(57)【要約】  本発明は、有機溶媒やイオン交換樹脂を使用することなく、簡便に、ピロロキノリンキノンのフリー体を製造する方法とその高純度な結晶の提供を目的とする。本発明によれば、ピロロキノリンキノンのアルカリ金属塩を溶解してなるｐＨ１．５以下の溶液を調製し、析出物を得ることを含んでなる、ピロロキノリンキノンのフリー体の製造方法およびその高純度な結晶が提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）：
【化１】
2011055796.tif 000006
で表される化合物の製造方法であって、該化合物のアルカリ金属塩を溶解してなるｐＨ１．５以下の溶液を調製し、析出物を得ることを含んでなる、製造方法。
【請求項２】
アルカリ金属塩が、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、セシウム塩およびルビジュウム塩から選択される、請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
アルカリ金属塩が、ジアルカリ金属塩である、請求項１に記載の製造方法。
【請求項４】
アルカリ金属塩が、ジナトリウム塩である、請求項１に記載の製造方法。
【請求項５】
ｐＨ１．５以下の溶液が、酸を使用することにより調製される、請求項１に記載の製造方法。
【請求項６】
酸が、塩酸、臭化水素、ヨウ化水素、過塩素酸、硫酸、燐酸、硝酸、酢酸、蟻酸、シュウ酸、乳酸およびクエン酸から選択される１種または２種以上の組み合わせである、請求項５に記載の製造方法。
【請求項７】
式（１）で表される化合物が、結晶の形態である、請求項１〜６のいずれかに記載の製造方法。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の製造方法により製造される、式（１）：
【化１】
2011055796.tif 000007
で表される化合物。
【請求項９】
式（１）：
【化１】
2011055796.tif 000008
で表される化合物の結晶。
【請求項１０】
粉末Ｘ線回折でＣｕ Ｋα放射線を用いた２θのピークとして１２．４°、１５．５°、１６．６°、１８．２°、２４．０°、２４．９°、２８．０°（いずれも±０．２°）を示す、請求項９に記載の結晶。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の参照】
【０００１】
本特許出願は、２００９年１１月６日に提出された日本出願である特願２００９−２５５０５６の利益を享受する。この先の出願における全開示内容は、引用することにより本明細書の一部とされる。
【技術分野】
【０００２】
本発明は、ピロロキノリンキノンのフリー体の製造方法および該製造方法により得られる高純度な結晶に関する。
【背景技術】
【０００３】
ピロロキノリンキノン（以下、「ＰＱＱ」と表すことがある）は、新しいビタミンの可能性があることが提案されて（例えば、nature, vol.422, 24 April, 2003, p832）、健康補助食品、化粧品などに有用な物質として注目を集めている。ＰＱＱは、細菌に限らず、真核生物のカビ、酵母に存在し、補酵素として重要な働きを行っている。また、ＰＱＱについては、近年までに、細胞の増殖促進作用、抗白内障作用、肝臓疾患予防治療作用、創傷治癒作用、抗アレルギ−作用、逆転写酵素阻害作用、グリオキサラ−ゼＩ阻害作用−制癌作用など多くの生理活性が明らかにされている。このＰＱＱは、有機化学的合成法（JACS、第103巻、第5599〜5600頁（1981））や発酵法（特開平１−２１８５９７号公報）などの方法により得たＰＱＱをクロマトグラフィーに供し、流出液中のＰＱＱ区分を濃縮して、晶析により結晶化し（特許第２０７２２８４号公報）、乾燥して得ることができる。しかし、こうして得られる結晶は、使用するｐＨや析出条件によってかわるが通常アルカリ金属塩である。【０００４】
ＰＱＱは、誘導体合成の原料や、アルカリ金属塩では溶けない有機溶媒に溶解した製品として利用するために、フリー体が求められている。しかし、ＪＡＣＳ、第１０３巻、第５５９９〜５６００頁（１９８１）では、ｐＨを２．５にすることでＰＱＱの結晶を得ているが、本発明者が鋭意検討した結果、この領域ではＰＱＱはフリー体ではなく、１アルカリ金属塩であることが判明した。さらに単結晶Ｘ線回折の結果、フリー体の構造が報告されているが（nature, vol. 280, 30 August, 1979, P844）、これはアセトン付加体が含まれている。【０００５】
通常、アルカリ金属塩をフリー体にするにはイオン交換樹脂の使用や、酸性にして有機溶媒抽出する方法が一般的である。しかし、イオン交換樹脂の場合、ＰＱＱのフリー体の溶解度が低いために大量の抽出液が必要であり、また、その後の濃縮工程も必要になり効率的でない。また、有機溶媒を使用して抽出する場合、装置は有機溶媒対応にしたものとなり、高価である。また、火災や爆発の危険性も増えるため、最小限にとどめることが好ましい。
【発明の概要】
【０００６】
本発明者らは、ピロロキノリンキノンのアルカリ金属塩が溶解された溶液のｐＨを１．５以下にすることにより、ピロロキノリンキノンのフリー体が析出されることを見出した（実施例１〜３）。本発明は、この知見に基づくものである。
【０００７】
本発明は、有機溶媒やイオン交換樹脂を使用することなく、簡便に、ピロロキノリンキノンのフリー体を製造する方法とその高純度な結晶の提供を目的とする。
【０００８】
本発明によれば  式（１）：
【化１】
2011055796.tif 000002
で表される化合物（ピロロキノリンキノンのフリー体）の製造方法であって、該化合物のアルカリ金属塩を溶解してなるｐＨ１．５以下の溶液を調製し、析出物を得ることを含んでなる製造方法（以下、「本発明による製造方法」ということがある）が提供される。
【０００９】
本発明によれば、また、本発明による製造方法により製造される、式（１）：
【化１】
2011055796.tif 000003
で表される化合物（以下、「本発明による化合物」ということがある）が提供される。
【００１０】
本発明によれば、さらに、式（１）：
【化１】
2011055796.tif 000004
で表される化合物の結晶（以下、「本発明による結晶」ということがある）が提供される。
【００１１】
本発明によれば、有機溶媒やイオン交換樹脂を使用することなく、アルカリ金属の含有量が少なく、結晶性が良いため純度が高いピロロキノリンキノンのフリー体を簡便に製造可能である点で有利である。
【００１２】
本発明で得られるＰＱＱフリー体は、医薬または機能性食品の有効成分とすることができ、皮膚外用剤、注射剤、経口剤、坐剤等の形態、あるいは、日常食する飲食物、栄養補強食、各種病院食等の形態で提供可能である点で有利である。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】実施例１で得られたＰＱＱフリー体の粉末Ｘ線解析の結果を示した図である。
【発明の具体的説明】
【００１４】
本発明によれば、ピロロキノリンキノンのアルカリ金属塩を溶解してなるｐＨ１．５以下の溶液を調製し、析出物を得ることにより、ピロロキノリンキノンのフリー体を製造することができる。
【００１５】
本願明細書において「ピロロキノリンキノン」および「ピロロキノリンキノンのフリー体」とは、下記式（１）で表される化合物を意味し、該化合物を表すために互換的に用いられる。
【化１】
2011055796.tif 000005
【００１６】
本願明細書において「ピロロキノリンキノンのアルカリ金属塩」とは、式（１）で表される化合物のアルカリ金属塩を意味する。
【００１７】
本願明細書において「ピロロキノリンキノンのフリー体の結晶」とは、式（１）で表される化合物の結晶を意味し、固体状態でピロロキノリンキノン分子が規則正しく整列している状態であり、一般的には、高純度で安定性の高い状態である。式（１）の化合物（ピロロキノリンキノンのフリー体）が結晶の形態であるか否かは、粉末Ｘ線回析でピークを検出することにより確認することができる。
【００１８】
本発明による製造方法は、ピロロキノリンキノンのアルカリ金属塩を溶解してなるｐＨ１．５以下の溶液を調製し、析出物を得る工程を実施することにより行うことができる。
【００１９】
本発明において、ピロロキノリンキノンのフリー体を製造するための原料として使用するピロロキノリンキノンのアルカリ金属塩としては、ナトリウム、カリウム、リチウム、セシウム、ルビジュウムなどの塩が挙げられる。これらの塩は単独でも、混合でもどちらでも良い。好ましくは、単独のナトリウム、カリウムの塩であり、容易に購入しやすい点で、ナトリウム塩がより好ましい。ピロロキノリンキノンのアルカリ金属塩における塩の置換数は、１〜３であり、モノアルカリ金属塩、ジアルカリ金属塩、トリアルカリ金属塩のどれでも良いが、好ましくは、ジアルカリ金属塩である。ピロロキノリンキノンのアルカリ金属塩として、特に好ましくはジナトリウム塩である。
【００２０】
このアルカリ金属塩を用いて、ｐＨ１．５以下の水溶液中で析出させることでフリー体を製造することができる。同様にしてアルカリ土類金属やアンモニウム、有機アンモニウム塩、遷移金属塩でも同様に製造できる。
【００２１】
本発明において原料に用いるピロロキノリンキノンのアルカリ金属塩は、市販されているものを入手することができる。
【００２２】
本発明において原料に用いるピロロキノリンキノンのアルカリ金属塩は、有機化学的合成法や発酵法などの公知の方法により製造することができる。
【００２３】
本発明において原料に用いるピロロキノリンキノンのアルカリ金属塩は、結晶でもよいし、非晶質でもよい。また、不純物を含んでいてもよい。
【００２４】
ピロロキノリンキノンのアルカリ金属塩を溶液として使用する場合は、水、アルコール等の溶媒に溶解して使用することができるが、ピロロキノリンキノンのアルカリ金属塩の水溶液として使用することが好ましい。
【００２５】
ピロロキノリンキノンのアルカリ金属塩の溶液は、例えば、０．００１〜１ｗ／ｗ％となるように調製することができるが、好ましくは、０．００５〜０．５ｗ／ｗ％、より好ましくは、０．０１〜０．２５ｗ／ｗ％である。
【００２６】
ピロロキノリンキノンのアルカリ金属塩を溶液として使用する場合は、該溶液のｐＨは、３以上で１３以下とすることができ、好ましくは、５〜１２であり、より好ましくは、７〜１０である。ｐＨを調整するために、アルカリ性物質（例えば、水酸化ナトリウム等）を加えることができる。このときの温度は０〜１４０℃とすることができるが、好ましくは、２０〜９０℃が特別な装置も要らず、使用しやすい。溶解度の面では高い温度が溶解しやすいため、生産性の点から、５０℃以上にするのが好ましい。
【００２７】
本発明による製造方法において、目的のピロロキノリンキノンのフリー体を析出させるために、ピロロキノリンキノンのアルカリ金属塩を溶解してなるｐＨ１．５以下の溶液を調製する。
【００２８】
ｐＨ１．５以下の溶液の調製は、酸を使用することにより行うことができる。
【００２９】
溶液のｐＨは１．５以下、好ましくは、１以下とすることができる。ｐＨが２以上であればアルカリ金属が残留、つまり、１ナトリウム塩以上の塩になってしまう。それを防ぐために使用するｐＨは１．５以下が良く、さらに好ましくは１以下で析出させることが好ましい。析出の際にｐＨを下げていないと、析出する結晶が１アルカリ金属塩の構造に由来するピークを有する固体になるために、結晶性を良くするには１以下であることが望ましい。
【００３０】
本発明による製造方法において、溶液のｐＨは０．５〜１．５、好ましくは、０．５〜１、より好ましくは、０．６〜０．９とすることができる。
【００３１】
本発明による製造方法において、ピロロキノリンキノンのアルカリ金属塩を溶解してなるｐＨ１．５以下の溶液を調製する工程について、ピロロキノリンキノンのアルカリ金属塩溶液に対して酸を加えてｐＨを下げることもできるし、酸の溶液にピロロキノリンキノンのアルカリ金属塩溶液を添加して実施することもできる。また、再結晶等の操作を行う場合は、ピロロキノリンキノンのアルカリ金属塩の固体と酸と混合することにより実施することもできる。この場合、急激に酸を加えた場合、混合状態が均一に起こらないため、アルカリ金属が残留しやすいが、使用する水の量も少なく、簡便である。
【００３２】
具体的には、ピロロキノリンキノンのアルカリ金属塩を含んでなるｐＨ１．５以下の溶液は、下記工程（以下「調製工程」ということがある）：
（ｉ）ピロロキノリンキノンのアルカリ金属塩を溶解してなる溶液に、酸または酸性溶液を添加し、該溶液のｐＨを１．５以下にする工程； 
（ｉｉ）酸性溶液に、ピロロキノリンキノンのアルカリ金属塩またはピロロキノリンキノンのアルカリ金属塩を溶解してなる溶液を添加し、該溶液のｐＨを１．５以下にする工程；または
（ｉｉｉ）酸に、ピロロキノリンキノンのアルカリ金属塩を溶解してなる溶液を添加し、該溶液のｐＨを１．５以下にする工程
を実施することにより調製することができる。好ましくは、ピロロキノリンキノンのアルカリ金属塩を溶解してなる溶液に、酸または酸性溶液を添加し、該溶液のｐＨを１．５以下に調整する工程を実施することにより調製することができる。
【００３３】
本願明細書における「添加」については、添加物を添加対象に一時に添加することもできるし、徐々に添加することもできる。
【００３４】
調製工程において使用される酸は、ｐＨを下げることができる限り、この種類は特に制限されない。無機酸、有機酸、どちらでも使用できる。具体的には、無機酸としては、塩酸、臭化水素、ヨウ化水素、過塩素酸、硫酸、燐酸、硝酸等が挙げられるが、好ましくは、塩酸、臭化水素、ヨウ化水素、過塩素酸、燐酸、硝酸、より好ましくは、塩酸である。有機酸としては、酢酸、蟻酸、シュウ酸、乳酸、クエン酸等が挙げられるが、好ましくは、酢酸、蟻酸、シュウ酸、乳酸、クエン酸である。使用するｐＨが低いために酸がピロロキノリンキノンに残留する危険性があることから、蒸気圧があり、毒性のない一価の酸、例えば塩酸が最も好ましい。また、塩酸は本発明の範囲にも規定する結晶性の高い固体を与え、結晶性の面からも優れている。多価の酸はアルカリ金属イオンとの塩の溶解度が低いことが多く、固体に残留しやすい。硫酸は発煙等がなく使用しやすいが、固体に残留しやすく、また、脱水性があるために変色を起こす危険性があるために他の酸と組み合わせることが好ましい。
【００３５】
酸は、単独または２種以上混合して使用することができるが、少なくとも塩酸を使用すること、すなわち、塩酸単独または塩酸と他の1種以上の酸（例えば、臭化水素、ヨウ化水素、過塩素酸、硫酸、燐酸、硝酸等）とを組み合わせて使用することが好ましい。
【００３６】
酸は、希釈酸（酸性溶液）として使用することができる。酸を酸性溶液として使用する場合は、酸を、水等の溶媒に溶解して使用することができる。
【００３７】
酸性溶液は、例えば、０．１〜２０ｇ／Ｌとなるように調製することができるが、好ましくは、０．５〜１０ｇ／Ｌである。  
【００３８】
ピロロキノリンキノンのアルカリ金属塩と酸とのモル比は、１：１〜１：１０００、好ましくは、１：２〜１：１００とすることができる。
【００３９】
調製工程を実施する温度は特に制限はないが、一般的な取り扱いやすさの点から、−２０℃から１４０℃とすることができる。ピロロキノリンキノンのアルカリ金属塩の溶解度を上げたい場合は加温することができる。
【００４０】
調製工程を実施する時間は特に制限がないが、５分から１週間ぐらいで行うことができる。スケールが小さい場合は短時間ですむが、大きな場合は長時間必要である。
【００４１】
上記の調製工程により調製されたピロロキノリンキノンのアルカリ金属塩を溶解してなるｐＨ１．５以下の溶液から析出物を得ることができる。
【００４２】
本願明細書において「析出物」とは、液相（溶液）から表れた固相（固体）を意味する。
【００４３】
本願発明による製造方法において、析出物を得るために、上記調製工程により調製されたピロロキノリンキノンのアルカリ金属塩を溶解してなるｐＨ１．５以下の溶液を放置する工程（以下「析出工程」ということがある）を実施することができる。該工程において、該溶液は、攪拌されてもよい。
【００４４】
攪拌は、磁気攪拌、機械攪拌、手動攪拌、振とう攪拌等に供することにより実施することができるが、好ましくは、磁気攪拌または機械攪拌である。
【００４５】
析出工程を実施する温度は特に制限はないが、一般的な取り扱いやすさの点から、−２０℃から１００℃とすることができる。析出させる時には低い温度のほうが析出しやすいため、好ましくは、−１０〜７０℃、より好ましくは０〜５０℃とすることができる。
【００４６】
析出工程を実施する時間は特に制限がないが、１分〜１週間、好ましくは、３０分〜１時間である。
【００４７】
析出した固体（析出物）は、濾過、遠心分離等の公知の方法を用いて液と分けることができる。これを水、塩酸溶液で洗い、必要であればイソプロパノールのような有機溶媒でさらに洗えばよい。この得られた固体は風乾、減圧乾燥することで水分を除くことができる。
【００４８】
本発明による製造方法は、より具体的には、下記のように実施することができる：
ピロロキノリンキノンのアルカリ金属塩を水に溶解させる。このときのｐＨは３以上で１３以下であることが望ましく、より好ましくは５から１２である。この時にｐＨ調整のためにアルカリ性の溶液を加えて調整してもよい。このときの温度は０から１４０℃で使用すれは良いが、好ましくは２０から９０℃が特別な装置も要らず、使用しやすい。溶解度の面では高い温度が溶解しやすいため、５０℃以上にするのが生産性を高める。この溶液に酸を加え、本発明の範囲まで下げることで固体が析出する。または、アルカリ金属塩の溶液を酸性溶液の中に添加することで析出させることができる。固体のアルカリ金属塩を粉末として酸性溶液に添加することでも製造できる。ｐＨを返すために混合する時は攪拌しながらするとアルカリ金属の残留を抑制することができる。
【００４９】
このような条件で調整し、析出してきた固体はピロロキノリンキノンのフリー体であり、粉末Ｘ線回折でＣｕ Ｋα放射線を用いた２θのピークとして１２．４°、１５．５°、１６．６°、１８．２°、２４．０°、２４．９°、２８．０°（いずれも±０．２°の範囲内）を示すピロロキノリンキノンの結晶である。
＜粉末Ｘ線回折による回折角２θの測定条件＞
装置：株式会社マックサイエンス製Ｍ１８ＸＣＥ
Ｘ線：Ｃｕ／管電圧４０ｋＶ／管電流１００ｍＡ
発散スリット：１°
散乱スリット：１°
受光スリット：０．３ｍｍスキャンスピード：４．０００°／ｍｉｎ
サンプリング幅：０．０２０°
【００５０】
なお、これらのピークは、その他、モノクロメータが装着された一般的な粉末Ｘ線回折装置で観測することもできる。本発明で規定する結晶形は測定誤差も含まれることから、ピークの角度に関する合理的な同一性があればよい。
【００５１】
本発明の好ましい態様によれば、式（１）で表される化合物（ピロロキノリンキノンのフリー体）の製造方法であって、式（１）で表される化合物のアルカリ金属塩を溶解してなる水溶液に酸または酸性溶液を添加してｐＨ１．５以下の溶液を調製し、析出物を得ることを含んでなり、好ましくは、アルカリ金属塩が、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、セシウム塩、およびルビジュウム塩からなる群から選択され、好ましくは、酸が、塩酸、臭化水素、ヨウ化水素、過塩素酸、燐酸、硝酸、酢酸、蟻酸、シュウ酸、乳酸およびクエン酸からなる群から選択される１種または２種以上の酸の組み合わせであり、好ましくは、ｐＨが１以下である製造方法が提供される。
【００５２】
本発明の好ましい態様によれば、また、式（１）で表される化合物（ピロロキノリンキノンのフリー体）の製造方法であって、酸性溶液に、式（１）で表される化合物のアルカリ金属塩または該アルカリ金属塩を溶解してなる水溶液を添加してｐＨ１．５以下の溶液を調製し、析出物を得ることを含んでなり、好ましくは、アルカリ金属塩が、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、セシウム塩、およびルビジュウム塩からなる群から選択され、好ましくは、酸が、塩酸、臭化水素、ヨウ化水素、過塩素酸、燐酸、硝酸、酢酸、蟻酸、シュウ酸、乳酸およびクエン酸からなる群から選択される１種または２種以上の酸の組み合わせであり、好ましくは、ｐＨが１以下である製造方法が提供される。
【００５３】
本発明のより好ましい態様によれば、式（１）で表される化合物（ピロロキノリンキノンのフリー体）の製造方法であって、式（１）で表される化合物のアルカリ金属塩を溶解してなる水溶液に酸または酸性溶液を添加してｐＨ１．５以下の溶液を調製し、析出物を得ることを含んでなり、好ましくは、アルカリ金属塩が、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、セシウム塩、およびルビジュウム塩からなる群から選択され、好ましくは、酸が、少なくとも塩酸を含む１種または２種以上の酸の組み合わせであり、好ましくは、ｐＨが１以下である製造方法が提供される。
【００５４】
本発明で得られるフリー体はアルカリ金属の含有量も少なく、結晶性が良いため純度も高い。この回折ピークはジナトリウム塩、モノナトリウム塩と区別することができ、品質管理に有効である。
【００５５】
本発明による製造方法で得られるピロロキノリンキノンのフリー体は、医薬または機能性食品の有効成分とすることができ、皮膚外用剤、注射剤、経口剤、坐剤等の形態、あるいは、日常食する飲食物、栄養補強食、各種病院食等の形態で提供可能である。調製の際に使用される添加剤としては、液剤としては水、果糖、ブドウ糖等の糖類、落下生油、大豆油、オリーブ油等の油類、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール等のグリコール類を用いることができる。
【００５６】
錠剤、カプセル剤、顆粒剤などの固形剤の賦型剤としては乳糖、ショ糖、マンニット等の糖類、滑沢剤としてはカオリン、タルク、ステアリン酸マグネシウム等、崩壊剤としてデンプン、アルギン酸ナトリウム、結合剤としてポリビニルアルコール、セルロース、ゼラチン等、界面活性剤としては脂肪酸エステル等、可塑剤としてグリセリン等を例示することができるが、これらに限定されるものではない。必要に応じて溶解促進剤、充填剤等を加えてもよい。
【００５７】
また、ピロロキノリンキノンのフリー体は、単独でも、他の素材と組み合わせても使用できる。組み合わせ可能な素材としては、ビタミンＢ 群、ビタミンＣ およびビタミンＥ 等のビタミン類、アミノ酸類、アスタキサンチン、α-カロテン、β-カロテン等のカロテノイド類、ドコサヘキサエン酸、エイコサペンタエン酸等のω  ３脂肪酸類、アラキドン酸等のω６脂肪酸類などが例示されるが、これらに限定されるものではない。
【００５８】
本発明によれば、さらに、以下の発明が提供される。
（１）ピロロキノリンキノンのアルカリ金属塩をｐＨ１．５以下の水溶液中で析出させることを特徴とするフリー体の製造方法。
（２）ピロロキノリンキノンのアルカリ金属塩がナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、セシウム塩及びルビジュウム塩から選択されることを特徴とする（１）記載のフリー体の製造方法。
（３）ピロロキノリンキノンのアルカリ金属塩がジナトリウム塩であることを特徴とする（１）記載のフリー体の製造方法。
（４）ピロロキノリンキノンを析出する際に使用する酸が塩酸、臭化水素、ヨウ化水素、過塩素酸、硫酸、燐酸、硝酸、酢酸、蟻酸、シュウ酸、乳酸及びクエン酸から選択されることを特徴とする（１）〜（３）のいずれかに記載のフリー体の製造方法。
（５）粉末Ｘ線回折でＣｕ  Ｋα放射線を用いた２θのピークとして１２．４°、１５．５°、１６．６°、１８．２°、２４．０°、２４．９°、２８．０°を示すピロロキノリンキノンの結晶。
【実施例】
【００５９】
実施例および比較例によって本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらの例にのみ限定されるものではない。また、特に断りのない限り本文中の％は重量％を示す。【００６０】
本発明に関する分析は以下のようにして行った。
[ＰＱＱ分析]
装置： 島津製作所、高速液体クロマトグラフィー、LC-20A
カラム：YMC-Pack ODS-TMS(5μm)、150x4.6mm I.D.
測定温度：40℃
検出：２６０ｎｍにおける吸光度
溶離液：100mM CH3COOH/100mM CH3COONH4 (30/70, pH5.1)
溶出速度：1.5mL/min
[Ｎａ分析]
ポンプ： 島津製作所、LC-6A
カラムオーブン：島津製作所、HIC-6A
測定温度：40℃
検出器：東ソー株式会社、電気伝導度計CM-8000
カラム：昭和電工株式会社、Shodex、IC Y-521
溶離液：4mM HNO3
溶出速度：1.0mL/min
[粉末X線回折]
装置：株式会社マックサイエンス製Ｍ１８ＸＣＥ
Ｘ線：Cu／管電圧４０kV／管電流１００mA
発散スリット：1°
散乱スリット：1°
受光スリット：0.３mmスキャンスピード：4.000°／min
サンプリング幅：0.02【００６１】
実施例１
原料のＰＱＱジナトリウム塩は三菱ガス化学社製の試薬（商品名：バイオＰＱＱ）を使用した。ＰＱＱジナトリウム塩の、高速液体クロマトグラフィーのＵＶ吸収による純度は９９．０％であった。【００６２】
上記のジナトリウム塩２ｇを水１９８ｇに加えてジナトリウム塩水溶液を得た。得られた溶液はＮａＯＨでｐＨ９にあわせた。次に、この溶液に和光純薬製濃塩酸を水で５０％希釈した液７．７ｇを攪拌しながら添加してｐＨを０．９にした。３０分攪拌後、析出した固体をろ過し、水、イソプロパノールで洗った。これを減圧乾燥５０℃で一晩行った。回収した赤色結晶の重量は１．６ｇであった。Ｎａ分析によると、Ｎａ含有量０でナトリウムは含まれず、簡単な方法でＰＱＱフリー体が得られた。得られたＰＱＱフリー体の粉末Ｘ線解析の結果を図１に示す。粉末Ｘ線回折でＣｕ  Ｋα放射線を用いた２θのピークとして１２．４°、１５．５°、１６．６°、１８．２°、２４．０°、２４．９°、２８．０°を示していた。【００６３】
実施例２
実施例１の原料（ＰＱＱジナトリウム塩）を水に溶かし、ｐＨを水酸化ナトリウムでｐＨ８にして、食塩を加えてＰＱＱトリナトリウム塩を析出させ、エタノールで洗浄し乾燥した。これを実験に使用した。【００６４】
ＰＱＱトリナトリウム塩０．９ｇを水（６０ｇ）に溶かした。これに攪拌しながら濃塩酸を約２ｇ加えた。得られた溶液のｐＨは０．６を示した。一晩攪拌後、濾過し、イソプロパノールで洗い、減圧乾燥して、赤色固体０．３５ｇを得た。得られた赤色固体の粉末Ｘ線回折、Ｎａ分析の結果は実施例１と同様の結果となり、ナトリウムの残留はなく、フリー体の結晶であった。【００６５】
実施例３
実施例１と同じＰＱＱジナトリウム塩１ｇの固体を、濃塩酸３．５ｇと水３．５ｇの混合液に加え、得られた溶液のｐＨを１とした。攪拌を室温で１時間行い、ろ過し、水で洗った。減圧乾燥して、赤色固体０．７９ｇを得た。得られた赤色固体におけるナトリウム／ＰＱＱのモル比は０．０６で、わずかにナトリウムが残留した。【００６６】
比較例１
実施例１と同じ原料（ＰＱＱジナトリウム塩）を使用し、操作を同じように行った。ただし、塩酸を加えて、溶液のｐＨを２．３とし、赤色固体１．７５ｇを析出させた。【００６７】
この物質を分析した結果、ナトリウム／ＰＱＱのモル比は０．９６で１ナトリウム塩であった。このときの粉末Ｘ線回折のデータは粉末Ｘ線回折でＣｕ  Ｋα放射線を用いた２θのピークとして８．５，１１．９，１５．７，１６．９，２４．４，２７．３を示した。フリー体とは異なるピークであった。【００６８】
比較例２
比較例１と同様の操作を行った。ただし、ｐＨをあわせるのに４Ｎ  硫酸を使用し、溶液のｐＨを２．５にし、赤色の固体１．７１ｇを得た。【００６９】
この物質を分析した結果、ナトリウム／ＰＱＱのモル比は０．９４で１ナトリウム塩であった。このときの粉末Ｘ線回折のデータは比較例１と同様の位置にピークを示していた。【００７０】
比較例３
実施例１と同様の原料（ＰＱＱジナトリウム塩）を固体として使用して実験を行った。４Ｎ  硫酸２００ｇにＰＱＱジナトリウム塩２ｇを添加し、ｐＨ０．６にし、茶色固体１．６６ｇを得た。【００７１】
この物質を分析した結果、ナトリウム／ＰＱＱのモル比は０．９６で１ナトリウム塩の範囲であった。この粉末Ｘ線回折のデータは明確なピークのないスペクトルで結晶性が低かった。粉末Ｘ線回折でＣｕ  Ｋα放射線を用いた２θのピークとして２６．６を中心とするブロードなピークであった。この場合、ナトリウムが残留し、変色が起こり、結晶性も低かった。
【図１】
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【国際調査報告】
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