(57)【要約】  一般式（Ｃ）2011138956.tif 000032（式中、Ｒ１０１は、置換もしくは無置換の芳香族複素環基を表す。Ｒ１０２、Ｒ１０３、Ｒ１０４およびＲ１０５は、同一または異なって水素原子、ハロゲン原子、炭素数１〜３のアルキル基、炭素数１〜３のハロアルキル基を表す。Ｒ１０６は、水素原子または炭素数１〜１２の直鎖もしくは分岐鎖を有する飽和もしくは不飽和の炭化水素基を表す。ただし、Ｒ１０１が３−フリル基、Ｒ１０２、Ｒ１０３、Ｒ１０４およびＲ１０５が全てメチル基で、Ｒ１０６がメチル基もしくは４−メチル−３−ペンテニル基もしくは４，８−ジメチル−３，７−ノナジエニル基の場合を除く。）で示される化合物またはその薬学的に許容される塩は、幅広い濃度範囲において低酸素環境選択的増殖阻害活性を有し、癌の予防または治療薬の有効成分として有用である。
2011138956.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｃ）
【化１】
2011138956.tif 000026
（式中、Ｒ１０１は、置換もしくは無置換の芳香族複素環基を表す。Ｒ１０２、Ｒ１０３、Ｒ１０４およびＲ１０５は、同一または異なって水素原子、ハロゲン原子、炭素数１〜３のアルキル基、炭素数１〜３のハロアルキル基を表す。Ｒ１０６は、水素原子または炭素数１〜１２の直鎖もしくは分岐鎖を有する飽和もしくは不飽和の炭化水素基を表す。ただし、Ｒ１０１が３−フリル基、Ｒ１０２、Ｒ１０３、Ｒ１０４およびＲ１０５が全てメチル基で、Ｒ１０６がメチル基もしくは４−メチル−３−ペンテニル基もしくは４，８−ジメチル−３，７−ノナジエニル基の場合を除く。）
で示される化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
一般式（Ｉ）
【化２】
2011138956.tif 000027
（式中、Ｒ１は、置換もしくは無置換の芳香族複素環基を表す。Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、同一または異なって水素原子、ハロゲン原子、炭素数１〜３のアルキル基、炭素数１〜３のハロアルキル基を表す。Ｒ６は、水素原子またはプレニル基を表す。ただし、Ｒ１が３−フリル基で、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５が全てメチル基の場合を除く。）
で示される化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項３】
Ｒ１０６が、メチル基、４−メチル−３−ペンテニル基または３−ブチニル基である請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項４】
置換もしくは無置換の芳香族複素環基が、フリル基またはチエニル基である請求項１〜３のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項５】
式（ＩＩ）
【化３】
2011138956.tif 000028
または式（ＩＩＩ）
【化４】
2011138956.tif 000029
または式（ＶＩ）
【化５】
2011138956.tif 000030
または式（ＣＩ）
【化６】
2011138956.tif 000031
である請求項４に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体を含有してなる医薬組成物。
【請求項７】
請求項１〜５のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有するインスリン様成長因子２発現阻害剤。
【請求項８】
請求項１〜５のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有する低酸素環境選択的細胞増殖阻害剤。
【請求項９】
請求項１〜５のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有する癌の予防または治療薬。
【請求項１０】
化学療法剤、免疫療法剤またはホルモン療法剤と併用することを特徴とする請求項９に記載の癌の予防または治療薬。
【請求項１１】
放射線療法と併用することを特徴とする請求項９に記載の癌の予防または治療薬。
【請求項１２】
哺乳動物に対して、請求項１〜５のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の有効量を投与することを特徴とする癌の予防または治療方法。
【請求項１３】
癌の予防または治療薬を製造するための、請求項１〜５のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項１４】
癌の予防または治療に使用するための、請求項１〜５のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規プレニルアレーン化合物およびその用途に関するものであり、詳細には、インスリン様成長因子２の発現を阻害することにより、低酸素環境選択的に細胞増殖阻害活性を発揮し、癌の予防または治療に有用なプレニルアレーン化合物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
癌克服は人類の大きな課題であり、その化学療法剤の開発は現在も精力的に行われている。しかしながら、癌細胞特異的に効果を示す医薬品の創製には至っていないのが現状である。近年、腫瘍内部は血管新生により誘導された血管網が無秩序に存在し、その血管構造も脆弱であることから、部分的な低酸素環境が存在することが知られている。また、低酸素環境の癌細胞はその代謝系を変化させ低酸素状況に対応するとともに、活発に血管新生促進因子や癌転移に関与する因子の産生を行うため、癌の増悪に大きく寄与していると考えられている。【０００３】
癌細胞の低酸素適応において重要な役割を担う転写因子としてＨＩＦ−１（Hypoxia Inducible Factor-1）が知られている。ＨＩＦ−１はアルファサブユニットとベータサブユニットのヘテロ二量体として機能するが、通常条件ではアルファサブユニットの酸化分解が亢進しているためアルファサブユニットが欠乏状態にある。一方、低酸素環境下ではこの酸化分解が抑制され、ヘテロ二量体となった活性型ＨＩＦ−１がプロモーター領域にあるＨＲＥ（hypoxia response element）に結合することにより、低酸素適応に必要な因子、血管新生や転移の促進因子の発現量を増加させる（非特許文献１参照）。これらの知見に加え、低酸素環境は腫瘍特異的な環境であり、生理条件下において低酸素環境はほとんど存在しないことから、ＨＩＦ−１またはその関連分子を標的とする化合物の探索研究は数多く行われている（非特許文献２、３参照）。しかしながら、癌細胞の低酸素適応機構の全容は明らかにされていないため、これら以外を標的とする薬剤開発はほとんどない。また現在までにＨＩＦ−１またはその関連分子を阻害する医薬品は上市されていない。以上のことから、既存の化合物とは化学構造や作用メカニズムの異なる新規医薬品の創製は重要な課題である。【０００４】
このような背景のもと、本発明者らは、ヒト前立腺癌ＤＵ−１４５細胞を用いて１％低酸素条件で培養することによりＨＩＦ−１アルファの発現が上昇して低酸素環境に適応できることを見出し、この細胞を用いて低酸素条件選択的に増殖阻害する化合物を探索するアッセイ系を構築した。そして、種々の天然物ライブラリーをスクリーニングした結果、インドネシア産海綿の抽出物に活性を見出した。活性試験の結果を指標にして分画精製したところ、低酸素環境選択的細胞増殖阻害活性物質として、下記式で表わされるフラノセスタテルペンｆｕｒｏｓｐｉｎｏｓｕｌｉｎ−１を見出した（非特許文献４参照）。【０００５】
【化１】
2011138956.tif 000003
【０００６】
本発明者らは、ｆｕｒｏｓｐｉｎｏｓｕｌｉｎ−１がｉｎ ｖｉｔｒｏで低酸素環境選択的に癌細胞の増殖を阻害するのみならず、ｉｎ ｖｉｖｏでもマウス由来肉腫細胞株Ｓ１８０を皮下に移植したマウスにおいて、コントロール群と比較して腫瘍重量を有意に減少させることを見出した。また、その作用メカニズムがＨＩＦ−１またはその関連分子の阻害ではなく、低酸素環境下で発現誘導されるインスリン様成長因子２（ＩＧＦ−２：insulin like growth factor 2）の発現阻害によることを明らかにした（非特許文献４参照）。【０００７】
しかしながら、ｆｕｒｏｓｐｉｎｏｓｕｌｉｎ−１は、１０００μＭでは通常酸素環境の細胞に対しても低酸素環境下と同等の増殖阻害活性を示すことから、高濃度においても低酸素環境選択性を維持可能な、より安全性の高い化合物の創製が望まれていた。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Nature Rev. Drug Discov., 2, 803, 2003
【非特許文献２】Pharmacol. Ther., 113, 229, 2007
【非特許文献３】Mol. Cancer Ther., 3, 647,2004
【非特許文献４】荒井ら、第51回天然有機化合物討論会講演要旨集（名古屋）、p647、2009
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、幅広い濃度範囲において低酸素環境選択的増殖阻害活性を有する新規化合物を提供すること、当該化合物を有効成分として含有する癌の予防または治療薬を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、上記課題を解決するために、以下の各発明を包含する。
［１］一般式（Ｃ）
【化２】
2011138956.tif 000004
（式中、Ｒ１０１は、置換もしくは無置換の芳香族複素環基を表す。Ｒ１０２、Ｒ１０３、Ｒ１０４およびＲ１０５は、同一または異なって水素原子、ハロゲン原子、炭素数１〜３のアルキル基、炭素数１〜３のハロアルキル基を表す。Ｒ１０６は、水素原子または炭素数１〜１２の直鎖もしくは分岐鎖を有する飽和もしくは不飽和の炭化水素基を表す。ただし、Ｒ１０１が３−フリル基、Ｒ１０２、Ｒ１０３、Ｒ１０４およびＲ１０５が全てメチル基で、Ｒ１０６がメチル基もしくは４−メチル−３−ペンテニル基もしくは４，８−ジメチル−３，７−ノナジエニル基の場合を除く。）
で示される化合物またはその薬学的に許容される塩。
［２］一般式（Ｉ）
【化３】
2011138956.tif 000005
（式中、Ｒ１は、置換もしくは無置換の芳香族複素環基を表す。Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、同一または異なって水素原子、ハロゲン原子、炭素数１〜３のアルキル基、炭素数１〜３のハロアルキル基を表す。Ｒ６は、水素原子またはプレニル基を表す。ただし、Ｒ１が３−フリル基で、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５が全てメチル基の場合を除く。）
で示される化合物またはその薬学的に許容される塩。
［３］Ｒ１０６が、メチル基、４−メチル−３−ペンテニル基または３−ブチニル基である前記［１］に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
［４］置換もしくは無置換の芳香族複素環基が、フリル基またはチエニル基である前記［１］〜［３］に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
［５］式（ＩＩ）
【化４】
2011138956.tif 000006
または式（ＩＩＩ）
【化５】
2011138956.tif 000007
または式（ＶＩ）
【化６】
2011138956.tif 000008
または式（ＣＩ）
【化７】
2011138956.tif 000009
である前記［４］に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
［６］前記［１］〜［５］のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体を含有してなる医薬組成物。
［７］前記［１］〜［５］のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有するインスリン様成長因子２発現阻害剤。
［８］前記［１］〜［５］のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有する低酸素環境選択的細胞増殖阻害剤。
［９］前記［１］〜［５］のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有する癌の予防または治療薬。
［１０］化学療法剤、免疫療法剤またはホルモン療法剤と併用することを特徴とする前記［９］に記載の癌の予防または治療薬。
［１１］放射線療法と併用することを特徴とする前記［９］に記載の癌の予防または治療薬。
［１２］哺乳動物に対して、前記［１］〜［５］のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の有効量を投与することを特徴とする癌の予防または治療方法。
［１３］癌の予防または治療薬を製造するための、前記［１］〜［５］のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用。
［１４］癌の予防または治療に使用するための、前記［１］〜［５］のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の一般式（Ｃ）または一般式（Ｉ）で示される化合物またはその薬学的に許容される塩は、低濃度から高濃度に至る広い濃度範囲で低酸素環境選択的細胞増殖阻害活性を有し、正常細胞に対する毒性が少ない臨床上有用な癌の予防または治療薬を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】式（ＩＩ）で示される化合物（ａｎａｌｏｇ−ｋ５）の低酸素環境選択的癌細胞増殖阻害活性を評価した結果を示す図である。
【図２】式（ＩＩＩ）で示される化合物（ａｎａｌｏｇ−ｋ６）の低酸素環境選択的癌細胞増殖阻害活性を評価した結果を示す図である。
【図３】ｆｕｒｏｓｐｉｎｏｓｕｌｉｎ−１の低酸素環境選択的癌細胞増殖阻害活性を評価した結果を示す図である。
【図４（ａ）】式（ＩＩ）で示される化合物（ａｎａｌｏｇ−ｋ５）の癌細胞移植モデルマウスにおける抗腫瘍活性を評価した結果を示す図である。
【図４（ｂ）】式（ＩＩ）で示される化合物（ａｎａｌｏｇ−ｋ５）を投与した癌細胞移植モデルマウスから摘出した腫瘍の写真である。
【図５】式（ＶＩ）で示される化合物（ａｎａｌｏｇ−ｆ９）の低酸素環境選択的癌細胞増殖阻害活性を評価した結果を示す図である。
【図６】式（ＣＩ）で示される化合物（ａｎａｌｏｇ−ｋ１３）の低酸素環境選択的癌細胞増殖阻害活性を評価した結果を示す図である。
【図７（ａ）】式（ＶＩ）で示される化合物（ａｎａｌｏｇ−ｆ９）の癌細胞移植モデルマウスにおける抗腫瘍活性を評価した結果を示す図である。
【図７（ｂ）】式（ＶＩ）で示される化合物（ａｎａｌｏｇ−ｆ９）を投与した癌細胞移植モデルマウスから摘出した腫瘍の写真である。
【図８（ａ）】式（ＣＩ）で示される化合物（ａｎａｌｏｇ−ｋ１３）の癌細胞移植モデルマウスにおける抗腫瘍活性を評価した結果を示す図である。
【図８（ｂ）】式（ＣＩ）で示される化合物（ａｎａｌｏｇ−ｋ１３）を投与した癌細胞移植モデルマウスから摘出した腫瘍の写真である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明は、一般式（Ｃ）
【化８】
2011138956.tif 000010
（式中、Ｒ１０１は、置換もしくは無置換の芳香族複素環基を表す。Ｒ１０２、Ｒ１０３、Ｒ１０４およびＲ１０５は、同一または異なって水素原子、ハロゲン原子、炭素数１〜３のアルキル基、炭素数１〜３のハロアルキル基を表す。Ｒ１０６は、水素原子または炭素数１〜１２の直鎖もしくは分岐鎖を有する飽和もしくは不飽和の炭化水素基を表す。ただし、Ｒ１０１が３−フリル基、Ｒ１０２、Ｒ１０３、Ｒ１０４およびＲ１０５が全てメチル基で、Ｒ１０６がメチル基もしくは４−メチル−３−ペンテニル基もしくは４，８−ジメチル−３，７−ノナジエニル基の場合を除く。）
で示される化合物またはその薬学的に許容される塩。
【００１４】
また、本発明は、一般式（Ｉ）
【化９】
2011138956.tif 000011
（式中、Ｒ１は、置換もしくは無置換の芳香族複素環基を表す。Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、同一または異なって水素原子、ハロゲン原子、炭素数１〜３のアルキル基、炭素数１〜３のハロアルキル基を表す。Ｒ６は、水素原子またはプレニル基を表す。ただし、Ｒ１が３−フリル基で、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５が全てメチル基の場合を除く。）
で示される化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【００１５】
「ハロゲン原子」とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子またはヨウ素原子である。
「炭素数１〜３のアルキル基」とは、メチル基、エチル基、プロピル基またはイソプロピル基である。
「炭素数１〜３のハロアルキル基」とは、上記炭素数１〜３のアルキル基が上記ハロゲン原子で置換されたものであり、例えば、クロロメチル基、ブロモメチル基、フルオロメチル基、トリフルオロメチル基、トリクロロメチル基、トリブロモメチル基、トリクロロエチル基、ペンタフルオロプロピル基などが挙げられる。
【００１６】
「置換もしくは無置換の芳香族複素環基」とは、環構成原子として窒素原子、硫黄原子、酸素原子等の複素原子を少なくとも１以上含む、５員環または６員環の基であり、これらはベンゼン環と縮合していてもよく、さらに環上に１個以上の種々の置換基を有していてもよい基をいい、例えば、ピリジル、フリル、チエニル、インドリル、キノリル、イソキノリル、ベンゾフラニル、ベンゾチエニル、イミダゾリル、ベンズイミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、ピラゾリル、ピリミジル、ピラジニル、イソオキサゾリル、イソインドリル、ピロリル等を挙げることができる。好ましくはフリル、チエニルであり、より好ましくは３−フリル、３−チエニルである。
【００１７】
置換基としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、シアノ基、水酸基、ニトロ基、アルキル基、シクロアルキル基、アルコキシ基、アミノ基、フェニル基、ナフチル基、アントリル基、スチリル基、ピリジル基、ピリドインドリル基、キノリル基、ベンゾチアゾリル基などを挙げることができ、これらの置換基はさらに置換されていてもよい。
【００１８】
「炭素数１〜１２の直鎖もしくは分岐鎖を有する飽和もしくは不飽和の炭化水素基」としては、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｎ−ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、４−メチルペンチル基、ビニル基、１−プロペニル基、２−プロペニル基、２−メチル−１−プロペニル基、Ｚ−２−ブテニル基、Ｅ−２−ブテニル基、プレニル基、４−メチル−３−ペンテニル基、エチニル基、１−プロピニル基、２−プロピニル基、２−ブチニル基、３−ブチニル基、４−ペンチニル基、４−ヘキシニル基、３−ペンテニル基、４−メチル−３−ヘキセニル基、４−メチル−３−ヘプテニル基、４−メチル−３−オクテニル基、４，６−ジメチル−３−ヘプテニル基、４，７−ジメチル−３−オクテニル基、４，６−ジメチル−３，５−ヘプタジエニル基、４，７−ジメチル−３，６−オクタジエニル基、４−メチル−３，６−ヘプタジエニル基、４−メチル−３，６−オクタジエニル基、４−メチル−３，７−オクタジエニル基、4-methyloct-3-en-7-ynyl基、4-methylhept-3-en-6-ynyl基、４，８−ジメチル−３，７−ノナジエニル基などを挙げることができる。好ましくは、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ビニル基、１−プロペニル基、プレニル基、４−メチル−３−ペンテニル基、エチニル基、１−プロピニル基、２−プロピニル基、２−ブチニル基、３−ブチニル基、４−ペンチニル基、4-methyloct-3-en-7-ynyl基、4-methylhept-3-en-6-ynyl基、４，８−ジメチル−３，７−ノナジエニル基であり、より好ましくは、メチル基、４−メチル−３−ペンテニル基、３−ブチニル基である。
【００１９】
本発明の一般式（Ｃ）または一般式（Ｉ）で示される化合物としては、例えば、以下の化合物（ＩＩ）〜（ＸＸＶＩＩ）ならびに化合物（ＣＩ）〜（ＣＬＸＸＩ）などが挙げられる。
【００２０】
【化１０】
2011138956.tif 000012
【００２１】
【化１１】
2011138956.tif 000013
【００２２】
【化１２】
2011138956.tif 000014
【００２３】
【化１３】
2011138956.tif 000015
【００２４】
【化１４】
2011138956.tif 000016
【００２５】
【化１５】
2011138956.tif 000017
【００２６】
【化１６】
2011138956.tif 000018
【００２７】
中でも一般式（Ｃ）におけるＲ１０６が、メチル基、４−メチル−３−ペンテニル基もしくは３−ブチニル基である化合物、または一般式（Ｉ）におけるＲ６が、水素原子またはプレニル基である化合物が好ましい。
【００２８】
本発明の化合物として特に好ましくは、以下の式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）、式（ＶＩ）または式（ＣＩ）で示される化合物である。
【００２９】
【化１７】
2011138956.tif 000019
【００３０】
【化１８】
2011138956.tif 000020
【００３１】
【化１９】
2011138956.tif 000021
【００３２】
【化２０】
2011138956.tif 000022
【００３３】
「薬学的に許容される塩」とは、例えば、アルカリ金属（例えば、カリウム、ナトリウム、リチウム等）の塩、アルカリ土類金属（例えば、カルシウム、マグネシウム等）の塩、アンモニウム塩（例えば、テトラメチルアンモニウム塩、テトラブチルアンモニウム塩等）、有機アミン（例えば、トリエチルアミン、メチルアミン、ジメチルアミン、シクロペンチルアミン、ベンジルアミン、フェネチルアミン、ピペリジン、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミン、リジン、アルギニン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン等）の塩、酸付加物塩（例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩等の無機酸塩；例えば、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、シュウ酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、安息香酸塩、クエン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、イセチオン酸塩、グルクロン酸塩、グルコン酸塩等の有機酸塩）などが挙げられる。
【００３４】
以下、本発明の一般式（Ｃ）または一般式（Ｉ）で示される化合物またはその薬学的に許容される塩を「本発明の化合物」と記す。
【００３５】
本発明の化合物の製造方法は特に限定されず、例えば、実施例１に記載の式（ＩＩ）で示される化合物の合成方法、実施例３に記載の式（ＣＩ）で示される化合物の合成方法、実施例４に記載の式（ＶＩ）で示される化合物の合成方法などに準じて製造することができる。
本発明の化合物は、公知の手段、例えば、転溶、濃縮、溶媒抽出、分溜、液性変換、晶出、再結晶、クロマトグラフィー等によって単離、精製することができる。本発明の化合物が遊離化合物として得られた場合には、公知の方法により目的とする塩に変換することができ、逆に塩で得られた場合には、公知の方法により遊離体または目的とする他の塩に変換することができる。
【００３６】
本発明の化合物が、光学異性体、立体異性体、位置異性体、回転異性体等の異性体を有する場合には、いずれか一方の異性体も混合物も本発明の化合物に包含される。例えば、本発明の化合物に光学異性体が存在する場合には、ラセミ体から分割された光学異性体も本発明の化合物に包含される。これらの異性体は、公知の合成手法、分離手法（濃縮、溶媒抽出、カラムクロマトグラフィー、再結晶等）によりそれぞれを単品として得ることができる。
本発明の化合物は、水和物または溶媒和物であってもよい。また、同位元素等で標識されていてもよい。
【００３７】
本発明の化合物は、低酸素環境下で発現誘導されるインスリン様成長因子２（ＩＧＦ−２）を転写レベルで阻害し、ＩＧＦ−２の受容体であるＩＧＦ−１受容体のシグナル伝達経路を遮断することにより、低酸素環境下において細胞増殖を阻害することができる。したがって、本発明は、本発明の化合物を有効成分とするＩＧＦ−２発現阻害剤を提供する。従来、ＩＧＦ−２の発現を転写レベルで阻害する化合物は報告されておらず、本発明のＩＧＦ−２発現阻害剤は、ＩＧＦ−２の機能およびそれに関連するシグナル伝達機構解析のための研究用試薬として、非常に高い有用性がある。
【００３８】
また、本発明の化合物は、低酸素環境下で発現誘導されるＩＧＦ−２の発現を阻害することにより、通常酸素環境下よりも低酸素環境下においてより顕著に細胞増殖を阻害する。したがって、本発明の化合物は、低酸素環境選択的細胞増殖阻害剤の有効成分として有用であり、低酸素環境選択的に癌細胞の増殖を阻害する癌の予防または治療に用いることができる。また、本発明の化合物は、ＩＧＦ−２依存性の疾患の予防または治療にも用いることができる。
【００３９】
本発明の化合物による予防または治療対象の癌は、特に限定されず、例えば、肺癌、大腸癌、前立腺癌、乳癌、膵臓癌、食道癌、胃癌、肝臓癌、胆道癌、脾臓癌、腎癌、膀胱癌、子宮癌、卵巣癌、精巣癌、甲状腺癌、脳腫瘍、血液腫瘍等が挙げられる。好ましくは、低酸素環境が存在する固形癌である。
【００４０】
本発明は、本発明の化合物と、薬学的に許容される担体とを含有する医薬組成物を提供する。本発明の医薬組成物は、本発明の化合物を有効成分とし、薬学的に許容される担体、さらに添加剤を適宜配合して製剤化することができる。具体的には錠剤、被覆錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、液剤、懸濁剤、乳剤等の経口剤；注射剤、輸液、坐剤、軟膏、パッチ剤等の非経口剤とすることができる。担体または添加剤の配合割合については、医薬品分野において通常採用されている範囲に基づいて適宜設定すればよい。配合できる担体または添加剤は特に制限されないが、例えば、水、生理食塩水、その他の水性溶媒、水性または油性基剤等の各種担体；賦形剤、結合剤、ｐＨ調整剤、崩壊剤、吸収促進剤、滑沢剤、着色剤、矯味剤、香料等の各種添加剤が挙げられる。
【００４１】
錠剤、カプセル剤などに混和することができる添加剤としては、例えば、ゼラチン、コーンスターチ、トラガント、アラビアゴムのような結合剤、結晶性セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチン、アルギン酸などのような膨化剤、ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、ショ糖、乳糖またはサッカリンのような甘味剤、ペパーミント、アカモノ油またはチェリーのような香味剤などが用いられる。調剤単位形態がカプセルである場合には、上記タイプの材料にさらに油脂のような液状担体を含有することができる。注射のための無菌組成物は注射用水のようなベヒクル中の活性物質、胡麻油、椰子油などのような天然産出植物油などを溶解または懸濁させるなどの通常の製剤実施に従って処方することができる。注射用の水性液としては、例えば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液（例えば、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンニトール、塩化ナトリウムなど）などが用いられ、適当な溶解補助剤、例えば、アルコール（例、エタノール）、ポリアルコール（例、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤（例、ポリソルベート８０ＴＭ、ＨＣＯ−５０）などと併用してもよい。油性液としては、例えば、ゴマ油、大豆油などが用いられ、溶解補助剤である安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどと併用してもよい。また、緩衝剤（例えば、リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液）、無痛化剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩酸プロカインなど）、安定剤（例えば、ヒト血清アルブミン、ポリエチレングリコールなど）、保存剤（例えば、ベンジルアルコール、フェノールなど）、酸化防止剤などと配合してもよい。
【００４２】
このようにして得られる製剤は安全で低毒性であるので、例えば、ヒトや他の哺乳動物（例えば、ラット、マウス、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して投与することができる。
【００４３】
投与量は、患者の状態、対象癌種、症状、投与方法などにより差異はあるが、経口投与の場合、一般的に例えば、体重約６０ｋｇのヒトにおいては、１日当たり有効成分として約０.１〜１０００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５００ｍｇ、より好ましくは約３．０〜２００ｍｇである。非経口的に投与する場合は、その１回投与量は患者の状態、対象癌種、症状、投与方法などによっても異なるが、例えば注射剤では、通常例えば体重１ｋｇ当たり約０．０１〜１００ｍｇ程度、好ましくは約０．０１〜５０ｍｇ程度、より好ましくは約０．０１〜２０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合である。１日当たりの総投与量は、単一投与量であっても分割投与量であってもよい。
【００４４】
本発明の癌の予防または治療薬は、他の癌治療用薬剤と併用して用いることができる。他の癌治療用薬剤は特に限定されないが、例えば、化学療法剤、免疫療法剤またはホルモン療法剤と併用して用いることが好ましい。また、本発明の癌の予防または治療薬は、放射線療法と併用して用いることができる。
【００４５】
化学療法剤としては、特に限定されないが、例えば、ナイトロジェンマスタード、塩酸ナイトロジェンマスタード−Ｎ−オキシド、クロラムブチル、シクロフォスファミド、イホスファミド、チオテパ、カルボコン、トシル酸インプロスルファン、ブスルファン、塩酸ニムスチン、ミトブロニトール、メルファラン、ダカルバジン、ラニムスチン、リン酸エストラムスチンナトリウム、トリエチレンメラミン、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾシン、ピポブロマン、エトグルシド、カルボプラチン、シスプラチン、ミボプラチン、ネダプラチン、オキサリプラチン、アルトレタミン、アンバムスチン、塩酸ジブロスピジウム、フォテムスチン、プレドニムスチン、プミテパ、リボムスチン、テモゾロミド、トレオスルファン、トロフォスファミド、ジノスタチンスチマラマー、アドゼレシン、システムスチン、ビゼレシン等のアルキル化剤；例えば、メルカプトプリン、６−メルカプトプリンリボシド、チオイノシン、メトトレキサート、ペメトレキセド、エノシタビン、シタラビン、シタラビンオクフォスファート、塩酸アンシタビン、５−ＦＵ系薬剤（例、フルオロウラシル、テガフール、ＵＦＴ、ドキシフルリジン、カルモフール、ガロシタビン、エミテフール、カペシタビン等）、アミノプテリン、ネルザラビン、ロイコボリンカルシウム、タブロイド、ブトシン、フォリネイトカルシウム、レボフォリネイトカルシウム、クラドリビン、エミテフール、フルダラビン、ゲムシタビン、ヒドロキシカルバミド、ペントスタチン、ピリトレキシム、イドキシウリジン、ミトグアゾン、チアゾフリン、アンバムスチン、ベンダムスチン等の代謝拮抗剤；例えば、アクチノマイシンＤ、アクチノマイシンＣ、マイトマイシンＣ、クロモマイシンＡ３、塩酸ブレオマイシン、硫酸ブレオマイシン、硫酸ペプロマイシン、塩酸ダウノルビシン、塩酸ドキソルビシン、塩酸アクラルビシン、塩酸ピラルビシン、塩酸エピルビシン、ネオカルチノスタチン、ミスラマイシン、ザルコマイシン、カルチノフィリン、ミトタン、塩酸ゾルビシン、塩酸ミトキサントロン、塩酸イダルビシン等の抗癌性抗生物質；例えば、エトポシド、リン酸エトポシド、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンクリスチン、硫酸ビンデシン、テニポシド、パクリタキセル、ドセタクセル、ビノレルビン等の植物由来抗癌剤などが挙げられる。
【００４６】
免疫療法剤としては、特に限定されないが、例えば、ピシバニール、クレスチン、シゾフィラン、レンチナン、ウベニメクス、インターフェロン、インターロイキン、マクロファージコロニー刺激因子、顆粒球コロニー刺激因子、エリスロポイエチン、リンホトキシン、ＢＣＧワクチン、コリネバクテリウムパルブム、レバミゾール、ポリサッカライドＫ、プロコダゾール、抗ＣＴＬＡ４抗体などが挙げられる。
【００４７】
ホルモン療法剤としては、特に限定されないが、例えば、ホスフェストロール、ジエチルスチルベストロール、クロロトリアニセン、酢酸メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、酢酸クロルマジノン、酢酸シプロテロン、ダナゾール、アリルエストレノール、ゲストリノン、メパルトリシン、ラロキシフェン、オルメロキシフェン、レボルメロキシフェン、抗エストロゲン（例、クエン酸タモキシフェン、クエン酸トレミフェン等）、ピル製剤、メピチオスタン、テストロラクトン、アミノグルテチイミド、ＬＨ−ＲＨアゴニスト（例、酢酸ゴセレリン、ブセレリン、リュープロレリン等）、ドロロキシフェン、エピチオスタノール、スルホン酸エチニルエストラジオール、アロマターゼ阻害薬（例、塩酸ファドロゾール、アナストロゾール、レトロゾール、エキセメスタン、ボロゾール、フォルメスタン等）、抗アンドロゲン（例、フルタミド、ビカルタミド、ニルタミド等）、５α−レダクターゼ阻害薬（例、フィナステリド、エプリステリド等）、副腎皮質ホルモン系薬剤（例、デキサメタゾン、プレドニゾロン、ベタメタゾン、トリアムシノロン等）、アンドロゲン合成阻害薬（例、アビラテロン等）などが挙げられる。
【００４８】
本発明の癌の予防または治療薬と他の癌治療用薬剤または放射線療法とを併用することにより、（１）相乗効果が得られる、（２）投与量を軽減することができる、（３）治療期間を長く設定することができる、（４）治療効果の持続を図ることができる、等の効果が得られる。
【００４９】
本発明の癌の予防または治療薬と他の癌治療用薬剤とを併用する場合、これらを投与対象に対し、同時に投与してもよいし、時間差をおいて投与してもよい。併用薬剤の投与量は、臨床上用いられている投与量に準ずればよく、投与対象、投与対象の年齢および体重、症状、投与時間、剤形、投与方法、組み合わせ等により適宜選択することができる。
【実施例】
【００５０】
以下、実施例により本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。【００５１】
〔実施例１：式（ＩＩ）で示される化合物の合成〕
以下のスキームに従って、式（ＩＩ）で示される化合物（以下、「ａｎａｌｏｇ−ｋ５」と記す。）を合成した。【００５２】
【化２１】
2011138956.tif 000023
【００５３】
（１）化合物２の合成
３−Ｂｒｏｍｏｆｕｒａｎ（2.94 g, 20 mmol）のＴＨＦ（40 mL）溶液に、−７８℃でｎ−ＢｕＬｉ（1.65 M in hexane, 13.3 mL, 22 mmol）をゆっくり滴下した。３０分撹拌した後、ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｅｎｅ ｏｘｉｄｅ（1.57 mL, 24 mmol）を加え、さらにＢＦ３・Ｅｔ２Ｏ（2.72 mL, 22 mmol）を１５分かけてゆっくり滴下した。−７８℃で２時間撹拌した後、飽和重曹水を加え、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を減圧留去して得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（hexane/AcOEt = 3:1）で精製し、化合物２（1.41 g, 56%）を淡黄色油状物として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（500 MHz, CDCl3）δ: 7.36 (1H, s), 7.23 (1H, s), 6.28 (1H, s), 3.68 (2H, t, J = 6.5 Hz), 2.52 (2H, t, J = 7.0 Hz), 1.86-1.80 (2H, m).【００５４】
（２）化合物３の合成
Ｐｙｒｉｄｉｎｉｕｍ ｃｈｌｏｒｏｃｈｒｏｍａｔｅ（3.6 g, 16.5 mmol）およびセライト（4.0 g）をジクロロメタン（22 mL）に懸濁させ、撹拌しながら化合物２（1.41 g, 11 mmol）のジクロロメタン（11 mL）溶液をゆっくり滴下した。３時間撹拌した後、反応液をジエチルエーテルで希釈し、フロリジルでろ過した。ろ液を減圧留去して化合物３を得た。本化合物は精製せず、そのまま次の反応に用いた。【００５５】
（３）化合物４の合成
上記生成物（化合物３）のジクロロメタン（10 mL）溶液に（ｃａｒｂｅｔｈｏｘｙｍｅｔｈｙｌｅｎｅ）ｔｒｉｐｈｅｎｙｌｐｈｏｓｐｈｏｒａｎｅ（1.80 g, 12.1 mmol）を加え、室温で２時間撹拌した。反応液を減圧留去して得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（hexane/AcOEt = 10:1）で精製し、化合物４（1.39 g, 65%）を無色油状物として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（500 MHz, CDCl3）δ: 7.36 (1H, s), 7.23 (1H, s), 6.98 (1H, dt, J = 16.0, 6.5 Hz), 6.27 (1H, s), 5.84 (1H, dt, J = 16.0, 1.5 Hz), 4.18 (2H, q, J = 7.5 Hz), 2.60 (1H, t, J = 7.5 Hz), 2.49-2.45 (2H, m), 1.28 (3H, t, J = 7.5 Hz).【００５６】
（４）化合物５の合成
化合物４（1.39 g, 7.2 mmol）のジクロロメタン（14 mL）溶液に、０℃で撹拌しながらｄｉｉｓｏｂｕｔｙｌａｌｕｍｉｎｕｍ ｈｙｄｒｉｄｅ（ＤＩＢＡＨ）（1.0 M in hexane, 15 mL, 15 mmol）をゆっくり滴下した。３０分撹拌した後、水（2.4 mL）および１５％ ＮａＯＨ（0.6 mL）を加え、室温で３０分撹拌し、セライトろ過した。ろ液を減圧留去して化合物５を得た。本化合物は精製せず、そのまま次の反応に用いた。【００５７】
（５）化合物６の合成
上記生成物（化合物５）のジクロロメタン（14 mL）溶液に、０℃で撹拌しながらＣＢｒ４（2.49 g, 7.5 mmol）およびＰＰｈ３（1.97 g, 7.5 mmol）を加えた。１５分撹拌した後、飽和重曹水を加え、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を減圧留去して得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（hexane/AcOEt = 20:1）で精製し、化合物６（1.16 g, 75%）を淡黄色油状物として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（500 MHz, CDCl3）δ: 7.35 (1H, s), 7.22 (1H, s), 6.26 (1H, s), 5.82-5.72 (2H, m), 3.94 (2H, d, J = 7.5 Hz), 2.52 (2H, t, J = 8.0 Hz), 2.35-2.31 (2H, m).【００５８】
（６）化合物７の合成
化合物６（323 mg, 1.5 mmol）およびｆａｒｎｅｓｙｌ ｐｈｅｎｙｌｓｕｌｆｏｎｅ（520 mg, 1.5 mmol）のＴＨＦ（3 mL）溶液に−２０℃でカリウム−ｔ−ブトキシド（202 mg, 1.8 mmol）を加え、−２０℃で６時間撹拌した。反応液に飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を減圧留去して得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（hexane/AcOEt = 7:1）で精製し、化合物７（598 mg, 83%）を淡黄色油状物として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（500 MHz, CDCl3）δ: 7.84-7.82 (2H, m), 7.61 (1H, t, J = 7.5 Hz), 7.50 (2H, t, J = 7.5 Hz), 7.31 (1H, s), 7.16 (1H, s), 6.22 (1H, s), 5.53 (1H, dt, J = 15.0, 7.0 Hz), 5.29 (1H, dt, J = 15.0, 6.7 Hz), 5.10-5.00 (2H, m), 4.95 (1H, d, J = 10.5 Hz), 3.73 (1H, td, J = 10.5, 3.0 Hz), 2.88-2.84 (1H, m), 2.43 (2H, t, J = 7.7 Hz), 2.38-2.19 (3H, m), 2.07-2.04 (2H, m), 1.99-1.95 (6H,m), 1.68 (3H, s), 1.59 (3H, s), 1.58 (3H, s), 1.16 (3H, s).【００５９】
（７）目的化合物１（ａｎａｌｏｇ−ｋ５）の合成
ナフタレン（1.53 g, 12 mmol）のＴＨＦ（20 mL）溶液に０℃でリチウム（70 mg, 10 mmol）を加え、０℃で４時間撹拌した。反応液を−２０℃に冷却し、撹拌しながら化合物７（240 mg, 0.50 mmol）のＴＨＦ（1.5 mL）溶液を滴下した。１０分撹拌した後、反応液に飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を減圧留去して得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（hexane/AcOEt = 50:1）で精製し、化合物１（62 mg, 36%）を無色油状物として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（500 MHz, CDCl3）δ: 7.34 (1H, s), 7.21 (1H, s), 6.27 (1H, s), 5.47-5.44 (2H, m), 5.15-5.06 (3H, m), 2.48 (2H, t, J = 7.5 Hz), 2.28-2.24 (2H, m), 2.09-1.95 (12H, m), 1.68 (3H, s), 1.60 (9H, s). 
１３Ｃ−ＮＭＲ（125 MHz, CDCl3）δ: 142.5, 138.8, 135.2, 134.9, 131.3, 130.8, 129.5, 124.8, 124.4, 124.2, 124.0, 111.1, 39.7, 33.0, 32.8, 30.3, 28.0, 26.8, 26.6, 25.7, 25.0, 17.7, 16.05, 16.00.【００６０】
〔実施例２：式（ＩＩＩ）で示される化合物の合成〕
式（ＩＩＩ）で示される化合物（以下、「ａｎａｌｏｇ−ｋ６」と記す。）は、実施例１のａｎａｌｏｇ−ｋ５の合成方法の（１）において、３−Ｂｒｏｍｏｆｕｒａｎを３−Ｂｒｏｍｏｔｈｉｏｐｈｅｎｅに変更して合成した。【００６１】
〔実施例３：式（ＣＩ）で示される化合物の合成〕
以下のスキームに従って、式（ＣＩ）で示される化合物（以下、「ａｎａｌｏｇ−ｋ１３」と記す。）を合成した。【００６２】
【化２２】
2011138956.tif 000024
【００６３】
（１）化合物８の合成
化合物３（198 mg, 1.59 mmol）のトルエン溶液（16 mL）に、Ｐｈ３Ｐ＝Ｃ（Ｍｅ）ＣＯ２Ｅｔ（665 mg, 1.91 mmol）を加えた後、６０℃で８時間撹拌した。反応液を減圧濃縮した後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（n-hexane : AcOEt = 5 : 1）にて精製し、化合物８（247 mg, 80%）を無色油状物として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（500 MHz, CDCl3）δ: 7.35 (1H, dd, J = 2.4, 1.2 Hz), 7.23 (1H, d, J = 1.8 Hz), 6.79-6.75 (1H, m), 6.28 (1H, s), 4.19 (2H, q, J = 7.1 Hz), 2.57 (2H, t, J = 7.3 Hz), 2.43 (2H, q, J = 7.5 Hz), 1.81 (3H, s), 1.29 (3H, t, J = 7.3 Hz).【００６４】
（２）化合物９の合成
化合物８（96 mg, 0.46 mmol）のジクロロメタン溶液（1.0 mL）に０℃でＤＩＢＡＨ（1.0 M in n-hexane, 1.6 mL, 1.62 mmol）を加え、２０分撹拌した。反応液に５%ＨＣｌを加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥後ろ過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（n-hexane : AcOEt = 5 : 1）にて精製し、化合物９（77 mg, quant.）を無色油状物として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（500 MHz, CDCl3）δ: 7.35 (1H, s), 7.22 (1H, s), 6.28 (1H, s), 5.45 (1H, td, J = 7.0, 1.4 Hz), 4.00 (2H, s), 2.49 (2H, t, J = 7.6 Hz), 2.30 (2H, q, J = 7.5 Hz), 1.66 (3H, s).【００６５】
（３）化合物１０の合成
化合物９（78 mg, 0.46 mmol）のジクロロメタン溶液（2.3 mL）に０℃でＰＰｈ３（147 mg, 0.55 mmol）、ＣＢｒ４（186 mg, 0.55 mmol）を加え、３０分撹拌した。反応液に水を加え ジクロロメタンで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥後ろ過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（n-hexane : AcOEt = 30 : 1）にて精製し、化合物１０（97 mg, quant.）を無色油状物として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（500 MHz, CDCl3）δ: 7.35 (1H, s), 7.21 (1H, s), 6.27 (1H, s), 5.63 (1H, td, J = 7.0, 1.0 Hz), 3.97 (2H, s), 2.49 (2H, t, J = 7.6 Hz), 2.29 (2H, q, J = 7.3 Hz), 1.74 (3H, s).【００６６】
（４）化合物１２の合成
化合物１０（35 mg, 0.15 mmol）と化合物１１（70 mg, 0.14 mmol）のＴＨＦ溶液（0.75 mL）に、−３０℃でｔ−ＢｕＯＫ（1.0 M in THF, 0.18 mL, 0.18 mmol）を加え、１時間撹拌した。反応液を０℃にした後飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液を加え、Ｅｔ２Ｏ で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥後ろ過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（n-hexane : AcOEt = 10 : 1）にて精製し、化合物１２（96 mg, 95%）を無色油状物として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（500 MHz, CDCl3）δ: 7.84 (2H, d, J = 8.0 Hz), 7.61 (1H, t, J = 7.0 Hz), 7.51 (2H, t, J = 7.5 Hz), 7.31 (1H, s), 7.15 (1H, s), 6.22 (1H, s), 5.41 (1H, t, J = 6.8 Hz), 5.19 (1H, t, J = 7.0 Hz), 5.05 (1H, t-like), 4.90 (1H, d, J = 10.5 Hz), 4.07 (2H, s), 3.88 (1H, td, J = 10.5, 3.0 Hz), 2.90 (1H, d, J = 13.5 Hz), 2.39 (2H, t, J = 7.8 Hz), 2.29 (1H, t, J = 12.5 Hz), 2.22-2.2.09 (4H, m), 2.00 (2H, t, J = 7.5 Hz), 1.93-1.92 (4H, s-like), 1.59 (3H, s), 1.58 (3H, s), 1.52 (3H, s), 1.15 (3H, s), 1.45-1.05 (21H, m).【００６７】
（５）化合物１３の合成
化合物１２（236 mg, 0.35 mmol）のＴＨＦ溶液（1.8 mL）に、Ｐｄ（ｄｐｐｐ）Ｃｌ２（42 mg, 0.071  mmol）を加え、０℃でＬｉＢＨＥｔ３（1.0 M in THF, 1.24 mL, 1.24 mmol）を加え３０分撹拌した。反応液に飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を加え、ＡｃＯＥｔで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥後ろ過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（n-hexane : AcOEt = 50 : 1）にて精製し、化合物１３（160 mg, 86%）を無色油状物として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（500 MHz, CDCl3）δ: 7.33 (1H, s), 7.21 (1H, s), 6.27 (1H, s). 5.42 (1H, t, J = 6.5 Hz), 5.17 (1H, t, J = 7.0 Hz), 5.12-5.09 (2H, m), 4.07 (2H, s), 2.45 (2H, t, J = 7.8 Hz), 2.24 (2H, q, J = 7.0 Hz), 2.15-1.95 (12H, m), 1.60 (9H, s), 1.59 (3H, s), 1.10-1.05 (21H, m).【００６８】
（６）化合物１４の合成
化合物１３（23 mg, 0.043 mmol）のＴＨＦ溶液（0.4 mL）に、ＴＢＡＦ（1.0 M in THF, 0.065 mL, 0.065 mmol）を加え３時間撹拌した。反応液に飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液を加え、ＡｃＯＥｔで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥後ろ過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（n-hexane : AcOEt = 8 : 1）にて精製し、化合物１４（16 mg, 99%）を無色油状物として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（500 MHz, CDCl3）δ: 7.36 (1H, s), 7.21 (1H, s), 6.28 (1H, s), 5.39 (1H, t, J = 7.0 Hz), 5.17 (1H, t, J = 6.8 Hz), 5.15-5.09 (2H, m), 4.00 (2H, s), 2.45 (2H, t, J = 7.5 Hz), 2.25 (2H, q, J = 7.5 Hz), 2.15-1.97 (12H, m), 1.67 (3H, s), 1.61 (9H, s).【００６９】
（７）化合物１５の合成
化合物１４（349 mg, 0.94 mmol）のジクロロメタン溶液（9.4 mL）に−４０℃でＥｔ３Ｎ（0.31 mL, 2.26 mmol）、ＭｓＣｌ（0.09 mL, 1.13 mmol）を順次加え、３時間撹拌した。反応液に水を加え、ＡｃＯＥｔで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥後ろ過し、減圧濃縮して化合物１５を得た。本化合物は精製せず、そのまま次の反応に用いた。
１Ｈ−ＮＭＲ（500 MHz, CDCl3）δ: 7.34 (1H, s), 7.21 (1H, s), 6.28 (1H, s), 5.59 (1H, t, J = 7.0 Hz), 5.17 (1H, t, J = 6.8 Hz), 5.11 (2H, q, J = 7.0 Hz), 4.60 (2H, s), 2.98 (3H, s), 2.45 (2H, t, J = 7.5 Hz), 2.24 (2H, q, J = 7.5 Hz), 2.16 (2H, q, J = 7.5 Hz), 2.10-1.96 (9H, m), 1.72 (3H, s), 1.60 (9H, s).【００７０】
（８）化合物１６の合成
上記生成物のＴＨＦ溶液（15 mL）にＬｉＢｒ（459 mg, 4.71 mmol）を加え室温で１時間撹拌した。反応液に飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液を加え、Ｅｔ２Ｏで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥後ろ過し、減圧濃縮して化合物１６を得た。本化合物は精製せず、そのまま次の反応に用いた。
１Ｈ−ＮＭＲ（500 MHz, CDCl3）δ: 7.34 (1H, s), 7.21 (1H, s), 6.28 (1H, s), 5.58 (1H, t, J = 7.0 Hz), 5.17 (1H, t, J = 6.8 Hz), 5.14-5.09 (2H, m), 3.97 (2H, s), 2.45 (2H, t, J = 7.5 Hz), 2.23 (2H, q, J = 7.5 Hz), 2.16-1.96 (12H, m), 1.75 (3H, s), 1.59 (9H, s).【００７１】
（９）化合物１７の合成
ｎ−ＢｕＬｉ（1.67 M in hexane, 1.13 mL, 1.88 mmol）をＴＨＦ（3.6 mL）で希釈した後、−４０℃で１−ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌ−１−ｐｒｏｐｙｎｅ（0.28 mL, 1.88 mmol）を加え、撹拌しながら１５分かけて−２０℃まで昇温した。再度−４０℃まで冷却し、上記生成物のＴＨＦ溶液（3.6 mL）をゆっくり滴下した。徐々に昇温しながら終夜撹拌した後、反応液に飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液を加え、Ｅｔ２Ｏで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥後ろ過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（n-hexane : AcOEt = 50 : 1）にて精製し、化合物１７（296 mg, 68%）を無色油状物として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（500 MHz, CDCl3）δ: 7.34 (1H, s), 7.21 (1H, s), 6.28 (1H, s), 5.18-5.09 (4H, m), 2.45 (2H, t, J = 7.5 Hz), 2.29 (2H, t, J = 7.5 Hz), 2.25 (2H, q, J = 7.5 Hz), 2.18 (2H, t, J = 7.5 Hz), 2.10-1.96 (12H, m), 1.60 (12H, s), 0.14 (9H, s).【００７２】
（１０）化合物１８の合成（ａｎａｌｏｇ−ｋ１３）
化合物１７（290 mg, 0.62 mmol）のＴＨＦ溶液（6.2 mL）に、ＴＢＡＦ（1.0 M in THF, 0.75 mL, 0.75 mmol）を加え終夜撹拌した。反応液に飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液を加え、ＡｃＯＥｔで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥後ろ過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（n-hexane : toluene = 10 : 1）にて精製し、化合物１８（244 mg, quant.）を無色油状物として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（500 MHz, CDCl3）δ: 7.33 (1H, s), 7.21 (1H, s), 6.28 (1H, s), 5.18-5.09 (4H, m), 2.45 (2H, t, J = 7.5 Hz), 2.29-2.18 (6H, m), 2.10-1.96 (12H, m), 1.94 (1H, t, J = 2.5 Hz), 1.60 (12H, s).【００７３】
（１１）化合物１９の合成
ＳｅＯ２（55 mg, 0.50 mmol）とｓａｌｉｃｙｌｉｃ ａｃｉｄ（68 mg, 0.50 mmol）のジクロロメタン溶液（1.9 mL）に、０℃で７０％ＴＢＨＰ水溶液（2.55 mL, 17.8 mmol）を加え、１０分間撹拌した後、Ｆａｒｎｅｓｙｌ ｐｈｅｎｙｌｓｕｌｆｏｎｅ（1.72 g, 4.95 mmol）のジクロロメタン溶液（1.9 mL）を０℃でゆっくり滴下し、４℃で終夜撹拌した。トルエンで希釈した後、ＡｃＯＥｔで抽出した。有機層を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液で順次洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥後ろ過し、減圧濃縮し、化合物１９を含む粗生成物を得た。
上記粗生成物のＭｅＯＨ溶液（5.0 mL）に０℃でＮａＢＨ４（105 mg, 2.48 mmol）を加え２時間撹拌した。反応液に飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液を加え、ＡｃＯＥｔで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥後ろ過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（n-hexane : AcOEt = 2 : 1）にて精製し、化合物１９（658 mg, 38%）を無色油状物として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（500 MHz, CDCl3）δ: 7.87-7.85 (2H, m), 7.63 (1H, t, J = 7.5 Hz), 7.55-7.50 (2H, m), 5.38 (1H, td, J = 7.0, 1.5 Hz), 5.19 (1H, dd, J = 8.0, 2.0 Hz), 5.06-5.04 (1H, m), 3.98 (2H, s), 3.80 (2H, d, J = 8.0 Hz), 2.14-1.96 (8H, m), 1.65 (3H, s), 1.58 (3H, s), 1.31 (3H, s), 0.87 (1H, t, J = 7.0 Hz).【００７４】
（１２）化合物１１の合成
化合物１９（622 mg, 1.72 mmol）のＤＭＦ溶液（4.3 mL）に、ｉｍｉｄａｚｏｌｅ（467 mg, 6.86 mmol）、ＴＩＰＳＣｌ（1.10 mL, 5.15 mmol）を０℃で加え、徐々に室温まで昇温しながら終夜撹拌した。反応液に飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液を加え、Ｅｔ２Ｏで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥後ろ過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（n-hexane : AcOEt = 10 : 1）にて精製し、化合物１１（841 mg, 98%）を無色油状物として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（500 MHz, CDCl3）δ: 7.87 (2H, d, J = 8.0 Hz), 7.63 (1H, t, J = 7.5 Hz), 7.53 (2H, t, J = 7.5 Hz), 5.41 (1H, t, J = 7.0 Hz), 5.19 (1H, t, J = 8.0 Hz), 5.06 (1H, brs), 4.07 (2H, s), 3.81 (2H, d, J = 8.0 Hz), 2.15-1.96 (8H, m), 1.60 (3H, s), 1.59 (3H, s), 1.32 (3H, s), 1.15-1.05 (21H).【００７５】
〔実施例４：式（ＶＩ）で示される化合物の合成〕
以下のスキームに従って、式（ＶＩ）で示される化合物（以下、「ａｎａｌｏｇ−ｆ９」と記す。）を合成した。【００７６】
【化２３】
2011138956.tif 000025
【００７７】
（１）化合物２０の合成
３−Ｔｈｉｏｐｈｅｎｅｃａｒｂｏｘａｌｄｅｈｙｄｅ（313 mg, 2.79 mmol）のジクロロメタン溶液（14 mL）に、Ｐｈ３Ｐ＝ＣＨＣＯ２Ｅｔ（1.17 g, 3.35 mmol）を加えた後、室温で２時間撹拌した。反応液を減圧濃縮した後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（n-hexane : AcOEt = 20 : 1）にて精製し、エステル体（486 mg, 95%）を無色油状物として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（500 MHz, CDCl3）δ: 7.67 (1H, d, J = 15.9 Hz), 7.49 (1H, dd, J = 2.7, 0.7 Hz), 7.32 (1H, dd, J = 5.1, 2.9 Hz), 7.27 (1H, dd, J = 5.1, 1.1 Hz), 6.26 (1H, d, J = 15.9 Hz), 4.25 (2H, q, J = 7.1 Hz), 1.33 (3H, t, J = 7.1 Hz).【００７８】
エステル体（467 mg, 2.56 mmol）のジクロロメタン溶液（13 mL）に０℃でＤＩＢＡＨ（1.0 M in n-hexane, 6.41 mL, 6.41 mmol）を加え、３０分撹拌した。反応液に５％ＨＣｌ を加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥後ろ過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（n-hexane : AcOEt = 2 : 1）にて精製し、アルコール体（351 mg, 98%）を無色油状物として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（500 MHz, CDCl3）δ: 7.21-7.19 (1H, m), 7.14 (1H, dd, J = 5.2, 1.5 Hz), 7.09 (1H, d, J = 3.1 Hz), 6.55 (1H, d, J = 15.2 Hz), 6.15 (1H, dt, J = 15.5, 5.8 Hz), (1H, m), 4.22 (2H, t, J = 5.2 Hz), 1.38 (1H, brs).【００７９】
アルコール体（328 mg, 2.34 mmol）のＥｔＯＨ溶液（12 mL）に、室温でＰｄ／Ｃ（49.8 mg）を加え、Ｈ２雰囲気下で４時間撹拌した。反応液をセライトろ過し、減圧濃縮することで、化合物２０（336 mg, quant.）を無色油状物として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（500 MHz, CDCl3）δ: 7.24 (1H, t, J = 4.0 Hz), 6.94 (2H, m), 3.67 (2H, t, J = 6.4 Hz), 2.72 (2H, t, J = 7.6 Hz), 1.90-1.87 (2H, m), 1.25 (1H, brs).【００８０】
（２）化合物２１の合成
セライト（2.47 g）とＰＣＣ（2.47 g, 11.5 mmol）のジクロロメタン溶液（19 mL）に、室温で化合物２０（1.36 g, 9.57 mmol）を滴下した後、１０時間撹拌した。反応液にエーテルを加えた後ＳｉＯ２ろ過し減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（n-hexane : Et2O = 8 : 1）にて精製し、化合物２１（900 mg, 67%）を無色油状物として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（500 MHz, CDCl3）δ: 9.81 (1H, d, J = 1.2 Hz), 7.25 (1H, dd, J = 4.9, 3.1 Hz), 6.97 (1H, dd, J = 3.1, 1.2 Hz), 6.94 (1H, dd, J = 4.9, 1.2 Hz), 2.97 (2H, t, J = 7.6 Hz), 2.77 (2H, td, J = 7.3, 1.4 Hz).【００８１】
（３）化合物２２の合成
化合物２１（164 mg, 1.17 mmol）のジクロロメタン溶液（1.17 mL）に、Ｐｈ３Ｐ＝Ｃ（Ｍｅ）ＣＯ２Ｅｔ（637 mg, 1.76 mmol）を加えた後、室温で３０分撹拌した。反応液を減圧濃縮した後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（n-hexane : AcOEt = 20 : 1）にて精製し、化合物２２（233 mg, 89%）を無色油状物として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（500 MHz, CDCl3）δ: 7.24 (1H, dd, J = 4.8, 3.0 Hz), 6.93 (2H, m), 6.79-6.75 (1H, m), 4.17 (2H, q, J = 7.1 Hz), 2.76 (2H, t, J = 7.6 Hz), 2.48 (2H, q, J = 7.5 Hz), 1.78 (3H, s), 1.27 (3H, t, J = 7.0 Hz).【００８２】
（４）化合物２３の合成
化合物２２（233 mg, 1.04 mmol）のジクロロメタン溶液（5.2 mL）に０℃でＤＩＢＡＨ（1.0 M in n-hexane, 2.60 mL, 2.60 mmol）を加え、２０分撹拌した。反応液に５%ＨＣｌを加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥後ろ過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（n-hexane : AcOEt = 3 : 1）にて精製し、化合物２３（175 mg, 92%）を無色油状物として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（500 MHz, CDCl3）δ: 7.22 (1H, dd, J = 4.9, 3.1 Hz), 6.93 (2H, m), 5.44 (1H, td, J = 7.2, 1.4 Hz), 3.98 (2H, s), 2.68 (2H, t, J = 7.9 Hz), 2.35 (2H, q, J = 7.5 Hz), 1.62 (3H, s), 1.22 (1H, brs).【００８３】
（５）化合物２４の合成
化合物２３（173 mg, 0.95 mmol）のジクロロメタン溶液（4.7 mL）に０℃でＰＰｈ３（323 mg, 1.23 mmol）、ＣＢｒ４（409 mg, 1.23 mmol）を加え、１５分撹拌した。反応液に水を加えジクロロメタンで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥後ろ過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（n-hexane : AcOEt = 30 : 1）にて精製し、化合物２４（208 mg, 89%）を無色油状物として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（500 MHz, CDCl3）δ: 7.26 (1H, t, J = 4.0 Hz), 6.95 (2H, m), 5.65 (1H, t, J = 7.0 Hz), 3.98 (2H, s), 2.72 (2H, t, J = 7.3 Hz), 2.37 (2H, q, J = 7.3 Hz), 1.74 (3H, s).【００８４】
（６）化合物２５の合成
化合物２４（99 mg, 0.40 mmol）とｇｅｒａｎｙｌｇｅｒａｎｙｌ ｐｈｅｎｙｌｓｕｌｆｏｎｅ（153 mg, 0.37 mmol）のＴＨＦ溶液（1.8 mL）に、−４０℃で、ｔ−ＢｕＯＫ（1 0 M in THF, 0.44 mL, 0.44 mmol）を加え、３０分撹拌した。反応液を０℃にした後、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液を加え、ＡｃＯＥｔで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥後ろ過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（n- hexane : AcOEt = 10 : 1）にて精製し、化合物２５（162 mg, 76%）を無色油状物として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（500 MHz, CDCl3）δ: 7.84 (2H, d, J = 7.0 Hz), 7.61 (1H, t, J = 7.3 Hz), 7.51 (2H, t, J = 7.6 Hz), 7.21 (1H, dd, J = 5.0, 3.0 Hz), 6.89-6.88 (2H, m), 5.20 (1H, t, J = 7.0 Hz), 5.10-5.02 (3H, m), 4.91 (1H, d, J = 10.0 Hz), 3.88 (1H, td, J = 10.7, 2.9 Hz), 2.89 (1H, d, J = 12.8 Hz), 2.60 (2H, t, J = 7.6 Hz), 2.30-2.26 (3H, m), 2.09-1.90 (12H, m), 1.68 (3H, s), 1.60 (3H, s), 1.59 (3H, s), 1.58 (3H, s), 1.50 (3H, s), 1.15 (3H, s).【００８５】
（７）化合物２６（ａｎａｌｏｇ−ｆ９）の合成
化合物２５（166 mg, 0.29 mmol）のＴＨＦ溶液（1.44 mL）に、Ｐｄ（ｄｐｐｐ）Ｃｌ２（34 mg, 0.057 mmol）を加え、０℃でＬｉＢＨＥｔ３（1.0 M in THF, 1.0 mL, 1.0 mmol）を加え２０分撹拌した。反応液に飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液を加え、ＡｃＯＥｔで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥後ろ過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（n- hexane : AcOEt = 20 : 1）にて精製し、化合物２６（110 mg, 87%）を無色油状物として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（500 MHz, CDCl3）δ: 7.23 (1H, dd, J = 4.9, 3.1 Hz), 6.95 (1H, dd, J = 4.9, 1.2 Hz), 6.93 (1H, dd, J = 3.1, 1.1 Hz), 5.18 (1H, td, J = 6.9, 1.0 Hz), 5.13-5.09 (4H, m), 2.66 (2H, t, J = 7.6 Hz), 2.31 (2H, q, J = 7.5 Hz), 2.10-1.96 (16H, m), 1.68 (3H, s), 1.61 (12H, s), 1.58 (3H, s).【００８６】
〔実施例５：低酸素環境選択的癌細胞増殖阻害活性の評価（１）〕
式（ＩＩ）で示されるａｎａｌｏｇ−ｋ５および式（ＩＩＩ）で示されるａｎａｌｏｇ−ｋ６を被験化合物とし、対照化合物にｆｕｒｏｓｐｉｎｏｓｕｌｉｎ−１を用いた。被験化合物および対照化合物は、ＥｔＯＨに溶解し、所定の濃度に調製した。細胞には、ヒト前立腺癌ＤＵ１４５細胞を使用した。なお、ａｎａｌｏｇ−ｋ６は、実施例１のａｎａｌｏｇ−ｋ５の合成方法において、３−Ｂｒｏｍｏｆｕｒａｎを３−Ｂｒｏｍｏｔｈｉｏｐｈｅｎｅに変更して合成し、取得した。【００８７】
ＤＵ１４５細胞浮遊液２００μＬ（1×104 cells / well）を９６穴マルチウェルプレートに分注し、５％ＣＯ２、３７℃の条件下で４時間前培養した。その後、マルチウェルプレートを低酸素培養チャンバー（三菱ガス化学株式会社）に入れ、チャンバー内を１％Ｏ２、５％ＣＯ２、９４％Ｎ２（低酸素条件）に設定し、１２時間培養した。ここに被験化合物のＥｔＯＨ溶液を２μＬ添加し、さらに２４時間低酸素条件下で培養した。２４時間後、２００μｇ／ｍＬに調製したＭＴＴ（3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide）試薬５０μＬを添加し、３時間、５％ＣＯ２、３７℃の条件下で培養した。次に培地を除去し、ＤＭＳＯ２００μＬを加えることにより、生成したＭＴＴ ｆｏｒｍａｚａｎを抽出した。その色素量を比色定量法（OD 560 nm）によって定量し、増殖阻害率を算出した。【００８８】
一方、通常酸素環境における被験化合物の増殖阻害活性を測定する場合は、ＤＵ１４５細胞浮遊液２００μＬ（1×104 cells / well）を９６穴マルチウェルプレートに分注し、５％ＣＯ２、３７℃の条件下で１２時間培養した。ここに被験化合物のＥｔＯＨ溶液を２μＬ添加し、さらに２４時間同条件下で培養した。２４時間培養後、低酸素条件での操作と同様にＭＴＴ試薬を添加し、増殖阻害率を算出した。【００８９】
結果を図１、図２および図３に示した。図１はａｎａｌｏｇ−ｋ５の結果、図２はａｎａｌｏｇ−ｋ６の結果、図３はｆｕｒｏｓｐｉｎｏｓｕｌｉｎ−１の結果である。図３から、対照化合物のｆｕｒｏｓｐｉｎｏｓｕｌｉｎ−１は、３００μＭ以下では低酸素環境選択的に細胞増殖阻害活性を示したが、１０００μＭでは通常酸素環境の細胞に対しても増殖阻害活性を示した。すなわち、ｆｕｒｏｓｐｉｎｏｓｕｌｉｎ−１は、高濃度における細胞増殖抑制活性は低酸素環境選択的でないことが明らかとなった。一方、図１および図２から明らかなように、ａｎａｌｏｇ−ｋ５およびａｎａｌｏｇ−ｋ６は、１０００μＭにおいても低酸素環境選択的な細胞増殖阻害活性を示した。
この結果から、ａｎａｌｏｇ−ｋ５およびａｎａｌｏｇ−ｋ６は、高用量における通常酸素環境下の細胞増殖阻害活性が低く、ｆｕｒｏｓｐｉｎｏｓｕｌｉｎ−１と比較して、高用量における副作用が小さいことが示唆された。【００９０】
〔実施例６：癌細胞移植モデルマウスでの抗腫瘍活性の評価（１）〕
被験化合物のａｎａｌｏｇ−ｋ５は、１％ＣＭＣを用いて所定の濃度に調製した。コントロール群には溶媒（１％ＣＭＣ）を投与した。【００９１】
マウス肉腫Ｓ１８０細胞を無血清のＲＰＭＩ培地で１×１０７ｃｅｌｌｓ／ｍＬの密度に調製し、氷上で保存した。次に、細胞浮遊液１００μＬ（１×１０６ｃｅｌｌｓ）をｄｄＹ雌性マウス（５週齢、６匹／群）の腹側部皮下に２３Ｇの注射針を用いて移植した。１週間飼育を行うことによりＳ１８０細胞を生着させた後、各用量（１０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ）の被験化合物または溶媒（１％ＣＭＣ）を２日に１回、計７回の投与スケジュールで経口投与した。抗腫瘍活性は、最終投与の１日後に腫瘍を摘出して重量を計測し、コントロール群と比較することにより評価した。有意差検定はＤｕｎｎｅｔｔ’ｓ法により行い、有意水準を５％以下とした。【００９２】
結果を図４（ａ）および（ｂ）に示した。（ａ）は各群の腫瘍重量を示すグラフであり、（ｂ）は摘出した腫瘍の写真である。図４（ａ）および（ｂ）から明らかなように、ａｎａｌｏｇ−ｋ５投与群の腫瘍重量は、コントロール群に対して１０ｍｇ／ｋｇ投与群で７０％、２５ｍｇ／ｋｇ投与群で４１％、５０ｍｇ／ｋｇ投与で２８％に減少し、顕著な抗腫瘍活性を示した。また、いずれの投与群においてもマウスの体重減少や下痢、目視での臓器の異常は観察されなかった。【００９３】
〔実施例７：低酸素環境選択的癌細胞増殖阻害活性の評価（２）〕
式（ＶＩ）で示されるａｎａｌｏｇ−ｆ９および式（ＣＩ）で示されるａｎａｌｏｇ−ｋ１３を被験化合物とし、実施例５に記載の方法と同様の方法で低酸素環境選択的癌細胞増殖阻害活性を評価した。【００９４】
結果を図５および図６に示した。図５はａｎａｌｏｇ−ｆ９の結果、図６はａｎａｌｏｇ−ｋ１３の結果である。なお、対照化合物として用いたｆｕｒｏｓｐｉｎｏｓｕｌｉｎ−１の結果は図３と同様であったので、ここでは示していない。図５および図６から明らかなように、ａｎａｌｏｇ−ｆ９およびａｎａｌｏｇ−ｋ１３は、いずれも１０００μＭにおいても低酸素環境選択的な細胞増殖阻害活性を示した。したがって、ａｎａｌｏｇ−ｆ９およびａｎａｌｏｇ−ｋ１３は、高用量における通常酸素環境下の細胞増殖阻害活性が低く、ｆｕｒｏｓｐｉｎｏｓｕｌｉｎ−１と比較して、高用量における副作用が小さいことが示唆された。また、図５からａｎａｌｏｇ−ｆ９は、１００μＭ以下において通常酸素環境における細胞増殖阻害活性が顕著に低いこと、特に１０μＭ以下では通常酸素環境においてほとんど細胞増殖を阻害しないことが示された。したがって、ａｎａｌｏｇ−ｆ９は、低用量においてほとんど副作用を示さないことが示唆された。また、図６からａｎａｌｏｇ−ｋ１３は、測定した全ての濃度範囲で、ｆｕｒｏｓｐｉｎｏｓｕｌｉｎ−１よりも強力な低酸素環境選択的な細胞増殖阻害を示した。したがって、ａｎａｌｏｇ−ｋ１３は、ｆｕｒｏｓｐｉｎｏｓｕｌｉｎ−１よりも低用量で、強力な効果を示すことが示唆された。【００９５】
〔実施例８：癌細胞移植モデルマウスでの抗腫瘍活性の評価（２）〕
式（ＶＩ）で示されるａｎａｌｏｇ−ｆ９および式（ＣＩ）で示されるａｎａｌｏｇ−ｋ１３を被験化合物とし、実施例６に記載の方法と同様の方法で癌細胞移植モデルマウスでの抗腫瘍活性を評価した。ただし、１群の匹数を４匹に変更し、被験化合物の用量を、３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇに変更した。【００９６】
ａｎａｌｏｇ−ｆ９の結果を図７（ａ）および（ｂ）に示した。また、ａｎａｌｏｇ−ｋ１３の結果を図８（ａ）および（ｂ）に示した。いずれも（ａ）は各群の腫瘍重量を示すグラフであり、（ｂ）は摘出した腫瘍の写真である。図７（ａ）および（ｂ）から明らかなように、ａｎａｌｏｇ−ｆ９投与群の腫瘍重量は、コントロール群に対して１０ｍｇ／ｋｇ投与群で２９％、２５ｍｇ／ｋｇ投与群で１８％に減少し、顕著な抗腫瘍活性を示した。また、図８（ａ）および（ｂ）から明らかなように、ａｎａｌｏｇ−ｋ１３投与群の腫瘍重量は、コントロール群に対して３ｍｇ／ｋｇ投与で７０％、１０ｍｇ／ｋｇ投与群で４１％、２５ｍｇ／ｋｇ投与群で２８％に減少し、顕著な抗腫瘍活性を示した。いずれの被験物質投与群においてもマウスの体重減少や下痢、目視での臓器の異常は観察されなかった。【００９７】
なお本発明は上述した各実施形態および実施例に限定されるものではなく、請求項に示した範囲で種々の変更が可能であり、異なる実施形態にそれぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。また、本明細書中に記載された学術文献および特許文献の全てが、本明細書中において参考として援用される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４（ａ）】
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【図５】
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【図６】
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【図７（ａ）】
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【図８（ａ）】
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【図４（ｂ）】
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【図７（ｂ）】
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【図８（ｂ）】
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【国際調査報告】
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