(57)【要約】  カルノシナーゼ阻害剤およびＬ−カルノシン類を含む高脂血症の予防または治療剤、ならびに、カルノシナーゼ阻害剤およびＬ−カルノシン類を含む抗疲労剤を提供する。カルノシナーゼ阻害剤とＬ−カルノシン類とを併用することにより、哺乳動物の血漿中の遊離脂肪酸濃度の減少させることができる。また、カルノシナーゼ阻害剤とＬ−カルノシン類とを併用することにより、血漿中の乳酸濃度を減少させ、疲労を軽減し、疲労回復を促進し、持久力を向上させることができる。カルノシナーゼ阻害剤としてはβ−アラニン、Ｎ−アルカノイル−β−アラニン誘導体、Ｎ−アルカノイル−Ｌ−カルノシン誘導体等が好ましく、Ｌ−カルノシン類としては、Ｌ−カルノシン、Ｎ−アセチル−Ｌ−カルノシン、Ｌ−アンセリン、Ｎ−アセチル−Ｌ−アンセリン、Ｌ−バレニン、Ｌ−ホモカルノシン、Ｎ−アセチル−Ｌ−ホモカルノシン、カルシニン等が好ましい。
2011078204.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
カルノシナーゼ阻害剤およびＬ−カルノシン類を含む高脂血症の予防または治療剤。
【請求項２】
カルノシナーゼ阻害剤が、下記式（ＩＩ）で表されるβ−アラニン、下記式（ＩＩＩ）で表されるＮ−アルカノイル−β−アラニン誘導体、下記式（ＩＶ）で表されるＮ−アルカノイル−Ｌ−カルノシン誘導体、γ−アミノ酸誘導体、チオール型還元剤、および分岐状炭化水素鎖を有する疎水性ビタミンから選ばれる少なくとも１種であることを特徴とする請求項１に記載の高脂血症の予防または治療剤。
【化１】
2011078204.tif 000017
【化２】
2011078204.tif 000018
（式中、Ｒ１およびＲ２は独立して水素原子または低級アルキル基を表す。）
【化３】
2011078204.tif 000019
（式中、Ｒ２は水素原子または低級アルキル基を表し、Ｒ３は炭素数２以上のアルキル基を表す。）
【請求項３】
Ｌ−カルノシン類が、Ｌ−カルノシン、Ｎ−アセチル−Ｌ−カルノシン、Ｌ−アンセリン、Ｎ−アセチル−Ｌ−アンセリン、Ｌ−バレニン、Ｌ−ホモカルノシン、Ｎ−アセチル−Ｌ−ホモカルノシンおよびカルシニンから選ばれる一種以上であることを特徴とする請求項１または２に記載の高脂血症の予防または治療剤。
【請求項４】
Ｎ−アルカノイル−β−アラニン誘導体が、低級アルキル基でエステル化されていてもよいＮ−アセチル−β−アラニンであることを特徴とする請求項２に記載の高脂血症の予防または治療剤。
【請求項５】
カルノシナーゼ阻害剤および／またはＬ−カルノシン類の吸収を上げるために、さらにセルロース誘導体、ゼラチン、デキストリン、乳糖、でんぷんおよびポリビニルピロリドンから選ばれる少なくとも１種を含むことを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載の高脂血症の予防または治療剤。
【請求項６】
高脂血症の予防または治療が血漿中の遊離脂肪酸濃度を低下させることによるものである請求項１〜５のいずれかに記載の高脂血症の予防または治療剤。
【請求項７】
高脂血症の予防または治療がメタボリックシンドローム、肥満、糖尿病、高血圧、高コレステロール血症、脂肪肝、心不全、狭心症、心筋梗塞、または動脈硬化の予防または治療である請求項１〜６のいずれかに記載の高脂血症の予防または治療剤。
【請求項８】
カルノシナーゼ阻害剤およびＬ−カルノシン類を含むことを特徴とする抗疲労剤。
【請求項９】
カルノシナーゼ阻害剤が、下記式（ＩＩ）で表されるβ−アラニン、下記式（ＩＩＩ）で表されるＮ−アルカノイル−β−アラニン誘導体、下記式（ＩＶ）で表されるＮ−アルカノイル−Ｌ−カルノシン誘導体、γ−アミノ酸誘導体、チオール型還元剤、および分岐状炭化水素鎖を有する疎水性ビタミンから選ばれる少なくとも１種であることを特徴とする請求項８に記載の抗疲労剤。
【化４】
2011078204.tif 000020
【化５】
2011078204.tif 000021
（式中、Ｒ１およびＲ２は独立して水素原子または低級アルキル基を表す。）
【化６】
2011078204.tif 000022
（式中、Ｒ２は水素原子または低級アルキル基を表し、Ｒ３は炭素数２以上のアルキル基を表す。）
【請求項１０】
Ｌ−カルノシン類が、Ｌ−カルノシン、Ｎ−アセチル−Ｌ−カルノシン、Ｌ−アンセリン、Ｎ−アセチル−Ｌ−アンセリン、Ｌ−バレニン、Ｌ−ホモカルノシン、Ｎ−アセチル−Ｌ−ホモカルノシンおよびカルシニンから選ばれる少なくとも１種であることを特徴とする請求項８または９に記載の抗疲労剤。
【請求項１１】
Ｎ−アルカノイル−β−アラニン誘導体が、低級アルキル基でエステル化されていてもよいＮ−アセチル−β−アラニンであることを特徴とする請求項９に記載の抗疲労剤。
【請求項１２】
カルノシナーゼ阻害剤および／またはＬ−カルノシン類の吸収を上げるために、さらにセルロース誘導体、ゼラチン、デキストリン、乳糖、でんぷんおよびポリビニルピロリドンから選ばれる少なくとも１種を含むことを特徴とする請求項８〜１１のいずれかに記載の抗疲労剤。
【請求項１３】
抗疲労が血漿中の乳酸濃度を低下させる作用によることを特徴とする請求項８〜１２のいずれかに記載の抗疲労剤。
【請求項１４】
抗疲労が持久力を増強させる作用によることを特徴とする請求項８〜１２のいずれかに記載の抗疲労剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、カルノシナーゼ阻害剤およびＬ−カルノシン類を含む高脂血症の予防または治療剤、ならびに抗疲労剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒトおよび他の哺乳動物組織の構造および機能が加齢と共に低下する原因の一つとして、細胞にダメージを与え、また過酸化を引き起こし、老化を進めるのが活性酸素・フリーラジカルと考えられている。その老化および細胞の障害による病状の発症を予防する、またはできるだけ少なくするため、すなわち長寿のためには、種々の体組織又は細胞内、あるいは血漿および血流を含む体液において、天然抗酸化剤（フリーラジカル捕捉剤）を高濃度に維持して、該抗酸化剤を器官、組織および細胞に供給することが重要である。【０００３】
以下の式（Ｉ）で示されるＬ−カルノシン（β−アラニル−Ｌ−ヒスチジン）は、脊椎動物の骨格筋の非蛋白画分（例えば、非特許文献１、２）、嗅覚上皮および嗅覚球のような他組織（例えば、非特許文献３）および水晶体（非特許文献４）に存在し、最も豊富（１−２０ｍＭ）な窒素系化合物の一つであることが分かっている。【０００４】
【化１】
2011078204.tif 000003
【０００５】
いくつかの他のＬ−カルノシン関連天然物、例えば、Ｎ−アセチル−Ｌ−カルノシン、Ｌ−アンセリン（β−アラニル−Ｌ−３−メチルヒスチジン）及びそのＮ−アセチル誘導体、Ｌ−バレニン（β−アラニル−Ｌ−１−メチルヒスチジン）、Ｌ−ホモカルノシン（γ−アミノブチリル−Ｌ−ヒスチジン）及びそのＮ−アセチル誘導体、カルシニン（β−アラニルヒスタミン）（例えば、非特許文献５、６、７）等は、その分布、活性および代謝性変換に興味ある違いがあるが（例えば、非特許文献８）、数種の哺乳動物の骨格筋、心臓および脳等の組織にミリモル濃度で存在していることが報告されている（例えば、非特許文献９）。【０００６】
上記したＬ−カルノシン及びその関連天然物質は、最も重要な天然抗酸化剤として、細胞膜あるいは生体膜の脂質層及び水性環境において、脂質及び蛋白質（酵素を含む）、ＤＮＡ及びその他の必須高分子等の水溶性分子が、活性酸素種および脂質過酸化物により損傷を受けるのを保護する作用を有することが知られている（非特許文献９、１０、１１、１２）。【０００７】
ＳＯＤ（スーパーオキサイドジスムターゼ）あるいはカタラーゼ等の種々の抗酸化酵素は、水性環境下のみでその基質と反応する。また、Ｌ−カルノシン及びその関連天然物質は、水酸基ラジカル、スーパーオキサイド及び一重項酸素を捕捉し、脂質の過酸化を抑制する作用を有することを示している（例えば、非特許文献１３，１４）。【０００８】
Ｌ−カルノシン類の生理学的な性質については、以下に更に詳細に説明する。
１）Ｌ−カルノシン及びその天然に存在する関連化合物は、市販されている細胞及び組織由来のＳＯＤのような酵素及びグルタチオンやセルロプラスミンのような抗酸化システムを不活性化から保護している。水溶性のＬ−カルノシンは、肝臓ミクロソームにおいて脂質過酸化の際、脂質可溶性のα−トコフェロールの抗酸化作用を増強させる。それ故、Ｌ−カルノシンは肝臓チトクロームＰ−４５０の系の主要な保護物質である。Ｌ−カルノシンは細胞染色体を酸化による障害から明らかに保護することが知られている唯一の抗酸化剤である。こうした抗酸化作用は、動脈硬化、虚血性疾患（例えば脳梗塞、一過性脳虚血発作、脳卒中、狭心症、心筋梗塞等）、白内障の発症と進行、及び筋肉及び皮膚の老化の予防に有用である。また、Ｌ−カルノシンは脳の神経変性疾患（例えば、アルツハイマー病、痴呆、てんかん等）を改善することも知られている。最近、Ｌ−カルノシン、グルタチオン、スパーオキサイドジスムターゼ（ＳＯＤ）のような抗酸化系における機能不全は、後シナプスのグルタミン酸受容体（ＮＭＤＡおよびＡＭＰＡ）の過剰刺激を齎し、精神分裂病、パーキンソン氏病、ハンチントン舞踏病、筋萎縮性側索硬化症等の発症及び進行に繋がると推測されている（例えば、非特許文献１５）。Ｌ−カルノシンの補填は、こうした疾患の予防及び治療に有用な方法と考えられる。【０００９】
２）Ｌ−カルノシンはこれまでに発見された最も優れた抗グリケーション剤であって、所謂メイラード反応、すなわち蛋白質の直接的グリケーション及び蛋白質の架橋といったアドバンスドグリケーション反応を阻害することが知られている。そのため、Ｌ−カルノシンは、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、糖尿病性神経症のみならず、脈管系組織の老化（例えば動脈硬化症、網膜症等）、皮膚の老化（例えばしわ）あるいは水晶体の老化（例えば白内障）等の種々の組織の老化を防止することが期待できる。最近、発癌性および毒性物質であるアクリルアミドが、調理中にメイラード反応により種々の食品の中に形成されることが報告されている（例えば、非特許文献１６，１７）。Ｌ−カルノシンを調理前の食品あるいは食料に添加することは、そのようなアクリルアミドの生成を抑制する有力な手段となると考えられる。【００１０】
３）Ｌ−カルノシンは膜安定化および組織修復作用を有しており、消化管の潰瘍性疾患（例えば、胃潰瘍、十二指腸潰瘍）あるいは皮膚の潰瘍性疾患の予防及び治療に効果的であることが判明している。また、傷や火傷の治療にも効果がある。【００１１】
４）Ｌ−カルノシンおよびその関連天然物は、脳のみならず心臓に対して抗虚血作用を有している。Ｌ−カルノシンは、心臓細胞のカルシウム応答を高めることにより、心臓の収縮力を増大させることが判明している。Ｌ−カルノシン注射は、虚血性発作の緊急治療に効果的であることが証明されている。【００１２】
５）激しい運動による乳酸の蓄積と連動して大量のＨ＋が生成されるとき、Ｌ−カルノシンは筋肉中の酸バランスを緩衝する重要な役割を果たしている。従って、Ｌ−カルノシンは運動実行能力の改善に繋がる筋肉疲労の防止という役割を果たしている。Ｌ−カルノシンは、筋肉細胞膜が筋肉運動の酸性条件下、酸化されるのを防止している。最近の報告によると、筋肉中のＬ−カルノシン濃度は、平均体力と大いに相関している（例えば、非特許文献１８）。Ｌ−カルノシンは運動による疲労回復を劇的に改善することが証明されている（しかしながら、運動能力の増大、即ち、動作性の助長を意味するのではなく、むしろ運動に対する同化応答を容易ならしめるものである）。カルノシンは疲労後の筋肉収縮能力を迅速に回復させることが証明されている。【００１３】
６）最近、Ｌ−カルノシンが一酸化窒素合成酵素（ＮＯＳ）の本当の基質のようであると言われている。Ｌ−カルノシンの補給は、内因性の血管緊張緩和物質である一酸化窒素（ＮＯ）の合成を刺激して、血圧を下げたり、狭心症のような虚血性疾患を予防したりすることが期待されている。【００１４】
７）Ｌ−カルノシンは、アルコール飲料（例えばウイスキー、コニャック、ウオッカ、ビール、酒、ワイン等）を消費したときのエタノール代謝の主要産物であるアセトアルデヒドの捕捉剤として有効である（例えば、非特許文献１９）。従って、Ｌ−カルノシンは肝臓、脳あるいは筋肉をアセトアルデヒドの毒性から保護している。また、傷を治癒させる作用があるため、Ｌ−カルノシンは、アルコール消費によって増悪する粘膜の糜爛や消化性潰瘍の治療および予防に有効である。【００１５】
８）慢性のアルコール性骨格筋障害は、ＩＩ型繊維の選択的萎縮に特徴があり、全アルコール濫用者の２／３までが影響を受けている。Ｌ−カルノシンは、繊維の萎縮を予防する。すなわちＬ−カルノシンは脂質過酸化のみならず過度のアルコール摂取によって起こる障害からも脳を保護している。【００１６】
９）Ｌ−カルノシンは、免疫賦活作用を有し、ハイドロコーチゾン、抗腫瘍剤あるいはその他の多くの免疫抑制剤による免疫抑制から免疫系を保護している。【００１７】
１０）健康と若さを保つためにＬ−カルノシンは次のような利点を有している。Ｌ−カルノシンおよびその関連化合物は、細胞分裂回数（ヘイフリックの限界）を増やし、生存期間の延長あるいは長寿に有用かも知れない（例えば、非特許文献２０）。Ｌ−カルノシンは、結合組織の若返り効果および傷の治療効果を有している。Ｌ−カルノシンを添加した組織培養系において、細胞は若い外観を保ち、その生存期間が延長した。このＬ−カルノシンが有する細胞生存期間を増大させるという能力は、老化細胞に対しても当てはまり、ある実験ではＬ−カルノシン添加により細胞の生存期間が６７％延長された。マウスを用いたｉｎ  ｖｉｖｏ試験でも証明され、Ｌ−カルノシンを投与されたマウスは、コントロールのマウスに比べ平均２０％長く生存し、年を取ってもコントロールのマウスよりも２倍以上健康な状態を保っていた。ヒトにおいては、Ｌ−カルノシン血中濃度は加齢と共に下がり、筋肉中のＬ−カルノシン濃度は、１０歳から７０歳までの間に６３％減少する。【００１８】
一方、外因性のカルノシンは、代表的な例として眼に局所投与した場合でも尿中に容易に排泄されるか、またはカルノシナーゼと呼ばれる酵素で分解されるので、組織には蓄積されない。このカルノシナーゼは、血漿、前方眼房の房水、肝臓、腎臓あるいは他の組織中に存在し、筋肉中には存在しないが（例えば、非特許文献２１、２２）、水晶体には存在している（例えば、非特許文献２３、２４）。Ｎ−アセチル−Ｌ−カルノシン、Ｌ−アンセリン、Ｎ−アセチル−Ｌ−アンセリン、Ｌ−バレニン、Ｌ−ホモカルノシン、Ｎ−アセチル−Ｌ−ホモカルノシンまたはカルシニン等のＬ−カルノシン関連天然物質は、加水分解速度がＬ−カルノシンよりも遅いけれども、カルノシナーゼにより加水分解または不活化される基質となり得る（例えば、非特許文献２５）。【００１９】
上述したように、老化あるいは栄養失調等で体の中にＬ−カルノシンおよび／またはその関連天然物質が不足すると、ヒトおよびその他の哺乳動物においては、体の様々な機能不全をもたらす。Ｌ−カルノシンまたはその関連天然物質の補給は、それ故、こうした機能不全あるいはそれから派生する疾患の治療または予防に有用であると考えられる。また、Ｌ−カルノシンおよび／またはその関連天然物質を過剰に補給することにより、こうした疾患の治療、運動能力の改善、老化の防止、皮膚の治療、生活の質（ＱＯＬ）の向上等に意義があるものと考えられる。Ｌ−カルノシンは栄養補助食品として、あるいは化粧品として数ケ国においてすでに使用されているが、上述したようにＬ−カルノシンはいわゆるカルノシナーゼという酵素（血清型および組織型の二形態がある）により容易に加水分解されてβ−アラニンおよびＬ−ヒスチジンになり、Ｌ−カルノシンの生理的活性を完全に失うので、これらの製品は非常に有効であるとは考えられない。カルノシナーゼはヒトおよびその他の哺乳動物の小腸の内腔、血漿およびその他の組織中に広く分布しているので、経口的、非経口的あるいは局所的な投与方法に関係なく、上記した目的、即ち疾患の治療、運動能力の改善、老化の防止、皮膚の手入れ（スキンケア）、ＱＯＬの改善等を達成するためには、大過剰のＬ−カルノシンを投与して該酵素を飽和させ、投与したＬ−カルノシンが完全に加水分解されるのを防止することが推奨されている。
また、Ｌ−カルノシンまたはその関連天然物質を分解することなく目標器官へ効果的に送達させる安全な方法としてカルノシナーゼ阻害剤の併用が有効であることが報告されている（特許文献１）。ベスタチンが強力な組織カルノシナーゼ阻害剤（非特許文献２６）であること、および内因性組織Ｌ−カルノシンの蓄積はベスタチン処理により増大することは公知であったが、Ｌ−カルノシンとベスタチンとをｉｎ  ｖｉｖｏで同時に投与したときも、ベスタチンがＬ−カルノシンの標的器官への効果的な送達を支援し、さらにベスタチンとＬ−カルノシンの併用に抗癌作用があることが報告されている（特許文献１）。【００２０】
しかしながら、カルノシナーゼ阻害剤およびＬ−カルノシン類を併用して摂取することが高脂血症の予防または治療に有効であること、また、カルノシナーゼ阻害剤およびＬ−カルノシン類を併用して摂取すると抗疲労効果が得られることについては全く知られていなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２１】
【特許文献１】国際公開２００４−０６４８６６号公報
【非特許文献】
【００２２】
【非特許文献１】K.G.Crush, Comp. Biochem. Physiol., Vol.34, 3, 1970
【非特許文献２】A.A. Boldyrev, S.E. Severin, Adv. Enzyme Regul., Vol.30, 175, 1990
【非特許文献３】F. Margolis, Science, Vol.184, 909, 1974
【非特許文献４】Jay et al., Meeting Abstr. J. Physiol. London, Vol.420, 155, 1990
【非特許文献５】P.R. Carnegie et al., J. Chromatogr., Vol.261, 153, 1983
【非特許文献６】L. Flancbaum et al., Life Sci., Vol.47, 1587, 1990
【非特許文献７】M.A. Babizhayev et al., Biochemistry (Moscow), Vol.63, 620, 1998
【非特許文献８】M.A. Babizhayev et al., Biochem. J., Vol.304, 509, 1994
【非特許文献９】M.A. Babizhayev et al., Biochem. J., Vol.304, 509, 1994
【非特許文献１０】M.A. Babizhayev et al., Biochemistry (Moscow), Vol.63, 523, 1998
【非特許文献１１】M.A. Babizhayev et al., Clinica Chimica Acta, Vol.254, 1, 1996
【非特許文献１２】J.H. Kang et al., Molecules and Cells, Vol.13, 107, 2002
【非特許文献１３】M.A. Babizhayev et al., Biochem. J., Vol.304, 509, 1994
【非特許文献１４】T.A. Dahl, W.R. Midden, P.E. Hartman, Photochem. Photobiol., Vol.47, 357, 1988
【非特許文献１５】Encephale, Vol. 28(2), 147, 2002
【非特許文献１６】D.S. Mottram, et al, Nature, Vol.419, 448, 2002
【非特許文献１７】R.H. Stadler, et al., Nature, Vol.419, 449, 2002
【非特許文献１８】Y. Suzuki et al., Japan. J of Physiol., Vol.64, 199, 2002
【非特許文献１９】Ann. NY. Acad. Sci., Vol. 854, 37 1998
【非特許文献２０】R. Holliday, G.A. McFarland., Biochemistry (Moscow), Vol.65, 843, 2000).
【非特許文献２１】Jackson et al., Clin. Chim. Acta, Vol.196, 193, 1991
【非特許文献２２】Lenney et al., Biochem. J., Vol.228, 653, 1985
【非特許文献２３】A.A. Boldyrev, A.Y. Dupin, M.A. Babizhayev, S.E. Severin, Biochem. Int., Vol.15, 1105, 1987
【非特許文献２４】J.L. Jay et al., Meeting Abstr. J. Physiol. Lond., Vol.420, 155, 1990
【非特許文献２５】A. Pegova et al., Comp. Biochem. Physiol. B. Biochem. Mol. Biol., Vol.127(4), 443, 2000
【非特許文献２６】S.C. Peppers, J.F. Lenney, Biol. Chem. Hoppe Seyler, Vol.369, 1281, 1988
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２３】
本発明は、カルノシナーゼ阻害剤とＬ−カルノシン類との併用による新規な用途を見出すことを目的とし、さらに、カルノシナーゼ阻害剤およびＬ−カルノシン類を含む新規な高脂血症の予防または治療剤、ならびに、カルノシナーゼ阻害剤およびＬ−カルノシン類を含む新規な抗疲労剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００２４】
本発明者らは、カルノシナーゼ阻害剤について精力的な研究を続けた結果、下記式（ＩＩ）で表されるβ−アラニン、下記式（ＩＩＩ）で表されるＮ−アルカノイル−β−アラニン誘導体、下記式（ＩＶ）で表されるＮ−アルカノイル−Ｌ−カルノシン誘導体が安全かつ安価であって、Ｌ−カルノシン類との併用において血漿中の乳酸濃度、または遊離脂肪酸濃度を減少させる効果があることを知見した。【００２５】
【化２】
2011078204.tif 000004
【００２６】
【化３】
2011078204.tif 000005
（式中、Ｒ１およびＲ２は独立して水素原子または低級アルキル基を表す。）【００２７】
【化４】
2011078204.tif 000006
（式中、Ｒ２は水素原子または低級アルキル基を表し、Ｒ３は炭素数２以上のアルキル基を表す。）【００２８】
さらに、本発明者らは、カルノシナーゼ阻害剤とＬ−カルノシン類とを含む組成物が高脂血症の予防または治療に有用であること、また、カルノシナーゼ阻害剤とＬ−カルノシン類とを含む組成物が抗疲労作用を奏することを見出し、本発明を完成した。【００２９】
すなわち、本発明は、
［１］カルノシナーゼ阻害剤およびＬ−カルノシン類を含む高脂血症の予防または治療剤、
［２］カルノシナーゼ阻害剤が、下記式（ＩＩ）で表されるβ−アラニン、下記式（ＩＩＩ）で表されるＮ−アルカノイル−β−アラニン誘導体、下記式（ＩＶ）で表されるＮ−アルカノイル−Ｌ−カルノシン誘導体、γ−アミノ酸誘導体、チオール型還元剤、および分岐状炭化水素鎖を有する疎水性ビタミンから選ばれる少なくとも１種であることを特徴とする前記［１］に記載の高脂血症の予防または治療剤、
【化５】
2011078204.tif 000007
【化６】
2011078204.tif 000008
（式中、Ｒ１およびＲ２は独立して水素原子または低級アルキル基を表す。）
【化７】
2011078204.tif 000009
（式中、Ｒ２は水素原子または低級アルキル基を表し、Ｒ３は炭素数２以上のアルキル基を表す。）
［３］Ｌ−カルノシン類が、Ｌ−カルノシン、Ｎ−アセチル−Ｌ−カルノシン、Ｌ−アンセリン、Ｎ−アセチル−Ｌ−アンセリン、Ｌ−バレニン、Ｌ−ホモカルノシン、Ｎ−アセチル−Ｌ−ホモカルノシンおよびカルシニンから選ばれる一種以上であることを特徴とする前記［１］または［２］に記載の高脂血症の予防または治療剤、
［４］Ｎ−アルカノイル−β−アラニン誘導体が、低級アルキル基でエステル化されていてもよいＮ−アセチル−β−アラニンであることを特徴とする前記［２］に記載の高脂血症の予防または治療剤、
［５］カルノシナーゼ阻害剤および／またはＬ−カルノシン類の吸収を上げるために、さらにセルロース誘導体、ゼラチン、デキストリン、乳糖、でんぷんおよびポリビニルピロリドンから選ばれる少なくとも１種を含むことを特徴とする前記［１］〜［４］のいずれかに記載の高脂血症の予防または治療剤、
［６］高脂血症の予防または治療が血漿中の遊離脂肪酸濃度を低下させることによるものである前記［１］〜［５］のいずれかに記載の高脂血症の予防または治療剤、
［７］高脂血症の予防または治療がメタボリックシンドローム、肥満、糖尿病、高血圧、高コレステロール血症、脂肪肝、心不全、狭心症、心筋梗塞、または動脈硬化の予防または治療である前記［１］〜［６］のいずれかに記載の高脂血症の予防または治療剤、
［８］カルノシナーゼ阻害剤およびＬ−カルノシン類を含むことを特徴とする抗疲労剤、
［９］カルノシナーゼ阻害剤が、下記式（ＩＩ）で表されるβ−アラニン、下記式（ＩＩＩ）で表されるＮ−アルカノイル−β−アラニン誘導体、下記式（ＩＶ）で表されるＮ−アルカノイル−Ｌ−カルノシン誘導体、γ−アミノ酸誘導体、チオール型還元剤、および分岐状炭化水素鎖を有する疎水性ビタミンから選ばれる少なくとも１種であることを特徴とする前記［８］に記載の抗疲労剤、
【化８】
2011078204.tif 000010
【化９】
2011078204.tif 000011
（式中、Ｒ１およびＲ２は独立して水素原子または低級アルキル基を表す。）
【化１０】
2011078204.tif 000012
（式中、Ｒ２は水素原子または低級アルキル基を表し、Ｒ３は炭素数２以上のアルキル基を表す。）
［１０］Ｌ−カルノシン類が、Ｌ−カルノシン、Ｎ−アセチル−Ｌ−カルノシン、Ｌ−アンセリン、Ｎ−アセチル−Ｌ−アンセリン、Ｌ−バレニン、Ｌ−ホモカルノシン、Ｎ−アセチル−Ｌ−ホモカルノシンおよびカルシニンから選ばれる少なくとも１種であることを特徴とする前記［８］または［９］に記載の抗疲労剤、
［１１］Ｎ−アルカノイル−β−アラニン誘導体が、低級アルキル基でエステル化されていてもよいＮ−アセチル−β−アラニンであることを特徴とする前記［９］に記載の抗疲労剤、
［１２］カルノシナーゼ阻害剤および／またはＬ−カルノシン類の吸収を上げるために、さらにセルロース誘導体、ゼラチン、デキストリン、乳糖、でんぷんおよびポリビニルピロリドンから選ばれる少なくとも１種を含むことを特徴とする前記［８］〜［１１］のいずれかに記載の抗疲労剤、
［１３］抗疲労が血漿中の乳酸濃度を低下させる作用によることを特徴とする前記［８］〜［１２］のいずれかに記載の抗疲労剤、および
［１４］抗疲労が持久力を増強させる作用によることを特徴とする前記［８］〜［１２］のいずれかに記載の抗疲労剤、
に関する。【００３０】
また、本発明には以下の各発明も含まれる。
［１５］哺乳動物に対して、カルノシナーゼ阻害剤およびＬ−カルノシン類の有効量を投与する工程を包含することを特徴とする高脂血症の予防または治療方法。
［１６］高脂血症の予防または治療剤を製造するための、カルノシナーゼ阻害剤およびＬ−カルノシン類の使用。
［１７］高脂血症の予防または治療に使用するための、カルノシナーゼ阻害剤およびＬ−カルノシン類。
［１８］哺乳動物に対して、カルノシナーゼ阻害剤およびＬ−カルノシン類の有効量を投与する工程を包含することを特徴とする抗疲労方法。
［１９］抗疲労剤を製造するための、カルノシナーゼ阻害剤およびＬ−カルノシン類の使用。
［２０］抗疲労に使用するための、カルノシナーゼ阻害剤およびＬ−カルノシン類。
【発明の効果】
【００３１】
本発明によれば、血漿中の遊離脂肪酸濃度を低下させる高脂血症の予防または治療剤を提供することができる。本発明の血漿中の遊離脂肪酸濃度を低下させる働きは、高脂血症の予防または治療に有効であり、血漿中の遊離脂肪酸濃度の上昇に関連する疾患の予防または治療に有効である。
また、本発明によれば、血漿中の乳酸濃度の増加を抑制もしくは血漿中の乳酸濃度を低下させる抗疲労剤を提供することができる。これらの働きにより、本発明の抗疲労剤は、優れた疲労軽減、疲労回復の促進作用を有し、持久力の向上作用を有する。
本発明の高脂血症の予防または治療剤、および抗疲労剤は、人体に安全な成分から成るため、長期にわたって摂取しても安心で、医薬組成物または機能性食品として広く適用が可能である。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１】遊泳させたマウスの血漿中の遊離脂肪酸濃度を示すグラフである。
【図２】遊泳させたマウスの血漿中の乳酸濃度を示すグラフである。
【図３】遊泳させたマウスの血漿中のグルコース濃度を示すグラフである。
【図４】マウスの遊泳時間の変化を示すグラフである。
【図５】マウスの体重の変化を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
本発明の高脂血症の予防または治療剤はカルノシナーゼ阻害剤およびＬ−カルノシン類を含むものである。
本発明の高脂血症の予防または治療剤で用いられるカルノシナーゼ阻害剤としては、公知のカルノシナーゼ阻害剤を制限なく用いることができるが、中でも下記式（ＩＩ）で表されるβ−アラニン、下記式（ＩＩＩ）で表されるＮ−アルカノイル−β−アラニン誘導体、下記式（ＩＶ）で表されるＮ−アルカノイル−Ｌ−カルノシン誘導体が人体に対して安全であり、安価であって、Ｌ−カルノシン類との併用において実用的である点で好ましい。
【００３４】
【化１１】
2011078204.tif 000013
【００３５】
【化１２】
2011078204.tif 000014
（式中、Ｒ１およびＲ２は独立して水素原子または低級アルキル基を表す。）
【００３６】
【化１３】
2011078204.tif 000015
（式中、Ｒ２は水素原子または低級アルキル基を表し、Ｒ３は炭素数２以上のアルキル基を表す。）
【００３７】
上記式（ＩＩＩ）および（ＩＶ）において、Ｒ１およびＲ２は独立して水素原子または低級アルキル基を表す。低級アルキル基としては、例えば、直鎖状または分岐状の低級アルキル基等が挙げられ、具体的には炭素数１〜６のメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ヘプチル基、ヘキシル基等が挙げられる。
上記式（ＩＶ）において、Ｒ３は炭素数２以上のアルキル基を表す。炭素数２以上のアルキル基としては、例えば、炭素数２以上の直鎖状または分岐状のアルキル基等が挙げられ、具体的には、例えば、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、エイコシル基等が挙げられる。その炭素数は３０以下であることが好ましい。
【００３８】
上記式（ＩＩＩ）で表されるＮ−アルカノイル−β−アラニン誘導体としては、例えば、Ｎ−ホルミル−β−アラニン、Ｎ−アセチル−β−アラニン、Ｎ−プロピオニル−β−アラニン、Ｎ−ブチリル−β−アラニン、Ｎ−（２−メチルプロピオニル）−β−アラニン、Ｎ−ペンタノイル−β−アラニン、Ｎ−ヘキサノイル−β−アラニン、Ｎ−ヘプタノイル−β−アラニン、またはそれらのエステル（例えば、メチルエステル、エチルエステル等の低級アルキルエステル）等が挙げられる。中でもＮ−アセチル−β−アラニンが好ましい。上記Ｎ−アルカノイル−β−アラニン誘導体は、公知化合物であるか、公知のアシル化剤あるいはエステル化剤を使用するそれ自体公知の方法で、上記式（ＩＩ）で表されるβ−アラニンから製造することができる。
【００３９】
上記式（ＩＶ）で表されるＮ−アルカノイル−Ｌ−カルノシン誘導体としては、例えば、Ｎ−プロピオニル−Ｌ−カルノシン、Ｎ−（２−メチルプロピオニル）−Ｌ−カルノシン、Ｎ−ブチリル−Ｌ−カルノシン、Ｎ−（２−メチルプロピオニル）−Ｌ−カルノシン、Ｎ−ペンタノイル−Ｌ−カルノシン、Ｎ−ヘキサノイル−Ｌ−カルノシン、Ｎ−ヘプタノイル−Ｌ−カルノシンまたはそれらのエステル（例えばメチルエステル、エチルエステル等の低級アルキルエステル）等が挙げられる。上記、Ｎ−アルカノイル−Ｌ−カルノシン誘導体は、公知化合物であるか、公知のアシル化剤あるいはエステル化剤を使用するそれ自体公知の方法により、式（Ｉ）で表されるＬ−カルノシンから製造することができる。
【００４０】
上記式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）および（ＩＶ）で表されるカルノシナーゼ阻害剤の他に、以下に記載する化合物等もカルノシナーゼ阻害剤として本発明の目的達成のために使用できる。そのような化合物としては、例えば、γ−アミノ酸誘導体（例えば、γ−アミノブチリルヒスタミン等）、チオール型還元剤（例えば、ユニチオール、ジチオスレイトール、２−メルカプトエタノール等）、プロリナーゼ基質（例えば、Ｌ−Ｐｒｏ−Ｌ−Ｈｉｓ等のＬ−プロリン含有ペプチドおよびその誘導体等）等が挙げられる。
さらに、例えば、ビタミンＡ、ビタミンＥ等の分岐状炭化水素鎖を有する疎水性ビタミン類をカルノシナーゼ阻害剤として使用することもできる。
【００４１】
本発明の高脂血症の予防または治療剤で用いられるＬ−カルノシン類としては、例えば、Ｌ−カルノシン、Ｌ−アンセリン、Ｌ−バレニン、Ｌ−ホモカルノシン、カルシニンまたはそれらのアシル誘導体（例えば、Ｎ−アセチル−Ｌ−カルノシン、Ｎ−アセチル−Ｌ−アンセリン、Ｎ−アセチル−Ｌ−ホモカルノシン等）等が挙げられる。アシル誘導体は、公知のアシル化剤を使用してそれ自体公知の方法で製造することができる。
【００４２】
本発明の高脂血症の予防または治療剤の剤型は使用目的に応じて、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、トローチ剤、散剤、シロップ剤等の経口投与用製剤、あるいは注射剤、点滴剤、坐剤等の非経口投与用製剤等が挙げられる。これらの製剤は、賦形剤（例えば、乳糖、白糖、ブドウ糖、マンニトール、ソルビトール、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、結晶性セルロース、アラビアゴム、デキストラン、プルラン、軽質無水珪酸、合成珪酸アルミニウム、炭酸カルシウム、燐酸水素カルシウム等）、滑沢剤（例えば、ステアリン酸、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、コロイドシリカ等）、結合剤（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、マクロゴール等）、崩壊剤（例えば、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチルスターチ、カルボキシメチルスターチナトリウム、架橋ポリビニルピロリドン等）、安定剤（例えば、メチルパラベン、プロピルパラベン、ベンジルアルコール等）、矯味矯臭剤（例えば、通常使用される甘味料、酸味料、香料等）、希釈剤等の添加剤を用いて自体公知の方法に従って製造することができる。
【００４３】
非経口投与用製剤のうち注射剤や点滴剤等の血管内投与用製剤は、好ましくは体液と等張の水性媒体を用いて調製することができる。例えば、注射剤は、塩溶液、ブドウ糖溶液または塩溶液とブドウ糖溶液の混合物等から選ばれる水性媒体を用い、常法に従って適当な助剤とともに溶液、懸濁液または分散液として調製することができる。
【００４４】
腸内投与のための坐剤は、例えば、カカオ脂、水素化脂肪または水素化カルボン酸等の担体を用いて調製することができる。
【００４５】
本発明の高脂血症の予防または治療剤は、ヒトを含む哺乳動物の血漿中の遊離脂肪酸濃度を低下させる働きがある。そして、この血漿中の遊離脂肪酸濃度を低下させる働きにより、高脂血症の予防または治療だけでなく、血漿中の遊離脂肪酸の上昇に関連する疾患の予防または治療剤として用いることもできる。遊離脂肪酸に関連する疾患としては、例えば、メタボリックシンドローム、肥満、糖尿病、高血圧、高コレステロール血症、脂肪肝、心不全、狭心症、心筋梗塞、動脈硬化等が挙げられる。
本発明にいう予防は、疾患の発症を完全に抑えることのほか、疾患の進行を抑制することを含み、治療は、疾患が完快することのほか、疾患が改善することを含む。
【００４６】
本発明の抗疲労剤はカルノシナーゼ阻害剤およびＬ−カルノシン類を含むものである。
本発明の抗疲労剤で用いられるカルノシナーゼ阻害剤およびＬ−カルノシン類は、上記した高脂血症の予防または治療剤で用いられるカルノシナーゼ阻害剤およびＬ−カルノシン類と同様である。
本発明における抗疲労とは、疲れにくいこと、疲労を軽減すること、疲労から回復することを意味する。また、疲労とは血漿中の乳酸濃度が上昇することに起因する疲労であって、抗疲労作用には血漿中の乳酸濃度の上昇を抑制すること、または血漿中の乳酸濃度を減少させること、運動能力が低下しないことが含まれる。
本発明の抗疲労剤の剤型および製造方法は上記した高脂血症の予防または治療剤の剤型および製造方法と同様である。
【００４７】
本発明の高脂血症の予防または治療剤、および抗疲労剤の投与量は、疾患の種類、症状、年齢、投与方法等によって異なるが、例えば、経口投与用製剤の場合には投与量が、カルノシナーゼ阻害剤が約５０〜１５００ｍｇ／日の範囲であり、Ｌ−カルノシン類が約５０〜１０００ｍｇ／日の範囲であればよく、中でも、カルノシナーゼ阻害剤が約１００〜１０００ｍｇ／日の範囲であり、Ｌ−カルノシン類が約１００〜６００ｍｇ／日の範囲であることが好ましい。また、投与する回数としては、一日の必要量を１回で投与しても良いし、数回に分けて投与してもよい。
本発明の高脂血症の予防または治療剤、および抗疲労剤のその他の哺乳動物に投与する場合は、上記したヒトの投与量と同じであるか、あるいは１〜１０倍程度であることが好ましい。
【００４８】
また、本発明の高脂血症の予防または治療剤、および抗疲労剤は、カルノシナーゼ阻害剤及び／又はＬ−カルノシン類の吸収を上げるために、セルロース誘導体（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース等）、ゼラチン、デキストリン、乳糖、でんぷん及びポリビニルピロリドンから選ばれる少なくとも１種を含んでいることが好ましい。
【００４９】
さらに、本発明の高脂血症の予防または治療剤、および抗疲労剤は、人体に安全な成分から成るため、長期にわたって摂取しても安心で、上記した医薬組成物以外にも機能性食品、健康補助食品、飲食品等の原料としても広く利用することができる。
【実施例】
【００５０】
以下、実施例で、本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。【００５１】
〔実施例１〕マウスによる遊泳実験
被験物質となるカルノシナーゼ阻害剤およびＬ−カルノシン類としては、β−アラニンおよびＬ−カルノシン（浜理薬品工業株式会社）を用いた。【００５２】
マウスを用いた遊泳試験により、カルノシナーゼ阻害剤、Ｌ−カルノシン類、およびカルノシナーゼ阻害剤とＬ−カルノシン類の併用の効果を評価した。
Ｓｌｄ：ｄｄＹ雄性マウス（５週齢）を日本クレア株式会社より購入し、１週間試験環境で馴化させた後、順調な発育を示した動物を試験に供した。体重と遊泳時間が均等になるように１群１５匹で下記表１のようにマウスを４群に群分けした。サンプルの投与は週５日、１日１回ゾンデにて強制経口投与を行った。サンプルの投与量は毎回０．３ｍｌとし、各サンプル中に下記表１となるように各成分を含有させた。【００５３】
マウスに体重の１０％の重りをつけて遊泳させ、頭部が水面下に５秒間水没するまでの時間を測定し、遊泳時間とした。一週間ごとに各マウスの体重と遊泳時間を測定し、実験開始から５週間後に血漿中のグルコース濃度、乳酸濃度、遊離脂肪酸濃度を測定した。血漿中のグルコース濃度、乳酸濃度、遊離脂肪酸濃度の測定は、１４時間の絶食後、マウスに体重の５％の重りをつけて１５分間遊泳させ、運動前、運動中、運動後に尾部より採血して測定した。【００５４】
【表１】
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【００５５】
結果を図１〜図５に示す。図中、値は各群の平均値±ＳＥを記載した。図１、２、４中、＊はＡ群に対してｐ＜０．０５であり、図１、４中、＊＊＊はＡ群に対してｐ＜０．００５であることを示す。コントロール（Ａ群）及びＢ、Ｃ、Ｄ群の間の統計的な差は、Ｔ−ｔｅｓｔ（Ｔ検定）を使用して評価した。
図１は遊泳させたマウスの血漿中の遊離脂肪酸濃度を示すグラフであり、図２は遊泳させたマウスの血漿中の乳酸濃度を示すグラフであり、図３は遊泳させたマウスの血漿中のグルコース濃度を示すグラフである。
図１より、Ｌ−カルノシン（６００ｍｇ／ｋｇ）を投与したＢ群（＊（２５分、４５分））、およびＬ−カルノシン（６００ｍｇ／ｋｇ）とβ−アラニン（９００ｍｇ／ｋｇ）を投与したＤ群（＊（１０分、４５分）、＊＊＊（２５分））のマウスの血漿中の遊離脂肪酸濃度がコントロールのＡ群のマウスと比較して有意に減少していることがわかる。
図２より、Ｌ−カルノシン（６００ｍｇ／ｋｇ）とβ−アラニン（９００ｍｇ／ｋｇ）を投与したＤ群（＊（５分））のマウスの血漿中の乳酸濃度がコントロールのＡ群のマウスと比較して有意に減少していることがわかる。
図３より、血漿中のグルコース濃度には有意な変化は見られなかったことがわかる。【００５６】
図４はマウスの遊泳時間の変化を示すグラフであり、図５は体重の変化を示すグラフである。
図４より、４週目において、β−アラニン（９００ｍｇ／ｋｇ）を投与したＣ群（＊＊＊）、およびＬ−カルノシン（６００ｍｇ／ｋｇ）とβ−アラニン（９００ｍｇ／ｋｇ）を投与したＤ群（＊）のマウスの遊泳時間が、コントロールのＡ群と比較して有意に高い値を示したことがわかる。
図５より、体重に関してはいずれの群においても有意な変化は見られなかったことがわかる。【００５７】
以上の結果から、β−アラニンおよびＬ−カルノシンの併用摂取に血漿中の遊離脂肪酸濃度の上昇を抑制する作用、および血漿中の遊離脂肪酸濃度を下げる作用があることが確認され、またβ−アラニンおよびＬ−カルノシンの併用摂取に血漿中の乳酸濃度の上昇を抑制する作用、および血漿中の乳酸濃度を下げる作用があることが確認された。さらにβ−アラニンおよびＬ−カルノシンを併用摂取するとマウスの遊泳時間が延びることが確認された。【００５８】
〔実施例２〕経口カプセル製剤の作製（その１）
経口カプセル製剤をそれ自体公知の方法で製造した。
１個のゼラチンまたはＨＭＰＣカプセル中に下記成分を含む。
Ｌ−カルノシン                                １００ｍｇ
β−アラニン                                  １５０ｍｇ【００５９】
〔実施例３〕経口カプセル製剤の作製（その２）
経口カプセル製剤をそれ自体公知の方法で製造した。
１個のゼラチンまたはＨＭＰＣカプセル中に下記成分を含む。
Ｌ−カルノシン                                  ５０ｍｇ
β−アラニン                                  １００ｍｇ
クエン酸                                      １００ｍｇ
【産業上の利用可能性】
【００６０】
本発明の高脂血症の予防または治療剤は、哺乳動物の血漿中の遊離脂肪酸濃度の減少に有用であり、本発明の抗疲労剤は、血漿中の乳酸濃度を減少させ、優れた疲労軽減、疲労回復の促進、持久力の向上に有用である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
2011078204.tif 000025
【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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2011078204.tif 000029
2011078204.tif 000030
2011078204.tif 000031
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