(57)【要約】本発明は、フマギロール誘導体又はその塩のヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン又はスルホブチルエーテル-7-β-シクロデキストリンとの包接化合物、及びこれを含む医薬組成物に関し、本発明の包接化合物は水での優れた溶解性及び安定性を有し毒性が低いため、抗癌剤又は癌転移阻害剤として有益である。
2005523305.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の化学式１のフマギロール誘導体又はその塩のヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン又はスルホブチルエーテル-7-β-シクロデキストリンとの包接化合物。
【化１】
2005523305.tif 000013
(式中、Ｘはヒドロキシ、Ｙはハロゲンであるか、又はＸとＹは共にオキシラン環を形成し、
ＢはＯ又はＨ2であり、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4及びＲ5は、それぞれ独立的に水素、ヒドロキシ、アセトキシ、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アミノアルコキシ、アルキルアミノアルコキシ、ジアルキルアミノアルコキシ、ハロゲン、シアノ、トリフルオロメチル、ニトロ、ホルミル、アセトアミド、メチレンオキシカルボキシ、メチレンジオキシ又はエチレンジオキシ基であり、ただし、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4及びＲ5が、同時に水素であることはない。)
【請求項２】
該フマギロール誘導体又はその塩が、下記の化合物：
Ｏ−(４-クロロシンナモイル)フマギロール；
Ｏ−(４−アミノシンナモイル)フマギロール；
Ｏ−(４−ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロール；
Ｏ−(４−メトキシシンナモイル)フマギロール；
Ｏ−(４−ジメチルアミノシンナモイル)フマギロール；
Ｏ−(４−ヒドロキシシンナモイル)フマギロール；
Ｏ−(３，４−ジメトキシシンナモイル)フマギロール；
Ｏ−(３，４−メチレンジオキシシンナモイル)フマギロール；
Ｏ−(３，４，５−トリメトキシシンナモイル)フマギロール；
Ｏ−(４−ニトロシンナモイル)フマギロール；
Ｏ−(３，４−ジメトキシ−６−アミノシンナモイル)フマギロール；
Ｏ−(４−アセトキシ−３，５−ジメトキシシンナモイル)フマギロール；
Ｏ−(４−エチルアミノシンナモイル)フマギロール；
Ｏ−(４−エチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロール；
Ｏ−(３−ジメチルアミノメチル−４−メトキシシンナモイル)フマギロール；
Ｏ−(４−トリフルオロメチルシンナモイル)フマギロール；
Ｏ−(３，４-ジメトキシ−６−ニトロシンナモイル)フマギロール；
Ｏ−(４−アセトキシシンナモイル)フマギロール；
Ｏ−(４−シアノシンナモイル)フマギロール；
４−(４−メトキシシンナモイル)オキシ−２−(１，２−エポキシ−１，５−ジメチル−４−ヘキセニル)−３−メトキシ−１−クロロメチル−１−シクロヘキサノール；
Ｏ−(３，４，５−トリメトキシシンナミル)フマギロール；
Ｏ−(４−ジメチルアミノシンナミル)フマギロール；
Ｏ−(３，４，５−トリメトキシシンナモイル)オキシ−２−(１，２−エポキシ−１，５−ジメチル−４−ヘキセニル)−３−メトキシ−１−クロロメチル−１−シクロヘキサノール；
Ｏ−(４−ジメチルアミノシンナモイル)オキシ−２−(１，２-エポキシ−１，５−ジメチル−４−ヘキセニル)−３−メトキシ−１−クロロメチル−１−シクロヘキサノール；
Ｏ−(３，５−ジメトキシ−４−ヒドロキシシンナモイル)フマギロール；又はこれらの塩であることを特徴とする請求項１に記載の包接化合物。
【請求項３】
該フマギロール誘導体又はその塩が、下記の化合物：
４−(４−メトキシシンナモイル)オキシ−２−(１，２−エポキシ−１，５−ジメチル−４−ヘキセニル)−３−メトキシ−１−クロロメチル−１−シクロヘキサノール；
Ｏ−(４−メトキシシンナモイル)フマギロール；
Ｏ−(３，５−ジメトキシ−４−ヒドロキシシンナモイル)フマギロール；
Ｏ−(４−ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロール；
Ｏ−(３，４，５−トリメトキシシンナモイル)フマギロール；
Ｏ−(３，４−ジメトキシ−６−アミノシンナモイル)フマギロール；又はこれらの塩であることを特徴とする請求項１に記載の包接化合物。
【請求項４】
該フマギロール誘導体又はその塩がＯ−(４−ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロール又はＯ−(３，４，５−トリメトキシシンナモイル)フマギロールであることを特徴とする請求項１に記載の包接化合物。
【請求項５】
該フマギロール誘導体の塩がフマギロール誘導体と塩酸、臭素酸、硫酸、リン酸、硝酸、蟻酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、シュウ酸、フマル酸、酒石酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸及びパラトルエンスルホン酸の塩からなる群から選択されることを特徴とする請求項１〜４のいずれか一項に記載の包接化合物。
【請求項６】
ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン、又はスルホブチルエーテル-7-β-シクロデキストリンを蒸留水に溶解させ、フマギロール誘導体又はその塩を攪拌下加えることにより製造されることを特徴とする請求項１に記載の包接化合物。
【請求項７】
包接化合物が、ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン又はスルホブチルエーテル-7-β-シクロデキストリンを蒸留水に溶解し、希釈塩酸又は水酸化ナトリウム溶液によりpH 6〜8の範囲に調節した後、フマギロール誘導体又はその塩を攪拌下加えることにより製造されることを特徴とする請求項１に記載の包接化合物。
【請求項８】
包接化合物が、リン酸塩を用いてpH 6〜8の範囲に調節した緩衝液に、ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン又はスルホブチルエーテル-7-β-シクロデキストリンを加えて溶解させた後、フマギロール誘導体又はその塩を攪拌下加えることにより製造されることを特徴とする請求項１に記載の包接化合物。
【請求項９】
包接化合物が攪拌後に得られた最終溶液をさらに凍結乾燥する段階により得られることを特徴とする請求項６〜８のいずれか一項に記載の包接化合物。
【請求項１０】
ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン又はスルホブチルエーテル-7-β-シクロデキストリンに対するフマギロール誘導体又はその塩のモル比が、1:1〜1:10であることを特徴とする請求項６〜８のいずれか一項に記載の包接化合物。
【請求項１１】
請求項１に記載の包接化合物と医薬的に許容可能な添加剤を含む医薬組成物。
【請求項１２】
医薬的に許容可能な添加剤が、医薬的に許容可能な希釈剤、緩衝剤、香味剤、結合剤、増粘剤、滑沢剤及び防腐剤からなる群から選ばれる少なくとも１つであることを特徴とする請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
該緩衝剤がリン酸塩緩衝剤であることを特徴とする請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
経口又は非経口製剤の形態に剤形化されることを特徴とする請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
非経口製剤が注射剤であることを特徴とする請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
徐放性製剤の形態に剤形化されることを特徴とする請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
請求項１に記載の包接化合物を有効成分として含む抗癌剤。
【請求項１８】
請求項１に記載の包接化合物を有効成分として含む癌転移阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、フマギロール誘導体又はその塩とヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン又はスルホブチルエーテル-7-β-シクロデキストリンとの包接化合物、及び該包接化合物を含む医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
シクロデキストリンは、α-1,4-グリコシド結合を介したグルコピラノース単位からなる環状化合物である。シクロデキストリン環の外側は親水性であるが、内部空洞は疎水性を示す。よって、水より非極性である、シクロデキストリンの空洞に適合した大きさを有する “ゲスト分子”と呼ばれる分子（疎水性分子）又はその一部分は、シクロデキストリン分子の疎水性空洞に包接されて包接化合物を形成することができる。シクロデキストリンの医薬的利用に関しては、様々な文献(Journal of Parenteral Science & Technology 43(5), pp 231-240 (1989)、及びPharmaceutical Research 14(5), pp 556-567 (1997))に開示されている。
【０００３】
６、７又は８個のグルコピラノース単位からなるシクロデキストリンは、通常それぞれα-、β-、及びγ-シクロデキストリンと呼ばれている。これらの天然シクロデキストリンのうち、β-シクロデキストリンが包接能と経済効率の点で最も有用であるが、水への溶解度が比較的低く(水100 ml当り1.8 g)深刻な腎臓毒性と非経口投与後の生体膜不適合性を有し、製剤において必ずしも理想的ではない。従って、その用途は食品や経口製剤に限定されている。
【０００４】
天然シクロデキストリンの包接能及び物理化学的性質を改善するために、近年、アルキル-シクロデキストリン、ヒドロキシアルキル-シクロデキストリン、カルボキシエチル-シクロデキストリン及びスルホアルキルエーテル-シクロデキストリンのような様々なシクロデキストリン誘導体が製造されている。
【０００５】
その中で、ヒドロキシアルキル基として、炭素数1〜6のアルキル基が好ましく、ヒドロキシメチル基、ヒドロキシエチル基、ヒドロキシプロピル基、及びヒドロキシブチル基等を挙げることができる。特にヒドロキシプロピル基が好ましい。また、スルホアルキル基としては、炭素数1〜6のアルキル基が好ましく、スルホメチル基、スルホエチル基、スルホプロピル基、スルホブチル基等を挙げることができる。特にスルホブチル基が好ましい。ヒドロキシアルキル化シクロデキストリンの具体的な製品としては２−ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリンが挙げられ、スルホアルキルエーテルシクロデキストリンの具体的な製品としてはスルホブチルエーテル-7-β-シクロデキストリンが挙げられる。ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン及びスルホブチルエーテル-7-β-シクロデキストリンは、水への溶解性が高く、非常に低毒性であるため、非経口的使用に特に適しているが、この点については、Journal of Pharmaceutical Science 85(11), pp 1142-1169 (1996)に開示されている。
【０００６】
また、シクロデキストリン包接化合物に関し、米国特許第4,371,673号では二種類のレチノイド-高分子と水溶性シクロデキストリンとの複合体、及びレチノイドとシクロデキストリンエーテル誘導体との複合体が開示されている。米国特許第4,596,795号では性ホルモンとシクロデキストリン誘導体との複合体の舌下及び口腔経路への投与の結果が開示されている。米国特許第4,727,064号では、容易に結晶化し水への溶解度が低い薬剤を本質的にアモルファス複合体に変換する方法の結果を示しているが、この方法ではシクロデキストリン誘導体を用いて医薬的性質を改善させている。米国特許第5,134,127号では、スルホアルキルエーテルシクロデキストリン誘導体と、難溶性薬物を経口、経鼻及び注射投与するための溶解剤としての該誘導体の用途を開示している。
【０００７】
近年、有望な概念として、血管新生依存と呼ばれる、固形癌が一定の大きさ以上に成長するためには栄養及び酸素の供給のため新たに形成された血管が必要であることが提示され、血管新生を抑制することにより様々な癌が強力かつ選択的に治療できると期待されている。特に、フマギロール誘導体は癌によって誘導される血管新生の効率的な阻害剤としての医薬的性質を示すことが、欧州特許第415,294号及び米国特許第6,063,812号に報告されている。しかし、臨床用途に適用可能なフマギロール誘導体の開発は、フマギロール誘導体が水に難溶性であり室温で極めて不安定であることに阻まれている。
【０００８】
薬物の低い溶解度によって、経口投与時は吸収率が低くなり、注射用製剤としての使用は不可能となることがよく知られている。また、安定性が低いことにより、製品保管期間が短くなり、低温保存の必要があり、また機械的な動きに制約があり、経済的に効率が悪く不便である。
【０００９】
フマギロール誘導体の合成研究は、幾つかの文献に報告されている。米国特許第5,196,406号ではフマギロール誘導体の溶解度が改善されているが、本技術分野では、結果物の安定性については開示されていない。欧州特許第519,428号においてもフマギロール誘導体の溶解度が改善されているが、これは、シクロデキストリンによるものではなく、エタノール、アセトニトリル、イソプロピルアルコール及びアセトンのような有機溶媒によるものである。しかし、有機溶媒の使用によっては潜在的に治療の副作用が起こる可能性がある。即ち、静脈注射や筋肉注射のために生理食塩水や５％デキストロース溶液などの輸液剤でさらに希釈すると、低い薬物溶解度により生命を脅かす沈殿が生じ、静脈炎になる恐れもある。また、用いたシクロデキストリン誘導体の種類により、安定性は一定ではない。マルトシル-β-シクロデキストリンとの混合物の安定性は改善されたが、ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリンとの混合物の安定性は、シクロデキストリン誘導体のみの安定性よりも悪い。さらに、マルトシル-β-シクロデキストリンとの複合体の形成は安定であるが、マルトシル-β-シクロデキストリンは、安全で経済的であるヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリンと比較して、現在まで非経口剤としての使用が検証されておらず、コストがかかり、様々な剤形で幅広く使用されるのは経済的に好まれない。米国特許第5,422,363号には安定なフマギロール誘導体の組成物が開示されているが、この製剤で用いられている全ての賦形剤、グリセリン又はポリグリセリンの脂肪酸エステル類は非経口投与には適していない。
【００１０】
従って、フマギロール誘導体をより溶解性が高く安定な形にして改善した医薬的特性を有するように変化させる必要があった。
【００１１】
上記に鑑み、本発明者らは新規フマギロール誘導体を開発し、これを特許出願した (米国特許第6,063,812号)、本発明に用いられる化合物はそこで開示された化合物と同一である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明者らは、優れた新生血管阻害剤であるが、室温保管時や水溶液中で不安定であることが分かっているフマギロール誘導体又はその塩の溶解度を増加させ、製剤での均質性、安全性、生体内利用効率、及び室温保管時の安定性を確保することによって、静脈注射や筋肉注射のような非経口投与、又は経口剤投与に適用可能なフマギロール誘導体製剤を提供するために鋭意研究を重ねた。その結果、フマギロール誘導体又はその塩のヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリ又はスルホブチルエーテル-7-β-シクロデキストリンとの包接化合物が、水での溶解性や安定性に優れているが刺激性が低い抗癌剤又は癌転移阻害剤として有用であることを発見し本発明を完成した。
【００１３】
従って、本発明の課題は、フマギロール誘導体又はその塩のヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン、又はスルホブチルエーテル-7-β-シクロデキストリンとの包接化合物、及び該包接化合物を含む医薬組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明は、下記の化学式１のフマギロール誘導体又はその塩のヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン又はスルホブチルエーテル-7-β-シクロデキストリンとの包接化合物、及び該包接化合物を含む医薬組成物に関する。
【００１５】
【化１】
2005523305.tif 000003
【００１６】
(式中、Ｘはヒドロキシであり、Ｙはハロゲンであるか、又はＸとＹは共にオキシラン環を形成し、
ＢはＯ又はＨ2であり、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4及びＲ5は、独立的して、水素、ヒドロキシ、アセトキシ、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アミノアルコキシ、アルキルアミノアルコキシ、ジアルキルアミノアルコキシ、ハロゲン、シアノ、トリフルオロメチル、ニトロ、ホルミル、アセトアミド、メチレンオキシカルボキシ、メチレンジオキシ又はエチレンジオキシ基であり、ただし、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4及びＲ5が、同時に水素であることはない。)
【発明の効果】
【００１７】
本発明のフマギロール誘導体又はその塩のヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン又はスルホブチルエーテル-7-β-シクロデキストリンとの包接化合物は、フマギロール誘導体単独と比較して、改善された水への溶解性、室温での優れた長期安定性及び注射部位への低刺激性を示しつつ、癌成長抑制活性には変化がないので、血管新生阻害剤として癌治療に有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
具体的には、本発明の包接化合物は、主成分として新生血管阻害剤、特に前記式１のフマギロール誘導体又はその塩を含み、溶解剤及び安定剤として有機溶媒を添加せずにシクロデキストリン誘導体、特にヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン又はスルホブチルエーテル-7-β-シクロデキストリンを含むことを特徴とする。
【００１９】
本発明のフマギロール誘導体又はその塩は下記の化合物：
Ｏ-(４-クロロシンナモイル)フマギロール；
Ｏ-(４-アミノシンナモイル)フマギロール；
Ｏ-(４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロール；
Ｏ-(４-メトキシシンナモイル)フマギロール；
Ｏ-(４-ジメチルアミノシンナモイル)フマギロール；
Ｏ-(４-ヒドロキシシンナモイル)フマギロール；
Ｏ-(３,４-ジメトキシシンナモイル)フマギロール；
Ｏ-(３,４-メチレンジオキシシンナモイル)フマギロール；
Ｏ-(３,４,５-トリメトキシシンナモイル)フマギロール；
Ｏ-(４-ニトロシンナモイル)フマギロール；
Ｏ-(３,４-ジメトキシ-６-アミノシンナモイル)フマギロール；
Ｏ-(４-アセトキシ-３,５-ジメトキシシンナモイル)フマギロール；
Ｏ-(４-エチルアミノシンナモイル)フマギロール；
Ｏ-(４-エチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロール；
Ｏ-(３-ジメチルアミノメチル-４-メトキシシンナモイル)フマギロール；
Ｏ-(４-トリフルオロメチルシンナモイル)フマギロール；
Ｏ-(３,４-ジメトキシ-６-ニトロシンナモイル)フマギロール；
Ｏ-(４-アセトキシシンナモイル)フマギロール；
Ｏ-(４-シアノシンナモイル)フマギロール；
４-(４-メトキシシンナモイル)オキシ-２-(１,２-エポキシ-１,５-ジメチル-４-ヘキセニル)-３-メトキシ-１-クロロメチル-１-シクロヘキサノール；
【００２０】
Ｏ-(３,４,５-トリメトキシシンナミル)フマギロール；
Ｏ-(４-ジメチルアミノシンナミル)フマギロール；
Ｏ-(３,４ ５-トリメトキシシンナモイル)オキシ-２-(１,２-エポキシ-１,５-ジメチル-４-ヘキセニル)-３-メトキシ-１-クロロメチル-１-シクロヘキサノール；
Ｏ-(４-ジメチルアミノシンナモイル)オキシ-２-(１,２-エポキシ-１,５-ジメチル-４-ヘキセニル)-３-メトキシ-１-クロロメチル-１-シクロヘキサノール；
Ｏ-(３,５-ジメトキシ-４-ヒドロキシシンナモイル)フマギロール；又はこれらの塩であることが好ましい。
【００２１】
より好ましくは、本発明のフマギロール誘導体又はその塩は、下記の化合物：
４-(４-メトキシシンナモイル)オキシ-２-(１,２-エポキシ-１,５-ジメチル-４-ヘキセニル)-３-メトキシ-１-クロロメチル-１-シクロヘキサノール；
Ｏ-(４-メトキシシンナモイル)フマギロール；
Ｏ-(３,５-ジメトキシ-４-ヒドロキシシンナモイル)フマギロール；
Ｏ-(４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロール；
Ｏ-(３,４,５-トリメトキシシンナモイル)フマギロール；
Ｏ-(３,４-ジメトキシ-６-アミノシンナモイル)フマギロール；又はこれらの塩である。
【００２２】
さらに好ましくは、本発明のフマギロール誘導体又はその塩は、Ｏ-(４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロール又はＯ-(３,４,５-トリメトキシシンナモイル)フマギロールである。
【００２３】
また、本発明のフマギロール誘導体の塩としては、塩酸、臭素酸、硫酸、リン酸、硝酸、蟻酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、シュウ酸、フマル酸、酒石酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン及びパラトルエンスルホン酸とフマギロール誘導体との塩からなる群から選ぶことが好ましい。
【００２４】
本発明に用いられる化学式１のフマギロール誘導体は、米国特許第6,063,812号に開示されており、米国特許第6,063,812号に記載された方法に従い製造した。
【００２５】
本発明の包接化合物は、ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン又はスルホブチルエーテル-7-β-シクロデキストリンを蒸留水に溶解し、攪拌下、フマギロール誘導体又はその塩を加えて製造できる、又はヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン又はスルホブチルエーテル-7-β-シクロデキストリンを蒸留水に溶解し、希釈塩酸又は水酸化ナトリウム溶液を使用して溶液のpH をpH 6〜8の範囲に調節した後、攪拌下フマギロール誘導体又はその塩を加えることにより製造できる。
【００２６】
また、本発明の包接化合物は、リン酸緩衝液を用いてpH 6〜8の範囲に調節した緩衝液に、ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン又はスルホブチルエーテル-7-β-シクロデキストリンを溶解させて、攪拌下、フマギロール誘導体又はその塩を加えることにより製造できる。
【００２７】
生成された包接化合物は、純粋な生成物、即ち溶液の形態、又は凍結乾燥して固体の形態で提供することができ、必要な場合は凍結乾燥前、振とう後に得られた最終溶液をpH 6〜8の範囲に調節する工程を経てもよい。
本発明に従って得られる包接化合物は、各種の形態で、例えば固形又は溶液で使用できる。
本発明において、フマギロール誘導体又はその塩のヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン又はスルホブチルエーテル-7-β-シクロデキストリンに対するモル比は、1:1〜1:10が好ましく、より好ましくは1:1〜1:6である。
【００２８】
本発明のフマギロール誘導体又はその塩の包接化合物は、他のフマギロール誘導体の製剤と比較して優れた溶解度と安定性を有する。
共溶媒及び界面活性剤を用いて溶解度評価を行った結果、Ｏ-(４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロールは、10 %のエタノールと10 %のTween80溶液の混液、又は10 %のクレモフォールCremophor-ELのみで約5 mg/mlの溶解度を示した。しかし、この製剤は多くの欠点がある、すなわち溶液状態では容易に加水分解が起こるため長期安定性を保証できず、沈殿によりイオンに対する感受性が増加するため緩衝されず、かつ界面活性剤には毒性がある。
【００２９】
これに反し、本発明の包接化合物は、上述の製剤よりも改善した溶解度を有することが見出された。例えば、Ｏ-(４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロールの溶解度は水中で50μg/mlであるが、7 w/v%のヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン水溶液では約7 mg/mlであり、14 w/v %のヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン水溶液(pH 6.7)では、約30 mg/mlである。また、7 w/v %のスルホブチルエーテル-7-β-シクロデキストリン水溶液中で、Ｏ-(４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロールの溶解度は約5.5 mg/mlである。すなわち、水溶液のpHや含まれるヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン又はスルホブチルエーテル-7-β-シクロデキストリンの濃度によって、Ｏ-(４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロールの水溶解性は20〜1000倍まで増加することが分かった。
【００３０】
さらに、本発明の包接化合物の安定性は、室温で驚くほど改善した。ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリンに包接されたＯ-(４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロールの分解速度は、固体状態、室温でＯ-(４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロール単独の分解速度に比べ、かなり減少した。また、本発明の好ましい包接化合物はまた、溶液中でのＯ-(４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロールの加水分解速度を低下させた。
【００３１】
従って、本発明の包接化合物は、共溶媒や界面活性剤を用いた製剤の欠点を除くことができるので非経口剤や経口剤形への適用が可能である。また、本発明の好ましい包接化合物は、イオン力の影響を克服できるため、溶液のpH調節のための緩衝液の使用が可能であり、ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン又はスルホブチルエーテル-7-β-シクロデキストリンの濃度によってフマギロール誘導体の溶解度が直線的に増加するため、十分に希釈可能である。従って、電解質又は非電解質を含む幅広い希釈剤の選択が可能である。
【００３２】
本発明はまた、本発明の包接化合物と医薬的に許容可能な添加剤を含む医薬組成物を提供することを特徴とする。
医薬的に許容可能な添加剤としては、医薬的に許容可能な電解質又は非電解質の希釈剤、緩衝剤、香味剤、結合剤、増粘剤、滑沢剤及び防腐剤等が挙げられ、本発明の組成物は、これらの成分から選択される少なくとも一成分を含むことができる。
ここで、本発明の組成物に含まれる前記緩衝剤が、リン酸塩緩衝液であることが好ましい。
【００３３】
本発明の医薬組成物は、経口又は非経口製剤として剤形化することができる。非経口製剤としては、注射剤、点眼剤、経鼻剤形が挙げられ、好ましい注射剤としては、皮下、静脈、筋肉、動脈、点滴投与が挙げられる。
また、本発明の医薬組成物は、徐放性製剤の形態に剤形化することができる。
【００３４】
本発明の医薬組成物は、癌を有するヒトの抗癌剤又は癌転移阻害剤として使用することができ、ラット、犬、ウサギ、猫、鶏等の温血動物の治療にも使用することができる。
【実施例】
【００３５】
本発明の好ましい態様を下記の実施例により示す。しかし、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
例１
30 mgのＯ-(４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロールを、1.5、3.5、7.0、14.0、28.0 w/v%のヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン溶液にそれぞれ加え、4℃で攪拌した。72時間後、混合物を0.2μm膜フィルターでろ過し、ろ液中のＯ-(４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロールを高速液体クロマトグラフィー(HPLC)で定量した。ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン濃度に従ったＯ-(４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロールの溶解度を表１に示した。
【００３６】
【表１】
2005523305.tif 000004
【００３７】
表１から明らかなように、ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリンを添加して複合体を形成させ、さらにヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリンの濃度を増加させたとき、Ｏ-(４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロールの溶解度は向上した。
【００３８】
例２
30mgのＯ-(４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロールを1.5、3.5、7.0、14.0、28.0 w/v%のスルホブチルエーテル-7-β-シクロデキストリン溶液にそれぞれ加え、4℃で攪拌した。72時間後、混合物を0.2μm膜フィルターでろ過し、ろ液中のＯ-(４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロールを高速液体クロマトグラフィー(HPLC)で定量した。スルホブチルエーテル-7-β-シクロデキストリン濃度に従ったＯ-(４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロールの溶解度を表２に示した。
【００３９】
【表２】
2005523305.tif 000005
【００４０】
表２から明らかなように、スルホブチルエーテル-7-β-シクロデキストリンを添加して複合体を形成させ、さらにスルホブチルエーテル-7-β-シクロデキストリンの濃度を増加させたとき、Ｏ-(４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロールの溶解度が向上した。
【００４１】
例３
20 mgのＯ-(３,４,５-トリメトキシシンナモイル)フマギロールを1.5、3.5、7.0、14.0、28.0 w/v%のヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン溶液にそれぞれ加え、4℃で攪拌した。72時間後、混合物を0.2μm膜フィルターでろ過し、ろ液中のＯ-(３,４,５-トリメトキシシンナモイル)フマギロールを高速液体クロマトグラフィー(HPLC)で定量した。ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン濃度に従ったＯ-(３,４,５-トリメトキシシンナモイル)フマギロールの溶解度を表３に示した。
【００４２】
【表３】
2005523305.tif 000006
【００４３】
表３から明らかなように、ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリンを添加して複合体を形成させ、さらにヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリンの濃度が増加させたとき、Ｏ-(３,４,５-トリメトキシシンナモイル)フマギロールの溶解度が向上した。
【００４４】
例４
20 mgのＯ-(３,４,５-トリメトキシシンナモイル)フマギロールを1.5、3.5、7.0、14.0、28.0 w/v%のスルホブチルエーテル-7-β-シクロデキストリン溶液にそれぞれ加え、4℃で攪拌した。72時間後、混合物を0.2μm膜フィルターでろ過し、ろ液中のＯ-(３,４,５-トリメトキシシンナモイル)フマギロールを高速液体クロマトグラフィー(HPLC)で定量した。スルホブチルエーテル-7-β-シクロデキストリン濃度に従ったＯ-(３,４,５-トリメトキシシンナモイル)フマギロールの溶解度を表４に示した。
【００４５】
【表４】
2005523305.tif 000007
【００４６】
表４から明らかなように、スルホブチルエーテル-β-シクロデキストリンを添加して複合体を形成させ、さらにスルホブチルエーテル-β-シクロデキストリンの濃度を増加させたとき、Ｏ-(３,４,５-トリメトキシシンナモイル)フマギロールの溶解度が向上した。
【００４７】
例５
50 mgのＯ-(４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロールを1.5、3.5、7.0、14.0 w/v%のヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリンを含有するリン酸塩緩衝液(pH 6.7)にそれぞれ加え、4℃で攪拌した。72時間後、混合物を0.2μm膜フィルターでろ過し、ろ液中のＯ-(４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロールを高速液体クロマトグラフィー(HPLC)で定量した。ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン濃度に従ったＯ-(４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロールの溶解度を表５に示した。
【００４８】
【表５】
2005523305.tif 000008
【００４９】
表５から明らかなように、ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリンを添加して複合体を形成させ、さらにヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリンの濃度を増加させたとき、Ｏ-(４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロールの溶解度が向上した。
【００５０】
例６
マスフラスコに13 gのヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリンを入れ、60 mlの蒸留水を加えた後、透明な溶液が得られるまで4℃で攪拌又は超音波振とうした。希釈塩酸又は水酸化ナトリウム溶液を用いて、溶液のpHを6〜8の範囲に調節した。ここに1 gのＯ-(４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロールを加え、完全に溶解するまで4℃で攪拌した。必要に応じて、最終溶液のpHを希釈塩酸又は水酸化ナトリウムを用いてpH 6〜8の範囲に調節し、0.2μmの膜フィルターでろ過した後、ろ液を凍結乾燥した。
【００５１】
例７
マスフラスコに13 gのヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリンを入れ、60 mlの蒸留水を加えた後、透明な溶液が得られるまで4℃で攪拌又は超音波振とうした。希釈塩酸又は水酸化ナトリウム溶液を用いて、溶液のpHを6〜8の範囲に調節した。ここに1 gのＯ-(３,４,５-トリメトキシシンナモイル)フマギロールを加え、完全に溶解するまで4℃で攪拌した。必要に応じて、最終溶液のpHを希釈塩酸又は水酸化ナトリウムを用いてpH 6〜8の範囲に調節し、0.2μmの膜フィルターでろ過した後、ろ液を凍結乾燥した。
【００５２】
例８
マスフラスコに6.8 gのリン酸カリウムと、21.67 gのヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリンを入れ、100 mlの蒸留水を加えた後、透明な溶液が得られるまで4℃で攪拌又は超音波振とうした。ここに1.67 gのＯ-(４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロールを加え、完全に溶解するまで4℃で攪拌した。最終溶液を0.2μmの膜フィルターでろ過した後、ろ液を凍結乾燥した。
【００５３】
例９
ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリンの代わりにスルホブチルエーテル-7-β-シクロデキストリンを用いたことを除いて、例８と同様な方法で、スルホブチルエーテル-7-β-シクロデキストリンとのＯ-(４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロールの包接化合物を製造した。
【００５４】
例１０
マスフラスコに6.8 gのリン酸カリウムと21.67 gのヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリンを入れ、100 mlの蒸留水を加えた後、透明な溶液が得られるまで4℃で攪拌又は超音波振とうした。ここに1.84 gのＯ-(４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロールのシュウ酸塩を加え、完全に溶解するまで4℃で攪拌した。最終溶液を0.2μmの膜フィルターでろ過した後、ろ液を凍結乾燥した。
【００５５】
例１１
ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリンの代わりにスルホブチルエーテル-7-β-シクロデキストリンを用いたことを除いて、例１０と同様な方法で、スルホブチルエーテル-7-β-シクロデキストリンとのＯ-(４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロールのシュウ酸塩の包接化合物を製造した。
【００５６】
例１２
例６で得られたろ液を凍結乾燥した。得られた凍結乾燥物を重水(D2O)に溶解し、二次元1H-NMR(NOSEY)スペクトルで解析した。結果を図1に示す。クロスピークは、Ｏ-(４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロールの４個の水素と、ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリンのグルコース骨格の水素間に相互作用があることを示す。このクロスピークは、Ｏ-(４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロールのみのスペクトルでは観測されなかった。この結果から、Ｏ-(４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロールが、ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリンと包接化合物を形成していることがわかる。
【００５７】
例１３
例６で得られた凍結乾燥物の安定性とＯ-(４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロールのみの安定性を25℃で保存し比較した。
Ｏ-(４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロールの残余量を高速液体クロマトグラフィー(HPLC)で測定した。結果を表６に示す。
【００５８】
【表６】
2005523305.tif 000009
【００５９】
表６から明らかなように、Ｏ-(４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロールとヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリンとの複合体の安定性は、Ｏ-(４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロール単独の安定性と比較して向上した。
【００６０】
例１４
例７で得られた凍結乾燥物の安定性と、Ｏ−（３，４，５-トリメトキシシンナモイル)フマギロールのみの安定性を25℃で比較した。
Ｏ−（３，４，５-トリメトキシシンナモイル)フマギロールの残余量を高速液体クロマトグラフィー(HPLC)で測定した。結果を表７に示す。
【００６１】
【表７】
2005523305.tif 000010
【００６２】
表７から明らかなように、Ｏ−（３，４，５-トリメトキシシンナモイル)フマギロールとヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリンとの複合体の安定性は、Ｏ−（３，４，５-トリメトキシシンナモイル)フマギロール単独の安定性と比較して向上した。
【００６３】
例１５
種々の濃度のヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン存在下でのＯ−（４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロールの、酸性、中性及び塩基性溶液中での安定性を50℃で比較した。
Ｏ−（４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロールの残余量を高速液体クロマトグラフィー(HPLC)で測定した。結果を表８に示す。
【００６４】
【表８】
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【００６５】
表８から明らかなように、ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリンはＯ−（４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロールの加水分解速度を顕著に抑制した。
【００６６】
例１６
予め調製された8 mm3の癌細胞(ルイス肺癌細胞)を、4週齢のBDF1マウスの右腋部位に皮下移植した。癌組織の大きさが100〜200 mm3になった時、マウスを無作為に処置群と対照群に分けた。処置群にはＯ−（４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロール又はＯ−（４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロールのヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリンとの包接化合物をＯ−（４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロールとして30 mg/kg、又は120 mg/kgの用量で一日置きで5回投与し、対照群には0.2 mlのリン酸塩緩衝生理食塩水を投与した。最終日に癌組織の重さを測定し、癌組織の体積を次式により計算した。
癌組織の体積(mm3)= a×b2×0.5
(a: 最長軸の直径, b: 最短軸の直径)
無処置の対照群に対する処置群の抑制率(IR%)は、次式を用いて計算した：
抑制率% = (１−処置群の癌組織の体積／対照群の癌組織の体積)×100 
抑制率% = (１−処置群の癌組織の重さ／対照群の癌組織の重さ)×100 
表９に結果を示す。
【００６７】
【表９】
2005523305.tif 000012
【００６８】
表９から明らかなように、Ｏ−（４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロールの包接化合物は、Ｏ−(４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロール単独と同等の抗癌活性を示す。
【００６９】
例１７
Ｏ−（４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロール単独と、同量のＯ−（４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロールを含むＯ−（４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロールのヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリンとの包接化合物を静脈注射し、薬物の血中濃度を測定した。実験動物として、１群あたり5匹の雄性ラットを用いた。
【００７０】
エーテルで軽く麻酔した後、ラットの大腿部動脈と静脈にPE-50ポリエチレンチューブを挿入した。麻酔から完全に覚めた後、pH 6.2のリン酸塩緩衝液にＯ−（４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロールのみを溶解させた溶液と、Ｏ−（４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロールのヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリンとの複合体を溶解させた溶液を、Ｏ−（４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロールとして20 mg/kgの用量でカテーテルで大腿部静脈に投与した。投与直後及び指定の時間間隔（15, 30, 45, 60, 120, 180, 240分）で血液サンプル（0.15 ml）を大腿部動脈から採取した。血液サンプルはすぐに遠心分離し、HPLCで血漿中のＯ−（４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロールの濃度を分析した。
【００７１】
図２から明らかなように、Ｏ−（４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロール単独と、Ｏ−（４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロールのヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリンとの複合体の血漿濃度には、有意な差はなかった。しかし、Ｏ−（４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロール単独での投与と異なり、Ｏ−（４-ジメチルアミノエトキシシンナモイル)フマギロールのヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリンとの複合体の投与は、注射部位の疼痛がほとんどないという長所があった。
【図面の簡単な説明】
【００７２】
【図１】例１２におけるフマギロール誘導体包接化合物の二次元核磁気共鳴(NOSEY)スペクトルを示した図である。
【図２】例１７におけるフマギロール誘導体単独(●)と、フマギロール誘導体の包接化合物(○)の静脈投与後のそれぞれの血漿濃度-時間曲線を示した図である。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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