(57)【要約】  安全性および抗菌性に優れるエピガロカテキンガレート誘導体（ＥＧＣＧ誘導体）を提供する。  下記化学式（１）で表されるエピガロカテキンガレート誘導体、もしくはその異性体またはその塩を、抗菌剤として使用する。下記式中、Ｒ１〜Ｒ６は、それぞれ、水素原子、ハロゲン、ナトリウム、カリウムまたは直鎖もしくは分枝状の飽和もしくは不飽和アシル基であり、同一でも異なっていても良く、前記アシル基は、さらに１または複数の置換基で置換されていても良く、前記Ｒ１〜Ｒ６の少なくとも１つが前記アシル基であり、Ｒ７〜Ｒ１６は、それぞれ、水素原子、ハロゲン、ナトリウムまたはカリウムであり、同一でも異なっていても良い。【化１】2011013825.tif 000021
2011013825.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化学式（１）で表されるエピガロカテキンガレート誘導体、もしくはその異性体またはそれらの塩を含むことを特徴とする抗菌剤。
【化１】
2011013825.tif 000020
前記化学式（１）において、
Ｒ１〜Ｒ６は、それぞれ、水素原子、ハロゲン、ナトリウム、カリウムまたは直鎖もしくは分枝状の飽和もしくは不飽和アシル基であり、同一でも異なっていても良く、前記アシル基は、さらに１または複数の置換基で置換されていても良く、前記Ｒ１〜Ｒ６の少なくとも１つが前記アシル基であり、Ｒ７〜Ｒ１６は、それぞれ、水素原子、ハロゲン、ナトリウムまたはカリウムであり、同一でも異なっていても良い。
【請求項２】
Ｒ１〜Ｒ６において、前記アシル基の主鎖長が、原子数２〜２０である、請求の範囲１記載の抗菌剤。
【請求項３】
Ｒ１〜Ｒ６において、前記アシル基の炭素原子数が、２〜２０である、請求の範囲１記載の抗菌剤。
【請求項４】
Ｒ１〜Ｒ６において、前記置換基が、アルキル基、アミノ基、アルキルアミノ基およびジアルキルアミノ基からなる群から選択される少なくとも一つである、請求の範囲１記載の抗菌剤。
【請求項５】
Ｒ１〜Ｒ６において、
前記アルキル基が、炭素原子数１〜６の直鎖もしくは分枝アルキル基であり、
前記アルキルアミノ基におけるアルキル基が、炭素原子数１〜６の直鎖もしくは分枝アルキル基であり、
前記ジアルキルアミノ基におけるアルキル基が、炭素原子数１〜６の直鎖もしくは分枝アルキル基であり、
Ｒ１〜Ｒ６は、それぞれ、同一でも異なっていても良い、請求の範囲４記載の抗菌剤。
【請求項６】
Ｒ１〜Ｒ６において、
前記アルキル基がメチル基であり、前記アルキルアミノ基がメチルアミノ基であり、
前記ジアルキルアミノ基がジメチルアミノ基であり、
Ｒ１〜Ｒ６は、それぞれ、同一でも異なっていても良い、請求の範囲４記載の抗菌剤。
【請求項７】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５およびＲ６の少なくとも一つが、前記アシル基である、請求の範囲１記載の抗菌剤。
【請求項８】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５およびＲ６の少なくとも一つが、前記アシル基であり、その他が、水素原子である、請求の範囲１記載の抗菌剤。
【請求項９】
Ｒ７〜Ｒ１６が、水素原子である、請求の範囲１記載の抗菌剤。
【請求項１０】
前記アシル基の主鎖長が、原子数１２〜１８である、請求の範囲１記載の抗菌剤。
【請求項１１】
前記アシル基の炭素原子数が、１２〜１８である、請求の範囲１記載の抗菌剤。
【請求項１２】
前記アシル基が、直鎖飽和アシル基および直鎖不飽和アシル基の少なくとも一方である、請求の範囲１記載の抗菌剤。
【請求項１３】
前記アシル基が、ブチリル基、オクタノイル基、トランス−８−メチル−６−ノネノイル基、ゲラノイル基、ラウロイル基、１２−（ジメチルアミノ）ラウロイル基、ファルネソイル基、パルミトイル基、パルミトレイル基、ステアロイル基、オレオイル基、リノレイル基、リノレニル基、エイコサノイル基およびそれらの異性体からなる群から選択された少なくとも一つのアシル基である、請求の範囲１記載の抗菌剤。
【請求項１４】
前記抗菌剤が、ブドウ球菌、肺炎球菌、緑膿菌、キャンピロバクター、ピロリ菌、大腸菌およびレジオネラ菌からなる群から選択された少なくとも一つの菌に対する抗菌剤である、請求の範囲１記載の抗菌剤。
【請求項１５】
菌の感染を抑制する方法であって、
被検体に請求の範囲１記載の抗菌剤を投与することを特徴とする感染抑制方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗菌剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
エピガロカテキンガレート（以下、ＥＧＣＧという）は、茶葉から抽出されるカテキン類の一種であり、抗菌効果を有する有用な天然物として注目されている（非特許文献１〜７）。特に、ＥＧＣＧは、天然物由来であることから、優れた安全性を示し、抗菌剤としての実用化が期待される。【０００３】
しかしながら、実用化にあたっては、ＥＧＣＧの抗菌効果をさらに向上することが望まれている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】戸田真佐子他、日本細菌学雑誌、４５（２）５６３，１９９０
【非特許文献２】Ｚｈａｏ  Ｗ−Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ，  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．  Ｖｏｌ．４６：ｐ．５８８−５６０，２００２年
【非特許文献３】Ｚｈａｏ  Ｗ−Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ，  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．  Ｖｏｌ．４５：ｐ．１７３７−１７４２，２００１年
【非特許文献４】Ｙａｎａｇａｗａ  Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．  Ｖｏｌ．４７：ｐ．２４４−２４９，２００３年
【非特許文献５】Ｈａｔａｎｏ  Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  Ｖｏｌ．６９，ｐ．３１１１−３１１６，２００８年
【非特許文献６】Ｋ．Ｋｉｄａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．  Ｖｏｌ．４８，ｐ．４１５１−４１５５，２０００年
【非特許文献７】Ｔ．Ｔａｎａｋａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．  Ｖｏｌ．８，ｐ．１８０１−１８０６，１９９８年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
そこで、本発明は、安全性ならびに抗菌性に優れる、新たなＥＧＣＧ誘導体の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
前記目的を達成するために、本発明の抗菌剤は、下記化学式（１）で表されるエピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ）の誘導体、もしくはその異性体またはそれらの塩を含むことを特徴とする。
【化１】
2011013825.tif 000003
前記化学式（１）中、
Ｒ１〜Ｒ６は、それぞれ、水素原子、ハロゲン、ナトリウム、カリウムまたは直鎖もしくは分枝状の飽和もしくは不飽和アシル基であり、同一でも異なっていても良く、前記アシル基は、さらに１または複数の置換基で置換されていても良く、前記Ｒ１〜Ｒ６の少なくとも１つが前記アシル基であり、Ｒ７〜Ｒ１６は、それぞれ、水素原子、ハロゲン、ナトリウムまたはカリウムであり、同一でも異なっていても良い。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、優れた安定性および抗菌性で、菌の感染を阻害できる。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】本発明の実施例１において、ＥＧＣＧ誘導体のＭＲＳＡに対する抗菌効果を示すグラフである。
【図２】本発明の前記実施例１において、ＥＧＣＧ誘導体の抗菌効果を示すグラフである。
【図３】本発明の実施例４において、ＥＧＣＧ誘導体の細胞膜に対する障害性を示すグラフである。
【図４】本発明の実施例７において、ＥＧＣＧ誘導体の代謝安定性を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明において、「抗菌」は、細菌の増殖を抑制することを意味し、例えば、殺菌による増殖抑制でもよいし、静菌による増殖抑制でもよい。
【００１０】
本発明の抗菌剤は、前述のように、下記化学式（１）で表されるエピガロカテキンガレートの誘導体、もしくはその異性体またはそれらの塩を含むことを特徴とする。
【化２】
2011013825.tif 000004
前記化学式（１）において、
Ｒ１〜Ｒ６は、それぞれ、水素原子、ハロゲン、ナトリウム、カリウムまたは直鎖もしくは分枝状の飽和もしくは不飽和アシル基であり、同一でも異なっていても良く、前記アシル基は、さらに１または複数の置換基で置換されていても良く、前記Ｒ１〜Ｒ６の少なくとも１つが前記アシル基であり、Ｒ７〜Ｒ１６は、それぞれ、水素原子、ハロゲン、ナトリウムまたはカリウムであり、同一でも異なっていても良い。ナトリウムまたはカリウムは、その他の一価金属またはアルカリ金属であってもよい。
【００１１】
前記化学式（１）において、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤは、ＥＧＣＧにおける各環の表記である。本発明において、以下、エピガロカテキンガレートは、「ＥＧＣＧ」といい、ＥＧＣＧの誘導体は、「ＥＧＣＧ誘導体」という。
【００１２】
本発明において、ＥＧＣＧ誘導体には、例えば、前記化学式（１）で表される化合物、その塩、互変異性体、立体異性体、光学異性体、幾何異性体等の異性体、異性体混合物も含まれる。前記塩は、特に制限されず、例えば、無機酸塩、有機酸塩、無機塩基塩、有機塩基塩、酸性または塩基性アミノ酸塩等があげられる。前記異性体は、例えば、各種クロマトグラフィー等の従来公知の分離方法により、精製可能である。また、本発明において、前記ＥＧＣＧ誘導体は、例えば、前記化学式（１）で表される化合物が、酸化、還元、加水分解、抱合等の代謝を受けて、生成する化合物も含む。
【００１３】
Ｒ１〜Ｒ６において、前記アシル基の主鎖長は、特に制限されないが、例えば、カルボニル炭素を含み、原子数２〜２０であり、好ましくは原子数４〜２０であり、より好ましくは原子数８〜１８であり、さらに好ましくは原子数１２〜１６である。前記アシル基の主鎖長は、例えば、アシル基において最も長い鎖の原子数をいい、炭素原子の他に、窒素原子、硫黄原子、リン原子、酸素原子、ホウ素原子、ハロゲン原子等を含んでもよい。また、本発明の抗菌剤において、前記ＥＧＣＧ誘導体の基本骨格であるＥＧＣＧは、例えば、お茶等に含まれるカテキンであって、安全性に優れることは十分に知られており、また、Ｒ１〜Ｒ６のアシル基も、安全性に優れるものである。したがって、本発明の抗菌剤は、例えば、安全性にも優れる薬剤といえる。
【００１４】
Ｒ１〜Ｒ６において、前記アシル基の炭素原子数は、特に制限されないが、例えば、カルボニル炭素を含み、炭素原子数２〜２０であり、好ましくは炭素原子数４〜２０、より好ましくは炭素原子数８〜１８、さらに好ましくは炭素原子数１２〜１６である。また、前記炭素原子数は、例えば、好ましくは４、８、１２、１６、１８または２０であり、より好ましくは８、１２、１６、１８または２０であり、さらに好ましくは１６、１８または２０であり、特に好ましくは１６または１８である。前記アシル基が、さらに前記置換基で置換されている場合、前記炭素原子数は、例えば、前記置換基における炭素原子数を含まない数であることが好ましい。前記不飽和アシル基は、例えば、シスでもトランスでもよい。
【００１５】
前記アシル基は、特に限定されないが、例えば、ホルミル基（Ｃ１）、アセチル基（Ｃ２）、プロピオニル基（Ｃ３）、ブチリル基（Ｃ４）、イソブチリル基（Ｃ４）、バレリル基（Ｃ５）、イソバレリル基（Ｃ５）、ピバロイル基（Ｃ５）、ヘキサノイル基（Ｃ６）、オクタノイル基（Ｃ８）、ゲラノイル基（３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエノイル基）（Ｃ１０）、トランス−８−メチル−６−ノネノイル基（Ｃ１０）、ウンデカノイル基（Ｃ１１）、ラウロイル基（ドデカノイル基）（Ｃ１２）、トリデカノイル基（Ｃ１３）、１２−（ジメチルアミノ）ラウロイル基（１２−（ジメチルアミノ）ドデカノイル基）（Ｃ１４）、ファルネソイル基（３，７，１１−トリメチルドデカ−２，６，１０−トリエノイル基（Ｃ１５）、パルミトイル基（ヘキサデカノイル基）（Ｃ１６）、パルミトレイル基（Ｃ１６）、ヘプタデカノイル基（Ｃ１７）、ステアロイル基（オクタデカノイル基）（Ｃ１８）、オレオイル基（Ｃ１８）、リノレイル基（Ｃ１８）、リノレニル基（Ｃ１８）、ノナデカノイル基（Ｃ１９）、エイコサノイル基（イコサノイル基）（Ｃ２０）等があげられる。列挙したアシル基のかっこ内の「Ｃ」は、カルボニル炭素を含む炭素数を示す。
【００１６】
前記アシル基の中でも、例えば、下記化学式に示すアシル基等が特に好ましい。下記化学式において、不飽和結合の位置は、これらには制限されない。具体例として、例えば、トランス−８−メチル−ノネノイル基（Ｃ１０）の不飽和結合（二重結合）は、以下に示す６位には制限されず、例えば、２〜５位および７位のいずれであってもよい。
【化３】
2011013825.tif 000005
【化４】
2011013825.tif 000006
【化５】
2011013825.tif 000007
【００１７】
前記アシル基の種類は、特に制限されず、前述のように、不飽和のアシル基および飽和のアシル基のいずれであってもよい。中でも、主鎖長が同じアシル基の場合、例えば、不飽和アシル基が好ましく、不飽和結合の数が多いことが好ましい。前記アシル基における不飽和結合の数は、特に制限されないが、例えば、１〜３であり、好ましくは２〜３である。
【００１８】
Ｒ１〜Ｒ６において、前記アシル基が、さらに前記置換基で置換されている場合、前記置換基は、特に制限されない。前記置換基は、例えば、アルキル基、アミノ基、アルキルアミノ基およびジアルキルアミノ基等があげられる。
【００１９】
前記アルキル基は、例えば、炭素原子数１〜６の直鎖もしくは分枝アルキル基があげられ、好ましくはメチル基である。また、前記アルキルアミノ基におけるアルキル基は、例えば、炭素原子数１〜６の直鎖もしくは分枝アルキル基があげられ、好ましくはメチルアミノ基である。前記ジアルキルアミノ基におけるアルキル基は、例えば、炭素原子数１〜６の直鎖もしくは分枝アルキル基があげられ、好ましくはジメチルアミノ基である。これらは、同一でも異なっていても良い。
【００２０】
前記化学式（１）において、例えば、Ｒ１〜Ｒ６のうち二カ所以上が前記アシル基でもよいし、いずれか一カ所のみがアシル基でもよい。前者の場合、各部位におけるアシル基は、例えば、同じであってもよいし、異なってもよい。二カ所以上が前記アシル基の場合、前記アシル基の前記主鎖長は、例えば、炭素数４〜１２が好ましく、より好ましくは炭素数４〜８である。アシル基以外の他のＲは、特に制限されないが、例えば、水素原子が好ましい。
【００２１】
前記化学式（１）において、Ｒ１〜Ｒ６のうちアシル基の部位は、特に制限されない。前記化学式（１）において、例えば、Ｂ環のＲ１およびＲ２ならびにＤ環のＲ５およびＲ６のうち少なくとも一カ所が、前記アシル基であることが好ましく、特に、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５およびＲ６のうちいずれか一カ所が、前記アシル基であることが好ましい。この際、アシル基以外の他のＲは、特に制限されないが、例えば、水素原子が好ましい。
【００２２】
前記化学式（１）において、Ｂ環のＲ１、Ｒ２およびＲ３のうち少なくとも一カ所がアシル基であることが好ましく、より好ましくは、Ｂ環のＲ１およびＲ２のうち一カ所のみがアシル基であることが好ましい。Ｂ環が修飾されたＥＧＣＧ誘導体は、例えば、代謝安定性により優れる。
【００２３】
前記化学式（１）において、Ｒ７〜Ｒ１６は、前述のように、同一でも異なってもよく、アシル基以外では、例えば、水素原子、ハロゲン、ナトリウムまたはカリウムがあげられる。Ｒ７〜Ｒ１６は、例えば、下記化学式（２）に示すように、水素原子が好ましい。下記式（２）において、Ｒ１〜Ｒ６は、例えば、いずれが前記アシル基でもよい。具体例として、例えば、Ｒ１〜Ｒ６のうち少なくとも一カ所、または、いずれか一カ所が、前述したアシル基であることが好ましく、より好ましくは、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５およびＲ６のうち少なくとも一カ所、または、いずれか一カ所が、前述したアシル基であることが好ましく、前記アシル基の中でも、例えば、ブチリル基、オクタノイル基、トランス−８−メチル−６−ノネノイル基、ゲラノイル基、ラウロイル基、１２−（ジメチルアミノ）ラウロイル基、ファルネソイル基、パルミトイル基、パルミトレイル基、ステアロイル基、オレオイル基、リノレイル基、リノレニル基、または、エイコサノイル基が好ましい。
【化６】
2011013825.tif 000008
【００２４】
本発明において、「ハロゲン」は、任意のハロゲン元素を指す。前記ハロゲンは、例えば、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素があげられる。また、本発明において、「アルキル基」は、特に限定されない。前記アルキル基は、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、イコシル基等があげられる。アルキル基を構造中に含む基またはアルキル基から誘導される基、具体的には、例えば、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、アルコキシ基、カルボキシアルキル基、アルコキシカルボニルアルキル基、アルコキシアルキル基、アルケノキシアルキル基等についても、同様である。
【００２５】
置換基等が、鎖状構造を有する基である場合、例えば、アルキル基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、アルコキシ基、カルボキシアルキル基、アルコキシカルボニルアルキル基、アルコキシアルキル基、アルケノキシアルキル基等である場合は、特に制限しない限り、例えば、直鎖状でも分枝状でも良い。置換基等の一部に鎖状構造を含む場合、例えば、置換アルキル基および置換アリール基等における置換基が鎖状構造を含む場合も、同様である。置換基等に異性体が存在する場合は、特に制限がない限り、例えば、どの異性体でも良い。具体例として、単に「プロピル基」という場合は、例えば、ｎ−プロピル基およびイソプロピル基のどちらでも良い。また、単に「ブチル基」という場合は、例えば、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基およびｔｅｒｔ−ブチル基のいずれでも良い。単に「ナフチル基」という場合は、例えば、１−ナフチル基および２−ナフチル基のどちらでも良い。
【００２６】
本発明におけるＥＧＣＧ誘導体は、例えば、一種類でもよいし、二種類以上を併用してもよい。本発明におけるＥＧＣＧ誘導体は、例えば、Ｒ１〜Ｒ６のうち異なる部位にアシル基を有する二種類以上のＥＧＣＧ誘導体であってもよいし、異なるアシル基を有する二種類以上のＥＧＣＧ誘導体であってもよい。具体例として、Ｂ環のＲ１が前記アシル基であるＥＧＣＧ誘導体、Ｂ環のＲ２が前記アシル基であるＥＧＣＧ誘導体、Ｂ環のＲ３が前記アシル基であるＥＧＣＧ誘導体のうち、いずれか二種類以上、または、三種類全てを含む混合物であってもよく、Ｄ環のＲ４が前記アシル基であるＥＧＣＧ誘導体、Ｄ環のＲ５が前記アシル基であるＥＧＣＧ誘導体、Ｄ環のＲ６が前記アシル基であるＥＧＣＧ誘導体のうち、いずれか二種類以上、または、三種類全てを含む混合物であってもよい。また、Ｂ環のＲ１〜Ｒ３の少なくともいずれかが前記アシル基であるＥＧＣＧ誘導体と、Ｄ環のＲ４〜Ｒ６の少なくともいずれかが前記アシル基であるＥＧＣＧ誘導体との混合物であってもよい。
【００２７】
本発明の抗菌剤は、特に制限されず、種々の細菌に適用できる。前記細菌は、例えば、グラム陽性菌およびグラム陰性菌があげられる。具体例としては、例えば、バシルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、スタフィロコッカス属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、ストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、エンテロコッカス属（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、ミクロコッカス属（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ）、モラクセラ属（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ）、ヘモフィルス属（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｉｓ）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｉａ ｃｏｌｉ）、エンテロバクター属（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）、セラチア属（Ｓｅｒｒａｔｉａ）、エルシニア属（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、ステノトロホモナス属（Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ）、ヘリコバクター属（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ）、キャンピロバクター属（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）、レジオネラ属（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）等の細菌があげられる。バシルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）は、例えば、枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｕｓ）、セレウス菌（Ｂ．ｃｅｒｅｕｓ）等があげられる。スタフィロコッカス属は、例えば、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）、表皮ブドウ球菌（Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、腐性ブドウ球菌（Ｓ．ｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｃｕｓ）等のブドウ球菌があげられる。前記黄色ブドウ球菌は、例えば、メシチリン感受性黄色ブドウ球菌（ＭＳＳＡ）、メシチリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）等があげられる。前記ストレプトコッカス属は、例えば、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、Ａ群連鎖球菌（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ等の連鎖球菌があげられる。エンテロコッカス属は、例えば、Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ等の腸球菌があげられる。マイクロコッカス属は、例えば、Ｍ．ｌｕｔｕｓ等があげられる。モラクセラ属としては、Ｍ．ｃａｔａｒｈａｌｉｓ等があげられる。ヘモフィルス属は、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ等があげられる。エンテロバクター属は、例えばＥ．ｃｌｏａｃａｅ、Ｅ．ａｅｒｏｇｅｎｅｓ等、セラチア属は、例えばＳ．ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ等があげられる。エルシニア属は、例えば、Ｙ．ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ等があげられる。シュードモナス属は、例えば、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、Ｐ．ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ等があげられる。ステノトロホモナス属は、例えば、Ｓ．ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ等があげられ、ヘリコバクター属（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ）は、例えば、ピロリ菌（Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ）等があげられる。キャンピロバクター属は、例えば、Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ等があげられ、レジオネラ属は、例えば、Ｌ．ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ等があげられる。
【００２８】
本発明の抗菌剤は、前記ＥＧＣＧ誘導体を含んでいればよく、その形態は何ら制限されない。前記形態は、例えば、溶液、懸濁液または分散液等の液体、固体、粉末等があげられる。また、剤形は、特に制限されず、例えば、投与方法に応じて適宜設定でき、液剤、カプセル剤、錠剤、細粒剤等の粒剤、散剤等があげられる。前記投与方法は、特に制限されず、経口投与、非経口投与があげられる。非経口投与は、例えば、経皮投与、腹腔内投与、静脈注射等の静脈内投与、筋肉投与、皮下注射等の皮下投与、直腸投与等があげられ、好ましくは、経皮投与である。本発明の抗菌剤は、例えば、これらの投与形態に応じて、前記ＥＧＣＧ誘導体そのもの、または前記ＥＧＣＧ誘導体を含む内服薬、舌下剤、点眼・点鼻薬、うがい薬、塗り薬等として投与でき、また、前記ＥＧＣＧ誘導体そのもの、または前記ＥＧＣＧ誘導体を含む溶液、懸濁液もしくは分散液として、注射、ネブライザー、吸引器等を用いて投与できる。また、本発明の抗菌剤は、例えば、前記ＥＧＣＧ誘導体そのもの、または前記ＥＧＣＧ誘導体を含む粉末として、例えば、ネブライザー、吸引器等を用いて投与できる。また、本発明の抗菌剤は、例えば、菌の感染能力を低下できることから、例えば、前記ＥＧＣＧ誘導体を含む、手洗い剤、ふき取り剤等の洗浄剤の形態もあげられる。本発明の抗菌剤によって、例えば、手または机等、菌が存在すると思われる箇所を処理することで、存在する菌の感染能力を低下させ、菌感染の予防を図ることも可能である。また、本発明の抗菌剤を、例えば、マスク、フィルター等に担持させてもよい。
【００２９】
本発明の抗菌剤は、例えば、菌の感染の抑制および予防、ならびに菌感染後の治療に使用できる。本発明の抗菌剤を投与する対象は、特に制限されず、例えば、ヒト、非ヒト動物があげられる。前記非ヒト動物は、例えば、ブタ、フェレット、ラット、マウス、ウシ等の非ヒト哺乳類、アヒル、ニワトリ等の鳥類等があげられる。
【００３０】
本発明の抗菌剤において、前記ＥＧＣＧ誘導体の含有量は、特に制限されず、例えば、投与の目的や投与方法に応じて適宜決定できる。本発明の抗菌剤がうがい薬の場合、例えば、一回あたり２０〜１００μｍｏｌ／ＬのＥＧＣＧ誘導体を含むことが好ましい。また、本発明の抗菌剤が点眼・点鼻薬の場合、例えば、一回あたり２０〜１００μｍｏｌ／ＬのＥＧＣＧ誘導体を含むことが好ましい。
【００３１】
本発明の抗菌剤は、例えば、前記ＥＧＣＧ誘導体以外に、さらに他の抗菌物質を含んでもよい。
【００３２】
本発明の抗菌剤は、例えば、その剤形や投与方法に応じて、適宜、さらに、添加剤や基剤等を含んでもよい。前記添加剤は、例えば、賦形剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤、乳化剤、界面活性剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤、防腐剤、抗酸化剤、安定化剤、吸収促進剤等があげられる。これらの添加割合は、特に制限されず、前記ＥＧＣＧ誘導体の効果を損なわない範囲で添加することができる。
【００３３】
本発明におけるＥＧＣＧ誘導体の製造方法は、特に制限されない。前記方法は、例えば、有機合成法、酵素等を利用する化学合成法等、従来公知の方法が採用できる。前記酵素を利用する化学合成法は、特に制限されないが、例えば、国際公開ＷＯ２００７／１０５２８０号パンフレットに開示された、リパーゼを利用する方法があげられる。この方法は、例えば、有機溶媒中、ＥＧＣＧとアシル基供与体とを基質として、リパーゼにより酵素反応を行い、ＥＧＣＧをアシル化する方法である。この方法によれば、例えば、ＥＧＣＧを選択的にアシル化できる。以下に、一例として、リパーゼを使用する方法を例示するが、本発明は、ＥＧＣＧ誘導体の製造方法には、何ら制限されない。
【００３４】
前記リパーゼは、例えば、ＩＵＢ  Ｎｏ．３．１．１．３．のリパーゼが使用できる。具体例として、Aspergillus niger等のAspergillus属由来リパーゼ；Candida rugosa、Candida cylindracea、Candida antarctica等のCandida属由来リパーゼ；Pseudomonas fluorescens、Pseudomonas cepacia、Pseudomonas stutzeri等のPseudomonas属由来リパーゼ；Alcaligenes属由来リパーゼ；Burkholderia cepacia等のBurkholderia属由来リパーゼ；ブタ膵臓由来のリパーゼ等があげられる。これらは、従来公知の方法により調製できるが、例えば、Lipase  AS“AMANO”、Lipase  AYS“AMANO”、Lipase  PS“AMANO”、Lipase  AK“AMANO”20、Lipase  AH“AMANO”（全て商品名：天野エンザイム社製）、Lipase  MY、Lipase  OF、Lipase  PL、Lipase  PLC、Lipase  PLG、Lipase  QLM、Lipase  QLC、Lipase  QLG、Lipase  SL、Lipase  TL（全て商品名：名糖産業社製）、Lipase  PPL、L4777  Lipase  acrylic  resin  from  Candida  Antarctica、L3126  Lipase  from  porcine  pancreas（全て商品名：シグマアルドリッチ社製）等の市販品も使用できる。各市販品の物理化学的性質は、それぞれの商品説明書に記載の通りであり、同様の物理化学的性質を示す酵素も同様に使用できる。
【００３５】
また、前記リパーゼは、以下に示すような（１）〜（８）の何れかの物理化学的特性および酵素学的特性を有するリパーゼであってもよい。
（１）分子量３５，０００、等電点４．１０
例えば、Aspergillus niger由来リパーゼ
（２）分子量６４，０００、等電点４．３０、８０℃１０分間の処理で不活性化
例えば、Candida rugosa由来リパーゼ
（３）至適ｐＨ８、至適温度６０℃、ｐＨ４〜１０の範囲で特に安定、７０℃以下で特に安定
例えば、Pseudomonas fluorescens由来リパーゼ
（４）分子量６０，０００、至適ｐＨ６〜７、ｐＨ安定性３〜８、至適温度４０〜５０℃、３７℃以下において溶液状態で特に安定
例えば、Candida cylindracea由来リパーゼ、Candida rugosa由来リパーゼ
（５）分子量３０，０００、等電点４．５、至適ｐＨ８〜９．５、ｐＨ安定性７〜１０、至適温度５０℃、４０℃以下において特に安定
例えば、Alcaligenes属由来リパーゼ
（６）分子量３１，０００、等電点４．９、至適ｐＨ７〜９、ｐＨ安定性６〜１０、至適温度６５〜７０℃、５０℃以下において特に安定
例えば、Alcaligenes属由来リパーゼ
（７）分子量３１，０００、等電点５．２、至適ｐＨ７〜９、ｐＨ安定性６〜１０、至適温度６５〜７０℃、６０℃以下において特に安定
例えば、Pseudomonas cepacia由来リパーゼ、Burkholderia cepacia由来リパーゼ
（８）分子量２７，０００、等電点６．６、至適ｐＨ７〜８、ｐＨ安定性６〜９、至適温度５０℃、４０℃以下において特に安定
例えば、Pseudomonas stutzeri由来リパーゼ
【００３６】
前記有機溶媒は、特に制限されず、例えば、アセトニトリル、アセトン、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）等が使用できる。前記有機溶媒は、例えば、疎水性を示すパラメータ（ｌｏｇＰ値）が−１．３５〜０．２８の範囲の有機溶媒でもよく、このような有機溶媒は、前述のアセトニトリル（ｌｏｇＰ値：−０．４５〜０．１９）、アセトン（ｌｏｇＰ値：−０．１６〜０．１９）、ＤＭＦ（ｌｏｇＰ値：−１．０１〜０．２８）、ＤＭＳＯ（ｌｏｇＰ値：−１．３５〜０．２８）があげられる。これらの他にも、前記パラメータを満たす従来公知の溶媒が使用できる。前記ｌｏｇＰは、溶媒固有の値であるため、当該技術分野における当業者であれば、前記パラメータを満たす溶媒を選択可能である。「ｌｏｇＰ」とは、目的物質をオクタノールと水との混合溶液に添加し、平衡に達した時のオクタノール層と水層とにおける前記目的物質の濃度比を常用対数で表示したものであり、前述のように、物質の疎水性を示すパラメータとして一般的である。
【００３７】
前記アシル基（Ｒ−ＣＯ−）供与体は、例えば、カルボン酸ビニルエステル（Ｒ−ＣＯ−Ｏ−ＣＨ＝ＣＨ２）があげられる。前記アシル基は、例えば、前述のような直鎖もしくは分枝状の飽和もしくは不飽和アシル基があげられる。
【００３８】
前記有機溶媒としてＤＭＦを用いた場合、リパーゼ反応の反応液におけるＥＧＣＧの添加割合は、特に制限されないが、例えば、０．２〜１００ｍｍｏｌ／Ｌであり、好ましくは０．５〜５０ｍｍｏｌ／Ｌ、より好ましくは０．５〜２０ｍｍｏｌ／Ｌである。前記アシル基供与体の添加割合は、特に制限されず、例えば、前記反応液におけるＥＧＣＧの添加割合に応じて適宜決定できる。具体例として、ＥＧＣＧと前記アシル基供与体との添加割合（モル比）は、例えば、１：１〜１：１０であり、好ましくは１：１〜１：５、より好ましくは１：１〜１：３である。また、前記反応液におけるリパーゼの添加割合は、例えば、ＥＧＣＧおよび前記アシル基供与体の添加割合、リパーゼの比活性等に応じて、適宜決定でき、特に制限されない。具体例として、前記リパーゼの添加割合は、例えば、ＥＧＣＧ１ｍｍｏｌ／Ｌに対して、例えば、５００〜５０，０００Ｕ／Ｌであり、好ましくは５００〜５，０００Ｕ／Ｌ、より好ましくは１，０００〜２，５００Ｕ／Ｌである。
【００３９】
酵素反応の条件は、特に制限されない。反応温度は、例えば、４５〜７５℃の範囲である。前記反応時間は、特に制限されず、例えば、基質および酵素の量によって適宜決定できる。前記反応時間は、例えば、３０分〜２４時間（１４４０分）であり、好ましくは１時間（６０分）〜３時間（１８０分）、より好ましくは１．５時間（９０分）〜３時間（１８０分）である。
【００４０】
前記反応液には、さらに、塩基性触媒を添加してもよい。前記塩基性触媒は、例えば、トリエチルアミン等の３級アミン、ピリジン等があげられる。前記反応液における塩基性触媒の添加割合は、特に制限されないが、例えば、５〜７２０ｍｍｏｌ／Ｌであり、好ましくは１２〜２４０ｍｍｏｌ／Ｌ、より好ましくは１２〜４８ｍｍｏｌ／Ｌである。
【００４１】
ＥＧＣＧにおいて前記アシル基が導入される位置は、例えば、使用するリパーゼの種類によって選択できる。ＥＧＣＧに導入するアシル基の数は、例えば、使用する有機溶媒の種類および反応時間によって決定可能である。具体例としては、例えば、有機溶媒の疎水性が相対的に高い程、すなわち、親水性が相対的に低い程、導入されるアシル基の数を相対的に低減できる。一方、例えば、有機溶媒の親水性が相対的に高い程、すなわち、疎水性が相対的に低い程、導入されるアシル基の数を相対的に増加できる。また、例えば、二種類以上の有機溶媒を混合して用いることによっても、導入されるアシル基の数を調節できる。具体例としては、例えば、１個のアシル基を導入する際には、アセトニトリル等を使用することが好ましく、例えば、１〜２個のアシル基を導入する際には、アセトン、アセトニトリル等を使用することが好ましく、例えば、３〜５個のアシル基を導入する際には、ＤＭＳＯ、ＤＭＦ等を使用することが好ましい。
【００４２】
さらに、同じ有機溶媒を用いる場合でも、例えば、反応温度および／または反応時間の制御等によって、導入するアシル基数を調節することもできる。以下に、その例を示すが、これには限定されない。有機溶媒としてＤＭＦを使用する場合、例えば、反応温度を約５７℃〜約７０℃の範囲に設定し、反応時間を長くする、例えば、約３〜５時間にすることによって、ＥＧＣＧに２個のアシル基が選択的に導入された誘導体を、優先的に得ることができる。一方、例えば、前記条件に対して、反応温度を低下させ（例えば、５７℃から約５℃低い温度）、反応時間を短くする（例えば、約１〜３時間）ことによって、１個のアシル基を選択的に導入することができる。また、アセトンとＤＭＦとを同量（重量）混合した混合溶媒を使用することによっても、ＥＧＣＧに１個のアシル基を選択的に導入できる。
【００４３】
導入するアシル基の数は、例えば、前記反応液に前述の塩基性触媒を添加することによって、増加できる。この場合、ＥＧＣＧにおけるどの部位にアシル基がさらに導入されるかは、例えば、前述のように、リパーゼの位置選択性に依存する。
【００４４】
前記リパーゼ反応によるＥＧＣＧ誘導体の収率は、例えば、反応温度を相対的に高く設定することによって、相対的に向上できる。反応温度は、通常、前述のように、４５〜７５℃であるが、収率向上の点から、好ましくは５７〜７５℃であり、より好ましくは５７〜７０℃である。特に、反応温度が５７〜７０℃の場合、例えば、前記ＥＧＣＧアシル化誘導体の収率は、約３５〜４５％を実現可能である。前記収率とは、例えば、反応に使用したＥＧＣＧを１００％とした場合のＥＧＣＧアシル化誘導体（例えば、全モノアシル化誘導体）の割合を意味し、変換効率ということもできる。
【００４５】
本発明において、ＥＧＣＧ誘導体は、例えば、前述のように、いずれか一種類を用いてもよいし、二種類以上の混合物を用いてもよい。前記混合物から一種類のＥＧＣＧ誘導体を単離する場合は、例えば、クロマトグラフィー等を用いる従来公知の方法により行うことができる。
【００４６】
つぎに、本発明の感染防止方法は、菌の感染を防止する方法であって、被検体に前述のＥＧＣＧ誘導体または前記本発明の抗菌剤を投与することを特徴とする。本発明において、菌の感染防止は、例えば、菌の感染阻害、感染低減、感染した菌の低減、除去等を含む。また、本発明の治療方法は、菌感染による疾患を治療する方法であって、被検体に前述のＥＧＣＧ誘導体または前記本発明の抗菌剤を投与することを特徴とする。本発明においては、前記ＥＧＣＧ誘導体または前記本発明の抗菌剤を使用することが特徴であって、その他の構成や条件等は、何ら制限されない。前記ＥＧＣＧ誘導体および前記抗菌剤ならびにそれらの使用方法等は、例えば、前述と同様である。
【００４７】
本発明において、被検体は、何ら制限されず、例えば、ヒトまたは非ヒト動物があげられる。前記非ヒト動物は、例えば、ブタ、フェレット、ラット、マウス、ウシ等の非ヒト哺乳類、アヒル、ニワトリ等の鳥類等があげられる。前記被検体は、例えば、生体そのものでもよいし、生体から採取した細胞または組織、それらの培養物でもよい。
【００４８】
前記被検体が生体の場合、前記投与方法は、特に制限されず、例えば、非経口投与および経口投与があげられる。非経口投与は、例えば、経皮投与、腹腔内投与、静脈内投与、筋肉投与、皮下投与、直腸投与等があげられ、好ましくは、経皮投与である。前記投与方法は、前述の通りである。また、前記投与における、前記ＥＧＣＧ誘導体および前記抗菌剤の形態等の条件は、前述の通りである。
【００４９】
前記被検体が、生体から採取した細胞や組織等の場合、例えば、前記投与方法は、特に制限されず、例えば、培地等への添加があげられる。
【００５０】
前記被検体に対する前記ＥＧＣＧ誘導体または前記本発明の抗菌剤の投与時期は、特に制限されないが、例えば、菌感染前でもよいし、菌感染後でもよい。
【００５１】
本発明は、菌感染による疾患の治療に使用するためのＥＧＣＧ誘導体であり、前記ＥＧＣＧ誘導体は、前述の通りである。また、本発明は、菌感染による疾患の治療に使用するためのＥＧＣＧ誘導体を含む組成物であり、前記ＥＧＣＧ誘導体は、前述の通りである。前記組成物は、例えば、一種類の前記ＥＧＣＧ誘導体を含んでもよいし、二種類以上のＥＧＣＧ誘導体を含んでもよい。二種類以上のＥＧＣＧ誘導体を含む場合、その種類の組み合わせは、特に制限されないが、例えば、前記抗菌剤において例示した組み合わせ等があげられる。
【実施例】
【００５２】
つぎに、本発明の実施例について説明する。ただし、本発明は、下記実施例により制限されない。【００５３】
［実施例１］
（１）ＥＧＣＧ誘導体の調製
下記方法によりＥＧＣＧ誘導体を調製した。【００５４】
ＤＭＦ１００ｍＬに、ＥＧＣＧ１ｇ、下記表１に示すアシル基供与体９２７ｍｇおよびリパーゼ（商品名Ｌｉｐａｓｅ  ＰＬ、名糖産業社製）５０，０００Ｕを混合し、５７℃で２時間インキュベートして酵素反応を行った。【００５５】
【表１】
2011013825.tif 000009
【００５６】
インキュベート後の反応液をろ過し、ろ液を濃縮後、カラムクロマトグラフィー（球状、中性、４０−５０μｍ、商品名Ｓｉｌｉｃａ  ｇｅｌＮ６０、関東化学株式会社製）に供し、不純物である未反応アシル基供与体を除去した。得られた反応生成物について、エレクトロスプレーイオン化質量分析（ＥＳＩ−ＭＳ）を行った結果、ＥＧＣＧに、エステル結合によって、前記表１に示すアシル基が一個導入されたＥＧＣＧ誘導体が得られた。具体的には、ＥＧＣＧのＢ環のＲ１もしくはＲ２、または、Ｄ環のＲ５もしくはＲ６に、前記表１に示すアシル基が１個導入された。【００５７】
さらに、ＥＧＣＧのどの位置がエステル化されたかを確認するため、前記反応生成物をプロトン核磁気共鳴（Ｈ１  ＮＭＲ）で分析した。この結果を下記表２に示す。【００５８】
【表２】
2011013825.tif 000010
【００５９】
前記Ｎｏ．１〜Ｎｏ．５のアシル基が導入されたＥＧＣＧ誘導体を、それぞれ、以下のように示す。
Ｎｏ．１  ＥＧＣＧ−Ｃ８またはＥＧＣＧ−ｏｃｔａｎｏｎａｔｅ
Ｎｏ．２  ＥＧＣＧ−Ｃ１２またはＥＧＣＧ−ｌａｕｒａｔｅ
Ｎｏ．３  ＥＧＣＧ−Ｃ１６またはＥＧＣＧ−ｐａｌｍｉｔａｔｅ
Ｎｏ．４  ＥＧＣＧ−Ｃ１８またはＥＧＣＧ−ｓｔｅａｒａｔｅ
Ｎｏ．５  ＥＧＣＧ−Ｃ２０またはＥＧＣＧ−ｅｉｃｏｓａｎｏａｔｅ【００６０】
これらのＥＧＣＧ誘導体は、前記化学式（２）に示すＥＧＣＧ誘導体であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５またはＲ６のいずれ一カ所が、前記表２に示すアシル基であり、その他のＲは、水素原子であった。これらのＥＧＣＧ誘導体を、実施例１の抗菌剤として使用した。【００６１】
（２）抗菌効果
細菌として、Ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ−ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ  Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（ＭＳＳＡ）ＮＣＴＣ８３２５およびＭｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ  Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）ＡＴＣＣ４３３００を使用した。前記各細菌の培養は、培地として、Ｍｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎ  Ｂｒｏｔｈ（ＭＨ−ｂｒｏｔｈ、Ｄｉｆｃｏ社製）を使用した。そして、各ＥＧＣＧ誘導体について、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  （ＣＬＳＩ）の微量液体希釈法に準拠して、最小発育阻止濃度（ＭＩＣ：Ｍｉｎｉｍｕｍ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）を測定した（以下、同様）。【００６２】
まず、前記各ＥＧＣＧ誘導体を、５１２０μｇ／ｍＬになるように、１００％ジメチルスルフォキシド（ＤＭＳＯ、和光純薬工業社製）で溶解した。これらの溶液を、ＤＭＳＯまたは滅菌蒸留水で希釈し、２倍希釈系列の抗菌剤溶液を調製した。具体的には、濃度１２８０μｇ／ｍＬまでは、ＤＭＳＯを使用して希釈を行い、濃度１２８０μｇ／ｍＬ未満は、滅菌蒸留水を用いて希釈を行った。これらの抗菌剤溶液を、９６ウェルプレートのウェルに分注した。前記ウェルに分注する前記抗菌剤溶液におけるＥＧＣＧ誘導体濃度は、最終濃度の１０倍濃度とした。一方、前記細菌を前記ＭＨ−ｂｒｏｔｈで３７℃一夜培養し、得られた前培養液を、新たなＭＨ−ｂｒｏｔｈで１０−４希釈（１０４倍希釈）して、約１×１０５ＣＦＵ／ｍＬ（ＣＦＵ：Ｃｏｌｏｎｙ  Ｆｏｒｍｉｎｇ  Ｕｎｉｔ、生菌数）となるように、菌液を調製した。前記ウェルに、さらに、前記菌液を添加し、３７℃で１８時間培養した。前記ウェルにおいて、前記抗菌剤溶液と前記菌液との添加割合（体積比）は、前記抗菌剤溶液：前記菌液＝１：９とし、１ウェルあたりの前記両者の混合液の体積は、トータル１００μＬとした。前記混合液における前記ＥＧＣＧ誘導体の最終濃度は、８μｇ／ｍＬ〜５１２μｇ／ｍＬ、前記混合液における生菌数は、約１×１０５ＣＦＵ／ｍＬとした。そして、培養終了後、ＭＩＣを判定した。また、詳細な差を判別するため、プレートリーダーを用いて濁度（ＯＤ６００ｎｍ）を測定した。【００６３】
また、比較例１は、抗菌剤として、前記実施例１のＥＧＣＧ誘導体に代えて、未置換のＥＧＣＧを使用した以外は、実施例１と同様にして行った。また、コントロールは、前記ＥＧＣＧ誘導体を含む前記抗菌剤溶液に代えて、滅菌蒸留水、１００％ＤＭＳＯまたは５０％ＤＭＳＯを使用した以外は、同様にして行った。【００６４】
前記ＭＩＣの結果を、下記表３に示す。また、ＭＲＳＡにおける前記濁度の測定結果を、図１に示す。図１のグラフにおいて、縦軸は、濁度（ＯＤ６００ｎｍ）であり、横軸は、前記混合液におけるＥＧＣＧまたはＥＧＣＧ誘導体の濃度（μｇ／ｍＬ）である。図１のグラフにおいて、白菱形（◇）は、ＥＧＣＧ−Ｃ８の結果であり、白四角（□）は、ＥＧＣＧ−Ｃ１２の結果であり、白丸（○）は、ＥＧＣＧ−Ｃ１６の結果であり、白三角（△）は、ＥＧＣＧ−Ｃ１８の結果であり、黒丸（●）は、ＥＧＣＧ−Ｃ２０の結果であり、×は、ＥＧＣＧの結果である。【００６５】
【表３】
2011013825.tif 000011
【００６６】
前記図１および表３に示すように、実施例１のＥＧＣＧ誘導体は、ＭＳＳＡおよびＭＲＳＡに対して、比較例１のＥＧＣＧよりも効果的に、増殖を抑制できた。中でも、ＥＧＣＧ−Ｃ１２およびＥＧＣＧ−Ｃ１６は、ＭＲＳＡに対する顕著な増殖抑制効果が見られた。【００６７】
（３）殺菌効果
前記ＥＧＣＧ−Ｃ１６について、ＭＲＳＡ  ＡＴＣＣ４３３００、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＭＧ１６５５およびＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ  ＰＡＯ１に対する殺菌効果を測定した。細菌の培養には、培地として、ＭＨ−ｂｒｏｔｈを使用した。【００６８】
前記混合液における前記ＥＧＣＧ−Ｃ１６の最終濃度を、ＭＲＳＡについては、６．２５μｇ／ｍＬおよび２５μｇ／ｍＬとし、Ｅ．ｃｏｌｉについては、２００μｇ／ｍＬとし、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａについては、５０μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬおよび２００μｇ／ｍＬとした以外は、前記（２）と同様にして、前記抗菌剤溶液と前記菌液とを混合し、３７℃で培養を行った。前記抗菌剤溶液と前記菌液との混合液における生菌数は、１×１０５ＣＦＵ／ｍＬとした。そして、培養開始から所定時間（０時間、２時間、４時間および６時間）経過時に、培養液を採取し、生理食塩水で希釈して、１０倍希釈系列を調製した。前記希釈した菌液から各１００μＬをシャーレに取り、５０℃に保温したＴｒｙｐｔｉｃａｓｅ−ｓｏｙ  Ａｇａｒ（ＢＢＬ社製）１０ｍＬで混合して固め、３７℃で一夜培養した。そして、発育したコロニー数（ＣＦＵ／ｍＬ）を数えて、残存生菌数を測定した。【００６９】
これらの結果を、図２に示す。図２（Ａ）は、ＭＲＳＡ  ＡＴＣＣ４３３００、図２（Ｂ）は、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＭＧ１６５５、図２（Ｃ）は、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ  ＰＡＯ１について、経時的な残存生菌数の変化を対数で示したグラフである。全ての図において、ｘ軸が、処理時間（時間）、ｙ軸が、コロニー数（ＣＦＵ／ｍＬ）の対数をそれぞれ示す。処理時間０時間のコロニー数は、１×１０５ＣＦＵ／ｍＬであった。また、図２の各図において、０μｇ／ｍＬとは、ＥＧＣＧ誘導体無添加でインキュベートした際の残存生菌数の結果である。【００７０】
同図（Ａ）に示すように、ＥＧＣＧ−Ｃ１６は、２５μｇ／ｍＬで増殖を抑えるだけでなく、生菌数を減少させたことから、ＭＲＳＡに対して顕著な殺菌作用を示すことがわかった。また、同図（Ｂ）および（Ｃ）に示すように、ＥＧＣＧ−Ｃ１６は、Ｅ.ｃｏｌｉ  ＭＧ１６５５およびＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ  ＰＡＯ１に対して、増殖を抑制する静菌作用（増殖抑制作用）を示した。【００７１】
［実施例２］
（１）ＥＧＣＧ誘導体の調製
下記方法によりＥＧＣＧ誘導体を調製した。【００７２】
下記表４に示すアシル供与体を使用した以外は、前記実施例１と同様にして、ＥＧＣＧ誘導体を調製した。【００７３】
【表４】
2011013825.tif 000012
【００７４】
さらに、ＥＧＣＧのどの位置がエステル化されたかを確認するため、前記反応生成物をプロトン核磁気共鳴（Ｈ１  ＮＭＲ）で分析した。この結果を下記表５に示す。【００７５】
【表５】
2011013825.tif 000013
【００７６】
前記Ｎｏ．６〜Ｎｏ．１２のアシル基が導入されたＥＧＣＧ誘導体を、それぞれ、以下のように示す。
Ｎｏ．６    ＥＧＣＧ−Ｃ１６またはＥＧＣＧ−ｐａｌｍｉｔａｔｅ
Ｎｏ．７    ＥＧＣＧ−Ｃ８×２またはＥＧＣＧ−ｄｉｏｃｔａｎｏａｔｅ
Ｎｏ．８    ＥＧＣＧ−Ｃ１８またはＥＧＣＧ−ｓｔｅａｒａｔｅ
Ｎｏ．９    ＥＧＣＧ−Ｃ１８ＥまたはＥＧＣＧ−ｏｌｅａｔｅ
Ｎｏ．１０  ＥＧＣＧ−Ｃ１８ＤＥまたはＥＧＣＧ−ｌｉｎｏｌａｔｅ
Ｎｏ．１１  ＥＧＣＧ−Ｃ１８ＴＥまたはＥＧＣＧ−α−ｌｉｎｏｌｅａｔｅ
Ｎｏ．１２  ＥＧＣＧ−Ｃ１６ＥまたはＥＧＣＧ−ｐａｌｍｉｔｏｌｅａｔｅ【００７７】
これらのＥＧＣＧ誘導体は、前記化学式（２）に示すＥＧＣＧ誘導体であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５またはＲ６のいずれか一カ所が、前記表５に示すアシル基であり、その他のＲは、水素原子であった。これらのＥＧＣＧ誘導体を、実施例２の抗菌剤として使用した。【００７８】
（２）抗菌効果
前記ＥＧＣＧ誘導体を、それぞれ、１２８０μｇ／ｍＬとなるように、１００％ＤＭＳＯで溶解した。これらの溶液を、滅菌蒸留水で希釈し、抗菌剤溶液を調製した。そして、細菌として、ＭＳＳＡ  ＮＣＴＣ８３２５、ＭＳＳＡ  ＡＴＣＣ２５９２３、ＭＳＳＡ  ＡＴＣＣ１２６００、ＭＳＳＡ  ＡＴＣＣ２９２１３、ＭＳＳＡ臨床分離株５株（Ｎｏ．１〜Ｎｏ．５）、ＭＲＳＡ  ＡＴＣＣ４３３００およびＭＲＳＡ臨床分離株７株（Ｎｏ．６〜Ｎｏ．１２）を用いた以外は、前記実施例１の（２）と同様にして、最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）を測定した。これらの結果を下記表６に示す。【００７９】
比較例２は、抗菌剤として、前記実施例２のＥＧＣＧ誘導体に代えて、未置換のＥＧＣＧを使用した以外、実施例２と同様にして行った。また、コントロールは、ＥＧＣＧ誘導体を含む前記抗菌剤溶液に代えて、滅菌蒸留水を使用した以外は、実施例２と同様にして行った。【００８０】
【表６】
2011013825.tif 000014
【００８１】
前記表６に示すように、実施例２のＥＧＣＧ誘導体は、前記ＭＳＳＡおよびＭＲＳＡに対して、比較例２のＥＧＣＧよりも優れた抗菌性を示した。さらに、以下に示すように、アシル基の炭素数が同じ場合、飽和脂肪酸よりも、不飽和結合が二カ所以上導入された不飽和脂肪酸であるＥＧＣＧ誘導体の方が、抗菌効果が高いことがわかった。また、炭素数１６の飽和脂肪酸を導入した誘導体と、炭素数８の飽和脂肪酸を２分子導入した誘導体とは、抗菌効果が同等であり、また、水溶性ならびに化学構造安定性が高いことがわかった。
ＥＧＣＧ−Ｃ１６≦ＥＧＣＧ−Ｃ１６Ｅ
ＥＧＣＧ−Ｃ１８≦ＥＧＣＧ−Ｃ１８Ｅ＜ＥＧＣＧ−Ｃ１８ＤＥ≦
ＥＧＣＧ−Ｃ１８ＴＥ
ＥＧＣＧ−Ｃ１６≦ＥＧＣＧ−Ｃ８×２【００８２】
（３）抗菌スペクトラム（ＭＩＣ）
下記表７および表８に示す各種標準菌株について、前記実施例２の抗菌剤溶液を使用し、以下に示す以外は、前記実施例１の（２）と同様にして、ＭＩＣを測定した。前記抗菌剤溶液は、１００％ＤＭＳＯに溶解後、滅菌蒸留水で希釈して調製した。前記各種菌株は、それぞれ、ＡＴＣＣまたはＮＣＴＣ由来の菌株を用いた。Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓおよびＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｕｓは、獲得耐性機構を持たない臨床分離株を用いた。富栄養菌であるＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＡＴＣＣ４９６１９、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ  ＡＴＣＣ１９６１５、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ  ＡＴＣＣ１３８１３、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、およびＨａｅｍｏｐｈｉｌｉｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ  ＡＴＣＣ４９７６６に対しては、培地にストレプト・ヘモサプリメント（栄研化学社製）を加えた。真菌に対するＭＩＣ測定は、ＲＰＭＩ１６４０／ＭＯＰＳ（ｐＨ７．０）培地を用い、ＣＬＳＩ法に準じ、微量液体希釈法により行った。約２×１０３ｃｅｌｌｓ／ｍＬの真菌を接種し、３５℃、２４〜４８時間培養後、ＭＩＣを判定した。また、前記比較例２の抗菌剤溶液についても、同様にＭＩＣを測定した。【００８３】
各種標準菌株に対する各誘導体のＭＩＣ判定結果を下記表７および表８に示す。下記表７は、細菌に対する結果であり、下記表８は、真菌に対する結果である。【００８４】
【表７】
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【００８５】
【表８】
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【００８６】
前記表７および前記表８に示すように、実施例２の各ＥＧＣＧ誘導体は、いずれの菌株に対しても抗菌活性を示した。前記表７に示すように、前記各ＥＧＣＧ誘導体は、グラム陽性菌に対してＥＧＣＧよりも優れた抗菌効果を示した。また、前記表７に示すように、各ＥＧＣＧ誘導体は、中でも、ブドウ球菌に対して、高い抗菌活性を示し、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｓ  ＡＴＣＣ１４９９０（表皮ブドウ球菌）に対しては、ＥＧＣＧ−Ｃ１６およびＥＧＣＧ−Ｃ１８が、最も強い抗菌効果を示した。また、前記表８に示すように、各ＥＧＣＧ誘導体は、各種の真菌にも抗菌活性を示し、中でも、ＥＧＣＧ−Ｃ１６ＥおよびＥＧＣＧ−Ｃ１８ＴＥが、最も優れた抗真菌効果を示した。ＥＧＣＧ−Ｃ１６Ｅの抗真菌効果は、比較例２のＥＧＣＧと比較して２〜８倍優れていた。【００８７】
［実施例３］
ＥＧＣＧ−Ｃ１６について、ＭＳＳＡおよびＭＲＳＡに対する抗菌作用が、細胞壁構成成分であるペプチドグリカン（ＰＧ）、Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ、または外膜のリポポリサッカライド（ＬＰＳ）の添加によって抑制されるかを確認した。ＭＩＣの測定は、前記実施例２の（２）に準じて行った。【００８８】
抗菌剤として、実施例３は、前記実施例１で調製したＥＧＣＧ−Ｃ１６を使用した。比較例３は、未置換のＥＧＣＧ、参考例は、ＰＧまたはＤ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａに直接結合するバンコマイシン（ＶＣＭ、ＳＩＧＭＡ社製）およびテイコプラニン（ＴＥＩＣ、ＳＩＧＭＡ社製）、ＰＧ合成酵素を阻害するアンピシリン（ＡＢＰＣ、ＳＩＧＭＡ社製）を使用した。ＥＧＣＧ−Ｃ１６およびＥＧＣＧは、前記実施例１の（２）と同様にして、抗菌剤溶液を調製した。これら以外の抗菌剤は、ＰＢＳに溶解し、抗菌剤溶液を調製した。【００８９】
また、添加剤として、ＰＧ（Ｐｅｐｔｉｄｏｇｌｙｃａｎ  Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ社製）、Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ（ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ社製）およびＬＰＳ（Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ  Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ社製）を準備した。各添加剤は、それぞれＰＢＳに溶解し、これらを添加剤溶液として使用した。【００９０】
前記抗菌剤溶液の希釈系列を調製した。これらを９６ウェルプレートに分注し、さらに、前記添加剤溶液を添加して混合した後、ＭＲＳＡ  ＡＴＣＣ４３３００またはＭＳＳＡ  ＡＴＣＣ２５９２３の菌液を添加して、３７℃で１８時間培養を行った。前記抗菌剤溶液と前記添加剤溶液と前記菌液との混合液において、ＰＧ、Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−ＡｌａおよびＬＰＳの最終濃度は、それぞれ３０μｇ／ｍＬとした。特に示さない限り、前記実施例２の（２）と同様にして、最小発育濃度（ＭＩＣ）を算出した。これらの結果を下記表９に示す。【００９１】
【表９】
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【００９２】
前記表９に示すように、比較例３のＥＧＣＧは、抗菌活性が弱く、ＭＩＣの変化を見ることはできなかった。実施例３のＥＧＣＧ誘導体は、ＶＣＭおよびＴＥＩＣと同様に、ＰＧの添加によって、ＭＩＣの値が２倍高くなった。このことから、実施例３のＥＧＣＧ誘導体は、ＶＣＭおよびＴＥＩＣと同様に、細胞壁成分であるＰＧに直接結合または吸着すると考えられ、このことが抗菌活性を示す一因になっていると推測された。また、ＶＣＭおよびＴＥＩＣは、Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａの添加によりＭＩＣが１６倍以上上昇したのに対して、前記ＥＧＣＧ誘導体は、Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａの影響を受けなかった。このことから、ＰＧにおける前記ＥＧＣＧ誘導体の結合部位は、ＶＣＭおよびＴＥＩＣとは異なり、Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａではないことが明らかになった。【００９３】
［実施例４］
ＥＧＣＧ−Ｃ１６について、ＭＳＳＡおよびＭＲＳＡの膜構造に対する障害性を確認した。【００９４】
抗菌剤として、実施例４は、前記実施例１で調製したＥＧＣＧ−Ｃ１６、比較例４は、ＥＧＣＧ、参考例は、膜障害性ペプチドＮＩＳＩＮ（ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ社製）を使用した。ＥＧＣＧ−Ｃ１６およびＥＧＣＧは、Ｔｏｐ濃度をＤＭＳＯに溶解して、抗菌剤溶液を調製し、他の抗菌剤は、それぞれＰＢＳに溶解し、適宜ＰＢＳで希釈し、抗菌剤溶液を調製した。前記抗菌剤の溶解に用いたＤＭＳＯの影響も検討した。【００９５】
ＭＳＳＡ  ＡＴＣＣ２５９２３、ＭＲＳＡ  ＡＴＣＣ４３３００を、ＭＨ−ｂｒｏｔｈ（Ｄｉｆｃｏ）で、指数増殖期後期まで振盪培養した。得られた培養液を、７０００ｒｐｍ、１０分間遠心し、沈澱した菌体をＰＢＳに懸濁した。菌体の懸濁液を、３８４  ｂｌａｃｋ  ｐｌａｔｅのウェルに添加し、さらに、前記各種抗菌剤溶液を添加して、混合し、３７℃で１５分インキュベートした。続いて、前記ウェルに、死菌染色色素（商品名ＳＹＴＯＸ  Ｇｒｅｅｎ、ＬＯＮＺＡ社製）を１０μｍｏｌ／Ｌとなるように混合し、３７℃で１０分インキュベートした。各種抗菌剤の最終濃度は、ＥＧＣＧ誘導体  ４、８、１６、３２μｇ／ｍＬ、ＥＧＣＧ  ８、１６、３２、６４、１２８μｇ／ｍＬ、ＮＩＳＩＮ  １、２、４、８μｇ／ｍＬとした。そして、インキュベート後、前記プレートの各ウェルに４８８ｎｍの励起光を照射し、５３０ｎｍの蛍光を、商品名Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ  ＳＨ−８１００（コロナ電気社製）で測定した。一方、コントロールとして、前記抗菌剤溶液に代えて、ＰＢＳまたは１０％ＤＭＳＯを添加して、同様に蛍光強度を測定した。そして、ＭＳＳＡおよびＭＲＳＡのそれぞれについて、コントロール（ＰＢＳ）の蛍光強度を１として、各薬剤を添加した際の蛍光強度の比率を算出した。前記ＳＹＴＯＸ  Ｇｒｅｅｎは、生菌の膜を透過しない、ＤＮＡのインターカレーターである。この蛍光強度が相対的に高いことは、薬剤の膜障害性が相対的に高く、前記インターカレーターが菌体内に取り込まれやすくなったことを示す。したがって、前記蛍光強度の比率が１より大きい程、膜障害作用が強いことを示し、１よりも顕著に小さい場合は、細菌の膜の透過性が低下している可能性があると考えられる。【００９６】
これらの結果を、図３に示す。図３は、各抗菌剤について、ＭＳＳＡおよびＭＲＳＡに対する膜障害性を、ＳＹＴＯＸ  Ｇｒｅｅｎの蛍光強度で示したグラフである。同図において、ｙ軸は、コントロールの蛍光強度を１とした際の蛍光強度比を示す。図３において、各抗菌剤の上に記載された数字は、前述の濃度を示す。また、各抗菌剤の濃度において、左（白）のバーがＭＳＳＡ  ＡＴＣＣ２５９２３の結果であり、右（黒）のバーが、ＭＲＳＡ  ＡＴＣＣ４３３００の結果を示す。図３に示すように、比較例のＥＧＣＧは、蛍光強度比が１よりも小さい。このことから、比較例のＥＧＣＧは、細胞膜に対する障害性が弱く、前記インターカレーターの菌体内への導入が、細胞壁への物理的な吸着によって、コントロール（ＰＢＳ）よりもさらに抑制されていると推測される。１０％ＤＭＳＯにも、弱いながら類似の傾向がみられた。これに対し、実施例４のＥＧＣＧ−Ｃ１６は、参考例の膜障害性ペプチドＮＩＳＩＮと同様に、蛍光強度比が極めて大きく、明らかに細胞膜に対する障害性を有していると推測される。また、ＥＧＣＧ−Ｃ１６は、６４μｇ／ｍＬの高濃度で、この作用が減弱する傾向がみられた。このことから、ＥＧＣＧ−Ｃ１６にもＥＧＣＧと同様の作用もあることが推測される。以上の結果、ＥＧＣＧ誘導体では、前述のように、細胞壁に結合する作用を示すことに、さらに膜への障害作用が加わったため、ＥＧＣＧより優れた抗菌活性が得られたと推定される。【００９７】
［実施例５］
ＥＧＣＧ誘導体について、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ  ＭＧ１６５５に対する抗菌力における多剤排出ポンプの影響を検討した。【００９８】
（１）ＥＧＣＧ誘導体
前記ＥＧＣＧ誘導体として、前記実施例２のＥＧＣＧ−Ｃ１６、Ｃ８×２、Ｃ１６ＥおよびＣ１８ＴＥを用いた。【００９９】
（２）抗菌効果
前記ＥＧＣＧ誘導体を用い、前記細菌として、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ  ＭＧ１６５５（以下、野生型株という）および前記Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ  ＭＧ１６５５の遺伝子欠損株を用いた以外は、前記実施例２の（２）と同様にして、最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）を測定した。前記遺伝子欠損株は、前記Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ  ＭＧ１６５５における排出ポンプ遺伝子ａｃｒＢ、ａｃｒＤまたはａｃｒＥＦを欠損させた株（△ａｃｒＤ、△ａｃｒＥＦおよび△ａｃｒＢ）、前記排出ポンプ遺伝子のコードタンパク質と共役する外膜タンパクの遺伝子ｔｏｌＣを欠損させた株（△ｔｏｌＣ）を用いた。【０１００】
比較例５は、前記ＥＧＣＧ誘導体に代えて、ＥＧＣＧを用いた以外は、前記実施例５と同様にして、最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）を測定した。これらの結果を下記表１０に示す。【０１０１】
【表１０】
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【０１０２】
表１０に示すように、前記ＥＧＣＧ誘導体は、△ａｃｒＢおよび△ｔｏｌＣに対して、野生型株より優れた抗菌活性を示し、前記ＥＧＣＧの２倍の抗菌性を示した。また、前記表１０に示すように、前記ＥＧＣＧ誘導体および前記ＥＧＣＧの抗菌性は、野生型株（ＭＧ１６５５）と、前記遺伝子欠損株（△ａｃｒＤ、△ａｃｒＥＦ）との間で、有意な差はなかった。これに対して、ａｃｒＢを欠損させたことにより、前記遺伝子欠損株（△ａｃｒＢ）に対して、前記ＥＧＣＧ誘導体および前記ＥＧＣＧは、優れた抗菌性を示した。これは、全てのＲＮＤ型ポンプと共役する外膜タンパク質遺伝子ｔｏｌＣを欠損させた前記遺伝子欠損株（△ｔｏｌＣ）に対する抗菌性と、ほぼ同程度であった。この結果から、前記ＥＧＣＧ誘導体と前記ＥＧＣＧは、主に、ａｃｒＢのコードタンパク質ＡｃｒＢに排出されることが推測された。【０１０３】
［実施例６］
前記ＥＧＣＧ−Ｃ１６について、チェッカーボード法により、β−ラクタム薬であるアンピシリン（ＡＢＰＣ）またはイミペネム（ＩＰＭ）との併用による、ブドウ球菌に対する抗菌性を確認した。【０１０４】
前記ＥＧＣＧ−Ｃ１６は１００％ＤＭＳＯ、前記各β−ラクタム薬は滅菌蒸留水に溶解後、滅菌蒸留水にて所定濃度に希釈し各薬剤の各濃度をそれぞれ組み合わせてチェッカーボード法によりＥＧＣＧ−Ｃ１６添加による前記各β−ラクタム薬のＭＩＣ変化を測定した。ＥＧＣＧ−Ｃ１６の最終濃度は０、２、４、８、１６、３２、６４および１２８μｇ／ｍＬ、ＡＢＰＣの最終濃度は、０、１、２、４、８、１６、３２および６４μｇ／ｍＬとし、ＩＰＭの最終濃度は、０、０．００１、０．００２、０．００４、０．００８、０．０１６および０．０３１μｇ／ｍＬとした。前記細菌として、ＭＲＳＡ  ＡＴＣＣ４３３００および前記実施例２のＭＲＳＡ臨床分離株Ｎｏ．８を用いた以外は、前記実施例２の（２）と同様にして、ＥＧＣＧ−Ｃ１６併用時の前記各β−ラクタム薬の最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）を測定した。【０１０５】
比較例６は、前記ＥＧＣＧ−Ｃ１６に代えて、ＥＧＣＧを用いた以外は、前記実施例６と同様にして、最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）を測定した。これらの結果を、下記表１１に示す。下記表１１には、所定濃度のＥＧＣＧ−Ｃ１６またはＥＧＣＧを併用した際のβ−ラクタム薬のＭＩＣ変化を示す。【０１０６】
【表１１】
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【０１０７】
前記表１１に示すように、前記ＥＧＣＧ誘導体によれば、前記ＥＧＣＧよりも、併用によって、前記ＡＴＣＣ４３３００および前記臨床分離株Ｎｏ．８に対する前記β−ラクタム薬のＭＩＣを顕著に低減できた。このことから、前記ＥＧＣＧ誘導体により、前記β−ラクタム薬の抗菌性を顕著に向上できることがわかった。また、ＩＰＭ感受性の前記ＡＴＣＣ４３３００に対して、前記ＥＧＣＧは、１６〜６４μｇ／ｍＬの濃度において、弱い拮抗作用を示したのに対して、前記ＥＧＣＧ誘導体は、検討した濃度範囲において拮抗作用を示さなかった。【０１０８】
［実施例７］
Ｄ環にアシル基を有するＥＧＣＧ誘導体と、Ｂ環にアシル基を有するＥＧＣＧ誘導体について、代謝安定性を確認した。【０１０９】
実施例１と同様にして、ＥＧＣＧ−Ｃ１６を作製した。前記ＥＧＣＧ−Ｃ１６は、前記化学式（２）中、Ｂ環の３位（Ｒ１）がパルミトイル基（Ｃ１６）である誘導体と４位（Ｒ２）がパルミトイル基である誘導体との混合物（以下、「Ｂ環誘導体」という）、および、Ｄ環の４位（Ｒ５）がパルミトイル基（Ｃ１６）である誘導体と５位（Ｒ６）がパルミトイル基である誘導体との混合物（以下、「Ｄ環誘導体」という）を使用した。前記化学式（２）において、前述したＲ以外のＲは、全て水素原子である。【０１１０】
１．２５μＬの１０ｍｇ／ｍＬマウスミクロソーム（日本チャールズ・リバー株式会社）と、０．２５μＬの１％  ３−[（３−コラミドプロピル）ジメチルアンモニオ]−１−プロパンスルホナート（ＣＨＡＰＳ、Ｄｏｊｉｎｄｏ社）水溶液とを、８．５μＬの０．１ｍｏｌ／Ｌリン酸カリウム水溶液（ｐＨ７．４）に溶解した。この混合溶液を、氷上で３０分インキュベートして、前記ミクロソーム中のグルクロン酸代謝酵素を溶出させた。これを反応液Ａとした。次に、１０μＬの１０ｍｍｏｌ／Ｌ  ＥＧＣＧ−Ｃ１６、５．０μＬの１０ｍｇ／ｍＬ  Ｌ−α−リゾフォスファチジルコリン（Ｗａｋｏ社）、および、２０μＬの３０ｍｍｏｌ／Ｌ  ＵＤＰ−グルクロン酸三ナトリウム（ＵＤＰ−Ｇｌｃ;ナカライ社）を、それぞれ１５５μＬの反応バッファー（１．０ｍｏｌ／Ｌ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）：０．１ｍｏｌ／Ｌ  ＭｇＣｌ２：Ｈ２Ｏ＝２：１：１３）に溶解させた。これらを、それぞれ反応液Ｂとした。続いて、３７℃の湯浴中、前記反応液Ａと前記反応液Ｂとを混合して、ＥＧＣＧ−Ｃ１６のグルクロン酸抱合化反応を行った。所定時間（０、０．５、１、１．５、３、６、１２、２４分）反応させた後、代謝反応の停止のために、２００μＬの反応液に対して、２００μＬのアセトニトリル（ＨＰＬＣ  ｇｒａｄｅ；関東化学株式会社）を添加した。続いて、前記反応液を０．４５μｍ  ＰＴＦＥ製ジスミックフィルター（Ｅｋｉｃｒｏｄｉｓｃ  １３ＣＲ；Ｇｅｌｍａｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ社）でろ過した後、得られたろ液約４０μＬを代謝反応液として、下記条件でＨＰＬＣ分析に供した。【０１１１】
ＨＰＬＣ分析システム（日本分光株式会社）にＷＰ３００−Ｃ４カラム（５μｍ，４．６×１５０ｍｍ，ＧＬ  Ｓｃｉｅｎｃｅ社）を搭載し、ＥＧＣＧ−Ｃ１６の代謝反応液を波長２６５ｎｍで解析した。ＨＰＬＣ分析の移動相は、０．１％トリフルオロ酢酸（ＨＰＬＣ  ｇｒａｄｅ；Ｗａｋｏ社）を含む蒸留水（ＨＰＬＣ  ｇｒａｄｅ；関東化学株式会社）をＡ液、０．１％トリフルオロ酢酸を含むアセトニトリル（ＨＰＬＣ  ｇｒａｄｅ；関東化学株式会社）をＢ液として使用した。そして、Ｂ液が移動相全体（Ａ液＋Ｂ液）において占める体積百分率を、溶出時間０、３、１０、２２、２６、２８、３０分において、それぞれ、０、０、２５、１００、１００、０、０％となるようにグラジエント設定し、流速１．５ｍＬ／ｍｉｎで分析を行った。そして、未反応の反応液におけるＥＧＣＧ−Ｃ１６のピーク面積を１００％として、所定時間の反応液におけるＥＧＣＧ−Ｃ１６のピーク面積の割合を、ＥＧＣＧ−Ｃ１６の残存率％として求めた。比較例７は、前記ＥＧＣＧ誘導体に代えて、アシル基未導入のＥＧＣＧを使用し、同様の処理を行った。これらの結果を図４に示す。図４は、ＥＧＣＧ−Ｃ１６の反応時間とＥＧＣＧ−Ｃ１６残存率との関係を示すグラフである。図４において、Ｄ−ｒｉｎｇは、Ｄ環誘導体であり、Ｂ−ｒｉｎｇは、Ｂ環誘導体を意味する。【０１１２】
図４に示すように、２４分経過時において、Ｄ環誘導体は、ピーク面積が開始時の０．５％に減少していたが、Ｂ環誘導体は、４４％が残存しており、より代謝安定性に優れることがわかった。
【産業上の利用可能性】
【０１１３】
本発明によれば、優れた安定性および抗菌性で、菌の感染を阻害できる。また、本発明の抗菌剤において、前記ＥＧＣＧ誘導体の基本骨格であるＥＧＣＧは、例えば、お茶等に含まれるカテキンであって、安全性に優れることは十分に知られており、また、前記ＥＧＣＧ誘導体のＲ１〜Ｒ６のアシル基も、例えば、安全性に優れるものである。したがって、本発明の抗菌剤は、例えば、安全性にも優れる薬剤といえる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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