(57)【要約】  本発明は、Ａｓｐ２（β−セクレターゼ、ＢＡＣＥ１またはメマプシン）阻害活性を有する新規ヒドロキシエチレン化合物、その製造方法、それを含んでなる組成物およびβ−アミロイドレベルまたはβ−アミロイド沈殿により特徴付けられる疾患、特にアルツハイマー病の治療におけるその使用。
2005510559.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2005510559.tif 000023
［式中、Ｒａは式（ａ）：
【化２】
2005510559.tif 000024
で示される基または式（ｂ）：
【化３】
2005510559.tif 000025
で示される基であり；
Ｒ１は−ＳＯ２Ｒ５であり；
Ｒ５は、メチルまたはエチルであり；
Ｘ１は、Ｎ、−Ｃ（−Ｒ６）−または−Ｃ（−Ｏ−Ｒ７）−であり；
Ｘ２およびＸ３は、独立して、Ｎ、−Ｃ（−Ｒ８）−または−Ｃ（−Ｙ−Ｒ９）−であり；
Ｙは、結合、ＣＨ２、Ｏ、Ｓ、ＣＯ、ＮＲ１０、−Ｎ（Ｒ１０）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）−、ＣＯＯ、アリール、ヘテロサイクリルまたはヘテロアリールであり；
Ｒ６は、水素、ハロゲン、−Ｃ１−６アルキル、−Ｃ２−６アルケニル、−Ｃ３−８シクロアルキル、−Ｃ１−２アルキル−Ｃ３−８シクロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロサイクリルまたはアリールであり；
Ｒ８はハロゲンであり；
Ｒ７、Ｒ９およびＲ１０は、独立して、水素、−Ｃ１−６アルキル、−Ｃ２−６アルケニル、−Ｃ３−８シクロアルキル、−Ｃ１−２アルキル−Ｃ３−８シクロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロサイクリルまたはアリールであり；
Ｗ１は、ＣＯまたはＳＯ２であり；
Ｒ２は、−Ｃ５−８アルキル、−Ｃ１−６アルキル−アリール、−Ｃ１−６アルキル−ヘテロアリール、−Ｃ１−６アルキル−ヘテロサイクリル、−Ｃ１−６アルキル−Ｃ３−８シクロアルキル、−Ｃ１−６アルキル−Ｓ−アリール、−Ｃ１−６アルキル−Ｏ−アリール、−Ｃ１−６アルキル−Ｓ−ヘテロアリールまたは−Ｃ１−６アルキル−Ｏ−ヘテロアリールであり；
Ｒ３は、−Ｃ１−６アルキルまたはプロパギルであり；
Ｒ４は、−Ｃ１−６アルキル、−Ｃ１−６アルキル−アリール、−Ｃ１−６アルキル−ヘテロアリール、−Ｃ１−６アルキル−ヘテロサイクリル、−Ｃ３−８シクロアルキル、−Ｃ１−６アルキル−Ｃ３−８シクロアルキルまたはプロパギルである］
で示される化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物。
【請求項２】
Ｎ−［（１Ｓ，２Ｓ，４Ｒ）−１−ベンジル−４−（３，３−ジメチルブチルカルバモイル）−２−ヒドロキシペンチル］−３−メタンスルホニル−ベンズアミド；
Ｎ−［１Ｓ，２Ｓ，４Ｒ）−１−ベンジル−４−（ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−イルカルバモイル）−２−ヒドロキシヘプト−６−イニル］−３−メタンスルホニルベンズアミド；
Ｎ−［（１Ｓ，２Ｓ，４Ｒ）−１−ベンジル−４−（ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−イルカルバモイル）−２−ヒドロキシペンチル］−３−メトキシ−５−メチルスルホニルベンズアミド；
Ｎ−［（１Ｓ，２Ｓ，４Ｒ）−１−ベンジル−４−（ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−イルカルバモイル）−２−ヒドロキシペンチル］−３−メチルスルホニル−５−ｎ−プロポキシベンズアミド；
Ｎ−［（１Ｓ，２Ｓ，４Ｒ）−１−ベンジル−４−（ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−イルカルバモイル）−２−ヒドロキシ−７−メチル−オクチル］−３−ｎ−プロポキシ−５−メチルスルホニルベンズアミド；
Ｎ−［（１Ｓ，２Ｓ，４Ｒ）−１−ベンジル−４−シクロヘキシルカルバモイル−２−ヒドロキシペンチル］−３−メトキシ−５−メチルスルホニルピリジン−４−カルボキサミド；
Ｎ−［（１Ｓ，２Ｓ，４Ｒ）−１−ベンジル−４−（ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−イルカルバモイル）−２−ヒドロキシペンチル］３−メチルスルホニル−５−（２オキソピロリジン−１−イル）−ベンズアミド；
Ｎ−［（１Ｓ，２Ｓ，４Ｒ）−１−ベンジル−４−（ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−イルカルバモイル）−２−ヒドロキシペンチル］−３−メトキシ−５−メチルスルホニルピリジン−４−カルボキサミド；
５−メタンスルホニル−チオフェン−２−カルボン酸［（１Ｓ，２Ｓ，４Ｒ）−１−ベンジル−４−（３，３−ジメチル−ブチルカルバモイル）−２−ヒドロキシペンチル］−アミド；
である請求項１記載の化合物またはその医薬上許容される塩。
【請求項３】
請求項１または請求項２記載の式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を、１つまたはそれ以上の医薬上許容される希釈剤または担体と混合して含む医薬組成物。
【請求項４】
医薬として用いるための請求項１または請求項２記載の式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物。
【請求項５】
高β−アミロイドレベルまたはβ−アミロイド沈殿により特徴付けられる疾患の治療における、請求項１または請求項２記載の式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物の使用。
【請求項６】
高β−アミロイドレベルまたはβ−アミロイド沈殿により特徴付けられる疾患の治療用の医薬の製造における、請求項１または請求項２記載の式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物の使用。
【請求項７】
高β−アミロイドレベルまたはβ−アミロイド沈殿により特徴付けられる疾患の治療または予防方法であって、有効量の請求項１または請求項２記載の式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を患者に投与することを含む方法。
【請求項８】
高β−アミロイドレベルまたはβ−アミロイド沈殿により特徴付けられる疾患の治療において用いるための、請求項１または請求項２記載の式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を含んでなる医薬組成物。
【請求項９】
請求項１記載の式（Ｉ）で示される化合物の製造方法であって：
（ａ）いずれのヒドロキシまたはアミノ基が保護されていてもよい、式（ＩＩ）：
【化４】
2005510559.tif 000026
［式中、Ｒａ、Ｒ２、Ｒ３およびＷ１は請求項１の記載と同意義である］
で示される化合物を、式Ｒ４−ＮＨ２
［式中、Ｒ４は請求項１の記載と同意義である］
で示される化合物と反応させ、ついで、要すれば、保護された式（Ｉ）で示される化合物を脱保護してもよいこと；
（ｂ）Ｗ１がＣＯである式（Ｉ）で示される化合物を製造する場合、いずれのヒドロキシまたはアミノ基が保護されていてもよい、式（ＩＩＩ）：
【化５】
2005510559.tif 000027
［式中、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は請求項１の記載と同意義である］
で示される化合物を、式Ｒａ−ＣＯＯＨ
［式中、Ｒａは請求項１の記載と同意義である］
で示される化合物またはその保護誘導体と反応させ、ついで、要すれば、保護された式（Ｉ）で示される化合物を脱保護してもよいこと；または
（ｃ）Ｗ１がＳＯ２である式（Ｉ）で示される化合物を製造する場合、いずれのヒドロキシまたはアミノ基が保護されていてもよい、式（ＩＩＩ）：
【化６】
2005510559.tif 000028
［式中、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は請求項１の記載と同意義である］
で示される化合物を、式（ＩＶ）：
【化７】
2005510559.tif 000029
［式中、Ｒａは請求項１の記載と同意義であり、Ｌ１は適当な脱離基、例えばハロゲン原子（例えば、塩素）である］
で示される化合物またはその保護されていてもよい誘導体と反応させ、ついで、要すれば、保護された式（Ｉ）で示される化合物を脱保護してもよいこと；または
（ｄ）保護された式（Ｉ）で示される化合物を脱保護すること；または
（ｅ）式（Ｉ）で示される化合物と別の式（Ｉ）で示される化合物に相互変換すること；
を含む方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、Ａｓｐ２（β−セクレターゼ，ＢＡＣＥ１またはメマプシン（Ｍｅｍａｐｓｉｎ））阻害活性を有する新規ヒドロキシエチレン化合物、その製造方法、それを含んでなる組成物および高β−アミロイドレベルまたはβ−アミロイド沈殿により特徴付けられる疾患、特にアルツハイマー病の治療におけるその使用に関する。
【０００２】
アルツハイマー病は、老人プラークの形態でのＡβの細胞外沈殿が疾患の重要な病理学的特性である、退行性脳障害である（Selkoe, D. J. (2001) Physiological Reviews 81: 741-766）。老人プラークの存在は、顕著な炎症性応答およびニューロン欠損を伴う。Ａβは、可溶性および不溶性線維形態で存在し、特定の線維形態は、有力な神経毒性種として同定されている（Vassar, R.およびCitron, M. (2000) Neuron 27: 419-422）。加えて、痴呆は、プラーク負担よりも、むしろ可溶性アミロイドのレベルに、より密接に関連していると報告されている（Naslund, J. et al. (2000) J. Am. Med. Assoc. 12: 1571-1577; Younkin, S. (2001) Nat. Med. 1: 8-19）。Ａβは、Ａｓｐ２（β−セクレターゼ、ＢＡＣＥ１またはメマプシンとしても知られている）として知られているアスパルチルプロテアーゼ酵素による、ベータアミロイド前駆体蛋白質（ＡＰＰとしても知られている）の開裂を介して産生されることが知られている（De Strooper, B.およびKonig, G. (1999) Nature 402: 471-472）。
【０００３】
したがって、Ａｓｐ２酵素の阻害は、ＡＰＰプロセシングのレベルを減少させ、その結果、脳内に見られるＡβペプチドのレベルを減少させるだろうことが提案されている。したがって、また、Ａｓｐ２酵素の阻害は、アルツハイマー病の効果的な治療標的であるだろうことが考えられている。
【０００４】
ＡＰＰは、種々の蛋白質分解酵素により開裂される（De Strooper, B.およびKonig, G. (1999) Nature 402: 471-472）。アミロイド生成経路における主要な酵素は、Ａｓｐ２（β−セクレターゼ）およびγ−セクレターゼであり、その両方ともがアスパラギン酸プロテイナーゼであり、これらの酵素によるＡＰＰの開裂により、Ａβが生成する。Ａβ形成を妨げる、非アミロイド生成α−セクレターゼ経路は、多くのプロテイナーゼにより触媒されることが示されており、最も良好な候補はＡＤＡＭ１０、ディスインテグリンおよびメタロプロテアーゼである。Ａｓｐ１は、インビトロで、α−およびβ−セクレターゼ活性の両方を示すことが要求されている。Ａｓｐ１およびＡｓｐ２の発現パターンは、全く異なるものであり、Ａｓｐ２は、膵臓および脳において最も高レベルで発現されるが、Ａｓｐ１発現は、多くの他の末端組織で起こる。Ａｓｐ２ノックアウトマウスは、Ａｓｐ２の欠損によりＡβ産生が停止することを示し、また、この動物モデルにおいて、内因性Ａｓｐ１は、Ａｓｐ２欠乏に代わるものではないことが示されている（Luo, Y. et al. (2001) Nat Neurosci. 4: 231-232; Cai, H. et. al. (2001) Nat Neurosci. 4: 233-234; Roberds, S. L. et al. (2001) Hum. Mol. Genet. 10: 1317-1324）。
【０００５】
アルツハイマー病の治療において治療的に有用である薬剤に関して、該薬剤は、Ａｓｐ２酵素の有力な阻害剤であることが好ましいが、アスパルチルプロテイナーゼファミリーの他の酵素、例えばカテプシンＤ（Connor, G. E. (1998) Cathepsin D in Handbook of Proteolytic Enzymes, Barrett, A. J., Rawlings, N. D., & Woesner, J. F. (Eds) Academic Press London. pp828-836）よりもＡｓｐに対して選択的であることが理想的である。
【０００６】
ＷＯ０１／７０６７２（Elan Pharmaceuticals Inc.）は、アルツハイマー病の治療に有用であると関連付けられたβ−セクレターゼ活性を有する一連のヒドロキシエチレン化合物を記載している。
【０００７】
本発明者らは、Ａｓｐ２酵素の有力な阻害剤である新規な一連の化合物を見出し、したがって、これらの化合物がアルツハイマー病の治療に効果的である可能性を示している。
【０００８】
かくして、本発明の第１の態様により、式（Ｉ）：
【化１】
2005510559.tif 000003
［式中、Ｒａは、式（ａ）：
【化２】
2005510559.tif 000004
で示される基；
または式（ｂ）：
【化３】
2005510559.tif 000005
で示される基であり；
Ｒ１は、−ＳＯ２Ｒ５であり；
Ｒ５は、メチルまたはエチルであり；
Ｘ１は、Ｎ、−Ｃ（−Ｒ６）−または−Ｃ（−Ｏ−Ｒ７）−であり；
Ｘ２およびＸ３は、独立して、Ｎ、−Ｃ（−Ｒ８）−または−Ｃ（−Ｙ−Ｒ９）−であり；
Ｙは、結合、ＣＨ２、Ｏ、Ｓ、ＣＯ、ＮＲ１０、−Ｎ（Ｒ１０）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）−、ＣＯＯ、アリール、ヘテロサイクリルまたはヘテロアリールであり；
Ｒ６は、水素、ハロゲン、−Ｃ１−６アルキル、−Ｃ２−６アルケニル、−Ｃ３−８シクロアルキル、−Ｃ１−２アルキル−Ｃ３−８シクロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロサイクリルまたはアリールであり；
Ｒ８は、ハロゲンであり；
Ｒ７、Ｒ９およびＲ１０は、独立して、水素、−Ｃ１−６アルキル、−Ｃ２−６アルケニル、−Ｃ３−８シクロアルキル、−Ｃ１−２アルキル−Ｃ３−８シクロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロサイクリルまたはアリールであり；
Ｗ１は、ＣＯまたはＳＯ２であり；
Ｒ２は、−Ｃ５−８アルキル、−Ｃ１−６アルキル−アリール、−Ｃ１−６アルキル−ヘテロアリール、−Ｃ１−６アルキル−ヘテロサイクリル、−Ｃ１−６アルキル−Ｃ３−８シクロアルキル、−Ｃ１−６アルキル−Ｓ−アリール、−Ｃ１−６アルキル−Ｏ−アリール、−Ｃ１−６アルキル−Ｓ−ヘテロアリールまたは−Ｃ１−６アルキル−Ｏ−ヘテロアリールであり；
Ｒ３は、−Ｃ１−６アルキルまたはプロパギルであり；
Ｒ４は、−Ｃ１−６アルキル、−Ｃ１−６アルキル−アリール、−Ｃ１−６アルキル−ヘテロアリール、−Ｃ１−６アルキル−ヘテロサイクリル、−Ｃ３−８シクロアルキル、−Ｃ１−６アルキル−Ｃ３−８シクロアルキルまたはプロパギルである］
で示される化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を提供する。
【０００９】
アルキルなる語は、対応するアルキルの直鎖または分枝鎖両方の脂肪族異性体を含む。アルケニルなる語も同様に解釈すべきであることは明らかだろう。また、アルキルは、１つまたはそれ以上の、好ましくは１〜３つのハロゲン原子、ヒドロキシ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＣＨ３、アルコキシ、シアノまたはアミノ基により置換されていてもよいことは明らかだろう。
【００１０】
Ｃ３−８シクロアルキルなる語は、対応するアルキルのすべての脂環式（分枝したものを含む）異性体を含む。シクロアルキルは、１つまたはそれ以上、好ましくは１〜３つのハロゲン原子、ヒドロキシ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＣＨ３、アルコキシ、シアノまたはアミノ基により置換されていてもよいことは明らかだろう。
【００１１】
「アリール」なる語は、単環式カルボサイクリック芳香環（例えば、フェニル）および二環式カルボサイクリック芳香環（例えば、ナフチル）を含む。
【００１２】
「ヘテロアリール」なる語は、窒素、酸素および硫黄から選択される１〜４つのヘテロ原子を含有する、単環または二環式ヘテロサイクリック芳香環を含む。単環式ヘテロサイクリック芳香環の例としては、例えば、チエニル、フリル、ピロリル、トリアゾリル、イミダゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、オキサジアゾリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、チアジアゾリル、ピラゾリル、ピリミジル、ピリダジニル、ピラジニル、ピリジル、テトラゾリル等が挙げられる。二環式ヘテロサイクリック芳香環の例としては、例えばキノリニル、イソキノリニル、キナゾリニル、キノキサリニル、シンノリニル、ナフチリジニル、インドリル、インダゾリル、ピロロピリジニル、ベンゾフラニル、ベンゾチエニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾイソチアゾリル、ベンゾオキサジアゾリル、ベンゾチアジアゾリル等が挙げられる。
【００１３】
「ヘテロサイクリル」の例としては、窒素、硫黄または酸素から選択される１〜３つのヘテロ原子を含有する５〜７員の非芳香族単環が挙げられる。ヘテロサイクリック非芳香環の例としては、モルホリニル、ピペリジニル、ピペラジニル、チオモルホリニル、オキサチアニル、ジチアニル、ジオキサニル、ピロリジニル、ジオキソラニル、オキソチオラニル、イミダゾリジニル、ピラゾリジニル等が挙げられる。
【００１４】
カルボサイクリックおよびヘテロサイクリック芳香族および非芳香族ヘテロサイクリック環は、例えば、１つまたはそれ以上の、好ましくは１〜３つのＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、ハロゲン、Ｃ１−６アルコキシ、ＣＮ、ヒドロキシ、オキソ、ニトロ、−ＮＨＣＯＣ１−６アルキル、−ＯＣＦ３、−ＣＦ３、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＣ１−６アルキル、−ＯＣＨＦ２、−ＳＣＦ３、−ＮＲ１１Ｒ１２、−ＣＯＮＲ１１Ｒ１２、−ＳＯ２ＮＲ１１Ｒ１２（ここに、Ｒ１１およびＲ１２は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキルまたはＣ３−８シクロアルキルである）、−ＮＨＳＯ２ＣＨ３、−ＳＯ２ＣＨ３または−ＳＣＨ３基により置換されていてもよい。
【００１５】
好ましくは、Ｒ５はメチルである。
好ましくは、Ｘ１は−Ｃ（Ｈ）−またはＮである。
好ましくは、Ｘ２は−Ｃ（−Ｙ−Ｒ９）−である。
好ましくは、Ｘ３は−Ｃ（Ｈ）−である。
好ましくは、Ｙは結合、Ｏ、ＳまたはＣＯであり、より好ましくはＯである。
好ましくは、Ｒ９は水素、−Ｃ１−６アルキル、ヘテロサイクリル（特に、２オキソピロリジン−１−イル）またはアリールであり、より好ましくは−Ｃ１−６アルキル、ヘテロサイクリルまたはアリールである。
Ｙが結合である場合、Ｒ９は、好ましくは、水素またはヘテロサイクリル（特に、２オキソピロリジン−１−イル）である。
【００１６】
ＹがＯである場合、Ｒ９は、好ましくは、−Ｃ１−６アルキル（特に、メチルまたはプロピル）である。
好ましくは、Ｗ１はＣＯである。
好ましくは、Ｒ２は、１つまたはそれ以上のハロゲン原子（例えば、フッ素）により置換されていてもよいベンジルである。
好ましくは、Ｒ３はメチル、３−メチルブチルまたはプロパギルであり、より好ましくはメチルである。
好ましくは、Ｒ４は−Ｃ１−６アルキル（特に、３，３−ジメチルブチル）、−Ｃ３−８シクロアルキル（特に、ノルボルニルまたはシクロヘキシル）であり、これらは各々、ＣＯＯＨ基またはプロパギルにより置換されていてもよい。
【００１７】
本発明の好ましい化合物は、下記する実施例Ｅ１〜Ｅ９またはその医薬上許容される塩を含む。
【００１８】
式（Ｉ）で示される化合物は、その酸付加塩を形成することができる。医薬として用いる場合、式（Ｉ）で示される化合物の塩は、医薬上許容されるべきであることは明らかだろう。適当な医薬上許容される塩は当業者に明らかなものであり、J. Pharm. Sci., 1977, 66, 1-19に記載されているもの、例えば無機酸または有機酸と形成する酸付加塩、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩、酢酸塩、安息香酸塩、クエン酸塩、硝酸塩、コハク酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、マレイン酸塩、１−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸塩、パルミチン酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、ナフタレンスルホン酸塩、ギ酸塩またはトリフルオロ酢酸塩を形成する。本発明はすべての可能性ある化学量論的および非化学量論的形態をその範囲内に含む。
【００１９】
式（Ｉ）で示される化合物は、結晶性または非結晶性形態で調製することができ、結晶性である場合、例えば、水和物として溶媒和していてもよい。本発明は、化学量論的溶媒和物（例えば水和物）ならびに可変量の溶媒（例えば水）を含有する化合物をその範囲内に含む。
【００２０】
式（Ｉ）で示されるある種の化合物は、立体異性体形態（例えば、ジアステレオマーおよびエナンチオマー）で存在することができ、本発明は、それらの立体異性体形態およびラセミ体を含むその混合物を範囲内に含む。異なる立体異性体形態は、通常の方法により他から１つを分離することができるか、いずれの所定の異性体は、立体異性的合成または不斉合成により得ることができる。また、本発明は互変異性体およびその混合物も範囲内に含む。好ましくは、式（Ｉ）で示される化合物は、式（Ｉａ）：
【化４】
2005510559.tif 000006
で示される単一のエナンチオマーの形態である。
【００２１】
式（Ｉ）で示される化合物ならびにその塩および溶媒和物は以下に記載の方法により調製することができ、それは本発明のさらなる態様を構成する。
【００２２】
本発明による式（Ｉ）で示される化合物の製造方法は以下の工程を含む：
（ａ）いずれのヒドロキシまたはアミノ基が保護されていてもよい、式（ＩＩ）：
【化５】
2005510559.tif 000007
［式中、Ｒａ、Ｒ２、Ｒ３およびＷ１は上記と同意義である］
で示される化合物を、式Ｒ４−ＮＨ２
［式中、Ｒ４は上記と同意義である］
で示される化合物と反応させ、ついで、要すれば、保護された式（Ｉ）で示される化合物を脱保護してもよいこと；
【００２３】
（ｂ）Ｗ１がＣＯである式（Ｉ）で示される化合物を製造する場合、いずれのヒドロキシまたはアミノ基が保護されていてもよい、式（ＩＩＩ）：
【化６】
2005510559.tif 000008
［式中、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は上記と同意義である］
で示される化合物を、式Ｒａ−ＣＯＯＨ
［式中、Ｒａは上記と同意義である］
で示される化合物またはその保護誘導体と反応させ、ついで、要すれば、保護された式（Ｉ）で示される化合物を脱保護してもよいこと；または
【００２４】
（ｃ）Ｗ１がＳＯ２である式（Ｉ）で示される化合物を製造する場合、いずれのヒドロキシまたはアミノ基が保護されていてもよい、式（ＩＩＩ）：
【化７】
2005510559.tif 000009
［式中、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は上記と同意義である］
で示される化合物を、式（ＩＶ）：
【化８】
2005510559.tif 000010
［式中、Ｒａは上記と同意義であり、Ｌ１は適当な脱離基、例えばハロゲン原子（例えば、塩素）である］
で示される化合物またはその保護されていてもよい誘導体と反応させ、ついで、要すれば、保護された式（Ｉ）で示される化合物を脱保護してもよいこと；または
【００２５】
（ｄ）保護された式（Ｉ）で示される化合物を脱保護すること；または
（ｅ）式（Ｉ）で示される化合物と別の式（Ｉ）で示される化合物に相互変換すること。
【００２６】
工程（ａ）は、典型的には、式（ＩＩ）で示される化合物およびＲ４−ＮＨ２の混合物を加熱することを含む。
【００２７】
工程（ｂ）は、慣用的なアミドカップリング反応であり、活性化誘導体は、例えば、酸クロライド、混合無水物、活性エステルまたはＯ−アシル−イソウレアであってもよい。反応は、典型的には、式（ＩＩＩ）の化合物およびＲａ−ＣＯＯＨを適当なカップリング剤（例えば、ＨＯＢＴの存在下でのＮ−シクロヘキシルカルボジイミド−Ｎ’−メチルポリスチレン）と、適当な溶媒（例えば、ジメチルホルムアミドまたはジクロロメタン）中で、適当な温度例えば、室温で混合することを含む。
【００２８】
工程（ｃ）は、典型的には、適当な塩基、例えばＮ−メチルモルホリンまたはポリスチレン−Ｎ−メチルモルホリンの、触媒（１０％）ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）の存在下、適当な溶媒、例えばジメチルホルムアミドおよび／またはジクロロメタン中での使用を含む。
【００２９】
工程（ｄ）において、保護基の例およびそれらの脱離の方法は、T. W. GreeneおよびP.G.M. Wuts 「Protective Groups in Organic Synthesis」（J. WileyおよびSons, 3rd Ed. 1999）において見られる。適当なアミン保護基は、スルホニル（例えば、トシル）、アシル（例えば、ベンジルオキシカルボニルまたはｔ−ブトキシカルボニル）およびアリールアルキル（例えば、ベンジル）を含み、これらは、要すれば、加水分解または水素化分解により除去することができる。別の適当なアミン保護基は、トリフルオロアセチル（−ＣＯＣＦ３）を含み、これは塩基触媒加水分解により除去することができる。適当なヒドロキシ保護基は、シリルを基本とする基、例えばｔ−ブチルジメチルシリルであり、これは標準的な方法、例えばトリフルオロ酢酸または塩酸のような酸あるいはフッ素化物供給源、例えばテトラｎ−ブチルアンモニウムフルオライドを用いて除去することができる。
【００３０】
工程（ｅ）は、慣用的な相互変換法、例えばエピマー化、酸化、還元、アルキル化、求核芳香族置換、エステル加水分解、アミド結合形成、ｔ−ブトキシカルボニル基付加または除去およびスルホニル化を用いて行うことができる。
【００３１】
Ｗ１がＣＯである式（ＩＩ）で示される化合物は、下記方法に従って調製することができる：
【化９】
2005510559.tif 000011
［式中、Ｒａ、Ｒ２およびＲ３は上記と同意義であり、Ｐ１は適当な保護基、例えばｔ−ブトキシカルボニルである］
【００３２】
工程（ｉ）は、典型的には、式（Ｖ）で示される化合物を適当な酸（例えば、トリフルオロ酢酸）と、適当な溶媒（例えばジクロロメタン）中で、適当な温度、例えば室温で混合することを含む。
工程（ｉｉ）は、典型的には、式（ＶＩ）で示される化合物およびＲａ−ＣＯＯＨを、適当なカップリング剤（例えば、ＨＯＢＴ存在下でのＮ−シクロヘキシルカルボジイミド−Ｎ’−メチルポリスチレン）と、適当な溶媒（例えば、ジメチルホルムアミドまたはジクロロメタン）中で、適当な温度、例えば室温で混合することを含む。
【００３３】
Ｗ１がＳＯ２である式（ＩＩ）で示される化合物は、工程（ｉｉ）において、式Ｒａ−ＣＯＯＨの代わりに上記した式（ＩＶｂ）で示される化合物を用いること、および工程（ｉｉ）に記載のものの代わりに上記した工程（ｃ）の条件を用いること以外は、Ｗ１がＣＯである式（ＩＩ）で示される化合物を調製するための上記した方法と同一の方法で調製することができる。
【００３４】
式（ＩＩＩ）で示される化合物は、以下の方法に従って調製することができる：
【化１０】
2005510559.tif 000012
［式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４は上記と同意義であり、Ｐ１は適当な保護基、例えばｔ−ブトキシカルボニルである］
【００３５】
工程（ｉ）は、典型的には、式（Ｖ）で示される化合物を、ニートアミンＲ４−ＮＨ２中で、適当な温度、例えば６０℃に加熱することを含む。
工程（ｉｉ）は、典型的には、式（ＶＩＩ）で示される化合物を適当な酸（例えばトリフルオロ酢酸）と、適当な溶媒（例えばジクロロメタン）中で適当な温度、例えば室温で混合することを含む。
【００３６】
式（ＩＶ）で示される化合物は、公知のものであり、および／または市販されており、および／または公知の方法に従って調製することができる。
式（Ｖ）で示される化合物は、Journal of Organic Chemistry (1986) 51(21), 3921に記載の合成法に従って調製することができる。
【００３７】
かくして、本発明のさらなる態様において、特に高β−アミロイドレベルまたはβ−アミロイド沈殿により特徴付けられる疾患を患っている患者の治療において医薬として用いるための、式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を提供する。
【００３８】
本発明の別の態様において、高β−アミロイドレベルまたはβ−アミロイド沈殿により特徴付けられる疾患を患っている患者の治療用の医薬の製造における、式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物の使用を提供する。
【００３９】
さらにまたは別の態様において、高β−アミロイドレベルまたはβ−アミロイド沈殿により特徴付けられる疾患を患っているヒトまたは動物対象の治療方法であって、該ヒトまたは動物対象に、有効量の式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を投与することを含む方法を提供する。
【００４０】
かくして、本発明のさらなる態様において、高β−アミロイドレベルまたはβ−アミロイド沈殿により特徴付けられる疾患を治療するための、式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を含んでなる医薬組成物を提供する。
【００４１】
本明細書において言及する治療は、高β−アミロイドレベルまたはβ−アミロイド沈殿により特徴付けられる疾患の予防ならびに治療に及ぶことは当業者には明らかだろう。
【００４２】
本発明の化合物は、いずれの慣用的な方法での投与用に処方することができ、したがって、また、本発明は、式（Ｉ）で示される化合物またはその生理学上許容される塩もしくは溶媒和物を、所望により、１つまたはそれ以上の生理学的に許容される希釈剤または担体と一緒に含んでなる、高β−アミロイドレベルまたはβ−アミロイド沈殿により特徴付けられる疾患の治療において用いるための医薬組成物を範囲内に含む。
【００４３】
高β−アミロイドレベルまたはβ−アミロイド沈殿により特徴付けられる疾患は、アルツハイマー病、軽度認識障害、ダウン症、ダッチタイプのβ−アミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血、脳β−アミロイド血管障害および種々の型の変性痴呆、例えばパーキンソン病に不随するもの、進行性核上麻痺、皮質基礎変性およびアルツハイマー病の広範性ルイス体を含むことは明らかだろう。
【００４４】
最も好ましくは、高β−アミロイドレベルまたはβ−アミロイド沈殿により特徴付けられる疾患は、アルツハイマー病である。
【００４５】
また、成分を混合して含むかかる医薬処方の製造方法を提供する。
本発明の化合物は、例えば、経口、吸入、経鼻、バッカル、経腸、局所、舌下、くも膜下または腸投与、好ましくは経口投与用に処方することができる。
【００４６】
経口投与用の錠剤およびカプセルは、慣用的な賦形剤、例えば混合剤、例えばシロップ、アカシア、ゼラチン、ソルビトール、トラガカント、スターチ糊、セルロースまたはポリビニルピロリドン；充填剤、例えばラクトース、微結晶セルロース、糖、とうもろこしでんぷん、リン酸カルシウムまたはソルビトール；滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、タルク、ポリエチレングリコールまたはシリカ；崩壊剤、例えばポテトスターチ、クロスカルメロースまたはスターチグリコール酸ナトリウム；または湿潤剤、例えばラウリル硫酸ナトリウムを含有していてもよい。錠剤は、公知の方法に従ってコートすることができる。経口液体製剤は、例えば水性または油性懸濁液、溶液、エマルジョン、シロップまたはエリキシルの形態であってもよいか、あるいは、使用前に水または他の適当なビヒクルで復元する乾燥生成物として提供されてもよい。かかる液体製剤は、慣用的な添加剤、例えば懸濁化剤、例えばソルビトールシロップ、メチルセルロース、グルコース／糖シロップ、ゼラチン、ヒドロキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲルまたは硬化食用油；乳化剤、例えばレシチン、ソルビタンモノオレアートまたはアカシア；非水性ビヒクル（食用油を含んでいてもよい）、例えばアーモンド油、ひまし油、油性エステル、プロピレングリコールまたはエチルアルコール；または保存剤、例えばｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルまたはｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピルまたはソルビン酸を含有していてもよい。また、製剤は、要すれば、緩衝塩、着色剤および／または甘味剤（例えば、マンニトール）を含有していてもよい。
【００４７】
バッカル投与に関して、組成物は、慣用的な方法により処方される錠剤またはロゼンジの形態を取り得る。
また、化合物は、坐剤、例えば慣用的な坐剤基剤、例えばココアバターまたは他のグリセライドを含有して処方することもできる。
【００４８】
また、本発明の化合物は、ボーラス注射または連続注入による非経口投与用に処方することができ、単位剤形、例えばアンプル、バイアル、少量輸液または予備充填シリンジまたは付加的な保存剤を含む複数回投与コンテナで提供されてもよい。組成物は、かかる形態、水性または非水性ビヒクル中の例えば溶液、懸濁液またはエマルジョンであってもよく、処方剤、例えば酸化防止剤、緩衝液、抗菌剤および／または聴力調整剤を含有していてもよい。別法として、活性成分は、適当なビヒクル、例えば滅菌発熱物質不含水で使用前に復元するための粉末形態であってもよい。乾燥固体製剤は、滅菌粉末を、無菌で、各々の滅菌容器に充填することによるか、または滅菌溶液を、無菌で、各々の容器に充填し、凍結乾燥することにより調製することができる。
本発明の化合物を局所投与する場合、これらはクリーム、軟膏またはパッチとして提供されてもよい。
【００４９】
０．１％〜９９重量％、好ましくは１０〜６０重量％の活性物質を、投与方法に応じて含有していてもよい。
上記した障害の治療に用いる化合物の投与量は、一般的に、障害の重度、対象の体重および他の同様な因子により変化するだろう。しかしながら、一般的なガイドのように、適当な単位投与量は、０．０５〜１０００ｍｇ、より好ましくは０．０５〜２０ｍｇ、例えば０．２〜５ｍｇであってもよく；かかる単位投与量は、１日に１回以上、例えば、１日あたり、１、２、３または４回（好ましくは、１または２回）投与することができ、それにより、１日の総投与量は、約０．５〜１００ｍｇの範囲であり；かかる治療は数週間または数ヶ月に及ぶ。
【００５０】
限定するものではないが、本明細書において示された特許および特許出願を含むすべての刊行物は、出典明示により本明細書に組み入れる。
【００５１】
実施例
記載１
［（１Ｓ，２Ｓ，４Ｒ）−１−ベンジル−４−（３，３−ジメチルブチルカルバモイル）−２−ヒドロキシペンチル］−カルバミン酸ｔ−ブチルエステル（Ｄ１）
［（Ｓ）−１−（４−メチル−５オキソ−テトラヒドロフラン−２−イル）−２−フェニルエチル］−カルバミン酸ｔ−ブチルエステル（Journal of Organic Chemistry (1986) 51(21), 3921に記載の合成）（２４５ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）を、３，３−ジメチルブチルアミン（１．０ｇ、９．９ｍｍｏｌ）で処理し、得られた溶液を７０℃で２４時間加熱した。ついで、溶液を蒸発させて乾燥し、残渣を１Ｍの塩酸および酢酸エチル間で分配した。有機相を分離し、さらに１Ｍの塩酸およびブラインで洗浄した。ついで、これをＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、蒸発させて白色泡沫体として粗生成物（３０３ｍｇ）を得た。ジクロロメタン中の０〜２％のメタノールで溶出するシリカゲルのクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（Ｄ１）（２６４ｍｇ、８２％）を得た。
ＭＳ（ＥＳ）ＭＮａ＋＝４４３
1H NMR (400MHz, CDCl3) 0.92 (9H, s), 1.10 (3H, d, J 7.2 Hz), 1.30-1.43 (11H, m), 1.57-1.75 (2H, m), 2.50 (1H, m), 2.90 (2H, m), 3.24 (2H, m), 3.66 (2H, m), 3.80 (1H, d, J 4.4 Hz), 4.85 (1H, br.d), 5.68 (1H, br.s)および7.15-7.30 (5H, m)。
【００５２】
記載２
（２Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−５−アミノ−４−ヒドロキシ−２−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸（３，３−ジメチルブチル）−アミド（Ｄ２）
［（１Ｓ，２Ｓ，４Ｒ）−１−ベンジル−４−（３，３−ジメチルブチルカルバモイル）−２−ヒドロキシペンチル］−カルバミン酸ｔ−ブチルエステル（Ｄ１）（２６４ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）を、ジオキサン（５ｍｌ）中の４ＭのＨＣｌで処理し、得られた溶液を室温で１時間撹拌した。ついで、これを蒸発させて乾燥し、残渣を飽和炭酸ナトリウム水溶液および酢酸エチル間で分配した。水層を分離し、さらに酢酸エチルで抽出した。合した有機抽出物をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、蒸発させてアミン（Ｄ２）（１７９ｍｇ、８９％）を得た。
ＭＳ（ＥＳ）ＭＨ＋＝３２１
1H NMR (400MHz, CDCl3) 0.93 (9H, s), 1.18 (3H, d, J 7.0 Hz), 1.40 (2H, t, J 8.5 Hz), 1.48 (1H, m), 1.60-1.90 (3H, br.s), 1.88 (1H, m), 2.48 (1H, dd, J 9.5, 14.0 Hz), 2.59 (1H, m), 2.82 (1H, m), 2.94 (1H, dd, J 4.0, 14.0Hz), 3.20-3.37 (3H, m), 5.81 (1H, br.s.)および7.13-7.33 (5H, m)。
【００５３】
記載３
（２Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−５−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−ヒドロキシ−２−メチル−６−フェニルヘキサン酸（ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−イル）アミド（Ｄ３）
［（Ｓ）−１−（４−メチル−５オキソ−テトラヒドロフラン−２−イル）−２−フェニルエチル］−カルバミン酸ｔ−ブチルエステル（Journal of Organic Chemistry (1986) 51(21), 3921に記載の合成）（２２．２ｇ）を、（±）エキソ−ノルボニルアミン（６２．８ｇ）で処理し、得られた混合物を７０℃で一晩加熱した。混合物を冷却し、ＨＣｌ水溶液（１Ｍ；７００ｍｌ）中に注ぎ、２回酢酸エチルで抽出した。合した有機層を重炭酸ナトリウム、水およびブラインで洗浄し、乾燥し、蒸発させてガム性固体を得た。エーテルを加え、混合物を撹拌し、ついで、一晩静置した。得られた白色固体沈殿物を濾過により回収し、乾燥して、Ｄ３（１４ｇ）を得た。
【００５４】
記載４
（２Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−５−アミノ−４−ヒドロキシ−２−メチル−６−フェニルヘキサン酸（ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−イル）アミド（Ｄ４）
（２Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−５−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−ヒドロキシ−２−メチル−６−フェニルヘキサン酸（ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−イル）アミド（Ｄ３）（１４ｇ）を、ジオキサン中のＨＣｌの溶液（４Ｍ；２２０ｍｌ）中に溶解し、２．５時間室温で撹拌した。溶液を蒸発させて乾燥し、残渣をエーテルでトリチュレートして、白色固体ＨＣｌ塩を得た。これに酢酸エチルおよび重炭酸ナトリウム溶液を加え、濃い白色固体がすぐに沈殿し始めた。これを回収し、４０℃減圧下ＫＯＨで乾燥した。湿った固体を乾燥して、白色のもろい泡沫体としてＤ４（８．７５ｇ）を得た。
ＭＳ（ＥＳ）ＭＨ＋＝３３１
【００５５】
記載５
｛（Ｓ）−１−［（２Ｓ，４Ｒ）−４−（３−メチル−ブト−２−エニル）−５オキソ−テトラヒドロ−フラン−２−イル］−２−フェニル−エチル｝−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（Ｄ５）
Journal of Organic Chemistry (1986) 51(21), 3921の［（Ｓ）−１−（４−メチル−５オキソ−テトラヒドロフラン−２−イル）−２−フェニルエチル］−カルバミン酸ｔ−ブチルエステルの合成と類似の好ましい方法で、ヨウ化メチルの代わりに４−ブロモ−２−メチル−２−ブテンを用いてＤ５を８４％の収率で得た。
1H NMR (400MHz, CDCl3): 1.38 (9H, s), 1.59 (3H, s), 1.67 (3H, s), 1.92 (1H, m), 2.25 (2H, m), 2.41 (1H, m), 2.69 (1H, m), 2.89 (2H, m), 3.99 (1H,m), 4.44 (1H, m), 4.53 (1H, d J 9.7Hz), 5.03 (1H, m)および7.22-7.33 (5H,m)。
【００５６】
記載６
［（１Ｓ，２Ｓ，４Ｒ）−１−ベンジル−４−（ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−イルカルバモイル）−２−ヒドロキシ−７−メチル−オクト−６−エニル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（Ｄ６）
｛（Ｓ）−１−［（２Ｓ，４Ｒ）−４−（３−メチル−ブト−２−エニル）−５オキソ−テトラヒドロ−フラン−２−イル］−２−フェニル−エチル｝−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（Ｄ５）を、（±）エキソ−ノルボルニルアミンで、Ｄ３に記載のように処理して、白色固体としてＤ６（６０％）を得た。
ＭＳ（ＥＳ）ＭＨ＋＝４８５、Ｍ−Ｈ−＝４８３。
【００５７】
記載７
［（１Ｓ，２Ｓ，４Ｒ）−１−ベンジル−４−（ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−イルカルバモイル）−２−ヒドロキシ−７−メチル−オクチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（Ｄ７）
メタノール（３０ｍｌ）中の［（１Ｓ，２Ｓ，４Ｒ）−１−ベンジル−４−（ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−イルカルバモイル）−２−ヒドロキシ−７−メチル−オクト−６−エニル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（Ｄ６）（１．６１ｇ、３．３３ｍｍｏｌ）を、１０％のＰｄ／Ｃ（３００ｍｇ）で３．７５時間水素化した。触媒を濾過し、濾液を蒸発させてＤ７（９３％）を得た。
ＭＳ（ＥＳ）ＭＨ＋＝４８７、Ｍ−Ｈ−＝４８５。
【００５８】
記載８
（２Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−５−アミノ−４−ヒドロキシ−２−（３−メチル−ブチル）−６−フェニル−ヘキサン酸ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−イルアミド（Ｄ８）
Ｄ７から、Ｄ４に記載の方法により、白色泡沫体としてＤ８（１００％）を調製した。
ＭＳ（ＥＳ）ＭＨ＋＝３８７、Ｍ−Ｈ−＝３８５。
【００５９】
記載９
（２Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−５−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−ヒドロキシ−２−メチル−６−フェニルヘキサン酸シクロヘキシルアミド（Ｄ９）
（±）エキソ−ノルボルニルアミンの代わりにシクロヘキシルアミンを用いてＤ３と類似の方法で調製した。
【００６０】
記載１０
（２Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−５−アミノ−４−ヒドロキシ−２−メチル−６−フェニルヘキサン酸シクロヘキシルアミド（Ｄ１０）
（２Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−５−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−ヒドロキシ−２−メチル−６−フェニルヘキサン酸シクロヘキシルアミド（Ｄ９）（９．４３ｇ）を、Ｄ４と類似の方法で脱保護して、白色固体としてＤ１０（２収穫、５．５３ｇ）を得た。
ＭＳ（ＥＳ）ＭＨ＋＝３１９
【００６１】
記載１１
３−メチルスルホニル−５−ニトロ安息香酸（Ｄ１１）
２０％の油剤（１００ｍｌ）中の３−メチルスルホニル安息香酸（１６．３ｇ）の溶液を冷却（氷浴）し、発煙硝酸（＞９０％；９０ｍｌ）を滴下した。得られた混合物を室温で４日間撹拌し、ついで、砕いた氷に注いだ。酸を、固体重炭酸ナトリウムを添加することにより部分的に中和（約ｐＨ２まで）した。固体沈殿物を濾過し、乾燥して、淡ベージュの固体としてＤ１１（１５．６ｇ）を得た。
1H NMR (DMSO-d6) 3.44 (3H, s), 8.75 (1H, t, J = 1.5 Hz), 8.84 (1H, t, J = 1.8 Hz), 8.86 (1H, t, J = 1.9 Hz), 14.20 (1H, v. br. s)。
【００６２】
記載１２
３−アミノ−５−メチルスルホニル安息香酸（Ｄ１２）
３−メチルスルホニル−５−ニトロ安息香酸（Ｄ１１）（７．５ｇ）を、メタノール（２５０ｍｌ）中に溶解し、ラネーニッケルを加えた。混合物を水素雰囲気下、大気圧下室温で一晩撹拌した。混合物を加熱し、沈殿生成物を溶解させ、熱濾過した。濾過ケークを熱ＭｅＯＨで洗浄し、合した濾液を蒸発させて、灰白色固体としてＤ１２（５．９７ｇ）を得た。
1H NMR (DMSO-d6) 3.16 (3H, s), 5.95 (2H, br. s), 7.24 (1H, m), 7.43 (1H, m), 7.49 (1H, m)。
【００６３】
記載１３
３−ヒドロキシ−５−メチルスルホニル安息香酸（Ｄ１３）
３−アミノ−５−メチルスルホニル安息香酸（Ｄ１２）（７．２４ｇ）を、濃Ｈ２ＳＯ４（１００ｍｌ）および水（３００ｍｌ）の混合物中に溶解し、５℃に冷却した。水（１５ｍｌ）中の硝酸ナトリウム（５．１ｇ）を、滴下し、ついで、混合物を冷却浴で１５分間撹拌し、４０分間冷却浴を除去した。ついで、これを１時間９０℃に加熱した。加熱を止め、反応物を一晩静置した。混合物を、固体の沈殿物が形成するまで、固体重炭酸ナトリウムで部分的に中和（約ｐＨ１）した。混合物を酢酸エチルで３回抽出し、合した抽出物を水およびブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、蒸発させて固体を得、これをエーテルでトリチュレートしてＤ１３（２収穫、４．１２ｇ）を得た。
1H NMR (DMSO-d6) 3.24 (3H, s), 7.48 (1H, m), 7.61 (1H, m), 7.84 (1H, m), 10.64 (1H, br. s), 13.42 (1H, v. br. s)。
【００６４】
記載１４
３−メトキシ−５−メチルスルホニル安息香酸メチル（Ｄ１４）
３−ヒドロキシ−５−メチルスルホニル安息香酸（Ｄ１３）を、ＤＭＦ（４２ｍｌ）中に溶解し、炭酸セシウム（１４．１ｇ）およびヨウ化メチル（８．６ｍｌ）で処理した。混合物を、アルゴン雰囲気下で４５分間超音波処理し、３時間室温で撹拌した。ＤＭＦを減圧下で蒸発させ、残渣を酢酸エチルおよび２Ｍの塩酸間で分配した。水層を、酢酸エチルで２回再び抽出し、合した抽出物を重炭酸ナトリウム水溶液、チオ硫酸ナトリウム水溶液、水およびブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、準固体を得た。エーテルでトリチュレートして、Ｄ１４（２収穫、２．９４ｇ）を得た。
1H NMR (DMSO-d6) 3.30 (3H, s), 3.91 (3H, s), 3.93 (3H, s), 7.72 (1H, m), 7.74 (1H, m), 8.00 (1H, m)。
【００６５】
記載１５
３−メトキシ−５−メチルスルホニル安息香酸（Ｄ１５）
３−メトキシ−５−メチルスルホニル安息香酸メチル（Ｄ１４）（２．９４ｇ）を、ジオキサン（１８ｍｌ）中に溶解し、水（１８ｍｌ）中の水酸化リチウム一水和物（０．７６２ｇ）を加えた。混合物を室温で２時間撹拌し、ついで、アンバーリスト（Ａｍｂｅｒｌｙｓｔ）−１５Ｈ＋樹脂を十分に加えて、約ｐＨ４まで調節した。樹脂を濾過により除去し、ジオキサンでよく洗浄し、合した濾液を蒸発させた。残渣をエーテルでトリチュレートして、淡黄色固体としてＤ１５（２収穫、２．２９ｇ）を得た。
1H NMR (DMSO-d6) 3.29 (3H, s), 3.92 (3H, s), 7.68 (1H, m), 7.72 (1H, m), 7.98 (1H, m), 13.52 (1H, v. br. s)。
【００６６】
記載１６
３−アミノ−５−メチルスルホニル安息香酸メチル（Ｄ１６）
３−アミノ−５−メチルスルホニル安息香酸（Ｄ１２）（１．０ｇ）をメタノール（１００ｍｌ）中に溶解し、ＨＣｌガスを通気した。混合物を４５分間還流し、ＭｅＯＨを蒸発させた。重炭酸ナトリウム溶液を加えて約ｐＨ９にし、混合物を酢酸エチルで２回抽出した。合した抽出物を水およびブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、灰白色固体としてＤ１６を得た。
1H NMR (DMSO-d6) 3.17 (3H, s), 3.86 (3H, s), 6.04 (2H, s), 7.28 (1H, m), 7.45 (1H, m), 7.50 (1H, m)。
【００６７】
記載１７
３−（４−ブロモブチルアミド）−５−メチルスルホニル安息香酸メチル（Ｄ１７）
３−アミノ−５−メチルスルホニル安息香酸メチル（Ｄ１６）（０．８５６ｇ）をジクロロメタン（５０ｍｌ）およびピリジン（２．６ｍｌ）中に溶解した。４−ブロモブチリルクロライド（０．７３ｍＬ）を、シリンジで加え、混合物を２時間撹拌した。溶液を、１０％のクエン酸水溶液、重炭酸ナトリウム水溶液およびブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、蒸発させて固体を得た。これをエーテルでトリチュレートし、灰白色固体としてＤ１７（１．２５ｇ）を得た。
1H NMR (DMSO-d6) 2.14 (2H, クインテット, J = 6.9 Hz), 2.55 (2H, t, J = 7.2 Hz), 3.26 (3H, s), 3.61 (2H, t, J = 6.6 Hz), 3.90 (3H, s), 8.08 (1H, m), 8.46 (1H, m), 8.51 (1H, m), 10.62 (1H, s)。
【００６８】
記載１８
３−メチルスルホニル−５−（２オキソピロリジン−１−イル）−安息香酸メチル（Ｄ１８）
３−（４−ブロモブチルアミド）−５−メチルスルホニル安息香酸メチル（Ｄ１７）（１．０ｇ）をジオキサン（２５ｍｌ）中に溶解し、ＤＢＵ（０．６５ｍｌ）を加えた。最初に透明な溶液が得られるが、ＤＢＵの臭化水素がまもなく沈殿し始める。混合物を室温で１時間撹拌し、ついで、１０％のクエン酸水溶液中に注ぎ、酢酸エチルで２回抽出した。合した抽出物を重炭酸ナトリウム水溶液、水およびブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、蒸発させて固体残渣を得、エーテルでトリチュレートして、淡黄色固体としてＤ１８（０．７２ｇ）を得た。
1H NMR (DMSO-d6) 2.11 (2H, クインテット, J = 7.5 Hz), 2.57 (2H, t, J = 8.0 Hz), 3.30 (3H, s), 3.93 (3H, s), 3.96 (2H, t, J = 7.0 Hz), 8.15 (1H, m), 8.40 (1H, m), 8.58 (1H, m)。
【００６９】
記載１９
３−メチルスルホニル−５−（２オキソピロリジン−１−イル）−安息香酸（Ｄ１９）
３−メチルスルホニル−５−（２オキソピロリジン−１−イル）−安息香酸メチル（Ｄ１８）（０．７１７ｇ）を、ジオキサン（３．６ｍｌ）中に懸濁させ、水（３．６ｍｌ）中の水酸化リチウム一水和物（０．１５３ｇ）の溶液で処理した。混合物を室温で２時間撹拌し、透明な溶液を形成させた。ｐＨを、約４に、アンバーリスト−１５Ｈ＋樹脂を添加することにより調節した。樹脂を濾過により除去し、ジオキサンでよく洗浄した。合した濾液を蒸発させ、残渣を乾燥させた。エーテルでトリチュレートして淡クリーム色固体としてＤ１９（０．５１ｇ）を得た。
1H NMR (DMSO-d6) 2.11 (2H, クインテット, J = 7.5Hz), 2.57 (1H, t, J = 8.0 Hz), 3.29 (3H, s), 3.96 (2H, t, J = 7.0Hz), 8.14 (1H, m), 8.41 (1H, m), 8.53 (1H, m)。
【００７０】
記載２０
２−クロロ−６−メトキシピリジン−４−カルボン酸ｔ−ブチル（Ｄ２０）
２−クロロ−６−メトキシピリジン−４−カルボン酸（３．９６ｇ）を、塩化チオニル（４０ｍｌ）中で２時間加熱還流した。過剰の塩化チオニルを減圧下で蒸発させ、残渣を再びジクロロメタンで２回抽出し、酸クロライドをほぼ透明な油（４．１７ｇ）として得た。これをＴＨＦ（２０ｍｌ）中に溶解させ、冷却（氷浴）した。カリウムｔ−ブトキシド（２．７２ｇ）を添加した。混合物は黒くなり、激しい反応が起こった。さらに、カリウムｔ−ブトキシド（１．０ｇ）を加え、混合物を室温で４８時間撹拌した。ついで、混合物を酢酸エチルおよび１０％のクエン酸水溶液間で分配した。水層を再び抽出し、合した抽出物を重炭酸ナトリウム水溶液、水およびブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、蒸発させて準固体を得、これをヘキサン／エーテルで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーに付した。生成物をヘキサンから結晶化して無色の固体として得；第２のクリーム色の収穫物を、エタノールからの母液から物質を再結晶することにより得た。Ｄ２０を総量１．５３ｇで得た。
1H NMR (DMSO-d6) 1.54 (9H, s), 3.90 (3H, s), 7.16 (1H, d, J = 1Hz), 7.37 (1H, d, J = 1 Hz)。
【００７１】
記載２１
６−メトキシ−２−メチルチオピリジン−４−カルボン酸ｔ−ブチル（Ｄ２１）
２−クロロ−６−メトキシピリジン−４−カルボン酸ｔ−ブチル（Ｄ２０）（０．７２ｇ）を、ＤＭＦ（１２ｍｌ）中のメタンチオール酸ナトリウム（０．４１４ｇ）と、６０℃で５０分間加熱した。溶液を、１０％のクエン酸水溶液に注ぎ、酢酸エチルで２回抽出した。合した抽出物を重炭酸ナトリウム水溶液、水およびブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、蒸発させて、黄色の準固体を得、これを、ヘキサン／酢酸エチルで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーに付してＤ２１（０．３３ｇ）を得た。
1H NMR (CDCl3) 1.57 (9H, s), 2.58 (3H, s), 3.97 (3H, s), 6.91 (1H, d, J = 1Hz), 7.26 (1H, J = 1Hz)。
【００７２】
記載２２
６−メトキシ−２−メチル−スルホニルピリジン−４−カルボン酸ｔ−ブチル（Ｄ２２）
６−メトキシ−２−メチルチオピリジン−４−カルボン酸ｔ−ブチル（Ｄ２１）（０．３３ｇ）を、ジクロロメタン（１３ｍｌ）中に溶解し、冷却（氷浴）した。３−クロロペル安息香酸（８６％；０．５７ｇ）を加えた。混合物を冷却しながら１時間撹拌し、ついで、室温に加温し、さらに２時間撹拌した。酢酸エチルを加え、混合物を１０％の炭酸ナトリウム水溶液（２回）で、チオ硫酸ナトリウム水溶液、水およびブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、蒸発させて、Ｄ２２（０．３３ｇ）を得た。
1H NMR (CDCl3) 1.60 (9H, s), 3.22 (3H, s), 4.04 (3H, s), 7.51 (1H, d, J = 1 Hz), 8.10 (1H, d, J = 1Hz)。
【００７３】
記載２３
２−メトキシ−６−メチルスルホニルピリジン−４−カルボン酸（Ｄ２３）
６−メトキシ−２−メチル−スルホニルピリジン−４−カルボン酸ｔ−ブチル（Ｄ２２）（０．３３ｇ）を、ジオキサン中のＨＣｌ（４Ｍ；１０ｍｌ）中で室温で２０時間撹拌した。反応混合物を蒸発させて乾燥し、残渣を１０％の炭酸ナトリウム水溶液および酢酸エチル間で分配した。水層を酢酸エチルで２回洗浄し、ついで、固体クエン酸を添加することにより約ｐＨ４に調節した。溶液を塩化ナトリウムで飽和させ、酢酸エチルで３回抽出し、合した抽出物を水（３×１０ｍＬ）、ブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）した。蒸発させてＤ２３を淡黄色固体（０．２１３ｇ）として得た。
1H NMR (CDCl3＋追跡DMSO-d6 ) 3.23 (3H, s), 4.05 (3H, s), 7.56 (1H, d, J = 1Hz), 8.16 (1H, d, J = 1Hz)。
【００７４】
記載２４
（２Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−５−アミノ−４−ヒドロキシ−６−フェニル−２−プロプ−２−イニルヘキサン酸ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−イルアミド（Ｄ２４）
［（１Ｓ，２Ｓ，４Ｒ）−１−ベンジル−４−（ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−イルカルバモイル）−２−ヒドロキシヘプト−６−イニル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（Ｄ６に類似の方法により得た）から、Ｄ４に記載の方法と類似の方法でＤ２４を白色泡沫体（９６％）として得た。
ＭＳ（ＥＳ）Ｍ＋Ｈ＝３５５、Ｍ−Ｈ＝３５３。
【００７５】
実施例１
Ｎ−［（１Ｓ，２Ｓ，４Ｒ）−１−ベンジル−４−（３，３−ジメチルブチルカルバモイル）−２−ヒドロキシペンチル］−３−メタンスルホニル−ベンズアミド（Ｅ１）
【化１１】
2005510559.tif 000013
固相法
Ｎ−シクロヘキシルカルボジイミド−Ｎ’−メチルポリスチレン（１００ｍｇ、１．７０ｍｍｏｌ／ｇで；例えばＮｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ）を、ジクロロメタン（０．５ｍｌ）、ついで、４：１のジクロロメタン／ＤＭＦ（０．５ｍｌ）中の１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（２２ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）の溶液で処理した。ついで、ＤＭＦ（０．５ｍｌ）中の３−メタンスルホニル安息香酸（２８ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）およびジクロロメタン（０．５ｍｌ）中の（２Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−５−アミノ−４−ヒドロキシ−２−メチル−６−フェニルヘキサン酸（３，３−ジメチルブチル）−アミド（Ｄ２）（３０ｍｇ、０．０９４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で一晩穏やかに撹拌した。ついで、これをジクロロメタン（０．５ｍｌ）で希釈し、イソシアン酸メチルポリスチレン（１００ｍｇ、１．８０ｍｍｏｌ／ｇで；例えばＮｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ）およびトリス−（２−アミノエチル）−アミンポリスチレン（１００ｍｇ、３．２０ｍｍｏｌ／ｇで；例えばＮｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ）で処理し、混合物をさらに１．５時間穏やかに撹拌した。ついで、これを濾過し、使用済みの樹脂をＤＭＦ（１ｍｌ）およびジクロロメタン（１ｍｌ）で洗浄した。合した濾液を蒸発させて乾燥し、残渣をジエチルエーテル／ヘキサンでトリチュレートして、標題化合物（Ｅ１）を白色固体（２３ｍｇ、４９％）として得た。
ＭＳ（ＥＳ）ＭＨ＋＝５０３、Ｍ−Ｈ−＝５０１。
【００７６】
液相法
２：１の「ジクロロメタン／ＤＭＦ（３．０ｍｌ）中の３−メタンスルホニル安息香酸（７７ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（５２ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）の溶液に、（２Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−５−アミノ−４−ヒドロキシ−２−メチル−６−フェニルヘキサン酸（３，３−ジメチルブチル）−アミド（Ｄ２）（１００ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）および１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（８６ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を室温で一晩撹拌し、ついで、蒸発させて乾燥した。残渣を酢酸エチルおよび１Ｍの塩酸間で分配した。有機相を分離し、さらに１Ｍの塩酸、希ＮａＨＣＯ３水溶液およびブラインで洗浄した。ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、蒸発させて粗生成物を得、これをエーテルでトリチュレートして標題化合物（６３ｍｇ、３９％）を得た。
【００７７】
実施例２
Ｎ−［１Ｓ，２Ｓ，４Ｒ）−１−ベンジル−４−（ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−イルカルバモイル）−２−ヒドロキシヘプト−６−イニル］−３−メタンスルホニルベンズアミド（Ｅ２）
【化１２】
2005510559.tif 000014
３−メチルスルホニル安息香酸および（２Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−５−アミノ−４−ヒドロキシ−６−フェニル−２−プロプ−２−イニルヘキサン酸ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−イルアミド（Ｄ２４）からＥ１と類似の方法で調製した。
ＭＳ（ＥＳ）ＭＨ＋＝５３７
【００７８】
実施例３
Ｎ−［（１Ｓ，２Ｓ，４Ｒ）−１−ベンジル−４−（ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−イルカルバモイル）−２−ヒドロキシペンチル］−３−メトキシ−５−メチルスルホニルベンズアミド（Ｅ３）
【化１３】
2005510559.tif 000015
３−メトキシ−５−メチルスルホニル安息香酸（Ｄ１５）および（２Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−５−アミノ−４−ヒドロキシ−２−メチル−６−フェニルヘキサン酸（ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−イル）アミド（Ｄ４）からのＥ１と類似の方法で調製した。
ＭＳ（ＥＳ）ＭＨ＋＝５４３
【００７９】
実施例４
Ｎ−［（１Ｓ，２Ｓ，４Ｒ）−１−ベンジル−４−（ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−イルカルバモイル）−２−ヒドロキシペンチル］−３−メチルスルホニル−５−ｎ−プロポキシベンズアミド（Ｅ４）
【化１４】
2005510559.tif 000016
３−ヒドロキシ−５−メチルスルホニル安息香酸（Ｄ１３）（８６ｍｇ）および（２Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−５−アミノ−４−ヒドロキシ−２−メチル−６−フェニルヘキサン酸（ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−イル）アミド（Ｄ４）（４３ｍｇ）を、Ｅ１のように反応させて、灰白色固体（９３ｍｇ）を得た。この物質（９２ｍｇ）を、ＤＭＦ（１．８６ｍｌ）中の炭酸セシウム（８５ｍｇ）および臭化アリル（４５μｌ）で処理した。反応を、０．５時間超音波処理し、室温で一晩撹拌した。混合物を２．０ＭのＨＣｌ中に注ぎ、酢酸エチルで２回抽出し、重炭酸ナトリウム溶液、水およびブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、蒸発させた。粗物質を、ＤＣＭ／ＭｅＯＨで溶出するシリカのクロマトグラフィーに付して、Ｎ−［（１Ｓ，２Ｓ，４Ｒ）−１−ベンジル−４−（ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−イルカルバモイル）−２−ヒドロキシペンチル］−３−ａｌｌｙｌｏｘｙ−５−メチルスルホニルベンズアミド（５５ｍｇ）を得た。この化合物（４１ｍｇ）を、ＭｅＯＨ（５ｍＬ）中、Ｐｄ−Ｃ（１０％）触媒（５ｍｇ）で、大気圧下３時間水素化した。触媒を濾過し、濾液を蒸発させて。残渣をＤＣＭ／ＭｅＯＨで溶出するシリカのクロマトグラフィーに付してＥ４（３０ｍｇ）を得た。
ＭＳ（ＥＳ）ＭＨ＋＝５７１
【００８０】
実施例５
Ｎ−［（１Ｓ，２Ｓ，４Ｒ）−１−ベンジル−４−（ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−イルカルバモイル）−２−ヒドロキシ−７−メチル−オクチル］−３−ｎ−プロポキシ−５−メチルスルホニルベンズアミド（Ｅ５）
【化１５】
2005510559.tif 000017
（２Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−５−アミノ−４−ヒドロキシ−２−（３−メチル−ブチル）−６−フェニル−ヘキサン酸ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−イルアミド（Ｄ８）（１０３ｍｇ）および３−ヒドロキシ−５−メチルスルホニル安息香酸（Ｄ１３）（８６ｍｇ）から、Ｅ４と類似の方法で、標題化合物を調製した。
ＭＳ（ＥＳ）ＭＨ＋＝６２７
【００８１】
実施例６
Ｎ−［（１Ｓ，２Ｓ，４Ｒ）−１−ベンジル−４−シクロヘキシルカルバモイル−２−ヒドロキシペンチル］−３−メトキシ−５−メチルスルホニルピリジン−４−カルボキサミド（Ｅ６）
【化１６】
2005510559.tif 000018
２−メトキシ−６−メチルスルホニルピリジン−４−カルボン酸（Ｄ２３）および（２Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−５−アミノ−４−ヒドロキシ−２−メチル−６−フェニルヘキサン酸シクロヘキシルアミド（Ｄ１０）からＥ１と類似の方法で調製した。
ＭＳ（ＥＳ）ＭＨ＋＝５３２
【００８２】
実施例７
Ｎ−［（１Ｓ，２Ｓ，４Ｒ）−１−ベンジル−４−（ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−イルカルバモイル）−２−ヒドロキシペンチル］３−メチルスルホニル−５−（２オキソピロリジン−１−イル）−ベンズアミド（Ｅ７）
【化１７】
2005510559.tif 000019
３−メチルスルホニル−５−（２オキソピロリジン−１−イル）−安息香酸（Ｄ１９）および（２Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−５−アミノ−４−ヒドロキシ−２−メチル−６−フェニルヘキサン酸（ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−イル）アミド（Ｄ４）からＥ１と類似の方法で調製した。
ＭＳ（ＥＳ）ＭＨ＋＝５９６
【００８３】
実施例８
Ｎ−［（１Ｓ，２Ｓ，４Ｒ）−１−ベンジル−４−（ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−イルカルバモイル）−２−ヒドロキシペンチル］−３−メトキシ−５−メチルスルホニルピリジン−４−カルボキサミド（Ｅ８）
【化１８】
2005510559.tif 000020
２−メトキシ−６−メチルスルホニルピリジン−４−カルボン酸（Ｄ２３）および（２Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−５−アミノ−４−ヒドロキシ−２−メチル−６−フェニルヘキサン酸（ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−イル）アミド（Ｄ４）からＥ１と類似の方法で調製した。
ＭＳ（ＥＳ）ＭＨ＋＝５４４
【００８４】
実施例９
５−メタンスルホニル−チオフェン−２−カルボン酸［（１Ｓ，２Ｓ，４Ｒ）−１−ベンジル−４−（３，３−ジメチル−ブチルカルバモイル）−２−ヒドロキシペンチル］−アミド（Ｅ９）
【化１９】
2005510559.tif 000021
Ｎ−シクロヘキシルカルボジイミド−Ｎ’−メチルポリスチレン（１３８ｍｇ、１．７０ｍｍｏｌ／ｇで；例えばＮｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ）を、ジクロロメタン（０．５ｍｌ）、ついで、４：１のジクロロメタン／ＤＭＦ（０．５ｍｌ）中の１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（３２ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）で処理した。ついで、ＤＭＦ（０．５ｍｌ）中の５−メタンスルホニルチオフェン−２−カルボン酸（５０ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）およびジクロロメタン（０．５ｍｌ）中の（２Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−５−アミノ−４−ヒドロキシ−２−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸（３，３−ジメチルブチル）−アミド（Ｄ２）（５０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で一晩穏やかに撹拌した。ついで、これをジクロロメタン（１ｍｌ）で希釈し、イソシアン酸メチルポリスチレン（１５０ｍｇ、１．８０ｍｍｏｌ／ｇで；例えばＮｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ）およびトリス−（２−アミノエチル）−アミンポリスチレン（１５０ｍｇ、３．２０ｍｍｏｌ／ｇで；例えばＮｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ）で処理し、混合物をさらに２時間穏やかに撹拌した。ついで、これを濾過し、消費した樹脂をＤＭＦ（１ｍｌ）およびジクロロメタン（１ｍｌ）で洗浄した。合した濾液を蒸発させて乾燥し、残渣をジエチルエーテルでトリチュレートして、標題化合物を白色固体（５７ｍｇ、７２％）として得た。
ＭＳ（ＥＳ）ＭＨ＋＝５０９、Ｍ−Ｈ−＝５０７。
【００８５】
略語
ＤＭＦ          ジメチルホルムアミド
ＤＢＵ          ジアザビシクロウンデカン
ＤＭＳＯ        ジメチルスルホキシド
ＴＨＦ          テトラヒドロフラン
ＤＣＭ          ジクロロメタン
ＦＡＭ          カルボキシフルオレセイン
ＴＡＭＲＡ      カルボキシテトラメチルローダミン
［  ］          ペプチド配列に関するアミノ酸の１文字表記
【００８６】
本発明の化合物は、以下のアッセイに従ってインビトロで生物活性を試験することができる：
（Ｉ）Ａｓｐ−２阻害アッセイ
３８４ウェルプレートにおいてアッセイされる各々の化合物に関して下記のものを加える：
ａ）試験化合物の１μｌのＤＭＳＯ溶液（ＩＣ５０曲線は、５００μＭからの２連続希釈体の内の１０種の希釈体を用いる）。
ｂ）緩衝液中の１０μｌの基質（ＦＡＭ−［ＳＥＶＮＬＤＡＥＦＫ］−ＴＡＭＲＡ）溶液。４００ｍｌの緩衝液（１００ｍＭの酢酸ナトリウム、ｐＨ＝４．５、１ｌのＭｉｌｌｉ−Ｑ水、０．０６％のトリトンＸ−１００（０．５ｍｌ／ｌ）、氷酢酸を用いてｐＨを４．５に調節）中に、２ｍｌの基質の２ｍＭのＤＭＳＯ溶液を希釈することにより調製する。アミノメチルフルオレセイン（ＦＡＭ）およびテトラメチルローダミン（ＴＡＭＲＡ）は、ＳＥＶＮＬＤＡＥＦＫペプチドが開裂した場合に、５３５ｎｍで蛍光を発光するように同時作用する蛍光分子である。
ｃ）１０μｌ酵素溶液。これは、１６ｍｌの５００ｎＭの酵素溶液を、３８４ｍｌの緩衝液（上記のように調製した）中に希釈することにより調製する。
ブランクウェル（酵素溶液を緩衝液に置き換えた）を、対照として、各々のプレートでインキュベートする。ウェルを、室温で１時間インキュベートし、蛍光をＴｅｃａｎ Ｕｌｔｒａ蛍光分析計／分光光度計を用いて読み取る（４８５ｎｍ励起，５３５ｎｍ発光）。
【００８７】
（ＩＩ）Ａｓｐ−１阻害アッセイ
３８４ウェルプレートにおいてアッセイされる各々の化合物に関して下記のものを加える：
ａ）試験化合物の１μｌのＤＭＳＯ溶液（ＩＣ５０曲線は、５００μＭからの２連続希釈体の内の１０種の希釈体を用いる）。
ｂ）緩衝液中の１０μｌの基質（ＦＡＭ−［ＳＥＶＮＬＤＡＥＦＫ］−ＴＡＭＲＡ）溶液。４００ｍｌの緩衝液（１００ｍＭの酢酸ナトリウム、ｐＨ＝４．５、１ｌのＭｉｌｌｉ−Ｑ水、０．０６％のトリトンＸ−１００（０．５ｍｌ／ｌ）、氷酢酸を用いてｐＨを４．５に調節）中に、２ｍｌの基質の２ｍＭのＤＭＳＯ溶液を希釈することにより調製する。
ｃ）１０μｌの酵素溶液。これは、４ｍｌの６．３μＭの酵素溶液を、４９６ｍｌの緩衝液（１００ｍＭの酢酸ナトリウム、ｐＨ＝４．５、４０ｍＭの塩化ナトリウム、９００ｍｌのＭｉｌｌｉ−Ｑ水、１００ｍｌの氷酢酸、０．２％のＣＨＡＰＳ（２ｇ／ｌ）、氷酢酸を用いてｐＨを４．５に調節）に希釈することにより調製する。
ブランクウェル（酵素溶液を緩衝液に置き換えた）を、対照として、各々のプレートでインキュベートする。ウェルを、室温で２時間インキュベートして、蛍光を、Ｔｅｃａｎ Ｕｌｔｒａ蛍光分光計／分光光度計を用いて読み取る（４８５ｎｍ励起、５３５ｎｍ発光）。
【００８８】
（ＩＩＩ）カテプシンＤ阻害アッセイ
３８４ウェルプレートにおいてアッセイされる各々の化合物に関して下記のものを加える：
ａ）試験化合物の１μｌのＤＭＳＯ溶液（ＩＣ５０曲線は、５００μＭからの２連続希釈体の内の１０種の希釈体を用いる）。
ｂ）１０μｌの緩衝液中の基質（ＦＡＭ−［ＳＥＶＮＬＤＡＥＦＫ］−ＴＡＭＲＡ）溶液。これは、２ｍｌの基質の２ｍＭのＤＭＳＯ溶液を、４００ｍｌの緩衝液（１００ｍＭの酢酸ナトリウムｐＨ＝４．５、１ｌのＭｉｌｌｉ−Ｑ水、０．０６％のトリトンＸ−１００（０．５ｍｌ／ｌ）、氷酢酸を用いてｐＨを４．５に調節）中に希釈することより調製する。
ｃ）１０μｌの酵素溶液。これは、１．６ｍｌの２００単位／ｍｌ（１０ｍＭのＨＣｌ中）酵素溶液を、３９８．４ｍｌの緩衝液（上記のように調製する）に希釈することにより調製する。
ブランクウェル（酵素溶液を緩衝液で置き換える）を、対照として、各々のプレートにおいてインキュベートする。ウェルを室温で１時間インキュベートし、蛍光を、Ｔｅｃａｎ Ｕｌｔｒａ蛍光分析計／分光光度計を用いて読み取る（４８５ｎｍ励起、５３５ｎｍ発光）。
【００８９】
生物学的データ
Ｅ１およびＥ２の化合物を、アッセイ（Ｉ）および（ＩＩ）において試験し、下記データを得た：
【表１】
2005510559.tif 000022
【００９０】
Ｅ３〜Ｅ８の化合物を、アッセイ（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）において試験し、すべての実施例に関する結果は、下記阻害範囲内：１０〜１６０ｎｍ（Ａｓｐ−２）、１０〜２０００ｎＭ（Ａｓｐ−１）および１０〜２７００ｎＭ（ＣａｔＤ）であった。
Ｅ９の化合物を、アッセイ（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）において試験し、下記阻害：１８０ｎＭ（Ａｓｐ−２）、３３００ｎＭ（Ａｓｐ−１）および９６００ｎＭ（ＣａｔＤ）が得られた。
【国際調査報告】
2005510559.tif 000030
2005510559.tif 000031