(57)【要約】  金コロイドやAuコアPtシェル型の複合コロイドよりも視認性が高く一層高感度で、免疫学的測定のような検査用標識剤等として好適な金属コロイドの提供。  金塩及び白金塩を、アミノ酸及びその誘導体、オリゴペプチド及びその誘導体並びにアミノ糖から選択される１種以上の還元剤と共にアルカリの存在下混合し、前記金塩及び白金塩を還元することにより形成される合金型Au/Pt複合コロイド。【特許請求の範囲】
【請求項１】
金塩及び白金塩を、アミノ酸及びその誘導体、オリゴペプチド及びその誘導体並びにアミノ糖から選択される１種以上の還元剤と共にアルカリの存在下混合し、前記金塩及び白金塩を還元することにより形成される合金型Au/Pt複合コロイド。
【請求項２】
金塩及び白金塩を、Pt量がAu量の7〜25％となるように使用する請求項１記載の合金型Au/Pt複合コロイド。
【請求項３】
請求項１又は２に記載の合金型Au/Pt複合コロイドを含有する免疫学的測定用標識剤。
【請求項４】
請求項１又は２に記載の合金型Au/Pt複合コロイドによって標識された抗体又は抗原。
【請求項５】
金塩及び白金塩を、アミノ酸及びその誘導体、オリゴペプチド及びその誘導体並びにアミノ糖から選択される１種以上の還元剤と共にアルカリの存在下混合し、前記金塩及び白金塩を還元することを特徴とする合金型Au/Pt複合コロイドの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、検査用標識剤等として好適な合金型金属コロイド及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
検査薬の開発では、臨床目的に応じて定量系試薬と定性系試薬が作り分けられている。インフルエンザウイルスのような感染症抗原の検出や心筋マーカー等ではPOCT検査として迅速診断に重きを置かれており、短時間に簡易な抗原検出が可能なイムノクロマト法が採用される。【０００３】
イムノクロマト法においては、目視検出に使用可能な抗体標識用の着色プローブとして、着色ラテックス、金属コロイド、酵素標識等が用いられるが、このうち金属コロイドは比較的扱いが簡単であり、またラテックス粒子に比し目視の強度が高いことから、最も一般的に使用されている。【０００４】
金属コロイドの中でも汎用されているのはクエン酸で還元した金（Au）コロイドである。しかし、金コロイド標識を用いたイムノクロマト法の感度は必ずしも十分なものとは云えない。また、金コロイドは赤〜赤紫色しか存在しないためラテックスのような２色判定は不可能であるという問題もある。【０００５】
他の金属コロイドとして、白金（Pt）コロイドがあり、このコロイドは黒色を呈することが知られている。イムノクロマト法に用いられているニトロセルロースメンブランが白色であることから、黒色のコロイドを用いることができれば白と黒の高いコントラスト差によって視認性の向上、ひいては高感度化が期待されている。【０００６】
従来、白金コロイドの合成は、クエン酸で還元したものや、より強い還元剤を用いる高分子保護のものの他、近年では、低分子保護のものも報告されている（特許文献１、特許文献２）。しかしながら、いずれの合成法によっても製造された白金コロイドの粒子径は小さいため、同じ粒子数では粒子径の大きな金コロイドに比べて視認性が低く、実用性に欠ける。【０００７】
粒子径が大きい白金コロイドについては、金コロイドを核（コア）としてその表面に白金が殻（シェル）として担持されているAuコアPtシェル型の構造をはじめ、PtコアAuシェル型、AuとPtが一体となった合金型等の構造をとる複合コロイドが報告されている（非特許文献１〜７）。
また、AuコアPtシェル型の複合コロイドをイムノクロマト法に用いることで測定法の感度が上昇することも報告されているが（特許文献３）、その感度は十分なものとは云えない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２００２-２３９３７２号公報
【特許文献２】国際公開第２００５/０２３４６８号パンフレット
【特許文献３】特許第３８８６０００号公報
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】R.S.Minor et.al., 7th International Congress on cata1ysis. E1sevier S.P.Co.1981.
【非特許文献２】P.A. Sermon et.al., Angew. Chem. Int. Ed. Eng1.26(1987) No.9.
【非特許文献３】P.A. Sermon et.al., Mat. Res. Soc. Symp. Proc. Vol.1988 Materials Reserch Society.
【非特許文献４】G.Schmid et.al., Angew. Chem. Int. Ed. Eng1.30(1991) No.7.
【非特許文献５】T.Yonezawa et.al., J. Mo1ecu1ar Cata1yis 83(1993) 167.
【非特許文献６】T.Yonezawa et.al., J.C.S. Faraday Trans.,1995,91(22),4111.
【非特許文献７】A.Henglein J. Phys. Chem. B2000,104,2201.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、金コロイドやAuコアPtシェル型の複合コロイドよりも視認性が高く一層高感度で、免疫学的測定のような検査用標識剤等として好適な金属コロイドを提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、視認性に優れるAu/Pt複合コロイドについて種々検討した結果、コアとなるコロイドを作らず、あらかじめ金塩と白金塩を、還元剤としてアミノ酸やペプチド等を用いて混合し、コロイドを作製した場合に、安定した合金型のAu/Pt複合コロイド粒子が得られ、当該コロイドは視認性が高く、免疫学的測定用標識剤として使用した場合に、信号強度が高く一層高感度な測定が可能となることを見出した。【００１２】
すなわち、本発明は、以下の１）〜４）に係るものである。
１）金塩及び白金塩を、アミノ酸及びその誘導体、オリゴペプチド及びその誘導体並びにアミノ糖から選択される１種以上の還元剤と共にアルカリの存在下混合し、前記金塩及び白金塩を還元することにより形成される合金型Au/Pt複合コロイド。
２）金塩及び白金塩を、Pt量がAu量の7〜25%となるように使用する１）の合金型Au/Pt複合コロイド。
３）上記１）又は２）の合金型Au/Pt複合コロイドを含有する免疫学的測定用標識剤。
４）上記１）又は２）の合金型Au/Pt複合コロイドによって標識された抗体又は抗原。
５）金塩及び白金塩を、アミノ酸及びその誘導体、オリゴペプチド及びその誘導体並びにアミノ糖から選択される１種以上の還元剤と共にアルカリの存在下混合し、前記金塩及び白金塩を還元することを特徴とする合金型Au/Pt複合コロイドの製造方法。
【発明の効果】
【００１３】
本発明の合金型Au/Pt複合コロイドは、金コロイドやAuコアPtシェル型の複合コロイドよりも視認性が高く一層高感度で、免疫学的測定のような検査用標識剤等として極めて有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】合金型Au/Pt複合コロイドの電子顕微鏡写真（20万倍、1目盛り8nm）。
【図２】合金型Au/Pt複合コロイドを用いたイムノクロマト法の測定結果(判定部分の写真)。C:コントロールライン、T:テストライン
【図３】Pt量を変えて合成した合金型Au/Pt複合コロイドを用いたイムノクロマト法の測定結果（判定部分の写真）。C:コントロールライン、T:テストライン
【図４】Pt量を変えて合成した合金型Au/Pt複合コロイドを用いたイムノクロマト法の測定結果（テストラインの信号強度）。
【図５】Pt量を変えて合成した合金型Au/Pt複合コロイドを用いたイムノクロマト法の測定結果（色調）。
【図６】AuコアPtシェル型Au/Pt複合コロイドを用いたイムノクロマト法の測定結果(判定部分の写真)。C:コントロールライン、T:テストライン
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明において用いられる、「金塩」としては、塩化金酸、シアン化第２金カリウム、シアン化金カリウム、テトラアンミン金硝酸塩、テトラニトラト金アンモニウム塩、ジアクア（１，１０−フェナントロリン）金硝酸塩等が挙げられ、このうち、塩化金酸、が好ましい。
また、「白金塩」としては、ヘキサクロロ白金酸、ジニトロジアンミン白金、ジニトロジアンミン白金硝酸塩、シス−ジアンミンジアクア白金硝酸塩、トランス−ジアンミンジアクア白金硝酸塩、テトラニトロ白金酸、テトラ（オキサラト）白金酸、シスジニトロジアクア白金、テトラアンミン白金水酸塩、ヘキサアンミン白金水酸塩、テトラアンミン白金塩化物、ヘキサアンミン白金塩化物、ヘキサヒドロキシ白金酸、酸化白金、塩化第１白金、塩化第２白金、テトラクロロ白金酸カリウム等が挙げられ、このうち、テトラクロロ白金酸カリウム、ヘキサクロロ白金酸等が好ましい。
【００１６】
本発明における還元剤は、アミノ酸、オリゴペプチド、アミノ糖等であり、通常の環境では還元特性はないが、アルカリ環境下においては金イオン及び白金イオンを還元する還元特性を示すものである。
【００１７】
アミノ酸としては、例えばグリシン、アラニン、セリン、バリン、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、イソロイシン、ロイシン、リジン、アルギニン、システイン、メチオニン、プロリン、トレオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、アルギニン、ヒスチジン等のα−アミノ酸が挙げられ、その誘導体としては、カルボン酸エステル誘導体（例えばメチルエステル、エチルエステル等）や、カルボン酸アミド誘導体を挙げることができる。
【００１８】
オリゴペプチドとしては、グリシルグリシン、グリシルアラニン、アラニルアラニン等のジペプチドや、グリシルグリシルグリシン、グリシルグリシルアラニン等のトリペプチドが挙げられるが、他のアミノ酸を含むオリゴペプチドでもよい。それらの誘導体としては、カルボン酸エステル誘導体（例えばメチルエステル、エチルエステル等）や、カルボン酸アミド誘導体を挙げることができる。例えば、ジペプチド残基のエステル誘導体としては、アスパルテーム（N-(L-α-アスパルチル)-L-フェニルアラニン 1-メチルエステル）等を例示できる。
【００１９】
アミノ糖としては、例えば、グルコサミン、Ｎ−アセチルグルコサミン、ガラクトサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン等が挙げられる。
【００２０】
これらの還元剤のうち、好適なものとして、グリシン、アラニン等のアミノ酸、グリシルグリシン等のオリゴペプチドが挙げられる。
当該還元剤は、アミノ酸、その誘導体、オリゴペプチド、その誘導体、及びアミノ糖をそれぞれ単独で用いる他、複数を組み合わせて用いてもよい。
尚、本発明において還元剤として用いるアミノ酸、オリゴペプチド、アミノ糖等は、これが合金型Au/Pt複合粒子を取り囲み、保護成分としても機能する。従って、本発明のコロイドは、別途保護成分を添加しなくても、形成された合金型Au/Pt複合粒子が沈降せずに分散してコロイドとして安定に存在可能である。但し、より沈降しづらくするために、メチオニンやシステインなどの硫黄を含有するアミノ酸やゼラチンコロイドを添加してもよい。
【００２１】
アルカリとしては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリ金属の水酸化物、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム等のアルカリ金属の炭酸塩、水酸化マグネシウム、水酸化カルシウム等のアルカリ土類金属の水酸化物、炭酸マグネシウム、炭酸カルシウム等のアルカリ土類金属の炭酸塩、ヒドラジン、ヒドロキシルアミン、アンモニア等が挙げられ、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリ金属の水酸化物が好ましい。
【００２２】
以下に、本発明の合金型Au/Pt複合コロイドの調製について具体的に説明する。
１）合金型Au/Pt複合粒子（コロイド）の形成
溶媒に、金塩、白金塩、および還元剤をアルカリの存在下混合し、反応させることにより、合金型のAu/Pt複合粒子（コロイド）を得ることができる。
ここで、用いられる溶媒は、通常、水が用いられるが、超純水や、イオン交換水を数回蒸留したものを使用することもできる。
尚、金塩、白金塩、還元剤の添加方法は特に限定されないが、例えば、溶媒に金塩を加え、次いで還元剤を添加し、次いで白金塩を加える方法が挙げられる。
【００２３】
金塩の添加量は、溶媒全量に対して、好ましくは0.01〜0.4w/v%、より好ましくは0.05〜0.09w/v%とするのが望ましい。
また、生成されたAu/Pt複合コロイドの視認性、特にイムノクロマト用の標識物（着色粒子）として使用する場合、その信号強度（検出感度）を高める観点から、金塩及び白金塩の添加量は、Pt量がAu量の7〜25%、より好ましくは12〜18%となるように添加するのが望ましい。
【００２４】
還元剤の添加量は、その種類によっても異なるが、金塩及び白金塩の1モルに対して、１〜12モルが好ましく、更に4〜6モルが好ましい。
【００２５】
アルカリは、溶液中における濃度が、通常5mmol/L〜30mmol/L、好ましくは12mmol/L〜14mmol/Lとなる範囲で使用するのが好ましく、また溶液のｐHが10以上、好ましくは11〜12となるように添加するのがよい。
【００２６】
反応は、通常90〜98℃、好ましくは93〜97℃で、10〜60分、好ましくは、20〜45分、攪拌下に行えばよいが、40〜65℃で、5〜20分反応後、さらに温度を上げて（93〜98℃）、20〜60分間反応させるのが好ましい。
斯かる反応により、合金型Au/Pt複合粒子（コロイド）が得られる。
【００２７】
２）未反応物及び脱塩処理
次いで、得られた合金型Au/Pt複合粒子（コロイド）から未反応物や塩を低減するための処理が行われる。
斯かる処理としては、例えば、（１）遠心分離器を用いた限外濾過（フィルターは分子量30000のものを用い、2000〜5000ｒｐｍにて30分遠心する）を行った後、適宜水を加える、（２）浸透膜を用いる、（３）超遠心分離器で分離（6000ｒｐｍ、10分）し、適宜水を加える、等が挙げられる。
【００２８】
３）中和処理
続いて、必要に応じて、溶液のｐＨが７〜９となるように中和処理が行われる。
当該中和処理は、例えば、コロイド溶液を遠心分離して沈降物と上澄みに分離し、上澄みを除去して沈降物を取り出し、水で薄め、ｐＨが6以下とならないように中和する。このとき加える水の量でコロイドの濃度を調節でき、容易に高濃度にできる。
【００２９】
斯くして得られたコロイドは、黒色に近い黒紫色を呈し、粒子が沈降せずに分散して安定的に存在する、いわゆる分散コロイドである。当該コロイドは、電子顕微鏡による観察では、AuコアPtシェル型ではなくAuとPtが一体となった滑らかな合金型（homogeneous alloy）のAu/Pt複合コロイドであり（図１参照、1目盛り8nm）、Au/Pt複合粒子の平均粒子径は、２０ｎｍ〜１００ｎｍである。尚、平均粒子径は、例えば透過型電子顕微鏡写真（ＴＥＭ）を撮影し、１００個の粒子について粒子径を測定し、その平均値として求めることができる。
従って、当該合金型Au/Pt複合コロイドは、イムノクロマト法やその他の各種免疫学的測定法に用いられる標識剤（可視プローブ）として好適に使用できる。
【００３０】
本発明の合金型Au/Pt複合コロイドを用いた抗原、抗体等のタンパク質の標識は、常法に行うことができる。例えば、合金型Au/Pt複合コロイドに抗体を混合し、20分〜24時間攪拌してコロイドに抗体を結合させた後、カゼイン溶液やBSA等を添加してコロイド表面をブロックする。次いで、遠心分離を行って上清を取り除いた後、カゼインを含む緩衝液に懸濁して合金型Au/Pt複合コロイド標識抗体を得ることができる。
【実施例】
【００３１】
実施例１  合金型Au/Pt複合コロイドの合成
253.2mlの水に１％(w/v)塩化金酸18mlを加え、次いで還元剤として１％(w/v)グリシンを18ml、0.5NのKOH8.1mlさらに１％(w/v)塩化白金酸（II）カリウム2.70mL（Pt量15%）を加えた後、50℃の温度で15分間反応させた。さらに98℃の水浴に移して30分間反応させた。300mlの水を加えた後、限外ろ過を行って100mlに濃縮したものをAu/Pt複合コロイドとした。
この方法で得られたコロイドは、黒色に近い黒紫色を呈し、電子顕微鏡による観察ではAuコアPtシェル型ではなくAuとPtが一体となった滑らかな合金型（homogeneous alloy）のAu/Pt複合コロイドであった。電子顕微鏡写真を図１に示す。【００３２】
実施例２  標識抗体の作製
得られた合金型Au/Pt複合コロイド1mL（OD520=10）に抗ヒトIgGヤギ抗体を20μg混合し、室温で約6時間攪拌してコロイドに抗体を結合させた。終濃度が1%となるようにカゼイン溶液を添加し、室温にて一夜攪拌してコロイド表面をブロックした。4500g、4℃で10分間遠心分離を行って回収し、1%カゼインを含む緩衝液に懸濁して合金型Au/Pt複合コロイド標識抗体を作製した。【００３３】
試験例１  イムノクロマト法による測定
実施例２で作製した合金型Au/Pt複合コロイド標識抗体を用いて、下記に示すイムノクロマト法での測定を行って当該コロイドの可視プローブとしての性能を評価した。
１）評価に用いるイムノクロマト法として検体中の抗ヘリコバクター・ピロリ抗体を検出する測定系を利用した。このイムノクロマト法は、ヘリコバクター・ピロリ菌体から抽出した抗原を固相化したニトロセルロースメンブランからなるイムノクロマト用テストストリップに検体を反応させ、メンブラン上の抗原に結合した抗ヘリコバクター・ピロリ抗体をコロイド標識抗ヒトIgG抗体によって検出するものである。材料の調製法及び測定法を下記に示す。【００３４】
２）抗原固相化メンブランの作製
ニトロセルロースメンブランにヘリコバクター・ピロリ菌体から抽出した抗原を1cm当り3μgの量でライン状に塗布した。同時に抗ヒトIgGヤギ抗体を適量ライン状に塗布した。塗布後37℃で2時間以上乾燥させた後、非特異的な吸着を防ぐためにスキムミルクを含んだ緩衝液にメンブランを浸してブロッキングを行った。その後、十分に乾燥させて抗原固相化メンブランとした。【００３５】
３）イムノクロマト用テストストリップの作製
グラスファイバー等からなるサンプルパッド、セルロース等からなる吸収パッドを２）で作製した抗原固相化メンブランに貼り付けた。サンプルパッドは測定検体と接触して抗原固相化メンブラン部分に測定検体を供給する部分として、吸収パッドはメンブラン上に展開する測定検体を吸い上げるために使用する。パッド類を貼り付けたメンブランを4mm幅にカットしてイムノクロマト用テストストリップとした。【００３６】
４）測定方法
ヘリコバクター・ピロリ陽性者から採取した血清を緩衝液で希釈した陽性管理試料を抗ヘリコバクター・ピロリ抗体陽性検体として、ヘリコバクター・ピロリ陽性者から採取した尿を抗ヘリコバクター・ピロリ抗体弱陽性検体として測定に用いた。加えてヘリコバクター・ピロリ陰性者から採取した尿を抗ヘリコバクター・ピロリ抗体陰性検体として用いた。測定及び判定手順を下記に示す。
ｉ）各検体を測定用緩衝液で希釈して測定容器に滴下する。
ii）各々の合金型Au/Pt複合コロイド標識抗体を測定容器に加えて混合する。
iii）測定容器にイムノクロマト用テストストリップを差し込んで室温で15分間静置する。
iv）15分後に目視によって有色ライン出現の有無を確認する。
なお、テストストリップ上のヘリコバクター・ピロリ抽出抗原を塗布した部分をテストライン部分、抗ヒトIgG抗体を塗布した部分をコントロールライン部分とし、テストライン部分とコントロールライン部分の両方に有色ラインが出現した場合を陽性と判定する。出現する有色ラインがコントロールライン部分のみであった場合は陰性と判定する。【００３７】
５）測定結果
測定結果を図２に示す。
図２より、コントラスト、信号強度ともに良好であり、イムノクロマトに適した高性能なコロイドであることが判った。本発明の方法により調製された合金型Au/Pt複合コロイドは、イムノクロマト法の高性能な可視プローブとして使用可能であることが分かる。【００３８】
実施例３
塩化金酸と混合するPt量を10%、12%、13%、15%、18%、20%としてAu/Pt複合コロイドを合成した。253.2mlの水に１％(w/v)塩化金酸18mlと１％(w/v)塩化白金酸(II)カリウムの量をそれぞれ1.80mL（Pt量10%）、2.70mL（Pt量15%）、2.16mL（Pt量12%）、2.34mL（Pt量13%）、2.70mL（Pt量15%）、3.24mL（Pt量18%）、3.60mL（Pt量20%）を加えた。次に0.5NのKOH8.1mlと還元剤として１％(w/v)グリシンを18ml添加した後、50℃の温度で15分間反応させた。さらに98℃の水浴に移して30分間反応させた。300mlの水を加えた後、限外ろ過を行って100mlに濃縮したものを、それぞれPt量が10%、12%、13%、15%、18%、20%のAu/Pt複合コロイドとした。
得られた各合金型Au/Pt複合コロイドを用いて、実施例２と同様にして、合金型Au/Pt複合コロイド標識抗体を作製した。【００３９】
試験例２
実施例３で作製した合金型Au/Pt複合コロイド標識抗体を用いて、試験例１と同様にしてイムノクロマト法での測定(図３)を行って当該コロイドの可視プローブとしての性能を評価した。
１）信号強度
測定が終了したテストストリップの判定部分の写真を撮影した。写真に写っているテストラインを画像解析ソフトウェア（デンシトグラフ、アトー株式会社）にて解析し、出現したラインの強弱を信号強度として数値化して比較した（図４）。
Pt量を変化させて作製した合金型Au/Pt複合コロイド標識抗体の信号強度は、20%で弱くなったが10〜18％の間では大きな差はなく、弱陽性検体もはっきりと確認することができた。
２）色調
１）で陽性検体の測定結果を撮影した写真について、画像ソフトウェア（photoshop（登録商標）、adobe社）を用いて明るさ・コントラスト等を調整した結果、Pt量が12〜18%の複合コロイドの色調は黒に近い色調であったが、Pt量が10%の複合コロイドについては赤色が強い色調であった（図５）。白いニトロセルロースメンブランに対しては、赤色より黒色に近い色調の方が高いコントラストを期待できることから、Pt量が12〜18%の合金型Au/Pt複合コロイドが可視プローブとして好ましい。【００４０】
比較例
特許文献３（特許第3886000号公報）に記載の方法でAuコアPtシェル型Au/Pt複合コロイドを合成し、試験例１と同様にしてイムノクロマト法での測定を行って、当該コロイドの可視プローブとしての性能を評価した。
（１）コロイドの合成
390mlの超純水をフラスコに入れて沸騰させ、この沸騰水に塩化金酸水溶液(水溶液1リットル当たり金として1g)30mlを加え、その後、1重量%クエン酸ナトリウム水溶液60mlを加えた。6分45秒後に、塩化白金酸水溶液(水溶液1リットル当たり白金として1g)30mlを加えた。塩化白金酸水溶液添加から5分後に1重量％クエン酸ナトリウム水溶液60mlを加え、4時間還流を行ってコロイドを得た。得られたコロイド1m1を13800xgで25分間遠心分離を行った後、上清を除き、残った沈殿に超純水を0.5ml加え、攪拌後、超音波で沈殿を再懸濁せしめ、この懸濁液を200mM炭酸カリウム水溶液でpH9.0に調整した。これに超純水を加えて全量を100mlとしてAu/Pt複合コロイドを得た。このコロイドは、AuコロイドからなるコアをPtが完全あるいは部分的に被膜するAuコアPtシェル型の構造となるとされている。【００４１】
（２）標識抗体の作製
このコロイドのイムノクロマト法での性能を確認するため、得られたコロイド1mL（OD520=3.4）に抗ヒトIgGヤギ抗体を6.8μg混合し、最適な標識条件を得るためにpHを7〜10として室温で約6時間攪拌してコロイドに抗体を結合させた。終濃度が1%となるようにカゼイン溶液を添加し、室温にて一夜攪拌してコロイド表面をブロックした。4500g、4℃で40分間遠心分離を行って回収し、1%カゼインを含む緩衝液に懸濁してAu/Pt複合コロイド標識抗体を作製した。【００４２】
（３）イムノクロマト法による測定
作製したAu/Pt複合コロイド標識抗体を、実施例１と同様のイムノクロマト法での測定を行った。【００４３】
（４）測定結果
測定の結果、いずれの標識抗体においても陽性検体測定時に出現するテストラインは非常に弱かった。さらに、弱陽性検体測定時においてはテストラインを確認することができず、イムノクロマト法における性能としては十分ではなかった。イムノクロマト法の測定結果（テストストリップ上のコントロールラインとテストラインが出現する判定部分の写真）を図６に示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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2011013378.tif 000009