【手続補正書】
【提出日】令和2年3月9日(2020.3.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
免疫エフェクター細胞の活性化受容体のエピトープ及びウイルス感染した細胞が発現する抗原のエピトープと結合する二重特異性ダイアボディ分子であって、前記二重特異性ダイアボディ分子は少なくとも二本のポリペプチド鎖を含む共有結合性複合体であり、
（Ａ）前記免疫エフェクター細胞の活性化受容体のエピトープと免疫特異的に結合することができる第一エピトープ結合ドメインであり、前記免疫エフェクター細胞はＴ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、顆粒球、または樹状細胞である、第一エピトープ結合ドメイン、及び
（Ｂ）前記ウイルス感染した細胞が発現する抗原のエピトープと免疫特異的に結合することができる第二エピトープ結合ドメインであり、前記ウイルスは、ＥＢＶ、ＨＳＶ、ＣＭＶ、ＨＩＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＰＶ、またはインフルエンザウイルスであり、前記抗原は、前記ウイルス上で前記二重特異性ダイアボディ分子により検出される前記抗原のレベルよりも高いレベルで、前記ウイルス感染した前記細胞上に検出可能に存在する、第二エピトープ結合ドメイン
を含む、二重特異性ダイアボディ分子。
【請求項２】
前記細胞は、前記ウイルスに潜在的に感染している、請求項１に記載の二重特異性ダイアボディ分子。
【請求項３】
前記ウイルス感染した前記細胞が発現する前記抗原は、ＬＭＰ−１、ＬＭＰ−２、インフルエンザウイルスＭ2タンパク質、ＨＩＶｅｎｖタンパク質、ＨＰＶＥ６、及びＨＰＶＥ７からなる群より選択される、請求項１または２に記載の二重特異性ダイアボディ分子。
【請求項４】
前記免疫エフェクター細胞の前記エピトープは、ＣＤ３エピトープ、ＣＤ４エピトープ、ＣＤ８エピトープ、ＣＤ２エピトープ、ＣＤ１６エピトープ、ＴＣＲエピトープまたはＮＫＧ２Ｄエピトープである、請求項１乃至３の何れか１項に記載の二重特異性ダイアボディ分子。
【請求項５】
前記第一エピトープ結合ドメインは、ＣＤ３抗体、ＣＤ４抗体、ＣＤ８抗体、ＣＤ２抗体、ＣＤ１６抗体、ＴＣＲ抗体またはＮＫＧ２Ｄ抗体からのエピトープ結合ドメインである、請求項１乃至４の何れか１項に記載の二重特異性ダイアボディ分子。
【請求項６】
前記ウイルス感染した前記細胞が発現する前記抗原は、前記感染した細胞に前記二重特異性ダイアボディ分子により検出可能に存在するが、前記ウイルス上で前記二重特異性ダイアボディ分子により検出されない、請求項１乃至５の何れか１項に記載の二重特異性ダイアボディ分子。
【請求項７】
（１）前記ウイルス感染した前記細胞が発現する前記抗原は、前記ウイルス上で前記二重特異性ダイアボディ分子により検出される前記抗原のレベルよりも少なくとも２倍高いレベルで、前記細胞上に検出可能に存在する；又は、
（２）前記ウイルス感染した前記細胞が発現する前記抗原は、前記ウイルス上で前記二重特異性ダイアボディ分子により検出される前記抗原のレベルよりも少なくとも５倍高いレベルで、前記細胞上に検出可能に存在する；又は、
（３）前記ウイルス感染した前記細胞が発現する前記抗原は、前記ウイルス上で前記二重特異性ダイアボディ分子により検出される前記抗原のレベルよりも少なくとも１０倍高いレベルで、前記細胞上に検出可能に存在する；又は、
（４）前記ウイルス感染した前記細胞が発現する前記抗原は、前記ウイルス上で前記二重特異性ダイアボディ分子により検出される前記抗原のレベルよりも少なくとも１００倍高いレベルで、前記細胞上に検出可能に存在する、
請求項１乃至６の何れか１項に記載の二重特異性ダイアボディ分子。
【請求項８】
前記ウイルス感染した前記細胞が発現する前記抗原は、前記感染した細胞に前記二重特異性ダイアボディ分子により検出可能に存在するが、前記ウイルスに感染していない細胞では前記二重特異性ダイアボディ分子により検出されない、請求項１乃至７の何れか１項に記載の二重特異性ダイアボディ分子。
【請求項９】
前記分子はＦｃドメインまたはその一部分を含む、請求項１乃至８の何れか１項に記載の二重特異性ダイアボディ分子。
【請求項１０】
前記分子は三本のポリペプチド鎖を含み、
（Ａ）第１のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端方向に、
（ｉ）エピトープ（１）に特異的な第一免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインの結合領域（ＶＬ１）を含むドメイン（Ａ）；
（ｉｉ）エピトープ（２）に特異的な第二免疫グロブリンの重鎖可変ドメインの結合領域（ＶＨ２）を含むドメイン（Ｂ）；および
（ｉｉｉ）システイン残基とＥコイル又はＫコイルとを含むドメイン（Ｃ）；
を含み、
（Ｂ）第２のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端方向に、
（ｉ）エピトープ（２）に特異的な第二免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインの結合領域（ＶＬ２）を含むドメイン（Ｄ）；
（ｉｉ）エピトープ（１）に特異的な第一免疫グロブリンの重鎖可変ドメインの結合領域（ＶＨ１）を含むドメイン（Ｅ）； 
（ｉｉｉ）システイン残基と、前記第１のポリペプチド鎖がＥコイルを有する場合はＫコイル、前記第１のポリペプチド鎖がＫコイルを有する場合はＥコイルとを含むドメイン（Ｆ）；および
（ｉｖ）ＦＣ領域のＣＨ２−ＣＨ３領域
を含み、
（Ｃ）第３のポリペプチド鎖は、ＦＣ領域のＣＨ２−ＣＨ３領域を含み、
（Ｄ）（ｉ）前記ドメイン（Ａ）及び（Ｂ）は互いに会合してエピトープ結合ドメインを形成することはなく、
（ｉｉ）前記ドメイン（Ｄ）及び（Ｅ）は互いに会合してエピトープ結合ドメインを形成することはなく、
（ｉｉｉ）前記ドメイン（Ａ）及び（Ｅ）は会合して前記エピトープ（１）と結合するエピトープ結合ドメインを形成し、前記ドメイン（Ｂ）及び（Ｄ）は会合して前記エピトープ（２）と結合するエピトープ結合ドメインを形成し、
（ａ）前記エピトープ（１）は免疫エフェクター細胞の活性化受容体のエピトープであり、前記エピトープ（２）はウイルス感染した細胞が発現する抗原のエピトープであり、又は
（ｂ）前記エピトープ（１）はウイルス感染した細胞が発現する抗原のエピトープであり、前記エピトープ（２）は免疫エフェクター細胞の活性化受容体のエピトープであり、
（ｉｖ）前記ドメイン（Ｃ）及び（Ｆ）はジスルフィド結合によって共有結合で会合する、請求項１乃至９の何れか１項に記載の二重特異性ダイアボディ分子。
【請求項１１】
（Ａ）前記活性化受容体はＣＤ３であり、前記ウイルス感染した細胞が発現する抗原はＥＢＶ  ＬＭＰ−１である、または、
（Ｂ）前記活性化受容体はＴＣＲであり、前記ウイルス感染した細胞が発現する抗原はＥＢＶ  ＬＭＰ−２である、または、
（Ｃ）前記活性化受容体はＣＤ３であり、前記ウイルス感染した細胞が発現する抗原はＭＨＣクラスＩに関するＨＰＶ  Ｅ６である、または、
（Ｄ）前記活性化受容体はＣＤ１６であり、前記ウイルス感染した細胞が発現する抗原はＨＩＶｅｎｖである、または、
（Ｅ）前記活性化受容体はＣＤ３であり、前記ウイルス感染した細胞が発現する抗原はＨＩＶｇｐ１２０である、または、
（Ｆ）前記活性化受容体はＣＤ３であり、前記ウイルス感染した細胞が発現する抗原はＨＩＶｅｎｖである、
請求項１乃至１０のいずれか１項に記載の二重特異性ダイアボディ分子。
【請求項１２】
第１及び第２のポリペプチド鎖を含む二重特異性ダイアボディ分子であって、
Ｉ  前記第１のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端方向に、
（ｉ）ＨＩＶエピトープに特異的な第一免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインの結合領域（ＶＬ１）を含むドメイン（Ａ）；
（ｉｉ）ＣＤ３エピトープに特異的な第二免疫グロブリンの重鎖可変ドメインの結合領域（ＶＨ２）を含むドメイン（Ｂ）；及び
（ｉｉｉ）ドメイン（Ｃ）；
を含み、
ＩＩ  前記第２のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端方向に、
（ｉ）前記ＣＤ３エピトープに特異的な第二免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインの結合領域（ＶＬ２）を含むドメイン（Ｄ）；
（ｉｉ）前記ＨＩＶエピトープに特異的な第一免疫グロブリンの重鎖可変ドメインの結合領域（ＶＨ１）を含むドメイン（Ｅ）； 
（ｉｉｉ）ドメイン（Ｆ）；及び
（ｉｖ）ＦＣ領域のＣＨ２−ＣＨ３領域；
を含み、
（１）前記ドメイン（Ａ）及び（Ｂ）は互いに会合してエピトープ結合ドメインを形成することはなく；
（２）前記ドメイン（Ｄ）及び（Ｅ）は互いに会合してエピトープ結合ドメインを形成することはなく；
（３）前記ドメイン（Ａ）及び（Ｅ）は会合して前記ＨＩＶエピトープと結合するエピトープ結合ドメインを形成し、前記ドメイン（Ｂ）及び（Ｄ）は会合して前記ＣＤ３エピトープと結合するエピトープ結合ドメインを形成し、
（４）前記ドメイン（Ｃ）及び（Ｆ）は共有結合で会合し、
（５）（ｉ）前記ＶＬ１は抗ＨＩＶ抗体Ａ３２の軽鎖可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み；
（ｉｉ）前記ＶＨ１は抗ＨＩＶ抗体Ａ３２の重鎖可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み；
（ｉｉｉ）前記ＶＬ２はヒト化抗ＣＤ３抗体２の軽鎖可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み；及び
（ｉｖ）前記ＶＨ２は前記ヒト化抗ＣＤ３抗体２の重鎖可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む；
、二重特異性ダイアボディ分子。
【請求項１３】
（ｉ）抗ＨＩＶ抗体Ａ３２の軽鎖可変ドメイン（配列番号４６の残基１−１１０）；及び
（ｉｉ）前記抗ＨＩＶ抗体Ａ３２の重鎖可変ドメイン（配列番号４７の残基１１９−２４１）；及び
（ｉｉｉ）ヒト化抗ＣＤ３抗体２の軽鎖可変ドメイン（配列番号４７の残基１−１１０）；及び
（ｉｖ）前記ヒト化抗ＣＤ３抗体２の重鎖可変ドメイン（配列番号４６の残基１１９−２４３）；
を含む、請求項１２に記載の二重特異性ダイアボディ分子。
【請求項１４】
第１及び第２のポリペプチド鎖を含む二重特異性ダイアボディ分子であって、
Ｉ  前記第１のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端方向に、
（ｉ）ＨＩＶエピトープに特異的な第一免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインの結合領域（ＶＬ１）を含むドメイン（Ａ）；
（ｉｉ）ＣＤ３エピトープに特異的な第二免疫グロブリンの重鎖可変ドメインの結合領域（ＶＨ２）を含むドメイン（Ｂ）；及び
（ｉｉｉ）ドメイン（Ｃ）；
を含み、
ＩＩ  前記第２のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端方向に、
（ｉ）前記ＣＤ３エピトープに特異的な第二免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインの結合領域（ＶＬ２）を含むドメイン（Ｄ）；
（ｉｉ）前記ＨＩＶエピトープに特異的な第一免疫グロブリンの重鎖可変ドメインの結合領域（ＶＨ１）を含むドメイン（Ｅ）； 
（ｉｉｉ）ドメイン（Ｆ）；及び
（ｉｖ）ＦＣ領域のＣＨ２−ＣＨ３領域；
を含み、
（１）前記ドメイン（Ａ）及び（Ｂ）は互いに会合してエピトープ結合ドメインを形成することはなく；
（２）前記ドメイン（Ｄ）及び（Ｅ）は互いに会合してエピトープ結合ドメインを形成することはなく；
（３）前記ドメイン（Ａ）及び（Ｅ）は会合して前記ＨＩＶエピトープと結合するエピトープ結合ドメインを形成し、前記ドメイン（Ｂ）及び（Ｄ）は会合して前記ＣＤ３エピトープと結合するエピトープ結合ドメインを形成し、
（４）前記ドメイン（Ｃ）及び（Ｆ）は共有結合で会合し、
（５）（ｉ）前記ＶＬ１は抗ＨＩＶ抗体７Ｂ２の軽鎖可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み；
（ｉｉ）前記ＶＨ１は抗ＨＩＶ抗体７Ｂ２の重鎖可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み；
（ｉｉｉ）前記ＶＬ２はヒト化抗ＣＤ３抗体２の軽鎖可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み；及び
（ｉｖ）前記ＶＨ２は前記ヒト化抗ＣＤ３抗体２の重鎖可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む；
、二重特異性ダイアボディ分子。
【請求項１５】
（ｉ）抗ＨＩＶ抗体７Ｂ２の軽鎖可変ドメイン（配列番号４８の残基１−１１３）；
（ｉｉ）前記抗ＨＩＶ抗体７Ｂ２の重鎖可変ドメイン（配列番号４９の残基１１９−２４４）；
（ｉｉｉ）ヒト化抗ＣＤ３抗体２の軽鎖可変ドメイン（配列番号４９の残基１−１１０）；及び
（ｉｖ）前記ヒト化抗ＣＤ３抗体２の重鎖可変ドメイン（配列番号４８の残基１２２−２４６）；
を含む、請求項１４に記載の二重特異性ダイアボディ分子。
【請求項１６】
（ｉ）前記ドメイン（Ｃ）はシステイン残基とＥコイル又はＫコイルとを含む；及び
（ｉｉ）前記ドメイン（Ｆ）はシステイン残基とＫコイル（前記第１のポリペプチド鎖がＥコイルを有する場合）又はＥコイル（前記第１のポリペプチド鎖がＫコイルを有する場合）を含む； 
、請求項１２乃至１５の何れか１項に記載の二重特異性ダイアボディ分子。
【請求項１７】
請求項１乃至１６のいずれか１項に記載の二重特異性ダイアボディ分子および薬学的に許容可能なキャリアを含む薬学的組成物。
【請求項１８】
潜在性ウイルス感染症、持続性ウイルス感染症又は不活性ウイルス感染症の治療のための薬剤の製造における、請求項１乃至１６のいずれか１項に記載の二重特異性ダイアボディ分子、又は請求項１７に記載の薬学的組成物の使用。
【請求項１９】
ウイルスゲノムを保有する細胞又はウイルスタンパク質を発現する細胞を死滅させるための薬剤の製造における、請求項１乃至１６のいずれか１項に記載の二重特異性ダイアボディ分子、又は請求項１７に記載の薬学的組成物の使用。
【請求項２０】
潜在性ウイルス感染症、持続性ウイルス感染症又は不活性ウイルス感染症の治療に使用される請求項１乃至１６のいずれか１項に記載の二重特異性ダイアボディ分子を含む組成物。
【請求項２１】
ウイルスゲノムを保有する細胞又はウイルスタンパク質を発現する細胞の死滅に使用される請求項１乃至１６のいずれか１項に記載の二重特異性ダイアボディ分子を含む組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４１】
したがって、好適な実施形態において、負電荷を帯びた「Ｅコイル」が、二重特異性ダイアボディを形成するために用いられるポリペプチドの一方に付加され、正電荷を帯びた「Ｋコイル」が、ダイアボディの第二のポリペプチドに付加される（図１Ｂ）。特に好適なＥコイルは、配列：（ＥＶＡＡＬＥＫ）4［すなわち（配列番号３９）ＥＶＡＡＬＥＫＥＶＡＡＬＥＫＥＶＡＡＬＥＫＥＶＡＡＬＥＫ］を有するだろう。特に好適なＫコイルは、配列：（ＫＶＡＡＬＫＥ）4［すなわち（配列番号４０）ＫＶＡＡＬＫＥＫＶＡＡＬＫＥＫＶＡＡＬＫＥＫＶＡＡＬＫＥ］を有するだろう。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１７７】
好適な実施形態において、負電荷を帯びた「Ｅコイル」が、二重特異性ダイアボディを形成するのに用いられるポリペプチドのうちの１本に付加され、正電荷を帯びた「Ｋコイル」が、ダイアボディの第二のポリペプチドに付加されるだろう。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１９１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１９１】
好適な実施形態において、負電荷を帯びた「Ｅコイル」が、二重特異性ダイアボディを形成するのに用いられるポリペプチドのうちの１本に付加され、正電荷を帯びた「Ｋコイル」が、ダイアボディの第二のポリペプチドに付加されるだろう。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１９６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１９６】
好適な実施形態において、負電荷を帯びた「Ｅコイル」が、二重特異性ダイアボディを形成するのに用いられるポリペプチドのうちの１本に付加され、正電荷を帯びた「Ｋコイル」が、ダイアボディの第二のポリペプチドに付加されるだろう。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２０１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２０１】
好適な実施形態において、負電荷を帯びた「Ｅコイル」が、二重特異性ダイアボディを形成するのに用いられるポリペプチドのうちの１本に付加され、正電荷を帯びた「Ｋコイル」が、ダイアボディの第二のポリペプチドに付加されるだろう。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２０６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２０６】
好適な実施形態において、負電荷を帯びた「Ｅコイル」が、二重特異性ダイアボディを形成するのに用いられるポリペプチドのうちの１本に付加され、正電荷を帯びた「Ｋコイル」が、ダイアボディの第二のポリペプチドに付加されるだろう。