(57)【要約】  白金錯体及びそのリポソーム、並びにその応用である。その白金錯体は、カルボキシル基を含有してpH感受性を示し、低いpH値の環境（例えば、腫瘍組織）において、カルボキシル基が脱プロトン化する傾向にあり、腫瘍組織への薬物放出の促進、薬物の治療効果の向上に寄与し、且つリポソームの膜材料と良好な結合を示すことで、リポソームの封入率と薬物担持量を向上させる。実験より、当該白金錯体のリポソームは薬物の副作用を軽減し、薬効を高めることができることが示された。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式I-a〜I-dで表される構造の白金錯体。
【化１】
2019504121.tif 000035
R1は、-H、-CnH2n+1、-CnH2n-1、-Ar-CnH2n+1、-Ar-CnH2n-1、-Ar-O-CnH2n+1、又は-Ar-O-CnH2n-1から選ばれ、n＝1〜22であり、
R4は、-CbH2b-、-CbH2b-2-、-Ar-CbH2b-、-Ar-CbH2b-2-、-Ar-O-CbH2b-、-Ar-O-CbH2b-2-、または2つのカルボキシル基を除去したヒアルロン酸から選ばれ、b＝0〜22であり、
R5は、-H、-CcH2c+1、-CcH2c-1、-Ar-CcH2c+1、-Ar-CcH2c-1、-Ar-O-CcH2c+1、-Ar-O-CcH2c-1、または1つのアミノ基を除去したキトサンから選ばれ、c＝1〜22であり、
R6は、-NH2、-NH-CO-（CH2）eCH3、-CdH2d-NH2、-CdH2d-2-NH2、-CdH2d-COOH、-CdH2d-2-COOH、又は-CdH2d-NH-CO-（CH2）eCH3から選ばれ、d＝1〜8、e＝1〜21であり、
x＝0〜10であり、
ここで、任意のCに連結したHは置換基で置換されてもよく、
ここで、前記置換基は-NH2、-OH、-COOH、ハロゲン、又は-Arの1種又は複数種である。
【請求項２】
x＝0〜10であり、
R1は、-H、-CnH2n+1又は-CnH2n-1から選ばれ、n＝8〜20であり、
R4は、-CbH2b-、-CbH2b-2-、または2つのカルボキシル基を除去したヒアルロン酸から選ばれ、b＝1〜10であり、
R5は、-CcH2c+1、-CcH2c-1、または1つのアミノ基を除去したキトサンから選ばれ、c＝8〜20であり、
R6は、-NH2、-NH-CO-（CH2）eCH3、-CdH2d-NH2、-CdH2d-COOH又は-（CH2）dNH-CO-（CH2）eCH3から選ばれ、d＝1〜6、e＝8〜20であることを特徴とする請求項1に記載の白金錯体。
【請求項３】
x＝0であり、
R1は、-CnH2n+1であり、n＝8〜18であり、
R6は、-（CH2）2-COOH、-CH2-COOH、-（CH2）4NH2、又は-（CH2）4NH-CO-（CH2）14CH3であることを特徴とする請求項1に記載の白金錯体。
【請求項４】
x＝1〜6であり、
R1は、-CnH2n+1であり、n＝8〜18であり、R6は-NH2であることを特徴とする請求項1に記載の白金錯体。
【請求項５】
R4は、
【化２】
2019504121.tif 000036
又は2つのカルボキシル基を除去したヒアルロン酸から選ばれ、
R5は、-CcH2c+1から選ばれ、c＝12〜18であることを特徴とする請求項1に記載の白金錯体。
【請求項６】
構造は、式（1）〜（22）（ここで、y＝7〜17である）で表されることを特徴とする請求項1に記載の白金錯体。  
【化３−１】
2019504121.tif 000037
【化３−２】
2019504121.tif 000038
【請求項７】
式IIで表される構造の両親媒性化合物。
【化４】
2019504121.tif 000039
R1は、-H、-CnH2n+1、-CnH2m-1、-Ar-CnH2n+1、-Ar-CnH2n-1、-Ar-O-CnH2n+1、又は-Ar-O-CnH2n-1から選ばれ、n＝1〜22であり、
R2は、-CmH2m-、-CmH2m-2-、-CmH2m-NH-、又は-CmH2m-2-NH-から選ばれ、m＝1〜8であり、
R3は、-OH、-CaH2a+1、-CaH2a-1、-Ar-CaH2a+1、-Ar-CaH2a-1、-Ar-O-CaH2a+1、又は-Ar-O-CaH2a-1から選ばれ、a＝1〜22であり、
ここで、任意のCに連結したHは置換基で置換されてもよく、
ここで、前記置換基は-NH2、-OH、-COOH、ハロゲン、又は-Arの1種又は複数種であり、
前記R2及びR3の構造には、少なくとも1つの-COOHを含む。
【請求項８】
R1は-CnH2n+1であり、R2は
【化５】
2019504121.tif 000040
であり、R3は-OHであり、
或いは、R1は-CnH2n+1であり、R2は
【化６】
2019504121.tif 000041
であり、R3は-OHであり、
或いは、R1は-CnH2n+1であり、R2は
【化７】
2019504121.tif 000042
であり、R3は-CaH2a+1であり、
或いは、R1は-CnH2n+1であり、R2は
【化８】
2019504121.tif 000043
であり、R3は-CaH2a+1であり、
n＝8〜18、m＝2〜6、a＝8〜18であることを特徴とする請求項7に記載の両親媒性化合物。
【請求項９】
構造は式II-a〜式II-bで表されることを特徴とする請求項7に記載の両親媒性化合物。
【化９】
2019504121.tif 000044
【請求項１０】
請求項1〜6のいずれか1項に記載の白金錯体、リポソーム膜材料及び/又は安定化剤を含む白金錯体のリポソームにおいて、前記白金錯体とリポソーム膜材料との比は（99：1）〜（1：99）であり、前記の比は、質量比、モル比、又は体積比であることを特徴とする白金錯体のリポソーム。
【請求項１１】
前記リポソーム膜材料は、リン脂質及び/又はコレステロールの組成物を含み、膜材料において、リン脂質の質量部は、1部〜100部であり、コレステロールの質量部は、0部〜60部であることを特徴とする請求項10に記載のリポソーム。
【請求項１２】
前記リン脂質は、卵黄レシチン、大豆レシチン、水素添加大豆リン脂質、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ジラウロイルレシチン、ジミリストイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン又はジステアリルホスファチジルコリン、ジオレイルホスファチジルコリン、ジラウロイルホスファチジルグリセロール、ジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール又はジステアロイルホスファチジルグリセロール、ジオレオイルホスファチジルグリセロール、ホスファチジルグリセロール、ジエルコイルホスファチジルグリセロール（Dierucoyl   Phosphatidylglycerole）、PEG化リン脂質などのいずれか1種又は2種以上の組成物であることを特徴とする請求項10に記載のリポソーム。
【請求項１３】
請求項10〜12のいずれか1項に記載のリポソームを含むことを特徴とするがん治療薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
相互参照
本願は、2016年01月25日に中国特許庁へ提出された、出願番号が201610049404.9、発明の名称が「化合物及びその応用、並びに白金錯体及びそのリポソーム」である中国特許出願に基づき優先権を主張し、その全内容は、援用により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、医薬分野に関し、特に、化合物及びその応用、並びに白金錯体及びそのリポソームに関する。
【背景技術】
【０００３】
1965年にアメリカの科学者B.Rosenborgは、シスプラチンの抗腫瘍活性を意外に発見したことから、白金系金属抗癌剤の合成・応用・研究は急速に発展し、伝統的な細胞傷害性の抗腫瘍薬と比較して、白金系抗腫瘍薬のメカニズムはユニークである。その主な作用ターゲットは、DNAであり、白金系抗腫瘍薬は、細胞内部に入って加水分解され、高い活性を持ち、且つ正に帯電した白金の水和物を形成し、この白金の水和物は、核酸及びタンパク質と結合し、DNA鎖内・鎖間の共役体を形成することで、DNAの二次構造が変化し、DNAの転写と複製を阻害し、最終的にがん細胞のアポトーシスを誘導する。現在、シス-ジアミンジクロロ白金（II）であるシスプラチン（Cisplatin）、シス-ジアミン（1,1-シクロブタンジカルボキシラト）白金（II）であるカルボプラチン（Carboplatin）、（トランス-1,2-シクロヘキサンジアミン）オキサラト白金（II）であるオキサリプラチン（Oxaliplatin）、ネダプラチン（Nedaplatin）、エプタプラチン（Eptaplatin）、ロバプラチン（Lobaplatin）などの順次開発に成功した。白金系抗腫瘍薬は、広い抗腫瘍スペクトル、強い活性、交差耐性なしなどの特徴がある。統計データにより、すべての化学療法の70％〜80％は白金を主成分とするか、又は白金系薬物と配合するものであることが示された。しかしながら、白金抗がん剤は、腫瘍細胞に対する特異性に乏しく、静脈注射の後、急速に血液中から消失し、迅速に諸臓器・組織に分布し、特に、肝臓、腎臓、腸などの組織に広く分布するので、重篤な副作用が生じる。主に、包括腎毒性、消化器毒性（悪心・嘔吐）、骨髄毒性、神経毒性、及び聴器毒性などを含み、且つ、腫瘍部位に到達する薬物濃度が低いほど、治療効果を低下させ、長期間にわたる応用により癌細胞に薬剤耐性を生じさせ、化学療法の効果を低下させるなどの欠点がある。
上記の問題を解決するために、薬物の血中循環時間を延長し、薬物とタンパク質との非特異的結合を減らすことにより、全身性の副作用を軽減し、薬効を高める。各国の薬学研究者らは、白金系薬物の標的指向性薬物送達システムに対する鋭意検討を行い、例えば、ミセル、ベシクル、リポソーム、ナノ粒子などがある。それらの薬物担体は、それらの内に薬物を効果的に閉じ込め、担体の性質により薬物の送達及び放出制御を実現することができることで、標的部位への薬物の効果的な蓄積を増加させ、非病変部位の薬物濃度を低下させ、治療効果を向上させるのみならず、全身性の副作用を軽減することができる。
【０００４】
先行技術は、多種の担体に薬物を担持させる手段により白金製剤の開発を行う方法を開示している。例えば、Uchinoらはシスプラチンをカルボキシル基リッチなポリエチレングリコール-b-ポリグルタミン酸と複合して調製された薬物担持量30wt.％のミセル（NC-6004）は、既に第II相臨床試験段階に入る「British Journal of Cancer（2005）93,678-687」得られたミセルはポリアミノ酸の側鎖間の架橋により形成されたので、その方法で得られた複合体が凍結乾燥された凍結乾燥粉末は再溶解し難く、且つその製剤の治療効果は向上しない。Access Pharmaceuticals社は一般的な重合体HPMAをシスプラチンと結合して調製されたAP5280、AP5280の腫瘍内蓄積量は、シスプラチン注射剤の19倍であり、且つシスプラチンの腎毒性を顕著に低減している「J.Drug Target 10（2002）549-556」。それらの研究により、白金化合物は、環境感受性化学結合を介して大分子と結合し、白金系薬物の毒性を効果的に低減し、治療効果を向上させることが示された。そして、異なる環境感受性化学結合は、白金抗がん剤の薬効に重要な役割を果たし、それが白金化合物の生体内における水和反応速度を変えるため、白金化合物の生体内における水和反応速度は速いほど、抗腫瘍効果が強くなるが、それに伴ってその毒性も強くなる。Poulomi Senguptaらがシスプラチンとコレステロールー無水マレイン酸を、モノカルボキシラト（monocarboxylato）とO→Pt結合で結合させて示された薬効は、シスプラチンと大分子とが安定的なジカルボキシラト（dicarboxylato）結合で結合した複合体よりも明らかに優れ、なお、白金系抗腫瘍薬をリポソームとすることにより、薬物の体内分布を変え、不良反応を軽減し、適用範囲を広げることが期待される。
【０００５】
しかしながら、白金系抗腫瘍薬によるリポソームの調製は、大きな困難に直面する。シスプラチンを例として、それからリポソームを調製するのは、2つの困難に直面する。まず、シスプラチンの水に対する溶解度は4℃で約1mg/mLである。その次に、シスプラチンは、受動的に薬物を担持してリポソームを調製するしかできず、登場したアドリアマイシンのリポソームDoxilなどのようにpH勾配に従って能動的に薬物を担持することができない。上述の2つの原因により、一般的にシスプラチンのリポソームの薬物担持量は低い。ALAZA社により研究開発されたシスプラチン長期血中滞留性リポソーム（SPI-077）は、PEG修飾リポソームであり、主に加熱の方式によりシスプラチンの溶解度を向上させ、SPI-077の調製過程は、水和温度65℃の高温によりシスプラチンの溶解度を約8mg/mL向上させ、その方法で調製されたシスプラチン長期血中滞留性リポソームの薬物担持量は依然として非常に低く、また、SPI-077は、リパーゼで脂質二分子膜を分解しただけでは、薬物を放出できる。従って、リポソームから腫瘍細胞外液に放出される遊離の薬物は非常に少なく、抗腫瘍活性の低下につながる「Advanced Drug Delivery Reviews,2013,65（13-14）:1667-1685」。
以上により、従来の技術は、白金化合物の上述の問題をうまく解決できなく、薬物担持量を増加しながら、良い薬物活性を維持し、且つその副作用を低減することができない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、かかる事情に鑑み、化合物及びその応用、並びに白金錯体及びそのリポソームを提供することを解決すべき技術課題とする。本発明にかかる化合物は、白金錯体の調製に適用でき、それから調製された白金錯体を用いて調製されたリポソームは、抗腫瘍活性を著しく増強するだけでなく、その毒性、特に腎毒性も顕著に低減され、また調製されたリポソームへの白金錯体の封入率及び薬物担持量がいずれも高く、調製プロセスが簡単で、産業応用価値がある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、式I-a〜I-bで表される構造の白金錯体を提供する。
【０００８】
【化１】
2019504121.tif 000002
【０００９】
R4は、-CbH2b-、-CbH2b-2-、-Ar-CbH2b-、-Ar-CbH2b-2-、-Ar-O-CbH2b-、-Ar-O-CbH2b-2-、または2つのカルボキシル基を除去したヒアルロン酸から選ばれ、b＝0〜22であり、
R5は、-H、-CcH2c+1、-CcH2c-1、-Ar-CcH2c+1、-Ar-CcH2c-1、-Ar-O-CcH2c+1、-Ar-O-CcH2c-1、または1つのアミノ基を除去したキトサンから選ばれ、c＝1〜22であり、
ここで、任意のCに連結したHは、置換基で置換されてもよく、
ここで、上記置換基は、-NH2、-OH、-COOH、ハロゲン、又は-Arの1種又は複数種である。
本発明の実施例において、
R4は、-CbH2b-、-CbH2b-2-、または2つのカルボキシル基を除去したヒアルロン酸から選ばれ、b＝1〜10であり、
R5は、-CcH2c+1、-CcH2c-1、または1つのアミノ基を除去したキトサンから選ばれ、c＝8〜18であり、
【００１０】
本発明の実施例において、R4は、
【化２】
2019504121.tif 000003
または2つのカルボキシル基を除去したヒアルロン酸から選ばれる。
R5は、-CcH2c+1から選ばれ、c＝12〜18であり、
本発明は、さらに、式I-c〜I-dで表される構造の白金錯体を提供する。
【００１１】
【化３】
2019504121.tif 000004
【００１２】
R1は、-H、-CnH2n+1、-CnH2n-1、-Ar-CnH2n+1、-Ar-CnH2n-1、-Ar-O-CnH2n+1、又は-Ar-O-CnH2n-1から選ばれ、n＝1〜22であり、
R6は、-NH2、-NH-CO-（CH2）eCH3、-（CH2）dNH-CO-（CH2）eCH3、-CdH2d-NH2、-CdH2d-2-NH2、-CdH2d-COOH、-CdH2d-2-COOHから選ばれ、d＝1〜8、e＝1〜21であり、
x＝0〜10であり、
ここで、任意のCに連結したHは、置換基で置換されてもよく、
ここで、上記置換基は、-NH2、-OH、-COOH、ハロゲン、又は-Arの1種又は複数種である。
【００１３】
本発明の実施例において、
x＝0〜10であり、
R1は、-H、-CnH2n+1、又は-CnH2n-1から選ばれ、n＝8〜20であり、
R6は、-NH2、-NH-CO-（CH2）eCH3、-CdH2d-NH2、-CdH2d-2-COOH、又は-（CH2）dNH-CO-（CH2）eCH3から選ばれ、d＝1〜6、e＝8〜20である。
本発明の実施例において、
x＝0〜6であり、
R1は、-CnH2n+1であり、n＝8〜18であり、
R6は、-NH2、-（CH2）2-COOH、-NH-CO-（CH2）eCH3、又は-（CH2）4NH-CO-（CH2）14CH3から選ばれる。
いくつかの実施例において、x＝0であり、R1は-CnH2n+1であり、n＝8〜18であり、R6は、-（CH2）2-COOH、-（CH2）4NH2、又は-（CH2）4NH-CO-（CH2）14CH3である。
x＝1〜6であり、R1は-CnH2n+1であり、n＝8〜18であり、R6は-NH2である。
【００１４】
本発明は、式IIで表される構造の両親媒性化合物を提供する。
【００１５】
【化４】
2019504121.tif 000005
【００１６】
R1は、-H、-CnH2n+1、-CnH2m-1、-Ar-CnH2n+1、-Ar-CnH2n-1、-Ar-O-CnH2n+1、又は-Ar-O-CnH2n-1から選ばれ、n＝1〜22であり、
R2は、-CmH2m-、-CmH2m-2-、-CmH2m-NH-、又は-CmH2m-2-NH-から選ばれ、m＝1〜8であり、
R3は、-OH、-CaH2a+1、-CaH2a-1、-Ar-CaH2a+1、-Ar-CaH2a-1、-Ar-O-CaH2a+1、又は-Ar-O-CaH2a-1から選ばれ、a＝1〜22であり、
ここで、任意のCに連結したHは、置換基で置換されてもよく、
ここで、上記置換基は、-NH2、-OH、-COOH、ハロゲン、又は-Arの1種又は複数種であり、
上記のR2及びR3の構造には、少なくとも1つの-COOHを含む。
本発明にかかる両親媒性化合物において、
R1は-CnH2n+1であり、R2は
【化５】
2019504121.tif 000006
であり、R3は-OHであり、
若しくは、R1は-CnH2n+1であり、R2は
【化６】
2019504121.tif 000007
であり、R3は-OHであり、
若しくは、R1は-CnH2n+1であり、R2は
【化７】
2019504121.tif 000008
であり、R3は-CaH2a+1であり、
若しくは、R1は-CnH2n+1であり、R2は
【化８】
2019504121.tif 000009
であり、R3は-CaH2a+1であり、
n＝8〜18、m＝2〜6、a＝8〜18である。
本発明にかかる両親媒性化合物の構造は式II-a〜式II-bで表される。
【００１７】
【化９】
2019504121.tif 000010
【００１８】
本発明にかかる白金錯体は、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ネダプラチン、又はロバプラチン（それらの白金系薬物に限定されない）などの白金化合物を、両親媒性化合物のカルボキシル基とアミド基とから形成された配位結合と結合させることにより調製される。本発明は、反応条件について特別な限定がなく、当分野における公知の白金錯体の調製に適用できる反応条件であればよい。
本発明の式I-a、式I-bの白金錯体に使用された両親媒性化合物は、二塩基酸（酸無水物）の1つのカルボキシル基と脂肪族アミンとのアミド化反応により調製されることがでいる（それに限定されなく、すべての当該構造を生成できる合成反応はいずれも適用できる）。本発明の式I-c、式I-dの白金錯体における両親媒性化合物は、脂肪酸クロライドとアミノ酸（例えば、グルタミン酸、アスパラギン酸、リシンが挙げられるが、それに限定されなく、類似している構造を持つ化合物はいずれも適用できる）とのアミド化反応により調製された。本発明は、反応条件について特別な限定がなく、当分野における公知のアミンと酸、アミンと酸塩化物によるアミドの調製に適用可能な反応条件はいずれも使用できる。
本発明は、さらに、本発明にかかる白金錯体、リポソーム膜材料、及び/又は安定剤を含む白金錯体のリポソームを提供し、上記白金錯体とリポソーム膜材料との比は（99：1）〜（1：99）である。
上記の比は、質量比、モル比、または体積比である。
本発明にかかるリポソームは、膜材料が、リン脂質及び/又はコレステロールの組成物を含み、膜材料において、リン脂質の質量部が1部〜100部であり、コレステロールの質量部が0部〜60部である。
【００１９】
本発明にかかるリポソームは、上記リン脂質、卵黄レシチン、大豆レシチン、水素添加大豆リン脂質、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール（Phosphatidylglycerole）、ジラウロイルレシチン、ジミリストイルホスファチジルコリン（Dimyristoyl Phosphatidylcholine）、ジパルミトイルホスファチジルコリン、又はジステアリルホスファチジルコリン、ジオレイルホスファチジルコリン、ジラウロイルホスファチジルグリセロール、ジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール、又はジステアロイルホスファチジルグリセロール、ジオレオイルホスファチジルグリセロール、ホスファチジルグリセロール（Phosphatidylglycerole）、ジエルコイルホスファチジルグリセロール（Dierucoyl Phosphatidylglycerole）、PEG化リン脂質などのいずれか1種又は2種以上の組成物である。
本発明は、本発明にかかるリポソームを含むがん治療薬を提供する。
本発明にかかる白金錯体、及びそのリポソームは、さらに適当な補助材料添加剤を加え、当分野における公知の技術により既存の異なる剤形（dosage form）、例えば、注射液、注射用凍結乾燥粉末、リポソーム懸濁液、錠剤、ゲル剤、植込剤（Implants）などに調製されることができ、静脈注射、局所注射、植込み、吸入、経口などの経路で投与されることに供する。
【発明の効果】
【００２０】
本発明は、式IIの構造の化合物を提供し、その化合物は、良好な生体適合性を備え、そのカルボキシル基及びアミド基が白金系薬物と配合でき、白金系薬物と形成された不安定な配位結合が薬物の生体内における水和反応速度を速めることで、薬効を高める。また、本発明にかかる化合物から調製された白金錯体は、リポソームの膜材料とよく結合できることにより、リポソームの封入率及び薬物担持量を向上させる。さらに、本発明にかかる化合物から白金錯体を調製した後、カルボキシル基を含有してpH感受性を示し、低いpH値の環境（例えば、腫瘍組織）で、カルボキシル基が脱プロトン化する傾向にあり、腫瘍組織への薬物放出を促進し、薬物の治療効果を向上させることに寄与する。試験により分かるように、本発明にかかるリポソームは薬物の副作用を低減し、薬効を高めることができる。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１−ａ】実施例1の両親媒性化合物のNMRスペクトルである。
【図１−ｂ】実施例2の両親媒性化合物のNMRスペクトルである。
【図１−ｃ】実施例3の両親媒性化合物のNMRスペクトルである。
【図１−ｄ−１】実施例4の両親媒性化合物の赤外吸収スペクトルである。
【図１−ｄ−２】実施例4の両親媒性化合物のNMRスペクトルである。
【図１−ｅ】実施例5の両親媒性化合物のNMRスペクトルである。
【図１−ｆ】実施例9の両親媒性化合物のNMRスペクトルである。
【図１−ｇ】実施例10の両親媒性化合物のNMRスペクトルである。
【図１−ｈ】実施例11の両親媒性化合物のNMRスペクトルである。
【図２−１ａ】実施例12の白金錯体の赤外吸収スペクトルである。
【図２−１ｂ】実施例13の白金錯体の赤外吸収スペクトルである。
【図２−２ａ】実施例14の白金錯体の赤外吸収スペクトルである。
【図２−２ｂ】実施例15の白金錯体の赤外吸収スペクトルである。
【図２−３ａ】実施例16の白金錯体の赤外吸収スペクトルである。
【図２−３ｂ】実施例17の白金錯体の赤外吸収スペクトルである。
【図２−４ａ】実施例18の白金錯体の赤外吸収スペクトルである。
【図２−４ｂ】実施例19の白金錯体の赤外吸収スペクトルである。
【図２−５ａ】実施例20の白金錯体の赤外吸収スペクトルである。
【図２−５ｂ】実施例21の白金錯体の赤外吸収スペクトルである。
【図２−６ａ】実施例22の白金錯体の赤外吸収スペクトルである。
【図２−７ａ】実施例23の白金錯体の赤外吸収スペクトルである。
【図２−７ｂ】実施例24の白金錯体の赤外吸収スペクトルである。
【図２−８ａ】実施例25の白金錯体の赤外吸収スペクトルである。
【図２−９ａ】実施例26の白金錯体の赤外吸収スペクトルである。
【図２−９ｂ】実施例27の白金錯体の赤外吸収スペクトルである。
【図３】実施例31で調製されたリポソームの電子顕微鏡の画像である。
【図４】実施例31で調製されたリポソームの粒子径分布図である。
【図５】マウスへの投与後の体重変化率（10mg/kg）を示すグラフである。
【図６】マウスの生存率を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
本発明は、化合物及びその応用、並びに白金錯体及びそのリポソームを提供し、当業者は、本明細書を参考し、適当にプロセスパラメータを改良して実現できる。特に、すべての類似の置換および変更が当業者にとっては明らかであり、それらはすべて本発明に含まれるとみなされることを指摘するべきである。本発明の方法及び応用は好ましい実施例により述べられたが、当業者にとっては、本発明の内容、精神および範囲から逸脱することなく、本明細書の方法及び応用に対して改良、又は適当な変更、及び組み合わせを行い、本発明技術を実現または適用することが明らかである。
【００２３】
本発明は式I-a〜I-dで表される構造の白金錯体を提供する。
【００２４】
【化１０】
2019504121.tif 000011
【００２５】
R1は、-H、-CnH2n+1、-CnH2n-1、-Ar-CnH2n+1、-Ar-CnH2n-1、-Ar-O-CnH2n+1、又は-Ar-O-CnH2n-1から選ばれ、n＝1-22であり、
R4は、-CbH2b-、-CbH2b-2-、-Ar-CbH2b-、-Ar-CbH2b-2-、-Ar-O-CbH2b-、-Ar-O-CbH2b-2-、または2つのカルボキシル基を除去したヒアルロン酸から選ばれ、b＝0〜22であり、
R5は、-H、-CcH2c+1、-CcH2c-1、-Ar-CcH2c+1、-Ar-CcH2c-1、-Ar-O-CcH2c+1、-Ar-O-CcH2c-1、または1つのアミノ基を除去したキトサンから選ばれ、c＝0〜21であり、
R6は、-NH2、-CdH2d-NH2、-CdH2d-2-NH2、-CdH2d-COOH、-CdH2d-2-COOH、-NH-CO-（CH2）eCH3、又は-（CH2）dNH-CO-（CH2）eCH3から選ばれ、d＝1〜8、e＝1〜21であり、
x＝0〜10であり、
ここで、任意のCに連結したHは、置換基で置換されてもよく、
ここで、上記置換基は、-NH2、-OH、-COOH、ハロゲン、又は-Arの1種又は複数種である。
本発明において、-CnH2n+1または-CcH2c+1は、アルキル基であり、nは1〜22である。いくつかの実施例において、nは8〜20である。他のいくつかの実施例において、nは8〜18であり、若しくは、nは12〜18であり、他のいくつかの実施例において、nは14〜16であり、いくつかの実施例において、nは15である。cの値とnの値は、同じであっても異なっていてもよく、独立に、cの値は1〜22である。いくつかの実施例において、cの値は8〜20である。他のいくつかの実施例において、cは8〜18であり、或いは、cは12〜18であり、他のいくつかの実施例において、cは14〜16であり、いくつかの実施例において、cは15である。かかるアルキル基は、直鎖状のアルキル基、又は分岐鎖状のアルキル基であり、いくつかの実施例において、直鎖状のアルキル基である。かかるアルキル基は、置換又は非置換のアルキル基である。かかる置換とは、アルキル基の任意のCに連結したHは置換基で置換されてもよいことを意味し、かかる置換アルキル基の置換基は、-NH2、-OH、-COOH、ハロゲン、又は-Arの1種又は複数種である。任意の炭素上の置換基の数は、1又は2である。本発明において、-CnH2n+1のアルキル基は、メチル基（Me、-CH3）、エチル基（Et、-CH2CH3）、n-プロピル基（n-Pr、-CH2CH2CH3）、イソプロピル基（i-Pr、-CH（CH3）2）、n-ブチル基（n-Bu、-CH2CH2CH2CH3）、イソブチル基（i-Bu、-CH2CH（CH3）2）、sec-ブチル基（s-Bu、-CH（CH3）CH2CH3）、tert-ブチル基（t-Bu、-C（CH3）3）、n-ペンチル基（-CH2CH2CH2CH2CH3）、2-ペンチル基（-CH（CH3）CH2CH2CH3）、3-ペンチル基（-CH（CH2CH3）2）、2-メチル-2-ブチル基（-C（CH3）2CH2CH3）、3-メチル-2-ブチル基（-CH（CH3）CH（CH3）2）、3-メチル-1-ブチル基（-CH2CH2CH（CH3）2）、2-メチル-1-ブチル基（-CH2CH（CH3）CH2CH3）、n-ヘキシル基（-CH2CH2CH2CH2CH2CH3）、2-ヘキシル基（-CH（CH3）CH2CH2CH2CH3）、3-ヘキシル基（-CH（CH2CH3）（CH2CH2CH3））、2-メチル-2-ペンチル基（-C（CH3）2CH2CH2CH3）、3-メチル-2-ペンチル基（-CH（CH3）CH（CH3）CH2CH3）、4-メチル-2-ペンチル基（-CH（CH3）CH2CH（CH3）2）、3-メチル-3-ペンチル基（-C（CH3）（CH2CH3）2）、2-メチル-3-ペンチル基（-CH（CH2CH3）CH（CH3）2）、2,3-ジメチル-2-ブチル基（-C（CH3）2CH（CH3）2）、3,3-ジメチル-2-ブチル基（-CH（CH3）C（CH3）3）、n-ヘプチル基、n-オクチル基、n-ノニル基、n-デシル基、n-ウンデシル基、n-ドデシル基、n-トリデシル基、n-テトラデシル基、n-ペンタデシル基、n-ヘキサデシル基、n-ヘプタデシル基、n-オクタデシル基を含むが、これらに限定されない。
【００２６】
本発明において、-CnH2n-1又は-CcH2c-1とは、アルケニル基をいい、そのうちの少なくとも1つの位置は不飽和であり、即ち、1つのC-Cは、sp2の二重結合である。nの値は2〜22である。いくつかの実施例において、nの値は8〜20である。他のいくつかの実施例において、nは8〜18であり、或いは、nは12〜18であり、他のいくつかの実施例において、nは14〜16であり、いくつかの実施例において、nは15である。cの値及びnの値は同じであっても異なっていてもよく、独立に、cの値は2〜22である。いくつかの実施例において、cの値は8〜20である。他のいくつかの実施例において、cは8〜18であり、或いは、cは12〜18であり、他のいくつかの実施例において、cは14〜16であり、いくつかの実施例において、cは15である。かかるアルケニル基は、直鎖状のアルケニル基又は分岐鎖状のアルケニル基であり、いくつかの実施例において、直鎖状のアルケニル基である。かかるアルケニル基は、置換又は非置換のアルケニル基である。かかる置換アルケニル基の任意のCに連結したHは置換基で置換されてもよく、かかる置換アルケニル基の置換基は、-NH2、-OH、-COOH、ハロゲン、又は-Arの1種又は複数種である。任意の炭素上の置換基の数は、1又は2である。かかるアルケニル基は、基の「トランス」、「シス」、或いは「E体」、「Z体」という異性体を含み、その具体的な例は、ビニル基（-CH＝CH2）、プロペニル基、アリル基（-CH2CH＝CH2）、ブテニル基、4-メチルブテニル基、2-ペンテニル基、ヘキセニル基、ヘプテニル基、オクテニル基、ノネニル基、デセニル基、ウンデセニル基、ドデセニル基、トリデセニル基、テトラデセニル基、ペンタデセニル基、ヘキサデセニル基、ヘプタデセニル基、オクタデセニル基を含むが、これらに限定されない。
本発明において、-Ar-CnH2n+1とは、フェニル基又はアリール基と連結している-CnH2n+1をいい、-Ar-CnH2n-1とは、フェニル基又はアリール基と連結している-CnH2n-1をいい、-Ar-O-CnH2n+1とは、-Ar-O-と連結している-CnH2n+1をいい、-Ar-O-CnH2n-1とは、-Ar-O-と連結している-CnH2n-1をいう。-Ar-CcH2c+1とは、フェニル基又はアリール基と連結している-CcH2c+1をいい、-Ar-CcH2c-1とは、フェニル基又はアリール基と連結している-CcH2c-1をいい、-Ar-O-CcH2c+1とは、-Ar-O-と連結している-CcH2c+1をいい、-Ar-O-CcH2c-1とは、-Ar-O-と連結している-CcH2c-1をいう。かかる-Ar-は、合計で6〜14員環の単環、二環、及び三環を含む炭素環系を表し、且つ、少なくとも1つの環系が芳香族環系であり、各環系が3-7員環を含み、そのうちの2つの結合手が分子の他の部分と連結する。-Ar-は、フェニレン基、ナフチル基、及びアントリレン基であってもよい。さらに、かかる-Ar-は、置換又は非置換のものであってもよい。
【００２７】
本発明において、-CbH2b-又は-CdH2d-とは、アルキレン基をいい、bの値は1〜8である。いくつかの実施例において、bの値は1〜6である。他のいくつかの実施例において、bは1〜4であり、他のいくつかの実施例において、bは2〜4であり、かかるアルキレン基は、直鎖状または分岐鎖状のアルキレン基であり、dの値及びbの値は同じであっても異なっていてもよい、独立に、dの値は1〜8である。いくつかの実施例において、dの値は1〜6である。他のいくつかの実施例において、dは1〜4であり、他のいくつかの実施例において、dは2〜4であり、かかるアルキレン基は、直鎖状又は分岐鎖状のアルキレン基であり、いくつかの実施例において、直鎖状のアルキレン基である。かかるアルキレン基は、置換又は非置換のアルキレン基である。かかる置換とは、アルキレン基の任意のCに連結したHは置換基で置換されてもよく、かかる置換アルキル基の置換基は、-NH2、-OH、-COOH、又は-Arの1種又は複数種である。任意の炭素上の置換基の数は、1又は2である。本発明において、アルキレン基は、メチレン基（-CH2-）、エチレン基（-CH2CH2-）、n-プロピレン基（-CH2CH2CH2-）、イソプロピレン基（-C（CH3）2-）、n-ブチレン基（-CH2CH2CH2CH2-）、イソブチレン基、sec-ブチレン基、tert-ブチレン基、n-ペンチレン基、2-ペンチレン基、3-ペンチレン基、2-メチル-2-ブチレン基、3-メチル基-2-ブチレン基、3-メチル基-1-ブチレン基、2-メチル基-1-ブチレン基、n-ヘキシレン基、2-ヘキシレン基、3-ヘキシレン基、2-メチル-2-ペンチレン基、3-メチル-2-ペンチレン基、4-メチル-2-ペンチレン基、3-メチル-3-ペンチレン基、2-メチル-3-ペンチレン基、2,3-ジメチル-2-ブチレン基、3,3-ジメチル基-2-ブチレン基、n-ヘプチレン基、n-オクチレン基、カルボキシル基で置換されたプロピレン基、カルボキシル基で置換されたn-ブチレン基、カルボキシル基で置換されたn-ペンチレン基、アミノ基で置換されたプロピレン基、アミノ基で置換されたn-ブチレン基、アミノ基で置換されたn-ペンチレン基を含むが、これらに限定されない。
本発明において、-CbH2b-2-又は-CdH2d-2-とは、アルケニレン基をいい、そのうちの少なくとも1つの位置は不飽和であり、即ち、1つのC-Cはsp2二重結合である。bの値は2〜8である。いくつかの実施例において、bの値は2〜6である。他のいくつかの実施例において、bは2〜4である。dの値及びbの値は同じであっても異なっていてもよい、独立に、dの値は2〜8である。いくつかの実施例において、dの値は2〜6である。他のいくつかの実施例において、dは2〜4である。かかるアルケニル基は、直鎖状のアルケニレン基又は分岐鎖状のアルケニレン基であり、いくつかの実施例において、直鎖状のアルケニレン基である。かかるアルケニレン基は、置換又は非置換のアルケニレン基である。かかる置換アルケニレン基の任意のCに連結したHは置換基で置換されてもよく、かかる置換アルケニレン基の置換基は、-NH2、-OH、-COOH、又は-Arの1種又は複数種である。任意の炭素上の置換基の数は1又は2である。かかるアルケニレン基は、基の「トランス」、「シス」、或いは「E体」、「Z体」という異性体を含み、その具体的な例は、ビニレン基（-CH＝CH-）、プロペニレン基、アリレン基（-CH2CH＝CH-）、ブテニレン基、4-メチルブテニレン基、2-ペンテニレン基、ヘキセニレン基、ヘプテニレン基、オクテニレン基を含むが、これらに限定されない。
【００２８】
本発明の実施例において、-CdH2d-NH2、-CdH2d-2-NH2は、アミノ基（-NH2）と連結している-CdH2d-又は-CdH2d-2-であり、-CdH2d-COOH、-CdH2d-2-COOHは、カルボキシル基（-COOH）と連結している-CdH2d-又は-CdH2d-2-である。
いくつかの実施例において、
R1は、-H、-CnH2n+1、又は-CnH2n-1から選ばれ、n＝8〜18であり、
R4は、-CbH2b-、-CbH2b-2-、または2つのカルボキシル基を除去したヒアルロン酸から選ばれ、b＝1〜10であり、
R5は、-CcH2c+1、-CcH2c-1、または1つのアミノ基を除去したキトサン、c＝8〜18であり、
R6は、-NH2、-NH-CO-（CH2）eCH3、-CdH2d-NH2、-CdH2d-COOH、又は-（CH2）dNH-CO-（CH2）eCH3から選ばれ、d＝2〜6、e＝8〜18である。
いくつかの実施例において、
x＝0〜6であり；
R1は、-CnH2n+1であり、n＝8〜18であり、
R4は、
【化１１】
2019504121.tif 000012
または2つのカルボキシル基を除去したヒアルロン酸から選ばれ、
R5は、-CcH2c+1から選ばれ、c＝12〜18であり、
R6は、-NH2、-（CH2）4NH2、-（CH）2-COOH、又は-（CH2）4NH-CO-（CH2）14CH3から選ばれる。
いくつかの実施例において、x＝0であり、R1は-CnH2n+1であり、n＝8〜18であり、R6は、-CH2-COOH、-（CH2）4NH2、-（CH2）2-COOH、または-（CH2）4NH-CO-（CH2）14CH3である。
x＝1〜6であり、R1は-CnH2n+1であり、n＝8〜18であり、R6は-NH2である。
【００２９】
本発明にかかる白金錯体は、式（1）〜（22）で表される（ここで、y＝7〜17である）。
【００３０】
【化１２】
2019504121.tif 000013
【化１３】
2019504121.tif 000014
【００３１】
本発明にかかる白金錯体の構造式（1）〜（22）において、y＝7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、または17である。
本発明にかかる白金錯体は、式IIの化合物、又は式IIIの化合物と白金化合物とを反応させて調製され、上記白金化合物は、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、又はネダプラチン、エプタプラチン、ロバプラチンなどである。
【００３２】
【化１４】
2019504121.tif 000015
【００３３】
R1は、-H、-CnH2n+1、-CnH2m-1、-Ar-CnH2n+1、-Ar-CnH2n-1、-Ar-O-CnH2n+1、又は-Ar-O-CnH2n-1から選ばれ、n＝1〜22であり、
R2は、-CmH2m-、-CmH2m-2-、-CmH2m-NH-、又は-CmH2m-2-NH-から選ばれ、m＝1〜8であり、
R3は、-OH、-CaH2a+1、-CaH2a-1、-Ar-CaH2a+1、-Ar-CaH2a-1、-Ar-O-CaH2a+1、又は-Ar-O-CaH2a-1から選ばれ、a＝1〜22であり、
R4は、-CbH2b-、-CbH2b-2-、-Ar-CbH2b-、-Ar-CbH2b-2-、-Ar-O-CbH2b-、-Ar-O-CbH2b-2-、または2つのカルボキシル基を除去したヒアルロン酸から選ばれ、b＝0〜22であり、
R5は、-H、-CcH2c+1、-CcH2c-1、-Ar-CcH2c+1、-Ar-CcH2c-1、-Ar-O-CcH2c+1、-Ar-O-CcH2c-1、または1つのアミノ基を除去したキトサンから選ばれ、c＝0〜22であり、
ここで、任意のCに連結したHは、置換基で置換されてもよく、
ここで、上記置換基は、-NH2、-OH、-COOH、ハロゲン、又は-Arの1種又は複数種であり、
上記のR2及びR3の構造には、少なくとも1つの-COOHを含む。
本発明にかかる方法では、式II又は式IIIの化合物と白金化合物におけるPtとのモル比は、30：1以下である。
いくつかの実施例において、式II又は式IIIの化合物と白金化合物におけるPtとのモル比は、（1〜8）：1である。
他のいくつかの実施例において、式II又は式IIIの化合物と白金化合物におけるPtとのモル比は、（1〜5）：1である。
他のいくつかの実施例において、式II又は式IIIの化合物と白金化合物におけるPtとのモル比は1：1である。
【００３４】
白金錯体を調製する反応に使用される溶媒は、水性媒体である。
本発明にかかる実施例、水性媒体は、水、マンニトール水溶液、塩化ナトリウム水溶液、グリセリン水溶液、糖含有水溶液、又はリン酸塩緩衝液などであるが、これらに限定されなく、ジメチルホルムアミド（DMF）、ジメチルスルホキシド（DMSO）を含む上記水溶液であってもよい。
本発明は、式IIで表される構造の両親媒性化合物を提供する。
【００３５】
【化１５】
2019504121.tif 000016
【００３６】
R1は、-H、-CnH2n+1、-CnH2n-1、-Ar-CnH2n+1、-Ar-CnH2n-1、-Ar-O-CnH2n+1、又は-Ar-O-CnH2n-1から選ばれ、n＝1〜22であり、
R2は、-CmH2m-、-CmH2m-2-、-CmH2m-NH-、又は-CmH2m-2-NH-から選ばれ、m＝1〜8であり、
R3は、-OH、-CaH2a+1、-CaH2a-1、-Ar-CaH2a+1、-Ar-CaH2a-1、-Ar-O-CaH2a+1、又は-Ar-O-CaH2a-1から選ばれ、a＝1〜22であり、
ここで、任意のCに連結したHは、置換基で置換されてもよく、
ここで、上記置換基は、-NH2、-OH、-COOH、ハロゲン、又は-Arの1種又は複数種であり、
上記のR2及びR3の構造には、少なくとも1つの-COOHを含む。
本発明において、-CnH2n+1又は-CaH2a+1は、アルキル基であり、nの値は、1〜22である。いくつかの実施例において、nの値は8〜20である。他のいくつかの実施例において、nは8〜18であり、或いは、nは12〜18であり、他のいくつかの実施例において、nは14〜16であり、いくつかの実施例において、nは15である。aの値及びnの値は同じであっても異なっていてもよい、独立に、aの値は1〜22である。いくつかの実施例において、aの値は8〜20である。他のいくつかの実施例において、aは8〜18であり、或いは、aは12〜18であり、他のいくつかの実施例において、aは14〜16であり、いくつかの実施例において、aは15である。かかるアルキル基は、直鎖状のアルキル基または分岐鎖状のアルキル基であり、いくつかの実施例において、直鎖状のアルキル基である。かかるアルキル基は、置換又は非置換のアルキル基である。かかる置換とは、アルキル基の任意のCに連結したHは、置換基で置換されてもよく、かかる置換アルキル基の置換基は、-NH2、-OH、-COOH、又は-Arの1種又は複数種である。任意の炭素上の置換基の数は、1又は2である。本発明において、-CnH2n+1のアルキル基は、メチル基（Me、-CH3）、エチル基（Et、-CH2CH3）、n-プロピル基（n-Pr、-CH2CH2CH3）、イソプロピル基（i-Pr、-CH（CH3）2）、n-ブチル基（n-Bu、-CH2CH2CH2CH3）、イソブチル基（i-Bu、-CH2CH（CH3）2）、sec-ブチル基（s-Bu、-CH（CH3）CH2CH3）、tert-ブチル基（t-Bu、-C（CH3）3）、n-ペンチル基（-CH2CH2CH2CH2CH3）、2-ペンチル基（-CH（CH3）CH2CH2CH3）、3-ペンチル基（-CH（CH2CH3）2）、2-メチル-2-ブチル基（-C（CH3）2CH2CH3）、3-メチル-2-ブチル基 （-CH（CH3）CH（CH3）2）、3-メチル-1-ブチル基（-CH2CH2CH（CH3）2）、2-メチル-1-ブチル基（-CH2CH（CH3）CH2CH3）、n-ヘキシル基（-CH2CH2CH2CH2CH2CH3）、2-ヘキシル基（-CH（CH3）CH2CH2CH2CH3）、3-ヘキシル基（-CH（CH2CH3）（CH2CH2CH3））、2-メチル-2-ペンチル基（-C（CH3）2CH2CH2CH3）、3-メチル-2-ペンチル基（-CH（CH3）CH（CH3）CH2CH3）、4-メチル-2-ペンチル基（-CH（CH3）CH2CH（CH3）2）、3-メチル-3-ペンチル基（-C（CH3）（CH2CH3）2）、2-メチル-3-ペンチル基（-CH（CH2CH3）CH（CH3）2）、2,3-ジメチル-2-ブチル基（-C（CH3）2CH（CH3）2）、3,3-ジメチル-2-ブチル基（-CH（CH3）C（CH3）3）、n-ヘプチル基、n-オクチル基、n-ノニル基、n-デシル基、n-ウンデシル基、n-ドデシル基、n-トリデシル基、n-テトラデシル基、n-ペンタデシル基、n-ヘキサデシル基、n-ヘプタデシル基、n-オクタデシル基を含むが、これらに限定されない。
【００３７】
本発明において、-CnH2n-1または-CaH2a-1とは、アルケニル基をいい、そのうちの少なくとも1つの位置は不飽和であり、即ち、1つのC-Cは、sp2二重結合である。nの値は2〜22である。いくつかの実施例において、nの値は8〜20である。他のいくつかの実施例において、nは8〜18であり、或いは、nは12〜18であり、他のいくつかの実施例において、nは14〜16であり、いくつかの実施例において、nは15である。aの値とnの値は、同じであっても異なっていてもよい、独立に、aの値は2〜22である。いくつかの実施例において、aの値は8〜20である。他のいくつかの実施例において、aは8〜18であり、或いは、aは12〜18であり、他のいくつかの実施例において、aは14〜16であり、いくつかの実施例において、aは15である。かかるアルケニル基は、直鎖状のアルケニル基または分岐鎖状のアルケニル基であり、いくつかの実施例において、直鎖状のアルケニル基である。かかるアルケニル基は、置換又は非置換のアルケニル基である。かかる置換アルケニル基の任意のCに連結したHは、置換基で置換されてもよく、かかる置換アルケニル基の置換基は、-NH2、-OH、-COOH、ハロゲン、又は-Arの1種又は複数種である。任意の炭素上の置換基の数は、1又は2である。かかるアルケニル基は、基の「トランス」、「シス」、或いは「E体」、「Z体」という異性体を含み、その具体的な例は、ビニル基（-CH＝CH2）、プロペニル基、アリル基（-CH2CH＝CH2）、ブテニル基、4-メチルブテニル基、2-ペンテニル基、ヘキセニル基、ヘプテニル、オクテニル基、ノネニル基、デセニル基、ウンデセニル基、ドデセニル基、トリデセニル基、テトラデセニル基、ペンタデセニル基、ヘキサデセニル基、ヘプタデセニル基、オクタデセニル基を含むが、それらに限定されない。
本発明において、-Ar-CnH2n+1とは、フェニル基又はアリール基と連結している-CnH2n+1をいい、-Ar-CnH2n-1とは、フェニル基又はアリール基と連結している-CnH2n-1をいい、-Ar-O-CnH2n+1とは、-Ar-O-と連結している-CnH2n+1をいい、-Ar-O-CnH2n-1とは、-Ar-O-と連結している-CnH2n-1をいう。-Ar-CaH2a+1とは、フェニル基又はアリール基と連結している-CaH2a+1をいい、-Ar-CaH2a-1とは、フェニル基又はアリール基と連結している-CaH2a-1をいい、-Ar-O-CaH2a+1とは、-Ar-O-と連結している-CaH2a+1、-Ar-O-CaH2a-1とは、-Ar-O-と連結している-CaH2a-1をいう。かかる-Ar-は、合計で6〜14員環の単環、二環、及び三環を含む炭素環系を表し、且つ少なくとも1つの環系が芳香族環系であり、各環系が3〜7員環を含み、そのうちの2つの結合手が分子の他の部分と連結している。-Ar-は、フェニレン基、ナフチル基、及びアントリレン基であってもよい。さらに、かかる-Ar-は、置換又は非置換のものであってもよい。
本発明において、-CmH2m-とは、アルキレン基をいい、mの値は1〜8である。いくつかの実施例において、mの値は1〜6である。他のいくつかの実施例において、mは1〜4であり、他のいくつかの実施例において、mは2〜4であり、かかるアルキレン基は、直鎖状又は分岐鎖状のアルキレン基であり、いくつかの実施例において、直鎖状のアルキレン基である。かかるアルキレン基は、置換又は非置換のアルキレン基である。かかる置換とは、アルキレン基の任意のCに連結したHは、置換基で置換されてもよく、かかる置換アルキル基の置換基は、-NH2、-OH、-COOH、又は-Arの1種又は複数種である。任意の炭素上の置換基の数は、1又は2である。本発明において、-CmH2m-のアルキレン基は、メチレン基（-CH2-）、エチレン基（-CH2CH2-）、n-プロピレン基（-CH2CH2CH2-）、イソプロピレン基（-C（CH3）2-）、n-ブチレン基（-CH2CH2CH2CH2-）、イソブチレン基、sec-ブチレン基、tert-ブチレン基、n-ペンチレン基、2-ペンチレン基、3-ペンチレン基、2-メチル-2-ブチレン基、3-メチル-2-ブチレン基、3-メチル-1-ブチレン基、2-メチル-1-ブチレン基、n-ヘキシレン基、2-ヘキシレン基、3-ヘキシレン基、2-メチル-2-ペンチレン基、3-メチル-2-ペンチレン基、4-メチル-2-ペンチレン基、3-メチル-3-ペンチレン基、2-メチル-3-ペンチレン基、2,3-ジメチル-2-ブチレン基、3,3-ジメチル-2-ブチレン基、n-ヘプチレン基、n-オクチレン基、カルボキシル基で置換されたプロピレン基、カルボキシル基で置換されたn-ブチレン基、カルボキシル基で置換されたn-ペンチレン基、アミノ基で置換されたプロピレン基、アミノ基で置換されたn-ブチレン基、アミノ基で置換されたn-ペンチレン基を含むが、それらに限定されない。
【００３８】
本発明において、-CmH2m-2-とは、アルケニレン基をいい、そのうちの少なくとも1つの位置は不飽和であり、即ち、1つのC-Cは、sp2の二重結合である。nの値は2〜8である。いくつかの実施例において、nの値は2〜6である。他のいくつかの実施例において、nは2〜4である。かかるアルケニル基は、直鎖状のアルケニレン基又は分岐鎖状のアルケニレン基であり、いくつかの実施例において、直鎖状のアルケニレン基である。かかるアルケニレン基は、置換又は非置換のアルケニレン基である。かかる置換アルケニレン基の任意のCに連結したHは置換基で置換されてもよく、かかる置換アルケニレン基の置換基は、-NH2、-OH、-COOH、又は-Arの1種又は複数種である。任意のC上の置換基の数は、1又は2である。かかるアルケニレン基は、基の「トランス」、「シス」、或いは「E体」、「Z体」という異性体を含み、その具体的な例は、ビニレン基（-CH＝CH-）、プロペニレン基、アリレン基（-CH2CH＝CH-）、ブテニレン基、4-メチルブテニレン基、2-ペンテニレン基、 ヘキセニレン基、ヘプテニレン基、オクテニレン基を含むが、それらに限定されない。
本発明において、-CmH2m-NH-又は-CmH2m-2-NH-とは、-NH-と連結している-CmH2m-又は-CmH2m-2-をいう。
本発明の実施例において、両親媒性化合物は、
R1が、-CnH2n+1、-CnH2n-1から選ばれ、n＝8〜18であり、
R2が、-CmH2m-、-CmH2m-1-NH-から選ばれ、m＝2〜6であり、
R3が、-OH、-CaH2a+1、-CaH2a-1から選ばれ、a＝8〜18である。
ここで、任意のCに連結したHは1つ又は2つの置換基で置換されてもよく、
ここで、上記置換基は、-NH2又は-COOHである。
上記のR2及びR3の構造には、少なくとも1つの-COOHを含む。
【００３９】
本発明の実施例において、
R1は-CnH2n+1であり、R2は
【化１６】
2019504121.tif 000017
であり、R3は-OHであり、
或いは、R1は-CnH2n+1であり、R2は
【化１７】
2019504121.tif 000018
であり、R3は-OHであり、
或いは、R1は-CnH2n+1であり、R2は
【化１８】
2019504121.tif 000019
であり、R3は-CaH2a+1であり、
或いは、R1は-CnH2n+1であり、R2は
【化１９】
2019504121.tif 000020
であり、R3は-CaH2a+1である。
本発明の実施例において、その構造は、
【００４０】
【化２０】
2019504121.tif 000021
【００４１】
本発明にかかる白金錯体は、リポソームの膜材料と良好に結合できることで、リポソームの封入率及び薬物担持量を向上させる。さらに、本発明にかかる化合物により白金錯体を調製した後、カルボキシル基を含有してpH感受性を示し、低いpH値の環境（例えば、腫瘍組織）で、カルボキシル基が脱プロトン化する傾向にあり、腫瘍組織への薬物放出を促進し、薬物の治療効果を向上させることに寄与する。
【００４２】
本発明は、さらに、本発明にかかる白金錯体、リポソーム膜材料及び/又は安定剤を含む、白金錯体のリポソームを提供し、上記白金錯体とリポソーム膜材料との比は、（99：1）〜（1：99）である。
上記の比は、質量比、モル比、又は体積比である。
本発明にかかるリポソームは、リポソーム膜材料が、リン脂質及び/又はコレステロールの組成物を含み、膜材料において、リン脂質の質量部が、1部〜100部であり、コレステロールの質量部が、0部〜60部である。
本発明の実施例において、リン脂質は、卵黄レシチン、大豆レシチン、水素添加大豆リン脂質、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ジラウロイルレシチン、ジミリストイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン又はジステアリルホスファチジルコリン、ジオレイルホスファチジルコリン、ジラウロイルホスファチジルグリセロール、ジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール又はジステアロイルホスファチジルグリセロール、ジオレオイルホスファチジルグリセロール、ホスファチジルグリセロール、ジエルコイルホスファチジルグリセロール、PEG化リン脂質などのいずれか1種又は2種以上の組成物である。
【００４３】
本発明にかかるリポソームには、長期血中滞留性材料を含んでもよく、本発明で用いられた長期血中滞留性材料は、MPEG2000-DSPE、MPEG5000-DSPE、MPEG2000-DMPE、MPEG5000-DMPE、MPEG2000-DPPE、MPEG5000-DPPEなどである。
本発明にかかるリポソームは、長期血中滞留性材料の質量分率が0〜50％である。
本発明にかかるリポソームは、酸化防止剤を含んでもよく、本発明で用いられた酸化防止剤は、L-システイン、アスコルビン酸、dl-?-トコフェロール、亜硫酸ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、又は無水重亜硫酸ナトリウムのいずれか1種又は2種以上の組成物である。
本発明にかかるリポソームは、酸化防止剤の質量分率が20％以下である。
本発明にかかるリポソームは、等張化剤を加えても良く、上記等張化剤は、マンニトール、ソルビトール、グルコース、スクロース、又は塩化ナトリウムのいずれか1種又は2種以上の組成物である。
【００４４】
本発明にかかるリポソームの調製方法は、薄膜分散法、逆相蒸発法、又はマルチプルエマルション法（multiple emulsion method）などを使用してもよい。
いくつかの実施例において、リポソームの調製方法は、丸底フラスコに膜材料、酸化防止剤、長期血中滞留性材料を取り、適量の有機溶媒を添加して溶解し、本発明にかかる白金錯体の水性溶液を加え、機械的にまたは超音波により均質化してW/Oエマルションを形成し、減圧下、ロータリーエバポレーターで有機溶媒を除去し、容器壁に薄膜を形成し、水和媒体を注入し、膜材料を1h〜2h水和させ、リポソーム押出機を通過し、又は均質化によって新規の白金系リポソームが得られ、なお、長期血中滞留性材料は、リポソームを形成した後、添加し、撹拌し、リポソームの表面に修飾することもできる。
他のいくつかの実施例において、リポソームの調製方法は、丸底フラスコに膜材料、酸化防止剤、本発明にかかる白金錯体、及び長期血中滞留性材料を取り、適量の有機溶媒を添加して溶解させ、減圧下、ロータリーエバポレーターで有機溶媒を除去し、容器壁に薄膜を形成し、水和媒体を注入し、膜材料を1h〜2h水和させ、リポソーム押出機を通過し、又は均質化して新規の白金系リポソームを得る。
他のいくつかの実施例において、リポソームの調製方法は、丸底フラスコに膜材料、酸化防止剤、及び長期血中滞留性材料を取り、適量の有機溶媒を添加して溶解させ、本発明にかかる白金錯体を加え、超音波または機械的に均質化してW/Oエマルションを形成し、減圧下、ロータリーエバポレーターで有機溶媒を除去し、水和媒体を注入し、機械的に撹拌してW/O/Wを形成した後、減圧下、ロータリーエバポレーターで有機溶媒を除去し、リポソーム押出機を通過し、又は均質化して新規の白金系リポソームを得る。
【００４５】
本発明は、さらに、本発明にかかるリポソーム及び製剤を含むがん治療薬を提供する。
本発明にかかる薬物は、乳がん、非小細胞肺癌、睾丸腫瘍、膵臓癌、直腸癌、肝臓癌、卵巣癌、または頭頸部癌のような癌の治療に適用できる。
本発明にかかる薬物の剤形は、注射剤（懸濁剤又は注射用凍結乾燥粉末）、乳剤、サブマイクロエマルションなどである。
試験結果より、本発明にかかるリポソームは、白金化合物の血中濃度を顕著に向上させ、薬物の生体内における滞留時間を延長し、且つ白金系薬物をがん発生が生じる器官に蓄積させることができ、薬剤投与量を減らし、治療効果を向上させるのみならず、薬物の副作用を軽減されることができ、多種の腫瘍疾患の治療に適する。
【００４６】
本発明は式IIの構造の化合物を提供し、その化合物は、良好な生体適合性を備え、そのカルボキシル基及びアミド基が白金系薬物と配合でき、白金系薬物と形成された不安定な配位結合が薬物の生体内における水和反応速度を速めることで、薬効を高める。また、本発明にかかる化合物から調製された白金錯体は、リポソームの膜材料と良好に結合できることにより、リポソームの封入率及び薬物担持量を向上させる。さらに、本発明にかかる化合物から白金錯体を調製した後、カルボキシル基を含有してpH感受性を示し、低いpH値の環境（例えば、腫瘍組織）で、カルボキシル基が脱プロトン化する傾向にあり、腫瘍組織への薬物放出を促進し、さらに薬物の治療効果を向上させ、副作用を軽減させることに寄与する。実験によりわかるように、本発明にかかるリポソームは、薬物の副作用を顕著に軽減しながら、薬効を高めることができる。
【実施例１】
【００４７】
［図１］本発明で用いられた試薬及び機器はいずれも一般的な市販品であり、市場から購入することができる。
以下、本発明を実施例によりさらに説明する。
【００４８】
実施例1〜8の両親媒性化合物及びその調製  
【化２１】
2019504121.tif 000022
【００４９】
その調製方法は、以下の通りである。
1.実施例1〜5
1.5mmolの脂肪族アミン（例えば、オクタデシルアミン、ヘキサデシルアミン、テトラデシルアミン、又はドデシルアミンなど）を取り、20mLのクロロホルムを加えて溶解させた後、別に3.3mmolの酸無水物（例えば、無水マレイン酸又は無水コハク酸）を取って20mLのクロロホルムに溶解した後、脂肪族アミンのクロロホルム溶液を酸無水物溶液に加え、30min撹拌し、減圧ろ過し、得られた生成物をクロロホルム、アセトンで順に洗浄した後、乾燥し（仕込みモル比は1：2）、上記の両親媒性化合物（実施例1〜実施例5）を得た。調製された両親媒性化合物に対してNMRスペクトルにより特徴付け、結果は図1-a〜1-eに示した。
【００５０】
2.実施例6〜8
1.5mmolのオクタデシルアミンを20mLのジクロロメタンに溶解した後、別に3.3mmol酸（例えば、無水酢酸、無水プロピオン酸、メチルコハク酸無水物）を20mLのジクロロメタンに溶解し、脂肪族アミンのジクロロメタン溶液を酸無水物溶液に加え、30min撹拌し、減圧ろ過し、得られた生成物をジクロロメタン、アセトンで順に洗浄した後、乾燥し（仕込みモル比は1：2）、上記の両親媒性化合物（実施例6〜実施例8）を得た。
【００５１】
実施例9  両親媒性化合物及びその調製：
【化２２】
2019504121.tif 000023
【００５２】
調製方法は、以下の通りである。
パルミトイルクロリドとグルタミン酸との反応により合成し、具体的な反応条件は以下の通りである。
10mmolのグルタミン酸を10mlのDMFに懸濁し、45℃の油浴に置いて撹拌しながら、12mmolのパルミトイルクロリドを滴下し、グルタミン酸をすべて溶解させた後、200ulのトリエチルアミンを加えて1〜2h撹拌し、100mlの蒸留水を加え、1M HClでpH 1〜2に調整し、減圧下で吸引ろ過し、水で洗浄した。水洗後の材料を50℃のオーブンに乾燥し、取り出し、石油エーテル：アセトン：酢酸エチル（100：1：1）の混合溶媒で3回加熱洗浄し、遠心し、取り出し、減圧下で乾燥した。
得られた化合物に対してNMRスペクトルにより特徴付け、結果を図1-fに示した。
【００５３】
実施例10  両親媒性化合物及びその調製
【化２３】
2019504121.tif 000024
【００５４】
その調製方法は、以下の通りである。
10mmolのリシンを10ml DMFに懸濁し、45℃の油浴に置いて撹拌しながら、24mmolのパルミトイルクロリドを滴下し、リシンをすべて溶解させた後、200ulのトリエチルアミンを加えて1〜2h撹拌し、100mlの蒸留水を加え、1M HClでpH1〜2に調整し、減圧下で吸引ろ過し、水で洗浄した。
水洗後の材料を50℃のオーブンに乾燥し、取り出し、石油エーテル：アセトン：酢酸エチル（100：1：1）の混合溶媒で3回加熱洗浄し、遠心し、取り出し、減圧下で乾燥した。得られた化合物に対してNMRスペクトルにより特徴付け、結果を図1-gに示した。
【００５５】
実施例11  両親媒性化合物及びその調製：
【化２４】
2019504121.tif 000025
【００５６】
その調製方法は、以下の通りである。
10mmolのリシンを10ml DMFに懸濁し、45℃の油浴に置いて撹拌しながら、12mmolのパルミトイルクロリドを滴下し、リシンをすべて溶解させた後、200ulのトリエチルアミンを加えて1〜2h撹拌し、100mlの蒸留水を加え、1M HClでpH1〜2に調整し、減圧下で吸引ろ過し、水で洗浄した。水洗後の材料を50℃のオーブンに乾燥し、取り出し、石油エーテル：アセトン：酢酸エチル（100：1：1）の混合溶媒で3回加熱洗浄し、遠心し、沈殿を取り出し、減圧下で乾燥した。
得られた化合物に対してNMRスペクトルにより特徴付け、結果を図1-hに示した。
【００５７】
実施例12〜27の白金錯体の調製
【表１−１】
2019504121.tif 000026
【表１−２】
2019504121.tif 000027
【００５８】
調製方法は、両親媒性化合物を水に加え、一定の条件下で撹拌して溶解させ、白金化合物（両親媒性化合物と白金化合物とのモル比は1：1〜10：1である。）を加え、12h加熱撹拌して反応させ、白金錯体が得られ、乾燥して白金錯体の固体粉末を得た。その赤外吸収スペクトルは図2-1a〜図2-9bに示した。
シスプラチンと両親媒性化合物とが白金錯体を形成した後、赤外吸収スペクトルの変化が生じ、元の両親媒性化合物のカルボキシル基のνOHピーク（3076cm-1）は消失し、エステル結合のνC＝Oは1720cm-1から1630cm-1〜1640cm-1程度にシフトし、アミド結合のνC＝Oは1643cm-1から1530cm-1〜1570cm-1程度にシフトし、且つシスプラチンのνC-Nは1420〜1440cm-1程度に現れた。
両親媒性化合物とオキサリプラチンとは錯体を形成し、元の両親媒性化合物のカルボキシル基のνOHピークは消失し（3076cm-1、920cm-1）、エステル結合のνC＝Oは1720cm-1から1650cm-1〜1700cm-1程度にシフトし、アミド結合のνC＝Oは1643cm-1から1530cm-1〜1570cm-1程度にシフトし、且つオキサリプラチンのシクロヘキサンジアミンのνs（N-H）は3220cm-1、シクロヘキサンジアミンのν（C-N）は1100〜1200cm-1に現れた。
【００５９】
実施例28〜37  逆相蒸発法によるリポソームの調製
【表２】
2019504121.tif 000028
【００６０】
丸底フラスコに配合量の膜材料、酸化防止剤を取り、適量の有機溶媒（クロロホルム又は水で飽和したジエチルエーテル又はジクロロメタン、メタノール、エタノール、又はそれらの少なくとも2種の溶媒の混合溶媒から選ばれる）を加えて溶解させ、配合量の白金錯体水溶液を加え、（有機溶媒と水相との体積比＝3：1〜6：1）、機械的にまたは超音波により均質化しW/Oエマルションを形成し、減圧下、ロータリーエバポレーターで有機溶媒を除去し、容器壁に薄膜を形成し、水和媒体を注入し（生理食塩水、又は5％グルコース、又は注射用水、又はマンニトール水溶液）、40℃（又は55℃）で膜材料を1h〜2h水和させ、リポソーム押出機を通過し、又はマイクロジェットにより均質化して白金錯体リポソームを得、長期血中滞留性材料を加えて、室温で1h撹拌し得られた。
【００６１】
実施例38の薄膜分散法によるリポソームの調製
【表３】
2019504121.tif 000029
丸底フラスコに配合量の膜材料、酸化防止剤、長期血中滞留性材料を取り、配合量の白金錯体を添加し、適量のクロロホルムを加えて溶解させ、減圧下でロータリーエバポレーターで有機溶媒を除去し、容器壁に薄膜を形成し、水和媒体（注射用水）を注入し、40 〜55℃で膜材料を1〜2h水和させ、リポソーム押出機を通過して均質化させ、新規の白金系リポソームを得た。
【００６２】
実施例39  マルチプルエマルション法によるリポソームの調製
【表４】
2019504121.tif 000030
【００６３】
丸底フラスコに配合量の膜材料、酸化防止剤を取り、適量のジエチルエーテルを加えて溶解させ、配合量の白金化合物水溶液（有機相と水相との体積比は、3：1である）を加えて、超音波によりまたは機械的に均質化してW/Oエマルションを形成し、減圧下でロータリーエバポレーターにより一部の有機溶媒を除去し、注射用水を注入し、機械的に撹拌してW/O/Wを形成した後、減圧下でロータリーエバポレーターで有機溶媒を除去し、リポソーム押出機を通過し、マイクロジェットにより均質化して分散させ、新規の白金系リポソームを得た。
【００６４】
実施例40  リポソームの品質調査
本発明で調製された白金錯体を内包するリポソームの形態を電子顕微鏡で観察し、Zetasizer Nano ZS90レーザー粒度分布測定装置によりリポソームの粒子径及び分布を測定した。「中国薬局方」に提供された方法により本発明で調製されたリポソームの封入率を算出した。結果は表5に示した。
【表５】
2019504121.tif 000031
【００６５】
図3及び図4は、実施例31で調製されたリポソームの形態及び粒度スペクトルであり、他の実施例で調製されたリポソームの調査結果はこれに似ている。
結果により、本発明にかかる新規の白金錯体リポソーム製剤は、粒子径が90〜150nmであり、封入率が92〜98％であり、薬物担持量が8〜30％であることが示された。先行技術文献に報告されているリポソームと異なり、当該白金系リポソームは、封入率が高く、安定性が良く、抗癌活性が強い特徴がある。
【００６６】
実施例41  リポソームの薬効
1、癌細胞の生存率及びIC50値
市販の注射用シスプラチンを対照薬剤とし、実施例31、33、36で調製されたリポソームを実験材料とし、トリプシン処理の対数期のMCF-7、A549、HEPG2細胞を利用し、終了後で遠心して收集し、細胞懸濁液を調製し、細胞数で濃度（5〜10）×104/mLに調製した。細胞懸濁液を調製した後、軽く均一に混合し、各ウェルに100μLずつ加え、接種された細胞をインキュベーターに置いて24h培養し、それぞれ1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L、8μmol/L、16μmol/L、32μmol/Lの従来のシスプラチン注射剤、及び実施例20〜31で調製されたリポソーム溶液を加え、5％CO2、37℃で48時間インキュベートした。各ウェルにMTT溶液（5mg/mL、0.5％MTT）を10μLずつ加え、4h培養し続けた後、培養を終了し、各ウェルにジメチルスルホキシドを150μLずつ加え、シェーカー上に置いて低速で10min振動し、結晶をよく溶解させた。マイクロプレートリーダーを用いてOD 570nmにおける各ウェルの吸光度を測定した。公式により各製剤のIC50値を算出し、結果を表6に示した。
【表６】
2019504121.tif 000032
【００６７】
結果により、本発明にかかる白金錯体のリポソームは、腫瘍細胞に対するIC50値を有意に低減させ（p<0.01）、薬効が顕著に改善することができることが示された。
【００６８】
2、腫瘍に対する抑制率
生理食塩水、注射用シスプラチン、実施例31、33、36で調製されたリポソームを実験材料とし、SPFレベルのKM（昆明）マウスを採用し、SPFレベルであり、いずれも雄性、6〜8週齢、体重18〜22gである。対数増殖期の肝癌細胞H22を採用し、単細胞の濃度を（1〜5）×106cell/mLに調整した。H22細胞の懸濁液をマウスの右腋窩の皮下に接種し、1匹あたり0.2mLとし、H22肝癌細胞株の腋窩下接種モデルを構築した。担癌マウスをランダムに5群に分け、1群あたり10匹とし、それぞれ生理食塩水群、注射用シスプラチン対照群、実験群（それぞれ本発明の実施例31、33、36で提供された白金錯体リポソームを投与する。）であり、群内で記号を付け、各群に尾静脈へ生理食塩水を注射し、シスプラチン対照群、実験群は、3日おきに1回投与し、2回投与し、薬剤投与量はそれぞれ2.5mg/kgである。投与後、マウスの生存状態を毎日観察し、投与後7日目にマウスを犠牲死させ、腫瘍を取り出し、その表面を生理食塩水で洗浄し、ろ紙で吸水して乾燥させ、秤量し、腫瘍抑制率を計算し、計算方法は以下の通りである。
腫瘍抑制率（％）＝（対照群の平均腫瘍重量−被検群の平均腫瘍重量）÷対照群の平均腫瘍重量×100
実験結果により、投与群では、いずれも対照群に比べて腫瘍の成長がより遅く、実験群は、シスプラチン対照群と比較して、腫瘍の成長を著明に抑制しながら、担癌マウスの生存期間 を大幅に延長することができることが示された。腫瘍体積及び関連パラメータは表7に示した。
【表７】
2019504121.tif 000033
【００６９】
結果により、シスプラチン注射液と比較して、本発明にかかるリポソームは、腫瘍の成長を著明に抑制でき、その効果はシスプラチン注射液よりも有意差（p<0.01）がある。
【００７０】
実施例42  リポソームの安全性
1、生存状態、体重
KMマウスをランダムに群分けをし、1群あたり5匹とし、それぞれ空白対照群、注射用シスプラチン対照群、実施例31、33、36で調製されたリポソームであり、群内で記号を付け、各群に尾静脈へ生理食塩水を注射し、市販のシスプラチン対照群、実施例31、33、36で調製されたリポソームは、1回投与し、薬剤投与量はそれぞれ10mg/kg、20mg/kgであり、投与後、マウスの生存状態を毎日観察し、その体重を秤量し、マウスの生存率を記録した。
結果は図5及び図6に示し、結果により、シスプラチン対照群と比較して、実施例31、33、36で調製されたリポソームは、マウスの体重減少が明らかに軽減され、生存率が顕著に向上し、シスプラチン錯体のリポソーム系は毒性が顕著に軽減されたことが示された。
【００７１】
実施例43  リポソームの安全性
2、腎毒性
KMマウスをランダムに5群に分け、1群あたり10匹とし、それぞれ空白対照群、実施例31、33、36で調製されたリポソーム、市販の注射用シスプラチン対照群であり、群内で記号を付け、各群に尾静脈へ生理食塩水を注射し、実施例31、33、36で調製されたリポソーム溶液、シスプラチン注射液を、1回投与し、薬剤投与量はそれぞれ10mg/kgである。投与後、マウスの生存状態を毎日観察し、投与後7日目にマウスを犠牲死させ、マウスの尿素窒素及びクレアチニン値をそれぞれ測定し、結果は表8に示した。
【表８】
2019504121.tif 000034
【００７２】
実験結果により、シスプラチン注射剤と比較して、本発明で調製されたシスプラチン錯体のリポソームはシスプラチンの腎毒性を顕著に軽減できることが示された。
以上、本発明の好適な実施形態に過ぎず、当業者にとっては、本発明の原理を逸脱することなく、若干の改良及び修飾を行うことが可能であり、それらの改良及び修飾も本発明の範囲内に含まれることを指摘する必要がある。
【図１−ａ】
2019504121.tif 000045
【図１−ｂ】
2019504121.tif 000046
【図１−ｃ】
2019504121.tif 000047
【図１−ｄ−１】
2019504121.tif 000048
【図１−ｄ−２】
2019504121.tif 000049
【図１−ｅ】
2019504121.tif 000050
【図１−ｆ】
2019504121.tif 000051
【図１−ｇ】
2019504121.tif 000052
【図１−ｈ】
2019504121.tif 000053
【図２−１ａ】
2019504121.tif 000054
【図２−１ｂ】
2019504121.tif 000055
【図２−２ａ】
2019504121.tif 000056
【図２−２ｂ】
2019504121.tif 000057
【図２−３ａ】
2019504121.tif 000058
【図２−３ｂ】
2019504121.tif 000059
【図２−４ａ】
2019504121.tif 000060
【図２−４ｂ】
2019504121.tif 000061
【図２−５ａ】
2019504121.tif 000062
【図２−５ｂ】
2019504121.tif 000063
【図２−６ａ】
2019504121.tif 000064
【図２−７ａ】
2019504121.tif 000065
【図２−７ｂ】
2019504121.tif 000066
【図２−８ａ】
2019504121.tif 000067
【図２−９ａ】
2019504121.tif 000068
【図２−９ｂ】
2019504121.tif 000069
【図３】
2019504121.tif 000070
【図４】
2019504121.tif 000071
【図５】
2019504121.tif 000072
【図６】
2019504121.tif 000073
【国際調査報告】
2019504121.tif 000074
2019504121.tif 000075
2019504121.tif 000076
2019504121.tif 000077