(57)【要約】  本発明は、ヒアルロン酸と、デルマタン硫酸と、少なくとも１つのω−３脂肪酸と、少なくとも１つのヌクレオチドとを含む組成物に関する。更に、皮膚の疾患、病気、機能不全、または変調、望ましくはアトピー性皮膚炎の治療または予防に使用する、新たな組成物に関する。この組成物は、医薬組成物、補助食品、機能性食品、または医療食の形状をしていることがある。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒアルロン酸と、デルマタン硫酸と、少なくとも１つのω−３脂肪酸と、少なくとも１つのヌクレオチドとを含む組成物。
【請求項２】
前記ω−３脂肪酸と前記ヒアルロン酸とが、１００：０．５０から１００：５の間の、ω−３脂肪酸：ヒアルロン酸質量比で存在することを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ω−３脂肪酸と前記デルマタン硫酸とが、１００：０．１０から１００：２の間の、ω−３脂肪酸：デルマタン硫酸質量比で存在することを特徴とする、請求項１または請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記ω−３脂肪酸と前記ヌクレオチドとが、１００：２０から１００：２００の間の、ω−３脂肪酸：ヌクレオチド質量比で存在することを特徴とする、請求項１から請求項３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
亜鉛化合物を更に含むことを特徴とする、請求項１から請求項４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
前記亜鉛化合物が、酸化亜鉛であることを特徴とする、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記ω−３脂肪酸と前記酸化亜鉛とが、１００：１から１００：１０の間の、ω−３脂肪酸：酸化亜鉛質量比で存在することを特徴とする、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
少なくとも１つのω−６脂肪酸を更に含むことを特徴とする、請求項１から請求項７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
前記ω−３脂肪酸が、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、α−リノレン酸、ステアリドン酸、エイコサテトラエン酸、ヘンエイコサペンタエン酸、ドコサペンタエン酸、およびこれらの混合物から成る群より選ばれることを特徴とする、請求項１から請求項８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記ω−６脂肪酸が、γ−リノレン酸、リノール酸、およびこれらの混合物から成る群より選ばれることを特徴とする、請求項８または請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記ヌクレオチドが、酵母から得たものであることを特徴とする、請求項１から請求項１０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１２】
請求項１から請求項１１のいずれか１項において記載された組成物と、少なくとも１つの栄養添加物とを含む、補助食品、機能性食品、または医療食。
【請求項１３】
請求項１から請求項１１のいずれか１項において記載された組成物と、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項１４】
薬剤または医療食として使用するための、請求項１から請求項１１のいずれか１項において記載された組成物。
【請求項１５】
哺乳動物における、アトピー性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、毛包虫症、乾癬、創傷、潰瘍、および熱傷から成る群より選ばれる、皮膚疾患または損傷の治療または予防に使用するための、請求項１から請求項１１のいずれか１項において記載された組成物。
【請求項１６】
哺乳動物における、皮膚炎もしくは毛包虫症の際もしくはその後の皮膚の健常性（integrity）の回復、乾癬病巣の予防もしくは逆転（reversing）、皮膚の潤い（hydration）と柔軟性の増進、創傷もしくは潰瘍の形成予防、または、創傷、潰瘍、もしくは熱傷の治癒品質の向上に使用するための、請求項１から請求項１１のいずれか１項において記載された組成物を含む医療食。
【請求項１７】
哺乳動物における、皮膚炎もしくは毛包虫症の際もしくはその後の皮膚の健常性の回復、乾癬病巣の予防もしくは逆転、皮膚の潤いと柔軟性の増進、創傷もしくは潰瘍の形成予防、または、創傷、潰瘍、もしくは熱傷の治癒品質の向上のための、補助食品、機能性食品、または医療食としての、請求項１から請求項１１のいずれか１項において記載された組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は新たな組成物に関する。また、皮膚の疾患、病気、機能不全、または変調、特に、アトピー性皮膚炎の治療または予防に、更に、皮膚の健常性（integrity）の回復のために使用する、新たな組成物に関する。この組成物は、医薬組成物、補助食品、機能性食品、または医療食の形状をしていることがある。
【背景技術】
【０００２】
アトピー性皮膚炎は、痒みのある鱗状の発疹を特徴とする慢性炎症性皮膚病の一種である。これは、遺伝因子、バリア機能の欠陥、環境因子、皮膚感染に対する感受性、一連の免疫因子が絡み合って起こる多因性の疾患である。本来、小児期の病気であるが、大人になっても続くことがある。
【０００３】
アトピー性皮膚炎はペットにもよく見られる病気である。イヌでは品種による傾向があることから、遺伝因子の重要性がうかがわれる。
【０００４】
線維芽細胞は、ケラチン生成細胞と共に、真皮および表皮の主細胞である。その移動と増殖は再上皮化過程に関与し、皮膚バリアが変調する、また、病変自体により、または痒みのため掻きむしることで患者に障害が表れる皮膚病変において、非常に重要な役割を果たしている。実際、線維芽細胞がアトピー性皮膚炎の発症機序に関与することは知られている（A. Berrothほか, J. Allergy Clin. Immunol. 131（6), 1547-1554 （2013)）。
【０００５】
アトピー性皮膚炎の治療では、通常、ステロイド、抗ヒスタミン剤、または抗生物質が処方される。これらの薬剤を長期に亘って使用すると、好ましくない様々な副作用が起こることがある。
【０００６】
このため、副作用なく、アトピー性皮膚炎を効果的に治療するための新たな組成物が求められている。
【０００７】
多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）は、その炭素原子の間に２つ以上の二重結合を含む脂肪酸である。これらは生体中の重要な代謝経路に関与している。これらは、脂の多い魚や、クルミ、トウモロコシ、ヒマワリの種、大豆などの植物から得ることができる。多価不飽和脂肪酸の２つの種類、ω−３類およびω−６類を強調することは重要である。ω−３脂肪酸は、高血圧、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症などの循環器疾患の危険因子に対して有益な効果を持つ。より重要ないくつかのω−３脂肪酸としては、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）およびドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）が挙げられ、ω−６脂肪酸の中では、γ−リノレン酸（ＧＬＡ）が挙げられる。
【０００８】
アトピー性皮膚炎の治療におけるω−３およびω−６脂肪酸の効果は知られている。国際公開第２０１５／０４００６７号（Patent application WO 2015/040067）は、γ−リノレン脂肪酸とエイコサペンタエン脂肪酸とを含む、アトピー性皮膚炎のための組成物について述べている。RS Muellerほかは、イヌのアトピー性皮膚炎におけるω−３脂肪酸の効果について述べている（J. Small Anim. Pract. 45（6), 293-297 (2004)）。
【０００９】
グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）は、二糖類単位の繰り返しから成る、高分子量のポリマ生体分子である。これらは基本的に生体中に見られ、様々な生理学的機能を果たしている。
【００１０】
ヒアルロン酸は、ポリマ構造が、単糖類のＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミンとＤ−グルクロン酸から成る繰り返し二糖類単位であることを特徴とする、非硫酸化グリコサミノグリカンである。これは、軟骨、滑膜、滑液の主成分のひとつである。特に、一般に関節内投与法による、変形性関節症などの関節の機能不全の治療において、その使用は重要である。眼科、創傷の治療や、化粧品での、その使用も述べられている。
【００１１】
デルマタン硫酸は、ポリマ構造の大部分が、４位置が硫酸化したＮ−アセチル−Ｄ−ガラクトサミンと、しばしば２位置が硫酸化したＬ−イズロン酸との二糖類から成る、硫酸化グリコサミノグリカンである。これは、創傷修復に、また血液凝固の調節に関与していることが報告されている。米国特許第７，７６３，５９４号は、変形性関節症の治療のための、ヒアルロン酸とデルマタン硫酸の組成物の使用について述べている。デルマタン硫酸をコンドロイチン硫酸と混同してはならない。いずれの多糖類も硫酸化グリコサミノグリカンであるが、その起源と構造の点で異なる。
【００１２】
ヌクレオチドは、殆ど全ての生化学過程に関与する低分子量の細胞内化合物である。食物中に天然に存在するが、その量は限られている（＜４００ｍｇ／１００ｇ）。免疫系や腸などの細胞増殖速度の大きい組織は、デノボ合成だけではそのヌクレオチド要求量を賄えないため、ヌクレオチドを回復するための方法として、好んで食物を利用する。免疫系にストレスのかかった状況（重篤な患者）では、ヌクレオチドを配合した食事補給が免疫系の体液性および細胞性応答の維持に極めて重要であることが報告されている（A. Gil, European Journal of Clinical Nutrition, 56 suppl 3, S1-S4 (2002)）。特に、外部からのヌクレオチドの補給が、リンパ球様細胞の増殖と、アロ抗原およびマイトジェンに対するリンパ球増殖反応を刺激することが立証されている。更に、この補給は、Ｔリンパ球の応答に寄与し、遅延型皮膚過敏症の応答を強め、移植片に対する拒絶反応を強め、栄養不良に伴う免疫抑制を逆転し、ある種の感染症に対する抵抗性を高め、“ナチュラルキラー”（ＮＫ）細胞とマクロファージの量を調節し、免疫グロブリンの合成を促進する（J. Maldonadoほか, Early Human Development, 65 Suppl., S69-S74 (2001)）。
【００１３】
酸化亜鉛（ＺｎＯ）は、紫外線の有害性から皮膚を守るために使用される。傷の回復におけるその効果についても述べられている（欧州特許第１０６４９４６号）。
【００１４】
加水分解コラーゲンは、アミノ酸と低分子量のペプチドとの混合物で構成されている。これは、皮膚や他の結合組織に含まれるコラーゲンタンパク質を制御しながら酵素加水分解することで得られる。これは主に化粧品に用いられる。
【００１５】
本発明の組成物のような成分の組み合わせについて述べたものは、これまでなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１６】
【特許文献１】国際公開第２０１５／０４００６７号パンフレット
【特許文献２】米国特許第７，７６３，５９４号明細書
【特許文献３】欧州特許第１０６４９４６号明細書
【非特許文献】
【００１７】
【非特許文献１】A. Berrothほか, J. Allergy Clin. Immunol. 131 (6), 1547-1554 (2013)
【非特許文献２】RS Muellerほか, J. Small Anim. Pract. 45 (6), 293-297 (2004)
【非特許文献３】A. Gil, European Journal of Clinical Nutrition, 56 suppl 3, S1-S4 (2002)
【非特許文献４】J. Maldonadoほか, Early Human Development, 65 Suppl., S69-S74 (2001)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１８】
発明者は、後に定義するような本発明の組成物が新たなものであり、ヒト皮膚線維芽細胞の増殖を促し、細胞毒性を示さず、創傷閉鎖に関するin vitro試験において良好な治癒活性を相乗効果的に示すことを発見した。このため、アトピー性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、毛包虫症、乾癬、創傷、潰瘍、および熱傷から成る群より選ばれる、皮膚疾患または損傷の治療または予防にこれを用いることができる。更に、哺乳動物における、皮膚炎もしくは毛包虫症の際もしくはその後の皮膚の健常性の回復、乾癬病巣の予防もしくは逆転、皮膚の潤い（hydration）と柔軟性の増進、創傷もしくは潰瘍の形成予防、または、創傷、潰瘍、もしくは熱傷の治癒品質の向上に、これを用いることができる。
【課題を解決するための手段】
【００１９】
従って、本発明は、ヒアルロン酸と、デルマタン硫酸と、少なくとも１つのω−３脂肪酸と、少なくとも１つのヌクレオチドとを含む組成物に関する。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】図１は、４８時間後の、ヒト皮膚線維芽細胞の増殖率に対する、０．１５６ｍｇ／ｍＬの濃度における、ω−３脂肪酸とヒアルロン酸とデルマタン硫酸とヌクレオチドとを含む、本発明の組成物（Ｏ−３＋ＨＡ＋ＤＳ＋Ｎ）の効果と、ω−３脂肪酸とヒアルロン酸とデルマタン硫酸とを含む組成物（Ｏ−３＋ＨＡ＋ＤＳ）の効果を示している。陽性対照（ＴＧＦ−β存在下でのヒト皮膚線維芽細胞の培養）と、ベースライン対照（被験組成物を含まない培地でのヒト皮膚線維芽細胞の培養）も示してある。
【図２】図２は、２４時間後の、ヒト皮膚線維芽細胞の増殖率に対する、０．０７８ｍｇ／ｍＬの濃度における、ω−３脂肪酸とヒアルロン酸とデルマタン硫酸とヌクレオチドと酸化亜鉛とを含む、本発明の組成物（Ｏ−３＋ＨＡ＋ＤＳ＋Ｎ＋ＺｎＯ）の効果と、ω−３脂肪酸とヒアルロン酸とデルマタン硫酸とを含む組成物（Ｏ−３＋ＨＡ＋ＤＳ）の効果を示している。陽性対照（ＴＧＦ−β存在下でのヒト皮膚線維芽細胞の培養）と、ベースライン対照（被験組成物を含まない培地でのヒト皮膚線維芽細胞の培養）も示してある。
【図３】図３は、０．０８１８ｍｇ／ｍＬのヌクレオチド（Ｎ）、０．００２７ｍｇ／ｍＬのＺｎＯ、Ｏ−３＋ＨＡ＋ＤＳ（０．１５６ｍｇ／ｍＬのＯ−３＋０．００１７ｍｇ／ｍＬのＨＡ＋０．０００４ｍｇ／ｍＬのＤＳ）、または、Ｏ−３＋ＨＡ＋ＤＳ＋Ｎ＋ＺｎＯ（０．１５６ｍｇ／ｍＬのＯ−３＋０．００１７ｍｇ／ｍＬのＨＡ＋０．０００４ｍｇ／ｍＬのＤＳ＋０．０８１８ｍｇ／ｍＬのＮ＋０．００２７ｍｇ／ｍＬのＺｎＯ）を創傷に適用後４８時間での、細胞で覆われた面積（％）を示している。陰性対照は非処置細胞を示している。
【図４】図４は、０．１５６ｍｇ／ｍＬのＯ−３、Ｏ−３＋ＨＡ＋ＤＳ＋Ｎ（０．１５６ｍｇ／ｍＬのＯ−３＋０．００１７ｍｇ／ｍＬのＨＡ＋０．０００４ｍｇ／ｍＬのＤＳ＋０．０８１８ｍｇ／ｍＬのＮ）、または、Ｏ−３＋ＨＡ＋ＤＳ＋Ｎ＋ＺｎＯ（０．１５６ｍｇ／ｍＬのＯ−３＋０．００１７ｍｇ／ｍＬのＨＡ＋０．０００４ｍｇ／ｍＬのＳＤ＋０．０８１８ｍｇ／ｍＬのＮ＋０．００２７ｍｇ／ｍＬのＺｎＯ）を創傷に適用後４８時間での、細胞で覆われた面積（％）を示している。本発明の２つの組成物を、ω−３脂肪酸（Ｏ−３）と比較する。陰性対照は非処置細胞を示している。
【図５】図５は、０．００２７ｍｇ／ｍＬのＺｎＯ、Ｏ−３＋ＨＡ＋ＤＳ＋Ｎ（０．１５６ｍｇ／ｍＬのＯ−３＋０．００１７ｍｇ／ｍＬのＨＡ＋０．０００４ｍｇ／ｍＬのＤＳ＋０．０８１８ｍｇ／ｍＬのＮ）、または、Ｏ−３＋ＨＡ＋ＤＳ＋Ｎ＋ＺｎＯ（０．１５６ｍｇ／ｍＬのＯ−３＋０．００１７ｍｇ／ｍＬのＨＡ＋０．０００４ｍｇ／ｍＬのＤＳ＋０．０８１８ｍｇ／ｍＬのＮ＋０．００２７ｍｇ／ｍＬのＺｎＯ）を創傷に適用後４８時間での、細胞で覆われた面積（％）を示している。本発明の２つの組成物を、ＺｎＯと比較する。陰性対照は非処置細胞を示している。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
本発明は、ヒアルロン酸と、デルマタン硫酸と、少なくとも１つのω−３脂肪酸と、少なくとも１つのヌクレオチドとを含む組成物に関する。
【００２２】
望ましい実施形態において、ω−３脂肪酸とヒアルロン酸とは、１００：０．５０から１００：５の間、望ましくは１００：０．５０から１００：２．５０の間の、ω−３脂肪酸：ヒアルロン酸質量比で存在する。より望ましくは、質量比は１００：１．１３である。
【００２３】
別の望ましい実施形態において、ω−３脂肪酸とデルマタン硫酸とは、１００：０．１０から１００：２の間、望ましくは１００：０．１０から１００：１の間の、ω−３脂肪酸：デルマタン硫酸質量比で存在する。より望ましくは、質量比は１００：０．２３である。
【００２４】
別の望ましい実施形態において、ω−３脂肪酸とヌクレオチドとは、１００：２０から１００：２００の間、望ましくは１００：２０から１００：１００の間の、ω−３脂肪酸：ヌクレオチド質量比で存在する。より望ましくは、質量比は１００：５２．４４である。
【００２５】
望ましくは、ω−３脂肪酸とヒアルロン酸とデルマタン硫酸とヌクレオチドとは、１００：０．５０：０．１０：２０から１００：５：２：２００の間、望ましくは１００：０．５０：０．１０：２０から１００：２．５０：１：１００の間の、ω−３脂肪酸：ヒアルロン酸：デルマタン硫酸：ヌクレオチド質量比で存在する。１００：１．１３：０．２３：５２．４４の質量比が特に望ましい。
【００２６】
別の望ましい実施形態において、本組成物は、亜鉛化合物、望ましくは酸化亜鉛を更に含んでいる。
【００２７】
別の同様に望ましい実施形態において、ω−３脂肪酸と酸化亜鉛とは、１００：１から１００：１０の間、望ましくは１００：１から１００：５の間の、ω−３脂肪酸：酸化亜鉛質量比で存在する。より望ましくは、質量比は１００：２．４２である。
【００２８】
望ましくは、ω−３脂肪酸とヒアルロン酸とデルマタン硫酸とヌクレオチドと酸化亜鉛とは、１００：０．５０：０．１０：２０：１から１００：５：２：２００：１０の間、望ましくは１００：０．５０：０．１０：２０：１から１００：２．５０：１：１００：５の間の、ω−３脂肪酸：ヒアルロン酸：デルマタン硫酸：ヌクレオチド：酸化亜鉛質量比で存在する。１００：１．１３：０．２３：５２．４４：２．４２の質量比が特に望ましい。
【００２９】
別の望ましい実施形態において、本組成物は、少なくとも１つのω−６脂肪酸を更に含んでいる。
【００３０】
ω−３脂肪酸とω−６脂肪酸とは、１：０．０５から１：１の間の、ω−３脂肪酸：ω−６脂肪酸質量比で存在し、望ましい質量比は１：０．１３である。
【００３１】
望ましくは、ω−３脂肪酸とヒアルロン酸とデルマタン硫酸とヌクレオチドと酸化亜鉛とω−６脂肪酸とは、１００：０．５０：０．１０：２０：１：５から１００：５：２：２００：１０：１００の間の、ω−３脂肪酸：ヒアルロン酸：デルマタン硫酸：ヌクレオチド：酸化亜鉛：ω−６脂肪酸質量比で存在する。１００：１．１３：０．２３：５２．４４：２．４２：１３の質量比が特に望ましい。
【００３２】
別の望ましい実施形態において、ω−３脂肪酸は、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、α−リノレン酸、ステアリドン酸、エイコサテトラエン酸、ヘンエイコサペンタエン酸、ドコサペンタエン酸、およびこれらの混合物から成る群より選ばれる。最も望ましいものはエイコサペンタエン酸である。
【００３３】
別の同様に望ましい実施形態において、ω−６脂肪酸は、γ−リノレン酸, リノール酸、およびこれらの混合物から成る群より選ばれる。最も望ましいものはγ−リノレン酸である。
【００３４】
望ましくは、エイコサペンタエン酸：γ−リノレン酸質量比は、１：０．０７５である。
【００３５】
望ましくは、エイコサペンタエン酸の濃度は、組成物中に存在するω−３脂肪酸の総量に対して、５０％から９０質量％の間である。最も望ましい濃度は７０％である。
【００３６】
望ましくは、γ−リノレン酸の濃度は、組成物中に存在するω−６脂肪酸の総質量に対して、２０％から６０質量％の間である。最も望ましい濃度は４０％である。
【００３７】
望ましくは、ヌクレオチドは酵母から、最も望ましくは、Saccharomices cerevisiaeから得たものである。
【００３８】
別の同様に望ましい実施形態において、本組成物は加水分解コラーゲンも含んでいる。
【００３９】
加水分解コラーゲンは、アミノ酸と、低分子量のペプチドとを含んでいる。
【００４０】
別の同様に望ましい実施形態において、本組成物はビタミンＥも含んでいる。
【００４１】
本発明はまた、先に定義した組成物と、少なくとも１つの栄養添加物とを含む、補助食品、機能性食品、または医療食に関する。
【００４２】
同様に、本発明はまた、先に定義した組成物と、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物に関する。
【００４３】
同様に、本発明はまた、薬剤または医療食として使用するための、先に定義した組成物に関する。
【００４４】
本発明は更に、哺乳動物における、アトピー性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、毛包虫症、乾癬、創傷、潰瘍、および熱傷から成る群より選ばれる、皮膚疾患または損傷の治療または予防に使用するための、先に定義した組成物に関する。
【００４５】
同様に、本発明はまた、哺乳動物における、皮膚炎もしくは毛包虫症の際もしくはその後の皮膚の健常性の回復、乾癬病巣の予防もしくは逆転、皮膚の潤いと柔軟性の増進、創傷もしくは潰瘍の形成予防、または、創傷、潰瘍、もしくは熱傷の治癒品質の向上に使用するための、先に定義した組成物を含む医療食に関する。
【００４６】
同様に、本発明はまた、哺乳動物における、皮膚炎もしくは毛包虫症の際もしくはその後の皮膚の健常性の回復、乾癬病巣の予防もしくは逆転、皮膚の潤いと柔軟性の増進、創傷もしくは潰瘍の形成予防、または、創傷、潰瘍、もしくは熱傷の治癒品質の向上に使用するための、先に定義した組成物を含む、補助食品、機能性食品、または医療食に関する。
【００４７】
本発明はまた、哺乳動物における、アトピー性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、毛包虫症、乾癬、創傷、潰瘍、および熱傷から成る群より選ばれる、皮膚疾患または損傷の治療または予防のための薬剤の調製における、先に定義した組成物の使用に関する。
【００４８】
同様に、本発明はまた、哺乳動物における、皮膚炎もしくは毛包虫症の際もしくはその後の皮膚の健常性の回復、乾癬病巣の予防もしくは逆転、皮膚の潤いと柔軟性の増進、創傷もしくは潰瘍の形成予防、または、創傷、潰瘍、もしくは熱傷の治癒品質の向上のための、補助食品、機能性食品、または医療食の調製における、先に定義した組成物の使用に関する。
【００４９】
同様に、本発明はまた、哺乳動物における、皮膚炎もしくは毛包虫症の際もしくはその後の皮膚の健常性の回復、乾癬病巣の予防もしくは逆転、皮膚の潤いと柔軟性の増進、創傷もしくは潰瘍の形成予防、または、創傷、潰瘍、もしくは熱傷の治癒品質の向上のための、補助食品、機能性食品、または医療食としての、先に定義した組成物の使用に関する。
【００５０】
望ましくは、哺乳動物は、イヌまたはヒトである。
【００５１】
本発明において、用語“含む（comprising）”は、“〜から成る（consisting of）”場合、および“本質的に〜から成る（consisting essentially of）”場合も含むと解釈しなければならない。
【００５２】
本発明において、ヒアルロン酸およびデルマタン硫酸への言及は、その物質の任意の塩、例えば、ナトリウム、カリウム、またはカルシウム塩を含む。
【００５３】
望ましくは、本発明の組成物のヒアルロン酸およびデルマタン硫酸は、ナトリウム塩の形である。
【００５４】
本発明の組成物のω−３およびω−６脂肪酸は、酸の形、または、トリグリセリドの形であっても良い。いずれの形も含まれるが、トリグリセリドの形が望ましい。
【００５５】
本発明において、以下の用語は次に示すような意味を持つ。
【００５６】
“機能性食品”とは、物質的およびエネルギー的観点から見た食物の基本的な栄養的役割に加えて、１つ以上の生物活性成分、または生物活性成分の組み合わせを含むことで、健康上の利益を与えられる食品を指す。機能性食品は、個人の食習慣の一部を成している。
【００５７】
“補助食品”とは、１つ以上の栄養素または他の生物活性成分を濃縮した形で含む、健康に良い栄養学的および生理学的効果を持つ食事補足物（diet supplement）を指す。これは、錠剤、カプセル剤、その他の用量形態（dosed form）で投与される。
【００５８】
“医療食”とは、医師の指示および監督下で患者に供される食品を指す。この食品は、特定の病気、不快症状、または障害を持つ患者の栄養要求に特に応じた食品である。これは米国内で使われており、通常は食品の形をしているが、用量形態のこともある。ヨーロッパで“医療食”に相当する物は、“特別な医療目的のための治療食”であり、これは、通常の食物もしくは通常の食物の特定の栄養素もしくは代謝産物を、摂取、消化、吸収、代謝、もしくは排泄する能力が限定または欠如している、もしくは変調している患者の、または、特別食用の他の食品で正常食に変更を加えただけでは食餌療法が行えない、臨床的に特定された栄養素を必要としている患者の、またはその両者の、食餌的要求の全てもしくは一部を満たすために特別に調製もしくは配合された、特別食用の食品である。これは用量形態であることも、用量形態でないこともある。
【００５９】
本発明の組成物に使用するω−３およびω−６脂肪酸は市販されている製品である。従って、例えば、本発明の組成物を調製するために、KinOmega社のω−３脂肪酸（製品コード：７０１０ＥＥ）と、De Wit Speciality Oilsのω−６脂肪酸（製品コード：４１１４０）を用いることがある。
【００６０】
本発明の組成物のヒアルロン酸およびデルマタン硫酸は、鳥もしくは哺乳動物の組織からの抽出法によって、またはバイオテクノロジを利用して得ることがある。
【００６１】
本発明の組成物のヒアルロン酸およびデルマタン硫酸の平均分子量は、それを得るために用いた方法によって変わることがある。望ましくは、ヒアルロン酸の平均分子量は、３０万から２００万ドルトンの間、より望ましくは８０万から１００万ドルトンの間であり、デルマタン硫酸の分子量は、１万から５万ドルトンの間である。本発明で、ヒアルロン酸とデルマタン硫酸の平均分子量は、ゲル浸透クロマトグラフィ（ＧＰＣ）で測定した。
【００６２】
本発明の組成物のヒアルロン酸は、鳥もしくは哺乳動物の組織、例えば、硝子体液、哺乳動物の皮、臍帯、もしくは鳥の鶏冠からの抽出により、または、微生物（例えば、Streptococcus）の発酵の後、文献に記載の手順に従って得ることがある（D.A. Swann, Biochim. Biophys. Acta156, 17-30 (1968)、米国特許第４，７８０，４１４号）。
【００６３】
望ましくは、本発明の組成物のヒアルロン酸は、www.bioiberica.com.より入手可能な商品である。これは雄鶏の鶏冠から得たもので、鶏冠を刻んだ後、タンパク質分解酵素で消化する。次に、加熱により酵素を不活性化して濾過し、デルマタン硫酸を除き、ヒアルロン酸を沈殿させ、脱水、乾燥、および粉砕する。このナトリウム塩形のヒアルロン酸は、グルクロン酸の含有量による測定で、９０％の最小リッチネス（minimum richness）を示し、平均分子量は８０万から１００万ドルトンの間である。
【００６４】
本発明の組成物のデルマタン硫酸は、鳥または哺乳動物の組織から、例えば、ブタまたはウシの粘膜、鳥の鶏冠、または哺乳動物の皮から、文献に記載の手順に従って得ることがある（N. Volpi, Anal. Biochem.218, 382-391 (1994)、欧州特許第２３８９９４号）。
【００６５】
望ましくは、本発明の組成物のデルマタン硫酸は、ヒアルロン酸を得るための処理で、雄鶏の鶏冠から得られたものである。デルマタン硫酸を錯体の形で分離後、イオン力で錯体を分解し、沈殿、脱水、乾燥、および粉砕する。Sigma-Aldrich Quimica社より市販の、ブタ粘膜から得たデルマタン硫酸（製品コード：Ｃ３７８８）を使用しても良い。雄鶏の鶏冠から得られた、このナトリウム塩形のデルマタン硫酸は、光度滴定による測定で、９０％の最小リッチネスを示し、平均分子量は１万から５万ドルトンの間である。
【００６６】
本発明の組成物を調製するため、ヒアルロン酸とデルマタン硫酸とを含む、Bioibericaからの製品、Dermialが使用できる。
【００６７】
本発明の組成物中のヌクレオチドの例は、アデノシン５’−一リン酸（ＡＭＰ）、グアノシン５’−一リン酸（ＧＭＰ）、ウリジン５’−一リン酸（ＵＭＰ）、シチジン５’−一リン酸（ＣＭＰ）、デオキシチミジン５’−一リン酸（ｄＴＭＰ）、デオキシシチジン５’−一リン酸（ｄＣＭＰ）、イノシン５’−一リン酸（ＩＭＰ）、更に、これらの二リン酸および三リン酸化物である。
【００６８】
望ましくは、本発明のヌクレオチドは酵母から、より詳細には、酵母Saccharomices cerevisiaeから得たものである。詳しくは、酵母 Saccharomices cerevisiaeのＲＮＡから得たものである。これは、酵母 Torula utilisのＲＮＡから得ることもできる。ヌクレオチドを得る方法は、酵母からＲＮＡを抽出する工程と、次に、ＲＮＡを精製および加水分解する工程とから成る。製品 Nucleoforce（登録商標）、Nucleoforce（登録商標）Dogs、Nucleoforce（登録商標）Piglets、またはNucleoforce（登録商標）Poultry（登録商標）（Bioiberica S.A.社 (www.bioiberica.com)より市販され、本発明でヌクレオチド源として使用可能）は、酵母 Saccharomices cerevisiaeのＲＮＡから得たものである。市販の他のヌクレオチド、例えば、Ascogen（登録商標）、Vannagen（登録商標）、Ascosan（登録商標）、Bioracing（登録商標）（Chemoforma（www.chemoforma.com)より）、もしくは、Provesta（登録商標）（Ohly (www.ohly.com)より）、または、Nupro（Alltech (www.alltech.com)より）を使用することもある。
【００６９】
酸化亜鉛は市販の製品である。本発明の組成物では、Kirsch Pharma Espana より販売されている酸化亜鉛（製品コード：１０１２１７）が使用できる。
【００７０】
本発明の組成物の加水分解コラーゲンは、哺乳動物の皮または雄鶏の鶏冠から、文献に記載の手順に従って得ることができる(“Final Report on the Safety Assessment of Hydrolyzed Collagen”, Journal of the American College of Toxicology 4, no5, 199-221, Mary Ann Liebert, Inc., Publishers, (1985))。
【００７１】
本発明の組成物は、個別の成分を望ましい割合で混ぜ合わせることで調製可能である。
【００７２】
本発明の組成物のいくつかの成分は一緒に得ることができる。これは、ヒアルロン酸とデルマタン硫酸と加水分解コラーゲンとの組み合わせが、鳥または哺乳動物の組織から抽出法を用いて得られることを意味している。例えば、この方法では、初めに雄鶏の鶏冠を凍結し、刻んだ後、タンパク質分解酵素で消化することがある。次に、加熱して酵素を不活性化した後、濾過し、溶媒で沈殿させる。ヒアルロン酸とデルマタン硫酸との組み合わせは、この方法に少し変更を加えて得ることができる。
【００７３】
本発明の最も望ましい組成物は、５７．９７％のω−３脂肪酸（Ｏ−３）と、０．６６％のヒアルロン酸（ＨＡ）と、０．１５％のデルマタン硫酸（ＤＳ）と、３０．４０％のヌクレオチド（Ｎ）と、１．４０％の酸化亜鉛（ＺｎＯ）と、７．６０％のω−６脂肪酸（Ｏ−６）とを含む組成物（Ｏ−３：ＨＡ：ＤＳ：Ｎ：ＺｎＯ：Ｏ−６の質量比は、１００：１．１３：０．２３：５２．４４：２．４２：１３）である。
【００７４】
本組成物は、１．８２％のビタミンＥも含むことがある。
【００７５】
本発明の組成物を、哺乳動物における、アトピー性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、毛包虫症、乾癬、創傷、潰瘍、または熱傷の治療、予防、または防止に使用するため、Remington: The Science and Practice of Pharmacy 2000, edited by Lippincott Williams and Wilkins, 20th edition, Philadelphia に記載されているような、従来の技術と、賦形剤またはビヒクルを用いて、これを適当な医薬組成物となるよう調剤する。医薬組成物は、治療効果のある量の本発明の組成物と、患者に投与するための少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤とを含んでいる。この医薬組成物は、必要な用量で患者に投与することができる。医薬組成物は、様々な投与法、例えば、経口、静脈内、皮下、筋肉内、舌下、皮内、経鼻、または局所投与法を用いて投与することがある。本発明の医薬組成物は、治療効果のある量の本発明組成物を含み、その量は、患者の健康状態、年齢、性別、投与径路、投与頻度、病気の重症度など、多くの要因に応じて変わる。更に、当然のことながら、本発明の組成物のこの投薬は、望ましい治療効果を得るために、単一または複数の用量単位として投与することがある。
【００７６】
本発明の医薬組成物は、一般に、固体、液体、またはゲル状と考えられる。本発明に従って調製可能な固体状の医薬製剤としては、粉剤、微小顆粒剤（ペレット剤）、錠剤、分散性顆粒剤、カプセル剤、カシェ剤、丸剤、凍結乾燥剤、および座剤が挙げられる。液状の医薬製剤としては、液剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤、エリキシル剤、飲用バイアル剤（drinkable vials）、および輸液が挙げられる。使用直前に液体製剤に変える、固体状の製剤も含まれる。このような液体物としては、液剤、懸濁剤、および乳剤が挙げられる。
【００７７】
哺乳動物における、皮膚炎もしくは毛包虫症の際もしくはその後の皮膚の健常性の回復、乾癬病巣の予防もしくは逆転、皮膚の潤いと柔軟性の増進、創傷もしくは潰瘍の形成予防、または、創傷、潰瘍、または熱傷の治癒品質の向上に、本発明の組成物を使用するため、本発明の組成物と、栄養摂取に用いられる添加物とを含む、特別な医療目的のための補助食品もしくは治療食を用量形態で調製し、または、食事の一部を成している食品に本発明の組成物を加えて機能性食品を調製し、または、本発明の組成物と栄養素もしくは食品を含む、特別な医療目的のための医療食もしくは治療食を、非用量形態で調製する。補助食品は、錠剤、カプセル剤、液剤、懸濁剤、またはカシェ剤の形をしていることがある。機能性食品は、ヨーグルト、乳、発酵乳、フルーツジュース、野菜ジュース、スープ、ピューレ、乾燥食品、クッキー、またはベビーフードの形をしていることがある。特別な医療目的のための治療食は、錠剤、カプセル剤、液剤、懸濁剤、もしくはカシェ剤の形、または、特別な患者食のための食品の形をしていることがある。医療食は通常、患者食用の食品の形をしているが、用量形態をしていることもある。
【００７８】
本発明の医薬組成物、補助食品、機能性食品、または医療食は、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ビタミンＡ、葉酸、ナイアシン、パントテン酸、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＤ、およびビオチンから成る群より選ばれる、少なくとも１つのビタミンも含むことがある。
【実施例】
【００７９】
以下の実施例は説明を目的として提示したものであり、本発明の範囲に対して何ら制限を加えるものではない。
【００８０】
［実施例１：軟ゼラチンカプセル］
従来法に従ってカプセルを調製した。
カプセル毎に含まれるもの
ω−３脂肪酸                ５７２．００  ｍｇ
ヒアルロン酸＊                  ６．５０  ｍｇ
デルマタン硫酸＊                １．３４  ｍｇ
ヌクレオチド                ３００．００  ｍｇ
酸化亜鉛                      １３．８８  ｍｇ
ω−６脂肪酸                  ７５．００  ｍｇ
＊ヒアルロン酸およびデルマタン硫酸を、１０ｍｇのDermial（ヒアルロン酸とデルマタン硫酸とを含む）で代用することがある。
【００８１】
［実施例２：ビタミンＥを含む軟ゼラチンカプセル］
従来法に従ってカプセルを調製した。
カプセル毎に含まれるもの
ω−３脂肪酸                ５７２．００  ｍｇ
ヒアルロン酸＊                  ６．５０  ｍｇ
デルマタン硫酸＊                １．３４  ｍｇ
ヌクレオチド                ３００．００  ｍｇ
酸化亜鉛                      １３．８８  ｍｇ
ω−６脂肪酸                  ７５．００  ｍｇ
ビタミンＥ                    １８．００  ｍｇ
＊ヒアルロン酸およびデルマタン硫酸を、１０ｍｇの Dermial（ヒアルロン酸とデルマタン硫酸とを含む）で代用することがある。
【００８２】
［実施例３：ω−３脂肪酸とヒアルロン酸とデルマタン硫酸とヌクレオチドとを含む、本発明の組成物の、線維芽細胞の増殖に対する刺激活性（ヌクレオチドを含まない組成物との比較）］
線維芽細胞は、ケラチン生成細胞と共に、真皮および表皮の主細胞である。その移動と増殖は再上皮化過程に関与し、皮膚バリアが変調する、また、病変自体により、または痒みのため掻きむしることで患者に損傷が表れる皮膚病変において、非常に重要である。この実験の狙いは、ω−３脂肪酸とヒアルロン酸とデルマタン硫酸とヌクレオチドを含む、本発明の組成物の、ヒト皮膚線維芽細胞の増殖に対する刺激活性を測定し、これを、ω−３脂肪酸とヒアルロン酸とデルマタン硫酸とを含む組成物と比較することであった。２つの組成物を、０．１５６ｍｇ／ｍＬの同じ最終濃度で比較した。
【００８３】
６５．３８％のω−３脂肪酸（Ｏ−３）と、０．６４％のヒアルロン酸（ＨＡ）と、０．１５％のデルマタン硫酸（ＤＳ）と、３４．１３％のヌクレオチド（Ｎ）とを含む、本発明の組成物（Ｏ−３：ＨＡ：ＤＳ：Ｎの質量比は、１００：０．９８：０．２３：５２．２０）を使用した。
【００８４】
３成分組成物は、９８．６５％のω−３脂肪酸（Ｏ−３）と、１．１２％のヒアルロン酸（ＨＡ）と、０．２３％のデルマタン硫酸（ＤＳ）とを含むもの（Ｏ−３：ＨＡ：ＤＳの質量比は、１００：１．１３：０．２３）であった。
【００８５】
＜材料及び方法＞
増殖中の線維芽細胞内におけるＤＮＡ合成の際のブロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ）の取り込みを測定し、増殖の程度を定量した。
【００８６】
９６ウェルのディッシュに、ヒト皮膚線維芽細胞を、５，５００細胞／ウェルで播き、６〜７時間後、成長因子の欠乏した培地を加えて一晩置いた。翌日、ω−３脂肪酸とヒアルロン酸とデルマタン硫酸とヌクレオチドとを含む、０．１５６ｍｇ／ｍＬの濃度の、本発明の組成物（Ｏ−３＋ＨＡ＋ＤＳ＋Ｎ）で、または、ω−３脂肪酸とヒアルロン酸とデルマタン硫酸とを含む、０．１５６ｍｇ／ｍＬの濃度の組成物（Ｏ−３＋ＨＡ＋ＤＳ）で細胞を処理した。培養物を被験組成物に４８時間曝露後、吸収量を分光光度法で測定した。
【００８７】
ベースライン対照としては、細胞を処理せず、陽性対照としては、線維芽細胞をＴＧＦ−β１（２５ｎｇ／ｍＬ）に曝露した。
【００８８】
＜結果＞
図１に示すように、本発明の組成物（Ｏ−３＋ＨＡ＋ＤＳ＋Ｎ）は、０．１５６ｍｇ／ｍＬの用量において、４８時間後、ベースライン対照と比べて、線維芽細胞の増殖に対して統計的に有意な刺激作用を示した（ｐ＝０．０２９７）。詳細には、増殖率が４０．７０％増加した。しかし、０．１５６ｍｇ／ｍＬの同じ用量において、ω−３脂肪酸とヒアルロン酸とデルマタン硫酸とを含むが、ヌクレオチドを含まない組成物（Ｏ−３＋ＨＡ＋ＤＳ）は、効果を示さなかった（線維芽細胞の増殖を刺激する傾向は見られたが、ベースライン対照と比べて、統計的に有意ではなかった）。図１は、２つの組成物の間に統計的有意差がある（ｐ＝０．０２６３）ことも示している。
【００８９】
［実施例４：ω−３脂肪酸とヒアルロン酸とデルマタン硫酸とヌクレオチドとＺｎＯとを含む、本発明の組成物の、線維芽細胞の増殖に対する刺激活性（ヌクレオチドまたはＺｎＯを含まない組成物との比較）］
この試験の狙いは、ω−３脂肪酸とヒアルロン酸とデルマタン硫酸とヌクレオチドとＺｎＯとを含む、本発明の組成物の、ヒト皮膚線維芽細胞の増殖に対する刺激活性を測定し、これを、ω−３脂肪酸とヒアルロン酸とデルマタン硫酸とを含む組成物と比較することであった。２つの組成物を、０．０７８ｍｇ／ｍＬの同じ最終濃度で比較した。
【００９０】
６４．１０％のω−３脂肪酸（Ｏ−３）と、０．７６％のヒアルロン酸（ＨＡ）と、０．１２％のデルマタン硫酸（ＤＳ）と、３３．３３％のヌクレオチド（Ｎ）と、１．２８％のＺｎＯとを含む本発明の組成物（Ｏ−３：ＨＡ：ＤＳ：Ｎ：ＺｎＯの質量比は、１００：１．２０：０．２０：５２：２）を使用した。
【００９１】
３成分の組成物は、９８．６５％のω−３脂肪酸（Ｏ−３）と、１．１２％のヒアルロン酸（ＨＡ）と、０．２３％のデルマタン硫酸（ＤＳ）とを含むもの（Ｏ−３：ＨＡ：ＤＳの質量比は、１００：１．１３：０．２３）であった。
【００９２】
＜材料及び方法＞
実施例３で使用したものと同じ手順を適用したが、この場合では、培養物を、０．０７８ｍｇ／ｍＬの最終濃度に調製した被験組成物に２４時間曝露した。
【００９３】
＜結果＞
図２に示すように、０．０７８ｍｇ／ｍＬの用量において、２４時間後、本発明の組成物（Ｏ−３＋ＨＡ＋ＤＳ＋Ｎ＋ＺｎＯ）と、ω−３脂肪酸とヒアルロン酸とデルマタン硫酸とを含む（Ｏ−３＋ＨＡ＋ＤＳ）がヌクレオチドまたは酸化亜鉛を含まない組成物との間に、統計的有意差（ｐ＝０．０００１）があった。
【００９４】
［実施例５：ω−３脂肪酸とヒアルロン酸とデルマタン硫酸とヌクレオチドとＺｎＯとを含む、本発明の組成物の治癒活性および相乗効果の検討］
この試験の狙いのひとつは、創傷閉鎖に関するin vitro試験により、５成分を含む本発明の組成物の治癒活性を測定し、これを、３成分（ω−３脂肪酸とヒアルロン酸とデルマタン硫酸）しか含まない組成物と比較することであった。もうひとつの狙いは、５成分（ω−３脂肪酸とヒアルロン酸とデルマタン硫酸とヌクレオチドと酸化亜鉛）を含む本発明の組成物が、相乗効果を持つかどうかを調べることであった。
【００９５】
＜材料及び方法＞
ヒト皮膚線維芽細胞（ＨＤＦ）を使用し、これを、表面積１．９９ｃｍ２の、２４ウェルのディッシュ中、７×１０４細胞／ウェルの密度で培養した。滅菌したプラスチックチップを用いて、細胞の単一層の表面に約２ｍｍ幅の直線を引き、細胞のない部分を作った。その後すぐに、化合物または組成物を、次の濃度で、培養物に適用した。
・ω−３脂肪酸（Ｏ−３）：０．１５６  ｍｇ／ｍＬ
・ヒアルロン酸（ＨＡ）：０．００１７  ｍｇ／ｍＬ
・デルマタン硫酸（ＤＳ）：０．０００４  ｍｇ／ｍＬ
・ヌクレオチド（Ｎ）：０．０８１８  ｍｇ／ｍＬ
・酸化亜鉛（ＺｎＯ）：０．００２７  ｍｇ／ｍＬ
・３成分組成物：０．１５６ｍｇ／ｍＬのＯ−３＋０．００１７ｍｇ／ｍＬのＨＡ＋０．０００４ｍｇ／ｍＬのＤＳ  （Ｏ−３：ＨＡ：ＤＳの質量比は、１００：１．０９：０．２５）
・本発明の４成分組成物：０．１５６ｍｇ／ｍＬのＯ−３＋０．００１７ｍｇ／ｍＬのＨＡ＋０．０００４ｍｇ／ｍＬのＤＳ＋０．０８１８ｍｇ／ｍＬのＮ  （Ｏ−３：ＨＡ：ＤＳ：Ｎの質量比は、１００：１．０９：０．２５：５２．４３）
・本発明の５成分組成物：０．１５６ｍｇ／ｍＬのＯ−３＋０．００１７ｍｇ／ｍＬのＨＡ＋０．０００４ｍｇ／ｍＬのＤＳ＋０．０８１８ｍｇ／ｍＬのＮ＋０．００２７ｍｇ／ｍＬのＺｎＯ  （Ｏ−３：ＨＡ：ＤＳ：Ｎ：ＺｎＯの質量比は、１００：１．０９：０．２５：５２．４３：１．７３）
【００９６】
陰性対照として、未処理細胞を使用した。陽性対照は、ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を０．１％加えた、ダルベッコ培地（ＤＭＥＭ）であった。
【００９７】
次に、被験化合物の存在下、細胞がディッシュの中心へ移動し、細胞のない部分を覆うようにさせて、４８時間後、ＴＩＲＦ自動倒立顕微鏡-ScanR Olympus（Leica）と４×対物レンズ（総合倍率４０×）を用いて、細胞で覆われた面積を定量した。各実験条件を３回行った。
【００９８】
それぞれの処理の治癒活性を測るため、ソフトウェア Image Jを使った画像解析を使用して、処理の前（Ｔ０ｈ）と後（４８ｈ）の、細胞で覆われた面積（μｍ２）を定量した。その結果を、陰性および陽性対照で得られたものと比較した。
【００９９】
＜結果＞
図３は、本発明の組成物、Ｏ−３＋ＨＡ＋ＤＳ＋Ｎ＋ＺｎＯに相乗効果があることを示している。ヌクレオチドとＺｎＯと３成分組成物（Ｏ−３＋ＨＡ＋ＤＳ）との組み合わせは、個別の成分それぞれを合わせたものより大きな相乗的治癒効果を示した。
【０１００】
図４は、ω−３脂肪酸は、治癒の有意な増大を引き起こさないが、ＨＡ＋ＤＳ＋Ｎを加えて本発明の４成分組成物（Ｏ−３＋ＨＡ＋ＤＳ＋Ｎ）とした場合、また、ＨＡ＋ＤＳ＋Ｎ＋ＺｎＯをω−３脂肪酸に加えて本発明の５成分組成物（Ｏ−３＋ＨＡ＋ＤＳ＋Ｎ＋ＺｎＯ）とした場合、治癒に有意な増大が見られた（ｐ＜０．０５）ことを示している。更に、グループ間で治癒の増大を比較したところ、４成分の発明とＯ−３との間（ｐ＝０．０２３４５９）、および、５成分の発明（Ｏ−３＋ＨＡ＋ＤＳ＋Ｎ＋ＺｎＯ）とＯ−３との間（ｐ＝０．０１７７１４）で、有意差が見られた。
【０１０１】
更に、図５は、ＺｎＯは治癒の有意な増大を引き起こさず、本発明の４成分組成物（Ｏ−３＋ＨＡ＋ＤＳ＋Ｎ）と、本発明の５成分組成物（Ｏ−３＋ＨＡ＋ＤＳ＋Ｎ＋ＺｎＯ）は、ＺｎＯに対して有意差（それぞれ、ｐ＝０．０２４１０６、ｐ＝０．０１８３９５）を示したことを示している。
【図１】
2019515685.tif 000003
【図２】
2019515685.tif 000004
【図３】
2019515685.tif 000005
【図４】
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【図５】
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【手続補正書】
【提出日】平成30年12月18日(2018.12.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図２】
2019515685.tif 000008
【国際調査報告】
2019515685.tif 000009
2019515685.tif 000010
2019515685.tif 000011