(57)【要約】下記式［Ｉ］で表されるＦＫＩ−４４２９−１物質、その他３物質。このＦＫＩ−４４２９−１物質を生産する能力を有し、糸状菌に属する微生物を、培地で培養する。この培養物の中に、ＦＫＩ−４４２９−１物質を蓄積せしめる。この培養物からＦＫＩ−４４２９−１物質を採取する。その他３物質は、ＦＫＩ−４４２９−２物質と、ＦＫＩ−４４２９−３物質と、ＦＫＩ−４４２９−４物質とである。抗菌剤は、ＦＫＩ−４４２９−１物質とアミノグリコシド系抗生物質とを含む。【化２１】2011111738.tif 000026
2011111738.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式［Ｉ］で表されるＦＫＩ−４４２９−１物質。
【化９】
2011111738.tif 000014
【請求項２】
下記式［ＩＩ］で表されるＦＫＩ−４４２９−２物質。
【化１０】
2011111738.tif 000015
【請求項３】
下記式［ＩＩＩ］で表されるＦＫＩ−４４２９−３物質。
【化１１】
2011111738.tif 000016
【請求項４】
下記式［ＩＶ］で表されるＦＫＩ−４４２９−４物質。
【化１２】
2011111738.tif 000017
【請求項５】
糸状菌に属し、下記式［Ｉ］で表されるＦＫＩ−４４２９−１物質と、下記式［ＩＩ］で表されるＦＫＩ−４４２９−２物質と、下記式［ＩＩＩ］で表されるＦＫＩ−４４２９−３物質と、下記式［ＩＶ］で表されるＦＫＩ−４４２９−４物質との少なくともいずれかひとつであるＦＫＩ−４４２９物質を生産する能力を有する微生物を、培地で培養し、培養物中に前記ＦＫＩ−４４２９物質を蓄積せしめる工程と、該培養物から前記ＦＫＩ−４４２９物質を採取する工程とを有することを特徴とするＦＫＩ−４４２９物質の製造方法。
【化１３】
2011111738.tif 000018
【化１４】
2011111738.tif 000019
【化１５】
2011111738.tif 000020
【化１６】
2011111738.tif 000021
【請求項６】
前記微生物が、ペニシリウム・エスピー（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐ．）ＦＫＩ−４４２９（受託番号（国内寄託）  ＮＩＴＥ  Ｐ−８６９，受託番号（国際寄託）  ＮＩＴＥ  ＢＰ−８６９）である請求の範囲第５項記載のＦＫＩ−４４２９物質の製造方法。
【請求項７】
ペニシリウム・エスピー（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐ．）ＦＫＩ−４４２９（受託番号（国内寄託）  ＮＩＴＥ  Ｐ−８６９，受託番号（国際寄託）  ＮＩＴＥ  ＢＰ−８６９）株。
【請求項８】
下記式［Ｉ］で表されるＦＫＩ−４４２９−１物質と下記式［ＩＩ］で表されるＦＫＩ−４４２９−２物質と下記式［ＩＩＩ］で表されるＦＫＩ−４４２９−３物質と下記式［ＩＶ］で表されるＦＫＩ−４４２９−４物質との少なくともいずれかひとつと、アミノグリコシド系抗生物質とを組み合わせたことを特徴とする抗菌剤。
【化１７】
2011111738.tif 000022
【化１８】
2011111738.tif 000023
【化１９】
2011111738.tif 000024
【化２０】
2011111738.tif 000025
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗菌剤として利用されているアミノグリコシド系抗生物質と併用することによりその効果を増強する新規ＦＫＩ−４４２９物質及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）は、院内感染の主な原因菌として社会的問題となっている。この病原菌は、β−ラクタム抗生物質など種々の薬剤に対する耐性を有している。一般にＭＲＳＡ感染症の治療には、グリコペプチド系のバンコマイシンやアミノグリコシド系のアルベカシンといった抗生物質が使用されている。このうち特に急性期の治療に多用されるアミノグリコシド系抗生物質に対する耐性菌が出現している。現在までに、このような状況に対処すべく、アミノグリコシド系抗生物質の効力を回復させる作用を有する物質が報告されている。例えば、アミノグリコシド系抗生物質を含む抗菌剤と組み合わせて使用することで相乗的効果を示す７−ヒドロキシトロポロンがこれに相当する（例えば、非特許文献１参照）。新規ＦＫＩ−４４２９物質は、アミノグリコシド系抗生物質に属するストレプトマイシン、カナマイシン、ジベカシン、アルベカシンなどの抗菌活性を増強する作用を有している。このため、新規ＦＫＩ−４４２９物質は、アミノグリコシド系抗生物質を含む抗菌剤との併用療法へも応用できることが期待される。新規ＦＫＩ−４４２９物質は、トロポロン系化合物とは、分子式および化学構造が明確に区別される。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
【非特許文献１】Ｎ．Ｅ．アレン（Ａｌｌｅｎ）、外３名「７−ヒドロキシトロポロン：アミノグリコシド−２"−Ｏ−アデニリル転移酵素阻害剤（７−Ｈｙｄｒｏｘｙｔｒｏｐｏｌｏｎｅ：ａｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ａｍｉｎｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅ−２"−Ｏ−ａｄｅｎｙｌｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）」、アンチミクロビアル・エージェンツ・アンド・ケモセラピー（Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ）、米国微生物学会（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ）、１９８２年１１月、第２２巻、第５号、ｐ．８２４−８３１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
アミノグリコシド系抗生物質の活性を増強する薬剤は、アミノグリコシド系抗生物質の投与量を減量させ、投与期間を短縮させることにより耐性菌出現の頻度を低減させることが期待される。また同時に、作用の異なる２つの薬剤を併用することにより、アミノグリコシド系抗生物質に対する耐性を克服することも期待される。【０００５】
かかる状況において、ＭＲＳＡに対するアミノグリコシド系抗生物質の活性増強作用を有する物質を提供することは、ＭＲＳＡ感染症やアミノグリコシド系抗生物質耐性を含む多剤耐性菌を起因とする感染症の新しい治療薬を提供するものであり大いに期待される。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、微生物の生産する代謝産物を対象にアミノグリコシド系抗生物質であるアルベカシンのＭＲＳＡに対する耐性克服物質を探索した結果、新たに土壌から分離した糸状菌ＦＫＩ−４４２９株の培養液中にアルベカシン耐性克服作用を有する物質が産生されていることを見出した。次いで該培養物を精製、単離した結果、アルベカシン耐性克服作用を有するＦＫＩ−４４２９−１物質、ＦＫＩ−４４２９−２物質、ＦＫＩ−４４２９−３物質、およびＦＫＩ−４４２９−４物質の４種の化合物を得た。以下、これらを総称してＦＫＩ−４４２９物質と呼ぶ。すなわち、ＦＫＩ−４４２９物質とは、ＦＫＩ−４４２９−１物質、ＦＫＩ−４４２９−２物質、ＦＫＩ−４４２９−３物質、およびＦＫＩ−４４２９−４物質の少なくともいずれかひとつである。ＦＫＩ−４４２９物質のような化学構造を有する物質は従来全く知られていなかった。【０００７】
本発明は、かかる知見に基づいて完成されたものであって、請求の範囲第１項に記載するように下記式［Ｉ］で表される新規ＦＫＩ−４４２９−１物質と、請求の範囲第２項に記載するように下記式［ＩＩ］で表される新規ＦＫＩ−４４２９−２物質と、請求の範囲第３項に記載するように下記式［ＩＩＩ］で表される新規ＦＫＩ−４４２９−３物質と、請求の範囲第４項に記載するように下記式［ＩＶ］で表される新規ＦＫＩ−４４２９−４物質とである。【０００８】
【化１】
2011111738.tif 000003
【０００９】
【化２】
2011111738.tif 000004
【００１０】
【化３】
2011111738.tif 000005
【００１１】
【化４】
2011111738.tif 000006
【００１２】
本発明はまた、請求の範囲第５項に記載するように、糸状菌に属し、式［Ｉ］で表されるＦＫＩ−４４２９−１物質と、式［ＩＩ］で表されるＦＫＩ−４４２９−２物質と、式［ＩＩＩ］で表されるＦＫＩ−４４２９−３物質と、式［ＩＶ］で表されるＦＫＩ−４４２９−４物質との少なくともいずれかひとつであるＦＫＩ−４４２９物質を生産する能力を有する微生物を、培地で培養し、培養物中に前記ＦＫＩ−４４２９物質を蓄積せしめる工程と、該培養物から前記ＦＫＩ−４４２９物質を採取する工程とを有することを特徴として構成されるＦＫＩ−４４２９物質の製造方法である。【００１３】
本発明はまた、請求の範囲第６項に記載するように、前記微生物が、ペニシリウム・エスピー（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐ．）ＦＫＩ−４４２９（受託番号（国内寄託）  ＮＩＴＥ  Ｐ−８６９，受託番号（国際寄託）  ＮＩＴＥ  ＢＰ−８６９）である請求の範囲第５項に記載の製造方法である。【００１４】
本発明は更に請求の範囲第７項に記載するように、ペニシリウム・エスピー（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐ．）ＦＫＩ−４４２９（受託番号（国内寄託）  ＮＩＴＥ  Ｐ−８６９，受託番号（国際寄託）  ＮＩＴＥ  ＢＰ−８６９）株である。【００１５】
さらにまた、請求の範囲第８項記載のように、本発明の抗菌剤は、式［Ｉ］で表されるＦＫＩ−４４２９−１物質と式［ＩＩ］で表されるＦＫＩ−４４２９−２物質と式［ＩＩＩ］で表されるＦＫＩ−４４２９−３物質と式［ＩＶ］で表されるＦＫＩ−４４２９−４物質との少なくともいずれかひとつと、アミノグリコシド系抗生物質とを備える。
【発明の効果】
【００１６】
本発明の新規ＦＫＩ−４４２９−１物質と新規ＦＫＩ−４４２９−２物質と新規ＦＫＩ−４４２９−３物質と新規ＦＫＩ−４４２９−４物質とは、抗菌剤として利用されているアミノグリコシド系抗生物質と併用することにより、アミノグリコシド系抗生物質の活性を増強する。また、本発明の製造方法によれば、新規ＦＫＩ−４４２９−１物質と新規ＦＫＩ−４４２９−２物質と新規ＦＫＩ−４４２９−３物質と新規ＦＫＩ−４４２９−４物質とを製造することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】本発明によるＦＫＩ−４４２９−１物質の紫外部吸収スペクトル（メタノール溶液中）を示したものである。
【図２】本発明によるＦＫＩ−４４２９−１物質の赤外部吸収スペクトル（臭化カリウム法）を示したものである。
【図３】本発明によるＦＫＩ−４４２９−１物質のプロトン核磁気共鳴スペクトル（ＣＤ３ＯＨ中）を示したものである。
【図４】本発明によるＦＫＩ−４４２９−１物質のカーボン核磁気共鳴スペクトル（ＣＤ３ＯＨ中）を示したものである。
【図５】本発明によるＦＫＩ−４４２９−２物質の紫外部吸収スペクトル（メタノール溶液中）を示したものである。
【図６】本発明によるＦＫＩ−４４２９−２物質の赤外部吸収スペクトル（臭化カリウム法）を示したものである。
【図７】本発明によるＦＫＩ−４４２９−２物質のプロトン核磁気共鳴スペクトル（ＣＤ３ＯＨ中）を示したものである。
【図８】本発明によるＦＫＩ−４４２９−２物質のカーボン核磁気共鳴スペクトル（ＣＤ３ＯＨ中）を示したものである。
【図９】本発明によるＦＫＩ−４４２９−３物質の紫外部吸収スペクトル（メタノール溶液中）を示したものである。
【図１０】本発明によるＦＫＩ−４４２９−３物質の赤外部吸収スペクトル（臭化カリウム法）を示したものである。
【図１１】本発明によるＦＫＩ−４４２９−３物質のプロトン核磁気共鳴スペクトル（ＣＤ３ＯＤ中）を示したものである。
【図１２】本発明によるＦＫＩ−４４２９−３物質のカーボン核磁気共鳴スペクトル（ＣＤ３ＯＤ中）を示したものである。
【図１３】本発明によるＦＫＩ−４４２９−４物質の紫外部吸収スペクトル（メタノール溶液中）を示したものである。
【図１４】本発明によるＦＫＩ−４４２９−４物質の赤外部吸収スペクトル（臭化カリウム法）を示したものである。
【図１５】本発明によるＦＫＩ−４４２９−４物質のプロトン核磁気共鳴スペクトル（ＣＤ３ＯＤ中）を示したものである。
【図１６】本発明によるＦＫＩ−４４２９−４物質のカーボン核磁気共鳴スペクトル（ＣＤ３ＯＤ中）を示したものである。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明のＦＫＩ−４４２９物質は、糸状菌に属するＦＫＩ−４４２９物質を生産する能力を有する微生物を培養し、ＦＫＩ−４４２９物質を蓄積させた培養物から常法によって得ることができる。ＦＫＩ−４４２９物質は、前記式［Ｉ］、［ＩＩ］、［ＩＩＩ］、及び［ＩＶ］で表される。本発明に用いることのできる菌株としては、糸状菌に属するＦＫＩ−４４２９物質生産菌のすべてを使用することができる。その一例としては、本発明者等によって土壌より新たに分離されたペニシリウム・エスピー（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐ．）ＦＫＩ−４４２９株を挙げることができる。
【００１９】
［ペニシリウム・エスピー（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐ．）ＦＫＩ−４４２９株の菌学的性質］
１．形態的特徴
本菌株は、ツァペック・イーストエキス寒天培地、麦芽汁寒天培地、２５％グリセリン・硝酸塩寒天培地で良好に生育し、各種寒天培地で分生子の着生は良好であった。
【００２０】
麦芽汁寒天培地に生育したコロニーを顕微鏡で観察すると、菌糸は無色で隔壁を有している。分生子柄（５０〜１２５×１．５〜２．５μｍ）は、気菌糸より直立して生じ、分岐することはなかった。分生子柄の先端にはペニシルスが形成される。ペニシルスは二輪生で、３〜５本のフィアライドが群生して構成される。フィアライドは円筒型で、大きさ１０．０〜１２．５×２．３〜２．７μｍであった。フィアライドの先端からフィアロ型分生子が形成され、培養時間の経過とともに連鎖状となる。分生子は紡錘型、緑色、大きさ２．５〜５．０×２．３〜２．７μｍで、表面は粗面であった。
【００２１】
２．培養性状
各種寒天培地上で、２５℃、７日間培養した場合の肉眼的観察結果を表１に示す。
【００２２】
【表１】
2011111738.tif 000007
【００２３】
３．生理的性状
（１）最適生育条件
本菌株の最適生育条件は、ｐＨ３〜７、温度２６．１〜３６．９℃である。
２）生育の範囲
本菌株の生育範囲は、ｐＨ２〜９、温度１０．２〜３８．６℃である。
３）好気性、嫌気性の区別
好気性。
【００２４】
上記ＦＫＩ−４４２９株の形態的特徴、培養性状および生理的性状に基づき、既知菌種との比較を試みた。この結果、本菌株はペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）に属する一菌株と同定し、ペニシリウム・エスピーＦＫＩ−４４２９と命名した。なお本菌株はペニシリウム・エスピーＦＫＩ−４４２９（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐ．ＦＫＩ−４４２９）として、日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８（郵便番号２９２−０８１８）に所在する独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに、平成２２年１月２２日に寄託されている。受託番号（国内寄託）はＮＩＴＥ  Ｐ−８６９である。また、本菌株は、特許手続上の微生物の寄託の国際的承認に関するブタペスト条約に基づき、日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８（郵便番号２９２−０８１８）に所在する独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに、平成２３年１月１７日に、国際寄託へ移管されている。受託番号（国際寄託）はＮＩＴＥ  ＢＰ−８６９である。
【００２５】
［培養方法］
ＦＫＩ−４４２９物質は糸状菌に属し、ＦＫＩ−４４２９物質生産能を有する微生物を培養することによって得られる。培養は一般微生物の培養方法に準じて行われる。
【００２６】
ＦＫＩ−４４２９物質生産に適した栄養源としては、糸状菌の栄養源として使用し得るものであればよい。例えば、市販のペプトン、肉エキス、コーン・スティープ・リカー、綿実粉、落花生粉、大豆粉、酵母エキス、ＮＺ−アミン、カゼインの水和物、硝酸ソーダ、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム等の窒素源、グリセリン、澱粉、グルコース、ガラクトース、マンノース等の炭水化物、あるいは脂肪等の炭素源、及び食塩、リン酸塩、炭酸カルシウム、硫酸マグネシウム等の無機塩を単独であるいは組み合わせて使用することができる。
【００２７】
その他必要に応じて微量の金属塩、消泡剤として動・植・鉱物油等を添加することもできる。これらのものは生産菌が利用しＦＫＩ−４４２９物質の生産の役だつものであればよく、公知の糸状菌の培養材料はすべて用いることができる。ＦＫＩ−４４２９物質の大量培養には液体培養が好ましく、培養温度は生産菌が発育し、ＦＫＩ−４４２９物質を生産できる範囲で適用することができる。培養は以上に述べた条件を使用するＦＫＩ−４４２９物質生産菌の性質に応じて適宜選択して行なうことができる。
【００２８】
［精製方法］
ＦＫＩ−４４２９物質は、培養液よりクロロホルム、酢酸エチル等の水不混和性の有機溶媒で抽出することができる。上述の抽出法に加え、脂溶性物質の採取に用いられる公知の方法、例えば吸着クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィーよりのかき取り、遠心向流分配クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー等を適宜組み合わせることによってあるいは繰り返すことによって純粋に採取することができる。
【００２９】
［理化学的性状］
次に、本発明のＦＫＩ−４４２９物質の理化学的性状について説明する。
【００３０】
１．ＦＫＩ−４４２９−１物質
（１）性状：白色粉末
（２）分子式：Ｃ１９Ｈ３０Ｏ５
ＨＲ−ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）［Ｍ＋Ｎａ］＋  計算値３６１．１９９１，  実測値３６１．２００１
（３）分子量：３３８
ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）で［Ｍ＋Ｎａ］＋３６１を観測
（４）紫外部吸収スペクトル（ＵＶスペクトル）：メタノール（ＣＨ３ＯＨ）溶液中で測定した紫外部吸収スペクトルは図１に示すとおりであり、λｍａｘ（ε）：２１５ｎｍ（２０５００）の吸収極大を示す。
（５）赤外部吸収スペクトル（ＩＲスペクトル）：臭化カリウム（ＫＢｒ）錠剤法で測定した赤外吸収スペクトルは図２に示すとおりであり、νｍａｘは、３４３５，２９５６，２９２５，２８５７，１７４３，１６４１，１４４６ｃｍ−１等に特徴的な吸収極大を示す。
（６）溶剤に対する溶解性：メタノール、酢酸エチルおよびクロロホルムに可溶。水、ヘキサンに不溶。
（７）プロトン及びカーボン核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−ＮＭＲスペクトル及び１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル）：ＣＤ３ＯＨ中で、バリアン社４００及び１００ＭＨｚ核磁気共鳴スペクトロメータで測定した水素の化学シフト（ｐｐｍ）及び炭素の化学シフト（ｐｐｍ）は下記に示すとおりである。なお（  ）内は水素の数を示す。
δＨ：０．９０（３Ｈ），０．９６（３Ｈ），１．１８〜１．３７（１０Ｈ），１．６８（３Ｈ），２．４５（１Ｈ），２．４８（１Ｈ），２．７３（１Ｈ），３．１７（１Ｈ），３．２３（１Ｈ），４．０５（１Ｈ），４．５８（１Ｈ），５．１８（１Ｈ），７．１８（１Ｈ）
δＣ：１２．５，１４．３，２１．１，２３．６，２８．５，３０．４，３１．１，３２．９，３３．２，３５．１，３８．４，６４．６，８８．７，１２６．７，１３０．３，１３７．５，１４０．８，１６７．９，１７４．１
【００３１】
以上のように、ＦＫＩ−４４２９−１物質の各種理化学性状やスペクトルデータを詳細に検討した。その結果、ＦＫＩ−４４２９−１物質は下記の式［Ｉ］で表される化学構造であることが決定された。
【００３２】
【化５】
2011111738.tif 000008
【００３３】
２．ＦＫＩ−４４２９−２物質
（１）性状：白色粉末
（２）分子式：Ｃ１９Ｈ３０Ｏ５
ＨＲ−ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）［Ｍ＋Ｎａ］＋  計算値３６１．１９９１，実測値３６１．１９８５
（３）分子量：３３８
ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）で［Ｍ＋Ｎａ］＋３６１を観測
（４）紫外部吸収スペクトル：メタノール溶液中で測定した紫外部吸収スペクトルは図５に示すとおりであり、λｍａｘ（ε）：２１４ｎｍ（２５２００）の吸収極大を示す。
（５）赤外部吸収スペクトル：臭化カリウム錠剤法で測定した赤外吸収スペクトルは図６に示すとおりであり、νｍａｘは、３４４４，２９５６，２９２５，２８５８，１７５１，１６８５，１６３３，１４４６ｃｍ−１等に特徴的な吸収極大を示す。
（６）溶剤に対する溶解性：メタノール、酢酸エチルおよびクロロホルムに可溶。水、ヘキサンに不溶。
（７）プロトン及びカーボン核磁気共鳴スペクトル：ＣＤ３ＯＨ中で、バリアン社４００及び１００ＭＨｚ核磁気共鳴スペクトロメータで測定した水素の化学シフト（ｐｐｍ）及び炭素の化学シフト（ｐｐｍ）は下記に示すとおりである。なお（  ）内は水素の数を示す。
δＨ：０．９１（３Ｈ），０．９５（３Ｈ），１．１８〜１．３７（１０Ｈ），１．６６（３Ｈ），２．４３（１Ｈ），２．８０（２Ｈ），３．２０（２Ｈ），４．１６（１Ｈ），４．７１（１Ｈ），５．３４（１Ｈ），６．８０（１Ｈ）
δＣ：１３．７，１４．３，２１．２，２３．６，２３．６，２８．６，３０．６，３３．０，３３．１，３８．７，４８．０，７７．１，７９．８，１３０．４，１３２．５，１３３．４，１３５．３，１７０．０，１７２．７
【００３４】
以上のように、ＦＫＩ−４４２９−２物質の各種理化学性状やスペクトルデータを詳細に検討した。その結果、ＦＫＩ−４４２９−２物質は下記の式［ＩＩ］で表される化学構造であることが決定された。
【００３５】
【化６】
2011111738.tif 000009
【００３６】
３．ＦＫＩ−４４２９−３物質
（１）性状：白色粉末
（２）分子式：Ｃ１９Ｈ２８Ｏ５
ＨＲ−ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）［Ｍ＋Ｎａ］＋  計算値３５９．１８３４，実測値３５９．１８４９
（３）分子量：３３６
ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）で［Ｍ＋Ｎａ］＋３５９を観測
（４）紫外部吸収スペクトル：メタノール溶液中で測定した紫外部吸収スペクトルは図９に示すとおりであり、λｍａｘ（ε）：２０６ｎｍ（６７０００），２５１ｎｍ（６１７０）の吸収極大を示す。
（５）赤外部吸収スペクトル：臭化カリウム錠剤法で測定した赤外吸収スペクトルは図１０に示すとおりであり、νｍａｘは、３４２９，２９５６，２９２５，２８５８，１７５８，１７０５，１６４７ｃｍ−１等に特徴的な吸収極大を示す。
（６）溶剤に対する溶解性：メタノール、酢酸エチルおよびクロロホルムに可溶。水、ヘキサンに不溶。
（７）プロトン及びカーボン核磁気共鳴スペクトル：ＣＤ３ＯＤ中で、バリアン社４００及び１００ＭＨｚ核磁気共鳴スペクトロメータで測定した水素の化学シフト（ｐｐｍ）及び炭素の化学シフト（ｐｐｍ）は下記に示すとおりである。なお（  ）内は水素の数を示す。
δＨ：０．９０（３Ｈ），０．９４（３Ｈ），１．２０〜１．４０（１０Ｈ），１．７１（３Ｈ），２．４４（１Ｈ），４．１９（１Ｈ），５．１７（１Ｈ），５．３０（１Ｈ），６．９０（１Ｈ），７．３６（１Ｈ），７．７８（１Ｈ）
δＣ：１３．９，１５．０，２１．６，２４．１，２９．０，３０．０，３３．３，３３．５，３８．８，７７．０，８４．２，１２５．２，１２８．１，１３１．４，１３２．３，１３５．５，１５４．８，１７１．０，１７２．０
【００３７】
以上のように、ＦＫＩ−４４２９−３物質の各種理化学性状やスペクトルデータを詳細に検討した。その結果、ＦＫＩ−４４２９−３物質は下記の式［ＩＩＩ］で表される化学構造であることが決定された。
【００３８】
【化７】
2011111738.tif 000010
【００３９】
４．ＦＫＩ−４４２９−４物質
（１）性状：白色粉末
（２）分子式：Ｃ１９Ｈ２８Ｏ５
ＨＲ−ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）［Ｍ＋Ｈ］＋  計算値３３７．１９５６，  実測値３３７．１９８６
（３）分子量：３３６
ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）で［Ｍ＋Ｈ］＋３３７を観測
（４）紫外部吸収スペクトル：メタノール溶液中で測定した紫外部吸収スペクトルは図１３に示すとおりであり、λｍａｘ（ε）：２０２ｎｍ（６７０００），２５８ｎｍ（６９８０）の吸収極大を示す。
（５）赤外部吸収スペクトル：臭化カリウム錠剤法で測定した赤外吸収スペクトルは図１４に示すとおりであり、νｍａｘは、３４５２，２９５６，２９２５，２８５７，１７０３，１６３９，１４５７，１３８０ｃｍ−１等に特徴的な吸収極大を示す。
（６）溶剤に対する溶解性：メタノール、酢酸エチルおよびクロロホルムに可溶。水、ヘキサンに不溶。
（７）プロトン及びカーボン核磁気共鳴スペクトル：ＣＤ３ＯＤ中で、バリアン社４００及び１００ＭＨｚ核磁気共鳴スペクトロメータで測定した水素の化学シフト（ｐｐｍ）及び炭素の化学シフト（ｐｐｍ）は下記に示すとおりである。なお（  ）内は水素の数を示す。
δＨ：０．８０（３Ｈ），０．８８（３Ｈ），１．１０〜１．２５（１０Ｈ），１．６５（３Ｈ），２．３８（１Ｈ），４．４５（１Ｈ），４．５２（１Ｈ），５．２５（１Ｈ），６．５５（１Ｈ），７．１０（１Ｈ），７．１８（１Ｈ）
δＣ：１０．９，１３．３，１９．９，２２．５，２７．０，２９．０，３２．０，３２．３，３７．３，６３．８，８８．２，１２３．８，１２６．０，１２８．０，１３８．０，１４０．０，１５１．０，１６３．０，１６９．８
【００４０】
以上のように、ＦＫＩ−４４２９−４物質の各種理化学性状やスペクトルデータを詳細に検討した。その結果、ＦＫＩ−４４２９−４物質は下記の式［ＩＶ］で表される化学構造であることが決定された。
【００４１】
【化８】
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【００４２】
以下に本発明の実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれのみに限定されるものではない。
【実施例１】
【００４３】
［培養方法］
寒天斜面培地で培養したＦＫＩ−４４２９株を、種培地１０ｍＬを分注した大試験管１本に１白金耳接種し、２７℃で３日間シェイカー（３００ｒｐｍ）で培養した。寒天斜面培地は、グリセロール０．１％（和光純薬）、リン酸二水素カリウム０．０８％（関東化学）、リン酸水素二カリウム０．０２％（関東化学）、硫酸マグネシウム七水和物０．０２％（和光純薬）、塩化カリウム０．０２％（関東化学）、硝酸ナトリウム０．２％（和光純薬）、酵母エキス０．０２％（オリエンタル酵母）、寒天１．５％（清水食品）を含み、ｐＨ６．０に調製したものである。種培地は、グルコース２．０％（和光純薬）、酵母エキス０．２％（オリエンタル酵母）、硫酸マグネシウム七水和物０．０５％（和光純薬）ポリペプトン０．５％（和光純薬）、リン酸二水素カリウム０．１％（関東化学）、寒天０．１％（清水食品）を含み、ｐＨ６．０に調製したものである。その後、生産培地１００ｍＬを入れた５００ｍＬ容三角フラスコ４本に１％ずつ植菌し、２７℃、２１０ｒｐｍで６日間、ロータリーシェーカーで培養した。生産培地は、水溶性でんぷん３．０％（ホクレン）、グリセロール１．０％（和光純薬）、ソイビーンミール２．０％（東京保存食料）、ドライイースト０．３％（オリエンタル酵母）、塩化カリウム０．３％（関東化学）、硫酸マグネシウム七水和物０．０５％（和光純薬）、炭酸カルシウム０．２％（関東化学）、リン酸水素二カリウム０．０５％（関東化学）を含み、ｐＨ７．０に調製したものである。【００４４】
［精製方法］
培養終了後、この培養液（４００ｍＬ）にエタノール（４００ｍＬ）を加え、３０分撹拌後遠心してエタノール抽出液を得た。エタノール抽出液から減圧下でエタノールを留去して得られた水溶液より、酸性条件下、酢酸エチル（４００ｍＬ）で三度抽出した。酢酸エチル層を濃縮乾固して得た活性粗物質（１９２ｍｇ）をシリカゲルカラム（シリカゲル６０（メッシュ６０−２３０）、メルク社、２０φ×７０ｍｍ）にて粗精製を行った。クロロホルムでシリカゲルカラムを洗浄した。こののち、クロロホルム−メタノール（１００：０、１００：１、５０：１、１０：１、１：１、０：１００）の各混合溶媒を展開溶媒とするクロマトグラフィーを行い、溶出液を溶出条件毎に分画した。活性画分（１０：１）を濃縮乾固することで、褐色油状物質３６ｍｇを得た。【００４５】
続いて、活性画分（１０：１）３６ｍｇを少量のメタノールに溶解し、分取ＨＰＬＣ（カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８、１０φ×２５０ｍｍ、センシュー科学）により精製を行った。５０％アセトニトリル水溶液／０．１％トリフルオロ酢酸を移動相とし、４ｍＬ／ｍｉｎの流速において、ＵＶ２１０ｎｍの吸収をモニターした。保持時間１９ｍｉｎ、２６ｍｉｎ、３２ｍｉｎ、３４ｍｉｎに活性を示すピークを観察し、これらのピークを分取した。分取液を減圧下で濃縮乾固することにより、ＦＫＩ−４４２９−１物質、ＦＫＩ−４４２９−２物質、ＦＫＩ−４４２９−３物質、ＦＫＩ−４４２９−４物質をそれぞれ収量０．７１ｍｇ、２．３４ｍｇ、１．１７ｍｇ、２．５７ｍｇで単離した。
【実施例２】
【００４６】
［ペーパーディスク法によるアルベカシン耐性克服作用の評価］
試験菌として、臨床分離されたメチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）ＴＨ−１４６６株を用いた。Ｓ．ａｕｒｅｕｓ  ＴＨ−１４６６株は、Ｍｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎ  ｂｒｏｔｈ（２．１％ｗ／ｖ、Ｄｉｆｃｏ社）にて３５℃、２０時間培養した。この後、ＭＨＡ培地（Ｍｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎ  ｂｒｏｔｈ  ２．１％ｗ／ｖ、Ａｇａｒ１．５％）および同組成の培地にアルベカシン（明治製菓株式会社：硫酸アルベカシン、力価７１０ｍｇ／ｍＬ）を試験菌の生育に影響を与えない濃度、すなわち最終濃度８μｇ／ｍＬとなるように添加した培地に１％植菌した。【００４７】
試験菌に対する各培地上での抗菌活性は、ペーパーディスク法（直径６ｍｍ、薄手：Ａｄｖａｎｔｅｃ社）にて、３５℃で２０時間培養した後の阻止円径の直径を測定した。測定した阻止円径を単位ｍｍで表記し、表２に示した。その結果、ＦＫＩ−４４２９−１、２、３および４の各物質はそれぞれ３０、１０、３および０．３μｇ／ディスク条件下において、アルベカシン非存在下では阻止円が観察されなかった。これに対して、アルベカシン存在下ではいずれも８ｍｍから１３ｍｍの直径の阻止円が観察され、アルベカシン活性増強作用が確認された。表２において「ＮＴ」とは、試験を行わなかったことを示す。【００４８】
【表２】
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【実施例３】
【００４９】
［微量液体希釈法によるアルベカシン耐性克服作用の評価］
ＦＫＩ−４４２９物質に関して、微量液体希釈法に従い、ＭＲＳＡ  ＴＨ−１４６６株に対するアルベカシン耐性克服活性を評価した。評価は、日本化学療法学会標準法（Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ３８巻、１０３−１０５頁、１９９０年）を一部改変して行った。９６  ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅ（Ｃｏｒｎｉｎｇ社、米国）の各ｗｅｌｌに、Ｍｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎ  ｂｒｏｔｈ（２．１％ｗ／ｖ）を８５μＬ添加した後、あらかじめ滅菌水で段階希釈しておいたアルベカシンを最終濃度４．８×１０−４から２５６μｇ／ｍＬとなるように各ｗｅｌｌに５μＬ添加した。【００５０】
さらに、これら各ｗｅｌｌにＦＫＩ−４４２９−１，−２、および−４の各物質のメタノール溶液をそれぞれそれ自身では生育に影響を与えない最終濃度６４，１２８および１６μｇ／ｍＬとなるように５μＬ添加した。よく混合した後、ＭＲＳＡ  ＴＨ−１４６６株を０．５  ＭｃＦａｒｌａｎｄ（約１０８  ＣＦＵ／ｍＬ）相当に懸濁し、これを同培地で１０倍に希釈した接種菌液を各ｗｅｌｌに５μＬ接種した。３５℃、２０時間培養後、菌の発育が肉眼的に認められないｗｅｌｌのうち、最小のアルベカシンの濃度をもって最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）とした。【００５１】
アルベカシンとＦＫＩ−４４２９物質併用時のＭＩＣは表３に示した。アルベカシン単独時ではＭＩＣが１２８μｇ／ｍＬであったが、ＦＫＩ−４４２９物質の併用によりＭＩＣは最大で４μｇ／ｍＬまで低下し、最大３２倍の活性増強が確認された。【００５２】
【表３】
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【産業上の利用可能性】
【００５３】
以上のとおり、新規ＦＫＩ−４４２９物質を生産する能力を有するペニシリウム属に属するＦＫＩ−４４２９株を代表とする微生物を培地に培養して、その培養液中から採取したＦＫＩ−４４２９物質は、抗菌剤として利用されているアミノグリコシド系抗生物質と併用することによりその効果を増強する作用を有することから、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）感染症やアミノグリコシド系抗生物質耐性を含む多剤耐性菌を起因とする感染症の治療薬として有用であると期待される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【手続補正書】
【提出日】平成24年9月7日(2012.9.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４８】
【表２】
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【国際調査報告】
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