(57)【要約】  本発明は、抗原結合ドメイン及びＦｃドメインを含む抗体構築物と、アジュバント部分と、リンカーと、を含み、各アジュバント部分がリンカーを介して抗体に共有結合している、免疫複合体を提供する。本発明の免疫複合体を用いて癌を治療する方法も説明される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）（ｉ）抗原結合ドメイン及び（ｉｉ）Ｆｃドメインを含む抗体構築物と、
（ｂ）アジュバント部分と、
（ｃ）リンカーと、を含み、
各アジュバント部分がリンカーを介して抗体構築物に共有結合している、免疫複合体。
【請求項２】
前記抗体構築物が標的化結合ドメインを更に含む、請求項１に記載の免疫複合体。
【請求項３】
前記抗体構築物が抗体である、請求項１に記載の免疫複合体。
【請求項４】
前記抗原結合ドメインが癌細胞の抗原に結合する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の免疫複合体。
【請求項５】
前記抗原結合ドメインが、ＣＤＨ１、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４７、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＥＧＦＲ、ＶＥＧＦ、ＨＥＲ２、ＳＬＡＭＦ７、ＰＤＧＦＲａ及びｇｐ７５からなる群から選択される抗原に結合する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の免疫複合体。
【請求項６】
前記抗体が、オララツマブ、オビヌツズマブ、トラスツズマブ、セツキシマブ、リツキシマブ、ペルツズマブ、ベバシズマブ、ダラツムマブ、エタネルセプト、及びエロツズマブからなる群から選択される、請求項３〜４のいずれか一項に記載の免疫複合体。
【請求項７】
前記抗体が、免疫チェックポイント阻害剤の抗原に結合する、請求項３〜４のいずれか一項に記載の免疫複合体。
【請求項８】
前記抗体が、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＬＡＧ−３、Ｂ７−Ｈ４、ＫＩＲ、ＴＮＦＲＳＦ４、ＯＸ４０Ｌ、ＩＤＯ−１、ＩＤＯ−２、ＣＥＡＣＡＭ１、ＢＴＬＡ、ＴＩＭ３、Ａ２Ａｒ、及びＶＩＳＴＡからなる群から選択される抗原に結合する、請求項３〜４のいずれか一項に記載の免疫複合体。
【請求項９】
前記抗体が、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、アテゾリズマブ、及びイピリムマブからなる群から選択される、請求項３〜４のいずれか一項に記載の免疫複合体。
【請求項１０】
前記抗体が、ＣＬＥＣ４Ｃ（ＢＤＣＡ−２、ＤＬＥＣ、ＣＤ３０３、ＣＬＥＣＳＦ７）、ＣＬＥＣ４Ｄ（ＭＣＬ、ＣＬＥＣＳＦ８）、ＣＬＥＣ４Ｅ（Ｍｉｎｃｌｅ）、ＣＬＥＣ６Ａ（Ｄｅｃｔｉｎ−２）、ＣＬＥＣ５Ａ（ＭＤＬ−１、ＣＬＥＣＳＦ５）、ＣＬＥＣ１Ｂ（ＣＬＥＣ−２）、ＣＬＥＣ９Ａ（ＤＮＧＲ−１）、及びＣＬＥＣ７Ａ（Ｄｅｃｔｉｎ−１）からなる群から選択される抗原に結合する、請求項３〜４のいずれか一項に記載の免疫複合体。
【請求項１１】
前記抗体が、ＩｇＧ１抗体である、請求項３〜４のいずれか一項に記載の免疫複合体。
【請求項１２】
前記抗体が、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、アテゾリズマブ、イピリムマブ、オビヌツズマブ、トラスツズマブ、セツキシマブ、リツキシマブ、ペルツズマブ、ベバシズマブ、ダラツムマブ、エタネルセプト、オララツマブ、及びエロツズマブからなる群から選択される抗体のバイオシミラーである、請求項３〜４のいずれか一項に記載の免疫複合体。
【請求項１３】
前記抗体が、修飾されたＦｃ領域を含む、請求項３〜４のいずれか一項に記載の免疫複合体。
【請求項１４】
前記免疫複合体が、式Ｉの構造体、
【化１】
2019520352.tif 000218
又はその薬学的に許容される塩を有し、式中、Ａｂは抗体であり、Ａは、前記抗体中の未修飾アミノ酸側鎖、又は前記抗体中の修飾アミノ酸側鎖であり、Ｚは連結部分であり、Ａｄｊはアジュバント部分であり、下付き文字ｒは、１〜１０の整数である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の免疫複合体。
【請求項１５】
前記免疫複合体が、式Ｉａの構造体、
【化２】
2019520352.tif 000219
又はその薬学的に許容される塩を有し、式中、
Ａｂは抗体であり、
Ａは、前記抗体中の未改変アミノ酸側鎖、又は前記抗体中の改変アミノ酸側鎖であり、
Ｚは連結部分であり、
Ｒ１は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから選択され、又は、
Ｚ、Ｒ１、及び結合先である窒素原子は、５〜８員複素環を含む連結部分を形成し、
各Ｙは、独立して、ＣＨＲ２であり、式中、Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、及びＮＨ２から選択され、
Ｒ３は、Ｃ１〜６アルキル及び２〜６員ヘテロアルキルから選択され、それぞれは、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、オキソ（＝Ｏ）、アルキルアミノ、アミド、アシル、ニトロ、シアノ、及びアルコキシからなる群から選択される、１つ又は２つ以上のメンバーで任意に置換され、
Ｘは、Ｏ及びＣＨ２から選択され、
下付き文字ｎは、１〜１２の整数であり、
下付き文字ｒは、１〜１０の整数である、請求項１４に記載の免疫複合体。
【請求項１６】
前記免疫複合体が、式Ｉｂの構造体、
【化３】
2019520352.tif 000220
又はその薬学的に許容される塩を有し、式中、
Ａｂは抗体であり、
Ａは、前記抗体中の未改変アミノ酸側鎖、又は前記抗体中の改変アミノ酸側鎖であり、
Ｚは連結部分であり、
Ｒ１は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから選択され、又は、
Ｚ、Ｒ１、及び結合先である窒素原子は、５〜８員複素環を含む連結部分を形成し、
各Ｙは、独立して、ＣＨＲ２であり、式中、Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、及びＮＨ２から選択され、
Ｘは、Ｏ及びＣＨ２から選択され、
下付き文字ｎは、１〜１２の整数であり、
Ｗは、Ｏ、及びＣＨ２からなる群から選択される、請求項１５に記載の免疫複合体。
【請求項１７】
前記免疫複合体が、式Ｉｃの構造体、
【化４】
2019520352.tif 000221
又はその薬学的に許容される塩を有し、式中、
Ａｂは抗体であり、
下付き文字ｒは、１〜１０の整数であり、
Ａは、前記抗体中の未改変アミノ酸側鎖、又は前記抗体中の改変アミノ酸側鎖であり、
Ｚは連結部分であり、
Ｒ１は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから選択され、又は、
Ｚ、Ｒ１、及び結合先である窒素原子は、５〜８員複素環を含む連結部分を形成し、
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、及びＮＨ２から選択される、請求項１６に記載の免疫複合体。
【請求項１８】
前記免疫複合体が、式Ｉｄの構造体、
【化５】
2019520352.tif 000222
又はその薬学的に許容される塩を有し、式中、Ａｂは抗体であり、Ａは、前記抗体中の未修飾アミノ酸側鎖、又は前記抗体中の修飾アミノ酸側鎖であり、Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、及びＮＨ２から選択され、下付き文字ｒは、１〜１０の整数である、請求項１７に記載の免疫複合体。
【請求項１９】
前記免疫複合体が、式ＩＩの構造体、
【化６】
2019520352.tif 000223
又はその薬学的に許容される塩を有し、式中、Ａｂは抗体であり、Ａは、前記抗体中の未修飾アミノ酸側鎖、又は前記抗体中の修飾アミノ酸側鎖であり、Ａｄｊはアジュバント部分であり、下付き文字ｒは、１〜１０の整数であり、
Ｚ１は、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＣＨ２−から選択され、
Ｚ２及びＺ４は、独立して、結合、Ｃ１〜３０アルキレン、及び３〜３０員ヘテロアルキレンから選択され、このとき、
Ｃ１〜３０アルキレン及び３〜３０員ヘテロアルキレン中の隣接する原子のうち１つ又は２つ以上のグループは、任意にかつ独立して、−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲａＣ（Ｏ）−、又は−Ｃ（Ｏ）ＮＲａ−で置換され、
Ｃ１〜３０アルキレン及び３〜３０員ヘテロアルキレン中の隣接する原子のうち１つ又は２つ以上のグループは、任意にかつ独立して、４〜８員の二価炭素環で置換され、
Ｃ１〜３０アルキレン及び３〜３０員ヘテロアルキレン中の隣接する原子のうち１つ又は２つ以上のグループは、任意にかつ独立して、Ｏ、Ｓ、及びＮから選択される１〜４つのヘテロ原子を有する４〜８員の二価複素環で置換され、
各Ｒａは、Ｈ及びＣ１〜６アルキルから独立して選択され、
Ｚ３は、結合、二価ペプチド部分、二価ポリマー部分から選択され、
Ｚ５は、前記抗体中のアミノ酸側鎖の側鎖に結合される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の免疫複合体。
【請求項２０】
前記免疫複合体が、式ＩＩＩの構造体、
【化７】
2019520352.tif 000224
又は薬学的に許容されるその塩を有し、式中、Ａｂは、少なくとも１つのリジン側鎖を有する抗体であり、Ａｄｊはアジュバントであり、Ｇは、ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、又は結合であり、Ｌはリンカーであり、下付き文字ｒは、１〜１０の整数である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の免疫複合体。
【請求項２１】
前記アジュバント部分が、パターン認識受容体（ＰＲＲ）アゴニストである、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の免疫複合体。
【請求項２２】
前記アジュバント部分が、次式のものであり、
【化８】
2019520352.tif 000225
式中、各Ｊは、独立して、水素、ＯＲ４、又はＲ４であり、各Ｒ４は、独立して、水素、又は、１〜８個の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、若しくはヘテロアリールアルキル基であり、Ｑは任意に存在し、１〜８個の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、又はヘテロアリールアルキル基であり、破線
【化９】
2019520352.tif 000226
は、アジュバントに結合する点を表す、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の免疫複合体。
【請求項２３】
前記アジュバント部分が、次式のものであり、
【化１０】
2019520352.tif 000227
式中、Ｊは、水素、ＯＲ４、又はＲ４であり、各Ｒ４は、独立して、水素、又は、１〜８個の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、若しくはヘテロアリールアルキル基であり、Ｑは、１〜８個の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、又はヘテロアリールアルキル基からなる群から選択され、破線
【化１１】
2019520352.tif 000228
は、アジュバントに結合する点を表す、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の免疫複合体。
【請求項２４】
前記アジュバント部分が、次式のものであり、
【化１２】
2019520352.tif 000229
式中、各Ｒ４は、独立して、水素、又は、１〜８個の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、若しくはヘテロアリールアルキル基であり、Ｑは、１〜８個の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、又はヘテロアリールアルキル基であり、破線
【化１３】
2019520352.tif 000230
は、アジュバントに結合する点を表す、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の免疫複合体。
【請求項２５】
前記アジュバント部分が、次式のものであり、
【化１４】
2019520352.tif 000231
式中、各Ｊは、独立して、水素、ＯＲ４、又はＲ４であり、各Ｒ４は、独立して、水素、又は１〜８個の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、若しくはヘテロアリールアルキル基であり、各Ｕは、独立して、ＣＨ又はＮであり、このとき少なくとも１つのＵがＮであり、各下付き文字ｔは、１〜３の整数であり、Ｑは任意に存在し、１〜８個の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、又はヘテロアリールアルキル基であり、破線
【化１５】
2019520352.tif 000232
は、アジュバントに結合する点を表す、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の免疫複合体。
【請求項２６】
前記アジュバント部分が、次式のものであり、
【化１６】
2019520352.tif 000233
式中、Ｊは、水素、ＯＲ４、又はＲ４であり、各Ｒ４は、独立して、水素、又は１〜８個の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、若しくはヘテロアリールアルキル基であり、Ｒ５は、水素、又は、１〜１０個の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、若しくはヘテロアリールアルキル基であり、Ｑは、１〜８個の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、若しくはヘテロアリールアルキル基であり、破線
【化１７】
2019520352.tif 000234
は、アジュバントに結合する点を表す、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の免疫複合体。
【請求項２７】
前記アジュバント部分が、次式のものであり、
【化１８】
2019520352.tif 000235
式中、Ｒ１は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから選択され、Ｒ３は、Ｃ１〜６アルキル及び２〜６員ヘテロアルキルから選択され、これらはそれぞれ、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、オキソ（＝Ｏ）、アルキルアミノ、アミド、アシル、ニトロ、シアノ、及びアルコキシからなる群から選択される１つ又は２つ以上のメンバーで任意に置換され、Ｘは、Ｏ及びＣＨ２から選択され、各Ｙは、独立して、ＣＨＲ２であり、このとき、Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、及びＮＨ２から選択され、下付き文字ｎは、１〜１２の整数であり、破線
【化１９】
2019520352.tif 000236
は、アジュバントに結合する点を表す、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の免疫複合体。
【請求項２８】
前記アジュバント部分が、次のものであり、
【化２０】
2019520352.tif 000237
【化２１】
2019520352.tif 000238
式中、破線
【化２２】
2019520352.tif 000239
は、アジュバントに結合する点を表す、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の免疫複合体。
【請求項２９】
複数の、請求項１１〜２８のいずれか一項に記載の免疫複合体を含む、組成物。
【請求項３０】
治療有効量の、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の免疫複合体、又は、請求項２９に記載の組成物をこれらが必要な被検体に投与することを含む、癌の治療方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
腫瘍増殖が、免疫回避を促進する変異の獲得を必要とすることは、今では十分に認識されている。しかし、腫瘍発生は、ｅｘ  ｖｉｖｏ刺激に続いて宿主免疫系によって容易に認識される変異抗原又はネオ抗原の蓄積をもたらす。免疫系がネオ抗原の認識に失敗する理由及び様式が、明らかにされつつある。Ｃａｒｍｉ  ｅｔ  ａｌ．（Ｎａｔｕｒｅ，５２１：９９〜１０４（２０１５））による画期的な研究では、抗体−腫瘍免疫複合体を介してネオ抗原を活性化樹状細胞に送達することによって、免疫無視を克服できることが示されている。これらの研究では、腫瘍内注入によって腫瘍結合抗体及び樹状細胞アジュバントを同時に送達すると、強い抗腫瘍免疫が得られた。近付きにくい腫瘍に到達させ、癌患者やその他被検体に対する治療の選択肢を増やすため、抗体及び樹状細胞アジュバントを送達するための新たな組成物及び方法が必要とされている。
【発明の概要】
【０００２】
第１の態様では、本発明は、（ａ）（ｉ）抗原結合ドメイン及び（ｉｉ）Ｆｃドメインを含む抗体構築物と、（ｂ）アジュバント部分と、（ｃ）リンカーと、を含み、各アジュバント部分がリンカーを介して抗体構築物に共有結合している、免疫複合体を提供する。
【０００３】
いくつかの実施形態では、免疫複合体は、式Ｉの構造体、
【化１】
2019520352.tif 000002
又はその薬学的に許容される塩を有し、式中、Ａｂは抗体構築物であり、Ａは、抗体構築物中の未改変アミノ酸側鎖、又は抗体構築物の改変アミノ酸側鎖であり、Ｚは連結部分であり、Ａｄｊはアジュバント部分であり、下付き文字ｒは、１〜１０の整数である。
【０００４】
関連する態様では、本発明は、本明細書に記載される複数の免疫複合体を含む組成物を提供する。
【０００５】
別の態様では、本発明は、癌を治療する方法を提供する。その方法は、治療有効量の本発明の免疫複合体を、それを必要とする被験体に投与することを含む。
【図面の簡単な説明】
【０００６】
本発明は、以下の発明を実施するための形態を添付の図面と併せて読むことで、最大限に理解される。一般的な慣習により、図面の様々な特徴は実物大ではない。逆に、様々な特徴の寸法は、任意に拡大されており、又は明確にするために縮小されている。
【０００７】
【図１】機能性アジュバントが骨髄系細胞活性化の強力な誘導因子であることを示す。末梢血抗原提示細胞（ＡＰＣ）を、１０倍で段階希釈したＲ８４８、化合物２、又は対照ＴＬＲアゴニストを用いて、３７℃で刺激した。１８時間後、細胞をフローサイトメトリーによって分析した。データは、各指定のマーカーの蛍光強度の中央値として示す（ｎ＝３）。
【０００８】
【図２】機能性アジュバントがＴＬＲアゴニスト活性を維持していることを示す。ＨＥＫ２９３細胞に、ヒトＴＬＲ７若しくはＴＬＲ８（上の２つのパネル）又はマウスＴＬＲ７（下のパネル）と、誘導性分泌胚性アルカリホスファターゼレポーター遺伝子を、ＮＦ−κＢ及びＡＰ−１結合部位に融合したＩＦＮ−βミニマルプロモーターの制御下で同時にトランスフェクトした。続いて細胞を、２倍で段階希釈した指定のアジュバントと共に、１２時間、３７℃でインキュベートした。アルカリホスファターゼの基質を加えた後、活性を分光測光法（ＯＤ  ６５０ｎｍ）によって測定した。
【０００９】
【図３】液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ−ＭＳ）によるアジュバントリンカー化合物の分析を示す。
【００１０】
【図４】ＣＤ４０、ＣＤ８６、及びＨＬＡ−ＤＲの発現によって示されるように、非複合体の抗体及びアジュバントと比べて、抗体−アジュバント複合体がＡＰＣ活性化の誘発に優れていることを示す。ヒトＡＰＣを、リツキシマブ−ＳＡＴＡ−ＳＭＣＣ−化合物１（複合体）、リツキシマブ単独（Ａｂ）、化合物１単独又はリツキシマブ＋化合物１（混合物）で、ＣＦＳＥ標識化ＣＤ１９＋腫瘍細胞存在下にて刺激した。１８時間後、ＣＤ１９−ヒトＡＰＣをフローサイトメトリーによって分析した（ｎ＝３）。Ｐ値≦０．０５を＊で示し、Ｐ値≦０．０１を＊＊で示し、Ｐ値≦０．００１を＊＊＊で示し、Ｐ値≦０．０００１を＊＊＊＊で示す。
【００１１】
【図５】非複合体の抗体及びアジュバントと比較して、抗体アジュバント複合体が、ヒトＡＰＣで低レベルのＰＤ−Ｌ１発現を誘導することを示す。ヒトＡＰＣを、リツキシマブ−ＳＡＴＡ−ＳＭＣＣ−化合物１（複合体）、リツキシマブ単独（Ａｂ）、化合物１単独又はリツキシマブ＋化合物１（混合物）で、ＣＦＳＥ標識化ＣＤ１９＋腫瘍細胞存在下にて刺激した。１８時間後、ＣＤ１９−ヒトＡＰＣをフローサイトメトリーによって分析した（ｎ＝３）。Ｐ値≦０．０５を＊で示し、Ｐ値≦０．０１を＊＊で示し、Ｐ値≦０．００１を＊＊＊で示し、Ｐ値≦０．０００１を＊＊＊＊で示す。
【００１２】
【図６】抗体アジュバント複合体がＤＣ分化を誘発することを示す。〜９５％単球のヒトＡＰＣを、２倍で段階希釈したリツキシマブ−ＳＡＴＡ−ＳＭＣＣ−化合物１（複合体）、リツキシマブ単独（Ａｂ）、化合物１単独又はリツキシマブ＋化合物１（混合物）で、ＣＦＳＥ標識化腫瘍細胞存在下にて刺激した。１８時間後、ＣＤ１９−ヒトＡＰＣをフローサイトメトリーによって分析した（ｎ＝３）。Ｐ値≦０．０５を＊で示し、Ｐ値≦０．０１を＊＊で示し、Ｐ値≦０．００１を＊＊＊で示し、Ｐ値≦０．０００１を＊＊＊＊で示す。
【００１３】
【図７】抗体アジュバント複合体が、ヒトＡＰＣからの前炎症性サイトカインの分泌の誘導において、非複合体の抗体とアジュバントとの混合物より優れていることを示す。ヒトＡＰＣを、２倍で段階希釈したリツキシマブ−ＳＡＴＡ−ＳＭＣＣ−化合物１（複合体）、リツキシマブ単独（Ａｂ）、化合物１単独又はリツキシマブ＋化合物１（混合物）で、固定したＣＦＳＥ標識化腫瘍細胞存在下にて刺激した。１８時間後、サイトカインビーズアレイによるサイトカイン分泌について、細胞を含まない上清を分析した（ｎ＝３）。Ｐ値≦０．０５を＊で示し、Ｐ値≦０．０１を＊＊で示し、Ｐ値≦０．００１を＊＊＊で示し、Ｐ値≦０．０００１を＊＊＊＊で示す。
【００１４】
【図８Ａ】切断可能なリンカーを有する免疫複合体が、ＡＰＣ活性化及びＤＣ分化を誘発することを示す。〜９５％単球のヒトＡＰＣを、２倍で段階希釈したリツキシマブ−ＳＡＴＡ−ＳＰＤＰ−化合物１（複合体、切断可能）、リツキシマブ単独（Ａｂ）、化合物１単独又はリツキシマブ＋化合物１（混合物）で、ＣＦＳＥ標識化腫瘍細胞存在下にて刺激した。免疫複合体（ＡＡＣ−切断可能）は、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦで確認したとき、１．４の薬剤対抗体比（ＤＡＲ）を有していた。１８時間後、ＣＤ１９−ヒトＡＰＣ（ＣＤ１４及びＣＤ１２３）をフローサイトメトリーによって分析した（ｎ＝３）。
【００１５】
【図８Ｂ】切断可能なリンカーを有する免疫複合体（ＡＡＣ）が、ＡＰＣ活性化及びＤＣ分化を誘発することを示す。〜９５％単球のヒトＡＰＣを、２倍で段階希釈したリツキシマブ−ＳＡＴＡ−ＳＰＤＰ−化合物１（複合体、切断可能）、リツキシマブ単独（Ａｂ）、化合物１単独又はリツキシマブ＋化合物１（混合物）で、ＣＦＳＥ標識化腫瘍細胞存在下にて刺激した。免疫複合体（ＡＡＣ−切断可能）は、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦで確認したとき、１．４の薬剤対抗体比（ＤＡＲ）を有していた。１８時間後、ＣＤ１９−ヒトＡＰＣ（ＣＤ１６及びＣＤ１６３）をフローサイトメトリーによって分析した（ｎ＝３）。
【００１６】
【図８Ｃ】切断可能なリンカーを有する免疫複合体が、ＡＰＣ活性化及びＤＣ分化を誘発することを示す。〜９５％単球のヒトＡＰＣを、２倍で段階希釈したリツキシマブ−ＳＡＴＡ−ＳＰＤＰ−化合物１（複合体、切断可能）、リツキシマブ単独（Ａｂ）、化合物１単独又はリツキシマブ＋化合物１（混合物）で、ＣＦＳＥ標識化腫瘍細胞存在下にて刺激した。免疫複合体（ＡＡＣ−切断可能）は、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦで確認したとき、１．４の薬剤対抗体比（ＤＡＲ）を有していた。１８時間後、ＣＤ１９−ヒトＡＰＣ（ＣＤ４０及びＰＤＬ１）をフローサイトメトリーによって分析した（ｎ＝３）。
【００１７】
【図９Ａ】抗体アジュバント複合体が、ｉｎ  ｖｉｖｏで腫瘍を減少させることを示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウス（右脇腹にＢ１６Ｆ１０腫瘍を有する）に、ＰＢＳ（未処置）、αＧＰ７５＋化合物１（混合物）又はαＧＰ７５−ＳＡＴＡ−ＳＭＣＣ−化合物１（αＧＰ７５−免疫複合体）を腫瘍内注入した。
【００１８】
【図９Ｂ】腫瘍内（ＩＴ）又は静脈内（ＩＶ）注入によって投与したとき、αＧＰ７５−免疫複合体がｉｎ  ｖｉｖｏで腫瘍を減少させることを示す。
【００１９】
【図１０Ａ】ＬＣ−ＭＳによるイピリムマブの分析を示す。
【００２０】
【図１０Ｂ】ＨＬＡ−ＤＲの発現によって示されるように、非複合体のイピリムマブと比べて、イピリムマブ−アジュバント（イピリムマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）がＡＰＣ活性化の誘発に優れていることを示す。
【００２１】
【図１０Ｃ】ＣＤ１４の発現によって示されるように、非複合体のイピリムマブと比べて、イピリムマブ−アジュバント（イピリムマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）がＡＰＣ活性化の誘発に優れていることを示す。
【００２２】
【図１０Ｄ】ＣＤ４０の発現によって示されるように、非複合体のイピリムマブと比べて、イピリムマブ−アジュバント（イピリムマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）がＡＰＣ活性化の誘発に優れていることを示す。
【００２３】
【図１０Ｅ】ＣＤ８６の発現によって示されるように、非複合体のイピリムマブと比べて、イピリムマブ−アジュバント（イピリムマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）がＡＰＣ活性化の誘発に優れていることを示す。
【００２４】
【図１１Ａ】ＬＣ−ＭＳによるペンブロリズマブの分析を示す。
【００２５】
【図１１Ｂ】ＨＬＡ−ＤＲの発現によって示されるように、非複合体のペンブロリズマブと比べて、ペンブロリズマブ−アジュバント（ペンブロリズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）がＡＰＣ活性化の誘発に優れていることを示す。
【００２６】
【図１１Ｃ】ＣＤ１４の発現によって示されるように、非複合体のペンブロリズマブと比べて、ペンブロリズマブ−アジュバント（ペンブロリズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）がＡＰＣ活性化の誘発に優れていることを示す。
【００２７】
【図１１Ｄ】ＣＤ４０の発現によって示されるように、非複合体のペンブロリズマブと比べて、ペンブロリズマブ−アジュバント（ペンブロリズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）がＡＰＣ活性化の誘発に優れていることを示す。
【００２８】
【図１１Ｅ】ＣＤ８６の発現によって示されるように、非複合体のペンブロリズマブと比べて、ペンブロリズマブ−アジュバント（ペンブロリズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）がＡＰＣ活性化の誘発に優れていることを示す。
【００２９】
【図１２Ａ】ＬＣ−ＭＳによるニボルマブの分析を示す。
【００３０】
【図１２Ｂ】ＨＬＡ−ＤＲの発現によって示されるように、非複合体のニボルマブと比べて、ニボルマブ−アジュバント（ニボルマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）がＡＰＣ活性化の誘発に優れていることを示す。
【００３１】
【図１２Ｃ】ＣＤ１４の発現によって示されるように、非複合体のニボルマブと比べて、ニボルマブ−アジュバント（ニボルマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）がＡＰＣ活性化の誘発に優れていることを示す。
【００３２】
【図１２Ｄ】ＣＤ４０の発現によって示されるように、非複合体のニボルマブと比べて、ニボルマブ−アジュバント（ニボルマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）がＡＰＣ活性化の誘発に優れていることを示す。
【００３３】
【図１２Ｅ】ＣＤ８６の発現によって示されるように、非複合体のニボルマブと比べて、ニボルマブ−アジュバント（ニボルマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）がＡＰＣ活性化の誘発に優れていることを示す。
【００３４】
【図１３Ａ】ＬＣ−ＭＳによるアテゾリズマブの分析を示す。
【００３５】
【図１３Ｂ】ＨＬＡ−ＤＲの発現によって示されるように、非複合体のアテゾリズマブと比べて、アテゾリズマブ−アジュバント（アテゾリズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）がＡＰＣ活性化の誘発に優れていることを示す。
【００３６】
【図１３Ｃ】ＣＤ１４の発現によって示されるように、非複合体のアテゾリズマブと比べて、アテゾリズマブ−アジュバント（アテゾリズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）がＡＰＣ活性化の誘発に優れていることを示す。
【００３７】
【図１３Ｄ】ＣＤ４０の発現によって示されるように、非複合体のアテゾリズマブと比べて、アテゾリズマブ−アジュバント（アテゾリズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）がＡＰＣ活性化の誘発に優れていることを示す。
【００３８】
【図１３Ｅ】ＣＤ８６の発現によって示されるように、アテゾリズマブ−アジュバント（アテゾリズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）複合体の活性化のレベルを示す。
【００３９】
【図１４Ａ】アテゾリズマブ免疫複合体（アテゾリズマブＩｇＧ１ＮＱ  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）による分化細胞が、アテゾリズマブによる分化細胞よりも高レベルのＴＮＦαを分泌していることを示す。
【００４０】
【図１４Ｂ】アテゾリズマブ免疫複合体（アテゾリズマブＩｇＧ１ＮＱ  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）による分化細胞が、アテゾリズマブによる分化細胞よりも高レベルのＩＬ−１βを分泌していることを示す。
【００４１】
【図１５Ａ】ニボルマブ免疫複合体（ニボルマブＩｇＧ４  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）による分化細胞が、ニボルマブによる分化細胞よりも高レベルのＴＮＦαを分泌していることを示す。
【００４２】
【図１５Ｂ】ニボルマブ免疫複合体（ニボルマブＩｇＧ４  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）による分化細胞が、ニボルマブによる分化細胞よりも高レベルのＩＬ−１βを分泌していることを示す。
【００４３】
【図１６Ａ】ペンブロリズマブ免疫複合体（ペンブロリズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）による分化細胞が、ペンブロリズマブによる分化細胞よりも高レベルのＴＮＦαを分泌していることを示す。
【００４４】
【図１６Ｂ】ペンブロリズマブ免疫複合体（ペンブロリズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）による分化細胞が、ペンブロリズマブによる分化細胞よりも高レベルのＩＬ−１βを分泌していることを示す。
【００４５】
【図１７】ＬＣ−ＭＳによるペンブロリズマブ−アジュバント複合体の分析を示す。
【００４６】
【図１８】ＬＣ−ＭＳによるニボルマブ−アジュバント複合体の分析を示す。
【００４７】
【図１９】ＬＣ−ＭＳによるアテゾリズマブ−アジュバント複合体の分析を示す。
【００４８】
【図２０】イピリムマブ免疫複合体（イピリムマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）による分化細胞が、イピリムマブによる分化細胞よりも高レベルのＴＮＦαを分泌していることを示す。
【００４９】
【図２１】Ｄｅｃｔｉｎ−２免疫複合体による分化細胞が、等量の非複合体の成分に曝露された細胞よりも、高レベルのＴＮＦα、ＩＬ−６、及びＩＬ−１２ｐ７０を分泌していることを示す。各サイトカインのｘ軸よりも極めて高いラインは、抗Ｄｅｃｔｉｎ−２免疫複合体（抗Ｄｅｃｔｉｎ−２−化合物１（アジュバント化合物１と結合した抗体））である。見えていないがｘ軸に沿って３本のラインがあり、抗Ｄｅｃｔｉｎ−２抗体単独、及びアジュバント化合物１単独、及び抗Ｄｅｃｔｉｎ２抗体とアジュバント化合物１の混合物（抗Ｄｅｃｔｉｎ−２＋化合物１混合物、非複合体）が、いずれかのサイトカイン応答を産生できなかったことを示す。ＩＬ−６についてｘ軸のわずかに上方にあるラインは、対照抗体である、ＡＣＣとアジュバントとしての化合物１、及びラットＩｇＧ２アイソタイプの対照抗体（図２１中で「Ｉｓｏ−Ｃｍｐｄ１」と表示）。ＴＮＦα及びＩＬ−１２ｐ７０のグラフでは、Ｉｓｏ−Ｃｍｐｄ１のラインはｘ軸に沿っているため見えていない。
【００５０】
【図２２Ａ】アジュバントＣＬ２６４の構造を示し、円はアジュバント上の、リンカーに結合し得る位置、具体的にはアジュバントの末端カルボン酸を示す。
【００５１】
【図２２Ｂ】アジュバントＣＬ４０１の構造を示し、円はアジュバント上の、リンカーに結合し得る位置、具体的にはアジュバントの一級アミンを示す。
【００５２】
【図２２Ｃ】アジュバントＣＬ４１３の構造を示し、円はアジュバント上の、リンカーに結合し得る位置、具体的にはアジュバントの第１リジン残基を示す。
【００５３】
【図２２Ｄ】アジュバントＣＬ４１３の構造を示し、円はアジュバント上の、リンカーに結合し得る位置、具体的にはアジュバントの第２リジン残基を示す。
【００５４】
【図２２Ｅ】アジュバントＣＬ４１３の構造を示し、円はアジュバント上の、リンカーに結合し得る位置、具体的にはアジュバントの第３リジン残基を示す。
【００５５】
【図２２Ｆ】アジュバントＣＬ４１３の構造を示し、円はアジュバント上の、リンカーに結合し得る位置、具体的にはアジュバントの第４リジン残基を示す。
【００５６】
【図２２Ｇ】アジュバントＣＬ４１３の構造を示し、円はアジュバント上の、リンカーに結合し得る位置、具体的にはアジュバントの一級アミンを示す。
【００５７】
【図２２Ｈ】アジュバントＣＬ４１９の構造を示し、円はアジュバント上の、リンカーに結合し得る位置、具体的にはアジュバントのアミン（図２２Ｈの上図の末端アミン、及び図２２Ｈの下図の二級アミン）を示す。
【００５８】
【図２２Ｉ】アジュバントＣＬ５５３の構造を示し、円はアジュバント上の、リンカーに結合し得る位置、具体的にはアジュバントの二級アミンを示す。
【００５９】
【図２２Ｊ】アジュバントＣＬ５５３の構造を示し、円はアジュバント上の、リンカーに結合し得る位置、具体的にはアジュバントの別の二級アミンを示す。
【００６０】
【図２２Ｋ】アジュバントＣＬ５５３の構造を示し、円はアジュバント上の、リンカーに結合し得る位置、具体的にはアジュバントの一級アミンを示す。
【００６１】
【図２２Ｌ】アジュバントＣＬ５５３の構造を示し、円はアジュバント上の、リンカーに結合し得る位置、具体的にはアジュバントの別の二級アミンを示す。
【００６２】
【図２２Ｍ】アジュバントＣＬ５５３の構造を示し、円はアジュバント上の、リンカーに結合し得る位置、具体的にはアジュバントの別の二級アミンを示す。
【００６３】
【図２２Ｎ】アジュバントＣＬ５５３の構造を示し、円はアジュバント上の、リンカーに結合し得る位置、具体的にはアジュバントの別の二級アミンを示す。
【００６４】
【図２２Ｏ】アジュバントＣＬ５７２の構造を示し、円はアジュバント上の、リンカーに結合し得る位置、具体的にはアジュバントの一級アミン（図２２Ｏの上図）及びカルボニル（図２２Ｏの下図）を示す。
【００６５】
【図２２Ｐ】アジュバントＰａｍ２ＳＣＫ４の構造を示し、円はアジュバント上の、リンカーに結合し得る位置、具体的にはアジュバントの末端カルボン酸を示す。
【００６６】
【図２２Ｑ】アジュバントＰａｍ２ＳＣＫ４の構造を示し、円はアジュバント上の、リンカーに結合し得る位置、具体的にはアジュバントの末端チオールを示す。
【００６７】
【図２２Ｒ】アジュバントＰａｍ２ＳＣＫ４の構造を示し、円はアジュバント上の、リンカーに結合し得る位置、具体的にはアジュバントの第２リジン残基を示す。
【００６８】
【図２２Ｓ】アジュバントＰａｍ２ＳＣＫ４の構造を示し、円はアジュバント上の、リンカーに結合し得る位置、具体的にはアジュバントの第３リジン残基を示す。
【００６９】
【図２２Ｔ】アジュバントＰａｍ２ＳＣＫ４の構造を示し、円はアジュバント上の、リンカーに結合し得る位置、具体的にはアジュバントの末端リジン残基を示す。
【００７０】
【図２２Ｕ】アジュバントＰａｍ３ＳＣＫ４の構造を示し、円はアジュバント上の、リンカーに結合し得る位置、具体的にはアジュバントの末端カルボン酸を示す。
【００７１】
【図２２Ｖ】アジュバントＰａｍ３ＳＣＫ４の構造を示し、円はアジュバント上の、リンカーに結合し得る位置、具体的にはアジュバントの末端チオールを示す。
【００７２】
【図２２Ｗ】アジュバントＰａｍ３ＳＣＫ４の構造を示し、円はアジュバント上の、リンカーに結合し得る位置、具体的にはアジュバントの第２リジン残基を示す。
【００７３】
【図２２Ｘ】アジュバントＰａｍ３ＳＣＫ４の構造を示し、円はアジュバント上の、リンカーに結合し得る位置、具体的にはアジュバントの第３リジン残基を示す。
【００７４】
【図２３Ａ】αＣＬＥＣ５Ａ免疫複合体による分化細胞が、等量の非複合体の成分に曝露された細胞よりも、高レベルのＩＬ−６を分泌していることを示す。各サイトカインのｘ軸よりも極めて高いラインは、αＣＬＥＣ５Ａ免疫複合体（αＣＬＥＣ５Ａ抗体で、アジュバント化合物１と結合しているもの）である。ｘ軸に沿ったラインは、αＣＬＥＣ５Ａ抗体及びアジュバント化合物１の混合物（非複合体）が、いずれかのサイトカイン応答を産生できなかったことを示す。ｘ軸とαＣＬＥＣ５Ａ免疫複合体のラインとの間のランは、対照複合体である、ラットＩｇＧ２アイソタイプが化合物１に結合したものを表す。
【００７５】
【図２３Ｂ】αＣＬＥＣ５Ａ免疫複合体による分化細胞が、等量の非複合体の成分に曝露された細胞よりも、高レベルのＩＬ−１２ｐ４０を分泌していることを示す。各サイトカインのｘ軸よりも極めて高いラインは、αＣＬＥＣ５Ａ免疫複合体（αＣＬＥＣ５Ａ−Ｃｍｐｄ１  ＡＡＣ）である。ｘ軸に沿ったラインは、αＣＬＥＣ５Ａ抗体及びアジュバント化合物１の混合物（非複合体のαＣＬＥＣ５Ａ−Ｃｍｐｄ１混合物）が、いずれかのサイトカイン応答を産生できなかったことを示す。ｘ軸とαＣＬＥＣ５Ａ免疫複合体のラインとの間のランは、対照複合体である、ラットＩｇＧ２アイソタイプが化合物１に結合したものを表す。
【００７６】
【図２３Ｃ】αＣＬＥＣ５Ａ免疫複合体による分化細胞が、等量の非複合体の成分に曝露された細胞よりも、高レベルのＩＬ−１２ｐ７０を分泌していることを示す。各サイトカインのｘ軸よりも極めて高いラインは、αＣＬＥＣ５Ａ免疫複合体（αＣＬＥＣ５Ａ抗体で、アジュバント化合物１と結合しているもの）である。ｘ軸に沿ったラインは、αＣＬＥＣ５Ａ抗体及びアジュバント化合物１（非複合体）が、いずれかのサイトカイン応答を産生できなかったことを示す。ｘ軸とαＣＬＥＣ５Ａ免疫複合体のラインとの間のランは、対照複合体である、ラットＩｇＧ２アイソタイプが化合物１に結合したものを表す。
【００７７】
【図２３Ｄ】αＣＬＥＣ５Ａ免疫複合体による分化細胞が、等量の非複合体の成分に曝露された細胞よりも、高レベルのＴＮＦαを分泌していることを示す。各サイトカインのｘ軸よりも極めて高いラインは、αＣＬＥＣ５Ａ免疫複合体（αＣＬＥＣ５Ａ抗体で、アジュバント化合物１と結合しているもの）である。ｘ軸に沿ったラインは、αＣＬＥＣ５Ａ抗体及びアジュバント化合物１（非複合体）が、いずれかのサイトカイン応答を産生できなかったことを示す。ｘ軸とαＣＬＥＣ５Ａ免疫複合体のラインとの間のランは、対照複合体である、ラットＩｇＧ２アイソタイプが化合物１に結合したものを表す。
【００７８】
【図２３Ｅ】ＬＣ−ＭＳによるαＣＬＥＣ５Ａ免疫複合体の分析を示す。
【００７９】
【図２４】抗Ｈｅｒ２抗体アジュバント複合体（αＨｅｒ２免疫複合体、黒丸）が、ＴＬＲ７／８アゴニスト化合物１に結合したものを用いると、同じ抗体とアジュバント成分（αＨｅｒ２及び化合物１、黒四角）が非結合混合物として送達されたときと比較して、樹状細胞の分化が増加したことを示す。
【００８０】
【図２５】抗ＥＧＦＲ抗体アジュバント複合体（αＥＧＦＲ免疫複合体、黒丸）が、ＴＬＲ７／８アゴニスト化合物１に結合したものを用いると、同じ抗体とアジュバント成分（αＥＧＦＲ及び化合物１、黒四角）が非結合混合物として送達されたときと比較して、樹状細胞の分化が増加したことを示す。
【００８１】
【図２６】抗ＣＤ２０抗体が、ＴＬＲ７／８アゴニストに結合したものは、強い樹状細胞の活性化を示し、一方活性化は、脱グリコシル化複合体で顕著に低下することを示す。
【００８２】
【図２７】化合物１に結合したリツキシマブ及びオビヌツズマブ抗体の比較である。オビヌツズマブは、リツキシマブと比較してフコース含量が低く、ＣＤ４０の上方調節の増加を示す。
【００８３】
【図２８】ＴＬＲ７／８アゴニストである化合物１に結合したαＥＧＦＲ免疫複合体を用いる、ＮＫ細胞活性化を示す。免疫複合体は、αＥＧＦＲ及び化合物１の非複合型混合物と比較して、顕著に高いＮＫ細胞活性化を示す。
【００８４】
【図２９】αＥＧＦＲ免疫複合体を用いたヒト被験体から単離された末梢血単核球由来の樹状細胞集団における、強い活性化を示す。
【００８５】
【図３０Ａ】ＳＡＴＡ法を用いて合成した免疫複合体ＢＢ−０１の、液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【００８６】
【図３０Ｂ】エステル法を用いて合成した免疫複合体ＢＢ−０１の、液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【００８７】
【図３１Ａ】ＳＡＴＡ法を用いて合成した免疫複合体ＢＢ０１の、サイズ排除クロマトグラフィー分析を示す。
【００８８】
【図３１Ｂ】エステル法を用いて合成した免疫複合体ＢＢ−０１の、サイズ排除クロマトグラフィー分析を示す。
【００８９】
【図３２】エステル法を用いて合成した免疫複合体ＢＢ−１４の、液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【００９０】
【図３３】エステル法を用いて合成した免疫複合体ＢＢ−１４の、サイズ排除クロマトグラフィー分析を示す。
【００９１】
【図３４】エステル法を用いて合成した免疫複合体ＢＢ−１５の、液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【００９２】
【図３５】エステル法を用いて合成した免疫複合体ＢＢ−１５の、サイズ排除クロマトグラフィー分析を示す。
【００９３】
【図３６】エステル法を用いて合成した免疫複合体の、液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【００９４】
【図３７】エステル法を用いて合成した免疫複合体の、サイズ排除クロマトグラフィー分析を示す。
【００９５】
【図３８Ａ】エステル法を用いて合成したＢＢ−０１及びＢＢ−１７が、ＣＤ１４の下方制御によって示される骨髄系の活性化を誘発する一方で、対照が誘発しないことを示す。ＣＤ２０は、対照として用いた非複合型モノクローナル抗体である。
【００９６】
【図３８Ｂ】エステル法を用いて合成したＢＢ−０１及びＢＢ−１７が、ＣＤ１６の下方制御によって示される骨髄系の活性化を誘発する一方で、対照が誘発しないことを示す。ＣＤ２０は、対照として用いた非複合型モノクローナル抗体である。
【００９７】
【図３８Ｃ】エステル法を用いて合成したＢＢ−０１及びＢＢ−１７が、ＣＤ４０の上方制御によって示される骨髄系の活性化を誘発する一方で、対照が誘発しないことを示す。ＣＤ２０は、対照として用いた非複合型モノクローナル抗体である。
【００９８】
【図３８Ｄ】エステル法を用いて合成したＢＢ−０１及びＢＢ−１７が、ＣＤ８６の上方制御によって示される骨髄系の活性化を誘発する一方で、対照が誘発しないことを示す。ＣＤ２０は、対照として用いた非複合型モノクローナル抗体である。
【００９９】
【図３８Ｅ】エステル法を用いて合成したＢＢ−０１及びＢＢ−１７が、ＣＤ１２３の上方制御によって示される骨髄系の活性化を誘発する一方で、対照が誘発しないことを示す。ＣＤ２０は、対照として用いた非複合型モノクローナル抗体である。
【０１００】
【図３８Ｆ】エステル法を用いて合成したＢＢ−０１及びＢＢ−１７が、ヒト白血球型抗原−抗原Ｄ関連、すなわち「ＨＬＡ−ＤＲ」によって示される骨髄系の活性化を誘発する一方で、対照が誘発しないことを示す。ＣＤ２０は、対照として用いた非複合型モノクローナル抗体である。
【０１０１】
【図３９Ａ】ＢＢ−０１が、ＣＤ１４の下方制御によって示される骨髄系の活性化を誘発する一方で、比較ＩＲＭ１及びＩＲＭ２免疫複合体が誘発しないことを示す。ＣＤ２０は、対照として用いた非複合型モノクローナル抗体である。
【０１０２】
【図３９Ｂ】ＢＢ−０１が、ＣＤ１６の下方制御によって示される骨髄系の活性化を誘発する一方で、比較ＩＲＭ１及びＩＲＭ２免疫複合体が誘発しないことを示す。ＣＤ２０は、対照として用いた非複合型モノクローナル抗体である。
【０１０３】
【図３９Ｃ】ＢＢ−０１が、ＣＤ４０の上方制御によって示される骨髄系の活性化を誘発する一方で、比較ＩＲＭ１及びＩＲＭ２免疫複合体が誘発しないことを示す。ＣＤ２０は、対照として用いた非複合型モノクローナル抗体である。
【０１０４】
【図３９Ｄ】ＢＢ−０１が、ＣＤ８６の上方制御によって示される骨髄系の活性化を誘発する一方で、比較ＩＲＭ１及びＩＲＭ２免疫複合体が誘発しないことを示す。ＣＤ２０は、対照として用いた非複合型モノクローナル抗体である。
【０１０５】
【図３９Ｅ】ＢＢ−０１が、ＣＤ１２３の上方制御によって示される骨髄系の活性化を誘発する一方で、比較ＩＲＭ１及びＩＲＭ２免疫複合体が誘発しないことを示す。ＣＤ２０は、対照として用いた非複合型モノクローナル抗体である。
【０１０６】
【図３９Ｆ】ＢＢ−０１が、ＨＬＡ−ＤＲの上方制御によって示される骨髄系の活性化を誘発する一方で、比較ＩＲＭ１及びＩＲＭ２免疫複合体が誘発しないことを示す。ＣＤ２０は、対照として用いた非複合型モノクローナル抗体である。
【０１０７】
【図４０Ａ】ＢＢ−０１が、サイトカイン分泌（ＩＬ−１β）を誘発する一方で、比較ＩＲＭ１及びＩＲＭ２免疫複合体が誘発しないことを示す。ＣＤ２０は、対照として用いた非複合型モノクローナル抗体である。
【０１０８】
【図４０Ｂ】ＢＢ−０１が、サイトカイン分泌（ＩＬ−６）を誘発する一方で、比較ＩＲＭ１及びＩＲＭ２免疫複合体が誘発しないことを示す。ＣＤ２０は、対照として用いた非複合型モノクローナル抗体である。
【０１０９】
【図４０Ｃ】ＢＢ−０１が、サイトカイン分泌（ＴＮＦα）を誘発する一方で、）比較ＩＲＭ１及びＩＲＭ２免疫複合体が誘発しないことを示す。ＣＤ２０は、対照として用いた非複合型モノクローナル抗体である。
【０１１０】
【図４１Ａ】エステル法を用いて合成した免疫複合体ＢＢ−２６の、サイズ排除クロマトグラフィー分析を示す。
【０１１１】
【図４１Ｂ】エステル法を用いて合成した免疫複合体ＢＢ−２６の、液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０１１２】
【図４２Ａ】エステル法を用いて合成した免疫複合体ＢＢ−２７の、サイズ排除クロマトグラフィー分析を示す。
【０１１３】
【図４２Ｂ】エステル法を用いて合成した免疫複合体ＢＢ−２７の、液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０１１４】
【図４３Ａ】エステル法を用いて合成した免疫複合体ＢＢ−３６の、サイズ排除クロマトグラフィー分析を示す。
【０１１５】
【図４３Ｂ】エステル法を用いて合成した免疫複合体ＢＢ−３６の、液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０１１６】
【図４４Ａ】比較複合体ＩＲＭ１の、サイズ排除クロマトグラフィー分析を示す。
【０１１７】
【図４４Ｂ】比較複合体ＩＲＭ２の、サイズ排除クロマトグラフィー分析を示す。
【０１１８】
【図４４Ｃ】ＢＢ−０１の、サイズ排除クロマトグラフィー分析を示す。
【０１１９】
【図４５Ａ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＩＲＭ１複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０１２０】
【図４５Ｂ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０１複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０１２１】
【図４６Ａ】エステル法を用いて合成した免疫複合体ＢＢ−４５の、サイズ排除クロマトグラフィー分析を示す。
【０１２２】
【図４６Ｂ】エステル法を用いて合成した免疫複合体ＢＢ−４５の、液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０１２３】
【図４７Ａ】エステル法を用いて合成した免疫複合体ＢＢ−２４の、サイズ排除クロマトグラフィー分析を示す。
【０１２４】
【図４７Ｂ】エステル法を用いて合成した免疫複合体ＢＢ−２４の、液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０１２５】
【図４８Ａ】エステル法を用いて合成した免疫複合体ＢＢ−３７の、サイズ排除クロマトグラフィー分析を示す。
【０１２６】
【図４８Ｂ】エステル法を用いて合成した免疫複合体ＢＢ−３７の、液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０１２７】
【図４９Ａ】エステル法を用いて合成した免疫複合体ＢＢ−４２の、サイズ排除クロマトグラフィー分析を示す。
【０１２８】
【図４９Ｂ】エステル法を用いて合成した免疫複合体ＢＢ−４２の、液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０１２９】
【図５０】エステル法を用いて合成した免疫複合体ＢＢ−４３の、液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０１３０】
【図５１】エステル法を用いて合成した免疫複合体ＢＢ−４４の、液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０１３１】
【図５２Ａ】ＢＢ−１４が、ＣＤ１４の下方制御によって示される骨髄系の活性化を誘発する一方で、対照が誘発しないことを示す。ＣＤ２０は、対照として用いた非複合型モノクローナル抗体である。
【０１３２】
【図５２Ｂ】ＢＢ−１４が、ＣＤ４０の上方制御によって示される骨髄系の活性化を誘発する一方で、対照が誘発しないことを示す。ＣＤ２０は、対照として用いた非複合型モノクローナル抗体である。
【０１３３】
【図５２Ｃ】ＢＢ−１４が、ＣＤ８６の上方制御によって示される骨髄系の活性化を誘発する一方で、対照が誘発しないことを示す。ＣＤ２０は、対照として用いた非複合型モノクローナル抗体である。
【０１３４】
【図５２Ｄ】ＢＢ−１４が、ＨＬＡ−ＤＲの上方制御によって示される骨髄系の活性化を誘発する一方で、対照が誘発しないことを示す。ＣＤ２０は、対照として用いた非複合型モノクローナル抗体である。
【０１３５】
【図５３Ａ】ＢＢ−１５が、ＣＤ１４の下方制御によって示される骨髄系の活性化を誘発する一方で、対照が誘発しないことを示す。ＣＤ２０は、対照として用いた非複合型モノクローナル抗体である。
【０１３６】
【図５３Ｂ】ＢＢ−１５が、ＣＤ４０の上方制御によって示される骨髄系の活性化を誘発する一方で、対照が誘発しないことを示す。ＣＤ２０は、対照として用いた非複合型モノクローナル抗体である。
【０１３７】
【図５３Ｃ】ＢＢ−１５が、ＣＤ８６の上方制御によって示される骨髄系の活性化を誘発する一方で、対照が誘発しないことを示す。ＣＤ２０は、対照として用いた非複合型モノクローナル抗体である。
【０１３８】
【図５３Ｄ】ＢＢ−２７が、ＨＬＡ−ＤＲの上方制御によって示される骨髄系の活性化を誘発する一方で、対照が誘発しないことを示す。ＣＤ２０は、対照として用いた非複合型モノクローナル抗体である。
【０１３９】
【図５４Ａ】ＢＢ−２７が、ＣＤ１４の下方制御によって示される骨髄系の活性化を誘発する一方で、対照が誘発しないことを示す。ＣＤ２０は、対照として用いた非複合型モノクローナル抗体である。
【０１４０】
【図５４Ｂ】ＢＢ−２７が、ＣＤ４０の上方制御によって示される骨髄系の活性化を誘発する一方で、対照が誘発しないことを示す。ＣＤ２０は、対照として用いた非複合型モノクローナル抗体である。
【０１４１】
【図５４Ｃ】ＢＢ−２７が、ＣＤ８６の上方制御によって示される骨髄系の活性化を誘発する一方で、対照が誘発しないことを示す。ＣＤ２０は、対照として用いた非複合型モノクローナル抗体である。
【０１４２】
【図５４Ｄ】ＢＢ−２７が、ＨＬＡ−ＤＲの上方制御によって示される骨髄系の活性化を誘発する一方で、対照が誘発しないことを示す。ＣＤ２０は、対照として用いた非複合型モノクローナル抗体である。
【０１４３】
【図５５Ａ】ＢＢ−４５が、ＣＤ１４の下方制御によって示される骨髄系の活性化を誘発する一方で、対照が誘発しないことを示す。ＣＤ２０は、対照として用いた非複合型モノクローナル抗体である。
【０１４４】
【図５５Ｂ】ＢＢ−４５が、ＣＤ４０の上方制御によって示される骨髄系の活性化を誘発する一方で、対照が誘発しないことを示す。ＣＤ２０は、対照として用いた非複合型モノクローナル抗体である。
【０１４５】
【図５５Ｃ】ＢＢ−４５が、ＣＤ８６の上方制御によって示される骨髄系の活性化を誘発する一方で、対照が誘発しないことを示す。ＣＤ２０は、対照として用いた非複合型モノクローナル抗体である。
【０１４６】
【図５５Ｄ】ＢＢ−４５が、ＨＬＡ−ＤＲの上方制御によって示される骨髄系の活性化を誘発する一方で、対照が誘発しないことを示す。ＣＤ２０は、対照として用いた非複合型モノクローナル抗体である。
【０１４７】
【図５６Ａ】ＢＢ−２４が、ＣＤ１４の下方制御によって示される骨髄系の活性化を誘発する一方で、対照が誘発しないことを示す。ＣＤ２０は、対照として用いた非複合型モノクローナル抗体である。
【０１４８】
【図５６Ｂ】ＢＢ−２４が、ＣＤ４０の上方制御によって示される骨髄系の活性化を誘発する一方で、対照が誘発しないことを示す。ＣＤ２０は、対照として用いた非複合型モノクローナル抗体である。
【０１４９】
【図５６Ｃ】ＢＢ−２４が、ＣＤ８６の上方制御によって示される骨髄系の活性化を誘発する一方で、対照が誘発しないことを示す。ＣＤ２０は、対照として用いた非複合型モノクローナル抗体である。
【０１５０】
【図５６Ｄ】ＢＢ−２４が、ＨＬＡ−ＤＲの上方制御によって示される骨髄系の活性化を誘発する一方で、対照が誘発しないことを示す。ＣＤ２０は、対照として用いた非複合型モノクローナル抗体である。
【０１５１】
【図５７】ＢＢ−０１の、非ホジキンリンパ腫の研究のモデル系として使用される細胞株である、ＣＤ２０  Ｔｏｌｅｄｏ細胞への結合を示す。ＢＢ−０１は、抗体であるリツキシマブ又はセツキシマブよりも強い結合を有していた。
【０１５２】
【図５８】化合物１とのａＥＧＦＲ免疫複合体（ａＥＧＦＲ  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、ＮＫ細胞の活性化において、抗体とアジュバントの混合物よりも効果が高かったことを示す。ＰＢＭＣを、免疫複合体又は混合物で１８時間活性化した。ＮＫ細胞を、系列陰性（ＣＤ３、ＣＤ１９、ＣＤ１４陰性）及びＣＤ５６陽性によってゲーティングした。
【０１５３】
【図５９】ＬＣ−ＭＳ（ＤＧ）による、比較免疫複合体の分析を示す。この比較複合体は、トラスツズマブ及び、ガーディキモドを有するペンタフルオロフェニル基を含む切断不可能なマレイミド−ＰＥＧ４リンカーを用いて調製した（米国特許出願公開第２０１７／０１５７７２号、段落０２７５、免疫複合体ＡＴＡＣ３の説明参照）。
【０１５４】
【図６０】ＬＣ−ＭＳ（重鎖）による、比較免疫複合体の分析を示す。この比較複合体は、トラスツズマブ及び、ガーディキモドを有するペンタフルオロフェニル基を含む切断不可能なマレイミド−ＰＥＧ４リンカーを用いて調製した（米国特許出願公開第２０１７／０１５７７２号、段落０２７５、免疫複合体ＡＴＡＣ３の説明参照）。
【０１５５】
【図６１】ＬＣ−ＭＳによる、比較免疫複合体の分析を示す。この比較複合体は、トラスツズマブ及び、ガーディキモドを有するペンタフルオロフェニル基を含む切断不可能なマレイミド−ＰＥＧ４リンカーを用いて調製した（米国特許出願公開第２０１７／０１５７７２号、段落０２７５、免疫複合体ＡＴＡＣ３の説明参照）。
【０１５６】
【図６２】ＬＣ−ＭＳ（軽鎖）による、比較免疫複合体の分析を示す。この比較複合体は、トラスツズマブ及び、ガーディキモドを有するペンタフルオロフェニル基を含む切断不可能なマレイミド−ＰＥＧ４リンカーを用いて調製した（米国特許出願公開第２０１７／０１５７７２号、段落０２７５、免疫複合体ＡＴＡＣ３の説明参照）。
【０１５７】
【図６３】ＬＣ−ＭＳ（ＤＧ、重鎖）による、比較免疫複合体の分析を示す。この比較複合体は、トラスツズマブ及び、ガーディキモドを有するペンタフルオロフェニル基を含む切断不可能なマレイミド−ＰＥＧ４リンカーを用いて調製した（米国特許出願公開第２０１７／０１５７７２号、段落０２７５、免疫複合体ＡＴＡＣ３の説明参照）。
【０１５８】
【図６４】ＬＣ−ＭＳ（ＤＧ、軽鎖）による、比較免疫複合体の分析を示す。この比較複合体は、トラスツズマブ及び、ガーディキモドを有するペンタフルオロフェニル基を含む切断不可能なマレイミド−ＰＥＧ４リンカーを用いて調製した（米国特許出願公開第２０１７／０１５７７２号、段落０２７５、免疫複合体ＡＴＡＣ３の説明参照）。
【０１５９】
【図６５】ＬＣ−ＭＳ（ＤＧ）による、比較免疫複合体の分析を示す。この比較複合体は、トラスツズマブ及び、スクシンアミドを有するＰＡＢＡ基を含む切断可能なバリン−シトルリンリンカーを用いて調製した（米国特許出願公開第２０１７／０１５７７２号、段落０２７５、免疫複合体ＡＴＡＣ２の説明参照）。
【０１６０】
【図６６】ＬＣ−ＭＳによる、比較免疫複合体の分析を示す。この比較複合体は、トラスツズマブ及び、スクシンアミドを有するＰＡＢＡ基を含む切断可能なバリン−シトルリンリンカーを用いて調製した（米国特許出願公開第２０１７／０１５７７２号、段落０２７５、免疫複合体ＡＴＡＣ２の説明参照）。
【０１６１】
【図６７Ａ】ＢＢ−０１  ＳＡＴＡ法によって作製されたリツキシマブ免疫複合体（リツキシマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）並びに、リツキシマブとバリン−シトルリン−ＰＡＢＣかマレイミド−ＰＥＧ４リンカーのいずれかを用いて調製した等モル濃度の比較複合体（いずれも、ガーディキモドを有するペンタフルオロフェニル基を含む）（それぞれ、米国特許出願公開第２０１７／０１５７７２号のリツキシマブ−ＡＴＡＣ２、リツキシマブ−ＡＴＡＣ３）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞からの優れたＩＬ−１β分泌を誘発することを示す。
【０１６２】
【図６７Ｂ】ＢＢ−０１  ＳＡＴＡ法によって作製されたリツキシマブ免疫複合体（リツキシマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）並びに、リツキシマブとバリン−シトルリン−ＰＡＢＣかマレイミド−ＰＥＧ４リンカーのいずれかを用いて調製した等モル濃度の比較複合体（いずれも、ガーディキモドを有するペンタフルオロフェニル基を含む）（それぞれ、米国特許出願公開第２０１７／０１５７７２号のリツキシマブ−ＡＴＡＣ２、リツキシマブ−ＡＴＡＣ３）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞からの優れたＴＮＦα分泌を誘発することを示す。
【０１６３】
【図６７Ｃ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０１結合法によるリツキシマブ免疫複合体、又は、米国特許出願公開第２０１７／０１５７７２号に記載される方法によるリツキシマブ免疫複合体の産生に用いた、非複合体型リツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０１６４】
【図６７Ｄ】ＢＢ−０１結合法によるリツキシマブ免疫複合体、又は、米国特許出願公開第２０１７／０１５７７２号に記載される方法によるリツキシマブ免疫複合体の産生に用いた、非複合体型リツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０１６５】
【図６７Ｅ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、米国特許出願公開第２０１７／０１５７７２号に記載されるようにバリン−シトルリン−ＰＡＢＣリンカーを用いて産生されたリツキシマブ免疫複合体の同側の重−軽鎖の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０１６６】
【図６７Ｆ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、米国特許出願公開第２０１７／０１５７７２号に記載されるようにバリン−シトルリン−ＰＡＢＣリンカーを用いて産生されたリツキシマブ免疫複合体の軽鎖の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０１６７】
【図６７Ｇ】米国特許出願公開第２０１７／０１５７７２号に記載される方法に従って産生されたバリン−シトルリン−ＰＡＢＣリンカーを有するリツキシマブ免疫複合体（Ｒｉｔｕｘ−ＡＴＡＣ２）が、骨髄系細胞において、ＣＤ１２３の上方制御を、１８時間の刺激後に誘発できなかったことを示す。図６７Ｇは、ＳＡＴＡ法に従って産生されたＢＢ−０１免疫複合体［リツキシマブＢｏｌｔｂｏｄｙ（ＢＢ−０１）］が、ＣＤ１２３の上方制御の誘発において、Ｒｉｔｕｘ−ＡＴＡＣ２と等モル濃度の非複合体型リツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比べて優れていることも示す。
【０１６８】
【図６７Ｈ】米国特許出願公開第２０１７／０１５７７２号に記載される方法に従って産生されたバリン−シトルリン−ＰＡＢＣリンカーを有するリツキシマブ免疫複合体（Ｒｉｔｕｘ−ＡＴＡＣ２）が、骨髄系細胞において、ＣＤ１４の下方制御を、１８時間の刺激後に誘発できなかったことを示す。図６７Ｈは、ＳＡＴＡ法に従って産生されたＢＢ−０１免疫複合体［リツキシマブＢｏｌｔｂｏｄｙ（ＢＢ−０１）］が、ＣＤ１４の下方制御の誘発において、Ｒｉｔｕｘ−ＡＴＡＣ２と等モル濃度の非複合体型リツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比べて優れていることも示す。
【０１６９】
【図６７Ｉ】ＳＡＴＡ法に従って産生されたＢＢ−０１免疫複合体［リツキシマブＢｏｌｔｂｏｄｙ（ＢＢ−０１）］が、骨髄系細胞でのＣＤ１６の下方制御の誘発において、米国特許出願公開第２０１７／０１５７７２号に記載の方法に従って産生されたバリン−シトルリン−ＰＡＢＣリンカーを有するリツキシマブ免疫複合体（Ｒｉｔｕｘ−ＡＴＡＣ２）及び等モル濃度の非複合体型リツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して優れていることを示す。
【０１７０】
【図６７Ｊ】米国特許出願公開第２０１７／０１５７７２号に記載される方法に従って産生されたバリン−シトルリン−ＰＡＢＣリンカーを有するリツキシマブ免疫複合体（Ｒｉｔｕｘ−ＡＴＡＣ２）が、骨髄系細胞において、ＣＤ４０の上方制御を、１８時間の刺激後に誘発できなかったことを示す。図６７Ｊは、ＳＡＴＡ法に従って産生されたＢＢ−０１免疫複合体［リツキシマブＢｏｌｔｂｏｄｙ（ＢＢ−０１）］が、ＣＤ４０の上方制御の誘発において、Ｒｉｔｕｘ−ＡＴＡＣ２と等モル濃度の非複合体型リツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比べて優れていることも示す。
【０１７１】
【図６７Ｋ】ＳＡＴＡ法に従って産生されたＢＢ−０１免疫複合体［リツキシマブＢｏｌｔｂｏｄｙ（ＢＢ−０１）］が、骨髄系細胞でのＣＤ８６の上方制御の誘発において、米国特許出願公開第２０１７／０１５７７２号に記載の方法に従って産生されたバリン−シトルリン−ＰＡＢＣリンカーを有するリツキシマブ免疫複合体（Ｒｉｔｕｘ−ＡＴＡＣ２）及び等モル濃度の非複合体型リツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して優れていることを示す。
【０１７２】
【図６７Ｌ】米国特許出願公開第２０１７／０１５７７２号に記載の方法に従って産生されたバリン−シトルリン−ＰＡＢＣリンカーを有するリツキシマブ免疫複合体（Ｒｉｔｕｘ−ＡＴＡＣ２）での１８時間の刺激後の、非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較する、骨髄系細胞でのＣＤ１２３発現を示す。
【０１７３】
【図６７Ｍ】米国特許出願公開第２０１７／０１５７７２号に記載の方法に従って産生されたバリン−シトルリン−ＰＡＢＣリンカーを有するリツキシマブ免疫複合体（Ｒｉｔｕｘ−ＡＴＡＣ２）での１８時間の刺激後の、非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較する、骨髄系細胞でのＣＤ１４発現を示す。
【０１７４】
【図６７Ｎ】米国特許出願公開第２０１７／０１５７７２号に記載の方法に従って産生されたバリン−シトルリン−ＰＡＢＣリンカーを有するリツキシマブ免疫複合体（Ｒｉｔｕｘ−ＡＴＡＣ２）での１８時間の刺激後の、非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較する、骨髄系細胞でのＣＤ１６発現を示す。
【０１７５】
【図６７Ｏ】米国特許出願公開第２０１７／０１５７７２号に記載の方法に従って産生されたバリン−シトルリン−ＰＡＢＣリンカーを有するリツキシマブ免疫複合体（Ｒｉｔｕｘ−ＡＴＡＣ２）での１８時間の刺激後の、非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較する、骨髄系細胞でのＣＤ４０発現を示す。
【０１７６】
【図６７Ｐ】米国特許出願公開第２０１７／０１５７７２号に記載の方法に従って産生されたバリン−シトルリン−ＰＡＢＣリンカーを有するリツキシマブ免疫複合体（Ｒｉｔｕｘ−ＡＴＡＣ２）での１８時間の刺激後の、非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較する、骨髄系細胞でのＣＤ８６発現を示す。
【０１７７】
【図６８Ａ】ＢＢ−０１  ＳＡＴＡ法によって作製されたリツキシマブ免疫複合体（リツキシマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）並びに、リツキシマブとバリン−シトルリン−ＰＡＢＣかマレイミド−ＰＥＧ４リンカーのいずれかを用いて調製した等モル濃度の比較複合体（いずれも、ガーディキモドを有するペンタフルオロフェニル基を含む）（それぞれ、米国特許出願公開第２０１７／０１５７７２号のリツキシマブ−ＡＴＡＣ２、リツキシマブ−ＡＴＡＣ３）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞からの優れたＩＬ−１β分泌を誘発することを示す。
【０１７８】
【図６８Ｂ】ＢＢ−０１  ＳＡＴＡ法によって作製されたリツキシマブ免疫複合体（リツキシマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）並びに、リツキシマブとバリン−シトルリン−ＰＡＢＣかマレイミド−ＰＥＧ４リンカーのいずれかを用いて調製した等モル濃度の比較複合体（いずれも、ガーディキモドを有するペンタフルオロフェニル基を含む）（それぞれ、米国特許出願公開第２０１７／０１５７７２号のリツキシマブ−ＡＴＡＣ２、リツキシマブ−ＡＴＡＣ３）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞からの優れたＴＮＦα分泌を誘発することを示す。
【０１７９】
【図６８Ｃ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０１結合法によるリツキシマブ免疫複合体、又は、米国特許出願公開第２０１７／０１５７７２号に記載される方法によるリツキシマブ免疫複合体の産生に用いた、非複合体型リツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０１８０】
【図６８Ｄ】ＢＢ−０１結合法によるリツキシマブ免疫複合体、又は、米国特許出願公開第２０１７／０１５７７２号に記載される方法によるリツキシマブ免疫複合体の産生に用いた、非複合体型リツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０１８１】
【図６８Ｅ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、米国特許出願公開第２０１７／０１５７７２号に記載されるようにマレイミド−ＰＥＧ４リンカーを用いて産生されたリツキシマブ免疫複合体の同側の重−軽鎖の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０１８２】
【図６８Ｆ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、米国特許出願公開第２０１７／０１５７７２号に記載されるようにマレイミド−ＰＥＧ４リンカーを用いて産生されたリツキシマブ免疫複合体の軽鎖の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０１８３】
【図６８Ｇ】米国特許出願公開第２０１７／０１５７７２号に記載される方法に従って産生されたマレイミド−ＰＥＧ４リンカーを有するリツキシマブ免疫複合体（Ｒｉｔｕｘ−ＡＴＡＣ３）が、骨髄系細胞において、ＣＤ１２３の上方制御を、１８時間の刺激後に誘発できなかったことを示す。図６８Ｇは、ＳＡＴＡ法に従って産生されたＢＢ−０１免疫複合体［リツキシマブＢｏｌｔｂｏｄｙ（ＢＢ−０１）］が、ＣＤ１２３の上方制御の誘発において、Ｒｉｔｕｘ−ＡＴＡＣ３と等モル濃度の非複合体型リツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比べて優れていることも示す。
【０１８４】
【図６８Ｈ】ＳＡＴＡ法に従って産生されたＢＢ−０１免疫複合体［リツキシマブＢｏｌｔｂｏｄｙ（ＢＢ−０１）］が、刺激１８時間後の骨髄系細胞でのＣＤ１４の下方制御の誘発において、米国特許出願公開第２０１７／０１５７７２号に記載の方法に従って産生されたマレイミド−ＰＥＧ４リンカーを有するリツキシマブ免疫複合体（Ｒｉｔｕｘ−ＡＴＡＣ３）及び等モル濃度の非複合体型リツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して優れていることを示す。
【０１８５】
【図６８Ｉ】米国特許出願公開第２０１７／０１５７７２号に記載される方法に従って産生されたマレイミド−ＰＥＧ４リンカーを有するリツキシマブ免疫複合体（Ｒｉｔｕｘ−ＡＴＡＣ３）が、骨髄系細胞において、ＣＤ１６の下方制御を、１８時間の刺激後に誘発できなかったことを示す。図６８Ｉは、ＳＡＴＡ法に従って産生されたＢＢ−０１免疫複合体［リツキシマブＢｏｌｔｂｏｄｙ（ＢＢ−０１）］が、ＣＤ４０の上方制御の誘発において、Ｒｉｔｕｘ−ＡＴＡＣ２と等モル濃度の非複合体型リツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比べて優れていることも示す。
【０１８６】
【図６８Ｊ】米国特許出願公開第２０１７／０１５７７２号に記載される方法に従って産生されたマレイミド−ＰＥＧ４リンカーを有するリツキシマブ免疫複合体（Ｒｉｔｕｘ−ＡＴＡＣ３）が、骨髄系細胞において、ＣＤ４０の上方制御を、１８時間の刺激後に誘発できなかったことを示す。図６８Ｊは、ＳＡＴＡ法に従って産生されたＢＢ−０１免疫複合体［リツキシマブＢｏｌｔｂｏｄｙ（ＢＢ−０１）］が、ＣＤ４０の上方制御の誘発において、Ｒｉｔｕｘ−ＡＴＡＣ２と等モル濃度の非複合体型リツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比べて優れていることも示す。
【０１８７】
【図６８Ｋ】米国特許出願公開第２０１７／０１５７７２号に記載される方法に従って産生されたマレイミド−ＰＥＧ４リンカーを有するリツキシマブ免疫複合体（Ｒｉｔｕｘ−ＡＴＡＣ３）が、骨髄系細胞において、ＣＤ８６の上方制御を、１８時間の刺激後に誘発できなかったことを示す。図６８Ｊは、ＳＡＴＡ法に従って産生されたＢＢ−０１免疫複合体［リツキシマブＢｏｌｔｂｏｄｙ（ＢＢ−０１）］が、ＣＤ８６の上方制御の誘発において、Ｒｉｔｕｘ−ＡＴＡＣ２と等モル濃度の非複合体型リツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比べて優れていることも示す。
【０１８８】
【図６８Ｌ】米国特許出願公開第２０１７／０１５７７２号に記載の方法に従って産生されたマレイミド−ＰＥＧ４リンカーを有するリツキシマブ免疫複合体（Ｒｉｔｕｘ−ＡＴＡＣ３）での１８時間の刺激後の、非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較する、骨髄系細胞でのＣＤ１２３発現を示す。
【０１８９】
【図６８Ｍ】米国特許出願公開第２０１７／０１５７７２号に記載の方法に従って産生されたマレイミド−ＰＥＧ４リンカーを有するリツキシマブ免疫複合体（Ｒｉｔｕｘ−ＡＴＡＣ３）での１８時間の刺激後の、非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較する、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲ発現を示す。
【０１９０】
【図６８Ｎ】米国特許出願公開第２０１７／０１５７７２号に記載の方法に従って産生されたマレイミド−ＰＥＧ４リンカーを有するリツキシマブ免疫複合体（Ｒｉｔｕｘ−ＡＴＡＣ３）での１８時間の刺激後の、非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較する、骨髄系細胞でのＣＤ１４発現を示す。
【０１９１】
【図６８Ｏ】米国特許出願公開第２０１７／０１５７７２号に記載の方法に従って産生されたマレイミド−ＰＥＧ４リンカーを有するリツキシマブ免疫複合体（Ｒｉｔｕｘ−ＡＴＡＣ３）での１８時間の刺激後の、非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較する、骨髄系細胞でのＣＤ１６発現を示す。
【０１９２】
【図６８Ｐ】米国特許出願公開第２０１７／０１５７７２号に記載の方法に従って産生されたマレイミド−ＰＥＧ４リンカーを有するリツキシマブ免疫複合体（Ｒｉｔｕｘ−ＡＴＡＣ３）での１８時間の刺激後の、非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較する、骨髄系細胞でのＣＤ４０発現を示す。
【０１９３】
【図６８Ｑ】米国特許出願公開第２０１７／０１５７７２号に記載の方法に従って産生されたマレイミド−ＰＥＧ４リンカーを有するリツキシマブ免疫複合体（Ｒｉｔｕｘ−ＡＴＡＣ３）での１８時間の刺激後の、非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較する、骨髄系細胞でのＣＤ８６発現を示す。
【０１９４】
【図６９Ａ】ＢＢ−０１法に従って産生されたアテゾリズマブ免疫複合体（アテゾリズマブＩｇＧ１  ＮＱ  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、等モル濃度の非複合体のアテゾリズマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞からの優れたＩＬ−１β分泌を誘発することを示す。
【０１９５】
【図６９Ｂ】ＢＢ−０１法に従って産生されたアテゾリズマブ免疫複合体（アテゾリズマブＩｇＧ１  ＮＱ  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、等モル濃度の非複合体のアテゾリズマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞からの優れたＴＮＦα分泌を誘発することを示す。
【０１９６】
【図６９Ｃ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０１結合法に従って産生されたアテゾリズマブ免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０１９７】
【図６９Ｄ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０１結合法によるアテゾリズマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のアテゾリズマブ（Ｒｏｃｈｅ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０１９８】
【図６９Ｅ】ＢＢ−０１法によるアテゾリズマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のアテゾリズマブ（Ｒｏｃｈｅ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０１９９】
【図６９Ｆ】非複合体のアテゾリズマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較する、ＢＢ−０１法に従って産生されたアテゾリズマブ免疫複合体（アテゾリズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１２３発現を示す。
【０２００】
【図６９Ｇ】非複合体のアテゾリズマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較する、ＢＢ−０１法に従って産生されたアテゾリズマブ免疫複合体（アテゾリズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲ発現を示す。
【０２０１】
【図６９Ｈ】ＢＢ−０１法に従って産生されたアテゾリズマブ免疫複合体（アテゾリズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のアテゾリズマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１４の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２０２】
【図６９Ｉ】ＢＢ−０１法に従って産生されたアテゾリズマブ免疫複合体（アテゾリズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のアテゾリズマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１６の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２０３】
【図６９Ｊ】ＢＢ−０１法に従って産生されたアテゾリズマブ免疫複合体（アテゾリズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のアテゾリズマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ４０の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２０４】
【図６９Ｋ】非複合体のアテゾリズマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較する、ＢＢ−０１法に従って産生されたアテゾリズマブ免疫複合体（アテゾリズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ８６発現を示す。
【０２０５】
【図７０Ａ】ＢＢ−０１法に従って産生されたベバシズマブ免疫複合体（ベバシズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、等モル濃度の非複合体のベバシズマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞からの優れたＩＬ−１β分泌を誘発することを示す。
【０２０６】
【図７０Ｂ】ＢＢ−０１法に従って産生されたベバシズマブ免疫複合体（ベバシズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、等モル濃度の非複合体のベバシズマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞からの優れたＴＮＦα分泌を誘発することを示す。
【０２０７】
【図７０Ｃ】ＢＢ−０１法に従って産生されたベバシズマブ免疫複合体（ベバシズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、等モル濃度の非複合体のベバシズマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激３６時間後に、骨髄系細胞からの優れたＩＬ−１β分泌を誘発することを示す。
【０２０８】
【図７０Ｄ】ＢＢ−０１法に従って産生されたベバシズマブ免疫複合体（ベバシズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、等モル濃度の非複合体のベバシズマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激３６時間後に、骨髄系細胞からの優れたＴＮＦα分泌を誘発することを示す。
【０２０９】
【図７０Ｅ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０１結合法に従って産生されたベバシズマブ免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０２１０】
【図７０Ｆ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０１結合法によるベバシズマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のベバシズマブ（Ｒｏｃｈｅ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０２１１】
【図７０Ｇ】ＢＢ−０１法によるベバシズマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のベバシズマブ（Ｒｏｃｈｅ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０２１２】
【図７０Ｈ】ＢＢ−０１法に従って産生されたベバシズマブ免疫複合体（ベバシズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のベバシズマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１２３の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２１３】
【図７０Ｉ】非複合体のベバシズマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較する、ＢＢ−０１法に従って産生されたベバシズマブ免疫複合体（ベバシズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲ発現を示す。
【０２１４】
【図７０Ｊ】ＢＢ−０１法に従って産生されたベバシズマブ免疫複合体（ベバシズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のベバシズマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１４の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２１５】
【図７０Ｋ】ＢＢ−０１法に従って産生されたベバシズマブ免疫複合体（ベバシズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のベバシズマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１６の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２１６】
【図７０Ｌ】ＢＢ−０１法に従って産生されたベバシズマブ免疫複合体（ベバシズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のベバシズマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ４０の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２１７】
【図７０Ｍ】ＢＢ−０１法に従って産生されたベバシズマブ免疫複合体（ベバシズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のベバシズマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ８６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２１８】
【図７１Ａ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、セツキシマブのバイオシミラー（Ａｌｐｈａｍａｂ）からＢＢ−０１結合法に従って産生されたセツキシマブ免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０２１９】
【図７１Ｂ】ＢＢ−０１結合法に従って産生されたセツキシマブ免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０２２０】
【図７１Ｃ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０１法によるセツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のセツキシマブのバイオシミラー（Ａｌｐｈａｍａｂ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０２２１】
【図７１Ｄ】ＢＢ−０１結合法によるセツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のセツキシマブのバイオシミラー（Ａｌｐｈａｍａｂ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０２２２】
【図７１Ｅ】リツキシマブのバイオシミラー（ＡｍＡｂ、Ａｌｐｈａｍａｂ；ＪＨＬ、ＪＨＬ  Ｂｉｏｔｅｃｈ；ＬＧＭ、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）からＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体が、骨髄系細胞において、１８時間の刺激後に同等のＣＤ１２３の上方制御を誘発することを示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０２２３】
【図７１Ｆ】リツキシマブのバイオシミラー（ＡｍＡｂ、Ａｌｐｈａｍａｂ；ＪＨＬ、ＪＨＬ  Ｂｉｏｔｅｃｈ；ＬＧＭ、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）からＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体が、骨髄系細胞において、１８時間の刺激後に同等のＨＬＡ−ＤＲ発現を誘発することを示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０２２４】
【図７１Ｇ】ＢＢ−０１法に従って、リツキシマブのバイオシミラー（バイオシミラー１、Ａｌｐｈａｍａｂ；バイオシミラー２、ＪＨＬ  Ｂｉｏｔｅｃｈ；バイオシミラー３、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）から産生されたリツキシマブ免疫複合体が、骨髄系細胞において、１８時間の刺激後に同等のＣＤ１４の下方制御を誘発することを示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０２２５】
【図７１Ｈ】リツキシマブのバイオシミラー（ＡｍＡｂ、Ａｌｐｈａｍａｂ；ＪＨＬ、ＪＨＬ  Ｂｉｏｔｅｃｈ；ＬＧＭ、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）からＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体が、骨髄系細胞において、１８時間の刺激後に同等のＣＤ１６の下方制御を誘発することを示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０２２６】
【図７１Ｉ】リツキシマブのバイオシミラー（ＡｍＡｂ、Ａｌｐｈａｍａｂ；ＪＨＬ、ＪＨＬ  Ｂｉｏｔｅｃｈ；ＬＧＭ、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）からＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体が、骨髄系細胞において、１８時間の刺激後に同等のＣＤ４０の上方制御を誘発することを示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０２２７】
【図７１Ｊ】リツキシマブのバイオシミラー（ＡｍＡｂ、Ａｌｐｈａｍａｂ；ＪＨＬ、ＪＨＬ  Ｂｉｏｔｅｃｈ；ＬＧＭ、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）からＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体が、骨髄系細胞において、１８時間の刺激後に同等のＣＤ８６の上方制御を誘発することを示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０２２８】
【図７１Ｋ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、リツキシマブのバイオシミラー（Ａｌｐｈａｍａｂ）からＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０２２９】
【図７１Ｌ】リツキシマブのバイオシミラー（Ａｌｐｈａｍａｂ）からＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０２３０】
【図７１Ｍ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０１法によるリツキシマブのバイオシミラー免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（Ａｌｐｈａｍａｂ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０２３１】
【図７１Ｎ】ＢＢ−０１法によるリツキシマブのバイオシミラー免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（Ａｌｐｈａｍａｂ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０２３２】
【図７１Ｏ】リツキシマブのバイオシミラーからＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブのバイオシミラー免疫複合体［ＢＢ−０１（バイオシミラー１）］が、対応する非複合体のリツキシマブのバイオシミラー［（ＣＤ２０（バイオシミラー１）、Ａｌｐｈａｍａｂ］と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１２３の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２３３】
【図７１Ｐ】リツキシマブのバイオシミラーからＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブのバイオシミラー免疫複合体［ＢＢ−０１（バイオシミラー１）］が、対応する非複合体のリツキシマブのバイオシミラー［（ＣＤ２０（バイオシミラー１）、Ａｌｐｈａｍａｂ］と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲの上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２３４】
【図７１Ｑ】リツキシマブのバイオシミラーからＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブのバイオシミラー免疫複合体［ＢＢ−０１（バイオシミラー１）］が、対応する非複合体のリツキシマブのバイオシミラー［（ＣＤ２０（バイオシミラー１）、Ａｌｐｈａｍａｂ］と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１４の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２３５】
【図７１Ｒ】リツキシマブのバイオシミラーからＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブのバイオシミラー免疫複合体［ＢＢ−０１（バイオシミラー１）］が、対応する非複合体のリツキシマブのバイオシミラー［（ＣＤ２０（バイオシミラー１）、Ａｌｐｈａｍａｂ］と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１６の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２３６】
【図７１Ｓ】リツキシマブのバイオシミラーからＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブのバイオシミラー免疫複合体［ＢＢ−０１（バイオシミラー１）］が、対応する非複合体のリツキシマブのバイオシミラー［（ＣＤ２０（バイオシミラー１）、Ａｌｐｈａｍａｂ］と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ４０の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２３７】
【図７１Ｔ】リツキシマブのバイオシミラーからＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブのバイオシミラー免疫複合体［ＢＢ−０１（バイオシミラー１）］が、対応する非複合体のリツキシマブのバイオシミラー［（ＣＤ２０（バイオシミラー１）、Ａｌｐｈａｍａｂ］と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ８６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２３８】
【図７１Ｕ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、リツキシマブのバイオシミラー（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）からＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０２３９】
【図７１Ｖ】リツキシマブのバイオシミラー（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）からＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０２４０】
【図７１Ｗ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０１法によるリツキシマブのバイオシミラー免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０２４１】
【図７１Ｘ】ＢＢ−０１法によるリツキシマブのバイオシミラー免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０２４２】
【図７１Ｙ】リツキシマブのバイオシミラー（ＢＢ−０１）からＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブのバイオシミラー免疫複合体が、対応する非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１２３の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２４３】
【図７１Ｚ】リツキシマブのバイオシミラー（ＢＢ−０１）からＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブのバイオシミラー免疫複合体が、対応する非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲの上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２４４】
【図７１ＡＡ】リツキシマブのバイオシミラー（ＢＢ−０１）からＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブのバイオシミラー免疫複合体が、対応する非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１４の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２４５】
【図７１ＡＢ】リツキシマブのバイオシミラー（ＢＢ−０１）からＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブのバイオシミラー免疫複合体が、対応する非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１６の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２４６】
【図７１ＡＣ】リツキシマブのバイオシミラー（ＢＢ−０１）からＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブのバイオシミラー免疫複合体が、対応する非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ４０の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２４７】
【図７１ＡＤ】リツキシマブのバイオシミラー（ＢＢ−０１）からＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブのバイオシミラー免疫複合体が、対応する非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ８６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２４８】
【図７１ＡＥ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、リツキシマブのバイオシミラー（ＪＨＬ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）からＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０２４９】
【図７１ＡＦ】リツキシマブのバイオシミラー（ＪＨＬ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）からＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０２５０】
【図７１ＡＧ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０１法によるリツキシマブのバイオシミラー免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＪＨＬ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０２５１】
【図７１ＡＨ】ＢＢ−０１法によるリツキシマブのバイオシミラー免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＪＨＬ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０２５２】
【図７１ＡＩ】リツキシマブのバイオシミラーからＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブのバイオシミラー免疫複合体［ＢＢ−０１（バイオシミラー２）］が、対応する非複合体のリツキシマブのバイオシミラー［（ＣＤ２０（バイオシミラー２）、ＪＨＬ  Ｂｉｏｔｅｃｈ］と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１２３の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２５３】
【図７１ＡＪ】リツキシマブのバイオシミラーからＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブのバイオシミラー免疫複合体［ＢＢ−０１（バイオシミラー２）］が、対応する非複合体のリツキシマブのバイオシミラー［（ＣＤ２０（バイオシミラー２）、ＪＨＬ  Ｂｉｏｔｅｃｈ］と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲの上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２５４】
【図７１ＡＫ】リツキシマブのバイオシミラーからＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブのバイオシミラー免疫複合体［ＢＢ−０１（バイオシミラー２）］が、対応する非複合体のリツキシマブのバイオシミラー［（ＣＤ２０（バイオシミラー２）、ＪＨＬ  Ｂｉｏｔｅｃｈ］と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ４０の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２５５】
【図７１ＡＬ】リツキシマブのバイオシミラーからＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブのバイオシミラー免疫複合体［ＢＢ−０１（バイオシミラー２）］が、対応する非複合体のリツキシマブのバイオシミラー［（ＣＤ２０（バイオシミラー２）、ＪＨＬ  Ｂｉｏｔｅｃｈ］と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ８６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２５６】
【図７１ＡＭ】非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０２５７】
【図７１ＡＮ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、トラスツズマブのバイオシミラー（ＪＨＬ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）からＢＢ−０１結合法に従って産生されたトラスツズマブ免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０２５８】
【図７１ＡＯ】トラスツズマブのバイオシミラー（ＪＨＬ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）からＢＢ−０１結合法に従って産生されたトラスツズマブ免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０２５９】
【図７１ＡＰ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０１法によるトラスツズマブのバイオシミラー免疫複合体産生に利用された非複合体のトラスツズマブのバイオシミラー（ＪＨＬ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０２６０】
【図７１ＡＱ】ＢＢ−０１法によるトラスツズマブのバイオシミラー免疫複合体産生に利用された非複合体のトラスツズマブのバイオシミラー（ＪＨＬ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０２６１】
【図７１ＡＲ】トラスツズマブのバイオシミラー（ＢＢ−４０）からＢＢ−０１法に従って産生されたトラスツズマブのバイオシミラー免疫複合体が、対応する非複合体のトラスツズマブのバイオシミラー［トラスツズマブ（ＪＨＬ）、ＪＨＬ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１２３の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２６２】
【図７１ＡＳ】トラスツズマブのバイオシミラー（ＢＢ−４０）からＢＢ−０１法に従って産生されたトラスツズマブのバイオシミラー免疫複合体が、対応する非複合体のトラスツズマブのバイオシミラー［トラスツズマブ（ＪＨＬ）、ＪＨＬ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲの上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２６３】
【図７１ＡＴ】トラスツズマブのバイオシミラー（ＢＢ−４０）からＢＢ−０１法に従って産生されたトラスツズマブのバイオシミラー免疫複合体が、対応する非複合体のトラスツズマブのバイオシミラー［トラスツズマブ（ＪＨＬ）、ＪＨＬ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１４の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２６４】
【図７１ＡＵ】トラスツズマブのバイオシミラー（ＢＢ−４０）からＢＢ−０１法に従って産生されたトラスツズマブのバイオシミラー免疫複合体が、対応する非複合体のトラスツズマブのバイオシミラー［トラスツズマブ（ＪＨＬ）、ＪＨＬ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１６の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２６５】
【図７１ＡＶ】トラスツズマブのバイオシミラー（ＢＢ−４０）からＢＢ−０１法に従って産生されたトラスツズマブのバイオシミラー免疫複合体が、対応する非複合体のトラスツズマブのバイオシミラー［トラスツズマブ（ＪＨＬ）、ＪＨＬ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ４０の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２６６】
【図７１ＡＷ】トラスツズマブのバイオシミラー（ＢＢ−４０）からＢＢ−０１法に従って産生されたトラスツズマブのバイオシミラー免疫複合体が、対応する非複合体のトラスツズマブのバイオシミラー［トラスツズマブ（ＪＨＬ）、ＪＨＬ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ８６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２６７】
【図７２Ａ】ＢＢ−０１法に従って産生されたセツキシマブ免疫複合体（セツキシマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、等モル濃度の非複合体のセツキシマブ（Ｉｍｃｌｏｎｅ／Ｌｉｌｌｙ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞からの優れたＩＬ−１β分泌を誘発することを示す。
【０２６８】
【図７２Ｂ】ＢＢ−０１法に従って産生されたセツキシマブ免疫複合体（セツキシマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、等モル濃度の非複合体のセツキシマブ（Ｉｍｃｌｏｎｅ／Ｌｉｌｌｙ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞からの優れたＴＮＦα分泌を誘発することを示す。
【０２６９】
【図７２Ｃ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０１結合法によるセツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のセツキシマブ（Ｉｍｃｌｏｎｅ／Ｌｉｌｌｙ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０２７０】
【図７２Ｄ】ＢＢ−０１結合法によるセツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のセツキシマブ（Ｉｍｃｌｏｎｅ／Ｌｉｌｌｙ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０２７１】
【図７２Ｅ】ＢＢ−０１法に従って産生されたセツキシマブ免疫複合体（丸、赤）が、非複合体のセツキシマブ（四角、黒；Ｉｍｃｌｏｎｅ／Ｌｉｌｌｙ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１２３の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２７２】
【図７２Ｆ】ＢＢ−０１法に従って産生されたセツキシマブ免疫複合体（丸、赤）が、非複合体のセツキシマブ（四角、黒；Ｉｍｃｌｏｎｅ／Ｌｉｌｌｙ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲの上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２７３】
【図７２Ｇ】ＢＢ−０１法に従って産生されたセツキシマブ免疫複合体（丸、赤）が、非複合体のセツキシマブ（四角、黒；Ｉｍｃｌｏｎｅ／Ｌｉｌｌｙ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１４の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２７４】
【図７２Ｈ】ＢＢ−０１法に従って産生されたセツキシマブ免疫複合体（丸、赤）が、非複合体のセツキシマブ（四角、黒；Ｉｍｃｌｏｎｅ／Ｌｉｌｌｙ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１６の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２７５】
【図７２Ｉ】ＢＢ−０１法に従って産生されたセツキシマブ免疫複合体（丸、赤）が、非複合体のセツキシマブ（四角、黒；Ｉｍｃｌｏｎｅ／Ｌｉｌｌｙ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ４０の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２７６】
【図７２Ｊ】ＢＢ−０１法に従って産生されたセツキシマブ免疫複合体（丸、赤）が、非複合体のセツキシマブ（四角、黒；Ｉｍｃｌｏｎｅ／Ｌｉｌｌｙ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ８６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２７７】
【図７３Ａ】ＢＢ−０１法に従って産生されたダラツムマブ免疫複合体（ダラツムマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、等モル濃度の非複合体のダラツムマブ（Ｇｅｎｍａｂ／Ｊａｎｓｓｅｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞からの優れたＩＬ−１β分泌を誘発することを示す。
【０２７８】
【図７３Ｂ】ＢＢ−０１法に従って産生されたダラツムマブ免疫複合体（ダラツムマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、等モル濃度の非複合体のダラツムマブ（Ｇｅｎｍａｂ／Ｊａｎｓｓｅｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞からの優れたＴＮＦα分泌を誘発することを示す。
【０２７９】
【図７３Ｃ】ＢＢ−０１法に従って産生されたダラツムマブ免疫複合体（ダラツムマブ［ｓｉｃ］Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、等モル濃度の非複合体のダラツムマブ（ダラツムマブ［ｓｉｃ］、Ｇｅｎｍａｂ／Ｊａｎｓｓｅｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）と比較して、刺激３６時間後に、骨髄系細胞からの優れたＴＮＦα分泌を誘発することを示す。
【０２８０】
【図７３Ｄ】ＢＢ−０１法に従って産生されたダラツムマブ免疫複合体（ダラツムマブ［ｓｉｃ］Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、等モル濃度の非複合体のダラツムマブ（ダラツムマブ［ｓｉｃ］、Ｇｅｎｍａｂ／Ｊａｎｓｓｅｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）と比較して、刺激３６時間後に、骨髄系細胞からの優れたＩＬ−１β分泌を誘発することを示す。
【０２８１】
【図７３Ｅ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０１法によるダラツムマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のトラスツズマブ（Ｇｅｎｍａｂ／Ｊａｎｓｓｅｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０２８２】
【図７３Ｆ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０１法に従って産生されたダラツムマブ免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０２８３】
【図７３Ｇ】ＢＢ−０１法によるダラツムマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のダラツムマブ（Ｇｅｎｍａｂ／Ｊａｎｓｓｅｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０２８４】
【図７３Ｈ】ＢＢ−０１法に従って産生されたダラツムマブ免疫複合体（ダラツムマブ［ｓｉｃ］Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のダラツムマブ（ダラツムマブ［ｓｉｃ］、Ｇｅｎｍａｂ／Ｊａｎｓｓｅｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１２３の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２８５】
【図７３Ｉ】非複合体のダラツムマブ（Ｇｅｎｍａｂ／Ｊａｎｓｓｅｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）と比較する、ＢＢ−０１法に従って産生されたダラツムマブ免疫複合体（ダラツムマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲ発現を示す。
【０２８６】
【図７３Ｊ】ＢＢ−０１法に従って産生されたダラツムマブ免疫複合体（ダラツムマブ［ｓｉｃ］Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のダラツムマブ（ダラツムマブ［ｓｉｃ］、Ｇｅｎｍａｂ／Ｊａｎｓｓｅｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１４の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２８７】
【図７３Ｋ】ＢＢ−０１法に従って産生されたダラツムマブ免疫複合体（ダラツムマブ［ｓｉｃ］Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のダラツムマブ（ダラツムマブ［ｓｉｃ］、Ｇｅｎｍａｂ／Ｊａｎｓｓｅｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１６の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２８８】
【図７３Ｌ】ＢＢ−０１法に従って産生されたダラツムマブ免疫複合体（ダラツムマブ［ｓｉｃ］Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のダラツムマブ（ダラツムマブ［ｓｉｃ］、Ｇｅｎｍａｂ／Ｊａｎｓｓｅｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ４０の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２８９】
【図７３Ｍ】ＢＢ−０１法に従って産生されたダラツムマブ免疫複合体（ダラツムマブ［ｓｉｃ］Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のダラツムマブ（ダラツムマブ［ｓｉｃ］、Ｇｅｎｍａｂ／Ｊａｎｓｓｅｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ８６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２９０】
【図７４Ａ】ＢＢ−０１法に従って産生されたエロツズマブ免疫複合体（エロツズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、等モル濃度の非複合体のエロツズマブ（ＢＭＳ）と比較して、刺激３６時間後に、骨髄系細胞からの優れたＩＬ−１β分泌を誘発することを示す。
【０２９１】
【図７４Ｂ】ＢＢ−０１法に従って産生されたエロツズマブ免疫複合体（エロツズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、等モル濃度の非複合体のエロツズマブ（ＢＭＳ）と比較して、刺激３６時間後に、骨髄系細胞からの優れたＴＮＦα分泌を誘発することを示す。
【０２９２】
【図７４Ｃ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０１結合法に従って産生されたエロツズマブ免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０２９３】
【図７４Ｄ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０１結合法によるエロツズマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のエロツズマブ（ＢＭＳ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０２９４】
【図７４Ｅ】ＢＢ−０１法によるエロツズマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のエロツズマブ（ＢＭＳ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０２９５】
【図７４Ｆ】ＢＢ−０１法に従って産生されたエロツズマブ免疫複合体（エロツズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のエロツズマブ（ＢＭＳ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１２３の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２９６】
【図７４Ｇ】ＢＢ−０１法に従って産生されたエロツズマブ免疫複合体（エロツズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のエロツズマブ（ＢＭＳ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲの上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２９７】
【図７４Ｈ】ＢＢ−０１法に従って産生されたエロツズマブ免疫複合体（エロツズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のエロツズマブ（ＢＭＳ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１４の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２９８】
【図７４Ｉ】ＢＢ−０１法に従って産生されたエロツズマブ免疫複合体（エロツズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のエロツズマブ（ＢＭＳ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１６の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０２９９】
【図７４Ｊ】ＢＢ−０１法に従って産生されたエロツズマブ免疫複合体（エロツズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のエロツズマブ（ＢＭＳ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ４０の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３００】
【図７４Ｋ】ＢＢ−０１法に従って産生されたエロツズマブ免疫複合体（エロツズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のエロツズマブ（ＢＭＳ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ８６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３０１】
【図７５Ａ】ＢＢ−０１法に従って産生されたイピリムマブ免疫複合体（イピリムマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、等モル濃度の非複合体のイピリムマブ（ＢＭＳ）と比較して、刺激３６時間後に、骨髄系細胞からの優れたＴＮＦα分泌を誘発することを示す。
【０３０２】
【図７５Ｂ】ＢＢ−０１法に従って産生されたイピリムマブ免疫複合体（イピリムマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、等モル濃度の非複合体のイピリムマブ（ＢＭＳ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞からの優れたＩＬ−１β分泌を誘発することを示す。
【０３０３】
【図７５Ｃ】ＢＢ−０１法に従って産生されたイピリムマブ免疫複合体（イピリムマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、等モル濃度の非複合体のイピリムマブ（ＢＭＳ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞からの優れたＴＮＦα分泌を誘発することを示す。
【０３０４】
【図７５Ｄ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０１結合法によるイピリムマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のイピリムマブ（ＢＭＳ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０３０５】
【図７５Ｅ】ＢＢ−０１法によるイピリムマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のイピリムマブ（ＢＭＳ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０３０６】
【図７５Ｆ】ＢＢ−０１法に従って産生されたイピリムマブ免疫複合体（イピリムマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のイピリムマブ（ＢＭＳ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１２３の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３０７】
【図７５Ｇ】ＢＢ−０１法に従って産生されたイピリムマブ免疫複合体（イピリムマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のイピリムマブ（ＢＭＳ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲの上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３０８】
【図７５Ｈ】ＢＢ−０１法に従って産生されたイピリムマブ免疫複合体（イピリムマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のイピリムマブ（ＢＭＳ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１４の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３０９】
【図７５Ｉ】ＢＢ−０１法に従って産生されたイピリムマブ免疫複合体（イピリムマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のイピリムマブ（ＢＭＳ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１６の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３１０】
【図７５Ｊ】ＢＢ−０１法に従って産生されたイピリムマブ免疫複合体（イピリムマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のイピリムマブ（ＢＭＳ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ４０の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３１１】
【図７５Ｋ】ＢＢ−０１法に従って産生されたイピリムマブ免疫複合体（イピリムマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のイピリムマブ（ＢＭＳ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ８６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３１２】
【図７６Ａ】ＢＢ−０１法に従って産生されたニボルマブ免疫複合体（ニボルマブＩｇＧ４Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、等モル濃度の非複合体のニボルマブ（ニボルマブＩｇＧ４、ＢＭＳ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞からの優れたＩＬ−１β分泌を誘発することを示す。
【０３１３】
【図７６Ｂ】ＢＢ−０１法に従って産生されたニボルマブ免疫複合体（ニボルマブＩｇＧ４Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、等モル濃度の非複合体のニボルマブ（ニボルマブＩｇＧ４、ＢＭＳ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞からの優れたＴＮＦα分泌を誘発することを示す。
【０３１４】
【図７６Ｃ】ＢＢ−０１法に従って産生されたニボルマブ免疫複合体（ニボルマブＩｇＧ４Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、等モル濃度の非複合体のニボルマブ（ニボルマブＩｇＧ４、ＢＭＳ）と比較して、刺激３６時間後に、骨髄系細胞からの優れたＩＬ−１β分泌を誘発することを示す。
【０３１５】
【図７６Ｄ】ＢＢ−０１法に従って産生されたニボルマブ免疫複合体（ニボルマブＩｇＧ４Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、等モル濃度の非複合体のニボルマブ（ニボルマブＩｇＧ４、ＢＭＳ）と比較して、刺激３６時間後に、骨髄系細胞からの優れたＴＮＦα分泌を誘発することを示す。
【０３１６】
【図７６Ｅ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０１結合法に従って産生されたニボルマブ免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０３１７】
【図７６Ｆ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０１結合法によるニボルマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のニボルマブ（ＢＭＳ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０３１８】
【図７６Ｇ】ＢＢ−０１法によるニボルマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のニボルマブ（ＢＭＳ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０３１９】
【図７６Ｈ】ＢＢ−０１法に従って産生されたニボルマブ免疫複合体（ニボルマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のニボルマブ（ＢＭＳ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１２３の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３２０】
【図７６Ｉ】非複合体のニボルマブ（ＢＭＳ）と比較する、ＢＢ−０１法に従って産生されたニボルマブ免疫複合体（ニボルマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲ発現を示す。
【０３２１】
【図７６Ｊ】ＢＢ−０１法に従って産生されたニボルマブ免疫複合体（ニボルマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のニボルマブ（ＢＭＳ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１４の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３２２】
【図７６Ｋ】ＢＢ−０１法に従って産生されたニボルマブ免疫複合体（ニボルマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のニボルマブ（ＢＭＳ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１６の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３２３】
【図７６Ｌ】ＢＢ−０１法に従って産生されたニボルマブ免疫複合体（ニボルマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のニボルマブ（ＢＭＳ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ４０の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３２４】
【図７６Ｍ】ＢＢ−０１法に従って産生されたニボルマブ免疫複合体（ニボルマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のニボルマブ（ＢＭＳ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ８６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３２５】
【図７７Ａ】ＢＢ−０１法に従って産生されたオビヌツズマブ免疫複合体（オビヌツズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、等モル濃度の非複合体のオビヌツズマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激３６時間後に、骨髄系細胞からの優れたＩＬ−１β分泌を誘発することを示す。
【０３２６】
【図７７Ｂ】ＢＢ−０１法に従って産生されたオビヌツズマブ免疫複合体（オビヌツズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、等モル濃度の非複合体のオビヌツズマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激３６時間後に、骨髄系細胞からの優れたＴＮＦα分泌を誘発することを示す。
【０３２７】
【図７７Ｃ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０１結合法によるオビヌツズマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のオビヌツズマブ（Ｒｏｃｈｅ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０３２８】
【図７７Ｄ】ＢＢ−０１結合法によるオビヌツズマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のオビヌツズマブ（Ｒｏｃｈｅ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０３２９】
【図７７Ｅ】ＢＢ−０１法に従って産生されたオビヌツズマブ免疫複合体（オビヌツズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のＣＤ２０  ｍＡｂ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１２３の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３３０】
【図７７Ｆ】非複合体のＣＤ２０  ｍＡｂ（Ｒｏｃｈｅ）と比較する、ＢＢ−０１法に従って産生されたオビヌツズマブ免疫複合体（オビヌツズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲ発現を示す。
【０３３１】
【図７７Ｇ】ＢＢ−０１法に従って産生されたオビヌツズマブ免疫複合体（オビヌツズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のＣＤ２０  ｍＡｂ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１４の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３３２】
【図７７Ｈ】ＢＢ−０１法に従って産生されたオビヌツズマブ免疫複合体（オビヌツズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のＣＤ２０  ｍＡｂ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１６の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３３３】
【図７７Ｉ】ＢＢ−０１法に従って産生されたオビヌツズマブ免疫複合体（オビヌツズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のＣＤ２０  ｍＡｂ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ４０の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３３４】
【図７７Ｊ】ＢＢ−０１法に従って産生されたオビヌツズマブ免疫複合体（オビヌツズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のＣＤ２０  ｍＡｂ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ８６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３３５】
【図７８Ａ】ＢＢ−０１法に従って産生されたオララツマブ免疫複合体（オララツマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、等モル濃度の非複合体のオララツマブ（Ｌｉｌｌｙ）と比較して、刺激３６時間後に、骨髄系細胞からの優れたＩＬ−１β分泌を誘発することを示す。
【０３３６】
【図７８Ｂ】ＢＢ−０１法に従って産生されたオララツマブ免疫複合体（オララツマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、等モル濃度の非複合体のオララツマブ（Ｌｉｌｌｙ）と比較して、刺激３６時間後に、骨髄系細胞からの優れたＴＮＦα分泌を誘発することを示す。
【０３３７】
【図７８Ｃ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０１結合法に従って産生されたオララツマブ免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０３３８】
【図７８Ｄ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０１結合法によるオララツマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のオララツマブ（Ｌｉｌｌｙ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０３３９】
【図７８Ｅ】ＢＢ−０１結合法によるオララツマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のオララツマブ（Ｌｉｌｌｙ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０３４０】
【図７８Ｆ】ＢＢ−０１法に従って産生されたオララツマブ免疫複合体（オララツマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のオララツマブ（Ｌｉｌｌｙ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１２３の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３４１】
【図７８Ｇ】ＢＢ−０１法に従って産生されたオララツマブ免疫複合体（オララツマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のオララツマブ（Ｌｉｌｌｙ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲの上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３４２】
【図７８Ｈ】ＢＢ−０１法に従って産生されたオララツマブ免疫複合体（オララツマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のオララツマブ（Ｌｉｌｌｙ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１４の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３４３】
【図７８Ｉ】ＢＢ−０１法に従って産生されたオララツマブ免疫複合体（オララツマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のオララツマブ（Ｌｉｌｌｙ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１６の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３４４】
【図７８Ｊ】ＢＢ−０１法に従って産生されたオララツマブ免疫複合体（オララツマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のオララツマブ（Ｌｉｌｌｙ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ４０の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３４５】
【図７８Ｋ】ＢＢ−０１法に従って産生されたオララツマブ免疫複合体（オララツマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のオララツマブ（Ｌｉｌｌｙ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ８６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３４６】
【図７９Ａ】ＢＢ−０１法に従って産生されたペンブロリズマブ免疫複合体（ペンブロリズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、等モル濃度の非複合体のペンブロリズマブ（Ｍｅｒｃｋ）と比較して、刺激３６時間後に、骨髄系細胞からの優れたＩＬ−１β分泌を誘発することを示す。
【０３４７】
【図７９Ｂ】ＢＢ−０１法に従って産生されたペンブロリズマブ免疫複合体（ペンブロリズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、等モル濃度の非複合体のペンブロリズマブ（Ｍｅｒｃｋ）と比較して、刺激３６時間後に、骨髄系細胞からの優れたＴＮＦα分泌を誘発することを示す。
【０３４８】
【図７９Ｃ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０１結合法に従って産生されたペンブロリズマブ免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０３４９】
【図７９Ｄ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０１結合法によるペンブロリズマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のペンブロリズマブ（Ｍｅｒｃｋ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０３５０】
【図７９Ｅ】ＢＢ−０１結合法によるペンブロリズマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のペンブロリズマブ（Ｍｅｒｃｋ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０３５１】
【図７９Ｆ】ＢＢ−０１法に従って産生されたペンブロリズマブ免疫複合体（ペンブロリズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のペンブロリズマブ（Ｍｅｒｃｋ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１２３の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３５２】
【図７９Ｇ】ＢＢ−０１法に従って産生されたペンブロリズマブ免疫複合体（ペンブロリズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のペンブロリズマブ（Ｍｅｒｃｋ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲの上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３５３】
【図７９Ｈ】ＢＢ−０１法に従って産生されたペンブロリズマブ免疫複合体（ペンブロリズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のペンブロリズマブ（Ｍｅｒｃｋ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１４の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３５４】
【図７９Ｉ】ＢＢ−０１法に従って産生されたペンブロリズマブ免疫複合体（ペンブロリズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のペンブロリズマブ（Ｍｅｒｃｋ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１６の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３５５】
【図７９Ｊ】ＢＢ−０１法に従って産生されたペンブロリズマブ免疫複合体（ペンブロリズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のペンブロリズマブ（Ｍｅｒｃｋ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ４０の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３５６】
【図７９Ｋ】ＢＢ−０１法に従って産生されたペンブロリズマブ免疫複合体（ペンブロリズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のペンブロリズマブ（Ｍｅｒｃｋ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ８６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３５７】
【図８０Ａ】ＢＢ−０１法に従って産生されたペルツズマブ免疫複合体（ペルツズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、等モル濃度の非複合体のペルツズマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞からの優れたＩＬ−１β分泌を誘発することを示す。
【０３５８】
【図８０Ｂ】ＢＢ−０１法に従って産生されたペルツズマブ免疫複合体（ペルツズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、等モル濃度の非複合体のペルツズマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞からの優れたＴＮＦα分泌を誘発することを示す。
【０３５９】
【図８０Ｃ】ＢＢ−０１法に従って産生されたペルツズマブ免疫複合体（ペルツズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、等モル濃度の非複合体のペルツズマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激３６時間後に、骨髄系細胞からの優れたＩＬ−１β分泌を誘発することを示す。
【０３６０】
【図８０Ｄ】ＢＢ−０１法に従って産生されたペルツズマブ免疫複合体（ペルツズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、等モル濃度の非複合体のペルツズマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激３６時間後に、骨髄系細胞からの優れたＴＮＦα分泌を誘発することを示す。
【０３６１】
【図８０Ｅ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０１結合法に従って産生されたペルツズマブ免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０３６２】
【図８０Ｆ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０１結合法によるペルツズマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のペルツズマブ（Ｒｏｃｈｅ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０３６３】
【図８０Ｇ】ＢＢ−０１結合法によるペルツズマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のペルツズマブ（Ｒｏｃｈｅ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０３６４】
【図８０Ｈ】ＢＢ−０１法に従って産生されたペルツズマブ免疫複合体（ペルツズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のペルツズマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１２３の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３６５】
【図８０Ｉ】ＢＢ−０１法に従って産生されたペルツズマブ免疫複合体（ペルツズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のペルツズマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲの上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３６６】
【図８０Ｊ】ＢＢ−０１法に従って産生されたペルツズマブ免疫複合体（ペルツズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のペルツズマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１４の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３６７】
【図８０Ｋ】ＢＢ−０１法に従って産生されたペルツズマブ免疫複合体（ペルツズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のペルツズマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１６の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３６８】
【図８０Ｌ】ＢＢ−０１法に従って産生されたペルツズマブ免疫複合体（ペルツズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のペルツズマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ４０の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３６９】
【図８０Ｍ】ＢＢ−０１法に従って産生されたペルツズマブ免疫複合体（ペルツズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のペルツズマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ８６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３７０】
【図８１Ａ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（リツキシマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、等モル濃度の非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激３６時間後に、骨髄系細胞からの優れたＩＬ−１β分泌を誘発することを示す。
【０３７１】
【図８１Ｂ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（リツキシマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、等モル濃度の非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激３６時間後に、骨髄系細胞からの優れたＴＮＦα分泌を誘発することを示す。
【０３７２】
【図８１Ｃ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０３７３】
【図８１Ｄ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０３７４】
【図８１Ｅ】ＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０３７５】
【図８１Ｆ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０１結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０３７６】
【図８１Ｇ】ＢＢ−０１結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０３７７】
【図８１Ｈ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−０１）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１２３の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３７８】
【図８１Ｉ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−０１）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲの上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３７９】
【図８１Ｊ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−０１）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１４の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３８０】
【図８１Ｋ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−０１）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１６の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３８１】
【図８１Ｌ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−０１）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ４０の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３８２】
【図８１Ｍ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−０１）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ８６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３８３】
【図８２Ａ】ＢＢ−０１法に従って産生されたトラスツズマブ免疫複合体（トラスツズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、等モル濃度の非複合体のトラスツズマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激３６時間後に、骨髄系細胞からの優れたＩＬ−１β分泌を誘発することを示す。
【０３８４】
【図８２Ｂ】ＢＢ−０１法に従って産生されたトラスツズマブ免疫複合体（トラスツズマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、等モル濃度の非複合体のトラスツズマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激３６時間後に、骨髄系細胞からの優れたＴＮＦα分泌を誘発することを示す。
【０３８５】
【図８２Ｃ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０１結合法に従って産生されたトラスツズマブ免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０３８６】
【図８２Ｄ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０１結合法によるトラスツズマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のトラスツズマブ（Ｒｏｃｈｅ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０３８７】
【図８２Ｅ】ＢＢ−０１結合法によるトラスツズマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のトラスツズマブ（Ｒｏｃｈｅ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０３８８】
【図８２Ｆ】ＢＢ−０１法に従って産生されたトラスツズマブ免疫複合体（丸、赤）が、非複合体のトラスツズマブ（四角、黒；Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１２３の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３８９】
【図８２Ｇ】ＢＢ−０１法に従って産生されたトラスツズマブ免疫複合体（丸、赤）が、非複合体のトラスツズマブ（四角、黒；Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲの上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３９０】
【図８２Ｈ】ＢＢ−０１法に従って産生されたトラスツズマブ免疫複合体（丸、赤）が、非複合体のトラスツズマブ（四角、黒；Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１４の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３９１】
【図８２Ｉ】ＢＢ−０１法に従って産生されたトラスツズマブ免疫複合体（丸、赤が、非複合体のトラスツズマブ（四角、黒；Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１６の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３９２】
【図８２Ｊ】ＢＢ−０１法に従って産生されたトラスツズマブ免疫複合体（丸、赤）が、非複合体のトラスツズマブ（四角、黒；Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ４０の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３９３】
【図８２Ｋ】ＢＢ−０１法に従って産生されたトラスツズマブ免疫複合体（丸、赤）が、非複合体のトラスツズマブ（四角、黒；Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ８６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３９４】
【図８３Ａ】ＢＢ−０１法に従って産生されたエタネルセプト免疫複合体（エタネルセプトＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、等モル濃度の非複合体のエタネルセプト（Ａｍｇｅｎ）と比較して、刺激３６時間後に、骨髄系細胞からの優れたＩＬ−１β分泌を誘発することを示す。
【０３９５】
【図８３Ｂ】ＢＢ−０１法に従って産生されたエタネルセプト免疫複合体（エタネルセプトＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、等モル濃度の非複合体のエタネルセプト（Ａｍｇｅｎ）と比較して、刺激３６時間後に、骨髄系細胞からの優れたＴＮＦα分泌を誘発することを示す。
【０３９６】
【図８３Ｃ】ＢＢ−０１法に従って産生されたエタネルセプト免疫複合体（エタネルセプトＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のエタネルセプト（Ａｍｇｅｎ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１４の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３９７】
【図８３Ｄ】ＢＢ−０１法に従って産生されたエタネルセプト免疫複合体（エタネルセプトＢｏｌｔｂｏｄｙが、非複合体のエタネルセプト（Ａｍｇｅｎ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１６の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３９８】
【図８３Ｅ】ＢＢ−０１法に従って産生されたエタネルセプト免疫複合体（エタネルセプトＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のエタネルセプト（Ａｍｇｅｎ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ４０の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０３９９】
【図８３Ｆ】ＢＢ−０１法に従って産生されたエタネルセプト免疫複合体（エタネルセプトＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のエタネルセプト（Ａｍｇｅｎ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ８６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０４００】
【図８３Ｇ】ＢＢ−０１法に従って産生されたエタネルセプト免疫複合体（エタネルセプトＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のエタネルセプト（Ａｍｇｅｎ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１２３の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０４０１】
【図８３Ｈ】ＢＢ−０１法に従って産生されたエタネルセプト免疫複合体（エタネルセプトＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のエタネルセプト（Ａｍｇｅｎ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲの上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０４０２】
【図８４Ａ】リツキシマブのバイオシミラー（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）からＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。算出されたＤＡＲは０．７である。
【０４０３】
【図８４Ｂ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０１結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０４０４】
【図８４Ｃ】ＢＢ−０１結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブ（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０４０５】
【図８４Ｄ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体［ＢＢ−０１（ＤＡＲ０．７）］での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１４発現を示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０４０６】
【図８４Ｅ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体［ＢＢ−０１（ＤＡＲ０．７）］での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１６発現を示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０４０７】
【図８４Ｆ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体［ＢＢ−０１（ＤＡＲ０．７）］での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ４０発現を示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０４０８】
【図８４Ｇ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体［ＢＢ−０１（ＤＡＲ０．７）］での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ８６発現を示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０４０９】
【図８４Ｈ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体［ＢＢ−０１（ＤＡＲ０．７）］での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１２３発現を示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０４１０】
【図８４Ｉ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体［ＢＢ−０１（ＤＡＲ０．７）］での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲ発現を示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０４１１】
【図８５Ａ】リツキシマブのバイオシミラー（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）からＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。算出されたＤＡＲは１．６である。
【０４１２】
【図８５Ｂ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０１結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０４１３】
【図８５Ｃ】ＢＢ−０１結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブ（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０４１４】
【図８５Ｄ】ＢＢ−０１結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブ（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０４１５】
【図８５Ｅ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体［ＢＢ−０１（ＤＡＲ１．６）］での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１４発現を示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０４１６】
【図８５Ｆ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体［ＢＢ−０１（ＤＡＲ１．６）］での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１６発現を示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０４１７】
【図８５Ｇ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体［ＢＢ−０１（ＤＡＲ１．６）］での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ４０発現を示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０４１８】
【図８５Ｈ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体［ＢＢ−０１（ＤＡＲ１．６）］での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ８６発現を示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０４１９】
【図８５Ｉ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体［ＢＢ−０１（ＤＡＲ１．６）］での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１２３発現を示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０４２０】
【図８５Ｊ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体［ＢＢ−０１（ＤＡＲ１．６）］での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲ発現を示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０４２１】
【図８６Ａ】リツキシマブのバイオシミラー（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）からＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。算出されたＤＡＲは２．５である。
【０４２２】
【図８６Ｂ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０１結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０４２３】
【図８６Ｃ】ＢＢ−０１結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブ（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０４２４】
【図８６Ｄ】リツキシマブのバイオシミラー（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）からＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。算出されたＤＡＲは２．５である。
【０４２５】
【図８６Ｅ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体［ＢＢ−０１（ＤＡＲ２．５）］での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１４発現を示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０４２６】
【図８６Ｆ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体［ＢＢ−０１（ＤＡＲ２．５）］での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１６発現を示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０４２７】
【図８６Ｇ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体［ＢＢ−０１（ＤＡＲ２．５）］での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ４０発現を示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０４２８】
【図８６Ｈ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体［ＢＢ−０１（ＤＡＲ２．５）］での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ８６発現を示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０４２９】
【図８６Ｉ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体［ＢＢ−０１（ＤＡＲ１．６）］での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１２３発現を示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０４３０】
【図８６Ｊ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体［ＢＢ−０１（ＤＡＲ１．６）］での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲ発現を示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０４３１】
【図８７Ａ】全てリツキシマブのバイオシミラー（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）からＢＢ−０１法に従って産生された様々なＤＡＲのリツキシマブ免疫複合体が、骨髄系細胞において、１８時間の刺激後に同等のＣＤ１４の下方制御を誘発することを示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０４３２】
【図８７Ｂ】全てリツキシマブのバイオシミラー（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）からＢＢ−０１法に従って産生された様々なＤＡＲのリツキシマブ免疫複合体が、骨髄系細胞において、１８時間の刺激後に同等のＣＤ１６の下方制御を誘発することを示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０４３３】
【図８７Ｃ】全てリツキシマブのバイオシミラー（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）からＢＢ−０１法に従って産生された様々なＤＡＲのリツキシマブ免疫複合体が、骨髄系細胞において、１８時間の刺激後に同等のＣＤ４０の上方制御を誘発することを示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０４３４】
【図８７Ｄ】全てリツキシマブのバイオシミラー（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）からＢＢ−０１法に従って産生された様々なＤＡＲのリツキシマブ免疫複合体が、骨髄系細胞において、１８時間の刺激後に同等のＣＤ８６の上方制御を誘発することを示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０４３５】
【図８７Ｅ】全てリツキシマブのバイオシミラー（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）からＢＢ−０１法に従って産生された様々なＤＡＲのリツキシマブ免疫複合体が、骨髄系細胞において、１８時間の刺激後に同等のＣＤ１２３の上方制御を誘発することを示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０４３６】
【図８７Ｆ】全てリツキシマブのバイオシミラー（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）からＢＢ−０１法に従って産生された様々なＤＡＲのリツキシマブ免疫複合体が、骨髄系細胞において、１８時間の刺激後に同等のＨＬＡ−ＤＲの上方制御を誘発することを示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０４３７】
【図８８Ａ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０１結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブＩｇＡ２（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ７）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０４３８】
【図８８Ｂ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブＩｇＡ２免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０４３９】
【図８８Ｃ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブＩｇＡ２免疫複合体（ＣＤ２０  ＩｇＡ２Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０  ＩｇＡ２；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｃ７）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１４の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０４４０】
【図８８Ｄ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブＩｇＡ２免疫複合体（ＣＤ２０  ＩｇＡ２Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０  ＩｇＡ２；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｃ７）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１６の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０４４１】
【図８８Ｅ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブＩｇＡ２免疫複合体（ＣＤ２０  ＩｇＡ２Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０  ＩｇＡ２；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｃ７）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ４０の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０４４２】
【図８８Ｆ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブＩｇＡ２免疫複合体（ＣＤ２０  ＩｇＡ２Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０  ＩｇＡ２；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｃ７）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ８６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０４４３】
【図８８Ｇ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブＩｇＡ２免疫複合体（ＣＤ２０  ＩｇＡ２Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０  ＩｇＡ２；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｃ７）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１２３の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０４４４】
【図８８Ｈ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブＩｇＡ２免疫複合体（ＣＤ２０  ＩｇＡ２Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０  ＩｇＡ２；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｃ７）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲの上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０４４５】
【図８９Ａ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブＩｇＧ１免疫複合体（ＩｇＧ１Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、等モル濃度（０．２μＭ）の非複合体のリツキシマブ（ＩｇＧ１；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ１）と比較して、刺激３６時間後に、骨髄系細胞からの優れたＴＮＦα分泌を誘発することを示す。
【０４４６】
【図８９Ｂ】ＢＢ−０１結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブＩｇＧ１（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ１）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０４４７】
【図８９Ｃ】ＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブＩｇＧ１免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０４４８】
【図８９Ｄ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブＩｇＧ１免疫複合体（ＣＤ２０  ＩｇＧ１Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０  ＩｇＧ１；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｃ１）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１４の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０４４９】
【図８９Ｅ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブＩｇＧ１免疫複合体（ＣＤ２０  ＩｇＧ１Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０  ＩｇＧ１；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｃ１）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１６の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０４５０】
【図８９Ｆ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブＩｇＧ１免疫複合体（ＣＤ２０  ＩｇＧ１Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０  ＩｇＧ１；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｃ１）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ４０の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０４５１】
【図８９Ｇ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブＩｇＧ１免疫複合体（ＣＤ２０  ＩｇＧ１Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０  ＩｇＧ１；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｃ１）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ８６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０４５２】
【図８９Ｈ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブＩｇＧ１免疫複合体（ＣＤ２０  ＩｇＧ１Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０  ＩｇＧ１；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｃ１）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１２３の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０４５３】
【図８９Ｉ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブＩｇＧ１免疫複合体（ＣＤ２０  ＩｇＧ１Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０  ＩｇＧ１；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｃ１）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲの上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０４５４】
【図９０Ａ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ非フコシル化ＩｇＧ１免疫複合体（ＩｇＧ１  ＡＦ  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、等モル濃度（０．２μＭ）の非複合体のリツキシマブ（ＩｇＧ１  ＡＦ；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ１３）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞からの優れたＴＮＦα分泌を誘発することを示す。
【０４５５】
【図９０Ｂ】ＢＢ−０１結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブＩｇＧ１（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ１３）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０４５６】
【図９０Ｃ】ＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブＩｇＧ１免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０４５７】
【図９０Ｄ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブＩｇＧ１  ＡＦ免疫複合体（ＩｇＧ１  ＡＦ  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＩｇＧ１  ＡＦ；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ１３）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１４の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０４５８】
【図９０Ｅ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブＩｇＧ１  ＡＦ免疫複合体（ＩｇＧ１  ＡＦ  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＩｇＧ１  ＡＦ；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ１３）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１６の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０４５９】
【図９０Ｆ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブＩｇＧ１  ＡＦ免疫複合体（ＩｇＧ１  ＡＦ  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＩｇＧ１  ＡＦ；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ１３）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ４０の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０４６０】
【図９０Ｇ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブＩｇＧ１  ＡＦ免疫複合体（ＩｇＧ１  ＡＦ  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＩｇＧ１  ＡＦ；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ１３）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ８６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０４６１】
【図９０Ｈ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブＩｇＧ１  ＡＦ免疫複合体（ＩｇＧ１  ＡＦ  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＩｇＧ１  ＡＦ；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ１３）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１２３の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０４６２】
【図９０Ｉ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブＩｇＧ１  ＡＦ免疫複合体（ＩｇＧ１  ＡＦ  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＩｇＧ１  ＡＦ；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ１３）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲの上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０４６３】
【図９１Ａ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブのＮ２９７Ｑ変異体ＩｇＧ１免疫複合体（ＩｇＧ１  ＮＱ  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、等モル濃度（０．２μＭ）の非複合体のリツキシマブ（ＩｇＧ１  ＮＱ；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ１２）と比較して、刺激３６時間後に、骨髄系細胞からの優れたＴＮＦα分泌を誘発することを示す。
【０４６４】
【図９１Ｂ】ＢＢ−０１結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブＩｇＧ１（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ１２）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０４６５】
【図９１Ｃ】ＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブＩｇＧ１免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０４６６】
【図９１Ｄ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブのＮ２９７Ｑ変異体ＩｇＧ１免疫複合体（ＩｇＧ１  ＮＱ  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）での１８時間の刺激後の、非複合体のリツキシマブＩｇＧ１（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ１２）と比較する、骨髄系細胞でのＣＤ１４発現を示す。
【０４６７】
【図９１Ｅ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブのＮ２９７Ｑ変異体ＩｇＧ１免疫複合体（ＩｇＧ１  ＮＱ  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）での１８時間の刺激後の、非複合体のリツキシマブＩｇＧ１（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ１２）と比較する、骨髄系細胞でのＣＤ１６発現を示す。
【０４６８】
【図９１Ｆ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブのＮ２９７Ｑ変異体ＩｇＧ１免疫複合体（ＩｇＧ１  ＮＱ  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）での１８時間の刺激後の、非複合体のリツキシマブＩｇＧ１（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ１２）と比較する、骨髄系細胞でのＣＤ４０発現を示す。
【０４６９】
【図９１Ｇ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブのＮ２９７Ｑ変異体ＩｇＧ１免疫複合体（ＩｇＧ１  ＮＱ  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）での１８時間の刺激後の、非複合体のリツキシマブＩｇＧ１（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ１２）と比較する、骨髄系細胞でのＣＤ８６発現を示す。
【０４７０】
【図９１Ｈ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブのＮ２９７Ｑ変異体ＩｇＧ１免疫複合体（ＩｇＧ１  ＮＱ  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）での１８時間の刺激後の、非複合体のリツキシマブＩｇＧ１（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ１２）と比較する、骨髄系細胞でのＣＤ１２３発現を示す。
【０４７１】
【図９１Ｉ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブのＮ２９７Ｑ変異体ＩｇＧ１免疫複合体（ＩｇＧ１  ＮＱ  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）での１８時間の刺激後の、非複合体のリツキシマブＩｇＧ１（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ１２）と比較する、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲ発現を示す。
【０４７２】
【図９２Ａ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブＩｇＧ２免疫複合体（ＩｇＧ２Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、等モル濃度（０．２μＭ）の非複合体のリツキシマブ（ＩｇＧ２；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ２）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞からの優れたＴＮＦα分泌を誘発することを示す。
【０４７３】
【図９２Ｂ】ＢＢ−０１結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブＩｇＧ２（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ２）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０４７４】
【図９２Ｃ】ＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブＩｇＧ２免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０４７５】
【図９２Ｄ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブＩｇＧ２免疫複合体（ＩｇＧ２  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＩｇＧ２；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ２）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１４の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０４７６】
【図９２Ｅ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブＩｇＧ２免疫複合体（ＩｇＧ２  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＩｇＧ２；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ２）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１６の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０４７７】
【図９２Ｆ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブＩｇＧ２免疫複合体（ＩｇＧ２  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＩｇＧ２；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ２）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ４０の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０４７８】
【図９２Ｇ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブＩｇＧ２免疫複合体（ＩｇＧ２  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＩｇＧ２；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ２）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ８６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０４７９】
【図９２Ｈ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブＩｇＧ２免疫複合体（ＩｇＧ２  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＩｇＧ２；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ２）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１２３の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０４８０】
【図９２Ｉ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブＩｇＧ２免疫複合体（ＩｇＧ２  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＩｇＧ２；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ２）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲの上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０４８１】
【図９３Ａ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブＩｇＧ３免疫複合体（ＩｇＧ３Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、等モル濃度（０．２μＭ）の非複合体のリツキシマブ（ＩｇＧ３；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ３）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞からの優れたＴＮＦα分泌を誘発することを示す。
【０４８２】
【図９３Ｂ】ＢＢ−０１結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブＩｇＧ３（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ３）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０４８３】
【図９３Ｃ】ＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブＩｇＧ３免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０４８４】
【図９３Ｄ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブＩｇＧ３免疫複合体（ＩｇＧ３  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＩｇＧ３；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ３）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１４の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０４８５】
【図９３Ｅ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブＩｇＧ３免疫複合体（ＩｇＧ３  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＩｇＧ３；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ３）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１６の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０４８６】
【図９３Ｆ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブＩｇＧ３免疫複合体（ＩｇＧ３  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＩｇＧ３；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ３）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ４０の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０４８７】
【図９３Ｇ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブＩｇＧ３免疫複合体（ＩｇＧ３  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＩｇＧ３；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ３）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ８６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０４８８】
【図９３Ｈ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブＩｇＧ３免疫複合体（ＩｇＧ３  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＩｇＧ３；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ３）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１２３の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０４８９】
【図９３Ｉ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブＩｇＧ３免疫複合体（ＩｇＧ３  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＩｇＧ３；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ３）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲの上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０４９０】
【図９４Ａ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブＩｇＧ４免疫複合体（ＩｇＧ４Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、等モル濃度（０．２μＭ）の非複合体のリツキシマブ（ＩｇＧ４；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ４）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞からの優れたＴＮＦα分泌を誘発することを示す。
【０４９１】
【図９４Ｂ】ＢＢ−０１結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブＩｇＧ４（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ４）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０４９２】
【図９４Ｃ】ＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブＩｇＧ４免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０４９３】
【図９４Ｄ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブＩｇＧ４免疫複合体（ＩｇＧ４  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＩｇＧ４；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ４）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１４の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０４９４】
【図９４Ｅ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブＩｇＧ４免疫複合体（ＩｇＧ４  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＩｇＧ４；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ４）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１６の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０４９５】
【図９４Ｆ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブＩｇＧ４免疫複合体（ＩｇＧ４  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＩｇＧ４；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ４）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ４０の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０４９６】
【図９４Ｇ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブＩｇＧ４免疫複合体（ＩｇＧ４  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＩｇＧ４；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ４）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ８６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０４９７】
【図９４Ｈ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブＩｇＧ４免疫複合体（ＩｇＧ４  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＩｇＧ４；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ４）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１２３の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０４９８】
【図９４Ｉ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブＩｇＧ４免疫複合体（ＩｇＧ４  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＩｇＧ４；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ４）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲの上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０４９９】
【図９５】ＩｇＧ１  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ（ＢＢ−ＩｇＧ１）、ＩｇＧ１  ＡＦ  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ（ＢＢ−ＩｇＧ１  ＡＦ）、ＩｇＧ２  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ（ＢＢ−ＩｇＧ２）、ＩｇＧ３  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ（ＢＢ−ＩｇＧ３）、及びＩｇＧ４  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ（ＢＢ−ＩｇＧ４）について、それぞれ図８９、９０、９２、９３、及び９４を参照して、ＣＤ１４、ＣＤ４０、及びＣＤ８６発現のＥＤＣ５０値と変化倍数を一覧にした表である。ＥＣ５０値は、５倍の連続希釈から得られた用量反応曲線に基づいて算出した。全ての変化倍数は、指定された濃度におけるそれぞれのＮａｋｅｄ抗体に対して計算した。
【０５００】
【図９６Ａ】ＢＢ−０１結合法によるアテゾリズマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のアテゾリズマブＩｇＧ１アイソタイプ変異体（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｐｄｌ１−ｍａｂ１）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０５０１】
【図９６Ｂ】ＢＢ−０１結合法に従って産生されたアテゾリズマブＩｇＧ１アイソタイプ変異体免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０５０２】
【図９６Ｃ】ＢＢ−０１法に従って産生されたアテゾリズマブＩｇＧ１アイソタイプ変異体免疫複合体（アテゾリズマブ−ＩｇＧ１  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）での１８時間の刺激後の、非複合体のアテゾリズマブ（アテゾリズマブ−ＩｇＧ１；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｐｄｌ１−ｍａｂ１）と比較する、骨髄系細胞でのＣＤ１４発現を示す。
【０５０３】
【図９６Ｄ】ＢＢ−０１法に従って産生されたアテゾリズマブＩｇＧ１アイソタイプ変異体免疫複合体（アテゾリズマブ−ＩｇＧ１  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）での１８時間の刺激後の、非複合体のアテゾリズマブ（アテゾリズマブ−ＩｇＧ１；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｐｄｌ１−ｍａｂ１）と比較する、骨髄系細胞でのＣＤ１６発現を示す。
【０５０４】
【図９６Ｅ】ＢＢ−０１法に従って産生されたアテゾリズマブＩｇＧ１アイソタイプ変異体免疫複合体（アテゾリズマブ−ＩｇＧ１  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）での１８時間の刺激後の、非複合体のアテゾリズマブ（アテゾリズマブ−ＩｇＧ１；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｐｄｌ１−ｍａｂ１）と比較する、骨髄系細胞でのＣＤ４０発現を示す。
【０５０５】
【図９６Ｆ】ＢＢ−０１法に従って産生されたアテゾリズマブＩｇＧ１アイソタイプ変異体免疫複合体（アテゾリズマブ−ＩｇＧ１  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）での１８時間の刺激後の、非複合体のアテゾリズマブ（アテゾリズマブ−ＩｇＧ１；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｐｄｌ１−ｍａｂ１）と比較する、骨髄系細胞でのＣＤ８６発現を示す。
【０５０６】
【図９６Ｇ】ＢＢ−０１法に従って産生されたアテゾリズマブＩｇＧ１アイソタイプ変異体免疫複合体（アテゾリズマブ−ＩｇＧ１  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）での１８時間の刺激後の、非複合体のアテゾリズマブ（アテゾリズマブ−ＩｇＧ１；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｐｄｌ１−ｍａｂ１）と比較する、骨髄系細胞でのＣＤ１２３発現を示す。
【０５０７】
【図９６Ｈ】ＢＢ−０１法に従って産生されたアテゾリズマブＩｇＧ１アイソタイプ変異体免疫複合体（アテゾリズマブ−ＩｇＧ１  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）での１８時間の刺激後の、非複合体のアテゾリズマブ（アテゾリズマブ−ＩｇＧ１；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｐｄｌ１−ｍａｂ１）と比較する、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲ発現を示す。
【０５０８】
【図９７Ａ】ＢＢ−０１結合法によるニボルマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のニボルマブＩｇＧ１アイソタイプ変異体（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｐｄ１ｎｉ−ｍａｂ１）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０５０９】
【図９７Ｂ】ＢＢ−０１結合法に従って産生されたニボルマブＩｇＧ１アイソタイプ変異体免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０５１０】
【図９７Ｃ】ＢＢ−０１法に従って産生されたニボルマブＩｇＧ１アイソタイプ変異体免疫複合体（ニボルマブ−ＩｇＧ１  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）での１８時間の刺激後の、非複合体のニボルマブ（ニボルマブ−ＩｇＧ１；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｐｄ１ｎｉ−ｍａｂ１）と比較する、骨髄系細胞でのＣＤ１４発現を示す。
【０５１１】
【図９７Ｄ】ＢＢ−０１法に従って産生されたニボルマブＩｇＧ１アイソタイプ変異体免疫複合体（ニボルマブ−ＩｇＧ１  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）での１８時間の刺激後の、非複合体のニボルマブ（ニボルマブ−ＩｇＧ１；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｐｄ１ｎｉ−ｍａｂ１）と比較する、骨髄系細胞でのＣＤ１６発現を示す。
【０５１２】
【図９７Ｅ】ＢＢ−０１法に従って産生されたニボルマブＩｇＧ１アイソタイプ変異体免疫複合体（ニボルマブ−ＩｇＧ１  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）での１８時間の刺激後の、非複合体のニボルマブ（ニボルマブ−ＩｇＧ１；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｐｄ１ｎｉ−ｍａｂ１）と比較する、骨髄系細胞でのＣＤ４０発現を示す。
【０５１３】
【図９７Ｆ】ＢＢ−０１法に従って産生されたニボルマブＩｇＧ１アイソタイプ変異体免疫複合体（ニボルマブ−ＩｇＧ１  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）での１８時間の刺激後の、非複合体のニボルマブ（ニボルマブ−ＩｇＧ１；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｐｄ１ｎｉ−ｍａｂ１）と比較する、骨髄系細胞でのＣＤ８６発現を示す。
【０５１４】
【図９７Ｇ】ＢＢ−０１法に従って産生されたニボルマブＩｇＧ１アイソタイプ変異体免疫複合体（ニボルマブ−ＩｇＧ１  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）での１８時間の刺激後の、非複合体のニボルマブ（ニボルマブ−ＩｇＧ１；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｐｄ１ｎｉ−ｍａｂ１）と比較する、骨髄系細胞でのＣＤ１２３発現を示す。
【０５１５】
【図９７Ｈ】ＢＢ−０１法に従って産生されたニボルマブＩｇＧ１アイソタイプ変異体免疫複合体（ニボルマブ−ＩｇＧ１  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）での１８時間の刺激後の、非複合体のニボルマブ（ニボルマブ−ＩｇＧ１；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｐｄ１ｎｉ−ｍａｂ１）と比較する、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲ発現を示す。
【０５１６】
【図９８Ａ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０１結合法による抗−ｇｐ７５  ｍＡｂ免疫複合体産生に利用された非複合体の抗−ｇｐ７５  ｍＡｂ（ＢｉｏＸｃｅｌｌ、ＴＡ９９−ＢＥ０１５１）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０５１７】
【図９８Ｂ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０１結合法に従って産生された抗−ｇｐ７５  ｍＡｂ免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０５１８】
【図９８Ｃ】ＢＢ−０１法に従って産生された抗ｇｐ７５  ｍＡｂ免疫複合体（ＧＰ７５  Ｂｏｌｔｂｏｄｙでの１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１４発現を示す。
【０５１９】
【図９８Ｄ】ＢＢ−０１法に従って産生された抗ｇｐ７５  ｍＡｂ免疫複合体（ＧＰ７５  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１６発現を示す。
【０５２０】
【図９８Ｅ】ＢＢ−０１法に従って産生された抗ｇｐ７５  ｍＡｂ免疫複合体（ＧＰ７５  Ｂｏｌｔｂｏｄｙでの１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ４０発現を示す。
【０５２１】
【図９８Ｆ】ＢＢ−０１法に従って産生された抗ｇｐ７５  ｍＡｂ免疫複合体（ＧＰ７５  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ８６発現を示す。
【０５２２】
【図９８Ｇ】ＢＢ−０１法に従って産生された抗ｇｐ７５  ｍＡｂ免疫複合体（ＧＰ７５  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲ発現を示す。
【０５２３】
【図９９Ａ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０３結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０５２４】
【図９９Ｂ】ＢＢ−０３結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０５２５】
【図９９Ｃ】ＢＢ−０３結合法に従って産生されたＢＢ−０３免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０５２６】
【図９９Ｄ】ＢＢ−０３法に従って産生されたＢＢ−０３免疫複合体（ＢＢ−０３）が、非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１２３の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０５２７】
【図９９Ｅ】ＢＢ−０３法に従って産生されたＢＢ−０３免疫複合体（ＢＢ−０３）が、非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲの上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０５２８】
【図９９Ｆ】ＢＢ−０３法に従って産生されたＢＢ−０３免疫複合体（ＢＢ−０３）が、非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１４の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０５２９】
【図９９Ｇ】ＢＢ−０３法に従って産生されたＢＢ−０３免疫複合体（ＢＢ−０３）が、非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１６の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０５３０】
【図９９Ｈ】ＢＢ−０３法に従って産生されたＢＢ−０３免疫複合体（ＢＢ−０３）が、非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ４０の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０５３１】
【図９９Ｉ】ＢＢ−０３法に従って産生されたＢＢ−０３免疫複合体（ＢＢ−０３）が、非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ８６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０５３２】
【図１００Ａ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０５結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０５３３】
【図１００Ｂ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０５結合法に従って産生されたＢＢ−０５免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０５３４】
【図１００Ｃ】ＢＢ−０５結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０５３５】
【図１００Ｄ】ＢＢ−０５法に従って産生されたＢＢ−０５免疫複合体（ＢＢ−０５）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１２３発現を示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０５３６】
【図１００Ｅ】ＢＢ−０５法に従って産生されたＢＢ−０５免疫複合体（ＢＢ−０５）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲ発現を示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０５３７】
【図１００Ｆ】ＢＢ−０５法に従って産生されたＢＢ−０５免疫複合体（ＢＢ−０５）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１４発現を示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０５３８】
【図１００Ｇ】ＢＢ−０５法に従って産生されたＢＢ−０５免疫複合体（ＢＢ−０５）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１６発現を示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０５３９】
【図１００Ｈ】ＢＢ−０５法に従って産生されたＢＢ−０５免疫複合体（ＢＢ−０５）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ４０発現を示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０５４０】
【図１００Ｉ】ＢＢ−０５法に従って産生されたＢＢ−０５免疫複合体（ＢＢ−０５）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ８６発現を示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０５４１】
【図１０１Ａ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０６結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０５４２】
【図１０１Ｂ】ＢＢ−０６結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０５４３】
【図１０１Ｃ】ＢＢ−０６結合法に従って産生されたＢＢ−０６免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０５４４】
【図１０２Ａ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０７結合法に従って産生されたＢＢ−０７免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０５４５】
【図１０２Ｂ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０７結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０５４６】
【図１０２Ｃ】ＢＢ−０７結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０５４７】
【図１０２Ｄ】ＢＢ−０７法に従って産生されたＢＢ−０７免疫複合体（ＢＢ−０７）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１２３発現を示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。図１０２Ｄは、ＢＢ−０７を、ＢＢ−０１結合法に従って産生されたＢＢ−０１免疫複合体（ＢＢ−０１）に対しても比較している。
【０５４８】
【図１０２Ｅ】ＢＢ−０７法に従って産生されたＢＢ−０７免疫複合体（ＢＢ−０７）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲ発現を示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。図１０２Ｅは、ＢＢ−０７を、ＢＢ−０１結合法に従って産生されたＢＢ−０１免疫複合体（ＢＢ−０１）に対しても比較している。
【０５４９】
【図１０２Ｆ】ＢＢ−０７法に従って産生されたＢＢ−０７免疫複合体（ＢＢ−０７）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１４発現を示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。図１０２Ｆは、ＢＢ−０７を、ＢＢ−０１結合法に従って産生されたＢＢ−０１免疫複合体（ＢＢ−０１）に対しても比較している。
【０５５０】
【図１０２Ｇ】ＢＢ−０７法に従って産生されたＢＢ−０７免疫複合体（ＢＢ−０７）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１６発現を示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。図１０２Ｇは、ＢＢ−０７を、ＢＢ−０１結合法に従って産生されたＢＢ−０１免疫複合体（ＢＢ−０１）に対しても比較している。
【０５５１】
【図１０２Ｈ】ＢＢ−０７法に従って産生されたＢＢ−０７免疫複合体（ＢＢ−０７）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ４０発現を示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。図１０２Ｈは、ＢＢ−０７を、ＢＢ−０１結合法に従って産生されたＢＢ−０１免疫複合体（ＢＢ−０１）に対しても比較している。
【０５５２】
【図１０２Ｉ】ＢＢ−０７法に従って産生されたＢＢ−０７免疫複合体（ＢＢ−０７）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ８６発現を示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。図１０２Ｉは、ＢＢ−０７を、ＢＢ−０１結合法に従って産生されたＢＢ−０１免疫複合体（ＢＢ−０１）に対しても比較している。
【０５５３】
【図１０２Ｊ】ＢＢ−０７法に従って産生されたＢＢ−０７免疫複合体（ＢＢ−０７）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１２３発現を示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０５５４】
【図１０２Ｋ】ＢＢ−０７法に従って産生されたＢＢ−０７免疫複合体（ＢＢ−０７）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１４発現を示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０５５５】
【図１０２Ｌ】ＢＢ−０７法に従って産生されたＢＢ−０７免疫複合体（ＢＢ−０７）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１６発現を示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０５５６】
【図１０２Ｍ】ＢＢ−０７法に従って産生されたＢＢ−０７免疫複合体（ＢＢ−０７）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ４０発現を示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。図１０２Ｍは、ＢＢ−０７を、ＢＢ−０１結合法に従って産生されたＢＢ−０１免疫複合体（ＢＢ−０１）に対しても比較している。
【０５５７】
【図１０２Ｎ】ＢＢ−０７法に従って産生されたＢＢ−０７免疫複合体（ＢＢ−０７）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ８６発現を示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０５５８】
【図１０３Ａ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−１１結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０５５９】
【図１０３Ｂ】ＢＢ−１１結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０５６０】
【図１０３Ｃ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−１１結合法に従って産生されたＢＢ−１１免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０５６１】
【図１０３Ｄ】ＢＢ−１１法に従って産生されたＢＢ−１１免疫複合体（ＢＢ−１１）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１２３発現を示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０５６２】
【図１０３Ｅ】ＢＢ−１１法に従って産生されたＢＢ−１１免疫複合体（ＢＢ−１１）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲ発現を示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０５６３】
【図１０３Ｆ】ＢＢ−１１法に従って産生されたＢＢ−１１免疫複合体（ＢＢ−１１）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１４発現を示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０５６４】
【図１０３Ｇ】ＢＢ−１１法に従って産生されたＢＢ−１１免疫複合体（ＢＢ−１１）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１６発現を示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０５６５】
【図１０３Ｈ】ＢＢ−１１法に従って産生されたＢＢ−１１免疫複合体（ＢＢ−１１）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ４０発現を示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０５６６】
【図１０３Ｉ】ＢＢ−１１法に従って産生されたＢＢ−１１免疫複合体（ＢＢ−１１）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ８６発現を示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０５６７】
【図１０４Ａ】ＢＢ−１４  ＰＦＰ結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０５６８】
【図１０４Ｂ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−１４  ＰＦＰ結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０５６９】
【図１０４Ｃ】ＢＢ−１４  ＰＦＰ結合法に従って産生されたＢＢ−１４免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０５７０】
【図１０４Ｄ】ＢＢ−１４  ＰＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−１４）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１２３の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０５７１】
【図１０４Ｅ】ＢＢ−１４  ＰＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−１４）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲの上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０５７２】
【図１０４Ｆ】ＢＢ−１４  ＰＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−１４）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１４の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０５７３】
【図１０４Ｇ】ＢＢ−１４  ＰＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−１４）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０５７４】
【図１０４Ｈ】ＢＢ−１４  ＰＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−１４）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ４０の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０５７５】
【図１０４Ｉ】ＢＢ−１４  ＰＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−１４）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ８６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０５７６】
【図１０５Ａ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−１５  ＮＨＳ結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０５７７】
【図１０５Ｂ】ＢＢ−１５  ＮＨＳ結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０５７８】
【図１０５Ｃ】ＢＢ−１５  ＮＨＳ結合法に従って産生されたＢＢ−１５免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０５７９】
【図１０５Ｄ】ＢＢ−１５  ＮＨＳ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−１５）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１２３の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０５８０】
【図１０５Ｅ】ＢＢ−１５  ＮＨＳ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−１５）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲの上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０５８１】
【図１０５Ｆ】ＢＢ−１５  ＮＨＳ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−１５）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１４の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０５８２】
【図１０５Ｇ】ＢＢ−１５  ＮＨＳ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−１５）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０５８３】
【図１０５Ｈ】ＢＢ−１５  ＮＨＳ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−１５）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ４０の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０５８４】
【図１０５Ｉ】ＢＢ−１５  ＮＨＳ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−１５）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ８６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０５８５】
【図１０６Ａ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−１７  ＴＦＰ結合法に従って産生されたＢＢ−１７免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０５８６】
【図１０６Ｂ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−１７  ＴＦＰ結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０５８７】
【図１０６Ｃ】ＢＢ−１７  ＴＦＰ結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０５８８】
【図１０６Ｄ】ＢＢ−１７  ＴＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−１７）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１２３の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０５８９】
【図１０６Ｅ】ＢＢ−１７  ＴＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−１７）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲの上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０５９０】
【図１０６Ｆ】ＢＢ−１７  ＴＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−１７）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１４の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０５９１】
【図１０６Ｇ】ＢＢ−１７  ＴＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−１７）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０５９２】
【図１０６Ｈ】ＢＢ−１７  ＴＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−１７）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ４０の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０５９３】
【図１０６Ｉ】ＢＢ−１７  ＴＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−１７）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ８６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０５９４】
【図１０７Ａ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−２２  ＳＡＴＡ結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０５９５】
【図１０７Ｂ】ＢＢ−２２  ＳＡＴＡ結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０５９６】
【図１０７Ｃ】ＢＢ−２２  ＳＡＴＡ結合法に従って産生されたＢＢ−２２免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０５９７】
【図１０８Ａ】ＢＢ−２４  ＴＦＰ結合法に従って産生されたＢＢ−２４免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０５９８】
【図１０８Ｂ】ＢＢ−２４  ＴＦＰ結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０、Ａｌｐｈａｍａｂ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０５９９】
【図１０８Ｃ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−２４  ＴＦＰ結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０、Ａｌｐｈａｍａｂ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０６００】
【図１０８Ｄ】ＢＢ−２４  ＴＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−２４）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、Ａｌｐｈａｍａｂ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１２３の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６０１】
【図１０８Ｅ】ＢＢ−２４  ＴＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−２４）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、Ａｌｐｈａｍａｂ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲの上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６０２】
【図１０８Ｆ】ＢＢ−２４  ＴＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−２４）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、Ａｌｐｈａｍａｂ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１４の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６０３】
【図１０８Ｇ】ＢＢ−２４  ＴＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−２４）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、Ａｌｐｈａｍａｂ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６０４】
【図１０８Ｈ】ＢＢ−２４  ＴＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−２４）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、Ａｌｐｈａｍａｂ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ４０の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６０５】
【図１０８Ｉ】ＢＢ−２４  ＴＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−２４）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、Ａｌｐｈａｍａｂ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ８６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６０６】
【図１０９Ａ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−２６  ＴＦＰ結合法に従って産生されたＢＢ−２６免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０６０７】
【図１０９Ｂ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−２６  ＴＦＰ結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０６０８】
【図１０９Ｃ】ＢＢ−２６  ＴＦＰ結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０６０９】
【図１０９Ｄ】ＢＢ−２６  ＴＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−２６）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１２３の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６１０】
【図１０９Ｅ】ＢＢ−２６  ＴＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−２６）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲの上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６１１】
【図１０９Ｆ】ＢＢ−２６  ＴＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−２６）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ４０の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６１２】
【図１０９Ｇ】ＢＢ−２６  ＴＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−２６）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ８６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６１３】
【図１１０Ａ】ＢＢ−２７  ＴＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−２７）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１２３の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６１４】
【図１１０Ｂ】ＢＢ−２７  ＴＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−２７）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲの上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６１５】
【図１１０Ｃ】ＢＢ−２７  ＴＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−２７）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１４の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６１６】
【図１１０Ｄ】ＢＢ−２７  ＴＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−２７）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６１７】
【図１１０Ｅ】ＢＢ−２７  ＴＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−２７）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ４０の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６１８】
【図１１０Ｆ】ＢＢ−２７  ＴＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−２７）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ８６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６１９】
【図１１０Ｇ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−２７  ＴＦＰ結合法に従って産生されたＢＢ−２７免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０６２０】
【図１１０Ｈ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−２７  ＴＦＰ結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０６２１】
【図１１０Ｉ】ＢＢ−２７  ＴＦＰ結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０、ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０６２２】
【図１１１Ａ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−３６  ＴＦＰ結合法に従って産生されたＢＢ−３６免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０６２３】
【図１１１Ｂ】ＢＢ−３６  ＴＦＰ結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０、Ａｌｐｈａｍａｂ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０６２４】
【図１１１Ｃ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−３６  ＴＦＰ結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０、Ａｌｐｈａｍａｂ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０６２５】
【図１１１Ｄ】ＢＢ−３６  ＴＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−３６）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、Ａｌｐｈａｍａｂ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１２３の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６２６】
【図１１１Ｅ】ＢＢ−３６  ＴＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−３６）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、Ａｌｐｈａｍａｂ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲの上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６２７】
【図１１１Ｆ】ＢＢ−３６  ＴＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−３６）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、Ａｌｐｈａｍａｂ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１４の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６２８】
【図１１１Ｇ】ＢＢ−３６  ＴＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−３６）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、Ａｌｐｈａｍａｂ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６２９】
【図１１１Ｈ】ＢＢ−３６  ＴＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−３６）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、Ａｌｐｈａｍａｂ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ４０の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６３０】
【図１１１Ｉ】ＢＢ−３６  ＴＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−３６）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、Ａｌｐｈａｍａｂ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ８６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６３１】
【図１１２Ａ】ＢＢ−３７  ＴＦＰ結合法に従って産生されたＢＢ−３７免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０６３２】
【図１１２Ｂ】ＢＢ−３７  ＴＦＰ結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０、Ａｌｐｈａｍａｂ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０６３３】
【図１１２Ｃ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−３７  ＴＦＰ結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０、Ａｌｐｈａｍａｂ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０６３４】
【図１１２Ｄ】ＢＢ−３７  ＴＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−３７）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、Ａｌｐｈａｍａｂ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１２３の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６３５】
【図１１２Ｅ】ＢＢ−３７  ＴＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−３７）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、Ａｌｐｈａｍａｂ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲの上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６３６】
【図１１２Ｆ】ＢＢ−３７  ＴＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−３７）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、Ａｌｐｈａｍａｂ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１４の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６３７】
【図１１２Ｇ】ＢＢ−３７  ＴＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−３７）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、Ａｌｐｈａｍａｂ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６３８】
【図１１２Ｈ】ＢＢ−３７  ＴＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−３７）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、Ａｌｐｈａｍａｂ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ４０の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６３９】
【図１１２Ｉ】ＢＢ−３７  ＴＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−３７）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、Ａｌｐｈａｍａｂ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ８６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６４０】
【図１１３Ａ】ＢＢ−４５  ＴＦＰ結合法に従って産生されたＢＢ−４５免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０６４１】
【図１１３Ｂ】ＢＢ−４５  ＴＦＰ結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０、Ａｌｐｈａｍａｂ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０６４２】
【図１１３Ｃ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−４５  ＴＦＰ結合法によるリツキシマブ免疫複合体産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０、Ａｌｐｈａｍａｂ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０６４３】
【図１１３Ｄ】ＢＢ−４５  ＴＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−４５）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、Ａｌｐｈａｍａｂ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１２３の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６４４】
【図１１３Ｅ】ＢＢ−４５  ＴＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−４５）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、Ａｌｐｈａｍａｂ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲの上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６４５】
【図１１３Ｆ】ＢＢ−４５  ＴＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−４５）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、Ａｌｐｈａｍａｂ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１４の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６４６】
【図１１３Ｇ】ＢＢ−４５  ＴＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−４５）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、Ａｌｐｈａｍａｂ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６４７】
【図１１３Ｈ】ＢＢ−４５  ＴＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−４５）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、Ａｌｐｈａｍａｂ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ４０の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６４８】
【図１１３Ｉ】ＢＢ−４５  ＴＦＰ結合法に従って産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−４５）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０、Ａｌｐｈａｍａｂ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ８６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６４９】
【図１１４Ａ】非複合体のＣＤ４０モノクローナル抗体（Ｂｉｏｘｃｅｌｌ、ＢＥ００１６−２）の重鎖の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０６５０】
【図１１４Ｂ】非複合体のＣＤ４０モノクローナル抗体（Ｂｉｏｘｃｅｌｌ、ＢＥ００１６−２）の軽鎖の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０６５１】
【図１１４Ｃ】米国特許出願公開第２０１７／０１５８７７２号に従って産生されたＣＤ４０免疫複合体の重鎖の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０６５２】
【図１１４Ｄ】米国特許出願公開第２０１７／０１５８７７２号に従って産生されたＣＤ４０免疫複合体の軽鎖の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０６５３】
【図１１５Ａ】非複合体のＣＤ４０モノクローナル抗体（Ｂｉｏｘｃｅｌｌ、ＢＥ００１６−２）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０６５４】
【図１１５Ｂ】ＢＢ−０１結合法に従って産生されたＣＤ４０免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０６５５】
【図１１６Ａ】非複合体のＣＬＥＣ５モノクローナル抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ｍａｂ１６３９）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０６５６】
【図１１６Ｂ】ＢＢ−０１結合法に従って産生されたＣＬＥＣ５免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０６５７】
【図１１７Ａ】ＢＢ−０１結合法に従って産生されたＣＬ２６４免疫複合体の概略図を示す。
【０６５８】
【図１１７Ｂ】エステル合成法に従って産生されたＣＬ２６４免疫複合体の概略図を示す。
【０６５９】
【図１１８Ａ】ＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブ−ＣＬ３０７免疫複合体が、刺激１８時間後に、骨髄系細胞においてＣＤ１２３を用量依存的に上方制御することを示す。破線は、１８時間培養した非刺激細胞での発現レベルを示す。
【０６６０】
【図１１８Ｂ】ＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブ−ＣＬ３０７免疫複合体が、刺激１８時間後に、骨髄系細胞においてＨＬＡ−ＤＲを用量依存的に上方制御することを示す。破線は、１８時間培養した非刺激細胞での発現レベルを示す。
【０６６１】
【図１１８Ｃ】ＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブ−ＣＬ３０７免疫複合体が、刺激１８時間後に、骨髄系細胞においてＣＤ１４を用量依存的に下方制御することを示す。破線は、１８時間培養した非刺激細胞での発現レベルを示す。
【０６６２】
【図１１８Ｄ】ＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブ−ＣＬ３０７免疫複合体が、刺激１８時間後に、骨髄系細胞においてＣＤ１６を用量依存的に下方制御することを示す。破線は、１８時間培養した非刺激細胞での発現レベルを示す。
【０６６３】
【図１１８Ｅ】ＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブ−ＣＬ３０７免疫複合体が、刺激１８時間後に、骨髄系細胞においてＣＤ４０を用量依存的に上方制御することを示す。破線は、１８時間培養した非刺激細胞での発現レベルを示す。
【０６６４】
【図１１８Ｆ】ＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブ−ＣＬ３０７免疫複合体が、刺激１８時間後に、骨髄系細胞においてＣＤ８６を用量依存的に上方制御することを示す。破線は、１８時間培養した非刺激細胞での発現レベルを示す。
【０６６５】
【図１１８Ｇ】リツキシマブ−ＣＬ３０７の産生に利用された非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０６６６】
【図１１８Ｈ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、リツキシマブ−ＣＬ３０７の産生に利用された非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０６６７】
【図１１８Ｉ】ＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブ−ＣＬ３０７免疫複合体が、刺激１８時間後に、ＴＮＦαの分泌を用量依存的に誘発することを示す。
【０６６８】
【図１１８Ｊ】ＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブ−ＣＬ３０７免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０６６９】
【図１１９Ａ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ−ＣＬ４１９免疫複合体（リツキシマブ−ＣＬ４１９  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激３６時間後に、骨髄系細胞からのＩＬ−１β分泌の誘発に優れていることを示す。
【０６７０】
【図１１９Ｂ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ−ＣＬ４１９免疫複合体（リツキシマブ−ＣＬ４１９  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激３６時間後に、骨髄系細胞からのＴＮＦα分泌の誘発に優れていることを示す。
【０６７１】
【図１１９Ｃ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、リツキシマブ−ＣＬ４１９の産生に利用された非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０６７２】
【図１１９Ｄ】リツキシマブ−ＣＬ４１９の産生に利用された非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０６７３】
【図１１９Ｅ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブ−ＣＬ４１９免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０６７４】
【図１１９Ｆ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ−ＣＬ４１９免疫複合体（ＣＬ４１９  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０；Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１６の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６７５】
【図１１９Ｇ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ−ＣＬ４１９免疫複合体（ＣＬ４１９  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０；Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ４０の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６７６】
【図１１９Ｈ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ−ＣＬ４１９免疫複合体（ＣＬ４１９  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０；Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ８６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６７７】
【図１１９Ｉ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ−ＣＬ４１９免疫複合体（ＣＬ４１９  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０；Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１２３の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６７８】
【図１２０Ａ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ−ＣＬ５７２免疫複合体（リツキシマブ−ＣＬ５７２  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激３６時間後に、骨髄系細胞からのＩＬ−１β分泌の誘発に優れていることを示す。
【０６７９】
【図１２０Ｂ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ−ＣＬ５７２免疫複合体（リツキシマブ−ＣＬ５７２  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激３６時間後に、骨髄系細胞からのＴＮＦα分泌の誘発に優れていることを示す。
【０６８０】
【図１２０Ｃ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、リツキシマブ−ＣＬ５７２の産生に利用された非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０６８１】
【図１２０Ｄ】リツキシマブ−ＣＬ５７２の産生に利用された非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０６８２】
【図１２０Ｅ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブ−ＣＬ５７２免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０６８３】
【図１２０Ｆ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ−ＣＬ５７２免疫複合体（ＣＬ５７２  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０；Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１２３の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６８４】
【図１２０Ｇ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ−ＣＬ５７２免疫複合体（ＣＬ５７２  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０；Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲの上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６８５】
【図１２０Ｈ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ−ＣＬ５７２免疫複合体（ＣＬ５７２  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０；Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１６の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６８６】
【図１２０Ｉ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ−ＣＬ５７２免疫複合体（ＣＬ５７２  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０；Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ４０の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６８７】
【図１２１Ａ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ−Ｐａｍ２ＣＳＫ４免疫複合体（リツキシマブ−Ｐａｍ２ＣＳＫ４  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激３６時間後に、骨髄系細胞からのＩＬ−１β分泌の誘発に優れていることを示す。
【０６８８】
【図１２１Ｂ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ−Ｐａｍ２ＣＳＫ４免疫複合体（リツキシマブ−Ｐａｍ２ＣＳＫ４  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激３６時間後に、骨髄系細胞からのＴＮＦα分泌の誘発に優れていることを示す。
【０６８９】
【図１２１Ｃ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、リツキシマブ−Ｐａｍ２ＣＳＫ４の産生に利用された非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０６９０】
【図１２１Ｄ】リツキシマブ−Ｐａｍ２ＣＳＫ４の産生に利用された非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０６９１】
【図１２１Ｅ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブ−Ｐａｍ２ＣＳＫ４免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０６９２】
【図１２１Ｆ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ−Ｐａｍ２ＣＳＫ４免疫複合体（Ｐａｍ２ＣＳＫ４  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０；Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１６の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６９３】
【図１２１Ｇ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ−Ｐａｍ２ＣＳＫ４免疫複合体（Ｐａｍ２ＣＳＫ４  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０；Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ４０の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６９４】
【図１２１Ｈ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ−Ｐａｍ２ＣＳＫ４免疫複合体（Ｐａｍ２ＣＳＫ４  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０；Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ８６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０６９５】
【図１２２Ａ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ−Ｐａｍ３ＣＳＫ４免疫複合体（リツキシマブ−Ｐａｍ３ＣＳＫ４  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激３６時間後に、骨髄系細胞からのＩＬ−１β分泌の誘発に優れていることを示す。
【０６９６】
【図１２２Ｂ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ−Ｐａｍ３ＣＳＫ４免疫複合体（リツキシマブ−Ｐａｍ３ＣＳＫ４  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激３６時間後に、骨髄系細胞からのＴＮＦα分泌の誘発に優れていることを示す。
【０６９７】
【図１２２Ｃ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、リツキシマブ−Ｐａｍ３ＣＳＫ４の産生に利用された非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０６９８】
【図１２２Ｄ】リツキシマブ−Ｐａｍ３ＣＳＫ４の産生に利用された非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０６９９】
【図１２２Ｅ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブ−Ｐａｍ３ＣＳＫ４免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０７００】
【図１２２Ｆ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ−Ｐａｍ３ＣＳＫ４免疫複合体（Ｐａｍ３ＣＳＫ４  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０；Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１６の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０７０１】
【図１２２Ｇ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ−Ｐａｍ３ＣＳＫ４免疫複合体（Ｐａｍ３ＣＳＫ４  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０；Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ４０の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０７０２】
【図１２２Ｈ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ−Ｐａｍ３ＣＳＫ４免疫複合体（Ｐａｍ３ＣＳＫ４  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０；Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ８６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０７０３】
【図１２２Ｉ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ−Ｐａｍ３ＣＳＫ４免疫複合体（Ｐａｍ３ＣＳＫ４  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、非複合体のリツキシマブ（ＣＤ２０；Ｒｏｃｈｅ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１２３の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０７０４】
【図１２３Ａ】ＴＦＰ結合法に従って産生されたＢＢ−４３免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０７０５】
【図１２３Ｂ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−４３の産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０７０６】
【図１２３Ｃ】ＢＢ−４３の産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０７０７】
【図１２３Ｄ】ＴＦＰ結合法に従って産生されたＢＢ−４３免疫複合体が、非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１２３の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０７０８】
【図１２３Ｅ】ＴＦＰ結合法に従って産生されたＢＢ−４３免疫複合体が、非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲの上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０７０９】
【図１２３Ｆ】ＴＦＰ結合法に従って産生されたＢＢ−４３免疫複合体が、非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１４の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０７１０】
【図１２３Ｇ】ＴＦＰ結合法に従って産生されたＢＢ−４３免疫複合体が、非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１６の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０７１１】
【図１２３Ｈ】ＴＦＰ結合法に従って産生されたＢＢ−４３免疫複合体が、非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ４０の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０７１２】
【図１２３Ｉ】ＴＦＰ結合法に従って産生されたＢＢ−４３免疫複合体が、非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ８６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０７１３】
【図１２４Ａ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ−ＳＡＴＡ−Ｔ７８２免疫複合体（リツキシマブ−ＳＡＴＡ−ＣＬ７８２  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、刺激１８時間後に、骨髄系細胞からのＴＮＦα分泌を用量依存的に誘発することを示す。
【０７１４】
【図１２４Ｂ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、リツキシマブ−ＳＡＴＡ−Ｔ７８２の産生に利用された非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０７１５】
【図１２４Ｃ】リツキシマブ−ＳＡＴＡ−Ｔ７８２の産生に利用された非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０７１６】
【図１２４Ｄ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ−ＳＡＴＡ−Ｔ７８２の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０７１７】
【図１２４Ｅ】ＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブ−ＳＡＴＡ−Ｔ７８２免疫複合体（リツキシマブ−ＳＡＴＡ−Ｔ７８２）が、刺激１８時間後に、骨髄系細胞においてＣＤ１２３を用量依存的に上方制御することを示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０７１８】
【図１２４Ｆ】ＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブ−ＳＡＴＡ−Ｔ７８２免疫複合体（リツキシマブ−ＳＡＴＡ−Ｔ７８２）が、刺激１８時間後に、骨髄系細胞においてＨＬＡ−ＤＲを用量依存的に上方制御することを示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０７１９】
【図１２４Ｇ】ＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブ−ＳＡＴＡ−Ｔ７８２免疫複合体（リツキシマブ−ＳＡＴＡ−Ｔ７８２）が、刺激１８時間後に、骨髄系細胞においてＣＤ１４を用量依存的に下方制御することを示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０７２０】
【図１２４Ｈ】ＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブ−ＳＡＴＡ−Ｔ７８２免疫複合体（リツキシマブ−ＳＡＴＡ−Ｔ７８２）が、刺激１８時間後に、骨髄系細胞においてＣＤ１６を用量依存的に下方制御することを示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０７２１】
【図１２４Ｉ】ＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブ−ＳＡＴＡ−Ｔ７８２免疫複合体（リツキシマブ−ＳＡＴＡ−Ｔ７８２）が、刺激１８時間後に、骨髄系細胞においてＣＤ４０を用量依存的に上方制御することを示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０７２２】
【図１２４Ｊ】ＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブ−ＳＡＴＡ−Ｔ７８２免疫複合体（リツキシマブ−ＳＡＴＡ−Ｔ７８２）が、刺激１８時間後に、骨髄系細胞においてＣＤ８６を用量依存的に上方制御することを示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０７２３】
【図１２５Ａ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ−ＳＡＴＰ−Ｔ７８２免疫複合体（リツキシマブ−ＳＡＴＰ−ＣＬ７８２  Ｂｏｌｔｂｏｄｙ）が、刺激１８時間後に、骨髄系細胞からのＴＮＦα分泌を用量依存的に誘発することを示す。
【０７２４】
【図１２５Ｂ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、リツキシマブ−ＳＡＴＰ−Ｔ７８２の産生に利用された非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０７２５】
【図１２５Ｃ】リツキシマブ−ＳＡＴＰ−Ｔ７８２の産生に利用された非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０７２６】
【図１２５Ｄ】ＢＢ−０１法に従って産生されたリツキシマブ−ＳＡＴＰ−Ｔ７８２の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０７２７】
【図１２５Ｅ】ＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブ−ＳＡＴＰ−Ｔ７８２免疫複合体（リツキシマブ−ＳＡＴＰ−Ｔ７８２）が、刺激１８時間後に、骨髄系細胞においてＣＤ１２３を用量依存的に上方制御することを示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０７２８】
【図１２５Ｆ】ＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブ−ＳＡＴＰ−Ｔ７８２免疫複合体（リツキシマブ−ＳＡＴＰ−Ｔ７８２）が、刺激１８時間後に、骨髄系細胞においてＨＬＡ−ＤＲを用量依存的に上方制御することを示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０７２９】
【図１２５Ｇ】ＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブ−ＳＡＴＰ−Ｔ７８２免疫複合体（リツキシマブ−ＳＡＴＰ−Ｔ７８２）が、刺激１８時間後に、骨髄系細胞においてＣＤ１４を用量依存的に下方制御することを示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０７３０】
【図１２５Ｈ】ＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブ−ＳＡＴＰ−Ｔ７８２免疫複合体（リツキシマブ−ＳＡＴＰ−Ｔ７８２）が、刺激１８時間後に、骨髄系細胞においてＣＤ１６を用量依存的に下方制御することを示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０７３１】
【図１２５Ｉ】ＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブ−ＳＡＴＰ−Ｔ７８２免疫複合体（リツキシマブ−ＳＡＴＰ−Ｔ７８２）が、刺激１８時間後に、骨髄系細胞においてＣＤ４０を用量依存的に上方制御することを示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０７３２】
【図１２５Ｊ】ＢＢ−０１結合法に従って産生されたリツキシマブ−ＳＡＴＰ−Ｔ７８２免疫複合体（リツキシマブ−ＳＡＴＰ−Ｔ７８２）が、刺激１８時間後に、骨髄系細胞においてＣＤ８６を用量依存的に上方制御することを示す。破線は、１８時間培養した非刺激骨髄系細胞での発現レベルを示す。
【０７３３】
【図１２６Ａ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩結合した後の、ＳＡＴＡ結合法に従って産生されたＢＢ−１２免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０７３４】
【図１２６Ｂ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−１２の産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０７３５】
【図１２６Ｃ】ＢＢ−１２の産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０７３６】
【図１２６Ｄ】ＳＡＴＡ法に従って産生されたＢＢ−１２免疫複合体が、刺激１８時間後に、ＣＤ１２３の上方制御を誘発できないことを示す。図１２６Ｄは、ＳＡＴＡ法に従って産生されたＢＢ−１１免疫複合体が、ＣＤ１２３の上方制御の誘発において、ＢＢ−１２及び等モル濃度の混合物（ＣＤ２０＋ＩＲＭ１）と比べて優れていることも示す。ＢＢ−１１及びＢＢ−１２は、同一のリンカーで構成されているが、異なるアジュバントを有していることに留意されたい。
【０７３７】
【図１２６Ｅ】ＳＡＴＡ法に従って産生されたＢＢ−１２免疫複合体が、刺激１８時間後に、ＨＬＡ−ＤＲの上方制御を誘発できないことを示す。図１２６Ｅは、ＳＡＴＡ法に従って産生されたＢＢ−１１免疫複合体が、ＨＬＡ−ＤＲの上方制御の誘発において、ＢＢ−１２及び等モル濃度の混合物（ＣＤ２０＋ＩＲＭ１）と比べて優れていることも示す。ＢＢ−１１及びＢＢ−１２は、同一のリンカーで構成されているが、異なるアジュバントを有していることに留意されたい。
【０７３８】
【図１２６Ｆ】ＳＡＴＡ法に従って産生されたＢＢ−１２免疫複合体が、刺激１８時間後に、等モル濃度の混合物（ＣＤ２０＋ＩＲＭ１）と比べて、ＣＤ１４の下方制御を誘発できないことを示す。図１２６Ｆは、ＳＡＴＡ法に従って産生されたＢＢ−１１免疫複合体が、ＣＤ１４の下方制御の誘発において、ＢＢ−１２及び等モル濃度の混合物（ＣＤ２０＋ＩＲＭ１）と比べて優れていることも示す。ＢＢ−１１及びＢＢ−１２は、同一のリンカーで構成されているが、異なるアジュバントを有していることに留意されたい。
【０７３９】
【図１２６Ｇ】ＳＡＴＡ法に従って産生されたＢＢ−１１免疫複合体が、ＣＤ１６の下方制御の誘発において、ＢＢ−１２及び等モル濃度の混合物（ＣＤ２０＋ＩＲＭ１）と比べて優れていることも示す。ＢＢ−１１及びＢＢ−１２は、同一のリンカーで構成されているが、異なるアジュバントを有していることに留意されたい。
【０７４０】
【図１２６Ｈ】ＳＡＴＡ法に従って産生されたＢＢ−１２免疫複合体が、刺激１８時間後に、等モル濃度の混合物（ＣＤ２０＋ＩＲＭ１）と比べて、ＣＤ４０の上方制御を誘発できないことを示す。図１２６Ｈは、ＳＡＴＡ法に従って産生されたＢＢ−１１免疫複合体が、ＣＤ４０の上方制御の誘発において、ＢＢ−１２及び等モル濃度の混合物（ＣＤ２０＋ＩＲＭ１）と比べて優れていることも示す。ＢＢ−１１及びＢＢ−１２は、同一のリンカーで構成されているが、異なるアジュバントを有していることに留意されたい。
【０７４１】
【図１２６Ｉ】ＳＡＴＡ法に従って産生されたＢＢ−１２免疫複合体が、刺激１８時間後に、等モル濃度の混合物（ＣＤ２０＋ＩＲＭ１）と比べて、ＣＤ８６の上方制御を誘発できないことを示す。図１２６Ｉは、ＳＡＴＡ法に従って産生されたＢＢ−１１免疫複合体が、ＣＤ８６の上方制御の誘発において、ＢＢ−１２及び等モル濃度の混合物（ＣＤ２０＋ＩＲＭ１）と比べて優れていることも示す。ＢＢ−１１及びＢＢ−１２は、同一のリンカーで構成されているが、異なるアジュバントを有していることに留意されたい。
【０７４２】
【図１２６Ｊ】ＢＢ−１２による刺激１８時間後のＣＤ１２３発現を示す。破線は、インキュベーション１８時間後の非刺激細胞でのＣＤ１２３の発現レベルを示す。
【０７４３】
【図１２６Ｋ】ＢＢ−１２による刺激１８時間後のＨＬＡ−ＤＲ発現を示す。破線は、インキュベーション１８時間後の非刺激細胞でのＨＬＡ−ＤＲの発現レベルを示す。
【０７４４】
【図１２６Ｌ】ＢＢ−１２による刺激１８時間後のＣＤ１４発現を示す。破線は、インキュベーション１８時間後の非刺激細胞でのＣＤ１４の発現レベルを示す。
【０７４５】
【図１２６Ｍ】ＢＢ−１２による刺激１８時間後のＣＤ１６発現を示す。破線は、インキュベーション１８時間後の非刺激細胞でのＣＤ１６の発現レベルを示す。
【０７４６】
【図１２６Ｎ】ＢＢ−１２による刺激１８時間後のＣＤ４０発現を示す。破線は、インキュベーション１８時間後の非刺激細胞でのＣＤ４０の発現レベルを示す。
【０７４７】
【図１２６Ｏ】ＢＢ−１２による刺激１８時間後のＣＤ８６発現を示す。破線は、インキュベーション１８時間後の非刺激細胞でのＣＤ８６の発現レベルを示す。
【０７４８】
【図１２７Ａ】ＰＮＧａｓｅを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＳＡＴＡ結合法に従って産生されたＢＢ−１０免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０７４９】
【図１２７Ｂ】ＢＢ−１０の産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０７５０】
【図１２７Ｃ】ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−１０の産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０７５１】
【図１２７Ｄ】ＳＡＴＡ法に従って産生されたＢＢ−１０免疫複合体が、刺激１８時間後に、ＣＤ１２３の上方制御を誘発できないことを示す。図１２７Ｄは、ＳＡＴＡ法に従って産生されたＢＢ−０５免疫複合体が、ＣＤ１２３の上方制御の誘発において、ＢＢ−１０及び等モル濃度の混合物（ＣＤ２０＋ＩＲＭ１）と比べて優れていることも示す。ＢＢ−０５及びＢＢ−１０は、同一のリンカーで構成されているが、異なるアジュバントを有していることに留意されたい。
【０７５２】
【図１２７Ｅ】ＳＡＴＡ法に従って産生されたＢＢ−１０免疫複合体が、刺激１８時間後に、ＨＬＡ−ＤＲの上方制御を誘発できないことを示す。図１２７Ｅは、ＳＡＴＡ法に従って産生されたＢＢ−０５免疫複合体が、ＨＬＡ−ＤＲの上方制御の誘発において、ＢＢ−１０及び等モル濃度の混合物（ＣＤ２０＋ＩＲＭ１）と比べて優れていることも示す。ＢＢ−０５及びＢＢ−１０は、同一のリンカーで構成されているが、異なるアジュバントを有していることに留意されたい。
【０７５３】
【図１２７Ｆ】ＳＡＴＡ法に従って産生されたＢＢ−１０免疫複合体が、刺激１８時間後に、等モル濃度の混合物（ＣＤ２０＋ＩＲＭ１）と比べて、ＣＤ１４の下方制御を誘発できないことを示す。図１２７Ｆは、ＳＡＴＡ法に従って産生されたＢＢ−０５免疫複合体が、ＣＤ１４の下方制御の誘発において、ＢＢ−１０及び等モル濃度の混合物（ＣＤ２０＋ＩＲＭ１）と比べて優れていることも示す。ＢＢ−０５及びＢＢ−１０は、同一のリンカーで構成されているが、異なるアジュバントを有していることに留意されたい。
【０７５４】
【図１２７Ｇ】ＳＡＴＡ法に従って産生されたＢＢ−０５免疫複合体が、ＣＤ１６の下方制御の誘発において、ＢＢ−１０及び等モル濃度の混合物（ＣＤ２０＋ＩＲＭ１）と比べて優れていることを示す。ＢＢ−０５及びＢＢ−１０は、同一のリンカーで構成されているが、異なるアジュバントを有していることに留意されたい。
【０７５５】
【図１２７Ｈ】ＳＡＴＡ法に従って産生されたＢＢ−１０免疫複合体が、刺激１８時間後に、等モル濃度の混合物（ＣＤ２０＋ＩＲＭ１）と比べて、ＣＤ４０の上方制御を誘発できないことを示す。図１２７Ｈは、ＳＡＴＡ法に従って産生されたＢＢ−０５免疫複合体が、ＣＤ４０の上方制御の誘発において、ＢＢ−１０及び等モル濃度の混合物（ＣＤ２０＋ＩＲＭ１）と比べて優れていることも示す。ＢＢ−０５及びＢＢ−１０は、同一のリンカーで構成されているが、異なるアジュバントを有していることに留意されたい。
【０７５６】
【図１２７Ｉ】ＳＡＴＡ法に従って産生されたＢＢ−１０免疫複合体が、刺激１８時間後に、等モル濃度の混合物（ＣＤ２０＋ＩＲＭ１）と比べて、ＣＤ８６の上方制御を誘発できないことを示す。図１２７Ｉは、ＳＡＴＡ法に従って産生されたＢＢ−０５免疫複合体が、ＣＤ８６の上方制御の誘発において、ＢＢ−１０及び等モル濃度の混合物（ＣＤ２０＋ＩＲＭ１）と比べて優れていることも示す。ＢＢ−０５及びＢＢ−１０は、同一のリンカーで構成されているが、異なるアジュバントを有していることに留意されたい。
【０７５７】
【図１２７Ｊ】ＢＢ−１０による刺激１８時間後のＣＤ１２３発現を示す。破線は、インキュベーション１８時間後の非刺激細胞でのＣＤ１２３の発現レベルを示す。
【０７５８】
【図１２７Ｋ】ＢＢ−１０による刺激１８時間後のＨＬＡ−ＤＲ発現を示す。破線は、インキュベーション１８時間後の非刺激細胞でのＨＬＡ−ＤＲの発現レベルを示す。
【０７５９】
【図１２７Ｌ】ＢＢ−１０による刺激１８時間後のＣＤ１４発現を示す。破線は、インキュベーション１８時間後の非刺激細胞でのＣＤ１４の発現レベルを示す。
【０７６０】
【図１２７Ｍ】ＢＢ−１０による刺激１８時間後のＣＤ１６発現を示す。破線は、インキュベーション１８時間後の非刺激細胞でのＣＤ１６の発現レベルを示す。
【０７６１】
【図１２７Ｎ】ＢＢ−１０による刺激１８時間後のＣＤ４０発現を示す。破線は、インキュベーション１８時間後の非刺激細胞でのＣＤ４０の発現レベルを示す。
【０７６２】
【図１２７Ｏ】ＢＢ−１０による刺激１８時間後のＣＤ８６発現を示す。破線は、インキュベーション１８時間後の非刺激細胞でのＣＤ４０の発現レベルを示す。
【０７６３】
【図１２８Ａ】ＢＢ−０１法に従って産生されたＢＢ−０１免疫複合体米国特許第８，９５１，５２８号に開示される方法に従って産生された等モル濃度のＢＢ−１９と非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞からの優れたＩＬ−１β分泌を誘発することを示す。
【０７６４】
【図１２８Ｂ】ＢＢ−０１法に従って産生されたＢＢ−０１免疫複合体米国特許第８，９５１，５２８号に開示される方法に従って産生された等モル濃度のＢＢ−１９と非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞からの優れたＴＮＦα分泌を誘発することを示す。
【０７６５】
【図１２８Ｃ】等モル濃度の非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）又は米国特許第８，９５１，５２８号に開示される方法に従って産生されたＢＢ−１９と１８時間インキュベーションした後の、骨髄系細胞からのＩＬ−１β分泌を示す。
【０７６６】
【図１２８Ｄ】等モル濃度の非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）又は米国特許第８，９５１，５２８号に開示される方法に従って産生されたＢＢ−１９と１８時間インキュベーションした後の、骨髄系細胞からのＴＮＦα分泌を示す。
【０７６７】
【図１２８Ｅ】ＰＮＧａｓｅを用いて一晩脱グリコシル化した後の、米国特許第８，９５１，５２８号に開示される方法に従って産生されたＢＢ−１９の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０７６８】
【図１２８Ｆ】ＰＮＧａｓｅを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−１９の産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０７６９】
【図１２８Ｇ】ＢＢ−１９の産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０７７０】
【図１２８Ｈ】ＢＢ−０１法に従って産生されたＢＢ−０１が、米国特許第８，９５１，５２８号に開示される方法に従って産生されたＢＢ−１９免疫複合体と非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１２３の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０７７１】
【図１２８Ｉ】ＢＢ−０１法に従って産生されたＢＢ−０１が、米国特許第８，９５１，５２８号に開示される方法に従って産生されたＢＢ−１９免疫複合体と非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲの上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０７７２】
【図１２８Ｊ】ＢＢ−０１法に従って産生されたＢＢ−０１が、米国特許第８，９５１，５２８号に開示される方法に従って産生されたＢＢ−１９免疫複合体と非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１４の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０７７３】
【図１２８Ｋ】ＢＢ−０１法に従って産生されたＢＢ−０１が、米国特許第８，９５１，５２８号に開示される方法に従って産生されたＢＢ−１９免疫複合体と非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１６の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０７７４】
【図１２８Ｌ】米国特許第８，９５１，５２８号に開示される方法に従って産生されたＢＢ−１９免疫複合体が、刺激１８時間後に、ＣＤ４０の上方制御を誘発できないことを示す。図１２８Ｌは、ＢＢ−０１法に従って産生されたＢＢ−０１免疫複合体が、ＣＤ４０の上方制御の誘発において、ＢＢ−１９及び非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比べて優れていることも示す。
【０７７５】
【図１２８Ｍ】ＢＢ−０１法に従って産生されたＢＢ−０１が、米国特許第８，９５１，５２８号に開示される方法に従って産生されたＢＢ−１９免疫複合体と非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ８６の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０７７６】
【図１２８Ｎ】米国特許第８，９５１，５２８号に開示される方法に従って産生されたＢＢ−１９免疫複合体又は非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１２３発現を示す。
【０７７７】
【図１２８Ｏ】米国特許第８，９５１，５２８号に開示される方法に従って産生されたＢＢ−１９免疫複合体又は非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲ発現を示す。
【０７７８】
【図１２８Ｐ】米国特許第８，９５１，５２８号に開示される方法に従って産生されたＢＢ−１９免疫複合体又は非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１４発現を示す。
【０７７９】
【図１２８Ｑ】米国特許第８，９５１，５２８号に開示される方法に従って産生されたＢＢ−１９免疫複合体又は非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１６発現を示す。
【０７８０】
【図１２８Ｒ】米国特許第８，９５１，５２８号に開示される方法に従って産生されたＢＢ−１９免疫複合体又は非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ４０発現を示す。
【０７８１】
【図１２８Ｓ】米国特許第８，９５１，５２８号に開示される方法に従って産生されたＢＢ−１９免疫複合体又は非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ８６発現を示す。
【０７８２】
【図１２９Ａ】ＢＢ−０１法に従って産生されたＢＢ−０１免疫複合体米国特許第８，９５１，５２８号に開示される方法に従って産生された等モル濃度のＢＢ−２０と非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞からの優れたＩＬ−１β分泌を誘発することを示す。
【０７８３】
【図１２９Ｂ】ＢＢ−０１法に従って産生されたＢＢ−０１免疫複合体米国特許第８，９５１，５２８号に開示される方法に従って産生された等モル濃度のＢＢ−２０と非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞からの優れたＴＮＦα分泌を誘発することを示す。
【０７８４】
【図１２９Ｃ】等モル濃度の非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）又は米国特許第８，９５１，５２８号に開示される方法に従って産生されたＢＢ−２０と１８時間インキュベーションした後の、骨髄系細胞からのＩＬ−１β分泌を示す。
【０７８５】
【図１２９Ｄ】等モル濃度の非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）又は米国特許第８，９５１，５２８号に開示される方法に従って産生されたＢＢ−２０と１８時間インキュベーションした後の、骨髄系細胞からのＴＮＦα分泌を示す。
【０７８６】
【図１２９Ｅ】ＰＮＧａｓｅを用いて一晩脱グリコシル化した後の、米国特許第８，９５１，５２８号に開示される方法に従って産生されたＢＢ−２０の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０７８７】
【図１２９Ｆ】ＰＮＧａｓｅを用いて一晩脱グリコシル化した後の、ＢＢ−２０の産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０７８８】
【図１２９Ｇ】ＢＢ−２０の産生に利用された非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０７８９】
【図１２９Ｈ】ＢＢ−０１法に従って産生されたＢＢ−０１が、米国特許第８，９５１，５２８号に開示される方法に従って産生されたＢＢ−２０免疫複合体と非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１２３の上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０７９０】
【図１２９Ｉ】ＢＢ−０１法に従って産生されたＢＢ−０１が、米国特許第８，９５１，５２８号に開示される方法に従って産生されたＢＢ−２０免疫複合体と非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲの上方制御の誘発に優れていることを示す。
【０７９１】
【図１２９Ｊ】ＢＢ−０１法に従って産生されたＢＢ−０１が、米国特許第８，９５１，５２８号に開示される方法に従って産生されたＢＢ−２０免疫複合体と非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１４の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０７９２】
【図１２９Ｋ】ＢＢ−０１法に従って産生されたＢＢ−０１が、米国特許第８，９５１，５２８号に開示される方法に従って産生されたＢＢ−２０免疫複合体と非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比較して、刺激１８時間後に、骨髄系細胞でのＣＤ１６の下方制御の誘発に優れていることを示す。
【０７９３】
【図１２９Ｌ】米国特許第８，９５１，５２８号に開示される方法に従って産生されたＢＢ−２０免疫複合体が、刺激１８時間後に、ＣＤ４０の上方制御を誘発できないことを示す。図１２９Ｌは、ＢＢ−０１法に従って産生されたＢＢ−０１免疫複合体が、ＣＤ４０の上方制御の誘発において、ＢＢ−２０及び非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比べて優れていることも示す。
【０７９４】
【図１２９Ｍ】米国特許第８，９５１，５２８号に開示される方法に従って産生されたＢＢ−２０免疫複合体が、刺激１８時間後に、ＣＤ８６の上方制御を誘発できないことを示す。図１２９Ｍは、ＢＢ−０１法に従って産生されたＢＢ−０１免疫複合体が、ＣＤ８６の上方制御の誘発において、ＢＢ−２０及び非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）と比べて優れていることも示す。
【０７９５】
【図１２９Ｎ】米国特許第８，９５１，５２８号に開示される方法に従って産生されたＢＢ−２０免疫複合体又は非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１２３発現を示す。
【０７９６】
【図１２９Ｏ】米国特許第８，９５１，５２８号に開示される方法に従って産生されたＢＢ−２０免疫複合体又は非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲ発現を示す。
【０７９７】
【図１２９Ｐ】米国特許第８，９５１，５２８号に開示される方法に従って産生されたＢＢ−２０免疫複合体又は非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１４発現を示す。
【０７９８】
【図１２９Ｑ】米国特許第８，９５１，５２８号に開示される方法に従って産生されたＢＢ−２０免疫複合体又は非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１６発現を示す。
【０７９９】
【図１２９Ｒ】米国特許第８，９５１，５２８号に開示される方法に従って産生されたＢＢ−２０免疫複合体又は非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ４０発現を示す。
【０８００】
【図１２９Ｓ】米国特許第８，９５１，５２８号に開示される方法に従って産生されたＢＢ−２０免疫複合体又は非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；ＬＧＭ  Ｐｈａｒｍａ）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ８６発現を示す。
【０８０１】
【図１３０Ａ】等モル濃度のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）又はＢＢ−３７  ＴＦＰ法に従って産生されたＢＳＡ免疫複合体（ＢＳＡ−化合物１）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１４発現を示す。
【０８０２】
【図１３０Ｂ】等モル濃度のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）又はＢＢ−３７  ＴＦＰ法に従って産生されたＢＳＡ免疫複合体（ＢＳＡ−化合物１）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１６発現を示す。
【０８０３】
【図１３０Ｃ】等モル濃度のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）又はＢＢ−３７  ＴＦＰ法に従って産生されたＢＳＡ免疫複合体（ＢＳＡ−化合物１）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１２３発現を示す。
【０８０４】
【図１３０Ｄ】等モル濃度のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）又はＢＢ−３７  ＴＦＰ法に従って産生されたＢＳＡ免疫複合体（ＢＳＡ−化合物１）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ４０発現を示す。
【０８０５】
【図１３０Ｅ】等モル濃度のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）又はＢＢ−３７  ＴＦＰ法に従って産生されたＢＳＡ免疫複合体（ＢＳＡ−化合物１）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ８６発現を示す。
【０８０６】
【図１３０Ｆ】等モル濃度のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）又はＢＢ−３７  ＴＦＰ法に従って産生されたＢＳＡ免疫複合体（ＢＳＡ−化合物１）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲ発現を示す。
【０８０７】
【図１３０Ｇ】等モル濃度のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）又はＢＢ−３７  ＴＦＰ法に従って産生されたＢＳＡ免疫複合体（ＢＳＡ−化合物１）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲ発現を示す。
【０８０８】
【図１３０Ｈ】Ｎａｋｅｄ  ＢＳＡ−ＭのＬＣ−ＭＳを示す。
【０８０９】
【図１３１Ａ】等モル濃度のキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）又はＢＢ−１７  ＴＦＰ法に従って産生されたＫＬＨ免疫複合体（ＫＬＨ−化合物１）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１４発現を示す。
【０８１０】
【図１３１Ｂ】等モル濃度のキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）又はＢＢ−１７  ＴＦＰ法に従って産生されたＫＬＨ免疫複合体（ＫＬＨ−化合物１）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１６発現を示す。
【０８１１】
【図１３１Ｃ】等モル濃度のキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）又はＢＢ−１７  ＴＦＰ法に従って産生されたＫＬＨ免疫複合体（ＫＬＨ−化合物１）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１２３発現を示す。
【０８１２】
【図１３１Ｄ】等モル濃度のキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）又はＢＢ−１７  ＴＦＰ法に従って産生されたＫＬＨ免疫複合体（ＫＬＨ−化合物１）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ４０発現を示す。
【０８１３】
【図１３１Ｅ】等モル濃度のキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）又はＢＢ−１７  ＴＦＰ法に従って産生されたＫＬＨ免疫複合体（ＫＬＨ−化合物１）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ８６発現を示す。
【０８１４】
【図１３１Ｆ】等モル濃度のキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）又はＢＢ−１７  ＴＦＰ法に従って産生されたＫＬＨ免疫複合体（ＫＬＨ−化合物１）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲ発現を示す。
【０８１５】
【図１３２Ａ】Ｅｎｂｒｅｌ（Ａｍｇｅｎ）及び、ＢＢ−０１結合法を用いて産生されたＥｎｂｒｅｌ免疫複合体（ＢＢ−０１  Ｅｎｂｒｅｌ）が、抗ヒトＩｇＧをコーティングしたＥＬＩＳＡプレート上で捕捉されるとき、抗ヒトＩｇＧ検出抗体に相当する反応性を示すことを示す。
【０８１６】
【図１３２Ｂ】Ｅｎｂｒｅｌ（Ａｍｇｅｎ）ではなく、ＢＢ−０１結合法を用いて産生されたＥｎｂｒｅｌ免疫複合体（ＢＢ−０１  Ｅｎｂｒｅｌ）が、抗ヒトＩｇＧをコーティングしたＥＬＩＳＡプレート上に捕捉後、抗化合物１抗体との強い反応性を示すことを示す。
【０８１７】
【図１３２Ｃ】セツキシマブ（Ｉｍｃｌｏｎｅ／Ｌｉｌｌｙ）及び、ＢＢ−０１結合法を用いて産生されたセツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−０１セツキシマブ）が、抗ヒトＩｇＧをコーティングしたＥＬＩＳＡプレート上で捕捉されるとき、抗ヒトＩｇＧ検出抗体に相当する反応性を示すことを示す。
【０８１８】
【図１３２Ｄ】セツキシマブ（Ｉｍｃｌｏｎｅ／Ｌｉｌｌｙ）ではなく、ＢＢ−０１結合法を用いて産生されたセツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−０１セツキシマブ）が、抗ヒトＩｇＧをコーティングしたＥＬＩＳＡプレート上に捕捉後、抗化合物１抗体との強い反応性を示すことを示す。
【０８１９】
【図１３２Ｅ】イピリムマブ（ＢＭＳ）及び、ＢＢ−０１結合法を用いて産生されたイピリムマブ免疫複合体（ＢＢ−０１イピリムマブ）が、抗ヒトＩｇＧをコーティングしたＥＬＩＳＡプレート上で捕捉されるとき、抗ヒトＩｇＧ検出抗体に相当する反応性を示すことを示す。
【０８２０】
【図１３２Ｆ】イピリムマブ（ＢＭＳ）ではなく、ＢＢ−０１結合法を用いて産生されたイピリムマブ免疫複合体（ＢＢ−０１イピリムマブ）が、抗ヒトＩｇＧをコーティングしたＥＬＩＳＡプレート上に捕捉後、抗化合物１抗体との強い反応性を示すことを示す。
【０８２１】
【図１３２Ｇ】オビヌツズマブ（Ｒｏｃｈｅ）及び、ＢＢ−０１結合法を用いて産生されたオビヌツズマブ免疫複合体（ＢＢ−０１オビヌツズマブ）が、抗ヒトＩｇＧをコーティングしたＥＬＩＳＡプレート上で捕捉されるとき、抗ヒトＩｇＧ検出抗体に相当する反応性を示すことを示す。
【０８２２】
【図１３２Ｈ】オビヌツズマブ（Ｒｏｃｈｅ）ではなく、ＢＢ−０１結合法を用いて産生されたオビヌツズマブ免疫複合体（ＢＢ−０１オビヌツズマブ）が、抗ヒトＩｇＧをコーティングしたＥＬＩＳＡプレート上に捕捉後、抗化合物１抗体との強い反応性を示すことを示す。
【０８２３】
【図１３２Ｉ】リツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）及び、ＢＢ−０１結合法を用いて産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−０１リツキシマブ）が、抗ヒトＩｇＧをコーティングしたＥＬＩＳＡプレート上で捕捉されるとき、抗ヒトＩｇＧ検出抗体に相当する反応性を示すことを示す。
【０８２４】
【図１３２Ｊ】リツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）ではなく、ＢＢ−０１結合法を用いて産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−０１リツキシマブ）が、抗ヒトＩｇＧをコーティングしたＥＬＩＳＡプレート上に捕捉後、抗化合物１抗体との強い反応性を示すことを示す。
【０８２５】
【図１３２Ｋ】抗Ｄｅｃｔｉｎ  ２抗体（Ｂｉｏｒａｄ  ＭＣＡ２４１５）及びＢＢ−０１結合法を用いて産生された抗Ｄｅｃｔｉｎ  ２免疫複合体（ＢＢ−０１抗Ｄｅｃｔｉｎ  ２）が、ＥＬＩＳＡプレート上にコーティングされると、ＩｇＧ検出抗体に相当する反応性を示すことを示す。
【０８２６】
【図１３２Ｌ】抗Ｄｅｃｔｉｎ  ２抗体（Ｂｉｏｒａｄ  ＭＣＡ２４１５）ではなく、ＢＢ−０１結合法を用いて産生された抗Ｄｅｃｔｉｎ２免疫複合体（ＢＢ−０１抗Ｄｅｃｔｉｎ２）が、ＥＬＩＳＡアッセイによって、抗化合物１抗体との強い反応性を示すことを示す。
【０８２７】
【図１３３Ａ】リツキシマブ免疫複合体（リツキシマブＢＢ−０１）が、ＣＤ１６ａに対する結合活性を保持していることを示す。結合は、実施例２９に記載されるＥＬＩＳＡ法により評価した。示される化合物は、リツキシマブ、非グリコシルリツキシマブ、（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ  ｈｃｄ２０−ｍａｂ１２）、又はリツキシマブ免疫複合体（リツキシマブＢＢ−０１）である。リツキシマブ複合体のＤＡＲレベルは次のとおりであった。ＢＢ−０１、１．１；ＢＢ−１４、２．０；ＢＢ−３６低ＤＡＲ、１．４；ＢＢ３６高ＤＡＲ、２．８；ＢＢ３７低ＤＡＲ、１．７；ＢＢ−３７高ＤＡＲ、２．６。Ｙ軸は、各サンプルについて、最高濃度での最大ＯＤシグナルの画分を示す。リツキシマブの非グリコシル変異体は、エフェクター機能におけるグリコシル化の役割と一致して、結合の低下を示す。
【０８２８】
【図１３３Ｂ】リツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）及びＢＢ−０１結合法を用いて産生されたリツキシマブ免疫複合体（ＢＢ−０１リツキシマブ）が、ＥＬＩＳＡプレート上に固定されたＣＤ６４への同等の結合を示すことを示す。ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて脱グリコシル化されたリツキシマブは、ＣＤ６４への結合低下を示す。
【０８２９】
【図１３３Ｃ】リツキシマブ及びリツキシマブ免疫複合体（リツキシマブＢＢ−３７）が、プロテインＡに結合することを示す。２回分のサンプルを、プロテインＡセファロースを用いて沈降させた。沈降上清中に、未結合のリツキシマブ又はリツキシマブＢＢ−３７は検出されなかった。ＩｇＧ上では、プロテインＡとＦｃＲＮの結合部位がかなり重なり合っている。したがって、リツキシマブＢＢ−３７でプロテインＡへの結合が保存されていることは、ＦｃＲＮへの結合の保存を示唆している。
【０８３０】
【図１３４Ａ】ＢＢ−４８法に従って産生されたＢＢ−４８免疫複合体又は非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；Ａｌｐｈａｍａｂ）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１２３発現を示す。
【０８３１】
【図１３４Ｂ】ＢＢ−４８法に従って産生されたＢＢ−４８免疫複合体又は非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；Ａｌｐｈａｍａｂ）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲ発現を示す。
【０８３２】
【図１３４Ｃ】ＢＢ−４８法に従って産生されたＢＢ−４８免疫複合体又は非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；Ａｌｐｈａｍａｂ）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１４発現を示す。
【０８３３】
【図１３４Ｄ】ＢＢ−４８法に従って産生されたＢＢ−４８免疫複合体又は非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；Ａｌｐｈａｍａｂ）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１６発現を示す。
【０８３４】
【図１３４Ｅ】ＢＢ−４８法に従って産生されたＢＢ−４８免疫複合体又は非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；Ａｌｐｈａｍａｂ）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ４０発現を示す。
【０８３５】
【図１３４Ｆ】ＢＢ−４８法に従って産生されたＢＢ−４８免疫複合体又は非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；Ａｌｐｈａｍａｂ）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ８６発現を示す。
【０８３６】
【図１３４Ｇ】ＢＢ−４８法に従って産生されたＢＢ−４８免疫複合体のＬＣ−ＭＳを示す。
【０８３７】
【図１３５Ａ】ＢＢ−４９法に従って産生されたＢＢ−４９免疫複合体又は非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；Ａｌｐｈａｍａｂ）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１２３発現を示す。
【０８３８】
【図１３５Ｂ】ＢＢ−４９法に従って産生されたＢＢ−４９免疫複合体又は非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；Ａｌｐｈａｍａｂ）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲ発現を示す。
【０８３９】
【図１３５Ｃ】ＢＢ−４９法に従って産生されたＢＢ−４９免疫複合体又は非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；Ａｌｐｈａｍａｂ）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１４発現を示す。
【０８４０】
【図１３５Ｄ】ＢＢ−４９法に従って産生されたＢＢ−４９免疫複合体又は非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；Ａｌｐｈａｍａｂ）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１６発現を示す。
【０８４１】
【図１３５Ｅ】ＢＢ−４９法に従って産生されたＢＢ−４９免疫複合体又は非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；Ａｌｐｈａｍａｂ）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ４０発現を示す。
【０８４２】
【図１３５Ｆ】ＢＢ−４９法に従って産生されたＢＢ−４９免疫複合体又は非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；Ａｌｐｈａｍａｂ）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ８６発現を示す。
【０８４３】
【図１３５Ｇ】ＢＢ−４９法に従って産生されたＢＢ−４９免疫複合体のＬＣ−ＭＳを示す。
【０８４４】
【図１３６Ａ】ＢＢ−５０法に従って産生されたＢＢ−５０免疫複合体又は非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；Ａｌｐｈａｍａｂ）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１２３発現を示す。
【０８４５】
【図１３６Ｂ】ＢＢ−５０法に従って産生されたＢＢ−５０免疫複合体又は非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；Ａｌｐｈａｍａｂ）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＨＬＡ−ＤＲ発現を示す。
【０８４６】
【図１３６Ｃ】ＢＢ−５０法に従って産生されたＢＢ−５０免疫複合体又は非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；Ａｌｐｈａｍａｂ）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１４発現を示す。
【０８４７】
【図１３６Ｄ】ＢＢ−５０法に従って産生されたＢＢ−５０免疫複合体又は非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；Ａｌｐｈａｍａｂ）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ１６発現を示す。
【０８４８】
【図１３６Ｅ】ＢＢ−５０法に従って産生されたＢＢ−５０免疫複合体又は非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；Ａｌｐｈａｍａｂ）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ４０発現を示す。
【０８４９】
【図１３６Ｆ】ＢＢ−５０法に従って産生されたＢＢ−５０免疫複合体又は非複合体のリツキシマブのバイオシミラー（ＣＤ２０；Ａｌｐｈａｍａｂ）での１８時間刺激後の、骨髄系細胞でのＣＤ８６発現を示す。
【０８５０】
【図１３６Ｇ】ＢＢ−５０法に従って産生されたＢＢ−５０免疫複合体のＬＣ−ＭＳを示す。
【０８５１】
【図１３７Ａ】ＢＢ−０１  ＳＡＴＡ法に従って産生されたＢＢ−０１免疫複合体（リツキシマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、ＳＭＣＣ−Ｃｍｐｄ１（リツキシマブ−Ｃｙｓ−Ｃｍｐｄ１）を介したＴＣＥＰ還元後の鎖間ジスルフィド残基によって結合されるリツキシマブ免疫複合体と比較して、骨髄系細胞でのＣＤ１４の下方制御の誘発に優れていることを示す。データは、リツキシマブＢｏｌｔｂｏｄｙ又はリツキシマブ−Ｃｙｓ−Ｃｍｐｄ１のいずれかと１８時間インキュベートした後に得た。
【０８５２】
【図１３７Ｂ】ＢＢ−０１  ＳＡＴＡ法に従って産生されたＢＢ−０１免疫複合体（リツキシマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、ＳＭＣＣ−Ｃｍｐｄ１（リツキシマブ−Ｃｙｓ−Ｃｍｐｄ１）を介したＴＣＥＰ還元後の鎖間ジスルフィド残基によって結合されるリツキシマブ免疫複合体と比較して、骨髄系細胞でのＣＤ１６の下方制御の誘発に優れていることを示す。データは、リツキシマブＢｏｌｔｂｏｄｙ又はリツキシマブ−Ｃｙｓ−Ｃｍｐｄ１のいずれかと１８時間インキュベートした後に得た。
【０８５３】
【図１３７Ｃ】ＢＢ−０１  ＳＡＴＡ法に従って産生されたＢＢ−０１免疫複合体（リツキシマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、ＳＭＣＣ−Ｃｍｐｄ１（リツキシマブ−Ｃｙｓ−Ｃｍｐｄ１）を介したＴＣＥＰ還元後の鎖間ジスルフィド残基によって結合されるリツキシマブ免疫複合体と比較して、骨髄系細胞でのＣＤ４０の上方制御の誘発に優れていることを示す。データは、リツキシマブＢｏｌｔｂｏｄｙ又はリツキシマブ−Ｃｙｓ−Ｃｍｐｄ１のいずれかと１８時間インキュベートした後に得た。
【０８５４】
【図１３７Ｄ】ＢＢ−０１  ＳＡＴＡ法に従って産生されたＢＢ−０１免疫複合体（リツキシマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、ＳＭＣＣ−Ｃｍｐｄ１（リツキシマブ−Ｃｙｓ−Ｃｍｐｄ１）を介したＴＣＥＰ還元後の鎖間ジスルフィド残基によって結合されるリツキシマブ免疫複合体と比較して、骨髄系細胞でのＣＤ８６の上方制御の誘発に優れていることを示す。データは、リツキシマブＢｏｌｔｂｏｄｙ又はリツキシマブ−Ｃｙｓ−Ｃｍｐｄ１のいずれかと１８時間インキュベートした後に得た。
【０８５５】
【図１３７Ｅ】ＢＢ−０１  ＳＡＴＡ法に従って産生されたＢＢ−０１免疫複合体（リツキシマブＢｏｌｔｂｏｄｙ）が、ＳＭＣＣ−Ｃｍｐｄ１（リツキシマブ−Ｃｙｓ−Ｃｍｐｄ１）を介したＴＣＥＰ還元後の鎖間ジスルフィド残基によって結合されるリツキシマブ免疫複合体と比較して、骨髄系細胞でのＣＤ１２３の上方制御の誘発に優れていることを示す。データは、リツキシマブＢｏｌｔｂｏｄｙ又はリツキシマブ−Ｃｙｓ−Ｃｍｐｄ１のいずれかと１８時間インキュベートした後に得た。
【０８５６】
【図１３７Ｆ】リツキシマブ−ｃｙｓ−ｃｍｐｄ１免疫複合体の産生に利用したＴＣＥＰによる還元後の非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０８５７】
【図１３７Ｇ】リツキシマブ−ｃｙｓ−ｃｍｐｄ１免疫複合体の産生に利用したＴＣＥＰによる還元後の非複合体のリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）の軽鎖の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０８５８】
【図１３７Ｈ】リツキシマブ−ｃｙｓ−ｃｍｐｄ１免疫複合体の重鎖の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０８５９】
【図１３７Ｉ】リツキシマブ−ｃｙｓ−ｃｍｐｄ１免疫複合体の重鎖の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０８６０】
【図１３８Ａ】野生型リツキシマブの重鎖をコードするベクターのＤＮＡ配列を示す。
【０８６１】
【図１３８Ｂ】Ｖ２０５Ｃ変異（ｋａｂａｔナンバリングを用いて指定）を有するリツキシマブのκ軽鎖をコードするベクターのＤＮＡ配列を示す。
【０８６２】
【図１３８Ｃ】野生型リツキシマブＩｇＧ１重鎖をコードするｐＦＵＳＥ−ＣＨＩｇ−ｈＧ１クローニングプラスミド（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｐｆｕｓｅ−ｈｃｈｇ１）のベクターマップを示す。
【０８６３】
【図１３８Ｄ】リツキシマブＩｇκ軽鎖の定常領域にＶ２０５Ｃ変異をコードするように改変した、ｐＦＵＳＥ２−ＣＬＩｇ−ｈＫクローニングプラスミド（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｐｆｕｓｅ２−ｈｃｌｋ）のベクターマップを示す。
【０８６４】
【図１３８Ｅ】化合物１−ＳＭＣＣを、図１３８Ｄに記載される改変したシステイン残基に直接連結することによって産生された、リツキシマブ−Ｖ２０５Ｃ免疫複合体の構造を示す。
【０８６５】
【図１３８Ｆ】リツキシマブ−Ｖ２０５Ｃ免疫複合体の産生に利用した、Ｖ２０５Ｃ変異を含む非複合体のリツキシマブの液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【０８６６】
【図１３８Ｇ】化合物１−ＳＭＣＣを、図１３８Ｄに記載される改変したシステイン残基に直接連結することによって産生された、リツキシマブ−Ｖ２０５Ｃ免疫複合体の液体クロマトグラフィー質量分析を示す。
【発明を実施するための形態】
【０８６７】
全般
本発明は、抗体依存性細胞傷害、抗体依存性細胞貪食作用を促進する抗体、及び、免疫チェックポイント分子として働く癌が産生するタンパク質の作用を阻害する抗体、樹状細胞活性化及びＴ細胞増殖を促進するアジュバント、並びに、抗腫瘍効果を促進する抗体とアジュバントとの間の共有結合などの、多くの利点を有する抗体−アジュバント免疫複合体を提供する。例えば、いくつかの場合において、ヒト単球は、本発明の免疫複合体による一晩刺激後にＤＣ分化を受けるが、既知の刺激剤（例えば、ＧＭ−ＣＳＦ及びＩＬ−４）によるＤＣ分化は、より長い時間を要する。免疫複合体活性化細胞は、既知の刺激剤で達成し得るものよりも、高い量（例えば、いくつかの場合では数倍量以上）の共刺激分子及び炎症性サイトカインを発現する。
【０８６８】
本明細書に示されるように、免疫複合体は、免疫活性化を誘発する点において非共有結合型の抗体−アジュバント混合物よりも定量的かつ定性的に効果が高い。更に、本明細書に示されるように、本発明に従って結合された抗体−アジュバント免疫複合体は、多の既知の免疫複合体よりも遥かに効果が高い。例えば、免疫複合体は、米国特許第８，９５１，５２８号に開示されている。しかし、これらの免疫複合体は、骨髄系細胞の効率的な活性化ができない（例えば、図１２８Ａ〜１２９Ａ参照）。別の公報である、米国特許出願公開第２０１７／０１５９７７２にも同様に、免疫複合体を開示している。ここに開示されている免疫複合体も、図６７Ａ〜６８Ｐに見られるように、骨髄系細胞を効率的に活性化しない。国際公開第２０１５／１０３９８７（Ａ１）号は、請求項１において、実験を通して、アジュバントを不活化し、無視できるほどの骨髄系活性化をもたらす、ある場所にあるアジュバント（レシキモド）への免疫複合体取り付け部位を示している。この公報は、リンカー−アジュバントの抗体への共役は、過剰なＤＴＴによる抗体の還元後に、システインヒンジ残基（チオエーテル結合）を介して起こることも示している（国際公開第２０１５／１０３９８７号、段落０２７３−０２７３）。実験によると、この結合の態様は、免疫複合体が骨髄系細胞を効果的に活性化することを阻止する（図６７Ａ〜６８Ｐ及び１３７Ａ〜１３７Ｉ参照）。対照的に、本発明の免疫複合体は、例えば、図６７Ｇ〜Ｋ、１２８Ａ〜１２Ｍ、１２９Ｅ〜１２９、及び１３７Ａ〜１３７Ｉに見られるように、優れた生物活性を提供する。
【０８６９】
最後に、アジュバント−抗体複合体を全身投与することによって、腫瘍内注入及び外科的切除を必要とすることなく、原発腫瘍及び随伴する転移の同時標的化を可能にする。
【０８７０】
図１〜１３８Ｇに示されるように、本発明及び他の情報源に従って多くの免疫複合体が作製され、測定された。
定義
【０８７１】
本明細書で使用するとき、用語「免疫複合体」は、本明細書に記載される非自然発生的化学部分に共有結合している、抗体構築物、又は抗体を指す。用語「免疫複合体」、「抗体アジュバント免疫複合体」、「ＡＡＣ」、及び「Ｂｏｌｔｂｏｄｙ」は、本明細書で互換的に使用される。
【０８７２】
本明細書で使用するとき、語句「抗体構築物」は、抗原結合ドメイン及びＦｃドメインを含むポリペプチドを指す。抗体構築物は、抗体を含んでよい。
【０８７３】
本明細書で使用するとき、語句「抗原結合ドメイン」は、特定の抗原（例えば、パラトープ）に特異的に結合するタンパク質、又はタンパク質の一部を指す。例えば、抗原結合タンパク質の一部は、抗原と相互作用するアミノ酸残基を含み、抗原結合タンパク質に、抗原に対する特異性及び親和性を与える。
【０８７４】
本明細書で使用するとき、語句「Ｆｃドメイン」は、結晶化可能なフラグメント領域、つまり抗体のテール領域を指す。Ｆｃドメインは、細胞表面上のＦｃ受容体と相互作用する。
【０８７５】
本明細書で使用するとき、語句「標的化結合ドメイン」は、免疫複合体の抗原結合ドメインによって結合される抗原とは異なる第２の抗原に特異的に結合する、タンパク質、又はタンパク質の一部を指す。標的化結合ドメインは、ＦｃドメインのＣ末端において、抗体構築物に結合できる。
【０８７６】
本明細書で使用するとき、用語「抗体」は、抗原に特異的に結合し、それを認識する免疫グロブリン遺伝子又はその断片由来の抗原結合領域（相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む）を含む、ポリペプチドを指す。認められている免疫グロブリン遺伝子として、κ、λ、α、γ、δ、ε及びμ定常領域遺伝子、並びに多数の免疫グロブリン可変領域遺伝子が挙げられる。
【０８７７】
代表的な免疫グロブリン（抗体）構造単位は、四量体を含む。各四量体は、それぞれの対が、１本の「軽」鎖（約２５ｋＤ）及び１本の「重」鎖（約５０〜７０ｋＤ）を有する、２つの同一のポリペプチド鎖対からなる。各鎖のＮ末端は、主に抗原認識を担う、約１００〜１１０個以上のアミノ酸を有する可変領域を画定する。用語、可変軽鎖（ＶＬ）及び可変重鎖（ＶＨ）は、それぞれこれらの軽鎖及び重鎖を指す。軽鎖は、κ又はλのいずれかに分類される。重鎖は、γ、μ、α、δ又はεとして分類され、それぞれ免疫グロブリンの、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥの種類を定義する。
【０８７８】
ＩｇＧ抗体は、４本のペプチド鎖からなる約１５０ｋＤａの大分子である。ＩｇＧ抗体は、２本の同一種の約５０ｋＤａのγ重鎖及び２本の同一種の約２５ｋＤａの軽鎖からの、四量体の四次構造を含む。２本の重鎖は、互いに、かつそれぞれ軽鎖に、ジスルフィド結合によって結合されている。得られる四量体は、半分ずつ２つの同一部分を有し、共にＹ字形状を形成する。フォーク状の各端部は、同一の抗原結合部位を含む。ヒトではＩｇＧのサブクラスは４つあり（ＩｇＧ１、２、３、及び４）、血清中の存在量から名付けられている（ＩｇＧ１は最も豊富である）。典型的には、抗体の抗原結合領域は、結合の特異性及び親和性において最も重要である。
【０８７９】
二量体であるＩｇＡ抗体は、約３２０ｋＤａである。ＩｇＡは、２つのサブクラス（ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）を有し、単量体及び二量体として産生され得る。ＩｇＡの二量体形態（分泌型、つまりｓＩｇＡ）が最も豊富である。
【０８８０】
抗体は、例えば、無傷の免疫グロブリンとして、又は、様々なペプチダーゼでの消化によって産生されるよく知られている多数のフラグメントとして存在する。つまり、例えば、ペプシンは、ヒンジ領域中のジスルフィド結合の下部で抗体を消化し、Ｆ（ａｂ）’２、つまり、それ自体がジスルフィド結合によってＶＨ−ＣＨ１に結合された軽鎖であるＦａｂの二量体を産生する。Ｆ（ａｂ）’２を温和な条件下で還元し、ヒンジ領域のジスルフィド結合を切断することによって、Ｆ（ａｂ）’２二量体をＦａｂ’単量体に変換できる。Ｆａｂ’単量体は、本質的には、ヒンジ領域の一部を有するＦａｂである（Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｐａｕｌ  ｅｄ．，７ｅ  ｅｄ．２０１２参照）。無傷抗体の消化に基づいて様々な抗体フラグメントが定義されているが、当業者は、このようなフラグメントを、化学的に又は組換えＤＮＡ法を用いて、ｄｅ  ｎｏｖｏ合成できることを理解しているだろう。したがって、本明細書で使用するとき、用語、抗体は、抗体全体を改変することによって産生された抗体フラグメント、又は、組換えＤＮＡ法を用いてｄｅ  ｎｏｖｏ合成されたもの（例えば、一本鎖Ｆｖ）、又は、ファージディスプレイライブラリを用いて同定されたもの、のいずれかも含む（例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３４８：５５２〜５５４（１９９０））。
【０８８１】
用語「抗体」は広義で用いられ、具体的には、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び、所望の生物学的活性を呈する限り、抗体フラグメントが含まれる。本明細書で使用するとき、「抗体フラグメント」及びその全ての文法的変形は、無傷抗体の抗原結合部位又は可変領域を含む、無傷抗体の一部と定義され、この部分は、無傷抗体のＦｃ領域の定常重鎖ドメイン（すなわち、ＣＨ２、ＣＨ３、及びＣＨ４、抗体アイソタイプによる）を含まない。抗体フラグメントの例として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖフラグメント；ダイアボディ；１本の中断されていない配列の近接するアミノ酸残基からなる一次構造を有するポリペプチド（本明細書では、「一本鎖抗体フラグメント」又は「一本鎖ポリペプチド」と称する）である、任意の抗体フラグメントであり、（１）一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子；（２）軽鎖可変ドメインを１つのみ含む一本鎖ポリペプチド、又は軽鎖可変ドメインの３つのＣＤＲを含み、関連する重鎖部分を含まないそのフラグメント；（３）重鎖可変領域を１つのみ含む一本鎖ポリペプチド、又は重鎖可変領域の３つのＣＤＲを含み、関連する軽鎖部分を含まないそのフラグメント；（４）非ヒト種由来の単一のＩｇドメイン又は他の特異的単一ドメイン結合分子を含むナノボディ；及び、（５）抗体フラグメントから形成される多重特異性、つまり多価構造体を非限定的に含むものが挙げられる。１本以上の重鎖を含む抗体フラグメントにおいて、重鎖は、無傷抗体の非Ｆｃ領域にある任意の定常ドメイン配列（例えば、ＩｇＧアイソタイプのＣＨ１）を含んでよく、及び／又は、重鎖のヒンジ領域配列又は定常ドメイン配列に融合又は配置されるロイシンジッパー配列を含んでよい。
【０８８２】
本明細書で使用するとき、生物学的製剤に関連する用語「バイオシミラー」は、生物学的製剤が、臨床的不活性要素において小さい違いがあるものの、基準とする製品に極めて類似しており、安全性、純度、及び製品の力価において、生物学的製剤と基準製品との間に臨床的に意味のある差がないことを意味する。
【０８８３】
本明細書で使用するとき、用語「エピトープ」は、抗体の抗原結合部位（パラトープとも呼ばれる）に結合する、抗原上の抗原決定基を意味する。エピトープの決定基は、通常、分子の化学的に活性な表面グルーピング、例えば、アミノ酸又は糖側鎖からなり、通常、特定の三次元構造特性並びに特定の荷電特性を有する。
【０８８４】
用語「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」は、本明細書で互換的に使用され、アミノ酸残基のポリマーを指す。この用語は、１つ以上のアミノ酸残基が対応する天然に存在するアミノ酸の人工的な化学的模倣物であるアミノ酸ポリマー、並びに、天然に存在するアミノ酸ポリマー及び天然に存在しないアミノ酸ポリマーにも適用される。
【０８８５】
本明細書で使用するとき、用語「アジュバント」は、アジュバントに暴露された被験体において免疫応答を誘発することができる物質を指す。
【０８８６】
本明細書で使用するとき、用語「アジュバント部分」は、本明細書に記載の抗体と共有結合しているアジュバントを指す。アジュバント部分は、抗体に結合している間、又は、被検体に免疫複合体を被検体に投与した後に抗体から切断（例えば、酵素的切断）後、免疫応答を誘発することができる。
【０８８７】
本明細書で使用するとき、用語「パターン認識受容体」及び「ＰＲＲ」は、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰｓ）又は損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰｓ）を認識し、先天免疫における主要なシグナル伝達要素として作用する、保存された哺乳類タンパク質の種の任意のメンバーを指す。パターン認識受容体は、膜結合ＰＲＲ、細胞質ＰＲＲ、及び分泌ＰＲＲに分類される。膜結合ＰＲＲの例として、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）及びＣ型レクチン受容体（ＣＬＲ）が挙げられる。細胞質ＰＲＲの例として、ＮＯＤ様受容体（ＮＬＲ）及びＲｉｇ−Ｉ様受容体（ＲＬＲ）が挙げられる。
【０８８８】
本明細書で使用するとき、用語「Ｔｏｌｌ様受容体」及び「ＴＬＲ」は、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰｓ）を認識し、先天免疫における主要なシグナル伝達要素として作用する、高度に保存された哺乳類タンパク質のファミリーの任意のメンバーを指す。ＴＬＲポリペプチドは、ロイシンリッチリピートを有する細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＴＬＲシグナル伝達に関与する細胞内ドメインを含む、特有の構造を共有している。
【０８８９】
用語「Ｔｏｌｌ様受容体１」及び「ＴＬＲ１」は、公表されているＴＬＲ１配列、例えば、ヒトＴＬＲ１ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＡＹ８５６４３、又は、マウスＴＬＲ１ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＡＧ３７３０２と、少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上の配列同一性を共有している核酸又はポリペプチドを指す。
【０８９０】
用語「Ｔｏｌｌ様受容体２」及び「ＴＬＲ２」は、公表されているＴＬＲ２配列、例えば、ヒトＴＬＲ２ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＡＹ８５６４８、又は、マウスＴＬＲ２ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＡＤ４９３３５と、少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上の配列同一性を共有している核酸又はポリペプチドを指す。
【０８９１】
用語「Ｔｏｌｌ様受容体３」及び「ＴＬＲ３」は、公表されているＴＬＲ３配列、例えば、ヒトＴＬＲ３ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＡＣ３４１３４、又は、マウスＴＬＲ３ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＡＫ２６１１７と、少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上の配列同一性を共有している核酸又はポリペプチドを指す。
【０８９２】
用語「Ｔｏｌｌ様受容体４」及び「ＴＬＲ４」は、公表されているＴＬＲ４配列、例えば、ヒトＴＬＲ４ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＡＹ８２２７０、又は、マウスＴＬＲ４ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＡＤ２９２７２と、少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上の配列同一性を共有している核酸又はポリペプチドを指す。
【０８９３】
用語「Ｔｏｌｌ様受容体５」及び「ＴＬＲ５」は、公表されているＴＬＲ５配列、例えば、ヒトＴＬＲ５ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＣＭ６９０３４、又は、マウスＴＬＲ５ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＡＦ６５６２５と、少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上の配列同一性を共有している核酸又はポリペプチドを指す。
【０８９４】
用語「Ｔｏｌｌ様受容体６」及び「ＴＬＲ６」は、公表されているＴＬＲ６配列、例えば、ヒトＴＬＲ６ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＢＹ６７１３３、又は、マウスＴＬＲ６ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＡＧ３８５６３と、少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上の配列同一性を共有している核酸又はポリペプチドを指す。
【０８９５】
用語「Ｔｏｌｌ様受容体７」及び「ＴＬＲ７」は、公表されているＴＬＲ７配列、例えば、ヒトＴＬＲ７ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＡＺ９９０２６、又は、マウスＴＬＲ７ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＡＫ６２６７６と、少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上の配列同一性を共有している核酸又はポリペプチドを指す。
【０８９６】
用語「Ｔｏｌｌ様受容体８」及び「ＴＬＲ８」は、公表されているＴＬＲ８配列、例えば、ヒトＴＬＲ８ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＡＺ９５４４１、又は、マウスＴＬＲ８ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＡＫ６２６７７と、少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上の配列同一性を共有している核酸又はポリペプチドを指す。
【０８９７】
用語「Ｔｏｌｌ様受容体７／８」及び「ＴＬＲ７／８」は、ＴＬＲ７アゴニストかつＴＬＲ８アゴニストの両方である、核酸又はポリペプチドを指す。
【０８９８】
用語「Ｔｏｌｌ様受容体９」及び「ＴＬＲ９」は、公表されているＴＬＲ９配列、例えば、ヒトＴＬＲ９ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＡＦ７８０３７、又は、マウスＴＬＲ９ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＡＫ２８４８８と、少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上の配列同一性を共有している核酸又はポリペプチドを指す。
【０８９９】
用語「Ｔｏｌｌ様受容体１０」及び「ＴＬＲ１０」は、公表されているＴＬＲ１０配列、例えば、ヒトＴＬＲ１０ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＡＫ２６７４４と、少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上の配列同一性を共有している核酸又はポリペプチドを指す。
【０９００】
用語「Ｔｏｌｌ様受容体１１」及び「ＴＬＲ１１」は、公表されているＴＬＲ１１配列、例えば、マウスＴＬＲ１１ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＡＳ８３５３１と、少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上の配列同一性を共有している核酸又はポリペプチドを指す。
【０９０１】
「ＴＬＲアゴニスト」は、ＴＬＲ（例えば、ＴＬＲ７及び／又は８）に直接的又は間接的に結合し、ＴＬＲシグナル伝達を誘導する物質である。ＴＬＲシグナル伝達の任意の検出可能な差は、アゴニストがＴＬＲを刺激又は活性化することを示し得る。シグナル伝達の差は、例えば、標的遺伝子の発現、シグナル伝達成分のリン酸化、ＮＫ−κＢなどの下流の要素の細胞内局在、ある構成要素（ＩＲＡＫ等）と他のタンパク質や細胞内構造体との会合、又はキナーゼ（例えばＭＡＰＫ）などの構成要素の生化学的活性における変化として、明らかにできる。
【０９０２】
本明細書で使用するとき、用語「アミノ酸」は、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質に組み込まれ得る任意のモノマー単位を指す。アミノ酸として、天然に存在するαアミノ酸及びその立体異性体、並びに非天然型（天然に存在しない）アミノ酸及びその立体異性体が挙げられる。あるアミノ酸の「立体異性体」は、同一の分子式及び分子内結合を有するが、結合及び原子の三次元配列が異なる異性体を指す（例えば、Ｌ−アミノ酸と対応するＤ−アミノ酸）。
【０９０３】
天然に存在するアミノ酸は、遺伝子コードによりコードされるもの、並びに、後に改変されるアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタミン酸、及びＯ−ホスホセリンである。天然に存在するαアミノ酸として、アラニン（Ａｌａ）、システイン（Ｃｙｓ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、グリシン（Ｇｌｙ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、アルギニン（Ａｒｇ）、リジン（Ｌｙｓ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、プロリン（Ｐｒｏ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、セリン（Ｓｅｒ）、スレオニン（Ｔｈｒ）、バリン（Ｖａｌ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、チロシン（Ｔｙｒ）、及びこれらの組み合わせが非限定的に挙げられる。天然に存在するαアミノ酸の立体異性体として、Ｄ−アラニン（Ｄ−Ａｌａ）、Ｄ−システイン（Ｄ−Ｃｙｓ）、Ｄ−アスパラギン酸（Ｄ−Ａｓｐ）、Ｄ−グルタミン酸（Ｄ−Ｇｌｕ）、Ｄ−フェニルアラニン（Ｄ−Ｐｈｅ）、Ｄ−ヒスチジン（Ｄ−Ｈｉｓ）、Ｄ−イソロイシン（Ｄ−Ｉｌｅ）、Ｄ−アルギニン（Ｄ−Ａｒｇ）、Ｄ−リジン（Ｄ−Ｌｙｓ）、Ｄ−ロイシン（Ｄ−Ｌｅｕ）、Ｄ−メチオニン（Ｄ−Ｍｅｔ）、Ｄ−アスパラギン（Ｄ−Ａｓｎ）、Ｄ−プロリン（Ｄ−Ｐｒｏ）、Ｄ−グルタミン（Ｄ−Ｇｌｎ）、Ｄ−セリン（Ｄ−Ｓｅｒ）、Ｄ−スレオニン（Ｄ−Ｔｈｒ）、Ｄ−バリン（Ｄ−Ｖａｌ）、Ｄ−トリプトファン（Ｄ−Ｔｒｐ）、Ｄ−チロシン（Ｄ−Ｔｙｒ）、及びこれらの組み合わせが非限定的に挙げられる。
【０９０４】
非天然型（天然に存在しない）アミノ酸として、天然に存在するアミノ酸と類似して機能する、アミノ酸アナログ、アミノ酸模倣物、合成アミノ酸、Ｎ−置換グリシン、及びＬ−又はＤ−配置のいずれかのＮ−メチルアミノ酸が非限定的に挙げられる。例えば、「アミノ酸アナログ」は、天然に存在するアミノ酸と同一の基本的化学構造有する（すなわち、水素に結合する炭素、カルボキシル基、アミノ基）が、修飾された側鎖基又は修飾されたペプチド骨格を有する非天然型アミノ酸、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムであってよい。「アミノ酸模倣物」は、アミノ酸の一般的化学構造とは異なる構造を有するが、天然に存在するアミノ酸と同様に機能する化学物質を指す。本明細書では、アミノ酸は、一般に知られる３文字記号、又はＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎが推奨する１文字記号のいずれかによって称され得る。
【０９０５】
本明細書で使用するとき、用語「免疫チェックポイント阻害剤」は、免疫チェックポイント分子の活性を阻害する任意の調節因子を指す。免疫チェックポイント阻害剤として、免疫チェックポイント分子結合タンパク質、低分子阻害剤、抗体、抗体誘導体（Ｆｃ融合体、Ｆａｂフラグメント、ｓｃＦｖを含む）、抗体薬物複合体、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、アプタマー、ペプチド及びペプチド模倣物が挙げられるが、これらに限定されない。
【０９０６】
本明細書で使用するとき、用語「連結部分」は、化合物又は物質中の２つ以上の部分を共有結合する官能基を指す。例えば、連結部分は、免疫複合体においてアジュバント部分を抗体に共有結合する働きをすることができる。
【０９０７】
連結部分をタンパク質及び他の物質に結合させるのに有用な結合として、アミド、アミン、エステル、カルバメート、尿素、チオエーテル、チオカルバメート、チオカーボネート、チオ尿素が挙げられるが、これらに限定されない。「二価」連結部分は、２つの官能基を連結するための２つの結合点を含み、多価連結部分は、更なる官能基を連結するための追加的な結合点を有することができる。例えば、二価連結部分として、二価ポリ（エチレングリコール）、二価ポリ（プロピレングリコール）、及び二価ポリ（ビニルアルコール）などの二価ポリマー部分が挙げられる。
【０９０８】
本明細書で使用するとき、用語「任意に存在する」を化学構造（例えば、「Ｒ」又は「Ｑ」）を指すのに使用する場合、化学構造が存在しない場合には、元々の化学構造をなす結合は、直接隣接する原子に結合される。
【０９０９】
本明細書で使用するとき、用語「リンカー」は、化合物又は物質中の２つ以上の部分を共有結合する官能基を指す。例えば、リンカーは、免疫複合体においてアジュバント部分を抗体構築物に共有結合する働きをすることができる。
【０９１０】
本明細書で使用するとき、用語「アルキル」は、示される炭素原子数を有する、直鎖又は分枝鎖、飽和、脂肪族ラジカルを指す。アルキルは、任意の数の炭素、例えば、Ｃ１〜２、Ｃ１〜３、Ｃ１〜４、Ｃ１〜５、Ｃ１〜６、Ｃ１〜７、Ｃ１〜８、Ｃ１〜９、Ｃ１〜１０、Ｃ２〜３、Ｃ２〜４、Ｃ２〜５、Ｃ２〜６、Ｃ３〜４、Ｃ３〜５、Ｃ３〜６、Ｃ４〜５、Ｃ４〜６、及びＣ５〜６を含んでよい。例えば、Ｃ１〜６アルキルとして、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ヘキシルなどが挙げられるが、これらに限定されない。アルキル、最大３０個の炭素原子を有するアルキル基、例えば限定されないが、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシルなども指してよい。アルキル基は、置換又は非置換であってよい。「置換アルキル」基は、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、オキソ（＝Ｏ）、アルキルアミノ、アミド、アシル、ニトロ、シアノ、及びアルコキシから選択される、１つ以上の基で置換されてよい。用語「アルキレン」は、二価のアルキル基を指す。
【０９１１】
本明細書で使用するとき、用語「ヘテロアルキル」は、１つ以上の炭素原子が、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択されるヘテロ原子に任意に、かつ独立して置換されている、本明細書に記載のアルキル基を指す。用語「ヘテロアルキレン」は、二価のヘテロアルキル基を指す。
【０９１２】
本明細書で使用するとき、用語「炭素環」は、飽和又は部分不飽和、単環式、縮合二環式、又は３〜１２個の環原子（つまり、示される原子数）からなる架橋多環式環状集合体を指す。炭素環は、任意の数の炭素、例えば、Ｃ３〜６、Ｃ４〜６、Ｃ５〜６、Ｃ３〜８、Ｃ４〜８、Ｃ５〜８、Ｃ６〜８、Ｃ３〜９、Ｃ３〜１０、Ｃ３〜１１、及びＣ３〜１２を含んでよい。飽和単環式炭素環として、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、及びシクロオクチルが挙げられる。飽和二環式及び多環式の炭素環として、例えば、ノルボルナン、［２．２２］ビシクロオクタン、デカヒドロナフタレン、及びアダマンタンが挙げられる。炭素環式基は、部分的に不飽和であって、環中に１つ以上の二重又は三重結合を有してもよい。部分的に不飽和である代表的な炭素環式基として、シクロブテン、シクロペンテン、シクロヘキセン、シクロヘキサジエン（１，３−及び１，４−異性体）、シクロヘプテン、シクロヘプタジエン、シクロオクテン、シクロオクタジエン（１，３−、１，４−及び１，５−異性体）、ノルボルネン、及びノルボルナジエンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０９１３】
不飽和の炭素環式基は、アリール基も含む。用語「アリール」は、任意の好適な数の環原子及び任意の好適な数の環を有する芳香族環系を指す。アリール基は、任意の好適な数の環原子、例えば、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又は１６個の環原子、並びに、６〜１０、６〜１２、又は６〜１４の環員を含んでよい。アリール基は、融合して二環式又は三環式基を形成する、又は結合によって連結されてビアリール基を形成する、単環式であってよい。代表的なアリール基として、フェニル、ナフチル及びビフェニルが挙げられる。他のアリール基として、メチレン連結基を有するベンジルが挙げられる。一部のアリール基、例えばフェニル、ナフチル又はビフェニルは、Ｃ６〜１２の環員を有する。他のアリール基、例えばフェニル又はナフチルは、Ｃ６〜１０の環員を有する。
【０９１４】
「二価」炭素環は、分子又は物質中の２つの部分を共有結合する、２つの結合点を有する炭素環式基を指す。炭素環は、置換又は非置換であってよい。「置換炭素環」基は、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、アルキルアミノ、アミド、アシル、ニトロ、シアノ、及びアルコキシから選択される、１つ以上の基で置換されてよい。
【０９１５】
本明細書で使用するとき、用語「複素環」は、ヘテロシクロアルキル基及びヘテロアリール基を指す。「ヘテロアリール」は、それ自体又は別の置換基の一部として、５〜１６個の環原子を含み、１〜５個の環原子がＮ、Ｏ又はＳなどのヘテロ原子である、単環式又は融合二環式若しくは三環式の芳香環集合体を指す。Ｂ、Ａｌ、Ｓｉ及びＰを非限定的に含む、追加のヘテロ原子も有用であり得る。ヘテロ原子を酸化し、非限定的に、−Ｓ（Ｏ）−及び−Ｓ（Ｏ）２−などの部分を形成してよい。ヘテロアリール基は、任意の数の環原子、例えば、３〜６、４〜６、５〜６、３〜８、４〜８、５〜８、６〜８、３〜９、３〜１０、３〜１１、又は３〜１２個の環員を含んでよい。１、２、３、４、又は５、又は１〜２、１〜３、１〜４、１〜５、２〜３、２〜４、２〜５、３〜４、又は３〜５などの、任意の好適な数のヘテロ原子をヘテロアリール基内に含めてよい。ヘテロアリール基として、ピロール、ピリジン、イミダゾール、ピラゾール、トリアゾール、テトラゾール、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、トリアジン（１，２，３−、１，２，４−及び１，３，５−異性体）、チオフェン、フラン、チアゾール、イソチアゾール、オキサゾール、イソキサゾールなどの基を挙げることができる。ヘテロアリール基は、フェニル環などの芳香族環系に融合し、インドール及びイソインドールなどのベンゾピロール、キノリン及びイソキノリンなどのベンゾピリジン、ベンゾピラジン（キノキサリン）、ベンゾピリミジン（キナゾリン）、フタラジン及びシンノリンなどのベンゾピリダジン、ベンゾチオフェン、及びベンゾフランなどが挙げられるがこれらに限定されない、メンバーを形成することもできる。他のヘテロアリール基として、結合によって連結されたビピリジンなどのヘテロアリール環が挙げられる。ヘテロアリール基は、置換又は非置換であってよい。「置換ヘテロアリール」基は、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、オキソ（＝Ｏ）、アルキルアミノ、アミド、アシル、ニトロ、シアノ、及びアルコキシから選択される、１つ以上の基で置換されてよい。
【０９１６】
ヘテロアリール基は、環上の任意の位置を介して連結することができる。例えば、ピロールとして、１−、２−及び３−ピロールが挙げられ、ピリジンとして、２−、３−及び４−ピリジンが挙げられ、イミダゾールとして、１−、２−、４−及び５−イミダゾールが挙げられ、ピラゾールとして、１−、３−、４−及び５−ピラゾールが挙げられ、トリアゾールとして、１−、４−及び５−トリアゾールが挙げられ、テトラゾールとして、１−及び５−テトラゾールが挙げられ、ピリミジンとして、２−、４−、５−及び６−ピリミジンが挙げられ、ピリダジンとして、３−及び４−ピリダジンが挙げられ、１，２，３−トリアジンとして、４−及び５−トリアジンが挙げられ、１，２，４−トリアジンとして、３−、５−及び６−トリアジンが挙げられ、１，３，５−トリアジンとして、２−トリアジンが挙げられ、チオフェンとして、２−及び３−チオフェンが挙げられ、フランとして、２−及び３−フランが挙げられ、チアゾールとして、２−、４−及び５−チアゾールが挙げられ、イソチアゾールとして、３−、４−及び５−イソチアゾールが挙げられ、オキサゾールとして、２−、４−及び５−オキサゾールが挙げられ、イソキサゾールとして、３−、４−及び５−イソキサゾールが挙げられ、インドールとして、１−、２−及び３−インドールが挙げられ、イソインドールとして、１−及び２−イソインドールが挙げられ、キノリンとして、２−、３−及び４−キノリンが挙げられ、イソキノリンとして、１−、３−及び４−イソキノリンが挙げられ、キナゾリンとして、２−及び４−キナゾリン（quinoazoline）が挙げられ、シンノリンとして、３−及び４−シンノリンが挙げられ、ベンゾチオフェンとして、２−及び３−ベンゾチオフェンが挙げられ、並びに、ベンゾフランとして、２−及び３−ベンゾフランが挙げられる。
【０９１７】
「ヘテロシクリル」は、それ自体又は別の置換基の一部として、３〜１２の環員と、１〜４個のＮ、Ｏ及びＳであるヘテロ原子と、を有する飽和環系を指す。Ｂ、Ａｌ、Ｓｉ及びＰを非限定的に含む、追加のヘテロ原子も有用であり得る。ヘテロ原子を酸化し、非限定的に、−Ｓ（Ｏ）−及び−Ｓ（Ｏ）２−などの部分を形成してよい。ヘテロシクリル基は、任意の数の環原子、例えば、３〜６、４〜６、５〜６、３〜８、４〜８、５〜８、６〜８、３〜９、３〜１０、３〜１１、又は３〜１２個の環員を含んでよい。１、２、３、又は４、又は１〜２、１〜３、１〜４、２〜３、２〜４、又は３〜４などの、任意の好適な数のヘテロ原子をヘテロシクリル基内に含めてよい。ヘテロシクリル基として、アジリジン、アゼチジン、ピロリジン、ピペリジン、アゼパン、アゾカン、キヌクリジン、ピラゾリジン、イミダゾリジン、ピペラジン（１，２−、１，３−及び１，４−異性体）、オキシラン、オキセタン、テトラヒドロフラン、オキサン（テトラヒドロピラン）、オキセパン、チイラン、チエタン、チオラン（テトラヒドロチオフェン）、チアン（テトラヒドロチオピラン）、オキサゾリジン、イソキサゾリジン、チアゾリジン、イソチアゾリジン、ジオキソラン、ジチオラン、モルホリン、チオモルホリン、ジオキサン、又はジチアンなどの基を挙げることができる。ヘテロシクリル基は、芳香族又は非芳香環系に融合し、インドリンが挙げられるが、これらに限定されないメンバーを形成することもできる。ヘテロシクリル基は、非置換又は置換であってよい。「置換ヘテロシクリル」基は、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、オキソ（＝Ｏ）、アルキルアミノ、アミド、アシル、ニトロ、シアノ、及びアルコキシから選択される、１つ以上の基で置換されてよい。
【０９１８】
置換ヘテロシクリル基は、環上の任意の位置を介して連結することができる。例えば、アジリジンは、１−又は２−アジリジンであってよく、アゼチジンは、１−又は２−アゼチジンであってよく、ピロリジンは、１−、２−又は３−ピロリジンであってよく、ピペリジンは、１−、２−、３−又は４−ピペリジンであってよく、ピラゾリジンは、１−、２−、３−、又は４−ピラゾリジンであってよく、イミダゾリンは、１−、２−、３−又は４−イミダゾリンであってよく、ピペラジンは、１−、２−、３−又は４−ピペラジンであってよく、テトラヒドロフランは、１−又は２−テトラヒドロフランであってよく、オキサゾリジンは、２−、３−、４−又は５−オキサゾリジンであってよく、イソキサゾリジンは、２−、３−、４−又は５−イソキサゾリジンであってよく、チアゾリジンは、２−、３−、４−又は５−チアゾリジンであってよく、イソチアゾリジンは、２−、３−、４−又は５−イソチアゾリジンであってよく、モルホリンは、２−、３−又は４−モルホリンであってよい。
【０９１９】
本明細書で使用するとき、用語「ハロ」及び「ハロゲン」は、それ自体又は別の置換基の一部として、フッ素、塩素、臭素、又はヨウ素原子を指す。
【０９２０】
本明細書で使用するとき、用語「カルボニル」は、それ自体又は別の置換基の一部として、−Ｃ（Ｏ）−、すなわち、酸素に二重結合し、カルボニルを有する部分において２つの他の基に結合した炭素原子を指す。
【０９２１】
本明細書で使用するとき、用語「アミノ」は、部分−ＮＲ３を指し、式中、各Ｒ基はＨ又はアルキルである。アミノ部分をイオン化し、対応するアンモニウムカチオンを形成することができる。
【０９２２】
本明細書で使用するとき、用語「ヒドロキシ」は、部分−ＯＨを指す。
【０９２３】
本明細書で使用するとき、用語「シアノ」は、窒素原子に三重結合した炭素原子を指す（すなわち、部分−Ｃ≡Ｎ）。
【０９２４】
本明細書で使用するとき、用語「カルボキシ」は、部分−Ｃ（Ｏ）ＯＨを指す。カルボキシ部分をイオン化し、対応するカルボキシレートアニオンを形成することができる。
【０９２５】
本明細書で使用するとき、用語「アミド」は、部分−ＮＲＣ（Ｏ）Ｒ又は−Ｃ（Ｏ）ＮＲ２を指し、式中、各Ｒ基はＨ又はアルキルである。
【０９２６】
本明細書で使用するとき、用語「ニトロ」は、部分−ＮＯ２を指す。
【０９２７】
本明細書で使用するとき、用語「オキソ」は、化合物に二重結合している酸素原子を指す（すなわち、Ｏ＝）。
【０９２８】
本明細書で使用するとき、用語「治療する」、「治療」、及び「治療すること」は、傷害、病態、状態又は症状（例えば、認知障害）の治療、つまり改善における、何らかの成功の兆候を指し、これには、症状の寛解、緩解、減少；又は、症状、傷害、病態若しくは状態を患者にとってより許容できるものにすること；症状の進行速度を遅くすること；症状若しくは状態の頻度若しくは期間を減らすこと；又は、一部の状況では、発症を防ぐこと等の、何らかの客観的又は主観的パラメータを含む。症状の治療、つまり改善は、例えば、診察の結果などの、任意の客観的又は主観的パラメータに基づくことができる。
【０９２９】
本明細書で使用するとき、用語「癌」は、固形癌、リンパ腫、及び白血病を含む状態を指す。様々な種類の癌の例として、肺癌（例えば、非小細胞肺癌、つまりＮＳＣＬＣ）、卵巣癌、前立腺癌、結腸直腸癌、肝癌（すなわち、肝細胞癌）、腎癌（すなわち、腎細胞癌）、膀胱癌、乳癌、甲状腺癌、胸膜癌、膵臓癌、子宮癌、子宮頸癌、精巣癌、肛門癌、胆管癌、消化管カルチノイド、食道癌、胆嚢癌、虫垂癌、小腸癌、胃（胃部）癌、中枢神経系の癌、皮膚癌（例えば、黒色腫）、絨毛癌、頭頚部癌、血液癌、骨肉腫、線維肉腫、神経芽細胞腫、神経膠腫、黒色腫、Ｂ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、小細胞型リンパ腫、大細胞型リンパ腫、単球性白血病、骨髄性白血病、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、及び多発性骨髄腫が挙げられるが、これらに限定されない。
【０９３０】
本明細書で使用するとき、用語「有効量」及び「治療有効量」は、投与されるものの治療効果をもたらす、免疫複合体などの物質の用量を指す。実際の用量は治療目的によって決まり、既知の手法を用いて当業者によって確定されるであろう（例えば、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ（ｖｏｌｓ．１〜３，１９９２）；Ｌｌｏｙｄ，Ｔｈｅ  Ａｒｔ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇ（１９９９）；Ｐｉｃｋａｒ，Ｄｏｓａｇｅ  Ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎｓ（１９９９）；Ｇｏｏｄｍａｎ  ＆  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，１１ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００６，Ｂｒｕｎｔｏｎ，Ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ；及びＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１Ｓｔ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００５，Ｈｅｎｄｒｉｃｋｓｏｎ，Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ参照）。
【０９３１】
本明細書で使用するとき、用語「被検体」は、霊長類（例えば、ヒト）、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、マウス等を非限定的に含む、哺乳類などの動物を指す。特定の実施形態では、被検体はヒトである。
【０９３２】
本明細書で使用するとき、用語「投与」は、非経口の静脈内、腹腔内、筋肉内、腫瘍内、口腔内、病巣内、鼻腔内、若しくは皮下投与、経口投与、座薬としての投与、経皮的接触、くも膜下腔内投与、又は、徐放装置、例えば、小型浸透圧ポンプの被検体への埋め込みを指す。
【０９３３】
本明細書で使用するとき、数値を修飾する用語「約」及び「およそ」は、その明確な値の周囲の近接範囲を指す。「Ｘ」がその値である場合、「約Ｘ」又は「およそＸ」は、０．９Ｘ〜１．１Ｘ、例えば、０．９５Ｘ〜１．０５Ｘ、又は０．９９Ｘ〜１．０１Ｘの値を示す。「約Ｘ」又は「およそＸ」に対するあらゆる言及は、具体的には、少なくとも、値Ｘ、０．９５Ｘ、０．９６Ｘ、０．９７Ｘ、０．９８Ｘ、０．９９Ｘ、１．０１Ｘ、１．０２Ｘ、１．０３Ｘ、１．０４Ｘ、及び１．０５Ｘを指す。したがって、「約Ｘ」又は「およそＸ」は、例えば、「０．９８Ｘ」のクレーム限定に対する書面による記載を教示し、かつ提供することを意図している。
抗体アジュバント免疫複合体
【０９３４】
本発明は、抗原結合ドメイン及びＦｃドメインを含む抗体構築物と、アジュバント部分と、リンカーと、を含み、各アジュバント部分がリンカーを介して抗体に共有結合している、免疫複合体を提供する。
【０９３５】
本明細書に記載される免疫複合体は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）の活性化反応において、予期せぬ増加を提供できる。この活性化の増加は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏで検出できる。いくつかの場合において、ＡＰＣ活性化の増加は、特定のレベルのＡＰＣ活性化に到達するまでの時間の短縮という形で検出できる。例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイにおいて、ＡＰＣ活性化％は、非複合体の抗体及びＴＬＲアゴニストの混合物によるＡＰＣ活性化と同じ又は類似の割合を得るのに必要な時間の１％、１０％、又は５０％以内に、免疫複合体の等価用量において達成できる。いくつかの場合において、免疫複合体は、短い時間でＡＰＣ（例えば、樹状細胞）及び／又はＮＫ細胞を活性化できる。例えば、いくつかの場合において、抗体ＴＬＲアゴニスト混合物によるＡＰＣ（例えば、樹状細胞）及び／若しくはＮＫ細胞の活性化、並びに／又は、樹状細胞の分化誘導は、混合物と２、３、４、５、１〜５、２〜５、３〜５、又は４〜７日間インキュベーションした後に可能であり、一方対照的に、本明細書に記載される免疫複合体は、４時間、８時間、１２時間、１６時間、又は１日以内に活性化及び／又は分化誘導することができる。あるいは、ＡＰＣ活性化の増加を、ＡＰＣ活性化について、ある量（例えば、ＡＰＣの割合）、レベル（例えば、好適なマーカーの上方制御のレベルによって測定）、又は速度（例えば、活性化に要するインキュベーション時間による検出）に達するのに必要な免疫複合体の濃度の低下という形で検出できる。
【０９３６】
本発明の免疫複合体は、Ｆｃ領域を含まなければならない。図１３０Ａ〜１３１Ｅに示されるように、化合物１に結合するとき、非ＦｃＲ結合タンパク質は、骨髄系細胞を活性化しない。
【０９３７】
一実施形態では、本発明の免疫複合体は、従来技術の免疫複合体（例えば、‘５２８特許に開示される免疫複合体）と比較して、５％超の活性増加をもたらす。別の実施形態では、本発明の免疫複合体は、従来技術の免疫複合体と比較して、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、又は７０％超の活性増加をもたらす。活性の増加は、当業者によって任意の既知の手段によって評価でき、これには、骨髄系の活性化、又はサイトカイン分泌による評価を含み得る。
【０９３８】
一実施形態では、本発明の免疫複合体は、薬物対アジュバント比の改良をもたらす。いくつかの実施形態では、免疫複合体当たりのアジュバント部分の平均数は、約１〜約１０の範囲内である。望ましい薬物対アジュバント比は、所望の治療効果に応じて、当業者によって測定できる。例えば、１．２を超える薬物対アジュバント比が望ましい場合がある。一実施形態では、０．２、０．４、０．６、０．８、１、１．２、１．４、１．６、１．８、２．０、２．２、２．４、２．６、２．８、３．０、３．２、３．４、３．６、３．８、４．０、５．０、６．０、７．０、８．０、又は９．０を超える薬物対アジュバント比が望ましい場合がある。別の実施形態では、１０．０、９．０、８．０、７．０、６．０、５．０、４．０、３．８、３．６、３．４、３．２、３．０、２．８、２．６、２．４、２．２、２．０、１．８、１．６、１．４、１．２、０．８、０．６、０．４又は０．２の薬物対アジュバント比が望ましい場合がある。薬物対アジュバント比は、当業者によって任意の既知の手段によって評価できる。
【０９３９】
本発明の免疫複合体は、アジュバント部分を抗体に共有結合する連結部分を含む。いくつかの実施形態では、免疫複合体は、式Ｉの構造体、
【化２】
2019520352.tif 000003
又はその薬学的に許容される塩を有し、式中、Ａｂは抗体であり、Ａは、抗体中の未改変アミノ酸側鎖、又は抗体中の改変アミノ酸側鎖であり、Ｚは連結部分であり、Ａｄｊはアジュバント部分であり、下付き文字ｒは、１〜１０の整数（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０）である。
【０９４０】
いくつかの実施形態では、免疫複合体は、式Ｉａの構造体、
【化３】
2019520352.tif 000004
又はその薬学的に許容される塩であり、式中、
Ａｂは抗体であり、
Ａは、抗体中の未改変アミノ酸側鎖、又は抗体中の改変アミノ酸側鎖であり、
Ｚは連結部分であり、
Ｒ１は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから選択され、又は、
Ｚ、Ｒ１、及び結合先である窒素原子は、５〜８員複素環を含む連結部分を形成し、
各Ｙは、独立して、ＣＨＲ２であり、式中、Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、及びＮＨ２から選択され、
Ｒ３は、Ｃ１〜６アルキル及び２〜６員ヘテロアルキルから選択され、それぞれは、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、オキソ（＝Ｏ）、アルキルアミノ、アミド、アシル、ニトロ、シアノ、及びアルコキシからなる群から選択される、１つ又は２つ以上のメンバーで任意に置換され、
Ｘは、Ｏ及びＣＨ２から選択され、
下付き文字ｎは、１〜１２の整数（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２）であり、下付き文字ｒは、１〜１０の整数（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０）である。
式Ｉａの免疫複合体の特定の実施形態では、下付き文字ｎは、１〜６（すなわち、１、２、３、４、５、又は６）である。
【０９４１】
いくつかの実施形態では、免疫複合体は、式Ｉｂの構造体、
【化４】
2019520352.tif 000005
又はその薬学的に許容される塩であり、式中、
Ａｂは抗体であり、
Ａは、抗体中の未改変アミノ酸側鎖、又は抗体中の改変アミノ酸側鎖であり、
Ｚは連結部分であり、
Ｒ１は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから選択され、又は、
Ｚ、Ｒ１、及び結合先である窒素原子は、５〜８員複素環を含む連結部分を形成し、
各Ｙは、独立して、ＣＨＲ２であり、式中、Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、及びＮＨ２から選択され、
Ｘは、Ｏ及びＣＨ２から選択され、
下付き文字ｎは、１〜１２の整数（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２）であり、
Ｗは、Ｏ、及びＣＨ２からなる群から選択される。
【０９４２】
いくつかの実施形態では、免疫複合体は、式Ｉｃの構造体、
【化５】
2019520352.tif 000006
又はその薬学的に許容される塩であり、式中、
Ａｂは抗体であり、
下付き文字ｒは、１〜１０の整数（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０）であり、
Ａは、抗体中の未改変アミノ酸側鎖、又は抗体中の改変アミノ酸側鎖であり、
Ｚは連結部分であり、
Ｒ１は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから選択され、又は、
Ｚ、Ｒ１、及び結合先である窒素原子は、５〜８員複素環を含む連結部分を形成し、
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、及びＮＨ２から選択される。
【０９４３】
いくつかの実施形態では、免疫複合体は、式Ｉｄの構造体、
【化６】
2019520352.tif 000007
【０９４４】
又はその薬学的に許容される塩を有し、式中、Ａｂは抗体であり、Ａは、抗体中の未改変アミノ酸側鎖、又は抗体中の改変アミノ酸側鎖であり、Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、及びＮＨ２から選択され、下付き文字ｒは、１〜１０の整数（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０）である。特定の実施形態では、下付き文字ｒは、１〜４の整数（すなわち、１、２、３、又は４）である。式Ｉ及び式Ｉａ〜Ｉｄの免疫複合体の特定の実施形態では、Ａはチオール修飾リジン側鎖である。式Ｉ及び式Ｉａ〜Ｉｄの免疫複合体のいくつかの実施形態では、Ａはシステイン側鎖である。
【０９４５】
いくつかの実施形態では、Ｚは、次から選択され、
【化７】
2019520352.tif 000008
式中、下付き文字ｘは、１〜１２の整数（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２）であり、下付き文字ｙは、１〜３０の整数（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、又は３０）であり、破線
【化８】
2019520352.tif 000009
は、アジュバント部分に結合する点を表し、波線
【化９】
2019520352.tif 000010
は、抗体中のアミノ酸側鎖に結合する点を表す。
【０９４６】
いくつかの実施形態では、免疫複合体は、式ＩＩの構造体、
【化１０】
2019520352.tif 000011
又はその薬学的に許容される塩を有し、式中、Ａｂは抗体であり、Ａは、抗体中の未改変アミノ酸側鎖、又は抗体中の改変アミノ酸側鎖であり、Ａｄｊはアジュバント部分であり、下付き文字ｒは、１〜１０の整数（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０）であり、
Ｚ１は、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＣＨ２−から選択され、
Ｚ２及びＺ４は、独立して、結合、Ｃ１〜３０アルキレン、及び３〜３０員ヘテロアルキレンから選択され、このとき、
Ｃ１〜３０アルキレン及び３〜３０員ヘテロアルキレン中の隣接する原子のうち１つ又は２つ以上のグループは、任意にかつ独立して、−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲａＣ（Ｏ）−、又は−Ｃ（Ｏ）ＮＲａ−で置換され、
Ｃ１〜３０アルキレン及び３〜３０員ヘテロアルキレン中の隣接する原子のうち１つ又は２つ以上のグループは、任意にかつ独立して、４〜８員の二価炭素環で置換され、
Ｃ１〜３０アルキレン及び３〜３０員ヘテロアルキレン中の隣接する原子のうち１つ又は２つ以上のグループは、任意にかつ独立して、Ｏ、Ｓ、及びＮから選択される１〜４つのヘテロ原子を有する４〜８員の二価複素環で置換され、
各Ｒａは、Ｈ及びＣ１〜６アルキルから独立して選択され、
Ｚ３は、結合、二価ペプチド部分、二価ポリマー部分から選択され、
Ｚ５は、抗体中のアミノ酸側鎖の側鎖に結合される。
【０９４７】
いくつかの実施形態では、免疫複合体は、式ＩＩａの構造体、
【化１１】
2019520352.tif 000012
又はその薬学的に許容される塩であり、式中、
Ｚ１は、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＣＨ２−から選択され、
Ｚ２及びＺ４は、独立して、結合、Ｃ１〜３０アルキレン、及び３〜３０員ヘテロアルキレンから選択され、このとき、
Ｃ１〜３０アルキレン及び３〜３０員ヘテロアルキレン中の隣接する原子のうち１つ又は２つ以上のグループは、任意にかつ独立して、−Ｃ（Ｏ）−、
−ＮＲａＣ（Ｏ）−又は−Ｃ（Ｏ）ＮＲａ−で置換され、
Ｃ１〜３０アルキレン及び３〜３０員ヘテロアルキレン中の隣接する原子のうち１つ又は２つ以上のグループは、任意にかつ独立して、４〜８員の二価炭素環で置換され、
Ｃ１〜３０アルキレン及び３〜３０員ヘテロアルキレン中の隣接する原子のうち１つ又は２つ以上のグループは、任意にかつ独立して、Ｏ、Ｓ、及びＮから選択される１〜４つのヘテロ原子を有する４〜８員の二価複素環で置換され、
各Ｒａは、Ｈ及びＣ１〜６アルキルから独立して選択され、
Ｚ３は、結合、二価ペプチド部分、二価ポリマー部分から選択され、
Ｚ５は、アミン結合部分及びチオール結合部分から選択される。
【０９４８】
式ＩＩ及び式ＩＩａの免疫複合体の特定の実施形態では、Ｚ５は、チオール結合部分である。式ＩＩ及び式ＩＩａの免疫複合体の特定の実施形態では、Ｚ５は、チオール結合部分であり、Ａはチオール修飾リジン側鎖である。式ＩＩ及び式ＩＩａの免疫複合体の特定の実施形態では、Ｚ５は、チオール結合部分であり、Ａはシステイン側鎖である。
【０９４９】
式ＩＩ及び式ＩＩａの免疫複合体の特定の実施形態では、連結部分（すなわち、アジュバント（「Ａｄｊ」）とアミノ酸（「Ａ」）との間の構造成分）は、次から選択された構造を含み、
【化１２】
2019520352.tif 000013
式中、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、及びＺ４は、上記のとおりであり、破線
【化１３】
2019520352.tif 000014
は、アジュバント部分に結合する点を表し、波線
【化１４】
2019520352.tif 000015
は、抗体中のアミノ酸側鎖に結合する点を表す。
【０９５０】
いくつかの実施形態では、Ｚ３は、二価のペプチド部分である。いくつかの実施形態では、ペプチドは、アラニン残基、バリン残基、ロイシン残基、イソロイシン残基、メチオニン残基、フェニルアラニン残基、トリプトファン残基、及びプロリン残基から選択される第１の残基を含む。いくつかのかかる実施形態では、ペプチドは、非保護リジン残基、保護リジン残基、非保護アルギニン残基、保護アルギニン残基、ヒスチジン残基、非保護オルニチン残基、保護オルニチン残基、リジン残基、及びシトルリンから選択される第２のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドは、フェニルアラニン残基及びバリン残基から選択される第１の残基を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドは、リジン残基及びシトルリン残基から選択される第２の残基を含む。典型的には、ペプチド部分は、約２〜１２個のアミノ酸残基を含むであろう。例えば、ペプチドは、２〜８個のアミノ酸残基、又は２〜４個のアミノ酸残基を含んでよい。いくつかの実施形態では、ペプチドはジペプチドである。いくつかの実施形態では、ペプチドはテトラペプチドである。
【０９５１】
いくつかの実施形態では、ペプチドは、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｃｉｔ、Ｌｅｕ−Ｃｉｔ、Ｉｌｅ−Ｃｉｔ、Ｔｒｐ−Ｃｉｔ、Ｐｈｅ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｐｈｅ−Ｎ９−トシル−Ａｒｇ、及びＰｈｅ−Ｎ９−ニトロ−Ａｒｇから選択される。いくつかの実施形態では、ペプチドは、カテプシンＢ、カテプシンＣ、カテプシンＤなどのプロテアーゼによって切断できる。カテプシンＢは、多くの病態や癌化プロセスに関与しているため、カテプシンＢ感受性ペプチドが、リンカー成分として特に有用であり得る。カテプシンＢの発現及び活性は、健康な組織及び器官においてしっかりと制御されているが、その制御は、腫瘍及びその他悪性病変において複数のレベルで変更され得る。カテプシンＢの過剰発現は、脳、肺、前立腺、乳房、及び結腸直腸癌などの様々な癌において観察されている。例えば、Ｇｏｎｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｔａｒｇｅｔｓ，２０１３；１７（３）：２８１〜２９１を参照されたい。したがって、カテプシンＢ感受性ペプチド成分を含むリンカー、例えば、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ及びＶａｌ−Ｃｉｔジペプチドは、免疫複合体が被検体内で腫瘍などの悪性標的に到達すると、切断され得る。これらのペプチド成分は、循環系及び健康な組織中の酵素には一般に非感受性であるため、アジュバント部分は、免疫複合体が被験体中の標的に到達する前に放出されない。
【０９５２】
いくつかの実施形態では、Ｚ２は、Ｃ１〜３０アルキレン及び３〜３０員ヘテロアルキレンからなる群から選択され、隣接する原子のうち１つ又は２つ以上のグループは、任意にかつ独立して、−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、又は−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−で置換され、隣接する原子のうち１つ又は２つ以上のグループは、任意にかつ独立して、４〜８員の二価炭素環で置換される。いくつかの実施形態では、Ｚ２は、次から選択され、
【化１５】
2019520352.tif 000016
式中、破線
【化１６】
2019520352.tif 000017
は、Ｚ１に結合する点を表し、波線
【化１７】
2019520352.tif 000018
は、Ｚ３に結合する点を表す。
【０９５３】
特定の実施形態では、−Ｚ１−Ｚ２−は、次のものであり、
【化１８】
2019520352.tif 000019
式中、破線
【化１９】
2019520352.tif 000020
は、アジュバント部分に結合する点を表し、波線
【化２０】
2019520352.tif 000021
は、Ｚ３に結合する点を表す。いくつかの実施形態では、Ｚ３は、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ及びＶａｌ−Ｃｉｔから選択される二価のペプチド部分である。
【０９５４】
いくつかの実施形態では、Ｚ４は、Ｃ１〜３０アルキレンであり、隣接する原子のうち１つ又は２つ以上のグループは、任意にかつ独立して、−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、又は−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−で置換され、隣接する原子のうち１つ又は２つ以上のグループは、任意にかつ独立して、４〜８員の二価炭素環で置換される。いくつかの実施形態では、Ｚ４は、次から選択され、
【化２１】
2019520352.tif 000022
式中、破線
【化２２】
2019520352.tif 000023
は、Ｚ３に結合する点を表し、波線
【化２３】
2019520352.tif 000024
は、Ｚ５に結合する点を表す。いくつかの実施形態では、Ｚ３は、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ及びＶａｌ−Ｃｉｔから選択される二価のペプチド部分である。
【０９５５】
当業者は、複合体中のアジュバント部分を、タンパク質を修飾するための様々な化学物質を用いて抗体に共有結合でき、上記連結部分が、タンパク質の官能基（すなわち、アミン酸側鎖）と反応性リンカー基を有する試薬との反応によって得られることを理解しているだろう。このような様々な試薬が、当該技術分野において既知である。このような試薬の例として、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル（ＮＨＳ）エステル及びＮ−ヒドロキシスルホスクシンイミジル（スルホ−ＮＨＳ）エステル（アミン反応性）、カルボジイミド（アミン及びカルボキシル反応性）、ヒドロキシメチルホスフィン（アミン反応性）、マレイミド（チオール反応性）、ハロゲン化アセトアミド、例えば、Ｎ−ヨードアセトアミド（チオール反応性）、アリールアジド（一級アミン反応性）、フッ化アリールアジド（炭素−水素（Ｃ−Ｈ）挿入を介する反応）、ペンタフルオロフェニル（ＰＦＰ）エステル（アミン反応性）、テトラフルオロフェニル（ＴＦＰ）エステル（アミン反応性）、イミドエステル（アミン反応性）、イソシアネート（ヒドロキシル反応性）、ビニルスルホン（チオール、アミン、及びヒドロキシル反応性）、ピリジルジスルフィド（チオール反応性）、及びベンゾフェノン誘導体（Ｃ−Ｈ結合挿入を介する反応）が挙げられるが、これらに限定されない。更なる試薬として、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，２００８に記載されるものが挙げられるが、これらに限定されない。
【０９５６】
マレイミド基、ビニルスルホン基、ピリジルジスルフィド基及びハロゲン化アセトアミド基を含むリンカーは、抗体中のチオール基への共有結合に特に有用である。抗体中のチオール基は、一般的に、システイン側鎖中に位置している。遊離のチオール基は、天然に存在し、溶媒が到達可能な抗体中のシステイン残基中に存在する場合がある。以下に記載されるように、遊離チオールは、遺伝子操作を受けたシステイン残基中に存在させることもできる。また、抗体中のシステイン側鎖間のジスルフィド結合の完全又は部分的な還元によって、チオール基を発生できる。チオール基を、２−イミノチオラン（Ｔｒａｕｔ試薬）、Ｎ−サクシニミジル−Ｓ−アセチルチオアセテート（ＳＡＴＡ）、及びＳＡＴＰ（Ｎ−サクシニミジル−Ｓ−アセチルチオプロピオネート）が挙げられるが、これらに限定されない試薬によって、既知の方法を用いてリジン側鎖に付加することもできる。抗体が、ＳＡＴＡ及びＳＡＴＰなどのアセチル化試薬で修飾されるとき、更なる結合のために遊離のチオール基を発生させるため、ヒドロキシルアミン又は類似の試薬を用いる加水分解によりアセチル基を除去できる。例えば、Ｔｒａｕｔ  ｅｔ  ａｌ．（Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１２（１７）：３２６６〜３２７３（１９７３））及びＤｕｎｃａｎ  ｅｔ  ａｌ．（Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１３２（１）：６８〜７３（１９８３））を参照されたい。
【０９５７】
リンカーは、リンカーが抗体構築物及びアジュバント部分に共有結合するとき、抗体構築物及びアジュバント部分の機能が維持されるような、任意の好適な長さを有してよい。リンカーは、約３Å以上、例えば、約４Å以上、約５Å以上、約６Å以上、約７Å以上、約８Å以上、約９Å以上、又は約１０Å以上の長さを有してよい。あるいは、又は加えて、リンカーは、約５０Å以下、例えば、約４５Å以下、約４０Å以下、約３５Å以下、約３０Å以下、約２５Å以下、約２０Å以下の、又は約１５Å以下の長さを有してよい。したがって、リンカーは、上記の端点のうち任意の２つに囲まれた長さを有してよい。リンカーは、約３Å〜約５０Å、例えば、約３Å〜約４５Å、約３Å〜約４０Å、約３Å〜約３５Å、約３Å〜約３０Å、約３Å〜約２５Å、約３Å〜約２０Å、約３Å〜約１５Å、約５Å〜約５０Å、約５Å〜約２５Å、約５Å〜約２０Å、約１０Å〜約５０Å、約１０Å〜約２０Å、約５Å〜約３０Å、又は約５Å〜約１５Åの長さを有してよい。好ましい実施形態では、リンカーは、約３Å〜約２０Åの長さを有する。
【０９５８】
したがって、本発明は、アジュバント部分が、次の中から選択される試薬（つまり、共有結合試薬（「ＣＢＲ」））を用いて抗体に共有結合している実施形態を提供する。
【化２４】
2019520352.tif 000025
式中、Ｘはハロゲン（例えば、ヨード、ブロモ、又はクロロ）であり、Ｒ’はＨ又はスルホであり、Ｒ’’は、任意に置換されたアリール（例えば、３−カルボキシ−４−ニトロフェニル）又は任意に置換されたヘテロアリール（例えば、ピリジン−２−イル）であり、Ｒ’’’は、任意に置換されたアルキル（例えば、メトキシ）であり、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、及びＺ４は上述のとおりであり、破線
【化２５】
2019520352.tif 000026
は、アジュバント部分に結合する点を表す。
【０９５９】
いくつかの実施形態では、リンカー部分である−Ｚ１−Ｚ２−Ｚ３−Ｚ４−Ｚ５−は、次のものであり、
【化２６】
2019520352.tif 000027
式中、破線
【化２７】
2019520352.tif 000028
は、アジュバント部分に結合する点を表し、波線
【化２８】
2019520352.tif 000029
は、抗体のアミノ酸側鎖に結合する点を表す。いくつかのかかる実施形態では、アミノ酸側鎖は、システイン側鎖又はチオール基を含む修飾リジン側鎖である。
【０９６０】
いくつかの実施形態では、免疫複合体は、式ＩＩＩの構造体、
【化２９】
2019520352.tif 000030
又は薬学的に許容されるその塩を有し、式中、Ａｂは、少なくとも１つのリジン側鎖を有する抗体であり、Ａｄｊはアジュバントであり、Ｇは、ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、又は結合であり、Ｌはリンカーであり、下付き文字ｒは、１〜１０の整数（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０）である。式ＩＩＩの免疫複合体の特定の実施形態では、抗体はチオール修飾リジン側鎖を含まない。
【０９６１】
いくつかの実施形態では、Ｌは、次から選択され、
【化３０】
2019520352.tif 000031
式中、Ｒは任意に存在し、１〜８個の炭素単位を含む、直鎖又は分岐鎖、環状又は直線状、飽和又は不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖であり、ａは、１〜４０の整数であり、各Ａは、独立して、任意のアミノ酸から選択され、下付き文字ｃは、１〜２０の整数であり、破線
【化３１】
2019520352.tif 000032
は、
【化３２】
2019520352.tif 000033
に結合する点を表し、波線
【化３３】
2019520352.tif 000034
は、
【化３４】
2019520352.tif 000035
に結合する点を表す。
【０９６２】
いくつかの実施形態では、免疫複合体は、式ＩＩＩａの構造体、
【化３５】
2019520352.tif 000036
又は薬学的に許容されるその塩を有し、式中、Ａｂは、少なくとも１つのリジン側鎖を有する抗体であり、Ａｄｊはアジュバントであり、Ｇは、ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、又は結合であり、Ｒは任意に存在し、１〜８個の炭素単位を含む、直鎖又は分岐鎖、環状又は直線状、飽和又は不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖であり、下付き文字ａは、１〜４０の整数であり、下付き文字ｒは、１〜１０の整数（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０）である。
【０９６３】
いくつかの実施形態では、免疫複合体は、式ＩＩＩｂの構造体、
【化３６】
2019520352.tif 000037
又は薬学的に許容されるその塩を有し、式中、Ａｂは、少なくとも１つのリジン側鎖を有する抗体であり、Ａｄｊはアジュバントであり、Ｇは、ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、又は結合であり、下付き文字ａは、１〜４０の整数であり、下付き文字をｒは、１〜１０の整数（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０）である。
【０９６４】
いくつかの実施形態では、免疫複合体は、式ＩＩＩｃの構造体、
【化３７】
2019520352.tif 000038
又は薬学的に許容されるその塩を有し、式中、Ａｂは、少なくとも１つのリジン側鎖を有する抗体であり、Ａｄｊはアジュバントであり、Ｇは、ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、又は結合であり、Ｒは任意に存在し、１〜８個の炭素単位を含む、直鎖又は分岐鎖、環状又は直線状、飽和又は不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖であり、各Ａは、独立して任意のアミノ酸から選択され、下付き文字ｃは、１〜２０の整数であり、下付き文字ｒは、１〜１０の整数（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０）である。
【０９６５】
いくつかの実施形態では、免疫複合体は、式ＩＩＩｄの構造体、
【化３８】
2019520352.tif 000039
又は薬学的に許容されるその塩を有し、式中、Ａｂは、少なくとも１つのリジン側鎖を有する抗体であり、Ａｄｊはアジュバントであり、Ｇは、ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、又は結合であり、Ｒは任意に存在し、１〜８個の炭素単位を含む、直鎖又は分岐鎖、環状又は直線状、飽和又は不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖であり、下付き文字ｃは、１〜２０の整数であり、下付き文字ｒは、１〜１０の整数（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０）である。
【０９６６】
いくつかの実施形態では、免疫複合体は、式ＩＩＩｅの構造体、
【化３９】
2019520352.tif 000040
又は薬学的に許容されるその塩を有し、式中、Ａｂは、少なくとも１つのリジン側鎖を有する抗体であり、Ａｄｊはアジュバントであり、Ｇは、ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、又は結合であり、Ｒは任意に存在し、１〜８個の炭素単位を含む、直鎖又は分岐鎖、環状又は直線状、飽和又は不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖であり、下付き文字ｒ１〜１０の整数（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０）である。
【０９６７】
いくつかの実施形態では、免疫複合体は、式ＩＩＩｆの構造体、
【化４０】
2019520352.tif 000041
又は薬学的に許容されるその塩を有し、式中、Ａｂは、少なくとも１つのリジン側鎖を有する抗体であり、Ａｄｊはアジュバントであり、Ｇは、ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、又は結合であり、Ｒは任意に存在し、１〜８個の炭素単位を含む、直鎖又は分岐鎖、環状又は直線状、飽和又は不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖であり、下付き文字ｒ１〜１０の整数（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０）である。
【０９６８】
いくつかの実施形態では、免疫複合体は、式ＩＩＩｇの構造体、
【化４１】
2019520352.tif 000042
又は薬学的に許容されるその塩を有し、式中、Ａｂは、少なくとも１つのリジン側鎖を有する抗体であり、Ａｄｊはアジュバントであり、Ｇは、ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、又は結合であり、Ｒは任意に存在し、１〜８個の炭素単位を含む、直鎖又は分岐鎖、環状又は直線状、飽和又は不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖であり、下付き文字ｒ１〜１０の整数（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０）である。
【０９６９】
したがって、免疫複合体は、式ＩＶａ〜式ＩＶｋの構造体、
【化４２】
2019520352.tif 000043
又は薬学的に許容されるその塩を有し、式中、Ａｂは、少なくとも１つのリジン側鎖を有する抗体であり、Ａｄｊはアジュバントであり、下付き文字ｒは、１〜１０の整数（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０）である。特定の実施形態では、下付き文字ｒは、１〜４の整数（すなわち、１、２、３、又は４）である。
【０９７０】
特定の実施形態では、免疫複合体は、次から選択される構造体、
【化４３】
2019520352.tif 000044
【化４４】
2019520352.tif 000045
【化４５】
2019520352.tif 000046
【化４６】
2019520352.tif 000047
【化４７】
2019520352.tif 000048
又は薬学的に許容されるその塩を有し、式中、Ａｂは、少なくとも１つのリジン側鎖を有する抗体であり、下付き文字ｒは、１〜１０の整数（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０）である。特定の実施形態では、下付き文字ｒは、１〜４の整数（すなわち、１、２、３、又は４）である。
【０９７１】
特定の実施形態では、免疫複合体は、次から選択される構造体、
【化４８】
2019520352.tif 000049
【化４９】
2019520352.tif 000050
又は薬学的に許容されるその塩を有し、式中、Ａｂは、少なくとも１つのリジン側鎖を有する抗体であり、下付き文字ｒは、１〜１０の整数（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０）である。特定の実施形態では、下付き文字ｒは、１〜４の整数（すなわち、１、２、３、又は４）である。
【０９７２】
第２の態様において、本発明は、式Ｖの１つ又は２つ以上の化合物及び式ＶＩの抗体から式ＩＩＩの免疫複合体を製造するための改良された方法を提供し、この方法は次の工程を含み、
【化５０】
2019520352.tif 000051
式中、Ａｄｊはアジュバントであり、Ｇは、ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、又は結合であり、Ｌはリンカーであり、Ｅはエステルであり、式ＶＩは、少なくとも１つのリジン側鎖を有する抗体であり、下付き文字ｒは、１〜１０の整数（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０）である。特定の実施形態では、アジュバント（「Ａｄｊ」）はＴＬＲアゴニストである。
【０９７３】
エステルを介して抗体（式ＶＩの化合物）に結合できる場合に、任意の好適なリンカーを用いることができる。例えば、リンカー（「Ｌ」）は、次式
【化５１】
2019520352.tif 000052
を有することができ、式中、Ｒは任意に存在し、１〜８個（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８個）の炭素単位を含む、直鎖又は分岐鎖、環状又は直線状、飽和又は不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖であり、下付き文字ａは、１〜４０の整数であり、破線
【化５２】
2019520352.tif 000053
は、
【化５３】
2019520352.tif 000054
に結合する点を表し、波線
【化５４】
2019520352.tif 000055
は、Ｅに結合する点を表す。いくつかの実施形態では、下付き文字ａは、１〜２０の整数である。いくつかの実施形態では、下付き文字ａは、１〜１０の整数である。いくつかの実施形態では、下付き文字ａは、１〜５の整数である。いくつかの実施形態では、下付き文字ａは、１〜３の整数である。特定の実施形態では、Ｒは存在し、１〜８個（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８個）の炭素単位を含む、直鎖又は分岐鎖、環状又は直線状、飽和又は不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖である。
【０９７４】
リンカー（「Ｌ」）は、次式
【化５５】
2019520352.tif 000056
を有してよく、
式中、下付き文字ａは、１〜４０の整数であり、破線
【化５６】
2019520352.tif 000057
は、
【化５７】
2019520352.tif 000058
に結合する点を表し、波線
【化５８】
2019520352.tif 000059
は、Ｅに結合する点を表す。
【０９７５】
いくつかの実施形態では、下付き文字ａは、１〜２０の整数である。いくつかの実施形態では、下付き文字ａは、１〜１０の整数である。いくつかの実施形態では、下付き文字ａは、１〜５の整数である。いくつかの実施形態では、下付き文字ａは、１〜３の整数である。
【０９７６】
例えば、リンカー（「Ｌ」）は、次式
【化５９】
2019520352.tif 000060
を有することもでき、式中、Ｒは任意に存在し、１〜８個（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８個）の炭素単位を含む、直鎖又は分岐鎖、環状又は直線状、飽和又は不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖であり、各Ａは、独立して任意のアミノ酸から選択され、下付き文字ｃは、１〜２０の整数であり、破線
【化６０】
2019520352.tif 000061
は、
【化６１】
2019520352.tif 000062
に結合する点を表し、波線
【化６２】
2019520352.tif 000063
は、Ｅに結合する点を表す。いくつかの実施形態では、下付き文字ｃは、１〜１０の整数である。いくつかの実施形態では、下付き文字ｃは、１〜５の整数である。いくつかの実施形態では、下付き文字ｃは、１〜２の整数である。特定の実施形態では、Ｒは存在し、１〜８個（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８個）の炭素単位を含む、直鎖又は分岐鎖、環状又は直線状、飽和又は不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖である。
【０９７７】
リンカー（「Ｌ」）は、次式
【化６３】
2019520352.tif 000064
を有してもよく、
式中、Ｒは任意に存在し、１〜８個（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８個）の炭素単位を含む、直鎖又は分岐鎖、環状又は直線状、飽和又は不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖であり、下付き文字ｃは、１〜２０の整数であり、破線
【化６４】
2019520352.tif 000065
は、
【化６５】
2019520352.tif 000066
に結合する点を表し、波線
【化６６】
2019520352.tif 000067
は、Ｅに結合する点を表す。いくつかの実施形態では、下付き文字ｃは、１〜１０の整数である。いくつかの実施形態では、ｃは、１〜５の整数である。特定の実施形態では、Ｒは存在し、１〜８個（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８個）の炭素単位を含む、直鎖又は分岐鎖、環状又は直線状、飽和又は不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖である。
【０９７８】
リンカー（「Ｌ」）は、次式
【化６７】
2019520352.tif 000068
を有してもよく、
【０９７９】
式中、Ｒは任意に存在し、１〜８個（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８個）の炭素単位を含む、直鎖又は分岐鎖、環状又は直線状、飽和又は不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖であり、破線
【化６８】
2019520352.tif 000069
は、
【化６９】
2019520352.tif 000070
に結合する点を表し、波線
【化７０】
2019520352.tif 000071
は、Ｅに結合する点を表す。特定の実施形態では、Ｒは存在し、１〜８個（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８個）の炭素単位を含む、直鎖又は分岐鎖、環状又は直線状、飽和又は不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖である。
【０９８０】
リンカー（「Ｌ」）は、次式
【化７１】
2019520352.tif 000072
を有してもよく、式中、Ｒは任意に存在し、１〜８個（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８個）の炭素単位を含む、直鎖又は分岐鎖、環状又は直線状、飽和又は不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖であり、破線
【化７２】
2019520352.tif 000073
は、
【化７３】
2019520352.tif 000074
に結合する点を表し、波線
【化７４】
2019520352.tif 000075
は、Ｅに結合する点を表す。特定の実施形態では、Ｒは存在し、１〜８個（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８個）の炭素単位を含む、直鎖又は分岐鎖、環状又は直線状、飽和又は不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖である。
【０９８１】
リンカー（「Ｌ」）は、次式
【化７５】
2019520352.tif 000076
を有してもよく、
式中、Ｒは任意に存在し、１〜８個（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８個）の炭素単位を含む、直鎖又は分岐鎖、環状又は直線状、飽和又は不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖であり、破線
【化７６】
2019520352.tif 000077
は、
【化７７】
2019520352.tif 000078
に結合する点を表し、波線
【化７８】
2019520352.tif 000079
は、Ｅに結合する点を表す。特定の実施形態では、Ｒは存在し、１〜８個（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８個）の炭素単位を含む、直鎖又は分岐鎖、環状又は直線状、飽和又は不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖である。
【０９８２】
いくつかの実施形態では、式Ｖの化合物は、次から選択され、
【化７９】
2019520352.tif 000080
式中、Ｇは、ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、又は結合であり、Ｒは任意に存在し、１〜８個の炭素単位を含む、直鎖又は分岐鎖、環状又は直線状、飽和又は不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖であり、下付き文字ａは、１〜４０の整数であり、各Ａは、独立して、任意のアミノ酸から選択され、下付き文字ｃは、１〜２０の整数であり、Ｅはエステルである。
【０９８３】
先に説明したように、免疫複合体を形成する方法が多く存在する。従来技術の方法はそれぞれ、デメリットに悩まされている。本発明の方法は、リンカーを含むように修飾されたアジュバントを抗体（式ＶＩの化合物）のリジン側鎖に結合させる、一段階工程を含む。このプロセスは、エステルを使用することによっても可能である。エステルは、式Ｖの化合物を抗体（式ＶＩの化合物）のリジン側鎖に連結することが可能な、任意の好適なエステルであってよい。
【０９８４】
例えば、式Ｖのエステルは、次式のＮ−ヒドロキシスクシンイミド（「ＮＨＳ」）エステルであってもよく、
【化８０】
2019520352.tif 000081
式中、波線
【化８１】
2019520352.tif 000082
は、リンカー（「Ｌ」）に結合する点を表す。
【０９８５】
式Ｖのエステルは、次式のスルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルであってもよく、
【化８２】
2019520352.tif 000083
式中、Ｍは任意のカチオンであり、波線
【化８３】
2019520352.tif 000084
は、リンカー（「Ｌ」）に結合する点を表す。例えば、カチオン対イオン（「Ｍ」）は、プロトン、アンモニウム、四級アミン、アルカリ金属のカチオン、アルカリ土類金属のカチオン、遷移金属のカチオン、希土類金属のカチオン、主族元素のカチオン、又はこれらの組み合わせであってよい。
【０９８６】
式Ｖのエステルは、次式のフェノールエステルであってもよく、
【化８４】
2019520352.tif 000085
式中、各Ｒ２は、独立して、水素又はフッ素から選択され、波線
【化８５】
2019520352.tif 000086
は、リンカー（「Ｌ」）に結合する点を表す。
【０９８７】
式Ｖのエステルは、次式のフェノールエステルであってもよく、
【化８６】
2019520352.tif 000087
（テトラフルオロフェニル）又は
【化８７】
2019520352.tif 000088
（ペンタフルオロフェニル）、
式中、波線
【化８８】
2019520352.tif 000089
は、リンカー（「Ｌ」）に結合する点を表す。
【０９８８】
いくつかの実施形態では、式ＶＩの抗体及び式Ｖのエステルは、任意の好適な水性緩衝液中で混合される。好適な水性緩衝液の例示的リストは、リン酸緩衝生理食塩水、ホウ酸塩緩衝生理食塩水、トリス緩衝生理食塩水である。
【０９８９】
テトラフルオロフェニル（「ＴＦＰ」）又はペンタフルオロフェニル（「ＰＦＰ」）の使用は、本発明の免疫複合体の合成に特に有効である。
【０９９０】
したがって、例示的であるが非限定的な式Ｖの化合物のリストは、次のものであり、
【化８９】
2019520352.tif 000090
【化９０】
2019520352.tif 000091
【化９１】
2019520352.tif 000092
【化９２】
2019520352.tif 000093
式中、Ａｄｊはアジュバントであり、Ｍは任意のカチオンである。例えば、カチオン対イオン（「Ｍ」）は、プロトン、アンモニウム、四級アミン、アルカリ金属のカチオン、アルカリ土類金属のカチオン、遷移金属のカチオン、希土類金属のカチオン、主族元素のカチオン、又はこれらの組み合わせであってよい。
【０９９１】
結果的に、１つ又は２つ以上の式Ｖの化合物及び式ＶＩの抗体を組み合わせ、式ＩＩＩの免疫複合体を形成できる。例示的であるが非限定的な式ＩＩＩの免疫複合体のリストは、次のもの、
【化９３】
2019520352.tif 000094
又は薬学的に許容されるその塩であり、式中、Ａｂは、少なくとも１つのリジン側鎖を有する抗体であり、Ａｄｊはアジュバントであり、Ｇは、ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、又は結合であり、Ｒは任意に存在し、１〜８個の炭素単位を含む、直鎖又は分岐鎖、環状又は直線状、飽和又は不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖であり、下付き文字ａは１〜４０の整数であり、各Ａは、独立して任意のアミノ酸から選択され、下付き文字ｃは１〜２０の整数であり、下付き文字ｒは、１〜１０の整数（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０）である。
【０９９２】
第３の態様では、本発明は、オリゴヌクレオチドを含むアジュバント部分を抗体に共有結合する連結部分を含む、免疫複合体を提供する。特定の実施形態では、免疫複合体は、式ＶＩＩａの免疫複合体から選択されるＡ型ＣＰＧオリゴヌクレオチド免疫複合体、
【化９４】
2019520352.tif 000095
又はその薬学的に許容される塩であり、式中、Ａｂは、抗体中の未改変アミノ酸側鎖、又は抗体中の改変アミノ酸側鎖で結合した抗体であり、Ｚは連結部分であり、下付き文字ｒは、１〜１０の整数（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０）であり、小文字のヌクレオチドはホスホロチオエート結合を意味し、大文字のヌクレオチドはホスホジエステル結合を意味する。特定の実施形態では、連結部分（「Ｚ」）は、上記及び本明細書で定義されたとおりである。
【０９９３】
特定の実施形態では、免疫複合体は、式ＶＩＩｂの免疫複合体から選択されるＢ型ＣＰＧオリゴヌクレオチド免疫複合体、
【化９５】
2019520352.tif 000096
又はその薬学的に許容される塩であり、式中、Ａｂは、抗体中の未改変アミノ酸側鎖、又は抗体中の改変アミノ酸側鎖で結合した抗体であり、Ｚは連結部分であり、下付き文字ｒは、１〜１０の整数（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０）であり、大文字のヌクレオチドはホスホロチオエート結合を意味する。特定の実施形態では、連結部分（「Ｚ」）は、上記及び本明細書で定義されたとおりである。
【０９９４】
特定の実施形態では、免疫複合体は、式ＶＩＩｃの免疫複合体から選択されるＣ型ＣＰＧオリゴヌクレオチド免疫複合体、
【化９６】
2019520352.tif 000097
又はその薬学的に許容される塩であり、式中、Ａｂは、抗体中の未改変アミノ酸側鎖、又は抗体中の改変アミノ酸側鎖で結合した抗体であり、Ｚは連結部分であり、下付き文字ｒは、１〜１０の整数（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０）であり、大文字のヌクレオチドはホスホロチオエート結合を意味する。特定の実施形態では、連結部分（「Ｚ」）は、上記及び本明細書で定義されたとおりである。
【０９９５】
特定の実施形態では、免疫複合体は、式ＶＩＩｄの免疫複合体から選択されるポリＩ：Ｃオリゴヌクレオチド免疫複合体、
【化９７】
2019520352.tif 000098
又はその薬学的に許容される塩であり、式中、Ａｂは、抗体中の未改変アミノ酸側鎖、又は抗体中の改変アミノ酸側鎖で結合した抗体であり、Ｚは連結部分であり、下付き文字ｒは、１〜１０の整数（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０）である。特定の実施形態では、連結部分（「Ｚ」）は、上記及び本明細書で定義されたとおりである。
アジュバント
【０９９６】
いくつかの実施形態では、アジュバント部分は、免疫応答を誘発する化合物である。いくつかの実施形態では、アジュバント部分は、パターン認識受容体（「ＰＲＲ」）アゴニストである。パターン認識受容体（ＰＲＲ）を活性化できる任意のアジュバントを、本発明の免疫複合体に導入することができる。本明細書で使用するとき、用語「パターン認識受容体」及び「ＰＲＲ」は、病原体関連分子パターン（「ＰＡＭＰｓ」）又は損傷関連分子パターン（「ＤＡＭＰｓ」）を認識し、先天免疫における主要なシグナル伝達要素として作用する、保存された哺乳類タンパク質の種の任意のメンバーを指す。パターン認識受容体は、膜結合ＰＲＲ、細胞質ＰＲＲ、及び分泌ＰＲＲに分類される。膜結合ＰＲＲの例として、Ｔｏｌｌ様受容体（「ＴＬＲ」）及びＣ型レクチン受容体（「ＣＬＲ」）が挙げられる。細胞質ＰＲＲの例として、ＮＯＤ様受容体（「ＮＬＲ」）及びＲｉｇ−Ｉ様受容体（「ＲＬＲ」）が挙げられる。いくつかの実施形態では、免疫複合体は、２つ以上の異なるＰＲＲアジュバント部分を有することができる。
【０９９７】
特定の実施形態では、本発明の免疫複合体中のアジュバント部分は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニストである。好適なＴＬＲアゴニストとして、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１、又はその任意の組み合わせ（例えば、ＴＬＲ７／８アゴニスト）が挙げられる。Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）を活性化できる任意のアジュバントを、本発明の免疫複合体に導入することができる。Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）は、脊椎動物における先天性免疫応答の開始に関与するＩ型膜貫通タンパク質である。ＴＬＲは、細菌、ウイルス、及び真菌由来の様々な病原体関連分子パターンを認識し、病原体の侵入に対する防御の最前線として働く。ＴＬＲは、細胞発現とそれらが開始するシグナル伝達経路の違いによって、重複はするが明確に異なる生物学的応答を遊はつるす。一旦結合すると（例えば、天然の刺激や合成ＴＬＲアゴニストにより）、ＴＬＲは、ＮＦ−κＢの活性化に至るシグナル伝達カスケードを開始し、これはアダプタータンパク質であるｍｙｅｌｏｉｄ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｇｅｎｅ  ８８（ＭｙＤ８８）と、ＩＬ−１受容体関連キナーゼ（ＩＲＡＫ）のリクルートメントを介する。続いて、ＩＲＡＫのリン酸化によりＴＮＦ受容体関連因子６（ＴＲＡＦ６）のリクルートメントに至り、その結果、ＮＦ−κＢ阻害剤であるＩ−κＢがリン酸化する。結果として、ＮＦ−κＢは、細胞核に侵入し、そのプロモーターがＮＦ−κＢ結合部位を含む遺伝子、例えばサイトカインなどの転写を開始する。ＴＬＲシグナル伝達に関する更なる制御様式として、ＴＩＲドメイン含有アダプター誘導性インターフェロンβ（ＴＲＩＦ）依存性のＴＲＡＦ６の誘導、及び、ＭｙＤ８８の活性化非依存性の経路であって、ＴＲＩＦ及びＴＲＡＦ３を介するものが挙げられ、インターフェロン応答因子３（ＩＲＦ３）のリン酸化に至る。同様に、ＭｙＤ８８依存性経路も、ＩＲＦ５及びＩＲＦ７などのいくつかのＩＲＦファミリーメンバーを活性化し、一方、ＴＲＩＦ依存性経路も、ＮＦκＢ経路を活性化する。
【０９９８】
ＴＬＲ３アゴニストの例として、ポリイノシンポリシチジル酸（ポリ（Ｉ：Ｃ））、ポリアデニルポリウリジル酸（ポリ（Ａ：Ｕ）、及びポリ（Ｉ）−ポリ（Ｃ１２Ｕ）が挙げられる。
【０９９９】
ＴＬＲ４アゴニストの例として、リポ多糖（ＬＰＳ）及びモノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬＡ）が挙げられる。
【１０００】
ＴＬＲ５アゴニストの例として、フラゲリンが挙げられる。
【１００１】
ＴＬＲ９アゴニストの例として、一本鎖ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ  ＯＤＮ）が挙げられる。構造的特性とヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）、特にＢ細胞及び形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）での活性に基づいて、３つの主要クラスの刺激性ＣｐＧ  ＯＤＮが同定されている。これらの３つのクラスは、クラスＡ（Ｄ型）、クラスＢ（Ｋ型）及びクラスＣである。
【１００２】
Ｎｏｄ様受容体（ＮＬＲ）アゴニストの例として、ｉＥ−ＤＡＰのアシル化誘導体、Ｄ−γ−Ｇｌｕ−ｍＤＡＰ、Ｌ−Ａｌａ−γ−Ｄ−Ｇｌｕ−ｍＤＡＰ、Ｃ１８脂肪酸鎖を有するムラミルジペプチド、ムラミルジペプチド、ムラミルトリペプチド、及びＮ−グリコール酸化ムラミルジペプチドが挙げられる。
【１００３】
ＲＩＧ−Ｉ様受容体（ＲＬＲ）アゴニストの例として、５’ｐｐｐ−ｄｓｒｎａ（５’−ｐｐｐＧＣＡＵＧＣＧＡＣＣＵＣＵＧＵＵＵＧＡ−３’：３’−ＣＧＵＡＣＧＣＵＧＧＡＧＡＣＡＡＡＣＵ−５’）、及びポリ（デオキシアデニル−デオキシチミジル）酸（ポリ（ｄＡ：ｄＴ））が挙げられる。
【１００４】
細胞質ＤＮＡ及び環状ジヌクレオチドと呼ばれる細菌固有の核酸など、追加の免疫刺激性化合物が、インターフェロン遺伝子の刺激物質（「ＳＴＩＮＧ」）によって認識され、細胞質ＤＮＡセンサーとして作用できる。ＡＤＵ−ＳｌＯＯは、ＳＴＩＮＧアゴニストであり得る。ＳＴＩＮＧアゴニストの非限定例として、次のものが挙げられる。環状［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（２’，５’）ｐ］（２’２’−ｃＧＡＭＰ）、環状［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］（２’３’−ｃＧＡＭＰ）、環状［Ｇ（３’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］（３’３’−ｃＧＡＭＰ）、環状ジアデニル化一リン酸（ｃ−ジ−ＡＭＰ）、２’，５’−３’，５’−ｃ−ジＡＭＰ（２’３’−ｃ−ジ−ＡＭＰ）、環状ジグアニル化一リン酸（ｃ−ジ−ＧＭＰ）、２’，５’−３’，５’−ｃ−ジＧＭＰ（２’３’−ｃ−ジ−ＧＭＰ）、環状ジイノシン一リン酸（ｃ−ジ−ＩＭＰ）、環状ジウリジン一リン酸（ｃ−ジ−ＵＭＰ）、ＫＩＮ７００、ＫＩＮ１１４８、ＫＩＮ６００、ＫＩＮ５００、ＫＩＮｌＯＯ、ＫＩＮ１０１、ＫＩＮ４００、ＫＩＮ２０００、又はＳＢ−９２００を認識できる。
【１００５】
ＴＬＲ７及び／又はＴＬＲ８を活性化できる任意のアジュバントを、本発明の免疫複合体に導入してよい。ＴＬＲ７アゴニスト及びＴＬＲ８アゴニストは、例えば、Ｖａｃｃｈｅｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．（ＯｎｃｏＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２：８，ｅ２５２３８，ＤＯＩ：１０．４１６１／ｏｎｃｉ．２５２３８（２０１３））及びＣａｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（米国特許出願公開第２０１３／０１６５４５５号、その全体を参照することにより本明細書に組み込まれる）によって説明されている。ＴＬＲ７及びＴＬＲ８は、共に単球及び樹状細胞で発現している。ヒトでは、ＴＬＲ７は、形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）及びＢ細胞中でも発現している。ＴＬＲ８は、大部分が骨髄系の細胞すなわち、単球、顆粒球、及び骨髄樹状細胞中で発現している。ＴＬＲ７及びＴＬＲ８は、ウイルス侵入に応答する手段として、細胞内の「異種」一本鎖ＲＮＡの存在を検出することができる。ＴＬＲ８−発現細胞をＴＬＲ８アゴニストで処理すると、ＩＬ−１２、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１、ＴＮＦα、ＩＬ−６、及び他の炎症性サイトカインを高レベルで産生できる。同様にして、ｐＤＣなどのＴＬＲ７−発現細胞をＴＬＲ７アゴニストで刺激すると、ＩＦＮα及び他の炎症性サイトカインを高レベルで産生できる。ＴＬＲ７／ＴＬＲ８の結合及びその結果として生じるサイトカイン産生は、樹状細胞及び他の抗原提示細胞を活性化し、腫瘍破壊につながる多様な先天性及び後天性免疫応答機構を駆動することができる。
【１００６】
ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、又はＴＬＲ７／８アゴニストの例として、非限定的に次のものが挙げられる。ガーディキモド（１−（４−アミノ−２−エチルアミノメチルイミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）−２−メチルプロパン−２−オール）、イミキモド（Ｒ８３７）（ＴＬＲ７のアゴニスト）、ロキソリビン（ＴＬＲ７のアゴニスト）、ＩＲＭ１（１−（２−アミノ−２−メチルプロピル）−２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ−［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン）、ＩＲＭ２（２−メチル−１−［２−（３−ピリジン−３−イルプロポキシ）エチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン）（ＴＬＲ８のアゴニスト）、ＩＲＭ３（Ｎ−（２−［２−［４−アミノ−２−（２−メトキシエチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］エトキシ］エチル）−Ｎ−メチルシクロヘキサンカルボキサミド）（ＴＬＲ８のアゴニスト）、ＣＬ０９７（２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン）（ＴＬＲ７／８のアゴニスト）、ＣＬ３０７（ＴＬＲ７のアゴニスト）、ＣＬ２６４（ＴＬＲ７のアゴニスト）、レシキモド（ＴＬＲ７／８のアゴニスト）、３Ｍ−０５２／ＭＥＤＩ９１９７（ＴＬＲ７／８のアゴニスト）、ＳＤ−１０１（Ｎ−［（４Ｓ）−２，５−ジオキソ−４−イミダゾリジニル］−尿素）（ＴＬＲ７／８のアゴニスト）、モトリモド（２−アミノ−Ｎ，Ｎ−ジプロピル−８−［４−（ピロリジン−１−カルボニル）フェニル］−３Ｈ−１−ベンザゼピン−４−カルボキサミド）（ＴＬＲ８のアゴニスト）、ＣＬ０７５（３Ｍ００２、２−プロピルチアゾロ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン）（ＴＬＲ７／８のアゴニスト）、及びＴＬ８−５０６（３Ｈ−１−ベンザゼピン−４−カルボン酸、２−アミノ−８−（３−シアノフェニル）−，エチルエステル）（ＴＬＲ８のアゴニスト）。
【１００７】
ＴＬＲ２アゴニストの例として、Ｎ−α−パルミトイル−Ｓ−［２，３−ビス（パルミトイルオキシ）−（２ＲＳ）−プロピル］−Ｌ−システイン、パルミトイル−Ｃｙｓ（（ＲＳ）−２，３−ジ（パルミトイルオキシ）−プロピル）（「Ｐａｍ３Ｃｙｓ」）、例えば、Ｐａｍ３Ｃｙｓ、Ｐａｍ３Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−（Ｌｙｓ）４（「Ｐａｍ３Ｃｙｓ−ＳＫＫＫＫ」及び「Ｐａｍ３ＣＳＫ４」としても知られる）、トリアシルリピドＡ（「ＯＭ−１７４」）、リポテイコ酸（「ＬＴＡ」）、ペプチドグリカン、及びＣＬ４１９（Ｓ−（２，３−ビス（パルミトイルオキシ）−（２ＲＳ）プロピル）−（Ｒ）−システイニルスペルミン）を含む薬剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【１００８】
ＴＬＲ２／６アゴニストの例は、Ｐａｍ２ＣＳＫ４（Ｓ−［２，３−ビス（パルミトイルオキシ）−（２ＲＳ）−プロピル］−［Ｒ］−システイニル−［Ｓ］−セリル−［Ｓ］−リシル−［Ｓ］−リシル−［Ｓ］−リシル−［Ｓ］−リジン×３ＣＦ３ＣＯＯＨ）である。
【１００９】
ＴＬＲ２／７アゴニストの例として、ＣＬ５７２（Ｓ−（２−ミリストイルオキシエチル）−（Ｒ）−システイニル４−（（６−アミノ−２−（ブチルアミノ）−８−ヒドロキシ−９Ｈ−プリン−９−イル）メチル）アニリン）、ＣＬ４１３（Ｓ−（２，３−ビス（パルミトイルオキシ）−（２ＲＳ）プロピル）−（Ｒ）−システイニル−（Ｓ）−セリル−（Ｓ）−リシル−（Ｓ）−リシル−（Ｓ）−リシル−（Ｓ）−リシル４−（（６−アミノ−２−（ブチルアミノ）−８−ヒドロキシ−９Ｈ−プリン−９−イル）メチル）アニリン）、及びＣＬ４０１（Ｓ−（２，３−ビス（パルミトイルオキシ）−（２ＲＳ）プロピル）−（Ｒ）−システイニル４−（（６−アミノ−２（ブチルアミノ）−８−ヒドロキシ−９Ｈ−プリン−９−イル）メチル）アニリン）が挙げられる。
【１０１０】
図２２Ａ〜２２Ｘは、ＴＬＲアゴニストであるＣＬ２６４、ＣＬ４０１、ＣＬ４１３、ＣＬ４１９、ＣＬ５５３、ＣＬ５７２、Ｐａｍ３ＣＳＫ４、及びＰａｍ２ＣＳＫ４が、そのアジュバント活性を維持しつつ、本発明の免疫複合体に結合できたことを示している。具体的には、リンカーがアジュバントに結合すべき場所に丸を付けている。
【１０１１】
いくつかの実施形態では、アジュバント部分はイミダゾキノリン化合物である。有用なイミダゾキノリン化合物の例として、米国特許第５，３８９，６４０号、同第６，０６９，１４９号、及び同第７，９６８，５６２号に記載されるものが挙げられ、これらの全体は参照することにより本明細書に組み込まれる。
【１０１２】
いくつかの実施形態では、アジュバント（「Ａｄｊ」）は次式のものであり、
【化９８】
2019520352.tif 000099
式中、各Ｊは、独立して、水素、ＯＲ４、又はＲ４であり、各Ｒ４は、独立して、水素、又は、１〜８個（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８個）の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、若しくはヘテロアリールアルキル基であり、Ｑは任意に存在し、１〜８個（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８個）の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、若しくはヘテロアリールアルキル基であり、破線
【化９９】
2019520352.tif 000100
は、アジュバントに結合する点を表す。特定の実施形態では、Ｑは存在する。特定の実施形態では、アジュバント（「Ａｄｊ」）は次式のものであり、
【化１００】
2019520352.tif 000101
式中、各Ｒ４は、独立して、水素、又は、１〜８個（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８個）の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、若しくはヘテロアリールアルキル基からなる群から選択され、破線
【化１０１】
2019520352.tif 000102
は、アジュバントに結合する点を表す。
【１０１３】
いくつかの実施形態では、アジュバント（「Ａｄｊ」）は次式のものであり、
【化１０２】
2019520352.tif 000103
式中、Ｊは、水素、ＯＲ４、又はＲ４であり、各Ｒ４は、独立して、水素、又は、１〜８個（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８個）の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、及びヘテロアリールアルキル基であり、Ｑは、１〜８個（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８個）の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、及びヘテロアリールアルキル基からなる群から選択され、破線
【化１０３】
2019520352.tif 000104
は、アジュバントに結合する点を表す。特定の実施形態では、アジュバント（「Ａｄｊ」）は次式のものであり、
【化１０４】
2019520352.tif 000105
式中、各Ｒ４は、独立して、水素、又は、１〜８個（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８個）の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、若しくはヘテロアリールアルキル基からなる群から選択され、破線
【化１０５】
2019520352.tif 000106
は、アジュバントに結合する点を表す。
【１０１４】
いくつかの実施形態では、アジュバント（「Ａｄｊ」）は次式のものであり、
【化１０６】
2019520352.tif 000107
式中、各Ｒ４は、独立して、水素、又は１から８個（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８個）の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、若しくはヘテロアリールアルキル基であり、Ｑは、１〜８個（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８個の）炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、又はヘテロアリールアルキル基であり、破線
【化１０７】
2019520352.tif 000108
は、アジュバントに結合する点を表す。
【１０１５】
いくつかの実施形態では、アジュバント（「Ａｄｊ」）は次式のものであり、
【化１０８】
2019520352.tif 000109
式中、各Ｊは、独立して、水素、ＯＲ４、又はＲ４であり、各Ｒ４は、独立して、水素、又は１〜８個（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８個）の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、若しくはヘテロアリールアルキル基であり、各Ｕは、独立して、ＣＨ又はＮであり、このとき少なくとも１つのＵがＮであり、各下付き文字ｔは、１〜３の整数（すなわち、１、２、又は３）であり、Ｑは任意に存在し、１から８個（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８個）の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、又はヘテロアリールアルキル基であり、破線
【化１０９】
2019520352.tif 000110
は、アジュバントに結合する点を表す。特定の実施形態では、Ｑは存在する。特定の実施形態では、アジュバント（「Ａｄｊ」）は次式のものであり、
【化１１０】
2019520352.tif 000111
式中、Ｒ４は、水素、又は１から８個（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８個）の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、及びヘテロアリールアルキル基からなる群から選択され、Ｑは、１〜８個（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８個の）炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、又はヘテロアリールアルキル基であり、破線
【化１１１】
2019520352.tif 000112
は、アジュバントに結合する点を表す。
いくつかの実施形態では、アジュバント（「Ａｄｊ」）は次式のものであり、
【化１１２】
2019520352.tif 000113
式中、Ｊは、水素、ＯＲ４、又はＲ４であり、各Ｒ４は、独立して、水素、又は、１〜８個（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８個）の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、若しくはヘテロアリールアルキル基であり、Ｒ５は、水素、又は、１〜１０個（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０個）の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、若しくはヘテロアリールアルキル基であり、Ｑは、１〜８個（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８個）の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、又はヘテロアリールアルキル基であり、破線
【化１１３】
2019520352.tif 000114
は、アジュバントに結合する点を表す。特定の実施形態では、アジュバント（「Ａｄｊ」）は次式のものであり、
【化１１４】
2019520352.tif 000115
式中、Ｊは、水素、ＯＲ４、又はＲ４であり、各Ｒ４は、独立して、水素、又は、１〜８個（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８個）の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、及びヘテロアリールアルキル基からなる群から選択され、Ｕは、ＣＨ又はＮであり、Ｖは、ＣＨ２、Ｏ、又はＮＨであり、各下付き文字ｔは、独立して、１〜３の整数（すなわち、１、２、又は３）であり、破線
【化１１５】
2019520352.tif 000116
は、アジュバントに結合する点を表す。
【１０１６】
いくつかの実施形態では、アジュバント（「Ａｄｊ」）は次式のものであり、
【化１１６】
2019520352.tif 000117
式中、Ｒ１は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから選択され、Ｒ３は、Ｃ１〜６アルキル及び２〜６員ヘテロアルキルから選択され、これらはそれぞれ、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、オキソ（＝Ｏ）、アルキルアミノ、アミド、アシル、ニトロ、シアノ、及びアルコキシからなる群から選択される１つ又は２つ以上のメンバーで任意に置換され、Ｘは、Ｏ及びＣＨ２から選択され、各Ｙは、独立して、ＣＨＲ２であり、このとき、Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、及びＮＨ２から選択され、下付き文字ｎは、１〜１２の整数（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２）であり、破線
【化１１７】
2019520352.tif 000118
は、アジュバントに結合する点を表す。あるいは、Ｒ１、及び結合先である窒素原子は、５〜８員複素環を含む連結部分を形成できる。いくつかの実施形態では、下付き文字ｎは、１〜６（すなわち、１、２、３、４、５、又は６）である。特定の実施形態では、下付き文字ｎは１〜３の整数（すなわち、１、２、又は３）である。
【１０１７】
いくつかの実施形態では、アジュバント（「Ａｄｊ」）は次式のものであり、
【化１１８】
2019520352.tif 000119
式中、Ｗは、Ｏ及びＣＨ２からなる群から選択され、Ｒ１は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから選択され、各Ｙは、独立して、ＣＨＲ２であり、このとき、Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、及びＮＨ２から選択され、下付き文字ｎは、１〜１２の整数（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２）であり、破線
【化１１９】
2019520352.tif 000120
は、アジュバントに結合する点を表す。あるいは、Ｒ１、及び結合先である窒素原子は、５〜８員複素環を含む連結部分を形成できる。いくつかの実施形態では、下付き文字ｎは、１〜６（すなわち、１、２、３、４、５、又は６）である。特定の実施形態では、下付き文字ｎは１〜３の整数（すなわち、１、２、又は３）である。
【１０１８】
いくつかの実施形態では、アジュバント（「Ａｄｊ」）は次式のものであり、
【化１２０】
2019520352.tif 000121
式中、Ｗは、Ｏ及びＣＨ２からなる群から選択され、Ｒ１は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから選択され、各Ｙは、独立して、ＣＨＲ２であり、このとき、Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、及びＮＨ２から選択され、下付き文字ｎは、１〜１２の整数（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２）であり、破線
【化１２１】
2019520352.tif 000122
は、アジュバントに結合する点を表す。あるいは、Ｒ１、及び結合先である窒素原子は、５〜８員複素環を含む連結部分を形成できる。いくつかの実施形態では、下付き文字ｎは、１〜６（すなわち、１、２、３、４、５、又は６）である。特定の実施形態では、下付き文字ｎは１〜３の整数（すなわち、１、２、又は３）である。
【１０１９】
いくつかの実施形態では、アジュバント（「Ａｄｊ」）は次式のものであり、
【化１２２】
2019520352.tif 000123
式中、Ｗは、Ｏ及びＣＨ２からなる群から選択され、Ｘは、Ｏ及びＣＨ２からなる群から選択され、各Ｙは、独立して、ＣＨＲ２であり、このとき、Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、及びＮＨ２から選択され、下付き文字ｎは１〜１２の整数（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２）であり、破線
【化１２３】
2019520352.tif 000124
は、アジュバントに結合する点を表す。いくつかの実施形態では、下付き文字ｎは、１〜６（すなわち、１、２、３、４、５、又は６）である。特定の実施形態では、下付き文字ｎは１〜３の整数（すなわち、１、２、又は３）である。
【１０２０】
いくつかの実施形態では、アジュバント（「Ａｄｊ」）は次式のものであり、
【化１２４】
2019520352.tif 000125
式中、Ｒ１は、Ｈ及びＣ１〜４アルキル基から選択され、Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、及びＮＨ２から選択され、破線
【化１２５】
2019520352.tif 000126
は、アジュバントに結合する点を表す。
【１０２１】
いくつかの実施形態では、アジュバント（「Ａｄｊ」）は次式のものであり、
【化１２６】
2019520352.tif 000127
式中、Ｒ１は、Ｈ及びＣ１〜４アルキル基から選択され、Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、及びＮＨ２から選択され、破線
【化１２７】
2019520352.tif 000128
は、アジュバントに結合する点を表す。
【１０２２】
特定の実施形態では、アジュバント（「Ａｄｊ」）は次のものであり、
【化１２８】
2019520352.tif 000129
【化１２９】
2019520352.tif 000130
式中、破線
【化１３０】
2019520352.tif 000131
は、アジュバントに結合する点を表す。
【１０２３】
いくつかの実施形態では、アジュバントフルオロフォアではない。いくつかの実施形態では、アジュバントは、放射線診断用化合物ではない。いくつかの実施形態では、アジュバントは、放射線治療用化合物ではない。いくつかの実施形態では、アジュバントは、チューブリン阻害剤ではない。いくつかの実施形態では、アジュバントは、ＤＮＡ架橋剤／アルキル化剤ではない。いくつかの実施形態では、アジュバントは、トポイソメラーゼ阻害剤ではない。
抗体
【１０２４】
免疫複合体中の抗体は、同種抗体であってよい。「同種抗体」又は「アロ抗体」は、問題となっている個体（例えば、腫瘍を有し、治療を求めている個体）由来ではなく、同種又は異種由来であるが、異種抗体（例えば、非自己）としての認識を低減、緩和、又は防ぐように遺伝子操作を受けている抗体を指す。例えば、「同種抗体」は、ヒト化抗体であってよい。具体的な記述がない限り、本明細書で使用するとき、「抗体」及び「同種抗体」は、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）又は免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）を指す。
【１０２５】
ヒトの個体の癌細胞が同一のヒトによって生成されなかった抗体（例えば、抗体が第２のヒト個体によって生成された、抗体がマウスなどの他の種によって生成された、抗体が他の種によって生成されたヒト化抗体であるなど）と接触する場合、抗体は、（第１の個体に対して）同種と見なす。ヒト抗原（例えば、癌特異的抗原、癌細胞内又は／及び癌細胞上で濃縮される抗原など）を認識するヒト化マウスモノクローナル抗体は、「アロ抗体」（同種抗体）であると考えられる。
【１０２６】
いくつかの実施形態では、抗体は、ポリクローナル同種ＩｇＧ抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、複数の結合特異性を有するポリクローナルＩｇＧ抗体の混合物中に存在する。いくつかの場合において、この混合物の抗体は、異なる標的分子に特異的に結合し、いくつかの場合において、この混合物の抗体は、同じ標的分子の異なるエピトープに特異的に結合する。これにより、いくつかの場合において、抗体の混合物は、２種類以上の本発明の免疫複合体を含んでよい（例えば、アジュバント部分が抗体混合物（例えば、ポリクローナルＩｇＧ抗体の混合物）に共有結合できることで、本発明の抗体アジュバント複合体の混合物が得られる）。抗体混合物を、２以上の個体（例えば、３以上の個体、４個体、５以上の個体、６以上の個体、７以上の個体、８以上の個体、９以上の個体、１０以上の個体など）からプールしてよい。いくつかの場合において、プールした血清をアロ抗体の原料として使用し、このとき血清は、いずれも第１の個体ではない任意の数の個体由来であってよい（例えば、血清を、２以上の個体、３以上の個体、４以上の個体、５以上の個体、６以上の個体、７以上の個体、８以上の個体、９以上の個体、１０以上の個体などからプールできる）。いくつかの場合において、抗体は使用前に血清から単離又は精製される。精製は、異なる個体から抗体をプールする前又は後に実施できる。
【１０２７】
免疫複合体中の抗体が血清由来のＩｇＧを含むいくつかの場合において、一部（例えば、０％超であるが５０％未満）、半分、大部分（５０％超であるが１００％未満）、又は更には全ての抗体（すなわち、血清由来ＩｇＧ）の標的抗原は未知であろう。しかし、このような混合物は、広範な標的抗原に対して特異的な広範な抗体を含むため、混合物中の少なくとも１つの抗体が目的とする標的抗原を認識する可能性は高い。
【１０２８】
いくつかの実施形態では、抗体は、ポリクローナル同種ＩｇＡ抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、複数の結合特異性を有するポリクローナルＩｇＡ抗体の混合物中に存在する。いくつかの場合において、この混合物の抗体は、異なる標的分子に特異的に結合し、いくつかの場合において、この混合物の抗体は、同じ標的分子の異なるエピトープに特異的に結合する。これにより、いくつかの場合において、抗体の混合物は、２種類以上の本発明の免疫複合体を含んでよい（例えば、アジュバント部分が抗体混合物（例えば、ポリクローナルＩｇＡ抗体の混合物）に共有結合できることで、本発明の抗体アジュバント複合体の混合物が得られる）。抗体混合物を、２以上の個体（例えば、３以上の個体、４個体、５以上の個体、６以上の個体、７以上の個体、８以上の個体、９以上の個体、１０以上の個体など）からプールしてよい。いくつかの場合において、プールした血清をアロ抗体の原料として使用し、このとき血清は、いずれも第１の個体ではない任意の数の個体由来であってよい（例えば、血清を、２以上の個体、３以上の個体、４以上の個体、５以上の個体、６以上の個体、７以上の個体、８以上の個体、９以上の個体、１０以上の個体などからプールできる）。いくつかの場合において、抗体は使用前に血清から単離又は精製される。精製は、異なる個体から抗体をプールする前又は後に実施できる。
【１０２９】
免疫複合体中の抗体が血清由来のＩｇＡを含むいくつかの場合において、一部（例えば、０％超であるが５０％未満）、半分、大部分（５０％超であるが１００％未満）、又は更には全ての抗体（すなわち、血清由来ＩｇＡ）の標的抗原は未知であろう。しかし、このような混合物は、広範な標的抗原に対して特異的な広範な抗体を含むため、混合物中の少なくとも１つの抗体が目的とする標的抗原を認識する可能性は高い。
【１０３０】
いくつかの場合において、免疫複合体中の抗体は、静注用免疫グロブリン（ＩＶＩＧ）及び／又はＩＶＩＧ由来（例えば、濃縮、精製、例えば、親和性精製）の抗体を含む。ＩＶＩＧは、血漿（例えば、いくつかの場合において、その他タンパク質をいずれも含まない）からプールされ、その血漿は多数（例えば、１，０００〜６０，０００の場合がある）正常かつ健康な給血者由来であるＩｇＧ（免疫グロブリンＧ）を含む血液製剤である。ＩＶＩＧは市販されている。ＩＶＩＧは、天然のヒトモノマーＩＶＩＧを高い割合で含み、ＩｇＡ含量が低い。静脈内投与されると、ＩＶＩＧはいくつかの疾患状態を改善する。このため、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）は、（１）川崎病、（２）免疫媒介性血小板減少症、（３）原発性免疫不全症、（４）造血幹細胞移植（２０歳以上のものに対する）、（５）慢性Ｂ細胞リンパ性白血病、及び（６）小児ＨＩＶタイプ１感染などの多くの疾患に対して、ＩＶＩＧの使用を承認している。２００４年には、ＦＤＡは、腎移植患者に対して、血液型（ＡＢＯ不適合）又は組織適合性に関わらず、このような移植患者があらゆる健康なドナーから生体ドナーの腎臓を受け入れられるように、Ｃｅｄａｒｓ−Ｓｉｎａｉ  ＩＶＩＧ法を承認した。これら及びＩＶＩＧの他の太陽は、例えば、米国特許出願公開第２０１０／０１５０９４２号、同第２００４／０１０１９０９号、同第２０１３／０１７７５７４号、同第２０１３／０１０８６１９号、及び同第２０１３／００１１３８８号に記載されており、これらの全体は参照することにより本明細書に組み込まれる。
【１０３１】
いくつかの場合において、抗体は、定義されたサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、又はＩｇＡ２）のモノクローナル抗体である。抗体の組み合わせが使用される場合、抗体は同じサブクラス又は異なるサブクラス由来であってよい。例えば、抗体は、ＩｇＧ１抗体であってよい。異なるサブクラスを異なる相対的割合で含む様々な組み合わせを、当業者によって得ることができる。いくつかの場合において、特定のサブクラス、又は異なるサブクラスの特定の組み合わせは、癌治療又は腫瘍サイズの縮小において特に有効である場合がある。これにより、本発明のいくつかの実施形態は、抗体がモノクローナル抗体である、免疫複合体を提供する。いくつかの実施形態では、モノクローナル抗体はヒト化されている。
【１０３２】
いくつかの実施形態では、抗体は、癌細胞の抗原に結合する。例えば、抗体は、がん細胞の表面上に、少なくとも１０、１００、１，０００、１０，０００、１００，０００、１，０００，０００、２．５×１０６、５×１０６、又は１×１０７コピー以上の量で存在する、標的抗原に結合できる。
【１０３３】
いくつかの実施形態では、抗体は、非癌細胞上の対応する抗原よりも、癌又は免疫細胞上の抗原に高い親和性で結合する。例えば、抗体は、非癌又は非免疫細胞上の対応する野生型抗原の認識と比較して、癌又は免疫細胞上にある多型を含む抗原を優先的に認識できる。いくつかの場合において、抗体は、非癌又は非免疫細胞よりも高い結合活性で癌又は免疫細胞に結合する。例えば、癌又は免疫細胞は、より高い密度で抗原を発現できるため、癌又は免疫細胞への多価抗体のより高い親和性をもたらす。
【１０３４】
いくつかの場合において、抗体は、非癌抗原にあまり結合しない（例えば、抗体は、標的とする癌抗原よりも、１つ又は２つ以上の非癌抗原に、少なくとも１０、１００、１，０００、１０，０００、１００，０００、又は１，０００，０００倍低い親和性（高いＫｄ）で結合する）。いくつかの場合において、抗体が結合する標的癌抗原は、癌細胞上で濃縮されている。例えば、標的癌抗原は、癌細胞の表面上に、対応する非癌細胞よりも、少なくとも２、５、１０、１００、１，０００、１０，０００、１００，０００、又は１，０００，０００倍高いレベルで存在し得る。いくつかの場合において、対応する非癌細胞は、過剰増殖していない、つまり癌性ではない同一の組織又は原料の細胞である。一般に、癌細胞の抗原（標的抗原）に特異的に結合する被検体ＩｇＧ抗体は、他に存在する抗原に対して特定の抗原に優先的に結合する。しかし、標的抗原は、癌細胞に特異的である必要はなく、他の細胞に対して癌細胞中で濃縮されている（例えば、標的抗原は、他の細胞によって発現できる）。したがって、「癌細胞の抗原に特異的に結合する抗体」という語句中の用語「特異的」とは、特定の細胞種における抗原の特異性ではなく、抗体の特異性を指す。
【１０３５】
修飾Ｆｃ領域
【１０３６】
いくつかの実施形態では、免疫複合体中の抗体は、修飾されたＦｃ領域を含み、この修飾により、Ｆｃ領域の１つ又は２つ以上のＦｃ受容体への結合が調節される。
【１０３７】
用語「Ｆｃ受容体」又は「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を指す。ＩｇＧに結合するＦｃγＲ、ＩｇＡに結合するＦｃαＲ、及びＩｇＥに結合するＦｃεＲと、３つの主なクラスのＦｃ受容体がある。ＦｃγＲファミリーは、ＦｃγＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６Ａ）、ＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６Ｂ）などのいくつかのメンバーを含む。Ｆｃγ受容体は、ＩｇＧに対する親和性が異なり、ＩｇＧサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）に対する異なる親和性も有する。
【１０３８】
いくつかの実施形態では、免疫複合体中の抗体（例えば、ＴＬＲ７／８アゴニストなどのＴＬＲアゴニストにリンカーを介して結合された抗体）は、Ｆｃ領域中に１つ又は２つ以上の修飾を含み（例えば、アミノ酸挿入、欠失、及び／又は置換）、その結果、Ｆｃ領域内に突然変異がない天然の抗体と比較して結合が調節され（例えば、結合の増加又は結合の減少）るが、この結合は１つ又は２つ以上のＦｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）、及び／又はＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ））に対するものである。いくつかの実施形態では、免疫複合体中の抗体は、ＦｃγＲＩＩＢに対する抗体のＦｃ領域の結合を減少させる、Ｆｃ領域における１つ又は２つ以上の修飾（例えば、アミノ酸挿入、欠失及び／又は置換）を含む。いくつかの実施形態では、免疫複合体中の抗体は、ＦｃγＲＩＩＢに対する抗体の結合を減少させる、抗体のＦｃ領域における１つ又は２つ以上の修飾（例えば、アミノ酸挿入、欠失及び／又は置換）を含む一方で、Ｆｃ領域内に突然変異がない天然の抗体と比較して、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）、及び／又はＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）への結合を同程度に維持する、又は、結合を増加させる。いくつかの実施形態では、免疫複合体中の抗体は、ＦｃγＲＩＩＢに対する抗体のＦｃ領域の結合を増加させる、Ｆｃ領域における１つ又は２つ以上の修飾を含む。
【１０３９】
いくつかの場合において、抗体の天然のＦｃ領域に対して、抗体のＦｃ領域中の変異によって結合の調製がもたらされる。この変異は、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、又はこれらの組み合わせ中であってよい。「天然のＦｃ領域」は「野生型Ｆｃ領域」と同義であり、天然に存在するＦｃ領域のアミノ酸配列と同一、又は、天然に抗体（例えば、リツキシマブ）にあるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。天然配列のヒトＦｃ領域として、天然配列のヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域、天然配列のヒトＩｇＧ２Ｆｃ領域、天然配列のヒトＩｇＧ３Ｆｃ領域、及び天然配列のヒトＩｇＧ４Ｆｃ領域、並びに、その自然発生変異体が挙げられる。天然配列のＦｃは、様々なアロタイプのＦｃを含む（例えば、Ｊｅｆｆｅｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，ｍＡｂｓ，１（４）：３３２〜３３８（２００９））。
【１０４０】
いくつかの実施形態では、結果として１つ又は２つ以上のＦｃ受容体への結合調節するＦｃ領域における変異として、次の変異のうち１つ又は２つ以上が挙げられる。ＳＤ（Ｓ２３９Ｄ）、ＳＤＩＥ（Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ）、ＳＥ（Ｓ２６７Ｅ）、ＳＥＬＦ（Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ）、ＳＤＩＥ（Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ）、ＳＤＩＥＡＬ（Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｌ）、ＧＡ（Ｇ２３６Ａ）、ＡＬＩＥ（Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、ＧＡＳＤＡＬＩＥ（Ｇ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、Ｖ９（Ｇ２３７Ｄ／Ｐ２３８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ）、及びＶ１１（Ｇ２３７Ｄ／Ｐ２３８Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ）、並びに／又は、Ｅ２３３、Ｇ２３７、Ｐ２３８、Ｈ２６８、Ｐ２７１、Ｌ３２８及びＡ３３０のアミノ酸の位置での１つ又は２つ以上の変異。Ｆｃ受容体結合を調節するための更なるＦｃ領域の変異が、例えば、米国特許出願公開第２０１６／０１４５３５０号、米国特許第７，４１６，７２６号、及び同第５，６２４，８２１号に記載されている。
【１０４１】
いくつかの実施形態では、免疫複合体の抗体のＦｃ領域を修飾し、天然の非修飾Ｆｃ領域と比較して、Ｆｃ領域のグリコシル化パターンを変更する。
【１０４２】
ヒト免疫グロブリンは、Ａｓｎ２９７残基（各重鎖のＣγ２ドメイン中）においてグリコシル化される。このＮ−架橋オリゴサッカライドは、コアであるヘプタサッカライド、Ｎ−アセチルグルコサミン４マンノース３（ＧｌｃＮＡｃ４Ｍａｎ３）からなる。エンドグリコシダーゼ又はＰＮＧａｓｅ  Ｆによるヘプタサッカライドの除去は既知であり、抗体のＦｃ領域内に立体構造変化をもたらして、活性化ＦｃγＲへの抗体結合親和性を顕著に減少させて、エフェクター機能の低下をもたらし得る。コアであるヘプタサッカライドは、ガラクトース、二分するＧｌｃＮＡｃ、フコース又はシアル酸で修飾されていることが多く、このことが、活性化及び阻害性ＦｃγＲへのＦｃ結合に異なる影響を与える。また、α２，６−シアリル化は、ｉｎ  ｖｉｖｏでの抗炎症性活性の改善が証明されており、一方、脱フコシル化は、ＦｃγＲＩＩＩａ結合が向上し、抗体依存性細胞傷害及び抗体依存性食作用が１０倍増加させる。したがって、特定のグリコシル化パターンは、炎症性エフェクター機能を制御するために使用することができる。
【１０４３】
いくつかの実施形態では、グリコシル化パターンを変更する修飾は、変異である。例えば、Ａｓｎ２９７での置換である。いくつかの実施形態では、Ａｓｎ２９７をグルタミンに変異させる（Ｎ２９７Ｑ）。ＦｃγＲ調節性シグナル伝達を改変する抗体による免疫応答を制御する方法は、例えば、米国特許第７，４１６，７２６号、並びに、米国特許出願公開第２００７／００１４７９５号及び同第２００８／０２８６８１９号に記載されている。
【１０４４】
いくつかの実施形態では、免疫複合体の抗体を、天然に存在しないグリコシル化パターンを有する遺伝子操作を受けたＦａｂ領域を含むように修飾する。例えば、ハイブリドーマの遺伝子組み換えを行い、ＦｃＲγＩＩＩａ結合及びエフェクター機能の増大が可能な特定の変異を有する、非フコシル化ｍＡｂ、脱シアリル化ｍＡｂ、又は脱グリコシル化Ｆｃを分泌できる。いくつかの実施形態では、免疫複合体の抗体を遺伝子操作し、非フコシル化する（例えば、非フコシル化リツキシマブ、Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎから入手可能、ｈｃｄ２０−ｍａｂ１３）。
【１０４５】
いくつかの実施形態では、免疫複合体中の抗体のＦｃ領域全体を、異なるＦｃ領域と交換し、抗体のＦａｂ領域を非天然Ｆｃ領域に結合する。例えば、通常はＩｇＧ１  Ｆｃ領域を含むリツキシマブのＦａｂ領域を、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、若しくはＩｇＡに結合し、又は、通常はＩｇＧ４  Ｆｃ領域を含むニボルマブのＦａｂ領域を、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＡ１、若しくはＩｇＡＧ２に結合できる。いくつかの実施形態では、非天然Ｆｃドメインを有するＦｃ修飾抗体は、１つ又は２つ以上のアミノ酸修飾、例えば、記載されるＦｃドメインの安定性を調節する、Ｓ２２８Ｐ変異（ＩｇＧ４  Ｆｃ内）も含む。いくつかの実施形態では、非天然Ｆｃドメインを有するＦｃ修飾抗体は、ＦｃＲへのＦｃの結合を調節する本明細書に記載される１つ又は２つ以上のアミノ酸修飾も含む。
【１０４６】
いくつかの実施形態では、ＦｃＲへのＦｃ領域の結合を調節する修飾は、天然の非修飾抗体と比較するとき、抗体のＦａｂ領域の抗体に対する結合を変化させない。別の実施形態では、ＦｃＲへのＦｃ領域の結合を調節する修飾は、天然の非修飾抗体と比較するとき、抗体のＦａｂ領域の抗体に対する結合も向上する。
【１０４７】
抗体の標的
【１０４８】
いくつかの実施形態では、抗体は、５Ｔ４、ＡＢＬ、ＡＢＣＦ１、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ１Ｂ、ＡＣＶＲ２、ＡＣＶＲ２Ｂ、ＡＣＶＲＬ１、ＡＤＯＲＡ２Ａ、アグリカン、ＡＧＲ２、ＡＩＣＤＡ、ＡＩＦ１、ＡＩＧＩ、ＡＫＡＰ１、ＡＫＡＰ２、ＡＭＨ、ＡＭＨＲ２、ＡＮＧＰＴ１、ＡＮＧＰＴ２、ＡＮＧＰＴＬ３、ＡＮＧＰＴＬ４、ＡＮＰＥＰ、ＡＰＣ、ＡＰＯＣｌ、ＡＲ、アロマターゼ、ＡＴＸ、ＡＸ１、ＡＺＧＰ１（亜鉛−ａ−グリコプロテイン）、Ｂ７．１、Ｂ７．２、Ｂ７−Ｈ１、ＢＡＤ、ＢＡＦＦ、ＢＡＧ１、ＢＡＩ１、ＢＣＲ、ＢＣＬ２、ＢＣＬ６、ＢＤＮＦ、ＢＬＮＫ、ＢＬＲ１（ＭＤＲ１５）、ＢＩｙＳ、ＢＭＰ１、ＢＭＰ２、ＢＭＰ３Ｂ（ＧＤＦＩＯ）、ＢＭＰ４、ＢＭＰ６、ＢＭＰ８、ＢＭＰＲ１Ａ、ＢＭＰＲ１Ｂ、ＢＭＰＲ２、ＢＰＡＧ１（プレクチン）、ＢＲＣＡ１、Ｃ１９ｏｒｆｌＯ（ＩＬ２７ｗ）、Ｃ３、Ｃ４Ａ、Ｃ５、Ｃ５Ｒ１、ＣＡＮＴ１、ＣＡＰＲＩＮ−１、ＣＡＳＰ１、ＣＡＳＰ４、ＣＡＶ１、ＣＣＢＰ２（Ｄ６／ＪＡＢ６１）、ＣＣＬ１（１−３０９）、ＣＣＬＩ１（エオタキシン）、ＣＣＬ１３（ＭＣＰ−４）、ＣＣＬ１５（ＭＩＰ−Ｉｄ）、ＣＣＬ１６（ＨＣＣ−４）、ＣＣＬ１７（ＴＡＲＣ）、ＣＣＬ１８（ＰＡＲＣ）、ＣＣＬ１９（ＭＩＰ−３ｂ）、ＣＣＬ２（ＭＣＰ−１）、ＭＣＡＦ、ＣＣＬ２０（ＭＩＰ−３ａ）、ＣＣＬ２１（ＭＥＰ−２）、ＳＬＣ、ｅｘｏｄｕｓ−２、ＣＣＬ２２（ＭＤＣ／ＳＴＣ−Ｉ）、ＣＣＬ２３（ＭＰＩＦ−Ｉ）、ＣＣＬ２４（ＭＰＩＦ−２／エオタキシン−２）、ＣＣＬ２５（ＴＥＣＫ）、ＣＣＬ２６（エオタキシン−３）、ＣＣＬ２７（ＣＴＡＣＫ／ＩＬＣ）、ＣＣＬ２８、ＣＣＬ３（ＭＩＰ−Ｉａ）、ＣＣＬ４（ＭＩＰＩｂ）、ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）、ＣＣＬ７（ＭＣＰ−３）、ＣＣＬ８（ｍｃｐ−２）、ＣＣＮＡ１、ＣＣＮＡ２、ＣＣＮＤ１、ＣＣＮＥ１、ＣＣＮＥ２、ＣＣＲ１（ＣＫＲ１／ＨＭ１４５）、ＣＣＲ２（ｍｃｐ−ＩＲＢ／ＲＡ）、ＣＣＲ３（ＣＫＲ３／ＣＭＫＢＲ３）、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５（ＣＭＫＢＲ５／ＣｈｅｍＲ１３）、ＣＣＲ６（ＣＭＫＢＲ６／ＣＫＲ−Ｌ３／ＳＴＲＬ２２／ＤＲＹ６）、ＣＣＲ７（ＣＫＲ７／ＥＢＩ１）、ＣＣＲ８（ＣＭＫＢＲ８／ＴＥＲＩ／ＣＫＲ−Ｌ１）、ＣＣＲ９（ＧＰＲ−９−６）、ＣＣＲＬ１（ＶＳＨＫ１）、ＣＣＲＬ２（Ｌ−ＣＣＲ）、ＣＤ１６４、ＣＤ１９、ＣＤＩＣ、ＣＤ２、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２００、ＣＤ−２２、ＣＤ２４、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ３３、ＣＤ３５、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ３Ｅ、ＣＤ３Ｇ、ＣＤ３Ｚ、ＣＤ４、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４４、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ４７、ＣＤ５２、ＣＤ６９、ＣＤ７２、ＣＤ７４、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ８、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８３、ＣＤ８６、ＣＤ１３７、ＣＤ１５２、ＣＤ２７４、ＣＤＨ１（Ｅカドヘリン）、ＣＤＨ１Ｏ、ＣＤＨ１２、ＣＤＨ１３、ＣＤＨ１８、ＣＤＨ１９、ＣＤＨ２Ｏ、ＣＤＨ５、ＣＤＨ７、ＣＤＨ８、ＣＤＨ９、ＣＤＫ２、ＣＤＫ３、ＣＤＫ４、ＣＤＫ５、ＣＤＫ６、ＣＤＫ７、ＣＤＫ９、ＣＤＫＮ１Ａ（ｐ２１Ｗａｐ１／Ｃｉｐ１）、ＣＤＫＮ１Ｂ（ｐ２７Ｋｉｐ１）、ＣＤＫＮ１Ｃ、ＣＤＫＮ２Ａ（ｐ１６ＩＮＫ４ａ）、ＣＤＫＮ２Ｂ、ＣＤＫＮ２Ｃ、ＣＤＫＮ３、ＣＥＢＰＢ、ＣＥＲＩ、ＣＨＧＡ、ＣＨＧＢ、キチナーゼ、ＣＨＳＴ１Ｏ、ＣＫＬＦＳＦ２、ＣＫＬＦＳＦ３、ＣＫＬＦＳＦ４、ＣＫＬＦＳＦ５、ＣＫＬＦＳＦ６、ＣＫＬＦＳＦ７、ＣＫＬＦＳＦ８、ＣＬＤＮ３、ＣＬＤＮ７（クローディン−７）、ＣＬＮ３、ＣＬＵ（クラスタリン）、ＣＭＫＬＲ１、ＣＭＫＯＲ１（ＲＤＣ１）、ＣＮＲ１、ＣＯＬ１８Ａ１、ＣＯＬＩＡ１、ＣＯＬ４Ａ３、ＣＯＬ６Ａ１、ＣＲ２、Ｃｒｉｐｔｏ、ＣＲＰ、ＣＳＦ１（Ｍ−ＣＳＦ）、ＣＳＦ２（ＧＭ−ＣＳＦ）、ＣＳＦ３（ＧＣＳＦ）、ＣＴＬ８、ＣＴＮＮＢ１（ｂ−ｃａｔｅｎｉｎ）、ＣＴＳＢ（カテプシンＢ）、ＣＸ３ＣＬ１（ＳＣＹＤ１）、ＣＸ３ＣＲ１（Ｖ２８）、ＣＸＣＬ１（ＧＲＯ１）、ＣＸＣＬ１Ｏ（ＩＰ−ＩＯ）、ＣＸＣＬＩ１（１−ＴＡＣ／ＩＰ−９）、ＣＸＣＬ１２（ＳＤＦ１）、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＬ２（ＧＲＯ２）、ＣＸＣＬ３（ＧＲＯ３）、ＣＸＣＬ５（ＥＮＡ−７８／ＬＩＸ）、ＣＸＣＬ６（ＧＣＰ−２）、ＣＸＣＬ９（ＭＩＧ）、ＣＸＣＲ３（ＧＰＲ９／ＣＫＲ−Ｌ２）、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ６（ＴＹＭＳＴＲ／ＳＴＲＬ３３／Ｂｏｎｚｏ）、ＣＹＢ５、ＣＹＣ１、ＣＹＳＬＴＲ１、ＤＡＢ２ＩＰ、ＤＥＳ、ＤＫＦＺｐ４５１Ｊ０１１８、ＤＮＣＬ１、ＤＰＰ４、Ｅ２Ｆ１、Ｅｎｇｅｌ、Ｅｄｇｅ、Ｆｅｎｎｅｌ、ＥＦＮＡ３、ＥＦＮＢ２、ＥＧＦ、ＥＧＦＲ、ＥＬＡＣ２、ＥＮＧ、Ｅｎｏｌａ、ＥＮＯ２、ＥＮＯ３、ＥＰＨＡ１、ＥＰＨＡ２、ＥＰＨＡ３、ＥＰＨＡ４、ＥＰＨＡ５、ＥＰＨＡ６、ＥＰＨＡ７、ＥＰＨＡ８、ＥＰＨＡ９、ＥＰＨＡ１０、ＥＰＨＢ１、ＥＰＨＢ２、ＥＰＨＢ３、ＥＰＨＢ４、ＥＰＨＢ５、ＥＰＨＢ６、ＥＰＨＲＩＮ−Ａ１、ＥＰＨＲＩＮ−Ａ２、ＥＰＨＲＩＮＡ３、ＥＰＨＲＩＮ−Ａ４、ＥＰＨＲＩＮ−Ａ５、ＥＰＨＲＩＮ−Ａ６、ＥＰＨＲＩＮ−Ｂ１、ＥＰＨＲＩＮ−Ｂ２、ＥＰＨＲＩＮ−Ｂ３、ＥＰＨＢ４、ＥＰＧ、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ−２）、ＥＲＥＧ、ＥＲＫ８、エストロゲン受容体、Ｅａｒｌ、ＥＳＲ２、Ｆ３（ＴＦ）、ＦＡＤＤ、ファルネシルトランスフェラーゼ、ＦａｓＬ、ＦＡＳＮｆ、ＦＣＥＲ１Ａ、ＦＣＥＲ２、ＦＣＧＲ３Ａ、ＦＧＦ、ＦＧＦ１（ａＦＧＦ）、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１  １、ＦＧＦ１２、ＦＧＦ１２Ｂ、ＦＧＦ１３、ＦＧＦ１４、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２（ｂＦＧＦ）、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２２、ＦＧＦ２３、ＦＧＦ３（ｉｎｔ−２）、ＦＧＦ４（ＨＳＴ）、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６（ＨＳＴ−２）、ＦＧＦ７（ＫＧＦ）、ＦＧＦ８、ＦＧＦ９、ＦＧＦＲ３、ＦＩＧＦ（ＶＥＧＦＤ）、ＦＩＬ１（ＥＰＳＩＬＯＮ）、ＦＢＬ１（ＺＥＴＡ）、ＦＬＪ１２５８４、ＦＬＪ２５５３０、ＦＬＲＴ１（フィブロネクチン）、ＦＬＴ１、ＦＬＴ−３、ＦＯＳ、ＦＯＳＬ１（ＦＲＡ−１）、ＦＹ（ＤＡＲＣ）、ＧＡＢＲＰ（ＧＡＢＡａ）、ＧＡＧＥＢ１、ＧＡＧＥＣ１、ＧＡＬＮＡＣ４Ｓ−６ＳＴ、ＧＡＴＡ３、ＧＤ２、ＧＤＦ５、ＧＦＩ１、ＧＧＴ１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＧＮＡＳ１、ＧＮＲＨ１、ＧＰＲ２（ＣＣＲ１０）、ＧＰＲ３１、ＧＰＲ４４、ＧＰＲ８１（ＦＫＳＧ８０）、ＧＲＣＣ１Ｏ（Ｃ１Ｏ）、ＧＲＰ、ＧＳＮ（ゲルゾリン）、ＧＳＴ���１、ＨＡＶＣＲ２、ＨＤＡＣ、ＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣ５、ＨＤＡＣ７Ａ、ＨＤＡＣ９、ヘッジホッグ、ＨＧＦ、ＨＩＦ１Ａ、ＨＩＰ１、ヒスタミン及びヒスタミン受容体、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−ＤＲＡ、ＨＬＡ−Ｅ、ＨＭ７４、ＨＭＯＸＩ、ＨＳＰ９０、ＨＵＭＣＹＴ２Ａ、ＩＣＥＢＥＲＧ、ＩＣＯＳＬ、ＩＤ２、ＩＦＮ−ａ、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＡ２、ＩＦＮＡ４、ＩＦＮＡ５、ＥＦＮＡ６、ＢＦＮＡ７、ＩＦＮＢ１、ＩＦＮγ、ＩＦＮＷ１、ＩＧＢＰ１、ＩＧＦ１、ＩＧＦＩＲ、ＩＧＦ２、ＩＧＦＢＰ２、ＩＧＦＢＰ３、ＩＧＦＢＰ６、ＤＬ−１、ＩＬＩＯ、ＩＬＩＯＲＡ、ＩＬＩＯＲＢ、ＩＬ−１、ＩＬ１Ｒ１（ＣＤ１２１ａ）、ＩＬ１Ｒ２（ＣＤ１２１ｂ）、ＩＬ−ＩＲＡ、ＩＬ−２、ＩＬ２ＲＡ（ＣＤ２５）、ＩＬ２ＲＢ（ＣＤ１２２）、ＩＬ２ＲＧ（ＣＤ１３２）、ＩＬ−４、ＩＬ−４Ｒ（ＣＤ１２３）、ＩＬ−５、ＩＬ５ＲＡ（ＣＤ１２５）、ＩＬ３ＲＢ（ＣＤ１３１）、ＩＬ−６、ＩＬ６ＲＡ、（ＣＤ１２６）、ＩＲ６ＲＢ（ＣＤ１３０）、ＩＬ−７、ＩＬ７ＲＡ（ＣＤ１２７）、ＩＬ−８、ＣＸＣＲ１（ＩＬ８ＲＡ）、ＣＸＣＲ２、（ＩＬ８ＲＢ／ＣＤ１２８）、ＩＬ−９、ＩＬ９Ｒ（ＣＤ１２９）、ＩＬ−１０、ＩＬ１０ＲＡ（ＣＤ２１０）、ＩＬ１０ＲＢ（ＣＤＷ２１０Ｂ）、ＩＬ−１１、ＩＬ１１ＲＡ、ＩＬ−１２、ＩＬ−１２Ａ、ＩＬ−１２Ｂ、ＩＬ−１２ＲＢ１、ＩＬ−１２ＲＢ２、ＩＬ−１３、ＩＬ１３ＲＡ１、ＩＬ１３ＲＡ２、ＩＬ１４、ＩＬ１５、ＩＬ１５ＲＡ、ＩＬ１６、ＩＬ１７、ＩＬ１７Ａ、ＩＬ１７Ｂ、ＩＬ１７Ｃ、ＩＬ１７Ｒ、ＩＬ１８、ＩＬ１８ＢＰ、ＩＬ１８Ｒ１、ＩＬ１８ＲＡＰ、ＩＬ１９、ＩＬＩＡ、ＩＬＩＢ、ＩＬＩＦ１０、ＩＬＩＦ５、ＩＬ１Ｆ６、ＩＬＩＦ７、ＩＬ１Ｆ８、ＤＬ１Ｆ９、ＩＬＩＨＹＩ、ＩＬＩＲ１、ＩＬ１Ｒ２、ＩＬＩＲＡＰ、ＩＬＩＲＡＰＬＩ、ＩＬＩＲＡＰＬ２、ＩＬＩＲＬ１、ＩＬ１ＲＬ２、ＩＬＩＲＮ、ＩＬ２、ＩＬ２０、ＩＬ２０ＲＡ、ＩＬ２１Ｒ、ＩＬ２２、ＩＬ２２Ｒ、ＩＬ２２ＲＡ２、ＩＬ２３、ＤＬ２４、ＩＬ２５、ＩＬ２６、ＩＬ２７、ＩＬ２８Ａ、ＩＬ２８Ｂ、ＩＬ２９、ＩＬ２ＲＡ、ＩＬ２ＲＢ、ＩＬ２ＲＧ、ＩＬ３、ＩＬ３０、ＩＬ３ＲＡ、ＩＬ４、１Ｌ４、ＩＬ６ＳＴ（グリコプロテイン１３０）、ＩＬＫ、ＩＮＨＡ、ＩＮＨＢＡ、ＩＮＳＬ３、ＩＮＳＬ４、ＩＲＡＫ１、ＩＲＡＫ２、ＩＴＧＡ１、ＩＴＧＡ２、ＩＴＧＡ３、ＩＴＧＡ６（α６  インテグリン）、ＩＴＧＡＶ、ＩＴＧＢ３、ＩＴＧＢ４（β４  インテグリン）、ＪＡＧ１、ＪＡＫ１、ＪＡＫ３、ＪＴＢ、ＪＵＮ、Ｋ６ＨＦ、ＫＡＩ１、ＫＤＲ、ＫＩＴＬＧ、ＫＬＦ５（ＧＣ  Ｂｏｘ  ＢＰ）、ＫＬＦ６、ＫＬＫ１０、ＫＬＫ１２、ＫＬＫ１３、ＫＬＫ１４、ＫＬＫ１５、ＫＬＫ３、ＫＬＫ４、ＫＬＫ５、ＫＬＫ６、ＫＬＫ９、ＫＲＴ１、ＫＲＴ１９（Ｋｅｒａｔｉｎ  １９）、ＫＲＴ２Ａ、ＫＲＴＨＢ６（毛髪特異性ＩＩ型ケラチン）、ＬＡＭＡ５、ＬＥＰ（レプチン）、Ｌｉｎｇｏ−ｐ７５、Ｌｉｎｇｏ−Ｔｒｏｙ、ＬＰＳ、ＬＴＡ（ＴＮＦ−ｂ）、ＬＴＢ、ＬＴＢ４Ｒ（ＧＰＲ１６）、ＬＴＢ４Ｒ２、ＬＴＢＲ、ＭＡＣＭＡＲＣＫＳ、ＭＡＧ  ｏｒ  ＯＭｇｐ、ＭＡＰ２Ｋ７（ｃ−Ｊｕｎ）、ＭＣＰ−１、ＭＤＫ、ＭＩＢ１、ミッドカイン、ＭＩＦ、ＭＩ��ＲＩＩ、ＭＪＰ−２、ＭＫ、ＭＫＩ６７（Ｋｉ−６７）、ＭＭＰ２、ＭＭＰ９、ＭＳ４Ａ１、ＭＳＭＢ、ＭＴ３（メタロチオネクチン−ＵＩ）、ｍＴＯＲ、ＭＴＳＳ１、ＭＵＣ１（ムチン）、ＭＹＣ、ＭＹＤ８８、ＮＣＫ２、ニューロカン、ＮＦＫＢＩ、ＮＦＫＢ２、ＮＧＦＢ（ＮＧＦ）、ＮＧＦＲ、ＮｇＲ−Ｌｉｎｇｏ、ＮｇＲＮｏｇｏ６６、（Ｎｏｇｏ）、ＮｇＲ−ｐ７５、ＮｇＲ−Ｔｒｏｙ、ＮＭＥＩ（ＮＭ２３Ａ）、ＮＯＴＣＨ、ＮＯＴＣＨ１、ＮＯＸ５、ＮＰＰＢ、ＮＲＯＢ１、ＮＲＯＢ２、ＮＲＩＤ１、ＮＲ１Ｄ２、ＮＲ１Ｈ２、ＮＲ１Ｈ３、ＮＲ１Ｈ４、ＮＲ１１２、ＮＲ１１３、ＮＲ２Ｃ１、ＮＲ２Ｃ２、ＮＲ２Ｅ１、ＮＲ２Ｅ３、ＮＲ２Ｆ１、ＮＲ２Ｆ２、ＮＲ２Ｆ６、ＮＲ３Ｃ１、ＮＲ３Ｃ２、ＮＲ４Ａ１、ＮＲ４Ａ２、ＮＲ４Ａ３、ＮＲ５Ａ１、ＮＲ５Ａ２、ＮＲ６Ａ１、ＮＲＰ１、ＮＲＰ２、ＮＴ５Ｅ、ＮＴＮ４、ＯＤＺＩ、ＯＰＲＤＩ、Ｐ２ＲＸ７、ＰＡＰ、ＰＡＲＴ１、ＰＡＴＥ、ＰＡＷＲ、ＰＣＡ３、ＰＣＤＧＦ、ＰＣＮＡ、ＰＤＧＦＡ、ＰＤＧＦＢ、ＰＤＧＦＲＡ、ＰＤＧＦＲＢ、ＰＥＣＡＭＩ、ＰＥＧ−アスパラギナーゼ、ＰＦ４（ＣＸＣＬ４）、ＰＧＦ、ＰＧＲ、ホスファカン、ＰＩＡＳ２、ＰＩ３キナーゼ、ＰＩＫ３ＣＧ、ＰＬＡＵ（ｕＰＡ）、ＰＬＧ、ＰＬＸＤＣＩ、ＰＫＣ、ＰＫＣ−β、ＰＰＢＰ（ＣＸＣＬ７）、ＰＰＩＤ、ＰＲ１、ＰＲＫＣＱ、ＰＲＫＤ１、ＰＲＬ、ＰＲＯＣ、ＰＲＯＫ２、ＰＳＡＰ、ＰＳＣＡ、ＰＴＡＦＲ、ＰＴＥＮ、ＰＴＧＳ２（ＣＯＸ−２）、ＰＴＮ、ＲＡＣ２（Ｐ２１Ｒａｃ２）、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫリガンド、ＲＡＲＢ、ＲＧＳ１、ＲＧＳ１３、ＲＧＳ３、ＲＮＦＩ１Ｏ（ＺＮＦ１４４）、Ｒｏｎ、ＲＯＢＯ２、ＲＸＲ、Ｓ１００Ａ２、ＳＣＧＢ  １Ｄ２（リポフィリンＢ）、ＳＣＧＢ２Ａ１（マンマグロビン２）、ＳＣＧＢ２Ａ２（マンマグロビン１）、ＳＣＹＥ１（内皮単球活性化サイトカイン）、ＳＤＦ２、ＳＥＲＰＥＮＡ１、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＳＥＲＰＩＮＢ５（マスピン）、ＳＥＲＰＩＮＥＩ（ＰＡＩ−Ｉ）、ＳＥＲＰＩＮＦＩ、ＳＨＩＰ−１、ＳＨＩＰ−２、ＳＨＢ１、ＳＨＢ２、ＳＨＢＧ、ＳｆｃＡＺ、ＳＬＣ２Ａ２、ＳＬＣ３３Ａ１、ＳＬＣ４３Ａ１、ＳＬＩＴ２、ＳＰＰ１、ＳＰＲＲ１Ｂ（Ｓｐｒ１）、ＳＴ６ＧＡＬ１、ＳＴＡＢ１、ＳＴＡＴＥ、ＳＴＥＡＰ、ＳＴＥＡＰ２、ＴＢ４Ｒ２、ＴＢＸ２１、ＴＣＰ１Ｏ、ＴＤＧＦ１、ＴＥＫ、ＴＧＦＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦ
Ｂ１Ｉ１、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢ３、ＴＧＦＢＩ、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＧＦＢＲ３、ＴＨＩＬ、ＴＨＢＳ１（トロンボスポンジン−１）、ＴＨＢＳ２、ＴＨＢＳ４、ＴＨＰＯ、ＴＩＥ（Ｔｉｅ−１）、ＴＩＭＰ３、組織因子、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１、ＴＮＦ、ＴＮＦ−ａ、ＴＮＦＡＩＰ２（Ｂ９４）、ＴＮＦＡＩＰ３、ＴＮＦＲＳＦＩ１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ２１、ＴＮＦＲＳＦ５、ＴＮＦＲＳＦ６（Ｆａｓ）、ＴＮＦＲＳＦ７、ＴＮＦＲＳＦ８、ＴＮＦＲＳＦ９、ＴＮＦＳＦ１Ｏ（ＴＲＡＩＬ）、ＴＮＦＳＦ１  １（ＴＲＡＮＣＥ）、ＴＮＦＳＦ１２（ＡＰＯ３Ｌ）、ＴＮＦＳＦ１３（Ａｐｒｉｌ）、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＴＮＦＳＦ１４（ＨＶＥＭ−Ｌ）、ＴＮＦＲＳＦ１４（ＨＶＥＭ）、ＴＮＦＳＦ１５（ＶＥＧＩ）、ＴＮＦＳＦ１８、ＴＮＦＳＦ４（ＯＸ４０リガンド）、ＴＮＦＳＦ５（ＣＤ４０リガンド）、ＴＮＦＳＦ６（ＦａｓＬ）、ＴＮＦＳＦ７（ＣＤ２７リガンド）、ＴＮＦＳＦ８（ＣＤ３０リガンド）、ＴＮＦＳＦ９（４−１ＢＢリガンド）、ＴＯＬＬＩＰ、Ｔｏｌｌ様受容体、ＴＯＰ２Ａ（トポイソメラーゼＩｉａ）、ＴＰ５３、ＴＰＭ１、ＴＰＭ２、ＴＲＡＤＤ、ＴＲＡＦ１、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ３、ＴＲＡＦ４、ＴＲＡＦ５、ＴＲＡＦ６、ＴＲＫＡ、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＴＲＰＣ６、ＴＳＬＰ、ＴＷＥＡＫ、チロシナーゼ、ｕＰＡＲ、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＣ、バーシカン、ＶＨＬ  Ｃ５、ＶＬＡ−４、Ｗｎｔ−１、ＸＣＬ１（リンホタクチン）、ＸＣＬ２（ＳＣＭ−Ｉｂ）、ＸＣＲＩ（ＧＰＲ５／ＣＣＸＣＲ１）、ＹＹ１、ＺＦＰＭ２、ＣＬＥＣ４Ｃ（ＢＤＣＡ−２、ＤＬＥＣ、ＣＤ３０３、ＣＬＥＣＳＦ７）、ＣＬＥＣ４Ｄ（ＭＣＬ、ＣＬＥＣＳＦ８）、ＣＬＥＣ４Ｅ（Ｍｉｎｃｌｅ）、ＣＬＥＣ６Ａ（Ｄｅｃｔｉｎ−２）、ＣＬＥＣ５Ａ（ＭＤＬ−１、ＣＬＥＣＳＦ５）、ＣＬＥＣ１Ｂ（ＣＬＥＣ−２）、ＣＬＥＣ９Ａ（ＤＮＧＲ−１）、ＣＬＥＣ７Ａ（Ｄｅｃｔｉｎ−１）、ＰＤＧＦＲａ、ＳＬＡＭＦ７、ＧＰ６（ＧＰＶＩ）、ＬＩＬＲＡ１（ＣＤ８５Ｉ）、ＬＩＬＲＡ２（ＣＤ８５Ｈ、ＩＬＴ１）、ＬＩＬＲＡ４（ＣＤ８５Ｇ、ＩＬＴ７）、ＬＩＬＲＡ５（ＣＤ８５Ｆ、ＩＬＴ１１）、ＬＩＬＲＡ６（ＣＤ８５ｂ、ＩＬＴ８）、ＮＣＲ１（ＣＤ３３５、ＬＹ９４、ＮＫｐ４６）、ＮＣＲ３（ＣＤ３３５、ＬＹ９４、ＮＫｐ４６）、ＮＣＲ３（ＣＤ３３７、ＮＫｐ３０）、ＯＳＣＡＲ、ＴＡＲＭ１、ＣＤ３００Ｃ、ＣＤ３００Ｅ、ＣＤ３００ＬＢ（ＣＤ３００Ｂ）、ＣＤ３００ＬＤ（ＣＤ３００Ｄ）、ＫＩＲ２ＤＬ４（ＣＤ１５８Ｄ）、ＫＩＲ２ＤＳ、ＫＬＲＣ２（ＣＤ１５９Ｃ、ＮＫＧ２Ｃ）、ＫＬＲＫ１（ＣＤ３１４、ＮＫＧ２Ｄ）、ＮＣＲ２（ＣＤ３３６、ＮＫｐ４４）、ＰＩＬＲＢ、ＳＩＧＬＥＣ１（ＣＤ１６９、ＳＮ）、ＳＩＧＬＥＣ１４、ＳＩＧＬＥＣ１５（ＣＤ３３Ｌ３）、ＳＩＧＬＥＣ１６、ＳＩＲＰＢ１（ＣＤ１７２Ｂ）、ＴＲＥＭ１（ＣＤ３５４）、ＴＲＥＭ２、及びＫＬＲＦ１（ＮＫｐ８０）から選択される1つ又は2つ以上の標的に結合可能である（例えば、上記から選択される標的に特異的に結合する）。
【１０４９】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＦｃＲγ結合受容体に結合する。いくつかの実施形態では、ＦｃＲγ結合受容体は、ＧＰ６（ＧＰＶＩ）、ＬＩＬＲＡ１（ＣＤ８５Ｉ）、ＬＩＬＲＡ２（ＣＤ８５Ｈ、ＩＬＴ１）、ＬＩＬＲＡ４（ＣＤ８５Ｇ、ＩＬＴ７）、ＬＩＬＲＡ５（ＣＤ８５Ｆ、ＩＬＴ１１）、ＬＩＬＲＡ６（ＣＤ８５ｂ、ＩＬＴ８）、ＮＣＲ１（ＣＤ３３５、ＬＹ９４、ＮＫｐ４６）、ＮＣＲ３（ＣＤ３３５、ＬＹ９４、ＮＫｐ４６）、ＮＣＲ３（ＣＤ３３７、ＮＫｐ３０）、ＯＳＣＡＲ、及びＴＡＲＭ１からなる群から選択される。
【１０５０】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＤＡＰ１２結合受容体に結合する。いくつかの実施形態では、ＤＡＰ１２結合受容体は、ＣＤ３００Ｃ、ＣＤ３００Ｅ、ＣＤ３００ＬＢ（ＣＤ３００Ｂ）、ＣＤ３００ＬＤ（ＣＤ３００Ｄ）、ＫＩＲ２ＤＬ４（ＣＤ１５８Ｄ）、ＫＩＲ２ＤＳ、ＫＬＲＣ２（ＣＤ１５９Ｃ、ＮＫＧ２Ｃ）、ＫＬＲＫ１（ＣＤ３１４、ＮＫＧ２Ｄ）、ＮＣＲ２（ＣＤ３３６、ＮＫｐ４４）、ＰＩＬＲＢ、ＳＩＧＬＥＣ１（ＣＤ１６９、ＳＮ）、ＳＩＧＬＥＣ１４、ＳＩＧＬＥＣ１５（ＣＤ３３Ｌ３）、ＳＩＧＬＥＣ１６、ＳＩＲＰＢ１（ＣＤ１７２Ｂ）、ＴＲＥＭ１（ＣＤ３５４）、及びＴＲＥＭ２からなる群から選択される。
【１０５１】
いくつかの実施形態では、抗体は、ｈｅｍＩＴＡＭ含有受容体に結合する。いくつかの実施形態では、ｈｅｍＩＴＡＭ含有受容体は、ＫＬＲＦ１（ＮＫｐ８０）である。
【１０５２】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＣＬＥＣ４Ｃ（ＢＤＣＡ−２、ＤＬＥＣ、ＣＤ３０３、ＣＬＥＣＳＦ７）、ＣＬＥＣ４Ｄ（ＭＣＬ、ＣＬＥＣＳＦ８）、ＣＬＥＣ４Ｅ（Ｍｉｎｃｌｅ）、ＣＬＥＣ６Ａ（Ｄｅｃｔｉｎ−２）、ＣＬＥＣ５Ａ（ＭＤＬ−１、ＣＬＥＣＳＦ５）、ＣＬＥＣ１Ｂ（ＣＬＥＣ−２）、ＣＬＥＣ９Ａ（ＤＮＧＲ−１）、及びＣＬＥＣ７Ａ（Ｄｅｃｔｉｎ−１）から選択される１つ又は２つ以上の標的に結合可能である。いくつかの実施形態では、抗体は、ＣＬＥＣ６Ａ（Ｄｅｃｔｉｎ−２）又はＣＬＥＣ５Ａに結合可能である。いくつかの実施形態では、抗体は、ＣＬＥＣ６Ａ（Ｄｅｃｔｉｎ−２）に結合可能である。
【１０５３】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＡＴＰ５Ｉ（Ｑ０６１８５）、ＯＡＴ（Ｐ２９７５８）、ＡＩＦＭ１（Ｑ９Ｚ０Ｘ１）、ＡＯＦＡ（Ｑ６４１３３）、ＭＴＤＣ（Ｐ１８１５５）、ＣＭＣ１（Ｑ８ＢＨ５９）、ＰＲＥＰ（Ｑ８Ｋ４１１）、ＹＭＥＬ１（Ｏ８８９６７）、ＬＰＰＲＣ（Ｑ６ＰＢ６６）、ＬＯＮＭ（Ｑ８ＣＧＫ３）、ＡＣＯＮ（Ｑ９９ＫＩ０）、ＯＤＯ１（Ｑ６０５９７）、ＩＤＨＰ（Ｐ５４０７１）、ＡＬＤＨ２（Ｐ４７７３８）、ＡＴＰＢ（Ｐ５６４８０）、ＡＡＴＭ（Ｐ０５２０２）、ＴＭＭ９３（Ｑ９ＣＱＷ０）、ＥＲＧＩ３（Ｑ９ＣＱＥ７）、ＲＴＮ４（Ｑ９９Ｐ７２）、ＣＬ０４１（Ｑ８ＢＱＲ４）、ＥＲＬＮ２（Ｑ８ＢＦＺ９）、ＴＥＲＡ（Ｑ０１８５３）、ＤＡＤ１（Ｐ６１８０４）、ＣＡＬＸ（Ｐ３５５６４）、ＣＡＬＵ（Ｏ３５８８７）、ＶＡＰＡ（Ｑ９ＷＶ５５）、ＭＯＧＳ（Ｑ８０ＵＭ７）、ＧＡＮＡＢ（Ｑ８ＢＨＮ３）、ＥＲＯ１Ａ（Ｑ８Ｒ１８０）、ＵＧＧＧ１（Ｑ６Ｐ５Ｅ４）、Ｐ４ＨＡ１（Ｑ６０７１５）、ＨＹＥＰ（Ｑ９Ｄ３７９）、ＣＡＬＲ（Ｐ１４２１１）、ＡＴ２Ａ２（Ｏ５５１４３）、ＰＤＩＡ４（Ｐ０８００３）、ＰＤＩＡ１（Ｐ０９１０３）、ＰＤＩＡ３（Ｐ２７７７３）、ＰＤＩＡ６（Ｑ９２２Ｒ８）、ＣＬＨ（Ｑ６８ＦＤ５）、ＰＰＩＢ（Ｐ２４３６９）、ＴＣＰＧ（Ｐ８０３１８）、ＭＯＴ４（Ｐ５７７８７）、ＮＩＣＡ（Ｐ５７７１６）、ＢＡＳＩ（Ｐ１８５７２）、ＶＡＰＡ（Ｑ９ＷＶ５５）、ＥＮＶ２（Ｐ１１３７０）、ＶＡＴ１（Ｑ６２４６５）、４Ｆ２（Ｐ１０８５２）、ＥＮＯＡ（Ｐ１７１８２）、ＩＬＫ（Ｏ５５２２２）、ＧＰＮＭＢ（Ｑ９９Ｐ９１）、ＥＮＶ１（Ｐ１０４０４）、ＥＲＯ１Ａ（Ｑ８Ｒ１８０）、ＣＬＨ（Ｑ６８ＦＤ５）、ＤＳＧ１Ａ（Ｑ６１４９５）、ＡＴ１Ａ１（Ｑ８ＶＤＮ２）、ＨＹＯＵ１（Ｑ９ＪＫＲ６）、ＴＲＡＰ１（Ｑ９ＣＱＮ１）、ＧＲＰ７５（Ｐ３８６４７）、ＥＮＰＬ（Ｐ０８１１３）、ＣＨ６０（Ｐ６３０３８）、及びＣＨ１０（Ｑ６４４３３）から選択される１つ又は２つ以上の標的に結合可能である（例えば、上記から選択される標的に特異的に結合する）。上記リストにおいて、受入番号を括弧内に示す。
【１０５４】
いくつかの実施形態では、抗原は、ＣＤＨ１、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４７、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＥＧＦＲ、Ｈｅｒ２、ＳＬＡＭＦ７、及びｇｐ７５から選択される抗原に結合する。いくつかの実施形態では、抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ４７、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＥＧＦＲ、及びＨｅｒ２から選択される。いくつかの実施形態では、抗体は、Ｔｎ抗原及びＴｈｏｍｓｅｎ−Ｆｒｉｅｄｅｎｒｅｉｃｈ抗原から選択される抗原に結合する。
【１０５５】
いくつかの実施形態では、抗体又はＦｃ融合タンパク質は、ａｂａｇｏｖｏｍａｂ、アバタセプト（ＯＲＥＮＣＩＡ（商標）としても知られる）、アブシキシマブ（ＲＥＯＰＲＯ（商標）、ｃ７Ｅ３Ｆａｂとしても知られる）、アダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（商標）としても知られる）、ａｄｅｃａｔｕｍｕｍａｂ、アレムツズマブ（ＣＡＭＰＡＴＨ（商標）、ＭａｂＣａｍｐａｔｈ又はＣａｍｐａｔｈ−１Ｈとしても知られる）、アルツモマブ、アフェリモマブ、ａｎａｔｕｍｏｍａｂ  ｍａｆｅｎａｔｏｘ、ａｎｅｔｕｍｕｍａｂ、ａｎｒｕｋｉｚｕｍａｂ、アポリズマブ、アルシツモマブ、ａｓｅｌｉｚｕｍａｂ、アトリズマブ、ａｔｏｒｏｌｉｍｕｍａｂ、バピネオズマブ、バシリキシマブ（ＳＩＭＵＬＥＣＴ（商標）としても知られる）、バビツキシマブ、ベクツモマブ（ＬＹＭＰＨＯＳＣＡＮ（商標）としても知られる）、ベリムマブ（ＬＹＭＰＨＯ−ＳＴＡＴ−Ｂ（商標）としても知られる）、ｂｅｒｔｉｌｉｍｕｍａｂ、ベシレソマブ、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（商標）としても知られる）、ｂｉｃｉｒｏｍａｂ  ｂｒａｌｌｏｂａｒｂｉｔａｌ、ｂｉｖａｔｕｚｕｍａｂ  ｍｅｒｔａｎｓｉｎｅ、キャンパス、カナキヌマブ（ＡＣＺ８８５としても知られる）、カンツズマブメルタンシン、カプロマブ（ＰＲＯＳＴＡＳＣＩＮＴ（商標）としても知られる）、カツマキソマブ（ＲＥＭＯＶＡＢ（商標）としても知られる）、セデリズマブ（ＣＩＭＺＩＡ（商標）としても知られる）、セルトリズマブペゴル、セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（商標）としても知られる）、クレノリキシマブ、ダセツズマブ、ｄａｃｌｉｘｉｍａｂ、ダクリズマブ（ＺＥＮＡＰＡＸ（商標）としても知られる）、デノスマブ（ＡＭＧ１６２としても知られる）、ｄｅｔｕｍｏｍａｂ、ｄｏｒｌｉｍｏｍａｂ  ａｒｉｔｏｘ、ｄｏｒｌｉｘｉｚｕｍａｂ、ｄｕｎｔｕｍｕｍａｂ、ｄｕｒｉｍｕｌｕｍａｂ、ｄｕｒｍｕｌｕｍａｂ、エクロメキシマブ、エクリズマブ（ＳＯＬＩＲＩＳ（商標）としても知られる）、エドバコマブ、エドレコロマブ（Ｍａｂ１７−１Ａ、ＰＡＮＯＲＥＸ（商標）としても知られる）、エファリズマブ（ＲＡＰＴＩＶＡ（商標）としても知られる）、エファングマブ（ＭＹＣＯＧＲＡＢ（商標）としても知られる）、ｅｌｓｉｌｉｍｏｍａｂ、ｅｎｌｉｍｏｍａｂ  ｐｅｇｏｌ、ｅｐｉｔｕｍｏｍａｂ  ｃｉｔｕｘｅｔａｎ、エファリズマブ、ｅｐｉｔｕｍｏｍａｂ、エプラツズマブ、エルリズマブ、ｅｒｔｕｍａｘｏｍａｂ（ＲＥＸＯＭＵＮ（商標）としても知られる）、エタネルセプト（ＥＮＢＲＥＬ（商標）としても知られる）、エタラシズマブ（ｅｔａｒａｔｕｚｕｍａｂ、ＶＩＴＡＸＩＮ（商標）、ＡＢＥＧＲＩＮ（商標）としても知られる）、ｅｘｂｉｖｉｒｕｍａｂ、ファノレソマブ（ＮＥＵＴＲＯＳＰＥＣ（商標）としても知られる）、ｆａｒａｌｉｍｏｍａｂ、フェルビズマブ、フォントリズマブ（ＨＵＺＡＦ（商標）としても知られる）、ガリキシマブ、ガンテネルマブ、ｇａｖｉｌｉｍｏｍａｂ（ＡＢＸＣＢＬ（商標）としても知られる）、ゲムツズマブオゾガマイシン（ＭＹＬＯＴＡＲＧ（商標）としても知られる）、ゴリムマブ（ＣＮＴＯ１４８としても知られる）、ゴミリキシマブ、イバリズマブ（ＴＮＸ−３５５としても知られる）、イブリツモマブチウキセタン（ＺＥＶＡＬＩＮ（商標）としても知られる）、ｉｇｏｖｏｍａｂ、イミシロマブ、インフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（商標）としても知られる）、ｉｎｏｌｉｍｏｍａｂ、イノツズマブオゾガマイシン、イピリムマブ（ＭＤＸ−０１０、ＭＤＸ−１０１としても知られる）、イラツムマブ、ｋｅｌｉｘｉｍａｂ、ラベツズマブ、ｌｅｍａｌｅｓｏｍａｂ、ｌｅｂｒｉｌｉｚｕｍａｂ、ｌｅｒｄｅｌｉｍｕｍａｂ、レクサツムマブ（ＨＧＳ−ＥＴＲ２、ＥＴＲ２−ＳＴ０１としても知られる）、ｌｅｘｉｔｕｍｕｍａｂ、ｌｉｂｉｖｉｒｕｍａｂ、ｌｉｎｔｕｚｕｍａｂ、ルカツムマブ、ルミリキシマブ、マパツムマブ（ＨＧＳＥＴＲ１、ＴＲＭ−１としても知られる）、ｍａｓｌｉｍｏｍａｂ、ｍａｔｕｚｕｍａｂ（ＥＭＤ７２０００としても知られる）、メポリズマブ（ＢＯＳＡＴＲＩＡ（商標）としても知られる）、ｍｅｔｅｌｉｍｕｍａｂ、ミラツズマブ、ｍｉｎｒｅｔｕｍｏｍａｂ、ミツモマブ、ｍｏｒｏｌｉｍｕｍａｂ、モタビズマブ（ＮＵＭＡＸ（商標）としても知られる）、ムロモナブ（ＯＫＴ３としても知られる）、ｎａｃｏｌｏｍａｂ  ｔａｆｅｎａｔｏｘ、ｎａｐｔｕｍｏｍａｂ  ｅｓｔａｆｅｎａｔｏｘ、ナタリズマブ（ＴＹＳＡＢＲＩ（商標）、ＡＮＴＥＧＲＥＮ（商標）としても知られる）、ネバクマブ、ネレリモマブ、ｎｉｍｏｔｕｚｕｍａｂ（ＴＨＥＲＡＣＩＭ  ｈＲ３（商標）、ＴＨＥＲＡ−ＣＩＭ−ｈＲ３（商標）、ＴＨＥＲＡＬＯＣ（商標）としても知られる）、ノフェツモマブメルペンタン（ＶＥＲＬＵＭＡ（商標）としても知られる）、オクレリズマブ、ｏｄｕｌｉｍｏｍａｂ、オファツムマブ、オマリズマブ（ＸＯＬＡＩＲ（商標）としても知られる）、オレゴボマブ（ＯＶＡＲＥＸ（商標）としても知られる）、オテリキシズマブ、パジバキシマブ、パリビズマブ（ＳＹＮＡＧＩＳ（商標）としても知られる）、パニツムマブ（ＡＢＸ−ＥＧＦ、ＶＥＣＴＩＢＩＸ（商標）としても知られる）、パスコリズマブ、ｐｅｍｔｕｍｏｍａｂ（ＴＨＥＲＡＧＹＮ（商標）としても知られる）、ペルツズマブ（２Ｃ４、ＯＭＮＩＴＡＲＧ（商標）としても知られる）、ペキセリズマブ、ｐｉｎｔｕｍｏｍａｂ、プリリキシマブ、ｐｒｉｔｕｍｕｍａｂ、ラニビズマブ（ＬＵＣＥＮＴＩＳ（商標）としても知られる）、ラキシバクマブ、レガビルマブ、レスリズマブ、リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（商標）、ＭａｂＴＨＥＲＡ（商標）としても知られる）、ロベリズマブ、ルプリズマブ、サツモマブ、セヴィルマブ、ｓｉｂｒｏｔｕｚｕｍａｂ、シプリズマブ（ＭＥＤＩ−５０７としても知られる）、ｓｏｎｔｕｚｕｍａｂ、スタムルマブ（ＭＹＯ−０２９としても知られる）、スレソマブ（ＬＥＵＫＯＳＣＡＮ（商標）としても知られる）、タカツズマブテトラキセタン、タドシズマブ、タリズマブ、ｔａｐｌｉｔｕｍｏｍａｂ  ｐａｐｔｏｘ、テフィバズマブ（ＡＵＲＥＸＩＳ（商標）としても知られる）、ｔｅｌｉｍｏｍａｂ  ａｒｉｔｏｘ、テネリキシマブ、テプリズマブ、ｔｉｃｉｌｉｍｕｍａｂ、トシリズマブ（ＡＣＴＥＭＲＡ（商標）としても知られる）、トラリズマブ、トシツモマブ��トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（商標）としても知られる）、トレメリムマブ（ＣＰ−６７５，２０６としても知られる）、ツコツズマブセルモロイキン、ツビルマブ、ｕｒｔｏｘａｚｕｍａｂ、ウステキヌマブ（ＣＮＴＯ１２７５としても知られる）、ｖａｐａｌｉｘｉｍａｂ、ベルツズマブ、ｖｅｐａｌｉｍｏｍａｂ、ビシリズマブ（ＮＵＶＩＯＮ（商標）としても知られる）、ヴォロシキシマブ（Ｍ２００としても知られる）、ボツムマブ（ＨＵＭＡＳＰＥＣＴ（商標）としても知られる）、ザルツムマブ、ザノリムマブ（ＨｕＭＡＸ−ＣＤ４としても知られる）、ｚｉｒａｌｉｍｕｍａｂ、ゾリモマブアリトックス、ダラツムマブ、ｅｌｏｔｕｘｕｍａｂ、ｏｂｉｎｔｕｎｚｕｍａｂ、オララツマブ、ブレンツキシマブベドチン、ａｆｉｂｅｒｃｅｐｔ、アバタセプト、ベラタセプト、ａｆｉｂｅｒｃｅｐｔ、エタネルセプト、ロミプロスチム、ＳＢＴ−０４０（配列が、米国特許出願公開第２０１７／０１５８７７２号に記載される）から選択される。いくつかの実施形態では、抗体はリツキシマブである。
【１０５６】
チェックポイント阻害剤
【１０５７】
任意の好適な免疫チェックポイント阻害剤が、本明細書で開示される免疫複合体と共に使用するために想定される。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、１つ又は２つ以上の免疫チェックポイントタンパク質の発現又は活性を低下させる。別の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、１つ又は２つ以上の免疫チェックポイントタンパク質とそのリガンドとの間の相互作用を低下させる。免疫チェックポイント分子の発現及び／又は活性を低下する阻害性核酸を、本明細書に記載される方法で使用することもできる。
【１０５８】
本明細書のデータは、通常はＩｇＧ４である免疫チェックポイント阻害剤のニボルマブを、ＩｇＧ１  Ｆｃを含むように改変でき、続いて本発明の免疫複合体に変換されることを示す。データは、ニボルマブＩｇＧ１免疫複合体が、依然として非常に強力であることを示す。同様に、臨床グレードのアテゾリズマブのＩｇＧ１  ＮＱ  ＦｃがＩｇＧ１に置換されたとき、結果は改善された。（図９７Ａ〜９７Ｈ参照）
【１０５９】
多くのチェックポイント抗体は、細胞を殺滅するのではなく、シグナル伝達の阻害を狙っているため、これらはエフェクター機能を持たないように設計されている。本発明の免疫複合体は、骨髄性免疫の活性化に必要な「エフェクター機能」を戻して付加できる。したがって、多くのチェックポイント抗体阻害剤にとって、この発見は重要であろう。
【１０６０】
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、細胞毒性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ４、ＣＤ１５２としても知られる）、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）、グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ、ＴＮＦＲＳＦ１８としても知られる）、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ、ＣＤ２７８としても知られる）、ＣＤ９６、ポリオウイルス受容体関連２（ＰＶＲＬ２、ＣＤ１１２Ｒとしても知られる）、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１、ＣＤ２７９としても知られる）、プログラム細胞死１リガンド１（ＰＤ−Ｌ１、Ｂ７−Ｈ３及びＣＤ２７４としても知られる）、プログラム細胞死リガンド２（ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−ＤＣ及びＣＤ２７３としても知られる）、リンパ球活性化遺伝子−３（ＬＡＧ−３、ＣＤ２２３としても知られる）、Ｂ７−Ｈ４、キラー免疫グロブリン受容体（ＫＩＲ）、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー４（ＴＮＦＲＳＦ４、ＯＸ４０及びＣＤ１３４としても知られる）及びそのリガンドＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ１（ＩＤＯ−１）、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ２（ＩＤＯ−２）、癌胎児抗原関連細胞接着分子１（ＣＥＡＣＡＭ１）、Ｂ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ、ＣＤ２７２としても知られる）、Ｔ細胞膜タンパク質３（ＴＩＭ３）、アデノシンＡ２Ａ受容体（Ａ２Ａｒ）、及びＴ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサー（ＶＩＳＴＡタンパク質）である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−１、又はＰＤ−Ｌ１の阻害剤である。
【１０６１】
いくつかの実施形態では、抗体は、イピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙとしても知られる（登録商標））、ペンブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａとしても知られる（登録商標））、ニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏとしても知られる（登録商標））、アテゾリズマブ（Ｔｅｃｅｎｔｒｉｇとしても知られる（登録商標））、アベルマブ（Ｂａｖｅｎｃｉｏとしても知られる（登録商標））、及びデュルバルマブ（Ｉｍｆｉｎｚｉ（商標）としても知られる）から選択される。いくつかの実施形態では、抗体は、イピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）としても知られる）、ペンブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）としても知られる）、ニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標）としても知られる）、及びアテゾリズマブ（Ｔｅｃｅｎｔｒｉｇ（登録商標）としても知られる）から選択される。
【１０６２】
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ４の阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ４に対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ４に対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ４に対するヒト又はヒト化モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、１つ又は２つ以上の免疫チェックポイントタンパク質、例えばＣＴＬＡ４の発現又は活性を低下させる。
【１０６３】
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１の阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１に対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１に対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１に対するヒト又はヒト化モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、１つ又は２つ以上の免疫チェックポイントタンパク質、例えばＰＤ−１の発現又は活性を低下させる。
【１０６４】
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−Ｌ１の阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−Ｌ１に対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−Ｌ１に対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−Ｌ１に対するヒト又はヒト化モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、１つ又は２つ以上の免疫チェックポイントタンパク質、例えばＰＤ−Ｌ１の発現又は活性を低下させる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を低下させる。
【１０６５】
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−Ｌ２の阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−Ｌ２に対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−Ｌ２に対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−Ｌ２に対するヒト又はヒト化モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、１つ又は２つ以上の免疫チェックポイントタンパク質、例えばＰＤ−Ｌ２の発現又は活性を低下させる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ２との間の相互作用を低下させる。
【１０６６】
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＬＡＧ−３の阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＬＡＧ−３に対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＬＡＧ−３に対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＬＡＧ−３に対するヒト又はヒト化モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、１つ又は２つ以上の免疫チェックポイントタンパク質、例えばＬＡＧ−３の発現又は活性を低下させる。
【１０６７】
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、Ｂ７−Ｈ４阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、Ｂ７−Ｈ４に対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、Ｂ７−Ｈ４に対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、Ｂ７−Ｈ４に対するヒト又はヒト化モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、１つ又は２つ以上の免疫チェックポイントタンパク質、例えばＢ７−Ｈ４の発現又は活性を低下させる。
【１０６８】
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＫＩＲの阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＫＩＲに対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＫＩＲに対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＫＩＲに対するヒト又はヒト化モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、１つ又は２つ以上の免疫チェックポイントタンパク質、例えばＫＩＲの発現又は活性を低下させる。
【１０６９】
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＴＮＦＲＳＦ４の阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＴＮＦＲＳＦ４に対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＴＮＦＲＳＦ４に対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＴＮＦＲＳＦ４に対するヒト又はヒト化モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、１つ又は２つ以上の免疫チェックポイントタンパク質、例えばＴＮＦＲＳＦ４の発現又は活性を低下させる。
【１０７０】
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＯＸ４０の阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＯＸ４０に対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＯＸ４０に対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＯＸ４０に対するヒト又はヒト化モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、１つ又は２つ以上の免疫チェックポイントタンパク質、例えばＯＸ４０の発現又は活性を低下させる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＴＮＦＲＳＦ４とＯＸ４０との間の相互作用を低下させる。
【１０７１】
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＩＤＯ−１の阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＩＤＯ−１に対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＩＤＯ−１に対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＩＤＯ−１に対するヒト又はヒト化モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、１つ又は２つ以上の免疫チェックポイントタンパク質、例えばＩＤＯ−１の発現又は活性を低下させる。
【１０７２】
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＩＤＯ−２の阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＩＤＯ−２に対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＩＤＯ−２に対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＩＤＯ−２に対するヒト又はヒト化モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、１つ又は２つ以上の免疫チェックポイントタンパク質、例えばＩＤＯ−２の発現又は活性を低下させる。
【１０７３】
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＥＡＣＡＭ１の阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＥＡＣＡＭ１に対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＥＡＣＡＭ１に対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＥＡＣＡＭ１に対するヒト又はヒト化モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、１つ又は２つ以上の免疫チェックポイントタンパク質、例えばＣＥＡＣＡＭ１の発現又は活性を低下させる。
【１０７４】
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＢＴＬＡの阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＢＴＬＡに対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＢＴＬＡに対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＢＴＬＡに対するヒト又はヒト化モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、１つ又は２つ以上の免疫チェックポイントタンパク質、例えばＢＴＬＡの発現又は活性を低下させる。
【１０７５】
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＴＩＭ−３の阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＴＩＭ−３に対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＴＩＭ−３に対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＴＩＭ−３に対するヒト又はヒト化モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、１つ又は２つ以上の免疫チェックポイントタンパク質、例えばＴＩＭ−３の発現又は活性を低下させる。
【１０７６】
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、Ａ２Ａｒの阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、Ａ２Ａｒに対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、Ａ２Ａｒに対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、Ａ２Ａｒに対するヒト又はヒト化モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、１つ又は２つ以上の免疫チェックポイントタンパク質、例えばＡ２Ａｒの発現又は活性を低下させる。
【１０７７】
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＶＩＳＴＡタンパク質の阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＶＩＳＴＡタンパク質に対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＶＩＳＴＡタンパク質に対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＶＩＳＴＡタンパク質に対するヒト又はヒト化モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、１つ又は２つ以上の免疫チェックポイントタンパク質、例えばＶＩＳＴＡタンパク質の発現又は活性を低下させる。
【１０７８】
バイオシミラー
【１０７９】
本発明の免疫複合体は、市販の、つまり「先発」抗体構築物に極めて類似している、つまりバイオシミラーである、抗体構築物によっても有効である。例えば、セツキシマブ、リツキシマブ、及びトラスツズマブのバイオシミラー抗体を、図７１Ａ〜７１ＡＱに見られるように、いくつかの本発明の成功した免疫複合体で使用した。バイオシミラー免疫複合体は、市販の抗体と同様の効率で骨髄系の活性化を誘発した。これらの研究より、バイオシミラー免疫複合体は、先発製品の免疫複合体と同様に作用すると予想される。
【１０８０】
ＤＡＲ比
【１０８１】
本発明の免疫複合体は、望ましいＤＡＲ比を提供する。図８４Ａ〜８７Ｃに見られるように、本発明の免疫複合体は、０．７、１．６、及び２．５のＤＡＲ比を提供する。
【１０８２】
様々なＤＡＲ比を示す免疫複合体は全て、骨髄系細胞の活性化及びサイトカイン分泌の誘発において、有効であった。データは、ＣＤ４０、ＣＤ８６及びＨＬＡ−ＤＲが、抗体単独で刺激されたものと比較して、免疫複合体で刺激されたＡＰＣ中でより高いレベルで発現していたため、様々なＤＡＲ比を有する免疫複合体は、ＡＰＣ活性化の誘発において全て優れていたことを示す。様々なＤＡＲを有する免疫複合体は、抗体単独と比較して、一貫してＣＤ１４及びＣＤ１６の下方制御と、ＣＤ１２３の発現増加を誘導した。これらの研究から、骨髄系細胞活性化の誘発において、全てのＤＡＲ比が有効であると予想される。
【１０８３】
アイソタイプ改変
【１０８４】
本明細書のデータは（図８８Ｃ〜８８Ｈ参照）、リツキシマブなどの抗体のＩｇＧ１  ｆｃ領域が、ＩｇＧ１  ＡＦ、ＩｇＧ１  ＮＱ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、又はＩｇＡ２と変換され、本発明の免疫複合体に形成されると、免疫複合体の活性を改変でき、多くの場合、所望の用途に対して改善できることを示す。
【１０８５】
およそ３０％のヒトＩｇＧがＦａｂ領域内でグリコシル化され、本発明の免疫複合体中の抗体は、天然に存在しないグリコシル化パターンを有する遺伝子操作したＦａｂ領域を含んでよい。例えば、ハイブリドーマの遺伝子組み換えを行い、ＦｃＲγＩＩＩａ結合及びエフェクター機能の増大が可能な特定の変異を有する、非フコシル化ｍＡｂ、脱シアリル化ｍＡｂ、又は脱グリコシル化Ｆｃを分泌できる。
【１０８６】
免疫複合体を形成する抗体は、遺伝子操作された（すなわち、天然に存在しない）システイン残基を含んでよく、これは、アジュバント部分の抗体への共有結合に使用される試薬に対する改変された（例えば、向上した）反応性を特徴とする。特定の実施形態では、遺伝子操作されたシステイン残基は、０．６〜１．０の範囲のチオール反応性値を有するであろう。多くの場合、遺伝子操作された抗体は、親抗体よりも反応性が高いものである。
【１０８７】
一般に、遺伝子操作される残基は、ジスルフィド架橋の一部ではない「遊離」システイン残基である。用語「チオール反応性値」は、遊離システインアミノ酸の反応性に対する定量的特性である。本明細書で使用するとき、用語「チオール反応性値」は、チオール反応性試薬と反応する遺伝子操作された抗体中の遊離システインアミノ酸の割合を指し、最大値である１に変換する。例えば、修飾抗体を形成するため、マレイミドなどのチオール反応性試薬と１００％の収率で反応する遺伝子操作された抗体中のシステイン残基は、１．０のチオール反応性値を有する。８０％の収率でチオール反応性試薬と反応する、同一又は異なる親抗体に操作される別のシステイン残基は、０．８のチオール反応性値を有する。特定のシステイン残基のチオール反応性値の決定は、ＥＬＩＳＡアッセイ、質量分析、液体クロマトグラフィー、オートラジオグラフィー、又はその他定量分析試験によって行うことができる。
【１０８８】
遺伝子操作されたシステイン残基は、抗体重鎖又は抗体軽鎖中に位置してよい。特定の実施形態では、遺伝子操作されたシステイン残基は、重鎖のＦｃ領域に位置する。例えば、抗体の軽鎖中のＬ−１５、Ｌ−４３、Ｌ−１１０、Ｌ−１４４、Ｌ−１６８の位置、又は、抗体の重鎖中のＨ−４０、Ｈ−８８、Ｈ−１１９、Ｈ−１２１、Ｈ−１２２、Ｈ−１７５、及びＨ−１７９の位置にあるアミノ酸残基を、システイン残基と置換してよい。これらの位置の各鎖上、約５個のアミノ酸残基内の範囲、すなわち、Ｌ−１０〜Ｌ−２０；Ｌ−３８〜Ｌ−４８；Ｌ−１０５〜Ｌ−１１５；Ｌ−１３９〜Ｌ−１４９；Ｌ−１６３〜Ｌ−１７３；Ｈ−３５〜Ｈ−４５；Ｈ−８３〜Ｈ−９３；Ｈ−１１４〜Ｈ−１２７；及びＨ−１７０〜Ｈ−１８４、並びに、Ｈ−２６８〜Ｈ−２９１；Ｈ−３１９〜Ｈ−３４４；Ｈ−３７０〜Ｈ−３８０；及びＨ−３９５〜Ｈ−４０５から選択されるＦｃ領域の範囲を、システイン残基と置換して、免疫複合体の形成に有用なシステイン操作抗体を提供できる。他の遺伝子操作された抗体は、例えば、米国特許第７，８５５，２７５号、同第８，３０９，３００号、及び同第９，０００，１３０号に記載されており、これらを参照することにより本明細書に組み込まれる。
【１０８９】
抗体に加え、代替タンパク質スカフォールドを免疫複合体の一部として使用できる。用語「代替タンパク質スカフォールド」は、タンパク質又はペプチド由来の非免疫グロブリンを指す。かかるタンパク質及びペプチドは、一般に遺伝子操作に適しており、ある抗原に対する単一特異性、二重特異性、又は多重特異性を付与するように設計することができる。代替タンパク質スカフォールドの操作は、いくつかの方法を用いて実施できる。既知の特異性を有する配列がスカフォールドの可変ループ上にグラフトされる場合、ループグラフト法を使用できる。配列ランダム化及び変異誘発を用いて変異体ライブラリーを開発でき、これを種々ディスプレイプラットフォーム（例えば、ファージディスプレイ）を用いてスクリーニングして、新規バインダーを同定できる。部位特異的変異誘発法を、同様の方法の一部として使用することもできる。代替タンパク質スカフォールドは、最低限の二次構造を有する小ペプチドから通常の抗体と類似する大きさの大型タンパク質までの範囲の、様々な大きさで存在する。スカフォールドの例として、シスチンノットミニタンパク質（ノッチンとしても知られる）、環状シスチンノットミニタンパク質（サイクロチドとしても知られる）、アビマー、アフィボディ、ヒトフィブロネクチン第１０  ＩＩＩ型ドメイン、ＤＡＲＰｉｎ（設計されたアンキリンリピート）、及びアンチカリン（リポカリンとしても知られる）が挙げられるが、これらに限定されない。既知の特異性を有する天然に存在するリガンドを遺伝子操作し、ある標的に対する新たな特異性を付与することもできる。遺伝子操作可能な天然に存在するリガンドの例として、ＥＧＦリガンド及びＶＥＧＦリガンドが挙げられる。遺伝子操作されたタンパク質は、所望の結合様式及び特異性に応じて、モノマー又はマルチマータンパク質として産生できる。タンパク質工学的戦略を使用して、代替タンパク質スカフォールドをＦｃドメインに融合できる。
【１０９０】
抗体アジュバント複合体の調製
【１０９１】
本発明の免疫複合体を形成するための反応を、アジュバント部分を抗体に共有結合するのに十分な条件下で実施する。一般に、反応は、抗体中のアミノ酸側鎖がアジュバントリンカー化合物と反応するように、抗体をアジュバント−リンカー化合物に接触させることによって実施される。いくつかの実施形態では、免疫複合体を形成する際に、アジュバント−リンカー化合物及び抗体をおよそ等モル量で使用する。いくつかの実施形態では、免疫複合体を形成する際に、過剰のアジュバント−リンカー化合物を使用する。例えば、免疫複合体を形成するための反応混合物は、抗体に対して約１．１〜約５０モル当量のアジュバント−リンカー化合物を含んでよい。
【１０９２】
反応を、任意の好適な温度で実施してよい。一般に、反応は、約４℃〜約４０℃の温度で実施される。反応は、例えば、約２５℃又は約３７℃で実施される。反応を、任意の好適なｐＨで実施してよい。一般に、反応は、約４．５〜約１０のｐＨで実施される。反応は、例えば、約５〜約９のｐＨで実施される。いくつかの実施形態では、反応は、中性付近（すなわち、およそｐＨ７）で実施される。いくつかの実施形態では、反応は、７．２〜７．５の範囲のｐＨで実施される。反応を、任意の好適な時間で実施してよい。一般に、反応混合物は、好適な条件下で、約１分間〜数時間の範囲でインキュベートされる。反応は、例えば、約１分間、又は約５分間、又は約１０分間、又は約３０分間、又は約１時間、又は約２時間、又は約４時間、又は約８時間、又は約１２時間、又は約２４時間、又は約４８時間、又は約７２時間実施してよい。複合体中の抗体の特性、及び、アジュバント部分の導入に使用する試薬に応じて、他の反応条件を本発明の方法に利用してよい。
【１０９３】
抗体アジュバント複合体を形成するための反応混合物は、生体共役反応に典型的に使用されるものなどの追加の試薬を含んでよい。例えば、特定の実施形態では、反応混合物は、緩衝液（例えば、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、２−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イル］エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、３−モルホリノプロパン−１−スルホン酸（ＭＯＰＳ）、リン酸カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸緩衝生理食塩水、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、及びホウ酸ナトリウム）、共溶媒（例えば、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、エタノール、メタノール、テトラヒドロフラン、アセトン、及び酢酸）、塩（例えば、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＣａＣｌ２、並びに、Ｍｎ２＋及びＭｇ２＋の塩）、洗剤／界面活性剤（例えば、Ｎ，Ｎ−ビス［３−（Ｄ−グルコンアミド）プロピル］コラミド、ポリオキシエチレン（２０）セチルエーテル、ジメチルデシルホスフィンオキシド、分枝鎖オクチルフェノキシポリ（エチレンオキシ）エタノール、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロックコポリマー、ｔ−オクチルフェノキシポリエトキシエタノール、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート等などの非イオン性界面活性剤；コール酸ナトリウム、Ｎ−ラウロイルサルコシン、ドデシル硫酸ナトリウム等などのアニオン性界面活性剤；ヘクスデシルトリメチルアンモニウムブロミド、トリメチル（テトラデシル）アンモニウムブロミド等などのカチオン性界面活性剤；若しくは、アミドスルホベタイン、３−［（３−コラミドプロピル）ジメチル−アンモニオ］−１−プロパンスルホネート等などの両性イオン性界面活性剤）、キレート剤（例えば、エチレングリコール−ビス（２−アミノエチルエーテル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラ酢酸（ＥＧＴＡ）、２−（｛２−［ビス（カルボキシメチル）アミノ］エチル｝（カルボキシメチル）アミノ）酢酸（ＥＤＴＡ）、及び１，２−ビス（ｏ−アミノフェノキシ）エタン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラ酢酸（ＢＡＰＴＡ））、及び還元剤（例えば、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、β−メルカプトエタノール（ＢＭＥ）、及びトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ））を含んでよい。緩衝剤、共溶媒、塩、洗剤／界面活性剤、キレート剤、及び還元剤を任意の濃度で使用することができるが、これは当業者によって容易に決定することができる。一般に、緩衝液、共溶媒、塩、洗剤／界面活性剤、キレート剤、及び還元剤は、反応混合物中で、約１μＭ〜約１Ｍの範囲の濃度で含まれる。例えば、緩衝液、共溶媒、塩、洗剤／界面活性剤、キレート剤、又は還元剤は、反応混合物中で、約１μＭ、又は約１０μＭ、又は約１００μＭ、又は約１ｍＭ、又は約１０ｍＭ、又は約２５ｍＭ、又は約５０ｍＭ、又は約１００ｍＭ、又は約２５０ｍＭ、又は約５００ｍＭ、又は約１Ｍの濃度で含まれてよい。
【１０９４】
免疫複合体の処方及び投与
【１０９５】
関連する態様では、本発明は、上記複数の免疫複合体を含む組成物を提供する。いくつかの実施形態では、免疫複合体当たりのアジュバント部分の平均数は、約１〜約１０の範囲内である。免疫複合体当たりのアジュバント部分の平均数は、例えば、約１〜約１０、又は約１〜約６、又は約１〜約４の範囲であってよい。免疫複合体当たりのアジュバント部分の平均数は、約０．８、１、１．２、１．４、１．６、１．８、２、２．２、２．４、２．６、２．８、３、３．２、３．４、３．６、３．８、４．０、又は４．２であってよい。いくつかの実施形態では、免疫複合体当たりのアジュバント部分の平均数は、約４である。いくつかの実施形態では、免疫複合体当たりのアジュバント部分の平均数は、約２である。いくつかの場合において、抗体は、単一のアジュバント部分に共有結合する。いくつかの場合において、抗体は、２つ又はそれ以上のアジュバント部分（例えば、３つ以上、４つ以上、又は５つ以上のアジュバント部分）に共有結合する。いくつかの場合において、抗体は、１〜１０のアジュバント部分（例えば、１〜８つ、１〜５つ、１〜３つ、２〜１０、２〜８つ、２〜５つ、２〜３つ、又は３〜８つのアジュバント部分）に共有結合する。いくつかの場合において、抗体は、２〜１０のアジュバント部分（例えば、２〜８つ、２〜５つ、２〜３つ、又は３〜１０、又は３〜８つのアジュバント部分）に共有結合する。抗体が２つ以上のアジュバント部分に共有結合する場合において、付加されたアジュバント部分は同一であっても異なっていてもよい。例えば、いくつかの場合において、２つ以上のアジュバント部分が同一であってよい（例えば、同一のアジュバント部分の２つの異なる分子が、抗体上の異なる部位において、それぞれ抗体に付加されてよい）。いくつかの場合において、抗体は、２つ又はそれ以上の異なるアジュバント部分（例えば、３つ以上、４つ以上、又は５つ以上の異なるアジュバント部分）に共有結合する。例えば、本発明の免疫複合体を生成する際に、１つ又は２つ以上の抗体を、２つ以上（例えば、３つ以上、４つ以上、又は５つ以上）の異なるアジュバント−リンカー化合物を含む混合物と接触させ、１つ又は２つ以上の抗体中のアミノ酸側鎖がアジュバント−リンカー化合物と反応し、その結果、２つ以上の異なるアジュバント部分にそれぞれが共有結合する、１つ又は２つ以上の免疫複合体を得てよい。
【１０９６】
部位特異的抗体共役は、抗体中のリジン残基への付加から得られる不均一な共役生成物と比較して、抗体へのアジュバントの正確な配置と、均質なＤＡＲを可能にする。抗体の様々な修飾により、部位特異的免疫複合体を生成することができる。部位特異的共役の方法として次の方法が挙げられるが、本明細書に記載のこれらの方法に限定されない。部位特異的共役法の１つとして、後に酵素により認識され、結果的に化学修飾される配列の組み込みが挙げられる。例えば、酵素ＦＧＥは、配列Ｃｙｓ−Ｘ−Ｐｒｏ−Ｘ−Ａｒｇを認識する。哺乳類培養中でＦＧＥと共に修飾抗体を共発現させると、遺伝子操作した部位においてアルでヒトタグを含む抗体が生成される。部位特異的共役を可能にするため、化学反応性基に変換するための天然に存在する配列又は残基を認識する、その他酵素を使用することもできる。細菌性トランスグルタターゼ（ＢＴＧ）は、グルタミン残基と一級アミンとの間の結合の形成を触媒することができ、細菌酵素であるソルターゼＡは、認識モチーフを介してペプチド転移反応を触媒することができる。後に反応して部位特異的複合体を生成することができる、非天然アミノ酸を抗体配列に組み込んでもよい。部位特異的共役のため、アミノ酸であるセレノシステインなどの天然に存在する残基を抗体に取り込み、続いてマレイミド及びヨードアセトアミドが挙げられるが、これらに限定されない、適切な反応性基と反応させてよい。別の方法は、抗体構築物の重鎖又は軽鎖に添加される、遺伝子操作されたシステイン残基の取り込みである。重鎖及び／又は軽鎖をコードするベクターを、システイン残基のコドン配列を含むように改変する（ベクター配列、図１３８Ａ〜図１３８Ｂ、及びベクターマップ、図１３８Ｃ〜１３８Ｄ）。共役は、まず抗体を還元し、次に再酸化して抗体の天然のジスルフィド結合を再生させることによって、反応性チオールのキャッピングを外す。アジュバント−リンカーと反応すると、得られる生成物は、抗体内に遺伝子操作されたシステイン残基の数によって定義されるＤＡＲを有する、均質な免疫複合体の集団を含む（図１３８に示す構造）。例えば、軽鎖中の２０５の位置において、バリンからシステインへの変異を含めると（Ｖ２０５Ｃ変異）、規定した部位においてアジュバントが共役する生成物が得られる（Ｖ２０５Ｃ、図１３８Ｆ〜１３８Ｇ）。
【１０９７】
いくつかの実施形態では、組成物は、薬学的に許容される賦形剤を更に含む。例えば、本発明の免疫複合体は、静脈内（ＩＶ）投与又は体腔若しくは器官の内腔への投与など、非経口投与用に処方することができる。別の方法としては、免疫複合体を腫瘍内に注入することもできる。注射用製剤は、一般に、薬学的に許容されるキャリアに溶解された免疫複合体の溶液を含む。利用できる許容されるビヒクル及び溶媒には、水、リンゲル溶液、等張塩化ナトリウムがある。また、従来、無菌の不揮発性油を溶媒や懸濁媒体として使用できる。この目的のため、合成モノグリセリド又はジグリセリドなどの、任意のブランドの不揮発性油を使用できる。また同様に、注射剤の調製には、オレイン酸などの脂肪酸を使用することもできる。これらの溶液は滅菌され、一般には望まれない物質を含まない。これらの製剤を、従来の周知の滅菌手法によって滅菌することができる。製剤は、ｐＨ調節及び緩衝剤、毒性調節剤、例えば、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウムなど、生理学的条件に近づけるための必要性に応じて、薬学的に許容される補助物質を含んでよい。これらの製剤中の免疫複合体の濃度は広範囲に変化してよく、選択された特定の投与方法及び患者の必要性に応じて、主に液体量、粘度、体重等に基づいて選択されるであろう。特定の実施形態では、注射用溶液製剤中の免疫複合体の濃度は、約０．１％（ｗ／ｗ）〜約１０％（ｗ／ｗ）の範囲であろう。
【１０９８】
別の態様では、本発明は、癌を治療する方法を提供する。その方法は、治療有効量の免疫複合体（例えば、上記組成物として）を、それを必要とする被験体に投与することを含む。例えば、この方法は、被検体に、約１００ｎｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの用量をもたらすように免疫複合体を投与することを含んでよい。免疫複合体の用量は、約５ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ、又は約１００μｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇの範囲であってよい。免疫複合体の用量は、約１００、２００、３００、４００、又は５００μｇ／ｋｇであってよい。免疫複合体の用量は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０ｍｇ／ｋｇであってよい。免疫複合体の用量は、特定の複合体、並びに、治療される癌の種類及び重篤度に応じて、これらの範囲外であってもよい。投与頻度は、１週当たり単回投与から複数回投与の範囲、又はそれ以上であってよい。いくつかの実施形態では、免疫複合体を、１ヶ月当たり約１回から１週当たり約５回まで投与する。いくつかの実施形態では、免疫複合体を、１週当たり１回投与する。
【１０９９】
本発明のいくつかの実施形態は、上記のような癌の治療方法を提供し、このとき癌は頭頸部癌である。頭頸部癌（並びに、頭頸部扁平上皮細胞癌）は、口腔、咽頭、喉頭、唾液腺、副鼻腔、及び鼻腔、並びに、頸部上部のリンパ節の扁平上皮細胞癌を特徴とする、様々な癌を指す。頭頸部癌は、米国において全ての癌のおよそ３〜５パーセントを占める。これらの癌は、男性、及び５０歳を超える人々に多い。喫煙（無煙タバコを含む）及びアルコールの摂取は、頭頸部癌、特に口腔、中咽頭、下咽頭及び喉頭の癌の最も重要な危険因子である。頭頸部癌の８５パーセントは、喫煙と関係がある。本発明の方法では、免疫複合体を用いて、多くの悪性細胞を標的とすることができる。例えば、免疫複合体を用いて、口唇、口腔、咽頭、喉頭、鼻腔、又は副鼻腔の扁平上皮細胞を標的とすることができる。免疫複合体を用いて、粘膜表皮癌細胞、腺様癌細胞、腺癌細胞、小細胞未分化癌細胞、感覚神経芽腫細胞、ホジキンリンパ腫細胞、及び非ホジキンリンパ腫細胞を標的とすることができる。いくつかの実施形態では、頭頸部癌の治療方法は、ＥＧＦＲ（例えば、セツキシマブ、パニツムマブ、マツズマブ、及びザルツムマブ）、ＰＤ−１（例えば、ペンブロリズマブ）、及び／又はＭＵＣ１に結合可能な抗体を含む免疫複合体を投与することを含む。
【１１００】
本発明のいくつかの実施形態は、上記のような癌の治療方法を提供し、このとき癌は乳癌である。乳癌は、乳房内の様々な領域が起源であってよく、多数の異なる種類の乳癌の特徴が確認されている。例えば、本発明の免疫複合体を、非浸潤性乳管癌、浸潤性乳管癌（例えば、乳房の管状癌、髄様癌、粘液癌、乳頭癌、又は篩状癌）、非浸潤性小葉癌、侵襲的小葉癌、炎症性乳癌、及び他の形態の乳癌の治療に使用できる。いくつかの実施形態では、乳癌の治療方法は、ＨＥＲ２（例えば、トラスツズマブ、マルジェツキシマブ）、グリコプロテインＮＭＢ（例えば、グレンバツムマブ）、及び／又はＭＵＣ１に結合可能な抗体を含む免疫複合体を投与することを含む。
【１１０１】
本開示の非限定的態様の例
【１１０２】
本明細書に記載される本発明の主題の実施形態を含む態様は、単独で、又は１つ若しくは２つ以上の他の態様若しくは実施形態と組み合わせて有益であり得る。上記の説明を制限することなく、番号１〜９８の本開示の特定の非限定的態様を以下に示す。この開示を読む際に当業者に明らかであるように、個々の番号の態様はそれぞれ、前又は後の個々の番号の態様のいずれかと使用されてもよく、又はこれらと組み合わせてもよい。これは、かかる態様の組み合わせ全てに対する支持を提供することを意図し、以下にはっきりと提供される態様の組み合わせに制限されない。
【１１０３】
１．
（ａ）（ｉ）抗原結合ドメイン及び（ｉｉ）Ｆｃドメインを含む抗体構築物と、
（ｂ）アジュバント部分と、
（ｃ）リンカーと、を含み、
各アジュバント部分がリンカーを介して抗体構築物に共有結合している、免疫複合体。
【１１０４】
２．抗体構築物が標的化結合ドメインを更に含む、態様１に記載の免疫複合体。
【１１０５】
３．抗体構築物が抗体である、態様１に記載の免疫複合体。
【１１０６】
４．抗原結合ドメインが癌細胞の抗原に結合する、態様１〜３のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１０７】
５．抗原結合ドメインが、ＣＤＨ１、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４７、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＥＧＦＲ、ＶＥＧＦ、ＨＥＲ２、ＳＬＡＭＦ７、ＰＤＧＦＲａ及びｇｐ７５からなる群から選択される抗原に結合する、態様１〜４のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１０８】
６．抗原結合ドメインが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ４０、ＣＤ４７、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＰＤＧＦＲａ、ＥＧＦＲ、及びＨＥＲ２からなる群から選択される抗原に結合する、態様１〜５のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１０９】
７．抗原結合ドメインが、Ｔｎ抗原及びＴｈｏｍｓｅｎ−Ｆｒｉｅｄｅｎｒｅｉｃｈ抗原から選択される抗原に結合する、態様１〜６のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１１０】
８．抗体が、ポリクローナル抗体である、態様３〜７のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１１１】
９．抗体が、モノクローナル抗体である、態様３〜７のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１１２】
１０．抗体がヒト化されている、態様８又は９に記載の免疫複合体。
【１１１３】
１１．抗体がマウスである、態様８又は９に記載の免疫複合体。
【１１１４】
１２．抗体が、オララツマブ、オビヌツズマブ、トラスツズマブ、セツキシマブ、リツキシマブ、ペルツズマブ、ベバシズマブ、ダラツムマブ、エタネルセプト、及びエロツズマブからなる群から選択される、態様３〜１１のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１１５】
１３．抗体が、オララツマブである、態様３〜１１のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１１６】
１４．抗体が、オビヌツズマブである、態様３〜１１のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１１７】
１５．抗体が、トラスツズマブである、態様３〜１１のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１１８】
１６．抗体が、セツキシマブである、態様３〜１１のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１１９】
１７．抗体が、リツキシマブである、態様３〜１１のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１２０】
１８．抗体が、ペルツズマブである、態様３〜１１のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１２１】
１９．抗体が、ベバシズマブである、態様３〜１１のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１２２】
２０．抗体が、ダラツムマブである、態様３〜１１のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１２３】
２１．抗体が、エロツズマブである、態様３〜１１のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１２４】
２２．抗体が、エタネルセプトである、態様３〜１１のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１２５】
２３．抗体が、免疫チェックポイント阻害剤の抗原に結合する、態様３〜１１のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１２６】
２４．抗体が、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＬＡＧ−３、Ｂ７−Ｈ４、ＫＩＲ、ＴＮＦＲＳＦ４、ＯＸ４０Ｌ、ＩＤＯ−１、ＩＤＯ−２、ＣＥＡＣＡＭ１、ＢＴＬＡ、ＴＩＭ３、Ａ２Ａｒ、及びＶＩＳＴＡからなる群から選択される抗原に結合する、態様３〜１１のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１２７】
２５．抗体が、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−１、及びＰＤ−Ｌ１からなる群から選択される抗原に結合する、態様３〜１１のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１２８】
２６．抗体が、ＰＤ−１抗原に結合する、態様３〜１１のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１２９】
２７．抗体が、ＰＤ−Ｌ１抗原に結合する、態様３〜１１のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１３０】
２８．抗体が、ＣＴＬＡ４抗原に結合する、態様３〜１１のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１３１】
２９．抗体が、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、アテゾリズマブ、及びイピリムマブからなる群から選択される、態様３〜１１のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１３２】
３０．抗体が、ペンブロリズマブである、態様３〜１１のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１３３】
３１．抗体が、ニボルマブである、態様３〜１１のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１３４】
３２．抗体が、アテゾリズマブである、態様３〜１１のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１３５】
３３．抗体が、イピリムマブである、態様３〜１１のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１３６】
３４．抗体が、ＣＬＥＣ４Ｃ（ＢＤＣＡ−２、ＤＬＥＣ、ＣＤ３０３、ＣＬＥＣＳＦ７）、ＣＬＥＣ４Ｄ（ＭＣＬ、ＣＬＥＣＳＦ８）、ＣＬＥＣ４Ｅ（Ｍｉｎｃｌｅ）、ＣＬＥＣ６Ａ（Ｄｅｃｔｉｎ−２）、ＣＬＥＣ５Ａ（ＭＤＬ−１、ＣＬＥＣＳＦ５）、ＣＬＥＣ１Ｂ（ＣＬＥＣ−２）、ＣＬＥＣ９Ａ（ＤＮＧＲ−１）、及びＣＬＥＣ７Ａ（Ｄｅｃｔｉｎ−１）からなる群から選択される抗原に結合する、態様３〜１１のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１３７】
３５．抗体が、ＣＬＥＣ５Ａに結合する、態様３〜１１のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１３８】
３６．抗体が、ＣＬＥＣ６Ａ（Ｄｅｃｔｉｎ−２）に結合する、態様３〜１１のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１３９】
３７．抗体が、ＩｇＡ１である、態様３〜１１のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１４０】
３８．抗体が、ＩｇＡ２抗体である、態様３〜１１のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１４１】
３９．抗体が、ＩｇＧ抗体である、態様３〜１１のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１４２】
４０．抗体が、ＩｇＧ１抗体である、態様３〜１１のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１４３】
４１．抗体が、ＩｇＧ２抗体である、態様３〜１１のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１４４】
４２．抗体が、ＩｇＧ３抗体である、態様３〜１１のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１４５】
４３．抗体が、ＩｇＧ４抗体である、態様３〜１１のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１４６】
４４．抗体が、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、アテゾリズマブ、イピリムマブ、オビヌツズマブ、トラスツズマブ、セツキシマブ、リツキシマブ、ペルツズマブ、ベバシズマブ、ダラツムマブ、エタネルセプト、オララツマブ、及びエロツズマブからなる群から選択される抗体のバイオシミラーである、態様３〜１１のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１４７】
４５．抗体が、セツキシマブのバイオシミラーである、態様３〜１１のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１４８】
４６．抗体が、リツキシマブのバイオシミラーである、態様３〜１１のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１４９】
４７．抗体が、トラスツズマブのバイオシミラーである、態様３〜１１のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１５０】
４８．抗体が、修飾されたＦｃ領域を含む、態様３〜１１のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１５１】
４９．修飾されたＦｃ領域が、少なくとも１つのアミノ酸挿入、欠失、又は置換を含む、態様４８に記載の免疫複合体。
【１１５２】
５０．修飾されたＦｃ領域が、結果として、修飾Ｆｃ領域を欠く天然の抗体と比較して、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）、及びＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ）からなる群から選択されるＦｃ受容体の結合の調節をもたらす、態様４８に記載の免疫複合体。
【１１５３】
５１．修飾されたＦｃ領域により、Ｆｃ受容体であるＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）へのＦｃ領域の結合が増加する、態様４８に記載の免疫複合体。
【１１５４】
５２．修飾されたＦｃ領域により、Ｆｃ受容体であるＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ）へのＦｃ領域の結合が増加する、態様４８に記載の免疫複合体。
【１１５５】
５３．免疫複合体が、式Ｉの構造体、
【化１３１】
2019520352.tif 000132
又はその薬学的に許容される塩を有し、式中、Ａｂは抗体であり、Ａは、抗体中の未修飾アミノ酸側鎖、又は抗体中の修飾アミノ酸側鎖であり、Ｚは連結部分であり、Ａｄｊはアジュバント部分であり、下付き文字ｒは、１〜１０の整数である、態様１〜５２のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１５６】
５４．免疫複合体が、式Ｉａの構造体、
【化１３２】
2019520352.tif 000133
又はその薬学的に許容される塩であり、式中、
Ａｂは抗体であり、
Ａは、抗体中の未改変アミノ酸側鎖、又は抗体中の改変アミノ酸側鎖であり、
Ｚは連結部分であり、
Ｒ１は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから選択され、又は、
Ｚ、Ｒ１、及び結合先である窒素原子は、５〜８員複素環を含む連結部分を形成し、
各Ｙは、独立して、ＣＨＲ２であり、式中、Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、及びＮＨ２から選択され、
Ｒ３は、Ｃ１〜６アルキル及び２〜６員ヘテロアルキルから選択され、それぞれは、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、オキソ（＝Ｏ）、アルキルアミノ、アミド、アシル、ニトロ、シアノ、及びアルコキシからなる群から選択される、１つ又は２つ以上のメンバーで任意に置換され、
Ｘは、Ｏ及びＣＨ２から選択され、
下付き文字ｎは、１〜１２の整数であり、
下付き文字ｒは、１〜１０の整数である、態様５３に記載の免疫複合体。
【１１５７】
５５．免疫複合体が、式Ｉｂの構造体、
【化１３３】
2019520352.tif 000134
又はその薬学的に許容される塩であり、式中、
Ａｂは抗体であり、
Ａは、抗体中の未改変アミノ酸側鎖、又は抗体中の改変アミノ酸側鎖であり、
Ｚは連結部分であり、
Ｒ１は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから選択され、又は、
Ｚ、Ｒ１、及び結合先である窒素原子は、５〜８員複素環を含む連結部分を形成し、
各Ｙは、独立して、ＣＨＲ２であり、式中、Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、及びＮＨ２から選択され、
Ｘは、Ｏ及びＣＨ２から選択され、
下付き文字ｎは、１〜１２の整数であり、
Ｗは、Ｏ、及びＣＨ２からなる群から選択される、態様５４に記載の免疫複合体。
【１１５８】
５６．免疫複合体が、式Ｉｃの構造体、
【化１３４】
2019520352.tif 000135
又はその薬学的に許容される塩であり、式中、
Ａｂは抗体であり、
下付き文字ｒは、１〜１０の整数であり、
Ａは、抗体中の未改変アミノ酸側鎖、又は抗体中の改変アミノ酸側鎖であり、
Ｚは連結部分であり、
Ｒ１は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから選択され、又は、
Ｚ、Ｒ１、及び結合先である窒素原子は、５〜８員複素環を含む連結部分を形成し、
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、及びＮＨ２から選択される、態様５５に記載の免疫複合体。
【１１５９】
５７．免疫複合体が、式Ｉｄの構造体、
【化１３５】
2019520352.tif 000136
又はその薬学的に許容される塩を有し、式中、Ａｂは抗体であり、Ａは、抗体中の未修飾アミノ酸側鎖、又は抗体中の修飾アミノ酸側鎖であり、Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、及びＮＨ２から選択され、下付き文字ｒは、１〜１０の整数である、態様５６に記載の免疫複合体。
【１１６０】
５８．Ｚが、次から選択され、
【化１３６】
2019520352.tif 000137
下付き文字ｘは、１〜１２の整数であり、下付き文字ｙは、１〜３０の整数であり、破線
【化１３７】
2019520352.tif 000138
は、アジュバント部分に結合する点を表し、波線
【化１３８】
2019520352.tif 000139
は、抗体中のアミノ酸側鎖に結合する点を表す、態様５３〜５６のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１６１】
５９．免疫複合体が、式ＩＩの構造体、
【化１３９】
2019520352.tif 000140
又はその薬学的に許容される塩を有し、式中、Ａｂは抗体であり、Ａは、抗体中の未修飾アミノ酸側鎖、又は抗体中の修飾アミノ酸側鎖であり、Ａｄｊはアジュバント部分であり、下付き文字ｒは、１〜１０の整数であり、
Ｚ１は、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＣＨ２−から選択され、
Ｚ２及びＺ４は、独立して、結合、Ｃ１〜３０アルキレン、及び３〜３０員ヘテロアルキレンから選択され、このとき、
Ｃ１〜３０アルキレン及び３〜３０員ヘテロアルキレン中の隣接する原子のうち１つ又は２つ以上のグループは、任意にかつ独立して、−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲａＣ（Ｏ）−、又は−Ｃ（Ｏ）ＮＲａ−で置換され、
Ｃ１〜３０アルキレン及び３〜３０員ヘテロアルキレン中の隣接する原子のうち１つ又は２つ以上のグループは、任意にかつ独立して、４〜８員の二価炭素環で置換され、
Ｃ１〜３０アルキレン及び３〜３０員ヘテロアルキレン中の隣接する原子のうち１つ又は２つ以上のグループは、任意にかつ独立して、Ｏ、Ｓ、及びＮから選択される１〜４つのヘテロ原子を有する４〜８員の二価複素環で置換され、
各Ｒａは、Ｈ及びＣ１〜６アルキルから独立して選択され、
Ｚ３は、結合、二価ペプチド部分、二価ポリマー部分から選択され、
Ｚ５は、抗体中のアミノ酸側鎖の側鎖に結合される、態様１〜５２のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１６２】
６０．免疫複合体が、式ＩＩａの構造体、
【化１４０】
2019520352.tif 000141
又はその薬学的に許容される塩であり、式中、
Ｚ１は、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＣＨ２−から選択され、
Ｚ２及びＺ４は、独立して、結合、Ｃ１〜３０アルキレン、及び３〜３０員ヘテロアルキレンから選択され、このとき、
Ｃ１〜３０アルキレン及び３〜３０員ヘテロアルキレン中の隣接する原子のうち１つ又は２つ以上のグループは、任意にかつ独立して、−Ｃ（Ｏ）−、
−ＮＲａＣ（Ｏ）−又は−Ｃ（Ｏ）ＮＲａ−で置換され、
Ｃ１〜３０アルキレン及び３〜３０員ヘテロアルキレン中の隣接する原子のうち１つ又は２つ以上のグループは、任意にかつ独立して、４〜８員の二価炭素環で置換され、
Ｃ１〜３０アルキレン及び３〜３０員ヘテロアルキレン中の隣接する原子のうち１つ又は２つ以上のグループは、任意にかつ独立して、Ｏ、Ｓ、及びＮから選択される１〜４つのヘテロ原子を有する４〜８員の二価複素環で置換され、
各Ｒａは、Ｈ及びＣ１〜６アルキルから独立して選択され、
Ｚ３は、結合、二価ペプチド部分、二価ポリマー部分から選択され、
Ｚ５は、アミン結合部分及びチオール結合部分から選択される、態様５９に記載の免疫複合体。
【１１６３】
６１．免疫複合体が、式ＩＩＩの構造体、
【化１４１】
2019520352.tif 000142
又は薬学的に許容されるその塩を有し、式中、Ａｂは、少なくとも１つのリジン側鎖を有する抗体であり、Ａｄｊはアジュバントであり、Ｇは、ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、又は結合であり、Ｌはリンカーであり、下付き文字ｒは、１〜１０の整数である、態様１〜５２のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１６４】
６２．Ｌが、次から選択され、
【化１４２】
2019520352.tif 000143
式中、Ｒは任意に存在し、１〜８個の炭素単位を含む、直鎖又は分岐鎖、環状又は直線状、飽和又は不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖であり、ａは、１〜４０の整数であり、各Ａは、独立して、任意のアミノ酸から選択され、下付き文字ｃは、１〜２０の整数であり、破線
【化１４３】
2019520352.tif 000144
は、
【化１４４】
2019520352.tif 000145
に結合する点を表し、波線
【化１４５】
2019520352.tif 000146
は、
【化１４６】
2019520352.tif 000147
に結合する点を表す、態様６１に記載の免疫複合体。
【１１６５】
６３．免疫複合体が、式ＩＩＩａ〜式ＩＩＩｇの構造体、
【化１４７】
2019520352.tif 000148
又は薬学的に許容されるその塩を有し、式中、Ａｂは、少なくとも１つのリジン側鎖を有する抗体であり、Ａｄｊはアジュバントであり、Ｇは、ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、又は結合であり、Ｒは任意に存在し、１〜８個の炭素単位を含む、直鎖又は分岐鎖、環状又は直線状、飽和又は不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖であり、下付き文字ａは１〜４０の整数であり、各Ａは、独立して任意のアミノ酸から選択され、下付き文字ｃは１〜２０の整数であり、下付き文字ｒは、１〜１０の整数である、態様６１に記載の免疫複合体。
【１１６６】
６４．免疫複合体が、式ＩＶａ〜式ＩＶｋの構造体、
【化１４８】
2019520352.tif 000149
又は薬学的に許容されるその塩を有し、式中、Ａｂは、少なくとも１つのリジン側鎖を有する抗体であり、Ａｄｊはアジュバントであり、下付き文字ｒは、１〜１０の整数である、態様６１〜６３のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１６７】
６５．アジュバント部分が、パターン認識受容体（ＰＲＲ）アゴニストである、態様１〜５３、５９、及び６１〜６４のうちいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１６８】
６６．アジュバント部分が、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニストである、態様６５に記載の免疫複合体。
【１１６９】
６７．アジュバント部分が、ＴＬＲ２アゴニスト、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、ＴＬＲ７アゴニスト、ＴＬＲ８アゴニスト、ＴＬＲ７／ＴＬＲ８アゴニスト、及びＴＬＲ９アゴニストからなる群から選択される、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニストである、態様６５に記載の免疫複合体。
【１１７０】
６８．アジュバント部分が、ＴＬＲ７アゴニスト、ＴＬＲ８アゴニスト、又はＴＬＲ７／ＴＬＲ８アゴニストである、態様６５に記載の免疫複合体。
【１１７１】
６９．アジュバント部分が、ガーディキモド（１−（４−アミノ−２−エチルアミノメチルイミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）−２−メチルプロパン−２−オール）、イミキモド（Ｒ８３７）、ロキソリビン、ＩＲＭ１（１−（２−アミノ−２−メチルプロピル）−２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ−［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン）、ＩＲＭ２（２−メチル−１−［２−（３−ピリジン−３−イルプロポキシ）エチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン）、ＩＲＭ３（Ｎ−（２−［２−［４−アミノ−２−（２−メトキシエチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］エトキシ］エチル）−Ｎ−メチルシクロヘキサンカルボキサミド）、ＣＬ０９７（２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン）、ＣＬ３０７、ＣＬ２６４、レシキモド、３Ｍ−０５２／ＭＥＤＩ９１９７、ＳＤ−１０１（Ｎ−［（４Ｓ）−２，５−ジオキソ−４−イミダゾリジニル］−尿素）、モトリモド（２−アミノ−Ｎ，Ｎ−ジプロピル−８−［４−（ピロリジン−１−カルボニル）フェニル］−３Ｈ−１−ベンザゼピン−４−カルボキサミド）、ＣＬ０７５（２−プロピルチアゾロ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン）、及びＴＬ８−５０６（３Ｈ−１−ベンザゼピン−４−カルボン酸、２−アミノ−８−（３−シアノフェニル）−、エチルエステル）、Ｎ−α−パルミトイル−Ｓ−［２，３−ビス（パルミトイルオキシ）−（２ＲＳ）−プロピル］−Ｌ−システイン、パルミトイル−Ｃｙｓ（（ＲＳ）−２，３−ジ（パルミトイルオキシ）−プロピル）（Ｐａｍ３Ｃｙｓ）、トリアシルリピドＡ（ＯＭ−１７４）、リポテイコ酸（ＬＴＡ）、ペプチドグリカン、ＣＬ４１９（Ｓ−（２，３−ビス（パルミトイルオキシ）−（２ＲＳ）プロピル）−（Ｒ）−システイニルスペルミン）、Ｐａｍ２ＣＳＫ４（Ｓ−［２，３−ビス（パルミトイルオキシ）−（２ＲＳ）−プロピル］−［Ｒ］−システイニル−［Ｓ］−セリル−［Ｓ］−リジル−［Ｓ］−リジル−［Ｓ］−リジル−［Ｓ］−リジン×３  ＣＦ３ＣＯＯＨ）、ＣＬ５７２（Ｓ−（２−ミリストイルオキシエチル）−（Ｒ）−システイニル４−（（６−アミノ−２−（ブチルアミノ）−８−ヒドロキシ−９Ｈ−プリン−９−イル）メチル）アニリン）、ＣＬ４１３（Ｓ−（２，３−ビス（パルミトイルオキシ）−（２ＲＳ）プロピル）−（Ｒ）−システイニル−（Ｓ）−セリル−（Ｓ）−リジル−（Ｓ）−リジル−（Ｓ）−リジル−（Ｓ）−リジル４−（（６−アミノ−２−（ブチルアミノ）−８−ヒドロキシ−９Ｈ−プリン−９−イル）メチル）アニリン）、及びＣＬ４０１（Ｓ−（２，３−ビス（パルミトイルオキシ）−（２ＲＳ）プロピル）−（Ｒ）−システイニル４−（（６−アミノ−２（ブチルアミノ）−８−ヒドロキシ−９Ｈ−プリン−９−イル）メチル）アニリン）からなる群から選択される、態様６５に記載の免疫複合体。
【１１７２】
７０．アジュバントがイミダゾキノリン化合物である、態様６５に記載の免疫複合体。
【１１７３】
７１．アジュバント部分が、次式のものであり、
【化１４９】
2019520352.tif 000150
式中、各Ｊは、独立して、水素、ＯＲ４、又はＲ４であり、各Ｒ４は、独立して、水素、又は、１〜８個の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、若しくはヘテロアリールアルキル基であり、Ｑは任意に存在し、１〜８個の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、又はヘテロアリールアルキル基であり、破線
【化１５０】
2019520352.tif 000151
は、アジュバントに結合する点を表す、態様１〜５３、５９、及び６１〜６４のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１７４】
７２．アジュバント部分が、次式のものであり、
【化１５１】
2019520352.tif 000152
式中、各Ｒ４は、独立して、水素、又は、１〜８個の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、若しくはヘテロアリールアルキル基からなる群から選択され、破線
【化１５２】
2019520352.tif 000153
は、アジュバントに結合する点を表す、態様７１に記載の免疫複合体。
【１１７５】
７３．アジュバント部分が、次式のものであり、
【化１５３】
2019520352.tif 000154
式中、Ｊは、水素、ＯＲ４、又はＲ４であり、各Ｒ４は、独立して、水素、又は、１〜８個の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、若しくはヘテロアリールアルキル基であり、Ｑは、１〜８個の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、又はヘテロアリールアルキル基からなる群から選択され、破線
【化１５４】
2019520352.tif 000155
は、アジュバントに結合する点を表す、態様１〜５３、５９、及び６１〜６４のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１７６】
７４．アジュバント部分が、次式のものであり、
【化１５５】
2019520352.tif 000156
式中、各Ｒ４は、独立して、水素、又は、１〜８個の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、若しくはヘテロアリールアルキル基からなる群から選択され、破線
【化１５６】
2019520352.tif 000157
は、アジュバントに結合する点を表す、態様７２に記載の免疫複合体。
【１１７７】
７５．アジュバント部分が、次式のものであり、
【化１５７】
2019520352.tif 000158
式中、各Ｒ４は、独立して、水素、又は、１〜８個の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、若しくはヘテロアリールアルキル基であり、Ｑは、１〜８個の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、又はヘテロアリールアルキル基であり、破線
【化１５８】
2019520352.tif 000159
は、アジュバントに結合する点を表す、態様１〜５３、５９、及び６１〜６４のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１７８】
７６．アジュバント部分が、次式のものであり、
【化１５９】
2019520352.tif 000160
式中、各Ｊは、独立して、水素、ＯＲ４、又はＲ４であり、各Ｒ４は、独立して、水素、又は１〜８個の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、若しくはヘテロアリールアルキル基であり、各Ｕは、独立して、ＣＨ又はＮであり、このとき少なくとも１つのＵがＮであり、各下付き文字ｔは、１〜３の整数であり、Ｑは任意に存在し、１〜８個の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、又はヘテロアリールアルキル基であり、破線
【化１６０】
2019520352.tif 000161
は、アジュバントに結合する点を表す、態様１〜５３、５９、及び６１〜６４のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１７９】
７７．アジュバント部分が、次式のものであり、
【化１６１】
2019520352.tif 000162
式中、Ｒ４は、水素、又は、１〜８個の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、及びヘテロアリールアルキル基からなる群から選択され、Ｑは、１〜８個の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、又はヘテロアリールアルキル基であり、破線
【化１６２】
2019520352.tif 000163
は、アジュバントに結合する点を表す、態様７４に記載の免疫複合体。
【１１８０】
７８．アジュバント部分が、次式のものであり、
【化１６３】
2019520352.tif 000164
式中、Ｊは、水素、ＯＲ４、又はＲ４であり、各Ｒ４は、独立して、水素、又は１〜８個の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、若しくはヘテロアリールアルキル基であり、Ｒ５は、水素、又は、１〜１０個の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、若しくはヘテロアリールアルキル基であり、Ｑは、１〜８個の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、若しくはヘテロアリールアルキル基であり、破線
【化１６４】
2019520352.tif 000165
は、アジュバントに結合する点を表す、態様１〜５３、５９、及び６１〜６３のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１８１】
７９．アジュバント部分が、次式のものであり、
【化１６５】
2019520352.tif 000166
式中、Ｊは、水素、ＯＲ４、又はＲ４であり、各Ｒ４は、独立して、水素、又は、１〜８個の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、及びヘテロアリールアルキル基からなる群から選択され、Ｕは、ＣＨ又はＮであり、Ｖは、ＣＨ２、Ｏ、又はＮＨであり、各下付き文字ｔは、独立して、１〜３の整数であり、破線
【化１６６】
2019520352.tif 000167
は、アジュバントに結合する点を表す、態様７６に記載の免疫複合体。
【１１８２】
８０．アジュバント部分が、次式のものであり、
【化１６７】
2019520352.tif 000168
式中、Ｒ１は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから選択され、Ｒ３は、Ｃ１〜６アルキル及び２〜６員ヘテロアルキルから選択され、これらはそれぞれ、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、オキソ（＝Ｏ）、アルキルアミノ、アミド、アシル、ニトロ、シアノ、及びアルコキシからなる群から選択される１つ又は２つ以上のメンバーで任意に置換され、Ｘは、Ｏ及びＣＨ２から選択され、各Ｙは、独立して、ＣＨＲ２であり、このとき、Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、及びＮＨ２から選択され、下付き文字ｎは、１〜１２の整数であり、破線
【化１６８】
2019520352.tif 000169
は、アジュバントに結合する点を表す、態様１〜５３、５９、及び６１〜６４のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１８３】
８１．アジュバント部分が、次式のものであり、
【化１６９】
2019520352.tif 000170
式中、Ｗは、Ｏ及びＣＨ２からなる群から選択され、Ｒ１は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから選択され、各Ｙは、独立して、ＣＨＲ２であり、このとき、Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、及びＮＨ２から選択され、下付き文字ｎは、１〜１２の整数であり、破線
【化１７０】
2019520352.tif 000171
は、アジュバントに結合する点を表す、態様１〜５３、５９、及び６１〜６４のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１８４】
８２．アジュバント部分が、次式のものであり、
【化１７１】
2019520352.tif 000172
式中、Ｗは、Ｏ及びＣＨ２からなる群から選択され、Ｒ１は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから選択され、各Ｙは、独立して、ＣＨＲ２であり、このとき、Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、及びＮＨ２から選択され、下付き文字ｎは、１〜１２の整数であり、破線
【化１７２】
2019520352.tif 000173
は、アジュバントに結合する点を表す、態様１〜５３、５９、及び６１〜６４のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１８５】
８３．アジュバント部分が、次式のものであり、
【化１７３】
2019520352.tif 000174
式中、Ｗは、Ｏ及びＣＨ２からなる群から選択され、Ｘは、Ｏ及びＣＨ２からなる群から選択され、各Ｙは、独立して、ＣＨＲ２であり、このとき、Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、及びＮＨ２から選択され、下付き文字ｎは、１〜１２の整数であり、破線
【化１７４】
2019520352.tif 000175
は、アジュバントに結合する点を表す、態様１〜５３、５９、及び６１〜６４のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１８６】
８４．アジュバント部分が、次式のものであり、
【化１７５】
2019520352.tif 000176
式中、Ｒ１は、Ｈ及びＣ１〜４アルキル基から選択され、Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、及びＮＨ２から選択され、破線
【化１７６】
2019520352.tif 000177
は、アジュバントに結合する点を表す、態様１〜５３、５９、及び６１〜６４のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１８７】
８５．アジュバント部分が、次式のものであり、
【化１７７】
2019520352.tif 000178
式中、Ｒ１は、Ｈ及びＣ１〜４アルキル基から選択され、Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、及びＮＨ２から選択され、破線
【化１７８】
2019520352.tif 000179
は、アジュバントに結合する点を表す、態様１〜５３、５９、及び６１〜６４のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１８８】
８６．アジュバント部分が、次のものであり、
【化１７９】
2019520352.tif 000180
【化１８０】
2019520352.tif 000181
式中、破線
【化１８１】
2019520352.tif 000182
は、アジュバントに結合する点を表す、態様１〜５３、５９、及び６１〜６４のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１８９】
８７．次のもの、
【化１８２】
2019520352.tif 000183
【化１８３】
2019520352.tif 000184
【化１８４】
2019520352.tif 000185
【化１８５】
2019520352.tif 000186
【化１８６】
2019520352.tif 000187
【化１８７】
2019520352.tif 000188
又は薬学的に許容されるその塩であって、式中、Ａｂは、少なくとも１つのリジン側鎖を有する抗体であり、下付き文字ｒは、１〜１０の整数である、免疫複合体。
【１１９０】
８８．ｒが、１〜４である、態様８７に記載の免疫複合体。
【１１９１】
８９．リンカーが、約２．５Å〜約４５Åである、態様１〜８８のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１９２】
９０．リンカーが、約２．５Å〜約２０Åである、態様１〜８８のいずれか１つに記載の免疫複合体。
【１１９３】
９１．複数の、態様１１〜９０のいずれか１つに記載の免疫複合体を含む、組成物。
【１１９４】
９２．免疫複合体当たりのアジュバント部分の平均数が、約１〜約９である、態様９１に記載の組成物。
【１１９５】
９３．免疫複合体当たりのアジュバント部分の平均数が、約０．５〜約４である、態様９１に記載の組成物。
【１１９６】
９４．１種又は２種以上の薬学的に許容される賦形剤を更に含む、態様９１〜９３のいずれか１つに記載の組成物。
【１１９７】
９５．態様１〜９０のいずれか１つに記載の治療有効量の免疫複合体、又は、態様９１〜９４のいずれか１つに記載の組成物をこれらが必要な被検体に投与することを含む、癌の治療方法。
【１１９８】
９６．癌が乳癌である、態様９５に記載の方法。
【１１９９】
９７．癌が頭頸部癌である、態様９５に記載の方法。
【１２００】
９８．癌がリンパ腫である、態様９５に記載の方法。
【１２０１】
実施例
実施例１．抗体結合のためのイミダゾキノリン
【１２０２】
遊離アミン基を有するイミダゾキノリン化合物（化合物１）又はマレイミド基を有するイミダゾキノリン化合物（化合物２）を、スキーム１に従って合成し、リンカーの技術、及び抗体−アジュバント免疫複合体の効果の迅速な評価を可能にした。
【１２０３】
アジュバントによる機能付与が、化合物２又は化合物１の免疫活性化誘発能への影響を与えるかどうかを確認するため、フローサイトメトリーによる分析に先立ち、ヒト抗原提示細胞を、１０倍に段階希釈したＲ８４８、化合物２、化合物１、又は対照ＴＬＲアゴニストであるＣＬ３０７で、１８時間刺激した。データは、化合物２及び化合物１は、アッセイを行った各濃度範囲において、Ｒ８４８に対して同様に作用することを示した（図４、化合物１のデータはなし）。
【１２０４】
次に、機能付与された各ＴＬＲアゴニストの、ヒトＴＬＲ７又はＴＬＲ８の活性化能を直接評価した。ＨＥＫ２９３細胞に、ヒトＴＬＲ７若しくはＴＬＲ８又はマウスＴＬＲ７と、誘導性分泌胚性アルカリホスファターゼレポーター遺伝子を、ＮＦ−κＢ及びＡＰ−１結合部位に融合したＩＦＮ−βミニマルプロモーターの制御下で同時にトランスフェクトした。続いて細胞を、２倍で段階希釈した指定の各アジュバントと共に、アルカリホスファターゼの基質の存在下で、１２時間、３７℃でインキュベートした。活性を分光測光法（ＯＤＯＤ６５０ｎｍ）によって測定した。データは、化合物１が、ヒトＴＬＲ７及びＴＬＲ８の両方を活性化したが、化合物２は、ＴＬＲ７活性に特異的であったことを示す（図２）。同様に、化合物２及び化合物１の両方とも、マウスＴＬＲ７を活性化した（図２）。
【１２０５】
【化１８８】
2019520352.tif 000189
実施例２．抗体アジュバント複合体の調製
【１２０６】
リツキシマブとの複合体の調製には、化合物１を非切断性架橋剤（ＳＭＣＣ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）及び切断性架橋剤（ＳＰＤＰ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて、スキーム２Ａ及びスキーム２Ｂに概説する一般スキームに従って改変した。
【１２０７】
【化１８９】
2019520352.tif 000190
【１２０８】
遊離アミンを有するアジュバント（Ｒ８４８、化合物１など）を、化合物を１：１のモル比で、ＰＢＳ又はｐＨ７〜７．５のその他好適な緩衝液中で反応させることによって、ＳＭＣＣ、ＳＰＤＰ、又はその他ＮＨＳ含有リンカーに結合させた。全ての反応を遮光下で行い、室温で３０分間インキュベートした。可能であれば、アジュバント架橋剤複合体を、逆相高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって精製した。以下に記載されるように、アジュバント架橋剤複合体を、結合後すぐに利用した。
【１２０９】
アジュバント−リンカーの組み合わせを、Ｚｅｂａ  Ｓｐｉｎ  Ｄｅｓａｌｔｉｎｇ  Ｃｏｌｕｍｎｓ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）によって脱塩し、脱イオン水にバッファー交換した。続いてサンプルを、Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＬＣ／ＭＳ−２０２０  Ｓｉｎｇｌｅ  Ｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ  Ｌｉｑｕｉｄ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒで分析した。０〜１００％アセトニトリルの範囲の勾配を用いる方法（１００〜１０００ｍ／ｚ内の低分子の検出に好適）を、化合物の検出に用いた。
【１２１０】
反応効率をＬＣ−ＭＳによって評価したところ、遊離ＳＭＣＣの大部分が化合物１と反応し、化合物１−ＳＭＣＣを形成しており、これは５３１の想定分子量を有していたことを示した（図３、右下のパネル）。化合物１−ＳＰＤＰについても同様の反応効率が観察された（図示せず）。
【１２１１】
化合物１の架橋剤に対する良好な結合に続いて、抗体をＳＡＴＡ架橋剤で修飾し、抗体上の遊離アミンを保護スルフヒドリル基に変換した。ＳＡＴＡの結合に続いて、スルフヒドリル基がヒドロキシルアミンによって脱アセチル化され、スキーム３に示されるように、露出したチオールが、アジュバント−ＳＭＣＣ化合物のマレイミド要素と反応した。
【１２１２】
【化１９０】
2019520352.tif 000191
【１２１３】
抗体を、リン酸塩緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に１〜５ｍｇ／ｍＬで再懸濁し、ＳＡＴＡ架橋剤（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、使用直前に７０ｍＭの無水ＤＭＳＯに再懸濁した。抗体を、１０倍モル過剰のＳＡＴＡと、室温で３０分間反応させた。ＳＡＴＡ修飾抗体を、３回洗浄し（Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ  Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｕｎｉｔｓ、Ｕｌｔｒａｃｅｌ−１００膜付きを、製造業者の指示（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）に従って平衡化したＰＢＳ中）、過剰の試薬及び副産物から精製した。体当たりのＳＡＴＡ架橋剤の数を、マトリックス支援レーザー脱離イオン化質量分析法（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）によって決定した。
【１２１４】
ＳＡＴＡ修飾抗体を、２時間の室温でのインキュベーション（ｐＨ７．２〜７．５、０．０５Ｍヒドロキシルアミン及び２．５ｍＭ  ＥＤＴＡ含むＰＢＳ中）によって脱アセチル化した。続いて脱アセチル化ＳＡＴＡ修飾抗体を３回洗浄し（Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ  Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｕｎｉｔｓ、Ｕｌｔｒａｃｅｌ−１００膜付きを、製造業者の指示（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）に従って平衡化した５ｍＭ  ＥＤＴＡを含むＰＢＳ中）、過剰の試薬及び副産物から精製した。その後、精製した脱アセチル化ＳＡＴＡ修飾抗体を、５〜４０倍モル過剰のアジュバント−架橋剤と、３０分間〜１時間室温にて反応させた。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦによって決定するとき、正確なモル過剰率は、抗体当たりのＳＡＴＡ分子の平均数よりも、１０倍高かった。結合後、抗体アジュバント免疫複合体を、３回洗浄し（Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ  Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｕｎｉｔｓ、Ｕｌｔｒａｃｅｌ−１００膜付きを、製造業者の指示（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）に従って平衡化したＰＢＳ中）、過剰の試薬及び副産物から精製した。
【１２１５】
平均薬物対抗体比を、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦによって決定した。サンプルを、Ｚｅｂａ  Ｓｐｉｎ  Ｄｅｓａｌｔｉｎｇ  Ｃｏｌｕｍｎｓ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて、脱塩し、脱イオン水にバッファー交換した。まず、マトリックス（シナピン酸）をＭＡＬＤＩサンプルターゲットプレート上にスポッティングし、乾燥させる。次に、サンプルを、１：１の比でウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）標準液（０．２５〜１ｐＭ  ＢＳＡ）と混合し、及び混合しないサンプルを調製し、マトリックスサンプルと共にプレート上にスポッティングした。マトリックス及びサンプル層の両方を乾燥させた後、サンプルを、ＡＢ  Ｓｃｉｅｘ  ＴＯＦ／ＴＯＦ  ５８００（Ｓｔａｎｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃａｎａｒｙ  Ｃｅｎｔｅｒ）で分析した。負イオン化を伴う高質量検出器（ＣｏｖａｌＸ）によって、完全な無傷ＩｇＧ抗体のタンパク質サイズ範囲（〜１５０，０００ｋＤａ）での、感受性及び解像度の向上が可能であった。
【１２１６】
抗体−アジュバント免疫複合体（スキーム３に示されるＡｂ−ＳＡＴＡ−ＳＭＣＣ−アジュバント）の良好な共役に続いて、平均薬物対抗体比を、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析によって決定した（表１）。ＳＡＴＡ修飾抗体と非修飾抗体との間の質量差を利用して、抗体当たりのリンカーの存在数を決定した。ＳＡＴＡ修飾抗体と免疫複合体との間の質量差を利用して、平均薬物対抗体比（ＤＡＲ）を決定した。
【表１】
2019520352.tif 000192
実施例３．ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの抗体アジュバント複合体活性の評価
【１２１７】
ヒト抗原提示細胞の単離。ヒト抗原提示細胞（ＡＰＣ）を、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ５６、ＣＤ６６ｂ及びＣＤ２３５ａに対するモノクローナル抗体を含むＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ  Ｈｕｍａｎ  Ｍｏｎｏｃｙｔｅ  Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ  Ｃｏｃｋｔａｉｌ（Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いる密度勾配遠心によって、健康な給血者（Ｓｔａｎｆｏｒｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｎｔｅｒ）から得られたヒト末梢血単核細胞から陰性選択した。続いて、未熟なＡＰＣを、純度＞９７％まで精製した（ＣＤ１６枯渇を行わず、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ５６、ＣＤ６６ｂ、ＣＤ１２３及びＣＤ２３５ａに対するモノクローナル抗体を含む、ＥａｓｙＳｅｐ  Ｈｕｍａｎ  Ｍｏｎｏｃｙｔｅ  Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ  Ｋｉｔを用いる陰性選択による）。
【１２１８】
腫瘍細胞の調製。腫瘍細胞を、０．１％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含むＰＢＳ中に、細胞１〜１０×１０６個／ｍＬで再懸濁した。続いて細胞を、２μＭ  ＣＦＳＥ（最終濃度１μＭ）とインキュベートした。この反応は、２分後に、１０ｍＬの完全培地（１０％  ＦＢＳ含む）を加えることによって停止し、完全培地で１回洗浄した。細胞を、２％パラホルムアルデヒドに固定してＰＢＳで３回洗浄する、又は、未固定のままのいずれかとして、その後、１０％  ＤＭＳＯ、２０％  ＦＢＳ、及び７０％培地中で細胞を凍結した。
【１２１９】
ＡＰＣ−腫瘍の共培養。２×１０５個のＡＰＣを、６．５×１０５個の自家又は同種のＣＦＳＥラベル化腫瘍細胞の存在下又は非存在下で、９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）（１０％ウシ胎児血清、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、ピルビン酸ナトリウム、非必須アミノ酸、５０μＭ  ２−ＭＥを加え、指定された場合、種々濃度の抗腫瘍抗体と指定のアジュバントを加えたＩＭＤＭ培地（Ｇｉｂｃｏ）を含む）にてインキュベートした。１８時間後、細胞と無細胞上清を、フローサイトメトリーにて分析した。
【１２２０】
結果。免疫複合体の免疫活性化誘発能を判定するため、新鮮な血液から得たヒトＡＰＣ（〜９５％単球）を、３：１の比のＣＦＳＥラベル化ヒトＢ細胞リンパ腫細胞（Ｔｏｌｅｄｏ，ＡＴＣＣ）、及び、２倍で段階希釈した、化合物１、リツキシマブ（Ａｂ）、リツキシマブ＋化合物１（混合物）、又はリツキシマブ−ＳＡＴＡ−ＳＭＣＣ−化合物１（複合体）と共にインキュベートした。これらの実験では、免疫複合体は、抗体当たり平均２．１分子の化合物１を有しており、その結果、化合物１の投与量を調節し、全条件において、等モル量の化合物１を確実に比較するようにした。１８時間後、フローサイトメトリーによって、活性化マーカーの発現について細胞を分析した。このデータは、ＣＤ４０、ＣＤ８６及びＨＬＡ−ＤＲが、Ａｂのみ、化合物１のみ、又は混合物で刺激したものと比較して、免疫複合体で刺激したＡＰＣにおいて数倍高いレベルで発現していたことから、免疫複合体がＡＰＣ活性化の誘発において遥かに優れていたことを示す（図４）。
【１２２１】
免疫複合体による活性化後に高レベルの活性化マーカーが観察されたと考え、ＡＰＣ活性化と極めて相関する阻害性マーカーである、ＰＤ−Ｌ１の発現を調べた。驚くべきことに、アジュバントのみ又は混合物と比較して、免疫複合体では、ＰＤ−Ｌ１発現の上方制御の誘発が極めて低かった（図５）。とりわけ、ＰＤ−Ｌ１発現は、最大生物活性濃度に相当する、０．１μＭの免疫複合体においてごくわずかであった（図４、図５）。これらのデータは、免疫複合体がヒトＡＰＣにおける予期せぬシグナル伝達経路を活性化し得ることを示唆している。
【１２２２】
この仮説の裏付けとして、免疫複合体で刺激した細胞は、意外にも樹状細胞を生じ、ＤＣに分化する単球と一致する、形態学的変化を受けていた。この発見は、ＤＣ関連表面分子の分析を促した。その形態学的特徴と一致して、混合物ではなく免疫複合体で刺激したＡＰＣは、ＣＤ１４、ＣＤ１６及びＣＤ１６３発現を、用量依存的に下方制御した（図６）。単球及びマクロファージによって発現されるが単球由来のＤＣでは大きく減少しているこれらの分子の下方制御は、免疫複合体に曝露されたヒト単球が迅速にＤＣに分化することを示す。これらのデータに一致して、免疫複合体によって刺激されたＡＰＣが、ヒト炎症性単球由来ＤＣのマーカーである、ＣＤ１２３の発現を上方制御した（図６）。
【１２２３】
ＣＤ４０、ＣＤ８６及びＨＬＡ−ＤＲなどのＴ細胞刺激分子の発現は、有効なＴ細胞活性化に必要であるが、ＡＰＣは、サイトカインの分泌を介するその後の免疫応答の性質にも影響を及ぼす。このため、免疫複合体の、刺激後のヒトＡＰＣにおけるサイトカイン分泌の誘発能を、上記のように調べた。データは、免疫複合体によって分化した細胞が、数倍高いＩＬ−１β及びＴＮＦαを分泌したのに対し、抗炎症性サイトカインであるＩＬ−１０の分泌が低い傾向であった（図７）。
【１２２４】
切断可能なリンカーを有する免疫複合体についても調製し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＡＰＣ活性化及びＤＣ分化を誘発することが見いだされた（図８）。〜９５％単球のヒトＡＰＣを、２倍で段階希釈したリツキシマブ−ＳＡＴＡ−ＳＰＤＰ−化合物１（複合体、切断可能）、リツキシマブ単独（Ａｂ）、化合物１単独又はリツキシマブ＋化合物１（混合物）で、ＣＦＳＥ標識化腫瘍細胞存在下にて刺激した。免疫複合体（切断可能）は、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦで確認したとき、１．４のＤＡＲを有していた。１８時間後、ＣＤ１９−ヒトＡＰＣをフローサイトメトリーによって分析した（ｎ＝３）。
実施例４．ｉｎ  ｖｉｖｏでの抗体アジュバント複合体効果の評価
【１２２５】
腫瘍の研究のため、２×１０５個のＢ１６Ｆ１０黒色腫細胞を、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの右脇腹上部に皮下（ｓ．ｃ．）注入した。１０日後、又は、腫瘍が２５ｍｍ２に達したとき、マウスに、４００μｇの免疫複合体（抗ＧＰ７５−ＳＡＴＡ−ＳＭＣＣ−化合物１）（ＤＡＲ＝１．７４）を静脈内注入するか、又は、４００μｇの免疫複合体（抗ＧＰ７５−ＳＡＴＡ−ＳＭＣＣ−化合物１）、若しくは、１．５μｇの化合物１及び４００μｇの抗ＧＰ７５（ＴＡ９９）の混合物を用いる腫瘍内処置を行った。初期治療２及び４日後に、航続治療を行った。腫瘍の発生は、１週間につき２〜３回ノギスで測定した。
【１２２６】
混合物ではなく、免疫複合体で処理したマウスでは、腫瘍が小さかった（図９）。次に、等価用量のαＧＰ７５−免疫複合体を、腫瘍が成立したマウスに腫瘍内又は静脈内投与した。驚くべきことに、１０％未満の免疫複合体が腫瘍に到達していると推定されるにもかかわらず、ＩＶ投与により腫瘍が減少した（図９）。
【１２２７】
本明細書に記載される研究は、免疫複合体が、等モル量の共有結合していない抗体−アジュバント混合物よりも、免疫活性化及び抗腫瘍免疫の誘発という点で、定量的及び定性的により効果があることを示した。これらの所見は、表現型の顕著な変更及び新たな生物学的特徴が、短いｉｎ  ｖｉｔｒｏインキュベーション期間中に観察されるため、抗体共役に伴うアジュバントの単純な血清半減期の延長に起因するとは考えにくい。これらの研究は、ＧＭ−ＣＳＦ及びＩＬ−４によるゴールドスタンダードとなっているＤＣ分化法が６日を要するのに対して、健康なヒトドナーから新たに単離された末梢血単球が、免疫複合体による一晩の刺激後にＤＣに分化することを示す。更に、免疫複合で活性化したヒトＡＰＣは、同等用量の共有結合していない抗体−アジュバント混合物によって達成可能なものよりも、数倍高い量の共刺激分子及び炎症性サイトカインを発現した。また、免疫複合体は、ＰＤ−Ｌ１などの負の共刺激分子を非常に低いレベルで、ＩＬ−１０については同じ程度に誘発することから、免疫複合体が予期せぬシグナル伝達経路を活性化することを示唆している。いかなる特定の理論にも束縛されるものではないが、免疫複合体による刺激は、生理学的抗体媒介性免疫に非常に類似していると考えられ、それにより、ＡＰＣは、親和性の高いオプソニン化病原体（病原体に結合した抗体）を認識する。
実施例５．ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの追加の抗体アジュバント複合体活性の調製及び評価
【１２２８】
追加の抗体アジュバント複合体の調製。実施例１及び２に記載される方法を用いて、追加の抗体−アジュバント複合体を調製した。抗体ペンブロリズマブ（ＰＤ−１）、ニボルマブ（ＰＤ−１）、アテゾリズマブ（ＰＤ−Ｌ１）、及びイピリムマブ（ＣＴＬＡ４）を用いて、ＳＡＴＡ−ＳＭＣＣリンカーを有する抗体−アジュバント複合体を作製した（上記スキーム３参照）。
【１２２９】
免疫複合体の良好な共役に続いて、平均薬物対抗体比を、ＬＣ−ＭＳによって決定した。まず、免疫複合体をＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて脱グリコシル化し、抗体からグリカンを除去した後、免疫複合体を脱イオン水中でバッファー交換する。抗体アジュバント複合体を、Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｅｖｏ  Ｇ２−ＸＳ  ＱＴｏｆ／Ｔｏｆで、アセトニトリル／水で溶出するＣ４カラムを通した。質量分析の生データを簡潔にし、薬物対抗体（ＤＡＲ）比を決定した。ＬＣ−ＭＳデータは、良好な共役及び望ましいＤＡＲ比を示した。
【１２３０】
ヒト抗原提示細胞の単離。ヒト抗原提示細胞（ＡＰＣ）を、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ４０、ＣＤ８６、ＣＤ１２３、及びＨＬＡ−ＤＲに対するモノクローナル抗体を含むＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ  Ｈｕｍａｎ  Ｍｏｎｏｃｙｔｅ  Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ  Ｃｏｃｋｔａｉｌ（Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いる密度勾配遠心によって、健康な給血者（Ｓｔａｎｆｏｒｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｎｔｅｒ）から得られたヒト末梢血単核細胞から陰性選択した。続いて、未熟なＡＰＣを、純度＞９７％まで精製した（ＣＤ１６枯渇を行わず、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ４０、ＣＤ８６、ＣＤ１２３、及びＨＬＡ−ＤＲに対するモノクローナル抗体を含む、ＥａｓｙＳｅｐ  Ｈｕｍａｎ  Ｍｏｎｏｃｙｔｅ  Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ  Ｋｉｔを用いる陰性選択による）。
【１２３１】
腫瘍細胞の調製。実施例３に従って、腫瘍細胞を調製した。
【１２３２】
ＡＰＣ−腫瘍の共培養。２×１０５個のＡＰＣを、６．５×１０５個の自家又は同種のＣＦＳＥラベル化腫瘍細胞の存在下又は非存在下で、９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）（１０％ウシ胎児血清、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、ピルビン酸ナトリウム、非必須アミノ酸、５０μＭ  ２−ＭＥを加え、指定された場合、種々濃度の抗体を加えたＩＭＤＭ培地（Ｇｉｂｃｏ）を含む）にてインキュベートした。１８時間後、細胞と無細胞上清を、フローサイトメトリーにて分析した。
【１２３３】
結果。新鮮な血液から得たヒトＡＰＣ（〜９５％単球）を、３：１の比のＣＦＳＥラベル化ヒトＢ細胞リンパ腫細胞（Ｔｏｌｅｄｏ，ＡＴＣＣ）、及び、２倍で段階希釈した、抗体のみ、又は、抗体−ＳＡＴＡ−ＳＭＣＣ−化合物１（複合体）と共にインキュベートした。１８時間後、フローサイトメトリーによって、活性化マーカーの発現について細胞を分析した。このデータは、ＣＤ４０、ＣＤ８６及びＨＬＡ−ＤＲが、抗体のみで刺激したものと比較して、免疫複合体で刺激したＡＰＣにおいて高いレベルで発現する傾向があったことから、免疫複合体がＡＰＣ活性化の誘発において優れていたことを示す（イピリムマブについては図１０Ｄ及び１０Ｅ、ペンブロリズマブについては図１１Ｄ及び１１Ｅ、ニボルマブについては１２Ｄ及び１２Ｅ、並びに、アテゾリズマブについては図１３Ｄ及び１３Ｅ参照）。実施例３で観察された結果と一致して、免疫複合体は、ＣＤ１４を下方制御する（イピリムマブについては図１０Ｃ、ペンブロリズマブについては１１Ｃ、ニボルマブについては１２Ｃ、及びアテゾリズマブについては１３Ｃ参照）。実施例３の結果に基づき、ＣＤ１６及びＣＤ１２３に関するこれらの免疫複合体の結果は予想されるものであった（データ示さず）。
【１２３４】
これら免疫複合体について、刺激後のヒトＡＰＣにおけるサイトカイン分泌の誘発能を、上記実施例３に記載されるように調べた。このデータは、免疫複合体による分化細胞が、より大量のＩＬ−１β及びＴＮＦαを分泌したことを示す（アテゾリズマブについては図１４Ａ及び１４Ｂ、ニボルマブについては１５Ａ及び１５Ｂ、ペンブロリズマブについては１６Ａ及び１６Ｂ、並びに、イピリムマブについては２０参照）。
実施例６．ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの抗Ｄｅｃｔｉｎ−２アジュバント複合体活性の調製及び評価
【１２３５】
追加の抗体アジュバント複合体の調製。実施例１及び２に記載される方法を用いて、追加の抗体−アジュバント複合体を調製した。抗Ｄｅｃｔｉｎ−２抗体（ＣＬＥＣ６Ａ）及びアイソタイプのラットＩｇＧ２ａを用いて、ＳＡＴＡ−ＳＭＣＣリンカーを含む抗体−アジュバント複合体を作製した（上記スキーム３参照）。
【１２３６】
この免疫複合体について、刺激後のマウス単球由来のＡＰＣにおけるサイトカイン分泌の誘発能を、上記実施例３に記載されるように調べた。具体的には、免疫複合体又は等量の非共役成分で１８時間刺激した、ＧＭ−ＣＳＦで前処理した単球でのサイトカイン産生を、図２１に示す。このデータは、免疫複合体による分化した細胞が、等量の成分（アジュバントのみ、抗体のみ、及び対照抗体複合体）よりも、高い量のＴＮＦα、ＩＬ−６、及びＩＬ−１２ｐ７０を分泌したことを示す（図２１）。
【１２３７】
Ｄｅｃｔｉｎ−２及びＣＬＥＣ５は、レセプター架橋後、アダプタータンパク質であるＦｃＲγ（ＦＣＥＲ１Ｇ）及びＤＡＰ１２（ＴＹＲＯＢＰ）とそれぞれ会合し、これらによってシグナル伝達するＣ型レクチン受容体である。これらのアダプタータンパク質は、Ｓｙｋ依存性経路を介する下流のシグナル伝達を媒介する、免疫受容体チロシン系活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含み、免疫細胞の活性化につながる（すなわち、サイトカイン産生、共刺激分子の発現、抗原提示等）。示される（図２１及び図２３）ように、これらの受容体に対する免疫複合体は、ＩＴＡＭ結合受容体（抗原結合ドメインを介する）及び他のシグナル伝達経路（アジュバント部分、例えばＴＬＲ７／８を介する）の同時係合により、相乗的な免疫賦活効果を呈する。ＦｃＲγ及び／若しくはＤＡＰ１２と会合する、又は、類似のシグナルドメイン（例えば、ｈａｍＩＴＡＭ）を含む他の受容体を標的とする免疫複合体を、同様に調製することができ、同様の効果を示すことが期待される。
実施例７．ＴＬＲ７／８アジュバントの合成
【１２３８】
本発明の免疫複合体を形成するための抗体への共役に好適な、ＴＬＲ７／ＴＬＲ８アジュバント（スキーム１、化合物１）の調製には、次の工程を取った。生成物の質量は、Ｘｅｖｏ  ＸＳ  ＱＴｏＦ分光検出器を備えたＵＰＬＣシステム（Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ）で確認した。アセトニトリル：水に溶解したサンプルを、ＢＥＨ２００Ｃ１８カラム（直径２．１ｍｍ×長さ５０ｍｍ）に注入し、１０〜９０％の勾配のアセトニトリル：水で、５分間かけて溶出した。
【１２３９】
【化１９１】
2019520352.tif 000193
【１２４０】
冷却（０℃）した硝酸（７０％、１６０ｍＬ）を、氷浴中で撹拌しているキノリン−２，４−ジオールＩ（１００ｇ、６２１ｍｍｏｌ）／氷酢酸（６００ｍＬ）に、ゆっくりと加えた。続いて、氷浴から除去した混合物を室温に加温した。室温で３０分間撹拌した。８０℃で１．５時間加熱した後、混合物を０℃まで冷却した。混合物に１Ｌの水をゆっくりと加え、黄色固体を沈殿させた。１５分間激しく撹拌した後濾過した。固体を水（１Ｌ）に再懸濁し、１５分間激しく撹拌した後濾過した。固体のＮａＨＣＯ３をゆっくりと加え、ｐＨを＞６にする追加の工程を繰り返した後、一晩吸引濾過した。固体をエチルエーテル（７５０ｍＬ）に再懸濁し、激しく撹拌して、微細懸濁液を作製した。濾過し繰り返した。一晩吸引濾過して乾燥させた。収量１１２ｇ  ＩＩ（８８％）黄色固体。
【１２４１】
【化１９２】
2019520352.tif 000194
【１２４２】
室温で、ジイソプロピルエチルアミン（６３ｍＬ、４７ｇ、０．３６ｍｏｌ、２．５当量）を、ＰＯＣｌ３（３００ｍＬ）にゆっくりと加えた。Ａｒブランケット下で、混合物を８０℃に加熱した。２ｇずつのニトロ−ジオールＩＩ（３０ｇ、１４５ｍｍｏｌ、１当量）を、３０分間かけて、温度を９５℃未満に維持しながらゆっくりと加えた。追加完了後、温度を１１０℃まで上昇させ、１時間加熱した。反応物を０℃まで冷却した後、激しく撹拌しながら氷の上に少量ずつ注いだ。冷水を、１．２Ｌの最終体積になるように加えた後、激しく撹拌した。水性母液をデカントし、１Ｌの水を暗色の固体に添加して、粘着性固体をフラスコ壁から掻き取って、懸濁液を作製した。濾過できる固体が得られるまで、必要に応じて繰り返した。固体を１Ｌの水に再懸濁した後、固体ＮａＨＣＯ３をｐＨが＞６になるまでゆっくりと加えた。固体を濾過した後、ＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）に溶解した。Ｃｅｌｉｔｅを通してＥｔＯＡｃ溶液を濾過し、不溶性の黒色不純物を除去した。飽和ＮａＨＣＯ３、水、ブラインで濾液を洗浄した後、分離し、有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させて濾過し、減圧下で濃縮した。生成した褐色固体を、３：１ヘキサン／ジエチルエーテル（５００ｍＬ）と共に粉砕し、濾過した。黄褐色固体ＩＩＩ（２２ｇ、３０ｍｍｏｌ、６２％）を次の反応にそのまま使用した。
【１２４３】
【化１９３】
2019520352.tif 000195
【１２４４】
ニトロ−ジクロロ化合物ＩＩＩ（２２ｇ、６２ｍｍｏｌ、１当量）及び固体のＫ２ＣＯ３（１７ｇ、１２４ｍｍｏｌ、２当量）／ＤＭＦ（２５０ｍＬ）の溶液に、０℃にて、Ｎ−Ｂｏｃ−１，４−ジアミノブタン（１２．８ｇ、１．１当量）／ＤＭＦ（６０ｍＬ）を、３０分間かけてゆっくりと加えた。添加完了後、反応液を室温まで加温し、更に３０分間撹拌した。水（８００ｍＬ）を加え、この混合物を激しく撹拌した。上清を捨て、湿潤固体を酢酸エチル（５００ｍＬ）に溶解した。溶液を水、ブラインで洗浄し、分離し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、真空で濃縮した。褐色固体を１：１ヘキサン／ジエチルエーテル（４００ｍＬ）と共に粉砕し、濾過し、黄色固体ＩＶ（１７ｇ、４３ｍｍｏｌ、６９％）を得て、次の反応に使用した。
【１２４５】
【化１９４】
2019520352.tif 000196
【１２４６】
ニトロ−アミノ化合物ＩＶ（１７ｇ、４３ｍｍｏｌ、１当量）／メタノール（４００ｍＬ）及び水（６０ｍＬ）の０℃の溶液に、ＮｉＣｌ２・６Ｈ２Ｏ（０．５１ｇ、２．２ｍｍｏｌ、０．０５当量）を加えた。水素化ホウ素ナトリウム（ペレット、３．２ｇ、８６ｍｍｏｌ、２当量）を加え、反応物を１時間、０℃にて撹拌した後、室温まで加温し、更に１５分間撹拌させた。氷酢酸を少量ずつ添加し、あらゆる未反応のＮａＢＨ４を、ｐＨ〜５が得られるまで中和した。この溶液をＣｅｌｉｔｅ床を通して濾過し、黒色の不溶性物質を除去した。溶媒を減圧下で除去した。暗褐色固体をエーテルと共に粉砕した後に濾過し、黄褐色固体Ｖ（１３．３ｇ、３７ｍｍｏｌ、８５％）を得て、次の反応にそのまま使用した。
【１２４７】
【化１９５】
2019520352.tif 000197
【１２４８】
室温で撹拌しているジアミノ化合物Ｖ（１３．３ｇ、３７ｍｍｏｌ、１当量）／ＤＭＦ（２５０ｍＬ）（イソプロピルエチルアミン（７．１７ｇ、９．７ｍＬ、５６ｍｍｏｌ、１．５当量）含有）の溶液に、未希釈のバレリルクロリド（５．５ｍＬ、５．５ｇ、４２ｍｍｏｌ、１．２当量）を加えた。この混合物を３０分間撹拌した後、氷、次に水を、最終体積１Ｌになるように加えた。混合物を、清澄な上清が形成されるまで、激しく撹拌した。上清を捨て、粗固体を酢酸エチル（４００ｍＬ）に溶解し、Ｃｅｌｉｔｅ床を通して濾過した。濾液を、水（４００ｍＬ）、ブライン（４００ｍＬ）で洗浄し、分離した後乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過して濃縮した。固体をエーテルと共に粉砕し、濾過して吸引乾燥した。得られた褐色固体ＶＩ（１３．９ｇ、３１ｍｍｏｌ、８４％）を、次の工程でそのまま用いた。
【１２４９】
【化１９６】
2019520352.tif 000198
【１２５０】
ディーン・スターク装置を取り付けた５００ｍＬ容の丸底フラスコ中で、アミドＶＩの混合物（１３．９ｇ、３１ｍｍｏｌ、１当量）及び２−クロロベンゼン酸（２．４ｇ、１５．５ｍｍｏｌ、０．５当量）を、１５０ｍＬのトルエン（浴温＝１７０℃）中で４時間還流させた。ディーン・スターク装置及び凝縮器を取り外し、８０〜９０％までトルエンを蒸発した。２，４−ジメトキシベンジルアミン（２５ｇ、１５０ｍｍｏｌ、５当量）を加え、混合物を、１２０℃で、１．２５時間継続的に加熱した。反応液を冷却し、粗混合物を１：１ＭｅＯＨ／水（１Ｌ）で希釈して、激しく撹拌した。上清をデカントし（過剰の２，４−ジメトキシベンジルアミンの大部分を除去する）、粗生成物を水と酢酸エチルに分配した。水相のｐＨが５〜６になるまで、酢酸を加えた。有機層を水、ブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過して濃縮した。濃褐色シロップをジエチルエーテルに溶解し、濾過して、灰色固体（生成物ではない）を除去した。エーテルを除去し、褐色シロップ（１４．４ｇ、２６ｍｍｏｌ、７３％）を得て、これを次の反応にそのまま使用した。
【１２５１】
【化１９７】
2019520352.tif 000199
【１２５２】
材料ＶＩＩ（１４．４ｇ、２６ｍｍｏｌ、１当量）に、水（６０ｍＬ）と、ゆっくり撹拌しながら濃ＨＣｌ（６０ｍＬ）を加えた。混合物を室温で３０分間激しく撹拌した後、加熱して１時間還流させた。反応液を氷浴中で冷却し、固体のＮａＯＨペレット（２８ｇ、７００ｍｍｏｌ）を少量ずつ３０分間かけて塩基性ｐＨに達するまで加えた。この溶液を、室温に加温して激しく撹拌した。飽和溶液が得られるまで、固体ＮａＣｌを添加した。この水性層を、１０％イソプロパノール／ジクロロメタン（４００ｍＬ）で３回抽出した。合わせた有機層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過して濃縮すると、褐色固体ＶＩＩＩが得られた（６．８ｇ、２２ｍｍｏｌ、７９％）。
実施例８．免疫複合体の合成
【１２５３】
【化１９８】
2019520352.tif 000200
【１２５４】
この実施例は、ＴＦＰエステル法を用いる、免疫複合体の合成に関する指針を提供する。化合物ＶＩＩＩ（３１１ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を、１０ｍＬのジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解した後、２モル当量のジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）を加えた。ＳＭＣＣリンカー（１．５ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのジクロロメタンに溶解し、一度にＶＩＩＩに加えた。この反応液を２０℃で一晩撹拌し、回転蒸発によって乾燥するまで濃縮した。粗生成物ＩＸを、１２ｇの使い捨てカートリッジを取り付けたＢｕｃｈｉフラッシュクロマトグラフィーシステムを用いるシリカゲルにおいて、０〜１０％メタノールの１５分かけた勾配によって溶出し、精製した。純粋な画分を合わせ、回転蒸発によって乾燥させ、１６０ｍｇの淡黄色固体ＩＸが得られた。
【１２５５】
【化１９９】
2019520352.tif 000201
【１２５６】
化合物ＩＸ（０．１ｍｍｏｌ、５３ｍｇ）を、１０ｍＬのジクロロメタンに溶解した後、２当量のチオグリコール酸を一度に加えた。混合物を減圧下で乾燥するまで濃縮し、残渣を５ｍＬのジエチルエーテルで３回洗浄した。
【１２５７】
【化２００】
2019520352.tif 000202
【１２５８】
化合物Ｘ（６．２ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）を、２ｍＬのＴＨＦに溶解した後、５ｍｇのテトラフルオロフェノールを加えた。次に、５ｍｇのジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）を添加した。混合物を室温で一晩撹拌した後、減圧下で乾燥するまで濃縮した。粗生成物ＸＩを、シリカゲル（４グラムのプレパックドカラム）によるフラッシュクロマトグラフィーを用いて、０〜１０％  ＭｅＯＨ／ジクロロメタンで溶出して精製した。純粋な画分を合わせ、蒸発させて、３．６ｍｇの純粋なＸＩを得た（ＬＣ／ＭＳで確認）。続いて、ＴＦＰエステルＸＩを、次の抗体共役工程において使用した。
【１２５９】
【化２０１】
2019520352.tif 000203
【１２６０】
ＩｇＧ１抗体（具体的には、抗ＣＤ２０抗体であるリツキシマブ）を、ｐＨ７．２のＰＢＳ内でバッファー交換し、１０ｍｇ／ｍＬ（６６μＭ）に希釈した。ＴＦＰ活性化アジュバントであるＸＩをＤＭＳＯに加え、６モル当量（ＩｇＧに対して）を、１ｍＬの抗体溶液（１０ｍｇ）に一度に追加した。混合液を数回反転して混合し、一晩２０℃でインキュベートした。得られた免疫複合体（「ＢＢ−０１」）を、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中に、ＰＤ１０カラム（ＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５（登録商標））のサイズ排除クロマトグラフィーカラムを用いてバッファー交換することによって精製した。純粋な画分をプールし、ｎａｎｏ−ｄｒｏｐ分光光度計で２８０ｎｍの吸光度を測定することによって濃度を決定した。収量は、８ｍｇ、つまり、回収タンパク質に対しておよそ８０％であった。免疫複合体生成物を、０．２μｍのシリンジフィルターを通して無菌濾過し、必要になるまで４℃で保存した。
【１２６１】
得られた免疫複合体の薬物対抗体比薬（「ＤＡＲ」）の特徴確認を、Ｘｅｖｏ  ＸＳ  ＱＴｏＦ質量分光検出器を備えたＵＰＬＣシステム（Ｗａｔｅｒｓ  Ａｑｕｉｔｙ）での液体クロマトグラフ質量分析（「ＬＣ／ＭＳ」）によって行った。分析は、５μｇの免疫複合体をＢＥＨ２００Ｃ４カラム（直径２．１ｍｍ×長さ５０ｍｍ）に注入し、１０〜９０％の勾配のアセトニトリル：水で４分間かけて溶出することによって行った。
【１２６２】
分析により、ＴＦＰ法によって合成された免疫複合体が、ＳＡＴＡ法を用いて合成された免疫複合体よりも高いＤＡＲを示すことが示された。更に、ＴＦＰ法により、ＳＡＴＡ合成法（約２０％）と比べて、未共役抗体量が低い（約５％のみ）免疫複合体が得られた（図１Ａと１Ｂの比較）。
【１２６３】
ＢＢ−０１のサイズ排除クロマトグラフィー（「ＳＥＣ」）分析を行い、モノマー純度を決定した。分析は、ＢＥＨ２００  ＳＥＣカラムをＰＢＳ（ｐＨ７．２）で、０．２ｍＬ／分にて溶出して実施した。ＴＦＰ活性エステル法を用いて合成した免疫複合体ＢＢ−０１は、ＳＡＴＡ法を使用したときに８％を超える凝集体が観察された（図２Ａ）のに対し、２％未満の高分子量の凝集体を含んでいた（図２Ｂ）。
実施例９．ペンタフルオロフェニル（「ＰＦＰ」）エステルを用いる免疫複合体ＢＢ−１４の合成
【１２６４】
【化２０２】
2019520352.tif 000204
【１２６５】
この実施例は、ＰＦＰエステル法を用いる、免疫複合体の合成に関する指針を提供する。アジュバントのエステル修飾及び修飾されたアジュバントの抗体への共役は、上記スキーム１２に示されている。シクロヘキサンｔｒａｎｓ−１，４−ジカルボキシレート（１ｇ）を、１０ｍＬのジメチルホルムアミド（「ＤＭＦ」）に溶解し、１−［ビス）（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム３−オキシドヘキサフルオロホスフェート）（「ＨＡＴＵ」）（１ｍｍｏｌ）に続き、１ｍＬのＮ−エチル−Ｎ−（プロパン−２−イル）プロパン−２−アミン（「ＤＩＰＥＡ」）を加えた。化合物１（３１１ｍｇ）を加え、この混合物を一晩２０℃で撹拌した。反応混合物を、５０ｍＬのジクロロメタン（「ＤＣＭ」）で希釈し、２０ｍＬの１Ｎ  ＨＣｌで洗浄した。ＤＣＭ層を蒸発乾燥固し、その生成物を、シリカゲルで０〜１０％  ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（１％酢酸含有）にて溶出して精製した。純粋な画分を濃縮し、２２０ｍｇの精製酸ＩＩを得た。化合物ＩＩ（１００ｍｇ）をＴＨＦに溶解し、１００ｍｇのＨＡＴＵに続けて２００μＬのＤＩＰＥＡを加えた。２当量のアミノ−ＰＥＧ２−ｔｅｒｔブチル−カルボキシレートを加え、２０℃で１時間撹拌した。この混合物を濃縮して乾燥し、１０ミリリットルのジオキサン中４Ｎ  ＨＣｌを加えた。混合物を濃縮して乾燥し、粗生成物ＩＩＩを分取ＨＰＬＣで精製して、４０ｍｇの化合物ＩＩＩを得た。
【１２６６】
次に記載するように、化合物ＩＩＩをＰＦＰエステルＩＶに変換した。化合物ＩＩＩ（３５ｍｇ）を、５０ｍｇ  ＰＦＰ／５ｍＬ  ＴＨＦに加え、５ｍＬ  ＤＭＦに続き、２０ｍｇのＤＣＣを加えた。ＤＭＡＰ（２〜３ｍｇ）を加え、この溶液を一晩２０℃で撹拌した。反応物を濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（０〜１０％  ＭｅＯＨで溶出）で精製して、１７ｍｇのＰＦＰエステルＩＶを、１：２のアセトニトリルと水から凍結乾燥した後に得た。
【１２６７】
ＰＦＰエステルＩＶ（ＩｇＧに対して６モル当量）を、２０ｍｇのＩｇＧ抗体（具体的には、抗ＣＤ２０抗体のリツキシマブ）（１０ｍｇ／ｍＬ  ＰＢＳ）に加え、３７℃で一晩インキュベートした。得られた免疫複合体ＢＢ−１４を、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中でバッファー交換し、過剰な低分子量不純物を除去し、濃度をｎａｎｏｄｒｏｐで決定した。１５ｍｇの免疫複合体が得られた（収率７５％）。生成物を４℃で保存した。ＬＣ／ＭＳ分析によって、２．２のＤＡＲであることを測定した。望ましいＤＡＲと高い収率の他に、生成物は、ＳＥＣ分析によって決定される不純物も少なかった（図３及び４参照）。
実施例１０．ＮＨＳエステルを用いる免疫複合体ＢＢ−１５の合成
【１２６８】
【化２０３】
2019520352.tif 000205
【１２６９】
アジュバントのエステル修飾及び修飾されたアジュバントの抗体への共役は、上記スキーム１３に示されている。化合物ＶＩＩ（１５０ｍｇ）を、２０ｍＬのテトラヒドロフラン（「ＴＨＦ」）に溶解し、１０ｍＬの水性飽和重炭酸ナトリウムを加えた。次に、５０ｍｇの無水コハク酸を一度に加え、この混合物を１時間室温で撹拌した。２０ミリリットルの１Ｎ  ＨＣｌをゆっくりと加え、混合物を２×５０ｍＬのジクロロメタンで抽出した。合わせた有機抽出物を蒸発乾燥固した。粗生成物（Ｓｕｃ−ＶＩＩ）を４グラムのシリカゲルカラム（０〜１５％のＭｅＯＨ（１％酢酸）で１５分間かけて溶出）で精製した。純粋な画分を合わせ、蒸発させて、１９０ｍｇの純粋なＶＩＩ−Ｓｕｃを得た。
【１２７０】
化合物ＶＩＩ−Ｓｕｃ（１５０ｍｇ）を１０ｍＬのＤＭＦに溶解し、１当量のＨＡＴＵに続けて２当量のＤＩＰＥＡを加えた。１．５当量のグリシン−ＯｔＢｕを加え、一晩撹拌した。ＤＭＦを蒸発させ、残渣を５ｍＬの１Ｎ  ＨＣｌ／ジオキサンで３０分間処理した。溶媒を蒸発させ、粗Ｇｌｙ−Ｓｕｃ−ＶＩＩを、４グラムのシリカゲルで、０〜１０％  ＭｅＯＨにて１０分間かけて溶出するフラッシュ法により精製した。純粋な画分を蒸発させると、１１０ｍｇのＧｌｙ−Ｓｕｃ−ＶＩＩが得られ、その純粋な物質をＤＭＦに溶解して上記プロセスを繰り返し、６０ｍｇの純粋なＧｌｙ２−Ｓｕｃ−ＶＩＩを得た。
【１２７１】
純粋なＧｌｙ２−Ｓｕｃ−ＶＩＩ（３０ｍｇ）を５ｍＬのＤＭＦに溶解し、１．５当量のＮＨＳに続けて５ｍＬのＴＨＦを加えた。ＤＣＣ（１．５当量）を加え、この混合物を一晩室温で撹拌した。溶媒を蒸発させ、粗ＮＨＳエステルを、シリカゲルで、０〜１０％  ＭｅＯＨ／ＤＣＭにて１０分間かけて溶出するフラッシュ法により精製した。純粋な画分（ＴＬＣにより決定）を合わせて蒸発させ、アセトニトリルと水から凍結乾燥した後に、１ｍｇの純粋なＮＨＳ−Ｇｌｙ２−Ｓｕｃ−ＶＩＩを得た。
【１２７２】
純粋なＮＨＳエステルをＤＭＳＯに溶解して、２０ｍＭ溶液を作製し、６当量を、２ｍＬのＩｇＧ抗体（具体的には、抗ＣＤ２０抗体のリツキシマブ）（ＰＢＳ中、１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。共役反応物を室温で一晩インキュベートし、新しいＰＢＳ中でバッファー交換して、過剰なアジュバントを除去した。精製した免疫複合体ＢＢ−１５を無菌濾過し、４℃で保存した。収量は、約１６ｍｇであった。高い収率の他に、ＬＣ／ＭＳ分析により、高レベルの純度、低レベルの凝集、及び望ましいＤＡＲ比であることが示された（図５及び６参照）。
実施例１１．ＴＦＰエステルを用いる免疫複合体の合成
【１２７３】
【化２０４】
2019520352.tif 000206
【１２７４】
この実施例は、ＴＦＰエステル法を用いる、異なるリンカーとの免疫複合体の合成に関する指針を提供する。アジュバントのエステル修飾及び修飾されたアジュバントの抗体への共役は、上記スキーム１４に示されている。化合物ＶＩＩ（３１１ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を、１０ｍＬのＤＭＦに溶解した後、０．３ｍＬのＤＩＰＥＡを加えた。ＮＨＳ−ＰＥＧ５−酸（１．２当量）を５ｍＬのジクロロメタンに溶解し、化合物ＶＩＩに一度に加えた。混合物を室温で一晩撹拌した後、乾燥するまで濃縮した。粗残渣を、４グラムのカラムを、０〜１０％  ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（１％酢酸含む）にて１０分間かけて溶出するシリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、純粋な画分の濃縮後、２６０ｍｇ（収率５７％）のＰＥＧ５−ＶＩＩを得た。
【１２７５】
ＰＥＧ５−ＶＩＩ（５０ｍｇ）を１０ｍＬのＤＭＦに溶解し、１．５当量のＴＦＰに続けて１．２当量のＤＣＣと、５ｍｇのＤＭＡＰを加えた。反応物を一晩撹拌し、濃縮して乾燥し、シリカゲル４グラムのカラムにて、０〜１０％  ＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶出して精製し、３５ｍｇの純粋なＴＦＰ−ＰＥＧ５−ＶＩＩを、１：２のアセトニトリルと水から凍結乾燥した後に得た。
【１２７６】
ＴＦＰエステル（ＴＦＰ−ＰＥＧ５−ＶＩＩ）をＤＭＳＯに溶解して、２０ｍＭの原液を作製し、２０ｍｇのＩｇＧ抗体（具体的には、抗ＣＤ２０抗体のリツキシマブ）（ＰＢＳ中、１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。共役反応を、室温で一晩進行させた。得られた免疫複合体を、ｐＨ７．４のＰＢＳ中にバッファー交換した（ＧＥ、ＰＤ１０脱塩カラム）。精製した免疫複合体を、２μｍのシリンジフィルターを用いて無菌濾過し、４℃で保存した。ＬＣ／ＭＳ分析により、この方法が、抗体当たり、２．９個のアジュバントであるＤＡＲをもたらしたことが確認された（図７）参照。ＳＥＣ分析では、凝集が最小限である（すなわち、２％未満）ことがしめされた（図８参照）。
実施例１２．別のＴＬＲ７／ＴＬＲ８アジュバントの合成
【１２７７】
この実施例は、別のＴＬＲ７／８アジュバントの合成方法に関する指針を提供する。化合物ＸＩＶを、化合物ＶＩ（スキーム８、実施例３）から開始して合成した。
【１２７８】
【化２０５】
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【１２７９】
化合物ＶＩ（２ｇ）を、２０％の乾燥酢酸を含むトルエンに溶解し、７５℃で一晩加熱した。溶媒を真空下で除去し、２グラムの粗化合物ＸＩを得た。化合物ＸＩを、更に精製せずに使用した。化合物ＸＩ（２ｇ）を２０ｍＬ  ＤＭＦに溶解し、１．２当量のＮａＨ（５０％分散液）をゆっくりと加え、この混合物を３０分間室温で撹拌した。ヨウ化メチル（２当量）を一度に加え、この反応混合物を一晩室温で撹拌した。反応物を濃縮して乾燥し、生成物をフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。生成物を、０〜１０％  ＭｅＯＨ／ジクロロメタンの勾配で１５分かけて溶出した。純粋な画分を合わせて濃縮すると、１ｇの化合物ＸＩＩが得られた（２工程での収率５０％）。
【１２８０】
【化２０６】
2019520352.tif 000208
【１２８１】
化合物ＸＩＩ（１０ｇ）を１０ｍＬの未希釈ジメトキシベンジルアミン（「ＤＭＢＡ」）に希釈し、１２０℃で３時間加熱した。反応混合物を冷却し、１００ｍＬの酢酸エチルで希釈した。得られた溶液を、１０％クエン酸／水で２回、水で１回洗浄して、過剰なＤＭＢＡを除去した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮すると、褐色油として粗化合物ＸＩＩＩが得られた。粗ＤＭＢ誘導体である化合物ＸＩＩＩをジクロロメタンに溶解し、２ｍＬの４Ｎ  ＨＣｌ／ジオキサンを加えた。２時間後、反応混合物を乾燥するまで濃縮し、粗ＨＣｌ塩化合物ＸＩＶを３ｍＬのメタノールに溶解した。エチルエーテル（２０ｍＬ）を撹拌しながら粗溶液にゆっくりと加えると、白色の沈殿物が形成した。この反応物を濾過し、白色固体生成物を、１０ｍＬのエチルエーテルで２回洗浄し、真空下で乾燥させると、４グラムのＨＣｌ塩化合物ＸＩＶが得られた。ＬＣ／ＭＳ分析により、正確な分子量（Ｍ／ｚ＝３２６．５）と、純度が９５％超であることを確認した。
実施例１３．ＴＦＰエステルを用いる免疫複合体ＢＢ−２６の合成
【１２８２】
【化２０７】
2019520352.tif 000209
【１２８３】
この実施例は、ＴＦＰエステル法を用いる、アリール三級アミンリンカーを含む免疫複合体の合成に関する指針を提供する。化合物ＸＩＶ（３００ｍｇ）の実施例１２をＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解し、１．２当量のＮａＨ（５０％分散液）を加えた。この混合物を１５分間撹拌し、２当量の４−ブロモメチルフェニル酢酸を加えた。反応物を室温で一晩撹拌し、乾燥するまで濃縮した。１ｍＬの酢酸を加え、生成物を、Ｃ−１８カラムにて、１０〜９０％アセトニトリル／水（０．１％  ＴＦＡ）の溶媒で２０分かけて溶出する分取ＨＰＬＣによって精製し、１６５ｍｇの精製されたフェニル酢酸化合物ＸＶを得た。
【１２８４】
化合物ＸＶ（５０ｍｇ）をジクロロメタン／ジメチルホルムアミド（５ｍＬ、１：１）に溶解し、２当量のＴＦＰに続き、１．５当量の１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（「ＥＤＣＩ」）を加えた。反応物を一晩室温で撹拌し、生成物を、４グラムのシリカゲルカラムにて、０〜１０％イソプロパノールで１０分間かけて溶出するフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。純粋な画分を濃縮し、３０％アセトニトリル水から凍結乾燥させて、２１ｍｇの精製したＴＦＰエステル化合物ＸＶＩを淡黄色固体として得た。分子量及び純度をＬＣ／ＭＳで確認した（ｍ／ｚ＝６２１．７）。
【１２８５】
抗体への共役：ＴＦＰエステルＸＶＩを無水ＤＭＳＯに溶解して２０ｍＭの原液を作成し、６モル当量（抗体に対して）を、２０ｍｇのＩｇＧ抗体（具体的には、抗ＣＤ２０抗体であるリツキシマブ）（ＰＢＳ中１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。共役反応液を、４℃で一晩インキュベートした。得られた免疫複合体ＢＢ−２６を、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中でバッファー交換し、過剰な低分子量試薬を除去した。分光光度計Ｎａｎｏｄｒｏｐ  １０００で２８０ｎｍにおいて抗体を測定することによって、最終濃度を決定した。収率は、１５ｍｇのＢＢ−２６であり、回収タンパク質に対して７５％であった。図１２Ａに示されるように、ＳＥＣ分析で検出される最小限の凝集が見られた（１％未満）。図１２Ｂに示されるように、生成物は、ＬＣ／ＭＳ分析で決定するとき、２．８のＤＡＲ比を有していた。精製した免疫複合体ＢＢ−２６を０．２μＭの無菌フィルターを通して濾過し、−２０℃で保存した。
実施例１４．ＴＦＰエステルを用いる免疫複合体ＢＢ−２７の合成
【１２８６】
【化２０８】
2019520352.tif 000210
【１２８７】
この実施例は、ＴＦＰエステル法を用いる、アルキル三級アミンリンカーを含む免疫複合体の合成に関する指針を提供する。化合物ＸＩＶ（２００ｍｇ）をメタノール（２０ｍＬ）に溶解し、３当量の１−ホルミル−７−ｔｅｒｔ−ブチルヘプタノエートに続き、１．１当量のＮａＣＮＢＨ４を加えた。混合物を室温で１．５時間撹拌し、乾燥するまで濃縮した。ＴＦＡ（５ｍＬ）を加え、この混合物を一晩室温で撹拌した。ＴＦＡを真空下で蒸発させ、粗生成物をＣ−１８カラムでの分取ＨＰＬＣによって精製した。生成物を、１０〜９０％アセトニトリル／水（０．１％ＴＦＡ）の勾配を用いて２０分間かけて溶出し、１１０ｍｇの精製した酸化合物ＸＶＩＩ（ＬＣ／ＭＳによって確認した）を得た。
【１２８８】
化合物ＸＶＩＩ（５０ｍｇ）をジクロロメタン／ジメチルホルムアミド（５ｍＬ、１：１）に溶解し、２当量のＴＦＰに続き、１．５当量のＥＤＣＩを加えた。反応物を一晩室温で撹拌した。粗ＴＦＰエステル生成物ＸＶＩＩＩを、４グラムのシリカゲルカラムにて、０〜１０％イソプロパノールで１０分間かけて溶出するフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。純粋な画分を濃縮し、残渣を３０％アセトニトリル水から凍結乾燥させて、１４ｍｇの精製したＴＦＰエステル化合物ＸＶＩＩＩを白色固体として得た。分子量及び純度をＬＣ／ＭＳで確認した（ｍ／ｚ＝６０１．７）。
【１２８９】
抗体への共役：ＴＦＰエステルＸＶＩＩＩを無水ＤＭＳＯに溶解して２０ｍＭの原液を作成し、８モル当量（抗体に対して）を、２０ｍｇのＩｇＧ抗体（具体的には、抗ＣＤ２０抗体であるリツキシマブ）（ＰＢＳ中１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。共役反応液を、４℃で一晩インキュベートした。得られた免疫複合体ＢＢ−２７を、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中でバッファー交換し、過剰な低分子量試薬を除去した。分光光度計Ｎａｎｏｄｒｏｐ  １０００で２８０ｎｍにおいて抗体を測定することによって、最終濃度を決定した。収率は、１６ｍｇの免疫複合体、ＢＢ−２７であった（８０％）。
【１２９０】
ＳＥＣ分析で検出される最小限の凝集が見られた（１％未満）。生成物は、ＬＣ／ＭＳ分析で決定するとき、２．５のＤＡＲ比を有していた。精製したＢＢ−２７を０．２μＭの無菌フィルターを通して濾過し、−２０℃で保存した。
実施例１５．ＴＦＰエステルを用いる免疫複合体ＢＢ−３６の合成
【１２９１】
【化２０９】
2019520352.tif 000211
【１２９２】
この実施例は、ＴＦＰ法を用いる、ＰＥＧ三級アミンリンカーを含む免疫複合体の合成に関する指針を提供する。化合物ＸＩＶ（２００ｍｇ）をメタノール（２０ｍＬ）に溶解し、３当量のアルデヒドＸＩＸに続き、１．１当量のＮａＣＮＢＨ４を加えた。混合物を室温で３時間撹拌し、乾燥するまで濃縮した。トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ、１０ｍＬ）を加え、この混合物を２時間室温で撹拌した。ＴＦＡを真空下で蒸発させ、粗生成物をＣ−１８カラムでの分取ＨＰＬＣによって精製した。生成物を、１０〜９０％アセトニトリル／水（０．１％ＴＦＡ）の勾配を用いて２０分間かけて溶出し、合わせた純粋な画分の凍結乾燥後、８５ｍｇの精製した酸ＸＸ（ＬＣ／ＭＳによって確認した）を得た。
【１２９３】
化合物ＸＸ（８０ｍｇ）をジクロロメタン／ジメチルホルムアミド（５ｍＬ、１：１）に溶解し、２当量のＴＦＰに続き、１．２当量のＥＤＣＩを加えた。反応物を一晩室温で撹拌した。粗ＴＦＰエステル生成物ＸＸＩを、４グラムのシリカゲルカラムにて、０〜１０％イソプロパノールで１０分間かけて溶出するフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。純粋な画分を濃縮し、残渣を３０％アセトニトリル水から凍結乾燥させて、４５ｍｇの精製したＴＦＰエステルの化合物ＸＸＩをベージュ色固体として得た。分子量及び純度をＬＣ／ＭＳで確認した（ｍ／ｚ＝６４７．７）。
【１２９４】
抗体への共役：ＴＦＰエステルの化合物ＸＸＩを無水ＤＭＳＯに溶解して２０ｍＭの原液を作成し、８モル当量（抗体に対して）を、ＩｇＧ１抗体（具体的には、抗ＣＤ２０抗体であるリツキシマブ）（ＰＢＳ中１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。共役反応液を、４℃で一晩インキュベートした。得られた免疫複合体ＢＢ−３６を、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中でバッファー交換し、過剰な低分子量試薬を除去した。分光光度計Ｎａｎｏｄｒｏｐ  １０００で２８０ｎｍにおいて抗体を測定することによって、最終濃度を決定した。収率は、１５ｍｇの免疫複合体ＢＢ−３６（７５％）であり、これを、４℃で使用するまで保存した。
【１２９５】
ＳＥＣ分析で検出される最小限の凝集が見られた（１％未満）。生成物は、ＬＣ／ＭＳ分析で決定するとき、２．２のＤＡＲ比を有していた。精製した免疫複合体ＢＢ−３６を０．２μＭの無菌フィルターを通して濾過し、−２０℃で保存した。
実施例１６．ＴＦＰエステルを用いる免疫複合体ＢＢ−４５の合成
【１２９６】
【化２１０】
2019520352.tif 000212
【１２９７】
この実施例は、ＴＦＰエステル法を用いる、異なるリンカーとの免疫複合体の合成に関する指針を提供する。化合物ＶＩＩ（３１１ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を、１０ｍＬのＤＭＦに溶解し、０．３ｍＬのＤＩＰＥＡを加えた。別の容器で、１．２当量の７−メトキシ−７−オキソヘプタン酸を５ｍＬのＤＭＦに溶解し、１．５当量のＤＩＰＥＡに続き、ＨＡＴＵ（１．２当量）を加えた。この混合物をＶＩＩに加え、一晩室温で撹拌した。この反応混合物を真空下で濃縮して乾燥し、残渣を１０ｍＬの（１：１）テトラヒドロフラン：水に溶解した。１ｍＬの２Ｍ水酸化リチウム／水を加え、反応物を２時間室温で撹拌した。ＴＨＦを回転蒸発により除去し、水溶液を、１０ｍＬの１Ｍ塩酸を加えて酸性化した。水溶液を２×ジクロロメタン（２０ｍＬ）で抽出し、有機層を合わせて硫酸マグネシウムによって乾燥した。この溶液を濾過し、濾液を濃縮して乾燥させた。粗生成物２２を、４グラムのカラムにて、０〜１０％イソプロパノール／ＤＣＭ（ｗ／１％酢酸）で１０分かけて溶出するシリカゲルクロマトグラフィーによって精製した。純粋な画分を合わせ、濃縮して、２２０ｍｇの純粋な２２を淡黄色固体として得た。
【１２９８】
化合物２２（５０ｍｇ）をジクロロメタン／ジメチルホルムアミド（５ｍＬ、１：１）に溶解し、２当量のＴＦＰに続き、１．５当量のＥＤＣＩを加えた。反応物を一晩２２℃で撹拌し、粗反応物を乾燥するまで濃縮した。生成物を、４グラムのシリカゲルカラムにて、０〜１０％イソプロパノールで１０分間かけて溶出するフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。純粋な画分を濃縮し、残渣を、３０％アセトニトリル／水から凍結乾燥させて、２１ｍｇの精製したＴＦＰエステル化合物２３を淡黄色固体として得た。分子量及び純度をＬＣ／ＭＳで確認した。
【１２９９】
抗体への共役：ＴＦＰエステル２３を無水ＤＭＳＯに溶解して２０ｍＭの原液を作成し、６モル当量（抗体に対して）を、２０ｍｇのＩｇＧ抗体（具体的には、抗ＣＤ２０抗体であるリツキシマブ）（ＰＢＳ中１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。共役反応液を、４℃で一晩インキュベートした。得られた免疫複合体ＢＢ−４５を、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中でバッファー交換し、過剰な低分子量不純物を除去した。分光光度計Ｔｈｅｒｍｏ  Ｎａｎｏｄｒｏｐ  １０００で２８０ｎｍにおける吸光度を測定することによって、最終濃度を決定した。収率は、１４ｍｇのＢＢ−４５であり、回収タンパク質に対して７０％であった。ＳＥＣ分析により凝集が最小限（１％未満）であることが検出され、ＤＡＲが２．８であることが、ＬＣ／ＭＳ分析によって測定された。精製した免疫複合体を０．２μＭの無菌フィルターを通して濾過し、−２０℃で保存した。
実施例１７．ＴＦＰエステルを用いる免疫複合体ＢＢ−２４の合成
【１３００】
【化２１１】
2019520352.tif 000213
【１３０１】
この実施例は、ＴＦＰエステル法を用いる、異なるリンカーとの免疫複合体の合成に関する指針を提供する。化合物ＶＩＩ（１５０ｍｇ）を、２０ｍＬのＴＨＦに溶解し、１０ｍＬの水性飽和重炭酸ナトリウムを加えた。無水コハク酸（５０ｍｇ）を一度に加え、この混合物を１時間室温で撹拌した。２０ｍＬの１Ｎ  ＨＣｌをゆっくりと加え、混合物を、２×５０ｍＬのジクロロメタンで抽出し、有機抽出物を合わせて蒸発乾燥固した。粗生成物２４を４グラムのシリカゲルカラム（０〜１５％のＭｅＯＨ（１％酢酸）で１５分間かけて溶出）で精製した。純粋な画分を合わせ、蒸発させて、１８０ｍｇの純粋な２４を得た。
【１３０２】
１５０ｍｇの２４をＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶解し、１当量のＨＡＴＵに続けて２当量のＤＩＰＥＡを加えた。１．５当量のグリシン−ＯｔＢｕを加え、一晩撹拌した。ＤＭＦを蒸発させ、残渣を５ｍＬの１Ｎ  ＨＣｌ／ジオキサンで３０分間撹拌しながら処理した。溶媒を蒸発させ、粗残渣を、４グラムのシリカゲルで、０〜１０％イソプロパノールにて１５分間かけて溶出するフラッシュ法により精製した。純粋な画分の蒸発により、１１０ｍｇの純粋な２５が得られた。
【１３０３】
化合物２５（５０ｍｇ）を１０ｍＬのＤＭＦに溶解し、１．５当量のＴＦＰに続けて１．２当量のＤＣＣと２ｍｇのＤＭＡＰを加えた。反応物を一晩撹拌し、乾燥するまで濃縮し、シリカゲル（４ｇカラム）にて、０〜１０％  ＩＰＡ／ＤＣＭで溶出して精製し、３２ｍｇの純粋なＴＦＰエステル、化合物２６を、１：３のアセトニトリルと水から凍結乾燥した後に得た。
【１３０４】
抗体への共役：ＴＦＰエステル、化合物２６を無水ＤＭＳＯに溶解して２０ｍＭの原液を作成し、５モル当量（抗体に対して）を、２０ｍｇの抗体に、ＰＢＳ中１０ｍｇ／ｍＬで加えた。共役反応液を、４℃で６時間インキュベートした。得られた免疫複合体ＢＢ−２４を、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中でバッファー交換し、過剰な低分子量不純物を除去した。分光光度計Ｎａｎｏｄｒｏｐ  １０００で２８０ｎｍにおける吸光度を測定することによって、最終タンパク質濃度を決定した。収率は、１５ｍｇ（回収タンパク質に対して７５％）であった。ＳＥＣ分析では、１％未満の最小限の凝集が検出され、ＤＡＲは、２．８の抗体当たりアジュバントであることが、ＬＣ／ＭＳ分析によって決定された。精製した免疫複合体を０．２μＭの無菌フィルターを通して濾過し、−２０℃で必要になるまで保存した。
実施例１８．ＴＦＰエステルである免疫複合体ＢＢ−３７の合成
【１３０５】
【化２１２】
2019520352.tif 000214
【１３０６】
この実施例は、ＴＦＰ法を用いる、異なるリンカーとの免疫複合体の合成に関する指針を提供する。化合物ＶＩＩ（１５５ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を、１０ｍＬのＤＭＦに溶解し、０．２ｍＬのＤＩＰＥＡを加えた。別の容器で、１．２当量のＰＥＧ２−ジカルボキシレートモノメチルエステルを５ｍＬのＤＭＦに溶解し、２当量のＤＩＰＥＡに続き、ＨＡＴＵ（１．２当量）を加えた。この混合物をＶＩＩに加え、１時間室温で撹拌した。この混合物を真空下で乾燥するまで濃縮し、残渣をＴＨＦ（５ｍＬ）に溶解した。等量の水に続き、２ｍＬの１Ｍ水性ＬｉＯＨを加えた。この混合物を一晩撹拌した後、１０ｍＬの１Ｎ  ＨＣｌを加えた。酸性化混合物を２×ジクロロメタンで抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥し、乾燥するまで濃縮して、シリカゲルクロマトグラフィーで精製した。生成物を、０〜１０％メタノールで１０分かけて溶出した。純粋な画分を合わせ、濃縮して、１１０ｍｇの純粋な化合物２７を淡黄色固体として得た。
【１３０７】
化合物２７（５０ｍｇ）をジクロロメタン／ジメチルホルムアミド（５ｍＬ、１：１）に溶解し、２当量のＴＦＰに続き、１．５当量のＥＤＣＩを加えた。反応物を一晩周囲温度で撹拌し、反応物を乾燥するまで濃縮した。粗ＴＦＰエステル２８を、４グラムのシリカゲルカラムにて、０〜１０％イソプロパノールで１０分間かけて溶出するフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。純粋な画分を濃縮し、残渣を、３０％アセトニトリル／水から凍結乾燥させて、４１ｍｇの精製したＴＦＰエステル化合物２３を白色固体として得た。分子量及び純度をＬＣ／ＭＳで確認した。
【１３０８】
抗体への共役：ＴＦＰエステル２８を無水ＤＭＳＯに溶解して２０ｍＭの原液を作成し、８モル当量（抗体に対して）を、２０ｍＬのＩｇＧ抗体（具体的には、抗ＣＤ２０抗体であるリツキシマブ）（ＰＢＳ中１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。共役反応液を、４℃で一晩インキュベートした。得られた免疫複合体ＢＢ−３７を、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中でバッファー交換し、過剰な低分子量不純物を除去した。分光光度計Ｔｈｅｒｍｏ  Ｎａｎｏｄｒｏｐ  １０００で２８０ｎｍにおける吸光度を測定することによって、最終濃度を決定した。収率は、１６ｍｇの共役した免疫複合体、ＢＢ−３７であり、回収タンパク質に対して７０％であった。ＳＥＣ分析により凝集が最小限（１％未満）であることが検出され、ＤＡＲが２．３であることが、ＬＣ／ＭＳ分析によって測定された。精製した免疫複合体を０．２μＭの無菌フィルターを通して濾過し、−２０℃で保存した。
実施例１９．別のＴＬＲ７／８アジュバントの合成
【１３０９】
【化２１３】
2019520352.tif 000215
【１３１０】
この実施例は、別のＴＬＲアゴニストの合成に関する指針を提供する。化合物２９は、リンカー結合のためにピペリジン側鎖を含む、化合物ＶＩＩのアナログである。化合物ＶＩＩの合成について上述して方法を、Ｂｏｃ−保護ピペリジンアナログをＢｏｃ−ジアミノブタンの代わりに合成のステップ３で用いた以外利用して合成した。化合物２９の全般的な合成経路は、スキーム２３に概説されている。ピペラジン側鎖を加えることで、不安定であったため以前は不可能であった免疫複合体の合成が可能になる。スクシネートリンカーを含む類似の化合物ＶＩＩアナログは、ＴＦＰ活性化によって環化しやすく、ピペラジンは環化を阻害する。また、ピペラジン部分内の三級アミノ基は、リンカー付加及び共役後の正電荷を維持する。この位置における正電荷は、ＴＬＲ８力価の改善に重要である。化合物２９を、以下の実施例１９〜２１に記載されるように、免疫複合体の合成に続けて使用した。
実施例２０．ＴＦＰエステルを用いる免疫複合体ＢＢ−４２の合成
【１３１１】
【化２１４】
2019520352.tif 000216
【１３１２】
この実施例は、ＴＦＰエステル法を用いる、異なるリンカーとの免疫複合体の合成に関する指針を提供する。化合物２９（１００ｍｇ）を１０ｍＬのＴＨＦに溶解し、２ｍＬの水性飽和重炭酸ナトリウムに続き、１０ｍＬの水を加えた。無水コハク酸（５０ｍｇ）を一度に加え、この混合物を室温で撹拌した。１時間後、２０ｍＬの１Ｎ  ＨＣｌをゆっくりと加え、反応混合物を２×５０ｍＬのジクロロメタン（「ＤＣＭ」）で抽出した。合わせた有機抽出物を蒸発乾燥固した。粗生成物３０を４グラムのシリカゲルカラム（０〜１５％イソプロパノール／ＤＣＭ（１％酢酸）で１５分間かけて溶出）で精製した。純粋な画分を合わせ、蒸発乾燥固させ、８０ｍｇの純粋な酸３０を得た。
【１３１３】
化合物３０（５０ｍｇ）をジクロロメタン／ジメチルホルムアミド（５ｍＬ、１：１）に溶解し、２当量のＴＦＰに続き、１．５当量のＥＤＣＩを加えた。反応物を一晩周囲温度で撹拌し、反応物を乾燥するまで濃縮した。粗ＴＦＰエステル３１をフラッシュクロマトグラフィーで精製し、０〜１０％イソプロパノールで１０分かけて溶出した。純粋な画分を濃縮し、残渣を、３０％アセトニトリル／水から凍結乾燥させて、４１ｍｇの精製したＴＦＰエステル化合物３１を白色固体として得た。分子量及び純度をＬＣ／ＭＳで確認した。
【１３１４】
ＴＦＰエステル３１をＩｇＧ１抗体（具体的には、抗ＣＤ２０抗体のリツキシマブ）に、ＢＢ−２４について上述のように共役し、ＢＢ−４２を得た。ＢＢ−４２のＳＥＣ及びＬＣ／ＭＳ分析により、分子量、凝集が２％未満の高いモノマー純度、及び１．７のＤＡＲが確認された（図２０Ａ〜Ｂ参照）。
実施例２１．ＴＦＰエステルを用いる免疫複合体ＢＢ−４３及びＢＢ−４４の合成
【１３１５】
【化２１５】
2019520352.tif 000217
【１３１６】
この実施例は、ＴＦＰエステル法を用いる、異なるリンカーとの免疫複合体の合成に関する指針を提供する。化合物３０（スキーム２５）を、２又は８個のＰＥＧ単位を含むポリエチレングリコール（ＰＥＧ）リンカーに結合し、アジュバントと抗体との間の距離を延長した。ＰＥＧリンカー延長部の付加は、リンカー付加及びＴＦＰ活性化について上述した方法を用いて実施した。簡潔に言うと、１００ｍｇの化合物３０を１０ｍＬのＤＭＦに溶解し、０．２ｍＬのＤＩＰＥＡに続き、ＨＡＴＵ（１．２当量）を添加した。１時間後、適当なアミノＰＥＧリンカー（ｎ＝２又は８）を加え、更に２時間室温で撹拌した。反応混合物を真空下で乾燥するまで濃縮し、残渣を、Ｃ−１８カラムにて、１０〜９０％アセトニトリル／水で３０分かけて溶出する分取ＨＰＬＣによって精製した。純粋な画分を合わせ、凍結乾燥して、６５ｍｇ及び４５ｍｇの中間体３１又は３２を透明なガラス状物質として得た。
【１３１７】
化合物３１及び３２を、上述の方法を用いて対応するＴＦＰエステル３３及び３４に変換した。簡潔に言うと、遊離酸３１又は３２（５０ｍｇ）をジクロロメタン／ジメチルホルムアミド（５ｍＬ、１：１）に溶解し、２当量のＴＦＰに続き、１．５当量のＥＤＣＩを加えた。この混合物を一晩室温で撹拌し、乾燥するまで濃縮して、粗ＴＦＰエステル３３及び３４を得た。粗ＴＦＰエステルを、シリカゲルにて、０〜１０％イソプロパノールで１０分間かけて溶出するフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。純粋な画分を濃縮し、残渣を、３０％アセトニトリル／水から凍結乾燥させて、精製したＴＦＰエステル３３及び３４を透明な固体として得た。純粋な化合物の分子量及び純度をＬＣ／ＭＳで確認した。
【１３１８】
抗体への共役：ＴＦＰエステル３３及び３４を、ＩｇＧ１抗体（具体的には、抗ＣＤ２０抗体のリツキシマブ）に、上記方法を用いて共役させた。ＴＦＰエステルを無水ＤＭＳＯに溶解して２０ｍＭの原液を作成し、８モル当量（抗体に対して）を、２０ｍｇのＩｇＧ抗体に、ＰＢＳ中１０ｍｇ／ｍＬで加えた。共役反応液を、４℃で１２時間インキュベートした。得られた免疫複合体ＢＢ−４３及びＢＢ−４４を、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中でバッファー交換し、過剰な低分子量不純物を除去した。分光光度計Ｎａｎｏｄｒｏｐ  １０００で２８０ｎｍにおける吸光度を測定することによって、最終タンパク質濃度を決定した。収率は、回収タンパク質に対して７５％であった。ＳＥＣ分析では最小限の凝集が存在すると検出され、ＤＡＲは、１．０及び１．７の抗体当たりアジュバントであることが、ＬＣ／ＭＳ分析によって決定された。精製した免疫複合体を０．２μＭの無菌フィルターを通して濾過し、−２０℃で必要になるまで保存した。
実施例２２．ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの免疫複合体活性の評価
【１３１９】
ヒト抗原提示細胞の単離。ヒト抗原提示細胞（ＡＰＣ）を、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ４０、ＣＤ８６、ＣＤ１２３、及びＨＬＡ−ＤＲに対するモノクローナル抗体を含むＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ  Ｈｕｍａｎ  Ｍｏｎｏｃｙｔｅ  Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ  Ｃｏｃｋｔａｉｌ（Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いる密度勾配遠心によって、健康な給血者（Ｓｔａｎｆｏｒｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｎｔｅｒ）から得られたヒト末梢血単核細胞から陰性選択した。続いて、未熟なＡＰＣを、純度＞９７％まで精製した（ＣＤ１６枯渇を行わず、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ４０、ＣＤ８６、ＣＤ１２３、及びＨＬＡ−ＤＲに対するモノクローナル抗体を含む、ＥａｓｙＳｅｐ  Ｈｕｍａｎ  Ｍｏｎｏｃｙｔｅ  Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ  Ｋｉｔを用いる陰性選択による）。
【１３２０】
腫瘍細胞の調製。腫瘍細胞を、０．１％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含むＰＢＳ中に、細胞１〜１０×１０６個／ｍＬで再懸濁した。続いて細胞を、２μＭ  ＣＦＳＥ（最終濃度１μＭ）とインキュベートした。この反応は、２分後に、１０ｍＬの完全培地（１０％  ＦＢＳ含む）を加えることによって停止し、完全培地で１回洗浄した。細胞を、２％パラホルムアルデヒドに固定してＰＢＳで３回洗浄する、又は、未固定のままのいずれかとして、その後、１０％  ＤＭＳＯ、２０％  ＦＢＳ、及び７０％培地中で細胞を凍結した。
【１３２１】
ＡＰＣ−腫瘍の共培養。２×１０５個のＡＰＣを、６．５×１０５個の同種ＣＦＳＥラベル化腫瘍細胞の存在下又は非存在下で、９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）（１０％ウシ胎児血清、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、ピルビン酸ナトリウム、非必須アミノ酸を加え、指定された場合、種々濃度の未共役のＣＤ２０抗体、及び上記実施例に従って調製された本発明の免疫複合体を加えたＩＭＤＭ培地（Ｇｉｂｃｏ）を含む）にてインキュベートした。１８時間後、細胞と無細胞上清を、フローサイトメトリー又はＥＬＩＳＡにて分析した。
【１３２２】
このアッセイの結果を、図９Ａ〜９Ｆ（ＢＢ−１７及びＢＢ−０１について）に示す。具体的には、このグラフは、ＢＢ−１７及びＢＢ−０１（スキーム１１及び１４に従って調製）が骨髄系の活性化を誘発する一方で、対照である未共役のＣＤ２０抗体が誘発しないことを示している。更に、図２３Ａ〜Ｄは、ＢＢ−１４が、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ８６、及びＨＬＡ−ＤＲによって示される骨髄系の活性化を誘発する一方で、対照が誘発しないことを示している。図２４Ａ〜Ｄは、ＢＢ−１５が、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ８６、及びＨＬＡ−ＤＲによって示される骨髄系の活性化を誘発する一方で、対照が誘発しないことを示している。図２５Ａ〜Ｄは、ＢＢ−２７が、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ８６、及びＨＬＡ−ＤＲによって示される骨髄系の活性化を誘発する一方で、対照が誘発しないことを示している。図２６Ａ〜Ｄは、ＢＢ−４５が、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ８６、及びＨＬＡ−ＤＲによって示される骨髄系の活性化を誘発する一方で、対照が誘発しないことを示している。図２７Ａ〜Ｄは、ＢＢ−２４が、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ８６、及びＨＬＡ−ＤＲによって示される骨髄系の活性化を誘発する一方で、対照が誘発しないことを示している。
実施例２３．ＢＢ−０１の、比較複合体ＩＲＭ１及び比較複合体ＩＲＭ２に対する比較
【１３２３】
先に説明したように、免疫複合体は、米国特許第８，９５１，５２８号（「’５２８特許」）に記載されている。この実施例は、本発明の免疫複合体が、’５２８特許に開示される免疫複合体より優れていることを示す。ＢＢ−０１を、スキーム１５に従って合成した。比較複合体ＩＲＭ１及びＩＲＭ２を、’５２８パテントに記載されるアジュバントを、アジュバントＩＲＭ１及びＩＲＭ２として用いて調製した。具体的には、ＩＲＭ１及びＩＲＭ２を、ＩｇＧ抗体（具体的には、抗ＣＤ２０抗体のリツキシマブ）に、アミドリンカーを用いて共役させた。
【１３２４】
ＢＢ−０１、並びに、比較複合体ＩＲＭ１及びＩＲＭ２を、実施例９のアッセイを用いて分析した。この結果を、図１０Ａ〜１０Ｆ及び１１Ａ〜１１Ｃに示す。具体的には、図１０Ａ〜１０Ｆは、ＢＢ−０１（スキーム１１に従って調製）が骨髄系の活性化を誘発する一方で、比較複合体ＩＲＭ１及びＩＲＭ２、並びに対照である未共役のＣＤ２０抗体が誘発しないことを示している。更に、図１１Ａ〜１１Ｃは、ＢＢ−０１（スキーム１１に従って調製）がサイトカイン分泌を誘発する一方で、比較複合体ＩＲＭ１及びＩＲＭ２、並びに対照である未共役のＣＤ２０抗体が誘発しないことを示している。
【１３２５】
比較複合体ＩＲＭ１及びＩＲＭ２は、ＬＣ／ＭＳで測定するとき、過度の凝集を有していた。図１５Ａ〜Ｃは、０．２μＭのフィルターで濾過後のサイズ排除クロマトグラフィーの結果を示す。比較複合体ＩＲＭ１は、４％の凝集を有しており、４．５分に最初のピークを示した。比較複合体ＩＲＭ２は、９．５％の凝集を有しており、４．５分に最初のピークを示した。対照的に、ＢＢ−０１は少量の凝集を有していた。この差は、一部は、ＩＲＭ１及びＩＲＭ２が有し、ＢＢ−０１の合成には不要な、チオール化中間体によるものである。
【１３２６】
ＢＢ−０１、並びに、比較複合体ＩＲＭ１及びＩＲＭ２を、保存安定性についても試験した。合成後、複合体を１５ｍＬのコニカルチューブ内で数時間保存した。保存後、比較複合体ＩＲＭ２を含むチューブは、チューブの底部に大きな白色凝集物があった。ＢＢ−０１及び比較複合体ＩＲＭ１を含むチューブは、透明な液体のみを含み、沈殿物は何もなかった。
実施例２４．抗化合物１抗体の生成
【１３２７】
ＫＬＨ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、製品＃７７６００）又はウシ血清アルブミン（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ、製品＃２９１３０）を、アミン反応性化学物質を用いて化合物１に共役した。
【１３２８】
ウサギ抗体の産生には、フロイント完全アジュバント中に配合した２００μｇのＫＬＨ−化合物１複合体を、足蹠に注入することによってウサギを免疫した。動物に、更に１００μｇの免疫原複合体を用いて、初回投与１４、２８、及び４２日後に追加免疫した。３５及び４９日目に血液を採取し、血清を分離して、抗化合物１抗体についてＥＬＩＳＡによってスクリーニングを行った。ＥＬＩＳＡプレートをＢＳＡ−化合物１複合体でコーティングし、抗体をペルオキシダーゼ結合抗ウサギＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、製品＃１１１−０３５−１４４）で検出した。
【１３２９】
マウス抗体の産生には、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに１００μｇの化合物１複合体を静脈内注入し、その後、初回投与後６、１２及び２４日目に繰り返し投与した。投与後１２及び２４日目に血液を採取し、抗化合物１抗体についてＥＬＩＳＡによって血清をスクリーニングした。抗体が十分に検出されたら、血液、脾臓及びリンパ節を採取し、単一細胞懸濁液内に回収した。続いて、陰性選択によってＢ細胞を分離し、ＦＡＣＳを用いて分別した。ＩｇＧ陽性の染色、ＩｇＭ及びＩｇＤ陰性の染色、並びに、化合物１会合陽性の染色（ＢＳＡ−化合物１複合体と蛍光ラベルしたストレプトアビジンを用いて測定）を示したＢ細胞を回収した。単離したＢ細胞を完全培地で２回洗浄した後、ＳＰ２Ｏ骨髄腫細胞と、ポリエチレングリコール１５００（Ｒｏｃｈｅ、製品＃１０  ７８３  ６４１  ００１）を製造業者の指示に従って用い、融合させた。融合に先立ち、ＳＰ２Ｏ骨髄腫細胞は、１０％  ＦＢＳ、グルタミン、及びペニシリンストレプトマイシンを含むＤＭＥＭ中で維持した。融合細胞を、およそ１００，０００細胞／ウェル（平坦な９６ウェルプレート）でプレーティングした。１〜２日間のインキュベーション後、培地にＨＡＴ液及びＩＬ−６（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、製品＃２１０６００１７及びＧｉｂｃｏ、製品＃ＰＨＣ００６５）を加えた。１０〜１４日後、培地をサンプリングし、上述のようにＥＬＩＳＡによってスクリーニングし、抗化合物１抗体を測定した。陽性クローンを増殖させ、限界希釈によってサブクローニングして更にスクリーニングして、抗体産生を確認し、その後、ハイブリドーマを凍結保存した。フラスコを摂氏３７度、５％  ＣＯ２で処理し、１０％完全培地及び９０％ハイブリドーマ−ＳＦＭ（Ｇｉｂｃｏ、製品＃１２０４５０７６）での組織培養中でハイブリドーマを増殖させた。培地を１００％ハイブリドーマ−ＳＦＭに交換し、更に３〜６日間細胞を培養した。培地を回収し、０．２２μｍのフィルターを通して濾過した。抗体を、Ｈｉ−Ｔｒａｐ  Ｍａｂｓｅｌｅｃｔカラム（ＧＥ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、製品＃２８−４０８２−５３）を用いて精製し、透析又は脱塩カラムによって無菌ＰＢＳ中にバッファー交換した。
実施例２５．ＥＬＩＳＡによる共役の検出
【１３３０】
生成物の不均質性のため、５例において、抗体構築物の共役状態をＬＣ／ＭＳで分離することができなかった。共役が成功したことを判定するため、ＥＬＩＳＡアッセイを利用した。抗体上のアジュバントの存在の検出に使用した抗体は、抗化合物１抗体（実施例１８に記載）であった。
【１３３１】
図Ｘは、セツキシマブ免疫複合体、エタネルセプトＮａｋｅｄ抗体、エタネルセプト免疫複合体、イピリムマブ免疫複合体、及びオビヌツズマブ免疫複合体について、共役が成功したことを示している。
実施例２６．ヒトＩｇＧのヒトＩｇ−Ｆｃに結合した化合物１のＥＬＩＳＡによる検出
【１３３２】
Ｍａｘｙｓｏｒｐ  ＥＬＩＳＡプレート（Ｆｉｓｈｅｒ、４４−２４０４−２１）を、１μｇ／ｍＬヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）で一晩コーティングした。プレートを、１％  ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ、Ａ７０３０）を含むＰＢＳでブロッキングし、滴定量の指定の抗体又は対応するＢｏｌｔｂｏｄｙ（ＢＢ−０１）複合体と共にインキュベートした。結合した抗体は、ペルオキシダーゼ結合ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ）、又は、化合物１に対するマウスモノクローナル抗体とその後のペルオキシダーゼ結合ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｆｃフラグメント特異的）で検出した。ＴＭＢをウェルに加え、４５０ｎＭにおける吸光度を測定した（ＴＭＢ停止溶液（Ｆｉｓｈｅｒ、ＮＣ１２９１０１２）で反応を停止した後）。
実施例２７．ラット抗Ｄｅｃｔｉｎ２に結合した化合物１のＥＬＩＳＡによる検出
【１３３３】
Ｍａｘｉｓｏｒｐ  ＥＬＩＳＡプレート（Ｆｉｓｈｅｒ、４４−２４０４−２１）を、１μｇ／ｍＬのラット抗Ｄｅｃｔｉｎ−２（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）又はＢＢ−０１ラット抗Ｄｅｃｔｉｎ−２で一晩コーティングした。プレートを、１％  ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ、Ａ７０３０）を含むＰＢＳでブロッキングし、総ＩｇＧ検出には滴定量のペルオキシダーゼ結合ヤギ抗マウスＩｇＧ、重鎖及び軽鎖特異的（Ｊａｃｋｓｏｎ、１１５−０３５−００３）と共に、Ｂｏｌｔｂｏｄｙ検出には滴定量のウサギ抗化合物１抗血清と共にインキュベートした。ウサギ抗化合物１は、ペルオキシダーゼ結合ヤギ抗ウサギＩｇＧ、ヒト、マウス、及びラット血清タンパク質との交差反応性が最低限のもの（Ｊａｃｋｓｏｎ、１１１−０３５−１４４）で検出した。ＴＭＢをウェルに加え、４５０ｎＭにおける吸光度を測定した（ＴＭＢ停止溶液（Ｆｉｓｈｅｒ、ＮＣ１２９１０１２）で反応を停止した後）。
【１３３４】
上記は、明確にし、かつ理解させる目的で実例及び実施例として多少詳しく述べているが、特定の変更や改変が添付の特許請求の範囲内で実施され得ることが、当業者には理解されよう。また、本明細書に提供される各参考文献は、各参考文献が参照することにより個々に組み込まれるのと同様に、その全体を参照することにより組み込まれる。
実施例２８．プロテインＡ結合活性の測定方法
【１３３５】
リツキシマブ又はリツキシマブＢＢ−３７（１００μＬ、ＰＢＳ中５０μｇ／ｍＬ）のサンプル２つずつを、１２．５μＬのプロテインＡセファロースビーズ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ、２２８１０）と共に、回転させながら一晩インキュベートした。遠心分離によってビーズを沈殿させ、上清を除去し、細いピペットチップを用いたビーズから残りの液体を除去した。非還元性Ｌａｅｍｍｌｉサンプルバッファー（１００μＬ）をビーズに加えた。ビーズ及び上清を９０°℃で５分間加熱し、同じ分画を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（４〜１２％  ＮＵＰＡＧＥゲル、ＭＯＰＳバッファー）で分析した後、Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ（ＧｅｌＣｏｄｅ（商標）Ｂｌｕｅ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）で染色した。分子量の標準品は、ＳｅｅＢｌｕｅ（登録商標）Ｐｌｕｓ  ２マーカー（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、ＬＣ５９２５）である。図１３３Ｃに示されるように、リツキシマブＢＢ−３７でプロテインＡへの結合が保存されていることは、ＦｃＲＮへの結合の保存を示唆している。
実施例２９．ＣＤ１６ａへの結合活性の測定方法
【１３３６】
Ｍａｘｙｓｏｒｐ  ＥＬＩＳＡプレートを、１．５μｇ／ｍＬの組み換えヒトＣＤ１６ａタンパク質（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、４３２５−ＦＣ−０５０）で一晩コーティングした。プレートを、１％  ＢＳＡを含むＰＢＳでブロッキングし、滴定量の抗体又は抗体免疫複合体と共にインキュベートした。結合した抗体を、ペルオキシダーゼ結合ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ  Ｆ（ａｂ’）２フラグメントヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ、１０９−０３６−００３）で検出した。ＴＭＢ（Ｆｉｓｈｅｒ、ＰＩ３４０２８）をウェルに加え、４５０ｎＭにおける吸光度を測定した（ＴＭＢ停止溶液（Ｆｉｓｈｅｒ、ＮＣ１２９１０１２）で反応を停止した後）。図１３３Ａに示されるように、リツキシマブの非グリコシル変異体は、エフェクター機能におけるグリコシル化の役割と一致して、結合の低下を示す。
実施例３０．ＣＤ６４への結合活性の測定方法
【１３３７】
Ｍａｘｙｓｏｒｐ  ＥＬＩＳＡプレートを、１．５μｇ／ｍＬの組み換えヒトＣＤ６４タンパク質（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）で一晩コーティングした。プレートを、１％  ＢＳＡを含むＰＢＳでブロッキングし、滴定量のリツキシマブ又はリツキシマブ免疫複合体（リツキシマブＢＢ−０１）と共にインキュベートした。結合した抗体を、ペルオキシダーゼ結合ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ  Ｆ（ａｂ’）２フラグメントヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ）で、反応停止後に測定されたＴＭＢの発色と４５０ｎＭでの吸光度を用いて検出した。図１３３Ｂに示されるように、ＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて脱グリコシル化されたリツキシマブは、ＣＤ６４への結合低下を示す。
【１３３８】
本明細書に引用される刊行物、特許出願、及び特許などの全ての参考文献は、各参考文献が、参照することにより組み込まれることが個々にかつ具体的に示され、本明細書にその全体が記載されているのと同様に、参照することにより本明細書に組み込まれる。
【１３３９】
本明細書を説明する文脈において（特に、以下の「特許請求の範囲」の文脈において）、用語「ａ」及び「ａｎ」及び「ｔｈｅ」及び「少なくとも１つ」及び同様の指示対象の使用は、本明細書において別途記載のない限り、又は文脈が明らかに矛盾しない限り、単数及び複数の両方を含むと解釈されるものとする。１つ又は２つ以上の項目のリストに続く用語「少なくとも１つ」（例えば、「Ａ及びＢのうち少なくとも１つ」）の使用は、本明細書において別途記載のない限り、又は文脈が明らかに矛盾しない限り、列挙された項目（Ａ又はＢ）、又は列挙された項目の２つ以上の任意の組み合わせ（Ａ及びＢ）から選択される１つの項目を意味すると解釈されるものとする。用語「含む（comprising）」、「有する（having）」、「挙げられる（including）」、及び「含有する（containing）」は、別途記載のない限り、無制限用語（すなわち、「挙げられるが、これらに限定されない」）と解釈されるものとする。本発明における値の範囲の記述は、本明細書において別途記載のない限り、その範囲内に含まれる各々の値を個別に参照するための省略様式としての機能を意図しているに過ぎず、各々の値は、本明細書に個別に列挙されるかのように、明細書内に組み込まれる。本明細書に記載される全ての方法は、本明細書において別途記載のない限り、又は文脈が明らかに矛盾しない限り、任意の好適な順序で実施できる。本明細書に提供される任意の及び全ての例、つまり例示的文言（例えば、「など」）の使用は、本明細書の理解をより容易にするために過ぎず、別途主張されない限り、本発明の範囲の限定をもたらさない。明細書中の文言が含まれないことは、本発明の実践に必須である任意の特許請求の範囲に含まれない要素を示しているとして解釈されなくてはならない。
【１３４０】
本明細書には、本発明を実施するために発明者らにとって既知の最良の形態を含む、本発明の好ましい実施形態が記載される。これらの好ましい実施形態の変更例は、上記説明を読むことによって、当業者には明らかになり得る。発明者らは、当業者がかかる変更例を適切に利用することを期待しており、発明者らは、本発明が、本明細書に具体的に記載されているもの以外で実施されることを意図している。したがって、本発明は、適用法的に認められているように、本明細書に添付される特許請求の範囲に列挙される、主題の全ての改変例及び同等例を含む。また、全ての可能性のあるこれらの変更例における上記要素の任意の組み合わせは、本明細書において別途記載のない限り、又は文脈が明らかに矛盾しない限り、本明細書に包含される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１０Ｄ】
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【図１０Ｅ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１１Ｄ】
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【図１１Ｅ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１２Ｄ】
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【図１２Ｅ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１３Ｃ】
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【図１３Ｄ】
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【図１３Ｅ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２Ａ】
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【図２２Ｂ】
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【図２２Ｃ】
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【図２２Ｄ】
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【図２２Ｅ】
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【図２２Ｆ】
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【図２２Ｇ】
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【図２２Ｈ】
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【図２２Ｉ】
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【図２２Ｊ】
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【図２２Ｋ】
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【図２２Ｌ】
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【図２２Ｍ】
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【図２２Ｎ】
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【図２２Ｏ】
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【図２２Ｐ】
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【図２２Ｑ】
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【図２２Ｒ】
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【図２２Ｓ】
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【図２２Ｔ】
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【図２２Ｕ】
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【図２２Ｖ】
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【図２２Ｗ】
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【図２２Ｘ】
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【図２３Ａ】
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【図２３Ｂ】
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【図２３Ｃ】
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【図２３Ｄ】
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【図２３Ｅ】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０Ａ】
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【図３０Ｂ】
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【図３１Ａ】
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【図３１Ｂ】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８Ａ】
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【図３８Ｂ】
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【図３８Ｃ】
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【図３８Ｄ】
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【図３８Ｅ】
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【図３８Ｆ】
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【図３９Ａ】
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【図３９Ｂ】
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【図３９Ｃ】
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【図３９Ｄ】
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【図３９Ｅ】
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【図３９Ｆ】
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【図４０Ａ】
2019520352.tif 000340
【図４０Ｂ】
2019520352.tif 000341
【図４０Ｃ】
2019520352.tif 000342
【図４１Ａ】
2019520352.tif 000343
【図４１Ｂ】
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【図４２Ａ】
2019520352.tif 000345
【図４２Ｂ】
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【図４３Ａ】
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【図４３Ｂ】
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【図４４Ａ】
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【図４４Ｂ】
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【図４４Ｃ】
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【図４５Ａ】
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【図４５Ｂ】
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【図４６Ａ】
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【図４６Ｂ】
2019520352.tif 000355
【図４７Ａ】
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【図４７Ｂ】
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【図４８Ａ】
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【図４８Ｂ】
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【図４９Ａ】
2019520352.tif 000360
【図４９Ｂ】
2019520352.tif 000361
【図５０】
2019520352.tif 000362
【図５１】
2019520352.tif 000363
【図５２Ａ】
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【図５２Ｂ】
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【図５２Ｃ】
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【図５２Ｄ】
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【図５３Ａ】
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【図５３Ｂ】
2019520352.tif 000369
【図５３Ｃ】
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【図５３Ｄ】
2019520352.tif 000371
【図５４Ａ】
2019520352.tif 000372
【図５４Ｂ】
2019520352.tif 000373
【図５４Ｃ】
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【図５４Ｄ】
2019520352.tif 000375
【図５５Ａ】
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【図５５Ｂ】
2019520352.tif 000377
【図５５Ｃ】
2019520352.tif 000378
【図５５Ｄ】
2019520352.tif 000379
【図５６Ａ】
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【図５６Ｂ】
2019520352.tif 000381
【図５６Ｃ】
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【図５６Ｄ】
2019520352.tif 000383
【図５７】
2019520352.tif 000384
【図５８】
2019520352.tif 000385
【図５９】
2019520352.tif 000386
【図６０】
2019520352.tif 000387
【図６１】
2019520352.tif 000388
【図６２】
2019520352.tif 000389
【図６３】
2019520352.tif 000390
【図６４】
2019520352.tif 000391
【図６５】
2019520352.tif 000392
【図６６】
2019520352.tif 000393
【図６７Ａ】
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【図６７Ｂ】
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【図６７Ｃ】
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【図６７Ｄ】
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【図６７Ｅ】
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【図６７Ｆ】
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【図６７Ｇ】
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【図６７Ｈ】
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【図６７Ｉ】
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【図６７Ｊ】
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【図６７Ｋ】
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【図６７Ｌ】
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【図６７Ｍ】
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【図６７Ｎ】
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【図６７Ｏ】
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【図６７Ｐ】
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【図６８Ａ】
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【図６８Ｂ】
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【図６８Ｃ】
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【図６８Ｄ】
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【図６８Ｅ】
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【図６８Ｆ】
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【図６８Ｇ】
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【図６８Ｈ】
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【図６８Ｉ】
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【図６８Ｊ】
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【図６８Ｋ】
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【図６８Ｌ】
2019520352.tif 000421
【図６８Ｍ】
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【図６８Ｎ】
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【図６８Ｏ】
2019520352.tif 000424
【図６８Ｐ】
2019520352.tif 000425
【図６８Ｑ】
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【図６９Ａ】
2019520352.tif 000427
【図６９Ｂ】
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【図６９Ｃ】
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【図６９Ｄ】
2019520352.tif 000430
【図６９Ｅ】
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【図６９Ｆ】
2019520352.tif 000432
【図６９Ｇ】
2019520352.tif 000433
【図６９Ｈ】
2019520352.tif 000434
【図６９Ｉ】
2019520352.tif 000435
【図６９Ｊ】
2019520352.tif 000436
【図６９Ｋ】
2019520352.tif 000437
【図７０Ａ】
2019520352.tif 000438
【図７０Ｂ】
2019520352.tif 000439
【図７０Ｃ】
2019520352.tif 000440
【図７０Ｄ】
2019520352.tif 000441
【図７０Ｅ】
2019520352.tif 000442
【図７０Ｆ】
2019520352.tif 000443
【図７０Ｇ】
2019520352.tif 000444
【図７０Ｈ】
2019520352.tif 000445
【図７０Ｉ】
2019520352.tif 000446
【図７０Ｊ】
2019520352.tif 000447
【図７０Ｋ】
2019520352.tif 000448
【図７０Ｌ】
2019520352.tif 000449
【図７０Ｍ】
2019520352.tif 000450
【図７１Ａ】
2019520352.tif 000451
【図７１Ｂ】
2019520352.tif 000452
【図７１Ｃ】
2019520352.tif 000453
【図７１Ｄ】
2019520352.tif 000454
【図７１Ｅ】
2019520352.tif 000455
【図７１Ｆ】
2019520352.tif 000456
【図７１Ｇ】
2019520352.tif 000457
【図７１Ｈ】
2019520352.tif 000458
【図７１Ｉ】
2019520352.tif 000459
【図７１Ｊ】
2019520352.tif 000460
【図７１Ｋ】
2019520352.tif 000461
【図７１Ｌ】
2019520352.tif 000462
【図７１Ｍ】
2019520352.tif 000463
【図７１Ｎ】
2019520352.tif 000464
【図７１Ｏ】
2019520352.tif 000465
【図７１Ｐ】
2019520352.tif 000466
【図７１Ｑ】
2019520352.tif 000467
【図７１Ｒ】
2019520352.tif 000468
【図７１Ｓ】
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【図７１Ｔ】
2019520352.tif 000470
【図７１Ｕ】
2019520352.tif 000471
【図７１Ｖ】
2019520352.tif 000472
【図７１Ｗ】
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【図７１Ｘ】
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【図７１Ｙ】
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【図７１Ｚ】
2019520352.tif 000476
【図７１ＡＡ】
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【図７１ＡＢ】
2019520352.tif 000478
【図７１ＡＣ】
2019520352.tif 000479
【図７１ＡＤ】
2019520352.tif 000480
【図７１ＡＥ】
2019520352.tif 000481
【図７１ＡＦ】
2019520352.tif 000482
【図７１ＡＧ】
2019520352.tif 000483
【図７１ＡＨ】
2019520352.tif 000484
【図７１ＡＩ】
2019520352.tif 000485
【図７１ＡＪ】
2019520352.tif 000486
【図７１ＡＫ】
2019520352.tif 000487
【図７１ＡＬ】
2019520352.tif 000488
【図７１ＡＭ】
2019520352.tif 000489
【図７１ＡＮ】
2019520352.tif 000490
【図７１ＡＯ】
2019520352.tif 000491
【図７１ＡＰ】
2019520352.tif 000492
【図７１ＡＱ】
2019520352.tif 000493
【図７１ＡＲ】
2019520352.tif 000494
【図７１ＡＳ】
2019520352.tif 000495
【図７１ＡＴ】
2019520352.tif 000496
【図７１ＡＵ】
2019520352.tif 000497
【図７１ＡＶ】
2019520352.tif 000498
【図７１ＡＷ】
2019520352.tif 000499
【図７２Ａ】
2019520352.tif 000500
【図７２Ｂ】
2019520352.tif 000501
【図７２Ｃ】
2019520352.tif 000502
【図７２Ｄ】
2019520352.tif 000503
【図７２Ｅ】
2019520352.tif 000504
【図７２Ｆ】
2019520352.tif 000505
【図７２Ｇ】
2019520352.tif 000506
【図７２Ｈ】
2019520352.tif 000507
【図７２Ｉ】
2019520352.tif 000508
【図７２Ｊ】
2019520352.tif 000509
【図７３Ａ】
2019520352.tif 000510
【図７３Ｂ】
2019520352.tif 000511
【図７３Ｃ】
2019520352.tif 000512
【図７３Ｄ】
2019520352.tif 000513
【図７３Ｅ】
2019520352.tif 000514
【図７３Ｆ】
2019520352.tif 000515
【図７３Ｇ】
2019520352.tif 000516
【図７３Ｈ】
2019520352.tif 000517
【図７３Ｉ】
2019520352.tif 000518
【図７３Ｊ】
2019520352.tif 000519
【図７３Ｋ】
2019520352.tif 000520
【図７３Ｌ】
2019520352.tif 000521
【図７３Ｍ】
2019520352.tif 000522
【図７４Ａ】
2019520352.tif 000523
【図７４Ｂ】
2019520352.tif 000524
【図７４Ｃ】
2019520352.tif 000525
【図７４Ｄ】
2019520352.tif 000526
【図７４Ｅ】
2019520352.tif 000527
【図７４Ｆ】
2019520352.tif 000528
【図７４Ｇ】
2019520352.tif 000529
【図７４Ｈ】
2019520352.tif 000530
【図７４Ｉ】
2019520352.tif 000531
【図７４Ｊ】
2019520352.tif 000532
【図７４Ｋ】
2019520352.tif 000533
【図７５Ａ】
2019520352.tif 000534
【図７５Ｂ】
2019520352.tif 000535
【図７５Ｃ】
2019520352.tif 000536
【図７５Ｄ】
2019520352.tif 000537
【図７５Ｅ】
2019520352.tif 000538
【図７５Ｆ】
2019520352.tif 000539
【図７５Ｇ】
2019520352.tif 000540
【図７５Ｈ】
2019520352.tif 000541
【図７５Ｉ】
2019520352.tif 000542
【図７５Ｊ】
2019520352.tif 000543
【図７５Ｋ】
2019520352.tif 000544
【図７６Ａ】
2019520352.tif 000545
【図７６Ｂ】
2019520352.tif 000546
【図７６Ｃ】
2019520352.tif 000547
【図７６Ｄ】
2019520352.tif 000548
【図７６Ｅ】
2019520352.tif 000549
【図７６Ｆ】
2019520352.tif 000550
【図７６Ｇ】
2019520352.tif 000551
【図７６Ｈ】
2019520352.tif 000552
【図７６Ｉ】
2019520352.tif 000553
【図７６Ｊ】
2019520352.tif 000554
【図７６Ｋ】
2019520352.tif 000555
【図７６Ｌ】
2019520352.tif 000556
【図７６Ｍ】
2019520352.tif 000557
【図７７Ａ】
2019520352.tif 000558
【図７７Ｂ】
2019520352.tif 000559
【図７７Ｃ】
2019520352.tif 000560
【図７７Ｄ】
2019520352.tif 000561
【図７７Ｅ】
2019520352.tif 000562
【図７７Ｆ】
2019520352.tif 000563
【図７７Ｇ】
2019520352.tif 000564
【図７７Ｈ】
2019520352.tif 000565
【図７７Ｉ】
2019520352.tif 000566
【図７７Ｊ】
2019520352.tif 000567
【図７８Ａ】
2019520352.tif 000568
【図７８Ｂ】
2019520352.tif 000569
【図７８Ｃ】
2019520352.tif 000570
【図７８Ｄ】
2019520352.tif 000571
【図７８Ｅ】
2019520352.tif 000572
【図７８Ｆ】
2019520352.tif 000573
【図７８Ｇ】
2019520352.tif 000574
【図７８Ｈ】
2019520352.tif 000575
【図７８Ｉ】
2019520352.tif 000576
【図７８Ｊ】
2019520352.tif 000577
【図７８Ｋ】
2019520352.tif 000578
【図７９Ａ】
2019520352.tif 000579
【図７９Ｂ】
2019520352.tif 000580
【図７９Ｃ】
2019520352.tif 000581
【図７９Ｄ】
2019520352.tif 000582
【図７９Ｅ】
2019520352.tif 000583
【図７９Ｆ】
2019520352.tif 000584
【図７９Ｇ】
2019520352.tif 000585
【図７９Ｈ】
2019520352.tif 000586
【図７９Ｉ】
2019520352.tif 000587
【図７９Ｊ】
2019520352.tif 000588
【図７９Ｋ】
2019520352.tif 000589
【図８０Ａ】
2019520352.tif 000590
【図８０Ｂ】
2019520352.tif 000591
【図８０Ｃ】
2019520352.tif 000592
【図８０Ｄ】
2019520352.tif 000593
【図８０Ｅ】
2019520352.tif 000594
【図８０Ｆ】
2019520352.tif 000595
【図８０Ｇ】
2019520352.tif 000596
【図８０Ｈ】
2019520352.tif 000597
【図８０Ｉ】
2019520352.tif 000598
【図８０Ｊ】
2019520352.tif 000599
【図８０Ｋ】
2019520352.tif 000600
【図８０Ｌ】
2019520352.tif 000601
【図８０Ｍ】
2019520352.tif 000602
【図８１Ａ】
2019520352.tif 000603
【図８１Ｂ】
2019520352.tif 000604
【図８１Ｃ】
2019520352.tif 000605
【図８１Ｄ】
2019520352.tif 000606
【図８１Ｅ】
2019520352.tif 000607
【図８１Ｆ】
2019520352.tif 000608
【図８１Ｇ】
2019520352.tif 000609
【図８１Ｈ】
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【図８１Ｉ】
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【図８１Ｊ】
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【図８１Ｋ】
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【図８１Ｌ】
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【図８１Ｍ】
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【図８２Ａ】
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【図８２Ｂ】
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【図８２Ｃ】
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【図８２Ｄ】
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【図８２Ｅ】
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【図８２Ｆ】
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【図８２Ｇ】
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【図８２Ｈ】
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【図８２Ｉ】
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【図８２Ｊ】
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【図８２Ｋ】
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【図８３Ａ】
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【図８３Ｂ】
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【図８３Ｃ】
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【図８３Ｄ】
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【図８３Ｅ】
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【図８３Ｆ】
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【図８３Ｇ】
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【図８３Ｈ】
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【図８４Ａ】
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【図８４Ｂ】
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【図８４Ｃ】
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【図８４Ｄ】
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【図８４Ｅ】
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【図８４Ｆ】
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【図８４Ｇ】
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【図８４Ｈ】
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【図８４Ｉ】
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【図８５Ａ】
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【図８５Ｂ】
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【図８５Ｃ】
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【図８５Ｄ】
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【図８５Ｅ】
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【図８５Ｆ】
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【図８５Ｇ】
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【図８５Ｈ】
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【図８５Ｉ】
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【図８５Ｊ】
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【図８６Ａ】
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【図８６Ｂ】
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【図８６Ｃ】
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【図８６Ｄ】
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【図８６Ｅ】
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【図８６Ｆ】
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【図８６Ｇ】
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【図８６Ｈ】
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【図８６Ｉ】
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【図８６Ｊ】
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【図８７Ａ】
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【図８７Ｂ】
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【図８７Ｃ】
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【図８７Ｅ】
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【図８７Ｆ】
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【図８８Ａ】
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【図８８Ｃ】
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【図８８Ｅ】
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【図８８Ｆ】
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【図８８Ｇ】
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【図８９Ａ】
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【図８９Ｃ】
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【図９１Ａ】
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【図９１Ｅ】
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【図９１Ｆ】
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【図９１Ｇ】
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【図９１Ｉ】
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【図９２Ａ】
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【図９４Ａ】
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【図９４Ｃ】
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【図９４Ｅ】
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【図９４Ｆ】
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【図９４Ｇ】
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【図９４Ｈ】
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【図９４Ｉ】
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【図９５】
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【図９６Ａ】
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【図９６Ｆ】
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【図９６Ｇ】
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【図９６Ｈ】
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【図９７Ａ】
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【図９７Ｃ】
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【図９７Ｆ】
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【図９９Ａ】
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【図１００Ａ】
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【図１０１Ａ】
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【図１０２Ａ】
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【図１０２Ｃ】
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【図１０２Ｅ】
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【図１０３Ａ】
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【図１１０Ａ】
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【図１１２Ａ】
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【図１１２Ｂ】
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【図１１２Ｈ】
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【図１１３Ｄ】
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【図１１３Ｇ】
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【図１１３Ｈ】
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【図１１３Ｉ】
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【図１１４Ａ】
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【図１１４Ｂ】
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【図１１４Ｃ】
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【図１１４Ｄ】
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【図１１５Ａ】
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【図１１５Ｂ】
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【図１１６Ａ】
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【図１１６Ｂ】
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【図１１７Ａ】
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【図１１７Ｂ】
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【図１１８Ａ】
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【図１１８Ｂ】
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【図１１８Ｃ】
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【図１１８Ｄ】
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【図１１８Ｅ】
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【図１１８Ｆ】
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【図１１８Ｇ】
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【図１１８Ｈ】
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【図１１８Ｉ】
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【図１１８Ｊ】
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【図１１９Ａ】
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【図１１９Ｂ】
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【図１１９Ｃ】
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【図１１９Ｄ】
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【図１１９Ｅ】
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【図１１９Ｇ】
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【図１１９Ｈ】
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【図１１９Ｉ】
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【図１２０Ａ】
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【図１２０Ｂ】
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【図１２０Ｃ】
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【図１２０Ｅ】
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【図１２０Ｆ】
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【図１２０Ｇ】
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【図１２０Ｈ】
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【図１２１Ａ】
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【図１２１Ｂ】
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【図１２２Ａ】
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【図１２２Ｂ】
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【図１２２Ｃ】
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【図１２２Ｄ】
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【図１２２Ｅ】
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【図１２２Ｆ】
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【図１２２Ｇ】
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【図１２２Ｈ】
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【図１２２Ｉ】
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【図１２３Ａ】
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【図１２３Ｃ】
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【図１２４Ａ】
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【図１２６Ａ】
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【図１２７Ｅ】
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【図１２７Ｆ】
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【図１２７Ｈ】
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【図１２７Ｋ】
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【図１２７Ｎ】
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【図１２８Ｅ】
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【図１３７Ａ】
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【図１３７Ｃ】
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【図１３７Ｄ】
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【図１３７Ｆ】
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【図１３７Ｇ】
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【図１３７Ｈ】
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【図１３７Ｉ】
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【図１３８Ａ】
2019520352.tif 001093
【図１３８Ｂ】
2019520352.tif 001094
【図１３８Ｃ】
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【図１３８Ｄ】
2019520352.tif 001096
【図１３８Ｅ】
2019520352.tif 001097
【図１３８Ｆ】
2019520352.tif 001098
【図１３８Ｇ】
2019520352.tif 001099
【配列表】
2019520352000001.app
【国際調査報告】
2019520352.tif 001100
2019520352.tif 001101