【手続補正書】
【提出日】令和1年12月23日(2019.12.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００２】
ゴミ焼却場を最大の汚染源として環境中に蓄積し続けているダイオキシン類は、難分解性・生物濃縮性・猛毒であり、ほ乳類、鳥類、魚類等において種々の毒性を誘発することが示唆されている環境汚染物質である。実験動物を用いた研究および産業事故後の人体曝露の報告によると、ダイオキシン類は経皮毒性、神経毒性、免疫毒性、発癌性、催奇形性、生殖毒性、発生毒性を含む種々の毒性影響を誘発することが示唆されている (例えば非特許文献１、２、３、４)。ダイオキシン類は性ホルモンと一部構造が類似していて、年々増加している乳癌、子宮内膜症、前立腺癌、精巣癌、生殖能低下等の原因として疑われている。さらに、ダイオキシン類は、母親の年齢が高いほどへその緒を通じて胎児に移行する量が高くなる傾向が示唆されているが、これは、上述したようにダイオキシン類が体内でも分解されにくく、年齢が高い人程蓄積量が高くなっているためと考えられており、自然発生先天異常との相関が指摘されている。出産年齢が高くなっている現代では特に重要な問題である。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００４】
ある合成フラボノイド: 例えばα-ナフトフラボン (非特許文献５)、3’-メトキシ-4’-ニトロフラボン (非特許文献６)、3’,4’-ジメトキシフラボン (非特許文献７) は、AhRの形質転換を抑制することが知られている。また、天然フラボノイド: 例えばgalangin、kaempferol (特許文献１)、新規フラボノイド化合物 (特許文献２) もAhRの形質転換を抑制することが報告されている。非特許文献５〜７の合成フラボノイドはそれ自体に強い毒性があることから、日常的に摂取できるものではない。また、特許文献１、２は、in vitro (試験管内での抽出細胞等を用いた人工的な) 実験のみを扱ったものであり、in vivo (実験動物を用いて生体の反応を見る) 実験は扱っておらず、フラボノイドの摂取はダイオキシンにより引き起こされるAhR依存性の作用を単一細胞レベルにおいて減じる可能性を暗示するが、その可能性の暗示は単一細胞レベルのみに限定される。つまり、何重ものフィードバック機構等きわめて複雑な諸過程を含む生体レベルにおいてダイオキシンの毒性抑制が実際に起こり得るのか、生体レベルにおいての具体的な効果については全く検討・言及しておらず、不明である。さらに、ダイオキシン類により生じる形態異常・機能異常等の先天異常を実際に効果的に予防ないし阻害する化合物を報告した例はこれまでにない。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
このように、未だ満足にダイオキシン類の種々の毒性を生体レベルにおいて安全に予防ないし阻害する方法はない状況であり、ダイオキシン類と自然発生先天異常との相関が指摘されている現状において、ダイオキシン類の種々の毒性、特に催奇形性を生体レベルにおいて効果的に予防ないし阻害する方法が必要とされていた。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
本発明を極めて独創的にしている要素の一つは、非公知の独自の解析法により、その構造等から推測したセコイソラリシレシノール (SECO) の潜在的なAhR拮抗能に着眼した点であり、鋭意研究を重ねた結果、SECOが生体レベルにおいてダイオキシン類の毒性、特に催奇形性を予防および阻止できることを初めて見出すことに成功し、本発明を完成するに至った。
本発明は、セコイソラリシレシノール (SECO) およびその植物リグナン前駆体であるセコイソラリシレシノールジグルコシド (SDG) の少なくとも１つを有効成分として含有することを特徴とするダイオキシン類の催奇形性予防および阻止剤、ダイオキシン類の他の毒性予防および阻止剤によって達成される。
さらに、本発明は、ダイオキシン類の毒性、特に催奇形性を予防および阻止するためにSECOおよびその植物リグナン前駆体であるSDGの少なくとも１つを使用することによって達成される。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
本発明の剤は、ダイオキシン類が誘発する種々の毒性を生体レベルにおいて予防および阻止することができる。なかでも、ダイオキシン類と自然発生先天異常との相関が指摘されている現状において重要な問題となっている催奇形性に対し、多大な予防および阻止効果を有することが示された。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
ダイオキシン類とは、AhRとの間の相互作用を通して発現される類似した毒性を示すダイオキシンおよびダイオキシン様物質の総称をいう。本発明で言うダイオキシン類は特に限定されないが、化学構造が異なる化合物群 (ポリ塩化ジベンゾパラジオキシン (PCDDs)、ポリ塩化ジベンゾフラン (PCDFs)、コプラナーポリ塩化ビフェニル (Co-PCBs) ) に含まれる2,3,7,8-テトラクロロジベンゾ-パラ-ジオキシン (2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin, 2,3,7,8-TCDD)、1,2,3,7,8-ペンタクロロジベンゾ-パラ-ジオキシン(1,2,3,7,8-Pentachlorodibenzo-p-dioxin, 1,2,3,7,8-PeCDD)、1,2,3,4,7,8-ヘキサクロロジベンゾ-パラ-ジオキシン (1,2,3,4,7,8-Hexachlorodibenzo-p-dioxin, 1,2,3,4,7,8-HxCDD)、2,3,7,8-テトラクロロジベンゾフラン(2,3,7,8-Tetrachlorodibenzofuran, 2,3,7,8-TCDF)、2,3,4,7,8-ペンタクロロジベンゾフラン(2,3,4,7,8-Pentachlorodibenzofuran, 2,3,4,7,8-PeCDF)、1,2,3,4,7,8-ヘキサクロロジベンゾフラン (1,2,3,4,7,8-Hexachlorodibenzofuran, 1,2,3,4,7,8-HxCDF)、3,3',4,4',5-ペンタクロロビフェニル(3,3',4,4',5'-Pentachlorobiphenyl, PCB126)、3,3',4,4',5,5'-ヘキサクロロビフェニル(3,3',4,4',5,5'-Hexachlorobiphenyl, PCB169)、3,4,4',5-テトラクロロビフェニル(3,4,4',5-Tetrachlorobiphenyl, PCB81) 等が代表的なものとして挙げられる。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
毒性とは、急性的・慢性的に生体に悪影響を及ぼす性質をいう。本発明で言うダイオキシン類の毒性は特に限定されないが、経皮毒性、神経毒性、免疫毒性、発癌性、催奇形性、生殖毒性、発生毒性、遺伝毒性、神経発達毒性、発達障害毒性等が挙げられる。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
催奇形性とは、発生過程に作用して形態異常・機能異常を含む先天異常を生じさせる性質をいう (岩波理化学辞典)。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
セコイソラリシレシノール (SECO) およびその植物リグナン前駆体であるセコイソラリシレシノールジグルコシド (SDG) は、天然の成分として見いだされる。本発明で有効成分として使用されるSECOは、ほ乳類等の生体内に存在する腸内細菌によりSDGが代謝される過程で生じるより高い生理活性を有する代謝産物としても知られている (非特許文献８)。SDGは、SECO等の生理活性植物リグナンの前駆体として利用することが効果的であることが報告されている (たとえば非特許文献９)。したがって、本発明では、好適には、SECOが使用されるが、これに制限されるものではなく、その植物リグナン前駆体であるSDGを使用することが可能である。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
ダイオキシン類は我々の日常生活の至る所に溢れかえっており、我々は知らず知らずの内に摂取している。摂取されたダイオキシン類は体内に蓄積されていき、種々の毒性影響を誘発する可能性があるほか、へその緒を通じて移行し胎児にも重大な影響 (形態異常・機能異常を含む先天異常) を及ぼす。本発明の剤は、ヒトに投与することができる。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２７】
動物においては一般に、胚形成期が全ライフサイクル中で最も化学物質の影響を受けやすく、魚類胚はダイオキシン類に最も感受性の高い生物のひとつである (たとえば非特許文献１０、１１)。魚類胚においてダイオキシン類によってもたらされる特徴的な形態・機能異常は、心嚢浮腫、頭蓋顔面奇形である (たとえば非特許文献１２、１３、１４)。また、魚類胚は化学物質に対し、液体中に混合することによって完全に曝露させることが可能なため、その影響を高感度に検出することができる。本実施例１〜３では、形態・機能異常を観察するモデルとして、発達中のゼブラフィッシュ胚 (ゼブラフィッシュ (学名: Danio rerio) は、急速な発達、透明性、生産性等の利点のために胎生学、発生生物学における最も重要な脊椎動物モデル種である) を用い、ダイオキシン類の毒性、特に催奇形性に対するSECOの予防および阻止効果を検討した。ダイオキシン類としては、最も強力なAHR作用薬の一つである3,3',4,4',5-Pentachlorobiphenyl (3,3',4,4',5-ペンタクロロビフェニル, PCB126) を用い、ダイオキシン類への曝露により生じる形態・機能異常としては、心嚢浮腫に焦点をあてた。心嚢浮腫は、血管発達障害による心機能障害、腎機能障害と共に見られる異常な表現型である。