【手続補正書】
【提出日】令和2年5月11日(2020.5.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
特定量の拡大された造血細胞をエクスビボまたはインビトロで遺伝子改変する方法であって、該方法が、
（ａ）特定量の造血細胞を入手する工程と、
（ｂ）少なくとも1種類のヒストンデアセチラーゼ阻害剤（HDACi）および少なくとも1種類の成長因子の存在下で前記特定量の造血細胞を培養して、該造血細胞を拡大する工程と、
（ｃ）該拡大された造血細胞を核酸配列と接触させる工程と、
を含み、ここで、該核酸配列が、前記特定量の拡大された造血細胞を改変する、、方法。
【請求項２】
造血細胞が造血幹細胞（HSC）を含む、請求項１記載の方法。
【請求項３】
造血細胞が造血幹前駆細胞（HSPC）を含む、請求項１記載の方法。
【請求項４】
造血細胞が臍帯血、骨髄、または末梢血から単離される、請求項１記載の方法。
【請求項５】
少なくとも1種類のHDACiが、トリコスタチン（TSA）、MS275、SAHA、VPA、UNC0638、およびHDAC6阻害剤161からなる群より選択される、請求項１記載の方法。
【請求項６】
少なくとも1種類の成長因子が、幹細胞因子（SCF）、flt3リガンド（FL）、インターロイキン-3（IL3）、およびインターロイキン-6（IL6）からなる群より選択される、請求項１記載の方法。
【請求項７】
工程（ｂ）において、JQ1-S、JY1、UNC0638、JMJD3、JQ-EZ-05、SR1、DBZ、dmPGE2、およびUM171からなる群より選択される1種類または複数種類の小分子の存在下で前記特定量の造血細胞をさらに培養する工程をさらに含む、請求項１記載の方法。
【請求項８】
前記核酸配列がヌクレアーゼをコードする、請求項１記載の方法。
【請求項９】
前記ヌクレアーゼが、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ZFN）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（TALEN）、およびCRISPR関連タンパク質（Cas）ヌクレアーゼからなる群から選択される、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
前記核酸配列がレンチウイルスをコードする、請求項１記載の方法。
【請求項１１】
前記接触がトランスフェクションまたは形質導入である、請求項１記載の方法。
【請求項１２】
前記核酸配列を発現する改変された拡大された造血細胞について選択する工程をさらに含む、請求項１記載の方法。
【請求項１３】
請求項１記載の方法によって調製された特定量の拡大された造血細胞を含む組成物。
【請求項１４】
薬学的に許容されるキャリアをさらに含む、請求項１３記載の組成物。
【請求項１５】
特定量の拡大された造血細胞をエクスビボまたはインビトロで改変する方法であって、該方法が、
（ａ）少なくとも1種類のヒストンデアセチラーゼ阻害剤（HDACi）および少なくとも1種類の成長因子の存在下で培養された特定量の造血細胞を入手する工程であって、該少なくとも1種類のHDACiおよび該少なくとも1種類の成長因子が該造血細胞を拡大することができる、工程と、
（ｂ）該拡大された造血細胞に核酸配列を移入する工程と、
を含む、方法。
【請求項１６】
前記特定量の造血細胞が、JQ1-S、JY1、UNC0638、JMJD3、JQ-EZ-05、SR1、DBZ、dmPGE2、およびUM171からなる群より選択される1種類または複数種類の小分子の存在下でさらに培養される、請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
請求項１５記載の方法によって調製された特定量の拡大された造血細胞を含む組成物。
【請求項１８】
特定量の拡大された造血細胞をエクスビボまたはインビトロで遺伝子改変する方法であって、該方法が、
（ａ）特定量の造血細胞を入手する工程と、
（ｂ）該特定量の造血細胞を核酸配列と接触させる工程であって、該核酸配列が該特定量の造血細胞を改変する、工程と、
（ｃ）少なくとも1種類のヒストンデアセチラーゼ阻害剤（HDACi）および少なくとも1種類の成長因子の存在下で前記特定量の造血細胞を培養して、該造血細胞を拡大する工程と、
を含む、方法。
【請求項１９】
請求項１８記載の方法によって調製された特定量の拡大された造血細胞を含む組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
臍帯血、骨髄、または末梢血からある分量の造血幹細胞（HSC）または造血幹前駆細胞（HSPC）を入手する工程、ならびにトリコスタチン（TSA）、DLS3、MS275、SAHA、HDAC6阻害剤161、5-アザシチジン、JQ1-S、JY1、UNC0638、JMJD3、JQ-EZ-05、SR1、DBZ、dmPGE2、およびUM171より選択される少なくとも1種類の小分子、ならびに幹細胞因子（SCF）、flt3リガンド（FL）、インターロイキン-3（IL3）、およびインターロイキン-6（IL6）より選択される少なくとも1種類の成長因子の存在下で、少なくとも48時間の期間HSCまたはHSPCを培養することによってHSCまたはHSPCを拡大させ、それによってHSCまたはHSPCが拡大する工程を含む、造血細胞を拡大させるエクスビボ方法も本明細書において記載される。別の態様において、ある分量のHSPCを入手する工程は、CD34+および/またはCD90+を発現する細胞の単離を含む。別の態様において、少なくとも48時間の期間には、72時間、96時間、120時間、144時間、または168時間が含まれる。
[本発明1001]
（a）ある分量の造血細胞を準備する工程；ならびに
（b）造血細胞を拡大させることができる少なくとも1種類の小分子および少なくとも1種類の成長因子の存在下で該ある分量の造血細胞を培養する工程
を含む、造血細胞を拡大させる方法。
[本発明1002]
造血細胞が造血幹細胞（HSC）を含む、本発明1001の方法。
[本発明1003]
造血細胞が造血幹前駆細胞（HSPC）を含む、本発明1001の方法。
[本発明1004]
造血細胞が臍帯血から単離される、本発明1001の方法。
[本発明1005]
造血細胞が骨髄から単離される、本発明1001の方法。
[本発明1006]
造血細胞が末梢血から単離される、本発明1001の方法。
[本発明1007]
少なくとも1種類の小分子がヒストンデアセチラーゼ阻害剤（HDACi）を含む、本発明1001の方法。
[本発明1008]
HDACiが、トリコスタチン（TSA）、DLS3、MS275、SAHA、およびHDAC6阻害剤161からなる群より選択される1種類または複数種類のHDACiを含む、本発明1007の方法。
[本発明1009]
少なくとも1種類の小分子が、5-アザシチジン、JQ1-S、JY1、UNC0638、JMJD3、JQ-EZ-05、SR1、DBZ、dmPGE2、およびUM171からなる群より選択される1種類または複数種類の小分子を含む、本発明1001の方法。
[本発明1010]
少なくとも1種類の成長因子が、幹細胞因子（SCF）、flt3リガンド（FL）、インターロイキン-3（IL3）、およびインターロイキン-6（IL6）からなる群より選出される1種類または複数種類の成長因子を含む、本発明1001の方法。
[本発明1011]
（a）ある分量の造血細胞を準備する工程；ならびに
（b）少なくとも1種類の小分子および少なくとも1種類の成長因子の存在下で該ある分量の造血細胞を培養する工程；
（c）該細胞と、各ベクターが少なくとも1つの選択カセットおよび/または少なくとも1種類のヌクレアーゼをコードする1種類または複数種類のベクターとを接触させる工程；ならびに
（d）該選択カセットおよび該ヌクレアーゼを発現する造血細胞を選択する工程であって、該選択カセットおよび該ヌクレアーゼを発現する細胞が、編集されたゲノムを含む、前記工程
を含む、ゲノム編集の方法。
[本発明1012]
前記細胞が造血幹細胞（HSC）を含む、本発明1011の方法。
[本発明1013]
多能性幹細胞が造血幹前駆細胞（HSPC）を含む、本発明1011の方法。
[本発明1014]
少なくとも1種類のヌクレアーゼがジンクフィンガーヌクレアーゼ（ZFN）を含む、本発明1011の方法。
[本発明1015]
少なくとも1種類のヌクレアーゼが転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（TALEN）を含む、本発明1011の方法。
[本発明1016]
少なくとも1種類のヌクレアーゼがCRISPR関連タンパク質（Cas）ヌクレアーゼを含む、本発明1011の方法。
[本発明1017]
1種類または複数種類のベクターが、少なくとも1つの選択カセットおよび少なくとも1種類のヌクレアーゼをコードするベクターを含む、本発明1011の方法。
[本発明1018]
前記ある分量の造血細胞が、臍帯血、骨髄、または末梢血から単離される、本発明1011の方法。
[本発明1019]
（e）選択された造血細胞を対象に投与する工程
を含む、本発明1018の方法。
[本発明1020]
造血細胞が対象と免疫適合性である、本発明1019の方法。
[本発明1021]
本発明1011の方法によって産生された、ある分量の細胞。
[本発明1022]
（a）臍帯血、骨髄、または末梢血からある分量の造血幹細胞（HSC）または造血幹前駆細胞（HSPC）を入手する工程；ならびに
（b）以下：
（i）トリコスタチン（TSA）、DLS3、MS275、SAHA、HDAC6阻害剤161、5-アザシチジン、JQ1-S、JY1、UNC0638、JMJD3、JQ-EZ-05、SR1、DBZ、dmPGE2、およびUM171からなる群より選択される少なくとも1種類の小分子；ならびに
（ii）幹細胞因子（SCF）、flt3リガンド（FL）、インターロイキン-3（IL3）、およびインターロイキン-6（IL6）からなる群より選択される少なくとも1種類の成長因子
の存在下で、少なくとも48時間の期間、HSCまたはHSPCを培養することによってHSCまたはHSPCを拡大させ、それによってHSCまたはHSPCが拡大する工程
を含む、造血細胞を拡大させるエクスビボ方法。
[本発明1023]
ある分量のHSPCを入手する工程が、CD34+および/またはCD90+を発現する細胞の単離を含む、本発明1022の方法。
[本発明1024]
少なくとも48時間の期間が、72時間、96時間、120時間、144時間、または168時間を含む、本発明1022の方法。