(57)【要約】  本開示は、対象に、治療的有効量の、Ｂ型肝炎ウイルスから由来するポリペプチド上記ポリペプチドを含む薬学組成物を投与することで、対象における代謝疾患（例えば、糖尿病と高脂血症）を治療する組成物と方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
それを必要とする対象における代謝疾患を治療する方法であって、対象に治療的有効量のポリペプチド或いは上記ポリペプチドを含む薬学組成物を投与することを含み、投与されたポリペプチドの血清濃度が、対象におけるＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取の両方向制御を可能にして、ただし、上記ポリペプチドが、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）から由来するアミノ酸配列を含む方法。
【請求項２】
それを必要とする対象における血清脂質レベルを低下する方法であって、対象に治療的有効量のポリペプチド或いは上記ポリペプチドを含む薬学組成物を投与することを含み、投与されたポリペプチドの血清濃度が、対象におけるＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取の両方向制御を可能にして、ただし、上記ポリペプチドが、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）から由来するアミノ酸配列を含む方法。
【請求項３】
（ａ）対象に投与されたポリペプチドの血清濃度は、９３ｎｍｏｌ／Ｌ以下である場合に、上記ポリペプチドが、対象におけるＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取を増強する；および／または
（ｂ）対象に投与されたポリペプチドの血清濃度は、９３ｎｍｏｌ／Ｌより高い場合に、上記ポリペプチドが、対象におけるＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取を阻害する、
請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
上記血清脂質は、コレステロール、トリグリセリドおよびＬＤＬ−Ｃから選ばれる一つ以上の脂質を含む請求項２に記載の方法。
【請求項５】
対象におけるポリペプチドの血清濃度が、投与から約２０分間の時点に、ピーク濃度に至る請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
上記ピーク濃度は、９３ｎｍｏｌ／Ｌを超える請求項５に記載の方法。
【請求項７】
上記対象は、代謝疾患に罹患するまたは発展するリスクがある請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
上記代謝疾患が脂質代謝の異常調節に関係する請求項７に記載の方法。
【請求項９】
上記代謝疾患は、コレステロール関連病気である請求項７または８に記載の方法。
【請求項１０】
上記代謝疾患は、高脂血症である請求項７〜９のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
上記高脂血症は、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、またはそれらの組み合わせである請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
上記代謝疾患がグルコース代謝の異常調節に関係する請求項７に記載の方法。
【請求項１３】
上記代謝疾患は、高血糖である請求項７に記載の方法。
【請求項１４】
上記代謝疾患は、糖尿病である請求項７、１２、１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
上記代謝疾患は、肥満である請求項７、１２、１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
それを必要とする対象における血糖レベルを低下するする方法であって、対象に治療的有効量のポリペプチドまたは上記ポリペプチドを含む薬学組成物を投与することを含み、ただし、上記ポリペプチドは、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）から由来するアミノ酸を含む方法。
【請求項１７】
投与されたポリペプチドの血清濃度が、対象におけるＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取の両方向制御を可能にする請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
（ａ）対象に投与されたポリペプチドの血清濃度は、９３ｎｍｏｌ／Ｌ以下である場合に、上記ポリペプチドが、対象におけるＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取を増強する；および／または
（ｂ）対象に投与されたポリペプチドの血清濃度は、９３ｎｍｏｌ／Ｌより高い場合に、上記ポリペプチドが、対象におけるＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取を阻害する、
請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
対象におけるポリペプチドの血清濃度が、投与から約２０分間の時点に、ピーク濃度に至る請求項１７または１８に記載された方法。
【請求項２０】
上記ピーク濃度は、９３ｎｍｏｌ／Ｌを超える請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
上記対象は、代謝疾患に罹患するまたは発展するリスクがある請求項１６〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
上記代謝疾患がグルコース代謝の異常調節に関係する請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
上記代謝疾患は、高血糖である請求項２１または２２に記載の方法。
【請求項２４】
上記代謝疾患は、糖尿病である請求項２１〜２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
上記代謝疾患は、肥満である請求項２１〜２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
上記ポリペプチドは、対象における代謝に関連する一つ以上の化学的または生物学的分子のレベルまたは活性を低下または安定化できる；ただし、上記化学的または生物学的分子は、グルコース、コレステロール、トリグリセリド、遊離脂肪酸、アミノ酸、ホルモン、ＬＤＬ−Ｃ、ＨＤＬ−Ｃ、ＨｂＡ１ｃ、血液尿素窒素およびミネラルから選ばれる、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
上記ポリペプチドは、対象における総コレステロール、トリグリセリド、および／またはＬＤＬ−Ｃのレベルを低下できる請求項１〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
上記ポリペプチドは、対象におけるグルコースおよび／またはＨｂＡ１ｃのレベルを低下できる請求項１〜２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
上記ポリペプチドは、対象におけるインスリンのレベルを安定化できる請求項１〜２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
上記ポリペプチドは、代謝変化を測定する一つ以上の生理学的パラメータのレベルまたは値を低下または安定化できる請求項１〜２９のいずれか１項に記載された方法であって、上記パラメータは、血糖、血圧、体重、脂肪量、ボディマス指数（ＢＭＩ）、炎症、アテローム性動脈硬化指数、心臓指数、腎指数、総脂肪指数および恒常性モデル評価（ＨＯＭＡ）指数から選ばれる、方法。
【請求項３１】
対象が、心血管疾患（例えば、アテローム性動脈硬化疾患）、心臓疾患、または腎障害を罹患する、或いはそれらが進展するリスクを有する請求項１〜３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
上記対象は代謝疾患に罹患するまたは発展するリスクがある請求項１〜３１のいずれか１項に記載の方法であって、上記代謝疾患は、高血糖；低血糖；高インスリン血症；肥満；高脂血症；高トリグリセリド血症；高コレステロール血症；心臓病；メタボリック・シンドローム；アテローム性動脈硬化症；冠状動脈性心臓病；冠動脈疾患；末梢動脈疾患；狭心症；脳血管疾患；急性冠症候群；心筋梗塞；卒中；循環器疾患；アルツハイマー病；脂質異常症；家族性複合型高脂血症；家族性高トリグリセリド血症；家族性高コレステロール血症；ヘテロ接合型高コレステロール血症；ホモ接合性高コレステロール血症；家族性欠陥アポリポタンパク質Ｂ−１００；多遺伝子性高コレステロール血症；レムナント除去病；肝性リパーゼ欠損症；食傷と、甲状腺機能低下症と、エストロゲンおよびプロゲスチン療法、β遮断薬、チアジド系利尿薬などの薬による脂質異常症；ネフローゼ症候群；慢性腎不全；クッシング症候群；原発性胆汁性肝硬変；グリコーゲン蓄積症；肝細胞癌；胆汁うっ滞；先端巨大症；インスリノーマ；成長ホルモン単独欠損症；腎臓障害；肥満；およびアルコール誘発性高トリグリセリド血症から選ばれる、方法。
【請求項３３】
上記ポリペプチドは、ＨＢＶのｐｒｅ−Ｓ１領域のアミノ酸配列を含む請求項１〜３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
上記ポリペプチドは、ＨＢＶの遺伝子型Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、またはＨのｐｒｅ−Ｓ１領域のアミノ酸配列を含む請求項１〜３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
上記ＨＢＶは、遺伝子型Ｃである請求項１〜３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
上記ポリペプチドは、ＨＢＶ遺伝子型Ｃのｐｒｅ−Ｓ１領域のアミノ酸１３−５９の配列を含む請求項１〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
上記ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１−４０から選ばれるアミノ酸配列を含む請求項１〜３６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
上記ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３のアミノ酸配列を含む請求項１〜３７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３９】
上記ポリペプチドは、少なくとも２０、２５、３０、３５、または４０個アミノ酸の長さを有する請求項１〜３８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４０】
上記ポリペプチドの一つ以上のアミノ酸残基は、削除、置換、または挿入された請求項１〜３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４１】
上記ポリペプチドの１−３０、１−２０、１−１０、１−８、１−５、または１−３個アミノ酸残基は、削除、置換、または挿入された請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
上記ポリペプチドは、Ｎ−末端および／またはＣ−末端に、ＨＢＶのｐｒｅ−Ｓ１領域からの天然フランキングアミノ酸配列を含む請求項１〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４３】
ＨＢＶのｐｒｅ−Ｓ１領域からの上記天然フランキングアミノ酸配列は、１−１０、１−８、１−５、または１−３個アミノ酸の長さを有する請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
上記ポリペプチドが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１−４０から選ばれるアミノ酸配列に対して、少なくとも約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する請求項１〜４３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４５】
上記ポリペプチドは、ＨＢＶ遺伝子型Ｃのｐｒｅ−Ｓ１領域のアミノ酸１３に対応するグリシンを含む請求項１〜４４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４６】
上記ポリペプチドは、ＨＢＶ遺伝子型Ｃのｐｒｅ−Ｓ１領域のアミノ酸２０に対応するアスパラギンを含む請求項１〜４５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４７】
上記ポリペプチドは、Ｎ−末端修飾に疎水基を有する請求項１〜４６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４８】
上記疎水基が、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、コレステロールおよびアラキドン酸から選ばれる請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
上記疎水基は、ミリスチン酸である請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
上記ポリペプチドは、上記ポリペプチドを安定化できるＣ−末端修飾を含む請求項１〜４９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５１】
上記Ｃ−末端修飾は、アミド化（アミノ化）またはイソペンタンジオール化である請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
上記ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３を含み、かつ上記ポリペプチドは、さらに、Ｎ−末端修飾にミリスチン酸およびＣ−末端修飾にアミノ化を有する；或いは上記ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３を含む請求項１〜５１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５３】
上記ポリペプチドは、ナトリウム−タウロコール酸共輸送ポリペプチド（ＮＴＣＰ）と結合できる請求項１〜５２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５４】
上記ポリペプチドは、ＮＴＣＰ仲介の肝細胞への胆汁酸の輸送を両方向制御できる請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
（ａ）肝細胞が、９３ｎｍｏｌ／Ｌ以下の上記ポリペプチドと接触する場合に、上記ポリペプチドは、ＮＴＣＰ仲介の肝細胞への胆汁酸の輸送を増強する；および／または
（ｂ）肝細胞が、９３ｎｍｏｌ／Ｌを超える上記ポリペプチドと接触する場合に、上記ポリペプチドは、ＮＴＣＰ仲介の肝細胞への胆汁酸の輸送を阻害する、
請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
（ａ）対象に投与されたポリペプチドの血清濃度は、５００ｎｇ／ｍｌ以下である場合に、上記ポリペプチドが、対象におけるＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取を増強する；および／または
（ｂ）対象に投与されたポリペプチドの血清濃度は、５００ｎｇ／ｍｌを超える場合に、上記ポリペプチドが、対象におけるＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取を阻害する、
請求項５４に記載の方法。
【請求項５７】
上記ポリペプチドまたは上記ポリペプチドを含む薬学組成物は、治療的有効量の少なくとも一つの第２の薬剤の投与の前、同時、後に、対象に投与される請求項１〜５６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５８】
上記第２の薬剤は、抗高脂血症剤、抗高血糖剤、抗糖尿病剤、抗肥満剤および胆汁酸類似物から選ばれる請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
上記第２の薬剤は、インスリン、メトホルミン、シタグリプチン、コレセベラム、グリピジド、シンバスタチン、アトルバスタチン、エゼチミブ、フェノフィブラート、ニコチン酸、オルリスタット、ロルカセリン、フェンテルミン、トピラマート、オベチコール酸およびウルソデオキシコール酸から選ばれる請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
上記ポリペプチドまたは上記ポリペプチドを含む薬学組成物は、腸管外、肺内、鼻腔内、病巣内、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内および皮下投与から選ばれる少なくとも一つのモードで、対象に投与される請求項１〜５９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６１】
上記ポリペプチドまたは上記ポリペプチドを含む薬学組成物は、皮下で対象に投与される請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
代謝疾患を治療するための医薬品の製造におけるポリペプチドまたは上記ポリペプチドを含む薬学組成物の使用であって、上記ポリペプチドは、ＨＢＶから由来するアミノ酸配列を含み、上記医薬品は、投与されたポリペプチドの血清濃度が、対象におけるＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取の両方向制御を可能にするように、それを必要とする対象に投与するための量のポリペプチドを含む使用。
【請求項６３】
それを必要とする対象における血清脂質レベルを低下するための医薬品の製造におけるポリペプチドまたは上記ポリペプチドを含む薬学組成物の使用であって、上記ポリペプチドは、ＨＢＶから由来するアミノ酸配列を含み、上記医薬品は、投与されたポリペプチドの血清濃度が、対象におけるＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取の両方向制御を可能にするように、対象に投与するための量のポリペプチドを含む使用。
【請求項６４】
上記血清脂質は、コレステロール、トリグリセリドおよびＬＤＬ−Ｃから選ばれる一つ以上の脂質を含む請求項６３に記載の使用。
【請求項６５】
ポリペプチドは、ＨＢＶから由来するアミノ酸配列である、それを必要とする対象における血糖レベルを低下するための医薬品の製造におけるポリペプチドまたは上記ポリペプチドを含む薬学組成物の使用。
【請求項６６】
上記医薬品は、投与されたポリペプチドの血清濃度が、対象におけるＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取の両方向制御を可能にするように、対象に投与するための量のポリペプチドを含む請求項６５に記載の使用。
【請求項６７】
請求項１〜６１のいずれか１項に記載の方法で使用するための医薬品の製造におけるポリペプチドまたは上記ポリペプチドを含む薬学組成物の使用。
【請求項６８】
投与されたポリペプチドの血清濃度が、対象におけるＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取の両方向制御を可能にするように、対象に投与するための量のポリペプチドを含み、ただし、上記ポリペプチドは、ＨＢＶから由来するアミノ酸配列を含む、それを必要とする対象における代謝疾患の治療で使用するためのポリペプチドまたは上記ポリペプチドを含む薬学組成物。
【請求項６９】
投与されたポリペプチドの血清濃度が、対象におけるＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取の両方向制御を可能にするように、対象に投与するための量のポリペプチドを含み、ただし、上記ポリペプチドは、ＨＢＶから由来するアミノ酸配列を含む、それを必要とする対象における血清脂質レベルの低下に使用するためのポリペプチドまたは上記ポリペプチドを含む薬学組成物。
【請求項７０】
上記血清脂質は、コレステロール、トリグリセリド、ＬＤＬ−ＣおよびＨＤＬ−Ｃから選ばれる一つ以上の脂質を含む請求項６９に記載のポリペプチド。
【請求項７１】
ポリペプチドは、ＨＢＶから由来するアミノ酸配列を含む、それを必要とする対象における血糖レベルの低下に使用するためポリペプチドまたは上記ポリペプチドを含む薬学組成物。
【請求項７２】
請求項１〜６１のいずれか１項に記載の方法で使用するためのポリペプチドまたは上記ポリペプチドを含む薬学組成物。
【請求項７３】
それを必要とする対象に投与される場合に、対象におけるＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取の両方向制御を可能にするポリペプチドの血清濃度を提供する、ＨＢＶから由来するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む薬学組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、その全体は、本明細書に組み込まれる。上記ＡＳＣＩＩファイルは、２０１６年４月１４日に作成され、１３２３０．０００１＿ＳＬ．ｔｘｔと名づけられ、５６，０３４  ｂｙｔｅｓのサイズを有する。
【０００２】
本開示は、糖尿病と高脂血症のような代謝疾患を治療する組成物と方法に関わる。特定の実施形態において、本願は、Ｂ型肝炎ウイルスから由来するポリペプチドによる代謝疾患の治療に関わる。
【背景技術】
【０００３】
代謝疾患は、炭水化物、脂肪、脂質およびミネラルを含む、生体の健康に不可欠な代謝産物の不均衡によるものである。例えば、２型糖尿病と高脂血症は、最もよく見られる二つの代謝疾患である。代謝産物の不均衡が、老化、行動、遺伝および環境の影響を含む複数の因子に引き起こされ、かつ通常に、複数の因子が、一緒に疾患の兆候を助長する。代謝疾患に罹患する患者が、例えば、高血糖、高インスリン血症、高脂血症、インスリン抵抗性、及びアミノ酸とミネラルのような他の代謝産物の異常調節を含む広い範囲の症状を表す。代謝疾患は通常、その根本的な原因を確定しにくいから、それを効果的に治療することは困難です。また、代謝疾患に罹患する患者が、高血圧、心血管疾患、腎臓損傷と神経損傷のような疾患に関連する重篤な合併症が発展するリスクを有する。
【０００４】
それらの疾患の異質性のため、代謝疾患に罹患する患者が、数多くの異なる医薬品を需要し、複数の代謝経路を標的し、複数の症状を同時に対処する。例えば、ある研究が、調査された２型糖尿病の患者は、毎日平均８．４つの異なる薬物化合物を服用することを示した（例えば、Ｂａｕｅｒら、Ｄｉａｂｅｔｉｃ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、３１：１０７８−８５（２０１４）（非特許文献１）を参照する）。代謝疾患に罹患する患者が、異なる薬品を服用しなければならない理由の一つとしては、それらの薬品は、一般的に、代謝疾患の一つの特定の症状又は経路を標的し、そして他の関連する症状を標的できないためである。残念ながら、複数の薬品の服用が、患者の生活の質に影響し、かつ最終に疾患進行の経過を悪化させる。実際に、統計が示されたように、２型糖尿病の患者が、それらの投薬計画を続けづらい、その理由の一部は、それらの投薬計画の複雑性である（例えば、Ｇａｒｃｉａ−Ｐeｒｅｚら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｔｈｅｒａｐｙ、４：１７５−９４（２０１３）（非特許文献２）を参照する）。
【０００５】
また、通常に、代謝疾患が、シグナル経路の複雑なネットワークに関係するので、一つの薬剤で一つの特定の経路を標的することは、必ず患者に治療的に関連する効果を達成することではない。例えば、拒絶反応を防ぐために臓器移植に広く使用されている免疫抑制薬物とするシクロスポリンＡ（ＣｓＡ）が、ナトリウム−タウロコール酸共輸送ポリペプチド（ＮＴＣＰ）（血流から肝細胞へ胆汁酸を輸送するＮａ+−依存性胆汁酸輸送体）に仲介された、培養肝細胞への胆汁酸の摂取とＨＢＶの進入を阻害することを示す（Ｗａｔａｓｈｉら、Ｈｐａｔｏｌｏｇｙ、５９：１７２６−３７（２０１４）（非特許文献３））。しかしながら、ＣｓＡによる治療は、グルコース代謝に有害な影響をもたらし、インスリン応答を損なう可能性がある（Ｄｒｅｓｎｅｒら、Ｓｕｒｇｅｒｙ，１０６（２）：１６３−６９（１９８９）（非特許文献４））。なお、ＣｓＡが、総コレステロールレベルを増加させることにより（主に、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）コレステロールレベルの増加により）、患者において高脂血症を誘発することができる（Ｂａｌｌａｎｔｙｎｅら、ＪＡＭＡ、２６２（１）：５３−５６（１９８９）（非特許文献５））。様々な他の化合物がＮＴＣＰに結合することを示されたが、それらの一部の化合物が、阻害剤として機能し、他の一部が、増強剤として機能するので、ＮＴＣＰに対して同様な効果を生じない（Ｋｉｍら、Ｊ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｅｘｐ．  Ｔｈｅｒ．，２９１（３）：１２０４−０９（１９９９）（非特許文献６））。それらの薬物の大部分は、これまで代謝疾患の治療における治療成績が実証されていないが、ＮＴＣＰの一部の増強剤は、グルコースまたは脂質代謝に反対の効果をもたらす（例えば、Ｂｅａｕｄｏｉｎら、Ａｐｐｌ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  Ｎｕｔｒ．  Ｍｅｔａｂ．  ３８（２）：１４０−４７  （２０１３）（非特許文献７）；Ｔｈｅｌｌｅら、Ｎ．  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３０８（２４）：１４５４−５７（１９８３）（非特許文献８）；Ｐｈｉｌｌｉｐｓら、Ｂｒ．  Ｍｅｄ．  Ｊ．  ２９２：１３１９−２１（１９８６）（非特許文献９）；Ｂｏｄｅｎら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ、８５（６）：２０３９−４４（１９９２）（非特許文献１０）を参照する）。ＮＴＣＰ欠損の対象は、明確な臨床的表現型を示さなかったから、生体内のＮＴＣＰの調節が治療的に関連する効果を有するかどうかは不明である（Ｖａｚら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ、６１（１）：２６０−２６７（２０１５）（非特許文献１１）を参照する）。したがって、複数の症状を同時に対処できるとともに強力な治療効果を有する代謝疾患の新しい医薬品の開発が、切望されている。
【０００６】
ＨＢＶウイルスエンベロープが、三つの表面抗原タンパク質を含む：大（Ｌ）、中（Ｍ）および小（Ｓ）。これらのタンパク質は、三つの異なる翻訳開始点、すなわち、Ｌ（Ｐｒｅ−Ｓ１＋Ｐｒｅ−Ｓ２＋Ｓ）、Ｍ（Ｐｒｅ−Ｓ２＋Ｓ）およびＳ（Ｓ）から、Ｓ遺伝子における単一のオープンリーディングフレームにコードされる。ＨＢＶは、そのエンベロープタンパク質に存在する抗原エピトープによって、四つの主な血清型（ａｄｒ、ａｄｗ、ａｙｒ、ａｙｗ）に分けられ、かつゲノムの全体ヌクレオチド配列の変異によって、八つの遺伝子型（Ａ‐Ｈ）に分けられる。ウイルス感染期間において、ＨＢＶのＬタンパク質のＰｒｅ−Ｓ１領域が、ＮＴＣＰに結合することが示された（Ｙａｎら、ｅＬｉｆｅ、１：ｅ０００４９（２０１２）（非特許文献１２））。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｂａｕｅｒら、Ｄｉａｂｅｔｉｃ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、３１：１０７８−８５（２０１４）
【非特許文献２】Ｇａｒｃｉａ−Ｐeｒｅｚら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｔｈｅｒａｐｙ、４：１７５−９４（２０１３）
【非特許文献３】Ｗａｔａｓｈｉら、Ｈｐａｔｏｌｏｇｙ、５９：１７２６−３７（２０１４）
【非特許文献４】Ｄｒｅｓｎｅｒら、Ｓｕｒｇｅｒｙ、１０６（２）：１６３−６９（１９８９）
【非特許文献５】Ｂａｌｌａｎｔｙｎｅら、ＪＡＭＡ、２６２（１）：５３−５６（１９８９）
【非特許文献６】Ｋｉｍら、Ｊ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｅｘｐ．  Ｔｈｅｒ．，２９１（３）：１２０４−０９（１９９９）
【非特許文献７】Ｂｅａｕｄｏｉｎら、Ａｐｐｌ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  Ｎｕｔｒ．  Ｍｅｔａｂ．  ３８（２）：１４０−４７  （２０１３）
【非特許文献８】Ｔｈｅｌｌｅら、Ｎ．  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３０８（２４）：１４５４−５７（１９８３）
【非特許文献９】Ｐｈｉｌｌｉｐｓら、Ｂｒ．  Ｍｅｄ．  Ｊ．  ２９２：１３１９−２１（１９８６）
【非特許文献１０】Ｂｏｄｅｎら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ、８５（６）：２０３９−４４（１９９２）
【非特許文献１１】Ｖａｚら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ、６１（１）：２６０−２６７（２０１５）
【非特許文献１２】Ｙａｎら、ｅＬｉｆｅ、１：ｅ０００４９（２０１２）
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本開示が、ＨＢＶ由来のポリペプチドで代謝疾患を治療する組成物と方法を提供する。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドが、ＨＢＶ遺伝子型Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、ＧおよびＨのいずれか一つのｐｒｅ−Ｓ１領域から由来するポリペプチドを含む。本願が、さらに、対象（ヒトおよび薬学的に関連する動物モデルを含む）におけるグルコースと脂質代謝のような代謝を変われる、ＨＢＶ由来のポリペプチドを提供する。
【０００９】
一部の態様において、本願が、ここに記載されたポリペプチドを含む薬学組成物を提供し、ただし、それを必要とする対象に投与される場合に、薬学組成物が、対象におけるＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取の両方向制御を可能にするポリペプチドの血清濃度を提供する。
【００１０】
一部の態様において、本願が、それを必要とする対象における代謝疾患を治療する方法を提供し、対象に治療的有効量のここに記載されたポリペプチド或いは上記ポリペプチドを含む薬学組成物を投与することを含み、投与されたポリペプチドの血清濃度が、対象におけるＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取の両方向制御を可能にして、ただし、上記ポリペプチドが、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）から由来するアミノ酸配列を含む。
【００１１】
一部の態様において、本願が、対象に治療的有効量のここに記載されたポリペプチド或いは上記ポリペプチドを含む薬学組成物を投与することで、それを必要とする対象における血清脂質レベルを低下させ、そして投与されたポリペプチドの血清濃度が、対象におけるＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取の両方向制御を可能にする方法に関わる。一部の実施形態において、血清脂質が、例えば、総コレステロール（「ＴＣ」）、トリグリセリド（「ＴＧ」）およびＬＤＬ−Ｃを含んでも良い。
【００１２】
特定の態様において、本願が、対象に治療的有効量のここに記載されたポリペプチド或いはこのようなポリペプチドを含む薬学組成物を投与することを含む、それを必要とする対象における血糖レベルを低下させる方法にも関わる。
【００１３】
一部の実施形態において、対象に投与されたポリペプチドの血清濃度は、９３ｎｍｏｌ／Ｌまたはそれ以下である場合に、上記ポリペプチドが、対象におけるＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取を増強する。一部の実施形態において、対象に投与されたポリペプチドの血清濃度は、９３ｎｍｏｌ／Ｌより高い場合に、上記ポリペプチドが、対象におけるＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取を阻害する。一部の実施形態において、対象におけるポリペプチドの血清濃度が、投与から約２０分間の時点に、ピーク濃度（すなわち、Ｃmax）に至る。したがって、一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドのＴmaxは、約２０分間である。一部の実施形態において、上記ピーク濃度は、９３ｎｍｏｌ／Ｌより高い。
【００１４】
一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドを投与された対象が、代謝疾患を罹患する、或いは代謝疾患が進展するリスクを有する。一部の実施形態において、上記代謝疾患が脂質代謝の異常調節に関係する。一部の実施形態において、上記代謝疾患は、コレステロール関連病気である。一部の実施形態において、上記代謝疾患は、高脂血症（例えば、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、またはそれらの組み合わせ）である。一部の実施形態において、上記代謝疾患がグルコース代謝の異常調節に関係する。一部の実施形態において、上記代謝疾患は、高血糖である。一部の実施形態において、上記代謝疾患は、糖尿病或いは肥満である。一部の実施形態において、対象が、心血管疾患（例えば、アテローム性動脈硬化疾患）、心臓疾患、または腎障害を罹患する、或いはそれらが進展するリスクを有する。
【００１５】
一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドが、対象における代謝に関連する一つ以上の化学的または生物学的分子のレベルまたは活性を低下または安定化できる。代謝に関連する化学的または生物学的分子は、グルコース、コレステロール、トリグリセリド、遊離脂肪酸、アミノ酸、ホルモン、ＬＤＬ−Ｃ、ＨＤＬ−Ｃ、ＨｂＡ１ｃ、血液尿素窒素、ミネラルから選ばれるものである。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドが、代謝変化を測定する一つ以上の生理学的パラメータのレベルまたは値を低下または安定化もできる。生理学的パラメータは、血糖、血圧、体重、脂肪量、ボディマス指数（ＢＭＩ）、炎症、アテローム性動脈硬化指数、心臓指数、腎指数、総脂肪指数および恒常性モデル評価（ＨＯＭＡ）指数から選ばれるものである。
【００１６】
一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドが、ＨＢＶ遺伝子型Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、またはＨのｐｒｅ−Ｓ１領域から由来するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドが、ＨＢＶ  遺伝子型Ｃのｐｒｅ−Ｓ１領域のアミノ酸１３−５９配列を含む。他の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドが、ＨＢＶ遺伝子型Ｃのｐｒｅ−Ｓ１領域のアミノ酸１３−５９と対応する、任意の他のＨＢＶ遺伝子型のｐｒｅ−Ｓ１領域から由来するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、上記ポリペプチドが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１−４０から選ばれるアミノ酸配列を含む。
【００１７】
一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドの一つ以上のアミノ酸残基は、削除、置換、または挿入されるが、ＮＴＣＰに結合する能力と、ＮＴＣＰ仲介の肝細胞への胆汁酸の輸送を両方向制御する能力を持ちつづける。特定の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドが、ＨＢＶ遺伝子型Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、またはＨのｐｒｅ−Ｓ１領域からの天然フランキングアミノ酸配列を含む。他の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１−４０から選ばれるいずれか一つのアミノ酸配列に対して、少なくとも約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する。一部の実施形態において、ポリペプチドが、ＨＢＶ遺伝子型Ｃのｐｒｅ−Ｓ１領域のアミノ酸１３に対応するグリシンおよび／またはＨＢＶ遺伝子型Ｃのｐｒｅ−Ｓ１領域のアミノ酸２０に対応するアスパラギンを含む。
【００１８】
一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドが、ポリペプチドを安定化できる、Ｎ−末端の疎水基修飾および／またはＣ−末端修飾を含む。上記疎水基が、例えば、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、コレステロールおよびアラキドン酸から選ばれても良い。上記Ｃ−末端修飾は、例えば、アミド化（アミノ化）、イソペンタンジオール化（ｉｓｏｐｅｎｔａｎｅｄｉｏｌｉｚａｔｉｏｎ）と、ポリペプチドを安定化できる任意のＣ−末端修飾から選ばれても良い。特定の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドが、ミリスチン酸によるＮ−末端修飾および／またはアミノ化によるＣ−末端修飾を含む。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１−４０から選ばれるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３のアミノ酸配列を含む。
【００１９】
一つの態様において、ここに記載されたポリペプチドが、代謝疾患に関連する一つ以上の症状を軽減できる。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチド或いはこのようなポリペプチドを含む薬学組成物は、治療的有効量の少なくとも一つの第２の薬剤の投与の前、同時、またはその後に、対象に投与される。上記第２の薬剤は、例えば、抗高脂血症剤、抗高血糖剤、抗糖尿病剤、抗肥満剤および胆汁酸類似物から選ばれても良い。例えば、上記第２の薬剤は、例えば、インスリン、メトホルミン（ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ）、シタグリプチン（ｓｉｔａｇｌｉｐｔｉｎ）、コレセベラム（ｃｏｌｅｓｅｖｅｌａｍ）、グリピジド（ｇｌｉｐｉｚｉｄｅ）、シンバスタチン（ｓｉｍｖａｓｔａｔｉｎ）、アトルバスタチン（ａｔｏｒｖａｓｔａｔｉｎ）、エゼチミブ（ｅｚｅｔｉｍｉｂｅ）、フェノフィブラート（ｆｅｎｏｆｉｂｒａｔｅ）、ニコチン酸（ｎｉｃｏｔｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）、オルリスタット（ｏｒｌｉｓｔａｔ）、ロルカセリン（ｌｏｒｃａｓｅｒｉｎ）、フェンテルミン（ｐｈｅｎｔｅｒｍｉｎｅ）、トピラマート（ｔｏｐｉｒａｍａｔｅ）、オベチコール酸（ｏｂｅｔｉｃｈｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）およびウルソデオキシコール酸（ｕｒｓｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）から選ばれても良い。
【００２０】
一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチド或いはこのようなポリペプチドを含む薬学組成物は、例えば、腸管外、肺内、鼻腔内、病巣内、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内および皮下投与を含む少なくとも一つの方式で、対象に投与する。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチド或いはこのようなポリペプチドを含む薬学組成物は、皮下投与で対象に投与する。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】図１Ａは、高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で測定されたＣｍｙｒ−４７の純度を示す例示的なグラフを示す。図１Ｂは、質量分析法で確定されたＣｍｙｒ−４７の分子量を示す例示的なグラフを示す。
【図２】図２Ａは、ＦＩＦＣで標識されたＣｍｙｒ−４７が、ツパイ初代肝細胞と結合することを示す。図２Ｂは、ＦＩＦＣで標識されたＣｍｙｒ−４７が、ヒト肝細胞から由来する細胞系とするＨｅｐＧ２細胞と結合することを示す。
【図３】図３は、ＦＩＦＣで標識されたＣｍｙｒ−４７が、ＮＴＣＰを発現するＬ０２細胞（「ＮＴＣＰ−Ｌ０２」）と結合するが、対照とするＬ０２細胞（「ＢＬＡＮＫ−Ｌ０２」）と結合しないことを説明する。
【図４】図４は、ＦＩＦＣで標識されたＣｍｙｒ−４７が、ＮＴＣＰを発現するＨＥＫ２９３細胞（「ＮＴＣＰ−２９３」）と結合するが、対照とするＨＥＫ２９３細胞（「ＢＬＡＮＫ−２９３」）と結合しないことを示す。サギＨＢＶから由来する、ＦＩＦＣで標識されたポリペプチドは、対照ポリペプチドとして用いられる。
【図５Ａ】図５Ａは、インビトロで胆汁酸の摂取におけるＣｍｙｒ−４７の作用を示す。シクロスポリンＡ（「ＣｓＡ」）は、陽性対照として用いられる。
【図５Ｂ】図５Ｂは、胆汁酸の摂取におけるＣｍｙｒ−４７の両方向の効果を説明する。
【図５Ｃ】図５Ｃと図５Ｄは、インビトロで胆汁酸の摂取におけるＣｓＡの効果を示し、かつＣｓＡの阻害効果を確認した。
【図５Ｄ】図５Ｃと図５Ｄは、インビトロで胆汁酸の摂取におけるＣｓＡの効果を示し、かつＣｓＡの阻害効果を確認した。
【図５Ｅ】図５Ｅと図５Ｆは、それぞれに、インビトロで、６２．５ｎｇ／ｍｌ（１１．５８ｎｍｏｌ／Ｌ）  Ｃｍｙｒ−４７に相当する低いモル濃度と１μｇ／ｍｌ（１８５．２３ｎｍｏｌ／Ｌ）  Ｃｍｙｒ−４７に相当する高いモル濃度で胆汁酸の摂取におけるＨＢＶ由来のポリペプチドの効果を示す。
【図５Ｆ】図５Ｅと図５Ｆは、それぞれに、インビトロで、６２．５ｎｇ／ｍｌ（１１．５８ｎｍｏｌ／Ｌ）  Ｃｍｙｒ−４７に相当する低いモル濃度と１μｇ／ｍｌ（１８５．２３ｎｍｏｌ／Ｌ）  Ｃｍｙｒ−４７に相当する高いモル濃度で胆汁酸の摂取におけるＨＢＶ由来のポリペプチドの効果を示す。
【図６】図６は、Ｃｍｙｒ−４７またはＣｓＡで４週間処理された高脂血症のゴールデンハムスターにおける血清総コレステロール（「ＴＣ」）の変化を示す。通常食で給餌されたゴールデンハムスターは、ＰＢＳで処理され、かつ「正常対照」として用いられるとともに、ＰＢＳで処理された高脂血症ゴールデンハムスターは「モデル対照」として用いられる。フェノフィブラート（「陽性処理」）で処理された高脂血症ゴールデンハムスターは、陽性対照として用いられる。
【図７】図７Ａは、ＨＢＶから由来するポリペプチドで処理する前の血清ＴＣのレベルを示す。図７Ｂは、４週間処理後の血清ＴＣのレベルを示す。
【図８】図８は、４週間のＣｍｙｒ−４７処理にわたって、高脂血症ゴールデンハムスターの血清トリグリセリド（「ＴＧ」）の変化を描く。
【図９】図９Ａは、ＨＢＶから由来するポリペプチドで処理する前の血清ＴＧのレベルを示す。図９Ｂは、４週間処理後の血清ＴＧのレベルを示す。
【図１０】図１０は、４週間のＣｍｙｒ−４７処理後、高脂血症ゴールデンハムスターの血清ＬＤＬ−Ｃのレベルを描く。
【図１１】図１１Ａは、ＨＢＶから由来するポリペプチドで処理する前の血清ＬＤＬ−Ｃのレベルを示す。図１１Ｂは、４週間処理後の血清ＬＤＬ−Ｃのレベルを示す。
【図１２】図１２は、４週間のＣｍｙｒ−４７処理後、高脂血症ゴールデンハムスターの血清ＨＤＬ−Ｃのレベルを示す。
【図１３】図１３は、４週間のＣｍｙｒ−４７処理後、高脂血症ゴールデンハムスターのアテローム性動脈硬化指数（「ＡＩ」）を描く。
【図１４】図１４は、４週間のＣｍｙｒ−４７処理後、高脂血症ゴールデンハムスターの血清総胆汁酸（ＴＢＡ）の変化を示す。比較として、フェノフィブラートとＣｓＡもテストされた。
【図１５】図１５は、三つの異なる用量（１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇ）のＣｍｙｒ−４７で４週間処理された高脂血症ゴールデンハムスターの血清ＴＣの変化を示す。通常食で給餌されたゴールデンハムスターは、ＰＢＳで処理され、かつ「正常対照」として用いられるとともに、ＰＢＳで処理された高脂血症ゴールデンハムスターは「モデル対照」として用いられる。
【図１６】図１６は、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇのＣｍｙｒ−４７で４週間処理された高脂血症ゴールデンハムスターの血清ＴＧの変化を示す。
【図１７】図１７は、４週間のＣｍｙｒ−４７またはＣｓＡ処理にわたって、Ｚｕｃｋｅｒ糖尿病性ｆａｔｔｙラットにおける血清グルコース（「ＧＬＵ」）の変化を示す。ＰＢＳで処理されたＺｕｃｋｅｒ  ｌｅａｎラットは、「正常対照」として用いられるとともに、ＰＢＳで処理されたＺｕｃｋｅｒ糖尿病性ｆａｔｔｙラットは、「モデル対照」として用いられる。メトホルミン（「陽性処理」）で処理されたＺｕｃｋｅｒ糖尿病性ｆａｔｔｙラットは、陽性対照として用いられる。
【図１８】図１８Ａは、ＨＢＶから由来するポリペプチドで処理する前の血清ＧＬＵのレベルを示す。図１８Ｂは、４週間処理後の血清ＧＬＵのレベルを示す。
【図１９】図１９は、４週間のＣｍｙｒ−４７処理にわたって、Ｚｕｃｋｅｒ糖尿病性ｆａｔｔｙラットにおけるＨｂＡ１ｃの変化を示す。
【図２０】図２０Ａは、ＨＢＶから由来するポリペプチドで処理する前のＨｂＡ１ｃのレベルを示す。図２０Ｂは、４週間処理後のＨｂＡ１ｃのレベルを示す。
【図２１】図２１は、４週間のＣｍｙｒ−４７処理にわたって、Ｚｕｃｋｅｒ糖尿病性ｆａｔｔｙラットにおけるインスリンの変化を示す。
【図２２】図２２は、４週間のＣｍｙｒ−４７処理にわたって、Ｚｕｃｋｅｒ糖尿病性ｆａｔｔｙラットにおける血清ＴＣの変化を示す。
【図２３】図２３Ａは、ＨＢＶから由来するポリペプチドで処理する前の血清ＴＣのレベルを示す。図２３Ｂは、４週間処理後の血清ＴＣのレベルを示す。
【図２４】図２４は、４週間のＣｍｙｒ−４７処理にわたって、Ｚｕｃｋｅｒ糖尿病性ｆａｔｔｙラットにおける血清ＴＧの変化を示す。
【図２５】図２５Ａは、ＨＢＶから由来するポリペプチドで処理する前の血清ＴＧのレベルを示す。図２５Ｂは、４週間処理後の血清ＴＧのレベルを示す。
【図２６】図２６は、４週間のＣｍｙｒ−４７処理後のＺｕｃｋｅｒ糖尿病性ｆａｔｔｙラットにおける血液尿素窒素（「ＢＵＮ」）のレベルを示す。
【図２７】図２７Ａ−Ｃは、４週間のＣｍｙｒ−４７処理後のＺｕｃｋｅｒ糖尿病性ｆａｔｔｙラットにおける心臓指数、腎指数および総脂肪指数を描く。「Ｃｍｙｒ−４７（Ｌ）」は、１０ｍｇ／ｋｇ／ｄのＣｍｙｒ−４７の用量を指し、「Ｃｍｙｒ−４７（Ｈｉ）」は、３０ｍｇ／ｋｇ／ｄのＣｍｙｒ−４７の用量を指す。
【図２８】図２８は、４週間のＣｍｙｒ−４７処理後のＺｕｃｋｅｒ糖尿病性ｆａｔｔｙラットにおける血清ＴＢＡのレベルを示す。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
具体的な実施形態
特に定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術および科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者が一般に理解するものと同じ意味を有する。本開示の目的によって、以下の用語を以下に定義する。
【００２３】
冠詞「１」と「一つ」は、１つまたは複数（すなわち、少なくとも１つ）の上記冠詞の文法的な目的語を指す。例えば、「一つの要素」は、一つの要素または複数の要素を意味する。
【００２４】
コンテキストに明確に説明されない限り、用語「または」は、用語「および／または」を意味し、それと互換的に用いられる。
【００２５】
本開示または請求項のいずれにおいても使用される限り、用語「備える」、「含有する」、「有する」またはそれらの用語の文法的な変形に対して、このような用語は、用語「含む」と同様の態様に含まれ、「含む」が、請求項における移行語として用いられる際と類似する方式で解釈される。用語「含む」またはその文法的な変形は、表現「含むが、それらに限定されない」を意味し、それと互換的に用いられる。
【００２６】
用語「約」は、数、レベル、値、回数、頻度、百分率、寸法、サイズ、量、重量、または長さに対して、３０、２５、２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１％で変化する数、レベル、値、回数、頻度、百分率、寸法、サイズ、量、重量、または長さを意味する。用語「約」は、数値範囲と一緒に用いられる場合に、それが、境界を上記数値の上下に拡張することによって、該範囲を変更する。一般に、用語「約」は、記載された値より≦１０％で高い若しくは低い数値を変更することを指す。
【００２７】
Ｉ．ポリペプチド
本開示のある態様が、例えば、糖尿病と高脂血症を含む代謝疾患を治療する、ＨＢＶから由来するポリペプチドを提供する。上記ポリペプチドは、ＨＢＶのｐｒｅ−Ｓ１領域から由来しても良く、インビトロ（例えば、溶液または無細胞系（例えば、細胞溶解物または再構成系）、或いは例えば培養されたエクスビボの細胞（例えば、ＮＴＣＰを発現する細胞、または肝細胞））でまたはインビボ（対象における細胞）でＮＴＣＰと結合しても良い。上記対象は、哺乳類であっても良い。一部の実施形態において、上記対象は、ヒトであっても良い。
【００２８】
用語「ポリペプチド」、「ペプチド」、「タンパク質」は互換的に用いられ、全長タンパク質および断片、ならびに全長タンパク質および断片のバリアントを含む。ここに記載されたポリペプチドのこのような断片とバリアントが、少なくともポリペプチドのＮＴＣＰと結合する生物学的活性と、ＮＴＣＰ仲介の肝細胞への胆汁酸の輸送を両方向制御する生物学的活性を持ちつづける。「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」が、天然および／または非天然のアミノ酸残基を含んでも良い。それらの用語は、さらに例えば、グリコシル化、シアル酸化、アセチル化、および／またはリン酸化されたタンパク質を含む翻訳後修飾タンパク質を含む。上記用語は、さらに、一つ以上のアミノ酸残基に（例えば、Ｎ−末端および／またはＣ−末端に）化学修飾されたタンパク質を含む。例えば、ここに開示されたポリペプチドのＮ−末端は、例えば、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、コレステロールとアラキドン酸を含む疎水基に修飾されても良い。一部の実施形態において、ここに開示されたポリペプチドのＣ−末端は、ポリペプチドの安定化のため、修飾されても良い。上記Ｃ−末端修飾は、アミド化（アミノ化）、イソペンタンジオール化と、ポリペプチドを安定化できる任意の他のＣ−末端修飾から選ばれても良い。
【００２９】
ここに使用されたように、用語「ＨＢＶから由来するポリペプチド」または「ＨＢＶ由来のポリペプチド」は、ポリペプチドの起源または由来はＨＢＶであることを指し、かつ天然、組み換え、合成、或いは精製のポリペプチドを含む。用語「ＨＢＶから由来するポリペプチド」または「ＨＢＶ由来のポリペプチド」は、全長天然ＨＢＶポリペプチドまたはその断片、ならびに全長天然ポリペプチドまたはその断片のバリアントを指す。一部の実施形態において、上記断片は、少なくとも３−５個のアミノ酸、少なくとも５−１０個のアミノ酸、少なくとも１０−２０個のアミノ酸、少なくとも２０−３０個のアミノ酸、少なくとも３０−５０個のアミノ酸、または天然配列の全部のアミノ酸からなっても良く、或いは当業者に、天然配列から由来することを同定されても良い。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドは、任意のＨＢＶサブタイプのＬタンパク質のｐｒｅ−Ｓ１領域から由来しても良い。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドは、任意のＨＢＶサブタイプのＬタンパク質のｐｒｅ−Ｓ１領域全体を含んでも良い。特定の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドは、ＨＢＶ遺伝子型Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、ＧおよびＨのいずれか一つのＬタンパク質のｐｒｅ−Ｓ１領域から由来しても良い。それらのＨＢＶ遺伝子型のゲノム配列は、それぞれに、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＫＣ８７５２６０（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１）、ＡＹ２２０７０４（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２）、ＡＦ４６１３６３（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４３）、ＡＹ７９６０３０（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４）、ＡＢ２０５１２９（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４５）、ＤＱ８２３０９５（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６）、ＨＥ９８１１７６（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７）およびＡＢ１７９７４７（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８）に見つけられる。特定の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドは、ＨＢＶ遺伝子型ＣのＬタンパク質のｐｒｅ−Ｓ１領域から由来しても良い。ここに記載されたＨＢＶから由来するポリペプチドが、天然ＨＢＶポリペプチドに対応する、ここに記載された一つ以上の生物学的活性（少なくともポリペプチドのＮＴＣＰと結合する生物学的活性と、ＮＴＣＰ仲介の肝細胞への胆汁酸の輸送を両方向制御する生物学的活性を含む）を持ちつづける。
【００３０】
ここに使用された、ここに記載されたポリペプチド、ＨＢＶから由来するポリペプチド、またはＨＢＶ由来のポリペプチドに関連する「バリアント」は、アミノ酸配列の点で、所与のポリペプチド（すなわち、ここに記載されたポリペプチド、ＨＢＶから由来するポリペプチド、またはＨＢＶ由来のポリペプチド）と区別するが、所与のポリペプチドのここに記載された一つ以上の生物学的活性を持ちつづけるポリペプチドを指す。ここに記載されたバリアントポリペプチドが、少なくともポリペプチドのＮＴＣＰと結合する生物学的活性と、ＮＴＣＰ仲介の肝細胞への胆汁酸の輸送を両方向制御する生物学的活性を持ちつづける。ここに記載されたバリアントポリペプチドは、所与のポリペプチドに対して、一つ以上のアミノ酸の添加（例えば、挿入）、削除、または置換を有しても良い。一部の実施形態において、ここに記載されたバリアントポリペプチドは、所与のポリペプチドに対して、１−３０、１−２０、１−１０、１−８、１−５、または１−３個（これらの範囲の間のすべての整数を含む）のアミノ酸の添加（例えば、挿入）、削除、または置換を有しても良い。例えば、ポリペプチド配列は、アミノ酸の保存的置換を含んでも良い。アミノ酸の保存的置換、すなわち、アミノ酸が、類似する特性（例えば、親水性と、帯電領域の程度と分布）を有する異なるアミノ酸に置換されることは、典型的にはわずかな変化しか伴わず、したがってポリペプチドの生物学的活性を有意に変化させない。これらのわずかな変化は、部分的に、アミノ酸の疎水性および電荷を斟酌することに基づき、アミノ酸の疎水性指数を考慮することによって、同定できる。類似の疎水性指数および親水性値のアミノ酸は、置換されるとともに、タンパク質機能を保持できる。アミノ酸の疎水性指数と親水性値は、アミノ酸の特定の側鎖に影響される。その観察と一致し、生物学的機能が一致するアミノ酸の置換は、アミノ酸（特にそれらのアミノ酸の側鎖）の相対的類似性に依存し、疎水性、親水性、電荷、サイズと他の特性から明らかになる。
【００３１】
用語「バリアント」は、さらに、所与のポリペプチドと特定の同一性、例えば、少なくとも約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するポリペプチドを含む。ここに使用された「バリアント」は、さらに、ＨＢＶタンパク質の天然配列に対応する、所与のポリペプチドの部分を含有するポリペプチドを含む。「バリアント」は、さらに、一つ以上の異なるソースから由来するポリペプチドを含む融合タンパク質またはキメラタンパク質を指す。ここに記載された融合タンパク質の非限定的な例、例えば、ＨＢＶから由来する一つのポリペプチドと非ＨＢＶタンパク質から由来するもう一つのポリペプチドとの融合タンパク質、異なるＨＢＶサブタイプから由来する二つのポリペプチドの融合タンパク質、いずれか一つのＨＢＶサブタイプのＬタンパク質の異なる領域から由来する、或いはいずれか一つのＨＢＶサブタイプのＬタンパク質のｐｒｅ−Ｓ１領域における異なる配列から由来する二つのポリペプチドの融合タンパク質を含む。
【００３２】
用語「バリアント」は、さらに、所与のポリペプチドと同じのアミノ酸配列（すなわち、ここに記載されたポリペプチド、ＨＢＶから由来するポリペプチド、またはＨＢＶ由来のポリペプチド）を含み、かつ所与のポリペプチドの一つ以上の生物学的活性を持ちつづけるが、所与のポリペプチドと異なる方式で化学的および／または翻訳後修飾されたポリペプチドを含む。「バリアント」は、さらに、タンパク質分解、リン酸化、またはその他の翻訳後修飾のような差別化処理されたが、ＮＴＣＰと結合する生物学的活性とＮＴＣＰ仲介の肝細胞への胆汁酸の輸送を両方向制御する生物学的活性を持ちつづけるポリペプチドまたはその断片を記述するために使用されても良い。ここの「バリアント」の使用は、特に説明しない限り、バリアントの断片を含むことを意図する。用語「バリアント」は、さらに、ヘパドナウイルス属の異なるウイルス種、株、またはサブタイプに発見された相同性ポリペプチド配列を含む。ＨＢＶは、そのエンベロープタンパク質に存在する抗原エピトープによって、四つの主な血清型（ａｄｒ、ａｄｗ、ａｙｒ、ａｙｗ）に分けられ、かつゲノムの全体ヌクレオチド配列の変異によって、八つの遺伝子型（Ａ−Ｈ）に分けられる。したがって、用語「バリアント」は、それらのＨＢＶサブタイプのいずれか一つに発見された相同性ポリペプチドを含む。「バリアント」は、さらに、Ｎおよび／またはＣ末端に添加されたそれらのＨＢＶサブタイプのいずれか一つの天然フランキングアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。
【００３３】
用語「保存的アミノ酸置換」と「保存的置換」は、ここに互換的に用いられ、アミノ酸組における意図されたアミノ酸交換を指し、ただし、アミノ酸は、サイズ、構造、電荷、および／または極性が似ている別のアミノ酸に交換された。類似する側鎖を有するアミノ酸残基ファミリーは、当分野に公知されたものであり、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、無極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）と芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を含む。そして、一部の実施形態において、ポリペプチドにおけるアミノ酸残基は、同じ側鎖ファミリーの別のアミノ酸残基に置換されても良い。他の実施形態において、アミノ酸のストリング（ｓｔｒｉｎｇ）は、構造的に類似するが、側鎖ファミリーメンバーの順番および／または組成が異なるストリングに置換されても良い。その他の実施形態において、変異は、ポリペプチドの全部または一部にランダムに導入されても良い。保存的アミノ酸置換の例は、例えば、脂肪族または疎水性アミノ酸Ａｌａ、Ｖａｌ、ＬｅｕおよびＩｌｅの一つと、その四つの組における他のアミノ酸の一つとの交換；ヒドロキシルを含有する残基ＳｅｒとＴｈｒの間の交換；酸性残基ＡｓｐとＧｌｕの間の交換；アミド残基ＡｓｎとＧｌｎの間の交換；塩基性残基Ｌｙｓ、ＡｒｇおよびＨｉｓの間の交換；芳香族残基Ｐｈｅ、ＴｙｒおよびＴｒｐの間の交換；小サイズアミノ酸Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＭｅｔおよびＧｌｙの間の交換を含む。保存的アミノ酸を類似の構造的に関連するアミノ酸で置換することのような保存的置換は、ポリペプチドの生物学的活性に実質的な影響を与えないと合理的に予想される。
【００３４】
用語「配列同一性」（例えば、「配列は、５０％同一する」）は、比較ウィンドウにおいて、アミノ酸ごとに配列が同一する程度を指す。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドは、所与のポリペプチドの配列に対して、少なくとも約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むが、所与のポリペプチドの一つまたは以上の生物学的活性を持ちつづける。「百分比同一性」（または「％同一性」）は、比較ウィンドウで２つの最適に整列された配列を比較し、一致した位置の数を得るために、両方の配列において同一のアミノ酸が存在する位置の数を決定し、一致した位置の数を比較ウィンドウ内の位置の総数で割り、そして結果に１００を掛けて配列同一性のパーセンテージを得ることで、計算できる。比較ウィンドウを整列する配列の最適アライメントは、当分野で利用可能なアルゴリズム（例えば、ＢＬＡＳＴ(登録商標)ファミリーのプログラム）のコンピューター化実行、または目視検査によって実施されてもよい、選択したさまざまな方法のいずれかによって最適なアライメント（すなわち、比較ウィンドウで最も高い割合の相同性が得られるもの）が生成される。配列比較において、一つの配列は、参照配列として作用し、テスト配列はそれと比較される。配列比較アルゴリズムを使用する場合に、テスト配列と参照配列をコンピューターに入力し、必要に応じて、サブ配列の座標を設定し、そして配列アルゴリズムプログラムのパラメータを設定する。次いで、配列比較アルゴリズムは、指定されたプログラムパラメーターに基づいて、テスト配列の、参照配列に対する現在の配列同一性を計算する。配列アルゴリズムプログラムのパラメータの設定は、本分野に公知されたものである。例えば、比較ウィンドウは、一方または両方の比較配列の全長にわたって指定することができ、例えば、参照配列の全長にわたって、参照配列中のアミノ酸の総数の５％までのギャップが許容されてもよい。
【００３５】
ここに使用されたように、ここに記載されたポリペプチドの「生物学的活性」は、ポリペプチドのＮＴＣＰと結合する能力と、ＮＴＣＰ仲介の肝細胞への胆汁酸の摂取を両方向制御する能力を含む。ここに使用されたように、分子または経路の「両方向制御」は、ここに記載されたＨＢＶ由来のポリペプチドが、ある濃度以下で、分子または経路の活性を増強する（すなわち、増強剤として機能する）が、その濃度を超えると、分子または経路の活性を阻害する（すなわち、阻害剤として機能する）ことを指す。例えば、ここに記載されたポリペプチドが、ＮＴＣＰと結合し、ある濃度以下で肝細胞におけるＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取を促進できる（すなわち、ＮＴＣＰの「増強剤」として機能する）。同じポリペプチドは、ＮＴＣＰと結合するが、ある濃度を超える場合にＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取を阻害する（すなわち、ＮＴＣＰの「ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ」として機能する）こともできる。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドは、９３ｎｍｏｌ／Ｌ以下でＮＴＣＰ増強剤として、９３ｎｍｏｌ／Ｌを超える場合にＮＴＣＰ阻害剤として機能する。例えば、ここに記載されたＣｍｙｒ−４７ポリペプチドは、５００ｎｇ／ｍｌ以下でＮＴＣＰ増強剤として、５００ｎｇ／ｍｌを超える場合にＮＴＣＰ阻害剤として機能する。
【００３６】
一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドは、インビトロでＮＴＣＰ仲介の肝細胞への胆汁酸の摂取を両方向制御する。ここに記載されたポリペプチドは、ある濃度以下で、インビトロでＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取を促進するが、上記ポリペプチドは、その濃度を超える場合に、インビトロでＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取を阻害する。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドは、９３ｎｍｏｌ／Ｌ以下で、インビトロでＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取を促進するが、上記ポリペプチドは、９３ｎｍｏｌ／Ｌを超える場合に、インビトロでＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取を阻害する。例えば、ここに記載されたＣｍｙｒ−４７ポリペプチドは、５００ｎｇ／ｍｌ以下で、インビトロでＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取を促進するが、５００ｎｇ／ｍｌを超える場合に、インビトロでＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取を阻害する。
【００３７】
一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドは、投与されたポリペプチドの特定の血清濃度の以下で、ポリペプチドで処理された対象におけるＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取を促進する。上記ポリペプチドは、投与されたポリペプチドの血清濃度を超える場合に、ポリペプチドで処理された対象におけるＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取を阻害する。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドで処理された対象におけるポリペプチドの血清濃度は、９３ｎｍｏｌ／Ｌ以下である場合に、ポリペプチド、対象におけるＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取を増強できる。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドで処理された対象におけるポリペプチドの血清濃度は、９３ｎｍｏｌ／Ｌを超える場合に、ポリペプチド、対象におけるＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取を阻害できる。例えば、ここに記載されたＣｍｙｒ−４７ポリペプチドが、５００ｎｇ／ｍｌの血清濃度以下である場合に、対象におけるＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取を増強できるが、５００ｎｇ／ｍｌの血清濃度を超える場合に、対象におけるＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取を阻害できる。
【００３８】
ここに記載されたポリペプチドの生物学的活性は、代謝疾患を治療する能力、または代謝疾患に関連する一つ以上の症状を改善する能力を含む。上記生物学的活性は、さらにここに記載されたポリペプチドが代謝性疾患の発展を予防する能力を含む。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドの生物学的活性は、代謝に関連する一つ以上の化学的または生物学的分子のレベルまたは活性を調整する、および／または代謝変化を測定する一つ以上の生理学的パラメータのレベルまたは値を調整するポリペプチドの能力を含む。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドの「生物学的活性」は、ポリペプチドが、一つ以上のこのような化学的または生物学的分子のレベルまたは活性、または生理学的パラメータを低下または安定化する能力を含む。一部の実施形態において、上記代謝は、胆汁酸代謝、グルコース代謝、脂質代謝、および／またはアミノ酸代謝を指す。代謝に関連する化学的または生物学的分子は、例えば、グルコース、トリグリセリド、コレステロール、遊離脂肪酸、胆汁酸、アミノ酸、ホルモン（例えば、インスリン）、ＬＤＬ−Ｃ、ＨＤＬ−Ｃ、ＨｂＡ１ｃ、血液尿素窒素およびミネラルを含む。代謝変化を測定する生理学的パラメータは、例えば、血糖、血圧、体重、脂肪量、ボディマス指数（ＢＭＩ）、炎症、アテローム性動脈硬化指数（ＡＩ）、心臓指数、腎指数、総脂肪指数および恒常性モデル評価（ＨＯＭＡ）指数を含む。
【００３９】
特定の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドの「生物学的活性」は、対象における血清胆汁酸のレベルを増加するポリペプチドの能力を含む。特定の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドの「生物学的活性」は、肝細胞における胆汁酸合成によって、コレステロール除去を増強するポリペプチドの能力を含む。
【００４０】
一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドの生物学的活性は、ポリペプチドを投与された対象における脂質代謝に関連する一つ以上の化学的または生物学的分子の血清レベルを低下する能力を含む。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドの生物学的活性は、ポリペプチドを投与された対象における血清脂質（例えば、トリグリセリド、総コレステロール、またはＬＤＬ−Ｃ）の血清レベルを低下する能力を含む。
【００４１】
一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドの生物学的活性は、ポリペプチドを投与された対象におけるグルコース代謝に関連する一つ以上の化学的または生物学的分子の血清レベルを低下する能力を含む。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドの生物学的活性は、ポリペプチドを投与された対象におけるグルコースまたはＨｂＡ１ｃの血清レベルを低下する能力を含む。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドが、対象におけるインスリンの血清レベルを安定化できる。
【００４２】
特定の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドの「生物学的活性」は、対象における代謝病気を治療するポリペプチドの能力を含む。一部の実施形態において、上記代謝病気が脂質代謝の異常調節に関係する。上記代謝疾患は、例えば、高脂血症（高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、または両者を含む）のようなコレステロール関連病気を含む。一部の実施形態において、上記代謝病気がグルコース代謝の異常調節に関係する。上記代謝疾患は、例えば、糖尿病と肥満を含む。
【００４３】
特定の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドの「生物学的活性」は、このような病気の一つ以上の症状または合併症を改善または予防するポリペプチドの能力を含む。特定の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドの「生物学的活性」は、このような病気が患者の健康に及ぼす悪影響を緩和する、またはこのような病気を発展するリスクを低下するポリペプチドの能力を含む。特定の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドの「生物学的活性」は、例えば、アテローム性動脈硬化および／または心血管疾患、心臓疾患、腎障害、または肥満のような他の関連する疾患を発展する重症度またはリスクを低下するポリペプチドの能力を含む。
【００４４】
理論にとらわれず、ここに記載されたポリペプチドのそれらの生物学的活性は、対象にポリペプチドを投与する後に血清濃度でのポリペプチドによる、対象におけるＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取の両方向制御に起因する可能性があると信じられる。一部の実施形態において、このようなポリペプチドを投与された対象の血流におけるここに記載されたポリペプチドの濃度は、特定の濃度以下である場合に、対象における胆汁酸摂取は、増加される。一部の実施形態において、対象の血流におけるここに記載されたポリペプチドの濃度は、特定の濃度を超える場合に、対象における胆汁酸摂取は、阻害される。一部の実施形態において、このようなポリペプチドを投与された対象の血流におけるここに記載されたポリペプチドの濃度は、９３ｎｍｏｌ／Ｌ以下である場合に、対象における胆汁酸摂取は、増加される。一部の実施形態において、対象の血流におけるここに記載されたポリペプチドの濃度は、９３ｎｍｏｌ／Ｌを超える場合に、対象における胆汁酸摂取は、阻害される。例えば、このようなポリペプチドを投与された対象の血流におけるここに記載されたＣｍｙｒ−４７ポリペプチドの濃度は、５００ｎｇ／ｍｌ以下である場合に、対象における胆汁酸摂取は、増加される。対象の血流におけるここに記載されたＣｍｙｒ−４７ポリペプチドの濃度は、５００ｎｇ／ｍｌを超える場合に、対象における胆汁酸摂取は、阻害される。
【００４５】
ここに記載されたポリペプチドの生物学的活性を確定するための様々なインビボ、インビトロおよびエクスビボ試験は、考えられる。ここに記載されたポリペプチドの生物学的活性は、ここに記載されたポリペプチドで処理された対象からサンプルを採取することでインビボで確定する。サンプルは、例えば肝臓、筋肉、脂肪、および膵臓などの特定の組織から採取された生検サンプル、または死後の動物から採取された急速冷凍組織であってもよい。一部の実施形態において、サンプルは、対象からの血液から採取された血清サンプルであってもよい。対象から血清サンプルを採取するための様々な方法が当分野において公知されたものであり、例えば、尾部出血、眼窩後穿刺、および心臓穿刺を含む。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドの生物学的活性は、ここに記載されたポリペプチドを、形質転換細胞系または動物から単離された細胞のいずれか一つとする細胞と接触させることにより、インビトロで確定する。一部の実施形態において、上記細胞は動物から単離された初代肝細胞である。
【００４６】
様々な方法は、定量的な手段でＮＴＣＰを両方向制御するここに記載されたポリペプチドの能力を確定するために使用できる。例えば、ＮＴＣＰを発現する細胞（例えば、ＮＴＣＰを過剰発現する哺乳動物細胞または肝細胞）は、胆汁酸および増加する量のここに記載されたポリペプチドでインビトロで処理されてもよい。検出のために、細胞に添加された胆汁酸は、放射能標識または化学的標識されても良い。次いで、細胞を採取し、細胞に摂取された胆汁酸の量を測定できる。ポリペプチドが特定の濃度以下の場合に胆汁酸摂取を増強しつつ、上記濃度を超える場合に胆汁酸摂取を阻害する場合に、ここに記載されたポリペプチドのＮＴＣＰを両方向制御する能力を確定される。
【００４７】
ポリペプチドの生物学的活性の確定に有用な例示的な試験は、ここに記載されたポリペプチドで処理された対象から採取されたサンプルでの機能的分析を含み、例えば、グルコース産生試験、グルコース摂取試験、脂肪酸酸化試験、コレステロール試験、胆汁酸試験、尿素試験およびトリグリセリド試験を含む。一部の実施形態において、上記試験は、さらに例えば、ポリペプチドとＮＴＣＰの間の結合分析、胆汁酸を輸送するためのＮＴＣＰ活性試験、および、例えば、胆汁酸代謝、グルコース代謝、脂質代謝およびアミノ酸代謝のような代謝に関わる分子的要因の発現、局在化、または活性分析を含む。ここに記載されたポリペプチドの生物学的活性を確定するための前記の技術と手順は、当分野において公知された方法および本明細書に提供される手順に従って行うことができる。
【００４８】
一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドは、任意のＨＢＶサブタイプのｐｒｅ−Ｓ１領域のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドが、ＨＢＶ遺伝子型Ｃのｐｒｅ−Ｓ１領域のアミノ酸１３−５９配列：ＧＴＮＬＳＶＰＮＰＬＧＦＦＰＤＨＱＬＤＰＡＦＧＡＮＳＮＮＰＤＷＤＦＮＰＮＫＤＨＷＰＥＡＮＱＶＧ  （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３）を含む。他の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドは、例えば、遺伝子型Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、ＧおよびＨのような別のＨＢＶ遺伝子型からの対応するｐｒｅ−Ｓ１配列を含む。例えば、一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドが：
ＨＢＶ遺伝子型Ａのｐｒｅ−Ｓ１  アミノ酸  １３−５９：ＧＴＮＬＳＶＰＮＰＬＧＦＦＰＤＨＱＬＤＰＡＦＧＡＮＳＮＮＰＤＷＤＦＮＰＶＫＤＤＷＰＡＡＮＱＶＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４）、
ＨＢＶ遺伝子型  Ｂのｐｒｅ−Ｓ１  アミノ酸  １３−５９：ＧＴＮＬＳＶＰＮＰＬＧＦＦＰＤＨＱＬＤＰＡＦＫＡＮＳＥＮＰＤＷＤＬＮＰＮＫＤＮＷＰＤＡＮＫＶＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５）、
ＨＢＶ遺伝子型  Ｄのｐｒｅ−Ｓ１  アミノ酸  ２−４８：ＧＱＮＬＳＴＳＮＰＬＧＦＦＰＤＨＱＬＤＰＡＦＲＡＮＴＡＮＰＤＷＤＦＮＰＮＫＤＴＷＰＤＡＮＫＶＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６）、
ＨＢＶ遺伝子型  Ｅのｐｒｅ−Ｓ１  アミノ酸  １２−５８：ＧＫＮＩＳＴＴＮＰＬＧＦＦＰＤＨＱＬＤＰＡＦＲＡＮＴＲＮＰＤＷＤＨＮＰＮＫＤＨＷＴＥＡＮＫＶＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７）、
ＨＢＶ遺伝子型  Ｆのｐｒｅ−Ｓ１  アミノ酸  １３−５９：ＧＱＮＬＳＶＰＮＰＬＧＦＦＰＤＨＱＬＤＰＬＦＲＡＮＳＳＳＰＤＷＤＦＮＴＮＫＤＳＷＰＭＡＮＫＶＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８）、
ＨＢＶ遺伝子型  Ｇのｐｒｅ−Ｓ１  アミノ酸  １２−５８：ＧＫＮＬＳＡＳＮＰＬＧＦＬＰＤＨＱＬＤＰＡＦＲＡＮＴＮＮＰＤＷＤＦＮＰＫＫＤＰＷＰＥＡＮＫＶＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９）、または
ＨＢＶ遺伝子型  Ｈのｐｒｅ−Ｓ１  アミノ酸  １３−５９：ＧＱＮＬＳＶＰＮＰＬＧＦＦＰＤＨＱＬＤＰＬＦＲＡＮＳＳＳＰＤＷＤＦＮＴＮＫＤＮＷＰＭＡＮＫＶＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０）
を含んでも良い。
【００４９】
一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドは、ＨＢＶのｐｒｅ−Ｓ１領域の部分を含み、上記部分は、少なくともＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  ２３と３４−４０から選ばれるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドは、ＨＢＶのｐｒｅ−Ｓ１領域全体を含む。
【００５０】
一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドは、１０−１００個のアミノ酸の長さを有する。例えば、上記ポリペプチドは、１５−１００、１５−８０、２０−１００、２０−８０、２０−６０、２５−６０、３０−６０、３５−６０、または４０−６０個のアミノ酸の長さ有する（これらの範囲内のすべての整数を含む）。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドの長さは、少なくとも２０、例えば、少なくとも２５、３０、３５、４０個のアミノ酸である。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドは、２０、２５、３０、３５、４０、４７、５５、６０個のアミノ酸の長さを有する。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドは、４７個のアミノ酸の長さを有する。ここに記載されたポリペプチドの異なる長さを有するバリアントは、対応するポリペプチドに関連する一つ以上の、少なくともＮＴＣＰと結合する生物学活性と、ＮＴＣＰ仲介の肝細胞への胆汁酸輸送を両方向制御する生物学的活性を含む生物学的活性を持ちつづける。
【００５１】
一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドは、疎水基によるＮ−末端修飾を含む。例えば、上記疎水基が、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、コレステロールおよびアラキドン酸から選ばれても良い。一部の実施形態において、上記疎水基は、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸およびコレステロールから選ばれても良い。一部の実施形態において、上記疎水基は、ミリスチン酸であっても良い。特定の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３と３４−４０から選ばれるアミノ酸配列を含み、ただし、上記Ｎ末端は、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸およびコレステロールから選ばれる疎水基で修飾される。特定の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３と３４−４０から選ばれるアミノ酸配列を含み、ただし、上記Ｎ末端は、ミリストイル化された。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３のアミノ酸配列を含み、ただし、上記Ｎ末端は、ミリストイル化された。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドは、ポリペプチドの安定化のためのＣ−末端修飾を含む。例えば、上記Ｃ−末端修飾は、アミド化（アミノ化）、イソペンタンジオール化と、ここに記載されたポリペプチドを安定化できる任意のＣ−末端修飾から選ばれても良い。一部の実施形態において、上記Ｃ−末端修飾は、アミド化（アミノ化）であっても良い。例えば、ここに記載されたポリペプチドは、ＮＯ：２３のアミノ酸配列を含み、ただし上記Ｎ末端はミリストイル化され、および／または上記Ｃ末端は、アミド化（アミノ化）される。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドが、ＮＯ：３のアミノ酸配列（Ｃｍｙｒ−４７）を含む。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４−４０から選ばれるアミノ酸配列を含み、ただし、上記Ｎ末端はミリストイル化され、および／または上記Ｃ末端は、アミド化（アミノ化）で修飾される。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４−２０から選ばれるアミノ酸配列を含む。Ｎ末端および／またはＣ末端に修飾されるここに記載されたポリペプチドのバリアントは、同じ方式で修飾されていない対応するポリペプチドの一つ以上の、少なくともＮＴＣＰと結合する生物学活性と、ＮＴＣＰ仲介の肝細胞への胆汁酸輸送を両方向制御する生物学的活性を含む生物学的活性を持ちつづける。
【００５２】
ここに記載されたポリペプチドのバリアントは、本開示に考えられ、一つ以上のアミノ酸の削除、置換、または挿入を有する、ポリペプチドの一つ以上の、少なくともＮＴＣＰと結合する生物学活性と、ＮＴＣＰ仲介の肝細胞への胆汁酸輸送を両方向制御する生物学的活性を含む生物学的活性を持ちつづけるバリアントを含む。好ましくは、ここに記載されたポリペプチドは、ＨＢＶ遺伝子型Ｃのｐｒｅ−Ｓ１領域のアミノ酸１３に対応するグリシン（すなわち、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３のＮ−末端グリシン）を持ちつづける。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドは、ＨＢＶ遺伝子型Ｃのｐｒｅ−Ｓ１領域のアミノ酸２０に対応するアスパラギンを持ちつづける。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドは、ＨＢＶのｐｒｅ−Ｓ１領域に一つ以上の天然に発生する変異を有しても良い。一部の実施形態において、ＨＢＶのｐｒｅ−Ｓ１領域から由来する配列に対して、ここに記載されたポリペプチドは、１−３０、例えば、１−２０、１−１０、１−８、１−５、または１−３個のアミノ酸の削除、置換、または挿入を有しても良い（これらの範囲内のすべての整数を含む）。一部の実施形態において、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３と３４−４０から選ばれるアミノ酸配列に対して、ここに記載されたポリペプチドは、１−３０、例えば、１−２０、１−１０、１−８、１−５、または１−３個のアミノ酸の削除、置換、または挿入を有しても良い（これらの範囲内のすべての整数を含む）。一部の実施形態において、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  ２３のアミノ酸配列に対して、ここに記載されたポリペプチドは、１−３０、例えば、１−２０、１−１０、１−８、１−５、または１−３個のアミノ酸の削除、置換、または挿入を有しても良い（これらの範囲内のすべての整数を含む）。一部の実施形態において、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３のアミノ酸配列に対して、ここに記載されたポリペプチドは、１−３個のアミノ酸の削除、置換、または挿入を有しても良い。特定の実施形態において、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３と３４−４０から選ばれるアミノ酸配列に対して、ここに記載されたポリペプチドは、Ｃ末端に１−３０、例えば、１−２０、１−１０、１−８、１−５、または１−３個のアミノ酸の削除または挿入を有しても良い（これらの範囲内のすべての整数を含む）。例えば、ここに記載されたポリペプチドが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１、２２および２４−２８から選ばれるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドは、表１に記載されたポリペプチドのいずれか一つのアミノ酸配列を含んでも良い。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドは、表１に記載された翻訳後修飾ポリペプチドのいずれか一つから選ばれてもよい。
【００５３】
【表１】
2019520341.tif 000002
2019520341.tif 000003
2019520341.tif 000004
【００５４】
各種な実施形態において、ここに記載されたポリペプチドが、任意のここに記載されたポリペプチドに対して、少なくとも約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有しても良い。例えば、上記ポリペプチドが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１−４０から選ばれるいずれか一つに対して、少なくとも約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、上記ポリペプチドが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３と３４−４０から選ばれるいずれか一つに対して、少なくとも約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、上記ポリペプチドが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３に対して、少なくとも約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。ここに記載されたポリペプチドと特定の配列同一性を有するバリアントは、対応するポリペプチドの一つ以上の、少なくともＮＴＣＰと結合する生物学活性と、ＮＴＣＰ仲介の肝細胞への胆汁酸輸送を両方向制御する生物学的活性を含む生物学的活性を持ちつづける。
【００５５】
本開示の態様は、さらに、Ｎおよび／またはＣ末端に添加された、ＨＢＶのＬタンパク質から（例えば、Ｌタンパク質のｐｒｅ−Ｓ１領域から）由来する天然フランキングアミノ酸配列を有するここに記載されたポリペプチドのバリアントを含む。天然フランキングアミノ酸配列は、対応するＨＢＶ遺伝子型または任意の他のＨＢＶ遺伝子型のｐｒｅ−Ｓ１領域において、ここに記載されたポリペプチドのＮまたはＣ末端にフランキングする天然配列を指す。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３と３４−４０から選ばれるアミノ酸配列を含み、かつそのＮおよび／またはＣ末端に、ＨＢＶ遺伝子型Ａ−Ｈのいずれか一つのｐｒｅ−Ｓ１領域から由来するを天然フランキングアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、天然フランキングアミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋ  アクセッション番号ＫＣ８７５２６０（遺伝子型Ａ；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１）、ＡＹ２２０７０４（遺伝子型Ｂ；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２）、ＡＦ４６１３６３（遺伝子型Ｃ；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４３）、ＡＹ７９６０３０（遺伝子型Ｄ；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４）、ＡＢ２０５１２９（遺伝子型Ｅ；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４５）、ＤＱ８２３０９５（遺伝子型Ｆ；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６）、ＨＥ９８１１７６（遺伝子型Ｇ；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７）、またはＡＢ１７９７４７（遺伝子型Ｈ；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８）のＨＢＶ株のコンセンサス配列から由来してもよい。例えば、ここに記載されたポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３のアミノ酸配列を含み、かつそのＮおよび／またはＣ末端に、ＨＢＶ遺伝子型Ｃのｐｒｅ−Ｓ１領域から由来する天然フランキングアミノ酸配列を含む。或いは、ここに記載されたポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３のアミノ酸配列を含み、かつそのＮおよび／またはＣ末端に、ＨＢＶ遺伝子型Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、ＧおよびＨのいずれか一つのｐｒｅ−Ｓ１領域から由来する天然フランキングアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドは、そのＮおよび／またはＣ末端に、独立に、１−１０、例えば、１−８、１−５、または、１−３個のアミノ酸の長さを有する天然フランキングアミノ酸配列を含む（これらの範囲内のすべての整数を含む）。例えば、ここに記載されたポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３のアミノ酸配列を含み、かつそのＮ末端に、ＨＢＶ遺伝子型Ｃのｐｒｅ−Ｓ１領域から由来する１０個のアミノ酸の天然フランキングアミノ酸配列を含む。言い換えると、上記ポリペプチドは、ＨＢＶ遺伝子型Ｃのｐｒｅ−Ｓ１領域のアミノ酸２−５９（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９）を含んでも良い。別の例として、ここに記載されたポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３のアミノ酸配列を含み、かつそのＮ末端に、ＨＢＶ遺伝子型ＥまたはＧのｐｒｅ−Ｓ１領域から由来する９個のアミノ酸の天然フランキングアミノ酸配列を含む。言い換えると、上記ポリペプチドは、ＨＢＶ遺伝子型Ｃのｐｒｅ−Ｓ１領域のアミノ酸１３−５９とＨＢＶ遺伝子型ＥまたはＧのｐｒｅ−Ｓ１領域のアミノ酸２−１１（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０）を含んでも良い。理解すべきのは、ここに記載された任意のポ���ペプチドは、Ｎおよび／またはＣ末端から延長する任意の長さの天然フランキングアミノ酸配列を有しても良く、得られたポリペプチドは、元のポリペプチドの一つ以上の、少なくともＮＴＣＰと結合する生物学活性と、ＮＴＣＰ仲介の肝細胞への胆汁酸輸送を両方向制御する生物学的活性を含む生物学的活性を持ちつづける。
【００５６】
一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドは、ＮＴＣＰ仲介の肝細胞への胆汁酸の輸送を両方向制御できる。肝細胞が、特定の濃度以下のここに記載されたポリペプチドと接触する場合に、このようなポリペプチドと接触していない肝細胞と比較して、ＮＴＣＰ仲介の肝細胞への胆汁酸の輸送は、増強される。肝細胞が、特定の濃度を超えるここに記載されたポリペプチドと接触する場合に、このようなポリペプチドと接触していない肝細胞と比較して、ＮＴＣＰ仲介の肝細胞への胆汁酸の輸送は、阻害される。一部の実施形態において、肝細胞が、９３ｎｍｏｌ／Ｌ以下のここに記載されたポリペプチドと接触する場合に、このようなポリペプチドと接触していない肝細胞と比較して、ＮＴＣＰ仲介の肝細胞への胆汁酸の輸送は、増強される。一部の実施形態において、肝細胞が、９３ｎｍｏｌ／Ｌを超えるここに記載されたポリペプチドと接触する場合に、このようなポリペプチドと接触していない肝細胞と比較して、ＮＴＣＰ仲介の肝細胞への胆汁酸の輸送は、阻害される。例えば、肝細胞が、５００ｎｇ／ｍｌ以下のここに記載されたＣｍｙｒ−４７ポリペプチドと接触する場合に、このようなポリペプチドと接触していない肝細胞と比較して、ＮＴＣＰ仲介の肝細胞への胆汁酸の輸送は、増強される。一部の実施形態において、肝細胞が、５００ｎｇ／ｍｌを超えるここに記載されたＣｍｙｒ−４７ポリペプチドと接触する場合に、このようなポリペプチドと接触していない肝細胞と比較して、ＮＴＣＰ仲介の肝細胞への胆汁酸の輸送は、阻害される。
【００５７】
一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドが、対象における代謝に関連する一つ以上の化学的または生物学的分子のレベルまたは活性を調整（例えば、低下または安定化）できる。一部の実施形態において、上記代謝は、例えば、胆汁酸代謝、グルコース代謝、脂質代謝、またはアミノ酸代謝を含む。一部の実施形態において、化学的または生物学的分子は、グルコース、トリグリセリド、コレステロール、遊離脂肪酸、胆汁酸、アミノ酸、ホルモン、ＬＤＬ−Ｃ、ＨＤＬ−Ｃ、ＨｂＡ１ｃ、血液尿素窒素およびミネラルから選ばれるものである。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドは、代謝変化を測定する一つ以上の生理学的パラメータ（例えば、血糖、血圧、体重、脂肪量、ボディマス指数（ＢＭＩ）、炎症、アテローム性動脈硬化指数（ＡＩ）、心臓指数、腎指数、総脂肪指数および恒常性モデル評価（ＨＯＭＡ）指数）のレベルまたは値を調整（例えば、低下または安定化）できる。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドが、対象における胆汁酸の血清レベルを増加できる。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドが、対象における血清脂質のレベルを低下できる。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドが、対象における総コレステロールの血清レベルを低下できる。さらなる実施形態において、ここに記載されたポリペプチドが、対象におけるＬＤＬ−コレステロールの血清レベルを低下できる。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドが、対象におけるトリグリセリドの血清レベルを低下できる。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドが、対象におけるグルコースの血清レベルを低下できる。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドが、対象におけるＨｂＡ１ｃの血清レベルを低下できる。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドが、対象におけるインスリンの血清レベルを安定化できる。一部の実施形態において、上記対象は、哺乳類であっても良い。一部の実施形態において、上記対象は、ヒトであっても良い。一部の実施形態において、上記対象は、代謝疾患を罹患し、またはこのような疾患を発展するリスクを有しても良い。
【００５８】
ここに使用されたように、「調整」または「変化」はすべて互換的に用いられ、一つ以上の定量化可能なパラメータを任意に、定義されたおよび／または統計的に有意な量で「減少」、「低下」、「低減」、「下方に制御」または「阻害」することを含む。用語「調整」は、さらに一つ以上の定量化可能なパラメータを任意に、定義されたおよび／または統計的に有意な量で、「増強」、「増加」、「向上」、「上方に制御」または「促進」することを含む。
【００５９】
用語「減少」、「低下」、「低減」、「下方に制御」または「阻害」は、すべてここに互換的に用いられ、代謝に関連する一つ以上の、例えば、グルコース、トリグリセリド、コレステロール、遊離脂肪酸、胆汁酸、アミノ酸、またはホルモン（例えば、インスリンを含む）、ＬＤＬ−Ｃ、ＨＤＬ−Ｃ、ＨｂＡ１ｃ、血液尿素窒素およびミネラルのような化学的または生物学的分子のレベルまたは活性は、ここに記載のポリペプチドが存在しない場合に観察されるレベルまたは活性を下回るか、または対照ポリペプチドより低いことを指す。一部の実施形態において、「低下」は、代謝変化を測定する一つ以上の生理学的パラメータ（例えば、血糖、血圧、体重、脂肪量、ボディマス指数（ＢＭＩ）、炎症、アテローム性動脈硬化指数（ＡＩ）、心臓指数、腎指数、総脂肪指数および恒常性モデル評価（ＨＯＭＡ）指数）のレベルまたは値は、ここに記載のポリペプチドが存在しない場合に観察されるレベルまたは活性を下回るか、または対照ポリペプチドより低いことを指す。特定の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドによる低下は、不活性分子または弱毒化分子の存在下で観察されるレベルまたは活性を下回ることである。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドは、血清および／または他の組織または器官（例えば、肝臓、心臓、筋肉、内臓脂肪、皮下脂肪、腸および脳）におけるグルコース、インスリン、コレステロール、またはトリグリセリドのレベルを低下できる。
【００６０】
ここに使用されたように、対象のボディマス指数（ＢＭＩ）の値は、以下の式で計算できる：ＢＭＩ＝（ｋｇで表した対象の体重）／［（ｍで表した対象の身長）2］。炎症のレベルは、本分野の以下の様々な臨床テストで測定できる。例えば、血におけるＣ−反応性タンパク質（ＣＲＰ）レベルを測定することで、対象の炎症のレベルを定量的に測定できる。赤血球沈降速度（ＥＳＲ）テストは、対象の炎症のレベルを測定するテストのもう一つの例である。ＥＳＲテストは、設定期間中の赤血球沈降物の割合を測定する。対象における総コレステロール（ＴＣ）とＨＤＬ−Ｃのレベル（例えば、ｍｍｏｌ／Ｌで）を得る後に、アテローム性動脈硬化指数（ＡＩ）の値は、以下の式で計算できる：ＡＩ＝（ＴＣ−ＨＤＬ−Ｃ）／ＨＤＬ−Ｃ。ここに使用されたように、恒常性モデル評価（ＨＯＭＡ）指数は、ＨＯＭＡ−ＩＲ（インスリン抵抗性のレベルを定量化する）指数および／またはＨＯＭＡ−β指数（β細胞機能のレベルを定量化する）を指す。ＨＯＭＡ−ＩＲの値は、以下の式で計算できる：ＨＯＭＡ−ＩＲ＝［（ｍｍｏｌ／Ｌで表した血グルコース）ｘ（ｍＵ／Ｌで表した血清インスリン）］／２２．５。ＨＯＭＡ−βの値は、以下の式で計算できる：ＨＯＭＡ−β＝［（２０ｘｍＵ／Ｌで表した血清インスリン）／（ｍｍｏｌ／Ｌで表した血グルコース−３．５）］％。心臓指数の値は、心臓の重量と総体重との比を意味し、以下の式で計算できる：心臓指数（ｇ／ｋｇ）＝心臓の重量（ｇ）／体重（ｋｇ）。腎指数の値は、腎の重量と総体重との比を意味し、以下の式で計算できる：腎指数（ｇ／ｋｇ）＝腎の重量（ｇ）／体重（ｋｇ）。総脂肪指数の値は、脂肪の重量（例えば、腹部脂肪および／または肩甲骨脂肪）と総体重との間の比を指す。ここに使用されたように、脂肪指数は、以下の式で計算できる：総脂肪指数（ｇ／ｋｇ）＝腹部脂肪と肩甲骨脂肪の合計重量（ｇ）／体重（ｋｇ）。
【００６１】
同様に、用語「増強」、「増加」、「向上」、「上方に制御」または「促進」は、すべて互換的に用いられ、代謝に関連する一つ以上の、例えば、グルコース、トリグリセリド、コレステロール、遊離脂肪酸、胆汁酸、アミノ酸、またはホルモン（例えば、インスリンを含む）、ＬＤＬ−Ｃ、ＨＤＬ−Ｃ、ＨｂＡ１ｃ、血液尿素窒素およびミネラルのような化学的または生物学的分子のレベルまたは活性は、ここに記載のポリペプチドが存在しない場合に観察されるレベルまたは活性を上回るか、または対照ポリペプチドより高いことを指す。一部の実施形態において、「増強」は、代謝変化を測定する一つ以上の生理学的パラメータ（例えば、血糖、血圧、体重、脂肪量、ボディマス指数（ＢＭＩ）、炎症、アテローム性動脈硬化指数（ＡＩ）、心臓指数、腎指数、総脂肪指数および恒常性モデル評価（ＨＯＭＡ）指数）のレベルまたは値は、ここに記載のポリペプチドが存在しない場合に観察されるレベルまたは活性を上回るか、または対照ポリペプチドより高いことを指す。特定の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドによる増加は、不活性分子または弱毒化分子の存在下で観察されるレベルまたは活性を上回ることである。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドは、血清および／または他の組織または器官（例えば、肝臓、心臓、筋肉、内臓脂肪、皮下脂肪、腸および脳）における胆汁酸のレベルを増強できる。
【００６２】
用語「安定化」、「維持」、「保持」と「保つ」は、代謝に関連する一つ以上の化学的または生物学的分子に関連して、互換的に用いられ、代謝に関連する一つ以上の化学的または生物学的分子（例えば、グルコース、トリグリセリド、コレステロール、遊離脂肪酸、胆汁酸、アミノ酸、ホルモン（例えば、インスリンを含む）、ＬＤＬ−Ｃ、ＨＤＬ−Ｃ、ＨｂＡ１ｃ、血液尿素窒素およびミネラル）のレベルまたは活性が、健康な対象もしくは代謝性疾患に罹患していない対象において観察されるレベルまたは活性、または陽性対照ポリペプチドの存在下で観察されるレベルまたは活性からの最小の差を示すことを指す。一部の実施形態において、「安定化」は、代謝変化を測定する一つ以上の生理学的パラメータ（例えば、血糖、血圧、体重、脂肪量、ボディマス指数（ＢＭＩ）、炎症、アテローム性動脈硬化指数（ＡＩ）、心臓指数、腎指数、総脂肪指数および恒常性モデル評価（ＨＯＭＡ）指数）のレベルまたは値が、健康な対象もしくは代謝性疾患に罹患していない対象において観察されるレベルまたは値、または陽性対照ポリペプチドの存在下で観察されるレベルまたは値からの最小の差を示すことを指す。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドは、血清におけるインスリンレベルおよび／または膵臓からのインスリンの産生を安定させることができる。
【００６３】
ここに記載されたポリペプチドは、化学合成または組換え技術を用いて製造することができる。
【００６４】
組換え手法が選択される場合、合成遺伝子は初めから構築されてもよいか、または天然遺伝子を、例えばカセット突然変異誘発によって突然変異してもよい。ここに記載されたポリペプチドは、組換えＤＮＡ技術を用いて製造できる。簡単な形で、これらの技術は、ペプチドをコードする天然または合成の遺伝子を取得する；それを適切なベクトルに挿入する；ベクターを適切な宿主細胞に挿入する；宿主細胞を培養して遺伝子を発現させる；それによって産生されたペプチドを回収または単離することを含む。一部の実施形態において、回収されたペプチドは、その後、適切な程度に精製される。
【００６５】
例えば、ここに記載されたポリペプチドをコードするＤＮＡ配列は、適当な宿主において発現できるように、クローンされ、かつ操作される。親ポリペプチドをコードするＤＮＡは、ＨＢＶゲノムライブラリーから、ポリペプチドを発現する細胞由来のｍＲＮＡに由来するｃＤＮＡから得られ、或いはＤＮＡ配列を合成的に構築することによって得られる。次いで、親ＤＮＡを宿主細胞を形質転換するために使用される適当なプラスミドまたはベクターに挿入する。通常に、宿主細胞と適合する種から由来する複製および制御配列を含むプラスミドベクターは、それらの宿主に関連して使用される。ベクターは、通常に、複製サイトと、形質転換細胞において表現型選択を提供することができるタンパク質またはペプチドをコードする配列を有する。ベクターは、当技術分野で一般的に使用されているものであってもよく、または当技術分野で一般的に使用されているベクターの機能的断片を組み合わせることによって標準的な技術を使用して構築してもよい。
【００６６】
宿主細胞は原核なまたは真核なものであっても良い。例えば、原核な宿主細胞は、大腸菌（Ｅ．  ｃｏｌｉ）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）および例えば、ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）またはセラチア・マルセッセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓａｎｓ）および様々なシュードモナス種（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｅｃｉｅｓ）のような他の腸内細菌科を含む。原核生物以外に、酵母培養物などの真核生物、または昆虫もしくは哺乳動物細胞培養物などの多細胞生物から由来する細胞を使用することができる。このような真核な宿主細胞系の例は、ＶＥＲＯとＨｅＬａ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞系、Ｗ１３８、２９３、ＢＨＫ、ＣＯＳ−７およびＭＤＣＫ細胞系を含む。
【００６７】
一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドは、固相合成、または当分野において公知された他の同等の化学合成を用いて調製できる。一部の実施形態において、固相合成は、保護されたα−アミノ酸を適切な樹脂にカップリングすることによってペプチドのＣ末端から開始される。このような出発物質は、α−アミノ保護アミノ酸を、エステル結合によってクロロメチル化樹脂またはヒドロキシメチル樹脂へ、或いはアミド結合によってＢＨＡ樹脂またはＭＢＨＡ樹脂へ結合することにより調製できる。アミノ酸は、ペプチド結合の形成のための本分野の公知された技術を用いてペプチド鎖に結合される。一つの方法はアミノ酸を誘導体に変換することに関わり、上記誘導体は、カルボキシル基をペプチドフラグメントの遊離Ｎ末端アミノ基と容易に反応させる。例えば、アミノ酸は、保護されたアミノ酸とクロロギ酸エチル、クロロギ酸フェニル、クロロギ酸ｓｅｃ−ブチル、クロロギ酸イソブチル、塩化ピバロイルなどの酸塩化物との反応によって、混合無水物に変換できる。或いは、アミノ酸は、２，４，５−トリクロロフェニルエステル、ペンタクロロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、ｐ−ニトロフェニルエステル、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、または１−ヒドロキシベンゾトリアゾールから形成されるエステルのような活性エステルに変換できる。他のカップリング方法はＮ、Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミドまたはＮ、Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミドなどの適切なカップリング剤の使用を含む。
【００６８】
一部の実施形態において、ペプチド合成に使用される各アミノ酸のα−アミノ基は、それらの活性なα−アミノ機能を含む副反応を防ぐために、カップリング反応期間にわたって保護されてもよい。例えば、反応性側鎖官能基（例えば、スルフヒドリル、アミノ、カルボキシル、ヒドロキシル）を含む特定のアミノ酸は、初期および後続のカップリングステップにわたって化学反応がその部位で起こるのを防ぐために適切な保護基で保護されてもよい。適切な側鎖保護基の選択は当分野の技術に含まれる。保護基は、ペプチド鎖の構造を変えない反応条件下において、所望のアミノ酸ペプチドを完成する際に容易に除去される。
【００６９】
α−アミノ保護基の除去後、残りのα−アミノおよび側鎖保護アミノ酸は、所望の順序で段階的に結合する。合成において各アミノ酸を別々に添加する代わりに、固相合成機に添加する前にいくつかを互いにカップリングさせてもよい。適切なカップリング剤の選択は当業者の技術に含まれる。
【００７０】
各保護されたアミノ酸またはアミノ酸配列は、固相反応器に過剰に導入され、カップリングは、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）またはＣＨ2Ｃｌ2またはそれらの混合物の媒体中で適切に行われる。不完全なカップリングが生じた場合、次のアミノ酸とカップリングする前に、Ｎ−アミノ保護基を除去する前にカップリング手順を繰り返す。合成の各段階に、カップリング反応の成功をモニターしても良い。カップリング反応は、公知の方法、例えばＢＩＯＳＥＡＲＣＨ  ９５００(商標)ペプチド合成機を使用して自動的に実施できる。
【００７１】
所望のペプチド配列を完成すると、保護されたペプチドは、樹脂支持体から切断しなければならず、かつ全ての保護基を除去しなければならない。切断反応および保護基の除去は、同時にまたは順番に適切に行う。樹脂支持体がクロロメチル化ポリスチレン樹脂である場合、ペプチドを樹脂に錨着する結合は、Ｃ末端残基の遊離カルボキシル基と樹脂マトリックス上に存在する多くのクロロメチル基のうちの１つとの間に形成されるエステル結合である。理解すべきのは、錨着する結合は、エステル結合を破壊し、樹脂マトリックスを貫通することができる試薬よって切断することができる。認識すべきのは、ポリペプチドは、ポリペプチドが支持体から切断される前または後に、修飾（例えば、例えば、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、コレステロール、アラキドン酸のような疎水基でＮ−末端に修飾すること；アミド化（アミノ化）、イソペンタンジオール化、または他の安定化Ｃ−末端修飾でＣ−末端に修飾すること）されても良い。
【００７２】
本発明のポリペプチドの精製は、分取ＨＰＬＣ（逆相ＨＰＬＣを含む）または他の公知のクロマトグラフィー技術（ゲル浸透、イオン交換、分配クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー（モノクローナル抗体カラムを含む）または向流分布）などの従来の手順を用いて行われても良い。
【００７３】
ＩＩ．薬学組成物
本開示は、さらに、ここに記載されたポリペプチドを含む組成物（薬学組成物を含む）を提供する。特定の実施形態において、組成物は、一つまたは以上のここに記載されたポリペプチドを含んでも良い。一部の実施形態において、上記組成物は、さらに適当な薬学的に許容される担体を含んでも良い。一部の実施形態において、それを必要とする対象に投与する際に、薬学組成物が、対象におけるＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取を両方向制御させる、ここに記載されたポリペプチドの血清濃度を提供する。
【００７４】
「薬学的に許容される担体」は、例えば、固体、半固体、または液体充填剤、希釈剤、カプセル化材料、製剤補助剤、賦形剤、または担体のような不活性成分を指し、対象に投与する「薬学組成物」を含む治療薬と一緒に使用される。薬学的に許容される担体は、受領者に対して、用いられる投与量と濃度では無毒であり、かつ製剤の他の成分と適合性がある。薬学的に許容される担体は、使用される製剤に適している。例えば、治療薬を経口投与する場合、担体はゲルカプセルであっても良い。治療薬を皮下投与する場合、理想的に、担体は皮膚に対して刺激性がなく、注射部位反応を引き起こさない。
【００７５】
ここに記載されたポリペプチドの薬学組成物は、所望の純度を有するこのようなポリペプチドを、一つ以上の任意の薬学的に許容される担体と混合することによって調製されても良い。薬学的に許容される担体は、例えば：緩衝剤（例えば、リン酸塩、クエン酸塩、および他の有機酸）；酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸とメチオニン）；防腐剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチルもしくはベンジルアルコール、メチルパラベンもしくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン、カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾール）；低分子量（例えば約１０残基未満）のポリペプチド；タンパク質（例えば、血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン）；親水性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン）；アミノ酸（例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジン）；グルコース、マンノース、またはデキストリンを含む単糖、二糖、および他の炭水化物；キレート化剤（例えば、ＥＤＴＡ）；糖（例えば、スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトール）；塩形成性対イオン（例えば、ナトリウム）；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）；および／または非イオン性界面活性剤（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ））を含む。
【００７６】
例示的な薬学的担体は、結合剤（例えば、アルファー化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースなど）；フィラー（例えば、ラクトースおよび他の糖、微結晶セルロース、ペクチン、ゼラチン、硫酸カルシウム、エチルセルロース、ポリアクリレートまたはリン酸水素カルシウムなど）；潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、シリカ、コロイド状二酸化ケイ素、ステアリン酸、金属ステアリン酸塩、硬化植物油、コーンスターチ、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウムなど）；崩壊剤（例えば、デンプン、デンプングリコール酸ナトリウムなど）；と湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウムなど）を含んでいても良い。
【００７７】
例示的な薬学的に許容される担体は、さらに、間質性薬物分散剤を含み、可溶性の中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ヒト可溶性ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（例えば、ｒＨｕＰＨ２０  （ＨＹＬＥＮＥＸ(登録商標)、Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、Ｉｎｃ．））をあげられる。一部の実施形態において、ｓＨＡＳＥＧＰは、薬学組成物に、一つ以上の追加のグリコサミノグリカナーゼ（ｇｌｙｃｏｓａｍｍｏｇｌｙｃａｎａｓｅｓ）（例えば、コンドロイチナーゼ）と混ぜても良い。
【００７８】
上記薬学組成物は、更に治療される特定の症状に適した、例えば互いに悪影響を及ぼさない相補的な活性を有する複数の活性成分を含んでも良い。そのような活性成分は、意図する目的に有効な量で組み合わせて適切に存在してもよい。
【００７９】
一部の実施形態において、上記活性成分は、コロイド状薬物送達システム（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子およびナノカプセルなど）中、またはマクロエマルジョン中において、例えばコアセルベーション技術または界面重合で製造されたマイクロカプセル（例えば、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンマイクロカプセルとポリ（メチルメタクリレート）マイクロカプセル）にそれぞれ封入されてもよい。
【００８０】
一部の実施形態において、上記薬学組成物は、徐放性製剤を含んでも良い。徐放性製剤の適切な例としては、例えば、ここに記載のポリペプチドを含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが挙げられ、このマトリックスは、例えばフィルムまたはマイクロカプセルなどの成形品の形態であっても良い。
【００８１】
一部の実施形態において、上記薬学組成物は、インビボ投与に使用でき、かつ無菌性である。無菌性は、例えば無菌濾過膜を通して濾過することによって容易に達成できる。
【００８２】
上記薬学組成物は、例えば錠剤、カプセル剤、ゲルカプセル剤、散剤または顆粒剤などの多くの可能な投与形態のいずれか一つに製剤されても良い。上記薬学組成物は、液剤、懸濁剤、乳剤、または混合媒体として製剤されても良い。一部の実施形態において、上記薬学組成物は、凍結乾燥製剤または水溶液として製剤されても良い。
【００８３】
一部の実施形態において、上記薬学組成物は、溶液として製剤されても良い。例えば、ここに記載されたポリペプチドは、緩衝化されていない溶液中（例えば、食塩水中または水中）で投与することができる。一部の実施形態において、上記ポリペプチドは、適当な緩衝剤溶液中で投与することもできる。例えば、上記緩衝剤溶液は、酢酸塩、クエン酸塩、プロラミン、炭酸塩、またはリン酸塩、あるいはそれらの任意の組み合わせを含んでも良い。一部の実施形態において、上記緩衝剤溶液は、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）であっても良い。ポリペプチドを含有する緩衝液のｐＨおよび浸透圧は、対象への投与に適するように調整できる。
【００８４】
一部の実施形態において、上記薬学組成物は、水性、非水性、または混合媒体中の懸濁液として製剤されても良い。上記水性懸濁液は、さらに例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトールおよび／またはデキストランを含む懸濁液の粘度を増加させる物質を含んでも良い。上記懸濁液は、さらに安定剤を含んでも良い。
【００８５】
一部の実施形態において、上記薬学組成物は、エマルジョンとして製剤されても良い。例示的なエマルジョンは、通常直径０．１μｍを超える小滴の形態の液体が、他の液体に分散された不均一系を含む。エマルジョンは、分散相と、水相中、油相中、またはそれ自体が分離相として溶液中に存在できる活性薬物以外に、追加の成分を含んでも良い。マイクロエマルジョンも本開示の実施形態として含まれる。一部の実施形態において、上記薬学組成物は、さらにリポソーム製剤として製剤されても良い。
【００８６】
ＩＩＩ．使用の方法
本開示の実施形態は、ここに記載されたポリペプチドの治療的用途を含む。一つの態様において、医薬品としてのここに記載されたポリペプチドの使用を提供する。もう一つの態様において、代謝疾患の治療におけるここに記載されたポリペプチドの使用を提供する。一部の実施形態において、上記代謝疾患が脂質代謝の異常調節に関係する。特定の実施形態において、上記代謝疾患は、コレステロール関連病気であっても良い。一部の実施形態において、上記コレステロール関連病気は、高脂血症であっても良い。一部の実施形態において、上記高脂血症は、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、またはそれらの組み合わせであっても良い。一部の実施形態において、総トリグリセリド、総コレステロールおよびＬＤＬ−Ｃのいずれか一つの血清レベルの上昇に関連した症状の治療におけるここに記載のポリペプチドの使用を提供する。
【００８７】
一部の実施形態において、上記代謝疾患がグルコース代謝の異常調節に関係する。一部の実施形態において、上記代謝疾患は、糖尿病である。一部の実施形態において、上記代謝疾患は、２型糖尿病である。一部の実施形態において、上記代謝疾患は、肥満である。一部の実施形態において、グルコースまたはＨｂＡ１ｃの血清レベルの上昇に関連した症状の治療におけるここに記載のポリペプチドの使用も提供する。
【００８８】
もう一つの態様において、対象に治療的有効量のここに記載されたポリペプチドまたはこのようなポリペプチドの薬学組成物を投与することを含む、対象における代謝疾患を治療する方法を提供する。特定の実施形態において、上記対象は、代謝疾患を罹患する、或いはこのような疾患が進展するリスクを有する。一部の実施形態において、上記対象は、哺乳類であっても良い。一部の実施形態において、上記対象は、ヒトであっても良い。特定の実施形態において、ここに記載された方法と用途は、さらに対象に治療的有効量の少なくとも一つの他の治療薬を投与することを含む。
【００８９】
一部の実施形態において、上記代謝疾患が脂質代謝の異常調節に関係する。一部の実施形態において、上記代謝疾患は、コレステロール関連病気であっても良い。一部の実施形態において、上記コレステロール関連病気は、高脂血症であっても良い。一部の実施形態において、上記高脂血症は、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、またはそれらの組み合わせであっても良い。
【００９０】
他の態様において、対象に治療的有効量のここに記載されたポリペプチド或いは上記ポリペプチドを含む薬学組成物を投与することを含む、それを必要とする対象における血清脂質のレベル（例えば、総コレステロール、総トリグリセリド、またはＬＤＬコレステロールのレベル）を低下させる方法を提供する。一部の実施形態において、以上の対象は、脂質代謝の異常調節に関係する代謝疾患に罹患するまたは発展するリスクがある。一部の実施形態において、上記対象は、コレステロール関連病気に罹患するまたは発展するリスクがある。一部の実施形態において、上記対象は、高脂血症に罹患するまたは発展するリスクがある。一部の実施形態において、上記対象は、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、またはそれらの組み合わせに罹患するまたは発展するリスクがある。
【００９１】
一部の実施形態において、上記代謝疾患がグルコース代謝の異常調節に関係する。一部の実施形態において、上記代謝疾患は、糖尿病である。一部の実施形態において、上記代謝疾患は、２型糖尿病である。一部の実施形態において、上記代謝疾患は、肥満である。
【００９２】
一部の態様において、対象に治療的有効量のここに記載されたポリペプチド或いは上記ポリペプチドを含む薬学組成物を投与することを含む、それを必要とする対象における血グルコースまたはＨｂＡ１ｃレベルを低下させる方法を提供する。一部の態様において、対象に治療的有効量のここに記載されたポリペプチド或いは上記ポリペプチドを含む薬学組成物を投与することを含むそれを必要とする対象におけるインスリンの血清レベルを安定化させる方法を提供する。一部の実施形態において、以上の対象は、グルコース代謝の異常調節に関係する代謝疾患に罹患するまたは発展するリスクがある。一部の実施形態において、上記対象は、糖尿病に罹患するまたは発展するリスクがある。一部の実施形態において、上記対象は、２型糖尿病に罹患するまたは発展するリスクがある。一部の実施形態において、上記対象は、肥満に罹患するまたは発展するリスクがある。
【００９３】
理論にとらわれずに、ポリペプチドの投与後の対象におけるＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取を両方向制御することで、ここに記載されたポリペプチドは、代謝疾患を治療、または対象における代謝関連分子の血清レベルを調整できると考えられる。一部の実施形態において、このようなポリペプチドを投与された対象の血流におけるここに記載されたポリペプチドの濃度は、特定の濃度以下である場合に、対象における胆汁酸摂取は、増強される。一部の実施形態において、このようなポリペプチドを投与された対象の血流におけるここに記載されたポリペプチドの濃度は、特定の濃度を超える場合に、対象における胆汁酸摂取は、阻害される。一部の実施形態において、このようなポリペプチドを投与された対象の血流におけるここに記載されたポリペプチドの濃度は、９３ｎｍｏｌ／Ｌ以下である場合に、対象における胆汁酸摂取は、増強される。一部の実施形態において、このようなポリペプチドを投与された対象の血流におけるここに記載されたポリペプチドの濃度は、９３ｎｍｏｌ／Ｌを超える場合に、対象における胆汁酸摂取は、阻害される。例えば、このようなポリペプチドを投与された対象の血流におけるここに記載されたＣｍｙｒ−４７ポリペプチドの濃度は、５００ｎｇ／ｍｌ以下である場合に、対象における胆汁酸摂取は、増強される。上記対象の血流におけるここに記載されたＣｍｙｒ−４７ポリペプチドの濃度は、５００ｎｇ／ｍｌを超える場合に、対象における胆汁酸摂取は、阻害される。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドの血清濃度は、投与後少なくとも約１０、２０、４０、６０、９０、１２０、１８０、２４０、または３６０分間に測定される。一部の実施形態において、投与後の特定の時点に、ここに記載されたポリペプチドの血清濃度は、９３ｎｍｏｌ／Ｌを超える。一部の実施形態において、投与後の特定の時点に、ここに記載されたポリペプチドの血清濃度は、９３ｎｍｏｌ／Ｌを下回る。例えば、投与後の特定の時点に、ここに記載されたＣｍｙｒ−４７ポリペプチドの血清濃度は、５００ｎｇ／ｍｌを超える。一部の実施形態において、投与後の特定の時点に、ここに記載されたＣｍｙｒ−４７ポリペプチドの血清濃度は、５００ｎｇ／ｍｌを下回る。一部の実施形態において、ポリペプチドのこのような閾値血清濃度は、投与後の約２０分間に発生する。
【００９４】
ここに使用されたように、「代謝疾患」または「代謝病気」は、例えば、胆汁酸代謝、グルコース代謝、脂質代謝およびアミノ酸代謝に関係する経路のような代謝経路の異常調節に起因する任意の疾患を含む。一部の実施形態において、上記代謝疾患は、脂質代謝の異常調節に関係する疾患を指す。特定の実施形態において、上記代謝疾患は、脂質代謝産物（例えば、胆汁酸、コレステロール、トリグリセリドおよび脂肪酸を含む）の生産、除去、および／または利用における異常調節を含む疾患を指す。そして、ここに記載された代謝疾患は、コレステロール関連病気を指しても良い。そして、ここに記載された代謝疾患は、例えば、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、またはそれらの組み合わせを含む高脂血症を指しても良い。一部の実施形態において、上記代謝疾患は、グルコース代謝の異常調節に関係する疾患を指す。特定の実施形態において、上記代謝疾患は、グルコース代謝産物（例えば、グルコース、ピルビン酸およびグルコース−６−リン酸）の生産、除去、および／または利用における異常調節を含む疾患を指す。そして、ここに記載された代謝疾患は、糖尿病と肥満を指しても良い。
【００９５】
ここに記載された代謝疾患は、高血糖；低血糖；高インスリン血症；肥満；高脂血症；高トリグリセリド血症；高コレステロール血症；心臓病；メタボリック・シンドローム；アテローム性動脈硬化症；冠状動脈性心臓病；冠動脈疾患；末梢動脈疾患；狭心症；脳血管疾患；急性冠症候群；心筋梗塞；卒中；循環器疾患；アルツハイマー病；脂質異常症；家族性複合型高脂血症；家族性高トリグリセリド血症；家族性高コレステロール血症；ヘテロ接合型高コレステロール血症；ホモ接合性高コレステロール血症；家族性欠陥アポリポタンパク質Ｂ−１００；多遺伝子性高コレステロール血症；レムナント除去病；肝性リパーゼ欠損症；食傷と、甲状腺機能低下症と、エストロゲンおよびプロゲスチン療法、β遮断薬、チアジド系利尿薬などの薬による脂質異常症；ネフローゼ症候群；慢性腎不全；クッシング症候群；原発性胆汁性肝硬変；グリコーゲン蓄積症；肝細胞癌；胆汁うっ滞；先端巨大症；インスリノーマ；成長ホルモン単独欠損症；腎臓障害；肥満；およびアルコール誘発性高トリグリセリド血症から選ばれても良い。
【００９６】
用語「代謝疾患」は、例えば、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、高血糖、低血糖、高インスリン血症、肥満、高脂血症、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、心臓病、メタボリック・シンドローム、冠状動脈性心臓病、脳卒中、心血管疾患、アルツハイマー病、ならびに一般的に、例えば、総血清コレステロール、ＬＤＬ、トリグリセリド、ＶＬＤＬ、および／またはＨＤＬの上昇によって現れる異常脂質血症を含む。ここに記載のポリペプチドを単独で、または１つ以上の他の薬剤と組み合わせて使用して治療できる原発性および続発性脂質異常症のいくつかの非限定的な例は、メタボリック・シンドローム、糖尿病、高脂血症、家族性高脂血症、家族性高トリグリセリド血症、ヘテロ型高コレステロール血症を含む家族型高コレステロール血症、ホモ型高コレステロール血症、家族性不完全アポリポタンパク質Ｂ−１００、多遺伝子性高コレステロール血症、ムナント除去病；肝性リパーゼ欠損症；食傷と、甲状腺機能低下症と、エストロゲンおよびプロゲスチン療法、β遮断薬、チアジド系利尿薬などの薬に続発する脂質異常症；ネフローゼ症候群、慢性腎不全、クッシング症候群、原発性胆汁性肝硬変、グリコーゲン蓄積症、肝細胞癌、胆汁うっ滞、先端巨大症、インスリノーマ、成長ホルモン単独欠損症、腎臓障害、肥満、およびアルコール誘発性高トリグリセリド血症を含む。
【００９７】
一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドは、一つ以上の代謝疾患を予防または治療することに有用する。特定の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドは、代謝疾患に関連する一つ以上の症状または合併症を予防または治療することにも有用できる。例えば、上記ポリペプチドは、心血管疾患を予防または治療することに有用でき、例えば冠状動脈性心臓病、冠状動脈疾患、末梢動脈疾患、脳卒中（虚血性および出血性）、狭心症、または脳血管疾患および急性冠症候群、心筋梗塞などのアテローム性動脈硬化症を含む。特定の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドは、心臓疾患、腎障害、または代謝病気に関連する肥満を予防または治療することにも有用できる。
【００９８】
用語「糖尿病」は、一般的に体内で適切な血糖レベルを維持できず、グルコースの産生および／または利用における代謝欠陥を特徴とする疾患または病状を指す。血糖値の上昇を含むこれらの欠陥の結果は、「高血糖」と呼ばれる。糖尿病の二つの主要な形態は、１型糖尿病および２型糖尿病である。１型糖尿病は、一般にインスリンの絶対的欠乏（例えば、膵臓β細胞からの産生が極めて低いかまたは完全に除去されている）に起因し、したがってグルコース利用を調節することができない。２型糖尿病は、インスリンの正常レベルまたはさらに高いレベルに表し、組織がインスリンに適切に応答できないことで生じるものである。ほとんどの２型糖尿病患者はインスリン抵抗性を有し、インスリン分泌がインスリンに応答するための末梢組織の抵抗性を補うことができないから、インスリンの相対的欠乏症を有する。
【００９９】
「高脂血症」という用語は、血清脂質の異常な増加を特徴とする病状を指す。循環血中の脂質画分は、例えば、総コレステロール、特定のリポタンパク質、およびトリグリセリドを含む。血清リポタンパク質は、循環中の脂質の担体として働き、それらの密度によって、キロミクロン、超低密度リポタンパク質（「ＬＤＬ」）、中密度リポタンパク質（「ＩＤＬ」）、低密度リポタンパク質（「ＬＤＬ」）、および高密度リポタンパク質（「ＨＤＬ」）に分類される。用語「高脂血症」は、原発性および続発性高脂血症を含む。原発性高脂血症は、一般に遺伝的欠陥によって引き起こされるが、続発性高脂血症は、一般に様々な病状、薬物、および食事要因などの他の要因によって引き起こされる。例えば、続発性高脂血症は、糖尿病に引き起こされても良い。或いは、高脂血症は、原発性および続発性の要因の組み合わせに引き起こされても良い。高脂血症は、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、またはそれらの組み合わせを含む。用語「高トリグリセリド血症」は、ここに使用されたように、血清総トリグリセリドレベルが所望のレベルを超えて上昇する病状を指す。用語「高コレステロール血症」は、ここに使用されたように、血清コレステロールレベルが所望のレベルを超えて上昇する病状を指す。特定の実施形態において、血清総コレステロール、ＨＤＬコレステロール（「ＨＤＬ−Ｃ」）、またはＬＤＬコレステロール（「ＬＤＬ−Ｃ」）レベルは、高コレステロール血症における所望のレベルを超えて上昇する。高脂血症は、心血管とアテローム性動脈硬化疾患の発展を含むリスクを増加する。用語「心血管疾患」は、血管内の異常に高濃度の脂質によって引き起こされる循環系の血管の疾患を含む。用語「アテローム性動脈硬化」は、脂肪プラークが内壁で発生し、最終的に血流が閉塞する動脈疾患を指す。
【０１００】
「患者」と「対象」は互換的に用いられ、疾患、障害、または病状について治療または評価されている、疾患、障害、または病状を発症する危険性のある、あるいは疾患、障害、または病状に罹患する哺乳類またはヒトなどの動物を指す。一部の実施形態において、このような疾患、病気、または病状は、代謝疾患を含んでも良い。一部の実施形態において、上記代謝疾患が脂質代謝の異常調節に関係しても良い。一部の実施形態において、上記代謝疾患は、高脂血症（例えば、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、またはそれらの組み合わせ）のようなコレステロール関連病気であっても良い。一部の実施形態において、上記代謝疾患がグルコース代謝の異常調節に関係しても良い。一部の実施形態において、上記代謝疾患は、１型と２型糖尿病を含む糖尿病であっても良い。
【０１０１】
ここに記載されたポリペプチドまたはこのようなポリペプチドを含む組成物の用語「治療的有効量」または「有効量」は、治療のためのポリペプチドまたは組成物が有効である障害の予防または治療に有効な量を指す。上記用語は、代謝疾患に罹患するまたは発展するリスクがある対象における胆汁酸の血清レベルの向上に対して、有効するここに記載されたポリペプチドの量を含む。上記用語は、代謝疾患（例えば、糖尿病と肥満）に罹患するまたは発展するリスクがある対象における血糖またはＨｂＡ１ｃレベルの低下や、インスリンの血清レベルの安定化に対して、有効するここに記載されたポリペプチドの量を含む。上記用語は、代謝疾患（例えば、高脂血症（高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、または両者を含む））に罹患するまたは発展するリスクがある対象における血清脂質のレベル（例えば、総コレステロール、総トリグリセリド、ＬＤＬコレステロールレベル）の低下に対して、有効するここに記載されたポリペプチドの量を含む。上記用語は、さらに、代謝疾患（例えば、糖尿病と高脂血症（例えば、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、または両者））を治療するために対象に投与した場合に、既存の疾患またはその疾患の１つもしくは複数の症状を軽減、改善、または維持すること、あるいは疾患の進行を抑制することによって、疾患の治療に十分であるここに記載されたポリペプチドの量を含む。「治療的有効量」または「有効量」は、ポリペプチド、投与経路、疾患およびその重症度、ならびに健康状態、年齢、体重、家族歴、遺伝子構成、病理学的過程の段階、先行または同時の治療の種類（あれば）、および治療されるべき対象の他の個々の特徴に応じて変われる。
【０１０２】
ここに記載されたポリペプチドの「治療的有効量」は、投与されたポリペプチドを、該ポリペプチドが対象におけるＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取を阻害できるほどの対象の血流における濃度に達成させる。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドの治療的有効量は、その量を投与された対象の血流に、投与されたポリペプチドが、少なくとも約９３ｎｍｏｌ／Ｌに達成させる。例えば、ここに記載されたＣｍｙｒ−４７ポリペプチドの治療的有効量は、その量を投与された対象の血流に、投与されたポリペプチドが、少なくとも約５００ｎｇ／ｍｌに達成させる。
【０１０３】
特定の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドの治療的有効量は、投与されたポリペプチドの血清濃度が、対象におけるＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取を両方向制御することを可能にする量を指す。例えば、対象が、ここに記載されたポリペプチドの治療的有効量で投与される場合に、対象におけるポリペプチドの初期血清濃度は、ポリペプチドが、ＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取を阻害する特定の濃度を超えてもよい。対象におけるポリペプチドの血清濃度は、徐々に減少し、ポリペプチドがＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取を増強し始める値まで或いは以下になってもよい。投与されたポリペプチドの血清濃度は、投与後少なくとも約１０、２０、４０、６０、９０、１２０、１８０、２４０、または３６０分後に評価できる。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドの治療的有効量は、ポリペプチドが、投与後の特定の時点に、９３ｎｍｏｌ／Ｌを超える血清濃度に達成させる。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドの治療的有効量は、ポリペプチドが、投与後の特定の時点に、９３ｎｍｏｌ／Ｌ以下の血清濃度に達成させる。例えば、ここに記載されたＣｍｙｒ−４７ポリペプチドの治療的有効量は、ポリペプチドが、投与後の特定の時点に、５００ｎｇ／ｍｌを超える血清濃度に達成させる。一部の実施形態において、ここに記載されたＣｍｙｒ−４７ポリペプチドの治療的有効量は、ポリペプチドが、投与後の特定の時点に、５００ｎｇ／ｍｌ以下の血清濃度に達成させる。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドの治療有効量は、投与後約２０分でポリペプチドのそのような閾値血清濃度を生じる。
【０１０４】
様々な実施形態において、用語「治療」は、対象（例えば、ヒトなどの哺乳類）または細胞の現在の経過を変えるための対象または細胞の治療を含む。治療は、例えば、ここに記載されたポリペプチド或いは上記ポリペプチドを含む薬学組成物の投与を含み、かつ予防的にまたは病理学的事象の開始または病因との接触の後に行うことができる。「予防的」治療も含まれ、これは治療される疾患または病状の進行速度を低下させること、その疾患または病状の発症を遅らせること、またはその発症の重症度を低下させることを目的とする。「治療」または「予防」は、必ずしも疾患もしくは病状または関連症状の完全な根絶、治癒、または予防を示すわけではない。様々な実施形態において、用語「治療」は、例えば糖尿病および高脂血症（例えば、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、または両者）のような代謝性疾患に罹患する対象における病理学的過程または症状の軽減、遅延または回復を含む。一部の実施形態において、用語「治療」は、代謝疾患の少なくとも１つの症状または測定可能なパラメータを改善することを含む。当業者にとって、代謝疾患の病理学的過程を評価するために、どの生物学的および／または生理学的パラメータを使用できることは、明らかなことである。このような病理学的過程または症状は、代謝に関連する一つ以上の化学的または生物学的分子（例えば、グルコース、トリグリセリド、コレステロール、遊離脂肪酸、胆汁酸、アミノ酸、ホルモン（例えば、インスリン）、ＬＤＬ−Ｃ、ＨＤＬ−Ｃ、ＨｂＡ１ｃ、血液尿素窒素およびミネラル）の健康対象と比較して過剰または増加したレベル、または代謝変化を測定する一つ以上の生理学的パラメータ（例えば、血糖、血圧、体重、脂肪量、ボディマス指数（ＢＭＩ）、炎症、アテローム性動脈硬化指数（ＡＩ）、心臓指数、腎指数、総脂肪指数および恒常性モデル評価（ＨＯＭＡ）指数）の健康対象と比較して過剰または増加したレベルを含む。
【０１０５】
用語「投与」または「給与」は、ここに記載のポリペプチドの局所または全身投与による対象への送達を含む。投与は、局所的（点眼用、および膣と直腸送達を含む粘膜への投与を含む）、経肺（例えばネブライザー、気管内、鼻腔内を含む粉末またはエアロゾルの吸入または送気）、表皮、経皮、経口、または非経口であっても良い。非経口投与は、静脈内、皮下、腹腔内、または筋肉内注射または注入；または頭蓋内投与、例えば髄腔内投与または脳室内投与を含む。
【０１０６】
特定の実施形態において、本開示は、対象における代謝に関連する一つ以上の化学的または生物学的分子（例えば、グルコース、トリグリセリド、コレステロール、遊離脂肪酸、胆汁酸、アミノ酸、ホルモン、ＬＤＬ−Ｃ、ＨＤＬ−Ｃ、ＨｂＡ１ｃ、血液尿素窒素およびミネラル）のレベルまたは活性の調整（低下または安定化）におけるここに記載されたポリペプチドの用途を提供する。一部の実施形態において、本開示は、代謝変化を測定する一つ以上の生理学的パラメータ（例えば、血糖、血圧、体重、脂肪量、ボディマス指数（ＢＭＩ）、炎症、アテローム性動脈硬化指数（ＡＩ）、心臓指数、腎指数、総脂肪指数および恒常性モデル評価（ＨＯＭＡ）指数）のレベルまたは値の調整（低下または安定化）におけるここに記載されたポリペプチドの使用を提供する。
【０１０７】
一部の実施形態において、本開示は、対象における血清脂質のレベルの低下におけるここに記載されたポリペプチドの用途を提供する。一部の実施形態において、本開示は、対象における総コレステロールの血清レベルの低下におけるここに記載されたポリペプチドの使用を提供する。一部の実施形態において、本開示は、対象におけるＬＤＬ−コレステロールの血清レベルの低下におけるここに記載されたポリペプチドの使用を提供する。一部の実施形態において、本開示は、対象におけるトリグリセリドの血清レベルの低下におけるここに記載されたポリペプチドの使用を提供する。一部の実施形態において、本開示は、対象におけるグルコースの血清レベルの低下におけるここに記載されたポリペプチドの使用を提供する。一部の実施形態において、本開示は、対象におけるインスリンの血清レベルの安定化におけるここに記載されたポリペプチドの使用を提供する。一部の実施形態において、上記対象は、哺乳類であっても良い。一部の実施形態において、上記対象は、ヒトであっても良い。
【０１０８】
一部の実施形態において、本開示は、代謝疾患を発展するリスクの低下におけるここに記載されたポリペプチドの用途を提供する。特定の実施形態において、本開示は、さらに代謝疾患に関連する一つ以上の症状または合併症を発展するリスクの低下におけるここに記載されたポリペプチドの使用を提供する。一部の実施形態において、上記代謝疾患が脂質代謝の異常調節に関係する。一部の実施形態において、上記代謝疾患は、コレステロール関連病気である。一部の実施形態において、上記代謝疾患は、高脂血症である。上記高脂血症は、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、または両者を含む。一部の実施形態において、上記代謝疾患がグルコース代謝の異常調節に関係する。一部の実施形態において、上記代謝疾患は、糖尿病である。上記糖尿病は、１型と２型糖尿病を含む。一部の実施形態において、上記代謝疾患は、肥満である。代謝疾患に関連する症状または合併症は、このような代謝疾患（例えば、糖尿病、高脂血症（高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、または両者を含む））を有する対象における、例えば、アテローム性動脈硬化疾患のような心血管疾患、心臓疾患、腎障害、または肥満を含む。
【０１０９】
本開示は、さらに対象において、ここに記載されたポリペプチドの上記使用を実行する方法を提供する。このような方法は、対象に、治療的有効量のここに記載されたポリペプチド或いは上記ポリペプチドを含む薬学組成物を投与することを含む。一部の実施形態において、上記対象は、哺乳類であっても良い。一部の実施形態において、上記対象は、ヒトであっても良い。一部の実施形態において、上記対象は、代謝疾患を罹患する、或いはこのような疾患が進展するリスクを有する。
【０１１０】
さらなる態様において、本開示は、医薬品の製造または調製におけるここに記載されたポリペプチドの用途を提供する。一部の実施形態において、上記医薬品は、代謝疾患の治療に用いられても良い。上記代謝疾患は、脂質代謝の異常調節に関係する。一部の実施形態において、上記医薬品は、コレステロール関連病気の治療に用いられても良い。一部の実施形態において、上記コレステロール関連病気は、高脂血症であっても良い。上記高脂血症は、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、またはそれらの組み合わせであっても良い。もう一つの実施形態、上記医薬品は、対象における血清脂質のレベル（例えば、総コレステロール、総トリグリセリド、またはＬＤＬコレステロールレベル）を低下する方法に用いられ、対象に治療的有効量の医薬品を投与することを含む。
【０１１１】
一部の実施形態において、上記代謝疾患がグルコース代謝の異常調節に関係しても良い。一部の実施形態において、上記医薬品は、糖尿病（例えば、１型または２型糖尿病）の治療に用いられる。一部の実施形態において、上記医薬品は、肥満の治療に用いられても良い。もう一つの実施形態において、上記医薬品は、対象における血糖またはＨｂＡ１ｃレベルを低下する方法に用いられ、対象に治療的有効量の医薬品を投与することを含む。
【０１１２】
特定の実施形態において、治療される病気は、ＮＴＣＰ活性を両方向制御することで改善、改良、抑制、または予防される任意な疾患または病状であっても良い。特定の実施形態において、肝細胞による胆汁酸摂取の調節から利益を得る病気または疾患も、ここに記載されたポリペプチドで治療できる。特定の実施形態において、ここに記載のポリペプチドと方法と用途で治療可能な対象は、ＬＤＬアフェレーシスを示す対象、糖尿病を有する対象、原発性高脂血症（高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、またはそれらの組み合わせを含む）を有するが他の治療薬を受けつけない対象或いは他の治療薬で制御されない対象、高脂血症を発展するリスクがあるが予防的に治療され得る対象を含む。他の適応症は、２型真性糖尿病、胆汁うっ滞性肝疾患（原発性胆汁性肝硬変）、ネフローゼ症候群、甲状腺機能低下症、肥満などの続発性原因、ならびに心血管疾患（例えばアテローム性動脈硬化症）、心臓疾患、腎臓障害の予防および治療に関連する脂質異常症を含む。
【０１１３】
特定の実施形態において、ここに記載された方法と用途は、さらに対象に有効量の少なくとも一つの他の治療薬を投与することを含む。特定の実施形態において、他の治療薬は、ここに記載された代謝疾患に関連する一つ以上の疾患（例えば、糖尿病または高脂血症に関連する一つ以上の疾患）を予防および／または治療することに用いられても良い。特定の実施形態において、他の治療薬は、心血管疾患（例えばアテローム性動脈硬化症）を予防および／または治療することに用いられても良い。特定の実施形態において、他の治療薬は、再発性心血管イベントのリスクを低下することに用いられても良い。特定の実施形態において、他の治療薬は、心臓疾患、腎障害、または肥満を予防および／または治療することに用いられても良い。ここに記載されたポリペプチドは、治療において、単独でまたは他の薬剤と組み合わせて使用できる。例えば、任意のここに記載されたポリペプチドは、少なくとも一つの他の治療薬の投与の前に、同時に、または後に、投与されても良い。特定の実施形態において、他の治療薬は、例えば、抗高脂血症剤、抗高血糖剤、抗糖尿病剤、抗肥満剤および胆汁酸類似物から選ばれても良い。
【０１１４】
一部の実施形態において、上記抗高血糖剤は、例えば、ビドアニド（例えば、メトホルミン、フェンホルミン、およびブホルミン）、インスリン（例えば、通常のヒトインスリン、ＮＰＨインスリン、インスリンアスパルト、インスリンリスプロ、インスリングラルギン、インスリンデテミル、およびインスリンレベミル）、グルカゴン様ペプチド１受容体作動薬（ＧＬＰ−１ＲＡ；例えばアルビグルチド（ａｌｂｉｇｌｕｔｉｄｅ）、デュラグルチド（ｄｕｌａｇｌｕｔｉｄｅ）、エキセナチド（Ｅｘｅｎａｔｉｄｅ）、リラグルチド（ｌｉｒａｇｌｕｔｉｄｅ）、リキシセナチド（ｌｉｘｉｓｅｎａｔｉｄｅ）、および持続放出グルカゴン）、ナトリウム−グルコース共輸送体２阻害剤（ＳＧＬＲ  ２  Ｉ；例えば、カナグリフロジン（Ｃａｎａｇｌｉｆｌｏｚｉｎ）、エンパグリフロジン（Ｅｍｐａｇｌｉｆｌｏｚｉｎ）、ダパグリフロジン（Ｄａｐａｇｌｉｆｌｏｚｉｎ）、エンパグリフロジン（Ｅｍｐａｇｌｉｆｌｏｚｉｎ）、およびイプラグリフロジン（Ｉｐｒａｇｌｉｆｌｏｚｉｎ））、ジペプチジルペプチダーゼ４阻害剤（ＤＰＰ４Ｉ；例えばブロモクリプチン（ｂｒｏｍｏｃｒｉｐｔｉｎｅ）、シタグリプチン（ｓｉｔａｇｌｉｐｔｉｎ）、ビルダグリプチン（Ｖｉｌｄａｇｌｉｐｔｉｎ）、サクサグリプチン（ｓａｘａｇｌｉｐｔｉｎ）、リナグリプチン（Ｌｉｎａｇｌｉｐｔｉｎ）、アナグリプチン（Ａｎａｇｌｉｐｔｉｎ）、テネリグリプチン（Ｔｅｎｅｌｉｇｌｉｐｔｉｎ）、アログリプチン（Ａｌｏｇｌｉｐｔｉｎ）、トレラグリプチン（ｔｒｅｌａｇｌｉｐｔｉｎ）、ゲミグリプチン（ｇｅｍｉｇｌｉｐｔｉｎ）、デュトグリプチン（ｄｕｔｏｇｌｉｐｔｉｎ）、オマリグリプチン（ｏｍａｒｉｇｌｉｐｔｉｎ）、ベルベリン（ｂｅｒｂｅｒｉｎｅ）、およびルペオール（ｌｕｐｅｏｌ））、α−グルコシダーゼ阻害剤（ＡＧＩ；例えば、ミグリトール（Ｍｉｇｌｉｔｏｌ）、アカルボース（Ａｃａｒｂｏｓｅ）、およびボグリボース（Ｖｏｇｌｉｂｏｓｅ））、チアゾリジンジオン（Ｔｈｉａｚｏｌｉｄｉｎｅｄｉｏｎｅ）（ＴＺＤ；例えば、ピオグリタゾン（Ｐｉｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ）、ロシグリタゾン（Ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ）、ロベグリタゾン（Ｌｏｂｅｇｌｉｔａｚｏｎｅ）、トログリタゾン（Ｔｒｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ）、シグリタゾン（Ｃｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ）、ダルグリタゾン（ｄａｒｇｌｉｔａｚｏｎｅ）、エングリタゾン（ｅｎｇｌｉｔａｚｏｎｅ）、ネトグリタゾン（ｎｅｔｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ）、リボグリタゾン（Ｒｉｖｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ）、およびミフェプリストン（ｍｉｆｅｐｒｉｓｔｏｎｅ））、メグリチニド（ｍｅｇｌｉｔｉｎｉｄｅ）（例えば、レパグリニド（ｒｅｐａｇｌｉｎｉｄｅ）、ナテグリニド（ｎａｔｅｇｌｉｎｉｄｅ）、およびミチグリニド（ｍｉｔｉｇｌｉｎｉｄｅ））、スルホニルウレア（ｓｕｌｆｏｎｙｌｕｒｅａ）（ＳＵ；例えば、カルブタミド（ｃａｒｂｕｔａｍｉｄｅ）、アセトヘキサミド（Ａｃｅｔｏｈｅｘａｍｉｄｅ）、クロルプロパミド（ｃｈｌｏｒｐｒｏｐａｍｉｄｅ）、トルブタミド（ｔｏｌｂｕｔａｍｉｄｅ）、トラザミド（ｔｏｌａｚａｍｉｄｅ）、グリピジド（ｇｌｉｐｉｚｉｄｅ）（グルコトロール（Ｇｌｕｃｏｔｒｏｌ））、グリクラジド（ｇｌｉｃｌａｚｉｄｅ）、グリベンクラミド（ｇｌｉｂｅｎｃｌａｍｉｄｅ）、グリブリド（ｇｌｙｂｕｒｉｄｅ）（例えば、ミクロナーゼ（Ｍｉｃｒｏｎａｓｅ））、グリボルヌリド（ｇｌｉｂｏｒｎｕｒｉｄｅ）、グリキドン（ｇｌｉｑｕｉｄｏｎｅ）、グリソキセピド（ｇｌｉｓｏｘｅｐｉｄｅ）、グリクロピラミド（Ｇｌｙｃｌｏｐｙｒａｍｉｄｅ）、グリメピリド（ｇｌｉｍｅｐｉｒｉｄｅ）、アマリール（Ａｍａｒｙｌ）、グリムプライム（ｇｌｉｍｉｐｒｉｍｅ））、アミリン類似体（例えば、プラムリンチド（Ｐｒａｍｌｉｎｉｔｉｄｅ））、プロタンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型阻害剤（ＰＣＳＫ９Ｉ；例えば、エボロクマブ（ｅｖｏｌｏｃｕｍａｂ）、ボコシズマブ（ｂｏｃｏｃｉｚｕｍａｂ）、アリロクマブ（ａｌｉｒｏｃｕｍａｂ）、１Ｄ０５−ＩｇＧ２、ＲＧ−７６５２、ＬＹ３０１５０１４、ＲＮＡｉ治療剤ＡＬＮ−ＰＣＳＯ２、ＡＭＧ−１４５、およびＲＥＧＮ７２７／ＳＡＲ２３６５５３）、グルコキナーゼ活性化剤（ＧＫＡ；例えば、ＭＫ−０９４１、ＲＯ−２８−１６７５、およびＡＺＤ１６５６）、ＰＰＡＲアゴニスト／モジュレーター、グルカゴン受容体拮抗剤、Ｃ−Ｃケモカイン（Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ）受容体２型（ＣＣＲ２）拮抗剤、インターロイキン−１モジュレーター（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１  ｍｏｄｕｌａｔｏｒ）、Ｇタンパク質共役受容体作動薬、ＧＬＰ−１以外の胃腸ペプチド作動薬、ＳＧＬＴ１および二重ＳＧＬＴ１／ＳＧＬＴ２阻害剤（ＳＧＬＴ２のみに対する阻害剤を除く）、１１β−ＨＳＤ１阻害剤、ジアシルグリセリンアシルトランスフェラーゼ（ＤＧＡＴ）−１阻害剤、カンナビノイド（ｃａｎｎａｂｉｎｏｉｄ）、肝カルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ１（ＣＰＴ１）阻害剤、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）−２１作動薬、グルココルチコイド受容体拮抗薬、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）誘導剤、４型メラノコルチン受容体（ＭＣ４Ｒ）作動薬、経口糖尿病治療薬グリミンを含むテトラヒドロトリアジン、テトラヒドロトリアジン（ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｔｒｉａｚｉｎ）を含む経口糖尿病治療薬、グリミン（ｇｌｉｍｉｎ）、タンパク質チロシンホスファターゼ１Ｂ（ＰＴＰ１Ｂ）阻害剤、サーチュイン１（ＳＩＲＴ１）活性化剤およびミクロバイオームモジュレーター（ｍｉｃｒｏｂｉｏｍｅ  ｍｏｄｕｌａｔｏｒ）から選ばれても良い。
【０１１５】
一部の実施形態において、他の治療薬は、抗高脂血症剤であって、スタチン（例えば、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤；例えば、シンバスタチン（ｓｉｍｖａｓｔａｔｉｎ）、アトルバスタチン（ａｔｏｒｖａｓｔａｔｉｎ）、ロスバスタチン（Ｒｏｓｕｖａｓｔａｔｉｎ）、プラバスタチン（ｐｒａｖａｓｔａｔｉｎ）、ピタバスタチン（Ｐｉｔａｖａｓｔａｔｉｎ）、ロバスタチン（ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ）、アトルバスタチン（ａｔｏｒｖａｓｔａｔｉｎ）、フルバスタチン（ｆｌｕｖａｓｔａｔｉｎ）、セリバスタチン（ｃｅｒｉｖａｓｔａｔｉｎ）、メバスタチン（ｍｅｖａｓｔａｔｉｎ）、パンテチン（ｐａｎｔｅｔｈｉｎｅ）、エラスターゼ（ｅｌａｓｔａｓｅ）、およびプロブコール（ｐｒｏｂｕｃｏｌ））、フィブリン酸（例えば、ベザフィブラート（ｂｅｚａｆｉｂｒａｔｅ）（例えば、ベザリップ（Ｂｅｚａｌｉｐ））、シプロフィブラート（ｃｉｐｒｏｆｉｂｒａｔｅ）（例えば、モダリム（Ｍｏｄａｌｉｍ））、クロフィブラート（ｃｌｏｆｉｂｒａｔｅ）、ゲムフィブロジル（ｇｅｍｆｉｂｒｏｚｉｌ）（例えば、ロピッド（Ｌｏｐｉｄ））、フェノフィブラート（ｆｅｎｏｆｉｂｒａｔｅ）（例えば、トライコア（ＴｒｉＣｏｒ））、クリノフィブラート（ｃｌｉｎｏｆｉｂｒａｔｅ）（例えば、リポクリン（Ｌｉｐｏｃｌｉｎ））、リフィブレート（ｌｉｆｉｂｒａｔｅ）、アルフィブレート（ａｌｕｆｉｂｒａｔｅ）、シンフィブラート（ｓｉｍｆｉｂｒａｔｅ）、エトフィリンクロフィブラート（ｅｔｏｆｙｌｌｉｎｅ  ｃｌｏｆｉｂｒａｔｅ）およびゲムフィブロジル（ｇｅｍｆｉｂｒｏｚｉｌ））、ニコチン酸（ｎｉｃｏｔｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）（例えば、ナイアシン（ｎｉａｃｉｎ）、イノシトールヘキサニコチネート（ｉｎｏｓｉｔｏｌ  ｈｅｘａｎｉｃｏｔｉｎａｔｅ）、ニコチンアミド（ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ）およびアシピモックス（ａｃｉｐｉｍｏｘ））、胆汁酸吸着剤（例えば、コレスチラミン（ｃｈｏｌｅｓｔｙｒａｍｉｎｅ）（例えば、クエストラン（登録商標）（Ｑｕｅｓｔｒａｎ（登録商標）））、コレセベラム（ｃｏｌｅｓｅｖｅｌａｍ）（例えば、ウェルコール（登録商標）（Ｗｅｌｃｈｏｌ（登録商標）））、コレスチポール（ｃｏｌｅｓｔｉｐｏｌ）（例えば、コレスチド（登録商標）（Ｃｏｌｅｓｔｉｄ（登録商標）））、ポリデキシド（ｐｏｌｉｄｅｘｉｄｅ）、コレスチラミン（ｄｈｏｌｅｓｔｙｒａｍｉｎｅ）およびｄｉｖｉｓｔｙｒａｍｉｎｅ）、エゼチミブ（Ｅｚｅｔｉｍｉｂｅ）（例えば、ゼチーア（Ｚｅｔｉａ））、プロタンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型阻害剤（ＰＣＳＫ９Ｉ；例えば、エボロクマブ（ｅｖｏｌｏｃｕｍａｂ）、ボコシズマブ（ｂｏｃｏｃｉｚｕｍａｂ）、アリロクマブ（ａｌｉｒｏｃｕｍａｂ）、１Ｄ０５−ＩｇＧ２、ＲＧ−７６５２、ＬＹ３０１５０１４、ＲＮＡｉ治療剤ＡＬＮ−ＰＣＳＯ２、ＡＭＧ−１４５、およびＲＥＧＮ７２７／ＳＡＲ２３６５５３）、ミクロソームトリグリセリド輸送タンパク質阻害剤（ＭＴＴＰＩ；例えば、ロミタピド（ｌｏｍｉｔａｐｉｄｅ）とＪＴＴ−１３０）、アポリポタンパク質Ｂ阻害剤（ａｐｏＢＩ；例えば、ミポメルセン（ｍｉｐｏｍｅｒｓｅｎ）（例えば、Ｋｙｎａｍｒｏ））、ジアシルグリセリンアシルトランスフェラーゼ１（ＤＧＡＴ１）阻害剤（例えば、プラジガスタット（ｐｒａｄｉｇａｓｔａｔ））、アンジオポエチン様タンパク質３阻害剤（例えば、ＲＥＧＮ１５００）、コレステロールエステル転移タンパク質（ＣＥＴＰ）阻害剤（例えば、アナセトラピブ（Ａｎａｃｅｔｒａｐｉｂ）とエバセトラピブ（ｅｖａｃｅｔｒａｐｉｂ））、ペルオキシゾーム増殖剤応答性受容体（ＰＰＡＲ）α／γ作動薬、アシルＣｏＡ阻害剤、インクレチンミメティックス阻害剤、アンジオポエチン様タンパク質３（ＡＮＧＰＴＬ３）阻害剤、アンジオポエチン様タンパク質４（ＡＮＧＰＴＬ４）阻害剤、ａｐｏＣ−ＩＩＩを阻害する阻害剤および選択的ペルオキシゾーム増殖剤応答性受容体モジュレーター（ＳＰＰＡＲＭ）から選ばれても良い。
【０１１６】
一部の実施形態において、他の治療薬は、抗肥満剤であって、例えば、オルリスタット（例えば、ゼニカル（Ｘｅｎｉｃａｌ））、ロルカセリン（例えば、Ｂｅｌｖｉｑ）、フェンテルミン、トピラマート、ジエチルプロピオン（ｄｉｅｔｈｙｌｐｒｏｐｉｏｎ）、フェンジメトラジン（ｐｈｅｎｄｉｍｅｔｒａｚｉｎｅ）、ベンズフェタミン（ｂｅｎｚｐｈｅｔａｍｉｎｅ）およびフェンジメトラジンとベンズフェタミンの組み合わせから選べられても良い。
【０１１７】
一部の実施形態において、他の治療薬は、胆汁酸類似物であって、例えば、オベチコール酸、ウルソデオキシコール酸およびコリルサルコシン（ｃｈｏｌｙｌｓａｒｃｏｓｉｎｅ）から選ばれても良い。
【０１１８】
一部の実施形態において、他の治療薬例えば、ファルネソイドＸ受容体（ＦＸＲ）作動薬、ＦＸＲ阻害剤、膜貫通Ｇタンパク質共役受容体５（ＴＧＲ５）作動薬およびＴＧＲ５阻害剤から選ばれても良い。
【０１１９】
一部の実施形態において、他の治療薬は、例えば、インスリン、メトホルミン、シタグリプチン、コレセベラム、グリピジド、シンバスタチン、アトルバスタチン、エゼチミブ、フェノフィブラート、ニコチン酸、オルリスタット、ロルカセリン、フェンテルミン、トピラマート、オベチコール酸およびウルソデオキシコール酸から選ばれても良い。
【０１２０】
ここに記載されたこのような併用療法は、併用投与（ただし、二つ以上の治療薬は、同じまたは別々の製剤に含まれる）と個別投与を含み、個別投与の場合に、ここに記載されたポリペプチドの投与は、他の治療薬の投与の前に、同時に、および／または後に行われても良い。
【０１２１】
ここに記載されたポリペプチド（と任意の他の治療薬）は、任意の適当な手段で投与されても良く、非経口投与、肺内投与、鼻腔内投与、および必要に応じて局所治療または病巣内投与を含む。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドは、腸管外に投与されても良い。腸管外投与は、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与を含む。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドは、皮下に投与されても良い。一部の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドは、静脈内に投与されても良い。給薬は、任意の適当な経路（例えば、静脈内または皮下注射または注入のような注射または注入）で行われても良く、投与が短期か長期かによって部分的に決定される。例えば、様々な時点にわたる単回または複数回投与、ボーラス投与、およびパルス注入を含む様々な投与スケジュールも含む。
【０１２２】
ここに記載されたポリペプチドは、一般的な医療行為と一致する方法で、製剤、給薬および投与される。これに関連して考慮すべき要因は、例えば、治療されている特定の疾患、治療されている特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、疾患の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与計画および医師に知られている他の要因を含む。ここに記載されたポリペプチドは、必ずしもその必要はないが、解決しようとする病気を予防または治療するために現在使用される一つ以上の薬剤とともに製剤化できる。このような他の薬剤の有効量は、製剤に存在するここに記載されたポリペプチドの量、病気または治療のタイプ、上記他の要因に依存する。
【０１２３】
疾患の予防または治療のために、ここに記載されたポリペプチドの適当な投与量（単独で、または１つ以上の他の治療薬と組み合わせて使用される場合）は、治療される疾患のタイプ、疾患の重症度と経過、該ポリペプチドが予防または治療目的のために投与されたかどうか、以前の治療、患者の病歴およびポリペプチドに対する反応、および医師の判断に依存しても良い。ここに記載されたポリペプチドは、一回にまたは一連の治療にわたって患者に適切に投与されても良い。疾患の種類と重症度によって、ここに記載されたポリペプチドは、例えば一回以上の個別の投与、または持続注入によって、患者に投与されても良い。数日またはそれ以上にわたる反復投与については、病状に応じて、上記治療は、疾患症状の所望の抑制が生じるまで続けられても良い。ここに記載されたポリペプチドは、断続的に投与されても良く、例えば毎日、２日ごと、３日ごと、毎週、または２〜３週間ごと（例えば、患者が二回以上、例えば約２〜約２０回、または例えば約６回の使用量のポリペプチドを受ける）。投与は、最初のより高負荷使用量、その後の一回以上の低使用量で行っても良い。
【０１２４】
特定の実施形態において、ここに記載されたポリペプチドを対象に投与するために、固定用量投与計画を用いてもよい。しかしながら、上記要因に応じて、他の投与計画も有用であっても良い。この治療法の進行は、治療される疾患または病状に用いられる従来の技術および試験によって容易にモニターできる。
【０１２５】
以下の実施例は説明の目的のために使用され、本発明の範囲を縮小することと見なされるべきではない。
【実施例１】
【０１２６】
実施例１．１．ポリペプチドの合成
表１に示されるポリペプチドは、ポリペプチド合成のための標準的なＦｍｏｃプロトコルに従って合成された。一般に、ＭＢＨＡ樹脂から出発して、個々のアミノ酸残基を、カルボキシル末端からアミノ末端まで延びた。その後、Ｎ末端は、ミリストイル化によって修飾された。ペプチド合成の完了後、ポリペプチドを切断溶液によって樹脂から切断し、ポリペプチドのＣ末端をアミノ化によってさらに修飾した。樹脂をＧ６サンドコアロートで濾過することにより除去し、ポリペプチドを含有する濾液を真空乾燥した。ポリペプチド産物を脱イオン水に溶解し、そしてＣ１８カラムを装着したＡＫＴＡエクスプローラ１００型中圧液体クロマトグラフで精製した。主ピークは段階的に回収された。標的ピークから収集したサンプルを、それらの純度についてＣ１８カラムを装着したＡｇｉｌｅｎｔ  １１００型逆相高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって分析し、それらの分子量を質量分析によって確認した。中圧液体クロマトグラフィーで精製した回収液を凍結乾燥して保存した。乾燥サンプルをＰＢＳに溶解し、次いで０．２０μＭの膜を通して濾過した。ＰＢＳに溶解したポリペプチドストックを使用前に−８０℃で保存した。図１Ａは、ＨＰＬＣにより測定された合成ポリペプチドＣｍｙｒ−４７の純度を表す例示的なグラフを示す。図１Ｂは、質量分析によって測定されたＣｍｙｒ−４７の精確分子量（５３９８．８Ｄａ）を確認する例示的なグラフを示す。
【０１２７】
実施例１．２．Ｃｍｙｒ−４７とＮＴＣＰの結合試験
ＨＢＶから由来するポリペプチドがＮＴＣと結合できることを証明するために、様々なＮＴＣＰを発現する細胞系は、Ｃｍｙｒ−４７で処理された。Ｃｍｙｒ−４７を視覚化するために、上記ポリペプチドは、ＦＩＴＣで標識された。ＮＴＣＰが、肝臓で高度に発現するから、ツパイから由来する初代肝細胞とヒト肝細胞細胞系ＨｅｐＧ２細胞は、研究に用意された。図２Ａと図２Ｂに示されたように、ＦＩＴＣで標識されたＣｍｙｒ−４７が、二つ異なる種の肝細胞に結合した（図２Ａは、Ｃｍｙｒ−４７とツパイ初代肝細胞の結合を示した；図２Ｂは、Ｃｍｙｒ−４７とＨｅｐＧ２細胞の結合を示した）。Ｃｍｙｒ−４７が、ＮＴＣＰと特異性的に結合することを証明するために、ＮＴＣＰを発現するＬ０２細胞（ＮＴＣＰ−Ｌ０２）は、ＮＴＣＰを発現するベクターをトランスフェクトすることで、確立された。ＮＴＣＰを発現しないベクター（ＢＬＡＮＫ−Ｌ０２）でトランスフェクトされたＬ０２細胞は、陰性対照として使用された。図３に示されたように、ＦＩＴＣで標識されたＣｍｙｒ−４７が、ＮＴＣＰ−Ｌ０２細胞と結合したが、ＢＬＡＮＫ−Ｌ０２細胞と結合しなかった。Ｃｍｙｒ−４７の特異性を確認するために、肝臓由来ではない細胞系とするＨＥＫ２９３細胞は、研究に用意された。ＮＴＣＰを発現するＨＥＫ２９３細胞（ＮＴＣＰ−２９３）は、細胞をＮＴＣＰを発現するベクターでトランスフェクトすることで確立された。ＮＴＣＰを発現しない対照ベクター（ＢＬＡＮＫ−２９３）でトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞は、陰性対照として使用された。図４に示されたように、ＦＩＴＣで標識されたＣｍｙｒ−４７が、ＮＴＣＰ−２９３細胞と結合したが、ＢＬＡＮＫ−２９３細胞を結合しなかった。逆に、鳥のＨＢＶは哺乳動物に感染しないという以前の発見（Ｇｒｉｐｏｎら、Ｊ．  Ｖｉｒｏｌ．  ７９（３）：１６１３−２２（２００５））に基づいて予想されるように、サギＨＢＶのｐｒｅ−Ｓ１領域から由来する４７個アミノ酸残基の対照ポリペプチド（ミリストイル化−ＧＬＮＱＳＴＦＮＰＬＧＦＦＰＳＨＱＬＤＰＬＦＫＡＮＡＧＳＡＤＷＤＫＮＰＮＫＤＰＷＰＱＡＨＤＴＡ−アミド化、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４９）が、ＮＴＣＰ−２９３細胞と結合しなかった。これらの結果は、Ｃｍｙｒ−４７がＮＴＣＰと特異性的に結合することを証明した。
【０１２８】
実施例１．３．Ｃｍｙｒ−４７のインビトロ胆汁酸試験
胆汁酸輸送におけるＨＢＶから由来するポリペプチドの効果をさらに研究するために、ＮＴＣＰ−２９３  細胞は、3Ｈ（3Ｈ−ＴＡ；タウロコール酸）で標識された胆汁酸にインキュベートされた。3Ｈ−ＴＡの使用によって、細胞に吸収された胆汁酸の量は、細胞の放射能レベルを測定することで定量できる。ＨＥＫ２９３細胞は、ＮＴＣＰを発現しない場合に、胆汁酸を吸収できないから、ＮＴＣＰ−２９３細胞に摂取された任意の胆汁酸は、ＮＴＣＰに起因するものだと思われる。１０μｍｏｌ／ＬのＴＡ（０．５μＣｉ／ｍｌの３  Ｈ−ＴＡとして放射性標識されている）と、増加する量のＣｍｙｒ−４７は、同時に培養細胞に１０分間添加された。胆汁酸輸送を阻害することが知られているシクロスポリン  Ａ（ＣｓＡ）は、５０μＭの濃度で陽性対照として使用された。図５Ａに示されたように、ＢＬＡＮＫ−２９３細胞と比較し、ＮＴＣＰ−２９３細胞が、多くの量の胆汁酸を吸収できる。ＮＴＣＰ−２９３細胞は、Ｃｍｙｒ−４７で処理された場合に、胆汁酸摂取は、異なる濃度のＣｍｙｒ−４７に両方向制御された。図５Ｂに示されたように、Ｃｍｙｒ−４７が、５００ｎｇ／ｍｌ以下の濃度で、肝細胞への胆汁酸のＮＴＣＰ輸送を増強したが、Ｃｍｙｒ−４７が、５００ｎｇ／ｍｌを超える濃度で、ＴＡ吸収を有意に減少させた。特に、６２．５ｎｇ／ｍｌのＣｍｙｒ−４７は、ＴＡ吸収を５０％以上増加させたが、陽性対照ＣｓＡと比較して、２μｇ／ｍｌのＣｍｙｒ−４７は胆汁酸の摂取を効果的に阻害した。図５Ｂに示された漸増用量試験に基づき、Ｃｍｙｒ−４７は、胆汁酸輸送の遮断に、０．１５μＭのＩＣ50値を有すると解明された。
【０１２９】
Ｃｍｙｒ−４７によるＮＴＣＰ仲介の胆汁酸輸送の双方向制御と逆に、ＴＡ吸収の一方向阻害は、ＣｓＡによって誘導された（図５Ｃおよび図５Ｄ）。ＣｓＡは、１０ｎｇ／ｍｌの低濃度と１００μｇ／ｍｌの高濃度に、ＮＴＣＰ仲介のＴＡの輸送を促進しなかった。図５Ｄに示された漸増用量試験に基づいて、胆汁酸輸送を阻害するためのＣｓＡの計算されたＩＣ50値は、３．０５μＭである。
【０１３０】
実施例１．４．他のＨＢＶ由来のポリペプチドのインビトロ胆汁酸試験
ＨＢＶ由来のポリペプチドの、ＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取に対する両方向効果をさらに分析するために、二つの異なる濃度（代表的な低濃度として６２．５ｎｇ／ｍｌ、代表的な高濃度として１μｇ／ｍｌ）のＣｍｙｒ−４７と他のＨＢＶ由来のポリペプチドは、インビトロ胆汁酸試験において、上記プロトコルによってテストされた。二つの対照処理とするＣｓＡとキニジンも、比較のためにテストされた。キニジンはクラスＩ抗不整脈薬であり、以前に、ＮＴＣＰ仲介のＴＡ摂取を増強することが示されていた（Ｋｉｍら，  Ｊ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｅｘｐ．  Ｔｈｅｒ．  ２９１（３）：１２０４−０９（１９９９）を参照）。ＣｓＡおよびキニジンはＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから購入した（それぞれＳｉｇｍａ−３００２４およびＳｉｇｍａ−Ｑ３６２５）。
【０１３１】
図５Ｅに示されたように、１００ｎｇ／ｍｌのＣｓＡは、ＴＡ吸収に有意な影響を及ぼさなかったが、キニジンは、０．１μｍｏｌ／Ｌで、ＴＡ吸収を増強した。表１に挙げられたＨＢＶ由来ポリペプチド（Ｃｍｙｒ−６０，Ｃｍｙｒ−５５，Ｃｍｙｒ−４７，Ｃｍｙｒ−４０，Ｃｍｙｒ−３５，Ｃｍｙｒ−３０，Ｃｍｙｒ−２５，Ｃｍｙｒ−２０，Ｃｍｙｒ−４７＋（−１０），Ｃｍｙｒ−４７＋（−９），Ｃｐｌａｍ−４７，Ｃｓｔｅａ−４７，Ｃｃｈｏｌ−４７，Ａｍｙｒ−４７，Ｂｍｙｒ−４７，Ｄｍｙｒ−４７，Ｅｍｙｒ−４７，Ｆｍｙｒ−４７，Ｇｍｙｒ−４７またはＨｍｙｒ−４７）は、６２．５ｎｇ／ｍｌ（１１．５８ｎｍｏｌ／Ｌ）のＣｍｙｒ−４７に相当する低いモル濃度でＴＡ吸収を増強し、ＨＢＶ由来ポリペプチドは、低濃度でＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取を増強できることを確認した。
【０１３２】
これに対して、ＨＢＶ由来ポリペプチド（Ｃｍｙｒ−６０，Ｃｍｙｒ−５５，Ｃｍｙｒ−４７，Ｃｍｙｒ−４０，Ｃｍｙｒ−３５，Ｃｍｙｒ−３０，Ｃｍｙｒ−２５，Ｃｍｙｒ−２０，Ｃｍｙｒ−４７＋（−１０），Ｃｍｙｒ−４７＋（−９），Ｃｐｌａｍ−４７，Ｃｓｔｅａ−４７，Ｃｃｈｏｌ−４７，Ａｍｙｒ−４７，Ｂｍｙｒ−４７，Ｄｍｙｒ−４７，Ｅｍｙｒ−４７，Ｆｍｙｒ−４７，Ｇｍｙｒ−４７またはＨｍｙｒ−４７）は、１μｇ／ｍｌ（１８５．２３ｎｍｏｌ／Ｌ）のＣｍｙｒ−４７に相当する高いモル濃度でテストされた場合に、全てのポリペプチドがＴＡ吸収を効果的に阻害し（図５Ｆ）、ＨＢＶ由来ポリペプチドがＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取を特定の高濃度で阻害できることを確認した。比較として、５０μｇ／ｍｌのＣｓＡは、ＴＡ吸収を阻害したが、２０μモル／Ｌのキニジンは、ＴＡ吸収を増強した。これらの結果は、ＨＢＶ由来ポリペプチドが、用量依存的にＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取を双方向制御できることを証明した。
【実施例２】
【０１３３】
実施例２．１．Ｃｍｙｒ−４７で処理されたラットの毒性と胆汁酸、総コレステロール、トリグリセリドおよび血糖分析
Ｃｍｙｒ−４７の毒性を確定し、かつＣｍｙｒ−４７がインビボで胆汁酸の摂取を調節できることを確認するために、同数の雄および雌を有する１９０匹のＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットは、６ヶ月間の慢性毒性テストを行った。各ラットに、対照とするＰＢＳ、或いは１、３または９ｍｇ／ｋｇのＣｍｙｒ−４７を１８０日間毎日皮下注射した。実験スキームは、表２に示された。
【０１３４】
【表２】
2019520341.tif 000005
【０１３５】
実験終了時に、尾部出血によって血液試料を各ラットから採取した。血液サンプルからの血清を、３，０００ｒｐｍで１０分間の遠心分離によってさらに分離した。次いで、血清サンプルを総胆汁酸試験キット（南京建城生物工学研究所）で分析して、総胆汁酸（ＴＢＡ）のレベルを確定した。表３と表４に示されたように、対照グループと比較して、Ｃｍｙｒ−４７で処理された雌および雄のラットの両方が、血清中の総胆汁酸レベルの増加を示し、これは、Ｃｍｙｒ−４７がインビボで胆汁酸摂取を効果的に阻害できることを示す。総胆汁酸の増加は使用量依存的である。
【０１３６】
【表３】
2019520341.tif 000006
【０１３７】
【表４】
2019520341.tif 000007
【０１３８】
実施例２．２．Ｃｍｙｒ−４７で処理されたラットの総コレステロール、トリグリセリドおよび血糖
実施例２．１にテストされた各動物の総コレステロール（ＴＣ）、トリグリセリド（ＴＧ）および血糖（ＧＬＵ）のレベルは、表５と６にまとめられた。表５と６に示されたように、対照グループと比較して、Ｃｍｙｒ−４７の低使用量、中使用量、または高用量は、血清ＴＣ、ＴＧまたはＧＬＵに有意な影響を及ぼさなかった（全てのＰの値＞０．０５）。したがって、生理的条件において、Ｃｍｙｒ−４７は、正常レベルの血清ＴＣ、ＴＧまたはＧＬＵに影響しない。
【０１３９】
【表５】
2019520341.tif 000008
【０１４０】
【表６】
2019520341.tif 000009
【０１４１】
実施例２．３．Ｃｍｙｒ−４７で処理されたイヌの毒性と胆汁酸、総コレステロール、トリグリセリドおよび血糖分析
Ｃｍｙｒ−４７の毒性を確定し、かつＣｍｙｒ−４７がインビボで胆汁酸の摂取を調節できるかをさらに確認するために、同数の雄および雌を有する５６匹のビーグルイヌは、９ヶ月間の慢性毒性テストを行った。各イヌに、対照とするＰＢＳ、或いは毎回の注射に０．２５、０．７５または２ｍｇ／ｋｇのＣｍｙｒ−４７を２７０日間毎日皮下注射した。実験スキームは、表７に示された。
【０１４２】
【表７】
2019520341.tif 000010
【０１４３】
実験終了時に、静脈穿刺によって各イヌから血液サンプルを採取し、そして採取した血液サンプルからの血清を上記のように分離した。次いで血清試料を分析して、上記のように総胆汁酸レベルの濃度を確定した。表８に示されたように、対照グループと比較して、Ｃｍｙｒ−４７は、用量依存的にイヌの総胆汁酸の血清レベルを増加させた。各動物の総コレステロール（ＴＣ）、トリグリセリド（ＴＧ）および血糖（ＧＬＵ）のレベルは、表９にまとめられた。表９に示されたように、対照グループと比較して、Ｃｍｙｒ−４７の低使用量、中使用量、または高用量は、血清ＴＣ、ＴＧまたはＧＬＵに有意な影響を及ぼさなかった（全てのＰの値＞０．０５）。したがって、生理的条件において、Ｃｍｙｒ−４７は、正常レベルの血清ＴＣ、ＴＧまたはＧＬＵに影響しない。
【０１４４】
【表８】
2019520341.tif 000011
【０１４５】
【表９】
2019520341.tif 000012
【０１４６】
実施例２．４．Ｃｍｙｒ−４７で処理されたイヌの薬物動態分析
雌雄同数の５６匹のビーグルイヌは、１ヶ月間の慢性毒性テストを行われた。各イヌに、対照とするＰＢＳ、或いは毎回の注射に０．４、１．２または３．６ｍｇ／ｋｇのＣｍｙｒ−４７を３０日間毎日皮下注射した。実験スキームは、表１０に示された。
【０１４７】
【表１０】
2019520341.tif 000013
【０１４８】
実験中、各イヌからの血液サンプルは、最初の投与後および最後の投与後に、０、１０、２０、４０、６０、９０、１２０、１８０、２４０、３６０、１４４０分に静脈穿刺によって採取された。採取した血液サンプルからの血清を上記のように分離した。次いで、血清サンプルを分析して、抗ＰｒｅＳ１抗体１２５Ｅ１１を用いて、放射免疫測定（ＲＩＡ）によりＣｍｙｒ−４７の濃度を確定した（Ｗｅｉら，  Ｃｌｉｎｉｃａ．  Ｃｈｉｍｉｃａ．  Ａｃｔａ．  ３１７：１５９−６９（２００２））。表１１〜１３は、それぞれに、０．４、１．２、または３．６ｍｇ／ｋｇで投与された各動物の血清濃度を示す。表１３に示されたように、３．６ｍｇ／ｋｇのＣｍｙｒ−４７を投与されたイヌは、使用量によく耐え、重大な毒性は観察されなかった。血流中のＣｍｙｒ−４７のピーク濃度（すなわちＣmax）は投与後２０分（すなわちＴmax）に達した。Ｃmaxは、投薬後に、薬物が達成するピーク血清濃度を指す。Ｔmaxは、Ｃmaxが観察される時間を指す。例えば表１３に示されたように、最高用量のＣｍｙｒ−４７は、２０分で５００ｎｇ／ｍｌを超えるＣmaxに達成でき、この試験条件において、Ｃｙｍｒ−４７のＴmaxが、約２０分であることを示した。表１１〜１３に示されたように、最高用量（３．６ｍｇ／ｋｇ）のみが、５００ｎｇ／ｍｌを超えるピーク濃度に達成できた。
【０１４９】
【表１１】
2019520341.tif 000014
【０１５０】
【表１２】
2019520341.tif 000015
【０１５１】
【表１３】
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【実施例３】
【０１５２】
実施例３．１．Ｃｍｙｒ−４７で高脂質血症ゴールデンハムスターモデルの処理における方法と材料
脂質代謝におけるＣｍｙｒ−４７のインビボ効果を分析するために、２週間高脂肪食で（１０日間の順応性飼育後）ハムスターを飼うことで、高脂質血症ゴールデンハムスターモデルを確立した。雄ゴールデンハムスター（Ｎ＝７０、９０−１１０ｇ）は、北京バイタルリバー会社（Ｂｅｉｊｉｎｇ  Ｖｉｔａｌ  Ｒｉｖｅｒ）（ＳＣＸＫ  （Ｊｉｎｇ）  ２０１２−０００１）から購入され、動物品質証明書番号１１４００７０００９３３３８。動物は、浙江漢方医学大学動物実験研究センター（Ｚｈｅｊｉａｎｇ  Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ  Ｃｈｉｎｅｓｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｅｎｔｅｒ）（ＳＹＸＫ（Ｚｈｅ）２０１３−０１８４）に、騒音が制御された部屋（＜５０ｄＢ）内で、１２時間の明暗サイクル（１５０〜２００Ｌｘ）で、湿度５０〜７０％、２３±１℃で飼育された。高脂肪食の組成は、１．２５％コレステロールと２０．０６％脂肪（大豆油２．７９％、カカオバター１７．２７％）を含み、食事はＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔｓ  Ｉｎｃ．（Ｎｅｗ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ、ＮＪ）から購入され、４℃で保存された。正常な非高脂血症対照（「正常対照グループ」）として、ゴールデンハムスターのグループに通常の固形飼料を給餌した。Ｃｏ60の照射による滅菌された完全栄養ラットペレットは、通常の固形飼料として使用された。動物は、濾過および滅菌した水道水を自由に摂取する。全ての食物は、自由に摂取できて、動物は、ケージ当たり４〜５匹を収容した。高脂肪食を給餌した各ハムスターの体重および摂餌量を毎週モニターした。すべての動物は、人道的に処理され、３Ｒの原則（代替、削減、および最適化）に従って痛みと苦痛を最小限に抑える。
【０１５３】
高脂肪食処理の２週間後、動物が１０ｍｍｏｌ／Ｌより高い血清総コレステロール（ＴＣ）レベルを有する場合に、ハムスターの高脂血症表現型が確認された。合計４０匹の高脂血症ハムスターは、ランダムに５つのグループに分類された（Ｎ＝８／グループ）：モデル対照グループ（１０ｍＬ／ｋｇ  ＰＢＳ、皮下投与（ｓｃ））、陽性処理対照グループ（フェノフィブラート、５０ｍｇ／ｋｇ／日、経口胃内投与（ｐｏ））、低使用量処理グループ（Ｃｍｙｒ−４７、１０ｍｇ／ｋｇ／日、ｓｃ）、高使用量処理グループ（３０ｍｇ／ｋｇ／日Ｃｍｙｒ−４７、ｓｃ）、ＣｓＡ処理グループ（ＣｓＡ、５ｍｇ／ｋｇ／日、ｐｏ）。通常の固形飼料を給餌した１０匹のハムスターは、正常対照グループとして使用された（１０ｍＬ／ｋｇ  ＰＢＳ、ｓｃ）。
【０１５４】
上記プロトコールに従って、Ｃｍｙｒ−４７は、ＨＥＰ製薬（ＨＥＰ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）（中国、上海；ロット番号：１４０１１８０１）により白色粉末として合成された。各処理について、Ｃｍｙｒ−４７をＰＢＳ中で新たに調製し、調製直後に使用した。２０×ＰＢ溶液（Ｎａ2ＨＰＯ4・１２Ｈ2Ｏ（６４．４６５２ｇ）とＮａＨ2ＰＯ4・２Ｈ2Ｏ（３．１２０２ｇ）、水を５００ｍＬまで加えた）を製剤することによって、ＰＢＳを調製した。その後、１倍量の２０×ＰＢ、４倍量の純水、１５倍量の０．９％生理食塩水を混合して、テスト薬溶解用ＰＢＳを得た。本研究に陽性対照として使用されたフェノフィブラート（ＦＥＮＯ）のＦｅｎｏｌｉｐ錠は、Ｌａｂｏｒａｔｏｉｒｅｓ  ＦＯＵＲＮＩＥＲ  Ｓ．Ａ．から購入された。ＣｓＡ（Ｓａｎｄｉｍｍｕｎｅ（登録商標））はＮｏｖａｒｔｉｓから購入された。
【０１５５】
ＰＢＳ、Ｃｍｙｒ−４７、ＦＥＮＯ、およびＣｓＡは、それぞれに４週間連続して投与された。実験において、モデル対照グループ、低使用量グループおよび高使用量グループ、ならびに陽性対照グループのすべての動物は、高脂肪食を与えられたが、一方、正常対照グループは、通常の固形食を与えられた。Ｃｍｙｒ−４７またはＰＢＳをハムスターに１日２回に皮下注射した（午前９：００〜１０：００、午後１６：００〜１７：００）。陽性処理対照グループには、経口胃内投与により、ＦＥＮＯを投与した。ＣｓＡ処理グループには、経口胃内投与により、ＣｓＡを投与した。毎朝、食料と水の消費量、糞、動物のグルーミングをモニターしました。全ての動物の体重を週ごとに測定した。
【０１５６】
２週間の処理後、全ての動物の血清ＴＣとトリグリセリド（ＴＧ）レベルを測定した。４週間の処理後、全ての動物の血清ＴＣとＴＧ、ＬＤＬ−ＣおよびＨＤＬ−Ｃレベルを測定した。測定する前に、全ての動物は採血前に１２時間絶食させた（水を除外）。各動物からの血液（０．３ｍＬ）サンプルを眼窩後叢から採集し、サンプルからの血清を３，０００ｒｐｍで１０分間の遠心分離によってさらに単離した。脂質を測定するためのキットはＳｈｅｎｎｅｎｇ  ＤＥＳＡＹ診断技術有限公司（Ｓｈｅｎｎｅｎｇ  ＤＥＳＡＹ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．  Ｌｔｄ．）（上海、中国）から購入され、すべての測定は製造元のプロトコルに従って行った。測定には７０２０自動生化学分析装置を使用した。各動物のアテローム性動脈硬化指数（ＡＩ）は、ＡＩ＝（ＴＣ−ＨＤＬ−Ｃ）／ＨＤＬ−Ｃの式に従って計算した。ＡＩは、アテローム性動脈硬化症を発展するリスクが増加することの最も信頼できる指標の一つと考えられる。
【０１５７】
Ｓａｎｙｏ  Ｃｏｍｐａｎｙ（日本）のＭＬＳ−３７５０高圧滅菌チャンバーと、ザルトリウス科学機器株式会社（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）（中国北京）のＳＱＰ電子スケールを使用した。Ｙｏｎｇｊｉｅｄａ精製技術株式会社（Ｙｏｎｇｊｉｅｄａ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．  Ｌｔｄ．）（中国、浙江、杭州）のＲＯ−ＭＢ−５０超純水システムを使用した。ＫＱ−３００ＤＥ超音波を、昆山超音波計器有限会社（Ｋｕｎｓｈａｎ  Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｃｏ．，  Ｌｔｄ．）（昆山、江蘇省、中国）から購入し、日立７０２０自動生化学分析装置を、日立製作所（日本）から購入した。多機能ＥＬＩＳＡ装置は、サーモフィッシャーサイエンティフィック社（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｃ．）（米国）から得られた。
【０１５８】
ＳＰＳＳ１９．０ソフトウェアを用いてデータを分析し、平均±標準偏差または平均±ＳＥＭとして表した。テスト結果からのデータを評価するために、ＡＮＯＶＡ分散分析を用いられた。ＬＳＤテストは、一対比較に用いられた。統計分析の値は小数点第２位を四捨五入した。
【０１５９】
実施例３．２．血清総コレステロール（ＴＣ）に対するＣｍｙｒ−４７とＨＢＶから由来する他のポリペプチドの効果
表１４および図６に示されたように、実験期間において、正常対照の血清ＴＣレベルより、モデル対照の血清ＴＣレベルは有意に高く、高脂肪食を与えた動物が、高脂血症であることを確認した（全てのＰ＜０．０１）。モデル対照グループと比較して、ＦＥＮＯの投与は、血清ＴＣレベルを有意に低下させた（Ｐ値は全て０．０１未満）。Ｃｍｙｒ−４７で処理された高脂血症動物も、モデル対照グループより低い血清ＴＣレベルを示し、Ｃｍｙｒ−４７の効果は、用量依存的であった。これに対して、モデル対照グループと比較して、ＣｓＡで処理された高脂血症動物は、有意に高い血清ＴＣレベルを示した。
【０１６０】
【表１４】
2019520341.tif 000017
【０１６１】
インビボで血清ＴＣに及ぼす効果を確認するために、表１に挙げられたＨＢＶから由来する他のポリペプチドもテストされた。実験は、上記と同じ実験プロトコルに従って実施した。全てのポリペプチドを、３０ｍｇ／ｋｇ／日のＣｍｙｒ−４７に相当するモル使用量で投与した。
【０１６２】
図７Ａおよび図７Ｂで、（正常対照とモデル対照の血清ＴＣレベルを比較して）高脂肪食を与えた動物が高脂血症を有することを確認した。上記に示されたように、ＦＥＮＯは、動物の血清ＴＣレベルを減少させることができる。４週目に、ＨＢＶ由来の他のペプチド（Ｃｍｙｒ−６０、Ｃｍｙｒ−５５、Ｃｍｙｒ−４０、Ｃｍｙｒ−３５、Ｃｍｙｒ−３０、Ｃｍｙｒ−２５、Ｃｍｙｒ−２０、Ｃｍｙｒ−４７＋（−１０）、Ｃｍｙｒ−４７＋（−９）、Ｃｐｌａｍ−４７、Ｃｓｔｅａ−４７、Ｃｃｈｏｌ−４７、Ａｍｙｒ−４７、Ｂｍｙｒ−４７、Ｄｍｙｒ−４７、Ｅｍｙｒ−４７、Ｆｍｙｒ−４７、Ｇｍｙｒ−４７またはＨｍｙｒ−４７）で処理された動物も、モデル対照よりも低い血清ＴＣレベルを示した。
【０１６３】
実施例３．３．血清トリグリセリド（ＴＧ）に対するＣｍｙｒ−４７とＨＢＶから由来する他のポリペプチドの効果
表１５および図８に示されたように、実験において、モデル対照における血清ＴＧレベルは正常対照よりも有意に高かった（全てのＰ＜０．０１）。２週目および４週目の測定により、ＦＥＮＯが動物の血清ＴＧレベルを有意に減少させることが確認された（Ｐ値はすべて０．０１未満）。モデル対照と比較して、高使用量のＣｍｙｒ−４７も、動物における血清ＴＧレベルを有意に低下させた。血清ＴＣに対する効果と同様に、血清ＴＧに対するＣｍｙｒ−４７の効果も、用量依存的であった。注目すべきこととして、モデル対照と比較して、ＣｓＡ処理は、動物の血清ＴＧレベルを増加させた。
【０１６４】
【表１５】
2019520341.tif 000018
【０１６５】
ＨＢＶ由来の他のポリペプチド（Ｃｍｙｒ−６０、Ｃｍｙｒ−５５、Ｃｍｙｒ−４０、Ｃｍｙｒ−３５、Ｃｍｙｒ−３０、Ｃｍｙｒ−２５、Ｃｍｙｒ−２０、Ｃｍｙｒ−４７＋（−１０）、Ｃｍｙｒ−４７＋（−９）、Ｃｐｌａｍ−４７、Ｃｓｔｅａ−４７、Ｃｃｈｏｌ−４７、Ａｍｙｒ−４７、Ｂｍｙｒ−４７、Ｄｍｙｒ−４７、Ｅｍｙｒ−４７、Ｆｍｙｒ−４７、Ｇｍｙｒ−４７またはＨｍｙｒ−４７）で処理された動物の血清ＴＧレベルも、上記プロトコルに従って測定された。図９Ａおよび図９Ｂに示されたように、これらのＨＢＶ由来のポリペプチドで処理された動物の血清ＴＧレベルは、モデル対照のそれよりも低く、テストされたＨＢＶ由来のポリペプチドは、インビボで、すべて血清ＴＧを低下させることができることを示す。
【０１６６】
実施例３．４．血清ＬＤＬ−Ｃに対するＣｍｙｒ−４７とＨＢＶから由来する他のポリペプチドの効果
表１６および図１０は、ＰＢＳ、ＦＥＮＯ、またはＣｍｙｒ−４７で処理された動物からの血清ＬＤＬ−Ｃレベルの測定値をまとめたものである。予想通り、正常対照と比較して、モデル対照における血清ＬＤＬ−Ｃレベルは有意に増加し、高脂血症表現型を確認した（Ｐ＜０．０１）。ＦＥＮＯで処理された陽性対照は、モデル対照よりも有意に低い血清ＬＤＬ−Ｃレベルを示した。血清ＴＣおよびＴＧに対するＣｍｙｒ−４７の効果と一致し、モデル対照と比較して、Ｃｍｙｒ−４７（特に高使用量３０ｍｇ／ｋｇ）で処理された動物は、有意に低い血清ＬＤＬ−Ｃレベルを示した。
【０１６７】
【表１６】
2019520341.tif 000019
【０１６８】
ＨＢＶ由来の他のポリペプチド（Ｃｍｙｒ−６０、Ｃｍｙｒ−５５、Ｃｍｙｒ−４０、Ｃｍｙｒ−３５、Ｃｍｙｒ−３０、Ｃｍｙｒ−２５、Ｃｍｙｒ−２０、Ｃｍｙｒ−４７＋（−１０）、Ｃｍｙｒ−４７＋（−９）、Ｃｐｌａｍ−４７、Ｃｓｔｅａ−４７、Ｃｃｈｏｌ−４７、Ａｍｙｒ−４７、Ｂｍｙｒ−４７、Ｄｍｙｒ−４７、Ｅｍｙｒ−４７、Ｆｍｙｒ−４７、Ｇｍｙｒ−４７またはＨｍｙｒ−４７）で処理された動物の血清ＬＤＬ−Ｃレベルも、上記プロトコルに従って測定された。図１１Ａと図１１Ｂに示されたように、それらの動物の血清ＬＤＬ−Ｃレベルはモデル対照より低かった。
【０１６９】
実施例３．５．血清ＨＤＬ−ＣとＡＩに対するＣｍｙｒ−４７の効果
表１７と図１２は、血清ＨＤＬ−Ｃレベルの測定を提供する。この試験で得られた値に基づき、各動物のＡＩ値を上記式に従って計算した。各グループの平均ＡＩ値は、表１７および図１３に提供された。Ｃｍｙｒ−４７がインビボで血清ＨＤＬ−Ｃを低下させなかったが、Ｃｍｙｒ−４７で処理された動物の平均ＡＩ値は、モデル対照の平均値より有意に低く、これはＣｍｙｒ−４７が、アテローム性動脈硬化症と脂肪の蓄積によって引き起こされる心血管疾患を含む他の血管疾患に対して保護できることを示す。
【０１７０】
【表１７】
2019520341.tif 000020
【０１７１】
実施例３．６．血清総胆汁酸（ＴＢＡ）に対するＣｍｙｒ−４７の効果
表１８と図１４は、血清ＴＢＡレベルの測定を提供する。予想通り、モデル対照における血清ＴＢＡレベルは、正常対照より高い。対照グループと比較して、Ｃｍｙｒ−４７で処理された動物の血清ＴＢＡレベルは、用量依存的な方式でさらに上昇し、Ｃｍｙｒ−４７が、インビボで胆汁酸摂取を阻害できることを確認した。４週目の測定で、高使用量のＣｍｙｒ−４７が血清ＴＢＡレベルを有意に増加させることが確認した（Ｐ値は０．０５未満）。ＣｓＡおよび低用量のＣｍｙｒ−４７も４週間の処理後に、血清ＴＢＡレベルを中程度に上昇させたが、有意な差に達していなかった。
【０１７２】
【表１８】
2019520341.tif 000021
【０１７３】
実施例３．７．血清グルコース（ＧＬＵ）に対するＣｍｙｒ−４７の効果
表１９に示されたように、正常対照と比較して、高脂血症の動物は、有意な高血糖表現型を示さなかった（全てのＰの値＞０．０５）。高使用量と低使用量のＣｍｙｒ−４７は、血清ＧＬＵレベルを、正常対照およびモデル対照に示される正常血糖より低下させなかった（すべてのＰの値＞０．０５）。
【０１７４】
【表１９】
2019520341.tif 000022
【０１７５】
上記に記載されたように、Ｃｍｙｒ−４７が、高脂肪食を与えたゴールデンハムスターの高脂血症表現型を逆転させることができる。特に、高使用量のＣｍｙｒ−４７は、この研究に測定されたすべての生物学的指標を低下させることができる。これに対して、胆汁酸摂取阻害剤であるＣｓＡは、同様の効果を有しない。さらに、インビトロでＣｓＡが、効果的に胆汁酸摂取を阻害できるが、インビボでＣｓＡ処理は、血清ＴＧおよびＴＣレベルの増加を引き起こし、ＣｓＡの高脂血症効果を確認した。
【０１７６】
Ｃｍｙｒ−４７の血清ＴＣとＴＧレベルに対する効果と一致し、Ｃｍｙｒ−４７で処理された動物のＡＩ値は、処理されない高脂血症の動物より有意に低く、心血管疾患の予防薬とするＣｍｙｒ−４７の有効性をさらに実証した。なお、ＨＢＶから由来する他のポリペプチドが、血清ＴＧ、ＴＣおよびＬＤＬ−Ｃを低下することに同様の効果を有し、それらのポリペプチドも、インビボで高脂血症表現型を逆転できることを示唆した。
【０１７７】
実施例３．８．血清ＴＣおよびＴＧに対するＣｍｙｒ−４７の各使用量の効果
実施例３．１と同じように、高脂血症のゴールデンハムスターモデルを、確立した。高脂肪食処理の２週間後、動物が１０ｍｍｏｌ／Ｌより高い血清総コレステロール（ＴＣ）レベルを有する場合に、ハムスターの高脂血症表現型が確認された。合計３２匹の高脂血症ハムスターを、ランダムに４つのグループに分けられた（Ｎ＝８／グループ）：モデル対照グループ（１０ｍＬ／ｋｇ  ＰＢＳ、皮下（ｓｃ））、低使用量処理グループ（Ｃｍｙｒ−４７、１ｍｇ／ｋｇ／日、ｓｃ）、中使用量処理グループ（Ｃｍｙｒ−４７、３ｍｇ／ｋｇ／日、ｓｃ）、高使用量処理グループ（１０ｍｇ／ｋｇ／日Ｃｍｙｒ−４７、ｓｃ）。通常の固形飼料を給餌した８匹のハムスターは、正常対照グループとして使用された（１０ｍＬ／ｋｇ  ＰＢＳ、ｓｃ）。
【０１７８】
実施例３．１に記載のプロトコールに従って、Ｃｍｙｒ−４７を４週間連続して投与した。実験において、モデル対照グループ、低使用量グループ、中使用量グループおよび高使用量グループのすべての動物は、高脂肪食を与えられたが、一方、正常対照グループは、通常の固形食を与えられた。Ｃｍｙｒ−４７またはＰＢＳをハムスターに１日２回に皮下注射した（午前９：００〜１０：００、午後１６：００〜１７：００）。毎朝、食料と水の消費量、糞、動物のグルーミングをモニターした。全ての動物の血清ＴＣおよびＴＧレベルは、処理の２週目および４週目に、実施例３．１に記載されたように測定され、結果は、表２０および２１にまとめられた。データは、実施例３．１に記載のように分析された。
【０１７９】
表２０および図１５に示されたように、実験期間において、モデル対照における血清ＴＣレベルは正常対照よりも有意に高かった（全てのＰ＜０．０１）。１ｍｇ／ｋｇまたは３ｍｇ／ｋｇの用量でＣｍｙｒ−４７による処理は、血清ＴＣに対する効果を有しない。しかしながら、モデル対照グループと比較して、１０ｍｇ／ｋｇのＣｍｙｒ−４７で４週間処理された高脂血症の動物は、ある程度に減少したレベルの血清ＴＣを示した（Ｐ＜０．０５）。
【０１８０】
【表２０】
2019520341.tif 000023
【０１８１】
表２１および図１６に示されたように、実験において、モデル対照における血清ＴＧレベルは正常対照よりも有意に高かった（全てのＰ＜０．０１）。１ｍｇ／ｋｇまたは３ｍｇ／ｋｇの用量でＣｍｙｒ−４７による処理は、血清ＴＧに対する効果を有しない。モデル対照グループと比較して、１０ｍｇ／ｋｇのＣｍｙｒ−４７で４週間処理された高脂血症の動物は、ある程度に減少したレベルの血清ＴＣを示した（Ｐ＜０．０５）。それらのデータによって示唆されたように、ＮＴＣＰ仲介の胆汁酸摂取を双方向制御できるＣｍｙｒ−４７の血清濃度に達する治療有効量のＣｍｙｒ−４７を投与することは、高脂血症患者の血清ＴＣとＴＧレベルの低減に有益する。
【０１８２】
【表２１】
2019520341.tif 000024
【実施例４】
【０１８３】
実施例４．１．Ｚｕｃｋｅｒ糖尿病性ｆａｔｔｙラットのＣｍｙｒ−４７による処理に使用された方法と材料
抗糖尿病薬、抗高脂血症薬、および／または抗高コレステロール血症薬とするＣｍｙｒ−４７の有効性を、自発的ＩＩ型糖尿病動物モデルであるＺｕｃｋｅｒ糖尿病性ｆａｔｔｙ（ＺＤＦ）ラットでテストした。雄の６０日齢ＺＤＦラット（ｎ＝４０）およびＺｕｃｋｅｒ  ｌｅａｎ（ＺＬ）ラット（ｎ＝６）をバイタルリバー実験動物技術会社（Ｖｉｔａｌ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．、Ｌｔｄ．）から購入した（ＳＣＸＫ（Ｂｅｉｊｉｎｇ）２０１２−０００１）、動物品質認証番号１１４００７００１０９９７０および１１４００７００１０９９７２である。全ての動物は、浙江漢方医学大学動物実験研究センター（Ｚｈｅｊｉａｎｇ  Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ  Ｃｈｉｎｅｓｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｅｎｔｅｒ）（ＳＹＸＫ（Ｚｈｅ）２０１３−０１８４）に、騒音が制御された部屋（＜５０ｄＢ）内で、特定の病原体のない（ＳＰＦ）環境で、１２時間の明暗サイクル（１５０〜２００Ｌｘ）で、湿度５０〜７０％、２３±１℃で飼育された。動物が、オートクレーブ処理の水ボトルにおけるろ過滅菌水を自由に飲める。ＺＤＦラットに、特殊フィード会社（Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ  Ｆｅｅｄｓ．Ｉｎｃ．）から購入したＰｕｒｉｎａ＃５００８食餌（テネシー州メンフィス；Ｐｕｒｉｎａ  ５００８；カタログ番号ＳＦ０６−０１９）を与えた。ＺＬラットに、Ｃｏ60γ線照射によって滅菌した通常の固形飼料（基本飼料）を与えた。２匹のＺＤＦラットまたはＺＬラットを各ケージに収容し、ケージベッドを２日に１回交換した。実験ラットの飼育および他のすべての操作は、人道的に行われ、３Ｒの原則に従った。
【０１８４】
２週間のＰｕｒｉｎａ＃５００８食餌または通常の食餌を給餌した後に、全ての動物は、水を摂取しながら１０時間絶食させた。次いで、各動物の体重を量り、尾部出血によって０．３ｍＬの血液を採取した。血液サンプルをさらに糖化ヘモグロビン（ＨｂＡ１ｃ）について分析した。さらに０．５ｍＬの血液を採取し、血清を分離するために、３，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。動物におけるＨｂＡ１ｃ、血清グルコース（ＧＬＵ）およびインスリンレベルは、以下に提供されるキットによって測定された。全ての測定には日立７０２０自動生化学分析装置を使用した。
【０１８５】
空腹時血清グルコースレベルが平均レベルに近い３０匹の動物を選択し、ランダムに５つのグループに分けられ、グループあたり６匹の動物：モデル対照グループ（１０ｍｌ・ｋｇ-1  ＰＢＳ）、低使用量処理グループ（１０ｍｇ・ｋｇ-1  Ｃｍｙｒ−４７）、高使用量処理グループ（１０ｍｇ・ｋｇ-1  Ｃｍｙｒ−４７）、陽性対照グループ（３００ｍｇ・ｋｇ-1メトホルミン）、ＣｓＡ処理グループ（２０ｍｇ・ｋｇ-1  ＣＳＡ）。６匹のＺＬラットは、正常対照グループとして使用された（１０ｍｌ・ｋｇ-1  ＰＢＳ）。ＰＢＳまたはＣｍｙｒ−４７を動物に１日２回皮下注射した（０９：００および１７：００）。メトホルミン（ＭＥＴ）とＣｓＡ溶液は、１日２回（午前および午後）に強制経口投与によって与えられた。投与は４週間行った。実験期間に、ＺＤＦラットにはＰｕｒｉｎａ＃５００８食餌を与え、ＺＬラットには通常の食事を与えた。
【０１８６】
Ｃｍｙｒ−４７は、上記のように合成され、上海ヘップ製薬株式会社（Ｓｈａｎｇｈａｉ  ＨＥＰ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ）（中国、上海；ロット番号１４０１１８０１）によって白色粉末として精製され、−２０℃で保存された。Ｃｍｙｒ−４７を秤量し、使用直前にＰＢＳに溶解した。ＭＥＴはブリストル・マイヤーズ  スクイブ株式会社（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｃｏ．，  Ｌｔｄ．）（中国、上海）によって承認番号Ｈ２００２３３７０およびロット番号ＡＡＤ７８７８で製造された。ＣｓＡ（Ｓａｎｄｉｍｍｕｎｅ（登録商標））はＮｏｖａｒｔｉｓから購入された。
【０１８７】
投与の２週目に、動物を水に自由に摂取させながら１０時間絶食させ、血清ＧＬＵ、総コレステロール（ＴＣ）、トリグリセリド（ＴＧ）および血中尿素窒素（ＢＵＮ）を測定するために、各動物から、０．３ｍＬの血液を尾静脈出血により採取した。投与の４週目に、動物を１０時間絶食させ、次いで血清ＧＬＵ、ＴＣ、ＴＧおよびＢＵＮ、ＨｂＡ１ｃおよびインスリンの測定のために、血液を採取した。最後の薬物投与後、動物を１２時間絶食させ、次いで、３％ペントバルビタールナトリウムの腹腔内注射と、頸椎脱臼を行った。目視観察のために、各動物の心臓、腎臓、肩甲骨脂肪、および腹部脂肪を解剖し、心臓、腎臓、および総脂肪指数を計量した。
【０１８８】
ペントバルビタールナトリウム（含有量≧９５．０％；ロット番号２０１３０１１２）はメルク（Ｍｅｒｃｋ）から購入した。ＴＣ、ＴＧ、ＧＬＵおよびＢＵＮキットはＤｉａＳｙｓ診断システム（ＤｉａＳｙｓ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）（中国、上海）から購入した。ＨｂＡｌｃ検出試薬は、アイルランドのトリニティバイオテック会社（Ｔｒｉｎｉｔｙ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．）から購入した。インスリンＥＬＩＳＡ検出キット（ロット番号：０４６９６３６−１）は、Ｂｅｒｔｉｎ  Ｐｈａｒｍａ（フランス）から購入した。購入したキットを使用した測定は、すべて、キットに記載されている製造元のプロトコルに従って実施した。
【０１８９】
ＳＱＰ電子天秤は、ザルトリウス科学機器（北京）会社（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  （Ｂｅｉｊｉｎｇ）  Ｃｏ．，Ｌｔｄ（Ｂｅｉｊｉｎｇ、ｃｈｉｎａ）から購入した。ＭＬＳ−３７５０オートクレーブは日本のＳａｎｙｏから購入した。ＲＯ−ＭＢ−５０超純水システムは、杭州Ｙｏｎｇｊｉｅｄａクリーニング科学技術会社（Ｈａｎｇｚｈｏｕ  Ｙｏｎｇｊｉｅｄａ  Ｃｌｅａｎｉｎｇ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  Ｃｏ．，  Ｌｔｄ．）（中国浙江）によって製造された。ＫＱ−３００ＤＥ超音波は、昆山超音波計器有限会社（Ｋｕｎｓｈａｎ  Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｃｏ．，  Ｌｔｄ．）（昆山、江蘇省、中国）から購入した。日立７０２０自動生化学分析装置を、日立（日本）から購入した。Ｈｂ９２１０糖化ヘモグロビン分析器：トリニティバイオテック会社（Ｔｒｉｎｉｔｙ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．）、アイルランド。マルチモードマイクロプレートリーダーは、サーモフィッシャーサイエンティフィック社（米国マサチューセッツ州）から購入した。
【０１９０】
ＳＰＳＳ  １９．０ソフトウェア（ＳＰＳＳ、Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ）を統計分析に使用した。全てのデータは、平均±標準誤差の平均
【０１９１】
【数１】
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【０１９２】
として表した。テスト結果からのデータを評価するために、ＡＮＯＶＡ分散分析を用いられた。ＬＳＤテストは、一対比較に用いられた。統計分析の値は小数点第２位を四捨五入した。
【０１９３】
実施例４．２．血清グルコース（ＧＬＵ）に対するＣｍｙｒ−４７とＨＢＶから由来する他のポリペプチドの効果
高血糖（すなわち、血糖値の上昇）は、２型糖尿病の最も顕著な症状の一つである。表２２および図１７に示されたように、モデル対照と正常対照との血清ＧＬＵレベルを比較することによって、ＺＤＦラットの高血糖表現型を確認した（全てのＰの値＜０．０１）。ＭＥＴは、糖尿病患者の血糖を効果的に下げる抗糖尿病薬として知られる。予想通り、ＭＥＴで処理されたＺＤＦラットは、モデル対照と比較して、有意に減少した空腹時血清ＧＬＵを示した。Ｃｍｙｒ−４７も、ＺＤＦラットの血糖を低下できた。特に、４週間の処理で、低使用量および高使用量のＣｍｙｒ−４７は、共に動物の血清ＧＬＵレベルを効果的に低下させた。血糖に対するＣｍｙｒ−４７の効果は、用量依存的である。これに対して、モデル対照と比較して、ＣｓＡ処理は、動物の血清ＧＬＵレベルを有意に上昇させた。
【０１９４】
【表２２】
2019520341.tif 000026
【０１９５】
インビボで血糖に対する効果を分析するために、表１に挙げられたＨＢＶから由来する他のポリペプチドも、上記と同じプロトコルに従ってテストされた。全てのポリペプチドを、３０ｍｇ／ｋｇ／日のＣｍｙｒ−４７に相当するモル使用量で投与した。
【０１９６】
図１８Ａおよび図１８Ｂに示されたように、ＺＤＦラットの高血糖表現型を確認した。上記研究に観察されたように、ＭＥＴによる処理は、インビボで空腹時血清ＧＬＵを有意に減少させた。ＨＢＶ由来ペプチド（Ｃｍｙｒ−６０、Ｃｍｙｒ−５５、Ｃｍｙｒ−４０、Ｃｍｙｒ−３５、Ｃｍｙｒ−３０、Ｃｍｙｒ−２５、Ｃｍｙｒ−２０、Ｃｍｙｒ−４７＋（−１０）、Ｃｍｙｒ−４７＋（−９）、Ｃｐｌａｍ−４７、Ｃｓｔｅａ−４７、Ｃｃｈｏｌ−４７、Ａｍｙｒ−４７、Ｂｍｙｒ−４７、Ｄｍｙｒ−４７、Ｅｍｙｒ−４７、Ｆｍｙｒ−４７、Ｇｍｙｒ−４７またはＨｍｙｒ−４７）による４週間の処理後、モデル対照と比較して、ＺＤＦラットの空腹時血清ＧＬＵレベルは減少し、これは抗糖尿病薬としてのポリペプチドの有効性を示している。
【０１９７】
実施例４．３．ＨｂＡ１ｃに対するＣｍｙｒ−４７とＨＢＶから由来する他のポリペプチドの効果
ＨｂＡ１ｃは、糖化ヘモグロビンを指し、対象が慢性高血糖を経るときに、そのレベルが、有意に増加する。表２３および図１９に示されたように、ＺＤＦラットの高血糖表現型と一致し、研究において、モデル対照におけるＨｂＡ１ｃレベルは正常対照よりも有意に高かった（全てのＰの値＜０．０１）。また、血糖に対するＭＥＴの効果と一致し、ＭＥＴによる処理はＺＤＦラットのＨｂＡ１ｃレベルを有意に減少させた（Ｐ＜０．０１）。モデル対照と比較して、Ｃｍｙｒ−４７で処理されたＺＤＦラットも、用量依存的に有意に低いＨｂＡ１ｃレベルを示し、インビボで、Ｃｍｙｒ−４７の血糖を調節する抗糖尿病薬とする有効性を確認した。ＣｓＡの血清ＧＬＵレベルに対する効果と一致し、ＣｓＡ処理が、４週間の処理後に血清ＨｂＡ１ｃを有意に増加させた。
【０１９８】
【表２３】
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【０１９９】
上記と同じ動物モデルにおいて試験された場合に、表１に挙げられたＨＢＶから由来する他のポリペプチドも、ＨｂＡ１ｃに同様の効果を示した。図２０Ａおよび図２０Ｂに示されたように、モデル対照のＨｂＡ１ｃレベルは、ポリペプチドで処理されたＺＤＦラットより高かった。これらの結果は、ＨＢＶから由来するポリペプチドが、血糖とＨｂＡ１ｃを効果的に低下できることを証明し、ＣｓＡの血糖向上効果を確認した。
【０２００】
実施例４．４．血清インスリンに対するＣｍｙｒ−４７の効果
２型糖尿病患者は、インスリン抵抗性とインスリンの過剰産生に伴って、最終的に、膵臓の損傷によるインスリンの欠乏になった。Ｃｍｙｒ−４７が膵臓損傷を予防することによってインスリンを調節することができることを確認するために、Ｃｍｙｒ−４７で処理された動物のインスリンレベルは、ＰＢＳまたはＭＥＴで処理された動物と比較された。表２４および図２１に示されたように、ＺＤＦラットの初期血清インスリンレベルは、正常対照より有意に高かった。４週目に、ＺＤＦラットのインスリンレベルは、正常対照より高かったが、初期レベルと比較して、絶対レベルは有意に低下した。この変化は、研究にわたって、ＺＤＦラットにおけるインスリン抵抗性も発展し、膵臓機能不全をもたらしたことを示している。モデル対照と陽性対照との空腹時インスリンレベルの間の差は、統計的に有意ではなかったが（Ｐ＞０．０５）、ＭＥＴによる処理は、血清インスリンの喪失から保護できることを示した。しかしながら、モデル対照とＣｍｙｒ−４７処理動物との間の有意な差が、Ｃｍｙｒ−４７処理は二つの使用量で（増加しないと）、共にインスリン分泌を完全に安定化できることを示した（全てのＰの値＜０．０５）。これらの結果は、Ｃｍｙｒ−４７が膵臓の損傷を予防できることを証明し、そして、糖尿病患者における適切なインスリン分泌の維持を助けられることを証明した。
【０２０１】
【表２４】
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【０２０２】
実施例４．５．血清総コレステロール（ＴＣ）に対するＣｍｙｒ−４７とＨＢＶから由来する他のポリペプチドの効果
上記に記載されたように、糖尿病表現型は血流中のコレステロールおよびトリグリセリドの上昇を含む脂質調節異常を含む。表２５および図２２に示されたように、正常対照と比較して、モデル対照における血清ＴＣレベルは、常に上昇した（全てのＰの値＜０．０５）。しかしながら、血糖に対するＭＥＴの効果と逆に、ＭＥＴは、ＺＤＦラットの血清ＴＣレベルの低下に、全く効果がなかった。ＣｓＡも、ＺＤＦラットにおける血清ＴＣレベルの低下に効果がなく、４週間の処理後に、モデル対照と比較して、ＣｓＡは血清ＴＣレベルを有意に増加させた。特に、モデル対照と比較して、高使用量のＣｍｙｒ−４７は、ＺＤＦラットの血清ＴＣレベルを有意に低下させ、Ｃｍｙｒ−４７が糖尿病患者に著しく上昇する広範囲のバイオマーカーを調節できることを確認した。
【０２０３】
【表２５】
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【０２０４】
ＨＢＶから由来する他のポリペプチドで処理された動物も、それらのポリペプチドがインビボで血清ＴＣを低下させることができることを示した。図２３Ａと図２３Ｂに示されたように、ＨＢＶ由来の他のペプチド（Ｃｍｙｒ−６０、Ｃｍｙｒ−５５、Ｃｍｙｒ−４０、Ｃｍｙｒ−３５、Ｃｍｙｒ−３０、Ｃｍｙｒ−２５、Ｃｍｙｒ−２０、Ｃｍｙｒ−４７＋（−１０）、Ｃｍｙｒ−４７＋（−９）、Ｃｐｌａｍ−４７、Ｃｓｔｅａ−４７、Ｃｃｈｏｌ−４７、Ａｍｙｒ−４７、Ｂｍｙｒ−４７、Ｄｍｙｒ−４７、Ｅｍｙｒ−４７、Ｆｍｙｒ−４７、Ｇｍｙｒ−４７またはＨｍｙｒ−４７）で４週間処理された後に、ＺＤＦラットの血清ＴＣレベルはモデル対照より低かった。これらの結果は、ＭＥＴが、一つの具体的な症状のみを標的できるが、ＨＢＶから由来するポリペプチドが、複数の経路を標的でき、したがって、糖尿病関連症状を同時に管理することに有用であることを証明した。
【０２０５】
実施例４．６．血清トリグリセリド（ＴＧ）に対するＣｍｙｒ−４７とＨＢＶから由来する他のポリペプチドの効果
血清ＴＣに加えて、血清ＴＧも、糖尿病によって引き起こされ得る高脂血症のバイオマーカーである。予想通り、表２６と図２４に示されたように、研究において、モデル対照における血清ＴＧレベルは正常対照よりも有意に高かった（全てのＰの値＜０．０１）。注目すべきは、ＭＥＴは、２週目にＺＤＦラットの血清ＴＧレベルを有意に上昇させた（Ｐ＜０．０１）。差は有意ではないが、４週目に、ＭＥＴで処理されたＺＤＦラットの血清ＴＣレベルは、モデル対照より高かった。血清ＴＣレベルに対する効果と一致し、ＣｓＡは、ＺＤＦラットにおける血清ＴＧレベルをさらに増加させた。これに対して、二つの用量のＣｍｙｒ−４７は、共に、ＺＤＦラットの血清ＴＧレベルを低下させることができ、Ｃｍｙｒ−４７の効果は用量依存的である。
【０２０６】
【表２６】
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【０２０７】
上記と同じ動物モデルにおいて試験された場合に、ＨＢＶから由来する他のポリペプチドも、インビボで血清ＴＧを減少できた。図２５Ａと図２５Ｂに示されたように、モデル対照の血清ＴＧレベルは、ＨＢＶ由来ペプチド（Ｃｍｙｒ−６０、Ｃｍｙｒ−５５、Ｃｍｙｒ−４０、Ｃｍｙｒ−３５、Ｃｍｙｒ−３０、Ｃｍｙｒ−２５、Ｃｍｙｒ−２０、Ｃｍｙｒ−４７＋（−１０）、Ｃｍｙｒ−４７＋（−９）、Ｃｐｌａｍ−４７、Ｃｓｔｅａ−４７、Ｃｃｈｏｌ−４７、Ａｍｙｒ−４７、Ｂｍｙｒ−４７、Ｄｍｙｒ−４７、Ｅｍｙｒ−４７、Ｆｍｙｒ−４７、Ｇｍｙｒ−４７またはＨｍｙｒ−４７）で処理されたＺＤＦラットより高かった、さらに、ＨＢＶから由来するポリペプチドが、グルコース代謝および脂質代謝を同時に調節できることを確認した。
【０２０８】
実施例４．７．血清血液尿素窒素（ＢＵＮ）に対するＣｍｙｒ−４７の効果
上昇の血清ＢＵＮは、腎機能障害を反映し、しばしばに、ヒト糖尿病患者に発生する。ＺＤＦモデルにおいて、糖尿病表現型は、腎機能障害と血清ＢＵＮとの相関的な上昇をもたらす。予想通り、表２７と図２６に示されたように、研究において、モデル対照における血清ＢＵＮレベルは正常対照よりも有意に高かった。モデル対照と陽性対照との間にＢＵＮの差は、有意ではないので、ＭＥＴの処理は、腎機能障害を逆転できない。しかしながら、高使用量のＣｍｙｒ−４７は、４週目に、ＺＤＦラットの血清ＢＵＮレベルを有意に低下させ（Ｐ＜０．０１）、Ｃｍｙｒ−４７が、糖尿病患者を腎臓損傷および腎機能障害から保護できることを示した。
【０２０９】
【表２７】
2019520341.tif 000031
【０２１０】
実施例４．８．器官指数に対するＣｍｙｒ−４７の効果
糖尿病患者は、心血管疾患、腎機能障害、および肥満を発展するリスクが高くなる。上述に記載されたように、心臓指数（ＨＩ）、腎臓指数（ＫＩ）および総脂肪指数（ＴＦＩ）のような各種の指数を、リスクの定量的指標として、使用できる。表２８および図２７Ａに示されたように、モデル対照のＨＩ値は、正常対照より高かった。ＭＥＴによる処理は、ＨＩ値に影響を及ぼさなかった。驚くべきことに、二つの使用量のＣｍｙｒ−４７は、共にＺＤＦラットのＨＩ値を有意に減少させ、Ｃｍｙｒ−４７が有害な心血管イベントを予防することに有用であることを示した。
【０２１１】
表２８および図２７Ｂに示されたように、モデル対照のＫＩ値は、正常対照より有意に高く（Ｐ＜０．０１）、これは、研究期間に、ＺＤＦラットが腎機能障害を発生したことを表明した。血清ＢＵＮに対するＣｍｙｒ−４７の効果と一致し、Ｃｍｙｒ−４７処理も、ＺＤＦラットにおけるＫＩ値を低下させたが、その差は統計的有意性を有しない。
【０２１２】
表２８および図２７Ｃは、モデル対照のＴＦＩ値が正常対照より有意に高く（Ｐ＜０．０１）、ＺＤＦラットが病的肥満に達したことを示した。有意ではないが、Ｃｍｙｒ−４７で処理されたＺＤＦラットは、モデル対照より低いＴＦＩ値になる傾向を示した。注目すべきことに、ＭＥＴは同様の傾向を示さず、逆にＺＤＦラットにおけるＴＦＩ値を増加した。
【０２１３】
【表２８】
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【０２１４】
実施例４．９．血清総胆汁酸（ＴＢＡ）に対するＣｍｙｒ−４７の効果
Ｃｍｙｒ−４７が血清ＴＢＡレベルを調節できることを確認するために、各動物の血清ＴＢＡレベルを測定した。表２９および図２８に示されたように、モデル対照における血清ＴＢＡレベルは、正常対照より高かった。モデル対照グループと比較して、Ｃｍｙｒ−４７で処理されたＺＤＦラットの血清ＴＢＡレベルは、用量依存的にさらに上昇した。４週目の測定で、高使用量のＣｍｙｒ−４７が血清ＴＢＡレベルを有意に増加させることが確認した（Ｐ値は０．０５未満）。また、４週間の治療後に、ＣｓＡは、血清ＴＢＡレベルを有意に上昇させた（Ｐ値０．０１未満）。
【０２１５】
【表２９】
2019520341.tif 000033
【０２１６】
ＭＥＴは、広く使用されている抗糖尿病薬であり、インビボで血糖を効果的に調節できる。上記のように、血糖調節におけるＭＥＴの有効性も、この研究に確認された。しかしながら、ＭＥＴは、ＺＤＦラットの血清ＴＣ、ＴＧ、およびＢＵＮレベル、ならびにＨＩ値を低下できないことが証明したように、ＭＥＴは、脂質調節異常および関連疾患に利益をもたらすことができない。高脂血症動物モデルに示されたように、ＣｓＡ処理は、血清ＴＧおよびＴＣレベルを増加させるだけでなく、血清ＧＬＵレベルもさらに増加させ、インビトロで胆汁酸取摂取を有効に阻害できるものは、必ずしインビボで脂質およびグルコース代謝に対する治療効果を有するわけではないことを表明する。これに対して、Ｃｍｙｒ−４７は、すべてのテストに、うまく機能した。上記に証明されたように、Ｃｍｙｒ−４７は、膵臓損傷、腎機能障害、および心血管疾患に対する保護を提供しながら、血糖および脂質代謝を調節できる。したがって、抗高血糖剤、抗高コレステロール血症剤、抗高脂血症剤、および抗脂肪症剤として、Ｃｍｙｒ−４７は、ＭＥＴより優れ、同時に複数の糖尿病表現型に対する全面的な効果を示した。
【図１】
2019520341.tif 000034
【図２Ａ】
2019520341.tif 000035
【図２Ｂ】
2019520341.tif 000036
【図３】
2019520341.tif 000037
【図４】
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【図５Ａ】
2019520341.tif 000039
【図５Ｂ】
2019520341.tif 000040
【図５Ｃ】
2019520341.tif 000041
【図５Ｄ】
2019520341.tif 000042
【図５Ｅ】
2019520341.tif 000043
【図５Ｆ】
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【図６】
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【図７】
2019520341.tif 000046
【図８】
2019520341.tif 000047
【図９】
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【図１０】
2019520341.tif 000049
【図１１】
2019520341.tif 000050
【図１２】
2019520341.tif 000051
【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
2019520341.tif 000054
【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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2019520341.tif 000069
2019520341.tif 000070
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