め込み時の血流が高い剪断速度である相の間に治療薬が急速に目減りする危険がある。医薬の治療ウインドウが長期間、確実に継続されるように、ポリマーマトリックスを使用することができる。
【００６８】
これらのポリマーは下記のうちのいずれか１種であってもよい：医薬送達用のセミテレケリックポリマー、標的医薬送達用の熱応答性ポリマーミセル、ｐＨまたは温度感受性ポリマー、ペプチドおよびプロテインを主体とする医薬送達用の水不溶性医薬複合医薬送達マトリックス、ポリキレート両親媒性ポリマー、送達用の生分解性ポリ乳酸／グリコール酸の生体接合、送達用エラスチン模倣タンパク質ネットワーク、医薬送達用の遺伝子工学によるタンパク質ドメイン、医薬送達用の超多孔質性ヒドロゲル複合体、医薬送達用の相互侵入ポリマーネットワーク、ヒアルロン酸を主体とする医薬の送達、調整水分解性送達性を有する光架橋ポリアンハイドライド、サイトカイン巨大分子糖脂質を主体とする送達、局所送達用のカチオン性ポリサッカライド、医薬送達用のｎ−ハラミンポリマーコーティング、医薬送達用のデキストランを主体とするコーティング、医薬送達用の蛍光分子、医薬送達用の自己腐食性重合開始プライムおよび生活性複合体を主体とする医薬送達。
【００６９】
上記コーティングがポリマーマトリックスを含むか否か、およびどこに適用されるか（埋め込みに直接、プライマーの頂部に、またはトップコートに覆われて）に関わらず、本発明に従う治療用コーティングを提供するための多数の異なる方法がある。これらの方法にはディップコーティングおよびスプレイコーティングがある。本出願と同日に出願された本出願人の同時係属出願「ステント表面塗布方法」はコーティング方法に関する先行技術を検討し、ステントをコーティングする新規な方法を開示している。この同時係属出願の全内容を引用により本明細書に導入する。
【００７０】
上記治療用コーティングを血管内埋め込み体、この場合はステント、に適用する他の方法は下記の通りである。
【００７１】
ステントをレーザーカットし、次いで電気研磨する。
電気研磨したステントを１％〜５％Ｗ／Ｖ水酸化カリウムまたは水酸化ナトリウム中で１時間洗浄する。温度を約６０℃に上げて洗浄が適切に行われるようにしてもよい。この洗浄はヘキサンまたはイソプロピルアルコール溶液を用いて行うこともできる。
次いで、この装置を熱水で洗浄する。この洗浄は水を一定温度に維持した浴中で行ってもよい。あるいはまた、熱水を超音波浴の頂部に維持して、ステントが熱水中で洗浄される際に旋回するようにする。
ステントを室温で４時間未満乾燥する。
プライマーをステントに適用する。このプライマーはポリマーに結合する以下の段階のためのステントの表面を調製する。
官能化薬剤を調製する。これらの薬剤としては、ハイドライド末端化ポリフェニル（ジメチルハイドロシロキシ）シロキサン、メチルハイドロシロキサン、フェニルメチルシロキサン、およびメチルハイドロシロキサン−オクチルメチルシロキサン共重合体、ハイドライド末端化ポリジメチルシロキサン、メチルハイドロシロキサン−ジメチルシロキサン共重合体；ポリメチルハイドロシロキサン、ポリエチルハイドロシロキサンが挙げられる。上記薬剤としては、また、シラノール官能性シロキサン、例えばシラノール末端化ポリジメチルシロキサン；シラノール末端化ジフェニルシロキサン−ジメチルシロキサン共重合体；およびシラノール末端化ポリジフェニルシロキサンが挙げられる。好適なエポキシ官能性シロキサンとしては、エポキシプロポキシプロピル末端化ポリジメチルシロキサンおよび（エポキシシクロヘキシルエチル）メチルシロキサン−ジメチルシロキサン共重合体が挙げられる。
上記医薬はポリマー溶液の混合物中に導入することができ、またはポリマーの表面に結合することができ、また表面に接ぎ木することもできる。コーティング混合物中で１種以上の治療薬をコーティングポリマーと混合する。治療薬は液体、微粉砕固体その他の適当な物理的形状で存在していてもよい。この混合物は１種以上の添加物、無毒性の補助物質、例えば希釈剤、担体、安定化剤等を含んでいてもよい。最良の条件は、ポリマーおよび医薬が共通の溶媒を有する場合である。これにより、真性の溶液であるウェットコーティングを提供することができる。
この装置を次いで官能化薬剤の混合物中に２時間室温で置く。上記同時係属特許出願に記載されている揺動運動はこのコーティングの工程を容易にすることができる。
この装置を次いでメタノールで洗浄して表面の汚れを除去する。
完全な医薬−ポリマー系を封入するポリマー材料性のトップコートがある場合は、トップコートをステントに適用する。トップコートは医薬の放出を遅らせることができるが、または異なる製薬活性材料の送達のためのマトリックスとして使用することができる。
アンダーコートの全厚さは５μｍを超えず、トップコートは通常２μｍ未満である。
【００７２】
以上、本発明の種々の説明を行ったが、種々の特徴は単独でまたは任意に組み合わせて使用することができることが了解されるべきである。従って、本発明は説明された特定の好ましい実施の形態に限定されない。
【００７３】
さらに、本発明の思想および範囲内で種々の変更および改変をなすことができることは当業者には明らかである。従って、当業者がここに開示された内容から容易に達成しえる臨機応変の変更であって本発明の思想および範囲内のものはすべて本発明のさらなる実施の形態として含まれるものである。本発明の範囲は特許請求の範囲の請求項によって定義されるものである。
【図面の簡単な説明】
【００７４】
【図１】種々の大環状免疫抑制薬の化学構造を示す図である。
【図２】サイクロスポリンＡ，ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミゾリビン、ミコフェノール酸、ブレキナールナトリウム、およびデオキシスペルグアリンの、カルシウム依存または非依存経路によるＴ細胞活性化に対する作用の部位として考え得る部位の概略図である。一定の免疫抑制薬もＢ細胞に影響しそれらの考え得る作用部位も示されている。
【図３】サイクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミゾリビン、ミコフェノール酸およびブレキナールナトリウムのＴ細胞活性化効果を示す概略図である。
【図４】サイクロスポリンＡ単独（白棒）、ラパマイシン単独（ハッチング付き棒）およびサイクロスポリンＡとラパマイシンの組み合わせ（黒棒）の細胞増殖応答に対する効果を比較するグラフである。
【図５】サイクロスポリンＡとラパマイシンの組み合わせのイソボログラム分析を示す図である。１から１へ引かれた線は単位直線である。この単位直線の下側に入る組み合わせは相乗的であり、線上は付加的であり、上方は拮抗的である。
【図６】サイクロスポリンＡとラパマイシンの組み合わせのイソボログラム分析を示す図である。Ｘ軸上の単位はラパマイシンのＦＩＣであり、Ｙ軸上の単位はサイクロスポリンＡのＦＩＣである。最大の増殖応答が阻害される組み合わせを用いて両者の間の相乗的相互作用をプロットした。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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