【手続補正書】
【提出日】令和3年11月19日(2021.11.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト細胞においてロドプシン（ＲＨＯ）遺伝子を編集するための方法において使用するための、１つまたは複数のデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）エンドヌクレアーゼを含む組成物であって、前記方法は、
前記ヒト細胞へと、前記１つまたは複数のデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）エンドヌクレアーゼを導入して、前記ＲＨＯ遺伝子または前記ＲＨＯ遺伝子の調節エレメントをコードする他のＤＮＡ配列内またはその近傍に、１つまたは複数の一本鎖切断（ＳＳＢ）または二本鎖切断（ＤＳＢ）をもたらし、それによって、編集されたヒト細胞を作り出すステップであって、前記ＳＳＢまたはＤＳＢは、前記ＲＨＯ遺伝子内もしくはその近傍に、またはその発現もしくは機能に影響を及ぼす、１つまたは複数の変異の恒久的な欠失、挿入、修正、またはその発現もしくは機能のモジュレーションをもたらす、ステップ
を含む、組成物。
【請求項２】
ヒト細胞においてロドプシン（ＲＨＯ）遺伝子におけるＰ２３Ｈ変異を編集するための方法において使用するための１つまたは複数のデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）エンドヌクレアーゼを含む組成物であって、前記方法は、
前記ヒト細胞へと、前記１つまたは複数のデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）エンドヌクレアーゼを導入して、ＲＨＯ遺伝子における前記Ｐ２３Ｈ変異内またはその近傍に、前記Ｐ２３Ｈ変異の恒久的な欠失、挿入、修正、またはその発現もしくは機能のモジュレーションをもたらす１つまたは複数の一本鎖切断（ＳＳＢ）または二本鎖切断（ＤＳＢ）をもたらし、それによって、編集されたヒト細胞を作り出すステップ
を含む、組成物。
【請求項３】
網膜色素変性（ＲＰ）を有する患者を処置するための方法において使用するための１つまたは複数のデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）エンドヌクレアーゼを含む組成物であって、前記方法は、前記患者の細胞においてロドプシン（ＲＨＯ）遺伝子におけるＰ２３Ｈ変異を編集するステップを含み、前記編集するステップは、
前記細胞へと、１つまたは複数のデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）エンドヌクレアーゼを導入して、ＲＨＯ遺伝子における前記Ｐ２３Ｈ変異内またはその近傍に、前記Ｐ２３Ｈ変異の恒久的な欠失、挿入、修正、またはその発現もしくは機能のモジュレーションをもたらし、ＲＨＯタンパク質活性の回復をもたらす、１つまたは複数の一本鎖切断（ＳＳＢ）または二本鎖切断（ＤＳＢ）をもたらすこと
を含む、組成物。
【請求項４】
前記１つまたは複数のＤＮＡエンドヌクレアーゼが、Ｃａｓ１、Ｃａｓ１Ｂ、Ｃａｓ２、Ｃａｓ３、Ｃａｓ４、Ｃａｓ５、Ｃａｓ６、Ｃａｓ７、Ｃａｓ８、Ｃａｓ９（Ｃｓｎ１およびＣｓｘ１２としても知られている）、Ｃａｓ１００、Ｃｓｙ１、Ｃｓｙ２、Ｃｓｙ３、Ｃｓｅ１、Ｃｓｅ２、Ｃｓｃ１、Ｃｓｃ２、Ｃｓａ５、Ｃｓｎ２、Ｃｓｍ２、Ｃｓｍ３、Ｃｓｍ４、Ｃｓｍ５、Ｃｓｍ６、Ｃｍｒ１、Ｃｍｒ３、Ｃｍｒ４、Ｃｍｒ５、Ｃｍｒ６、Ｃｓｂ１、Ｃｓｂ２、Ｃｓｂ３、Ｃｓｘ１７、Ｃｓｘ１４、Ｃｓｘ１０、Ｃｓｘ１６、ＣｓａＸ、Ｃｓｘ３、Ｃｓｘ１、Ｃｓｘ１５、Ｃｓｆ１、Ｃｓｆ２、Ｃｓｆ３、Ｃｓｆ４、またはＣｐｆ１エンドヌクレアーゼ、その相同体、その天然に存在する分子の組換え、そのコドン最適化形態、またはそれらの修飾バージョン、ならびにそれらの組合せである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記方法は、前記細胞へと、前記１つまたは複数のＤＮＡエンドヌクレアーゼをコードする１つまたは複数のポリヌクレオチドを導入するステップを含む、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記方法は、前記細胞へと、前記１つまたは複数のＤＮＡエンドヌクレアーゼをコードする１つまたは複数のリボ核酸（ＲＮＡ）を導入するステップを含む、請求項４に記載の組成物。
【請求項７】
前記１つもしくは複数のポリヌクレオチドまたは１つもしくは複数のＲＮＡが、１つもしくは複数の修飾ポリヌクレオチドまたは１つもしくは複数の修飾ＲＮＡである、請求項５または６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
前記ＤＮＡエンドヌクレアーゼが、１つまたは複数のタンパク質またはポリペプチドである、請求項４に記載の組成物。
【請求項９】
前記方法は、前記細胞へと、１つまたは複数のガイドリボ核酸（ｇＲＮＡ）を導入するステップをさらに含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記１つまたは複数のｇＲＮＡが、単一分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記１つもしくは複数のｇＲＮＡまたは１つもしくは複数のｓｇＲＮＡが、１つもしくは複数の修飾ｇＲＮＡまたは１つもしくは複数の修飾ｓｇＲＮＡである、請求項９または１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記１つまたは複数のＤＮＡエンドヌクレアーゼが、１つもしくは複数のｇＲＮＡまたは１つもしくは複数のｓｇＲＮＡとあらかじめ複合体化されている、請求項８〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記方法は、前記細胞へと、野生型ＲＨＯ遺伝子またはｃＤＮＡの少なくとも一部分を含む、ポリヌクレオチドドナー鋳型を導入するステップをさらに含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記野生型ＲＨＯ遺伝子またはｃＤＮＡの前記少なくとも一部分が、エクソン１、エクソン２、エクソン３、エクソン４、エクソン５、イントロン領域、その断片もしくは組合せ、または前記ＲＨＯ遺伝子もしくはｃＤＮＡの全体である、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記ドナー鋳型が、一本鎖ポリヌクレオチドまたは二本鎖ポリヌクレオチドのいずれかである、請求項１３または１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記ドナー鋳型が、３ｑ２２．１領域に対する相同性アームを有する、請求項１３または１４に記載の組成物。
【請求項１７】
前記方法は、前記細胞へと、１つのガイドリボ核酸（ｇＲＮＡ）、および前記野生型ＲＨＯ遺伝子の少なくとも一部分を含むポリヌクレオチドドナー鋳型を導入するステップ
をさらに含み、
前記１つまたは複数のＤＮＡエンドヌクレアーゼが、ＲＨＯ遺伝子における前記Ｐ２３Ｈ変異内またはその近傍に位置するローカスに、１つの一本鎖切断（ＳＳＢ）または二本鎖切断（ＤＳＢ）をもたらす、１つまたは複数のＣａｓ９またはＣｐｆ１エンドヌクレアーゼであり、前記ＳＳＢまたはＤＳＢは、前記ローカスにおける染色体ＤＮＡへの前記ポリヌクレオチドドナー鋳型に由来する新しい配列の挿入を促進し、ＲＨＯ遺伝子における前記Ｐ２３Ｈ変異の恒久的な挿入または修正をもたらし、
前記ｇＲＮＡが、ＲＨＯ遺伝子における前記Ｐ２３Ｈ変異内またはその近傍に位置する前記ローカスのセグメントに相補的であるスペーサー配列を含む、請求項２または３に記載の組成物。
【請求項１８】
前記方法は、前記細胞へと、１つまたは複数のガイドリボ核酸（ｇＲＮＡ）、および前記野生型ＲＨＯ遺伝子の少なくとも一部分を含むポリヌクレオチドドナー鋳型を導入するステップ
をさらに含み、
前記１つまたは複数のＤＮＡエンドヌクレアーゼが、ＲＨＯ遺伝子における前記Ｐ２３Ｈ変異内またはその近傍に、１対の一本鎖切断（ＳＳＢ）または二本鎖切断（ＤＳＢ）をもたらす、１つまたは複数のＣａｓ９またはＣｐｆ１エンドヌクレアーゼであり、１対のＳＳＢまたはＤＳＢは、第１のものが５’ローカスにあり、第２のものが３’ローカスにあり、前記５’ローカスと前記３’ローカスとの間における染色体ＤＮＡへの前記ポリヌクレオチドドナー鋳型に由来する新しい配列の挿入を促進し、ＲＨＯ遺伝子における前記Ｐ２３Ｈ変異内またはその近傍の前記５’ローカスと前記３’ローカスとの間における前記染色体ＤＮＡの恒久的な挿入または修正をもたらし、
第１のガイドＲＮＡが、前記５’ローカスのセグメントに相補的であるスペーサー配列を含み、第２のガイドＲＮＡが、前記３’ローカスのセグメントに相補的であるスペーサー配列を含む、請求項２または３に記載の組成物。
【請求項１９】
前記１つまたは複数のｇＲＮＡが、１つまたは複数の単一分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）である、請求項１７または１８に記載の組成物。
【請求項２０】
前記１つもしくは複数のｇＲＮＡまたは１つもしくは複数のｓｇＲＮＡが、１つもしくは複数の修飾ｇＲＮＡまたは１つもしくは複数の修飾ｓｇＲＮＡである、請求項１７〜１９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２１】
前記１つまたは複数のＤＮＡエンドヌクレアーゼが、１つもしくは複数のｇＲＮＡまたは１つもしくは複数のｓｇＲＮＡとあらかじめ複合体化されている、請求項１７〜２０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２２】
前記野生型ＲＨＯ遺伝子またはｃＤＮＡの前記少なくとも一部分が、エクソン１、エクソン２、エクソン３、エクソン４、エクソン５、イントロン領域、その断片もしくは組合せ、または前記ＲＨＯ遺伝子もしくはｃＤＮＡの全体である、請求項１７〜２１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２３】
前記ドナー鋳型が、一本鎖ポリヌクレオチドまたは二本鎖ポリヌクレオチドのいずれかである、請求項１７〜２２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２４】
前記ドナー鋳型が、３ｑ２２．１領域に対する相同性アームを有する、請求項１７〜２３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２５】
前記ＳＳＢまたはＤＳＢが、前記ＲＨＯ遺伝子の第１のエクソン、第２のエクソン、第３のエクソン、第４のエクソン、第５のエクソン、またはそれらの組合せにある、請求項１７〜２４に記載の組成物。
【請求項２６】
前記ｇＲＮＡまたはｓｇＲＮＡが、病理学的バリアントＰ２３Ｈを対象とする、請求項９〜１２または１９〜２１に記載の組成物。
【請求項２７】
前記挿入または修正が、相同組換え修復（ＨＤＲ）によるものである、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２８】
前記ドナー鋳型が、病理学的バリアントＰ２３Ｈに対する相同性アームを有する、請求項１７または１８に記載の組成物。
【請求項２９】
前記方法は、前記細胞へと、２つのガイドリボ核酸（ｇＲＮＡ）、および前記野生型ＲＨＯ遺伝子の少なくとも一部分を含むポリヌクレオチドドナー鋳型を導入するステップ
をさらに含み、
前記１つまたは複数のＤＮＡエンドヌクレアーゼが、ＲＨＯ遺伝子における前記Ｐ２３Ｈ変異内またはその近傍に、１対の二本鎖切断（ＤＳＢ）をもたらす、１つまたは複数のＣａｓ９またはＣｐｆ１エンドヌクレアーゼであり、前記１対のＤＳＢは、第１のものが５’ＤＳＢローカスにあり、第２のものが３’ＤＳＢローカスにあり、前記５’ＤＳＢローカスと前記３’ＤＳＢローカスとの間の染色体ＤＮＡの欠失を引き起こし、ＲＨＯ遺伝子における前記Ｐ２３Ｈ変異内またはその近傍の前記５’ＤＳＢローカスと前記３’ＤＳＢローカスとの間における前記染色体ＤＮＡの恒久的な欠失をもたらし、
第１のガイドＲＮＡが、前記５’ＤＳＢローカスのセグメントに相補的であるスペーサー配列を含み、第２のガイドＲＮＡが、前記３’ＤＳＢローカスのセグメントに相補的であるスペーサー配列を含む、請求項２または３に記載の組成物。
【請求項３０】
前記２つのｇＲＮＡが、２つの単一分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）である、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３１】
前記２つのｇＲＮＡまたは２つのｓｇＲＮＡが、２つの修飾ｇＲＮＡまたは２つの修飾ｓｇＲＮＡである、請求項２９または３０に記載の組成物。
【請求項３２】
前記１つまたは複数のＤＮＡエンドヌクレアーゼが、２つのｇＲＮＡまたは２つのｓｇＲＮＡとあらかじめ複合体化されている、請求項２９〜３１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３３】
前記５’ＤＳＢおよび３’ＤＳＢの両方が、前記ＲＨＯ遺伝子の第１のエクソン、第１のイントロン、第２のエクソン、第２のイントロン、第３のエクソン、第３のイントロン、第４のエクソン、第４のイントロン、第５のエクソン、第５のイントロンのいずれか、またはこれらの組合せ内またはその近傍にある、請求項２９〜３２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３４】
前記欠失が、１ｋｂまたはそれを下回る欠失である、請求項２９〜３３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３５】
前記Ｃａｓ９またはＣｐｆ１  ｍＲＮＡ、ｇＲＮＡ、およびドナー鋳型が、それぞれ、別個の脂質ナノ粒子中に製剤化されるか、またはすべてが１つの脂質ナノ粒子中に共製剤化されるかのいずれかである、請求項１７、１８、および２９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３６】
前記Ｃａｓ９またはＣｐｆ１  ｍＲＮＡ、ｇＲＮＡ、およびドナー鋳型が、それぞれ、別個のアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター中に製剤化されるか、またはすべてが１つのＡＡＶベクター中に共製剤化されるかのいずれかである、請求項１７、１８、および２９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３７】
前記Ｃａｓ９またはＣｐｆ１  ｍＲＮＡが、脂質ナノ粒子中に製剤化され、前記ｇＲＮＡおよびドナー鋳型の両方が、ＡＡＶベクターによって前記細胞へと送達される、請求項１７、１８、および２９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３８】
前記Ｃａｓ９またはＣｐｆ１  ｍＲＮＡが、脂質ナノ粒子中に製剤化され、前記ｇＲＮＡが、電気穿孔によって前記細胞へと送達され、ドナー鋳型が、ＡＡＶベクターによって前記細胞へと送達される、請求項１７、１８、および２９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３９】
前記ＡＡＶベクターが、自己不活性化ＡＡＶベクターである、請求項３６〜３８に記載の組成物。
【請求項４０】
前記ＲＨＯ遺伝子が、第３染色体：１２９，５２８，６４０〜１２９，５３５，１６９（Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ−ＧＲＣｈ３８／ｈｇ３８）に位置する、請求項１〜３９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４１】
ＲＨＯタンパク質活性の前記回復が、野生型または正常なＲＨＯタンパク質活性と比較される、請求項２〜４０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４２】
前記ポリヌクレオチドドナー鋳型が、ＲＨＯのエクソン１を含み、最大５ＫＢである、請求項１３に記載の組成物。
【請求項４３】
前記ポリヌクレオチドドナー鋳型が、ＡＡＶによって送達される、請求項４２に記載の組成物。
【請求項４４】
前記ヒト細胞が、光受容細胞または網膜前駆細胞である、請求項１〜２に記載の組成物。
【請求項４５】
前記細胞が、光受容細胞または網膜前駆細胞である、請求項３〜４３に記載の組成物。
【請求項４６】
網膜色素変性（ＲＰ）を有する患者に由来する細胞において、ロドプシン（ＲＨＯ）遺伝子におけるＰ２３Ｈ変異を編集するための１つまたは複数のガイドリボ核酸（ｇＲＮＡ）を含む組成物であって、前記１つまたは複数のｇＲＮＡが、配列表の配列番号５２８７〜５２９１、５３１９〜５３２２、および５３５８における核酸配列からなる群から選択されるスペーサー配列を含む、組成物。
【請求項４７】
前記１つまたは複数のｇＲＮＡが、１つまたは複数の単一分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）である、請求項４６に記載の組成物。
【請求項４８】
前記１つもしくは複数のｇＲＮＡまたは１つもしくは複数のｓｇＲＮＡが、１つもしくは複数の修飾ｇＲＮＡまたは１つもしくは複数の修飾ｓｇＲＮＡである、請求項４６または４７に記載の組成物。
【請求項４９】
前記細胞が、光受容細胞、網膜前駆細胞、または人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）である、請求項４６〜４８に記載の組成物。
【請求項５０】
ＲＨＯ遺伝子におけるＰ２３Ｈ変異を編集するための少なくとも１つまたは複数のｇＲＮＡを含む治療剤であって、前記１つまたは複数のｇＲＮＡが、配列表の配列番号５２８７〜５２９１、５３１９〜５３２２、および５３５８における核酸配列からなる群から選択されるスペーサー配列を含む、治療剤。
【請求項５１】
前記１つまたは複数のｇＲＮＡが、１つまたは複数のｓｇＲＮＡである、請求項５０に記載の治療剤。
【請求項５２】
前記１つもしくは複数のｇＲＮＡまたは１つもしくは複数のｓｇＲＮＡが、１つもしくは複数の修飾ｇＲＮＡまたは１つもしくは複数の修飾ｓｇＲＮＡである、請求項５０または５１に記載の治療剤。
【請求項５３】
１つまたは複数のＤＮＡエンドヌクレアーゼを導入するステップ、
ＲＨＯ遺伝子におけるＰ２３Ｈ変異を編集するための１つもしくは複数のｇＲＮＡまたは１つもしくは複数のｓｇＲＮＡを導入するステップ、
１つまたは複数のドナー鋳型を導入するステップ
を含む方法によって形成される、常染色体優性網膜色素変性（ＲＰ）を有する患者を処置するための治療剤であって、
前記１つまたは複数のｇＲＮＡまたはｓｇＲＮＡが、配列表の配列番号５２８７〜５２９１、５３１９〜５３２２、および５３５８における核酸配列からなる群から選択されるスペーサー配列を含む、治療剤。
【請求項５４】
ｉｎ  ｖｉｖｏで網膜色素変性（ＲＰ）を有する患者を処置するためのキットであって、
ＲＨＯ遺伝子におけるＰ２３Ｈ変異を編集するための１つまたは複数のｇＲＮＡまたはｓｇＲＮＡであって、配列表の配列番号５２８７〜５２９１、５３１９〜５３２２、および５３５８における核酸配列からなる群から選択されるスペーサー配列を含む、１つまたは複数のｇＲＮＡまたはｓｇＲＮＡと、
１つまたは複数のＤＮＡエンドヌクレアーゼと、
必要に応じて、１つまたは複数のドナー鋳型と
を含む、キット。
【請求項５５】
前記１つまたは複数のＤＮＡエンドヌクレアーゼが、Ｃａｓ１、Ｃａｓ１Ｂ、Ｃａｓ２、Ｃａｓ３、Ｃａｓ４、Ｃａｓ５、Ｃａｓ６、Ｃａｓ７、Ｃａｓ８、Ｃａｓ９（Ｃｓｎ１およびＣｓｘ１２としても知られている）、Ｃａｓ１００、Ｃｓｙ１、Ｃｓｙ２、Ｃｓｙ３、Ｃｓｅ１、Ｃｓｅ２、Ｃｓｃ１、Ｃｓｃ２、Ｃｓａ５、Ｃｓｎ２、Ｃｓｍ２、Ｃｓｍ３、Ｃｓｍ４、Ｃｓｍ５、Ｃｓｍ６、Ｃｍｒ１、Ｃｍｒ３、Ｃｍｒ４、Ｃｍｒ５、Ｃｍｒ６、Ｃｓｂ１、Ｃｓｂ２、Ｃｓｂ３、Ｃｓｘ１７、Ｃｓｘ１４、Ｃｓｘ１０、Ｃｓｘ１６、ＣｓａＸ、Ｃｓｘ３、Ｃｓｘ１、Ｃｓｘ１５、Ｃｓｆ１、Ｃｓｆ２、Ｃｓｆ３、Ｃｓｆ４、またはＣｐｆ１エンドヌクレアーゼ、その相同体、その天然に存在する分子の組換え、そのコドン最適化形態、またはそれらの修飾バージョン、ならびにそれらの組合せである、請求項５４に記載のキット。
【請求項５６】
１つまたは複数のドナー鋳型を含む、請求項５４または５５に記載のキット。
【請求項５７】
前記ドナー鋳型が、３ｑ２２．１領域に対する相同性アームを有する、請求項５６に記載のキット。
【請求項５８】
前記ドナー鋳型が、病理学的バリアントＰ２３Ｈに対する相同性アームを有する、請求項５６に記載のキット。
【請求項５９】
配列番号５２９０の核酸配列を含む、単一分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）。
【請求項６０】
配列番号５２９１の核酸配列を含む、単一分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）。
【請求項６１】
配列番号５３１９の核酸配列を含む、単一分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）。
【請求項６２】
配列番号５３２０の核酸配列を含む、単一分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）。
【請求項６３】
配列番号５３２１の核酸配列を含む、単一分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）。
【請求項６４】
配列番号５３２２の核酸配列を含む、単一分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）。
【請求項６５】
配列番号５３５８の核酸配列を含む、単一分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）。
【請求項６６】
配列番号５２９０、および配列番号５３２７〜５３３８のうちのいずれか１つの核酸配列を含む、単一分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）。
【請求項６７】
配列番号５２９１、および配列番号５３２７〜５３３８のうちのいずれか１つの核酸配列を含む、単一分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）。
【請求項６８】
配列番号５３１９、および配列番号５３２７〜５３３８のうちのいずれか１つの核酸配列を含む、単一分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）。
【請求項６９】
配列番号５３２０、および配列番号５３２７〜５３３８のうちのいずれか１つの核酸配列を含む、単一分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）。
【請求項７０】
配列番号５３２１、および配列番号５３２７〜５３３８のうちのいずれか１つの核酸配列を含む、単一分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）。
【請求項７１】
配列番号５３２２、および配列番号５３２７〜５３３８のうちのいずれか１つの核酸配列を含む、単一分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）。
【請求項７２】
配列番号５３５８、および配列番号５３２７〜５３３８のうちのいずれか１つの核酸配列を含む、単一分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）。
【請求項７３】
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を編集するための、配列番号５２９０を含むｓｇＲＮＡを含む組成物。
【請求項７４】
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を編集するための、配列番号５２９１を含むｓｇＲＮＡを含む組成物。
【請求項７５】
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を編集するための、配列番号５３１９を含むｓｇＲＮＡを含む組成物。
【請求項７６】
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を編集するための、配列番号５３２０を含むｓｇＲＮＡを含む組成物。
【請求項７７】
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を編集するための、配列番号５３２１を含むｓｇＲＮＡを含む組成物。
【請求項７８】
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を編集するための、配列番号５３２２を含むｓｇＲＮＡを含む組成物。
【請求項７９】
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を編集するための、配列番号５３５８を含むｓｇＲＮＡを含む組成物。
【請求項８０】
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を編集するための、配列番号５２９０、および配列番号５３２７〜５３３８のうちのいずれか１つを含むｓｇＲＮＡを含む組成物。
【請求項８１】
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を編集するための、配列番号５２９１、および配列番号５３２７〜５３３８のうちのいずれか１つを含むｓｇＲＮＡを含む組成物。
【請求項８２】
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を編集するための、配列番号５３１９、および配列番号５３２７〜５３３８のうちのいずれか１つを含むｓｇＲＮＡを含む組成物。
【請求項８３】
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を編集するための、配列番号５３２０、および配列番号５３２７〜５３３８のうちのいずれか１つを含むｓｇＲＮＡを含む組成物。
【請求項８４】
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を編集するための、配列番号５３２１、および配列番号５３２７〜５３３８のうちのいずれか１つを含むｓｇＲＮＡを含む組成物。
【請求項８５】
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を編集するための、配列番号５３２２、および配列番号５３２７〜５３３８のうちのいずれか１つを含むｓｇＲＮＡを含む組成物。
【請求項８６】
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を編集するための、配列番号５３５８、および配列番号５３２７〜５３３８のうちのいずれか１つを含むｓｇＲＮＡを含む組成物。
【請求項８７】
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を有する患者を処置するための、配列番号５２９０を含むｓｇＲＮＡを含む組成物。
【請求項８８】
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を有する患者を処置するための、配列番号５２９１を含むｓｇＲＮＡを含む組成物。
【請求項８９】
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を有する患者を処置するための、配列番号５３１９を含むｓｇＲＮＡを含む組成物。
【請求項９０】
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を有する患者を処置するための、配列番号５３２０を含むｓｇＲＮＡを含む組成物。
【請求項９１】
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を有する患者を処置するための、配列番号５３２１を含むｓｇＲＮＡを含む組成物。
【請求項９２】
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を有する患者を処置するための、配列番号５３２２を含むｓｇＲＮＡを含む組成物。
【請求項９３】
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を有する患者を処置するための、配列番号５３５８を含むｓｇＲＮＡを含む組成物。
【請求項９４】
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を有する患者を処置するためのｓｇＲＮＡを含む組成物であって、前記ｓｇＲＮＡが、配列番号５２９０、および配列番号５３２７〜５３３８のうちのいずれか１つを含む、組成物。
【請求項９５】
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を有する患者を処置するためのｓｇＲＮＡを含む組成物であって、前記ｓｇＲＮＡが、配列番号５２９１、および配列番号５３２７〜５３３８のうちのいずれか１つを含む、組成物。
【請求項９６】
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を有する患者を処置するためのｓｇＲＮＡを含む組成物であって、前記ｓｇＲＮＡが、配列番号５３１９、および配列番号５３２７〜５３３８のうちのいずれか１つを含む、組成物。
【請求項９７】
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を有する患者を処置するためのｓｇＲＮＡを含む組成物であって、前記ｓｇＲＮＡが、配列番号５３２０、および配列番号５３２７〜５３３８のうちのいずれか１つを含む、組成物。
【請求項９８】
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を有する患者を処置するためのｓｇＲＮＡを含む組成物であって、前記ｓｇＲＮＡが、配列番号５３２１、および配列番号５３２７〜５３３８のうちのいずれか１つを含む、組成物。
【請求項９９】
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を有する患者を処置するためのｓｇＲＮＡを含む組成物であって、前記ｓｇＲＮＡが、配列番号５３２２、および配列番号５３２７〜５３３８のうちのいずれか１つを含む、組成物。
【請求項１００】
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を有する患者を処置するためのｓｇＲＮＡを含む組成物であって、前記ｓｇＲＮＡが、配列番号５３５８、および配列番号５３２７〜５３３８のうちのいずれか１つを含む、組成物。
【請求項１０１】
部位特異的変異誘発を誘導するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、第１のセグメントと、
ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）または単一分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）をコードするヌクレオチド配列を含む、第２のセグメントであって、前記ｇＲＮＡまたはｓｇＲＮＡが、配列番号５２９０を含む、第２のセグメントと、
自己不活性化（ＳＩＮ）部位を含む、１つまたは複数の第３のセグメントと
を含む自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系であって、
前記ｇＲＮＡまたはｓｇＲＮＡが、前記ＳＩＮ部位に実質的に相補的であり、
前記ｇＲＮＡまたはｓｇＲＮＡが、ゲノム標的配列に実質的に相補的である、自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
【請求項１０２】
部位特異的変異誘発を誘導するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、第１のセグメントと、
ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）または単一分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）をコードするヌクレオチド配列を含む、第２のセグメントであって、前記ｇＲＮＡまたはｓｇＲＮＡが、配列番号５２９１を含む、第２のセグメントと、
自己不活性化（ＳＩＮ）部位を含む、１つまたは複数の第３のセグメントと
を含む自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系であって、
前記ｇＲＮＡまたはｓｇＲＮＡが、前記ＳＩＮ部位に実質的に相補的であり、
前記ｇＲＮＡまたはｓｇＲＮＡが、ゲノム標的配列に実質的に相補的である、自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
【請求項１０３】
部位特異的変異誘発を誘導する前記ポリペプチドが、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ  Ｃａｓ９（ＳａＣａｓ９）またはその任意のバリアントである、請求項１０１または１０２のいずれか一項に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
【請求項１０４】
部位特異的変異誘発を誘導する前記ポリペプチドが、ＳａＣａｓ９またはその任意のバリアントであり、前記ＳＩＮ部位が、ＳａＣａｓ９オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）の５’に位置する５’ＳＩＮ部位、または前記ＳａＣａｓ９  ＯＲＦ内に位置する天然に存在するイントロンもしくはキメラ挿入イントロン内に位置する３’ＳＩＮ部位である、請求項１０１〜１０３のいずれか一項に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
【請求項１０５】
前記５’ＳＩＮ部位が、配列番号５３００を含む、請求項１０４に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
【請求項１０６】
前記３’ＳＩＮ部位が、配列番号５２８０を含む、請求項１０４または１０５に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
【請求項１０７】
前記５’ＳＩＮ部位が、配列番号５３０１を含む、請求項１０４に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
【請求項１０８】
前記３’ＳＩＮ部位が、配列番号５２８１を含む、請求項１０４またはおよび１０７に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
【請求項１０９】
前記５’ＳＩＮ部位が、前記ＳａＣａｓ９オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）の上流およびＳＶ４０核局在化シグナル（ＮＬＳ）の下流に位置する、請求項１０４、１０５、および１０７のいずれか一項に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
【請求項１１０】
前記５’ＳＩＮ部位が、前記ＳａＣａｓ９オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）の上流および５’非翻訳領域（ＵＴＲ）内のＳＶ４０核局在化シグナル（ＮＬＳ）の上流に位置する、請求項１０４、１０５、および１０７のいずれか一項に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
【請求項１１１】
前記３’ＳＩＮ部位が、前記ＳａＣａｓ９  ＯＲＦ内に位置する天然に存在するイントロンまたはキメラ挿入イントロン内に位置する、請求項１０４、１０６、または１０８のいずれか一項に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
【請求項１１２】
前記ＳＩＮ部位が、プロトスペーサー隣接モチーフ（ＰＡＭ）を含む、請求項１０１〜１１１のいずれかに記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
【請求項１１３】
前記ＰＡＭが、ＮＮＧＲＲＴまたはその任意のバリアントである、請求項１１２に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
【請求項１１４】
前記ゲノム標的配列が、ロドプシン（ＲＨＯ）遺伝子におけるＰ２３Ｈ変異である、請求項１０１〜１１３のいずれか一項に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
【請求項１１５】
部位特異的変異誘発を誘導するポリペプチド（polpeptide）をコードするヌクレオチド配列を含む前記第１のセグメントが、開始コドン、終止コドン、およびポリ（Ａ）終結部位をさらに含む、請求項１０１〜１１４のいずれかに記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
【請求項１１６】
前記第１のセグメントおよび前記第３のセグメントが、第１のベクターにおいて一緒に提供され、前記第２のセグメントが、第２のベクターにおいて提供される、請求項１０１〜１１５のいずれかに記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
【請求項１１７】
前記第１のセグメント、第２のセグメント、および第３のセグメントが、１つのベクターにおいて一緒に提供される、請求項１０１〜１１５のいずれかに記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
【請求項１１８】
前記第３のセグメントが、前記第１または第２のベクターにおいて、前記第１のセグメントの５’の位置に存在する、請求項１１６または１１７に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
【請求項１１９】
前記第３のセグメントが、前記第１または第２のベクターにおいて、前記第１のセグメントの３’の位置に存在する、請求項１１６または１１７に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
【請求項１２０】
前記１つまたは複数の第３のセグメントが、前記第１および第２のベクターにおいて、前記第１のセグメントの５’末端および３’末端に存在する、請求項１１６または１１７に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
【請求項１２１】
前記第１のベクターが、配列番号５３４１を含み、前記第２のベクターが、配列番号５３３９を含む、請求項１１６に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
【請求項１２２】
前記第１のベクターが、配列番号５３４１を含み、前記第２のベクターが、配列番号５３４０を含む、請求項１１６に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
【請求項１２３】
前記第１のベクターが、配列番号５３４２を含み、前記第２のベクターが、配列番号５３３９を含む、請求項１１６に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
【請求項１２４】
前記第１のベクターが、配列番号５３４２を含み、前記第２のベクターが、配列番号５３４０を含む、請求項１１６に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
【請求項１２５】
前記第３のセグメントが、１００ヌクレオチド未満の長さである、請求項１０１〜１２４のいずれかに記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
【請求項１２６】
前記第３のセグメントが、５０ヌクレオチド未満の長さである、請求項１２５に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
【請求項１２７】
前記ｇＲＮＡまたはｓｇＲＮＡが、少なくとも１つの位置を除き、前記ＳＩＮ部位のヌクレオチド配列に完全に相補的である、請求項１０１〜１２６のいずれかに記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
【請求項１２８】
前記ｇＲＮＡまたはｓｇＲＮＡが、少なくとも２つの位置を除き、前記ＳＩＮ部位のヌクレオチド配列に完全に相補的である、請求項１０１〜１２７のいずれかに記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
【請求項１２９】
プロモーターをコードする核酸配列が、前記第１のセグメントに作動可能に連結されている、請求項１０１〜１２８のいずれか一項に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
【請求項１３０】
前記プロモーターが、空間制限プロモーター、ｇＲＮＡもしくはｓｇＲＮＡを１つの方向に駆動し、ＳａＣａｓ９を反対の方向に駆動する、二方向性プロモーター、または誘導性プロモーターである、請求項１２９に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
【請求項１３１】
前記空間制限プロモーターが、任意の組織または細胞型特異的プロモーター、肝細胞特異的プロモーター、ニューロン特異的プロモーター、脂肪細胞特異的プロモーター、心筋細胞特異的プロモーター、骨格筋特異的プロモーター、肺前駆細胞特異的プロモーター、光受容器特異的プロモーター、および網膜色素上皮（ＲＰＥ）選択的プロモーターからなる群から選択される、請求項１３０に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
【請求項１３２】
前記第１のベクターおよび前記第２のベクターが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである、請求項１１６〜１１７に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
【請求項１３３】
前記アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターが、ＡＡＶ５血清型キャプシドベクターである、請求項１３２に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
【請求項１３４】
ＳａＣａｓ９またはその任意のバリアントをコードするヌクレオチド配列を含む、第１のセグメントと、
ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）または単一分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）をコードするヌクレオチド配列を含む、第２のセグメントと、
自己不活性化（ＳＩＮ）部位を含む、１つまたは複数の第３のセグメントと
を含む自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系であって、
前記ｇＲＮＡまたはｓｇＲＮＡが、前記ＳＩＮ部位に実質的に相補的であり、
前記ｇＲＮＡまたはｓｇＲＮＡが、ゲノム標的配列に実質的に相補的であり、
前記ＳＩＮ部位が、配列番号５３１３〜５３１４からなる群から選択される配列を含む、自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
【請求項１３５】
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を編集するための、請求項１０１〜１３４のいずれかに記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系を含む組成物。
【請求項１３６】
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を有する患者を処置するための、請求項１０１〜１３４のいずれかに記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系を含む組成物。
【請求項１３７】
請求項１０１〜１３４のいずれかに記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系を含む、遺伝子改変細胞。
【請求項１３８】
古細菌細胞、細菌細胞、真核生物細胞、真核生物単細胞生物、体細胞、生殖細胞、幹細胞、植物細胞、藻類細胞、動物細胞、無脊椎動物細胞、脊椎動物細胞、魚類細胞、カエル細胞、鳥類細胞、哺乳動物細胞、ブタ細胞、ウシ細胞、ヤギ細胞、ヒツジ細胞、げっ歯動物細胞、ラット細胞、マウス細胞、非ヒト霊長類細胞、およびヒト細胞からなる群から選択される、請求項１３７に記載の遺伝子改変細胞。
【請求項１３９】
細胞においてＣａｓ９発現を制御するための、請求項１０１〜１３４のいずれか一項に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系を含む組成物であって、前記細胞が、請求項１０１〜１３４のいずれか一項に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系と接触されることを特徴とする、組成物。
【請求項１４０】
常染色体優性網膜色素変性を有する患者を処置するための治療剤であって、請求項１０１〜１３４のいずれかに記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系を含む、治療剤。
【請求項１４１】
ｉｎ  ｖｉｖｏで常染色体優性網膜色素変性を有する患者を処置するためのキットであって、
請求項１０１〜１３４に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系と、
必要に応じて、１つまたは複数のドナー鋳型と
を含む、キット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０８６４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０８６４】
本開示は、本開示の様々な例および／またはその潜在的適用を例示する目的のために様々な具体的な態様の説明を提供するが、変形および改変が当業者に想起されることが理解される。したがって、本明細書で説明する発明（単数または複数）は、少なくともそれらが請求されるのと同程度に広いものであり、本明細書で提供される特定の例示的な例により、より狭く定義されるものではないと理解されるべきである。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
ヒト細胞においてロドプシン（ＲＨＯ）遺伝子を編集するための方法であって、
前記ヒト細胞へと、１つまたは複数のデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）エンドヌクレアーゼを導入して、前記ＲＨＯ遺伝子または前記ＲＨＯ遺伝子の調節エレメントをコードする他のＤＮＡ配列内またはその近傍に、１つまたは複数の一本鎖切断（ＳＳＢ）または二本鎖切断（ＤＳＢ）をもたらし、それによって、編集されたヒト細胞を作り出すステップであって、前記ＳＳＢまたはＤＳＢは、前記ＲＨＯ遺伝子内もしくはその近傍に、またはその発現もしくは機能に影響を及ぼす、１つまたは複数の変異の恒久的な欠失、挿入、修正、またはその発現もしくは機能のモジュレーションをもたらす、ステップ
を含む、方法。
（項目２）
ヒト細胞においてロドプシン（ＲＨＯ）遺伝子におけるＰ２３Ｈ変異を編集するための方法であって、
前記ヒト細胞へと、１つまたは複数のデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）エンドヌクレアーゼを導入して、ＲＨＯ遺伝子における前記Ｐ２３Ｈ変異内またはその近傍に、前記Ｐ２３Ｈ変異の恒久的な欠失、挿入、修正、またはその発現もしくは機能のモジュレーションをもたらす１つまたは複数の一本鎖切断（ＳＳＢ）または二本鎖切断（ＤＳＢ）をもたらし、それによって、編集されたヒト細胞を作り出すステップ
を含む、方法。
（項目３）
網膜色素変性（ＲＰ）を有する患者を処置するためのｉｎ  ｖｉｖｏ方法であって、前記患者の細胞においてロドプシン（ＲＨＯ）遺伝子におけるＰ２３Ｈ変異を編集するステップを含む、方法。
（項目４）
前記編集するステップが、
前記細胞へと、１つまたは複数のデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）エンドヌクレアーゼを導入して、ＲＨＯ遺伝子における前記Ｐ２３Ｈ変異内またはその近傍に、前記Ｐ２３Ｈ変異の恒久的な欠失、挿入、修正、またはその発現もしくは機能のモジュレーションをもたらし、ＲＨＯタンパク質活性の回復をもたらす、１つまたは複数の一本鎖切断（ＳＳＢ）または二本鎖切断（ＤＳＢ）をもたらすこと
を含む、項目３に記載の方法。
（項目５）
前記１つまたは複数のＤＮＡエンドヌクレアーゼが、Ｃａｓ１、Ｃａｓ１Ｂ、Ｃａｓ２、Ｃａｓ３、Ｃａｓ４、Ｃａｓ５、Ｃａｓ６、Ｃａｓ７、Ｃａｓ８、Ｃａｓ９（Ｃｓｎ１およびＣｓｘ１２としても知られている）、Ｃａｓ１００、Ｃｓｙ１、Ｃｓｙ２、Ｃｓｙ３、Ｃｓｅ１、Ｃｓｅ２、Ｃｓｃ１、Ｃｓｃ２、Ｃｓａ５、Ｃｓｎ２、Ｃｓｍ２、Ｃｓｍ３、Ｃｓｍ４、Ｃｓｍ５、Ｃｓｍ６、Ｃｍｒ１、Ｃｍｒ３、Ｃｍｒ４、Ｃｍｒ５、Ｃｍｒ６、Ｃｓｂ１、Ｃｓｂ２、Ｃｓｂ３、Ｃｓｘ１７、Ｃｓｘ１４、Ｃｓｘ１０、Ｃｓｘ１６、ＣｓａＸ、Ｃｓｘ３、Ｃｓｘ１、Ｃｓｘ１５、Ｃｓｆ１、Ｃｓｆ２、Ｃｓｆ３、Ｃｓｆ４、またはＣｐｆ１エンドヌクレアーゼ、その相同体、その天然に存在する分子の組換え、そのコドン最適化形態、またはそれらの修飾バージョン、ならびにそれらの組合せである、項目１〜２、または４のいずれか一項に記載の方法。
（項目６）
前記細胞へと、前記１つまたは複数のＤＮＡエンドヌクレアーゼをコードする１つまたは複数のポリヌクレオチドを導入するステップを含む、項目５に記載の方法。
（項目７）
前記細胞へと、前記１つまたは複数のＤＮＡエンドヌクレアーゼをコードする１つまたは複数のリボ核酸（ＲＮＡ）を導入するステップを含む、項目５に記載の方法。
（項目８）
前記１つもしくは複数のポリヌクレオチドまたは１つもしくは複数のＲＮＡが、１つもしくは複数の修飾ポリヌクレオチドまたは１つもしくは複数の修飾ＲＮＡである、項目６または７のいずれか一項に記載の方法。
（項目９）
前記ＤＮＡエンドヌクレアーゼが、１つまたは複数のタンパク質またはポリペプチドである、項目５に記載の方法。
（項目１０）
前記細胞へと、１つまたは複数のガイドリボ核酸（ｇＲＮＡ）を導入するステップをさらに含む、先行する項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１）
前記１つまたは複数のｇＲＮＡが、単一分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）である、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
前記１つもしくは複数のｇＲＮＡまたは１つもしくは複数のｓｇＲＮＡが、１つもしくは複数の修飾ｇＲＮＡまたは１つもしくは複数の修飾ｓｇＲＮＡである、項目１０〜１１のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３）
前記１つまたは複数のＤＮＡエンドヌクレアーゼが、１つもしくは複数のｇＲＮＡまたは１つもしくは複数のｓｇＲＮＡとあらかじめ複合体化されている、項目９〜１１のいずれか一項に記載の方法。
（項目１４）
前記細胞へと、野生型ＲＨＯ遺伝子またはｃＤＮＡの少なくとも一部分を含む、ポリヌクレオチドドナー鋳型を導入するステップをさらに含む、先行する項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５）
前記野生型ＲＨＯ遺伝子またはｃＤＮＡの前記少なくとも一部分が、エクソン１、エクソン２、エクソン３、エクソン４、エクソン５、イントロン領域、その断片もしくは組合せ、または前記ＲＨＯ遺伝子もしくはｃＤＮＡの全体である、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
前記ドナー鋳型が、一本鎖ポリヌクレオチドまたは二本鎖ポリヌクレオチドのいずれかである、項目１４〜１５のいずれか一項に記載の方法。
（項目１７）
前記ドナー鋳型が、３ｑ２２．１領域に対する相同性アームを有する、項目１４〜１５のいずれか一項に記載の方法。
（項目１８）
前記細胞へと、１つのガイドリボ核酸（ｇＲＮＡ）、および前記野生型ＲＨＯ遺伝子の少なくとも一部分を含むポリヌクレオチドドナー鋳型を導入するステップ
をさらに含み、
前記１つまたは複数のＤＮＡエンドヌクレアーゼが、ＲＨＯ遺伝子における前記Ｐ２３Ｈ変異内またはその近傍に位置するローカスに、１つの一本鎖切断（ＳＳＢ）または二本鎖切断（ＤＳＢ）をもたらす、１つまたは複数のＣａｓ９またはＣｐｆ１エンドヌクレアーゼであり、前記ＳＳＢまたはＤＳＢは、前記ローカスにおける染色体ＤＮＡへの前記ポリヌクレオチドドナー鋳型に由来する新しい配列の挿入を促進し、ＲＨＯ遺伝子における前記Ｐ２３Ｈ変異の恒久的な挿入または修正をもたらし、
前記ｇＲＮＡが、ＲＨＯ遺伝子における前記Ｐ２３Ｈ変異内またはその近傍に位置する前記ローカスのセグメントに相補的であるスペーサー配列を含む、項目２または４に記載の方法。
（項目１９）
前記細胞へと、１つまたは複数のガイドリボ核酸（ｇＲＮＡ）、および前記野生型ＲＨＯ遺伝子の少なくとも一部分を含むポリヌクレオチドドナー鋳型を導入するステップ
をさらに含み、
前記１つまたは複数のＤＮＡエンドヌクレアーゼが、ＲＨＯ遺伝子における前記Ｐ２３Ｈ変異内またはその近傍に、１対の一本鎖切断（ＳＳＢ）または二本鎖切断（ＤＳＢ）をもたらす、１つまたは複数のＣａｓ９またはＣｐｆ１エンドヌクレアーゼであり、１対のＳＳＢまたはＤＳＢは、第１のものが５’ローカスにあり、第２のものが３’ローカスにあり、前記５’ローカスと前記３’ローカスとの間における染色体ＤＮＡへの前記ポリヌクレオチドドナー鋳型に由来する新しい配列の挿入を促進し、ＲＨＯ遺伝子における前記Ｐ２３Ｈ変異内またはその近傍の前記５’ローカスと前記３’ローカスとの間における前記染色体ＤＮＡの恒久的な挿入または修正をもたらし、
第１のガイドＲＮＡが、前記５’ローカスのセグメントに相補的であるスペーサー配列を含み、第２のガイドＲＮＡが、前記３’ローカスのセグメントに相補的であるスペーサー配列を含む、項目２または４に記載の方法。
（項目２０）
前記１つまたは複数のｇＲＮＡが、１つまたは複数の単一分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）である、項目１８〜１９のいずれか一項に記載の方法。
（項目２１）
前記１つもしくは複数のｇＲＮＡまたは１つもしくは複数のｓｇＲＮＡが、１つもしくは複数の修飾ｇＲＮＡまたは１つもしくは複数の修飾ｓｇＲＮＡである、項目１８〜２０のいずれか一項に記載の方法。
（項目２２）
前記１つまたは複数のＤＮＡエンドヌクレアーゼが、１つもしくは複数のｇＲＮＡまたは１つもしくは複数のｓｇＲＮＡとあらかじめ複合体化されている、項目１８〜２１のいずれか一項に記載の方法。
（項目２３）
前記野生型ＲＨＯ遺伝子またはｃＤＮＡの前記少なくとも一部分が、エクソン１、エクソン２、エクソン３、エクソン４、エクソン５、イントロン領域、その断片もしくは組合せ、または前記ＲＨＯ遺伝子もしくはｃＤＮＡの全体である、項目１８〜２２のいずれか一項に記載の方法。
（項目２４）
前記ドナー鋳型が、一本鎖ポリヌクレオチドまたは二本鎖ポリヌクレオチドのいずれかである、項目１８〜２３のいずれか一項に記載の方法。
（項目２５）
前記ドナー鋳型が、３ｑ２２．１領域に対する相同性アームを有する、項目１８〜２４のいずれか一項に記載の方法。
（項目２６）
前記ＳＳＢまたはＤＳＢが、前記ＲＨＯ遺伝子の第１のエクソン、第２のエクソン、第３のエクソン、第４のエクソン、第５のエクソン、またはそれらの組合せにある、項目１８〜２５に記載の方法。
（項目２７）
前記ｇＲＮＡまたはｓｇＲＮＡが、病理学的バリアントＰ２３Ｈを対象とする、項目１０〜１３または２０〜２２に記載の方法。
（項目２８）
前記挿入または修正が、相同組換え修復（ＨＤＲ）によるものである、項目１〜２または４〜２７のいずれか一項に記載の方法。
（項目２９）
前記ドナー鋳型が、病理学的バリアントＰ２３Ｈに対する相同性アームを有する、項目１８〜１９のいずれか一項に記載の方法。
（項目３０）
前記細胞へと、２つのガイドリボ核酸（ｇＲＮＡ）、および前記野生型ＲＨＯ遺伝子の少なくとも一部分を含むポリヌクレオチドドナー鋳型を導入するステップ
をさらに含み、
前記１つまたは複数のＤＮＡエンドヌクレアーゼが、ＲＨＯ遺伝子における前記Ｐ２３Ｈ変異内またはその近傍に、１対の二本鎖切断（ＤＳＢ）をもたらす、１つまたは複数のＣａｓ９またはＣｐｆ１エンドヌクレアーゼであり、前記１対のＤＳＢは、第１のものが５’ＤＳＢローカスにあり、第２のものが３’ＤＳＢローカスにあり、前記５’ＤＳＢローカスと前記３’ＤＳＢローカスとの間の染色体ＤＮＡの欠失を引き起こし、ＲＨＯ遺伝子における前記Ｐ２３Ｈ変異内またはその近傍の前記５’ＤＳＢローカスと前記３’ＤＳＢローカスとの間における前記染色体ＤＮＡの恒久的な欠失をもたらし、
第１のガイドＲＮＡが、前記５’ＤＳＢローカスのセグメントに相補的であるスペーサー配列を含み、第２のガイドＲＮＡが、前記３’ＤＳＢローカスのセグメントに相補的であるスペーサー配列を含む、項目２または４に記載の方法。
（項目３１）
前記２つのｇＲＮＡが、２つの単一分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）である、項目３０に記載の方法。
（項目３２）
前記２つのｇＲＮＡまたは２つのｓｇＲＮＡが、２つの修飾ｇＲＮＡまたは２つの修飾ｓｇＲＮＡである、項目３０〜３１のいずれか一項に記載の方法。
（項目３３）
前記１つまたは複数のＤＮＡエンドヌクレアーゼが、２つのｇＲＮＡまたは２つのｓｇＲＮＡとあらかじめ複合体化されている、項目３０〜３２のいずれか一項に記載の方法。
（項目３４）
前記５’ＤＳＢおよび３’ＤＳＢの両方が、前記ＲＨＯ遺伝子の第１のエクソン、第１のイントロン、第２のエクソン、第２のイントロン、第３のエクソン、第３のイントロン、第４のエクソン、第４のイントロン、第５のエクソン、第５のイントロンのいずれか、またはこれらの組合せ内またはその近傍にある、項目３０〜３３のいずれか一項に記載の方法。
（項目３５）
前記欠失が、１ｋｂまたはそれを下回る欠失である、項目３０〜３４のいずれか一項に記載の方法。
（項目３６）
前記Ｃａｓ９またはＣｐｆ１  ｍＲＮＡ、ｇＲＮＡ、およびドナー鋳型が、それぞれ、別個の脂質ナノ粒子中に製剤化されるか、またはすべてが１つの脂質ナノ粒子中に共製剤化されるかのいずれかである、項目１８〜１９、および３０のいずれか一項に記載の方法。
（項目３７）
前記Ｃａｓ９またはＣｐｆ１  ｍＲＮＡ、ｇＲＮＡ、およびドナー鋳型が、それぞれ、別個のアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター中に製剤化されるか、またはすべてが１つのＡＡＶベクター中に共製剤化されるかのいずれかである、項目１８〜１９、および３０のいずれか一項に記載の方法。
（項目３８）
前記Ｃａｓ９またはＣｐｆ１  ｍＲＮＡが、脂質ナノ粒子中に製剤化され、前記ｇＲＮＡおよびドナー鋳型の両方が、ＡＡＶベクターによって前記細胞へと送達される、項目１８〜１９、および３０のいずれか一項に記載の方法。
（項目３９）
前記Ｃａｓ９またはＣｐｆ１  ｍＲＮＡが、脂質ナノ粒子中に製剤化され、前記ｇＲＮＡが、電気穿孔によって前記細胞へと送達され、ドナー鋳型が、ＡＡＶベクターによって前記細胞へと送達される、項目１８〜１９、および３０のいずれか一項に記載の方法。
（項目４０）
前記ＡＡＶベクターが、自己不活性化ＡＡＶベクターである、項目３７〜３９に記載の方法。
（項目４１）
前記ＲＨＯ遺伝子が、第３染色体：１２９，５２８，６４０〜１２９，５３５，１６９（Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ−ＧＲＣｈ３８／ｈｇ３８）に位置する、先行する項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目４２）
ＲＨＯタンパク質活性の前記回復が、野生型または正常なＲＨＯタンパク質活性と比較される、項目２、または４〜４１のいずれか一項に記載の方法。
（項目４３）
前記ポリヌクレオチドドナー鋳型が、ＲＨＯのエクソン１を含み、最大５ＫＢである、項目１４に記載の方法。
（項目４４）
前記ポリヌクレオチドドナー鋳型が、ＡＡＶによって送達される、項目４３に記載の方法。
（項目４５）
前記ヒト細胞が、光受容細胞または網膜前駆細胞である、項目１〜２に記載の方法。
（項目４６）
前記細胞が、光受容細胞または網膜前駆細胞である、項目３〜４４に記載の方法。
（項目４７）
網膜色素変性（ＲＰ）を有する患者に由来する細胞において、ロドプシン（ＲＨＯ）遺伝子におけるＰ２３Ｈ変異を編集するための１つまたは複数のガイドリボ核酸（ｇＲＮＡ）であって、配列表の配列番号５２８７〜５２９１、５３１９〜５３２２、および５３５８における核酸配列からなる群から選択されるスペーサー配列を含む、１つまたは複数のｇＲＮＡ。
（項目４８）
１つまたは複数の単一分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）である、項目４７に記載の１つまたは複数のｇＲＮＡ。
（項目４９）
前記１つもしくは複数のｇＲＮＡまたは１つもしくは複数のｓｇＲＮＡが、１つもしくは複数の修飾ｇＲＮＡまたは１つもしくは複数の修飾ｓｇＲＮＡである、項目４７または４８に記載の１つまたは複数のｇＲＮＡまたはｓｇＲＮＡ。
（項目５０）
前記細胞が、光受容細胞、網膜前駆細胞、または人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）である、項目４７〜４９に記載の１つまたは複数のｇＲＮＡまたはｓｇＲＮＡ。
（項目５１）
ＲＨＯ遺伝子におけるＰ２３Ｈ変異を編集するための少なくとも１つまたは複数のｇＲＮＡを含む治療であって、前記１つまたは複数のｇＲＮＡが、配列表の配列番号５２８７〜５２９１、５３１９〜５３２２、および５３５８における核酸配列からなる群から選択されるスペーサー配列を含む、治療。
（項目５２）
前記１つまたは複数のｇＲＮＡが、１つまたは複数のｓｇＲＮＡである、項目５１に記載の治療。
（項目５３）
前記１つもしくは複数のｇＲＮＡまたは１つもしくは複数のｓｇＲＮＡが、１つもしくは複数の修飾ｇＲＮＡまたは１つもしくは複数の修飾ｓｇＲＮＡである、項目５１または５２に記載の治療。
（項目５４）
１つまたは複数のＤＮＡエンドヌクレアーゼを導入するステップ、
ＲＨＯ遺伝子におけるＰ２３Ｈ変異を編集するための１つもしくは複数のｇＲＮＡまたは１つもしくは複数のｓｇＲＮＡを導入するステップ、
１つまたは複数のドナー鋳型を導入するステップ
を含む方法によって形成される、常染色体優性網膜色素変性（ＲＰ）を有する患者を処置するための治療であって、
前記１つまたは複数のｇＲＮＡまたはｓｇＲＮＡが、配列表の配列番号５２８７〜５２９１、５３１９〜５３２２、および５３５８における核酸配列からなる群から選択されるスペーサー配列を含む、治療。
（項目５５）
ｉｎ  ｖｉｖｏで網膜色素変性（ＲＰ）を有する患者を処置するためのキットであって、
ＲＨＯ遺伝子におけるＰ２３Ｈ変異を編集するための１つまたは複数のｇＲＮＡまたはｓｇＲＮＡであって、配列表の配列番号５２８７〜５２９１、５３１９〜５３２２、および５３５８における核酸配列からなる群から選択されるスペーサー配列を含む、１つまたは複数のｇＲＮＡまたはｓｇＲＮＡと、
１つまたは複数のＤＮＡエンドヌクレアーゼと、
必要に応じて、１つまたは複数のドナー鋳型と
を含む、キット。
（項目５６）
前記１つまたは複数のＤＮＡエンドヌクレアーゼが、Ｃａｓ１、Ｃａｓ１Ｂ、Ｃａｓ２、Ｃａｓ３、Ｃａｓ４、Ｃａｓ５、Ｃａｓ６、Ｃａｓ７、Ｃａｓ８、Ｃａｓ９（Ｃｓｎ１およびＣｓｘ１２としても知られている）、Ｃａｓ１００、Ｃｓｙ１、Ｃｓｙ２、Ｃｓｙ３、Ｃｓｅ１、Ｃｓｅ２、Ｃｓｃ１、Ｃｓｃ２、Ｃｓａ５、Ｃｓｎ２、Ｃｓｍ２、Ｃｓｍ３、Ｃｓｍ４、Ｃｓｍ５、Ｃｓｍ６、Ｃｍｒ１、Ｃｍｒ３、Ｃｍｒ４、Ｃｍｒ５、Ｃｍｒ６、Ｃｓｂ１、Ｃｓｂ２、Ｃｓｂ３、Ｃｓｘ１７、Ｃｓｘ１４、Ｃｓｘ１０、Ｃｓｘ１６、ＣｓａＸ、Ｃｓｘ３、Ｃｓｘ１、Ｃｓｘ１５、Ｃｓｆ１、Ｃｓｆ２、Ｃｓｆ３、Ｃｓｆ４、またはＣｐｆ１エンドヌクレアーゼ、その相同体、その天然に存在する分子の組換え、そのコドン最適化形態、またはそれらの修飾バージョン、ならびにそれらの組合せである、項目５５に記載のキット。
（項目５７）
１つまたは複数のドナー鋳型を含む、項目５５〜５６のいずれかに記載のキット。
（項目５８）
前記ドナー鋳型が、３ｑ２２．１領域に対する相同性アームを有する、項目５７に記載のキット。
（項目５９）
前記ドナー鋳型が、病理学的バリアントＰ２３Ｈに対する相同性アームを有する、項目５７に記載のキット。
（項目６０）
配列番号５２９０の核酸配列を含む、単一分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）。
（項目６１）
配列番号５２９１の核酸配列を含む、単一分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）。
（項目６２）
配列番号５３１９の核酸配列を含む、単一分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）。
（項目６３）
配列番号５３２０の核酸配列を含む、単一分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）。
（項目６４）
配列番号５３２１の核酸配列を含む、単一分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）。
（項目６５）
配列番号５３２２の核酸配列を含む、単一分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）。
（項目６６）
配列番号５３５８の核酸配列を含む、単一分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）。
（項目６７）
配列番号５２９０、および配列番号５３２７〜５３３８のうちのいずれか１つの核酸配列を含む、単一分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）。
（項目６８）
配列番号５２９１、および配列番号５３２７〜５３３８のうちのいずれか１つの核酸配列を含む、単一分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）。
（項目６９）
配列番号５３１９、および配列番号５３２７〜５３３８のうちのいずれか１つの核酸配列を含む、単一分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）。
（項目７０）
配列番号５３２０、および配列番号５３２７〜５３３８のうちのいずれか１つの核酸配列を含む、単一分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）。
（項目７１）
配列番号５３２１、および配列番号５３２７〜５３３８のうちのいずれか１つの核酸配列を含む、単一分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）。
（項目７２）
配列番号５３２２、および配列番号５３２７〜５３３８のうちのいずれか１つの核酸配列を含む、単一分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）。
（項目７３）
配列番号５３５８、および配列番号５３２７〜５３３８のうちのいずれか１つの核酸配列を含む、単一分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）。
（項目７４）
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を編集するための方法であって、配列番号５２９０を含むｓｇＲＮＡを投与するステップを含む、方法。
（項目７５）
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を編集するための方法であって、配列番号５２９１を含むｓｇＲＮＡを投与するステップを含む、方法。
（項目７６）
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を編集するための方法であって、配列番号５３１９を含むｓｇＲＮＡを投与するステップを含む、方法。
（項目７７）
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を編集するための方法であって、配列番号５３２０を含むｓｇＲＮＡを投与するステップを含む、方法。
（項目７８）
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を編集するための方法であって、配列番号５３２１を含むｓｇＲＮＡを投与するステップを含む、方法。
（項目７９）
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を編集するための方法であって、配列番号５３２２を含むｓｇＲＮＡを投与するステップを含む、方法。
（項目８０）
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を編集するための方法であって、配列番号５３５８を含むｓｇＲＮＡを投与するステップを含む、方法。
（項目８１）
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を編集するための方法であって、配列番号５２９０、および配列番号５３２７〜５３３８のうちのいずれか１つを含むｓｇＲＮＡを投与するステップを含む、方法。
（項目８２）
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を編集するための方法であって、配列番号５２９１、および配列番号５３２７〜５３３８のうちのいずれか１つを含むｓｇＲＮＡを投与するステップを含む、方法。
（項目８３）
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を編集するための方法であって、配列番号５３１９、および配列番号５３２７〜５３３８のうちのいずれか１つを含むｓｇＲＮＡを投与するステップを含む、方法。
（項目８４）
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を編集するための方法であって、配列番号５３２０、および配列番号５３２７〜５３３８のうちのいずれか１つを含むｓｇＲＮＡを投与するステップを含む、方法。
（項目８５）
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を編集するための方法であって、配列番号５３２１、および配列番号５３２７〜５３３８のうちのいずれか１つを含むｓｇＲＮＡを投与するステップを含む、方法。
（項目８６）
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を編集するための方法であって、配列番号５３２２、および配列番号５３２７〜５３３８のうちのいずれか１つを含むｓｇＲＮＡを投与するステップを含む、方法。
（項目８７）
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を編集するための方法であって、配列番号５３５８、および配列番号５３２７〜５３３８のうちのいずれか１つを含むｓｇＲＮＡを投与するステップを含む、方法。
（項目８８）
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を有する患者を処置するための方法であって、配列番号５２９０を含むｓｇＲＮＡを、前記患者へと投与するステップを含む、方法。
（項目８９）
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を有する患者を処置するための方法であって、配列番号５２９１を含むｓｇＲＮＡを、前記患者へと投与するステップを含む、方法。
（項目９０）
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を有する患者を処置するための方法であって、配列番号５３１９を含むｓｇＲＮＡを、前記患者へと投与するステップを含む、方法。
（項目９１）
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を有する患者を処置するための方法であって、配列番号５３２０を含むｓｇＲＮＡを、前記患者へと投与するステップを含む、方法。
（項目９２）
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を有する患者を処置するための方法であって、配列番号５３２１を含むｓｇＲＮＡを、前記患者へと投与するステップを含む、方法。
（項目９３）
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を有する患者を処置するための方法であって、配列番号５３２２を含むｓｇＲＮＡを、前記患者へと投与するステップを含む、方法。
（項目９４）
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を有する患者を処置するための方法であって、配列番号５３５８を含むｓｇＲＮＡを、前記患者へと投与するステップを含む、方法。
（項目９５）
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を有する患者を処置するための方法であって、ｓｇＲＮＡを前記患者へと投与するステップを含み、前記ｓｇＲＮＡが、配列番号５２９０、および配列番号５３２７〜５３３８のうちのいずれか１つを含む、方法。
（項目９６）
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を有する患者を処置するための方法であって、ｓｇＲＮＡを前記患者へと投与するステップを含み、前記ｓｇＲＮＡが、配列番号５２９１、および配列番号５３２７〜５３３８のうちのいずれか１つを含む、方法。
（項目９７）
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を有する患者を処置するための方法であって、ｓｇＲＮＡを前記患者へと投与するステップを含み、前記ｓｇＲＮＡが、配列番号５３１９、および配列番号５３２７〜５３３８のうちのいずれか１つを含む、方法。
（項目９８）
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を有する患者を処置するための方法であって、ｓｇＲＮＡを前記患者へと投与するステップを含み、前記ｓｇＲＮＡが、配列番号５３２０、および配列番号５３２７〜５３３８のうちのいずれか１つを含む、方法。
（項目９９）
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を有する患者を処置するための方法であって、ｓｇＲＮＡを前記患者へと投与するステップを含み、前記ｓｇＲＮＡが、配列番号５３２１、および配列番号５３２７〜５３３８のうちのいずれか１つを含む、方法。
（項目１００）
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を有する患者を処置するための方法であって、ｓｇＲＮＡを前記患者へと投与するステップを含み、前記ｓｇＲＮＡが、配列番号５３２２、および配列番号５３２７〜５３３８のうちのいずれか１つを含む、方法。
（項目１０１）
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を有する患者を処置するための方法であって、ｓｇＲＮＡを前記患者へと投与するステップを含み、前記ｓｇＲＮＡが、配列番号５３５８、および配列番号５３２７〜５３３８のうちのいずれか１つを含む、方法。
（項目１０２）
部位特異的変異誘発を誘導するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、第１のセグメントと、
ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）または単一分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）をコードするヌクレオチド配列を含む、第２のセグメントであって、前記ｇＲＮＡまたはｓｇＲＮＡが、配列番号５２９０を含む、第２のセグメントと、
自己不活性化（ＳＩＮ）部位を含む、１つまたは複数の第３のセグメントと
を含む自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系であって、
前記ｇＲＮＡまたはｓｇＲＮＡが、前記ＳＩＮ部位に実質的に相補的であり、
前記ｇＲＮＡまたはｓｇＲＮＡが、ゲノム標的配列に実質的に相補的である、自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
（項目１０３）
部位特異的変異誘発を誘導するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、第１のセグメントと、
ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）または単一分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）をコードするヌクレオチド配列を含む、第２のセグメントであって、前記ｇＲＮＡまたはｓｇＲＮＡが、配列番号５２９１を含む、第２のセグメントと、
自己不活性化（ＳＩＮ）部位を含む、１つまたは複数の第３のセグメントと
を含む自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系であって、
前記ｇＲＮＡまたはｓｇＲＮＡが、前記ＳＩＮ部位に実質的に相補的であり、
前記ｇＲＮＡまたはｓｇＲＮＡが、ゲノム標的配列に実質的に相補的である、自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
（項目１０４）
部位特異的変異誘発を誘導する前記ポリペプチドが、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ  Ｃａｓ９（ＳａＣａｓ９）またはその任意のバリアントである、項目１０２または１０３のいずれか一項に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
（項目１０５）
部位特異的変異誘発を誘導する前記ポリペプチドが、ＳａＣａｓ９またはその任意のバリアントであり、前記ＳＩＮ部位が、ＳａＣａｓ９オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）の５’に位置する５’ＳＩＮ部位、または前記ＳａＣａｓ９  ＯＲＦ内に位置する天然に存在するイントロンもしくはキメラ挿入イントロン内に位置する３’ＳＩＮ部位である、項目１０２〜１０４のいずれか一項に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
（項目１０６）
前記５’ＳＩＮ部位が、配列番号５３００を含む、項目１０５に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
（項目１０７）
前記３’ＳＩＮ部位が、配列番号５２８０を含む、項目１０５〜１０６のいずれか一項に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
（項目１０８）
前記５’ＳＩＮ部位が、配列番号５３０１を含む、項目１０５に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
（項目１０９）
前記３’ＳＩＮ部位が、配列番号５２８１を含む、項目１０５および１０８のいずれか一項に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
（項目１１０）
前記５’ＳＩＮ部位が、前記ＳａＣａｓ９オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）の上流およびＳＶ４０核局在化シグナル（ＮＬＳ）の下流に位置する、項目１０５〜１０６、および１０８のいずれか一項に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
（項目１１１）
前記５’ＳＩＮ部位が、前記ＳａＣａｓ９オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）の上流および５’非翻訳領域（ＵＴＲ）内のＳＶ４０核局在化シグナル（ＮＬＳ）の上流に位置する、項目１０５〜１０６、および１０８のいずれか一項に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
（項目１１２）
前記３’ＳＩＮ部位が、前記ＳａＣａｓ９  ＯＲＦ内に位置する天然に存在するイントロンまたはキメラ挿入イントロン内に位置する、項目１０５、１０７、または１０９のいずれか一項に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
（項目１１３）
前記ＳＩＮ部位が、プロトスペーサー隣接モチーフ（ＰＡＭ）を含む、項目１０２〜１１２のいずれかに記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
（項目１１４）
前記ＰＡＭが、ＮＮＧＲＲＴまたはその任意のバリアントである、項目１１３に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
（項目１１５）
前記ゲノム標的配列が、ロドプシン（ＲＨＯ）遺伝子におけるＰ２３Ｈ変異である、項目１０２〜１１４のいずれか一項に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
（項目１１６）
部位特異的変異誘発を誘導するポリペプチド（polpeptide）をコードするヌクレオチド配列を含む前記第１のセグメントが、開始コドン、終止コドン、およびポリ（Ａ）終結部位をさらに含む、先行する項目のいずれかに記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
（項目１１７）
前記第１のセグメントおよび前記第３のセグメントが、第１のベクターにおいて一緒に提供され、前記第２のセグメントが、第２のベクターにおいて提供される、項目１０２〜１１６のいずれかに記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
（項目１１８）
前記第１のセグメント、第２のセグメント、および第３のセグメントが、１つのベクターにおいて一緒に提供される、項目１０２〜１１６のいずれかに記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
（項目１１９）
前記第３のセグメントが、前記第１または第２のベクターにおいて、前記第１のセグメントの５’の位置に存在する、項目１１７〜１１８のいずれかに記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
（項目１２０）
前記第３のセグメントが、前記第１または第２のベクターにおいて、前記第１のセグメントの３’の位置に存在する、項目１１７〜１１８のいずれかに記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
（項目１２１）
前記１つまたは複数の第３のセグメントが、前記第１および第２のベクターにおいて、前記第１のセグメントの５’末端および３’末端に存在する、項目１１７〜１１８のいずれかに記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
（項目１２２）
前記第１のベクターが、配列番号５３４１を含み、前記第２のベクターが、配列番号５３３９を含む、項目１１７に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
（項目１２３）
前記第１のベクターが、配列番号５３４１を含み、前記第２のベクターが、配列番号５３４０を含む、項目１１７に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
（項目１２４）
前記第１のベクターが、配列番号５３４２を含み、前記第２のベクターが、配列番号５３３９を含む、項目１１７に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
（項目１２５）
前記第１のベクターが、配列番号５３４２を含み、前記第２のベクターが、配列番号５３４０を含む、項目１１７に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
（項目１２６）
前記第３のセグメントが、１００ヌクレオチド未満の長さである、先行する項目のいずれかに記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
（項目１２７）
前記第３のセグメントが、５０ヌクレオチド未満の長さである、項目１２６に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
（項目１２８）
前記ｇＲＮＡまたはｓｇＲＮＡが、少なくとも１つの位置を除き、前記ＳＩＮ部位のヌクレオチド配列に完全に相補的である、先行する項目のいずれかに記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
（項目１２９）
前記ｇＲＮＡまたはｓｇＲＮＡが、少なくとも２つの位置を除き、前記ＳＩＮ部位のヌクレオチド配列に完全に相補的である、先行する項目のいずれかに記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
（項目１３０）
プロモーターをコードする核酸配列が、前記第１のセグメントに作動可能に連結されている、先行する項目のいずれか一項に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
（項目１３１）
前記プロモーターが、空間制限プロモーター、ｇＲＮＡもしくはｓｇＲＮＡを１つの方向に駆動し、ＳａＣａｓ９を反対の方向に駆動する、二方向性プロモーター、または誘導性プロモーターである、項目１３０に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
（項目１３２）
前記空間制限プロモーターが、任意の組織または細胞型特異的プロモーター、肝細胞特異的プロモーター、ニューロン特異的プロモーター、脂肪細胞特異的プロモーター、心筋細胞特異的プロモーター、骨格筋特異的プロモーター、肺前駆細胞特異的プロモーター、光受容器特異的プロモーター、および網膜色素上皮（ＲＰＥ）選択的プロモーターからなる群から選択される、項目１３１に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
（項目１３３）
前記第１のベクターおよび前記第２のベクターが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである、項目１１７〜１１８のいずれかに記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
（項目１３４）
前記アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターが、ＡＡＶ５血清型キャプシドベクターである、項目１３３に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
（項目１３５）
ＳａＣａｓ９またはその任意のバリアントをコードするヌクレオチド配列を含む、第１のセグメントと、
ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）または単一分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）をコードするヌクレオチド配列を含む、第２のセグメントと、
自己不活性化（ＳＩＮ）部位を含む、１つまたは複数の第３のセグメントと
を含む自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系であって、
前記ｇＲＮＡまたはｓｇＲＮＡが、前記ＳＩＮ部位に実質的に相補的であり、
前記ｇＲＮＡまたはｓｇＲＮＡが、ゲノム標的配列に実質的に相補的であり、
前記ＳＩＮ部位が、配列番号５３１３〜５３１４からなる群から選択される配列を含む、自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
（項目１３６）
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を編集するための方法であって、項目１０２〜１３５のいずれかに記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系を投与するステップを含む、方法。
（項目１３７）
ＲＨＯ遺伝子内のＰ２３Ｈ変異を有する患者を処置するための方法であって、項目１０２〜１３５のいずれかに記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系を投与するステップを含む、方法。
（項目１３８）
項目１０２〜１３５のいずれかに記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系を含む、遺伝子改変細胞。
（項目１３９）
古細菌細胞、細菌細胞、真核生物細胞、真核生物単細胞生物、体細胞、生殖細胞、幹細胞、植物細胞、藻類細胞、動物細胞、無脊椎動物細胞、脊椎動物細胞、魚類細胞、カエル細胞、鳥類細胞、哺乳動物細胞、ブタ細胞、ウシ細胞、ヤギ細胞、ヒツジ細胞、げっ歯動物細胞、ラット細胞、マウス細胞、非ヒト霊長類細胞、およびヒト細胞からなる群から選択される、項目１３８に記載の遺伝子改変細胞。
（項目１４０）
細胞においてＣａｓ９発現を制御する方法であって、前記細胞を、項目１０２〜１３５のいずれか一項に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系と接触させるステップを含む、方法。
（項目１４１）
常染色体優性網膜色素変性を有する患者を処置するための治療であって、項目１０２〜１３５のいずれかに記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系を含む、治療。
（項目１４２）
ｉｎ  ｖｉｖｏで常染色体優性網膜色素変性を有する患者を処置するためのキットであって、
項目１０２〜１３５に記載の自己不活性化ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系と、
必要に応じて、１つまたは複数のドナー鋳型と
を含む、キット。