(57)【要約】本発明は、ピペリジノウラシル類およびそれらの製造方法、並びに疾患、特に細菌性疾患の処置および／または予防用の医薬の製造におけるそれらの使用に関する。【化１】2005523294.tif 000047
2005523294.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式
【化１】
2005523294.tif 000040
式中、
Ｒ１はヘテロアリールであり、
ここで、ヘテロアリールは、アルキル、アルコキシ、アルキルチオ、ハロゲン、アルカノイル、ヒドロキシ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ、アルカノイルアミノ、シアノ、カルボキシ、シクロアルキル、複素環、アリールおよびメチル置換されていることもあるヘテロアリールからなる群から相互に独立して選択される０個、１個、２個または３個の置換基により置換されていてもよく、
Ｒ２は、水素またはアルキルであり、
Ｒ３は、以下の式
【化２】
2005523294.tif 000041
式中、
Ｒ３−１およびＲ３−２は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキルチオ、シクロアルキルおよびハロゲンからなる群から相互に独立して選択されるか、または、
Ｒ３−１およびＲ３−２は、それらが結合する炭素原子と共に、３個までのハロゲンにより置換されていることもあるシクロアルキルまたは複素環式環を形成する、
の置換基である、
の化合物。
【請求項２】
式中、
ウラシル環が３位、４位または５位を介してピペリジン環に連結しており、
Ｒ１がヘテロアリールであり、
ここで、ヘテロアリールは、アルキル、アルコキシ、アルキルチオ、ハロゲン、ヒドロキシ、カルボキシ、複素環およびアリールからなる群から相互に独立して選択される０個、１個、２個または３個の置換基により置換されていてもよく、
Ｒ２が水素またはアルキルであり、
Ｒ３が以下の式
【化３】
2005523294.tif 000042
式中、
Ｒ３−１およびＲ３−２は、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ２−Ｃ６−アルケニル、Ｃ２−Ｃ６−アルキニル、Ｃ１−Ｃ６−アルキルチオ、Ｃ３−Ｃ６−シクロアルキルおよびハロゲンからなる群から相互に独立して選択されるか、または、
Ｒ３−１およびＲ３−２は、それらが結合する炭素原子と共に、３個までのハロゲンにより置換されていることもあるＣ３−Ｃ６−シクロアルキルまたは複素環式環を形成する、
の置換基である、
請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項３】
式中、
ウラシル環が３位、４位または５位を介してピペリジン環に連結しており、
Ｒ１がヘテロアリールであり、
ここで、ヘテロアリールは、アルキル、ハロゲンおよびカルボキシからなる群から相互に独立して選択される０個、１個または２個の置換基により置換されていてもよく、
Ｒ２が水素であり、そして、
Ｒ３が以下の式
【化４】
2005523294.tif 000043
式中、
Ｒ３−１およびＲ３−２は、メチル、エチル、フッ素および塩素からなる群から相互に独立して選択されるか、または、
Ｒ３−１およびＲ３−２は、それらが結合する炭素原子と共に、塩素またはフッ素からなる群から相互に独立して選択される２個までの置換基により置換されていることもあるＣ５−シクロアルキル環を形成する、
の置換基である、
請求項１または請求項２に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項４】
式中、ウラシル環が３位、４位または５位を介してピペリジン環に連結している、請求項１または請求項２に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項５】
式中、Ｒ１が５ないし６員のヘテロアリール基である、請求項１ないし請求項４のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項６】
式中、Ｒ２が水素である、請求項１、請求項２、請求項４または請求項５に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項７】
式中、Ｒ３が
【化５】
2005523294.tif 000044
の群から選択される、請求項１ないし請求項６のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項８】
式（Ｉ）の化合物の製造方法であって、式
【化６】
2005523294.tif 000045
式中、Ｒ２およびＲ３は、請求項１に記載の意味を有する、
の化合物を、一般式
【化７】
2005523294.tif 000046
式中、Ｒ１は、請求項１に記載の意味を有し、そして、
Ｘ１は、ハロゲン、好ましくは塩素もしくは臭素、またはヒドロキシである、
の化合物と反応させることによる、方法。
【請求項９】
疾患の処置および／または予防のための、請求項１ないし請求項７のいずれかに記載の化合物。
【請求項１０】
請求項１ないし請求項７のいずれかに記載の少なくとも１つの化合物を、少なくとも１つの医薬的に適する、医薬的に許容し得る担体または賦形剤と組み合わせて含む、医薬。
【請求項１１】
細菌感染の処置および／または予防のための医薬を製造するための、請求項１ないし請求項７のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項１２】
細菌感染の処置および／または予防のための、請求項１０に記載の医薬。
【請求項１３】
抗細菌的有効量の請求項１ないし請求項７のいずれかに記載の少なくとも１つの化合物を投与することによる、ヒトおよび動物における細菌感染の制御方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、ピペリジノウラシル類およびそれらの製造方法、並びに疾患、特に細菌性疾患の処置および／または予防用の医薬を製造するためのそれらの使用に関する。
【０００２】
グラム陽性真性細菌は、Ｐｏｌ１、Ｐｏｌ２およびＰｏｌ３と呼ばれる３つの異なるＤＮＡポリメラーゼエキソヌクレアーゼを有する。Ｐｏｌ３は、ＤＮＡの複製的合成に必要な酵素である。
【０００３】
ウラシル誘導体の細菌感染の処置に対する適合性は、かねてから既知である。かくして、抗細菌化合物として、ＷＯ０１／２９０１０は、３−アミノカルボニル−置換フェニルアミノウラシル類を記載し、ＷＯ９６／０６６１４は、３−アルキリデン−置換ウラシル類を記載し、ＷＯ００／７１５２３は、３−アルカノイルオキシアルキルウラシル類を記載し、そしてＷＯ００／２０５５６は、ジンクフィンガー活性ユニットを有するウラシル類を記載している。
【０００４】
J. Med. Chem., 1999, 42, 2035, Antimicro. Agents and Chemotherapy, 1999, 43, 1982 and Antimicro. Agents and Chemotherapy, 2000, 44, 2217 は、フェニルアミノウラシル類を抗細菌化合物として記載している。
【０００５】
本発明の１つの目的は、ヒトおよび動物における細菌疾患処置用の抗細菌効果を有する新規代替可溶性化合物を提供することである。
【０００６】
本発明は、式（Ｉ）
【化１】
2005523294.tif 000003
式中、
Ｒ１はヘテロアリールであり、
ここで、ヘテロアリールは、アルキル、アルコキシ、アルキルチオ、ハロゲン、アルカノイル、ヒドロキシ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ、アルカノイルアミノ、シアノ、カルボキシ、シクロアルキル、複素環、アリールおよびメチル置換されていることもあるヘテロアリールからなる群から相互に独立して選択される０個、１個、２個または３個の置換基により置換されていてもよく、
Ｒ２は、水素またはアルキルであり、
Ｒ３は、以下の式
【化２】
2005523294.tif 000004
式中、
Ｒ３−１およびＲ３−２は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキルチオ、シクロアルキルおよびハロゲンからなる群から相互に独立して選択されるか、または、
Ｒ３−１およびＲ３−２は、それらが結合する炭素原子と共に、３個までのハロゲンにより置換されていることもあるシクロアルキルまたは複素環式環を形成する、
の置換基である、
の化合物に関する。
【０００７】
本発明の化合物は、それらの塩、溶媒和物、または塩の溶媒和物の形態でもあり得る。
本発明の化合物は、それらの構造によって、立体異性体形（エナンチオマー、ジアステレオマー）で存在し得る。従って、本発明は、エナンチオマーまたはジアステレオマーおよびそれらの各々の混合物に関する。そのようなエナンチオマーおよび／またはジアステレオマーの混合物から、既知方法で立体異性的に純粋な成分を単離できる。
本発明はまた、化合物の構造によって、化合物の互変体に関する。
【０００８】
本発明のために好ましい塩は、本発明の化合物の生理的に許容し得る塩である。
化合物（Ｉ）の生理的に許容し得る塩には、鉱酸、カルボン酸およびスルホン酸の酸付加塩、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、酢酸、プロピオン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸および安息香酸の塩が含まれる。
【０００９】
化合物（Ｉ）の生理的に許容し得る塩には、従来の塩基の塩も含まれる。例えば、そして好ましくは、アルカリ金属塩（例えばナトリウムおよびカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えばカルシウムおよびマグネシウム塩）およびアンモニアまたは炭素数１ないし１６の有機アミン類（例えば、そして好ましくは、エチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、エチルジイソプロピルアミン、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、ジメチルアミノエタノール、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、ジヒドロアビエチルアミン、アルギニン、リジン、エチレンジアミンおよびメチルピペリジン）から誘導されるアンモニウム塩などである。
【００１０】
溶媒和物は、本発明のために、固体または液体状態で配位により溶媒分子と錯体を形成している化合物の形態を表す。水和物は、配位が水と起こる、溶媒和物の特別な形態である。
【００１１】
本発明のために、断りのない限り、置換基は以下の意味を有する：
アルキル自体、並びにアルコキシ、アルキルアミノ、アルキルチオ、アルカノイルおよびアルカノイルアミノにおける「アルコ（アルカ）」および「アルキル」は、通常炭素数１ないし６、好ましくは１ないし４、特に好ましくは１ないし３の、線状または分枝アルキル基を表す。例えば、そして好ましくは、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチルおよびｎ−ヘキシルである。
【００１２】
アルケニルは、炭素数２ないし６の直鎖または分枝アルケニル基を表す。炭素数２ないし４の直鎖または分枝アルケニルが好ましく、炭素数２ないし３のものが特に好ましい。言及し得る好ましい例は：ビニル、アリル、ｎ−プロプ−１−エン−１−イルおよびｎ−ブト−２−エン−１−イルである。
【００１３】
アルキニルは、炭素数２ないし６の直鎖または分枝アルケニル基を表す。好ましいのは、炭素数２ないし４の直鎖または分枝アルケニル基であり、炭素数２ないし３のものが特に好ましい。言及し得る好ましい例は：ｎ−プロプ−１−イン−１−イルおよびｎ−ブト−２−イン−１−イルである。
【００１４】
アルコキシは、例えば、そして好ましくは、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ｎ−ペントキシおよびｎ−ヘキソキシを表す。
【００１５】
アルキルアミノは、１個または２個のアルキル置換基（相互に独立して選択される）を有するアルキルアミノ基を表し、例えば、そして好ましくは、メチルアミノ、エチルアミノ、ｎ−プロピルアミノ、イソプロピルアミノ、ｔｅｒｔ−ブチルアミノ、ｎ−ペンチルアミノ、ｎ−ヘキシルアミノ、Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノ、Ｎ,Ｎ−ジエチルアミノ、Ｎ−エチル−Ｎ−メチルアミノ、Ｎ−メチル−Ｎ−ｎ−プロピルアミノ、Ｎ−イソプロピル−Ｎ−ｎ−プロピルアミノ、Ｎ−ｔ−ブチル−Ｎ−メチルアミノ、Ｎ−エチル−Ｎ−ｎ−ペンチルアミノおよびＮ−ｎ−ヘキシル−Ｎ−メチルアミノを表す。
【００１６】
アルキルチオは、例えば、そして好ましくは、メチルチオ、エチルチオ、ｎ−プロピルチオ、イソプロピルチオ、ｔｅｒｔ−ブチルチオ、ｎ−ペンチルチオおよびｎ−ヘキシルチオを表す。
アルカノイルは、例えば、そして好ましくは、アセチルおよびエチルカルボニルを表す。
アルカノイルアミノは、例えば、そして好ましくは、アセチルアミノおよびエチルカルボニルアミノを表す。
【００１７】
シクロアルキルは、通常は炭素数３ないし８、好ましくは５ないし７のシクロアルキル基を表す。例えば、そして好ましくは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルおよびシクロヘプチルを表す。
アリールは、通常は炭素数６ないし１４の、単環式ないし三環式、芳香族性、炭素環式基を表す；例えば、そして好ましくは、フェニル、ナフチルおよびフェナントレニルを表す。
【００１８】
ヘテロアリールは、通常は５ないし１０、好ましくは５ないし６の環原子、およびＳ、ＯおよびＮの系列から５まで、好ましくは４まで、特に３までのヘテロ原子を有する、芳香族性、単環式または二環式基を表す。例えば、そして好ましくは、チエニル、フリル、ピロリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、イミダゾリル、ピリジル、ピリミジル、ピリダジニル、インドリル、インダゾリル、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル、キノリニル、イソキノリニルを表す。
【００１９】
複素環は、通常４ないし１０個、好ましくは５ないし８個、特に５個または６個の環原子、およびＮ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ２の系列から３個まで、好ましくは２個までのヘテロ原子および／またはヘテロ基を有する、単環式または多環式、好ましくは単環式または二環式の、非芳香族性ヘテロ環基である。複素環基は、飽和または部分不飽和であり得る。Ｏ、ＮおよびＳの系列から２個までのヘテロ原子を有する５ないし６員の単環式飽和複素環基が好ましく、例えば、そして好ましくは、テトラヒドロフラン−２−イル、ピロリジン−２−イル、ピロリジン−３−イル、ピロリニル、ピペリジニル、モルホリニル、ペルヒドロアゼピニルを表す。
ハロゲンは、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素を表す。
【００２０】
結合上の記号＊は、分子内の連結点を示す。
本発明の化合物中の基が置換されているならば、断りのない限り、１個またはそれ以上の同一かまたは異なる置換基を有し得る。３個までの同一かまたは異なる置換基による置換が好ましい。１個の置換基による置換がことさら特に好ましい。
【００２１】
本発明のためには、式中、
ウラシル環が３位、４位または５位を介してピペリジン環に連結しており、
Ｒ１がヘテロアリールであり、
ここで、ヘテロアリールは、アルキル、アルコキシ、アルキルチオ、ハロゲン、ヒドロキシ、カルボキシ、複素環およびアリールからなる群から相互に独立して選択される０個、１個、２個または３個の置換基により置換されていてもよく、
Ｒ２が水素またはアルキルであり、
Ｒ３が以下の式
【化３】
2005523294.tif 000005
式中、
Ｒ３−１およびＲ３−２は、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ２−Ｃ６−アルケニル、Ｃ２−Ｃ６−アルキニル、Ｃ１−Ｃ６−アルキルチオ、Ｃ３−Ｃ６−シクロアルキルおよびハロゲンからなる群から相互に独立して選択されるか、または、
Ｒ３−１およびＲ３−２は、それらが結合する炭素原子と共に、３個までのハロゲンにより置換されていることもあるＣ３−Ｃ６−シクロアルキルまたは複素環式環を形成する、
の置換基である、
一般式（Ｉ）の化合物が好ましい。
【００２２】
本発明のためには、式中、
ウラシル環が３位、４位または５位を介してピペリジン環に連結しており、
Ｒ１がヘテロアリールであり、
ここで、ヘテロアリールは、アルキル、ハロゲンおよびカルボキシからなる群から相互に独立して選択される０個、１個または２個の置換基により置換されていてもよく、
Ｒ２が水素であり、そして、
Ｒ３が以下の式
【化４】
2005523294.tif 000006
式中、
Ｒ３−１およびＲ３−２は、メチル、エチル、フッ素および塩素からなる群から相互に独立して選択されるか、または、
Ｒ３−１およびＲ３−２は、それらが結合する炭素原子と共に、塩素またはフッ素からなる群から相互に独立して選択される２個までの置換基により置換されていることもあるＣ５−シクロアルキル環を形成する、
の置換基である、
一般式（Ｉ）の化合物が好ましい。
【００２３】
本発明のためには、式中、ウラシル環が３位、４位または５位を介してピペリジン環に連結している一般式（Ｉ）の化合物も好ましい。
本発明のためには、式中、Ｒ１が５ないし６員のヘテロアリール基、特に５員のヘテロアリール基である一般式（Ｉ）の化合物も好ましい。
本発明のためには、式中、Ｒ１がイソオキサゾリルまたはフリルである一般式（Ｉ）の化合物も好ましい。
本発明のためには、式中、Ｒ２が水素である一般式（Ｉ）の化合物も好ましい。
【００２４】
本発明のためには、式中、Ｒ３が
【化５】
2005523294.tif 000007
の群から選択される一般式（Ｉ）の化合物も好ましい。
【００２５】
本発明のためには、なかんずく、式中、Ｒ３が
【化６】
2005523294.tif 000008
の群から選択される一般式（Ｉ）の化合物が特に好ましい。
【００２６】
本発明のためには、式中、Ｒ３が
【化７】
2005523294.tif 000009
の群から選択される一般式（Ｉ）の化合物も好ましい。
【００２７】
本発明はさらに、一般式（Ｉ）の化合物の製造方法に関する。その方法では、一般式
【化８】
2005523294.tif 000010
式中、Ｒ２およびＲ３は、上記の意味を有する、
の化合物を、一般式
【化９】
2005523294.tif 000011
式中、Ｒ１は、上記の意味を有し、そして、
Ｘ１は、ハロゲン、好ましくは塩素もしくは臭素、またはヒドロキシである、
の化合物と反応させる。
【００２８】
Ｘ１がハロゲンである場合、反応は、不活性溶媒中、適するならば塩基の存在下、好ましくは０℃ないし５０℃の温度範囲で、大気圧下で行う。
【００２９】
不活性溶媒の例は、塩化メチレン、トリクロロメタン、テトラクロロメタン、トリクロロエタン、テトラクロロエタン、１,２−ジクロロエタンまたはトリクロロエチレンなどのハロ炭化水素類、ジエチルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、ジオキサン、テトラヒドロフラン、グリコールジメチルエーテルまたはジエチレングリコールジメチルエーテルなどのエーテル類、ベンゼン、キシレン、トルエン、ヘキサン、シクロヘキサンまたは石油分画などの炭化水素類、またはニトロメタン、酢酸エチル、アセトン、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、１,２−ジメトキシエタン、２−ブタノン、ジメチルスルホキシド、アセトニトリルまたはピリジンなどのその他の溶媒であり、ジオキサンまたは塩化メチレンが好ましい。
【００３０】
塩基の例は、水酸化ナトリウムまたはカリウムなどのアルカリ金属水酸化物、炭酸セシウム、炭酸ナトリウムもしくはカリウムなどのアルカリ金属炭酸塩、リチウムジイソプロピルアミドなどのアミド類、またはＤＢＵ、トリエチルアミンもしくはジイソプロピルエチルアミンなどの他の塩基であり、ジイソプロピルエチルアミンまたはトリエチルアミンが好ましい。
【００３１】
Ｘ１がヒドロキシである場合、反応は、不活性溶媒中、常套の縮合剤の存在下、適するならば塩基の存在下、好ましくは室温ないし５０℃の温度範囲で、大気圧下で行う。
【００３２】
不活性溶媒の例は、塩化メチレン、トリクロロメタン、テトラクロロメタン、トリクロロエタン、テトラクロロエタン、１,２−ジクロロエタンまたはトリクロロエチレンなどのハロ炭化水素類、ジエチルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、ジオキサン、テトラヒドロフラン、グリコールジメチルエーテルまたはジエチレングリコールジメチルエーテルなどのエーテル類、ベンゼン、キシレン、トルエン、ヘキサン、シクロヘキサンまたは石油分画などの炭化水素類、またはニトロメタン、酢酸エチル、アセトン、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、１,２−ジメトキシエタン、ジメチルスルホキシド、アセトニトリルまたはピリジンなどのその他の溶媒であり、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、１,２−ジクロロエタンまたは塩化メチレンが好ましい。
【００３３】
常套の縮合剤の例は、例えば、Ｎ,Ｎ'−ジエチル−、Ｎ,Ｎ'−ジプロピル−、Ｎ,Ｎ'−ジイソプロピル−、Ｎ,Ｎ'−ジシクロヘキシルカルボジイミド、Ｎ−（３−ジメチルアミノイソプロピル）−Ｎ'−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）、Ｎ−シクロヘキシルカルボジイミド−Ｎ'−プロピルオキシメチル−ポリスチレン（ＰＳ−カルボジイミド）などのカルボジイミド類、またはカルボニルジイミダゾールなどのカルボニル化合物、または２−エチル−５−フェニル−１,２−オキサゾリウム−３−硫酸塩または２−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルイソキサゾリウム過塩素酸塩などの１,２−オキサゾリウム化合物、または２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１,２−ジヒドロキノリンなどのアシルアミノ化合物、またはプロパンホスホン酸無水物、またはイソブチルクロロホルメート、またはビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスホリルクロリドまたはベンゾトリアゾリルオキシトリ（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロリン酸塩、またはＯ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸（ＨＢＴＵ）、２−（２−オキソ−１−（２Ｈ）−ピリジル）−１,１,３,３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸塩（ＴＰＴＵ）またはＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸（ＨＡＴＵ）、または１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、またはベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）−ホスホニウムヘキサフルオロリン酸塩（ＢＯＰ）、またはこれらの混合物である。
【００３４】
塩基の例は、炭酸ナトリウムもしくはカリウム、または重炭酸ナトリウムもしくはカリウムなどのアルカリ金属炭酸塩、または例えばトリエチルアミンなどのトリアルキルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、Ｎ−メチルピペリジン、４−ジメチルアミノピリジンまたはジイソプロピルエチルアミンなどの有機塩基である。
【００３５】
ジメチルホルムアミド中のＮ−（３−ジメチルアミノイソプロピル）−Ｎ'−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）およびトリエチルアミン、またはテトラヒドロフラン中のベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロリン酸（ＢＯＰ）およびジイソプロピルエチルアミンの組合せが特に好ましい。
【００３６】
式（ＩＩＩ）の化合物は知られているか、または既知方法と同様にして製造できる。
一般式（ＩＩ）の化合物のある製造方法は、式
【化１０】
2005523294.tif 000012
式中、Ｒ２は上記の意味を有する、
の化合物を、一般式
Ｈ２Ｎ−Ｒ３      （Ｖ）
式中、Ｒ３は上記の意味を有する、
の化合物と、適するならば塩基の存在下で、反応させることを特徴とする。
【００３７】
反応は、適するならば不活性溶媒中、好ましくは１００℃ないし１５０℃の温度範囲で、大気圧下で行う。
【００３８】
不活性溶媒の例は、ハロ炭化水素類、ジオキサン、グリコールジメチルエーテルまたはジエチレングリコールジメチルエーテルなどのエーテル類、ベンゼン、キシレンまたはトルエンなどの炭化水素類、またはジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、ジメチルスルホキシド、ピリジンまたは１−メチルピロリジノンなどのその他の溶媒であり、ジオキサンまたは１−メチルピロリジノンが好ましい。
【００３９】
塩基の例は、水酸化ナトリウムまたはカリウムなどのアルカリ金属水酸化物、炭酸セシウム、炭酸ナトリウムもしくはカリウムなどのアルカリ金属炭酸塩、リチウムジイソプロピルアミドなどのアミド類、またはＤＢＵ、トリエチルアミンもしくはジイソプロピルエチルアミンなどの他の塩基であり、ジイソプロピルエチルアミンまたはトリエチルアミンが好ましい。
【００４０】
式（Ｖ）の化合物は知られているか、または既知方法と同様にして製造できる。
一般式（ＩＶ）の化合物のある製造方法は、式
【化１１】
2005523294.tif 000013
式中、Ｒ２は上記の意味を有する、
の化合物を、トリフルオロ酢酸と、適するならば塩化メチレンの存在下、好ましくは６０℃ないし溶媒の還流の温度範囲で、大気圧下で反応させることを特徴とする。
【００４１】
一般式（ＶＩ）の化合物のある製造方法は、式
【化１２】
2005523294.tif 000014
の化合物を、一般式
【化１３】
2005523294.tif 000015
式中、Ｒ２は上記の意味を有する、
の化合物と、光延条件下、ホスフィンおよびジアルキルアゾジカルボキシラートの存在下、好ましくはトリフェニルホスフィンおよびジエチルアゾジカルボキシラートの存在下、テトラヒドロフラン中、０℃ないし室温で、大気圧下で反応させることを特徴とする。
【００４２】
式（ＶＩＩ）および（ＶＩＩＩ）の化合物は知られているか、または既知方法と同様にして製造できる。
【００４３】
製造経路を、以下の図により例示として図解する：
アルキルピペリジニル−６−クロロウラシル類の製造：
【化１４】
2005523294.tif 000016
【００４４】
脱保護アルキルピペリジニル−６−クロロウラシル類の製造：
【化１５】
2005523294.tif 000017
【００４５】
６−アミノアリール−アルキルピペリジニルウラシル類の製造：
【化１６】
2005523294.tif 000018
【００４６】
６−アミノアリール−アルキル−Ｎ'−アシルピペリジニルウラシル類の製造：
【化１７】
2005523294.tif 000019
【００４７】
本発明の化合物は、予想し得なかった、価値ある医薬的および薬物動態学的効果の範囲を示す。従って、それらは、ヒトおよび動物における疾患の処置および／または予防用医薬としての使用に適する。
【００４８】
本発明の化合物は、細菌および細菌様微生物、特にグラム陽性細菌に対して、特に効果的である。従って、それらは、ヒトの医学および獣医学において、これらの病原体に起因する局所的感染および適するならば全身的感染の予防および化学療法に特に良好に適する。
【００４９】
例えば、以下の病原体または以下の病原体の混合物に起因する局所的および／または全身的疾患を処置および／または予防することが可能である：
グラム陽性球菌、例えば、スタフィロコッカス類（スタフィロコッカス・アウレウス、スタフィロコッカス・エピデルミディス）およびストレプトコッカス類（ストレプトコッカス・アガラクティー、ストレプトコッカス・ファエカリス、ストレプトコッカス・ニューモニアエ、ストレプトコッカス・ポジェンス）、並びに、例えば、クロストリジウム属などの厳密に嫌気性の細菌、また、マイコプラズマ類（Ｍ.ニューモニアエ、Ｍ.オミニス、Ｍ.ウレアリチクム）。
【００５０】
上記の病原体リストは、単なる例示であり、決して限定的と見なされるべきではない。上述の病原体または混合感染に起因し、本発明の化合物により予防、改善または治療でき、言及し得る疾患の例は以下である：
ヒトにおける感染性疾患、例えば、敗血性感染、骨および関節感染、皮膚感染、術後創感染、膿瘍、蜂巣炎、創傷感染、感染熱傷、熱創傷、口部感染、歯科手術後の感染、敗血症性関節炎、乳腺炎、扁桃炎、生殖器感染および眼感染。
【００５１】
ヒトは別として、他の種における細菌感染を処置することも可能である。言及され得る例は以下である：
ブタ：敗血症、子宮炎−乳腺炎−アガラクティエ症候群、乳腺炎；
反芻動物（ウシ、ヒツジ、ヤギ）：敗血症、気管支肺炎、マイコプラズマ病、生殖器感染；
ウマ：気管支肺炎、産褥性および産褥後感染；
イヌおよびネコ：気管支肺炎、皮膚炎、耳炎、尿路感染、前立腺炎；
飼鳥類（ニワトリ、シチメンチョウ、ウズラ、ハト、観賞用鳥類など）：マイコプラズマ病、慢性気道疾患、オウム病。
【００５２】
養殖および観賞用魚類の飼養および管理において細菌性疾患を処置することが同様に可能である。その場合、抗細菌スペクトルは、上述の病原体を超えて、ブルセラ、カンピロバクター、リステリア、エリシペロトリス（erysipelothris）、ノカルジアなどのさらなる病原体に拡張される。
【００５３】
有効成分は、全身的および／または局所的効果を有し得る。この目的のために、例えば、経口、非経腸、肺、鼻腔、舌下、経舌（lingual）、頬内、経直腸、経皮、結膜または耳内（otic）経路またはインプラントとしてなど、適するやり方で投与できる。非経腸投与が好ましい。
【００５４】
これらの投与経路用に、有効成分を適する投与形で投与できる。
経口投与に適する投与形は、迅速におよび／または変更されたやり方で有効成分を送達する既知のものである。例えば、錠剤（非被覆および被覆錠剤、例えば、胃液耐性被覆を有する錠剤）、カプセル剤、糖衣錠剤、顆粒剤、ペレット剤、粉末剤、乳剤、懸濁剤および液剤である。
【００５５】
非経腸投与は、吸収段階を避けて（静脈内、動脈内、心臓内、髄腔内または腰椎内）、または吸収を含めて（筋肉内、皮下、皮内、経皮または腹腔内）行うことができる。非経腸投与に適する投与形には、液剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥剤および滅菌粉末形態の、注射および点滴用製剤が含まれる。静脈投与が好ましい。
【００５６】
他の投与経路に適する例は、吸入用医薬形態（なかんずく、粉末吸入器、噴霧器）、点鼻薬／液剤、スプレー剤；経舌、舌下または頬内投与用の錠剤、またはカプセル剤、坐剤、耳または眼用の製剤、膣用カプセル剤、水性懸濁剤（ローション、震盪混合物）、親油性懸濁剤、軟膏、クリーム、ミルク、ペースト、散布剤またはインプラントである。
【００５７】
有効成分は、本質的に既知の方法で、列挙した投与形に変換できる。これは、不活性、非毒性、医薬的に適する賦形剤を使用して行う。これらには、なかんずく、担体（例えば、微結晶性セルロース）、溶媒（例えば、液体ポリエチレングリコール類）、乳化剤（例えば、ドデシル硫酸ナトリウム）、分散剤（例えば、ポリビニルピロリドン）、合成および天然バイオポリマー（例えば、アルブミン）、安定剤（例えば、アスコルビン酸などの抗酸化剤）、着色剤（例えば、酸化鉄などの無機色素）、または風味および／または臭気マスキング剤（masking agent）。
【００５８】
非経腸投与では、体重の約０.００１ないし１０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０.０１ないし１ｍｇ／ｋｇを投与するのが効果的な結果を達成するのに有利であると一般的に証明された。経口投与では、量は、体重の約０.０１ないし５００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約１ないし１０ｍｇ／ｋｇである。
【００５９】
これにも関わらず、適するならば、特に体重、投与経路、有効成分に対する個体の挙動、製剤のタイプおよび投与時間または間隔の関数として、上述の量から逸脱することが必要であり得る。
【００６０】
特に好ましいのは、非経腸投与、特に静脈投与であり、例えば、ｉｖボーラス注射（即ち、例えば注射器による、単回投与として）、短時間点滴（即ち、１時間までの点滴）または長時間点滴（即ち、１時間以上の点滴）などである。これらの場合、投与容積は、特定の条件に依存し、ｉｖボーラス注射で０.５ないし３０、特に１ないし２０ｍｌ、短時間点滴で２５ないし５００、特に５０ないし２５０ｍｌ、そして長時間点滴で５０ないし１０００、特に１００ないし５００ｍｌであり得る。この目的のために、有効成分が、溶解媒体にもっぱら投与直前に溶解される固体形態（例えば、凍結乾燥物）で提供されるのが有利であり得る。
【００６１】
これらの場合、投与形が滅菌され、パイロジェンを含まないことが必要である。これらは、水性、または水性および有機溶媒の混合物をベースとし得る。
【００６２】
これらには、例えば、水性溶液、水性および有機溶媒の混合物（特にエタノール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）３００または４００）、シクロデキストリンを含有する水性溶液、または乳化剤（界面活性可溶化剤、例えば、レシチンまたは Pluronic F 68、Solutol HS15、Cremophor）を含有する水性溶液が含まれる。これに関して、水性溶液が好ましい。
【００６３】
非経腸投与に適する製剤は、実質的に等張かつ等水素性（euhydric）のものであり、例えば、ｐＨ３ないし１１、特に６ないし８、特に約７.４のものである。
【００６４】
注射用液剤は、ガラスまたはプラスチック製の適する容器、例えばバイアル、に詰める。これらは、１ないし１０００、特に５ないし５０ｍｌの容積を有し得る。液剤をそこから直接取り出し、投与できる。凍結乾燥物の場合、適する溶媒を注入することにより、バイアル中でそれを溶解し、その後取り出す。
【００６５】
点滴用液剤は、ガラスまたはプラスチック製の適する容器、例えば瓶または折り畳めるプラスチックバッグに詰める。これらは、１ないし１０００、特に５０ないし５００ｍｌの容積を有し得る。
【００６６】
以下の試験における百分率のデータは、断りのない限り、重量による百分率である；
部は、重量による部である。液体／液体溶液の溶媒比、希釈比および濃度のデータは、各場合で体積に基づく。
【００６７】
Ａ．実施例
略号：
【表１】
2005523294.tif 000020
【００６８】
ＨＰＬＣおよびＬＣ−ＭＳ方法：
方法１：器具 Micromass Quattro LCZ
カラム：Symmetry C18、５０ｍｍ×２.１ｍｍ、３.５μｍ；温度：４０℃；流速＝０.５ｍｌ分−１；溶離剤Ａ＝ＣＨ３ＣＮ＋０.１％蟻酸、溶離剤Ｂ＝水＋０.１％蟻酸；勾配０.０分１０％Ａ→４分９０％Ａ→６分９０％Ａ
【００６９】
方法２：器具 Micromass Platform LCZ
カラム：Symmetry C18、５０ｍｍ×２.１ｍｍ、３.５μｍ；温度：４０℃；流速＝０.５ｍｌ分−１；溶離剤Ａ＝ＣＨ３ＣＮ＋０.１％蟻酸、溶離剤Ｂ＝水＋０.１％蟻酸；勾配０.０分１０％Ａ→４分９０％Ａ→６分９０％Ａ
【００７０】
方法３：器具：Finnigan MAT 900S, TSP: P4000, AS3000, UV3000HR
カラム：symmetry C 18、１５０ｍｍ×２.１ｍｍ、５.０μｍ；溶離剤Ｃ：水、溶離剤Ｂ：水＋３５％強度ＨＣｌ０.３ｇ、溶離剤Ａ：アセトニトリル；勾配：０.０分２％Ａ→２.５分９５％Ａ→５分９５％Ａ、オーブン：７０℃、流速：１.２ｍｌ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ
【００７１】
出発化合物：
実施例Ｉ
１−［（ベンジルオキシ）メチル］−６−クロロ−２,４（１Ｈ,３Ｈ）ピリミジンジオン
【化１８】
2005523294.tif 000021
【００７２】
クロロウラシル４５ｇ（３０７.０９ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド６００ｍｌと混合し、０℃に冷却する。水素化リチウム３.２２ｇ（４０５.４６ｍｍｏｌ）を注意深く添加し（高い発熱）、続いて１０分間撹拌する。その後、ベンジルクロロメチルエーテル６２.２５ｇ（３１７.１７ｍｍｏｌ）を、１０分間かけて滴下して添加する。続いて０℃で９０分間撹拌する。反応溶液を２％強度水酸化ナトリウム溶液１０００ｍｌと混合し、トルエン１０００ｍｌで抽出する。トルエン相を２％強度水酸化ナトリウム溶液で一回洗浄する。合わせた水相を１Ｎ硫酸でｐＨ３に合わせる。沈殿した固体を濾取し、高真空で乾燥させる。
生成物５７.１ｇ（理論値の７０％）が得られる。
1H-NMR (200 MHz, CDCl3): δ = 4.69 (s, 2H), 5.54 (s, 2H), 5.87 (s, 1H), 7.35 (m, 5H), 8.45 (s, 1H).
【００７３】
実施例ＩＩ
ｔｅｒｔ−ブチル４−（ヒドロキシメチル）−１−ピペリジンカルボキシラート
【化１９】
2005523294.tif 000022
【００７４】
４−（ヒドロキシメチル）ピペリジン１２.１ｇ（１０５.０６ｍｍｏｌ）を、４−ジメチルアミノピリジン０.３１ｇ（２.５ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン３２.２２ｍｌ（２３１.１３ｍｍｏｌ）と共に、ジクロロメタン３０５ｍｌに溶解する。混合物を０℃に冷却し、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルピロカルボナート２４.０７ｇ（１１０.３１ｍｍｏｌ）を数回に分けて添加する。続いて室温で５０時間撹拌する。反応溶液を水２５ｍｌと混合する。相を分離し、有機相を１Ｍ塩酸１００ｍｌで１回、塩化ナトリウム溶液５０ｍｌで１回洗浄する。それを硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空で濃縮する。
生成物２０ｇ（理論値の９２％）を得る。
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝２.１３分
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２１６（Ｍ＋Ｈ）＋
【００７５】
実施例ＩＩＩ
ｔｅｒｔ−ブチル４−｛［３−［（ベンジルオキシ）メチル］−４−クロロ−２,６−ジオキソ−３,６−ジヒドロ−１（２Ｈ）−ピリミジニル］メチル｝−１−ピペリジンカルボキシラート
【化２０】
2005523294.tif 000023
【００７６】
実施例Ｉの化合物５ｇ（２３.２２ｍｍｏｌ）、実施例ＩＩの化合物６.１９ｇ（２３.２２ｍｍｏｌ）およびトリフェニルホスフィン６.７ｇ（２５.５５ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン１５３ｍｌ中で混合する。混合物を０℃に冷却し、ジエチルアゾジカルボキシラート４.０２ｍｌ（２５.５５ｍｍｏｌ）を、１０分間かけて滴下して添加する。続いて室温で７２時間撹拌する。反応溶液を真空で濃縮し、シリカゲル６０上で精製する。
生成物７.４３ｇ（理論値の６９％）を得る。
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝４.７分
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４６４（Ｍ＋Ｈ）＋
【００７７】
実施例ＩＶ
６−クロロ−３−（４−ピペリジニルメチル）−２,４（１Ｈ,３Ｈ）ピリミジンジオン
【化２１】
2005523294.tif 000024
実施例ＩＩＩの化合物９.８５ｇ（２１.２３ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸１６１ｍｌと混合し、還流に加熱する。２時間後、反応溶液を冷却し、真空で濃縮する。それをもう一度メタノールに溶かし、再度真空で濃縮する。残渣を酢酸エチル３０ｍｌから再結晶化する。
生成物５.４３ｇ（理論値の９９％）を得る。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０.３２分
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２４４（Ｍ＋Ｈ）＋
【００７８】
実施例Ｖ
６−（２,３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−５−イルアミノ）−３−（４−ピペリジニルメチル）−２,４（１Ｈ,３Ｈ）ピリミジンジオン
【化２２】
2005523294.tif 000025
実施例ＩＶ由来化合物０.７７ｇ（３.１８ｍｍｏｌ）を、５−アミノインダン０.９３ｇ（７ｍｍｏｌ）と混合し、１５０℃に加熱する。２時間後、反応溶液を冷却する。ジクロロメタン１０ｍｌおよびメタノール５ｍｌを添加し、この混合物をジエチルエーテル５０ｍｌに撹拌しながら添加する。沈殿を濾取し、高真空下で乾燥させる。
生成物０.６６７ｇ（理論値の６１％）を得る。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝２.３７分
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３４１（Ｍ＋Ｈ）＋
【００７９】
実施例ＶＩ
６−［（３−エチル−４−メチルフェニル）アミノ］−３−（４−ピペリジニルメチル）−２,４（１Ｈ,３Ｈ）ピリミジンジオン
【化２３】
2005523294.tif 000026
製造は、実施例Ｖと同様に、実施例ＩＶ由来化合物１ｇ（４.１０４ｍｍｏｌ）、３−エチル−４−メチルアニリン塩酸塩０.８４５ｇ（４.９２４ｍｍｏｌ）およびＮ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１.５７ｍｌ（９.０２ｍｍｏｌ）から行う。
生成物０.４９８ｇ（理論値の３５％）を得る。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝２.４７分
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３４３（Ｍ＋Ｈ）＋
【００８０】
製造実施例
実施例１
６−（２,３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−５−イルアミノ）−３−（｛１−［（５−メチル−４−イソオキサゾリル）カルボニル］−４−ピペリジニル｝メチル）−２,４（１Ｈ,３Ｈ）ピリミジンジオン
【化２４】
2005523294.tif 000027
【００８１】
実施例Ｖ由来化合物１３３.９ｍｇ（０.３９ｍｍｏｌ）を、５−メチルイソオキサゾール−４−カルボン酸５０ｍｇ（０.３９ｍｍｏｌ）および１−ベンゾトリアゾリルオキシトリピロリジンホスホニウムヘキサフルオロリン酸２２５.１９ｍｇ（０.４３ｍｍｏｌ）と共に、テトラヒドロフラン１.５ｍｌ中に懸濁する。Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン５５.９３ｍｇ（０.４３ｍｍｏｌ）を添加し、続いて室温で２４時間撹拌する。水０.５ｍｌを反応溶液に添加する。１５分後、それを Extrelut／シリカゲルカートリッジを通して濾過する。比２：１のメタノール／ジクロロメタン３ｍｌを洗浄に使用する。濾液を真空で濃縮する。残渣を酢酸エチルに取り、重炭酸ナトリウム溶液で２回洗浄する。硫酸ナトリウムを乾燥に使用し、溶液を真空で濃縮する。分取ＨＰＬＣを精製に使用する。
生成物６５ｍｇ（理論値の３７％）を得る。
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝３.５７分
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４５０（Ｍ＋Ｈ）＋
【００８２】
下表に列挙する実施例は、適する出発化合物から、上記方法と同様にして製造できる。
【表２】
2005523294.tif 000028
【００８３】
【表３】
2005523294.tif 000029
【００８４】
【表４】
2005523294.tif 000030
【００８５】
【表５】
2005523294.tif 000031
【００８６】
【表６】
2005523294.tif 000032
【００８７】
【表７】
2005523294.tif 000033
【００８８】
【表８】
2005523294.tif 000034
【００８９】
【表９】
2005523294.tif 000035
【００９０】
【表１０】
2005523294.tif 000036
【００９１】
【表１１】
2005523294.tif 000037
【００９２】
【表１２】
2005523294.tif 000038
【００９３】
Ｂ  薬学的活性の評価
インビトロの効果
インビトロにおける本発明の化合物の効果は、以下のアッセイで示すことができる：
Ｓ.アウレウス由来ＰｏｌＩＩＩのクローニング、発現および精製
Ｎ末端にＨｉｓタグを有するｐｏｌＣをクローニングするために、構造遺伝子ｐｏｌＣをＳ.アウレウスのゲノムＤＮＡからＰＣＲを利用して増幅する。プライマーＳＡＰｏｌ３１ ５'−ＧＣＧＣＣＡＴＡＴＧＧＡＣＡＧＡＧＣＡＡＣＡＡＡＡＡＴＴＴＡＡ−３'およびＳＡＰｏｌｒｅｖ ５'−ＧＣＧＣＧＧＡＴＣＣＴＴＡＣＡＴＡＴＣＡＡＡＴＡＴＣＧＡＡＡ−３'を、増幅遺伝子の前後に各々ＮｄｅＩおよびＢａｍＨＩ制限切断部位を導入するのに使用する。４３００ｂｐのサイズのＰＣＲ産物をＮｄｅＩおよびＢａｍＨＩで切断し、同様にＮｄｅＩおよびＢａｍＨＩで切断されたベクターｐＥＴ１５ｂ（Novagen, USA）にライゲーションし、大腸菌 XL-1 Blue に形質転換する。
【００９４】
大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）に形質転換した後、ＰｏｌＣ発現のために、１００μｇ／ｍｌアンピシリンを含むＬＢ培地中、３０℃で、ＯＤ５９５ｎｍが０.５になるまで細胞を培養し、１８℃に冷却し、１ｍＭ ＩＰＴＧを添加した後、さらに２０時間インキュベートする。遠心分離により細胞を回収し、１ｍＭ ＰＭＳＦを含むＰＢＳで一回洗浄し、５０ｍＭ ＮａＨ２ＰＯ４ ｐＨ８.０、１０ｍＭイミダゾール、２ｍＭβ−メルカプトエタノール、１ｍＭ ＰＭＳＦ、２０％グリセロールに取る。フレンチプレスを１２,０００ｐｓｉで使用して細胞を破壊し、細胞の破片を遠心分離（２７,０００ＴＮＲｘｇ、１２０分、４℃）により除去し、上清を適量のＮｉ−ＮＴＡ−アガロース（Quiagen, Germany より）と４℃で１時間撹拌する。ゲルマトリクスをカラムに詰め、それを５０ｍＭ ＮａＨ２ＰＯ４ ｐＨ８.０、２ｍＭβ−メルカプトエタノール、２０ｍＭイミダゾール、１０％グリセロールで洗浄し、精製タンパク質を１００ｍＭイミダゾールを含有する同じ緩衝液で抽出する。精製タンパク質を５０％グリセロールと混合し、−２０℃で保存する。
【００９５】
ポリメラーゼＩＩＩのＩＣ５０の決定
ＰｏｌＣの活性を、重合中に形成されるピロリン酸がＡＴＰスルフリラーゼ（sulfurylase）の補助でＡＴＰに変換され、それをホタルルシフェラーゼで検出する、酵素的共役反応で測定する。反応混合物は、最終容積５０μｌ中、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ／Ｃｌ ｐＨ７.５；５ｍＭ ＤＴＴ、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、３０ｍＭ ＮａＣｌ、０.１ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡ、１０％グリセロール、各２０μＭのｄＡＴＰ、ｄＴＴＰ、ｄＣＴＰ、２Ｕ／ｍｌ活性化ウシ胸腺ＤＮＡ（Worthington, USA より）、２０μＭ ＡＰＳおよび０.０６ｍＭルシフェリンを含有する。〜２ｎＭの最終濃度で精製ＰｏｌＣを添加して反応を開始し、３０℃で３０分間インキュベートする。次いで、ＡＴＰスルフリラーゼ（Sigma, USA）を最終濃度５ｎＭで添加し、３０℃で１５分間インキュベートすることにより、形成された量のピロリン酸をＡＴＰに変換する。０.２ｎＭのホタルルシフェラーゼを添加した後、発光を照度計で６０秒間測定する。ＩＣ５０は、ＰｏｌＣの酵素活性の５０％阻害を導く阻害剤の濃度として報告される。
【００９６】
表Ａ
【表１３】
2005523294.tif 000039
【００９７】
多数の微生物についての最小阻害濃度（ＭＩＣ）の測定
様々な細菌株（Ｓ.アウレウス、Ｓ.ニューモニアエ、Ｅ.ファエカリス）についてのＭＩＣ値を、ＢＨＩブロス中での微量希釈法を使用して実行する。細菌株をＢＨＩブロス（スタフィロコッカス類）またはＢＨＩブロス＋１０％ウシ血清（ストレプトコッカス類、エンテロコッカス類）中で終夜培養する。試験物質を濃度範囲０.５ないし２５６μｇ／ｍｌで試験する。試験物質の連続希釈の後、マイクロタイタープレートに試験微生物を播種する。微生物濃度は、約１ｘ１０６微生物／ｍｌ懸濁液である。プレートを３７℃、８％ＣＯ２（ストレプトコッカス類、エンテロコッカス類）下で、２０ｈインキュベートする。ＭＩＣは、細菌の可視的増殖が完全に阻害される最低濃度として報告される。
【００９８】
インビボでの効果
細菌感染の処置に対する本発明の化合物の適合性は、以下の動物モデルで示すことができる：
Ｓ.アウレウス１３３による全身的感染
Ｓ.アウレウス１３３細胞を、ＢＨブロス中で終夜培養する。終夜培養を新しいＢＨブロスで１：１００に希釈し、３時間増幅させる。対数増殖期にある細菌を遠沈し、緩衝生理塩水（３０３）で２回洗浄する。その後細胞懸濁物を光度計（モデル LP 2W 、Dr. Lange, Germany より）中で、３０３中の吸光度５０ユニットに合わせる。希釈段階（１：１５）の後、この懸濁液を１：１で１０％強度ムチン懸濁液と混合する。この感染溶液０.２５ｍｌをマウス２０ｇ毎にｉｐ投与する。これは、約１ｘ１０Ｅ６微生物／マウスの細胞数に相当する。ｉｐ治療を感染の３０分後に行う。雌のＣＦＷ１マウスを感染実験に使用する。動物の生存を６日間記録する。
【００９９】
Ｃ．医薬組成物の例示的実施態様
本発明の物質は、以下のやり方で医薬製剤に変換できる：
錠剤：
組成：
実施例１の化合物１００ｍｇ、ラクトース（一水和物）５０ｍｇ、コーンスターチ（天然）５０ｍｇ、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ２５）（BASF, Ludwigshafen, Germany より）１０ｍｇおよびステアリン酸マグネシウム２ｍｇ。
錠剤重量２１２ｍｇ。直径８ｍｍ、曲率半径１２ｍｍ。
【０１００】
製造：
有効成分、ラクトースおよびスターチの混合物を、５％強度のＰＶＰ水溶液（ｍ／ｍ）で造粒する。顆粒を乾燥させ、ステアリン酸マグネシウムと５分間混合する。この混合物を従来の打錠機を使用して打錠する（錠剤の形状については上記参照）。打錠のガイドラインとして、圧縮力１５ｋＮを使用する。
【０１０１】
経口投与できる懸濁剤：
組成：
実施例１の化合物１０００ｍｇ、エタノール（９６％）１０００ｍｇ、Rhodigel (FMC, Pennsylvania, USA のキサンタンゴム) ４００ｍｇおよび水９９ｇ。
１０ｍｌの経口懸濁剤は、本発明の化合物の単回用量１００ｍｇに相当する。
製造：
Rhodigel をエタノールに懸濁し、有効成分を懸濁液に添加する。撹拌しながら水を添加する。混合物を約６時間、Rhodigel の膨張が完了するまで撹拌する。
【０１０２】
静脈投与できる液剤：
組成：
注射用に、実施例１の化合物１ｍｇ、ポリエチレングリコール４００ １５ｇ、および水２５０ｇ。
製造：
実施例１の化合物を、ポリエチレングリコール４００と共に水に撹拌しながら溶解する。溶液を濾過滅菌し（孔直径０.２２μｍ）、加熱滅菌した点滴瓶に無菌条件下で満たすのに使用する。これらを点滴ストッパーと圧接栓（crimped cap）で密封する。
【手続補正書】
【提出日】平成16年11月4日(2004.11.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2005523294000001.app
【国際調査報告】
2005523294.tif 000048
2005523294.tif 000049
2005523294.tif 000050
2005523294.tif 000051
2005523294.tif 000052
2005523294.tif 000053
2005523294.tif 000054
2005523294.tif 000055