(57)【要約】  本発明は、ポリ（メチルビニルエーテル−コ−無水マレイン酸）（ＰＶＭ／ＭＡ）コポリマーのＣ１−４半アルキルエステルを含んでなるシクロスポリンＡの局所用医薬マイクロエマルジョンに関する。また、本発明は当該組成物の製造方法、および幾つかの疾患、特に乾癬またはアトピー性皮膚炎、の予防および／または治療でのそれらの使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
局所用医薬マイクロエマルジョンであって、
（ａ）前記マイクロエマルジョンの総重量に対して０．１％ｗ／ｗ〜１０％ｗ／ｗのシクロスポリンＡ、
（ｂ）ポリ（メチルビニルエーテル−コ−無水マレイン酸）（ＰＶＭ／ＭＡ）コポリマーのＣ１−４半アルキルエステル、
（ｃ）２−（２−エトキシエトキシ）エタノールおよびＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤以外の、成分（ｂ）を溶解化させることができる非揮発性有機溶媒、
（ｄ）揮発性アルコール、
（ｅ）２−（２−エトキシエトキシ）エタノール、
（ｆ）中鎖トリグリセリド、
（ｇ）ＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤または界面活性剤の混合物、
（ｈ）場合により水、ならびに
（ｉ）場合によりトリアセチン
を含んでなる、前記局所用医薬マイクロエマルジョン。
【請求項２】
成分（ｂ）がＰＶＭ／ＭＡコポリマーの半ｎ−ブチルエステルである、請求項１に記載のマイクロエマルジョン。
【請求項３】
成分（ｃ）がプロピレングリコールである、請求項１または２に記載のマイクロエマルジョン。
【請求項４】
成分（ｄ）がエタノールである、請求項１〜３のいずれか一項に記載のマイクロエマルジョン。
【請求項５】
成分（ｆ）がカプリル酸／カプリン酸トリグリセリドである、請求項１〜４のいずれか一項に記載のマイクロエマルジョン。
【請求項６】
成分（ｇ）がポリソルベート８０またはポリソルベート８０とポリソルベート２０との混合物のいずれかである、請求項１〜５のいずれか一項に記載のマイクロエマルジョン。
【請求項７】
成分（ａ）が、前記マイクロエマルジョンの総重量に対して、１％ｗ／ｗ〜７％ｗ／ｗの濃度、好ましくは１．５％ｗ／ｗ〜５％ｗ／ｗの濃度、さらに好ましくは２％ｗ／ｗ〜５％ｗ／ｗの濃度で存在する、請求項１〜６のいずれか一項に記載のマイクロエマルジョン。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか一項に記載のマイクロエマルジョンであって、
（ａ）１％ｗ／ｗ〜７％ｗ／ｗのシクロスポリンＡ、
（ｂ）０．０２％ｗ／ｗ〜５％ｗ／ｗのポリ（メチルビニルエーテル−コ−無水マレイン酸）（ＰＶＭ／ＭＡ）コポリマーのＣ１−４半アルキルエステル、
（ｃ）５％ｗ／ｗ〜１５％ｗ／ｗの、２−（２−エトキシエトキシ）エタノールおよびＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤およびトリアセチン以外の、成分（ｂ）を溶解化させることができる非揮発性有機溶媒、
（ｄ）０．０５％ｗ／ｗ〜１５％ｗ／ｗの揮発性アルコール、
（ｅ）２０％ｗ／ｗ〜２５％ｗ／ｗの２−（２−エトキシエトキシ）エタノール、
（ｆ）２％ｗ／ｗ〜３０％ｗ／ｗの中鎖トリグリセリド、
（ｇ）１０％ｗ／ｗ〜５０％ｗ／ｗの、ＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤または界面活性剤の混合物、
（ｈ）場合により１５％ｗ／ｗ〜２５％ｗ／ｗの水、ならびに
（ｉ）場合により１０％ｗ／ｗ〜２０％ｗ／ｗのトリアセチン
を含んでなり、ｗ／ｗが、前記マイクロエマルジョンの総重量に対する各成分の重量である、前記マイクロエマルジョン。
【請求項９】
請求項８に記載のマイクロエマルジョンであって、
（ａ）１％ｗ／ｗ〜７％ｗ／ｗのシクロスポリンＡ、
（ｂ）０．０２％ｗ／ｗ〜５％ｗ／ｗのポリ（メチルビニルエーテル−コ−無水マレイン酸）（ＰＶＭ／ＭＡ）コポリマーのＣ１−４半アルキルエステル、
（ｃ）５％ｗ／ｗ〜１５％ｗ／ｗの、２−（２−エトキシエトキシ）エタノールおよびＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤およびトリアセチン以外の、成分（ｂ）を溶解化させることができる非揮発性有機溶媒、
（ｄ）５％ｗ／ｗ〜１５％ｗ／ｗの揮発性アルコール、
（ｅ）２０％ｗ／ｗ〜２５％ｗ／ｗの２−（２−エトキシエトキシ）エタノール、
（ｆ）１０％ｗ／ｗ〜３０％ｗ／ｗの中鎖トリグリセリド、
（ｇ）１０％ｗ／ｗ〜２０％ｗ／ｗの、ＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤または界面活性剤の混合物、ならびに
（ｊ）１０％ｗ／ｗ〜２０％ｗ／ｗのトリアセチン
を含んでなり、ｗ／ｗが、前記マイクロエマルジョンの総重量に対する各成分の重量である、前記マイクロエマルジョン。
【請求項１０】
請求項１〜８のいずれか一項に記載のマイクロエマルジョンであって、
（ａ）１％ｗ／ｗ〜７％ｗ／ｗのシクロスポリンＡ、
（ｂ）０．０２％ｗ／ｗ〜５％ｗ／ｗのポリ（メチルビニルエーテル−コ−無水マレイン酸）（ＰＶＭ／ＭＡ）コポリマーのＣ１−４半アルキルエステル、
（ｃ）５％ｗ／ｗ〜１５％ｗ／ｗの、２−（２−エトキシエトキシ）エタノールおよびＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤以外の、成分（ｂ）を溶解化させることができる非揮発性有機溶媒、
（ｄ）１％ｗ／ｗ〜１０％ｗ／ｗの揮発性アルコール、
（ｅ）２０％ｗ／ｗ〜２５％ｗ／ｗの２−（２−エトキシエトキシ）エタノール、
（ｆ）２％ｗ／ｗ〜１０％ｗ／ｗの中鎖トリグリセリド、
（ｇ）３０％ｗ／ｗ〜５０％ｗ／ｗの、ＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤または界面活性剤の混合物、ならびに
（ｈ）１５％ｗ／ｗ〜２５％ｗ／ｗの水、
を含んでなり、ｗ／ｗが、前記マイクロエマルジョンの総重量に対する各成分の重量である、前記マイクロエマルジョン。
【請求項１１】
請求項１０に記載のマイクロエマルジョンであって、
（ａ）１％ｗ／ｗ〜５％ｗ／ｗのシクロスポリンＡ、
（ｂ）０．０２％ｗ／ｗ〜５％ｗ／ｗのＰＶＭ／ＭＡコポリマーの半ｎ−ブチルエステル、
（ｃ）５％ｗ／ｗ〜１０％ｗ／ｗのプロピレングリコール、
（ｄ）１％ｗ／ｗ〜６％ｗ／ｗのエタノール、
（ｅ）２０％ｗ／ｗ〜２５％ｗ／ｗの２−（２−エトキシエトキシ）エタノール、
（ｆ）２％ｗ／ｗ〜８％ｗ／ｗのカプリル酸／カプリン酸トリグリセリド、
（ｇ）２０％ｗ／ｗ〜３０％ｗ／ｗのポリソルベート８０および１０％ｗ／ｗ〜２０％ｗ／ｗのポリソルベート２０、ならびに
（ｈ）１５％ｗ／ｗ〜２５％ｗ／ｗの水
を含んでなり、ｗ／ｗが、前記マイクロエマルジョンの総重量に対する各成分の重量である、前記マイクロエマルジョン。
【請求項１２】
オレイン酸および／または追加の保存剤を含まない、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のマイクロエマルジョン。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の局所用医薬マイクロエマルジョンを製造する方法であって、
（ｉ）シクロスポリンＡおよび中鎖トリグリセリドを含んでなる均一混合物を調製する工程、
（ｉｉ）ポリ（メチルビニルエーテル−コ−無水マレイン酸）（ＰＶＭ／ＭＡ）コポリマーのＣ１−４半アルキルエステルと、揮発性アルコールと、２−（２−エトキシエトキシ）エタノールおよびＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤以外の非揮発性有機溶媒とを含んでなる均一溶液を調製する工程、
（ｉｉｉ）撹拌しながら、工程（ｉ）で得られた混合物に、工程（ｉｉ）で得られた溶液を加える工程、
（ｉｖ）２−（２−エトキシエトキシ）エタノールと、ＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤または界面活性剤の混合物と、場合によりトリアセチンとを、工程（ｉｉｉ）で得られた混合物に加えて、均一溶液が得られるまで撹拌する工程、ならびに
（ｖ）場合により、工程（ｉｖ）で得られた混合物に水を加え、均一溶液が得られるまで撹拌する工程
を含んでなる、前記方法。
【請求項１４】
ヒト用または家畜用の医薬として使用するための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の局所用医薬マイクロエマルジョン。
【請求項１５】
乾癬、アトピー性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、壊疽性膿皮症、不応性難治性特発性じんましん、発汗異常性湿疹、ベーチェット病、毛孔性紅色粃糠疹、皮膚筋炎、尋常性天疱瘡、良性家族性天疱瘡、落葉状天疱瘡およびエリテマトーデス、栄養障害性表皮水疱症、光線皮膚症、扁平苔癬、結節性痒疹、円形脱毛症、好酸球性膿疱性毛嚢炎、肉芽腫性の毛嚢炎およびせつ腫症、ミュラー毛嚢炎、汗腺膿瘍、強皮症、白斑、好酸球性肉芽腫複合体、肛門周囲ろうこう、皮脂腺炎、若年性蜂巣炎、小水疱性皮膚紅斑性エリテマトーデス、多形性紅斑、円板状エリテマトーデス、無菌性結節性脂肪織炎、中足骨瘻孔、鼻の動脈炎、鼻の人中の潰瘍性皮膚症、顔の皮膚炎、無菌性肉芽腫または膿肉芽腫症候群、萎縮性脱毛症、皮膚反応性ヒスティオサイトーシス、ネコ形質細胞足皮膚炎、脈管炎および虚血性皮膚症からなる群から選択される疾患の予防および／または治療に使用するための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の局所用医薬マイクロエマルジョン。
【請求項１６】
前記疾患が、乾癬、アトピー性皮膚炎およびアレルギー性皮膚炎からなる群から選択される、請求項１５に記載の使用のための局所用医薬マイクロエマルジョン。
【請求項１７】
乾癬、アトピー性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、壊疽性膿皮症、不応性難治性特発性じんましん、発汗異常性湿疹、ベーチェット病、毛孔性紅色粃糠疹、皮膚筋炎、尋常性天疱瘡、良性家族性天疱瘡、落葉状天疱瘡およびエリテマトーデス、栄養障害性表皮水疱症、光線皮膚症、扁平苔癬、結節性痒疹、円形脱毛症、好酸球性膿疱性毛嚢炎、肉芽腫性の毛嚢炎およびせつ腫症、ミュラー毛嚢炎、汗腺膿瘍、強皮症、白斑、好酸球性肉芽腫複合体、肛門周囲ろうこう、皮脂腺炎、若年性蜂巣炎、小水疱性皮膚紅斑性エリテマトーデス、多形性紅斑、円板状エリテマトーデス、無菌性結節性脂肪織炎、中足骨瘻孔、鼻の動脈炎、鼻の人中の潰瘍性皮膚症、顔の皮膚炎、無菌性肉芽腫または膿肉芽腫症候群、萎縮性脱毛症、皮膚反応性ヒスティオサイトーシス、ネコ形質細胞足皮膚炎、脈管炎および虚血性皮膚症からなる群から選択される疾患を予防および／または治療するための医薬の製造のための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の局所用医薬マイクロエマルジョンの使用。
【請求項１８】
前記疾患が、乾癬、アトピー性皮膚炎およびアレルギー性皮膚炎からなる群から選択される、請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
乾癬、アトピー性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、壊疽性膿皮症、不応性難治性特発性じんましん、発汗異常性湿疹、ベーチェット病、毛孔性紅色粃糠疹、皮膚筋炎、尋常性天疱瘡、良性家族性天疱瘡、落葉状天疱瘡およびエリテマトーデス、栄養障害性表皮水疱症、光線皮膚症、扁平苔癬、結節性痒疹、円形脱毛症、好酸球性膿疱性毛嚢炎、肉芽腫性の毛嚢炎およびせつ腫症、ミュラー毛嚢炎、汗腺膿瘍、強皮症、白斑、好酸球性肉芽腫複合体、肛門周囲ろうこう、皮脂腺炎、若年性蜂巣炎、小水疱性皮膚紅斑性エリテマトーデス、多形性紅斑、円板状エリテマトーデス、無菌性結節性脂肪織炎、中足骨瘻孔、鼻の動脈炎、鼻の人中の潰瘍性皮膚症、顔の皮膚炎、無菌性肉芽腫または膿肉芽腫症候群、萎縮性脱毛症、皮膚反応性ヒスティオサイトーシス、ネコ形質細胞足皮膚炎、脈管炎および虚血性皮膚症からなる群から選択される疾患を患う対象を予防および／または治療する方法であって、前記対象に請求項１〜１２のいずれか一項に記載の局所用医薬マイクロエマルジョンを投与することを含んでなる、前記方法。
【請求項２０】
前記疾患が、乾癬、アトピー性皮膚炎およびアレルギー性皮膚炎からなる群から選択される、請求項１９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、局所投与のためのシクロスポリンＡの医薬組成物、当該組成物の製造方法、医薬における、特に乾癬またはアトピー性皮膚炎の予防および／または治療におけるそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
シクロスポリンＡは、新規の抗真菌剤を探索している間に１９７２年に発見された。それは１１種のアミノ酸からなる環式ポリペプチドであり、菌種 Beauveria nivea によって代謝産物として生産される。シクロスポリンＡの抗菌スペクトラムは狭いと当初は指摘されてきたが、その後１９７６年に強力な免疫抑制剤であることが見出された。
【０００３】
シクロスポリンＡはＴ細胞に選択的に作用すると分かった初めての免疫抑制剤であった。ヘルパーＴ細胞が主要標的であるが、Ｔ抑制細胞にも作用し得る。シクロスポリンＡは、細胞内のイムノフィリンであるシクロフィリンと複合体を形成し、カルシニューリンホスファターゼ、カルシウム／カルモジュリン依存性セリン−トレオニンホスファターゼの活性を抑制する。その結果、カルシニューリンホスファターゼは、転写因子である活性化Ｔ細胞の核因子（nuclear factor of activated T cells：ＮＦＡＴ）をリン酸化することができない。ＮＦＡＴは、Ｔ細胞経路、インターフェロン−ガンマおよび顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（granulocyte-macrophage colony-stimulating factor：ＧＭ−ＣＳＦ）の完全活性化に必要なサイトカインであるインターロイキン２（ＩＬ−２）をコードする遺伝子を転写するために細胞核へ移動する前にリン酸化する必要がある。シクロスポリンＡは、表皮および真皮中のリンパ球およびマクロファージを使い尽くし、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞および抗原提示細胞の活性化を阻害する。またシクロスポリンＡはケラチン生成細胞の超増殖を阻害し、マスト細胞からのヒスタミンの放出を阻害し、真皮の血管内皮上の細胞接着分子の発現を下方制御する［Amor et al., J. Am. Acad. Dermatol., 2010, 63, 925-946］。
【０００４】
１９７８年には、不適合な死体腎を受け取った腎移植患者での拒絶を防止するためにシクロスポリンＡが功を奏することが分かった。１９７９年には、シクロスポリンＡが乾癬を改善させたことが観察された。実際、シクロスポリンＡは１９９７年にこの疾患の治療のためにＦＤＡの認可を受けた。より最近の報告書では、シクロスポリンＡが種々の皮膚科学的な疾患の治療に有用であることが開示された。この点に関して、Amorら［J. Am. Acad. Dermatol., 2010, 63, 925-946］は、シクロスポリンＡが、アトピー性皮膚炎、壊疽性膿皮症および不応性難治性特発性じんましん、発汗異常性湿疹、ベーチェット病、毛孔性紅色粃糠疹、皮膚筋炎、尋常性天疱瘡、栄養障害性表皮水疱症、光線皮膚症（例えば、慢性光線性皮膚炎、多形日光疹および日光じんま疹など）、扁平苔癬、結節性痒疹、円形脱毛症、良性家族性天疱瘡（benign familiar pemphigus）、好酸球性膿疱性毛嚢炎、汗腺膿瘍および強皮症の治療に功を奏したことを開示した。また、シクロスポリンＡは獣医学の皮膚科学でも使用されてきていて;特に、ネコおよびイヌのアトピー性皮膚炎、皮脂腺炎、落葉状天疱瘡およびエリテマトーデス、小水疱性皮膚紅斑性エリテマトーデスおよび皮膚反応性ヒスティオサイトーシスの治療に有用であることが報告されており、［Kovalikら、The Veterinary Journal, 2012, 193, 317-325］。獣医学でのシクロスポリンＡのさらなる皮膚科学的適応は、Palmeiroによって報告されていて、それは即ち、ネコおよびイヌのアレルギー性皮膚炎、好酸球性肉芽腫複合体、アトピー性皮膚炎、肛門周囲ろうこう（perianal fistulas）、皮脂腺炎、落葉状天疱瘡およびエリテマトーデス、若年性蜂巣炎、小水疱性皮膚紅斑性エリテマトーデス、多形性紅斑、円板状エリテマトーデス、無菌性結節性脂肪織炎、中足骨瘻孔、肉芽腫性の毛嚢炎およびせつ腫症、鼻の動脈炎、鼻の人中の潰瘍性皮膚症、顔の皮膚炎、無菌性肉芽腫または膿肉芽腫（pyogranuloma）症候群、ミュラー毛嚢炎（mular folliculitis）、円形脱毛症、萎縮性脱毛症（psudopelade）、皮膚反応性ヒスティオサイトーシス（cutaneous 
reactive hitiocytosis）、ネコ形質細胞足皮膚炎、脈管炎および虚血性皮膚症である。またシクロスポリンＡは、その免疫抑制活性、特に、白斑の患者の病変部の再色素形成に期待できる結果を示してきた薬剤の部類であるカルシニューリン阻害剤としての活性により尋常性白斑の治療に使用することもできる［Caridiら、Topical Calcineurin Inhibitors in the Treatment of Vitiligo in Bitiligo − Management and Therapy, Dr. Kelly KyunHwa Park Ed., 2001］。
【０００５】
シクロスポリンＡの水への溶解性は非常に低いため、Sandimmune（商標） およびNeoral（商標）（Novartis Pharmaceuticals）など、経口投与および注射のために懸濁形態およびエマルション形態が開発されてきた。しかしながら、経口投与および静脈内投与などの全身治療には、顕著な副作用を生じさせるという欠点がある。
【０００６】
したがって、特に皮膚への部位特異的な送達を可能にするための、シクロスポリンＡの局所投与に好適な局所用シクロスポリンＡ製剤が存在することが望ましい。この薬剤の局所送達で鍵となる課題は、その水への溶解性が悪いこと、高分子量であること、および皮膚への浸透が制限的であることである。
【０００７】
シクロスポリンＡ、グリセリン、ヒマシ油、ポリソルベート８０、カルボマーコポリマーＡおよび水を含有している点眼用エマルジョンは、［ＵＳ８，６４２，５５６Ｂ２；ＵＳ８，６２９，１１１Ｂ２；ＵＳ８，６１８，０６４Ｂ２；ＵＳ８，６３３，１６２Ｂ２；ＵＳ８，６４８，０４８Ｂ２；およびＵＳ８，６８５，９３０Ｂ２］で開示されていて、その一つは、商標名Restasis（商標）として販売されている。しかしながら、これらのエマルジョン中のシクロスポリンＡの濃度は０．１重量％以下である。
【０００８】
ＵＳ５，８９１，８４６に開示されているように、シクロスポリンＡをより高濃度、０．１〜１０重量％で含んでなる局所用組成物は、アジピン酸、ピメリン酸、アゼライン酸、セバシン酸およびフタル酸ジアルキル等のポリカルボン酸のポリアルキルエステルを使用することによって剤形化することができる。しかしながら、これら製剤の製造には、複雑な機器および／または方法を用いる必要がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
したがって、当技術分野では、特にシクロスポリンＡの皮膚区画への局所送達を可能にし、シクロスポリンＡを高濃度で含有することができ、高い安定性を有する、シクロスポリンＡを含んでなるさらなる局所用組成物を開発する必要がある。また、これら組成物の調製では有毒な有機溶媒または複雑な技術の使用が回避されることが望ましい。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、驚くべきことに、ポリ（メチルビニルエーテル−コ−無水マレイン酸）（ＰＶＭ／ＭＡ）コポリマーのＣ１−４半アルキルエステル、中鎖トリグリセリド、揮発性アルコール、２−（２−エトキシエトキシ）エタノール、コポリマーを溶解化させることができる非揮発性有機溶媒、および、ＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤または界面活性剤の混合物を含んでなるマイクロエマルジョンが、シクロスポリンＡを高濃度に含有することができることを見出した。これらのマイクロエマルジョンは安定しており、局所適用に好適である。
【００１１】
本発明のマイクロエマルジョンは、先行技術の他の製剤よりも、例えば薬剤の改善された可溶化、皮膚の生体接着性、物理的および化学的な安定性、経皮吸収、自発的形成、製造および規模拡大の容易さ、および噴霧に好適である製剤の製造への好適性などのいくつかの有利な点を有することが実証された。このようなマイクロエマルジョンは、他のシクロスポリンＡの組成物に関係する難点、例えば、低い長期安定性、低いカプセル化効能、薬剤の可溶化の低さ、低い経皮吸収、前進吸収、有毒な有機溶媒または複雑な技術の使用を要するコストがかかり、かつ複雑な製造プロセスなど、をすべてまたは幾つか解決することができる。
【００１２】
本発明の例には、本発明のマイクロエマルジョンが、加速化された保存条下で、物理的安定性（特にマイクロエマルジョン特性を維持するための物理的安定性）および化学的安定性（特にシクロスポリンＡの分解を回避するための化学的安定性）の両方の点で高い安定性を有し、シクロスポリンＡの皮膚区画への局所送達を可能にすることを示した。
【００１３】
第一の態様において、本発明は、局所用医薬マイクロエマルジョンであって、
（ａ）該マイクロエマルジョンの総重量に対して０．１％ｗ／ｗ〜１０％ｗ／ｗのシクロスポリンＡ、
（ｂ）ポリ（メチルビニルエーテル−コ−無水マレイン酸）（ＰＶＭ／ＭＡ）コポリマーのＣ１−４半アルキルエステル、
（ｃ）２−（２−エトキシエトキシ）エタノールおよびＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤以外の、成分（ｂ）を溶解化させることができる非揮発性有機溶媒、
（ｄ）揮発性アルコール、
（ｅ）２−（２−エトキシエトキシ）エタノール、
（ｆ）中鎖トリグリセリド、
（ｇ）ＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤または界面活性剤の混合物、
（ｈ）場合により水、ならびに
（ｉ）場合によりトリアセチン
を含んでなる局所用医薬マイクロエマルジョンに関する。
【００１４】
第二の態様において、本発明は、第一の態様で定義された局所用医薬マイクロエマルジョンを製造する方法であって、
（ｉ）シクロスポリンＡおよび中鎖トリグリセリドを含んでなる均一混合物を調製する工程、
（ｉｉ）ポリ（メチルビニルエーテル−コ−無水マレイン酸）（ＰＶＭ／ＭＡ）コポリマーのＣ１−４半アルキルエステルと、揮発性アルコールと、２−（２−エトキシエトキシ）エタノールおよびＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤以外の非揮発性有機溶媒とを含んでなる均一溶液を調製する工程、
（ｉｉｉ）撹拌しながら、工程（ｉ）で得られた混合物に、工程（ｉｉ）で得られた溶液を加える工程、
（ｉｖ）２−（２−エトキシエトキシ）エタノールと、ＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤または界面活性剤の混合物と、場合によりトリアセチンとを、工程（ｉｉｉ）で得られた混合物に加えて、均一溶液が得られるまで撹拌する工程、ならびに
（ｖ）場合により、工程（ｉｖ）で得られた混合物に水を加え、均一溶液が得られるまで撹拌する工程
を含んでなる方法に関する。
【００１５】
第三の態様において、本発明は、医薬として、特にヒトにまたは家畜に使用するための医薬として使用するための、第一の態様で定義された局所用医薬マイクロエマルジョンに関する。
【００１６】
第四の態様において、本発明は、乾癬、アトピー性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、壊疽性膿皮症、不応性難治性特発性じんましん、発汗異常性湿疹、ベーチェット病、毛孔性紅色粃糠疹、皮膚筋炎、尋常性天疱瘡、良性家族性天疱瘡、落葉状天疱瘡およびエリテマトーデス、栄養障害性表皮水疱症、光線皮膚症、扁平苔癬、結節性痒疹、円形脱毛症、好酸球性膿疱性毛嚢炎、肉芽腫性の毛嚢炎およびせつ腫症、ミュラー毛嚢炎、汗腺膿瘍、強皮症、白斑、好酸球性肉芽腫複合体、肛門周囲ろうこう、皮脂腺炎、若年性蜂巣炎、小水疱性皮膚紅斑性エリテマトーデス、多形性紅斑、円板状エリテマトーデス、無菌性結節性脂肪織炎、中足骨瘻孔、鼻の動脈炎、鼻の人中の潰瘍性皮膚症、顔の皮膚炎、無菌性肉芽腫または膿肉芽腫症候群、萎縮性脱毛症、皮膚反応性ヒスティオサイトーシス、ネコ形質細胞足皮膚炎、脈管炎および虚血性皮膚症からなる群から選択された疾患の予防および／または治療に使用するための、第一の態様で定義された局所用医薬マイクロエマルジョンに関する。
【００１７】
さらなる態様において、本発明は、乾癬、アトピー性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、壊疽性膿皮症、不応性難治性特発性じんましん、発汗異常性湿疹、ベーチェット病、毛孔性紅色粃糠疹、皮膚筋炎、尋常性天疱瘡、良性家族性天疱瘡、落葉状天疱瘡およびエリテマトーデス、栄養障害性表皮水疱症、光線皮膚症、扁平苔癬、結節性痒疹、円形脱毛症、好酸球性膿疱性毛嚢炎、肉芽腫性の毛嚢炎 およびせつ腫症、ミュラー毛嚢炎 、汗腺膿瘍、強皮症、白斑、好酸球性肉芽腫複合体、肛門周囲ろうこう、皮脂腺炎、若年性蜂巣炎、小水疱性皮膚紅斑性エリテマトーデス、多形性紅斑、円板状エリテマトーデス、無菌性結節性脂肪織炎、中足骨瘻孔、鼻の動脈炎、鼻の人中の潰瘍性皮膚症、顔の皮膚炎、無菌性肉芽腫または膿肉芽腫症候群、萎縮性脱毛症、皮膚反応性ヒスティオサイトーシス、ネコ形質細胞足皮膚炎、脈管炎および虚血性皮膚症からなる群から選択される疾患を予防および／または治療するための医薬の製造のための、第一の態様で定義された局所用医薬マイクロエマルジョンの使用に関する。
【００１８】
さらなる態様において、本発明は、乾癬、アトピー性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、壊疽性膿皮症、不応性難治性特発性じんましん、発汗異常性湿疹、ベーチェット病、毛孔性紅色粃糠疹、皮膚筋炎、尋常性天疱瘡、良性家族性天疱瘡、落葉状天疱瘡およびエリテマトーデス、栄養障害性表皮水疱症、光線皮膚症、扁平苔癬、結節性痒疹、円形脱毛症、好酸球性膿疱性毛嚢炎、肉芽腫性の毛嚢炎 およびせつ腫症、ミュラー毛嚢炎 、汗腺膿瘍、強皮症、白斑、好酸球性肉芽腫複合体、肛門周囲ろうこう、皮脂腺炎、若年性蜂巣炎、小水疱性皮膚紅斑性エリテマトーデス、多形性紅斑、円板状エリテマトーデス、無菌性結節性脂肪織炎、中足骨瘻孔、鼻の動脈炎、鼻の人中の潰瘍性皮膚症、顔の皮膚炎、無菌性肉芽腫または膿肉芽腫症候群、萎縮性脱毛症、皮膚反応性ヒスティオサイトーシス、ネコ形質細胞足皮膚炎、脈管炎および虚血性皮膚症からなる群から選択される疾患を患う対象を予防および／または治療する方法であって、該対象に第一の態様で定義された局所用医薬マイクロエマルジョンを投与することを含んでなる方法に関する。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
医薬組成物
第一の態様において、本発明は、局所用医薬マイクロエマルジョンであって、
（ａ）該マイクロエマルジョンの総重量に対して０．１％ｗ／ｗ〜１０％ｗ／ｗのシクロスポリンＡ、
（ｂ）ポリ（メチルビニルエーテル−コ−無水マレイン酸）（ＰＶＭ／ＭＡ）コポリマーのＣ１−４半アルキルエステル、
（ｃ）２−（２−エトキシエトキシ）エタノール以外の、成分（ｂ）およびＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤を溶解化させることができる非揮発性有機溶媒、
（ｄ）揮発性アルコール、
（ｅ）２−（２−エトキシエトキシ）エタノール、
（ｆ）中鎖トリグリセリド、
（ｇ）ＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤または界面活性剤の混合物、
（ｈ）場合により水、ならびに
（ｉ）場合によりトリアセチン
を含んでなる局所用医薬マイクロエマルジョンに関する。
【００２０】
マイクロエマルジョン中にコポリマー（成分（ｂ））が存在することで、マイクロエマルジョンの安定性が増大して生成物に対する接着性がもたらされ、よって皮膚へのその接着性が強化される。
【００２１】
本発明の組成物は局所適用に好適である。「局所用（topical）」という用語は、本明細書では、限定することなく、皮膚、頭皮および爪などの身体の外部への適用；ならびに、限定することなく、口腔、鼻腔または直腸の粘膜などの粘膜への適用を指定するために使用する。
【００２２】
本発明の文脈では、「医薬組成物」および「医薬マイクロエマルジョン」という用語は互換性であり、液滴（即ち、分散相）、一般には球状液滴から作られた等方性の、熱力学的に安定した透明系を指し、この分散相はコポリマーに囲まれ、かつ分散相の平均直径は１ｎｍ〜２００ｎｍの間、好ましくは１０ｎｍ〜１００ｎｍの間である。本発明の文脈では、肉眼での検査に基づき、透明な外観の製剤（透明製剤）のみがマイクロエマルジョンの範囲内であると考えられた。
【００２３】
本明細書で使用される場合、「医薬（pharmaceutical）」という用語は、本発明のマイクロエマルジョンが、マイクロエマルジョンを形成する成分が同一であることによって、薬理学的／毒物学的な観点から患者（哺乳類など）にとって薬学的に許容可能であり、かつ物理学的／科学的な観点から製薬技師にとって薬学的に許容可能であることを意味する。
【００２４】
本明細書で使用される場合、「平均直径（average diameter）」または「平均径（mean diameter）」という用語は、分散相を形成する液滴の母集団の平均直径に関する。これらの系の平均サイズは、動的光散乱（Dynamic light scattering：ＤＬＳまたは光子相関分光法、photon correlation spectroscopy：ＰＣＳ）などの当業者に知られた標準プロセスによって測定することができ、これはマイクロエマルジョン中の液滴サイズを測定するための好適な方法と記載されており［Goddereris C.ら、International Journal of Pharmaceutics, 2006, 312, 187-195］、当業者にとっては周知である。上で説明されているように、本発明のマイクロエマルジョンでは、液滴の平均直径は１ｎｍ〜２００ｎｍである。
【００２５】
本発明のマイクロエマルジョンの分散相は、シクロスポリンＡ、中鎖トリグリセリド、場合により２−（２−エトキシエトキシ）エタノール以外の非揮発性有機溶媒、およびＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤を含有し、この分散相はＰＶＭ／ＭＡコポリマーに囲まれている。成分（ｃ）の２−（２−エトキシエトキシ）エタノール以外の非揮発性有機溶媒およびＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤は、分散相、連続相または両方の相にあってもよい。ポリマーは、マイクロエマルジョンの分散相と連続相の間の中間相にあってもよい。本発明のマイクロエマルジョンの連続相は残りの成分を含有している。本発明の文脈では、「ｗ／ｗ」という用語は、別段規定しない限り、マイクロエマルジョンの総重量に対する各成分の重量に関する。
【００２６】
本発明の医薬マイクロエマルジョン中の成分ａ）はシクロスポリンＡである。
【００２７】
本明細書で使用される場合、「シクロスポリンＡ」という用語は、化学名を（３Ｓ，６Ｓ，９Ｓ，１２Ｒ，１５Ｓ，１８Ｓ，２１Ｓ，２４Ｓ，３０Ｓ，３３Ｓ）−３０−エチル−３３−［（１Ｒ，２Ｒ，４Ｅ）−１−ヒドロキシ−２−メチル−４−ヘキセン−１−イル］−６，９，１８，２４−テトライソブチル−３，２１−ジイソプロピル−１，４，７，１０，１２，１５，１９，２５，２８−ノナメチル−１，４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１−ウンデカアザシクロトリトリアコンタン−２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２−ウンデカン（undecone）またはシクロ［［（Ｅ）−（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ）−３−ヒドロキシ−４−メチル−２−（メチルアミノ）−６−オクテノイル］−Ｌ−２−アミノブチリル−Ｎ−メチルグリシル−Ｎ−メチル−Ｌ−ロイシル−バリル−Ｎ−メチル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−アラニル−Ｄ−アラニル−Ｎ−メチル−Ｌ−ロイシル−Ｎ−メチル−Ｌ−ロイシル−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル］とする、以下の化学式：
【化１】
2019504878.tif 000002
を有する環式ウンデカペプチド化合物を指す。
【００２８】
シクロスポリンＡは強力な免疫抑制活性を有するカルシニューリンホスファターゼ阻害剤である。
【００２９】
特別の実施態様では、本発明のマイクロエマルジョンは、マイクロエマルジョンの総重量に対して、シクロスポリンＡを重量で０．１％ｗ／ｗ〜７％ｗ／ｗ含んでなる。好ましい実施態様では、本発明のマイクロエマルジョンは、マイクロエマルジョンの総重量に対して、シクロスポリンＡを１％ｗ／ｗ〜７％ｗ／ｗ、好ましくは１％ｗ／ｗ〜５％ｗ／ｗ、より好ましくは１．５％ｗ／ｗ〜７％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは１．５％ｗ／ｗ〜５％ｗ／ｗ、一層より好ましくは２％ｗ／ｗ〜５％ｗ／ｗの濃度で含んでなる。
【００３０】
本発明の医薬マイクロエマルジョン中の成分ｂ）は、ポリ（メチルビニルエーテル−コ−無水マレイン酸）（ＰＶＭ／ＭＡ）コポリマーのＣ１−４半アルキルエステルである。
【００３１】
本明細書で使用される場合、「Ｃ１−４アルキル」という用語は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル基などの、炭素原子を１〜４個含有している直鎖状または分岐状の飽和一価炭化水素鎖である。
【００３２】
「ポリ（メチルビニルエーテル−コ−無水マレイン酸）（ＰＶＭ／ＭＡ）コポリマーのＣ１−４半アルキルエステル」または「ＰＶＭ／ＭＡコポリマーのＣ１−４半アルキルエステル」という用語は本明細書では互換的に用いられ、水溶液中の塩基によって中性化された場合水溶性であり、以下の式の構造を有する不水溶性コポリマーを指し、
【化２】
2019504878.tif 000003
式中、ＲはＣ１−４−アルキルであり、即ち、２つのカルボキシル基のうちの１つだけがエステル化されているＰＶＭ／ＭＡコポリマーエステルである。これらの半エステルには、アルキル鎖長が異なるＰＶＭ／ＭＡの形態が含まれる（例えば、Ｒがエチルであるモノエチルエステル；Ｒがブチルであるモノブチルエステル；およびＲがイソプロピルであるイソプロピルエステル）。当該コポリマーは、Gantrez（商標）ESの商標名でInternational Specialty Products (ISP)によって市販されていて、Gantrez（商標）ES 225（モノエチルエステル）、Gantrez（商標）ES 425（モノブチルエステル）およびGantrez（商標）ES 335I（イソプロピルエステル）が含まれ、例えば、エタノール系溶液［５０％（ｗ／ｖ）］中でアルコール系溶液として供給されている。
【００３３】
特別の実施態様では、ＰＶＭ／ＭＡコポリマーのＣ１−４半アルキルアルキルエステルは、ＰＶＭ／ＭＡコポリマーのエチルエステル、ＰＶＭ／ＭＡコポリマーのイソプロピルエステルおよびＰＶＭ／ＭＡコポリマーのｎ−ブチルエステルからなる群から選択され、より好ましくは、ＰＶＭ／ＭＡコポリマーのｎ−ブチルエステルである。
【００３４】
好ましい実施態様では、本発明のマイクロエマルジョンは、ＰＶＭ／ＭＡコポリマーのＣ１−４半アルキルアルキルエステルを０．０２〜５％ｗ／ｗ、好ましくは０．０２〜２％ｗ／ｗ、より好ましくは０．０５〜１．８％ｗ／ｗ含んでなる。
【００３５】
本発明の医薬組成物中では、ＰＶＭ／ＭＡコポリマーのＣ１−４半アルキルアルキルエステルは、揮発性アルコール、２−（２−エトキシエトキシ）エタノール以外の非揮発性有機溶媒およびＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤、あるいは１つまたは幾つかの揮発性アルコールと、１つまたは幾つかの２−（２−エトキシエトキシ）エタノール以外の非揮発性有機溶媒と、ＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤との混合物、即ち、本発明のマイクロエマルジョンの成分ｃ）およびｄ）中で溶解させる。
【００３６】
本明細書で使用される場合、「非揮発性有機溶媒」という用語は、室温で容易に蒸発しないか、または非常にゆっくり蒸発する有機液体、即ち、２５℃での蒸気圧が１ｋＰａ未満であり、標準気圧（１０１．３２５ｋＰａ）での沸点が１１０℃より高いものを指し、ただし２−（２−エトキシエトキシ）エタノールおよびＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤は含まれない。本発明で有用な、２−（２−エトキシエトキシ）エタノールおよびＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤以外の非揮発性有機溶媒は、溶媒１ｍＬ当たりのＰＶＭ／ＭＡコポリマーのＣ１−４半アルキルアルキルエステルを１０ｍｇ溶解させることができなければならない。また、２−（２−エトキシエトキシ）エタノールおよびＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤のいくつかは、コポリマーを溶解させることができるが、本発明の組成物にはこれらと異なる有機溶媒が必要である。したがって、２−（２−エトキシエトキシ）エタノールおよびＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤のいくつかは、本発明の組成物中の非揮発性有機溶媒の範囲内であるとは考慮されず、このため、それらはこの分類（成分（ｃ））から明示的に除外されている。本発明で使用することができる、ＰＶＭ／ＭＡコポリマーのＣ１−４半アルキルアルキルエステルを溶解させることができる、２−（２−エトキシエトキシ）エタノールおよびＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤以外の非揮発性有機溶媒の例としては、限定することなく、プロピレングリコールおよびポリエチレングリコールが挙げられる。好ましくは、２−（２−エトキシエトキシ）エタノールおよびＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤以外の非揮発性有機溶媒、即ち、成分ｃ）は、プロピレングリコールである。また、２−（２−エトキシエトキシ）エタノールおよびＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤以外の非揮発性有機溶媒には、１つ以上の本明細書で定義された非揮発性有機溶媒の混合物、例えば、１、２または３つの本明細書で定義された非揮発性有機溶媒の混合物、好ましくはたった１つの２−（２−エトキシエトキシ）エタノールおよびＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤以外の非揮発性有機溶媒が包含されている。
【００３７】
特別の実施態様では、本発明のマイクロエマルジョンは、ポリマーを溶解させることができる、２−（２−エトキシエトキシ）エタノールおよびＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤以外の非揮発性有機溶媒を、５％ｗ／ｗ〜１５％ｗ／ｗ、好ましくは１０％ｗ／ｗ〜１５％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンに水が含まれない場合）、あるいは５％ｗ／ｗ〜１０％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンが水を１０％超含有している場合）、より好ましくは１２％ｗ／ｗ〜１３％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンに水が含まれない場合）、あるいは５．０％ｗ／ｗ〜８．５％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンに水が含まれない場合）含んでなる。
【００３８】
好ましい実施態様では、２−（２−エトキシエトキシ）エタノールおよびＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤以外の非揮発性有機溶媒は、プロピレングリコールである。「プロピレングリコール」という用語はプロパン−１，２−ジオールを指す。
【００３９】
特別の実施態様では、本発明のマイクロエマルジョンは、プロピレングリコールを５％ｗ／ｗ〜１５％ｗ／ｗ、好ましくは１０％ｗ／ｗ〜１５％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンに水が含まれない場合）、あるいは５％ｗ／ｗ〜１０％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンが水を１０％超含有している場合）、より好ましくは１２％ｗ／ｗ〜１３％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンに水が含まれない場合）、あるいは５．０％ｗ／ｗ〜８．５％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンに水が含まれない場合）含んでなる。
【００４０】
本発明の医薬マイクロエマルジョン中の成分ｄ）は揮発性アルコールである。
【００４１】
本明細書で使用される場合、「揮発性アルコール」は、室温で容易に揮発／蒸発する液体アルコールを指し、揮発性アルコールは、通常２５℃での蒸気圧が１ｋＰａ超であり、沸点が１１０℃未満である。本発明で有用な揮発性アルコールは、揮発性アルコール１ｍＬ当たりのＰＶＭ／ＭＡコポリマーのＣ１−４半アルキルアルキルエステルを１０ｍｇ溶解させることができる。「アルコール」という用語は、指定された数の炭素原子、典型的には１〜４個の炭素原子、好ましくは１〜３個の炭素原子を含有している直鎖状または分岐状の飽和一価炭化水素鎖を指し、当該炭化水素鎖はＯＨ基に結合している。揮発性アルコールの例はメタノール、エタノール、イソプロパノール、イソブタノールなどである。
【００４２】
特別の実施態様では、本発明のマイクロエマルジョンは、揮発性アルコールを０．０５％ｗ／ｗ〜１５％ｗ／ｗ、好ましくは５％ｗ／ｗ〜１５％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンに水が含まれない場合）、あるいは１％ｗ／ｗ〜１０％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンが水を１０％超含有している場合）、より好ましくは１％ｗ／ｗ〜６％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンが水を１０％超含有している場合）、あるいは７％ｗ／ｗ〜１０％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンに水が含まれない場合）、さらにより好ましくは２％ｗ／ｗ〜５．５％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンが水を１０％超含有している場合）、あるいは９％ｗ／ｗ〜１０％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンに水が含まれない場合）含んでなる。
【００４３】
好ましい実施態様では、揮発性アルコールはエタノールである。
【００４４】
特別の実施態様では、本発明のマイクロエマルジョンは、エタノールを０．０５％ｗ／ｗ〜１５％ｗ／ｗ、好ましくは５％ｗ／ｗ〜１５％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンに水が含まれない場合）、あるいは１％ｗ／ｗ〜１０％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンが水を１０％超含有している場合）、より好ましくは１％ｗ／ｗ〜６％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンが水を１０％超含有している場合）、あるいは７％ｗ／ｗ〜１０％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンに水が含まれない場合）、さらにより好ましくは２％ｗ／ｗ〜５．５％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンが水を１０％超含有している場合）、あるいは９％ｗ／ｗ〜１０％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンに水が含まれない場合）含んでなる。
【００４５】
本発明の医薬マイクロエマルジョン中の成分ｅ）は２−（２−エトキシエトキシ）エタノールである。
【００４６】
２−（２−エトキシエトキシ）エタノールはトランスクトール（transcutol）という名称で市販されている。
【００４７】
特別の実施態様では、本発明のマイクロエマルジョンは、２−（２−エトキシエトキシ）エタノールを１５％ｗ／ｗ〜２５％ｗ／ｗ、好ましくは２０％ｗ／ｗ〜２５％ｗ／ｗ、より好ましくは２０％ｗ／ｗ〜２３％ｗ／ｗ含んでなる。
【００４８】
本発明の医薬マイクロエマルジョン中の成分ｆ）は中鎖トリグリセリドである。
【００４９】
本明細書で使用される場合、「中鎖トリグリセリド」または「ＭＣＴ」という用語は、グリセロールおよび炭素数６〜１２の脂肪酸のトリグリセリドトリエステルを指す。中鎖トリグリセリド中に見つかる脂肪酸は中鎖脂肪酸と呼ばれる。すべてのトリグリセリド（油脂類）と同様に、中鎖トリグリセリドはグリセロール骨格および３つの脂肪酸からなる。中鎖トリグリセリドの場合には、グリセロールに接着した脂肪酸鎖のうちの、２つまたは３つが、中間鎖の長さである。ＭＣＴの３つの脂肪酸は、同一でも異なっていてもよく、好ましくは２つの異なる脂肪酸が存在する。中鎖脂肪酸（medium fatty acids）の例は、カプロン酸またはヘキサン酸（Ｃ６：０）、カプリル酸またはオクタン酸（Ｃ８：０）、カプリン酸またはデカン酸（Ｃ１０：０）、およびラウリン酸またはドデカン酸（Ｃ１２：０）である。
【００５０】
本発明のマイクロエマルジョン中にＭＣＴの存在が存在することは、製剤の安定性に寄与するために特に有利である。実施例で示されているように、特にＭＣＴの不在下での、他の油状物（オレイン酸、イソプロピルミリスチン酸塩、オレイン酸エチルまたはトリオレインなど）の使用では、物理的安定性および化学的安定性の両方の点から安定したマイクロエマルジョンを得ることはできない。
【００５１】
特別の実施態様では、本発明のマイクロエマルジョンは、MCTを２％ｗ／ｗ〜３０％ｗ／ｗ、好ましくは１０％ｗ／ｗ〜３０％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンに水が含まれない場合）、あるいは２％ｗ／ｗ〜１０％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンが水を１０％超含有している場合）、より好ましくは１５％ｗ／ｗ〜２５％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンに水が含まれない場合）、あるいは２％ｗ／ｗ〜８％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンが水を１０％超含有している場合）、さらにより好ましくは２０％ｗ／ｗ〜２１％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンに水が含まれない場合）、あるいは４％ｗ／ｗ〜５％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンが水を１０％超含有している場合）含んでなる。
【００５２】
好ましい実施態様では、中鎖トリグリセリドはカプリル酸/カプリン酸トリグリセリドである。
【００５３】
特別の実施態様では、本発明のマイクロエマルジョンは、カプリル酸/カプリン酸トリグリセリドを２％ｗ／ｗ〜３０％ｗ／ｗ、好ましくは１０％ｗ／ｗ〜３０％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンに水が含まれない場合）、あるいは２％ｗ／ｗ〜１０％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンが水を１０％超含有している場合）、より好ましくは１５％ｗ／ｗ〜２５％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンに水が含まれない場合）、あるいは２％ｗ／ｗ〜８％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンが水を１０％超含有している場合）、さらにより好ましくは２０％ｗ／ｗ〜２１％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンに水が含まれない場合）、あるいは４％ｗ／ｗ〜５％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンが水を１０％超含有している場合）含んでなる。
【００５４】
本発明の医薬マイクロエマルジョン中の成分ｇ）は、ＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤または界面活性剤の混合物である。
【００５５】
本明細書で使用される場合、「界面活性剤」という用語は、２つの液体の間または液体と固体の間の表面張力または界面張力を低下させる化合物を指す。界面活性剤は、洗剤、湿潤剤、乳化剤、発泡剤および分散剤としての役割を果たすことがある。
【００５６】
「ＨＬＢ」という用語は、親水性−親油性バランスを指し、界面活性剤が親水性であるか脂肪親和性であるかの程度の指標となる。界面活性剤のＨＬＢ値は、文献で広く報告されている［例えば、Griffin, Journal of the Society of Cosmetic Chemists, 1949, 1, 311-326; Raymond C Rowe, Poul, J. Sheskey, Marian E Quinn (Eds)、Handbook of pharmaceutical excipients、Pharmaceutical PressおよびAmerican Pharmacists Associationにより出版、第６版、2009を参照のこと］。本発明のマイクロエマルジョン中に２つ以上の界面活性剤が存在する場合、当該２つ以上の非イオン性界面活性剤の混合物の合計ＨＬＢｔ値は、２つ以上の非イオン性界面活性剤（次の方程式（１）を参照のこと）のＨＬＢ値の重量平均として計算される：
ＨＬＢｔ＝（ΣＷｉ・ＨＬＢｉ）／（ΣＷｉ）    方程式（１）
［式中、ＷｉおよびＨＬＢｉは、ｉ番目の非イオン性界面活性剤の重量およびＨＬＢ値をそれぞれ示す］。
【００５７】
本発明で使用することができる、ＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤は、特にポリソルベートおよびポロキサマーである。
【００５８】
ポリソルベートは、ラウリン酸、パルミチン酸、ステアリン酸およびオレイン酸などの脂肪酸を有するソルビタンのエステルを指す。ポリソルベート部分に続く数は、分子のポリオキシエチレンソルビタン部分に関連した脂肪酸の種類と関係する。モノラウレートは２０として示され、モノパルミテートは４０として示され、モノステアレートは６０として示され、モノオレエートは８０として示される。本発明で使用することができるＨＬＢ値が１０〜１８であるポリソルベートの非限定的な例としては、ポリソルベート−２０、ポリソルベート−２１、ポリソルベート−４０、ポリソルベート−６０、ポリソルベート−６５、ポリソルベート８０およびポリソルベート−８１である。
【００５９】
ポロキサマーはポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマーを指す。本発明で使用することができるＨＬＢ値が１０〜１８であるポロキサマーの非限定的な例としては、ポロキサマー１８４およびポロキサマー１８５である。特定のポロキサマーには数が続き、その最初の２桁は、１００を掛けると、コポリマーのポリオキシプロピレン部分のおよその平均分子量に相当し、３番目の桁数は、１０を掛けると、ポリオキシエチレン部分の重量パーセントに相当する。
【００６０】
界面活性剤の混合物を使用することができる。
【００６１】
特別の実施態様では、本発明のマイクロエマルジョンは、ＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤または界面活性剤の混合物を、１０％ｗ／ｗ〜５０％ｗ／ｗ、好ましくは１０％ｗ／ｗ〜３０％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンに水が含まれない場合）、あるいは２０％ｗ／ｗ〜５０％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンが水を１０％超含有している場合）、より好ましくは１０％ｗ／ｗ〜２０％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンに水が含まれない場合）、あるいは３５％ｗ／ｗ〜４５％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンが水を１０％超含有している場合）含んでなる。
【００６２】
好ましい実施態様では、界面活性剤はポリソルベート８０である。Tween８０としても知られている「ポリソルベート８０」という用語は、食品および化粧品でも使用されることが多い非イオン性界面活性剤および乳化剤を指す。この合成化合物は、ポリエトキシ化したソルビタンおよびオレイン酸に由来する粘性の水溶性の黄色液体である。その完全な化学名は、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレアートまたは（ｘ）−ソルビタンモノ−９−オクタデセノエートポリ（オキシ−１，２−エタンジイル）である。その化学式は次のとおりである。
【化３】
2019504878.tif 000004
【００６３】
特別の実施態様では、本発明のマイクロエマルジョンは、ポリソルベート８０を、１０％ｗ／ｗ〜５０％ｗ／ｗ、好ましくは１０％ｗ／ｗ〜２０％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンに水が含まれない場合）、あるいは２０％ｗ／ｗ〜３０％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンが水を１０％超含有している場合）、より好ましくは１０％ｗ／ｗ〜１５％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンに水が含まれない場合）、あるいは２２％ｗ／ｗ〜３０％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンが水を１０％超含有している場合）含んでなる。
【００６４】
別の好ましい実施態様では、特にマイクロエマルジョンが水を１０％超含有している場合、界面活性剤はポリソルベート８０とポリソルベートの２０の混合物である。
【００６５】
Ｔｗｅｅｎ２０としても知られている「ポリソルベート２０」という用語は、食品および化粧品でも使用されることが多い非イオン性界面活性剤および乳化剤を指す。この合成化合物は、ポリエトキシ化したソルビタンおよびラウリン酸に由来する粘性の水溶性の黄色液体である。その完全な化学名は、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレートである。その化学式は次のとおりである。
【化４】
2019504878.tif 000005
【００６６】
特別の実施態様では、本発明のマイクロエマルジョンは、ポリソルベート８０を２０％ｗ／ｗ〜３０％ｗ／ｗおよびポリソルベート２０を１０％ｗ／ｗ〜２０％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンが水を１０％超含有している場合）、より好ましくは、ポリソルベート８０を２５％ｗ／ｗ〜３０％ｗ／ｗおよびポリソルベート２０を１０％ｗ／ｗ〜１５％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンが水を１０％超含有している場合）含んでなる。
【００６７】
成分ｈ）、即ち水は、本発明の医薬マイクロエマルジョン中に場合により存在する。
【００６８】
一実施態様では、本発明のマイクロエマルジョン中に水が存在する。特別の実施態様では、本発明のマイクロエマルジョンは、水を、１０％ｗ／ｗ超、好ましくは１５％ｗ／ｗ〜２５％ｗ／ｗ、より好ましくは１７％ｗ／ｗ〜２１％ｗ／ｗ含んでなる。別の実施態様では、本発明のマイクロエマルジョンには水が含まれない。
【００６９】
本発明のマイクロエマルジョンを特徴づける場合の「水を含まない（water-free）」という用語は、実質的に水を含まないマイクロエマルジョンを指す。しかしながら、本発明の水を含まないマイクロエマルジョンは、製剤の残りの成分からのわずかな量の水を含有しているかもしれない。特に、本発明の水を含まないマイクロエマルジョンには、２％ｗ／ｗを超える水が含まれない。本発明の水を含まないマイクロエマルジョンは、水を０％ｗ／ｗ〜２％ｗ／ｗの間含んでなっていてもよい。特に、水の存在に明示的な言及がされていない限り、本発明のマイクロエマルジョンには、実質的に水が含まれない、即ち、２％ｗ／ｗ超の水が含まれない。本発明の水を含まないマイクロエマルジョンは有利的な官能特性および皮膚上への伸長性を有している。
【００７０】
成分ｉ）は、本発明の医薬マイクロエマルジョン中に場合により存在し、トリアセチンである。
【００７１】
本明細書で使用される場合、「トリアセチン」という用語は、トリグリセリド１，２，３−トリアセトキシプロパンであり、三酢酸グリセリンまたは１，３−ジアセチルオキシプロパン−２−イル−アセテートとしても知られ、その化学式は以下の通りである。
【化５】
2019504878.tif 000006
【００７２】
一実施態様では、トリアセチンは本発明のマイクロエマルジョン中に存在する。特別の実施態様では、本発明のマイクロエマルジョンは、トリアセチンを１０％ｗ／ｗ〜２０％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンに水が含まれない場合）、より好ましくは１５％ｗ／ｗ〜２０％ｗ／ｗ（特に、マイクロエマルジョンに水が含まれない場合）含んでなる。好ましくは、トリアセチンを含んでなる本発明のマイクロエマルジョン中に水は存在しない。好ましくは、水を含んでなる本発明のマイクロエマルジョン中にトリアセチンは存在しない。
【００７３】
好ましい実施態様において、本発明のマイクロエマルジョンは、
（ａ）１％ｗ／ｗ〜７％ｗ／ｗのシクロスポリンＡ、
（ｂ）０．０２％ｗ／ｗ〜５％ｗ／ｗのポリ（メチルビニルエーテル−コ−無水マレイン酸）（ＰＶＭ／ＭＡ）コポリマーのＣ１−４半アルキルエステル、
（ｃ）５％ｗ／ｗ〜１５％ｗ／ｗの、２−（２−エトキシエトキシ）エタノールおよびＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤以外の、成分（ｂ）を溶解化させることができる非揮発性有機溶媒、
（ｄ）０．０５％ｗ／ｗ〜１５％ｗ／ｗの揮発性アルコール、
（ｅ）２０％ｗ／ｗ〜２５％ｗ／ｗの２−（２−エトキシエトキシ）エタノール、
（ｆ）２％ｗ／ｗ〜３０％ｗ／ｗの中鎖トリグリセリド、
（ｇ）１０％ｗ／ｗ〜５０％ｗ／ｗの、ＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤または界面活性剤の混合物、
（ｈ）場合により１５％ｗ／ｗ〜２５％ｗ／ｗの水、ならびに
（ｉ）場合により１０％ｗ／ｗ〜２０％ｗ／ｗのトリアセチン
を含んでなり、ここで、ｗ／ｗは、マイクロエマルジョンの総重量に対する各成分の重量である。
【００７４】
別の好ましい実施態様において、本発明のマイクロエマルジョンは、
（ａ）１％ｗ／ｗ〜７％ｗ／ｗのシクロスポリンＡ、
（ｂ）０．０２％ｗ／ｗ〜５％ｗ／ｗのポリ（メチルビニルエーテル−コ−無水マレイン酸）（ＰＶＭ／ＭＡ）コポリマーのＣ１−４半アルキルエステル、
（ｃ）５％ｗ／ｗ〜１５％ｗ／ｗの、２−（２−エトキシエトキシ）エタノールおよびＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤以外の、成分（ｂ）を溶解化させることができる非揮発性有機溶媒、
（ｄ）０．０５％ｗ／ｗ〜１５％ｗ／ｗの揮発性アルコール、
（ｅ）２０％ｗ／ｗ〜２５％ｗ／ｗの２−（２−エトキシエトキシ）エタノール、
（ｆ）２％ｗ／ｗ〜３０％ｗ／ｗの中鎖トリグリセリド、
（ｇ）１０％ｗ／ｗ〜５０％ｗ／ｗの、ＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤または界面活性剤の混合物、ならびに
（ｈ）１５％ｗ／ｗ〜２５％ｗ／ｗの水
を含んでなり、ここで、ｗ／ｗは、マイクロエマルジョンの総重量に対する各成分の重量である。
【００７５】
別の好ましい実施態様において、本発明のマイクロエマルジョンは、
（ａ）１％ｗ／ｗ〜７％ｗ／ｗのシクロスポリンＡ、
（ｂ）０．０２％ｗ／ｗ〜５％ｗ／ｗのポリ（メチルビニルエーテル−コ−無水マレイン酸）（ＰＶＭ／ＭＡ）コポリマーのＣ１−４半アルキルエステル、
（ｃ）５％ｗ／ｗ〜１５％ｗ／ｗの、２−（２−エトキシエトキシ）エタノールおよびＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤以外の、成分（ｂ）を溶解化させることができる非揮発性有機溶媒、
（ｄ）０．０５％ｗ／ｗ〜１５％ｗ／ｗの揮発性アルコール、
（ｅ）２０％ｗ／ｗ〜２５％ｗ／ｗの２−（２−エトキシエトキシ）エタノール、
（ｆ）２％ｗ／ｗ〜３０％ｗ／ｗの中鎖トリグリセリド、
（ｇ）１０％ｗ／ｗ〜５０％ｗ／ｗの、ＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤または界面活性剤の混合物、ならびに
（ｉ）場合により１０％ｗ／ｗ〜２０％ｗ／ｗのトリアセチン
を含んでなり、ここで、ｗ／ｗは、マイクロエマルジョンの総重量に対する各成分の重量である。
【００７６】
別の好ましい実施態様において、本発明のマイクロエマルジョンは、
（ａ）１％ｗ／ｗ〜７％ｗ／ｗのシクロスポリンＡ、
（ｂ）０．０２％ｗ／ｗ〜５％ｗ／ｗのポリ（メチルビニルエーテル−コ−無水マレイン酸）（ＰＶＭ／ＭＡ）コポリマーのＣ１−４半アルキルエステル、
（ｃ）５％ｗ／ｗ〜１５％ｗ／ｗの、２−（２−エトキシエトキシ）エタノールおよびＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤以外の、成分（ｂ）を溶解化させることができる非揮発性有機溶媒、
（ｄ）５％ｗ／ｗ〜１５％ｗ／ｗの揮発性アルコール、
（ｅ）２０％ｗ／ｗ〜２５％ｗ／ｗの２−（２−エトキシエトキシ）エタノール、
（ｆ）１０％ｗ／ｗ〜３０％ｗ／ｗの中鎖トリグリセリド、
（ｇ）１０％ｗ／ｗ〜２０％ｗ／ｗの、ＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤または界面活性剤の混合物、ならびに
（ｉ）１０％ｗ／ｗ〜２０％ｗ／ｗのトリアセチン
を含んでなり、ここで、ｗ／ｗは、マイクロエマルジョンの総重量に対する各成分の重量である。
【００７７】
別の好ましい実施態様において、本発明のマイクロエマルジョンは、
（ａ）１％ｗ／ｗ〜７％ｗ／ｗのシクロスポリンＡ、
（ｂ）０．０２％ｗ／ｗ〜５％ｗ／ｗのポリ（メチルビニルエーテル−コ−無水マレイン酸）（ＰＶＭ／ＭＡ）コポリマーのＣ１−４半アルキルエステル、
（ｃ）１０％ｗ／ｗ〜１５％ｗ／ｗの、２−（２−エトキシエトキシ）エタノールおよびＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤以外の、成分（ｂ）を溶解化させることができる非揮発性有機溶媒、
（ｄ）５％ｗ／ｗ〜１５％ｗ／ｗの揮発性アルコール、
（ｅ）２０％ｗ／ｗ〜２５％ｗ／ｗの２−（２−エトキシエトキシ）エタノール、
（ｆ）１５％ｗ／ｗ〜２５％ｗ／ｗの中鎖トリグリセリド、
（ｇ）１０％ｗ／ｗ〜１５％ｗ／ｗの、ＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤または界面活性剤の混合物、ならびに
（ｉ）１５％ｗ／ｗ〜２０％ｗ／ｗのトリアセチン
を含んでなり、ここで、ｗ／ｗは、マイクロエマルジョンの総重量に対する各成分の重量である。
【００７８】
別の好ましい実施態様において、本発明のマイクロエマルジョンは、
（ａ）１％ｗ／ｗ〜７％ｗ／ｗのシクロスポリンＡ、
（ｂ）０．０２％ｗ／ｗ〜１％ｗ／ｗのＰＶＭ／ＭＡコポリマーの半ｎ−ブチルエステル、
（ｃ）５％ｗ／ｗ〜１５％ｗ／ｗのプロピレングリコール、
（ｄ）５％ｗ／ｗ〜１５％ｗ／ｗのエタノール、
（ｅ）２０％ｗ／ｗ〜２５％ｗ／ｗの２−（２−エトキシエトキシ）エタノール、
（ｆ）１０％ｗ／ｗ〜３０％ｗ／ｗのカプリル酸／カプリン酸トリグリセリド、
（ｇ）１０％ｗ／ｗ〜２０％ｗ／ｗのポリソルベート８０、ならびに
（ｉ）１０％ｗ／ｗ〜２０％ｗ／ｗのトリアセチン
を含んでなり、ここで、ｗ／ｗは、マイクロエマルジョンの総重量に対する各成分の重量である。
【００７９】
別の好ましい実施態様において、本発明のマイクロエマルジョンは、
（ａ）１％ｗ／ｗ〜７％ｗ／ｗのシクロスポリンＡ、
（ｂ）０．０２％ｗ／ｗ〜１％ｗ／ｗのＰＶＭ／ＭＡコポリマーの半ｎ−ブチルエステル、
（ｃ）１０％ｗ／ｗ〜１５％ｗ／ｗのプロピレングリコール、
（ｄ）５％ｗ／ｗ〜１５％ｗ／ｗのエタノール、
（ｅ）２０％ｗ／ｗ〜２５％ｗ／ｗの２−（２−エトキシエトキシ）エタノール、
（ｆ）１５％ｗ／ｗ〜２５％ｗ／ｗのカプリル酸／カプリン酸トリグリセリド、
（ｇ）１０％ｗ／ｗ〜１５％ｗ／ｗのポリソルベート８０、ならびに
（ｉ）１５％ｗ／ｗ〜２０％ｗ／ｗのトリアセチン
を含んでなり、ここで、ｗ／ｗは、マイクロエマルジョンの総重量に対する各成分の重量である。
【００８０】
別の好ましい実施態様において、本発明のマイクロエマルジョンは、
（ａ）１％ｗ／ｗ〜７％ｗ／ｗのシクロスポリンＡ、
（ｂ）０．０２％ｗ／ｗ〜０．１％ｗ／ｗのＰＶＭ／ＭＡコポリマーの半ｎ−ブチルエステル、
（ｃ）１２％ｗ／ｗ〜１３％ｗ／ｗのプロピレングリコール、
（ｄ）８％ｗ／ｗ〜１０％ｗ／ｗのエタノール、
（ｅ）２０％ｗ／ｗ〜２３％ｗ／ｗの２−（２−エトキシエトキシ）エタノール、
（ｆ）２０％ｗ／ｗ〜２２％ｗ／ｗのカプリル酸／カプリン酸トリグリセリド、
（ｇ）１０％ｗ／ｗ〜１５％ｗ／ｗのポリソルベート８０、ならびに
（ｉ）１５％ｗ／ｗ〜２０％ｗ／ｗのトリアセチン
を含んでなり、ここで、ｗ／ｗは、マイクロエマルジョンの総重量に対する各成分の重量である。
【００８１】
別の好ましい実施態様において、本発明のマイクロエマルジョンは、
（ａ）１％ｗ／ｗ〜５％ｗ／ｗのシクロスポリンＡ、
（ｂ）０．０２％ｗ／ｗ〜５％ｗ／ｗのポリ（メチルビニルエーテル−コ−無水マレイン酸）（ＰＶＭ／ＭＡ）コポリマーのＣ１−４半アルキルエステル、
（ｃ）５％ｗ／ｗ〜１５％ｗ／ｗの、２−（２−エトキシエトキシ）エタノールおよびＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤以外の、成分（ｂ）を溶解化させることができる非揮発性有機溶媒、
（ｄ）１％ｗ／ｗ〜１０％ｗ／ｗの揮発性アルコール、
（ｅ）２０％ｗ／ｗ〜２５％ｗ／ｗの２−（２−エトキシエトキシ）エタノール、
（ｆ）２％ｗ／ｗ〜１０％ｗ／ｗの中鎖トリグリセリド、
（ｇ）３０％ｗ／ｗ〜５０％ｗ／ｗの、ＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤または界面活性剤の混合物、ならびに
（ｈ）１５％ｗ／ｗ〜２５％ｗ／ｗの水
を含んでなり、ここで、ｗ／ｗは、マイクロエマルジョンの総重量に対する各成分の重量である。
【００８２】
別の好ましい実施態様において、本発明のマイクロエマルジョンは、
（ａ）１％ｗ／ｗ〜５％ｗ／ｗのシクロスポリンＡ、
（ｂ）０．０２％ｗ／ｗ〜５％ｗ／ｗのポリ（メチルビニルエーテル−コ−無水マレイン酸）（ＰＶＭ／ＭＡ）コポリマーのＣ１−４半アルキルエステル、
（ｃ）５％ｗ／ｗ〜１０％ｗ／ｗの、２−（２−エトキシエトキシ）エタノールおよびＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤以外の、成分（ｂ）を溶解化させることができる非揮発性有機溶媒、
（ｄ）１％ｗ／ｗ〜６％ｗ／ｗの揮発性アルコール、
（ｅ）２０％ｗ／ｗ〜２５％ｗ／ｗの２−（２−エトキシエトキシ）エタノール、
（ｆ）２％ｗ／ｗ〜８％ｗ／ｗの中鎖トリグリセリド、
（ｇ）３５％ｗ／ｗ〜４５％ｗ／ｗの、ＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤または界面活性剤の混合物、ならびに
（ｈ）１７％ｗ／ｗ〜２１％ｗ／ｗの水
を含んでなり、ここで、ｗ／ｗは、マイクロエマルジョンの総重量に対する各成分の重量である。
【００８３】
別の好ましい実施態様において、本発明のマイクロエマルジョンは、
（ａ）１％ｗ／ｗ〜５％ｗ／ｗのシクロスポリンＡ、
（ｂ）０．０２％ｗ／ｗ〜５％ｗ／ｗのＰＶＭ／ＭＡコポリマーの半ｎ−ブチルエステル、
（ｃ）５％ｗ／ｗ〜１５％ｗ／ｗのプロピレングリコール、
（ｄ）１％ｗ／ｗ〜１０％ｗ／ｗのエタノール、
（ｅ）２０％ｗ／ｗ〜２５％ｗ／ｗの２−（２−エトキシエトキシ）エタノール、
（ｆ）２％ｗ／ｗ〜１０％ｗ／ｗのカプリル酸／カプリン酸トリグリセリド、
（ｇ）２０％ｗ／ｗ〜３０％ｗ／ｗのポリソルベート８０および１０％ｗ／ｗ〜２０％ｗ／ｗのポリソルベート２０、ならびに
（ｈ）１５％ｗ／ｗ〜２５％ｗ／ｗの水
を含んでなり、ここで、ｗ／ｗは、マイクロエマルジョンの総重量に対する各成分の重量である。
【００８４】
別の好ましい実施態様において、本発明のマイクロエマルジョンは、
（ａ）１％ｗ／ｗ〜５％ｗ／ｗのシクロスポリンＡ、
（ｂ）０．０２％ｗ／ｗ〜５％ｗ／ｗのＰＶＭ／ＭＡコポリマーの半ｎ−ブチルエステル、
（ｃ）５％ｗ／ｗ〜１０％ｗ／ｗのプロピレングリコール、
（ｄ）１％ｗ／ｗ〜１０％ｗ／ｗのエタノール、
（ｅ）２０％ｗ／ｗ〜２５％ｗ／ｗの２−（２−エトキシエトキシ）エタノール、
（ｆ）２％ｗ／ｗ〜８％ｗ／ｗのカプリル酸／カプリン酸トリグリセリド、
（ｇ）２０％ｗ／ｗ〜３０％ｗ／ｗのポリソルベート８０および１０％ｗ／ｗ〜２０％ｗ／ｗのポリソルベート２０、ならびに
（ｈ）１５％ｗ／ｗ〜２５％ｗ／ｗの水
を含んでなり、ここで、ｗ／ｗは、マイクロエマルジョンの総重量に対する各成分の重量である。
【００８５】
別の好ましい実施態様において、本発明のマイクロエマルジョンは、
（ａ）１％ｗ／ｗ〜５％ｗ／ｗのシクロスポリンＡ、
（ｂ）０．０２％ｗ／ｗ〜２％ｗ／ｗのＰＶＭ／ＭＡコポリマーの半ｎ−ブチルエステル、
（ｃ）７．５％ｗ／ｗ〜８．５％ｗ／ｗのプロピレングリコール、
（ｄ）１．５％ｗ／ｗ〜６％ｗ／ｗのエタノール、
（ｅ）２０％ｗ／ｗ〜２３％ｗ／ｗの２−（２−エトキシエトキシ）エタノール、
（ｆ）４％ｗ／ｗ〜５％ｗ／ｗのカプリル酸／カプリン酸トリグリセリド、
（ｇ）２２％ｗ／ｗ〜３０％ｗ／ｗのポリソルベート８０および１０％ｗ／ｗ〜１５％ｗ／ｗのポリソルベート２０、ならびに
（ｈ）１７％ｗ／ｗ〜２１％ｗ／ｗの水
を含んでなり、ここで、ｗ／ｗは、マイクロエマルジョンの総重量に対する各成分の重量である。
【００８６】
特別の実施態様では、マイクロエマルジョンは、本明細書に記載された実施態様のうちのいずれかで明示的に言及された成分からなり、即ち、それらは、明示的に言及されたもの以外の成分を含んでいない。
【００８７】
本発明のマイクロエマルジョンは、保存剤の使用を必要としない。したがって、別の実施態様では、マイクロエマルジョンは追加の保存剤を含有していない。本明細書で使用される場合、「追加の保存剤」とは、微生物の増殖または望ましくない化学変化による分解を防止するために医薬品に加えられる物質として理解される。追加の保存剤には抗菌添加剤および酸化防止剤が含まれる。
【００８８】
追加の保存剤を加えることは必要とされていないが、本発明のマイクロエマルジョンには保存剤が含まれてもよい。本発明のマイクロエマルジョン中で使用することができる典型的な保存剤には、限定することなく、ソルビン酸カリウム、安息香酸ナトリウム、フェノキシエタノール、ソルビン酸、チメロサール、塩化ベンズアルコニウム、パラベン類などが含まれる。
【００８９】
別の実施態様では、マイクロエマルジョンはオレイン酸を含有していない。
【００９０】
別の実施態様では、マイクロエマルジョンは追加の保存剤およびオレイン酸を含有していない。
【００９１】
本発明の組成物は安定しており、アジピン酸、ピメリン酸、アゼライン酸、セバシン酸およびフタル酸のジアルキルエステルなどのポリカルボン酸のポリアルキルエステルを使用することなく、シクロスポリンＡを高濃度で剤形化することを可能にする。
【００９２】
本明細書で使用される場合、「ポリカルボン酸のポリアルキルエステル」という用語は、ＵＳ５，８９１，８４６（これは、その定義に関して参照することによって組込まれるものとする）に開示されたポリカルボン酸のポリアルキルエステルを指し、常温で液体であるものとして定義される。合計炭素原子数が１０〜２５個であるエステルが好ましく、少なくとも２つのカルボキシル基および直鎖状または分岐状のアルコールを有するポリカルボン酸を有するエステルが好ましく、ここでこのカルボキシル基は脂肪族基、芳香族脂肪族基、または脂肪族的もしくは芳香族的に結合したカルボキシル基を有する芳香族基である。部分的エステル化合物を使用してもよい。これらのエステルは、単独で使用しても、または２種以上の混合物で使用してもよい。特定の例には、合計炭素原子数が１２〜２２個であるアジピン酸ジアルキルエステル、合計炭素原子数が１３〜２３個であるピメリン酸ジアルキルエステル、合計炭素原子数が１４〜２２個であるセバシン酸ジアルキルエステル、合計炭素原子数が１４〜２４個であるフタル酸ジアルキルエステルが挙げられる（これらのアルキル基は直鎖状でも分岐状でもよく、ジアルキルのアルキル部分は同一でも異なっていてもよい）。好ましい例は、フタル酸ジブチル、フタル酸ジエチル、フタル酸ジイソブチル、セバシン酸ジブチル、セバシン酸ジエチル、アゼライン酸ジイソプロピル、アジピン酸ジイソプロピル、アジピン酸ジブチルおよびアジピン酸ジイソブチルである。
【００９３】
したがって、特別の実施態様では、本発明のマイクロエマルジョンは、ポリカルボン酸のポリアルキルエステルを含有していない。別の特定の実施態様では、マイクロエマルジョンは追加の保存剤およびポリカルボン酸のポリアルキルエステルを含有していない。別の特別の実施態様では、マイクロエマルジョンはオレイン酸およびポリカルボン酸のポリアルキルエステルを含有していない。さらなる特別の実施態様では、マイクロエマルジョンはオレイン酸、追加の保存剤およびポリカルボン酸のポリアルキルエステルを含有していない。
【００９４】
本発明の組成物は賦形剤を含有してもよい。本明細書で使用される場合、「賦形剤」という用語は、組成物の有効成分の媒体または担体として使用される、液体、固体または半固体になり得る不活性物質を指す。添加剤の実例となる、非制限的な例は、ブチルヒドロキシトルエン（butyl hydroxytoluene：ＢＨＴ）、液体パラフィンまたはワックス、綿実油、水素化植物油、キャノーラ油、ココナッツオイルなどの溶融した脂質である。増粘剤、即ち、組成物の粘性を増大させる物質も本発明の組成物に加えてもよい。当該賦形剤はマイクロエマルジョンの製造に特に有用であり、当該マイクロエマルジョンの分散相で発見することがある。
【００９５】
当業者は、本発明のマイクロエマルジョンが、単独の有効成分としてか、または他の有効成分と組み合わせたシクロスポリンＡを含んでなる医薬組成物の形態で投与されてもよいことを知っている。
【００９６】
本発明の医薬組成物は、限定することなく、皮膚、口腔、鼻腔または直腸の経路など、異なる局所的経路によって投与することができる。好ましい実施態様では、それらは、好ましくは噴霧することによって皮膚に適用される（即ち、皮膚経路)。より好ましくは、それらはマッサージによって適用される。
【００９７】
医薬組成物の製造方法
第二の態様において、本発明は、第一の態様で定義された局所用医薬マイクロエマルジョンを製造する方法であって、
（ｉ）シクロスポリンＡおよび中鎖トリグリセリドを含んでなる均一混合物を調製する工程、
（ｉｉ）ポリ（メチルビニルエーテル−コ−無水マレイン酸）（ＰＶＭ／ＭＡ）コポリマーのＣ１−４半アルキルエステルと、揮発性アルコールと、２−（２−エトキシエトキシ）エタノールおよびＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤以外の非揮発性有機溶媒とを含んでなる均一溶液を調製する工程、
（ｉｉｉ）撹拌しながら、工程（ｉ）で得られた混合物に、工程（ｉｉ）で得られた溶液を加える工程、
（ｉｖ）２−（２−エトキシエトキシ）エタノールと、ＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤または界面活性剤の混合物と、場合によりトリアセチンとを、工程（ｉｉｉ）で得られた混合物に加えて、均一溶液が得られるまで撹拌する工程、ならびに
（ｖ）工程（ｉｖ）で得られた混合物に水を加え、均一溶液が得られるまで撹拌する工程
を含んでなる方法に関する。
【００９８】
工程（ｉ）は、好ましくは室温（２０℃〜２５℃）で、シクロスポリンＡおよび中鎖トリグリセリドを混合して、シクロスポリンＡが完全に溶解するまで、または均質の懸濁物が得られるまで撹拌することを含んでなる。特に、混合は少なくとも１時間実施する。
【００９９】
工程（ｉｉ）は、好ましくは室温（２０℃〜２５℃）で、ポリ（メチルビニルエーテル−コ−無水マレイン酸）（ＰＶＭ／ＭＡ）コポリマーのＣ１−４半アルキルエステル、揮発性アルコールならびに２−（２−エトキシエトキシ）エタノールおよびＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤以外の非揮発性有機溶媒を混合して、コポリマーが完全に溶解するまで撹拌することを含んでなる。
【０１００】
工程（ｉｉｉ）は、好ましくは室温（２０℃〜２５℃）で、撹拌しながら工程（ｉ）で得られたシクロスポリンＡ混合物に工程（ｉｉ）で得られたコポリマー溶液を加えることを含んでなる。
【０１０１】
工程（ｉｖ）は、好ましくは室温（２０℃〜２５℃）で、２−（２−エトキシエトキシ）エタノール、ＨＬＢ値が１０〜１８である界面活性剤または界面活性剤の混合物、および場合によりトリアセチンを、工程（ｉｉｉ）で得られた混合物に加えて、均一溶液が得られるまで撹拌することを含んでなる。他の賦形剤が本発明のマイクロエマルジョン中に存在する場合、それらはこの工程で加えられる。工程ｉｖ）の終わりに、透明な溶液が得られるが、これはマイクロエマルジョンが形成されたことを示すものである。
【０１０２】
最後に、水を含んでなる本発明のマイクロエマルジョンについては、工程（ｖ）が行われる。この工程は、好ましくは室温（２０℃〜２５℃）で、工程（ｉｖ）で得られた混合物に水を加えて均一溶液が得られるまで撹拌することを含んでなる。
【０１０３】
本発明の組成物の文脈で示された特定の実施態様はすべて、本発明の方法に適用可能である。
【０１０４】
医薬組成物の医療用途
本発明の医薬組成物は、シクロスポリンＡで局所治療することが可能な疾患の全ての治療に適用することができ、当該疾患は、本文書の背景技術の欄に開示されているものである。
【０１０５】
よって、第三の態様では、本発明は、医薬、特にヒトにまたは家畜に使用するための医薬として使用するための、本発明の局所用医薬マイクロエマルジョンに関する。
【０１０６】
第四の態様では、本発明は、乾癬、アトピー性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、壊疽性膿皮症、不応性難治性特発性じんましん、発汗異常性湿疹、ベーチェット病、毛孔性紅色粃糠疹、皮膚筋炎、尋常性天疱瘡、良性家族性天疱瘡、落葉状天疱瘡およびエリテマトーデス、栄養障害性表皮水疱症、光線皮膚症、扁平苔癬、結節性痒疹、円形脱毛症、好酸球性膿疱性毛嚢炎、肉芽腫性の毛嚢炎 およびせつ腫症、ミュラー毛嚢炎 、汗腺膿瘍、強皮症、白斑、好酸球性肉芽腫複合体、肛門周囲ろうこう、皮脂腺炎、若年性蜂巣炎、小水疱性皮膚紅斑性エリテマトーデス、多形性紅斑、円板状エリテマトーデス、無菌性結節性脂肪織炎、中足骨瘻孔、鼻の動脈炎、鼻の人中の潰瘍性皮膚症、顔の皮膚炎、無菌性肉芽腫または膿肉芽腫症候群、萎縮性脱毛症、皮膚反応性ヒスティオサイトーシス、ネコ形質細胞足皮膚炎、脈管炎および虚血性皮膚症;好ましくは、乾癬、アトピー性皮膚炎またはアレルギー性皮膚炎からなる群から選択された疾患の予防および／または治療に使用するための、第一の態様で定義された局所用医薬マイクロエマルジョンに関する。
【０１０７】
別の態様では、本発明は、乾癬、アトピー性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、壊疽性膿皮症、不応性難治性特発性じんましん、発汗異常性湿疹、ベーチェット病、毛孔性紅色粃糠疹、皮膚筋炎、尋常性天疱瘡、良性家族性天疱瘡、落葉状天疱瘡およびエリテマトーデス、栄養障害性表皮水疱症、光線皮膚症、扁平苔癬、結節性痒疹、円形脱毛症、好酸球性膿疱性毛嚢炎、肉芽腫性の毛嚢炎 およびせつ腫症、ミュラー毛嚢炎 、汗腺膿瘍、強皮症、白斑、好酸球性肉芽腫複合体、肛門周囲ろうこう、皮脂腺炎、若年性蜂巣炎、小水疱性皮膚紅斑性エリテマトーデス、多形性紅斑、円板状エリテマトーデス、無菌性結節性脂肪織炎、中足骨瘻孔、鼻の動脈炎、鼻の人中の潰瘍性皮膚症、顔の皮膚炎、無菌性肉芽腫または膿肉芽腫症候群、萎縮性脱毛症、皮膚反応性ヒスティオサイトーシス、ネコ形質細胞足皮膚炎、脈管炎および虚血性皮膚症；好ましくは乾癬、アトピー性皮膚炎またはアレルギー性皮膚炎からなる群から選択された疾患の予防および／または治療に使用するための医薬の製造のための、本発明の局所用医薬マイクロエマルジョンの使用に関する。
【０１０８】
別の態様では、本発明は、乾癬、アトピー性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、壊疽性膿皮症、不応性難治性特発性じんましん、発汗異常性湿疹、ベーチェット病、毛孔性紅色粃糠疹、皮膚筋炎、尋常性天疱瘡、良性家族性天疱瘡、落葉状天疱瘡およびエリテマトーデス、栄養障害性表皮水疱症、光線皮膚症、扁平苔癬、結節性痒疹、円形脱毛症、好酸球性膿疱性毛嚢炎、肉芽腫性の毛嚢炎 およびせつ腫症、ミュラー毛嚢炎 、汗腺膿瘍、強皮症、白斑、好酸球性肉芽腫複合体、肛門周囲ろうこう、皮脂腺炎、若年性蜂巣炎、小水疱性皮膚紅斑性エリテマトーデス、多形性紅斑、円板状エリテマトーデス、無菌性結節性脂肪織炎、中足骨瘻孔、鼻の動脈炎、鼻の人中の潰瘍性皮膚症、顔の皮膚炎、無菌性肉芽腫または膿肉芽腫症候群、萎縮性脱毛症、皮膚反応性ヒスティオサイトーシス、ネコ形質細胞足皮膚炎、脈管炎および虚血性皮膚症、好ましくは乾癬、アトピー性皮膚炎またはアレルギー性皮膚炎疾患からなる群から選択された疾患を患う対象を予防および／または治療する方法であって、該対象に本発明の局所用医薬マイクロエマルジョンを投与することを含んでなる方法に関する。
【０１０９】
上で定義された態様のうちの一つの特別の実施態様では、疾患は乾癬である。
【０１１０】
上で定義された態様のうちの別の特別の実施態様では、疾患はアトピー性皮膚炎である。
【０１１１】
上で定義された態様のうちの別の特別の実施態様では、疾患はアレルギー性皮膚炎である。
【０１１２】
上で定義された態様のうちの別の特別の実施態様では、疾患は乾癬またはアトピー性皮膚炎である。
【０１１３】
本明細書で使用される場合、「予防」という用語は、疾患の最初または初期段階での本発明のマイクロエマルジョンの投与、またはその発病の防止を指す。
【０１１４】
本明細書で使用される場合、「治療」という用語は、臨床的兆候が現われる前または現われた後に障害の進行を制御するための本発明のマイクロエマルジョンの投与を定めために使用する。障害の進行を制御するとは、限定することなく、症状の低減、障害の長さの縮小、病理状態の安定化（特に、さらなる悪化の回避）、障害進行の遅延、病理状態の改善および寛解（部分的および完全の両方）を含む有益または所望される臨床結果を定めることを意味する。本発明の特別の実施態様では、本発明のマイクロエマルジョンは、少なくとも１つの障害の臨床的症状が現われた後に、障害の進行を制御するために使用される。
【０１１５】
本明細書で使用される場合、「医薬（medicament）」という用語は、シクロスポリンＡを含んでなる本発明の医薬マイクロエマルジョンを指す。医薬は任意の好適な局所経路によって投与してもよい。それは薬学的に許容可能な賦形剤で従来の手段によって調製される。皮膚上への適用のための製剤が好ましい。
【０１１６】
本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、上で開示された疾患のうちの１つを患っている任意の動物またはヒトを指す。好ましくは、対象は哺乳類である。本明細書で使用される場合、「哺乳類」という用語は、限定することなく、家畜（domestic animal）および農場動物（farm animal）（ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコまたはげっ歯類）、霊長類、およびヒトを含む任意の哺乳類の種を指す。好ましくは、哺乳動物は、ヒト、イヌ、ネコおよびウマから選択される。本発明の文脈では、哺乳動物は、乾癬、アトピー性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、壊疽性膿皮症、不応性難治性特発性じんましん、発汗異常性湿疹、ベーチェット病、毛孔性紅色粃糠疹、皮膚筋炎、尋常性天疱瘡、良性家族性天疱瘡、落葉状天疱瘡およびエリテマトーデス、栄養障害性表皮水疱症、光線皮膚症、扁平苔癬、結節性痒疹、円形脱毛症、好酸球性膿疱性毛嚢炎、肉芽腫性の毛嚢炎 およびせつ腫症、ミュラー毛嚢炎 、汗腺膿瘍、強皮症、白斑、好酸球性肉芽腫複合体、肛門周囲ろうこう、皮脂腺炎、若年性蜂巣炎、小水疱性皮膚紅斑性エリテマトーデス、多形性紅斑、円板状エリテマトーデス、無菌性結節性脂肪織炎、中足骨瘻孔、鼻の動脈炎、鼻の人中の潰瘍性皮膚症、顔の皮膚炎、無菌性肉芽腫または膿肉芽腫症候群、萎縮性脱毛症、皮膚反応性ヒスティオサイトーシス、ネコ形質細胞足皮膚炎、脈管炎および虚血性皮膚症、好ましくは乾癬からなる群から選択される疾患を患っているか、または当該疾患の１つを患う危険性があるものである。
【０１１７】
本発明の組成物の文脈で開示された実施態様はすべて、本発明の医薬組成物の医療用途に適用可能である。
【０１１８】
本発明は、幾つかの実施例によって説明され、それらは本発明を限定するのではなく、むしろ説明するものである。
【実施例】
【０１１９】
１．材料
シクロスポリンＡをＣｏｎｃｏｒｄｅ  Ｂｉｏｔｈｅｃｈ  Ｌｔｄから購入した。カプリル酸／カプリン酸トリグリセリド（ＭＣＴ）、プロピレングリコール、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ（商標）８０）、ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ（商標）２０）およびミリスチン酸イソプロピル（ＩＰＭ）を、Ｇｕｉｎａｍａから購入した。Ｇａｎｔｒｅｚ（商標）ＥＳ（ポリ（メチルビニルエーテル−マレイン酸モノブチルエステル）（ＧＥＳ４２５）およびオレイン酸エチルをＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから購入した。２−（２−エトキシエトキシ）エタノールＰ（商標）をＦａｇｒｏｎから購入した。トリアセチン、無水エタノールおよびオレイン酸をＰａｎｒｅａｃから購入した。アセトニトリルＨＰＬＣ等級はＭｅｒｃｋから購入した。
【０１２０】
２．機器
−生物学的および細胞増殖抑制性の安全キャビネット、Ｔｅｌｓｔａｒ、Ｃｙｔｏｓｔａｒ、２９０４５。
−化学てんびん。Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ、ＸＡ  ２０４  Ｄｅｌｔａ  Ｒａｎｇｅ。
−化学てんびん。ＯＨＡＵＳ、ＰＡ１１４Ｃ。
−超音波浴。Ｂａｎｄｅｌｉｎ、Ｓｏｎｏｒｅｘ  Ｄｉｇｉｔｅｃ    ＤＴ１００Ｈ。
−加熱ストーブ。ＩＮＤＥＬＡＢ、ＩＤＬ−ＣＤ−１２０。
−気候室。ＭＥＭＭＥＲＴ、ＨＰＰ  １０８。
−浄水装置。Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｄｉｒｅｃｔ  Ｑ  ３ＵＶ。
−オートクレーブ。Ｒａｙｐａ，  ＡＨ−２１Ｎ２。
【０１２１】
３．局所適用のためのシクロスポリンＡ製剤
以下の製剤を調製した:
【０１２２】
【表１】
2019504878.tif 000007
【０１２３】
【表２】
2019504878.tif 000008
【０１２４】
例１〜８の製剤５ｇを以下の方法によって製造した：
−薬液の調製：必要量のシクロスポリンＡを計量し、次に、対応する量の油（即ち、オレイン酸、オレイン酸エチル、ＭＣＴまたはＩＰＭ）を加えた。この溶液を少なくとも１時間室温にて磁気撹拌下で維持した。
−ポリマー溶液：適正量のＧＥＳ４２５を必要量のエタノールおよびプロピレングリコールと、ポリマーが完全に溶解するまで連続的に撹拌しながら混合した。
−賦形剤の添加：前に記載した薬液に、連続的に撹拌しながらポリマー溶液を加えられた。その後、製剤組成物により必要とされる残りの成分を、次の順序で加えた：２−（２−エトキシエトキシ）エタノール、Ｔｗｅｅｎ２０、８０およびトリアセチンおよび／またはジメチルイソソルビド。透明な均質溶液が得られるまで、混合物を室温にて激しい磁気撹拌下で維持した。
−水性混合物：適用可能な場合、対応する量の水を前の混合物に加えた。均一混合物が達成されるまで、最終製剤を室温にて磁気撹拌下で維持した。
【０１２５】
さらに、例６の製剤１００ｇおよび例７〜８の製剤２００ｇを上記と同一の手順に従い製造した。
【０１２６】
例９および１０の製剤５０ｇを以下の方法によって製造した：
−薬液の調製：必要量のシクロスポリンＡを加えた対応する量のＭＣＴと混合した。この溶液を少なくとも3時間室温にて磁気撹拌下で維持した。
−ポリマー溶液：必要量のエタノール、プロピレングリコールおよびＧＥＳ４２５を混合し、溶液が視覚的に透明で均一になるまで、少なくとも１時間室温にて磁気撹拌下で維持した。
−賦形剤の添加：前に記載した薬液に、一定の磁気撹拌下で、ポリマー溶液である２−（２−エトキシエトキシ）エタノール、Ｔｗｅｅｎ８０およびトリアセチンをこの順序で加えた。透明な均質溶液が得られるまで、混合物を室温にて少なくとも５時間撹拌した。
これらの製剤は、噴霧による投与に好適な特性を示した。
【０１２７】
４．安定性研究
物理的安定性
前に例６〜８で記載したシクロスポリンＡで満たした局所用ポリマー製剤（１〜３ｍＬ）を、４０℃および７５％ＲＨにて１週間維持した。その後、それらをストレス条件下（即ち、−２０℃で１５時間、続けて８０℃で２時間の凍結サイクルを３回）に置いた。製剤はすべて肉眼での検証により安定していた（即ち、製剤は透明なままであった）。
【０１２８】
例１〜８のシクロスポリンＡで満たした局所用ポリマー製剤（５ｇ）を、２５℃および６０％ＲＨ、４０℃および７５％ＲＨで維持した。２５℃および６０％ＲＨ、４０℃および７５％ＲＨでの５日間の保管後に例１の製剤で安定性が失われたことが観察された（白濁した沈殿物の存在）。また、例２および３の製剤については、２５℃および６０％ＲＨでそれぞれ１３日および１９日間保管した後に安定性が失われたことが観察された（白濁した沈殿物の存在）。また、例５の製剤については、４０℃および７５％ＲＨで６週間保管した後に安定性が失われ、それは若干橙色になり、粘性を失った。肉眼での検証により、例４および６〜８の製剤は、８週間および６か月（長期安定性）後に安定性を維持した（即ち、製剤は透明なまま維持された）。
【０１２９】
例９および１０のシクロスポリンＡで満たした局所用ポリマー製剤（５０ｇ）は、２５℃および６０％ＲＨ、４０℃および７５％ＲＨで維持した。肉眼での検証により、これら製剤は、２および６週間後ならびに６か月後に安定性を維持した（即ち、製剤は透明なまま維持された）。
【０１３０】
化学的安定性
例１〜８のシクロスポリンＡで満たした局所用ポリマー製剤（５ｇ）を、６週間、４０℃および７５％ＲＨで維持した。製剤は６週間の保管前後にＨＰＬＣクロマトグラフィーによって分析した。
【０１３１】
ＨＰＬＣクロマトグラフィー条件：
−分析カラム：Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−Ｃ１８（２５０×４．６ｍｍ）５μｍ、
−カラム温度：７０℃、
−移動相：ＡＣＮ：Ｈ２Ｏ（７５：２５）、
−流速：２ｍＬ／分、
−射出量：５μＬ、その後移動相でのニードル洗浄、
−検出波長：流路６０ｍｍでの高性能フローセルを用いて２１０ｎｍ。
【０１３２】
例９および１０のシクロスポリンＡで満たした局所用ポリマー製剤（５０ｇ）を、２５℃および６０％ＲＨ、４０℃および７５％ＲＨで維持した。製剤は２および６週間の保管前（ｔ＝０）と後、ならびに６か月後にＨＰＬＣクロマトグラフィーによって分析した。
【０１３３】
ＨＰＬＣクロマトグラフィー条件：
−分析カラム：Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−Ｃ１８（２５０×４．６ｍｍ）５μｍ、次のガードカラム：Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−Ｃ１８（２５０×４．６ｍｍ）で１００Å
−カラム温度：７０℃、
−移動相：ＡＣＮ：Ｈ２Ｏ（７５：２５）、
−流速：２ｍＬ／分、
−射出量：５μＬ、その後移動相でのニードル洗浄、
−検出波長：流路６０ｍｍでの高性能フローセルを用いて２１０ｎｍ。
【０１３４】
各製剤について、相対誤差を、保管期間後の濃度に対する保管前のシクロスポリンＡの濃度として計算し、％で表現した。相対誤差が５％未満である製剤は化学的に安定していると考えられた。相対誤差が５％以上である製剤は化学的に不安定であると考えられた。
【０１３５】
２５℃および６０％ＲＨ、４０℃および７５％ＲＨで、6週間保管した後の例４および５の製剤は不安定であった一方、例６〜８の製剤は、６週間および６か月間保管した後に安定性を維持した。例９および１０の製剤は２５℃および６０％ＲＨ、４０℃および７５％ＲＨで、２および６週間、ならびに６か月間保管した後に安定性を維持した。
【０１３６】
カプセル化効率
以下の方程式を用いてカプセル化効率を計算した。
【０１３７】
【数１】
2019504878.tif 000009
【０１３８】
式中、シクロスポリンＡ（ＣｙＡ）の合計量は、化学的安定性に関する上記の方法を使用して、ＨＰＬＣによって決定し、シクロスポリンＡ（ＣｙＡ）の遊離量（free amount）は、上記と同一のＨＰＬＣ法によって決定したが、製剤は水で２０倍に希釈し、３０分間、１００００ｘｇで、遠心濾過チューブ（５０ｋＤａの膜）で濾過し、次に、結果として生じた濾過した溶液は、ＨＰＬＣ分析の前にアセトニトリルで２０倍に希釈した。
【０１３９】
カプセル化効率は、好ましくは９５％超であるべきである。
【０１４０】
例６〜８の製剤のＥＥは、２５℃および６０％ＲＨ、４０℃および７５％ＲＨで３か月間および６か月間保管した後に＞９８％であった。また、例９〜１０の製剤のＥＥは、２５℃および６０％ＲＨ、４０℃および７５％ＲＨで２および６周間後ならびに６か月間保管した後に９８％であった。
【０１４１】
５．経皮吸収
フランツ拡散セルでの経皮吸収研究を行い、例６〜８の製剤中に存在するシクロスポリンＡの皮膚への浸透度合いを評価した。各製剤（２５〜３５ｍｇ）は、４００±３０μｍの最終的な厚さで採皮（dermatomize）したブタの耳の皮膚(Navarra政府の好適獣医療サービスによりヒトの消費に適合していると認定済みであり、食肉処理場（slaughterhourse）であるLa Protectora S.A.により提供されたもの)を使用して、異なる３つのセルで試験した。研究を行うために、レセプターチャンバ内で、ブタの皮膚を一片、液体（ＰＢＳ：ＥｔＯＨ  ６０：４０）と接触しているセル上に置いた。評価する製剤は皮膚の表面上に置き、所望の期間（最大２４時間）の間中、３２±１℃で撹拌しながら系を維持した。この期間の間、レセプターチャンバのサンプル（１ｍＬ）のいくつかを抽出し（０時間、１時間および６時間で）、抽出した容積を新鮮な流体で置き換えた。研究終了した時点（２４時間で）で、セルの全体量（７ｍＬ）を回収し、皮膚を十分な媒体で洗浄して任意の吸収されていない過剰な生成物を除去した。次に、この洗浄液を回収して皮膚を保存した。その後、研究で得られた皮膚サンプルと一緒に液体  （洗浄およびレセプターチャンバ）はすべて、分析するまで冷凍装置中で−２０℃にて保管された。
【０１４２】
製剤処理
各製剤を３連で分析した。例６および７の製剤を分析するために、この製剤１００ｍｇを正確に計量し、５ｍＬの容量フラスコ中にアセトニトリル（ACN、Merck、HPLC等級）で目印まで満たした。例８の製剤を分析するために、この製剤１００ｍｇを正確に計量し、１０ｍＬ容量フラスコ中にアセトニトリル（Merck、HPLC等級）で目印まで満たした。サンプルはすべて０．２２μｍの膜で濾過してＨＰＬＣ上に射出した。
【０１４３】
皮膚調製
研究を行う日に食肉処理した動物から、市の食肉処理場からブタの耳を得た。受領後、耳を水で洗浄し、その毛をカミソリで慎重に剃り、最後に生検を行い、メスで任意の付着した皮下組織を除去した。次いで、皮膚を採皮刀（Braun, Acculan 3Ti）で４００±３０μｍの最終的な厚さに採皮した。一旦採皮した後に、皮膚が処理中に損傷を一切受けていないか確認するために目視点検を行った。肉眼による評価に合格した皮膚片のみを研究に用いた。次いで、各皮膚の厚さを測定するために、特定のマイクロメートルを使用し、本研究では厚さが３７０μｍ〜４３０μｍの間の断片のみが許容された。例６〜８の製剤の適用に先立って、各拡散セルについて経表皮水分損失（Trans Epidermal Water Loss：ＴＥＷＬ）を測定することによって、実験モデルの皮膚バリアと水密性の完全性を確認した。測定は、蒸発計（Tewameter、Microcaya、TM300）を用いて、ドナー区画に対して直接行った。
【０１４４】
経皮吸収研究
研究は自動的なフランツ拡散セル(Hanson Corporate)を使用して行った。研究を開始する前に、レセプター区画液（リン酸緩衝液：エタノール（ＰＢＳ：ＥｔＯＨ）６０：４０）でセルを洗浄して状態を整えた。採皮したブタの耳の皮膚はそれぞれ、２つの区画を定めるセルの２つの部分の間に水平位置で、皮膚の両側に１つずつ載せた：
−レセプター区画：皮膚の下側に、ＢＳ：ＥｔＯＨ（６０：４０）７ｍＬからなる液体を適用し、サンプル回収にはサンプリングポートがあった、および
−ドナー区画：１．７６７ｃｍ２の正確に画定した表面を有するテフロンシリンダー（ウエハース投薬）を皮膚の上部側に適用した。
【０１４５】
各セルには、系をいつでも３２±１℃の一定温度に維持することができるウォータージャケットが存在していた。各セルの内部には、レセプター区画の流体を均質化するために４００ｒｐｍの一定の撹拌速度に設定した小型のマグネットおよびヘリックスが存在していた。セル上に皮膚を載せて状態を整えてから３０分後に、例６〜８の製剤を適用する前に、ＴＥＷＬの測定を行うことによって各拡散セルについての実験モデルの皮膚バリアと水密性の完全性を確認した。測定は、蒸発計を用いて、ドナー区画に対して直接行った。
【０１４６】
最後に、対応する例６〜８の製剤を各セル上に投与した（２２〜３４ｍｇ）。投与後、皮膚の表面は閉塞状況下の実験室の大気に開放させたままにした。
【０１４７】
レセプター区画のサンプル１ミリリットルを、初期時点（０時間）、および１時間と６時間後に回収した。セルの全体量（７ｍＬ）を２４時間後に回収した。各サンプリング時間では、引き出した容積を新鮮な流体（ＰＢＳ：ＥｔＯＨ  ６０：４０）と置き替えた。
【０１４８】
２４時間後、およびレセプター区画液体を完全に回収した後、皮膚の表面上の残りの有効成分を、皮膚を洗浄することによって除去した。洗浄は綿棒でこすり取ることによって行った。綿棒をＦａｌｃｏｎ管内に入れ、１５時間空けたまま放置して乾燥させ、次に、分析を行うまで−２０℃で凍結させた。
【０１４９】
皮膚を洗浄した後に、セルは取り外し、皮膚を回収してＦａｌｃｏｎ管内に入れ、分析を行うまで凍結させた。
【０１５０】
レセプターチャンバ液体内のシクロスポリンＡを検出するためのＨＰＬＣ法
４０℃で、ＵＰＬＣカラム（ＢＥＨ  Ｃ１８、１．７μｍ、５０×２．１ｍｍ、Waters）を使用してＡｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ機器（Waters）中でサンプルを超高速液体クロマトグラフィーによって分析した。サンプル５０μＬに、内部標準としての［２Ｈ１２］シクロスポリンＡ（Alsachim）（各サンプルに［２Ｈ１２］シクロスポリンＡを２５０ｎｇ／ｍＬを１００μＬ）およびメタノール：水（８：２）３５０μＬを加えた。結果として生じた溶液を１０μＬ注入した。
【０１５１】
［２Ｈ１２］シクロスポリンＡの内標準原液をＤＭＳＯ中で１ｍｇ／ｍＬの濃度で調製した。次に、この原液１０μＬを９９０μＬのメタノール：Ｈ２Ｏ１：１に加えた。最後に、後者の溶液２５０μＬを９７５０μＬのメタノール：Ｈ２Ｏ８：２に加え、２５０ｎｇ／ｍＬの［２Ｈ１２］シクロスポリンＡの溶液を得た。
【０１５２】
移動相Ａは、水中０．１％のギ酸での２ｍＭ酢酸アンモニウムであった。移動相Ｂはメタノール中０．１％のギ酸であった。流量は０．２５ｍＬ／分であった。移動相勾配は以下のとおりであった。
−最初：２０％Ａ、８０％Ｂ
−０．６分：２０％Ａ、８０％Ｂ
−２．０分：５％Ａ、９５％Ｂ
−３．０分：２０％Ａ、８０％Ｂ
【０１５３】
タンデム型質量分析（陽性モードでのエレクトロスプレイ）（ＴＱＤ質量分析法システム、Waters）によって以下のとおり検出を行った：
−シクロスポリンＡ： 
ＭＲＭパラメーター：１２２０．６９→１２０３．７０
コーン電圧：４０Ｖ
衝突エネルギー：２０ｅＶ
−［２Ｈ１２］シクロスポリンＡ： 
ＭＲＭパラメーター：１２３２．７０→１２１５．８０
コーン電圧：４０Ｖ
衝突エネルギー：２０ｅＶ
【０１５４】
ブタ耳皮膚中のシクロスポリンＡを検出するためのＨＰＬＣ方法
４０℃で、ＵＰＬＣカラム（ＢＥＨ  Ｃ１８、１．７μｍ、５０×２．１ｍｍ、Waters）を使用してＡｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ機器（Waters）中でサンプルを超高速液体クロマトグラフィーによって分析した。
【０１５５】
サンプルは、皮膚サンプルにメタノール１０  ｍＬを加えて１６〜１８時間混合させておくことによって抽出した。次いで、サンプルを１時間超音波で分解した。次いで、サンプルの処理１：２０（サンプル５０μＬおよびメタノール：水１：１を９５０μＬ）を行う前にサンプルをメタノール：水（１：１）で希釈した。このサンプル１００μＬに、内部標準として［２Ｈ１２］シクロスポリンＡ（Alsachim）を加え（各サンプルへ５００ｎｇ／ｍＬの［２Ｈ１２］シクロスポリンＡを１００μＬ）、メタノール：水（８：２）を３００μＬ加えた。結果として生じた溶液１０μＬを注入した。移動相Ａは、水中０．１％のギ酸での２ｍＭ酢酸アンモニウムであった。移動相Ｂはメタノール中０．１％のギ酸であった。流量は０．２５ｍＬ／分であった。移動相勾配は以下のとおりであった。
−最初：２０％Ａ、８０％Ｂ
−０．６分：２０％Ａ、８０％Ｂ
−２．０分：５％Ａ、９５％Ｂ
−３．０分：２０％Ａ、８０％Ｂ
【０１５６】
タンデム型質量分析（陽性モードでのエレクトロスプレイ）（ＴＱＤ質量分析法システム、Waters）によって以下のとおり検出を行った：
−シクロスポリンＡ：
ＭＲＭパラメーター：１２２０．６９→１２０３．７０
コーン電圧：４０Ｖ
衝突エネルギー：２０ｅＶ
−［２Ｈ１２］シクロスポリンＡ：
ＭＲＭパラメーター：１２３２．７０→１２１５．８０
コーン電圧：４０Ｖ
衝突エネルギー：２０ｅＶ
【０１５７】
レセプターチャンバ液体内のシクロスポリンＡを検出するためのキャリブレーション曲線
シクロスポリンＡの標準原液溶液をＤＭＳＯ中１ｍｇ／ｍＬの濃度で調製した。次に、この原液の対応する量を、対応する量のメタノール：Ｈ２Ｏ  １：１に加えて、対応するシクロスポリンＡのキャリブレーション溶液を５〜１０００ｎｇ／ｍＬの濃度の範囲で得た。 
【０１５８】
４０℃で、ＵＰＬＣカラム（ＢＥＨ  Ｃ１８、１．７μｍ、５０×２．１ｍｍ、Waters）を使用してＡｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ機器（Waters）中でこれらの溶液を超高速液体クロマトグラフィーによって分析した。シクロスポリンＡのキャリブレーション溶液１０μＬに、エタノール：リン酸緩衝液０．０１Ｍ（４：６）９９０μＬを加えた。
【０１５９】
キャリブレーション曲線パラメーター(勾配、切片および相関係数)は、最小二乗算定方式を使用することにより、異なる濃度のシクロスポリンＡ溶液から得た。
【０１６０】
ブタ耳皮膚中のシクロスポリンＡを検出するためのキャリブレーション曲線
シクロスポリンＡの標準原液をＤＭＳＯ中１ｍｇ／ｍＬの濃度で調製した。次に、この原液の対応する量を、対応する量のメタノール：Ｈ２Ｏ  １：１に加えて、対応するシクロスポリンＡのキャリブレーション溶液を５〜１０００ｎｇ／ｍＬの濃度の範囲で得た。 
【０１６１】
消化したブランクスキンをメタノール：Ｈ２Ｏ（１：１）で、１：２０に希釈することによりマトリックスのブランク溶液を調製した。製剤を一切加えずにフランツセルの研究を行った皮膚サンプルにメタノールを１０ｍＬ加え、次いで１６〜１８時間混合させておくことによって消化したブランクスキンを調製した。次いで、サンプルは１時間超音波で処理した。
【０１６２】
４０℃で、ＵＰＬＣカラム（ＢＥＨ  Ｃ１８、１．７μｍ、５０×２．１ｍｍ、Waters）を使用してＡｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ機器（Waters）中でこれらの溶液を超高速液体クロマトグラフィーによって分析した。シクロスポリンＡのキャリブレーション溶液１０μＬに、ブランクマトリックス９９０μＬを加えた。
【０１６３】
キャリブレーション曲線パラメーター(勾配、切片および相関係数)は、最小二乗算定方式を使用することにより、異なる濃度のシクロスポリンＡ溶液から得た。
【０１６４】
製剤の定量化
各製剤中のシクロスポリンＡ（ＣｙＡ）の正確な濃度をキャリブレーション曲線に対して計算した。結果は、下記の表（ＳＤは標準偏差である）に示した。
【０１６５】
【表３】
2019504878.tif 000010
【０１６６】
レセプター区画の結果は下記の表で提供される。
【０１６７】
【表４】
2019504878.tif 000011
【０１６８】
【表５】
2019504878.tif 000012
【０１６９】
結果は、例６〜８の製剤がシクロスポリンＡの局所的送達に好適であることを示している。
【０１７０】
６．生物学的活性の研究
局所適用した例６〜８の製剤の生物学的活性は、農場のブタの皮膚（アレルギー性皮膚炎の認証モデル）に対するアレルギー性接触皮膚炎の誘発によって産まれた炎症反応について評価した。参照製剤として、市販の製剤である０．１％タクロリムス（tacrolimus） (Protopic 0.1%)を使用した。
【０１７１】
試験動物
平均体重が１１．０±０．８４ｋｇである雌ブタ６個体（同胞ではない）（Prolaborからランドレース×ラージホワイト)を使用した。動物は、標準実験室状態下で飼育し、不断で標準のブタ用餌および水道水を受け取った。
【０１７２】
投与経路および投与量
動物の背面の直径およそ２ｃｍの円形領域に局所的に治療を適用した。各治療で適用された試験製剤の量は、各適用部位に６３０ｍｇまたは同等の容積であった。
【０１７３】
アレルギー性接触皮膚炎に対する活性
９日間の順応期間後に、動物の耳（内側面）と鼠径部に１０％ジフルオロニトロベンゼン（ＤＮＦＢ、Sigma Aldrich）１００μＬを局所投与することが１日目と考慮された感作を開始した。研究の４日目には、１日目の適用部位を避けて、各動物の耳に２％の濃度でＤＮＦＢ１００μＬを投与した。１日目および４日目のＤＮＦＢの適用は、前述の領域に製剤を塗布することによって行われた。感染試験の４日前に、治療が正確に適用されているかを確かめるために動物にシェービングを行った。研究の１２日目では、動物の背面の両側に６か所の適用部位（直径２ｃｍ）（合計１２か所の適用部位）に１％ＤＮＦＢを２０μＬ局所適用することによって感染（challenge）を引き起こした。適用部位は動物の首の屈筋領域を避けて、背部の位置にあった。頭尾方向の位置に対する第一の適用部位は、対照（処置なし）のために保留にしておいた。残りの処置（参照製剤での治療を含む）は、対照の処置位置の後に適用した。参照製剤での処置および試験製剤に対応する処置の両方ともすべての動物の適用部位にランダムに適用した。研究の動物６個体は参照製剤および例６〜８の製剤で処置した。感染を引き起こしてから０．５および６時間後に前述の感作領域に割当処置を適用した。適用は次の二相で行った：第一には、少量を適用し、吸収されるまでマッサージし、次に、適用する量の残りを同一の領域に適用した。６時間目での処置を適用する前に、生理食塩水で湿らせたガーゼで試験製剤の残りを取り除いた。処置はそれぞれ、各動物の適用部位の２か所（動物の背面の両側に１か所ずつ適用）に施した。対照部位にはたった２０μＬの１％ＤＮＦＢを適用した。感染を誘発してから２４時間後に、生理食塩水で湿らせたガーゼで試験製剤の残りを取り除き、およそ４分後に、処置を適用した皮膚の領域を評価した。
【０１７４】
結果の評価
紅斑の強さおよび広がりならびに病変の硬さ（consistency）は、以下の基準に従い、０〜４の尺度で評価を行った。
【０１７５】
【表６】
2019504878.tif 000013
【０１７６】
得られたスコアの平均は、動物１個体あたりと処置群１つあたりの両方で、評価を行う異なるパラメーターに対して計算した。平均、標準誤差(standard error：ＳＥ）および標準誤差（standard error of the mean：ＳＥＭ）は、各処置群に対して計算した。阻害の百分率は以下の式を使用して、各処置群について計算した。
【０１７７】
【数２】
2019504878.tif 000014
【０１７８】
対照の処置適用部位で誘発された病変の硬さのスコアが２以上であった場合のみに各動物に対して得られた値が受け入れられた。
【０１７９】
ＤＮＦＢの適用によって誘発された炎症に対する活性の分類の基準は、以下のとおりである。
【０１８０】
【表７】
2019504878.tif 000015
【０１８１】
結果
対照治療に関して異なる処置（例６〜８の調合物およびProtopic０．１％を備えた参照治療）の阻害の百分率を以下の表にまとめた。
【０１８２】
【表８】
2019504878.tif 000016
【０１８３】
例６〜８の製剤は、ＤＮＦＢの適用によって誘発された反応に対して良好な阻害応答を示した。
【国際調査報告】
2019504878.tif 000017
2019504878.tif 000018
2019504878.tif 000019