【手続補正書】
【提出日】令和2年7月31日(2020.7.31)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次式（Ｉ）で示される化合物、またはその塩。
2020109088.tif 000001
（式中、
Ａは、ルシフェリン、プロルシフェリン、アミノルシフェリン、キノリル−ルシフェリン、ナフチルルシフェリン、クロロルシフェリン、セレンテラジン、フリマジン、セレンテラジン−ｎ、セレンテラジン−ｆ、セレンテラジン−ｈ、セレンテラジン−ｈｃｐ、セレンテラジン−ｃｐ、セレンテラジン−ｃ、セレンテラジン−ｅ、セレンテラジン−ｆｃｐ、ビス−デオキシセレンテラジン（「セレンテラジン−ｈｈ」）、セレンテラジン−ｉ、セレンテラジン−ｉｃｐ、セレンテラジン−ｖ、２−メチルセレンテラジン、Ｒ１１０、ＤＤＡＯ、レゾルフィン、クレシルバイオレット、シリルキサンテン、ローダミン１２３、ローダミンＸ、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ−３５０、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ−４３０、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ−４８８、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ−６６０、ＤｙＬｉｇｈｔ５９４、スルホローダミンＢ、スルホローダミン１０１、Ｔｅｘａｓ  Ｒｅｄ、フルオレセイン、６−カルボキシフルオレセイン（６−ＦＡＭ）、５−カルボキシフルオレセイン（５−Ｆａｍ）、５−もしくは６−カルボキシ−４，７，２’，７’−テトラクロロフルオレセイン（ＴＥＴ）、５−もしくは６−カルボキシ−４’５’２’４’５’７’ヘキサクロロフルオレセイン（ＨＥＸ）、５’もしくは６’−カルボキシ−４’，５’−ジクロロ−２’，７’−ジメトキシフルオレセイン（ＪＯＥ）、６−ＪＯＥ、５−カルボキシ−２’，４’，５’，７’−テトラクロロフルオレセイン（ＺＯＥ）ロドール、フルオレセインイソチオシアネート、クマリン、７−アミノ−４−メチルクマリン、アミノクマリン、ヒドロキシクマリン、シリルキサンテン及びカルボピロニンの部分からなる群から選択されたレポーター部分であり；
Ｒ14は、Ｈ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、カルボキシアルキル、またはアミドアルキルであり；
Ｒ9及びＲ10は、アルキルから独立に選択され；
Ｒ11、Ｒ12、及びＲ13は、独立にアルキルであり；
Ｘは、Ｏであり；
Ｌは、−（ＣＨ2）mＣ（Ｒ17）2（ＣＨ2）n−Ｙ−Ｃ（Ｏ）−であり；
Ｒ17は、独立にＨまたはアルキルであり；
ｍは、０〜２の整数であり；
ｎは、０〜２の整数であり；
Ｙは、ＮＲ15であり；
Ｒ15は、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキル−ＣＯＮ（Ｒ32）（Ｒ33）であり；
ｘは、１〜２０から選択される整数であり；そして
Ｒ32及びＲ33は、水素、アルキル、カルボキシ、アリール、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクル、ヒドロキシアルキル、タンパク質、ポリペプチド、ポリペプチドを基礎とする毒物、アミノ酸、ヌクレオチド、ポリヌクレオチド、脂質、糖、炭水化物、酵素基質、薬物、薬物の誘導体、ポリマー連結ナノ粒子、抗体、界面活性剤、及び色素、またはそれらの組み合わせからそれぞれ独立に選択される。）
【請求項２】
2020109088.tif 000002
2020109088.tif 000003
からなる群から選択される請求項１に記載の化合物またはその塩。
【請求項３】
標識化されるべき物質が標識用試薬によって標識された標識化複合体であって、前記標識用試薬が、以下の式（Ｉ）で示されることを特徴とする標識化複合体。
2020109088.tif 000004
（Ｉ）
（式中、
Ａは、ルシフェリン、プロルシフェリン、アミノルシフェリン、キノリル−ルシフェリン、ナフチルルシフェリン、クロロルシフェリン、セレンテラジン、フリマジン、セレンテラジン−ｎ、セレンテラジン−ｆ、セレンテラジン−ｈ、セレンテラジン−ｈｃｐ、セレンテラジン−ｃｐ、セレンテラジン−ｃ、セレンテラジン−ｅ、セレンテラジン−ｆｃｐ、ビス−デオキシセレンテラジン（「セレンテラジン−ｈｈ」）、セレンテラジン−ｉ、セレンテラジン−ｉｃｐ、セレンテラジン−ｖ、２−メチルセレンテラジン、Ｒ１１０、ＤＤＡＯ、レゾルフィン、クレシルバイオレット、シリルキサンテン、ローダミン１２３、ローダミンＸ、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ−３５０、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ−４３０、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ−４８８、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ−６６０、ＤｙＬｉｇｈｔ５９４、スルホローダミンＢ、スルホローダミン１０１、Ｔｅｘａｓ  Ｒｅｄ、フルオレセイン、６−カルボキシフルオレセイン（６−ＦＡＭ）、５−カルボキシフルオレセイン（５−Ｆａｍ）、５−もしくは６−カルボキシ−４，７，２’，７’−テトラクロロフルオレセイン（ＴＥＴ）、５−もしくは６−カルボキシ−４’５’２’４’５’７’ヘキサクロロフルオレセイン（ＨＥＸ）、５’もしくは６’−カルボキシ−４’，５’−ジクロロ−２’，７’−ジメトキシフルオレセイン（ＪＯＥ）、６−ＪＯＥ、５−カルボキシ−２’，４’，５’，７’−テトラクロロフルオレセイン（ＺＯＥ）ロドール、フルオレセインイソチオシアネート、クマリン、７−アミノ−４−メチルクマリン、アミノクマリン、ヒドロキシクマリン、シリルキサンテン及びカルボピロニンの部分からなる群から選択されたレポーター部分であり；
Ｒ14は、Ｈ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、カルボキシアルキル、またはアミドアルキルであり；
Ｒ9及びＲ10は、アルキルから独立に選択され；
Ｒ11、Ｒ12、及びＲ13は、独立にアルキルであり；
Ｘは、Ｏであり；
Ｌは、−（ＣＨ2）mＣ（Ｒ17）2（ＣＨ2）n−Ｙ−Ｃ（Ｏ）−であり；
Ｒ17は、独立にＨまたはアルキルであり；
ｍは、０〜２の整数であり；
ｎは、０〜２の整数であり；
Ｙは、ＮＲ15であり；
Ｒ15は、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキル−ＣＯＮ（Ｒ32）（Ｒ33）であり；
ｘは、１〜２０から選択される整数であり；そして
Ｒ32及びＲ33は、水素、アルキル、カルボキシ、アリール、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクル、ヒドロキシアルキル、タンパク質、ポリペプチド、ポリペプチドを基礎とする毒物、アミノ酸、ヌクレオチド、ポリヌクレオチド、脂質、糖、炭水化物、酵素基質、薬物、薬物の誘導体、ポリマー連結ナノ粒子、抗体、界面活性剤、及び色素、またはそれらの組み合わせからそれぞれ独立に選択される。）
【請求項４】
前記標識化されるべき物質が、タンパク質、ポリペプチド、ポリペプチドを基礎とする毒物、アミノ酸、ヌクレオチド、ポリヌクレオチド、脂質、糖、炭水化物、酵素基質、薬物、ポリマー連結ナノ粒子及び抗体からなる群から選択される、請求項３に記載の標識化複合体。
【請求項５】
試薬の細胞取り込みの評価方法であって、以下の工程、
ａ）試料を、請求項３または４に記載の標識化複合体と接触させる工程であって、前記試料が、細胞を含む工程と、
ｂ）光放出を検出する工程であって、それによって、光放出の検出が、前記試薬の細胞取り込みを示す工程と、
を含むことを特徴とする評価方法。
【請求項６】
前記試薬の細胞取り込みが、前記標識用試薬の還元及び遊離レポーター部分の生成をもたらす、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
光放出の検出が、前記試料の所定波長の光への暴露と、前記試料における蛍光レベルの検出とを含み、対照試料の蛍光または蛍光波長と比較した、蛍光における増加または蛍光波長における変化が、前記試薬の細胞取り込みを示す、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記試料と、ルシフェラーゼとの接触をさらに含み、光放出の検出が、前記遊離レポーター部分を利用して、前記ルシフェラーゼによって生成される発光の検出を含む、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
前記細胞が、真核細胞または原核細胞である、請求項６に記載の方法。