(57)【要約】【課題】Ｈｅｓ１プロモーター阻害活性が強い一方、神経幹細胞に対して毒性のより低いＨｅｓ１プロモーター阻害剤を提供する。【解決手段】  下記一般式に示される化合物又はその誘導体を含むＨｅｓ１プロモーター阻害剤とする。2012014848.tif 000024【選択図】なし
2012014848.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式に示される化合物又はその誘導体を含むＨｅｓ１プロモーター阻害剤。
【化１】
2012014848.tif 000018
上記式中Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４は置換基を有してよいアルキル基、ハロゲン、アシル基、ヒドロキシル基、アルコキシ基、アミノ基、ニトロ基、アミド基、シアノ基、リン酸若しくはそのエステル、スルホニル基、チオール、チオエーテル基、アリール基、又はヘテロ環を表し、Ｒ２は置換基を有してよいアルキル基、ハロゲン、アシル基、アルコキシ基、アミノ基、アミド基、シアノ基、リン酸若しくはそのエステル、スルホニル基、チオール、チオエーテル基、アリール基、又はヘテロ環を表す。またＲ１、Ｒ３は一つであっても、複数であってもよい。
【請求項２】
下記一般式に示される化合物又はその誘導体を含むＨｅｓ１プロモーター阻害剤。
【化２】
2012014848.tif 000019
上記式中Ｒ１、は水素、ハロゲン、又は、置換基を有してよいアルキル基若しくはアルコキシ基を表し、Ｒ’２は水素、ハロゲン、又は、置換基を有してよいアルキル基素若しくはアルコキシ基を表し、Ｒ’３は水素、ハロゲン、又は、置換基を有してよいアルキル基素若しくはアルコキシ基を表し、Ｒ４は置換基を有してよいヘテロ環を表す。Ｒ１は一つであっても、複数であってもよい。
【請求項３】
下記式（１）に示される化合物又はその誘導体を含むＨｅｓ１プロモーター阻害剤。
【化３】
2012014848.tif 000020
【請求項４】
下記式（２）に示される化合物又はその誘導体を含むＨｅｓ１プロモーター阻害剤。
【化４】
2012014848.tif 000021
【請求項５】
下記式（３）に示される化合物又はその誘導体を含むＨｅｓ１プロモーター阻害剤。
【化５】
2012014848.tif 000022
【請求項６】
下記式（４）に示される化合物又はその誘導体を含むＨｅｓ１プロモーター阻害剤。
【化６】
2012014848.tif 000023
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はＨｅｓ１プロモーター阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
神経幹細胞の分化を促進させ、選択的に特定の神経細胞（ニューロン、アストロサイト、オリゴデンドロサイト）に導く化合物は、認知症などの重篤な神経疾患や、脳溢血後や脊髄損傷後の神経再生医薬のリードとなる。特に、特定のニューロン（例えばドーパミンニューロンなど）に導くことは重要である。【０００３】
神経幹細胞に作用し、神経再生医薬候補となる有効な化合物は、世界でもほとんど報告例が無い。再生医療の発展がめざましく、幹細胞の活用が非常に期待されている最近の世界状況からも、神経幹細胞に作用する化合物の創製が非常に望まれている。【０００４】
ところで、下記非特許文献１には、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）の神経幹細胞の分化促進作用とＨｅｓ１発現阻害の関連に関する報告がある。また、下記非特許文献２には、神経幹細胞の増殖・維持や種々の神経細胞への分化を調節しているｂＨＬＨ転写因子群の中で、Ｈｅｓ１プロモーター活性を阻害すると神経幹細胞の分化を促進することに繋がることが開示されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｍ．  Ｋａｔａｋｕｒａ，  Ｍ．  Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ，  Ｈ．  Ｍ．  Ｓｈａｈｄａｔ，  Ｓ．  Ｇａｍｏｈ，  Ｔ．  Ｏｋｕｉ，  Ｋ．  Ｍａｔｓｕｚａｋｉ，  Ｏ．  Ｓｈｉｄｏ，Ｄｏｃｏｓａｈｅｘａｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ  ｂａｓｉｃ  ｈｅｌｉｘ-ｌｏｏｐ-ｈｅｌｉｘ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｃｅｌｌ  ｃｙｃｌｉｃ  ｉｎ  ｎｅｕｒａｌ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ，  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，２００９，１６０，６５１−６６０．
【非特許文献２】荒井緑，天然物様化合物を軸とした神経幹細胞，癌細胞へのアプローチ，日本薬学会第１３０年会要旨集１，ｐ．５６
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、上記非特許文献１に記載された化合物は、Ｈｅｓ１プロモーター阻害活性において改善の余地があり、より効果の大きな化合物を探索することは極めて有用である。【０００７】
また、上記非特許文献２に記載された化合物は、マウス神経幹細胞に対してではあるが、神経幹細胞に対し強い毒性を有するといった課題がある。【０００８】
そこで、本発明は、Ｈｅｓ１プロモーター阻害活性が強い一方、神経幹細胞に対して毒性のより低い神経幹細胞分化促進剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記課題について鋭意検討、試行錯誤を行なったところ、Ｈｅｓ１プロモーター阻害活性が強い一方、神経幹細胞に対して毒性のより低い化合物を発見するに至った。【００１０】
即ち、上記課題を解決するための第一の観点に係るＨｅｓ１プロモーター阻害剤は、下記一般式に示される化合物を含む。
【化１】
2012014848.tif 000003
【００１１】
上記式中Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４は置換基を有してよいアルキル基、ハロゲン、アシル基、ヒドロキシル基、アルコキシ基、アミノ基、ニトロ基、アミド基、シアノ基、リン酸若しくはそのエステル、スルホニル基、チオール、チオエーテル基、アリール基、又はヘテロ環を表し、Ｒ２は置換基を有してよいアルキル基、ハロゲン、アシル基、アルコキシ基、アミノ基、アミド基、シアノ基、リン酸若しくはそのエステル、スルホニル基、チオール、チオエーテル基、アリール基、又はヘテロ環を表す。またＲ１、Ｒ３は一つであっても、複数であってもよい。
【発明の効果】
【００１２】
以上、本発明によると、Ｈｅｓ１プロモーター阻害活性が強い一方、神経幹細胞に対して毒性のより低い神経幹細胞分化促進剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】実施例の結果を示す図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
以下、本発明を実施するための形態について図面を用いて詳細に説明する。ただし、本発明は多くの異なる形態による実施が可能であって、以下に示す実施形態、実施例の記載にのみ限定されるわけではない。【００１５】
本実施形態に係るＨｅｓ１プロモーター阻害剤は、下記一般式に示される化合物を含む。
【化２】
2012014848.tif 000004
【００１６】
上記式中Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４は置換基を有してよいアルキル基、ハロゲン、アシル基、ヒドロキシル基、アルコキシ基、アミノ基、ニトロ基、アミド基、シアノ基、リン酸若しくはそのエステル、スルホニル基、チオール、チオエーテル基、アリール基、又はヘテロ環を表し、Ｒ２は置換基を有してよいアルキル基、ハロゲン、アシル基、アルコキシ基、アミノ基、アミド基、シアノ基、リン酸若しくはそのエステル、スルホニル基、チオール、チオエーテル基、アリール基、又はヘテロ環を表す。またＲ１、Ｒ３は一つであっても、複数であってもよい。【００１７】
なおここで「置換基」とは、アルキル基、ハロゲン、アシル基、ヒドロキシル基、アルコキシ基、アミノ基、ニトロ基、アミド基、シアノ基、リン酸若しくはそのエステル、スルホニル基、チオール、チオエーテル基、アリール基、又はヘテロ環をいうがこれに限定されない。【００１８】
また、ここで「ヘテロ環」とは、２種以上の元素を含む環式の化合物であって、例えば下記の例で示すようなチオール環、オキソール環、アゾール環又はピリジン環をいう。もちろん、上記のとおり、ヘテロ環は置換基を有していてもよい。【００１９】
【化３】
2012014848.tif 000005
【００２０】
また、上記一般式に示される化合物は、好ましくは、下記一般式に示される化合物を含む。
【化４】
2012014848.tif 000006
【００２１】
上記式中Ｒ１、は水素、ハロゲン、又は、置換基を有してよいアルキル基若しくはアルコキシ基を表し、Ｒ’２は水素、ハロゲン、又は、置換基を有してよいアルキル基素若しくはアルコキシ基を表し、Ｒ’３は水素、ハロゲン、又は、置換基を有してよいアルキル基素若しくはアルコキシ基を表し、Ｒ４は置換基を有してよいヘテロ環を表す。Ｒ１は一つであっても、複数であってもよい。【００２２】
また、上記一般式に示される化合物は、より好ましくは、下記一般式に示される化合物を含む。
【化５】
2012014848.tif 000007
【００２３】
上記式中Ｒ１は１又は複数のアルコキシ基を表し、Ｒ４はアルキル基又はアルコキシル基を有してよいピリジン環を表す。【００２４】
なお、上記式に示される化合物は、限定されるわけではないが、より具体的には、下記１乃至４で例示することができる。
【化６】
2012014848.tif 000008
【化７】
2012014848.tif 000009
【化８】
2012014848.tif 000010
【化９】
2012014848.tif 000011
【００２５】
本実施形態にかかる化合物は、Ｈｅｓ１プロモーター阻害剤が強い一方、神経幹細胞に対して公知の化合物より毒性がより低いものとなっており、認知症等の神経疾患の治療や予防に有用な薬剤となる。【００２６】
薬剤として用いる場合、上記化合物のほか、薬学的に許容される通常の担体、結合剤、賦形剤、希釈剤（例えば蒸留水）、ｐＨ緩衝材（例えばリン酸緩衝生理食塩水）、崩壊剤、可溶化剤、溶解補助剤、等張剤等の各種調剤用配合剤成分を含有することができる。【００２７】
また本実施形態に係るＨｅｓ１プロモーター阻害剤は、その使用形態に応じて経口的に又は非経口的に投与することができるが、長期にわたるリハビリ等を考慮すると経口的であることが好ましく、脳溢血や脳梗塞等の発病段階では非経口的であることが好ましい。経口的な投与としては通常用いられる投与形態、例えば粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤、液剤、懸濁液、油剤、乳化剤等の投与形態を採用することができる。非経口的な投与としては、通常用いられる投与形態、例えば上記の液剤、懸濁液等にしたものを点滴や注射により投与する形態、直接損傷部位に投与する形態等を採用することができる。【００２８】
本実施形態に係るＨｅｓ１プロモーター阻害剤の投与量は、患者の体重、性別、神経損傷の程度、投与の方法に応じて適宜選択されうるが、例えば非経口な投与であって、損傷部位に直接投与する場合、例えば成人１日、上記化合物を１ｍｇ以上１００ｍｇ以下の範囲内で含む量であることが好ましく、より好ましくは有効成分を１ｍｇ以上２０ｍｇ以下の範囲内で含む量である。なお、注射による投与の場合、非経口な投与であっても、有効成分が上記有効成分の量の１０倍程度の範囲内にあることが好ましい。【００２９】
本実施形態に係るＨｅｓ１プロモーター阻害剤は、得られる限りにおいて限定されるわけではないが、合成によって作製することができる。上記化合物の合成は、例えば、まずヒドロキシアセトフェノン誘導体を出発物質として芳香族アルデヒドと塩基性条件下にてカルコン誘導体を合成し、更にこの化合物にヘテロ環アルデヒドを添加し、さらにＰｄ触媒による薗頭−萩原カップリング、あるいは鈴木−宮浦カップリングにより置換基を導入することで作製することができる。これについては、例えば、Ａｒａｉ，Ｍ．Ａ．，Ｓａｔｏ，Ｍ．，Ｓａｗａｄａ，Ｋ．，Ｈｏｓｏｙａ，Ｔ．，Ｉｓｈｉｂａｓｈｉ，Ｍ．，“Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｃｈｒｏｍｏｎｅ  ａｎｄ  Ｆｌａｖｏｎｏｉｄ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ｗｉｔｈ  Ｄｉｖｅｒｓｅ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｕｎｉｔｓ”  Ｃｈｅｍ．Ａｓｉａｎ  Ｊ．，２００８，３，２０５６−２０６４．）にある方法を参照することで製造できる。【００３０】
以上、本実施形態によると、Ｈｅｓ１プロモーター阻害活性が強い一方、神経幹細胞に対して毒性のより低い神経幹細胞分化促進剤を提供することができる。
【実施例】
【００３１】
以下、上記実施形態に係る神経肝細胞分化促進剤について実際に作製を行い、その効果を確認した。以下に説明する。【００３２】
（一般式で示される化合物の作製）
（４−メトキシフェニル）ジイソプロピルシリルプロピルポリスチレンに４’−ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｏｘｙ−２’−ｈｙｄｒｏｘｙａｃｅｔｏｐｈｅｎｏｎｅ−４’−ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｏｘｙ−２’−ｈｙｄｒｏｘｙａｃｅｔｏｐｈｅｎｏｎｅを担持させたビーズ１００ｍｇ（０．７８ｍｍｏｌ／ｇ）（担持の方法は、Ａｒａｉ，Ｍ．Ａ．，Ｓａｔｏ，Ｍ．，Ｓａｗａｄａ，Ｋ．，Ｈｏｓｏｙａ，Ｔ．，Ｉｓｈｉｂａｓｈｉ，Ｍ．，“Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｃｈｒｏｍｏｎｅ  ａｎｄ  Ｆｌａｖｏｎｏｉｄ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ｗｉｔｈ  Ｄｉｖｅｒｓｅ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｕｎｉｔｓ”  Ｃｈｅｍ．Ａｓｉａｎ  Ｊ．，２００８，３，２０５６−２０６４にある方法に従うことでできる）をＫＯＨ（２６ｍｇ）存在下、ＥｔＯＨ（２ｍｌ）中、種々の芳香族アルデヒド（３当量）と４０℃で２４−５０時間攪拌し、対応するカルコン誘導体担持ビーズを得た。次に、この得られたビーズ５０ｍｇに対し、対応するヘテロ環アルデヒド（２０当量）と６０℃で７２時間攪拌し、対応するフラボノイド誘導体担持ビーズを得た。次に、この得られたビーズ２０ｍｇに対し、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（１当量）、トリフェニルホスフィン（２当量）、ピロリジン（３０当量）存在下、対応するアセチレン化合物（２０当量）を加え、ＤＭＦ（１ｍｌ）中、６０℃で２４時間攪拌し、対応する薗頭−萩原カップリングによるフラボノイド誘導体担持ビーズを得た。一方、鈴木−宮浦カップリングでは、ビーズ２０ｍｇに対し、ｔｒｉｓ（ｄｉｂｅｎｄｙｌｉｄｅｎｅａｃｅｔｏｎｅ）ｄｉｐａｌｌａｄｉｕｍ（０）（１当量）、ＮａＯＭｅ（１５当量）を加え、ＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（１０／１，１  ｍｌ）中、対応するボラン化合物（１５当量）と反応させ、６０℃で４８時間攪拌し、対応する鈴木−宮浦カップリングによるフラボノイド誘導体担持ビーズを得た。ビーズからの切り出しは、５％ＨＦ・ＰｙのＴＨＦ溶媒中、室温、１時間で行い、一般式で示される化合物を得た。【００３３】
（化合物（１）の作製）  
（４−メトキシフェニル）ジイソプロピルシリルプロピルポリスチレンに４’−ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｏｘｙ−２’−ｈｙｄｒｏｘｙａｃｅｔｏｐｈｅｎｏｎｅを担持させたビーズ１００ｍｇ（０．７８ｍｍｏｌ／ｇ）ＫＯＨ（２６ｍｇ）存在下、ＥｔＯＨ（２ｍｌ）中、５−ｂｒｏｍｏ−２，３−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｃａｒｂｏｘｙａｌｄｅｈｙｄｅ（５７ｍｇ）と４０℃で３０時間攪拌し、カルコン誘導体担持ビーズを得た。次に、この得られたビーズ５０ｍｇに対し、４−ｐｙｒｉｄｉｎｅｃａｒｂｏｘｙａｌｄｅｈｙｄｅ（７３μＬ）と６０℃で７２時間攪拌し、フラボノイド誘導体担持ビーズを得た。次に、この得られたビーズ２０ｍｇに対し、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（４ｍｇ）、トリフェニルホスフィン（８  ｍｇ）、ピロリジン（３９μＬ）存在下、ｐｈｅｎｙｌａｃｅｔｙｌｅｎｅ（３４μＬ）を加え、ＤＭＦ（１ｍｌ）中、６０℃で２４時間攪拌し、対応する薗頭−萩原カップリングによるフラボノイド誘導体担持ビーズを得た。ビーズからの切り出しは、５％ＨＦ・ＰｙのＴＨＦ溶媒中、室温、１時間で行い、下記式（１）で示される化合物（４．４ｍｇ）を得た。
【化１０】
2012014848.tif 000012
【００３４】
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．７６（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５４−７．５２（ｍ，３Ｈ），７．４６（ｄｔ，Ｊ＝７．３，２．０Ｈｚ，２Ｈ），７．３３−７．２８（ｍ，５Ｈ），７．２１（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄｄ，Ｊ＝８．２，２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．４５（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．１０（ｔ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，２Ｈ），４．００（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），３．９７（ｔ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，２Ｈ），３．７２（ｓ，３Ｈ），３．６４（ｓ，３Ｈ）．【００３５】
１３Ｃ−ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１７９．０，１６２．８，１５９．３，１５６．１，１３４．９，１３４．５，１３２．２，１３２．１，１３２．０，１３１．６，１３１．４，１３１．０，１３０．９，１３０．４，１３０．０，１２８．６，１２８．５，１２８．４，１２２．８，１１３．３，１０７．６，１００．８，６１．１，５５．９，３７．１，３１．９，２９．４，２２．７，１４．１．【００３６】
ＥＳＩ−ＨＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋：ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ３３Ｈ２８ＮＯ６  ５３４．１９１７，ｆｏｕｎｄ  ５３４．１９６２．【００３７】
（化合物（２）の作製）
（４−メトキシフェニル）ジイソプロピルシリルプロピルポリスチレンに４’−ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｏｘｙ−２’−ｈｙｄｒｏｘｙａｃｅｔｏｐｈｅｎｏｎｅを担持させたビーズ１００ｍｇ（０．７８ｍｍｏｌ／ｇ）ＫＯＨ（２６ｍｇ）存在下、ＥｔＯＨ（２ｍｌ）中、５−ｂｒｏｍｏ−２，３−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｃａｒｂｏｘｙａｌｄｅｈｙｄｅ（５７ｍｇ）と４０℃で３０時間攪拌し、カルコン誘導体担持ビーズを得た。次に、この得られたビーズ５０ｍｇに対し、６−ｍｅｔｈｙｌ−２−ｐｙｒｉｄｉｎｅｃａｒｂｏｘｙａｌｄｅｈｙｄｅ（９４ｍｇ）と６０℃で７２時間攪拌し、フラボノイド誘導体担持ビーズを得た。次に、この得られたビーズ２０ｍｇに対し、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（４ｍｇ）、トリフェニルホスフィン（８ｍｇ）、ピロリジン（３９μＬ）存在下、ｐｈｅｎｙｌａｃｅｔｙｌｅｎｅ（３４μＬ）を加え、ＤＭＦ（１ｍｌ）中、６０℃で２４時間攪拌し、対応する薗頭−萩原カップリングによるフラボノイド誘導体担持ビーズを得た。ビーズからの切り出しは、５％ＨＦ・ＰｙのＴＨＦ溶媒中、室温、１時間で行い、下記式（２）で示される化合物（５．７ｍｇ）を得た。
【化１１】
2012014848.tif 000013
【００３８】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ８．１５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４８（ｄｄ，Ｊ＝７．０，２．２Ｈｚ，２Ｈ），７．４１（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．３５−７．３３（ｍ，４Ｈ），７．１８（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．０３（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），６．９９（ｄｄ，Ｊ＝８．８，２．４Ｈｚ，１Ｈ），６．８９（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．１５（ｔ，Ｊ＝４．２Ｈｚ，２Ｈ），４．０１（ｔ，Ｊ＝４．２Ｈｚ，２Ｈ），３．９３（ｓ，３Ｈ），３．８２（ｓ，３Ｈ），２．４６（ｓ，３Ｈ）．【００３９】
１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１７３．８，１６３．０，１６０．８，１５８．８，１５７．４，１５２．５，１４９．７，１３６．５，１３４．７，１３１．５，１３１．４，１２８．４，１２７．５，１２７．３，１２６．４，１２１．０，１２０．５，１１９．６，１１９．０，１１８．７，１１７．４，１１７．１，１１４．５，１００．７，６９．８，６１．４，６１．０，５６．０，３４．２，２９．７，２４．４，２４．３．【００４０】
ＥＳＩ−ＨＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋：ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ３４Ｈ３０ＮＯ６  ５４８．２０７３，ｆｏｕｎｄ  ５４８．２０８６．【００４１】
（化合物（３）の作製）
（４−メトキシフェニル）ジイソプロピルシリルプロピルポリスチレンに４’−ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｏｘｙ−２’−ｈｙｄｒｏｘｙａｃｅｔｏｐｈｅｎｏｎｅを担持させたビーズ１００ｍｇ（０．７８ｍｍｏｌ／ｇ）ＫＯＨ（２６ｍｇ）存在下、ＥｔＯＨ（２ｍｌ）中、５−ｂｒｏｍｏ−２，３−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｃａｒｂｏｘｙａｌｄｅｈｙｄｅ（５７ｍｇ）と４０℃で３０時間攪拌し、カルコン誘導体担持ビーズを得た。次に、この得られたビーズ５０ｍｇに対し、３−ｐｙｒｉｄｉｎｅｃａｒｂｏｘｙａｌｄｅｈｙｄｅ（７３μＬ）と６０℃で７２時間攪拌し、フラボノイド誘導体担持ビーズを得た。次に、この得られたビーズ２０ｍｇに対し、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（４ｍｇ）、トリフェニルホスフィン（８ｍｇ）、ピロリジン（３９μＬ）存在下、ｐｈｅｎｙｌａｃｅｔｙｌｅｎｅ（３４μＬ）を加え、ＤＭＦ（１ｍｌ）中、６０℃で２４時間攪拌し、対応する薗頭−萩原カップリングによるフラボノイド誘導体担持ビーズを得た。ビーズからの切り出しは、５％ＨＦ・ＰｙのＴＨＦ溶媒中、室温、１時間で行い、下記式（３）で示される化合物（５．０ｍｇ）を得た。
【化１２】
2012014848.tif 000014
【００４２】
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．７６（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５４−７．５２（ｍ，３Ｈ），７．４６（ｄｔ，Ｊ＝７．３，２．０Ｈｚ，２Ｈ），７．３３−７．２８（ｍ，５Ｈ），７．２１（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄｄ，Ｊ＝８．２，２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．４５（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．１０（ｔ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，２Ｈ），４．００（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），３．９７（ｔ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，２Ｈ），３．７２（ｓ，３Ｈ），３．６４（ｓ，３Ｈ）．【００４３】
１３Ｃ−ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１７９．０，１６２．８，１５９．３，１５６．１，１３４．９，１３４．５，１３２．２，１３２．１，１３２．０，１３１．６，１３１．４，１３１．０，１３０．９，１３０．４，１３０．０，１２８．６，１２８．５，１２８．４，１２２．８，１１３．３，１０７．６，１００．８，６１．１，５５．９，３７．１，３１．９，２９．４，２２．７，１４．１．【００４４】
ＥＳＩ−ＨＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋：ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ３３Ｈ２８ＮＯ６  ５３４．１９１７，ｆｏｕｎｄ  ５３４．１９６２．【００４５】
（化合物（４）の作製）
（４−メトキシフェニル）ジイソプロピルシリルプロピルポリスチレンに４’−ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｏｘｙ−２’−ｈｙｄｒｏｘｙａｃｅｔｏｐｈｅｎｏｎｅを担持させたビーズ１００ｍｇ（０．７８ｍｍｏｌ／ｇ）ＫＯＨ（２６ｍｇ）存在下、ＥｔＯＨ（２ｍｌ）中、５−ｂｒｏｍｏ−２，３−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｃａｒｂｏｘｙａｌｄｅｈｙｄｅ（５７ｍｇ）と４０℃で３０時間攪拌し、カルコン誘導体担持ビーズを得た。次に、この得られたビーズ５０ｍｇに対し、６−ｍｅｔｈｏｘｙ−２−ｐｙｒｉｄｉｎｅｃａｒｂｏｘｙａｌｄｅｈｙｄｅ（９４μＬ）と６０℃で７２時間攪拌し、フラボノイド誘導体担持ビーズを得た。次に、この得られたビーズ２０ｍｇに対し、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（４ｍｇ）、トリフェニルホスフィン（８ｍｇ）、ピロリジン（３９μＬ）存在下、ｐｈｅｎｙｌａｃｅｔｙｌｅｎｅ（３４μＬ）を加え、ＤＭＦ（１ｍｌ）中、６０℃で２４時間攪拌し、対応する薗頭−萩原カップリングによるフラボノイド誘導体担持ビーズを得た。ビーズからの切り出しは、５％ＨＦ・ＰｙのＴＨＦ溶媒中、室温、１時間で行い、下記式（４）で示される化合物（４．２ｍｇ）を得た。
【化１３】
2012014848.tif 000015
【００４６】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ８．１４（ｄｄ，Ｊ＝８．３，２．２Ｈｚ，１Ｈ），７．９５（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５５−７．４３（ｍ，４Ｈ），７．３５−７．２８（ｍ，４Ｈ），６．８６（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），６．４７（ｄｄ，Ｊ＝９．０，２．３Ｈｚ，１Ｈ），６．３５（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），４．２０（ｔ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，２Ｈ），４．０１（ｔ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，２Ｈ），３．９５（ｓ，２Ｈ），３．９２（ｓ，３Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ），３．７８（ｓ，３Ｈ）．【００４７】
１３Ｃ−ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１８０．６，１６３．５，１６２．４，１５７．９，１４８．３，１４１．３，１３４．３，１３４．２，１３２．２，１３２．０，１３１．９，１３１．４，１３１．０，１３０．８，１３０．４，１２９．６，１２８．８，１２８．６，１２８．３，１２８．０，１２７．８，１２６．６，１２３．０，１０２．３，６９．９，６９．４，６３．４，６０．６，５５．８，５０．１，２９．６，２２．６．【００４８】
ＥＳＩ−ＨＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋：ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ３４Ｈ３０ＮＯ７  ５６４．２０２２，ｆｏｕｎｄ  ５６４．２０２６．【００４９】
（化合物（５）の作製：比較例）
（４−メトキシフェニル）ジイソプロピルシリルプロピルポリスチレンに４’−ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｏｘｙ−２’−ｈｙｄｒｏｘｙａｃｅｔｏｐｈｅｎｏｎｅを担持させたビーズ１００ｍｇ（０．７８ｍｍｏｌ／ｇ）をＫＯＨ（２６ｍｇ）存在下、ＥｔＯＨ（２ｍｌ）中、４−ｂｒｏｍｏｂｅｎｚａｌｄｅｈｙｄｅ（４３ｍｇ）と４０℃で３０時間攪拌し、対応するカルコン誘導体担持ビーズを得た。次に、この得られたビーズ５０ｍｇに対し、２−ｂｒｏｍｏ−３−ｐｙｒｉｄｉｎｅｃａｒｂｏｘｙａｌｄｅｈｙｄｅ（１４５ｍｇ）と６０℃で７２時間攪拌し、対応するフラボノイド誘導体担持ビーズを得た。次に、得られたビーズ２０ｍｇに対し、ｔｒｉｓ（ｄｉｂｅｎｄｙｌｉｄｅｎｅａｃｅｔｏｎｅ）ｄｉｐａｌｌａｄｉｕｍ（０）（１４ｍｇ）、ＮａＯＭｅ（１３ｍｇ）を加え、ＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（１０／１，１ｍｌ）中、ｐｈｅｎｙｌｂｏｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ（２９ｍｇ）と反応させ、６０℃で４８時間攪拌し、対応する鈴木−宮浦カップリングによるフラボノイド誘導体担持ビーズを得た。ビーズからの切り出しは、５％ＨＦ・ＰｙのＴＨＦ溶媒中、室温、１時間で行い、下記式（５）で示される化合物を得た。
【化１４】
2012014848.tif 000016
【００５０】
ＩＲ（ＡＴＲ）：３４２０，２９２６，１６２４，１５０７，１４８８，１４４１，１３８６，１２４９，１１７７，１０７７，８４４，７６５，６９９ｃｍ−１．【００５１】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ３．６８（ｓ，２Ｈ），３．９６（ｔ，Ｊ＝４．６Ｈｚ，２Ｈ），４．１０（ｔ，Ｊ＝４．６Ｈｚ，２Ｈ），６．７３（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），６．９１−６．９４（ｍ，２Ｈ），６．９８（ｄｄ，Ｊ＝８．９，２．２Ｈｚ，１Ｈ），７．０２（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），７．１１（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），７．１２−７．１３（ｍ，２Ｈ），７．３１−７．４０（ｍ，６Ｈ），７．５３（ｔ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），８．０８（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），８．３２−８．３４（ｍ，１Ｈ），８．６８（ｄｄ，Ｊ＝８．６，１．８Ｈｚ，１Ｈ）．【００５２】
１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１７３．９，１６５．３，１６３．０，１５７．８，１５７．５，１５４．５，１４６．９，１４３．３，１３５．８，１３２．１，１３２．０，１３１．９，１２８．９，１２８．７，１２８．５，１２８．４，１２７．２，１２７．１，１２７．０，１２６．９，１２６．８，１２２．４，１００．７，１００．２，６９．８，６１．０，２９．７．【００５３】
（化合物（６）の作製：比較例）
（４−メトキシフェニル）ジイソプロピルシリルプロピルポリスチレンに４’−ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｏｘｙ−２’−ｈｙｄｒｏｘｙａｃｅｔｏｐｈｅｎｏｎｅを担持させたビーズ１００ｍｇ（０．７８ｍｍｏｌ／ｇ）をＫＯＨ（２６ｍｇ）存在下、ＥｔＯＨ（２ｍｌ）中、４−ｂｅｎｚｏｘｙｂｅｎｚａｌｄｅｈｙｄｅ（５０ｍｇ）と４０℃で３０時間攪拌し、対応するカルコン誘導体担持ビーズを得た。次に、この得られたビーズ５０ｍｇに対し、２−ｂｒｏｍｏ−３−ｐｙｒｉｄｉｎｅｃａｒｂｏｘｙａｌｄｅｈｙｄｅ（１４５ｍｇ）と６０℃で７２時間攪拌し、対応するフラボノイド誘導体担持ビーズを得た。ビーズからの切り出しは、５％ＨＦ・ＰｙのＴＨＦ溶媒中、室温、１時間で行い、下記式（６）で示される化合物を得た。
【化１５】
2012014848.tif 000017
【００５４】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ８．２２（ｄ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，１Ｈ），８．１５（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），７．４５−７．３５（ｍ，８Ｈ），７．１７（ｄｄ，Ｊ＝７．６，４．７Ｈｚ，１Ｈ），７．０５−７．０１（ｍ，３Ｈ），６．９３（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），５．１２（ｓ，２Ｈ），４．２０（ｔ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，２Ｈ），４．０５（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），３．９９（ｓ，２Ｈ）．【００５５】
１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１７７．４，１６３．２，１６０．６，１５７．８，１４７．５，１４４．２，１３７．３，１３６．７，１３６．２，１２９．８，１２８．７，１２８．２，１２７．５，１２７．４，１２５．１，１２２．９，１１６．９，１１６．８，１１５．０，１１４．９，１００．７，７０．１，６９．９，６１．１，３２．０．【００５６】
ＥＳＩ−ＨＲＭＳ［Ｍ＋Ｎａ］＋：ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ３０Ｈ２４７９ＢｒＮＯ５Ｎａ  ５８０．０７３６，ｆｏｕｎｄ  ５８０．０７４０．【００５７】
（アッセイの準備）
本実施例において、Ｈｅｓ１発現阻害は、マウスＨｅｓ１プロモーター部を有するルシフェラーゼレポータージーンを用いるアッセイにて評価した。【００５８】
Ｈｅｓ１プロモーター部を有するルシフェラーゼレポータージーンを安定発現する細胞（Ｃ３Ｈ１０Ｔ１／２を用いて発明者が作成）を５０μＬ／ｗｅｌｌ（１×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬ）ずつ９６−ｗｅｌｌ  ｗｈｉｔｅ  ｐｌａｔｅに播種し、１８時間培養（３７℃、５％ＣＯ２）した。培地を取り除き、それぞれの濃度に希釈した化合物溶液を作成し、５０μＬずつ加えた。２４時間インキュベーションし、ルシフェラーゼ活性の測定を行った。ルシフェラーゼ活性の測定は、以下のように行った。培地を取り除き、５０μＬの１×Ｇｌｏ  Ｌｙｓｉｓ  Ｂｕｆｆｅｒ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を加え、室温にて３０分間振とうした。細胞が溶解した後、３０μＬのＢｒｉｇｈｔ−ＧｌｏＴＭ  Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  Ａｓｓａｙ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ）のｌｕｃｉｆｅｒｉｎを添加し、Ｌｕｍｉｎｏｓｋａｎ  Ａｓｃｅｎｔ（Ｔｈｅｒｍｏ）を用いて化学発光量を測定し、Ｈｅｓ１  ｐｒｏｍｏｔｅｒ活性を評価した。【００５９】
また本実施例では、同時に、細胞毒性試験（ＦＭＣＡ）も行い、細胞の生存率を調べた。１×１０５  ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞を５０μＬ／ｗｅｌｌずつ９６−ｗｅｌｌ  ｂｌａｃｋ  ｐｌａｔｅ播種し、１８時間培養（３７℃、５％ＣＯ２）した。ルシフェラーゼ活性用のサンプル添加と同時に、同じ濃度のテストサンプルを加え、２４時間作用させた後、ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｒｉｃ  ｍｉｃｒｏｃｕｌｔｕｒｅ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ａｓｓａｙ（ＦＭＣＡ）の手法を用いてＦｌｕｏｒｏｓｋａｎ  ａｓｃｅｎｔ（Ｔｈｅｒｍｏ）にてその蛍光量を測定し（Ｅｘ：４８５ｎｍ、Ｅｍ：５３８ｎｍ）、細胞生存率を評価した。【００６０】
それぞれの活性評価は、サンプルを添加していないコントロールの値を１００％とし、テストサンプル群の値の変化を割合で計算し、ルシフェラーゼ活性ではＨｅｓ１プロモーター活性を、ＦＭＣＡでは細胞生存率を算出した。【００６１】
そしてこのアッセイを用いて、上記化合物（１）乃至（６）についてその効果を確認した。この結果を図１に示す。図中、棒グラフはルシフェラーゼ活性を、折れ線グラフは、アッセイ細胞（Ｃ３Ｈ１０Ｔ１／２）の生存率を表す。また図中「ｃｏ」はコントロールを意味する。【００６２】
この結果、化合物のＨｅｓ１発現阻害作用のＩＣ５０は、化合物（１）において２１μＭ、化合物（２）において４６μＭ、化合物（３）において２９μＭ、化合物（４）において２５μＭであることが確認でき、Ｈｅｓ１発現阻害を確認した。一方、上記化合物（５）については、ＩＣ５０が＞５０μＭであり、Ｈｅｓ１発現阻害作用が低かった。【００６３】
また一方、化合物のマウス神経幹細胞に対する毒性は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−ＧｌｏＴＭ  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用い、生存細胞のＡＴＰ量を指標に比較した。化合物を２４時間作用させた後のマウス神経幹細胞の生存率は、化合物濃度２０μＭにおいて、化合物（１）では７７％、化合物（２）では８３％、化合物（３）では７７％、化合物（４）では８８％であり、一方、化合物（６）においては２％であり、化合物濃度５０μＭにおいても、化合物（１）〜（４）において生存率は６０％以上であったが、一方、化合物（６）においては０．７％とほぼ死滅した。本実施形態に係る化合物の神経幹細胞の毒性が低いことが確認できた。【００６４】
以上、本実施例により、Ｈｅｓ１プロモーター阻害活性が強い一方、神経幹細胞に対して毒性のより低いＨｅｓ１プロモーター阻害剤となっていることを確認した。
【産業上の利用可能性】
【００６５】
本発明は、Ｈｅｓ１プロモーター阻害剤、神経幹細胞分化促進剤のリード化合物として産業上の利用可能性がある。
【図１】
2012014848.tif 000025
【国際調査報告】
2012014848.tif 000026
2012014848.tif 000027
2012014848.tif 000028
2012014848.tif 000029