(57)【要約】本発明は、不斉のシクレン（cyclen）誘導体を基礎とする新規の二官能性キレートに関する。キレートは、キレートをＰ−アルキルによってホスフィン酸誘導体内でかまたはＰ−Ｏ−アルキルによってホスホン酸誘導体内で標的に適した任意の有機骨格に結合させることができる、３つのアセテート腕および１つのメチルホスフィン酸腕または３つのアセテート腕および１つのメチルホスホン酸腕を含有する。適当な標的部位は、モノクロナール抗体、その断片および組換え誘導体、例えば１個の鎖状抗体、ディアボディーズ（diabodies）、トリアボディーズ（triabodies）、人間化変体、ヒト変体またはキメラ変体であるが、しかし、ペプチド、アプタマーズ（aptamers）、シュピーゲルマーズ（spiegelmers）、ヌクレオチド、抗センスオリゴマーおよび常用の小分子でもある。これらの新規の二官能性キレートは、放射性金属、例えばイットリウム−９０を用いての放射線治療に使用されるために標的部位の常用の標識化のため、またはガドリニウムを使用しての磁気共鳴撮像（ＭＲＩ）のためのキットの製造に適している。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
2005523235.tif 000043
〔式中、
それぞれＸは、独立にＣ（Ｒ１）２またはＣＲ１Ｒ２から選択されており、
それぞれＺは、独立にＯＨ、Ｒ１、Ｒ２、−ＯＲ１、ＯＲ２またはＯＭであり、Ｍは、陽イオンであり、
Ｙは、独立にＯＨ、ＯＭ、ＯＲ１、ＯＲ２、ＮＲ１Ｒ２、Ｎ（Ｒ１）２またはＮ（Ｒ２）２であり、Ｍは、陽イオンであり、
それぞれＲ１は、独立にＨまたは１〜２０個の炭素原子を有する有機基から選択されており、
それぞれＲ２は、独立にＨ、官能基または少なくとも１個の官能基を有し１〜２０個の炭素原子を有する有機基から選択されている〕で示される化合物またはその光学異性体、配位化合物または塩。
【請求項２】
官能基がＯＲ１、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＮＯ２、Ｎ（Ｒ１）２、ＣＯＯＲ１、ＮＣＳ、ＮＨＣＯＣＨ２Ｂｒから選択されており、この場合Ｒ１は、請求項１に定義されている、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
ＸがＣＨ２である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１がＨである、請求項１から３までのいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５】
ＺがＨ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ、−Ｏｎ−Ｃ１〜Ｃ２アルキル−アリールまたは−Ｏｎ−アリールであり、この場合ｎは、０または１である、請求項１から４までのいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｚが−Ｏｎ−（ＣＨ２）１〜６−Ｑ、−Ｏn−（ＣＨ２）１〜４−Ｐｈ−Ｑまたは−Ｏｎ−Ｐｈ−Ｑであり、この場合Ｑは、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＮＣＳまたは−ＮＨＣＯＣＨ２Ｂｒであり、ｎが０または１である、請求項１から４までのいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
請求項１から６までのいずれか１項に記載の化合物の金属錯体。
【請求項８】
金属が放射性同位体である、請求項７記載の錯体。
【請求項９】
放射性同位体が６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６７Ｇａ、９０Ｙ、１１１Ｉｎ、１５３Ｓｍ、１６６Ｈｏ、１７７Ｌｕ、２０１Ｔｌ、２１２Ｂｉおよびこれらの組合せ物から選択されている、請求項８記載の錯体。
【請求項１０】
金属がＧｄである、請求項７記載の錯体。
【請求項１１】
請求項１から６までのいずれか１項に記載の化合物または請求項７から１０までのいずれか１項に記載の金属錯体と生体分子との接合体。
【請求項１２】
生体分子ペプチド、タンパク質、糖タンパク質、オリゴ糖類および多糖類、オリゴ糖類およびポリアミノ糖類ならびに核酸から選択されている、請求項１１記載の接合体。
【請求項１３】
生体分子が抗体または抗体断片である、請求項１２記載の接合体。
【請求項１４】
請求項１から６までのいずれか１項に記載の化合物、請求項７から１０までのいずれか１項に記載の金属錯体または請求項１１から１３までのいずれか１項に記載の接合体を製薬学的に認容性の担持剤、希釈剤または助剤と一緒に有することを特徴とする医薬組成物。
【請求項１５】
診断の用途のための請求項１４記載の組成物。
【請求項１６】
放射線撮像のための請求項１５記載の組成物。
【請求項１７】
核磁気共鳴撮像のための請求項１５記載の組成物。
【請求項１８】
治療の用途のための請求項１４記載の組成物。
【請求項１９】
放射線治療のための請求項１８記載の組成物。
【請求項２０】
中性子捕獲治療のための請求項１８記載の組成物。
【請求項２１】
診断学的または治療的に有効量の請求項１から６までのいずれか１項に記載の化合物、請求項７から１０までのいずれか１項に記載の金属錯体または請求項１１から１３までのいずれか１項に記載の接合体を、製薬学的に認容性の担持剤、希釈剤または助剤と一緒に、必要とされる対象に投与する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、不斉のシクレン（cyclen）誘導体を基礎とする新規の二官能性キレートに関する。キレートは、キレートをＰ−アルキルによってホスフィン酸誘導体内でかまたはＰ−Ｏ−アルキルによってホスホン酸誘導体内で標的に適した任意の有機骨格に結合させることができる、３つのアセテート腕および１つのメチルホスフィン酸腕または３つのアセテート腕および１つのメチルホスホン酸腕を含有する。適当な標的部位は、モノクロナール抗体、その断片および組換え誘導体、例えば１個の鎖状抗体、ディアボディーズ（diabodies）、トリアボディーズ（triabodies）、人間化変体、ヒト変体またはキメラ変体であるが、しかし、ペプチド、アプタマーズ（aptamers）、シュピーゲルマーズ（spiegelmers）、ヌクレオチド、抗センスオリゴマーおよび常用の小分子でもある。これらの新規の二官能性キレートは、放射性金属、例えばイットリウム−９０を用いての放射線治療に使用されるために標的部位の常用の標識化のため、またはガドリニウムを使用しての磁気共鳴撮像（ＭＲＩ）のためのキットの製造に適している。
【０００２】
発明の背景
多座配位子、例えばＤＴＰＡ（ジエチレントリアミン五酢酸）、大環状ＴＥＴＡ（１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン−１，４，８，１１−四酢酸）およびＤＯＴＡ（１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸）は、第１列の遷移金属二価イオンまたは三価ランタニドのような不安定な金属イオンを用いた場合であっても、熱力学的および運動学的に極めて安定な金属キレート錯体を形成する（Lindoy L. F.: Adv. Inorg. Chem.1998, 45, 75; Wainwright K. P.:Coord. Chem. Rev. 1997, 166, 35; Lincoln S. F.: Coord. Chem. Rev. 1997, 166, 255; Meyer M., Dahaoui-Gindrey V., Lecomte C., Guilard R.: Coord. Chem. Rev. 1998. 178-180, 1313; Hancock R. D., Maumela H., de Sousa A. S.: Coord. Chem. Rev. 1996, 148, 315）。大環状配位子の性質は、Ｇｄ３＋を基礎とする磁気共鳴撮像（ＭＲＩ）造影剤（Parker D.: Comprehensive Supramolecular Chemistry (Lehn J.-M., 編), Vol. 10, pp. 487-536. Pergamon Press, Oxford 1996; Aime S., Botta M., Fasano M., Terreno E., Chem. Soc. Rev. 1998, 27, 19; Caravan P., Ellison J. J., Mc Murry T. J., Laufer R. B.: Chem. Rev. 1999, 99, 2293; Aime S., Botta M., Fasano , Terreno E.: Acc. Chem. Res. 1999, 32, 941; Botta M.: Eur. J. Inorg. Chem. 2000, 399）ならびに金属放射性核種を基礎とする診断用放射性医薬品および／または治療用放射性医薬品（Anderson C.J., Welch M. J.: Chem. Rev. 1999, 99, 2219; Volkert W. A., Hoffmann T. J.: Chem. Rev. 1999, 99, 2269; Reichert D. E., Lewis J. S., Anderson C. J.: Coord. Chem. Rev. 1999, 184, 3; Liu S/. Edwards D. S.: Biocojugate Chem. 2001, 12, 7）を設計しながら合成された。放射性医薬品の使用のためには、標的の部位は、放射性金属キレート錯体に結合されていなければならない。キレートは、一面で標的部位への結合能力、他面、放射性金属を錯化する能力のために二官能性と呼ばれる。
【０００３】
標的部位、例えばモノクロナール抗体（Mabs）は、KoehlerおよびMilsteinによってmid seventiesに記載された（Koehler G.およびMilstein C.: Nature 1975, 256, 495-497）。それ以来、研究者は、過去に例がない特異性の前記タンパク質を診断薬および治療薬として開発することを試みた。診断薬分野での成功は、きわめて早く達成されたが、しかし、数多くの研究グループの多大な努力にも拘わらず、最近になってようやく、最初の治療的に成果を収めたＭａｂｓは、癌を治療するためにＦＤＡおよびＥＭＥＡによって達成された。今までのところ、癌の治療のために認可されたＭａｂｓは、細胞表面受容体機能（erb B2受容体：Herceptin）と干渉することによって治療効果を誘発するかまたは適当なＦｃ部位（CD 20:ROCHE-Rituxan）を介してＡＤＣＣおよびＣＤＣの媒介となる組換え操作されたキメラＭａｂｓまたは人間化Ｍａｂｓである。
【０００４】
更に、最近になって比較臨床学的研究により、イットリウム−９０（Y-90）で標識化された、ＣＤ２０（IDEC-Y2B8）に対して選択的なIbritumomab、マウスＭＡｂは、キメラ標識化されていないが細胞毒性の組換え変種MAb Rituximab（ROCHE-Rituxan）よりも非ホジキンリンパ腫の治療に対する臨床学的効能に関連して意図した効果を生じている。Ibritumomab-tiuxetan（Zevalin）の増加した治療学的効能は、高エネルギー（2.3 MeV）のラジオヌクレオチドの純粋なβ線放出で、ＣＤ２０の正の腫瘍細胞から９ｍｍ離れた範囲内でＣＤ２０の負のリンパ腫細胞に放射線照射させることによって引き起こされる。
【０００５】
Ibritumomabの場合、Ｙ−９０は、tiuxetan（MX-DTPA）と呼ばれる共有結合したキレート化剤リンカーによりＭａｂ  Ｙ２Ｂ８に結合して比較的安定性である（Brechbiel M.W. et. al.: Inorg. Chem. 1986, 25, 2772; Cummins et al.: Bioconjugate Chem. 1991, 2, 180; Brechbiel M.W.およびGansow O.A.: Bioconjugate Chem. 1991, 2, 187）。Ｙ−９０に対してキレート化群の安定性を増加させるために、QuadriおよびMohammadpour（Bioorg. Med. CHem. Lett. 1992, 2, 1661-1664）は、ベンジルをＣ２位に有しかつメチルをＣ３位に有するベンジル−メチル−ＤＴＰＡを合成した。しかし、このＩＴＣ−２Ｂ３Ｍ−ＤＴＰＡと呼ばれる試薬は、ＩＴＣ  ＭＸ−ＤＴＰＡと比較してＹ−９０に対し増加したキレート化安定性を示さなかった。それにも拘わらず、このキレートは、腹腔内注射後の卵巣癌を治療する目的で試験的な研究において使用されている（Borchardt et al.: J. Nucl. Med. 1998, 39, 476-484）。
【０００６】
Ｙ−９０またはＩｎ−１１１に対して最も安定したキレートは、異なるリンカー化学を用いてＭａｂに結合されているＤＯＴＡｓである（Li M.およびMeares C. F.: Bioconjugate Chem. 1993, 4, 275-283）。しかし、ＤＯＴＡの使用を制限する主な欠点は、Ｍａｂ−ＤＯＴＡ免疫接合体中への放射性金属の配合に適用されることが必要とされている物理化学的条件である（Lewis et al.: Bioconjugate Chem. 1994, 5, 565-576）。Ｍａｂ−ＤＯＴＡ免疫接合体は、免疫接合体のＭａｂ成分に損傷を与え、放射線標識化法を通常の使用にとって不適当にする長時間の間、高められた温度で恒温保持されなければならない。
【０００７】
付加的に、Ｍａｂ部位の損傷は、９０％を上廻る免疫反応性を有する免疫接合体と比較して増加した好ましくない肝臓蓄積量を生じる免疫接合体の免疫反応画分の重大な減少によって検出されうる（ドイツ特許出願第１００１６８７７．９号）。幾人かの研究者は、ＤＯＴＡとＭａｂ部位との間に酵素分解可能なペプチドリンカーを導入することによって肝臓蓄積量の問題点を少なくすることを試みた（Peterson J. J.およびMeares C.: Bioconjugate Vhem. 1999, 10, 553-557）。このリンカーは、場合によっては肝臓からのＤＯＴＡ−キレートの迅速な除去、引続くリソソーム酵素、例えば、catepsin BまたはDによる分解を可能にする。しかし、酵素分解可能なキレートは、肝臓組織中で分解されるだけでなく、Ｍａｂ−リンカー−ＤＯＴＡキレートがリソソーム区画により内面化されかつ処理された区画を得る全ての組織内で分解される。これは、標的組織内、例えば腫瘍内で起こりうることであり、不利に標的組織に対して放射線量を減少させる。
【０００８】
同様かまたはよりいっそう良好な性質を有する他のリガンド、殊に通常のアセテート誘導体よりも迅速な錯化についての探索において、研究は、４つのホスホン酸ペンダント腕またはホスフィン酸ペンダント腕を有するazamacrocyclesの合成および研究にも焦点が当てられた。リンリガンドを有する錯体は、錯化においてよりいっそう高度な選択性および十分な熱力学的安定性を示す（Sherry A.D.: J. Alloys Compd. 1997, 249, 153; Belskii F. I., Polikarpov Yu. M., Kabachnik M. I.: Usp. Khim. 1992, 61, 415; Rohovec J., Kyvala M., Vojtisek P., Hermann P., Lukes I.: Eur. J. Inorg. Chem. 2000, 195; Bazakas K., Lukes I.: J. Chem. Soc., Dalton Trans. 1995, 1133）。一面で酢酸ペンダント腕を有するシクレン誘導体とシクラム（cyclam）誘導体との錯化の性質の比較、他面、そのメチルホスホン酸類似物またはメチルホスフィン酸類似物の比較は、纏められ、最近刊行された（Lukes I., Kotek J., Vojtisek P., Hermann P.: Coord. Chem. Rev. 2001, 216-217, 287）。
【０００９】
発明の開示
意外なことに、３つのカルボン酸腕および１つのホスフィン酸腕またはホスホン酸腕を有する環式化合物は、金属キレート錯体安定性および金属配合に関連して利点および予想しなかった特性を示した。キレートは、有利に３つのアセテートまたはその場合によっては置換されたアミドと１つのメチルホスホン酸腕を含有する（ホスホン酸誘導体）か、３つのアセテートまたはその場合によっては置換されたアミドと１つのメチルホスフィン酸腕を含有する（ホスフィン酸誘導体）か、または３つのアセテートまたはその場合によっては置換されたアミドと１つのメチルホスフィンオキシド腕を含有する（ホスフィンオキシド誘導体）。
【００１０】
従って、本発明は、  式Ｉ
【００１１】
【化１】
2005523235.tif 000002
〔式中、
それぞれＸは、独立にＣ（Ｒ１）２またはＣＲ１Ｒ２から選択されており、
それぞれＺは、独立にＯＨ、Ｒ１、Ｒ２、−ＯＲ１、ＯＲ２またはＯＭであり、Ｍは、陽イオンであり、
Ｙは、独立にＯＨ、ＯＭ、ＯＲ１、ＯＲ２、ＮＲ１Ｒ２、Ｎ（Ｒ１）２またはＮ（Ｒ２）２であり、Ｍは、陽イオンであり、
それぞれＲ１は、独立にＨまたは１〜２０個の炭素原子を有する有機基から選択されており、
それぞれＲ２は、独立にＨ、官能基または少なくとも１個の官能基を有し１〜２０個の炭素原子を有する有機基から選択されている〕で示される化合物またはその光学異性体、配位化合物または塩に関する。
【００１２】
本発明の１つの好ましい実施態様において、それぞれＸは、ＣＨ２である。しかし、幾つかの場合には、１つの基Ｘは、ＣＨＲ１またはＣＨＲ２を意味し、但し、Ｒ１とＲ２は、異なることに注意しなければならない。
【００１３】
本発明による用語”１〜２個の炭素原子を有する有機基”は、詳細には、アルキル基のような他の置換基を有するアリール基またはシクロアルキル基を含めて、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル基、Ｃ２〜Ｃ１０アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル基、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル基、Ｃ５〜Ｃ１０（ヘテロ）アリール基に関連する。更に、Ｒ１基は、ヘテロ原子、例えばＦ、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、Ｏ、Ｎ、Ｓおよび／またはＰを含有していてよい。
【００１４】
符号Ｒ２は、Ｒ１と同様に定義されているが、しかし、付加的に官能基、特に式Ｉの化合物を結合成分、例えば生体分子に共役するのに適している基であってよいかまたはこの基を含有していてよい。例えば、生体分子のアミノ基、チオ基またはヒドロキシ基と選択的に反応しうるかかるカップリング基の数多くの例は、刊行物に公知である。官能基の特殊な例は、ＯＲ１、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＮＯ２、Ｎ（Ｒ１）２、ＣＯＯＲ１、ＮＣＳおよびＮＨＣＯＣＨ２Ｂｒであり、この場合Ｒ１は、上記の記載と同様に定義されている。
【００１５】
亜燐酸原子上の置換基Ｚは、炭素原子または酸素原子により亜燐酸原子に結合していてよい。結合が炭素原子による場合には、式Ｉの化合物は、ホスフィン酸誘導体である。結合が酸素原子により起こる場合には、式Ｉの化合物は、ホスホン酸誘導体である。結合成分の共役は、好ましくは置換基Ｚにより起こる。
【００１６】
Ｚの例は、Ｈ、ＯＨ、Ｏ−Ｃ１〜Ｃ４アルキル、例えばＯＣ２Ｈ５、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、例えばＣＨ３、−Ｏｎ−アルカリール、例えば−ＣＨ２フェニル、−ＣＨ２Ｃ６Ｈ４ＮＯ２または−ＣＨ２Ｃ６Ｈ４ＮＨ２、−Ｏｎ−Ｃ１〜Ｃ４ヒドロキシアルキル、例えばＣＨ２ＯＨ、−Ｏｎ−Ｃ１〜Ｃ４アルキルカルボキシル、例えばＣＨ２ＣＯ２Ｈまたは−Ｏｎ−Ｃ１〜Ｃ４アミノアルキル、例えばＣＨ２ＮＨ２であり、但し、ｎは、０または１であるものとし、またはＯＭであり、この場合、Ｍは、金属陽イオンである。よりいっそう好ましくは、Ｚは、結合成分にカップリングしうる官能基、例えば生体分子を含有する。Ｚの特に好ましい意味は、−Ｏ−ｎ−（ＣＨ２）１〜６−Ｑ、−Ｏn−（ＣＨ２）１〜４−Ｐｈ−Ｑまたは−Ｏｎ−Ｐｈ−Ｑであり、この場合、Ｑは、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＮＣＳまたは−ＮＨＣＯＣＨ２Ｂｒであり、ｎは、０または１である。
【００１７】
置換基Ｙは、ＨまたはＯＭであってよく、この場合、Ｍは陽イオン、例えばアルカリ金属陽イオン、アルカリ土類金属陽イオンまたは有機陽イオン、例えばアミン陽イオン、例えば第四アンモニウムイオンである。しかし、カルボン酸腕は、例えばエステル、アミドまたは類似物として誘導体化（derivatize）されていてもよい。
【００１８】
本発明による化合物は、金属イオン、好ましくは＋２以上の酸化状態での金属イオンで錯化されていてよい。金属イオンの好ましい例は、遷移金属、ランタニド、アクチニドであるが、しかし、主要な群は、金属イオンである。好ましい実施態様において、金属は、放射性同位体、例えば６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６７Ｇａ、９０Ｙ、１１１Ｉｎ、１５３Ｓｍ、１６６Ｈｏ、１７７Ｌｕ、２０１Ｔｌ、２１２Ｂｉおよびこれらの組合せ物である。更に、好ましい実施態様において、金属は、Ｇｄである。
【００１９】
本発明の金属錯体の化合物は、結合成分、特に生体分子、例えばペプチド、タンパク質、糖タンパク質、オリゴ糖類および多糖類、オリゴ糖類およびポリアミノ糖類または核酸にカップリングされていてよい。最も好ましくは、生体分子は、抗体、例えばモノクロナール抗体、キメラ化抗体、人間化抗体、組換え抗体、例えば完全な抗体からの蛋白質分解によってかまたは抗体をコードする核酸の遺伝学的マニプレーションによって得ることができる一本鎖抗体または抗体断片である。適当な抗体または抗体断片を調製する方法は、当業者に公知である。
【００２０】
式Ｉは、ＤＯＴＡの化合物、即ちモノホスホン酸ＤＯ３Ａ−Ｐおよびモノホスフィン酸ＤＯ３Ａ−ＰＲの好ましい実施態様を表わす。
【００２１】
式（Ｉ）の化合物のキレート錯体は、次のような予想されなかった性質を示す：
１）ＤＯ３Ａ−ＰおよびＤＯ３Ａ−ＰＲならびにこれらの誘導体の錯化速度は、カルボン酸の錯化速度よりも迅速である。錯体の動的安定性および熱力学的安定性は、ＤＯＴＡ錯体に対して観察される動的安定性および熱力学的安定性と同様に高い。従って、標的部位およびキレート（以下、免疫接合体と呼ぶ）から構成されている共有接合体は、生理学的温度での放射性金属の迅速な配合ならびにインビボでのキレートからの放射線金属の任意の損失の回避の双方を可能にする。
２）ホスフィン酸基およびホスホン酸基の双方は、ホスフィン酸誘導体またはホスフィンオキシド誘導体内でのＰ−アルキルによるかまたはホスホン酸誘導体内でのＰ−Ｏ−アルキルによる、標的部位に対するキレートのカップリングを可能にする。Ｐ−アルキルリンカーまたはＰ−Ｏ−リンカーの形成は、ＤＯＴＡモノアミドの誘導体とは異なり、燐基の配位能力に影響を及ぼさない。
３）ＤＯＴＡ、ＤＯ３Ａ−ＰおよびＤＯ３Ａ−ＰＲならびに相応するホスフィンオキシド誘導体とは異なり、硬質イオン、例えばランタニドに対してよりいっそう特異的である。
４）ＤＯ３Ａ−ＰおよびＤＯ３Ａ−ＰＲの双方ならびに相応するホスフィンオキシド誘導体は、十字形である１つの水分子を磁気共鳴、例えばＭＲＩの使用で配位するために有利な性質を有する。ホスホン酸基／ホスフィン酸基／ホスフィン酸オキシド基の寸法により、水分子は、十分に迅速に交換され、それぞれの造影剤（Ｇｄを基礎とするホスフィン酸誘導体またはホスホン酸誘導体）は、よりいっそう効能を有する。
【００２２】
式（Ｉ）の化合物は、ＤＯ３ＡとＰ−Ｈ結合を含有する燐酸誘導体との間のマンニッヒ反応を有するプロトコルによって合成されることができる。
＞Ｎ−Ｈ ＋ ＣＨ２Ｏ ＋ Ｈ−ＰＺ(Ｏ)(ＯＲ１)→＞Ｎ−ＣＨ２−ＰＺ(Ｏ)(ＯＲ１)
＞Ｎ−Ｈ ＋ ＣＨ２Ｏ ＋ Ｈ−Ｐ(Ｏ)(ＯＲ１)(ＯＺ)→＞Ｎ−ＣＨ２−Ｐ(Ｏ)(ＯＲ１)(ＯＺ)
ＤＯ３Ａならびに立体障害を有しない任意のアミンは、燐成分、例えばホスフィン酸またはそのエステル（Ｈ−ＰＺ(Ｏ)(ＯＲ１)）および亜燐酸またはそのモノエステルもしくはジエステル（Ｈ−Ｐ(Ｏ)(ＯＲ１)(ＯＺ)）およびホルムアルデヒドまたはパラホルムアルデヒドと反応する。反応は、非水性媒体中で、通常、エステルを用いて溶剤中、例えばベンゼン、トルエンまたはＴＨＦ中で実施されることができる。ホルムアルデヒドは、有利にパラホルムアルデヒドとして導入される（２００〜４００％の過剰量）。反応は、水性媒体中で水溶性燐成分を用いて実施されてよい。ホルムアルデヒドは、有利に飽和水溶液の形でパラホルムアルデヒドとして過剰量（２００〜４００％）で使用される。水以外に、共沸ＨＣｌに対して極めて低い濃度のＨＣｌ溶液は、４０℃ないし還流温度の温度範囲内で使用されてもよい。非水性溶液中での燐酸エステル誘導体との反応からの生成物は、カラムクロマトグラフィーによって、例えばＳｉＯ２またはアルミナ上で精製されることができる。通常、水溶液中での反応は、よりいっそう高い収率を生じる。生成物は、クロマトグラフィーによってイオン交換樹脂上で精製されることができる。
【００２３】
更に、化合物は、マンニッヒ反応によって、例えばアルカリ溶液中でｐＨ８〜１０でメタノール中で、ジメチルホスフェートおよびホスフィン酸のメチルエステルを用いてかまたはエタノール中で相応するエチルエステルを用いて調製されてよい。１つの好ましい一般的な方法は、第２アミン、亜燐酸メチルエステル（３〜２０当量）およびメタノール中のホルムアルデヒド水溶液（３０％、３〜２０当量）を約ｐＨ９（第３アミン、例えばジイソプロピルエチルアミンまたは別の立体障害アミンの添加によって調節された）で密閉されたフラスコ中で適当な条件下、例えば７０〜９０℃で１０〜４８時間反応させることよりなる。更に、反応混合物は、冷却され、蒸発される。反応生成物は、Ａｌ２Ｏ３、ＳｉＯ２またはイオン交換樹脂上で精製されることができる。
【００２４】
免疫接合体の形成のために、反応性官能基は、化合物中に導入される。生じる新規の二官能性キレート化剤は、有利に標的部位のＯＨ、ＮＨ２またはＳＨ基との円滑な反応を可能にする燐腕上でイソチオシアネートまたは他の官能基を有する。
【００２５】
新規の二官能性キレート化剤は、特にランタニドおよびイットリウムの錯化に好適である。錯化のために、金属、例えばランタニドおよびイットリウムの酸化物または共通の塩、例えば硝酸塩、塩化物または酢酸塩を使用することができる。イオンは、キレート中で周囲温度およびほぼ中性のｐＨで配合されてよい。錯化の方法は、約ｐＨ５で開始され、１０分後に約ｐＨ７に徐々に上昇される。この条件下で、錯化は、ＮＭＲを用いて示されるように、３０分間で完結される。
【００２６】
更に、本発明は、化合物、金属錯体または上記したような接合体を製薬学的に認容性の担持剤、希釈剤または助剤と一緒に有する医薬組成物に関する。この組成物は、診断の用途、例えば放射線撮像または核磁気共鳴撮像に適当であることができる。他面、この組成物は、治療の用途、例えば放射線治療または中性子捕獲治療のために適当であることができる。
【００２７】
核医学への使用に加えて、現在有効なガドリニウム（ＩＩＩ）を基礎とするＭＲＩ造影剤は、弛緩性（relaxivity）の理論的な値に適合せず、それ故に、効率的な造影剤が著しく所望されている。弛緩性は、水交換速度を増加させるかまたは大きな分子への共有／非共有結合によって改善されることができ、したがって新規のＧｄ（ＩＩＩ）錯体は、上記の新規の二官能性キレートを用いて、例えばアミノ糖または蛋白質の有機骨格へ結合されることができる。殊に好ましい実施態様において、錯体は、非共有的に、例えば疎水性側鎖を介して生体分子、例えばヒト血清アルブミンにカップリングされることができる。ＭＲＩにおいて造影剤として使用される前記の高分子量の凝集体の効率は、分離された錯体の効率よりも高い。特に、非共有接合体は、血中でのよりいっそう長い半減期を有し、その後によりいっそう遅い薬物速度を有する。
【００２８】
組成物は、好ましくは注射可能な液体である。しかし、投与および調製の他の形も可能であることに注意しなければならない。本明細書中では、金属キレート錯体、特に生体分子、例えばポリペプチド、ペプチド、糖類および／または核酸に共役結合した金属キレート錯体のための公知の投与プロトコルが引用されている。
【００２９】
最後に、本発明は、被験者に診断学的または治療学的に必要とされる有効量の化合物、金属錯体または上記のような接合体を製薬学的認容性の担持剤、希釈剤または助剤と一緒に投与する方法に関する。
【００３０】
実施例
二官能性キレートの合成
別記しない限り、商業的な化学薬品を合成に使用した。
【００３１】
例１
ＤＯ３Ａ−Ｐ（１）の合成
【００３２】
【化２】
2005523235.tif 000003
【００３３】
ＤＯ３Ａ  １ｇ（２．８９ｍｍｏｌ）およびＨＰ（Ｏ）（ＯＥｔ）２  １．８５ｍｌ（１４．４ｍｍｏｌ、５当量）を、還流凝縮器を備えた２５ｍｌのフラスコ中でＨＣｌ  ５ｍｌ（１：１）に溶解した。フラスコをアルゴンでフラッシュした。８０℃で、（ＣＨ２Ｏ）ｎ０．５２ｇ（１７．３ｍｍｏｌ、６当量）を５時間に亘ってフラスコ中に徐々に添加した。反応混合物を温和な還流下に５０時間、加熱した。溶剤をロータリーエバポレーター上で除去し、残留物を水２ｍｌに溶解し、木炭で脱色した（１日、６０℃で攪拌する）。木炭を濾別し、濾液を濃縮し、Dowex 50 カラム（１００ｍｌ、Ｈ＋形）上に入れた。非アミン系不純物を水（２００ｍｌ）で溶出させ、環状化合物を５％のアンモニア水によって溶出させた。アミンを含有する画分を真空中で蒸発させ、残留物を水２ｍｌに溶解した。溶液をAmberlite 50CGカラム（１００ｍｌ）上に入れ、カラムを水で溶離した。最初の幾つかの４０ｍｌの画分は、純粋な生成物を含有し、後の画分は、未反応のＤＯ３Ａおよび幾らかの未確認の不純物を含有する。純粋なリガンドを含有する画分を蒸発させた。残留物を水５ｍｌに溶解し、短時間木炭と一緒に加熱し、濾過し、溶液を再び蒸発させた。残留物を水１ｍｌに溶解した。溶液を強力に攪拌したＥｔＯＨ（２５０ｍｌ）中に徐々に滴下した。この溶液を一晩中、置き、遠心分離し、ＥｔＯＨで洗浄し、真空中で数時間、５０℃で乾燥させた。白色の固体を放置し、一晩中、空気湿分で平衡にした。収量ＤＯ３Ａ−Ｐ・３Ｈ２Ｏ  １．１５ｇ（８１％）。化合物をＮＭＲを用いて分析した。
【００３４】
【化３】
2005523235.tif 000004
【００３５】
例２
ＤＯ３Ａ−Ｐ（１）の合成
例１の場合と同じ方法を使用したが、燐酸（１．１８ｇ）をジエチルエステルの代わりに使用した。１の三水和物の収量は、０．９５ｇであった。
【００３６】
例３
ＤＯＳＡ−ＰＭｅ（３）の合成
【００３７】
【化４】
2005523235.tif 000005
【００３８】
ａ）ＭｅＰＯ２Ｈ２（２）の合成（引続き、刊行物のK. Issleib et al., Z. Anorg. Allg. Chem. 1985, 530, 16およびE. A. Boyd et al., Tetrahedron Lett. 1994, 35, 4223に記載の方法を実施した）
ヘキサメチルジシラザン１２０ｍｌ中の無水ＮＨ４Ｈ２ＰＯ２  ２０．８ｇの微細な懸濁液を６時間（形成されたアンモニアを排気した）、アルゴン雰囲気下に還流し、中間体のＨＰ（ＯＳｉＭｅ３）２の溶液を生じた。０℃に冷却した後、無水ＣＨ２Ｃｌ２を添加した。無水ＣＨ２Ｃｌ２  ５０ｍｌ中のＭｅｌの溶液（１５．６ｍｌ、０．２５ｍｏｌ）を冷却（０℃）下で攪拌しながらホスフィン溶液中に徐々に滴下した。反応混合物を一晩中、室温で攪拌した。メタノール（２０ｍｌ）を冷却下に添加し、３０分後、溶液を濾過した。揮発分をロータリーエバポレーターを用いて除去し、次の工程にとって十分に純粋な油を留めた。化合物をＮＭＲを用いて分析した。
【００３９】
ｂ）ＭｅＰＯ２Ｈ２のエステル化（刊行物Y.R. Dumond et al., Org. Lett. 2000, 2, 3341に記載の方法に基づく）
前記例からの酸２（１０ｇ、０．１２５ｍｏｌ）をＴＨＦ１００ｍｌに溶解し、Ｓｉ（ＯＭｅ）４またはＳｉ（ＯＥｔ）４  ２０ｍｌを徐々に滴加した。この混合物を一晩中、還流させ、揮発分をロータリーエバポレーターを用いて除去した。残留物をアセトニトリルとヘキサンとの間に分配した。アセトニトリル相を傾瀉し、溶剤をロータリーエバポレーターを用いて除去し、残留物を短いカラム上で蒸留した。ＭｅＰ（Ｏ）（Ｈ）（ＯＭｅ）の収率は、７５％（沸点６５〜６９℃／１５torr）であり、ＭｅＰ（Ｏ）（Ｈ）（ＯＥｔ）の収率は、８１％（沸点８３〜８７℃／１５torr）であった。化合物をＮＭＲを用いて分析した。
エチルエステル：３１Ｐ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：３２．８ｐｐｍ（１Ｊ（ＰＨ）＝５４５Ｈｚ）
メチルエステル：３１Ｐ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：３１．３ｐｐｍ（１Ｊ（ＰＨ）＝５５５Ｈｚ）
ｃ）ＤＯ３ＡとＭｅＰＯ２Ｈ２（２）との反応。ＤＯ３Ａ−ＰＭｅ（３）の形成。
【００４０】
ＤＯ３Ａ  １ｇ（２．３ｍｍｏｌ）およびＭｅＰＯ２Ｈ２（２）  ０．５２ｇ（１０ｍｍｏｌ、４．５当量）を還流凝縮器を備えた５０ｍｌのフラスコ中で共沸ＨＣｌ  １０ｍｌに溶解した。この溶液をアルゴンで１０分間泡立たせた。アルゴンの下で、ＣＨ２Ｏ水溶液０．５ｍｌ（３６％、３当量）をフラスコ中に添加した。この反応混合物を温和な還流温度で２４時間加熱した。付加的に、ＣＨ２Ｏ水溶液０．５ｍｌ（３６％、３当量）を添加し、この混合物をさらに６時間還流させた。溶剤をロータリーエバポレーターを用いて除去し（不活性雰囲気は、不要である）、残留物を水２ｍｌに溶解に、木炭で脱色し、Dowex 50 カラム（１００ｍｌ、Ｈ＋形）上に入れた。非アミン系不純物を水（２００ｍｌ）で溶出させ、環状化合物を５％のアンモニア水によって溶出させた。アミンを含有する画分を真空中で蒸発させ、残留物を水２ｍｌに溶解した。溶液をAmberlite 50CGカラム（１００ｍｌ）上に入れ、カラムを水で溶離した。最初の２つの１００ｍｌの画分は、純粋な生成物を含有し、画分４および５は、純粋な内部ラクタム（１６）を含有していた。純粋な化合物を含有する画分を蒸発させ、濃厚なＨＣｌ１ｍｌに溶解した。ＴＨＦ（５０ｍｌ）を徐々に（３時間）攪拌しながら溶液中に滴加した。固体を濾過し、ＴＨＦで洗浄し、真空中でＰ２Ｏ５上で乾燥させた。収量は、ＤＯ３Ａ−ＰＭｅ・２ＨＣｌ・３Ｈ２Ｏ  ０．７８ｇ（３・２ＨＣｌ・３Ｈ２Ｏ）およびＤＯ３Ａ−ラクタム・２ＨＣｌ・２Ｈ２Ｏ  ０．２０ｇ（４・２ＨＣｌ・２Ｈ２Ｏ）であった。
【００４１】
化合物をＮＭＲを用いて分析した。
【００４２】
【化５】
2005523235.tif 000006
【００４３】
ｄ）ＤＯ３ＡとＭｅＰ（Ｏ）（Ｈ）（ＯＥｔ）との反応。ＤＯ３Ａ−ＰＭｅ（３）の形成
例１ｃと同様の方法を使用するが、酸（２）の代わりにそのエチルエステル（１．１３ｇ）を使用した。（３）の塩酸塩水和物の収量は、０．７３ｇであった。
【００４４】
例４
ＤＯ３Ａ−ＰＢｎ（６）の合成
【００４５】
【化６】
2005523235.tif 000007
【００４６】
ａ）ベンジルホスフィン酸ＰｈＣＨ２ＰＯ２Ｈ２（５）ならびにそのメチルエステルおよびエチルエステルの合成
酸を化合物（７）の場合と同様に、Ｍｅｌの代わりにＮＨ４Ｈ２ＰＯ２  １０．４ｇ（０．１２５ｍｏｌ）および臭化ベンジル（１０．８ｇ、０．０６３ｍｏｌ）を用いて調製し、次のように精製した。溶剤除去後の油を水に溶解し、沈殿したＢｎ２ＰＯ２Ｈ（＝（ＰｈＣＨ２）２ＰＯ２Ｈ）を濾別し、水で洗浄した。水を真空中で除去し、残留物をAmberlite 50CG上で水での溶離を用いてクロマトグラフィー処理した。純粋なＢｎＰＯ２Ｈ２を含有する画分をプールし、水の蒸発により、結晶性ＰｈＣＨ２ＰＯ２Ｈ２を５４％の収率で留めた。化合物をＮＭＲを用いて分析した。
【００４７】
【化７】
2005523235.tif 000008
【００４８】
ベンジルホスフィン酸のエステル化（メチルエステルおよびエチルエステル）をメチルホスフィン酸（２）のエステル化と同様に実施し、その後、蒸留した（１１０〜１１５℃／０．０２５torrでのエチルエステル）。
【００４９】
ｂ）ベンジルホスフィン酸ＰｈＣＨ２ＰＯ２Ｈ２（５）の合成
エステルＰ（ＯＳｉＭｅ３）（２６．８ｇ、０．１ｍｏｌ）を無水ＣＨ２Ｃｌ２  １００ｍｌに溶解した。臭化ベンジル（１７．１ｇ、０．１ｍｏｌ）を無水ＣＨ２Ｃｌ２  １００ｍｌに溶解し、攪拌しながらシリルエステル溶液に徐々に滴加し、冷却した。この溶液を一晩中、室温で放置した。ＭｅＯＨ（３０ｍｌ）を添加し、揮発分をロータリーエバポレーターを用いて除去した。残留物をＥｔＯＨ  ２５ｍｌに溶解し、濃厚なＨＣｌ  ２５ｍｌを添加し、溶液を一晩中、還流した。溶剤を真空中で蒸発させた。残留物を水に溶解し、木炭によって脱色させ、蒸発するまで乾燥させ、生成物を９１％の収率で生じた。
【００５０】
ｃ）ベンジルホスフィン酸ＰｈＣＨ２ＰＯ２Ｈ２（５）の合成
エステルＨＰ（Ｏ）（ＯＥｔ）（ＣＨ）（ＯＥｔ）２）のナトリウム塩の溶液（エステル９．８１ｇから形成した、０．０５ｍｌ）を、無水ＥｔＯＨ１０ｍｌ中のＮａＯＥｔ溶液（等量のＮａから形成した）を滴下することによって、トルエン３０ｍｌ中のエステル溶液から出発して調製した。臭化ベンジル（８．５５ｇ、０．０５ｍｏｌ）のトルエン（１０ｍｌ）溶液をナトリウム塩溶液に滴加し、この混合物を室温で２０時間、攪拌した。溶剤をロータリーエバポレーターを用いて除去し、保護されたエステルを還流するＨＣｌ水溶液中で加水分解した。真空中での蒸発後、ベンジルホスフィン酸をAmberlite 50CGカラム上で水で溶離させながら精製した。収率は、７５％であった。
【００５１】
ｄ）ＤＯ３ＡとＣ６Ｈ５ＣＨ２ＰＯ２Ｈ２（５）との反応。ＤＯ３Ａ−ＰＢｎ（６）の形成
ＤＯ３Ａ  ０．６５ｇ（１．５ｍｍｏｌ）およびＣ６Ｈ５ＣＨ２ＰＯ２Ｈ２（５）０．９ｇ（６．７ｍｍｏｌ、４．５当量）を、還流凝縮器を備えた５０ｍｌのフラスコ中で共沸ＨＣｌ  １０ｍｌに溶解した。フラスコをアルゴンでフラッシュした。ＣＨ２Ｏ水溶液０．５ｍｌ（３６％、３当量）をフラスコ中に添加した。反応混合物を温和な還流下に２４時間、加熱した。付加的に、ＣＨ２Ｏ水溶液０．５ｍｌ（３６％、３当量）を添加し、混合物をさらに３０時間還流した。溶剤をロータリーエバポレーターを用いて除去し、残留物を水２ｍｌに溶解し、木炭で脱色し、Dowex 50 カラム（１００ｍｌ、Ｈ＋形）上に入れた。非アミン系不純物を水（２００ｍｌ）で溶出させ、環状化合物を５％のアンモニア水によって溶出させた。アミンを含有する画分を真空中で蒸発させ、残留物を水２ｍｌに溶解した。溶液をAmberlite 50CGカラム（１００ｍｌ）上に入れ、カラムを水で溶離した。最初の２つの１００ｍｌの画分は、純粋な生成物を含有し、後の画分は、内部ラクタムおよび未反応のＨ３ｄｏ３ａを含有していた。純粋なキレートを含有する画分を蒸発させ、残留物を水１ｍｌに溶解した。ＴＨＦ（５０ｍｌ）を攪拌しながら溶液中に滴加した。固体を濾過し、ＴＨＦで洗浄し、真空中でＰ２Ｏ５上で乾燥させた。収量は、三水和物として単離されたＤＯ３Ａ−ＰＢｎ０．５１ｇであった。化合物を分析した。
【００５２】
【化８】
2005523235.tif 000009
【００５３】
例５
ＤＯ３Ａ−ＰＢｎ（６）の合成
例４の方法と同様の方法を使用したが、酸それ自体（４）の代わりに、そのメチルエステル（１．１５ｇ）を使用した。収量は、０．７３ｇであった。
【００５４】
例６
ＤＯ３Ａ−ＰＨ（７）の合成
【００５５】
【化９】
2005523235.tif 000010
【００５６】
ＤＯ３Ａ  １ｇ（２．３ｍｍｏｌ）およびＨ３ＰＯ２  ０．６６ｇ（１０ｍｍｏｌ、４．５当量）を５０ｍｌのフラスコを用いて水１０ｍｌおよび濃厚なＨＣｌ  ２ｍｌに溶解した。フラスコをゴム栓で密閉し、アルゴンでフラッシュした。ＣＨ２Ｏ水溶液０．８２ｇ（３６％、４．５当量）をフラスコ中に添加した。反応混合物を８０℃で２０時間加熱した。溶剤をロータリーエバポレーターを用いて除去し、残留物を水２ｍｌに溶解し、木炭で脱色し、Dowex 50 カラム（１００ｍｌ、Ｈ＋形）上に入れた。非アミン系不純物を水（２００ｍｌ）で溶出させ、環状化合物を５％のアンモニア水によって溶出させた。アミンを含有する画分を真空中で蒸発させ、残留物を水２ｍｌに溶解した。溶液をAmberlite 50CGカラム（１００ｍｌ）上に入れ、カラムを水で溶離した。最初の２つの１００ｍｌの画分は、純粋な生成物を含有し、画分４および５は、純粋な内部ラクタムを含有していた。純粋な化合物を含有する画分を蒸発させ、濃厚なＨＣｌ  ２ｍｌに溶解した。ＴＨＦ（５０ｍｌ）を徐々に（３時間）攪拌しながら溶液中に滴加した。固体を濾過し、ＴＨＦで洗浄し、真空中でＰ２Ｏ５上で乾燥させた。収量は、Ｈ４ｄｏ３ａ−ＰＨ・２ＨＣｌ・２Ｈ２Ｏ  ０．６５〜０．７３ｇ（７・２ＨＣｌ・２Ｈ２Ｏ）およびＨ２ｄｏ３ａ−ラクタム・２ＨＣｌ・２Ｈ２Ｏ  ０．１５〜０．２０ｇ（４・２ＨＣｌ・２Ｈ２Ｏ）であった。
【００５７】
化合物をＮＭＲを用いて分析した。
【００５８】
【化１０】
2005523235.tif 000011
【００５９】
例７
ＤＯ３Ａ−ＰＣＨ２ＯＨ（８）の合成
【００６０】
【化１１】
2005523235.tif 000012
【００６１】
例６のリガンド７の合成のための方法と同様の方法を使用するが、しかし、次亜リン酸０．３ｇ（２当量）およびホルムアルデヒド水溶液１０当量（１．８ｇ）だけを使用した。精製後、溶液を蒸発させ、残留物を濃厚なＨＣｌ  １ｍｌに溶解した。ＴＨＦを溶液中に徐々に滴加し、白色のゴムを生じた。このゴムを数回、ＴＨＦで擦り、白色の粉末を生じさせ、この粉末を真空デシケーター中で乾燥させた。Ｈ４ｄｏ３ａ−ＰＨ・２ＨＣｌ・２Ｈ２Ｏ（８・２ＨＣｌ・２Ｈ２Ｏ）の収量は、０．４７ｇであった。化合物を分析した。
【００６２】
【化１２】
2005523235.tif 000013
【００６３】
例８
ＤＯ３Ａ−ＰＣＨ２ＯＨ（８）の合成
ＤＯ３Ａ−ＰＨ（７）０．６０ｇ（１．１ｍｍｏｌ）を等量のＨＣｌ  １０ｍｌ（１：１）および等量のＣＨ２Ｏ  ５ｍｌ（３７％）中で還流させた。例７と同様に精製しかつ乾燥させた後の収量は、０．９５ｇであった。
【００６４】
例９
Ｈ4ｄｏ３ａ−ＰＢｎＮＯ２（１０）の合成
【００６５】
【化１３】
2005523235.tif 000014
【００６６】
ａ）ｐ−ニトロベンジルホスフィン酸（４−ＮＯ２−Ｃ６Ｈ４）ＣＨ２ＰＯ２Ｈ２（ＰＮＢＰＡ、９）ならびにそのメチルエステルおよびエチルエステルの合成
シリルエステルＰ（ＯＳＩＭｅ３）（ＯＥｔ）（ＣＨ（ＯＥｔ）２）（２６．８ｇ、０．１ｍｏｌ）を無水ＣＨ２Ｃｌ２  １００ｍｌに溶解した。ｐ−ニトロベンジルブロミド１００ｍｌ（２１．６ｇ、０．１ｍｏｌ）を無水ＣＨ２Ｃｌ２  １００ｍｌに溶解し、攪拌しながらシリルエステル溶液中に徐々に滴加し、冷却した。この溶液を一晩中、室温で放置した。ＭｅＯＨ（３０ｍｌ）を添加し、揮発分をロータリーエバポレーターを用いて除去した。残留物をＥｔＯＨ  ２５ｍｌに溶解し、濃厚なＨＣｌ  ２５ｍｌを添加し、溶液を一晩中、還流させた。溶剤を真空中で蒸発させた。残留物を沸騰水（１００ｍｌ）に溶解し、木炭２ｇを添加した。濾過および冷蔵庫中での冷却の後、生成物の第１の画分を結晶させ、これを濾別し、空気で乾燥させた。更に、画分を濾液の濃縮後に得ることができる。全ての収率は、８７％であった。化合物をＮＭＲを用いて分析した。
【００６７】
【化１４】
2005523235.tif 000015
【００６８】
メチルエステルおよびエチルエステルをＭｅＰＯ４Ｈ２（２）のエステル（例２ｂ）と同様の方法によって調製した（Y.R. Dumond et al., Supraによる刊行物に記載の方法を続けた）。精製を蒸留の代わりにＳｉＯ２上でのクロマトグラフィーによって達成させた。
ｂ）ｐ−ニトロベンジルホスフィン酸（４−ＮＯ２−Ｃ６Ｈ４）ＣＨ２ＰＯ２Ｈ２（ＰＮＢＰＡ、９）の合成
この化合物をＮＨ４Ｈ２ＰＯ２８．３ｇ（０．１ｍｏｌ）およびｐ−ニトロベンジルブロミド（１３．４ｇ、０．０５ｍｏｌ）を用いて化合物２と同様に合成、例９ａの記載と同様に精製した。収率は、１５％であった。
【００６９】
ｃ）ＤＯ３Ａとｐ−ＮＯ２Ｃ６Ｈ４ＣＨ２ＰＯ２Ｈ２（９）との反応。ＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＯ２（１０）の形成
Ｈ３ｄｏ３ａ  ０．５ｇ（１．７ｍｍｏｌ）およびｐ−ＮＯ２Ｃ６Ｈ４ＣＨ２ＰＯ２Ｈ２ １ｇ（９）（５．１ｍｍｏｌ、３当量）を、還流凝縮器を備えた５０ｍｌのフラスコ中で共沸ＨＣｌ  １０ｍｌに溶解した。フラスコをアルゴンでフラッシュした。ＣＨ２Ｏ水溶液０．２ｍｌ（３６％、１当量）をフラスコ中に添加した。反応混合物を温和な還流下に２４時間、加熱した。付加的に、ＣＨ２Ｏ水溶液０．５ｍｌ（３６％、２．５当量）を添加し、この混合物をさらに４８時間還流させた。溶剤をロータリーエバポレーターを用いて除去し、残留物を水２ｍｌに溶解に、木炭で脱色し、Dowex 50 カラム（１００ｍｌ、Ｈ＋形）上に入れた。非アミン系不純物を水（２００ｍｌ）で溶出させ、引続き水−ＥｔＯＨ混合物で溶出させ（１：１、６００ｍｌ；出発酸およびカラム副生成物の除去）、環状化合物を５％のアンモニア水によって溶出させた。アミンを含有する画分を真空中で蒸発させ、残留物を水２ｍｌに溶解した。溶液をAmberlite 50CGカラム（１００ｍｌ）上に入れ、カラムを水で溶離した。最初の２つの１００ｍｌの画分は、純粋な生成物を含有し、後の画分は、幾らかの内部ラクタムおよび未反応のＨ３ｄｏ３ａを含有していた。純粋なキレートを含有する画分を蒸発させ、残留物を水１ｍｌに溶解した。ＴＨＦ（５０ｍｌ）を徐々に（３時間）攪拌しながら溶液中に滴加した。固体を濾過し、ＴＨＦで洗浄し、真空中でＰ２Ｏ５上で乾燥させた。また、リガンドの水溶液を攪拌した無水ＥｔＯＨ（１００ｍｌ）に滴加し、単離し、上記と同様に乾燥させた。収量は、ＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＯ２・３Ｈ２Ｏ  ０．３８ｇであった。化合物を分析した。
【００７０】
【化１５】
2005523235.tif 000016
【００７１】
例１０
ＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＨ２（１１）の合成
【００７２】
【化１６】
2005523235.tif 000017
【００７３】
ニトロ化合物１０（０．１ｇ）を水５ｍｌに溶解し、この溶液を蟻酸０．５ｍｌで酸性に変え、１０％Ｐｄ／Ｃ  ０．０１ｇを添加した。この混合物を４８時間攪拌しながら水素の（大気圧）下で維持した。触媒を濾別した。溶剤をロータリーエバポレーターを用いて除去し、残留物を水２ｍｌに溶解し、木炭で脱色し、Dowex 50 カラム（１００ｍｌ、Ｈ＋形）上に入れた。非アミン系不純物を水（２００ｍｌ）で溶出させ、引続き水（５００ｍｌ）で溶出させ、環状化合物を５％のアンモニア水によって溶出させた。アミンを含有する画分を真空中で蒸発させ、残留物を水２ｍｌに溶解した。溶液をAmberlite 50CGカラム（１００ｍｌ）上に入れ、カラムを水で溶離した。純粋な生成物を含有する最初の２つの１００ｍｌの画分を蒸発させ、残留物を合わせ、水１ｍｌに溶解した。ＴＨＦ（５０ｍｌ）を攪拌しながら溶液中に徐々に（３時間）滴加した。固体を濾過し、ＴＨＦで洗浄し、真空中でＰ２Ｏ５上で乾燥させた。また、リガンドの水溶液を攪拌した無水ＥｔＯＨ（１００ｍｌ）に滴加し、単離し、上記と同様に乾燥させた。収量は、ＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＨ２・３Ｈ２Ｏ  ０．０８７ｇであった。化合物を分析した。
【００７４】
【化１７】
2005523235.tif 000018
【００７５】
例１１
ＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＨ２（１１）の合成
ＥｔＯＨ：濃厚なＮＨ３水（１：１）混合物をＨ２Ｓで飽和し、ニトロ化合物１０を添加した（０．１ｇ）。この混合物を６時間還流させた。この時間の間、溶液を４回Ｈ２Ｓで飽和した。溶剤を懸濁液から蒸発させた。残留物を５回ＡｃＯＨに溶解し、蒸発させ（Ｈ２Ｓの除去および硫黄の凝固）、水に溶解し、この溶液を木炭の束を通して濾過した。Amberlite 50CG上での精製（水を用いての溶離）により、生成物（例１０の場合と同様の蒸発および結晶化の後、約０．０３１ｇ、第２のバンドとして溶離した）および大量の出発酸を生じた。
【００７６】
例１２
ＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＢｎ２（１３）の合成
【００７７】
【化１８】
2005523235.tif 000019
【００７８】
ａ）（ＰｈＣＨ２）２ＮＣＨ２ＰＯ２Ｈ２（１２）およびそのエステルの合成
（ＰｈＣＨ２）２ＮＨ３．９５ｇ（０．０２ｍｏｌ）および５０％Ｈ３ＰＯ２  ２．６４ｇ（０．０３ｍｏｌ）を水２５ｍｌに溶解した。ホルムアルデヒド水溶液（３０％、１．２ｇ、０．０４ｍｏｌ）を１００℃の温度で溶液中に徐々に滴加した。この溶液を５時間還流させた。冷却後、揮発分を真空中で除去した。残留物を最小量の水に溶解し、Dowex 50上で精製した。酸を水を用いての溶離によって除去し、生成物を１％のアンモニア水で溶出した。生成物を含有する画分を蒸発させ、無水ＴＨＦで残留油を擦ることにより、白色の固体３５％を生じた。化合物をＮＭＲを用いて分析した。
【００７９】
【化１９】
2005523235.tif 000020
【００８０】
燐原子上のメチルエステルおよびエチルエステルをＭｅＰＯ２Ｈ２のエステル（２）（例２ｂ）と同様の方法で調製し、蒸留の代わりにＳｉＯ２でのクロマトグラフィーによって精製した（引続き、Y.R. Dumond et al., Supraによる刊行物に記載の方法を実施した）。
ｂ）ＤＯ３ＡとＢｎ２ＮＣＨ２ＰＯ２Ｈ２（１２）との反応。ＤＯ３Ａ−ＰＣＨ２ＮＢｎ２（１３）の形成
ＤＯ３Ａ  ０．６５ｇ（１．５ｍｍｏｌ）およびＢｎ２ＮＣＨ２ＰＯ２Ｈ２（１２）  １．８６ｇ（６．７ｍｍｏｌ、４．５当量）を還流凝縮器を備えた５０ｍｌのフラスコ中で共沸ＨＣｌ  １０ｍｌに溶解した。フラスコをアルゴンでフラッシュした。ＣＨ２Ｏ水溶液０．５ｍｌ（３６％、３当量）をフラスコ中に添加した。この反応混合物を温和な還流温度で２４時間加熱した。付加的に、ＣＨ２Ｏ水溶液０．５ｍｌ（３６％、３当量）を添加し、この混合物をさらに６時間還流させた。溶剤をロータリーエバポレーターを用いて除去し、残留物を水２ｍｌに溶解に、木炭で脱色し、Dowex 50 カラム（１００ｍｌ、Ｈ＋形）上に入れた。非アミン系不純物を水（２００ｍｌ）で溶出させ、環状化合物を５％のアンモニア水によって溶出させた。アミンを含有する画分を真空中で蒸発させ、残留物を水２ｍｌに溶解した。溶液をAmberlite 50CGカラム（１００ｍｌ）上に入れ、カラムを水で溶離した。最初の４つの１００ｍｌの画分は、純粋な生成物を含有していた。純粋なキレートを含有する画分を蒸発させ、残留物を水１ｍｌに溶解した。ＴＨＦ（１００ｍｌ）を徐々に（５時間）攪拌しながら溶液中に滴加した。固体を濾過し、ＴＨＦで洗浄し、真空中でＰ２Ｏ５上で乾燥させた。収量は、ＤＯ３Ａ−ＰＣＨ２ＮＢｎ  ０．９５ｇであった。
【００８１】
化合物をＮＭＲを用いて分析した。
【００８２】
例１３
ＤＯ３Ａ−ＰＣＨ２ＮＨ２（１４）の合成
【００８３】
【化２０】
2005523235.tif 000021
【００８４】
ジベンゾイルアミノリガンド１３（０．１５ｇ）を水１０ｍｌに溶解し、この溶液を蟻酸０．５ｍｌで酸性に変え、１０％Ｐｄ／Ｃ０．０２ｇを添加した。この混合物を水素の（大気圧）下で維持し、２４時間攪拌した。触媒を濾別した。溶剤をロータリーエバポレーターを用いて除去し、残留物を水２ｍｌに溶解に、木炭で脱色し、Dowex 50 カラム（１００ｍｌ、Ｈ＋形）上に入れた。非アミン系不純物を水（２００ｍｌ）で溶出させ、引続き水（５００ｍｌ）で溶出させ、環状化合物を５％のアンモニア水によって溶出させた。アミンを含有する画分を真空中で蒸発させ、残留物を水２ｍｌに溶解した。溶液をAmberlite 50CGカラム（１００ｍｌ）上に入れ、カラムを水で溶離した。純粋な生成物を含有する最初の３つの１００ｍｌの画分を蒸発させ、残留物を濃厚なＨＣｌ２ｍｌに溶解した。ＴＨＦ（１００ｍｌ）を徐々に（５時間）攪拌しながら溶液中に滴加した。固体を濾過し、ＴＨＦで洗浄し、真空中でＰ２Ｏ５上で乾燥させた。収量は、ＤＯ３Ａ−ＰＣＣＨ２ＮＨ２・２ＨＣｌ・？Ｈ２Ｏ  ０．０７３ｇ（１３・２ＨＣｌ・？Ｈ２Ｏ）であった。
【００８５】
化合物をＮＭＲを用いて分析した。
【００８６】
例１４
ＤＯ３Ａ−ＰＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ（１６）の合成
【００８７】
【化２１】
2005523235.tif 000022
【００８８】
ａ）ＨＯＯＣＣＨ２ＣＨ２ＰＯ２Ｈ２（１５）およびそのエステルの合成
エチルアクリレート（２．００ｇ、０．０２ｍｏｌ）およびエステル（３．９２ｇ、０．０２ｍｏｌ）をトルエン２０ｍｌに溶解し、ＮａＯＥｔ溶液（ＥｔＯＨ１０ｍｌ中のＮａ  ０．４６ｇおよびトルエン１０ｍｌから形成された）を滴加した。この混合物を室温で２０時間攪拌した。溶剤をロータリーエバポレーターを用いて除去し、保護されたエステルを還流するＨＣｌ水溶液中で加水分解した。真空中での蒸発後、生成物をDowex 50 カラム上でＨ＋作業周期で精製した。酸を水で溶出させ、真空中での蒸発後に、生成物を澄明な油として７５％の収率で得た。化合物をＮＭＲを用いて分析した。
【００８９】
【化２２】
2005523235.tif 000023
【００９０】
燐原子上のメチルエステルおよびエチルエステルをＭｅＰＯ２Ｈ２のエステル（２）（例２ｂ）と同様の方法で調製し、蒸留の代わりにＳｉＯ２でのクロマトグラフィーによって精製した（引続き、Y.R. Dumond et al., Supraによる刊行物に記載の方法を実施した）。
【００９１】
ｂ）ＨＯＯＣＣＨ２ＣＨ２ＰＯ２Ｈ２（１５）の合成（引続き、A.E. Wroblewski et al. J. Am. Chem. Soc. 1996, 118, 10168による刊行物の記載の方法を実施した）
メチルアクリレート（２．１５ｇ、０．０２５ｍｏｌ）をＨＣ（ＯＭｅ）３  ２０ｍｌに溶解し、混合物を室温で２４時間維持した。揮発分をロータリーエバポレーターを用いて除去し、残留する油を真空（０．２torr）で４０℃で１５時間加熱した。残留物は、殆んど純粋なＭｅＯＯＣＣＨ２ＣＨ２Ｐ（Ｏ）（Ｈ）（ＯＭｅ）から構成されている。この残留物を共沸ＨＣｌに溶解し、一晩中、還流させた。酸を例１４ａと同様に精製した。
【００９２】
ｃ）ＤＯ３ＡとＨＯＯＣＣＨ２ＣＨ２ＰＯ２Ｈ２（１５）との反応。ＤＯ３Ａ−ＰＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ（１６）の形成
ＤＯ３Ａ  ０．６５ｇ（１．５ｍｍｏｌ）およびＨＯＯＣＣＨ２ＣＨ２ＰＯ２Ｈ２（１５）０．９３ｇ（６．７ｍｍｏｌ、４．５当量）を、還流凝縮器を備えた５０ｍｌのフラスコ中で共沸ＨＣｌ  １０ｍｌに溶解した。フラスコをアルゴンでフラッシュした。ＣＨ２Ｏ水溶液０．５ｍｌをフラスコ中に添加した。反応混合物を温和な還流下に２４時間、加熱した。付加的にＣＨ２Ｏ水溶液０．５ｍｌ（３６％、３当量）を添加し、混合物をさらに６時間還流した。溶剤をロータリーエバポレーターを用いて除去し、残留物を水２ｍｌに溶解し、木炭で脱色し、Dowex 50 カラム（１００ｍｌ、Ｈ＋形）上に入れた。非アミン系不純物を水（２００ｍｌ）で溶出させ、環状化合物を５％のアンモニア水によって溶出させた。アミンを含有する画分を真空中で蒸発させ、残留物を水２ｍｌに溶解した。溶液をAmberlite 50CGカラム（１００ｍｌ）上に入れ、カラムを水で溶離した。最初の４つの１００ｍｌの画分は、純粋な生成物を含有していた。純粋なキレートを含有する画分を蒸発させ、残留物を水１ｍｌに溶解した。ＴＨＦ（１００ｍｌ）を徐々に（５時間）攪拌しながら溶液中に滴加した。固体を濾過し、ＴＨＦで洗浄し、真空中でＰ２Ｏ５上で乾燥させた。また、リガンドの水溶液を攪拌した無水ＥｔＯＨ（１００ｍｌ）に滴加し、単離し、上記と同様に乾燥させた。収量は、ＤＯ３Ａ−ＰＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ・３Ｈ２Ｏ  ０．６７ｇであった。化合物を分析した。
【００９３】
【化２３】
2005523235.tif 000024
【００９４】
例１５
ＤＯ３Ａ−Ｐ（１７、Ｅｔ５ＤＯ３Ａ−Ｐ）のペンタエチルエステルの合成
【００９５】
【化２４】
2005523235.tif 000025
【００９６】
ＤＯ３Ａのトリエチルエステル０．５ｇ（１．１６ｍｍｏｌ）およびジエチルホスファイト０．４８ｇ（３．４８ｍｍｏｌ）を無水ベンゼン１５ｍｌに溶解し、パラホルムアルデヒド（０．１４ｇ、４当量）を少量分ずつ２時間に亘って還流溶液に添加した。水をディーン−シュタルク（Dean-Stark）装置を用いて除去した。混合物を一晩中、還流した。溶剤をロータリーエバポレーターを用いて除去し、残留物をＥｔＯＨに溶解した。溶液を木炭で脱色し、ＳｉＯ２カラム（ＥｔＯＨ：２５％ＮＨ３水＝１５：１）でクロマトグラフィーによって精製した。純粋な生成物を含有する画分を蒸発させ、淡黄色の油（５７％）を生じた。化合物をＮＭＲを用いて分析した。
【００９７】
例１６
ＤＯ３Ａ−Ｐ（１７、Ｅｔ５ＤＯ３−Ｐ）のペンタエチルエステルの合成
ＤＯ３Ａのトリエチルエステル０．５ｇ（１．１６ｍｍｏｌ）およびトリエチルホスファイト０．６６ｇ（４ｍｍｏｌ）を無水ベンゼン１５ｍｌに溶解し、パラホルムアルデヒド（０．１４ｇ、４当量）を少量分ずつ２時間に亘って還流溶液に添加した。混合物を一晩中、還流した。溶剤をロータリーエバポレーターを用いて除去し、残留物をＥｔＯＨに溶解した。溶液を木炭で脱色し、ＳｉＯ２カラム（ＥｔＯＨ：２５％ＮＨ３水＝１５：１）でクロマトグラフィーによって精製した。純粋な生成物を含有する画分を蒸発させ、淡黄色の油（８４％）を生じた。
【００９８】
例１７
ＤＯ３Ａ−Ｐ（１８、ＥｔＤＯ３Ａ−Ｐ）のモノエチルエステルの合成
【００９９】
【化２５】
2005523235.tif 000026
【０１００】
エステル１７  ０．６５ｇを１ＭのＮａＯＨ  １０ｍｌに溶解し、一晩中、還流させた。水を蒸発させ、残留物を水３ｍｌに溶解した。溶液をDowex 50 カラム（ＯＨ−形）上に入れ、水で溶出させ、ナトリウムイオンを除去した。生成物を５％ＡｃＯＨでの溶出によって得た。生成物を含有する画分を乾燥するまで蒸発させ、水に溶解し、数回蒸発させ、過剰量のＡｃＯＨを除去した。残留物を水１ｍｌに溶解し、生成物１８を無水ＥｔＯＨ（７６％）の添加によって沈殿させた。化合物をＮＭＲを用いて分析させた。
【０１０１】
例１８
ＤＯ３Ａ−Ｐ（１）の合成
化合物１７（０．６５ｇ）を共沸ＨＣｌに溶解し、一晩中、還流させた。反応混合物を例１の場合と同様に精製し、三水和物を９２％の収率で生じた。化合物１のバッチ量を例１の場合のバッチ量と同一の分光分析データーで生じた。
【０１０２】
例１９
ＤＯ３Ａ−ＰＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨのトリ−ｔ−ブチルエステル（１９）の合成
【０１０３】
【化２６】
2005523235.tif 000027
【０１０４】
ＤＯ３Ａのトリ−ｔ−ブチルエステル１．００ｇ（１．９４ｍｍｏｌ）および酸１５のＰ−エチルエステル１．３３ｇ（８ｍｍｏｌ）を無水ベンゼン２０ｍｌに溶解し、パラホルムアルデヒド（０．１４ｇ、４当量）を少量分ずつ３時間に亘って還流溶液に添加した。水をディーン−シュタルク（Dean-Stark）装置を用いて除去した。混合物を一晩中、還流した。溶剤をロータリーエバポレーターを用いて除去し、残留物をＥｔＯＨに溶解した。溶液を木炭で脱色し、ＳｉＯ２カラム（ＥｔＯＨ：２５％ＮＨ３水＝１０：１）でクロマトグラフィーによって精製した。純粋な生成物を含有する画分を蒸発させ、淡黄色の油（７３％）を生じた。化合物は、標的部位にカップリングするのに十分に純粋であった。化合物をＮＭＲを用いて分析した。
【０１０５】
例２０
ＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＯ２のテトラエチルエステル（２０）の合成
【０１０６】
【化２７】
2005523235.tif 000028
【０１０７】
ＤＯ３Ａのトリエチルエステル０．５ｇ（１．１６ｍｍｏｌ）および酸８のエチルエステル１．１５ｇ（５ｍｍｏｌ）を無水ベンゼン１５ｍｌに溶解し、パラホルムアルデヒド（０．２１ｇ、６当量）を少量分ずつ５時間に亘って還流溶液に添加した。水をディーン−シュタルク（Dean-Stark）装置を用いて除去した。混合物を一晩中、還流した。溶剤をロータリーエバポレーターを用いて除去し、残留物をＥｔＯＨに溶解した。溶液を木炭で脱色し、ＳｉＯ２カラム（ＥｔＯＨ：２５％ＮＨ３水＝１０：１）でクロマトグラフィーによって精製した。純粋な生成物を含有する画分を蒸発させ、黄色の油（４５％）を生じた。化合物をＮＭＲを用いて分析した。
【０１０８】
例２１
ＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＨ２のテトラエチルエステル（２１）の合成
【０１０９】
【化２８】
2005523235.tif 000029
【０１１０】
ニトロキレート２０（０．２ｇ）をＥｔＯＨ５ｍｌに溶解し、この溶液を蟻酸０．５ｍｌで酸性に変え、１０％Ｐｄ／Ｃ  ０．０２ｇを添加した。この混合物を水素の（大気圧）下で維持し、２４時間攪拌した。触媒を濾別した。溶剤をロータリーエバポレーターを用いて除去し、残留物をＳｉＯ２カラム（ＥｔＯＨ：２５％ＮＨ３水＝１０：１）でクロマトグラフィーによって精製した。純粋な生成物を含有する画分を蒸発させ、黄色の油（８２％）を生じた。化合物をＮＭＲを用いて分析した。
【０１１１】
例２２
ＤＯ３Ａ−ＰＲのテトラエチルエステル（２２、Ｒ＝−ＣＨ２Ｃ６Ｈ４−４−（ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｂｒ））の合成
【０１１２】
【化２９】
2005523235.tif 000030
【０１１３】
アミノキレート２１（０．１５ｇ）を無水アセトニトリル３０ｍｌに溶解し、微粒状の無水Ｋ２ＣＯ３  １．５ｇを添加した。ブロモアセチルブロミド（１．１当量）を強力に攪拌された懸濁液中に徐々に滴加した。この混合物を室温で２０時間攪拌した。この混合物を濾過し、乾燥するまで蒸発させた。ＳｉＯ２上でのクロマトグラフィー後、生成物２２を６５％の収率で得た。化合物をＮＭＲを用いて分析した。
【０１１４】
他の前駆体の合成
例２３
ＨＰ（Ｏ）（ＯＥｔ）（ＣＨ）（ＯＥｔ）２）（２３）の合成
無水ホスフィン酸２０．１ｇ（０．３ｍｏｌ）をＨＣ（ＯＥｔ）３  １５０ｍｌおよび水４ｍｌに溶解した。全ての固体を溶解した後、Ｆ３ＣＣＯＯＨ４．５ｍｌを攪拌下に冷水浴を用いて冷却しながら５分間滴下した。この混合物を室温で１週間放置した。揮発分をロータリーエバポレーターを用いて除去し（浴温度最大４０℃）、残留する液体をＣＨ２Ｃｌ２  １８０ｍｌに溶解した。この溶液を燐酸塩緩衝水溶液（Ｎａ２ＨＰＯ４  ２１ｇ＜水１８０ｍｌ中の１２Ｈ２Ｏ）で抽出した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過した。溶剤をロータリーエバポレーターを用いて除去し（浴温最大４０℃）、任意の残留する溶剤を低い圧力（１torr）で約４０℃の温度で留去した。標的化合物を短いカラムで６５〜７３℃／０．２５torrで蒸留した。収率は、６８％であった（３１Ｐ  ＮＭＲ分光分析によって測定された純度＞９８％、δｐ＝２７．８ｐｐｍ（整然とした））。
【０１１５】
例２４
Ｐ（ＯＳｉＭｅ3）（ＯＥｔ）（ＣＨ（ＯＥｔ）2（２４）の合成
化合物（２３）（２８．６ｇ、０．１４６ｍｏｌ）をヘキサメチルジシラザン３８ｍｌに溶解し、アルゴンの少ない流れの下で６時間還流した。反応混合物を室温に冷却し、注意深く１トルの圧力で短いカラムを用いて分画した。５２〜５５℃／１トルで沸騰する画分を捕集し、望ましいエステルを感空気性液体および感湿性液体として９１％の収率で生じた。
【０１１６】
【化３０】
2005523235.tif 000031
【０１１７】
例２５
ＨＰ（Ｏ）（ＯＭｅ）（ＣＨ（ＯＭｅ）2）（２５）の合成
化合物（２３）の記載と同様に、無水次亜リン酸塩２０．１ｇ（０．３ｍｏｌ）、ＨＣ（ＯＭｅ）3  １３０ｍｌ、水４ｍｌおよびＣＦ3ＣＯＯＨ４．５ｍｌから調製した。収率６５％（９５％を上廻る純度、沸点６８〜７３℃／０．２５トル）。この化合物をＮＭＲ（δp＝２９．８ｐｐｍ（整然とした））を用いて分析した。
【０１１８】
例２６
Ｐ（ＯＳｉＭｅ3）（ＯＭｅ）（ＣＨ（ＯＭｅ）2）（２６）の合成
化合物（２４）の記載と同様に、２５  ２５ｇ（０．１８ｍｏｌ）から９２％の収率（沸点３８〜４１℃／１トル）で合成した。この化合物をＮＭＲを用いて分析した。
【０１１９】
例２７
ＨＰ（Ｏ）（ＯｉＰｒ）（ＣＨ（ＯｉＰｒ）２）（２７）の合成
化合物（２３）の記載と同様に無水次亜リン酸２０．１ｇ（０．３０ｍｏｌ）、ＨＣ（ＯｉＰｒ）３  １７０ｍｌ、水４ｍｌおよびＣＦ３ＣＯＯＨ４．５ｍｌから調製した。収率は、７８％であった（純度＞９５％、沸点１０２〜１０８℃／０．２５torr）。化合物をＮＭＲを用いて分析した。
【０１２０】
例２８
Ｐ（ＯＳｉＭｅ３）（ＯｉＰｒ）（ＣＨ（ＯｉＰｒ）２）（２８）の合成
化合物（２４）の記載と同様に２７  ２８ｇ（０．１１８ｍｏｌ）から８５％の収率（沸点６２〜６５℃／１torr）で合成した。化合物をＮＭＲを用いて分析した。
【０１２１】
例２９
ｐ−ニトロフェニルホスフィン酸４−ＮＯ２−Ｃ６Ｈ４−ＰＯ２Ｈ２（２９）の合成（引続き、刊行物のJ.-L. Montchamp J. Am. Chem. Soc. 2001, 123,510に記載の方法を実施した）
Ｈ３ＰＯ２のアニリニウム塩（０．２６ｇ、３．５ｍｍｏｌ）と４−ＮＯ２−Ｃ６Ｈ４−Ｉ（０．７５ｇ、３ｍｍｏｌ）との混合物をＤＭＦ１０ｍｌに溶解し、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４５０ｍｇ（触媒）およびＥｔ３Ｎ  １ｍｌを添加した。反応混合物を９０℃で５時間攪拌した。ＤＭＦを真空中で除去し、水を残留物に添加し、約ｐＨ１の酸性に変え、ＮａＣｌで飽和し、３回酢酸エチルで抽出した。有機画分を捕集し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、蒸発させ、生成物７４％を生じた。
【０１２２】
燐原子上のメチルエステルおよびエチルエステルをＭｅＰＯ２Ｈ２（２）のエステル（例２ｂ）と同様の方法で調製し、蒸留の代わりにＳｉＯ２上でのクロマトグラフィーによって精製した（引続き、刊行物のY.R. Dumond et al., Supraに記載の方法を実施した）。
【０１２３】
例３０
ＨＯＯＣＣＨ２ＰＯ２Ｈ２  （３０）の合成
シリルエステルＰ（ＯＳｉＭｅ３）（ＯＥｔ）（ＣＨ（ＯＥｔ）２）（２４）（２６．８ｇ、０．１ｍｏｌ）（１３．４ｇ、０．０５ｍｏｌ）を無水ＣＨ２Ｃｌ２  １００ｍｌに溶解した。エチルブロムアセテート（８．３５ｇ、０．０５ｍｏｌ）を無水ＣＨ２Ｃｌ２  ５０ｍｌに溶解し、撹拌下に冷却しながらシリルエステル溶液中に徐々に滴加した。この混合物を一晩中放置した。ＭｅＯＨ（３０ｍｌ）を添加し、溶液を室温で３０分間攪拌した。この溶液を濾過し、揮発分をロータリーエバポレーターを用いて除去した。残留物をＥｔＯＨ２５ｍｌに溶解し、濃厚なＨＣｌ  ２５ｍｌを添加し、溶液を一晩中、還流した。溶剤を真空中で除去し、残留物からのＨＣｌを、蒸留を繰り返すことによって水と一緒に除去した。残留する油は、次の反応またはエステルの合成にとって十分に純粋であった。化合物をＮＭＲを用いて分析した。
【０１２４】
燐原子上のメチルエステルおよびエチルエステルをＭｅＰＯ２Ｈ２のエステル（２）（例２ｂ）と同様の方法で調製し、蒸留の代わりにＳｉＯ２でのクロマトグラフィーによって精製した（引続き、Y.R. Dumond et al., Supraによる刊行物に記載の方法を実施した）。
【０１２５】
例３１
ＮＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＰＯ２Ｈ２  （３１）の合成
アクリロニトリル（１．０６ｇ、０．０２ｍｏｌ）およびエステルＨＰ（Ｏ）（ＯＥｔ）（ＣＨ（ＯＥｔ）２）（２３）（３．９２ｇ、０．０２ｍｏｌ）をトルエン２０ｍｌに溶解し、ＮａＯＥｔ溶液（ＥｔＯＨ  １０ｍｌ中のＮａ  ０．４６ｇおよびトルエン１０ｍｌから得た）を滴加した。この混合物を室温で２０時間攪拌した。溶剤をロータリーエバポレーターを用いて除去し、残留物を無水ＥｔＯＨ５０ｍｌに溶解した。ＮａＢＨ４  １．５ｇ（０．０４ｍｏｌ）を少量分ずつニトリルの攪拌した溶液に添加した。この混合物を一晩中攪拌した。水素化ホウ素の過剰量を水１０ｍｌおよび濃厚なＨＣｌ  ５０ｍｌで破壊した。混合物を一晩中、還流した。この混合物を冷却し、揮発分を真空中で除去した。残留物を少量の水に溶解し、Dowex 50 カラム（１００ｍｌ、Ｈ＋作業周期）に入れた。水での溶離後、０．５％アンモニア水で溶離した後に生成物を得た。生成物を含有する画分を真空中で蒸発させ、残留する油を無水ＴＨＦで擦り、固体の生成物７１％を生じた。
【０１２６】
化合物をＮＭＲを用いて分析した。
【０１２７】
例３２
ＰｈＣＨ２ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＰＯ２Ｈ２  （３２）の合成
エステルＨＰ（Ｏ）（ＯＥｔ）（ＣＨ（ＯＥｔ）２）（２３）４．９０ｇ（０．０２５ｍｏｌ）およびＮ−ベンジル−アジリジン３．３３ｇ（０．０２５ｍｏｌ）を無水トルエン５０ｍｌに溶解した。この溶液にＮａＯＥｔ溶液（無水ＥｔＯＨ  ５ｍｌ中のＮａ  ０．０６ｇから得た）を滴加し、混合物を４８時間還流した。溶剤を真空中で除去し、残留物を無水ＥｔＯＨ５０ｍｌに溶解した。濃厚なＨＣｌ水溶液５０ｍｌを添加し、溶液を一晩中還流した。Dowex 50 カラム上での精製を例１２中の化合物１２の記載と同様に実施し、白色の固体７８％を生じた。
【０１２８】
例３３
（ＰｈＣＨ２）２ＮＣＨ２ＣＨ２ＰＯ２Ｈ２  （３３）およびそのエステルの合成
酸３２（１．００ｇ、５ｍｍｏｌ）を水２０ｍｌに溶解し、ｐＨをＮａＯＨ水溶液の添加によって増加させた。塩化ベンゾイル（１．００ｇ、８ｍｍｏｌ）を攪拌しながら溶液中に滴加した。２時間後、この混合物をＨＣｌ水溶液を用いて約ｐＨ２の酸性に変えた。沈殿した固体を濾過し、水で洗浄し、真空中で乾燥させた。固体を無水ＴＨＦに溶解し、１Ｍ  ＢＨ３・ＳＭｅ２ １０ｍｌ（０．０１ｍｏｌ）を少量分ずつ添加した。溶液を室温で１時間攪拌し、次に５時間還流した。溶剤を真空中で除去し、残留物を共沸ＨＣｌに溶解し、５時間還流した。揮発分をロータリーエバポレーターを用いて除去し、残留する油をDowex 50 カラム上で例１２の化合物１２と同様に精製し、純粋な化合物を５３％の収率で生じた。
【０１２９】
化合物をＮＭＲを用いて分析した。
【０１３０】
燐原子上のメチルエステルおよびエチルエステルをＭｅＰＯ２Ｈ２のエステル（２）（例２ｂ）と同様の方法で調製し、蒸留の代わりにＳｉＯ２でのクロマトグラフィーによって精製した（引続き、Y.R. Dumond et al., Supraによる刊行物に記載の方法を実施した）。
【０１３１】
金属イオンの錯化
例３４
ＤＯ３Ａ−Ｐ（３４）のガドリニウム（ＩＩＩ）錯体の合成
Ｇｄ２Ｏ３（０．０３７ｇ、０．０１ｍｍｏｌ）を濃厚なＨＣｌ  ２ｍｌに溶解し、溶液を真空中で乾燥するまで蒸発させた。残留物を水（２ｍｌ）に溶解し、ＤＯ３Ａ−Ｐの水和物（１）０．１０ｇ（０．２０ｍｍｏｌ）を添加した。この溶液を４０℃で３０分間攪拌し、ｐＨを希釈されたＮａＯＨ水溶液の添加によって約８に徐々に増加させた。任意の沈殿した水酸化ガドリニウムを遠心分離し、上澄み液をAmberlite 50（Ｈ＋形）カラム上で水での溶離によって精製した。錯体を含有する画分を、真空中で、乾燥するまで常圧させた。残留物を水１ｍｌに溶解し、溶液を無水ＥｔＯＨ３０ｍｌ中に徐々に滴加し、僅かに吸湿性の固体１１０ｍｇを生じた。
【０１３２】
例３５
ガドリニウム（ＩＩＩ）錯体ＤＯ３Ａ−ＰＢｎ（３５）の合成
例３４の化合物３４と同様の方法を使用したが、酸５アダクト０．１６ｇ（０．１９５ｍｍｏｌ）を使用し、精製後に錯体１１８ｍｇを生じた。
【０１３３】
例３６
ＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＨ２のイットリウム（ＩＩＩ）錯体（３６）の合成
例３４の化合物３４と同様の方法を使用したが、酸１１アダクト０．２１ｇ（０．１９５ｍｍｏｌ）およびＹ２０３（０．５当量）を使用し、精製後に錯体１３５ｍｇを生じた。
【０１３４】
例３７
ＤＯ３Ａのイソチオシアナトベンジルホスフィン酸誘導体の合成
ＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＣＳ（３７）の合成
【０１３５】
【化３１】
2005523235.tif 000032
【０１３６】
ＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＮＨ２（１１）（２００ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）を水３ｍｌに溶解した。溶液を塩酸でｐＨ２〜３の酸性に変え、その後にチオホスゲン溶液（ＣＣｌ４  ２ｍｌ中の９０％（ＧＣによる）ＣＳＣｌ２  ３７μｌ）を添加し、反応混合物を暗中で室温で１２時間振盪した。水相を分離し、２回ＣＣｌ４  ２ｍｌで洗浄し、２回Ｅｔ２Ｏ  １ｍｌで洗浄し、その後に真空中（最大３０℃）で蒸発させ、ガラスを生じた。ガラス−粗製生成物（ＮＭＲの結果によれば９５％）を粉砕し、１Ｈ、３１Ｐ  ＮＭＲ、ＩＲおよびＵＶ分光分析によって特性決定した。この化合物は、リシンのε−アミノ基へのカップリングに適していた。
【０１３７】
ほぼＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＣＳ・４ＨＣｌとして単離した。
【０１３８】
【化３２】
2005523235.tif 000033
【０１３９】
システインのＳＨ基へのＤＯ３Ａ−Ｐの供給結合のために、ＤＯ３Ａ−Ｐの（Ｓ）−Ｎ−４−［２，３−ビス｛ビス（カルボキシメチル）アミノ｝−プロピル］フェニルブロモアセトアミド誘導体を刊行物に公知の方法を用いて合成することができる。
【０１４０】
生体接合体の形成および錯化
例３８
溶液および容器の調製：
処理前に、全ての容器、反応溶液および緩衝液は、不適当な金属イオンでのキレートの金属結合部位の遮断を回避させるために、”低金属含有溶液”として調製されなければならない。それ故、使用前に、全ての反応溶液および緩衝液をキレート化セファロース（Pharmacia）によってクロマトグラフィー処理し、汚染金属の痕跡量を除去する。低金属反応溶液を使用時まで滅菌ポリプロピレンまたはポリエチレン容器中に貯蔵しなければならない。
【０１４１】
例３９
ＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＣＳとグリシンとの共役反応
粗製ＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＣＳ（３７）（５０ｍｇ、６９．６μｍｏｌ）を水（０．５ｍｌ）に溶解し、その後にグリシン溶液を添加し（水中の０．８Ｍ溶液９８μｌ）、希釈した水酸化カリウム溶液の添加によってｐＨを８に調節した。反応混合物を暗中で６時間攪拌し、蒸発させ、ガラスを生じさせ、これを粉砕した。粗製生成物（９０％）を１Ｈ、３１Ｐ  ＮＭＲおよびＩＲ分光分析法によって特性決定した。
【０１４２】
例４０
９０Ｙ−イットリウムおよび８８Ｙ−イットリウム−ＤＯ３Ａ−Ｐ錯体の形成
精製されたＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＣＳを脱イオン化水に９×１０−５ｍｏｌ／ｌの濃度で溶解した。この溶液０．１ｍｌを小さな反応バイアル（ＰＥ）中に移した。０．１Ｍ  ＨＣｌ中の９０Ｙ−イットリウムクロリド０．１ｍｌ（ＹＣｌ３）および酢酸アンモニウム緩衝液０．１ｍｌ、ｐＨ５．７、を添加した。反応溶液を十分に混合した。連続的に溶液を調製しながらｐＨ値を測定した。従って、２４個の同一の溶液を調製し、それぞれ２５℃および３７℃で貯蔵した。
【０１４３】
試料を１５分後、３０分後、４５分後、６０分後、９０分後および１２０分後に引き取り、シリカゲル（POLYGRAM SIL G/UV２５４）または好ましくは紙（Whatman No.1）を固体相として用いて薄層クロマトグラフィーによって分析した。ＴＬＣを溶剤Ｉ：０．１Ｎ酢酸アンモニウム溶液または溶剤ＩＩ：３％塩化ナトリウム溶液を展開液として使用することによりＴＬＣを運転した。同時に、試料（２０μｌ）をＨＰＬＣを用いてゲル濾過によって分析した。γ−検出器（Berthold LB 506）およびＵＶ／ＶＩＳ分光計（Waters 486）から構成されたＨＰＬＣシステムをそれぞれセルを通じて２つの流れの中に取り付けた。２つの方法は、２つの段階を有する９０Ｙ−イットリウム−ＤＯ３Ａ−錯体の急速な錯体形成を示した。
【０１４４】
錯体形成の第１の段階は、酸性条件（ｐＨ３〜４）下でのイットリウム（または他の３価金属イオン）とＤＯ３Ａ−Ｐ分子のプロトン化された基との反応として直ちに開始する。第１段階よりも遅く、よりいっそう高いｐＨ値（ｐＨ５〜６）で起こる第２段階の間に、プロトンを窒素原子から除去しながら、金属イオン（３価金属イオンおよびランタニド）をＤＯ３Ａ−Ｐ分子の内部に移した。第２工程をＯＨ基によって促進させる。
【０１４５】
温度および時間に依存する研究は、９０Ｙ−イットリウム−ＤＯ３Ａ−錯体の錯体形成のための極めて短い反応時間を示す。意外なことに、２５℃であっても９０Ｙ−イットリウムの添加直後にＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＨ２への９０Ｙの８８％の結合が達成され、１５分で９７％の最適な結合に到達した（第４表参照）。
【０１４６】
更に、ｐＨの効果および放射線化学的収率に対するリガンドの濃度を評価した。第５表には、ｐＨ２．０〜ｐＨ８．９の間でのｐＨの変動に関連する結果が纏められており、一方で、ＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＨ２とＹとの一定の比３：１および２５℃での６０分間の反応時間を維持した。従って、最適な標識化の結果は、４．９〜８．０のｐＨ値で達成される。第６表には、１：１〜７：１でのＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＨ２：Ｙのリガンド濃度の変動に関連する結果が纏められており、一方で、一定のｐＨ範囲（ｐＨ５．２）および２５℃での６０分間の反応時間を維持した。
【０１４７】
前記条件下で錯体（９４％）の最適な標識化は、既にＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＨ２：Ｙ＝１：１の率で達成される。
【０１４８】
同様の反応運動は、治療の目的に適した他のランタニド、例えば８８Ｙ−イットリウムを用いて観察される。相応するデータは、第７表〜第８表に示されている。
【０１４９】
例４１
８８Ｙ−ＤＯ３Ａ−Ｐ錯体の生体分布および除去を評価するための動物による研究
キレートＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＨ２をキャリヤー不含の８８Ｙ−イットリウム（イットリウムクロリド（ＹＣｌ３）の形、上記の例４０参照）を用いて放射線標識化し、それぞれ８８Ｙ−ＤＯ３Ａ−Ｐ錯体を生じた。この錯体の放射線化学的純度を薄層クロマトグラフィーを用いて試験した。この錯体の薬動力学的特性を動物による研究で評価した。
【０１５０】
動物における生体分布および除去の研究
８８Ｙ−ＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＨ２錯体の生体分布および除去の研究をWistar SPFラットで実施した。次のインビボアッセイおよびインビトロアッセイを実施した：
１．器官内での８８Ｙ−ＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＨ２錯体の生体分布の測定
２．有機体からの８８Ｙ−ＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＨ２錯体の除去（モードおよび速度）の測定
３．ヒト血漿蛋白質に対する８８Ｙ−ＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＨ２錯体のインビトロ結合能力の測定
４．ヒト血漿中での８８Ｙ−ＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＨ２錯体の安定性の測定
結果
１．動物の単独の器官、系および組織内で測定された８８Ｙ−イットリウム活性ならびに伏在静脈内への８８Ｙ−ＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＨ２錯体の静脈内投与の５分後、６０分後、１２０分後および２４時間後に測定された単独の器官、系および組織内での活性濃度に基づく８８Ｙ−ＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＨ２錯体の器官分布は、第１表、第２表および第３表に記載されている（単独の値は、それぞれ４匹の動物の平均値である）。
２．  Wistar SPFラットの伏在静脈内への８８Ｙ−ＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＨ２錯体の静脈内投与のそれぞれ０〜２時間後および０〜２４時間後の時間間隔での放射能の累積的排泄によって測定される有機体からの８８Ｙ−ＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＨ２錯体の除去のモードおよび速度
３．ヒト血漿蛋白質への８８Ｙ−ＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＨ２錯体の結合を平衡透析または限外濾過を用いて３７℃で評価した。１０．２±２．３％または３．７±３．２％がそれぞれ血漿蛋白質に結合された。薬動力学的に可逆の結合は、重要ではない。
４．８８Ｙ−ＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＨ２錯体の安定性を標準化されたインビトロ条件を使用することによりヒト血漿中で３７℃で１４日間に亘って測定した。８８Ｙ−ＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＨ２錯体は、高度に安定であることが見出された。８８Ｙ−ＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＨ２錯体からの放射性核種８８Ｙ−イットリウムの解離および血漿蛋白質への結合（主に錯体形成トランスフェリン、３価元素、例えばＦｅ３＋、Ｃｏ３＋、またＹ３＋と錯体を形成することが優先される蛋白質）は、ヒト血漿に投与された全活性の２％未満に対してのみ示された。
【０１５１】
（Sephadex G 25を用いてのカラムクロマトグラフィーの例は、図１、２および３に示されている）。
【０１５２】
概要
Wistar SPFラットにおける安定性、生体分布および除去についての研究は、明らかに適当な放射性核種、例えば９０Ｙ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６７Ｇａ、１１１Ｉｎ、１５３Ｓｍ、１６６Ｈｏ、１７７Ｌｕ、２０１ＴＩ、２１２Ｂｉおよびこれらの組合せ物を用いての巨大分子有機物質、例えば多糖類、蛋白質、ペプチドならびにモノクロナール抗体またはその断片の標識化に適した二官能性キレートの成分としての意図的な使用に関連してイットリウム−ＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＨ２錯体の極めて良好な生物学的特性および生物化学的特性を有する。それ故、８８Ｙ−ＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＨ２接合体は、有利に放射線診断剤、放射線治療剤および殊に放射線免疫治療剤として使用されることができ、これとは異なり、Ｇｄ−ＤＯ３Ａ−Ｐは、殊にＭＲＩのための診断剤として適している。
【０１５３】
８８Ｙ−ＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＨ２錯体は、示されているように血液、他の器官および生物学的組織から短時間でのみ除去される。この８８Ｙ−ＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＨ２錯体は、主に腎臓により排泄される（約８５％の活性は、糞便中に見出された４．５％の活性、平均値、と比較して尿中で２４時間後に見出される）。
【０１５４】
危険臓器または組織累積放射能は、使用された動物モデルにおいては検出されなかった。
【０１５５】
有機体内で放射性接合体、例えばモノクロナール抗体からの８８Ｙ−ＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＨ２の解離の場合には、投与された活性は、短時間で有機体から腎臓によって排泄される。付加的に、ヒト血漿中での８８Ｙ−ＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＨ２錯体の高い安定性は、インキュベーションアッセイを用いて次の標準化条件により示された。
【０１５６】
例４２
ＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＣＳとＭＡｂとの共役反応
ＭＡｂ  １０ｍｇ／ｍｌの濃度で燐酸塩緩衝された食塩水（ＰＢＳ：１０ｍＭ燐酸ナトリウムおよび１５０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ７．２）に溶解されたＭＡｂ  ＢＷ  ２５０／１８３を、５０ｍＭ硼酸ナトリウム溶液を滴加することによってｐＨ８．６に調節した。この溶液に４倍のモル過剰量のＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＣＳを乾燥物質として添加したかまたは５０ｍＭ硼酸ナトリウム溶液１〜２ｍｌ、ｐＨ８．６に溶解して添加した。
【０１５７】
混合の後、溶液を室温で８時間恒温保持した。遊離ＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＣＳおよび他の非反応性低分子量化合物を高分子量免疫接合体から除去し、標準法、例えばサイジングゲル透過クロマトグラフィーまたは限外濾過またはセントリコン３０スピン濾過（centricon 30 spin filtration）または透析を用いて生理的食塩水（塩化ナトリウム０．９％）に移す。
【０１５８】
その後に、この溶液をＭＡｂ  ２ｍｇ／ｍｌのＭＡｂ濃度に希釈する。分析試料を免疫活性（変性Lindmoアッセイ）および免疫接合体の均一性を測定（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、ＴＳＫ３０００ゲル透過クロマトグラフィー）するために取り、０．２μｍの濾過を用いて滅菌し、滅菌された５ｍｌのガラス瓶中に分取し、滅菌窒素で覆い、滅菌されたネオプレンキャップで密閉した。試料をさらに使用するまで４℃で貯蔵する。
【０１５９】
例４３
ｔ−Ｂｕ３ＤＯ３Ａ−Ｐ（Ｏ）（ＯＭｅ）２の合成
ＤＯ３Ａのトリ−ｔ−ブチルエステル０．４ｇ（０．７７８ｍｍｏｌ）（ｔ−Ｂｕ３ＤＯ３Ａ）、ＨＰ（Ｏ）（ＯＭｅ）２（０．７２ｍｌ、１９ｍｍｏｌ）および３０％ホルムアルデヒド水溶液０．８０ｇ（１２当量）をＭｅＯＨ（８ｍｌ）に溶解し、ｉ−Ｐｒ２ＮＥｔを９〜１０のｐＨが達成されるまで滴加した。この溶液を８０℃で２１時間加熱した。揮発分を真空中で蒸発させ、残留物をカラムクロマトグラフィー（Ａｌ２Ｏ３、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／ｉＰＲ２ＮＥｔ＝３０／６／２）によって精製した。純粋なエステルを含有する画分を捕集し、蒸発させ、淡黄色の油を生じた（１．１３ｇ、９１％）。
３１Ｐ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：３０．４ｐｐｍ；ＥＳＩ／ＭＳ：６３７．４（Ｍ＋Ｈ＋）
例４４
ＤＯ３Ａ−Ｐ（１）の合成
例４３からのエステル（０．５ｇ）をＥｔＯＨ（１０ｍｌ）に溶解し、濃厚なＨＣｌ水溶液を添加した（１０ｍｌ）。この混合物を一晩中環流させた。溶剤を真空中で蒸発させ、残留物を例１の記載と同様に精製し、単離した。物理的データは、例１からのデータと同一であった。
【０１６０】
例４５
ＤＯ３Ａ−Ｐのモノメチルエステル（ＤＯ３Ａ−ＰＯＭｅ）の合成
例４３からのエステル（０．５ｇ）を６０％ピリジン水溶液５ｍｌに溶解し、５０℃で３０時間加熱した。濃厚なＨＣｌ水溶液を添加した（１０ｍｌ）。この混合物を一晩中環流させた。反応混合物の３１Ｐ  ＮＭＲスペクトルは、１つの生成物のみを２０．９ｐｐｍで示した。例４３の記載と同様に精製し、淡黄色の純粋な生成物を生じた。収量０．４２ｇ（８５％）。
ＥＳＩ／ＭＳ：６２３．３（Ｍ＋Ｈ＋）６２４．９（Ｍ＋Ｎａ＋）
例４６
ＤＯ３Ａ−Ｐ（１）の合成
ＤＯ３Ａ（１．０ｇ、２．８８ｍｍｏｌ）、ＨＰ（Ｏ）（ＯＭｅ）２（３．３ｍｇ、３０ｍｍｏｌ）および３０％ホルムアルデヒド水溶液３ｍｌ（３０ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１０ｍｌ）に溶解し、ｉ−Ｐｒ２ＮＥｔの添加によってｐＨを約９に調節した。この溶液を８０℃で２４時間加熱した。揮発分を真空中で蒸発させ、残留物を共沸ＨＣｌ（２０ｍｌ）に溶解し、この溶液を一晩中、環流させた。この溶液を真空中で蒸発させ、残留物を精製し、例１の記載と同様に単離し、同一の生成物を生じた。
【０１６１】
例４７
ＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＯ２（１０）の合成
ｔ−Ｂｕ３ＤＯ３Ａ  １．０ｇ（１．９４ｍｍｏｌ）、ＨＰ（Ｏ）（ＯＭｅ）（ＣＨ２Ｃ６Ｈ４ＮＯ２）（３．３４ｇ、８ｍｍｏｌ）および３０％ホルムアルデヒド水溶液１．８ｍｌ（１０ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１０ｍｌ）に溶解し、ｉ−Ｐｒ２ＮＥｔを約９のｐＨ値が達成されるまで滴加した。この溶液を８０℃で２４時間加熱した。揮発分を真空中で蒸発させ、残留物をカラムクロマトグラフィー（Ａｌ２Ｏ３、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／ｉＰｒ２ＮＥｔ＝３０／６／２）によって精製した。純粋なエステルを含有する画分を捕集し、蒸発させ、黄色の油を生じた。この油をＥｔＯＨ（１０ｍｌ）および共沸ＨＣｌ（１０ｍｌ）に溶解し、この溶液を一晩中環流させた。この溶液を真空中で蒸発させ、残留物を精製し、例９の記載と同様に単離し、同一の生成物を生じた。
【０１６２】
例４８
ｔ−Ｂｕ３ＤＯ３Ａ−Ｐ（Ｏ）（ＯＭｅ）（ＣＨ２Ｃ６Ｈ４ＮＨ２）の合成
例４７からのエステル（１．２ｇ、１．６ｍｍｏｌ）をＥｔＯＨ（２０ｍｌ）に溶解し、１０％Ｐｄ／Ｃ（０．５ｇ）を添加した。この混合物を４８時間水素化した（大気圧）。触媒を濾過によって除去し、ＥｔＯＨを蒸発させ、定量的な収量の生成物を生じた。
３１Ｐ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：ＥＳＩ／ＭＳ  ７１３．１（Ｍ＋Ｈ＋）
例４９
ｔ−Ｂｕ３ＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＨ２の合成
例４８からのエステル（１．１ｇ、１．５５ｍｍｏｌ）を６０％ピリジン水溶液１０ｍｌに溶解した。この溶液を５０℃で３０時間加熱した。揮発分を真空中で除去し、定量的な収量の生成物をピリジニウム塩として生じた。
３１Ｐ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：３３．２ｐｐｍ；ＥＳＩ／ＭＳ  ６９８．１（Ｍ＋Ｈ＋）。
【０１６３】
例５０
ＤＯ３Ａ−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）（ＣＨ２Ｃ６Ｈ４ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｂｒ）（ＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＨＡｃＢｒ）の合成
例４９からのエステル（１．０ｇ、１．４３ｍｍｏｌ）をＴＨＦに溶解した。ｉＰｒ２ＮＥｔ（０．２８ｇ、１．５ｍｍｏｌ）を添加し、溶液を−１０℃に冷却した。ブロモアセチルブロミド（０．４３ｇ、１．５ｍｍｏｌ）を撹拌下に冷却しながら溶液中に徐々に滴加した。臭化水素アミンを濾過によって除去し、溶剤を真空中で蒸発させ、残留物を５０％ＣＦ３ＣＯＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍｌ）に溶解した。この溶液を一晩中攪拌した。その後に、この溶液を真空中で蒸発させた。残留物を酸性化された水２０ｍｌ（ＨＣｌ、ｐＨ＝１）に溶解し、ＣＨＣｌ３で抽出し、任意の残留するブロモ酢酸を除去した。水溶液を−２０℃に冷却し、この温度で貯蔵した。生成物は、共役反応のために十分に純粋であった。
３１Ｐ  ＮＭＲ（Ｈ２Ｏ）：３０．５ｐｐｍ；ＥＳＩ／ＭＳ：６５１．７（Ｍ＋Ｈ＋）
例５１
ＧｄＣｌ３・６Ｈ２Ｏ（ｇ、０．０４７２ｍｍｏｌ）を化合物１１の水溶液（Ｈ２Ｏ  ８００ｍｇおよびＤ２Ｏ  １００ｍｇ中５０ｍｇ）に添加し、ｐＨを固体のＫＯＨの添加によって徐々に５．５に上昇させた。溶液を室温で１時間攪拌し、ｐＨを固体のＫＯＨの注意深い添加によって約ｐＨ７に設定した。こうして調製された溶液ならびに同様の方法によって調製された異なる濃度の他の溶液（全てが公知量の水およびガドリニウム（ＩＩＩ）を含有する）を弛緩性の測定のために使用した。溶液は、弛緩性７．８６ｍｍｏｌを生じた（１０ＭＨｚで）。配位水分子１４ｎｓの交換半減期を測定した（１７Ｏ  ＮＭＲパラメーターの温度依存性から）。
【０１６４】
例５２
弛緩性の測定のための化合物１のガドリニウム（ＩＩＩ）錯体の溶液を例５１と同様に調製した。この溶液は、弛緩性７．５４ｍｍｏｌを生じた（１０ＭＨｚで）。配位水分子７０ｎｓの交換半減期を測定した（１７Ｏ  ＮＭＲパラメーターの温度依存性から）。
【０１６５】
例５３
ＤＯ３Ａのトリエチルエステル（Ｅｔ３ＤＯ３Ａ）の合成
シクレン（５ｇ、２９ｍｍｏｌ）を無水ＣＨ２Ｃｌ２（５００ｍｌ）に溶解し、無水ＣＨ２Ｃｌ２  ５０ｍｌに溶解したＢｒＣＨ２ＣＯＯＨＥｔ（１３．２３ｇ、２．７３当量）を効果的に攪拌しながら１４時間徐々に添加した。２４時間の攪拌の後、白色の沈殿物を濾別し、濾液を真空中で蒸発させ、濃厚な油に変えた。この油をＣＨ２Ｃｌ２  ２ｍｌで希釈し、一晩中放置して結晶させた。結晶の固体を濾過し、少量のＣＨ２Ｃｌ２およびＥｔ２Ｏで洗浄し、放置して空気で乾燥させた。Ｅｔ３ＤＯ３Ａ・２ＨＢｒの収量は、６．５３ｇ（３８％）であった。
【０１６６】
【化３３】
2005523235.tif 000034
【０１６７】
例５４
ＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＨＡｃＢｒの合成
ＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＨ２（０．５ｇ、０．９４ｍｍｏｌ）を水１０ｍｌに溶解し、ｉＰｒ２ＮＥｔ（１．８２ｇ、１５当量）を添加した。ブロモアセチルブロミド（２．８５ｇ、１５当量）をＣＨＣｌ３  １０ｍｌに溶解し、２つの溶液を混合し、強力に攪拌した。１時間後、同量のｉＰｒ２Ｅｔを２相混合物に添加し、引き続きＣＨＣｌ３  ５ｍｌ中の同量の臭化物を添加した。混合物を付加的に１時間攪拌した。２つの相を分離し、水相をＣＨＣｌ３  ２×１０ｍｌで洗浄した。水相を希釈したＨＣｌでｐＨ１の酸性に変え、１０回ＣＨＣｌ３  １０ｍｌで抽出した。水相を木炭で脱色し、蒸発させて油に変えた（浴温度３０℃）。この油を水３ｍｌで希釈し、溶液を特性決定し、最終的に−２０℃で貯蔵した。この溶液の一定部分は、共役反応に直接使用することができる。データーは、例５０と同一であった。
【０１６８】
例５５
ＤＯ３Ａ−ＰＨの酸化によるＤＯ３Ａの合成
ＤＯ３Ａ−ＰＨの塩酸塩（１．５ｇ、約２．８ｍｍｏｌ）の試料を水１０ｍｌに溶解した。臭素１．２当量（臭素水の形で）を滴加し、次にこの液滴を反応混合物の脱色後に添加した。溶剤を真空中で除去し、残留物を例１の記載と同様にイオン交換樹脂で精製し、同一の生成物を得た。収量は、生成物の三水和物１．１８ｇ（８５％）に達した。
【０１６９】
【表１】
2005523235.tif 000035
【０１７０】
【表２】
2005523235.tif 000036
【０１７１】
【表３】
2005523235.tif 000037
【０１７２】
【表４】
2005523235.tif 000038
【０１７３】
【表５】
2005523235.tif 000039
【０１７４】
【表６】
2005523235.tif 000040
【０１７５】
【表７】
2005523235.tif 000041
【０１７６】
【表８】
2005523235.tif 000042
【図面の簡単な説明】
【０１７７】
【図１】セファデックス（Sephadex）G-25上でのヒト血漿中での８８Ｙ−ＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＨ２錯体の放射能の溶離プロファイル、恒温保持の１日目を示す線図。
【０１７８】
【図２】セファデックス（Sephadex）G-25上でのヒト血漿中での８８Ｙ−ＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＨ２錯体の放射能の溶離プロファイル、恒温保持の１日目を示す線図。
【０１７９】
【図３】セファデックス（Sephadex）G-25上での蛋白質（赤の曲線）および遊離８８Ｙ−ＤＯ３Ａ−ＰＢｎＮＨ２錯体（青の曲線）の溶離プロファイルを示す線図。
【図１】
2005523235.tif 000044
【図２】
2005523235.tif 000045
【図３】
2005523235.tif 000046
【手続補正書】
【提出日】平成15年6月12日(2003.6.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
2005523235.tif 000047
〔式中、
それぞれＸは、独立にＣ（Ｒ１）２、ＣＨ２、ＣＨＲ１、ＣＨＲ２またはＣＲ１Ｒ２から選択されており、
それぞれＺは、独立にＯＨ、Ｒ１、Ｒ２、−ＯＲ１またはＯＲ２であり、
Ｙは、独立にＯＨ、ＯＭ、ＯＲ１、ＯＲ２、ＮＨ２、ＮＨＲ１、ＮＨＲ２、ＮＲ１Ｒ２、Ｎ（Ｒ１）２またはＮ（Ｒ２）２であり、Ｍは、陽イオンであり、
それぞれＲ１は、独立に１〜２０個の炭素原子を有する有機基から選択されており、
それぞれＲ２は、独立にＨ、官能基または少なくとも１個の官能基を有し１〜２０個の炭素原子を有する有機基から選択されている〕で示される化合物またはその光学異性体、配位化合物または塩。
【請求項２】
官能基がＯＲ１、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＮＯ２、Ｎ（Ｒ１）２、ＣＯＯＲ１、ＮＣＳ、ＮＨＣＯＣＨ２Ｂｒから選択されており、この場合Ｒ１は、請求項１に定義されている、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
ＸがＣＨ２である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
ＺがＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ、−Ｏｎ−Ｃ１〜Ｃ２アルキル−アリールまたは−Ｏｎ−アリールであり、この場合ｎは、０または１である、請求項１から３までのいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｚが−Ｏｎ−（ＣＨ２）１〜６−Ｑ、−Ｏn−（ＣＨ２）１〜４−Ｐｈ−Ｑまたは−Ｏｎ−Ｐｈ−Ｑであり、この場合Ｑは、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＮＣＳまたは−ＮＨＣＯＣＨ２Ｂｒであり、ｎが０または１である、請求項１から３までのいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
請求項１から５までのいずれか１項に記載の化合物の金属錯体。
【請求項７】
金属が放射性同位体である、請求項６記載の錯体。
【請求項８】
放射性同位体が６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６７Ｇａ、９０Ｙ、１１１Ｉｎ、１５３Ｓｍ、１６６Ｈｏ、１７７Ｌｕ、２０１Ｔｌ、２１２Ｂｉおよびこれらの組合せ物から選択されている、請求項７記載の錯体。
【請求項９】
金属がＧｄである、請求項６記載の錯体。
【請求項１０】
化合物と生体分子との接合体において、該生体分子に対するカップリングがＰ−アルキルまたはＰ−Ｏ−アルキルによって形成されており、前記化合物が式ＩＩ
【化２】
2005523235.tif 000048
〔式中、
それぞれＸは、独立にＣ（Ｒ１）２またはＣＲ１Ｒ２から選択されており、
それぞれＺは、独立にＯＨ、Ｒ１、Ｒ２、−ＯＲ１もしくはＯＲ２またはＯＭあり、Ｍは陽イオンであり、
Ｙは、独立にＯＨ、ＯＭ、ＯＲ１、ＯＲ２、ＮＲ１Ｒ２、Ｎ（Ｒ１）２またはＮ（Ｒ２）２であり、Ｍは、陽イオンであり、
それぞれＲ１は、独立にＨまたは１〜２０個の炭素原子を有する有機基から選択されており、
それぞれＲ２は、独立に官能基または少なくとも１個の官能基を有し１〜２０個の炭素原子を有する有機基から選択されている〕で示される化合物またはその光学異性体、配位化合物または金属錯体である、化合物と生体分子との接合体。
【請求項１１】
生体分子ペプチド、タンパク質、糖タンパク質、オリゴ糖類および多糖類、オリゴ糖類およびポリアミノ糖類ならびに核酸から選択されている、請求項１０記載の接合体。
【請求項１２】
生体分子が抗体または抗体断片である、請求項１１記載の接合体。
【請求項１３】
請求項１から５までのいずれか１項に記載の化合物、請求項６から９までのいずれか１項に記載の金属錯体または請求項１０から１２までのいずれか１項に記載の接合体を製薬学的に認容性の担持剤、希釈剤または助剤と一緒に有することを特徴とする医薬組成物。
【請求項１４】
診断の用途のための請求項１３記載の組成物。
【請求項１５】
放射線撮像のための請求項１３記載の組成物。
【請求項１６】
核磁気共鳴撮像のための請求項１４記載の組成物。
【請求項１７】
治療の用途のための請求項１３記載の組成物。
【請求項１８】
放射線治療のための請求項１７記載の組成物。
【請求項１９】
中性子捕獲治療のための請求項１７記載の組成物。
【請求項２０】
診断学的または治療的に有効量の請求項１から５までのいずれか１項に記載の化合物、請求項６から９までのいずれか１項に記載の金属錯体または請求項１０から１２までのいずれか１項に記載の接合体を、製薬学的に認容性の担持剤、希釈剤または助剤と一緒に、必要とされる対象に投与する方法。
【国際調査報告】
2005523235.tif 000049
2005523235.tif 000050
2005523235.tif 000051