(57)【要約】  本発明は、疎水性の生体適合性生分解性ポリマーまたはコポリマー（例えば、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド））、および約２以下の水吸収比率を有する生体適合性両親媒性ポリマーをブレンドすることにより調製されているポリマーの新規なシリーズに関する。新規ポリマーブレンドおよびこの新規ポリマーブレンドを含有する徐放性組成物の調製方法もまた、本明細書に記載の本発明の一部である。さらに、徐放性組成物を使用して、所望の放出プロファイルで、かつ持続様式で生物学的活性剤をそれが必要な患者に送達し得る。【特許請求の範囲】
【請求項１】
疎水性の生体適合性生分解性ポリマーおよび約２以下の水吸収比率を有する生体適合性両親媒性ポリマーを含むポリマーブレンドに組込まれた生物学的に活性な薬剤を含んでなる徐放性組成物。
【請求項２】
疎水性の生体適合性生分解性ポリマーが、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリカーボネート、ポリエステルアミド、ポリ酸無水物、ポリオルトエステル、ポリ（ジオキサノン）、ポリカプロラクトン、ポリウレタン、ポリシアノアクリレート、そのブレンド、およびそのコポリマーから選択される、請求項１記載の徐放性組成物。
【請求項３】
疎水性の生体適合性生分解性ポリマーがポリ（ラクチド−コ−グリコリド）である、請求項２記載の徐放性組成物。
【請求項４】
ポリマーブレンドの両親媒性ポリマーがポリエーテルエステルである、請求項１記載の徐放性組成物。
【請求項５】
ポリエーテルエステルポリマーがポリエチレングリコールとポリブチレンテレフタレートのコポリマーである、請求項４記載の徐放性組成物。
【請求項６】
ポリエチレングリコールとポリブチレンテレフタレートのコポリマーが、300PEGT80PBT20、300PEGT70PBT30、300PEGT55PBT45、600PEGT80PBT20、1000PEGT60PBT40、1000PEGT70PBT30、1000PEGT80PBT20から選択される、請求項５記載の徐放性組成物。
【請求項７】
両親媒性ポリマーがブロックコポリマーＡ−Ｂ−Ａ、式中、Ａは生体適合性疎水性ポリマーであり、Ｂは生体適合性親水性ポリマーである、である、請求項１記載の徐放性組成物。
【請求項８】
生体適合性疎水性ポリマーＡが生分解性である、請求項７記載の徐放性組成物。
【請求項９】
生体適合性生分解性疎水性ポリマーＡが、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリカーボネート、ポリエステルアミド、ポリ酸無水物、ポリオルトエステル、ポリ（ジオキサノン）、ポリカプロラクトン、ポリウレタン、ポリシアノアクリレート、そのブレンドおよびそのコポリマーから選択される、請求項８記載の徐放性組成物。
【請求項１０】
Ｂがポロキサマーである、請求項７記載の徐放性組成物。
【請求項１１】
ポロキサマーがポロキサマー188またはポロキサマー407である、請求項１０記載の徐放性組成物。
【請求項１２】
ブロックコポリマーのポリマーＡがポリマーブレンドの疎水性の生体適合性生分解性ポリマーと同じである、請求項８記載の徐放性組成物。
【請求項１３】
ポリマーブレンドに存在する疎水性の生体適合性生分解性ポリマーの量がポリマーブレンドの総重量の約10％w/w〜約90％w/wである、請求項１記載の徐放性組成物。
【請求項１４】
ポリマーブレンドに存在する疎水性の生体適合性生分解性ポリマーの量がポリマーブレンドの総重量の約20％w/w〜約80％w/wである、請求項１３記載の徐放性組成物。
【請求項１５】
約２以下の水吸収比率を有する両親媒性ポリマーの量がポリマーブレンドの総重量の約10％w/w〜約90％w/wでポリマーブレンドに存在する、請求項１記載の徐放性組成物。
【請求項１６】
約２以下の水吸収比率を有する両親媒性ポリマーの量がポリマーブレンドの総重量の約20％w/w〜約80％w/wでポリマーブレンドに存在する、請求項１５記載の徐放性組成物。
【請求項１７】
約２以下の水吸収比率を有する両親媒性ポリマーの量がポリマーブレンドの総重量の約10％w/w〜約50％w/wでポリマーブレンドに存在し、ポリエチレングリコール／ポリブチレンテレフタレートポリマーである、請求項１５記載の徐放性組成物。
【請求項１８】
ポリエチレングリコール／ポリブチレンテレフタレートポリマーが、300PEGT80PBT20、300PEGT70PBT30、300PEGT55PBT45、600PEGT80PBT20、1000PEGT60PBT40、1000PEGT70PBT30、1000PEGT80PBT20から選択される、請求項１７記載の徐放性組成物。
【請求項１９】
約２以下の水吸収比率を有する両親媒性ポリマーの量がポリマーブレンドの総重量の約50％w/w〜約90％w/wでポリマーブレンドに存在し、ブロックコポリマーＡ−Ｂ−Ａ、式中、Ａは生体適合性疎水性ポリマーであり、Ｂは生体適合性親水性ポリマーである、である、請求項１５記載の徐放性組成物。
【請求項２０】
ブロックコポリマーＡ−Ｂ−Ａがポリ（ラクチド−コ−グリコリド）−ポロキサマー−ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）ブロックである、請求項１９記載の徐放性組成物。
【請求項２１】
ポロキサマーがポロキサマー407である、請求項２０記載の徐放性組成物。
【請求項２２】
ポロキサマーがポロキサマー188である、請求項２０記載の徐放性組成物。
【請求項２３】
生物学的に活性な薬剤が組成物の総重量の約0.01％(w/w)〜約50％(w/w)で存在する、請求項１記載の徐放性組成物。
【請求項２４】
生物学的に活性な薬剤が組成物の総重量の約0.1％(w/w)〜約30％(w/w)で存在する、請求項２３記載の徐放性組成物。
【請求項２５】
マイクロ粒子の形態である、請求項１記載の徐放性組成物。
【請求項２６】
生物学的に活性な薬剤がタンパク質である、請求項１記載の徐放性組成物。
【請求項２７】
ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）コポリマーおよび約２以下の水吸収比率を有する両親媒性ポリエーテルエステルコポリマーを含むポリマーブレンドに組込まれた生物学的に活性な薬剤を含んでなる徐放性組成物。
【請求項２８】
ポリエーテルエステルコポリマーがポリエチレングリコールとポリブチレンテレフタレートのコポリマーである、請求項２７記載の徐放性組成物。
【請求項２９】
ポリエチレングリコールとポリブチレンテレフタレートのコポリマーが、300PEGT80PBT20、300PEGT70PBT30、300PEGT55PBT45、600PEGT80PBT20、1000PEGT60PBT40、1000PEGT70PBT30、1000PEGT80PBT20から選択される、請求項２８記載の徐放性組成物。
【請求項３０】
ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）コポリマーおよび約２以下の水吸収比率を有するブロックコポリマーＡ−Ｂ−Ａ、式中、Ａは生体適合性生分解性疎水性ポリマーであり、Ｂは生体適合性親水性ポリマーである、を含むポリマーブレンドに組込まれた生物学的に活性な薬剤を含んでなる徐放性組成物。
【請求項３１】
生体適合性生分解性疎水性ポリマーＡが、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリカーボネート、ポリエステルアミド、ポリ酸無水物、ポリオルトエステル、ポリ（ジオキサノン）、ポリカプロラクトン、ポリウレタン、ポリシアノアクリレート、そのブレンドおよびそのコポリマーから選択される、請求項３０記載の徐放性組成物。
【請求項３２】
Ｂがポロキサマーである、請求項３０記載の徐放性組成物。
【請求項３３】
ポロキサマーがポロキサマー188またはポロキサマー407である、請求項３２記載の徐放性組成物。
【請求項３４】
ブロックコポリマーのポリマーＡがブレンドポリマーの疎水性の生体適合性生分解性ポリマーと同じである、請求項３０記載の徐放性組成物。
【請求項３５】
疎水性の生体適合性生分解性ポリマーおよび約２以下の水吸収比率を有する生体適合性両親媒性ポリマーを含むブレンドポリマーに組込まれた生物学的に活性な薬剤を含んでなる徐放性組成物の治療有効量を投与することを含む、生物学的に活性な薬剤の必要な患者への生物学的に活性な薬剤の持続送達のための方法。
【請求項３６】
疎水性の生体適合性生分解性ポリマーが、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリカーボネート、ポリエステルアミド、ポリ酸無水物、ポリオルトエステル、ポリ（ジオキサノン）、ポリカプロラクトン、ポリウレタン、ポリシアノアクリレート、そのブレンドおよびそのコポリマーから選択される、請求項３５記載の方法。
【請求項３７】
疎水性の生体適合性生分解性ポリマーがポリ（ラクチド−コ−グリコリド）である、請求項３６記載の方法。
【請求項３８】
ブレンドポリマーの両親媒性ポリマーがポリエーテルエステルである、請求項３５記載の方法。
【請求項３９】
ポリエーテルエステルポリマーがポリエチレングリコールとポリブチレンテレフタレートのコポリマーである、請求項３８記載の方法。
【請求項４０】
ポリエチレングリコールとポリブチレンテレフタレートのコポリマーが、300PEGT80PBT20、300PEGT70PBT30、300PEGT55PBT45、600PEGT80PBT20、1000PEGT60PBT40、1000PEGT70PBT30、1000PEGT80PBT20から選択される、請求項３９記載の方法。
【請求項４１】
両親媒性ポリマーがブロックコポリマーＡ−Ｂ−Ａ、式中、Ａは生体適合性疎水性ポリマーであり、Ｂは生体適合性親水性ポリマーである、である、請求項３５記載の方法。
【請求項４２】
生体適合性疎水性ポリマーＡが生分解性である、請求項４１記載の方法。
【請求項４３】
生体適合性疎水性ポリマーＡが、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリカーボネート、ポリエステルアミド、ポリ酸無水物、ポリオルトエステル、ポリ（ジオキサノン）、ポリカプロラクトン、ポリウレタン、ポリシアノアクリレート、そのブレンドおよびそのコポリマーから選択される、請求項４２記載の方法。
【請求項４４】
Ｂがポロキサマーである、請求項４１記載の方法。
【請求項４５】
ポロキサマーがポロキサマー188またはポロキサマー407である、請求項４４記載の方法。
【請求項４６】
ブロックコポリマーのポリマーＡがポリマーブレンドの疎水性の生体適合性生分解性ポリマーと同じである、請求項４１記載の方法。
【請求項４７】
ポリマーブレンドに存在する疎水性の生体適合性生分解性ポリマーの量がポリマーブレンドの総重量の約10％w/w〜約90％w/wである、請求項３５記載の方法。
【請求項４８】
ポリマーブレンドに存在する疎水性の生体適合性生分解性ポリマーの量がポリマーブレンドの総重量の約20％w/w〜約80％w/wである、請求項４７記載の方法。
【請求項４９】
約２以下の水吸収比率を有する両親媒性ポリマーの量がポリマーブレンドの総重量の約10％w/w〜約90％w/wでポリマーブレンドに存在する、請求項３５記載の方法。
【請求項５０】
約２以下の水吸収比率を有する両親媒性ポリマーの量がポリマーブレンドの総重量の約20％w/w〜約80％w/wでポリマーブレンドに存在する、請求項４９記載の方法。
【請求項５１】
約２以下の水吸収比率を有する両親媒性ポリマーの量がポリマーブレンドの総重量の約10％w/w〜約50％w/wでポリマーブレンドに存在し、ポリエチレングリコール／ポリブチレンテレフタレートポリマーである、請求項４９記載の方法。
【請求項５２】
ポリエチレングリコール／ポリブチレンテレフタレートポリマーが、300PEGT80PBT20、300PEGT70PBT30、300PEGT55PBT45、600PEGT80PBT20、1000PEGT60PBT40、1000PEGT70PBT30、1000PEGT80PBT20から選択される、請求項５１記載の方法。
【請求項５３】
約２以下の水吸収比率を有する両親媒性ポリマーの量がポリマーブレンドの総重量の約50％w/w〜約90％w/wでポリマーブレンドに存在し、ブロックコポリマーＡ−Ｂ−Ａ、式中、Ａは生体適合性疎水性ポリマーであり、Ｂは生体適合性親水性ポリマーである、である、請求項４９記載の方法。
【請求項５４】
ブロックコポリマーＡ−Ｂ−Ａがポリ（ラクチド−コ−グリコリド）−ポロキサマー−ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）ブロックである、請求項５３記載の方法。
【請求項５５】
ポロキサマーがポロキサマー407である、請求項５４記載の方法。
【請求項５６】
ポロキサマーがポロキサマー188である、請求項５４記載の方法。
【請求項５７】
生物学的に活性な薬剤が組成物の総重量の約0.01％(w/w)〜約50％(w/w)で存在する、請求項３５記載の方法。
【請求項５８】
生物学的に活性な薬剤が組成物の総重量の約0.1％(w/w)〜約30％(w/w)で存在する、請求項５７記載の方法。
【請求項５９】
徐放性組成物がマイクロ粒子の形態である、請求項３５記載の方法。
【請求項６０】
生物学的に活性な薬剤がタンパク質である、請求項３５記載の方法。
【請求項６１】
疎水性の生体適合性生分解性ポリマーおよび約２以下の水吸収比率を有する生体適合性両親媒性ポリマーを含んでなるポリマーブレンド組成物。
【請求項６２】
疎水性の生体適合性生分解性ポリマーが、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリカーボネート、ポリエステルアミド、ポリ酸無水物、ポリオルトエステル、ポリ（ジオキサノン）、ポリカプロラクトン、ポリウレタン、ポリシアノアクリレート、そのブレンドおよびそのコポリマーから選択される、請求項６１記載の組成物。
【請求項６３】
疎水性の生体適合性生分解性ポリマーがポリ（ラクチド−コ−グリコリド）である、請求項６２記載の組成物。
【請求項６４】
ポリマーブレンドの両親媒性ポリマーがポリエーテルエステルである、請求項６１記載の徐放性組成物。
【請求項６５】
ポリエーテルエステルポリマーがポリエチレングリコールとポリブチレンテレフタレートのコポリマーである、請求項６４記載の組成物。
【請求項６６】
ポリエチレングリコールとポリブチレンテレフタレートのコポリマーが、300PEGT80PBT20、300PEGT70PBT30、300PEGT55PBT45、600PEGT80PBT20、1000PEGT60PBT40、1000PEGT70PBT30、1000PEGT80PBT20から選択される、請求項６５記載の組成物。
【請求項６７】
両親媒性ポリマーがブロックコポリマーＡ−Ｂ−Ａ、式中、Ａは生体適合性疎水性ポリマーであり、Ｂは生体適合性親水性ポリマーである、である、請求項６１記載の組成物。
【請求項６８】
生体適合性疎水性ポリマーＡが生分解性である、請求項６７記載の組成物。
【請求項６９】
生体適合性生分解性疎水性ポリマーＡが、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリカーボネート、ポリエステルアミド、ポリ酸無水物、ポリオルトエステル、ポリ（ジオキサノン）、ポリカプロラクトン、ポリウレタン、ポリシアノアクリレート、そのブレンドおよびそのコポリマーから選択される、請求項６８記載の組成物。
【請求項７０】
Ｂがポロキサマーである、請求項６７記載の組成物。
【請求項７１】
ポロキサマーがポロキサマー188またはポロキサマー407である、請求項７０記載の組成物。
【請求項７２】
ブロックコポリマーのポリマーＡがポリマーブレンドの疎水性の生体適合性生分解性ポリマーと同じである、請求項６８記載の組成物。
【請求項７３】
ポリマーブレンドに存在する疎水性の生体適合性生分解性ポリマーの量がポリマーブレンドの総重量の約10％w/w〜約90％w/wである、請求項６１記載の組成物。
【請求項７４】
ポリマーブレンドに存在する疎水性の生体適合性生分解性ポリマーの量がポリマーブレンドの総重量の約20％w/w〜約80％w/wである、請求項７３記載の組成物。
【請求項７５】
約２以下の水吸収比率を有する両親媒性ポリマーの量がポリマーブレンドの総重量の約10％w/w〜約90％w/wでポリマーブレンドに存在する、請求項６１記載の組成物。
【請求項７６】
約２以下の水吸収比率を有する両親媒性ポリマーの量がポリマーブレンドの総重量の約20％w/w〜約80％w/wでポリマーブレンドに存在する、請求項７５記載の組成物。
【請求項７７】
約２以下の水吸収比率を有する両親媒性ポリマーの量がポリマーブレンドの総重量の約10％w/w〜約50％w/wでポリマーブレンドに存在し、ポリエチレングリコール／ポリブチレンテレフタレートポリマーである、請求項７５記載の組成物。
【請求項７８】
ポリエチレングリコール／ポリブチレンテレフタレートポリマーが、300PEGT80PBT20、300PEGT70PBT30、300PEGT55PBT45、600PEGT80PBT20、1000PEGT60PBT40、1000PEGT70PBT30、1000PEGT80PBT20から選択される、請求項７７記載の組成物。
【請求項７９】
約２以下の水吸収比率を有する両親媒性ポリマーの量がポリマーブレンドの総重量の約50％w/w〜約90％w/wでポリマーブレンドに存在し、ブロックコポリマーＡ−Ｂ−Ａ、式中、Ａは生体適合性疎水性ポリマーであり、Ｂは生体適合性親水性ポリマーである、である、請求項７５記載の組成物。
【請求項８０】
ブロックコポリマーＡ−Ｂ−Ａがポリ（ラクチド−コ−グリコリド）−ポロキサマー−ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）ブロックである、請求項７９記載の組成物。
【請求項８１】
ポロキサマーがポロキサマー407である、請求項８０記載の組成物。
【請求項８２】
ポロキサマーがポロキサマー188である、請求項８０記載の徐放性組成物。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
関連出願
本出願は、2001年11月12日に提出された米国仮出願第60/332,868号の利益を主張する。該出願の教示は、その全体が参照により本明細書中に取り込まれる。
【０００２】
発明の背景
ポリマーのPLGまたはポリ（ラクチド−コ−グリコリド）ファミリーは、伝統的に薬剤送達システム用に選ばれたポリマーである。しかしながら、PLGは、ある場合に、ポリマーマトリックス内でpH低下を生じ、これは取り込まれた薬剤に対して、特に薬剤がタンパク質、ポリペプチドまたはオリゴヌクレオチドなどの不安定な薬剤である場合に、有害であり得る。また、PLGの疎水性の性質は、ポリマー表面上への薬剤の吸着、薬剤の変性および薬剤の凝集により、取り込まれた薬剤の放出に関する問題を生じ得る。このように、ポリマー状の徐放性組成物の処理の間および該組成物からのインビボでの放出の間にしばしば生じる問題を低減し得る新しいポリマー組成物が必要とされている。
【０００３】
発明の要旨
本発明は、徐放性組成物用のマトリックスとしてのあるポリマーブレンド（本明細書では、ブレンドポリマー（blend polymer）ともいう）の使用が以下の一種以上：ポリマーマトリックスからの生物学的活性剤の放出持続時間の増大、活性剤の初期放出の低減、活性な状態で放出された活性剤の量の増大および活性剤放出の持続レベルの増大を示す改良された徐放性組成物になりうるという驚くべき発見に基づいている。徐放性組成物用のマトリックスを提供するこのポリマーブレンドは、疎水性の生体適合性の生分解性ポリマーと約２以下の水吸収比率を有する生体適合性の両親媒性ポリマーとを含む。従って、徐放性組成物は、ポリマーブレンドおよびその中に組み込まれた活性剤を含む。
【０００４】
したがって、本発明は、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）などの疎水性の生体適合性の生分解性ポリマーまたはコポリマーと、約２以下の水吸収比率を有する生体適合性の両親媒性コポリマーとを混合することにより調製された、新規のシリーズのポリマーに関する。該新規のポリマーブレンドおよびこの新規のブレンドポリマーを含む徐放性組成物の調製方法も、本明細書に記載の発明の一部である。さらに、徐放性組成物は、所望の放出プロフィールで、かつそれが必要な患者に持続的な形式で生物学的活性剤を送達するのに使用され得る。
【０００５】
さらにとりわけ、本発明の徐放性組成物は、疎水性生体適合性の生分解性ポリマーと約２以下の水吸収比率を有する生体適合性の両親媒性ポリマーとを含むポリマーブレンドに取り込まれた生物学的活性剤を含有する。ポリマーブレンド中に存在する疎水性生体適合性の生分解性ポリマーの量は、ポリマーブレンドの全重量の約10重量％〜約90重量％の範囲、たとえば約20％〜約80％にわたり得る。ポリマーブレンド中に存在する、約２以下の水吸収比率を有する両親媒性ポリマーの量は、ポリマーブレンドの全重量の約10重量％〜約90重量％の範囲、たとえば、約20重量％〜約80重量％にわたり得る。
【０００６】
さらに、本発明は、疎水性生体適合性の生分解性ポリマーと約２以下の水吸収比率を有する両親媒性ポリマーとを含有するポリマーブレンド内に取り込まれた生物学的活性剤を含有する徐放性組成物の治療有効量を投与することを含む、持続的な形式で活性剤をそれが必要な患者に送達する方法に関する。
【０００７】
本発明のポリマーブレンドは、疎水性生体適合性の生分解性ポリマーと約２以下の水吸収比率を有する両親媒性ポリマーとを含む。
【０００８】
ポリマーブレンド中に存在する疎水性生体適合性の生分解性ポリマーの量は、ポリマーブレンドの全重量の約10重量％〜約90重量％の範囲、たとえば約20％〜約80％にわたり得る。ポリマーブレンド中に存在する、約２以下の水吸収比率を有する両親媒性コポリマーの量は、ポリマーブレンドの全重量の約10重量％〜約90重量％の範囲、たとえば約20重量％〜約80重量％にわたり得る。
【０００９】
本発明の前記および他の目的、特徴および利点は、本発明の好ましい態様についての以下のより詳細な説明から明らかであろう。
【００１０】
発明の詳細な説明
本発明の好ましい態様の説明は、以下のとおりである。
本明細書で使用される用語である「ポリマーブレンド」は、２つ以上のポリマーの混合物、特にポリ（ラクチド−コ−グリコリド）などの疎水性生体適合性の生分解性ポリマーまたはコポリマーと、PEG/PBTコポリマーなどの約２以下の水吸収比率を有する生体適合性の両親媒性ポリマーとの混合物を含む混合物を言う。
【００１１】
本明細書で使用される用語である「両親媒性ポリマー」は、親水性および疎水性サブユニットを共に有する任意のポリマーである。本明細書で使用される用語「サブユニット」は、多数の隣接するモノマー単位（例えば、約10を超える）を含むポリマーの一部をいう。本発明での使用に適切な両親媒性ポリマーは約２以下の水吸収比率を有する。
【００１２】
本発明での使用に適切な両親媒性ポリマーの例は、PEG（ポリエチレングリコール）/PBT（ポリブチレンテレフタレート）コポリマーなどのポリエーテルエステルコポリマーを含む。かかるコポリマーは、オランダ国のIsoTis社から入手でき、かつGoedemoedらに1999年11月9日に布告された米国特許第5,980,948号に記載されており、これらの教示は参照によりすべて本明細書に取り込まれる。このポリマーは、POLYACTIVE（登録商標）と一般に呼ばれる。POLYACTIVE（登録商標）は、２段階の溶解重縮合方法で合成される。このコポリマーは、aPEGbPBTcとして略され、式中aはPEGの分子量、bはPEGテレフタレートの重量％およびcはPBTの重量％である。テレフタレート部位は、ポリエチレングリコール単位とコポリマーのポリブチレンテレフタレート単位とを接続しており、したがって、かかるコポリマーはまたポリエチレングリコールテレフタレート／ポリブチレンテレフタレートコポリマー、すなわちPEGT/PBTコポリマーと呼ばれ得る。この型の両親媒性ポリマーの例は、300PEGT80PBT20、300PEGT70PBT30、300PEGT55PBT45、600PEGT80PBT20、1000PEGT60PBT40、1000PEGT70PBT30、1000PEGT80PBT20を含むが、これらに限定されない。
【００１３】
本発明での使用に適切な他の両親媒性ポリマーは、生体適合性の疎水性ポリマー（Ａ）と生体適合性の親水性ポリマー（Ｂ）とのブロックコポリマーを含む。このブロック両親媒性ポリマーの生体適合性疎水性ポリマー（Ａ）は、ブレンドポリマーの疎水性生体適合性の生分解性ポリマーと同一または異なっていてもよい。好ましい態様において、前記ブロックポリマーとブレンドポリマーとの疎水性生体適合性ポリマーは同一のものである。前記ブロックポリマーは、式Ａ−Ｂ−Ａで示される直鎖状のブロックコポリマーであり得る。この型のブロックコポリマーはChurchillらに1985年7月2日に布告された米国特許第4,526,938号に詳細に記載されており、これらの教示は参照によりすべて本明細書に取り込まれる。ポロキサマー（poloxamer）と呼ばれる非イオン性ポリマー界面活性剤のクラスは、親水性ポリマーＢとしての使用に好適である。ポロキサマーは、それ自体、ポリエチレンオキシド（PEO）とポリプロピレンオキシド（PPO）とのブロックコポリマーであり、一般にPLURONIC（商標）ポリマーと呼ばれる。ポロキサマーの一般的な構造は、HO(CH2CH2O)a(CH(CH3)CH2O)b(CH2CH2O)cHであり、式中、bは少なくとも15であり、(CH2CH2O)a＋cは20〜90重量％の範囲で変動される。ポリ（オキシプロピレン）セグメントは疎水性であり、ポリ（オキシエチレン）セグメントは親水性である。このポロキサマーの分子量は、1000から16,000を超える範囲にわたり得る。
【００１４】
特定のポロキサマーの例は、商標PLURONIC F127で販売されるポロキサマー407、商標PLURONIC F68で販売されるポロキサマー188（BASF Wyandotteから入手）を含む。
【００１５】
（PEO/PPO/PEO）ブロックコポリマーは、PEO/PPO率の関数として、広範囲の親水性／疎水性を示す。本発明のポリマーブレンドでの使用に好ましいブロックコポリマーを含むPLURONIC（商標）は、本明細書に記載のように測定された約２以下の水吸収比率を有する。
【００１６】
両親媒性トリブロックポリマーでの使用に適切な疎水性生体適合性ポリマーは、生分解性または非生分解性ポリマーのいずれか、あるいはそのブレンドまたはそのコポリマーであり得る。好ましい態様において、この疎水性生体適合性ポリマーは生分解性である。
【００１７】
本明細書に使用されるように、ポリマーは、該ポリマーおよび該ポリマーの任意の分解産物がレシピエントに対して一般に非毒性であり、また、その注入部位での有意な免疫学的反応などのように、レシピエントの身体に有意に有害であるか都合の悪い効果を有しない場合、生体適合性である。
【００１８】
本明細書で規定される「生分解性」は、前記組成物がインビボで分解または衰退して、より低分子の化学種を形成することを意味する。分解は、例えば、酵素的、化学的および物理学的方法により生じ得る。
【００１９】
適切な疎水性生体適合性の生分解性ポリマーは、たとえば、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）（これらはすべて以下に規定されるようにPLGと呼ばれ得る）、ポリカーボネート、ポリエステルアミド、ポリ無水物、ポリオルトエステル、ポリ（ジオキサノン）、ポリカプロラクトン、生分解性ポリウレタン、これらのポリシアノアクリレートブレンド、およびこれらのコポリマーを含む。これらのポリマーは、ブレンドポリマーの疎水性生体適合性の生分解性ポリマーとして使用され得、また、前記両親媒性トリブロックポリマーの疎水性生体適合性ポリマーであり得る。
【００２０】
本発明の両親媒性トリブロックポリマーでの使用に好適な疎水性生体適合性の非生分解性ポリマーは、ポリアクリレート、エチレンビニルアセテートのポリマー並びに他のアシル置換酢酸セルロース、非分解性ポリウレタン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリフッ化ビニル、ポリ（ビニルイミダゾール）、クロロスルホネートポリオレフィン、ポリプロピレンオキシド、それらの混合物、およびそれらのコポリマーからなる群より選ばれる非生分解性ポリマーを含む。
【００２１】
本発明に使用されるポリマーの許容される分子量は、所望のポリマー分解速度などの重要な要因、機械強度および溶媒中のポリマーの溶解速度などの物理的特性を考慮して当業者により測定され得る。典型的に、分子量の許容される範囲は、約2,000ダルトン〜約2,000,000ダルトンである。
【００２２】
特定の態様において、ポリマーブレンドの疎水性生体適合性の生分解性ポリマーは、PLGポリマーである。本明細書で使用される用語PLGは、乳酸単独のポリマー、グリコール酸単独のポリマー、これらのポリマーの混合物、グリコール酸と乳酸のコポリマー、かかるコポリマーの混合物、またはかかるポリマーとコポリマーとの混合物を示すことを意味する。好ましくは、該PLGはポリ（ラクチド−コ−グルコリド）である。該ポリマーの末端基は、カルボン酸、およびアルキルエステルまたは異なる末端基を有するポリマーの混合物であり得る。ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）は、例えば、約10：90、25：75、50：50、75：25または90：10のラクチド：グリコリドの比率、および約5,000ダルトン〜約150,000ダルトンの分子量を有し得る。
【００２３】
別の態様において、両親媒性ポリマーの疎水性生体適合性ポリマーは、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）などの生分解性PLGポリマーである。
【００２４】
さらなる態様において、ポリマーブレンドの疎水性生体適合性の生分解性ポリマーと両親媒性トリブロックポリマーの疎水性生体適合性部位とは同一である。
【００２５】
本発明の徐放性組成物は、疎水性生体適合性の生分解性ポリマーと約２以下の水吸収比率を有する生体適合性の両親媒性ポリマーとを含有するポリマーブレンドに取り込まれる生物学的活性剤を含有する。
【００２６】
ブレンドポリマー中に存在する疎水性生体適合性の生分解性ポリマーの量は、ポリマーブレンドの全重量の約10重量％〜約90重量％の範囲、たとえば約20％〜約80％にわたり得る。
【００２７】
ポリマーブレンド中に存在する、約２以下の水吸収比率を有する両親媒性ポリマーの量は、ポリマーブレンドの全重量の約10重量％〜約90重量％の範囲、たとえば約20％〜約80％にわたり得る。
【００２８】
特定の態様において、両親媒性コポリマーが、約２以下の水吸収比率を有するポリエチレングリコールテレフタレート／ポリブチレンテレフタレート（PEG/PBT）などのポリエーテルエステルコポリマーである場合、該ブレンド中に存在する両親媒性コポリマーの量は、約10重量％〜約50重量％、たとえば、ポリマーブレンドの全重量の約20％〜約40％または約30％〜約40％が好ましい。
【００２９】
他の態様において、両親媒性コポリマーが約２以下の水吸収比率を有するPLG−ポロキサマー−PLGのトリブロックである場合、前記ブレンド中に存在する両親媒性コポリマーの量は、約50重量％〜約90重量％、たとえばポリマーブレンドの全重量の約60重量％〜約80重量％が好ましい。
【００３０】
本明細書で使用される用語「水吸収比率」は、平衡（すなわち、最大量の水が吸収される時点、一般に約2〜3日）に到達するのに必要な十分量の時間の間、生理学的温度およびpHでの水系バッファー溶液中でのインキュベーション後のポリマーの重量を、インキュベーション前のポリマーの重量で割った割合をいう。
【００３１】
本明細書で使用される用語「コポリマー」は、ランダムコポリマー、代替コポリマー、ブロックコポリマーおよびグラフトコポリマーなどの２つ以上の異なる繰り返し単位またはモノマーを有する任意のポリマーである。この場合、用語コポリマーは、したがって、PEG/PBTコポリマーならびにPLG−F127−PLGなどのトリブロックポリマーを含む。
【００３２】
本明細書で使用される用語「患者」は、処置を受ける人（レシピエント）をいう。哺乳類および非哺乳類の患者が含まれる。特定の態様において、患者は、ヒト、イヌ科動物、ネズミ、ネコ、ウシ、ヒツジ、ブタまたはヤギなどの哺乳動物である。好ましい態様において、患者はヒトである。
【００３３】
本明細書に規定される用語「徐放性組成物」は、疎水性生体適合性の生分解性ポリマーと２以下の水吸収比率を有する両親媒性ポリマーとを含有し、少なくとも１つの生物学的活性剤がその中に取り込まれるブレンドポリマーを含む。
【００３４】
典型的には、徐放性組成物は、約0.01％（w/w）〜約50％（w/w）の生物学的活性剤（組成物の乾燥重量）を含むことができる。薬剤の使用量は、その薬剤の所望の効果、計画された放出レベル、および薬剤が放出される期間の長さに応じて変化するだろう。負荷される薬剤の好ましい範囲は、約0.1％（w/w）〜約30％（w/w）の薬剤である。負荷する薬剤のより好ましい範囲は、約0.5％（w/w）〜約20％（w/w）の薬剤である。
【００３５】
本発明の徐放性組成物は、フィルム、ロッド、フィラメント、シリンダー、ディスク、ウェハー、ナノ粒子またはマイクロ粒子などの多くの形状に成形され得る。マイクロ粒子が好ましい。本明細書で規定される「マイクロ粒子」は、約１ミリメートル未満の直径を有し、かつその中に生物学的活性剤が分散されたブレンドポリマー成分を含む。マイクロ粒子は、球形、非球形または不規則な形状を有し得る。典型的には、マイクロ粒子は、注入に適した大きさのものであるだろう。マイクロ粒子にとって好ましい大きさの範囲は、直径約1〜約180ミクロンである。
【００３６】
本明細書で規定される場合、生物学的活性剤の徐放とは、該薬剤の徐放性組成物からの放出のことである。この放出は、治療有意量（therapeutically significant amount）の生物学的活性剤が該生物学的活性剤溶液の直接投与後に有効である期間よりも長い期間にわたって生じる。徐放は、２日よりも大きな期間、たとえば、約１週間、約２週間、約３週間またはそれ以上にわたって生じる生物学的活性剤の放出であることが好ましい。徐放性組成物からの生物学的活性剤の徐放は、放出速度が相対的に一定または変化を伴う連続または不連続の放出であってもよい。放出の連続性および放出のレベルは、使用されるポリマー組成物の様式（たとえば、モノマーの割合、分子量、およびポリマーの種々の組み合わせ）、負荷する薬剤、および／または所望の効果を生じるための賦形剤の選択に影響され得る。
【００３７】
本明細書で使用される場合、用語「a」または「an」は１以上を意味する。
【００３８】
本明細書で使用される場合、「治療有効量」、「予防有効量」または「診断有効量」は、投与後の所望の生物学的応答を顕在化するのに必要な徐放性組成物の量である。
【００３９】
本明細書で使用される場合、用語「生物学的活性剤」は、インビボで放出された場合、所望の生物学的活性、たとえば、インビボでの治療的、診断的および／または予防的特性を有する薬剤、またはその薬学的に許容される塩である。この用語は本明細書に記載されるような安定化された生物学的活性剤を含むことが理解される。
【００４０】
適切な生物学的活性剤の例は、免疫グロブリン、抗体、サイトカイン（たとえば、リンホカイン、モノカイン、ケモカイン）、インターロイキン、インターフェロン、エリトロポエチン、ヌクレアーゼ、腫瘍壊死因子、コロニー刺激因子、インスリン、酵素（たとえば、スーパーオキシドジスムターゼ、プラスミノーゲンアクチベーターなど）、腫瘍サプレッサー、血液タンパク質、ホルモンおよびホルモンアナログ（たとえば、成長ホルモン、副腎皮質刺激ホルモン、および黄体化ホルモン放出ホルモン（LHRH））、ワクチン（たとえば、腫瘍抗原、細菌抗原およびウイルス抗原）、抗原、血液凝固因子などのタンパク質；成長因子；プロテインインヒビター、プロテインアンタゴニスト、およびプロテインアゴニストなどのペプチド；アンチセンス分子などの核酸；オリゴヌクレオチド；ならびにリボザイムを含む。本発明での使用に適切な低分子量の薬剤は、塩酸ブレオマイシン、カルボプラチン、メトトレキサートおよびアドリアマイシンなどの抗腫瘍剤；ゲンタマイシン、テトラサイクリン塩酸塩、およびアンピシリンなどの抗生物質；解熱剤、鎮痛剤および抗炎症剤；塩酸エフェドリン、塩酸メチルエフェドリン、塩酸ノスカピンおよびリン酸コデインなどの鎮咳薬および去痰薬；塩酸クロルプロマジン、塩酸プロクロルペラジンおよび硫酸アトロピンなどの鎮静薬；塩化ツボクラリンなどの筋肉弛緩薬；フェニトインナトリウムおよびエトスクシミドなどの鎮痙薬；メトクロプラミドなどの抗潰瘍剤；クロミプラミンなどの抗うつ薬；ジフェンヒドラミンなどの抗アレルギー剤；テオフィロール（theopHillol）などの強心剤；塩酸プロプラノロールなどの抗不整脈剤；塩酸ジルチアゼムおよび硫酸バメタン（bamethan）などの血管拡張薬；ペントリニウムおよび塩酸エカラジン（ecarazine）などの低血圧利尿薬；メトホルミンなどの抗利尿剤；クエン酸ナトリウムおよびヘパリンナトリウムなどの抗凝固薬；トロンビン、メナジオン重亜硫酸ナトリウムおよびアセトメナフトンなどの恒常性剤；イソニアジドおよびエタンブトールなどの抗結核剤；リン酸プレドニゾロンナトリウムおよびメチマゾールなどのホルモン；リスペリドンなどの抗精神剤；ならびに塩酸ナロルフィンなどの麻酔アンタゴニストを含む。
【００４１】
一つの態様において、生物学的活性剤は、安定化される。この生物学的活性剤は、分解、効力の喪失および／または生物学的活性の喪失（これらの全ては生物学的活性剤をその中に分散させた徐放性組成物の形成中、および／または生物学的活性剤のインビボでの放出前および放出の間に生じうる）に対して安定化することができる。一つの態様において、安定化により、生物学的活性剤の溶解性が低減し得、その結果、特に放出が徐放性組成物からである場合、生物学的活性剤の初期の放出が低減する。さらに、生物学的活性剤の放出期間は延長され得る。
【００４２】
生物学的活性剤の安定化は、たとえば、安定化剤または安定化剤の特定の組み合わせの使用により達成され得る。安定化剤は、混合物中に存在し得る。本明細書中で使用される用語「安定化剤」は、生物学的活性剤と共有または非共有結合方式で結合または相互作用する、あるいは生物学的活性剤で包含される任意の薬剤である。本発明での使用に適切な安定化剤は、米国特許第5,716,644号、5,674,534号、5,654,010号、5,667,808号、および5,711,968号、ならびに1997年9月22日に提出されたBurkeらに関する同時係属中の米国特許出願第08/934,830号および1998年6月25日に提出されたブルケに関する第09/104,549号に記載されており、これらの教示は参照によりすべて本明細書に取り込まれる。
【００４３】
たとえば、金属カチオンは、生物学的活性剤と錯体を形成し得、または生物学的活性剤は、プロタミン、アルブミン、スペルミジンおよびスペルミンなどの多価カチオン複合化剤と錯体を形成し、もしくは「塩析」塩と会合し得る。さらに、安定化剤および／または賦形剤の特定の組み合わせは、生物学的活性剤の安定化を最適化するのに必要とされ得る。
【００４４】
適切な金属カチオンは、生物学的活性剤と錯体を形成することができる任意の金属カチオンを含む。金属カチオン安定化生物学的活性剤は、本明細書で規定されるように、生物学的活性剤と少なくとも一つの型の金属カチオンとを含有し、ここでカチオンは生物学的活性剤に対して有意に酸化しない。特定の態様において、金属カチオンは多価であり、たとえば、＋２以上の結合価を有する。金属カチオンは生物学的活性剤に錯体形成されることが好ましい。
【００４５】
適切な安定化金属カチオンは、生物適合性金属カチオンを含む。その使用量で金属カチオンがレシピエントに対して非毒性であり、注入部位での有意な免疫応答などのレシピエントの身体に対して有意に有害または不都合な影響も示さない場合、金属カチオンは生体適合性である。生物学的活性剤を安定化するための金属カチオンの適合性および金属カチオンと必要な生物学的活性剤の比率は、粒径低減および／またはカプセル化の前および後の金属カチオン−安定化生物学的活性剤の粒子に関する、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、等電点電気泳動、逆相クロマトグラフィー、およびHPLC分析などの種々の安定化指示技術を行なうことにより、当業者によって測定され得る。金属カチオンと生物学的活性剤とのモル比率は、典型的には約1：2から約100：1、好ましくは約2：1から約12：1の間である。
【００４６】
安定化金属カチオンの例は、K+、Zn+2、Mg+2およびCa+2を含むが、これらに限定されない。安定化金属カチオンは、Cu+2などの遷移金属のカチオンも含む。金属カチオンの組み合わせも使用され得る。
【００４７】
生物学的活性剤は、また、少なくとも１つの多価カチオン複合化剤で安定化され得る。適切な多価カチオン複合化剤は、プロタミン、スペルミン、スペルミジンおよびアルブミンを含むがこれらに限定されない。生物学的活性剤を安定化するための多価カチオン複合化剤の適合性は、金属カチオンを用いる安定化に関して上記の方法で当業者により決定され得る。多価カチオン複合化剤と生物学的活性剤との重量比は等しいことが適切である。
【００４８】
さらに、放出の間、生物学的活性剤の効力を維持し、ポリマー分解を改変するために賦形剤を添加することができる。賦形剤を、次いで噴霧される分散系に添加することができ、または生物学的活性剤の粒子を得るための乾燥物質の断片化の前もしくは後のいずれかの粉砕に供される混合物に添加することができる。適切な賦形剤は、たとえば、炭化水素、アミノ酸、脂肪酸、界面活性剤、および増量剤（bulking agent）を含み、これは当業者に公知である。酸性または塩基性の賦形剤も適切である。賦形剤の使用量は、重量基準で生物学的活性剤に対する割合に基づく。アミノ酸、脂肪酸およびスクロース、トレハロース、ラクトース、マンニトール、デキストランおよびヘパリンなどの炭水化物に関して、炭水化物と生物学的活性剤との比率が、典型的には約1：10から約20：1の間である。界面活性剤に関して、界面活性剤と生物学的活性剤との比率は、典型的には約1：1000から約2：1の間である。増量剤は典型的には不活性物質を含む。適切な増量剤は、当業者に公知である。
【００４９】
賦形剤は、また、ポリマーマトリックス内に別々に分散された金属カチオン成分であり得る。この金属カチオン成分は、生物学的活性剤の放出を調整するのに作用し、生物学的活性剤と錯体を形成しない。金属カチオン成分は、存在する場合、金属カチオン安定化生物学的活性剤に含まれるように、同じ種類の金属カチオンを任意に含み得、および／または１以上の異なる種類の金属カチオンを含み得る。金属カチオン成分は、徐放性組成物のポリマーマトリックスからの生物学的活性剤の放出を調整するのに作用し、かつ組成物中の生物学的活性剤の安定性を高めることができる。放出を調整するのに使用される金属カチオン成分は、典型的に、少なくとも１つの型の多価金属カチオンを含む。放出を調整するのに適切な金属カチオン成分の例は、たとえば、Mg(OH)2、MgCO3(4MgCO3.Mg(OH)2.5H2Oなど)、MgSO4、Zn(OAc)2、Mg(OAc)2、ZnCO3(3Zn(OH)2・2ZnCO3)ZnSO4、ZnCl2、MgCl2、CaCO3、Zn3(C6H5O7)2およびMg3(C6H5O7)2を含むまたは含有する。金属カチオン成分とポリマーとの適切な比率は、重量あたり約1：99〜約1：2の間である。最適な比率は、使用されるポリマーおよび金属カチオン成分に依存する。ポリマーマトリックスからの生物学的活性剤の放出を調整するために分散された金属カチオン成分を含有するポリマーマトリックスは、さらに、Bernsteinらに関する米国特許第5,656,297号、および1998年4月7日に提出された同時係属中の米国特許出願第09/056,566号に記載され、この２つの教示は参照によりすべて本明細書に取り込まれる。
【００５０】
徐放性組成物（ポリマー／活性剤マトリックス）を形成することができる多くの方法が知られている。これらの方法の多くにおいて、カプセル化される物質は、壁形成物質を含有する溶媒中で分散される。この方法の１段目で、溶媒をマイクロ粒子から除去し、その後マイクロ粒子産物を得る。
【００５１】
生物学的活性剤の徐放用の組成物を形成する方法は、Gomobotzらに布告された米国特許第5,019,400号、およびHerbertらに布告された米国特許第5,922,253号に記載され、これらの教示は参照によりすべて本明細書に取り込まれる。
【００５２】
本方法において、生物学的活性剤、生物適合性ポリマーおよびポリマー溶媒を含有する混合物が液滴を作製するために処理され、該液滴の少なくとも有効な部分はポリマー、ポリマー溶媒およびその活性剤を含有する。これらの液滴は、次いで適当な手段により凍結される。液滴を形成するために混合物を処理する手段の例は、超音波ノズル、圧力ノズル、レイリージェットを通してまたは溶液から液滴を作製する他の公知の手段により、分散液を指向することを含む。
【００５３】
液滴を凍結するのに適切な手段は、液滴を、液体アルゴンまたは液体窒素などの液体ガス中またはその付近に指向し、凍結したミクロ液滴（microdroplet）を形成させ、次いで該液体ガスから取り出すことを含む。凍結したミクロ液滴は、次いで、エタノール、ヘキサン、ヘキサンと混合したエタノール、ヘプタン、ヘプタンと混合したエタノール、ペンタンまたはオイルなどの液体または非溶媒の固体に曝露される。
【００５４】
凍結したミクロ液滴中の溶媒は、非溶媒（non-solvent）中に固体および／または液体として抽出され、生体適合性ポリマーと生物学的活性剤とを含有するポリマー／活性剤マトリックスを形成する。エタノールと、ヘキサン、ヘプタンまたはペンタンなどの他の非溶媒との混合は、エタノール単独で達成されるものより、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）ポリマーなどのある種のポリマーからの溶媒抽出の速度を増大することができる。
【００５５】
広範囲の大きさの徐放性組成物は、液滴の大きさを変えることにより、たとえば、超音波ノズルの径を変えることにより作製することができる。徐放性組成物がマイクロ粒子の形態であり、極めて大きなマイクロ粒子が所望されている場合、マイクロ粒子をたとえば、シリンジを直接通して冷却した液体中に、押し出し成形することができる。ポリマー溶液の粘度を増大することで、マイクロ粒子径を増大することもできる。この工程により作製することができるマイクロ粒子径は、例えば、直径約1000ミクロメーターより大きい〜約１ミクロメーターまでの範囲にわたる。
【００５６】
生体適合性ポリマーおよび生物学的活性剤を含有する懸濁物から徐放組成物を形成するためのさらに別の方法は、フィルムまたは型を形成するための鋳型などのフィルム遺贈を含む。例えば、鋳型に懸濁物を入れた後、次いでポリマー溶媒は当該分野で公知の手段により除去されるか、または一貫した乾燥重量を有するフィルムもしくは型が得られるまで、ポリマー懸濁物の温度を低下させる。
【００５７】
従来のマイクロカプセル化プロセスおよびそれにより製造されるマイクロ粒子のさらなる例は、米国特許第3,737,337号（その全体が参考として本明細書中に援用される）に開示されており、ここで溶媒中のポリマー材料の溶液が調製される。溶媒は、水に部分的にのみ混和する。固体またはコア材料は、ポリマー含有混合物に溶解または分散し、その後、コア材料含有混合物は、マイクロ粒子から溶媒を除去するために有機溶媒に混ざらない水溶液に分散される。
【００５８】
物質を含有するマイクロ粒子から溶媒を除去するプロセスの別の例は、米国特許第3,523,906号に開示されており、その全体が参考として本明細書中に援用される。このプロセスでは、カプセル化対象の材料は、水と混ざらない溶媒中のポリマー材料の溶液中で乳化され、次いでエマルジョンは親水性コロイドを含む水溶液中で乳化される。次いで、マイクロ粒子からの溶媒の除去は、蒸発により達成され、生成物が得られる。
【００５９】
米国特許第3,691,090号（その全体が参考として本明細書中に援用される）に示されるさらに別の方法では、有機溶媒は、水性媒体中のマイクロ粒子の分散物から、好ましくは減圧下で蒸発される。
【００６０】
同様に、米国特許第3,891,570号（その全体が参考として本明細書中に援用される）の開示は、多価アルコール媒体中のマイクロ粒子の分散物から溶媒を、熱の適用により、またはマイクロ粒子を減圧に供することにより蒸発させる方法を示す。
【００６１】
溶媒除去プロセスの別の例は、米国特許第3,960,757号（その全体が参考として本明細書中に援用される）に示されている。
【００６２】
Ticeら、米国特許第4,389,330号は、（ａ）活性薬剤を溶媒に溶解または分散させ、その溶媒に壁形成材料（wall forming material）を溶解させる工程；（ｂ）活性薬剤および壁形成材料を含有する溶媒を連続相プロセシング媒体に分散させる工程；（ｃ）工程（ｂ）の分散物から溶媒部分を蒸発させ、それにより懸濁物中に活性薬剤を含有するマイクロ粒子を形成させる工程；および（ｄ）マイクロ粒子から溶媒の残渣を抽出する工程、を含む方法による活性薬剤を含有するマイクロ粒子の調製を記載している。
【００６３】
本発明の組成物は、インビボで、例えば、ヒトもしくは動物に、経口、または注射、移植（例えば、皮下、筋肉内、腹腔内、頭蓋内、および皮内）、粘膜への投与（例えば、鼻腔内、腟内、肺内、頬腔内または坐薬による）等により非経口で、あるいはインサイチュ送達（例えば、浣腸またはエアロゾル噴霧により）で投与され得、種々の医学的疾患の特定の薬剤での処置のための公知のパラメータに基づいて生物学的活性剤の所望の投薬量が提供される。
【００６４】
本発明の徐放組成物の治療的使用は、ブレンドポリマーに組み込まれる生物学的活性剤に依存する。当業者は、所望の生物学的活性剤を、意図する治療的使用のために本発明に容易に適合することができる。かかる薬剤の治療的使用は、その全体が参考として本明細書中に援用される以下の刊行物により大いに詳細に述べられている。そういうものとして、治療的使用としては、インターフェロン（米国特許第5,980,884号および同第5,372,808号）、インターロイキン（例えば、米国特許第5,075,222号）、エリスロポイエチン（米国特許第4,703,008号、同第5,441,868号、同第5,618,698号、同第5,547,933号および同第5,621,080号）、および顆粒球-コロニー刺激因子（例えば、米国特許第4,999,291号、同第5,581,476号、同第5,582,823号、同第4,810,643号およびPCT公開WO94/7185号）等のタンパク質のための使用が挙げられるがこれらに限定されない。さらに、本発明の徐放組成物はまた、組み込まれた生物学的活性剤が処置に意図される、疾患の処置または寛解のための１つ以上の薬物の製造のために使用されうる。
【実施例】
【００６５】
ポリマー2A：Alkermes, Inc. Cincinnati, OH, カタログ番号：5050DL2A ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）；50：50 ラクチド：グリコリド比；10kD Mol.WT.；酸末端基。
【００６６】
ポリマー2.5A：カタログ番号5050DL2.5A, ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）；50：50ラクチド：グリコリド；20kD Mol.St.、酸末端基。
【００６７】
ポリマー2M：カタログ番号5050DL2M ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）；50：50 ラクチド：グリコリド比；16kD Mol.Wt.、メチルエステル末端基。
【００６８】
マイクロ粒子の調製のための一般的PROLEASE（登録商標）方法
適切なポリマー溶媒にポリマーブレンドを溶解させることによるポリマー溶液の形成。
ポリマー／活性薬剤の混合物を形成するためのポリマーブレンド溶液への活性薬剤の添加。
ポリマー／活性薬剤の混合物の任意の均一化。
超音波処理によるポリマー／活性薬剤の微粒化、および液体窒素との接触による液滴の凍結。
抽出溶媒（例えば、-80℃エタノール）へのポリマー／活性薬剤の液滴からのポリマー溶媒の抽出、それによりポリマー／活性薬剤マトリックスを含む粒子の形成。
濾過による抽出溶媒からの粒子の単離。
蒸発による残渣の溶媒の除去。
注射可能な生成物を製造するための適切なサイズのメッシュを通すことによる粒子のふるい分け。
【００６９】
実施例１
PEG/PBTブレンド
実験方法
オランダのIsoTis, Inc.から入手可能であり、POLYACTIVE（登録商標）と呼ばれるPEG（ポリエチレングリコール）／PBTポリブチレンテレフタレート）ポリマーを有するポリエーテルエステルコポリマーの種々の組成物を、PEG/PBTを含む本発明のポリマーブレンドの調製前に評価した。
【００７０】
コポリマーを、aPEGbPBTcと略記し、ここでａはPEG分子量、ｂはPEG-テレフタレートの重量％であり、ｃはPBTの重量％である。評価したコポリマーを表１に列挙する。ある場合には、ポリマーはaPEGTbPBTcと呼ばれる。
【００７１】
PEG/PBTポリマーの特徴づけ
溶解度実験
表１のPEG/PBTコポリマーのポリマー溶液を溶解度について試験するための種々の溶媒を用いて調製した。次いで、ポリマー溶液を冷蔵したエタノールに移し、不溶性の程度を決定した。溶解度実験のさらなる詳細および結果を以下に詳細に記載する。
【００７２】
10％ポリマー溶液を、塩化メチレン中の上記組成物の全てを用いて作製した。最も高い分子量のPEG（4000PEGT80PBT20）またはPBT対PEGの最も高い比（55：45および60：40）は溶解に最も時間がかかったにも関わらず、全ての組成物は有意に膨張したが、最終的にMeCl2に可溶性であった。
【００７３】
次いで、ポリマー溶液を-80℃エタノールに注ぎ、溶解度を測定した。全ての場合において、ポリマーは、溶液に沈殿し、エタノール溶解しないことを示した。別の硬化溶媒もまた、ヘプタン／エタノールの組み合わせ、混合ヘキサン、および混合ヘキサン／エタノールの組み合わせを含むコポリマー組成物を選択して試験した。コポリマーは、全ての試験した溶媒に十分に不溶性であることが決定された。
【００７４】
固有粘度および膨張度
25℃でのCHCl3において測定された固有粘度（IV）および膨張度（Goedemoedら、米国特許第5,980,948号に記載の方法に従って湿重量／乾燥重量として測定した）をコポリマーサンプルに関して測定した。情報を表１に示す。本明細書中で使用される用語、水吸収比率は、表１に示す「膨張度」についての値と同一である。
【００７５】
詳細には、乾燥フィルム（直径15mmおよび厚さ50〜100μm）を秤量し、振盪浴中で37℃でPBSに浸した。平衡容量膨張比Ｑは、全てのポリマーに関して1.2g/mLの密度を用いて膨張サンプルの平衡重量から決定した。重量を測定する前に、表面の水を、ティッシュで表面をブロッティングすることにより除去した。平衡膨張は3日以内に達成された。
【００７６】
【表１】
2005510521.tif 000002
【００７７】
PEG/PBTコポリマーのインビトロ分解
約50mgの各ポリマー組成物をCarver（登録商標）テストシリンダー一式に負荷し、65℃で配置した。テストシリンダー一式をオーブンから取り出し、５分間4000lbs.の圧力下でCarver（登録商標）マニュアル液圧プレスを用いて、ポリマーをペレットにプレスした。ペレットを秤量し、20mLシンチレーションバイアルに入れた。10mM KClおよび0.1％アジ化ナトリウム（pH-7.2）を有する5mLの50mM HEPESバッファーを各バイアルに添加し、バイアルをインキュベーションのために37℃に配置した。ペレットを７、21、29、44および56日目に取り出した。上清をペレットから吸引し、湿潤ペレットを乾燥し、再秤量した。ポリマー分解のプロフィールを以下に記載する。
【００７８】
純粋なPEG/PBTコポリマーのペレットからの質量減少は、より疎水性のポリマーを用いた8週間にわたる実験で組成と共に変化し、最も遅い分解を示す。300ダルトンの分子量を有するPEGから作製したポリマーは、最後の時点でわずか1〜3％の最も低い質量減少を有した。次は1000PEG60PBT40および1000PEG70PBT30であり、これらは両方とも56日間で質量の約10〜12％が減少した。80％PEGおよび20％PBTからなるそれらのポリマーは、最初のペレット質量の19％〜30％が減少したが、この群内では、PEG分子量と質量減少の程度との間に相関関係はなかった。一般に、質量減少は、任意の傾向がこれらの実験に存在する一定の実験的誤差を見分けうる程度には、4〜8週間では増大しなかった。ペレット構造における変化は、PEG/PBTコポリマーの物理的特性のために、ある場合には、バイアルからのバッファーの除去またはペレットの取り出しの間にペレット質量の減少を導いた。結果を上記表１に示す。
【００７９】
また、2000以上の分子量を有するPEG単位を含有する、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）とPEG/PBTコポリマーとのいくつかのポリマーブレンドについて初期分解実験を行った。5050 2.5Aからなる初期重量の50％を有するペレットは、８週間にわたり約43〜48％の質量減少を示したが、25％PLGを含有するそれらの組成物は、同じ時間でその初期質量の約30〜35％が減少した。種々のPEB/PBTコポリマー間で有意な差異は存在しなかった。３週間での質量減少の程度は、ほとんどの組成物で約20％であり、それゆえブレンドにおいて時間外に分解の増大があった。比較のために、PLG単独の浸食は３週間で約50％であり、４週間の終わりにはほぼ完全であった。
【００８０】
実施例２
マイクロ粒子調製
マイクロ粒子組成物をポリ（ラクチド−コ−グリコリド）および表１の種々のPEG/PBTコポリマーのポリマーブレンドから調製した。マイクロ粒子を、上記に概説した一般的なPROLEASETMプロセスを用いて調製した。
【００８１】
10：90、20：80、35：65、50：50、75：25のPEG/PBT等の種々の比で、選択したPEG/PBT（1000PEGT70PB30、1000PEGT60PBT40、1000PEG80PBT20、2000PEGT70PBT30 4000PEG80PBT20）ポリマーとポリ（ラクチド−コ−グリコリド）とをブレンドした。ブレンドは、選択したポリマーの重量対重量比で行った。ブレンドポリマーの各々に関して、5％または6％のポリマー溶液（15mL MeCl2中に750または900mgの各々のポリマー）を塩化メチレン中に調製した。次いで、予め決定した量の選択した生物学的活性剤および所望される任意の賦形剤をポリマー溶液に添加した。次いで、ポリマー溶液（活性ありまたはなし（ブランク）のいずれか）を噴霧した。噴霧中の溶液の流速は約2mL/分であった。ポリマー溶液の噴霧から得られた液滴を、ヘプタン／エタノール（約35％ヘプタン）または100％混合ヘキサンのいずれかを硬化溶媒として使用して硬化させた。
【００８２】
α-IFN-含有マイクロ粒子
α-IFNを含有するマイクロ粒子を、1.4〜2.0％の標的荷重のタンパク質と、α-IFN凍結粉体（亜鉛錯体化α-IFN、スクロース（IFNに対して1：1比）、酢酸亜鉛およびTrisバッファー（IFNの42重量％）を含有する噴霧凍結乾燥タンパク質粉体）で共カプセル化した５％炭酸マグネシウムまたは水酸化マグネシウムとを用いて調製した。
【００８３】
ある調製物では、IFN含有マイクロ粒子を製造するために使用したポリマー相は、PLGとしてMedisorb 5050 2Aとブレンドした約50％ 1000PEG70PBT30コポリマーであった。２つの他のPEG/PBTコポリマー（1000PEG60PBT40および4000PEG80PBT20）をまた、αIFN-負荷ミクロスフェアにおいてPLGとブレンドした。
【００８４】
他の調製物では、1000PEG70PBT30の量は、0％、10％、20％または35％であり、残りは5020 2A PLGであった。
【００８５】
インビトロ放出
インビトロ放出実験を、α-IFN負荷マイクロ粒子の種々のバッチで行った。各マイクロ粒子製剤について２つ組で、約20mgのマイクロ粒子を遠心分離チューブに量り取った。300μLのバッファー（25mMリン酸塩、130mM NaCl、および0.3mM EDTA pH=7.2）を各遠心分離チューブに添加した。サンプルを約２秒間ボルテックスしてマイクロ粒子を懸濁し、次いでチューブを37℃で一晩揺り子に配置した。24時間後、上清を各チューブから収集し、Centrifuge 5415Cを用いて14,000rpmで６分間遠心分離し、残りの粒子を全て分離し、上清を別のチューブに移した。新しいバッファーを添加し、4日間アッセイを続けた。各サンプル中のタンパク質濃度をBioRad Protein Assayを用いて測定した。
【００８６】
図１は、1000PEG70PBT30および5050 2A PLGを使用し、33：65、20：80；10：90および0：100のPEG/PBT：2A比を有するポリマーブレンドについて上記のように調製したαIFN含有マイクロ粒子について得られた4日間のインビトロ放出試験の結果を図示する。PEG/PBT含量における増大は、αIFN放出の累積的％における増大と良好に相関する。例えば、PLGに対して35％のPEG/PBTの添加は、4日間で20％〜約50％の放出割合のアップをもたらす。
【００８７】
インビボ実験
インビボ薬動態学的実験を、種々のPEGT/PBT：PLG製剤で作製され、α-IFNが負荷されたマイクロ粒子を用いて行った。上記のように調製したα-IFN-含有マイクロ粒子を以下のようにインビボで試験した。約450±50gの重量を有する雄のSprague-Dawleyラット（群当たり3匹の動物）を、注射後0〜14日間（日曜日以外）、毎日5mg/kg サンドイムネシクロスポリン（Sandimmune Cyclosporine）IPで処置した。ビヒクル中の所望の用量のマイクロ粒子を、1.0ccシリンジおよび21ゲージ針を用いて動物の肩胛骨間の領域に注射した。マイクロ粒子の用量は、3.0％カルボキシメチルセルロース（CMC）、0.9％NaCl、0.1％Tween20を含有する1.0mLのビヒクルに懸濁した約17mgのマイクロ粒子であった。
【００８８】
血液サンプルを2、4、6、9および24時間および2、4、7、10、14、17、21、24および28日目に採取した。いくつかの動物については、所望の全ての時点で血液サンプルを収集することはできなかった。血清を分離し、ELISAを用いてIFN濃度を測定した。
【００８９】
インターフェロンαELISA（Endogen, Inc.）は、酵素的に増幅した「２工程」サンドイッチ型イムノアッセイである。このアッセイでは、標準、対照および未知のラット血清サンプルを、抗ヒトIFNα捕捉抗体で被覆したマイクロタイトレーションウェル中でインキュベートする。インキュベーションおよび洗浄後、ウェルを、酵素西洋ワサビペルオキシダーゼ（HRP）で標識した別の抗ヒトIFNα検出抗体で処理する。第２のインキュベーションおよび洗浄後、ウェルを基質テトラメチルベンジジン（TMB）とともにインキュベートする。次いで、酸停止溶液を添加し、基質の酵素的ターンオーバーの程度を450nmおよび620nmでの二重波長吸光度測定により決定する。測定した吸光度は、存在するIFNαの濃度に直接比例する。IFNα標準のセットを使用し、吸光度対IFNα濃度の検量線をプロットする。検量線に一致する４つのパラメータを用いて、未知のIFNα濃度を計算することができる。
【００９０】
詳細には、α-IFNを用いる最初のインビボ実験は、米国特許第6,165,508号に記載されるようなZn対α-IFNのモル比が約6：1〜10：1で上記のように亜鉛複合体化凍結乾燥物の形態で５％水酸化マグネシウムおよび約1.4％負荷のα-IFNを有する1000PEG70PBT30：50502A PLGの50：50（w/w）ブレンドを有するマイクロ粒子製剤を使用した。この実験の結果を図２に示す。ブレンドマイクロ粒子中のα-IFNについて達成された相対バイオアベイラビリティは、subQ大量瞬時投与と比べてPLGA単独マイクロ粒子で25％に対して、subQ大量瞬時投与と比べて99％であると決定された。
【００９１】
続く実験において、1000PEGT70PBT30および2A PLGを３つのw/w比でブレンドした。詳細には、35％、20％および10％の1000PEGT70PBT30と残部5050 2APLGとのブレンドを用いて、42％のIFNおよび約5％の水酸化マグネシウムと共に上記のような1.4％のα-IFNの標的負荷を有するマイクロ粒子を調製した。マイクロ粒子を上記のプロトコルに従ってインビボで試験した。この実験の結果を図３に示す。図３の説明と一致して、特定のマイクロ粒子製剤は以下の通りである：35％PEG/PBT、20％PEG/PBT、10％PEG/PBTおよび5050 2A PLG単独。
【００９２】
50：50 w/wのPEG/PBT：PLG比を有するα-IFNマイクロ粒子のさらなる製剤を調製した。詳細には、ブレンドは、上記のように調製された1.4％のα-IFNの標的負荷および約5％の水酸化ナトリウムを有する4000PEG80PBT20および5050 2A PLG；1000PEG70PBT30および50502A PLG；ならびに1000PEG60PBT40および5050 2A PLGであった。マイクロ粒子を上記のようにインビボで試験した。結果を図４に図示する。図４の説明と一致して、特定のマイクロ粒子製剤は以下の通りである：50：50の4000PEG80PBT20：5050 2A PLG；50：50の1000PEG70PBT30：50502A PLG；および50：50の1000PEG60PBT40：5050 2A PLGである。最も高い分子量、低PBT含量および２よりも高い水吸収比率を有するPEG/PBTの使用は、両親媒性ポリマーの水吸収比率が約２以下であるブレンドから調製されたマイクロ粒子よりも高いバーストおよびより短い放出の期間を生じることが図４から理解されうる。
【００９３】
実施例３
FSH含有マイクロ粒子
80％スクロース、10％FSHおよび10％リン酸塩からなるタンパク質粉体を用いて、約0.5％のタンパク質負荷を有するFSH含有マイクロ粒子を製造した。1000PEG70PBT30からなる20％のポリマー、ならびに5050 2Aまたは5050 2Mおよび5050 2Aのブレンド（75：25ブレンド）のいずれかの残部を用いて２つのバッチを調製した。上記に概説した一般的なPROLEASETM手順を使用した。この場合、エタノールを硬化溶媒として使用した。
【００９４】
インビボ
FSH-含有マイクロ粒子を放出プロフィールに関してインビボで解析した。注射用量は、名目上、0.5％負荷のFSH、または100μgタンパク質が負荷された20mgのマイクロ粒子であった。PKデータは、200μg/kg用量に用量規準化したデータとして表される。
【００９５】
典型的なPK実験において、３匹の雄のSprague-Dawleyラット（450±50g）に３％カルボキシメチルセルロース、0.9％NaCl、および0.1％TWEEN-20を有する0.175mLの希釈剤に懸濁した20mgのマイクロ粒子を皮下に注射した。血清サンプルを１日目にいくつかの時点、14日目まで1日に1回収集した。FSHを、BioChem. Immunosystems Italia S.P.A.により提供されるMAIAclone（IRMA）を用いて血清サンプルから定量した。示されるデータは、200μg FSH/kgに典型的に用量規準化される。
【００９６】
インビボ試験の結果を図５に示す。図５のグラフは、75：25の5050 2M：2Aのポリマーが20％PEG/PBTでブレンドされる場合のバイオアベイラビリティおよび持続性血清薬物濃度の増大を示す。すなわち、図５に示されるインビボ試験の結果は、最初の7日間にわたるほとんど線状の放出プロフィール、および投薬後2〜7日間の2M/2Aブレンド自身よりも高い桁数の血清濃度を示す。相対バイオアベイラビリティは、結果として30％から65％に倍加した。ブレンドポリマーが5050 2A PLGおよび20％の1000PEG70PBT30である場合、相対バイオアベイラビリティは35％から45％に増大し、5050 2A PLG単独と比べて、実質的に線状な放出プロフィールを有した。
【００９７】
実施例４
トリブロックブレンド（TRIBLOCK BLEND）
要約：PLG-ポロキサマー-PLGトリブロックポリマーを調製した。トリブロックを、所望のコポリマー組成およびブロック長を有するブロックコポリマーを達成するために熱縮合により調製しうる。トリブロックポリマーの組成および相対ブロック長は、1H-NMR等の標準的な解析方法を用いて確認しうる。トリブロックポリマーはまた、開始剤としてＢブロック（例えば、PLURONICSTM）を用いて、Aブロック（例えば、PLG）の開環重合を含む融解プロセスにおいて調製しうる。例えば、PLG-PLURONICTM-PLGトリブロックコポリマーは、開始剤としてPLURONICSTMを用いるオクチル酸スズ（stannous octoate）触媒開環重合により調製されうる。PLGに対するPLURONICSTMのモル比は、PLGブロックの長さを制御するために使用され、種々のブロック含量を有する一連のポリマーを提供しうる。このタイプのトリブロックポリマーの合成は、WO01/41735号およびChurchillら、米国特許第4,942,035号に見出され、それら両方の全体の内容は参考として本明細書中に援用される。
【００９８】
次いで、トリブロックポリマーを、PLGとブレンドし、PLGおよびトリブロックを含有するポリマーブレンドを得た。次いで、ポリマーブレンドを使用して活性薬剤の徐放のためにマイクロ粒子を調製した。カプセル化された特定の薬剤としては、α-インターフェロン（α-IFN）およびFSHが挙げられる。トリブロックポリマーを調製する方法、PLGおよびトリブロックのポリマーブレンドおよびポリマーマトリックスとしてブレンドを有するマイクロ粒子が以下に示される。さらに、調製されたトリブロック、ブレンドおよびマイクロ粒子の試験から得られたインビトロおよびインビボデータもまた提供される。
【００９９】
PLG-ポロキサマートリブロック
ポリマーは、90％の50：50ポリ（dI-ラクチド−コ−グリコリド）および10％のポロキサマー407（PLURONIC F-127TM）を含有するトリブロックコポリマーである。ポロキサマーとの反応により開始されるdl-ラクチドおよびグリコリドの開環重合によるトリブロックコポリマーの調製が以下に示される。
【０１００】
【化１】
2005510521.tif 000003
【０１０１】
手短には、Puracから入手可能なdl-ラクチド 99.9+％およびPuracから入手可能なグリコリド 99.9+％を、スターラーおよび窒素入口を備えた反応容器に添加した。モノマーが完全に溶解した後、Sigmaから入手可能な0.2％の量のオクチル酸スズを触媒として添加し、続いて9,840〜14,600の重量平均分子量を有するポロキサマー407TMを添加した。重合を窒素ブランケット下で24時間150℃で行った。減圧を、未反応のモノマーを除去するために3時間適用した。
【０１０２】
合成された他のトリブロックでは、F127比を10％に維持しながら、最終トリブロックにおけるラクチド対グリコリド比を50：50から90：10のラクチド対グリコリドまで変化させること、ならびに最終トリブロック中のF127ポリキサマー濃度を10％から30％まで変化させ、残りのPLGAを50：50のラクチド対グリコリドで構成することを含む。ラクチド対グリコリドまたはF127対PLGAのいずれかの比におけるこれらの変化は、重合体化の開始前に各々の投入質量比を変化させることにより行った。
【０１０３】
得られたトリブロックコポリマーは以下の特性を有した：
・0.5〜0.7dL/gの固有粘度（IV）範囲および50,000〜100,000の重量平均分子量、
・「A」末端ブロックとしてポリ（dl-ラクチド−コ−グリコリド）、「B」ブロックとしてポリエチレンオキシドおよび「C」ブロックとしてポリプロピレンからなるA-B-C-B-Aブロック、
・ポリ（dl-ラクチド−コ−グリコリド）およびポロキサマーの重量比が90：10である、
・ラクチドおよびグリコリドのモル比がプロトンNMRにより約53：47である、
・塩化メチレン、クロロホルム、酢酸エチル、アセトンを含む有機溶媒中での良好な溶解性、
・1.15の水吸収比率。
【０１０４】
次いで、トリブロックポリマーをPLGとブレンドし、ブレンドポリマーを達成した。トリブロックおよびPLGのブレンドは、塩化メチレンに両方のポリマーを溶解させ、次いで凍結乾燥した薬物物質を有するか、または有さない噴霧凍結乾燥により達成した。
【０１０５】
ペレットのインビトロ分解：水吸収比率の決定
材料：
50mM HEPESバッファー（10mM KCl、0.1％アジ化ナトリウム、pH7.2）Alkermes 5050 DL 2Aポリマー
上記のように調製された90：10 PLG/F127トリブロック
上記のように調製された80％の90：10 PLG：F127と20％の2Aとのブレンド
【０１０６】
手順：
各ペレットについて、約160mgの全ポリマーを9mm i.d. Carver（登録商標）テストシリンダーセットに負荷し、65℃に配置した。テストシリンダーセットをオーブンから取り出し、4000lbsの圧力で５分間Carver（登録商標）マニュアル液圧プレスを用いてポリマーをペレットにプレスした。ペレットを秤量し、20mLシンチレーションバイアルに入れ、次いで10mLのHEPESバッファーで被覆し、37℃でインキュベートした。純粋ポリマー組成物およびブレンドの両方に関してグランドアップ（ground up）ポリマー粉体を用いて、４つのペレットを各組成物について調製した。
【０１０７】
インキュベーションの48時間後、各組成物の１つのペレットをバッファーから取り出し、ティッシュ上で叩いて乾燥し、次いでペレットの水の取り込みを測定するために秤量した。次いで、このペレットを同じバッファーに戻し、７日目の時点で使用するまで37℃でインキュベートした。
【０１０８】
引き続く各時点（７、14、28および38日目）で、各組成物の１つのペレットを、バッファーから取り出し、１日減圧下で乾燥し、残存する質量を測定するために再び秤量した。また、ペレットが除去されたバッファーのpHを測定した。これらの測定の結果を図６および７それぞれに図示する。
【０１０９】
2A、PLG：F127トリブロックおよびPLG：F127コポリマー/2Aブレンドの37℃で２日間のインキュベーション後の水の取り込み％は、34％、15％、および133％であり、これは1.34、1.15および2.33の水吸収比率に相当した。
【０１１０】
α-IFN-含有マイクロ粒子の調製
材料：
--塩化メチレン
--エタノール
--90：10 PLG/F127、本明細書に記載のように調製
--Alkermes 5050 DL 2Aポリマー、（PLG、10kD、酸末端基（acid end group））
--α-IFN、スクロース（IFNに対して1：1比）、リン酸緩衝液を含む噴霧冷凍凍結乾燥タンパク質粉末（42重量％αIFN）
--炭酸マグネシウム
【０１１１】
調製
216mgの90：10 PLG/F127および54mgのPLGに4.5mLの塩化メチレンを添加し、ポリマーを溶解した。次いで、ポリマー溶液を15mgのタンパク質粉末（Zn複合体）に添加し、約2％負荷のIFNを達成し、得られた懸濁液を3分間超音波処理し、粉末をばらばらにした。次いで、15mgの炭酸マグネシウム（ポリマー、タンパク質および賦形剤の総重量の約5％）を添加し、懸濁液をさらに1分超音波処理した。
【０１１２】
次に、超音波処理した懸濁液を、超音波ノズルを使用して、凍結エタノール床上の液体窒素を含む容器へ噴霧冷凍した。容器を-80℃で一晩貯蔵し、液体窒素を蒸発させ、エタノールを溶解して、塩化メチレンの抽出およびポリマーマイクロ粒子の硬化を行った。
【０１１３】
得られたマイクロ粒子を低温濾過（cold filtration）により採取し、次いで凍結乾燥して残りの溶媒を除去した。次いで、これらの乾燥マイクロ粒子を125μmメッシュを用いて篩い分けして、21ゲージ注射針を介して容易に注射できる画分を得た。
【０１１４】
5050 DL 2Aポリマー単独およびその中に組込んだインターフェロンを有するマイクロ粒子をまた調製した。簡単には、270mgの5050 DL 2Aポリ（ラクチド−コ−グリコリド）ポリマー単独を含有する3.5mLの塩化メチレンを使用することを除き、上記手順に従った。
【０１１５】
上記のように調製したα-IFN含有マイクロ粒子を以下のようにインビボで試験した。約450±50グラムの体重を有する雄Sprague-Dawleyラット（1群あたり3匹の動物）を、注射後0〜14日間毎日（日曜日を除く）5mg/kgのSandimmune Cyclosporine IPを用いて処置した。所望の用量のマイクロ粒子を含有するビヒクルを、1.0cc注射器および21ゲージ注射針を用いて動物の肩甲骨間領域に注射した。マイクロ粒子の用量は、3.0％カルボキシメチルセルロース（CMC）、0.9％NaCl、0.1％Tween 20を含有する1.0mLのビヒクルに懸濁した約17mgのマイクロ粒子であった。
【０１１６】
血液試料を2、4、6、9および24時間ならびに2、4、7、10、14、17、21、24および28日に採取した。数匹の動物については、所望の毎時点で血液試料を回収することができなかった。血清を分離し、IFN濃度を上記のようなELISAを使用して測定した。
【０１１７】
上記のように調製したαIFN含有マイクロ粒子のインビボ放出プロファイルの結果を図８に示す（データを用量正規化する）。
【０１１８】
PLGおよびPLG：F127ブロックポリマーのポリマーブレンドから調製したマイクロ粒子は、同じ様式だがPLG単独を使用して調製したマイクロ粒子と比較してインターフェロンの初期放出において実質的な減少を生じた。さらに、ブレンドポリマーを有するインターフェロン含有マイクロ粒子を受けた動物については、PLG単独と比較して、徐放期の間に血清レベルの実質的な増加が見られた。結果として、約２倍の血中薬物濃度時間曲線下面積（AUC）または生物学的利用能（ブレンドについては61％ vs. PLG単独については30％）であった。
【０１１９】
MgCO3および凍結乾燥タンパク質粉末（α-IFN、スクロース（1：1比）、リン酸緩衝液を含む）（42重量％αIFN）を用いる以外はほぼ上記のように調製したマイクロ粒子を調製した。上記のように、マイクロ粒子の薬物負荷は2％であり、約5％MgCO3であった。データを1mg/kgに対して用量正規化する。インビボ試験の結果を図９に示す（亜鉛のないIFN）。
【０１２０】
本発明をその好ましい態様を参照して具体的に示し記載したが、当業者は、添付の請求の範囲により包含される本発明の範囲を逸脱することなく本明細書において形態および詳細における種々の変更が行われ得ることを理解するだろう。
【図面の簡単な説明】
【０１２１】
【図１】図１は、1000PEG70PBT30および5050 2A PLGのポリマーブレンドであり、PEG/PBT：2Aの割合が35：65、20：80、10：90、および0：100であるポリマーブレンドを用いて調製されたIFN含有マイクロ粒子の4日間にわたるインビトロ放出試験に関する、放出の累積％対時間（日）のグラフである。
【図２】図２は、提示された製剤の投与後のラット中のIFN血清濃度対時間（日）のグラフである。
【図３】図３は、提示された製剤の投与後のラット中のIFN血清濃度対時間（日）のグラフである。
【図４】図４は、提示された製剤の投与後のラット中のIFN血清濃度対時間（日）のグラフである。
【図５】図５は、提示されたＦＳＨマイクロ粒子製剤の投与後のラット中のFSH血清濃度対時間（日）のグラフである。
【図６】図６は、提示されたポリマー組成物のペレットについてインキュベーション開始後の質量減少の割合対時間（日）のグラフである。
【図７】図７は、インキュベーション開始後のペレットの質量減少の測定用インキュベーション溶液のpH対時間（日）のグラフである。
【図８】図８は、提示されたIFNマイクロ粒子製剤の投与後のラット中のIFN血清濃度対時間（日）のグラフである。
【図９】図９は、提示されたIFNマイクロ粒子製剤の投与後のラット中のIFN血清濃度対時間（日）のグラフである。
【図１】
2005510521.tif 000004
【図２】
2005510521.tif 000005
【図３】
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【図４】
2005510521.tif 000007
【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際調査報告】
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