【手続補正書】
【提出日】令和3年11月15日(2021.11.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１７７】
様々な刊行物、特許、及び、特許出願を、本明細書で引用しており、それらの開示の全内容を参照により援用する。
本件出願は、以下の態様の発明を提供する。
（態様１）
胎盤、または、その一部からエキソソームを単離する方法であって、前記方法は：
ａ）胎盤、または、その一部、好ましくは、培養胎盤、または、その一部を、第１の培地と接触させること；及び
ｂ）前記胎盤、または、その一部からエキソソームの集団を含む第１の画分を得ること；
ｃ）任意に、前記胎盤、または、その一部を、第２の培地と接触させ、かつ、前記胎盤、または、その一部に由来するエキソソームの集団を含む第２の画分を得ること；
ｄ）任意に、前記胎盤、または、その一部を、第３の培地と接触させ、かつ、前記胎盤、または、その一部に由来するエキソソームの集団を含む第３の画分を得ること；及び
ｅ）任意に、前記第１、第２、及び／または、第３の画分に由来するエキソソームの集団を、好ましくは、連続遠心分離、及び／または、所望のエキソソームの集団に存在するマーカー、または、ペプチドに特異的な抗体、または、その結合部分を使用するアフィニティークロマトグラフィーで単離すること、を含み、前記抗体、または、その結合部分を、膜、樹脂、ビーズ、または、容器などの基質に固定している、前記方法。
（態様２）
前記胎盤、または、その一部が、羊膜をさらに含む、態様１に記載の方法。
（態様３）
前記胎盤、または、その一部が、ヒト胎盤、または、その一部である、態様２に記載の方法。
（態様４）
前記第１、第２、及び／または、第３の培地を、胎盤、または、その一部と、４５分間、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または、２４時間、または、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または、２０日間など、少なくとも４５分間かけて接触させ、任意の時間の長さは、前記した時点のいずれか２つで定義した範囲内にある、前出態様のいずれか１項に記載の方法。
（態様５）
前記第１、第２、及び／または、第３の培地を、胎盤、または、その一部と、少なくとも７、１４、２８、３５、または、４２日間、または、前記した時点のいずれか２つで定義した範囲内にある任意の長さの時間をかけて接触させる、態様１〜４のいずれか１項に記載の方法。
（態様６）
前記胎盤、または、その一部が、細分化、粉砕、または、酵素処理してある、態様１〜５のいずれか１項に記載の方法。
（態様７）
前記胎盤、または、その一部は、実質的に平坦、または、シート状であり、及び、脱細胞化し、かつ、実質的に乾燥させており、及び、前記方法が、外因性細胞を含む体液を、前記脱細胞化胎盤、または、その一部と接触させて、前記脱細胞化胎盤、または、その一部に対して、前記外因性細胞を播種することをさらに含み、及び、前記細胞と、前記脱細胞化胎盤、または、その一部との接触は、脱細胞化胎盤、または、その一部を、第１の培地と接触させる前に行う、態様１〜５のいずれか１項に記載の方法。
（態様８）
前記外因性細胞を、前記胎盤、または、その一部のドナー対象とは異なる対象から得る、態様７に記載の方法。
（態様９）
前記体液が、腹水、血液、または、血漿である、態様７または８に記載の方法。
（態様１０）
前記細胞が、臓器に由来する、態様７または８に記載の方法。
（態様１１）
前記細胞が、肝臓、腎臓、肺、または、膵臓に由来する、態様１０に記載の方法。
（態様１２）
前記細胞が、免疫細胞である、態様７または８に記載の方法。
（態様１３）
前記細胞が、Ｔ細胞またはＢ細胞である、態様１２に記載の方法。
（態様１４）
前記第１の培地が、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を含む、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
（態様１５）
前記第１、第２、または第３の画分が、腹水、血液、または、血漿に由来するエキソソームを含む、態様９に記載の方法。
（態様１６）
前記第１、第２、または第３の画分が、臓器細胞に由来するエキソソームを含む、態様１０に記載の方法。
（態様１７）
前記細胞が、肝臓、腎臓、肺、または、膵臓に由来する、態様１１に記載の方法。
（態様１８）
前記第２の培地が、成長因子を含む、態様１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
（態様１９）
前記第３の培地が、キレート剤を含む、態様１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
（態様２０）
前記キレート剤が、ホスホネート、ＢＡＰＴＡ四ナトリウム塩、ＢＡＰＴＡ／ＡＭ、Ｄｉ−Ｎｏｔｒｏｐｈｅｎ（商標）試薬四ナトリウム塩、ＥＧＴＡ／ＡＭ、ピリドキサールイソニコチノイルヒドラジン、Ｎ、Ｎ、Ｎ’、Ｎ’−テトラキス−（２ピリジルメチル）エチレンジアミン、６−ブロモ−Ｎ’−（２−ヒドロキシベンジリデン）−２−メチルキノリン−４−カルボヒドラジド、１，２−ビス（２−アミノフェノキシ）エタン−Ｎ、Ｎ、Ｎ’、Ｎ’−四酢酸テトラキス（アセトキシメチルエステル）、（エチレンジニトリロ）四酢酸、（ＥＤＴＡ）、エダタミル、エチレンジニトリロ四酢酸、エチレングリコール−ビス（２−アミノエチルエーテル）−Ｎ、Ｎ、Ｎ’、Ｎ’−四酢酸、または、エチレングリコール−ビス（β−アミノエチルエーテル）−Ｎ、Ｎ、Ｎ’、Ｎ’−四酢酸四ナトリウム塩（ＥＧＴＡ）、または、これらのあらゆる組み合わせである、態様１９に記載の方法。
（態様２１）
前記キレート剤が、ＥＤＴＡ、または、ＥＧＴＡ、または、これらの組み合わせである、態様１９または２０に記載の方法。
（態様２２）
前記キレート剤を、１ｍＭ、２ｍＭ、３ｍＭ、４ｍＭ、５ｍＭ、６ｍＭ、７ｍＭ、８ｍＭ、９ｍＭ、１０ｍＭ、２０ｍＭ、３０ｍＭ、４０ｍＭ、５０ｍＭ、６０ｍＭ、７０ｍＭ、８０ｍＭ、９０ｍＭ、または、１００ｍＭの濃度、または、前記した濃度のいずれか２つで定義した範囲内にある濃度で第３の培地に提供する、態様１９〜２１のいずれか１項に記載の方法。
（態様２３）
前記第３の培地でのＥＤＴＡの濃度は、１ｍＭ、２ｍＭ、３ｍＭ、４ｍＭ、５ｍＭ、６ｍＭ、７ｍＭ、８ｍＭ、９ｍＭ、１０ｍＭ、２０ｍＭ、３０ｍＭ、４０ｍＭ、５０ｍＭ、６０ｍＭ、７０ｍＭ、８０ｍＭ、９０ｍＭ、または、１００ｍＭの濃度、または、前記した濃度のいずれか２つで定義した範囲内にある濃度で提供する、態様１９〜２２のいずれか１項に記載の方法。
（態様２４）
前記第３の培地が、プロテアーゼを含む、態様１〜２３のいずれか１項に記載の方法。
（態様２５）
前記プロテアーゼが、トリプシン、コラゲナーゼ、キモトリプシン、または、カルボキシペプチダーゼ、または、これらのあらゆる組み合わせである、態様２４に記載の方法。
（態様２６）
前記プロテアーゼが、トリプシンである、態様２５に記載の方法。
（態様２７）
前記プロテアーゼを、１ｍＭ、２ｍＭ、３ｍＭ、４ｍＭ、５ｍＭ、６ｍＭ、７ｍＭ、８ｍＭ、９ｍＭ、１０ｍＭ、２０ｍＭ、３０ｍＭ、４０ｍＭ、５０ｍＭ、６０ｍＭ、７０ｍＭ、８０ｍＭ、９０ｍＭ、または、１００ｍＭの濃度、または、前記した濃度のいずれか２つで定義した範囲内にある濃度で第３の培地に提供する、態様２４に記載の方法。
（態様２８）
前記方法が、前記胎盤、または、その一部を、さらなる複数の培地と接触させることをさらに含み、前記接触により、エキソソームを含む複数の画分が得られる、態様１〜２７のいずれか１項に記載の方法。
（態様２９）
前記第１、第２、第３、または、さらなる培地が、グルコースを含む、態様２８に記載の方法。
（態様３０）
前記第１、第２、第３、または、さらなる培地が、ＧＭ−ＣＳＦを含む、態様２８または２９記載の方法。
（態様３１）
前記第１、第２、第３、または、さらなる培地が、血清を含む、態様２８〜３０のいずれか１項に記載の方法。
（態様３２）
前記第１、第２、第３、または、さらなる培地が、ＤＭＥＭを含む、態様２８〜３１のいずれか１項に記載の方法。
（態様３３）
前記第１、第２、第３、または、さらなる培地が、ＡＨＲアンタゴニストを含む、態様２８〜３２のいずれか１項に記載の方法。
（態様３４）
前記ＡＨＲアンタゴニストが、ＳＲ１である、態様３３に記載の方法。
（態様３５）
前記ＳＲ１が、１ｎＭ、１０ｎＭ、１００ｎＭ、２００ｎＭ、３００ｎＭ、４００ｎＭ、５００ｎＭ、６００ｎＭ、７００ｎＭ、８００ｎＭ、９００ｎＭ、または、１ｍＭの濃度、または、前記した値のいずれか２つで定義した範囲内にあるその他のあらゆる濃度である、態様３４に記載の方法。
（態様３６）
前記第１の培地が、０℃、５℃、１０℃、１５℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、４０℃の温度、または、前記した温度のいずれか２つで定義した範囲内にある温度を維持しながら、前記胎盤、または、その一部と接触している、態様１〜３５のいずれか１項に記載の方法。
（態様３７）
前記第２の培地が、０℃、５℃、１０℃、１５℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、４０℃の温度、または、前記した温度のいずれか２つで定義した範囲内にある温度を維持しながら、前記胎盤、または、その一部と接触している、態様１〜３６のいずれか１項に記載の方法。
（態様３８）
前記第３の培地が、０℃、５℃、１０℃、１５℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、４０℃の温度、または、前記した値のいずれか２つで定義した範囲内にある温度を維持しながら、前記胎盤、または、その一部と接触している、態様１〜３７のいずれか１項に記載の方法。
（態様３９）
前記複数のさらなる培地が、０℃、５℃、１０℃、１５℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、４０℃の温度、または、前記した値のいずれか２つで定義した範囲内にある温度を維持しながら、前記胎盤、または、その一部と接触している、態様２８〜３８のいずれか１項に記載の方法。
（態様４０）
前記第１、第２または第３のかん流液、または、さらなる複数の培地が、抗生物質を含む、態様１〜３９のいずれか１項に記載の方法。
（態様４１）
（ａ）前記第１、第２、及び／または、第３の画分、または、複数の画分を、組織フィルターに通すこと；
（ｂ）（ａ）で回収した濾過物に対して第１の遠心分離を行って、細胞ペレット、及び、第１の上清を生成すること；
（ｃ）前記第１の上清に関して第２の遠心分離を行って、第２の上清を生成すること；及び
（ｄ）前記第２の上清に関して第３の遠心分離を行って、エキソソームペレットを生成すること；及び、任意に、
（ｅ）前記エキソソームを溶液に再懸濁すること、
を含む方法で、前記エキソソームを、前記第１、第２、及び／または、第３の画分、または、複数の画分から単離する、態様１〜４０のいずれか１項に記載の方法。
（態様４２）
前記エキソソームが、ＣＤ６３、ＣＤ６３−Ａ、パーフォリン、Ｆａｓ、ＴＲＡＩＬ、または、グランザイムＢ、または、これらのあらゆる組み合わせを含む、態様１〜４１のいずれか１項に記載の方法。
（態様４３）
前記エキソソームが、ＣＤ６３Ａを含む、態様４２に記載の方法。
（態様４４）
前記エキソソームが、シグナル伝達分子を含む、態様１〜４３のいずれか１項に記載の方法。
（態様４５）
前記エキソソームが、サイトカイン、ｍＲＮＡ、または、ｍｉＲＮＡを含む、態様１〜４４のいずれか１項に記載の方法。
（態様４６）
アフィニティークロマトグラフィーによってエキソソームを単離することをさらに含み、アフィニティークロマトグラフィーが、ウイルス抗原、ウイルスタンパク質、細菌抗原、細菌タンパク質、真菌抗原、または、真菌タンパク質を含むエキソソームの除去に関して選択的である、前出態様のいずれか１項に記載の方法。
（態様４７）
１つ以上のさらなるアフィニティークロマトグラフィーステップによってエキソソームを単離することをさらに含み、前記１つ以上のさらなるクロマトグラフィーステップが、炎症マーカー、及び／または、腫瘍マーカーを含むエキソソームの除去に関して選択的である、態様１〜４６のいずれか１項に記載の方法。
（態様４８）
ヒト胎盤由来のエキソソームを含む組成物であって、前記エキソソームが、ＣＤ１ｃ、ＣＤ２０、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ２９、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、ＣＤ１９、ＣＤ３１、ＣＤ４０、ＣＤ４１ｂ、ＣＤ４２ａ、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ４９ｅ、ＣＤ４、ＣＤ５６、ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ６３、ＣＤ６９、ＣＤ８１、ＣＤ８６、ＣＤ１０５、ＣＤ１３３−１、ＣＤ１４２、ＣＤ１４６、ＣＤ２０９、ＣＤ３２６、ＨＬＡ−ＡＢＣ、ＨＬＡ−ＤＲＤＰＤＱ、ＭＣＳＰ、ＲＯＲ１、ＳＳＥＡ−４、または、これらの組み合わせに対して陽性である、前記組成物。
（態様４９）
前記エキソソームが、ＣＤ１ｃ、ＣＤ２０、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ２９、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、ＣＤ１９、ＣＤ３１、ＣＤ４０、ＣＤ４１ｂ、ＣＤ４２ａ、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ４９ｅ、ＣＤ４、ＣＤ５６、ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ６３、ＣＤ６９、ＣＤ８１、ＣＤ８６、ＣＤ１０５、ＣＤ１３３−１、ＣＤ１４２、ＣＤ１４６、ＣＤ２０９、ＣＤ３２６、ＨＬＡ−ＡＢＣ、ＨＬＡ−ＤＲＤＰＤＱ、ＭＣＳＰ、ＲＯＲ１、及び、ＳＳＥＡ−４に対して陽性である、態様４８に記載の組成物。
（態様５０）
前記エキソソームが、ＣＤ１ｃ、ＣＤ２０、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ２９、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、ＣＤ１９、ＣＤ３１、ＣＤ４０、ＣＤ４１ｂ、ＣＤ４２ａ、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ４９ｅ、ＣＤ４、ＣＤ５６、ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ６３、ＣＤ６９、ＣＤ８１、ＣＤ８６、ＣＤ１０５、ＣＤ１３３−１、ＣＤ１４２、ＣＤ１４６、ＣＤ２０９、ＣＤ３２６、ＨＬＡ−ＡＢＣ、ＨＬＡ−ＤＲＤＰＤＱ、ＭＣＳＰ、ＲＯＲ１、及び、ＳＳＥＡ−４からなる群から選択した、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、または、それ以上のマーカーに対して陽性である、態様４８に記載の組成物。
（態様５１）
前記エキソソームが、ＣＤ３−、ＣＤ１１ｂ−、ＣＤ１４−、ＣＤ１９−、ＣＤ３３−、ＣＤ１９２−、ＨＬＡ−Ａ−、ＨＬＡ−Ｂ−、ＨＬＡ−Ｃ−、ＨＬＡ−ＤＲ−、ＣＤ１１ｃ−、または、ＣＤ３４−である、態様４８〜５０のいずれか１項に記載の組成物。
（態様５２）
前記エキソソームが、ＣＤ３−、ＣＤ１１ｂ−、ＣＤ１４−、ＣＤ１９−、ＣＤ３３−、ＣＤ１９２−、ＨＬＡ−Ａ−、ＨＬＡ−Ｂ−、ＨＬＡ−Ｃ−、ＨＬＡ−ＤＲ−、ＣＤ１１ｃ−、及び、ＣＤ３４−である、態様４８〜５０のいずれか１項に記載の組成物。
（態様５３）
前記エキソソームが、非コードＲＮＡ分子を含む、態様４８〜５２のいずれか１項に記載の組成物。
（態様５４）
前記ＲＮＡ分子が、ミクロＲＮＡである、態様５３に記載の組成物。
（態様５５）
前記ミクロＲＮＡを、表７のミクロＲＮＡ、及び、それらの組み合わせからなる群から選択する、態様５４に記載の組成物。
（態様５６）
前記ミクロＲＮＡを、ｈｓａ−ｍｉｒ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉｒ−２６ａ−２、ｈｓａ−ｍｉｒ−２６ａ−１、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉｒ−３０ｄ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｄ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉｒ−１００、ｈｓａ−ｍｉＲ−１００−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉｒ−２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉｒ−２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉｒ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉｒ−１８１ａ−２、ｈｓａ−ｍｉｒ−１８１ａ−１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ−５ｐ、及び、これらの組み合わせからなる群から選択する、態様５４に記載の組成物。
（態様５７）
前記エキソソームが、表３のサイトカイン、及び、それらの組み合わせからなる群から選択するサイトカインを含む、態様４８〜５６のいずれか１項に記載の組成物。
（態様５８）
前記エキソソームが、表４のサイトカイン受容体、及び、それらの組み合わせからなる群から選択するサイトカイン受容体を含む、態様４８〜５７のいずれか１項に記載の組成物。
（態様５９）
前記エキソソームが、表６のタンパク質、及び、それらの組み合わせからなる群から選択するタンパク質を含む、態様４８〜５８のいずれか１項に記載の組成物。
（態様６０）
前記エキソソームが、細胞質アコニット酸ヒドラターゼ、細胞表面糖タンパク質ＭＵＣ１８、タンパク質アルギニンＮ−メチルトランスフェラーゼ１、グアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｓ）サブユニットアルファ、カリン−５、カルシウム結合タンパク質３９、グルコシダーゼ２サブユニットベータ、塩化物細胞内チャネルタンパク質５、セマフォリン−３Ｂ、６０Ｓリボソームタンパク質Ｌ２２、スプライセオソームＲＮＡヘリカーゼＤＤＸ３９Ｂ、転写活性化タンパク質Ｐｕｒ−アルファ、プログラム細胞死タンパク質１０、ＢＲＯ１ドメイン含有タンパク質ＢＲＯＸ、キヌレニン−オキソグルタル酸トランスアミナーゼ３、ラミニンサブユニットアルファ５、ＡＴＰ結合カセットサブファミリーＥメンバー１、シンタキシン結合タンパク質３、プロテアソームサブユニットベータタイプ７、及び、これらの組み合わせ、からなる群から選択したタンパク質を含む、態様４８〜５８のいずれか１項に記載の組成物。
（態様６１）
前記エキソソームが、間葉系幹細胞、臍帯血、または、胎盤かん流液に由来するエキソソームよりも少なくとも２倍高いレベルで、少なくとも１つのマーカー分子を含む、態様４８〜６０のいずれか１項に記載の組成物。
（態様６２）
前記エキソソームが、間葉系幹細胞、臍帯血、及び、胎盤かん流液に由来するエキソソームよりも少なくとも２倍高いレベルで、少なくとも１つのマーカー分子を含む、態様４８〜６０のいずれか１項に記載の組成物。
（態様６３）
前記エキソソームを、全胎盤培養物の培地から単離する、態様４８〜６２のいずれか１項に記載の組成物。
（態様６４）
前記エキソソームを、胎盤葉、または、胎盤の一部を含む全培養物の培地から単離する、態様４８〜６２のいずれか１項に記載の組成物。
（態様６５）
前記エキソソームを、態様１〜４７のいずれか１項に記載の方法で生成する、態様４８〜６４のいずれか１項に記載の組成物。
（態様６６）
静脈内投与に適した形態である、態様４８〜６５のいずれか１項に記載の組成物。
（態様６７）
局所注射に適した形態である、態様４８〜６５のいずれか１項に記載の組成物。
（態様６８）
局所投与に適した形態である、態様４８〜６５のいずれか１項に記載の組成物。
（態様６９）
超音波送達に適した形態である、態様４８〜６５のいずれか１項に記載の組成物。
（態様７０）
免疫細胞の増殖を増加させる方法であって、前記細胞を、態様４８〜６５のいずれか１項に記載の組成物と接触させることを含む、前記方法。
（態様７１）
前記免疫細胞が、Ｔ細胞である、態様７０に記載の方法。
（態様７２）
前記免疫細胞が、ＮＫ細胞である、態様７０に記載の方法。
（態様７３）
前記免疫細胞が、ＣＤ３４＋細胞である、態様７０に記載の方法。
（態様７４）
がん細胞の増殖を阻害する方法であって、前記細胞を、態様４８〜６５のいずれか１項に記載の組成物と接触させることを含む、前記方法。
（態様７５）
前記対象での血管形成または血管新生の方法であって、前記対象に対して、態様４８〜６５のいずれか１項に記載の組成物を投与することを含む、前記方法。
（態様７６）
前記対象の免疫系を調節する方法であって、前記対象に対して、態様４８〜６５のいずれか１項に記載の組成物を投与することを含む、前記方法。
（態様７７）
対象の罹患組織または損傷組織を修復する方法であって、前記対象に対して、態様４８〜６５のいずれか１項に記載の組成物を投与することを含む、前記方法。
（態様７８）
対象のがんを処置する方法であって、前記対象に対して、態様４８〜６５のいずれか１項に記載の組成物を投与することを含む、前記方法。
（態様７９）
前記対象が、ヒトである、態様７５〜７８のいずれか１項に記載の方法。