(57)【要約】  Ａβモノマーに結合せず、Ａβオリゴマーのみに特異的に結合するヒト化抗体、該抗体を有効成分として含有する、抗認知機能障害剤、アルツハイマー病治療剤、老人斑形成抑制剤またはＡβアミロイド線維形成阻害剤、該抗体を投与する工程を含む、認知機能障害またはアルツハイマー病の予防および治療の少なくとも一方のための方法、並びに該抗体を投与する工程を含む、アルツハイマー病の進行を抑制する方法。【特許請求の範囲】
【請求項１】
アミロイドβタンパク質モノマーには結合せず、アミロイドβタンパク質オリゴマーに結合するヒト化抗体であって、以下の（ａ）抗体重鎖可変領域および（ｂ）抗体軽鎖可変領域を含むヒト化抗体。
（ａ）配列番号１２で示されるアミノ酸配列、または配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓにおよび９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換するアミノ酸改変の少なくとも１つの改変を行ったアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変領域
（ｂ）配列番号１４で示されるアミノ酸配列、または配列番号１４で示されるアミノ酸配列の２番目のＩｌｅをＶａｌに、１５番目のＰｒｏをＬｅｕに、５０番目のＧｌｎをＬｙｓにおよび９２番目のＴｙｒをＰｈｅに置換するアミノ酸改変の少なくとも１つの改変を行ったアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変領域
【請求項２】
抗体重鎖可変領域が配列番号１２または１５で示されるアミノ酸配列を含み、かつ抗体軽鎖可変領域が配列番号１４、１６または１７で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１記載のヒト化抗体。
【請求項３】
請求項１または２に記載のヒト化抗体を有効成分として含有する、抗認知機能障害剤。
【請求項４】
請求項１または２に記載のヒト化抗体を有効成分として含有する、アルツハイマー病治療剤。
【請求項５】
請求項１または２に記載のヒト化抗体を有効成分として含有する、老人斑形成抑制剤。
【請求項６】
請求項１または２に記載のヒト化抗体を有効成分として含有する、アミロイドβアミロイド線維形成阻害剤。
【請求項７】
請求項１または２に記載のヒト化抗体を投与する工程を含む、認知機能障害の予防および治療の少なくとも一方のための方法。
【請求項８】
請求項１または２に記載のヒト化抗体を投与する工程を含む、アルツハイマー病の予防および治療の少なくとも一方のための方法。
【請求項９】
請求項１または２に記載のヒト化抗体を投与する工程を含む、アルツハイマー病の進行を抑制する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アミロイドβ（以下、Ａβとも記す）タンパク質オリゴマーに特異的に結合する抗体およびその用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
アルツハイマー病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ;ＡＤ、以下ＡＤと記載する）における記憶力低下は、さまざまな証拠により、可溶性アミロイドβタンパク質オリゴマー（以下、アミロイドβタンパク質をＡβ、アミロイドβタンパク質オリゴマーをＡβオリゴマーと記す場合もある）が、シナプス機能不全の結果、引き起こされているものと考えられている（非特許文献１および２）。【０００３】
したがって、Ａβオリゴマーが、脳内に過度に蓄積または沈着することが、アルツハイマー病を引き起こす一連の病的カスケードの引き金となっている可能性がある。以上のことは、Ａβオリゴマーを標的とした治療が、ＡＤの発症、病期進行の遅延または予防に有効な可能性を示している。【０００４】
しかし、このアミロイドカスケード仮説の中核となる責任分子、特にＡβオリゴマーによって引き起こされる神経変性に関する知見は、主としてインビトロ実験において証明されたものであり（非特許文献３）、インビボでは直接的には証明されていない。【０００５】
これまでに報告されたインビボ実験（非特許文献４）では、Ａβオリゴマーの構造特異的な検討がなされていないために、内因性Ａβオリゴマーによるシナプス毒性は明らかにされていない。【０００６】
また、種々のアルツハイマー病モデルマウスにおいて検討がなされているものの、未だにアルツハイマー病患者の脳内におけるＡβオリゴマーの神経毒性については明らかにされていない。【０００７】
更に、なぜヒト内嗅領皮質において神経原線維変化（Ｎｅｕｒｏｆｉｂｒｉｌｌａｒｙ  Ｔａｎｇｌｅ；ＮＦＴ、以下ＮＦＴと略記する）形成および神経細胞喪失が、老人斑形成に先行して発症するのか、Ａβオリゴマーが、これらの組織変化および機能不全に、どのように関与するのかは未だに明らかにされていない。【０００８】
Ａβオリゴマーに対する抗体としては、抗Ａβオリゴマーマウスモノクローナル抗体  ＮＡＢ６１（非特許文献４）、１Ａ９、２Ｃ３、Ｅ１２、１Ｃ１０、および４Ｄ３（特許文献１）などが知られている。【０００９】
一般にヒト以外の動物の抗体、例えばマウス抗体などをヒトに投与すると、異物として認識されることにより、ヒト体内にマウス抗体に対するヒト抗体（Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉ  Ｍｏｕｓｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ：ＨＡＭＡ）が誘導されることが知られている。ＨＡＭＡは投与されたマウス抗体と反応し、副作用を引き起こすこと（非特許文献５〜８）、およびマウス抗体の体内からの消失を速め（非特許文献６、９、１０）、マウス抗体の治療効果を減じてしまうことが知られている（非特許文献１１、１２）。【００１０】
これらの問題点を解決するため、遺伝子組換え技術を利用してヒト以外の動物の抗体からヒト型キメラ抗体やヒト化抗体などの遺伝子組換え抗体の作製が試みられている。【００１１】
ヒト型キメラ抗体やヒト化抗体は、マウス抗体などのヒト以外の動物の抗体と比較してヒトへの臨床応用上、様々な利点を有している。例えば、サルを用いた実験でマウス抗体に比べ免疫原性が低下し、血中半減期が延長したことが報告されている（非特許文献１３）。【００１２】
すなわち、ヒト型キメラ抗体やヒト化抗体は、ヒト以外の動物の抗体に比べ、ヒトにおいて副作用が少なく、その治療効果が長期間持続することが期待される。【００１３】
また、ヒト型キメラ抗体やヒト化抗体、ヒト抗体などの遺伝子組換え抗体は、遺伝子組換え技術を利用して作製するため、様々な形態の分子として作製することができる。【００１４】
例えば、ヒト抗体の重鎖（以下、Ｈ鎖と表記する）定常領域（以下、Ｃ領域と表記する）（Ｈ鎖Ｃ領域を、ＣＨと表記する）としてγ１サブクラスを使用すれば、抗体依存性細胞傷害（以下、ＡＤＣＣと表記する）活性などのエフェクター機能の高い遺伝子組換え抗体を作製することができる。また、γ２やγ４サブクラスを使用すればエフェクター活性を低下させた遺伝子組換え抗体を作製することができ、かつマウス抗体に比べ血中半減期の延長が期待される（非特許文献１４）。【００１５】
特に、抗体のＦｃ領域（抗体Ｈ鎖のヒンジ領域以降の領域）を介した補体依存性細胞傷害活性（以下、ＣＤＣ活性と表記する）やＡＤＣＣ活性等の細胞傷害活性の高さがその治療効果に重要であるために、ヒト型キメラ抗体、ヒト化抗体やヒト抗体はマウス抗体などのヒト以外の動物の抗体と比較して望ましい（非特許文献１５、１６）。【００１６】
さらに、遺伝子組換え抗体は、最近の蛋白質工学、遺伝子工学の進歩により、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、一本鎖抗体（以下、ｓｃＦｖと表記する）（非特許文献１７）、２量体化Ｖ領域断片（以下、Ｄｉａｂｏｄｙと表記する）（非特許文献１８）、ジスルフィド安定化Ｖ領域断片（以下、ｄｓＦｖと表記する）（非特許文献１９）、ＣＤＲを含むペプチド（非特許文献２０）などの、分子量の小さい抗体断片としても作製でき、これらの抗体断片は、完全な抗体分子に比べ、標的組織への移行性に優れている（非特許文献２１）。【００１７】
以上の事実は、ヒトへの臨床応用に用いる抗体としては、マウス抗体などのヒト以外の動物の抗体よりもヒト型キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体または該抗体断片の方が望ましいことを示している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１８】
【特許文献１】国際公開第２００９／０５１２２０号
【非特許文献】
【００１９】
【非特許文献１】Ｋｌｅｉｎ  ＷＬ，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ２４：２１９−２２４，２００１．
【非特許文献２】Ｓｅｌｋｏｅ  ＤＪ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２９８：７８９−７９１，２００２．
【非特許文献３】Ｈａｓｓ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ：Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｗ  ８：１０１−１２，２００７．
【非特許文献４】Ｌｅｅ  ＥＢ，ｅｔ  ａｌ：Ｊ  Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８１：４２９２−４２９９，２００６．
【非特許文献５】Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．，２，８８１（１９８４）
【非特許文献６】Ｂｌｏｏｄ，６５，１３４９（１９８５）
【非特許文献７】Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．，８０，９３２（１９８８）
【非特許文献８】Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．,ＵＳＡ，８２，１２４２（１９８５）
【非特許文献９】Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．，２６，１０１１（１９８５）
【非特許文献１０】Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．，８０，９３７（１９８８）
【非特許文献１１】Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３５，１５３０（１９８５）
【非特許文献１２】Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，４６，６４８９（１９８６）
【非特許文献１３】Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５６，１１１８（１９９６）
【非特許文献１４】Ｉｍｍｕｎｏｌ．，８５，６６８（１９９５）
【非特許文献１５】Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４４，１３８２（１９９０）
【非特許文献１６】Ｎａｔｕｒｅ，３２２，３２３（１９８８）
【非特許文献１７】Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４２，４２３（１９８８）
【非特許文献１８】Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１５，６２９（１９９７）
【非特許文献１９】Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，３２，２４９（１９９５）
【非特許文献２０】Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７１，２９６６（１９９６）
【非特許文献２１】Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５２，３４０２（１９９２）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２０】
上記の非特許文献４および特許文献１にはＡβオリゴマーに対する抗体が開示されている。しかしながら、これらの抗体はＡβオリゴマーに結合するだけでなく、Ａβモノマーにも結合する抗体である。そのため、脳内病態を標的としているアルツハイマー病における抗体療法における、抗体の脳内移行性が懸念される。【００２１】
したがって、本発明は、Ａβモノマーに結合せず、Ａβオリゴマーのみに特異的に結合するヒト化抗体およびその用途を提供することを課題とする。より詳細には、Ａβオリゴマーに特異的に結合する抗体、該抗体を用いたＡβオリゴマーを測定する方法、該抗体を用いたアルツハイマー病を診断する方法、ならびに該抗体を含む薬剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００２２】
上記課題を鑑み鋭意検討した結果、本発明者らは、Ａβモノマーに結合せず、Ａβオリゴマーのみに特異的に結合するヒト化抗体を見出し、本発明を完成させた。すなわち、本発明は以下である。
１．アミロイドβタンパク質モノマーには結合せず、アミロイドβタンパク質オリゴマーに結合するヒト化抗体であって、以下の（ａ）抗体重鎖可変領域および（ｂ）抗体軽鎖可変領域を含むヒト化抗体。
（ａ）配列番号１２で示されるアミノ酸配列、または配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓにおよび９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換するアミノ酸改変の少なくとも１つの改変を行ったアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変領域
（ｂ）配列番号１４で示されるアミノ酸配列、または配列番号１４で示されるアミノ酸配列の２番目のＩｌｅをＶａｌに、１５番目のＰｒｏをＬｅｕに、５０番目のＧｌｎをＬｙｓにおよび９２番目のＴｙｒをＰｈｅに置換するアミノ酸改変の少なくとも１つの改変を行ったアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変領域
２．抗体重鎖可変領域が配列番号１２または１５で示されるアミノ酸配列を含み、かつ抗体軽鎖可変領域が配列番号１４、１６または１７で示されるアミノ酸配列を含む、前項１記載のヒト化抗体。
３．前項１または２に記載のヒト化抗体を有効成分として含有する、抗認知機能障害剤。
４．前項１または２に記載のヒト化抗体を有効成分として含有する、アルツハイマー病治療剤。
５．前項１または２に記載のヒト化抗体を有効成分として含有する、老人斑形成抑制剤。
６．前項１または２に記載のヒト化抗体を有効成分として含有する、アミロイドβアミロイド線維形成阻害剤。
７．前項１または２に記載のヒト化抗体を投与する工程を含む、認知機能障害の予防および治療の少なくとも一方のための方法。
８．前項１または２に記載のヒト化抗体を投与する工程を含む、アルツハイマー病の予防および治療の少なくとも一方のための方法。
９．前項１または２に記載のヒト化抗体を投与する工程を含む、アルツハイマー病の進行を抑制する方法。
【発明の効果】
【００２３】
本発明の抗体によれば、アルツハイマー病の原因分子であるアミロイドβタンパク質を標的とした、アルツハイマー病の予防、治療法確立および早期診断マーカー確立が期待される。【００２４】
アルツハイマー病における抗体療法は、脳内病態を標的としており、抗体の脳内移行性が懸念されているが、本発明の抗体は末梢静脈投与により病態の治療を行うことができる可能性があり、アルツハイマー病の抗体医療が一気に加速すると考えられる。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】図１はＨ鎖可変領域ＨＶ０のアミノ酸配列、およびＨＶ２、ＨＶ３，ＨＶ４、ＨＶ５、ＨＶ７ａ、ＨＶ７ｂ、ＨＶ９およびＨＶ１２において配列番号１２で示されるアミノ酸配列から改変されたアミノ酸残基を示している。図中第１行および第２行はＨ鎖可変領域のアミノ酸番号を表し、各行におけるアルファベットは改変されたアミノ酸（１文字表記）を表している。
【図２】図２はＬ鎖可変領域ＬＶ０のアミノ酸配列、およびＬＶ２ａ、ＬＶ２ｂ、ＬＶ２ｃ、ＬＶ２ｄ、ＬＶ３、ＬＶ４において配列番号１４で示されるアミノ酸配列から改変されたアミノ酸残基を示している。図中第１行および第２行はＬ鎖可変領域のアミノ酸番号を表し、各行におけるアルファベットは改変されたアミノ酸（１文字表記）を表している。
【図３】図３はビアコアにより各抗Ａβオリゴマーヒト化抗体のＡβモノマーへの結合活性を測定したセンサーグラムを示している。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
本発明の抗Ａβオリゴマーヒト化抗体（以下、本発明の抗体、本発明のヒト化抗体ともいう）は、Ａβオリゴマーに結合し、Ａβモノマーに結合しないことを特徴とするヒト化抗体である。本発明の抗体は、単離された抗体、精製された抗体または抗体組成物であることが好ましい。
【００２７】
前記単離された抗体、並びに精製された抗体および抗体組成物とは、目的の抗体を実質的に１００％含み、抗体作製における抗体生産細胞、組織、または抗体産生動物由来の共雑タンパク質等の不純物を含まない抗体をいう。
【００２８】
抗体とは、２本の重鎖（Ｈ鎖）と２本の軽鎖（Ｌ鎖）からなるヘテロ４量体のタンパク質である。抗体には、単一の抗原を認識するポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体がある。
【００２９】
ポリクローナル抗体とは、単一の抗原を認識する抗体の混合物である。ポリクローナル抗体としては、例えば、抗原を免疫した宿主動物の抗血清などが挙げられる。
【００３０】
モノクローナル抗体とは、単一クローンの抗体産生細胞が分泌する抗体である。モノクローナル抗体は、ただ一つのエピトープ（抗原決定基ともいう）を認識し、構成するアミノ酸配列（１次構造）が均一である。
【００３１】
本発明の抗体はモノクローナル抗体であることが好ましい。本発明においてモノクローナル抗体としては、抗体重鎖（以下、Ｈ鎖と記す）の相補性決定領域（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ  Ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ  ｒｅｇｉｏｎ；ＣＤＲ、以下ＣＤＲと記す）１〜３が、それぞれ配列番号１〜３で示されるアミノ酸配列を含み、かつＬ鎖ＣＤＲ１〜３が、それぞれ配列番号４〜６で示されるアミノ酸配列を含むモノクローナル抗体、抗体のＨ鎖可変領域（以下、ＶＨと記す）が配列番号８で示されるアミノ酸配列を含み、かつＬ鎖可変領域（以下、ＶＬと記す）が配列番号１０で示されるアミノ酸配列を含むモノクローナル抗体、および抗Ａβオリゴマーマウスモノクローナル抗体６Ｅ４を挙げることができる。
【００３２】
エピトープとしては、例えば、モノクローナル抗体が認識して結合する単一のアミノ酸配列、アミノ酸配列からなる立体構造、糖鎖が結合したアミノ酸配列および糖鎖が結合したアミノ酸配列からなる立体構造などが挙げられる。
【００３３】
本発明の抗体が認識するエピトープとしては、Ａβタンパク質および該タンパク質断片の少なくとも一方を含み、かつ複合体を形成したＡβオリゴマー上に存在するエピトープであればいかなるものもでもよい。
【００３４】
本発明の抗体が結合するエピトープとしては、例えば、Ａβオリゴマー上に露出しているＡβのアミノ酸の一次配列からなるエピトープ、Ａβオリゴマーの立体構造からなるエピトープなどが挙げられる。
【００３５】
アミロイドの主要構成成分であるＡβタンパク質とは、４０〜４２アミノ酸からなるペプチドで、アミロイド前駆体タンパク質（ａｍｙｌｏｉｄ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ；  ＡＰＰ、以下ＡＰＰと記す）という前駆体タンパク質から、プロテアーゼの作用によって産生されることが知られている。
【００３６】
ＡＰＰから生成されるアミロイド分子には、超遠心沈査画分に回収されるアミロイド線維とは別に、可溶性のモノマーおよび可溶性のオリゴマーの非線維性重合体がある。
【００３７】
本発明において、Ａβオリゴマーとは、非線維性重合体を指し、Ａβタンパク質または該タンパク質断片の少なくとも一方を含み、かつ複合体を形成したＡβオリゴマーをいう。
【００３８】
Ａβオリゴマーとして、具体的には、例えば、Ａβ４０（Ａβ１−４０）オリゴマー、Ａβ４２（Ａβ１−４２）オリゴマー、並びにＡβ４０およびＡβ４２の少なくとも一方が含まれるＡβオリゴマーが挙げられる。
【００３９】
また、本発明において、Ａβオリゴマーとしては、Ａβ４０およびＡβ４２の少なくとも一方に、ＡβのＮ末端が欠損したＡβ断片を含むＡβオリゴマーも挙げられる。
【００４０】
本発明におけるＡβ４２オリゴマーとは、具体的には、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより測定される分子量が４５〜１６０ｋＤａであり、Ｂｌｕｅ  Ｎａｔｉｖｅ−ＰＡＧＥにより測定される分子量が２２．５〜１，０３５ｋＤａである分子をいう。
【００４１】
前記Ａβ４２オリゴマーは、分子篩では、主に、＞１００ｋＤａ保持液に回収される。また、原子間力顕微鏡による観察では、高さ１．５〜３．１ｎｍの粒状分子、数珠状分子および輪状分子が混在した形態を呈す。
【００４２】
また、前記Ａβ４２オリゴマーは、ゲル濾過法では、分子量＞６８０ｋＤａ以上のｖｏｉｄ  ｖｏｌｕｍｅ画分８と分子量１７〜４４ｋＤａ境界の画分１５に溶出される。
【００４３】
本発明の抗体は、Ａβオリゴマーに結合し、Ａβモノマーに結合しないヒト化抗体であればよく、その由来および形状については制限されない。
【００４４】
本発明の抗体は、生理的分子である可溶性アミロイドβ（Ａβ）モノマーを認識せず、可溶性Ａβオリゴマーのみに反応することが好ましい。
【００４５】
本発明において、可溶性Ａβモノマーには結合せず、可溶性Ａβオリゴマーのみに結合するとは、限外濾過・分子篩法により判別されるＡβモノマーおよびＡβオリゴマーのうち、モノマー(約４．５ｋＤａ)を認識せず、Ａβダイマー以上の可溶性のＡβオリゴマーを特異的に認識することをいう。従って、本発明の抗体は、Ａβダイマー以上の可溶性Ａβオリゴマーに特異的に結合することがより好ましい。
【００４６】
本発明の抗体は、以下の（１）〜（５）の少なくとも１つの活性を有することが好ましい。
（１）抗神経毒性活性
（２）Ａβアミロイド線維形成抑制活性
（３）Ａβオリゴマーのみを認識する特異性
（４）ＡＤ脳においてＡβオリゴマーを捕捉する能力
（５）ＡＰＰｓｗｅ−トランスジェニックマウス（Ｔｇ２５７６）におけるアルツハイマー病様表現型発症（記憶障害、脳Ａβ蓄積レベル）を予防する能力
【００４７】
本発明の抗体の前記（１）〜（５）に関する活性は、国際公開第２００９／０５１２２０号に記載の方法を用いて、確認することができる。
【００４８】
本発明の抗体は、遺伝子組換え抗体として作製することもできる。本発明において、遺伝子組換え抗体は、ヒト型キメラ抗体、ヒト化抗体（または、ヒト型ＣＤＲ移植抗体ともいう）、ヒト抗体および抗体断片など、遺伝子組換えにより製造される抗体を包含する。
【００４９】
遺伝子組換え抗体において、モノクローナル抗体の特徴を有し、抗原性が低く、血中半減期が延長されたものは、治療薬として好ましい。遺伝子組換え抗体としては、例えば、上記本発明のモノクローナル抗体を遺伝子組換え技術を用いて改変したものが挙げられる。
【００５０】
前記ヒト型キメラ抗体とは、ヒト以外の動物の抗体の重鎖可変領域（以下、ＶＨと記す）および軽鎖可変領域（以下、ＶＬと記す）とヒト抗体の重鎖定常領域（以下、ＣＨと記す）および軽鎖定常領域（以下、ＣＬと記す）とからなる抗体をいう。
【００５１】
本発明におけるヒト型キメラ抗体は、Ａβオリゴマーを特異的に結合するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマより、前記ＶＨおよびＶＬをコードするｃＤＮＡを取得し、前記ＣＨおよびＣＬをコードする遺伝子を有する動物細胞用発現ベクターにそれぞれ挿入してヒト型キメラ抗体発現ベクターを構築し、動物細胞へ導入することにより発現させ、製造することができる。
【００５２】
前記ＣＨとしては、ヒトイムノグロブリン（以下、ｈＩｇと表記する）に属するＣＨであればいかなるものでもよいが、ｈＩｇＧクラスに属するＣＨが好ましく、さらにｈＩｇＧクラスのサブクラスであるｈＩｇＧ１、ｈＩｇＧ２、ｈＩｇＧ３、ｈＩｇＧ４に属するＣＨを用いることもできる。
【００５３】
また、前記ＣＬとしては、ｈＩｇに属するＣＬであればいずれのものでもよく、κクラスあるいはλクラスに属するＣＬを用いることができる。
【００５４】
本発明におけるヒト化抗体とは、ヒト以外の動物の抗体のＶＨおよびＶＬのＣＤＲのアミノ酸配列をヒト抗体のＶＨおよびＶＬの適切な位置に移植した抗体をいう。
【００５５】
ヒト化抗体は、ヒト以外の動物由来のハイブリドーマから生産されるＡβオリゴマーに特異的に結合するモノクローナル抗体のＶＨおよびＶＬのＣＤＲのアミノ酸配列を、任意のヒト抗体のＶＨおよびＶＬのフレームワーク領域（Ｆｒａｍｅｗｏｒｋ  Ｒｅｇｉｏｎ；以下ＦＲと表記する）に移植したＶ領域のアミノ酸配列を作製し、Ｖ領域のアミノ酸配列をコードするｃＤＮＡを構築し、ヒト抗体のＣＨおよびＣＬをコードする遺伝子を有する動物細胞用発現ベクターにそれぞれ挿入してヒト化抗体発現ベクターを構築し、動物細胞へ導入することにより発現させ、製造することができる。
【００５６】
ヒト化抗体のＶＨおよびＶＬのＦＲのアミノ酸配列としては、ヒト抗体由来のＶＨおよびＶＬのＦＲのアミノ酸配列であれば、いかなるものでも用いることができる。
【００５７】
例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄａｔａ  Ｂａｎｋなどのデータベースに登録されているヒト抗体のＶＨおよびＶＬのＦＲのアミノ酸配列、並びにＳｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＵＳ  Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（１９９１）などに記載の、ヒト抗体のＶＨおよびＶＬのＦＲの各サブグループの共通アミノ酸配列などを用いることができる。
【００５８】
本発明のヒト化抗体としては、例えば、抗体のＶＨのＣＤＲ１〜３がそれぞれ配列番号１〜３で示されるアミノ酸配列を含み、かつ抗体のＶＬのＣＤＲ１〜３がそれぞれ配列番号４〜６で示されるアミノ酸配列を含むヒト化抗体が挙げられる。
【００５９】
本発明のヒト化抗体としては、以下の（ａ）ＶＨおよび（ｂ）ＶＬの少なくとも一方を含むヒト化抗体が好ましい。なお、以下の（ａ）および（ｂ）において、導入される改変の数に制限はない。 
（ａ）配列番号１２で示されるアミノ酸配列、または配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓ、２０番目のＶａｌ、３８番目のＡｒｇ、３９番目のＧｌｎ、４５番目のＬｅｕ、４８番目のＭｅｔ、６７番目のＡｒｇ、６８番目のＶａｌ、７０番目のＩｌｅ、７２番目のＡｌａ、７４番目のＴｈｒおよび９７番目のＡｌａから選ばれる少なくとも１つのアミノ酸残基が他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含むＶＨ
（ｂ）配列番号１４で示されるアミノ酸配列、または配列番号１４で示されるアミノ酸配列の２番目のＩｌｅ、１５番目のＰｒｏ、５０番目のＧｌｎ、および９２番目のＴｙｒから選ばれる少なくとも１つのアミノ酸残基が他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含むＶＬ 
【００６０】
本発明のヒト化抗体に含まれるＶＨとしては、例えば、配列番号１２で示されるアミノ酸配列中の１２番目のＬｙｓ、２０番目のＶａｌ、３８番目のＡｒｇ、３９番目のＧｌｎ、４５番目のＬｅｕ、４８番目のＭｅｔ、６７番目のＡｒｇ、６８番目のＶａｌ、７０番目のＩｌｅ、７２番目のＡｌａ、７４番目のＴｈｒ、および９７番目のＡｌａが、他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含むＶＨが好適に挙げられる。 
【００６１】
また、本発明のヒト化抗体に含まれるＶＨとしては、以下の（１）〜（９）から選ばれる１のＶＨもまた好ましい。
（１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓ、２０番目のＶａｌ、３８番目のＡｒｇ、３９番目のＧｌｎ、４５番目のＬｅｕ、４８番目のＭｅｔ、６７番目のＡｒｇ、６８番目のＶａｌ、７２番目のＡｌａ、７４番目のＴｈｒ、および９７番目のＡｌａが、他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含むＶＨ 
（２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓ、３８番目のＡｒｇ、３９番目のＧｌｎ、４５番目のＬｅｕ、４８番目のＭｅｔ、６７番目のＡｒｇ、６８番目のＶａｌ、７２番目のＡｌａ、７４番目のＴｈｒ、および９７番目のＡｌａが、他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含むＶＨ 
（３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓ、３９番目のＧｌｎ、４５番目のＬｅｕ、４８番目のＭｅｔ、６７番目のＡｒｇ、６８番目のＶａｌ、７２番目のＡｌａ、７４番目のＴｈｒ、および９７番目のＡｌａが、他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含むＶＨ
（４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎ、４５番目のＬｅｕ、４８番目のＭｅｔ、６７番目のＡｒｇ、６８番目のＶａｌ、７４番目のＴｈｒ、および９７番目のＡｌａが、他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含むＶＨ
（５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕ、４８番目のＭｅｔ、６７番目のＡｒｇ、６８番目のＶａｌ、７２番目のＡｌａ、７４番目のＴｈｒ、および９７番目のＡｌａが、他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含むＶＨ
（６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎ、４５番目のＬｅｕ、４８番目のＭｅｔ、６７番目のＡｒｇ、および９７番目のＡｌａが、他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含むＶＨ
（７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕ、４８番目のＭｅｔ、６７番目のＡｒｇ、および９７番目のＡｌａが、他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含むＶＨ
（８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕ、４８番目のＭｅｔ、および９７番目のＡｌａが、他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含むＶＨ
（９）配列番号１２のアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕ、および９７番目のＡｌａが、他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含むＶＨ
【００６２】
前記ＶＨのアミノ酸配列としては、例えば、配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換する改変から選ばれる少なくとも１つの改変が導入されたアミノ酸配列が挙げられる。
【００６３】
前記ＶＨのアミノ酸配列としては、さらに具体的には、例えば、以下の１２個〜１個の改変が導入されたＶＨのアミノ酸配列が挙げられる。
【００６４】
１２個の改変が導入されたＶＨのアミノ酸配列としては、具体的には、例えば、配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓにおよび９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列が挙げられる。
【００６５】
１１個の改変が導入されたＶＨのアミノ酸配列としては、具体的には、例えば、以下の（１）〜（１２）のアミノ酸配列が挙げられる。
（１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
【００６６】
１０個の改変が導入されたＶＨのアミノ酸配列としては、具体的には、例えば、以下の（１）〜（６６）のアミノ酸配列が挙げられる。
（１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（１２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（２２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（３１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（３９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（４６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（５０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（５１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（５２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（５３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（５４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（５５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（５６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（５７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（５８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（５９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（６０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（６１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（６２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（６３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（６４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（６５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（６６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、および７２番目のＡｌａをＶａｌに置換したアミノ酸配列
【００６７】
９個の改変が導入されたＶＨのアミノ酸配列としては、具体的には、例えば、以下の（１）〜（１０）のアミノ酸配列が挙げられる。
（１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
【００６８】
８個の改変が導入されたＶＨのアミノ酸配列としては、具体的には、例えば、以下の（１）〜（４７）のアミノ酸配列が挙げられる。
（１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（１０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（１８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（２６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（３３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（３８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（４２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（４５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（４７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、および７２番目のＡｌａをＶａｌに置換したアミノ酸配列
【００６９】
７個の改変が導入されたＶＨのアミノ酸配列としては、具体的には、例えば、以下の（１）〜（２２）のアミノ酸配列が挙げられる。
（１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｓｙに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
【００７０】
６個の改変が導入されたＶＨのアミノ酸配列としては、具体的には、例えば、以下の（１）〜（７）のアミノ酸配列が挙げられる。
（１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
【００７１】
５個の改変が導入されたＶＨのアミノ酸配列としては、具体的には、例えば、以下の（１）〜（８）のアミノ酸配列が挙げられる。
（１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
【００７２】
４個の改変が導入されたＶＨのアミノ酸配列としては、具体的には、例えば、以下の（１）〜（９）のアミノ酸配列が挙げられる。
（１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
【００７３】
３個の改変が導入されたＶＨのアミノ酸配列としては、具体的には、例えば、以下の（１）〜（１９）のアミノ酸配列が挙げられる。
（１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、および４８番目のＭｅｔをＩｌｅに置換したアミノ酸配列
（１２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、および４８番目のＭｅｔをＩｌｅに置換したアミノ酸配列
（１３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、および４８番目のＭｅｔをＩｌｅに置換したアミノ酸配列
（１４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、および４８番目のＭｅｔをＩｌｅに置換したアミノ酸配列
（１５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、および６７番目のＡｒｇをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（１６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、および６８番目のＶａｌをＡｌａに置換したアミノ酸配列
（１７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、および７０番目のＩｌｅをＬｅｕに置換したアミノ酸配列
（１８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、および７２番目のＡｌａをＶａｌに置換したアミノ酸配列
（１９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
【００７４】
２個の改変が導入されたＶＨのアミノ酸配列としては、具体的には、例えば、以下の（１）〜（６６）のアミノ酸配列が挙げられる。
（１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、および２０番目のＶａｌをＬｅｕに置換したアミノ酸配列
（２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、および３８番目のＡｒｇをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、および３９番目のＧｌｎをＬｅｕに置換したアミノ酸配列
（４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、および４５番目のＬｅｕをＰｈｅに置換したアミノ酸配列
（５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、および４８番目のＭｅｔをＩｌｅに置換したアミノ酸配列
（６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、および６７番目のＡｒｇをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、および６８番目のＶａｌをＡｌａに置換したアミノ酸配列
（８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、および７０番目のＩｌｅをＬｅｕに置換したアミノ酸配列
（９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、および７２番目のＡｌａをＶａｌに置換したアミノ酸配列
（１０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（１１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（１２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、および３８番目のＡｒｇをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（１３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、および３９番目のＧｌｎをＬｅｕに置換したアミノ酸配列
（１４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、および４５番目のＬｅｕをＰｈｅに置換したアミノ酸配列
（１５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、および４８番目のＭｅｔをＩｌｅに置換したアミノ酸配列
（１６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、および６７番目のＡｒｇをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（１７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、および６８番目のＶａｌをＡｌａに置換したアミノ酸配列
（１８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、および７０番目のＩｌｅをＬｅｕに置換したアミノ酸配列
（１９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、および７２番目のＡｌａをＶａｌに置換したアミノ酸配列
（２０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（２１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（２２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、および３９番目のＧｌｎをＬｅｕに置換したアミノ酸配列
（２３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、および４５番目のＬｅｕをＰｈｅに置換したアミノ酸配列
（２４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、および４８番目のＭｅｔをＩｌｅに置換したアミノ酸配列
（２５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、および６７番目のＡｒｇをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（２６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、および６８番目のＶａｌをＡｌａに置換したアミノ酸配列
（２７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、および７０番目のＩｌｅをＬｅｕに置換したアミノ酸配列
（２８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、および７２番目のＡｌａをＶａｌに置換したアミノ酸配列
（２９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（３０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、および４５番目のＬｅｕをＰｈｅに置換したアミノ酸配列
（３２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、および４８番目のＭｅｔをＩｌｅに置換したアミノ酸配列
（３３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、および６７番目のＡｒｇをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（３４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、および６８番目のＶａｌをＡｌａに置換したアミノ酸配列
（３５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、および７０番目のＩｌｅをＬｅｕに置換したアミノ酸配列
（３６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、および７２番目のＡｌａをＶａｌに置換したアミノ酸配列
（３７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（３８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（３９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、および４８番目のＭｅｔをＩｌｅに置換したアミノ酸配列
（４０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、および６７番目のＡｒｇをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（４１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、および６８番目のＶａｌをＡｌａに置換したアミノ酸配列
（４２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、および７０番目のＩｌｅをＬｅｕに置換したアミノ酸配列
（４３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、および７２番目のＡｌａをＶａｌに置換したアミノ酸配列
（４４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（４５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（４６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、および６７番目のＡｒｇをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（４７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、および６８番目のＶａｌをＡｌａに置換したアミノ酸配列
（４８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、および７０番目のＩｌｅをＬｅｕに置換したアミノ酸配列
（４９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、および７２番目のＡｌａをＶａｌに置換したアミノ酸配列
（５０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（５１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（５２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、および６８番目のＶａｌをＡｌａに置換したアミノ酸配列
（５３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、および７０番目のＩｌｅをＬｅｕに置換したアミノ酸配列
（５４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、および７２番目のＡｌａをＶａｌに置換したアミノ酸配列
（５５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（５６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（５７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の６８番目のＶａｌをＡｌａに、および７０番目のＩｌｅをＬｅｕに置換したアミノ酸配列
（５８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の６８番目のＶａｌをＡｌａに、および７２番目のＡｌａをＶａｌに置換したアミノ酸配列
（５９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の６８番目のＶａｌをＡｌａに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（６０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の６８番目のＶａｌをＡｌａに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（６１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、および７２番目のＡｌａをＶａｌに置換したアミノ酸配列
（６２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（６３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（６４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の７２番目のＡｌａをＶａｌに、および７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（６５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の７２番目のＡｌａをＶａｌに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
（６６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
【００７５】
１個の改変が導入されたＶＨのアミノ酸配列としては、具体的には、例えば、以下の（１）〜（１２）のアミノ酸配列が挙げられる。
（１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに置換したアミノ酸配列
（２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の２０番目のＶａｌをＬｅｕに置換したアミノ酸配列
（３）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３８番目のＡｒｇをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（４）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の３９番目のＧｌｎをＬｅｕに置換したアミノ酸配列
（５）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４５番目のＬｅｕをＰｈｅに置換したアミノ酸配列
（６）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の４８番目のＭｅｔをＩｌｅに置換したアミノ酸配列
（７）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の６７番目のＡｒｇをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（８）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の６８番目のＶａｌをＡｌａに置換したアミノ酸配列
（９）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の７０番目のＩｌｅをＬｅｕに置換したアミノ酸配列
（１０）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の７２番目のＡｌａをＶａｌに置換したアミノ酸配列
（１１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の７４番目のＴｈｒをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（１２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列の９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列
【００７６】
上記のＶＨのアミノ酸配列の中でも、配列番号１２で示されるアミノ酸配列、並びに配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換したアミノ酸配列が好ましい。
【００７７】
本発明のヒト化抗体としては、配列番号１４で示されるアミノ酸配列の２番目のＩｌｅ、１５番目のＰｒｏ、５０番目のＧｌｎ、９２番目のＴｙｒが、他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含むＶＬを含むヒト化抗体が好ましく、配列番号１４で示されるアミノ酸配列中の１５番目のＰｒｏ、５０番目のＧｌｎ、および９２番目のＴｙｒが、他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含むＶＬが好適に挙げられる。
【００７８】
また、本発明のヒト化抗体として、以下の（１）〜（４）から選ばれる１のＶＬを含むヒト化抗体もまた好ましい。
（１）配列番号１４で示されるアミノ酸配列の５０番目のＧｌｎ、および９２番目のＴｙｒが、他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含むＶＬ
（２）配列番号１４で示されるアミノ酸配列の２番目のＩｌｅ、および９２番目のＴｙｒが、他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含むＶＬ
（３）配列番号１４で示されるアミノ酸配列の１５番目のＰｒｏ、および９２番目のＴｙｒが、他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含むＶＬ
（４）配列番号１４で示されるアミノ酸配列の２番目のＩｌｅ、および５０番目のＧｌｎが、他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含むＶＬ
【００７９】
前記ＶＬのアミノ酸配列としては、例えば、配列番号１４で示されるアミノ酸配列の２番目のＩｌｅをＶａｌに、１５番目のＰｒｏをＬｅｕに、５０番目のＧｌｎをＬｙｓに、および９２番目のＴｙｒをＰｈｅに置換する改変から選ばれる少なくとも１つの改変が導入されたアミノ酸配列が挙げられる。
【００８０】
上記の改変が導入された本発明の抗体のＶＬのアミノ酸配列としては、さらに具体的には、例えば、以下の４個〜１個の改変が導入されたＶＨのアミノ酸配列が挙げられる。
【００８１】
４個の改変が導入されたＶＬのアミノ酸配列としては、具体的には、例えば、配列番号１４で示されるアミノ酸配列の２番目のＩｌｅをＶａｌに、１５番目のＰｒｏをＬｅｕに、５０番目のＧｌｎをＬｙｓに、および９２番目のＴｙｒをＰｈｅに置換したアミノ酸配列が挙げられる。
【００８２】
３個の改変が導入されたＶＬのアミノ酸配列としては、具体的には、例えば、以下の（１）〜（４）のアミノ酸配列が挙げられる。
（１）配列番号１４で示されるアミノ酸配列の２番目のＩｌｅをＶａｌに、１５番目のＰｒｏをＬｅｕに、および５０番目のＧｌｎをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（２）配列番号１４で示されるアミノ酸配列の２番目のＩｌｅをＶａｌに、１５番目のＰｒｏをＬｅｕに、および９２番目のＴｙｒをＰｈｅに置換したアミノ酸配列
（３）配列番号１４で示されるアミノ酸配列の２番目のＩｌｅをＶａｌに、５０番目のＧｌｎをＬｙｓに、および９２番目のＴｙｒをＰｈｅに置換したアミノ酸配列
（４）配列番号１４で示されるアミノ酸配列の１５番目のＰｒｏをＬｅｕに、５０番目のＧｌｎをＬｙｓに、および９２番目のＴｙｒをＰｈｅに置換したアミノ酸配列
【００８３】
２個の改変が導入されたＶＬのアミノ酸配列としては、具体的には、例えば、以下の（１）〜（６）のアミノ酸配列が挙げられる。
（１）配列番号１４で示されるアミノ酸配列の２番目のＩｌｅをＶａｌに、および１５番目のＰｒｏをＬｅｕに置換したアミノ酸配列
（２）配列番号１４で示されるアミノ酸配列の２番目のＩｌｅをＶａｌに、および５０番目のＧｌｎをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（３）配列番号１４で示されるアミノ酸配列の２番目のＩｌｅをＶａｌに、および９２番目のＴｙｒをＰｈｅに置換したアミノ酸配列
（４）配列番号１４で示されるアミノ酸配列の１５番目のＰｒｏをＬｅｕに、および５０番目のＧｌｎをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（５）配列番号１４で示されるアミノ酸配列の１５番目のＰｒｏをＬｅｕに、および９２番目のＴｙｒをＰｈｅに置換したアミノ酸配列
（６）配列番号１４で示されるアミノ酸配列の５０番目のＧｌｎをＬｙｓに、および９２番目のＴｙｒをＰｈｅに置換したアミノ酸配列
【００８４】
１個の改変が導入されたＶＬのアミノ酸配列としては、具体的には、例えば、以下の（１）〜（４）のアミノ酸配列が挙げられる。
（１）配列番号１４で示されるアミノ酸配列の２番目のＩｌｅをＶａｌに置換したアミノ酸配列
（２）配列番号１４で示されるアミノ酸配列の１５番目のＰｒｏをＬｅｕに置換したアミノ酸配列
（３）配列番号１４で示されるアミノ酸配列の５０番目のＧｌｎをＬｙｓに置換したアミノ酸配列
（４）配列番号１４で示されるアミノ酸配列の９２番目のＴｙｒをＰｈｅに置換したアミノ酸配列
【００８５】
上記のＶＬのアミノ酸配列の中でも、配列番号１４で示されるアミノ酸配列、配列番号１４で示されるアミノ酸配列の２番目のＩｌｅをＶａｌに、１５番目のＰｒｏをＬｅｕに、５０番目のＧｌｎをＬｙｓに、および９２番目のＴｙｒをＰｈｅに置換したアミノ酸配列、並びに配列番号１４で示されるアミノ酸配列中の５０番目のＧｌｎをＬｙｓに、および９２番目のＴｙｒをＰｈｅに置換したアミノ酸配列が好ましい。
【００８６】
本発明の抗体の具体例としては、上記のＶＨとＶＬをそれぞれ組み合わせたいずれか１の抗体を挙げることができる。
【００８７】
本発明の抗体としては、例えば、以下の（１）〜（４）の抗体が好適に挙げられる。
（１）配列番号１２で示されるアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１４で示されるアミノ酸配列を含むＶＬの少なくとも一方を含むヒト化抗体
（２）配列番号１２で示されるアミノ酸配列を含むＶＨおよび図２で示されるアミノ酸配列のいずれか１を含むＶＬの少なくとも一方を含むヒト化抗体
（３）図１で示されるアミノ酸配列のいずれか１を含むＶＨおよび配列番号１４で示されるアミノ酸配列を含むＶＬの少なくとも一方ヒト化抗体
（４）図１で示されるアミノ酸配列のいずれか１を含むＶＨおよび図２で示されるアミノ酸配列のいずれか１を含むＶＬを含むヒト化抗体
【００８８】
図１で示されるＶＨのアミノ酸配列のうち、６Ｅ４ＨＶ０またはＨＶ１２が好ましい。また、図２で示されるＶＬのアミノ酸配列の６Ｅ４ＬＶ０、ＬＶ２ａおよびＬＶ４が好ましい。
【００８９】
したがって、図１で示されるアミノ酸配列のいずれか１を含むＶＨおよび図２で示されるアミノ酸配列のいずれか１を含むＶＬを含むヒト化抗体としては、図１で示される６Ｅ４ＨＶ０またはＨＶ１２のアミノ酸配列を含むＶＨと、図２で示される６Ｅ４ＬＶ０、ＬＶ２ａおよびＬＶ４のいずれか１のアミノ酸配列を含むＶＬとを含むヒト化抗体がより好ましい。
【００９０】
具体的には、例えば、配列番号１２または１５で示されるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号１４、１６または１７で示されるアミノ酸配列を含むＶＬとを含むヒト化抗体を挙げることができる。
【００９１】
図１で示されるＶＨのアミノ酸配列と図２で示されるＶＬのアミノ酸配列の組み合わせとしては、ＨＶ０とＬＶ０、ＨＶ０とＬＶ２ａ、ＨＶ０とＬＶ４およびＨＶ１２とＬＶ４の組み合わせが好ましい。
【００９２】
したがって、本発明の抗体としては、以下の（１）〜（４）のヒト化抗体がさらに好ましい。
（１）図１のＨＶ０で示されるアミノ酸配列を含むＶＨと図２のＬＶ０で示されるアミノ酸配列を含むＶＬとを含むヒト化抗体（ＨＶ０ＬＶ０）
（２）図１のＨＶ０で示されるアミノ酸配列を含むＶＨと図２のＬＶ２ａで示されるアミノ酸配列を含むＶＬ（ＨＶ０ＬＶ２ａ）
（３）図１のＨＶ０で示されるアミノ酸配列を含むＶＨと図２のＬＶ４で示されるアミノ酸配列を含むＶＬ（ＨＶ０ＬＶ４）
（４）図１のＨＶ１２で示されるアミノ酸配列を含むＶＨと図２のＬＶ４で示されるアミノ酸配列を含むＶＬ（ＨＶ１２ＬＶ４）
【００９３】
前記抗体としては、具体的には、例えば、ＶＨおよびＶＬが含むアミノ酸配列の組み合わせが、配列番号１２および１４、配列番号１２および１６、配列番号１２および１７並びに配列番号１５および１７の組み合わせであるヒト化抗体を挙げることができる。
【００９４】
更に、本発明のヒト化抗体には、上記のヒト化抗体と競合してＡβオリゴマーに反応するヒト化抗体、および上記のヒト化抗体が反応するエピトープと同じエピトープに結合するヒト化抗体も包含される。
【００９５】
本発明において、ヒト抗体とは、元来ヒト体内に天然に存在する抗体をいうが、最近の遺伝子工学的、細胞工学的、発生工学的な技術の進歩により作製されたヒト抗体ファージライブラリーおよびヒト抗体産生トランスジェニック動物から得られる抗体なども含まれる。
【００９６】
ヒト体内に天然に存在する抗体は、例えば、ヒト末梢血リンパ球を単離し、ＥＢウイルスなどを感染させ不死化し、クローニングすることにより、該抗体を産生するリンパ球を培養でき、培養上清中より該抗体を精製することができる。
【００９７】
ヒト抗体ファージライブラリーは、ヒトＢ細胞から調製した抗体遺伝子をファージ遺伝子に挿入することによりＦａｂ、ｓｃＦｖなどの抗体断片をファージ表面に発現させたライブラリーである。
【００９８】
ヒト抗体ファージライブラリーより、抗原を固定化した基質に対する結合活性を指標として所望の抗原結合活性を有する抗体断片を表面に発現しているファージを回収することができる。該抗体断片は、さらに、遺伝子工学的手法により２本の完全なＨ鎖および２本の完全なＬ鎖からなるヒト抗体分子へも変換することができる。
【００９９】
ヒト抗体産生トランスジェニック動物は、ヒト抗体遺伝子が細胞内に組込まれた動物を意味する。具体的には、例えば、マウスＥＳ細胞へヒト抗体遺伝子を導入し、該ＥＳ細胞をマウスの初期胚へ移植後、発生させることによりヒト抗体産生トランスジェニックマウスを作製することができる。
【０１００】
ヒト抗体産生トランスジェニック動物からのヒト抗体は、通常のヒト以外の動物で行われているハイブリドーマ作製方法を用い、ヒト抗体産生ハイブリドーマを取得し、培養することで培養上清中にヒト抗体を産生蓄積させることにより作製することができる。
【０１０１】
上記抗体または抗体断片を構成するアミノ酸配列において、１つ以上のアミノ酸が欠失、付加、置換または挿入され、かつ上述の抗体またはその抗体断片と同様な活性を有するモノクローナル抗体またはその抗体断片も、本発明のモノクローナル抗体またはその抗体断片に包含される。
【０１０２】
欠失、置換、挿入および／または付加されるアミノ酸の数は１個以上でありその数は特に限定されないが、部位特異的変異導入法［Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  ２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（１９８９）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（１９８７−１９９７）、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１０，６４８７（１９８２）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，７９，６４０９（１９８２）、Ｇｅｎｅ，３４，３１５（１９８５）、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１３，４４３１（１９８５）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ.,ＵＳＡ，８２，４８８（１９８５）］などの周知の技術により、欠失、置換もしくは付加できる程度の数である。例えば、１〜数十個、１〜２０個が好ましく、１〜１０個がより好ましく、１〜５個がさらに好ましい。
【０１０３】
上記の抗体のアミノ酸配列において１つ以上のアミノ酸残基が欠失、置換、挿入または付加されたとは、次のことを示す。即ち、同一配列中の任意、かつ１もしくは複数のアミノ酸配列中において、１または複数のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入または付加があることを意味する。また、欠失、置換、挿入または付加が同時に生じる場合もあり、置換、挿入または付加されるアミノ酸残基は天然型と非天然型いずれの場合もある。
【０１０４】
天然型アミノ酸残基としては、例えば、Ｌ−アラニン、Ｌ−アスパラギン、Ｌ−アスパラギン酸、Ｌ−グルタミン、Ｌ−グルタミン酸、グリシン、Ｌ−ヒスチジン、Ｌ−イソロイシン、Ｌ−ロイシン、Ｌ−リジン、Ｌ−アルギニン、Ｌ−メチオニン、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−プロリン、Ｌ−セリン、Ｌ−スレオニン、Ｌ−トリプトファン、Ｌ−チロシン、Ｌ−バリンおよびＬ−システインなどが挙げられる。
【０１０５】
以下に、相互に置換可能なアミノ酸残基の好ましい例を示す。同一群に含まれるアミノ酸残基は相互に置換可能である。
Ａ群：ロイシン、イソロイシン、ノルロイシン、バリン、ノルバリン、アラニン、２−アミノブタン酸、メチオニン、Ｏ−メチルセリン、ｔ−ブチルグリシン、ｔ−ブチルアラニンおよびシクロヘキシルアラニン
Ｂ群：アスパラギン酸、グルタミン酸、イソアスパラギン酸、イソグルタミン酸、２−アミノアジピン酸および２−アミノスベリン酸
Ｃ群：アスパラギンおよびグルタミン
Ｄ群：リジン、アルギニン、オルニチン、２，４−ジアミノブタン酸および２，３−ジアミノプロピオン酸
Ｅ群：プロリン、３−ヒドロキシプロリンおよび４−ヒドロキシプロリン
Ｆ群：セリン、スレオニンおよびホモセリン
Ｇ群：フェニルアラニンおよびチロシン
【０１０６】
本発明において、抗体断片としては、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ｄｉａｂｏｄｙ、ｄｓＦｖおよびＣＤＲを含むペプチドなどが挙げられる。
【０１０７】
Ｆａｂは、ＩｇＧを蛋白質分解酵素であるパパインで処理して得られる断片のうち（Ｈ鎖の２２４番目のアミノ酸残基で切断される）、Ｈ鎖のＮ末端側約半分とＬ鎖全体がジスルフィド結合で結合した分子量約５万の抗原結合活性を有する抗体断片である。
【０１０８】
本発明のＦａｂは、Ａβオリゴマーを特異的に認識し、かつ該細胞外領域に結合するモノクローナル抗体をパパインで処理して得ることができる。また、該抗体のＦａｂをコードするＤＮＡを原核生物用発現ベクターまたは真核生物用発現ベクターに挿入し、該ベクターを原核生物または真核生物へ導入することにより発現させ、Ｆａｂを製造することもできる。
【０１０９】
Ｆ（ａｂ’）２は、ＩｇＧのヒンジ領域の２個のジスルフィド結合の下部を蛋白質分解酵素であるペプシンで分解して得られた、２つのＦａｂ領域がヒンジ部分で結合して構成された、分子量約１０万の抗原結合活性を有する断片である。
【０１１０】
本発明のＦ（ａｂ’）２は、Ａβオリゴマーを特異的に認識し、かつ該細胞外領域に結合するモノクローナル抗体をペプシンで処理して得ることができる。また、下記のＦａｂ’をチオエーテル結合またはジスルフィド結合させ、作製することもできる。
【０１１１】
Ｆａｂ’は、上記Ｆ（ａｂ’）２のヒンジ領域のジスルフィド結合を切断した分子量約５万の抗原結合活性を有する抗体断片である。
【０１１２】
本発明のＦａｂ’は、本発明のＡβオリゴマーを特異的に認識し、かつ該細胞外領域に結合するＦ（ａｂ’）２をジチオスレイトールなどの還元剤で処理して得ることができる。
【０１１３】
また、該抗体のＦａｂ’断片をコードするＤＮＡを原核生物用発現ベクターまたは真核生物用発現ベクターに挿入し、該ベクターを原核生物または真核生物へ導入することにより発現させ、Ｆａｂ’を製造することもできる。
【０１１４】
ｓｃＦｖは、１本のＶＨと１本のＶＬとを適当なペプチドリンカー（以下、Ｐと表記する）を用いて連結した、ＶＨ−Ｐ−ＶＬまたはＶＬ−Ｐ−ＶＨポリペプチドで、抗原結合活性を有する抗体断片である。
【０１１５】
本発明のｓｃＦｖは、本発明のＡβオリゴマーを特異的に認識し、かつ該細胞外領域に結合するモノクローナル抗体のＶＨおよびＶＬをコードするｃＤＮＡを取得し、ｓｃＦｖをコードするＤＮＡを構築し、該ＤＮＡを原核生物用発現ベクターあるいは真核生物用発現ベクターに挿入し、該発現ベクターを原核生物あるいは真核生物へ導入することにより発現させ、製造することができる。
【０１１６】
ｄｉａｂｏｄｙは、ｓｃＦｖが二量体化した抗体断片で、二価の抗原結合活性を有する抗体断片である。二価の抗原結合活性は、同一であることもできるし、一方を異なる抗原結合活性とすることもできる。
【０１１７】
本発明のｄｉａｂｏｄｙは、本発明のＡβオリゴマーを特異的に認識し、かつ該細胞外領域に結合するモノクローナル抗体のＶＨおよびＶＬをコードするｃＤＮＡを取得し、ｓｃＦｖをコードするＤＮＡをペプチドリンカーのアミノ酸配列の長さが８残基以下となるように構築し、該ＤＮＡを原核生物用発現ベクターまたは真核生物用発現ベクターに挿入し、該発現ベクターを原核生物または真核生物へ導入することにより発現させ、製造することができる。
【０１１８】
ｄｓＦｖとは、ＶＨおよびＶＬ中のそれぞれ１アミノ酸残基をシステイン残基に置換したポリペプチドを該システイン残基間のジスルフィド結合を介して結合させたものをいう。システイン残基に置換するアミノ酸残基は既知の方法［Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，７，６９７（１９９４）］に従って、抗体の立体構造予測に基づいて選択することができる。
【０１１９】
本発明のｄｓＦｖは、本発明のＡβオリゴマーを特異的に認識し、かつ該細胞外領域に結合するモノクローナル抗体のＶＨおよびＶＬをコードするｃＤＮＡを取得し、ｄｓＦｖをコードするＤＮＡを構築し、該ＤＮＡを原核生物用発現ベクターあるいは真核生物用発現ベクターに挿入し、該発現ベクターを原核生物または真核生物へ導入することにより発現させ、製造することができる。
【０１２０】
ＣＤＲを含むペプチドは、ＶＨまたはＶＬのＣＤＲの少なくとも１領域以上を含んで構成される。複数のＣＤＲを含むペプチドは、直接または適当なペプチドリンカーを介して結合させることができる。
【０１２１】
本発明のＣＤＲを含むペプチドは、本発明のＡβオリゴマーに特異的に結合するヒト化抗体のＶＨおよびＶＬのＣＤＲをコードするＤＮＡを構築し、該ＤＮＡを原核生物用発現ベクターまたは真核生物用発現ベクターに挿入し、該発現ベクターを原核生物あるいは真核生物へ導入することにより発現させ、製造することができる。また、ＣＤＲを含むペプチドは、Ｆｍｏｃ法およびｔＢｏｃ法などの化学合成法によって製造することもできる。
【０１２２】
本発明のモノクローナル抗体には、本発明の抗Ａβオリゴマーヒト化抗体または該抗体断片に放射性同位元素、低分子の薬剤、高分子の薬剤、蛋白質または抗体医薬などを化学的若しくは遺伝子工学的に結合させた抗体の誘導体も含まれる。
【０１２３】
本発明の抗体の誘導体は、本発明の抗Ａβオリゴマーヒト化抗体または該抗体断片のＨ鎖またはＬ鎖のＮ末端側またはＣ末端側、抗Ａβオリゴマーヒト化抗体または該抗体断片中の適当な置換基または側鎖および糖鎖などに、放射性同位元素、低分子の薬剤、高分子の薬剤、免疫賦活剤、蛋白質および抗体医薬などを化学的手法［抗体工学入門，  地人書館  （１９９４）］により結合させることにより製造することができる。
【０１２４】
また、本発明の抗Ａβオリゴマーヒト化抗体または該抗体断片をコードするＤＮＡと、結合させたい蛋白質または抗体医薬をコードするＤＮＡを連結させて発現ベクターに挿入し、該発現ベクターを適当な宿主細胞へ導入し、発現させる遺伝子工学的手法により、本発明の抗体の誘導体を製造することができる。
【０１２５】
上記抗体の誘導体を検出方法、定量方法または診断方法において、検出用試薬、定量用試薬または診断薬として使用する場合に、本発明の抗Ａβオリゴマーヒト化抗体またはその抗体断片に結合する薬剤としては、通常の免疫学的検出または測定法で用いられる標識体が挙げられる。
【０１２６】
標識体としては、例えば、アルカリホスファターゼ、ペルオキシダーゼおよびルシフェラーゼなどの酵素、アクリジニウムエステルおよびロフィンなどの発光物質、またはフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）およびテトラメチルローダミンイソチオシアネート（ＲＩＴＣ）などの蛍光物質などが挙げられる。
【０１２７】
以下に、具体的な抗体作製方法について記載する。
１．抗Ａβオリゴマーモノクローナル抗体の作製
本発明において、抗Ａβオリゴマーモノクローナル抗体は、以下のようにして作製することができる。
【０１２８】
（１）抗原の調製
抗原とするＡβオリゴマーを作製する方法としては、合成Ａβ１−４２（ペプチド研、大阪）を蒸留脱イオン水または１０ｍｍｏｌ／Ｌ  リン酸緩衝液中に溶解させ、それを３７℃で１８時間インキュベート後、４−１２％  ＳＤＳ−ＰＡＧＥにてペプチドを分離し、ＣＢＢ染色にて可視化後、Ａβ１−４２モノマーの混入のないＡβ１−４２テトラマーのみを切り出すことにより、Ａβ１−４２オリゴマーを作製することができる。
【０１２９】
また、合成したＡβ１−４０ペプチドのＮ末端に６−Ｃａｒｂｏｘｙｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｒｈｏｄａｍｉｎｅ（６−ＴＡＭＲＡ）（ＳＩＧＭＡ）を従来の方法を用いて化学結合させた修飾Ａβ１−４０を、合成Ａβ１−４０（ペプチド研、大阪）とともに重合反応させることにより、オリゴマーを多く含むＡβ１−４０オリゴマーを調製することもできる。
【０１３０】
（２）動物の免疫
抗原をＢａｌｂ−ｃマウスの肉趾に対して、完全フロイントアジュバントにより乳化させた２．５μｇのＡβ１−４２テトラマーまたはＡβ１−４０オリゴマーによる免疫処置を行い、続いてさらに６回の追加免疫を行う。抗体産生細胞とミエローマ細胞との融合は、公知の方法、例えば、ケーラーとミルステインらの方法（Ｋｏｈｌｅｒ．Ｇ．ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｃ．、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．（１９８１）７３，３−４６）等により行うことができる。具体的には、抗原を免疫したマウスの鼠径リンパ節から抗体を産生する免疫細胞を取得する。
【０１３１】
免疫は、動物の皮下あるいは静脈内または腹腔内に、例えば、フロインドの完全アジュバント、または水酸化アルミニウムゲルと百日咳菌ワクチンなどの適当なアジュバントとともに抗原を投与することにより行う。
【０１３２】
抗原が部分ペプチドである場合には、ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）およびＫＬＨ（Ｋｅｙｈｏｌｅ  Ｌｉｍｐｅｔ  ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎ）などのキャリア蛋白質とコンジュゲートを作製し、これを免疫原として用いる。
【０１３３】
抗原を免疫する動物としてはハイブリドーマを作製することが可能であれば、いかなるものも用いることができるが、好ましくはマウス、ラット、ハムスター、ニワトリまたはラビットなどが用いられる。また、このような動物から抗体産生能を有する細胞を取得し、該細胞にｉｎ  ｖｉｔｒｏで免疫を施した後に、骨髄腫細胞と融合して作製したハイブリドーマが生産する抗体なども包含される。
【０１３４】
（３）骨髄腫細胞の調製
骨髄腫細胞としては、マウスから得られた株化細胞を用い、例えば、８−アザグアニン耐性マウス（ＢＡＬＢ／ｃ由来）骨髄腫細胞株Ｐ３−Ｘ６３Ａｇ８−Ｕ１（Ｐ３−Ｕ１）［Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｔｏｐｉｃｓ  ｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１８，１（１９７８）］、Ｐ３−ＮＳ１／１−Ａｇ４１（ＮＳ−１）［Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６，５１１（１９７６）］、ＳＰ２／０−Ａｇ１４（ＳＰ−２）［Ｎａｔｕｒｅ，２７６，２６９（１９７８）］、Ｐ３−Ｘ６３−Ａｇ８６５３（６５３）［Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１２３，１５４８（１９７９）］およびＰ３−Ｘ６３−Ａｇ８（Ｘ６３）［Ｎａｔｕｒｅ，２５６，４９５（１９７５）］などを用いる。
【０１３５】
前記骨髄腫細胞は、正常培地［グルタミン、２−メルカプトエタノール、ジェンタマイシン、ＦＢＳ、および８−アザグアニンを加えたＲＰＭＩ１６４０培地］で継代し、細胞融合の３〜４日前に正常培地に継代し、融合当日２×１０７個以上の細胞数を確保する。
【０１３６】
（４）細胞融合とモノクローナル抗体産生ハイブリドーマの調製
（２）で得られる融合用抗体産生細胞と（３）で得られる骨髄腫細胞を、ポリエチレングリコール１５００を用いて融合することで、ハイブリドーマを作製することができる。
【０１３７】
培養後、培養上清の一部を抜き取り、後述のドットブロット法、バインディングアッセイなどのハイブリドーマの選択方法により、Ａβオリゴマーに反応し、Ａβモノマーに反応しない細胞群を選択する。次に、限界希釈法によりクローニングを２回繰り返し［１回目はＨＴ培地（ＨＡＴ培地からアミノプテリンを除いた培地）、２回目は正常培地を使用する］、安定して強い抗体価の認められたものをモノクローナル抗体産生ハイブリドーマとして選択する。
【０１３８】
（５）精製モノクローナル抗体の調製
プリスタン処理［２，６，１０，１４−テトラメチルペンタデカン（Ｐｒｉｓｔａｎｅ）０．５ｍｌを腹腔内投与し、２週間飼育する］した８〜１０週令のマウスまたはヌードマウスに、（４）で得られるモノクローナル抗体産生ハイブリドーマを腹腔内に注射する。
【０１３９】
１０〜２１日でハイブリドーマは腹水癌化する。このマウスから腹水を採取し、遠心分離して固形分を除去後、４０〜５０％硫酸アンモニウムで塩析し、カプリル酸沈殿法、ＤＥＡＥ−セファロースカラム、プロテインＡ−カラムあるいはゲル濾過カラムによる精製を行ない、ＩｇＧあるいはＩｇＭ画分を集め、精製モノクローナル抗体とする。
【０１４０】
（６）モノクローナル抗体の選択
抗体をスクリーニングする方法としては、抗体とＡβオリゴマーの結合活性を指標に抗体を選択する方法が挙げられる。
【０１４１】
本発明の抗体の抗原（Ａβオリゴマー）への結合活性は、例えば、吸光度測定法、酵素結合免疫吸着アッセイ法（ドットブロット法、ＥＬＩＳＡ）、酵素免疫アッセイ法（ＥＩＡ）、放射免疫アッセイ法（ＲＩＡ）、免疫蛍光法等および表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ法）を利用したＢｉａｃｏｒｅ（ビアコア社製）の少なくとも１を用いて解析することができる。
【０１４２】
具体的には、例えば、抗Ａβオリゴマーモノクローナル抗体のＡβオリゴマーに対する結合は、１８時間プレインキュベートした２．５μｌのＡβ１−４２（２．５μｇ／ドット）をニトロセルロース膜上に固相化するドットブロット法で確認することができる。膜上の非特異結合部位を５％低脂肪乳、１％ＢＳＡ及び０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０を含有するリン酸緩衝液でブロッキング後、培養液上清とともにインキュベートし、培養上清中のＡβオリゴマー結合抗体は西洋ワサビペルオキシダーゼ標識ヤギ抗マウスＦ（ａｂ’)２（１：３０００；Ａｍｅｒｓｈａｍ）で検出し、ＬＡＳ３０００  ｍｉｎｉ（Ｆｕｊｉｔｓｕ，Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ）を用いる高感度化学発光（ＥＣＬ）キットを用いて検出できる（国際公開第２００９／０５１２２０号）。
【０１４３】
ＥＬＩＳＡでは、抗体をプレート上に固定し、それに対する抗原をプレートに添加し、次いで、抗体を産生する細胞の培養上清または精製抗体などの所望の抗体を含む試料を添加する。次に、一次抗体を認識しかつアルカリホスファターゼなどの酵素でタグ付加された二次抗体を添加し、プレートをインキュベーションする。洗浄後に、ｐ−ニトロフェニルリン酸などの酵素基質をプレートに添加し、吸光度を測定して、目的試料の抗原結合能力を評価することができる。
【０１４４】
また、本発明において、ＡβモノマーではなくＡβオリゴマーを特異的に検出するために、化学発光を利用するサンドイッチ固相酵素免疫アッセイ（化学発光−ＥＬＩＳＡ）を用いて、抗体の反応性を確認することもできる（国際公開第２００９／０５１２２０号）。
【０１４５】
また、本発明において、マウスｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、末梢から投与されたモノクローナル抗体の有効性を評価するためには、投与マウスから入手した血漿および臓器におけるＡβオリゴマー分析を、６Ｅ１０−ＨＲＰ標識６Ｅ１０（Ｓｅｎｅｔｅｋ  ＰＬＣ，Ｎａｐａ，ＣＡ，ＵＳＡ）ヒト特異的オリゴマーＥＬＩＳＡを行うことも可能である（国際公開第２００９／０５１２２０号）
【０１４６】
更に、本発明の抗Ａβオリゴマーヒト化抗体が、ＡＤ脳内のＡβオリゴマーに結合しうるか否かは、Ａβオリゴマーを大量に含有するアミロイド分画（Ｍａｔｓｕｂａｒａ  Ｅ，ｅｔ  ａｌ；Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  Ａｇｉｎｇ，２００４）にて免疫沈降実験（Ｇｈｉｓｏ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ：Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ，１９９３）を行うことで、確認することができる（国際公開第２００９／０５１２２０号）。
【０１４７】
（７）抗Ａβオリゴマー抗体の活性評価
本発明において、抗Ａβオリゴマー抗体がＡβオリゴマー特異的に結合し、細胞保護活性を有することは、Ｙａｍａｍｏｔｏ  Ｎ，ｅｔ  ａｌ：Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２８２：２６４６−２６５５，２００７、または国際公開第２００９／０５１２２０号に記載の、ＡβインキュベーションおよびＴｈＴアッセイ法、Ａβ誘発性神経毒性アッセイ法や、限外濾過およびゲルろ過を用いて分離された各分子サイズのＡβオリゴマーに対する反応性により確認することができる。
【０１４８】
更に、Ａβアミロイド線維形成抑制活性は、チオフラビンＴアッセイおよび電子顕微鏡検査を用いて確認することができる。
【０１４９】
本発明において、ＡＤ脳における両抗体のＡβオリゴマー捕捉能は、抗Ａβオリゴマーヒト化抗体を用いた免疫沈降を行う際に、ＳＤＳ安定性４−、５−、８−、１２−ｍｅrの存在を確認することで測定することができる。
【０１５０】
また、本発明において、ＡＰＰｓｗｅ−トランスジェニックマウス（Ｔｇ２５７６）におけるアルツハイマー病様表現型発症を予防する能力を確認する方法としては、本発明のヒト化抗体を該マウスに投与し、記憶障害、老人斑病変、シナプス機能不全およびＡβ蓄積等のアルツハイマー様表現型を予防できるか否かを検証することが挙げられる（国際公開第２００９／０５１２２０号）。
【０１５１】
２．遺伝子組換え抗体の作製
遺伝子組換え抗体を安定に発現する形質転換株の取得と遺伝子組換え抗体の調製は以下のようにして行うことができる。
【０１５２】
（１）遺伝子組換え抗体発現用ベクターの構築
遺伝子組換え抗体発現用ベクターは、ヒト抗体のＣＨおよびＣＬをコードするＤＮＡが組み込まれた動物細胞用発現ベクターであり、動物細胞用発現ベクターにヒト抗体のＣＨおよびＣＬをコードするＤＮＡをそれぞれクローニングすることにより構築することができる。
【０１５３】
ヒト抗体のＣ領域は任意のヒト抗体のＣＨおよびＣＬを用いることができる。例えば、ヒト抗体のγ１サブクラスのＣＨおよびκクラスのＣＬなどを用いる。ヒト抗体のＣＨおよびＣＬをコードするＤＮＡには、ｃＤＮＡを用いるが、エキソンとイントロンからなる染色体ＤＮＡを用いることもできる。
【０１５４】
動物細胞用発現ベクターには、ヒト抗体のＣ領域をコードする遺伝子を組込み発現できるものであればいかなるものでも用いることができる。例えば、ｐＡＧＥ１０７［Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌ．，３，１３３（１９９０）］、ｐＡＧＥ１０３［Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０１，１３０７（１９８７）〕、ｐＨＳＧ２７４［Ｇｅｎｅ，２７，２２３（１９８４）］、ｐＫＣＲ［Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．,ＵＳＡ，７８，１５２７（１９８１）］、ｐＳＧ１ｂｄ２−４［Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌ．，４，１７３（１９９０）］およびｐＳＥ１ＵＫ１Ｓｅｄ１−３［Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１３，７９（１９９３）］などを用いる。
【０１５５】
動物細胞用発現ベクターのうちプロモーターには、例えば、ＳＶ４０の初期プロモーター［Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０１，１３０７（１９８７）］、モロニーマウス白血病ウイルスＬＴＲ［Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１４９，９６０（１９８７）〕および免疫グロブリンＨ鎖のプロモーター［Ｃｅｌｌ，４１，４７９（１９８５）］などを用いる。また、エンハンサーには、例えば、エンハンサー［Ｃｅｌｌ，３３，７１７（１９８３）］などを用いる。
【０１５６】
遺伝子組換え抗体発現用ベクターには、遺伝子組換え抗体発現ベクターの構築の容易さ、動物細胞への導入の容易さ、動物細胞内での抗体Ｈ鎖およびＬ鎖の発現量のバランスが均衡するなどの点から、抗体Ｈ鎖およびＬ鎖が同一のベクター上に存在するタイプ（タンデム型）の遺伝子組換え抗体発現用ベクター［Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１６７，２７１（１９９４）］を用いるが、抗体Ｈ鎖およびＬ鎖が別々のベクター上に存在するタイプを用いることもできる。
【０１５７】
タンデム型の遺伝子組換え抗体発現用ベクターには、ｐＫＡＮＴＥＸ９３（国際公開第９７／１０３５４号）、ｐＥＥ１８［Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，１７，５５９（１９９８）］などを用いる。
【０１５８】
（２）ヒト以外の動物由来の抗体のＶ領域をコードするｃＤＮＡの取得およびアミノ酸配列の解析
非ヒト抗体を産生するハイブリドーマからＲＮＡを抽出し、ｃＤＮＡを合成後、適当なクローニングベクターに遺伝子をクローングし、ＤＮＡシークエンサーを用いた配列解析を行うことで、ＶＨ及びＶＬをコードするＤＮＡ配列を決定することができる。
【０１５９】
決定したＤＮＡ配列からＶＨおよびＶＬの全アミノ酸配列をそれぞれ推定し、既知の抗体のＶＨおよびＶＬの全アミノ酸配列［Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  ＵＳ  Ｄｅｐｔ．  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（１９９１）］と比較することにより、取得したｃＤＮＡが分泌シグナル配列を含む抗体のＶＨおよびＶＬの完全なアミノ酸配列をコードしているかをそれぞれ確認する。
【０１６０】
分泌シグナル配列を含む抗体のＶＨおよびＶＬの完全なアミノ酸配列に関しては、既知の抗体のＶＨおよびＶＬの全アミノ酸配列［Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＵＳ  Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（１９９１）］と比較することにより、分泌シグナル配列の長さおよびＮ末端アミノ酸配列を推定でき、更にはそれらが属するサブグループを知ることができる。
【０１６１】
また、ＶＨおよびＶＬの各ＣＤＲのアミノ酸配列についても、既知の抗体のＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列［Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＵＳ  Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（１９９１）］と比較することによって見出すことができる。
【０１６２】
（３）ヒト型キメラ抗体発現ベクターの構築
（１）で得られる遺伝子組換え抗体発現用ベクターのヒト抗体のＣＨまたはＣＬをコードするそれぞれの遺伝子の上流に、それぞれ非ヒト抗体のＶＨまたはＶＬをコードするｃＤＮＡをそれぞれクローニングすることで、ヒト型キメラ抗体発現ベクターを構築することができる。
【０１６３】
非ヒト抗体のＶＨまたはＶＬをコードするｃＤＮＡの３’末端側と、ヒト抗体のＣＨまたはＣＬの５’末端側とを連結するために、連結部分の塩基配列が適切なアミノ酸をコードし、かつ適当な制限酵素認識配列になるように設計したＶＨおよびＶＬのｃＤＮＡを作製する。
【０１６４】
作製されたＶＨおよびＶＬのｃＤＮＡを、（１）で得られるヒト化抗体発現用ベクターのヒト抗体のＣＨまたはＣＬをコードするそれぞれの遺伝子の上流にそれらが適切な形で発現するようにそれぞれクローニングし、ヒト型キメラ抗体発現ベクターを構築する。
【０１６５】
また、非ヒト抗体ＶＨまたはＶＬをコードするｃＤＮＡを、適当な制限酵素の認識配列を両端に有する合成ＤＮＡを用いてＰＣＲ法によりそれぞれ増幅し、（１）で得られる遺伝子組換え抗体発現用ベクターにクローニングすることもできる。
【０１６６】
（４）ヒト化抗体のＶ領域をコードするｃＤＮＡの構築
ヒト化抗体のＶＨまたはＶＬをコードするｃＤＮＡは、以下のようにして構築することができる。
【０１６７】
非ヒト抗体のＶＨまたはＶＬのＣＤＲのアミノ酸配列を移植するヒト抗体のＶＨまたはＶＬのフレームワーク領域（以下、ＦＲと表記する）のアミノ酸配列をそれぞれ選択する。選択するＦＲのアミノ酸配列には、ヒト抗体由来のものであれば、いずれのものでも用いることができる。
【０１６８】
例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄａｔａ  Ｂａｎｋなどのデータベースに登録されているヒト抗体のＦＲのアミノ酸配列、またはヒト抗体のＦＲの各サブグループの共通アミノ酸配列［Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＵＳ  Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（１９９１）］などを用いる。
【０１６９】
抗体の結合活性の低下を抑えるため、元の抗体のＶＨまたはＶＬのＦＲのアミノ酸配列とできるだけ高い相同性（少なくとも６０％以上）のＦＲのアミノ酸配列を選択する。
【０１７０】
次に、選択したヒト抗体のＶＨまたはＶＬのＦＲのアミノ酸配列に、もとの抗体のＣＤＲのアミノ酸配列をそれぞれ移植し、ヒト化抗体のＶＨまたはＶＬのアミノ酸配列をそれぞれ設計する。
【０１７１】
設計したアミノ酸配列を抗体の遺伝子の塩基配列に見られるコドンの使用頻度［Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＵＳ  Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（１９９１）］を考慮してＤＮＡ配列に変換し、ヒト化抗体のＶＨまたはＶＬのアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列をそれぞれ設計する。
【０１７２】
（５）ヒト化抗体のＶ領域のアミノ酸配列の改変
ヒト化抗体は、非ヒト抗体のＶＨおよびＶＬのＣＤＲのみをヒト抗体のＶＨおよびＶＬのＦＲに移植しただけでは、その抗原結合活性は元の非ヒト抗体に比べて低下する［ＢＩＯ／ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ，９，２６６（１９９１）］。
【０１７３】
ヒト化抗体では、ヒト抗体のＶＨおよびＶＬのＦＲのアミノ酸配列の中で、直接抗原との結合に関与しているアミノ酸残基、ＣＤＲのアミノ酸残基と相互作用するアミノ酸残基、および抗体の立体構造を維持し、間接的に抗原との結合に関与しているアミノ酸残基を同定し、それらのアミノ酸残基を元の非ヒト抗体のアミノ酸残基に置換することにより、低下した抗原結合活性を上昇させることができる。
【０１７４】
抗原結合活性に関わるＦＲのアミノ酸残基を同定するために、Ｘ線結晶解析［Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１１２，５３５（１９７７）］およびコンピューターモデリング［Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，７，１５０１（１９９４）］などを用いることにより、抗体の立体構造の構築および解析を行うことができる。
【０１７５】
また、それぞれの抗体について数種の改変体を作製し、それぞれの抗原結合活性との相関を検討することを繰り返し、試行錯誤することで必要な抗原結合活性を有する改変ヒト化抗体を取得できる。
【０１７６】
ヒト抗体のＶＨ及びＶＬのＦＲのアミノ酸残基は、改変用合成ＤＮＡを用いて（４）に記載のＰＣＲ反応を行うことにより、改変させることができる。ＰＣＲ反応後の増幅産物について（２）に記載の方法により、塩基配列を決定し、目的の改変が施されたことを確認する。
【０１７７】
（６）ヒト化抗体発現ベクターの構築
（１）で得られる遺伝子組換え抗体発現用ベクターのヒト抗体のＣＨまたはＣＬをコードするそれぞれの遺伝子の上流に、構築した遺伝子組換え抗体のＶＨまたはＶＬをコードするｃＤＮＡをそれぞれクローニングし、ヒト化抗体発現ベクターを構築することができる。
【０１７８】
例えば、（４）および（５）で得られるヒト化抗体のＶＨまたはＶＬを構築する際に用いる合成ＤＮＡのうち、両端に位置する合成ＤＮＡの５’末端に適当な制限酵素の認識配列を導入することで、（１）で得られるヒト化抗体発現用ベクターのヒト抗体のＣＨまたはＣＬをコードするそれぞれの遺伝子の上流にそれらが適切な形で発現するようにそれぞれクローニングする。
【０１７９】
（７）遺伝子組換え抗体の一過性発現
（３）および（６）で得られる遺伝子組換え抗体発現ベクター、またはそれらを改変した発現ベクターを用いて遺伝子組換え抗体の一過性発現を行い、作製した多種類のヒト化抗体の抗原結合活性を効率的に評価することができる。
【０１８０】
発現ベクターを導入する宿主細胞には、遺伝子組換え抗体を発現できる宿主細胞であれば、いかなる細胞でも用いることができるが、例えばＣＯＳ−７細胞［Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）番号：ＣＲＬ１６５１］を用いる［Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，ＣＲＣ  ｐｒｅｓｓ，２８３（１９９１）］。
【０１８１】
（８）遺伝子組換え抗体を安定に発現する形質転換株の取得と遺伝子組換え抗体の調製
（３）および（６）で得られた遺伝子組換え抗体発現ベクターを適当な宿主細胞に導入することにより遺伝子組換え抗体を安定に発現する形質転換株を得ることができる。
【０１８２】
宿主細胞への発現ベクターの導入には、エレクトロポレーション法［日本国特開平２−２５７８９１号公報、Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，３，１３３（１９９０）］などを用いる。
【０１８３】
遺伝子組換え抗体発現ベクターを導入する宿主細胞には、遺伝子組換え抗体を発現させることができる宿主細胞であれば、いかなる細胞でも用いることができる。例えば、ＣＨＯ−Ｋ１（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−６１）、ＤＵｋＸＢ１１  （ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−９０９６）、Ｐｒｏ−５（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−１７８１）、ＣＨＯ−Ｓ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｔ  ＃  １１６１９）、ラットミエローマ細胞ＹＢ２／３ＨＬ．Ｐ２．Ｇ１１．１６Ａｇ．２０（またはＹＢ２／０ともいう）、マウスミエローマ細胞ＮＳＯ、マウスミエローマ細胞ＳＰ２／０−Ａｇ１４（ＡＴＣＣ番号：ＣＲＬ１５８１）、マウスＰ３Ｘ６３−Ａｇ８．６５３細胞（ＡＴＣＣ番号：ＣＲＬ１５８０）、ジヒドロ葉酸還元酵素遺伝子（以下、ｄｈｆｒと表記する）が欠損したＣＨＯ細胞［Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．,ＵＳＡ，７７，４２１６（１９８０）］、レクチン耐性を獲得したＬｅｃ１３［Ｓｏｍａｔｉｃ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１２，５５（１９８６）］、α１，６−フコース転移酵素遺伝子が欠損したＣＨＯ細胞（国際公開第２００５／０３５５８６号、国際公開第０２／３１１４０号）およびラットＹＢ２／３ＨＬ．Ｐ２．Ｇ１１．１６Ａｇ．２０細胞（ＡＴＣＣ番号：ＣＲＬ１６６２）などを用いる。
【０１８４】
また、細胞内糖ヌクレオチドＧＤＰ−フコースの合成に関与する酵素などの蛋白質、Ｎ−グリコシド結合複合型糖鎖の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンの６位にフコースの１位がα結合する糖鎖修飾に関与する酵素などの蛋白質および細胞内糖ヌクレオチドＧＤＰ−フコースのゴルジ体への輸送に関与する蛋白質などの活性が低下または欠失した宿主細胞、例えばα１，６−フコース転移酵素遺伝子が欠損したＣＨＯ細胞（国際公開第２００５／０３５５８６号、国際公開第０２／３１１４０号）などを用いることもできる。
【０１８５】
発現ベクターの導入後、遺伝子組換え抗体を安定に発現する形質転換株は、Ｇ４１８硫酸塩（以下、Ｇ４１８と表記する）などの薬剤を含む動物細胞培養用培地で培養することにより選択する（日本国特開平２−２５７８９１号公報）。
【０１８６】
動物細胞培養用培地には、ＲＰＭＩ１６４０培地（インビトロジェン社製）、ＧＩＴ培地（日本製薬社製）、ＥＸ−ＣＥＬＬ３０１培地（ジェイアールエイチ社製）、ＩＭＤＭ培地（インビトロジェン社製）、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ−ＳＦＭ培地（インビトロジェン社製）、またはこれら培地にＦＢＳなどの各種添加物を添加した培地などを用いる。
【０１８７】
得られた形質転換株を培地中で培養することで培養上清中に遺伝子組換え抗体を発現蓄積させる。培養上清中の遺伝子組換え抗体の発現量および抗原結合活性はＥＬＩＳＡ法などにより測定できる。
【０１８８】
また、形質転換株は、ＤＨＦＲ増幅系（日本国特開平２−２５７８９１号公報）などを利用して遺伝子組換え抗体の発現量を上昇させることができる。
【０１８９】
遺伝子組換え抗体は、形質転換株の培養上清よりプロテインＡ−カラムを用いて精製する［Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ−Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｔｈｉｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（１９９６）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ−Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９８８）］。
【０１９０】
また、ゲル濾過、イオン交換クロマトグラフィーおよび限外濾過などの蛋白質の精製で用いられる方法を組み合わすこともできる。
【０１９１】
精製した遺伝子組換え抗体のＨ鎖、Ｌ鎖或いは抗体分子全体の分子量は、ポリアクリルアミドゲル電気泳動法［Ｎａｔｕｒｅ，２２７，６８０（１９７０）］およびウェスタンブロッティング法［Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ−Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｔｈｉｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（１９９６）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ−Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９８８）］などを用いて測定することができる。
【０１９２】
３．抗体のエフェクター活性を制御する方法
本発明の抗Ａβオリゴマーヒト化抗体のエフェクター活性を制御する方法としては、抗体のＦｃ領域の２９７番目のアスパラギン（Ａｓｎ）に結合するＮ結合複合型糖鎖の還元末端に存在するＮ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）にα-１,６結合するフコース（コアフコースともいう）の量を制御する方法（国際公開第２００５／０３５５８６号、国際公開第２００２／３１１４０号、国際公開第００／６１７３９号）や、抗体のＦｃ領域のアミノ酸残基を改変することで制御する方法、および抗体サブクラスを変更することなどが知られている。本発明の抗Ａβオリゴマーヒト化抗体にはいずれの方法を用いても、エフェクター活性を制御することができる。
【０１９３】
エフェクター活性とは、抗体のＦｃ領域を介して引き起こされる抗体依存性の活性をいい、抗体依存性細胞傷害活性（ＡＤＣＣ活性）、補体依存性傷害活性（ＣＤＣ活性）や、マクロファージや樹状細胞などの食細胞による抗体依存性ファゴサイトーシス（Ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ，ＡＤＰ活性）などが知られている。
【０１９４】
抗体のＦｃのN結合複合型糖鎖のコアフコースの含量を制御することで、抗体のエフェクター活性を増加または低下させることができる。抗体のＦｃに結合しているＮ結合複合型糖鎖に結合するフコースの含量を低下させる方法としては、α１，６−フコース転移酵素遺伝子が欠損したＣＨＯ細胞を用いて抗体を発現することで、フコースが結合していない抗体を取得する方法を用いることができる。フコースが結合していない抗体は高いＡＤＣＣ活性を有する。
【０１９５】
一方、抗体のＦｃに結合しているN結合複合型糖鎖に結合するフコースの含量を増加させる方法としては、α１，６−フコース転移酵素遺伝子を導入した宿主細胞を用いて抗体を発現させることで、フコースが結合している抗体を取得する方法を用いることができる。フコースが結合している抗体は、フコースが結合していない抗体よりも低いＡＤＣＣ活性を有する。
【０１９６】
また、抗体のＦｃ領域のアミノ酸残基を改変することでＡＤＣＣ活性やＣＤＣ活性を増加または低下させることができる。例えば、米国特許出願公開第２００７／０１４８１６５号明細書に記載のＦｃ領域のアミノ酸配列を用いることで、抗体のＣＤＣ活性を増加させることができる。また、米国特許第６，７３７，０５６、米国特許第７，２９７，７７５号明細書または米国特許第７，３１７，０９１号明細書に記載のアミノ酸改変を行うことで、ＡＤＣＣ活性またはＣＤＣ活性を、増加させることも低下させることもできる。
【０１９７】
更に、ヒトＩｇＧサブクラスにおいて、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４サブクラスは、ＩｇＧ１やＩｇＧ３サブクラスに比べてエフェクター活性が低いことが知られており、エフェクター活性の低い抗体サブクラスのＦｃ領域に組換えることで、エフェクター活性を低下した抗体を作製することができる。
【０１９８】
ＩｇＧ２やＩｇＧ４サブクラスに関する抗体の安定化については、国際公開第２００６／０７５６６８号、国際公開第２００６／０３５５８６号などに記載の方法を用いることにより、安定でありかつエフェクター活性を制御したＩｇＧ２抗体やＩｇＧ４抗体を作製することができる。
【０１９９】
更に、上述の方法を組み合わせて、一つの抗体に使用することにより、抗体のエフェクター活性が制御された抗体を取得することができる。
【０２００】
４．本発明の抗Ａβオリゴマー抗体を用いた治療方法
アルツハイマー病に伴う記憶力低下は、可溶性Ａβオリゴマーによって引き起こされるシナプス機能不全に関連することが示唆されている［Ｋｌｅｉｎ  ＷＬ，２００１，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ；Ｓｅｌｋｏｅ  ＤＪ，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ］。従って、Ａβオリゴマーの過度の蓄積および沈着は、アルツハイマー病を結果として引き起こす複雑な下流カスケードの引き金を引く可能性がある。
【０２０１】
本発明において治療とは、疾患または疾病による症状を呈する臓器、組織に対して、必ずしも完全な治療効果または予防効果を有する必要はなく、部分的な効果を有する場合であってよい。
【０２０２】
本発明におけるアルツハイマー病の治療とは、アルツハイマー病によって生じ得る少なくとも１つの症状を改善することであり、例えば、認知機能障害の改善および抑制、老人斑形成の改善および抑制、シナプス機能不全の改善および抑制、並びに脳組織中および血液中等におけるＡβ蓄積の減少および抑制等が挙げられる。
【０２０３】
ここで認知機能障害には、例えば、記憶障害とされる、長期／短期記憶障害、物体認識記憶障害、空間記憶障害、および連合情緒記憶障害が含まれる。
【０２０４】
また、本発明の抗Ａβオリゴマーヒト化抗体を用いた治療方法としては、認知機能障害を抑制する方法、アルツハイマー病を抑制する方法、アルツハイマー病の進行を抑制する方法、老人斑形成を抑制する方法、Ａβの蓄積を抑制する方法、神経毒性活性を中和する（抑制する）方法、Ａβアミロイド線維形成を阻害する方法およびシナプス毒性活性を中和する（抑制する）方法を挙げることができる。
【０２０５】
さらに他の態様として、認知機能障害の予防および治療の少なくとも一方ための方法、アルツハイマー病の予防および治療の少なくとも一方のための方法も挙げることができる。
【０２０６】
また、本発明の抗体または該抗体断片、またはこれらの誘導体を含有する治療剤は、有効成分としての該抗体もしくは該抗体断片、またはこれらの誘導体のみを含むものであってもよいが、通常は薬理学的に許容される１以上の担体と一緒に混合し、製剤学の技術分野において公知の方法により製造した医薬製剤として提供される。
【０２０７】
投与経路としては、例えば、経口投与、並びに口腔内、気道内、直腸内、皮下、筋肉内および静脈内などの非経口投与が挙げられる。
【０２０８】
投与形態としては、例えば、噴霧剤、カプセル剤、錠剤、散剤、顆粒剤、シロップ剤、乳剤、座剤、注射剤、軟膏およびテープ剤などが挙げられる。
【０２０９】
経口投与に適当な製剤は、乳剤、シロップ剤、カプセル剤、錠剤、散剤および顆粒剤などである。
【０２１０】
乳剤またはシロップ剤のような液体調製物は、水、ショ糖、ソルビトールおよび果糖などの糖類、ポリエチレングリコールおよびプロピレングリコールなどのグリコール類、ごま油、オリーブ油および大豆油などの油類、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エステル類などの防腐剤、並びにストロベリーフレーバーおよびペパーミントなどのフレーバー類などを添加剤として用いて製造する。
【０２１１】
カプセル剤、錠剤、散剤および顆粒剤などは、乳糖、ブドウ糖、ショ糖およびマンニトールなどの賦形剤、デンプンおよびアルギン酸ナトリウムなどの崩壊剤、ステアリン酸マグネシウムおよびタルクなどの滑沢剤、ポリビニルアルコール、ヒドロキシプロピルセルロースおよびゼラチンなどの結合剤、脂肪酸エステルなどの界面活性剤並びにグリセリンなどの可塑剤などを添加剤として用いて製造する。
【０２１２】
非経口投与に適当な製剤としては、例えば、注射剤、座剤および噴霧剤などが挙げられる。
【０２１３】
注射剤は、例えば、塩溶液若しくはブドウ糖溶液またはこれらの混合物からなる担体などを用いて製造する。
【０２１４】
座剤は、例えば、カカオ脂、水素化脂肪およびカルボン酸などの担体を用いて製造する。
【０２１５】
噴霧剤は受容者の口腔および気道粘膜を刺激せず、かつ本発明のモノクローナル抗体またはその抗体断片を微細な粒子として分散させ、吸収を容易にさせる担体などを用いて製造する。
【０２１６】
担体としては、例えば、乳糖およびグリセリンなどが挙げられる。また、エアロゾルまたはドライパウダーとして製造することもできる。
【０２１７】
さらに、上記非経口剤においても、経口投与に適当な製剤で添加剤として例示した成分を添加することもできる。
【実施例１】
【０２１８】
抗Ａβオリゴマー抗体ヒト化抗体の作製
（１）抗Ａβオリゴマー６Ｅ４ヒト化抗体のＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列の設計
初めに、Ｋａｂａｔら[Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＵＳ  Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（１９９１）]の報告に基づいて、参考例で作製した抗Ａβオリゴマーマウスモノクローナル抗体６Ｅ４のＶＨのアミノ酸配列（配列番号８）のＣＤＲ配列を決定した。その結果、ＶＨのＣＤＲ１〜３を配列番号１〜３とした。【０２１９】
次に、ＶＨの抗Ａβオリゴマー６Ｅ４ヒト化抗体のＶＨのアミノ酸配列を以下のようにして設計した。６Ｅ４ＶＨのＣＤＲ１〜３のアミノ酸配列（配列番号１〜３）を移植するためのヒト抗体のＶＨのＦＲのアミノ酸配列を選択した。【０２２０】
カバットらは、既知の様々なヒト抗体のＶＨをそのアミノ酸配列の相同性からサブグループ（ＨＳＧ  Ｉ〜ＩＩＩ）に分類し、それらのサブグループ毎に共通配列を報告している［Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＵＳ  Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（１９９１）］。【０２２１】
そこで、ヒト抗体のＶＨのサブグループＩ〜ＩＩＩの共通配列のＦＲのアミノ酸配列と６Ｅ４ＶＨのＦＲのアミノ酸配列との相同性検索を実施した。相同性を検索した結果、ＨＳＧＩ、ＨＳＧＩＩ、およびＨＳＧＩＩＩの相同性はそれぞれ７５．９％、５４．０％、５７．５％であった。従って、６Ｅ４ＶＨのＦＲのアミノ酸配列はサブグループＩと最も高い相同性を有していた。【０２２２】
以上の結果から、ヒト抗体のＶＨのサブグループＩの共通配列のＦＲのアミノ酸配列の適切な位置に、６Ｅ４ＶＨのＣＤＲのアミノ酸配列（配列番号１〜３）を移植した。このようにして、配列番号１２で表される抗Ａβオリゴマー６Ｅ４ヒト化抗体のＶＨのアミノ酸配列６Ｅ４ＨＶ０を設計した。【０２２３】
次に、Ｈ鎖と同様にして、ＶＬのアミノ酸配列（配列番号１０）のＣＤＲ１〜３の配列を配列番号４〜６と決定し、抗Ａβオリゴマー６Ｅ４ヒト化抗体のＶＬのアミノ酸配列を以下のようにして設計した。【０２２４】
６Ｅ４ＶＬのＣＤＲ１〜３のアミノ酸配列（配列番号４〜６）を移植するためのヒト抗体のＶＬのＦＲのアミノ酸配列を選択した。【０２２５】
カバットらは、既知の様々なヒト抗体のＶＬをそのアミノ酸配列の相同性からサブグループ（ＨＳＧ  Ｉ〜ＩＶ）に分類し、それらのサブグループ毎に共通配列を報告している［Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＵＳ  Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（１９９１）］。【０２２６】
そこで、ヒト抗体のＶＬのサブグループＩ〜ＩＶの共通配列のＦＲのアミノ酸配列と６Ｅ４ＶＬのＦＲのアミノ酸配列との相同性検索を実施した。相同性を検索した結果、ＨＳＧＩ、ＨＳＧＩＩ、ＨＳＧＩＩＩ、およびＨＳＧＩＶの相同性はそれぞれ６７．５％、８６．３％、６８．８％、７６．３％であった。従って、６Ｅ４ＶＬのＦＲのアミノ酸配列はサブグループＩＩと最も高い相同性を有していた。【０２２７】
以上の結果から、ヒト抗体のＶＬのサブグループＩＩの共通配列のＦＲのアミノ酸配列の適切な位置に、６Ｅ４ＶＬのＣＤＲのアミノ酸配列（配列番号４〜６）を移植した。【０２２８】
しかし、６Ｅ４ＶＬのアミノ酸配列（配列番号１０）中の１１０番目のＬｅｕは、カバットらが挙げるヒト抗体ＦＲのアミノ酸配列の相当する部位において、最も使用される頻度が高いアミノ酸残基ではないが、比較的高い頻度で使用されるアミノ酸残基である。【０２２９】
したがって、上記の６Ｅ４のアミノ酸配列で認められるアミノ酸残基を用いることとした。このようにして、抗Ａβオリゴマー６Ｅ４ヒト化抗体のＶＬのアミノ酸配列６Ｅ４ＬＶ０（配列番号１４）を設計した。【０２３０】
上記で設計した抗Ａβオリゴマー６Ｅ４ヒト化抗体のＶＨのアミノ酸配列６Ｅ４ＨＶ０およびＶＬのアミノ酸配列６Ｅ４ＬＶ０は、選択したヒト抗体のＦＲのアミノ酸配列に抗Ａβオリゴマーマウスモノクローナル抗体である６Ｅ４のＣＤＲのアミノ酸配列のみを移植した配列である。【０２３１】
しかし、一般に、ヒト化抗体を作製する場合には、単なるヒト抗体のＦＲへのマウス抗体のＣＤＲのアミノ酸配列の移植のみでは結合活性が低下してしまうことが多い。【０２３２】
このため、結合活性の低下を回避するため、ＣＤＲのアミノ酸配列の移植とともに、ヒト抗体とマウス抗体で異なっているＦＲのアミノ酸残基のうち、結合活性に影響を与えると考えられるアミノ酸残基を改変することが行われている。【０２３３】
そこで、本実施例でも、結合活性に影響を与えると考えられるＦＲのアミノ酸残基を以下のようにして同定した。【０２３４】
まず、上記で設計した抗Ａβオリゴマー６Ｅ４ヒト化抗体のＶＨのアミノ酸配列６Ｅ４ＨＶ０およびＶＬのアミノ酸配列６Ｅ４ＬＶ０よりなる抗体Ｖ領域（以下、ＨＶ０ＬＶ０と表す）の三次元構造をコンピューターモデリングの手法を用いて構築した。【０２３５】
三次元構造座標作製および三次元構造の表示には、Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｓｔｕｄｉｏ（アクセルリス社製）を添付の使用説明書に従い、用いた。また、抗Ａβオリゴマーマウスモノクローナル抗体６Ｅ４のＶ領域の三次元構造のコンピューターモデルも同様にして構築した。【０２３６】
更に、ＨＶ０ＬＶ０のＶＨおよびＶＬのＦＲのアミノ酸配列の中で、６Ｅ４と異なっているアミノ酸残基を選択し、６Ｅ４のアミノ酸残基へ改変したアミノ酸配列を作製し、同様に三次元構造モデルを構築した。【０２３７】
これら作製した６Ｅ４、ＨＶ０ＬＶ０および改変体のＶ領域の三次元構造を比較し、抗体の結合活性に影響を与えると予測されるアミノ酸残基を同定した。【０２３８】
その結果、ＨＶ０ＬＶ０のＦＲのアミノ酸残基の中で抗原結合部位の三次元構造を変化させ、抗体の結合活性に影響を与えると考えられるアミノ酸残基として、６Ｅ４ＨＶ０では配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓ、２０番目のＶａｌ、３８番目のＡｒｇ、３９番目のＧｌｎ、４５番目のＬｅｕ、４８番目のＭｅｔ、６７番目のＡｒｇ、６８番目のＶａｌ、７０番目のＩｌｅ、７２番目のＡｌａ、７４番目のＴｈｒ、および９７番目のＡｌａを、６Ｅ４ＬＶ０では２番目のＩｌｅ、１５番目のＰｒｏ、５０番目のＧｌｎ、および９２番目のＴｙｒをそれぞれ選択した。【０２３９】
これらの選択したアミノ酸残基のうち、少なくとも１つ以上のアミノ酸配列を６Ｅ４の同じ部位に存在するアミノ酸残基へ改変し、様々な改変を有するアミノ酸配列を含むヒト化抗体のＶＨおよびＶＬを設計した。【０２４０】
具体的には、ＶＨについては、配列番号１２で示されるアミノ酸配列の１２番目のＬｙｓをＶａｌに、２０番目のＶａｌをＬｅｕに、３８番目のＡｒｇをＬｙｓに、３９番目のＧｌｎをＬｅｕに、４５番目のＬｅｕをＰｈｅに、４８番目のＭｅｔをＩｌｅに、６７番目のＡｒｇをＬｙｓに、６８番目のＶａｌをＡｌａに、７０番目のＩｌｅをＬｅｕに、７２番目のＡｌａをＶａｌに、７４番目のＴｈｒをＬｙｓに、および９７番目のＡｌａをＴｈｒに置換するアミノ酸改変の少なくとも１つの改変を導入した。【０２４１】
また、ＶＬについては、配列番号１４で示されるアミノ酸配列の２番目のＩｌｅをＶａｌに、１５番目のＰｒｏをＬｅｕに、５０番目のＧｌｎをＬｙｓに、および９２番目のＴｙｒをＰｈｅに置換するアミノ酸改変の少なくとも１つの改変を導入した。【０２４２】
ＨＶ０ＬＶ０のＦＲに存在する、少なくとも１つのアミノ酸残基を改変した抗Ａβオリゴマー６Ｅ４ヒト化抗体の抗体Ｖ領域として、ＨＶ０ＬＶ０、ＨＶ０ＬＶ２ａ、ＨＶ０ＬＶ２ｂ、ＨＶ０ＬＶ２ｃ、ＨＶ０ＬＶ２ｄ、ＨＶ０ＬＶ３、ＨＶ０ＬＶ４、ＨＶ２ＬＶ０、ＨＶ２ＬＶ２ａ、ＨＶ２ＬＶ２ｂ、ＨＶ２ＬＶ２ｃ、ＨＶ２ＬＶ２ｄ、ＨＶ２ＬＶ３、ＨＶ２ＬＶ４、ＨＶ３ＬＶ０、ＨＶ３ＬＶ２ａ、ＨＶ３ＬＶ２ｂ、ＨＶ３ＬＶ２ｃ、ＨＶ３ＬＶ２ｄ、ＨＶ３ＬＶ３、ＨＶ３ＬＶ４、ＨＶ４ＬＶ０、ＨＶ４ＬＶ２ａ、ＨＶ４ＬＶ２ｂ、ＨＶ４ＬＶ２ｃ、ＨＶ４ＬＶ２ｄ、ＨＶ４ＬＶ３、ＨＶ４ＬＶ４、ＨＶ５ＬＶ０、ＨＶ５ＬＶ２ａ、ＨＶ５ＬＶ２ｂ、ＨＶ５ＬＶ２ｃ、ＨＶ５ＬＶ２ｄ、ＨＶ５ＬＶ３、ＨＶ５ＬＶ４、ＨＶ７ａＬＶ０、ＨＶ７ａＬＶ２ａ、ＨＶ７ａＬＶ２ｂ、ＨＶ７ａＬＶ２ｃ、ＨＶ７ａＬＶ２ｄ、ＨＶ７ａＬＶ３、ＨＶ７ａＬＶ４、ＨＶ７ｂＬＶ０、ＨＶ７ｂＬＶ２ａ、ＨＶ７ｂＬＶ２ｂ、ＨＶ７ｂＬＶ２ｃ、ＨＶ７ｂＬＶ２ｄ、ＨＶ７ｂＬＶ３、ＨＶ７ｂＬＶ４、ＨＶ９ＬＶ０、ＨＶ９ＬＶ２ａ、ＨＶ９ＬＶ２ｂ、ＨＶ９ＬＶ２ｃ、ＨＶ９ＬＶ２ｄ、ＨＶ９ＬＶ３、ＨＶ９ＬＶ４、ＨＶ１２ＬＶ０、ＨＶ１２ＬＶ２ａ、ＨＶ１２ＬＶ２ｂ、ＨＶ１２ＬＶ２ｃ、ＨＶ１２ＬＶ２ｄ、ＨＶ１２ＬＶ３、およびＨＶ１２ＬＶ４をそれぞれ設計した。【０２４３】
Ｈ鎖可変領域ＨＶ２、ＨＶ３，ＨＶ４、ＨＶ５、ＨＶ７ａ、ＨＶ７ｂ、ＨＶ９、ＨＶ１２およびＬ鎖可変領域ＬＶ２ａ、ＬＶ２ｂ、ＬＶ２ｃ、ＬＶ２ｄ、ＬＶ３、ＬＶ４のアミノ酸配列をそれぞれ図１および図２に示した。【０２４４】
（２）抗Ａβオリゴマーヒト化抗体の作製
抗Ａβオリゴマーヒト化抗体の可変領域のアミノ酸配列をコードするＤＮＡは、６Ｅ４ＶＨおよび６Ｅ４ＶＬのアミノ酸配列をコードするＤＮＡ（配列番号７、９）で用いられているコドンを利用し、アミノ酸改変を行う場合は、哺乳動物細胞において高頻度で使用されるコドンを用いて、作製した。【０２４５】
抗Ａβオリゴマー６Ｅ４ヒト化抗体の６Ｅ４ＨＶ０および６Ｅ４ＬＶ０のアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列を配列番号１１、１３にそれぞれ示す。また、アミノ酸改変を行った可変領域の作製には、６Ｅ４ＶＨおよび６Ｅ４ＶＬのアミノ酸配列をコードするＤＮＡで用いられているコドンを利用し、作製した。【０２４６】
これらＤＮＡ配列を用いて、ヒト化抗体の発現ベクターの構築およびヒト化抗体の発現をそれぞれ行った。【０２４７】
（３）抗Ａβオリゴマーヒト化抗体のＶＨをコードするｃＤＮＡの構築
上記（１）で設計した配列番号１２に表される抗Ａβオリゴマーヒト化抗体のＶＨのアミノ酸配列６Ｅ４ＨＶ０、および上記（２）の方法により設計した図１に示されるＨＶ１２をコードするｃＤＮＡを全合成にて作成した。【０２４８】
（４）抗Ａβオリゴマーヒト化抗体のVＬをコードするｃＤＮＡの構築
上記（１）で設計した配列番号１４に表される抗Ａβオリゴマーヒト化抗体のＶＬのアミノ酸配列６Ｅ４ＬＶ０、および上記（２）の方法により設計した図２に示されるＬＶ２a、ＬＶ４をコードするｃＤＮＡを全合成にて作成した。【０２４９】
（５）抗Ａβオリゴマーヒト化抗体発現ベクターの構築
国際公開第９７／１０３５４号に記載のヒト化抗体発現用ベクターｐＫＡＮＴＥＸ９３の適当な位置に上記（３）および（４）で得られた６Ｅ４ＨＶ０またはＨＶ１２をコードするｃＤＮＡ、並びに６Ｅ４ＬＶ０、ＬＶ２ａおよびＬＶ４のいずれか１をコードするｃＤＮＡを挿入し、各種抗Ａβオリゴマーヒト化抗体発現ベクターを構築した。【０２５０】
（６）動物細胞を用いた抗Ａβオリゴマーヒト化抗体の発現
上記（５）で得られた抗Ａβオリゴマーヒト化抗体発現ベクターを用いて抗Ａβオリゴマーヒト化抗体の動物細胞での発現を、常法［Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，  Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ，Ｗ．Ｈ．  Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ（１９９２）］により行い、抗Ａβオリゴマーヒト化抗体（ＨＶ０ＬＶ０、ＨＶ０ＬＶ２ａ、ＨＶ０ＬＶ４およびＨＶ１２ＬＶ４）を産生する形質転換株を取得した。【０２５１】
発現させる動物細胞株としては、α１，６−フコシルトランスフェラーゼ（ＦＵＴ８）の遺伝子をダブルノックアウトしたＣＨＯ／ＤＧ４４細胞株（以下、ＦＵＴ８ノックアウトＣＨＯ細胞）を用いた。この宿主細胞株で発現させた抗体のＮ−結合型複合型糖鎖のコア部分には、フコースが付加されないことが知られている（国際公開第２００２／３１１４０号）。【０２５２】
（７）精製抗Ａβオリゴマーヒト化抗体取得
本実施例（６）で得られた形質転換株を、通常の培養法で培養した後、細胞懸濁液を回収し、３０００ｒｐｍ、４℃の条件で２０分間の遠心分離を行い、培養上清を回収した後、０．２２μｍ孔径Ｍｉｌｌｅｘ  ＧＶフィルターを通して濾過滅菌した。【０２５３】
０．８ｃｍ径のカラムにＰｒｏｓｅｐ  ｖＡ  Ｈｉｇｈ  Ｃａｐａｃｉｔｙ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）０．５ｍＬを充填し、精製水５．０ｍＬおよびＰＢＳバッファー（ｐＨ７．４）５．０ｍＬを順次通塔し、担体の平衡化を行った。【０２５４】
次に、上記培養上清をカラムに通塔した後、ＰＢＳバッファー（ｐＨ７．４）５．０ｍＬで洗浄した。洗浄後、０．１ｍｏｌ／Ｌクエン酸緩衝液（ｐＨ  ５．０）、０．１ｍｏｌ／Ｌクエン酸緩衝液（ｐＨ  ３．５）、０．１ｍｏｌ／Ｌクエン酸緩衝液（ｐＨ  ３．０）の順に各２．０  ｍＬを用いて担体に吸着した抗体の溶出を行った。【０２５５】
溶出は５００μＬずつ、４画分に分けて取得した。次に、得られた精製画分のＳＤＳ−ＰＡＧＥ解析を行い、目的蛋白質の溶出が確認された画分をまとめ、１５０ｍｍｏｌ／Ｌ  ＮａＣｌ、１０ｍｍｏｌ／Ｌクエン酸Ｎａ溶液（ｐＨ６．０）を用いて、４℃で一昼夜透析を行った。【０２５６】
透析後、抗Ａβオリゴマーヒト化抗体溶液を回収し、０．２２μｍ孔径Ｍｉｌｌｅｘ  ＧＶ（ＭＩＬＬＩＰＯＲＥ社）を用いて滅菌濾過した後に、２８０ｎｍの吸光度（ＯＤ２８０ｎｍ）を、吸光光度計（ＳＨＩＭＡＤＺＵ  ＵＶ−１７００）を用いて測定し、各精製抗Ａβオリゴマーヒト化抗体濃度を算出した。【０２５７】
その結果、抗体のＶＨが６Ｅ４ＨＶ０、ＶＬが６Ｅ４ＬＶ０からなる抗Ａβオリゴマーヒト化抗体ＨＶ０ＬＶ０、抗体のＶＨが６Ｅ４ＨＶ０、ＶＬがＬＶ２aからなるＨＶ０ＬＶ２a、抗体のＶＨが６Ｅ４ＨＶ０、ＶＬがＬＶ４からなるＨＶ０ＬＶ４、および抗体のＶＨがＨＶ１２、ＶＬがＬＶ４からなるＨＶ１２ＬＶ４の４種類を作製した。
【実施例２】
【０２５８】
抗原の作製
（１）Ａβオリゴマーの調製
Ａｍｙｌｏｉｄ  β−Ｐｒｏｔｅｉｎ，  Ｈｕｍａｎ  １−４２ペプチド（ペプチド研究所社製）を、ヘキサフロロイソプロパノールを用いて１ｍｍｏｌ／Ｌとなるよう調製した。調製した溶液を１０分間ソニケーションした後、室温で一晩風乾させた。【０２５９】
次に、ジメチルスルホキシドを４μＬ添加し、３分間ソニケーションを実施した。調製した溶液に酢酸溶液（ｐＨ４．５）２００μＬ添加し、４℃の条件で一晩静置保存することで、Ａβオリゴマーを調製した。【０２６０】
（２）Ａβモノマーの調製
Ｂｉｏｔｉｎ−ｂｅｔａ−Ａｍｙｌｏｉｄ，Ｈｕｍａｎ  １−４０（ＡｎａＳｐｅｃ社製)を、０．１％アンモニア水を用いて２５０μｍｏｌ／Ｌとなるよう調製した。調製した溶液を５分間ソニケーションした後、１６０００ｒｐｍ、４℃の条件で６０分間の遠心分離を行い、上清を回収することでＡβモノマーを調製した。
【実施例３】
【０２６１】
（１）抗Ａβオリゴマーヒト化抗体の活性評価
ビアコアによる抗Ａβオリゴマーヒト化抗体のＡβオリゴマーへの結合活性評価
各抗Ａβオリゴマーヒト化抗体（ＨＶ０ＬＶ０、ＨＶ０ＬＶ２ａ、ＨＶ０ＬＶ４、およびＨＶ１２ＬＶ４）のＡβオリゴマーに対する結合活性を反応速度論的に解析するため、表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ法）を用いて結合活性測定を行った。【０２６２】
以下の操作は全てＢｉａｃｏｒｅ  Ｔ１００（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス社製）を用いて行った。実施例２（１）で得られたＡβオリゴマーを、アミンカップリング法によりＣＭ５センサーチップ（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス社製）に固定化した。【０２６３】
Ａβオリゴマーを固定化したチップに３０μｇ／ｍＬから２倍希釈で段階的に希釈して８濃度に調製した測定サンプル（ＨＶ０ＬＶ０、ＨＶ０ＬＶ２ａ、ＨＶ０ＬＶ４、およびＨＶ１２ＬＶ４）をマルチカイネティクスの自動プログラムに従い低濃度から順に連続添加して測定した。【０２６４】
装置添付の解析ソフトＢｉａｃｏｒｅ  Ｔ１００  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｂｉａｃｏｒｅ社製）を用い、Ｂｉｖａｌｅｎｔ  Ａｎａｌｙｔｅモデルで解析し、各抗体のＡβオリゴマーに対する結合速度定数ｋａ及び解離速度定数ｋｄを算出した。【０２６５】
その結果得られた各抗体の結合速度定数ｋａ１、解離速度定数ｋｄ１および解離定数ＫＤ（ｋｄ１／ｋａ１）を表１に示す。【０２６６】
【表１】
2011016567.tif 000002
【０２６７】
表１に示すように、各抗Ａβオリゴマーヒト化抗体（ＨＶ０ＬＶ０、ＨＶ０ＬＶ２ａ、ＨＶ０ＬＶ４、およびＨＶ１２ＬＶ４）はいずれも、Ａβオリゴマーに対し、３×１０−７から４×１０−８ｍｏｌ／Ｌのアフィニティーでの結合能を示した。【０２６８】
（２）ビアコアによる抗Ａβオリゴマーヒト化抗体のＡβモノマーへの結合活性評価
各抗Ａβオリゴマーヒト化抗体（ＨＶ０ＬＶ０、ＨＶ０ＬＶ２ａ、ＨＶ０ＬＶ４、およびＨＶ１２ＬＶ４）のＡβモノマーに対する結合活性を解析するため、本実施例（１）と同様の手法により結合活性測定を行った。また対照抗体として抗Ａβ抗体６Ｅ１０（ＣＯＶＡＮＣＥ社製）の測定を行った。【０２６９】
実施例２（２）で得られたＡβモノマーを、ビオチンキャプチャー法によりＳＡセンサーチップ（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス社製）に固定化した。Ａβモノマーを固定化したチップに３０μｇ／ｍＬから２倍希釈で段階的に希釈して５濃度に調製した測定サンプル（６Ｅ１０、ＨＶ０ＬＶ０、ＨＶ０ＬＶ２ａ、ＨＶ０ＬＶ４、およびＨＶ１２ＬＶ４）をマルチカイネティクスの自動プログラムに従い低濃度から順に連続添加して測定した。センサーグラムを図３に示す。【０２７０】
図３に示すように、４種類の抗Ａβオリゴマーヒト化抗体（ＨＶ０ＬＶ０、ＨＶ０ＬＶ２ａ、ＨＶ０ＬＶ４、およびＨＶ１２ＬＶ４）はいずれもＡβモノマーへの結合能を示さないことが明らかとなった。【０２７１】
［参考例］
１．抗原の作製
Ａβ  １−４０ペプチドを合成し、そのＮ末端に蛍光色素６−Ｃａｒｂｏｘｙｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｒｈｏｄａｍｉｎｅ（６−ＴＡＭＲＡ）（ＳＩＧＭＡ）を化学結合した化合物を作製した。この化合物を、Ａβ１−４０ペプチド（ペプチド研）とともに重合反応させることにより、オリゴマーを多く含む標品（Ａβ１−４０オリゴマー）を調製した。【０２７２】
２．抗体産生ハイブリドーマの作製
上述の方法で作製した抗原をＢａｌｂ−ｃマウスの肉趾に対して、免疫処置を行い、続いてさらに６回の追加免疫を行った。鼠径リンパ節を用いて、ポリエチレングリコール１５００を用いたＳｐ２／Ｏ−Ａｇ１４細胞との融合によってハイブリドーマを作製した。【０２７３】
３．ドットブロット解析
初期スクリーニングは、１８時間プレインキュベートした２．５μlのＡβ１−４２（２．５μｇ／ドット）をニトロセルロース膜上に固相化するドットブロット解析で行った。膜上の非特異結合部位を５％低脂肪乳、１％ＢＳＡ及び０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０を含有するリン酸緩衝液でブロッキング後、培養液上清とともにインキュベートした。【０２７４】
培養上清中のＡβオリゴマー結合抗体は西洋ワサビペルオキシダーゼ標識ヤギ抗マウスＦ（ａｂ’）２（１：３０００；Ａｍｅｒｓｈａｍ）で検出し、ＬＡＳ３０００ｍｉｎｉ（Ｆｕｊｉｔｓｕ，Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ）を用いる高感度化学発光（ＥＣＬ）キットによって描出した。これにより、抗Ａβオリゴマーマウスモノクローナル抗体６Ｅ４を確立した。【０２７５】
上記の参考例は、ＰＣＴ／ＪＰ２００９／５２０３９（国際公開第２００９／０９９１７６号）に記載されている。【０２７６】
本発明を特定の態様を用いて詳細に説明したが、本発明の意図と範囲を離れることなく様々な変更および変形が可能であることは、当業者にとって明らかである。なお、本出願は、２００９年８月７日付けで出願された米国仮出願（６１／２３２，０３８号）に基づいており、その全体が引用により援用される。
【配列表フリーテキスト】
【０２７７】
配列番号１−人工配列の説明；ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号２−人工配列の説明；ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号３−人工配列の説明；ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号４−人工配列の説明；ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号５−人工配列の説明；ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号６−人工配列の説明；ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１１−人工配列の説明；６Ｅ４ＨＶ０可変領域をコードするＤＮＡ配列
配列番号１２−人工配列の説明；６Ｅ４ＨＶ０可変領域のアミノ酸配列
配列番号１３−人工配列の説明；６Ｅ４ＬＶ０可変領域をコードするＤＮＡ配列
配列番号１４−人工配列の説明；６Ｅ４ＬＶ０可変領域のアミノ酸配列
配列番号１５−人工配列の説明；ＨＶ１２可変領域のアミノ酸配列
配列番号１６−人工配列の説明；ＬＶ２ａ可変領域のアミノ酸配列
配列番号１７−人工配列の説明；ＬＶ４可変領域のアミノ酸配列
【図１】
2011016567.tif 000003
【図２】
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【図３】
2011016567.tif 000005
【配列表】
2011016567000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成24年2月16日(2012.2.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アミロイドβタンパク質モノマーには結合せず、アミロイドβタンパク質オリゴマーに結合するヒト化抗体であって、抗体重鎖可変領域が配列番号１２で示されるアミノ酸配列を含み、かつ抗体軽鎖可変領域が配列番号１４で示されるアミノ酸配列を含む、ヒト化抗体。
【請求項２】
請求項１に記載のヒト化抗体を有効成分として含有する、認知機能障害改善剤。
【請求項３】
請求項１に記載のヒト化抗体を有効成分として含有する、アルツハイマー病治療剤。
【請求項４】
請求項１に記載のヒト化抗体を有効成分として含有する、老人斑形成抑制剤。
【請求項５】
請求項１に記載のヒト化抗体を有効成分として含有する、アミロイドβアミロイド線維形成阻害剤。
【請求項６】
請求項１に記載のヒト化抗体を有効成分として含有する、認知機能障害抑制剤。
【請求項７】
請求項１に記載のヒト化抗体を有効成分として含有する、アミロイドβ蓄積減少剤。
【請求項８】
請求項１に記載のヒト化抗体を有効成分として含有する、アミロイドβ蓄積抑制剤。
【請求項９】
請求項１に記載のヒト化抗体を有効成分として含有する、シナプス機能不全改善剤。
【請求項１０】
請求項１に記載のヒト化抗体を有効成分として含有する、シナプス機能不全抑制剤。
【請求項１１】
請求項１に記載のヒト化抗体を有効成分として含有する、神経毒性活性中和剤。
【請求項１２】
請求項１に記載のヒト化抗体を有効成分として含有する、シナプス毒性活性中和剤。
【手続補正書】
【提出日】平成24年5月22日(2012.5.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アミロイドβタンパク質モノマーには結合せず、アミロイドβタンパク質オリゴマーに結合する、以下の（１）〜（４）から選ばれる１のヒト化抗体。
（１）抗体重鎖可変領域が配列番号１２で示されるアミノ酸配列を含み、かつ抗体軽鎖可変領域が配列番号１４で示されるアミノ酸配列を含むヒト化抗体
（２）抗体重鎖可変領域が配列番号１２で示されるアミノ酸配列を含み、かつ抗体軽鎖可変領域が配列番号１６で示されるアミノ酸配列を含むヒト化抗体
（３）抗体重鎖可変領域が配列番号１２で示されるアミノ酸配列を含み、かつ抗体軽鎖可変領域が配列番号１７で示されるアミノ酸配列を含むヒト化抗体
（４）抗体重鎖可変領域が配列番号１５で示されるアミノ酸配列を含み、かつ抗体軽鎖可変領域が配列番号１７で示されるアミノ酸配列を含むヒト化抗体
【請求項２】
請求項１に記載のヒト化抗体を有効成分として含有する、認知機能障害改善剤。
【請求項３】
請求項１に記載のヒト化抗体を有効成分として含有する、アルツハイマー病治療剤。
【請求項４】
請求項１に記載のヒト化抗体を有効成分として含有する、老人斑形成抑制剤。
【請求項５】
請求項１に記載のヒト化抗体を有効成分として含有する、アミロイドβアミロイド線維形成阻害剤。
【請求項６】
請求項１に記載のヒト化抗体を有効成分として含有する、認知機能障害抑制剤。
【請求項７】
請求項１に記載のヒト化抗体を有効成分として含有する、アミロイドβ蓄積減少剤。
【請求項８】
請求項１に記載のヒト化抗体を有効成分として含有する、アミロイドβ蓄積抑制剤。
【請求項９】
請求項１に記載のヒト化抗体を有効成分として含有する、シナプス機能不全改善剤。
【請求項１０】
請求項１に記載のヒト化抗体を有効成分として含有する、シナプス機能不全抑制剤。
【請求項１１】
請求項１に記載のヒト化抗体を有効成分として含有する、神経毒性活性中和剤。
【請求項１２】
請求項１に記載のヒト化抗体を有効成分として含有する、シナプス毒性活性中和剤。
【国際調査報告】
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