(57)【要約】  本発明は、ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０タンパク質に特異的に結合し、かつＨＩＶ−１中和活性を有する、新規のヒト抗体およびその抗原結合部分に記載の関する。本発明はまた、本発明の抗体を産生する細胞株に関する。本発明はさらに、本発明の抗体またはその抗原結合部分を含む薬学的組成物またはキットに関する。本発明はさらに、ＨＩＶ−１感染を患う被験体を処置するか、または被験体をＨＩＶ−１感染から予防するための本発明の抗体の使用方法に関する。本発明はまた、本発明の抗体の新規の作製方法に関する。この方法は非ヒトトランスジェニック動物を使用することを包含する。本発明はさらに、ＨＩＶ−１ワクチンとしての使用のためのｇｐ１２０の領域を同定する方法に関する。
2005510201.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０タンパク質に特異的に結合し、そしてＨＩＶ−１中和活性を有する、単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分であって、ここで、該抗体またはその抗原結合部分は、ＨＩＶ-１  ｇｐ１２０のＶ１／Ｖ２ドメイン上のエピトープを認識し、ここで、該エピトープは、Ｖ１ループ中の配列の存在に依存する、単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項２】
前記抗体またはその抗原結合部分が、ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０のＶ１ドメイン上のエピトープを認識する、請求項１に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項３】
前記抗体またはその抗原結合部分が、ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０のＶ１ドメイン上の線状エピトープを認識する、請求項１に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項４】
前記抗体またはその抗原結合部分が、ＨＩＶ−１株Ｃａｓｅ−Ａ２のｇｐ１２０のＶ１／Ｖ２ドメインに結合しない、請求項１に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項５】
前記抗体またはその抗原結合部分が、ＨＩＶ−１株Ｃａｓｅ−Ａ２のｇｐ１２０のＶ１／Ｖ２ドメインに結合しない、請求項２に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項６】
前記抗体またはその抗原結合部分が、ＨＩＶ−１株Ｃａｓｅ−Ａ２のｇｐ１２０のＶ１／Ｖ２ドメインに結合しない、請求項３に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項７】
前記抗体またはその抗原結合部分が、ＨＩＶ−１株Ｃａｓｅ−Ａ２  ｇｐ１２０  Ｖ１／Ｖ２ドメイン特異的エピトープに結合しない、請求項１に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項８】
前記抗体またはその抗原結合部分が、ＨＩＶ−１株Ｃａｓｅ−Ａ２  ｇｐ１２０  Ｖ１／Ｖ２ドメイン特異的エピトープに結合しない、請求項２に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項９】
前記抗体またはその抗原結合部分が、ＨＩＶ−１株Ｃａｓｅ−Ａ２  ｇｐ１２０  Ｖ１／Ｖ２ドメイン特異的エピトープに結合しない、請求項３に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１０】
前記抗体またはその抗原結合部分が、ＨＩＶ−１ＳＦ１６２中和活性を有する、請求項１〜９のいずれか１項に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１１】
前記抗体またはその抗原結合部分が、ＨＩＶ−１ＳＦ１６２  ｇｐ１２０のＶ１ドメイン上の線状エピトープを認識する、請求項１〜９のいずれか１項に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１２】
前記抗体またはその抗原結合部分が、ＨＩＶ−１ＳＦ１６２  ｇｐ１２０のＶ１ドメイン上の線状エピトープを認識する、請求項１０に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１３】
前記抗体が、配列番号３からなるペプチドに結合する、請求項１に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１４】
前記抗体が、配列番号２からなるペプチドに結合しない、請求項１３に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１５】
前記ＨＩＶ−１ＳＦ１６２中和活性が、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００２により指定されるハイブリドーマにより分泌される、４５Ｄ１／Ｂ７、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００３により指定されるハイブリドーマにより分泌される、５８Ｅ１／Ｂ３、およびＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００４により指定されるハイブリドーマにより分泌される、６４Ｂ９／Ａ６からなる群より選択される、ヒトモノクローナル抗体のＨＩＶ−１ＳＦ１６２中和活性とほぼ同じくらい強力である、請求項１０に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１６】
前記ヒト抗体が、ヒトモノクローナル抗体である、請求項１〜９または１２〜１５のいずれか１項に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１７】
前記ヒト抗体が、ヒトモノクローナル抗体である、請求項１０に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１８】
前記ヒト抗体が、ヒトモノクローナル抗体である、請求項１１に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１９】
細胞株３５Ｄ１０／Ｄ２（ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００１）、細胞株４０Ｈ２／Ｃ７（ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００６）、細胞株４３Ａ３／Ｅ４（ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００５）、細胞株４３Ｃ７／Ｂ９（ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００７）、細胞株４５Ｄ１／Ｂ７（ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００２）、細胞株４６Ｅ３／Ｅ６（ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００８）、細胞株５８Ｅ１／Ｂ３（ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００３）、および６４Ｂ９／Ａ６（ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００４）からなる群より選択される、ハイブリドーマ細胞株。
【請求項２０】
請求項１９に記載のハイブリドーマ細胞株により産生されるヒトモノクローナル抗体、またはその抗原結合部分。
【請求項２１】
前記ヒト抗体が、請求項２０に記載の抗体の重鎖および軽鎖を含む、請求項１に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項２２】
前記ヒト抗体が、請求項２０に記載の抗体由来の、重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む、請求項１に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項２３】
前記ヒト抗体が、請求項２０に記載のヒト抗体の重鎖を含む、請求項１に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項２４】
請求項２０に記載の抗体の重鎖をコードするヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項２５】
請求項２０に記載の抗体の軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項２６】
発現制御配列に作動可能に連結された、請求項２４または２５に記載の核酸。
【請求項２７】
請求項２４に記載の核酸を用いて形質転換した宿主細胞。
【請求項２８】
請求項２５に記載の核酸分子を用いてさらに形質転換した、請求項２７に記載の宿主細胞。
【請求項２９】
請求項２０に記載のヒト抗体を産生するための方法であって、請求項２８に記載の宿主細胞を培養する工程、および該抗体を回収する工程を包含する、方法。
【請求項３０】
請求項２９に記載の方法により産生された、ヒト抗体。
【請求項３１】
ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０タンパク質に特異的に結合し、そしてＨＩＶ−１中和活性を有する、単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分であって、ここで、該抗体またはその抗原結合部分は、ＨＩＶ-１  ｇｐ１２０のＶ１／Ｖ２ドメイン上のエピトープを認識し、ここで、該抗体またはその抗原結合部分は、ＨＩＶ-１  ｇｐ１２０のＶ２ドメイン上の線状エピトープを認識する、単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項３２】
前記抗体またはその抗原結合部分が、ＨＩＶ−１ＳＦ１６２  ｇｐ１２０のＶ２ドメイン上の線状エピトープを認識する、請求項３１に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項３３】
前記抗体またはその抗原結合部分が、ＨＩＶ−１ＳＦ１６２中和活性を有する、請求項３１に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項３４】
前記抗体またはその抗原結合部分が、ＨＩＶ−１ＳＦ１６２  ｇｐ１２０のＶ２ドメイン上の線状エピトープを認識し、かつＨＩＶ−１ＳＦ１６２中和活性を有する、請求項３１に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項３５】
前記ヒト抗体が、ヒトモノクローナル抗体である、請求項３１〜３４のいずれか１項に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項３６】
前記ヒト抗体が、少なくとも３つのＣＣＲ５  クレード  Ｂ  ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０タンパク質に結合する、請求項３１に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項３７】
前記ヒト抗体が、配列番号４の配列からなるペプチドに結合する、請求項３１に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項３８】
前記ヒト抗体が、ＨＩＶ−１  ＩＩＩＢ、ＨＢＸ２、ＨＢＸ２ｄ、またはＢＨ１０のｇｐ１２０に結合しない、請求項３１〜３４のいずれか１項に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項３９】
８．２２．２で指定され、そしてＡＴＣＣ受託番号＿＿＿＿＿＿を有する、ハイブリドーマ細胞株。
【請求項４０】
請求項３９に記載のハイブリドーマ細胞株により産生されるヒト抗体、またはその抗原結合部分。
【請求項４１】
前記抗体またはその抗原結合部分が、請求項４０に記載の抗体により結合される抗原に対する結合について、請求項４０に記載の抗体と競合する、請求項３１に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項４２】
前記ヒトモノクローナル抗体が、請求項４０に記載の抗体の重鎖および軽鎖を含む、請求項３１に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項４３】
前記ヒトモノクローナル抗体が、請求項４０に記載の抗体の重鎖を含む、請求項３１に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項４４】
前記ヒト抗体が、請求項４０に記載の抗体由来の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む、請求項３１に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項４５】
請求項４０に記載の抗体の重鎖をコードするヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項４６】
請求項４０に記載の抗体の軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項４７】
発現制御配列に作動可能に連結された、請求項４５または４６に記載の核酸。
【請求項４８】
請求項４５に記載の核酸を用いて形質転換した、宿主細胞。
【請求項４９】
請求項４６に記載の核酸分子を用いてさらに形質転換した、請求項４８に記載の宿主細胞。
【請求項５０】
請求項４０に記載のヒト抗体を産生するための方法であって、請求項４９に記載の宿主細胞を培養する工程、および該抗体を回収する工程を包含する、方法。
【請求項５１】
請求項５０に記載の方法により産生される、ヒト抗体。
【請求項５２】
前記抗体またはその抗原結合部分が、インビボでのＨＩＶ−１中和活性を有する、請求項１または３１のいずれか１項に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項５３】
前記抗体が、１を超えるＨＩＶ−１の初代単離物に対する中和活性を有する、請求項１または３１のいずれか１項に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項５４】
前記抗体が、インビボで１を超えるＨＩＶ−１の初代単離物に対する中和活性を有する、請求項５３に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項５５】
前記１を超えるＨＩＶ−１の初代単離物が、１を超えるクレードのメンバーである、請求項５３に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項５６】
ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０のＶ３領域上のエピトープに特異的に結合する、単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分であって、ここで、該抗体は、ＨＩＶ−１のＶ３領域上のエピトープに結合し、かつ配列番号９からなるペプチドに特異的に結合しない、単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項５７】
前記Ｖ３領域が、ＨＩＶ−１ＳＦ１６２  ｇｐ１２０のＶ３領域である、請求項５６に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項５８】
細胞株８．２７．３（ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００９）および細胞株８Ｅ１１／Ａ８（ＡＴＣＣ受託番号＿＿＿＿＿＿）からなる群より選択される、ハイブリドーマ細胞株。
【請求項５９】
請求項５８に記載のハイブリドーマ細胞株により産生されるヒト抗体、またはその抗原結合部分。
【請求項６０】
前記抗体が、請求項５９に記載のヒト抗体の重鎖および軽鎖を含む、請求項５６に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項６１】
前記ヒト抗体が、請求項５９に記載の抗体由来の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む、請求項５６に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項６２】
前記抗体が、請求項５９に記載のヒト抗体の重鎖を含む、請求項５６に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項６３】
前記抗体またはその抗原結合部分が、請求項５９に記載の抗体により結合される抗原に対する結合について、請求項５９に記載のヒト抗体と競合する、請求項５６に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項６４】
前記抗体が、ＨＩＶ−１中和活性を有する、請求項５６、５７または５９〜６３のいずれか１項に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項６５】
前記抗体が、ＨＩＶ−１ＳＦ１６２中和活性を有する、請求項６４に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項６６】
前記抗体またはその部分が、インビボでのＨＩＶ−１中和活性を有する、請求項６４に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項６７】
前記抗体が、１を超えるＨＩＶ−１の初代単離物に対する中和活性を有する、請求項６４に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項６８】
前記１を超えるＨＩＶ−１の初代単離物が、１を超えるクレードのメンバーである、請求項６７に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項６９】
前記抗体またはその部分が、ヒトＣＸＣＲ４レセプターに対するＨＩＶ−１  ｇｐ１２０の結合を阻害する、請求項１、３１または５６のいずれか１項に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項７０】
前記抗体またはその部分が、ヒトＣＣＲ５レセプターに対するＨＩＶ−１  ｇｐ１２０の結合を阻害する、請求項１、３１または５６のいずれか１項に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項７１】
請求項５９に記載の抗体の重鎖をコードするヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項７２】
請求項５９に記載の抗体の軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項７３】
発現制御配列に作動可能に連結された、請求項７１または７２に記載の核酸。
【請求項７４】
請求項７１に記載の核酸を用いて形質転換された、宿主細胞。
【請求項７５】
請求項７２に記載の核酸分子を用いてさらに形質転換された、請求項７４に記載の宿主細胞。
【請求項７６】
請求項５９に記載のヒト抗体を産生するための方法であって、請求項７５に記載の宿主細胞を培養する工程、および該抗体を回収する工程を包含する、方法。
【請求項７７】
請求項７６に記載の方法により産生される、ヒト抗体。
【請求項７８】
前記抗体またはその部分が、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）分子、ＩｇＭ分子、ＩｇＥ分子、ＩｇＡ分子、またはＩｇＤ分子であるか、またはそれらに由来する、請求項１７〜１８、または５６のいずれか１項に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項７９】
前記抗体またはその部分が、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）分子、ＩｇＭ分子、ＩｇＥ分子、ＩｇＡ分子、またはＩｇＤ分子であるか、またはそれらに由来する、請求項１６に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項８０】
前記抗体またはその部分が、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）分子、ＩｇＭ分子、ＩｇＥ分子、ＩｇＡ分子、またはＩｇＤ分子であるか、またはそれらに由来する、請求項３５に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項８１】
前記抗体またはその部分が、ＩｇＧであるか、またはそれらに由来する、請求項７８に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項８２】
前記抗体またはその部分が、ＩｇＧであるか、またはそれらに由来する、請求項７９〜８０のいずれか１項に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項８３】
前記ＩｇＧが、ＩｇＧ１サブタイプ、ＩｇＧ２サブタイプ、ＩｇＧ３サブタイプ、またはＩｇＧ４サブタイプから選択される、請求項８１に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項８４】
前記ＩｇＧが、ＩｇＧ１サブタイプ、ＩｇＧ２サブタイプ、ＩｇＧ３サブタイプ、またはＩｇＧ４サブタイプから選択される、請求項８２に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項８５】
前記抗体またはその部分が、標識される、請求項１６に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項８６】
前記抗体またはその部分が、標識される、請求項３５に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項８７】
前記抗体またはその部分が、標識される、請求項１７〜１８、または５６のいずれか１項に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項８８】
前記標識が、放射性標識、酵素標識、毒素、および磁性因子からなる群より選択される、請求項８５〜８６のいずれか１項に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項８９】
前記標識が、放射性標識、酵素標識、毒素、および磁性因子からなる群より選択される、請求項８７に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項９０】
前記抗原結合フラグメントが、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、またはＦｖフラグメントである、請求項１、３１、または５６のいずれか１項に記載の単離されたヒト抗体の抗原結合部分。
【請求項９１】
前記抗体が、単鎖抗体である、請求項１６に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項９２】
前記抗体が、単鎖抗体である、請求項３５に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項９３】
前記抗体が、単鎖抗体である、請求項１７〜１８、または５６のいずれか１項に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項９４】
前記抗体が、キメラ抗体である、請求項１６に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項９５】
前記抗体が、キメラ抗体である、請求項１８に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項９６】
前記抗体が、キメラ抗体である、請求項１７〜１８、または５６のいずれか１項に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項９７】
前記キメラ抗体が、ヒトモノクローナル抗体と異なるフレームワーク領域およびＣＤＲ領域を含む、請求項９６に記載のキメラ抗体。
【請求項９８】
前記キメラ抗体が、ヒトモノクローナル抗体と異なるフレームワーク領域およびＣＤＲ領域を含む、請求項９４〜９５のいずれか１項に記載のキメラ抗体。
【請求項９９】
前記キメラ抗体が、第１のヒトモノクローナル抗体由来のフレームワーク領域および第２のヒトモノクローナル抗体由来のＣＤＲ領域を含む、請求項９６に記載のキメラ抗体。
【請求項１００】
前記キメラ抗体が、第１のヒトモノクローナル抗体由来のフレームワーク領域および第２のヒトモノクローナル抗体由来のＣＤＲ領域を含む、請求項９４〜９５のいずれか１項に記載のキメラ抗体。
【請求項１０１】
前記キメラ抗体が、少なくとも２つの異なるヒトモノクローナル抗体由来のＣＤＲ領域を含む、請求項９６に記載のキメラ抗体。
【請求項１０２】
前記キメラ抗体が、２重特異性である、請求項９６に記載のキメラ抗体。
【請求項１０３】
前記キメラ抗体が、２重特異性である、請求項９４〜９５のいずれか１項に記載のキメラ抗体。
【請求項１０４】
前記抗体またはその部分が誘導体化される、請求項１６に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１０５】
前記抗体またはその部分が誘導体化される、請求項３５に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１０６】
前記抗体またはその部分が誘導体化される、請求項１７〜１８、または５６のいずれか１項に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１０７】
前記抗体またはその部分が、ポリエチレングリコールを用いて、少なくとも１つのメチル基もしくはエチル基、または少なくとも１つの糖質部分を誘導体化される、請求項１０６に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１０８】
前記抗体またはその部分が、ポリエチレングリコールを用いて、少なくとも１つのメチル基もしくはエチル基、または少なくとも１つの糖質部分を誘導体化される、請求項１０３〜１０４のいずれか１項に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１０９】
請求項１〜１８、２０〜２３、３０〜３８、４０〜４４、５１〜５７、５９〜７０、または７７のいずれか１項に記載の抗体またはその部分、および薬学的に受容可能なキャリアを含む、組成物。
【請求項１１０】
少なくとも１つのさらなる治療剤をさらに含む、請求項１０９に記載の組成物。
【請求項１１１】
１つ以上の前記さらなる治療剤が、抗ウイルス剤、免疫調節剤、および免疫刺激剤からなる群より選択される、請求項１１０に記載の組成物。
【請求項１１２】
請求項１〜１８、２０〜２３、３０〜３８、４０〜４４、５１〜５７、５９〜７０、または７７のいずれか１項に記載の抗体またはその部分、ならびにそれらに対する薬学的に受容可能な塩を含む容器を含む、キット。
【請求項１１３】
使用のための指示書をさらに含む、請求項１１２に記載のキット。
【請求項１１４】
別の抗ウイルス剤、免疫調節剤、または免疫刺激剤、またはそれらの組み合わせをさらに含む、請求項１１２〜１１３のいずれか１項に記載のキット。
【請求項１１５】
ＨＩＶ−１感染を患う患者を処置するための方法であって、請求項１〜１８、２０〜２３、３０〜３８、４０〜４４、５１〜５７、５９〜７０、または７７のいずれか１項に記載の抗体、またはその抗原結合部分を投与する工程を包含する、方法。
【請求項１１６】
被験体におけるＨＩＶ−１感染を予防または阻害する方法であって、請求項１〜１８、２０〜２３、３０〜３８、４０〜４４、５１〜５７、５９〜７０、または７７のいずれか１項に記載の抗体、またはその抗原結合部分を投与する工程を包含する、方法。
【請求項１１７】
被験体におけるＨＩＶ−１感染により引き起こされる状態を予防するか、またはその重篤度を低減する方法であって、請求項１〜１８、２０〜２３、３０〜３８、４０〜４４、５１〜５７、５９〜７０、または７７のいずれか１項に記載の抗体、またはその抗原結合部分を投与する工程を包含する、方法。
【請求項１１８】
Ｔ細胞に結合するＨＩＶ−１ウイルスを阻害する方法であって、該ウイルスを請求項１〜１８、２０〜２３、３０〜３８、４０〜４４、５１〜５７、５９〜７０、または７７のいずれか１項に記載の抗体、またはその抗原結合部分と接触させる工程を包含する、方法。
【請求項１１９】
Ｔ細胞のＨＩＶ−１ウイルス感染を阻害する方法であって、該ウイルスを請求項１〜１８、２０〜２３、３０〜３８、４０〜４４、５１〜５７、５９〜７０、または７７のいずれか１項に記載の抗体、またはその抗原結合部分と接触させる工程を包含する、方法。
【請求項１２０】
ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０媒介結合を阻害する方法であって、ｇｐ１２０−発現ＨＩＶ−１ウイルスを請求項１〜１８、２０〜２３、３０〜３８、４０〜４４、５１〜５７、５９〜７０、または７７のいずれか１項に記載の抗体、またはその抗原結合部分と接触させる工程を包含する、方法。
【請求項１２１】
１つ以上のさらなる治療剤を投与する工程をさらに包含する、請求項１１５〜１２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２２】
前記１つ以上の治療剤が、抗ウイルス剤、免疫調節剤、および免疫刺激剤からなる群より選択される、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２３】
前記投与工程が、静脈内経路、皮下経路、筋肉内経路、経口経路、肺吸入経路、経皮経路、または非経口経路を介して行われる、請求項１１５〜１１７または１２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２４】
前記抗体またはその抗原結合部分が、標識されるか、または融合タンパク質の部分である、請求項１１５〜１２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２５】
前記抗体または抗原結合部分が、放射標識を用いて標識されるか、免疫毒素に連結されるか、または毒素に連結される、請求項１２４に記載の方法。
【請求項１２６】
前記融合タンパク質が、毒素ペプチドを含む、請求項１２４に記載の方法。
【請求項１２７】
ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０に特異的に結合する、ヒト抗体を産生する方法であって、以下の工程：
ａ）  非ヒト哺乳動物をＨＩＶ−１  ｇｐ１２０抗原で免疫する工程であって、少なくともいくつかの該非ヒト哺乳動物のＢ細胞が、ヒト免疫グロブリン重鎖およびヒト免疫グロブリン軽鎖を産生し得る、工程；および
ｂ）  ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０に特異的に結合する該ヒト抗体を、該非ヒト哺乳動物から収集する工程、
を包含する、方法。
【請求項１２８】
前記ｇｐ１２０抗原が、組換えｇｐ１２０、ｇｐ１２０ペプチド、ｇｐ１２０ポリペプチド、組換えｇｐ１２０を含む融合タンパク質、ｇｐ１２０ペプチドを含む融合タンパク質、およびｇｐ１２０ポリペプチドを含む融合タンパク質からなる群より選択される、請求項１２７に記載の方法。
【請求項１２９】
請求項１２７に記載の方法であって、以下の工程：
ａ）  ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０に特異的に結合する前記ヒト抗体を産生する細胞を、前記非ヒト哺乳動物から単離する工程；
ｂ）  該ヒト抗体産生細胞を不死化する工程；および
ｃ）  ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０に特異的に結合する該ヒト抗体を、該不死化細胞から収集する工程、
をさらに包含する、方法。
【請求項１３０】
請求項１２７に記載の方法であって、以下の工程：
ａ）  ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０に特異的に結合する前記ヒト抗体を産生する細胞を、前記非ヒト哺乳動物から単離する工程；
ｂ）  該抗体をコードする遺伝子を、該単離された細胞から単離する工程；
ｃ）  工程ｂ）において単離された該遺伝子を、宿主細胞に導入する工程；および
ｄ）  ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０に特異的に結合する該ヒト抗体を、該宿主細胞から収集する工程、
をさらに包含する、方法。
【請求項１３１】
前記非ヒト哺乳動物がマウスである、請求項１２７〜１３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３２】
前記非ヒト哺乳動物が、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）マウスである、請求項１２７〜１３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３３】
ＨＩＶ−１ワクチンとしての使用のためのＨＩＶ−１  ｇｐ１２０の領域を同定するための方法であって、以下の工程：
ａ）  非ヒト哺乳動物において、ヒトモノクローナル抗体を産生し、そしてｇｐ１２０に結合しかつＨＩＶ−１に対する中和活性を有する該非ヒトモノクローナル抗体を単離する工程；および
ｂ）  該抗体により結合される該ｇｐ１２０上のエピトープを同定する工程、
を包含する、方法。
【請求項１３４】
前記ヒト抗体がモノクローナル抗体である、請求項１３３に記載の方法。
【請求項１３５】
請求項１〜１８、２０〜２３、３０〜３８、４０〜４４、５１〜５７、５９〜７０、または７７のいずれか１項に記載の抗体を産生する、単離された細胞株。
【請求項１３６】
ハイブリドーマである、請求項１３５に記載の細胞株。
【請求項１３７】
ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００１により指定されるハイブリドーマにより分泌される、３５Ｄ１０／Ｄ２、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００６により指定されるハイブリドーマにより分泌される、４０Ｈ２／Ｃ７、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００５により指定されるハイブリドーマにより分泌される、４３Ａ３／Ｅ４、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００７により指定されるハイブリドーマにより分泌される、４３Ｃ７／Ｂ９、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００２により指定されるハイブリドーマにより分泌される、４５Ｄ１／Ｂ７、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００８により指定されるハイブリドーマにより分泌される、４６Ｅ３／Ｅ６、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００３により指定されるハイブリドーマにより分泌される、５８Ｅ１／Ｂ３、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００４により指定されるハイブリドーマにより分泌される、６４Ｂ９／Ａ６、ＡＴＣＣ受託番号＿＿＿＿＿＿により指定されるハイブリドーマにより分泌される、８Ｅ１１／Ａ８、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００９により指定されるハイブリドーマにより分泌される、８．２７．３、およびＡＴＣＣ受託番号＿＿＿＿＿＿により指定されるハイブリドーマにより分泌される、８．２２．２からなる群より選択される抗体を産生する、請求項１３６に記載のハイブリドーマ。
【請求項１３８】
ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０に特異的に結合する、ヒト抗体を発現する、非ヒト哺乳動物。
【請求項１３９】
請求項２０に記載の抗体により結合される抗原に対する結合について、請求項２０に記載の抗体と競合する、請求項１に記載のヒト抗体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、国立衛生研究所によって与えられたＰＨＳ助成金番号ＡＩ４６２８３のもと、政府の援助により部分的になされた。政府は本発明において一定の権利を有し得る。
【０００２】
（発明の技術分野）
本発明は、ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０タンパク質に特異的に結合しかつＨＩＶ−１を中和する活性を有する新規の抗体およびその抗原結合部位に関する。
【０００３】
本発明はまた、本発明の抗体を産生する細胞株に関する。本発明はさらに、組成物、または本発明の抗体もしくはその抗原結合部位を含むキットに関する。
【０００４】
本発明はさらに、本発明の抗体を用いる方法に関する。
【０００５】
本発明はまた、本発明の抗体を作製する新規の方法に関する。特定の実施形態において、その方法は非ヒトトランスジェニック動物を用いる工程を含む。
【０００６】
本発明はさらに、ＨＩＶ−１ワクチンとして使用するためのｇｐ１２０の領域を同定する方法に関する。
【背景技術】
【０００７】
（発明の背景）
ヒト免疫不全ウイルス１（「ＨＩＶ−１」）は後天性免疫不全症候群（「ＡＩＤＳ」）−−免疫系の破壊、特にＣＤ４＋Ｔ細胞の破壊によって特徴付けられる疾患、結果として日和見感染への感受性を伴う−−およびその前兆であるＡＩＤＳ関連複合体（「ＡＲＣ」）−−持続する全身性のリンパ節腫脹、熱ならびに体重減少のような症状によって特徴付けられる症候群−−に対する因子となる病原体である。
【０００８】
ＨＩＶ−１に対する臨床的に有益なモノクローナル抗体（Ｍａｂ）の開発に相当な関心があるにもかかわらず、このようなＭａｂはほとんど同定されていない。ヒトのモノクローナル抗体（ヒトＭａｂ）は、臨床的応用のためにげっ歯類のＭａｂより好ましい。しかし標準的方法であるＢ細胞のＥＢＶ形質転換またはファージディスプレイによるヒトのＭａｂ単離は非効率的で、そのため、初期単離物のＨＩＶ−１に対する中和活性を有するヒトＭａｂは少数しか同定されていない。免疫およびスクリーニングに使われる抗原の性質、ならびに免疫レジメンを操作する能力の不足もまた制限となっている。
【０００９】
ＨＩＶに対する有効なワクチンの開発は、ウイルス初期株の強力な中和を促進するＨＩＶエンベロープタンパク質、ｇｐ１２０およびｇｐ４１、を標的にするという制限された知識によって部分的に妨げられている。例えば、下記を参照のこと：Ｃａｏら（１９９５）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３２：２０１−２０８；Ｋｏｓｔｒｉｋｉｓら（１９９６）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７０：４４５−４５８；Ｍｏｏｇら（１９９７）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７１：３７３４−３７４１およびＰｒｉｎｃｅら（１９８７）Ｊ．Ｉｎｆ．Ｄｉｓ．１５６：２６８。幾人かの感染した人々の血清は初期単離物を強力に中和する抗体を含んでいる一方、既存のＨＩＶワクチンの候補は同様の活性を誘導することができなかった。例えば下記を参照のこと：Ｂｅｒｍａｎら（１９９７）Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１７６：３８４−３９７；Ｂｏｌｏｇｎｅｓｉ  ａｌ．（１９９８）Ｎａｔｕｒｅ  ３９１：６３８−６３９；Ｃｏｎｎｏｒら（１９９８）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ７２：１５５２−１５７６；Ｇｒａｈａｍ  ＢＳら（１９９８）Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１７７：３１０−３１９；Ｋａｈｎ，Ｊ．ら（１９９５）Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１７１：１３４３−１３４７；Ｍａｓｃｏｌａ，Ｊ．Ｒ．ら（１９９６）Ｊ．Ｉｎｆ．Ｄｉｓ．１７３：３４０−３４８およびＭｃＥｌｒａｔｈ，Ｍ．ら（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．９３：３９７２−３９９７。このような標的を同定する重要なアプローチは、ウイルス感染を強力に中和できるＭａｂを単離することである。しかし、相当な努力にも関わらず、この種のＭａｂは比較的少数しか単離されていない。
【００１０】
ほんの少数のヒトのモノクローナル抗体が、臨床的な単離物に対して強力な中和活性を保持していると述べられている（Ｂｕｒｔｏｎ，Ｄ．Ｒ．ら（１９９４）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６６：１０２４−１０２７；Ｍｏｏｒｅ，Ｊ．ら（１９９５）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６９：１０１−１０９；Ｔｒｋｏｌａ，Ａ．ら（１９９５）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６９：６６０９−６６１７およびＴｒｋｏｌａ，Ａ．，Ｍ．ら（１９９６）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７０：１１００−１１０８）、ならびに規定どおり、これらの抗体ですらマクロファージ親和性の単離物より実験室適応のＴ細胞親和性の株を優先的に中和した。下記を参照のこと：Ｈｏｎｎｅｎ，Ｗ．Ｊ．ら（１９９６）ｐ．２８９−２９７，Ｉｎ  Ｅ．Ｎ．Ｆ．Ｂｒｏｗｎ  ａｎｄ  Ｄ．Ｂｕｒｔｏｎ  ａｎｄ  Ｊ．Ｍｅｋａｌａｎｏｓ（ｅｄ．），Ｖａｃｃｉｎｅｓ  １９９６；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ。モノクローナル抗体（「Ｍａｂ」）の組み合わせは共同的に中和することが証明されている（Ｖｉｊｈ−Ｗａｒｒｉｅｒ（１９９６）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７０：４４６６−４４７３；Ｌｉら（１９９８）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７２：３２３５−３２４０）。しかしこれらの効果は相対的にあまり大きくない。幾人かのヒトの血清の広い中和能力と、特徴付けられたＭａｂの狭くおよびそれ程強力でない活性の間にある矛盾は、臨床的に関連するＨＩＶ−１株の表面上のエピトープを中和する能力範囲が完全には明らかとなっていないことを示唆している。
【００１１】
もっとも有効なヒトのＭａｂは、ＨＩＶ−１感染患者から得られたＢ細胞のＥＢＶ形質転換、それに続くヒト−マウスハイブリドーマ細胞との融合（比較的効率の悪いプロセスである）により得られる。これらの研究で同定された中和標的はかなり制限されており、およびＶ３ループにおけるエピトープ（Ｃｏｎｌｅｙ，Ａ．Ｊ．ら（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．９１：３３４８−３３５２；Ｍｕｓｔｅｒ，Ｔら（１９９３）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６７：６６４２−６６４７；Ｔｉｌｌｅｙ，Ｓ．Ａ．ら（１９９２）ＡＩＤＳ  Ｒｅｓ．Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ．８：４６１−４６７およびＴｒｋｏｌａ，Ａ．ら（１９９５）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６９：６６０９−６６１７）、ＣＤ４結合ドメイン（Ｃｏｒｄｅｌｌ，Ｊ．ら（１９９１）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  １８５：７２−７９；Ｐｏｓｎｅｒ，Ｍ．Ｒ．ら（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４６：４３２５−４３３２；Ｐｏｔｔｓ，Ｂ．Ｊ．ら（１９９３）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  １９７：４１５−４１９およびＴｉｌｌｅｙ，Ｓ．Ａ．ら（１９９１）Ｒｅｓ．Ｖｉｒｏｌ．１４２：２４７−２５９）、立体的Ｖ２エピトープ（Ｇｏｒｎｙら（１９９４）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６８：８３１２−８３２０）；ｇｐ４１上の１つのエピトープ（２Ｆ５）（Ｃｏｎｌｅｙ，Ａ．Ｊ．ら（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．９１：３３４８−３３５２；Ｍｕｓｔｅｒ，Ｔ．ら（１９９４）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６８：４０３１−４０３４およびＴｒｋｏｌａ，Ａ．ら（１９９５）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６９：６６０９−６６１７）ならびにｇｐ１２０におけるあまり規定されていないエピトープ（２Ｇ１２）（Ｔｒｋｏｌａ，Ａ．ら（１９９６）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７０：１１００−１１０８）を含む。さらに２つのヒトのＭａｂは、ＣＤ４のｇｐ１２０への結合で誘導される立体的エピトープを同定し（Ｔｈａｌｉら（１９９３）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６７：３９７８−３９８８）、いくつかの単離物に対して中程度の中和活性も有していることが記載されていた。感染患者の骨髄細胞由来の組換えＦａｂのファージディスプレイは、ＣＤ４結合部位に対して主に向けられたＭａｂの単離を可能にした（Ｂｕｒｔｏｎら（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８８：１０１３４−１０１３７；Ｄｉｔｚｅｌら（１９９５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４：８９３−９０６；Ｒｏｂｅｎら（１９９４）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６８：４８２１−４８２８）。これらのうち最も強力かつ交差反応性のものは、ＣＤ４−ｂｓとＶ２領域が重なり合う独特のｇｐ１２０のエピトープに対して指向されるＩｇＧｂ１２であった（Ｂｕｒｔｏｎ，Ｄ．Ｒ．ら（１９９４）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６６：１０２４−１０２７およびＧａｕｄｕｉｎら（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ３：１３８９−１３９３）。しかし、この方法の技術的な違いが、その広がる応用および有用性を制限している。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１２】
（発明の要旨）
本発明は、いくつかの実施形態において抗体、ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０タンパク質に特異的に結合し、そしてＨＩＶ−１中和活性を有する（好ましくはヒトの抗体）を提供することにより上記で確認された問題を解決する。ここで上記抗体は、ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０のＶ１／Ｖ２ドメイン上のエピトープを認識する。いくつかの実施形態において上記のエピトープは、Ｖ１ループにおける配列の存在に依存する。別の実施形態では、上記のエピトープはＶ２ドメインにおける配列の存在に依存する。
【００１３】
本発明はまた、ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０のＶ３領域上のエピトープに特異的に結合する、単離されたヒトのモノクローナル抗体を提供する。ここで、上記抗体は、配列番号９（ＨＩＶ−１  ＭＮ株のｇｐ１２０のＶ３アミノ酸１−２０）からなるペプチドに、特異的には結合しない。
【００１４】
本発明はまた、生産する細胞株および本発明の抗体をコードする核酸を提供する。本発明はまた、薬学的組成物および本発明の抗体を含むキットを提供する。
【００１５】
本発明はさらに、ＨＩＶ−に感染した被験者を処置するために本発明の抗体を用いる方法を提供する。本発明はまた、患者がＨＩＶ−１に感染してしまうのを防ぐために本発明の抗体を使用する方法を提供する。本発明はさらに、被験者においてＨＩＶ−１感染を検出するために本発明の抗体を使用する方法を提供する。
【００１６】
本発明はまた、トランスジェニックの非ヒト哺乳動物を用いてＨＩＶ−１に対するヒトのモノクローナル抗体を作製する方法を提供する。いくつかの実施形態において、この哺乳動物はヒトの抗体をつくるトランスジェニックマウスである。
【００１７】
本発明はまた、ＨＩＶ−１ワクチンとして使用するためにＨＩＶ−１  ｇｐ１２０上の領域を同定する方法を提供する。
【００１８】
本発明の前述および他の目的、特徴および利点ならびに本発明自体が、好ましい実施形態の次のような記載からより完全に理解される。
【００１９】
（発明の詳細な説明）
（定義および一般的技術）
本明細書中で他に定義されない限り、本発明に関して用いられる科学用語および専門用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有する。さらに文脈によって他に要求されない限り、単数の用語は複数を含んでおり、そして複数の用語は単数を含む。一般的に、本明細書中に記載される細胞および組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学、ウイルス学ならびにタンパク質化学および核酸化学ならびにハイブリダイゼーションに関連して使われる命名法およびこれらの技術は当該分野において周知であり、かつ一般的に使われるものである。他に示されない限り、本発明の方法および技術は、当該分野で周知の慣習的な方法によって、そして本明細書を通じて引用および考察されている、様々の一般的参考文献およびより特定の参考文献において記載されるように、一般的に実施される。例えば下記を参照のこと：Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，第２版，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９）およびＡｕｓｕｂｅｌら，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ（１９９２）、ならびにＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９９０）、これらは参考として本明細書中に援用される。酵素反応および精製技術は、一般的に当該分野で達成されるように、または本明細書中に記載されるように、製造業者の仕様書に従って実施される。本明細書中に記載される分析化学、合成有機化学および医化学および薬化学に関して用いられる命名法ならびにこれらの研究室の手順および技術は、当該分野で周知であり、かつ一般的に当該分野で使われているものである。標準的技術は、化学合成、化学分析、薬学的調整物、処方物、および送達ならびに患者の処置について用いられる。
【００２０】
以下の用語は、他に示されない限り以下の意味を有すると理解されるべきである。
【００２１】
用語「ポリペプチド」は、ネイティブまたは人工のタンパク質、タンパク質フラグメントおよびタンパク質配列のポリペプチドアナログを包含する。本発明に従う好ましいポリペプチドは、ヒト重鎖免疫グロブリン分子およびヒト軽鎖免疫グロブリン分子ならびに重鎖免疫グロブリン分子とκ軽鎖免疫グロブリン分子のような軽鎖免疫グロブリン分子とを含む組み合わせによって形成される抗体分子、そしてこれらのフラグメントおよびアナログを含む。
【００２２】
用語「単離されたタンパク質」または「単離されたポリペプチド」とは、その起源または誘導物の供給の源によって、（１）その天然の状態において付随する、天然に関連する成分に付随しない、（２）同種由来の他のタンパク質を含まない、（３）異なった種由来の細胞によって発現される、または（４）天然には存在しない、タンパク質またはポリペプチドである。従って、化学的に合成されたポリペプチドまたはそれが天然に起源する細胞とは異なった細胞系において合成されたポリペプチドは、その天然に関連する成分から「単離」される。タンパク質またはポリペプチドはまた、当該分野で周知のタンパク質精製技術を使用して天然に関連する成分を実質的には含まないようにされ得る。
【００２３】
サンプルの少なくとも約６０〜７５％が１つの種のポリペプチドを示す場合に、タンパク質またはポリペプチドは、「実質的に純粋」、「実質的に均質」または「実質的に精製される」。ポリペプチドまたはタンパク質は、モノマーまたはポリマーであり得る。実質的に純粋なポリペプチドまたはタンパク質は、代表的には約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％ｗ／ｗのタンパク質サンプルを含み、より通常には約９５％、そして好ましくは９９％を超えて純粋である。タンパク質の純度または均質性は、タンパク質サンプルのポリアクリルアミドゲル電気泳動、その後の、当該分野で周知の染色を用いるゲル染色の際の１本のポリペプチドバンドの視覚化のような、当該分野で周知の多くの手段によって示され得る。特定の目的のために、ＨＰＬＣまたは精製について当該分野で周知の他の手段を用いることにより、より高い解像度が提供され得る。
【００２４】
本明細書中で用いられる場合、用語「ポリペプチドフラグメント」は、アミノ末端および／またはカルボキシ末端の欠失を有するが、残りのアミノ酸配列は、天然に存在する配列における対応する位置と同一であるポリペプチドをいう。フラグメントは、代表的には少なくとも５、６、８または１０アミノ酸長、特定の実施形態では少なくとも１４アミノ酸長、より好ましくは少なくとも２０アミノ酸長、通常は少なくとも５０アミノ酸長または少なくとも７０アミノ酸長である。
【００２５】
本明細書中で用いられる場合、用語「ポリペプチドアナログ」は、アミノ酸配列の一部と実質的な同一性を有し、そして以下の特性のうち少なくとも１つを有する、少なくとも２５アミノ酸のセグメントから成るポリペプチドをいう：（１）適切な結合条件下でＨＩＶ−１  ｇｐ１２０と特異的に結合する、または（２）ＨＩＶ−１を中和する能力。代表的には、ポリペプチドアナログは、天然に存在する配列に関して保存的なアミノ酸置換（または挿入もしくは欠失）を含む。アナログは代表的には、少なくとも２０アミノ酸長、好ましくは少なくとも５０アミノ酸長またはさらに長く、そして全長の天然に存在するポリペプチドとしばしば同じ長さであり得る。
【００２６】
非ペプチドアナログは、鋳型ペプチドの特性と類似の特性を有する薬物として製薬産業において一般的に用いられている。これらの型の非ペプチド化合物は「ペプチド模倣物（ｐｅｐｔｉｄｅ  ｍｉｍｅｔｉｃｓ）」または「ペプチド模倣物（ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃｓ）」と呼ばれる。Ｆａｕｃｈｅｒｅ，Ｊ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓ．１５：２９（１９８６）；ＶｅｂｅｒおよびＦｒｅｉｄｉｎｇｅｒ  ＴＩＮＳ  ３９２頁（１９８５）；ならびにＥｖａｎｓ  ら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３０：１２２９（１９８７）は、参考として本明細書中に援用される。このような化合物は、コンピューター分子モデリングの助けをかりてしばしば開発される。治療的に有用なペプチドに構造的に類似しているペプチド模倣物は、等価な治療効果または予防効果を生じるために使用され得る。一般的に、ペプチド模倣物は、ヒト抗体のような模範的ポリペプチド（すなわち、望ましい生化学的特性または薬理学的活性を有するポリペプチド）と構造的に類似しているが、当該分野で周知の方法により、−−ＣＨ２ＮＨ−−、−−ＣＨ２Ｓ−−、−−ＣＨ２−ＣＨ２−−、−−ＣＨ＝ＣＨ−−（シスおよびトランス）、−−ＣＯＣＨ２−−、−−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−−、および−ＣＨ２ＳＯ−−から成る群から選択される結合により必要に応じて置換された、１つ以上のペプチド結合を有する。同じ型のＤ−アミノ酸（例えば、Ｌ−リジンの代わりにＤ−リジン）を用いる、コンセンサス配列の１つ以上のアミノ酸の系統的な置換はまた、より適切なペプチドを生成するために使用され得る。さらに、コンセンサス配列または実質的に同一のコンセンサス配列バリエーションを含む不自然なペプチドは、当該分野で公知の方法によって（ＲｉｚｏおよびＧｉｅｒａｓｃｈ  Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６１：３８７（１９９２）、これは、参考として本明細書中に援用される）；例えば、ペプチドを環化する分子内ジスルフィド結合を形成し得る内部のシステイン残基の付加によって、生成され得る。
【００２７】
「免疫グロブリン」は４量体分子である。天然に存在する免疫グロブリンにおいて、各４量体は、２つの同一対のポリペプチド鎖から構成され、各対は、１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）および１つの「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、主として抗原認識を担う、約１００〜１１０アミノ酸またはより多くのアミノ酸の可変領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、主にエフェクター機能を担う定常領域を規定する。ヒトの軽鎖は、κおよびλ軽鎖として分類される。重鎖の定常領域は、μ、Δ、γ、α、またはεとして分類され、そして抗体のアイソタイプを、それぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥと定義する。軽鎖および重鎖内の可変領域および定常領域は、約１２以上のアミノ酸の「Ｊ」領域によって連結され、重鎖もまた、約１０以上のアミノ酸の「Ｄ」領域を含む。一般的に下記を参照のこと：Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  第７章（Ｐａｕｌ，Ｗ．，編，第２版，Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））（全ての目的のために、その全体が参考として援用される）。インタクトな免疫グロブリンが一般的に少なくとも２つの結合部位を有するように、各軽／重鎖の対の可変領域が、抗体結合部位を形成する。
【００２８】
免疫グロブリン鎖は、３つの超可変領域（相補性決定領域すなわちＣＤＲとも呼ばれる）により連結され、比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）の同じ一般的構造を示す。各対の２つの鎖由来のＣＤＲは、フレームワーク領域によって整列され、特異的エピトープへの結合を可能にする。Ｎ末端からＣ末端、軽鎖および重鎖の両方は、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４を含む。各ドメインへのアミノ酸の割り当ては、Ｋａｂａｔ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９８７および１９９１））またはＣｈｏｔｈｉａ＆Ｌｅｓｋ  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７）；Ｃｈｏｔｈｉａら，Ｎａｔｕｒｅ３４２：８７８−８８３（１９８９）の定義に従う。
【００２９】
「抗体」は、インタクトな免疫グロブリンまたは特異的結合についてインタクトな抗体と競合するその抗原結合部分をいう。抗原結合部分は、組み換えＤＮＡ技術またはインタクトな抗体の酵素的開裂もしくは化学的開裂によって産生され得る。抗原結合部分は、とりわけ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｄＡｂおよび相補性決定領域（ＣＤＲ）フラグメント、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、キメラ抗体、ディアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）およびポリペプチドに対する特異的抗原の結合を与えるのに十分な免疫グロブリンの少なくとも一部を含むポリペプチドが挙げられる。Ｆａｂフラグメントは、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインから成る一価のフラグメントであり；Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、ヒンジ領域でジスルフィド結合によって連結された２つのＦａｂフラグメントを含む２価のフラグメントであり；Ｆｄフラグメントは、ＶＨおよびＣＨ１ドメインから成り；Ｆｖフラグメントは、抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインから成り；そしてｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄら，Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６，１９８９）は、ＶＨドメインから成る。単鎖抗体（ｓｃＦｖ）は、ＶＬおよびＶＨ領域が単一のタンパク質鎖として作製されることを可能にする合成のリンカーを介して、一価の分子を形成するように対形成される抗体である（Ｂｉｒｄら，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６，１９８８およびＨｕｓｔｏｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３，１９８８）。ディアボディは二価の二重特異的な抗体であり、ここでＶＨおよびＶＬドメインは、単一ポリペプチド鎖上に発現されているが、同じ鎖上の２つのドメイン間の対形成を可能にするには短すぎるリンカーを使用し、それによってドメインを別の鎖の相補的なドメインと対形成させ、２つの抗原結合部位を作製する。例えば下記を参照のこと：Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８，１９９３，およびＰｏｌｊａｋ，Ｒ．Ｊ．ら，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２：１１２１−１１２３．１９９４）。一つ以上のＣＤＲは、分子を免疫付着因子にするために、共有結合もしくは非共有結合のいずれかによって分子中に取込まれ得る。免疫接着因子は、より大きいポリペプチド鎖の一部としてＣＤＲを組込み得るか、ＣＤＲを別のポリペプチドに共有結合させ得るか、またはＣＤＲを非共有結合的に組込み得る。ＣＤＲは、免疫付着因子が目的の特定の抗原に特異的に結合するのを可能にする。
【００３０】
抗体は一つ以上の結合部位を有し得る。一つより多い結合部位が存在する場合、結合部位は互いに同一であっても異なってもよい。例えば、天然に存在する免疫グロブリンは、２つの同一の結合部位を有し、単鎖抗体またはＦａｂフラグメントは１つの結合部位を有する。一方、「二重特異的」または「二機能性」抗体は、２つの異なった結合部位を有する。
【００３１】
「単離された抗体」とは、（１）天然状態で付随する、天然に会合する成分（他の天然に会合する抗体を含む）に会合しないか、（２）同種由来の他のタンパク質を含まないか、（３）異なった種由来の細胞によって発現されるか、または（４）天然に存在しない、抗体である。単離された抗体の例としては、プロテインＡもしくはプロテインＧカラムを用いて、またはアフィニティーリガンドとしてｇｐ１２０を用いてアフィニティ精製された抗ＨＩＶ−１−ｇｐ１２０抗体、ハイブリドーマまたは他の細胞株によってインビトロで合成された抗ＨＩＶ−１−ｇｐ１２０抗体、およびトランスジェニックマウス由来の抗ＨＩＶ−１−ｇｐ１２０抗体が挙げられる。
【００３２】
用語「ヒト抗体」は、ヒト免疫グロブリン配列由来の１つ以上の可変領域および定常領域を有する全ての抗体を含む。これらの抗体は、下記に記載されるように様々な方法によって調製され得る。
【００３３】
「ヒト化抗体」は、非ヒト種由来の抗体であり、ここで重鎖および軽鎖のフレームワークおよび定常ドメイン中の特定のアミノ酸が、ヒトにおける免疫応答を回避または排除するために変異されている。あるいは、ヒト化抗体は、ヒト抗体由来の定常ドメインを非ヒト種の可変ドメインに融合することによって作製され得る。ヒト化抗体を作製する方法の例は、米国特許第６，０５４，２９７号、同第５，８８６，１５２号および同第５，８７７，２９３号に見出され得る。
【００３４】
用語「キメラ抗体」は、１つの抗体由来の１つ以上の領域および１つ以上の他の抗体由来の１つ以上の領域を含む抗体をいう。例えば、１つ以上のＣＤＲは、ヒト抗ＨＩＶ１抗体に由来する。あるいは、全てのＣＤＲは、ヒト抗ＨＩＶ１抗体由来である。あるいは、１つより多いヒト抗ＨＩＶ−１抗体由来のＣＤＲは、キメラ抗体において混合および一致される。例えば、キメラ抗体は、第一のヒト抗ＨＩＶ−１抗体の軽鎖由来のＣＤＲ（これは第２のヒトＨＩＶ−１抗体の軽鎖由来のＣＤＲ２およびＣＤＲ３と組み合わされ得る）を含み得、そして重鎖由来のＣＤＲは、第三の抗ＨＩＶ−１抗体に由来し得る。さらに、フレームワーク領域は、同じ抗ＨＩＶ−１抗体の１つか、１つ以上の異なったヒト抗体か、またはヒト化抗体に由来し得る。
【００３５】
本明細書中で用いられる場合、用語「表面プラスモン共鳴」は例えば、ＢＩＡｃｏｒｅシステム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ  ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ、ＳｗｅｄｅｎおよびＰｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）
を用いる、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度における変化の検出によって、リアルタイムの生体特異的相互作用の解析を可能にする光学的現象をいう。さらなる記載としては下記を参照のこと：Ｊｏｎｓｓｏｎ，Ｕ．ら，（１９９３）Ａｎｎ．Ｂｉｏｌ．Ｃｌｉｎ．５１：１９−２６；Ｊｏｎｓｓｏｎ，Ｕ．ら，（１９９１）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １１：６２０−６２７；Ｊｏｈｎｓｓｏｎ，Ｂ．ら，（１９９５）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．８：１２５−１３１；およびＪｏｈｎｓｏｎ，Ｂ．ら，（１９９１）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９８：２６８−２７７。
【００３６】
用語「Ｋｏｆｆ」は、抗体／抗原複合体からの抗体の解離に対するオフ速度（ｏｆｆ  ｒａｔｅ）定数をいう。
【００３７】
用語「Ｋｄ」は、特定の抗体−抗原相互作用の解離定数をいう。
【００３８】
抗体または免疫グロブリン分子のフラグメントまたはアナログは、本明細書の教示の後に、当業者により容易に調製され得る。好ましいアミノ末端およびカルボキシ末端のフラグメントまたはアナログは、機能的ドメインの境界近くで生じる。構造的および機能的ドメインは、ヌクレオチド配列および／またはアミノ酸配列のデータを、公または専有の配列データベースと比較することによって同定され得る。好ましくは、コンピューター化された比較方法は、公知の構造および／または機能の他のタンパク質において生じる配列モチーフまたは予想されるタンパク質コンフォメーションドメインを同定するために用いられる。公知の３次元構造に折り畳まれるタンパク質配列を同定する方法は、公知である。Ｂｏｗｉｅら，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５３：１６４（１９９１）。
【００３９】
好ましいアミノ酸置換は下記のものである：（１）タンパク質分解に対する感受性を下げる、（２）酸化に対する感受性を下げる、（３）タンパク質複合体の形成について結合親和性を変える、（４）結合親和性を変える、および（４）このようなアナログの他の物理化学的または機能的特性を与えるかまたは改変する。アナログは、天然に存在するペプチド配列以外の配列の様々な突然変異タンパク質を含み得る。例えば、単一または複数のアミノ酸置換（好ましくは、保存的アミノ酸置換）は、天然に存在する配列において（好ましくは分子間接触を形成するドメインの外側のポリペプチド部分）において作製され得る。保存的アミノ酸置換は、親配列の構造的特徴を実質的に変えるべきではない
（例えば、置換アミノ酸は、親配列に存在するヘッリクスを壊す傾向があるべきでないか、または親配列を特徴付ける他の型の２次構造を破壊すべきではない）。当該分野で認識されたポリペプチドの２次構造および３次構造の例は、以下に記載される：Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ（Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，編，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８４）；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｃ．ＢｒａｎｄｅｎおよびＪ．Ｔｏｏｚｅ，編，Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９９１））；ならびにＴｈｏｒｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｔ．Ｎａｔｕｒｅ  ３５４：１０５（１９９１）、これらは、各々、参考として本明細書中に援用される。
【００４０】
本明細書で用いられる場合、２０の通常のアミノ酸およびその省略形は、通常の使用に従う。Ｉｍｍｕｏｌｏｇｙ−Ａ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（第２版，Ｅ．Ｓ．ＧｏｌｕｂおよびＤ．Ｒ．Ｇｒｅｎ，編，Ｓｉｎａｕｅｒ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ，Ｍａｓｓ．（１９９１））を参照のこと、これは参考として本明細書中に援用される。２０の通常アミノ酸、α−置換アミノ酸、α-２置換アミノ酸、Ｎ-アルキルアミノ酸、乳酸、および他の非通常アミノ酸のような非天然アミノ酸の立体異性体（例えば、Ｄ−アミノ酸）はまた、本発明のポリペプチドに対して適切な成分であり得る。非通常アミノ酸の例としては：４-ヒドロキシプロリン、γ-カルボキシグルタミン酸、ε−Ｎ，Ｎ，Ｎ-トリメチルリジン、ε-Ｎ-アセチルリジン、Ｏ−ホスホセリン、Ｎ−アセチルリジン、Ｎ-ホルミルメチオニン、３−メチルヒスチジン、５−ヒドロキシリジン、ｓ-Ｎ-メチルアルギニン、ならびに他の類似アミノ酸およびイミノ酸（例えば４−ヒドロキシプロリン）が挙げられる。本明細書で用いられるポリペプチド表記において、標準な使用および慣例に従い、左側がアミノ末端方向および右側がカルボキシ末端方向である。
【００４１】
本明細書で述べられる場合、用語「ポリヌクレオチド」は、少なくとも１０塩基長のヌクレオチドの重合体（リボヌクレオチドもしくはデオキシヌクレオチドのいずれか）またはいずれかの型のヌクレオチドの修飾型を意味する。この用語は一本鎖および二本鎖型のＤＮＡを含む。
【００４２】
本明細書で用いられる場合、用語「単離ポリヌクレオチド」は、ゲノム、ｃＤＮＡ、もしくは合成源のポリヌクレオチド、またはそのいくつかの組み合わせを意味し、その起源によって「単離ポリペプチド」は、（１）その「単離ポリヌクレオチド」が天然で見い出だされるポリヌクレオチドの全てまたは一部分を付随していないか、（２）天然において連結していないポリヌクレオチドに、動作可能に連結しているか、または（３）より大きな配列の部分として天然に存在しない。
【００４３】
本明細書中で述べられる、用語「オリゴヌクレオチド」は、天然に存在するオリゴヌクレオチド鎖および天然に存在するオリゴヌクレオチド鎖と一つに連結された修飾ヌクレオチドならびに非天然のオリゴヌクレオチド鎖を含む。オリゴヌクレオチドは、２００塩基程度の長さを一般的に含むポリヌクレオチドの部分集合である。好ましいオリゴヌクレオチドは１０〜６０塩基長であり、最も好ましいくは１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０〜４０塩基長である。例えばプローブの場合、オリゴヌクレオチドは、通常一本鎖である；しかし例えば遺伝子変異体の構築において使用する場合；オリゴヌクレオチドは二本鎖であり得る。オリゴヌクレオチドはセンスまたはアンチセンスのオリゴヌクレオチドであり得る。
【００４４】
本明細書中で述べられる、用語「天然に存在するヌクレオチド」は、デオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチドを含む。本明細書中で述べられる、用語「修飾ヌクレオチド」は、修飾または置換された糖基などを有するヌクレオチドを含む。本明細書中で述べられる、用語「オリゴヌクレオチド鎖」は、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレノエート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｓｅｌｅｎｏａｔｅ）、ホスホロジセレノエート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｄｉｓｅｌｅｎｏａｔｅ）、ホスホロアニロチオエート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏａｎｉｌｏｔｈｉｏａｔｅ）、ホスホラニラデート（ｐｈｏｓｈｏｒａｎｉｌａｄａｔｅ）、ホスホロアミダイトなどのようなオリゴヌクレオチド鎖」を含む。例えば下記を参照のこと：ＬａＰｌａｎｃｈｅら，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１４：９０８１（１９８６）；Ｓｔｅｃら，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０６：６０７７（１９８４）；Ｓｔｅｉｎら，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１６：３２０９（１９８８）；Ｚｏｎら，Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ６：５３９（１９９１）；Ｚｏｎら，Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，８７−１０８頁（Ｆ．Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，編，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｅｎｇｌａｎｄ（１９９１））；Ｓｔｅｃら，米国特許第５，１５１，５１０号；ＵｈｌｍａｎｎおよびＰｅｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ９０：５４３（１９９０）。これらの文献の開示は、本明細書中に参考として援用される。所望の場合、オリゴヌクレオチドは、検出のための標識を含む。
【００４５】
他に特定されない限り、一本鎖ポリヌクレオチド配列の左末端は、５’末端であり；二本鎖ポリヌクレオチド配列の左方向は、５’方向といわれる。初期のＲＮＡ転写物の５’から３’への付加の方向は、転写方向といわれ；ＲＮＡと同一配列を有しそしてＲＮＡ転写物の５’末端に対して５’側である、ＤＮＡ鎖上の配列領域は、「上流配列」といわれ；ＲＮＡと同じ配列を有しそしてＲＮＡ転写物の３’末端に対して３’である、ＤＮＡ鎖上の配列領域が、「下流配列」といわれる。
【００４６】
「作動可能に連結された」配列は、目的の遺伝子と連続する発現制御配列およびトランス（ｉｎ  ｔｒａｎｓ）で作用するか、または目的の遺伝子を制御するための距離にある発現制御配列の両方を含む。本明細書で用いられる場合、用語「発現制御配列」は、連結されるコード配列の発現およびプロセシングをもたらすのに必要なポリヌクレオチド配列をいう。発現制御配列として、適切な転写開始配列、終了配列、プロモーター配列およびエンハンサー配列；スプライシングおよびポリアデニル化シグナルのような効率的なＲＮＡプロセシングシグナル；細胞質ｍＲＮＡを安定化する配列；効率的に翻訳を増強する配列（すなわち、コザックコンセンサス配列）；タンパク質の安定性を増強する配列；ならびに必要な場合、タンパク質の分泌を増強する配列が挙げられる。このような制御配列の性質は、宿主生物に依存して変化する；原核生物におけるこのような制御配列として、プロモーター、リボソーム結合部位および転写終止配列が一般的に挙げられる；真核生物におけるこのような制御配列として、プロモーターおよび転写終止配列が一般的に挙げられる。用語「制御配列」は、発現およびプロセシングに必須の全ての組成を最小限含み、そして利益な付加的な組成、例えばリーダー配列および融合パートナー配列、を含み得る。
【００４７】
本明細書で用いられる場合、用語「ベクター」は、連結される別の核酸を輸送し得る核酸分子をいうことが意図される。ベクターの１つの型は、「プラスミド」であり、プラスミドは付加的なＤＮＡセグメントが連結され得る、環状の二本鎖ＤＮＡループのことをいう。別の型のベクターは、ウイルスベクターであり、付加的なＤＮＡセグメントはウイルスゲノムに連結され得る。特定のベクターは導入された宿主細胞において自律的に複製し得る（例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソーム哺乳類ベクター）。他のベクター（例えば非エピソーム哺乳類ベクター）は、宿主細胞へ導入される際に宿主細胞のゲノムに組み込まれ得、それによって宿主ゲノムとともに複製し得る。さらに、特定のベクターは、作動可能に連結する遺伝子の発現を指示し得る。このようなベクターは本明細書において「組み換え発現ベクター」（または単に「発現ベクター」）という。一般的に組み換えＤＮＡ技術において有用な発現ベクターは、しばしばプラスミドの形態である。本明細書において、「プラスミド」および「ベクター」は、互換可能に使われ得るが、プラスミドは最も一般的に使用されるベクターの形態である。しかし、同等の機能を提供する本発明は、他の形態の発現ベクター、（例えばウイルスベクター（例えば複製できないレトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス）を含むことが意図される。
【００４８】
本明細書で使用される場合、用語「組み換え宿主細胞」（または単に「宿主細胞」）は、発現ベクターが導入される細胞をいうことが意図される。このような用語は、特定の対象細胞をいうのみではなくこのような細胞の子孫もいうことが意図されることが理解されるべきである。特定の修飾は、突然変異もしくは環境的影響のいずれかによって次の世代に生じ得るので、このような子孫は実際には親細胞と同一ではない可能性があるが、本明細書中で使われる場合、用語「宿主細胞」の範囲内に含まれる。
【００４９】
本明細書中でいわれる用語「選択的にハイブダイズする」は、検出可能および特異的な結合を意味する。本発明にしたがって、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチドおよびそれらのフラグメントは、ハイブリダイゼーション条件下および洗浄条件下（非特異的な核酸への、かなりの量の検出可能な結合を最小限にする条件）において核酸鎖に選択的にハイブリダイズする。「高いストリンジェンシー」または「高度にストリンジェント」な条件は、当該分野で公知であり、および本明細書中で考察されるように、選択的なハイブリダイゼーション条件を達成するために使われ得る。「高いストリンジェンシー」または「高度にストリンジェント」な条件の例は、ポリヌクレオチドを別のポリヌクレオチドとインキュベートする方法であって、１つのポリヌクレオチドが、６×ＳＳＰＥまたはＳＳＣ、５０％ホルムアミド、５×デンハルト試薬、０．５％ＳＤＳ、１００μｇ／ｍｌの変性サケ精子ＤＮＡのハイブリダイゼーション緩衝液において、４２℃のハイブリダイゼーション温度で１２〜１６時間、固体表面（例えばメンブレン）に貼り付け、その後、１×ＳＳＣ、０．５％ＳＤＳの洗浄緩衝液を用いて５５℃で２度洗浄する方法である。Ｓａｍｂｒｏｏｋら、前出、９．５０〜９．５５頁も参照のこと。
【００５０】
配列間で一部または完全に同一である場合、２つのアミノ酸配列は相同である。例えば、８５％の相同性は、２つの配列を最も一致するように整列する場合、８５％のアミノ酸が同一であることを意味する。ギャップ（２つの配列のいずれかを適合させる際の）は、一致を最大にする場ために認められる；５以下のギャップ長が好ましく、２以下のギャップ長がより望ましい。あるいはおよび好ましくは、この用語が本明細書で用いられる場合、２つのタンパク質配列（または少なくとも３０アミノ酸長のタンパク質配列由来のポリペプチド配列）が、突然変異データマトリックスを有するＡＬＩＧＮプログラムを用いて、５より大きい整列スコア（標準偏差単位）および６以上のギャップペナルティを有する場合、相同である。Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．，  Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，１０１〜１１０頁（第５巻，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ（１９７２））およびこの巻の付録２、１〜１０頁を参照のこと。ＡＬＩＧＮプログラムを用いて最適に配列させた際、アミノ酸配列が５０％以上同一であれば、２つの配列またはその部分は、より好ましく相同である。
【００５１】
用語「〜に対応する」は、ポリヌクレオチド配列が参考ポリヌクレオチド配列の全てもしくは一部と同一であること、またはポリヌクレオチド配列が参考ポリヌクレオチド配列と同一であることを意味するよう本明細書中で用いられる。対照的に、用語「〜に相補的」は、相補的な配列が参考ポリヌクレオチド配列の全てまたは一部と同一であることを意味するよう本明細書中で用いられる。説明のため、ヌクレオチド配列「ＴＡＴＡＣ］は、参照配列「ＴＡＴＡＣ」に対応しており、そして参照配列「ＧＴＡＴＡ」に相補的である。
【００５２】
次の用語は、２つ以上のポリヌクレオチドまたはアミノ酸配列間の配列関係を表すのに用いられる；「参照配列」、「比較ウインドウ」、「配列同一性」、配列同一性のパーセンテージ」および「実質的な同一性」。「参照配列」は、配列比較の基本として用いられる、定義された配列である；参照配列はより多いな配列（例えば、配列表で与えられる全長ｃＤＮＡもしくは遺伝子配列のセグメント）の部分集合であり得るか、または完全なｃＤＮＡもしくは遺伝子配列を含み得る。一般的に参照配列は、少なくとも１８ヌクレオチド長または６アミノ酸長、たびたび少なくとも２４ヌクレオチド長または８アミノ酸長、そしてしばしば少なくとも４８ヌクレオチド長または１６アミノ酸長である。２つのポリヌクレオチド配列またはアミノ酸配列は、それぞれ（１）２つの分子間で類似する配列（すなわち完全なポリヌクレオチド配列もしくは完全なアミノ酸配列の一部を含み得、（２）２つのポリヌクレオチド配列または２つのアミノ酸配列の間で、異なる配列をさらに含み得るので、２つ（もしくはより多く）の分子間の配列の比較は、配列の類似している局所領域を同定および比較するための「比較ウインドウ」上で２つの分子の配列を比較することによって代表的に行われる。本明細書中で用いられる場合、「比較ウインドウ」は、少なくとも１８の連続ポリヌクレオチド位置または６アミノ酸の概念的なセグメントである。そこでは、ポリヌクレオチド配列またはアミノ酸配列は、少なくとも１８の連続ヌクレオチド配列または６アミノ酸配列の参照配列と比較され得、そして比較ウインドウ中のポリヌクレオチド配列の部分は、２つの配列の最適な整列のため参照配列（参照配列は付加または欠失を含まない）と比較して２０パーセント以下の付加、欠失、置換など（すなわちギャップ）を含み得る。比較ウインドウを整列するための、配列の最適な整列は、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ  Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１）の局所的な相同性アルゴリズムによって、ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｈ  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）の相同性整列アルゴリズムによって、ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：２４４４（１９８８）の類似方法の探索によって、これらのアルゴリズムのコンピューター上での実行（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ７．０におけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡおよびＴＦＡＳＴＡ（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．），ＧｅｎｅｗｏｒｋｓもしくはＭａｃＶｅｃｔｏｒ  ｓｏｆｔｗａｒｅ  ｐａｃｋａｇｅ）によって、または検査によって行われ得、そして様々な方法により生じた最良の整列（すなわちコンピューターウインドウ上で最も高い相同性を生じる整列）が選択される。
【００５３】
用語「配列同一性」は、二つのポリヌクレオチド配列またはアミノ酸配列が、比較ウインドウ上で同一（すなわち、ヌクレオチド毎または残基毎の基準において）であることを意味する。用語「配列同一性のパーセンテージ」は、比較ウインドウ上で二つの最適に整列した配列を比較することによって計算され、同一の核酸塩基（例えば、Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、ＵもしくはＩ）または残基が、両方の配列中で生じる位置の数を決定して一致する位置の数を与え、比較ウインドウ上の位置の総数（つまりウインドウのサイズ）によって一致する位置の数を除算し、そしてその結果に１００をかけて配列同一性のパーセンテージを算出する。本明細書中で用いられる場合、用語「実質的な同一性」は、少なくとも１８ヌクレオチド（６アミノ酸）の位置の比較ウインドウ上、頻繁には少なくとも２４〜４８ヌクレオチド（８〜１６アミノ酸）の位置のウインドウ上の参照配列と比較した場合、少なくとも８５パーセントの配列同一性、好ましくは少なくとも９０パーセントから９５パーセントの配列同一性、より好ましくは少なくとも９８パーセントの配列同一性、より一般的には少なくとも９９パーセントの配列同一性を有する配列を含む。ポリヌクレオチド配列またはアミノ酸配列の特徴を示す。ここで、配列同一性のパーセンテージは、合計で比較ウインドウ上の参照配列の２０パーセント以下になる欠失または付加を含み得る、配列と参照配列を比較することによって計算される。参照配列はより大きな配列の部分集合であり得る。
【００５４】
ポリペプチドに適用する場合、用語「実質的な同一性」は、例えば、デフォルトのギャップウエイト（ｇａｐ  ｗｅｉｇｈｔ）を用いるＧＡＰプログラムまたはＢＥＳＴＦＩＴプログラムによって最適に整列される場合、２つのペプチド配列は、少なくとも８０パーセントの配列同一性、好ましくは少なくとも９０パーセントの配列同一性、さらに好ましくは少なくとも９５パーセントの配列同一性、なおさらに好ましくは少なくとも９８パーセントの配列同一性および最も好ましくは少なくとも９９パーセントの配列同一性を共有することを意味する。好ましくは、同一でない残基の位置は、保存的アミノ酸置換によって異なる。保存的アミノ酸置換とは、類似の側鎖を有する残基の互換性のことをいう。例えば、脂肪族の側鎖を有するアミノ酸群は、グリシン、アランン、バリン、ロイシンおよびイソロイシンであり；脂肪族−水酸基側鎖を有するアミノ酸群は、セリンおよびスレオニンであり；アミド含有側鎖を有するアミノ酸群は、アスパラギンおよびグルタミンであり；芳香族側鎖を有するアミノ酸群は、フェニルアラニン、チロシンおよびトリプトファンであり；塩基性側鎖を有するアミノ酸群は、リジン、アルギニンおよびヒスチジンであり；そして硫黄含有側鎖を有するアミノ酸群は、システインおよびメチオニンである。好ましい保存的アミノ酸置換群は：バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リジン−アルギニン、アラニン−バリン、グルタミン酸−アスパラギン酸およびアスパラギン−グルタミンである。
【００５５】
本明細書中で議論されるように、抗体または免疫グロブリン分子のアミノ酸配列におけるマイナーな改変は、このアミノ酸配列における改変が、少なくとも７５％、より好ましくは、少なくとも８０％、９０％、９５％、最も好ましくは９９％維持する限り、本発明によって含まれることが企図される。特に、保存的アミノ酸置換が、企図される。保存的置換は、その側鎖に関連するアミノ酸のファミリー内で生じる置換である。遺伝的にコードされるアミノ酸は、一般に、以下のファミリーに分類される：（１）酸性＝アスパラギン酸、グルタミン酸；（２）塩基性＝リジン、アルギニン、ヒスチジン；（３）非極性＝アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン；および（４）非荷電極性＝グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、トレオニン、チロシン。より好ましいファミリーは、以下である：セリンおよびトレオニンは、脂肪族−ヒドロキシファミリーであり；アスパラギンおよびグルタミンは、アミド含有ファミリーであり；アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシンは、脂肪族ファミリーであり；そしてフェニルアラニン、トリプトファンおよびチロシンは、芳香族ファミリーである。例えば、ロイシンのイソロイシンまたはバリンとの単離された置換、アスパラギン酸のグルタミン酸との単離された置換、トレオニンのセリンとの単離された置換、またはあるアミノ酸の構造的に関連するアミノ酸との類似の置換について、特にその置換がフレームワーク部位内のアミノ酸を含まない場合、生じる分子の結合または特性に対する主要な効果を有さないことを予想することは、妥当である。アミノ酸変化が機能的ペプチドを生じるか否かは、ポリペプチド誘導体の比活性をアッセイすることによって容易に決定され得る。アッセイは、本明細書中で詳細に記載される。
【００５６】
本明細書中で使用される場合、用語「標識」または「標識される（標識された）」とは、抗体における別の分子の組込みをいう。１つの実施形態において、標識は、検出可能なマーカー（例えば、放射標識されたアミノ酸の組込み、あるいは、印を付けられたアビジン（例えば、光学的方法または比色法によって検出され得る蛍光マーカーまたは酵素活性を含有するストレプトアビジン）によって検出され得るビオチン化部分のポリペプチドへの結合）である。別の実施形態において、標識またはマーカーは、治療的（例えば、薬物結合体または毒素）であり得る。ポリペプチドおよび糖タンパク質を標識する種々の方法は、当該分野において公知であり、かつ使用され得る。ポリペプチドに対する標識の例としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：放射性同位元素または放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、１５Ｎ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ）、蛍光標識（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニド、蛍光体）、酵素標識（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）、化学発光マーカー、ビオチン化基、二次レポーターによって認識される予め決定されたポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体に対する結合部位、金属結合ドメインエピトープタグ）、磁気因子（例えば、ガドリニウムキレート）、毒素（例えば、百日咳毒素、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、エチジウムブロミド、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトザントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロールおよびピューロマイシン、ならびにこれらのアナログまたはホモログ）。いくつかの実施形態において、標識は、潜在的な立体障害を低減させるために、種々の長さのスペーサーアームによって結合される。
【００５７】
用語「被験体」は、ヒトおよび非ヒト動物被験体を含む。患者は、被験体である。
【００５８】
本明細書中で使用される場合、「線状エピトープ」は、タンパク質中で連続するアミノ酸配列上に存在するエピトープとして規定され、そして約３５アミノ酸以下、より好ましくは２０アミノ酸以下、さらにより好ましくは１５アミノ酸以下である合成ペプチド上のその存在によって同定される。
【００５９】
「ジスルフィド依存的エピトープ」は、ＤＴＴまたは関連の還元剤を用いるｇｐ１２０の還元によって破壊されるものである。線状エピトープは、ジスルフィドに依存するエピトープであり得る。
【００６０】
本明細書および特許請求の範囲を通じて、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」または語尾変化（例えば、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、決められた整数または整数の群の包含を意見するが、他の任意の整数または整数の群の除外は意見しないことが理解される。
【００６１】
（ＨＩＶ−Ｉ  ｅｎｖ遺伝子）
ＨＩＶ−Ｉ  ｅｎｖ遺伝子は、最初の翻訳タンパク質であるｇｐ１６０をコードする。これは、２つのサブユニット（表面サブユニット（ＳＵまたはｇｐ１２０）または膜貫通サブユニット（ＴＭまたはｇｐ４１））へタンパク質分解処理される。これらのサブユニットは、ネイティブなビリオン中で三量体構造として存在するヘテロダイマーに、非共有結合的に結合されると考えられている。中和ｍａｂは、ＨＩＶ−Ｉ  ｅｎｖ遺伝子サブユニットのいずれかの上に存在するエピトープに対して指向され得る。さらに、このようなエピトープのいくつかは、ｇｐ１２０−ｇｐ４１ヘテロダイマー上、またはこれらのヘテロダイマーの三量体複合体上に独自に存在し得る。特定の中和エピトープは、その細胞表面レセプターＣＤ４へのｇｐ１２０の結合によって誘導されるコンフォーメーションの再配列の際に選択的または排他的に曝露され得る。さらに、さらなるエピトープは、ｇｐ１２０またはｇｐ１２０−ＣＤ４の、二次レセプターであるＣＸＣＲ４またはＣＣＲ５のうちの１つとの複合体化の際に形成され得る。これらの全ては、本出願中に記載される方法によって作製される抗体の標的であり得、そして本発明の抗体を作製するための免疫原として使用され得る。また、オリゴマーＥｎｖ複合体（例えば、最近記載された、安定化された三量体形態のＨＩＶ−１  Ｅｎｖタンパク質（Ｂｉｎｌｅｙら、（２０００）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７４：６２７−６４３、Ｙａｎｇ，Ｘ．ら、（２０００）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７４：５７１６−５７２５）、またはウイルス粒子または細胞表面上に発現されるネイティブなＥｎｖ複合体が、免疫原として使用され得る。
【００６２】
ＨＩＶ−Ｉ  ｅｎｖ遺伝子は、任意のＨＩＶ−１株またはクローン由来であり得、任意のクレードおよび単離物由来の株またはクローンを含む。これらのｅｎｖ遺伝子が由来するウイルスは、最初の単離物または研究室適合した単離物であり得、そしてこれらのウイルスのｇｐ１２０は、ＣＸＣＲ４コレセプター、ＣＣＲ５コレセプターと選択的に相互作用し得るか、またはコレセプターとして異なるケモカインレセプターを利用し得る。特定の実施形態において、ｇｐ１２０は、例えば、ＳＦ１６２であり得る最初のクレードＢ単離物由来である。
【００６３】
（ヒト抗体および抗体のヒト化）
ヒト抗体は、マウスまたはラットの可変領域および／もしくは定常領域を有する抗体に関連する特定の問題を回避する。このようなマウスまたはラット由来のタンパク質の存在は、抗体の迅速なクリアランスを導き得るか、または患者による抗体に対する免疫応答の発生を導き得る。１つの実施形態において、本発明は、ヒト化抗ＨＩＶ−１−ｇｐ１２０抗体を提供する。別の実施形態において、本発明は、げっ歯類の免疫を介して完全なヒト抗ＨＩＶ−１−ｇｐ１２０抗体を提供する。ここで、ヒト免疫グロブリン遺伝子は、げっ歯類が完全なヒト抗体を産生するように導入される。完全なヒト抗体は、マウスまたはマウス誘導体化Ｍａｂに固有の免疫原性応答およびアレルギー性応答を最小化して、これにより、投与された抗体の効力および安全性を増加させることが、期待される。完全なヒト抗体の使用は、抗体の反復投与が必要とされ得る種々のヒト疾患（例えば、ＨＩＶ−１感染）の処置において実質的な利点を提供することが期待され得る。
【００６４】
（抗体の産生方法および抗体産生細胞株免疫化方法）
本発明の１つの実施形態において、ヒト抗体は、非ヒト動物を免疫化することによって産生され、この非ヒト動物の細胞のいくつかは、ヒト免疫グロブリン重鎖の遺伝子座および／または軽鎖の遺伝子座（とりわけ、ｇｐ１２０抗原、ｇｐ４１抗原、ｇｐ１２０−ｇｐ４１へテロダイマー、これらのヘテロダイマーの三量体複合体、あるいはｇｐ１２０および／またはｇｐ４１を含む任意の抗原、ならびに他の宿主細胞レセプタータンパク質）の全てまたは機能的部分を含む。好ましい実施形態において、非ヒトトランスジェニック動物は、ヒト抗体を作製する能力を有するが、その同族の抗体を作製する能力を欠損する。好ましい実施形態において、非ヒト動物は、哺乳動物である。より好ましい実施形態において、非ヒト動物は、マウスである。さらにより好ましい実施形態において、非ヒト動物は、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）動物である。
【００６５】
ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）動物は、操作された多くのマウス系統のいずれか１つであり、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の大きなフラグメントを含み（一般に、ヒト重鎖遺伝子座および軽鎖遺伝子座のいくつかまたは全てを含む）、そしてマウス抗体産生を欠損する。例えば、Ｇｒｅｅｎら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ７：１３−２１（１９９４）および米国特許第５，９１６，７７１号、同第５，９３９，５９８号、同第５，９８５，６１５号、同第５，９９８，２０９号、同第６，０７５，１８１号、同第６，０９１，００１号、同第６，１１４，５９８号および同第６，１３０，３６４号を参照のこと。また、ＷＯ９１／１０７４１（１９９１年７月２５日公開）、ＷＯ９４／０２６０２（１９９４年２月３日公開）、ＷＯ９６／３４０９６およびＷＯ９６／３３７３５（両方とも１９９６年１０月３１日公開）、ＷＯ９８／１６６５４（１９９８年４月２３日公開）、ＷＯ９８／２４８９３（１９９８年６月１１日公開）、ＷＯ９８／５０４３３（１９９８年１１月１２日公開）、ＷＯ９９／４５０３１（１９９９年９月１０日公開）、ＷＯ９９／５３０４９（１９９９年１０月２１日公開）、ＷＯ００／０９５６０（２０００年２月２４日公開）、およびＷＯ００／０３７５０４（２０００年６月２９日公開）を参照のこと。
【００６６】
初期のＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）動物系統は、ヒト重鎖遺伝子座およびκ軽鎖遺伝子座のそれぞれ２４５ｋｂおよび１９０ｋｂのサイズの生殖系構成フラグメント（これらは、コアの可変領域配列および定常領域配列を含む）を含む酵母人工染色体（ＹＡＣ）で操作された。Ｉｄ．続いて、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）動物は、ヒト重鎖遺伝子座およびκ軽鎖遺伝子座のメガベースサイズの生殖系構成ＹＡＣフラグメントの導入を介して、ヒト抗体レパートリーの約８０％を含む。Ｍｅｎｄｅｚら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １５：１４６−１５６（１９９７）、ＧｒｅｅｎおよびＪａｋｏｂｏｖｉｔｓ  Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８８：４８３−４９５（１９９８）ならびに米国特許出願番号０８／７５９，６２０（１９９６年１２月３日公開）（これらの開示は、本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）動物は、完全なヒト抗体の成体様のヒトレパートリーを産生し、そして抗原特異的ヒト抗体を生成する。
【００６７】
別の実施形態において、ヒト免疫グロブリン遺伝子の遺伝子座を含む非ヒト動物は、ヒト免疫グロブリンの「小遺伝子座（ｍｉｎｉｌｏｃｕｓ）」を有する動物である。小遺伝子座アプローチにおいて、外因性Ｉｇ遺伝子座は、Ｉｇ遺伝子座由来の個々の遺伝子の封入を介して模倣される。従って、１つ以上のＶＨ遺伝子、１つ以上のＤＨ遺伝子、１つ以上のＪＨ遺伝子、ｍｕ定常領域および第２の定常領域（好ましくは、γ定常領域）が、動物への挿入のための構築物中に形成される。このアプローチは、とりわけ、米国特許第５，５４５，８０７号、同第５，５４５，８０６号、同第５，６２５，８２５号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号、同第５，６６１，０１６号、同第５，７７０，４２９号、同第５，７８９，６５０号、同第５，８１４，３１８号、同第５，５９１，６６９号、同第５，６１２，２０５号、同第５，７２１，３６７号、同第５，７８９，２１５号および同第５，６４３，７６３号（本明細書中に参考として援用される）に記載される。
【００６８】
小遺伝子座アプローチの利点は、Ｉｇ遺伝子座の部分を含む構築物が生成され得そして動物に導入され得るという迅速性である。しかし、小遺伝子座アプローチの潜在的な不利益は、完全なＢ細胞の発達を支持するためには免疫グロブリンの多様性が十分ではないかもしれないので、その結果、抗体産生がより少ないかもしれないということである。
【００６９】
別の実施形態において、本発明は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を含む非ヒトトランスジェニック動物を免疫することにより、非ヒト非マウス動物由来の抗ＨＩＶ−１−ｇｐ１２０抗体を作製するための方法を提供する。以下に記載される方法を使用してこのような動物を生成し得る：米国特許第５，９１６，７７１号、同第５，９３９，５９８号、同第５，９８５，６１５号、同第５，９９８，２０９号、同第６，０７５，１８１号、同第６，０９１，００１号、同第６，１１４，５９８号および同第６，１３０，３６４号。以下もまた参照のこと：ＷＯ９１／１０７４１（１９９１年７月２５日公開）、ＷＯ９４／０２６０２（１９９４年２月３日公開）、ＷＯ９６／３４０９６およびＷＯ９６／３３７３５（両方とも１９９６年１０月３１日公開）、ＷＯ９８／１６６５４（１９９８年４月２３日公開）、ＷＯ９８／２４８９３（１９９８年６月１１日公開）、ＷＯ９８／５０４３３（１９９８年１１月１２日公開）、ＷＯ９９／４５０３１（１９９９年９月１０日公開）、ＷＯ９９／５３０４９（１９９９年１０月２１日公開）、ＷＯ００  ０９５６０（２０００年２月２４日公開）およびＷＯ００／０３７５０４（２０００年６月２９日公開）。これらの特許に開示される方法は、米国特許第５，９９４，６１９号に記載されるように改変され得る。好ましい実施形態において、非ヒト動物は、ラット、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウシまたはウマであり得る。
【００７０】
別の実施形態において、本発明は、非ヒト非トランスジェニック動物由来の抗ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０抗体を作製する方法を提供する。この実施形態において、非ヒト非トランスジェニック動物は、以下に記載されるような抗原を用いて免疫され、そして抗体は、これらの動物により産生される。抗体産生細胞は、これらの動物から単離され得、当該分野で公知の任意の手段により（例えば、好ましくは、骨髄腫と融合してハイブリドーマを生成することにより）不死化され得、その後、当業者に公知の技術および以下にさらに記載される技術を使用して、ヒトにおいて免疫応答を生じないように、「ヒト化抗体」を産生するように操作され得る。
【００７１】
（ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０に対するヒトモノクローナル抗体）
実施例１に示されるように、予め選択された免疫原を用いて、そして最適化された免疫プロトコル下でＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）を超免疫する能力により、標的ｇｐ１２０抗原に存在する複数のエピトープに対する多数の抗体を単離することが可能となり、従って、標的抗原を飽和する能力が改善される。
【００７２】
このストラテジーにより、ヒトＭａｂの供給源として現在使用される臨床サンプル中に希であるかまたは存在しない中和抗体が産生された。例として、少数のヒトのみが、保存されたＶ１／Ｖ２エピトープに対する抗体を産生する（Ｋａｙｍａｎ，Ｓ．Ｃ．ら、（１９９４）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６８：４００〜４１０を参照のこと）。これは、おそらく、これらの領域の比較的低い免疫原性またはウイルスの臨床株のウイルス感染および伝播の間のこれらのエピトープの不適切な提示に起因する。これとは対照的に、組換えｇｐ１２０（「ｒｇｐ１２０」）を用いて免疫されたＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）動物は、比較的高い力価の、Ｖ１／Ｖ２エピトープに対する抗体を産生した。
【００７３】
変異し脱グリコシル化したｒｇｐ１２０と可変ドメインとの融合タンパク質の利用は、隔離され得るかまたはネイティブタンパク質およびビリオンにおいてあまり免疫原性でないエピトープの免疫原性をさらに改善し得る。さらに、中和オリゴマー形態で細胞またはビリオンの表面上に発現されるネイティブウイルスエンベロープタンパク質の、免疫原としての使用およびスクリーニングアッセイにおける使用の両方は、精製された可溶性抗原上で十分に提示されないかまたは全く提示されない不安定かまたは準安定なエピトープの同定を可能にし得る。
【００７４】
ＨＩＶ中和活性を有する、Ｍａｂを産生するハイブリドーマを選択するために有効な機能的スクリーニングの利用により、入手可能な精製された抗原上で発現されないかもしれないネイティブエピトープに対して標的化された抗体の単離を可能にし得る。これらには、高次構造エピトープ、オリゴマー複合体に依存するエピトープ、またはＴＭタンパク質もしくはＥｎｖレセプター複合体上に位置するエピトープが含まれ得る。このようなアッセイの特異性により、より効率的なスクリーニングアッセイが可能になり得る。なぜなら、無関係な抗体（すなわち、非中和部位に対する抗体）は、回避され得、それにより現在可能なものよりも多数の融合物の分析が容易になるからである。
【００７５】
抗ＨＩＶ−１−ｇｐ１２０抗体を産生するために、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の一部または全てを含む非ヒトトランスジェニック動物は、ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０抗原またはそのフラグメントを用いて免疫される。好ましい実施形態において、この非ヒト動物は、ヒト抗体を産生する能力を有するが、その同起源の抗体の産生は不十分である。より好ましい実施形態において、この非ヒト動物は、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）動物である。
【００７６】
複数の初代ＨＩＶ−１単離物に対して強力な中和活性を有するヒトモノクローナル抗体は、種々の形態のＨＩＶ−１  ｅｎｖ抗原を用いてＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）マウスを免疫することにより生成される。これらの抗原は、組換え体ｇｐ１２０、ｇｐ１６０もしくはｇｐ４１、それらの一部、あるいはｇｐ１２０、ｇｐ１６０もしくはｇｐ４１またはそれらの一部を含む融合タンパク質であり得る。さらに、いくつかのエピトープは、ｇｐ１２０−ｇｐ４１ヘテロダイマー上に独自に存在し得るか、またはこれらのヘテロダイマーのトリマー複合体上に存在し得る。特定の中和エピトープは、その細胞表面レセプター（ＣＤ４）へのｇｐ１２０の結合により誘導されるコンホメーションの再配列の際に、優先的にかまたは排他的に露出され得る。さらに、さらなるエピトープは、二次レセプターであるＣＸＣＲ４またはＣＣＲ５のうちの１つに対するｇｐ１２０またはｇｐ１２０−ＣＤ４の複合体化の際に形成され得る。これらの全ては、本出願に記載される方法により生成される抗体の標的であり得、そして本発明の抗体を生成するための免疫原として使用され得る。また、オリゴマーＥｎｖ複合体（例えば、最近記載された、ＨＩＶ−１  Ｅｎｖタンパク質の安定化されたトリマー形態（Ｂｉｎｌｅｙら、（２０００）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７４：６２７−６４３、Ｙａｎｇ，Ｘ．ら（２０００）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７４：５７１６−５７２５））、またはウイルス粒子もしくは細胞表面上に発現されるネイティブＥｎｖ複合体は、免疫原として使用され得る。免疫原としては、クレード（ｃｌａｄｅ）Ｂ系統および非クレードＢ系統の両方由来の組換え抗原（ＣＸＣＲ４（Ｘ４）指向性（ｔｒｏｐｉｃ）単離物およびＣＣＲ５（Ｒ５）指向性単離物の両方を含む）が挙げられる。好ましい実施形態において、ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０は、組換えｇｐ１２０（ｒｇｐ１２０）である。別の好ましい実施形態において、抗原は、ＨＩＶ−１の初代単離物由来である。より好ましい実施形態において、免疫原（例えば、ｒｇｐ１２０）は、ＨＩＶ−１のＳＦ１６２単離物由来である。
【００７７】
免疫はまた、インタクトな全ウイルスを用いて行われ、これらとしては、生弱毒化ＨＩＶ−１、不活化ＨＩＶ−１またはその表面上にＨＩＶ−１  ｅｎｖ複合体を提示するキメラウイルス（例えば、その表面上にＨＩＶ−１  ｇｐ１２０エピトープを提示している、異種サル：ヒト免疫不全ウイルス（ＳＨＩＶ）、異種マウス：ヒト免疫不全ウイルス、ワクシニア：ＨＩＶ−１キメラ、またはピコルナウイルス（例えば、ポリオウイルス、ヒトライノウイルス））が挙げられるがこれらに限定されない。好ましい実施形態において、このような全ウイルス免疫原は、複製適合性でないタンパク質抗原として作用する（例えば、不活化ＨＩＶ−１、ＳＨＩＶ）。より好ましい実施形態において、このような全ウイルス免疫原は、マウスにおいて複製適合性である（例えば、マウス：ヒト免疫不全ウイルス、またはＨＩＶ−１  ｇｐ１２０免疫原を提示する別のマウスウイルス）。
【００７８】
免疫はまた、ネイティブまたは代替の環境において提示されるネイティブｅｎｖ複合体を用いて行われる。このようなネイティブまたは代替のアプローチとしては、インタクトなウイルス粒子および安定化されたウイルス粒子（例えば、その表面上にネイティブＨＩＶ−１  ｅｎｖ複合体を提示しているゴースト細胞、リポソーム、またはビーズ）または完全ＨＩＶ−１  ｅｎｖ遺伝子でトランスフェクトされたマウス細胞が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７９】
別の実施形態において、免疫は、ＨＩＶ−１免疫原（例えば、ｇｐ１２０免疫原）をコードするＤＮＡを用いて実施される。
【００８０】
ハイブリドーマスクリーニングは、適切な抗原（ウイルス粒子を含む）を用いる標準的な結合アッセイ、および超感受性の、ルシフェラーゼベースのＨＩＶ中和アッセイを使用する、直接機能スクリーニングアッセイの両方により実施される。
【００８１】
最初のスクリーニングアッセイにおいて単離された抗体は、エピトープ特異性、鎖分布およびウイルス単離物のパネルに対する中和効力に関して完全に特徴付けされる。エピトープの特徴付けは、ｅｎｖタンパク質の特定のドメインに対応する種々のペプチドおよび組換え小タンパク質、およびウイルス性ｇｐ１２０のパネル（特定ドメインの欠失を含むタンパク質を含む）に対する結合アッセイを利用する。ｇｐ１２０結合競合アッセイは、ＥＬＩＳＡ法およびＢｉａｃｏｒｅ法の両方を使用して、可溶性ＣＤ４（ｓＣＤ４）、または十分に特徴づけされたエピトープに対するＭａｂを用いて実施される。中和アッセイは、広範なウイルス単離物（Ｔ細胞指向性単離物およびＭ指向性初代単離物を含む）（クレードＢ単離物および外来クレード単離物を含む）を用いて、ＰＢＭＣアッセイおよび細胞株ベースのアッセイの両方を利用して行われる。本発明の抗体の中和活性は、いくつかの異なる方法で測定され得る。最も有用なアッセイは、ＨＩＶ−１  ｅｎｖで擬性された（ｐｓｅｕｄｏｔｙｐｅｄ）ＮＬ４−３ルシフェラーゼウイルスを使用する、単回の感染性アッセイである。ＮＬ４−３  ｌｕｃウイルスは、ｅｎｖ遺伝子を欠損し、そしてｎｅｆの代わりにｌｕｃ遺伝子を有する。Ｃｈｅｎ，Ｂ．Ｋ．ら（１９９４）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６８：６５４〜６６０を参照のこと。機能的ｅｎｖ遺伝子とトランスで補完される場合、得られるビリオンは、感受性細胞中への侵入の際にｌｕｃ活性を形質導入する。このアッセイは、非常に急速であり、定量的であり、そして感受性である。ルシフェラーゼ活性は、９６ウェルプレート蛍光計を使用して、感染後２日程度で迅速かつ正確に測定され得、そしてこのアッセイは、非常に大きなダイナミックレンジを有する。インビトロでＨＩＶ−１を中和する抗体は、インビボでＨＩＶ−１を中和し得る。これらの抗体がＨＩＶ−１をインビボで中和するという事実は、動物モデル系（例えば、ｈｕ−ＰＢＬ−ＳＣＩＤマウス（Ｓａｆｒｉｔ（１９９３）ＡＩＤＳ７：１５〜２１）または新生児マカク（Ｈｏｆｍａｎｎ−Ｌｅｈｍａｎｎ（２００１）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７５：７４７０〜７４８０））においてさらに確認され得る。
【００８２】
実施例１は、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）動物を、ＨＩＶ−１のＳＦ１６２初代単離物の全長組換えｇｐ１２０を用いて免疫するためのプロトコルを提供し、そしてＨＩＶ−１  ｇｐ１２０と結合する抗体およびＨＩＶ−１を中和する抗体を提供する。
【００８３】
本発明の１つの実施形態において、ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０タンパク質（例えば、ＨＩＶ−１ＳＦ１６２  ｇｐ１２０タンパク質）に特異的に結合し、そしてＨＩＶ−１中和活性を有する、単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分が提供され、この抗体またはその抗原結合部分は、ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０のＶ１／Ｖ２ドメイン上のエピトープ（好ましくは、線状エピトープ）を認識し、このエピトープは、Ｖ１ループ中の配列の存在に依存する。好ましい実施形態において、この段落に記載される抗体またはその抗原結合部分は、ＨＩＶ−１株Ｃａｓｅ−Ａ２  Ｖ１／Ｖ２ドメイン特異的エピトープに結合しない。なお別の好ましい実施形態において、この段落に記載される抗体またはその抗原結合部分は、ＨＩＶ−１株Ｃａｓｅ−Ａ２のｇｐ１２０のＶ１／Ｖ２ドメインに結合しない。より好ましい実施形態において、この段落に記載される抗体またはその抗原結合部分は、ＨＩＶ−１ＳＦ１６２中和活性を有する。別のより好ましい実施形態において、この段落に記載される抗体またはその抗原結合部分は、ＨＩＶ−１ＳＦ１６２  ｇｐ１２０のＶ１ドメイン上の線状エピトープを認識する。さらにより好ましい実施形態において、この段落に記載される抗体またはその抗原結合部分は、ＨＩＶ−１ＳＦ１６２  ｇｐ１２０のＶ１ドメイン上の線状エピトープを認識し、そしてその抗体またはその抗原結合部位は、ＨＩＶ−１ＳＦ１６２中和活性を有する。別のさらにより好ましい実施形態において、この段落に記載される抗体またはその抗原結合部分は、ＨＩＶ−１ＳＦ１６２中和活性を有し、そしてＳＦ１６２中和活性は、４５Ｄ１／Ｂ７（ＡＴＣＣ登録番号ＰＴＡ−３００２によって指定されるハイブリドーマによって分泌される）、５８Ｅ１／Ｂ３（ＡＴＣＣ登録番号ＰＴＡ−３００３によって指定されるハイブリドーマによって分泌される）および６４Ｂ９／Ａ６（ＡＴＣＣ登録番号ＰＴＡ−３００４によって指定されるハイブリドーマによって分泌される）からなる群より選択されるヒトモノクローナル抗体のＨＩＶ−１ＳＦ１６２中和活性とほぼ同じぐらいに強力である。図９および実施例１に示されるように、Ｍａｂ  ４５Ｄ１／Ｂ７は、約１．９μｇ／ｍｌのＮＤ５０でＨＩＶ−１ＳＦ１６２ウイルスを中和し；Ｍａｂ  ５８Ｅ１／Ｂ３は、約０．５５μｇ／ｍｌのＮＤ５０でＨＩＶ−１ＳＦ１６２ウイルスを中和し；そしてＭａｂ  ６４Ｂ９／Ａ６は、約０．２９μｇ／ｍｌのＮＤ５０でＨＩＶ−１ＳＦ１６２ウイルスを中和した。別の好ましい実施形態において、この段落に記載される抗体またはこの段落に記載されるその抗原結合部分は、配列番号３からなるペプチドに特異的に結合する。より好ましい実施形態において、この段落に記載される抗体またはその抗原結合部分は、配列番号３からなるペプチドに特異的に結合し、そして配列番号２からなるペプチドに特異的に結合しない。さらにより好ましい実施形態において、この段落に記載される抗体またはその抗原結合部分は、ヒトモノクローナル抗体（ヒトＭａｂ）である。さらにより好ましい実施形態において、上記ヒトＭａｂは、３５Ｄ１０／Ｄ２（ＡＴＣＣ登録番号ＰＴＡ−３００１によって指定されるハイブリドーマによって分泌される）、４０Ｈ２／Ｃ７（ＡＴＣＣ登録番号ＰＴＡ−３００６によって指定されるハイブリドーマによって分泌される）、４３Ａ３／Ｅ４（ＡＴＣＣ登録番号ＰＴＡ−３００５によって指定されるハイブリドーマによって分泌される）、４３Ｃ７／Ｂ９（ＡＴＣＣ登録番号ＰＴＡ−３００７によって指定されるハイブリドーマによって分泌される）、４５Ｄ１／Ｂ７（ＡＴＣＣ登録番号ＰＴＡ−３００２によって指定されるハイブリドーマによって分泌される）、４６Ｅ３／Ｅ６（ＡＴＣＣ登録番号ＰＴＡ−３００８によって指定されるハイブリドーマによって分泌される）、５８Ｅ１／Ｂ３（ＡＴＣＣ登録番号ＰＴＡ−３００３によって指定されるハイブリドーマによって分泌される）、および６４Ｂ９／Ａ６（ＡＴＣＣ登録番号ＰＴＡ−３００４によって指定されるハイブリドーマによって分泌される）からなる群より選択される。Ｍａｂ  ３５Ｄ１０／Ｄ２、４０Ｈ２／Ｃ７、４３Ａ３／Ｅ４、４３Ｃ７／Ｂ９、４５Ｄ１／Ｂ７、４６Ｅ３／Ｅ６、５８Ｅ１／Ｂ３および６４Ｂ９／Ａ６は、ＨＩＶ−１ＳＦ１６２を中和し、その多くが、非常に強力な終点を有した（図９）。これら８つの全ての抗体は、線状Ｖ１エピトープに対して特異的であった。
【００８４】
別の実施形態において、ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０タンパク質（例えば、ＨＩＶ−１ＳＦ１６２  ｇｐ１２０タンパク質）に特異的に結合し、そしてＨＩＶ−１中和活性を有する、単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分が提供され、この抗体またはその抗原結合部分は、ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０（例えば、ＨＩＶ−１ＳＦ１６２  ｇｐ１２０）のＶ１／Ｖ２ドメイン上のエピトープ（好ましくは、線状エピトープ）を認識し、このエピトープは、Ｖ２ドメイン中の配列の存在に依存する。より好ましい実施形態において、この段落に記載される抗体またはその抗原結合部分は、ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０（例えば、ＨＩＶ−１ＳＦ１６２  ｇｐ１２０）のＶ２ドメイン上のエピトープ（好ましくは、線状エピトープ）を認識する。別の好ましい実施形態において、この段落に記載される抗体またはその抗原結合部分は、ＨＩＶ−１中和活性を有する。より好ましい実施形態において、この段落に記載される抗体またはその抗原結合部分は、ＨＩＶ−１ＳＦ１６２中和活性を有する。別の好ましい実施形態において、この段落に記載される抗体またはその抗原結合部分は、ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０（例えば、ＨＩＶ−１ＳＦ１６２  ｇｐ１２０）のＶ２ドメイン上の線状エピトープを認識し、そしてその抗体または抗原結合部分は、ＨＩＶ−１ＳＦ１６２中和活性を有する。好ましい実施形態において、この段落に記載される抗体またはその抗原結合部分は、少なくとも３つのＲ５クレードＢ  ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０タンパク質に特異的に結合する。好ましい実施形態において、この段落に記載される抗体またはその抗原結合部分は、配列番号４からなるペプチドに特異的に結合する。別の好ましい実施形態において、この段落に記載される抗体またはその抗原結合部分は、ＨＩＶ−１  ＩＩＩＢまたは関連するクローン（例えば、ＨＸＢ２、ＨＸＢ２ｄおよびＢＨ１０）のｇｐ１２０に特異的に結合しない。より好ましい実施形態において、この段落に記載されるヒト抗体またはその抗原結合部分は、ヒトモノクローナル抗体である。さらにより好ましい実施形態において、このヒトＭａｂは、Ｍａｂ８．２２．２（ＡＴＣＣ登録番号 によって指定されるハイブリドーマによって分泌される）。
【００８５】
本発明の別の実施形態において、ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０のＶ３領域上のエピトープに特異的に結合する、単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分が提供され、好ましくは、この抗体は、ＨＩＶ−１ＳＦ１６２  ｇｐ１２０のＶ３領域中のエピトープに結合し、そしてこの抗体は、配列番号９（ＨＩＶ−１  ＭＮ株のｇｐ１２０のＶ３アミノ酸１〜２０）からなるペプチドに特異的に結合しない。より好ましい実施形態において、この段落に記載される抗体またはその抗原結合部分は、ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０タンパク質（例えば、ＨＩＶ−１ＳＦ１６２  ｇｐ１２０タンパク質）に特異的に結合する。より好ましい実施形態において、この段落に記載される抗体またはその抗原結合部分は、ＨＩＶ−１ＳＦ１６２  ｇｐ１２０のＶ３領域上のエピトープ（線状またはコンフォメーション）に結合する。別の好ましい実施形態において、この段落に記載される抗体またはその抗原結合部分は、ＨＩＶ−１中和活性を有する。より好ましい実施形態において、この段落に記載される抗体またはその抗原結合部分は、ＨＩＶ−１ＳＦ１６２中和活性を有する。さらにより好ましい実施形態において、この段落に記載される抗体またはその抗原結合部分は、ヒトモノクローナル抗体８．２７．３（ＡＴＣＣ登録番号ＰＴＡ−３００９によって指定されるハイブリドーマによって分泌される）またはＭａｂ  ８Ｅ１１／Ａ８（ＡＴＣＣ登録番号 によって指定されるハイブリドーマによって分泌される）である。実施例１に示されるように、Ｍａｂ  ８．２７．３およびｍａｂ  ８Ｅ１１／Ａ８は、ＭＮ  Ｖ３  １−２０（配列番号９）に特異的に結合しない。図９に示されるように、Ｍａｂ  ８．２７．３は、約０．１１μｇ／ｍｌのＳＦ１６２  ＨＩＶ−１ウイルス中和活性を有することが示され、Ｍａｂ  ８Ｅ１１／Ａ８は、約２．６μｇ／ｍｌのＳＦ１６２  ＨＩＶ−１ウイルス中和活性を有することが示された。図２および実施例１に示されるように、Ｍａｂ  ６９４および４４７−５２Ｄ（米国特許第５，９１４，１０９号に記載される）（これらは、比較目的で本明細書中に含まれる）は、ＭＮ  Ｖ３  １−２０（配列番号９）に特異的に結合した。対照的に、ヒトモノクローナル抗体８．２７．３および８Ｅ１１／Ａ８（上記の手順によって作製される（実施例１もまた参照のこと））は、ＭＮ  Ｖ３  １−２０（配列番号９）にも、ＭＮ  Ｖ３  ２１−４０（配列番号１１）にも特異的に結合しなかったが、ＭＮ  Ｖ３ループの全３３アミノ酸（ＴＲＰＮＹＮＫＲＫＲＩＨＩＧＰＧＲＡＦＹＴＴＫＮＩＩＧＴＩＲＱＡＨ）(配列番号７）を含む、より長いペプチドに結合した。Ｍａｂ８．２７．３は、ＭＮ  Ｖ３  １１−３０（配列番号１０）に結合しなかったが、Ｍａｂ  ８Ｅ１１／Ａ８は、ＭＮ  Ｖ３  １１−３０（配列番号１０）に結合した。
【００８６】
より好ましい実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合部分は、ＨＩＶ−１の１種より多い初代単離株に対してＨＩＶ−１中和活性を有する。いくつかの実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合部分は、ＨＩＶ−１の１種の初代単離株に対してのみＨＩＶ−１中和活性を有する。より好ましい実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合部分は、１より多い分岐群（クレード）のメンバー由来のＨＩＶ−１の１種より多い初代単離株に対してＨＩＶ−１中和活性を有する。別のさらにより好ましい実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合部分は、インビボでＨＩＶ−１中和活性を有する。これらの抗体がインビボでＨＩＶ−１を中和するという事実は、動物モデル系（例えば、ｈｕ−ＰＢＬ−ＳＣＩＤマウス（Ｓａｆｒｉｔ（１９９３）ＡＩＤＳ  ７：１５−２１）または新生児マカク（Ｈｏｆｍａｎｎ−Ｌｅｈｍａｎｎ（２００１）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７５：７４７０−７４８０））においてさらに確かめられ得る。
【００８７】
本発明は、単離されたヒト抗体を提供する。この抗体は、ヒトモノクローナル抗体であり得る。
【００８８】
本発明の抗体またはその部分は、ヒトＣＸＣＲ４レセプターへのＨＩＶ−１  ｇｐ１２０の結合を阻害し得る。当該分野で公知の任意の従来のアッセイ（インビトロまたはインビボでのいずれか）を使用して、このような阻害を測定し得る。
【００８９】
本発明の抗体またはその部分は、ヒトＣＣＲ５レセプターへのＨＩＶ−１  ｇｐ１２０の結合を阻害し得る。当該分野で公知の任意の従来のアッセイ（インビトロまたはインビボでのいずれか）を使用して、このような阻害を測定し得る。
【００９０】
（抗体および抗体産生細胞株の産生）
（免疫）
動物の免疫は、当該分野で公知の任意の方法によって行われ得る。例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ、１９９０を参照のこと。非ヒト動物（例えば、マウス、ラット、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ウシおよびウマ）を免疫するための方法は、当該分野で周知である。例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、ならびに米国特許第５，９９４，６１９を参照のこと。好ましい実施形態において、抗原は、アジュバント有りまたは無しで投与され、免疫応答を刺激する。このようなアジュバントとしては、とりわけ、完全フロイントアジュバントまたは不完全フロイントアジュバント、ＲＩＢＩ（ムラミルジペプチド）またはＩＳＣＯＭ（免疫刺激複合体）が挙げられる。このようなアジュバントは、そのポリペプチドを局所的沈着物中に隔離することによって、そのポリペプチドを迅速な分散から保護し得るか、またはそれらは、マクロファージに対して走化性の因子および免疫系の他の成分を分泌するように宿主を刺激する物質を含み得る。好ましくは、ポリペプチドが投与されている場合、免疫スケジュールは、そのポリペプチドの２回以上の投与を含み、そのポリペプチドが、数週間にわたって拡散される。
【００９１】
動物の抗原による免疫の後に、抗体および／または抗体産生細胞が、動物から得られ得る。１つの実施形態において、抗体含有血清を、動物を出血させるかまたは屠殺することにより動物から入手し得る。血清を、動物から得られたものとして使用し得るか、免疫グロブリン画分を、血清から得るか、または抗体を、血清から精製し得る。このようにして得られた血清または免疫グロブリンが、ポリクローナルであることは当業者に公知である。血清から調製されたポリクローナル抗体の使用の不都合は、得られ得る抗体の量が限られていること、および、ポリクローナル抗体が、一連の不均質な性質を有することである。
【００９２】
別の実施形態において、抗体産生細胞は、例えば、エプスタイン−バーウイルスによってか、適切な不死化骨髄腫細胞株との融合によってか、または当該分野で公知の他の従来の方法によって不死化され得る。
【００９３】
好ましい実施形態において、抗体産生不死化ハイブリドーマを、免疫された動物から調製し得る。免疫の後、動物を、屠殺し、そして脾臓Ｂ細胞を、当該分野で周知なように、不死化された骨髄腫細胞と融合させる。例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、前出を参照のこと。好ましい実施形態において、骨髄腫細胞は、免疫グロブリンポリペプチドを分泌しない（非分泌細胞株）。融合および抗生物質選択の後、ハイブリドーマを、例えば、ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０か、またはＨＩＶ−１  ｇｐ１２０の一部か、またはＨＩＶ−１  ｇｐ１２０を発現する細胞を使用してスクリーニングする。好ましい実施形態において、初期スクリーニングを、例えば、酵素結合免疫アッセイ法（ＥＬＩＳＡ）または放射性免疫アッセイを使用して、実施する。より好ましい実施形態において、ＥＬＩＳＡは、初期スクリーニングに使用される。ＥＬＩＳＡスクリーニングの例は、ＷＯ００／３７５０４（本明細書中に参考として援用される）に提供される。
【００９４】
以下でさらに議論するように、抗体産生ハイブリドーマを、選択し、クローン化し、そしてさらに、強固なハイブリドーマの増殖、高い抗体産生および望ましい抗体特性を含む、望ましい特性についてスクリーニングする。ハイブリドーマを、インビボで、同系の動物においてか、ヌードマウスのような免疫系を欠く動物においてか、またはインビトロでの細胞培養において拡大し得る。ハイブリドーマを選択、クローニングおよび拡大する方法は、当業者に周知である。
【００９５】
好ましい実施形態において、免疫された動物は、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現する非ヒト動物であり、そして脾臓Ｂ細胞は、その非ヒト動物と同じ種由来の骨髄腫と融合される。より好ましい実施形態において、免疫された動物は、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）動物であり、そしてその骨髄腫細胞株は、非分泌マウス骨髄腫である。
【００９６】
１つの実施形態において、ヒト抗−ＨＩＶ−１−ｇｐ１２０抗体を産生するハイブリドーマが、産生される。好ましい実施形態において、ハイブリドーマは、上記のように、マウスハイブリドーマである。別の好ましい実施形態において、ハイブリドーマは、ラット、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ネコまたはウマのような、非ヒト、非マウス動物種において産生される。別の実施形態において、ハイブリドーマは、ヒト非分泌骨髄腫が、抗−ＨＩＶ−１−ｇｐ１２０抗体を発現する、ヒト細胞と融合された、ヒトハイブリドーマである。
【００９７】
別の実施形態において、抗体産生細胞は、ＨＩＶ−１に感染しそして抗−ＨＩＶ−１−ｇｐ１２０抗体を発現する、ヒトから調製される。抗−ＨＩＶ−１−ｇｐ１２０抗体を発現する細胞は、白血球を単離し得、そしてそれらを蛍光細胞分析分離装置（ＦＡＣＳ）に供することによってか、またはＨＩＶ−１  ｇｐ１２０もしくはその一部を被覆したプレート上でのパニング法によって単離され得る。ヒト抗−ＨＩＶ−１−ｇｐ１２０抗体を発現するヒトハイブリドーマを産生するために、これらの細胞を、ヒト非分泌骨髄腫と融合させ得る。
【００９８】
（抗体作製のための核酸、ベクター、宿主細胞および組換え方法）
抗−ＨＩＶ−１−ｇｐ１２０抗体の重鎖全体および軽鎖全体またはその可変領域のいずれかをコードする核酸分子を、このような抗体を産生する任意の供給源から入手し得る。
【００９９】
本発明の１つの実施形態において、抗体を発現するハイブリドーマから（例えば、上記に記載されたハイブリドーマの１つから）、これらの核酸分子を、入手し得る。抗体をコードするｍＲＮＡを単離する方法は、当該分野で周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、前出、を参照のこと。このｍＲＮＡを使用して、抗体遺伝子のポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）またはｃＤＮＡクローニングにおいて使用するためのｃＤＮＡを産生し得る。好ましい実施形態において、この核酸分子は、その融合パートナーの一方として、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現するトランスジェニック非ヒト動物細胞を有する、ハイブリドーマに由来する。なおさらに好ましい実施形態において、この融合パートナー動物細胞は、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）動物に由来する。別の実施形態において、このハイブリドーマは、上記のような非ヒト、非マウストランスジェニック動物に由来する。別の実施形態において、このハイブリドーマは、非ヒト、非トランスジェニック動物に由来する。非ヒト、非トランスジェニック動物から得られる核酸分子は、例えば、ヒト化抗体のために使用され得る。
【０１００】
好ましい実施形態において、抗−ＨＩＶ−１−ｇｐ１２０抗体の重鎖を、重鎖の可変ドメインをコードする核酸分子を重鎖の定常ドメインと融合することによって構築し得る。同様に、抗−ＨＩＶ−１−ｇｐ１２０の軽鎖を、軽鎖の可変ドメインをコードする核酸分子を軽鎖の定常ドメインと融合することによって構築し得る。
【０１０１】
別の実施形態において、抗−ＨＩＶ−１−ｇｐ１２０抗体産生細胞自体を、非ヒト、非マウス動物から精製し得る。１つの実施形態において、抗体産生細胞を、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現し、そして適切な抗原を用いて免疫した、トランスジェニック動物から誘導され得る。トランスジェニック動物は、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）動物のようなマウスであり得るか、または別の非ヒトトランスジェニック動物であり得る。別の実施形態において、抗−ＨＩＶ−１−ｇｐ１２０抗体産生細胞を、非トランスジェニック動物から誘導し得る。別の実施形態において、抗−ＨＩＶ−１−ｇｐ１２０抗体産生細胞は、ＨＩＶ−１に感染し、抗−ＨＩＶ−１−ｇｐ１２０抗体を有する、ヒト患者から誘導され得る。抗体産生細胞由来のｍＲＮＡを、標準的技術によって単離し、ＰＣＲを使用して増幅し、そして標準的技術を使用してスクリーニングして、抗−ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０重鎖および軽鎖をコードする核酸分子を入手し得る。
【０１０２】
別の実施形態において、核酸分子は、当業者に公知の方法を使用してベクターを作製するために、使用され得る。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、前出、およびＡｕｓｕｂｅｌら、前出を参照のこと。１つの実施形態において、これらのベクターは、プラスミドベクターまたはコスミドベクターであり得る。別の実施形態において、これらのベクターは、ウイルスベクターであり得る。ウイルスベクターとしては、限定されないが、アデノウイルス、レトロウイルス、アデノ随伴ウイルスおよび他のピコルナウイルス、肝炎ウイルスおよびバキュロウイルスが挙げられる。これらのベクターはまた、バクテリオファージであり得、これらとしては、限定されないが、Ｍ１３が挙げられる。
【０１０３】
これらの核酸分子は、以下に記載されるように、大量の抗体を組換え発現するために使用され得る。これらの核酸分子はまた、以下にさらに記載されるように、キメラ抗体、単鎖抗体、免疫付着因子、二重特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）、変異した抗体（例えば、抗原に対しより強い結合親和性を有する抗体）および抗体誘導体を産生するために使用され得る。核酸分子が非ヒト、非マウス動物に由来する場合、その核酸分子は、また以下に記載されるように、抗体のヒト化のために使用され得る。
【０１０４】
１つの実施形態において、重鎖（ＶＨ）および軽鎖（ＶＬ）の可変領域をコードする核酸分子は、全長抗体遺伝子に転換され得る。１つの実施形態において、ＶＨ鎖およびＶＬ鎖をコードする核酸分子は、これらを、それぞれ、既に重鎖定常領域および軽鎖定常領域をコードしている発現ベクターに、そのＶＨセグメントが、そのベクター内において、ＣＨセグメントに対して作動可能に連結され、そしてそのＶＩセグメントが、そのベクター内において、ＣＬセグメントに作動可能に連結されるように、挿入することにより、全長抗体遺伝子に転換され得る。別の実施形態において、ＶＨ鎖および／またはＶＬ鎖をコードする核酸分子は、標準的な分子生物学的技術を使用してＶＨ鎖をコードする核酸分子をＣＨ鎖をコードする核酸分子に連結することによって、全長抗体遺伝子に転換される。同じことが、ＶＬ鎖およびＣＬ鎖をコードする核酸分子を使用して達成され得る。ヒト重鎖および軽鎖の定常領域遺伝子の配列は、当該分野で公知である。例えば、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌ．Ｎｏ．９１−３２４２，１９９１を参照のこと。抗体の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３領域もまた、決定し得る。同書。
【０１０５】
別の実施形態において、本発明の核酸分子は、特定の抗体配列のためのプローブとしてかまたはＰＣＲプライマーとして使用され得る。例えば、核酸分子プローブは、診断方法において使用され得るか、または核酸分子ＰＣＲプライマーは、ＤＮＡの領域を増幅するために使用され得、このＤＮＡの領域は、特に、本発明の抗体の可変ドメインを産生するために使用する核酸を単離するために、使用され得る。好ましい実施形態において、これらの核酸分子は、オリゴヌクレオチドである。より好ましい実施形態において、これらのオリゴヌクレオチドは、目的の抗体の重鎖および軽鎖の高度可変領域に由来する。さらにより好ましい実施形態において、これらのオリゴヌクレオチドは、１つ以上のＣＤＲの全部または一部をコードする。
【０１０６】
上記の方法は、本発明の抗体のいずれか１つの重鎖、重鎖および軽鎖またはＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む抗体を産生するために使用され得る。
【０１０７】
（ベクター）
本発明の抗体、または抗体の一部を発現させるために、上記に記載されるように得られた、軽鎖および重鎖の一部または全長をコードするＤＮＡを、その遺伝子が転写制御配列および翻訳制御配列と作動可能に連結されるように、発現ベクターに挿入する。発現ベクターとしては、プラスミド、レトロウイルス、コスミド、ＹＡＣ、ＥＢＶ由来エピソームなどが挙げられる。ベクターの中の転写制御配列および翻訳制御配列が、抗体遺伝子の転写および翻訳を調節するための意図される機能を果たすように、抗体遺伝子を、ベクターに連結する。発現ベクターおよび発現制御配列を、使用される発現宿主細胞と適合するように選択する。抗体軽鎖遺伝子および抗体重鎖遺伝子は、別個のベクターに挿入され得る。好ましい実施形態において、両方の遺伝子は、同一の発現ベクターに挿入され得る。抗体遺伝子を、標準的方法（例えば、抗体遺伝子フラグメントおよびベクター上の相補的な制限酵素認識部位の連結、あるいは制限酵素認識部位が存在しない場合には、平滑末端連結）によって発現ベクターに挿入する。
【０１０８】
簡便なベクターは、機能的に完全なヒトＣＨまたはＣＬ免疫グロブリン配列をコードするベクターであり、上記のように任意のＶＨまたはＶＬ配列が容易に挿入され、かつ発現されるように適切な制限部位が操作されている。このようなベクターにおいて、スプライシングは、通常、挿入されたＪ領域中のスプライスドナー部位とヒトＣ領域の前にあるスプライスアクセプター部位との間に存在し、そしてヒトＣＨエキソン内に存在するスプライス領域においてもまた存在する。ポリアデニル化および転写終結は、コード領域の下流にあるネイティブな染色体部位に存在する。組換え発現ベクターはまた、宿主細胞からの抗体鎖の分泌を促進させるシグナルペプチドをコードする。この抗体鎖遺伝子は、シグナルペプチドが抗体鎖遺伝子のアミノ末端にインフレームで連結されるように、ベクターにクローニングされ得る。このシグナルペプチドは、免疫グロブリンシグナルペプチドまたは異種シグナルペプチド（すなわち、非免疫グロブリンタンパク質由来のシグナルペプチド）であり得る。
【０１０９】
抗体鎖遺伝子に加えて、本発明の組換え発現ベクターは、調節配列を有する。この調節配列は、宿主細胞における抗体鎖遺伝子の発現を制御する。発現ベクターの設計（調節配列の選択を含む）が、形質転換されるべき宿主細胞の選択、所望されるタンパク質の発現のレベルなどのような要因に依存し得ることが当業者に理解される。哺乳動物宿主細胞発現についての好ましい調節配列としては、プロモーターおよび／またはエンハンサーのような、哺乳動物細胞における高レベルのタンパク質発現を方向付けるウイルスエレメントが挙げられ、これらのプロモーターおよび／またはエンハンサーは、レトロウイルスＬＴＲ、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）（例えば、ＣＭＶプロモーター／エンハンサー）、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）（例えば、ＳＶ４０プロモーター／エンハンサー）、アデノウイルス（例えば、アデノウイルス主要後期プロモーター（ＡｄＭＬＰ））、ポリオーマおよび強い哺乳動物プロモーター（例えば、ネイティブの免疫グロブリンプロモーターおよびアクチンプロモーター）に由来する。ウイルス調節エレメントさらなる記載、およびその配列については、例えば、米国特許第５，１６８，０６２号（Ｓｔｉｎｓｋｉら）、米国特許第４，５１０，２４５号（Ｂｅｌｌら）、米国特許第４，９６８，６１５号（Ｓｃｈａｆｆｎｅｒら）を参照のこと。
【０１１０】
抗体鎖遺伝子および調節配列に加えて、本発明の組換え発現ベクターは、さらなる配列を含み得、これらの配列としては、宿主細胞におけるベクターの複製を調節する配列（例えば、複製起点）および選択マーカー遺伝子が挙げられる。選択マーカー遺伝子は、ベクターが宿主細胞に導入された宿主細胞の選択を容易にする（例えば、米国特許第４，３９９，２１６号、同第４，６３４，６６５号および同第５，１７９，０１７号（全てＡｘｅｌら）を参照のこと）。例えば、代表的には、選択マーカー遺伝子は、ベクターが導入された宿主細胞に薬物（例えば、Ｇ４１８、ハイグロマイシンまたはメトトレキサート）に対する耐性を付与する。好ましい選択マーカー遺伝子としては、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）遺伝子（例えば、メトトレキサート選択／増幅を用いたｄｈｆｒ−宿主細胞における使用のために）、およびｎｅｏ遺伝子（Ｇ４１８選択のために）が挙げられる。
【０１１１】
（非ハイブリドーマ宿主細胞、およびタンパク質を組換え生成する方法）
抗ＨＩＶ−１−ｇｐ１２０抗体をコードする核酸分子およびこれらの抗体を含むベクターは、適切な哺乳動物宿主細胞の形質転換のために使用され得る。形質転換は、ポリヌクレオチドを宿主細胞に導入するための任意の公知の方法によって行われ得る。異種ポリヌクレオチドの哺乳動物細胞への導入のための方法は、当該分野で周知であり。デキストラン媒介性トランスフェクション、リン酸カルシウム沈澱、ポリブレン媒介性トランスフェクション、プロトプラスト融合、エレクトロポレーション、ポリヌクレオチドのリポソームへのカプセル化およびＤＮＡの核への微量注入が挙げられる。さらに、核酸分子は、ウイルスベクターにより哺乳動物細胞に導入され得る。細胞を形質転換する方法は、当該分野で周知である。例えば、米国特許第４，３９９，２１６号、同第４，９１２，０４０号、同第４，７４０，４６１号、および同第４，９５９，４５５号（これらの開示は、本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。
【０１１２】
宿主として利用可能な哺乳動物細胞株は、当該分野で周知であり、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）から入手可能な多くの不死化細胞株が挙げられる。これらとしては、とりわけ、以下が挙げられる：チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）細胞、ＮＳＯ、ＳＰ２細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）細胞、サル腎臓細胞（ＣＯＳ）、ヒト肝細胞癌細胞（例えば、Ｈｅｐ  Ｇ２）、Ａ５４９細胞、および多くの他の細胞株。特に好ましい細胞株は、どの細胞株が高い発現レベルを有するかを決定することにより選択される。使用され得る他の細胞株は、昆虫細胞株（例えば、Ｓｆ９）である。抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターは、哺乳動物細胞に導入される場合、この抗体は、宿主細胞における抗体の発現を可能にするに十分な期間か、または、より好ましくは、宿主細胞が増殖される培養培地に抗体を分泌するに十分な期間、宿主細胞を培養することにより生成される。
【０１１３】
さらに、生成細胞株からの本発明の抗体（これに由来する他の部分）の発現は、多くの公知の技術を使用して増強され得る。例えば、グルタミンシンセターゼ遺伝子発現系（ＧＳ系）は、特定の条件下で発現を増強するための一般的なアプローチである。このＧＳ系は、欧州特許第０  ２１６  ８４６号、同第０  ２５６  ０５５号および同第０  ３２３  ９９７号および欧州特許出願第８９３０３９６４．４号とともに、全てまたは一部議論されている。
【０１１４】
（トランスジェニック動物）
本発明の抗体はまた、哺乳動物または植物の生成を介して、トランスジェニック生成され得る。この哺乳動物または植物は、目的の抗体の免疫グロブリン重鎖配列または軽鎖配列をコードする遺伝子およびこれらから回収可能な形態にある抗体の生成についてトランスジェニックである。哺乳動物のトランスジェニック生成とともに、抗体は、ヤギ、ウシ、または他の哺乳動物の乳汁中に生成され得、そしてこれらから回収され得る。例えば、米国特許第５，８２７，６９０号、同第５，７５６，６８７号、同第５，７５０，１７２号、および同第５，７４１，９５７号を参照のこと。
【０１１５】
別の実施形態において、トランスジェニック動物またはトランスジェニック植物は、抗ＨＩＶ−１−ｇｐ１２０抗体をコードする核酸分子を含む。好ましい実施形態において、トランスジェニック動物またはトランスジェニック植物は、ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０に特異的な重鎖または軽鎖をコードする核酸分子を含む。
【０１１６】
別の実施形態において、トランスジェニック動物またはトランスジェニック植物は、改変抗体（例えば、単鎖抗体、キメラ抗体、またはヒト化抗体）をコードする核酸分子を含む。抗ＨＩＶ−１−ｇｐ１２０抗体は、トランスジェニック動物またはトランスジェニック植物において作製され得る。好ましい実施形態において、非ヒト動物は、マウス、ラット、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウシまたはウマであるが、これらに限定されず；そして植物は、タバコ、トウモロコシ、またはダイズであるが、これらに限定されない。理解されるように、タンパク質はまた、タンパク質をコードする遺伝子についてトランスジェニックである卵（とりわけ、例えば、ニワトリの卵）中に生成され得る。
【０１１７】
（ファージディスプレイライブラリー）
本明細書中に開示される抗ＨＩＶ−１−ｇｐ１２０抗体に加えて、本発明の組換え抗ＨＩＶ−１−ｇｐ１２０抗体は、ヒトリンパ球由来のｍＲＮＡから調製されたヒトＶＬおよびＶＨ  ｃＤＮＡを使用して調製された、組換えコンビナトリアル抗体ライブラリー、好ましくは、ｓｃＦｖファージディスプレイライブラリーのスクリーニングにより単離され得る。このようなライブラリーを調製し、スクリーニングするための方法論は、当該分野で公知である。ファージディスプレイライブラリーを生成するためにキットが市販されている（例えば、Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｐｈａｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｓｙｓｔｅｍ，カタログ番号２７−９４００−０１；およびＳｔｒａｔａｇｅｎｅ  ＳｕｒｆＺＡＰＴＭファージディスプレイキット、カタログ番号２４０６１２）。抗体ディスプレイライブラリーを生成し、スクリーニングする際に使用され得る他の方法および試薬もまた存在する（例えば、Ｌａｄｎｅｒら、米国特許第５，２２３，４０９号；Ｋａｎｇら、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／１８６１９；Ｄｏｗｅｒら、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９１／１７２７１；Ｗｉｎｔｅｒら、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／２０７９１；Ｍａｒｋｌａｎｄら、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／１５６７９；Ｂｒｅｉｔｌｉｎｇら、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９３／０１２８８；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／０１０４７；Ｇａｒｒａｒｄら、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／０９６９０；Ｆｕｃｈｓら（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：１３７０−１３７２；Ｈａｙら（１９９２）Ｈｕｍ．Ａｎｔｉｂｏｄ．Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ３：８１−８５；Ｈｕｓｅら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：１２７５−１２８１；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ（１９９０）３４８：５５２−５５４；Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら（１９９３）ＥＭＢＯ  Ｊ  １２：７２５−７３４；Ｈａｗｋｉｎｓら（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６−８８９−８９６；Ｃｌａｃｋｓｏｎら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８；Ｇｒａｍら（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：３５７６−３５８０；Ｇｒｒａｒｄら（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：１３７３−１３７７；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら（１９９１）Ｎｕｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ  １９：４１３３−４１３７；およびＢａｒｂａｓら（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：７９７８−７９８２）。
【０１１８】
好ましい実施形態において、所望の特性を有するヒト抗ＨＩＶ−１−ｇｐ１２０抗体を単離するために、本明細書中に記載のヒト抗ＨＩＶ−１−ｇｐ１２０抗体は、まず、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９３／０６２１３に記載されるエピトープインプリンティング法を使用して、ＨＩＶ−１−ｇｐ１２０に対する類似の結合活性を有するヒト重鎖配列またはヒト軽鎖配列を選択するために使用される。この方法において使用される抗体ライブラリーは、好ましくは、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／０１０４７、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ（１９９０）３４８：５５２−５５４；およびＧｒｉｆｆｉｔｈｓら（１９９３）ＥＭＢＯ  Ｊ  １２：７２５−７３４に記載されるように、調製およびスクリーニングされるｓｃＦｖライブラリーである。このｓｃＦｖ抗体ライブラリーは、好ましくは、それぞれ、抗原としてＨＩＶ−１−ｇｐ１２０を使用してスクリーニングされる。
【０１１９】
一旦、開始ヒトＶＬセグメントおよびＶＨセグメントが選択されると、始めに選択されたＶＬセグメントおよびＶＨセグメントの異なる対がＨＩＶ−１ｇｐ１２０結合に対してスクリーニングされる「混合および調和」実験は、好ましいＶＬ／ＶＨ対の組み合わせを選択するために行なわれる。さらに、抗体の質をさらに改善するために、自然の免疫応答の間、抗体のアフィニティー成熟の原因であるインビボの体細胞の変異プロセスに類似した工程において、好ましいＶＬ／ＶＨ対のＶＬセグメントおよびＶＨセグメントは、ランダムに好ましくは、ＶＨおよび／またはＶＬのＣＤＲ３領域内で、変異され得る。このインビトロアフィニティー成熟は、ＶＨ  ＣＤＲ３またはＶＬ  ＣＤＲ３に対してそれぞれ相補的なＰＣＲプライマーを用いて、ＶＨ領域およびＶＬ領域を増幅することによって達成され得、このプライマーは、特定の位置で４つのヌクレオチド塩基のランダムな混合物で、「スパイク」されており、その結果、生じるＰＣＲ産物は、ランダムな変異体が、ＶＨ  ＣＤＲ３および／またはＶＬ  ＣＤＲ３領域に導入されるＶＨセグメントおよびＶＬセグメントをコードする。これらのランダムな変異したＶＨセグメントおよびＶＬセグメントは、抗原に結合するために再スクリーニングされ得る。
【０１２０】
組換え免疫グロブリン提示ライブラリーからの本発明の抗原のスクリーニングおよび単離に続いて、選択された抗体をコードする核酸は、提示パッケージ（例えば、ファージゲノムから）から回収され得、そして標準的な組換えＤＮＡ技術によって他の発現ベクターへとサブクローン化され得る。所望であるならば、核酸は、以下に記載されるように、本発明の他の抗体形態を作製するようにさらに操作され得る。コンビナトリアルライブラリーのスクリーニングによって単離された組換えヒト抗体を発現するするために、抗体をコードするＤＮＡは、上に記載されるように、組換え発現ベクターへクローン化され、そして哺乳動物の宿主細胞へと導入される。
【０１２１】
（クラススイッチング）
本発明の別の局面は、本発明の抗体のクラスが別のクラスにスイッチングされ得る機構を提供することである。発明の１つの局面において、ＶＬまたはＶＨをコードする核酸分子は、当該分野で周知の方法を用いて単離され、その結果、核酸分子はＣＬをコードする核酸配列もＣＨをコードする核酸配列も含まない。ＶＬまたはＶＨをコードする核酸分子は、次いで、免疫グロブリンの異なるクラスからのＣＬまたはＣＨをコードする核酸配列に作動可能に結合される。ＣＬ鎖またはＣＨ鎖を含むベクターまたは核酸分子を用いて、これは、上記のように達成され得る。例えば、本来はＩｇＭであった抗体は、ＩｇＧにスイッチングされるクラスであり得る。さらに、クラススイッチングは１つのＩｇＧサブクラスを別のサブクラスに変えるために使用され得る（例えば、ＩｇＧ１からＩｇＧ２へ）。
【０１２２】
（抗体誘導体）
上記の核酸分子を、技術および当業者に公知の方法を用いて、抗体誘導体を生産するために使用し得る。
【０１２３】
（ヒト化抗体）
ヒト抗体発生に関連して上記で議論されたように、減少した免疫原性を有する抗体を生産することに利点がある。これは、ヒト化技術および適切なライブラリーを用いてのディスプレイ技術を用いてある程度達成され得る。マウス抗体または他の種からの抗体が、当該分野で公知の技術を用いて、ヒト化または霊長類化され得ることが認識される。例えば、ＷｉｎｔｅｒおよびＨａｒｒｉｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｏｄａｙ  １４：４３−４６（１９９３）およびＷｒｉｇｈｔら、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２１２５−１６８（１９９２）を参照のこと。目的の抗体は、対応するヒト配列を用いてＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ヒンジドメインおよび／またはフレームワークドメインに置換するように、組換えＤＮＡ技術によって操作され得る（ＷＯ  ９２／０２１９０および米国特許第５，５３０，１０１号、同第５，５８５，０８９号、同第５，６９３，７６１号、同第５，６９３，７９２号、同第５，７１４，３５０号および同第５，７７７，０８５を参照のこと）。
【０１２４】
（変異した抗体）
別の実施形態において、核酸分子、ベクターおよび宿主細胞は、抗体を変異させるために使用され得る。抗体は、抗体の結合特性を変えるために重鎖および／または軽鎖の可変領域で変異され得る。例えば、変異は、その抗原に対する抗体のＫｄを増加または減少するように、Ｋｏｆｆを増加または減少するように、または抗体の結合特異性を変えるために、１つ以上のＣＤＲ領域になされる。部位特異的変異誘発の技術は、当該分野で周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、およびＡｕｓｕｂｅｌら、前出を参照のこと。好ましい実施形態において、変異は、本発明の抗体の可変領域の生殖系列と比べて変化されることが公知であるアミノ酸残基でなされる。別の実施形態において、核酸分子は、１つ以上のフレームワーク領域で変異され得る。変異が抗体の半減期を増加するように、フレームワーク領域または定常ドメインでなされ得る。例えば、本明細書中で参考として援用される１９９９年８月１７日に出願された米国出願番号０９／３７５，９２４を参照のこと。フレームワーク領域または定常ドメインの変異はまた、抗体の免疫原性を変化させるために、別の分子に共有結合または非共有結合するような部位を提供するために、または補体結合としてのこのような特性を変化するようになされ得る。変異は、単一の変異した抗体中のそれぞれのフレームワーク領域、定常ドメインおよび可変領域でなされ得る。あるいは、変異は、単一の変異した抗体中の１つのみのフレームワーク領域、可変領域または定常ドメインでなされ得る。
【０１２５】
１つの実施形態において、変異前の抗体と比べて、変異した抗体のＶＨ領域またはＶＬ領域のいずれかにおけるアミノ酸変化は１０未満である。より好ましい実施形態において、変異した抗体のＶＨ領域またはＶＬ領域のいずれかにおけるアミノ酸変化は５未満であり、より好ましくは、３未満のアミノ酸変化である。別の実施形態において、定常ドメインのアミノ酸変化は１５未満であり、より好ましいアミノ酸変化は、１０未満であり、なおより好ましいアミノ酸変化は、５未満である。
【０１２６】
（融合抗体と免疫付着因子（Ｉｍｍｕｎｏａｄｈｅｓｉｎ））
別の実施形態において、別のポリペプチドに結合する本発明の抗体の全体または一部を含む融合抗体または免疫付着因子が、作製され得る。好ましい実施形態において、抗体の可変領域だけがポリペプチドに結合される。別の好ましい実施形態において、ＶＨドメインおよびＶＬドメインが、抗体結合部位を形成するために互いに相互作用し得る様式において、本発明の抗体のＶＬドメインが、第１のポリペプチドに関連する第２のポリペプチドに結合される一方で、本発明の抗体のＶＨ領域は、第１のポリペプチドに結合される。別の好ましい実施形態において、ＶＨドメインは、ＶＬドメインからリンカーによって分離され、その結果、ＶＨドメインおよびＶＬドメインは、互いに相互作用し得る（下記の単鎖抗体を参照のこと）。ＶＨ−リンカー−ＶＬ抗体は、次いで目的のポリペプチドに結合される。融合抗体は、ｇｐ１２０発現細胞または組織にポリペプチドを方向付けるために有用である。ポリペプチドは、治療的薬剤（例えば、毒素、増殖因子または他の調節タンパク質）であり得、または診断的薬剤（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼのように容易に可視化され得る酵素）であり得る。さらに、２つ（またはそれ以上）の単鎖抗体が互いに結合され、融合抗体が作成され得る。単鎖ポリペプチドの２価または多価の抗体を作製しようとするか、または二重特異性抗体を作製しようとする場合、これは有用である。
【０１２７】
変異した抗体は、特定の特性（例えば、ｇｐ１２０抗原のような抗原の改善された結合）についてスクリーニングされ得る。
【０１２８】
（単鎖抗体）
単鎖抗体（ｓｃＦＶ）を作るために、ＶＨおよびＶＬをコードするＤＮＡフラグメントが、可撓性のリンカーをコードする別のフラグメント（例えば、アミノ酸配列（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）３をコードする）に作動可能に結合され、その結果、ＶＨ配列およびＶＬ配列は、連続する単鎖タンパク質（可撓性のリンカーによって結合されたＶＬ領域およびＶＨ領域を有する）として発現され得る（例えば、Ｂｉｒｄら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６；Ｈｕｓｔｏｎら（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ  （１９９０）３４８：５５２−５５４を参照のこと）。単鎖抗体は、単一のＶＨおよびＶＬを使用する場合、一価であり得、２つのＶＨおよびＶＬを使用する場合、２価であり、２つ以上のＶＨおよびＶＬを使用する場合、多価であり得る。
【０１２９】
（κボディー（Ｋａｐｐａｂｏｄｙ）、ミニボディー（Ｍｉｎｉｂｏｄｙ）、ダイアボディー（Ｄｉａｂｏｄｙ）およびＪａｎｕｓｉｎ）
別の実施形態において、抗ＨＩＶ−１  ｇｐｌ２０をコードする核酸分子を用いて、他の改変された抗体が、調製され得る。例えば「κボディー」（Ｉｌｌら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ  １０：９４９−５７（１９９７））、「ミニボディー」（Ｍａｒｔｉｎら、ＥＭＢＯ  Ｊ  １３：５３０３−９（１９９４））、「ダイアボディー」（Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８（１９９３））または「Ｊａｎｕｓｉｎｓ」（Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、ＥＭＢＯ  Ｊ  １０：３６５５−３６５９（１９９１）およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら「Ｊａｎｕｓｉｎ：ｎｅｗ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｄｅｓｉｇｎ  ｆｏｒ  ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｒｅａｇｅｎｔｓ」Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｕｐｐｌ  ７：５１−５２（１９９２））は、本明細書の教示に従って、標準的な分子生物学的技術を用いて調節され得る。
【０１３０】
（キメラ抗体）
別の局面において、二重特異的抗体が、生産され得る。１つの実施形態において、１つ目の結合ドメインを通してＨＩＶ−１  ｇｐ１２０に、そして２つ目の結合ドメインを通して第２の分子に特異的に結合する、キメラ抗体が生産され得る。キメラ抗体は、組換え分子生物学的な技術を通して生産され得るか、または物理的に一緒に接合され得る。さらに、１つを越えるＶＨおよびＶＬを含む単鎖抗体は、ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０および別の分子に特異的に結合するように生産され得る。このような二重特異性抗体は、周知の技術、例えば、（ｉ）および（ｉｉ）（例えば、Ｆａｎｇｅｒら、Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ４：７２−８１（１９９４）、およびＷｒｉｇｈｔおよびＨａｒｒｉｓ、前出を参照のこと）、ならびに（ｉｉｉ）に関連して（例えば、Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら  Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ（補遺）７：５１−５２（１９９２））生産され得る。
【０１３１】
（誘導体化抗体および標識化された抗体）
本発明の抗体または抗体部分は、誘導体化され得るか、または別の分子（例えば、別のペプチドまたはタンパク質）に結合され得る。一般的に、抗体またはその部分は、誘導体化され、その結果、ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０結合は、誘導体化または標識化によって不利に影響されない。従って、本発明の抗体および抗体部分は、本明細書中に記載されるヒト抗ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０抗体のインタクトな形態および改変された形態の両方を含むことを意図する。例えば、本発明の抗体または抗体部分は、１つ以上の他の分子の実体（例えば、別の抗体  （例えば、二重特異性抗体またはダイアボディー）、検出薬剤、細胞毒性薬剤、薬学的薬剤および／または抗体もしくは抗体部分と別の分子（例えば、ストレプトアビジンコア領域またはポリヒスチジンタグ）との会合を媒介し得るタンパク質またはペプチド）に機能的に結合され得る（化学的カップリング、遺伝的融合、非共有結合的会合または他の方法によって）。
【０１３２】
１つの型の誘導体化抗体は、２つ以上の抗体（例えば、二重特異性抗体を作製するための、同じ型の抗体または異なる型の抗体）を架橋することによって産生される。適切な架橋剤としては、ヘテロ二官能性である架橋剤（適切なスペーサー（例えば、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）によって隔てられた２つの別々の反応性の基を有する）またはホモ二官能性である架橋剤（例えば、ジスクシンイミジルスベレート）が挙げられる。このようなリンカーは、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌから入手可能である。
【０１３３】
別の型の誘導体化抗体は、標識化された抗体である。本発明の抗体または抗体部分を誘導体化し得る有用な検出剤としては、蛍光化合物（フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、５−ジメチルアミン−１−ナフタレンスルホニルクロリド、フィコエリトリン、ランタニド発光体などを含む）が挙げられる。抗体はまた、検出のために有用である酵素（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ、グルコースオキシダーなど）で標識され得る。抗体を、検出可能な酵素で標識する場合、その抗体は、識別され得る反応生成物を生じさせるためにその酵素が使用するさらなる試薬を添加することによって、検出される。例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ剤が存在する場合には、過酸化水素およびジアミノベンジジンを添加することにより、検出可能な着色された反応生成物が導かれる。抗体はまた、ビオチンで標識され得、そしてアビジンまたはストレプトアビジンの結合を間接的に測定することを通して検出され得る。抗体はまた、二次レポーターによって認識される予め決定されたポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体の結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）で標識され得る。いくつかの実施形態では、標識は、潜在的な立体障害を減少させるために、種々の長さのスペーサーアームによって結合される。
【０１３４】
本発明の抗体はまた、放射性標識アミノ酸で標識され得る。放射性標識は、診断目的および治療目的の両方のために使用され得る。ポリペプチドについての標識の例としては、以下の放射性同位元素または放射性核種が挙げられるが、これらに限定されない−−３Ｈ、１４Ｃ、１５Ｎ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ。
【０１３５】
本発明の抗体はまた、化学基（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、メチル基もしくはエチル基、または炭水化物基）で誘導体化され得る。これらの基は、抗体の生物学的特徴を改善するため（例えば、血清半減期を増加させるため、または、組織結合を増加させるため）に有用であり得る。
【０１３６】
（抗ＨＩＶ−１−ｇｐ１２０抗体の特徴付け）
（抗体のクラスおよびサブクラス）
本発明の抗体のクラスおよびサブクラスは、当該分野で公知の任意の方法によって決定され得る。一般的に、抗体のクラスおよびサブクラスは、抗体の特定のクラスおよびサブクラスに特異的である抗体を使用して決定され得る。このような抗体は市販されている。クラスおよびサブクラスは、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロットならびに他の技術によって決定され得る。あるいは、クラスおよびサブクラスは、抗体の重鎖および／または軽鎖の定常ドメインのすべてまたは一部分を配列決定すること、そのアミノ酸配列を、免疫グロブリンの種々のクラスおよびサブクラスの既知のアミノ酸配列と比較すること、そしてその抗体のクラスおよびサブクラスを決定することによって決定され得る。
【０１３７】
本発明の１つの実施形態では、抗体はポリクローナル抗体である。別の実施形態では、抗体はモノクローナル抗体である。抗体は、ＩｇＧ分子、ＩｇＭ分子、ＩｇＥ分子、ＩｇＡ分子またはＩｇＤ分子であり得る。好ましい実施形態では、抗体は、ＩｇＧであり、そしてＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４サブタイプである。より好ましい実施形態では、抗体は、ＩｇＧ２サブクラスである。
【０１３８】
（薬学的組成物およびキットおよび治療的な使用方法）
本発明はまた、ＨＩＶ−１感染を有する被験体を処置するため、または健康な被験体に対して予防的に投与（すなわち、予防）するための薬学的組成物に関し、この組成物は、治療的に有効な量の本発明の抗体を含む。
【０１３９】
本発明の薬学的組成物は、本発明の任意の抗体を、任意の薬学的に受容可能なキャリア、アジュバントまたはビヒクルと共に含む。本発明の薬学的組成物において使用され得る薬学的に受容可能なキャリア、アジュバントおよびビヒクルとしては、生理学的に適合性である任意およびすべての溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などが挙げられるが、これらに限定されない。薬学的に受容可能なキャリアの例としては、１つ以上の水、生理食塩水、リン酸緩衝化生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなど、ならびにそれらの組み合わせが挙げられる。多くの場合、組成物中に等張剤（例えば、糖類、多価アルコール（例えば、マンニトール、ソルビトール）または塩化ナトリウム）を含ませることが好ましい。薬学的に受容可能な物質（例えば、湿潤剤）または少量の補助物質（例えば、湿潤剤または乳化剤）、防腐剤または緩衝液（これらは、抗体または抗体の部分の保存期間または有効性を高める）。
【０１４０】
本発明の組成物は、種々の形態であり得る。これらとしては、例えば、液体、半固体および固体の投薬形態（例えば、液体溶液（例えば、注射可能な溶液および注入可能な溶液）、分散剤または懸濁物、錠剤、丸剤、粉末、リポソーム、および坐剤）が挙げられる。好ましい形態は、意図される投与様式および治療的適用に依存する。
【０１４１】
代表的に好ましい組成物は、注射可能な溶液または注入可能な溶液の形態（例えば、他の抗体を用いてヒトを受動免疫するために使用される組成物と類似した組成物）である。好ましい投与様式は、非経口的（例えば、静脈内、皮下、腹腔内、筋内）である。好ましい実施形態では、抗体は、静脈内注入または静脈内注射によって投与される。別の好ましい実施形態では、抗体は、筋内注射または皮下注射によって投与される、別の好ましい実施形態では、この組成物は、経口的に投与される。
【０１４２】
治療的組成物は、代表的に、製造条件下および保存条件下で無菌かつ安定でなければならない。この組成物は、溶液、マイクロエマルジョン（ｍｉｃｒｏｅｍｕｌｓｉｏｎ）、分散剤、リポソームまたは高薬物濃度に対して適合性である他の規定された構造（ｏｒｄｅｒｅｄ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）として処方され得る。無菌の注射可能な溶液は、上記に列挙された成分の１つまたは組み合わせを有する適切な溶媒中に、必要とされる量の本発明の抗体を組み込むこと、必要に応じて、次いで濾過滅菌すること、によって調製され得る。一般的に、分散剤は、基本的な分散媒および上記に列挙されたものの中から必要とされる他の成分を含む無菌ビヒクル中に、活性化合物を組み込むことによって調製される。無菌の注射可能な溶液の調製のための無菌粉末の場合、その好ましい調製方法は、活性成分および任意のさらなる所望の成分の粉末を、予め濾過滅菌されたそれらの溶液から産出させる真空乾燥および凍結乾燥である。溶液の適切な流動性は、例えば、レシチンのようなコーティングの使用によって、分散剤の場合には、必要とされる粒子サイズの維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持され得る。注射可能な組成物の長期吸収は、その組成物中に、吸収を遅延させる薬剤（例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチン）を含ませることによってもたらされ得る。
【０１４３】
本発明の抗体および任意の他の抗ウイルス剤、免疫調節剤、または免疫刺激薬は、当該分野で公知の種々の方法によって投与され得るが、多くの治療的適用について、好ましい投与の経路／様式は、皮下、筋内、静脈内、腹腔内または注入である。当業者に理解されるように、投与の経路および／または様式は、所望される結果に依存して変動する。
【０１４４】
特定の実施形態では、活性化合物は、迅速な放出に対して化合物を保護するキャリアを用いて調製され得る（例えば、制御放出処方物（インプラント、経皮パッチ、およびマイクロカプセル化送達系を含む））。生分解性、生体適合性のポリマー（例えば、エチレンビニルアセテート、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステルおよびポリ乳酸）が使用され得る。このような処方物の調製のための多くの方法が特許を取得しており、そして一般的に、当業者に公知である。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ編，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９７８を参照のこと。
【０１４５】
特定の実施形態において、本発明の抗体は、例えば、不活性な希釈剤または同化できる食用可能なキャリアと共に経口的に投与され得る。化合物（および、所望される場合には、他の成分）はまた、硬い殻のゼラチンカプセルまたは軟らかい殻のゼラチンカプセルに包まれ得るか、錠剤に圧縮され得るか、または被験体の食餌に直接入れられ得る。経口治療投与のためには、この化合物は、賦形剤と共に取りこまれ得、そして摂取可能な錠剤、口腔錠、トローチ、カプセル、エリキシル、懸濁物、シロップ、カシェ剤などの形態で使用され得る。非経口的投与以外によって本発明の化合物を投与するためには、その不活性化を妨げるための物質でその化合物をコーティングすること、またはその不活性化を妨げるための物質と共にその化合物を同時投与することが必要とされ得る。
【０１４６】
本発明の薬学的組成物は、本発明の抗体または抗体の部分の「治療的な有効量」または「予防的な有効量」を含み得る。「治療的な有効量」は、必要とされる投薬および期間において、所望の治療的な結果を達成するために有効な量をいう。抗体または抗体の部分の治療的な有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別、および体重のような因子、および個体において所望の応答を誘発する抗体または抗体の部分の能力に従って変動し得る。治療的な有効量はまた、抗体または抗体の部分のあらゆる毒性作用または有害作用よりも、治療的に有益な効果が上回る量である。「予防的な有効量」は、必要とされる投薬および期間において、所望の予防的な結果を達成するために有効な量をいう。代表的に、予防的な用量は、疾患に先立ってかまたは疾患の早期段階において被験体に使用されるので、予防的な有効量は、治療的な有効量よりも少ない。
【０１４７】
投薬レジメンは、最適な所望の応答（例えば、治療的応答または予防的応答）を提供するように調整され得る。例えば、単回のボーラスが、投与され得るか、いくつかの分割された用量が、ゆっくり時間をかけて投与され得るか、あるいは用量は、治療的な状況の緊急性により指し示されるように、比例して減少または増加され得る。投与の容易さおよび投薬の均一性のために、単位投薬形態の非経口組成物を処方することが、特に有利である。本明細書中で使用されるような単位投薬形態は、処置される哺乳動物の被験体に対する単位投薬物として適した、物理的に分離したユニットをいい；必要とされる薬学的なキャリアと関連して所望の治療的な効果を生じさせるように計算された予め決定された量の活性化合物を含む各ユニットをいう。本発明の単位投薬形態の仕様は、以下により指示され、そして以下に直接的に依存する：（ａ）活性化合物の独自の特徴、および達成されるべき特定の治療効果または予防効果、ならびに（ｂ）処置のための活性化化合物の個体における感受性のような、化合物配合の分野における特有の制限。
【０１４８】
例として、本発明の抗体または抗体の部分の治療的な有効量または予防的な有効量についての非限定的な範囲は、０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ、さらに好ましくは０．５〜５０ｍｇ／ｋｇ、さらに好ましくは１〜２０ｍｇ／ｋｇ、およびさらに好ましくは１〜１０ｍｇ／ｋｇまでもである。投薬値は、緩和されるべき状態の型および重篤度と共に変動し得ることに注意するべきである。任意の特定の被験体について、特定の投薬レジメンは、個々の必要性およびこの組成物を投与するかまたはこの組成物の投与を管理する人の専門的な判断力に従い、長時間にわたって調整されるべきであり、そして本明細書中で示す投薬量の範囲は、例示のみであり、本願組成物の範囲も実施も制限することを意図しない。
【０１４９】
本発明の別の局面は、この抗体を含むキットおよびこれらの抗体を含む薬学的組成物を提供する。キットは、この抗体または薬学的組成物に加えて、診断剤または治療剤を含み得る。キットはまた、治療方法における使用のための説明書を含み得る。別の好ましい実施形態において、このキットは、抗体またはそれらの薬学的組成物と、ひとつ以上の抗ウイルス剤、免疫調節剤および／または免疫刺激薬とを含む。
【０１５０】
本発明の抗体は、ＨＩＶの生活環を妨げる単一の薬剤としてまたは他の抗ウイルス薬剤との組み合わせのいずれかで、健康な被験体またはＨＩＶ感染被験体に投与され得る。他の抗ウイルス薬剤と共に本発明の化合物を投与することにより、これらのＭａｂの治療的な効果は、増強され得る。例えば、同時投与された抗ウイルス薬剤は、ウイルスの生活環における初期の事象（例えば、細胞への進入、逆転写および細胞のＤＮＡへのウイルスＤＮＡの組み込み）を標的化する薬剤であり得る。このような初期の生活環事象を標的化する抗ＨＩＶ薬剤には、ジダノシン（ｄｄＩ）、ジデオキシシチジン（ｄｄＣ）、ｄ４Ｔ、ジドブジン（ＡＺＴ）、３ＴＣ、９３５Ｕ８３、１５９２Ｕ８９、５２４Ｗ９１、ポリ硫酸化多糖類、ｓＴ４（可溶性のＣＤ４）、ガンシクロビル（ｇａｎｉｃｌｏｖｉｒ）、ホスホノギ酸三ナトリウム（ｔｒｉｓｏｄｉｕｍ  ｐｈｏｓｐｈｏｎｏｆｏｒｍａｔｅ）、エフロルニチン、リバビリン、アシクロビル、αインターフェロンおよびトリメトトレキサート（ｔｒｉ−ｍｅｎｏｔｒｅｘａｔｅ）が挙げられる。さらに、逆転写酵素の非ヌクレオシドインヒビター（例えば、ＴＩＢＯ、デラビルジン（ｄｅｌａｖｉｒｄｉｎｅ）（Ｕ９０）またはネビラピン（ｎｅｖｉｒａｐｉｎｅ））は、ウイルス脱殻インヒビター、トランス活性化タンパク質のインヒビター（例えば、ｔａｔまたはｒｅｖ）、あるいはウイルスインテグラーゼのインヒビターと同様であり得るように、本発明の抗体の効果を増強するために使用され得る。さらに、ＨＩＶプロテアーゼのインヒビターが、同時投与され得る。
【０１５１】
本発明に従う組み合わせ治療は、ＨＩＶ複製の阻害において相加効果または相乗効果を発揮し得る。なぜなら、組み合わせの各々の成分因子が、ＨＩＶ複製の異なる部位に対して作用するからである。このような組み合わせ治療の使用はまた、所望の治療効果または予防効果に必要とされる所定の従来の抗レトロウイルス薬剤の投薬量を、その薬剤が単独療法で投与される場合と比較して、有利に減少し得る。このような組み合わせは、従来の単一抗レトロウイルス剤治療の副作用を減少または排除し得るが、それらの薬剤の抗レトロウイルス活性を妨げない。これらの組み合わせは、単一薬剤治療に対する抵抗性の可能性を減少しつつ、任意の関連した毒性を最小化する。これらの組み合わせはまた、関連した毒性を増加させることなく、従来の薬剤の効力を増加し得る。好ましい組み合わせ治療は、ＡＺＴ、ｄｄＩ、ｄｄＣ、ｄ４Ｔ、３ＴＣ、９３５Ｕ８３、１５９２Ｕ８９、５２４Ｗ９１、プロテアーゼインヒビター、ＨＩＶ−１に対する既存の抗体またはこれらの組み合わせと共に、本発明の化合物を投与することを含む。
【０１５２】
単一の薬剤としてまたはレトロウイルス逆転写酵素インヒビター（例えば、ヌクレオシド誘導体）、または他のＨＩＶアスパルチルプロテアーゼインヒビターとの組み合わせ（３〜５個の薬剤を含む多数の組み合わせを含む）で、本発明の抗体を投与することが、好ましい。レトロウイルス逆転写酵素インヒビターまたはＨＩＶアスパルチルプロテアーゼインヒビターと本発明の抗体の同時投与は、実質的な相加効果または相乗効果を発揮し得、それによってウイルス複製もしくは感染またはその両方、およびそれに関連した症状を予防するか、実質的に減少させるか、またはの完全に排除する。
【０１５３】
本発明の抗体はまた、免疫調節薬および免疫刺激薬（例えば、ブロピリミン、抗ヒトαインターフェロン抗体、ＩＬ−２、ＧＭ−ＣＳＦ、インターフェロンα、ジエチルジチオカーボネート、腫瘍壊死因子、ナルトレキソン、タスカラソル（ｔｕｓｃａｒａｓｏｌ）およびｒＥＰＯ）；ならびに感染およびＨＩＶ感染に関する疾患（例えば、ＡＩＤＳ、ＡＲＣおよびＨＩＶ関連癌）を妨害するか、またはそれらと戦うための抗生物質（例えば、ペンタミジンイセチオネート（ｐｅｎｔａｍｉｄｉｎｅ  ｉｓｅｔｈｉｏｒａｔｅ））との組み合わせで投与され得る。
【０１５４】
本発明の抗体が、他の薬剤との組み合わせ治療で投与される場合、これらは、被験体に連続してまたは同時に投与され得る。あるいは、本発明に従う薬学的組成物は、本発明の抗体と、ひとつ以上の治療剤または予防剤との組み合わせを含み得る。
【０１５５】
ひとつの実施形態において、本発明は、本発明の抗体またはこれらの抗原結合部分を、これらを必要とする患者に投与することによりＨＩＶ−１感染を有する被験体を処置する方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、本発明の抗体またはこれらの抗原結合部分を前記被験体に投与することにより健康な被験体を予防的に処置する方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、ＨＩＶ−１感染を有する被験体またはＨＩＶ−１感染を獲得し得る被験体においてＨＩＶ−１ウイルスのＴ細胞またはマクロファージへの結合を阻害する方法を提供し、この方法は、前記被験体に本発明の抗体またはこれらの抗原結合部分の有効量を投与することを含む。本明細書中で記載した抗体の任意の型が、治療的または予防的（すなわち、予防）に使用され得る。好ましい実施形態において、被験体はヒトの被験体である。抗体は、ヒト疾患の動物モデルとして、その抗体と交差反応する非ヒト哺乳動物（すなわち、霊長類、カニクイザルまたはアカゲザル）に投与され得る。このような動物モデルは、本発明の抗体の治療効果を評価するために有用であり得る。
【０１５６】
本発明の抗体はまた、診断的に使用され、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロットまたは抗体もしくはこれらの抗原結合部分を使用するタンパク質検出のための任意の他の公知技術により被験体中のＨＩＶ−１タンパク質（例えば、ｇｐ１２０）の存在を検出することにより被験体中のＨＩＶ−１ウイルスの存在を検出し得る。被験体中のＨＩＶ−１タンパク質の存在は、被験体の、例えば、血液、血清、尿、涙、任意の他の体液または分泌物、組織、器官、細胞などにおけるＨＩＶ−１タンパク質の存在を検出することにより行なわれ得る。
【０１５７】
別の実施形態において、本発明の抗体は、放射標識、免疫毒素または毒素を用いて標識されるか、または毒性ペプチドを含む融合タンパク質である。抗体または抗原の融合タンパク質は、ＨＩＶ−１発現細胞に対して放射標識、免疫毒素、毒素または毒性ペプチドを指向する。好ましい実施形態において、放射標識、免疫毒素、毒素または毒性ペプチドは、抗体が細胞表面上でその結合パートナーに結合した後で、内部移行される。
【０１５８】
別の実施形態において、本発明の抗体は、抗原（例えば、ｇｐ１２０抗原）（例えば寄託された、抗体の抗原）に対して、「生物学的寄託」の項で以下に説明されるような、ＡＴＣＣに前記抗体を発現するハイブリドーマとして寄託された抗体のいずれかひとつと結合に関して競合する抗体またはこれらの抗原結合部分である。
【０１５９】
別の実施形態において、本発明の抗体は、以下の「生物学的寄託」の節に詳述されるように、寄託したハイブリドーマによって産生された抗体のうちのいずれか１つの重鎖を含む、抗体またはその抗原結合部分である。
【０１６０】
別の実施形態において、本発明の抗体は、以下の「生物学的寄託」の節に詳述されるように、寄託したハイブリドーマによって産生された抗体のうちのいずれか１つの重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む、抗体またはその抗原結合部位である。
【０１６１】
別の実施形態において、本発明の抗体は、以下の「生物学的寄託」の節に詳述されるように、寄託したハイブリドーマによって産生された抗体のうちのいずれか１つの重鎖および軽鎖を含む、抗体またはその抗原結合部位である。
【０１６２】
（ＨＩＶ−１ワクチンとして使用するためのＨＩＶ−１  ｇｐ１２０上の領域を同定する方法）
本発明の別の局面において、ＨＩＶ−１ワクチンとしての使用するためのＨＩＶ−１  ｇｐ１２０上の領域を同定する方法が提供される。この方法は、以下の工程を包含する：
ａ）ヒトモノクローナル抗体を、非ヒト哺乳動物において産生し、そして単離する工程であって、この抗体はｇｐ１２０に結合し、かつＨＩＶ−１の活性を中和する、工程；ならびに
ｂ）この抗体によって結合されるｇｐ１２０の、Ｖ１ドメイン、Ｖ２ドメインおよび／またはＶ３ドメイン（あるいはＶ１／Ｖ２／Ｖ３のドメインおよびその周囲）上のエピトープ（好ましくは、線状エピトープ）を同定する工程。
【０１６３】
例えば、ＨＩＶ−１ワクチンは、中和エピトープを含む全長ｇｐ１２０タンパク質、ｇｐ１２０タンパク質の一部分、中和エピトープを含む、全長ｇｐ１２０タンパク質またはｇｐ１２０タンパク質の一部分を含む融合タンパク質、あるいはペプチドを利用する。ｇｐ１２０タンパク質部分は、それ自体あるいはタンパク質または別の分子の一部分によってワクチンとして使用され得る。この部分を含む薬学的組成物は、本明細書中で同様に提供される。
【０１６４】
（遺伝子治療）
本発明の抗体の核酸分子は、遺伝子治療を介して、それを必要とする患者に投与され得る。この治療は、インビボまたはエキソビボのいずれかであり得る。好ましい実施形態において、重鎖および軽鎖の両方をコードする核酸分子が患者に投与される。より好ましい実施形態において、核酸分子は、Ｂ細胞の染色体中に安定に組み込まれるように投与される。なぜなら、これらの細胞は抗体産生のために特殊化（ｓｐｅｃｉａｌｉｚｅ）されているからである。好ましい実施形態において、前駆Ｂ細胞は、トランスフェクトされるか、またはエキソビボで感染され、そしてそれを必要とする患者に再移植される。別の実施形態において、前駆体Ｂ細胞または他の細胞は、目的の細胞型に感染することが既知のウイルスを使用して、インビボで感染される。遺伝子治療のために使用される代表的なベクターとしては、リポソーム、プラスミドまたはウイルスベクター（例えば、レトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス）が挙げられる。インビボまたはエキソビボのいずれかでの感染後、抗体発現レベルは、処置した患者からサンプルを取り出し、そして当該分野で公知の任意の免疫アッセイおよび本明細書中で議論される任意の免疫アッセイを使用することによってモニタリングされ得る。
【０１６５】
好ましい実施形態において、遺伝子治療法は、ヒト抗体の重鎖またはその抗原結合部分をコードする単離した核酸分子またはその一部分の有効量を投与する工程およびこの核酸分子を発現させる工程を包含する。別の実施形態において、遺伝子治療法は、ヒト抗体の軽鎖またはその抗原結合部分をコードする単離した核酸分子またはその一部分の有効量を投与する工程およびこの核酸分子を発現させる工程を包含する。より好ましい方法において、遺伝子治療法は、ヒト抗体の重鎖またはその抗原結合部分をコードする単離した核酸分子またはその一部分の有効量、およびヒト抗体の軽鎖またはその抗原結合部分をコードする単離した核酸分子またはその一部分の有効量を投与する工程ならびにこれらの核酸分子を発現させる工程を包含する。遺伝子治療法はまた、上で記載されるように、別の抗ウイルス薬剤、免疫モジュレーターおよび／または免疫賦活剤を投与する工程を包含する。
【０１６６】
本発明をより理解するために、以下の実施例を記載する。これらの実施例は、例示のみを目的としており、いずれの様式においても、本発明の範囲を制限するように構成されるべきでない。
【実施例】
【０１６７】
（実施例１  ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０に特異的に結合するヒトモノクローナル抗体）
（材料および方法）
（組換えタンパク質および合成ペプチド）
可溶性Ｒ５−トロピッククレードＢ（Ｒ５−ｔｒｏｐｉｃ  ｃｌａｄｅ  Ｂ）の最初の単離体ＨＩＶＳＦ１６２（Ｃｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８６：８５７５−８５７９）およびＨＩＶＪＲ−ＦＬ（Ｋｏｙａｎａｇｉ，Ｙ．ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３６：８１９−８２２）由来のｒｇｐ１２０を、ＨＥＫ２９３（Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９７７）Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．３６：５９−７２）細胞株から分泌させる。このＨＥＫ２９３細胞は、ｐｃＤＮＡ３．１ｚｅｏ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）によりこの組換えタンパク質を安定に発現させる。これらｇｐ１２０に対するコード配列を、分子クローンからのＰＣＲによって調製し、そして完全に配列決定した。ｒｇｐ１２０ＪＲ−ＦＬに対する配列を、その開始コドンで最適化し（Ｋｏｚａｋ（１９８９）Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１０８：２２９−２４１）た。これは、そのＣ末端に、Ａｌａ残基およびＧｌｙ残基に続いて埋め込まれたＨｉｓ６親和性タグを有する。
【０１６８】
１つの場合において、可溶性のＨＩＶＳＦ１６２  ｇｐｌ２０タンパク質（ＳＦ１６２は、ＨＩＶのＣＣＲ５−トロピック単離体である）をコードするプラスミドを、以下の様式で調製した。最初のＨＩＶ−１の単離体ＳＦ１６２のｇｐ１２０配列を、プライマー（５’−ａｇａｃａｔｃｔａｇａａｔｇａｇａｇｔｇａａｇｇｇｇａｔｃａｇｇ−３’（配列番号１４）および５’−ｇｃｔｃｃｇａａｔｔｃｔｔａｔｔａｔｃｔｔｔｔｔｔｃｔｃｔｃｔｇ−３’（配列番号１５））を用いるＰＣＲにより、ウイルスゲノムＤＮＡから増幅した。これらのプライマーは、ｇｐ１２０遺伝子に隣接する部位に、ＸｂａＩ部位およびＥｃｏＲＩ部位を導入した。これらの部位は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ製のｐｃＤＮＡ３．１ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）中にＰＣＲ産物をクローニングするために使用された。安定な細胞株を、このプラスミドでヒト２９３細胞をトランスフェクトすることによって確立し、Ｚｅｏｃｉｎに耐性な細胞を選択した。可溶性ｒｇｐ１２０を高濃度で分泌する細胞クローンを、上清培地のＥＬＩＳＡによって同定し、そして大量に増殖させた。
【０１６９】
可溶性ｒｐｇ１２０を、以前（Ｇｉｌｌｊａｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）ＡＩＤＳ  Ｒｅｓ  Ｈｕｍ  Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ  ５月；９（５）：９：４３１−４３８）に記載したように、Ｇａｌａｎｔｈｕｓ  ｎｉｖａｌｉｓ  ｓｎｏｗｄｒｏｐ凝集素（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．）を用いるレクチンクロマトグラフィーによって細胞培養培地から９５％よりも高い純度まで精製した。Ｖ２およびＣＤ４の結合部位における立体構造的エピトープに対するｓＣＤ４およびＭＡｂとの反応性によって決定したので、これらは非常にネイティブである。
【０１７０】
他の可溶性ｒｇｐ１２０を、ＮＩＨ  ＡＩＤＳ研究および関連試薬プログラム（ＮＩＨ  ＡＩＤＳ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｒｅａｇｅｎｔ  Ｐｒｏｇｒａｍ）から得た。これらには、Ｘ４−トロピッククレードＢの研究用に適応させた単離体である、ＨＩＶＳＦ２（番号３８６）、ＨＩＶＩＩＩＢ（番号３９２６）およびＨＩＶＭＮ（番号３９２７）；Ｒ５−トロピッククレードＢの最初の単離体ＨＩＶＢａＬ（番号４９６１）；Ｒ５−トロピッククレードＥの最初の単離体ＨＩＶＣＭ２３５（番号２９６８）；ならびにクレードＥの最初の単離体ＨＩＶ９３ＴＨ９７５（番号３２３４）から誘導されるｇｐ１２０が挙げられる。
【０１７１】
マウス白血病ウイルスのＳＵタンパク質のＮ末端フラグメントのＣ末端に結合する、ＨＩＶ−１可変ドメインを含む融合タンパク質の発現および精製は記載されており、同様に、融合タンパク質およびそれらを作製する方法も記載されている（Ｋａｙｍａｎ，Ｓ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６８：４００−４１０およびＫｒａｃｈｍａｒｏｖ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）ＡＩＤＳ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ第１７巻、１８号：１７３７−１７４８、米国特許番号第５，６４３，７５６（１９９７年７月１日に発行）、同第５，９５２，４７４（１９９９年９月１４日に発行））。野生型（図６の環状ＪＲ−ＣＳＦおよび図２〜３のＶ３融合タンパク質ならびに図６ＢのＪＲ−ＣＳＦ融合タンパク質）および線状Ｖ３ＪＲ−ＣＳＦ融合タンパク質（線状化したＶ３ＪＲ−ＣＳＦ融合タンパク質（図６の線状ＪＲ−ＣＳＦ）は、Ｖ３ループのＮ末端の塩基のＣｙｓをＳｅｒに変異させた変異体Ｖ３ＪＲ−ＣＳＦ融合タンパク質である）ならびにＶ１／Ｖ２ＳＦ１６２ドメイン（図２および３）を発現する融合タンパク質（米国特許番号第５，６４３，７５６（１９９７年７月１日発行）、同第５，９５２，４７４（１９９９年９月１４日発行）、Ｋａｙｍａｎ，Ｓ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６８：４００−４１０およびＫｒａｃｈｍａｒｏｖ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）ＡＩＤＳ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ第１７巻、１８号：１７３７−１７４８）（含まれる領域については、図３を参照のこと）を使用した。
【０１７２】
合成ペプチドＴ１５Ｋ（配列番号４）、Ｐ１３０−１（配列番号２）およびＰ１３０−２（配列番号３）を、Ｂｉｏ−Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｉｎｃ．（Ｌｅｗｉｓｖｉｌｌｅ，ＴＸ  ７５０５７）から購入した。ＨＩＶＭＮ（全長線状（「線状ＭＮ」（配列番号７））（番号１８４０）；全長環状（「環状ＭＮ」（配列番号８））（番号１８４１）；ＭＮ１〜２０（配列番号９）（番号１９８５）；ＭＮ１１〜３０（配列番号１０）（番号１９８６）；ＭＮ２１〜４０（配列番号１１）（番号１９８７）；ＰＮＤ  ＭＮ／ＩＩＩＢ  ＭＮ６〜２７＋ＱＲ（配列番号１２）（番号８６４）およびＨＩＶＩＩＩ３（配列番号１３）（番号１５９０）由来のＶ３ループの種々の領域に対応するペプチドを、ＮＩＨ  ＡＩＤＳ研究および関連試薬プログラムから得た。
【０１７３】
（免疫化およびハイブリドーマの単離）
マウス（ＸＭＧ２系統のＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）動物（これは、ヒトγ−２κ抗体産生トランスジェニックマウスである））を、ＳＦ１６２  ｒｇｐ１２０（組換えｇｐ１２０（ｒｇｐ１２０ＳＦ１６２））で皮内に免疫した（例えば、Ｍｅｎｄｅｚ，Ｍ．ら（１９９７）Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．１５：１４６〜１５６を参照のこと）。２０μｇのｒｇｐ１２０ＳＦ１６２を、Ｒｉｂｉアジュバント（ＭＰＬ＋ＴＤＭ）の存在下で使用して、各ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）動物をプライムし、そして同じアジュバントとともに混合した１５μｇのｒｇｐ１２０ＳＦ１６２を使用して、４週間隔で３回ブーストした。最後のブーストは、アジュバントを用いずに、１５μｇのｒｇｐ１２０ＳＦ１６２からなり、融合の４日前に与えた。１つの実施形態において、免疫化を、ｒｇｐ１２０を用いて行い、これは、ＰＮＧａｓｅ  Ｆ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ）で処理することによって酵素学的に脱グリコシル化されている。ｒｇｐ１２０に対して特異的な抗体を、数回の免疫化の後に誘導した。この抗体で免疫したＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）マウスは、数回の免疫化の後に、高い力価の抗ｇｐ１２０抗体を発生した。免疫性のＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）マウス由来の脾細胞は、Ｓｐ２／０骨髄腫と効率的に融合し、このことは、多数のｇｐ１２０特異的ハイブリドーマの単離を可能にした。
【０１７４】
免疫したＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）マウス由来の脾細胞を収集し、そして標準的な技術（例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９９０）を参照のこと）を使用して、ＳＰ２／０骨髄腫細胞に融合させた。簡潔には、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）動物由来の脾細胞を、収集し、そして１個の骨髄腫細胞に対して５個の脾臓細胞の割合で、ＳＰ２／０骨髄腫細胞に融合させた。融合を、１ｍｌのＰＥＧ／ＤＭＳＯ（Ｓｉｇｍａ  Ｐ７３０６）を細胞混合物に１分間にわたって添加し、ピペットを用いてさらに数分間穏やかに攪拌することによって、開始した。次いで、この細胞を、１０ｍｌの不完全なＤＭＥＭを、少なくとも１０分間にわたって添加することによってゆっくりと希釈した。次いで、この細胞を、４００ｇにて５分間遠心分離し、ＨＡＴ培地中に再懸濁し、そして１ウェルあたり２００μｌで、２００，０００個の細胞濃度にて、９６ウェルの平底培養プレートにプレートした。
【０１７５】
このプレートを、融合の後７日間、平静に保った。７日目に、このウェルを、上清の半分を取り除き、そして１００μｌのＨＡＴ培地を、各ウェルに加えることによって栄養補給した。ハイブリドーマを、１２〜１４日目、ｒｇｐ１２０ＳＦ１６２に対して標準的なＥＬＩＳＡによってスクリーニングした。
【０１７６】
ポジティブウェル由来の細胞を、増殖させそして再試験した。ポジティブのままである培養物を、安定するまでサブクローン化した。ｒｇｐ１２０ＳＦ１６２（組換えｇｐ１２０ＳＦ１６２）と反応性のヒトＭａｂを発現する、クローンのハイブリドーマ細胞株を得た。クローニングおよびサブクローニングを、以下のように行った。スクリーニングした後、ポジティブなハイブリドーマを、４８ウェルプレートに移し、そしてＨＴ培地中で増殖させた。この４８ウェルからの上清を、ｒｇｐ１２０および２％  ＢＬＯＴＴＯ単独に対して、ＥＬＩＳＡによって試験した。所望の場合、反復的にポジティブなハイブリドーマを、クローニングおよびサブクローニングし、そしてＥＬＩＳＡによって再スクリーニングした。Ａｂ精製および特徴付けのために、ポジティブなハイブリドーマを、培養物をバルクするように増殖させた。抗体を、製造業者の指示書に従って、プロテインＡカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｉｎｃ．ＮＪ）を使用して精製した。
【０１７７】
（スクリーニングアッセイ）
ハイブリドーマの上清を、以前に記載されたように（Ｐｉｎｔｅｒら（１９９３）ＡＩＤＳ  Ｒｅｓ．Ｈｕｍ．Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ  ９：９８５〜９９６）、アルカリホスファターゼ結合体化ヤギ抗ヒトＩｇＧを二次抗体として使用して、ＥＬＩＳＡによってスクリーニングした。代表的な実験において、１ウェルあたり５０μｌ中、１００ｎｇのｒｇｐ１２０ＳＦ１６２を、被覆緩衝液（炭酸緩衝液、ｐＨ９．８）中で４℃にて一晩、９６ウェルのＥＬＩＳＡプレート上にコーティングし、そしてこのウェルを、１００μｌの２％  ＢＬＯＴＴＯ（カーネーション粉末状脱脂乳）で、３７℃にて１時間または４℃にて一晩、ブロッキングした。このプレートを、０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０を含有するＰＢＳ（ＰＢＳＴ）で３回洗浄し、そしてこのハイブリドーマ培養物由来の５０μｌの上清を、このウェル中に加えた。３７℃にて２時間のインキュベーションの後、このプレートを洗浄し、そして二次抗体（アルカリホスファターゼ結合体化ヤギ抗ヒト抗体）を加え、そして３７℃にて１時間インキュベートした。ＰＢＳＴで３回洗浄した後、５０μｌ／ウェルのＡＰ発色試薬を加え、そしてこのプレートを、ＯＤ４０５で読み出した。
【０１７８】
結合阻害の研究について、可溶性ＣＤ４（「ｓＣＤ４」）および１ｍｇ／ｍｌのＭａｂを、室温にて４時間、１／８容量のビオチンアミドカプロン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＤＭＳＯ中１ｍｇ／ｍｌ）（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍ  Ｃｏ．）でビオチン化し、その後、ＰＢＳに対して透析を行った。ビオチン化したプローブおよび非標識の競合試薬を、抗原でコーティングしたＥＬＩＳＡプレートに加える前に混合し、次いで、ストレプトアビジン−ＡＰ（Ｘｙｍｅｄ）を二次試薬として使用して正常にプロセスした。各ビオチン化試薬を、その線形応答範囲内の濃度で使用した。
【０１７９】
（ＨＩＶ中和活性の測定）
ヒトＭａｂの中和活性を、いくつかの異なる方法で測定した。最も有用なアッセイは、単サイクルの感染性アッセイであり、このアッセイは、ＨＩＶ−１  ｅｎｖで偽型化された（ｐｓｅｕｄｏｔｙｐｅｄ）ＮＬ４−３ルシフェラーゼウイルスを使用した。このＮＬ４−３  ｌｕｃウイルスは、欠損性ｅｎｖ遺伝子を有し、かつｎｅｆ遺伝子の代わりにｌｕｃ遺伝子を有する。Ｃｈｅｎ，Ｂ．Ｋ．ら（１９９４）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６８：６５４〜６６０を参照のこと。機能的なｅｎｖ遺伝子をトランスで捕足した場合、得られるビリオンは、感受性細胞内に入る際にｌｕｃ活性を形質転換する。このアッセイは、非常に高速で、定量的で、かつ感受性である。ルシフェラーゼ活性を、感染の２日後ほどの早期に、９６ウェルプレート蛍光光度計を使用して、迅速かつ正確に測定し得、そしてこのアッセイは、非常に大きな動的範囲を有する。
【０１８０】
ＨＩＶ−１中和活性を、ＨＩＶ−１ビリオン保有Ｅｎｖ欠損性のルシフェラーゼ発現ＨＩＶＮＬ４−３ゲノム（Ｃｈｅｎら（１９９４）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６８：６５４〜６６０）（これは、以前に記載したように（Ｋｒａｃｈｍａｒｏｖら（２００１）ＡＩＤＳ  Ｒｅｓｅａｃｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ  第１７巻、１８号：１７３７〜１７４８）、ＨＩＶＳＦ１６２  Ｅｎｖで偽型化されている）を使用する単サイクルの感染性アッセイを用いて決定した。感染を、９６ウェル形式で行い、そしてルシフェラーゼ活性を、感染の４８〜７２時間後に、Ｐｒｏｍｅｇａ製のアッセイ試薬およびマイクロタイタープレート照度計（Ｄｙｎｅｘ，Ｉｎｃ．）を使用して決定した。慣習的に、９６ウェルの培養プレート中、１ウェルあたり、１０，０００個のＵ−８７−Ｔ４−ＣＣＲ５細胞を、プレートした。１日後、ｄＮＬ４−３ウイルス偽型を、１ｍｌあたり０．５ｎｇのｐ２４の濃度で、１０μｇ／ｍｌのポリブレンの存在下で加えた。この細胞に、新鮮な培地およびポリブレンを、２４時間後に再び栄養補給し、そしてさらに２４〜７２時間、増殖させた。次いで、細胞を、Ｐｒｏｍｅｇａルシフェラーゼアッセイキットで提供される緩衝液で溶解し、そしてルシフェラーゼ活性を、ルシフェラーゼ基質（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｉｎｃ．，Ｍａｄｉｓｏｎ  ＷＩ）を加えることによって測定した。次いで、相対的な光単位を、マイクロタイタープレート照度計（Ｄｙｎｅｘ，Ｉｎｃ．，ＶＡ）を使用して測定した。慣習的に、これは、コントロールウイルスサンプルに対して、５０，０００〜１００，０００のＲＬＵを生じる。
【０１８１】
（結果）
（ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）マウスにおけるＧｐ１２０特異的体液性応答の効果的な発生）
ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）マウス（Ｇ２系統（「ＸＭＧ２」）を、ＨＩＶＳＦ１６２由来のネイティブの組換えｇｐ１２０で免疫することによって、ｇｐ１２０の複数のエピトープおよびドメインに対する強い抗体応答が生じ、それにより、ハイブリドーマ産生ｇｐ１２０特異的ヒトＭａｂの効率的な単離が可能になる。得られたＭａｂを、複数のｇｐ１２０領域に対して指向させ、そしてこれらの多数のＭａｂは、自系ＳＦ１６２系統に対して強い中和活性を有した。広範なエピトープ（保存されたコンホメーションのｇｐ１２０エピトープおよび型特異的エピトープと交差反応性エピトープの両方を含む）を、単離したＭａｂによって認識させた。これらの結果は、新しくかつ興味深いＨＩＶ−１のエピトープを同定するためにＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）系が有用であることを証明し、そしてこの系が、ＨＩＶ−１感染の検出、ＨＩＶ−１感染の予防およびＨＩＶ−１感染の処置における、免疫療法での適用に適切なヒトＭａｂを提供し得ることを示唆する。
【０１８２】
図１Ａに示すように、ｒｇｐ１２０で免疫したＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）マウスは、可溶性ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０に対して急激な体液性応答を生じた。図１Ａは、可溶性組換えＳＦ１６２  ｇｐ１２０で免疫した、４匹のＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｇ２動物の、Ｒｉｂｉアジュバント（ＭＰＬ＋ＴＤＭ）の存在下における体液性応答の代表的なプロフィールを示す。４匹全てのＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）動物は、最初のブーストの後に検出可能なｇｐ１２０特異的抗体を産生し、そしてこれらの抗体の力価は、後の免疫化とともに増加した。このプロトコルで免疫したＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）マウスの血清は、しばしば、自系ＳＦ１６２ウイルスに対する中和活性を含んだ。血清の力価を、ｒｇｐ１２０ＳＦ１６２（５０ｎｇ／ウェル）を標的抗原として使用する標準的なＥＬＩＳＡによって決定した。図１Ｂは、このプロトコルで免疫したＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）マウスの免疫前の血清および免疫後の３つの血清（２−Ｃ、２−Ｄ、３−Ａ）を用いて行ったＳＦ１６２中和アッセイの結果を示す。この免疫前の血清は、中和活性を有さず、一方、免疫後のＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）マウスの３つの血清のうちの２つ（２−Ｄ、３−Ａ）は、ＳＦ１６２を、およそ１：２５希釈のＮＤ５０で中和した（図１Ｂ）。これらおよび他の免疫した動物を屠殺し、そしてそれらの脾細胞を、上記のように、骨髄腫細胞と融合させた。
【０１８３】
Ｍａｂのエピトープ特異性を、複数の抗原（Ｖ１／Ｖ２およびＶ３の融合タンパク質、合成ペプチドならびに複数系統のｒｇｐ１２０を含む）を使用するＥＬＩＳＡによって分析した。これらの分析は、高密度のエピトープが、これらのＭａｂ（型特異的配列と比較的保存された配列の両方を含む）によって認識されることを示した。これらのエピトープは、Ｖ１／Ｖ２およびＶ３可変領域、ならびにより保存されたコンホメーション構造中に存在する部位を含んだ。
【０１８４】
（Ｇｐ１２０特異的ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂの単離および初期の特徴付け）
免疫したＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）マウス由来の脾細胞は、Ｓｐ２／０骨髄腫と効率的に融合し、これによって、多数のｇｐ１２０特異的ハイブリドーマの単離が可能になった。これらを、相同なｒｇｐ１２０（ｒｇｐ１２０ＳＦ１６２）抗原に対してＥＬＩＳＡによって初期スクリーニングし、そしてポジティブなウェルをサブクローニングして、反応性について再スクリーニングした。次いで、ポジティブなサブクローンから得られた単細胞クローンを、ｇｐ１２０可変ドメイン（Ｖ１／Ｖ２およびＶ３）を発現する融合タンパク質との反応性について（Ｋａｙｍａｎら、（１９９４）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６８：４００〜４１０）、およびＤＴＴを用いて還元されたかまたは還元されていないｒｇｐ１２０ＳＦ１６２との反応性について、ＥＬＩＳＡによって試験し、産生されるモノクローナル抗体のエピトープ特異性の予備マッピングを得た。代表的なデータを、図２に示す。ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）動物（「ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂ」）由来のヒトＭａｂで観察されるエピトープは、試験した３つの可変ドメインの内外の部位を含んだ。これらのＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂのうちの１１個を、Ｖ１／Ｖ２ドメインに対して指向させ、そして４つが、Ｖ３ドメインに特異的であった。これらの可変ドメインに特異的なＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂは、ネイティブなｒｇｐ１２０ＳＦ１６２および還元されたｒｇｐ１２０ＳＦ１６２とのそれらの類似の反応性によって示されるように、線状エピトープを認識した（図２、第一パネルおよび第二パネル）。２つの主要な可変領域の外側のｇｐ１２０部位に対して指向された２０個のＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂのうち、１７個は、還元されたｒｇｐ１２０ＳＦ１６２と反応せず、このことは、それらがジスルフィド依存性コンホメーションエピトープを認識することを示し、一方、３つは、還元された後のｒｇｐ１２０ＳＦ１６２とより高い反応性を有した。これらのエピトープのより正確な規定を、以下に記載する。
【０１８５】
（Ｖ１／Ｖ２中のエピトープに対するＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂの特徴付け）
Ｖ１／Ｖ２ドメイン融合タンパク質（Ｋａｙｍａｎ，Ｓ．Ｃ．ら（１９９４）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６８：４００−４１０およびＫｒａｃｈｍａｒｏｖら（２００１）ＡＩＤＳ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ  Ｖｏｌ．１７、Ｎｕｍｂｅｒ  １８：１７３７−１７４８）と反応する１１個のＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂ（図２）は、ＤＴＴでの還元後に、ｒｇｐ１２０ＳＦ１６２との反応性を保持し、このことは、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂが、合成ペプチドと反応し得ることを示唆する。Ｖ２ドメインのＮ末端領域と一致する１７マーのペプチド（２つの位置で免疫原ＳＦ１６２とは異なるＣａｓｅＡ２単離体（Ｗａｎｇら（１９９５）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６９：２７０８−２７１５）に対応する）が利用可能であり（Ｔ１５Ｋ（配列番号４））、そして、ＳＦ１６２  Ｖ１ドメインと一致する２つの重複する１５マーのペプチド（それぞれ、Ｐ１３０．１およびＰ１３０．２（配列番号２および３））が合成された（図３Ｂ）。
【０１８６】
１０個のＳＦ１６２  Ｖ１／Ｖ２反応性ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂが、Ｃ末端Ｖ１ペプチドであるＰ１３０−２（配列番号３）と反応したが、１１番目のＳＦ１６２  Ｖ１／Ｖ２反応性ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂは、Ｖ２ペプチド（Ｔ１５Ｋ（配列番号４））と反応した（図３Ａ）。これら１０個は、Ｍａｂ  ３５Ｄ１０／Ｄ２：ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００１、Ｍａｂ  ４０Ｈ２／Ｃ７：ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００６、Ｍａｂ  ４３Ｃ７／Ｂ９：ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００７、Ｍａｂ  ４３Ａ３／Ｅ４：ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００５、Ｍａｂ  ４５Ｄ１／Ｂ７：ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００２、Ｍａｂ  ４６Ｅ３／Ｅ６：ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００８、Ｍａｂ  ５８Ｅ１／Ｂ３：ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００３、Ｍａｂ  ６４Ｂ９／Ａ６：ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００４、Ｍａｂ  ６９Ｄ２／Ａ１およびＭａｂ  ８２Ｄ３／Ｃ３である。これら１０個のＭａｂ（図３Ａ）（Ｍａｂ  ３５Ｄ１０／Ｄ２：ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００１、Ｍａｂ  ４０Ｈ２／Ｃ７：ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００６、Ｍａｂ  ４３Ｃ７／Ｂ９：ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００７、Ｍａｂ  ４３Ａ３／Ｅ４：ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００５、Ｍａｂ  ４５Ｄ１／Ｂ７：ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００２、Ｍａｂ  ４６Ｅ３／Ｅ６：ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００８、Ｍａｂ  ５８Ｅ１／Ｂ３：ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００３、Ｍａｂ  ６４Ｂ９／Ａ６：ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００４、Ｍａｂ  ６９Ｄ２／Ａ１およびＭａｂ  ８２Ｄ３／Ｃ３）は、ＣａｓｅＡ２のＶ１／Ｖ２ドメインを含む融合タンパク質に結合しなかった（Ｐｉｎｔｅｒら（１９９８）Ｖａｃｃｉｎｅ  １６：１８０３−１８０８；Ｋａｙｍａｎ，Ｓ．Ｃ．ら（１９９４）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６８：４００−４１０およびＫｒａｃｈｍａｒｏｖら（２００１）ＡＩＤＳ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ  Ｖｏｌ．１７、Ｎｕｍｂｅｒ  １８：１７３７−１７４８、米国特許第５，６４３，７５６号（１９９７年７月１日発行）、米国特許第５，９５２，４７４号（１９９９年９月１４日発行））。Ｃ末端Ｖ１ペプチド（Ｐ１３０．２（配列番号３））と反応性のＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂは、Ｎ末端Ｖ１ペプチド（Ｐ１３０．１（配列番号２））とは反応せず、中心領域の最後の４つのＶ１残基および最初の４つの残基を含む配列ＫＥＭＤＧＥＩＫ（配列番号１６）が、これらのエピトープにとって重要な残基を含んだことを示した（「Ｖ１ドメイン」は、Ｖ１ドメインの直ぐＮ末端および／または直ぐＣ末端のアミノ酸残基を含み得る；本発明の抗体は、Ｖ１ドメインの配列または残基に依存するエピトープを認識し得る）。これら２つのＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂは、このペプチドと弱くのみ反応し（図３Ａ）；これらの抗体はまた、ｒｇｐ１２０により弱く結合し、このことは、これらが低い親和性を有したことを示唆する。これら２つのＭａｂのエピトープは、Ｖ１／Ｖ２融合タンパク質およびｒｇｐ１２０とのこれらの抗体の反応性が、Ｖ１ペプチド（Ｐ１３０−２）によって有効にブロックされたという実証によって、より決定的に��１領域にマップされた（データ示さず）。
【０１８７】
８．２２．２（８．２２．３および８．２２．２は、元のハイブリドーマクローンの２つのサブクローンに由来する）によって認識されるＶ２ペプチドに対応する一般的な領域は、いくつかの中和ラットＭａｂ（ＭｃＫｅａｔｉｎｇら（１９９３）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６７：４９３２−４９４４）によって認識されるエピトープを含み、そしてチンパンジーＭａｂであるＣ１０８Ｇ（Ｗａｒｒｉｅｒら（１９９４）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ６８：４６３６−４６４２）を非常に強力に中和するエピトープの一部であることが、以前に示されている。非ヒトＭａｂのエピトープは、ペプチドのＮ末端半分に位置し、そしてＨＸＢ−２／ＨＸＢ−１０配列に対して高度に型特異的であった（Ｃ１０８Ｇはまた、ＢａＬ配列を認識した（Ｖｉｊｈ−Ｗａｒｒｉｅｒ，Ｓ．（１９９６）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７０：４４６６−４４７３））。Ｔ１５Ｋ（配列番号４）のＮ末端領域中の２つの位置でのバリエーションに対する８．２２．２結合の非感受性は、この８．２２．２エピトープが、Ｖ２ペプチドのＣ末端部分に位置することを示唆した。これは、比較的保存された領域であり、分岐群Ｂ内でのこの抗体の広い交差反応性と一致する（図８〜９を参照のこと）。これらの反応性パターンは、８．２２．２のエピトープが、以前に記載されたＶ２中の線状エピトープよりも、異なるＶ２アミノ酸を含むことを示唆した。Ｍａｂ８．２２．２は、ＨＩＶ−１ＩＩＩＢまたは関連のクローン（例えば、ＨＸＢ２、ＨＸＢ２ｄまたはＤ１０）のｇｐ１２０に結合しなかったか、または結合しない。「Ｖ２ドメイン」は、Ｖ２ドメインの直ぐＮ末端および／または直ぐＣ末端のアミノ酸残基を含み得る。本発明の抗体は、Ｖ２ドメインの配列または残基に依存するエピトープを認識し得る。
【０１８８】
図１０は、Ｍａｂ８．２２．２との反応性について試験されたｇｐ１２０のＶ２領域配列を示す。Ｍａｂ８．２２．２と反応した、試験された４つのｇｐ１２０は、ＳＦ１６２、ＣａｓｅＡ２Ｂ、ＪＲ−ＦＬおよびＢａＬである。Ｍａｂ８．２２．２と反応しなかった、試験された３つのｇｐ１２０は、ＨＸＢ２ｄ、ＭＮ−ＳＴおよびＳＦ２である。反応性配列（ＱＫＥＹＡＬＦＹＫ（配列番号２６））において保存されているペプチドＴ１５Ｋ（配列番号４）によってマップされる領域に存在する配列に、下線を付す。
【０１８９】
競合アッセイを、以前に記載されたＶ１およびＶ２中のエピトープと、これらの新たに単離されたＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂのエピトープの近似についての情報を得るために実行した。２つの抗Ｖ１  ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂ（１つは高い親和性を有し（３５Ｄ１０／Ｄ２）そして１つは低い親和性を有する（４３Ａ３／Ｅ４））、患者由来の、Ｖ２中のコンフォメーションエピトープに対する以前に記載されたヒトＭａｂ（６９７Ｄ）（Ｇｏｒｎｙ，Ｍ．Ｋ．ら（１９９４）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６８：８３１２−８３２０）およびｓＣＤ４がビオチン化され、そして種々のＭａｂがＳＦ１２６  ｒｇｐ１２０に対するそれらの結合をブロックする能力を決定した（図５）。予測されたように、４１１７Ｃ（Ｖ３ドメイン中のエピトープに対する、患者由来のヒトＭａｂ（「ＨｕＭａｂＰ」））も、５１４５Ａ（ＣＤ４結合部位（Ｃｄ４ｂｓ）と重複するエピトープに対するＨｕＭａｂＰ）のいずれも、Ｖ１反応性ＭａｂまたはＶ２反応性Ｍａｂのいずれかによる結合をブロックしなかった。Ｖ１反応性ＭａｂまたはＶ２反応性Ｍａｂは、どちらも、ｓＣＤ４の結合のブロックに有効ではなかったが、コントロールＨｕＭａｂＰ  ５１４５Ａは、高度に有効であった。従って、これらのＶ１エピトープおよびＶ２エピトープは、ＣＤ４ｂｓと重複しないようである。Ｖ１ドメインペプチドと反応性の全てのＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂは、これらの各エピトープ中のＫＥＭＤＧＥＩＫ配列（配列番号１６）の関与を示すペプチド結合データと一致して、ビオチン化Ｖ１特異的ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂの両方と競合する。ビオチン化Ｖ１特異的ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂのいずれも、８．２２．２（線状Ｖ２エピトープに対するＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂ）によっても、コンフォメーションＶ２エピトープに以前にマップされた２つのＭａｂ（マウスＭａｂ  ＳＣ２５８（Ｍｏｏｒｅら（１９９３）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６７：６１３６−６１５１）およびヒトＭａｂ  ６９７Ｄ（Ｇｏｒｎｙ，Ｍ．Ｋ．ら（１９９４）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６８：８３１２−８３２０））によっても競合されなかった。ビオチン化６９７Ｄの結合は、８．２２．２によって効果的にブロックされたが、Ｖ１特異的ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂのいずれによってもブロックされなかった。従って、ｇｐ１２０の３次元構造において、線状Ｖ２エピトープは、一次配列中のＶ１ペプチドおよびＶ２ペプチドの比較的近位であるにもかかわらず、コンフォメーションＶ２エピトープのすぐ近位に位置するが、Ｖ１エピトープの近位に位置しない。
【０１９０】
（Ｖ３中のエピトープに対するＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂの特徴付け）
４つのＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂを、Ｖ３ＪＲ−ＣＳＦ融合タンパク質とのこれらの反応性に基づいて、Ｖ３ドメインにマップした（Ｋａｙｍａｎ，Ｓ．Ｃ．ら（１９９４）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６８：４００−４１０およびＫｒａｃｈｍａｒｏｖら（２００１）ＡＩＤＳ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ  Ｖｏｌ．１７、Ｎｕｍｂｅｒ  １８：１７３７−１７４８）（図６）。ＪＲ−ＣＳＦは、ＳＦ１６２と密に関連する。これらのＭａｂのエピトープを、ＪＲ−ＣＳＦ、ＭＮおよびＩＩＩＢのｇｐ１２０のＶ３ドメインの領域に対応する一連のペプチドに対するＥＬＩＳＡによってさらに位置づけ、そしてこれらのエピトープを、ＨＩＶ−１感染ヒト患者から単離されたＶ３ループに対するＨｕＭａｂＰのパネルのエピトープと比較した。ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂは、標準的なＨｕＭａｂＰがマップされる３つの群（Ｃ、ＤおよびＥ）とは別個の、２つの別個の群（ＡおよびＢ）にマップされた（図６）。「Ｖ３ドメイン」は、Ｖ３ドメインの直ぐＮ末端および／または直ぐＣ末端のアミノ酸残基を含み得る。本発明の抗体は、Ｖ３ドメインの配列または残基に依存するエピトープを認識し得る。
【０１９１】
最も著しい区別は、全ての標準的なＨｕＭａｂＰが、Ｖ３ループのＮ末端領域およびクラウン（残基１５〜１８（ＧＰＧＲ（配列番号１７）））に対応するＭＮ１〜２０ペプチド（配列番号９）と反応したが、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂはどれも、このエピトープを認識しなかったことであった。群ＡのＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂは、ＭＮペプチド１１〜３０（配列番号１０）、それらのエピトープ中の関連残基２１〜３０（ＹＴＴＫＮＩＩＧＴＩ（配列番号２５））と反応した。これらがＭＮペプチド１〜２０（配列番号９）および２１〜４０（配列番号１１）と反応できないことは、それらのエピトープが、ループのクラウン近傍の残基２０にわたることを示唆した。ＰＮＤＭＮ／ＩＩＩＢ（配列番号１２）ペプチド（ＨＩＶ−ＩＩＩＢペプチド（配列番号１３）ではなく）との群ＡのＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂの反応性は、それらのエピトープ中のＹ２１および／またはＩ２７（図６中で下線を付した；ＭＮ  Ｖ３ループの最初のＣから番号付ける）に関与した。これらのＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂがｒｇｐ１２０ＳＦ２（以下を参照のこと）と反応できないことは、Ｖ３ＳＦ２が図６中のコンセンサスとは異なる唯一の位置であるＹ２１についての重要な役割と一致した。Ｖ３ＩＩＩＢ配列由来の１４位の後ろにＱＲ挿入を組み込んだＰＮＤＭＮ／ＩＩＩＢペプチド（配列番号１２）との、群ＡのＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂの反応性はまた、群Ａのエピトープが、ループのクラウンに対してＮ末端である領域中の配列に対して感受性でないことを示唆した。このＱＲ挿入は、Ｖ３ＩＩＩＢに特徴的であり、そして少なくとも一部は、群ＥのＨｕＭａｂＰの型特異性を説明するようであるが、群ＣおよびＤのＨｕＭａｂＰの特異性は説明しない。
【０１９２】
群ＢのＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂである８．２７．３は、全長ペプチドとのみのその反応性によって他とは識別され、このことは、これが非連続エピトープまたはコンフォメーションエピトープを認識したことを示唆する。線状ＭＮペプチドおよびＶ３ＪＲ−ＣＳＦ融合タンパク質の線状形態の両方との反応性は、８．２７．３エピトープのコンフォメーションが、Ｖ３ループの基部でのジスルフィド結合に依存しないことを示した。
【０１９３】
（可変ドメインの外側のＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂの特徴付け）
単離されたＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂのほとんどは、可変領域プローブのいずれとも反応しなかった。結合競合アッセイを行って、これらの抗体によって認識されるエピトープをマッピングした。ｒｇｐ１２０ＳＦ１６２に対するビオチン化ｓＣＤ４またはビオチン化ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂの結合を阻害する各ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂの能力を、ＥＬＩＳＡにおいて決定した（図７）。６個のＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂ（Ｃｏｎｆ．−ｇｐ１２０−ＡまたはＣｏｎｆ  Ａ、ＣＤ４ｂまたはＣＤ４ｂ）およびコントロールＨｕＭａｂＰ（５１４５Ａ）は、ｇｐ１２０へのｓＣＤ４の結合を効率的にブロックし、このことは、これらが、ｇｐ１２０のＣＤ４ｂと重複するエピトープ（単数または複数）に対するものであることを示す。これらのＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂの全ては、ジスルフィド結合依存性エピトープを認識し（図２）、これは、ＣＤ４ｂおよびｓＣＤ４結合の阻害を媒介する標準的なエピトープの立体的特性と一致する（Ｔｈａｌｉ，Ｍ．，Ｃ．ら、（１９９２）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６６：５６３５−５６４１）。
【０１９４】
ジスルフィド結合依存性エピトープに対する１１個のＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂは、ｓＣＤ４の結合を阻害しなかった。これらのＭａｂの全ては、この群の１つのメンバーである６３Ｇ３／Ｅ２による結合をブロックしたが、ＣＤ４ｂに対するＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂの１つである３８Ｇ３／Ａ９による結合をブロックしなかった（図７）。従って、これらのＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂは、別の競合群を構成した（Ｃｏｎｆ−ｇｐ１２０−ＢまたはＣｏｎｆ  Ｂ）。これらのＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂのうちの２つは、６３Ｇ３／Ｅ２を部分的にのみ阻害し、これは、他のＣｏｎｆ−ｇｐ１２０−Ａエピトープと部分的にのみ重複するエピトープとのより低い親和性または反応性のいずれかを反映し得る。
【０１９５】
還元ｒｇｐ１２０とは反応性であったが、Ｖ１／Ｖ２融合タンパク質およびＶ３融合タンパク質のいずれとも反応性でない、３つのＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂは、第３の競合群（ｇｐ１２０−Ｃ）を構成した。これらのＭａｂの各々は、９７Ｂ１／Ｅ８結合を阻害したが、ＣＤ４ｂまたはＣｏｎｆ−ｇｐ１２０−Ｂエピトープに対するｓＣＤ４またはＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂによる結合を有意にブロックしなかった（図７）。ｇｐ１２０−Ｃエピトープに対するＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂは、全て、ＰＮＧａｓｅ  Ｆで脱グリコシル化したｒｇｐ１２０で免疫したマウスから単離された。ｇｐ１２０へのこれらの抗体の結合は、ジスルフィド結合の還元の際に増強され（図１）、このことは、これらのエピトープが、そのグリコシル化された分子の変性によって露出されることを示唆する。
【０１９６】
（ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂによって認識されるエピトープの保存性の程度）
これらのＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂが交差反応性である程度を、８つのｒｇｐ１２０のパネルに対するＥＬＩＳＡを実施することによって調査した（図８）。３つのＲ５向性分岐群Ｂ単離株、３つのＸ４向性分岐群Ｂウイルスおよび２つの分岐群Ｅ単離株由来のｇｐ１２０を使用した。
【０１９７】
Ｖ１特異的ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂは、全て、ｒｇｐ１２０ＳＦ１６２に対して高度に特異的であり、このことは、このドメインが、ｇｐ１２０の領域において最も高度に可変性であることと一致する（Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ  ａｎｄ  ＡＩＤＳ，１９９６：Ａ  Ｃｏｍｐｉｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  ａｎｄ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，Ｍｙｅｒｓ，Ｇ．，Ｂ．Ｋｏｒｂｅｒ，Ｂ．Ｆｏｌｅｙ，Ｋ．Ｔ．Ｊｅａｎｇ，Ｊ．Ｗ．Ｍｅｌｌｏｒｓ，およびＳ．Ｗａｉｎ−Ｈｏｂｓｏｎ（１９９６）編、Ｌｏｓ  Ａｌａｍｏｓ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｌｏｓ  Ａｌａｍｏｓ，Ｎｅｗ  Ｍｅｘｉｃｏ，Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ  Ｇｒｏｕｐ  Ｔ−１０，Ｍａｉｌ  Ｓｔｏｐ  Ｋ７１０，Ｌｏｓ  Ａｌａｍｏｓ，Ｎｅｗ  Ｍｅｘｉｃｏ  ８７５４５発行（ｈｔｔｐ：／／ｈｉｖ−ｗｅｂ．ｌａｎｌ．ｇｏｖ／））。Ｖ２特異的ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂである８．２２．２は、３つ全てのＲ５向性（すなわち、ＣＣＲ５向性）分岐群Ｂ  ｇｐ１２０と反応したが、Ｘ４向性（すなわち、ＣＸＣＲ４向性）分岐群Ｂ  ｇｐ１２０とは反応せず、このことは、有意な配列類似性の領域の存在（Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ  ａｎｄ  ＡＩＤＳ，１９９６：Ａ  Ｃｏｍｐｉｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  ａｎｄ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，Ｍｙｅｒｓ，Ｇ．，Ｂ．Ｋｏｒｂｅｒ，Ｂ．Ｆｏｌｅｙ，Ｋ．Ｔ．Ｊｅａｎｇ，Ｊ．Ｗ．Ｍｅｌｌｏｒｓ，およびＳ．Ｗａｉｎ−Ｈｏｂｓｏｎ（１９９６）編、Ｌｏｓ  Ａｌａｍｏｓ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｌｏｓ  Ａｌａｍｏｓ，Ｎｅｗ  Ｍｅｘｉｃｏ，Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ  Ｇｒｏｕｐ  Ｔ−１０，Ｍａｉｌ  Ｓｔｏｐ  Ｋ７１０，Ｌｏｓ  Ａｌａｍｏｓ，Ｎｅｗ  Ｍｅｘｉｃｏ  ８７５４５発行（ｈｔｔｐ：／／ｈｉｖ−ｗｅｂ．ｌａｎｌ．ｇｏｖ／））およびこの可変ドメイン内の向性の決定基の存在（Ｍｏｒｉｋｉｔａ  Ｔ，Ｍ．Ｙ．ら（１９９７）ＡＩＤＳ  Ｒｅｓ  Ｈｕｍ  Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ：１２９１−１２９９，Ｏｇｅｒｔ  ＲＡら  Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．：５９９８−６００６，Ｓｈｉｅｈ  ＪＴら  （２０００）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６９３−７０１，Ｖｅｌｌａ  Ｃ，Ｋ．Ｄ．ら（１９９９）ＡＩＤＳ  Ｒｅｓ  Ｈｕｍ  Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ：１３９９−１４０２）の両方と一致する。Ｖ３特異的ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂは、分岐群Ｂ内の４〜５つのｇｐ１２０を認識し、コレセプターに関する明確な偏りは存在せず；唯一の群ＢのＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂ（８．２７．３のような）は、ｒｇｐ１２０ＳＦ２を認識した。
【０１９８】
これらの可変ドメインの外側のエピトープに対するＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂは、高度に交差反応性であった。ＣＤ４ｂ特異的ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂのうちの４つは、６つ全ての分岐群Ｂのｒｇｐ１２０を認識し、１つが、５つの分岐群Ｂのｒｇｐ１２０を認識し、そして１つ（脱グリコシル化ｇｐ１２０での免疫から誘導された唯一のもの）は、ＳＦ１６２に対して型特異的であった。Ｃｏｎｆ．−ｇｐ１２０−Ｂ  ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂは、３〜７個のｒｇｐ１２０と反応し、ほとんどの場合において、分岐群Ｅのタンパク質のうちの少なくとも１つが含まれた。ｇｐ１２０−Ｃ  ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂもまた交差反応性であり、これは、３〜６個の分岐群Ｂのｒｇｐ１２０を認識する。これらの分類のほとんどにおける抗体の認識パターンにおけるバリエーションは、これらのＭａｂが、これらのエピトープクラスターの各々における複数のエピトープを識別することを示唆する。
【０１９９】
（ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂの中和活性）
ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂの各々を、ＳＦ１６２  ＨＩＶ−１ウイルスを中和する能力について試験した。ＳＦ１６２エンベロープタンパク質を保有し、そしてルシフェラーゼを発現する欠損性のＨＩＶ−１ゲノムを保持するビリオンを使用する、１サイクル感染アッセイを使用した。中和は、４つのエピトープクラスター（Ｖ１、Ｖ２およびＶ３可変ドメインならびにＣＤ４ｂ）の各々に対するＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂの少なくとも１つについて見られた（図４および９）。コンフォメーションｇｐ１２０−Ｂドメインまたは線状ｇｐ１２０−Ｃドメインに対するＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂは、２００μｇ／ｍｌでさえも、中和活性を有さなかった（図９）。この中和の欠失は、インタクトなビリオンにおけるこれらのドメインの露出の欠失、または抗体結合によって干渉され得るこれらの領域に対する機能の欠失のいずれかを反映し得る。
【０２００】
抗Ｖ１  ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂは、全て、ＳＦ１６２株に対する強力な中和活性を有し、ＮＤ５０は、約０．３μｇ／ｍｌ未満〜約４．５μｇ／ｍｌの範囲であった（図９）。１０個の抗Ｖ１／Ｖ２  Ｍａｂ（これらは、３５Ｄ１０／Ｄ２、４０Ｈ２／Ｃ７、４３Ａ３／Ｅ４、４３Ｃ７／Ｂ９、４５Ｄ１／Ｂ７、４６Ｅ３／Ｅ６、５８Ｅ１／Ｂ３および６４Ｂ９／Ａ６、６９Ｄ２／Ａ１および８２Ｄ３／Ｃ３である）は、ＳＦ１６２を中和し、その多くが、非常に強力な終点を有した（図５）。これらの１０個の抗体の全てが、線状Ｖ１エピトープに対して特異的であった。
【０２０１】
Ｖ２特異的ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂである８．２２．２は、それほど強力な中和活性を有さず、ＮＤ５０は、約４８μｇ／ｍｌであった。これらの活性は、全て、コントロールの抗Ｖ２  ＨｕＭａｂＰ、６９７Ｄの活性（約８０μｇ／ｍｌのＮＤ５０）よりもさらに強力であった。Ｖ３特異的ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂは、それらの中和効力において広範に変動した。Ｍａｂ  ８．２７．３は、全てのＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂのうちで最も高い中和活性を有し、ＮＤ５０は、約０．１１μｇ／ｍｌであった。一方、８Ｅ１１／Ａ８は、約２．６μｇ／ｍｌのＮＤ５０を有した。しかし、８Ｅ１１／Ａ８と同じ反応性パターンを有する２つのさらなるＶ３特異的ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂ、６．１および６．７は、５０μｇ／ｍｌの濃度で検出可能な中和活性を有さなかった。ＣＤ４結合部位におけるエピトープに対するＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂのうちの４つもまた、中程度の中和活性を有し、ＮＤ５０は、３０〜６０μｇ／ｍｌの範囲であった。このドメインに対する２つのさらなるＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂは、２００μｇ／ｍｌで中和しなかった。これらの中和ドメインに対するＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂの中和効力における可変性は、異なる親和性に起因し得るか、またはこれらのエピトープにおける構造的および機能的役割における微細な差異に起因し得る。
【０２０２】
ｇｐ１２０の超可変Ｖ１ループは、単離された上記のＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂのパネルに対する免疫優性領域であり、そしてこのドメインに対する全ての抗体は、強力な型特異的中和活性を有した。これは、Ｖ１ドメインに対するＭａｂの最初の記載である（Ｂ．Ｋｏｒｂｅｒ，Ｃ．Ｂ．，Ｂ．Ｈａｙｎｅｓ，Ｒ．Ｋｏｕｐ，Ｃ．Ｋｕｉｋｅｎ，Ｊ．Ｍｏｏｒｅ，Ｂ．Ｗａｌｋｅｒ，Ｄ．Ｗａｔｋｉｎｓ（２０００）ＨＩＶ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｌｏｓ  Ａｌａｍｏｓ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｌｏｓ  Ａｌａｍｏｓ，Ｎｅｗ  Ｍｅｘｉｃｏ；また、ｈｔｔｐ／／ｈｉｖ−ｗｅｂ．ｌａｎｌ．ｇｏｖおよびｈｔｔｐ／／ｈｉｖ−ｗｅｂ．ｌａｎｌ．ｇｏｖ／ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙも参照のこと）。実験用に適合したＸ４向性ＨＩＶＩＩＩＢウイルスに感染した３人の共同研究者の体液性応答を試験する以前の研究は、Ｖ１領域が、感染株に対する抗体を中和する免疫優性標的であることを報告し（Ｐｉｎｃｕｓ，Ｓ．Ｈ．ら（１９９４）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９３：２５０５−２５１３）、これは、現在の研究の結果と一致する。上記のＶ１特異的Ｍａｂの比較的強力な中和活性は、この領域がまた、少なくとも１つのＲ５向性ウイルスにおける強力な中和標的であることを実証し、これは、このような抗体が、インビボ中和体液性応答の重要な要素であり得ることを示唆する。
【０２０３】
Ｖ２ドメインに対する単一のＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂである８．２２（８．２２．２は、８．２２．３のサブクローンである）のみが、本研究で単離されたが、この抗体は、固有かつ興味深いエピトープに対するものであった。Ｖ２における線状エピトープに対する他のＭａｂ（ＭｃＫｅａｔｉｎｇ，Ｊ．Ａ．ら（１９９３）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６７：４９３２−４９４４，Ｓｈｏｔｔｏｎら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６９：２２２−２３０）とは異なり、８．２２．２（８．２２のサブクローン）は、中程度に交差反応性であり、これは、試験した３つ全ての分岐群ＢＲ５向性ｒｇｐ１２０を認識する（図８）。また、８．２２．２は、ＨＩＶ−１１ＩＩＩＢのｇｐ１２０（Ｘ４分岐群Ｂ単離株）に結合しなかった（図８）。Ｖ２に対する他の交差反応性のＭａｂは、報告されているが、コンフォメーションエピトープに対するものであり、これらのエピトープは、そのドメインのジスルフィド結合構造に依存する（Ｆｕｎｇ，Ｍ．Ｓ．Ｃ．ら（１９９２）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６６：８４８−８５６、Ｇｏｒｎｙ，Ｍ．Ｋ．ら（１９９４）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６８：８３１２−８３２０、Ｈｏ，Ｄ．Ｄ．ら（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８８：８９４９−８９５２）。さらに、８．２２．２は、Ｒ５向性ＨＩＶＳＦ１６２単離株に対する有意な中和活性を有し、これは、６９７Ｄ（このようなウイルス単離株を中和することが以前に報告された、Ｖ２に対するヒトＭａｂ（Ｇｏｒｎｙ，Ｍ．Ｋ．ら（１９９４）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６８：８３１２−８３２０））よりも１０倍を超える能力である。この結果は、チンパンジーＭａｂ  Ｃ１０８Ｇ（これは、Ｖ２の同じ領域に局在化されたグリカン依存性エピトープにマッピングされている）の高い能力と一致する。
【０２０４】
本研究において同定されたＶ３エピトープのレパートリーはまた、興味深かった。第１に、Ｖ３−反応性ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂは、中程度に、交差反応性であり、より強力な２つの中和ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂ（グループＢ、８．２７．３）が、試験された６クレードのＢ  ｒｇｐ１２０のうちの５個を認識し、そして他の中和Ｖ−３特異的ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂ（グループＡ、８Ｅ１１／Ａ８）は、６クレードのＢｒｇｐ１２０のうちの４個を認識した。いずれのグループによっても認識されないｒｇｐ１２０は、ＨＩＶ−１ＩＩＩＢ単離物由来であり、これは、免疫学的に異なるＶ３ドメインを有する。グループＡ  ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂによって認識されない他のｒｇｐ１２０は、ＨＩＶＳＦ２由来である。強力なグループＢ  ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂ（８．２７．３）はまた、全長Ｖ３ループペプチドのみと反応する点で独特である。これらのエピトープの違いは、一部、使用されるＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）マウス系統とヒトとの間の免疫レパートリーにおける違いから生じ得る。しかし、ＨＩＶＳＦ２は、ヒト患者血清からアフィニティー精製した、Ｖ３指向中和抗体に対する異常な耐性が見出された（Ｋｒａｃｈｍａｒｏｖら、（２００１）ＡＩＤＳ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ  第１７巻、１８号：１７３７−１７４８）。これは、グループＡエピトープが、実際に、感染患者において見られる中和Ｖ３標的の代表であり得る可能性を提案する。
【０２０５】
この研究において単離されたＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂの大部分は、Ｖ１可変ドメイン内にも、Ｖ２可変ドメイン内にも、Ｖ３可変ドメイン内にも含まれないエピトープに指向された。これらの抗体は、保存エピトープに対して指向され、これは、脱グリコシル化ｒｇｐ１２０ＳＦ１６２を用いる免疫化によって誘導される３つを除いて、コンフォメーショナルであった。結合競合研究は、コンフォメーショナルなエピトープに対して指向されるＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂを２つのグループに分離し、これらのうちの１つは、以前に記載されたＣＤ４ｂクラスターに対応する（Ｃｏｒｄｅｌｌ，Ｊら、（１９９１）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  １８５：７２−７９．，Ｈｏ，Ｄ．Ｄ．ら（１９９１）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６５：４８９−４９３，ＭｃＫｅａｔｉｎｇ，Ｊ．Ａ．ら（１９９２）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  １９０：１３４−１４２．，Ｔｈａｌｉら（１９９２）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６６：５６３５−５６４１，Ｔｉｌｌｅｙら（１９９１）Ｈｕｍａｎ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ｔｈｅ  ｐｕｔａｔｉｖｅ  ＣＤ４  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｖ３  ｌｏｏｐ  ｏｆ  ＨＩＶ  ｇｐ１２０  ａｃｔ  ｉｎ  ｃｏｎｃｅｒｔ  ｔｏ  ｎｅｕｔｒａｌｉｚｅ  ｖｉｒｕｓ．ＶＩＩ  Ｉｎｔｌ．Ｃｏｎｆ．ｏｎ  ＡＩＤＳ．ａｂｓｔｒ．７０：Ｆｌｏｒｅｎｃｅ，Ｉｔａｌｙ）。これらのグループのいずれも、還元非感受性エピトープ（これは、変性ｒｇｐ１２０によって優先的に提示された）に対するＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂと重複しなかった。ＣＤ４ｂｓエピトープに対するＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂのうちのいくつかは、中程度の活性を有したが、一方、コンフォメーショナルなエピトープの他のクラスターに対するＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂは、いずれの中和活性も有さなかった。可溶性モノマー性ｇｐ１２０の１つの面は、ネイティブな三量体Ｅｎｖ複合体中に閉鎖され（Ｋｗｏｎｇら（１９９８）Ｎａｔｕｒｅ  ３９３：６４８−６５９，Ｒｉｚｚｕｔｏ，Ｃ．Ｄ．ら（１９９８）Ｓｃｉｅｎｃｅ：１９４９−１９５３，Ｗｙａｔｔ，Ｒ．ら（１９９８）Ｎａｔｕｒｅ  ３９３：７０５−７１１）、そして後者のクラスのＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂは、この面上のエピトープに対して指向されることが可能である。
【０２０６】
ｒｇｐ１２０ＳＦ１６２以外のＨＩＶ−１免疫原の使用および／または他のスクリーニング方法は、既に同定されたドメインに対するより効果的な中和ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂの単離ならびに完全に新規な標的に対する中和ＭＡｂの単離を可能にし得る。異なるｒｇｐ１２０免疫原は、異なるクラスの保存された領域のエピトープおよび可変領域のエピトープに対する応答を誘導し得る。オリゴマーＥｎｖ複合体（例えば、ＨＩＶ−１  Ｅｎｖタンパク質の最近記載された安定化３量体形態（Ｂｉｎｌｅｙら（２０００）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７４：６２７−６４３，Ｙａｎｇ，Ｘ．ら（２０００）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７４：５７１６−５７２５））あるいはウイルス粒子または細胞表面上に発現されたネイティブなＥｎｖ複合体を用いて免疫化し、そして／またはスクリーニングすることによって、ｇｐ１２０の閉鎖された面に対するＭａｂの単離を避けることが可能であり得る。開発された中和活性に対する直接的なスクリーニングは、最も関連するＭａｂに焦点を当てるために特に有用であり得る。三量体Ｅｎｖ複合体からなる抗原（可溶性または膜結合のいずれか）は、（もし発現するなら）ｇｐ１２０モノマーにおいて乏しく発現される中和標的に対する効果的な免疫原であり得る。
【０２０７】
本明細書中に示されるように、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）システムは、ＨＩＶ−１  Ｅｎｖに対するヒトモノクローナル抗体を単離するための有用なアプローチを提供する。新規な免疫原および機能的スクリーニングアッセイの開発とともに、完全ヒト抗体を産生するトランスジェニックマウスの利用可能性は、ＨＩＶ−１感染の中和に対する標的のより完全なマッピングを容易にするはずであり、そしてＨＩＶ−１に対する免疫療法としての潜在的な臨床的有用性を有するヒトＭａｂの単離を容易にするはずである。
【０２０８】
（生物学的寄託）
以下に記載されるような抗体を発現する以下のハイブリドーマ（これらは、マウスハイブリドーマである）：
細胞株３５Ｄ１０／Ｄ２（Ｍａｂ  ３５Ｄ１０／Ｄ２）：ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００１、
細胞株４０Ｈ２／Ｃ７（Ｍａｂ  ４０Ｈ２／Ｃ７）：ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００６、
細胞株４３Ｃ７／Ｂ９（Ｍａｂ  ４３Ｃ７／Ｂ９）：ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００７、
細胞株４３Ａ３／Ｅ４（Ｍａｂ  ４３Ａ３／Ｅ４）：ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００５、
細胞株４５Ｄ１／Ｂ７（Ｍａｂ  ４５Ｄ１／Ｂ７）：ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００２、
細胞株４６Ｅ３／Ｅ６（Ｍａｂ  ４６Ｅ３／Ｅ６）：ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００８、
細胞株５８Ｅ１／Ｂ３（Ｍａｂ  ５８Ｅ１／Ｂ３）：ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００３、
細胞株６４Ｂ９／Ａ６（Ｍａｂ  ６４Ｂ９／Ａ６）：ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００４、および
細胞株８．２７．３（細胞株Ａｂｘ  ８．２７．３としても公知）（Ｍａｂ  ８．２７．３（Ｍａｂ  Ａｂｘ  ８．２７．３としても公知））：ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３００９は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（「ＡＴＣＣ」），１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ  ２０１１０−２２０９，ＵＳＡ，２００１年２月２日に寄託され（ＡＴＣＣは、ｅｍａｉｌにより、２００１年２月２日に、これらの９個のハイブリドーマの受託を確認した）、そして上に示されたＡＴＣＣ受託番号を与えられた。
【０２０９】
以下に示されるような抗体を発現する以下のハイブリドーマ（これは、マウスハイブリドーマである）：
細胞株８．２２．２（Ｍａｂ  ８．２２．２）：ＡＴＣＣ受託番号＿＿＿＿＿＿
は、２００２年１月２４日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（「ＡＴＣＣ」），１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ  ２０１１０−２２０９，ＵＳＡに寄託され、そして上に示されたＡＴＣＣ受託番号を与えられた。
【０２１０】
以下に示されるような抗体を発現する以下のハイブリドーマ（これは、マウスハイブリドーマである）：
細胞株８Ｅ１１／Ａ８（Ｍａｂ  ８Ｅ１１／Ａ８）：ＡＴＣＣ受託番号＿＿＿＿＿＿
は、２００２年１月２５日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（「ＡＴＣＣ」），１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ  ２０１１０−２２０９，ＵＳＡに寄託され、そして上に示されたＡＴＣＣ受託番号を与えられた。
【０２１１】
本発明の１つの実施形態において、本発明の抗体は、抗原（ｇｐ１２０抗原であり得る）（例えば、寄託された抗体の抗原）への、この節（生物学的寄託）において上記され、ＡＴＣＣに寄託されたいずれか１つの抗体の結合に競合する抗体である。
【０２１２】
別の実施形態において、本発明の抗体は、この節（生物学的寄託）において上記され、ＡＴＣＣに寄託されたいずれか１つの抗体の重鎖を含む抗体である。
【０２１３】
別の実施形態において、本発明の抗体は、この節（生物学的寄託）において上記され、ＡＴＣＣに寄託されたいずれか１つの抗体の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む抗体である。各ＣＤＲドメインに対するアミノ酸の帰属は、Ｋａｂａｔ  Ｓｅａｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９８７および１９９１）），またはＣｈｏｔｈｉａ  ＆  Ｌｅｓｋ  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．ｌ９６：９０ｌ−９ｌ７（１９８７）；Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７８−８８３（１９８９）の定義に従う。
【０２１４】
別の実施形態において、本発明の抗体は、この節（生物学的寄託）において上記され、ＡＴＣＣに寄託されたいずれか１つの抗体の重鎖および軽鎖を含む抗体である。
【０２１５】
本明細書中に引用された全ての刊行物、特許および特許出願は、各個々の刊行物、特許または特許出願が、具体的にそして個々に参考として援用されて示されるかのように、本明細書中において参考として援用される。
【０２１６】
（等価物）
本発明は、その精神または必須の特徴から逸脱することなく、他の特定の形態で具体化され得る。従って、上記実施形態は、全ての観点において、本明細書中に開示される本発明の制限というよりもむしろ、例示的とみなされる。
【０２１７】
【数１】
2005510201.tif 000003
寄託された微生物または他の生物学的材料に関する表示に対する添付書類−形式ＰＣＴ／ＲＯ／１３４
代理人参照番号：ＡＢＸ−ＰＨＲＩ  ＰＣＴ
国際出願番号：ＰＣＴ／ＵＳ０２／０２１７１
寄託日：２００２年１月２４日（２４．０１．０２）
受託番号：ＰＴＡ−４００７
（囲みＡの続き：）
表示は、明細書中以下の頁および行において言及された、寄託された生物または他の生物学的材料に関してなされた。
【０２１８】
１２頁２行目；
５１頁５行目〜７行目；
１０３頁２行目〜４行目；
１０３頁１６行目；
１０３頁１８行目；
１０３頁２４行目；
１０３頁２６行目；
１０４頁４行目；
１０４頁５行目；
１０４頁７行目；
１０５頁６行目；
１０５頁１２行目；
１０９頁１８行目；
１１１頁１９行目；
１１３頁４行目〜５行目；
１１３頁１０行目；
１１３頁１２行目；
１１３頁２１行目；
１１７頁２７行目〜２８行目；
１２７頁１８行目〜１９行目；
１４６頁６行目〜７行目；
図２、図３Ａ、図４、図５、図８、図９。
【０２１９】
【数２】
2005510201.tif 000004
寄託された微生物または他の生物学的材料に関する表示に対する添付書類−形式ＰＣＴ／ＲＯ／１３４
代理人参照番号：ＡＢＸ−ＰＨＲＩ  ＰＣＴ
国際出願番号：ＰＣＴ／ＵＳ０２／０２１７１
寄託日：２００２年１月２４日（２４．０１．０２）
受託番号：ＰＴＡ−４０１２
（囲みＡの続き：）
表示は、明細書中以下の頁および行において言及された、寄託された生物または他の生物学的材料に関してなされた。
【０２２０】
９頁１５行目；
５２頁１行目〜４行目；
５２頁７行目；
５２頁１３行目；
５２頁２０行目；
１１１頁２７行目；
１１１頁３０行目；
１１４頁６行目；
１１８頁８行目〜９行目；
１３１頁１行目〜２行目；
１４６頁３行目〜４行目；
図２、図３Ａ、図４、図６、図８、図９。
【図面の簡単な説明】
【０２２１】
【図１】図１は、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）のｒｇｐ１２０に対する応答である。 図１Ａ  ｒｇｐ１２０で免疫されたＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）は、免疫の後、高い力価の抗ｇｐ１２０抗体を発生させた。血清力価は、標的抗原としてＳＦ１６２  ｒｇｐ１２０（ｒｇｐ１２０ＳＦ１６２）（５０ｎｇ／ウェル）を用いて、標準的なＥＬＡＳＡにより決定された。ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）からの血清は、１／１００希釈でＥＬＡＳＡによりｒｇｐ１２０ＳＦ１６２との反応性についてアッセイした。ｒｇｐ１２０ＳＦ１６２での示されたブーストに続いて、３日サンプルを取った。  図１Ｂ  ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）の血清がＨＩＶＳＦ１６２を中和する能力を、３回目のｒｇｐ１２０ＳＦ１６２でのブーストに続いて決定した。ＳＦ１６２のｅｎｖで偽型化したＮＬ４−３  ｌｕｃウイルスの中和は、１：２５の血清希釈物を用いてＵ８７−Ｔ４−ＣＣＲ５細胞において決定した。
【図２】図２は、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）動物由来のＭａｂによって結合されるエピトープの初期段階のマップピングである。ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）ＭａｂのＥＬＩＳＡ反応性を、ＤＴＴで還元する前後にｒｇｐＳＦ１６２に対しておよびＨＩＶＳＦ１６２のＶ１／Ｖ２領域（米国特許第５，６４３，７５６号（１９９７年７月１日発行）、米国特許第５，９５２，４７４号（１９９９年９月１４日発行）、Ｋａｙｍａｎ，Ｓ．Ｃ．ら（１９９４）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６８：４００−４１０およびＫｒａｃｈｍａｒｏｖら（２００１）ＡＩＤＳ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ第１７巻，Ｎｕｍｂｅｒ  １８：１７３７−１７４８；これら４つの参考文献の開示は、本明細書中で参考として援用される）、もしくは密接に関連したＨＩＶＪＲ−ＣＳＦのＶ３領域（Ｋａｙｍａｎ，Ｓ．Ｃ．ら（１９９４）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６８：４００−４１０およびＫｒａｃｈｍａｒｏｖら（２００１）ＡＩＤＳ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ第１７巻，Ｎｕｍｂｅｒ  １８：１７３７−１７４８）を発現する融合タンパク質に対して、１０μｇ／ｍｌで決定した。ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂは，追加実験によって決定されるように、エピトープのクラスによって分類される。８．２７．１．および８．２７．３は最初のハイブリドーマクローンの２つのサブクローンに由来する。
【図３Ａ】図３は、Ｖ１およびＶ２ドメインのエピトープの地図作製である。以前Ｖ１／Ｖ２ＳＦ１６２融合タンパク質との反応性が評価されたのＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂ（米国特許第５，６４３，７５６号（１９９７年７月１日発行）、同第５，９５２，４７４号（１９９９年９月１４）発行、Ｋａｙｍａｎ，Ｓ．Ｃ．ら（１９９４）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６８：４００−４１０およびＫｒａｃｈｍａｒｏｖら（２００１）ＡＩＤＳ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ第１７巻，Ｎｕｍｂｅｒ  １８：１７３７−１７４８）がこの抗原と３つの合成ペプチドに対して再テストされた。ＥＬＩＳＡの反応性は図３Ａに示されている。図３Ｂに、抗原の配列が示されている。融合タンパク質（「ＦＰ」）における配列（配列番号１）は、正確にＳＦ１６２単離物に相当し、そしてＶ１／Ｖ２ドメインをｇｐ１２０のコアにつなぐステムを含む。ペプチド１３０−１（Ｐ１３０−１）（配列番号２）においてＶ１ループに対するＣｙｓのＮ末端の代わりにＳｅｒがあり、そしてペプチド１３０−２（配列番号３）はＳＦ１６２の配列中に存在するＲ残基を欠いている（失われたアルギニンはＰ１３０−２の１１位のＤ残基とｐ１３０−２（配列番号３）の１２位のＧ残基との間にある）ことを除いて、Ｖ１ペプチドはＳＦ１６２の配列に相当する。ペプチド１３０−２（Ｐ１３０−２）は配列番号３である。Ｖ２ペプチド（Ｔ１５Ｋ）（配列番号４）はケースＡ２単離物の配列に相当し、ＳＦ１６２の配列とは異なる２つの残基に下線が引かれている。
【図３Ｂ】図３は、Ｖ１およびＶ２ドメインのエピトープの地図作製である。以前Ｖ１／Ｖ２ＳＦ１６２融合タンパク質との反応性が評価されたのＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂ（米国特許第５，６４３，７５６号（１９９７年７月１日発行）、同第５，９５２，４７４号（１９９９年９月１４）発行、Ｋａｙｍａｎ，Ｓ．Ｃ．ら（１９９４）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６８：４００−４１０およびＫｒａｃｈｍａｒｏｖら（２００１）ＡＩＤＳ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ第１７巻，Ｎｕｍｂｅｒ  １８：１７３７−１７４８）がこの抗原と３つの合成ペプチドに対して再テストされた。ＥＬＩＳＡの反応性は図３Ａに示されている。図３Ｂに、抗原の配列が示されている。融合タンパク質（「ＦＰ」）における配列（配列番号１）は、正確にＳＦ１６２単離物に相当し、そしてＶ１／Ｖ２ドメインをｇｐ１２０のコアにつなぐステムを含む。ペプチド１３０−１（Ｐ１３０−１）（配列番号２）においてＶ１ループに対するＣｙｓのＮ末端の代わりにＳｅｒがあり、そしてペプチド１３０−２（配列番号３）はＳＦ１６２の配列中に存在するＲ残基を欠いている（失われたアルギニンはＰ１３０−２の１１位のＤ残基とｐ１３０−２（配列番号３）の１２位のＧ残基との間にある）ことを除いて、Ｖ１ペプチドはＳＦ１６２の配列に相当する。ペプチド１３０−２（Ｐ１３０−２）は配列番号３である。Ｖ２ペプチド（Ｔ１５Ｋ）（配列番号４）はケースＡ２単離物の配列に相当し、ＳＦ１６２の配列とは異なる２つの残基に下線が引かれている。
【図４】図４は、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）ＭａｂのＨＩＶＳＦ１６２の中和である。ＳＦ１６２  ｅｎｖで偽型化したＮＬ４−３  ｌｕｃウイルスに対する、Ｖ１特異的ＭａｂおよびＶ２特異的Ｍａｂ（図４Ａ）、ＣＤ４ｂに特異的なＭａｂ（図４Ｂ），ならびにＶ３に特異的なＭａｂ（図４Ｃ）（８Ｅ１１／Ａ８は８Ｅ１１のサブクローンである）と比較した、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂ（黒い記号）およびＨｕＭａｂＰ（患者由来のヒトのＭａｂ）の典型的な中和アッセイ。
【図５】図５は、結合の競合によるＶ１およびＶ２エピトープの地図作製である。ＥＬＩＳＡプレート上に固定されたｒｇｐ１２０ＳＦ１６２へのビオチン化試薬の結合を阻害する、競合するＭａｂの能力が決定された。４０％より大きな結合阻害は、陽性の競合（太字の値）と考えられた。負の数字はシグナルにおいて、示されたパーセントの上昇が得られたことを示す。競合するＭａｂは１００μｇ／ｍｌで使われた。ビオチン化された分子は、４３Ａ３／Ｅ４、３５Ｄ１０／Ｄ２、６９７ＤおよびｓＣＤ４（始めの３つは抗体）である。
【図６】図６は、Ｖ３のエピトープの地図作製である。  図６Ａ  示されたＥＬＩＳＡ反応において得られた２回のＡ４０５値の平均を示す。陽性と思われる値は太字である。２μｇ／ｍｌの融合タンパクおよび５μｇ／ｍｌの合成ペプチドをＥＬＩＳＡプレートの被覆使用した。Ｍａｂを１０μｇ／ｍｌで使用した。ペプチドＭＮ−ＩＩＩＢはＰＮＤ  ＭＮ／ＩＩＩＢ  ＭＮ６−２７＋ＱＲ（配列番号１２）およびペプチドＩＩＩＢはＨＩＶ−１ＩＩＩＢ（配列番号１３）である。配列番号５はＳＦ１６２（ｒｇｐ１２０）のＶ３ドメイン近接のアミノ酸配列であり、そして配列番号６はＪＲ−ＣＳＦ（融合タンパク質）のＶ３ドメイン近接のアミノ酸配列である［ＪＲ−ＣＳＦ（融合タンパク質）は、環状ＪＲ−ＣＳＦ、および図２−３において参照されるＶ３融合タンパク質である］。  図６Ｂ  ＨＩＶＳＦ１６２のＶ３ループの配列およびパネルＡで使われた抗原の配列を並べる。ＨＩＶＭＮのペプチドの番号は、ループのＮ末端のＣｙｓから始まる。非反応性のＨＩＶＩＩＩＢの配列とは異なる、グループＡ−反応性の配列に共通な残基に下線が引かれている。線状にされたＶ３ＪＲ−ＣＳＦ融合タンパク質（図６の線状ＪＲ−ＣＳＦ）は、Ｖ３ループのＮ末端の基のシステインがセリンに変異された、変異体Ｖ３ＪＲ−ＣＳＦ融合タンパク質である。線状ＪＲ−ＣＳＦのＶ３ドメインの配列は、ＳＴＲＰＳＮＮＴＲＫＳＩＨＩＧＰＧＲＡＦＹＴＴＧＥＩＩＧＤＩＲＱＡＨＣ（配列番号２７）である。
【図７】図７は、結合の競合による、保存ドメインにおけるエピトープの地図作製である。ＥＬＩＳＡにおいて指定されたビオチン化試薬のｒｇｐ１２０ＳＦ１６２への結合をブロックする能力について、示されたＭａｂが１００μｇ／ｍｌでテストされた。４０％よりも大きな結合の阻害は、陽性の競合（太字の値）であると考えられた。負の数値はシグナルにおいて示されたパーセントの増加が得られたことを意味している。ＮＤは測定されていないことを示している。ビオチン化された分子は：ｓＣＤ４、３８Ｇ３／Ａ９、６３Ｇ４／Ｅ２および９７Ｂ１／Ｅ８（最後の３つは抗体である）である。
【図８】図８は、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂと種々のｒｇｐ１２０の反応性である。一連のｒｇｐ１２０を認識するＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）Ｍａｂの能力およびコントロールのＨｕＭａｂＰ（５１４５ａ）の能力がＥＬＩＳＡにおいてテストされた。Ｍａｂを１０μ／ｍｌにて使用し、二連で試験した。＋＋はバックグラウンドをこえて少なくとも１０倍のＡ４０５を示している。＋はバックグラウンドを超えて少なくとも３倍のＡ４０５を示している（０．２４）。脱グリコシル化したｒｇｐ１２０ＳＦ１６２での免疫に続いて単離されたＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）のＭａｂは、＊で示される。５７Ｂ６Ｆ１＝５７Ｂ６／Ｆ１。５７Ｂ６Ｆ１は５７Ｂ６／Ｆ１を記載するときの別の方法である。
【図９】図９は、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）ＭａｂのＨＩＶＳＦ１６２に対する中和活性である。ＨＩＶＳＦ１６２に対する中和の力価は、図４におけるようにデータから図表を用いて決定される。ＮＤ５０はμｇ／ｍｌで報告されている；＞は５０％の中和が達成されなかったことを示していおり、そして＞＞は、使用された、示された最高濃度で本質的に中和が見られなかったことを示している。脱グリコシル化ｒｇｐ１２０ＳＦ１６２での免疫に続いて単離されたＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標登録）Ｍａｂは＊で示される。
【図１０】図１０はＭａｂ８．２２．２との反応性についてテストされたｇｐ１２０のＶ２領域の配列を示している。反応性の配列（ＱＫＥＹＡＬＦＹＫ（配列番号２６））に保存されているペプチドＴ１５Ｋ（配列番号４）によりマッピングされた領域中に存在する配列に下線が引かれている。ＨＣＴＮＬＫＮＡＴＮＴＫＳＳＮＷＫＥＭＤＲＧＥＩＫＮＣＳＦＫＶＴＴＳＩＲＮＫＭＱＫＥＹＡＬＦＹＫＬＤＶＶＰＩＤＮＤＮＴＳＹＫＬＩＮＣ（配列番号１８）ＮＣＩＤＬＲＮＡＴＮＡＴＳＮＳＮＴＴＮＴＴＳＳＳＧＧＬＭＭＥＱＧＥＩＫＮＣＳＦＮＩＴＴＳＩＲＤＫＶＱＫＥＹＡＬＦＹＫＬＤＩＶＰＩＤＮＰＫＮＳＴＮＹＲＬＩＳＣ（配列番号１９）。ＮＣＶＫＤＶＮＡＴＮＴＴＮＤＳＥＧＴＭＥＲＧＥＩＫＮＣＳＦＮＩＴＴＳＩＲＤＥＶＱＫＥＹＡＬＦＹＫＬＤＶＶＰＩＤＮＮＮＴＳＹＲＬＩＳＣ（配列番号２０）。ＮＣＴＤＬＲＮＡＴＮＧＮＤＴＮＴＴＳＳＳＲＧＭＶＧＧＧＥＭＫＮＣＳＦＮＩＴＴＮＩＲＧＫＶＱＫＥＹＡＬＦＹＫＬＤＩＡＰＩＤＮＮＳＮＮＲＹＲＬＩＳＣ（配列番号２１）ＫＣＴＤＬＫＮＤＴＮＴＮＳＳＳＧＲＭＩＭＥＫＧＥＩＫＮＣＳＦＮＩＳＴＳＩＲＧＫＶＱＫＥＹＡＦＦＹＫＬＤＩＩＰＩＤＮＤＴＴＳＹＫＬＴＳＣ（配列番号２２）。ＮＣＴＤＬＲＮＴＴＮＴＮＮＳＴＡＮＮＮＳＮＳＥＧＴＩＫＧＧＥＭＫＮＣＳＦＮＩＴＴＳＩＲＤＫＭＱＫＥＹＡＬＬＹＫＬＤＩＶＳＩＮＤＳＴＳＹＲＬＩＳＣ（配列番号２３）ＮＣＴＤＬＧＫＡＴＮＴＮＳＳＮＷＫＥＥＩＫＧＥＩＫＮＣＳＦＮＩＴＴＳＩＲＤＫＩＱＫＥＮＡＬＦＲＮＬＤＶＶＰＩＤＮＡＳＴＴＴＮＹＴＮＹＲＬＩＨＣ（配列番号２４）。
【図１】
2005510201.tif 000005
【図２】
2005510201.tif 000006
【図３Ａ】
2005510201.tif 000007
【図３Ｂ】
2005510201.tif 000008
【図４】
2005510201.tif 000009
【図５】
2005510201.tif 000010
【図６】
2005510201.tif 000011
【図７】
2005510201.tif 000012
【図８】
2005510201.tif 000013
【図９】
2005510201.tif 000014
【図１０】
2005510201.tif 000015
【国際調査報告】
2005510201.tif 000016
2005510201.tif 000017
2005510201.tif 000018
2005510201.tif 000019
2005510201.tif 000020
2005510201.tif 000021
2005510201.tif 000022