(57)【要約】  一般式Ｉ：    【化１】2005510456.tif 000045（式中、Ｒ1は、フェニル、ピリジニル、チエニル、フラニル、イミダゾリル、ピロリル、トリアゾリル、チアゾリル及びピリジンＮ−オキシドのいずれか一つから選ばれ；Ｒ1フェニル環及びＲ1複素芳香族環は、それぞれ場合により及び独立して直鎖及び分枝Ｃ1−Ｃ6アルキル、ＮＯ2、ＣＦ3、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、クロロ、フルオロ、ブロモ、及びヨードから選ばれる１、２又は３個の置換基によってさらに置換されていてもよく、フェニル環上の及び複素芳香族環上の置換は、前記環系上の任意の位置で実施することができる）の化合物及び塩、及び新規化合物を含んでなる医薬組成物、並びに治療、特に疼痛、不安症及び機能性胃腸障害の処置におけるその使用が本明細書で開示され、請求されている。
2005510456.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
2005510456.tif 000031
の化合物及びその塩。
式Ｉ中、Ｒ1は、
(ｉ) フェニル
【化２】
2005510456.tif 000032
(ii) ピリジニル
【化３】
2005510456.tif 000033
(iii) チエニル
【化４】
2005510456.tif 000034
(iv) フラニル
【化５】
2005510456.tif 000035
(ｖ) イミダゾリル
【化６】
2005510456.tif 000036
(vi) トリアゾリル
【化７】
2005510456.tif 000037
(vii) ピロリル
【化８】
2005510456.tif 000038
(viii) チアゾリル
【化９】
2005510456.tif 000039
(ix) ピリジル−Ｎ−オキシド
【化１０】
2005510456.tif 000040
のいずれか一つから選ばれ、その際、Ｒ1フェニル環及びＲ1複素芳香族環は、それぞれ独立して、直鎖及び分枝Ｃ1−Ｃ6アルキル、ＮＯ2、ＣＦ3、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、クロロ、フルオロ、ブロモ及びヨードから独立して選ばれる１、２又は３個の置換基によってさらに置換されていてもよい。
【請求項２】
Ｒ1フェニル環及びＲ1複素芳香族環がそれぞれ独立してメチル、ＣＦ3、クロロ、フル
オロ、ブロモ及びヨードから独立して選ばれる１、２又は３個の置換基によってさらに置換されていてもよい請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ1フェニル環及びＲ1複素芳香族環は、それぞれ独立してメチル基によってさらに置換されていてもよい請求項１記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ1がピリジニル、ピロリル、チエニル又はフラニルである請求項１記載の化合物。
【請求項５】
[（１−ベンジル−ピペリジン−４−イル）−（４−ジエチル−カルバモイル−フェニ
ル）−アミノ]−フルオロ−ベンズアミド、
[（４−ジエチルカルバモイル−フェニル）−（１−ピリジン−２−イルメチル−ピペ
リジン−４−イル）−アミノ]−フルオロ−ベンズアミド、
[（４−ジエチルカルバモイル−フェニル）−（１−チオフェン−３−イルメチル−ピ
ペリジン−４−イル）−アミノ]−フルオロ−ベンズアミド、
[（４−ジエチルカルバモイル−フェニル）−（１−フラン−３−イルメチル−ピペリ
ジン−４−イル）−アミノ]−フロオロ−ベンズアミド、
[（４−ジエチルカルバモイル−フェニル）−（１−チオフェン−２−イルメチル−ピ
ペリジン−４−イル）−アミノ]−フルオロ−ベンズアミド、
[[１−（２,４−ジクロロ−ベンジル）−ピペリジン−４−イル]−（４−ジエチルカルバモイル−フェニル）−アミノ]−フルオロ−ベンズアミド、
[（４−ジエチルカルバモイル−フェニル）−（１−チアゾール−２−イルメチル−ピ
ペリジン−４−イル）−アミノ]−フルオロ−ベンズアミド、
[[１−（４−ブロモ−ベンジル）−ピペリジン−４−イル]−（４−ジエチルカルバモ
イル−フェニル）−アミノ]−フルオロ−ベンズアミド、
[（４−ジエチルカルバモイル−フェニル）−（１−フラン−２−イルメチル−ピペリ
ジン−４−イル）−アミノ]−フルオロ−ベンズアミド、
[（４−ジエチルカルバモイル−フェニル）−（１−ピリジン−４−イルメチル−ピペ
リジン−４−イル）−アミノ]−フロオロ−ベンズアミド、
[ [１−（４−クロロ−ベンジル）−ピペリジン−４−イル]−（４−ジエチルカルバモイル−フェニル）−アミノ]−フロオロ−ベンズアミド、
[（４−ジエチルカルバモイル−フェニル）−（１−ピリジン−３−イルメチル−ピペ
リジン−４−イル）−アミノ]−ベンズアミド、
｛（４−ジエチルカルバモイル−フェニル）−[１−（３Ｈ−イミダゾール−４−イル
メチル）−ピペリジン−４−イル]−アミノ｝−フルオロ−ベンズアミド、
｛（４−ジエチルカルバモイル−フェニル）−[１−（１Ｈ−イミダゾール−２−イル
メチル）−ピペリジン−４−イル]−アミノ｝−フルオロ−ベンズアミド、及び
｛（４−ジエチルカルバモイル−フェニル）−［１−（１Ｈ−ピロール−２−イルメチル）−ピペリジン−４−イル］−アミノ｝−フルオロ−ベンズアミド
のいずれか一つから選ばれる請求項１記載の化合物。
【請求項６】
塩酸塩、二塩酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、ジトリフルオロ酢酸塩又はクエン酸塩の形態の請求項１〜５のいずれか一項記載の化合物。
【請求項７】
一般式II
【化１１】
2005510456.tif 000041
（式中、ＰＧは、ウレタン保護基、例えばＢｏｃ及びＣＢＺ又はベンジルもしくは置換されたベンジル保護基、例えば２,４−ジメトキシベンジルである）の化合物を、塩基、例
えばナトリウムtert−ブトキシドの存在下で、パラジウム触媒、例えばＰｄ2(ｄｂａ)3を用いてＮ,Ｎ−ジエチル−４−ブロモベンズアミドと反応させて一般式III
【化１２】
2005510456.tif 000042
の化合物を得、その後、これを標準条件下で脱保護し、そして還元条件下で一般式Ｒ1−
ＣＨＯの化合物を用いてアルキル化して一般式Ｉの化合物を得ることからなる式Ｉの化合物の製造方法。
【請求項８】
治療に使用するための請求項１記載の化合物。
【請求項９】
疼痛、不安症又は機能性胃腸障害の治療に使用する医薬を製造するための請求項１記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項１０】
活性成分として請求項１記載の式Ｉの化合物を、医薬上許容しうる担体と共に含む医薬組成物。
【請求項１１】
請求項１記載の式Ｉの化合物の有効量を疼痛処置の必要な患者に投与する疼痛の治療方法。
【請求項１２】
請求項１記載の式Ｉの化合物の有効量を胃腸障害の患者に投与する胃腸障害の治療方法。
【請求項１３】
請求項１記載の式Ｉの化合物の有効量を、脊椎損傷の患者に投与する脊椎損傷の治療方法。
【請求項１４】
式III
【化１３】
2005510456.tif 000043
（式中、ＰＧは、ウレタン保護基、例えばＢｏｃ及びＣＢＺ、又はベンジルもしくは置換されたベンジル保護基、例えば２,４−ジメトキシベンジルである）の化合物。
【請求項１５】
一般式Ｘ
【化１４】
2005510456.tif 000044
（式中、Ｒ1は、フェニル、ピリジニル、チエニル、フラニル、イミダゾリル、トリアゾ
リル、ピロリル、チアゾリル又はピリジル−Ｎ−オキシドから選択され、ＰＧは、ウレタン保護基、例えばＢｏｃ及びＣＢＺ、又はベンジルもしくは置換されたベンジル保護基、例えば２,４−ジメトキシベンジルである）の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規化合物、その製造方法、その使用及び新規化合物を含んでなる医薬組成物に関する。新規化合物は、治療、特に疼痛、不安症及び機能性胃腸障害の治療に有用である。
【背景技術】
【０００２】
δ受容体は、循環系や痛覚系といったような多くの身体機能において役割を有することが確認されている。従って、δ受容体のリガンドは、鎮痛剤及び／又は抗高血圧剤としての使用可能性を見出すことができる。また、δ受容体のリガンドは、免疫調節活性を有することがわかった。
【０００３】
今のところ、少なくとも３つの異なる個体群のオピオイド受容体（μ、δ及びκ）が確認されており、３つは、いずれもヒトを含めた多くの種の中枢及び末梢神経系の両方で見られる。これらの受容体の１つ以上が活性化された時に、種々の動物モデルで痛覚脱失が観察された。
【０００４】
一部の例外を除いて、現在入手可能な選択的オピオイドδリガンドは、性質がペプチド性であり、全身経路による投与に適していない。非ペプチド性δ作動薬の一例は、ＳＮＣ８０である(Bilsky E.J.等, Journal of Pharmacology ahd Experimental Therapeutics,
273(1), 第359-366頁 (1995))。しかし、改善された選択性を有するだけでなく副作用プロフィールも改善された選択的δ作動薬が、なお必要とされている。
【０００５】
従って、本発明の根本的な課題は、改善された鎮痛効果を有するだけでなく、現在のμ作動薬よりも改善された副作用プロフィールを有し、しかも改善された全身有効性を有する新しい鎮痛剤を見出すことである。
【０００６】
先行技術において確認された既存の鎮痛剤は、薬理動態に乏しく、全身経路によって投与した場合に鎮痛性がないといった多くの欠点を有する。また、先行技術に記載された好ましいδ作動薬化合物は、全身投与した場合、有意な痙攣効果を示すことが報告されている。
【０００７】
ここで、本発明者らは、驚くほど改善された性質、すなわち改善されたδ作動薬効力、生体内効力、薬理動態、生物学的利用能、生体外安定性及び／又はより低い毒性を示すある種の化合物を見出した。
【発明の開示】
【０００８】
本発明の新規化合物は、式Ｉ
【化１】
2005510456.tif 000003
（式中、Ｒ1は、
(ｉ) フェニル
【化２】
2005510456.tif 000004
(ii) ピリジニル
【化３】
2005510456.tif 000005
(iii) チエニル
【化４】
2005510456.tif 000006
(iv) フラニル
【化５】
2005510456.tif 000007
(ｖ) イミダゾリル
【化６】
2005510456.tif 000008
(vi) トリアゾリル
【化７】
2005510456.tif 000009
(vii) ピロリル
【化８】
2005510456.tif 000010
(viii) チアゾリル
【化９】
2005510456.tif 000011
(ix) ピリジル−Ｎ−オキシド
【化１０】
2005510456.tif 000012
のいずれか一つから選ばれ、その際、Ｒ1フェニル環及びＲ1複素芳香族環は、それぞれ場合により独立して、直鎖及び分枝Ｃ1−Ｃ6アルキル、ＮＯ2、ＣＦ3、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、クロロ、フルオロ、ブロモ及びヨードから独立して選ばれる１、２又は３個の置換基によってさらに置換されていてもよい）によって定義される。フェニル環及び複素芳香族環上の置換は、前記環系上の任意の位置で行うことができる。
【０００９】
Ｒ1フェニル環及びＲ1複素芳香族環が置換されている場合、好ましい置換基は、ＣＦ3、メチル、ヨード、ブロモ、フルオロ及びクロロのいずれかより選ばれる。
【００１０】
本発明のさらなる実施態様は、Ｒ1が上記定義された通りであり、そしてＲ1フェニル及びＲ1複素芳香族環は、それぞれ独立してメチル基によってさらに置換されている式Ｉの
化合物である。
【００１１】
本発明のさらなる実施態様は、Ｒ1がフェニル、ピロリル、ピリジニル、チエニル又は
フラニルであり、場合によりＲ1フェニル又はＲ1複素芳香族環上で１個又は２個の好ましい置換基を有する式Ｉの化合物である。
【００１２】
本発明の別の実施態様は、Ｒ1がフェニル、ピロリル又はピリジニルであり、場合によ
り、Ｒ1フェニル又はＲ1複素芳香族環上で１個又は２個の好ましい置換基を有する式Ｉの化合物である。
【００１３】
本発明の別の実施態様は、Ｒ1がチエニル又はフラニルであり、場合によりＲ1複素芳香族環上で１個又は２個の好ましい置換基を有する式Ｉの化合物である。
【００１４】
また、式Ｉの化合物の塩及び鏡像異性体は、鏡像異性体の塩を含めて本発明の範囲内である。
【００１５】
スキーム１の反応工程ｂ（後記参照）は、一般式II
【化１１】
2005510456.tif 000013
（式中、ＰＧは、ウレタン保護基、例えばＢｏｃ及びＣＢＺ、又はベンジルもしくは置換されたベンジル保護基、例えば２,４−ジメトキシベンジルである）の中間化合物を、塩基、例えばtert−ＢｕＯＮａ及びホスフィンリガンド、例えばビス−ジフェニルホスファニル−ジメチル−９Ｈ−キサンテン（キサントホス）の存在下で、パラジウム触媒、例えばトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（Ｐｄ2(ｄｂａ)3)を用いてＮ,Ｎ−ジエチル−４−ブロモベンズアミドと反応させて一般式III
【化１２】
2005510456.tif 000014
の化合物を得、これを、その後、１）標準条件下で脱保護し、２）塩基性条件下で加水分解し、そして３）
ｉ）一般式Ｒ1−ＣＨ2−Ｘ（式中、Ｒ1は上記定義された通りであり、そしてＸはハロゲン、好ましくは臭素又は塩素である）の化合物及び適切な塩基、又は
ii）一般式Ｒ1−ＣＨＯ（式中、Ｒ1は、上記定義された通りである）の化合物及び適切な還元剤：のいずれかを用いてアルキル化して、一般式Ｉの化合物を得る
ことによって実施される。
【００１６】
上記の標準アルキル化工程ｉ）に使用する適切な塩基には、トリエチルアミン及び炭酸カリウムが含まれるが、これらに限定されない。
【００１７】
標準還元工程ii）に使用する適切な還元剤には、ナトリウムシアノボロヒドリド及びナトリウムトリアセトキシボロヒドリドが含まれるが、これらに限定されない。
【００１８】
本発明の新規化合物は、治療、特に種々の疼痛状態、例えば慢性疼痛、神経因性疼痛、急性疼痛、癌性疼痛、慢性関節リウマチによって生じる疼痛、偏頭痛、内臓痛等の治療に有用である。しかし、このリストは、網羅するものとして解釈してはならない。
【００１９】
本発明の化合物は、免疫調節物質として、特に自己免疫疾患、例えば関節炎、皮膚移植片、臓器移植及び同様の外科的必要性、膠原病、種々のアレルギー、抗腫瘍剤及び抗ウイルス剤としての使用に有用である。
【００２０】
本発明の化合物は、オピオイド受容体の退行変性又は機能不全が存在する又はそのパラダイムが関与する疾病状態に有用である。診断技術及び画像化用途、例えば陽電子射出断層撮影法（ＰＥＴ）においては、本発明化合物の同位元素的に標識化されたバージョンの使用を含むことができる。
【００２１】
本発明の化合物は、下痢、うつ病、不安症及びストレス関連障害、例えば心的外傷後ストレス障害、恐慌性障害、全般性不安障害、社会的恐怖症、及び強迫性障害；尿失禁、種々の精神的な病気、咳、肺水腫、種々の胃腸障害、例えば便秘、機能性胃腸障害、例えば過敏性腸症候群及び機能性消化不良、パーキンソン病及び他の運動性障害、外傷性脳損傷、卒中、心筋梗塞後の心臓保護、脊髄損傷及び薬物嗜癖（アルコール、ニコチン、オピオイド及び他の薬物乱用の治療を含む）並びに交感神経系の障害、例えば高血圧の治療に有用である。
【００２２】
本発明の化合物は、全身麻酔やモニターによる麻酔治療中に使用する鎮痛剤として有用である。麻酔状態（例えば記憶喪失、痛覚脱失、筋弛緩及び鎮静作用）を維持するために必要な効果のバランスを得るため、しばしば異なる性質の薬剤の組合せが用いられる。この組合せには、吸入麻酔剤、催眠剤、不安緩解剤、神経筋遮断剤及びオピオイドが含まれる。
【００２３】
また、上で議論したいずれかの状態を治療する医薬の製造における上記式Ｉのいずれかの化合物の使用は、本発明の範囲である。
【００２４】
本発明のさらなる態様は、上記式Ｉの化合物の有効量を治療の必要な患者に投与することによって上で議論したいずれかの状態で苦しむ患者を治療する方法である。
【００２５】
本発明のさらなる態様は、一般式II及びIII
【化１３】
2005510456.tif 000015
（式中、ＰＧはウレタン保護基、例えばＢｏｃもしくはＣＢＺ、又はベンジルもしくは置換されたベンジル保護基、例えば２,４−ジメトキシベンジルである）の中間体である。
【００２６】
本発明のさらなる態様は、式Ｘ；
【化１４】
2005510456.tif 000016
（式中、Ｒ1は、式Ｉに関して上記された通りである）の中間体である。
【００２７】
さらに別の合成経路において、スキーム２（後記参照）の反応工程ｂは、一般式IV
【化１５】
2005510456.tif 000017
（式中、ＰＧは、ウレタン又はベンジルのような保護基、例えばＢｏｃである）の中間化合物を、パラジウム触媒、例えばトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）[Ｐｄ2(ｄｂａ)3 ]を用いて、塩基、例えばtert−ＢｕＯＮａ及びホスフィンリガンド、例えばビス−ジフェニルホスファニル−ジメチル−９Ｈ−キサンテン（キサントホス）の存在下でＮ,Ｎ−ジエチル−４−ブロモベンズアミドと反応させて、一般式Ｖ
【化１６】
2005510456.tif 000018
の化合物を得、その後、これを１）標準条件下で脱保護し、２）塩基性条件下で加水分解し、そして３）
ｉ）一般式Ｒ1−ＣＨ2−Ｘ（式中、Ｒ1は、上記定義された通りであり、そしてＸは、
ハロゲン、好ましくは臭素又は塩素である）の化合物及び適切な塩基、又は
ii）一般式Ｒ1−ＣＨＯ（式中、Ｒ1は、上記定義された通りである）の化合物及び適切な還元剤
のいずれかを用いてアルキル化して、一般式Ｉの化合物を得ることによって実施される。
【００２８】
この後、標準条件下で、１) ケタールをアルデヒド（式VI）へ加水分解し、続いて２) アルデヒドを対応するカルボン酸（式VII）へ酸化し、続いて３) 塩化アンモニウムを用
いて第一級アミドにアミド化することによりケタール官能基を第一級アミドに転化して一般式Ｉの化合物を得る。
【化１７】
2005510456.tif 000019
【００２９】
標準加水分解工程(ｉ)で用いる適切な加水分解条件には、テトラヒドロフラン中の水性塩酸が含まれるが、これに限定されない。
【００３０】
酸化工程(ii)の適切な条件には、過剰の２−メチル−２−ブテンの存在下で水性リン酸二水素ナトリウム及び亜塩素酸ナトリウム中、０℃で撹拌することが含まれるが、これに限定されない。
【００３１】
アミド化工程(iii)の適切な条件には、カップリング剤、例えばベンゾトリアゾール−
１−イルオキシ−トリスホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（以下、Ｐｙ−ＢＯＰ）の存在下で過剰の塩化アンモニウムで処理することが含まれるが、これに限定されない。
【００３２】
製造方法
〔実施例〕
ここで、本発明を、以下のスキーム及び実施例によってより詳細に説明するが、これらは本発明を制限するものとして解釈されない。
【００３３】
【化１８】
2005510456.tif 000020
【００３４】
方法１Ａ（化合物１）：
３−（１−ベンジル−ピペリジン−４−イルアミノ）−４−フルオロ−ベンゾニトリル
３−ブロモ−４−フルオロベンゾニトリル（６.５６ｇ，１当量）を含む乾燥フラスコ
に、乾燥トルエン（１００ｍＬ）、４−アミノ−１−ベンジルピペリジン（１.２当量）
、ラセミＢＩＮＡＰ（６１２ｍｇ，０.０３当量）、酢酸パラジウム（２２０ｍｇ，０.０２当量）及びナトリウムtert−ブトキシド（４.４ｇ，１.４当量）を加えた。反応物を不活性雰囲気で８０℃に２０時間加熱した。反応物を冷まし、酢酸エチル（２００ｍＬ）で希釈し、水（１００ｍＬ）で洗浄した。合わせた有機物を乾燥し（ＭｇＳＯ4）、濾過、そして濃縮した。フラッシュクロマトグラフィによりジクロロメタン中の３％メタノールで溶出させて精製し、アミン(１)を黄色固形物（６.６５５ｇ，６６％）として得た。
【００３５】
方法１Ｂ（化合物２）：
[（１−ベンジル−ピペリジン−４−イル）−（５−シアノ−２−フルオロ−フェニル）
−アミノ]−Ｎ,Ｎ−ジエチル−ベンズアミド
乾燥トルエン（５０ｍＬ）中のアミン(１)（３.５０ｇ，１当量）の溶液に、臭化アリ
ール（４.３５ｇ，１.５当量）、キサントホス（３９３ｍｇ，０.０６当量）、Ｐｄ2(ｄ
ｂａ)3（３３１ｍｇ，０.０３当量）及びナトリウムtert−ブトキシド（１.５２ｇ，１.
４当量）を加えた。次いで、反応物を１４時間、還流加熱してから冷まし、酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈した。溶液を水（１００ｍＬ）で洗浄してから有機物を乾燥し（ＭｇＳＯ4）、濾過、そして濃縮した。フラッシュクロマトグラフィにより６５％酢酸エチル、３５％ヘキサンから７０％酢酸エチル３０％ヘキサンへ上昇させ溶出させて精製し、アミン(２)をオレンジ色油状物（３.５６８ｇ，収率６５％）として得た。
【００３６】
方法１Ｃ（化合物３）：
[（５−シアノ−２−フルオロ−フェニル）−ピペリジン−４−イル−アミノ]−Ｎ,Ｎ−
ジエチルベンズアミド
１,２−ジクロロエタン（６５ｍＬ）中のアミン(２)（３.５６４ｇ，１当量）の溶液に、０℃で、１−クロロエチルクロロホルメート（９２０μｌ，１.１５当量）を加えた。０℃で１時間後、反応物を室温に加温してから７０℃に９０分間加熱した。次いで、反応物を冷まして濃縮した。残留物をメタノール（６０ｍＬ）に溶解してから７０℃に１時間加熱した。次に、溶液を冷まして濃縮した。フラッシュクロマトグラフィによりジクロロメタン中の１０％メタノールからジクロロメタン中の４０％メタノールへ上昇させ溶出させて精製し、アミンを黄色泡状物（２.７８６ｇ，９６％）として得た。
【００３７】
【化１９】
2005510456.tif 000021
【００３８】
中間体４：（１−ベンジル−ピペリジン−４−イル）−（５−[１,３]ジオキソラン−２−イル−２
−フルオロ−フェニル）−アミン
乾燥トルエン中に２−（３−ブロモ−４−フルオロフェニル）−１,３−ジオキソラン
（１.０当量）及びアミン（１.２当量）を含む乾燥フラスコに、ＢＩＮＡＰ（０.０３当
量）、酢酸パラジウム（０.０２当量）及びナトリウムtert−ブトキシド（１.４当量）を加えた。反応物は、窒素下で８０℃に加熱した。約２４時間後、溶液を冷まし、酢酸エチルで希釈し水で１回洗浄した。有機物を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過、そして濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィによってジクロロメタン中のメタノールで勾配溶出させて精製した。
【００３９】
中間体５：[（１−ベンジル−ピペリジン−４−イル）−（５−[１,３]ジオキソラン−２−イル−２−フルオロ−フェニル）−アミノ]−Ｎ,Ｎ−ジエチル−ベンズアミド
乾燥トルエン（４の１ミリモル当たり約６ｍＬ）中にアミン４を含む乾燥フラスコに、臭化アリール（１.４当量）、キサントホス（０.０６当量）、Ｐｄ2(ｄｂａ)3（０.０３
当量）及びナトリウムtert−ブトキシド（１.４当量）を加えた。反応物を窒素下で１１
０℃に加熱した。約２４時間後、溶液を冷まし、酢酸エチルで希釈し、水で１回洗浄した。有機物を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過、そして濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィによってジクロロメタン中のメタノールで勾配溶出させて精製した。
【００４０】
中間体６：[（１−ベンジル−ピペリジン−４−イル）−（２−フルオロ−５−ホルミル
−フェニル）−アミノ]−Ｎ,Ｎ−ジエチル−ベンズアミド
テトラヒドロフラン中のアセタール５の溶液に、２Ｎ ＨＣｌ溶液（２.０当量）を加えた。室温で１６時間後、ジクロロメタンを加え、水性相を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で中和した。有機相を除去し、水性相をジクロロメタンで２回抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥し（ＭｇＳＯ4）、濾過、濃縮し、そして残留物をフラッシュクロマトグラフ
ィによってヘキサン中酢酸エチルで勾配溶出させて精製した。
【００４１】
中間体７：[（１−ベンジル−ピペリジン−４−イル）−（４−ジエチルカルバモイル−
フェニル）−アミノ]−４−フルオロ−安息香酸
tert−ブタノール中のアルデヒド６（１.０当量）の溶液に、２−メチル−２−ブテン
（１０.０当量）を加え、溶液を０℃に冷やした。水中のリン酸二水素ナトリウム（９当
量）及び亜塩素酸ナトリウム（９当量）の溶液を加え、反応物を０℃で３０分間撹拌した。tert−ブタノールを除去し、反応混合物をジクロロメタンで抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥し（ＭｇＳＯ4）、濾過、濃縮し、そして残留物をフラッシュクロマトグラフィによってメタノール／ジクロロメタンで勾配溶出させて精製した。
【実施例１】
【００４２】
[（１−ベンジル−ピペリジン−４−イル）−（４−ジエチルカルバモイル−フェニル）
−アミノ]−４−フルオロ−ベンズアミド（別の合成法）
ＤＭＦ中の酸７（１.０当量）の溶液に、ｐｙＢＯＰ（１.５当量）、ＨＯＢｔ（１.５
当量）、ジイソプロピルエチルアミン（４.０当量）及び塩化アンモニウム（２当量）を
加えた。室温で１６〜２４時間後、反応物を濃縮した。残留物を酢酸エチルに溶解し、水で２回、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で１回洗浄した。有機相を乾燥し（ＭｇＳＯ4）、
濾過、濃縮し、そして残留物をフラッシュクロマトグラフィによってジクロロメタン中のメタノールで勾配溶出させて精製した。
さらなる例は、後述する一般的な方法を経て合成した。
【００４３】
Ａ.中間体３の還元的アミノ化：
【化２０】
2005510456.tif 000022
乾燥テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）又は１,２−ジクロロエタン中のアミン（３）の溶
液に、アルデヒド（１〜１.５当量）続いてナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（１
〜１.６当量）を加えた。反応物を窒素雰囲気下、室温で完全に確実に反応するように時
間を延長して（６〜４８時間）撹拌した。次いで、反応混合物を標準後処理方法及び標準精製にかけた。ＴＨＦ又は１,２−ジクロロエタンの量は、重要ではない。約１ｍＬ／３
０ｍｇに相当する量が好ましい。
下の実施例２の合成における方法２Ａは、典型的なものである。
【００４４】
Ｂ.中間体シアノ化合物の加水分解：
【化２１】
2005510456.tif 000023
tert−ブタノール中のシアノ中間体の溶液に、粉砕した水酸化カリウム（ＫＯＨ）（２.５当量）を加え、得られた混合物を約２時間、還流加熱した。次いで、混合物を室温に冷まし、標準後処理方法及び標準精製にかけた。tert−ブタノールの量は、重要でない。約１ｍＬ／３０ｍｇに相当する量が好ましい。
下の実施例２の合成における方法２Ｂは、典型的なものである。
【実施例２】
【００４５】
[（４−ジエチルカルバモイル−フェニル）−（１−ピリジン−２−イルメチル−ピペリ
ジン−４−イル）−アミノ]−４−フルオロ−ベンズアミド
【化２２】
2005510456.tif 000024
２Ａ：[（５−シアノ−２−フルオロ−フェニル）−（１−ピリジン−２−イルメチル−
ピペリジン−４−イル）−アミノ]−Ｎ,Ｎ−ジエチル−ベンズアミド
乾燥テトラヒドロフラン（１０ｍＬ）中のアミン（３７０ｍｇ）の溶液に、ピリジン−２−カルボキシアルデヒド（１１６μｌ；１.３当量）及びナトリウムトリアセトキシボ
ロヒドリド（２７９ｍｇ；１.４当量）を加えた。反応物を窒素下、室温で撹拌した。２
４時間後、反応物をジクロロメタンで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した。水性相をジクロロメタンで２回抽出し、合わせた有機物を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過、そして濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィによってジクロロメタン中の４％メタノールで溶出させて精製した。無色泡状物を得た（３１７.５ｍｇ；収率７０％）。
【００４６】
【化２３】
2005510456.tif 000025
２Ｂ：[（４−ジエチルカルバモイル−フェニル）−（１−ピリジン−２−イルメチル−
ピペリジン−４−イル）−アミノ]−４−フルオロ−ベンズアミド
tert−ブタノール（１０ｍＬ）中のニトリル（３１７ｍｇ）の溶液に、粉砕した水酸化カリウム（９２ｍｇ；２.５当量）を加え、反応物を還流加熱した。９０分後、溶液を冷
まし、ジクロロメタンで希釈し、そして水で１回洗浄した。有機物を除去し、水相を２Ｍ塩酸で中和しジクロロメタンで２回抽出した。合わせた有機物を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過、そして濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィによってジクロロメタン中の５％メタノールからジクロロメタン中７％のメタノールに上昇させて溶出させ精製した。無色泡状物を得た（１６４.０ｍｇ；収率５０％）。泡状物を、少量のジクロロメタンを含むエーテル（８ｍＬ）中に溶解し、１Ｎ ＨＣｌ／エーテル（１.０ｍＬ；≒３.０当量）を加え、１時間後、溶液を濃縮し、固形物を高真空下で乾燥した。
【００４７】
さらなる実施例は、同様に製造した。合成実施例について分析データは、以下の表１に示した。
【００４８】
【表１】
2005510456.tif 000026
【００４９】
【表２】
2005510456.tif 000027
【００５０】
【表３】
2005510456.tif 000028
【００５１】
医薬組成物
本発明による新規化合物は、経口的に、舌下に、筋内に、皮下に、局所的に、鼻腔内に、腹膜内に、胸腔内に、静脈内に、硬膜外に、髄膜下に、脳室内に、そして関節への注射によって投与することができる。
【００５２】
好ましい投与経路は、経口的、静脈内又は筋内である。用量は、投与経路、疾患の重さ、患者の年齢及び体重並びに個々の処方計画及び特定の患者にとって最適な用量レベルを決定する時に主治医によって通常考慮される他の因子に左右される。
【００５３】
本発明の化合物から医薬組成物を製造する際、不活性の医薬上許容しうる担体は、固体又は液体であることができる。固形製剤には、散剤、錠剤、分散性顆粒剤、カプセル剤、カシェ剤及び坐剤が含まれる。
【００５４】
また、固体担体は、希釈剤、着香剤、可溶化剤、潤滑剤、懸濁化剤、結合剤又は錠剤崩壊剤として作用することができる１つまたはそれ以上の物質であることができ、それはまたカプセル化物質であってもよい。
【００５５】
散剤では、担体は微粉砕された活性成分との混合物中にある微粉砕された固形物である。錠剤では、活性成分を、必要な結合性を有する担体と適切な比率で混合して所望の形状及びサイズに成形する。
【００５６】
坐剤組成物を製造するには、最初に、低融点ロウ、例えば脂肪酸グリセリド及びカカオ脂の混合物を溶融し、活性成分を、例えば撹拌によってその中に分散させる。次に、溶融した均質な混合物を、都合のよいサイズの型に注ぎ、冷やして凝固させる。
【００５７】
適切な担体は、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ラクトース、砂糖、ペクチン、デキストリン、デンプン、トラガカンタ、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、低融点ロウ、カカオ脂、等である。
【００５８】
塩には、医薬上許容しうる塩が含まれるが、これに限定されるものではない。本発明の範囲内の医薬上許容しうる塩の例には、酢酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、炭酸水素塩、酒石酸水素塩、臭化物、酢酸カルシウム、カムシル酸塩、炭酸塩、塩化物、クエン酸塩、二塩酸塩、エデト酸塩、エジシル酸塩、エストレート、エシル酸塩、フマル酸塩、グルカプト酸塩、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリルアルサニル酸塩、ヘキシルレソルシン酸塩、ヒドラバミン、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシナフトエート、イセチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、臭化メチル、硝酸メチル、硫酸メチル、粘液酸塩、ナプチル酸塩、硝酸塩、パモ酸塩（エンボン酸塩）、パントテン酸塩、リン酸塩／二リン酸塩、ポリガラクツロン酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、塩基性酢酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクル酸塩、トリエチオジド、及びベンザチンが含まれる。
【００５９】
本発明の範囲内の医薬上許容しえない塩の例には、ヨウ化水素酸塩、過塩素酸塩、テトラフルオロホウ酸塩が含まれる。医薬上許容しえない塩は、それらの有益な物理的及び／又は化学的性質、例えば結晶化度のため有用である可能性がある。
【００６０】
好ましい医薬上許容しうる塩は、塩酸塩、硫酸塩及び酒石酸水素塩である。塩酸塩及び硫酸塩は、特に好ましい。
【００６１】
組成物なる用語は、カプセル供給担体としてカプセル化物質を用いた活性成分の製剤を含むものとし、その中で活性成分（他の担体と共に又はなしで）は担体によって囲まれ、担体と会合している。同様に、カシェ剤が含まれる。
錠剤、散剤、カシェ剤及びカプセル剤は、経口投与に適切な固体剤形として使用することができる。
【００６２】
組成物の液体には、液剤、懸濁剤及び乳剤が含まれる。活性化合物の滅菌水又は水−プロピレングリコール溶液は、非経口投与に適切な液体製剤の例として記載することができる。また、液体組成物は、水性ポリエチレングリコール溶液中の液剤として処方することができる。
【００６３】
経口投与の水性液剤は、活性成分を水中に溶解し、 所望の適切な着色剤、着香剤、安
定剤及び増粘剤を加えることによって製造することができる。経口用の使用について水性懸濁剤は、微粉砕された活性成分を、水中で、粘性物質、例えば天然の合成ゴム、樹脂、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、及び医薬製剤技術で知られている他の懸濁化剤と共に分散させることによって製造することができる。
【００６４】
好ましくは、医薬組成物は、単位剤形である。このような形態では、組成物は適当な量の活性成分を含む単位用量に分割される。単位剤形は、パック製剤、離散量の製剤を含むパッケージ、例えばパケット単位にされた錠剤、カプセル剤及びバイアル又はアンプル中の散剤であることができる。また、単位剤形は、カプセル、カシェ剤又は錠剤それ自体であることができるし、又は適当な数のこれらのいずれかのパック形態であることができる。
【００６５】
生物学的評価
生体外モデル
細胞培養
Ａ．クローニングされたヒトμ、δ及びκ受容体及びネオマイシン耐性を発現するヒト２９３Ｓ細胞を、３７℃及び５％ＣＯ2で、カルシウムを含まないＤＭＥＭ10％ＦＢＳ、
５％ＢＣＳ、０.１％Pluronic F-68及び６００μｇ／ｍｌのゲネチシンを含む振盪フラスコ中の懸濁液中で成長させた。
【００６６】
Ｂ．マウス及びラット脳を計量し、氷冷ＰＢＳ（２.５ｍＭ ＥＤＴＡを含む、ｐＨ７.
４）中ですすいだ。ポリトロンを用いて、氷冷溶解緩衝液（５０ｍＭトリス，ｐＨ７.０
，２.５ｍＭ ＥＤＴＡ、使用直前に、フェニルメチルスルホニルフルオリドを、ＤＭＳＯ：エタノール中の０.５ＭｍＭ〜０.５Ｍのストックに加えた）中で、脳を１５秒間（マウス）又は３０秒間（ラット）均一化した。
【００６７】
膜調製
細胞をペレット化し、溶解緩衝液（５０ｍＭトリス，ｐＨ７.０，２.５ｍＭ ＥＤＴＡ
，使用直前にＰＭＳＦを、エタノール中０.１ｍＭ〜０.１Ｍのストックに加えた）中で再懸濁し、氷上で１５分間インキューベートし、次いでポリトロンで３０秒間均一化した。懸濁液を４℃で１０分間、１０００ｇ（最大）で遠心した。上澄液を氷上で保存し、ペレットを再懸濁し、前と同様に遠心した。両遠心からの上澄液を合わせ、４６，０００ｇ(最大)で３０分間遠心した。ペレットを冷トリス緩衝液（５０ｍＭトリス／Ｃｌ，ｐＨ７.０）中で再懸濁し、再び遠心した。最終的なペレットを、膜緩衝液（５０ｍＭトリス，０.３２Ｍスクロース，ｐＨ７.０）中で再懸濁した。ポリプロピレン管中のアリコート（１ｍｌ）をドライアイス／エタノール中で冷凍し、使用するまで−７０℃で保存した。ＳＤＳを用いて改良されたLowzyアッセイによってタンパク質濃度を測定した。
【００６８】
結合アッセイ
膜を３７℃で解凍し、氷冷し、２５ゲージニードルに３回通過させ、そして結合緩衝液（５０ｍＭのトリス，３ｍＭのＭｇＣｌ2，１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ（Sigma A-7888），ｐ
Ｈ７.４、これを０.２２ｍフィルタで濾過した後、４℃で保存し、これに新しく５μｇ／ｍｌのアプロチニン，１０μＭのベスタチン、１０μＭのジプロチンを加えた、ＤＴＴは含まない）中に希釈した。適当な放射性リガンド１００μｌ及び種々の濃度の試験化合物
１００μｌを含む氷冷した１２×７５ｍｍのポリプロピレン管に、１００μｌのアリコートを加えた。全結合（ＴＢ）及び非特異的（ＮＳ）結合を、それぞれ１０μＭナロキソンの非存在下及び存在下で測定した。管をかき混ぜ、２５℃で６０〜７５分間インキューベートし、この後、内容物を急速に真空濾過し、少なくとも２時間、０.１％のポリエチレンイミン中に前もって浸したＧＦ／Ｂフィルタ(Whatman)を通して、約１２ｍｌ／管の氷冷洗浄緩衝液（５０ｍＭのトリス，ｐＨ７.０，３ｍＭのＭｇＣｌ2）により洗浄した。６〜７ｍｌのシンチレーション液を含むミニバイアル中に少なくとも１２時間フィルタを浸した後にベータカウンターを用いてフィルタに保持された放射活性（ｄｐｍ）を測定した。アッセイを９６穴深型プレートで行う場合、９６箇所のＰＥＩ浸漬ユニフィルタで濾過し、これを３×１ｍｌの洗浄緩衝液で洗浄し、オーブン中５５℃で２時間乾燥した。フィルタープレートは、５０μｌのＭＳ−２０シンチレーション液／穴を加えた後にTopCount (Packard)で計数した。
【００６９】
機能性アッセイ
化合物の作動薬活性は、化合物受容体複合体が、ＧＴＰと、受容体が結合するＧ−タンパク質との結合を活性化する程度を測定することによって評価した。ＧＴＰ結合アッセイでは、ＧＴＰ [γ] 35Ｓを、試験化合物及びクローニングされたヒトオピオイド受容体を発現するＨＥＫ−２９３Ｓ細胞からの膜、又は均一化されたラット及びマウス脳からの膜と結合させる。作動薬は、これらの膜中のＧＴＰ [γ] 35Ｓの結合を刺激する。化合物のＥＣ50及びＥmax値は、用量応答曲線から決定される。作動薬活性がδ受容体を介して仲
介されることを確認するため、δ拮抗薬ナルトリンドールによる用量応答曲線の右シフトを実施した。
【００７０】
ラット脳ＧＴＰ法
ラット脳膜を３７℃で解凍し、２５−ゲージブラットエンドニードルに３回通過させ、ＧＴＰγＳ結合液（５０ｍＭ Hepes，２０ｍＭのＮａＯＨ，１００ｍＭのＮａＣｌ，１ｍＭのＥＤＴＡ，５ｍＭのＭｇＣｌ2，ｐＨ７.４、新たな１ｍＭのＤＴＴ，０.１％のＢＳ
Ａを加えた）で希釈した。最終的に１２０μＭのＧＤＰを膜希釈物に加えた。適当な量の膜タンパク質（２０μｇ／穴）及び１０００００〜１３００００ｄｐｍのＧＴＰγ35Ｓ／穴（０.１１〜０.１４ｎＭ）を用いて３００μｌ中で実施した１０点用量応答曲線から化合物のＥＣ50及びＥmaxを評価した。刺激された結合の基底及び最大を３μＭのＳＮＣ−
８０の非存在下及び存在下で測定した。
【００７１】
データ分析
特異的結合（ＳＢ）をＴＢ−ＮＳとして算出し、そして種々の試験化合物の存在下でのＳＢを、対照ＳＢのパーセンテージとして示した。特異的に結合した放射性リガンドの置換におけるリガンドのＩＣ50及びヒル係数（ｎH）の値は、対数プロット又は曲線適合プ
ログラム、例えばLigand、GraphPad Prism、SigmaPlotもしくはReceptorFitから算出した。Ｋiの数値は、Cheng-Prussoff式から算出した。ＩＣ50、Ｋi及びｎHの平均±Ｓ.Ｅ.Ｍ.値を、少なくとも３つの置換曲線で試験したリガンドについて報告した。本発明の化合物の生物活性を表２に示す。
【００７２】
【表４】
2005510456.tif 000029
【００７３】
受容体飽和実験
予想されるＫδ値の０.２〜５倍の範囲の濃度（必要な放射性リガンドの量が可能なら
ば、１０倍まで）で適当な放射性リガンドを用いて細胞膜における結合アッセイを実施することによって放射性リガンドのＫδ値を測定した。特異的な放射性リガンド結合は、ｐmole／ｍｇの膜タンパク質として示した。個々の実験からのＫδ及びＢmaxの値は、ワン
サイトモデル(one−site model)に従って特異結合（Ｂ）対個体からのｎＭ遊離(Ｆ)放射
性リガンドの非線形適合から得た。
【００７４】
Von Frey試験を用いた機械性異痛の測定
試験は、Chaplan等（１９９４）に記載された方法を用いて０８:００〜１６:００時の
間で実施した。脚へのアクセス可能なワイヤーメッシュボトム上のプレキシガラスケージ中にラットを入れ、１０〜１５分間、順化させた。試験部分は、左後脚の足底中央であり、感受性の低い足の肉趾を避けた。硬さが対数的に徐々に増加する一連の８種のVon Frey毛（０.４１、０.６９、１.２０、２.０４、３.６３、５.５０、８.５１及び１５.１４グラム；Stoelting、III、ＵＳＡ）を脚に接触させた。von Frey毛は、脚に対してわずかな反りが生じるのに十分な力で、足底表面に対して垂直にメッシュ床の下側から適用し、約６〜８秒間保持した。脚を急激に引っ込める場合、正の反応と記載した。また、毛を除去して直ちに畏縮するのも正の反応とみなした。歩行はあいまいな反応とみなし、このような場合、刺激を繰り返した。
【００７５】
試験プロトコール
ＦＣＡ処理した群について、手術後１日に動物を試験した。５０％の引っ込め閾値は、Dixon (1980)のアップ−ダウン法(up−down method)を用いて測定した。試験は、一連の
中程にあたる２.０４ｇの毛で開始した。上り又は下りにかかわらず、刺激は常に連続的
なやり方で与えた。最初に選択された毛に対して脚の引っ込め反応がなければ、より強い刺激を与え；脚を引っ込めた場合には、次により弱い刺激を選んだ。この方法による最適閾値の算出には５０％閾値付近で６つの反応が必要であり、これらの６つの反応の計数は、反応の最初の変化が生じた時、例えば閾値が最初に超えた時に開始した。閾値が刺激の範囲外になった場合は、それぞれ１５.１４（通常の感度）又は０.４１（最大異痛）の値にした。正及び負の反応の得られたパターンを、表記法を用いて表にした。Ｘ＝引っ込めなかった；Ｏ＝引っ込めた、そして５０％の引っ込め閾値は、式：
５０％ｇ閾値＝１０(Xf+kδ)／１０,０００
を用いて内挿した。式中、Ｘｆ＝使用する最後のvon Frey毛の値（ログ単位）；ｋ＝正／負の反応パターンについての表の数値（Chaplan等 (1994)）；そしてδ＝刺激間の平均の差分（ログ単位）である。ここでδ＝０.２２４。
【００７６】
Von Frey閾値は、Chaplan等1994に従って最大可能な効果（％ＭＰＥ）のパーセントに
変換した。以下の式は、％ＭＰＥを計算するために用いた：
【数１】
2005510456.tif 000030
【００７７】
試験物質の投与
von Frey試験前に、試験物質をラットに注射（皮下に、腹膜内に、静脈内に又は経口的に）し、試験化合物の投与間の時間及びvon Frey試験は、試験化合物の性質に応じて変更した。
【００７８】
身もだえ（writhing）試験
酢酸は、マウスの腹膜内に投与した時に腹筋を収縮させる。次に典型的なパターンでは、これはマウスの身体に広がる。鎮痛薬を投与した時には、この記載した運動はあまり頻繁に観察されず、その薬物は潜在的に良好な候補物質として選ばれる。
以下の要素：動物が身動きしない；下背部をわずかに下げる；両脚の足底状況が観察可能である：があるときにのみ完全な及び典型的な身もだえ反射とみなした。本アッセイでは、本発明の化合物は、１〜１００μmol／ｋｇの経口投薬後、身もだえ反応の有意な阻
害を示した。
【００７９】
(ｉ) 液剤調製
酢酸（ＡｃＯＨ）：０.６％ＡｃＯＨの最終濃度で２０ｍｌの最終体積にするため１２
０μｌの酢酸を１９.８８ｍｌの蒸留水に加えた。次に、液剤を混合し（かきまぜ）、注
射の準備をした。
化合物（薬物）：各化合物を製造し、標準方法に従って最も適切なビヒクル中に溶解した。
【００８０】
(ii) 液剤投与
化合物（薬物）を、試験前２０分、３０分又は４０分に（化合物の種類及びその特性による）、１０ｍｌ／ｋｇ（平均マウス体重を考慮して）で経口的に、腹膜内に（ｉ.ｐ.）皮下に（ｓ.ｃ.）又は静脈内に（ｉ.ｖ.）投与した。化合物を中枢に供給する時は、心室内に（ｉ.ｃ.ｖ.）又は髄膜下に（ｉ.ｔ.）、５μｌの体積を投与した。
試験直前に１０ｍｌ／ｋｇ（平均マウス体重を考慮して）で、ＡｃＯＨを２箇所に腹膜内（ｉ.ｐ.）投与した。
【００８１】
(iii) 試験
動物（マウス）を２０分間観察し、事象（身もだえ反射）数を記し、実験終了後にまとめた。接触床を備えた個々の「シューボックス」ケージ中にマウスを保持した。通常、合計４匹のマウスを同時に観察した（一つの対照及び３つの用量の薬物）。
不安症及び不安症に類似の適応症について、ラットにおけるgeller−seifter葛藤試験
で有効性を確認した。
機能性胃腸障害の適応症について、Coutinho SV 等, in American Journal of Physiology- Gastrointestinal & Liver Physiology. 282(2): G307- 16, 2002年2月に記載され
たアッセイではラットにおける有効性を確認することができる。
【国際調査報告】
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2005510456.tif 000047
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