(57)【要約】本発明は、組織における瘢痕化又は繊維症の治療又は予防のための選択的サイクリックグアノシン３’，５’−モノホスフェート  タイプ５（ｃＧＭＰ  ＰＤＥ５）阻害剤（以後、ＰＤＥ５阻害剤）の使用に関する。ＰＤＥ５阻害剤には、特に、化合物シルデナフィルが含まれる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者を有効な量のｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤、又はその医薬組成物で処置することを含む、患者における瘢痕化を減少させるため及び／又は繊維症を治療するための方法。
【請求項２】
瘢痕化及び／又は繊維症に関連した疾患が：
肺繊維症；アテローム性動脈硬化症；心血管疾患；感染、外傷、外科処置若しくは熱傷の後の皮膚及び角膜瘢痕化及び／又は繊維症；強皮症及び他の結合組織障害；心臓の繊維症；慢性閉塞性肺疾患；筋繊維症；腎繊維症；慢性皮膚潰瘍及び脂質皮膚硬化症；（あらゆる原因による）肺繊維症；外科処置後及び特発性（idiophatic）の癒着；皮膚の炎症性状態（苔癬状態及びそれに関連する状態も含まれる）；老化及び全ての老化関連変性障害（皮膚の老化も含まれる）；あらゆる病因（ウイルス性及び非ウイルス性肝炎が含まれる）による肝繊維症；肝硬変；慢性膵炎；慢性甲状腺炎；（あらゆる原因による）石灰沈着症；その病原が結合マトリックスの沈着／リモデリングに関連する状態（ガンも含まれる）
から選択される、請求項１記載の方法。
【請求項３】
瘢痕化を減少させるため及び／又は繊維症を治療するための医薬の製造のためのｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤の使用。
【請求項４】
瘢痕化及び／又は繊維症に関連した疾患が：
肺繊維症；アテローム性動脈硬化症；心血管疾患；感染、外傷、外科処置若しくは熱傷の後の皮膚及び角膜瘢痕化及び／又は繊維症；強皮症及び他の結合組織障害；心臓の繊維症；慢性閉塞性肺疾患；筋繊維症；腎繊維症；慢性皮膚潰瘍及び脂質皮膚硬化症；（あらゆる原因による）肺繊維症；外科処置後及び特発性の癒着；皮膚の炎症性状態（苔癬状態及びそれに関連する状態も含まれる）；老化及び全ての老化関連変性障害（皮膚の老化も含まれる）；あらゆる病因（ウイルス性及び非ウイルス性肝炎が含まれる）による肝繊維症；肝硬変；慢性膵炎；慢性甲状腺炎；（あらゆる原因による）石灰沈着症；その病原が結合マトリックスの沈着／リモデリングに関連する状態（ガンも含まれる）
から選択される、請求項３記載の使用。
【請求項５】
前記阻害剤が経口投与又は局所投与される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法又は使用。
【請求項６】
前記阻害剤が１００ｎＭ未満のＩＣ５０を有する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法又は使用。
【請求項７】
前記阻害剤が１０００を超える選択性比を有する、請求項６記載の方法又は使用。
【請求項８】
前記阻害剤がシルデナフィルである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法又は使用。
【請求項９】
１日あたりの投与量が５〜５００ｍｇである、請求項８記載の方法又は使用。
【請求項１０】
１日あたりの投与量が１０〜１００ｍｇである、請求項９記載の方法又は使用。
【請求項１１】
瘢痕化を減少させるため及び／又は繊維症を治療するための医薬を製造するための、ＰＣＰ及び／又はＰＤＥ４阻害剤と組み合わせたｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤の使用。
【請求項１２】
ＰＤＥ５阻害剤を含む医薬組成物、瘢痕化を減少させるため及び／又は繊維症を治療するための当該組成物の使用に関する指示書、及び容器を含む医薬パック。
【請求項１３】
ＰＤＥ５阻害剤と、ＰＣＰ阻害剤及び／又はＰＤＥ４阻害剤（ｕＰＡ）との組合せ剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、瘢痕化及び／又は繊維症を減少又は防止するためのサイクリックグアノシン３’，５’−モノホスフェートタイプ５  ｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤（以下、ＰＤＥ５阻害剤）の使用に関する。ＰＤＥ５阻害剤には、特に、化合物シルデナフィルが含まれる。
【０００２】
本発明によると、瘢痕化及び／又は繊維症に関連する疾患の例には：肺繊維症；アテローム性動脈硬化症；心血管疾患；感染、外傷、外科処置若しくは熱傷の後の皮膚及び角膜瘢痕化及び／又は繊維症；強皮症及び他の結合組織障害；心臓の繊維症；慢性閉塞性肺疾患；筋繊維症；腎繊維症；慢性皮膚潰瘍及び脂質皮膚硬化症（lipdermatosclerosis）；（あらゆる原因による）肺繊維症；外科処置後及び特発性（idiophatic）の癒着；皮膚の炎症性状態（苔癬状態及びそれに関連する状態も含まれる）；老化及び全ての老化関連変性障害（皮膚の老化も含まれる）；あらゆる病因（ウイルス性及び非ウイルス性肝炎が含まれる）による肝繊維症；肝硬変；慢性膵炎；慢性甲状腺炎；（あらゆる原因による）石灰沈着症；その病原が結合マトリックスの沈着／リモデリングに関連する状態（ガンも含まれる）が、（必ずしもこれらに限定されないが）含まれる。
【０００３】
本発明は、このような疾患状態の治療における一定の化合物の使用に関する。
【背景技術】
【０００４】
開発途上国と先進国のいずれにおいても、瘢痕化及び／繊維症に関連する何らかの疾患の発生は資源の深刻な浪費である。これら疾患の結果を処理することを試みる国内的及び国際的公衆衛生プログラムの両方のための費用は相当なものである。従って、瘢痕化及び／又は繊維症に関連した疾患の作用を治療又は減少させるための手段を提供することが望ましい。
【０００５】
アテローム性動脈硬化症のような瘢痕化及び／又は繊維症に関連した一定の疾患の進行は、平滑筋細胞（ＳＭＣ）の蓄積／増殖に関与し得る。平滑筋細胞は、本質的に大部分膠原性である細胞外マトリックス微小分子を合成する。血栓症から心筋梗塞（ＭＩ）へのアテローム性動脈硬化症の進行は組織傷害につながる可能性があり、それは、瘢痕組織ターンオーバーと繊維組織形成のいずれをも引き起こし得る。組織傷害後の正常な創傷修復過程は繊維芽細胞の増殖を生じるが、繊維芽細胞の筋繊維芽細胞への分化が、組織繊維症の発達における初期の事象を特徴付け得る。筋繊維芽細胞が梗塞部位に長期に渡り存在すると、細胞外マトリックスタンパク質とプロテアーゼの不均衡も生じやすく、それは肥厚性瘢痕及び創傷形成を悪化し得る。
【０００６】
瘢痕化及び／又は繊維症に関連した疾患を治療するための、それら疾患状態を治療できるか又は少なくとも改善できる化合物を提供することが望ましいであろう。
ＥＰＯ９３００６９は、瘢痕化を減少させるための組成物を開示している。これら組成物のうち、ホスホジエステラーゼ阻害剤も、創傷の瘢痕化を減少するといわれている。しかしながら、その文献中に記載されたホスホジエステラーゼ阻害剤は、広範囲の阻害剤であり、ＰＤＥ５に特異的でない。従って、当該特許の阻害剤は、本発明の化合物と同じ治療効果を有さない点で不利であり得る。
【０００７】
Redondo et al (British Journal of Pharmacology 1998, 124, 1455-1462) は、成人心臓繊維芽細胞によるコラーゲン合成に対する、心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）とサイクリックＧＭＰホスホジエステラーゼ阻害の効果についての検討を記載している。ナトリウム利尿ペプチドレセプターの２つの主要なサブクラスが特定されており、これらのうちＮＰＲ−Ｃタイプが最も支配的で、心臓繊維芽細胞におけるナトリウム利尿ペプチドレセプターの集団の７０％を占める。その著者は、ＰＤＥ阻害剤であるザプリナスト（Zaprinast）が、それだけでは心臓繊維芽細胞増殖の制御において効果を有さないことを見出した。同様に、ＡＮＰもそれだけでは心臓繊維芽細胞増殖を制御しなかった。しかしながら、ＡＮＰとザプリナストの組合せは、限定された濃度範囲にわたりチミジン取り込み反応の濃度依存的阻害を引き起こし、その著者は、これをＤＮＡ合成の間接的アッセイとして用いた。それら結果は、Ｃ−ＡＮＦ４−３２（ＮＰＲ−Ｃ特異的類似体）とザプリナストの組合せでは再現することができなかった。実はどこか他の文献ではザプリナストが非特異的ＰＤＥ阻害剤として作用すると記録されている（例えば、McMahon et al (doc 18) と Kukoretz et al (doc 3) を参照のこと）のに、その著者はザプリナストが特異的ＰＤＥ５阻害剤であると記載していることにより、この検討に更なる疑いが投げかけられる。それは、ＰＤＥ５よりも、ＰＤＥ６に対して５倍強力であることも知られている。
【０００８】
Duncan et al (The FASEB Journal) は正常ラット腎臓の in vitro 検討を開示しており、その中で、結合組織成長因子（connective tissue growth factor）が腫瘍細胞増殖因子ベータ（ＴＧＦ−β）誘発繊維芽細胞コラーゲン合成を媒介すること、及び、ＣＴＧＦ合成又は作用の in vivo 遮断が、コラーゲン合成及び繊維芽細胞蓄積の両方を阻害することによってＴＧＦ−β誘発肉芽組織形成を減少させることが見出された。ｃＡＭＰもＣＴＧＦそれ自体により誘発されるコラーゲン合成を阻害したが、ｃＧＭＰは効果を有さないと報告された。この論文は、ＰＤＥ５はコラーゲン産生を阻害するという Redondo らによる仮説と矛盾する。従って、瘢痕化におけるｃＧＭＰの役割は、従来技術からは不明である。
【０００９】
組織ホメオスタシスの破壊に続く創傷治癒の過程は、協調的に結び付く重複した段階のカスケードに関与し、このカスケードには：炎症、肉芽組織形成、細胞外マトリックス沈着及び集合、及びターメーション (termation) が含まれる。ペプチド因子が、その過程に種々の方式で関与し、血小板機能、白血球走化性、サイトカイン合成及び血管形成を制御し、並びに、繊維芽細胞表現形の進行をもたらし、究極的に未熟な瘢痕組織の形成を引き起こす。それらペプチド因子は、これら過程を、繊維芽細胞の増殖する能力、及び定量的及び定性的にそれらの細胞外マトリックス成分産生プロファイルを変化させる能力を調節することにより制御する。創傷治癒カスケードの開始に関与することが知られている主な調節性因子の１つはＴＧＦ−βである。
【００１０】
その文献には、酸化窒素が創傷治癒の速度を改善するといういくつかの示唆がある。ｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤が酸化窒素由来ｃＧＭＰの細胞内濃度を増加させ、それによって酸化窒素の効果を促進するということも知られている。これは、男性勃起不全症の治療におけるシルデナフィルの効力の原因である。
【非特許文献１】Redondo et al, British Journal of Pharmacology 1998,124, 1455-1462
【特許文献１】ＥＰＯ９３００６９
【発明の開示】
【００１１】
理論に拘束されることを望まないが、抗瘢痕化効果は創傷治癒サイクルの適切な段階における特異的ＰＤＥ５阻害に関連すると考えられる。これは、ＮＯ媒介平滑筋弛緩のような適切なシグナルと共に生じ得る。他の因子も関与し得る。
【００１２】
驚くべきことに、かくして我々は、治癒している創傷にＰＤＥ５阻害剤を投与することが瘢痕組織形成の発生の減少をもたらし得ることを見出した。
我々は、心臓組織の繊維症の in vivo 観測から、正常な心臓組織と比較して過剰にタンパク質ＰＤＥ５が発現していることを見出した。筋繊維芽細胞として知られる繊維芽細胞の亜集団においてＰＤＥ５が存在していることも確認した。従って、これら細胞における増大したＰＤＥ５発現は、組織繊維症をもたらす病理に関与し得る。全ての組織における繊維症をもたらすメカニズムは類似していると考えられており、従って、肝臓、腎臓、肺、脊髄、及び皮膚における繊維症の発生も同様に進行する。本発明によると、これら全ての（及び多くの他の）組織タイプの繊維状態はＰＤＥ５阻害により軽減されることができ、このようにして、有意な治療的恩恵をもたらし得る。
【００１３】
（ザプリナストの検討においてRedondoらによって例示されているような）非選択的ＰＤＥ阻害や、ペントキシフィリン（弱く非選択的なＰＤＥ阻害剤）を用いたデータは、これら薬剤が抗繊維症剤として振舞い得ることを示唆したが、先行技術においては、瘢痕化を予防又は減少させるための治療が選択的ＰＤＥ５阻害を基礎とし得ることは認識されていない。実際、先行技術においては瘢痕形成におけるｃＧＭＰの役割（そして従ってＰＤＥ５の役割）に関して意見の争いがあるようである。
【００１４】
本発明の第一の側面によると、患者を有効な量のｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤又はその医薬組成物で処置することを含む、患者において瘢痕化を減少させるため及び／又は繊維症を治療するための方法が提供される。
【００１５】
本発明の第二の側面によると、瘢痕化を減少させるため及び／又は繊維症を治療するための医薬を製造するためのｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤の使用が提供される。
本発明の第三の側面によると、組織における瘢痕化を減少させるため及び／又は繊維症を治療するためのｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤の使用が提供される。
【００１６】
本発明の第四の側面によると、ＰＤＥ５阻害剤を含む医薬組成物、瘢痕化を減少させるため及び／又は繊維症を治療するためのその組成物の使用に関する指示書、及び容器を含む医薬パックが提供される。
【００１７】
上記側面の各々の態様において、本発明により治療され得る瘢痕化及び／又は繊維症に関連した疾患には：肺繊維症；アテローム性動脈硬化症；心血管疾患；感染、外傷、外科処置若しくは熱傷の後の皮膚及び角膜瘢痕化及び／又は繊維症；強皮症及び他の結合組織障害；心臓の繊維症；慢性閉塞性肺疾患；筋繊維症；腎繊維症；慢性皮膚潰瘍及び脂質皮膚硬化症；（あらゆる原因による）肺繊維症；外科処置後及び特発性の癒着；皮膚の炎症性状態（苔癬状態及びそれに関連する状態も含まれる）；老化及び全ての老化関連変性障害（皮膚の老化も含まれる）；あらゆる病因（ウイルス性及び非ウイルス性肝炎が含まれる）による肝繊維症；肝硬変；慢性膵炎；慢性甲状腺炎；（あらゆる原因による）石灰沈着症；その病原が結合マトリックスの沈着／リモデリングに関連する状態（ガンも含まれる）が含まれる。
【００１８】
ｃＧＭＰ  ＰＤＥ５イソ酵素に選択的に作用することにより組織における瘢痕化の発生を改善又は予防する治療薬剤は、現在は商業的に入手可能でない。
本発明の文脈において、ＰＤＥ５阻害剤とは、ｃＧＭＰ  ＰＤＥ５イソ酵素の強力で選択的な阻害剤である、あらゆる化合物のことをいう。
【００１９】
本発明の目的のためには、ＰＤＥ５阻害剤は、少なくとも２５倍、そして好ましくは少なくとも３０倍のＰＤＥ５阻害に有利な選択性を示すことが必要である。
本発明による薬学的組合せ剤の使用に適するＰＤＥ５阻害剤は、以下に詳述されるｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤である。本発明における使用のために特に好ましいものは、強力で選択的なｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤である。
【００２０】
本発明による使用に適するｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤には、以下のものが含まれる：
ＥＰ−Ａ−０４６３７５６中に開示されているピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン類；ＥＰ−Ａ−０５２６００４中に開示されているピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン類；公開された国際特許出願ＷＯ９３／０６１０４中に開示されているピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン類；公開された国際特許出願ＷＯ９３／０７１４９中に開示されている異性体であるピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン類；公開された国際特許出願ＷＯ９３／１２０９５中に開示されているキナゾリン−４−オン類；公開された国際特許出願ＷＯ９４／０５６６１中に開示されているピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４−オン類；公開された国際特許出願ＷＯ９４／００４５３中に開示されているプリン−６−オン類；公開された国際特許出願ＷＯ９８／４９１６６中に開示されているピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン類；公開された国際特許出願ＷＯ９９／５４３３３中に開示されているピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン類；ＥＰ−Ａ−０９９５７５１中に開示されているピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−４−オン類；公開された国際特許出願ＷＯ００／２４７４５中に開示されているピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン類；ＥＰ−Ａ−０９９５７５０中に開示されているピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−４−オン類；公開された国際出願ＷＯ９５／１９９７８中に開示されている化合物；公開された国際出願ＷＯ９９／２４４３３中に開示されている化合物；及び公開された国際出願ＷＯ９３／０７１２４中に開示されている化合物、
公開された国際出願ＷＯ０１／２７１１２中に開示されているピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン類；公開された国際出願ＷＯ０１／２７１１３中に開示されているピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン類；ＥＰ−Ａ−１０９２７１８中に開示されている化合物、及びＥＰ−Ａ−１０９２７１９中に開示されている化合物。
【００２１】
本発明による使用のための好ましいタイプＶホスホジエステラーゼ阻害剤には、以下のものが含まれる：
１−［［３−（６，７−ジヒドロ−１−メチル−７−オキソ−３−プロピル−１Ｈ−ピラゾロ［４,３−ｄ］ピリミジン−５−イル）−４−エトキシフェニル］スルホニル］−４−メチルピペラジンとしても知られる５−［２−エトキシ−５−（４−メチル−１−ピペラジニルスルホニル）フェニル］−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（シルデナフィル）（ＥＰ−Ａ−０４６３７５６を参照のこと）；
５−（２−エトキシ−５−モルホリノアセチルフェニル）−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１,６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４,３−ｄ］ピリミジン−７−オン（ＥＰ−Ａ−０５２６００４を参照のこと）；
３−エチル−５−［５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）−２−ｎ−プロポキシフェニル］−２−（ピリジン−２−イル）メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（ＷＯ９８／４９１６６を参照のこと）；
３−エチル−５−［５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）−２−（２−メトキシエトキシ）ピリジン−３−イル］−２−（ピリジン−２−イル）メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（ＷＯ９９／５４３３３を参照のこと）；
３−エチル−５−{５−［４−エチルピペラジン−１−イルスホニル］−２−（［（１Ｒ）−２−メトキシ−１−メチルエチル］オキシ）ピリジン−３−イル}−２−メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オンとしても知られる（＋）−３−エチル−５−［５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）−２−（２−メトキシ−１（Ｒ）−メチルエトキシ）ピリジン−３−イル］−２−メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（ＷＯ９９／５４３３３を参照のこと）；
１−｛６−エトキシ−５−［３−エチル−６，７−ジヒドロ−２−（２−メトキシエチル）−７−オキソ−２Ｈ−ピラゾロ［４,３−ｄ］ピリミジン−５−イル］−３−ピリジルスルホニル｝−４−エチルピペラジンとしても知られる、５−［２−エトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）ピリジン−３−イル］−３−エチル−２−［２−メトキシエチル］−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（ＷＯ０１／２７１１３、実施例８を参照のこと）；
５−［２−イソブトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）ピリジン−３−イル］−３−エチル−２−（１−メチルピペリジン−４−イル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４,３−ｄ］ピリミジン−７−オン（ＷＯ０１／２７１１３、実施例１５を参照のこと）；
５−［２−エトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）ピリジン−３−イル］−３−エチル−２−フェニル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（ＷＯ０１／２７１１３、実施例６６を参照のこと）；
５−（５−アセチル−２−プロポキシ−３−ピリジニル）−３−エチル−２−（１−イソプロピル−３−アゼチジニル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（ＷＯ０１／２７１１２、実施例１２４を参照のこと）；
５−（５−アセチル−２−ブトキシ−３−ピリジニル）−３−エチル−２−（１−エチル−３−アゼチニル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（ＷＯ０１／２７１１２、実施例１３２を参照のこと）；
（６Ｒ，１２ａＲ）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−２−メチル−６−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−ピラジノ［２’，１’：６，１］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン（ＩＣ−３５１）、即ち、公開された国際出願ＷＯ９５／１９９７８の実施例７８及び９５の化合物、並びに実施例１、３、７、及び８の化合物；
１−［［３−（３，４−ジヒドロ−５−メチル−４−オキソ−７−プロピルイミダゾ［５，１−ｆ］−ａｓ−トリアジン−２−イル）−４−エトキシフェニル］スルホニル］−４−エチルピペラジンとしても知られる、２−［２−エトキシ−５−（４−エチル−ピペラジン−１−イル−１−スルホニル）フェニル］−５−メチル−７−プロピル−３Ｈ−イミダゾ［５，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−４−オン（ヴァルデナフィル）、即ち、公開された国際出願ＷＯ９９／２４４３３の実施例２０、１９、３３７及び３３６の化合物；
公開された国際出願ＷＯ９３／０７１２４（エーザイ）の実施例１１の化合物；及び、
Rotella D P, J. Med. Chem., 2000, 43, 1257 からの化合物３及び１４。
【００２２】
本発明に関連して有用な更に他のタイプのｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤には以下のものが含まれる：４−ブロモ−５−（ピリジルメチルアミノ）−６−［３−（４−クロロフェニル）プロポキシ］−３（２Ｈ）ピリダジノン；１−［４−［（１，３−ベンゾジオキソール−５−イルメチル）アミノ］−６−クロロ−２−キナゾリニル］−４−ピペリジンカルボン酸・モノナトリウム塩；（＋）−シス−５，６ａ，７，９，９，９ａ−ヘキサヒドロ−２−［４−（トリフルオロメチル）フェニルメチル−５−メチル−シクロペンタ−４，５］イミダゾ［２，１−ｂ］プリン−４（３Ｈ）オン；フラズロシリン；シス−２−へキシル−５−メチル−３，４，５，６ａ，７，８，９，９ａ−オクタヒドロシクロペンタ［４，５］−イミダゾ［２，１−ｂ］プリン−４−オン；３−アセチル−１−（２−クロロベンジル）−２−プロピルインドール−６−カルボキシレート；３−アセチル−１−（２−クロロベンジル）−２−プロピルインドール−６−カルボキシレート；４−ブロモ−５−（３−ピリジルメチルアミノ）−６−（３−（４−クロロフェニル）プロポキシ）−３−（２Ｈ）ピリダジノン；１−メチル−５（５−モルホリノアセチル−２−ｎ−プロポキシフェニル）−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；１−［４−［（１，３−ベンゾジオキソール−５−イルメチル）アミノ］−６−クロロ−２−キナゾリニル］−４−ピペリジンカルボン酸・モノナトリウム塩；Pharmaprojects No. 4516（グラクソ・ウェルカム）；Pharmaprojects No. 5051（バイエル）；Pharmaprojects No. 5064（協和発酵；ＷＯ９６／２６９４０参照のこと）；Pharmaprojects No. 5069（シェーリング・プラウ）；ＧＦ−１９６９６０（グラクソ・ウェルカム）；Ｅ−８０１０及びＥ−４０１０（エーザイ）；Ｂａｙ−３８−３０４５及び３８−９４５６（バイエル）、及びＳｃｈ−５１８６６。
【００２３】
疑いを回避するため記載するが、引用され具体的に上記された公開特許明細書中に詳細に記載された上記のＰＤＥ５阻害性化合物は本開示の一部を具体的に形成し、本出願の発明の主題の一部を表す。
【００２４】
いずれの特定のｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤の適切性も、文献の方法を用いてその効力と選択性を評価した後に、標準的薬学プラクティスに従ってその毒性、吸収、代謝、薬物動力学等を評価することによって容易に決定され得る。
【００２５】
好ましくは、ｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤は、ＰＤＥ５に対する１００ｎＭ未満、より好ましくは５０ｎＭ未満、更により好ましくは１０ｎＭ未満のＩＣ５０値を有する。
ｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤についてのＩＣ５０値は、確立された文献の方法論を用いて、例えば、ＥＰ０４６３７５６−Ｂ１及びＥＰ０５２６００４−Ａ１に記載された様に測定され得る。
【００２６】
好ましくは、本発明において用いられるｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤は、ＰＤＥ５酵素について選択的である。好ましくは、それらは、ＰＤＥ３よりも選択的であり、より好ましくは、ＰＤＥ３及びＰＤＥ４よりも選択的である。好ましくは、本発明のｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤は、ＰＤＥ３よりも、より好ましくはＰＤＥ３及びＰＤＥ４よりもＰＤＥ５に対して、２５より大きい、より好ましくは３０より大きい、そして更により好ましくは１００より大きい選択性比を有する。最も良好な阻害剤は、ＰＤＥ３よりも、より好ましくはＰＤＥ３及びＰＤＥ４よりもＰＤＥ５に対して、好ましくは３００倍よりも大きい選択性を示す。
【００２７】
選択性比は、当業者により容易に測定され得る。ＰＤＥ３及びＰＤＥ４酵素についてのＩＣ５０値は、確立された文献の方法論を用いて測定され得る。S A Ballard et al., Journal of Urology, 1998, vol. 159, p. 2164-2171 を参照のこと。
【００２８】
治療として有効となるために、本発明の化合物は、好ましくは、経口で生物学的に利用可能なものである。経口生物学的利用能とは、経口投与された薬物が体循環に到達する割合のことをいう。薬物の経口生物学的利用能を決定する因子は、溶解性、膜透過性及び代謝安定性である。典型的には、先ず in vitro 手法により、次いで in vivo 手法によるスクリーニングカスケードが用いられて、経口生物学的利用能が決定される。
【００２９】
溶解性、即ち、胃腸管（ＧＩＴ）の水性内容物による薬物の可溶化は、ＧＩＴを擬似するのに適切なｐＨで行われる in vitro 溶解度実験によって予測されうる。好ましくは、本発明の化合物は、５０ｍｃｇ／ｍＬの最小溶解度を有する。溶解度は、Adv. Drug Deliv. Rev. 23, 3-25, 1997 中に記載されているような、当該技術分野において公知の標準的手順によって測定されうる。
【００３０】
膜透過性とは、ＧＩＴの細胞を通る化合物の通過性のことをいう。親油性は、これを予測するのに鍵となる特性であり、有機溶媒と緩衝液を用いる in vitro ＬｏｇＤ７．４測定によって規定される。好ましくは、本発明の化合物は、−２〜＋４、より好ましくは、−１〜＋２のＬｏｇＤ７．４を有する。ＬｏｇＤは、J. Pharm. Pharmacol. 1990, 42:144 中に記載されているような、当該技術分野において公知の標準的手順によって測定されうる。
【００３１】
ｃａｃｏ−２のような細胞単層アッセイは、ｐ−グリコプロテインのような外向きフラックストランスポーターの存在下における好ましい膜透過性の予測を実質的に与える。いわゆるｃａｃｏ−２フラックスである。好ましくは、本発明の化合物は、２×１０−６ｃｍｓ−１、より好ましくは、５×１０−６ｃｍｓ−１より大きいｃａｃｏ−２フラックスを有する。ｃａｃｏフラックス値は、J Pharm. Sci, 1990, 79, 595-600 中に記載されているような、当該技術分野において公知の標準的手順によって測定され得る。
【００３２】
代謝安定性は、吸収過程の間にＧＩＴ又は肝臓が化合物を代謝する能力、つまり初回通過効果を取り扱うものである。ミクロソーム、肝細胞等のようなアッセイ系は、代謝傾向を予測させる。好ましくは、実施例の化合物は、そのアッセイ系において０．５未満の肝抽出率と釣り合う代謝安定性を示す。アッセイ系の例及びデータ操作の例が、Curr. Opin. Drug Disc. Devel., 201, 4, 36-44, Drug Met. Disp., 2000, 28, 1518-1523 中に記載されている。
【００３３】
上記過程の相互作用性の故に、ある薬剤がヒトにおいて経口で生物学的に利用可能であろうという更なる裏付けは、動物における in vivo 実験によって得られうる。絶対的生物学的利用能は、これら化合物を経口ルートによって別々に又は混合物で投与することによるこれら検討において測定される。絶対的測定（吸収されたものの％）のために、静脈ルートも用いられる。動物における経口生物学的利用能の評価の例は、Drug Met. Disp., 2001, 29, 82-87; J. Med Chem, 1997, 40, 827-879；Drug Met. Disp., 1999, 27, 221-226 中に見出され得る。
【００３４】
好ましくは、ｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤はシルデナフィルである。
ｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤は単独で投与することもできるが、ヒト治療においては、一般に、意図される投与経路や標準的薬学プラクティスに関して適切に選択された薬学的賦形剤、希釈剤又は担体との混合物で投与される。
【００３５】
例えば、ＰＤＥ５阻害剤は、即時、遅延、修飾、又は制御放出の用途のための錠剤、カプセル剤、オビュール剤 (ovules)、エリキシル剤、溶液剤、又は懸濁液剤の形態で、経口、バッカル又は舌下で投与されてもよく、それらには、着香料又は着色剤が含有されてもよい。
【００３６】
そのような錠剤には、微結晶性セルロース、ラクト−ス、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、リン酸一水素カルシウム及びグリシンのような賦形剤、デンプン（好ましくはトウモロコシ、バレイショ、又はタピオカデンプン）、スターチグリコール酸ナトリウム、クロスカルメロースナトリウム及び一定の複合シリケートのような崩壊剤、及び、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ショ糖、ゼラチン、及びアラビアガムのような顆粒結合剤が含有されてもよい。更に、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ベヘン酸グリセリル及びタルクのような滑沢剤が包含されてもよい。
【００３７】
類似のタイプの固体組成物が、ゼラチンカプセルの充填剤としても使用され得る。これに関する好ましい賦形剤には、ラクトース、デンプン、セルロース、乳糖又は高分子量ポリエチレングリコール類が含まれる。水性懸濁液剤及び／又はエリキシル剤のためには、本発明のｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤は、種々の甘味料又は着香料、着色剤又は染料；乳化剤及び／又は懸濁剤；及び、水、エタノール、プロピレングリコール及びグリセリンのような希釈剤；及びその組み合わせと混合されてもよい。
【００３８】
ｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤は、非経口で、例えば、静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内若しくは皮下で投与されても、注入手法によって投与されてもよい。そのような非経口投与のためには、それらは滅菌水溶液の形態で最も良好に使用され、それには、他の物質、例えば、その溶液を血液と等張にするのに十分な塩又はグルコースが含有されてもよい。その水溶液は、必要であれば、適切に（好ましくは３〜９のｐＨに）緩衝化されるべきである。滅菌条件下での適する非経口製剤の調製は、当業者にとって周知の標準的薬学的手法によって容易に達成される。
【００３９】
本明細書における次の投与量レベル及び他の投与量レベルは、約６５〜７０ｋｇの体重を有する平均的なヒト対象のためのものである。当業者は、子供や老人のようにその体重がこの範囲外になる対象について、必要とされる投与量レベルを容易に決定できるであろう。
【００４０】
そのような製剤中のｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤の投与量はその効力に依存するが、１日３回までの投与について１〜５００ｍｇの範囲内であると予測され得る。ヒト患者への経口及び非経口投与のためには、ｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤の１日あたりの投与量レベルは、通常５〜５００ｍｇ（単回又は分割投与で）である。シルデナフィルの場合、好ましい投与量は、１日１回、２回又は３回（好ましくは１回）で投与されうる１０〜１００ｍｇ（例えば、１０、２５、５０及び１００ｍｇ）の範囲内である。しかしながら、正確な投与量は処方する医師によって決定されるものであり、そして患者の年齢及び体重、及び症状の重さに依存する。
【００４１】
従って、例えば、ｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤の錠剤又はカプセル剤は、一度に１錠若しくは又は２錠以上で適宜投与するために、５ｍｇ〜２５０ｍｇ（例えば、１０〜１００ｍｇ）の活性化合物を含有しうる。医師は、いずれにしても、どの個々の患者に対しても最も適する実際の投与量を決定することになり、それは、特定の患者の年齢、体重及び反応によって変動する。上記投与量は、平均的ケースの例示である。もちろん、より高い投与量又はより低い投与量の範囲が相応である個別の例もありえ、そのようなものは本発明の範囲内である。
【００４２】
ｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤は、鼻腔内に投与されても吸入によって投与されてもよく、そして、適する噴射剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン；トリクロロフルオロメタン；ジクロロテトラフルオロエタン；１，１，１，２−テトラフルオロエタン又は１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロプロパンのようなハイドロフルオロアルカン；二酸化炭素又は他の適するガスを使用して、加圧容器、ポンプ、スプレー、又はネブライザーから与えられるドライパウダー吸入体又はエアロゾルスプレーの形態で都合よく送り込まれる。加圧エアロゾルの場合、投与量単位は、計量された量を送り込むためのバルブを提供することによって決定されうる。加圧容器、ポンプ、スプレー又はネブライザーには、例えばエタノールと噴射剤の混合物を溶媒として使用するｃＧＭＰ  ＰＤＥ阻害剤の溶液剤又は懸濁液剤が含有されてもよく、それには、更に滑沢剤、例えばソルビタントリオレートが含有されてもよい。吸入器又は注入器中で使用するためのカプセル及びカートリッジ（例えばゼラチンから作られる）は、ｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤と、ラクトース又はデンプンのような適する粉末ベースとのパウダーミックスを含有するように製剤され得る。
【００４３】
エアロゾル又はドライパウダー製剤は、好ましくは、各々の計量された投与量若しくは“一吹きの量”が、患者へ送り込むための１〜５０ｍｇのｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤を含有するようにしつらえられる。エアロゾルでの一日投与の全量は１〜５０ｍｇの範囲内であり、その日全体を通じて１回で投与されても、より普通には分割で投与されてもよい。
【００４４】
また、ｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤は、坐剤又はペッサリーの形態で投与されても良い。
ｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤は、ゲル剤、ヒドロゲル剤、ローション剤、溶液剤、クリーム剤、軟膏剤又はダスティングパウダー剤の形態で局所に適用されてもよい。ｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤は、例えば、スキンパッチを使用することによって、皮膚に又は経皮的に投与されてもよい。
【００４５】
皮膚への局所適用のために、ｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤は、例えば、１以上の鉱油、流動ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン化合物、乳化ワックス及び水を有する混合物中に懸濁又は溶解された当該阻害剤を含有する適する軟膏剤として製剤されてもよい。また、それらは、例えば、１以上の鉱油、モノステアリン酸ソルビタン、ポリエチレングリコール、流動パラフィン、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セテアリルアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコール及び水の混合物中に懸濁又は溶解された適するローション剤又はクリーム剤として製剤されてもよい。
【００４６】
ｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤は、シクロデキストリンと組み合わせて使用されてもよい。シクロデキストリン類は、薬物分子と包摂複合体又は非包摂複合体を形成することが知られている。薬物−シクロデキストリン複合体の形成は、薬物分子の溶解性、溶解速度、生物学的利用能及び／又は安定性特性を修飾し得る。薬物−シクロデキストリン複合体は、一般に殆どの投与形態及び投与ルートに有用である。薬物との直接的複合体形成の別のやり方として、シクロデキストリンが、補助的添加剤、例えば、担体、希釈剤又は可溶化剤として使用されてもよい。α−、β−、及びγ−シクロデキストリンが最も普通に使用され、適する例は、ＷＯ−Ａ−９１／１１１７２、ＷＯ−Ａ−９４／０２５１８及びＷＯ−Ａ−９８／５５１４８中に記載されている。
【００４７】
一般に、ヒトにおいては、ｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤の経口投与は好ましいルートであり、最も便利である。受容者が嚥下障害又は経口投与後薬物吸収の障害を患う状況の下では、本薬剤は、非経口、舌下又はバッカルで投与されてもよい。
【００４８】
本発明のｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤は、１以上の次のものと組み合わせて投与されてもよい：
i）α−アドレノセプター、α−レセプター又はα−ブロッカーとしても知られるα−アドレナリン作動性レセプターアンタゴニスト化合物。本発明における使用のために適する化合物には、次のものが含まれる：１９９８年６月１４日に公開され、そのα−アドレナリン作動性レセプターに関する開示が参照により本明細書に組み込まれるＰＣＴ出願ＷＯ９９／３０６９７に記載されており、選択的α１−アドレノセプター又はα２−アドレノセプター及び非選択的アドレノセプターを包含する、α−アドレナリン作動性レセプター（適するα１−アドレノセプターには、フェントラミン、フェントラミンメシレート、トラゾドン、アルフゾシン、インドラミン、ナフトピジル、タムスロシン、ダピプラゾール (dapiprazole)、フェノキシベンザミン、イダゾキサン (idazoxan)、エファラキサン(efaraxan)、ヨヒンビン、ラウオルフィア・アルカロイド、Ｒｅｃｏｒｄａｔｉ１５／２７３９、ＳＮＡＰ１０６９、ＳＮＡＰ５０８９、ＲＳ１７０５３、ＳＬ８９．０５９１、ドキサゾシン、テラゾシン、アバノキル (abanoquil)及びプラゾシンが含まれる）；米国６，０３７，３４６［２０００年３月１４日］からのα２−ブロッカー、ジベナミン、トラゾリン、トリマゾシン (trimazosin) 及びジベナミン；その各々が参照により本明細書に取り込まれる米国特許４，１８８，３９０号、４，０２６，８９４号、３，５１１，８３６号、４，３１５，００７号、３，５２７，７６１号、３，９９７，６６６号、２，５０３，０５９号、４，７０３，０６３号、３，３８１，００９号、４，２５２，７２１号及び２，５９９，０００号に記載されたα−アドレナリン作動性レセプター；α２−アドレノセプターには、場合によりピルキサミン (pirxamine) のような強心剤（cariotonic）の存在下での、クロニジン、パパベリン、パパベリン塩酸塩が含まれる；
ii）ＮＯ供与体（ＮＯアゴニスト）化合物。本発明における使用のための適するＮＯ供与体化合物には、モノ−、ジ−若しくはトリ−ニトレートのような有機ニトレート類若しくは有機硝酸エステル類が含まれ、それらには、三硝酸グリセリン（ニトログリセリンとしても知られている）、イソソルビド・５−モノニトレート、イソソルビド・ジニトレート、ペンタエリトリトール・テトラニトレート、四硝酸エリトリチル、ニトロプルシドナトリウム（ＳＮＰ）、３−モルホリノシドノニミン (3-morpholinosydnonimine)モルシドミン、Ｓ−ニトロソ−Ｎ−アセチルペニシラミン（ＳＮＡＰ）、Ｓ−ニトロソ−Ｎ−グルタチオン（ＳＮＯ−ＧＬＵ）、Ｎ−ヒドロキシ−Ｌ−アルギニン、硝酸アミル、リンシドミン (linsidomine)、リンシドミンクロロハイドレート、（ＳＩＮ−１）、Ｓ−ニトロソ−Ｎ−システイン、ジアゼニウムジオレート類 (diazenium diolates)、（ＮＯＮＯエート）、１，５−ペンタンジニトレート、Ｌ−アルギネン（L-arginene）、薬用ニンジン、タイソウ、モルシドミン、Ｒｅ−２０４７、公開されたＰＣＴ出願ＷＯ００１２０７５中に記載されたＮＭＩ−６７８−１１及びＮＭＩ−９３７のようなニトロシル化モキシシリート誘導体が含まれる；
iii）血管拡張薬剤。本発明における使用のための適する血管拡張薬剤には、ニモデピン (nimodepine)、ピナシジル、シクランデレート、イソクスプリン、クロロプルマジン、ハロペリドール、Ｒｅｃ１５／２７３９、トラゾドン、ペントキシフィリンが含まれる；
iv）トロンボキサンＡ２アゴニスト；
v）Ｌ−アルギニンのようなＮＯ−合成酵素の基質；
vi）アムロジピンのようなカルシウムチャンネル遮断薬；
vii）ステロイド性又は非ステロイド性抗炎症薬剤；
viii）マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害剤、特にＭＭＰ−３、ＭＭＰ−１２及びＭＭＰ−１３阻害剤；
ix）ウロキナーゼタイププラスミノーゲンアクチベーター（ｕＰＡ）阻害剤；
x）ＰＣＰ阻害剤；及び
xi）ＰＤＥ４阻害剤。
【００４９】
本発明のＰＤＥ５阻害剤と組み合わせて創傷治療のために用いるための特に好ましい薬剤には：ＷＯ０１／４７９０１、ＧＢ０１０８０９７．７、ＰＣＴ／ＩＢ０１／０２３６０及びＧＢ０１０８１０２．５のもののようなＰＣＰ阻害剤が含まれる。
【００５０】
好ましくは、ＭＭＰ阻害剤は、ＷＯ９９／３５１２４、ＥＰ９３１７８８、ＷＯ９９／２９６６７又はＷＯ００／７４６８１中に具体的又は一般的に開示されているもののようなＭＭＰ−３及び／又はＭＭＰ−１３阻害剤である。特に好ましいＭＭＰ阻害剤は、ＷＯ９９／３５１２４、ＥＰ９３１７８８、ＷＯ９９／２９６６７及びＷＯ００／７４６８１の実施例のものである。
【００５１】
好ましくは、ｕＰＡ阻害剤は、ＷＯ９９／２０６０８、ＥＰ１０４４９６７又はＷＯ００／０５２１４中に具体的又は一般的に開示されたものから選択される。特に好ましいｕＰＡ阻害剤は、ＷＯ９９／２０６０８、ＥＰ１０４４９６７及びＷＯ００／０５２１４の実施例のものである。
【００５２】
本明細書における治療についての全ての言及には、治癒的、緩和的及び予防的治療が含まれることが理解される。
【実施例】
【００５３】
Fawcett et al(Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2000; 97: 3702-3707) の方法に従って、ヒトＰＤＥ５Ａ１のアミノ酸残基１〜１２に対応するＬＩＰ−１［ＭＥＲＡＧＰＳＦＧＱＱＲ］ペプチドに対して、抗ヒトポリクローナル抗血清がウサギ中で生成され、アフィニティー精製された。ＬＩＰ−１はＰＤＥ５Ａ１に特有である。
【００５４】
ホルマリン固定パラフィン埋め込み組織の４μｍ切片が切断され、ＡＰＥＳ（３−アミノプロピルトリエトキシシラン）でコートされたスライド上に取り上げられ、そして６０℃で１時間乾燥された。切片からロウが除かれ、水で戻され、その後にタンパク質分解抗原回復を、０．１％塩化カルシウム［ｐＨ７−６］中の０．１％トリプシン液中で、３７℃、８分間行った。少し水で洗浄した後、内因性ペルオキシダーゼ活性が、９ｍｌＨ２Ｏ２が蒸留水で１００ｍｌにされた溶液中で１０分間インキュベートすることによって遮断された。切片は水道水中で洗浄され、次いでＰＢＳに移された。過剰の緩衝液がスライドから除かれて、試験切片が、ＰＢＳ中で１：６００に希釈されたＬＩＰ−１抗体中で、１時間、室温でインキュベートされた。ネガティブコントロールは、一次抗体を省略することにより含められた。用いられたポジティブコントロール組織は、ヒト海綿体であった。免疫検出は、ＤＡＫＯ  Ｒａｂｂｉｔ  Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（商標）システムを用いて、基質色素体（赤／褐色染色）としての３−アミノ−９−エチルカルバゾール（３−ＡＥＣ）と共に行われた。
【００５５】
図１は、反応性であるが炎症を起こしていない皮膚の、皮膚創傷の端における切片を示す。細静脈の中膜における平滑筋細胞の陽性染色及び陰性繊維芽細胞は、治癒している創傷におけるＰＤＥ５の発現を示す。過形成であるが損なわれていない扁平上皮１は陰性である。下にある真皮は、小さな又は大きな細静脈２を有する成熟した瘢痕組織を含有する。細静脈の中膜内の平滑筋細胞の陽性の濃い染色に注目されたい（本来の倍率は×１０）。
【００５６】
図２は、第１４日の治癒している潰瘍（左）と無傷の上皮（右）の間の境界から採取されたパラフィン切片である。細静脈の中膜内の平滑筋細胞（右）と、潰瘍の基部内の紡錘細胞（筋繊維芽細胞、左）の陽性染色も、やはり、ＰＤＥ５の発現を示す。過形成であるが損なわれていない扁平上皮（右）と壊死炎症性滲出物３は陰性である。細静脈４の中膜内の平滑筋細胞と、潰瘍５の基部内の紡錘細胞の陽性の濃い染色に注目されたい（本来の倍率は×２０）。
【００５７】
図３は、治癒した潰瘍基部から採取されたパラフィン切片であり、そこでは、若い瘢痕組織の束が正常な皮膚構造にとって代わっている。紡錘細胞（筋繊維芽細胞）の内のいくつか（８）と、いくつかの血管構造の陽性染色も、やはり、ＰＤＥ５の発現を示す（本来の倍率は×２０）。
【００５８】
図４は、図３の皮膚のパラフィン切片をより高倍率で見たものである。その切片は治癒した潰瘍基部から採取され、そこでは、若い瘢痕組織の束が正常な皮膚構造にとって代わっている。ＰＤＥ５の発現が、紡錘細胞（筋繊維芽細胞）のいくつか（９）と、薄い中膜を有する微細血管のいくつか（１０）の陽性染色により示される（本来の倍率は×４０）。
【００５９】
図５は、図４をより高倍率で見たものであり、図４の治癒した潰瘍基部から採取された切片を示し、そこでは、若い瘢痕組織の束が正常な皮膚構造にとって代わっている。無細胞のコラーゲン中に存在する紡錘細胞（筋繊維芽細胞）のいくつか（１１）に陽性染色が存在する。これら紡錘細胞のいくつかの細胞質における免疫学的局在決定は、斑状の分布を有する。小さい細動脈内の中膜平滑筋細胞（１２）の陽性染色はＰＤＥ５の発現を示す。内張りの内皮細胞（１３）の陰性染色が存在し、これはＰＤＥ５がないことを示している（本来の倍率は×６０）。
【００６０】
図６も、図４をより高倍率で見たものであり、比較的若い瘢痕組織の領域における治癒した潰瘍基部からの切片を示す。紡錘細胞（筋繊維芽細胞）のいくつか（１４）と、小さい細動脈内の中膜平滑筋（中央）（１５）の陽性染色も、やはり、ＰＤＥ５を示す。これら紡錘細胞のいくつかにおいては、免疫学的局在決定は斑状の分布を有する（本来の倍率は×６０）。
【００６１】
次の製剤例は例示に過ぎず、本発明の範囲の限定を意図するものではない。活性成分とは、ｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤を意味する。
製剤１：
錠剤が、次の成分を用いて製造される：
クエン酸シルデナフィル（５０ｍｇ）が、セルロース（微結晶性）、二酸化ケイ素、ステアリン酸（ヒュームド）とブレンドされ、その混合物が圧縮されて錠剤が形成される。
製剤２：
点滴製剤は、活性成分（１００ｍｇ）を等張生理食塩水（１００ｍｌ）と混合することにより製造され得る。
製剤３：
局所製剤は、２重量％までの活性成分を、鉱油、流動パラフィン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン化合物、乳化ロウ及び水の１以上との混合物であってよい適する賦形剤と混合することにより製造され得る。
【図面の簡単な説明】
【００６２】
本発明の有用性は、次の図面により示される。
【図１】図１は、１０×倍率における皮膚のパラフィン切片の顕微鏡写真である。
【図２】図２は、２０×倍率における皮膚のパラフィン切片の顕微鏡写真である。
【図３】図３は、２０×倍率における皮膚のパラフィン切片の顕微鏡写真である。
【図４】図４は、４０×倍率における皮膚のパラフィン切片の顕微鏡写真である。
【図５】図５は、６０×倍率における皮膚のパラフィン切片の顕微鏡写真である。
【図６】図６は、６０×倍率における皮膚のパラフィン切片の顕微鏡写真である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【手続補正書】
【提出日】平成16年9月24日(2004.9.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤を含む、瘢痕化を減少させるため及び／又は繊維症を治療するための医薬組成物。
【請求項２】
瘢痕化及び／又は繊維症に関連した疾患が：
肺繊維症；アテローム性動脈硬化症；心血管疾患；感染、障害、外科処置若しくは熱傷の後の皮膚及び角膜瘢痕化及び／又は繊維症；強皮症及び他の結合組織障害；心臓の繊維症；慢性閉塞性肺疾患；筋繊維症；腎繊維症；慢性皮膚潰瘍及び脂質皮膚硬化症；（あらゆる原因による）肺繊維症；外科処置後及び特発性（idiophatic）の癒着；皮膚の炎症性状態（苔癬状態及びそれに関連する状態も含まれる）；老化及び全ての老化関連変性障害（皮膚の老化も含まれる）；あらゆる病因（ウイルス性及び非ウイルス性肝炎が含まれる）による肝臓繊維症；肝硬変；慢性膵炎；慢性甲状腺炎；（あらゆる原因による）石灰沈着症；その病原が結合マトリックスの沈着／リモデリングに関連する状態（ガンも含まれる）
から選択される、請求項１記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記阻害剤が経口投与又は局所投与される、請求項１又は２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記阻害剤が１００ｎＭ未満のＩＣ５０を有する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記阻害剤が１０００を超える選択性比を有する、請求項４記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記阻害剤がシルデナフィルである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項７】
１日あたりの投与量が５〜５００ｍｇである、請求項６記載の医薬組成物。
【請求項８】
１日あたりの投与量が１０〜１００ｍｇである、請求項７記載の医薬組成物。
【請求項９】
ｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤を、ＰＣＰ及び／又はＰＤＥ４阻害剤と組み合わせて含む、瘢痕化を減少させるため及び／又は繊維症を治療するための医薬組成物。
【請求項１０】
ＰＤＥ５阻害剤を含む医薬組成物、瘢痕化を減少させるため及び／又は繊維症を治療するための当該組成物の使用に関する指示書、及び容器を含む医薬パック。
【請求項１１】
ＰＤＥ５阻害剤と、ＰＣＰ阻害剤及び／又はＰＤＥ４阻害剤（ｕＰＡ）との組合せ剤。
【国際調査報告】
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