(57)【要約】  みかん属植物の果皮油から、ポリメトキシフラボン類を他の成分から一度に大量に分離でき、安価で食品に使用可能な安全性の高い、さらには安定性が高く、様々な製剤化が容易な汎用性のあるポリメトキシフラボン類の製造方法およびその利用方法を提供すること。みかん属植物の果皮油からポリメトキシフラボン類を製造する方法であって、みかん属植物の果皮油に含まれる揮発性成分を蒸留によって除去して蒸留残渣を得る工程、その残渣を薄膜減圧蒸留装置で蒸留して留分を得る工程、その留分をエタノール水溶液で抽出して抽出物を得る工程、およびその抽出物に含まれる不溶なオイルを除去した後の抽出物を活性炭に接触させて精製する工程を含むことを特徴とする、経時安定性に優れ且つ残留農薬の量が低減されたポリメトキシフラボン類の製造方法である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
みかん属植物の果皮油からポリメトキシフラボン類を製造する方法であって、みかん属植物の果皮油に含まれる揮発性成分を蒸留によって除去して蒸留残渣（１）を得る工程、その残渣を薄膜減圧蒸留装置で蒸留して留分（２）を得る工程、その留分をエタノール水溶液で抽出して抽出物（３）を得る工程、およびその抽出物に含まれる不溶なオイルを除去した後の抽出物を活性炭に接触させて精製する工程を含むことを特徴とする、下記一般式（Ｉ）
【化１】
2011092840.tif 000019
（式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、及びＲ5は各々独立して水素又はメトキシ基である）で表される経時安定性に優れ且つ残留農薬の量が低減されたポリメトキシフラボン類の製造方法。
【請求項２】
みかん属植物の果皮油が、テルペンカットされたものであることを特徴とする、請求項１記載のポリメトキシフラボン類の製造方法。
【請求項３】
揮発性成分を蒸留によって除去して蒸留残渣（１）を得る工程が、圧力１〜１００Ｐａおよび温度１２０〜２２０℃の条件であることを特徴とする、請求項１又は２に記載のポリメトキシフラボン類の製造方法。
【請求項４】
揮発性成分を蒸留によって除去して蒸留残渣（１）を得る工程が、最初に圧力１０００〜１００００Ｐａおよび温度５０〜２００℃の条件で蒸留に付して残渣(１ａ)を得、次いで残渣(１ａ)を圧力１〜１００Ｐａおよび温度１２０〜２２０℃の条件で蒸留に付して残渣(１)を得ることを特徴とする、請求項１記載のポリメトキシフラボン類の製造方法。
【請求項５】
薄膜減圧蒸留装置で蒸留して留分（２）を得る工程が、圧力０.１〜５Ｐａおよび温度１９０〜２６０℃の条件であることを特徴とする請求項１〜４のいずれかの項に記載のポリメトキシフラボン類の製造方法。
【請求項６】
エタノール水溶液で抽出して抽出物（３）を得る工程が、エタノール水溶液のエタノール濃度が１０〜５０％で行われることを特徴とする請求項１〜５のいずれかに記載の記載のポリメトキシフラボン類の製造方法。
【請求項７】
みかん属植物がスイートオレンジ（Citrus sinensis）、サワーオレンジ（Citrus aurantium）、タンジェリン（Citrus reticlata Blanco var. tangerine）、マンダリン（Citrus reticlata Blanco var. mandarin）、シイクワシャー（Citrus depressa Hayata）から選ばれる１種または２種以上であることを特徴とする請求項１〜６のいずれかの項に記載のポリメトキシフラボン類の製造方法。
【請求項８】
ポリメトキシフラボン類が、ペンタメトキシフラボン、ノビレチン、テトラメトキシフラボン、タンゲレチン、ヘプタメトキシフラボンからなる群より選ばれた少なくとも１種である請求項１〜７のいずれかの項に記載の製造方法。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれかの項に記載のポリメトキシフラボン類の製造方法により製造されたポリメトキシフラボン類を８０質量％以上含有するポリメトキシフラボン類組成物。
【請求項１０】
請求項９記載のポリメトキシフラボン類組成物を含有することを特徴とする経口組成物。
【請求項１１】
請求項９記載のポリメトキシフラボン類組成物に乳化剤を適用して粉末化したことを特徴とするポリメトキシフラボン類の粉末製剤。
【請求項１２】
請求項９記載のポリメトキシフラボン類組成物およびエタノールを含有することを特徴とするポリメトキシフラボン類の水溶性製剤。
【請求項１３】
請求項８記載のポリメトキシフラボン類組成物および食用油脂を含有することを特徴とするポリメトキシフラボン類の油溶性製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、天然物由来のポリメトキシフラボン類の簡便な製造方法に関する。
詳しくは、みかん属植物の果皮油からポリメトキシフラボン類を製造する方法であって、みかん属植物の果皮油に含まれる揮発性成分を蒸留によって除去して蒸留残渣を得る工程、その残渣を薄膜減圧蒸留装置で蒸留して留分を得る工程、その留分をエタノール水溶液で抽出して抽出物を得る工程、およびその抽出物に含まれる不溶なオイルを除去した後の抽出物を活性炭に接触させて精製する工程を含むことを特徴とする、経時安定性に優れ且つ残留農薬の量が低減されたポリメトキシフラボン類の製造方法である。
当該方法によれば、ポリメトキシフラボン類を効率的に、有機溶剤等を使用することなく、低コストで短時間に製造することができる。
【背景技術】
【０００２】
従来から下記一般式（Ｉ）の構造式で表されるポリメトキシフラボン類は、みかん属植物、すなわち柑橘類の果皮に多く含まれていることが知られている。
【化１】
2011092840.tif 000002
（式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、及びＲ5は各々独立して水素又はメトキシ基である。）
特にノビレチン（上記式(Ｉ)でＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、及びＲ5の全てがメトキシ基）に関しては、発ガン抑制作用等の生理活性が明らかにされている物質である（非特許文献１）。【０００３】
さらにポリメトキシフラボン類は食品の分野において、呈味改善剤及び呈味改善方法（特許文献１）や、香味劣化抑制剤（特許文献２）など、様々な有用な効果が見出され注目されている。【０００４】
みかん属植物の果皮油にはポリメトキシフラボン類以外に、非常に性質の異なる多種多様な数多くの成分が含まれている（例えば非特許文献２、非特許文献３）。例えば、テルペン類等の炭化水素化合物、アルデヒド、エステル等のカルボニル化合物、アルコール類等の揮発性成分および通常の条件では揮発しないワックス類、カロテノイド色素等の不揮発性成分が含まれており、簡便な方法でポリメトキシフラボン類を選択的に分離することは困難とされている。【０００５】
みかん属植物の果皮油からポリメトキシフラボン類を製造する従来技術としては、ミカン科植物の果実、果皮、果皮油、葉部等の原料をメタノール、エタノールまたはクロロホルム等の有機溶剤を用いて加熱抽出する方法、または超臨界流体溶媒を用いて抽出する方法が提案されている（特許文献１、特許文献２）。【０００６】
しかし、上記方法ではポリメトキシフラボン類以外に原料由来のリモネン、リナロール、ゲラニオール、ネロール、α−タピネオール、シトラール等の炭化水素化合物類、カルボニル化合物類、エステル類、アルコール類、その他香気成分、およびカロチノイド等の色素成分が含有され、純度の高いポリメトキシフラボン類を得ることができなかった。従って、従来の抽出法によって得られたポリメトキシフラボン類を呈味改善剤または香味劣化抑制剤等の用途に使用する場合、抽出物中の夾雑物による香味、異臭、着色等の問題が生じるので極めて用途が制限されていた。【０００７】
そのため、さらに純度の高いポリメトキシフラボン類を得るため、従来技術においては、ポリメトキシフラボン類を含有する抽出物をシリカゲル、アルミニウムオキシド、アルキルシリル化シリカゲル、アリルシリル化シリカゲル等の担体を充填したカラムに担持させ、例えば酢酸エチル−ヘキサンまたは水−アセトニトリル等の展開溶剤を用いたカラムクロマトグラフィー法または高速液体クロマトグラフィーにより分離精製されている。また、ヘキサン又はペンタン等と含水メタノール又はエタノールによる液液分配クロマトグラフィーが用いられることもある。【０００８】
しかしながら、これらの方法で得られるポリメトキシフラボン類は、非常に純度が高い反面、一度に多量のポリメトキシフラボン類を分離精製することが困難である。また、多量のポリメトキシフラボン類を調製するには非常に時間がかかり、さらには大量の高価な有機溶媒、特別な装置を必要とすることから、非常にコストがかかるという欠点は避けられず工業的生産には適していない方法であるとされている。またさらには、上記方法においては、ｎ−ヘキサン、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、アセトニトリルなどの人体に悪影響を与える可能性のある有機溶媒を使用するので、得られたポリメトキシフラボン類を食品に用いることは安全性の面からも適切でない方法である。【０００９】
ポリメトキシフラボン類の簡便な分離方法としては、みかん属植物の果皮油から揮発性成分を蒸留によって除去した後の残渣からアルコール水溶液で抽出する方法も提案されている（特許文献３）。この方法では、黒褐色タール状の蒸留残渣から簡便な操作で高含有のメトキシフラボン類組成物を得ることができるが、そのまま水性製剤として用いることができるが、経時的に沈殿が生じ、安定性に欠ける点があった。また、水性製剤以外の他の製剤化においては汎用性に欠ける点があった。すなわち、当該アルコール溶液から溶媒を留去した場合、メトキシフラボン類組成物は飴状に固化してしまうため取り扱いが難しくなり、油溶性製剤や粉末製剤への製剤化が困難となることがあった。【００１０】
みかん属植物の果皮からポリメトキシフラボン類を高濃度で分離する際に考慮すべき問題点として残留農薬の問題がある。
みかん属植物の多くは、虫害や病気の予防や対策、除虫や除草の簡素化、果実の長期保存を目的に、栽培中や収穫後に農薬や防腐剤が散布される。散布された農薬や防腐剤は、収穫した果実を洗浄することにより除去されるが、一部は果皮に残留し、果皮から精油を搾油する際に果皮油へ抽出される可能性がある。
例えば、日本に輸入された柑橘類・バナナに検出される残留農薬として、有機塩素系農薬（クロロベンジレート、ジコホール等）、有機りん系農薬（ピリダフェンチオン、メチダチオン等）、ピレスロイド系農薬（シペルメトリン、フェンプロパトリン等）が挙げられる。
農薬や防腐剤の多くは不揮発性の成分であり、ポリメトキシフラボン類の精製工程において、濃縮される可能性がある。【００１１】
植物抽出物から農薬を除去する方法としては、例えば（１）体積比で１０：９０ないし８０：２０の低級脂肪族アルコールと水との混合液に溶解させ、得られた溶液を、細孔の最頻度半径が３０〜１２０Åの多孔性吸着樹脂が充填されたカラムに通液して溶液中の残留農薬を該吸着樹脂に吸着させ、処理後の溶液より植物抽出物を回収する方法（特許文献４）が知られている。また、（２）植物抽出物を超臨界乃至は亜臨界状態の炭酸ガス流体に接触させて残留農薬を除去する方法（特許文献５）も知られている。【００１２】
しかし、方法（１）ではカラムに通液するのに非常に時間がかかるため、多量の抽出物を処理することができない、さらには大量の高価な有機溶媒、特別な装置を必要とすることから、非常にコストがかかるという欠点は避けられず工業的生産には適していない方法であるとされている。また、BHCやDDTといった有機塩素系化合物系残留農薬の除去には適しているが、汎用性に欠けている、残留農薬と物性が近似した抽出成分は吸着損失が大きく、抽出物の収率が低下してしまうという問題がある。
一方、方法（２）では、植物抽出成分の損失や劣化がなく植物抽出物から残留農薬を効率的に除去できるが、特別な装置を必要とすることから、非常にコストがかかるという問題点がある。【００１３】
別の精油から農薬を除去する方法として、（３）強陽イオン交換樹脂または強陰イオン交換樹脂と接触させる方法（特許文献６）やアルカリ性水溶液に接触させる方法（特許文献７）が知られている。【００１４】
しかし、方法（３）では、それぞれ塩基性、酸性、中性有機化合物を選択的に除去することができるが、様々な物性の農薬が残留している場合は、汎用性に欠けるという問題点があった。【００１５】
したがって、みかん属植物の果皮油から、安全性を懸念することなく食品に使用可能であり、簡便で経済的に有利で、なおかつ汎用性のあるポリメトキシフラボン類組成物を製造する方法の開発に成功した例は未だ知れていないのが現状であり、新たな製造方法の提供に期待が寄せられている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１６】
【特許文献１】特開平６−３３５３６２号公報
【特許文献２】特開平１１−１６９１４８号公報
【特許文献３】特開２００３−２９２４８８号公報
【特許文献４】特開２０００−７２７９０号公報
【特許文献５】特開２００６−８９４１４号公報
【特許文献６】特表２００９−５１１６４３号公報
【特許文献７】特表２００９−５３３４９４号公報
【非特許文献】
【００１７】
【非特許文献１】日本農芸化学会誌75巻、12号、2001年、1283〜1290頁
【非特許文献２】香料化学総覧（Ｉ）232頁、廣川書店、昭和42年
【非特許文献３】果実の科学、130頁、朝倉書店、1991年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１８】
本発明の目的は、上記の従来技術における問題点を解決し、みかん属植物の果皮油から、ポリメトキシフラボン類を一度に大量に他の成分から分離でき、安価で食品に使用可能な安全性の高い、さらには汎用性のあるポリメトキシフラボン類組成物の製造方法を提供することである。【００１９】
また、原料であるみかん属植物の果皮油、特にオレンジ果皮油に関しては、工業的にリモネン等のテルペン類や、テルペン類を除いた精油（テルペンレスオイル）等の香料原料として大量に利用されており、その残渣はほとんど有効利用されないまま廃棄されているのが現状である。しかしながら、リモネン等の香料採取後の残渣には大量のポリメトキシフラボン類が含まれており、無償に近い安価な原材料として本発明を適用することができ、廃棄物の有効利用という目的にも資する。
【課題を解決するための手段】
【００２０】
本発明者らは、ポリメトキシフラボン類が生理活性、呈味改善効果など様々な効果を有することに着目し、その簡便かつ効率的な分離方法について鋭意研究を行った結果、みかん属植物の果皮油からテルペン化合物等の揮発性成分を除去した後の残渣、または残渣を薄膜減圧蒸留装置で蒸留した留分を、エタノール水溶液で抽出し、不溶なオイルを除去後、活性炭に接触させることにより、経時安定性が高く且つ残存農薬の量が低減された高純度のポリメトキシフラボン類を低コスト且つ極めて簡便に製造することができることを見出し、本発明を完成するに至った。【００２１】
すなわち、本発明は、みかん属植物の果皮油から必要に応じて揮発性成分を蒸留によって除去した後の残渣を薄膜減圧蒸留装置で蒸留した留分をエタノール水溶液で抽出し、不溶なオイルを除去後、活性炭に接触させることを特徴とするポリメトキシフラボン類の製造方法である。
詳しくは、原材料のみかん属植物が、スイートオレンジ（Citrus sinensis）、サワーオレンジ（Citrus aurantium）、タンジェリン（Citrus reticlata Blanco var. tangerine）、マンダリン（Citrus reticlata Blanco var. mandarin）、シイクワシャー（Citrus depressa Hayata）から選ばれる１種または２種以上であり、更に詳しくは、第一の揮発性成分の蒸留による除去工程が圧力１〜１００Ｐａかつ温度１２０〜２２０℃の条件であり、第二の薄膜減圧蒸留装置での蒸留工程が圧力０.４〜２Ｐａかつ温度１９０〜２６０℃の条件であり、エタノール水溶液での抽出工程が、エタノール濃度が１０〜５０％、エタノール水溶液を活性炭に接触させることを特徴とする。【００２２】
さらに、ポリメトキシフラボン類が、下記一般式（Ｉ）：
【化２】
2011092840.tif 000003
（式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、及びＲ5は各々独立して水素又はメトキシ基である）で表される化合物、より具体的にはポリメトキシフラボン類が、ペンタメトキシフラボン、ノビレチン、テトラメトキシフラボン、タンゲレチン、ヘプタメトキシフラボンからなる群より選ばれた少なくとも１種であることを特徴とする。【００２３】
また、本発明は、上記の製造方法により製造されたポリメトキシフラボン類を７０質量％以上、好適には８０質量％以上含有するポリメトキシフラボン類組成物であり、また、該ポリメトキシフラボン類組成物を含有することを特徴とする経口組成物である。
【発明の効果】
【００２４】
本発明によれば、入手しやすい原材料のみかん属植物の果皮油から、純度の高いポリメトキシフラボン類を一度に大量に他の成分から分離でき、安価で食品に使用可能な安全性の高い、さらには経時安定性が高く、汎用性のあるポリメトキシフラボン類の製造方法を提供することができる。
さらに、ポリメトキシフラボン類が高純度であるが、活性炭処理によって残留農薬の量も顕著に低減されている。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
本発明は、(a)みかん属植物の果皮油に含まれる揮発性成分を蒸留によって除去して蒸留残渣を得る工程、(b)その残渣を薄膜減圧蒸留装置で蒸留して留分を得る工程、(c)その留分をエタノール水溶液で抽出して抽出物を得る工程、および(d)その抽出物に含まれる不溶なオイルを除去した後の抽出物を活性炭に接触させて精製する工程を含むことを特徴とする、経時安定性に優れ且つ残留農薬の量が低減されたポリメトキシフラボン類の製造方法である。
【００２６】
本発明のポリメトキシフラボン類を含有する製剤の形態は、用途に応じて水溶性製剤、油溶性製剤、粉末製剤のいずれの形態を採用することができる。
本発明の水溶性製剤に用いる溶剤は、水、アルコール、グリセリン、プロピレングリコール、トリエチルシトレート等の（混合）溶剤に適当な濃度で溶解させて製剤とする。製剤の安定性の観点から、水とエタノールの混合溶剤が好ましい。
本発明の油溶性製剤は、食用油脂に溶解或いは分散して用いられる。本発明で用いられる食用油脂は、特に限定されることはなく、例えばアボガド油、いわし油、オリーブ油、カカオ脂、カポック油、けし油、ごぼう子油、ごま油、こめ油、小麦胚芽油、さば油、さんま油、牛脂、大豆油、たら油、月見草油、つばき油、とうもろこし油、なたね油、ババスウ油、パーム油、パーム核油、マローオイル、綿実油、メンマオイル、やし油、落花生油、ラードなどの動植物由来の油脂、これらの精製油脂或いは水素添加した硬化油脂などが例示され、製剤の安定性の観点から中鎖脂肪酸トリグリセライドが好ましい。
本発明の粉末製剤で用いられる乳化剤は、乳化剤であれば特に限定されることはないが、アラビアガム、化工澱粉、トラガントガム、グアーガム、カラヤガム、キサンタンガム、ペクチン、アルギン酸及びその塩類、カラギーナン、微結晶セルロース等が例示され、製剤化のしやすさ、安定性の観点からアラビアガムが好ましい。
【００２７】
本発明のポリメトキシフラボン類を含有する食品の形態は、カプセル、顆粒状、錠剤、ペースト状又は飲料の形態などであってもよい。また、該ポリメトキシフラボン類は、必要に応じて、公知の製剤添加剤などと混合することができる。
【００２８】
公知の製剤添加剤としては、賦形剤、基剤、結合剤、崩壊剤、崩壊補助剤、滑沢剤、流動化剤、コーティング剤、可塑剤、消泡剤、糖衣剤、剤皮、光沢化剤、発泡剤、防湿剤、界面活性剤、可溶化剤、緩衝剤、溶解剤、溶解補助剤、溶剤、安定化剤、乳化剤、懸濁剤、分散剤、抗酸化剤、充填剤、粘稠剤、粘稠化剤、ｐＨ調整剤、防腐剤、保存剤、甘味剤、矯味剤、清涼化剤、着香剤・香料、芳香剤、着色剤などが挙げられる。
【００２９】
また、その他、ＤＨＡ（ドコサヘキサエン酸）、ＥＰＡ（エイコサペンタエン酸）、ホスファチジルセリン、ホスファチジルコリン、大豆レシチン、卵黄レシチン、トコトリエノール、ＧＡＢＡ（γ−アミノ酪酸）、テアニン、リコピン、ヤマブシタケ、イチョウ葉、明日葉、ホップ、菊の花、ガジュツ、サフラン、ニンニク、発芽玄米、ビタミンＣ、ビタミンＥ、コエンザイムＱ10、ローヤルゼリー、プロポリス、コラーゲン、植物ステロール、植物性油脂類（オリーブ油、大豆油など）、不飽和脂肪酸、ミツロウ、亜鉛酵母、セレン酵母等と配合してもよい。
【００３０】
以下に本発明の実施形態について説明する。
〔１〕ポリメトキシフラボン類およびその原材料：
本発明で抽出・分離されるポリメトキシフラボン類は、下記一般式（Ｉ）：
【化３】
2011092840.tif 000004
（式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、及びＲ5は各々独立して水素又はメトキシ基である）で表される化合物であり、具体的には、ペンタメトキシフラボン（Mp １７９℃）、ノビレチン（Mp １３４℃）、テトラメトキシフラボン（Mp １２８℃）、ヘプタメトキシフラボン（Mp １２９〜１３１℃）、タンゲレチン（Mp １５４℃）が該当する。
【００３１】
上記ポリメトキシフラボン類は、みかん属植物の外果皮に含まれる果皮油中に多く含有されている。中でも、入手の容易さの観点から特にスイートオレンジ（Citrus sinensis）、サワーオレンジ（Citrus aurantium）、タンジェリン（Citrus reticlata Blanco var. tangerine）、マンダリン（Citrus reticlata Blanco var. mandarin）、シイクワシャー（Citrus depressa Hayata）の果皮油を原材料として用いることが好ましい。果皮油の採取方法は特に限定されるものではないが、例えば、果皮を冷時又は常温下で圧搾して果皮油（コールドプレスオイル）を得る方法が挙げられる。また、テルペンカットされたオイル、例えば、オレンジ果皮油から工業的に生産されている天然リモネンの残渣や、香料素材となる低〜中沸点画分を得た残渣も使用可能である。
【００３２】
〔２〕揮発性成分の除去工程
果皮油中の揮発性成分は常圧又は減圧蒸留によって除去されるが、なるべく低い温度で揮発性成分を除去するという観点から減圧蒸留が好ましい。減圧蒸留は、単蒸留、精留、分子蒸留等一般的な方法で行うことができる。
また、リモネン（bp １７５〜１７６℃）等の揮発性が特に高い低沸点成分を予め蒸留（好ましくは圧力１０００〜１００００Ｐａで温度５０〜２００℃の条件）で除去する前処理を行い、次いで得られた残液を本工程に付する、すなわち高真空の条件で蒸留して残液中に残存する難揮発性成分を十分に除去する多段階蒸留が純度の高い製品が得られる点で望ましい。
【００３３】
この揮発性成分除去工程における蒸留は、圧力が１〜１００Ｐａで蒸留温度が１２０〜２２０℃で行われる減圧蒸留が好ましく、特に圧力が１０〜５０Ｐａで蒸留温度が１６０〜２００℃が好ましい。１２０℃未満では揮発性成分が十分に除去できない傾向にあり、一方、２２０℃を超えるとポリメトキシフラボン類が一部留去してしまうためである。
【００３４】
ここで、本発明において、果皮油から除去する揮発性成分とは、果皮油中に含まれるリモネン、リナロール（bp198℃）、ゲラニオール（bp229〜230℃）、ネロール（bp225〜226℃）、α−タピネオール（bp217〜218℃）、シトラール（bp229℃）等の炭化水素化合物類、カルボニル化合物類、エステル類、アルコール類、その他香気成分であり、前記ポリメトキシフラボン類よりも揮発度の高い、すなわち沸点のより低い成分をいう。
【００３５】
〔３〕薄膜減圧蒸留装置による蒸留工程
本工程は、先の揮発性成分除去工程による蒸留除去後の残渣（以下「蒸留残渣」という）をさらに薄膜減圧蒸留装置で蒸留してポリメトキシフラボン類を留出（以下「蒸留残渣留分」という）させて分離する工程である。
本工程において用いられる蒸留は薄膜蒸留で行う。薄膜蒸留とは、ある一定の温度に加熱された面上に被蒸留物（前記蒸留残渣）を連続的に供給して均一な薄膜を形成させ、該被蒸留物をその面上にある間だけ加熱し、揮発性成分を蒸発させることにより揮発性成分と不揮発性成分を分離する蒸留方法である。
【００３６】
本工程において、圧力および温度条件は０.１〜５Ｐａ、１９０〜２６０℃、好ましくは０.４〜２Ｐａ、１９０〜２６０℃で行われる。１９０℃未満ではポリメトキシフラボン類の留出に時間がかかり、一方、２６０℃を超えるとポリメトキシフラボン類以外の成分が留出してしまい、ポリメトキシフラボン含量が低下してしまう。
【００３７】
〔４〕エタノール水溶液による抽出工程
本工程は、先の蒸留残渣留分をエタノール水溶液で抽出してポリメトキシフラボン類を蒸留残渣から選択的に抽出する工程である。
本工程において、エタノール水溶液のエタノール濃度は１０〜５０％であり、好ましくは２０〜４０％である。エタノール濃度が５０％を超える場合には、ポリメトキシフラボン類と共に多くの夾雑物が抽出されてしまう傾向にあり、一方、１０％未満ではポリメトキシフラボン類の回収率が低下するため不適である。
【００３８】
本工程において用いるエタノール水溶液の量は任意に選択できるが、一般には蒸留残渣留分１重量部に対し、エタノール水溶液１〜１００重量部であり、好ましくは２〜２０重量部がさらに望ましい。抽出温度は、任意に選択できるが、４０℃〜１００℃が好ましい。
【００３９】
〔５〕活性炭による精製工程
本工程は、先のエタノール抽出液から不要な成分、特に残留農薬を選択的に除去、精製する工程である。
本発明において用いる活性炭としては、一般に工業レベルで使用されているものであれば特に限定されない。
活性炭は大きな比表面積と吸着能をもつ多項質の炭素質物質であるため吸着剤として用いられるものである。原料の木炭、ヤシがら、石炭チャー等を十分に炭化した後、水蒸気による高温処理あるいは塩化亜鉛等の水溶液の含浸と高温焼成などの方法で賦活し製造されている。一般に、比表面積は８００〜１２００ｍ２・ｇ−１、細孔容積０．２〜２ｃｍ３・ｇ−１、細孔径１〜４ｎｍである。活性炭の組成は炭素を主成分とするが他に少量の水素、酸素、無機成分を含み、化学構造はグラファイトを基本とするが無定形で表面にヒドロキシル基、キノン基などの官能基を持っている。
本発明において用いる活性炭として、例えば、太閤（フタムラ化学社製）、白鷺（キリン協和フーズ社製）、クラレコール（クラレケミカル社製）などの市販品を用いることができる。
【００４０】
本工程における活性炭処理の条件としては、特に限定されることはないが、農薬の除去、ポリメトキシフラボン類の回収率の観点から、活性炭使用量がポリメトキシフラボン類１質量部に対し、活性炭０．０１〜０．３質量部、処理温度が３０〜８０℃が好ましい。水溶性製剤では、農薬の除去、製剤の安定性、ポリメトキシフラボン類の回収率の観点から、活性炭量がポリメトキシフラボン類１質量部に対し、活性炭０．０１〜０．３質量部、処理温度が３０〜８０℃、処理時間は９０分間以上が好ましい。
【００４１】
以上述べた製造方法によって得られるポリメトキシフラボン類は、各種のポリメトキシフラボン化合物の混合物のままであっても、食品の呈味改善剤又は香味劣化抑制剤等として使用することができる。
従って、みかん属植物の果皮油からポリメトキシフラボン類だけを他の成分から分離できればよい場合が多く、必ずしもポリメトキシフラボン類の個々の成分を化合物ごとに単離精製する必要はない。
【００４２】
ただし、純度の高いポリメトキシフラボン類、例えばヘプタメトキシフラボン等の単品が必要な場合は、再結晶法またはカラムクロマトグラフィー法により容易に精製することが可能であり、必要に応じて当業者間で公知である適切な精製法を適宜選択して使用することができる。
【実施例】
【００４３】
本発明を以下の実施例を用いてさらに詳細に説明するが、以下の実施例は例示の目的にのみ用いられ、本発明はこれによって限定されるものではない。
〔測定例〕
市販のオレンジ果皮油（FISCHER S/A社製「ORANGE PEEL OIL」）を酢酸エチルで５倍希釈し、以下の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いてポリメトキシフラボン類の含有成分量について定量した。
定量した結果を以下の表１に示す。なお、本実験例で用いたＨＰＬＣの条件を以下に示す：
装置：アジレント・テクノロジー株式会社製「Agilent 1100 HPLC システム」
カラム：株式会社資生堂製「CAPCELL PAK C18MG」（カラム温度：40℃）
溶離液：Ａ. アセトニトリル
Ｂ. 10％アセトニトリル水溶液（pH2.5 H3PO4）
グラジエント条件： ０分   →  ２５分
Ａ. アセトニトリル ０％ 100％
Ｂ. 10％アセトニトリル水溶液
（ｐＨ2.5 H3PO4）    100％ ０％
流速： １ml／分間
検出波長： 325nm【００４４】
各成分の含有量は、予め単離した純品で作成した検量線を用いて算出した。表１のポリメトキシフラボン類の含量は、ペンタメトキシフラボン、ノビレチン、テトラメトキシフラボン、ヘプタメトキシフラボン、タンゲレチンの含有量の総和を示す。【００４５】
【表１】
2011092840.tif 000005
【００４６】
〔前処理〕
市販のオレンジ果皮油を各種蒸留方式、圧力条件で減圧蒸留を行い、リモネン等の揮発性が特に高い低沸点成分を除去した。
このようにして得られた留分及び蒸留残渣を分析した結果を表２に示す。
表中で「ＰＭＦ回収率」とは、オレンジ果皮油中に含まれるポリメトキシフラボン類の釜残液への回収率を示し、下記計算式（Ｉ）を用いて算出した。
回収率（％）＝（ｃ×ｄ）／（ａ×ｂ）×１００（％） （Ｉ）
〔式中ａ：蒸留に使用した油の重量（kg）
ｂ：蒸留に使用した油のポリメトキシフラボン（類）の含量（％）
ｃ：蒸留残渣の重量（kg）
ｄ：蒸留残渣のポリメトキシフラボン（類）の含量（％）〕【００４７】
【表２】
2011092840.tif 000006
【００４８】
表２に示した結果から明らかなように、香気成分の前処理除去工程は、蒸留方式にかかわらず定量的なポリメトキシフラボン類の回収の実施が可能であり、ミカン科植物から有益な香気成分を採取した廃棄物から、機能性素材であるポリメトキシフラボン類を調製できるという、経済的にも優れた技術であることが示された。【００４９】
〔蒸留例〕
前処理の蒸留で得られた釜残液１００ｇを各種の温度、圧力条件で減圧蒸留を行い、揮発性成分を除去した。
このようにして得られた留分及び蒸留残渣を分析した結果を表３に示す。【００５０】
表中で「収率」は減圧蒸留で得られた留分および蒸留残渣の重量を前処理蒸留の釜残液重量の百分率で表し、ポリメトキシフラボン類の回収率とは、オレンジ果皮油中に含まれるポリメトキシフラボン類の釜残液への回収率を示し、下記計算式（Ｉ）を用いて算出した。
回収率（％）＝（ｃ×ｄ）／（ａ×ｂ）×１００（％） （Ｉ）
〔式中ａ：蒸留に使用した油の重量（kg）
ｂ：蒸留に使用した油のポリメトキシフラボン（類）の含量（％）
ｃ：蒸留残渣の重量（kg）
ｄ：蒸留残渣のポリメトキシフラボン（類）の含量（％）〕【００５１】
また、蒸留により得られた蒸留残渣２５ｇに３０％エタノール水溶液を５００ｇ加え、１時間かけて加熱還流し抽出を行った。２５℃まで冷却後、上層のオイル部とエタノール水溶液層を分液した。エタノール水溶液層を濾過後、減圧濃縮乾固することにより得られたポリメトキシフラボン類を５０％エタノール水溶液で１％に希釈し、希釈液をグルコースの１０％水溶液に０.１％添加することにより異味異臭の有無を評価した結果を表３に示す。【００５２】
【表３】
2011092840.tif 000007
【００５３】
表３に示したように、蒸留温度が２００℃を超える場合は、留分にポリメトキシフラボン類が留出してしまい、蒸留残渣のポリメトキシフラボン類の回収率が低下してしまう。一方、蒸留温度が１６０℃以下ではオレンジ様の香気が残ってしまう。【００５４】
〔実施例１〕
（１）揮発性成分の除去工程
測定例で用いた市販のオレンジ果皮油１０００kgを、前処理として、圧力１３３０Ｐａ、釜温度１５０℃にて減圧蒸留を行い、リモネン等の低沸点成分が除去された釜残液５０kgを得た。
上記前処理で得られた釜残液５０ｋｇを圧力４０Ｐａ、温度１９０℃で、薄膜蒸留装置（アルバックテクノ株式会社製「CEH-400BII」）を用いて蒸留を行い、難揮発性成分が除去された蒸留残渣２５.６ｋｇを得た。
得られた蒸留残渣を酢酸エチルで１０００倍に希釈し、測定例と同条件で測定した。その結果を表４に示す。【００５５】
なお、回収率とは、オレンジ果皮油中に含まれるポリメトキシフラボン類の蒸留残渣への回収率を示し、下記計算式（Ｉ）を用いて算出した。
回収率（％）＝（ｃ×ｄ）／（ａ×ｂ）×１００（％） （Ｉ）
〔式中ａ：蒸留に使用した油の重量（kg）
ｂ：蒸留に使用した油のポリメトキシフラボン（類）の含量（％）
ｃ：蒸留残渣の重量（kg）
ｄ：蒸留残渣のポリメトキシフラボン（類）の含量（％）〕【００５６】
【表４】
2011092840.tif 000008
【００５７】
表４に示したように、揮発性成分の除去工程では、ポリメトキシフラボン類は損失することなく、オレンジ果皮油から蒸留残渣中に回収された。以下に示すポリメトキシフラボン類分離工程は、上記の揮発性成分の除去工程で得られた蒸留残渣を用いて行った。【００５８】
〔実施例２〕
（２）薄膜減圧蒸留装置による蒸留工程
揮発性成分除去工程で得られた蒸留残渣１５０ｇを圧力２Ｐａ、温度２１０℃で、薄膜減圧蒸留装置（大科工業株式会社製「MS-F」）を用いて蒸留を行い、ポリメトキシフラボン類を５６ｇ得た。得られたポリメトキシフラボン類は、橙黄色の粘性の高いペースト状のオイルであった。
このようにして得られたポリメトキシフラボン類を９９.５％アルコール水溶液で１０００倍希釈し、前記の測定例と同条件で固形分中のポリメトキシフラボン類の含量を測定した結果を表５に示す。なお、回収率とは前処理蒸留で得られた蒸留残渣からのポリメトキシフラボン（類）の回収率を示しており、揮発性成分除去工程における回収率の計算と同様にして算出した。【００５９】
【表５】
2011092840.tif 000009
【００６０】
表５に示したように容易にかつ高含有のポリメトキシフラボン類組成物を高い回収率で製造することが可能であった。【００６１】
〔実施例３〕
（１）揮発性成分の除去工程
実施例１の揮発性成分除去工程と全く同様の処理を行って揮発性成分が除去された蒸留残渣２５.６ｋｇを得た。【００６２】
（２）薄膜減圧蒸留装置による蒸留工程
得られた蒸留残渣１００ｇを圧力は０.４Ｐａに設定し、各種温度条件で薄膜減圧蒸留を行った。このようにして得られた留分を、実施例１と同条件で分析した結果を表６に示す。なお、回収率は減圧蒸留で得られた留分の重量を揮発性成分除去工程の釜残液重量の百分率で表し、ポリメトキシフラボン類の回収率は揮発性成分除去工程における回収率と同様な方法を用いて算出した。【００６３】
【表６】
2011092840.tif 000010
【００６４】
表６に示したように、蒸留温度が２６０℃を超える場合は、ポリメトキシフラボン類以外の成分が留出してしまい、ポリメトキシフラボン類の含量が低下してしまう。一方、蒸留温度が１９０℃以下ではポリメトキシフラボン類の回収率が低下してしまう。【００６５】
〔実施例４〕エタノール水溶液による抽出工程
実施例２で得られたポリメトキシフラボン類１０gにエタノール水溶液を１００ｇ加え、６０℃に加温して１時間攪拌抽出を行った。−１５℃まで冷却後、上層のオイル部とエタノール水溶液層を分液し、エタノール水溶液層をろ過した。得られたポリメトキシフラボンを実施例１と同条件で分析した結果を表７に示す。なお、表中の含量とは、エタノール水溶液に溶解しているオイルに対するポリメトキシフラボン類の割合を示す。【００６６】
【表７】
2011092840.tif 000011
【００６７】
表７に示された結果から、抽出に使用するエタノール濃度が１０％の場合には分離されるポリメトキシフラボン類の純度は高いものの、回収率が３３％と低く非効率であった。
一方、エタノール濃度が６０％以上の場合には、分離されるポリメトキシフラボン類の回収率は９７〜９９％と高いものの、純度は２５〜６４％と低かった。【００６８】
〔実施例５〕活性炭による精製工程
実施例４の４０重量％のエタノールを用いて得られた抽出液１００ｇを６０℃に加温して、活性炭（フタムラ化学社製「太閤」）０．１ｇ（ポリメトキシフラボン類に対して４重量％）を加え攪拌し、上澄みをサンプリングし、０．４５μｍメンブレンフィルターろ過し、得られたろ液中のポリメトキシフラボンを実施例１と同条件で分析した結果を表８に示す。表８中の回収率とは、活性炭処理工程でのポリメトキシフラボン類の回収率を示す。【００６９】
【表８】
2011092840.tif 000012
【００７０】
表８の結果から、活性炭の処理時間を９０分間以上にすることで、ポリメトキシフラボン類をロスすることなく回収することが出来た。【００７１】
〔実施例６〕
実施例４の３０重量％のエタノールを用いて得られた抽出液を濃縮後、エタノール、水を加えてポリメトキシフラボン類１０％、水２０％、エタノール３０％の組成になるように抽出液を調整した。
このようにして得られた抽出液１００ｇを５０℃に加温して、活性炭（フタムラ化学社製「太閤」）を加え１２０分間攪拌し、セライトろ過して活性炭処理液を得た。
得られたろ液は、室温、暗所で1日間保管し、沈殿の有無を確認した。
ろ液中のポリメトキシフラボンを実施例１と同条件で分析した結果を表９に示す。表９中の回収率とは、活性炭処理工程でのポリメトキシフラボン類の回収率を示す。【００７２】
【表９】
2011092840.tif 000013
【００７３】
表９に示したように、活性炭を使用しないと経時的に沈殿が生じるのに対して、活性炭をポリメトキシフラボン類に対して５〜２０重量％使用すると、高回収率で経時的に安定な液が得られた。
一方、活性炭をポリメトキシフラボン類に対して４０％使用すると、ポリメトキシフラボン類の回収率が低下し、経時的に沈殿が生じた。【００７４】
〔実施例７〕
実施例４の４０重量％エタノールで得られた抽出液１００ｇを、５℃又は５０℃に温度調整し、活性炭１ｇ（ポリメトキシフラボン類に対して１０重量％）を加え１２０分間攪拌し、セライトろ過して活性炭処理液を得た。
得られたろ液は、室温、暗所で1日間保管し、沈殿の有無を確認した。
ろ液中のポリメトキシフラボンを実施例１と同条件で分析した結果を表１０に示す。表１０中の回収率とは、活性炭処理工程でのポリメトキシフラボン類の回収率を示す。【００７５】
【表１０】
2011092840.tif 000014
【００７６】
表１０に示したように、５０℃で活性炭処理することにより、ポリメトキシフラボンをロスすることなく安定性の高いろ液を得ることが出来た。一方、５℃で処理すると、ポリメトキシフラボン類のロスは無いが、安定性は向上しなかった。【００７７】
〔残存農薬の低減試験〕
（１）残留農薬分析用サンプルの作成
（ａ）薄膜蒸留留分
実施例２の薄膜減圧蒸留装置による蒸留工程で得られた留分に中鎖脂肪酸トリグリセライドを加え、ポリメトキシフラボン類１０％の溶液を調製した。
（ｂ）活性炭処理溶液
実施例２の薄膜減圧蒸留装置による蒸留工程で得られた留分５０ｇに４０重量％のエタノール水溶液を５００ｇ加え、６０℃に加温して６０分間攪拌抽出した。
−１５℃に冷却後、エタノール水溶液層をろ過し、ろ液を得た。
このようにして得られた抽出液１００ｇを５０℃に加温して、活性炭（フタムラ化学社製「太閤」）０．２５ｇ（ポリメトキシフラボン類に対して１０重量％）を加え１２０分間攪拌し、セライトろ過、濃縮後、エタノール、水を加えてポリメトキシフラボン類が１０％含有するように抽出液を調製し、溶液に残留する農薬を分析した。
残留農薬分析結果を表１１に示す。表１１中の値は、残留農薬分析用サンプル中の濃度（ppm）を示す。なお、残留農薬の分析は財団法人食品分析開発センター（SUNATEC）が行い、２００成分の一斉分析を実施した結果である。【００７８】
【表１１】
2011092840.tif 000015
【００７９】
表１１に示すように、薄膜蒸留留分には残留農薬が残留しているのに対して、エタノール水溶液で抽出し活性炭で処理することにより、残留農薬が大幅に低減または除去されていた。【００８０】
〔実施例８〕油溶性製剤
実施例７の５０℃で活性炭処理して得られたろ液７４０ｇを、濃縮して水、エタノールを除去後、中鎖脂肪酸トリグリセライドを加え、ポリメトキシフラボン類を１０％含有する油溶性製剤１４０ｇを得た。
このようにして得られた油溶性製剤は、流動性の高い液状組成物であり、安定性が高い製剤であった。【００８１】
〔実施例９〕
実施例８で得られた油溶性製剤を用いて、常法に従って、下記の表１２の組成を有するソフトカプセル形状の食品を調製した。【００８２】
【表１２】
2011092840.tif 000016
【００８３】
〔実施例１０〕水溶性製剤の調製
本発明のポリメトキシフラボン類を使用して以下のように水溶性製剤を調製した。
実施例７の５０℃で活性炭処理して得られた溶液を９９ｇを濃縮し、エタノールを加えポリメトキシフラボン類が１０％になるように調整し、エタノール製剤２１ｇを得た。
このようにして得られた水溶性製剤は、異味・異臭がなく、粘性の低い黄色の液体で、かつ安定性の高い製剤であった。【００８４】
〔実施例１１〕オレンジ飲料の調製
以下の表１３の処方に従ってオレンジ飲料を調製した。【００８５】
【表１３】
2011092840.tif 000017
【００８６】
当該飲料を試飲したところ、異味異臭が感じられない美味な飲料であった。【００８７】
〔実施例１２〕乳化粉末製剤
アラビアガム１重量部を水9重量部に加温溶解させた後、実施例１０で得られた水溶性製剤に添加し、濃縮してエタノールを除去し、噴霧乾燥してポリメトキシフラボン類を１０％含有する乳化粉末製剤を調製した。この粉末製剤は、流動性があり、かつ安定性の高い製剤であった。【００８８】
〔実施例１３〕
実施例１２で得られた粉末製剤を用いて、常法に従って、下記の表１４の組成を有する錠剤を調製した。【００８９】
【表１４】
2011092840.tif 000018
【００９０】
当該錠剤を試食したところ、何ら異味異臭を感じることなく食することができた。
【産業上の利用可能性】
【００９１】
本発明により、蒸留（特に減圧蒸留）及び減圧薄膜蒸留による精製、エタノール水溶液での抽出、活性炭処理を組み合わせたことにより、みかん属植物の果皮油から残留農薬等の不純物が少なく異味異臭のないポリメトキシフラボン類を簡便にしかも非常に効率よく分離することができる。また、本発明により食品に使用可能な安価で且つ安全性の高いポリメトキシフラボン類を工業的に得ることが可能となる。さらに、本発明を適用すれば、これまで廃棄されていたリモネン等のテルペン類及びテルペン類を除いた精油（テルペンレスオイル）採取後のオレンジ果皮油残渣を利用することも可能となり、資源の有効利用に多大な貢献をすることができる。
【手続補正書】
【提出日】平成24年12月26日(2012.12.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
みかん属植物の果皮油からポリメトキシフラボン類を製造する方法であって、みかん属植物の果皮油に含まれる揮発性成分を蒸留によって除去して蒸留残渣（１）を得る工程、その残渣を薄膜減圧蒸留装置で蒸留して留分（２）を得る工程、その留分をエタノール水溶液で抽出して抽出物（３）を得る工程、およびその抽出物に含まれる不溶なオイルを除去した後の抽出物を活性炭に接触させて精製する工程を含むことを特徴とする、下記一般式（Ｉ）
【化１】
2011092840.tif 000020
（式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、及びＲ5は各々独立して水素又はメトキシ基である）で表される経時安定性に優れ且つ残留農薬の量が低減されたポリメトキシフラボン類の製造方法。
【請求項２】
みかん属植物の果皮油が、テルペンカットされたものであることを特徴とする、請求項１記載のポリメトキシフラボン類の製造方法。
【請求項３】
揮発性成分を蒸留によって除去して蒸留残渣（１）を得る工程が、圧力１〜１００Ｐａおよび温度１２０〜２２０℃の条件であることを特徴とする、請求項１又は２に記載のポリメトキシフラボン類の製造方法。
【請求項４】
揮発性成分を蒸留によって除去して蒸留残渣（１）を得る工程が、最初に圧力１０００〜１００００Ｐａおよび温度５０〜２００℃の条件で蒸留に付して残渣(１ａ)を得、次い
で残渣(１ａ)を圧力１〜１００Ｐａおよび温度１２０〜２２０℃の条件で蒸留に付して残渣(１)を得ることを特徴とする、請求項１記載のポリメトキシフラボン類の製造方法。
【請求項５】
薄膜減圧蒸留装置で蒸留して留分（２）を得る工程が、圧力０.１〜５Ｐａおよび温度１９０〜２６０℃の条件であることを特徴とする請求項１〜４のいずれかの項に記載のポリメトキシフラボン類の製造方法。
【請求項６】
エタノール水溶液で抽出して抽出物（３）を得る工程が、エタノール水溶液のエタノール濃度が１０〜５０％で行われることを特徴とする請求項１〜５のいずれかに記載の記載のポリメトキシフラボン類の製造方法。
【請求項７】
みかん属植物がスイートオレンジ（Citrus sinensis）、サワーオレンジ（Citrus aurantium）、タンジェリン（Citrus reticlata Blanco var. tangerine）、マンダリン（Citrus reticlata Blanco var. mandarin）、シイクワシャー（Citrus depressa Hayata）から選ばれる１種または２種以上であることを特徴とする請求項１〜６のいずれかの項に記載のポリメトキシフラボン類の製造方法。
【請求項８】
ポリメトキシフラボン類が、ペンタメトキシフラボン、ノビレチン、テトラメトキシフラボン、タンゲレチン、ヘプタメトキシフラボンからなる群より選ばれた少なくとも１種である請求項１〜７のいずれかの項に記載の製造方法。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれかの項に記載のポリメトキシフラボン類の製造方法により製造されたポリメトキシフラボン類を８０質量％以上含有するポリメトキシフラボン類組成物。
【請求項１０】
請求項９記載のポリメトキシフラボン類組成物を含有することを特徴とする経口組成物。
【請求項１１】
請求項９記載のポリメトキシフラボン類組成物に乳化剤を適用して粉末化したことを特徴とするポリメトキシフラボン類の粉末製剤。
【請求項１２】
請求項９記載のポリメトキシフラボン類組成物およびエタノールを含有することを特徴とするポリメトキシフラボン類の水溶性製剤。
【請求項１３】
請求項９記載のポリメトキシフラボン類組成物および食用油脂を含有することを特徴とするポリメトキシフラボン類の油溶性製剤。
【国際調査報告】
2011092840.tif 000021
2011092840.tif 000022
2011092840.tif 000023
2011092840.tif 000024