(57)【要約】  本発明は、現在の神経変性疾患に対し、従来の対症療法ではなく、酸化ストレス誘導神経細胞死を抑制するというより根本的な治療を可能とする今までにない画期的な組成物を提供するものである。酸化ストレス誘導神経細胞死を高度に抑制する化合物またはその塩を含む神経変性疾患治療薬、パーキンソン病等の神経変性疾患の治療に用いられる剤に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）
【化１】
2011118812.tif 000016
式中、
ｍは０または１であり；
ｎは０または１であり；
Ｒ１〜Ｒ６は、互いに同一または異なっていてもよい、水素原子、ヒドロキシ基、シアノ基、ニトロ基、ハロゲン原子、アミノ基、
または、
置換基を有していてもよいＣ１−８の直鎖もしくは分枝鎖の飽和もしくは不飽和炭化水素、置換基を有していてもよいシクロアルキル基、置換基を有していてもよいアリール基、置換基を有していてもよいヘテロシクリル基であり、
Ａ１〜Ａ６は、単結合、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯＯ−、−ＯＣＯ−、−Ｏ−ＣＯ−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−Ｏ−ＳＯ２−、−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯＯ−、−ＮＨ−ＳＯ２−であり、隣接する２つの−Ａ１−Ｒ１〜−Ａ６−Ｒ６は、それらが結合している炭素原子と一緒に環を形成してもよい、
で表される化合物またはその薬学的に許容され得る塩を含有してなる、神経変性疾患治療薬。
【請求項２】
ｍまたはｎが０である、請求項１に記載の神経変性疾患治療薬。
【請求項３】
ｍおよびｎが０である、請求項１〜２のいずれかに記載の神経変性疾患治療薬。
【請求項４】
Ａ１〜Ａ６が、単結合、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯＯ−、−ＯＣＯ−、−Ｏ−ＣＯ−Ｏ−、−ＮＨ−または−ＮＨ−ＣＯＯ−である、請求項１〜３のいずれかに記載の神経変性疾患治療薬。
【請求項５】
Ｒ１〜Ｒ６が、各々独立して置換基を有していてもよい、Ｃ１−８アルキル、Ｃ２−８アルケニル、Ｃ２−８アルキニル基、Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ６−１０アリール、炭素原子以外に、窒素原子、酸素原子、および硫黄原子から選択されるヘテロ原子を１〜４個含む５〜１０員のヘテロシクリル基である、請求項１〜４のいずれかに記載の神経変性疾患治療薬。
【請求項６】
−Ａ１−Ｒ１〜−Ａ６−Ｒ６の少なくとも１つが、水素原子、ヒドロキシ基、または置換基を有していてもよい以下の基；直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−８アルキル基、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−８アルコキシ基、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−８アルキル−カルボニル基、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−８アルコキシ−カルボニル基、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−８アルキル−カルボニルオキシ基、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−８アルコキシ−カルボニルオキシ基、Ｃ６−１０アリール基、５〜１０員のヘテロシクリル基（炭素原子以外に、窒素原子、酸素原子、および硫黄原子から選択されるヘテロ原子を１〜４個含む）、Ｃ６−１０アリールオキシ基、Ｃ６−１０アリール−カルボニル、Ｃ６−１０アリールオキシ−カルボニル基、Ｃ６−１０アリール−カルボニルオキシ基、Ｃ６−１０アリールオキシ−カルボニルオキシ基、５〜１０員のヘテロシクリルオキシ基、５〜１０員のヘテロシクリル−カルボニル、５〜１０員のヘテロシクリルオキシ−カルボニル基、５〜１０員のヘテロシクリル−カルボニルオキシ基、５〜１０員のヘテロシクリルオキシ−カルボニルオキシ基、Ｃ１−８アルコキシカルボニルアミノ基、である、請求項１〜６のいずれかに記載の神経変性疾患治療薬。
【請求項７】
−Ａ２−Ｒ２および／または−Ａ５−Ｒ５が、水素原子、ヒドロキシ基、または置換基を有していてもよい以下の基；直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−８アルキル基、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−８アルコキシ基、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−８アルキル−カルボニル基、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−８アルコキシ−カルボニル基、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−８アルキル−カルボニルオキシ基、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−８アルコキシ−カルボニルオキシ基、Ｃ６−１０アリール基、５〜１０員のヘテロシクリル基（炭素原子以外に、窒素原子、酸素原子、および硫黄原子から選択されるヘテロ原子を１〜４個含む）、Ｃ６−１０アリールオキシ基、Ｃ６−１０アリール−カルボニル、Ｃ６−１０アリールオキシ−カルボニル基、Ｃ６−１０アリール−カルボニルオキシ基、Ｃ６−１０アリールオキシ−カルボニルオキシ基、５〜１０員のヘテロシクリルオキシ基、５〜１０員のヘテロシクリル−カルボニル、５〜１０員のヘテロシクリルオキシ−カルボニル基、５〜１０員のヘテロシクリル−カルボニルオキシ基、５〜１０員のヘテロシクリルオキシ−カルボニルオキシ基、Ｃ１−８アルコキシカルボニルアミノ基、である、請求項１〜６のいずれかに記載の神経変性疾患治療薬。
【請求項８】
−Ａ２−Ｒ２および／または−Ａ５−Ｒ５が、置換基を有していてもよい直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１−４アルキルである、請求項１〜７のいずれかに記載の神経変性疾患治療薬。
【請求項９】
−Ａ２−Ｒ２および／または−Ａ５−Ｒ５が、置換基を有していてもよい単環または２環式のアリール基である、請求項１〜７のいずれかに記載の神経変性疾患治療薬。
【請求項１０】
−Ａ２−Ｒ２および／または−Ａ５−Ｒ５が、直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１−４アルキルで置換されている単環または２環式のアリール基である、請求項１〜７のいずれかに記載の神経変性疾患治療薬。
【請求項１１】
−Ａ２−Ｒ２および／または−Ａ５−Ｒ５が、置換基を有していてもよい、炭素原子以外に、窒素原子、酸素原子、および硫黄原子から選択されるヘテロ原子を１〜４個含む５〜１０員の単環または２環式のヘテロシクリル基である、請求項１〜７のいずれかに記載の神経変性疾患治療薬。
【請求項１２】
−Ａ２−Ｒ２および／または−Ａ５−Ｒ５が、直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１−４アルキルで置換されている、炭素原子以外に、窒素原子、酸素原子、および硫黄原子から選択されるヘテロ原子を１〜４個含む５〜１０員の単環または２環式のヘテロシクリル基である、請求項１〜７のいずれかに記載の神経変性疾患治療薬。
【請求項１３】
−Ａ１−Ｒ１〜−Ａ６−Ｒ６の少なくとも１つが、メトキシ基である、請求項１〜７のいずれかに記載の神経変性疾患治療薬。
【請求項１４】
−Ａ１−Ｒ１〜−Ａ３−Ｒ３がメトキシ基である、請求項１〜６のいずれかに記載の神経変性疾患治療薬。
【請求項１５】
隣接する２つの−Ａ１−Ｒ１〜−Ａ６−Ｒ６が、それらが結合している炭素原子と一緒に環を形成し、該環が、式（２）
【化２】
2011118812.tif 000017
で表される環構造である、請求項１に記載の神経変性疾患治療薬。
【請求項１６】
−Ａ１−Ｒ１および−Ａ２−Ｒ２が、および／または−Ａ５−Ｒ５およびＡ６−Ｒ６が、それらが結合している炭素原子と一緒に環を形成し、該環が、式（２）
【化３】
2011118812.tif 000018
で表される環構造である、請求項１に記載の神経変性疾患治療薬。
【請求項１７】
請求項１に記載の式（１）で表される化合物が、式（３）〜（１３）
【化４】
2011118812.tif 000019
で表される化合物である、請求項１に記載の神経変性疾患治療薬。
【請求項１８】
請求項１に記載の式（１）で表される化合物が、式（３）
【化５】
2011118812.tif 000020
で表される化合物である、請求項１に記載の神経変性疾患治療薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、神経変性疾患治療薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
神経変性疾患は、脳の特定部位の神経細胞が何らかの原因で死に至り様々な異常を起こす。神経変性疾患の発症原因はまだ明らかにされていないが、細胞への酸化ストレス、ミトコンドリア障害が発端となり、タンパク質の凝集体が生じることで神経細胞死が起こると想定されている。例えばパーキンソン病では、ドパミンと呼ばれる神経伝達物質を産生する神経細胞が死ぬので、不足するドパミン前駆体、ドパミンの分解抑制剤などが治療薬として用いられているが、対症療法であり治療中も神経細胞死の進行を止めることができない。また、多くの神経変性疾患には対症療法さえないものが多い。従って、神経細胞死抑制効果を有する薬剤の開発が急務であるが、現在までこうした薬剤の使用はほとんど報告されていない。【０００３】
一方、ＤＪ−１タンパク質は抗酸化ストレス機能を有するタンパク質であり、その機能破綻がパーキンソン病、脳卒中などの原因となることが知られており、非特許文献１には、パーキンソン病、脳卒中モデルラットにＤＪ−１タンパク質を注入すると、神経細胞死と行動異常が劇的に改善されることが報告されている。また、ミトコンドリア内膜に存在する複合体Iの活性低下により酸化ストレス誘導の原因となる活性酸素が発生することが知られており、パーキンソン病患者ではこの複合体Iの活性低下が報告されている。非特許文献２には、ＤＪ−１がこのミトコンドリア複合体Iに結合しその活性を維持し、活性酸素発生を抑制することが報告されている。【０００４】
特許文献１には、このＤＪ−１タンパク質の酸化ストレスによる神経細胞死の抑制効果を有する化合物が示されているが、同文献は、本発明とは異なる骨格構造を有する化合物または核酸構造を有する化合物の使用を示すに止まっている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第２００７／０６０８８６号パンフレット
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Inden et al. Neurobiology of Disease, (2006), 24, pp.144-158
【非特許文献２】Hayashi et al. Biochemical and Biophysical Research Communications, (2009), 390, pp.667-672
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の課題は、現在の神経変性疾患に対し、従来の対症療法ではなく、酸化ストレス誘導神経細胞死を抑制するより根本的な治療を可能とする今までにない画期的な組成物を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者は、上記の課題を解決すべく鋭意研究を重ねる中で、驚くべきことに、式（１）
【化１】
2011118812.tif 000002
で表される化合物が、酸化ストレス誘導神経細胞死を高度に抑制することを見出し、さらに検討を進めた結果、本発明を完成するに至った。【０００９】
すなわち、本発明は、式（１）
【化２】
2011118812.tif 000003
式中、
ｍは０または１であり；
ｎは０または１であり；
Ｒ１〜Ｒ６は、互いに同一または異なっていてもよい、水素原子、シアノ基、ニトロ基、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、アミノ基、
または、
置換基を有していてもよいＣ１−８の直鎖もしくは分枝鎖の飽和もしくは不飽和炭化水素、置換基を有していてもよいシクロアルキル基、置換基を有していてもよいアリール基、置換基を有していてもよいヘテロシクリルであり、
Ａ１〜Ａ６は、単結合、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯＯ−、−ＯＣＯ−、−Ｏ−ＣＯ−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−Ｏ−ＳＯ２−、−ＮＨ−、−ＮＨ−ＳＯ２−であり、隣接する２つの−Ａ１−Ｒ１〜−Ａ６−Ｒ６は、それらが結合している炭素原子と一緒に環を形成してもよい、
で表される化合物またはその薬学的に許容され得る塩を含有してなる、神経変性疾患治療薬に関する。【００１０】
また本発明は、ｍまたはｎが０である、前記の神経変性疾患治療薬に関する。
さらに本発明は、ｍおよびｎが０である、前記の神経変性疾患治療薬に関する。【００１１】
また本発明は、Ａ１〜Ａ６が、単結合、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯＯ−、−ＯＣＯ−、−Ｏ−ＣＯ−Ｏ−、−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯＯ−である、前記の神経変性疾患治療薬に関する。【００１２】
さらに本発明は、Ｒ１〜Ｒ６が、各々独立して置換基を有していてもよい、Ｃ１−８アルキル、Ｃ２−８アルケニル、Ｃ２−８アルキニル基、Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ６−１０アリール、炭素原子以外に、窒素原子、酸素原子、および硫黄原子から選択されるヘテロ原子を１〜４個含む５〜１０員のヘテロシクリル基である、前記の神経変性疾患治療薬に関する。【００１３】
また本発明は、−Ａ１−Ｒ１〜−Ａ６−Ｒ６の少なくとも１つが水素原子、ヒドロキシ基、または置換基を有していてもよい以下の基；直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−８アルキル基、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−８アルコキシ基、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−８アルキル−カルボニル基、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−８アルコキシ−カルボニル基、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−８アルキル−カルボニルオキシ基、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−８アルコキシ−カルボニルオキシ基、Ｃ６−１０アリール基、５〜１０員のヘテロシクリル基（炭素原子以外に、窒素原子、酸素原子、および硫黄原子から選択されるヘテロ原子を１〜４個含む）、Ｃ６−１０アリールオキシ基、Ｃ６−１０アリール−カルボニル、Ｃ６−１０アリールオキシ−カルボニル基、Ｃ６−１０アリール−カルボニルオキシ基、Ｃ６−１０アリールオキシ−カルボニルオキシ基、５〜１０員のヘテロシクリルオキシ基、５〜１０員のヘテロシクリル−カルボニル、５〜１０員のヘテロシクリルオキシ−カルボニル基、５〜１０員のヘテロシクリル−カルボニルオキシ基、５〜１０員のヘテロシクリルオキシ−カルボニルオキシ基、Ｃ１−８アルコキシカルボニルアミノ基である、前記の神経変性疾患治療薬に関する。【００１４】
さらに本発明は、−Ａ２−Ｒ２および／または−Ａ５−Ｒ５が、水素原子、ヒドロキシ基、または置換基を有していてもよい以下の基；直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−８アルキル基、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−８アルコキシ基、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−８アルキル−カルボニル基、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−８アルコキシ−カルボニル基、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−８アルキル−カルボニルオキシ基、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−８アルコキシ−カルボニルオキシ基、Ｃ６−１０アリール基、５〜１０員のヘテロシクリル基（炭素原子以外に、窒素原子、酸素原子、および硫黄原子から選択されるヘテロ原子を１〜４個含む）、Ｃ６−１０アリールオキシ基、Ｃ６−１０アリール−カルボニル、Ｃ６−１０アリールオキシ−カルボニル基、Ｃ６−１０アリール−カルボニルオキシ基、Ｃ６−１０アリールオキシ−カルボニルオキシ基、５〜１０員のヘテロシクリルオキシ基、５〜１０員のヘテロシクリル−カルボニル、５〜１０員のヘテロシクリルオキシ−カルボニル基、５〜１０員のヘテロシクリル−カルボニルオキシ基、５〜１０員のヘテロシクリルオキシ−カルボニルオキシ基、Ｃ１−８アルコキシカルボニルアミノ基、である、前記の神経変性疾患治療薬に関する。【００１５】
また本発明は、−Ａ２−Ｒ２および／または−Ａ５−Ｒ５が、直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１−４アルキルである、前記の神経変性疾患治療薬に関する。
さらに本発明は、−Ａ２−Ｒ２および／または−Ａ５−Ｒ５が、置換基を有していてもよい単環または２環式のアリール基である、前記の神経変性疾患治療薬に関する。【００１６】
また本発明は、−Ａ２−Ｒ２および／または−Ａ５−Ｒ５が、直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１−４アルキルで置換されていてもよい単環または２環式のアリール基である、前記の神経変性疾患治療薬に関する。
さらに本発明は、−Ａ２−Ｒ２および／または−Ａ５−Ｒ５が、置換基を有していてもよい、炭素原子以外に、窒素原子、酸素原子、および硫黄原子から選択されるヘテロ原子を１〜４個含む５〜１０員の単環または２環式のヘテロシクリル基である、前記の神経変性疾患治療薬に関する。【００１７】
また本発明は、−Ａ２−Ｒ２および／または−Ａ５−Ｒ５が、直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１−４アルキルで置換されていてもよい、炭素原子以外に、窒素原子、酸素原子、および硫黄原子から選択されるヘテロ原子を１〜４個含む５〜１０員の単環または２環式のヘテロシクリル基である、前記の神経変性疾患治療薬に関する。【００１８】
さらに本発明は、−Ａ１−Ｒ１〜−Ａ６−Ｒ６の少なくとも１つが、メトキシ基である、前記の神経変性疾患治療薬に関する。
また本発明は、−Ａ１−Ｒ１〜−Ａ３−Ｒ３がメトキシ基である、前記の神経変性疾患治療薬に関する。【００１９】
さらに本発明は、隣接する２つの−Ａ１−Ｒ１〜−Ａ６−Ｒ６が、それらが結合している炭素原子と一緒に環を形成し、該環が、式（２）
【化３】
2011118812.tif 000004
で表される環構造である、前記の神経変性疾患治療薬に関する。【００２０】
また本発明は、−Ａ１−Ｒ１および−Ａ２−Ｒ２が、および／または−Ａ５−Ｒ５およびＡ６−Ｒ６が、それらが結合している炭素原子と一緒に環を形成し、該環が、式（２）
【化４】
2011118812.tif 000005
で表される環構造である、前記の神経変性疾患治療薬に関する。【００２１】
さらに本発明は、式（１）で表される化合物が、式（３）〜（１３）
【化５】
2011118812.tif 000006
で表される化合物である、前記の神経変性疾患治療薬に関する。【００２２】
また本発明は、式（１）で表される化合物が、式（３）
【化６】
2011118812.tif 000007
で表される化合物である、前記の神経変性疾患治療薬に関する。
【発明の効果】
【００２３】
本発明は、上記の構成により、急性の神経変性疾患である脳卒中、慢性の神経変性疾患であるパーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、ＡＬＳ、卒中などに見られる神経細胞死を抑制することができる。【００２４】
ＤＪ−１タンパク質の機能は１０６番目のシステイン残基（Ｃ１０６）の酸化状態に起因し、−ＳＨから−ＳＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈへと酸化程度により移行する。このうち、ＤＪ−１が活性を有するのは前２者（−ＳＯ２Ｈ型の活性が最も高い）であり、−ＳＯ３Ｈ型は不活性である。
また、ＤＪ−１タンパク質は、酸化ストレス防御にあたる多数の遺伝子群のマスター転写因子であるＮｒｆ２の正の制御因子として機能し、酸化ストレスに対してＮｒｆ２を介して酸化ストレス防御遺伝子群の転写活性化を行う。しかしながら、酸化ストレス防御因子であるＤＪ−１タンパク質は酸化ストレスの経過とともにＣ１０６が強度に酸化されその機能を失う。【００２５】
本願発明の神経変性疾患治療薬の作用機構は必ずしも明らかではないが、式（１）で表される化合物の基本骨格は、ＤＪ−１タンパク質のＣ１０６領域（ドッキング部位）と非常に良く適合できるので、Ｃ１０６領域との結合が関与することによりＣ１０６の酸化状態を制御していると考えられ、これによりＤＪ−１の活性型が維持され、ＤＪ−１タンパク質の有する抗酸化能を通じて薬理作用を発揮するものと考えられる。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】図１は、過酸化水素により生じる細胞死に対し、細胞の生存率を示す図である。
【図２】図２は、試験化合物の過酸化水素濃度に対する細胞死抑制効果を示す図である。
【図３】図３は、右側脳へ連結する血管の模式図である。図中、ＡＣは前大脳動脈、ＰＣは後大脳動脈、ＭＣＡは中大脳動脈、ＣＣＡは共通の頸動脈、ＥＣＡは外頸動脈を示す。
【図４】図４は、ＴＴＣ（塩化２，３，５−トリフェニルテトラゾリウム）染色像を示した図である。図中、ＭＣＡＯ；Ｍｉｄｄｌｅ  ｃｅｒｅｂｒａｌ  ａｒｔｅｒｙ  Ｏｃｃｌｕｓｉｏｎは、中大脳動脈閉塞を示す。Ｓｈａｍは未処理、Ｖｅｈｉｌｃｌｅは０．０１％ＤＭＳＯを示す。
【図５】図５は、ＴＴＣ（塩化２，３，５−トリフェニルテトラゾリウム）染色像のスライス片を示した図である。図中、ＭＣＡＯ；Ｍｉｄｄｌｅ  ｃｅｒｅｂｒａｌ  ａｒｔｅｒｙ  Ｏｃｃｌｕｓｉｏｎは、中大脳動脈閉塞を示す。Ｓｈａｍは未処理、Ｖｅｈｉｌｃｌｅは０．０１％ＤＭＳＯを示す。
【図６】図６は、染色像の染色されていない領域をブレグマからの距離毎に算出し、プロットした図である。図中、ＭＣＡＯ；Ｍｉｄｄｌｅ  ｃｅｒｅｂｒａｌ  ａｒｔｅｒｙ  Ｏｃｃｌｕｓｉｏｎは、中大脳動脈閉塞を示す。Ｓｈａｍは未処理、Ｖｅｈｉｌｃｌｅは０．０１％ＤＭＳＯを示す。Ｉｎｆｒａｃｔ  ａｒｅａは梗塞領域を示す。
【図７】図７は、染色像の染色されていない領域の体積を算出した図である。図中、ＭＣＡＯ；Ｍｉｄｄｌｅ  ｃｅｒｅｂｒａｌ  ａｒｔｅｒｙ  Ｏｃｃｌｕｓｉｏｎは、中大脳動脈閉塞を示す。Ｓｈａｍは未処理、Ｖｅｈｉｌｃｌｅは０．０１％ＤＭＳＯを示す。Ｉｎｆｒａｃｔ  ｖｏｌｕｍｅは梗塞領域の体積を示す。
【００２７】
【図８】図８は、５０μＭ  ６−ＯＨＤＡ（６−ヒドロキシドパミン）の２４時間処理により生じる細胞死に対し、細胞の生存率を示す図である。
【図９】図９は、１２５μＭ  ６−ＯＨＤＡの１時間処理により生じる細胞死に対し、細胞の生存率を示す図である。
【図１０】図１０は、蛍光分光光度計による活性酸素種測定結果を示す図である。
【図１１】図１１は、ラット腹側中脳のプライマリー神経細胞の細胞培養物における免疫染色を示す。α−ＮｅｕＮとして示すａｎｔｉ−ＮｅｕＮ抗体による染色は緑色で観察されている。α−ＴＨとして示すａｎｔｉ−ＴＨ抗体による染色は赤色で観察されている。ＤＡＰＩによる染色は青色で観察されている。Ｍｅｒｇｅは、染色図を統合したものであり、黄白色で観察されている。
【図１２】図１２は、過酸化水素により生じる細胞死に対し、細胞の生存率を示す図である。
【図１３】図１３は、ＥＳＲスペクトルを示す図である。
【図１４】図１４は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏのヒドロキシラジカルの生成を定量したものである。それぞれの値は、コントロールを１００％として基準にしたときの８測定の平均値±標準誤差である。
【図１５】図１５は、投与後７日までのマウスの全回旋数を示す図である。
【図１６】図１６は、回旋数の経時変化を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
以下、本発明について詳細に説明する。
本発明の神経変性疾患治療薬に含有される化合物において、一般式（１）
【化７】
2011118812.tif 000008
のｍは０または１であり、好ましくはｍは０である。ｎは０または１であり、好ましくはｎは０である。
【００２９】
本発明の一般式（１）中のＲ１〜Ｒ６は、互いに同一または異なっていてもよい、水素原子、ヒドロキシ基、シアノ基、ニトロ基、ハロゲン原子、アミノ基、または、置換基を有していてもよい炭素原子１〜８個を有するＣ１−８の直鎖もしくは分枝鎖の飽和もしくは不飽和炭化水素、置換基を有していてもよいシクロアルキル基、置換基を有していてもよいアリール基、置換基を有していてもよいヘテロシクリル基である。
【００３０】
一般式（１）中、Ｒ１〜Ｒ６のハロゲン原子の例としては、これに限定するものではないが、例えばフッ素、塩素、臭素またはヨウ素などが挙げられる。
【００３１】
一般式（１）中、Ｒ１〜Ｒ６のアミノ基の例としては、これに限定するものではないが、例えば、アミノ基、ジ−Ｃ１−８アルキルアミノ基などが挙げられる。
【００３２】
一般式（１）中、Ｒ１〜Ｒ６の置換基を有していてもよい直鎖もしくは分枝鎖の飽和もしくは不飽和炭化水素の例としては、これに限定するものではないが、直鎖もしくは分枝鎖である、Ｃ１−８アルキル基、Ｃ２−８アルケニル基およびＣ２−８アルキニル基などが挙げられる。
【００３３】
直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−８アルキル基は、これに限定するものではないが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチルなどの炭素原子１〜８個を有する直鎖もしくは分枝鎖アルキル基を表わす。好ましくは、炭素原子１〜４個を有する直鎖もしくは分枝鎖アルキル基である。
【００３４】
直鎖もしくは分枝鎖のＣ２−８アルケニル基は、これに限定するものではないが、例えば、ビニル、アリル、プロペニル、ブテニル、ペンテニル、ヘキセニル、ヘプテニル、オクテニル、などの炭素原子２〜８個を有する直鎖もしくは分枝鎖アルケニル基を表わす。好ましくは、炭素原子２〜４個を有する直鎖もしくは分枝鎖アルケニル基である。
【００３５】
直鎖もしくは分枝鎖のＣ２−８アルキニル基は、これに限定するものではないが、例えば、エチニル、プロピニル、ブチニル、ペンチニル、ヘキシニル、ヘプチニル、オクチニル、などの直鎖、分枝鎖または環状の炭素原子２〜８個を有するアルキニル基を表わす。好ましくは、炭素原子２〜４個を有する直鎖もしくは分枝鎖アルキニル基である。
【００３６】
一般式（１）中、Ｒ１〜Ｒ６のシクロアルキル基の例としては、これに限定するものではないが、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチルが挙げられる。
【００３７】
一般式（１）中のＲ１〜Ｒ６の置換基を有してもよいアリール基の例としては、これに限定するものではないが、例えば、フェニル、ナフチルなどの炭素原子６〜１０個を有する単環式または二環式アリール基を表わす（アリール基の環の一部もしくは全部が飽和した環も含む）。
【００３８】
一般式（１）中のＲ１〜Ｒ６の置換基を有してもよいヘテロシクリル基とは、炭素原子以外に、ヘテロ原子１個または２個以上の原子を含有する環構造を表わし、該環構造は、芳香族性を有するものおよび有しないものを包含する。例えば、炭素原子以外に、窒素原子、酸素原子、および硫黄原子から選択されるヘテロ原子を１〜４個含む５〜１０員の単環または２環式のヘテロシクリル基であり、選択されるヘテロ原子は、同じでも異なっていてもよい。例えば、これに限定するものではないが、チオフェン、フラン、ピラン、ピリジン、ピロール、ピラジン、アゼピン、アゾシン、アゾニン、アゼシン、オキサゾール、チアゾール、ピリミジン、ピリダジン、トリアジン、トリアゾール、テトラゾール、イミダゾール、ピラゾール、モルホリン、チオモルホリン、ピペリジン、ピペラジン、キノリン、イソキノリン、インドール、イソインドール、キノキサリン、フタラジン、キノリジン、キナゾリン、キノキサリン、ナフチリジン、クロメン、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、ピロリジン、ピリンジン、インドリジン、インダゾール、プリンなどを表わす。好ましくは、窒素原子を含む単環または２環式のヘテロシクリル基であり、とくに好ましくは以下の構造、
【化８】
2011118812.tif 000009
で表されるヘテロシクリル基である。
【００３９】
一般式（１）中のＲ１〜Ｒ６は、好ましくは、各々独立して、水素原子、Ｃ１−８アルキル、Ｃ２−８アルケニル、Ｃ２−８アルキニル基、Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ６−１０アリールまたは炭素原子以外に、窒素原子、酸素原子、および硫黄原子から選択されるヘテロ原子を１〜４個含む５〜１０員のヘテロシクリル基である。
【００４０】
上記のＲ１〜Ｒ６は、置換基を有していてもよく、かかる置換基としては、これに限定するものではないが、例えば、ヒドロキシ基、シアノ基、ニトロ基、ハロゲン原子（例えば、フッ素、塩素、臭素等）、アミノ基、直鎖もしくは分枝鎖の以下の基、Ｃ１−８アルキル基、Ｃ１−８アルコキシ基、Ｃ１−８アルキル−カルボニル基、Ｃ１−８アルコキシ−カルボニル基、Ｃ１−８アルキル−カルボキシル基、Ｃ１−８アルコキシ−カルボキシル基、または、単環または２環式のＣ６−１０アリール基、５〜１０員の単環または２環式のヘテロシクリル基（炭素原子以外に、窒素原子、酸素原子、および硫黄原子から選択されるヘテロ原子を１〜４個含む）、単環または２環式のＣ６−１０アリールオキシ基、単環または２環式のＣ６−１０アリール−カルボニル、単環または２環式のＣ６−１０アリールオキシ−カルボニル基、単環または２環式のＣ６−１０アリール−カルボキシル基、単環または２環式のＣ６−１０アリールオキシ−カルボキシル基、５〜１０員の単環または２環式のヘテロシクリルオキシ基、５〜１０員の単環または２環式のヘテロシクリル−カルボニル、５〜１０員の単環または２環式のヘテロシクリルオキシ−カルボニル基、５〜１０員の単環または２環式のヘテロシクリル−カルボキシル基、５〜１０員の単環または２環式のヘテロシクリルオキシ−カルボキシ基などが挙げられる。Ｒ１〜Ｒ６は、上記置換基を置換可能な位置に１または２個以上有していてもよく、置換基数が２個以上の場合は、各置換基は同一でも異なっていてもよい。
【００４１】
したがって、Ｒ１〜Ｒ６はこれに限定するものではないが、例えば、以下の基
【化９】
2011118812.tif 000010
を母格とする場合、以下の構造等を挙げることができる。
【化１０】
2011118812.tif 000011
【００４２】
一般式（１）中のＡ１〜Ａ６は単結合、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯＯ−、−ＯＣＯ−、−ＯＣＯ−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−Ｏ−ＳＯ２−、−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯＯ−または−ＮＨ−ＳＯ２−である。好ましくは、Ａ１〜Ａ６が単結合、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯＯ−、−ＯＣＯ−、−ＯＣＯ−Ｏ−、−ＮＨ−または−ＮＨ−ＣＯＯ−が好ましい。
【００４３】
一般式（１）中、Ａ１〜Ａ６が単結合の場合、−Ａ１−Ｒ１〜−Ａ６−Ｒ６の典型的な例としては、水素原子、ヒドロキシ基、シアノ基、ニトロ基、ハロゲン原子、アミノ基、置換されていてもよいＣ１−８の直鎖もしくは分枝鎖アルキル、好ましくはＣ１−４の直鎖もしくは分枝鎖アルキル、シクロアルキル基、アリール基、ヘテロシクリル基が挙げられる。
【００４４】
Ａ１〜Ａ６が−Ｏ−の場合、−Ａ１−Ｒ１〜−Ａ６−Ｒ６の典型的な例としては、これに限定するものではないが、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシなどの直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−８アルコキシ基、フェノキシ、ナフチルオキシなどの単環式または二環式のＣ６−１０アリールオキシ基または炭素原子以外に、窒素原子、酸素原子、および硫黄原子から選択されるヘテロ原子を１〜４個含む単環または２環式の５〜１０員のヘテロシクリルオキシ基などが挙げられる。
【００４５】
Ａ１〜Ａ６が−ＣＯ−の場合、−Ａ１−Ｒ１〜−Ａ６−Ｒ６の典型的な例としては、これに限定するものではないが、アセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリルなどの直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−８アルキル−カルボニル基、フェニルカルボニル基、ナフチルカルボニルなどの単環式または二環式のＣ６−１０アリールカルボニル基または炭素原子以外に、窒素原子、酸素原子、および硫黄原子から選択されるヘテロ原子を１〜４個含む単環または２環式の５〜１０員のヘテロシクリルカルボニル基などが挙げられる。
【００４６】
Ａ１〜Ａ６が−ＣＯＯ−の場合、−Ａ１−Ｒ１〜−Ａ６−Ｒ６の典型的な例としては、これに限定するものではないが、カルボキシル基、またはメトキシカルボニル、エトキシカルボニル、プロポキシカルボニル、ブトキシカルボニルなどの直鎖または分枝鎖Ｃ１−８アルコキシ−カルボニル基、フェノキシカルボニル、ナフチルオキシカルボニルなどの単環式または二環式のＣ６−１０アリールオキシカルボニル基または炭素原子以外に、窒素原子、酸素原子、および硫黄原子から選択されるヘテロ原子を１〜４個含む単環または２環式の５〜１０員のヘテロシクリルオキシカルボニル基などが挙げられる。
【００４７】
Ａ１〜Ａ６が−ＯＣＯ−の場合、−Ａ１−Ｒ１〜−Ａ６−Ｒ６の典型的な例としては、これに限定するものではないが、メチルカルボニルオキシ、エチルカルボニルオキシ、プロピルカルボニルオキシなどの直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−８アルキル−カルボニルオキシ基、フェニルカルボニルオキシ基、ナフチルカルボニルオキシ基などの単環式または二環式のＣ６−１０アリールカルボニルオキシ基または炭素原子以外に、窒素原子、酸素原子、および硫黄原子から選択されるヘテロ原子を１〜４個含む単環または２環式の５〜１０員のヘテロシクリルカルボニルオキシ基などが挙げられる。
【００４８】
Ａ１〜Ａ６が−Ｏ−ＣＯ−Ｏ−の場合、−Ａ１−Ｒ１〜−Ａ６−Ｒ６の典型的な例としては、これに限定するものではないが、メトキシカルボニルオキシ、エトキシカルボニルオキシ、プロポキシカルボニルオキシ、ブトキシカルボニルオキシなどの直鎖または分枝鎖のＣ１−８アルコキシ−カルボニルオキシ基、フェノキシカルボニルオキシ、ナフチルオキシカルボニルオキシなどの単環式または二環式のＣ６−１０アリールオキシカルボニルオキシ基または炭素原子以外に、窒素原子、酸素原子、および硫黄原子から選択されるヘテロ原子を１〜４個含む単環または２環式の５〜１０員のヘテロシクリルカルボニルオキシ基などが挙げられる。
【００４９】
Ａ１〜Ａ６が−Ｓ−の場合、−Ａ１−Ｒ１〜−Ａ６−Ｒ６の典型的な例としては、これに限定するものではないが、メチルチオ、エチルチオ、プロピルチオ、ブチルチオなどのＣ１−８アルキルチオ基、フェニルチオ、ナフチルチオなどの単環式または二環式のＣ６−１０アリールチオ基または炭素原子以外に、窒素原子、酸素原子、および硫黄原子から選択されるヘテロ原子を１〜４個含む単環または２環式の５〜１０員のヘテロシクリルチオ基などが挙げられる。
【００５０】
Ａ１〜Ａ６が−ＳＯ−の場合、−Ａ１−Ｒ１〜−Ａ６−Ｒ６の典型的な例としては、これに限定するものではないが、メチルスルフィニル、エチルスルフィニル、プロピルスルフィニル、ブチルスルフィニルなどのＣ１−８アルキルスルフィニル基、フェニルスルフィニル、ナフチルスルフィニルなどの単環式または二環式のＣ６−１０アリールスルフィニル基または炭素原子以外に、窒素原子、酸素原子、および硫黄原子から選択されるヘテロ原子を１〜４個含む単環または２環式の５〜１０員のヘテロシクリルスルフィニル基などが挙げられる。
【００５１】
Ａ１〜Ａ６が−ＳＯ２−の場合、−Ａ１−Ｒ１〜−Ａ６−Ｒ６の典型的な例としては、これに限定するものではないが、メチルスルホニル、エチルスルホニル、プロピルスルホニル、ブチルスルホニルなどの直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−８アルキルスルホニル基、フェニルスルホニル、ナフチルスルホニルなどの単環式または二環式のＣ６−１０アリールスルホニル基または炭素原子以外に、窒素原子、酸素原子、および硫黄原子から選択されるヘテロ原子を１〜４個含む単環または２環式の５〜１０員のヘテロシクリルスルホニル基などが挙げられる。
【００５２】
また一般式（１）中、Ａ１〜Ａ６が−Ｏ−ＳＯ２−の場合、−Ａ１−Ｒ１〜−Ａ６−Ｒ６の典型的な例としては、これに限定するものではないが、メチルスルホニルオキシ、エチルスルホニルオキシ、プロピルスルホニルオキシ、ブチルスルホニルオキシなどの直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−８アルキルスルホニルオキシ基、フェニルスルホニルオキシ、ナフチルスルホニルオキシＣ６−１０アリールスルホニルオキシ基または炭素原子以外に、窒素原子、酸素原子、および硫黄原子から選択されるヘテロ原子を１〜４個含む単環または２環式の５〜１０員のヘテロシクリルスルホニルオキシ基などが挙げられる。
【００５３】
Ａ１〜Ａ６が−ＮＨ−の場合、−Ａ１−Ｒ１〜−Ａ６−Ｒ６の典型的な例としては、これに限定するものではないが、メチルアミノ、エチルアミノ、プロピルアミノ、ブチルアミノなどのＣ１−８アルキルアミノ基、フェニルアミノ、ナフチルアミノなどのＣ６−１０アリールアミノ基または炭素原子以外に、窒素原子、酸素原子、および硫黄原子から選択されるヘテロ原子を１〜４個含む単環または２環式の５〜１０員のヘテロシクリルアミノ基などが挙げられる。
【００５４】
Ａ１〜Ａ６が−ＮＨ−ＣＯＯ−の場合、−Ａ１−Ｒ１〜−Ａ６−Ｒ６の典型的な例としては、これに限定するものではないが、Ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ基（−ＮＨＢｏｃ）などの直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−８アルコキシカルボニルアミノ基、フェノキシカルボニルアミノ基、ナフチルオキシカルボニルアミノ基などの単環式または二環式のＣ６−１０アリールオキシ−カルボニルアミノ基または炭素原子以外に、窒素原子、酸素原子、および硫黄原子から選択されるヘテロ原子を１〜４個含む単環または２環式の５〜１０員のヘテロシクリルオキシカルボニルアミノ基などが挙げられる。
【００５５】
Ａ１〜Ａ６が−ＳＯ２−ＮＨ−の場合、−Ａ１−Ｒ１〜−Ａ６−Ｒ６の典型的な例としては、これに限定するものではないが、スルファモイル、メチルスルファモイル、エチルスルファモイル、プロピルスルファモイル、ブチルスルファモイルなどの直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−８アルキルスルファモイル基、フェニルスルファモイル、ナフチルスルファモイルなどの単環式または二環式のＣ６−１０アリールスルファモイル基または炭素原子以外に、窒素原子、酸素原子、および硫黄原子から選択されるヘテロ原子を１〜４個含む単環または２環式の５〜１０員のヘテロシクリルスルファモイル基などが挙げられる。
【００５６】
−Ａ１−Ｒ１〜−Ａ６−Ｒ６は、好ましくは各々独立して、水素原子、ヒドロキシ基、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−８アルキル基、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−８アルコキシ基、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−８アルキル−カルボニル基、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−８アルコキシ−カルボニル基、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−８アルキル−カルボニルオキシ基、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−８アルコキシ−カルボニルオキシ基、単環または２環式のＣ６−１０アリール基、５〜１０員の単環または２環式のヘテロシクリル基（炭素原子以外に、窒素原子、酸素原子、および硫黄原子から選択されるヘテロ原子を１〜４個含む）、単環または２環式のＣ６−１０アリールオキシ基、単環または２環式のＣ６−１０アリール−カルボニル、単環または２環式のＣ６−１０アリールオキシ−カルボニル基、単環または２環式のＣ６−１０アリール−カルボニルオキシ基、単環または２環式のＣ６−１０アリールオキシ−カルボニルオキシ基、５〜１０員の単環または２環式のヘテロシクリルオキシ基、５〜１０員の単環または２環式のヘテロシクリル−カルボニル、５〜１０員の単環または２環式のヘテロシクリルオキシ−カルボニル基、５〜１０員の単環または２環式のヘテロシクリル−カルボニルオキシ基、５〜１０員の単環または２環式のヘテロシクリルオキシ−カルボニルオキシ基、Ｃ１−８アルコキシカルボニルアミノ基などである。
【００５７】
上記−Ａ１−Ｒ１〜−Ａ６−Ｒ６は、置換基を有していてもよい。したがって、−Ａ１−Ｒ１〜−Ａ６−Ｒ６はこれに限定するものではないが、例えば、メトキシメチルなどのアルコキシアルキル、メチルフェニルまたは以下の構造
【化１１】
2011118812.tif 000012
のような窒素原子を含む単環または２環式の置換基を有するヘテロシクリル基などでもよい。
【００５８】
本発明の１つの好ましい態様においては、一般式（１）中の−Ａ２−Ｒ２および／または−Ａ５−Ｒ５は水素原子ではなく、−Ａ１−Ｒ１、−Ａ３−Ｒ３、−Ａ４−Ｒ４、−Ａ５−Ｒ５、−Ａ６−Ｒ６が水素原子である。このとき、−Ａ２−Ｒ２および／または−Ａ５−Ｒ５は、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−４アルキル、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−４アルコキシ、単環または二環式のアリール、または炭素原子以外に、窒素原子、酸素原子、および硫黄原子から選択されるヘテロ原子を１〜４個含む５〜１０員の単環または２環式のヘテロシクリル基であってよく、ここでＲ２および／またはＲ５は、直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１−４アルキルで一または二置換されていてもよい。
【００５９】
本発明の１つの好ましい態様においては、一般式（１）中の−Ａ１−Ｒ１〜−Ａ３−Ｒ３が、水素原子、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−４アルキル、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−４アルコキシのいずれかであり、−Ａ４−Ｒ４〜−Ａ６−Ｒ６のいずれかが単環または二環式のアリール、または炭素原子以外に、窒素原子、酸素原子、および硫黄原子から選択されるヘテロ原子を１〜４個含む５〜１０員の単環または２環式のヘテロシクリル基である場合である。ここで−Ａ４−Ｒ４〜−Ａ６−Ｒ６のいずれかの一つがアリール、ヘテロシクル基であることが好ましい。また、Ｒ４〜Ｒ６は、直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１−４アルキルで一または二置換されていてもよい。
【００６０】
本発明の１つの態様において、一般式（１）中の−Ａ１−Ｒ１〜−Ａ６−Ｒ６の少なくとも１つがＣ１−８アルコキシ基であり、好ましくはＣ１−４アルコキシ基であり、とくに好ましくはメトキシ基である。−Ａ１−Ｒ１〜−Ａ３−Ｒ３の全てがメトキシ基であってもよい。この場合、−Ａ１−Ｒ１〜−Ａ３−Ｒ３の全てがメトキシ基であり、−Ａ４−Ｒ４および−Ａ６−Ｒ６が水素であり、−Ａ５−Ｒ５が置換基を有していてもよいヘテロシクリル基が好ましい。
【００６１】
一般式（１）中の−Ａ１−Ｒ１〜−Ａ６−Ｒ６の隣接する２つ、好ましくは、−Ａ１−Ｒ１および−Ａ２−Ｒ２が、および／または−Ａ５−Ｒ５およびＡ６−Ｒ６が、それぞれそれらが結合している炭素原子と一緒に環を形成してもよい。
該環としては、これに限定するものではないが、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチルなどのシクロアルキル、例えば式（２）
【化１２】
2011118812.tif 000013
で表されるヘテロ環などが挙げられる。
【００６２】
以下式（３）〜（１３）の化合物が好ましいが、本発明はこれらに限定されない。
【化１３】
2011118812.tif 000014
【００６３】
特に好ましい化合物は以下式（３）
【化１４】
2011118812.tif 000015
で表されるＮｏ．２３である。Ｎｏ．２３は、特に細胞死抑制力が高い。この理由は明らかではないが、分子の予測される立体構造に起因している可能性がある。他の化合物に比べ、Ｃ１０６領域の活性部位を適度に覆う構造をとると推測され、この立体構造により、Ｃ１０６領域の高酸化を防ぎ、適度な酸化状態を維持することができると考えられる。
【００６４】
一般式（Ｉ）で示される化合物は、公知の方法で変換され薬学的に許容される塩を形成することができる。例えば、基中にカルボキシル基、スルホ基やアミノ基を有する化合物には、その塩も含まれる。
【００６５】
ここで塩としては、例えば、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、アンモニウム塩、アミン塩、酸付加塩などが挙げられる。
これらの適当な例としては、例えば、アルカリ金属（例えば、カリウム、ナトリウムなど）の塩、アルカリ土類金属（例えば、カルシウム、マグネシウムなど）の塩、アンモニウム（例えば、テトラメチルアンモニウムなど）の塩、有機アミン（例えば、トリエチルアミン、メチルアミン、ジメチルアミン、シクロペンチルアミン、ベンジルアミン、フェネチルアミン、ピペリジン、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、リジン、アルギニン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミンなど）などの塩が挙げられる。
【００６６】
適当な酸付加塩としては、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩などのような無機酸塩、または酢酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、安息香酸塩、クエン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、イセチオン酸塩、グルクロン酸塩、グルコン酸塩などのような有機酸塩が挙げられる。
【００６７】
また、一般式（Ｉ）で示される化合物およびその薬学的に許容される塩は、公知の方法により溶媒和物に変換することもできる。適当な溶媒和物として、例えば、水、アルコール系の溶媒（例えば、エタノール、メタノール、ベンジルアルコールなど）、エーテル系の溶媒（例えば、ジエチルエーテル、エチルメチルエーテルなど）、エステル系の溶媒（例えば、酢酸エチル、酢酸ブチルなど）、ベンゼン系の溶媒（ベンゼン、トルエン、キシレンなど）、ハロゲン系の溶媒（クロロホルム、ジクロロメタンなど）などとの溶媒和物が挙げられる。
また、本発明の化合物（I）は、水和物であっても、非水和物であってもよい。
【００６８】
本発明の神経変性疾患治療薬に含まれる本発明の化合物の濃度は特に限定されない。本発明の神経変性疾患治療薬は、本発明の効果を損なわない限り、前記化合物以外に任意の成分を含むことができる。本発明の神経変性疾患治療薬の投与方法は特に限定されず（経口投与、注射投与など）、またその剤型も特に限定されない（散剤、錠剤、注射液剤など）。
【実施例】
【００６９】
以下、実施例を示し、さらに詳しくこの発明について説明するが、本発明はこれらの実施例によって限定されるものではない。
〔実施例１〕  ＤＪ−１結合化合物の培養細胞での細胞死抑制効果
ヒトドパミン産生神経細胞ＳＨ−ＳＹ５Ｙの培養液に、０．０１％  ＤＭＳＯで溶解した以下のＤＪ−１結合化合物、
式（３）で示されるＮｏ．２３（ENAMINE  Ltd）、
式（６）で示されるＨＴ１３（星薬科大学・本多利夫氏提供）、
式（１２）で示されるＨＴ１９（星薬科大学・本多利夫氏提供）および、
式（１３）で示されるＨＴ２０（星薬科大学・本多利夫氏提供）、
１μＭをそれぞれ２４時間投与後、２５０μＭ  Ｈ２Ｏ２を添加し２時間処理し、細胞死の割合をＭＴＴアッセイで検討した。コントロールには、化合物を加えないコントロール（−）を用いた。コントロールと比べ、ＤＪ−１結合化合物により、サンプルの細胞死が抑制され、特にＮｏ．２３により顕著に抑制されていることが認められた（図１）。【００７０】
〔実施例２〕  ＤＪ−１結合化合物の培養細胞での過酸化水素濃度に対する細胞死抑制効果
ヒトドパミン産生神経細胞ＳＨ−ＳＹ５Ｙの培養液に、０．０１％  ＤＭＳＯで溶解したＤＪ−１結合化合物（Ｎｏ．２３）１μＭを２４時間投与後、種々の濃度のＨ２Ｏ２を添加し２時間処理し、細胞死の割合をＭＴＴアッセイで検討した。比較のため、ＤＪ−１結合化合物を加えないコントロール（−）および０．０１％  ＤＭＳＯのみを加えたコントロール（ＤＭＳＯ）を用いて、同様の方法を実施した。いずれのコントロールも１５０μＭから細胞死が増加するのに対し、ＤＪ−１結合化合物（Ｎｏ．２３）は、５００μＭという高いＨ２Ｏ２濃度まで顕著に細胞死を抑制した（図２）【００７１】
〔実施例３〕  ＤＪ−１結合化合物の脳卒中モデルラットでの細胞死抑制効果
ラット左脳（左線条体；ブレグマから１ｍｍ前側、４ｍｍ左外側、５ｍｍ腹側）に、０．０１％  ＤＭＳＯで溶解したＤＪ−１結合化合物（Ｎｏ．２３）を注射し３０分後、右側脳へ連結する血管を９０分閉塞した（図３）。再還流を行い２４時間後、脳切片スライスを作成し、ＴＴＣ染色した。比較のため、ＤＪ−１結合化合物を加えないコントロール（−）および０．０１％  ＤＭＳＯのみを加えたコントロール（ＤＭＳＯ）を用いて、同様の方法を実施した。結果を図４に示す。細胞死が起こった梗塞層は染色されない。ブレグマからの距離に対応するの脳の染色図を図５に示し、染色されていない領域をブレグマからの距離毎に算出し、プロットしたものを図６に示す。また、染色されていない領域の総体積を算出した結果を図７に示す。Ｎｏ．２３の投与により、ＴＴＣ染色領域が減少し、顕著に細胞死を抑制していることが認められた。【００７２】
〔実施例４〕ＤＪ−１結合化合物による酸化ストレス誘導神経細胞死抑制効果
ヒトドパミン産生神経細胞ＳＨ−ＳＹ５Ｙの培養液に、０．０１％  ＤＭＳＯで溶解した１μＭ  ＤＪ−１結合化合物（Ｎｏ．２３）を２０時間投与後、培養物を５０μＭ  ６−ＯＨＤＡ（６−ヒドロキシドパミン）
で２４時間処理したものおよび１２５μＭ  ６−ＯＨＤＡで１時間処理したものについて、細胞死の割合をＭＴＴアッセイで検討した。比較のため、ＤＪ−１結合化合物を加えないコントロール（−）、ＤＭＳＯのみを加えたコントロール（ＤＭＳＯ）およびドパミンを加えたサンプル（Ｄ）を用いて、同様の方法を実施した。結果を図８および図９に示す。
パーキンソン病の治療薬として知られているドパミンを含むサンプル（Ｄ）に対し、Ｎｏ．２３が著しく細胞死を抑制していることが認められた。さらにＮｏ．２３の投与は、培養細胞に対して毒性を示さなかった。【００７３】
〔実施例５〕ＤＪ−１結合化合物による活性酸素種の抑制効果
ヒトドパミン産生神経細胞ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞を、１μＭ  ＤＪ−１結合化合物（Ｎｏ．２３）で２０時間前処理し、蛍光プローブＤＣＦＡ−ＤＡで処理し、その後４０μｍ  ６−ＯＨＤＡに１０分間暴露した。その後、活性酸素種を蛍光分光光度計で測定した。比較のため、ＤＪ−１結合化合物を加えないコントロール（−）、ＤＭＳＯのみを加えたコントロール（ＤＭＳＯ）およびドパミンを加えたサンプル（Ｄ）を用いて、同様の方法を実施した。図１０に示すとおり、Ｎｏ．２３は、ドパミンと比較して、６−ＯＨＤＡにより生じる活性酸素種の生成を著しく抑制することが認められた。【００７４】
〔実施例７〕ＤＪ−１結合化合物による神経細胞死抑制効果
妊娠１７〜１９日間のラット胚芽細胞から、ラット腹側中脳のプライマリー神経細胞を調製した。細胞培養におけるドパミン産生ニューロンの存在を評価するために、ａｎｔｉ−ＮｅｕＮ抗体およびａｎｔｉ−ＴＨ抗体を用いて免疫染色し、全ニューロンおよびドパミン産生ニューロンをそれぞれ同定し、細胞核をＤＡＰＩで染色した。図１１に示すとおり、ほぼ全てのニューロンがドパミン産生ニューロンであることが認められた。【００７５】
次に、０．０１％  ＤＭＳＯに溶解した１μＭ  ＤＪ−１結合化合物（Ｎｏ．２３）でプライマリー神経細胞を２０時間前処理し、その後、２００μＭ  Ｈ２Ｏ２で３時間処理し、細胞死の割合をＭＴＴアッセイで評価した。比較のため、ＤＪ−１結合化合物を加えないコントロール（−）、０．０１％  ＤＭＳＯのみを加えたコントロール（ＤＭＳＯ）およびドパミンを加えたサンプル（Ｄ）を用いて、同様の方法で評価した。図１２に示すとおり、Ｎｏ．２３を投与したサンプルでは、細胞死が全く認められなかった。したがって、Ｎｏ．２３は酸化ストレスによって誘導される神経細胞死に抵抗性を与えることが明らかとなった。【００７６】
〔実施例８〕ＤＪ−１結合化合物のヒドロキシラジカル（・ＯＨ）の消去能
昨今の研究により、ミトコンドリア障害またはドパミンおよび６−ＯＨＤＡの自己酸化によりＨ２Ｏ２が生成され、Ｆｅ２＋の存在によりこのＨ２Ｏ２からヒドロキシラジカルが容易に生成する。ヒドロキシラジカルは、ドパミン神経変性において、最も重要な神経毒性要因である。そこで、ＤＪ−１結合化合物が直接ヒドロキシラジカルに作用するかについて、5，5−ジメチルピロリン−N−オキサイド（DMPO）を用いた電子スピン共鳴（Electron Spin Resonance：ESR）−スピントラッピング法により評価した。
２５μＭジエチレン-トリアミン五酢酸、２５μＭ  ＦｅＳＯ４、１００μＭ  Ｈ２Ｏ２および１１２．５ｍＭ  ＤＭＳＯを含む１００ｍＭリン酸バッファ反応混合物２００μＬに、１μＭ、１０μＭおよび１００μＭ のＤＪ−１結合化合物（Ｎｏ．２３）および５００ｍＭ  チオ尿素を、それぞれ添加した。比較として、ジエチレン-トリアミン五酢酸、ＦｅＳＯ４およびＤＭＳＯを含むリン酸バッファ反応混合物、さらに、これらにＨ２Ｏ２を加えたリン酸バッファ反応混合物を調製した。これらの薬品および試薬はミリＱ水に溶解した。反応混合物をフラットクォーツキュベットに移し、Ｘ−ｂａｎｄ  ＪＥＯＬ  ＲＦＲ−３０ｂラジカル分析システムに導入した。Ｆｅ２＋とＨ２Ｏ２とのフェントン反応により生成したヒドロキシラジカルはＤＭＰＯによって捕らえられる。ＤＭＰＯ添加から１分後に、安定したＤＭＰＯ−ＯＨアダクトを測定した。Ｍｎ２＋の信号を内部標準に用いた。【００７７】
図１３のＨ２Ｏ２を含有しないコントロール（コントロール）において、両端に検出されたピークが、内部標準Ｍｎ２＋の信号であり、Ｈ２Ｏ２が存在しないためその他のピークは検出されていない。一方、Ｆｅ２＋とＨ２Ｏ２の存在下では、Ｍｎ２＋の２つピークの間に１：２：２：１の強度比でピークが検出される（図１３、Ｈ２Ｏ２参照）。そして、この４重信号は、ヒドロキシラジカルの補足剤であるチオ尿素によって完全に消失しており（図１３、Ｈ２Ｏ２＋チオ尿素参照）、４重信号は、ＤＭＰＯ−ＯＨアダクトであることを示している。これに対し、Ｎｏ．２３を含む反応混合物においては、１００μＭの高濃度においてもピークの減少は認められなかった（図１３および図１４参照）。このことから、Ｎｏ．２３は、直接ヒドロキシラジカルには作用しないと考えられ、単なる抗酸化物質ではないことがわかる。【００７８】
〔実施例９〕ＤＪ−１結合化合物のパーキンソン病に対する効果
ｉｎ  ｖｉｖｏでのパーキンソン病に対するＤＪ−１結合化合物の効果を評価するため、片側（左）中脳に６−ＯＨＤＡを定位的に注入した。その後、ＤＪ−１結合化合物（Ｎｏ．２３）をメタンフェタミンと一緒に投与した。なお、動物へのメタンフェタミンの投与は、注入部位に対する同側性運動を誘発する。したがってメタンフェタミンをマウスに投与すると回旋行動が観察される。図１５に、投与後７日までのマウスの全回旋数を示す。図１６に、回旋数の経時変化を示す。図１５および図１６から、Ｎｏ．２３により、マウスの回旋行動が著しく抑制され、Ｎｏ．２３がパーキンソン病の治療に極めて有効であることが認められる。
【産業上の利用可能性】
【００７９】
本発明の神経変性疾患治療薬は、酸化ストレス誘導神経細胞死を高度に抑制することができ、現在の神経変性疾患に対し、従来の対症療法ではなく、酸化ストレス誘導神経細胞死を抑制するというより根本的な治療を可能とする。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【手続補正書】
【提出日】平成24年1月26日(2012.1.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）
【化１】
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式中、
ｍは０または１であり；
ｎは０または１であり；
Ｒ１〜Ｒ６は、互いに同一または異なっていてもよい、水素原子、ヒドロキシ基、シアノ基、ニトロ基、ハロゲン原子、アミノ基、
または、
置換基を有していてもよいＣ１−８の直鎖もしくは分枝鎖の飽和もしくは不飽和炭化水素、置換基を有していてもよいシクロアルキル基、置換基を有していてもよいアリール基、置換基を有していてもよいヘテロシクリル基であり、
Ａ１〜Ａ６は、単結合、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯＯ−、−ＯＣＯ−、−Ｏ−ＣＯ−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−Ｏ−ＳＯ２−、−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯＯ−、−ＮＨ−ＳＯ２−であって、
−Ａ１−Ｒ１〜−Ａ３−Ｒ３が、水素原子、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−４アルキル、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−４アルコキシのいずれかであり、
−Ａ４−Ｒ４〜−Ａ６−Ｒ６のいずれかが、置換基を有していてもよい、単環または二環式のアリール、または置換基を有していてもよい、炭素原子以外に、窒素原子、酸素原子、および硫黄原子から選択されるヘテロ原子を１〜４個含む５〜１０員の単環または２環式のヘテロシクリル基であり、
隣接する２つの−Ａ１−Ｒ１〜−Ａ６−Ｒ６は、それらが結合している炭素原子と一緒に環を形成してもよい、
で表される化合物またはその薬学的に許容され得る塩を含有してなる、神経変性疾患治療薬。
【請求項２】
ｍまたはｎが０である、請求項１に記載の神経変性疾患治療薬。
【請求項３】
ｍおよびｎが０である、請求項１〜２のいずれかに記載の神経変性疾患治療薬。
【請求項４】
−Ａ４−Ｒ４〜−Ａ６−Ｒ６のいずれかが、直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１−４アルキルで置換されていてもよい、単環または２環式のアリール基、または直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１−４アルキルで置換されていてもよい、炭素原子以外に、窒素原子、酸素原子、および硫黄原子から選択されるヘテロ原子を１〜４個含む５〜１０員の単環または２環式のヘテロシクリル基である、請求項１〜３のいずれかに記載の神経変性疾患治療薬。
【請求項５】
−Ａ５−Ｒ５が、直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１−４アルキルで置換されていてもよい、炭素原子以外に、窒素原子、酸素原子、および硫黄原子から選択されるヘテロ原子を１〜４個含む５〜１０員の単環または２環式のヘテロシクリル基である、請求項１〜４のいずれかに記載の神経変性疾患治療薬。
【請求項６】
−Ａ１−Ｒ１〜−Ａ３−Ｒ３の少なくとも１つが、Ｃ１−４アルコキシ基である、請求項１〜５のいずれかに記載の神経変性疾患治療薬。
【請求項７】
−Ａ５−Ｒ５が、直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１−４アルキルで置換されていてもよい、炭素原子以外に、窒素原子、酸素原子、および硫黄原子から選択されるヘテロ原子を１〜４個含む５〜１０員の単環または２環式のヘテロシクリル基であり、
−Ａ１−Ｒ１〜−Ａ３−Ｒ３が、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１−４アルコキシ基である、請求項６に記載の神経変性疾患治療薬。
【請求項８】
−Ａ４−Ｒ４および−Ａ６−Ｒ６が、水素原子である、請求項４〜７のいずれかに記載の神経変性疾患治療薬。
【請求項９】
隣接する２つの−Ａ１−Ｒ１〜−Ａ６−Ｒ６が、それらが結合している炭素原子と一緒に環を形成し、該環が、式（２）
【化２】
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で表される環構造である、請求項１に記載の神経変性疾患治療薬。
【請求項１０】
請求項１に記載の式（１）で表される化合物が、式（３）
【化３】
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で表される化合物である、請求項１に記載の神経変性疾患治療薬。
【国際調査報告】
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