(57)【要約】  代謝安定性に優れ、ＥＰ４受容体に選択的に結合する化合物、及びそれを含有する医薬を提供する。  式（１）：2011111714.tif 000015（式中、Ｒ1およびＲ2は、それぞれ独立に、水素原子、または炭素数１〜３の直鎖アルキル基を示し、Ｒ3は、水素原子、炭素数１〜４のアルキル基、アルコキシアルキル基、アリール基、ハロゲン原子、またはハロゲン化アルキル基を示す）で表される化合物若しくはその薬学的に許容できる塩は、公知のＰＧＩ２類とは異なり、選択的なＥＰ４アゴニスト作用を有し、それにより当該化合物を含有する医薬が、免疫疾患、循環器疾患、心疾患、呼吸器疾患、眼疾患、腎疾患、肝疾患、骨疾患、消化管疾患、神経疾患、皮膚疾患等の予防及び／又は治療に有用であることを見出した。
2011111714.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）:
【化１】
2011111714.tif 000014
（式中、Ｒ1およびＲ2は、それぞれ独立に、水素原子、または炭素数１〜３の直鎖アルキル基を示し、Ｒ3は、水素原子、炭素数１〜４のアルキル基、アルコキシアルキル基、アリール基、ハロゲン原子、またはハロゲン化アルキル基を示す）で表される化合物またはその薬学的に許容できる塩からなるＥＰ４アゴニスト。
【請求項２】
Ｒ1がメチル基である請求項１に記載のＥＰ４アゴニスト。
【請求項３】
Ｒ3がメチル基である請求項１または２に記載のＥＰ４アゴニスト。
【請求項４】
Ｒ2が水素原子である請求項１〜３のいずれか１項に記載のＥＰ４アゴニスト。
【請求項５】
Ｒ1がメチル基であり、Ｒ2が水素原子である請求項１〜４のいずれか１項に記載のＥＰ４アゴニスト。
【請求項６】
Ｒ3がｍ−メチル基である請求項１〜５のいずれか１項に記載のＥＰ４アゴニスト。
【請求項７】
Ｒ1はメチル基であり、Ｒ2は水素原子であり、Ｒ3はメチル基である請求項１に記載のＥＰ４アゴニスト。
【請求項８】
Ｒ1は水素原子であり、Ｒ2はメチル基であり、Ｒ3はメチル基である請求項１に記載のＥＰ４アゴニスト。
【請求項９】
４−[(Ｚ)−(１Ｓ，５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ)−６−[(１Ｅ，３Ｒ，４ＲＳ)−３−ヒドロキシ−４−(ｍ−トリル)−１−ペンテニル]−７−ヒドロキシ−２−オキサ−４，４−ジフルオロ−ビシクロ[３．３．０]オクタン−３−イリデン]−１−（テトラゾール−５−イル）ブタン、またはその薬学的に許容できる塩からなる、請求項１に記載のＥＰ４アゴニスト。
【請求項１０】
４−[(Ｚ)−(１Ｓ，５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ)−６−[(１Ｅ，３Ｒ，４Ｒ)−３−ヒドロキシ−４−(ｍ−トリル)−１−ペンテニル]−７−ヒドロキシ−２−オキサ−４，４−ジフルオロ−ビシクロ[３．３．０]オクタン−３−イリデン]−１−（テトラゾール−５−イル）ブタン、またはその薬学的に許容できる塩からなる、請求項１に記載のＥＰ４アゴニスト。
【請求項１１】
４−[(Ｚ)−(１Ｓ，５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ)−６−[(１Ｅ，３Ｒ，４Ｓ)−３−ヒドロキシ−４−(ｍ−トリル)−１−ペンテニル]−７−ヒドロキシ−２−オキサ−４，４−ジフルオロ−ビシクロ[３．３．０]オクタン−３−イリデン]−１−（テトラゾール−５−イル）ブタン、またはその薬学的に許容できる塩からなる、請求項１に記載のＥＰ４アゴニスト。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載のＥＰ４アゴニストを有効成分として含有する医薬。
【請求項１３】
ＥＰ４の関与する疾患の予防または治療のための請求項１２に記載の医薬。
【請求項１４】
選択的なＥＰ４アゴニスト作用により症状を緩和させることができる疾患の予防または治療のための請求項１３に記載の医薬。
【請求項１５】
選択的なＥＰ４アゴニスト作用により症状を緩和させることができる疾患が、免疫疾患、循環器疾患、心疾患、呼吸器疾患、眼疾患、腎疾患、肝疾患、骨疾患、神経疾患または皮膚疾患である、請求項１４に記載の医薬。
【請求項１６】
免疫疾患が、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、シェーグレン症候群、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、臓器移植後の拒絶反応、関節炎、全身性炎症反応症候群、敗血症、血球貪食症候群、マクロファージ活性化症候群、スチル（Ｓｔｉｌｌ）病、川崎病、透析時の高サイトカイン血症、多臓器不全、ショックまたは乾癬である、請求項１５に記載の医薬。
【請求項１７】
循環器疾患または心疾患が、動脈硬化症、狭心症、心筋梗塞、脳出血により生じる脳障害、脳梗塞により生じる脳障害、クモ膜下出血により生じる脳障害、肺動脈性肺高血圧症、末梢動脈閉塞症または末梢循環障害に基づく種々の症状である、請求項１５に記載の医薬。
【請求項１８】
呼吸器疾患が、喘息、肺傷害、肺線維症、肺気腫、気管支炎または慢性閉塞性呼吸器疾患である、請求項１５に記載の医薬。
【請求項１９】
眼疾患が、緑内障または高眼圧である、請求項１５に記載の医薬。
【請求項２０】
腎疾患が、糸球体腎炎、糖尿病性腎症、ＩｇＡ腎症または虚血−再灌流性腎障害である、請求項１５に記載の医薬。
【請求項２１】
肝疾患が、肝炎、肝障害または虚血−再灌流性肝障害である、請求項１５に記載の医薬。
【請求項２２】
骨疾患が、骨粗鬆症、骨折または骨切り術後の回復期である、請求項１５に記載の医薬。
【請求項２３】
神経疾患が、神経細胞死である、請求項１５に記載の医薬。
【請求項２４】
皮膚疾患が、褥創または創傷である、請求項１５に記載の医薬。
【請求項２５】
ＥＰ４の関与する疾患が、禿頭症、脱毛症、子宮頚管熟化不全、および難聴からなる群から選択される疾患である、請求項１３に記載の医薬。
【請求項２６】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載のＥＰ４アゴニストを有効成分として含有する、炎症性腸疾患の予防または治療のための医薬。
【請求項２７】
炎症性腸疾患が潰瘍性大腸炎またはクローン病である、請求項２６に記載の医薬。
【請求項２８】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載のＥＰ４アゴニストを有効成分として含有する、消化管の潰瘍性疾患の予防または治療のための医薬。
【請求項２９】
消化管の潰瘍性疾患が食道炎、食道潰瘍、胃炎、胃潰瘍または小腸潰瘍である、請求項２８に記載の医薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、プロスタグランジン（以下、プロスタグランジンをＰＧと記す）のＣ−１のカルボキシ基がテトラゾール基に置き換わり、かつ、ＰＧのＣ−７に２個のフッ素原子が結合した７，７−ジフルオロプロスタグランジンＩ２誘導体またはその薬学的に許容できる塩、その医薬組成物、およびその医薬用途に関する。より詳しくは、免疫疾患、循環器疾患、心疾患、呼吸器疾患、眼疾患、腎疾患、肝疾患、骨疾患、消化管疾患、神経疾患、皮膚疾患等の予防または治療に有用なＥＰ４アゴニストである７，７−ジフルオロプロスタグランジンＩ２誘導体に関する。
【背景技術】
【０００２】
天然型ＰＧ類は、それぞれ特異的な受容体に結合し、それぞれ特徴ある作用を発揮する。ＰＧＩ２、ＰＧＥ２、ＰＧＤ２、ＰＧＦ２α、トロンボキサンＡ２（ＴＸＡ２）のそれぞれの受容体は、ＩＰ、ＥＰ、ＤＰ、ＦＰ、ＴＰと呼ばれる。ＥＰは、さらに４種類のサブタイプＥＰ１、ＥＰ２、ＥＰ３、ＥＰ４が存在する。これらのＰＧ受容体は、臓器や細胞において発現パターンが異なり、また、同一細胞に発現しても、表現される作用が異なる。
天然型ＰＧ類の誘導体は、元の炭素骨格の影響は受けるものの、構造変化に伴い、種々の受容体に結合するようになる（非特許文献１及び２）。【０００３】
プロスタグランジンのＣ−１のカルボキシ基の代わりにテトラゾール基を有するＰＧ誘導体については、下記の特許文献１−４及び非特許文献２等に報告されている。さらに、７，７−ジフルオロＰＧＩ２類やその製造方法についての報告がある（特許文献５及び６）。また、７，７−ジフルオロＰＧＩ２類は、循環器系疾患の予防剤あるいは治療剤として有用であると記載されている（特許文献５）。７，７−ジフルオロＰＧＩ２類は、ＩＰに強く結合する一方、ＥＰ１−４には、弱いながら結合する（非特許文献４及び５）。しかし、７，７−ジフルオロＰＧＩ２類で、ＩＰやＥＰ１、ＥＰ２、ＥＰ３への結合性が弱く、ＥＰ４にのみ選択的に強く結合する選択的ＥＰ４アゴニストは、報告されていない。【０００４】
ＥＰ４は、免疫細胞、炎症性細胞、消化器、血管、神経細胞、眼、腎、骨等に発現し、ＥＰ４アゴニストは、免疫疾患、消化管疾患、循環器疾患、心疾患、神経疾患、眼疾患、腎疾患、肝疾患、骨疾患等への医薬として研究開発がなされている。
ＥＰ４アゴニストは、ＴＮＦ−α産生を抑制し、ＩＬ−１０の産生を促進し、炎症や免疫反応を抑制し、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、シェーグレン症候群、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス等の自己免疫疾患、臓器移植後の拒絶反応等、喘息、神経細胞死、関節炎、肺傷害、肺線維症、肺気腫、気管支炎、慢性閉塞性呼吸器疾患、肝障害、急性肝炎、腎炎(急性腎炎、慢性腎炎)、腎不全、全身性炎症反応症候群、敗血症、血球貪食症候群、マクロファージ活性化症候群、スチル（Ｓｔｉｌｌ）病、川崎病、熱傷、全身性肉芽腫、潰瘍性大腸炎、クローン病、透析時の高サイトカイン血症、多臓器不全、ショック、乾癬等の免疫疾患や炎症性疾患の予防および／または治療に有用であると考えられている。【０００５】
ＥＰ４アゴニストは、マクロファージの活性化を抑えるので、動脈硬化症の予防および／または治療に有用であると考えられる(非特許文献６)。
ＥＰ４アゴニストは、心臓の虚血−再灌流性障害に対して保護作用を有するので、狭心症や心筋梗塞の予防および／または治療剤として有用であると考えられる(非特許文献７)。
ＥＰ４アゴニストは、脳においても虚血−再灌流性障害に対して保護作用を有するので、脳出血、脳梗塞、クモ膜下出血等により生じる脳障害の予防および／または治療剤として有用であると考えられる(非特許文献８)。
ＥＰ４アゴニストは、肝においても虚血−再灌流性障害の予防および／または治療剤として有用であると考えられる(非特許文献９)。
ＥＰ４アゴニストは、眼圧下降作用を有し、緑内障の予防および／または治療剤として有用であると考えられる(非特許文献１０)。
ＥＰ４は腎糸球体に多く発現し、ＥＰ４アゴニストは、糸球体腎炎や糖尿病性腎炎の予防および／または治療にも有用であると考えられる（非特許文献１１）。
ＥＰ４は発毛および育毛作用にも関係しており、ＥＰ４アゴニストは、禿頭症、脱毛症等の予防および／または治療にも有用であると考えられる(非特許文献１２)。
ＥＰ４は子宮頚管の熟化にも関与しているため、ＥＰ４アゴニストは、子宮頚管熟化(促進）剤としても有用であると考えられる(非特許文献１３)。
ＥＰ４は、骨形成作用にも関係しており、ＥＰ４アゴニストは、骨粗鬆症の予防および／または治療剤として、骨折の治癒促進剤として有用であると考えられる(非特許文献１４及び１５)。
ＥＰ４は、血管に発現しており、ＥＰ４アゴニストは、血管を弛緩させ、血流増加に寄与するので、肺動脈性肺高血圧症、末梢動脈閉塞症（閉塞性動脈硬化症や閉塞性血栓血管炎）及び末梢循環障害に基づく種々の症状（腰部脊柱管狭窄症に伴う間歇性跛行・下肢しびれ、レイノー症候群、勃起不全、痔疾等）の予防および／または治療剤として有用であると考えられる（非特許文献１６−２０）。
ＥＰ４は、線維芽細胞に発現しており、ＥＰ４アゴニストは、塩基性線維芽細胞増殖因子の発現を促進し、褥創や創傷の治癒促進に有用であると考えられる（非特許文献２１）。
ＥＰ４は、蝸牛に発現し、ＥＰ４アゴニストは、音響が原因の難聴の予防および／または治療にも有用であると報告されている(非特許文献２２)。【０００６】
消化管の炎症は、口腔、食道、胃、小腸、大腸、肛門で認められ、急性的な炎症と慢性的な炎症がある。粘膜上皮が物理的または化学的な刺激や細菌またはウイルスの感染を受けると炎症が生じ、その程度によりびらんや潰瘍病変を生じる。ストレスによる過度の胃酸分泌は、胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍を生じる。また、アルコールの過剰摂取は、粘膜血流のうっ滞や胃運動の低下による胃酸の逆流を招き、胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍や食道炎を生じる。整形外科患者や関節リウマチ患者等では、非ステロイド性抗炎症剤の長期服薬により、薬剤性の胃潰瘍や十二指腸潰瘍が生じる。また、癌患者では放射線治療に付随して発症する放射性腸炎や抗癌剤治療に付随して発症する薬剤性腸炎が生じる。さらに、結核やアメーバ赤痢等の感染患者では、腸結核やアメーバ性大腸炎等の感染性胃腸炎が生じる。これら以外にも、血流障害に基づく虚血により生じる虚血性腸炎等もある。消化管の炎症性疾患の患者に免疫異常があると、原因を取り除いても、臓器の修復を妨げられ、病態を慢性化させる。これらの消化管の炎症性疾患のうち、炎症が腸管で生じるものは広義の炎症性腸疾患と言われる。【０００７】
一方、原因が明らかでない炎症性腸疾患もある。潰瘍性大腸炎とクローン病の二つが良く知られ、狭義の炎症性腸疾患である。さらに、類似した疾患である腸管ベーチェット病や単純性潰瘍もある。寛解と再燃を繰り返す難治性の慢性消化管疾患であり、病因の主体は、腸管上皮の防御力の低下、腸管組織に進入する腸内細菌に対する腸管免疫反応の異常によると考えられている。
潰瘍性大腸炎は、直腸から連続して大腸粘膜にびらん、潰瘍を形成する慢性の大腸疾患であり、その症状は、腹痛、下痢、粘血便、発熱等である。一方、クローン病は、口腔から大腸、肛門までのすべての消化管に病変が起こりうる。本症の特徴は、消化管の非連続性の縦走（縦長）潰瘍と敷石像であり、その症状は、腹痛、下痢、発熱や栄養の吸収障害による低栄養や貧血等である。【０００８】
消化管の炎症性疾患における炎症の予防及び/または治療は、原因が分かる場合、原因の除去や抑制を行う。例えば、胃炎、胃・十二指腸潰瘍等の炎症に対しては、胃酸分泌やその作用を抑制する目的で制酸剤、抗コリン剤、ヒスタミンＨ２受容体拮抗剤、プロトンポンプ阻害剤等が使われる。また、非ステロイド性抗炎症剤が原因の炎症には、その薬剤により産生が阻害されるＰＧＥ２を補う目的でＰＧＥ誘導体等が使われる。しかし、ＰＧＩ２誘導体が使われることはない。【０００９】
一方、狭義の炎症性腸疾患の予防または治療は、薬物療法、栄養（食事）療法、手術療法がある。薬物療法としては５−アミノサリチル酸製剤（ペンタサ、サラゾピリン）、ステロイド（プレドニゾロン）、免疫抑制剤（アザチオプリン、メルカプトプリン、及びタクロリムス）、抗ＴＮＦ−α抗体（インフリキシマブ）等が使われる。最近、ＥＰ４アゴニストが、炎症性腸疾患に有効であるという報告がなされている（非特許文献２３−２５）。
また、ＥＰ４は粘膜保護作用にも関係しており、ＥＰ４アゴニストは、胃潰瘍、十二指腸潰瘍等の消化管損傷や口内炎の予防および／または治療に有用であると考えられる(非特許文献２６)。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】ＤＥ２４０５２５５号明細書
【特許文献２】国際公開第０３／１０３６６４号パンフレット
【特許文献３】国際公開第００／２４７２７号パンフレット
【特許文献４】ＵＳ７４０２６０５号明細書
【特許文献５】特開平７−３３０７５２号公報
【特許文献６】特開２００４−２５６５４７号公報
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ｂｉｏｃｈｉｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ａｃｔａ, １４８３： ２８５−２９３（２０００）．
【非特許文献２】Ｂｒ． Ｊ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．, １２２： ２１７−２２４（１９９７）．
【非特許文献３】Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．, ２２： １３４０−１３４６（１９７９）．
【非特許文献４】Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ， ５３： ８３−９０（１９９７）．
【非特許文献５】Ｂｒ． Ｊ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．， １３４： ３１３−３２４（２００１）．
【非特許文献６】Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２８３： ９６９２−９７０３（２００８）．
【非特許文献７】Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ． Ｒｅｓ．， ８１： １２３−１３２（２００９）．
【非特許文献８】Ｎｅｕｒｏｓｃｉ． Ｌｅｔｔ．， ４３８： ２１０−２１５（２００８）．
【非特許文献９】Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ． Ｐｒｏｃ．， ３７： ４２２−４２４（２００５）．
【非特許文献１０】Ｅｘｐ． Ｅｙｅ Ｒｅｓ．， ８９： ６０８−６１７（２００９）．
【非特許文献１１】Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．， ７０： １０９９−１１０６（２００６）．
【非特許文献１２】Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｓ． Ｃｏｍｍｕｎ．， ２９０： ６９６−７００（２００２）．
【非特許文献１３】Ｂｉｏｌ． Ｒｅｐｒｏｄ．， ７５： ２９７−３０５（２００６）．
【非特許文献１４】Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ Ｓ Ａ．, ９９： ４５８０−４５８５（２００２）．
【非特許文献１５】Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔｉｇ Ｄｒｕｇｓ．， １８： ７４６−７６６（２００９）．
【非特許文献１６】Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ， ５０： ５２５−５３０（２００７）．
【非特許文献１７】Ｂｒ． Ｊ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．， １５４： １６３１−１６３９（２００８）．
【非特許文献１８】Ａｍ． Ｊ. Ｒｅｓｐｉｒ． Ｃｒｉｔ． Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．， １７８： １８８−１９６（２００８）．
【非特許文献１９】Ｓｐｉｎｅ， ３１： ８６９−８７２（２００６）．
【非特許文献２０】Ｂｒ． Ｊ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．， １３６： ２３−３０（２００２）．
【非特許文献２１】Ｋｏｂｅ Ｊ． Ｍｅｄ． Ｓｃｉ．， ４７： ３５−４５（２００１）．
【非特許文献２２】Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ, １６０： ８１３−８１９（２００９）．
【非特許文献２３】Ｊ. Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．, １０９： ８８３−８９３（２００２）．
【非特許文献２４】Ｓｃａｎｄ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．, ５６： ６６−７５（２００２）．
【非特許文献２５】Ｊ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． Ｅｘｐ． Ｔｈｅｒ．, ３２０： ２２−２８（２００７）．
【非特許文献２６】Ｗｏｒｌｄ Ｊ． Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．, １５： ５１４９−５１５６（２００９）．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明の課題は、新規なプロスタグランジンＩ２誘導体であって、代謝安定性に優れ、特定のプロスタグランジン受容体に選択的に結合する化合物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らは、上記課題を解決するために、フッ素原子の有する特殊な性質を付与した新規なＰＧ類を合成し、その物性や生理活性を明らかにすべく検討を行った。その結果、プロスタン酸骨格のＣ−１のカルボキシ基がテトラゾール基に置き換わり、２個のフッ素原子が結合した、新規な７，７−ジフルオロＰＧＩ２誘導体が、非常に優れた物性及び薬理作用を有すること、意外にも、ＰＧＩ２誘導体であるにもかかわらずＣ−１カルボン酸体で認められていたＩＰアゴニスト作用が極めて減弱した、選択的なＥＰ４アゴニスト作用を有すること、かかるアゴニスト作用により医薬として極めて優れた化合物であることを見いだし、本発明を完成した。選択的なＥＰ４アゴニストは、他の受容体を介する副作用を軽減した医薬の有効成分となりうる。
なお、本発明者らの知るところでは、ＰＧのＣ−１がテトラゾール基で、Ｃ−７に２個のフッ素原子を有するＰＧＩ２類については、その合成例、物性、生理活性等について、全く公表されていない。【００１４】
すなわち、本発明は、選択的なＥＰ４アゴニストである下記式（１）で表される７，７−ジフルオロＰＧＩ２誘導体（以下、本発明の化合物（１）と略記する場合がある）、その薬学的に許容できる塩、及び、それらを有効成分とする医薬を提供するものであり、【００１５】
〔１〕式（１）:【００１６】
【化１】
2011111714.tif 000003
【００１７】
（式中、Ｒ1およびＲ2は、それぞれ独立に、水素原子、または炭素数１〜３の直鎖アルキル基を示し、Ｒ3は、水素原子、炭素数１〜４のアルキル基、アルコキシアルキル基、アリール基、ハロゲン原子、またはハロゲン化アルキル基を示す）で表される化合物またはその薬学的に許容できる塩、
〔２〕Ｒ1がメチル基である〔１〕に記載の化合物、またはその薬学的に許容できる塩、
〔３〕Ｒ3がメチル基である〔１〕または〔２〕に記載の化合物、またはその薬学的に許容できる塩、
〔４〕Ｒ2が水素原子である〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載の化合物、またはその薬学的に許容できる塩、
〔５〕Ｒ1がメチル基であり、Ｒ2が水素原子である〔１〕〜〔４〕のいずれかに記載の化合物、またはその薬学的に許容できる塩、
〔６〕Ｒ3がｍ−メチル基である〔１〕〜〔５〕のいずれかに記載の化合物、またはその薬学的に許容できる塩、
〔７〕Ｒ1はメチル基であり、Ｒ2は水素原子であり、Ｒ3はメチル基である〔１〕に記載の化合物、またはその薬学的に許容できる塩、
〔８〕Ｒ1は水素原子であり、Ｒ2はメチル基であり、Ｒ3はメチル基である〔１〕に記載の化合物、またはその薬学的に許容できる塩、
〔９〕４−[(Ｚ)−(１Ｓ，５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ)−６−[(１Ｅ，３Ｒ，４ＲＳ)−３−ヒドロキシ−４−(ｍ−トリル)−１−ペンテニル]−７−ヒドロキシ−２−オキサ−４，４−ジフルオロ−ビシクロ[３．３．０]オクタン−３−イリデン]−１−（テトラゾール−５−イル）ブタン、またはその薬学的に許容できる塩、
〔１０〕４−[(Ｚ)−(１Ｓ，５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ)−６−[(１Ｅ，３Ｒ，４Ｒ)−３−ヒドロキシ−４−(ｍ−トリル)−１−ペンテニル]−７−ヒドロキシ−２−オキサ−４，４−ジフルオロ−ビシクロ[３．３．０]オクタン−３−イリデン]−１−（テトラゾール−５−イル）ブタン、またはその薬学的に許容できる塩、
〔１１〕４−[(Ｚ)−(１Ｓ，５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ)−６−[(１Ｅ，３Ｒ，４Ｓ)−３−ヒドロキシ−４−(ｍ−トリル)−１−ペンテニル]−７−ヒドロキシ−２−オキサ−４，４−ジフルオロ−ビシクロ[３．３．０]オクタン−３−イリデン]−１−（テトラゾール−５−イル）ブタン、またはその薬学的に許容できる塩、
〔１２〕〔１〕〜〔１１〕のいずれかに記載の化合物、またはその薬学的に許容できる塩を有効成分として含有する医薬、
〔１３〕〔１〕〜〔１１〕のいずれかに記載の化合物、またはその薬学的に許容できる塩を有効成分として含有する消化管疾患の予防または治療のための医薬、
〔１４〕消化管疾患が、消化管の炎症性疾患または消化管の潰瘍性疾患である、〔１３〕に記載の医薬、
〔１５〕消化管の炎症性疾患が、炎症性腸疾患である〔１４〕に記載の医薬、
〔１６〕炎症性腸疾患が、潰瘍性大腸炎またはクローン病である〔１５〕に記載の医薬、
〔１７〕炎症性腸疾患が、腸管ベーチェット病または単純性潰瘍である〔１５〕に記載の医薬、
〔１８〕消化管の潰瘍性疾患が、食道炎、食道潰瘍、胃炎、または胃潰瘍である〔１４〕に記載の医薬、
〔１９〕胃炎または胃潰瘍が、薬剤性の胃炎または胃潰瘍である〔１８〕に記載の医薬、
〔２０〕薬剤性の胃炎または胃潰瘍が、非ステロイド性抗炎症剤に起因する胃炎または胃潰瘍である〔１９〕に記載の医薬、
〔２１〕胃炎または胃潰瘍が、アルコールに起因する胃炎または胃潰瘍である〔１８〕に記載の医薬、
〔２２〕消化管の潰瘍性疾患が、小腸潰瘍である〔１４〕に記載の医薬、
〔２３〕小腸潰瘍が、薬剤性小腸潰瘍である〔２２〕に記載の医薬、
〔２４〕薬剤性小腸潰瘍が、非ステロイド性抗炎症剤に起因する小腸潰瘍である〔２３〕に記載の医薬、
〔２５〕小腸潰瘍が、アルコールに起因する小腸潰瘍である〔２２〕に記載の医薬、
〔２６〕〔１〕〜〔１１〕のいずれかに記載の化合物、またはその薬学的に許容できる塩からなるＥＰ４アゴニスト、
〔２７〕〔２６〕のＥＰ４アゴニストを有効成分として含有する医薬、
〔２８〕ＥＰ４の関与する疾患の予防または治療のための〔２７〕に記載の医薬、
〔２９〕選択的なＥＰ４アゴニスト作用により症状を緩和させることができる疾患の予防または治療のための〔２８〕に記載の医薬、
〔３０〕選択的なＥＰ４アゴニスト作用により症状を緩和させることができる疾患が、免疫疾患、循環器疾患、心疾患、呼吸器疾患、眼疾患、腎疾患、肝疾患、骨疾患、消化管疾患、神経疾患または皮膚疾患である、〔２９〕に記載の医薬、
〔３１〕免疫疾患が、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、シェーグレン症候群、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、臓器移植後の拒絶反応、関節炎、全身性炎症反応症候群、敗血症、血球貪食症候群、マクロファージ活性化症候群、スチル（Ｓｔｉｌｌ）病、川崎病、透析時の高サイトカイン血症、多臓器不全、ショックまたは乾癬である、〔３０〕に記載の医薬、
〔３２〕循環器疾患または心疾患が、動脈硬化症、狭心症、心筋梗塞、脳出血により生じる脳障害、脳梗塞により生じる脳障害、クモ膜下出血により生じる脳障害、肺動脈性肺高血圧症、末梢動脈閉塞症（閉塞性動脈硬化症や閉塞性血栓血管炎）または末梢循環障害に基づく種々の症状（腰部脊柱管狭窄症に伴う間歇性跛行・下肢しびれ、レイノー症候群、勃起不全、痔疾等）である、〔３０〕に記載の医薬、
〔３３〕呼吸器疾患が、喘息、肺傷害、肺線維症、肺気腫、気管支炎、または慢性閉塞性呼吸器疾患である、〔３０〕に記載の医薬、
〔３４〕眼疾患が、緑内障または高眼圧である、〔３０〕に記載の医薬、
〔３５〕腎疾患が、糸球体腎炎、糖尿病性腎症、ＩｇＡ腎症または虚血−再灌流性腎障害である、〔３０〕に記載の医薬、
〔３６〕肝疾患が、肝炎、肝障害または虚血−再灌流性肝障害である、〔３０〕に記載の医薬、
〔３７〕骨疾患が、骨粗鬆症、骨折または骨切り術後の回復期である、〔３０〕に記載の医薬、
〔３８〕神経疾患が、神経細胞死である、〔３０〕に記載の医薬、
〔３９〕皮膚疾患が、褥創や創傷である、〔３０〕に記載の医薬、
〔４０〕ＥＰ４の関与する疾患が、禿頭症、脱毛症、子宮頚管熟化不全、および難聴からなる群から選択される疾患である、〔２８〕に記載の医薬、に関する。
発明の効果【００１８】
本発明が提供する新規７，７−ジフルオロＰＧＩ２誘導体は、非経口投与または経口投与によって長時間血中濃度を維持し薬理作用を発揮し、炎症性腸疾患における消化管の炎症及び下痢・血便の発症を予防及び治療、胃炎、胃潰瘍や小腸潰瘍等における潰瘍を予防及び治療する医薬を提供することができる。さらに、ＥＰ４アゴニスト作用により、免疫疾患、循環器疾患、心疾患、呼吸器疾患、眼疾患、腎疾患、肝疾患、骨疾患、消化管疾患、神経疾患、皮膚疾患等を予防及び治療する医薬を提供することができる。本発明の化合物は、臨床においては、ＥＰ４アゴニストが奏効する疾患群に対して同様に薬効が期待されるとともに、ＩＰアゴニスト作用がもたらす循環器系への作用も弱まることによって、出血、低血圧、心悸亢進、顔面紅潮等の副作用の懸念が少ない。特に、本発明の化合物は、ＥＰ４アゴニスト作用に基づき、免疫が関与する消化管炎症、薬剤性消化管粘膜傷害、粘膜再生障害に基づく消化管傷害や治癒の遅延、眼疾患、腎疾患、及び肝疾患に対して有効である。具体的には、潰瘍性大腸炎、クローン病等の炎症性腸疾患、アルコール性胃炎・胃潰瘍や小腸潰瘍、腎炎、緑内障・高眼圧、肝炎等において有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１Ａ】マウス血圧に対する効果
【図１Ｂ】マウス心拍数に対する効果
【図２Ａ】マウス（ＢＡＬＢ/ｃ）ＤＳＳ大腸炎モデルにおける排便障害に対する効果
【図２Ｂ】マウス（ＢＡＬＢ/ｃ）ＤＳＳ大腸炎モデルにおける大腸短縮に対する効果
【図３Ａ】ＢＰＳのマウス（Ｃ５７ＢＬ/６）ＤＳＳ大腸炎モデルにおける排便障害に対する効果
【図３Ｂ】マウス（Ｃ５７ＢＬ/６）ＤＳＳ大腸炎モデルにおける排便障害に対する効果
【図３Ｃ】ＢＰＳのマウス（Ｃ５７ＢＬ/６）ＤＳＳ大腸炎モデルにおける大腸短縮に対する効果
【図３Ｄ】マウス（Ｃ５７ＢＬ/６）ＤＳＳ大腸炎モデルにおける大腸短縮に対する効果
【図４Ａ】ラットＤＳＳ大腸炎モデルにおける排便障害に対する効果
【図４Ｂ】ラットＤＳＳ大腸炎モデルにおける大腸短縮に対する効果
【図４Ｃ】ラットＤＳＳ大腸炎モデルにおける大腸組織傷害に対する効果
【図５】マウスＤＳＳ大腸炎の寛解／再燃モデルにおける排便障害に対する効果
【図６Ａ】マウスＴ細胞移入腸炎モデルにおける軟便スコアに対する効果
【図６Ｂ】マウスＴ細胞移入腸炎モデルにおける便潜血スコアに対する効果
【図６Ｃ】マウスＴ細胞移入腸炎モデルにおける体重減少スコアに対する効果
【図６Ｄ】マウスＴ細胞移入腸炎モデルにおけるＤＡＩスコアに対する効果
【図７】ラットエタノール誘発胃粘膜傷害モデルにおける胃潰瘍に対する効果
【図８】ラットインドメタシン誘発小腸傷害モデルにおける小腸潰瘍に対する効果
【図９Ａ】ラット抗Ｔｈｙ−１抗体誘発糸球体腎炎モデルにおける尿量に対する効果
【図９Ｂ】ラット抗Ｔｈｙ−１抗体誘発糸球体腎炎モデルにおける尿蛋白量に対する効果
【図９Ｃ】ラット抗Ｔｈｙ−１抗体誘発糸球体腎炎モデルにおける腎臓相対重量に対する効果
【図９Ｄ】ラット抗Ｔｈｙ−１抗体誘発糸球体腎炎モデルにおける腎病理組織（糸球体総細胞数）に対する効果
【図９Ｅ】ラット抗Ｔｈｙ−１抗体誘発糸球体腎炎モデルにおける腎病理組織（メサンギウム領域）に対する効果
【図９Ｆ】ラット抗Ｔｈｙ−１抗体誘発糸球体腎炎モデルにおける腎病理組織（糸球体ＰＣＮＡ陽性細胞数）に対する効果
【図１０】ウサギ眼圧に対する効果
【図１１】マウスコンカナバリンＡ誘発肝炎モデルにおける予防効果
【発明を実施するための形態】
【００２０】
（定義）
本明細書における「選択的なＥＰ４アゴニスト」とは、ＰＧＩ２類において通常みられるＰＧＩ２受容体（ＩＰ）に対するアゴニスト作用（薬理活性）が弱く、ＰＧＥ２受容体サブタイプＥＰ４に対するアゴニスト作用がＩＰアゴニスト作用と比較して顕著に優位となった化合物を意味する。ＥＰ４アゴニスト作用は、後述する実施例１９に記載のアゴニスト活性の測定方法に従って測定することができる。ＩＰアゴニスト作用は、実施例２０に記載の方法に従って測定することができる。化合物が選択的なＥＰ４アゴニストであるか否かは、実施例１８に記載の測定方法に従って、同一種のＥＰ４とＩＰで結合阻害定数Ｋｉ値の比（ＩＰ／ＥＰ４比）を求めることによって評価することができる。選択的なＥＰ４アゴニストとしては、前記比が５以上、好ましくは１０以上、より好ましくは５０以上、最も好ましくは１００以上の化合物が例示される。
【００２１】
本明細書における「プロスタグランジンＩ２誘導体」とは、天然型ＰＧＩ２の構造に基づいて、有機化学分野における通常の技術を用いてその構造が修飾された化合物を意味する。以下、本発明の化合物について説明する。
【００２２】
（本発明の化合物の定義）
本明細書における化合物の命名において、ＰＧ骨格における位置を示すために用いる数字は、プロスタン酸骨格の数字に対応する数字を用いる。本明細書において、アルキル基の水素原子が置換された基を、置換アルキル基とも記す。他の基においても同様である。
また、アルキル基等の有機基が「低級」とはその炭素数が１〜６であることをいう。なお、「低級」有機基の炭素数は１〜４が好ましい。
【００２３】
「アルキル基」は、直鎖であっても分岐であってもよい。アルキル基は特に記載しないかぎり炭素数が１〜６である低級アルキル基が好ましく、炭素数１〜４の低級アルキル基が特に好ましい。アルキル基の例としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチル基、またはヘキシル基等が挙げられる。
【００２４】
「アルコキシ基」は、炭素数が１〜６である低級アルコキシ基が好ましく、炭素数１〜４のアルコキシ基が特に好ましい。アルコキシ基は直鎖であっても分岐であってもよい。アルコキシ基の例としては、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、またはブトキシ基等が挙げられる。
【００２５】
「アルコキシアルキル基」は、アルコキシ基で置換されたアルキル基をいう。アルコキシアルキル基のアルコキシ基は炭素数１〜４の低級アルコキシ基が好ましく、アルコキシアルキル基のアルキル基は炭素数１〜４の低級アルキル基が好ましい。アルコキシアルキル基は低級アルコキシアルキル基であること（すなわち、アルコキシアルキル基全体の炭素数は１〜６）が好ましく、炭素数１〜４の低級アルコキシアルキル基であることがより好ましい。アルコキシアルキル基の例としては、メトキシメチル基、エトキシメチル基、プロポキシメチル基、エトキシエチル基等が挙げられる。
【００２６】
「アリール基」とは、置換基を有していてもよい１価の芳香族炭化水素基をいう。置換基を有しないアリール基としてはフェニル基が好ましい。
「置換アリール基」（置換基を有するアリール基をいう）としては、アリール基中の水素原子の１個以上が、低級アルキル基、ハロゲン原子、ハロゲン化（低級アルキル）基、または低級アルコキシ基等で置換された基が好ましい。置換アリール基としては置換フェニル基が好ましく、特にモノハロフェニル基（例えば、クロロフェニル基、フルオロフェニル基、ブロモフェニル基等）、（ハロゲン化低級アルキル）置換フェニル基（例えば、トリフルオロメチルフェニル基等）、または（低級アルコキシ）フェニル基（例えば、メトキシフェニル基、エトキシフェニル基等）が挙げられる。
【００２７】
「ハロゲン原子」とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子をいう。
「ハロゲン化アルキル基」とは、アルキル基中の水素原子の１個以上がハロゲン原子で置換された基をいい、炭素数が１〜６である低級ハロゲン化アルキル基が好ましい。ハロゲン化アルキル基の例としては、フルオロメチル基、ジフルオロメチル基、トリフルオロメチル基、トリフルオロエチル基、ペンタフルオロエチル基、クロロメチル基、またはブロモメチル基等が挙げられる。
【００２８】
本発明の化合物（１）としては、薬理活性や物性の観点より以下の化合物が好ましい。
すなわち、Ｒ1、Ｒ2は、それぞれ独立に水素原子または炭素数１〜３の直鎖アルキル基であり、それぞれ独立に水素原子またはメチル基が好ましい。特にＲ1、Ｒ2の一方が水素原子で他方がメチル基であることが好ましい。
Ｒ3は、水素原子、炭素数１〜４のアルキル基、アルコキシアルキル基、アリール基、ハロゲン原子、またはハロゲン化アルキル基であり、さらに水素原子、炭素数１〜４のアルキル基、メトキシメチル基等の低級アルコキシアルキル基、塩素原子、フッ素原子等のハロゲン原子、または低級フルオロアルキル基等の低級ハロゲン化アルキル基が好ましい。特に、水素原子、炭素数１〜４のアルキル基、塩素原子または炭素数１〜４のハロゲン化アルキル基が好ましい。なお、炭素数１〜４のアルキル基としては、メチル基とエチル基が好ましく、炭素数１〜４のハロゲン化アルキル基としてはトリフルオロメチル基が好ましい。
なお、Ｒ3としては、水素原子、メチル基、トリフルオロメチル基が最も好ましい。
加えて、Ｒ3はプロスタグランジン骨格の主鎖がベンゼン環に置換している位置に対して、オルト（ｏ）、メタ（ｍ）、あるいはパラ（ｐ）のいずれの位置に置換していてもよい。Ｒ3は特にメタ（ｍ）位に置換していることが好ましい。
【００２９】
（本発明の好ましい化合物の態様）
加えて、本発明の化合物（１）における好ましいＲ1，Ｒ2及びＲ3の組み合わせは、以下の通りである。
Ｒ1は水素原子であり、Ｒ2は水素原子であり、Ｒ3は水素原子である。
Ｒ1は水素原子であり、Ｒ2は水素原子であり、Ｒ3はメチル基である。
Ｒ1は水素原子であり、Ｒ2は水素原子であり、Ｒ3は塩素原子である。
Ｒ1は水素原子であり、Ｒ2は水素原子であり、Ｒ3はトリフルオロメチル基である。
Ｒ1はメチル基であり、Ｒ2は水素原子であり、Ｒ3は水素原子である。
Ｒ1はメチル基であり、Ｒ2は水素原子であり、Ｒ3はメチル基である。
Ｒ1はメチル基であり、Ｒ2は水素原子であり、Ｒ3は塩素原子である。
Ｒ1はメチル基であり、Ｒ2は水素原子であり、Ｒ3はトリフルオロメチル基である。
Ｒ1は水素原子であり、Ｒ2はメチル基であり、Ｒ3は水素原子である。
Ｒ1は水素原子であり、Ｒ2はメチル基であり、Ｒ3はメチル基である。
Ｒ1は水素原子であり、Ｒ2はメチル基であり、Ｒ3は塩素原子である。
Ｒ1は水素原子であり、Ｒ2はメチル基であり、Ｒ3はトリフルオロメチル基である。
Ｒ1はメチル基であり、Ｒ2はメチル基であり、Ｒ3は水素原子である。
Ｒ1はメチル基であり、Ｒ2はメチル基であり、Ｒ3はメチル基である。
Ｒ1はメチル基であり、Ｒ2はメチル基であり、Ｒ3は塩素原子である。
Ｒ1はメチル基であり、Ｒ2はメチル基であり、Ｒ3はトリフルオロメチル基である。
さらに、上記の中でも好ましい組み合わせは、選択的ＥＰ４アゴニスト作用が高いという観点から、以下の通りである。
Ｒ1はメチル基であり、Ｒ2は水素原子であり、Ｒ3はメチル基である。
Ｒ1は水素原子であり、Ｒ2はメチル基であり、Ｒ3はメチル基である。
さらに、最も好ましい組み合わせは、以下の通りである。
Ｒ1はメチル基であり、Ｒ2は水素原子であり、Ｒ3はｍ−メチル基である。
Ｒ1は水素原子であり、Ｒ2はメチル基であり、Ｒ3はｍ−メチル基である。
【００３０】
（本発明の化合物（１）の製造方法）
本発明の化合物（１）は、例えば、本発明者らの発明に係わる特開平０７−３２４０８１号公報や特開平０８−２１７７７２号公報に記載の方法を基にして製造できる。例えば、コーリーラクトンを出発原料として、ω鎖をまず導入したのち、フッ素化により、ω鎖付ジフルオロコーリーラクトンに変換する。次いで、末端にテトラゾール基を有する有機金属反応剤の付加反応と脱水反応、あるいは、末端にテトラゾール基を有するホスホニウム塩を用いるウィティッヒ反応、等によりα鎖ユニットを導入し、所望により水酸基の脱保護を行うことにより、合成することができる。
【００３１】
または、コーリーラクトンを出発原料として、フッ素化によりジフルオロコーリーラクトンとしたのち、まず末端にテトラゾール基を有する有機金属反応剤の付加反応と脱水反応、あるいは、末端にテトラゾール基を有するホスホニウム塩を用いるウィティッヒ反応等によりα鎖ユニットを導入し、次にω鎖を導入して所望により水酸基の脱保護を行うことにより合成することができる。
または、特開平０７−３２４０８１号公報に記載のカルボン酸誘導体からカルボキシ基をシアノ基に変換したのちテトラゾール誘導体に変換することによっても合成することができる。
【００３２】
これらの製造法の中で代表的な方法を以下の化学式を用いて具体的に説明する。
【００３３】
【化２】
2011111714.tif 000004
【００３４】
例えば、コーリーラクトン（７）を出発原料としてω鎖をまず導入したのち、得られたω鎖付コーリーラクトン類（６）にフッ素化反応を行ってカルボニル基のα位にフッ素原子２個を有するω鎖付ジフルオロコーリーラクトン類（３）を製造し、次いで、このジフルオロラクトン類（３）にホスホラン類（４）を反応させてα鎖ユニットを導入することにより、水酸基が保護されたＰＧＩ２誘導体（２）が得られる。そして、水酸基の保護基を脱保護して本発明の化合物（１）が得られる。
なお、ホスホラン類（４）はホスホニウム塩類（５）より得られる。
【００３５】
Ｒ1〜Ｒ3が特定の置換基である場合を除き、上記ラクトン類（６）は公知の化合物である。Ｒ1〜Ｒ3が特定の置換基である新規な上記ラクトン類（６）は、公知のラクトン類（６）と同様の方法で製造できる。例えば、３−アリール−２−オキソアルキルホスホン酸ジエステルを、ホルミル基を有するコーリーラクトンと反応させて新規なラクトン類（６）を製造できる。ここでアルキルホスホン酸のアルキル鎖は炭素数３以上である。
Ｒ4、Ｒ5及びＲ7はそれぞれ独立に水酸基の保護基である。Ｒ4、Ｒ5、及びＲ7は同一の保護基であってもよい。保護基としては、例えば「新実験化学講座１４、有機化合物の合成と反応（Ｖ）」（丸善）、「プロテクティブ／グループス／イン／オーガニック／シンセシス」（Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ著、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ）等に記載の水酸基の保護基を用いることができる。具体的には、トリオルガノシリル基、アルコキシアルキル基、環状エーテル構造を有する１価基等が挙げられる。トリオルガノシリル基としては、アルキル基、アリール基、アルアルキル基、またはアルコキシ基がケイ素原子に３個結合した基が好ましく、特に低級アルキル基またはアリール基がケイ素原子に３個結合した基が好ましい。保護基の具体例としては、テトラヒドロピラニル基、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル基、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル基、トリエチルシリル基、トリフェニルシリル基、またはトリイソプロピルシリル基等が好ましい。特にテトラヒドロピラニル基、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル基、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル基等が好ましい。
【００３６】
水酸基の保護基は、容易に脱保護できる。保護された水酸基の脱保護の方法は、常法が採用できる。例えば、「新実験化学講座１４  有機化合物の合成と反応（Ｉ）、（ＩＩ）、（Ｖ）」（丸善）、「プロテクティブ／グループス／イン／オーガニック／シンセシス」（Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ著、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ）等に記載の方法が採用できる。
【００３７】
ラクトン類（６）にフッ素化反応を行ってジフルオロラクトン類（３）とするには、種々の公知のフッ素化法が適用できる。例えば、種々の求電子的フッ素化剤を用い不活性溶媒中で反応させる方法が採用される。本発明者らの発明に係わる特開平０７−３２４０８１号公報や特開平０９−１１０７２９号公報に記載の方法によってもフッ素化できる。
ラクトン類（６）のフッ素化反応では、求電子的フッ素化剤を使用するのが好ましい。求電子的フッ素化剤としては、公知または周知の求電子的フッ素化剤を使用できる。例えば、北爪智也、石原孝、田口武夫著「フッ素の化学」（講談社サイエンティフィック）等に記載される求電子的フッ素化剤が挙げられる。具体的には、Ｎ−フルオロスルホンアミド類、Ｎ−スルホンイミド類、アセチルハイポフルオライト、フッ素ガス等が挙げられる。
【００３８】
求電子的フッ素化剤は、不活性溶媒の存在下で用いるのが好ましい。不活性溶媒としては、エーテル系溶媒、炭化水素系溶媒、極性溶媒またはこれらの混合溶媒等が挙げられる。
フッ素化反応で得られたジフルオロラクトン類（３）は、次にホスホラン類（４）と反応させて水酸基が保護されたＰＧＩ２誘導体（２）とする。ホスホラン類（４）は、対応するホスホニウム塩類（５）より、不活性溶媒中、塩基の存在下に製造され、生成したホスホラン類（４）は、単離せずにそのままジフルオロラクトン類（３）とのウィッティヒ反応に用いるのが好ましい。ホスホラン類（４）及びホスホニウム塩類（５）の製造方法は、ＤＥ２２４２２３９号明細書、ＤＥ２４０５２５５号明細書等に記載の方法等を採用できる。ホスホラン類（４）やホスホニウム塩類（５）におけるＲ6としては、フェニル基、トリル基等のアリール基が好ましく、フェニル基が特に好ましい。不活性溶媒としては、エーテル系溶媒、炭化水素系溶媒、極性溶媒、水系溶媒、アルコール系溶媒、またはこれらの混合溶媒等が挙げられる。
【００３９】
以上の方法で得た水酸基が保護されたＰＧＩ２誘導体（２）の水酸基の保護基を脱保護することにより、化合物（１）を得る。
なお、本発明の化合物（１）はその構造中に不斉炭素を有するため、各種の立体異性体、光学異性体が存在するが、本発明においては、これらすべての立体異性体、光学異性体、及びそれらの混合物を包含する。
本発明の化合物（１）の具体例としては、下記式（８）で表される化合物が挙げられる。
【００４０】
【化３】
2011111714.tif 000005
【００４１】
（本発明の化合物（１）の例）
また、式（８）においてＲ1、Ｒ2、及びＲ3が下記表１に示す構造である化合物が挙げられる。
【００４２】
【表１】
2011111714.tif 000006
【００４３】
（本発明の化合物（１）の特性）
本発明の化合物（１）は、生体内において代謝を受けにくく、安定性が向上したＰＧＩ２誘導体である。ＰＧ骨格のカルボキシ基がテトラゾール基に変換されているため、ＰＧ等の脂肪酸の一般的な代謝経路として知られているβ酸化による代謝を受けにくい。このため、ＰＧ骨格にカルボキシ基を有する化合物に比べて、血中半減期が長く、有効血中濃度を長く維持することができる。また、このように代謝的な安定性が向上していることにより、薬物のバイオアベイラビリティーを改善することができる。
本発明の化合物（１）またはその薬学的に許容できる塩は、選択的なＥＰ４アゴニストとしての作用を示す。該作用を示す好ましい化合物（１）の例は、前記の化合物（１）の好ましい例と同じである。
【００４４】
（本発明の化合物（１）またはその薬学的に許容できる塩を有効成分とする医薬）
本発明の医薬は、化合物（１）及び／又は薬学的に許容される化合物（１）の塩を含み、さらに薬剤として許容される担体、及び場合によっては他の治療成分も含めてもよい。
加えて、本発明の医薬は、化合物（１）及び／又は薬学的に許容される化合物（１）の塩、またはそれらの水和物を含み、さらに薬剤として許容される担体、及び場合によっては他の治療成分も含めてもよい。
【００４５】
本発明の予防・治療剤を患者に投与する場合、１日の投与量は患者の年齢、体重、病態及び重症度等により異なるが、通常は０．０００１〜１０ｍｇを、好ましくは０．０１〜１ｍｇを１乃至数回に分けて投与することが望ましい。例えば、経口投与では、０．００１〜３ｍｇが好ましく、特に０．００１〜０．５ｍｇが好ましい。静脈内投与では、０．０００１〜１ｍｇが好ましく、特に０．００１〜０．１ｍｇが好ましい。投与量は疾患や病態によって適宜増減することができる。また、投与形態は、注射剤の場合は点滴持続投与を行うことが望ましい場合もある。
【００４６】
医薬として使用する場合、経口的投与、及び非経口的投与（例えば、血管（静脈、動脈）内投与、皮下投与、直腸内投与等）によって生体内に投与することができる。投与形態としては、例えば、錠剤、カプセル剤、シロップ剤等の経口投与形態、溶液、乳剤、懸濁剤等の液状の注射剤、点滴剤、坐薬、点鼻剤、貼付剤、吸入剤等の非経口投与形態が例示される。特に経口的に投与されることが望ましい。
【００４７】
前記投与形態の製剤は、本発明の化合物（１）またはその薬学的に許容できる塩に、通常の担体、賦形剤、結合剤、安定化剤等の製剤上必要な添加剤を配合し、常法によって製剤化することにより製造できる。例えば、製剤が粉末、顆粒、錠剤等の場合、固形製剤を製造するのに好適な任意の製薬担体、例えば、賦形剤、滑沢剤、崩壊剤、結合剤等を用いて製造することができる。
これらの賦形剤は例えば、不活性希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウム、またはリン酸ナトリウム；グラニュール化剤及び崩壊剤、例えば、コーンスターチ、またはアルギン酸；結合剤、例えば、デンプン、ゼラチンまたはアラビアゴム、及び潤滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクであってもよい。これらの錠剤は、コーティングされていなくてもよく、またはこれらは、胃腸管における崩壊及び吸収を遅らせ、これによってより長時間にわたって持続作用を与えるために、公知技術によってコーティングされてもよい。例えば、時間遅延材料、例えば、グリセリルモノステアレート、またはグリセリルジステアレートが用いられてもよい。
【００４８】
また、本発明の化合物（１）が、不活性固体希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、またはカオリンと混合されているハードゼラチンカプセルであってもよい。あるいは、水混和性溶媒、例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール及びエタノール、または油媒質、例えば、ピーナッツオイル、液体パラフィン、またはオリーブ油と混合されているソフトゼラチンカプセルとして提供されてもよい。
【００４９】
また、製剤がシロップや液剤の場合、例えば、安定化剤、懸濁化剤、矯味剤、芳香剤等を適宜に選択して製造することができる。注射剤を製造するには、有効成分を塩酸、水酸化ナトリウム、乳糖、乳酸ナトリウム、酢酸、リン酸一水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム等のｐＨ調整剤、塩化ナトリウム、ブドウ糖等の等張化剤とともに注射用蒸留水に溶解し、無菌的に調製する。プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油、エタノール、ポリソルベート８０等の不活性な非水性の希釈剤を用いて調製してもよい。さらにマンニトール、デキストリン、シクロデキストリン、ゼラチン等を加えて、真空凍結乾燥し、用時溶解用注射剤としてもよい。また、安定化及び病巣到達性を改善するため公知の方法により、リポソーム製剤、脂肪乳剤を調製して注射剤として用いることもできる。
【００５０】
また、カカオ脂、脂肪酸のトリグリセリド、脂肪酸のジグリセリド、脂肪酸のモノグリセリド、ポリエチレングリコール等の坐剤用基剤を用いて直腸内投与製剤を調製してもよい。さらにポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、グリセリン、グリセロゼラチン等の水溶性基剤、白色ワセリン、ハードファット、パラフィン、流動パラフィン、プラスチベース、ラノリン、精製ラノリン等の油性基剤等を用いて適当な粘度に調製し直腸内注入軟膏を調製することもできる。
【００５１】
本発明の化合物（１）またはその薬学的に許容できる塩は局所的に皮膚または粘膜に、すなわち経皮または経粘膜投与することができる。この目的のための通常の剤型として、ゲル、ハイドロゲル、ローション、溶液、クリーム、軟膏、散布剤、ドレシング剤、泡製剤、フィルム剤、スキンパッチ、オブラート、インプラント、スポンジ、繊維、バンデージ、及びマイクロエマルジョン等が挙げられる。通常の担体としては、アルコール、水、鉱物油、流動パラフィン、白色ワセリン、グリセリン、ポリエチレングリコール及びプロピレングリコール等が挙げられる。
【００５２】
前述の投与形態のいずれかにおいて使用するため、その溶解度、溶解速度、バイオアベイラビリティー及び安定性を改善するために、本発明の化合物（１）は、シクロデキストリン及びその適切な誘導体またはポリエチレングリコール含有ポリマー等の可溶性高分子単位と混合することができる。例えば、薬物−シクロデキストリン複合体等は、一般的に大半の剤型及び投与経路に有用であることが確認されている。包接及び非包接複合体のいずれも使用することができる。薬物との直接の複合体化の別法として、シクロデキストリンを補助的添加剤、すなわち担体、賦形剤または可溶化剤として用いることもできる。これらの目的のために、α−、β−及びγ−シクロデキストリン等が一般的に使用される。
【００５３】
（本発明の化合物（１）の薬学的に許容できる塩）
本発明の化合物（１）の薬学的に許容できる塩は、該誘導体のテトラゾール基部分と塩基性物質の塩であり、テトラゾール基の水素原子が陽イオンに置換された化合物である。
この陽イオンとしては、例えば、Ｎａ＋、Ｋ＋等のアルカリ金属カチオン、１／２Ｃａ２＋、１／２Ｍｇ２＋、１／２Ｚｎ２＋、１／３Ａｌ３＋等のアルカリ金属以外の金属カチオン、ＮＨ４＋、及びトリエタノールアミン、ジエタノールアミン、エタノールアミン、トロメタミン、リジン、アルギニン等の有機アミンやアミノ酸のアンモニウムカチオン等がある。好ましい陽イオンはナトリウムイオンとカリウムイオンである。
【００５４】
より詳しくは、許容できる塩とは、無機塩基及び有機塩基を含む薬剤として許容される無毒の塩基から調製した塩を指す。薬学的に許容される無毒無機塩基由来の塩としては、前記ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、亜鉛塩、アルミニウム塩、アンモニウム塩等の他、リチウム塩、銅塩、第二鉄塩、第一鉄塩、第二マンガン塩、第一マンガン塩等の塩も挙げられる。これらのうち、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩及びアンモニウム塩が好ましく、ナトリウム塩及びカリウム塩が特に好ましい。薬学的に許容される無毒有機塩基由来の塩には、第１級、第２級、及び第３級アミン、自然に存在する置換アミンを含む置換アミン、環状アミン、及び塩基性イオン交換樹脂の塩が含まれる。前記した有機アミンやアミノ酸の具体例以外としては、例えば、イソプロピルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリメチルアミン、トリプロピルアミン、エチレンジアミン、Ｎ，Ｎ'−ジベンジルエチレンジアミン、２−ジエチルアミノエタノール、２−ジメチルアミノエタノール、モルホリン、Ｎ−エチル−モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、Ｎ−エチルピペリジン、ベタイン、カフェイン、コリン、グルカミン、グルコサミン、ヒスチジン、ヒドラブアミン、メチルグルカミン、ポリアミン樹脂、プロカイン、プリン、テオブロミン等が挙げられる。
【００５５】
（本発明の化合物（１）またはその薬学的に許容できる塩を有効成分とする医薬の用途）
本発明の化合物（１）またはその薬学的に許容できる塩を有効成分とする医薬は、ＥＰ４の関与する疾患、好ましくは選択的なＥＰ４アゴニスト作用によりその症状を緩和させることができる疾患に適用することができる。具体的には、免疫疾患、消化管疾患、循環器疾患、心疾患、呼吸器疾患、神経疾患、眼疾患、腎疾患、肝疾患、骨疾患、皮膚疾患等に対して有用である。
【００５６】
本発明における免疫疾患とは、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、シェーグレン症候群、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス等の自己免疫疾患、臓器移植後の拒絶反応等、喘息、神経細胞死、関節炎、肺傷害、肺線維症、肺気腫、気管支炎、慢性閉塞性呼吸器疾患、肝障害、急性肝炎、腎炎(急性腎炎、慢性腎炎)、腎不全、全身性炎症反応症候群、敗血症、血球貪食症候群、マクロファージ活性化症候群、スチル（Ｓｔｉｌｌ）病、川崎病、熱傷、全身性肉芽腫、透析時の高サイトカイン血症、多臓器不全、ショック、乾癬等の炎症性疾患を含む。
【００５７】
本発明における消化管疾患とは、物理的刺激、胃液等の化学的刺激、非ステロイド性抗炎症剤やステロイド等の薬物性刺激、原因が不明な免疫疾患や自己免疫疾患、精神疾患等が原因で消化管の上皮、粘膜、下部組織が炎症や潰瘍、粘膜上皮の異常増殖、機能障害を有する疾患であり、消化管の炎症性疾患及び潰瘍性疾患を含む。
【００５８】
該消化管の炎症性疾患は、炎症性腸疾患、特に潰瘍性大腸炎、線維化あるいは潰瘍を伴う非特異性の肉芽腫性炎症性疾患であるクローン病、腸管ベーチェット病または単純性潰瘍を含む。また、本発明における該消化管の潰瘍性疾患は、口腔炎、口腔アフタ、食道炎、食道潰瘍、胃炎、胃潰瘍、小腸潰瘍を含む。
【００５９】
さらに、胃炎、胃潰瘍は、薬剤性の胃炎、胃潰瘍、アルコールに起因する胃炎、胃潰瘍を含み、該薬剤性の胃炎、胃潰瘍は非ステロイド性抗炎症剤に起因する胃炎・胃潰瘍を含む。
【００６０】
また、小腸潰瘍は、薬剤性の小腸潰瘍、アルコールに起因する小腸潰瘍を含み、該薬剤性の小腸潰瘍は非ステロイド性抗炎症剤に起因する小腸潰瘍を含む。
特に、本発明の医薬は、潰瘍性大腸炎、クローン病、胃炎・胃潰瘍、小腸潰瘍の予防または治療のための医薬として有用である。
【００６１】
循環器疾患および心疾患は、動脈硬化症、狭心症、心筋梗塞、脳出血により生じる脳障害、脳梗塞により生じる脳障害、クモ膜下出血により生じる脳障害、肺動脈性肺高血圧症、末梢動脈閉塞症（閉塞性動脈硬化症や閉塞性血栓血管炎）及び末梢循環障害に基づく種々の症状（腰部脊柱管狭窄症に伴う間歇性跛行・下肢しびれ、レイノー症候群、勃起不全、痔疾等）を含む。
【００６２】
呼吸器疾患は、喘息、肺傷害、肺線維症、肺気腫、気管支炎、慢性閉塞性呼吸器疾患を含む。
【００６３】
神経疾患は、神経細胞死、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、脳障害（脳出血、脳梗塞、およびクモ膜下出血により生じる脳障害）を含む。
【００６４】
眼疾患は、緑内障、高眼圧を含む。
【００６５】
腎疾患は、糸球体腎炎、糖尿病性腎症、ＩｇＡ腎症、虚血−再灌流性腎障害を含む。
【００６６】
肝疾患は、肝炎、肝障害、虚血−再灌流性肝障害を含む。
【００６７】
骨疾患は、骨粗鬆症、骨折、骨切り術後の回復期を含む。
【００６８】
皮膚疾患は、褥創や創傷を含む。
さらに、本発明の化合物（１）またはその薬学的に許容できる塩を有効成分とする医薬は、脱毛症、禿頭症、または難聴（例、音響が原因の難聴）の予防および／または治療剤、あるいは子宮頚管熟化（促進）剤としても有用である。
【００６９】
以下に具体例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらの例に限定されない。
【実施例１】
【００７０】
(２Ｒ)−２−(ｍ−トリル)プロピオン酸メチルエステルの合成
(２Ｒ)−２−(ｍ−トリル)プロピオン酸１２．４５ｇにメタノール１４．８３ｇ、濃硫酸６．４６ｇを加え，還流下で６時間撹拌した。続いて、１０％炭酸ナトリウム水溶液で中和し、ヘキサンで抽出した。さらに、硫酸マグネシウムで乾燥後，減圧濃縮して標題化合物１２．７９ｇを得た。なお、構造特性は以下の通りである。【００７１】
1H-NMR(CDCl3)：δ 1.49(d, J=7.0 Hz, 3H), 2.33(s, 3H), 3.64(s, 3H), 3.69(dd, J=14.4, 7.3 Hz, 1H), 7.06-7.22(m, 4H)．
【実施例２】
【００７２】
(３Ｒ)−２−オキソ−３−(ｍ−トリル)ブチルホスホン酸ジメチルの合成
メチルホスホン酸ジメチルエステル１．９７ｇにテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）２５ｍＬを加え、−７８℃に冷却後にｎ−ブチルリチウム（１．５Ｍヘキサン溶液）１０ｍＬを加え、１時間攪拌した。次に、実施例１で合成したメチルエステル｛(２Ｒ)−２−(ｍ−トリル)プロピオン酸メチルエステル｝１．３４ｇのＴＨＦ（３．８ｍＬ）溶液を−７８℃で加え、２時間攪拌した。２５ｍＬ飽和重曹水で反応を停止し、酢酸エチルで抽出した。さらに、硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル  ５：１〜１：５）で精製して、標題化合物１．６３ｇを得た。なお、構造特性は以下の通りである。【００７３】
1H-NMR(CDCl3)：δ 1.39(d, J=6.7 Hz, 3H), 2.34(s, 3H), 2.84(ddd, J=22.3,14.1,0.6 Hz, 1H), 3.18(dd, J=22.3, 14.1 Hz, 1H), 3.76(dd, J=19.3, 11.1 Hz, 6H), 4.00(dd, J=13.8, 7.0 Hz, 1H), 7.01-7.24(m, 4H)．
【実施例３】
【００７４】
(１Ｓ，５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ)−６−[(１Ｅ，４Ｒ)−３−オキソ−４−(ｍ−トリル)−１−ペンテニル]−７−ベンゾイルオキシ−２−オキサビシクロ[３．３．０]オクタン−３−オンの合成
水素化ナトリウム（５５％）８．７５ｇを１，２−ジメトキシエタン（ＤＭＥ）３００ｍＬに分散させ氷冷し、そこに実施例２で合成したホスホナート｛(３Ｒ)−２−オキソ−３−(ｍ−トリル)ブチルホスホン酸ジメチル｝５４．７ｇのＤＭＥ（５０ｍＬ）溶液を加え、１時間攪拌した。上記の溶液に(１Ｓ，５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ)−６−ホルミル−７−ベンゾイルオキシ−２−オキサビシクロ[３．３．０]オクタン−３−オン５０．０ｇのＤＭＥ（４００ｍＬ）溶液を加え、１時間攪拌した後、３５０ｍＬの１０％食塩水で反応を停止し、酢酸エチルで抽出した。さらに、硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。濃縮した粗生成物をｔ−ブチルメチルエーテルから再結晶して、標題化合物６４．７ｇを得た。なお、構造特性は以下の通りである。【００７５】
1H-NMR(CDCl3)：δ 1.39(d, J=7.0 Hz, 3H), 2.20-2.28(m, 1H), 2.30(s, 3H), 2.34-2.41(m, 1H), 2.49-2.57(m, 1H), 2.76-2.85(m, 3H), 3.80(q, J=7.0 Hz, 1H), 5.03(t, J=5.3 Hz, 1H), 5.23(q, J=5.3 Hz, 1H),6.19(d, J=15.5 Hz, 1H), 6.69(dd, J=15.6,7.6 Hz, 1H), 6.94-7.19(m, 4H), 7.42-7.95(m, 5H)．
【実施例４】
【００７６】
(１Ｓ，５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ)−６−[(１Ｅ，３Ｒ，４Ｒ)−３−ヒドロキシ−４−(ｍ−トリル)−１−ペンテニル]−７−ベンゾイルオキシ−２−オキサビシクロ[３．３．０]オクタン−３−オンの合成
実施例３で合成したエノン｛(１Ｓ，５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ)−６−[(１Ｅ，４Ｒ)−３−オキソ−４−(ｍ−トリル)−１−ペンテニル]−７−ベンゾイルオキシ−２−オキサビシクロ[３．３．０]オクタン−３−オン｝１４７．０ｇのＴＨＦ（１４８０ｍＬ）溶液を−４０℃まで冷却し、（−）−Ｂ−クロロジイソピノカンフェイルボラン（１．７Ｍヘキサン溶液）７２１ｍＬを加えた後、氷冷下で２０時間攪拌した。アセトン１８３ｍＬを加え３時間攪拌した後に、重曹水を加え、ｔ−ブチルメチルエーテルで抽出した。そして、硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、粗製の標題化合物６４９．９ｇを得た。
【実施例５】
【００７７】
(１Ｓ，５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ)−６−[(１Ｅ，３Ｒ，４Ｒ)−３−ヒドロキシ−４−（ｍ−トリル）−１−ペンテニル]−７−ヒドロキシ−２−オキサビシクロ[３．３．０]オクタン−３−オンの合成
実施例４で合成した粗製アルコール、｛(１Ｓ，５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ)−６−[(１Ｅ，３Ｒ，４Ｒ)−３−ヒドロキシ−４−(ｍ−トリル)−１−ペンテニル]−７−ベンゾイルオキシ−２−オキサビシクロ[３．３．０]オクタン−３−オン｝６４９．９ｇをメタノール７４０ｍＬに溶解し、炭酸カリウム１１６．３ｇを加え、室温で１７時間撹拌した。酢酸でｐＨを７にした後にメタノールを留去し、水を加え、酢酸エチルで抽出した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＝４／１〜０／１）で精製し、標題化合物２２．３ｇを得た。なお、構造特性は以下の通りである。【００７８】
1H-NMR(CDCl3)：δ 1.33(d, J=7.0 Hz, 3H), 1.70(s, 1H(OH)), 1.86(ddd, J=11.3, 7.8, 3.2 Hz, 1H), 2.07(d, J=4.4 Hz, 1H(OH)), 2.13-2.23(m, 2H), 2.34(s, 3H), 2.35-2.44(m, 3H), 2.47(d, J=3.8 Hz, 1H), 2.56(dd, J=18.2, 9.7 Hz, 1H), 2.80(q, J=7.0 Hz, 1H), 3.79-3.85(m, 1H), 4.12-4.16(m, 1H), 4.81(dt, J=7.0, 3.2 Hz, 1H), 5.27(ddd, J=15.7, 8.5, 0.6 Hz, 1H), 5.50(dd, J=15.2, 6.8 Hz, 1H), 6.94-7.20(m, 4H)．
【実施例６】
【００７９】
(１Ｓ，５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ)−６−[(１Ｅ，３Ｒ，４Ｒ)−３−ｔ−ブチルジメチルシロキシ−４−(ｍ−トリル)−１−ペンテニル]−７−ｔ−ブチルジメチルシロキシ−２−オキサビシクロ[３．３．０]オクタン−３−オンの合成
実施例５で合成したジオール、｛(１Ｓ，５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ)−６−[(１Ｅ，３Ｒ，４Ｒ)−３−ヒドロキシ−４−(ｍ−トリル)−１−ペンテニル]−７−ヒドロキシ−２−オキサビシクロ[３．３．０]オクタン−３−オン｝９８８ｍｇのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（１０ｍＬ）溶液に室温でｔ−ブチルジメチルシリルクロリド１．１７ｇ、イミダゾール１．０８ｇを加え、２時間半撹拌した。反応液を飽和重曹水に注ぎ、ヘキサン／酢酸エチル＝２／１混合物で抽出した。硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル  ２０：１〜１０：１）で精製して、標題化合物１．５６ｇを得た。なお、構造特性は以下の通りである。【００８０】
1H-NMR(CDCl3)：δ-0.09(d, J=6.4 Hz, 6H), 0.02(d, J=2.4 Hz, 6H), 0.86(s, 9H), 0.89(s, 9H), 1.27(d, J=7.0 Hz, 3H), 1.86-1.92(m, 1H), 1.96-2.02(m, 1H), 2.32(s, 3H), 2.31-2.47(m, 3H), 2.62-2.73(m, 2H), 3.82(q, J=4.7 Hz, 1H), 4.05(t, J=6.4 Hz, 1H), 4.86(dt, J=8.0, 2.4 Hz, 1H), 5.16(dd, J=15.5, 7.4 Hz,1H), 5.30(dd, J=15.7, 6.3 Hz, 1H), 6.90-7.16(m, 4H)．
【実施例７】
【００８１】
(１Ｓ，５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ)−６−[(１Ｅ，３Ｒ，４Ｒ)−３−ｔ−ブチルジメチルシロキシ−４−(ｍ−トリル)−１−ペンテニル]−７−ｔ−ブチルジメチルシロキシ−２−オキサ−４，４−ジフルオロ−ビシクロ[３．３．０]オクタン−３−オンの合成
臭化マンガン１．４８ｇ、Ｎ−フルオロベンゼンスルホンイミド２．４８ｇにテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）１９ｍＬを加え３０分攪拌した後、−７８℃に冷却した。実施例６で合成したラクトン、｛(１Ｓ，５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ）−６−[(１Ｅ，３Ｒ，４Ｒ)−３−ｔ−ブチルジメチルシロキシ−４−(ｍ−トリル)−１−ペンテニル]−７−ｔ−ブチルジメチルシロキシ−２−オキサビシクロ[３．３．０]オクタン−３−オン｝０．５ｇのＴＨＦ（５ｍＬ）溶液を加え、その後カリウムビス（トリメチルシリル）アミドのトルエン溶液（０．５Ｍ、１３ｍＬ）を加えて３時間半かけて０℃まで昇温させた。反応液を飽和重曹水に注ぎ、ヘキサン／酢酸エチル＝１／１混合物で抽出した。硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル  ２０：１）で精製して、標題化合物０．３２ｇを得た。なお、構造特性は以下の通りである。【００８２】
1H-NMR(CDCl3)：δ-0.08-0.03(m, 12H), 0.82(s, 9H), 0.89(s, 9H),1.28(d, J=7.0 Hz, 3H),1.70-1.77(m, 1H), 1.96-2.04(m, 1H), 2.31(s, 3H), 2.60-2.91(m, 3H), 3.82-3.87(m, 1H), 3.99-4.23(m, 1H), 5.00(t, J=6.4 Hz, 1H), 5.06(dd, J=15.7, 7.8 Hz, 1H), 5.33(ddd, J=15.9, 6.7, 1.2 Hz, 1H), 6.88-7.16(m, 4H)．
19F-NMR(CDCl3)：-113.1(d, J=279.3 Hz),-91.0(dd, J=279.3, 25.9 Hz)．
【実施例８】
【００８３】
４−[(Ｚ)−(１Ｓ，５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ)−６−[(１Ｅ，３Ｒ，４Ｒ)−３−ｔ−ブチルジメチルシロキシ−４−(ｍ−トリル)−１−ペンテニル]−７−ｔ−ブチルジメチルシロキシ−２−オキサ−４，４−ジフルオロ−ビシクロ[３．３．０]オクタン−３−イリデン]−１−（テトラゾール−５−イル）ブタンの合成
４−(テトラゾール−５−イル)ブチルトリフェニルホスホニウム  ブロミド１４．０ｇのトルエン（３９０ｍＬ）懸濁液に、カリウムビス（トリメチルシリル）アミドのトルエン溶液（０．５Ｍ、１２０ｍＬ）を加え、６０℃で１時間撹拌した。実施例７で合成したジフルオロラクトン、｛(１Ｓ，５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ)−６−[(１Ｅ，３Ｒ，４Ｒ)−３−ｔ−ブチルジメチルシロキシ−４−(ｍ−トリル)−１−ペンテニル]−７−ｔ−ブチルジメチルシロキシ−２−オキサ−４，４−ジフルオロ−ビシクロ[３．３．０]オクタン−３−オン｝４．３２ｇのトルエン（１３０ｍＬ）溶液を−１０℃で加え、室温まで昇温させながら１８時間撹拌した。重曹水を加えて反応を停止し、ヘキサン／酢酸エチル＝１／１混合物で抽出した。硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＝５／１〜０／１）で精製し、標題化合物４．１ｇを得た。なお、構造特性は以下の通りである。【００８４】
1H-NMR(CDCl3)：δ-0.14-0.01(m, 12H), 0.82(s, 9H), 0.89(s, 9H), 1.23-1.27(m, 3H), 1.82-2.09(m, 5H), 2.21-2.28(m, 1H), 2.31(s, 3H), 2.45-2.53(m, 1H), 2.64-2.73(m, 2H), 2.93-2.97(m, 2H), 3.90(dd, J=11.7, 5.3Hz, 1H), 4.08-4.09(m, 1H), 4.84-4.87(m, 2H), 5.27(dd, J=15.5, 7.8 Hz, 1H), 5.44(dd, J=15.6, 6.2 Hz, 1H), 6.92-7.16(m, 4H).
19F-NMR(CDCl3): -112.3(d, J=253.4 Hz),-81.4(dd, J=253.4, 18.7 Hz).
【実施例９】
【００８５】
４−[(Ｚ)−(１Ｓ，５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ)−６−[(１Ｅ，３Ｒ，４Ｒ)−３−ヒドロキシ−４−(ｍ−トリル)−１−ペンテニル]−７−ヒドロキシ−２−オキサ−４，４−ジフルオロ−ビシクロ[３．３．０]オクタン−３−イリデン]−１−（テトラゾール−５−イル）ブタンの合成
実施例８で合成した化合物４．１ｇにＴＨＦ８１ｍＬ、水８１ｍＬ、酢酸２４４ｍＬを加え、３５℃で４６時間攪拌した。水５００ｍＬを加えクロロホルムで抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＝１／５〜０／１）で精製し、ジエチルエーテルで再結晶を行い、標題化合物１．１ｇを得た。なお、構造特性は以下の通りである。【００８６】
1H-NMR(CD3OD)：δ 1.30(d, J=7.0 Hz, 3H), 1.69(dddd, J=14.6, 7.6, 3.0, 2.6 Hz, 1H), 1.82-1.95(m, 2H), 2.10-2.16(m, 2H), 2.29(s, 3H), 2.31-2.41(m, 2H), 2.48-2.56(m, 1H), 2.72(q, J=7.0 Hz, 1H), 2.93(t, J=7.6 Hz, 2H), 3.78(q, J=7.6 Hz, 1H), 4.04-4.10(m, 1H), 4.69(dt, J=6.48, 2.96 Hz, 1H), 4.79(dt, J=7.6, 5.0 Hz, 1H), 5.36-5.46(m, 2H), 6.95-7.13(m, 4H)．
19F-NMR(CD3OD)：-116.6(d, J=250.5 Hz), -84.8(ddd, J=251.9, 17.3, 14.4 Hz).
【実施例１０】
【００８７】
２−オキソ−３−(ｍ−トリル)ブチルホスホン酸ジメチルの合成
ラセミ体の２−(ｍ−トリル)プロピオン酸を用いて実施例１〜２の方法と同様にして表題の化合物を合成した。なお、構造特性は以下の通りである。【００８８】
1H-NMR(CDCl3)：δ 1.39(d, J=7.2 Hz, 3H), 2.34(s, 3H), 2.83(dd, J=22.4, 14.4 Hz, 1H), 3.18(dd, J=22.4, 14.0 Hz, 1H), 3.76(dd, J=19.6, 11.2 Hz, 6H), 3.99(dd, J=14.0, 6.8Hz, 1H), 7.01-7.27(m, 4H)．
【実施例１１】
【００８９】
（１Ｓ，５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ）−６−[(１Ｅ，３Ｒ，４ＲＳ)−３−ｔ−ブチルジメチルシロキシ−４−(ｍ−トリル)−１−ペンテニル]−７−ｔ−ブチルジメチルシロキシ−２−オキサビシクロ[３．３．０]オクタン−３−オンの合成
ラセミ体の２−オキソ−３−(ｍ−トリル)ブチルホスホン酸ジメチルを用い実施例３〜６の方法と同様にして表題の化合物を合成した。なお、構造特性は以下の通りである。【００９０】
1H-NMR(CDCl3)：δ -0.20-0.10(m, 12H), 0.80-0.90(m, 18H), 1.18-1.28(m, 3H), 1.85-2.20(m, 2H), 2.31(s, 3H), 2.30-2.80(m, 5H), 3.80-4.15(m, 2H), 4.81-4.95(m, 1H), 5.12-5.42(m, 2H), 6.88-7.20(m, 4H)．
【実施例１２】
【００９１】
(１Ｓ，５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ)−６−[(１Ｅ，３Ｒ，４ＲＳ)−３−ｔ−ブチルジメチルシロキシ−４−(ｍ−トリル)−１−ペンテニル]−７−ｔ−ブチルジメチルシロキシ−２−オキサ−４，４−ジフルオロ−ビシクロ[３．３．０]オクタン−３−オンの合成
実施例１１で合成した(１Ｓ，５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ)−６−[(１Ｅ，３Ｒ，４ＲＳ)−３−ｔ−ブチルジメチルシロキシ−４−(ｍ−トリル)−１−ペンテニル]−７−ｔ−ブチルジメチルシロキシ−２−オキサビシクロ[３．３．０]オクタン−３−オンを用いて実施例７の方法と同様にして表題の化合物を合成した。なお、構造特性は以下の通りである。【００９２】
1H-NMR(CDCl3)：δ -0.20-0.05(m, 12H), 0.80-0.90(m, 18H), 1.19-1.29(m, 3H), 1.70-2.10(m, 2H), 2.31(s, 3H), 2.60-3.05(m, 3H), 3.84-4.12(m, 2H), 4.95-5.50(m, 3H), 6.85-7.20(m, 4H).
19F-NMR(CDCl3)：-113.6 - -112.8(m), -91.7 - -90.6(m).
【実施例１３】
【００９３】
４−[(Ｚ)−(１Ｓ，５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ)−６−[(１Ｅ，３Ｒ，４ＲＳ)−３−ｔ−ブチルジメチルシロキシ−４−(ｍ−トリル)−１−ペンテニル]−７−ｔ−ブチルジメチルシロキシ−２−オキサ−４，４−ジフルオロ−ビシクロ[３．３．０]オクタン−３−イリデン]−１−（テトラゾール−５−イル）ブタンの合成
実施例１２で合成した(１Ｓ，５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ)−６−[(１Ｅ，３Ｒ，４ＲＳ)−３−ｔ−ブチルジメチルシロキシ−４−(ｍ−トリル)−１−ペンテニル]−７−ｔ−ブチルジメチルシロキシ−２−オキサ−４，４−ジフルオロ−ビシクロ[３．３．０]オクタン−３−オンを用いて実施例８の方法と同様にして表題の化合物を合成した。なお、構造特性は以下の通りである。【００９４】
1H-NMR(CDCl3)：δ -0.15-0.05(m, 12H), 0.80-0.89(m, 18H), 1.20-1.28(m, 3H), 1.80-3.05(m, 14H), 3.90-4.15(m, 2H), 4.85-4.95(m, 2H), 5.23-5.58(m, 2H), 6.90-7.20(m, 4H)．
19F-NMR(CDCl3)：-113.0 - -111.3(m), -82.0 - -80.7(m).
【実施例１４】
【００９５】
４−[(Ｚ)−(１Ｓ，５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ)−６−[(１Ｅ，３Ｒ，４ＲＳ)−３−ヒドロキシ−４−(ｍ−トリル)−１−ペンテニル]−７−ヒドロキシ−２−オキサ−４，４−ジフルオロ−ビシクロ[３．３．０]オクタン−３−イリデン]−１−（テトラゾール−５−イル）ブタンの合成
実施例１３で合成した４−[(Ｚ)−(１Ｓ，５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ)−６−[(１Ｅ，３Ｒ，４ＲＳ)−３−ｔ−ブチルジメチルシロキシ−４−(ｍ−トリル)−１−ペンテニル]−７−ｔ−ブチルジメチルシロキシ−２−オキサ−４，４−ジフルオロ−ビシクロ[３．３．０]オクタン−３−イリデン]−１−（テトラゾール−５−イル）ブタンを用いて実施例９の方法と同様にして表題の化合物を合成した。なお、構造特性は以下の通りである。【００９６】
1H-NMR(CDCl3)：δ 1.15-1.35(m, 3H), 1.80-3.00(m, 11H), 2.29(s, 3H), 4.05-4.20(m, 2H), 4.75-4.85(m, 2H), 5.35-5.70(m, 2H), 6.95-7.25(m, 4H).
19F-NMR(CDCl3): -114.5 - -112.7(m), -83.5 - -81.8(m).
【実施例１５】
【００９７】
５−[(Ｚ)−(１Ｓ，５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ)−６−[(１Ｅ，３Ｒ，４ＲＳ)−３−ヒドロキシ−４−(ｍ−トリル)−１−ペンテニル]−７−ヒドロキシ−２−オキサ−４，４−ジフルオロ−ビシクロ[３．３．０]オクタン−３−イリデン]ペンタン酸（カルボン酸体）の合成
実施例１２で合成した(１Ｓ，５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ)−６−[(１Ｅ，３Ｒ，４ＲＳ)−３−ｔ−ブチルジメチルシロキシ−４−(ｍ−トリル)−１−ペンテニル]−７−ｔ−ブチルジメチルシロキシ−２−オキサ−４，４−ジフルオロ−ビシクロ[３．３．０]オクタン−３−オンと（４−カルボキシブチル）トリフェニルホスホニウムブロミドから、実施例８〜９と同様にして表題の化合物を合成した。なお、構造特性は以下の通りである。【００９８】
1H-NMR(CD3OD)：δ 1.17-1.30(m, 3H), 1.63-2.79(m, 11H), 2.29(s, 3H), 3.75-4.12(m, 2H), 4.66-4.85(m, 2H), 5.40-5.58(m, 2H), 6.95-7.15(m, 4H).  19F-NMR(CD3OD): -118.3 - -117.7(d, J=250.4Hz), -86.1 - -85.3(m).
【実施例１６】
【００９９】
本発明の化合物のインビトロ代謝的安定性
表１記載の本発明の化合物Ｆと化合物Ｊの混合物（Ｆ：Ｊ＝５２：４１、実施例１４で合成）、化合物Ｆと化合物ＪのＣ−１のテトラゾール基がカルボン酸に置換された化合物の混合物（カルボン酸体と呼ぶ、Ｆ：Ｊ＝５４：３４、実施例１５で合成）を試験した。
まず、ラット肝臓より下記文献Ａに準じてミトコンドリア画分を調製した。下記文献Ｂ、Ｃに記載のＹＡＭＡＧＵＣＨＩらの方法を参考にＮＡＤＰＨ非依存型β酸化の反応を検討した。反応は、３７℃で３０分間とし、適当な内部標準物質を加えたメタノール溶液で停止させた。各化合物は、高分解能液体クロマトグラフ質量分析装置（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）を用いて内部標準法で定量した。化合物Ｆ、Ｊ及びそれぞれのカルボン酸体のラットミトコンドリア画分における代謝反応後の化合物残存率を下記表２に３回実施の平均±標準偏差で示した。【０１００】
【表２】
2011111714.tif 000007
【０１０１】
上記表２で明らかなように本発明で代表される化合物Ｆや化合物Ｊは、ミトコンドリア画分でのβ酸化を受けないことが示された。【０１０２】
文献
Ａ）社団法人日本生化学会編集、生化学実験講座１２ エネルギー代謝と生体酸化（上），東京化学同人，ｐ．２１７−２１８，第１版第２刷，１９７９年７月１１日発行.
Ｂ）Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ Ａｎｄ Ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ  ２３(１１)： １１９５−１２０１（１９９５）．
Ｃ）Ｘｅｎｏｂｉｏｔｉｃａ ２６（６）: ６１３−６２６（１９９６）.
【実施例１７】
【０１０３】
ラット静脈内投与後の血中薬物動態
本発明の化合物のインビボでの代謝的安定性を確認する為に、ラットに静脈内投与し血中薬物動態を評価した。６週齡の雄性ラット（体重１６０〜１８０ｇ）を１週間馴化し、健康と判断された動物を使用した。表１記載の本発明の化合物Ｆと化合物Ｊの混合物（Ｆ：Ｊ＝５２：４１）、化合物Ｆと化合物Ｊのカルボン酸体（Ｆ：Ｊ＝５４：３４）、化合物Ｆ（実施例９で合成）を少量のエタノールで溶解し、さらに生理食塩液を添加し、被験化合物溶液を調製した。その被験化合物溶液を軽いエーテル麻酔を施した非絶食ラットに大腿静脈から１ｍＬ／ｋｇで瞬時静脈内投与した。投与後５、１５、３０、４５、６０、９０及び１２０分に尾静脈より静脈血を採取した。ヘパリンを混合し、遠心分離（３０００ｒｐｍ, ４℃, １５分）で血漿を得た。血漿中化合物濃度は、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳを用いた内部標準法により測定した。本分析法の定量範囲は０．１〜１００ｎｇ／ｍＬであった。得られた化合物濃度を薬物動態解析ソフトウエアＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（ｖｅｒ.３．３）で個体ごとに非モデル解析し、各群３匹の平均±標準偏差を得た。消失相におけるみかけの半減期（ｔ１／２）を、下記表３に示す。【０１０４】
【表３】
2011111714.tif 000008
【０１０５】
上記表３から明らかなように、本発明の化合物Ｆや化合物Ｊのｔ１／２は、約１〜２時間であり、カルボン酸体の１０分未満に比べて大きく延長し、優れた代謝安定性を示した。
【実施例１８】
【０１０６】
受容体結合性
本発明の化合物ＦとＪのＰＧ受容体結合性を評価した。化合物Ｆは、実施例９で合成したものを使用し、化合物Ｊは、実施例１４で合成したものをカラムで分離精製し、調製した(以降の実施例でも同じ調製物を使用した)。ＣＯＳ−７細胞にマウスＥＰ４、ヒトＥＰ１−４及びヒトＩＰの遺伝子を導入し、受容体を強制発現させ、細胞膜を回収した。標識リガンドとして、ＥＰにおいてトリチウム標識ＰＧＥ２を、ＩＰにおいてはトリチウム標識イロプロストを使用した。常法に従い、解離定数Ｋｄ値を得た後、各被験化合物の結合阻害定数Ｋｉ値を求めた。比較対照として、ＥＰにおいてＰＧＥ２を、ＩＰにおいてベラプロストナトリウム（ＢＰＳ）を使用した。
その結果、解離定数は文献値に近似した。表４に示すようにＰＧＥ２はＥＰ１−４に同等に結合し、これらのＥＰサブタイプに対する選択性はなかった。ＢＰＳはＩＰに選択的に結合した。化合物ＦとＪは、マウス及びヒトＥＰ４に結合した。化合物ＦのヒトＥＰ４結合性は、ヒトＥＰ１、ＥＰ２及びＥＰ３受容体よりも６０倍以上強く結合し、さらにＩＰと比べると１００倍以上強かった。化合物ＪのヒトＥＰ４への結合性は、ヒトＩＰへの結合性に比べて、４０倍強かった。【０１０７】
【表４】
2011111714.tif 000009
【実施例１９】
【０１０８】
アゴニスト活性
本発明の化合物Ｆと化合物ＪのＥＰ４アゴニスト活性を常法に従い評価した。簡潔に述べると、ＣＯＳ−７細胞にヒトＥＰ４の遺伝子とＣＲＥ−ＬＵＣレポーター遺伝子を導入し、１日後に、被験化合物を添加し、３時間インキュベーションした。細胞を洗浄し、発光基質を加え、発光強度を測定して、アゴニスト活性とした。比較対照として、ＰＧＥ２を使用し、その最大活性を１００％とし、５０％の作用を示す濃度（ＥＣ５０）を算出し、被験化合物のアゴニスト活性効果を比べた。
その結果、表５に示すように化合物ＦとＪは、ＥＰ４アゴニストであった。【０１０９】
【表５】
2011111714.tif 000010
【実施例２０】
【０１１０】
血小板凝集における抑制効果
化合物Ｆ及びＪ、並びにそれぞれのカルボン酸体の血小板凝集における抑制効果を評価した。カルボン酸体は、実施例１５で合成したものをカラムで分離精製し、調製した。健常人３名からクエン酸ナトリウムを抗凝固剤として血液を採取し、多血小板血漿を調製した。多血小板血漿を生理食塩液あるいは被験化合物で処理して、２分後にアデノシン２リン酸（ＡＤＰ、終濃度１０μｍｏｌ／Ｌ）で血小板凝集を惹起し、血小板凝集能測定装置(比濁法)で記録した。生理食塩液処理群の最大凝集率を１００％として、それを５０％抑制する被験化合物の濃度（ＩＣ５０）を算出し、抑制効果を調べた。
その結果、表６に示すとおりに化合物ＦやＪは、ＩＰアゴニストであるＢＰＳやカルボン酸体に比べ、凝集抑制効果がかなり弱かった。【０１１１】
【表６】
2011111714.tif 000011
【実施例２１】
【０１１２】
マウスの血圧および心拍数に及ぼす影響
ＩＣＲマウス、雄性、５週齢（日本エスエルシー）を購入し、６日間馴化飼育した後に試験に使用した。処置および測定は、イソフルラン吸入麻酔下（麻酔導入２．５％、麻酔維持１．８−２．１％）で、体温コントローラー（ＡＴＣ−４０２、ユニークメディカル）を用いて体温を３７℃に保ちながら行った。左大腿静脈にカテーテルを挿入して薬物投与経路とし、右大腿動脈にカテーテルを挿入し、圧トランスデューサーに接続して循環動態の各パラメーターを記録した。化合物Ｆ、化合物Ｆのカルボン酸体及びＢＰＳを０．０１ｍｇ／５ｍＬ／ｋｇの用量で静脈内投与し、平均血圧および心拍数に及ぼす影響を循環動態解析ソフト（フラクレット、大日本住友製薬）で評価した。対照群には溶媒（１．２％エタノール溶液）を５ｍＬ／ｋｇで同様に静脈内投与した。結果は薬物投与前後での各パラメーターの変化率で示した。各群３〜６匹の動物を使用し、結果は平均±標準偏差で表現した。
その結果、溶媒は、平均血圧に変化を与えなかったが、化合物Ｆのカルボン酸体及びＢＰＳは、投与１分後に顕著に血圧を低下させ、その最大低下率はそれぞれ４５％及び３８％であった（図１Ａ）。この血圧低下は１０分後に回復したが、心拍数は上昇傾向を示し、１０分後でも高値であった（図１Ｂ）。一方、化合物Ｆによる最大低下率は１６．２％であったが、有意ではなかった（図１Ａ）。また、化合物Ｆは、心拍数にほんど影響を与えなかった（図１Ｂ）。このように化合物Ｆの血圧及び心拍数への影響は、カルボン酸体やＩＰアゴニストであるＢＰＳに比べて、極めて弱かった。
【実施例２２】
【０１１３】
炎症性サイトカイン産生に対する抑制効果
ヒト末梢血を用いて化合物Ｆ及びＪの抗炎症効果をインビトロで検討した。健常人３名から血液を採取し、ＣＤ４陽性Ｔ細胞を調製した。抗ＣＤ３抗体と抗ＣＤ２８抗体を添加し２４時間後に培地中に遊離したＩＬ−２及びＴＮＦ−α量をＥＬＩＳＡで測定した。また、採取した全血を培地で希釈し、インドメタシン処理して内因性ＰＧＥ２の産生を抑制した上で、リポポリサッカライドを添加し、４８時間後に培地中に遊離したＩＰ−１０量をＥＬＩＳＡで測定した。いずれの場合も被験化合物は、刺激３０分前に添加した。溶媒対照群の産生量を１００％として、それを５０％抑制する濃度をＩＣ５０とした。
その結果、表７に示すようにＰＧＥ２と化合物Ｆは、極めて低濃度で炎症性サイトカインＩＬ−２、ＴＮＦ−α及びＩＰ−１０の産生を強く抑制した。化合物Ｊは、化合物Ｆに比べて弱いものの、同じくサイトカイン産生を抑制した。いずれの化合物もＥＰ４結合活性やＥＰ４アゴニスト活性を反映している。
以上のように化合物Ｆを始めとする本発明の化合物は、ＰＧＩ２誘導体であるにもかかわらずＣ−１カルボン酸体で認められていたＩＰアゴニスト活性が極めて減弱した、ＥＰ４選択的なアゴニストである。本発明の化合物は、臨床においては、ＥＰ４アゴニストが奏効する疾患群に対して同様に薬効が期待される。対照的に、当該化合物は、ＩＰアゴニスト作用がもたらす循環器系への作用も弱まることによって、出血、低血圧、心悸亢進、顔面紅潮等の副作用の懸念が少ない。例えば、炎症性腸疾患は、腸管出血を伴う疾患であり、ＩＰアゴニスト作用を減弱させることは重要である。化合物Ｆを用いて、炎症性腸疾患を始め種々の病態モデルでの本発明の化合物の薬効を検討した。【０１１４】
【表７】
2011111714.tif 000012
【実施例２３】
【０１１５】
マウスデキストラン硫酸ナトリウム誘発大腸炎モデルに対する予防効果
化合物Ｆの潰瘍性大腸炎に対する予防効果をデキストラン硫酸ナトリウム誘発大腸炎モデルで検討した。本モデルは、大腸に限局した炎症をもたらし、下痢や血便を誘発させ、臨床的な潰瘍性大腸炎と酷似した病態である（参照：文献Ｄ、Ｅ）。【０１１６】
ＢＡＬＢ／ｃ系マウス、雌性、６週齢（日本エスエルシー）を購入し、１週間馴化飼育した後、試験に使用した。正常群を除いて、２．２ｗ／ｖ％に調製したデキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳと略す。ＭＰ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ, Ｍ．Ｗ．３６，０００−５０，０００， Ｌｏｔ  Ｎｏ．３４３９Ｊ）溶液を９日間自由飲水させることにより大腸炎を誘発した。化合物Ｆを、０．１、０．３及び１ｍｇ／ｋｇの用量で、ＤＳＳ飲水開始日（０日目）から剖検日（９日目）の前日まで連日１日１回、経口投与した。対照群には、溶媒（１ｖｏｌ％エタノール液）を１０ｍＬ／ｋｇで同様に経口投与した。
マウスの便は、糞の水分量とその形状が相関することが予備的検討で分かった。そこで、下痢の度合いを示すために、便を６段階、すなわち、正常（０点）、球状の糞が５割以上（１点）、バナナ状の糞が５割未満（２点）、バナナ状の糞が５割以上（３点）、泥状便（４点）、水様便（６点）で評点した（軟便スコア）。便潜血（出血を含む）スコアは、便潜血スライド５シオノギII（塩野義製薬）を用いて、その程度を６段階、すなわち、陰性（スライドの色が黄色から全く変化しない、０点）、弱陽性（わずかに青緑色、１点）、陽性（青緑色、２点）、中等度陽性（はっきりした青緑色、３点）、強陽性（発色試薬で瞬時に濃青色、４点）、肛門出血（５点）で評点した。軟便スコアと潜血スコアの合計値を排便障害スコアとした。各群８〜１０匹の動物を使用し、結果は平均±標準偏差で表現した。剖検日にエーテル麻酔下で開腹し、採血後に放血致死させ、盲腸直下から肛門までを摘出して長さを測定した。【０１１７】
その結果、体重はいずれの群も差はなく終始、緩やかに増加した。対照群はＤＳＳ飲水開始４日目以降、明らかな軟便及び潜血便を示した。剖検日（９日目）の大腸の長さは、正常群に比して明らかな短縮を示した。化合物Ｆは、排便障害スコアの上昇に対して用量依存的な抑制効果を示し、０．１ｍｇ／ｋｇで抑制傾向にあり、０．３及び１ｍｇ／ｋｇで有意であった（図２Ａ）。また、大腸短縮に対しても同様に用量依存的な抑制効果を認めた（図２Ｂ）。このように、化合物Ｆは、明確に潰瘍性大腸炎の発症を予防した。【０１１８】
文献
Ｄ）Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ． ６９（２）：２３８−２４９（１９９３）．
Ｅ）Ｉｎｆｌａｍｍ．Ｒｅｓ． ４５（４）：１８１−１９１（１９９６）．
【実施例２４】
【０１１９】
マウスデキストラン硫酸ナトリウム誘発大腸炎モデルにおけるＩＰアゴニストの効果
ＩＰアゴニストが本病態モデルに効果を有するかどうかを、選択的なＩＰアゴニストであるＢＰＳで検討してみた。
Ｃ５７ＢＬ／６系マウス、雌性、６週齢（日本エスエルシー）を購入し、１週間馴化飼育した後、試験に使用した。正常群を除いて、３あるいは２ｗ／ｖ％ＤＳＳ（ＭＰ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ、それぞれＬｏｔ  Ｎｏ．５６５３Ｈ及び５４６４Ｈ）溶液を１週間自由飲水させることにより大腸炎を誘発した。ＢＰＳを０．３ｍｇ／ｋｇの用量で、化合物Ｆを０．３及び１ｍｇ／ｋｇの用量で、ＤＳＳ飲水開始日（０日目）から剖検前日まで連日１日１回、経口投与した。対照群には、溶媒（１ｖｏｌ％エタノール液）を１０ｍＬ／ｋｇで同様に経口投与した。便の硬さを正常（０点）、一部軟便（１点）、軟便（２点）、下痢（４点）で評価し、血便を正常（０点）、一部血便（１点）、血便（２点）、血便に加えて肛門出血（４点）で評価し、その合計値（最大８点）を求め、排便障害スコアとした。さらに、実施例２３と同様に大腸の長さも測定した。各群６〜１０匹の動物を使用し、結果は平均±標準偏差で表現した。
その結果、ＩＰアゴニストであるＢＰＳは、排便障害スコアに無効どころか悪化させる傾向を示し、大腸短縮にも効果を示さなかった（図３Ａ、３Ｃ）。しかし、化合物Ｆは、実施例２３と同様に大腸炎の発症に対して優れた予防効果を示した（図３Ｂ、３Ｄ）。したがって、治療効果は、ＥＰ４アゴニスト作用によりもたらされるものであり、ＩＰアゴニスト作用によって弱められることもある。したがって、選択的ＥＰ４アゴニストであることが重要である。
【実施例２５】
【０１２０】
ラットデキストラン硫酸ナトリウム誘発大腸炎に対する予防効果
化合物Ｆの大腸炎に対する予防効果をラットでも検討した。ＳＤ系ラット、雄性、７週齢、体重２１０ｇ〜２４０ｇ前後（チャールス  リバー）を購入し、１週間馴化飼育した後、試験に使用した。正常群を除いて、５．５ｗ／ｖ％に調製したＤＳＳ（ＭＰ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｍ．Ｗ．３６，０００−５０，０００， Ｌｏｔ  Ｎｏ．４５５６Ｊ）溶液を８日間自由飲水させることにより大腸炎を誘発した。化合物Ｆは、０．３ ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇの用量で、ＤＳＳ飲水開始前日から剖検日前日（ＤＳＳ飲水７日目）まで連日１日１回、経口投与した。対照群には溶媒（１ｖｏｌ％エタノール溶液）を５ｍＬ／ｋｇで経口投与した。【０１２１】
ＤＳＳ飲水開始８日目に１．２５ｗ／ｖ％のエバンスブルー溶液を０．２ｍＬ／１００ｇで尾静脈より投与し、３０分後にエーテル麻酔下で開腹して放血致死させた。その後、盲腸直下から肛門までの大腸を摘出して、ものさしでその長さを測定した。大腸は、内容物を除去後、肛門から７ｃｍの組織を生理食塩液で３回洗浄した後、真空ポンプを用いて一晩乾燥させた。翌日、乾燥重量を測定した後、ホルムアミドを２ｍＬ添加して、５０℃で一晩かけて色素抽出し、その程度を６２０ｎｍで測定した。エバンスブルー標準液で検量線を作成し、１ｇ中の大腸組織におけるエバンスブルーの量（ｍｇ）として算出し、その程度を大腸組織傷害として評価した。【０１２２】
下痢の度合いを示すために、便の形状を６段階、すなわち、正常（０点）、棒状が５割未満（１点）、棒状が５割以上（２点）、棒状と一部泥状 （３点）、泥状（４点）、水様（６点）と評点した（軟便スコア）。潜血スコアは、実施例２３に記載の方法で評価した。軟便スコアと潜血スコアの合計値を排便障害スコアとした。各群７〜１０匹の動物を使用し、結果は平均±標準偏差で表現した。【０１２３】
その結果、対照群の体重は、終始、緩やかに増加したが、正常群に比して有意に低値を推移した。排便障害スコアは、ＤＳＳ飲水開始１日目から有意に増加した。また、剖検日（８日目）では、大腸は明らかな組織傷害を認め、有意な短縮も認められた。これに対して、化合物Ｆは、１ｍｇ／ｋｇ及び３ｍｇ／ｋｇ投与でこれらいずれに対しても抑制傾向または有意な抑制効果を示した（図４Ａ、４Ｂ、４Ｃ）。すなわち、化合物Ｆは、大腸の潰瘍発生を予防し、臓器機能を正常化することで、下痢や血便の症状を抑制することがわかった。
【実施例２６】
【０１２４】
マウスデキストラン硫酸ナトリウム誘発大腸炎の寛解／再燃モデルにおける治療効果
次に慢性モデルで、化合物Ｆの大腸炎に対する治療効果を検討した。ＢＡＬＢ／ｃ系マウス、雌性、６週齢、体重２０ｇ前後（日本エスエルシー）を購入し、１週間馴化飼育した後、試験に使用した。マウスを大腸炎誘発群と正常群に群分けした後、大腸炎誘発群に２．６ｗ／ｖ％のＤＳＳ（ＭＰ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ, Ｍ．Ｗ．３６，０００−５０，０００， Ｌｏｔ  Ｎｏ．４５５６Ｊ）溶液を自由飲水させて大腸炎を誘発した。実施例２３で定義した大腸炎誘発群の排便障害スコアが約４．５に達した８日目に、マウスは対照群、化合物Ｆの１ｍｇ／ｋｇ投与群、サラゾスルファピリジン（ＳＩＧＭＡ、Ｌｏｔ Ｎｏ．０８５Ｋ１９３０、以下ＳＡＳＰと略す）１００ｍｇ／ｋｇ投与群に分け、ＤＳＳ溶液を蒸留水に交換してその後９日間飲水させた（これを寛解期とした）。群分け後は、３〜４日毎に一度排便スコアを評価し、対照群のスコアが約１になった時点で再びＤＳＳ溶液を飲水させ病態を再発させた（これを再燃期とした）。この寛解と再燃を１サイクルとし、これを５サイクル繰り返した。ただし、５サイクル目は寛解期のみ実施した。【０１２５】
化合物Ｆの１ｍｇ／ｋｇ及びＳＡＳＰの１００ｍｇ／ｋｇは初回寛解期（２．６ｗ／ｖ％ＤＳＳの飲水開始８日目）から５回目の寛解期（２．６ｗ／ｖ％ＤＳＳの飲水開始５７日目）までの５０日間、連日１日１回、経口投与した。対照群には溶媒（１ｖｏｌ％エタノール液）を１０ｍＬ／ｋｇで経口投与した。寛解率は各寛解期最終日の軟便スコア及び潜血スコアがともに０に至った個体を寛解とし、各群における寛解個体数の割合を寛解率（％）として算出した。各群８〜１０匹を使用し、結果は平均値で表現した。【０１２６】
その結果、対照群の排便障害スコアは、再燃期に上昇、寛解期に低下したが、正常群に比して終始ほぼ有意に高かった（図５）。寛解率は、寛解期５回の平均が３５．５％であった（表８）。化合物Ｆは、寛解期の排便スコアを早期に低下させ、また再燃期ではスコア上昇を抑制した。また、寛解率はいずれの寛解期でも６０％以上を示し、平均６６．０％と対照群に比して明らかに高かった。一方、ＳＡＳＰは、寛解期及び再燃期のいずれにおいても排便スコアに対する明らかな効果を示さなかった。また、寛解率は、１、３及び４サイクル目で対照群より僅かに高値を示したが、２及び５サイクル目では逆に低く、平均値は対照群と同等であった。
以上のように、化合物Ｆは、予防効果のみならず、治療効果があり、寛解維持効果を示した。さらに、その効果は、臨床的に使用されているＳＡＳＰに比べてはるかに優れていると考えられる。【０１２７】
【表８】
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【実施例２７】
【０１２８】
マウスＣＤ４＋ＣＤ２５−Ｔ細胞移入腸炎に対する予防効果
炎症性腸疾患のもう一つの病態であるクローン病に対する効果を検討した。Ｔ細胞移入モデルは、クローン病モデルとしてよく知られ、慢性的な胃炎や腸炎を発症する（参照：文献Ｆ、Ｇ、Ｈ）。また、Ｔ細胞の活性化を伴う類似した腸潰瘍を生じる腸管ベーチェット病・単純性潰瘍の病態モデルともみなすことができる（参照：文献Ｉ、Ｊ）。【０１２９】
ＢＡＬＢ／ｃＡ  Ｊｃｌ系マウス、雌性、６週齢、体重１９〜２３ｇ（日本クレア）及びＣ.Ｂ−１７／Ｉｃｒ−ｓｃｉｄ系マウス、雌性、６週齢（日本クレア）を購入し、１週間馴化飼育した後、試験に使用した。
ＢＡＬＢ／ｃＡ  Ｊｃｌ系マウスをエーテル麻酔下で開腹後、腹部大動静脈から放血致死させ、脾臓を摘出した。脾臓から脾細胞を調製し、ＣＤ４＋Ｔ  ｃｅｌｌ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｎｏ．１３０−０９０−８６０、ミルキーバイオテク株式会社）及びＣＤ２５−Ｂｉｏｔｉｎ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｎｏ．１３０−０９２−５６９、ミルキーバイオテク株式会社）を用いて、ＣＤ４＋ＣＤ２５−Ｔ細胞を調製した。細胞の分離は、Ｔｈｅ  ａｕｔｏＭＡＣＳ  Ｓｅｐａｒａｔｏｒ（ミルキーバイオテク株式会社）を用いて行った。分離したＣＤ４＋ＣＤ２５−Ｔ細胞は、生理リン酸緩衝液に懸濁し、Ｃ.Ｂ−１７／Ｉｃｒ−ｓｃｉｄマウスに１匹あたり２．５×１０５細胞を腹腔内投与し、大腸炎を誘発した。【０１３０】
化合物Ｆあるいはプレドニゾロンは、それぞれ１ｍｇ／ｋｇで、ＣＤ４＋ＣＤ２５−Ｔ細胞の移入５時間前に初回投与し、以後２０日間、連日１日１回、経口投与した。対照群には溶媒（１ｖｏｌ％エタノール液）を１０ｍＬ／ｋｇで経口投与した。病態評価項目は、軟便スコア（０〜５点）、便潜血スコア（０〜４点）及び体重減少スコア（０〜５点）を評点し、その総計をＤｉｓｅａｓｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｉｎｄｅｘスコア（以下、ＤＡＩスコアと略す：最高スコア１４）とした。軟便スコアは、便の硬さを正常（０点）、わずかに柔らかい（１点）、やや柔らかい（２点）、柔らかい（３点）、かなり柔らかい（４点）及び下痢（５点）と評点した。便潜血スコアは、実施例２３と同様に評価した。体重減少スコアは、体重の変化を体重の増加 （０点）、３％未満の減少（１点）、３％以上６％未満の減少（２点）、６％以上９％未満の減少（３点）、９％以上１２％未満の減少（４点）、１２％以上の減少（５点）と評点した。各群８〜１０匹を使用し、結果は平均値で表現した。【０１３１】
その結果、対照群の軟便スコア及び便潜血スコアはＴ細胞移入１２日後から明らかな増加を認め、また体重減少スコアは１９日目で明らかな増加を示し、２１日後にはいずれもほぼ最大となった。化合物Ｆは、図６Ａに示すように軟便スコア及び図６Ｂに示すように便潜血スコアの増加をほぼ半分まで抑制し、図６Ｃに示すように体重減少スコアの増加を、ほぼ完全に抑制した。一方、プレドニゾロンは、図６Ｂに示すように便潜血スコアの増加に対して化合物Ｆ投与とほぼ同程度の抑制を示したが、図６Ａに示すように軟便スコアに対して２１日目では明確な効果を示さなかった。また、図６Ｃに示すように体重減少スコアは、終始、対照群より高値に推移し、プレドニゾロンは、明らかに悪化させた。図６Ｄに示すように、ＤＡＩスコアは、化合物Ｆが、プレドニゾロンに比べ、総合的に優れていることを示した。
このように化合物Ｆは、潰瘍性大腸炎のみならず、クローン病、腸管ベーチェット病・単純性潰瘍の病態を既存の治療薬に比べて優れて抑制する。【０１３２】
文献
Ｆ）Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ．１８２：１９０−２００（２００１）．
Ｇ）Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．６（８）：１３４１−１３５４（２００６）．
Ｈ）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０（３）：１２１２−１２１８（１９９８）．
Ｉ）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ.１３９（２）: ３７１−３７８（２００５）．
Ｊ）Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ．４５（４）：３７７−３８３（２００４）．
【実施例２８】
【０１３３】
ラットエタノール誘発胃粘膜傷害モデルに対する効果
化合物Ｆの胃粘膜傷害に対する抑制効果をラットエタノール誘発胃粘膜傷害モデルで検討した。本モデルは、うっ血性粘膜傷害を伴うヒトの急性胃炎の動物モデルとして繁用されている（文献Ｋ）。
ＳＤ系ラット、雄性、７週齢（チャールス・リバー）を、オリエンタルバイオサービスを通じて購入し、１週間馴化飼育した後、試験に使用した。ラットは、体重を指標に群分けし、試験前日から金網を敷いたクリーンケージに移して１９時間絶食（絶食１６時間後から３時間は絶水）させた後、全ての群にエタノール（特級、ナカライテスク、Ｌｏｔ Ｎｏ.Ｖ８Ａ５８６２）１．５ｍＬを経口投与して胃粘膜傷害を誘発した。化合物Ｆは、０．０１、０．１及び１ｍｇ／ｋｇの用量で、胃粘膜傷害誘発３０分前にそれぞれ５ｍＬ／ｋｇの容量で経口投与した。対照群には、溶媒（１ｖｏｌ％エタノール液）を５ｍＬ／ｋｇで同様に経口投与した。各群８匹の動物を使用した。
ラットは、エタノール投与１時間後にエーテル麻酔下で腹部大動静脈より放血致死させ、胃を摘出した。摘出した胃は、直ちに２ｖｏｌ％中性ホルマリン溶液６ｍＬを充填し１５分間固定した。その胃を噴門部から幽門部まで大弯中央部に沿って切開し、塩化ビニル板に伸展させた。実体顕微鏡下にて各潰瘍の長さと幅を測定し、面積を算出して、これらの合計を総潰瘍面積とした。【０１３４】
その結果、対照群の総潰瘍面積の平均は１０３ｍｍ２であった。化合物Ｆは、０.０１ｍｇ／ｋｇから用量依存的に総潰瘍面積を有意に縮小し、１ｍｇ／ｋｇ投与ではほぼ完全に縮小した（図７）。このように化合物Ｆは胃粘膜傷害を抑制した。【０１３５】
文献
Ｋ）Ｄｉｇ Ｄｉｓ Ｓｃｉ. ３１(２ Ｓｕｐｐｌ), ８１Ｓ-８５Ｓ（１９８６）．
【実施例２９】
【０１３６】
ラットインドメタシン誘発小腸傷害モデルに対する効果
化合物Ｆの小腸傷害に対する抑制効果をラットインドメタシン誘発小腸傷害モデルで検討した。非ステロイド系抗炎症剤（ＮＳＡＩＤｓ）の投与はヒトにおいて小腸に出血性の傷害を惹起することが知られている。本モデルは、ラットにＮＳＡＩＤｓであるインドメタシンを投与することにより誘発される小腸粘膜傷害を特徴とし、ヒトＮＳＡＩＤｓ起因性小腸傷害あるいはクローン病に類似の病態を示す（文献Ｌ、Ｍ）。
ＳＤ系ラット、雄性、７週齢（チャールス・リバー）を購入し、１週間馴化飼育した後、試験に使用した。ラットは、体重を指標に群分けし、全ての群にインドメタシン（ＳＩＧＭＡ、Ｌｏｔ Ｎｏ.１９Ｆ００１８）を１５ｍｇ／５ｍＬ／ｋｇで皮下投与し、小腸傷害を誘発した。化合物Ｆは、０．０１、０．１及び１ｍｇ／ｋｇの用量で、インドメタシン皮下投与の３０分前と６時間後にそれぞれ５ｍＬ／ｋｇの容量で経口投与した。対照群には、溶媒（１ｖｏｌ％エタノール液）を５ｍＬ／ｋｇで同様に経口投与した。各群８匹の動物を使用した。
ラットは、インドメタシン投与２３．５時間後にエーテル麻酔下に２ｍＬの１０ｍｇ／ｍＬエバンスブルー溶液を静脈内投与した。その３０分後にエーテル麻酔下で腹部大動静脈より放血致死させ、小腸を摘出した。摘出した小腸は、２ｖｏｌ％中性ホルマリン溶液を適当量（約３５ｍＬ）充填し、約１５分間固定した。その後、腸管膜付着部位に沿って全小腸を切開し、塩化ビニル板に伸展させて実体顕微鏡下にて各潰瘍の長さと幅を測定し、面積を算出して、これらの合計を総潰瘍面積とした。【０１３７】
その結果、対照群では、小腸の総潰瘍面積は約７３０ｍｍ２であった。これに対して、化合物Ｆ投与群は０．１ｍｇ／ｋｇ投与から用量依存的に有意に潰瘍面積を縮小し、１ｍｇ／ｋｇ投与では完全であった（図８）。このように化合物Ｆは、小腸傷害を強く抑制した。【０１３８】
文献
Ｌ）Ａｌｉｍｅｎｔ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｈｅｒ. ７（１）：２９−３９（１９９３）．
Ｍ）Ａｃｔａ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ Ｂｅｌｇ. ５７（５-６）：３０６−３０９（１９９４）．【０１３９】
以上により、化合物Ｆは、アルコール等による消化管粘膜への直接傷害やＮＳＡＩＤｓ等による粘膜再生障害に対し優れた抑制作用を示した。すなわち、化合物Ｆは消化管粘膜の傷害に対する防御効果と組織修復効果が期待される。
上記実施例に示したとおりに、化合物Ｆに認められるように本発明の化合物は、免疫が関与する消化管炎症、薬剤性消化管粘膜傷害、薬剤性粘膜再生障害に基づく消化管傷害や治癒の遅延に対して有効である。具体的には、潰瘍性大腸炎、クローン病等の炎症性腸疾患、アルコール性胃炎・胃潰瘍や小腸潰瘍等において有用である。これらの作用は、ＥＰ４アゴニスト作用に基づくものであり、例示疾患に限定されるものではない。
【実施例３０】
【０１４０】
ラット抗Ｔｈｙ−１抗体誘発糸球体腎炎モデルにおける効果
Ｓｌｃ：Ｗｉｓｔａｒ系雄性ラット、６週齢（日本エスエルシー）を購入し、１週間予備飼育した。正常群を除き、動物に抗Ｔｈｙ−１抗体（マウス抗ＣＤ９０抗体（ＵＫ−Ｓｅｒｏｔｅｃｈ Ｌｔｄ． Ｃｏｄｅ：ＭＣＡ４７ＸＺ、ｃｌｏｎｅ Ｎｏ： ＭＲＣ ＯＸ−７、Ｌｏｔ Ｎｏ．０３０３））を１回静脈内投与した。化合物Ｆと化合物Ｊの混合物（Ｆ：Ｊ＝５２：４１、化合物Ｆ／Ｊと記す）を、抗体投与当日（０日）から６日後までの連日１日２回、朝夕に０．３ｍｇ／ｋｇで経口投与した。抗体投与３日後に1日尿を採取した。抗体投与７日後に剖検し、右腎の摘出を行い、重量測定後、ホルマリン固定した。各群５〜８匹の動物を使用し、結果は平均±標準偏差で表現した。
その結果、対照群の体重は、正常群に比べて、抗体投与１日後より、増加抑制が認められたが、３日後より正常群と同様の増加を示した。化合物Ｆ／Ｊ投与群の体重は、対照群のそれと同様の推移を示した。２４時間尿量は、対照群で正常群に比べて増加したが、化合物Ｆ／Ｊ投与群は正常群と同程度であった（図９Ａ）。２４時間尿蛋白量は、対照群で著明に増加したが、化合物Ｆ／Ｊ投与群はそれよりも低値を示した（図９Ｂ）。腎臓相対重量は、対照群で著明に増加したが、化合物Ｆ／Ｊ投与群はそれよりも低値を示し正常に近い値であった（図９Ｃ）。腎病理組織評価において、対照群は、糸球体総細胞数、メサンギウム領域及び糸球体ＰＣＮＡ陽性細胞数の増加が顕著であった。化合物Ｆ／Ｊ投与群は、これらの増加がいずれも有意に抑制されていた（図９Ｄ、９Ｅ、９Ｆ）。
したがって、本発明の化合物は、尿量を正常化し、蛋白尿を軽減し、糸球体の免疫反応や増殖反応を抑え、腎炎に有効である。
【実施例３１】
【０１４１】
ウサギ眼圧に対する効果
日本白色ウサギ、雄性、１０週齢（株式会社バイオテック）を購入し、１週間予備飼育後に使用した。０．０１ｗ／ｖ％の化合物Ｆ溶液を両眼角膜上にマイクロピペットを用いて５０μＬ／眼で単回点眼投与した。右眼の眼圧を測定し、左眼で眼局所刺激作用を評価した。眼圧は、点眼投与前と投与１、２、３、４、６及び８時間後にオキシブプラノール（ベノキシール０．４％点眼液）で表面麻酔を施した後、ニューマトノメーター（アルコン社）を用いて測定した。また、眼局所刺激作用は結膜充血、結膜浮腫、角膜混濁、虹彩充血、排泄物及び閉眼動作についてそれぞれスコア化し、評価した。溶媒対照群にはリン酸緩衝液を、また、対照薬としてイソプロピルウノプロストン（レスキュラ点眼液、参天製薬）を用いて評価した。各群６匹の動物を使用し、結果は平均で表現した。
その結果、溶媒対照群の眼圧は、投与８時間後まで０時点から±２ｍｍＨｇの範囲で推移した。化合物Ｆ群は、投与１時間後に６．９ｍｍＨｇの眼圧低下を示し、その後２時間に９．３ｍｍＨｇ、６時間に６．６ｍｍＨｇと有意な低下を維持した。一方、レスキュラ点眼液群は、化合物Ｆ群とほぼ同様の眼圧低下推移を示した（図１０）。
眼局所刺激性は、化合物Ｆ群では、投与１時間後に一部の個体で結膜浮腫及び閉眼を認めたが、その後回復した。レスキュラ点眼液群は、1時間後に一部の個体で結膜浮腫及び閉眼を認め、２時間後まで持続し、その後回復した。
このように、本発明の化合物Ｆは、レスキュラ点眼液と同等の眼圧低下作用を示し、眼局所刺激性は同等であり、緑内障・高眼圧治療剤として有用である。
【実施例３２】
【０１４２】
マウスコンカナバリンＡ誘発肝炎モデルに対する予防効果
化合物Ｆの肝炎に対する予防効果をコンカナバリンＡ（以下、ＣｏｎＡ）誘発肝炎モデルで検討した。本モデルは、Ｔ細胞依存性に肝実質細胞が傷害を受ける肝炎モデルで、臨床的には自己免疫性肝炎あるいは劇症肝炎と類似の病態である（参照：文献Ｎ、Ｏ、Ｐ）。
ＢＡＬＢ／ｃ系マウス、雌性、７週齢（日本エスエルシー）を購入し、１週間馴化飼育した後、試験に使用した。病態非惹起群を除いて、生理食塩水に溶解したＣｏｎＡ（ｔｙｐｅ  ＩＶ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を、１２．５ｍｇ／１０ｍＬ／ｋｇの用量で動物に尾静脈内投与し、肝炎を誘発し、２０時間後、エーテル麻酔下に開腹し、腹部大静脈より０．５ｍＬ採血し、ヘパリン血漿を得た。血漿ＡＬＴ及びＡＳＴ活性を測定した。試験物質は、化合物Ｆの１ｍｇ／１０ｍＬ溶液、プレドニゾロン（ナカライテスク）の５ｍｇ／１０ｍＬ懸濁液（０．５ｗ／ｖ％メチルセルロース使用）及び対照群に投与した注射用水であり、ＣｏｎＡの尾静脈内投与の１時間前に１０ｍＬ／ｋｇの容量で経口投与した。各群７−９例で実施し、対数変換して一元配置分散分析を実施した。
その結果、対照群の血漿ＡＬＴ活性及び血漿ＡＳＴ活性は非惹起群に比して顕著に上昇した。この上昇を化合物Ｆ及びプレドニゾロンは、有意で強い抑制作用を示した。図１１に血漿ＡＬＴのデータを示す。
したがって、化合物Ｆは、Ｔ細胞が関与する肝炎に対して有効である。【０１４３】
文献
Ｎ）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８（１２）：４１０５−４１１３（１９９８）．
Ｏ）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ. Ｓｃｉ．９７（１０）：５４９８−５５０３（２０００）．
Ｐ）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９１（１）：１０５−１１４（２０００）．
【産業上の利用可能性】
【０１４４】
本発明の化合物（１）は、医薬の有効成分として有用である。本発明の化合物（１）を有効成分とする医薬は、ＥＰ４の関与する免疫疾患、消化管疾患、循環器疾患、心疾患、呼吸器疾患、神経疾患、眼疾患、腎疾患、肝疾患、骨疾患、皮膚疾患等に対して有用である。特に、潰瘍性大腸炎、クローン病、胃炎または胃潰瘍、小腸潰瘍、腎炎、緑内障、または肝炎の予防または治療のための医薬として有用である。【０１４５】
以上、本発明の具体的な態様のいくつかを詳細に説明したが、当業者であれば示された特定の態様には、本発明の教示と利点から実質的に逸脱しない範囲で様々な修正と変更をなすことは可能である。従って、そのような修正及び変更も、すべて後記の請求の範囲で請求される本発明の精神と範囲内に含まれるものである。【０１４６】
本出願は、特願２０１０−５１１２７及び特願２０１０−２４６２０８を基礎としており、その内容は本明細書に全て包含されるものである。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図７】
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【図８】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図９Ｄ】
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【図９Ｅ】
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【図９Ｆ】
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【図１０】
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【図１１】
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【国際調査報告】
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