(57)【要約】本願発明は、ペプチドに結合するMetAP-2阻害核を含む血管新生抑制化合物、および前記血管新生抑制化合物および薬学的に許容な担体を含む薬学的組成物を提供する。  本願発明はまた、１種類以上の本願発明の前記血管新生抑制化合物を治療上有効な量多少に投与するステップを含む、前記対象におけるたとえば癌などの血管新生疾患を治療する方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
化学式Iの化合物であって、
2005536461.tif 000072
当該化学式において、
AはMet-AP2抑制核であって
WはOまたはNR2であって、
R1およびR2はそれぞれ独立に水素またはアルキルであって、
Xはアルキレンまたは置換アルキレンであって、
nは0または1であって、
R3およびR4はそれぞれ独立に水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールであるか、あるいはR3 およびR4は炭素原子とともに結合して炭素環またはヘテロ環基を形成するか、あるいはR3 およびR4はともにアルキレン基を形成し、
Zは-C(O)-またはアルキレン-C(O)-であって、
Pは、そのアミノ末端がZまたはOR5もしくはN(R6)R7基に結合する1乃至約100アミノ酸残基を含むペプチドであって、当該化学基において
R5、R6およびR7はそれぞれ独立に、水素、アルキル、置換アルキル、アザシクロアルキルもしくは置換アザシクロアルキルであるか、またはR6およびR7はそれらがともに窒素原子に結合して置換または非置換ヘテロ環状構造を形成するか、
または
Zは-C(O)-または-NR8-、アルキレン-O-、またはアルキレン-NR8-であって、当該化学基においてR8は水素またはアルキルであって、
Pは水素、アルキル、またはそのカルボニル末端がZに結合している1乃至約100アミノ酸残基からなるペプチドである、
化学式の化合物。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物であって、当該化合物においてR1, R3およびR4の少なくとも１つが置換または非置換アルキル基である、化合物。
【請求項３】
請求項２に記載の化合物であって、当該化合物においてR1, R3およびR4の少なくとも１つが置換または非置換、直鎖、分岐鎖、または環状C1-C6アルキル基である、化合物。  
【請求項４】
請求項３に記載の化合物であって、当該化合物においてR1, R3およびR4の少なくとも１つが直鎖または分岐鎖C1-C4アルキル基である、化合物。  
【請求項５】
請求項１に記載の化合物であって、当該化合物においてR3およびR4の1つが置換もしくは非置換アリール基、置換もしくは非置換ヘテロアリール基、置換もしくは非置換ヘテロアリールアルキル基、または置換または非置換アリールアルキル基である、化合物。
【請求項６】
請求項５に記載の化合物であって、当該化合物においてR3およびR4の１つがフェニル、ナフチル、インドリル、イミダゾリル、ピリジル、ベンジル、ナフチルメチル、インドリルメチル、イミダゾリルメチル、およびピリジルメチルからなるグループから選択される化合物。 
【請求項７】
請求項１に記載の化合物であって、当該化合物においてnは1であって、XはC1-C6-アルキレンである化合物。
【請求項８】
請求項7に記載の化合物であって、当該化合物においてXはメチレンまたはエチレンである、化合物。
【請求項９】
請求項1に記載の化合物であって、当該化合物においてZはC1-C6-アルキレン-C(O)-である、化合物。
【請求項１０】
請求項９に記載の化合物であって、当該化合物においてZはメチレン-C(O)-またはエチレン-C(O)-である、化合物。
【請求項１１】
請求項１に記載の化合物であって、当該化合物においてR6,およびR7の少なくとも１つは置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換アザシクロアルキル、または置換または非置換アザシクロアルキルである、化合物。   
【請求項１２】
請求項11に記載の化合物であって、当該化合物においてR6およびR7 の少なくとも１つはN-アルキル置換基を有するアザシクロアルキル基である、化合物。 
【請求項１３】
請求項１２に記載の化合物であって、当該化合物においてN-アルキル置換基はC1-C4-アルキル基である、化合物。 
【請求項１４】
請求項１３に記載の化合物であって、当該化合物においてN-アルキル置換基はメチル基である、化合物。 
【請求項１５】
請求項１に記載の化合物であって、当該化合物においてR6およびR7がそれらがともに窒素原子に結合して、置換または非置換5または6員環アザまたはジアザシクロアルキル基を形成する、化合物。   
【請求項１６】
請求項１５に記載の化合物であって、当該化合物においてR6およびR7がそれらがともに窒素原子に結合して、N-アルキル置換基を含む置換または非置換5または6員環ジアザシクロアルキル基を形成する、化合物。
【請求項１７】
請求項１６に記載の化合物であって、当該化合物においてN-アルキル置換基はC1-C4-アルキル基である、化合物。
【請求項１８】
請求項１７に記載の化合物であって、当該化合物においてN-アルキル置換基はメチル基である、化合物。
【請求項１９】
請求項1に記載の化合物であって、当該化合物においてPはNH2または以下に示す化学基
2005536461.tif 000073
2005536461.tif 000074
の１つである、化合物。
【請求項２０】
化学式XVの化合物であって、
2005536461.tif 000075
当該化学式において、
AはMetAP-2抑制核であって
WはOまたはNRであって、
各Rは独立に水素またはアルキルであって、
Zは-C(O)-またはアルキレン-C(O)-であって、
PはNHR、ORまたは水素、またはN末端がZに結合している1乃至約100アミノ酸残基からなるペプチドであって、
Qは水素、直鎖、分岐鎖、または環状アルキルまたはアリールであって、これはPが-ORであって、Qが水素ではない場合であるか、
または、
Zは-アルキレン-O-または-アルキレン-N(R)-であって、
Pは水素、またはカルボニル末端がZに結合している1乃至約100アミノ酸残基からなるペプチドであって、
Qは水素、直鎖、分岐鎖、または環状アルキルまたはアリールであって、これはPが水素であって、Qが水素ではない場合である
化合物、
および、その薬学的に許容な担体。
【請求項２１】
請求項２０に記載の化合物であって、当該化合物においてZは-C(O)-またはC1-C4-アルキレン-C(O)-である、化合物。
【請求項２２】
請求項２１に記載の化合物であって、当該化合物においてZは-C(O)-またはC1-C2アルキレン-C(O)-である、化合物。
【請求項２３】
請求項２１に記載の化合物であって、当該化合物においてQは直鎖、分岐鎖または環状C1-C6-アルキル、フェニル、またはナフチルである、化合物。  
【請求項２４】
請求項２３に記載の化合物であって、当該化合物においてQはイソプロピル、フェニル、またはシクロヘキシルである、化合物。
【請求項２５】
請求項１に記載の化合物であって、当該化合物においてZはC1-C6-アルキレン-C(O)-またはC1-C6-アルキレン-NR-である、化合物。 
【請求項２６】
請求項２５に記載の化合物であって、当該化合物においてZはC1-C4-アルキレン-O-またはC1-C4-アルキレン-NH-である、化合物。 
【請求項２７】
請求項２６に記載の化合物であって、当該化合物においてZはC1-C2-アルキレン-O-またはC1-C2-アルキレン-NHである、化合物。  
【請求項２８】
請求項２５に記載の化合物であって、当該化合物においてQは直鎖、分岐鎖または環状C1-C6-アルキル、フェニル、またはナフチルである、化合物。  
【請求項２９】
請求項２８に記載の化合物であって、当該化合物においてQはイソプロピル、フェニル、またはシクロヘキシルである、化合物。
【請求項３０】
請求項２０に記載の化合物であって、当該化合物において各Rは独立に水素または直鎖、分岐鎖もしくは環状C1-C6-アルキルである、化合物。  
【請求項３１】
請求項３０に記載の化合物であって、当該化合物において各Rは独立に水素または直鎖もしくは分岐鎖C1-C4-アルキルである、化合物。  
【請求項３２】
請求項３１に記載の化合物であって、当該化合物において各Rは水素またはメチルである、化合物。  
【請求項３３】
請求項３２に記載の化合物であって、当該化合物においてRは水素である、化合物。
【請求項３４】
請求項２０に記載の化合物であって、当該化合物においてAは化学式IIであって、
2005536461.tif 000076
当該化学式において、
R1は水素またはアルコキシであって、
R2は水素またはヒドロキシであって、
R3は水素またはアルキルであって、
Dは直鎖または分岐鎖アルキルまたはアリールアルキルであるか、またはDは化学式
2005536461.tif 000077
である、化合物。
【請求項３５】
請求項３４に記載の化合物であって、当該化合物においてR1はC1-C4-アルコキシである、化合物。 
【請求項３６】
請求項35に記載の化合物であって、当該化合物においてR1はメトキシである、化合物。  
【請求項３７】
請求項３４に記載の化合物であって、当該化合物においてR3は水素、またはC1-C4-アルキルである、化合物。 
【請求項３８】
請求項３７に記載の化合物であって、当該化合物においてR3はメチルである、化合物。  
【請求項３９】
請求項３４に記載の化合物であって、当該化合物においてDは直鎖、分岐鎖または環状C1-C6-アルキル、またはアリール-C1-C4-アルキルである、化合物。 
【請求項４０】
請求項２０に記載の化合物であって、当該化合物においてAが
2005536461.tif 000078
からなるグループから選択されて、
当該化学式において、
pは0乃至10の整数であって、
R1は水素、-OHまたはC1-C4-アルコキシであって、
Xは離脱基であって、
R2はH、OH、アミノ、C1-C4-アルキルアミノ、またはジ(C1-C4-アルキル)アミノ}である、 
化合物。
【請求項４１】
請求項４０に記載の化合物であって、当該化合物においてAは化学式
2005536461.tif 000079
である、化合物。
【請求項４２】
請求項２０に記載の化合物であって、当該化合物においてPは1乃至約20アミノ酸残基からなる、化合物。
【請求項４３】
請求項４２に記載の化合物であって、当該化合物においてPはマトリックスメタロプロテアーゼの基質であるアミノ酸配列を含む、化合物。
【請求項４４】
請求項４３に記載の化合物であって、当該化合物において前記マトリックスメタロプロテアーゼがMMP-2、MMP-1、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-12、MMP-13およびMMP-26から選択される、化合物。
【請求項４５】
請求項４４に記載の化合物であって、当該化合物において前記マトリックスメタロプロテアーゼはMMP-2またはMMP-9である、化合物。
【請求項４６】
請求項４５に記載の化合物であって、当該化合物においてPは-Pro-Leu-Gly-Xaa-という配列を含み、当該配列においてXaaは天然に存在するアミノ酸残基である、化合物。
【請求項４７】
請求項４６に記載の化合物であって、当該化合物においてPは、Pro-Cha-Gly-Cys(Me)-His (配列番号:2)、Pro-Gln-Gly-Ile-Ala-Gly-Gln-D-Arg (配列番号:3)、Pro-Gln-Gly-Ile-Ala-Gly-Trp (配列番号:4)、Pro-Leu-Gly-Cys(Me)-His-Ala-D-Arg (配列番号:5)、Pro-Leu-Gly-Met-Trp-Ser-Arg (配列番号:35)、Pro-Leu-Gly-Leu-Trp-Ala-D-Arg (配列番号:6)、Pro-Leu-Ala-Leu-Trp-Ala-Arg (配列番号:7)、Pro-Leu-Ala-Leu-Trp-Ala-Arg (配列番号:8)、Pro-Leu-Ala-Tyr-Trp-Ala-Arg (配列番号:9)、Pro-Tyr-Ala-Tyr-Trp-Met-Arg (配列番号:10)、Pro-Cha-Gly-Nva-His-Ala (配列番号:11)、Pro-Leu-Ala-Nva (配列番号:12)、Pro-Leu-Gly-Leu (配列番号:13)、Pro-Leu-Gly-Ala (配列番号:14)、Arg-Pro-Leu-Ala-Leu-Trp-Arg-Ser (配列番号:15)、Pro-Cha-Ala-Abu-Cys(Me)-His-Ala (配列番号:16)、Pro-Cha-Ala-Gly-Cys(Me)-His-Ala (配列番号:17)、Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu (配列番号:18)、Pro-Lys-Pro-Leu-Ala-Leu (配列番号:19)、Arg-Pro-Lys-Pro-Tyr-Ala-Nva-Trp-Met (配列番号:20)、Arg-Pro-Lys-Pro-Val-Glu-Nva-Trp-Arg (配列番号:21)、Arg-Pro-Lys-Pro-Val-Glu-Nva-Trp-Arg (配列番号:22)、およびArg-Pro-Lys-Pro-Leu-Ala-Nva-Trp (配列番号:23)からなるグループから選択される配列を含む、化合物。
【請求項４８】
以下の式の化合物であって、
2005536461.tif 000080
当該化学式において、
WはOまたはNRであって、
各Rは独立に水素またはC1-C4-アルキルであって、
Qは水素、直鎖、分岐鎖または環状C1-C6-アルキル、またはアリールであって、
R1はヒドロキシ、C1-C4-アルコキシ、またはハロゲンであって、
Zは-C(O)-またはC1-C4-アルキレンであって、
PはNHR、ORまたは水素、またはN末端がZに結合している1乃至約100アミノ酸残基からなるペプチドであって、
Zはまたはアルキレン-O-またはアルキレン-NRであって、
Pは水素、またはC末端がZに結合している1乃至約100アミノ酸残基からなるペプチドである
化合物か、または
Pが水素、NHR、またはORであってQが水素ではない場合の、その薬学的に許容な塩。 
【請求項４９】
請求項４８に記載の化合物であって、当該化合物において
WはOまたはNHであって、
Zはまたはアルキレン-O-またはアルキレン-NHであって、
Qはイソプロピルであって、
R1はメトキシであって、
Pは1乃至15アミノ酸残基からなる、
化合物。
【請求項５０】
請求項49に記載の化合物であって、当該化合物において
WはOであって、
Pは10以下のアミノ酸残基からなる、
化合物。
【請求項５１】
請求項48に記載の化合物であって、当該化合物においてPは1乃至約20アミノ酸残基からなる、化合物。
【請求項５２】
請求項51に記載の化合物であって、当該化合物においてPはマトリックスメタロプロテアーゼの基質であるアミノ酸配列を含む、化合物。
【請求項５３】
請求項５２に記載の化合物であって、当該化合物において前記マトリックスメタロプロテアーゼがMMP-2、MMP-1、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-12、MMP-13およびMMP-26から選択される、化合物。
【請求項５４】
請求項５３に記載の化合物であって、当該化合物において前記マトリックスメタロプロテアーゼはMMP-2またはMMP-9である、化合物。
【請求項５５】
請求項５４に記載の化合物であって、当該化合物においてPは-Pro-Leu-Gly-Xaa-という配列を含み、当該配列においてXaaは天然に存在するアミノ酸残基である、化合物。
【請求項５６】
請求項５５に記載の化合物であって、当該化合物においてPは、Pro-Cha-Gly-Cys(Me)-His (配列番号:2)、Pro-Gln-Gly-Ile-Ala-Gly-Gln-D-Arg (配列番号:3)、Pro-Gln-Gly-Ile-Ala-Gly-Trp (配列番号:4)、Pro-Leu-Gly-Cys(Me)-His-Ala-D-Arg (配列番号:5)、Pro-Leu-Gly-Met-Trp-Ser-Arg (配列番号:35)、Pro-Leu-Gly-Leu-Trp-Ala-D-Arg (配列番号:6)、Pro-Leu-Ala-Leu-Trp-Ala-Arg (配列番号:7)、Pro-Leu-Ala-Leu-Trp-Ala-Arg (配列番号:8)、Pro-Leu-Ala-Tyr-Trp-Ala-Arg (配列番号:9)、Pro-Tyr-Ala-Tyr-Trp-Met-Arg (配列番号:10)、Pro-Cha-Gly-Nva-His-Ala (配列番号:11)、Pro-Leu-Ala-Nva (配列番号:12)、Pro-Leu-Gly-Leu (配列番号:13)、Pro-Leu-Gly-Ala (配列番号:14)、Arg-Pro-Leu-Ala-Leu-Trp-Arg-Ser (配列番号:15)、Pro-Cha-Ala-Abu-Cys(Me)-His-Ala (配列番号:16)、Pro-Cha-Ala-Gly-Cys(Me)-His-Ala (配列番号:17)、Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu (配列番号:18)、Pro-Lys-Pro-Leu-Ala-Leu (配列番号:19)、Arg-Pro-Lys-Pro-Tyr-Ala-Nva-Trp-Met (配列番号:20)、Arg-Pro-Lys-Pro-Val-Glu-Nva-Trp-Arg (配列番号:21)、Arg-Pro-Lys-Pro-Val-Glu-Nva-Trp-Arg (配列番号:22)、およびArg-Pro-Lys-Pro-Leu-Ala-Nva-Trp (配列番号:23)からなるグループから選択される配列を含む、化合物。
【請求項５７】
血管新生抑制化合物であって、
{(3R, 4S, 5S, 6R)-5-メトキシ-4-[(2R, 3R)-2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イルオキシカルボニルアミノ}-3-メチル-ブチル酸 メチル エステル、
2-{(3R, 4S, 5S, 6R)-5-メトキシ-4-[(2R, 3R)-2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イルオキシカルボニルアミノ}-3-メチル-ブチル酸 メチル エステル、
2-{(3R, 4S, 5S, 6R)-5-メトキシ-4-[(2R, 3R)-2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イルオキシカルボニルアミノ}-4-メチル-ペンタン酸 メチル エステル、
{(3R, 4S, 5S, 6R)-5-メトキシ-4-[(2R, 3R )-2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イルオキシカルボニルアミノ}-フェニル酢酸 メチル エステル、
(1-カルバモイル-2-メチル-プロピル)-カルバミン酸-(3R, 4S, 5S, 6R )-5-メトキシ-4-[(2R, 3R)-2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イル エステル、
(1-カルバモイル-2-メチル-プロピル)-カルバミン酸-(3R, 4S, 5S, 6R )-5-メトキシ-4-[(2R, 3R)-2-メチル-3-(3-メチル-ブトイル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イル エステル、
(1-ヒドロキシメチル-2-メチル-プロピル)-カルバミン酸-(3R, 4S, 5S, 6R)-5-メトキシ-4-[(2R, 3R)- 2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イル エステル、
2-{(3R, 4S, 5S, 6R )-5-メトキシ-4-[(2R, 3R)-2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イルオキシカルボニルアミノ}-3,3-ジメチル-ブチル酸 メチル エステル、
シクロヘキシル2-{(3R, 4S, 5S, 6R )-5-メトキシ-4-[(2R, 3R)-2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イルオキシカルボニルアミノ}-酢酸 メチル エステル、
2-{(3R, 4S, 5S, 6R )-5-メトキシ-4-[(2R, 3R)-2-メチル-3-3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イルオキシカルボニルアミノ}-3-メチル-ペンタン酸 メチル エステル、
[1-(1-カルバモイル-2-ヒドロキシ-エチルカルバモイル)-2-メチル-プロピル]-カルバミン酸-(3R, 4S, 5S, 6R )-5-メトキシ-4-[(2R, 3R)-2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル]-オキシラニル-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イル エステル、
2-(3-{(3R, 4S, 5S, 6R )-5-メトキシ-4-[(2R, 3R)-2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イル}-ウレイド)-3-メチル-ブチラミド、 
2-{(3R, 4S, 5S, 6R)-5-メトキシ-4-[(2R, 3R)-2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イルオキシカルボニルアミノ}-3-メチル-ブチル酸、
N-カルバモイル (ID#31) (3R, 4S, 5S, 6R) 5-メトキシ-4-[(2R,3R)2-メチル-3-(3-メチル-ブトイル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イル エステル、
N-カルバモイル (ID#30) (3R, 4S, 5S, 6R) 5-メトキシ-4-[(2R,3R)2-メチル-3-(3-メチル-ブトイル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イル エステル、
N-カルバモイル (ID#32) (3R, 4S, 5S, 6R) 5-メトキシ-4-[(2R,3R)2-メチル-3-(3-メチル-ブトイル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イル エステル、
N-カルバモイル (ID#40) (3R, 4S, 5S, 6R) 5-メトキシ-4-[(2R,3R)2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イル エステル、
N-カルバモイル (ID#39) (3R, 4S, 5S, 6R) 5-メトキシ-4-[(2R,3R)2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イル エステル、
N-カルバモイル (ID#26) (3R, 4S, 5S, 6R) 5-メトキシ-4-[(2R,3R)2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イル エステル、
N-カルバモイル (ID#27) (3R, 4S, 5S, 6R) 5-メトキシ-4-[(2R,3R)2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イル エステル、
(ID#24)-(2R-｛(3R, 4S, 5S, 6R) 5-メトキシ-4-[(2R,3R)2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イルオキシカルボニル｝ アミノ-3-メチル-ブタノール) エステル、
(ID#36)-(2R-｛(3R, 4S, 5S, 6R) 5-メトキシ-4-[(2R,3R)2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イルオキシカルボニル｝ アミノ-3-メチル-ブタノール) エステル、
(ID#37)-(2R-｛(3R, 4S, 5S, 6R) 5-メトキシ-4-[(2R,3R)2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イルオキシカルボニル｝ アミノ-3-メチル-ブタノール) エステル、
(ID#38)-(2R-｛(3R, 4S, 5S, 6R) 5-メトキシ-4-[(2R,3R)2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イルオキシカルボニル｝ アミノ-3-メチル-ブタノール) エステル、 
(ID#34)-(2R-｛(3R, 4S, 5S, 6R) 5-メトキシ-4-[(2R,3R)2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イルオキシカルボニル｝ アミノ-3-メチル-ブタノール) エステル、 
{2-メチル-1-[メチル-(1-メチル-ピペリジン-4-イル)-カルバモイル]-プロピル}-カルバミン酸 5-メトキシ-4-[2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イル エステル、 
[1-(2-ジメチルアミノ-エチルカルバモイル)-2-メチル-プロピル]-カルバミン酸 5-メトキシ-4-[2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イル エステル、
{1-[(2-ジメチルアミノ-エチル)-メチル-カルバモイル]-2-メチル-プロピル}-カルバミン酸 5-メトキシ-4-[2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イル エステル、
[1-(3-ジメチルアミノ-プロピルカルバモイル)-2-メチル-プロピル]-カルバミン酸 5-メトキシ-4-[2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イル エステル、
[1-(3-ジメチルアミノ-2,2-ジメチル-プロピルカルバモイル)-2-メチル-プロピル]-カルバミン酸 5-メトキシ-4-[2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イル エステル、
[2-メチル-1-(4-メチル-ピペラジン-1-カルボニル)-プロピル]-カルバミン酸 5-メトキシ-4-[2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イル エステル、
{2-メチル-1-[2-(1-メチル-ピロリジン-2-イル)-エチルカルバモイル]-プロピル}-カルバミン酸 5-メトキシ-4-[2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イル エステル、
[2-メチル-1-(4-ピロリジン-1-イル-ピペリジン-1-カルボニル)-プロピル]-カルバミン酸 5-メトキシ-4-[2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イル エステルおよび
[1-(4-ベンジル-ピペラジン-1-カルボニル)-2-メチル-プロピル]-カルバミン酸 5-メトキシ-4-[2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イル エステル
からなるグループから選択される、血管新生抑制化合物。
【請求項５８】
対象において血管新生疾患を治療する方法であって、当該方法において、前記対象に以下の化学式であって、
2005536461.tif 000081
当該化学式において、
AはMetAP-2抑制核であって
WはOまたはNRであって、
各Rは独立に水素またはアルキルであって、
Zは-C(O)-またはアルキレン-C(O)-であって、
PはNHR、ORまたは水素、またはN末端がZに結合している1乃至約100アミノ酸残基からなるペプチドであって、
Qは水素、直鎖、分岐鎖、または環状アルキルまたはアリールであって、これはPが-ORであって、Qが水素ではない場合であるか、
または
Zは-アルキレン-O-または-アルキレン-N(R)-であって、
Pは水素、またはカルボニル末端がZに結合している1乃至約100アミノ酸残基からなるペプチドであって、
Qは水素、直鎖、分岐鎖、または環状アルキルまたはアリールであって、これはPが水素であって、Qが水素ではない場合である
化学式を含む血管新生阻害化合物を治療上有効な量投与するステップと、
その結果前記対象の前記血管新生疾患を治療するステップと、  
を含む、方法。
【請求項５９】
請求項58に記載の方法であって、当該方法において前記血管新生疾患は自己免疫性疾患である、方法。
【請求項６０】
請求項５９に記載の方法であって、当該方法において前記自己免疫性疾患は関節リウマチである、方法。
【請求項６１】
請求項５８に記載の方法であって、当該方法において前記血管新生疾患は癌である、方法。
【請求項６２】
請求項５９に記載の方法であって、当該方法において前記自己免疫疾患は、紅斑性狼瘡、乾癬、多発性硬化症、重症筋無力症、血管炎、または糖尿病からなるグループから選択される、方法。
【請求項６３】
請求項５８に記載の方法であって、当該方法において前記血管新生疾患はリンパ性悪性疾患である、方法。
【請求項６４】
対象において血管新生疾患を治療する方法であって、当該方法において、以下の化学式であって、
2005536461.tif 000082
当該化学式において、
AはMet-AP2抑制核であって
WはOまたはNR2であって、
R1およびR2はそれぞれ独立に水素またはアルキルであって、
Xはアルキレンまたは置換アルキレンであって、
nは0または1であって、
R3およびR4はそれぞれ独立に水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールであるか、あるいはR3 およびR4は炭素原子とともに結合して炭素環またはヘテロ環基を形成するか、あるいはR3 およびR4はともにアルキレン基を形成し、
Zは-C(O)-またはアルキレン-C(O)-であって、
Pは、そのアミノ末端がZまたはOR5もしくはN(R6)R7基に結合する1乃至約100アミノ酸残基を含むペプチドであって、当該化学基において
R5、R6およびR7はそれぞれ独立に、水素、アルキル、置換アルキル、アザシクロアルキルもしくは置換アザシクロアルキルであるか、またはR6およびR7はそれらがともに窒素原子に結合して、置換または非置換ヘテロ環状構造を形成するか、
または
Zは-O-または-NR8-、アルキレン-O-、またはアルキレン-NR8-であって、当該化学基においてR8は水素またはアルキルであって、
Pは水素、アルキル、またはそのカルボニル末端がZに結合している1乃至約100アミノ酸残基からなるペプチドである、
化学式を含む血管新生抑制化合物を治療上有効な量前記対象に投与するステップを含む、方法。
【請求項６５】
請求項６４に記載の方法であって、当該方法において前記血管新生疾患は自己免疫性疾患である、方法。
【請求項６６】
請求項６５に記載の方法であって、当該方法において前記自己免疫性疾患は関節リウマチである、方法。
【請求項６７】
請求項６４に記載の方法であって、当該方法において前記血管新生疾患は癌である、方法。
【請求項６８】
請求項６５に記載の方法であって、当該方法において前記自己免疫疾患は、紅斑性狼瘡、乾癬、多発性硬化症、重症筋無力症、血管炎、または糖尿病からなるグループから選択される、方法。
【請求項６９】
請求項６４に記載の方法であって、当該方法において前記血管新生疾患はリンパ性悪性疾患である、方法。
【請求項７０】
対象において寄生虫感染症を治療する方法であって、当該方法において、前記対象に以下の化学式であって、
2005536461.tif 000083
当該化学式において、
AはMetAP-2抑制核であって
WはOまたはNRであって、
各Rは独立に水素またはアルキルであって、
Zは-C(O)-またはアルキレン-C(O)-であって、
PはNHR、ORまたは水素、またはN末端がZに結合している1乃至約100アミノ酸残基からなるペプチドであって、
Qは水素、直鎖、分岐鎖、または環状アルキルまたはアリールであって、これはPが-ORであって、Qが水素ではない場合であるか、
または
Zは-アルキレン-O-または-アルキレン-N(R)-であって、
Pは水素、またはカルボニル末端がZに結合している1乃至約100アミノ酸残基からなるペプチドであって、
Qは水素、直鎖、分岐鎖、または環状アルキルまたはアリールであって、これはPが水素であって、Qが水素ではない場合である
化学式を含む血管新生抑制化合物を治療上有効な量前記対象に投与するステップと、
その結果前記対象の前記寄生虫感染症を治療するステップと、  
を含む、方法。
【請求項７１】
請求項７０に記載の方法であって、当該方法において前記寄生虫感染症はマラリアである、方法。
【請求項７２】
請求項７０に記載の方法であって、当該方法において前記寄生虫感染症はリーシュマニア症である、方法。
【請求項７３】
対象において胸腺症を治療する方法であって、当該方法において、前記対象に以下の化学式であって、
2005536461.tif 000084
当該構化学式において、
AはMetAP-2抑制核であって
WはOまたはNRであって、
各Rは独立に水素またはアルキルであって、
Zは-C(O)-またはアルキレン-C(O)-であって、
PはNHR、ORまたは水素、またはN末端がZに結合している1乃至約100アミノ酸残基からなるペプチドであって、
Qは水素、直鎖、分岐鎖、または環状アルキルまたはアリールであって、これはPが-ORであって、Qが水素ではない場合であるか、
または
Zは-アルキレン-O-または-アルキレン-N(R)-であって、
Pは水素、またはカルボニル末端がZに結合している1乃至約100アミノ酸残基からなるペプチドであって、
Qは水素、直鎖、分岐鎖、または環状アルキルまたはアリールであって、これはPが水素であって、Qが水素ではない場合である
化学式を含む血管新生抑制化合物を治療上有効な量投与するステップと、
その結果前記対象の前記胸腺症を治療するステップと、
を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【関連出願】
【０００１】
本願明細書は、現在は米国特許第6,548,477号である2000年11月1日に提出された米国特出願許第09/704,251号の一部継続出願である、係属中の2001年10月5日に提出された米国特許出願第09/972,772号の一部継続出願である、係属中の2001年11月1日に提出された米国特許第10/001,945号の一部継続出願である、2002年5月2日に提出された米国特許出願第10/138,935号の優先権を主張する。上述の各特許出願の内容全体は、引用をもって本願明細書に援用するものとする。 
【０００２】
発明の背景
リンパ腫は米国における死因の首位を占める。リンパ腫は、リンパ球が産生される途中でミスが生じる場合に発生するガンの1種である。このような異常な細胞が蓄積されるメカニズムは次の2通りある。つまり、(a)正常細胞よりも速く複製できる、または(b)正常リンパ球よりも長期間生存できる、メカニズムである。正常リンパ球と同様に、癌性リンパ球は、リンパ節、脾臓、骨髄、血液、またはその他の器官を含む、体内の数多くの部位で成長することができる。リンパ系の癌は主に2種類がある。一つはホジキン病で、もう一つは非ホジキンリンパ腫である。
【０００３】
米国では、自己免疫疾患もまた深刻な健康上の問題である。免疫系による自己の成分に対する進行性で持続的な応答を自己免疫という。通常、自己寛容性メカニズムによって自己成分への作用からの免疫応答は防御されている。しかし、すべてのメカニズムには崩壊の危険性があり、免疫系は時に宿主環境を激しく攻撃し、疾患を引き起こす。この崩壊によって、自己抗体を産生する自己応答B細胞および／または破壊的な自己免疫疾患を引き起こす自己応答T細胞が大量に産生される。この自己免疫のメカニズムは、外来成分に対する有用な免疫応答に関与するメカニズムと同様で、抗体依存性の細胞毒性、遅延型過敏症（DTH）、およびT細胞リンパ球溶解を含む。
【０００４】
ヒト自己免疫疾患は、器官特異性と全身性の2つのカテゴリーに分類できる。器官特異性自己免疫疾患の場合、自己応答性は一つの器官に固有の抗原に対して生じる。全身性自己免疫疾患の場合、自己応答性は主に幅広い範囲の抗原に対して生じ、多数の組織が関与する。いずれのタイプの疾患でも、1つまたは両方の自己応答細胞タイプ（BまたはT細胞）の産生によって引き起こされる。自己応答B細胞は自己抗体または免疫複合体の産生によって生じる。自己応答性T細胞によって、TDTh細胞の細胞性DTH応答、またはTc細胞の細胞毒性応答を生じる。
【０００５】
寄生虫によって引き起こされる疾患は首位を占める死因の一つであり、熱帯および亜熱帯地域の疾患である。このような疾患の無脊椎媒介生物を制御する作業は、多くの場合、殺虫剤に対する耐性、環境に与える損害に関する懸念、および既存の媒介生物制御法を適用するために十分なインフラ基盤の欠如などのために、困難である。したがって、これらの疾患の制御は、薬剤の利用可能性に大きく依存している。残念なことに、多くの既存の治療法はヒト宿主に対する有効性が不完全であるか有毒であるかのいずれかである。多くの場合、安全で有効な薬剤は、寄生生物の薬物耐性変種の選択およびまん延のせいで失敗に終わる。このことは、致死性のマラリアの大半の原因となっている生物である熱帯熱マラリア原虫の薬物耐性種が地球規模でまん延しているという現象に最も良く現れている。 
【０００６】
血管新生は新しい血管が形成される基礎的なプロセスで、さまざまな正常な身体活動（たとえば生殖、成長、および創傷の修復など）に必須である。このプロセスは完全に理解されてはいないが、毛細血管の主要細胞である内皮細胞の成長を刺激および抑制する分子の複雑な相互作用が関与すると考えられている。正常な条件下では、これらの分子は、静止状態（すなわち毛細血管成長がない状態）において、数週間、場合によっては数十年間の長期にわたって、微小血管系を維持しているようである。しかし、必要な場合には（たとえば創傷の修復中など）、この同じ細胞が急速に増殖して5日間以内にターンオーバーすることができる(Folkman, J. and Shing, Y., Journal of Biological Chemistry, 267(16): 10931-10934, and Folkman, J. and Klagsbrun, M. (1987) Science, 235: 442-447) 
【０００７】
血管新生は正常な状態では高度に制御されたプロセスであるが、多くの疾患（「血管新生疾患」として特徴づけられる疾患）が、長期にわたる制御されていない血管新生によって生じる。他に記載のない限り、調節されていない血管新生は、特定の疾患を直接引き起こすか、または既存の病理学的状態を悪化させるかの、いずれかであると考えられる。たとえば、眼球の血管新生は最も一般的な失明の原因として示唆されており、約20種類の癌疾患を支配している。関節炎などのある既存の症状の場合、新しく形成された毛細血管は関節に侵入して軟骨を破壊する。糖尿病の場合、網膜に新しく形成された毛細血管は硝子体に侵入し、出血して失明を引き起こす。充実性腫瘍の成長および転移も、血管新生依存性である(Folkman, J. (1986) Cancer Research 46:467-473 and Folkman, J. (1989) Journal of the National Cancer Institute 82:4-6)。たとえば、2mm超に肥大化した腫瘍は独自の血液供給を獲得しなければならず、新しい毛細血管の成長を誘発することによって血液を供給することが明らかになっている。一度このような新しい血管が腫瘍中に入り込むと、腫瘍細胞が循環に入り、肝臓、肺、または骨などの遠位の部位へ転移する手段ができあがる(Weidner, N., et al. (1991) The New England Journal of Medicine 324(1):1-8)。
【０００８】
フマギリンは抗菌および抗原虫物質として用いられている既知の化合物である。その物理化学的特性および生成方法は公知である。(U.S. Pat. No. 2,803,586 and Proc. Nat. Acad. Sci. USA (1962) 48:733-735).フマギリンおよびある種類のフマギリン類似物は、抗血管新生活性を示すとも報告されている。しかし、そのような抑制物質(たとえばTNP-470)の使用は、迅速な代謝分解、異常な血液濃度、および中枢神経系（CNS）の用量規定副作用によって、制限されることがある。
【０００９】
したがって、さらに強力で、神経毒性が少なく、安定で、および／または血清半減期がより長い血管新生抑制物質の必要性がいまだにある。
【００１０】
発明の概要
本願発明は、メチオニンアミノペプチダーゼ2(MetAP-2)を抑制してペプチドに結合すると考えられるフマギリン核などの核を含む血管抑制化合物を提供する。本願発明は、MetAP-2抑制核のアミノ酸残基またはアミノ酸誘導体への結合によって血管新生抑制化合物の代謝分解を防止し、上位の薬物動態学的プロフィールを確保して、血管新生抑制化合物が血液脳関門を通過する能力を変化させることによってCNS副作用を制限することができるという発見に、少なくとも部分的に基づいている。本願発明はまた、MetAP-2抑制核と部位特異的配列を含むペプチドとの結合が血管新生抑制化合物の細胞特異的送達を可能にし、血管新生抑制化合物の毒性を制限する、という発見に、少なくとも部分的に基づいている。
【００１１】
ある局面では、本願発明はリンパ性悪性疾患を罹患する対象（たとえば、ヒトなどの哺乳動物）の治療の方法を提供する。前記方法は、対象に有効な量のMetAP-2抑制物質を投与することによって、リンパ性悪性疾患を罹患する対象を治療するステップを含む。MetAP-2抑制物質で治療することができるリンパ性悪性疾患には、慢性リンパ性白血病、および急性リンパ性白血病などのリンパ性白血病、およびT細胞リンパ腫およびB細胞リンパ腫などのリンパ腫が含まれる。
好ましい実施態様では、前記方法にはさらにリンパ性悪性疾患を罹患する対象を治療するのに好適な第2の治療法を施すステップが含まれる。前記第2の治療法は、MetAP-2抑制物質を前記対象に投与する前後、または同時に、対象に施してもよい。前記第2の治療法には、前記対象への化学療法の試行、またはワクチンの投与のステップが含まれてもよい。
【００１２】
したがって、本願発明は化学式Iの化合物を提供する。
【００１３】
【化１】
2005536461.tif 000002
【００１４】
化学式Iにおいて、AはMetAP-2抑制核であって、WはOまたはNR2であって、R1 およびR2はそれぞれ独立に水素またはアルキルであって、Xはアルキレンまたは置換アルキレン、好ましくは直鎖C1-C6アルキレンであって、nは0または1であって、R3 およびR4はそれぞれ独立に水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換アリールまたはアリールアルキル、または置換または非置換ヘテロアリールもしくはヘテロアルキルである。R3およびR4はまた、それらに結合した炭素原子とともに炭素環またはヘテロ環基を形成するか、またはR1およびR4がともにアルキレン基を形成してもよく、Zは-C(O)-、アルキレン-C(O)-またはアルキレンであって、PはZまたはOR5もしくはN(R6)R7基にアミノ末端を結合させた1乃至約100アミノ酸残基からなるペプチドであって、当該化学基においてR5, R6およびR7はそれぞれ独立に水素、アルキル、置換アルキル、アザシクロアルキル、または置換アザシクロアルキルであってよい。R6およびR7はまた、それらがともに窒素原子に結合して、置換または非置換ヘテロ環状構造を形成してもよい。
【００１５】
化学式Iの化合物の別の実施態様では、W, X, n, R1, R3およびR4はこれらの変数が上述の意味を有しており、Zは-O-、-NR8-、アルキレン-O-またはアルキレン-NR8-であって、当該化学基においてR8は水素またはアルキルであって、Pは水素、アルキル、好ましくは直鎖または分岐鎖C1-C4アルキルまたはそのカルボキシ末端がZに結合した1乃至約100アミノ酸残基からなるペプチドである。
【００１６】
化学式Iの化合物では、R1-R8がアルキル基の場合、好ましいアルキル基は置換または非置換直鎖、分岐鎖、または環状C1-C6アルキル基である。特に好ましいアルキル基は直鎖または分岐鎖C1-C4アルキル基である。置換アルキル基には、例えばアミノ基、アルキルアミノ基またはジアルキルアミノ基などの少なくとも1つの非水素置換基、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素置換基などのハロゲン置換基、またはヒドロキシル基が含まれている。
【００１７】
少なくとも1つのR3およびR4が置換または非置換アリールまたはヘテロアリール基の場合、好ましい化学基には置換および非置換フェニール、ナフチル、インドリル、イミダゾリル、およびピリジルが含まれる。少なくとも1つのR3およびR4が置換または非置換アリールまたはヘテロアリール基の場合、好ましい化学基には置換および非置換ベンジル、ナフチルメチル、インドリルメチル、イミダゾリルメチル、およびピリジルメチル基が含まれる。アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキル基上の好ましい置換基は、独立に、アミノ、アルキル置換アミノ、フッ素、塩素、臭素、およびヨウ素などのハロゲン、ヒドロキシル基、およびアルキル基、好ましくは直鎖または分岐鎖C1-C6アルキル基、最も好ましくはメチル基からなるグループから選択される。Xは好ましくは直鎖C1-C6アルキレン、より好ましくはC1-C4アルキレン、および最も好ましくはメチレンまたはエチレンである。Zがアルキレン-C(O)-、アルキレン-O-、またはアルキレン-NR8の場合、当該アルキレン基は好ましくは直鎖C1-C6アルキレン、より好ましくはC1-C4アルキレン、および最も好ましくはメチレンまたはエチレンである。
【００１８】
R6およびR7はアルキル、置換アルキル、または水素に加えて、それぞれ独立に置換または非置換アザシクロアルキル基、または置換または非置換アザシクロアルキルアルキル基であってよい。好適な置換アザシクロアルキル基には、N-アルキル置換基、好ましくはN-C1-C4-アルキル基、およびさらに好ましくはN-メチル置換基を有するアザシクロアルキル基が含まれる。R6およびR7はまた、それらがともに窒素原子に結合して、置換または非置換5または6員環アザまたはジアザシクロアルキル基を形成してもよい。好ましくは、前記ジアザシクロアルキル基には、N-C1-C4-アルキル基などのN-アルキル置換基、またはさらに好ましくはN-メチル置換基が含まれる。 
【００１９】
得に好ましい実施態様では、-N(R6)R7はNH2かまたは以下に示す化学基の1つである。
【００２０】
【化２】
2005536461.tif 000003
2005536461.tif 000004
【００２１】
好ましくは、化学式Iの化合物には、Zが-O-、Pが水素、R3およびR4が両方とも水素、nが1、およびXがメチレンである化合物は含まない。  好ましくは、化学式Iの化合物にはさらに、Zがメチレン-O-、R3およびR4が両方とも水素、nが0である化合物は含まない。
【００２２】
別の局面では、本願発明は化学式XVであって、
【００２３】
【化３】
2005536461.tif 000005
【００２４】
当該化学式においてAはMetAP-2抑制核であって、WはOまたはNRである、化学式の血管新生抑制化合物を目的とする。ある実施態様では、Zは-C(O)-または-アルキレン-C(O)-であって、PはNHR、ORまたはN末端がZに結合している1乃至約100アミノ酸残基からなるペプチドである。この実施態様では、Qは水素、直鎖、分岐鎖、または環状アルキルまたはアリールであって、これはPが-ORであって、Qが水素ではない場合である。  
【００２５】
別の実施態様では、Zは-アルキレン-O-または-アルキレン-N(R)-であって、Pは水素、またはカルボニル末端がZに結合している1乃至約100アミノ酸残基からなるペプチドである。この実施態様では、Qは水素、直鎖、分岐鎖、または環状アルキルまたはアリールであって、これはPが水素であって、Qが水素ではない場合である。  
【００２６】
化学式XVの血管新生抑制化合物の場合、各Rは独立に水素またはアルキルである。
【００２７】
別の局面では、本願発明は化学式IまたはXVの血管新生抑制化合物および薬学的に許容な担体を含む薬学的組成物を特徴とする。
【００２８】
さらに別の局面では、本願発明は対象における例えば癌（肺癌、脳癌、腎癌、大腸癌、肝癌、膵癌、胃癌、前立腺癌、乳癌、卵巣癌、子宮頸癌、黒色腫、および任意の前述の癌の転移癌）などの血管新生疾患の治療の方法を特徴とする。前記方法には、1種類以上の化学式IまたはXVの血管新生抑制化合物を治療上有効な量、前記対象に投与するステップが含まれる。 
【００２９】
ある実施態様では、本願発明は熱帯熱マラリア原虫などのマラリア原虫種による感染症、またはリーシュマニア・ドナバニなどのリーシュマニア種による感染症などの寄生虫感染症を罹患した対象の治療の方法を提供する。前記方法は、本願発明の化合物を治療上有効な量、前記対象に投与するステップを含む。前記対象は、寄生生物による感染症を罹患した、または感受性のある個体であってよい。好ましい実施態様では、前記対象はマラリアまたはリーシュマニア症を罹患している。
【００３０】
本願発明はさらに、リンパ性悪性疾患を罹患する対象を治療する方法を提供する。前記方法は、本願発明の化合物を治療上有効な量、前記対象に投与するステップを含む。本願発明の化合物で治療することができる好適なリンパ性悪性疾患には、慢性リンパ性白血病、および急性リンパ性白血病などのリンパ性白血病、およびT細胞リンパ腫およびB細胞リンパ腫を含む非ホジキンリンパ腫などのリンパ腫が含まれる。
【００３１】
さらなる実施態様では、本願発明は、前記対象に本願発明の化合物を治療上有効な量投与するステップを含む、自己免疫疾患を罹患する対象を治療する方法を提供する。たとえば、前記自己免疫疾患は、たとえば関節リウマチ、紅斑性狼瘡、乾癬、多発性硬化症、重症筋無力症、血管炎、または糖尿病であってよい。
【００３２】
本願発明のその他の特徴および利点は、以下の発明の詳細な説明および特許請求の範囲から明らかになるであろう。
【００３３】
発明の詳細な説明
本願発明は血管新生抑制物質として有用な化合物、および血管新生疾患の治療にこれらの化合物を用いる方法を提供する。理論によって制限されることは意図しないが、本願発明の血管新生抑制化合物は、メチオニンアミノペプチダーゼ2 (MetAP-2)を抑制することによって血管新生を抑制する。この酵素は、新しく合成されたタンパク質のN末端メチオニンを分解して、活性状態になったタンパク質を産生する。同時に、本願発明の血管新生抑制化合物のペプチドの存在によって、血管新生抑制化合物の代謝分解を防止し、上位の薬物動態学的プロフィールが確保される。本願発明の血管新生抑制化合物のペプチドの存在によって、たとえばCNS副作用（たとえばCNS毒性）を制限するなど血液脳関門を通過する血管新生抑制物質の能力を変化させることもできる。本願発明の血管新生抑制化合物の部位特異的配列を含むペプチドの存在によって、血管新生抑制化合物の部位特異的送達を可能にし、したがって血管新生抑制化合物の毒性が制限される。
【００３４】
本願発明の血管新生抑制化合物は、MetAP-2抑制核およびそこに直接または間接的に結合しているペプチドを含む。  ある実施態様では、本願発明は化学式Iの化合物を提供する。
【００３５】
【化４】
2005536461.tif 000006
【００３６】
化学式Iにおいて、AはMetAP-2抑制核であって、WはOまたはNR2であって、R1 およびR2はそれぞれ独立に水素またはアルキルであって、Xはアルキレンまたは置換アルキレン、好ましくは直鎖C1-C6アルキレンであって、nは0または1であって、R3 およびR4はそれぞれ独立に水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換アリールまたはアリールアルキル、または置換または非置換ヘテロアリールもしくはヘテロアルキルである。R3およびR4はまた、それらに結合した炭素原子とともに炭素環またはヘテロ環基を形成するか、またはR1およびR4がともにアルキレン基を形成してもよく、Zは-C(O)-、アルキレン-C(O)-またはアルキレンであって、PはZまたはOR5もしくはN(R6)R7基にアミノ末端を結合させた1乃至約100アミノ酸残基からなるペプチドであって、当該化学基においてR5, R6およびR7はそれぞれ独立に水素、アルキル、置換アルキル、アザシクロアルキル、または置換アザシクロアルキルであってよい。R6およびR7はまた、それらがともに窒素原子に結合して、置換または非置換ヘテロ環状構造を形成することもできる。
【００３７】
化学式Iの化合物の別の実施態様では、W, X, n, R1, R3およびR4はこれらの変数が上述の意味を有しており、Zは-O-、-NR8-、アルキレン-O-またはアルキレン-NR8-であって、当該化学基においてR8は水素またはアルキルであって、Pは水素、アルキル、好ましくは直鎖または分岐鎖C1-C4アルキルまたはそのカルボキシ末端がZに結合した1乃至約100アミノ酸残基からなるペプチドである。
【００３８】
化学式Iの化合物では、R1-R8がアルキル基の場合、好ましいアルキル基は置換または非置換直鎖、分岐鎖、または環状C1-C6アルキル基である。特に好ましいアルキル基は直鎖または分岐鎖C1-C4アルキル基である。置換アルキル基には、例えばアミノ基、アルキルアミノ基またはジアルキルアミノ基などの少なくとも1つの非水素置換基、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素置換基などのハロゲン置換基、またはヒドロキシル基が含まれている。
【００３９】
少なくとも1つのR3およびR4が置換または非置換アリールまたはヘテロアリール基の場合、好ましい化学基には置換および非置換フェニール、ナフチル、インドリル、イミダゾリル、およびピリジルが含まれる。少なくとも1つのR3およびR4が置換または非置換アリールまたはヘテロアリール基の場合、好ましい化学基には置換および非置換ベンジル、ナフチルメチル、インドリルメチル、イミダゾリルメチル、およびピリジルメチル基が含まれる。アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキル基上の好ましい置換基は、独立に、アミノ、アルキル置換アミノ、フッ素、塩素、臭素、およびヨウ素などのハロゲン、ヒドロキシル基、およびアルキル基、好ましくは直鎖または分岐鎖C1-C6アルキル基、最も好ましくはメチル基からなるグループから選択される。Xは好ましくは直鎖C1-C6アルキレン、より好ましくはC1-C4アルキレン、および最も好ましくはメチレンまたはエチレンである。Zがアルキレン-C(O)-、アルキレン-O-、またはアルキレン-NR8の場合、当該アルキレン基は好ましくは直鎖C1-C6アルキレン、より好ましくはC1-C4アルキレン、および最も好ましくはメチレンまたはエチレンである。
【００４０】
【化５】
2005536461.tif 000007
【００４１】
R6およびR7はアルキル、置換アルキル、または水素に加えて、それぞれ独立に置換または非置換アザシクロアルキル基、または置換または非置換アザシクロアルキルアルキル基であってよい。好適な置換アザシクロアルキル基には、N-アルキル置換基、好ましくはN-C1-C4-アルキル基、およびさらに好ましくはN-メチル置換基を有するアザシクロアルキル基が含まれる。R6およびR7はまた、それらがともに窒素原子に結合して、置換または非置換5または6員環アザまたはジアザシクロアルキル基を形成する。好ましくは、前記ジアザシクロアルキル基には、N-C1-C4-アルキル基などのN-アルキル置換基、またはさらに好ましくはN-メチル置換基が含まれる。 
【００４２】
得に好ましい実施態様では、-N(R6)R7はNH2かまたは以下に示す化学基の1つである。
【００４３】
【化６】
2005536461.tif 000008
【００４４】
好ましくは、化学式Iの化合物には、Zが-O-、Pが水素、R3およびR4が両方とも水素、nが1、およびXがメチレンである化合物は含まない。  好ましくは、化学式Iの化合物にはさらに、Zがメチレン-O-、R3およびR4が両方とも水素、nが0である化合物は含まない。
【００４５】
別の実施態様では、本願発明は化学式XVであって、
【００４６】
【化７】
2005536461.tif 000009
【００４７】
当該化学式においてAはMetAP-2抑制核であって、WはOまたはNRである、化学式の血管新生抑制化合物を目的とする。ある実施態様では、Zは-C(O)-または-アルキレン-C(O)-であって、PはNHR、ORまたはN末端がZに結合している1乃至約100アミノ酸残基からなるペプチドである。Zは好ましくは-C(O)-またはC1-C4-アルキレン-C(O)-であって、より好ましくは, -C(O)-またはC1-C2-アルキレン-C(O)-である。Qは好ましくは直鎖、分岐鎖または環状C1-C6-アルキル、フェニル、またはナフチルである。より好ましくは、Qはイソプロピル、フェニル、またはシクロヘキシルである。
【００４８】
別の実施態様では、Zがアルキレン-O-または-アルキレン-N(R)-であって、当該アルキレンは好ましくは直鎖C1-C6アルキレン、より好ましくはC1-C4アルキレン、および最も好ましくはC1-C2-アルキレンである。  Pは水素、またはカルボニル末端がZに結合している1乃至約100アミノ酸残基からなるペプチドである。この実施態様では、Qは水素、直鎖、分岐鎖、または環状アルキルまたはアリールであって、これはPが水素であって、Qが水素ではない場合である。Qは好ましくは直鎖、分岐鎖または環状C1-C6-アルキル、フェニル、またはナフチルである。より好ましくは、Qはイソプロピル、フェニル、またはシクロヘキシルである。
【００４９】
化学式XVの化合物の場合、各Rは独立に水素またはアルキルである。ある実施態様では、各Rは独立に水素または直鎖、分岐鎖もしくは環状C1-C6-アルキルである。好ましくは、各Rは独立に水素または直鎖もしくは分岐鎖C1-C4-アルキルである。より好ましくは、各Rは独立に水素またはメチルである。最も好ましい実施態様では、各Rは水素である。
【００５０】
化学式IおよびXVでは、AはMetAP-2抑制核である。本願明細書に記載の「MetAP-2抑制核」には、たとえばMetAP-2が新しく合成されたタンパク質のN末端メチオニン残基を分解し、活性状態の当該タンパク質を産生する能力など、メチオニンアミノペプチダーゼ2(MetAP-2)の活性を抑制することができる部分を含む。好ましいMetAP-2抑制核はフマギリン誘導構造である。  
【００５１】
好適なMetAP-2抑制核には、化学式IIであって、
【００５２】
【化８】
2005536461.tif 000010
【００５３】
当該化学式においてR1は水素またはアルコキシ、好ましくはC1-C4-アルコキシ、およびより好ましくはメトキシである、化学式の核が含まれる。R2は水素またはヒドロキシであって、R3は水素またはアルキル、好ましくはC1-C4-アルキル、およびより好ましくは水素である、Dは直鎖または分岐鎖アルキルであって、好ましくはC1-C6-アルキル、アリールアルキル、好ましくはアリール-C1-C4-アルキルであって、より好ましくはフェニル-C1-C4-アルキルであるか、またはDは化学式
【００５４】
【化９】
2005536461.tif 000011
【００５５】
であって、当該化学式において点線は単結合または二重結合をあらわす、化学式の構造である。
【００５６】
Aは化学式IIIであって、
【００５７】
【化１０】
2005536461.tif 000012
【００５８】
当該化学式において、R1, R2, R3およびDは上述の化学式IIで定義した意味を有し、Xはハロゲンなどの離脱基である、化学式のMetAP-2抑制核であってよい。 
【００５９】
好適なMetAP-2抑制核の例には、以下に上げるものが、それらに限定されずに含まれる。
【００６０】
化学式IV乃至Xの各場合において、環の炭素上に示された結合価は、化学式I乃至XVに記載の構造変数Wの結合点である。化学式IXにおいて、pは整数0乃至10であって、好ましくは1乃至4である。化学式IV、V、およびVI乃至IXにおいて、R1は水素またはC1-C4-アルコキシであって、好ましくはメトキシである。化学式IVおよびVにおいて、点線は、その結合が二重結合または単結合であってよいことを示す。化学式Vにおいて、Xは、チオアルコキシ基、チオアリールオキシ基、ハロゲンまたはジアルキルスルフィニウム基などの離脱基をあらわす。化学式IVおよびVにおいて、R2はH、OH、アミノ、C1-C4-アルキルアミノ、またはジ(C1-C4-アルキル)アミノ)であって、好ましくは、Hである。特定の不斉中心の立体化学が示されていない化学式では、その不斉中心は、血管新生抑制化合物がMetAP-2の活性を抑制する能力と一致する、可能な立体化学のいずれかを有していてよい。
【００６１】
特に好ましい実施態様では、Aは以下の化学式XのMetAP-2抑制核である。
【００６２】
【化１１】
2005536461.tif 000013
【００６３】
本願明細書に記載の通り、「P」および「ペプチド」という用語には、1乃至約100アミノ酸残基（たとえば1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20またはそれ以上のアミノ酸残基）を含む化合物が含まれる。  好ましい実施態様では、前記ペプチドには、約90、80、70、60、50、40、30、20、または10未満のアミノ酸残基を含む化合物、好ましくは約1乃至10、1乃至20、1乃至30、1乃至40、1乃至50、1乃至60、1乃至70、1乃至80、or 1乃至90を含む化合物が含まれる。前記ペプチドは、天然のものであっても合成されていてもよい。前記アミノ酸残基は、好ましくはα-アミノ酸残基である。たとえば、前記アミノ酸残基は、独立に、20種類の天然アミノ酸残基、前記の20種類のアミノ酸残基のD鏡像異性体から選択されてもよく、非天然アミノ酸残基（たとえば、ノルロイシン、ノルバリン、フェニルグリシン、βアラニン、または3-アミノメチル安息香酸などのペプチド模倣体など）であってもよい。ある実施態様では、前記アミノ酸残基は独立に化学式XI、化学式XII、および化学式XIIIの残基から選択される。
【００６４】
【化１２】
2005536461.tif 000014
【００６５】
化学式XIでは、X1は水素、20種類の天然アミノ酸残基の1つの側鎖、直鎖、分岐鎖、または環状C1-C8-アルキル基、フェニルもしくはナフチル基などのアリール基、アリール-C1-C4-アルキル基、ピリジル、チエニル、ピロリル、もしくはフリル基などのヘテロアリール基、またはヘテロアリール-C1-C4-アルキル基であって、X2は水素、直鎖、分岐鎖、もしくは環状C1-C8-アルキル基、フェニルもしくはナフチル基などのアリール基、アリール-C1-C4-アルキル基、または上述のX1に記載したヘテロアリール基である。好ましくはX2 は水素である。化学式XIIの場合、Yはメチレン、酸素、硫黄、またはNHであって、aおよびbはそれぞれ独立に0乃至4であって、aとbの合計は1乃至4である。化学式XIおよびXIIは、α炭素原子においてDまたはL立体化学を有するαアミノ酸残基を包含する。1つ以上のアミノ酸残基が、β-、γ-またはε-アミノ酸残基などの、αアミノ酸残基以外のアミノ酸残基であってもよい。そのようなアミノ酸残基の好適な例は、化学式XIIIであって、当該化学式において、qは2乃至6の整数であって、X1およびX2はそれぞれ独立に化学式XIに記載の変数としての上述の意味を有する。
【００６６】
好ましい実施態様では、本願発明の血管新生抑制化合物に用いられるペプチドには、前記血管新生抑制化合物が目的の細胞表面に結合する特異性を増すための部位特異的配列が含まれてもよい。本願明細書に記載の、「部位特異的配列」という用語には、前記血管新生抑制化合物の末梢への曝露を制限するように働くか、および／または、たとえば血管新生もしくは以上細胞増殖の部位など、目的の部位に前記血管新生抑制化合物を方向付けるように働く、任意のアミノ酸配列（例えば天然または非天然アミノ酸残基など）が含まれることを意図する。
【００６７】
本願発明の血管新生抑制化合物内に含まれるペプチドには、血管新生または以上細胞増殖の対に発現する酵素のペプチド切断部位であって、細胞浸透活性血管新生抑制化合物またはその断片（例えば当該血管新生抑制化合物のMetAP-2抑制核を含む断片）の組織選択的送達を可能にするペプチド切断部位が含まれていてもよい。前記ペプチドはまた、血管新生または異常な細胞増殖の部位に発現し、血管新生抑制化合物を目的の細胞表面に向けさせる細胞表面受容体のリガンドである配列も含まれてよい。たとえば、本願発明の血管新生抑制化合物ないに含まれているペプチドは、メタロプロテイナーゼの切断部位もしくはインテグリン結合RGD(Arg-Gly-Asp)配列、または酵素「切断」配列と当該血管新生抑制化合物を内皮細胞膜に向けさせるように働く細胞表面「リガンド」の組み合わせを含んでもよい。しかし、ペプチド配列の選択は、MetAP-2抑制物質が望まれる細胞に送達されるような活性化した血管新生抑制化合物が利用できるように行われなければならない。
【００６８】
たとえば、マトリックスマタロプロテイナーゼによって分解される配列は、MetAP-2抑制核、結合基、およびペプチド断片を含有するような生成物を産生する。たとえば、配列の選択は、マトリックスマタロプロテイナーゼ分解によって生成された活性化血管新生抑制化合物などの活性化血管新生抑制化合物が細胞透過性であるように行う。好ましくは、前記活性化血管新生抑制化合物は、切断後に遊離酸を含んでいない。
【００６９】
ある実施態様では、前記ペプチドにはマトリックスメタロプロテアーゼ-2 (MMP-2)、MMP-1、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-12、MMP-13またはMMP-26が含まれる。好ましくは、前記ペプチドにはMMP-2またはMMP-9の切断部位が含まれる。たとえば、前記ペプチドは配列-Pro-Leu-Gly-Xaa- (配列番号:1)であって、当該配列においてXaaはGly-Xaa結合におけるマトリックスメタロプロテアーゼ(MMP)切断と一致する任意の天然アミノ酸残基である、配列であってよい。Xaaは好ましくは、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、およびバリンなどの疎水性アミノ酸残基である。
【００７０】
その他の好適な配列には、Pro-Cha-Gly-Cys(Me)-His (配列番号:2)、Pro-Gln-Gly-Ile-Ala-Gly-Gln-D-Arg (配列番号:3)、Pro-Gln-Gly-Ile-Ala-Gly-Trp (配列番号:4)、Pro-Leu-Gly-Cys(Me)-His-Ala-D-Arg (配列番号:5)、Pro-Leu-Gly-Met-Trp-Ser-Arg (配列番号:35)、Pro-Leu-Gly-Leu-Trp-Ala-D-Arg (配列番号:6)、Pro-Leu-Ala-Leu-Trp-Ala-Arg (配列番号:7)、Pro-Leu-Ala-Leu-Trp-Ala-Arg (配列番号:8)、Pro-Leu-Ala-Tyr-Trp-Ala-Arg (配列番号:9)、Pro-Tyr-Ala-Tyr-Trp-Met-Arg (配列番号:10)、Pro-Cha-Gly-Nva-His-Ala (配列番号:11)、Pro-Leu-Ala-Nva (配列番号:12)、Pro-Leu-Gly-Leu (配列番号:13)、Pro-Leu-Gly-Ala (配列番号:14)、Arg-Pro-Leu-Ala-Leu-Trp-Arg-Ser (配列番号:15)、Pro-Cha-Ala-Abu-Cys(Me)-His-Ala (配列番号:16)、Pro-Cha-Ala-Gly-Cys(Me)-His-Ala (配列番号:17)、Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu (配列番号:18)、Pro-Lys-Pro-Leu-Ala-Leu (配列番号:19)、Arg-Pro-Lys-Pro-Tyr-Ala-Nva-Trp-Met (配列番号:20)、Arg-Pro-Lys-Pro-Val-Glu-Nva-Trp-Arg (配列番号:21)、Arg-Pro-Lys-Pro-Val-Glu-Nva-Trp-Arg (配列番号:22)、およびArg-Pro-Lys-Pro-Leu-Ala-Nva-Trp (配列番号:23)の1つ以上を含む配列が含まれる。これらの配列は慣習的に3文字のアルファベットによる略称を用いてあらわされる天然アミノ酸残基によってあらわされており、以下にあげる略称は非天然アミノ酸をあらわす。Abu = L-a-アミノブチリル; Cha = L-シクロヘキシルアラニン; Nva = L-ノルバリン。
【００７１】
ある実施態様では、Pは、Ac-Pro-Leu-Gly-Met-Trp-Ala (配列番号:24)、Gly-Pro-Leu-Gly-Met-His-Ala-Gly (配列番号:25)、Gly-Pro-Leu-(Me)Gly (配列番号:26)、Gly-Pro-Leu-Gly (配列番号:27)、Gly-Met-Gly-Leu-Pro (配列番号:28)、Ala-Met-Gly-Ile-Pro (配列番号:29)、Gly-Arg-Gly-Asp-(O-Me-Tyr)-Arg-Glu (配列番号:30)、Gly-Arg-Gly-Asp-Ser-Pro (配列番号:31)、Gly-Arg-Gly-Asp (配列番号:32)、Asp-Gly-Arg、Ac-Pro-Leu-Gly-Met-Ala (配列番号:33)、Ac-Arg-Gly-Asp-Ser-Pro-Leu-Gly-Met-Trp-Ala (配列番号:34)、Ac-Pro-Leu-Gly-Met-Gly (配列番号:36)、Met-Trp-Ala (配列番号:37)、Met-Gly (配列番号:38)、Gly-Pro-Leu-Gly-Met-Trp-Ala-Gly (配列番号:39)、およびGly-Arg-(3-アミノ-3-ピリジルプロピオン酸) (配列番号:40)からなるグループから選択されるアミノ酸配列である。（前述のAcはアセチル基をあらわす）。
【００７２】
前記ペプチドは、そのN末端またはC末端において、MetAP-2抑制核に結合していてもよい。前記ペプチドがそのC末端においてMetAP-2抑制核に結合する場合、前記ペプチドのN末端は-NR2R3であって、当該化学基においてR2は水素、アルキル、またはアリールアルキルであって、R3は水素、アルキル、アリールアルキル、またはアシルである、化学基であってよい。前記ペプチドがそのN末端においてMetAP-2抑制核に結合する場合、前記ペプチドのC末端は-C(O)R4であって、当該化学基においてR4は-OH, -O-アルキル、-O-アリールアルキル、または-NR2R3であって、当該化学基においてR2は水素、アルキル、またはアリールアルキルであって、R3は水素、アルキル、アリールアルキル、またはアシルである、化学基であってよい。この実施態様において、前記C末端残基はまた、対応する第１級アルコールなどの還元型として存在することもできる。  
【００７３】
本願発明にはまた、本願発明の血管新生抑制化合物の薬学的に許容な塩も含まれる。「薬学的に許容な塩」には、本願発明の血管新生抑制化合物の望ましい生物学的活性を保持し、望ましくないいかなる毒性作用をも与えない塩が含まれる。そのような塩の例には、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、および硝酸などの酸、酢酸、オキサル酸、酒石酸、コハク酸、マレイン酸、安息香酸、パモン酸、アルギン酸、メタンスルホン酸、およびナフタレンスルホン酸などの酸の塩である。さらに含まれるものは、ナトリウム、カリウム、リチウム、亜鉛、銅、バリウム、ビスマス、およびカルシウムなどの陽イオン、またはトリアルキルアンモニウムなどの有機陽イオンの塩である。上述の塩の組み合わせも有用である。
【００７４】
好ましい化学式Iの血管新生抑制化合物
特に好ましい本願発明の血管新生抑制化合物のあるセットには、Aが化学式XのMetAP-2抑制核であって、W がOまたはNR2であって、化学式 
【００７５】
【化１３】
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【００７６】
が、後述の化学式によってあらわされる、化合物が含まれる。
【００７７】
【化１４】
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【００７８】
好ましい化学式XVの血管新生抑制化合物
化学式XVの血管新生抑制化合物の好ましいサブセットは、以下の化学式XIVを含む。
【００７９】
【化１５】
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【００８０】
ある実施態様では、WはOまたはNRである。Zは-C(O)-またはアルキレン-C(O)-であって、好ましくはC1-C4-アルキレン-C(O)-である。Rは水素またはC1-C4-アルキルである。Qは水素、直鎖、分岐鎖または環状C1-C6-アルキル、またはアリールである。R1はヒドロキシ、C1-C4-アルコキシ、またはハロゲンである。PはNH2、ORまたは、N末端でZに結合するペプチドであって、天然アミノ酸残基、前記天然アミノ酸残基のD-鏡像異性体、および非天然アミノ酸残基から独立に選択される1乃至100アミノ酸残基からなるペプチドである。QがHの場合、PはNH2またはORではない。好ましい実施態様では、WはOまたはNHであって、Qはイソプロピルであって、R1はメトキシであって、Pは1乃至15アミノ酸残基からなり、化学式XIVの点線は二重結合をあらわす。特に好ましい実施態様では、WはOであって、Pは10以下のアミノ酸残基を含む。
【００８１】
化学式XIVの化合物の別の実施態様では、WはOまたはNRである。Zはアルキレン-O-またはアルキレン-NRであって、好ましくはC1-C4-アルキレン-O-またはC1-C4-アルキレン-NR-である。Rは水素またはC1-C4-アルキルである。Qは水素、直鎖、分岐鎖または環状C1-C6-アルキル、またはアリールである。R1はヒドロキシ、C1-C4-アルコキシ、またはハロゲンである。Pは水素、またはC末端でZに結合するペプチドであって、天然アミノ酸残基、前記天然アミノ酸残基のD-鏡像異性体、および非天然アミノ酸残基から独立に選択される1乃至100アミノ酸残基からなるペプチドである。QがHの場合、PはHではない。好ましい実施態様では、WはOまたはNHであって、Qはイソプロピルであって、R1はメトキシであって、Pは1乃至15アミノ酸残基からなり、化学式XIVの点線は二重結合をあらわす。特に好ましい実施態様では、WはOであって、Pは10以下のアミノ酸残基を含むか、またはPは水素である。
【００８２】
特に好ましい本願発明の血管新生抑制化合物のあるセットは、以下の化学式によってあらわされる。
【００８３】
【化１６】
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【００８４】
血管新生疾患の治療のための血管新生抑制化合物を用いる方法
別の実施態様では、本願発明は対象における血管新生疾患を治療する方法を提供する。前記方法には、本願発明の血管新生抑制化合物を治療上有効な量、前記対象に投与し、前記対象における血管新生疾患を治療するステップが含まれる。 
本願明細書に用いられる「血管新生疾患」には、たとえば刺激または抑制などの異常なまたは不必要な血管の形成（血管新生）によって特徴づけられるまたは生じる疾患、障害、または症状が含まれる。異常なまたは不必要な血管新生は、特定の疾患を直接引き起こすか、または既存の病理学的状態を悪化させるかの、いずれかであると考えられる。血管新生疾患には、たとえば糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、角膜移植片拒絶症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、ルベオーシス、黄斑変性症による網膜新生血管、低酸素症、感染症または外科的介入に随伴する眼内の血管新生、眼腫瘍およびトラコーマ、ならびに血管新生が失明を生じる可能性があるその他の眼の異常な血管新生症状などの眼障害、たとえば乾癬および化膿性肉芽腫など皮膚が影響を受ける障害、たとえば進行性の成長が腫瘍細胞による血管新生の連続的な誘発に依存する、癌腫および肉腫、肺癌、脳癌、腎癌、大腸癌、肝癌、膵癌、胃癌、前立腺癌、乳癌、卵巣癌、子宮頸癌、黒色腫、ならびに任意の前述の癌の転移癌などの癌、たとえば慢性リンパ性白血病、および急性リンパ性白血病などのリンパ性白血病、ならびにT細胞リンパ腫およびB細胞リンパ腫などのリンパ腫などのリンパ性悪性疾患、たとえば血管線維腫および血友病性関節などの小児障害、血管腫およびアテローム斑内の毛細血管増殖などの血管疾患、たとえば肥大性瘢痕、創傷肉芽形成、および血管癒着などの手術に伴う障害、ならびに関節の新しい血管が関節の軟骨を破壊する可能性がある関節リウマチ、免疫性関節症、および変形性関節症、ならびに強皮症、紅斑性狼瘡、乾癬、多発性硬化症、重症筋無力症、血管炎、または糖尿病などの自己免疫性疾患が含まれる。 
【００８５】
血管新生疾患という用語には、さらに、消化管癒着、クローン病、アテローム性動脈硬化症、強皮症、および肥大性瘢痕すなわちケロイド、ネコひっかき病(Rochele ninalia quintosa)および潰瘍（ヘリコバクターピロリ）などの病理的な関連としての血管新生を有する疾患をそれらに限定されずに含まれる、内皮細胞の過剰なまたは異常な刺激を特徴とする疾患が含まれる。さらに、本願発明の血管新生抑制化合物は、避妊物質（血管新生に依存する排卵および胎盤形成を抑制する能力による）としても有用であり、手術前に対象に投与することによって出血を減少させるために用いることもできる。
【００８６】
本願発明の化合物は熱帯熱マラリア原虫などのマラリア原虫種による感染症、またはリーシュマニア・ドナバニなどのリーシュマニア種による感染症などの寄生虫感染症を罹患した対象を治療するために用いることもできる。前記方法は、本願発明の化合物を治療上有効な量、前記対象に投与するステップを含む。前記対象は、寄生生物による感染症を罹患した、または感受性のある個体であってよい。好ましい実施態様では、前記対象はマラリアまたはリーシュマニア症を罹患している。
【００８７】
本願発明の化合物はまた、胸腺腫を罹患する対象を治療するために用いることもできる。したがって、本願発明は、前記患者に本願発明の化合物を治療上有効な量投与するステップを含む、患者の胸腺腫を治療する方法を提供する。  
【００８８】
本願発明の化合物はまた、免疫システムの抑制が望ましい臨床プロトコルの免疫抑制物質として利用することもできる。したがって、本願発明は、対象に本願発明の化合物を免疫抑制に有効な量投与するステップを含む、対象の免疫抑制状態を誘発する方法を提供する。たとえば、本願発明の化合物は、ドナーからの臓器、組織、または細胞移植を受ける、または受けたことがある対象の免疫機能を抑制するために用いることができる。ある実施態様では、前記の移植組織、臓器、または細胞は骨髄、幹細胞、膵島細胞などの膵細胞、または角膜である。別の実施態様では、前記移植臓器は肝臓、腎臓、心臓、または肺などの固形臓器である。
【００８９】
本願発明の化合物は、リンパ性悪性疾患を罹患する対象（たとえば、ヒトなどの哺乳動物）を治療するために用いることもできる。前記方法は、対象に有効量のMetAP-2抑制物質を投与することによって、リンパ性悪性疾患を罹患する対象を治療するステップを含む。
【００９０】
本願発明の化合物はまた、関節リウマチ、狼瘡、強直性脊髄炎、乾癬性関節炎、強皮症、川崎病、およびPrimer on the Rheumatic Diseases, 11th Edition (John H. Klippel, MD, editor; Arthritis Foundation:Atlanta GA (1997))に記載のその他のリウマチ性疾患などのリウマチ性疾患を治療するために用いることもできる。
【００９１】
本願明細書に記載の「リンパ性悪性疾患」という用語には、リンパ細胞の任意の悪性疾患が含まれる。リンパ性悪性疾患の例には、慢性リンパ性白血病および急性リンパ性白血病などのリンパ性白血病、ならびに非ホジキンリンパ腫などのリンパ腫が含まれる。「非ホジキンリンパ腫」という用語には、前駆（末梢）T細胞リンパ芽球性リンパ腫、成人T細胞、結節外ナチュラルキラー／T細胞、鼻型、腸疾患型T細胞、肝脾T細胞、皮下脂肪組織炎様T細胞、皮膚リンパ腫、未分化大細胞、末梢T細胞、および血管免疫芽細胞性T細胞リンパ腫などのT細胞リンパ腫、ならびに前駆B細胞リンパ芽球、小リンパ球、B細胞リンパ球、リンパ形質細胞性、脾辺縁帯、結節外辺縁帯-MALT、結節辺縁帯、ろ胞性、外套細胞、びらん性大B細胞、原発性縦隔大B細胞、原発性体腔性およびバーキットリンパ腫が含まれる。非ホジキンリンパ腫には、AIDS関連リンパ腫および中枢神経系リンパ腫も含まれる。
【００９２】
本願明細書に記載の「対象」という用語には、温血動物、好ましくはヒトを含む哺乳動物が含まれる。好ましい実施態様では、前記対象は霊長類である。さらにより好ましい実施態様では、前記霊長類はヒトである。
【００９３】
本願明細書に用いられる、対象に「投与する」という用語には、たとえば薬学的剤形の血管新生抑制化合物などの血管新生抑制化合物（本願明細書に記載の）を、非経口または経口経路のいずれかによる送達、筋肉内注射、皮下／皮内注射、静脈内注射、口腔内投与、経皮送達、および直腸、結腸、膣、鼻、または気道経路による投与を含む、対象の望ましい部位に化合物を送達するのに好適な任意の経路によって、前記対象に投与、送達、または適用するステップを含む。
【００９４】
本願明細書に記載の「有効な量」という用語には、たとえば対象の血管新生疾患を治療するのに十分な、望ましい結果を達成するために有効となるのに必要な用量および期間の量を含む。本願明細書に記載の血管新生抑制化合物の有効な量は、前記対象の疾患の状態、年齢、および体重、ならびに前記対象に望ましい応答を誘導する血管新生抑制化合物の能力によって変化することもある。投与計画は、最適な治療応答を提供するように調整してもよい。有効な量はまた、当該血管新生抑制化合物の任意の毒性または有害な効果（たとえば副作用）を治療上有効な効果が上回る量でもある。
【００９５】
血管新生抑制化合物の治療上有効な量は、体重1kgにつき約0.001 to 30 mg、好ましくは体重1kgにつき約0.01 to 25 mg、さらに好ましくは体重1kgにつき約0.1 to 20 mg/kg、およびよりさらに好ましくは体重1kgにつき約1乃至10 mg、2乃至9 mg/kg、3乃至8 mg、4乃至7 mg、5乃至6 mgの範囲内であってよい。当業者は、特定の要因が、疾患またな障害の重篤度、治療歴、対象の全般的な健康状態、およびその他に罹患する疾患をそれらに限定せずに含む、前記対象を有効に治療するために必要な用量に影響することもあるということを理解するであろう。さらに、対象の治療上有効な量の血管新生抑制化合物での治療は、単回の治療を含んでもよく、または好ましくは、一連の治療を含んでもよい。ある例では、対象を、体重1kgにつき約0.1乃至20 mgの範囲内の血管新生抑制化合物で、約1乃至10週間、好ましくは2乃至8週間、さらに好ましくは約3乃至7週間、およびよりさらに好ましくは約4、5、または6週間に1回、治療する。また、治療に用いられる血管新生抑制化合物の有効な用量は、特定の治療の経過中において増加または減少させてもよい。 
【００９６】
本願発明の方法はさらに、対象に、治療上有効な量の血管新生抑制化合物を、たとえばタキソール、パクリタキセル、またはアクチノマイシンDなどの化学療法剤、またはトルブタミドなどの抗糖尿病剤などの血管新生疾患を治療することで知られる別の薬学的に活性な化合物、もしくはヘパリンまたは硫酸シクロデキストリンなどの血管新生抑制化合物の血管新生抑制活性を強化する可能性がある化合物と組み合わせて投与するステップを含む。使用することができるその他の薬学的に活性な化合物は、その完全な内容を引用により明確に本願明細書に援用する、Harrison's Principles of Internal Medicine, Thirteenth Edition, Eds. T.R. Harrison et al.McGraw-Hill N.Y., NY、および the Physicians Desk Reference 50th Edition 1997, Oradell New Jersey, Medical Economics Co.に見つけることができる。当該血管新生抑制化合物および当該薬学的に活性な化合物は、同一の薬学的組成物、または異なる薬学的組成物の中に入れて（同時にまたは異なる時間に）前記対象に投与することもできる。
【００９７】
血管新生抑制化合物の薬学的組成物
本願発明はまた、1種類以上の血管新生抑制化合物を含む薬学的に許容な製剤を提供する。そのような薬学的に許容な製剤には、典型的に、1種類以上の血管新生抑制化合物とともに薬学的に許容な担体および／または賦形剤が含まれる。  本願明細書に用いられる「薬学的に許容な担体」という文言には、溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌および抗真菌剤、等張および吸収遅延剤、ならびに生理学的に適合な類似物などが含まれる。薬学的に活性な物質へのそのような媒質および物質の使用は、当業に公知である。任意の従来の媒質または物質が血管新生抑制化合物と適合性がない場合を以外は、薬学的組成物へのそれらの使用が考慮される。  たとえばタキソール、パクリタキセル、またはアクチノマイシンDなどの化学療法剤、またはトルブタミドなどの抗糖尿病剤などの血管新生疾患を治療することで知られる別の薬学的に活性な化合物、またはヘパリンもしくは硫酸シクロデキストリンなどの血管新生抑制化合物の血管新生抑制活性を強化する可能性がある化合物などの、血管新生疾患を治療することで知られる補助的な薬学的に活性な化合物も、本願発明の組成物に組み込むことができる。使用することができる好適な薬学的に活性な化合物は、Harrison's Principles of Internal Medicine (上述)に見いだすことができる。
【００９８】
本願発明の薬学的組成物は、意図する投与経路と適合するように調剤される。投与経路の例には、たとえば静脈内、皮内、皮下、口腔内（たとえば吸入）、経皮（局所）、経粘膜、および直腸投与などの非経口投与が含まれる。非経口、皮内、または皮下投与に使用する溶液または懸濁液には、以下の成分、注射用の水、食塩水、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、またはその他の合成溶媒などの滅菌希釈剤、ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤、アスコルビン酸または亜硫酸ナトリウムなどの抗酸化剤、エチレンジアミン四酢酸などおキレート剤、酢酸塩、クエン酸塩、またはリン酸塩などのバッファ、および塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの張力調整剤などが含まれていてよい。非経口製剤は、アンプル、ガラスまたはプラスチック製の使い捨て用シリンジ、または複数の投与用バイアルの中に封入されていてよい。
【００９９】
注射に使用するために好適な薬学的組成物には、滅菌水溶液（水溶性）、または分散液、および滅菌注射用溶液または分散液の即時調整用滅菌粉末が含まれる。静脈内投与に好適な担体には、生理食塩水、静菌水、クレモホールEL?（BASF、ニュージャージー州パシッパニー）、またはリン酸緩衝食塩水（PBS）が含まれる。すべての場合において、前記薬学的組成物は滅菌状態であって、注射容器への充填が容易な程度、流動的でなければならない。前記組成物は、製造および保存の条件下において安定でなければならず、細菌および真菌などの微生物の汚染作用から保護されなければならない。前記担体は、たとえば水、エタノール、ポリオール（たとえばグリセロール、ポリエチレングリコール、および液体状ポリエチレングリコールなど）、それらの好適な混合物、ならびに植物油などを含む溶媒又は分散媒であってよい。適切な流動性は、たとえばレシチンなどのコーティングの使用、分散液の場合は所要の粒子サイズの維持、および表面活性剤の使用などによって維持することができる。微生物の作用は、たとえばパラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどの各種抗細菌剤および抗真菌剤によって防ぐことができる。多くの場合、たとえば糖、マニトールなどのポリアルコール、ソルビトール、塩化ナトリウムなどの等張剤を前記化合物に含めることが望ましいだろう。注射可能な組成物の吸収を持続させるために、たとえばモノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの吸収遅延剤を組成物に含ませてもよい。
【０１００】
滅菌された注射可能な溶液は、適切な溶媒中に入れた必要量の前記血管新生抑制化合物を、必要に応じて上述の成分1つまたはそれらの組み合わせに組み入れてからろ過滅菌することによって調製することができる。一般に、分散液は、塩基性分散媒および上述の物質のうちのその他の成分のうち必要な成分を含む滅菌担体に前記血管新生抑制化合物を組み入れて調製する。滅菌注射用溶液の調製のための滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、前記血管新生抑制化合物の粉末に加えて予め滅菌ろ過されたその溶液から得られた任意の追加の望ましい成分を得られる、真空乾燥および凍結乾燥である。
経口組成物には一般に、不活性な希釈剤または食用担体が含まれる。それらは、ゼラチンカプセルに封入されるか、または錠剤に圧縮されてよい。治療用の経口投与の場合、前記血管新生抑制化合物を賦形剤に組み込み、錠剤、トローチ、またはカプセルなどの形状で用いることができる。経口用組成物にはまた、腸溶コーティングが含まれてもよい。経口用組成物はまた、洗口液として用いるための液状担体であって、当該担体において前記液状担体中の前記血管新生抑制化合物が口腔内の塗布され、うがいして吐き出すかまたは飲み込まれる、液状担体を用いて調製することもできる。薬学的に適合な結合剤、および／またはアジュバント物質は、前記組成物の一部分として含めることもできる。前記錠剤、丸剤、カプセル、およびトローチなどは、以下の成分、もしくは同様の性質の化合物のいずれかを含むことができる。それは、微結晶性セルロース、ガムトラガカント、もしくはゼラチンなどの結合剤、デンプンもしくはラクトースなどの賦形剤、アルギン酸、プリモゲル、もしくはトウモロコシデンプンなどの崩壊剤、ステアリン酸マグネシウムもしくはステロート（Sterote）などの潤滑剤、コロイド状二酸化ケイ素などの流動促進剤、ショ糖もしくはサッカリンなどの甘味剤、またはペパーミント、サリチル酸メチル、もしくはオレンジ香味料などの香味剤である。
【０１０１】
吸入による投与の場合、前記血管新生抑制化合物は、たとえば二酸化炭素などの好適な高圧ガスを含む加圧容器またはディスペンサからのエアロゾルスプレーの形状で送達する。 
【０１０２】
全身投与はまた、経粘膜または経皮手段でもよい。経粘膜または経皮投与の場合、透過させようとする関門に適切な浸透剤を、前記製剤に用いる。そのような浸透剤は一般に当業に知られており、たとえば経粘膜投与の場合、界面活性剤、胆汁塩、およびフシジン酸誘導体が含まれる。経粘膜投与は、経鼻スプレーまたは坐剤の使用によって実施することができる。経皮投与の場合、前記血管新生抑制化合物は、一般に当業に知られる軟膏（ointment）、軟膏（salve）、ゲル、またはクリームに調製する。
【０１０３】
前記血管新生抑制化合物はまた、坐剤（たとえばカカオバターおよびその他のグリセリドなどの従来の坐剤ベース）または直腸送達用の停留浣腸の形状に調製してもよい。
【０１０４】
ある実施態様では、前記血管新生抑制化合物は、インプラントおよびマイクロカプセル封入送達システムを含む、制御放出製剤などの、体外への急速な排出から前記化合物を保護する担体とともに調製する。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸などの生分解性、生体適合性ポリマーを用いることができる。そのような製剤の調製の方法は当業に明らかであろう。前記物質はまた、アルザ社およびノバファーマシューティカルズ社から市販されており入手することもできる。リポソーム懸濁液はまた、薬学的に許容な担体として用いることもできる。これらは、たとえばその内容全体が引用により援用される、米国特許第4,522,811号、米国特許第5,455,044号、および米国特許第5,576,018号、ならびに米国特許第4,883,666号などに記載の、当業に知られる方法によって調製することができる。
【０１０５】
本願発明の血管新生抑制化合物質は、少なくとも数週間乃至1ヶ月以上の期間、対象に前記血管新生抑制化合物を持続的に送達することができる薬学的組成物に組み込むこともできる。そのような製剤は、引用によりその内容を本願明細書に援用する、米国特許第5,968,895号に記載されている。
【０１０６】
投与の簡便性と製剤の均一性のために、経口または非経口組成物を投与単位剤形に調剤することは、特に有利である。本願明細書に用いられる投与単位剤形は、治療される対象に単位投与量として好適な物理的に分散した単位であって、必要な薬学的担体とともに望ましい治療効果を生じるように計算された、予め決められた量の前記血管新生抑制化合物を含む各単位を意味する。本願発明の投与単位剤形の仕様は、前記血管新生抑制化合物に特有の性質および達成されるべき特定の治療効果、ならびに個体の治療用の当該血管新生抑制化合物を調合する技術に固有の限界によって支配され、およびそれらに依存する。
【０１０７】
当該血管新生抑制化合物の毒性および治療上の有効性は、たとえばLD50（個体群の50%に致死的な投与量）およびED50（個体群の50%に治療上有効な投与量）など、細胞培養物または実験動物における標準的な薬学的方法によって決定することができる。毒性作用および治療上有効な作用の投与量の比は治療指数であって、LD50/ED50の比で表すことができる。大きな治療指数を示す血管新生抑制化合物が好ましい。有毒な副作用を示す血管新生抑制化合物を用いる場合、感染していない細胞に与える可能性のある損傷を最小にして副作用を減少するよう、そのような血管新生抑制化合物を罹患組織の部位に狙わせる送達システムをデザインするように、注意が払われなければならない。
【０１０８】
細胞培養アッセイおよび動物研究から得られるデータは、ヒトにおける使用のための用量の範囲を決定する際に用いることができる。そのような血管新生抑制化合物の用量は、好ましくは毒性が小さいかまたは皆無のED50を含む循環濃度の範囲内にある。前記用量は、用いられた投与剤形および使用された投与経路によって、この範囲内で変化させてもよい。本願発明の方法に用いられるいずれの血管新生抑制化合物の場合も、治療上有効な投与量は、最初は細胞培養アッセイで推定することができる。１回投与量は、動物モデルにおいて、細胞培養物で決定したIC50（すなわち症状の最大半減抑制を達成する前記血管新生抑制化合物の濃度）を含む循環血漿濃度の範囲になるように調製してもよい。このような知見は、ヒトにおける有用な投与量をより正確に決定するために用いることができる。血漿濃度は、たとえば高性能液体クロマトグラフィによって測定することもできる。
【０１０９】
血管新生抑制化合物の活性を決定するためのアッセイ
本願発明の血管新生抑制化合物は、たとえばラット大動脈輪血管新生アッセイ、または絨毛尿膜（CAM）アッセイなど、さまざまな公知のアッセイにおいて、血管新生を調節（たとえば抑制または刺激）する能力をテストすることもできる。
【０１１０】
CAMアッセイは基本的には、その内容を引用により本願明細書に援用する、Liekens S.et al.(1997) Oncology Research 9:173-181に記載の通り行ってもよい。簡単に説明すると、新しい受精卵を3日間、37℃でインキュベートする。3日目に、その殻をわって卵を組織培養プレートに置き、38℃でインキュベートする。前記アッセイ用に、テストする当該血管新生抑制化合物をナイロンメッシュ上のコラーゲンマトリックスに結合させる。このメッシュを用いて絨毛尿膜をカバーし、前記卵を37℃でインキュベートする。血管新生が生ると、24時間以内に新しい毛細血管が形成してメッシュを通過して成長する。その後、たとえばFGF誘導血管新生などの血管新生を、たとえば抑制など調節する、前記血管新生抑制化合物の（さまざまな濃度における）能力を、決定することもできる。
【０１１１】
本願発明の血管新生抑制化合物はまた、ヒト内皮細胞の成長を調節（たとえば抑制または刺激）する能力についてテストすることもできる。ヒト臍静脈内皮細胞（HUVE）は、トリプシン含有培地での臍静脈の灌流によって分離することもできる。それから、HUVEを、37℃、5% CO2および7% O2下で、2.5%ウシ胎仔血清および2.0 ng/mlの組換ヒト塩基性線維芽細胞成長因子（rbFGF、武田バイオテクノロジー研究所、日本）を添加したGIT培地（Diago Eiyou Kagaku, Co. 日本）で培養してもよい。それから、HUVEを培地100 μlあたり2x103 の細胞密度で96穴マイクロタイタープレート(Nunc, 1-67008)に播蒔する。rbFGF（最終濃度が2 ng/ml）を含有する培地100μl、および各種濃度の各血管新生抑制化合物を各ウェルに加えてもよい。前記血管新生抑制化合物をジメチルスルホキシド（DMSO）に溶解してから、DMSOの最終濃度が0.25%を超えないように培養培地で希釈する。5日間培養後、培地を取り出して1 mg/mlのMTT（3-(4,5-ジメチル-2-チアゾリル)- 2,5-ジフェニル-2 H-テトラゾリウムブロミド）溶液をウェルに加え、マイクロタイターを4時間、37度に維持する。その後、10%ドデシル硫酸ナトリウム(SDS)溶液を100μlウェルに加えて、そのマイクロタイターを5乃至6時間37℃に維持する。当該血管新生抑制化合物が細胞数に与える影響を決定するために、各ウェルの吸光度を吸光度計を用いて測定する。 
【０１１２】
本願発明の血管新生抑制化合物がin vitroにおいて毛細血管内皮細胞遊走を調節する能力は、ボイデンチャンバーアッセイ（その内容を引用に本願明細書により援用するFalk et al.(1980) J. Immunol. Meth. 33:239-247に記載）を用いてテストすることもできる。簡単に説明すると、ウシ毛細血管内皮細胞を無血清DMEMに、ウェル1個あたり細胞1.5x104個播く。前記血管新生抑制化合物をエタノールに溶解してから、投与エタノールの最終濃度が0.01%を超えないようにDMEMで希釈する。細胞を200 μg/mlの内皮分裂促進因子（バイオメディカルテクノロジーズ社、マサチューセッツ州）、および無血清DMEMに入れたさまざまな濃度の当該血管新生抑制化合物に37℃で4時間曝露する。このインキュベーションの終わりに、フィルタの8μポアを遊走する細胞の数を100倍に拡大して計数し、それを4回繰り返した。
【０１１３】
本願発明の血管新生抑制化合物が腫瘍成長を調節する能力をin vivoでテストすることもできる。例えば、マウス細網肉腫（M 5076）を腹腔内に移植したC57BL/6Nマウスなどの動物モデルを用いてもよい。腹水中の腫瘍細胞を遠心分離器で収集し、食塩水中に懸濁させる。その細胞懸濁液(2x106 細胞/100 μl/マウス)をマウスの右横腹に接種する。それから、腫瘍を有するマウスの皮下に、腫瘍の接種1日後から12日間、当該血管新生抑制化合物（1%エタノールを含有する5%アラビアガム溶液にさまざまな濃度で懸濁させたもの）を投与する。前記の腫瘍成長は、2方向の腫瘍のサイズをノギスで測定することによって決定してもよい。
【０１１４】
最後に、本願発明の血管新生抑制化合物がMetAP2の活性を調節する能力を以下の通りテストすることもできる。組換えヒトMetAP2をLi and Chang, (1996) Biochem. Biophys. Res. Commun. 227:152-159に記載の通り、昆虫細胞に発現させて精製することもできる。各種量の血管新生抑制化合物を1nMの精製組換えヒトMetAP2を含有するバッファH(10 mM Hepes、pH 7.35、100 mM KC1、10% グリセロール、および0.1 M Co 2+)に加えた。酵素反応を開始する前に、たとえばMet-Gly-Metなどのメチオニン残基を含有するペプチドを反応混合物に加える（1mMの濃度で）。放出されたメチオニンは、続いて、Zou et al.(1995) Mol.Gen Genetics 246:247-253)の方法を用いて異なる時間点において定量化する。 
【０１１５】
本願発明は、以下の実施例によってさらに具体化されるが、それらは本願発明を制限するものと解釈されてはならない。本願明細書全体に引用されている特許、および公開済みの特許出願、ならびに図および配列表は、引用によりその全体を本願明細書に援用する。
【０１１６】
実施例
合成方法
本願発明の化合物は、以下に記載する一般的な方法を1つ以上用いて調製することができる。
【０１１７】
一般手順A：  カルボン酸-(3R, 4S, 5S, 6R)-5-メトキシ-4-[(2R, 3R)-2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イルエステル 4-ニトロ-フェニルエステル1(1, 0.47 mmol; Han, C. K.; Ahn, S. K.; Choi, N. S.; Hong, R. K.; Moon, S. K.; Chun, H. S.; Lee, S. J.; Kim, J. W.; Hong, C. I.; Kim, D.; Yoon, J. H.; No, K. T. Biorg. Med. Chem. Lett. 2000, 10, 39-43)、およびアミン(2.35 mmol)のエタノール溶液(9 mL)の混合物に、ジイソプロピルエチルアミン(2.35 mmol)を滴下して加えた。3乃至18時間後、前記エタノールを減圧下で除去し、その粗物質をEtOAc (10 mL)に溶解してH2O (2 x 5 mL)で洗浄し、その後食塩水(5 mL)で洗浄した。その有機相をNa2SO4で乾燥させて、溶媒を減圧除去した。フラッシュクロマトグラフィ(2-5% MeOH/CH2Cl2)で精製し、生成物を得た。 
【０１１８】
一般手順BパートI：  (3R, 4S, 5S, 6R) -5-メトキシ-4-[(2R, 3R)- 2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イルオキシカルボニルアミノ)-酢酸 2 (2, 0.11 mmol; 米国特許第6,017,954号)のDMF(1 mL)溶液を、膨潤させたPS-DCC (0.28 mmol)を入れた10 mL丸底フラスコに加えた。別の容器で、前記ペプチド(0.04 mmol)をDMF (0.5 mL)に溶解し、NMM (0.04 mmol)で中和した。1時間後、ペプチドの溶液を前もって活性化させた酸に加えて、反応を5乃至18時間続けた。その樹脂をろ過で除去し、DMF (0.5 mL)で洗浄して、溶媒を減圧下で除去した。 HPLC (CH3CN/H2O)で精製して、生成物を得た。 
【０１１９】
一般手順B、パートII：  パートI(0.009 mmol)の生成物の溶液をMeOH(1 mL)に溶解し、Pd/C (2 mg)で処理してからH2雰囲気下(38 psi)に24時間置いた。その混合物をセライトでろ過し、MeOH (0.5 mL)で洗浄して、溶媒を減圧下で除去した。HPLC (CH3CN/H2O)で精製して、白色固体状の生成物を得た。 
【０１２０】
一般手順C：  (1-ヒドロキシメチル-メチル-プロピル)-カルバミン酸 (3R, 4S, 5S, 6R)-5-メトキシ-4-[(2R, 3R)- 2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イル エステル (例7、189 mg、0.46 mmol)、酸(0.46 mmol)、およびDMAP (0.69 mmol)を無水CH2Cl2 (5 mL)で溶解し、ジイソプロピルカルボジイミド(0.46 mmol)で処理した。7乃至18時間後、その溶媒を減圧下で除去して、フラッシュクロマトグラフィ(MeOH/CH2Cl2)で精製し、生成物を得た。 
【０１２１】
例1
2-{(3R, 4S, 5S, 6R)-5-メトキシ-4-[(2R, 3R)-2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イルオキシカルボニルアミノ}-3-メチル-ブチル酸メチルエステル
【０１２２】
【化１７】
2005536461.tif 000035
【０１２３】
一般手順Aに従って、1 (31 mg, 0.07 mmol)、L-バリンメチル エステルヒドロクロリド (58 mg、0.35 mmol)、およびDIEA (60 μL, 0.35 mmol)のEtOH溶液(2 mL)を用いて行った。フラッシュクロマトグラフィ(1% MeOH/CH2Cl2)で精製し、透明油状の生成物を得た(10 mg, 0.02 mmol, 収率33%)、Rf = 0.60 (20% EtOAc/CH2Cl2)、LRMS (m/z) [M+1]+ 440.3 (C23H38NO7,の計算値 440.3)。 
【０１２４】
例2
2-{(3R, 4S, 5S, 6R)-5-メトキシ-4-[(2R, 3R)-2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イルオキシカルボニルアミノ}-3-メチル-ブチル酸 メチル エステル
【０１２５】
【化１８】
2005536461.tif 000036
【０１２６】
一般手順Aに従って、1 (41 mg, 0.09 mmol)、D-バリンメチルエステルヒドロクロリド(77 mg、0.45 mmol)、およびDIEA(80 μL, 0.45 mmol)のEtOH溶液(2 mL)を用いて行った。フラッシュクロマトグラフィ(1% MeOH/CH2Cl2)で精製し、透明油状の生成物を得た(18 mg, 0.04 mmol, 収率45%)、Rf = 0.39 (20% EtOAc/CH2Cl2)、LRMS (m/z) [M+1]+ 440.3 (C23H38NO7,の計算値 440.3)。
【０１２７】
例3
2-{(3R, 4S, 5S, 6R)-5-メトキシ-4-[(2R, 3R)-2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イルオキシカルボニルアミノ}-4-メチル-ペンタノン酸 メチル エステル
【０１２８】
【化１９】
2005536461.tif 000037
【０１２９】
一般手順Aに従って、1 (23 mg, 0.05 mmol)、D-ロイシンメチル エステルヒドロクロリド (47 mg、0.25 mmol)、およびDIEA (45 μL, 0.25 mmol)のEtOH溶液(2 mL)を用いて行った。フラッシュクロマトグラフィ(1% MeOH/CH2Cl2)で精製し、透明油状の生成物を得た(19 mg, 0.04 mmol, 収率83%)、Rf = 0.22 (15% EtOAc/CH2Cl2)、LRMS (m/z) [M+1]+454.3 (C24H40NO7,の計算値 454.3)。 
【０１３０】
例4
2-{(3R, 4S, 5S, 6R)-5-メトキシ-4-[(2R, 3R)-2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イルオキシカルボニルアミノ}-3-メチル-フェニル酢酸 メチル エステル
【０１３１】
【化２０】
2005536461.tif 000038
【０１３２】
一般手順Aに従って、1 (37 mg, 0.08 mmol)、D-フェニルグリシンメチル エステルヒドロクロリド (83 mg、0.40 mmol)、およびDIEA (72 μL, 0.40 mmol)のEtOH溶液(2 mL)を用いて行った。フラッシュクロマトグラフィ(1% MeOH/CH2Cl2)で精製し、透明油状の生成物を得た(32 mg, 0.07 mmol, 収率82%)、Rf = 0.41 (2% MeOH /CH2Cl2)、LRMS (m/z) [M+1]+474.3 (C26H36NO7,の計算値 474.3)。 
【０１３３】
例5
1-カルバモイル -2-メチル-プロピル)-カルバミン酸-(3R, 4S, 5S, 6R )-5-メトキシ-4-[(2R, 3R ) -2-メチル-3-(3-メチル-ブト -2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イルエステル
【０１３４】
【化２１】
2005536461.tif 000039
【０１３５】
一般手順Aに従って、1 (55 mg, 0.12 mmol)、D-バリンメチル エステルヒドロクロリド (93 mg、0.62 mmol)、およびDIEA (110 μL, 0.62  mmol)のEtOH溶液(2 mL)を用いて行った。フラッシュクロマトグラフィ(2% MeOH/CH2Cl2)で精製し、透明油状の生成物を得た(42 mg, 0.10  mmol, 収率80%)、Rf = 0.19 (2% MeOH /CH2Cl2)、LRMS (m/z) [M+1]+425.5 (C22H37N2O6の計算値 425.5)。 
【０１３６】
例6
1-カルバモイル -2-メチル-プロピル)-カルバミン酸-(3R, 4S, 5S, 6R )-5-メトキシ-4-[(2R, 3R ) -2-メチル-3-(3-メチル-ブチル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イルエステル
【０１３７】
【化２２】
2005536461.tif 000040
【０１３８】
例4に記載の化合物(18 mg, 0.04 mmol)を無水MeOH (1.5 mL)に溶解し、H2 雰囲気下でPd-C (2 mg)で処理した。12時間後、その反応物をセライトでろ過し、溶媒を減圧下で除去したところ無色油状の生成物を得た(18 mg, 0.04 mmol, 収率100%)、Rf = 0.21 (2% MeOH/CH2Cl2)、LRMS (m/z) [M+1]+ 427.5 (C22H39N2O6の計算値 427.5)。 
【０１３９】
例7
(1-ヒドロキシメチル-2-メチル-プロピル)-カルバミン酸-(3R, 4S, 5S, 6R)-5-メトキシ-4-[(2R,3R)- 2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イルエステル
【０１４０】
【化２３】
2005536461.tif 000041
【０１４１】
一般手順Aに従って、1 (290 mg, 0.65 mmol)、D-バリノール (337 mg、3.25  mmol)、およびDIEA (560 μL, 3.25  mmol)のEtOH溶液(5 mL)を用いて行った。フラッシュクロマトグラフィ(2% MeOH/CH2Cl2)で精製し、透明油状の生成物を得た(200 mg, 0.49  mmol, 収率75%)、Rf = 0.26 (2% MeOH /CH2Cl2)、LRMS (m/z) [M+1]+412.5 (C22H38NO6の計算値 412.5)。 
【０１４２】
例8
2-{(3R, 4S, 5S, 6R )-5-メトキシ-4-[(2R, 3R)-2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イルオキシカルボニルアミノ }-3,3-ジメチル-ブチル酸メチル エステル
【０１４３】
【化２４】
2005536461.tif 000042
【０１４４】
一般手順Aに従って、1 (65 mg, 0.15 mmol)、D- tBuグリシンメチル エステルヒドロクロリド (132 mg、0.73  mmol)、およびDIEA (127μL, 0.73  mmol)のEtOH溶液(8 mL)を用いて行った。フラッシュクロマトグラフィ(10% MeOH/CH2Cl2)で精製し、透明油状の生成物を得た(10 mg, 0.02 mmol, 収率15%)、Rf = 0.22 (10% EtOAc/CH2Cl2)、LRMS (m/z) [M+1]+454.5 (C24H40NO7,の計算値 454.5)。 
【０１４５】
例9
シクロヘキシル-2-{(3R, 4S, 5S, 6R)-5-メトキシ-4-[(2R, 3R)-2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イルオキシカルボニルアミノ}-3-酢酸 メチル エステル
【０１４６】
【化２５】
2005536461.tif 000043
【０１４７】
一般手順Aに従って、1 (65 mg, 0.15 mmol)、D- シクロヘキシルグリシンメチル エステルヒドロクロリド (207 mg、0.73  mmol)、およびDIEA (127μL, 0.73  mmol)のEtOH溶液(7 mL)を用いて行った。フラッシュクロマトグラフィ(10% MeOH/CH2Cl2)で精製し、透明油状の生成物を得た(20 mg, 0.04 mmol, 収率28%)、Rf = 0.22 (10% EtOAc/CH2Cl2)、LRMS (m/z) [M+1]+480.3 (C26H42NO7の計算値 480.3)。 
【０１４８】
例10
2-{(3R, 4S, 5S, 6R)-5-メトキシ-4-[(2R, 3R)-2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イルオキシカルボニルアミノ}-3-メチル-ペンタノン酸 メチル エステル
【０１４９】
【化２６】
2005536461.tif 000044
【０１５０】
一般手順Aに従って、1 (65 mg, 0.15  mmol)、D-イソロイシンメチル エステルヒドロクロリド (132 mg、0.73 mmol)、およびDIEA (127 μL, 0.73 mmol)のEtOH溶液(7 mL)を用いて行った。フラッシュクロマトグラフィ(10% MeOH/CH2Cl2)で精製し、透明油状の生成物を得た(20 mg, 0.04 mmol, 収率30%)、Rf = 0.20 (10% EtOAc/CH2Cl2)、LRMS (m/z) [M+1]+454.5 (C24H40NO7,の計算値 454.5)。 
【０１５１】
例11
{0>[1-(1-カルバモイル-2-ヒドロキシ-エチルカルバモイル)-2-メチル-プロピル]-カルバミン酸-(3R, 4S, 5S, 6R )-5-メトキシ-4-[(2R, 3R)-2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イルエステル<}71{> [1-(1-カルバモイル-2-ヒドロキシ-エチルカルバモイル)-2-メチル-プロピル]-カルバミン酸-(3R, 4S, 5S, 6R )-5-メトキシ-4-[(2R, 3R)-2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イルエステル<0]
【０１５２】
【化２７】
2005536461.tif 000045
【０１５３】
一般手順Aに従って、1 (74 mg, 0.17 mmol)、H-D-vS-NH2・TFA (262 mg、0.83  mmol)、およびDIEA (140 μL, 0.83  mmol)のEtOH溶液(5 mL)を用いて行った。HPLC (60% CH3CN/H2O)で精製し、白色固体状の生成物を得た(34 mg, 0.07 mmol, 収率40%)、Rf = 0.21 (5% MeOH /CH2Cl2)、LRMS (m/z) [M+1]+512.5 (C25H42N3O8の計算値 512.3)。 
【０１５４】
例12
2-{(3R, 4S, 5S, 6R)-5-メトキシ-4-[(2R, 3R)-2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イル}-ウレイド}-3-メチル-ブチラミド
【０１５５】
【化２８】
2005536461.tif 000046
【０１５６】
(3R, 4S, 5S, 6R)-5-メトキシ-4-[(2R, 3R)-2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イルアミン (3; PCT 特許出願第WO 99/59987号)を、出願明細書に記載の手順に従って調製した。0℃に冷却した粗3 (29 mg, 0.1 mmol)、DIEA (21 mL, 0.1 mmol)およびDMAP (2 mg)のCH2Cl2溶液(1.5 mL)に、p-NO2フェニルクロロホルム塩(25 mg, 0.12 mmol)を加えた。45分後、その反応物を室温まで温め、H-D-val-NH2・HCl (40 mg, 0.15 mmol)のEtOH 溶液(1 mL)およびDIEA (35 μL, 0.2 mmol)を加えた。 
【０１５７】
その反応を1時間続けてから、減圧下で濃縮し、EtOAc (15 mL)に吸収させて、希塩酸(2 x 15 mL)、H2O (2 x 15 mL)および食塩水(15 mL)で洗浄した。フラッシュクロマトグラフィ(5% MeOH/CH2Cl2)で精製し、白色固体状の生成物を得た(6 mg, 0.014  mmol, 3からの収率13%)、Rf = 0.12 (5% MeOH /CH2Cl2)、LRMS (m/z) [M+1]+424.4 (C22H38N3O5の計算値 424.4)。 
【０１５８】
例13
N-カルバモイル (ID#31) 3R, 4S, 5S, 6R) 5-メトキシ-4-[(2R,3R)2-メチル-3-(3-メチル-ブチル)-オキシラニル]-1-オキサ -スピロ[2.5]オクト-6-イルエステル
【０１５９】
【化２９】
2005536461.tif 000047
【０１６０】
一般手順BパートIに従って、2 (41 mg, 0.11 mmol)、PS-DCC (256 mg、0.28 mmol) のDMF (1 mL)溶液およびH-RGD(Bn)S(OBn)P-NH2・2TFA (37 mg、0.04 mmol)、NMM (4 μL, 0.04 mmol)のDMF (0.5 mL)溶液を用いて行った。HPLC (70%CH3CN/H2O/0.075% TFA)で精製し、ふさふさした白色固体状の生成物を得た(9.3 mg, 0.009 mmol, 収率17%); LRMS (m/z) [M+1]+ 1075.4 (C53H75N10O14の計算値1075.5)。 
【０１６１】
一般手順パートIIに従って、パートIの生成物(9.3 mg, 0.009 mmol)およびPd/C(2 mg)のMeOH(1 mL)溶液を用いて、H2雰囲気下(38 psi)に24時間置いて行った。HPLC (55%CH3CN/H2O/0.075% TFA)で精製し、白色固体状の生成物を得た(5 mg, 0.006 mmol, 収率65%); LRMS (m/z) [M+1]+897.3 (C39H65N10O14の計算値897.5)。 
【０１６２】
例14
N-カルバモイル (ID#30) 3R, 4S, 5S, 6R) 5-メトキシ-4-[(2R,3R)2-メチル-3-(3-メチル-ブチル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イルエステル
【０１６３】
【化３０】
2005536461.tif 000048
【０１６４】
一般手順BパートIに従って、2 (38 mg, 0.10 mmol)およびPS-DCC (238 mg、0.25 mmol) のDMF (1 mL)溶液、H-RGD(Bn)Y(OMe)RE(Bn)-NH2・3TFA (35 mg, 0.03 mmol)およびNMM (3 μL, 0.03 mmol)のDMF (0.5 mL)溶液を用いて行った。HPLC (70%CH3CN/H2O/0.075% TFA)で精製し、ふさふさした白色固体状の生成物を得た(4.0 mg, 0.002mmol, 収率8%); LRMS (m/z) [M+2/2]+ 677.6 (C66H92N14O17の計算値677.8)。 
【０１６５】
一般手順パートIIに従って、パートIの生成物(3.0 mg, 0.009 mmol)およびPd/C(2 mg)のMeOH(1 mL)溶液を用いて、H2雰囲気下(38 psi)に24時間置いて行った。HPLC (55%CH3CN/H2O/0.075% TFA)で精製し、白色固体状の生成物を得た(3.3 mg, 0.0027 mmol, 収率94%); LRMS (m/z) [M+2/2]+ 588.5 (C52H82N14O17の計算値588.7)。
【０１６６】
例15
N-カルバモイル (ID#32) 3R, 4S, 5S, 6R) 5-メトキシ-4-[(2R,3R)2-メチル-3-(3-メチル-ブチル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イルエステル
【０１６７】
【化３１】
2005536461.tif 000049
【０１６８】
一般手順BパートIに従って、2 (38 mg, 0.10 mmol)、PS-DCC (238 mg、0.25 mmol) のDMF (1 mL)溶液およびHOBt (29 mg, 0.25mmol)のDMF (1 mL)溶液、ならびにH-RGD(Bn)NH2・TFA (29 mg, 0.04 mmol) およびNMM (4.8 μL, 0.04 mmol)のDMF (0.5 mL)溶液を用いて行った。HPLC (60%CH3CN/H2O/0.075% TFA)で精製し、白色固体状の生成物を得た(35 mg, 0.04 mmol, 収率44%); LRMS (m/z) [M+1]801.2 (C38H57N8O11の計算値801.4)。 
【０１６９】
一般手順パートIIに従って、パートIの生成物(35 mg, 0.04  mmol)およびPd/C(2 mg)のMeOH(1 mL)溶液を用いて、H2雰囲気下(38 psi)に24時間置いて行った。HPLC (50%CH3CN/H2O/0.075% TFA)で精製し、白色固体状の生成物を得た(22 mg, 0.03 mmol, 収率71%); LRMS (m/z) [M+1]713.2 (C31H53N8O11の計算値713.4)。 
【０１７０】
例16
N-カルバモイル (ID#40) 3R, 4S, 5S, 6R) 5-メトキシ-4-[(2R,3R)2-メチル-3-(3-メチル- ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ -スピロ[2.5]オクト-6-イルエステル
【０１７１】
【化３２】
2005536461.tif 000050
【０１７２】
一般手順BパートIに従って、2 (65 mg, 0.17 mmol)、PS-DCC (405 mg、0. 43 mmol) のDMF (1 mL)溶液およびHOBt (34 mg, 0.26mmol)のDMF (1 mL)溶液、ならびにH-RG(ピリジル)D-OMe (43 mg, 0.06 mmol) およびNMM (7μL, 0.06 mmol)のDMF (0.5 mL)溶液を用いて行った。HPLC (60%CH3CN/H2O/0.075% TFA)で精製し、白色固体状の生成物を得た(15 mg, 0.02 mmol, 収率34%); LRMS (m/z) [M+1]773.2 (C34H55N4O10の計算値773.4)。
【０１７３】
パートIの生成物(11 mg, 0.01 mmol)をTHF:MeOH:H2O (2:1:1, 500 μL)に溶解し、LiOH・H2O (1.2 mg, 0.02 mmol)で2時間処理した。その反応混合物をEt2O (5 mL)で希釈し、希塩酸(10 mL)で酸化させた。その水相をEtOAc (2 x 5 mL)でさらに洗浄し、混合した状態の有機抽出物をNa2SO4で乾燥させてから溶媒を減圧除去した。HPLC (30% CH3CN/H2O/0.075% TFA)で精製して、白色固体状の生成物を得た(2 mg, 0.003 mmol, 収率19%)。LRMS (m/z) 745.3 (C33H53N4O10の計算値745.4)。 
【０１７４】
例17
N-カルバモイル (ID#39) (3R, 4S, 5S, 6R) 5-メトキシ-4-[(2R,3R)2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト -6-イルエステル
【０１７５】
【化３３】
2005536461.tif 000051
【０１７６】
一般手順BパートIに従って、2 (25 mg, 0. 07 mmol)およびPS-DCC (155 mg、0. 16 mmol) のDMF (1 mL)溶液、H-PLGMWAG-NH2 (20 mg, 0.03 mmol)およびNMM (3 μL, 0.03 mmol)のDMF (0.5 mL)溶液を用いて行った。HPLC (70%CH3CN/H2O/0.075% TFA)で精製し、白色固体状の生成物を得た(1.4 mg, 0.001 mmol, 収率65%); LRMS (m/z) [M+1] +1095.6 (C53H79N10O13Sの計算値1095.6)。 
【０１７７】
例18
N-カルバモイル (ID#26) (3R, 4S, 5S, 6R) 5-メトキシ-4-[(2R,3R)2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト -6-イルエステル
【０１７８】
【化３４】
2005536461.tif 000052
【０１７９】
一般手順BパートIに従って、2 (69 mg, 0.18 mmol)、PS-DCC (429 mg、0. 45 mmol) のDMF (1 mL)溶液およびHOBt (21 mg, 0.18mmol)のDMF (1 mL)溶液、ならびにH-PL(N-Me)G-OMe (31 mg, 0.07 mmol) およびNMM (7μL, 0.06 mmol)のDMF (0.5 mL)溶液を用いて行った。HPLC (70%CH3CN/H2O/0.075% TFA)で精製し、白色固体状の生成物を得た(27 mg, 0.04 mmol, 収率59%); LRMS (m/z) [M+1] +679.4 (C34H55N4O10の計算値679.4)。 
【０１８０】
パートIの生成物(27 mg, 0.04 mmol)をTHF:MeOH:H2O (2:1:1, 1.5 mL)に溶解し、LiOH・H2O (4 mg, 0.10 mmol)で1時間処理した。その溶液を、0.1 N HClを用いてpH3に酸化させ、MeOHおよびTHFを減圧下で除去した。HPLC (60% CH3CN/H2O/0.075% TFA)で精製して、白色固体状の生成物を得た(6 mg, 0.01 mmol, 収率23%)。LRMS (m/z) 665.4 (C33H53N4O10の計算値665.4)。 
【０１８１】
例19
N-カルバモイル (ID#27) (3R, 4S, 5S, 6R) 5-メトキシ-4-[(2R,3R)2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト -6-イルエステル
【化３５】
2005536461.tif 000053
【０１８２】
一般手順BパートIに従って、2 (44 mg, 0.12 mmol)、PS-DCC (276 mg、0. 29 mmol)およびHOBt (27 mg, 0.23mmol)のDMF (1 mL)溶液、ならびにH-PLG-OMe (20 mg, 0.05 mmol)およびNMM (5μL, 0.23 mmol)のDMF (0.5 mL)溶液を用いて行った。HPLC (90%CH3CN/H2O/0.075% TFA)で精製し、白色固体状の生成物を得た(13 mg, 0.02 mmol, 収率43%); LRMS (m/z) [M+1] +664.4 (C34H55N4O10の計算値664.4)。 
【０１８３】
パートIの生成物(27 mg, 0.04 mmol)をTHF:MeOH:H2O (2:1:1, 790μL)に溶解し、LiOH?H2O (1.2 mg, 0.03 mmol)で2時間処理した。その溶液を、0.1 N HClを用いてpH3に酸化させ、MeOHおよびTHFを減圧下で除去した。HPLC (90% CH3CN/H2O/0.075% TFA)で精製して、白色固体状の生成物を得た(1.8 mg, 0.003 mmol, 収率15%)。LRMS (m/z) 650.4 (C32H50N4O10の計算値650.4)。 
【０１８４】
例20
(ID#24)-(2R-｛(3R, 4S, 5S, 6R) 5-メトキシ-4-[(2R,3R)2-メチル-3-(3-メチル-but-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イルカルボニル｝ アミノ-3-メチル-ブタノール) エステル
【０１８５】
【化３６】
2005536461.tif 000054
【０１８６】
一般手順Cに従って、7 (189 mg, 0.46 mmol)、Ac-PLGMWA-OH (329 mg, 0.46 mmol)、DMAP (84 mg, 0.69 mmol)およびDIC (72 ?L, 0.46 mmol)のCH2Cl2 (5 mL)溶液を用いて行った。18時間後、その溶媒を減圧下で除去し、フラッシュクロマトグラフィ(2% MeOH/CH2Cl2)で精製し、白色固体状の生成物を得た(357 mg, 0.32  mmol, 収率70%)、Rf = 0.18 (5% MeOH /CH2Cl2)、LRMS (m/z) [M+1]+1110.3 (C56H85N8O13Sの計算値 1110.3)。 
【０１８７】
例21
(ID#36)-(2R-｛(3R, 4S, 5S, 6R) 5-メトキシ-4-[(2R,3R)2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イルカルボニル ｝アミノ-3-メチル-ブタノール) エステル
【０１８８】
【化３７】
2005536461.tif 000055
【０１８９】
一般手順Cに従って、7 (61 mg, 0.15 mmol)、Ac-PLGMWA-OH (92 mg, 0.18 mmol)、DMAP (22 mg, 0.18 mmol)およびDIC (28 μL, 0.18 mmol)のCH2Cl2 (2 mL)溶液を用いて行った。7時間後、その溶媒を減圧下で除去し、フラッシュクロマトグラフィ(3% MeOH/CH2Cl2)で精製し、白色固体状の生成物を得た(61 mg, 0. mmol, 収率45%)、Rf = 0.20 (5% MeOH /CH2Cl2)、LRMS (m/z) [M+1]+909.7 (C44H73N6O12Sの計算値 909.5)。 
【０１９０】
例22
(ID#37)-(2R-｛(3R, 4S, 5S, 6R) 5-メトキシ-4-[(2R,3R)2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イルカルボニル ｝アミノ-3-メチル-ブタノール) エステル
【０１９１】
【化３８】
2005536461.tif 000056
【０１９２】
一般手順Cに従って、7 (79 mg, 0. 19 mmol)、Fmoc-MWA-OH (121 mg, 0.19 mmol)、DMAP (4 mg, 0.19 mmol)およびDIC (30 ?L, 0.19 mmol)のCH2Cl2 (2 mL)溶液を用いて行った。11時間後、その溶媒を減圧下で除去し、フラッシュクロマトグラフィ(2% MeOH/CH2Cl2)で精製し、白色固体状の生成物を得た(128 mg, 0.12  mmol, 収率65%)、LRMS (m/z) [M+1]+1022.9 (C44H73N6O12Sの計算値 1022.5)。 
【０１９３】
一般手順Cの生成物（上述）(54 mg, 0.05 mmol)を0℃に冷却した無水CH2Cl2 (3 mL)に溶解し、穏やかなNH3(g)流で15分間処理した。この反応物質を密封し、0℃で36時間放置した。その溶媒を減圧下で除去し、粗残留物をCH3CN/H2O(0.075% TFA) (5 mL)で酸化させた。HPLC (70%CH3CN/H2O/0.075% TFA)で精製し、白色固体状の生成物を得た(2 mg, 0.003 mmol, 収率5%); LRMS (m/z) [M+1]+800.6 (C41H62N5O9Sの計算値800.5)。 
【０１９４】
例23
(ID#38)-(2R-｛(3R, 4S, 5S, 6R) 5-メトキシ-4-[(2R,3R)2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イルカルボニル ｝アミノ-3-メチル-ブタノール) エステル
【０１９５】
【化３９】
2005536461.tif 000057
【０１９６】
一般手順Cに従って、7 (76  mg, 0.18 mmol)、Fmoc-MG-OH (79 mg, 0.18 mmol)、DMAP (4 mg, 0.03 mmol)およびVDIC (29 μL, 0.18 mmol)のCH2Cl2 (2 mL)溶液を用いて行った。10時間後、その溶媒を減圧下で除去し、フラッシュクロマトグラフィ(2% MeOH/CH2Cl2)で精製し、白色固体状の生成物を得た(128 mg, 0.12  mmol, 収率65%)、LRMS (m/z) [M+1]+822.6 (C44H60N3O10Sの計算値 822.5)。 
【０１９７】
一般手順Cの生成物（上述）(42 mg, 0.05 mmol)を0℃に冷却した無水CH2Cl2 (3 mL)に溶解し、穏やかなNH3(g)流で15分間処理した。この反応物質を密封し、0℃で36時間放置した。その溶媒を減圧下で除去し、粗残留物をCH3CN/H2O(0.075% TFA) (5 mL)で酸化させた。HPLC (70%CH3CN/H2O/0.075% TFA)で精製し、白色固体状の生成物を得た(2 mg, 0.003 mmol, 収率5%); LRMS (m/z) [M+1]+600.4 (C29H50N3O8Sの計算値600.4)。 
【０１９８】
例24
2-{(3R, 4S, 5S, 6R)-5-メトキシ-4-[(2R, 3R)-2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イルオキシカルボニルアミノ}-3-メチル-ブチル酸 
【０１９９】
【化４０】
2005536461.tif 000058
【０２００】
例2に記載の化合物(9 mg, 0.02 mmol)をTHF:MeOH:H2O (1 mL)に溶解し、LiOH・H2O (2 mg, 0.05 mmol)で処理した。2時間後、その反応物をEtOAc (5 mL)および希塩酸 (5 mL)で分割した。その有機相をNa2SO4で乾燥させて、溶媒を減圧除去した。HPLC (85%CH3CN/H2O/0.075% TFA)で精製し、白色固体状の生成物を得た(0.58 mg, 0.001 mmol, 収率6%); LRMS (m/z) [M+1]+426.4 (C22H36NO7の計算値426.5)。 
【０２０１】
例25
(ID#34)-(2R-｛(3R, 4S, 5S, 6R) 5-メトキシ-4-[(2R,3R)2-メチル-3-(3-メチル-ブト-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イルカルボニル｝ アミノ-3-メチル-ブタノール) エステル
【０２０２】
【化４１】
2005536461.tif 000059
【０２０３】
一般手順Cに従って、7 (41 mg, 0.10 mmol)、Ac-PLGMWA-OH (63 mg, 0.12 mmol)、DMAP (15 mg, 0.12 mmol)およびDIC (19 ?L, 0.12 mmol)のCH2Cl2 (2 mL)溶液を用いて行った。7時間後、その溶媒を減圧下で除去し、フラッシュクロマトグラフィ(3% MeOH/CH2Cl2)で精製し、白色固体状の生成物を得た(43 mg, 0.05  mmol, 収率47%)、Rf = 0.21 (5% MeOH /CH2Cl2)、LRMS (m/z) [M+1]+923.7 (C45H75N6O12Sの計算値 923.5)。 
【０２０４】
例26
本願発明の血管新生抑制化合物をヒト内皮細胞成長の調節能力およびMetAP2の活性の調節能力についてテストした。MetAP2酵素アッセイは、基本的には、その内容を引用により本願明細書に援用する、Turk, B. et al.(1999) Chem.& Bio.6:823-833に記載の通り行った。ウシ大動脈内皮細胞成長アッセイは、基本的には、その内容を引用により本願明細書に援用する、Turk, B. et al.(同上)に記載の通り行った。
【０２０５】
ヒト内皮細胞成長アッセイ用に、ヒト臍緒静脈内皮細胞(HUVEC)を、クロンティクス社製内皮成長培地(EGM)に入れて、37℃の加湿インキュベータで保存した。細胞をトリプシンで取り外し、室温で5分間、300 x gで遠心分離してペレットにした。HUVECを、細胞5000個／ウェルの割合で96穴ウェルプレートに加えた。6時間インキュベートしたあと、前記培地を、0.5 nM bFGFを添加した新鮮なEGM 0.2mlおよび望ましい濃度の被験血管新生抑制化合物に交換した。被験血管新生抑制化合物は、最初に、原液濃度が10 mMまたは0.1 mMのいずれかのエタノールに溶解し、その後、EGM中で希釈して1 pM乃至10μMの濃度を得た。37℃に維持して48時間後、その培地を新鮮なbFGF添加EGMおよび被験血管新生抑制化合物に交換した。37度でさらに48時間インキュベーションしてから、MTT (3-[4,5-ジメチルチアゾール-2-イル]-2,5-ジフェニル-テトラゾリウムブロミド)を1mg/mlになるように加えた。37℃で2乃至4時間後、前記培地を1ウェルあたり0.1mlのイソプロピルに交換した。そのプレートを室温で15分間振盪器上に置き、ラブシステムズマルチスカンプレート分光器で吸光度570nmで分析した。
【０２０６】
以下の表I乃至IIIに示すそのアッセイの結果は、本願発明の血管新生抑制化合物が優れたMetAP2抑制活性を有し、ピコモル範囲で内皮細胞成長を抑制することができることを示している。
【０２０７】
【表１】
2005536461.tif 000060
【０２０８】
【表２】
2005536461.tif 000061
2005536461.tif 000062
【０２０９】
【表３】
2005536461.tif 000063
【０２１０】
各実験に用いられた血管新生抑制化合物のアイデンティティを以下の表IVおよびVに示す。
【０２１１】
【表４】
2005536461.tif 000064
2005536461.tif 000065
【０２１２】
【表５】
2005536461.tif 000066
【０２１３】
例27
例5の化合物も、癌細胞株のパネルに対して評価した(Alley, M. C. et al. (1998) Cancer Research 48:589-601; Grever, M.R., et al. (1992) Seminars in Oncology, Vol.19, No. 6, pp 622-638; Boyd, M.R., and Paull, K.D. (1995) Drug Development Research 34:91-109)。癌スクリーニングパネルのヒト腫瘍細胞株を、5%ウシ胎仔血清を含有するRPMI 1640培地および2mM L-グルタミンの中で成長させた。細胞を、96穴マイクロタイタープレートに100μL播種した。プレート密度は、個々の細胞株の倍加時間に応じて細胞5,000乃至40,000個／ウェルの範囲内とした。細胞を播種した後、このマイクロタイタープレートを37℃、5 % CO2, 95 %空気、および100%相対湿度で24時間インキュベートし、その後、実験薬を加えた。 
【０２１４】
24時間のインキュベーション後、各細胞株を2プレートずつ、TCAでin situに固定し、薬物添加時間（Tz）における各細胞株の細胞群の測定値とした。実験薬を望ましい最終最大被験濃度の400倍になるように硫酸ジメチルに溶解し、使用前まで凍結保存した。薬物添加の時間に、冷凍濃縮液のアリコートを解凍して、50 μg/mlゲンタマイシンを含有する完全培地で、望ましい最終最大被験濃度の2倍になるように希釈した。さらに4倍、10倍または1/2対数連続希釈をして、5種類の薬物濃度および対照を得た。これらの薬物希釈液100μlのアリコートを、すでに100μlの培地を入れた適切なマイクロタイタープレートに加え、所要の最終薬物濃度を得た。 
【０２１５】
薬物を加えたあと、そのプレートをさらに48時間、37℃、5 % CO2、95 %空気および100%相対湿度でインキュベートした。接着性の細胞のために、冷TCAを加えて前記アッセイを終了させた。細胞を、50 μl の冷50 % (w/v) TCAを穏やかに加えて（最終濃度10 % TCA）in situに固定し、4℃で60分間インキュベートした。上清を捨て、プレートを水道水で5回洗浄し、空気乾燥させた。1%酢酸に入れた0.4 % (w/v)のスルホローダミンB(SRB)溶液(100 μl)を各ウェルに加え、プレートを10分間室温でインキュベートした。染色後、結合しなかった色素を1 %酢酸で5回洗浄して取り除き、プレートを空気乾燥させた。結合した色素を10 mMトリズマベース（trizma base）で溶解し、自動プレートリーダーで波長515nmの吸光度を測定した。前記細胞の懸濁液のために用いられた方法論は同一であるが、前記アッセイは50 μlの80 % TCA (最終濃度 16 % TCA)を穏やかに加えることによって定着した細胞をウェルの底に固定することによって終了させた。吸光度の測定は7点で行い（0時点(Tz)、対照の成長(C)、および被験薬の5種類の濃度にでの成長）、成長率は各薬物濃度で計算した。  
【０２１６】
成長抑制率は次のように計算した。 
濃度がTi>/=Tzの場合、[(Ti-Tz)/(C-Tz)] x 100
濃度がTi<Tzの場合、[(Ti-Tz)/Tz] x 100
【０２１７】
50 %成長抑制(GI50)は、[(Ti-Tz)/(C-Tz)] x 100 = 50で計算した。これは、薬物のインキュベーション中の対照細胞中の総タンパク質増加量（SRB染色で測定）が50%減少する薬物濃度を表す。各細胞株のG I50は、活性レベルに到達した場合について計算した。しかし、その作用に到達しなかった場合、またはそれを超えた場合には、そのパラメータ値は最大(10-4 M)または最小(10-8 M)濃度よりも大きいか小さいかで表した。 
【０２１８】
【表６】
2005536461.tif 000067
2005536461.tif 000068
【０２１９】
結果
表VIに示した細胞株スクリーニングの結果は、例5の化合物が広範囲の腫瘍細胞株に有意な抑制作用を有していることを示している。この結果はまた、他と比較して例5の化合物にはるかに感受性の高い細胞株があることを示しており、この化合物は特定の細胞株に選択的であることを示唆している。
【０２２０】
例
例28乃至30では、例5の化合物（以降、「化合物5」と記す）1-カルバモイル -2-メチル-プロピル)-カルバミン酸-(3R, 4S, 5S, 6R )-5-メトキシ-4-[(2R, 3R ) -2-メチル-3-(3-メチル-ブト -2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクト-6-イルエステルを用いた。
【０２２１】
【化４２】
2005536461.tif 000069
【０２２２】
例28
培養物中におけるB細胞リンパ腫細胞株の抑制
目的：
化合物5によるB細胞リンパ腫株に由来する胚中心の抑制の確定
【０２２３】
実験デザイン
化合物5を、B細胞リンパ腫株に由来する胚中心が50,000細胞/mLで0.01乃至100 nMの範囲内での最終濃度でインキュベートする。5乃至6日間のインキュベーション期間後、各濃度のフラスコ3個ずつから細胞数を決定した。
【０２２４】
結果：
化合物Aは、テストしたリンパ腫細胞株のうち、バーキットリンパ種の細胞株であるラモス株以外すべてのリンパ腫株の増殖を抑制した。表VIIは、溶媒対照培養物中で見られる成長と比較した、化合物Aで処理した培養物中の最大成長抑制、および細胞増殖の50%減少を生じる推定濃度(GI50%)を示す。
【０２２５】
【表７】
2005536461.tif 000070
2005536461.tif 000071
【０２２６】
結論
化合物5は、テストしたすべてのDLBCLおよびFL細胞株の増殖を、低ナノモル濃度で抑制した。  
【０２２７】
例29
培養物中におけるSR細胞株の抑制
目的：
培養物中のヒトSRリンパ芽の投与量応答抑制の評価。
【０２２８】
実験デザイン：
化合物5を、ヒトリンパ芽SR細胞が25,000細胞/mLで0.1乃至10μMの範囲内での最終濃度でインキュベートする。3、5、または6日間インキュベーションを行ったあと、溶媒処理に対する細胞増殖を、3H-チミジン取り込みアッセイを用いて測定した。5および6日アッセイのために、3日目に培地を交換し、新鮮な薬物を加えた。
【０２２９】
結果：
図1は、これらの細胞増殖アッセイから得られた代表的なデータを示す。5および6日アッセイでは、化合物5は、平均GI50が0.5 nMの1乃至100nMの濃度において、SR細胞株の増殖を59乃至75%抑制した。
【０２３０】
結論：
これらの結果は、化合物5は培養物中のSR細胞株の増殖をnM濃度で抑制できることを示している。化合物5による最大抑制は、化合物5への曝露から5または6日は、0.5nMの平均GI50%で90%超だった。
【０２３１】
例30
マウス体内で成長するSRリンパ腫細胞腫瘍での化合物5のin vivoにおける有効性の評価
目的： 
本研究は、SR腫瘍をもつマウスに皮下または経口投与のいずれかで投与した化合物Aのin vivoにおける有効性を決定するために行った。
【０２３２】
実験デザイン： 
SRリンパ腫腫瘍細胞をSCID/NCメスマウスに皮下注射した。腫瘍の測定にはノギスを用い、腫瘍細胞の移植後12日目に3ないし4日ごとに測定した。動物は、腫瘍の測定と同じ日に規定どおり体重を測定し、有害な、薬物に関連する副作用のいずれかの臨床的兆候を監視した。化合物5または溶媒での処理は、第12日に開始し、5週間続けて第44日に終了した。評価エンドポイントは処理／対照(%T/C)の最適な比率、および研究中の複数の辞典で測定した腫瘍成長の遅延だった。
【０２３３】
結果：
SR腫瘍異種移植片において、化合物5の経口および皮下経路投与はどちらも投与量依存で有意に腫瘍の成長を抑制し、このモデルにおいては経口経路の方が皮下経路よりもわずかに優れているように見えた（図2）。化合物5を15または30 mg/kgで皮下投与したところ、最適% T/C値は70または50になったが、経口経路による投与では、最適% T/C値は、投与量15または30 mg/kgでそれぞれ48または43であった。さらに、化合物5の経口投与は、腫瘍成長の遅延によって測定したところ、皮下投与よりも有効だった。化合物5による腫瘍成長の遅延は、経口投与の場合（15または30 mg/kg）、それぞれ29または28%だったのに対し、皮下経路で投与した場合（15または30 mg/kg）はそれぞれ18または19%だった。
【０２３４】
結論：
化合物5は、30 mg/kg経口経路で投与した場合、本研究において認められた最大有効性を有するマウスにおいて成長するSRリンパ腫腫瘍の成長を、投与量に依存して抑制する。  
【０２３５】
等価物
当業者であれば、ごく普通の実験を用いるのみで、ここに説明した本願発明の特定の実施態様の等価物を数多く認識し、または確認できることであろう。このような等価物は、添付の請求の範囲の包含するところである。
【図面の簡単な説明】
【０２３６】
【図１】化合物5に曝露してから3または6日後の培養物中のSR細胞増殖の抑制を示す一連のグラフ（代表的なデータ）
【図２】化合物5で処理したSRリンパ腫腫瘍を持つマウスの腫瘍体積を示すグラフ
【図１Ａ】
2005536461.tif 000085
【図１Ｂ】
2005536461.tif 000086
【図２】
2005536461.tif 000087
【国際調査報告】
2005536461.tif 000088
2005536461.tif 000089