(57)【要約】  本発明は、奇数個の炭素原子を有する脂肪酸を有する脂質の医薬又は栄養補助食品としての使用に関する。特に、そのような脂質は、神経変性疾患、眼及び網膜変性疾患、脱髄疾患、神経筋障害及び筋ジストロフィー、脳若しくは脊髄神経損傷、アミロイド関連疾患、そして腎臓病、糖尿病又は喘息から選択される他の慢性疾患の治療及び/又は予防に使用することができるが、ヒト及び／又は動物のアンチエイジング若しくは寿命延長及び脳機能の改善のための機能性食品又は補助食品にも使用することができる。さらに、本発明は、薬草であるＯｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍに関し、これは上記疾患の治療及び／又は予防のために使用することができる。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト及び／又は動物用の医薬の製造のための式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩の使用：
【化１】
2019518034.tif 000006
（式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３はＨ又は−Ｃ（Ｏ）Ｒ４から独立に選択され、Ｒ４は、
−  １、２又は３個のＯＨ、ＮＨ２、ＮＨＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２、Ｆ又はＣｌで任意に置換された（Ｃ５−Ｃ２０）アルキル；又は
−  １、２又は３個の二重結合を有する（Ｃ５−Ｃ２０）アルケニル；
であり、
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３の少なくとも１つは、Ｒ４が偶数個の炭素原子を有する（Ｃ６−Ｃ２０）アルキルである−Ｃ（Ｏ）Ｒ４である。）。
【請求項２】
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３がＨ又は−Ｃ（Ｏ）Ｒ４から独立に選択され、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３の少なくとも１つが、Ｒ４が偶数個の炭素原子を有する（Ｃ６−Ｃ２０）アルキルである−Ｃ（Ｏ）Ｒ４である、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項３】
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３が、Ｒ４が偶数個の炭素原子を有する（Ｃ６−Ｃ２０）アルキルである−Ｃ（Ｏ）Ｒ４から独立に選択される、請求項１又は２に記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項４】
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３の１又は２つはＨであり、他は、Ｒ４がＣ１２−アルキル、Ｃ１４−アルキル、Ｃ１６−アルキル、Ｃ１８−アルキル又はＣ２０−アルキルである−Ｃ（Ｏ）Ｒ４である、請求項１又は２に記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項５】
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３が、Ｒ４がＣ１４−アルキルである−Ｃ（Ｏ）Ｒ４である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項６】
ヒト及び／又は動物用の医薬の製造のためのＨＯＣ（Ｏ）Ｃ１２−アルキル、ＨＯＣ（Ｏ）Ｃ１４−アルキル、ＨＯＣ（Ｏ）Ｃ１６−アルキル、ＨＯＣ（Ｏ）Ｃ１８−アルキル又はＨＯＣ（Ｏ）Ｃ２０−アルキルである、請求項４に記載の式（Ｉ）の化合物の代謝物又はプロドラッグ。
【請求項７】
神経変性疾患、網膜若しくは視神経変性疾患、脱髄疾患、神経筋障害及び筋ジストロフィー、脳若しくは脊髄神経損傷、脳神経障害若しくは発作、アミロイド沈着関連疾患、又は、腎臓病、糖尿病及び喘息からなる群より選択される慢性疾患の治療及び／又は予防のための医薬の製造のための；並びにアンチエイジング又は寿命延長及び脳機能の改善に使用するための、請求項１〜６のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項８】
アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、ハンチントン病（ＨＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、認知症、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、クロイツフェルト・ヤコプ病及び脳萎縮からなる群より選択される神経変性疾患の治療及び／又は予防のための医薬の製造のための、請求項１〜６のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項９】
視神経萎縮、レーベル遺伝性視神経症（ＬＨＯＮ）、優性視神経萎縮（ＤＯＡ）、加齢性黄斑変性症、緑内障及び網膜色素変性症からなる群より選択される眼及び網膜変性疾患の治療及び／又は予防のための医薬の製造のための、請求項１〜６のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項１０】
副腎白質ジストロフィー、多発性硬化症、視神経炎、急性炎症性脱髄性多発ニューロパチー（ＡＩＤＰ）、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー（ＣＩＤＰ）、ギラン・バレー症候群、ジカウィルスにより引き起こされ若しくはジカウィルスに関連する脳炎、脳神経麻痺、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）、急性散在性脳脊髄炎、急性壊死性出血性脳炎、同心性硬化症、びまん性硬化症、異染性白質ジストロフィー、球様細胞型白質ジストロフィー、中枢神経系の海綿状変性、ペリープラム病、アレキサンダー病、放射線障害白質脳症、低酸素白質脳症、脳室周囲白質軟化症、脳症下における動脈硬化性皮質、進行性多巣性白質脳症及び橋中心髄鞘崩解症候群からなる群より選択される脱髄疾患の治療及び／又は予防のための医薬の製造のための、請求項１〜６のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項１１】
重症筋無力症、ランバート・イートン症候群、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、ベッカー型筋ジストロフィー、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー、筋緊張性ジストロフィー、シャルコー・マリー・トゥース病（ＣＭＴ）からなる群より選択される神経筋障害及び筋ジストロフィー疾患の治療及び／又は予防のための医薬の製造のための、請求項１〜６のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項１２】
急性又は慢性脳損傷又は脊髄神経損傷、脳神経障害及び発作からなる群より選択される神経損傷関連疾患又は混合性神経疾患の治療及び／又は予防のための医薬の製造のための、請求項１〜６のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項１３】
糖尿病、心臓アミロイドーシス、原発性アミロイドーシス、家族性アミロイドーシス、老人性全身性アミロイドーシス（ＳＳＡ）、続発性アミロイドーシス及び血液透析関連アミロイドーシスからなる群より選択されるアミロイド沈着関連疾患の治療及び／又は予防のための医薬の製造のための、請求項１〜６のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項１４】
腎臓病、糖尿病及び喘息からなる群より選択される慢性疾患の治療及び／又は予防のための医薬の製造のための、請求項１〜６のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項１５】
前記化合物を１ｍｇ／日〜１０００ｍｇ／日の用量で含む、請求項７〜１４の疾患及び症状の治療及び／又は予防のための医薬の製造のための、請求項１〜６のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項１６】
請求項１〜６の化合物及び薬学的に許容される担体を含有する、請求項７〜１４の疾患及び症状の治療及び／又は予防において使用するための医薬組成物。
【請求項１７】
ヒト及び／又は動物用の医薬として使用するための、請求項１〜６のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１８】
請求項７〜１４のいずれか１項に記載の疾患及び症状の治療及び／又は予防のための医薬として使用するための、請求項１７に記載の式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１９】
効果的な量の請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物を患者に投与することを有する、請求項７〜１４の疾患及び症状を治療及び／又は予防する方法。
【請求項２０】
ヒト及び／又は動物用の機能性食品又は補助食品としての、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項２１】
前記化合物の用量が１μｇ（マイクログラム）／日〜５０ｍｇ／日である、請求項２０に記載の使用。
【請求項２２】
請求項７〜１４のいずれか１項の疾患及び症状の治療及び／又は予防のための医薬を製造するためのｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍの使用。
【請求項２３】
トリペンタデカノインがｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍに１ｍｇ／日〜１０００ｍｇ／日の量で含まれる、請求項２２に記載の使用。
【請求項２４】
Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍを含む、請求項７〜１４の疾患及び症状の治療及び／又は予防において使用するための医薬組成物。
【請求項２５】
ヒト及び／又は動物用の機能性食品又は補助食品としてのｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍの使用。
【請求項２６】
トリペンタデカノインがｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍに１μｇ（マイクログラム）／日〜５０ｍｇ／日の量で含まれる、請求項２５に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【関連出願】
【０００１】
本発明は、２０１６年６月８日に出願された米国仮特許出願第６２/３４７１０３号に基づく優先権の利益を主張するものであり、その全内容が参照により本明細書に取り込まれる。
【技術分野】
【０００２】
本発明は、脂質及び医薬組成物又は栄養補助食品としてのそれらの使用に関する。特に、本発明は、奇数個の炭素原子を有する脂肪酸を有する脂質、とりわけトリペンタデカノイン、の新規な使用を提供し、上記脂質は、強力な神経保護作用、抗アポトーシス作用、神経救済作用及び軸索伸長作用を示し、これらは、神経変性疾患、眼又は網膜変性疾患、脱髄疾患、神経筋障害及び筋ジストロフィー、脳又は脊髄神経損傷、アミロイド関連疾患、さらに腎臓病、糖尿病、喘息及び呼吸困難から選択される他の慢性疾患又は症状の治療及び/又は予防のための医薬又は栄養補助食品として有用であるが、ヒトのアンチエイジング又は寿命延長及び脳機能の改善のための機能性食品又は補助食品としても有用である。さらに、本発明は、上記疾患及び症状の治療及び／又は予防におけるＯｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ及び／又はその抽出物の新規な使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
全世界で何億人もの人々が神経障害を患っている。神経障害には、中枢及び抹消神経系の疾患が含まれる。換言すれば、脳、脊髄、脳神経、末梢神経、神経根、自立神経系、神経筋接合部及び筋肉である。
【０００４】
本発明は、以下に詳述するような種々の神経疾患及び関連慢性疾患の治療に関する：
Ａ．  神経変性疾患
神経変性疾患は、ニューロン死を含むニューロンの構造又は機能の進行的な損失に対する包括的な疾患用語である。ニューロンの損傷又は死により、神経系の影響を受けた部分により制御される機能が徐々に低下する。神経変性障害の選択された群には、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、ハンチントン病（ＨＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、認知症、レビー小体型認知症（ＤＢ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、クロイツフェルト・ヤコプ病（ＣＪＤ）及び脳萎縮が含まれる。
【０００５】
ほとんどの神経変性疾患は、加齢の過程における異常折り畳みタンパク質の凝集と関連するため、タンパク質症にも分類される。タンパク質の異常折り畳み及び凝集は、神経変性疾患の主要な組織病理学的特徴である。現在、すべての神経変性疾患における主要な組織病理学的関心は、オリゴマーと呼ばれる小タンパク質凝集体上に注がれている。これらの凝集体は、β-アミロイド、α-シヌクレイン、プリオン等の毒性種かもしれない。β-アミロイドの沈着がアルツハイマー病における老人班の主要な成分であり、ＡＤの病因に強く関与している；タウ蛋白（ｔａｕ  ｐｒｏｔｅｉｎ）は、ＡＤの病因に関与する神経原線維変化（ｎｅｕｒｏｆｉｂｒｉｌｌａｒｙ  ｔａｎｇｌｅｓ）の主要な成分である；α−シヌクレインは凝集することができ、パーキンソン病、レビー小体型認知症及び多系統萎縮症等のレビー小体により特徴づけられる病的状態において不溶性の原線維を形成し、ＰＤ及びＤＬＢの病因に強く関与している；プリオンはプリオン疾患及び伝染性の海綿状脳症の主要成分であり、海綿状脳症（クロイツフェルト・ヤコプ病)と強く関連している。
【０００６】
アポトーシス又はプログラム細胞死は、生理学的及び病理学的状態の両方において重要な役割を担っている。神経変性疾患を含む種々の急性及び慢性神経性疾患において、アポトーシス細胞死が増大することを示す膨大な証拠がある。アポトーシスは、ニューロン収縮、クロマチン凝縮、及びＤＮＡ断片化により特徴づけられるのに対し、細胞壊死は、細胞膜の溶解に続く細胞質及びミトコンドリアの膨潤と関連する。ＡＤ、ＨＤ及びＡＬＳを含む幾つかの変性神経障害においてＤＮＡ断片化の証拠が見いだされた。
【０００７】
神経変性疾患の根本的な原因を標的とした効果的な治療は存在しない。
【０００８】
認知症は、最も一般的な症状として記憶損失を伴う認知能力の後天的低下と定義される。全世界で３５６０万人が認知症であると推定されており−認知症の最も一般的な原因はＡＤであり、全患者の６０−７０％を占める（ＷＨＯ  Ｏｎｌｉｎｅ  Ｑ＆Ａ、２０１４年２月）。認知症の最大の危険因子は加齢である。ＡＤは、大脳皮質及び特定の皮質下領域におけるニューロン及びシナプスの損失により特徴づけられる。この損失は、側頭葉及び頭頂葉、前頭皮質及び帯状回の一部の変性を含む、罹患領域の総萎縮をもたらす。オリゴマーと呼ばれる可溶性アミロイド種が細胞機能不全を引き起こし、これがＡＤの初期毒性分子であることを示唆する証拠が増えている。β−アミロイド（Ａβ）を含む老人斑（ｎｅｕｒｉｔｉｃ  ｐｌａｑｕｅｓ）がある。Ａβは３９〜４２アミノ酸のタンパク質であり、より大きな膜貫通タンパク質であるアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）がセクレターゼにより切断される時に、ＡＰＰからタンパク質分解的に生じる。さらに、現在利用可能な分子には、この疾患の根底にある原因病態生理学的過程を効率的に標的とするものはない。
【０００９】
パーキンソン病は中枢神経系の変性障害である。これは、中脳の領域である黒質中のドーパミン生成細胞の死を原因とする。細胞死の原因は不明である。パ−キンソン病は、２番目に一般的な神経変性障害であり、寡動、筋固縮、安静時振戦及び姿勢保持反射障害として現れる。全世界で約７００万人、米国では１００万人の人々がＰＤを患っている。ＰＤの年間新規症例数は、１０万人あたり８〜１８人である。レボドパは３０年以上にわたり最も広く使用されてきた治療であるが、有効性は非常に限られている。神経保護に関する研究はＰＤ研究の最前線にある。
【００１０】
ハンチントン病（ＨＤ）はアストログリオーシス及び中型有棘神経細胞の損失を引き起こす。脳の領域がその構造やそこに含まれるニューロンのタイプに応じて影響を受け、累積的に細胞を失うためサイズが縮小する。影響を受ける領域は、主に線条体にあるが、前頭及び側頭皮質にもある。線条体の視床下核は、運動を開始し及び調節する淡蒼球に制御信号を送る。したがって、視床下核からの弱い信号は、運動の開始及び調節を減少させ、この障害に特徴的な動きをもたらす。ＨＤの治療法は存在しない。
【００１１】
筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）は、ルー・ゲーリック病と呼ばれることもあるが、随意筋の制御に関与する神経細胞（ニューロン）を攻撃し、急速に進行する、常に致死的な神経性疾患である。この疾患は、運動ニューロン疾患として知られる群の障害に属し、運動ニューロンの段階的な変性及び死を特徴とする。ＡＬＳに対する処置は、症状を緩和し、余命を延長することを試みる。リルゾールは生存を数ヶ月まで若干改善することが見い出された。ＡＬＳの主要な病理学的特徴は、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳ又はＳＯＤ１タンパク質を含むタンパク質封入体の異常な蓄積である。細胞株を用いたインビトロの実験的証拠は、ＳＯＤ１、ＴＤＰ−４３及びＦＵＳが不溶性の原線維性凝集体を形成することを示唆している。特に、これらのタンパク質凝集体は、正常な対応物の凝集を引き起こすシードになり得る。多くの証拠が主要ＡＬＳ関連タンパク質のプリオン様特性を支持し、プリオン様メカニズムに基づくＡＬＳの可能な治療戦略が議論された。（Ｇｒａｄ、Ｌｅｓｌｉｅ  Ｉ．；ら、Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｄｉｓｅａｓｅ。２０１５；７７：２５７−２６５）。
【００１２】
Ｂ．  網膜及び視神経変性疾患
Ｂ−１．  視神経変性疾患
視神経萎縮は、眼からの刺激を脳へ運ぶ視神経が影響を受ける状態である。視神経萎縮は、多種の病因により視神経が損傷を受けることにより生じる。この状態は、失明、緑内障、前虚血性視神経症として知られている視神経の卒中；視神経を圧迫する腫瘍；視神経炎、多発性硬化症によって引き起こされる視神経の炎症；レーベル遺伝性視神経症（ＬＨＯＮ）として知られる遺伝子疾患を含む、視力に関する問題を引き起こす可能性がある。
【００１３】
視神経炎（ＯＮ）は視神経の炎症であり、部分的又は完全な失明を引き起こす可能性がある。視神経は、眼の網膜から始まり、視覚情報を一次視覚核に運ぶ軸索を有し、その大部分は脳の後頭皮質に伝えられ視覚に変換される。視神経の炎症は、通常、視神経を覆うミエリン鞘の膨潤及び破壊のために、視力の喪失を引き起こす。直接的な軸索損傷もまた神経破壊において役割を果たすのかもしれない。
【００１４】
優性視神経萎縮（ＤＯＡ）は視神経の両側性変性を特徴とする神経眼科的症状であり、通常生後１０年の間に始まる潜行性の視覚損傷を起こす。この疾患は、光受容器からの視覚情報を脳の外側膝状体に伝達する視神経を形成する網膜神経節細胞（ＲＧＣ）及びそれらの軸索に主に影響を及ぼす。この疾患の有病率は、世界の他の地域において１／１００００から１／３００００までの幅がある。
【００１５】
Ｂ−２  網膜変性疾患
加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ又はＡＲＭＤ）としても知られる黄斑変性症は、視野の中心の視覚がぼやけるか又は失われる病状である。これは全世界でほぼ５０００万人が患っている不可逆的な失明の最も一般的な原因の１つである。老化した網膜及び脳における変性プロセスは著しい類似性を示し、新規な標的及び病理機構を特定する機会を提供する。アルツハイマー病の脳に蓄積するアミロイドベータはＡＭＤに蓄積するタンパク質の一つであり、そのため、ＡＭＤは「目のアルツハイマー」又は「網膜のアルツハイマー」と呼ばれる。現在、大多数のＡＭＤ患者は効果的な治療を受けていない。
【００１６】
緑内障は、全世界の失明の主な原因であり、一般に眼内圧上昇（ＩＯＰ）に関連している。ＩＯＰが、正確にどのように網膜神経節細胞（ＲＧＣ）の不可逆的破壊をもたらすかはほとんど解明されていない。緑内障において視覚の不可逆的損失をもたらす主要なステップは、ＲＧＣアポトーシスである。緑内障におけるＲＧＣアポトーシスの進行にＡβが関与することが報告されており、実験的緑内障でのＲＧＣにおけるＡβ発現の増大及び緑内障患者の硝子体Ａβレベルの低下（網膜Ａβ沈着と整合する）についての証拠がある。緑内障の動物モデルによる強力な証拠が、ＲＧＣの緑内障誘発アポトーシスにおけるＡβの関与を支持しており、Ａβ経路の複数の相を標的とする薬剤の使用が、緑内障の治療に対する神経保護的アプローチの可能性を高めることを示している。（Ｇｕｏ  Ｌら、Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ａｍｙｌｏｉｄ−β  ｉｎ  ｇｌａｕｃｏｍａ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ。Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．  ２００７；１０４（３３）：１３４４４−１３４４９．）。
【００１７】
網膜色素変性症（ＲＰ）は、網膜における桿体光受容体細胞の進行性変性に起因する重度の視力障害を引き起こす、遺伝性の退行性眼疾患である。進行性桿体変性の後、隣接する網膜色素上皮（ＲＰＥ）の異常及び錐体光受容体細胞の劣化が生じる。ＲＰの初期段階の患者は、遺伝的な桿体光受容体の減少により、周辺視野が損なわれ、視野が薄暗いことにまず気づき、最終的に盲目となる。現在、全世界で１５０万人、４，０００人に１人が罹患していると推定される。網膜色素変性症の治癒法はない。
【００１８】
Ｃ．  脱髄性神経障害
脱髄性神経障害の群には、副腎白質ジストロフィー、多発性硬化症（ＭＳ）、視神経炎、急性炎症性脱髄性多発ニューロパチー（ＡＩＤＰ）、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー（ＣＩＤＰ）、ギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）、ジカウィルスにより引き起こされ若しくはジカウィルスに関連する脳炎、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）、急性散在性脳脊髄炎、急性壊死性出血性脳炎、同心性硬化症、びまん性硬化症、異染性白質ジストロフィー、球様細胞型白質ジストロフィー、中枢神経系の海綿状変性、ペリープラム病（Ｐｅｒｒｙ−ｐｌｕｍ  ｄｉｓｅａｓｅ）、アレキサンダー病、放射線障害白質脳症、低酸素白質脳症、脳室周囲白質軟化症、脳症下における動脈硬化性皮質（ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ  ｃｏｒｔｅｘ  ｕｎｄｅｒ  ｅｎｃｅｐｈａｌｏｐａｔｈｙ）、進行性多巣性白質脳症及び橋中心髄鞘崩解症候群が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【００１９】
Ｃ−１．  副腎白質ジストロフィー
副腎白質ジストロフィー（Ｘ連鎖性副腎白質ジストロフィー、ＡＬＤ、Ｘ−ＡＬＤ、Ｓｉｅｍｅｒｌｉｎｇ−Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ病又は青銅Ｓｃｈｉｌｄｅｒ病としても知られる）は、Ｘ染色体に関連する疾患である。これは、関連する酵素が適切に機能しないことにより生成する脂肪酸によるものであり、それが神経のミエリン鞘に損傷を与え、結果として発作及び多動を引き起こす。他の症状としては、話し、聞き、口頭の指示を理解することが困難になる。ＡＬＤは、最も一般的なペルオキシソーム先天性代謝異常症であり、発生率は１：１８，０００から１：５０，０００の間と推定される。
【００２０】
ＡＬＤにおける食事療法の初期の試みは、超長鎖脂肪酸（ＶＬＣＦＡ）の摂取を制限するが、血漿及び他の身体組織におけるＶＬＣＦＡのレベルには影響しなかった。Ｌｏｒｅｎｚｏ  ＯｄｏｎｅはＡＬＤを患う少年であるが、彼の両親は、病気の進行を遅らせるための食事療法を開発するための努力を先導した。彼らはロレンツォ油として知られる不飽和脂肪酸（グリセロールトリオレエートとトリエルカ酸グリセリル（ｇｌｙｃｅｒｙｌ  ｔｒｉｅｒｕｃａｔｅ）を４：１の比で混合したもの）の混合物を開発し、これは体内の飽和脂肪酸の伸長を阻害する。Ｌｏｒｅｎｚｏオイルの補給により体内のＶＬＣＦＡ濃度が正常化することが見い出されたが、脳疾患発症の治療に対する有効性は依然として議論の余地があり、証明されていない。Ｌｏｒｅｎｚｏオイルを用いた試験では、Ｌｏｒｅｎｚｏオイルは症状を有する患者の神経学的低下を止めることはなく、副腎機能も改善しないことが示された。
【００２１】
Ｃ−２．  多発性硬化症
多発性硬化症（ＭＳ）と診断された人の総数は全世界で推定約１３０万人である。ＭＳは、中枢神経系におけるミエリンの多病巣性破壊を特徴とする衰弱性及び障害性の神経性疾患である。中枢神経系の白質における軸索のミエリン鞘の脱髄のために、ミエリンが損傷又は破壊され、神経インパルスが遅延し又は全く伝達されず、脳と身体の他の部分との間の通信が中断される。軸索損傷は新たに形成されるすべてのＭＳ病変において発生し、軸索損失の蓄積がＭＳにおける進行性かつ不可逆性の神経学的障害の主要な原因である。進行性不全対麻痺を有する患者の外側皮質脊髄（例えば、運動）路から軸索の７０％が失われ、縦方向ＭＲＩによる研究により、確立された不活性病変内において軸索損失が経時的に進行することが示唆されている。
【００２２】
Ｃ−３．  他の脱髄疾患
他の脱髄疾患には、急性炎症性脱髄性多発ニューロパチー（ＡＩＤＰ）、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー（ＣＩＤＰ）、ギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）、ジカウィルスにより引き起こされ若しくはジカウィルスに関連する脳炎、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）、急性散在性脳脊髄炎、急性壊死性出血性脳炎、同心性硬化症、びまん性硬化症、異染性白質ジストロフィー、球様細胞型白質ジストロフィー、中枢神経系の海綿状変性、ペリープラム病、アレキサンダー病、放射線障害白質脳症、低酸素白質脳症、脳室周囲白質軟化症、脳症下における動脈硬化性皮質、進行性多巣性白質脳症及び橋中心髄鞘崩解症候群が含まれる。
【００２３】
Ｄ．  神経筋障害及び筋ジストロフィー
神経筋疾患は、筋肉の機能が直接的又は間接的に損われ、神経、筋肉又は神経筋接合部の病理である多くの疾患、障害又は症状を包含する。脊髄性筋萎縮症は下位運動ニューロンの障害であり、筋委縮性側索硬化症は上位及び下位運動ニューロンの混合症状である。重症筋無力症及びランバート・イートン症候群は、神経筋接合部疾患の例である。これらの神経筋障害の治療法はない。現在の治療法はほとんどが対症療法であり、有効性は十分ではない。
【００２４】
筋ジストロフィー（ＭＤ）は、時間の経過とともに骨格筋の衰弱及び破壊が増大する筋疾患の群である。この障害は、どの筋肉が主として冒されるか、衰弱の程度、悪化の速度及び症状が始まる時期という点において異なる。最も一般的なタイプはデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）であり、通常、男性が４歳前後から患う。他のタイプには、ベッカー型筋ジストロフィー、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー及び筋緊張性ジストロフィーが含まれる。多くの人々は最終的に歩くことができなくなる。タイプによっては他の器官における問題とも関連している。シャルコー・マリー・トゥース病（ＣＭＴ）は、最初にそれを特定した３人の医師にちなんで命名された疾患であり、最も一般的な遺伝性神経障害の１つである。米国において２，５００人に１人、全世界で２６０万人がＣＭＴを患っているものと推定されるが、専門家は患者数はるかに多いであろうと考えている。
【００２５】
現在、筋ジストロフィーの治療法はない。
【００２６】
Ｅ．  脳損傷又は脊髄神経損傷、脳神経障害又は発作
脳損傷は脳内に発生するあらゆる損傷である。脳損傷はいくつかの側面から分類することができる。原発性及び二次性脳損傷は、脳損傷において生じる損傷プロセスを分類する方法であり、局所性脳損傷及びびまん性脳損傷は、脳における損傷の程度又は位置を分類する方法である。脳損傷は、身体制御の主要な源としての脳の性質のために、広範かつ様々な結果をもたらす。患者は通常記憶に関する問題を経験する。これは、損傷の場所及び重症度に応じて、長期記憶又は短期記憶の問題であるかもしれない。記憶はリハビリによって改善することができるが、場合によっては損傷は永続的である。
【００２７】
脊髄損傷（ＳＣＩ）は、脊髄の機能の一時的又は永続的な変化を引き起こす脊髄に対する損傷である。これらの変化は、病変の下位において脊髄によって制御される身体部分の筋肉機能、感覚又は自律機能の損失につながる。
【００２８】
脳神経疾患は、嗅神経（Ｉ）、視神経（ＩＩ）、動眼神経（ＩＩＩ）、滑車神経（ＩＶ）、三叉神経（Ｖ）、外転神経（ＶＩ）、顔面神経（ＶＩＩ）、内耳神経（ＶＩＩＩ）、舌咽神経（ＩＸ）、迷走神経（Ｘ）、副神経（ＸＩ）及び舌下神経を含む、脳（脳幹を含む。）から直接出ている１２の脳神経のいずれか１つが機能障害を受けることである。
【００２９】
これらの脳神経障害の治療法はない。現在の治療法はほとんどが対症療法であり、有効性は十分ではない。
【００３０】
てんかんは、てんかん発作を特徴とする神経性疾患の群である。全世界で約１％の人々（６５００万人）がてんかんを有し、症例のほぼ８０％は途上国で発生している。発作においては、一群のニューロンが、異常で、過度のかつ同期した態様で発火を始める。これにより突発性脱分極変位として知られる脱分極の波が生じる。ニューロン周辺の因子にはシナプス可塑性が含まれ、イオン濃度が潜在的な病理学的メカニズムである。現在の治療法はほとんどが対症療法である。
【００３１】
Ｆ．  アミロイド沈着関連疾患
アミロイド沈着関連疾患は、糖尿病、心臓アミロイドーシス、原発性アミロイドーシス、家族性アミロイドーシス、老人性全身性アミロイドーシス（ＳＳＡ）、続発性アミロイドーシス及び血液透析関連アミロイドーシスからなる群より選択される。
【００３２】
アミロイドーシスは、１又は複数の器官−通常、腎臓、心臓、中枢神経系（ＣＮＳ）及び／又は肝臓−にアミロイドと呼ばれるタンパク質が蓄積し、臓器機能に干渉し、最終的に臓器不全に至る関連疾患群である。原発性アミロイドーシス（ＡＬ、アロイミド軽鎖）は、クローン性形質細胞疾患及び異常な形質細胞によって作られた免疫グロブリン軽鎖と関連している。ＡＬは、多発性骨髄腫に関連するアミロイドーシスにおいても生じる。
【００３３】
家族性アミロイドーシス（ＡＦ）は、遺伝することがある遺伝子異常と関連している。ＡＦは、トランスサイレチンと呼ばれる異常な形態のタンパク質を肝臓に作らせる。
【００３４】
続発性アミロイドーシス（ＡＡ）は炎症及び炎症に起因する血清アミロイドＡのレベルの上昇と関連している。
【００３５】
Ｇ．  他の慢性疾患
本発明における他の慢性疾患又は症状は、慢性腎疾患、糖尿病性喘息及び呼吸困難からなる群より選択される。
【００３６】
慢性腎臓病（Ｃｈｒｏｎｉｃ  ｋｉｄｎｅｙ  ｄｉｓｅａｓｅ）（ＣＫＤ）は、慢性腎疾患（ｃｈｒｏｎｉｃ  ｒｅｎａｌ  ｄｉｓｅａｓｅ）としても知られており、数ヶ月又は数年に亘って腎機能が進行的に損失される。ステージ５のＣＫＤでは、透析又は移植のいずれかの形態における腎臓置換療法が通常必要となる。慢性腎臓病は２０１３年において全世界で９５６，０００人の死因であった。腎臓は、アミロイドーシス関連疾患においてアミロイド沈着が最も頻繁に起こる部位の１つである。腎疾患は全身性アミロイドーシスの頻発症状であり、しばしばこれらの障害を有する個体の病状の主要な原因である。治療がなければ、アミロイドーシス関連腎臓病は、通常末期腎疾患（ＥＳＲＤ）に進行する。（Ｄｅｍｂｅｒ  ＬＭ．、Ｊ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｎｅｐｈｒｏｌ．２００６；１７（１２）：３４５８−７１．）。
【００３７】
新生糖尿病（ＤＭ）は、一般に糖尿病と呼ばれ、長期間にわたり高血糖値が続く代謝性疾患群である。アミリンと２型糖尿病の発症との関連が知られている。膵島アミロイドポリペプチド（ＩＡＰＰ又はアミリン）に由来するアミロイド沈着物は、２型真性糖尿病に罹患している患者、又はインスリノーマ癌を有する患者の膵島に一般に見られる。アルツハイマー病に関連するベータアミロイド（Ａβ）のように、アミリンは、インスリン産生β細胞においてアポトーシス細胞死を誘発することができ、糖尿病の発症につながることが最近の結果により示唆されている。（Ｌｏｒｅｎｚｏ  Ａら、Ｎａｔｕｒｅ。３６８（６４７３）：７５６-６０．）。
【００３８】
喘息は、肺の気道の一般的な長期炎症性疾患であり、変動性及び再発性の症状、可逆的気道閉塞及び気管支痙攣を特徴とする。症状としては、喘鳴、咳、胸部圧迫及び息切れ等のエピソードがある。夜間や運動時に患者の状態が悪化しやすい。喘息の治癒法は存在しない。症状は、アレルゲンや刺激物等の誘因を避けたり、副腎皮質ホルモンの吸入により防ぐことができる。
【００３９】
Ｈ．  アンチエージング又は寿命延長
ヒトの最大寿命（又は、死亡又はＭＲＡＤにおける最大報告年齢）は、人口の１人又は複数の成員が出生と死亡の間に生存することが観察された最大時間の尺度である。現在、ヒトの寿命を延ばす有効な方法はない。
【００４０】
Ｉ．  脳機能
基本的な脳機能には、視覚、記憶、学習、イメージング、判断、読解、知覚、思考、創造等がある。知能指数（ＩＱ）のレベルは各人により異なることがある。脳の働きには未だ未知の領域が多く存在し、ヒトの脳機能は完全には発達していない。ヒトの脳機能をさらに発展させる方法は神経科学における発展途上の領域である。
【発明の概要】
【００４１】
本発明の目的は、ヒトのみならず、動物における、神経疾患の治療及び予防のための医薬を提供することである。これらの疾患には、神経変性疾患、眼若しくは網膜変性疾患、脱髄疾患、神経筋障害及び筋ジストロフィー、脳若しくは脊髄神経損傷、脳神経障害、又は、発作、アミロイド沈着関連疾患、そして腎臓病、糖尿病、喘息及び呼吸困難から選択される慢性疾患若しくは症状が含まれる。本発明のさらなる目的は、例えば、アンチエイジング、寿命延長又は脳機能の改善のための、ヒト及び動物用の機能性食品又は栄養補助食品を提供することである。さらに、本発明は、神経変性疾患、眼若しくは網膜変性疾患、脱髄疾患、神経筋障害及び筋ジストロフィー、脳若しくは脊髄神経損傷、アミロイド関連疾患、そして腎臓病、糖尿病、喘息及び呼吸困難から選択される他の慢性疾患若しくは症状の治療及び／又は予防におけるＯｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ及び／又はその抽出物の使用に関するが、ヒトのアンチエイジング、寿命延長及び脳機能の改善のための機能性食品にも関する。
【００４２】
本発明は、奇数個の炭素原子を有する脂肪酸を有する脂質；及びＯｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ及び／又はその抽出物の使用が中枢神経系の疾患及び障害の治療及び／又は予防に使用できるという驚くべき知見に基づく。
【図面の簡単な説明】
【００４３】
図１は実施例Ｉ−１に関し、ＭＴＴで評価した細胞生存度に基づく化合物Ｃ（単独又はＡβＯ処理の４８時間前に添加）の神経保護効果を示す；
図２は実施例Ｉ−１に関し、化合物Ｃの神経保護効果−ニューロンの顕微鏡画像−を示す；
図３は実施例Ｉ−２に関し、化合物Ｃの軸索伸長効果を示す；
図４は実施例Ｉ−３に関し、化合物ＣをＡβ０処理と同時に又はＡβ０処理後３、６時間後に添加した場合のマウス一次ニューロンモデルにおける化合物Ｃの神経保護、抗アポトーシス及び神経救済効果を示す；
図５ａ〜５ｃは実施例Ｉ−４に関し、化合物ＣをＡβ０処理と同時に又はＡβ０処理後３、６時間後に添加した場合のヒト人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）における化合物Ｃの神経保護、抗アポトーシス及び神経救済効果を示す；
図６ａ〜６ｉは実施例Ｉ−５に関し、化合物Ｃを毒素処理の３時間後に添加した場合の、複数の毒素で処理したマウス一次ニューロンモデルにおける化合物Ｃの神経保護、抗アポトーシス及び神経救済効果を示す；
図７は実施例Ｉ−６に関し、奇数個の炭素原子を有する異なる脂肪酸をＡβＯ処理の４８時間前に添加した場合のＡβＯ処理マウス一次ニューロンモデルにおける神経保護効果を示す；
図８は実施例Ｉ−７に関し、化合物Ｃをカンプトテシン処理の４８時間前に添加した場合のカンプトテシン処理マウス一次ニューロンにおける化合物Ｃの神経保護効果を示す；
図９ａ〜図９ｄは実施例Ｉ−８に関し、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅにおける加齢誘発タンパク質凝集体における化合物Ｃ及びハーブＢ抽出物の効果を示す；
図１０は実施例ＩＶ−１に関し、ハーブＢ抽出物をＡβＯ処理の４８時間前に添加した場合の、ＡβＯ処理マウス一次ニューロンにおけるハーブＢ抽出物の神経保護効果を示す；
図１１は実施例ＩＶ−１に関し、ハーブＢ抽出物の神経保護効果−ニューロンの顕微鏡画像−を示す；
図１２は実施例ＩＶ−２に関し、ハーブＢ抽出物をＡβＯ処理と同時に又は３若しくは６時間後に添加した場合の、マウス一次ニューロンにおけるハーブＢ抽出物の神経保護、抗アポトーシス及び神経救済効果を示す；
図１３ａ〜１３ｃは実施例ＩＶ−３に関し、ハーブＢ抽出物をＡβＯ処理と同時に又は３若しくは６時間後に添加した場合の、ＡβＯ処理ヒト人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）におけるハーブＢ抽出物の神経保護、抗アポトーシス及び神経救済効果を示す；
図１４ａ〜１４ｆは実施例ＩＶ−４に関し、ハーブＢ抽出物を毒素処理の３時間後に添加した場合の、複数のニューロン毒素で処理したマウス一次ニューロンモデルにおけるハーブＢ抽出物の神経保護、抗アポトーシス及び神経救済効果を示す；
図１５ａ及び図１５ｂは実施例ＩＶ−５に関し、ハーブＢ抽出物を毒素処理の４８時間前又は３時間後に添加した場合の、Ｈ２Ｏ２処理マウス一次ニューロンモデルにおけるハーブＢ抽出物の神経保護、抗アポトーシス及び神経救済効果を示す；
図１６は実施例ＩＶ−６に関し、ハーブＢ抽出物をカンプトテシン処理の４８時間前に添加した場合の、カンプトテシン処理マウス一次ニューロンモデルにおけるハーブＢ抽出物の神経保護、抗アポトーシス及び神経救済効果を示す。
【００４４】
発明の詳細な説明
Ｉ．  一般的な定義
「治療する」又は「治療」とは、疾患、障害若しくは症状を緩和すること、一時的若しくは永続的に疾患、障害若しくは症状の原因を取り除くこと；又は、無症候性個体における進行中の病理学的過程を遅延、減弱若しくは阻害するいかなる処置をも意味するが、これらに限定されるものではない。
【００４５】
「予防（Ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」及び／又は「予防（ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ）」とは、症状の発症に最終的につながる可能性のある病理学的過程が決して進展しないように病理学的過程の最初の発症を阻害すること（すなわち、疾患、障害又は症状の発症を予防的方法で防ぐこと）を意味する。
【００４６】
「治療上効果的な量」とは、特定の障害又は症状を治療及び／又は予防するのに有効な化合物の量を意味する。
【００４７】
「薬学的に許容される担体」は、医薬組成物の製剤化、すなわち対象又は患者に投与することができる剤形、に使用される無毒性溶媒、分散剤、賦形剤又は他の物質である。
【００４８】
「機能性食品」とは、新しい成分を加え又は既存の成分を富化することによって、さらなる機能（多くの場合、健康の促進又は病気の予防に関する機能）を付与された食品を意味する。この用語は、アントシアニン又はカロテノイド含量がそれぞれ富化された紫ジャガイモ又はゴールドポテトなど、既存の食用植物に意図的に付与された形質にも適用され得る。機能性食品は、「基本的な栄養機能を超えた生理学的利益を有するように及び／又は慢性疾患のリスクを低減するように設計されていてもよく、従来の食品と外観が似ており、通常の食事の一部として消費されてもよい」（ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ、Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、ＡｇＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｍａｇａｚｉｎｅ。２０１４年１１月；ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ、Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ。Ｊｕｌｙ  ２０１０年７月）。
【００４９】
「薬学的に許容される塩」という用語は、対象化合物の所望の生物活性を保持し、かつ最小の望ましくない毒性作用を示す塩を意味する。そのような塩としては、対象化合物中の塩基性基及び／又は酸性基の存在に応じた、無機又は有機の酸及び／又は塩基付加塩が挙げられる。参考としては、例えば、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ．Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ、Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｕｓｅ．」、Ｐ．Ｈｅｉｎｒｉｃｈ  Ｓｔａｈｌ、Ｃａｍｉｌｌｅ  Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（Ｅｄｓ．）、Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ（２００８）；及び「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ  ａｎｄ  Ｃｏ−ｃｒｙｓｔａｌｓ」、Ｊｏｈａｎ  Ｗｏｕｔｅｒｓ  ａｎｄ  Ｌｕｃ  Ｑｕｅｒｅ（Ｅｄｓ．）、ＲＳＣ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（２０１２）を参照されたい。
【００５０】
本明細書で使用される場合、「救済」とは、人体の現在の病理学的構造、状態、症状又は機能を以前のより若い又はより良好な構造、状態、症状又は機能水準に戻す又は回復させることを意味する。
【００５１】
本明細書中で使用される場合、「再生する」とは、失われ又は損傷した人体の組織又は機能を置換するために新たな組織を再生することを意味する。
【００５２】
（１）  第１の態様において、本発明は、ヒト及び／又は動物用の医薬として使用するための式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩に関する：
【００５３】
【化１】
2019518034.tif 000002
【００５４】
式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３はＨ又は−Ｃ（Ｏ）Ｒ４から独立に選択され、Ｒ４は、
−  １、２又は３個のＯＨ、ＮＨ２、ＮＨＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２、Ｆ又はＣｌで任意に置換された（Ｃ５−Ｃ２０）アルキル；又は
−  １、２又は３個の二重結合を有する（Ｃ５−Ｃ２０）アルケニル；
であり、
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３の少なくとも１つは、Ｒ４が偶数個の炭素原子を有する（Ｃ６−Ｃ２０）アルキルである−Ｃ（Ｏ）Ｒ４である。
【００５５】
（２）  さらなる態様において、本発明は、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３がＨ又は−Ｃ（Ｏ）Ｒ４から独立に選択され、Ｒ４が、
−  １、２又は３個のＯＨ、Ｆ又はＣｌで任意に置換された（Ｃ５−Ｃ２０）アルキル；又は
−  １、２又は３個の二重結合を有する（Ｃ５−Ｃ２０）アルケニル；
であり、
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３の少なくとも１つは、Ｒ４が偶数個の炭素原子を有する（Ｃ６−Ｃ２０）アルキルである−Ｃ（Ｏ）Ｒ４である；
態様（１）に関する。
【００５６】
（３）  さらなる態様において、本発明は、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３がＨ又は−Ｃ（Ｏ）Ｒ４から独立に選択され、Ｒ４が、
−  １、２又は３個のＯＨ、Ｆ又はＣｌで任意に置換された（Ｃ５−Ｃ２０）アルキルであり、
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３の少なくとも１つは、Ｒ４が偶数個の炭素原子を有する（Ｃ６−Ｃ２０）アルキルである−Ｃ（Ｏ）Ｒ４である；
態様（１）又は（２）に関する。
【００５７】
（４）  さらなる態様において、本発明は、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３がＨ又は−Ｃ（Ｏ）Ｒ４から独立に選択され、Ｒ４が、
−  １、２又は３個のＯＨ又はＦで任意に置換された（Ｃ５−Ｃ２０）アルキル；又は
−  １、２又は３個の二重結合を有する（Ｃ５−Ｃ２０）アルケニル；
であり、
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３の少なくとも１つは、Ｒ４が偶数個の炭素原子を有する（Ｃ６−Ｃ２０）アルキルである−Ｃ（Ｏ）Ｒ４である；
態様（１）〜（３）のいずれか１つに関する。
【００５８】
（５）  さらなる態様において、本発明は、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３がＨ又は−Ｃ（Ｏ）Ｒ４から独立に選択され、Ｒ４が、
−  １、２又は３個のＯＨ又はＦで任意に置換された（Ｃ５−Ｃ２０）アルキル；
であり、
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３の少なくとも１つは、Ｒ４が偶数個の炭素原子を有する（Ｃ６−Ｃ２０）アルキルである−Ｃ（Ｏ）Ｒ４である；
態様（１）〜（４）のいずれか１つに関する。
【００５９】
（６）  さらなる態様において、本発明は、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３がＨ又は−Ｃ（Ｏ）Ｒ４から独立に選択され、Ｒ４が、
−  １、２又は３個のＦで任意に置換された（Ｃ５−Ｃ２０）アルキル；又は
−  １、２又は３個の二重結合を有する（Ｃ５−Ｃ２０）アルケニル；
であり、
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３の少なくとも１つは、Ｒ４が偶数個の炭素原子を有する（Ｃ６−Ｃ２０）アルキルである−Ｃ（Ｏ）Ｒ４である；
態様（１）〜（５）のいずれか１つに関する。
【００６０】
（７）  さらなる態様において、本発明は、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３がＨ又は−Ｃ（Ｏ）Ｒ４から独立に選択され、Ｒ４が、
−  １、２又は３個のＦで任意に置換された（Ｃ５−Ｃ２０）アルキル；
であり、
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３の少なくとも１つは、Ｒ４が偶数個の炭素原子を有する（Ｃ６−Ｃ２０）アルキルである−Ｃ（Ｏ）Ｒ４である；
態様（１）〜（６）のいずれか１つに関する。
【００６１】
（８）  さらなる態様において、本発明は、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３がＨ又は−Ｃ（Ｏ）Ｒ４から独立に選択され、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３の少なくとも１つは、Ｒ４が偶数個の炭素原子を有する（Ｃ６−Ｃ２０）アルキルである−Ｃ（Ｏ）Ｒ４である；
態様（１）〜（７）のいずれか１つに関する。
【００６２】
（９）  さらなる態様において、本発明は、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３が、Ｒ４が偶数個の炭素原子を有する（Ｃ６−Ｃ２０）アルキルである−Ｃ（Ｏ）Ｒ４から独立に選択される；態様（１）〜（８）のいずれか１つに関する。
【００６３】
（１０）  さらなる態様において、本発明は、Ｒ４がＨ又は−Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４が、Ｃ１２−アルキル、Ｃ１４−アルキル、Ｃ１６−アルキル、Ｃ１８−アルキル又はＣ２０−アルキルであり、すべてのＲ１、Ｒ２及びＲ３が同時にＨではない、態様（１）〜（９）のいずれか１つに関する。
【００６４】
（１１）  （１０）の一態様において、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３の１つはＨであり、他は、Ｒ４がＣ１２−アルキル、Ｃ１４−アルキル、Ｃ１６−アルキル、Ｃ１８−アルキル又はＣ２０−アルキルである−Ｃ（Ｏ）Ｒ４である。
【００６５】
（１２）  （１０）の一態様において、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３の２つはＨであり、他は、Ｒ４がＣ１２−アルキル、Ｃ１４−アルキル、Ｃ１６−アルキル、Ｃ１８−アルキル又はＣ２０−アルキルである−Ｃ（Ｏ）Ｒ４である。
【００６６】
（１３）  （１０）の一態様において、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、互いに独立に、Ｒ４がＣ１２−アルキル、Ｃ１４−アルキル、Ｃ１６−アルキル、Ｃ１８−アルキル又はＣ２０−アルキルである−Ｃ（Ｏ）Ｒ４である。Ｒ４の各アルキルは前記の各アルキルと互いに組み合わせることができるものとする。特に、すべてのＲ１、Ｒ２及びＲ３は同種の−Ｃ（Ｏ）Ｒ４であってもよい。好ましくは、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、互いに独立に、Ｒ４がＣ１４−アルキル若しくはＣ１６−アルキルである−Ｃ（Ｏ）Ｒ４であるか、又は、すべての−Ｃ（Ｏ）Ｒ４において、Ｒ４はＣ１４−アルキル又はＣ１６−アルキルのいずれかである。
【００６７】
（１４）  特に好ましい態様において、本発明は、Ｒ４が−Ｃ（Ｏ）Ｃ１４−アルキルである式（Ｉ）の化合物、すなわち、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３がすべて−Ｃ（Ｏ）Ｃ１４−アルキルである式（Ｉ）の化合物に関する。本態様の化合物は下記の化合物Ｃと同じである。化合物Ｃの化学名はトリペンタデカノインであり、１，２，３−プロパントリイルトリペンタデカノエート、１，２，３−プロパントリイルトリペンタデカノエート又は１，２，３−トリペンタデカノイルグリセロールとしても知られる。
【００６８】
（１５）  別の態様において、本発明は、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３の１つがＨであり、他が−Ｃ（Ｏ）Ｃ１４−アルキルである式（Ｉ）の化合物に関する。
【００６９】
（１６）  別の態様において、本発明は、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３の２つがＨであり、３番目が−Ｃ（Ｏ）Ｃ１４−アルキルである式（Ｉ）の化合物に関する。
【００７０】
（１７）  さらなる態様において、本発明は、態様（１０）〜（１６）に従う化合物の代謝物又はプロドラッグ、すなわち、カルボン酸である、ＨＯＣ（Ｏ）Ｃ１２−アルキル、ＨＯＣ（Ｏ）Ｃ１４−アルキル、ＨＯＣ（Ｏ）Ｃ１６−アルキル、ＨＯＣ（Ｏ）Ｃ１８−アルキル及びＨＯＣ（Ｏ）Ｃ２０−アルキルに関する。特に、本発明は、態様（１４）に従う化合物の代謝物又はプロドラッグ、すなわちＨＯＣ（Ｏ）Ｃ１４−アルキルに関する。
【００７１】
（１８）  態様（１）〜（１７）はすべて、ヒト及び／又は動物用の医薬として使用するための上記の化合物又はその薬学的に許容される塩に関するものであることが理解されるべきである。
【００７２】
（１９）  本発明のさらなる態様は、神経変性疾患，網膜若しくは視神経変性疾患、脱髄疾患、神経筋障害及び筋ジストロフィー、脳若しくは脊髄神経損傷、脳神経障害若しくは発作、アミロイド沈着関連疾患、そして腎臓病、糖尿病、喘息及び呼吸困難からなる群より選択される慢性疾患若しくは症状の治療及び／又は予防において使用するための；並びにアンチエイジング又は寿命延長及び脳機能の改善に使用するための態様（１）〜（１７）に記載の化合物のいずれか１つに関する。
【００７３】
（２０）  本発明のさらなる態様は、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、ハンチントン病（ＨＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、認知症、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、クロイツフェルト・ヤコプ病及び脳萎縮からなる群より選択される神経変性疾患の治療及び／又は予防において使用するための態様（１）〜（１７）に記載の化合物のいずれか１つに関する。
【００７４】
（２１）  本発明のさらなる態様は、視神経萎縮、レーベル遺伝性視神経症（ＬＨＯＮ）、優性視神経萎縮（ＤＯＡ）、加齢性黄斑変性症、緑内障及び網膜色素変性症からなる群より選択される眼及び網膜変性疾患の治療及び／又は予防において使用するための態様（１）〜（１７）に記載の化合物のいずれか１つに関する。
【００７５】
（２２）  本発明のさらなる態様は、副腎白質ジストロフィー、多発性硬化症、視神経炎、急性炎症性脱髄性多発ニューロパチー（ＡＩＤＰ）、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー（ＣＩＤＰ）、ギラン・バレー症候群、ジカウィルスにより引き起こされ若しくはジカウィルスに関連する脳炎、脳神経麻痺、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）、急性散在性脳脊髄炎、急性壊死性出血性脳炎、同心性硬化症、びまん性硬化症、異染性白質ジストロフィー、球様細胞型白質ジストロフィー、中枢神経系の海綿状変性、ペリープラム病、アレキサンダー病、放射線障害白質脳症、低酸素白質脳症、脳室周囲白質軟化症、脳症下における動脈硬化性皮質、進行性多巣性白質脳症及び橋中心髄鞘崩解症候群からなる群より選択される脱髄疾患の治療及び／又は予防において使用するための態様（１）〜（１７）に記載の化合物のいずれか１つに関する。特に、多発性硬化症、視神経炎、急性炎症性脱髄性多発ニューロパチー（ＡＩＤＰ）、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー（ＣＩＤＰ）、ギラン・バレー症候群、ジカウィルスにより引き起こされ若しくはジカウィルスに関連する脳炎、脳神経麻痺及び視神経脊髄炎（ＮＭＯ）の治療及び／又は予防において使用するための態様（１）〜（１７）に記載の化合物のいずれか１つに関する。
【００７６】
（２３）  本発明のさらなる態様は、重症筋無力症、ランバート・イートン症候群、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、ベッカー型筋ジストロフィー、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー、筋緊張性ジストロフィー、シャルコー・マリー・トゥース病（ＣＭＴ）からなる群より選択される神経筋障害及び筋ジストロフィー疾患の治療及び／又は予防において使用するための態様（１）〜（１７）に記載の化合物のいずれか１つに関する。
【００７７】
（２４）  本発明のさらなる態様は、急性又は慢性脳損傷又は脊髄若しくは脊椎神経損傷（ｓｐｉｎａｌ  ｃｏｒｄ  ｏｒ  ｎｅｒｖｅ  ｉｎｊｕｒｙ）、脳神経障害及び発作からなる群より選択される神経損傷関連疾患又は混合性神経疾患（ｍｉｘｅｄ  ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ  ｄｉｓｅａｓｅｓ）の治療及び／又は予防において使用するための態様（１）〜（１７）に記載の化合物のいずれか１つに関する。
【００７８】
（２５）  本発明のさらなる態様は、糖尿病、心臓アミロイドーシス、原発性アミロイドーシス、家族性アミロイドーシス、老人性全身性アミロイドーシス（ＳＳＡ）、続発性アミロイドーシス及び血液透析関連アミロイドーシスからなる群より選択されるアミロイド沈着関連疾患の治療及び／又は予防において使用するための態様（１）〜（１７）に記載の化合物のいずれか１つに関する。
【００７９】
（２６）  本発明のさらなる態様は、腎臓病、糖尿病、喘息及び呼吸困難からなる群より選択される慢性疾患又は症状の治療及び／又は予防において使用するための態様（１）〜（１７）に記載の化合物のいずれか１つに関する。
【００８０】
（２７）  本発明のさらなる態様は、中枢神経系の疾患又は障害の治療及び／又は予防において使用するための態様（１）〜（１７）に記載の化合物のいずれか１つに関する。
【００８１】
（２８）  本発明のさらなる態様は、態様（１９）〜（２７）の疾患及び症状の治療及び／又は予防において使用するための、態様（８）〜（１７）に記載の化合物のいずれか１つに関する。
本発明の特に好ましい態様は、態様（１９）〜（２７）の疾患及び症状の治療及び／又は予防において使用するための、態様（１４）に記載の化合物のいずれか１つに関する。
【００８２】
（２９）  本発明のさらなる態様は、態様（１９）〜（２７）の疾患及び症状の治療及び／又は予防において使用するための態様（１）〜（１７）のいずれか１つに記載の化合物に関し、上記の治療用量は１ｍｇ／日〜１０００ｍｇ／日である。さらなる態様において、上記の治療用量は１ｍｇ／日〜１０００ｍｇ／日である。下限は、例えば、１ｍｇ／日、５ｍｇ／日、１０ｍｇ／日、２０ｍｇ／日、２５ｍｇ／日又は５０ｍｇ／日である。上限は、例えば、１０００ｍｇ／日、９００ｍｇ／日、８００ｍｇ／日、７５０ｍｇ／日、７００ｍｇ／日、６００ｍｇ／日、５００ｍｇ／日、２５０ｍｇ／日、２００ｍｇ／日である。上記の上限のそれぞれは上記の下限のそれぞれと組み合わせることができるものとする。好ましい態様において、用量は１０ｍｇ／日から２００ｍｇ／日までである。
【００８３】
態様の１つにおいて、記載した上記の用量は特に、態様（８）〜（１７）のいずれか１つ、とりわけ態様（１４）に従う化合物に適用される。
【００８４】
（３０）  本発明のさらなる態様は、医薬組成物自体、特に態様（１９）〜（２７）のいずれか１つの疾患及び症状の治療及び／又は予防において使用するための医薬組成物に関し、上記組成物は、態様（１）〜（１７）のいずれか１つの化合物及び薬学的に許容される担体を含有する。好ましくは、上記組成物は、態様（８）〜（１７）のいずれか１つの、特に態様（１４）の化合物を含有する。
【００８５】
（３１）  さらなる態様において、態様（３０）に従う医薬組成物は、態様（１）〜（１７）のいずれか１つの化合物を１ｍｇ／日〜１０００ｍｇ／日の量で含む。下限は、例えば、１ｍｇ／日、５ｍｇ／日、１０ｍｇ／日、２０ｍｇ／日、２５ｍｇ／日又は５０ｍｇ／日である。上限は、例えば、１０００ｍｇ／日、９００ｍｇ／日、８００ｍｇ／日、７５０ｍｇ／日、７００ｍｇ／日、６００ｍｇ／日、５００ｍｇ／日、２５０ｍｇ／日、２００ｍｇ／日である。上記の上限のそれぞれは上記の下限のそれぞれと組み合わせることができるものとする。好ましい態様において、用量は１０ｍｇ／日から２００ｍｇ／日までである。
【００８６】
態様の１つにおいて、記載した上記の用量は特に、態様（８）〜（１７）のいずれか１つ、とりわけ態様（１４）に従う化合物に適用される。
【００８７】
（３２）  態様の１つにおいて、態様（３０）の医薬組成物は、有効成分を、好ましくは態様（２９）又は（３１）に示す量で含む製剤に関し、経口剤型（粉末剤、錠剤、カプセル剤、ソフトカプセル剤、水薬、シロップ剤、エリキシル剤（ｅｌｉｘｉｒｓ  ｐｉｌｌ）、粉末剤、サシェー剤（ｓａｃｈｅｔ）、顆粒剤）又は局所製剤（クリーム、軟膏、ローション、ゲル、バーム製剤、パッチ、ペースト、スプレー溶液、エアロゾル等）又は注射剤（溶液、懸濁液、乳濁液）等のいかなる形態においても製造することができる。
【００８８】
態様の１つにおいて、上記製剤は、特に、態様（８）〜（１７）のいずれか１つ、とりわけ態様（１４）に従う化合物に適用される。
【００８９】
（３３）  本発明のさらなる態様は、態様（１９）〜（２７）のいずれか１つの疾患及び症状の治療及び／又は予防のための医薬を製造するための、態様（１）〜（１７）のいずれか１つに従う化合物の使用に関する。医薬そのものとして使用するための又は態様（１９）〜（２７）に記載の疾患の治療及び／又は予防のための医薬として使用するための態様（１）〜（１７）の化合物に関するすべての態様が開示されているものとし、さらに、上記態様は、開示された疾患及び症状の治療及び／又は予防のための医薬を製造するための化合物の使用と読み替えてもよいものとする。
【００９０】
好ましくは、態様（１）〜（１７）の、特に態様（８）〜（１７）のいずれか１つに従う化合物、好ましくは態様（１４）の化合物は、上記医薬中に、態様（２９）及び（３１）に記載の量で含まれる。さらに、上記医薬は態様（３２）に記載されるように製剤化してもよい。
【００９１】
（３４）  本発明のさらなる態様は、効果的な量の態様（１）〜（１７）のいずれか１つに従う化合物を患者に投与することを有する、態様（１９）〜（２７）のいずれか１つの疾患及び症状を治療及び／又は予防する方法に関する。ここで、「効果的な量」は上記した通りである。特に、効果的な量は態様（２９）及び（３１）に記載した通りである。医薬そのものとして使用するための又は態様（１９）〜（２７）に記載の疾患の治療及び／又は予防のための医薬として使用するための態様（１）〜（１７）の化合物に関するすべての態様が開示されているものとし、さらに、上記態様は、治療及び／又は予防するそれぞれの方法の形式に読み替えてもよいものとする。用量は、例えば、態様（２９）又は（３１）に開示されたものと同じである。さらに、治療及び／又は予防は、態様（３２）に記載のように製剤化された医薬を用いて行うことができる。
【００９２】
好ましくは、態様（１）〜（１７）の、特に態様（８）〜（１７）のいずれか１つに従う化合物、好ましくは態様（１４）の化合物は、態様（２９）及び（３１）に記載の量で含まれる。さらに、上記化合物は態様（３２）に記載されるように製剤化してもよい。
【００９３】
（３５）  本発明のさらなる態様は、ヒト及び／又は動物用の機能性食品又は補助食品としての、態様（１）〜（１７）のいずれか１つに従う化合物の使用に関する。ここで、機能性食品又は補助食品は、生理学的利益を有し、及び／又は、態様（１８）〜（２７）の疾患又は障害のリスクを低減する食品又は補助食品である。機能性食品又は補助食品は通常の食事の一部として消費することができる。
【００９４】
（３６）  本発明のさらなる態様は、ヒト及び動物のアンチエイジング、寿命延長又は脳機能の改善のための態様（１）〜（１７）に記載の化合物のいずれか１つの使用に関する。
【００９５】
（３７）  本発明のさらなる態様は、上記機能性食品又は補助食品が、ヒト及び動物のアンチエイジング、寿命延長又は脳機能の改善のためのものである、態様（３５）に従う使用に関する。
【００９６】
（３８）  本発明のさらなる態様は、ヒト及び／又は動物用の機能性食品又は補助食品としての態様（１）〜（１７）のいずれか１つに従う化合物に関し、上記機能性食品又は補助食品は、視覚、記憶、学習、イメージング、判断、読解、知覚、思考、創造を含む脳機能を改善し、知能指数（ＩＱ）を上げるためのものである。
【００９７】
（３９）  本発明のさらなる態様は、ヒト及び／又は動物用の機能性食品又は補助食品としての態様（１）〜（１７）のいずれか１つに従う化合物の使用に関し、上記機能性食品は、神経変性疾患、網膜若しくは視神経変性疾患、脱髄疾患、神経筋障害及び筋ジストロフィー、脳若しくは脊髄神経損傷、アミロイド沈着関連疾患並びに腎臓病、糖尿病、喘息及び呼吸困難からなる群より選択される慢性疾患又は症状のためのものである。
【００９８】
（４０）  本発明のさらなる態様は、特定の疾患又は症状のためのヒト及び／又は動物用の機能性食品又は補助食品としての態様（１）〜（１７）のいずれか１つに従う化合物の使用に関し、上記疾患及び症状は態様（１９）〜（２７）に記載したものである。
【００９９】
（４１）  本発明のさらなる態様は、態様（３５）〜（４０）に従うヒト及び／又は動物用の機能性食品又は補助食品としての、態様（８）〜（１７）に記載の化合物のいずれか１つに関する。
【０１００】
本発明の特に好ましい態様は、態様（３５）〜（４０）に従うヒト及び／又は動物用の機能性食品又は補助食品としての、態様（１４）に記載の化合物に関する。
【０１０１】
態様の１つにおいて、上記化合物は、態様（８）〜（１７）に記載の化合物のいずれか１つに、特に態様（１４）に関する。
【０１０２】
（４２）  本発明のさらなる態様は、用量が１μｇ（マイクログラム）／日〜５０ｍｇ／日である、ヒト及び／又は動物用の機能性食品又は補助食品としての態様（１）〜（１７）のいずれか１つに従う化合物の使用に関する。さらなる態様において、用量は１μｇ（マイクログラム）／日〜２０ｍｇ／日である。下限は、例えば、１μｇ（マイクログラム）／日、２μｇ（マイクログラム）／日、３μｇ（マイクログラム）／日、４μｇ（マイクログラム）／日、５μｇ（マイクログラム）／日、７μｇ（マイクログラム）／日、１０μｇ（マイクログラム）／日、２０μｇ（マイクログラム）／日、２５μｇ（マイクログラム）／日、５０μｇ（マイクログラム）／日、１００μｇ（マイクログラム）／日、２００μｇ（マイクログラム）／日、３００μｇ（マイクログラム）／日、４００μｇ（マイクログラム）／日又は５００μｇ（マイクログラム）／日である。上限は、例えば、５０ｍｇ／日、４０ｍｇ／日、３０ｍｇ／日、２０ｍｇ／日、１０ｍｇ／日、５ｍｇ／日、３ｍｇ／日、２ｍｇ／日、１ｍｇ／日、９００μｇ（マイクログラム）／日である。上記の上限のそれぞれは上記の下限のそれぞれと組み合わせることができるものとする。態様の１つにおいて、用量は１μｇ（マイクログラム）／日〜２０ｍｇ／日である。別の態様において、用量は１μｇ（マイクログラム）／日〜９００μｇ（マイクログラム）／日である。
【０１０３】
態様の１つにおいて、記載した上記の用量は特に、態様（８）〜（１７）のいずれか１つ、とりわけ態様（１４）に従う化合物に適用される。
【０１０４】
（４３）  本発明のさらなる態様は、グリセロールを式（ＩＩ）の脂肪酸ＨＯＣ（Ｏ）Ｒ４でエステル化することによる、態様（１）〜（１７）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物の製造に関し、Ｒ４は、互いに独立に、
−  １、２又は３個のＯＨ、ＮＨ２、ＮＨＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２、Ｆ又はＣｌで任意に置換された（Ｃ５−Ｃ２０）アルキル；又は
−  １、２又は３個の二重結合を有する（Ｃ５−Ｃ２０）アルケニル；
であり、
ＨＯＣ（Ｏ）Ｒ４の少なくとも１つは、偶数個の炭素原子を有する（Ｃ６−Ｃ２０）アルキルであるＲ４を有する。
【０１０５】
グリセロールのエステル化は当業者に公知である。例えば、エステル化は、例えばＬｅｗｉｓ酸の例としてメタノール性ＨＣｌ、メタノール性Ｈ２ＳＯ４、三フッ化ホウ素及び他の酸性触媒で酸触媒することができる。さらに、エステルは、酸ハライド、脂肪酸無水物、イミダゾリド等の活性化脂肪酸を介し、そしてＤＣＣ（Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド）又はＥＤＣ（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド）等の他の周知のカップリング剤を用いて得ることができる。
【０１０６】
さらに、所望の脂肪酸で所望の位置を特異的にエステル化するために、保護基を用いた戦略を用いることができる。１，３−ベンジリデン誘導体が得られるグリセロールのベンズアルデヒドとの反応又はアセトンによる１，２−アセトニドの形成等、適宜な保護基により５−又は６−員の１，２−ジオールを形成することができる。１，２−ジオールもまたそれらの環状炭酸エステルとして保護してもよく、これらは、ホスゲン（ＣＯＣｌ２）又はトリホスゲン（ＣＣｌ３ＯＣ（Ｏ）ＯＣＣｌ３）を用いて製造することができる。保護基を用いた戦略は、例えば「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ、Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ、Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、１９９９により当業者に公知である。
【０１０７】
（４４）  本発明のさらなる態様は、グリセロールをペンタデカン酸でエステル化することによる、態様（１４）に従う化合物の製造に関する。
【０１０８】
（４５）  本発明のさらなる態様において、態様（１４）の化合物は薬草（ｈｅｒｂ）又はヒト／動物の乳から得られる。
【０１０９】
（４６）  態様（１４）の化合物はＯｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ属植物に含まれている。
【０１１０】
（４７）  本発明において、ＯｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍはＯｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍのすべての種を包含するものとする。特に、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍは、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｓｐ．、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  Ｌ．、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｔｈｅｒｍａｌｅ  Ｋｏｍ．、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｔｈｅｒｍａｌｅ  Ｋｏｍａｒｏｖ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ａｕｓｔｒｏ−ａｓｉａｔｉｃｕｍ  Ｎｉｓｈｉｄａ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ａｕｓｔｒｏａｓｉａｔｉｃｕｍ  Ｎｉｓｈ．、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｐｅｔｉｏｌａｔｕｍ  Ｌ．、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｐｅｎｄｕｌｕｍ  Ｌ．、Ｏｐｈｉｏｄｅｒｍａ  ｐｅｎｄｕｌａ（Ｌ．）Ｐｒｅｓｌ．、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｒｅｔｉｃｕｌａｔｕｍ  Ｌ．、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｖｕｌｇａｔｕｍ  Ｌ．、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｐｅｄｕｎｃｕｌｏｓｕｍ  Ｄｅｓｖ．、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｐａｒｖｉｆｏｌｉｕｍ  Ｇｒｅｖ．  ｅｔ  ＨＫ．、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｐｅｔｉｏｌａｔｕｍ  Ｈｏｏｋ．、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｐｅｔｉｏｌａｔｕｍ  Ｈｏｏｋｅｒ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｔｅｎｅｒｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｐｙｃｎｏｓｔｉｃｈｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｐｙｃｎｏｓｔｉｃｈｕｍ（Ｆｅｒｎ．）Ａ．＆Ｄ．Ｌｏｖｅ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｐｙｃｎｏｓｔｉｃｈｕｍ（Ｆｅｒｎａｌｄ）Ａ．Ｌｏｅｖｅ＆Ｄ．Ｌｏｅｖｅ；Ｏ．ｖｕｌｇａｔｕｍ  ｖａｒ．ｐｙｃｎｏｓｔｉｃｈｕｍ  Ｆｅｒｎａｌｄ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｃｒｏｔａｌｏｐｈｏｒｏｉｄｅｓ  Ｗａｌｔ．、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｃｒｏｔａｌｏｐｈｏｒｏｉｄｅｓ  Ｗａｌｔｅｒ  ｖａｒ．  ｃｒｏｔａｌｏｐｈｏｒｏｉｄｅｓ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｃｒｏｔａｌｏｐｈｏｒｏｉｄｅｓ  Ｗａｌｔｅｒ  ｖａｒ．  ｎａｎｕｍ  Ｏｓｔｅｎ  ｅｘ  Ｊ．Ｓ．Ｌｉｃｈｔ．、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ａｚｏｒｉｃｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ａｚｏｒｉｃｕｍ  Ｃ．Ｐｒｅｓｌ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｖｕｌｇａｔｕｍ  Ｌｉｎｎａｅｕｓ  ｖａｒ．ｐｓｅｕｄｏｐｏｄｕｍ（Ｓ．Ｆ．Ｂｌａｋｅ）  Ｆａｒｗｅｌｌ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｄｅｎｄｒｏｎｅｕｒｏｎ  Ｅ．Ｐ．Ｓｔ．Ｊｏｈｎ；Ｏ．ｅｌｌｉｐｔｉｃｕｍ  Ｈｏｏｋｅｒ＆Ｇｒｅｖｉｌｌｅ；Ｏ．ｍｏｎｏｎｅｕｒｏｎ  Ｅ．Ｐ．Ｓｔ．Ｊｏｈｎ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｄｅｎｄｒｏｎｅｕｒｏｎ  Ｅ．Ｐ．Ｓｔ．Ｊｏｈｎ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  Ｌｉｎｎａｅｕｓ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｐａｌｍａｔｕｍ  Ｌ．、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｍｏｎｏｎｅｕｒｏｎ  Ｅ．Ｐ．Ｓｔ．  Ｊｏｈｎ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ａｕｓｔｒｏａｓｉａｔｉｃｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｂｅｒｇｉａｎｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｂｕｃｈａｒｉｃｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｃａｒｏｔｉｃａｕｌｅ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｃｏｎｖｅｘｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃｕｍ  Ｐｒａｎｔｌ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｃｏｎｃｉｎｎｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｃｏｎｃｉｎｎｕｍ  Ｂｒａｃｋ．、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｃｏｓｔａｔｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｃｏｓｔａｔｕｍ  Ｒ．Ｂｒ．、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｃｏｒｉａｃｅｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｄｅｃｉｐｉｅｎｓ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｄｉｅｔｒｉｃｈｉａｅ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｄｕｄａｄａｅ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｅｎｇｅｌｍａｎｎｉｉ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｅｎｇｅｌｍａｎｎｉｉ  Ｐｒａｎｔｌ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｅｌｌｉｐｔｉｃｕｍ  Ｈｏｏｋ．＆Ｇｒｅｖ．、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｆｅｒｎａｎｄｅｚｉａｎｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｇｏｍｅｚｉａｎｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｇｒａｃｉｌｅ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｇｒａｍｉｎｅｕｍ  Ｗｉｌｌｄ．、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｇｒａｍｉｎｅｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｈａｒｒｉｓｉｉ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｋａｗａｍｕｒａｅ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｌａｎｃｉｆｏｌｉｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｌａｔｉｆｏｌｉｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｌｉｔｏｒａｌｅ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｌｏｕｒｅｉｒｉａｎｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｌｕｓｉｔａｎｉｃｕｍ  Ｌ．、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｌｕｓｉｔａｎｉｃｕｍ  Ｌ．ｓｓｐ．ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃｕｍ（Ｐｒａｎｔｌ）  Ｒ．Ｔ．Ｃｌａｕｓｅｎ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｌｕｓｉｔａｎｉｃｕｍ  Ｌ．ｖａｒ．ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃｕｍ（Ｐｒａｎｔｌ）  Ｂｒｏｕｎ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｍｏｕｌｔｏｎｉ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｎａｍｅｇａｔａｅ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｎｕｄｉｃａｕｌｅ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｎｕｄｉｃａｕｌｅ  Ｌ．ｆ．、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｎｕｄｉｃａｕｌｅ  Ｌ．ｆ．ｖａｒ．ｍｉｎｕｓ  Ｒ．Ｔ．Ｃｌａｕｓｅｎ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｎｕｄｉｃａｕｌｅ  Ｌ．ｆ．ｖａｒ．ｔｅｎｅｒｕｍ（Ｍｅｔｔ．ｅｘ  Ｐｒａｎｔｌ）Ｒ．Ｔ．Ｃｌａｕｓｅｎ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｏｂｌｏｎｇｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｏｂｏｖａｔｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｏｐａｃｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｏｖａｔｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｐａｒｖｉｆｏｌｉｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｐａｒｖｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｐｅｎｄｕｌｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｐｅｎｄｕｌｕｍ  Ｌ．ｓｓｐ．ｆａｌｃａｔｕｍ（Ｃ．Ｐｒｅｓｌ）Ｒ．Ｔ．Ｃｌａｕｓｅｎ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｐｅｎｄｕｌｕｍ  Ｌ．ｓｓｐ．Ｐｅｎｄｕｌｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｐｅｔｉｏｌａｔｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｐｏｌｙｐｈｙｌｌｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｐｏｌｙｐｈｙｌｌｕｍ  Ａ．Ｂｒａｕｎ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｐｏｌｙｐｈｙｌｌｕｍ  Ａ．Ｂｒａｕｎ  ｅｘ  Ｓｃｈｕｂ．、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｐｕｍｉｌｉｏ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｐｕｓｉｌｌｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｐｕｓｉｌｌｕｍ  Ｒａｆ．、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｒａｃｉｂｏｒｓｋｉｉ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｒａｍｏｓｉｉ���Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｒｅｔｉｃｕｌａｔｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｒｕｂｅｌｌｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｓａｖａｔｉｅｒｉ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｓｃａｒｉｏｓｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｓｃｈｍｉｄｉｉ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｓｉｍｐｌｅｘ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｔｈｅｒｍａｌ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｔｈｏｍａｓｉｉ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｔｉｍｏｒｅｎｓｅ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｔｅｎｅｒｕｍ  Ｍｅｔｔ．ｅｘ  Ｐｒａｎｔｌ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｕｓｔｅｒｉａｎｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｖｕｌｇａｔｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｖｕｌｇａｔｕｍ  ａｕｃｔ．ｎｏｎ  Ｌ．、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｖｕｌｇａｔｕｍ  Ｌ．ｖａｒ．ａｌａｓｋａｎｕｍ（Ｅ．Ｇ．Ｂｒｉｔｔｏｎ）Ｃ．Ｃｈｒ．、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｖｕｌｇａｔｕｍ  Ｌ．ｖａｒ．ｐｓｅｕｄｏｐｏｄｕｍ（Ｓ．Ｆ．Ｂｌａｋｅ）Ｆａｒｗ．、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｖｕｌｇａｔｕｍ  Ｌ．ｖａｒ．ｐｙｃｎｏｓｔｉｃｈｕｍ  Ｆｅｒｎａｌｄ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓａｃｅａｅ  Ｍａｒｔｉｎｏｖ、Ｃｈｅｉｒｏｇｌｏｓｓａ  ｐａｌｍａｔａ（Ｌ．）Ｃ．Ｐｒｅｓｌ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｅｌｉｍｉｎａｔｕｍ  Ｋｈａｎｄ．＆Ｇｏｓｗａｍｉ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｎａｍｅｇａｔａｅ  Ｎｉｓｈ．＆Ｋｕｒｉｔａ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｎｉｐｐｏｎｉｃｕｍ  Ｍｉｙａｂｅ＆Ｋｕｄｏ及び／又は  Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｏｌｅｏｓｕｍ  Ｋｈａｎｄから選択される群からなる。
好ましいＯｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍは、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｔｈｅｒｍａｌｅ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｐｅｔｉｏｌａｔｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｒｅｔｉｃｕｌａｔｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｐａｒｖｉｆｏｌｉｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｖｕｌｇａｔｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ａｕｓｔｒｏａｓｉａｔｉｃｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ａｚｏｒｉｃｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｃｏｓｔａｔｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｃｒｏｔａｌｏｐｈｏｒｏｉｄｅｓ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｅｎｇｅｌｍａｎｉｉ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｌｕｓｉｔａｎｉｃｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｎｕｄｉｃａｕｌｅ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｐｏｌｙｐｈｙｌｌｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｐｕｓｉｌｌｕｍ及び／又はＯｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｐｙｃｎｏｓｔｉｃｕｍである。
特に好ましいＯｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍは、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｔｈｅｒｍａｌｅ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｐｅｔｉｏｌａｔｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｒｅｔｉｃｕｌａｔｕｍ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｖｕｌｇａｔｕｍ及び／又はＯｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ａｕｓｔｒｏ−ａｓｉａｔｉｃｕｍ  Ｎｉｓｈｉｄａである。
【０１１１】
本発明において、ハーブＢはｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍである。
【０１１２】
（４８）  従って、本発明の態様は、態様（１９）〜（２７）に記載の疾患の治療及び／又は予防のためのｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍに関し、すなわち、態様（１９）〜（２７）のいずれか１つの疾患及び症状の治療及び／又は予防のためのｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍの使用に関する。
【０１１３】
（４９）  本発明の態様の１つは、１ｍｇ／日〜１０００ｍｇ／日の態様（１４）の化合物、すなわちトリペンタデカノイン又は化合物Ｃ、を含む量でｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍを使用することに関する。
【０１１４】
さらなる態様は、１ｍｇ／日〜１０００ｍｇ／日の態様（１４）の化合物、すなわちトリペンタデカノイン又は化合物Ｃ、を含む量でｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍを使用することに関する。下限は、例えば、ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ中に含まれる化合物Ｃを１ｍｇ／日、５ｍｇ／日、１０ｍｇ／日、２０ｍｇ／日、２５ｍｇ／日又は５０ｍｇ／日である。上限は、例えば、ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ中に含まれる化合物Ｃを１０００ｍｇ／日、９００ｍｇ／日、８００ｍｇ／日、７５０ｍｇ／日、７００ｍｇ／日、６００ｍｇ／日、５００ｍｇ／日、２５０ｍｇ／日、２００ｍｇ／日である。上記の上限のそれぞれは上記の下限のそれぞれと組み合わせることができるものとする。好ましい態様において、用量は１０ｍｇ／日〜２００ｍｇ／日である。
【０１１５】
あるいは、本発明は、乾燥ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ粉末にして１０ｍｇ〜１００００ｍｇ／日の量でｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍを使用することに関する。下限は、例えば、１０ｍｇ／日、２０ｍｇ／日、３０ｍｇ／日、４０ｍｇ／日、５０ｍｇ／日、１００ｍｇ／日、１５０ｍｇ／日、２００ｍｇ／日、３００ｍｇ／日、５００ｍｇ／日、７００ｍｇ／日である。上限は、例えば、１００００ｍｇ／日、８０００ｍｇ／日、６０００ｍｇ／日、５０００ｍｇ／日、２５００ｍｇ／日、１０００ｍｇ／日である。上記の上限のそれぞれは上記の下限のそれぞれと組み合わせることができるものとする。
【０１１６】
（５０）  本発明のさらなる態様は、ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍを含む、態様（１９）〜（２７）のいずれか１つの疾患及び症状の治療及び／又は予防において使用するための医薬組成物に関する。
【０１１７】
（５１）  本発明のさらなる態様は、態様（１４）の化合物、すなわちトリペンタデカノイン又は化合物Ｃ、を１ｍｇ／日〜１０００ｍｇ／日含有する量でｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍを含む、態様（１９）〜（２７）のいずれか１つの疾患及び症状の治療及び／又は予防において使用するための医薬組成物に関する。
【０１１８】
本発明のさらなる態様は、１ｍｇ／日〜１０００ｍｇ／日の態様（１４）の化合物、すなわちトリペンタデカノイン又は化合物Ｃ、を含む、上記医薬組成物に関する。下限は、ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍに含まれる化合物Ｃについて、例えば、１ｍｇ／日、５ｍｇ／日、１０ｍｇ／日、２０ｍｇ／日、２５ｍｇ／日又は５０ｍｇ／日である。上限は、ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍに含まれる化合物Ｃについて、例えば、１０００ｍｇ／日、９００ｍｇ／日、８００ｍｇ／日、７５０ｍｇ／日、７００ｍｇ／日、６００ｍｇ／日、５００ｍｇ／日、２５０ｍｇ／日、２００ｍｇ／日である。上記の上限のそれぞれは上記の下限のそれぞれと組み合わせることができるものとする。好ましい態様において、用量は１０ｍｇ／日〜２００ｍｇ／日である。
【０１１９】
あるいは、本発明は、乾燥ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ粉末にして１０ｍｇ〜１００００ｍｇ／日のｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍを含む、ヒト及び／又は動物用の医薬組成物に関する。下限は、例えば、１０ｍｇ／日、２０ｍｇ／日、３０ｍｇ／日、４０ｍｇ／日、５０ｍｇ／日、１００ｍｇ／日、１５０ｍｇ／日、２００ｍｇ／日、３００ｍｇ／日、５００ｍｇ／日、７００ｍｇ／日である。上限は、例えば、１００００ｍｇ／日、８０００ｍｇ／日、６０００ｍｇ／日、５０００ｍｇ／日、２５００ｍｇ／日、１０００ｍｇ／日である。上記の上限のそれぞれは上記の下限のそれぞれと組み合わせることができるものとする。
【０１２０】
（５２）  本発明のさらなる態様は、ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍを好ましくは態様（４９）又は（５１）に示す量で含有する製剤に関し、経口剤型（粉末剤、錠剤、カプセル剤、ソフトカプセル剤、水薬、シロップ剤、エリキシル剤（ｅｌｉｘｉｒｓ  ｐｉｌｌ）、粉末剤、サシェー剤（ｓａｃｈｅｔ）、顆粒剤）又は局所製剤（クリーム、軟膏、ローション、ゲル、バーム製剤、パッチ、ペースト、スプレー溶液、エアロゾル等）又は注射剤（溶液、懸濁液、乳濁液）等のいかなる形態においても製造することができる。
【０１２１】
（５３）  本発明のさらなる態様は、態様（１９）〜（２７）のいずれか１つの疾患及び症状の治療及び／又は予防のための医薬を製造するためのｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍの使用に関する。態様（１９）〜（２７）に記載の疾患の治療及び／又は予防のためのｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍに関するすべての態様が開示されているものとし、さらに、上記態様は、開示した疾患及び症状の治療及び／又は予防のための医薬を製造するためのｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍの使用と読み替えてもよいものとする。
【０１２２】
好ましくは、ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍは、態様（１４）の化合物、すなわちトリペンタデカノイン又は化合物Ｃを、態様（４９）及び（５１）に記載の量で含有する。さらに、上記医薬は態様（５２）に記載のように製剤化してもよい。
【０１２３】
（５４）  本発明のさらなる態様は、効果的な量のｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍを患者に投与することを有する、態様（１９）〜（２７）のいずれか１つの疾患及び症状を治療及び／又は予防する方法に関する。ここで、「効果的な量」は上記した通りである。特に、効果的な量は態様（４９）及び（５１）に記載した通りである。態様（１９）〜（２７）に記載の疾患の治療及び／又は予防のためのｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍに関するすべての態様が開示されているものとし、さらに、上記態様は、治療及び／又は予防するそれぞれの方法の形式に読み替えてもよいものとする。用量は、例えば、態様（４９）又は（５１）に開示されたものと同じである。さらに、治療及び／又は予防は、態様（５２）に記載のように製剤化された医薬を用いて行うことができる。
【０１２４】
好ましくは、ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍは、態様（１４）の化合物、すなわちトリペンタデカノイン又は化合物Ｃを、態様（４９）及び（５１）に記載の量で含む。上記医薬は態様（５２）に記載のように製剤化してもよい。
【０１２５】
（５５）  さらに、本発明のさらなる態様は、ヒト及び／又は動物用の機能性食品又は補助食品としてのｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍの使用に関する。
【０１２６】
（５６）  本発明のさらなる態様は、ヒト及び動物のアンチエイジング、寿命延長又は脳機能の改善のためのｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍの使用に関する。
【０１２７】
（５７）  本発明のさらなる態様は、上記機能性食品又は補助食品が、ヒト及び動物のアンチエイジング、寿命延長又は脳機能の改善のためのものである、態様（５５）に従う使用に関する。
【０１２８】
（５８）  本発明のさらなる態様は、ヒト及び／又は動物用の機能性食品又は補助食品としてのｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍの使用に関し、上記機能性食品又は補助食品は、視覚、記憶、学習、イメージング、判断、読解、知覚、思考、創造を含む脳機能を改善し、知能指数（ＩＱ）を上げるためのものである。
【０１２９】
（５９）  本発明のさらなる態様は、ヒト及び／又は動物用の機能性食品又は補助食品としてのｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍの使用に関し、上記機能性食品は、神経変性疾患、網膜若しくは視神経変性疾患、脱髄疾患、神経筋疾患及び筋ジストロフィー、脳若しくは脊髄神経損傷、アミロイド沈着関連疾患並びに腎臓病、糖尿病、喘息及び呼吸困難からなる群より選択される慢性疾患又は症状のためのものである。
【０１３０】
（６０）  本発明のさらなる態様は、特定の疾患又は症状のためのヒト及び／又は動物用の機能性食品又は補助食品としてのｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍの使用に関し、上記疾患又は症状は態様（１９）〜（２７）に記載したものである。
【０１３１】
（６１）  本発明のさらなる態様は、ヒト及び／又は動物用の機能性食品又は補助食品としてのｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍの使用に関し、ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍの用量は、態様（１４）の化合物、すなわちトリペンタデカノイン又は化合物Ｃ、を１μｇ（マイクログラム）／日〜５０ｍｇ／日の量で含む。さらなる態様において、用量は１μｇ（マイクログラム）／日〜２０ｍｇ／日である。下限は、例えば、１μｇ（マイクログラム）／日、２μｇ（マイクログラム）／日、３μｇ（マイクログラム）／日、４μｇ（マイクログラム）／日、５μｇ（マイクログラム）／日、７μｇ（マイクログラム）／日、１０μｇ（マイクログラム）／日、２０μｇ（マイクログラム）／日、２５μｇ（マイクログラム）／日、５０μｇ（マイクログラム）／日、１００μｇ（マイクログラム）／日、２００μｇ（マイクログラム）／日、３００μｇ（マイクログラム）／日、４００μｇ（マイクログラム）／日又は５００μｇ（マイクログラム）／日である。上限は、例えば、５０ｍｇ／日、４０ｍｇ／日、３０ｍｇ／日、２０ｍｇ／日、１０ｍｇ／日、５ｍｇ／日、３ｍｇ／日、２ｍｇ／日、１ｍｇ／日、９００μｇ（マイクログラム）／日である。上記の上限のそれぞれは上記の下限のそれぞれと組み合わせることができるものとする。態様の１つにおいて、用量は１μｇ（マイクログラム）／日〜２０ｍｇ／日である。別の態様において、用量は１μｇ（マイクログラム）／日〜９００μｇ（マイクログラム）／日である。
【０１３２】
あるいは、本発明は、ヒト及び／又は動物用の機能性食品又は補助食品としてのｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍの使用に関し、乾燥ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ粉末にして、１０ｍｇ／日〜２０００ｍｇ／日のｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍが含まれる。下限は、例えば、１０ｍｇ／日、２０ｍｇ／日、３０ｍｇ／日、４０ｍｇ／日、５０ｍｇ／日、１００ｍｇ／日、１５０ｍｇ／日、２００ｍｇ／日、３００ｍｇ／日である。上限は、例えば、２０００ｍｇ／日、１８００ｍｇ／日、１６００ｍｇ／日、１５００ｍｇ／日、１２５０ｍｇ／日、１０００ｍｇ／日である。上記の上限のそれぞれは上記の下限のそれぞれと組み合わせることができるものとする。
【０１３３】
生薬（ｈｅｒｂａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ）における薬草の使用方法は当該技術分野において周知である。従って、当業者は、態様（４８）〜（６１）に従って使用するためのｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍの扱い方を認識している。
【０１３４】
Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍは、乾燥した植物又は植物の一部、特に根、茎、葉、花、花粉、胞子、表皮又は種子の粉末の形態で使用することができる。さらに、抽出物は有機溶媒、特に親油性有機溶媒を用いて製造することができる。ＥｔＯＨ、ＤＭＳＯ、クロロホルム、ジクロロメタン、メタノール、２−プロパノール、脂肪族炭化水素、アセトン、酢酸メチル等が有用である。抽出物は乾燥することもでき、又は、オイルの形態とすることができる。抽出物及びチンキ剤の一般的な製造方法は、例えば、Ｒ．Ｖｏｉｇｔ、「Ｐｈａｒｍａｚｅｕｔｉｓｃｈｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅ」、Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ  Ａｐｏｔｈｅｋｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ  Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ、ＩＳＢＮ  ９７８−３−７６９２−６１９４−３、２０１５に開示されている。
【０１３５】
要約すると、本発明は下記のように記載することもできる：
（ｉ）．  ヒト及び／又は動物用の医薬として使用するための式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩；
【０１３６】
【化２】
2019518034.tif 000003
【０１３７】
式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３はＨ又は−Ｃ（Ｏ）Ｒ４から独立に選択され、Ｒ４は、
−  １、２又は３個のＯＨ、ＮＨ２、ＮＨＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２、Ｆ又はＣｌで任意に置換された（Ｃ５−Ｃ２０）アルキル；又は
−  １、２又は３個の二重結合を有する（Ｃ５−Ｃ２０）アルケニル；
であり、
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３の少なくとも１つは、Ｒ４が偶数個の炭素原子を有する（Ｃ６−Ｃ２０）アルキルである−Ｃ（Ｏ）Ｒ４である。
【０１３８】
（ｉｉ）．  Ｒ１、Ｒ２及びＲ３がＨ又は−Ｃ（Ｏ）Ｒ４から独立に選択され、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３の少なくとも１つは、Ｒ４が偶数個の炭素原子を有する（Ｃ６−Ｃ２０）アルキルである−Ｃ（Ｏ）Ｒ４である、ヒト及び／又は動物用の医薬として使用するための（ｉ）に従う式（Ｉ）の化合物。
【０１３９】
（ｉｉｉ）．  Ｒ１、Ｒ２及びＲ３が、Ｒ４が偶数個の炭素原子を有する（Ｃ６−Ｃ２０）アルキルである−Ｃ（Ｏ）Ｒ４から独立に選択される、（ｉ）又は（ｉｉ）に従う式（Ｉ）の化合物。
【０１４０】
（ｉｖ）．  Ｒ１、Ｒ２及びＲ３の１又は２つはＨであり、他は、Ｒ４がＣ１２−アルキル、Ｃ１４−アルキル、Ｃ１６−アルキル、Ｃ１８−アルキル又はＣ２０−アルキルである−Ｃ（Ｏ）Ｒ４である、ヒト及び／又は動物用の医薬として使用するための（ｉ）又は（ｉｉ）に従う式（Ｉ）の化合物。
【０１４１】
（ｖ）．  Ｒ１、Ｒ２及びＲ３が、Ｒ４がＣ１４−アルキルである−Ｃ（Ｏ）Ｒ４である、ヒト及び／又は動物用の医薬として使用するための（ｉ）〜（ｉｉｉ）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物。
【０１４２】
（ｖｉ）．  ＨＯＣ（Ｏ）Ｃ１２−アルキル、ＨＯＣ（Ｏ）Ｃ１４−アルキル、ＨＯＣ（Ｏ）Ｃ１６−アルキル、ＨＯＣ（Ｏ）Ｃ１８−アルキル又はＨＯＣ（Ｏ）Ｃ２０−アルキルである、ヒト及び／又は動物用の医薬として使用するための（ｉｖ）に従う式（Ｉ）の化合物の代謝物又はプロドラッグ。
（ｖｉｉ）．  神経変性疾患、網膜若しくは視神経変性疾患、脱髄疾患、神経筋障害及び筋ジストロフィー、脳若しくは脊髄神経損傷、脳神経障害又は発作、アミロイド沈着関連疾患、そして腎臓病、糖尿病、喘息及び呼吸困難からなる群より選択される慢性疾患又は症状の治療及び／又は予防において使用するための、並びに、アンチエイジング若しくは寿命延長及び脳機能の改善に使用するための、（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物。
【０１４３】
（ｖｉｉｉ）．  アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、ハンチントン病（ＨＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、認知症、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、クロイツフェルト・ヤコプ病及び脳萎縮からなる群より選択される神経変性疾患の治療及び／又は予防において使用するための、（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物。
【０１４４】
（ｉｘ）．  視神経萎縮、レーベル遺伝性視神経症（ＬＨＯＮ）、優性視神経萎縮（ＤＯＡ）、加齢性黄斑変性症、緑内障及び網膜色素変性症からなる群より選択される眼及び網膜変性疾患の治療及び／又は予防において使用するための、（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物。
【０１４５】
（ｘ）．  副腎白質ジストロフィー、多発性硬化症、視神経炎、急性炎症性脱髄性多発ニューロパチー（ＡＩＤＰ）、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー（ＣＩＤＰ）、ギラン・バレー症候群、ジカウィルスにより引き起こされ若しくはジカウィルスに関連する脳炎、脳神経麻痺、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）、急性散在性脳脊髄炎、急性壊死性出血性脳炎、同心性硬化症、びまん性硬化症、異染性白質ジストロフィー、球様細胞型白質ジストロフィー、中枢神経系の海綿状変性、副腎白質ジストロフィー、ペリープラム病、アレキサンダー病、放射線障害白質脳症、低酸素白質脳症、脳室周囲白質軟化症、脳症下における動脈硬化性皮質、進行性多巣性白質脳症及び橋中心髄鞘崩解症候群からなる群より選択される脱髄疾患の治療及び／又は予防において使用するための、（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物。
【０１４６】
（ｘｉ）．    重症筋無力症、ランバート・イートン症候群、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、ベッカー型筋ジストロフィー、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー、筋緊張性ジストロフィー、シャルコー・マリー・トゥース病（ＣＭＴ）からなる群より選択される神経筋障害及び筋ジストロフィーの治療及び／又は予防において使用するための、（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物。
【０１４７】
（ｘｉｉ）．  急性又は慢性脳損傷又は脊髄神経損傷、脳神経障害及び発作からなる群より選択される神経損傷関連疾患又は混合性神経疾患の治療及び／又は予防において使用するための、（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物。
【０１４８】
（ｘｉｉｉ）．  糖尿病、心臓アミロイドーシス、原発性アミロイドーシス、家族性アミロイドーシス、老人性全身性アミロイドーシス（ＳＳＡ）、続発性アミロイドーシス及び血液透析関連アミロイドーシスからなる群より選択されるアミロイド沈着関連疾患の治療及び／又は予防において使用するための、（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物。
【０１４９】
（ｘｉｖ）．  腎臓病、糖尿病及び喘息からなる群より選択される慢性疾患の治療及び／又は予防において使用するための、（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物。
【０１５０】
（ｘｖ）．  治療用量が１ｍｇ／日〜１０００ｍｇ／日である、請求項７〜１４の疾患及び症状の治療及び／又は予防において使用するための、（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物。
【０１５１】
（ｘｖｉ）．  （ｉ）〜（ｖｉ）の式（Ｉ）の化合物及び及び薬学的に許容される担体を含む、請求項７〜１４の疾患及び症状の治療及び／又は予防において使用するための医薬組成物。
【０１５２】
（ｘｖｉｉ）．  （ｖｉｉ）〜（ｘｉｖ）の疾患及び症状の治療及び／又は予防のための医薬を製造するための、（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物の使用。
【０１５３】
（ｘｖｉｉｉ）．  効果的な量の（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物を患者に投与することを有する、（ｖｉｉ）〜（ｘｉｖ）の疾患及び症状を治療及び／又は予防する方法。
【０１５４】
（ｘｉｘ）．  ヒト及び／又は動物用の機能性食品又は補助食品としての、（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物の使用。
【０１５５】
（ｘｘ）．  用量が１μｇ（マイクログラム）／日〜５０ｍｇ／日である、ヒト及び／又は動物用の機能性食品又は補助食品としての、（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物の使用。
【０１５６】
（ｘｘｉ）．  （ｖｉｉ）〜（ｘｉｖ）のいずれか１つの疾患及び症状を治療及び／又は予防するためのＯｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ。
【０１５７】
（ｘｘｉｉ）．  （ｖ）の化合物を１ｍｇ／日〜１０００ｍｇ／日の量で含む、（ｖｉｉ）〜（ｘｉｖ）のいずれか１つの疾患及び症状を治療及び／又は予防するためのＯｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ。
【０１５８】
（ｘｘｉｉｉ）．  Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ．Ｅｍｂ，（５０）Ａを含む、（ｖｉｉ）〜（ｘｉｖ）の疾患及び症状の治療及び／又は予防において使用するための医薬組成物。
【０１５９】
（ｘｘｉｖ）．  ヒト及び／又は動物用の機能性食品又は補助食品としてのｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍの使用。
【０１６０】
（ｘｘｖ）．  （ｖ）の化合物を１μｇ（マイクログラム）／日〜５０ｍｇ／日の量で含む、ヒト及び／又は動物用の機能性食品又は補助食品としてのｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍの使用。
【０１６１】
結論
驚くべきことに、本発明者らは、奇数個の炭素原子を持つ脂肪酸を有する脂質の投与が神経保護効果を示すことを見い出した。特に、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍと呼ばれる薬草又はヒト／動物の乳由来の化合物Ｃ（ＳＢＣ００３、トリペンタデカノイン）は、とりわけニューロンモデルにおいて効能があり、非常に強力な神経保護、抗アポトーシス、神経救済、軸索伸長及び潜在的な神経再生効果を示す。化合物Ｃは、正常な酵母の加齢中に起こる加齢誘発タンパク質凝集の予防及び／又は解消に対して強力な効果を示した。カンプトテシンモデルによる結果は、化合物Ｃが遺伝子レベルで重要な保護機能を奏することを示唆する。化合物Ｃ（ＳＢＣ００３、トリペンタデカノイン）を含む機能性食品は特に、不治の疾患を有する患者のボランティアにおいてとりわけ効果があり、非常に強力な神経保護、抗アポトーシス、神経救済及び神経再生効果を示し、従って、神経変性疾患及び他の慢性疾患の治療及び／又は予防のための医薬及び／又は機能性食品として使用される潜在性を有する。
【０１６２】
驚くべきことに、本発明者らは、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍと呼ばれる薬草（ハーブＢ、ＳＢＣ００２）が、ニューロンモデル及び患者において特に効果的であり、非常に強力な神経保護、抗アポトーシス、神経救済、抗酸化及び神経再生効果を示すことも示した。Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ抽出物は、正常な酵母の加齢中に起こる加齢誘発タンパク質凝集の予防及び／又は解消に対して強力な効果を示した。カンプトテシンモデルによる結果は、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ抽出物が遺伝子レベルで重要な保護機能を奏することを示唆する。Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ抽出物は、神経変性疾患及び他の慢性疾患の治療及び／又は予防のための医薬及び機能性食品として使用される潜在性を有する。
【０１６３】
図１は実施例Ｉ−１に関する−ＭＴＴで評価した細胞生存度に基づく化合物Ｃ（単独又はＡβＯ処理の４８時間前に添加）の神経保護効果
マウス一次皮質ニューロンを、ビヒクル、０．０５μＭのＤＨＡ（ポジティブコントロールとして使用）又は異なる濃度の化合物Ｃと４８ｈプレインキュベートした。次いで、皮質ニューロンをビヒクル（図１、左）又は１μＭのＡβＯ（図２、右）で２４ｈ処理し、細胞生存度をＭＴＴアッセイを用いて測定した（１条件当たりｎ＝３の測定、１回の独立実験）。データをビヒクルコントロールに対する％として示す（平均±ＳＤ）。
【０１６４】
図２は実施例Ｉ−１に関する−化合物Ｃの神経保護効果−ニューロンの顕微鏡画像
左：ビヒクルコントロールを４８時間添加し、次いで、ＡβＯコントロールを２４時間添加；右：化合物Ｃを３２０ｎＭにて４８時間添加し、次いで、ＡβＯを２４時間添加。
【０１６５】
図３は実施例Ｉ−２に関する−化合物Ｃの軸索伸長効果
マウス一次皮質ニューロンを、ビヒクル、６０ｎＭのｓＡＰＰα（ポジティブコントロールとして使用）又は異なる濃度の化合物Ｃと４８ｈプレインキュベートした。次いで、皮質ニューロンをビヒクルで２４ｈ処理した。データをビヒクルコントロールに対する％として示す（平均±ＳＤ）。
【０１６６】
図４は実施例Ｉ−３に関する−化合物ＣをＡβ０処理と同時に又はＡβ０処理後３、６時間後に添加した場合のマウス一次ニューロンモデルにおける化合物Ｃの神経保護、抗アポトーシス及び神経救済効果
マウス一次皮質ニューロンを、０ｈ（Ｔ０）に、ビヒクル又は１μＭのＡβＯで処理した。異なる濃度の化合物Ｃ又はＨＮＧ（０．１μＭ、ポジティブコントロールとして使用）を、ＡβＯと同時に０ｈ（Ｔ０）に、ＡβＯの後、３ｈ（Ｔ３）又は６ｈ（Ｔ６）に添加した。次いで、皮質ニューロンを２４ｈインキュベートし、細胞生存度をＭＴＴアッセイを用いて測定した（１条件当たりｎ＝３の測定、１回の独立実験）。データをビヒクルコントロールに対する％として示す（平均±ＳＤ）。
【０１６７】
図５（図５ａ、５ｂ及び５ｃ）は実施例Ｉ−４に関する−化合物ＣをＡβ０処理と同時に又はＡβ０処理後３、６時間後に添加した場合のヒト人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）における化合物Ｃの神経保護、抗アポトーシス及び神経救済効果
ｉＰＳＣを、０ｈ（Ｔ０）に、ビヒクル又は１μＭのＡβＯで処理した。異なる濃度の化合物Ｃ又は０．１μＭのＨＮＧ（ポジティブコントロールとして使用）を、ＡβＯと同時に０ｈ（Ｔ０）に、ＡβＯの後、３ｈ（Ｔ３）又は６ｈ（Ｔ６）に添加した。次いで、２４ｈインキュベートし、細胞生存度をＮＳＥ  ＥＬＩＳＡアッセイを用いて測定した（１条件当たりｎ＝６の測定、１回の独立実験）。データをビヒクルコントロールに対する％として示す（平均±ＳＤ）。
【０１６８】
図６（図６ａ、６ｂ、６ｃ、６ｄ、６ｅ、６ｆ、６ｇ、６ｈ、６ｉ）は実施例Ｉ−５に関する−化合物Ｃを毒素処理の３時間後に添加した場合の、複数の毒素で処理したマウス一次ニューロンモデルにおける化合物Ｃの神経保護、抗アポトーシス及び神経救済効果
皮質ニューロンを、０ｈ（Ｔ０）に、ビヒクル又は複数のニューロン毒素で処理した。異なる濃度の化合物Ｃ又は０．１μＭのＨＮＧ（０．１μＭ、ポジティブコントロールとして使用）を毒素処理後３ｈ（Ｔ３）に添加した。次いで、皮質ニューロンを２４ｈインキュベートし、細胞生存度をＭＴＴアッセイを用いて測定した（１条件当たりｎ＝３の測定、１回の独立実験）。データをビヒクルコントロールに対する％として示す（平均±ＳＤ）。
【０１６９】
図７は実施例Ｉ−６に関する−ＡβＯ処理の４８時間前に添加した場合のＡβＯ処理マウス一次ニューロンモデルにおける奇数個の炭素原子を有する異なる脂肪酸の神経保護効果
マウス一次皮質ニューロンを、奇数個の炭素を有する異なる脂肪酸１μＭの非存在下又は存在下にて、ビヒクル又は１μＭのＡβＯと４８時間インキュベートした。次いで、ＡβＯ（１μＭのＡβ１−４２オリゴマー）又はビヒクルを２４ｈ添加した。ＡβＯ−誘発神経毒性をＭＴＴアッセイを用いて評価した。データをビヒクルコントロールに対する％として示す（平均±ＳＤ）。
【０１７０】
図８は実施例Ｉ−７に関する−化合物Ｃをカンプトテシン処理の４８時間前に添加した場合のカンプトテシン処理マウス一次ニューロンにおける化合物Ｃの神経保護効果
マウス一次ニューロンを、毒素処理の４８時間前に添加した異なる濃度の化合物Ｃの非存在下又は存在下にて、ビヒクル又は毒素とインキュベートした。毒素の添加後、細胞を２４ｈさらにインキュベートした。
【０１７１】
図９（図９ａ、９ｂ、９ｃ及び９ｄ）は実施例Ｉ−８に関する−Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅにおける加齢誘発タンパク質凝集体における化合物Ｃ及びハーブＢ抽出物の効果
図９ａ：  ハーブＢ（１０μｇ／ｍｌ）又は化合物Ｃ（３０μＭ）で処理した又は非処理の若細胞（ａ  ｙｏｕｎｇ  ｃｅｌｌ）又は老細胞（ｏｌｄ  ｃｅｌｌｓ）の典型的な画像。上側のパネルは、フルオレセントブライトナー２８で染色した細胞のＺ−合成（ｚ−ｓｅｒｉｅｓ  ｓｔａｃｋｓ）の最大投影であり、芽痕を表すためにＤＡＰＩチャンネル（ＤＡＰＩ  ｃｈａｎｎｅｌ）でイメージ化した。下側のパネルは、Ｈｓｐ１０４−ＧＦＰを発現する同じ細胞の単焦点平面像であり、ＧＦＰチャンネル（ＧＦＰ  ｃｈａｎｎｅｌ）でイメージ化した。矢印はＨｓｐ１０４−ＧＦＰフォーカスを指す。
【０１７２】
図９ｂ：  すべての試験条件で得られた老細胞の老化の定量化。指数関数的増殖培養により得られた若細胞は、平均老化度（ａｎ  ａｖｅｒａｇｅ  ａｇｅ）が０．３８３±０．５９５２であった。分析した細胞の数は７３から３４２の幅がある。
【０１７３】
図９ｃ：  Ｈｓｐ１０４−ＧＦＰフォーカスを有する細胞のパーセンテージ。細胞は同じ照明条件を用いて撮影した。撮影したすべての老細胞を含めた（７５から９４細胞の間の範囲）。すべての焦点面（ｆｏｃａｌ  ｐｌａｎｅｓ）を検査した。平均±ＳＤ。Ｐ値は、ビヒクルのみの場合に対して、分散分析（ＡＮＯＶＡ）により調整したｐ値である。
【０１７４】
図９ｄ：  Ｈｓｐ１０４−ＧＦＰ濃度の代理としての細胞中のＨｓｐ１０４−ＧＦＰの平均蛍光強度。平均±ＳＤ。Ｐ値は、ビヒクルのみの場合に対して、分散分析（ＡＮＯＶＡ）により調整したｐ値である。
【０１７５】
図１０は実施例ＩＶ−１に関する−ハーブＢ抽出物をＡβＯ処理の４８時間前に添加した場合の、ＡβＯ処理したマウス一次ニューロンにおけるハーブＢ抽出物の神経保護効果
マウス一次皮質ニューロンを、ビヒクル、０．０５μＭのＤＨＡ（ポジティブコントロールとして使用）又は異なる濃度のハーブＢ抽出物と４８ｈプレインキュベートした。次いで、皮質ニューロンを、ビヒクル（図１０、左）又は１μＭのＡβＯ（図１１、右）で２４ｈ処理し、細胞生存度をＭＴＴアッセイを用いて測定した（１条件当たりｎ＝３の測定、１回の独立実験）。データをビヒクルコントロールに対する％として示す（平均±ＳＤ）。
【０１７６】
図１１は実施例ＩＶ−１に関する−ハーブＢ抽出物の神経保護効果−ニューロンの顕微鏡画像
左：ビヒクルコントロールを４８時間添加し、次いで、ＡβＯコントロールを２４時間添加；右：ハーブＢ抽出物を３２ｎｇ／ｍＬにて４８時間添加し、次いで、ＡβＯを２４時間添加。
【０１７７】
図１２は実施例ＩＶ−２に関する−ハーブＢ抽出物をＡβＯ処理と同時に又は３若しくは６時間後に添加した場合の、マウス一次ニューロンにおけるハーブＢ抽出物の神経保護、抗アポトーシス及び神経救済効果
マウス一次皮質ニューロンを、０ｈ（Ｔ０）に、ビヒクル又は１μＭのＡβＯで処理した。異なる濃度のハーブＢ抽出物又は０．１μＭのＨＮＧ（０．１μＭ、ポジティブコントロールとして使用）を、ＡβＯと同時に０ｈ（Ｔ０）に、ＡβＯの後、３ｈ（Ｔ３）又は６ｈ（Ｔ６）に添加した。次いで、皮質ニューロンを２４ｈインキュベートし、細胞生存度をＭＴＴアッセイを用いて測定した（１条件当たりｎ＝３の測定、１回の独立実験）。データをビヒクルコントロールに対する％として示す（平均±ＳＤ）。
【０１７８】
図１３ａ、１３ｂ、１３ｃは実施例ＩＶ−３に関する−ハーブＢ抽出物をＡβＯ処理と同時に又は３若しくは６時間後に添加した場合の、ＡβＯ処理したヒト人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）におけるハーブＢ抽出物の神経保護、抗アポトーシス及び神経救済効果
ｉＰＳＣを、０ｈ（Ｔ０）に、ビヒクル又は１μＭのＡβＯで処理した。異なる濃度のハーブＢ又は０．１μＭのＨＮＧ（ポジティブコントロールとして使用）を、ＡβＯと同時に０ｈ（Ｔ０）に、ＡβＯの後、３ｈ（Ｔ３）又は６ｈ（Ｔ６）に添加した。次いで、２４ｈインキュベートし、細胞生存度をＮＳＥ  ＥＬＩＳＡアッセイを用いて測定した。データをビヒクルコントロールに対する％として示す（平均±ＳＤ）。
【０１７９】
図１４ａ、１４ｂ、１４ｃ、１４ｄ、１４ｅ、１４ｆ、１４ｆは実施例ＩＶ−４に関する−ハーブＢ抽出物を毒素処理の３時間後に添加した場合の、複数のニューロン毒素で処理したマウス一次ニューロンモデルにおけるハーブＢ抽出物の神経保護、抗アポトーシス及び神経救済効果
皮質ニューロンを、０ｈ（Ｔ０）に、ビヒクル又は複数のニューロン毒素で処理した。異なる濃度のハーブＢ又は０．１μＭのＨＮＧ（０．１μＭ、ポジティブコントロールとして使用）を毒素処理後３ｈ（Ｔ３）に添加した。次いで、皮質ニューロンを２４ｈインキュベートし、細胞生存度をＭＴＴアッセイを用いて測定した（１条件当たりｎ＝３の測定、１回の独立実験）。データをビヒクルコントロールに対する％として示す（平均±ＳＤ）。
【０１８０】
図１５ａ及び図１５ｂは実施例ＩＶ−５に関する−ハーブＢ抽出物を毒素処理の４８時間前又は３時間後に添加した場合の、Ｈ２Ｏ２処理したマウス一次ニューロンモデルにおけるハーブＢ抽出物の神経保護、抗アポトーシス及び神経救済効果
図１５ａ：  マウス一次皮質ニューロンを、ビヒクル又は０．２５ｍＭのＨ２Ｏ２で処理した。Ｈ２Ｏ２処理の３時間後、異なる濃度のハーブＢ又はＴｒｏｌｏｘ（１ｍＭ、ポジティブコントロールとして使用）を皮質ニューロン中に添加して、２４ｈまでインキュベートした。細胞生存度をＭＴＴアッセイを用いて測定した（１条件当たりｎ＝３の測定、１回の独立実験）。データをビヒクルコントロールに対する％として示す（平均±ＳＤ）。
【０１８１】
図１５ｂ：  マウス一次皮質ニューロンを、ビヒクル又は異なる濃度のハーブＢ又はＴｒｏｌｏｘ（１ｍＭ、ポジティブコントロールとして使用）で４８時間処理した。次いで、皮質ニューロンを０．２５ｍＭのＨ２Ｏ２で処理しながら、合わせて２４ｈインキュベートし、細胞生存度をＭＴＴアッセイを用いて測定した（１条件当たりｎ＝３の測定、１回の独立実験）。データをビヒクルコントロールに対する％として示す（平均±ＳＤ）。
【０１８２】
図１６は実施例ＩＶ−６に関する−ハーブＢ抽出物をカンプトテシン処理の４８時間前に添加した場合の、カンプトテシン処理マウス一次ニューロンにおけるハーブＢ抽出物の神経保護、抗アポトーシス及び神経救済効果
マウス一次ニューロンを、カンプトテシン処理の４８時間前に添加した異なる濃度のハーブＢの非存在下又は存在下にて、ビヒクル又は毒素とインキュベートした。カンプトテシンの添加後、細胞を２４ｈさらにインキュベートした。データをビヒクルコントロールに対する％として示す（平均±ＳＤ）。
【０１８３】
実験の部
略語及び定義
ＡβＯ            アミロイド−βオリゴマー
ＤＨＡ            ドコサヘキサエン酸
ＨＮＧ            ヒューマニン
ｉＰＳＣ          人工多能性幹細胞
ＭＴＴ            ３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド
ＮＳＥ            ニューロン特異的エノラーゼ
ＥＬＩＳＡ        酵素結合免疫吸着アッセイ
ｓＡＰＰα        分泌アミロイド前駆体タンパク質−α
ＳＤ              標準偏差
ＳＢＣ００３      化合物Ｃ、トリペンタデカノイン（ＣＡＳ  Ｎｏ．：７３７０−４６−９）
ＳＢＣ００２      ハーブＢ
ＳＢＣ００１      ＳＢＣ００２（すなわちハーブＢ）及びＳＢＣ００３（すなわち化合物Ｃ）を含む薬草混合物
【０１８４】
化合物Ｃ（ＳＢＣ００３）の歴史
本発明の態様の１つは、「ＳＢＣ００３」とも呼ばれる態様（１４）の化合物に関する。この化合物は、ハーブＢ、すなわちＯｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍであるＳＢＣ００２から最初に発見された。Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍは適宜な熱帯及び亜熱帯環境において世界中に分布している。
【０１８５】
ＳＢＣ００３抽出法の例：
ＳＢＣ００３を下記のようにＳＢＣ００２から分離した：
１．１  ５０ｇの乾燥ＳＢＣ００２を、４倍の体積の９５％工業用エタノールを用いて室温で３回浸漬抽出し、さらに減圧下で濃縮して、エタノール抽出物Ａ（推定１０ｇ）を得る。
１．２  酢酸エチル（２Ｌ）を用いてエタノール抽出物Ａを４回抽出し、さらに減圧下で濃縮して、酢酸エチル抽出物Ｂ（推定１０ｇ）を得る。
１．３  シリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：アセトン  ２０：１から１：１の勾配で溶出）を用いて、酢酸エチル抽出物ＢからバンドＣ１を得る（推定０．１ｇ）を得る。
１．４  シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール  ３０：１から１０：１の勾配で溶出）により、Ｃ１ストリップからＣ１Ｉストリップを得る。
１．５  薄層クロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール  ９：１）により、Ｃ１Ｉストリップから下記の化学構造を有するＳＢＣ００３（推定０．０２〜０．１ｇ）を得る：
【０１８６】
【化３】
2019518034.tif 000004
【０１８７】
化学式はＣ４８Ｈ９２Ｏ６であり、本明細書においては、化合物Ｃ、ＳＢＣ００３、トリペンタデカノインと命名され、１，２，３−プロパントリイルトリペンタデカノエート、１，２，３−プロパントリイルトリペンタデカノエート又は１，２，３−トリペンタデカノイルグリセロールとしても知られている。分子量は７６５．２４ｇ／ｍｏｌである（態様（１４）を参照されたい。）。
【０１８８】
化合物Ｃ（ＳＢＣ００３）に対する細胞実験の実施例（Ｉ）
化合物Ｃの実施例Ｉ−１
ＡβＯ処理の４８時間前に添加した場合の化合物Ｃ（トリペンタデカノイン、ＳＢＣ００３）のマウス一次ニューロンモデルにおける効果
この試験の目的は、イン  ビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）ニューロンモデルにおいて化合物がＣがニューロン死を救済するかどうかを決定することである。この目的のために、Ａβ１−４２オリゴマー（ＡβＯ）を暴露したマウス一次皮質ニューロンを用いて、化合物Ｃの神経保護効果を６濃度で調べた。β−アミロイドペプチドは種々の病理変化を誘引し、最終的にＡＤを含む複数の神経疾患において神経機能障害及び変性を引き起こす（Ｄｅｓｈｐａｎｄｅら、Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ、２００６；２６（２２）：６０１１−６０１８）。
【０１８９】
１６−１７日齢の胚からの皮質ニューロンをＣ５７ＢＬ６／Ｊマウス胎児から準備する。要約すると、１．５μｇ／ｍＬのポリオルニチン（Ｓｉｇｍａ）でプレコートした４８ウェルプレートに解離させた皮質細胞を播いた（５０．０００細胞／ウェル）。ホルモン、タンパク質及び塩類を添加した無血清合成ダルベッコ改変イーグル／Ｆ１２培地（ａ  ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ  ｄｅｆｉｎｅｄ  Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ｅａｇｌｅ’ｓ／Ｆ１２  ｍｅｄｉｕｍ）中で細胞を培養した。加湿６％ＣＯ２雰囲気下、３５℃にて培養を続けた。マウス皮質ニューロンをビヒクル又は異なる濃度の化合物Ｃと４８ｈプレインキュベートした後、１．０μＭのＡβＯに２４ｈ暴露した。ＡβＯ−誘発神経毒性をＭＴＴアッセイを用いて評価した。
【０１９０】
予測通りに、皮質ニューロンを１．０μＭのＡβＯと２４ｈインキュベートすることにより、細胞生存度が４８．６±１．４％まで減少した。ＤＨＡ（０．０５μＭ、ポジティブコントロール）はＡβＯ−誘発ニューロン死を減少させ、残った細胞の生存度はコントロールの８２．０±２．６％であった。これらのコントロールデータは、ｉ）  予測通りに、ＤＨＡはニューロンを保護し、かつ、ｉｉ）  ＤＨＡによる前処理により、ＡβＯを暴露した細胞の保護が成されることを示しており、本試験系の正しさを実証するものである。
【０１９１】
ニューロンを異なる濃度の化合物Ｃと４８ｈプレインキュベートした後、１μＭのＡβＯで２４ｈ処理した。その結果、異なる濃度の化合物Ｃの存在下において、用量依存的神経保護効果が観察された（図１、右及び図２）。最大神経保護効果は１００％であり、３２０ｎＭに相当する希釈の懸濁液におけるものであった（１１１．９±１．５％の細胞生存度）。ＥＣ５０は約６６ｎＭであると考えられる。
【０１９２】
ニューロンを異なる濃度の化合物Ｃのみと４８ｈプレインキュベートすると、細胞生存度がより高くなる傾向があり、１ｎＭの化合物Ｃで細胞生存度が１１６．６±３．７％まで上昇した（図１、左）。化合物Ｃは保存溶液に完全には溶解しないことに留意されたい。
【０１９３】
結論として、上記データは、化合物ＣがＡβＯ−誘発神経毒性に対する強力な保護を提供することを示唆する。化合物Ｃの神経成長刺激効果が観察される。
【０１９４】
化合物Ｃの実施例Ｉ−２
マウス一次ニューロンモデルにおける軸索成長に対する化合物Ｃ（トリペンタデカノイン）の効果
この試験の目的は、マウス一次皮質ニューロンにおける異なる濃度の化合物Ｃの神経栄養効果を試験することである。
【０１９５】
実施例Ｉ−１に記載の通りに、１６−１７日齢の胚からの皮質ニューロンをＣ５７Ｂｌ６／Ｊマウス胎児から準備する。９６ｈインキュベートした後に軸索の長さを記録する。要約すると、細胞を氷冷ＰＢＳで洗浄し、冷メタノールで固定する。固定に続き、細胞をＭＡＰ２タンパク質を検出する特異抗体を用いて免疫標識する。ＭＡＰ２に対する抗体は、神経細胞、それらの軸索及びニューロンの樹状突起に対する優れたマーカーである。軸索の長さを定量化するためには、倒立顕微鏡を用いて標識細胞の６つの独立した像をとらえる。細胞の写真をＮｅｕｒｏｎ−Ｊソフトウェアで解析し、軸索の長さを手動で記録する。少なくとも１００個の独立したニューロンを処理する。データを平均軸索長（μｍ）として表す（平均±ＳＤ）。ビヒクル処理細胞と化合物で処理した細胞の統計的差異をｔ検定を用いて決定する。
【０１９６】
予測通りに、ｓＡＰＰα（ポジティブコントロール）はニューロンの軸索伸長を強力に刺激し、ビヒクルコントロールの１６５．９６±９０．１８μｍに対し２６４．６３±１５７．５１μｍであった（ｐ＜０．０００１）；一方、化合物Ｃはニューロンの軸索伸長を強力に刺激し、ビヒクルコントロールに対し１００００ｎＭの濃度で３０４．２７±１４９．６０μｍ（ビヒクルコントロールに対しｐ＜０．０００１）；ビヒクルコントロールに対し１０００ｎＭの濃度で１９９．９３±１０１．１７μｍ（ビヒクルコントロールに対しｐ＜０．０５）であった（図３）。
【０１９７】
要約すると、化合物Ｃ（トリペンタデカノイン）は、マウス一次ニューロンモデルにおいて、有意な軸索成長効果及び神経栄養効果を示した。
【０１９８】
化合物Ｃの実施例Ｉ−３
Ａβ０処理と同時に又はＡβ０処理後３及び６時間後に添加した場合の化合物Ｃ（トリペンタデカノイン）のマウス一次ニューロンモデルにおける効果
この試験の目的は、イン  ビトロＡβＯ誘発ニューロン死モデルにおいて化合物Ｃが神経保護、抗アポトーシス及び神経救済効果を示すかどうかを決定することである。この目的のために、Ａβ１−４２オリゴマー（ＡβＯ）を暴露したマウス一次皮質ニューロンを用いて、化合物Ｃの神経保護効果を６濃度で調べた。救済効果又は抗アポトーシス効果を特定するために、化合物を異なる時点に（ＡβＯと同時にＴ０に、及びＡβＯの後Ｔ３又はＴ６に）添加した。
【０１９９】
実施例Ｉ−１に記載の通りに、１６−１７日齢の胚からの皮質ニューロンをＣ５７Ｂｌ６／Ｊマウス胎児から準備する。
【０２００】
マウス皮質ニューロンを１．０μＭのＡβＯに２４ｈ暴露した。ＡβＯ−誘発神経毒性をＭＴＴアッセイを用いて評価した。予測通りに、皮質ニューロンを１．０μＭのＡβＯと２４ｈインキュベートすることにより、細胞生存度が、プレート１、２及び３でそれぞれ５０．９±２．０％、５１．３±２．０％及び５１．７±４．２％まで減少した（図４）。
【０２０１】
予測通りに、Ｔ０で添加したヒューマニンペプチド（ＨＮＧ、ヒューマニンペプチドのＳ１４Ｇ変異体、ポジティブコントロール）は、ＡβＯ−誘発ニューロン死を著しく減少させ、残った細胞の生存度はコントロールの９１．６±２．１％であった（図４）。ＡβＯ後３又は６ｈに添加した場合には、ＨＮＧは細胞死を予防せず、これは過去のデータと一致した。これらのコントロールデータは、予測通りに、ＨＮＧはＡβＯと同時に添加した場合にのみ神経細胞を保護することを示しており、本試験系の正しさを実証するものである。
【０２０２】
Ａβ０と同時（Ｔ０）、Ａβ０後３ｈ（Ｔ３）又はＡβ０後６ｈ（Ｔ６）に添加した異なる濃度の化合物Ｃでニューロンを処理した。その結果、すべての実験条件（すなわちＴ０、Ｔ３及びＴ６）で、化合物Ｃは用量依存的神経保護効果を示した。ＡβＯと同時に添加した場合、化合物Ｃは１０００ｎＭの濃度でＡβＯ−誘発細胞死を予防した（生存度９４．５±４．６％）。さらに、ＡβＯ後３ｈに３２０及び１０００ｎＭの濃度で添加した場合（それぞれ６５．３±２．６％及び７６．６±２．９％の生存度）、ＡβＯ後６ｈに１０００ｎＭの濃度で添加した場合（生存度６２．４±３．５％）、化合物ＣはＡβＯ−誘発細胞死から保護した（図４）。
【０２０３】
神経保護及び抗アポトーシス効果のパーセンテージは次のように規定した：（化合物Ｃ群のニューロン生存度−毒素処理群のニューロン生存度）／（１００−毒素処理群のニューロン生存度）×１００％。化合物Ｃの神経保護及び抗アポトーシス効果の％は、１０００ｎＭで、Ｔ０、Ｔ３又はＴ６においてそれぞれ８８．７％、５２．０％、２２．３％である（図４）。
【０２０４】
要約すると、上記データは、化合物ＣがＡβＯ−誘発神経毒性に対する強力な神経保護、抗アポトーシス及び神経救済効果を提供することを示唆する。化合物Ｃは、ヒューマニンより強力にＡβＯ−誘発ニューロン死を救済する点で、ヒューマニンから差別化される。
【０２０５】
化合物Ｃの実施例Ｉ−４
化合物Ｃを同時に又はＡβ０処理後３及び６時間後に添加した場合のＡβ０処理ヒト人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）における化合物Ｃ（トリペンタデカノイン）の効果
Ａβ１−４２オリゴマー（ＡβＯ）に暴露されたヒトｉＰＳＣ由来ニューロンのニューロン死を化合物Ｃが救済するか否かを調べる。細胞モデルにおいてＡβＯはニューロン死を劇的に誘発し、これは、特異的ＥＬＩＳＡアッセイを用いてニューロン特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）のレベルによりモニターすることができる。救済効果を確認するために化合物Ｃを異なる時点（同時及びＡβＯ後）に添加する。
【０２０６】
細胞（ＨＩＰ−Ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ、ＧｌｏｂａｌＳｔｅｍ、カタログ番号ＧＳＣ−４３１２、ロット番号２００１０２６０）を９６ウェルプレートに１ウェル当たり６０．０００細胞の密度で播き、培養する。実験前に細胞を加湿５％ＣＯ２雰囲気下、３７℃にて５週間成熟させ、維持した。
【０２０７】
Ａβ０と同時（Ｔ０）、Ａβ０後３ｈ（Ｔ３）又はＡβ０後６ｈ（Ｔ６）に添加した異なる濃度（すなわち、１０、１００、１０００及び１００００ｎＭ）の化合物Ｃの非存在下又は存在下にて、細胞をビヒクル又は１μＭのＡβＯとインキュベートする。細胞を１ウェル当たり１００μＬの最終体積で２４ｈインキュベートする。ポジティブコントロールとして、０．１μＭのＨＮＧ（すなわちヒューマニンペプチドのＳ１４Ｇ変異体）の存在下で細胞を同様に処理する。加えて、ニューロンの損失を、供給者の推奨（ＣｌｏｎｅＣｌｏｕｄ、カタログ番号ＳＥＡ５３７Ｈｕ）に従ってＥＬＩＳＡアッセイを用いて、ニューロン特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）の検出によりモニターする。各実験条件当たり計３データを得る。
【０２０８】
ヒトｉＰＳＣを１．０μＭのＡβＯに２４ｈ暴露した。ＡβＯ−誘発神経毒性をＮＳＥアッセイを用いて評価した。予測通りに、ニューロンを１，０μＭのＡβＯと２４ｈインキュベートすることにより細胞生存度が減少し、プレート１、２及び３についてそれぞれ４９．７±５．５％、３７．５±３．０％及び４６．９±１．９％であった。
【０２０９】
予測通りに、Ｔ０に添加したヒューマニンペプチド（ＨＮＧ、ポジティブコントロール）はＡβＯ−誘発ニューロン死を著しく減少させ、ニューロン生存度はコントロールの８５．３±５．６％であった。ＡβＯ後３又は６ｈに添加した場合は、ＨＮＧは細胞死を予防しなかった。これらのコントロールデータは：ｉ）  予測通りに、ＨＮＧはＡβＯと同時に添加した場合にのみ神経細胞を保護し、かつ、ｉｉ）  ＡβＯを暴露した細胞の救済が成されることを示しており、本試験系の正しさを実証するものである（図５）。
【０２１０】
Ａβ０と同時（Ｔ０）、Ａβ０後３ｈ（Ｔ３）又はＡβ０後６ｈ（Ｔ６）に添加した異なる濃度の化合物ＣでＩＰＳＣを処理した。結果は次の通りであった：すべての実験条件（すなわちＴ０、Ｔ３及びＴ６）で、化合物Ｃは用量依存的神経保護、神経救済及び抗アポトーシス効果を示した。ＡβＯと同時に添加した場合、化合物Ｃは１００００ｎＭの濃度でＡβＯ−誘発細胞死を予防した（細胞生存度７６．７±２．７％）。ＡβＯ後３ｈに１００００ｎＭの濃度で添加した場合（細胞生存度９４．２±７．１％）、ＡβＯ後６ｈに１００００ｎＭの濃度で添加した場合（細胞生存度８８．８±１．３％）、化合物ＣはＡβＯ−誘発細胞死から保護した。化合物Ｃの神経保護及び抗アポトーシス効果の％は、１００００ｎＭで、Ｔ０、Ｔ３又はＴ６においてそれぞれ５３．７％、９０．８％、７８．９％である（図５）。
【０２１１】
結論として、上記データは、ｉＰＳＣ由来ヒトニューロンにおいて、化合物ＣがＡβＯ−誘発神経毒性に対する強力な保護、神経救済及び抗アポトーシス効果を提供することを示唆する。化合物Ｃは、この細胞モデルにおいてヒューマニンより強力にＡβＯ−誘発毒性を阻害するため、ヒューマニンから差別化される。
【０２１２】
化合物Ｃの実施例Ｉ−５
複数のニューロン毒素で処理したマウス一次ニューロンモデルにおける化合物Ｃ（トリペンタデカノイン）の効果−毒素処理後３時間に添加した場合
複数の毒素によるストレスを印加されたイン  ビトロモデルにおいてニューロン死を化合物Ｃが救済するか否かを調べる。異なる濃度の化合物Ｃの神経保護効果を異なる種類の毒素を暴露したマウス一次皮質ニューロンを用いて調べた。救済効果を確認するために化合物Ｃを毒素後３時間（Ｔ３）に添加した。細胞を毒素と２４ｈインキュベートした後、ＭＴＴアッセイを用いて細胞生存度を調べた。
【０２１３】
実施例Ｉ−１に記載の通りに、１６−１７日齢の胚からの皮質ニューロンをＣ５７Ｂｌ６／Ｊマウス胎児から準備する。
【０２１４】
安定なオリゴマー性又は原線維性調製物を従来のプロトコルに従って調製する。異なる毒素の供給元は下記の通りである：
−  ＢａｃｈｅｍのＡβ１−４２及びＡβ２５−３５（問い合わせ番号Ｈ１３６８及びＨ１１９２）。
−  Ｅｖｏｔｅｃのヒトタウ（２Ｎ４Ｒ）タンパク（Ｔａｕ（２Ｎ４Ｒ）  ｐｒｏｔｅｉｎ）。
−  ｒ−Ｐｅｐｔｉｄｅのヒトα−シヌクレイン（問い合わせ番号０１０１００８６０３）。
−  Ｂａｃｈｅｍのアミリン（問い合わせ番号Ｈ−７９０５．１０００）。
−  Ｂａｃｈｅｍのプリオンタンパク１１８−１３５（それぞれ問い合わせ番号Ｈ−４２０６）。
【０２１５】
全ての処理は４８ウェルプレート中でＤＩＶ  ６／７にて３重に行う。毒素の３ｈ後（Ｔ３）に添加した異なる濃度の化合物Ｃ（１００、１０００、１００００ｎＭ）の非存在下又は存在下にて、細胞をビヒクル又は（示した最終濃度の）毒素とインキュベートした。細胞を１ウェル当たり１４０μＬの最終体積で２４ｈインキュベートした。
【０２１６】
使用したポジティブコントロール（Ｔ３に添加）は０．１μＭのＨＮＧ（ヒューマニンペプチドのＳ１４Ｇ変異体）であり、これは周知の抗アポトーシスペプチドである。
【０２１７】
細胞を２４ｈインキュベートした後、ＭＴＴアッセイを用いて細胞生存度をモニターした。要約すると、細胞をＭＴＴ（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｍ２１２８−１０Ｇ、ロット番号ＭＫＢＨ７４８９Ｖ）と３５℃にて１ｈインキュベートした。そのために、（ＰＢＳ中に溶解した）５ｍｇ／ｍＬのＭＴＴ、１４μＬを各ウェルに添加する。インキュベーション後、培地を除き、細胞を１５０μＬのＤＭＳＯで１０分間溶解し、遮光した。ホルマザンが完全に溶解した後、Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ  ＢＭＧ  Ｌａｂｔｅｃｈ  Ｆｌｕｏｓｔａｒ  Ｏｍｅｇａを用いて５７０ｎｍにおける吸収を記録する。
【０２１８】
神経保護及び抗アポトーシス効果のパーセンテージは次のように規定した：（化合物Ｃ群のニューロン生存度−毒素処理群のニューロン生存度）／（１００−毒素処理群のニューロン生存度）×１００％。
【０２１９】
−  化合物Ｃは、Ａβ１−４２フィブリル（１００００ｎＭにて２２．３％）（図６ａ）及びＡβ２５−３５フィブリル（１００００ｎＭにて３２．１％）（図６ｂ）に対して抗アポトーシス及び神経保護効果を示した。
【０２２０】
−  化合物Ｃは、ヒトタウオリゴマー−誘発毒性（１００００ｎＭにて４６．８％）（図６ｃ）及びタウフィブリル−誘発毒性（１００００ｎＭにて２３．１％）（図６ｄ）に対して抗アポトーシス及び神経保護効果を示した。
【０２２１】
−  化合物Ｃは、ヒトアルファ−シヌクレインオリゴマー−誘発毒性に対して（図６ｅ）（１００００ｎＭにて４５．８％）及びアルファ−シヌクレインフィブリルに対して（図６ｆ）（１００００ｎＭにて３４．０％）抗アポトーシス及び神経保護効果を示した。
【０２２２】
−  化合物Ｃは、ヒトアミリンに対して、オリゴマー（１０００、１００００ｎＭにてそれぞれ３０．８％、３７．３％）（図６ｇ）及びフィブリル（１０００、１００００ｎＭにてそれぞれ４５．３％、５２．６％）（図６ｈ）アッセイの両方において、抗アポトーシス及び神経保護効果を示した。
【０２２３】
−  化合物Ｃは、プリオンオリゴマー−誘発毒性に対して抗アポトーシス及び神経保護効果（１００００ｎＭにてそれぞれ２３．５％、５３．８％）（図６ｉ）を示した。
【０２２４】
結論として、データは、化合物Ｃが、マウス一次皮質ニューロンにおいて、Ａβ１−４２フィブリル−、Ａβ２５−３５フィブリル−、ヒトタウオリゴマー−、ヒトタウフィブリル−、ヒトアルファ−シヌクレインオリゴマー−、アルファ−シヌクレインフィブリル−、ヒトアミリンオリゴマー−、ヒトアミリンフィブリル−及びプリオンオリゴマー−誘発神経毒性に対して強力な保護、神経救済及び抗アポトーシス効果を提供することを示唆する。化合物Ｃは、これらの細胞モデルにおいてヒューマニンより強力に複数毒素−誘発ニューロン死を阻害するため、ヒューマニンから差別化される。
【０２２５】
奇数個の炭素を有する脂肪酸の実施例Ｉ−６
ＡβＯ処理マウス一次ニューロンモデルにおける奇数個の炭素を有する異なる脂肪酸の効果-ＡβＯ処理前４８時間に添加した場合
この試験の目的は、奇数個の炭素を有する脂肪酸の神経保護効果に何らかの違いがあるかどうかを、ＡβＯを暴露したマウス一次皮質ニューロンを用いて試験することである。予防効果を確認するために、化合物を１μＭのＡβＯで処理する４８時間前に添加した。細胞をＡβＯと２４ｈインキュベートした後に、細胞生存度をＭＴＴアッセイを用いて調べた。
【０２２６】
実施例Ｉ−１に記載の通りに、１６−１７日齢の胚からの皮質ニューロンをＣ５７Ｂｌ６／Ｊマウス胎児から準備した。
【０２２７】
全ての処理は４８ウェルプレート中で３重に行った。ＡβＯの４８時間前に、示した最終濃度で添加した異なる脂質の非存在下又は存在下にて、細胞をビヒクル又は１μＭのＡβＯとインキュベートした。細胞を１ウェル当たり１４０μＬの最終体積でＡβＯと２４ｈインキュベートした。
【０２２８】
ポジティブコントロールとして、０．０５μＭのＤＨＡの存在下で細胞を同様に（ＡβＯの４８時間前）処理する。
【０２２９】
ＡβＯ処理後、ＭＴＴアッセイを用いて細胞生存度を測定した。要約すると、細胞をＭＴＴ（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｍ２１２８−１０Ｇ、ロット番号ＭＫＢＨ７４８９Ｖ）と３５℃にて１ｈインキュベートした。そのために、（ＰＢＳ中に溶解した）５ｍｇ／ｍＬのＭＴＴ、１４μＬを各ウェルに添加した。インキュベーション後、培地を除き、細胞を１５０μＬのＤＭＳＯで１０分間溶解し、遮光した。ホルマザンが完全に溶解した後、５７０ｎｍにおける吸収を記録した。
【０２３０】
マウス一次皮質ニューロンをビヒクル又は１μＭのＡβ１−４２オリゴマーに２４ｈ暴露した。ＡβＯ−誘発神経毒性をＭＴＴアッセイを用いて評価した。予測通りに、細胞をＡβＯと２４ｈインキュベートすることにより、生存度がコントロールの５９．９±１．７％に減少した（図７）。
【０２３１】
予測通りに、細胞を５０ｎＭのＤＨＡとプレインキュベートすることにより、ＡβＯ−誘発細胞死が予防された。実際に、５０ｎＭのＤＨＡと４８ｈプレインキュベートし、かつ、１μＭのＡβＯを暴露した一次ニューロンは、残った細胞の生存度がコントロールの９０．９±３．１％であった。
【０２３２】
要約すると、奇数個の炭素を有する脂質、ＧＧ０５、ＧＧ０７又はＧＧ０９と細胞を４８ｈプレインキュベートすると、０．０１及び０．１μＭで用量依存的神経保護効果を示し、１μＭで神経保護効果が失われた（図７）。
【０２３３】
選択された脂肪酸の名称及びコードは下記の通りであった：
【０２３４】
【表１】
2019518034.tif 000005
【０２３５】
化合物Ｃの実施例Ｉ−７
カンプトテシン処理マウス一次ニューロンにおける化合物Ｃの効果−カンプトテシン処理の４８時間前に添加した場合
異なる濃度の化合物Ｃの神経保護効果を、カンプトテシンを暴露したマウス一次皮質ニューロンを用いて調べた。カンプトテシンは、ＤＮＡ酵素であるトポイソメラーゼＩ（ｔｏｐｏ  Ｉ）を阻害する細胞毒性キノリンアルカロイドである。
【０２３６】
実施例Ｉ−１に記載の通りに、１６−１７日齢の胚からの皮質ニューロンをＣ５７Ｂｌ６／Ｊマウス胎児から準備した。
【０２３７】
カンプトテシンはＳｉｇｍａから入手する（問い合わせ番号Ｃ９９１１−（Ｓ）−（＋）−カンプトテシン）。
【０２３８】
マウス一次ニューロンを、毒素暴露の４８時間前に添加した異なる濃度の化合物Ｃの非存在下又は存在下にて、ビヒクル又は毒素とインキュベートした。１μＭのカンプトテシンの添加後、細胞を１ウェル当たり１４０μＬの最終体積で２４ｈさらにインキュベートした。
【０２３９】
予測通りに、細胞を１μＭのカンプトテシンと２４ｈインキュベートすることにより、細胞生存度がコントロールの５７．７±１．６％に減少した。カンプトテシン処理前に４８ｈプレインキュベートすると、化合物Ｃは用量依存的神経保護（ベル型曲線）を誘発し、１０及び１００ｎＭの用量で最大効果を示し、細胞生存度はそれぞれコントロールの７３．５±１．５％及び７３．４±５．９％であった。１０ｎＭ、１００ｎＭにおける化合物Ｃの神経保護及び抗アポトーシス効果はそれぞれ３７．３％、３７．２％である（図８）。
【０２４０】
結論として、データは、化合物Ｃが、カンプトテシンにより誘発されるニューロン死に対して保護を提供することを示唆する。
【０２４１】
化合物Ｃ（ＳＢＣ００３）及びハーブＢ（ＳＢＣ００２）の実施例Ｉ−８
Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅにおける加齢誘発タンパク質凝集体に対する化合物Ｃ（ＳＢＣ００３）及びハーブＢ（ＳＢＣ００２）の効果
背景：ほとんどの生物において、加齢は損傷しかつ異常に折りたたまれたタンパク質の蓄積と関連している。Ｔｈｏｍａｓ  Ｎｙｓｔｒｏｅｍのグループによるパイオニア的研究により、このことが出芽酵母にも当てはまることが確認された（Ａｇｕｉｌａｎｉｕら、２００３  １４；２９９（５６１３）：１７５１−３）。カルボニル化タンパク質が複製老母酵母細胞（ｒｅｐｌｉｃａｔｉｖｅ  ｏｌｄ  ｍｏｔｈｅｒ  ｙｅａｓｔ  ｃｅｌｌｓ）内に蓄積している。興味深いことに、これらのカルボニル化タンパク質はタンパク質ディスアグリガーゼ（ｔｈｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｄｉｓａｇｇｒｅｇａｓｅ）、Ｈｓｐ１０４を動員する。Ｈｓｐ１０４は、６量体の種々の細胞活動に関連するＡＴＰアーゼ（ＡＴＰａｓｅｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｄｉｖｅｒｓｅ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ）（ＡＡＡ＋）タンパク質及びトランスロカーゼ（ｔｒａｎｓｌｏｃａｓｅ）である（Ｓｗｅｅｎｙ  ＥＡ、Ｓｈｏｒｔｅｒ  Ｊ．、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．２０１６；４２８（９ＰｔＢ）：１８７０−８５）。Ｈｓｐ１０４は、ＡＴＰの加水分解を、可溶性プレアミロイドオリゴマーに補足されたタンパク質、変性タンパク質凝集体及び安定アミロイド又はプリオンコンフォーマーの分解及び再活性化に共役させる。ＨＳＰ１０４は、老細胞中における異常折り畳みタンパク質の凝集に起因して、内因的に生成される。
【０２４２】
目的：化合物Ｃ（ＳＢＣ００３）及びハーブＢ（ＳＢＣ００２）抽出物の作用機作を理解するために、出芽酵母系における加齢誘発タンパク質凝集体の形成及び維持に対する化合物Ｃ（ＳＢＣ００３）及びハーブＢ（ＳＢＣ００２）抽出物の効果を試験した。
【０２４３】
方法：老酵母細胞中では、加齢誘発タンパク質凝集体が一組の特異的なシャペロン及びコシャペロンを動員するため、顕微鏡で容易に可視化することができる。緑色蛍光タンパク質タグとの融合体（Ｈｓｐ１０４−ＧＦＰ）として内因的に発現したＨｓｐ１０４はこれらの細胞中にフォーカスを形成する（図９ａ）。
【０２４４】
加齢誘発Ｈｓｐ１０４−ＧＦＰのフォーカス形成に対する効果を試験するために、老細胞を入手し、化合物Ｃ（１μＭ、１０μＭ及び３０μＭ）、ハーブＢ（１０μｇ／ｍｌ）、エタノール（０．３％、ビヒクルのみ）の存在下、又は、いかなる処理も行わずに培養した。基本的な対数増殖により非処理の若細胞を得た。
【０２４５】
老化度は芽痕をフルオレセントブライトナー２８で染色することにより測定した。すべての条件下で、老細胞は同程度の老化度分布を有しており、平均老化度は１０世代（ｎ＞７３細胞）であった（図９ｂ）。
【０２４６】
非処理又はビヒクルのみで処理した老細胞のほとんどは１個のＨｓｐ１０４−ＧＦＰフォーカスを有していた（それぞれ、細胞の６８．２±３．７％及び５８．７±１０．６％）。細胞を１０μＭ又は３０μＭのいずれかの化合物Ｃ（ＳＢＣ００３）で処理すると、Ｈｓｐ１０４−ＧＦＰフォーカスを有する細胞の割合は有意に減少した（それぞれ、３７．５±６．０％及び３４．３±１３．７％、Ｐ＜０．００１）。１μＭの化合物Ｃで処理すると、Ｈｓｐ１０４−ＧＦＰフォーカスを有する細胞の割合は減少したが、この減少は統計的に有意ではなかった（４６．２±４．８％、Ｐ＞０．０５）。細胞をハーブＢ抽出物（ＳＢＣ００２）で処理すると、Ｈｓｐ１０４−ＧＦＰフォーカスを有する細胞の割合が有意に減少した（２９．７±５．５％、Ｐ＜０．０１）（図９ｃ）。
【０２４７】
Ｈｓｐ１０４は、タンパク質凝集体を中和（ｃｏｕｎｔｅｒａｃｔ）し、単タンパク質保管所（ａ  ｓｉｎｇｌｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｄｅｐｏｓｉｔ）に輸送するタンパク質群に属するため、老細胞におけるＨｓｐ１０４−ＧＦＰの強度をすべての条件で測定した。Ｈｓｐ１０４−ＧＦＰの強度は老細胞において若細胞よりもはるかに高かった。しかしながら、化合物Ｃ及びハーブＢはこの増大の度合いを減少させることから、これらの化合物に暴露された細胞中のＨｓｐ１０４−ＧＦＰ濃度はより低い（ｌｅｓｓ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄ）ことが示唆される。試験で用いた化合物Ｃの最大濃度（３０μＭ）及びハーブＢ処理と比べて、化合物Ｃ濃度がより低い場合（１及び１０μＭ）にＨｓｐ１０４−ＧＦＰ強度が高くなり、これは、Ｈｓｐ１０４−ＧＦＰフォーカスを有する細胞のパーセンテージに対するこれらの処理の効果と一致する（図９ｄ）。
【０２４８】
結論として、化合物Ｃ及びハーブＢ抽出物は、正常な酵母の加齢中に起こる加齢誘発タンパク質凝集の予防及び／又は解消に対して強力な効果を示した。
【０２４９】
機能性食品（ＳＢＣ００３）の実施例（ＩＩ）
化合物Ｃ（トリペンタデカノイン）は、特定の薬草中のみではなく、ヒト／動物の乳においても見いだされる天然の脂質である。効果的な治療のない不治の疾患を患う、実施例ＩＩに記載した患者らは、自由意思により、ＳＢＣ００３を含む機能性食品を要請した。
【０２５０】
機能性食品の実施例ＩＩ−１
本事例は４９歳の台湾人の女性に関するものであり、８年間、視神経萎縮と診断されており、盲目であった。第１日に、ＳＢＣ００３を含む機能性食品を摂取した時、視野がより鮮明で、より明瞭であると感じ、明確な黒と白のコントラストを有する物をよりよく区別することができた。気分が良いと感じ、手のひらと足に熱流を感じた。続けて、ＳＢＣ００３を含む機能性食品、約７ｍｇ／日を７日間摂取した。彼女は摂食時に目の前にある箸を見ることができ、器を洗う時に彼女の手を見ることができた。暗闇の中で光により敏感になったと感じた。手のひらと足が温かいと感じた。約１か月後、視野はより鮮明でより良くなった。
【０２５１】
機能性食品の実施例ＩＩ−２
本事例は４９歳の台湾人の男性に関するものであり、９年間、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）と診断されていた。彼はベッドに横たわったままであり、人口呼吸器の補助が必要であり、１本の指も動かすことができなかった。自力で呼吸できるのはせいぜい３０分／日であった。彼はＳＢＣ００３を含む機能性食品を約１０ｍｇ／日摂食した。約１カ月で自力で約５５分／日呼吸できるようになった。彼は背中に暖かいエネルギーを感じた。
【０２５２】
機能性食品の実施例ＩＩ−３
本事例は４８歳の中国人の男性に関するものであり、９年間、振戦、筋固縮、動作緩慢及び歩行困難を伴う原発性パーキンソン病と診断されていた。８年間、レボドパ及びトリヘキシフェニジルで治療をしたが、治療当初の効果は徐々に消失した。薬剤が無効なため、運動症状を緩和するために、３年前に脳深部刺激療法用微小電極を設置した。それでもなお、足の異常振戦、筋固縮、動作緩慢及び歩行困難の症状を示した。彼はＳＢＣ００３を含む機能性食品を約１０ｍｇ／日摂食した。約１週間後、足の異常振戦が約２週間の間改善した。その後諸事情により中断したが、中断後、約半月間再開し、症状は再び改善された。
【０２５３】
機能性食品の実施例ＩＩ−４
本事例は４９歳の台湾人の男性に関するものであり、肢痙攣を伴う小脳萎縮と診断され、ベッドの上で麻痺した状態で２４時間の介護補助が必要であった。微笑んだり話したりすることができず、他人と意思疎通ができなかった。話しかけられても何の表情もなかった。ＳＢＣ００３を含む機能性食品を約１０ｍｇ／日摂食した約１か月後、微笑みはじめ、顔に表情が現れ、話しかけられると話す傾向さえも現れた。
【０２５４】
機能性食品の実施例ＩＩ−５
本事例は１９５９年９月２２日生まれの中国人の男性に関するものである。２０１５年１２月に事故により１０ｍのビルから転落し、胸椎及び腰椎に重篤な脊柱骨折（ｓｅｖｅｒｅ  ｓｐｉｎａｌ  ｂｏｎｅｓ  ｆｒａｃｔｕｒｅｓ）を負った。当初、歩くことも座ることもできず、ベッドの上で麻痺した状態であり、下肢の感覚が無く、腰部に激痛があった。約６か月後、若干の改善が見られ、１回に１時間ほど座ることができるようになったが、他の症状は改善しなかった。ＣＴによる診断は以下の通りであった。「骨折線が後部皮質に達するＴ１１椎体（ｔｈｅ  Ｔ１１  ｖｅｒｔｅｂｒａｌ  ｂｏｄｙ）上終板（ｔｈｅ  ｓｕｐｅｒｉｏｒ  ｅｎｄ  ｐｌａｔｅ）の複雑破裂型圧迫骨折並びに高さの約４０−５０％の減少を伴う前部皮質の裂離骨折（ａｖｕｌｓｅｄ  ｆｒａｃｔｕｒｅ）であり、骨質（ｂｏｎｙ  ｍａｔｅｒｉａｌ）の後方侵入（ｒｅｔｒｏｐｕｌｓｉｏｎ）による、特にＴ１０−Ｔ１１円板（ｄｉｓｃ）レベルにおける脊柱管狭窄（ｔｈｅ  ｓｐｉｎａｌ  ｃａｎａｌ  ｓｔｅｎｏｓｉｓ）を伴う。」。
【０２５５】
ＳＢＣ００３を含む機能性食品を約２０ｍｇ／日摂食すると、ＳＢＣ００３摂取後第１日に背骨全体（特に腰部）に熱流を感じた。約１０日の間に下記の症状に大きな改善が見られた：１）  腰部痛がＳＢＣ００３摂取前の４０％に減少した；２）  ＳＢＣ００３摂取前に１回に１時間のみであったのに対し、１回に２時間まで座ることができるようになった。加えて、背骨部分に頻繁に暖かい流れを感じ、下肢の痙攣が以前より減少した。
【０２５６】
機能性食品の実施例ＩＩ−６
本事例は台湾人の女性に関するものであり、慢性腎不全を１０年間患い、この２〜３年間は血液透析療法（週３回）を受けている。尿が全く出ず、血清クレアチニンレベルは著しく高いままで、平均値が９．２１ｍｇ／ｄｌである。ＳＢＣ００３を含む機能性食品約１０ｍｇ／日〜２５ｍｇ／日を約１カ月摂食すると、約２カ月後、１日に１０ｍｌの尿が出；摂食量を５０−１００ｍｇ／日に増やして２〜３か月後には、１日に約２−３回、合わせて５０ｍｌの尿が出た。血清クレアチニンは８．８８、８．９７、８．５５、９．１２ｍｇ／ｄｌに減少し、平均値は８．８８ｍｇ／ｄｌであった。血中グルコースレベルも治療前の１３０〜１８０ｍｇ／ｄｌから７０−１０５ｍｇ／ｄｌに減少した。
【０２５７】
機能性食品の実施例ＩＩ−７
本事例は１９７４年９月１２日生まれの台湾人の男性に関するものであり、約２９年間、喘息と診断されている。寒気を感じた時、又は、早朝時、又は、冷水を飲んだ時、又は、階段を上る時には常に重篤な喘息が生じた。過去２９年間、喘息発作時には、副腎皮質ホルモン又は気管支拡張薬による治療を受けた。ＳＢＣ００３を含む機能性食品約５ｍｇを１又は２回摂食した後、症状が大幅に改善されたと感じた。大量の冷水を飲んだり、寒気を感じた時にも、喘息症状は誘引時においても起こらなかった。
【０２５８】
機能性食品の実施例ＩＩ−８
本事例は１９７７年７月４日生まれの台湾人の男性に関するものであり、約２０年間、喘息と診断されている。喘息は頻繁に起こり、喘息発作時には気管支拡張薬による治療を２週間に１度の頻度で受けた。ＳＢＣ００３を含む機能性食品約５ｍｇ／回を約数回摂食した後、喘息の症状は誘引時においても大幅に改善された。
【０２５９】
ハーブＢ（ＳＢＣ００２）の実施例（ＩＩＩ）
実施例ＩＩＩに記載の患者の治療に用いたＳＢＣ００２は、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｔｈｅｒｍａｌｅ、Ｏｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｐｅｔｉｏｌａｔｕｍ又はＯｐｈｉｏｇｌｏｓｓｕｍ  ｒｅｔｉｃｕｌａｔｕｍの選択部分の乾燥粉末の形態で調製された。
【０２６０】
ＳＢＣ００２で治療した患者の事例研究
実施例ＩＩＩ−１  事例ＳＢＣ００２−００１
１．  ２００２年時点の診断：視神経炎（左）
事例ＳＢＣ００２−００１は１９６６年９月２２日生まれの女性の患者に関するものである。２００２年に左目のかすみが初めて現れ、その後７日間ステロイドパルス療法を受けた。しかしながら、視力の改善は観られず、残存視力（ｒｅｓｉｄｕａｌ  ｖｉｓｉｏｎ）は２０ｃｍの距離で手を動かすのがわかる程度であった。四肢の衰弱はなかった。
【０２６１】
２．  ２００７年時点の診断：視神経炎（右）；視神経萎縮（左）
右目のかすみが２日間にわたって急性発症したため、２００７年３月２日にＣｈｉｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ（ＣＭＵＨ）に受け入れられた。相対的求心性瞳孔障害（Ｔｈｅ  Ｒｅｌａｔｉｖｅ  Ａｆｆｅｒｅｎｔ  Ｐａｐｉｌｌａｒｙ  Ｄｅｆｅｃｔ）（ＲＡＰＤ）サインは陽性であった。視神経炎が疑われた。ステロイドパルス療法を受けた。
【０２６２】
３．  ２００８年５月時点の診断：視神経萎縮（左）；視神経炎（右）、多発性硬化症と推測される；胸髄症
２００８年３月２６日のＲＮＦＬ  Ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ  Ａｖｅｒａｇｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓは４３．５１μｍ（ＯＳ）、７７．６０μｍ（ＯＤ）を示した；２００８年５月１９日のＲＮＦＬ  Ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ  Ａｖｅｒａｇｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓは検出不能（＜１０μｍ）（ＯＳ）、７２．３３μｍ（ＯＤ）であった。
【０２６３】
２００８年５月２４日、眼球運動により誘発される眼の痛みを伴う右目のかすみが５日間にわたって続いた。視神経炎（ＯＤ）の所見に基づき、ステロイドパルス療法が認められた。磁気モーター誘発電位（Ｍａｇｎｅｔｉｃ  Ｍｏｔｏｒ  Ｅｖｏｋｅｄ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ）（ＭＥＰ）試験により、左Ｃ５脊椎レベル上方の病変；右Ｃ５レベル及びＬ２脊椎レベル間の病変及び左右Ｌ２脊椎レベル下方の病変が示唆された。
【０２６４】
２００８年５月２７日、パターン及びゴーグル視覚誘発電位（ＶＥＰ）試験の両方（ｂｏｔｈ  ｐａｔｔｅｒｎ  ａｎｄ  ｇｏｇｇｌｅｓ  ｖｉｓｕａｌ  ｅｖｏｋｅｄ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ）において、左刺激によるＰ１００波は検出されず、右刺激によるＰ１００波については振幅減少を伴う持続性遅延が見られた。ＶＥＰにより、左側でより顕著な左右の視交叉前病変が示唆された。体性感覚誘発電位（ＳＳＥＰ）試験により、両上肢の末梢神経病変；左右のＣ５及びＬ２脊椎レベル間の病変；及び左Ｌ２脊椎レベル下方の病変が観察された。
【０２６５】
脳ＭＲＩは右視神経炎の診断と合致しており、いくらかの高信号が見られた。パルス療法の後、多発性硬化症が疑われた。視神経萎縮（ＯＳ）；視神経炎（ＯＤ）、多発性硬化症の推測；胸髄症の診断を受け２００８年５月３１日に退院した。退院後、プレドニゾロン５ｍｇ  ｂｉｄ；メコバラニン２５０ｍｇ  Ｑｄ；ビタミンＢ１２  ＱＩＤを含む薬剤治療を薦められた。
【０２６６】
４．  ２００８年８月時点の診断：多発性硬化症；再発右視神経炎；視神経萎縮の続発症を伴う以前からの左視神経炎；多発性硬化症関連ミエロパチー
２００８年８月１日、右眼の視力が１カ月間悪化した。パターンシフト法によるＶＥＰ試験：左又は右眼刺激のそれぞれにおいてＶＥＰ波が検出されなかった。ＭＳの所見に基づき、ステロイドパルス療法及びＩＦＮ−１ｂ療法が認められた。ステロイドパルス療法及びＩＦＮ療法を行い、症状が改善した。
【０２６７】
５．  ２００９年１月時点の診断：多発性硬化症（急性再発）；頚髄症；不眠症；神経因性膀胱。
２００９年１月１０日、右側の脱力を伴う頸部痛が３日間急性発症し、頸部脊髄炎の再発が疑われた。翌日、右脚の軽度の痙攣（ｅａｓｙ  ｓｐａｓｍ）及びしびれを伴う右腕の圧痛を感じ、次いで右側の脱力を訴えた。右腕でペンや箸を持つことが困難であり、歩く際に右脚を上げることが困難であり、階段を昇り降りすることが困難であった。ステロイドパルス療法を受けた後、頸部痛の緩和を感じたが、右側は脱力したままだった。
【０２６８】
６．  ２０１３年６月の皮質萎縮症の診断
２０１３年６月、脳ＭＲＩにより脳室及び脳溝の膨張が観られた。皮質萎縮症と診断された。
【０２６９】
７．  ２０１４年１月からのシェーグレン症候群の診断
２０１４年１月、両側盲の悪化の進行、眼のかすみ、易疲労感、四肢の感覚減退及び知覚異常並びに左前腕のかゆみのために、Ｔａｉｃｈｕｎｇ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ、Ｍｉｎｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｗｅｌｆａｒｅの神経外来診療部門（ＯＰＤ）において経過観察が行われた。シェーグレン症候群、湿疹と診断され、主としてゲニピン（硫酸ヒドロキシクロロキン）２００ｍｇ  ＢＩＤによる治療を受けた。
【０２７０】
８．  ２０１５年１２月２１日からＳＢＣ００２（ハーブＢ）治療を受けた。２０１５年１２月２１日前において両眼に重篤なかすみがあった。２０１５年１２月２１日、０．０１−０．０２ｇ／日の用量でＳＢＣ００２摂取を開始した。彼女は両眼の後側の強力なエネルギー場を報告した。
【０２７１】
最初の摂取後第５日に眼の前の自身の指を見ることができた。
【０２７２】
第１７日には、以前には見ることができなかった食事時の箸の動きを見ることができた。同日にＴａｉｃｈｕｎｇ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ、Ｍｉｎｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｗｅｌｆａｒｅを訪問し、（ゴーグル法による）ＶＥＰ試験により、左又は右眼刺激のそれぞれにおいて、Ｐ１００応答の遅延延長（ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ  ｌａｔｅｎｃｙ）及び波形の減衰が観られた（遅延の測定値：左＝１９０．３ｍｓ；右＝１９０．８ｍｓ）。眼底撮影法において明確な網膜症は観られなかった。
【０２７３】
第２７日には、３０ｃｍ以内の距離の白紙を見ることができ、昼間と夜間、通りの横断歩道の白黒パターン及びビルの輪郭を認識することができた。赤、白、黒及びオレンジ色を見ることができ；夕方に街灯を見ることができた。
【０２７４】
第３２日のＲＮＦＬ  Ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ  Ａｖｅｒａｇｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓは３２μＭの（ＯＳ）；３８μＭの（ＯＤ）を示した。
【０２７５】
第１２０日の脳ＭＲＩにおいてシルビウス溝及び大脳溝の拡張はなかった。脳室の膨張はなかった。脳ＭＲＩにおいて「皮質萎縮症」の診断はなされなかった。
【０２７６】
ＳＢＣ００２治療の約１４か月後、ＲＮＦＬ  Ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ  Ａｖｅｒａｇｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓは７１μＭの（ＯＳ）；４９μＭの（ＯＤ）を示した。
【０２７７】
９．  解説
ＳＢＣ００２の摂取前、５０歳の女性患者は２００２年から２０１５年の１３年間、多発性硬化症及び関連合併症に苦しんでいた。左視神経萎縮を７年間、右視神経炎を８年間；皮質萎縮症を２．５年間患っていた。２００８年８月のＶＥＰ試験において左又は右眼刺激によるＶＥＰ波は検出されなかった。左眼のＲＮＦＬは検出不能（＜１０μｍ）であった。ステロイド、インターフェロン、免疫抑制療法で５年間治療を受けていたにもかかわらず、多発性硬化症は神経変性的な状態に進行した。
【０２７８】
ＳＢＣ００２摂取から約５日で視力は部分的に回復し；１７日後には、ＶＥＰ試験において左及び右眼のＰ１００波の回復が見られ、両側の視神経機能が回復していることが示された；３２日後、左眼のＲＮＦＬが＜１０μｍから３２μｍに上昇し；１４か月後、ＲＮＦＬ厚が７１μｍに増大した。脳皮質萎縮症はハーブＢ治療の４か月後に消失した。主たる併用薬である硫酸ヒドロキシクロロキンには、不可逆的な網膜損傷、色素変化を伴う網膜症及び視野障害についての警告がなされている。１３年間の進行性疾患及び視神経萎縮に関し、視力回復前の重要な事象を注意深く調べると、視力及び皮質の回復は疾患の自然経過によるものとは説明し難い。本事例における予期しない視力の回復及び明確な時期的関連性により、視神経萎縮及び皮質萎縮症の回復においてＳＢＣ００２が直接的に寄与したものと結論づけられる。
【０２７９】
実施例ＩＩＩ−２  事例ＳＢＣ００２−００２
本事例は１９６６年６月２２日生まれの女性の患者に関するものである。２０１６年２月に彼女は卒中（脳溢血）を起こした。卒中の後、速やかに回復したが、片側視野欠損の症状が残った。夜に熟睡することができず、断続的に２〜３時間眠れるのみであった。ＳＢＣ００２を１０ｍｇ摂取すると、この薬草を摂取した夜に、目覚ましにより起こされるまで一晩中８時間眠った。
【０２８０】
実施例ＩＩＩ−３  ＳＢＣ００２を含む薬草混合物（ＳＢＣ００１）の効果及び安全性に関する観察的事例研究
多発性硬化症（ＭＳ）、視神経炎（ＯＮ）、急性炎症性脱髄性多発ニューロパチー（ＡＩＤＰ）及び脳神経疾患を含む神経疾患の治療に対する医学的需要は未だに充足されていない。神経疾患の治療のための重要な成分として使用される（約５−１０％のＳＢＣ００２を含む）ＳＢＣ００１と命名された薬草混合物の臨床効果及び安全性を観察するために、遡及的及び予測的事例診療録レビュー研究（Ａ  ｒｅｔｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  ａｎｄ  ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｃａｓｅ  ｃｈａｒｔ  ｒｅｖｉｅｗ  ｓｔｕｄｙ）を行った。
【０２８１】
病因記録により十分な裏付けのある９人の患者を遡及的に（ｎ＝８）又は予測的に（ｎ＝１）集めた。疾患の発症日、病因による診断及び治療、症状、効果及び安全性に関する情報を集め、記録した。予測的に追跡した１名の患者については、毎日の症状を記録した日記を使用して患者により報告された治療効果を集めた。全パラメーターについて記述分析を行った。
【０２８２】
疾患の発症年齢は１４〜７１歳であった。男性：女性の比率は４：５であった。５名の患者はＭＳを有し、２名の患者はＡＩＤＰを有し、２名の患者は脳神経麻痺を有していた。８名の患者は視覚症状を有し；６名の患者は四肢の脱力症状又はしびれを有していた。治療前の疾患の期間は４日から５年と多様であり、過半数（６／９）は＜６か月であった。全患者が、臨床経過、症状、神経学的検査及びＭＲＩの知見に基づいて病院により診断を受けていた。
【０２８３】
６／９の患者が病院の標準的治療（ステロイド、免疫抑制、非ステロイド性抗炎症薬）による治療を集中的に受けており；３／９の患者が食事療法又は補助療法（例えば、ビタミン）を受けていた。６／９の患者の症状は病院治療の後一時的に改善したものの、再発したため代替の医薬を求めており；３／９の患者が病院治療に反応しなかった。
【０２８４】
ＳＢＣ００１に含まれるＳＢＣ００２の用量は０．０５−０．２ｇ／回、３〜５回／日と同等であった。６名の患者がこの薬草混合物のみで治療を受け；３名の患者についてはステロイドと約２週間併用し、次いで薬草混合物を摂取した。７名の患者は治療レジメに従うことができたが；２名は治療レジメに従うことができなかった。
【０２８５】
薬草治療の後、合計で７／９の患者の症状が完治し；１／９の患者の症状が改善し；１／９が反応しなかった。効果が出るまでの時間は１日〜２カ月であった。完治までの時間は２５日から６か月であった。
【０２８６】
視覚症状（Ｖｉｓｕａｌ  ｓｙｍｐｔｏｍｓ）（ｎ＝８）：６／８の患者の視覚症状は２５日〜６か月の間に完治し；効果が出るまでの時間は１日〜２カ月であった。１名の患者は改善が見られず；１名の患者は改善が見られた。
【０２８７】
四肢の症状（ｎ＝６）：３／６の患者の四肢の脱力又はしびれは３−６か月の間に完治した。効果が出るまでの時間は１日〜１．５カ月であった。
【０２８８】
医療画像（ｎ＝３）：治療前後の一組のＭＲＩにおいて、３名の患者のうち２名についてはＭＲＩにおいて改善が認められた。
【０２８９】
４名の患者もまた１〜２か月後に記憶の改善を報告した。
【０２９０】
治療後の持続性（Ｏｆｆ−ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｓｕｓｔａｉｎａｂｉｌｉｔｙ）：最後の経過観察までに、６名の患者が完治し、治療を中止した。この６名の患者は、それぞれ１．５年、１．５年、３．８年、４．５年、４．５年、２２年間、症状のない状態で生存したと報告した。
【０２９１】
５名の患者については、自ら治療を中断し、症状がすぐに再発した；治療再開後、症状は再び改善した。デチャレンジ陽性（ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｄｅｃｈａｌｌｅｎｇｅ）及びリチェレンジ陽性（ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｒｅｃｈａｌｌｅｎｇｅ）により、症状の改善と本治療との因果関係は除外できなかった。
【０２９２】
概して、ＳＢＣ００２を含む薬草混合物（ＳＢＣ００１）は安全かつ忍容性良好であった。１名の患者は治療開始時に嘔吐を報告したが、治療を３日間中断した後回復した。他の有害事象又は毒性は観察されなかった。
【０２９３】
観察的事例レビューにより、ＳＢＣ００２を含むこの薬草混合物（ＳＢＣ００１）は、ＭＳ、ＯＮ、ＡＩＤＰ、脳神経疾患及び他の神経疾患を有する患者に対して臨床的有用性を示し、安全性プロファイルも良好であった。
【０２９４】
ＳＢＣ００２で処置した健常ボランティアの事例研究
実施例ＩＩＩ−４  事例ＳＢＣ００２−００３
本事例は、１９７４年９月１２日生まれの健常男性対象に関するものである。初めてＳＢＣ００２（０．００５ｇ）を摂取した１０〜３０分後、視野がより鮮明で明瞭になったと感じた。記憶及び反応速度も上昇した。
【０２９５】
実施例ＩＩＩ−５  事例ＳＢＣ００２−００４
本事例は、１９８３年５月１６日生まれの健常女性対象に関するものである。初めてＳＢＣ００２（０．００２ｇ）を摂取した後、精神状態がより明瞭になり、思考がより速くなったと感じた。
【０２９６】
実施例ＩＩＩ−６  事例ＳＢＣ００２−００５
本事例は、１９７７年７月４日生まれの健常男性対象に関するものである。初めてＳＢＣ００２（０．００５ｇ）を摂取した後、視野がより鮮明で明瞭になったと感じた。記憶がよくなり、反応が速くなった。
【０２９７】
実施例ＩＩＩ−７  事例ＳＢＣ００２−００６
本事例は、１９７０年７月３０日生まれの健常男性対象に関するものである。ＳＢＣ００２（０．００１ｇ）を初めて摂取した日（２０１６年１月１５日）に、視野がより鮮明で、視力がよくなったと感じ；コンピュータを長時間見た後の眼の疲れが減少したと感じ；眼の内部の圧迫感が減少したと感じた。思考が速くかつ明確になり、これが５日間続いた。
【０２９８】
実施例ＩＩＩ−８  事例ＳＢＣ００２−００７
本事例は、両眼に９００−９５０度の近視を有する１９７４年７月２９日生まれの女性対象に関するものである。初日に０．０１ｇを初めて摂取した後２０分以内に、左眼が熱いエネルギーに包まれていると感じ、３０分以内に右眼も熱いエネルギーに包まれていると感じ、４０分以内に、脳全体が熱いエネルギーに満たされていると感じ、極めて平穏な精神状態を感じ始めた。その後、０．０１ｇ／日を摂取すると、７時間の仕事の後にも目の疲れを感じなかったと報告した（以前は、コンピュータを４−５時間を見た後、よく目の疲れを感じた。）。ＳＢＣ００２処置の１か月後、視力が明瞭になり、目の疲れが減ったと感じた。ＳＢＣ００２を中断した後、視力は下がり、目の疲れはＳＢＣ００２摂取前と同等になった。
【０２９９】
細胞モデルにおけるハーブＢ抽出物（ＳＢＣ００２）の実施例（ＩＶ）
ハーブＢ抽出物の実施例ＩＶ−１
ハーブＢ（ＳＢＣ００２）抽出物をＡβＯ処理の４８時間前に添加した場合の又はＡβＯで処理しなかった場合の、マウス一次ニューロンにおけるハーブＢ（ＳＢＣ００２）抽出物の効果
この試験の目的は、ハーブＢ抽出物が、イン  ビトロニューロンモデルにおいてニューロン死を救済するか否かを決定することである。この目的のために、Ａβ１−４２オリゴマー（ＡβＯ）を暴露したマウス一次皮質ニューロンを用いて、ハーブＢ抽出物の神経保護効果を６濃度で調べた。β−アミロイドペプチドは種々の病理変化を誘引し、最終的にＡＤを含む複数の神経疾患において神経機能障害及び変性を引き起こす。
【０３００】
１６−１７日齢の胚からの皮質ニューロンをＣ５７ＢＬ６／Ｊマウス胎児から準備する。要約すると、１．５μｇ／ｍＬのポリオルニチン（Ｓｉｇｍａ）でプレコートした４８ウェルプレートに解離させた皮質細胞を播いた（５０．０００細胞／ウェル）。ホルモン、タンパク質及び塩類を添加した無血清合成ダルベッコ改変イーグル／Ｆ１２培地中で細胞を培養する。加湿６％ＣＯ２雰囲気下、３５℃にて培養を続ける。マウス皮質ニューロンをビヒクル又は異なる濃度のハーブＢ抽出物と４８ｈプレインキュベートした後、１．０μＭのＡβＯに２４ｈ暴露した。ＡβＯ−誘発神経毒性をＭＴＴアッセイを用いて評価した。
【０３０１】
ハーブＢ抽出物の調製：
Ｉ．  保存溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）を調製し、１．５ｍｌエッペンドルフチューブ（ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ  ｔｕｂｅ）内のハーブＢ（１０ｍｇ）に１ｍｌのＤＭＳＯを添加し、次いで、エッペンドルフチューブを３０〜３７℃の温度にて一晩遠心する。
ＩＩ．  上清（保存溶液）を取り、次いで、溶液を細胞培養培地で１０００倍に希釈して、最大用量の溶液を得る（１０μｇ／ｍｌ）。
ＩＩＩ．  最大用量の溶液を細胞培養培地で３倍段階希釈して、３．２μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ、３２０ｎｇ／ｍｌ、１００ｎｇ／ｍｌ、３２ｎｇ／ｍｌの他の５用量を調製する。
【０３０２】
予測通りに、皮質ニューロンを１．０μＭのＡβＯと２４ｈインキュベートすると、細胞生存度が４８．６±１．４％まで減少した。ＤＨＡ（０．０５μＭ、ポジティブコントロールとして使用。）はＡβＯ−誘発ニューロン死を減少させ、残った細胞の生存度はコントロールの８２．０±２．６％であった。これらのコントロールデータは、ｉ）  予測通りに、ＤＨＡはニューロンを保護し、かつ、ｉｉ）  ＡβＯを暴露した細胞の救済が成されることを示しており、本試験系の正しさを実証するものである。
【０３０３】
ニューロンを異なる濃度のハーブＢ抽出物と４８ｈプレインキュベートし、その後、１μＭのＡβＯで２４ｈ処理した。結果として、異なる濃度のハーブＢ抽出物の存在下において、用量依存的神経保護効果が観察された（図１０右及び図１１）。すべての濃度において神経保護効果は１００％であった（１１９．５±６．４％の細胞生存度）。
【０３０４】
ニューロンを異なる濃度のハーブＢ抽出物とのみ４８ｈプレインキュベートすると、３２又は１００００ｎｇ／ｍＬのハーブＢ抽出物において、それぞれ１１１．４±３．２％又は１１２．９±４．１％というさらに高い細胞生存度を示した（図１０左）。
【０３０５】
結論として、上記データは、ハーブＢ抽出物がＡβＯ−誘発神経毒性に対する強力な保護を提供することを示唆する。ハーブＢ抽出物の神経成長刺激効果が観察される。
【０３０６】
ハーブＢ抽出物の実施例ＩＶ−２
Ａβ０処理と同時に又はＡβ０処理後３及び６時間後に添加した場合のハーブＢ抽出物のマウス一次ニューロンにおける効果
この試験の目的は、イン  ビトロニューロンモデルにおいてハーブＢ抽出物がニューロン死を救済するかどうかを決定することである。この目的のために、Ａβ１−４２オリゴマー（ＡβＯ）を暴露したマウス一次皮質ニューロンを用いて、ハーブＢ抽出物の神経保護効果を６濃度で調べた。救済効果又は抗アポトーシス効果を特定するために、添加処理を異なる時点に（ＡβＯと同時にＴ０に、及びＡβＯの後Ｔ３又はＴ６に）行った。
【０３０７】
実施例ＩＶ−１に記載の通りに、１６−１７日齢の胚からの皮質ニューロンをＣ５７Ｂｌ６／Ｊマウス胎児から準備する。ハーブＢ抽出物を上記実施例ＩＶ−１における記載と同様に調製した。
【０３０８】
ハーブＢ抽出物を、異なる時点に（ＡβＯと同時にＴ０に、ＡβＯの後Ｔ３又はＴ６に）マウス一次皮質ニューロンに添加した。マウス皮質ニューロンを１．０μＭのＡβＯに２４ｈ暴露した。ＡβＯ−誘発神経毒性をＭＴＴアッセイを用いて評価した。予測通りに、皮質ニューロンを１．０μＭのＡβＯと２４ｈインキュベートすることにより、細胞生存度が減少した（プレート１、２及び３でそれぞれ５０．９±２．０％、５１．３±２．０％及び５１．７±４．２％）（図１２）。
【０３０９】
予測通りに、Ｔ０で添加したヒューマニンペプチド（ＨＮＧ、ポジティブコントロール）は、ＡβＯ−誘発ニューロン死を著しく減少させ、残った細胞の生存度はコントロールの９１．６±２．１％であった（図１２）。ＡβＯ後３又は６ｈに添加した場合には、ＨＮＧは細胞死を予防せず、これは過去のデータと一致した。これらのコントロールデータは、ｉ）  予測通りに、ＨＮＧはＡβＯと同時に添加した場合にのみ神経細胞を保護し、ｉｉ）  ＡβＯを暴露した細胞の救済が成されることを示しており、本試験系の正しさを実証するものである。
【０３１０】
Ａβ０と同時（Ｔ０）、Ａβ０後３ｈ（Ｔ３）又はＡβ０後６ｈ（Ｔ６）に添加した異なる濃度のハーブＢ抽出物でニューロンを処理した。その結果、すべての実験条件（すなわちＴ０、Ｔ３及びＴ６）で、ハーブＢ抽出物は用量依存的神経保護効果を示した。ＡβＯと同時に添加した場合、ハーブＢ抽出物はＡβＯ−誘発細胞死を完全に予防した（１００又は１０００ｎｇ／ｍＬの濃度にてそれぞれ９３．３±２．５％及び１０２．２±６．３％の細胞生存度）。さらに、ＡβＯ後３ｈに添加した場合（１００及び１０００ｎｇ／ｍｌの濃度でそれぞれ７７．５±１．５％及び９１．６±４．９％の細胞生存度）及びＡβＯ後６ｈに添加した場合（１００及び１０００ｎｇ／ｍｌの濃度でそれぞれ５９．９±２．２％及び７２．１±２．０％の細胞生存度）、ハーブＢ抽出物はＡβＯ−誘発ニューロン死から保護した（図１２）。
【０３１１】
神経保護及び抗アポトーシス効果のパーセンテージは次のように規定した：（ハーブＢ抽出物群のニューロン生存度−毒素処理群のニューロン生存度）／（１００−毒素処理群のニューロン生存度）×１００％。ハーブＢ抽出物の神経保護及び抗アポトーシス効果の％は、１０００ｎｇ／ｍｌで、Ｔ０、Ｔ３又はＴ６においてそれぞれ１００％、８２．７％、４２．２％である（図１２）。
結論として、上記データは、ハーブＢ抽出物がＡβＯ−誘発神経毒性に対する強力な保護、抗アポトーシス及び神経救済効果を提供することを示唆する。ハーブＢ抽出物は、ヒューマニンより強力にＡβＯ−誘発ニューロン死を予防し、救済する点で、ヒューマニンから差別化される。
【０３１２】
ハーブＢ抽出物の実施例ＩＶ−３
ハーブＢ抽出物を同時に又はＡβ０処理後３及び６時間後に添加した場合のＡβ０処理ヒト人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）におけるハーブＢ抽出物の効果
Ａβ１−４２オリゴマー（ＡβＯ）に暴露されたヒトｉＰＳＣ由来ニューロンのニューロン死をハーブＢ抽出物が救済するか否かを調べる。この細胞モデルにおいてＡβＯはニューロン死を劇的に誘発し、これは、特異的ＥＬＩＳＡアッセイを用いてニューロン特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）のレベルによりモニターすることができる。救済効果を確認するためにハーブＢ抽出物を異なる時点（同時及びＡβＯ後）に添加する。
【０３１３】
細胞（ＨＩＰ−Ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ、ＧｌｏｂａｌＳｔｅｍ、カタログ番号ＧＳＣ−４３１２、ロット番号２００１０２６０）を９６ウェルプレートに１ウェル当たり６０．０００細胞の密度で播き、培養した。実験前に細胞を加湿５％ＣＯ２雰囲気下、３７℃にて５週間成熟させ、維持した。
【０３１４】
ハーブＢ抽出物を上記実施例ＩＶ−１の記載と同様に調製した。
【０３１５】
Ａβ０と同時（Ｔ０）、Ａβ０後３ｈ（Ｔ３）又はＡβ０後６ｈ（Ｔ６）に添加した異なる濃度（すなわち１０、１００、１０００及び１００００ｎｇ／ｍｌ）のハーブＢ抽出物の非存在下又は存在下にて、細胞をビヒクル又は１μＭのＡβＯとインキュベートした。細胞を１ウェル当たり１００μＬの最終体積で２４ｈインキュベートする。ポジティブコントロールとして、０．１μＭのＨＮＧ（すなわちヒューマニンペプチドのＳ１４Ｇ変異体）の存在下で細胞を同様に処理する。加えて、ニューロンの損失を、供給者の推奨（ＣｌｏｎｅＣｌｏｕｄ、カタログ番号ＳＥＡ５３７Ｈｕ）に従ってＥＬＩＳＡを用いて、ニューロン特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）の検出によりモニターした。各実験条件当たり計６データ点を得た。
【０３１６】
ヒトｉＰＳＣを１．０μＭのＡβＯに２４ｈ暴露した。ＡβＯ−誘発神経毒性をＮＳＥアッセイを用いて評価した。予測通りに、ニューロンを１．０μＭのＡβＯと２４ｈインキュベートすることにより細胞生存度が減少し、プレート１、２及び３についてそれぞれ４９．７±５．５％、３７．５±３．０％及び４６．９±１．９％であった。
【０３１７】
予測通りに、Ｔ０に添加したヒューマニンペプチド（ＨＮＧ、ポジティブコントロール）はＡβＯ−誘発ニューロン死を著しく減少させ、ニューロン生存度は８５．３±５．６％であった。ＡβＯ後３又は６ｈに添加した場合は、ＨＮＧは細胞死を予防せず、これは過去のデータと一致した。これらのコントロールデータは：ｉ）  予測通りに、ＨＮＧはＡβＯと同時に添加した場合にのみ神経細胞を保護し、かつ、ｉｉ）  ＡβＯを暴露した細胞の救済が成されることを示しており、本試験系の正しさを実証するものである（図１３）。
【０３１８】
Ａβ０と同時（Ｔ０）、Ａβ０後３ｈ（Ｔ３）又はＡβ０後６ｈ（Ｔ６）に添加した異なる濃度のハーブＢ抽出物でＩＰＳＣを処理した。結果は次の通りであった：すべての実験条件（すなわちＴ０、Ｔ３及びＴ６）で、ハーブＢ抽出物は用量依存的神経保護効果を示した。
【０３１９】
ＡβＯと同時に添加した場合、ハーブＢ抽出物は１００、１０００、１００００ｎｇ／ｍＬの濃度でＡβＯ−誘発細胞死を予防した（それぞれ６９．０±６．３％、７２．７±２．４％又は７８．６±５．４％の細胞生存度）；ＡβＯ後３ｈに添加した場合（それぞれ７０．６±７．７％、７１．１±３．４％、８６．０±６．１％の細胞生存度）及びＡβＯ後６ｈに添加した場合（それぞれ５６．６±５．０％、５３．９±１４．９％、７４．９±６．７％の細胞生存度）。ハーブＢ抽出物の神経保護及び抗アポトーシス効果の％は、１０００ｎｇ／ｍｌで、Ｔ０、Ｔ３又はＴ６においてそれぞれ５７．４％、７７．６％、５２．８％である（図１３ａ、１３ｂ、１３ｃ）。結論として、上記データは、ｉＰＳＣ由来ヒトニューロンにおいて、ハーブＢ抽出物がＡβＯ−誘発神経毒性に対する強力な保護、抗アポトーシス及び神経救済効果を提供することを示唆する。ハーブＢ抽出物は、この細胞モデルにおいてヒューマニンより強力にＡβＯ−誘発毒性を阻害するため、ヒューマニンから差別化される。
【０３２０】
ハーブＢ抽出物の実施例ＩＶ−４
複数のニューロン毒素で処理したマウス一次ニューロンモデルにおけるハーブＢ抽出物の効果−毒素処理後３時間に添加した場合
複数の毒素によるストレスを印加されたイン  ビトロモデルにおいてニューロン死をハーブＢ抽出物が救済するか否かを調べる。異なる濃度のハーブＢ抽出物の神経保護効果を異なる種類の毒素を暴露したマウス一次皮質ニューロンを用いて調べた。救済効果を確認するためにハーブＢ抽出物を毒素後３時間（Ｔ３）に添加した。細胞を毒素と２４ｈインキュベートした後、ＭＴＴアッセイを用いて細胞生存度を調べた。
【０３２１】
実施例ＩＶ−１に記載の通りに、１６−１７日齢の胚からの皮質ニューロンをＣ５７Ｂｌ６／Ｊマウス胎児から準備する。ハーブＢ抽出物を上記実施例ＩＶ−１の記載と同様に調製した。
【０３２２】
安定なオリゴマー性又は原線維性調製物を従来のプロトコルに従って準備する。異なる毒素の供給元は下記の通りである：
−  ＢａｃｈｅｍのＡβ２５−３５（Ｈ１１９２）。
−  Ｅｖｏｔｅｃのヒトタウ（２Ｎ４Ｒ）タンパク。
−  ｒ−Ｐｅｐｔｉｄｅのヒトα−シヌクレイン（問い合わせ番号０１０１００８６０３）。
−  Ｂａｃｈｅｍから入手したアミリン（問い合わせ番号Ｈ−７９０５．１０００）。
−  Ｂａｃｈｅｍのプリオンタンパク１１８−１３５（問い合わせ番号Ｈ−４２０６）。
【０３２３】
全ての処理は４８ウェルプレート中でＤＩＶ  ６／７にて３重に行う。毒素の３ｈ後（Ｔ３）に添加した異なる濃度のハーブＢ抽出物（１０００、１００００ｎｇ／ｍｌ）の非存在下又は存在下にて、細胞をビヒクル又は（示した最終濃度の）毒素とインキュベートした。細胞を１ウェル当たり１４０μＬの最終体積で２４ｈインキュベートした。
【０３２４】
使用したポジティブコントロール（Ｔ３に添加）は０．１μＭのＨＮＧ（ヒューマニンペプチドのＳ１４Ｇ変異体）であり、これは周知の抗アポトーシスペプチドである。
【０３２５】
細胞を２４ｈインキュベートした後、ＭＴＴアッセイを用いて細胞生存度をモニターした。要約すると、細胞をＭＴＴ（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｍ２１２８−１０Ｇ、ロット番号ＭＫＢＨ７４８９Ｖ）と３５℃にて１ｈインキュベートした。そのために、（ＰＢＳ中に溶解した）５ｍｇ／ｍＬのＭＴＴ、１４μＬを各ウェルに添加する。インキュベーション後、培地を除き、細胞を１５０μＬのＤＭＳＯで１０分間溶解し、遮光した。ホルマザンが完全に溶解した後、Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ  ＢＭＧ  Ｌａｂｔｅｃｈ  Ｆｌｕｏｓｔａｒ  Ｏｍｅｇａを用いて５７０ｎｍにおける吸収を記録する。
【０３２６】
ハーブＢ抽出物の神経保護及び抗アポトーシス効果のパーセンテージは次のように規定した：（ハーブＢ抽出物群のニューロン生存度−毒素処理群のニューロン生存度）／（１００−毒素処理群のニューロン生存度）×１００％。
【０３２７】
−  ハーブＢ抽出物は、１０μＭのＡβ２５−３５フィブリルに対して、１００００ｎｇ／ｍｌの濃度にて抗アポトーシス及び神経保護効果を示し、細胞生存度は８２．９±２．２％で、３９．９％の保護であった（図１４ａ）。
【０３２８】
−  ハーブＢ抽出物は１μＭのヒトタウオリゴマーに対して用量依存的抗アポトーシス及び神経保護効果を示し、最大効果は１０．０００ｎｇ／ｍＬの濃度においてであり、細胞生存度は５９．４±２．１％であり、３４．０％の保護であった（図１４ｂ）。
【０３２９】
−  ハーブＢ抽出物は、α−シヌクレインフィブリル及びα−シヌクレインオリゴマーに対して用量依存的抗アポトーシス及び神経保護効果を示し、最大効果は１０．０００ｎｇ／ｍＬの用量においてであり、細胞生存度はそれぞれ８２．５±２．６％及び８２．２±２．２％であり、４６．６％及び６２．５％の保護であった（図１４ｃ及び１４ｄ）。
【０３３０】
−  ハーブＢ抽出物は、５μＭのアミリンフィブリルに対して抗アポトーシス及び神経保護効果を示し、最大効果は１０．０００ｎｇ／ｍＬの濃度においてであり、細胞生存度は８１．１±２．５％であり、２７．９％の保護であった（図１４ｅ）。
【０３３１】
−  ハーブＢ抽出物は、２μＭのプリオン１１８−１３５オリゴマーに対して抗アポトーシス及び神経保護効果を示し、最大効果は１０．０００ｎｇ／ｍＬの濃度においてであり、細胞生存度は６６．２±３．３％であり、２３．５％の保護であった（図１４ｆ）。
【０３３２】
結論として、この試験は、ハーブＢ抽出物が、マウス一次皮質ニューロンにおいて、Ａβ２５−３５フィブリル−、ヒトタウオリゴマー−、ヒトタウフィブリル−、ヒトアルファ−シヌクレインオリゴマー−、アルファ−シヌクレインフィブリル−、ヒトアミリンフィブリル−及びプリオンオリゴマー−誘発神経毒性に対して、強力な保護、神経救済及び抗アポトーシス効果を提供することを示唆した。ハーブＢ抽出物は、これらの細胞モデルにおいてヒューマニンより強力に複数毒素−誘発ニューロン死を阻害するため、ヒューマニンから差別化される。
【０３３３】
ハーブＢ抽出物の実施例ＩＶ−５
Ｈ２Ｏ２処理マウス一次ニューロンモデルにおけるハーブＢ抽出物の効果−ハーブＢ抽出物を毒素処理の４８時間前又は３時間後に添加した場合
Ｈ２Ｏ２ストレスを印加されたイン  ビトロモデルにおいてニューロン死をハーブＢ抽出物が救済するか否かを調べる。救済効果を確認するために、ハーブＢ抽出物を毒素の４８時間前又は３時間後（Ｔ３）に添加した。細胞を毒素と２４ｈインキュベートした後、ＭＴＴアッセイを用いて細胞生存度を調べた。
【０３３４】
実施例ＩＶ−１に記載の通りに、１６−１７日齢の胚からの皮質ニューロンをＣ５７Ｂｌ６／Ｊマウス胎児から準備する。ハーブＢ抽出物を上記実施例ＩＶ−１の記載と同様に調製した。周知の抗酸化剤として１ｍＭのＴｒｏｌｏｘ（Ｓｉｇｍａ、問い合わせ番号２３８８１３）を使用した。
【０３３５】
マウス一次皮質ニューロンを０．２５ｍＭのＨ２Ｏ２で２４ｈ処理した。Ｈ２Ｏ２処理の３時間後、ハーブＢ抽出物又はＴｒｏｌｏｘを添加した。毒素の神経毒性をＭＴＴアッセイを用いて測定した。予測通りに、細胞を毒素と２４ｈインキュベートすることにより細胞生存度が減少し、Ｈ２Ｏ２について３６．２±３．０％であった。ポジティブコントロールとして使用し、Ｔ３に添加したＴｒｏｌｏｘは、Ｈ２Ｏ２により誘発される細胞死を部分的に阻害した。Ｈ２Ｏ２後３ｈに添加した場合、ハーブＢ抽出物は用量依存的神経保護を誘発し、最大効果は１０．０００ｎｇ／ｍＬの用量においてであり、細胞生存度は５６．８±２．４％であった。ハーブＢ抽出物の神経保護及び抗アポトーシス効果の％は１００００ｎｇ／ｍｌにおいて３２．２％である（図１５ａ）。
【０３３６】
マウス一次皮質ニューロンを、ビヒクル又は異なる濃度のハーブＢ抽出物又は１ｍＭのＴｒｏｌｏｘを添加して４８時間インキュベートし、次いで、ニューロンを０．２５ｍＭのＨ２Ｏ２で２４ｈ処理した。Ｈ２Ｏ２の神経毒性をＭＴＴアッセイを用いて評価した。予測通りに、細胞をＨ２Ｏ２と２４ｈインキュベートすることにより細胞生存度が減少し、６１．７±２．５％であった。Ｔｒｏｌｏｘ（１ｍＭ）をＨ２Ｏ２の４８ｈ前に添加すると、Ｈ２Ｏ２により誘発される細胞死が部分的に阻害された。Ｈ２Ｏ２前に４８ｈプレインキュベートすると、ハーブＢ抽出物は１０．０００ｎｇ／ｍＬの用量でＨ２Ｏ２誘発細胞死を阻害し、細胞生存度は７６．７±２．４％であった。ハーブＢ抽出物の神経保護及び抗アポトーシス効果の％は１００００ｎｇ／ｍｌにおいて３９．２％である（図１５ｂ）。
【０３３７】
結論として、このデータは、Ｈ２Ｏ２処理の４８時間前又はＨ２Ｏ２添加の３時間後に添加した場合、ハーブＢ抽出物がＨ２Ｏ２誘発神経毒性に対して保護及び抗酸化効果を提供することを示唆する。
【０３３８】
ハーブＢ抽出物の実施例ＩＶ−６
カンプトテシン処理マウス一次ニューロンモデルにおけるハーブＢ抽出物の効果−カンプトテシン処理の４８時間前に添加した場合
異なる濃度のハーブＢ抽出物の神経保護効果を、カンプトテシンを暴露したマウス一次皮質ニューロンを用いて調べた。カンプトテシンは、ＤＮＡ酵素であるトポイソメラーゼＩ（ｔｏｐｏ  Ｉ）を阻害する細胞毒性キノリンアルカロイドである。
【０３３９】
実施例ＩＶ−１に記載の通りに、１６−１７日齢の胚からの皮質ニューロンをＣ５７Ｂｌ６／Ｊマウス胎児から準備する。カンプトテシンはＳｉｇｍａから入手する（問い合わせ番号Ｃ９９１１−（Ｓ）−（＋）−カンプトテシン）。ハーブＢ抽出物を上記実施例ＩＶ−１の記載と同様に調製した。
【０３４０】
細胞を、毒素暴露の４８時間前に添加した化合物Ｃの非存在下又は存在下にて、（下記のプレートレイアウトに記載した最終濃度にて）ビヒクル又は毒素とインキュベートした。１μＭのカンプトテシンの添加後、細胞を１ウェル当たり１４０μＬの最終体積で２４ｈさらにインキュベートした。
【０３４１】
予測通りに、細胞を１μＭのカンプトテシンと２４ｈインキュベートすることにより、細胞生存度がコントロールの５７．７±１．６％に減少した。カンプトテシン処理前に４８ｈプレインキュベートすると、ハーブＢ抽出物は用量依存的神経保護を誘発し、１０．０００ｎｇ／ｍＬの用量で最大効果を示した。細胞生存度はコントロールの８４．０±６．４％であった。１００００ｎｇ／ｍｌにおけるハーブＢ抽出物の神経保護及び抗アポトーシス効果は６２．１％である。興味深いことに、ハーブＢ抽出物の神経保護効果は二相性を示した。実際に、ハーブＢ抽出物の神経保護効果は、１０ｎｇ／ｍＬの用量において、１及び１００ｎｇ／ｍＬの用量におけるハーブＢ抽出物の効果より低かった（図１６）。
【０３４２】
結論として、データは、ハーブＢ抽出物が、カンプトテシンにより誘発されるニューロン死に対して強力な保護、神経救済及び抗アポトーシス効果を提供することを示唆する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５ａ】
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【図５ｂ】
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【図５ｃ】
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【図６ａ】
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【図６ｂ】
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【図６ｃ】
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【図６ｄ】
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【図６ｅ】
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【図６ｆ】
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【図６ｇ】
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【図６ｈ】
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【図６ｉ】
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【図７】
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【図８】
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【図９ａ】
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【図９ｂ】
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【図９ｃ】
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【図９ｄ】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３ａ】
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【図１３ｂ】
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【図１３ｃ】
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【図１４ａ】
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【図１４ｂ】
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【図１４ｃ】
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【図１４ｄ】
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【図１４ｅ】
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【図１４ｆ】
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【図１５ａ】
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【図１５ｂ】
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【図１６】
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【国際調査報告】
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