(57)【要約】  広範囲の飲料および食品に適用可能な、ポリフェノール類化合物の吸収促進剤及びポリフェノール類化合物を含有する飲食品又は飲食品素材の製造方法を提供する。  セリン、アスパラギン酸、リンゴ酸、カプリン酸、ラウリン酸、グレープフルーツ果汁、及びべにふうきエキスからなる群から選ばれた少なくとも１種をポリフェノール類化合物の吸収促進剤の有効成分とする。また、ポリフェノール類化合物を含有する飲食品又は飲食品素材の製造方法において、ポリフェノール類化合物を含有する飲食品用原料又は飲食品素材用原料に、セリン、アスパラギン酸、リンゴ酸、カプリン酸、ラウリン酸、グレープフルーツ果汁、及びべにふうきエキスからなる群から選ばれた少なくとも１種を添加するか、又はセリン、アスパラギン酸、リンゴ酸、カプリン酸、ラウリン酸、グレープフルーツ果汁、及びべにふうきエキスからなる群から選ばれる少なくとも１種を含む飲食品用原料又は飲食品素材用原料に、ポリフェノール類化合物を添加する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記（１）〜（７）からなる群から選ばれた少なくとも１種を有効成分とすることを特徴とするポリフェノール類化合物の吸収促進剤。
（１）セリン又はその塩類
（２）アスパラギン酸又はその塩類
（３）リンゴ酸又はその塩類
（４）カプリン酸、その塩類又はそのエステル類
（５）ラウリン酸、その塩類又はそのエステル類
（６）グレープフルーツ果汁
（７）べにふうきエキス
【請求項２】
前記ポリフェノール類化合物が、フラボノイド類化合物である請求項１記載の吸収促進剤。
【請求項３】
前記ポリフェノール類化合物が、カテキン類化合物である請求項１記載の吸収促進剤。
【請求項４】
前記ポリフェノール類化合物が、カテキン、エピカテキン、ガロカテキン、エピガロカテキン、カテキンガレート、エピカテキンガレート、ガロカテキンガレート、エピガロカテキンガレート及びそれらのメチル化体からなる群から選ばれた少なくとも１種を含むカテキン類化合物である請求項１記載の吸収促進剤。
【請求項５】
ポリフェノール類化合物を含有する飲食品用原料又は飲食品素材用原料に、下記（１）〜（７）からなる群から選ばれた少なくとも１種を添加する工程を含むことを特徴とするポリフェノール類化合物を含有する飲食品又は飲食品素材の製造方法。
（１）セリン又はその塩類
（２）アスパラギン酸又はその塩類
（３）リンゴ酸又はその塩類
（４）カプリン酸、その塩類又はそのエステル類
（５）ラウリン酸、その塩類又はそのエステル類
（６）グレープフルーツ果汁
（７）べにふうきエキス
【請求項６】
下記（１）〜（７）からなる群から選ばれた少なくとも１種を含む飲食品用原料又は飲食品素材用原料に、ポリフェノール類化合物を添加する工程を含むことを特徴とするポリフェノール類化合物を含有する飲食品又は飲食品素材の製造方法。
（１）セリン又はその塩類
（２）アスパラギン酸又はその塩類
（３）リンゴ酸又はその塩類
（４）カプリン酸、その塩類又はそのエステル類
（５）ラウリン酸、その塩類又はそのエステル類
（６）グレープフルーツ果汁
（７）べにふうきエキス
【請求項７】
前記ポリフェノール類化合物が、フラボノイド類化合物である請求項５又は６記載の製造方法。
【請求項８】
前記ポリフェノール類化合物が、カテキン類化合物である請求項５又は６記載の製造方法。
【請求項９】
前記ポリフェノール類化合物が、カテキン、エピカテキン、ガロカテキン、エピガロカテキン、カテキンガレート、エピカテキンガレート、ガロカテキンガレート、エピガロカテキンガレート及びそれらのメチル化体からなる群から選ばれた少なくとも１種を含むカテキン類化合物である請求項５又は６記載の製造方法。
【請求項１０】
ポリフェノール類化合物を含有する飲食品用原料又は飲食品素材用原料が、茶エキスである請求項５〜９のいずれか１つに記載の製造方法。
【請求項１１】
前記茶エキスが、緑茶エキスである請求項１０記載の製造方法。
【請求項１２】
べにふうきエキスとその他の茶エキスとを含有することを特徴とする飲食品。
【請求項１３】
前記茶エキスが、緑茶エキスである請求項１２記載の飲食品。
【請求項１４】
チョコレート、ビスケット、ガム、キャンディー、クッキー、グミ、打錠菓子等の菓子類、シリアル、粉末飲料、清涼飲料、乳飲料、栄養飲料、炭酸飲料、ゼリー飲料等の飲料、及びアイスクリーム、シャーベット等の冷菓からなる群から選ばれた一種である請求項１２又は１３記載の飲食品。
【請求項１５】
粉末、顆粒、カプセル、シロップ、タブレット、及び糖衣錠からなる群から選ばれた一種の形態からなる保健用食品又は栄養補助食品である請求項１２又は１３記載の飲食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ポリフェノール類化合物の吸収促進剤、及びその利用に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
緑茶は日本人が古くから親しんできた飲料であり、近年では容器詰緑茶飲料の普及もあって、非常に多く飲用されている。緑茶には茶カテキンと総称される一群のカテキン類化合物（フラバノール化合物）が含まれており、抗腫瘍効果、抗血小板凝集効果、抗高血圧効果、抗肥満効果 、抗酸化効果など、健康にとって有益な多くの機能を有することが知られている。しかし、カテキン類化合物を経口的に摂取しても一般に吸収率が低く、摂取量の極一部分しか体内に吸収されない。このため、カテキン類化合物の吸収性を高める工夫が多くなされてきた。【０００３】
例えば、下記特許文献１には、緑茶飲料中の茶カテキン濃度を高め、茶カテキンの摂取量を多くすることにより、茶カテキンの吸収量ならびに血中濃度を高める方法が開示されている。しかし、この方法では茶カテキン濃度が高くなることにより、茶カテキンに特有の苦味・渋味が強くなるため、緑茶飲料中に添加できる茶カテキンの量には限界があるほか、原料の茶カテキンを多量に使用することになるため、経済的な負担が増加するなどの問題があった。このほか、下記特許文献２には、飲料中のアルコール沈殿性物質の量を低減することにより茶カテキンの吸収率を高める方法が開示されている。しかし、この方法はアルコール沈殿性物質量を一定の含有量以下とするために精製、酵素処理等の操作を追加しなければならず、製造工程が煩雑になりコストが嵩むという問題があった。また、紅茶飲料中に含まれる茶カテキンのエピ体と非エピ体の含有量を一定の条件を満たすように配合することにより茶カテキンの吸収率を高める方法が知られている（下記特許文献３、及び特許文献４参照）。しかし、エピ体および非エピ体の含有量に関する要件は、一般家庭で飲用される緑茶等では通常満たされており、容器詰飲料のうちの紅茶飲料以外の飲食品への応用は難しいと考えられる。更には、下記特許文献５には、緑茶中のエピガロカテキンガレートおよびカフェインの含有量が所定の関係を満たすように配合することによりエピガロカテキンガレートの吸収を促進する方法が開示されている。しかし、合成吸着剤カラムを用いたクロマト処理等でカフェインを除去する処理を行わなくてはならず、本来の味や風味の成分までも損ねてしまうという問題があった。
【特許文献１】特開２００２−１４２６７７号公報
【特許文献２】特開２００３−１６９６４１号公報
【特許文献３】特開２００３−３３３９８９号公報
【特許文献４】特開２００４−４１１８６号公報
【特許文献５】特開２００７−１５１４６７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
上述したように、緑茶には茶カテキンと総称される一群のカテキン類化合物（フラバノール化合物）が含まれており、抗腫瘍効果[Katiyar SK and Mukhtar H （1996） Int J Oncol 7：133-141； Bu-Tian JI et al. （1997） Int J Cancer 70：255-258； Su LJ and Arab L（2002） Public Health Nutr 5：419-425]、抗血小板凝集効果[Duffy SJ  et al. （2001） Arterioscler Thromb Vasc 21：1084-1089]、抗高血圧効果 [Negishi H et al. （2005） J Nutr 134：38-42]、抗肥満効果 [Nagao T et al.（2005） Am J Clin Nutr 81：122-9； Murase T et al. （2002） Int J Obes 26：1459-64]、抗酸化効果[ Sano M et al. （2003） J  Agric Food Chem 51：2912-2916] など、健康にとって有益な多くの機能を有することが知られている。緑茶中に含まれる主要なカテキン類化合物は、カテキン、エピカテキン、ガロカテキン、エピガロカテキン、カテキンガレート、エピカテキンガレート、ガロカテキンガレート、エピガロカテキンガレートの８種類であるが、その中でも緑茶中のカテキン類化合物の約５０％を占めるエピガロカテキンガレートは、他と比較して高い生理活性を有するとされている。【０００５】
しかし、ポリフェノール類化合物であるカテキン類化合物は一般に吸収率が低く、ことにエピガロカテキンガレートの吸収率は非常に低いため、摂取量の極一部分しか体内に吸収されない [ラットでの研究結果は Chen L et al. （1997） Drug Metab Dispos 25：1045-1050； Zhu M et al. （2000） Planta Med 66：444-447] [ヒトでの研究結果はWarden BA et al. （2001） J Nutr 131：1731-1737； Chow et al. （2001） Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 10：53-58； Vaidyanathan and Walle （2001） Pharm Res （NY） 18：1420-1425]。【０００６】
したがって、本発明の目的は、広範囲の飲料および食品に適用可能で、摂取するポリフェノール類化合物、その中でも特に生理作用が強いエピガロカテキンガレートの吸収性を改善する方法を見出すことであり、これを利用してポリフェノール類化合物、特にカテキン類化合物であるエピガロカテキンガレート（以下、「EGCG」ともいう。）の吸収性が改善された飲食品ならびにその吸収性を改善するための飲食品素材を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記の課題を解決するために、EGCG の吸収効率を高めることができる食品あるいは食品関連成分を探索した。その結果、いくつかの食品あるいは食品関連成分にEGCGの吸収を顕著に促進する効果があることを見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は下記のとおりである。【０００８】
[１] 下記（１）〜（７）からなる群から選ばれた少なくとも１種を有効成分とすることを特徴とするポリフェノール類化合物の吸収促進剤。
（１）セリン又はその塩類
（２）アスパラギン酸又はその塩類
（３）リンゴ酸又はその塩類
（４）カプリン酸、その塩類又はそのエステル類
（５）ラウリン酸、その塩類又はそのエステル類
（６）グレープフルーツ果汁
（７）べにふうきエキス
[２] 前記ポリフェノール類化合物が、フラボノイド類化合物である上記[１]記載の吸収促進剤。
[３] 前記ポリフェノール類化合物が、カテキン類化合物である上記[１]記載の吸収促進剤。
[４] 前記ポリフェノール類化合物が、カテキン、エピカテキン、ガロカテキン、エピガロカテキン、カテキンガレート、エピカテキンガレート、ガロカテキンガレート、エピガロカテキンガレート及びそれらのメチル化体からなる群から選ばれた少なくとも１種を含むカテキン類化合物である上記[１]記載の吸収促進剤。
[５] ポリフェノール類化合物を含有する飲食品用原料又は飲食品素材用原料に、下記（１）〜（７）からなる群から選ばれた少なくとも１種を添加する工程を含むことを特徴とするポリフェノール類化合物を含有する飲食品又は飲食品素材の製造方法。
（１）セリン又はその塩類
（２）アスパラギン酸又はその塩類
（３）リンゴ酸又はその塩類
（４）カプリン酸、その塩類又はそのエステル類
（５）ラウリン酸、その塩類又はそのエステル類
（６）グレープフルーツ果汁
（７）べにふうきエキス
[６] 下記（１）〜（７）からなる群から選ばれた少なくとも１種を含む飲食品用原料又は飲食品素材用原料に、ポリフェノール類化合物を添加する工程を含むことを特徴とするポリフェノール類化合物を含有する飲食品又は飲食品素材の製造方法。
（１）セリン又はその塩類
（２）アスパラギン酸又はその塩類
（３）リンゴ酸又はその塩類
（４）カプリン酸、その塩類又はそのエステル類
（５）ラウリン酸、その塩類又はそのエステル類
（６）グレープフルーツ果汁
（７）べにふうきエキス
[７] 前記ポリフェノール類化合物が、フラボノイド類化合物である上記[５]又は[６]記載の製造方法。
[８] 前記ポリフェノール類化合物が、カテキン類化合物である上記[５]又は[６]記載の製造方法。
[９] 前記ポリフェノール類化合物が、カテキン、エピカテキン、ガロカテキン、エピガロカテキン、カテキンガレート、エピカテキンガレート、ガロカテキンガレート、エピガロカテキンガレート及びそれらのメチル化体からなる群から選ばれた少なくとも１種を含むカテキン類化合物である上記[５]又は[６]記載の製造方法。
[１０] ポリフェノール類化合物を含有する飲食品用原料又は飲食品素材用原料が、茶エキスである上記[５]〜[９]のいずれか１つに記載の製造方法。
[１１] 前記茶エキスが、緑茶エキスである上記[１０]記載の製造方法。
[１２] べにふうきエキスとその他の茶エキスとを含有することを特徴とする飲食品。
[１３] 前記茶エキスが、緑茶エキスである上記[１２]記載の飲食品。
[１４] チョコレート、ビスケット、ガム、キャンディー、クッキー、グミ、打錠菓子等の菓子類、シリアル、粉末飲料、清涼飲料、乳飲料、栄養飲料、炭酸飲料、ゼリー飲料等の飲料、及びアイスクリーム、シャーベット等の冷菓からなる群から選ばれた１種である上記[１２]又は[１３]記載の飲食品。
[１５] 粉末、顆粒、カプセル、シロップ、タブレット、及び糖衣錠からなる群から選ばれた一種の形態からなる保健用食品又は栄養補助食品である上記[１２]又は[１３]記載の飲食品。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、セリン又はその塩類、アスパラギン酸又はその塩類、リンゴ酸又はその塩類、カプリン酸、その塩類又はそのエステル類、ラウリン酸、その塩類又はそのエステル類、グレープフルーツ果汁、及びべにふうきエキスからなる群から選ばれた少なくとも１種をそれぞれ単独あるいは組み合わせて摂取することにより、ポリフェノール類化合物、例えばカテキン類化合物の吸収率を顕著に向上させることができる。したがって、少量の摂取によっても従来と同等あるいはそれ以上の効果を得ることが可能となる。また、吸収率が高まれば、これらの血中濃度を有効濃度に到達させるために必要な飲食品中の配合量を従来よりも少なくすることができるので、ポリフェノール類化合物、例えばカテキン類化合物に特有の苦味・渋味などを感じさせない、又はそれらの低減された、摂取しやすい飲食品を提供することができる。更に、原料として必要な量を減らすことができるので経済的である。【００１０】
これらの食品あるいは食品関連成分はそれぞれ単独でEGCGの吸収を促進する効果を有するが、２種類以上を組み合わせることにより更に大きな吸収促進効果を得ることができる。例えば、べにふうきエキスは単独で吸収促進効果を有するが、特にポリフェノール類化合物の源として茶エキスを摂取する場合には、茶エキス自体に付随した吸収阻害効果を打ち消して、茶エキスからのポリフェノール類化合物の吸収率を顕著に向上させることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】Caco-2細胞の絨毛側へ添加したHBSS溶液中に含有されるEGCG試薬の濃度が47.7 μM、184.9 μM、492.0 μM、又は954.6 μＭであるのときの、漿膜側へ移行したEGCG濃度の経時変化を示す図表である。
【図２】Caco-2細胞の絨毛側へ添加したHBSS溶液中に含有される緑茶エキス由来のEGCG濃度が38.9 μM、169.5 μM、430.2 μM、826.7 μMであるときの、漿膜側へ移行したEGCG濃度の経時変化を示す図表である。
【図３】Caco-2細胞の絨毛側へ添加したEGCG濃度とEGCG吸収速度との関係を示す図表である。
【図４】Caco-2細胞の絨毛側へ異なる濃度のEGCG試薬を添加したときのTEERの経時変化 (吸収実験開始0時間のTEERを100%とした)を示す図表である。
【図５】緑茶エキス溶液（EGCG濃度1 mM）を単回投与した後のラット血漿中EGCG濃度の経時変化を示す図表である（mean±SEM；  無添加群(i)のn = 8、添加群(ii)のn = 3、添加群(iii)のn = 2、添加群(iv)のn = 3）。
【図６】緑茶エキス溶液（EGCG濃度1 mM）を単回投与した後のラット血漿中EGCG濃度×時間（曲線下面積）の経時変化を示す図表である（mean±SEM；  無添加群(i)のn = 8、添加群(ii)のn = 3、添加群(iii)のn = 2、添加群(iv)のn = 3）。
【図７】べにふうきエキス溶液（EGCG濃度1 mM）を単回投与した後のラット血漿中EGCG濃度の経時変化を示す図表である（mean±SEM；  (i)無添加群のn = 6、(ii)40 mM セリン＋80 mMリンゴ酸添加群のn = 2）。
【図８】べにふうきエキス溶液（EGCG濃度1 mM）を単回投与した後のラット血漿中EGCG濃度×時間（曲線下面積）の経時変化を示す図表である（mean±SEM；  (i)無添加群のn = 6、(ii)40 mM セリン＋80 mMリンゴ酸添加群のn = 2）。
【図９】1 mM EGCG試薬溶液を単回投与した後のラット血漿中EGCG濃度の経時変化を示す図表である（mean±SEM；  (i)無添加群のn = 5、(ii)20 mM セリン＋40 mMリンゴ酸添加群のn = 3）。
【図１０】1 mM EGCG試薬溶液を単回投与した後のラット血漿中EGCG濃度×時間（曲線下面積）の経時変化を示す図表である（mean±SEM；  (i)無添加群のn = 5、(ii)20 mM セリン＋40 mMリンゴ酸添加群のn = 3）。
【図１１】べにふうきエキス溶液（EGCG濃度1 mM）又は緑茶エキス溶液（EGCG濃度1 mM）を単回投与した後のラット血漿中EGCG濃度の経時変化を示す図表である。
【図１２】べにふうきエキス溶液（EGCG濃度1 mM）又は緑茶エキス溶液（EGCG濃度1 mM）を単回投与した後のラット血漿中EGCG濃度×時間（曲線下面積）の経時変化を示す図表である。
【図１３】EGCGを含有する各投与液（EGCG濃度1 mM）を単回投与した後のラット血漿中EGCG濃度の経時変化を示す図表である。
【図１４】EGCGを含有する各投与液（EGCG濃度1 mM）を単回投与した後のラット血漿中EGCG濃度×時間（曲線下面積）の経時変化を示す図表である。
【図１５】カテキン類化合物195mg（カテキン類化合物９種の総量）を含有する各投与液を単回投与した後のヒト血漿中総カテキン（カテキン類化合物５種）濃度の経時変化を示す図表である。
【図１６】カテキン類化合物195mg（カテキン類化合物９種の総量）を含有する各投与液を単回投与した後のヒト血漿中総カテキン（カテキン類化合物５種）濃度×時間（曲線下面積）の経時変化を示す図表である。
【図１７】カテキン類化合物180mg（カテキン類化合物９種の総量）を含有する各投与液を単回投与した後のヒト血漿中総カテキン（カテキン類化合物５種）濃度×時間（曲線下面積）の経時変化を示す図表である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下、本発明について好ましい態様を挙げて、更に詳細に説明する。
【００１３】
本発明のポリフェノール類化合物の吸収促進剤において、その吸収促進のための有効成分であるセリンは、非必須アミノ酸の一種であり、細胞膜の構成成分であるホスファチジルセリンの原料として重要である。食品中ではそのほとんどがタンパク質の形で存在しており、多くの食品中に含まれている栄養素である。L-セリンは既存添加物として認可されており、調味料、栄養強化剤として広く使用されている。また、セリンの塩類としては、セリン塩酸塩、セリン硫酸塩、セリンリン酸塩等が挙げられるが、これらに限定されない。
【００１４】
本発明のポリフェノール類化合物の吸収促進剤において、その吸収促進のための有効成分であるアスパラギン酸は、非必須アミノ酸の一種であり、酸性アミノ酸に分類される。様々な食品中に含まれており、L-アスパラギン酸は既存添加物に認可され、調味料、栄養強化剤として使用されている。また、アスパラギン酸の塩類としては、アスパラギン酸ナトリウム、アスパラギン酸カリウム、アスパラギン酸マグネシウム、アスパラギン酸カルシウム等が挙げられるが、これらに限定されない。このうち、L-アスパラギン酸のナトリウム塩は、指定添加物に認可され、調味料、栄養強化剤として使用されている。
【００１５】
本発明のポリフェノール類化合物の吸収促進剤において、その吸収促進のための有効成分であるリンゴ酸は、ヒドロキシ酸に分類される有機化合物の一種であり、りんごなどに含まれている成分である。また、リンゴ酸の塩類としては、リンゴ酸ナトリウム、リンゴ酸カリウム、リンゴ酸マグネシウム、リンゴ酸カルシウム等が挙げられるが、これらに限定されない。このうち、DL-リンゴ酸、DL-リンゴ酸ナトリウムは指定添加物として認可されており、酸味料やpH調整剤の用途で食品添加物として広く使用されている。一日の摂取許容量（ADI）も設定されておらず、極めて安全性の高い成分として認識されている。
【００１６】
本発明のポリフェノール類化合物の吸収促進剤において、その吸収促進のための有効成分であるグレープフルーツ果汁の原料であるグレープフルーツは、そのまま生で食べるほか、ジュースやカクテル、サワーなどに用いられる、食経験豊富な柑橘類である。
【００１７】
本発明のポリフェノール類化合物の吸収促進剤において、その吸収促進のための有効成分であるカプリン酸は炭素数１０、ラウリン酸は炭素数１２の飽和脂肪酸であり、共にココナッツオイルやヤシ油に多く含まれている。また、カプリン酸又はラウリン酸の塩類としては、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム等との塩が挙げられるが、これらに限定されない。また、カプリン酸又はラウリン酸のエステル類としては、メチルエステル、エチルエステル、グリコールエステル、グリセリンエステル、ショ糖エステル等のエステル類が挙げられるが、これらに限定されない。このうち、カプリン酸エチル（別名：デカン酸エチル）は指定添加物に認可されている。
【００１８】
本発明のポリフェノール類化合物の吸収促進剤において、その吸収促進のための有効成分であるべにふうきエキスは、茶の品種のひとつであるべにふうき種（例えば農林水産省品種登録番号：第４５９１号）の茶葉から得られたものである。原料としては、通常の緑茶に製したものなどを用いることができる。エキスの調製は、上記べにふうきの茶葉を水あるいは熱水等の溶媒を用いて抽出することによって行うことができる。例えば、べにふうきの茶葉１質量部に対し、５〜１００質量部の溶媒を加え、室温〜１００℃程度の温度で、１〜１２０分間程度抽出する方法が挙げられる。なお、本発明において「べにふうきエキス」とは、ポリフェノール類化合物の吸収を促進する有効成分が茶葉に包含されている状態をも含む概念であり、溶媒で抽出したエキスのかわりに茶葉の乾燥粉末等を摂取してもよく、ポリフェノール類化合物を含有する飲食品用原料又は飲食品素材用原料に添加し、又は配合して用いてもよい。
【００１９】
本発明においては、ポリフェノール類化合物、フラボノイド類化合物、又はカテキン類化合物を経口的に摂取する際に、上記有効成分を単独で又は組み合わせて摂取することで、ポリフェノール類化合物、フラボノイド類化合物、又はカテキン類化合物の体内への吸収を促進させることができる。ここで、ポリフェノール類化合物には、フェニルカルボン酸類、リグナン類、クルクミン類、クマリン類、フラボノイド類が含まれる。また、フラボノイド類化合物には、フラボン類、フラボノール類、イソフラボン類、フラバン類、フラバノール（カテキン）類、フラバノン類、フラバノノール類、カルコン類、アントシアニジン類が含まれる。また、カテキン類化合物には、カテキン、ガロカテキン、カテキンガレート、ガロカテキンガレートなどの非エピ体カテキン類及びそのメチル化体などの誘導体、またはエピカテキン、エピガロカテキン、エピカテキンガレート、エピガロカテキンガレートなどのエピ体カテキン類及びそのメチル化体などの誘導体が含まれる。
【００２０】
本発明は、上記のうち、カテキン類化合物の体内への吸収を促進させるために用いることが好ましく、カテキン、エピカテキン、ガロカテキン、エピガロカテキン、カテキンガレート、エピカテキンガレート、ガロカテキンガレート、エピガロカテキンガレート及びそれらのメチル化体などの誘導体の体内への吸収を促進させるために用いることがより好ましく、エピガロカテキンガレート及びそのメチル化体などの誘導体の体内への吸収を促進させるために用いることが特に好ましい。例えば、お茶等に含まれるカテキン類化合物を好ましく例示できる。
【００２１】
本発明のポリフェノール類化合物の吸収促進剤の有効性を発揮するための上記有効成分の好ましい摂取量としては、後述する試験例の結果から概算すると、１日あたり、セリンの場合には、０．０５〜１１０ｍｇ／体重１ｋｇ、より好ましくは１０〜９０ｍｇ／体重１ｋｇ、更により好ましくは１０〜２５ｍｇ／体重１ｋｇであり、アスパラギン酸の場合には、０．０５〜１３０ｍｇ／体重１ｋｇ、より好ましくは１０〜１１０ｍｇ／体重１ｋｇ、更により好ましくは１０〜３０ｍｇ／体重１ｋｇであり、リンゴ酸の場合には、０．０５〜２６０ｍｇ／体重１ｋｇ、より好ましくは１０〜２２０ｍｇ／体重１ｋｇ、更により好ましくは１０〜６０ｍｇ／体重１ｋｇであり、カプリン酸の場合には、０．００４〜２５ｍｇ／体重１ｋｇ、より好ましくは１〜２０ｍｇ／体重１ｋｇ、更により好ましくは１〜１０ｍｇ／体重１ｋｇであり、ラウリン酸の場合には、０．０１〜２５ｍｇ／体重１ｋｇ、より好ましくは２〜２０ｍｇ／体重１ｋｇ、更により好ましくは２〜６ｍｇ／体重１ｋｇであり、グレープフルーツ果汁の場合には、固形分換算で、５〜１００００ｍｇ／体重１ｋｇ、より好ましくは１０００〜８０００ｍｇ／体重１ｋｇ、更により好ましくは１０００〜２０００ｍｇ／体重１ｋｇであり、べにふうきエキスの場合には、固形分換算で１〜１００ｍｇ／体重１ｋｇ、より好ましくは１０〜５０ｍｇ／体重１ｋｇ、更により好ましくは２０〜４０ｍｇ／体重１ｋｇである。
【００２２】
また、ポリフェノール類化合物の吸収を効果的に高めるための質量比としては、ポリフェノール類化合物１ｍｇあたり、セリンの場合には、０．０１〜３０ｍｇ、より好ましくは２〜２０ｍｇ、更により好ましくは２〜５ｍｇであり、アスパラギン酸の場合には、０．０１〜４０ｍｇ、より好ましくは２〜３０ｍｇ、更により好ましくは２〜６ｍｇであり、リンゴ酸の場合には、０．０１〜７０ｍｇ、より好ましくは２〜５０ｍｇ、更により好ましくは２〜１５ｍｇであり、カプリン酸の場合には、０．００１〜６ｍｇ、より好ましくは０．２〜４ｍｇ、更により好ましくは０．２〜３ｍｇであり、ラウリン酸の場合には、０．００２〜７ｍｇ、より好ましくは０．４〜５ｍｇ、更により好ましくは０．４〜２ｍｇであり、グレープフルーツ果汁の場合には、固形分換算で、１〜２６００ｍｇ、より好ましくは２００〜１８００ｍｇ、更により好ましくは２００〜５００ｍｇであり、べにふうきエキスの場合には、固形分換算で０．１〜５０ｍｇ、より好ましくは１〜１０ｍｇ、更により好ましくは２〜５ｍｇである。
【００２３】
本発明のポリフェノール類化合物の吸収促進剤においては、その総量当たり、上記有効成分を、セリンの場合には、固形分換算で１．０〜１００質量％含有することが好ましく、４．５〜１００質量％含有することがより好ましい、アスパラギン酸の場合には、固形分換算で１．０〜１００質量％含有することが好ましく、４．５〜１００質量％含有することがより好ましい、リンゴ酸の場合には固形分換算で１．５〜１００質量％含有することが好ましく、４．５〜１００質量％含有することがより好ましい、カプリン酸の場合には固形分換算で１．５〜１００質量％含有することが好ましく、４．５〜１００質量％含有することがより好ましい、ラウリン酸の場合には固形分換算で１．０〜１００質量％含有することが好ましく、４．５〜１００質量％含有することがより好ましい、グレープフルーツ果汁の場合には、固形分換算で１．５〜１００質量％含有することが好ましく、４．５〜１００質量％含有することがより好ましく、べにふうきエキスの場合には、固形分換算で０．１〜１００質量％含有することが好ましい。含有量がそれぞれの下限未満であると、十分な効果を得るには、飲食品への添加量を増加したり、摂取量を増やす必要が生じる。
【００２４】
本発明のポリフェノール類化合物の吸収促進剤の有効成分として、べにふうきエキスを用いる場合には、ポリフェノール類化合物の源として茶エキスを摂取する際に、特に好適に用いることができる。すなわち、後述の実施例で示すように、茶エキス自体に付随した吸収阻害効果を打ち消して、茶エキスからのポリフェノール類化合物の吸収率を顕著に向上させることができる。
【００２５】
上記茶エキスの、原料に特に制限はないが、緑茶種である茶葉が好ましく、これを緑茶に製したものからの緑茶エキスであることが好ましい。また、紅茶種である、ダージリン、アッサム、セイロンなども好ましく例示でき、これを紅茶に製したものからの紅茶エキスであってもよい。特に好ましくは、緑茶種であるやぶきた種の茶葉からの緑茶エキスである。エキスの調製にも特に制限はなく、茶葉を水あるいは熱水等の溶媒を用いて抽出することによって行うことができる。例えば、茶葉１質量部に対し、５〜１００質量部の溶媒を加え、室温〜１００℃程度の温度で、１〜１２０分間程度抽出する方法が挙げられる。なお、本発明において「茶エキス」とは、茶葉に包含されている状態をも含む概念であり、溶媒で抽出したエキスのかわりに茶葉の乾燥粉末等を用いてもよい。
【００２６】
本発明のポリフェノール類化合物の吸収促進剤には、上記の基本的成分以外に、炭水化物、食物繊維、たんぱく質、ビタミン類等を含むことができる。
【００２７】
本発明のポリフェノール類化合物の吸収促進剤は、医薬品、健康食品、加工食品等の各種分野で用いられ、医薬の有効成分、食品原料等として使用することができる。
【００２８】
例えば、医薬品とする場合には、薬学的に許容される基材や担体と共に製剤化し、医薬組成物として提供することができる。この医薬組成物には、基材や担体の他、薬学的に許容されることを限度として、結合剤、崩壊剤、緩衝剤、保存剤、保湿剤、抗菌剤、防腐剤、香料、顔料、界面活性剤、安定剤、溶解補助剤等の添加剤を任意に配合してもよい。そして、当該医薬組成物の形態としては、丸剤、散剤、錠剤、顆粒剤、カプセル剤、シロップ剤、液剤、ゼリー剤、トローチ剤等の剤型が例示できる。
【００２９】
また、本発明のポリフェノール類化合物の吸収促進剤を飲食品に添加して摂取する場合には、一般の食品の他、特定保健用食品、栄養補助食品、機能性食品等に配合して用いることができる。このような食品としては、例えば、チョコレート、ビスケット、ガム、キャンディー、クッキー、グミ、打錠菓子等の菓子類；シリアル；粉末飲料、清涼飲料、乳飲料、栄養飲料、炭酸飲料等の飲料；アイスクリーム、シャーベットなどの冷菓が挙げられる。また、特定保健用食品や栄養補助食品等の場合であれば、粉末、顆粒、カプセル、シロップ、タブレット、糖衣錠等の形態のものであってもよい。
【００３０】
また、後述の実施例で示すように、べにふうきエキスには、茶エキス自体に付随した吸収阻害効果を打ち消して、茶エキスからのポリフェノール類化合物の吸収率を顕著に向上させる効果がある。したがって、本発明のポリフェノール類化合物の吸収促進剤を飲食品に添加して摂取する態様としては、べにふうきエキスとその他の茶エキスとを含有する飲食品であることが好ましい。
【００３１】
一方、本発明のもう一つは、ポリフェノール類化合物を含有する飲食品用原料又は飲食品素材用原料に、セリン又はその塩類、アスパラギン酸又はその塩類、リンゴ酸又はその塩類、カプリン酸、その塩類又はそのエステル類、ラウリン酸、その塩類又はそのエステル類、グレープフルーツ果汁、及びべにふうきエキスからなる群から選ばれた少なくとも１種を添加する工程を含む、ポリフェノール類化合物を含有する飲食品又は飲食品素材の製造方法である。
【００３２】
上記製造方法は、ポリフェノール類化合物を含有する飲食品用原料又は飲食品素材用原料に、その飲食品又は飲食品素材に応じた公知の方法、又はこれに準じた方法にしたがって、その原料又は配合成分として、上記ポリフェノール類化合物の吸収を促進する成分である、セリン又はその塩類、アスパラギン酸又はその塩類、リンゴ酸又はその塩類、カプリン酸、その塩類又はそのエステル類、ラウリン酸、その塩類又はそのエステル類、グレープフルーツ果汁、及びべにふうきエキスからなる群から選ばれた少なくとも１種を添加し、必要に応じて適宜他の工程を施すことにより行うことができる。
【００３３】
また、本発明の他のもう一つは、セリン又はその塩類、アスパラギン酸又はその塩類、リンゴ酸又はその塩類、カプリン酸、その塩類又はそのエステル類、ラウリン酸、その塩類又はそのエステル類、グレープフルーツ果汁、及びべにふうきエキスからなる群から選ばれる少なくとも１種を含む飲食品用原料又は飲食品素材用原料に、ポリフェノール類化合物を添加する工程を含む、ポリフェノール類化合物を含有する飲食品又は飲食品素材の製造方法である。
【００３４】
上記製造方法は、上記ポリフェノール類化合物の吸収を促進する成分である、セリン又はその塩類、アスパラギン酸又はその塩類、リンゴ酸又はその塩類、カプリン酸、その塩類又はそのエステル類、ラウリン酸、その塩類又はそのエステル類、グレープフルーツ果汁、及びべにふうきエキスからなる群から選ばれた少なくとも１種を含有する飲食品用原料又は飲食品素材用原料に、その飲食品又は飲食品素材に応じた公知の方法、又はこれに準じた方法にしたがって、その原料又は配合成分として、ポリフェノール類化合物を添加し、必要に応じて適宜他の工程を施すことにより行うことができる。
【００３５】
また、後述の実施例で示すように、べにふうきエキスには、茶エキス自体に付随した吸収阻害効果を打ち消して、茶エキスからのポリフェノール類化合物の吸収率を顕著に向上させる効果がある。したがって、本発明のポリフェノール類化合物を含有する飲食品又は飲食品素材の製造方法において、べにふうきエキスを用いる場合には、べにふうきエキスが添加されるポリフェノール類化合物を含有する飲食品用原料又は飲食品素材用原料が、茶エキスであること、又はべにふうきエキスを含有する飲食品用原料又は飲食品素材用原料に、茶エキスを添加することが好ましい。茶エキスとしては緑茶エキスが好ましく用いられる。
【実施例】
【００３６】
以下に例を挙げて本発明を具体的に説明するが、これらの例は本発明の範囲を限定するものではない。【００３７】
＜試験例１＞（in vitroのEGCG吸収測定系の確立）  
経口摂取したポリフェノール類化合物、特にカテキン類化合物の体内吸収の場は、腸管、ことに小腸、が主要な場であると考えられている。そこでカテキン類化合物、ことにEGCGの小腸吸収を促進する食品あるいは食品関連成分を広範な対象から簡便にスクリーニングするために、本発明者らはヒト結腸癌由来Caco-2細胞株（American Type Culture Collection）を用いた小腸上皮モデルによるin vitroのEGCG吸収測定系を確立した。以下に具体的な方法と結果を示す。【００３８】
Caco-2細胞は培養を３週間程度継続する間に自然に分化し、小腸上皮様の多くの特質を示すことが知られている。Caco-2細胞は、5% CO2を含む加湿した空気の存在下で、75 cm2のプラスチックフラスコ中にて、10%非働化ウシ胎児血清 （HyClone社製）、50 U/mL ペニシリン-50 μg/mL ストレプトマイシン（GIBCO社製）および1%非必須アミノ酸 （GIBCO社製）を含むダルベッコ改変イーグル培地 （DMEM， pH 7.4； GIBCO社製）中で培養した。細胞は、80〜90%コンフルエントに到達する5〜8日毎に継代して維持した。以下に述べるEGCGの吸収実験は、継代数30〜70のCaco-2細胞を用いて実施した。【００３９】
EGCGの吸収実験は、直径12 mmのTranswell （ポリカーボネートフィルターの培養面積1.13 cm2, ポアサイズ0.4 μm； Corning社製） 上で培養したCaco-2細胞単層を用いて行った。Caco-2細胞をTranswell のインサート上に1.0×105 cells/cm2の密度で播種し、2日おきに新たな培地に交換しつつ培養を継続し、Millicell ERSメーター （Millipore社製） を用いて経上皮電気抵抗値 （以下、「TEER」という。） を測定することによって細胞単層のタイトジャンクションの完成度をモニターし、タイトジャンクションの形成が完成したことを確認できたものを実験に使用した。TEERの平均値は、播種後4週目に500〜1,000 Ωcm2に達し、その後7週目まで安定に保持された。吸収実験に用いたCaco-2細胞単層は、播種後4〜6週目のものを用いた。【００４０】
Caco-2細胞単層が載ったTranswellインサートの上部 （絨毛側） の培地をpH 5.5のHanks’ Balanced Salt Solution-like Transport Medium （絨毛側HBSS溶液； 10 mM MES, 5 mM グルコース, 10 mM グルタミン, 1 mM アスコルビン酸含有）に、また、インサート下部 （漿膜側） の培地を pH 7.4のHBSS （漿膜側HBSS溶液； 10 mM HEPES, 5 mM グルコース, 10 mM グルタミン, 1 mM アスコルビン酸含有） に置換して2回繰り返して洗った後、絨毛側に0.5 mL、漿膜側に1.5 mLの各HBSS溶液を新たに加えて、5% CO2存在下で37℃にて30分間インキュベーションした。30分経過後にTEERを測定した後、再度上下の溶液を新たなHBSS溶液に置換して30分間インキュベーションし、再びTEERを測定した。この時点を吸収開始後0時間とした。【００４１】
EGCGは中性〜アルカリ性の水溶液中では酸化されやすく不安定であるが、絨毛側HBSS溶液中に1 mMのアスコルビン酸を添加し、且つ、pHを5.5に保つことにより、吸収実験の実施時間中、EGCGは完全に安定に維持された。また、測定系の絨毛側および漿膜側HBSS溶液中に10 mMのグルタミンを添加することにより、Caco-2細胞のEGCG吸収能を4時間以上一定に維持できた。【００４２】
吸収開始後0時間のTEERを測定後、インサート上下の溶液を新しいHBSS溶液に置換した。この時、Caco-2細胞単層の絨毛側HBSS溶液は、EGCG（エピガロカテキンガレート，Cat. No. E4143； Sigma社製）を添加してEGCG終濃度を47.7μM、184.9μM、492.0μM、954.6μMとし、あるいは緑茶エキス（緑茶熱水抽出物，No. 16714； 三栄源エフ・エフ・アイ株式会社製）を添加してEGCG終濃度を38.9μM、169.5μM、430.2μM、826.7μMとした。5% CO2存在下で37℃に1時間インキュベーションし、TEERを測定した後、インサート上の絨毛側HBSS溶液は交換せずにインサートを新しい漿膜側HBSS溶液の入ったウェルに移動し、さらに2時間インキュベーションした。2時間経過後TEERを測定し、吸収開始後0時間、1時間、3時間の漿膜側HBSS溶液中に含まれるEGCGの濃度を高速液体クロマトグラフィー（HPLC）により、以下のようにして測定した。【００４３】
漿膜側HBSS溶液中に含まれるEGCG濃度の測定は、150 mm×4.6 mm （粒子径5μm） の逆相系カラム （Mightysil RP-18 GP； 関東化学株式会社製） を装着したHPLC装置 （CBM-20AまたはSCL-10Avp； いずれも株式会社島津製作所製） を用い、280 nmにおける吸光度の溶出パターンのピーク面積を測定することにより行った。カラム温度は40℃で行った。カラムからのEGCGの溶出はA液およびB液（A液： 水/アセトニトリル/リン酸 = 700/10/1；  B液： A液/メタノール = 2/1）を用いた直線濃度勾配法により、流速0.5 mL/minで行った。まず、400μLの漿膜側HBSS溶液をカラムにインジェクションしたあと、0分から12分までの12分間100% A液を流し、55分までの43分間でB液の濃度を0から80%まで上昇させた。60分まで80% B液を流した後、65分までの5分間でA液の濃度を再び100%として１サイクル75分間の分析を完了した。サンプル中のEGCG濃度は、濃度既知のEGCG標準物質のピーク面積から作成した標準直線を用いて定量した。標準物質において、EGCGの保持時間は53分、検出感度は10 nMであった。【００４４】
Caco-2細胞の絨毛側へEGCG試薬溶液を添加したときの結果を図１に、緑茶エキス溶液を添加したときの結果を図２に示す。図１及び図２に明らかなように、いずれのEGCG濃度においても、漿膜側に吸収されたEGCG濃度はインキュベーション時間にほぼ比例して増加した。また、図３に示すように、単位時間、単位面積当たりの透過量として表したEGCGの吸収速度を、絨毛側へ添加したEGCGの濃度に対してプロットすると、絨毛側へ添加したEGCGの濃度にほぼ比例して増加していることが明らかとなった。また、異なる濃度のEGCG試薬を添加したときのTEERの経時変化は図４のとおりであり、TEERは時間経過により若干の低下傾向を示すものの、3時間の測定時間中は開始時のTEERが良好に維持されていた。【００４５】
以上の結果より、Caco-2細胞単層を小腸吸収モデルとして用いることにより、EGCG試薬および緑茶からのEGCG吸収を簡便に測定することができることがわかる。即ち、EGCGを安定に保ちつつ、且つ、生体内に近い条件でEGCGの吸収を簡便に測定できるin vitro実験系を確立できた。【００４６】
＜試験例２＞（Caco-2細胞のEGCG吸収を促進する食品あるいは食品関連成分のスクリーニング）  
上記試験例１のEGCG吸収測定系を用い、絨毛側に下記表1に示す種々の食品あるいは食品関連成分を添加した場合のEGCGの吸収速度を、EGCGの見かけの透過係数（Papp）として算出し、無添加の場合と比較した。【００４７】
【表１】
2011042958.tif 000002
具体的には、吸収開始後0時間の時点でCaco-2細胞の絨毛側へ、1 mMのEGCGと共に、上記表１に示した各成分を異なる濃度（2〜3濃度）で添加し、一定時間後に漿膜側へ透過されたEGCG量（mol）をHPLCにより測定した。Papp（cm/sec）は、時間t（sec）に対するEGCG透過量Q（mol）をプロットしてその傾きよりdQ/dtを算出し、細胞表面積A（cm2）と絨毛側への添加濃度C0（M）から下記式（1）により求めた。【００４８】
【数１】
2011042958.tif 000003
食品あるいは食品関連成分を添加しなかった場合のPappを１として、各食品あるいは食品関連成分を添加した場合のPappの相対値を求めた。そのうちPappが有意に高くなったものについて表２に示す。【００４９】
【表２】
2011042958.tif 000004
表２に示すように、セリン、アスパラギン酸、リンゴ酸、カプリン酸、ラウリン酸、グレープフルーツ果汁の６種の成分が、それぞれ単独でEGCGの吸収を促進した。【００５０】
＜試験例３＞（食品あるいは食品関連成分の組み合わせによるEGCGの吸収促進効果）  
EGCG吸収促進効果が認められた上記6種の食品あるいは食品関連成分のうち、ラウリン酸と同一の中鎖脂肪酸に属するカプリン酸を除いたセリン、アスパラギン酸、リンゴ酸、グレープフルーツ果汁、ラウリン酸の5種類について、2種類ずつを組み合わせることによるEGCG吸収促進効果の相乗的あるいは相加的な効果について調べた。具体的には、試験例２と同様にして、Caco-2細胞の絨毛側へ1 mMのEGCGと同時に2種類の食品あるいは食品関連成分を組み合わせて添加し、漿膜側へのEGCG吸収速度を測定し、無添加の場合と比較した。その結果を表３に示す。【００５１】
【表３】
2011042958.tif 000005
表３に示すように、セリン＋アスパラギン酸、セリン＋リンゴ酸、セリン＋グレープフルーツ果汁、アスパラギン酸＋リンゴ酸、アスパラギン酸＋グレープフルーツ果汁、アスパラギン酸＋ラウリン酸、リンゴ酸＋グレープフルーツ果汁の組み合わせで、相加的なEGCG吸収促進効果が見られた。また、グレープフルーツ果汁＋ラウリン酸の組み合わせでは、EGCG吸収促進効果は相乗的であった。【００５２】
また、このとき、細胞間タイトジャンクションの開閉度合いの指標となるTEERは、EGCGの見かけの透過係数Pappとして算出したEGCGの吸収速度と逆相関の関係にあった。したがって、セリン、アスパラギン酸、リンゴ酸、グレープフルーツ果汁、ラウリン酸、カプリン酸などの働きによって、Caco-2細胞の細胞間通路が開かれ、そこを通ってEGCGが漿膜側へ移行したものと推察された。また、EGCGが細胞内を経由して吸収される場合には硫酸抱合やグルクロン酸抱合される可能性があるため、漿膜側へ通過したEGCGの脱抱合処理を試みたが、抱合体の形で吸収されたEGCGは存在しなかった。このことは、Caco-2細胞においてEGCGは大部分が遊離体の形で吸収されることを示唆し、EGCGが上記の細胞間通路を通って吸収される可能性を示唆していた。【００５３】
＜試験例４＞（ラットにおける食品あるいは食品関連成分のEGCG吸収促進効果）  
Caco-2細胞を用いた測定系でEGCGの吸収促進効果を示した上記の食品あるいは食品関連成分が、動物が口から摂取した場合にも同様のEGCG吸収促進効果を有するかどうかについて調べた。具体的には、緑茶熱水抽出物（三栄源エフエフアイ株式会社製、以下「緑茶エキス」という。）について、その緑茶エキス溶液中に添加したセリンとリンゴ酸の最終濃度が(i)無添加、(ii)20 mM セリン＋40 mMリンゴ酸、(iii)40 mM セリン＋80 mMリンゴ酸、(iv)80 mM セリン＋160 mMリンゴ酸となるように4種類の投与液を準備し、それぞれの投与液をラットへ強制経口投与し、投与後の時間経過を追って採血して得た血漿中のEGCG濃度を測定し、濃度×時間（曲線下面積）に変換してEGCGの血中滞在量を比較した。それぞれの投与液中に含まれる緑茶エキス由来のEGCGの濃度は、最終濃度が１ mMになるように調節した。【００５４】
実験に使用したラット（Sprague Dawley、雄、8週齢；日本SLC株式会社製）は、前もって頸静脈からカニューレを心臓方向に挿入し、カニューレ先端の開口部が右心房の入口近傍に位置するよう留置手術を行った後、実験開始までに1週間の回復期間をおいた。回復期間中のラットは、床網を備えたケージ中で個別に飼育し、CE-2飼料（日本クレア株式会社製）を自由摂食させた。【００５５】
実験前日の夕方から、16時間絶食させたラットに体重100 g 当たり1 mLの上記投与液(i)〜(iv)を単回強制経口投与した。投与前、投与後0.25、0.5、1、2、3時間の時点で各ラットからカニューレを通して0.5 mLずつヘパリン採血し、採血直後に血漿を分離して分析時まで酸性下で-80℃に保存した。【００５６】
血漿中のEGCG濃度は、各血漿をβ-グルクロニダーゼおよびスルファターゼにより脱抱合処理する前と後の両方のサンプルについて、サンプル中のEGCGを酸性下において酢酸エチル抽出・乾固した後、HPLCの移動相溶液に溶解してHPLC分析（電気化学検出法）することにより測定した。HPLCによるEGCGの分離は、HPLC装置（SCL-10Avp； 株式会社島津製作所製）に2.0 mm×150 mm （粒子径5μm） の逆相系カラム （CAPCELL PAK C18 MGII；株式会社資生堂製） を装着し、カラム温度40℃にて実施した。カラムへのサンプルのインジェクション量は20μL、移動相には0.1 mMのEDTA・2Naを含む0.1% リン酸：アセトニトリル = 90： 10を用い、流速0.4 mL/minでアイソクラティック溶出した。EGCGの検出は、電気化学検出器（NANOSPACE SI-2； 株式会社資生堂製）により行い、600 mVの印加電圧で検出された電流値の溶出パターンからピーク面積を算出し、濃度既知のEGCG標準物質のピーク面積から作成した標準直線を用いて定量した。EGCG標準物質の保持時間は8.0分、検出感度は2 nMであった。実際の投与液についてもEGCGの含有濃度を再度分析し、予定通りのEGCG量がラットへ投与されたことを確認した。(i)、(ii)、(iii)、及び(iv)の各投与液を投与後に採取したラット血漿を上記のように処理してHPLC分析した結果、(i)〜(iv)のいずれについても脱抱合処理の前後でEGCG濃度に変化はなかった。すなわち、EGCGは大部分が未抱合の遊離体として血中へ吸収されたと考えられる。【００５７】
各投与液を投与後3時間までのラット血漿中EGCG濃度の経時変化を図５に示す。また、血漿中EGCG濃度×時間（曲線下面積）の経時変化を図６に示す。これらの結果について以下のように統計解析を行った。【００５８】
まず、各投与液をラットに投与した後の3時間までの血漿中EGCG濃度の経時変化について、投与液の種類および投与後の経過時間を因子とした、繰り返しのある二元配置分散分析法による多重比較検定（Scheffe法；危険率５％）を実施した。その結果を表４に示す。【００５９】
【表４】
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表４に示すように、Scheffeの多重比較検定の結果は、緑茶エキス中に(ii)20 mM セリン＋40 mMリンゴ酸、(iii)40 mM セリン＋80 mMリンゴ酸、(iv)80 mM セリン＋160 mMリンゴ酸を添加してラットに投与したとき、(i)無添加の緑茶エキスを投与したときに比べて血漿中のEGCG濃度が有意に高く（P<0.05）、緑茶エキス中へ(ii)(iii)(iv)のいずれの濃度のセリン＋リンゴ酸の組み合わせを添加しても緑茶エキスからのEGCG吸収が促進されることを示した。【００６０】
続いて、同様にして、各投与液をラットに投与した後の3時間までについての血漿中EGCG濃度×時間（曲線下面積）および投与後の経過時間を因子とした、繰り返しのある二元配置分散分析法による多重比較検定（Scheffe法；危険率５％）を実施した。その結果を表５に示す。【００６１】
【表５】
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表５に示すように、Scheffeの多重比較検定の結果は、緑茶エキス中に(ii)20 mM セリン＋40 mMリンゴ酸、(iii)40 mM セリン＋80 mMリンゴ酸、(iv)80 mM セリン＋160 mMリンゴ酸を添加してラットに投与したとき、(i)無添加の緑茶エキスを投与したときに比べて血漿中のEGCG濃度×時間（曲線下面積）が有意に高く（P<0.05）、緑茶エキス中へ(ii)(iii)(iv)のいずれの濃度のセリン＋リンゴ酸の組み合わせを添加しても緑茶エキスから吸収されたEGCGの血中持続滞在量が増加することを示した。【００６２】
投与後3時間までの曲線下面積（AUC0→3h）で比較したセリン＋リンゴ酸の組み合わせ添加による緑茶エキスからのEGCG吸収促進の度合いは(i)無添加と比べて、(ii)20 mM セリン＋40 mMリンゴ酸の添加により9.9倍、(iii)40 mM セリン＋80 mMリンゴ酸の添加により11.0倍、(iv)80 mM セリン＋160 mMリンゴ酸の添加により12.7倍であった。【００６３】
上記2種類の多重比較検定の結果は、いずれもセリンとリンゴ酸を含む投与液(ii)(iii)(iv)が無添加の投与液(i)に比べてEGCGの吸収を促進することを示しているが、投与液中に含有されるセリンとリンゴ酸の濃度の違いによって(ii)(iii)(iv)の間に有意差は認められない（P≧0.05）。即ち、(ii)20 mM セリン＋40 mMリンゴ酸の濃度では既にEGCG吸収促進効果は頭打ちに近い状態になっていると考えられる。【００６４】
＜試験例５＞  
次に、セリン＋リンゴ酸の添加によるEGCG吸収促進効果が緑茶一般に対して有効であることを示すために、別の種類の緑茶エキスを用いてEGCG吸収促進効果を試験した。具体的には、茶エキスとして、べにふうき緑茶の熱水抽出物 （No. 070423；アサヒ飲料株式会社製、以下「べにふうきエキス」という。）を用いた。また、この試験例では、試験例４で用いた３種類のセリン＋リンゴ酸の組み合わせ濃度のうち中間の濃度である40 mM セリン＋80 mMリンゴ酸の添加によるEGCG吸収促進効果を調べた。【００６５】
試験例４と同様の方法によって、べにふうきエキス溶液に添加したセリンとリンゴ酸の最終濃度が(i)無添加、(ii)40 mM セリン＋80 mMリンゴ酸となるように2種類の投与液を準備し、それぞれの投与液を静脈にカニューレを装着したラットへ強制経口投与し、投与後の時間経過を追って血漿中のEGCG濃度を測定し、濃度×時間（曲線下面積）に変換してEGCGの血中滞在量を比較した。それぞれの投与液中に含まれるべにふうきエキス由来のEGCG濃度は、最終濃度が１ mMになるように調節した。【００６６】
各投与液を投与後3時間までのラット血漿中EGCG濃度の経時変化を図７に示す。また、血漿中EGCG濃度×時間（曲線下面積）の経時変化を図８に示す。これらの結果について以下のように統計解析を行った。【００６７】
まず、各投与液をラットに投与した後の3時間までの血漿中EGCG濃度の経時変化について、投与液の種類および投与後の経過時間を因子とした、繰り返しのある二元配置の分散分析を行った。その結果を表６に示す。【００６８】
【表６】
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表６に示すように、投与液の種類間に有意差（P<0.05）が認められたことから、べにふうきエキス中に(ii)40 mM セリン＋80 mMリンゴ酸を添加してラットに投与したとき、(i)無添加のべにふうきエキスを投与したときに比べて血漿中のEGCG濃度が有意に高く、べにふうきエキス中へのセリン＋リンゴ酸の組み合わせ添加によってべにふうきエキスからのEGCG吸収が試験例４で示した緑茶エキスへの添加の場合と同様に促進されることを示した。【００６９】
続いて、同様にして、各投与液をラットに投与した後の3時間までについての血漿中EGCG濃度×時間（曲線下面積）および投与後の経過時間を因子とした、繰り返しのある二元配置の分散分析を行った。その結果を表７に示す。【００７０】
【表７】
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表７に示すように、投与液の種類間に有意差（P<0.05）が認められたことから、べにふうきエキス中に(ii)40 mM セリン＋80 mMリンゴ酸を添加してラットに投与したとき、(i)無添加のべにふうきエキスを投与したときに比べて血漿中のEGCG濃度×時間（曲線下面積）が有意に高く、べにふうきエキス中へのセリン＋リンゴ酸の組み合わせ添加べにふうきエキスから吸収されたEGCGの血中持続滞在量が試験例４で示した緑茶エキスへの添加の場合と同様に増加することを示した。【００７１】
投与後3時間までの（曲線下面積） （AUC0→3h）で比較した(ii)40 mM セリン＋80 mMリンゴ酸の組み合わせ添加によるべにふうきエキスからのEGCG吸収促進の度合いは(i)無添加と比べて、28.6倍であった。【００７２】
＜試験例６＞  
緑茶エキスの代わりにEGCG試薬を用いて、試験例４で用いた3種類のセリン＋リンゴ酸の組み合わせ濃度のうち最も低濃度の組み合わせである20 mM セリン＋40 mMリンゴ酸を添加した場合のEGCG吸収促進効果について試験例４と同様の方法により試験した。【００７３】
試験例４と同様にして、１ mMのEGCG試薬を含有する投与液中に添加したセリンとリンゴ酸の最終濃度が(i)無添加、(ii) 20 mM セリン＋40 mMリンゴ酸となるように2種類の投与液を準備し、それぞれの投与液を静脈にカニューレを装着したラットへ強制経口投与し、投与後の時間経過を追って採血して得た血漿中のEGCG濃度を測定し、濃度×時間（曲線下面積）に変換してEGCGの血中滞在量を比較した。【００７４】
各投与液を投与後3時間までのラット血漿中EGCG濃度の経時変化を図９に示す。また、血漿中EGCG濃度×時間（曲線下面積）の経時変化を図１０に示す。これらの結果について以下のように統計解析を行った。【００７５】
まず、各投与液をラットに投与した後の3時間までの血漿中EGCG濃度の経時変化について、投与液の種類および投与後の経過時間を因子とした、繰り返しのある二元配置の分散分析を行った。その結果を表８に示す。【００７６】
【表８】
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表８に示すように、投与液の種類間に有意差（P<0.05）が認められたことから、EGCG試薬溶液中に(ii)20 mM セリン＋40 mMリンゴ酸を添加してラットに投与したとき、(i)無添加のEGCG試薬溶液を投与したときに比べて血漿中のEGCG濃度が有意に高く、EGCG試薬溶液中へのセリン＋リンゴ酸の組み合わせ添加によってEGCGの吸収が試験例４および試験例５で示した緑茶エキスへの添加の場合と同様に促進されることを示した。【００７７】
続いて、同様にして、各投与液をラットに投与した後の3時間までについての血漿中EGCG濃度×時間（曲線下面積）および投与後の経過時間を因子とした、繰り返しのある二元配置の分散分析を行った。その結果を表９に示す。【００７８】
【表９】
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表９に示すように、投与液の種類間に有意差（P<0.05）が認められたことから、EGCG試薬溶液中に(ii)20 mM セリン＋40 mMリンゴ酸を添加してラットに投与したとき、(i)無添加のEGCG試薬溶液を投与したときに比べて血漿中のEGCG濃度×時間（曲線下面積）が有意に高く、EGCG試薬溶液中へのセリン＋リンゴ酸の組み合わせ添加によって吸収されたEGCGの血中持続滞在量が試験例４および試験例５で示した緑茶エキスへの添加の場合と同様に増加することを示した。【００７９】
投与後3時間までの（曲線下面積）（AUC0→3h）で比較した(ii) 20 mM セリン＋40 mMリンゴ酸の組み合わせ添加によるEGCG試薬溶液からのEGCG吸収促進の度合いは(i)無添加と比べて、3.1倍であった。【００８０】
上記の試験例４〜６では、２種類の異なる緑茶エキスおよびEGCG試薬からのEGCGの吸収を促進するために添加する食品あるいは食品関連成分の一例としてセリン＋リンゴ酸の組み合わせについて例示したが、上記試験例２及び３のin vitro の試験結果を考え合わせると、EGCGの吸収促進効果はカプリン酸、ラウリン酸、グレープフルーツ果汁、セリン、アスパラギン酸、リンゴ酸の単独添加、および、これらの組み合わせ添加によって達成することができるものと考えられる。【００８１】
＜試験例７＞  
べにふうきエキス（アサヒ飲料株式会社製べにふうき茶熱水抽出物； ロット１[i]、ロット２[ii]、ロット３[iii]）、および緑茶エキス（三栄源エフエフアイ株式会社製緑茶熱水抽出物； ロット４[iv]、ロット５[v]）について、ラットによるEGCGの吸収性を比較した。具体的には、EGCG濃度が1 mMとなるように調製したそれぞれの投与液をラットへ単回強制経口投与し、投与後の時間経過を追って採血して得た血漿中のEGCG濃度を測定し、台形法により曲線下面積（AUC）に変換してEGCGの血中滞留量を比較した。【００８２】
更に詳細な実験操作法を説明すれば、以下のとおりである。【００８３】
実験に使用したラット（Sprague Dawley、雄、8週齢；日本SLC株式会社製）は、前もって頸静脈からカニューレを心臓方向に挿入し、カニューレ先端の開口部が右心房の入口近傍に位置するよう留置手術を行った後、実験開始までに1週間の回復期間をおいた。回復期間中のラットは、床網を備えたケージ中で個別に飼育し、CE-2飼料（日本クレア株式会社製）を自由摂食させた。各投与液についての被験数としては、[i]べにふうきエキスのロット１及び[ii]ロット２投与群はそれぞれn = 7、[iii]べにふうきエキスのロット３投与群はn = 6、[iv]緑茶エキスのロット４投与群はn = 5、[v]緑茶エキスのロット５投与群はn = 4、とした。【００８４】
実験前日の夕方から、16時間絶食させたラットに体重100 g当たり1 mLの上記投与液[i]〜[v]を単回強制経口投与した。投与前、投与後0.25、0.5、1、2、3時間の時点で各ラットからカニューレを通して0.5mLずつヘパリン採血し、採血直後に血漿を分離して分析時まで酸性下で-80℃に保存した。【００８５】
血漿中のEGCG濃度は、試験例４と同様にして測定した。すなわち、各血漿を酸性下において酢酸エチル抽出・乾固した後、HPLCの移動相溶液に溶解してHPLC分析（電気化学検出法）することにより測定した。HPLCによるEGCGの分離は、HPLC装置（SCL-10 Avp； 株式会社島津製作所製）に2.0 mm×150 mm（粒子径5μm） の逆相系カラム （CAPCELL PAK C18MGII；株式会社資生堂製） を装着し、カラム温度40℃にて実施した。カラムへのサンプルのインジェクション量は20μL、移動相には0.1 mMのEDTA・2Naを含む0.1% リン酸：アセトニトリル = 90： 10を用い、流速0.4mL/minでアイソクラティック溶出した。EGCGの検出は、電気化学検出器（NANOSPACESI-2； 株式会社資生堂製）により行い、600 mVの印加電圧で検出された電流値の溶出パターンからピーク面積を算出し、濃度既知のEGCG標準物質のピーク面積から作成した標準直線を用いて定量した。EGCG標準物質の保持時間は8.0分、検出感度は2nMであった。実際の投与液についてもEGCGの含有濃度を再度分析し、予定通りのEGCG量がラットへ投与されたことを確認した。ここで、血漿中のEGCG濃度を、β-グルクロニダーゼおよびスルファターゼにより脱抱合処理する前と後で測定した結果、脱抱合処理の前後でEGCG濃度に変化はなく、EGCGは血中において大部分が未抱合の遊離体として存在するものと考えられた。このことより、以下に示す結果は全て、脱抱合処理を行わなかった場合の測定結果である。【００８６】
図１１には、各投与液を投与後3時間までのラット血漿中EGCG濃度（mean±SEM）の経時変化を示す。また、図１２には、血漿中EGCG濃度×時間（曲線下面積）（mean±SEM）の経時変化を示す。これらの結果について以下のように統計解析を行った。【００８７】
各投与液をラットに投与した後の3時間までの血漿中EGCG濃度×時間（曲線下面積）および投与後の経過時間を因子とした、繰り返しのある二元配置の分散分析法による多重比較検定（FisherのPLSD法；危険率5％）を実施した。その結果を表１０に示す。【００８８】
【表１０】
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表１０に示すように、多重比較検定の結果、べにふうきエキス[i]とべにふうきエキス[ii]の間、およびべにふうきエキス[i]とべにふうきエキス[iii]の間には、血漿中EGCG濃度の曲線下面積に有意差が認められ、べにふうきエキス同士の間でもロットの違いによって血中のEGCG滞留量に差を生じることが示された。しかし、べにふうきエキス[i]、べにふうきエキス[ii]、べにふうきエキス[iii]のいずれを投与した場合にも、緑茶エキス[iv]あるいは緑茶エキス[v]を投与したときに比べて、血漿中EGCG濃度の曲線下面積は有意に高いことが示された。即ち、EGCGの含有量が同一であるべにふうきエキスおよび緑茶エキスを投与したにもかかわらず、血液中のEGCG滞在量は、べにふうきエキスを投与した場合の方が緑茶エキスを投与した場合よりも有意に高くなることが示された。投与後3時間までの曲線下面積で比較したとき、べにふうきエキス[i]、べにふうきエキス[ii]、およびべにふうきエキス[iii]投与によるEGCGの血中滞留量は、緑茶エキス[iv]と比較してそれぞれ5.3倍、4.4倍、および3.7倍であり、緑茶エキス[v]との比較ではそれぞれ4.8倍、4.0倍、および3.4倍であった。【００８９】
これらの結果から、べにふうきエキスが、ロットの違いによって多少の高低はあるものの、普遍的に通常の緑茶エキスより高いEGCG吸収性を有することが明らかとなった。【００９０】
＜試験例８＞  
試験例７によって、べにふうきエキスは一般的に、通常の緑茶エキスに比べてEGCGの吸収性において優れていることが示された。べにふうきエキスも通常の緑茶エキスも、両者共に同様の熱水抽出操作によって得られたエキスであるにもかかわらず、EGCGの吸収性に大きな差が生じる原因は、抽出されたエキス中に含まれる物質に違いがあるためと考えられた。即ち、緑茶エキス中にEGCGの吸収を阻害する成分が存在する可能性や、べにふうきエキス中にEGCGの吸収を促進する成分が存在する可能性などが考えられた。そこで、これらの可能性を追究するための糸口をつかむことを目的として、本試験例に示す実験を行った。即ち、含有するEGCGの濃度が互いに等しいべにふうきエキス溶液、通常の緑茶エキス溶液、ならびにEGCG試薬溶液を調製し、これらの溶液を適宜組み合わせて混合した溶液をラットへ投与した場合に、EGCGの吸収性がどのように変化するかを調べた。【００９１】
更に詳細な実験操作法を説明すれば、以下のとおりである。【００９２】
３種類の投与液、即ち、[i]EGCG試薬（Sigma社製；Cat. No. E4143）の1 mM溶液、[ii]EGCG試薬と緑茶エキスの混合溶液（［1 mM EGCG試薬溶液］：［EGCG濃度が1 mMとなるよう調製した緑茶エキス溶液＝1：1 (v/v) の混合溶液）、[iii]べにふうきエキスと緑茶エキスの混合溶液（［EGCG濃度が1 mMとなるよう調製したべにふうきエキス溶液］：［EGCG濃度が1 mMとなるよう調製した緑茶エキス溶液］＝1：1 (v/v) の混合溶液）を準備した。従って、いずれの投与液も含有するEGCGの濃度は１ mMである。なお、本試験例の実験に使用したべにふうきエキスは、試験例７において用いられたアサヒ飲料株式会社製のべにふうき茶熱水抽出物のロット１であり、また、緑茶エキスは、試験例７において用いられた三栄源エフエフアイ株式会社製の緑茶熱水抽出物のロット４である。【００９３】
試験例７と同様の方法により、それぞれの投与液を静脈にカニューレを装着したラットへ強制経口投与し、投与後の時間経過を追って血漿中のEGCG濃度を測定し、曲線下面積に変換してEGCGの血中滞留量を比較した。なお、各投与液についての被験数としては、 [i]EGCG試薬溶液投与群はn = 8、[ii]EGCG試薬と緑茶エキスの混合溶液投与群はn = 7、[iii]べにふうきエキスと緑茶エキスの混合溶液投与群はn = 6、とした。【００９４】
図１３には、各投与液を投与後3時間までのラット血漿中EGCG濃度（mean±SEM）の経時変化を示す。また、図１４には、血漿中EGCG濃度×時間（曲線下面積）（mean±SEM）の経時変化を示す。これらの結果について以下のように統計解析を行った。【００９５】
各投与液をラットに投与した後の3時間までの血漿中EGCG濃度×時間（曲線下面積）および投与後の経過時間を因子とした、繰り返しのある二元配置の分散分析法による多重比較検定（FisherのPLSD法；危険率5％）を実施した。その結果を表１１に示す。【００９６】
【表１１】
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表１１に示すように、多重比較検定の結果、EGCG試薬と緑茶エキスの混合溶液をラットに投与したとき、EGCG試薬のみの溶液を投与したときに比べて血漿中EGCG濃度の曲線下面積は有意に減少し、EGCG試薬に緑茶エキスを添加することによりEGCGの血中滞留量が少なくなることが示された。即ち、緑茶エキスに含まれる何らかの成分がEGCGの吸収を抑制するものと推測された。これに対して、緑茶エキスにEGCG試薬を混合する代わりにべにふうきエキスを混合してラットに投与すると、血漿中EGCG濃度の曲線下面積はEGCG試薬溶液を投与したときと同等のレベルにまで回復し、緑茶エキスにEGCG試薬を混合したときと比べて有意に高くなった。このことは、緑茶エキスにべにふうきエキスを混合することにより、緑茶エキス中の成分によるEGCGの吸収阻害効果を打ち消してEGCGの吸収量が増加し、結果的に血中滞留量が増加したことを示唆していた。【００９７】
緑茶エキスにべにふうきエキスを添加して得られるEGCGの血中滞留量増加の度合いは、投与後3時間までの曲線下面積で比較したとき、緑茶エキスにEGCG試薬を添加した場合の1.6倍であった。【００９８】
これらの結果から、緑茶エキス自体に付随した吸収阻害効果を打ち消す効果はべにふうきエキスに特有の効果であり、EGCGの吸収性が低い緑茶エキスにべにふうきエキスを添加することによって、緑茶エキスからのEGCG吸収性が高められることが明らかとなった。【００９９】
＜試験例９＞（ヒトにおけるリンゴ酸のカテキン類化合物吸収促進効果）
ヒトにおけるカテキン類化合物の吸収に及ぼすリンゴ酸の効果を調べた。被験者として20歳以上65歳未満の健常男女5人を選び、べにふうきエキスと同時にリンゴ酸ナトリウムを摂取することによるカテキン類化合物の血中滞留量増加の効果について、試験を行った。【０１００】
被検物質として、EGCG、3”-O-メチルエピガロカテキンガレート、エピガロカテキン、エピカテキンガレート、エピカテキン、ガロカテキンガレート、ガロカテキン、カテキンガレート、カテキンの９種類のカテキン類化合物の総量として195mgを含有するべにふうき緑茶の熱水抽出粉末（アサヒ飲料株式会社製）および135 mgのリンゴ酸ナトリウムを40mLの水に懸濁した飲料を準備した。また、試験対照物質として、上記べにふうきエキス粉末のみを40 mLの水に懸濁した飲料を準備した。【０１０１】
試験は、次のようなクロスオーバー試験で行った。すなわち、第1期目として、前日の21時より絶食した状態で早朝に採血し、被検物質を経口的に摂取してもらった。摂取後30分、1時間、2時間、3時間、4時間に採血を行い、直ちに血漿を分離した。得られた血漿をSulfataseおよびβ-Glucronidaseにより脱抱合酵素処理し、血漿中のカテキン類化合物を酢酸エチルにより抽出、試験例４と同様にしてHPLC-ECD法（電気化学検出法）により血漿中のカテキン類化合物濃度を測定した。その後、カテキン類化合物およびリンゴ酸の影響を完全に消失させるため、被験者には2日間以上通常の生活をしてもらった。第2期目として、試験対照物質を摂取させる以外は第1期目と同一条件にて血漿中のカテキン類化合物濃度を測定した。なお、カテキン類化合物濃度は、EGCG、3”-O-メチルエピガロカテキンガレート、エピガロカテキン、エピカテキンガレート、エピカテキンの５種類のカテキン類化合物の総量の濃度として求めた。【０１０２】
図１５には、べにふうきエキスのみを摂取した場合の血漿中の総カテキン濃度と、べにふうきエキスと一緒にリンゴ酸ナトリウムを摂取した場合の血漿中総カテキン濃度を、摂取後の時間に対してプロットしたグラフを示す。更に図１６には、べにふうきエキスのみを摂取した場合の血中総カテキン濃度×時間（曲線下面積AUC）と、べにふうきエキスと一緒にリンゴ酸ナトリウムを摂取した場合のAUCを、摂取後の時間に対してプロットしたグラフを示す。図１６に示されるように、摂取後４時間までの曲線下面積（AUC０→４ｈ）は、リンゴ酸ナトリウムを摂取しなかった場合に比べてリンゴ酸ナトリウム摂取の場合に1.6倍となり、リンゴ酸ナトリウム摂取により血中のカテキン滞留量が顕著に増加していた。よって、リンゴ酸には、カテキン類化合物の吸収を促進する作用効果のあることが、ヒト試験によっても確認できた。【０１０３】
＜試験例１０＞（ヒトにおけるべにふうきエキスのカテキン類化合物吸収促進効果）  
健常成人男性被験者に、べにふうき緑茶と通常の緑茶エキスをそれぞれ摂取することによるカテキン類化合物の血中滞留量増加の効果について、試験を行った。【０１０４】
被検物質として、EGCG、3”-O-メチルエピガロカテキンガレート、エピガロカテキン、エピカテキンガレート、エピカテキン、ガロカテキンガレート、ガロカテキン、カテキンガレート、カテキンの９種類のカテキン類化合物の総量として180mgを含有するべにふうき緑茶の熱水抽出粉末（アサヒ飲料株式会社製）を40 mLの水に懸濁した飲料を準備した。また、試験対照物質として、同じく９種類のカテキン類化合物の総量として180mgを含有する緑茶エキス末（三栄源エフエフアイ株式会社製）を40 mLの水に懸濁した飲料を準備した。【０１０５】
試験は次のように行った。すなわち、第1期目として、前日の21時より絶食した状態で早朝に採血し、被検物質を経口的に摂取させた。摂取後1時間、2時間、4時間後に採血を行い、直ちに血漿を分離した。得られた血漿を、Sulfataseおよびβ-Glucronidaseにより、脱抱合酵素処理し、血漿中のカテキン類化合物を酢酸エチルにより抽出、試験例４と同様にしてHPLC-ECD法（電気化学検出法）により、血漿中のカテキン類化合物濃度を測定した。その後、摂取したカテキン類化合物の影響を完全に消失させるため、被験者には7日間以上インターバルをおいた。第2期目として、試験対照物質を摂取させる以外は第1期と同一条件にて、血漿中のカテキン類化合物濃度を測定した。なお、カテキン類化合物濃度は、EGCG、3”-O-メチルエピガロカテキンガレート、エピガロカテキン、エピカテキンガレート、エピカテキンの５種類のカテキン類化合物の総量の濃度として求めた。【０１０６】
図１７には、べにふうきエキスを摂取した場合の血中総カテキン類化合物濃度×時間（曲線下面積AUC）と、通常の緑茶エキスを摂取した場合のAUCを、摂取後の時間に対してプロットしたグラフを示す。なお、べにふうきエキスを摂取した場合については、メチル化カテキンを含む上記５種カテキン類化合物の総量の値（+）および含まない４種カテキン類化合物の総量の値（-）とを、共に示した。【０１０７】
図１７に示されるように、摂取後４時間までの曲線下面積（AUC０→４ｈ）は、通常の緑茶エキスを摂取した場合に比べて、べにふうきエキス摂取の場合には4.1倍となり、べにふうきエキス摂取により血中のカテキン類化合物滞留量が顕著に増加していた。また、べにふうきに特有なメチル化カテキンを除いた値を比べても、3.4倍と滞留量が顕著に増加していた。よって、べにふうきエキスには、カテキン類化合物の吸収を促進する作用効果のあることが、ヒト試験によっても確認できた。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【国際調査報告】
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