(57)【要約】  本発明は、トラベクテジンの注射可能な胃腸外用医薬組成物及びその製造方法に関する。具体的には、該組成物はトラベクテジン及び第１賦形剤を含有し、該第１賦形剤が1つ以上の単糖類またはポリオールから選択される。本発明の製剤は安定した品質を有し、大量生産に適用できる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
トラベクテジン及び、単糖類及びポリオールから成る群より選択される1つ以上の第１賦形剤を含有する、注射可能な非経口医薬組成物。
【請求項２】
第１賦形剤がグルコース、フルクトース、ガラクトース、ソルビトール、マンニトール、グリセロール及びラクチトールから成る群より選択される1つ以上であり、好ましくはグルコースであることを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
さらに高分子材料である第２賦形剤を含有することを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
第２賦形剤がアルブミン、デキストラン、ヒドロキシエチルデンプン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルベータシクロデキストリン、マルトデキストリン及びポリエチレングリコールから成る群より選択される1つ以上であることを特徴とする、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
第１賦形剤がグルコースから成る群より選択され、第２賦形剤がアルブミン、デキストラン、ヒドロキシエチルデンプン、カルボキシメチルセルロースナトリウム及びヒドロキシプロピルベータシクロデキストリンから成る群より選択されることを特徴とする、請求項３に記載の組成物。
【請求項６】
第１賦形剤がソルビトールから成る群より選択され、第２賦形剤がアルブミン、デキストラン、ヒドロキシエチルデンプン、カルボキシメチルセルロースナトリウム及びヒドロキシプロピルベータシクロデキストリンから成る群より選択されることを特徴とする、請求項３に記載の組成物。
【請求項７】
トラベクテジンと第１賦形剤との重量比は1：10〜1：2000、好ましくは1：20〜1：1500、より好ましくは1：30〜1：1000、最も好ましくは1：40〜1：500である、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
トラベクテジンと第２賦形剤との重量比は1：10〜1：1000、好ましくは1：10〜1：500、より好ましくは1：10〜1：300、最も好ましくは1：10〜1：100である、請求項３に記載の組成物。
【請求項９】
第１賦形剤がグルコースであり、第２賦形剤がデキストランである、請求項５に記載の組成物。
【請求項１０】
グルコースとデキストランとの重量比は1：1〜10：1、好ましくは1：1〜1.5：1である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
グルコースの重量は組成物の総重量の2〜15％、好ましくは5〜8％を占める、請求項９に記載の組成物。
【請求項１２】
デキストランの重量は組成物の総重量の1〜10％、好ましくは3〜5％を占める、請求項９に記載の組成物。
【請求項１３】
さらに少なくとも１つの緩衝剤を含有し、該緩衝剤がリン酸塩緩衝液、乳酸塩緩衝液、酢酸塩緩衝液及びクエン酸塩緩衝液から成る群より選択され、好ましくはリン酸二水素カリウム、リン酸二水素ナトリウム、クエン酸カリウム及びクエン酸ナトリウムのうちの１つであることを特徴とする、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１４】
トラベクテジンと緩衝剤との重量比は1：10〜1：100、より好ましくは1：15〜1：50、最も好ましくは1：20〜1：40である、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記組成物は凍結乾燥製剤である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１６】
前記製剤は凍結乾燥の前にpH3〜5、好ましくは3.5〜4.5の溶液であることを特徴とする、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
請求項１５または１６に記載の凍結乾燥製剤を再溶解して得られるトラベクテジンの注射剤。
【請求項１８】
以下の工程を含む、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の組成物の調製方法：
１）トラベクテジンを酸性の緩衝塩溶液に溶解し、トラベクテジンの緩衝液を得る。好ましくは、該酸はリン酸であり、該緩衝塩はリン酸二水素カリウムである；
２）所望の第１賦形剤及び第２賦形剤を緩衝塩溶液に溶解し、pHを設定値に調整する；
３）工程１）及び工程２）の２つの溶液をよく混合した後、pHを設定値に調整する。
【請求項１９】
工程３）の混合溶液を凍結乾燥する工程も含む、請求項１８に記載の調製方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、トラベクテジンの注射用非経口医薬製剤及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
トラベクテジン(エクチナサイジン-743、ET-743)は海洋生物であるEcteinascidia turbinataから最初に単離されたテトラヒドロイソキノリンアルカロイドであり、現在は主に化学合成によって調製されている。トラベクテジンには独特の複雑なメカニズムがある。これは熱ショック誘発遺伝子の転写を阻害することができ、また転写結合-ヌクレオシド切除修復システムと相互作用することができ、致命的なDNA鎖の形成をもたらす。トラベクテジンは、軟部肉腫、白血病、黒色腫、乳癌、非小細胞肺癌及び卵巣癌のような、複数の腫瘍細胞系に対して強いin vitro活性を有する。
ET-743の構造（式Ｉ）は次のとおりである。
【化１】
2019504061.tif 000002
【０００３】
ET-743は複雑な化合物であり、純水における溶解度が限られている。その溶液のpHを4に調整することにより、水における溶解度を高めることができる。しかし、ET-743は熱安定性に乏しく、室温（25℃）で急速に分解し、5℃で冷蔵する場合には1ヶ月間のみ保存できる。トラベクテジンは-20℃でしか長期保存できないため、臨床での応用が大きく制限されている。従って、医薬的手段でET-743の熱安定性を改善する必要がある。一方、これは当業者にとって大きなチャレンジでもある。
【０００４】
トラベクテジン中の主な不純物はET-701、ET-745、ET-759B及びET-789A（シアノサフラシンBから天然エクチナサイジン（ET-729, ET-745, ET-759B, ET-736, ET-637, ET-594）の合成、Journal of Organic Chemistry 2003 68(23)、頁8859-8866）である。そのうち、不純物ET-701は加水分解物であり、製剤の凍結乾燥及び保存の過程における主要な不純物である。また、不純物ET-745はトラベクテジンの還元物である。それらの構造は次のとおりである。
【化２】
2019504061.tif 000003
【化３】
2019504061.tif 000004
【０００５】
WO 0069441は、ET-743、マンニトール及びリン酸塩緩衝液を含有する滅菌凍結乾燥製剤を開示している。該凍結乾燥製剤を再溶解し、希釈した後、静脈注射に使用できる。しかし、該製剤は、冷蔵または室温での長期保存に対して安定せず、暗所で-15〜-25℃で保存する必要がある。CN102018714Aは、ラクトース、スクロース及びトレハロースから成る群より選択される二糖を含有するET-743凍結乾燥製剤を開示している。本研究では、これらの製剤は40℃/70％RHの加速条件下で3ヶ月間保存した場合、活性成分の分解を示すことが発見された。これらの製剤は長時間保存でも依然として不安定であることが示唆された。従って、新規かつ安定なET-743製剤の開発が非常に必要とされている。
【発明の概要】
【０００６】
本発明は、安定なトラベクテジンの医薬組成物を提供する。具体的には、本発明はトラベクテジン及び第１賦形剤を含有する、注射可能な非経口医薬組成物を提供する。該第１賦形剤が、単糖類及びポリオールから成る群より選択される1つ以上である。好ましくは、本発明の第１賦形剤がグルコース、フルクトース及びガラクトースのうちの１つ以上の単糖類から成る群より選択でき、また、ソルビトール、マンニトール、グリセロール及びラクチトールのうちの１つ以上のポリオールから成る群よりも選択できる。該第１賦形剤が、好ましくはグルコース、ソルビトール、または両者の混合物でもよい。
【０００７】
本発明の医薬組成物において、第１賦形剤の主な役割は、有効成分トラベクテジンの凍結乾燥の過程における安定性を改善することである。
【０００８】
１つの好ましい実施形態では、本発明の組成物は主に保存過程における保護的な役割を果たす第２賦形剤も含有する。該第２賦形剤がアルブミン、デキストラン、ヒドロキシエチルデンプン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルベータシクロデキストリン、マルトデキストリン及びポリエチレングリコールのうちの１つ以上のような高分子材料から成る群より選択できる。
【０００９】
本発明に用いられるデキストランは、好ましくはデキストラン40である。
【００１０】
上記の第１賦形剤及び第２賦形剤は、任意に組み合わせることができる。好ましい組み合わせとして、第１賦形剤がグルコースから成る群より選択され、第２賦形剤がアルブミン、デキストラン、ヒドロキシエチルデンプン、カルボキシメチルセルロースナトリウム及びヒドロキシプロピルベータシクロデキストリンから成る群より選択される１つ以上である;または、第１賦形剤がソルビトールから成る群より選択され、第２賦形剤がアルブミン、デキストラン、ヒドロキシエチルデンプン、カルボキシメチルセルロースナトリウム及びヒドロキシプロピルベータシクロデキストリンから成る群より選択される１つ以上である。
【００１１】
本発明の医薬組成物に用いられる第１賦形剤は、凍結乾燥の過程におけるトラベクテジンの安定性を改善できるが、第１賦形剤のガラス変換温度は低いため、凍結乾燥品の成形性が悪くなり、また保存過程における安定性もやや悪くなる。従って、１つの好ましい実施形態では、第１賦形剤はより高いガラス変換温度及び吸湿性を有する第２賦形剤と組み合わせて用いられ、これにより凍結乾燥品の外観及び保存安定性はさらに改善する。
【００１２】
本発明のET-743凍結乾燥製剤において、本組成物の保護的な役割は主に凍結乾燥及び保存の2つの過程で反映される。1）凍結乾燥の過程：保護剤中のヒドロキシル基は水の中のヒドロキシル基と競合できるため、保護的な役割を果たす。2）保存の過程：アモルファス材料、特に保護剤中の高分子材料は高い吸湿性を有するため、バイアルのような密閉された環境の中で低い相対湿度を保つことができ、それにより保護的な役割を果たす。
【００１３】
上記の賦形剤に加えて、本発明の組成物は緩衝剤も含有する。該緩衝剤がリン酸塩緩衝液、乳酸塩緩衝液、酢酸塩緩衝液及びクエン酸塩緩衝液から成る群より選択され、好ましくはリン酸二水素カリウム及びリン酸二水素ナトリウムのうちの1つである。
【００１４】
本発明の医薬組成物において、トラベクテジンと第１賦形剤との重量比は1：10〜1：2000、好ましくは1：20〜1：1500、より好ましくは1：30〜1：1000、また最も好ましくは1：40〜1：500である。
【００１５】
本発明の医薬組成物において、トラベクテジンと第２賦形剤との重量比は1：10〜1：1000、好ましくは1：10〜1：500、より好ましくは1：10〜1：300、また最も好ましくは1：10〜1：100である。
【００１６】
本発明の特に好ましい実施形態では、第１賦形剤がグルコース、第２賦形剤がデキストランである。グルコースとデキストランとの重量比は1：1〜10：1、好ましくは1：1〜1.5：1である。より好ましい実施形態では、グルコースの重量は組成物の総重量の2〜15％、好ましくは5〜8％を占める。デキストランの重量は組成物の総重量の1〜10％、好ましくは3〜5％を占める。最も好ましい実施形態では、グルコースの重量及びデキストランの重量は組成物の総重量のそれぞれ6.65％及び4.55％を占める。
【００１７】
pHの変化はトラベクテジンの安定性に影響を及ぼすことから、システムのpHを特定の範囲内に維持するために緩衝剤が必要である。トラベクテジンと緩衝剤との重量比は、好ましくは1：10〜1：100、より好ましくは1：15〜1：50、また最も好ましくは1：20〜1：40である。
【００１８】
本発明の組成物は、凍結乾燥製剤の形態に調製することができる。
【００１９】
まず、上記成分をプレ-凍結乾燥溶液の形態に組み立てる。該プレ-凍結乾燥溶液のpHは3〜5、好ましくは3.5〜4.5、より好ましくは3.6〜4.2、また最も好ましくは3.9〜4.1である。上記成分のみで調製された溶液のpH値が所望の範囲外になった場合、1つ以上のpH調整剤でpH値を調整することができる。該pH調整剤が、例えば、リン酸、酢酸、酒石酸、クエン酸、クエン酸、水酸化ナトリウム及び水酸化カリウムから成る群より選択される１つ以上であり、好ましくはリン酸及び水酸化カリウムである。
【００２０】
本発明のプレ-凍結乾燥溶液の中、トラベクテジンの含有量は0.1〜0.5 mg/mL、好ましくは0.2〜0.3 mg/mL、より好ましくは0.25 mg/mLである；保護剤の含有量は10〜100 mg/mL、好ましくは20〜80 mg/mL、より好ましくは20〜60 mg/mLである；賦形剤の含有量は1〜100 mg/mL、好ましくは5〜50 mg/mL、より好ましくは5〜30 mg/mLである；緩衝剤の含有量は1〜10 mg/mL、好ましくは4〜8 mg/mL、より好ましくは6〜7 mg/mLである。
【００２１】
本発明はさらに、前記の凍結乾燥製剤を再溶解して得られるトラベクテジンの注射液を提供する。
【００２２】
本発明の医薬組成物は、以下の方法により調製できる。
1）トラベクテジンを酸性の緩衝塩溶液に溶解し、トラベクテジンの緩衝液を得る。好ましくは、該酸はリン酸であり、該緩衝塩はリン酸二水素カリウムである；
2）所望の第１賦形剤及び第２賦形剤を緩衝塩溶液に溶解し、pHを設定値に調整する；
3）上記２つの溶液をよく混合した後、pHを設定値に調整する。
凍結乾燥製剤を得るため、本方法はさらに、工程3）の混合溶液を凍結乾燥する工程を含む。
【００２３】
本発明の凍結乾燥製剤は、当該分野で慣用される凍結乾燥の方法により調製することができる。例えば、本発明の凍結乾燥の工程は、プレ-凍結、1次乾燥及び2次昇華といった３つの段階を含む。プレ-凍結の温度は-25〜-50℃、１次乾燥の温度は-10〜-40℃、また２次乾燥の温度は15〜30℃である。１次乾燥及び２次乾燥の際、真空度は0.1〜0.5 mbarである。凍結乾燥の工程が終了する前に、好ましくは凍結乾燥の工程が終了する5〜10分前に窒素ガスが充填される。
【００２４】
本発明により提供される医薬組成物は、高い安定性を有し、工業生産には容易である。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１Ａ】凍結乾燥試料（5％デキストラン40、デキストラン40の含水量は9％、デキストラン40の実際の用量は4.55％である。）の赤外走査スペクトルを示す図である。
【図１Ｂ】凍結乾燥試料（5％デキストラン40 / 6.65％グルコース、デキストラン40の含水量は9％、デキストラン40の実際の用量は4.55％である。）の赤外走査スペクトルを示す図である。
【図２Ａ】凍結乾燥試料（5％デキストラン40、デキストラン40の含水量は9％、デキストラン40の実際の用量は4.55％である。）の示差走査熱分析（DSC）スペクトルを示す図である。
【図２Ｂ】凍結乾燥試料（5％グルコース）のDSCスペクトルを示す図である。
【図２Ｃ】凍結乾燥試料（5％デキストラン40 / 6.65％グルコース、デキストラン40の含水量は9％、デキストラン40の実際の用量は4.55％である。）のDSCスペクトルを示す図である。
【発明の詳細な説明】
【００２６】
【実施例１】
【００２７】
有効成分としてトラベクテジンを、第１賦形剤としてグルコースを、第２賦形剤としてヒドロキシエチルデンプンを、緩衝剤としてリン酸二水素カリウムを、pH調整剤としてリン酸/水酸化カリウムを、そして溶媒として注射用水を用いてトラベクテジンのプレ-凍結乾燥溶液を調製した。製剤の具体的な成分及びそれらの用量は以下のとおりである：
2019504061.tif 000005
調製方法：
１．102 mgのリン酸二水素カリウムを2 mLの水に加えた後、0.645 mLのリン酸（0.1 N）を加えた。この混合物をよく攪拌し、緩衝液リン酸二水素カリウム/リン酸を得た。
２．3.75 mgのトラベクテジンを上記の緩衝液リン酸二水素カリウム/リン酸に加え、薬物が完全に溶解するまで混合物を攪拌し、薬物溶液を得た。
３．750 mgのグルコース及び450 mgのヒドロキシエチルデンプンを9 mLの注射用水に加え、混合物を攪拌しながら溶解した後、pHをある一定濃度のリン酸溶液で3.9±0.3に調整した。
４．工程２の薬物溶液を工程３の溶液に加え、よく混合した。その後、生成した溶液のpHをある一定濃度のリン酸溶液または水酸化カリウム溶液で3.9±0.3に調整した。
５．上記の溶液を総重量に合わせ、容器に充填した後、部分的に栓をした。
上記の中間溶液を凍結乾燥し、トラベクテジンの凍結乾燥製剤を調製した。その外観、含水量、再溶解性及びpHを調べた。凍結乾燥後の類縁物質の変化及び加速条件（25℃ 60％RH）や長期条件（2〜8℃）における保存安定性を測定した。
【表１】
2019504061.tif 000006
【表２】
2019504061.tif 000007
実験結論及び分析：第１賦形剤としてグルコースを、第２賦形剤としてヒドロキシエチルデンプンを用いて凍結乾燥品を調製した。その外観、含水量及びpHは基準を満たし、再溶解性も良好である。該凍結乾燥製剤は、長期及び加速の条件下で良好な安定性を有する。これにより、凍結乾燥及び保存の過程おけるトラベクテジンの安定性を改善するため、グルコース及びヒドロキシエチルデンプンの組成物は、トラベクテジン製剤の凍結保護剤として使用できることが実証された。
【実施例２】
【００２８】
有効成分としてトラベクテジンを、第１賦形剤としてグルコースを、第２賦形剤としてカルボキシメチルセルロースナトリウムを、緩衝剤としてリン酸二水素カリウムを、pH調整剤としてリン酸/水酸化カリウムを、そして溶媒として注射用水を用いてトラベクテジンのプレ-凍結乾燥溶液を調製した。製剤の具体的な成分及びそれらの用量は以下のとおりである：
2019504061.tif 000008
調製方法：
１．102 mgのリン酸二水素カリウムを2 mLの水に加えた後、0.645 mLのリン酸（0.1 N）を加えた。この混合物をよく攪拌し、緩衝液リン酸二水素カリウム/リン酸を得た。
２．3.75 mgのトラベクテジンを上記の緩衝液リン酸二水素カリウム/リン酸に加え、薬物が完全に溶解するまで混合物を攪拌し、薬物溶液を得た。
３．1.3125 gのグルコース及び562.5 mgのカルボキシメチルセルロースナトリウムを9 mLの注射用水に加え、混合物を攪拌しながら溶解した後、pHをある一定濃度のリン酸溶液で3.9±0.3に調整した。
４．工程２の薬物溶液を工程３の溶液に加え、よく混合した。その後、生成した溶液のpHをある一定濃度のリン酸溶液または水酸化カリウム溶液で3.9±0.3に調整した。
５．上記の溶液を総重量に合わせ、容器に充填した後、部分的に栓をした。
上記の中間溶液を凍結乾燥し、トラベクテジンの凍結乾燥製剤を調製した。その外観、含水量、再溶解性及びpHを調べた。凍結乾燥後の類縁物質の変化及び加速条件（25℃ 60％RH）や長期条件（2〜8℃）における保存安定性を測定した。
【表３】
2019504061.tif 000009
【表４】
2019504061.tif 000010
実験結論及び分析：第１賦形剤としてグルコースを、第２賦形剤としてカルボキシメチルセルロースナトリウムを用いて凍結乾燥品を調製した。その外観、含水量及びpHは基準を満たし、再溶解性も良好である。該凍結乾燥製剤は、長期及び加速の条件下で良好な安定性を有する。これにより、凍結乾燥及び保存の過程おけるトラベクテジンの安定性を改善するため、グルコース及びカルボキシメチルセルロースナトリウムの組成物は、トラベクテジン製剤の凍結保護剤として使用できることが実証された。
【実施例３】
【００２９】
有効成分としてトラベクテジンを、第１賦形剤としてグルコースを、第２賦形剤としてデキストラン40を、緩衝剤としてリン酸二水素カリウムを、pH調整剤としてリン酸/水酸化カリウムを、そして溶媒として注射用水を用いてトラベクテジンのプレ-凍結乾燥溶液を調製した。製剤の具体的な成分及びそれらの用量は以下のとおりである：
2019504061.tif 000011
調製方法：
１．102 mgのリン酸二水素カリウムを2 mLの水に加えた後、0.645 mLのリン酸（0.1 N）を加えた。この混合物をよく攪拌し、緩衝液リン酸二水素カリウム/リン酸を得た。
２．3.75 mgのトラベクテジンを上記の緩衝液リン酸二水素カリウム/リン酸に加え、薬物が完全に溶解するまで混合物を攪拌し、薬物溶液を得た。
３．750 mgのグルコース及び450 mgのデキストラン40を9 mLの注射用水に加え、混合物を攪拌しながら溶解した後、pHをある一定濃度のリン酸溶液で3.9±0.3に調整した。
４．工程２の薬物溶液を工程３の溶液に加え、よく混合した。その後、生成した溶液のpHをある一定濃度のリン酸溶液または水酸化カリウム溶液で3.9±0.3に調整した。
５．上記の溶液を総重量に合わせ、容器に充填した後、部分的に栓をした。
上記の中間溶液を凍結乾燥し、トラベクテジンの凍結乾燥製剤を調製した。その外観、含水量、再溶解性及びpHを調べた。凍結乾燥後の類縁物質の変化及び加速条件（25℃ 60％RH）や長期条件（2〜8℃）における保存安定性を測定した。
【表５】
2019504061.tif 000012
【表６】
2019504061.tif 000013
実験結論及び分析：第１賦形剤としてグルコースを、第２賦形剤としてデキストラン40を用いて凍結乾燥品を調製した。その外観、含水量及びpHは基準を満たし、再溶解性も良好である。該凍結乾燥製剤は、長期及び加速の条件下で良好な安定性を有する。これにより、凍結乾燥及び保存の過程おけるトラベクテジンの安定性を改善するため、グルコース及びデキストラン40の組成物は、トラベクテジン製剤の凍結保護剤として使用できることが実証された。
【実施例４】
【００３０】
有効成分としてトラベクテジンを、第１賦形剤としてグルコースを、第２賦形剤としてヒドロキシプロピルベータシクロデキストリンを、緩衝剤としてリン酸二水素カリウムを、pH調整剤としてリン酸/水酸化カリウムを、そして溶媒として注射用水を用いてトラベクテジンのプレ-凍結乾燥溶液を調製した。製剤の具体的な成分及びそれらの用量は以下のとおりである：
2019504061.tif 000014
調製方法：
１．102 mgのリン酸二水素カリウムを2 mLの水に加えた後、0.645 mLのリン酸（0.1 N）を加えた。この混合物をよく攪拌し、緩衝液リン酸二水素カリウム/リン酸を得た。
２．3.75 mgのトラベクテジンを上記の緩衝液リン酸二水素カリウム/リン酸に加え、薬物が完全に溶解するまで混合物を攪拌し、薬物溶液を得た。
３．750 mgのグルコース及び750 mgのヒドロキシプロピルベータシクロデキストリンを9 mLの注射用水に加え、混合物を攪拌しながら溶解した後、pHをある一定濃度のリン酸溶液で3.9±0.3に調整した。
４．工程２の薬物溶液を工程３の溶液に加え、よく混合した。その後、生成した溶液のpHをある一定濃度のリン酸溶液または水酸化カリウム溶液で3.9±0.3に調整した。
５．上記の溶液を総重量に合わせ、容器に充填した後、部分的に栓をした。
上記の中間溶液を凍結乾燥し、トラベクテジンの凍結乾燥製剤を調製した。その外観、含水量、再溶解性及びpHを調べた。凍結乾燥後の類縁物質の変化及び加速条件（25℃ 60％RH）や長期条件（2〜8℃）における保存安定性を測定した。
【表７】
2019504061.tif 000015
【表８】
2019504061.tif 000016
実験結論及び分析：第１賦形剤としてグルコースを、第２賦形剤としてヒドロキシプロピルベータシクロデキストリンを用いて凍結乾燥品を調製した。その外観、含水量及びpHは基準を満たし、再溶解性も良好である。該凍結乾燥製剤は、長期及び加速の条件下で良好な安定性を有する。これにより、凍結乾燥及び保存の過程おけるトラベクテジンの安定性を改善するため、グルコース及びデキストラン40の組成物は、トラベクテジン製剤の凍結保護剤として使用できることが実証された。
【実施例５】
【００３１】
有効成分としてトラベクテジンを、第１賦形剤としてソルビトールを、第２賦形剤としてカルボキシメチルセルロースナトリウムを、緩衝剤としてリン酸二水素カリウムを、pH調整剤としてリン酸/水酸化カリウムを、そして溶媒として注射用水を用いてトラベクテジンのプレ-凍結乾燥溶液を調製した。製剤の具体的な成分及びそれらの用量は以下のとおりである：
2019504061.tif 000017
調製方法：
１．102 mgのリン酸二水素カリウムを2 mLの水に加えた後、0.645 mLのリン酸（0.1 N）を加えた。この混合物をよく攪拌し、緩衝液リン酸二水素カリウム/リン酸を得た。
２．3.75 mgのトラベクテジンを上記の緩衝液リン酸二水素カリウム/リン酸に加え、薬物が完全に溶解するまで混合物を攪拌し、薬物溶液を得た。
３．1.5 gのソルビトール及び375 mgのカルボキシメチルセルロースナトリウムを9 mLの注射用水に加え、混合物を攪拌しながら溶解した後、pHをある一定濃度のリン酸溶液で3.9±0.3に調整した。
４．工程２の薬物溶液を工程３の溶液に加え、よく混合した。その後、生成した溶液のpHをある一定濃度のリン酸溶液または水酸化カリウム溶液で3.9±0.3に調整した。
５．上記の溶液を総重量に合わせ、容器に充填した後、部分的に栓をした。
上記の中間溶液を凍結乾燥し、トラベクテジンの凍結乾燥製剤を調製した。その外観、含水量、再溶解性及びpHを調べた。凍結乾燥後の類縁物質の変化及び加速条件（25℃ 60％RH）や長期条件（2〜8℃）における保存安定性を測定した。
【表９】
2019504061.tif 000018
【表１０】
2019504061.tif 000019
実験結論及び分析：第１賦形剤としてソルビトールを、第２賦形剤としてカルボキシメチルセルロースナトリウムを用いて凍結乾燥品を調製した。その外観、含水量及びpHは基準を満たし、再溶解性も良好である。該凍結乾燥製剤は、長期及び加速の条件下で良好な安定性を有する。これにより、凍結乾燥及び保存の過程おけるトラベクテジンの安定性を改善するため、ソルビトール及びカルボキシメチルセルロースナトリウムの組成物は、トラベクテジン製剤の凍結保護剤として使用できることが実証された。
【実施例６】
【００３２】
デキストラン40/グルコースの比率及び用量を最適化するため、応答表面法-中央複合体設計（RSM-CCD）を使用した。該デキストラン40の用量を2％〜5％に制限し、また該グルコースの用量を4％〜10％に制限している。Design Expertのソフトウェアは計13製剤を設計した。凍結乾燥品のイニシャル時及び２Ｍにおける類縁物質の試験結果を以下の表１１に示す。
【表１１】
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さらに、表１２に示すように凍結乾燥品の外観についても調べた。
【表１２】
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結果及び分析：
Design Expertのソフトウェアを用いてグルコース/デキストラン40の最適用量を分析及び予測した。応答値として、イニシャル時及び加速２Ｍ時の総不純物、イニシャル時及び加速２Ｍ時のET-701及び外観を用いた。
シミュレーションの結果、デキストラン40の用量が5％（含水量が9％）、グルコースの用量が6.65％である場合、イニシャル時の総不純物及びET-701がそれぞれ1.800％及び0.066％であり、加速２Ｍ時の総不純物及びET-701がそれぞれ1.799％及び0.059％であり、外観スコアは2.707であることが示され（外観スコアの最高値は３）、製剤の基準を満たした。従って、グルコース及びデキストラン40の最適用量（絶対用量）はそれぞれ6.65％及び4.55％である。
【実施例７】
【００３３】
凍結乾燥及び長期保存の過程におけるデキストラン40の効果を実証するため、赤外分光法及び示差走査熱量測定法（DSC）を用いて詳細な研究を行った。
（１）分子間水素結合の赤外特性
4.55％のデキストラン40のみを含有する凍結乾燥試料、同時に4.55％のデキストラン40及び6.65％のグルコースを含有する凍結乾燥試料について赤外スキャンを行った。その結果（図１Ａ及び図１Ｂ）、4.55％のデキストラン40を含有する凍結乾燥試料では、デキストラン40中のアルデヒド基の伸縮振動ピークが1649.81の波数で現れるが、4.55％のデキストラン40及び6.65％のグルコースを含有する試料では、該ピークは1636.36の波数で現れることが示された。グルコース中のヒドロキシル基とデキストラン40中のアルデヒド基との間には水素結合の相互作用が存在し、これによって、アルデヒド基の伸縮振動の幅が減少し、波数が減少することが実証された。（注：グルコースとデキストラン40との間の相互作用としては、主にヒドロキシル基間の水素結合の相互作用である。水素結合の相互作用を特徴付けることが困難であるために、アルデヒド基の特徴的なピークが特徴決定のために選ばれる。これは、アルデヒド基とヒドロキシル基との間にも水素結合の相互作用があるからである。）
（２）DSCによる凍結乾燥試料の熱分析
デキストラン40とグルコースとの間の相互作用により、凍結乾燥試料の熱応答挙動を分析するためにDSCも使用される。その結果（図２Ａ、図２Ｂ及び図２Ｃ）、4.55％のデキストラン40を含有する凍結乾燥試料のDSCスペクトルには1つの吸熱ピーク及び1つの発熱ピークがあり、5％のグルコースを含有する凍結乾燥試料中には1つの広い吸熱ピークがあり;4.55％のデキストラン40及び6.65％のグルコースを含有する凍結乾燥試料には2つの吸熱ピーク及び1つの発熱ピークがあり、グルコースの存在によりデキストラン40の元の吸熱ピークは高温の方向にシフトすることが示された。これは、両者間の相互作用をさらに実証している。
【実施例８】
【００３４】
デキストラン40/グルコースの比率が類縁物質に及ぼす影響をさらに研究するために、高温試験を設計し、最適な製剤の合理性及び有効性を評価及び検証した。その試験結果を表１３に示す。
【表１３】
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結果及び分析
（１）イニシャル試料：グルコース/デキストラン40の比率の類縁物質に及ぼす影響は主に総不純物で反映されている。ET-701は低レベルであり、他の既知の不純物には有意差がない。グルコース及びデキストラン40がより高いまたはより低い場合には、ある程度の総不純物の増加が見られる（注：その差は小さい）。
（２）40℃ 10日間
40℃の高温で10日後には試料の外観に著しい変化は観察されなかった。類縁物質について試験した結果、40℃で10日後にET-701が著しく増加し、未知の個々の不純物が増加し、それにより総不純物が増加し、異なる比率の賦形剤の増加度はわずかに相違し、また、グルコース：デキストラン40 = 6.65％：4.55％が最適な製剤であることが示された。
（３）60℃ 10日間
60℃の高温で10日後には、全ての試料は重度な収縮を示し、APIを含有する試料は明るい黄色に呈した。類縁物質について試験した結果、総不純物が著しく増加し、グルコース/デキストラン40を異なる比率で含有する製剤については、総不純物の増加度は相違し、グルコース：デキストラン40 = 6.65％：4.55％が最適な製剤であり、該製剤の増加度は最も小さいことが示された。
【実施例９】
【００３５】
臨床使用の要求を満たすため、凍結乾燥品を再溶解して得られた溶液の安定性を調べた。0.25 mgの規格試料（保護剤は6.65％グルコース及び4.55％デキストラン40であった。）を5 mLの注射用水に再溶解した。室温及び冷蔵（2〜8℃）保存による類縁物質の変化を調べた。その結果を下記の表１４及び表１５に示す。
【表１４】
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【表１５】
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その結果、製品を再溶解した後に、室温では不純物は徐々に増加するが、冷蔵における安定性は良好であることが示された。従って、該試料は再溶解後にできるだけ早く使用することを推奨する。一時保存したい場合は、該試料を冷蔵する必要がある。
【実施例１０】
【００３６】
グルコース及びデキストランがそれぞれ6.65％及び4.55％の場合に、試料に対する保護的な効果をさらに実証するために、長期及び加速の条件における凍結乾燥試料の安定性について調べた。
有効成分としてトラベクテジンを、第１賦形剤としてグルコースを、第２賦形剤としてデキストラン40を、緩衝剤としてリン酸二水素カリウムを、pH調整剤としてリン酸/水酸化カリウムを、そして溶媒として注射用水を用いてトラベクテジンのプレ-凍結乾燥溶液を調製した。製剤の具体的な成分及びそれらの用量は以下のとおりである：
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注[1]：デキストラン40の含水量は6.6％であり、その実際の濃度は45.5 mg/mLである。
調製方法：
１．室温で80 mLの注射用水を500 mLビーカーに入れた後、816 mgのリン酸二水素カリウム、5.88 gのデキストラン40及び7.98 gのグルコースを加え、攪拌しながら溶解し、よく混合した。
２．30 mgのトラベクテジンを5.16 mLのリン酸溶液（0.1 N）に加え、攪拌しながら溶解した。
３．工程２の溶液を工程１の溶液に加え、よく混合し、リン酸または水酸化カリウムでpHを3.6〜4.2に調整し、溶液を全重量に合わせた。
４．溶液を0.22 μmの膜を通して濾過し、10 mLバイアル（仕様：0.25 mg、1 mL/バイアル）または20 mLバイアル（仕様：1 mg、4 mL/バイアル）に充填した。
５．溶液を凍結乾燥し、トラベクテジンの凍結乾燥製剤を調製した。
上記の凍結乾燥製剤を加速条件（25℃ 60％RH）下で保存し、異なる時点で類縁物質及び含水量を測定した。
【表１６】
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【表１７】
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結果及び分析：類縁物質について試験した結果、加速及び長期の条件で3ヶ月間保存した後、2つの規格試料中の個々の不純物及び総不純物には著しい変化はなく、特に、加速条件下では、主要な不純物であるET-701には著しい増加はなく、試料の含水量の増加傾向はないことが示された。グルコース及びデキストラン40を特定の比率で賦形剤として使用することにより、加速条件及び長期条件における試料の安定性は著しく改善できることが実証された。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【国際調査報告】
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