【手続補正書】
【提出日】令和2年4月16日(2020.4.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
分化細胞を分化転換する方法であって、少なくとも１種類の要素（ｉ）および少なくとも１種類の要素（ｉｉ）と前記細胞を接触させることを含む方法であり、
前記要素（ｉ）が
（ｄ）Ｂｃｌ−２ファミリーのメンバーの抗アポトーシス活性を有する野生型であって、ヒトＢｃｌ−２（配列番号１または５）からなる群より選択されるＢｃｌ−２ファミリーのメンバーの前記野生型と少なくとも９８％の配列同一性を示すアミノ酸配列を含む、または前記アミノ酸配列からなるポリペプチドをコードする核酸であり、
前記要素（ｉ）が無いときと比較すると前記要素（ｉ）によって分化転換細胞の収率が少なくとも３０％向上し、
且つ、
前記要素（ｉｉ）が、Ａｓｃｌ１およびＮｅｕｒｏｇ２から選択される神経原性転写因子または筋原性転写因子ＭｙｏＤをコードする核酸であり、
ヒトまたは動物の身体を治療処置するあらゆる方法が除外され、
前記細胞を前記要素（ｉ）および前記要素（ｉｉ）と接触させる前記方法は、形質導入及び形質移入であり、
前記細胞が、
（ｉ）体細胞であり、前記体細胞が、線維芽細胞および星状細胞から選択され、
（ｉｉ）哺乳類細胞であり、および
（ｉｉｉ）胚由来または出生後段階の細胞
である前記方法。
【請求項２】
前記哺乳類細胞が、マウス起源またはヒト起源である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記出生後段階の細胞が、成体段階に由来する細胞である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
分化細胞を分化転換する方法であって、少なくとも１種類の要素（ｉｉｉ）および少なくとも１種類の要素（ｉｉ）と前記細胞を接触させることを含む方法であり、
前記要素（ｉｉｉ）によって脂質過酸化が減少し、前記要素（ｉｉｉ）が
（ａ）ビタミンＤ受容体またはその機能ホモログをコードする核酸、
（ｂ）ステロイド性抗酸化剤
（ｃ）フェノール性抗酸化剤および
（ｄ）ユビキノール
から選択され、
且つ、
前記要素（ｉｉ）が、Ａｓｃｌ１およびＮｅｕｒｏｇ２から選択される神経原性転写因子または筋原性転写因子ＭｙｏＤをコードする核酸であり、
ヒトまたは動物の身体を治療処置するあらゆる方法が除外され、
前記細胞を前記要素（ｉｉ）と接触させる前記方法は、形質導入、及び形質移入であり、
前記細胞が、
（ｉ）体細胞であり、前記体細胞が、線維芽細胞および星状細胞から選択され、
（ｉｉ）哺乳類細胞であり、および
（ｉｉｉ）胚由来または出生後段階の細胞
である前記方法。
【請求項５】
前記ステロイド性抗酸化剤が、カルシトリオールである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記フェノール性抗酸化剤が、α−トコフェロールまたはα−トコトリエノールである、
請求項４または５に記載の方法。
【請求項７】
前記哺乳類細胞が、マウス起源またはヒト起源である、請求項４〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記出生後段階の細胞が、成体段階に由来する細胞である、請求項４〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
請求項４において規定される少なくとも１種類の要素（ｉｉｉ）と前記細胞を接触させることをさらに含む請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
（ａ）請求項１において規定される少なくとも１種類の要素（ｉ）と請求項１において規定される少なくとも１種類の要素（ｉｉ）、
（ｂ）請求項４において規定される少なくとも１種類の要素（ｉｉｉ）と請求項４において規定される少なくとも１種類の要素（ｉｉ）、または
（ｃ）請求項９において規定される少なくとも１種類の要素（ｉ）、請求項９において規定される少なくとも１種類の要素（ｉｉ）、および請求項９において規定される少なくとも１種類の要素（ｉｉｉ）
を含む、またはそれらからなる配合物であって、
前記細胞が、
（ｉ）体細胞であり、前記体細胞が、線維芽細胞および星状細胞から選択され、
（ｉｉ）哺乳類細胞であり、および
（ｉｉｉ）胚由来または出生後段階の細胞
である配合物。
【請求項１１】
前記哺乳類細胞が、マウス起源またはヒト起源である、請求項１０に記載の配合物。
【請求項１２】
前記出生後段階の細胞が、成体段階に由来する細胞である、請求項１０または１１に記
載の配合物。
【請求項１３】
機能性神経細胞の消失および／または機能性筋細胞の消失を特徴とする神経障害または筋障害を治療または予防する方法に使用するための請求項１０において規定される配合物であって、前記１つ以上の転写因子が神経原性転写因子および筋原性転写因子から選択され、分化細胞を分化転換することによって前記治療または予防が達成される前記配合物。
【請求項１４】
前記ポリペプチドが
（ａ）アミノ酸配列が配列番号１に示されているヒトＢｃｌ−２と比較すると低下した抗アポトーシス機能を有しているか、またはその抗アポトーシス機能を失っており、および／または
（ｂ）ヒトＢｃｌ−２よりも高い程度にまで分化転換細胞の収率を向上させる、請求項１〜３および９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記ポリペプチドがＢＨ４ドメインと所望によりＢＨ１ドメイン、ＢＨ２ドメイン、ＢＨ３ドメインおよびＢＨ４ドメインからなる群より選択される１つ、２つ、３つ、またはそれより多くのドメインを含み、前記ポリペプチドがただ１つのＢＨ１ドメイン、ただ１つのＢＨ２ドメイン、ただ１つのＢＨ３ドメインおよびただ１つのＢＨ４ドメインを含む、請求項１〜３、９および１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記ポリペプチドが、
（ａ）可動性ループドメイン中の１つ以上のリン酸化可能残基がリン酸化不能残基によって置き換えられているか、または欠失している点で野生型Ｂｃｌ−２と異なるＢｃｌ−２突然変異体、例えば、
（ｉ）ヒトＢｃｌ−２のＳ７０Ａ突然変異体、
（ｉｉ）ヒトＢｃｌ−２のＴ６９Ａ／Ｓ７０Ａ二重突然変異体、
（ｉｉｉ）ヒトＢｃｌ−２のＳ８７Ａ突然変異体、
（ｉｖ）ヒトＢｃｌ−２のＴ６９Ａ／Ｓ７０Ａ二重突然変異体、
（ｖ）ヒトＢｃｌ−２のＴ６９Ａ／Ｓ８７Ａ二重突然変異体、
（ｖｉ）ヒトＢｃｌ−２のＳ７０Ａ／Ｓ８７Ａ二重突然変異体、
（ｖｉｉ）ヒトＢｃｌ−２のＴ６９Ａ／Ｓ７０Ａ／Ｓ８７Ａ三重突然変異体、
（ｖｉｉｉ）ヒトＢｃｌ−２のＴ６９、Ｓ７０およびＳ８７のうちの１つ、２つ、または３つの欠失から選択される欠失突然変異体、および
（ｉｘ）ヒトＢｃｌ−２のａａ６９〜８７の欠失突然変異体
から選択される、請求項１〜３、９、１４および１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記細胞が線維芽細胞であり、前記要素（ｉｉ）が、Ａｓｃｌ１、Ｎｅｕｒｏｇ２およびＭｙｏＤから選択される１つの転写因子である、請求項１〜３、９および１４〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記転写因子がＡｓｃｌ１およびＮｅｕｒｏｇ２から選択される神経原性転写因子であり、前記方法によってＧＡＢＡ作動性神経細胞、グルタミン酸作動性神経細胞、および運動神経細胞から選択される１つ以上の分化転換細胞が産出される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記転写因子がＭｙｏＤであり、前記方法によって筋細胞が産出される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記ポリペプチドが
（ａ）アミノ酸配列が配列番号１に示されているヒトＢｃｌ−２と比較すると低下した
抗アポトーシス機能を有しているか、またはその抗アポトーシス機能を失っており、および／または
（ｂ）ヒトＢｃｌ−２よりも高い程度にまで分化転換細胞の収率を向上させる、請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の配合物。
【請求項２１】
前記ポリペプチドがＢＨ４ドメインと所望によりＢＨ１ドメイン、ＢＨ２ドメイン、ＢＨ３ドメインおよびＢＨ４ドメインからなる群より選択される１つ、２つ、３つ、またはそれより多くのドメインを含み、前記ポリペプチドがただ１つのＢＨ１ドメイン、ただ１つのＢＨ２ドメイン、ただ１つのＢＨ３ドメインおよびただ１つのＢＨ４ドメインを含む、請求項１０〜１２および２０のいずれか一項に記載の配合物。
【請求項２２】
前記ポリペプチドが、
（ａ）可動性ループドメイン中の１つ以上のリン酸化可能残基がリン酸化不能残基によって置き換えられているか、または欠失している点で野生型Ｂｃｌ−２と異なるＢｃｌ−２突然変異体、例えば、
（ｉ）ヒトＢｃｌ−２のＳ７０Ａ突然変異体、
（ｉｉ）ヒトＢｃｌ−２のＴ６９Ａ／Ｓ７０Ａ二重突然変異体、
（ｉｉｉ）ヒトＢｃｌ−２のＳ８７Ａ突然変異体、
（ｉｖ）ヒトＢｃｌ−２のＴ６９Ａ／Ｓ７０Ａ二重突然変異体、
（ｖ）ヒトＢｃｌ−２のＴ６９Ａ／Ｓ８７Ａ二重突然変異体、
（ｖｉ）ヒトＢｃｌ−２のＳ７０Ａ／Ｓ８７Ａ二重突然変異体、
（ｖｉｉ）ヒトＢｃｌ−２のＴ６９Ａ／Ｓ７０Ａ／Ｓ８７Ａ三重突然変異体、
（ｖｉｉｉ）ヒトＢｃｌ−２のＴ６９、Ｓ７０およびＳ８７のうちの１つ、２つ、または３つの欠失から選択される欠失突然変異体、および
（ｉｘ）ヒトＢｃｌ−２のａａ６９〜８７の欠失突然変異体
から選択される、請求項１０〜１２、２０および２１のいずれか一項に記載の配合物。
【請求項２３】
前記細胞が線維芽細胞であり、前記要素（ｉｉ）が、Ａｓｃｌ１、Ｎｅｕｒｏｇ２およびＭｙｏＤから選択される１つの転写因子である、請求項１０〜１２および２０〜２２のいずれか一項に記載の配合物。
【請求項２４】
前記転写因子がＡｓｃｌ１およびＮｅｕｒｏｇ２から選択される神経原性転写因子であり、前記方法によってＧＡＢＡ作動性神経細胞、グルタミン酸作動性神経細胞、および運動神経細胞から選択される１つ以上の分化転換細胞が産出される、請求項２３に記載の配合物。
【請求項２５】
前記転写因子がＭｙｏＤであり、前記方法によって筋細胞が産出される、請求項２３に記載の配合物。
【請求項２６】
前記ポリペプチドが
（ａ）アミノ酸配列が配列番号１に示されているヒトＢｃｌ−２と比較すると低下した抗アポトーシス機能を有しているか、またはその抗アポトーシス機能を失っており、および／または
（ｂ）ヒトＢｃｌ−２よりも高い程度にまで分化転換細胞の収率を向上させる、請求項１３に記載の使用のための配合物。
【請求項２７】
前記ポリペプチドがＢＨ４ドメインと所望によりＢＨ１ドメイン、ＢＨ２ドメイン、ＢＨ３ドメインおよびＢＨ４ドメインからなる群より選択される１つ、２つ、３つ、またはそれより多くのドメインを含み、前記ポリペプチドがただ１つのＢＨ１ドメイン、ただ１つのＢＨ２ドメイン、ただ１つのＢＨ３ドメインおよびただ１つのＢＨ４ドメインを含む
、請求項１３または２６に記載の使用のための配合物。
【請求項２８】
前記ポリペプチドが、
（ａ）可動性ループドメイン中の１つ以上のリン酸化可能残基がリン酸化不能残基によって置き換えられているか、または欠失している点で野生型Ｂｃｌ−２と異なるＢｃｌ−２突然変異体、例えば、
（ｉ）ヒトＢｃｌ−２のＳ７０Ａ突然変異体、
（ｉｉ）ヒトＢｃｌ−２のＴ６９Ａ／Ｓ７０Ａ二重突然変異体、
（ｉｉｉ）ヒトＢｃｌ−２のＳ８７Ａ突然変異体、
（ｉｖ）ヒトＢｃｌ−２のＴ６９Ａ／Ｓ７０Ａ二重突然変異体、
（ｖ）ヒトＢｃｌ−２のＴ６９Ａ／Ｓ８７Ａ二重突然変異体、
（ｖｉ）ヒトＢｃｌ−２のＳ７０Ａ／Ｓ８７Ａ二重突然変異体、
（ｖｉｉ）ヒトＢｃｌ−２のＴ６９Ａ／Ｓ７０Ａ／Ｓ８７Ａ三重突然変異体、
（ｖｉｉｉ）ヒトＢｃｌ−２のＴ６９、Ｓ７０およびＳ８７のうちの１つ、２つ、または３つの欠失から選択される欠失突然変異体、および
（ｉｘ）ヒトＢｃｌ−２のａａ６９〜８７の欠失突然変異体
から選択される、請求項１３、２６および２７のいずれか一項に記載の使用のための配合物。
【請求項２９】
前記細胞が線維芽細胞であり、前記要素（ｉｉ）が、Ａｓｃｌ１、Ｎｅｕｒｏｇ２およびＭｙｏＤから選択される１つの転写因子である、請求項１３および２６〜２８のいずれか一項に記載の使用のための配合物。
【請求項３０】
前記転写因子がＡｓｃｌ１およびＮｅｕｒｏｇ２から選択される神経原性転写因子であり、前記方法によってＧＡＢＡ作動性神経細胞、グルタミン酸作動性神経細胞、および運動神経細胞から選択される１つ以上の分化転換細胞が産出される、請求項２９に記載の使用のための配合物。
【請求項３１】
前記転写因子がＭｙｏＤであり、前記方法によって筋細胞が産出される、請求項２９に記載の使用のための配合物。
【請求項３２】
機能性神経細胞の消失および／または機能性筋細胞の消失を特徴とする神経障害および／または筋障害のモデルを作製する方法であって、請求項１８または１９に記載の方法を含む方法であり、前記神経障害および／または筋障害の素因を有する個体または前記神経障害および／または筋障害を患う患者から前記線維芽細胞を入手している前記方法。
【請求項３３】
機能性神経細胞の消失および／または機能性筋細胞の消失を特徴とする神経障害および／または筋障害を診断する方法であって、請求項１〜３、９および１４〜１９のいずれか一項に記載の方法を含む方法であり、前記神経障害および／または筋障害を有することが疑われる個体または前記神経障害および／または筋障害の素因を有することが疑われる個体から前記分化細胞を入手しており、前記分化細胞が線維芽細胞であり、分化転換により獲得され、且つ、疾患表現型を有する神経細胞および／または筋細胞が前記神経障害および／または筋障害を示す前記方法。
【請求項３４】
分化転換細胞を含む組成物を作製する方法であって、請求項１〜３、９および３２〜３３のいずれか一項に記載の方法を含む前記方法。
【請求項３５】
分化転換の促進因子としての請求項１〜３および１４〜１６のいずれか一項において規定されるポリペプチドまたは前記ポリペプチドをコードする核酸の使用であって、ヒトまたは動物の治療処置方法におけるあらゆる使用が除外される前記使用。
【請求項３６】
前記配合物がキットとして提供され、前記キットが請求項１〜９、１４〜１９および３２〜３４のいずれか一項に記載の方法を実施するための指示を有するマニュアルを含んでもよい、請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の配合物。
【請求項３７】
前記細胞において前記ポリペプチドの量及び／又は活性を増加させるための手段をさらに含む、請求項１及び３〜９、１４〜１９および３２〜３４の何れか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記細胞において前記転写因子の量及び／又は活性を増加させるための手段をさらに含む、請求項１〜９、１４〜１９および３２〜３４及び３７の何れか一項に記載の方法。