(57)【要約】コンビナトリアル合成における固体サポートを同定する方法又はコンビナトリアル合成における化合物の構造を決定する方法である。前記方法は、固体サポートからタグを切り離し、前記切り離したタグとフルオロアルカノイル酸又はそのアルコール反応性のその等価物による、タグ少なくとも１つの付着、固体サポートからのタグの切り離し、及び同定を含む。好ましいリンカー／タグは、式：Ｃ（＝Ｏ）Ｃ６Ｈ３（ＯＣＨ３）−Ｏ−Ｒ１（式中、Ｒ１は、炭素原子数１３〜３３のアルカン又はエーテル）で表される。【化１】2005523944.tif 000016
2005523944.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
コンビナトリアル合成における固体サポートを同定する方法又は化合物の反応ヒストリーを決定する方法であって、アルカン又はオキサアルカンタグ少なくとも１つを付着させ、切り離し、そして同定することを含み、前記タグの同定が、前記タグを前記固体サポートから切り離すことによって得られるアルカノール又はオキサアルカノールと、フルオロアルカノイル酸及びアルコール反応性のその等価物から選ばれた検出試薬とを反応させることによって行われる、前記方法。
【請求項２】
（ａ）アルカン又はオキサアルカンタグ少なくとも１つを酸素リンケージを介して前記固体サポートに付着させ；
（ｂ）前記タグが付着された前記固体サポート上で化学反応少なくとも１つを実施し；
（ｃ）前記固体サポートから前記タグ少なくとも１つを切り離し；
（ｄ）前記切り離したタグと、フルオロアルカノイル酸、無水物、ハロゲン化物、及び活性化されたエステルから選ばれた検出試薬とを反応させて、アルキルフルオロアルカノエート又はオキサアルキルフルオロアルカノエートエステル検出可能タグを得；そして
（ｅ）前記タグを検出し、それによって前記固体サポートを同定する；
ことを含む、請求項１に記載のコンビナトリアル合成における固体サポートを同定する方法。
【請求項３】
（ａ）第１ステージの試薬及び／又は第１ステージの反応条件、及び第２ステージの試薬及び／又は第２ステージの反応条件を少なくとも含む反応シリーズによって化合物が合成された固体サポートを用意し（ここで、前記反応シリーズにおいて前記第１ステージは前記第２ステージに先行し、固体サポートは：
（ｉ）前記第１ステージの試薬、又は第１ステージの反応条件、又は前記試薬と前記反応条件の両方を記録するコードを含む第１のアルカン又はオキサアルカンタグ；及び
（ii）前記第２ステージの試薬、又は第２ステージの反応条件、又は前記試薬と前記反応条件の両方を記録するコードを含む第２のアルカン又はオキサアルカンタグ；
が付着されている）、
（ｂ）前記タグを前記固体サポートから、アルカノール又はオキサアルカノールタグの混合物が生ずるように切り離し；
（ｃ）前記タグの混合物と、フルオロアルカノイル酸、無水物、ハロゲン化物、及び活性化されたエステルから選ばれた検出試薬とを反応させてアルキルフルオロアルカノエート又はオキサアルキルフルオロアルカノエートエステルを形成し；そして
（ｄ）各タグを検出する；
ことを含む、請求項１に記載の化合物の反応ヒストリーを決定する方法。
【請求項４】
前記検出可能なタグが、式：
【化１】
2005523944.tif 000012
（式中、ｍは４〜６であり；そして
Ｒ１は、炭素原子数１３〜３３の飽和炭化水素であるか、又は炭素原子数１３〜３３の飽和炭化水素において
【化２】
2005523944.tif 000013
１つ以上が、−Ｏ−に置き換えられたものである）
で表される化合物である、請求項２又は３に記載の方法。
【請求項５】
ｍが６であり、Ｒ１が炭素原子数１３〜３３の飽和炭化水素である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記タグが、介在するリンカーによって前記固体サポートに共有結合で付着している、請求項２又は３に記載の方法。
【請求項７】
最初に、前記リンカーを前記タグに付着させてリンカー／タグを形成し、そして次に前記リンカー／タグを前記固体サポートに付着させる、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記切り離しが、前記リンカーの酸化、酸に触媒される加水分解、又は光分解によって行われる、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
前記リンカーが、オルト及びパラニトロベンジルエーテル及びオルト及びパラメトキシフェニルエーテルからなる群から選択される、請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
前記リンカーと前記タグとが一緒になって、式：
【化３】
2005523944.tif 000014
（式中、Ｒ１は、炭素原子数１３〜３３のアルカン又はオキサアルカンであり；そして、
ａは、固相サポートへの付着点である）
で表されるリンカー／タグを形成する、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記検出試薬が、パーフルオロアルカン酸無水物である、請求項２又は３に記載の方法。
【請求項１２】
前記タグの同定が、電子捕捉クロマトグラフィーによって行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
式：
【化４】
2005523944.tif 000015
（式中、Ｒ１は、炭素原子数１３〜３３のアルカン又はオキサアルカンであり；そして
Ｒ２は、−ＣＨＮ２，−ＯＨ、ハロゲン、−Ｏ−スクシンイミド、及び−Ｏ−ペンタフルオロフェニルから選ばれる）
で表される化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、通常、化合物の合成に関し、特に化合物のコンビナトリアルライブラリーの固相合成に関する。
【発明の背景】
【０００２】
コンビナトリアル有機合成は、医薬の発見における重要な手段となりつつある。多くの多種多様な化合物を合成する方法が記載されており[Ellman et al. Chem. Rev.96: 555-600, (1996)]、システムにタグを付ける方法も記載されている[Ohlmeyer et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90, 10922-10926 (1993)]。コンビナトリアル合成の重要性が増すにつれて、広範な合成条件と物理的性質に対応することができる化学的な性質を有し、非常に低レベルのサンプルの検出も可能にするタグの必要が生じてきた。
【０００３】
その最も一般的な形の識別タグとは、ある化合物の合成において、どのシントンが個々の固体サポートに組み込まれたかを同定することができる手段である。識別タグはまた、合成シリーズにおいて固体サポートがその反応を訪れたステップを記録する。識別タグは、米国特許第５，７０８，１５３号，第４欄，第２４〜３６行に、「何らかの認識可能な特徴であって、例えば、形、サイズ、色、光学的密度等で顕微鏡的に区別することができる；光の吸収又は放出が異なる；化学的に反応性である；磁気的又は電子的にコードされている；又は他の何らかの方法で必要な情報が特徴的に記され、そして固体サポート１つ（又は少数の）のレベルで判読することができるもの」と定義されている。
【０００４】
分子タグは識別タグのサブセットである。分子タグは次のようないくつかの性質を有する化学物質である：それは固体サポートから切り離すことができ、好ましくは薬理学的に関心のある化合物を放出するのに用いられる手段と直交する手段によって切り離すことができる；それは合成条件の下で安定であり；そして、それは非常に低い濃度（例えば、１０−１８〜１０−９モル）で検出可能である。適当な分子タグ、及びその使用方法は、米国特許第５，５６５，３２４号に記載されており、その開示の全体は参照によって本明細書に含まれる。
【０００５】
公知の、一般に用いられる分子タグ、例えば、アミン（米国特許第５，８４６，３２４号に記載）、ペプチド、ヌクレオチド（米国特許第５，７０８，１５３号に記載）、及びポリクロロフェノキシアルキルタグ（米国特許第５，５６５，３２４号に記載）などは、コンビナトリアル合成に用いたいと思われそうないくつかの試薬の存在下で実質的な分解を受ける。強い求核試薬、例えば、チオールやアルコキシドアニオン、及び有機金属試薬（例えば、グリニャール試薬やアルキルリチウム試薬）は、より堅牢なタグの場合でも問題がある。ナノモル未満の量でも検出が可能であり、現在のタグよりもコンビナトリアル合成の積極的な反応条件にも耐えられるタグがあれば有益である。
【発明の概要】
【０００６】
本発明は、コンビナトリアル合成において望ましい、多くの一般的な反応条件に耐える能力を明らかにし、ナノモル以下のレベルでも検出可能なタグ付けの方法に関する。
【０００７】
ある態様では、本発明は、コンビナトリアル合成における固体サポートを同定する方法、又はコンビナトリアル合成における化合物の反応ヒストリーを決定する方法に関する。前記反応ヒストリーから、前記化合物の構造を決定することができる。この方法は、タグ少なくとも１つを付着させ、固体サポートからタグを切り離し（detach）、そして切り離したタグを検出試薬と反応させることによってタグを同定することを含む。タグは酸素によって固体サポートに付着されるアルカン又はオキサアルカンであるので、固体サポートからタグを切り離すことによって、アルカノール又はオキサアルカノールが生成する。通常、酸素リンケージがタグとリンカーの間に生じ、そして前記リンカーが固体サポートに付着するという形で、タグは介在する前記リンカーによって固体サポートに付着される。検出試薬は、フルオロアルカノイル酸及びアルコール反応性の等価物から選ばれる。本明細書で用いられる場合、アルコール反応性の等価物とは、アルコールにアシル残基を供与することができるシントンである。それは以下で示すように、無水物、ハロゲン化物、及び活性化されたエステルを含む。
【０００８】
ある実施態様では、本発明はコンビナトリアル合成における固体サポートを同定する方法であって：
（ａ）アルカン又はオキサアルカンタグ少なくとも１つを酸素リンケージを介して固体サポートに付着させ、；
（ｂ）タグが付着した固体サポートで少なくとも１つの化学反応を実施し、；
（ｃ）タグをその固体サポートから切り離し、；
（ｄ）切り離したタグと、フルオロアルカノイル酸、無水物、ハロゲン化物、及び活性化されたエステルから選ばれた検出試薬とを反応させて、アルキルフルオロアルカノエート又はオキサアルキルフルオロアルカノエートエステル検出可能タグを得て、；及び
（ｅ）タグを検出し、それによって固体サポートを同定する；
ことを含む方法に関する。
【０００９】
別の実施態様では、本発明は化合物の構造を決定する方法であって：
（ａ）第１ステージの試薬及び／又は第１ステージの反応条件と第２ステージの試薬及び／又は第２ステージの反応条件とを少なくとも含み、第１ステージが第２ステージに先行する反応シリーズによって、化合物が合成された固体サポートで：
（ｉ）第１ステージの試薬又は第１ステージの反応条件を記録するコードを含む第１ジの反応条件を記録するコードを含む第２のアルカン又はオキサアルカンタグ；のアルカン又はオキサアルカンタグ；及び
（ii）第２ステージの試薬又は第２ステージの反応条件を記録するコードを含む第２のアルカン又はオキサアルカンタグ；
が付着されている固体サポートを準備し；
（ｂ）タグを固体サポートから切り離して、アルカノール又はオキサアルカノールタグの混合物を形成し；
（ｃ）このタグの混合物とフルオロアルカノイル酸、無水物、ハロゲン化物、及び活性化されたエステルから選ばれた検出試薬とを反応させて、アルキルフルオロアルカノエート又はオキサアルキルフルオロアルカノエートエステルの混合物を形成し、；そして
（ｄ）各タグを検出する；
ことを含む方法に関する。
【００１０】
別の態様では、本発明は、本発明の方法に特に有用なリンカー／タグの組み合わせ、すなわち、式：
【化１】
2005523944.tif 000003
（式中、Ｒ１は、炭素原子数１３〜３３のアルカン又はエーテルであり；
Ｒ２は、−ＣＨＮ２、−ＯＨ、ハロゲン、−Ｏ−スクシンイミド、及び−Ｏ−ペンタフルオロフェニルである）
で表される化合物に関する。
以下の開示において、変化する語は、それが登場する際に定義するものとし、その定義を本命最初の全体にわたって維持する。
【発明の詳細な説明】
【００１１】
「アルキル」とは、炭素原子数１〜３０の直鎖、環式、又は分鎖の炭化水素構造及びそれらの組み合わせを含むものとする。「低級アルキル」とは、炭素原子数１〜６のアルキル基を意味する。低級アルキル基の例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓ−及びｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル等を含む。「シクロアルキル」とは、環１つ以上を含み炭素原子数３〜１２の飽和炭化水素を示すアルキル基のサブセットである。「シクロアルキル」基の例としては、ｃ−プロピル、ｃ−ブチル、ｃ−ペンチル、ｃ−ヘキシル、２−メチルシクロプロピル、シクロプロピルメチル、シクロペンチルメチル、ノルボルニル、アダマンチル、ミルタニル（myrtanyl）等を含む。
【００１２】
炭素原子数１３〜３３のエーテル残基（別名オキサアルキル）は、上記のようなアルキルにおいて１つ以上の炭素が（結合している水素と共に）酸素によって置き換えられたものを示す。例としては、１４−エトキシテトラデカニル、３，６，９，１２，１５−テトラオキサヘプタデカニル等を含む。
【００１３】
「ハロ」は、Ｆ、Ｃｌ、及びＢｒを含む。
【００１４】
「フルオロアルキル」とは、水素原子１つ以上がフッ素原子で置き換えられたアルキル残基（例えば、トリフルオロメチル、４，４，４−トリフルオロブチル、及びペンタフルオロエチル）を示す。
【００１５】
本発明の目的に則して、コンビナトリアルライブラリーという用語は、論理的なデザインに基づく分子の集合（これは、同時化学反応によるビルディングブロックの選択的な組み合わせを含む）を意味する。ライブラリーの分子の各スピーシーズはライブラリーのメンバーと呼ばれる。
【００１６】
リンカーは、コンビナトリアル合成において、タグを付着させるために、及び化学的又は薬理学的に推定される興味対象の部分を付着させるためにも一般的に用いられる。リンカーとは、固体サポートに付着させることができる分子であって、それに本発明のタグ又は化合物のライブラリーの所望のメンバーを付着させることができる。ライブラリーの構成が完了したとき、前記リンカーは、固体サポートからの標的化合物とタグとのクリーンな分離を可能にして化合物を損なうことなく、そして好ましくはサポートにも損傷を与えない。多くのリンカーが文献に記載されている。適当なリンカーは、米国特許第５，７８９，１７２号に開示されており、その開示は参照によって本明細書に含まれる。
【００１７】
コンビナトリアル合成を実施する場である材料は、固相サポート、固体サポート、ビーズ、及び樹脂と種々に称されている。これらの用語は次のようなものを含む：
（ａ）ビーズ、ペレット、ディスク、ファイバー、ゲル、又は粒子、例えば、セルロースビーズ、ポアーグラスビーズ、シリカゲル、場合によりジビニルベンゼンで架橋され、場合によりポリエチレングリコールがグラフトされたポリスチレンビーズ、ポリアクリルアミドビーズ、ラテックスビーズ、場合によりＮ、Ｎ‘−ビス−アクリロイルエチレンジアミンで架橋されたジメチルアクリルアミドビーズ、疎水性ポリマーがコーティングされたガラス粒子等、すなわち、剛性又は半剛性表面を有する物質；及び（ｂ）可溶サポート、例えば、ポリエチレングリコール、又は低分子量の、非架橋ポリスチレン。前記固体サポートは、アミノ、ヒドロキシ、カルボキシ、又はハロ基で官能化された表面を有することができ、及び通常は有する；アミノ基が最も普通である。固体相の表面を官能化する方法は当業者には周知である。（利用することができる部位の数を増やすための）アミン−官能化されたビーズ表面へのリシンの付着、及びその後のリンカーの付着、並びに典型的なコンビナトリアル合成のその他のステップは、例えば、ＰＣＴ出願ＷＯ９５／３０６４２に記載されており、その開示は参照によって本明細書に含まれる。ＰＣＴ出願ＷＯ９５／３０６４２に記載されている合成では、リンカーは光分解による開裂が可能なリンカーである。
【００１８】
上述のように、本発明は、その広い態様では、コンビナトリアル合成における固体サポートを同定する方法又は化合物の構造を決定する方法であって、アルカン又はオキサアルカンタグ少なくとも１つを付着させ、切り離し、同定することを含む方法に関する。通常、アルカン又はオキサアルカンタグ１つより多くが用いられ、２つ以上のそのようなタグが用いられることがより普通である。同定は、固体サポートからタグを切り離して得られるアルカノール又はオキサアルカノールをフルオロアルカノイル酸とそのアルコール反応性の等価物から選ばれる検出試薬とを反応させることによって行われる。
【００１９】
本発明の重要な特徴は、切り離したタグを検出試薬と反応させる前には１０ナノモル以下で必ずしも検出することができないタグ（検出不能タグ）であって、誘導体化（ｄｅｒｉｖａｔｉｚａｔｉｏｎ）の後に検出可能になるタグに関することである。「検出不能」とは、固体サポートに付着した状態又は開裂後に反応混合物中にある状態で（それ以上の化学的修飾又は誘導体化なしで）タグの存在又は非存在が問題の検出器によって統計的に有意に確定することができないということを意味する。したがって、「検出不能」とは、グローバルな意味で、タグの存在又は非存在が本願の出願時点で利用することができる検出器によっては統計的に有意に確定することができないということを意味する。この特徴によって、コンビナトリアルライブラリーの構成が完了した後に感度が高く、検出を可能にする官能基が付加されるので、タグとして化学的にきわめて不活性な残基、例えば、アルカンやエーテル、でも使用することができる。
【００２０】
米国特許第５，７８９，１７２号に記載されたエレクトロフォリックタグ（ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｉｃ  ｔａｇ）では、タグのポリ塩化芳香環が、電子捕捉ガスクロマトグラフィー（ＥＣＧＣ）検出及び分析に必要な突出したエレクトロフォリックエレメントである。残念なことに、この構造的な特徴が、いくつかの望ましい試薬の存在下での前記タグの化学的不安定性の原因になる。前記環における塩素原子の数を減らすと化学的な不安定性が減少することができる：ＣｘＣｌ３タグ又はＣｘＣｌ５タグよりも少し反応性が低い。原理的に、ＣｘＣｌ２タグ又はＣｘＣｌタグのシリーズはＣｘＣｌ３タグよりも安定であるが、Ｃｌ原子の数を減らすとタグはＥＣによって検出することができなくなる。
【００２１】
非ハロゲン化タグ（例えば、脂肪族アルコールをベースとするもの）は化学的安定性という点では理想的である。アリールＣ−Ｃｌ結合と異なり、脂肪族Ｃ−Ｈ結合は、還元剤、ラジカル、Ｐｄ−触媒される炭素−炭素及び炭素−窒素結合、金属−ハロゲン交換、及び強い求核試薬、に対して反応しない。しかしながら、脂肪族アルコールは非エレクトロフォリックである。本発明によれば、脂肪族アルコールとエーテルとは適当な試薬によって誘導体化することによって電子を捕捉するようになる。本発明の方法では、脂肪族をベースとするタグは、取り除かれ（実施例では、酸化によって）、そして、ポリフルオロアルカノイルエステル又はエーテルに変換された後にＥＣＧＣ分析される。ポリフルオロアルカノイルエステル及びエーテルは、容易にＥＣＧＣによって検出され、そして、安く簡単に合成される。このようにして、十分に堅牢な、化学的耐性を有するタグがコンビナトリアル合成の間に用いられ、そして、開裂した後にそれらのエレクトロフォリックエーテル又はエステルに誘導体化される。
【００２２】
非ハロゲン化アルコールは、不活性なタグとして好適である。最適なタグの選択基準は多種多様である。タグアルコールは市販で入手することができるか、容易に合成されなければならない。各タグの純度は、誘導体化の後にＥＣＧＣでクリーンな信号を出すのに十分でなければならない（不純物を含まないクロマトグラム）。対応する誘導体はＥＣＧＣで曖昧さを残さずに分離され（高分解能）、高い信号対雑音比を与え、最適には分析時間が５分未満である。単純な、直鎖脂肪族炭化水素及びエーテルは、一般に、費用、純度及び安定性に関する基準を満たす。好ましい検出可能なタグは、化学式Ａ又はＢを有する：
【化２】
2005523944.tif 000004
式中、ｍは、４〜６であり；
Ｙは、炭素原子数１２〜３２の飽和炭化水素、又は炭素原子数１２〜３２の飽和炭化水素において、
【化３】
2005523944.tif 000005
１つ以上が−Ｏ−によって置き換えられたものであり；
ｑは、１〜３であり；そして
Ｚは、炭素原子数（９−ｑ）〜（２９−ｑ）の飽和炭化水素、又は炭素原子数（９−ｑ）〜（２９−ｑ）の飽和炭化水素において、
【化４】
2005523944.tif 000006
１つ以上が−Ｏ−によって置き換えられたものである。
【００２３】
３つのクラスの非ハロゲン化タグの可能な構造及び揮発性誘導体への変換を示す：
【化５】
2005523944.tif 000007
これらの好ましい化合物において、ｍは、０〜１０、好ましくは４〜６であり；ｎは、１０〜３０、好ましくは１３〜２８であり；ｐとｑの和は、１０〜３０、最適には１３〜２８であり；そして、ｑは、通常、１又は２である。例えば、（ＣＨ２）ｐ−の形の直鎖アルキルを表しているが、分鎖又は環式アルカンも本発明において使用することができる。同様に、エーテル（オキサアルカノール）の使用は本発明の別の実施形態を与えるが、たいていの場合、前記試薬はもっと高価になる。
【００２４】
リンカーを介してタグを固体基質に付着させるために、タグアルコールは、活性化されたアルコールとヒドロキシメトキシ安息香酸の反応とそれに続く対応するジアゾケトンへの変換によって、リンカータグ複合体に変換される。前記ジアゾケトンの合成を、以下に示す。次に、以下に示す手順で、ポリマービーズをそれからジアゾケトンと反応させる。
【００２５】
本発明の方法は、何万というビーズの、信頼することができるルーチン解読を可能にする。マスタープレートの単一ビーズを、室温で２時間、２０μＬの水性０．５Ｍ ＣＡＮ及び８０μＬのオクタンと共にインキュベートする。オクタン中の前記タグの溶液を、次に大過剰な誘導体化試薬（普通、５００倍以上に過剰）で処理し、抽出されたタグアルコールを迅速にかつ定量的に誘導体化する。大過剰な誘導体化試薬は、また、オクタン中にひそかに存在して誘導体化試薬の望ましくない加水分解をもたらすことのある水を補償するためにも用いられる。このような理由により試薬が安価であることが有利である。
【００２６】
揮発する検出試薬は、フルオロアルカノイルとハロアロイル無水物、ハロゲン化物、及び活性化されたエステルであることができる。末端ヒドロキシルを有する開裂タグをカルボン酸と反応させる縮合剤は、エステル合成の当業者には周知である。このような剤としては、いろいろな種類のカルボジイミド、２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１，２−ジヒドロキノリン、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロフォスフェート（ＨＡＴＵ）等が含まれる。検出試薬のカルボン酸を適当な脱離基と予備反応させて活性化されたエステル、例えば、トリフレートエステルを形成することもできる。ペルフルオロアルカノイル無水物、特にペルフルオロヘプタン酸無水物が好ましい。
【００２７】
状況によっては、過剰な誘導体化試薬を用いることが検出器を圧倒して正確な分析を妨げることが見出されることがある。これは、試薬の量を減らすことによって解決されるが、それが許容することができないほど遅い、又は不完全な誘導体化に導く可能性がある。別の方法はスカベンジャー樹脂を用いてオクタン溶液から過剰な誘導体化試薬を除去した後にＥＣＧＣ分析を行うことである。前記スカベンジャーは、自由なヒドロキシル基又はアミン基を有し、過剰な誘導体化試薬と反応することができる通常の樹脂であればよい。
【００２８】
本発明の戦略に適合する化学反応としては、縮合、アミド結合形成、還元、酸化、脱離、置換、アルキル化、アシル化、ニトロ化、還元的アミン化、チオール付加、脱カルボキシル化、脱ハロゲン化、金属−ハロゲン交換、及び炭素−炭素結合を含む。
【００２９】
場合により固体基質へのタグの付着は、タグと固体基質の間に介在するリンカーによって行われる。通常、まずリンカーをタグに付着させてリンカー／タグを形成し、次にこのリンカー／タグを固体基質に付着させることが有利である。切り離しは、リンカーの酸化、酸に触媒された加水分解、又は光分解によって行うことができる。適当なリンカーは、米国特許第５，７８９，１７２号に開示されている。４−[４−（ヒドロキシメチル）−３−メトキシフェノキシ]ブチリル残基は、公知のリンカーである。これは、アミノ官能基を有する固体サポートに、酪酸鎖のカルボキシルでアミドを形成することによって付着する。アルカノール（又は、オキサアルカノール）タグは４−（ヒドロキシメチル）基のヒドロキシルに付着して、２，４−ジアルコキシベンジルエーテルを形成し、これは合成が完了したときに酸媒質中で容易に開裂することができる。好ましいリンカーは、光分解で開裂するオルト及びパラニトロベンジルエーテル、及び酸化によって開裂するオルト及びパラメトキシフェニルエーテルである。
【００３０】
好ましいタグは、上述のように、アルカン及びエーテル残基であり、好ましくは炭素原子数１３〜３３のアルカン及びエーテル、さらに好ましくは炭素原子数１５〜３０のアルカン及びエーテルである。好ましいリンカー／タグの組み合わせは次の化学式のものである。
【化６】
2005523944.tif 000008
式中、Ｒ１は、炭素原子数１３〜３３のアルカン又はエーテルであり；
ａは、固相サポートへの付着点である。
【００３１】
前記リンカー／タグは、以下のように合成される：
【化７】
2005523944.tif 000009
【００３２】
（１）の合成：ＣＨ２Ｃｌ２１００ｍＬに懸濁されたアルコール、ヘネイコサノール（５ｇ、１６ｍｍｏｌ）に、メタンスルフォニルクロリド（１．７ｍＬ，２２ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（３．５ｍＬ）を添加した。前記溶液は、室温で１６時間撹拌した。前記反応混合物を、水（２Ｘ）で洗浄し、そして、その有機層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮してメシレート（１）を得た（６．４ｇ，収率１００％）。この生成物はそれ以上精製しないまま次の反応に使用した。
【００３３】
（２）の合成：ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）１１０ｍＬ中の（１）（６．４ｇ，１６ｍｍｏｌ）の溶液にメチルバニレート（２．９１ｇ，１６ｍｍｏｌ）とＫ２ＣＯ３（１６ｇ）を添加した。前記混合物は４５℃で４０時間撹拌した。４０時間後、前記混合物を室温まで冷却し、４Ｎ−ＨＣｌを添加してｐＨ＜４にした。前記生成物は、ＣＨＣｌ３（２Ｘ，１５０ｍＬ）で抽出し、Ｈ２Ｏで洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮して化合物（２）を淡黄色のオイルとして得た（５．９ｇ，収率７７％）。
【００３４】
（３）の合成：３０％Ｈ２Ｏ／ＴＨＦ１００ｍＬ中の（２）（５．９ｇ，１２．９ｍｍｏｌ）の溶液にＮａＯＨペレット（９ｇ）を添加した。前記溶液は、加熱して４０時間環流し、その時点で白色の沈澱が生じていた。前記反応混合物は、室温まで自然冷却され、そして上澄みを流した。残った固体に４Ｎ−ＨＣｌを撹拌しながらｐＨ＜４になるまで添加した。前記固体を濾過して出し、１Ｎ−ＨＣｌとＨ２Ｏとで洗浄し、その後減圧下で６０℃で８時間乾燥した。前記粗生成物（３）が単離された（５．９ｇ，収率１００％）。
【００３５】
（５）の合成：トルエン１００ｍＬ中の（３）、（５．９ｇ，１２．９ｍｍｏｌ）の懸濁液に塩化チオニル（４．８ｍＬ，６５．８ｍｍｏｌ）とＤＭＦ（０．１５ｍＬ）を添加した。前記懸濁液を加熱して透明な溶液を得た。前記溶液を、加熱して１．５時間環流した。全ての揮発成分が真空下で除去した。得られた残渣は真空下、６０℃で６時間乾燥した。ＣＨＣｌ３（１００ｍＬ）中の粗生成物（４）の溶液に、０℃でトリエチルアミン（４．１ｍＬ）を添加した。１０分後、（トリメチルシリル）ジアゾメタン（１３ｍＬ）を添加した。前記溶液を０℃で１時間撹拌した後、放置して室温まで温め、そして１６時間撹拌した。前記反応混合物を濃縮し、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（１５：８５酢酸エチル：ヘキサン）で精製し、ジアゾ−リンカー／タグ（５）を得た（２．２ｇ，収率３５％）。
【００３６】
樹脂へのリンカー／タグの付着は、以下のように行われる：樹脂にタグを付着させる前に以下で示すような手順で洗浄しなければならない：ＴＥＮＴＡＧＥＬＴＭ、 ＡＲＧＯＧＥＬＴＭ、及びポリスチレン（２００−２５０μＭ）樹脂の場合、０．９〜４ｇの樹脂をメタノール６０ｍＬで１回、次にジクロロメタン（ＤＣＭ）６０ｍＬで５回洗浄する；ポリスチレン（４００−５００μＭ）樹脂の場合、 ０．９〜４ｇの樹脂をＤＣＭ６０ｍＬで５回洗浄する。ジアゾ−リンカー／タグの量は、ＴＥＮＴＡＧＥＬＴＭ、ＡＲＧＯＧＥＬＴＭ、及びポリスチレン（２００−２５０μＭ）樹脂の場合、樹脂各１００ｍｇに対して各タグジアゾケトンが７〜１５ｍｇ；ポリスチレン（４００−５００μＭ）樹脂の場合、樹脂各１００ｍｇに対して各タグジアゾケトンが２〜４ｍｇ；でなければならない。このジアゾケトンをバイアルあたりＤＣＭ約１０ｍＬに、ロジウムトリフルオロアセテートダイマー（ＡＬＤＲＩＣＨ）９ｍｇをバイアルあたりＤＣＭ３ｍＬに溶解する。容器にタグ溶液を添加する前に、各バイアルのタグ溶液の小さな部分標本をＨＰＬＣ分析のために取り分けておかなければならない。洗浄された樹脂をバイアル中のＤＣＭ４５ｍＬに懸濁させ、ジアゾケトン溶液及び触媒溶液を以下のように添加する：
ｉ）各容器に触媒溶液の３３％を十分なＤＣＭと共に添加して６０ｍＬに達するようにし、３０分間振とうする。前記容器からこの溶液を流出させる。
ii）各容器に触媒溶液の３３％を適当な量のＤＣＭと共に加えて、他の全てを加えた後に６０ｍＬに達するようにする。１０分間振とうする。この溶液は前記容器から流出させない。
iii）各容器にタグ溶液の３０％を添加し、そして１０分間振とうする。
iv）各容器にタグ溶液の別の３０％を添加し、そして１０分間振とうする。
ｖ）各容器に触媒溶液の残液３３％を添加し、そして１０分間振とうする。
vi）各容器にタグ溶液の残液４０％と洗浄液とを添加し、そして１２時間振とうする。
前記反応は、ＨＰＬＣで観察してタグ付着の完了を確認する。
コード化が完了した後、以下の手順に従う：
ＴＥＮＴＡＧＥＬＴＭ、ＡＲＧＯＧＥＬＴＭ、及びポリスチレン（２００−２５０μＭ）樹脂の場合：懸濁液を流出させ、６０ｍＬのＨＰＬＣ等級ＤＣＭ（７Ｘ）及びＭｅＯＨ（６Ｘ）で交互に洗浄する。ポリスチレン樹脂（４００−５００μＭ）の場合：懸濁液を流出させ、６０ｍＬのＤＣＦ（５Ｘ）、続いてＤＣＭ（８Ｘ）で洗浄する。
【００３７】
本発明の不活性タグと米国特許第５，５６５，３２４号のポリクロロフェノキシアルキルタグの相対的な安定性が、スズキ反応を用いるプロトタイプコンビナトリアル合成で比較された。
《新しいタグの安定性を試験するためのスズキカプリング反応》
【化８】
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【００３８】
固体サポートでのスズキ反応：メリフィールド振とう容器（１０ｍＬ）に、米国特許第５，５６５，３２４号のＣ４Ｃｌ３、Ｃ１２Ｃｌ５、Ｃ１３Ｃｌ５ポリクロロフェノキシアルキルタグ、及び本発明の炭素原子数１７〜２０のタグによってコード化されたＰｏｌｙｍｅｒ  Ｌａｂｓ２００−２５０ミクロン樹脂（５ｍｇ）を入れ、続いてジメトキシエタン（ＤＭＥ）（５ｍＬ）を入れ、そして前記混合物にアルゴンを１５分間散布した。フェニルボロン酸（１２９ｍｇ，１．５４ｍｍｏｌ）を添加し、続いてテトラブチル水酸化アンモニウム（０．７８ｇ）とテトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（０）（４１ｍｇ）を添加した。前記反応混合物は１１０℃で２４時間振とうし、そして樹脂をＤＭＥ(Ｘ２)で洗浄し、続いてジクロロメタンとメタノールの交替サイクル（５サイクル）で洗浄した。いくつかのビーズを選び出してタグ切り離して実験を行い、反応条件が本発明のタグ又は従来技術のタグを損傷したかどうかを調べた。
【００３９】
本発明によるタグの開裂と誘導体化を下に示す：
【化９】
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【００４０】
本発明のタグの抽出と、揮発化検出試薬としてのパーフルオロヘプタン酸無水物によるタグの誘導体化：タグが付けられた単一ビーズを含むガラスインサートに０．３Ｍ硝酸アンモニウムセリウム（IV）（ＣＡＮ）２ｍＬとオクタン１０ｍＬを加えた。前記インサートは３０℃で１６時間インキュベートした。次に、オクタン溶液を別のガラスインサートに移し、続いて０．２Ｍパーフルオロヘプタン酸無水物オクタン溶液２ｍＬと１，１，１，３，３，３−ヘキサメチルジシラザン（ＨＭＳ）１ｍＬによって処理した。続いて、前記反応混合物を、真空下で乾燥した。残渣を、オクタン８ｍＬとＨＭＳ１ｍＬとに再溶解した。
【００４１】
前記実験は、この反応条件が従来技術のＣｌ５シリーズのタグを完全に破壊することを示した。溶液１μＬをＧＣで分析したところ、分析はＣｌ５タグの完全な消滅が示されると共に、本発明のタグと比較して、Ｃｌ３タグからの信号の５０％の減衰が示された。このように、従来技術のＣｌ３シリーズのタグは、不明瞭な情報を与えるか又は何も情報を与えないという状態まで損傷された。本発明のタグは実質的に影響されなかった。実質的に影響されないというのは機能的な定義である：それは、固体基質を同定するという点で有用性の減少を生ずるほどタグは劣化しなかったと言うことを意味する。一般に、一連の反応でタグの有用性の減少又は変化が５％未満であれば、それは「実質的に」何も影響されないということである。
【国際調査報告】
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