【手続補正書】
【提出日】令和2年2月20日(2020.2.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ハイブリッド生体適合性担体（ハイブリドソーム）を製造する方法であって、前記方法が、
（ａ）膜を含む第一の小胞を提供する工程であって、前記小胞はインビトロで生産され、前記小胞は、膜融合性のイオン化可能なカチオン性脂質を含む、工程と、
（ｂ）インビボで生産されて、細胞外環境中に放出される、脂質二重膜を含む自然に分泌される第二の小胞を提供する工程と、
（ｃ）前記第一の小胞を前記第二の小胞と、７．４より低いｐＨおよび０℃〜６０℃の間の温度にてバッファー中で接触させて、それにより前記第一の小胞を前記第二の小胞と統合させて、前記ハイブリドソームを生産する工程と
を含み、膜融合性の前記イオン化可能なカチオン性脂質が生理学的ｐＨ以下のｐＨで正に荷電し、かつ生理学的ｐＨを超えると中性である、方法。
【請求項２】
下記方法により製造されたハイブリドソームであって、前記方法が、
（ａ）膜を含む第一の小胞を提供する工程であって、前記小胞はインビトロで生産され、前記小胞は、膜融合性のイオン化可能なカチオン性脂質を含む、工程と、
（ｂ）インビボで生産されて、細胞外環境中に放出される、脂質二重膜を含む自然に分泌される第二の小胞を提供する工程と、
（ｃ）前記第一の小胞を前記第二の小胞と、７．４より低いｐＨおよび０℃〜６０℃の間の温度にてバッファー中で接触させて、それにより前記第一の小胞を前記第二の小胞と統合させて、前記ハイブリドソームを生産する工程と
を含み、膜融合性の前記イオン化可能なカチオン性脂質が生理学的ｐＨ以下のｐＨで正に荷電し、かつ生理学的ｐＨを超えると中性である、ハイブリドソーム。
【請求項３】
第一の小胞の脂質合計に対し少なくとも３０％のモル濃度で含む、請求項２に記載のハイブリドソーム。
【請求項４】
請求項２又は３に記載のハイブリドソームを含む医薬組成物。
【請求項５】
第一の小胞が生理活性剤を含む、請求項１に記載の方法、請求項２に記載のハイブリドソーム又は請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記生理活性剤が治療薬である、請求項５に記載の、方法、ハイブリドソーム又は医薬組成物。
【請求項７】
前記治療薬が下記（ａ）〜（ｃ）のいずれかである、請求項６に記載の、方法、ハイブリドソーム又は医薬組成物。
（ａ）薬物または医薬的に許容可能なその塩もしくは誘導体、
（ｂ）抗体に基づいた治療薬、
（ｃ）ペプチド、タンパク質、および核酸
【請求項８】
治療薬または診断薬を細胞内に送達する方法であって、生理活性剤を含むハイブリドソームと、前記細胞とを接触させることを含み、前記ハイブリドソームが下記方法により製造される、方法。
（ａ）膜を含む第一の小胞を提供する工程であって、前記小胞はインビトロで生産され、前記小胞は、膜融合性のイオン化可能なカチオン性脂質及び前記生理活性剤を含む、工程と、
（ｂ）インビボで生産されて、細胞外環境中に放出される、脂質二重膜を含む自然に分泌される第二の小胞を提供する工程と、
（ｃ）前記第一の小胞を前記第二の小胞と、７．４より低いｐＨおよび０℃〜６０℃の間の温度にてバッファー中で接触させて、それにより前記第一の小胞を前記第二の小胞と統合させて、前記ハイブリドソームを生産する工程と
を含み、膜融合性の前記イオン化可能なカチオン性脂質が生理学的ｐＨ以下のｐＨで正に荷電し、かつ生理学的ｐＨを超えると中性である。
【請求項９】
第一の小胞の脂質合計に対し少なくとも３０％のモル濃度で含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記生理活性剤が標的細胞へのさらなるハイブリドソームの標的化及び／又はトランスフェクションを容易にする機能的ポリペプチドを生産するのに適する、請求項８又は９に記載の方法。
【請求項１１】
前記生理活性剤が治療薬である、請求項８又は９に記載の方法。
【請求項１２】
前記治療薬が下記（ａ）〜（ｃ）のいずれかである、請求項１１に記載の方法。
（ａ）薬物または医薬的に許容可能なその塩もしくは誘導体、
（ｂ）抗体に基づいた治療薬、
（ｃ）ペプチド、タンパク質、および核酸
【請求項１３】
前記細胞が、白血球、グリア細胞、又はエクスビボ（ｅｘ  ｖｉｖｏ）増殖中の細胞である、請求項８〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記接触工程が、
（ａ）ｐＨ４〜６のバッファー中で、および／または
（ｂ）約３７℃の反応温度で
実施される、請求項１に記載の方法、請求項２に記載のハイブリドソーム、請求項４に記載の医薬組成物又は請求項８に記載の方法。
【請求項１５】
生理学的ｐＨが７．４である、請求項１に記載の方法、請求項２に記載のハイブリドソーム、請求項４に記載の医薬組成物又は請求項８に記載の方法。
【請求項１６】
前記第一の小胞が、脂質系ナノ粒子（ＬＮＰ）、リポソーム、ポリマー安定化ＬＮＰ、セラソーム、スフィンゴソーム、ポリマーソーム、合成ナノ粒子安定化ＬＮＰ、天然膜由来ＬＮＰ、および天然膜でコーティングされたＬＮＰからなる群より選択され、
前記第二の小胞がエキソソーム、エクトソーム、微小胞、およびアポトーシス小体からなる群より選択される、請求項１に記載の方法、請求項２に記載のハイブリドソーム、請求項４に記載の医薬組成物又は請求項８に記載の方法。
【請求項１７】
前記イオン化可能なカチオン性脂質が、１，２−ジリノレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎＤＭＡ）、２，２−ジリノレイル−４−（２−ジメチルアミノエチル）−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ヘプタトリアコンタ−６，９，２８，３１−テトラエン−１９−イル４−（ジメチルアミノ）ブタノエート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、ジオクタデシル−ジメチルアンモニウム（ＤＯＤＭＡ）、ジステアリルジメチルアンモニウム（ＤＳＤＭＡ）、Ｎ，Ｎ−ジオレイル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−塩化アンモニウム（ＤＯＤＡＣ）；Ｎ−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル−塩化アンモニウム（ＤＯＴＭＡ）；１，２−ジオレオイル−３−ジメチルアンモニウム−プロパン（ＤＯＤＡＰ）、Ｎ−（４−カルボキシベンジル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２，３−ビス（オレオイルオキシ）プロパン−１−アミニウム（ＤＯＢＡＱ）、ＹＳＫ０５、４−（（（２，３−ビス（オレオイルオキシ）プロピル）−（メチル）アミノ）メチル）安息香酸（ＤＯＢＡＴ）、Ｎ−（４−カルボキシベンジル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２，３−ビス（オレオイルオキシ）プロパン−１−アミニウム（ＤＯＢＡＱ）、３−（（２，３−ビス（オレオイルオキシ）プロピル）（メチル）アミノ）プロパン酸（ＤＯＰＡＴ）、Ｎ−（２−カルボキシプロピル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２，３−ビス−（オレオイルオキシ）−プロパン−１−アミニウム（ＤＯＭＰＡＱ）、Ｎ−カルボキシメチル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２，３−ビス（オレオイルオキシ）プロパン−１−アミニウム（ＤＯＡＡＱ）、アルニー（Ａｌｎｙ）−１００、３−（ジメチルアミノ）−プロピル（１２Ｚ，１５Ｚ）−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イル］−ヘニコサ−１２，１５−ジエノエート（ＤＭＡＰ−ＢＬＰ）、および、イオン化可能なアミノ脂質の誘導体からなる群より選択される、請求項１に記載の方法、請求項２に記載のハイブリドソーム、請求項４に記載の医薬組成物又は請求項８に記載の方法。
【請求項１８】
前記第一の小胞が、標的化部分を含み、前記標的化部分が、抗体またはその断片、抗体様分子、ペプチド、タンパク質、アプタマー、オリゴヌクレオチド、およびポリサッカライドからなる群より選択される、請求項１に記載の方法、請求項２に記載のハイブリドソーム、請求項４に記載の医薬組成物又は請求項８に記載の方法。
【請求項１９】
前記第一の小胞が、ＰＥＧ−リン脂質、ＰＥＧ−修飾ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）、ＰＥＧ−修飾セラミド、ＰＥＧ−修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ−修飾ジアシルグリセロール、ポリエチレングリコールジパルミトイルグリセロール（ＰＥＧ−ＤＰＧ）、ＰＥＧ−修飾ジアルキルグリセロール（メトキシポリエチレングリコール）−ジミリストイルグリセロール（ＰＥＧ−ｓ−ＤＭＧ）、ＰＥＧ−ジアルキルオキシプロピル（ＤＡＡ）、Ｒ−３−［（ω−メトキシ−ポリ（エチレングリコール）２０００）カルバモイル）］−１，２−ジミリストイルオキシプロピル−３−アミン（ＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧ）、およびＮ−アセチルガラクトサミン−（（Ｒ）−２，３−ビス（オクタデシルオキシ）プロピル−１−（メトキシ−ポリ（エチレングリコール）２０００）プロピルカルバメート））（ＧａｌＮＡｃ−ＰＥＧ−ＤＳＧ）からなる群より選択される、ＰＥＧ修飾脂質を更に含む、請求項１に記載の方法、請求項２に記載のハイブリドソーム、請求項４に記載の医薬組成物又は請求項８に記載の方法。
【請求項２０】
前記第二の小胞が、
（ａ）がんもしくは前がん患者の腫瘍細胞に由来するか、または、腫瘍もしくはがん細胞株に由来するか、
（ｂ）グリオブラストーマ細胞またはマントル細胞リンパ腫細胞に由来するか、
（ｃ）Ｂ細胞、抗原提示細胞、リンパ球、血小板、好中球、活性化多形核好中球および白血球からなる群から選択される細胞に由来するか、
（ｄ）細菌病原体、アメーバ病原体、寄生虫病原体または真菌病原体に由来するか、あるいは
（ｅ）病原体感染細胞に由来する、請求項１に記載の方法、請求項２に記載のハイブリドソーム、請求項４に記載の医薬組成物又は請求項８に記載の方法。
【請求項２１】
前記第一の小胞が、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、アンチセンスＲＮＡ、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、スモールまたはショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）、ＣＲＩＳＰＲ（Ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ  Ｒｅｇｕｌａｒｌｙ  Ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ  Ｓｈｏｒｔ  Ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ  Ｒｅｐｅａｔ）ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）、トランス活性化ＣＲＩＳＰＲＲＮＡ（ｔｒａｃｒＲＮＡ）、免疫刺激性オリゴヌクレオチド、プラスミド、アンチセンス核酸、およびリボザイムからなる群より選択される核酸を更に含む、請求項１に記載の方法、請求項２に記載のハイブリドソーム、請求項４に記載の医薬組成物又は請求項８に記載の方法。
【請求項２２】
（ａ）前記第一の小胞が、少なくとも一つの抗原をコードする修飾核酸分子および／もしくはｍＲＮＡを含み、ならびに／または
（ｂ）前記第二の小胞が、腫瘍関連抗原および病原体関連抗原から選択される疾患関連抗原を含む、請求項１に記載の方法、請求項２に記載のハイブリドソーム、請求項４に記載の医薬組成物又は請求項８に記載の方法。
【請求項２３】
前記第一の小胞が、
（ａ）２２５Ａｃ、７２Ａｓ、２１１Ａｔ、１１Ｂ、１２８Ｂａ、２１２Ｂｉ、７５Ｂｒ、７７Ｂｒ、１４Ｃ、１０９Ｃｄ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、１８Ｆ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、３Ｈ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３０Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、１３Ｎ、１５Ｏ、３２Ｐ、３３Ｐ、２１２Ｐｂ、１０３Ｐｄ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、４７Ｓｃ、１５３Ｓｍ、８９Ｓｒ、９９ｍＴｃ、８８Ｙ、および９０Ｙからなる群より選択される放射性同位元素、
（ｂ）量子ドット、ならびに金、銀、鉄および酸化鉄ナノ粒子から選択される金属ナノ粒子
から選択される剤を含む、請求項１に記載の方法、請求項２に記載のハイブリドソーム、請求項４に記載の医薬組成物又は請求項８に記載の方法。
【請求項２４】
前記接触工程におけるｐＨを上昇させることにより前記統合工程を終了させることを更に含む、請求項１に記載の方法、請求項２に記載のハイブリドソーム、請求項４に記載の医薬組成物又は請求項８に記載の方法。
【請求項２５】
治療薬を含む、ハイブリドソーム。
【請求項２６】
（ａ）エキソソーム、エクトソーム、微小胞、およびアポトーシス小体からなる群より選択される構造的及び生理活性的要素、並びに
（ｂ）脂質系ナノ粒子（ＬＮＰ）、リポソーム、ポリマー安定化ＬＮＰ、セラソーム、スフィンゴソーム、ポリマーソーム、合成ナノ粒子安定化ＬＮＰ、天然膜由来ＬＮＰ、および天然膜でコーティングされたＬＮＰからなる群より選択される構造的及び生理活性的要素を含み、ＬＮＰ、リポソーム、ポリマー安定化ＬＮＰ、セラソーム、スフィンゴソーム、ポリマーソーム、合成ナノ粒子安定化ＬＮＰ、天然膜由来ＬＮＰ、および天然膜でコーティングされたＬＮＰからなる群より選択される構造的及び生理活性的要素の脂質合計に対し少なくとも３０％のモル濃度で膜融合性のイオン化可能なカチオン性脂質を含む、請求項２５に記載のハイブリドソーム。
【請求項２７】
（ａ）エキソソームの構造的及び生理活性的要素、並びに
（ｂ）ＬＮＰの構造的及び生理活性的要素を含み、ＬＮＰの脂質合計に対し少なくとも３０％のモル濃度で膜融合性のイオン化可能なカチオン性脂質を含む、請求項２６に記載のハイブリドソーム。
【請求項２８】
（ａ）エキソソームの構造的及び生理活性的要素、並びに
（ｂ）ＬＮＰの構造的及び生理活性的要素を含み、ＬＮＰの脂質合計に対し少なくとも３０％のモル濃度で膜融合性のイオン化可能なカチオン性脂質を含む、請求項２６に記載のハイブリドソーム。
【請求項２９】
前記エキソソームが自然に分泌されたエキソソームである、請求項２７又は２８に記載のハイブリドソーム。
【請求項３０】
膜融合性のイオン化可能なカチオン性脂質を含む、請求項２５に記載のハイブリドソーム。
【請求項３１】
エキソソーム、エクトソーム、微小胞又はアポトーシス小体の脂質を含む、請求項２５又は３０に記載のハイブリドソーム。
【請求項３２】
前記エキソソーム、エクトソーム、微小胞又はアポトーシス小体が、自然に分泌された、エキソソーム、エクトソーム、微小胞又はアポトーシス小体である、請求項２６又は３１に記載のハイブリドソーム。
【請求項３３】
前記ハイブリドソームが、抗体またはその断片、抗体様分子、ペプチド、タンパク質、アプタマー、オリゴヌクレオチド、糖、ポリサッカライド、及びビタミンからなる群より選択される標的化部分を更に含む、請求項２５〜３２のいずれか１項に記載のハイブリドソーム。
【請求項３４】
前記標的化部分が標的となる細胞の表面上の部分に結合する、請求項３３に記載のハイブリドソーム。
【請求項３５】
前記ハイブリドソームがその表面にアンカーされる融合ペプチドを更に含み、前記融合ペプチドが可溶性Ｎ−エチルマレイミド感受性因子付着タンパク質受容体（ＳＮＡＲＥタンパク質）およびその合成模倣物から選択される、請求項２５〜３４のいずれか１項に記載のハイブリドソーム。
【請求項３６】
前記ハイブリドソームがＰＥＧ修飾脂質を更に含む、請求項２５〜３５のいずれか１項に記載のハイブリドソーム。
【請求項３７】
前記治療薬が下記（ａ）〜（ｃ）のいずれかである、請求項２５〜３６のいずれか１項に記載のハイブリドソーム。
（ａ）薬物または医薬的に許容可能なその塩もしくは誘導体、
（ｂ）抗体に基づいた治療薬、
（ｃ）ペプチド、タンパク質、および核酸