(57)【要約】  本発明は、体外受精に使用する卵胞液に関し、この使用は、胚移植の６日前から移植日までの期間中に１回または２回以上の投与で卵胞液を子宮に導入することを含む。【選択図】図１【特許請求の範囲】
【請求項１】
体外受精に使用するための新鮮な卵胞液であって、前記使用は、胚移植の６日前から移植日までの期間中に１回または２回以上の投与で新鮮な卵胞液を子宮に導入することを含む、新鮮な卵胞液。
【請求項２】
新鮮とは、卵胞液が、吸引されたばかりであるか、吸引後、好ましくは−８０℃でまたは液体窒素中で適切に保存されたことを意味する、請求項１に記載の使用のための新鮮な卵胞液。
【請求項３】
不妊治療での使用のための新鮮な卵胞液であって、前記卵胞液が、胚移植の６日前から移植日までの期間中に１回または２回以上の投与で子宮に導入されることを特徴とする、新鮮な卵胞液。
【請求項４】
前記使用が胚盤胞の移植成功率を改善する際のものである、請求項１から３のいずれか一項に記載の使用のための卵胞液。
【請求項５】
前記子宮への前記導入が、前記胚移植の３日前に行われる、請求項１から４のいずれか一項に記載の使用のための卵胞液。
【請求項６】
前記卵胞液が自己卵胞液である、請求項１から５のいずれか一項に記載の使用のための卵胞液。
【請求項７】
前記卵胞液が成熟卵胞から採取される、請求項１から６のいずれか一項に記載の使用のための卵胞液。
【請求項８】
前記使用が、プロゲステロン、一酸化窒素供与体、アロマターゼ阻害剤、アスコルビン酸、グルココルチコイド、インスリンもしくはインスリン抵抗性改善剤、リラキシン、ＨＣＧ、チロキシン、メラトニン、植物治療抽出物、バーバスカムを含む群から選択されるのが好ましい１つまたは２つ以上の薬理学的物質、およびオプションとして１つまたは２つ以上の薬学的に許容される担体の使用と組み合わせられる、請求項１から７のいずれか一項に記載の使用のための卵胞液。
【請求項９】
前記１つまたは２つ以上の物質が、前記卵胞液を前記子宮内に導入するのと同時に前記子宮に導入することによって投与されるか、あるいは前記卵胞液の導入の１４日前から、前記卵胞液の導入から３カ月後まで、または１カ月後まで、または１５日後まで、または５日後までの期間以内に、１回または２回以上の投与で、例えば、皮下、腹腔内、筋肉内、舌下、経口から選択される投与経路によって投与される、請求項８に記載の使用のための卵胞液。
【請求項１０】
ＩＶＦ−ＩＣＳＩ処置および他の子宮外受精処置における治療的使用のための新鮮な卵胞液を０．１〜５ｃｍ３、より好ましくは１．５〜３ｃｍ３の容量で、さらに好ましくは約２ｃｍ３の容量で含む、医薬組成物。
【請求項１１】
前記組成物が、胚移植の１日、２日、３日、４日、５日、または６日前に子宮に導入される、請求項１０に記載の使用のための組成物。
【請求項１２】
プロゲステロン、一酸化窒素供与体、アロマターゼ阻害剤、アスコルビン酸、グルココルチコイド、インスリンもしくはインスリン抵抗性改善剤、リラキシン、ＨＣＧ、チロキシン、メラトニン、植物治療抽出物、バーバスカムを含む群から選択されるのが好ましい１つまたは２つ以上の薬理学的物質と、１つまたは２つ以上の薬学的に許容される担体と、をさらに含む、請求項１０または１１に記載の使用のための組成物。
【請求項１３】
ＩＶＦ−ＩＣＳＩおよび他の子宮外受精処置のための方法であって、前記方法が、
−胚移植を受ける女性から卵胞液を吸引するステップと、
−前記卵胞液を同じ女性の子宮腔に導入するステップであって、前記導入は、前記卵胞液が採取された直後、または後で行われ、前記導入が、前記採取に続いて行われ、前記卵胞液が、−８０℃で、または液体窒素中で凍結保存され、前記卵胞液が、０．１〜５ｃｍ３の容積で子宮に導入される、ステップと、
前記卵胞液の導入の６日、５日、４日、３日、２日、および／もしくは１日後、または前記卵胞液の導入の同じ日に、前記同じ女性における前記胚移植に進むステップと、を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、体外受精で使用するための卵胞液に関し、この使用は、胚移植の６日前から移植日までの期間中に１回または２回以上の投与で卵胞液を子宮に導入することを含む。
【背景技術】
【０００２】
生殖補助医療技術には、ＩＶＦ−ＩＣＳＩがあり、これは卵子を体外受精し、その後、このようにして形成された胚を女性の子宮に移植することを含む。
【０００３】
この処置は基本的に４つのステップ：排卵調節誘発；卵母細胞の回収；体外受精；胚移植に分けられる。体外受精が自然に起こるか、または生殖細胞の細胞質内注入によって行われるかに応じて、これらの技術はそれぞれＩＶＦまたはＩＣＳＩと呼ばれる。
【０００４】
７０年代後半の最初のＩＶＦの成功以来今日まで、この技術の成功率には大きな改善はなかった。子宮に胚を再移植するステップは、ＩＶＦサイクルの結果に有意に影響する可能性のある最も重要なステップである。
【０００５】
本明細書の同じ著者は、Ｍａｒｔｅｌ  Ｄ．らによる非特許文献１で、胚の移植が行われる瞬間は、ヒトにおいて、排卵後５日目であることに注目した。しかしながら、実際には、以前の受精から保管された材料である卵母細胞または胚を使用しない限り、排卵後２日目に胚盤胞の移植が行われ続ける。
【０００６】
胚培養物の上清の胚盤胞移植前の子宮への注入では、移植の成功率は改善されなかった（非特許文献２；非特許文献３）。
【０００７】
平均して、明らかに健康な接合体の９０％までは、栄養膜移植およびヒト絨毛性性腺刺激ホルモン（ｈＣＧ）の産生の徴候を示さずに、子宮内に移植されたときに消滅することが予定されている。
【０００８】
ＩＶＦ−ＩＣＳＩの様々なステップは、身体的および心理的な観点から女性にとって特に困難であるため、依然として期待外れの成功率を高める必要性が強く感じられる。移植ステップは、現在、ＩＶＦ−ＩＣＳＩの成功率を高める目的で介入するための重要なステップである。
【０００９】
卵胞液は、卵胞障壁（ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ  ｂａｒｒｉｅｒ）を横切る血液成分の移動と、顆粒膜細胞および細胞様細胞（ｇｒａｎｕｌｏｓｅ  ａｎｄ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｃｅｌｌｓ）の分泌活性との組合せ生成物である（非特許文献４）。ホルモン誘導に続いて、生理学的にまたは典型的には補助生殖処置の観点から、女性生殖系において周期的に形成される卵母細胞は、内部に核を有し、その周りに単層の扁平細胞が配置され、これらは卵胞細胞である。日が過ぎると、平らな卵胞細胞は立方晶となり増殖し、それにより、卵胞液を収容する空間がそれらの間に形成されるまで、複数の同心層を形成する。成熟過程が進行するにつれて、卵胞を取り囲む皮質層が増殖し、それにより内卵胞膜および外卵胞膜が生じる。完全に成熟すると、内卵胞膜が消え、卵巣の表面に突出した卵胞が崩壊する。この破裂は、卵胞液の漏出と成熟卵母細胞の排除を伴う。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｍａｒｔｅｌ  Ｄ．ら、Ｊ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．１９８７  １１４（２）：３１９−２４
【非特許文献２】Ｚｈｕ  Ｗ．ら、Ｆｅｒｔｉｌ  Ｓｔｅｒｉｌ．２０１０  ９３（７）：２２１６−２１
【非特許文献３】Ｇｏｔｏ  Ｓ．ら、Ｆｅｒｔｉｌ  Ｓｔｅｒｉｌ．２００９  ９２（４）：１２６４−８
【非特許文献４】Ｆｏｒｔｕｎｅ  Ｊ．Ｅ．Ｂｉｏｌ  Ｒｅｐｒｏｄ．１９９４，５０：２２５−２３２
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明の著者は、この方法が驚くべきことに臨床移植ステップにおいて達成する改善により、ＩＶＦ−ＩＣＳＩの成功率を改善することが示されている移植方法を提案する。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
驚くべきことに、本発明の著者は、子宮内の接合体移植は、移植に、子宮内の卵胞液の導入が先行するか、またはこれらが同時に行われた場合に、より大きな移植効果を有することを証明しており、卵胞液は、被験者自身から卵子を採取する際に収集された自己卵胞液であるか、または卵母細胞の外植の時に採取され、子宮に導入されるまで凍結保存された卵胞液である。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】図１は、本発明による方法のブロック図である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
子宮における胚移植のステップで適用される革新的な方法が本明細書に記載されており、この方法は子宮内の移植の割合を有意に増加させ、以下の段落および特許請求の範囲で詳細に説明する。
【００１５】
本発明の目的のために、卵胞液は、当業者に既知の方法のいずれかによって卵巣から得られる。典型的には、ＩＶＦまたはＩＣＳＩ処置では、卵胞液は、卵母細胞収集ステップの間に卵母細胞と共に吸引されるので容易に入手可能である。
【００１６】
本発明の目的のために、卵胞液は、卵巣から吸引されたばかりの卵胞液の特徴を有する卵胞液である。一実施形態では、卵胞液は卵巣から外植されたばかりの卵胞液である。あるいは、卵胞液は、吸引から使用時まで、好ましくは−８０℃で、または液体窒素中で凍結させたままにしておく。したがって、卵胞液は、他の培地による希釈または不適切な保存条件による劣化を受けていない、未変化の新たに吸引された卵胞液のすべての成分を含む卵胞液である。
【００１７】
図１は、本明細書に記載の革新的な方法を表すブロック図である。
【００１８】
卵胞液は、体外受精に供される卵母細胞が吸引されるときに吸引されるか、または異なる時期に吸引される。典型的には、卵胞液は、卵母細胞と共に吸引される。次に、卵母細胞は、卵胞液からの吸引によって単離され、その後、この卵胞液は、子宮に導入されるか、またはその後の使用のために保存される。この目的のために、この卵胞液は、後に子宮に導入するために保管される。いずれの場合も、卵胞液は、本発明の目的のために与えられた定義に従って子宮に導入される。
【００１９】
本発明の目的のために、卵胞液は、好ましくは、卵母細胞の完全な成熟と同相で、すなわち細針吸引時に見出される形態で卵胞から採取される。
【００２０】
この卵胞液は、典型的には胚移植に用いられる処置を用いて子宮に導入される。この卵胞液の子宮への導入日は、治療の成功のために特に重要である。好ましい実施形態では、この卵胞液は、その採取および処理の直後に子宮に導入され、処理には、その中に含まれる卵母細胞の単離が含まれる。好ましくは、卵胞液を子宮に導入して５日後、胚移植を行う。別の実施形態では、子宮への卵胞液の導入の４日後、または３日後、または１日後に胚移植を行う。代替的な実施形態では、この卵胞液は、胚移植と同時に子宮に導入される。
【００２１】
驚くべきことに、本発明の著者は、子宮に導入された卵胞液が、胚移植の成功した成果を促進する上で有利な役割を有することを実証した。この効果は、この卵胞液が新たに外植された卵胞液のすべての特徴を有する場合に観察される。好ましい実施形態では、この卵胞液は、０．１〜５ｃｍ３、より好ましくは１．５〜３ｃｍ３の容積で、さらに好ましくは約２ｃｍ３の容積で子宮に導入される。
【００２２】
驚くべきことに、本発明の著者らは、卵胞液が子宮内膜移植の時間窓を決定する上で決定的な役割を果たすことを示しており、新鮮な卵胞液の存在、すなわち新たに吸引された卵胞液の特徴を有することで、子宮内膜の成熟を胚移植のための最適な成熟段階に到達させる。この効果は、新鮮な卵胞液の子宮への導入が、受精した胚の子宮への導入に１日、２日、３日、４日、５日、６日だけ先立つ場合にさらに有利に得られる。最大の効果は、受精した胚の導入（胚移植、ＥＴ）の２〜４日前、さらに好ましくは３日前から新鮮な卵胞液を子宮に導入することによって達成される。
【００２３】
本発明の目的のためには、数時間の吸引後、例えば室温に維持した場合、この卵胞液がその基本成分のいくつかの分解を受けるので、この卵胞液が適切に保存された卵胞液であることが不可欠であり、この分解は、卵胞液に本明細書に示されるその驚くべき能力を失わせて子宮内膜を成熟させる。好ましい実施形態では、この新鮮な卵胞液は他の培養培地で希釈されない。
【００２４】
卵胞液は、不妊治療における使用のために本明細書で特許請求され、この卵胞液が、胚移植の６日前から移植日までの期間中に１回または２回以上の投与で子宮に導入されることを特徴とする。
【００２５】
好ましい実施形態において、この使用は、胚移植プロセスにおけるものである。
【００２６】
好ましい実施形態では、この使用は、胚盤胞の移入によってヒトにおける移植成功率を改善する際のものであり、卵胞液が、胚移植の６日前から移植日までの期間中に１回または２回以上の投与で胚移植を受けるヒト患者の子宮腔に導入される。
【００２７】
さらなる態様では、医薬組成物が記載され、これは、ＩＶＦ−ＩＣＳＩ処置および他の子宮外受精処置における治療的使用のための新鮮な卵胞液を０．１〜５ｃｍ３、より好ましくは１．５〜３ｃｍ３、さらに好ましくは約２ｃｍ３の容量で含む。この組成物は、胚移植の１日、２日、３日、４日、５日、または６日前に子宮に導入される。
【００２８】
胚盤胞の移植によって移植成功率を改善するのに使用するための組成物の製造方法も特許請求され、この方法は、この胚盤胞の移植が行われる同じ被験体から卵胞液を採取する工程と、オプションとして卵胞液を−８０℃で、または液体窒素中で保管する工程と、オプションとして卵胞液を他の活性成分と混合する工程と、を含む。この卵胞液は、好ましくは、少なくとも１６ｍｍ、または少なくとも２０ｍｍの卵胞から採取される。
【００２９】
本発明のさらなる目的は、体外受精で使用するための卵胞液であり、この使用は、胚移植の６日前から移植日までの期間中に１回または２回以上の投与で卵胞液を子宮に導入することを含む。
【００３０】
好ましい実施形態では、この卵胞液は、好ましくは少なくとも１６ｍｍの成熟卵胞から採取される。
【００３１】
さらにより好ましくは、この卵胞液は自己卵胞液である。
【００３２】
本発明のさらなる態様は、卵胞液を採取および処理するための方法であって、この方法は、
−超音波技術を用いることによって、卵巣から卵胞を、好ましくは経膣的に採取する工程と、
−卵胞を穿刺し、卵母細胞含有卵胞液を採取する工程と、
−卵母細胞を吸引により単離する工程と、
−卵胞液を子宮内に導入するか、またはそれを保管する工程と、を含む。
【００３３】
本発明のさらなる態様は、卵胞液またはその画分を、例えばプロゲステロン、一酸化窒素供与体、アロマターゼ阻害剤、アスコルビン酸、グルココルチコイド、インスリンもしくはインスリン抵抗性改善剤、リラキシン、ＨＣＧ、チロキシン、メラトニン、植物治療抽出物（ｐｈｙｔｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｅｘｔｒａｃｔｓ）、バーバスカムから選択される１つまたは２つ以上の薬理学的物質と一緒に含む組成物の組み合わせ子宮内投与である。この１つまたは２つ以上の薬理学的物質の選択は、当業者に周知の特定の患者のニーズに基づいて行われる。
【００３４】
あるいは、卵胞液の子宮へのこの導入は、子宮着床に有利な１つまたは２つ以上の薬理学的物質の投与を伴う。例えば、プロゲステロン、一酸化窒素供与体、アロマターゼ阻害剤、アスコルビン酸、グルココルチコイド、インスリンもしくはインスリン抵抗性改善剤、リラキシン、ＨＣＧ、チロキシン、メラトニン、植物治療抽出物、バーバスカムを含む群から選択されたこの１つまたは２つ以上の薬理学的物質は、例えば、皮下、腹腔内、筋肉内、舌下、経口から選択された投与経路によって投与される。この１つまたは２つ以上の物質は、卵胞液の子宮への導入の１４日前から、卵胞液の導入から３カ月後まで、または１カ月後まで、または１５日後まで、または５日後までの期間以内に１回または２回以上の投与で投与される。
【００３５】
本発明のさらなる目的は、本発明に記載の定義による卵胞液と、例えばプロゲステロン、一酸化窒素供与体、アロマターゼ阻害剤、アスコルビン酸、グルココルチコイド、インスリンもしくはインスリン抵抗性改善剤、リラキシン、ＨＣＧ、チロキシン、メラトニン、植物治療抽出物、バーバスカムを含む群から選択される１つまたは２つ以上の薬理学的物質と、１つまたは２つ以上の薬学的に許容される担体と、を含む医薬組成物である。
【００３６】
この組成物は、体外受精での使用に応用され、この使用は、胚移植の６日前から移植日までの期間中に１回または２回以上の投与でこの組成物を子宮に導入することを含む。
【００３７】
さらなる態様では、ＩＶＦ−ＩＣＳＩおよび他の子宮内受精処置のための方法が本明細書に記載されており、この方法は、新鮮な自己卵胞液を女性に１回または２回以上の投与で投与することを含み、この卵胞液は、胚移植の６日前から移植日までの期間内に、１〜５ｃｍ３、より好ましくは１．５〜３ｃｍ３の容積で子宮に導入される。この方法は、驚くべきことに、移植成功率を改善することが示されている。
【００３８】
ヒトについて本明細書に記載されるこの方法は、他の哺乳動物種においても有利に適用される。
【図１】
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【国際調査報告】
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2019515002.tif 000004
2019515002.tif 000005