(57)【要約】  本発明は、アポトーシス阻害タンパク質（ＩＡＰ）に結合するＳＭＡＣタンパク質の阻害剤及び／又はＩＡＰに結合する活性化カスパーゼタンパク質の阻害剤として作用する式Ｉ2019518727.tif 000152の化合物、それらの製造、それらを含有する薬学的組成物、及び、単独又はＤＲ５／ＦＡＰアゴニスト抗体との組み合わせでの、治療的活性物質としてのそれらの使用を提供する。本発明の活性化合物は、がん、特に固形腫瘍の改善、治療又は制御に有用である。【選択図】なし
2019518727.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
2019518727.tif 000146
［式中、
Ａは、
2019518727.tif 000147
からなる群より選択され、
ｎは、０又は１であり、
Ｒ１は、Ｈ、ハロゲン又はＣ１−６−アルキルからなる群より選択され、
Ｒ２は、Ｈ、ハロゲン又はＣ１−６−アルキルからなる群より選択され、
Ｒ３は、Ｈ、ハロゲン又はＣ１−６−アルキルからなる群より選択され、
Ｒ４は、Ｃ１−６−アルキル、Ｃ１−６−アルコキシ−Ｃ１−６−アルキル又はＣ３−６−ヘテロシクロアルキルからなる群より選択され、
Ｒ５は、Ｈ、ハロゲン又はＣ１−６−アルキルからなる群より選択され、
Ｒ６は、Ｈ、ハロゲン又はＣ１−６−アルキルからなる群より選択され、
Ｌは、
2019518727.tif 000148
からなる群より選択され、
ｍは、１、２又は３であり、
ｋは、１、２又は３である］
の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
Ｒ１がＦである、請求項１に記載の式Ｉの化合物。
【請求項３】
ＡがＡ−１であり、Ｒ２及びＲ３がＦであり、Ｒ４が
2019518727.tif 000149
からなる群より選択される、請求項１又は２に記載の式Ｉの化合物。
【請求項４】
ＡがＡ−２であり、且つＲ５がＦであるか、又はＡがＡ−４であり、且つＲ６がＦである、請求項１又は２に記載の式Ｉの化合物。
【請求項５】
ＬがＬ−１、Ｌ−２又はＬ−３である、請求項１から４のいずれか一項に記載の式Ｉの化合物。
【請求項６】
ＬがＬ−４又はＬ−６である、請求項１から４のいずれか一項に記載の式Ｉの化合物。
【請求項７】
ＬがＬ−５であり、ｋが３である、請求項１から４のいずれか一項に記載の式Ｉの化合物。
【請求項８】
Ｎ−（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−５−イル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド、
（３Ｒ）−Ｎ−［２−［［（３Ｓ）−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパノイル］アミノ］−２−（オキサン−４−イル）アセチル］−１，３−ジヒドロイソインドール−５−イル］アミノ］−２−オキソエチル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−１−［２−［（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］−２Ｈ−インドール−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド、
（３Ｓ）−Ｎ−［２−［［（３Ｓ）−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパノイル］アミノ］−２−（オキサン−４−イル）アセチル］−１，３−ジヒドロインドール−５−イル］アミノ］−２−オキソエチル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−１−［２−［（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］−２Ｈ−インドール−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド、
（３Ｓ）−２−［（２Ｓ）−３，３−ジメチル−２−［［（２Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパノイル］アミノ］ブタノイル］−７−［［２−［［（３Ｓ）−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−１−［２−［（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］−２Ｈ−インドール−３−カルボニル］アミノ］アセチル］アミノ］−Ｎ−［（１Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−１−イル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド、
（３Ｓ）−２−［（２Ｓ）−３，３−ジメチル−２−［［（２Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパノイル］アミノ］ブタノイル］−７−［［２−［［（３Ｒ）−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−１−［２−［（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］−２Ｈ−インドール−３−カルボニル］アミノ］アセチル］アミノ］−Ｎ−［（１Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−１−イル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド、
（３Ｓ）−２−（（Ｓ）−３，３−ジメチル−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）ブタノイル）−７−（６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド）−Ｎ−（（Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−１−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド、
（３Ｓ）−２−（（Ｓ）−３，３−ジメチル−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）ブタノイル）−７−（２−（６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド）アセトアミド）−Ｎ−（（Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−１−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド、
（３Ｓ）−Ｎ−（２，６−ジフルオロフェニル）−７−（２−（６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド）アセトアミド）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド、
（Ｒ）−Ｎ−（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−５−イル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド、
（Ｒ，Ｒ，Ｒ）−Ｎ，Ｎ’−（エタン−１，２−ジイル）ビス（６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド）トリヒドロクロリド、
（Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−５−イル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド、
（Ｓ）−Ｎ−（２−（（（Ｓ）−１−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−２−オキソエチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド、
（Ｓ）−Ｎ−（２−（（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（２Ｓ，３Ｒ）−３−メトキシ−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）ブタノイル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−２−オキソエチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド、
（Ｓ）−Ｎ−（２−（（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（２Ｓ，３Ｓ）−３−メチル−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）ペンタノイル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−２−オキソエチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド、
（Ｓ）−Ｎ−（２−（（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−３，３−ジメチル−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）ブタノイル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−２−オキソエチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド、
（Ｓ）−Ｎ−（３−（（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−３−オキソプロピル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド、
（Ｓ）−Ｎ−（４−（（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−４−オキソブチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド、
Ｎ−（２−（（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−２−オキソエチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド、
Ｎ−（２−（４−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−１−カルボキサミド）ベンズアミド）エチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  ジヒドロクロリド、
Ｎ−（４−（（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−５−イル）カルバモイル）フェニル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド、
Ｎ−（４−（４−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−１−カルボキサミド）ベンズアミド）フェニル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド、及び
Ｎ１−（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−５−イル）−Ｎ３−（３−（６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−イル）プロピル）マロンアミド  トリヒドロクロリド
からなる群より選択される、請求項１から７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
治療的活性物質としての使用のための、請求項１から８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
がんの治療的及び／又は予防的処置における使用のための、請求項１から８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
式Ｉの二量体化合物の式Ｉ−ａ
2019518727.tif 000150
［式中、
Ｒ１は、Ｈ、ハロゲン又はＣ１−６−アルキルからなる群より選択され、
Ｒは、
2019518727.tif 000151
からなる群より選択される］
のモノマー。
【請求項１２】
アポトーシスインヒビタータンパク質（ＩＡＰ）に結合するＳＭＡＣタンパク質の阻害剤、及び／又は、がん、特に固形腫瘍の改善、処置又は制御の方法における二重特異性抗体との併用療法としての使用のためのＩＡＰに結合する活性カスパーゼタンパク質の阻害剤として機能する化合物であって、二重特異性抗体が、デスレセプター５（ＤＲ５）及び線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に結合し、ＤＲ５に特異的な少なくとも一の抗原結合部位と、ＦＡＰに特異的な少なくとも一の抗原結合部位とを含む、化合物。
【請求項１３】
アポトーシスインヒビタータンパク質（ＩＡＰ）に結合するＳＭＡＣタンパク質の阻害剤、及び／又は、請求項１２に記載のデスレセプター５（ＤＲ５）及び線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に結合する二重特異性抗体と組みあわせて、ＩＡＰに結合する活性カスパーゼタンパク質の阻害剤として機能する請求項１から８のいずれか一項に記載の式Ｉの化合物。
【請求項１４】
アポトーシスインヒビタータンパク質（ＩＡＰ）に結合するＳＭＡＣタンパク質の阻害剤、及び／又は、請求項１２に記載の二重特異性抗体との併用療法としての使用のためのＩＡＰに結合する活性カスパーゼタンパク質の阻害剤として機能する化合物であって、二重特異性抗体が、配列番号７のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域と配列番号８のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含むＤＲ５に特異的な少なくとも一の抗原結合部位と、配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含むＦＡＰに特異的な少なくとも一の抗原結合部位とを含む、化合物。
【請求項１５】
アポトーシスインヒビタータンパク質（ＩＡＰ）に結合するＳＭＡＣタンパク質の阻害剤、及び／又は、請求項１２に記載のデスレセプター５（ＤＲ５）及び線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に結合する二重特異性抗体と組み合わせてＩＡＰに結合する活性化カスパーゼタンパク質の阻害剤として機能する、請求項１から８のいずれか一項に記載の式Ｉの化合物であって、二重特異性抗体が、配列番号７のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域と配列番号８のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含むＤＲ５に特異的な少なくとも一の抗原結合部位と、配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含むＦＡＰに特異的な少なくとも一の抗原結合部位とを含む、化合物。
【請求項１６】
上に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アポトーシス阻害タンパク質（ＩＡＰ）に結合するＳＭＡＣタンパク質の阻害剤及び／又はＩＡＰに結合する活性化カスパーゼタンパク質の阻害剤として作用する二量体化合物に関する。これらの分子は、がん、特に固形腫瘍の改善、治療又は制御に有用である。それらは、ＤＲ５／ＦＡＰアゴニスト抗体のような他の薬剤と組み合わせることができる。
【０００２】
これらの化合物は、ＸＩＡＰ及びｃＩＡＰを含むＩＡＰタンパク質のＢＩＲ２又はＢＩＲ２及びＢＩＲ３領域に結合し、カスパーゼカスケードの活性化又は再活性化をもたらし、そのため、がんを含む増殖性疾患の治療に有用である。
【背景技術】
【０００３】
がんは、無制御な細胞増殖の疾患であり、腫瘍の局所増殖を起こし、また、遠隔転移を起こす可能性がある。がん細胞の増殖機構の一つは、アポトーシスすなわちプログラム細胞死の回避である。アポトーシス経路の変更は、例えば化学療法又は放射線療法等の標準的治療に対するがん細胞の耐性、並びにがんの発生及び進行に関連している。例えば、E. Dean et al., 「X-linked inhibitor of apoptosis protein as a therapeutic target」, Expert Opin. Ther. Targets (2007) 11 (11)：1459-1471を参照のこと。
【０００４】
アポトーシス細胞死のための二つの基本的な経路は、内因性経路及び外因性経路である。内因性アポトーシス経路は、細胞ストレス及び薬剤誘発性のＤＮＡ損傷を含む種々の機構によって開始されうる。外因性経路は、ケモカインによるデスレセプターの活性化によって開始されうる。いずれの経路の開始も、カスパーゼと呼ばれるプロテアーゼファミリーの活性化をもたらす。活性化されると、カスパーゼは、エフェクターカスパーゼ３及び７の活性化、並びに最終的な細胞死をもたらす事象のカスケードを生成する種々の基質を切断するように作用することができる。タンパク質のＩＡＰファミリーは、カスパーゼに結合してその活性を阻害することができ、ゆえにアポトーシスを阻害する。例えば、上掲のＤｅａｎ、１４６０を参照のこと。
【０００５】
ＩＡＰは、バキュロウイルスＩＡＰ反復（ＢＩＲ）ドメイン、ＢＩＲ１、ＢＩＲ２、及びＢＩＲ３と呼ばれる相同構造ドメインのコピーを三つまで含むことができる。プロトタイプＩＡＰであるｃＩＡＰ及びＸＩＡＰのＢＩＲ３ドメインは、活性化カスパーゼ９に結合してこれを阻害することができる。一方、ＢＩＲ２ドメインは、カスパーゼ３及び７に結合してそれらを阻害する。プロアポトーシスタンパク質のＳｍａｃ（ＤＩＡＢＬＯとしても知られている）は、活性化カスパーゼと競合するＩＡＰのＢＩＲ２ドメイン及びＢＩＲ３ドメインを遮断することができ、結果的に活性化カスパーゼをＩＡＰから放出し、アポトーシスプログラムを完了させる。例えば、S. Wang, 「Design of Small-Molecule Smac Mimetics as IAP Antagonists」, Current Topics in Microbiology and Immunology 348, DOI 10.1007/82_2010_111、pp. 89-113を参照のこと。
【０００６】
ペプチドや小分子は、ＸＩＡＰ及びｃＩＡＰのＢＩＲ３領域に結合してＳｍａｃタンパク質の作用を模倣し、活性化カスパーゼを放出することが報告されている。例えば、上掲のＤｅａｎ、及びM. Gyrd-Hanseら「IAPs：From caspase inhibitors to modulators of NF-κB、inflammation and cancer」, Nature Review/Cancer, August 2010, Vol 10:561-574を参照のこと。
【０００７】
ＸＩＡＰ阻害剤は、予め抵抗性のヒトがん細胞株をＤＲ５誘導性アポトーシスに強力に感作させることができる。
【０００８】
国際公開第２０１４０６０７７０号は、タンパク質のＩＡＰファミリー（ＩＡＰ）のアンタゴニストである可能性がある新規の二環式複素環に関する。国際公開第２０１４１６１８４５号は、ＤＲ５に特異的な少なくとも一の抗原結合部位と、ＦＡＰに特異的な少なくとも一の抗原結合部位とを含む二重特異性抗体、ＤＲ５に特異的な抗体、それらの製造のための方法、前記抗体を含有する薬学的組成物、及びそれらの使用に関する。
【０００９】
当該技術分野では、ＸＩＡＰ阻害剤を単独で、又はＤＲ５／ＦＡＰアゴニスト抗体と組み合わせて使用して、標的のがんのための有効な治療法を見出すことが、依然として問題である。
【発明の概要】
【００１０】
本発明の一態様は、式Ｉ：
2019518727.tif 000003
又はその薬学的に許容される塩であり、ここで、Ｌ、Ａ及びＲ１は本明細書に記載されるものである。
【００１１】
本発明はまた、一又は複数の本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体若しくは添加剤を含む薬学的組成物に関する。
【００１２】
本発明は、特に固形腫瘍を含むがん、例えば哺乳動物、特にヒトにおける肺、膵臓、結腸、乳房、骨、及び前立腺がんの改善、制御又は治療の方法にさらに関し、本発明による化合物又はその薬学的に許容される塩の治療的有効量を前記哺乳動物に投与することを含む。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】ＳＫ−ＯＶ−３細胞の細胞生存率アッセイにおけるＮ−（２−（（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−２−オキソエチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリドの単一薬剤活性を示す。
【図２】単一薬剤、及びＤＲ５−ＦＡＰ二重特異性抗体Ｘ  ＡＢ（ＦＡＰ−ＤＲ５濃度の漸増）との組み合わせとしての、ＨＣＴ−１１６細胞の細胞生存率アッセイにおけるＮ−（２−（（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−２−オキソエチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリドの活性を示す。
【図３】ＨＣＴ−１１６細胞の細胞生存率アッセイにおける、単一薬剤及び  ＤＲ５−ＦＡＰ二重特異性抗体Ｘ  ＡＢ  との組み合わせ（ＦＡＰ−ＤＲ５の固定濃度、１．５μｇ／ｍｌ）を使用）としての、Ｎ−（２−（（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−２−オキソエチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリドの活性を示す。
【図４】ＦＡＰ−ＤＲ５二重特異性抗体分子設計及び作用機序の略図を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
定義
別途定義しない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって通常理解されるものと同じ意味を有する。
【００１５】
本明細書において使用される以下の用語は、次のような定義を有する。
【００１６】
用語Ｃ１−６−アルキル」とは、単独で又は他の基と組み合わせて、１から６個の炭素原子の一価の直鎖状又は分岐状飽和炭化水素を意味する。例は、メチル（Ｍｅ）、エチル（Ｅｔ）、プロピル、イソプロピル、ブチル（ｎ−ブチルとしても知られる）、イソ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル等を含む。
【００１７】
用語「Ｃ１−６−アルコキシ」とは、単独で又は他の基と組み合わせて、直鎖状又は分岐状であっても、単一又は複数の分岐を有していてもよい−Ｏ−Ｃ１−６−アルキル基を表し、ここで、アルキル基は、一般に、１から６個の炭素原子を含み、例えば、これは、メトキシ（ＯＭｅ、ＭｅＯ）、エトキシ（ＯＥｔ）、プロポキシ、イソプロポキシ（ｉ−プロポキシ）、ｎ−ブトキシ、ｉ−ブトキシ（イソ−ブトキシ）、２−ブトキシ（ｓｅｃ−ブトキシ）、ｔ−ブトキシ（ｔｅｒｔ−ブトキシ）、イソペンチルオキシ（ｉ−ペンチルオキシ）等が挙げられる。特定の「Ｃ１−６−アルコキシ」は、１から４個の炭素原子を有する基、特に２−メトキシプロパニルである。
【００１８】
用語「Ｃ１−６−アルコキシ−Ｃ１−６−アルキル」とは、単独で又は他の基と組み合わせて、本明細書に記載されるような「Ｃ１−６−アルコキシ」により置換される本明細書に記載されるような「Ｃ１−６−アルキル」を意味する。例には-Ｃ（Ｈ，Ｍｅ）−ＯＭｅ等が含まれる。
【００１９】
用語「ハロゲン」とは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩから選択される原子を意味する。特定の実施態様ではハロゲンはＦを意味する。
【００２０】
用語「Ｃ３−６−ヘテロシクロアルキル」とは、単独で又は他の基と組み合わせて、少なくとも一のＯ、Ｎ又はＳのような、特に一つのＯのヘテロ原子を有する３から６員の炭素環を指す。具体的な例はテトラヒドロピラニルである。
【００２１】
用語「半数阻害濃度」（ＩＣ５０）は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで生物学的プロセスの５０％阻害を得るために必要な特定の化合物の濃度を意味する。ＩＣ５０値は、ｐＩＣ５０値（−ｌｏｇ  ＩＣ５０）に対数的に変換することができ、ここで、値が高ければ高いほど、指数関数的により大きな効力を示す。ＩＣ５０値は、絶対値ではなく、実験条件、例えば用いられる濃度に依存する。ＩＣ５０値は、Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ式を用いて絶対阻害定数（Ｋｉ）に変換することができる（Biochem. Pharmacol. (1973) 22：3099）。Pharmacol. 1973：22：3099。用語「阻害定数（Ｋｉ）」は、受容体に対する特定の阻害剤の絶対結合親和性を示す。それは、競合結合アッセイを用いて測定され、競合リガンド（例えば放射性リガンド）が存在しない場合に特定の阻害剤が受容体の５０％を占める濃度に等しい。Ｋｉ値は、ｐＫｉ値へと対数的に変換することができ（−ｌｏｇ  Ｋｉ）、高い値ほど指数関数的により大きな効力を示す。
【００２２】
「治療的有効量」とは、病状を治療するために対象に投与されるとき、病状についてそのような治療を行うのに十分な化合物の量を意味する。「治療的有効量」は、化合物、治療される病状、治療される重症度又は疾患、対象の年齢及び相対的健康度、投与の経路及び形態、担当の医師又は獣医師の判断、及び他の要因に応じて変化するだろう。
【００２３】
薬学的に許容される担体、添加剤等の「薬学的に許容される」とは、特定の化合物が投与される対象に対して薬理学的に許容され、実質的に非毒性であることを意味する。
【００２４】
「薬学的に許容される塩」は、本発明の化合物の生物学的有効性及び特性を保持しており、かつ好適な非毒性の有機酸若しくは無機酸又は有機塩基若しくは無機塩基から形成される一般的な酸付加塩又は塩基付加塩を指す。酸付加塩の例は、無機酸、例えば塩化水素酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、及び硝酸から誘導されるもの、並びに有機酸、例えばｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、コハク酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸、トリフルオロ酢酸等から誘導されるものを含む。塩基付加塩の例は、アンモニウム、カリウム、ナトリウム、及び第四級アンモニウム水酸化物、例えばテトラメチルアンモニウム水酸化物から誘導されるものを含む。薬学的化合物（すなわち薬物）の塩への化学的修飾は、化合物の物理的及び化学的安定性、吸湿性、流動性及び溶解性の向上を得るための、薬化学者にとってよく知られた技術である。例えば、Ａｎｓｅｌら、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（１９９５）の４５６〜４５７頁を参照されたい。
【００２５】
本願で用いられるように、式又は基に置換基がない場合、それは、原子価が完全には満たされておらず、欠けている置換基はＨであると推定される。
【００２６】
不斉炭素が化学構造中に存在するときはいつでも、その不斉炭素に付随するすべての立体異性体は、構造によって純粋な立体異性体及びその混合物として包含されることが意図される。
【００２７】
本発明はまた、薬学的組成物、上記化合物の使用方法及び上記化合物の調製方法も提供する。
【００２８】
用語「デスレセプター５（ＤＲ５）及び線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に特異的に結合する二重特異性抗体」とは、ＤＲ５及びＦＡＰを発現する細胞の標的化において、抗体が診断薬及び／又は治療剤として有用であるように、十分な親和性でＤＲ５及びＦＡＰに結合可能な二重特異性抗体を指す。特に「デスレセプター５（ＤＲ５）及び線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に特異的に結合する二重特異性抗体」とは、腫瘍細胞上のＤＲ５及び前記腫瘍を囲む基質中のＦＡＰを標的化する二重特異性抗体を指す。一実施態様では、デスレセプター５（ＤＲ５）及び線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）を無関係の、非ＦＡＰ又は非ＤＲ５タンパク質に特異的に結合する二重特異性抗体の結合度は、例えば酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）に基づくアッセイ（例えばＢｉａｃｏｒｅ）又はフローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）により測定された場合、ＤＲ５又はＦＡＰへの抗体の結合の約１０％未満である。特定の実施態様では、デスレセプター（ＤＲ５）及び線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に特異的に結合する二重特異性抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば１０−８Ｍ以下、例えば１０−８Ｍから１０−１３Ｍ、例えば１０−９Ｍから１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。特定の実施態様では、デスレセプター５（ＤＲ５）及び線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に特異的に結合する二重特異性抗体は、異なる種からＤＲ５又はＦＡＰの間で保存されるＤＲ５又はＦＡＰのエピトープに結合する。好ましくは、前記二重特異性抗体は、ヒト及びカニクイザルＤＲ５と、ヒト、カニクイザル及びマウスＦＡＰとに結合する。
【００２９】
用語「デスレセプター（ＤＲ５）に特異的に結合する抗体」とは、ＤＲ５を発現する細胞の標的化において診断薬及び／又は治療剤として抗体が有用であるように、十分な親和性でＤＲ５に結合可能な抗体を指す。一実施態様において、デスレセプター（ＤＲ５）の、無関係な、非ＤＲ５タンパク質への結合度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）又はフローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）によって測定される場合、抗体のＤＲ５への結合の約１０％未満である。特定の実施態様では、ＤＲ５に結合する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば１０−８Ｍ以下、例えば１０−８Ｍから１０−１３Ｍ、例えば１０−９Ｍから１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。特定の実施態様では、デスレセプター５（ＤＲ５）に特異的に結合する抗体は、異なる種からＤＲ５の間で保存されるＤＲ５のエピトープに結合する。特に、前記抗体は、ヒト及びカニクイザルＤＲ５に結合する。用語「デスレセプター５（ＤＲ５）に特異的に結合する抗体」とは、ＤＲ５と第２の抗原を結合可能な二重特異性抗体も包含する。
【００３０】
本明細書における用語「抗体」とは最も広い意味で用いられ、種々の抗体構造を包含し、限定されるものではないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば二重特異性抗体）、及び、所望の抗原結合活性を示す限り、抗体断片を含む。
【００３１】
用語「抗体断片」とは、インタクトな抗体が結合する抗原に結合するインタクトな抗体の一部分を含む、インタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例には、限定されないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；ダイアボディ、交差Ｆａｂ断片；直鎖状抗体；単鎖抗体分子（例えばｓｃＦｖ）；及び抗体断片から形成された多重特異性抗体が含まれる。ｓｃＦｖ抗体は、例えばHouston, J.S., Methods in Enzymol. 203 (1991) 46-96に記載されている。加えて、抗体断片は、ＶＨドメインの特性を有する、つまり、ＶＬドメインと一緒に、又はＶＬドメインの特性を有する、つまりＶＨドメインと一緒に、機能性抗原結合部位に集合することができ、それによって完全長抗体の抗原結合特性を提供する単鎖ポリペプチドを含む。
【００３２】
用語「Ｆａｂ断片」とは、ＶＬドメイン及び軽鎖（ＣＬ）の定常ドメインと、ＶＨドメイン及び重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）とを含む軽鎖断片を含む抗体断片を指す。本発明の二重特異性抗体の一実施態様は、少なくとも一のＦａｂ断片を含み、ここで、重鎖及び軽鎖の可変領域又は定常領域のいずれかは交換される。可変領域又は定常領域のいずれかの交換により、前記Ｆａｂ断片は、「交差Ｆａｂ断片」又は「ｘＦａｂ断片」又は「クロスオーバーＦａｂ断片」とも呼ばれる。クロスオーバーＦａｂ分子の二つの異なる鎖組成が可能であり、本発明の二重特異性抗体に含まれる。対して、Ｆａｂ重鎖及び軽鎖の可変領域は交換されており、即ち、クロスオーバーＦａｂ分子は、軽鎖可変領域（ＶＬ）と重鎖定常領域（ＣＨ１）からなるペプチド鎖、及び重鎖可変領域（ＶＨ）と軽鎖定常領域（ＣＬ）からなるペプチド鎖を含んでいる。このクロスオーバーＦａｂ分子は、ＣｒｏｓｓＦａｂ（ＶＬＶＨ）とも呼ばれる。対して、Ｆａｂ重鎖及び軽鎖の定常領域が交換されている場合、クロスオーバーＦａｂ分子は、重鎖可変領域（ＶＨ）と軽鎖定常領域（ＣＬ）からなるペプチド鎖、及び軽鎖可変領域（ＶＬ）と重鎖定常領域（ＣＨ１）からなるペプチド鎖を含んでいる。このクロスオーバー分子は、ＣｒｏｓｓＦａｂ（ＣＬＣＨ１）とも呼ばれる。クロスオーバーＦａｂ断片を含む二重特異性抗体フォーマットは、例えば国際公開第２００９／０８０２５２号、同第２００９／０８０２５３号、同第２００９／０８０２５１号、同第２００９／０８０２５４号、同第２０１０／１３６１７２号、同第２０１０／１４５７９２号及び同第２０１３／０２６８３１号に記載されている。
【００３３】
用語「単一鎖Ｆａｂ断片」又は「ｓｃＦａｂ」とは、抗体重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、抗体定常ドメイン１（ＣＨ１）、抗体軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、抗体軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）及びリンカーからなるポリペプチドであり、ここで、前記抗体ドメイン及び前記ドメインは、Ｎ末端からＣ末端方向において以下：ａ）ＶＨ−ＣＨ１−リンカー−ＶＬ−ＣＬ、ｂ）ＶＬ−ＣＬ−リンカー−ＶＨ−ＣＨ１、ｃ）ＶＨ−ＣＬ−リンカー−ＶＬ−ＣＨ１又はｄ）ＶＬ−ＣＨ１−リンカー−ＶＨ−ＣＬのうちの一つを有し；ここで、前記リンカーは、少なくとも３０のアミノ酸、好ましくは３２から５０の間のアミノ酸のポリペプチドである。前記単一鎖Ｆａｂ断片ａ）ＶＨ−ＣＨ１−リンカー−ＶＬ−ＣＬ、ｂ）ＶＬ−ＣＬ−リンカー−ＶＨ−ＣＨ１、ｃ）ＶＨ−ＣＬ−リンカー−ＶＬ−ＣＨ１及びｄ）ＶＬ−ＣＨ１−リンカー−ＶＨ−ＣＬは、ＣＬドメインとＣＨ１ドメインとの間の天然ジスルフィド結合を介して安定化される。加えて、これらの単一鎖Ｆａｂ分子は、システイン残基（例えばＫａｂａｔ番号付けによる可変重鎖の４４位及び可変軽鎖の１００位）の挿入を介した鎖間ジスルフィド結合の生成により、さらに安定化されることがある。
【００３４】
用語「Ｎ末端」とは、Ｎ末端の最後のアミノ酸を意味する。用語「Ｃ末端」とは、Ｃ末端の最後のアミノ酸を意味する。
【００３５】
参照抗体と「同じエピトープに結合する抗体」という語句は、 競合アッセイにおいて、参照抗体のその抗原に対する結合を５０％以上阻害する抗体を指し、逆に参照抗体は、競合アッセイにおいて、抗体のその抗原に対する結合を５０％以上阻害する。例示的な競合アッセイが、本明細書において提供される。
【００３６】
用語「抗原結合ドメイン」は、抗原の一部又は全部に特異的に結合し、且つ抗原の一部又は全部に相補的な領域を含む抗体結合分子の部分を指す。抗原が大きい場合、抗原結合分子は、エピトープと呼ばれる抗原の特定部分にのみ結合しうる。抗原結合ドメインは、例えば、一又は複数の抗体可変ドメイン（抗体可変領域とも呼ばれる）により提供されうる。好ましくは、抗原結合ドメインは、抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）及び抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。
【００３７】
用語「キメラ」抗体は、重鎖及び／又は軽鎖の一部分が特定の起源又は種に由来し、一方重鎖及び／又は軽鎖の残りは、通常組換えＤＮＡ技術により調製される異なる起源又は種に由来する抗体を指す。ウサギ可変領域及びヒト定常領域を含むキメラ抗体が好ましい。本発明により包含される「キメラ抗体」の他の好ましい形態は、特にＣ１ｑ結合及び／又はＦｃ受容体（ＦｃＲ）結合に関して本発明による特性を産むように定常領域が修飾されているもの又は元の抗体から変更されているものである。そのようなキメラ抗体は、「クラススイッチ抗体」とも称される。キメラ抗体は、免疫グロブリン可変領域をコードするＤＮＡセグメントと、免疫グロブリン定常領域をコードするＤＮＡセグメントとを含む、発現された免疫グロブリン遺伝子の産物である。キメラ抗体を作製するための方法は、一般的な組換えＤＮＡを含み、遺伝子トランスフェクション技術は当該技術分野でよく知られている。例えば、Morrison, S.L. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81 (1984) 6851-6855；米国特許第５２０２２３８号及び同第５２０４２４４号を参照のこと。
【００３８】
用語「エフェクター機能」とは、抗体のアイソタイプにより変わる、抗体のＦｃ領域に起因しうる生物学的活性を指す。抗体エフェクター機能の例には：Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）；サイトカイン分泌；抗原提示細胞による免疫複合体媒介抗原取り込み；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御；及びＢ細胞の活性化が含まれる。
【００３９】
用語「改変する、改変された、改変」は、ペプチド骨格のいずれかの操作、又は天然に存在するポリペプチド若しくは組み換えポリペプチド若しくはその断片の翻訳後修飾を含むと考慮される。改変には、アミノ酸配列、グリコシル化パターン、又は個々のアミノ酸の側鎖基の修飾と、このような手法の組合せが含まれる。
【００４０】
本明細書で使用される用語「アミノ酸変異」は、アミノ酸の置換、欠失、挿入、及び修飾を包含することを意図している。置換、欠失、挿入、及び修飾のあらゆる組み合わせは、最終的なコンストラクトが所望の特性、例えば、Ｆｃ受容体に対する結合の低減、又は別のペプチドとの会合の増大を保持することを前提に、最終的なコンストラクトに到達するために行うことができる。アミノ酸配列の欠失及び挿入には、アミノ末端及び／又はカルボキシ末端の欠失、並びにアミノ酸の挿入が含まれる。特定のアミノ酸変異はアミノ酸の置換である。Ｆｃ領域の結合特性などを変更する目的で、非保存的アミノ酸置換、即ち、一のアミノ酸を、異なる構造及び／又は化学特性を有する別のアミノ酸で置換することは、特に好ましい。アミノ酸置換には、２０の標準のアミノ酸（例えば、４−ヒドロキシプロリン、３−メチルヒスチジン、オルニチン、ホモセリン、５−ヒドロキシリジン）の天然に存在するアミノ酸誘導体又は天然に存在しないアミノ酸による置き換えが含まれる。アミノ酸変異体は、当技術分野で周知の遺伝学的方法又は化学的方法を用いて生成することができる。遺伝学的方法は、部位特異的変異原性、ＰＣＲ、遺伝子合成などを含みうる。遺伝学的改変以外の方法、例えば化学的修飾によるアミノ酸の側鎖基の変更方法も有用でありうると考えられる。本明細書では、同じアミノ酸変異を示すために、種々の表記が使用される。例えば、Ｆｃドメインの３２９位におけるプロリンからグリシンへの置換は、３２９Ｇ、Ｇ３２９、Ｇ３２９、Ｐ３２９Ｇ、又はＰｒｏ３２９Ｇｌｙとして示される。
【００４１】
本明細書の用語「Ｆｃドメイン」又は「Ｆｃ領域」は、定常領域の少なくとも一部を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。この用語は、天然配列Ｆｃ領域及び変異体Ｆｃ領域を含む。ＩｇＧ重鎖のＦｃ領域の境界はわずかに変化しうるが、通常、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域はＣｙｓ２２６又はＰｒｏ２３０から重鎖のカルボキシル末端まで延びると定義される。しかしながら、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、存在しても、存在してなくともよい。本明細書に別途指定のない限り、Ｆｃ領域又は定常領域内のアミノ酸残基の番号付けは、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991に記載されるように、ＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵ番号付けシステムに従う。Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991。本明細書において使用されるＦｃドメインの「サブユニット」は、二量体Ｆｃドメインを形成する二つのポリペプチドの一方、即ち、免疫グロブリン重鎖のＣ末端定常領域を含み、安定な自己会合能を有するポリペプチドを指す。例えば、ＩｇＧ  Ｆｃドメインのサブユニットは、ＩｇＧ  ＣＨ２及びＩｇＧ  ＣＨ３定常ドメインを含む。
【００４２】
「Ｆｃドメインの第１及び第２のサブユニットの会合を促す修飾」という語句は、Ｆｃドメインのサブユニットを含むポリペプチドの、同一のポリペプチドとの会合によるホモダイマーの形成を低減又は抑制する、ペプチド骨格の操作又はＦｃドメインサブユニットの翻訳後修飾を意味する。本明細書において使用される会合を促す修飾には、特に、会合することが望ましい二つのＦｃドメインサブユニット（即ち、Ｆｃドメインの第１及び第２のサブユニット）の各々に対して行われる別々の修飾が含まれ、これらの修飾は、二つのＦｃドメインサブユニットの会合を促進するために互いに相補的である。例えば、会合を促す修飾は、Ｆｃドメインサブユニットの一方又は両方の構造又は電荷を変化させることにより、それらの会合を、それぞれ立体的に又は静電的に好ましいものにすることができる。このように、（ヘテロ）二量体化は、第１のＦｃドメインサブユニットを含むポリペプチドと、第２のＦｃドメインサブユニットを含むポリペプチドとの間で起こり、これらのポリペプチドは、サブユニットの各々に融合したさらなる成分（例えば、抗原結合部分）が同じでないという意味で非同一でありうる。いくつかの実施態様では、会合を促す修飾は、Ｆｃドメイン内におけるアミノ酸変異、特にアミノ酸置換を含む。特定の実施態様では、会合を促す修飾は、Ｆｃドメインの二つのサブユニットの各々における別々のアミノ酸変異、特にアミノ酸置換を含む。
【００４３】
用語「完全長抗体」、「インタクトな抗体」、及び「全抗体」は、本明細書中で互換的に使用され、天然型抗体構造と実質的に類似の構造を有するか、又は本明細書で定義されるＦｃ領域を含む重鎖を有する抗体を指す。
【００４４】
用語「ヒト抗体」とは、ヒト若しくはヒト細胞により産生されるか、又はヒト抗体のレパートリー若しくは他のヒト抗体をコードする配列を利用した非ヒト起源に由来する抗体のものに対応するアミノ酸配列を有するものである。ヒト抗体のこの定義は、特に非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を除外する。本発明によるキメラ及びヒト化抗体に関しても言及されるように、本明細書で使用される用語「ヒト抗体」とは、特に、例えば「クラススイッチ」つまり、Ｆｃ部分の変化又は変異（例えばＩｇＧ１からＩｇＧ４及び／又はＩｇＧ１／ＩｇＧ４変異）によるＣ１ｑ結合及び／又はＦｃＲ結合に関して、定常領域で修飾されて、本発明による特性を生成するそのような抗体も含む。
【００４５】
用語「ヒト化」抗体とは、非ヒトＨＶＲのアミノ酸残基及びヒトＦＲのアミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。特定の実施態様において、ヒト化抗体は、少なくとも一つ、典型的には二つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、ＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）のすべて又は実質的にすべてが、非ヒト抗体のものに対応し、ＦＲのすべて又は実質的にすべてが、ヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は、場合によって、ヒト抗体由来の抗体定常領域の少なくとも一部を含んでもよい。抗体の「ヒト化型」、例えば、非ヒト抗体は、ヒト化を遂げた抗体を指す。本発明により包含される「ヒト化抗体」の他の形態は、特にＣ１ｑ結合及び／又はＦｃ受容体（ＦｃＲ）結合に関して本発明による特性を産むように定常領域が追加的に修飾されているもの又は元の抗体から変更されているものである。
【００４６】
本明細書で使用される用語「超可変領域」又は「ＨＶＲ」は、配列が超可変であるか、且つ／又は構造的に定義されたループ（「超可変ループ」）を形成する抗体可変ドメインの各領域を指す。一般的に、天然型４鎖抗体は、ＶＨに三つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、及びＶＬに三つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）、計六つのＨＶＲを含む。ＨＶＲは、一般的に超可変ループ由来及び／又は相補性決定領域（ＣＤＲ）由来のアミノ酸残基を含み、後者は、最高の配列可変性を有し、及び／又は抗原認識に関与している。例示的な超可変ループは、アミノ酸残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）、９１〜９６（Ｌ３）、２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）、及び９６〜１０１に生じる（Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)）。例示的なＣＤＲ（ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３）は、アミノ酸残基Ｌ１の２４−３４、Ｌ２の５０−５６、Ｌ３の８９−９７、Ｈ１の３１−３５Ｂ、Ｈ２の５０−６５、及びＨ３の９５−１０２に生じる（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD(1991)）。超可変領域(HVR)は、相補性決定領域(CDR)とも呼ばれ、これらの用語は、抗原結合領域を形成する可変領域の部分に言及して本明細書では交換可能に使用される。このような特定の領域は、Kabat et al., U.S. Dept. of Health and Human Services, 「Sequences of Proteins of Immunological Interest」(1983) and by Chothia et al., J Mol Biol 196：901-917 (1987)に記載されており、その定義には、互いに比較されたときのアミノ酸残基の重複又はサブセットが含まれる。それでも、抗体又はその変異体のCDRに言及していずれかの定義が適用される場合、本明細書において定義及び使用される用語の範囲に含まれることが意図されている。上記文献の各々により定義されるCDRを包含する適切なアミノ酸残基は、比較として以下の表Aに明記される。特定のCDＲを包含する正確な残基数は、ＣＤＲの配列及び大きさに応じて変化するであろう。当業者であれば、抗体の可変領域のアミノ酸配列を前提に、いずれの残基が特定のＣＤＲを含むかを、常套的に決定することができる。
2019518727.tif 000004
１  表ＡのすべてのＣＤＲの定義の番号付けは、Ｋａｂａｔら（以下参照）によって規定された番号付けの慣習に従っている。
２  表Ａにおいて使用されている小文字の「ｂ」を含む「ＡｂＭ」は、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒの「ＡｂＭ」抗体モデル化ソフトウェアによって定義されるＣＤＲを指す。
【００４７】
Ｋａｂａｔらは、あらゆる抗体に適用可能な可変領域配列の番号付けシステムも定義した。当業者であれば、配列自体を超える実験データに頼らなくとも、この「Ｋａｂａｔ番号付け」のシステムをあらゆる可変領域配列に明確に割り当てることができる。ここで使用される「Ｋａｂａｔ番号付け」は、Kabat et al., U.S. Dept. of Health and Human Services, 「Sequence of Proteins of Immunological Interest」(1983)によって規定された番号付けシステムを指す。特に断らない限り、抗体可変領域内における特定のアミノ酸残基の位置の番号付けへの言及は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従っている。
【００４８】
ＶＨのＣＤＲ１を除いて、ＣＤＲは一般的に超可変ループを形成するアミノ酸残基を含む。ＣＤＲは、抗原に接触する残基である「特異性決定残基」又は「ＳＤＲ」を含む。ＳＤＲは、略称（ａｂｂｒｅｖｉａｔｅｄ−）ＣＤＲ、又はａ−ＣＤＲと呼ばれるＣＤＲの領域内に含まれている。例示的なａ−ＣＤＲ（ａ−ＣＤＲ−Ｌ１、ａ−ＣＤＲ−Ｌ２、ａ−ＣＤＲ−Ｌ３、ａ−ＣＤＲ−Ｈ１、ａ−ＣＤＲ−Ｈ２、及びａ−ＣＤＲ−Ｈ３）は、アミノ酸残基Ｌ１の３１−３４、Ｌ２の５０−５５、Ｌ３の８９−９６、Ｈ１の３１−３５Ｂ、Ｈ２の５０−５８、及びＨ３の９５−１０２に生じる。（Almagro and Fransson、Front. Biosci. 13:1619-1633(2008)参照。）特に断らない限り、可変ドメイン内のＨＶＲ残基及び他の残基（例えば、ＦＲ残基）は、本明細書では上掲のＫａｂａｔらに従って番号が付けられる。
【００４９】
「単離された」抗体とは、その自然環境の成分から分離されたものである。いくつかの実施態様において、抗体は、例えば、電気泳動（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）又はクロマトグラフィー（例えば、イオン交換又は逆相ＨＰＬＣ）により決定される場合、９５％又は９９％を上回る純度に精製される。抗体純度の評価法の総説としては、例えばFlatman et al., J. Chromatogr. B 848:79-87 (2007)を参照のこと。
【００５０】
本明細書で使用される用語「モノクローナル抗体」とは、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を意味し、即ち、例えば、天然に生じる変異を含むか又はモノクローナル抗体調製物の製造時に発生し、一般的に少量で存在している可能性のある変異体抗体を除き、集団を構成する個々の抗体は同一であり、及び／又は同じエピトープに結合する。異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を通常含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対するものである。したがって、修飾語「モノクローナル」は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の製造を必要とするものとして解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、限定されるものではないが、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部又は一部を含有するトランスジェニック動物を利用する方法を含む様々な技術によって作製することができ、モノクローナル抗体を作製するためのこれらの方法及びその他の例示的な方法は本明細書に記載されている。
【００５１】
用語「ネイキッド抗体」とは、異種の部分（例えば、細胞傷害性部分）又は放射性標識にコンジュゲートしていない抗体を指す。ネイキッド抗体は薬学的製剤中に存在してもよい。
【００５２】
用語「天然型の抗体」とは、天然に生じる、様々な構造をとる免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然型のＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合している二つの同一の軽鎖と二つの同一の重鎖からなる約１５００００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。各重鎖は、Ｎ末端からＣ末端にかけて、可変重鎖ドメイン又は重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）、続いて三つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）を有する。同様に、各軽鎖は、Ｎ末端からＣ末端にかけて、可変軽鎖ドメイン又は軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）、続いて定常軽鎖（ＣＬ）ドメインを有する。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）とラムダ（λ）と呼ばれる、二つの種類のうちのいずれかに割り当てることができる。
【００５３】
「添付文書」という用語は、治療製品の商品包装に通例含まれる説明書を指すのに用いられ、そのような治療製品の適応症、用法、用量、投与、併用療法、使用に関する禁忌及び／又は注意事項についての情報を含む。
【００５４】
「実質的に交差反応性はない」という語句は、分子（例えば抗体）が、特に標的抗原と比較したとき、分子の実際の用的抗原とは異なる抗原（例えば標的抗原に密接に関係する抗原）を認識しないか、又はそれに特異的に結合することを意味する。例えば、抗体は、実際の標的抗原とは異なる抗原に約１０％未満から約５％未満結合しうるか、又は、前記実際の標的抗原とは異なる抗原に、約１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．２％若しくは０．１％未満からなる量で、好ましくは約２％、１％若しくは０．５％未満、最も好ましくは約０．２％又は０．１％未満の実際の標的抗原とは異なる抗原に結合しうる。
【００５５】
参照ポリペプチド配列に関する語句「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」は、配列を整列させ、最大のパーセント配列同一性を得るために必要ならば間隙を導入した後、いかなる保存的置換も配列同一性の一部と考えないとした場合の、参照ポリペプチドのアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセントとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的のためのアラインメントは、当分野の技術の範囲内にある種々の方法、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアのような公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成することができる。当業者であれば、比較する配列の全長にわたって最大のアライメントを達成するのに必要な任意のアルゴリズムを含めた、配列を整列させるための適切なパラメータを決定することができる。しかしながら、ここでの目的のためには、％アミノ酸配列同一性の値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ−２を使用して生成される。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータプログラムはジェネンテック社によって作製され、ソースコードは米国著作権庁、ワシントンＤ．Ｃ．，２０５５９に使用者用書類とともに提出され、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７の下で登録されている。ＡＬＩＧＮ−２は、ジェネンテック社（South San Francisco, California）から公的に入手可能であり、又はそのソースコードからコンパイルしてもよい。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、デジタルＵＮＩＸのＶ４．０Ｄを含む、ＵＮＩＸオペレーティングシステム上での使用のためにコンパイルされるべきである。すべての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ−２プログラムによって設定されて変動しない。
【００５６】
アミノ酸配列比較にＡＬＩＧＮ−２が用いられる状況では、所与のアミノ酸配列Ｂとの又はそれに対する、所与のアミノ酸配列Ａのアミノ酸配列同一性％（あるいは、所与のアミノ酸配列Ｂと若しくはそれに対して、ある程度のアミノ酸配列同一性％を有するか又は含む所与のアミノ酸配列Ａと言うこともできる）は次のように計算される：
１００×分率Ｘ／Ｙ、
ここで、Ｘは配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ−２により、ＡとＢのそのプログラムのアラインメントにおいて同一であるとして一致したスコアのアミノ酸残基の数であり、ＹはＢの全アミノ酸残基数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと異なる場合、ＡのＢに対する％アミノ酸配列同一性は、ＢのＡに対する％アミノ酸配列同一性とは異なることは理解されるであろう。特に断らない限り、本明細書で使用されるすべての％アミノ酸配列同一性値は、ＡＬＩＧＮ−２コンピュータプログラムを使用して、直前の段落で説明したように得られる。
【００５７】
特に断らない限り、本明細書で使用される用語「デスレセプター（ＤＲ５）」は、霊長類（例えばヒト）及びげっ歯類（例えば、マウス、ラット）などの哺乳動物を含む任意の脊椎動物由来の任意の天然型ＤＲ５を指す。用語は、「完全長」の、未処理のＤＲ５並びに細胞内でのプロセシングから生じた任意の形態のＤＲ５を包含する。この用語は、天然に存在するＤＲ５の変異体、例えば、スプライス変異体又は対立遺伝子変異体も包含する。例示的なヒトＤＲ５のアミノ酸配列は、国際公開第２０１１／０３９１２６号に記載されている。
【００５８】
特に断らない限り、本明細書で使用される用語「線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）」は、霊長類（例えばヒト）及びげっ歯類（例えば、マウス、ラット）などの哺乳動物を含む任意の脊椎動物由来の任意の天然型ＦＡＰを指す。用語は、「完全長」の、未処理のＦＡＰ並びに細胞内でのプロセシングから生じた任意の形態のＦＡＰを包含する。この用語は、天然に存在するＦＡＰの変異体、例えば、スプライス変異体又は対立遺伝子変異体も包含する。好ましくは、本発明の抗ＦＡＰ抗体は、ＦＡＰの細胞外ドメインに結合する。例示的なＦＡＰポリペプチド配列のアミノ酸配列（ヒトＦＡＰの配列を含む）は、国際公開第２０１２／０２０００６号に開示されている。
【００５９】
本明細書で使用される用語、がんとは、がんのような増殖性疾患、例えば結腸直腸がん、肉腫、頭部及び頸部がん、扁平上皮癌、乳がん、膵臓がん、胃がん、非小細胞肺癌、小細胞肺がん及び中皮腫（上記がんのいずれかの難治性型を含む）、又は上記がんの一又は複数の組み合わせを指す。一実施態様では、一実施態様では、がんは結腸直腸がんであり、任意選択的に化学療法剤はイリノテカンである。本明細書で使用される「肉腫」とは、結合組織で成長するがんの種類を指す。肉腫は、消化管間質腫瘍（胃及び消化管にみられる軟部組織肉腫の一種、一般的にはＧＩＳＴとして知られる）、軟部組織肉腫（例えば平滑筋肉腫、線維芽細胞肉腫、脂肪肉腫、カポジ肉腫（ＫＳ）、血管肉腫、悪性抹消神経鞘腫瘍（ＭＰＮＳＴ）、滑膜肉腫、横紋筋肉腫）及び骨肉腫（例えば軟骨肉腫、骨肉腫、ユーイング肉腫、脊索腫）を含む。
【００６０】
用語「可変領域」又は「可変ドメイン」は、抗体の抗原への結合に関与する抗体の重鎖又は軽鎖のドメインを指す。通常、天然型抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれＶＨ及びＶＬ）は、各々が四つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）と三つの超可変領域（ＨＶＲ）とを含む類似構造を有する。（例えば、Kindt et al., Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91(2007)を参照されたい。）抗原結合特異性を付与するには、単一のＶＨ又はＶＬドメインで十分である。さらに、特定の抗原に結合する抗体を、その抗原に特異的に結合する抗体に由来するＶＨドメイン又はＶＬドメインを用いて単離し、相補的なＶＬドメイン又はＶＨドメインそれぞれのライブラリーをスクリーニングすることができる。例えば、Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887(1993)；Clarkson et al., Nature 352:624-628(1991)を参照。
【００６１】
本明細書において使用される場合、「抗体の抗原結合部位」という用語は、抗原結合に関与する、抗体のアミノ酸残基を指す。抗体の抗原結合部分は、「相補性決定領域」すなわち「ＣＤＲ」のアミノ酸残基を含む。「フレームワーク」すなわち「ＦＲ」領域は、本明細書で定義される超可変領域残基以外の可変ドメイン領域である。したがって、抗体の軽鎖及び重鎖の可変ドメインは、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４を含む。特に、重鎖のＣＤＲ３は、抗原結合に最も寄与する領域であり、抗体の特性を定義する。ＣＤＲ及びＦＲ領域は、Kabat, et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD(1991)の標準定義によって決定される、及び／又は「超可変ループ」由来のそれらの残留物である。
【００６２】
抗体特異性とは、抗原の特定のエピトープのための抗体の選択的な認識を指す。例えば、天然抗体は単一特異的である。本発明による「二重特異性抗体」とは、二つの異なる抗原結合特異性を有する抗体である。本発明の抗体は、二つの異なる抗原、すなわち第１の抗原としてのＤＲ５と第２の抗原としてのＦＡＰとに特異的である。
【００６３】
本明細書で使用される用語「単一特異性」抗体とは、それぞれが同一の抗原の同一のエピトープに結合する一又は複数の結合部位を有する抗体を意味する。
【００６４】
本明細書で使用される用語「二重特異性」抗体とは、それぞれが同一の抗原又は異なる抗原の異なるエピトープに結合する少なくとも二つの結合部位を有する抗体を意味する。
【００６５】
本明細書に提供される抗体は、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも二つの異なる部位に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。本明細書で提供されるものは、ＦＡＰ及びＤＲ５に対して結合特異性を有する二重特異性抗体である。特定の実施態様において、二重特異性抗体は、ＤＲ５の二の異なるエピトープに結合することができる。二重特異性抗体はまた、ＤＲ５を発現する細胞に対して細胞傷害性剤を局在化させるために用いてもよい。二重特異性抗体は、完全長抗体又は抗体断片として調製することができる。
【００６６】
多重特異性抗体を作製するための技術には、限定されないが、異なる特異性を有する二つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の組み換え共発現（Milstein and Cuello, Nature 305：537 (1983)、国際公開第９３／０８８２９号、及びTraunecker et al.、EMBO J. 10：3655 (1991)を参照）及び「ｋｎｏｂ−ｉｎ−ｈｏｌｅ」エンジニアリング（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号を参照）が含まれる。多重特異抗体はまた、抗体のＦｃ−ヘテロ二量体分子を作成するための静電ステアリング効果を操作すること（国際公開第２００９／０８９００４号）；二つ以上の抗体又は断片を架橋すること（例えば米国特許第４６７６９８０号、及びBrennan et al., Science, 229：81 (1985)を参照）；二重特異性抗体を生成するためにロイシンジッパーを使用すること（例えば、Kostelny et al., J. Immunol., 148 (5)：1547-1553 (1992)を参照）；二重特異性抗体断片を作製するため、「ダイアボディ」技術を使用すること（例えば、Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90：6444-6448 (1993)を参照）；単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）ダイマーを使用すること（例えば、Gruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994)を参照）；及び、例えば、Tutt et al. J. Immunol. 147：60 (1991)に記載されているように、三重特異性抗体を調製することによって作成することができる。
【００６７】
「オクトパス抗体（Ｏｃｔｏｐｕｓ抗体）」を含む三つ以上の機能的抗原結合部位を有する操作抗体も本明細書に含まれる（例えば、米国特許公開第２００６／００２５５７６号を参照）。
【００６８】
本明細書中の抗体又は断片はまた、ＦＡＰ又はＤＲ５並びに別の異なる抗原（例えば米国特許公開第２００８／００６９８２０号参照）に結合する少なくとも一の抗原結合部位を含む、「二重作用（Ｄｕａｌ  Ａｃｔｉｎｇ）ＦＡｂ」又は「ＤＡＦ」を含む。
【００６９】
本願内で使用される用語「価」は、抗体分子における特定数の結合部位の存在を意味する。このように、用語「二価」、「四価」及び「六価」とは、抗体分子中、それぞれ二つの結合部位、四つの結合部位及び六つの結合部位の存在を意味する。本発明による二重特異性抗体は、少なくとも「二価」であり、「三価」又は「多価」（例えば「四価」又は「六価」）であってもよい。
【００７０】
本発明の抗体は、二以上の結合部位を有し、二重特異性である。つまり、抗体は、二を超える結合部位が存在する（つまり抗体が三価又は多価である）場合も、二重特異性でありうる。本発明の二重特異性抗体は、例えば、多価単一鎖抗体、ダイアボディ及びトリアボディ、並びに、さらなる抗原結合部位（例えば単一鎖Ｆｖ、ＶＨドメイン及び／又はＶＬドメイン、Ｆａｂ、又は（Ｆａｂ）２）が一又は複数のペプチドリンカーを介して結合される完全長抗体の定常ドメイン構造を有する抗体を含む。抗体は、単一種からの完全長でありうるか、又はキメラ若しくはヒト化されうる。
【００７１】
本願内で使用される場合、用語「アミノ酸」は、アラニン（３文字コード：ａｌａ、１文字コード：Ａ）、アルギニン（ａｒｇ、Ｒ）、アスパラギン（ａｓｎ、Ｎ）、アスパラギン酸（ａｓｐ、Ｄ）、システイン（ｃｙｓ、Ｃ）、グルタミン（ｇｌｎ、Ｑ）、グルタミン酸（ｇｌｕ、Ｅ）、グリシン（ｇｌｙ、Ｇ）、ヒスチジン（ｈｉｓ、Ｈ）、イソロイシン（ｉｌｅ、Ｉ）、ロイシン（ｌｅｕ、Ｌ）、リジン（ｌｙｓ、Ｋ）、メチオニン（ｍｅｔ、Ｍ）、フェニルアラニン（ｐｈｅ、Ｆ）、プロリン（ｐｒｏ、Ｐ）、セリン（ｓｅｒ、Ｓ）、スレオニン（ｔｈｒ、Ｔ）、トリプトファン（ｔｒｐ、Ｗ）、チロシン（ｔｙｒ、Ｙ）、及びバリン（ｖａｌ、Ｖ）を含む天然に存在するカルボキシα−アミノ酸の群を意味する。
【００７２】
本明細書で使用される場合、「細胞」、「細胞株」、及び「細胞培養物」という表現は互換的に用いられ、すべてのそのような名称は子孫を含む。したがって、用語「トランスフェクタント」及び「トランスフェクトされた細胞」は、初代の対象細胞と、移行回数に関係なく、これに由来する培養物とを含む。また、すべての子孫が、計画的な又は意図しない突然変異の影響で、ＤＮＡ量において正確に同一であるわけではない。元々の形質転換細胞においてスクリーニングしたものと同じ機能又は生物活性を有する変異体子孫が含まれる。
【００７３】
「親和性」は、分子（例えば、抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合相互作用の総和の強度を指す。本明細書で使用する場合、特に断らない限り、「結合親和性」は、結合対（例えば、抗体と抗原）のメンバー間の１：１の相互作用を反映する本質的な結合親和性を指す。一般的に、分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、解離定数（Ｋｄ）によって表される。親和性は、本明細書中に記載のものを含む当技術分野で既知の一般的な方法により測定することができる。結合親和性を測定するための具体的な説明的且つ例示的な実施態様は、以下で説明される。
【００７４】
本明細書で使用される場合、用語「結合」又は「特異的結合」とは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ、好ましくは表面プラズモン共鳴アッセイ（ＳＰＲ、BIAcore, GE-Healthcare Uppsala, Sweden）における、抗原のエピトープに対する抗体の結合を指す。結合の親和性は、用語ｋａ（抗体／抗原複合体からの抗体の会合に対する速度定数）、ｋＤ（解離定数）及びＫＤ（ｋＤ／ｋａ）によって規定される。結合又は特異的結合は、１０−８ｍｏｌ／ｌ以下、好ましくは１０−９Ｍから１０−１３ｍｏｌ／ｌの結合親和性（ＫＤ）を有する。
【００７５】
抗体のデスレセプターへの結合は、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイ（GE-Healthcare Uppsala, Sweden）により調査することができる。結合の親和性は、用語ｋａ（抗体／抗原複合体からの抗体の会合に対する速度定数）、ｋＤ（解離定数）及びＫＤ（ｋＤ／ｋａ）によって規定される。
【００７６】
用語「エピトープ」は、抗体への特異的結合が可能な任意のポリペプチド決定基を含む。特定の実施態様では、エピトープ決定基は、分子の化学的に活性な表面のグルーピング、例えばアミノ酸、糖側鎖、ホスホリル又はスルホニルを含み、特定の実施態様では、それは、特定の三次元構造特徴、及び／又は特異的荷電特徴を有しうる。エピトープは、抗体により結合される抗原の領域である。
【００７７】
本明細書で使用される場合、特に接頭語「グリコ−」を伴う用語「操作する」、「操作された」、「操作」並びに用語「グリコシル化操作」とは、天然に存在するか又は組み換えポリペプチド又はその断片のグリコシル化パターンの任意の操作を含むと考えられる。グリコシル化操作は、細胞内で発現される糖タンパク質のグリコシル化の変化を達成するためのオリゴ糖合成経路の遺伝子操作を含む、細胞のグリコシル化機構の代謝操作が含まれる。さらに、グリコシル化操作は、グリコシル化の変異及び細胞環境の影響を含む。一実施態様では、グリコシル化操作は、グリコシルトランスフェラーゼ活性の改変である。特定の実施態様では、操作は、グルコサミニルトランスフェラーゼ活性及び／又はフコシルトランスフェラーゼ活性の改変をもたらす。
【００７８】
すべての別個の実施態様は組み合わされてもよい。
【００７９】
一実施態様において、本発明は、式（Ｉ）：
2019518727.tif 000005
［式中、
Ａは、
2019518727.tif 000006
からなる群より選択され、
ｎは、０又は１であり、
Ｒ１は、Ｈ、ハロゲン又はＣ１−６−アルキルからなる群より選択され、
Ｒ２は、Ｈ、ハロゲン又はＣ１−６−アルキルからなる群より選択され、
Ｒ３は、Ｈ、ハロゲン又はＣ１−６−アルキルからなる群より選択され、
Ｒ４は、Ｃ１−６−アルキル、Ｃ１−６−アルコキシ−Ｃ１−６−アルキル又はＣ３−６−ヘテロシクロアルキルからなる群より選択され、
Ｒ５は、Ｈ、ハロゲン又はＣ１−６−アルキルからなる群より選択され、
Ｒ６は、Ｈ、ハロゲン又はＣ１−６−アルキルからなる群より選択され、
Ｌは、
2019518727.tif 000007
からなる群より選択され、
ｍは、１、２又は３であり、
ｋは、１、２又は３である］
の化合物又はその薬学的に許容される塩に関する。
【００８０】
本発明の一実施態様は、本明細書に記載される式Ｉの化合物に関し、ここで、Ｌ−Ａ基は、
2019518727.tif 000008
［式中、ｍは１、２又は３、且つｋは１、２又は３である。］
からなる群より選択される。
【００８１】
本発明の一実施態様は、Ｒ１がＦである、本明細書に記載の式Ｉの化合物に関する。
【００８２】
本発明の一実施態様は、ＡがＡ−１である、本明細書に記載の式Ｉの化合物に関する。
【００８３】
本発明の一実施態様は、ＡがＡ−１であり、ｎが０である、本明細書に記載の式Ｉの化合物に関する。
【００８４】
本発明の一実施態様は、ＡがＡ−１であり、ｎが１である、本明細書に記載の式Ｉの化合物に関する。
【００８５】
本発明の一実施態様は、ＡがＡ−１であり、Ｒ２及びＲ３がＦである、本明細書に記載の式Ｉの化合物に関する。
【００８６】
本発明の一実施態様は、ＡがＡ−１であり、ｎが０であり、Ｒ２及びＲ３がＦであり、Ｒ４が
2019518727.tif 000009
からなる群より選択される、本明細書に記載の式Ｉの化合物に関する。
【００８７】
本発明の一実施態様は、ＡがＡ−１であり、ｎが１であり、Ｒ２及びＲ３がＦであり、Ｒ４が
2019518727.tif 000010
からなる群より選択される、本明細書に記載の式Ｉの化合物に関する。
【００８８】
本発明の一実施態様は、ＡがＡ−２である、本明細書に記載の式Ｉの化合物に関する。
【００８９】
本発明の一実施態様は、ＡがＡ−２であり、且つＲ５がＦであるか、又はＡがＡ−４であり、且つＲ６がＦである、式Ｉの化合物に関する。
【００９０】
本発明の一実施態様は、ＡがＡ−２であり、Ｒ５がＦである、本明細書に記載の式Ｉの化合物に関する。
【００９１】
本発明の一実施態様は、ＡがＡ−３である、本明細書に記載の式Ｉの化合物に関する。
【００９２】
本発明の一実施態様は、ＡがＡ−４であり、Ｒ６がＦである、本明細書に記載の式Ｉの化合物に関する。
【００９３】
本発明の一実施態様は、ＬがＬ−１、Ｌ−２又はＬ−３である、本明細書に記載の式Ｉの化合物に関する。
【００９４】
本発明の一実施態様は、ＬがＬ−１である、本明細書に記載の式Ｉの化合物に関する。
【００９５】
本発明の一実施態様は、ＬがＬ−２である、本明細書に記載の式Ｉの化合物に関する。
【００９６】
本発明の一実施態様は、ＬがＬ−２であり、ｍが１である、本明細書に記載の式Ｉの化合物に関する。
【００９７】
本発明の一実施態様は、ＬがＬ−２であり、ｍが２である、本明細書に記載の式Ｉの化合物に関する。
【００９８】
本発明の一実施態様は、ＬがＬ−２であり、ｍが３である、本明細書に記載の式Ｉの化合物に関する。
【００９９】
本発明の一実施態様は、ＬがＬ−３である、本明細書に記載の式Ｉの化合物に関する。
【０１００】
本発明の一実施態様は、ＬがＬ−４又はＬ−６である、本明細書に記載の式Ｉの化合物に関する。
【０１０１】
本発明の一実施態様は、ＬがＬ−４である、本明細書に記載の式Ｉの化合物に関する。
【０１０２】
本発明の一実施態様は、ＬがＬ−５である、本明細書に記載の式Ｉの化合物に関する。
【０１０３】
本発明の一実施態様は、ＬがＬ−５であり、ｋが３である、本明細書に記載の式Ｉの化合物に関する。
【０１０４】
本発明の一実施態様は、ＬがＬ−６である、本明細書に記載の式Ｉの化合物に関する。
【０１０５】
本発明の一実施態様は、
Ｎ−（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−５−イル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド、
（３Ｒ）−Ｎ−［２−［［（３Ｓ）−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパノイル］アミノ］−２−（オキサン−４−イル）アセチル］−１，３−ジヒドロイソインドール−５−イル］アミノ］−２−オキソエチル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−１−［２−［（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］−２Ｈ−インドール−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド、
（３Ｓ）−Ｎ−［２−［［（３Ｓ）−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパノイル］アミノ］−２−（オキサン−４−イル）アセチル］−１，３−ジヒドロインドール−５−イル］アミノ］−２−オキソエチル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−１−［２−［（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］−２Ｈ−インドール−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド、
（３Ｓ）−２−［（２Ｓ）−３，３−ジメチル−２−［［（２Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパノイル］アミノ］ブタノイル］−７−［［２−［［（３Ｓ）−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−１−［２−［（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］−２Ｈ−インドール−３−カルボニル］アミノ］アセチル］アミノ］−Ｎ−［（１Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−１−イル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド、
（３Ｓ）−２−［（２Ｓ）−３，３−ジメチル−２−［［（２Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパノイル］アミノ］ブタノイル］−７−［［２−［［（３Ｒ）−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−１−［２−［（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］−２Ｈ−インドール−３−カルボニル］アミノ］アセチル］アミノ］−Ｎ−［（１Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−１−イル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド、
（３Ｓ）−２−（（Ｓ）−３，３−ジメチル−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）ブタノイル）−７−（６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド）−Ｎ−（（Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−１−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド、
（３Ｓ）−２−（（Ｓ）−３，３−ジメチル−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）ブタノイル）−７−（２−（６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド）アセトアミド）−Ｎ−（（Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−１−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド、
（３Ｓ）−Ｎ−（２，６−ジフルオロフェニル）−７−（２−（６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド）アセトアミド）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド、
（Ｒ）−Ｎ−（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−５−イル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド、
（Ｒ，Ｒ，Ｒ）−Ｎ，Ｎ’−（エタン−１，２−ジイル）ビス（６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド）トリヒドロクロリド、
（Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−５−イル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド、
（Ｓ）−Ｎ−（２−（（（Ｓ）−１−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−２−オキソエチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド、
（Ｓ）−Ｎ−（２−（（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（２Ｓ，３Ｒ）−３−メトキシ−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）ブタノイル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−２−オキソエチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド、
（Ｓ）−Ｎ−（２−（（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（２Ｓ，３Ｓ）−３−メチル−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）ペンタノイル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−２−オキソエチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド、
（Ｓ）−Ｎ−（２−（（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−３，３−ジメチル−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）ブタノイル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−２−オキソエチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド、
（Ｓ）−Ｎ−（３−（（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−３−オキソプロピル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド、
（Ｓ）−Ｎ−（４−（（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−４−オキソブチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド、
Ｎ−（２−（（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−２−オキソエチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド、
Ｎ−（２−（４−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−１−カルボキサミド）ベンズアミド）エチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  ジヒドロクロリド，
Ｎ−（４−（（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−５−イル）カルバモイル）フェニル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド、
Ｎ−（４−（４−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−１−カルボキサミド）ベンズアミド）フェニル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド、及び
Ｎ１−（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−５−イル）−Ｎ３−（３−（６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−イル）プロピル）マロンアミド  トリヒドロクロリド
からなる群より選択される、本明細書に記載の化合物に関する。
【０１０６】
本発明の一実施態様は、治療的活性物質としての使用のための、本明細書に記載の化合物に関する。
【０１０７】
本発明の一実施態様は、がんの治療的及び／又は予防的処置における使用のための、本明細書に記載の化合物に関する。
【０１０８】
本発明の一実施態様は、式Ｉ
2019518727.tif 000011
［式中、
Ｒ１は、Ｈ、ハロゲン又はＣ１−６−アルキルからなる群より選択され、
Ｒ４は、
2019518727.tif 000012
からなる群より選択される］
の二量体化合物の式Ｉ−ａのモノマーに関する。
【０１０９】
本発明の一実施態様は、薬学的に許容される担体又は添加剤とともに、本明細書に記載の化合物のいずれか、又は薬学的に許容されるその塩を活性成分として含む薬学的組成物に関する。
【０１１０】
本発明の一実施態様は、治療的活性物質としての使用のための、本明細書に記載の式Ｉの化合物に関する。
【０１１１】
本発明の一実施態様は、がんの治療的及び／又は予防的処置における使用のための、本明細書に記載の式Ｉの化合物に関する。
【０１１２】
本発明の一実施態様は、アポトーシスインヒビタータンパク質（ＩＡＰ）に結合するＳＭＡＣタンパク質の阻害剤、及び／又は、がん、特に固形腫瘍の改善、処置又は制御の方法における二重特異性抗体との併用療法としての使用のためのＩＡＰに結合する活性カスパーゼタンパク質の阻害剤として機能する化合物に関し、ここで、二重特異性抗体は、デスレセプター５（ＤＲ５）及び線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に結合し、ＤＲ５に特異的な少なくとも一の抗原結合部位と、ＦＡＰに特異的な少なくとも一の抗原結合部位とを含む。
【０１１３】
本発明の一実施態様は、アポトーシスインヒビタータンパク質（ＩＡＰ）に結合するＳＭＡＣタンパク質の阻害剤、及び／又は、本明細書に記載のデスレセプター５（ＤＲ５）及び線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に結合する二重特異性抗体と組みあわせて、ＩＡＰに結合する活性カスパーゼタンパク質の阻害剤として機能する請求項１から８のいずれか一項に記載の式Ｉの化合物に関する。
【０１１４】
本発明の一実施態様は、アポトーシスインヒビタータンパク質（ＩＡＰ）に結合するＳＭＡＣの阻害剤、及び／又は、本明細書に記載の二重特異性抗体との併用療法としての使用のためのＩＡＰに結合する活性カスパーゼタンパク質の阻害剤として機能する化合物に関し、ここで、二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域と配列番号８のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含むＤＲ５に特異的な少なくとも一の抗原結合部位と、配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含むＦＡＰに特異的な少なくとも一の抗原結合部位とを含む。
【０１１５】
本発明の一実施態様は、アポトーシスインヒビタータンパク質（ＩＡＰ）に結合するＳＭＡＣの阻害剤、及び／又は、本明細書に記載のデスレセプター５（ＤＲ５）及び線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に結合する二重特異性抗体と組み合わせてＩＡＰに結合する活性化カスパーゼタンパク質の阻害剤として機能する式Ｉの化合物に関し、ここで、二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域と配列番号８のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含むＤＲ５に特異的な少なくとも一の抗原結合部位と、配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含むＦＡＰに特異的な少なくとも一の抗原結合部位とを含む。
【０１１６】
本発明の一実施態様は、アポトーシスインヒビタータンパク質（ＩＡＰ）に結合するＳＭＡＣタンパク質の阻害剤、及び／又は、がん、特に固形腫瘍の改善、処置又は制御の方法における、本明細書に記載のデスレセプター５（ＤＲ５）及び線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に結合する二重特異性抗体との併用療法としての使用のためのＩＡＰに結合する活性化カスパーゼタンパク質の阻害剤として機能する化合物に関し、ここで、がんは、直腸結腸がん、肉腫、頭部及び頸部がん、扁平上皮癌、乳がん、膵臓がん、胃がん、非小細胞肺癌、小細胞肺がん及び中皮腫である。
【０１１７】
本発明の一実施態様は、アポトーシスインヒビタータンパク質（ＩＡＰ）に結合するＳＭＡＣタンパク質の阻害剤、及び／又は、がん、特に固形腫瘍の改善、処置又は制御の方法における、本明細書に記載のデスレセプター５（ＤＲ５）及び線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に結合する二重特異性抗体との併用療法としての使用のためのＩＡＰに結合する活性化カスパーゼタンパク質の阻害剤として機能する化合物に関し、ここで、アポトーシスインヒビタータンパク質（ＩＡＰ）に結合するＳＭＡＣタンパク質の阻害剤及び二重特異性抗体は、交互に投与される。
【０１１８】
本発明の一実施態様は、アポトーシスインヒビタータンパク質（ＩＡＰ）に結合するＳＭＡＣタンパク質の阻害剤、及び／又は、本明細書に記載のデスレセプター５（ＤＲ５）及び線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に結合する二重特異性抗体と組みあわせて、ＩＡＰに結合する活性化カスパーゼタンパク質の阻害剤として機能する本明細書に記載の式Ｉの化合物に関し、ここで、二重特異性抗体は、配列番号１８、１９及び２０のアミノ酸配列を含むか、又は二重特異性抗体は、配列番号１７、１９及び２０のアミノ酸配列を含む。
【０１１９】
本発明の一実施態様は、アポトーシスインヒビタータンパク質（ＩＡＰ）に結合するＳＭＡＣタンパク質の阻害剤、及び／又は、本明細書に記載のデスレセプター５（ＤＲ５）及び線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に結合する二重特異性抗体と組みあわせて、ＩＡＰに結合する活性化カスパーゼタンパク質の阻害剤として機能する本明細書に記載の式Ｉの化合物に関し、ここで、二重特異性抗体は、配列番号１８、１９及び２０のアミノ酸配列を含むか、又は二重特異性抗体は、配列番号１７、１９及び２０のアミノ酸配列を含む。
【０１２０】
本発明の一実施態様は、アポトーシスインヒビタータンパク質（ＩＡＰ）に結合するＳＭＡＣタンパク質の阻害剤、及び／又は、がん、特に固形腫瘍の改善、処置又は制御の方法における、本明細書に記載のデスレセプター５（ＤＲ５）及び線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に結合する二重特異性抗体との併用療法としての使用のためのＩＡＰに結合する活性化カスパーゼタンパク質の阻害剤として機能する化合物に関し、ここで、抗体はヒトである。
【０１２１】
本発明の一実施態様は、アポトーシスインヒビタータンパク質（ＩＡＰ）に結合するＳＭＡＣタンパク質の阻害剤、及び／又は、がん、特に固形腫瘍の改善、処置又は制御の方法における、本明細書に記載のデスレセプター５（ＤＲ５）及び線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に結合する二重特異性抗体との併用療法としての使用のためのＩＡＰに結合する活性化カスパーゼタンパク質の阻害剤として機能する化合物に関し、ここで、抗体はヒト化である。
【０１２２】
本発明の一実施態様は、アポトーシスインヒビタータンパク質（ＩＡＰ）に結合するＳＭＡＣタンパク質の阻害剤、及び／又は、がん、特に固形腫瘍の改善、処置又は制御の方法における、本明細書に記載のデスレセプター５（ＤＲ５）及び線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に結合する二重特異性抗体との併用療法としての使用のためのＩＡＰに結合する活性化カスパーゼタンパク質の阻害剤として機能する化合物を含む薬学的組成物に関する。
【０１２３】
本発明の一実施態様は、アポトーシスインヒビタータンパク質（ＩＡＰ）に結合するＳＭＡＣタンパク質の阻害剤、及び／又は、併用療法としての使用のためのＩＡＰに結合する活性化カスパーゼタンパク質の阻害剤として機能する化合物を含む第１の容器と、がん、特に固形腫瘍の改善、処置又は制御の方法における、本明細書に記載のデスレセプター５（ＤＲ５）及び線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に結合する二重特異性抗体を含む第２の容器とを備えるキットに関する。
【０１２４】
本発明の一実施態様は、アポトーシスインヒビタータンパク質（ＩＡＰ）に結合するＳＭＡＣタンパク質の阻害剤、及び／又は、がん、特に固形腫瘍の改善、処置又は制御の方法における、本明細書に記載のデスレセプター５（ＤＲ５）及び線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に結合する二重特異性抗体とＩＡＰとに結合する活性化カスパーゼタンパク質の阻害剤として機能する化合物の使用に関する。
【０１２５】
本発明の一実施態様は、がんの治療的及び／又は予防的処置のための医薬の製造のための、本明細書に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩の使用に関する。
【０１２６】
本発明の一実施態様は、デスレセプターを特異的に架橋するＦＡＰ及びＤＲ５に結合する二重特異性抗体に関し、標的細胞のアポトーシスが誘導される。抗体を標的化する一般的なデスレセプターに対するこれらの二重特異性デスレセプターアゴニスト抗体の利点は、ＦＡＰが発現される部位でのみのアポトーシスの誘導の特異性である。上で概説したように、本発明の発明者は、新規の有利なＤＲ５−ＦＡＰ二重特異性抗体に取り込むことができる既知のＤＲ５結合剤と比較して優れた特性を有するＤＲ５結合部分を開発した。
【０１２７】
本発明の一実施態様は、
（ａ）配列番号１の重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号２の重鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号３の重鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号４の軽鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号５の軽鎖ＣＤＲ２；
（ｆ）配列番号６の軽鎖ＣＤＲ３；
を含む、ＤＲ５に特異的な少なくとも一の抗原結合部位と、
ａ）配列番号９の重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１０の重鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号１１の重鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１２の軽鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号１３の軽鎖ＣＤＲ２；
（ｆ）配列番号１４の軽鎖ＣＤＲ３
を含む、ＦＡＰに特異的な少なくとも一の抗原結合部位と
を含む、ＤＲ５及びＦＡＰに結合する二重特異性抗体を含む治療組み合わせに関する。
【０１２８】
本発明の第１の実施態様は、配列番号７のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び配列番号８のアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む、ＤＲ５に特異的な少なくとも一の抗原結合部位と；配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、ＦＡＰに特異的な少なくとも一の抗原結合部位とを含む二重特異性抗体に関する。
【０１２９】
本発明の一実施態様は、配列番号１８、配列番号１９及び配列番号２０を含む二重特異性抗体に関する。
【０１３０】
本発明の一実施態様は、配列番号１７、配列番号１９及び配列番号２０を含む二重特異性抗体に関する。
【０１３１】
本発明の一実施態様では、ＤＲ５及びＦＡＰに結合する二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含むＤＲ５に特異的な少なくとも一の抗原結合部位と；配列番号１５の可変重鎖及び配列番号１６の可変軽鎖を含むＦＡＰに特異的な少なくとも一の抗原結合部位とを含む。
【０１３２】
本発明の一実施態様は、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＨ配列に関し、それは、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む、ＤＲ５及びＦＡＰに結合する二重特異性抗体は、ＦＡＰ及びＤＲ５へ結合する能力を保持する。特定の実施態様では、配列番号７において、合計１から１０のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。特定の実施態様において、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲ外の（即ちＦＲ内の）領域で生じる。場合によっては、ＤＲ５及びＦＡＰに結合する二重特異性抗体は、配列番号７のＶＨ配列を（その配列の翻訳後修飾も含めて）含む。
【０１３３】
本発明の一実施態様では、ＤＲ５及びＦＡＰに結合する二重特異性抗体は、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含むＤＲ５に特異的な少なくとも一の抗原結合部位と；配列番号１５の可変重鎖及び配列番号１６の可変軽鎖を含むＦＡＰに特異的な少なくとも一の抗原結合部位とを含む。
【０１３４】
本発明の一実施態様は、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列に関し、それは、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む、ＤＲ５及びＦＡＰに結合する二重特異性抗体は、ＤＲ５及びＦＡＰへ結合する能力を保持する。特定の実施態様では、配列番号８において、合計１から１０のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。特定の実施態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲ外の（即ちＦＲ内の）領域で生じる。場合によっては、ＤＲ５及びＦＡＰに結合する二重特異性抗体は、配列番号８のＶＬ配列を（その配列の翻訳後修飾も含めて）含む。
【０１３５】
本発明の一実施態様は、配列番号８の可変軽鎖及び配列番号７の可変重鎖を含む、ＤＲ５に特異的な少なくとも一の抗原結合部位と；配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、ＦＡＰに特異的な少なくとも一の抗原結合部位とを含む、ＤＲ５及びＦＡＰに結合する二重特異性抗体に関する。特定の実施態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む、ＤＲ５及びＦＡＰに結合する二重特異性抗体は、ＦＡＰ及びＤＲ５へ結合する能力を保持する。特定の実施態様では、配列番号１５において、合計１から１０のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。所定の実施態様において、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲ外の（即ちＦＲ内の）領域で生じる。場合によっては、ＤＲ５及びＦＡＰに結合する二重特異性抗体は、配列番号１５のＶＨ配列を（その配列の翻訳後修飾も含めて）含む。
【０１３６】
本発明の一実施態様は、配列番号８の可変軽鎖及び配列番号７の可変重鎖を含む、ＤＲ５に特異的な少なくとも一の抗原結合部位と；配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む、ＦＡＰに特異的な少なくとも一の抗原結合部位とを含む、ＤＲ５及びＦＡＰに結合する二重特異性抗体に関する。特定の実施態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む、ＤＲ５及びＦＡＰに結合する二重特異性抗体は、ＤＲ５及びＦＡＰへ結合する能力を保持する。特定の実施態様では、配列番号１６において、合計１から１０のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。特定の実施態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲ外の（即ちＦＲ内の）領域で生じる。場合によっては、ＤＲ５及びＦＡＰに結合する二重特異性抗体は、配列番号１６のＶＬ配列を（その配列の翻訳後修飾も含めて）含む。
【０１３７】
本発明の一実施態様は、ＤＲ５及びＦＡＰに結合する二重特異性に関し、ここで、抗体は、上に示した実施態様のいずれかと同様のＶＨ、及び上に示した実施態様のいずれかと同様のＶＬを含む。一実施態様において、該抗体は、配列番号７及び８のＶＨ配列と、配列番号１５及び１６のＶＬ配列とを（配列の翻訳後修飾も含めて）含む。
【０１３８】
本発明の一実施態様では、上の実施態様のいずれかに記載のＤＲ５及びＦＡＰに結合する二重特異性抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体又はヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。一実施態様では、上の実施態様のいずれかに記載のＤＲ５及びＦＡＰに結合する前記二重特異性抗体は、ヒト抗体である。
【０１３９】
式Ｉの化合物及びその塩は、少なくとも一の不斉炭素原子を含み、したがって異なる立体異性体の混合物として存在することがある。種々の異性体は、既知の分離方法、例えばクロマトグラフィーによって単離可能である。
【０１４０】
本明細書に開示され、上記の式Ｉに包含される化合物は、互変異性又は構造異性を示すことがある。本発明は、これら化合物のあらゆる互変異性若しくは構造的異性形態又はこのような形態の混合物を包含し、上述の式で表されるいずれか一の互変異性又は構造異性形態に限定されない。
【０１４１】
配列
2019518727.tif 000013
2019518727.tif 000014
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【０１４２】
投与量
本発明の化合物は、好ましくはＩＡＰのＢＩＲドメインに結合し、ＩＡＰが他のタンパク質に結合するのを妨げる。ＢＩＲ結合タンパク質の例は、カスパーゼ３、カスパーゼ７、カスパーゼ９、Ｓｍａｃ等を含むが、これらに限定されない。ＩＡＰの例は、ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ１、ｃＩＡＰ２又はＮＡＩＰを含むが、これらに限定されない。一態様では、本発明の化合物は、ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ１、及び／又はｃＩＡＰ２のＢＩＲ２ドメイン及び／又はＢＩＲ３ドメインに結合する。別の態様では、本発明の化合物は、ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ１、及び／又はｃＩＡＰ２のＢＩＲ２ドメインに結合する。
【０１４３】
本発明の化合物は、特にがん細胞において、細胞中にアポトーシスを誘導するため、又はアポトーシスシグナルに対して細胞を感受性にするために有用である。アポトーシスシグナルは、例えば放射線療法又は抗腫瘍化学療法により、がん細胞中に誘導することができる。代替的には、アポトーシスシグナルは、デスレセプターアゴニストによるデスレセプターの活性化によりがん細胞中に誘導することができる。デスレセプターアゴニストは、例えば腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）のような天然発生であるか、又はＤＲ４若しくはＤＲ５抗体等の合成抗体のような非天然発生である。
【０１４４】
したがって、本発明の化合物は、特に腫瘍学的障害のような細胞増殖性障害の改善、制御又は治療に有用である。このような化合物及び前記化合物を含有する製剤は、例えば、急性骨髄性白血病などの血液がん、若しくは乳房、結腸、肺、及び前立腺の腫瘍などの固形腫瘍の治療又は制御に有用であると期待されている。
【０１４５】
本発明による化合物の「治療的有効量」又は「有効量」は、疾患の症状を予防、軽減若しくは改善するために、又は治療対象の延命のために効果的である化合物の量を意味する。治療的有効量の決定は、当該技術分野の範囲内である。
【０１４６】
本発明による化合物の治療的有効量又は投与量は、広い範囲内で変動し、当該技術分野において既知の方式で決定されうる。このような投与量は、投与される特定の化合物、投与経路、治療される状態、及び治療される患者を含む各個別の症例における個々の要件に合わせて調整される。体重約７０Ｋｇの成人に対する経口又は非経口投与の場合、一般的に約１０ｍｇ〜約１００００ｍｇ、好ましくは約２００ｍｇ〜約１０００ｍｇの１日用量が適当であるが、指示があれば上限を超えてもよい。１日用量は、単回投与として、又は分割投与で投与することができ、あるいは非経口投与の場合、一又は複数のボーラス注入として、又は持続注入として投与してもよい。
【０１４７】
本発明の実施に有用な医薬品、すなわち本発明の化合物を含む医薬品は、内部的に、例えば経口で（例えば、錠剤、コーティング錠、糖衣錠、硬及び軟ゼラチンカプセル、液剤、乳剤又は懸濁剤の形態で）、経鼻的に（例えば点鼻薬の形態で）、又は直腸に（例えば坐薬の形態で）投与することができる。しかし、投与はまた、非経口的に、例えば筋肉内又は静脈内に（例えば注射液の形態で）行うこともできる。さらに、投与は局所的に（例えば軟膏、クリーム又はオイルの形態で）行うことができる。
【０１４８】
組成物／製剤
代替的実施態様では、本発明は、少なくとも一の式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される添加剤及び／又は担体とを含有する薬学的組成物を含む。
【０１４９】
これら薬学的組成物は、経口、経鼻、局所（頬側及び舌下を含む）、直腸内、膣内、及び／又は非経口投与に適したものにすることができる。製剤は、便利に単位剤形で提供することができ、薬学の分野において周知の任意の方法により調製することができる。単一剤形を製造するために担体物質と組み合わせることができる活性成分の量は、治療されている宿主及び特定の投与様式によって様々であろう。通常、単一剤形を製造するために担体物質と組み合わせることができる活性成分の量は、治療効果を生じさせる式Ｉの化合物の量である。このような活性成分の量は、通常１００パーセントのうち約１パーセントから約９９パーセント、好ましくは約５パーセントから約７０パーセント、最も好ましくは約１０パーセントから約３０パーセントの活性成分の範囲であろう。
【０１５０】
このような製剤又は組成物を調製する方法は、本発明の化合物を担体及び任意選択的に一又は複数の副成分と会合させる工程を含む。一般に、製剤は、本発明の化合物を液体担体若しくは微粉固体担体又はその両方と均一かつ緊密に会合させ、次いで必要に応じて製品を成形することにより調製される。
【０１５１】
式Ｉの化合物並びにその薬学的に許容される塩及びエステルは、錠剤、コーティング錠、糖衣錠、及び硬ゼラチンカプセルの製造のために、薬学的に不活性な無機又は有機アジュバントを用いて処理することができる。ラクトース、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、微結晶性セルロース、コーンスターチ又はその誘導体、タルク、ステアリン酸又はその塩等は、例えば錠剤、糖衣錠、及び硬ゼラチンカプセルのための、上記のようなアジュバントとして使用されうる。
【０１５２】
軟ゼラチンカプセルに適したアジュバントは、例えば植物油、ワックス、油脂、半固体物質及び液状ポリオール等である。溶液剤及びシロップ剤の製造に適したアジュバントは、例えばＨ２Ｏ、ポリオール、ショ糖、転化糖、グルコース等である。注射液に適したアジュバントは、例えばＨ２Ｏ、アルコール、ポリオール、グリセロール、植物油等である。坐剤に適したアジュバントは、例えば天然油若しくは硬化油、ワックス、油脂、半固体ポリオール又は液状ポリオール等である。局所用調製物に適したアジュバントは、グリセリド、半合成及び合成グリセリド、水素添加油、液状ワックス、流動パラフィン、液状脂肪アルコール、ステロール、ポリエチレングリコール並びにセルロース誘導体である。
【０１５３】
そのうえ、薬学的調製物は、保存料、可溶化剤、増粘物質、安定剤、湿潤剤、乳化剤、甘味料、着色料、香味料、浸透圧を変えるための塩、バッファー、マスキング剤又は抗酸化物質を含有することができる。薬学的調製物は、他の治療用物質を含有することもできる。
【０１５４】
本発明における化合物（一般式Ｉの化合物）は、以下のスキームに規定する一般的な反応スキームにより調製することができる。
【０１５５】
2019518727.tif 000017
工程Ａ：６０℃から１２０℃の適切な溶媒、例えばジオキサン、テトラヒドロフラン、ジメトキシエタン又はジグリム中パラジウム触媒、例えば［１，１−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）又は［１，１−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）ジクロロメタン錯体を１時間から２４時間使用することにより、ブロモ誘導体ＩＩと適切な有機金属試薬、例えば（４−フルオロベンジル）塩化亜鉛（ＩＩ）をカップリングして、誘導体ＩＩＩを形成することを達成することができる。
特定の条件は、シールド管内のテトラヒドロフラン中［１，１−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）ジクロロメタン錯体を９０℃で１８時間使用することである。
【０１５６】
工程Ｂ：：誘導体ＩＩＩからのアミノ保護基の切断は、当該技術分野で知られる様々な方法で行うことができる。ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基は、ジクロロメタン、クロロホルム、テトラヒドロフラン、メタノール、エタノール又は水のような０から６０℃の溶媒中トリフルオロ酢酸、ジクロロ酢酸、酢酸又はｐ−トルエンスルホン酸のような鉱酸をして切断することができる、特定の保護基ＰＧはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基である。好ましい条件は、ジオキサン中ＨＣｌを５０℃で５時間使用することである。
【０１５７】
工程Ｃ：アミドカップリングは、アミドカップリング試薬、例えば１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム−ヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ），（１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム  ３−オキシド  ヘキサフルオロホスフェート）（ＨＡＴＵ）、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム−テトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）、プロピルホスホン酸無水物（Ｔ３Ｐ）等、及び、溶媒、例えばメチレンクロリド、１，２−ジクロロエタン、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド又は酢酸エチル中塩基、例えばトリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン又はピリジンの存在下でのアミンＩＶと酸Ｖとの反応により達成することができる。特定の条件は、プロピルホスホン無水物と、酢酸エチル中Ｎ−メチルモルホリンを室温で１８時間使用することである。
【０１５８】
工程Ｄ：エステルＶＩの鹸化は、水又は水の混合物中水酸化リチウム、水酸化カリウム又は水酸化ナトリウムのような塩基、及び、テトラヒドロフラン、エタノール又はメタノールのような有機溶媒での処理により達成することができる。特定の条件は、エタノールと水の混合物中水酸化リチウムを６０℃で３時間使用することである。
【０１５９】
工程Ｅ：アミドカップリングは、アミドカップリング試薬、例えば１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム−ヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ），（１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム  ３−オキシド  ヘキサフルオロホスフェート）（ＨＡＴＵ）、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム−テトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）、プロピルホスホン酸無水物（Ｔ３Ｐ）等、及び、溶媒、例えばメチレンクロリド、１，２−ジクロロエタン、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド又は酢酸エチル中塩基、例えばトリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン又はピリジンの存在下での酸ＶＩＩアミンＶＩＩＩの反応により達成することができる。特定の条件は、プロピルホスホン無水物と、酢酸エチル中Ｎ−メチルモルホリンを室温で１８時間使用することである。
【０１６０】
工程Ｆ：Ｂｏｃ  Ｎ−保護基の除去は、鉱酸、例えば塩酸、硫酸若しくはリン酸、又は、０℃から８０℃の溶媒、例えばジクロロメタン、クロロホルム、テトラヒドロフラン、メタノール、エタノール若しくは水中有機酸、例えばトリフルオロ酢酸、ジクロロ酢酸、酢酸若しくはｐ−トルエンスルホン酸によって行うことができる。特定の条件は、ジオキサンと酢酸エチルの混合物中ＨＣｌを室温で１８時間使用することである。
【０１６１】
工程Ｇ：アミドカップリングは、アミドカップリング試薬、例えば１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム−ヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ），（１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム  ３−オキシド  ヘキサフルオロホスフェート）（ＨＡＴＵ）、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム−テトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）、プロピルホスホン酸無水物（Ｔ３Ｐ）等、及び、溶媒、例えばメチレンクロリド、１，２−ジクロロエタン、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド又は酢酸エチル中塩基、例えばトリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン又はピリジンの存在下での酸ＶＩＩアミノエステルＸの反応により達成することができる。特定の条件は、ＨＡＴＵと、酢酸エチル中Ｎ−メチルモルホリンを室温で１８時間使用することである。
【０１６２】
工程Ｈ：エステルＸＩの鹸化は、水又は水の混合物中水酸化リチウム、水酸化カリウム又は水酸化ナトリウムのような塩基、及び、テトラヒドロフラン、エタノール又はメタノールのような有機溶媒での処理により達成することができる。特定の条件は、エタノールと水の混合物中水酸化リチウムを６０℃で３時間使用することである。
【０１６３】
工程Ｉ：アミドカップリングは、アミドカップリング試薬、例えば１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム−ヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム−テトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）、プロピルホスホン酸無水物（Ｔ３Ｐ）等、及び、溶媒、例えばメチレンクロリド、１，２−ジクロロエタン、テトラヒドロフラン又は酢酸エチル中塩基、例えばトリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン又はピリジンの存在下での酸ＸＩＩアミンＶＩＩＩの反応により達成することができる。特定の条件は、プロピルホスホン無水物と、酢酸エチル中Ｎ−メチルモルホリンを室温で１８時間使用することである。
【０１６４】
工程Ｊ：Ｂｏｃ  Ｎ−保護基の除去は、鉱酸、例えば塩酸、硫酸若しくはリン酸、又は、０℃から８０℃の溶媒、例えばジクロロメタン、クロロホルム、テトラヒドロフラン、メタノール、エタノール若しくは水中有機酸、例えばトリフルオロ酢酸、ジクロロ酢酸、酢酸若しくはｐ−トルエンスルホン酸によって行うことができる。特定の条件は、ジオキサンと酢酸エチルの混合物中ＨＣｌを室温で１８時間使用することである。
【０１６５】
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エステルＩＶａは、キラル分離により、その光学異性体形態ＩＶａ−１とＩＶａ−２に分離することができる。好ましいキラル分離は、キラル固定相、例えばＣｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ、及び適切な溶媒、例えばイソプロパノールとヘプタンの混合物を使用するキラルクロマトグラフィーである。
【０１６６】
2019518727.tif 000019
工程Ａ：６０℃から１２０℃の適切な溶媒、例えばジオキサン、テトラヒドロフラン、ジメトキシエタン又はジグリム中パラジウム触媒、例えば［１，１−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）又は［１，１−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）ジクロロメタン錯体を１時間から２４時間使用することにより、ブロモ誘導体ＸＩＶと適切な有機金属試薬、例えば（４−フルオロベンジル）塩化亜鉛（ＩＩ）をカップリングして、誘導体ＸＶを形成することを達成することができる。
特定の条件は、シールド管内のテトラヒドロフラン中［１，１−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］  ジクロロパラジウム（ＩＩ）ジクロロメタン錯体を９０℃で２時間使用することである。
【０１６７】
工程Ｂ：誘導体ＸＶからのアミノ保護基の切断は、当該技術分野で知られる様々な方法で行うことができる。ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基は、ジクロロメタン、クロロホルム、テトラヒドロフラン、メタノール、エタノール又は水のような０から６０℃の溶媒中トリフルオロ酢酸、ジクロロ酢酸、酢酸又はｐ−トルエンスルホン酸のような鉱酸をして切断することができる、特定の保護基ＰＧはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基である。好ましい条件は、ジオキサン中ＨＣｌを５０℃で２時間使用することである。
【０１６８】
工程Ｃ：アミドカップリングは、アミドカップリング試薬、例えば１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム−ヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ），（１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム  ３−オキシド  ヘキサフルオロホスフェート）（ＨＡＴＵ）、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム−テトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）、プロピルホスホン酸無水物（Ｔ３Ｐ）等、及び、溶媒、例えばメチレンクロリド、１，２−ジクロロエタン、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド又は酢酸エチル中塩基、例えばトリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン又はピリジンの存在下でのアミンＸＶＩと酸Ｖとの反応により達成することができる。特定の条件は、ＨＡＴＵと、ジメチルホルムアミド中ジイソプロピルエチルアミンを室温で１８時間使用することである。
【０１６９】
工程Ｄ：ニトリルの還元は、ニッケル塩の存在下で水素化ホウ素試薬との反応により、又は、室温又は高温でアンモニアを添加して、又は添加せずに、メタノール又はエタノールのような溶媒中適切な触媒、例えばラネーニッケルを使用することにより、達成することができる。特定の条件は、大気圧の水素、触媒としてラネーニッケル及び溶媒としてメタノール中７Ｎアンモニア溶液を６０℃で１８時間使用することである。
【０１７０】
工程Ｅ：アミンＸＶＩＩＩとモノベンジルマロエートとのアミドカップリングは、アミドカップリング試薬、例えばジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム−ヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ），（１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム  ３−オキシド  ヘキサフルオロホスフェート）（ＨＡＴＵ）、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム−テトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）、プロピルホスホン酸無水物（Ｔ３Ｐ）等、及び、溶媒、例えばメチレンクロリド、１，２−ジクロロエタン、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド又は酢酸エチル中塩基、例えばトリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン又はピリジンの存在下で達成することができる。特定の条件は、ＨＡＴＵと、ジメチルホルムアミド中ジイソプロピルエチルアミンを室温で１８時間使用することである。
【０１７１】
工程Ｆ：エステルＸＸの鹸化は、水又は水と有機溶媒、例えばテトラヒドロフラン、エタノール又はメタノールとの混合物中水酸化リチウム、水酸化カリウム又は水酸化ナトリウムのような塩基での処理により、又は、標準圧力又は上昇圧力下でのメタノール若しくはエタノールのような溶媒中触媒、例えばＰｄ−Ｃでの水素化により達成することができる。特定の条件は、大気圧の水素、触媒としてのパラジウム炭とメタノールに溶解した化合物を室温で６時間使用することである。
【０１７２】
工程Ｇ：アミドカップリングは、アミドカップリング試薬、例えば１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム−ヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム−テトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）、プロピルホスホン酸無水物（Ｔ３Ｐ）等、及び、溶媒、例えばメチレンクロリド、１，２−ジクロロエタン、テトラヒドロフラン又は酢酸エチル中塩基、例えばトリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン又はピリジンの存在下での酸ＸＸＩアミンＶＩＩＩの反応により達成することができる。特定の条件は、プロピルホスホン無水物と、酢酸エチル中Ｎ−メチルモルホリンを室温で１８時間使用することである。
【０１７３】
工程Ｈ：Ｂｏｃ  Ｎ−保護基の除去は、鉱酸、例えば塩酸、硫酸若しくはリン酸、又は、０℃から８０℃の溶媒、例えばジクロロメタン、クロロホルム、テトラヒドロフラン、メタノール、エタノール若しくは水中有機酸、例えばトリフルオロ酢酸、ジクロロ酢酸、酢酸若しくはｐ−トルエンスルホン酸によって行うことができる。特定の条件は、ジオキサンと酢酸エチルの混合物中ＨＣｌを室温で１８時間使用することである。
【０１７４】
2019518727.tif 000020
工程Ａ：アミンＶＩＩとエチレンジアミンＸＸＩＶとのアミドカップリングは、アミドカップリング試薬、例えばジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム−ヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ），（１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム  ３−オキシド  ヘキサフルオロホスフェート）（ＨＡＴＵ）、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム−テトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）、プロピルホスホン酸無水物（Ｔ３Ｐ）等、及び、溶媒、例えばメチレンクロリド、１，２−ジクロロエタン、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド又は酢酸エチル中塩基、例えばトリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン又はピリジンの存在下で達成することができる。特定の条件は、ＨＡＴＵと、ジメチルホルムアミド中ジイソプロピルエチルアミンを室温で１８時間使用することである。
【０１７５】
工程Ｂ：Ｂｏｃ  Ｎ−保護基の除去は、鉱酸、例えば塩酸、硫酸若しくはリン酸、又は、０℃から８０℃の溶媒、例えばジクロロメタン、クロロホルム、テトラヒドロフラン、メタノール、エタノール若しくは水中有機酸、例えばトリフルオロ酢酸、ジクロロ酢酸、酢酸若しくはｐ−トルエンスルホン酸によって行うことができる。特定の条件は、ジオキサンと酢酸エチルの混合物中ＨＣｌを室温で１８時間使用することである。
【０１７６】
2019518727.tif 000021
工程Ａ：エステルＶＩは、適切な溶媒、例えば１，２−ジメトキシエタン、テトラヒドロフラン、トルエン、メタノール又はエタノール中還元剤、例えば水素化ホウ素リチウム、水素化ホウ素ナトリウム又はＲｅｄ−Ａｌでの−７８℃から還流で１〜２４時間の反応により、アルコールＸＸＶＩＩへ変換することができる。特定の条件は、メタノール中０℃で５時間の水素化ホウ素ナトリウムでの反応において使用され、混合物が一晩室温に温められることを可能にする。
【０１７７】
工程Ｂ：Ｂｏｃ  Ｎ−保護基の除去は、鉱酸、例えば塩酸、硫酸若しくはリン酸、又は、０℃から８０℃の溶媒、例えばジクロロメタン、クロロホルム、テトラヒドロフラン、メタノール、エタノール若しくは水中有機酸、例えばトリフルオロ酢酸、ジクロロ酢酸、酢酸若しくはｐ−トルエンスルホン酸によって行うことができる。特定の条件は、ジオキサンと酢酸エチルの混合物中ＨＣｌを室温で１８時間使用することである。
【０１７８】
2019518727.tif 000022
Ｂｏｃ  Ｎ−保護基の除去は、鉱酸、例えば塩酸、硫酸若しくはリン酸、又は、０℃から８０℃の溶媒、例えばジクロロメタン、クロロホルム、テトラヒドロフラン、メタノール、エタノール若しくは水中有機酸、例えばトリフルオロ酢酸、ジクロロ酢酸、酢酸若しくはｐ−トルエンスルホン酸によって行うことができる。特定の条件は、ジオキサンと酢酸エチルの混合物中ＨＣｌを室温で１８時間使用することである。
【０１７９】
2019518727.tif 000023
工程Ａ：アミンＶＩＩとアミンＸＸＸとのアミドカップリングは、アミドカップリング試薬、例えばジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム−ヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ），（１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム  ３−オキシド  ヘキサフルオロホスフェート）（ＨＡＴＵ）、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム−テトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）、プロピルホスホン酸無水物（Ｔ３Ｐ）等、及び、溶媒、例えばメチレンクロリド、１，２−ジクロロエタン、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド又は酢酸エチル中塩基、例えばトリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン又はピリジンの存在下で達成することができる。特定の条件は、ＨＡＴＵと、ジメチルホルムアミド中ジイソプロピルエチルアミンを室温で１８時間使用することである。
【０１８０】
工程Ｂ：Ｃｂｚ基の除去は、標準圧力又は上昇圧力下での、メタノール又はエタノールのような溶媒中Ｐｄ−Ｃのような触媒での水素化により達成することができる。特定の条件は、大気圧の水素、触媒としてのパラジウム炭とメタノールに溶解した化合物を室温で６時間使用することである。
【０１８１】
工程Ｃ：Ｂｏｃ  Ｎ−保護基の除去は、鉱酸、例えば塩酸、硫酸若しくはリン酸、又は、０℃から８０℃の溶媒、例えばジクロロメタン、クロロホルム、テトラヒドロフラン、メタノール、エタノール若しくは水中有機酸、例えばトリフルオロ酢酸、ジクロロ酢酸、酢酸若しくはｐ−トルエンスルホン酸によって行うことができる。特定の条件は、ジオキサンと酢酸エチルの混合物中ＨＣｌを室温で１８時間使用することである。
【０１８２】
上記の反応及びプロセスを実施する方法は、本開示に基づく技術分野の当業者にとって明らかであるか、又は実施例から同様に推定することができる。出発物質は、市販されているか、又は下記の実施例に記載されているものと類似の方法により作製することができる。
【０１８３】
結晶形
本発明の化合物が固体であるとき、当業者であれば、このような化合物及びその塩が異なる結晶形又は多形で存在することができ、それらすべてが本発明及び規定される式の範囲に含まれることを理解するであろう。
【０１８４】
アッセイ
ＸＩＡＰ  ＢＩＲ２及びＢＩＲ３のＴＲ−ＦＲＥＴアッセイ
ＸＩＡＰタンパク質のＢＩＲ２及び／又はＢＩＲ３ドメインのペプチドＡ（後述の、ＳＭＡＣ由来のペプチド）への結合を阻害する試験化合物の能力は、試験化合物がＳＭＡＣ−模倣剤として働き、その結果細胞のアポトーシス経路を再活性化させることを証明する。
【０１８５】
先述の通り（国際公開第２０１４／０９０７０９号）、ペプチドＡＶＰＩＡＱＫＳＥＫ（配列番号２１）を本アッセイにおける使用に最適であるとみなした。ペプチド配列を、ビオチンを用いて誘導体化し、ＴＲ−ＦＲＥＴアッセイの基質としてＡＶＰＩＡＱＫＳＥＫ−（ε−ビオチン）−ＯＨ  １：２  ＴＦＡを得た。
【０１８６】
ＸＩＡＰタンパク質配列は、ＳＷＩＳＳ−ＰＲＯＴタンパク質配列データベースから得られ、ＢＩＲ２及びＢＩＲ３ドメインはそこから導き出された。ＴＲ−ＦＲＥＴアッセイに使用されるＢＩＲ２ドメインの配列は、
ＭＲＨＨＨＨＨＨＲＤＨＦＡＬＤＲＰＳＥＴＨＡＤＹＬＬＲＴＧＱＶＶＤＩＳＤＴＩＹＰＲＮＰＡＭＹＳＥＥＡＲＬＫＳＦＱＮＷＰＤＹＡＨＬＴＰＲＥＬＡＳＡＧＬＹＹＴＧＩＧＤＱＶＱＣＦＡＣＧＧＫＬＫＮＷＥＰＧＤＲＡＷＳＥＨＲＲＨＦＰＮＣＦＦＶＬＧＲＮＬＮＩＲＳＥ（配列番号２２）である。
【０１８７】
ＴＲ−ＦＲＥＴアッセイに使用されるＢＩＲ３ドメインの配列は、
ＭＲＨＨＨＨＨＨＲＳＤＡＶＳＳＤＲＮＦＰＮＳＴＮＬＰＲＮＰＳＭＡＤＹＥＡＲＩＦＴＦＧＴＷＩＹＳＶＮＫＥＱＬＡＲＡＧＦＹＡＬＧＥＧＤＫＶＫＣＦＨＣＧＧＧＬＴＤＷＫＰＳＥＤＰＷＥＱＨＡＫＷＹＰＧＣＫＹＬＬＥＱＫＧＱＥＹＩＮＮＩＨＬＴＨＳＬＥＥＣＬＶＲＴＴ（配列番号２３）である。
【０１８８】
Ｂｉｒ２アッセイに関して、ＸＩＡＰのアミノ酸１２４−２４０に対応する、３．５ナノモルの６ｘヒスチジンでタグ付けされたＢＩＲ２ドメインを、５０ｍＭのトリス−Ｃｌ（ｐＨ７．５）、１００ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのジチオスレイトール（ＤＴＴ）及び０．１ｍｇ／ｍＬのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）の存在下で、３．６ｎＭのＡＶＰＩＡＱＫＳＥＫ−（ε−ビオチン）−ＯＨ  １：２  ＴＦＡと混合した。４５分間３７℃でのインキュベーションに続き、ユーロピウム−ストレプトアビジン（Ｅｕ−８０４４ストレプトアビジン、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）、及びアロフィコシアニン（Columbia Biosciences）でコンジュゲートされた抗ヒスチジン抗体を最終濃度がそれぞれ０．６ｎＭ及び１ｎＭになるまで添加した。時間分解蛍光共鳴エネルギー移動（ＴＲ−ＦＲＥＴ）シグナルを１時間後室温で測定した。試験化合物の有効性は、１０の連続的に希釈された濃度で評価された。各濃度における阻害率を決定し、各試験化合物のＩＣ５０値を生成した。
【０１８９】
Ｂｉｒ３アッセイに関して、ＸＩＡＰのアミノ酸２４１−３５６に対応する、１３．３ナノモルのＢＩＲ３ドメインを、５０ｍＭのトリス−Ｃｌ（ｐＨ７．５）、１００ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのジチオスレイトール（ＤＴＴ）及び０．１ｍｇ／ｍＬのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）の存在下で、２５．２ｎＭのＡＶＰＩＡＱＫＳＥＫ−（ε−ビオチン）−ＯＨ  １：２  ＴＦＡと混合した。４５分間３７℃でのインキュベーションに続き、ユーロピウム−ストレプトアビジン及びアロフィコシアニンでコンジュゲートされた抗ヒスチジン抗体を最終濃度がそれぞれ０．６ｎＭ及び２．５ｎＭになるまで添加した。時間分解蛍光共鳴エネルギー移動（ＴＲ−ＦＲＥＴ）シグナルを０．５時間後室温で測定した。試験化合物の有効性は、１０の連続的に希釈された濃度で評価された。各濃度における阻害率を決定し、各試験化合物のＩＣ５０値を生成した。
【０１９０】
ｃＩＡＰ  ＢＩＲ２及びＢＩＲ３のＴＲ−ＦＲＥＴアッセイ
ペプチドＡＶＰＩＡＱＫＳＥＫをビオチンを用いて誘導体化し、ＴＲ−ＦＲＥＴアッセイの基質としてＡＶＰＩＡＱＫＳＥＫ−（ε−ビオチン）−ＯＨ  １：２  ＴＦＡを得た。
【０１９１】
ｃＩＡＰタンパク質配列は、ＳＷＩＳＳ−ＰＲＯＴタンパク質配列データベースから得られ、ＢＩＲ２及びＢＩＲ３ドメインはそこから導き出された。ＴＲ−ＦＲＥＴアッセイに使用されるＢＩＲ２ドメインの配列は、
ＭＧＳＳＨＨＨＨＨＨＳＳＧＬＶＰＲＧＳＨＭＡＳＥＮＬＹＦＱＧＴＮＰＹＳＹＡＭＳＴＥＥＡＲＦＬＴＹＨＭＷＰＬＴＦＬＳＰＳＥＬＡＲＡＧＦＹＹＩＧＰＧＤＲＶＡＣＦＡＣ  ＧＧＫＬＳＮＷＥＰＫ  ＤＤＡＭＳＥＨＲＲＨＦＰＮＣＰＦＬＥＮＳ  ＬＥＴである。
【０１９２】
ＴＲ−ＦＲＥＴアッセイに使用されるＢＩＲ３ドメインの配列は、
ＭＡＨＨＨＨＨＨＥＮＬＹＦＱＧＳＳＩＳＮＬＳＭＱＴＨＡＡＲＭＲＴＦＭＹＷＰＳＳＶＰＶＱＰＥＱＬＡＳＡＧＦＹＹＶＧＲＮＤＤＶＫＣＦＣＣＤＧＧＬＲＣＷＥＳＧＤＤＰＷＶＥＨＡＫＷＦＰＲＣＥＦＬＩＲＭＫＧＱＥＦＶＤＥＩＱＧＲＹである。
【０１９３】
Ｂｉｒ２アッセイに関して、ｃＩＡＰのアミノ酸１７４−２５６に対応する、１２ナノモルの６ｘヒスチジンでタグ付けされたＢＩＲ２ドメインを、５０ｍＭのトリス−Ｃｌ（ｐＨ７．５）、１００ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのジチオスレイトール（ＤＴＴ）及び０．１ｍｇ／ｍＬのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）の存在下で、１９．３ｎＭのＡＶＰＩＡＱＫＳＥＫ−（ε−ビオチン）−ＯＨ  １：２  ＴＦＡと混合した。４５分間３７℃でのインキュベーションに続き、ユーロピウム−ストレプトアビジン及びアロフィコシアニンでコンジュゲートされた抗ヒスチジン抗体を最終濃度がそれぞれ０．６ｎＭ及び４ｎＭになるまで添加し、室温で６０分間インキュベートした。４℃での最終的な一晩のインキュベーション後、時間分解蛍光共鳴エネルギー移動（ＴＲ−ＦＲＥＴ）シグナルを測定した。試験化合物の力価は、１０の連続的に希釈された濃度で評価された。各濃度における阻害率を決定し、各試験化合物のＩＣ５０値を生成した。
【０１９４】
Ｂｉｒ３アッセイに関して、ｃＩＡＰのアミノ酸２６０−３５２に対応する、２５．５ナノモルのＢＩＲ３ドメインを、５０ｍＭのトリス−Ｃｌ（ｐＨ７．５）、１００ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのジチオスレイトール（ＤＴＴ）及び０．１ｍｇ／ｍＬのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）の存在下で、４１ｎＭのＡＶＰＩＡＱＫＳＥＫ−（ε−ビオチン）−ＯＨ  １：２  ＴＦＡと混合した。４５分間３７℃でのインキュベーションに続き、ユーロピウム−ストレプトアビジン及びアロフィコシアニンでコンジュゲートされた抗ヒスチジン抗体を最終濃度がそれぞれ０．６ｎＭ及び６．４ｎＭになるまで添加し、室温で６０分間インキュベートした。４℃での最終的な一晩のインキュベーション後、時間分解蛍光共鳴エネルギー移動（ＴＲ−ＦＲＥＴ）シグナルを測定した。試験化合物の力価は、１０の連続的に希釈された濃度で評価された。各濃度における阻害率を決定し、各試験化合物のＩＣ５０値を生成した。
【０１９５】
細胞生存率アッセイ
Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ATCC, 10801 University Boulevard Manassas, VA 20110 USA）からＳＫ−ＯＶ−３細胞及びＨＣＴ−１１６細胞を入手し、１０％のＦＢＳ及び２ｍｍｏｌ／ＬのＬ−グルタミンが補充されたＭｃＣｏｙの５Ａ媒体中で維持した。全ての媒体及び補充物はＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Life Technologies GmbH, Frankfurter Strase 129B 64293 Darmstadt Germany）より購入した。
【０１９６】
３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニル−テトラゾリウム臭化物（ＭＴＴ）を製造業者（Sigma-Aldrich Chemie GmbH, Eschenstr. 5 82024 Taufkirchen Germany）のプロトコールに従って添加することにより、細胞生存率を評価した。単一薬剤活性のために、ＳＫ−ＯＶ−３細胞を、ウェル当たり２０００細胞で９６ウェルプレート（BD Biosciences, Tullastrasse 8-1269126 Heidelberg Germany）に播種し、２４時間後、指示濃度のＮ−（２−（（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−２−オキソエチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリドの（実施例２）でインキュベートした。化合物をＤＭＳＯ中１０ｍＭのストック溶液としてアリコート中に−２０℃で貯蔵した。組み合わせのために、ＨＣＴ−１１６細胞を、ウェル当たり２０００細胞で９６ウェルプレート（BD Biosciences、Tullastrasse 8-12 69126 Heidelberg Germany）に播種し、２４時間後、指示濃度のＮ−（２−（（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−２−オキソエチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド単独で、又はＤＲ５−ＦＡＰ二重特異性抗体Ｘ  ＡＢ（ＤＲ５結合剤：ＶＨ配列番号７、ＶＬ配列番号８、ＦＡＰ結合剤：ＶＨ配列番号１５、ＶＬ配列番号１６）との組み合わせでインキュベートした。５日間のインキュベーションの後、細胞をＭＴＴで１時間処理し、エタノールを用いて染料を抽出した。吸光度を５７０ｎｍで測定し（Tecan Infinite 200 PRO, Tecan Group Ltd. Seestrase 103 8708 Mannedorf Switzerland）、６２０ｎｍの参照波長を使用した。全てのアッセイを二重で行い、データを標準化して制御し、ＸＬｆｉｔソフトウェアを用いて分析した。
【０１９７】
各濃度における阻害率を決定し、各試験化合物のＩＣ５０値を生成した。これらの値を以下の表に列挙する。
2019518727.tif 000024
2019518727.tif 000025
2019518727.tif 000026
2019518727.tif 000027
2019518727.tif 000028
2019518727.tif 000029
2019518727.tif 000030
2019518727.tif 000031
2019518727.tif 000032
2019518727.tif 000033
2019518727.tif 000034
2019518727.tif 000035
2019518727.tif 000036
【０１９８】
図面の簡単な説明
図１：ＳＫ−ＯＶ−３細胞の細胞生存率アッセイにおけるＮ−（２−（（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−２−オキソエチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリドの単一薬剤活性。
【０１９９】
図２：単一薬剤、及びＤＲ５−ＦＡＰ二重特異性抗体Ｘ  ＡＢ（ＦＡＰ−ＤＲ５濃度の漸増）との組み合わせとしての、ＨＣＴ−１１６細胞の細胞生存率アッセイにおけるＮ−（２−（（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−２−オキソエチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリドの活性。
【０２００】
図３：ＨＣＴ−１１６細胞の細胞生存率アッセイにおける、単一薬剤及び  ＤＲ５−ＦＡＰ二重特異性抗体Ｘ  ＡＢ  との組み合わせ（ＦＡＰ−ＤＲ５の固定濃度、１．５μｇ／ｍｌ）を使用）としての、Ｎ−（２−（（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−２−オキソエチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリドの活性。
【０２０１】
図４：ＦＡＰ−ＤＲ５二重特異性抗体分子設計及び作用機序の略図。
【実施例】
【０２０２】
本発明の化合物は、既知の技術に従って合成することができる。以下の実施例及び言及は、本発明の理解を助けるために提供される。ただし、実施例は本発明を限定することを意図するものではなく、本発明の真の範囲は添付の特許請求の範囲に記載されている。
【０２０３】
実施例１
Ｎ−（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−５−イル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド
ａ）１−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−メチル  ６−ブロモ−３−メチル−インドリン−１，３−ジカルボキシレート
2019518727.tif 000037
Ｂｏｃ無水物（１．４９ｇ、１．５９ｍｌ、６．８４ｍｍｏｌ、当量：１．０９）をジクロロメタン（３０ｍｌ）中メチル  ６−ブロモ−３−メチルインドリン−３−カルボキシレート（１．６９６ｇ、６．２８ｍｍｏｌ、当量：１）（国際公開第２０１２１４３７２６号に記載）とＤＩＰＥＡ（９３３ｍｇ、１．２６ｍｌ、７．２２ｍｍｏｌ、当量：１．１５）の溶液に０℃で添加した。室温にゆっくりと温めながら、週末にかけて撹拌を続けた。飽和ＮａＨＣＯ３溶液を添加し、ジクロロメタンで３回抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、エバポレートした。粗物質をシリカゲルに適用し、溶出剤としてヘプタン／酢酸エチル（０−５０％酢酸エチル）を使用したカラムクロマトグラフィーにより精製し、１−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−メチル  ６−ブロモ−３−メチル−インドリン−１，３−ジカルボキシレート（１．７２５ｇ、７４．２％）を明黄色の油として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝３５７．０
【０２０４】
ｂ）ｔｅｒｔ−ブチル−メチル  ６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１，３−ジカルボキシレート
2019518727.tif 000038
（ｄｐｐｆ）ＰｄＣｌ２．ＣＨ２Ｃｌ２（５６ｍｇ、６８．６μｍｏｌ、当量：０．０１）とＴＨＦ（２７．４ｍｌ、１３．７ｍｍｏｌ、当量：２）中（４−フルオロベンジル）塩化亜鉛（ＩＩ）の溶液とを、乾燥ＴＨＦ（１３．９ｍｌ）中１−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−メチル  ６−ブロモ−３−メチルインドリン−１，３−ジカルボキシレート（２．５３９ｇ、６．８６ｍｍｏｌ、当量：１）の溶液に添加した。混合物を密閉バイアル中９０℃で一晩撹拌した。水を数滴添加した後、粗混合物をシリカゲルに適用し、溶出剤としてヘプタン／酢酸エチル（０−３０％酢酸エチル）を使用したカラムクロマトグラフィーにより精製し、１−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−メチル  ６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−１，３−ジカルボキシレート（１．４４ｇ、５２．６％）を明黄色の油として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝３９９．１
【０２０５】
ｃ）メチル  ６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−３−カルボキシレート
2019518727.tif 000039
ジオキサン（８．６３ｇ、８．２１ｍｌ、３２．９ｍｍｏｌ、当量：９．１２）中塩酸を、メタノール（１０ｍｌ）中１−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−メチル  ６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−１，３−ジカルボキシレート（１．４４ｇ、３．６ｍｍｏｌ、当量：１）に添加し、５０℃で５時間撹拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、残留物を水と酢酸エチルとに分けた。水性相を飽和水性ＮａＨＣＯ３でクエンチし、固体を濾別した。水性相を酢酸エチルで３回抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、エバポレートした。粗物質をシリカゲルに適用し、溶出剤としてヘプタン／酢酸エチル（０−５０％酢酸エチル）を使用したカラムクロマトグラフィーにより精製し、メチル  ６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−３−カルボキシレート（１．０５ｇ、９７．３％）を明褐色の油として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝３００．１４
【０２０６】
ｄ）メチル  １−［２−［（２Ｓ，５Ｒ）−４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−３−カルボキシレート
2019518727.tif 000040
メチル  ６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−カルボキシレート（４０３ｍｇ、１．３５ｍｍｏｌ、当量：１）を酢酸エチル（４．５ｍｌ）に溶解し、２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）酢酸（５００ｍｇ、１．３５ｍｍｏｌ、当量：１）（国際公開第２０１２１４３７２６号に記載）、Ｎ−メチルモルホリン（１．３６ｇ、１．４８ｍｌ、１３．５ｍｍｏｌ、当量：１０）及び  ＥｔＯＡｃ  ５０％（２．５７ｇ、２．４ｍｌ、４．０４ｍｍｏｌ、当量：３）中Ｔ３Ｐを添加し、室温で一晩撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。粗物質をシリカゲルに適用し、溶出剤としてヘプタン／酢酸エチル（０−５０％酢酸エチル）を使用したカラムクロマトグラフィーにより精製し、メチル  １−［２−［（２Ｓ，５Ｒ）−４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−３−カルボキシレート（５８８ｍｇ、６６．９％）を白色の泡として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝６５３．３７
【０２０７】
ｅ）１−［２−［（２Ｓ，５Ｒ）−４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−３−カルボン酸
2019518727.tif 000041
メチル  １−（２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−カルボキシレート（２．１ｇ、３．２２ｍｍｏｌ、当量：１）をエタノール（１３ｍｌ）及び水（５．２ｍｌ）中で撹拌した。水酸化リチウム（２３１ｍｇ、９．６５ｍｍｏｌ、当量：３）を添加し、６０℃で３時間撹拌を続けた。溶媒をエバポレートし、ＨＣｌ  １Ｎ  ａｑを用いて水相をｐＨ７に酸性化した。混合物を酢酸エチルで３回抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、エバポレートして、１−［２−［（２Ｓ，５Ｒ）−４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−３−カルボン酸（２．０４ｇ、９９．３％）をオフホワイトの泡として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝６３９．３５
【０２０８】
ｆ）３−［［（３Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］イソインドリン−５−イル］カルバモイル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート
2019518727.tif 000042
１−（２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−カルボン酸（１００ｍｇ、１５７μｍｏｌ、当量：１）を、酢酸エチル（６００μｌ）中でｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−６−アミノ−１−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−２−イル）−２−オキソ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメート（９６．４ｍｇ、１５７μｍｏｌ、当量：１；中間体２）、Ｎ−メチルモルホリン（１５８ｍｇ、１７２μｌ、１．５７ｍｍｏｌ、当量：１０）及びＥｔＯＡｃ  ５０％（２９９ｍｇ、２８０μｌ、４７０μｍｏｌ、当量：３）中Ｔ３Ｐと室温で一晩撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ３溶液を添加し、酢酸エチルで３回抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、エバポレートした。粗物質をシリカゲルに適用し、溶出剤として酢酸エチルを使用したカラムクロマトグラフィーにより精製し、３−［［（３Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］イソインドリン−５−イル］カルバモイル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート（１２０ｍｇ、６２％）を白色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１２３６．２３
【０２０９】
ｇ）Ｎ−［（３Ｓ）−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］イソインドリン−５−イル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−１−［２−［（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド
2019518727.tif 000043
（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（３−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−５−イル）カルバモイル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（１１０ｍｇ、８９μｍｏｌ、当量：１）を酢酸エチル（１．５ｍｌ）中でジオキサン４Ｍ（２ｍｌ、８ｍｍｏｌ、当量：８９．９）中ＨＣｌと室温で一晩撹拌した。沈殿物を濾別し、エーテルで洗浄した。高減圧下で固体を乾燥させ、Ｎ−［（３Ｓ）−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］イソインドリン−５−イル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−１−［２−［（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド（９９．４ｍｇ、９７．５％）をオフホワイトの固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１０３６．５２
【０２１０】
実施例２
Ｎ−（２−（（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−２−オキソエチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド
ａ）（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（６−（４−フルオロベンジル）−３−（（２−メトキシ−２−オキソエチル）カルバモイル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート
2019518727.tif 000044
１−（２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−カルボン酸（５００ｍｇ、７８３μｍｏｌ、当量：１）を、メチル  ２−アミノアセテート  ヒドロクロリド（１１３ｍｇ）、ＤＩＰＥＡ（４０５ｍｇ、５４７μｌ、９００μｍｏｌ、当量：１．１５）及びＨＡＴＵ（３８７ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ、当量：１．３）と室温で一晩撹拌した。反応混合物を０．５Ｍ  ＨＣｌ  ａｑ．に注ぎ、酢酸エチルで３回抽出し、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、エバポレートした。粗物質をシリカゲルに適用し、溶出剤として酢酸エチル／メタノール（０−５％メタノール）を使用したカラムクロマトグラフィーにより精製し、（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（６−（４−フルオロベンジル）−３−（（２−メトキシ−２−オキソエチル）カルバモイル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（３６９ｍｇ、５２０μｍｏｌ、６６．４％）を明黄色の泡として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝７１０．３９
【０２１１】
ｂ）（２−（１−（２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−カルボキサミド）酢酸
2019518727.tif 000045
（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（６−（４−フルオロベンジル）−３−（（２−メトキシ−２−オキソエチル）カルバモイル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（３６０ｍｇ、５０７μｍｏｌ、当量：１）を、エタノール（２．５ｍｌ）及び水（１ｍｌ）中で撹拌した。水酸化リチウム（３６．４ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ、当量：３）を添加し、６０℃で３時間撹拌を続けた。溶媒をエバポレートし、ＨＣｌ  ２Ｎ  ａｑを用いて水相をｐＨ５〜６に酸性化した。混合物を酢酸エチルで３回抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、エバポレートして、２−（１−（２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−カルボキサミド）酢酸（３０６ｍｇ、４４０μｍｏｌ、８６．７％）を白色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝６９６．３８
【０２１２】
ｃ）ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［３−［［２−［［（３Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］イソインドリン−５−イル］アミノ］−２−オキソ−エチル］カルバモイル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート
2019518727.tif 000046
２−（１−（２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−カルボキサミド）酢酸（５０ｍｇ、７１．９μｍｏｌ、当量：１）を、酢酸エチル（３００μｌ）中でｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−６−アミノ−１−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−２−イル）−２−オキソ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメート（４４．２ｍｇ、７１．９μｍｏｌ、当量：１；中間体２）、Ｎ−メチルモルホリン（７２．７ｍｇ、７９μｌ、７１９μｍｏｌ、当量：１０）及びＥｔＯＡｃ  ５０％（１３７ｍｇ、１２８μｌ、２１６μｍｏｌ、当量：３）中Ｔ３Ｐと室温で一晩撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ３溶液を添加し、酢酸エチルで３回抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、エバポレートした。粗物質をシリカゲルに適用し、溶出剤として酢酸エチル／メタノール（０−１０％メタノール）を使用したカラムクロマトグラフィーにより精製し、ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［３−［［２−［［（３Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］イソインドリン−５−イル］アミノ］−２−オキソ−エチル］カルバモイル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート（４８ｍｇ、５１．６％）を白色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１２９３．６５
【０２１３】
ｄ）Ｎ−［２−［［（３Ｓ）−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］イソインドリン−５−イル］アミノ］−２−オキソ−エチル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−１−［２−［（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド
2019518727.tif 000047
（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（３−（（２−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−２−オキソエチル）カルバモイル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレートを、酢酸エチル（６００μＬ）中でジオキサン４Ｍ（７５０μｌ、３ｍｍｏｌ、当量：９２．４）中ＨＣｌと室温で一晩撹拌した。沈殿物を濾別し、ジエチルエーテルで洗浄した。高減圧下で固体を乾燥させ、Ｎ−［２−［［（３Ｓ）−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］イソインドリン−５−イル］アミノ］−２−オキソ−エチル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−１−［２−［（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド（３５．５ｍｇ、９０．９％）を白色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１０９３．５４
【０２１４】
実施例３
ａ）（Ｒ，Ｒ，Ｒ）−Ｎ，Ｎ’−（エタン−１，２−ジイル）ビス（６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド）トリヒドロクロリド  ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［３−［２−［［１−［２−［（２Ｓ，５Ｒ）−４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−３−カルボニル］アミノ］エチルカルバモイル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート
2019518727.tif 000048
１−（２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−カルボン酸（７５ｍｇ、１１７μｍｏｌ、当量：２）を、ＤＭＦ（５００μｌ）中でエタン−１，２−ジアミン（３．５３ｍｇ、３．９３μｌ、５８．７μｍｏｌ、当量：１）、ＤＩＰＥＡ（６０．７ｍｇ、７９．９μｌ、４７０μｍｏｌ、当量：８）及びＨＡＴＵ（５８．１ｍｇ、１５３μｍｏｌ、当量：２．６）と室温で一晩撹拌した。混合物を０．５Ｍ  ＨＣｌ  ａｑ．でクエンチし、酢酸エチルで３回抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、エバポレートした。粗物質をシリカゲルに適用し、溶出剤として酢酸エチル／メタノール（０−１０％メタノール）を使用したカラムクロマトグラフィーにより精製し、ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［３−［２−［［１−［２−［（２Ｓ，５Ｒ）−４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−３−カルボニル］アミノ］エチルカルバモイル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート（５６ｍｇ、７３．２％）を白色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１３０１．７５
【０２１５】
ｂ）６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−Ｎ−［２−［［６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−１−［２−［（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］インドリン−３−カルボニル］アミノ］エチル］−３−メチル−１−［２−［（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド
2019518727.tif 000049
（Ｒ，２Ｒ，２’Ｒ，５Ｓ，５’Ｓ）−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル  ４，４’−（（３，３’−（（エタン−１，２−ジイルビス（アザンジイル））ビス（カルボニル））ビス（６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３，１−ジイル））ビス（２−オキソエタン−２，１−ジイル））ビス（２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート）（４９ｍｇ、３７．６μｍｏｌ、当量：１）を、酢酸エチル（７５０μｌ）中で、ジオキサン４Ｍ（８５０μｌ、３．４ｍｍｏｌ、当量：９０．３）中  ＨＣｌと室温で一晩撹拌した。沈殿物を濾別し、ジエチルエーテルで洗浄した。固体を高減圧下で乾燥させ、（Ｒ，Ｒ，Ｒ）−Ｎ，Ｎ’−（エタン−１，２−ジイル）ビス（６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド）トリヒドロクロリド（３９．４ｍｇ、８６．４％）をオフホワイトの固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１１０１．６５
【０２１６】
実施例４
Ｎ−（４−（（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−５−イル）カルバモイル）フェニル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド
ａ）ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−［（４−メトキシカルボニルフェニル）カルバモイル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート
2019518727.tif 000050
１−（２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−カルボン酸（３００ｍｇ、４７０μｍｏｌ、当量：１）を、メチル  ４−アミノベンゾエート（７１ｍｇ、４７０μｍｏｌ、当量：１．０）、ＤＩＰＥＡ（１８２ｍｇ、２４６μｌ、１．４１ｍｍｏｌ、当量：３）及びＨＡＴＵ（２３２ｍｇ、６１１μｍｏｌ、当量：１．３）と室温で一晩撹拌した。反応混合物を０．５Ｍ  ＨＣｌ  ａｑ．に注ぎ、酢酸エチルで３回抽出し、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、エバポレートした。粗物質をシリカゲルに適用し、溶出剤としてヘプタン／酢酸エチル（０−１００％酢酸エチル）を使用したカラムクロマトグラフィーにより精製し、ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−［（４−メトキシカルボニルフェニル）カルバモイル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート（１８２ｍｇ、５０．２％）をオレンジ色の油として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝７７２．４
【０２１７】
ｂ）４−［［１−［２−［（２Ｓ，５Ｒ）−４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−３−カルボニル］アミノ］安息香酸
2019518727.tif 000051
（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（６−（４−フルオロベンジル）−３−（（４−（メトキシカルボニル）フェニル）カルバモイル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（１７５ｍｇ、２２７μｍｏｌ、当量：１）をエタノール（１．２ｍｌ）及び水（５００μｌ）中で撹拌した。水酸化リチウム（１６．３ｍｇ、６８０μｍｏｌ、当量：３）を添加し、６０℃で３時間撹拌を続けた。溶媒をエバポレートし、ＨＣｌ  １Ｎ  ａｑを用いて水層をｐＨ６に酸性化した。混合物を酢酸エチルで３回抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、エバポレートして、４−［［１−［２−［（２Ｓ，５Ｒ）−４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−３−カルボニル］アミノ］安息香酸（８７ｍｇ、５０．６％）をオフホワイトの固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝７５８．４
【０２１８】
ｃ）ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［３−［［４−［［（３Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］イソインドリン−５−イル］カルバモイル］フェニル］カルバモイル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート
2019518727.tif 000052
４−（１−（２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−カルボキサミド）安息香酸（４０ｍｇ、５２．８μｍｏｌ、当量：１）を、酢酸エチル（２５０μｌ）中でｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−６−アミノ−１−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−２−イル）−２−オキソ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメート（３２．５ｍｇ、５２．８μｍｏｌ、当量：１；中間体２）、Ｎ−メチルモルホリン（５３．４ｍｇ、５８μｌ、５２８μｍｏｌ、当量：１０）及びＥｔＯＡｃ  ５０％（１０１ｍｇ、９４．３μｌ、１５８μｍｏｌ、当量：３）中Ｔ３Ｐと室温で一晩撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ３を添加し、混合物を酢酸エチルで３回抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、エバポレートした。粗物質をシリカゲルに適用し、溶出剤として酢酸エチル／メタノール（０−５％メタノール）を使用したカラムクロマトグラフィーにより精製し、ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［３−［［４−［［（３Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］イソインドリン−５−イル］カルバモイル］フェニル］カルバモイル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート（２６ｍｇ、３６．３％）を白色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１３５５．７
【０２１９】
ｄ）Ｎ−［４−［［（３Ｓ）−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］イソインドリン−５−イル］カルバモイル］フェニル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−１−［２−［（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド
2019518727.tif 000053
（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（３−（（４−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−５−イル）カルバモイル）フェニル）カルバモイル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（２２ｍｇ、１６．２μｍｏｌ、当量：１）を、酢酸エチル（１０００μｌ）中でジオキサン４Ｍ（４００μｌ、１．６ｍｍｏｌ、当量：９８．６）中ＨＣｌと室温で一晩撹拌した。沈殿物を濾別し、ジエチルエーテルで洗浄した。固体を高減圧下で乾燥させ、Ｎ−（４−（（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−５−イル）カルバモイル）フェニル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド  （１２．１ｍｇ、５９％）をオフホワイトの固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１１５５．６
【０２２０】
実施例５
（３Ｓ）−２−（（Ｓ）−３，３−ジメチル−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）ブタノイル）−７−（６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド）−Ｎ−（（Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−１−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド  
ａ）ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［３−［［（３Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパノイル］アミノ］−３，３−ジメチル−ブタノイル］−３−［［（１Ｒ）−テトラリン−１−イル］カルバモイル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−７−イル］カルバモイル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート
2019518727.tif 000054
１−（２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−カルボン酸（４０ｍｇ、６２．６μｍｏｌ、当量：１）を、酢酸エチル（３５０μｌ）中でｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（Ｓ）−７−アミノ−３−（（（Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−１−イル）カルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）−３，３−ジメチル−１−オキソブタン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメート（３８．８ｍｇ、６２．６μｍｏｌ、当量：１）（国際公開第２０１３／１９２２８６号に記載）、Ｎ−メチルモルホリン（６３．３ｍｇ、６８．８μｌ、６２６μｍｏｌ、当量：１０）及びＥｔＯＡｃ  ５０％（１２０ｍｇ、１１２μｌ、１８８μｍｏｌ、当量：３）中Ｔ３Ｐと室温で一晩撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ３を添加し、酢酸エチルで３回抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、エバポレートした。粗物質をシリカゲルに適用し、溶出剤として酢酸エチルを使用したカラムクロマトグラフィーにより精製し、（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（３−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）プロパンアミド）−３，３−ジメチルブタノイル）−３−（（（Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−１−イル）カルバモイル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−イル）カルバモイル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（４４．１ｍｇ、５６．８％）を白色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１２４０．７２
【０２２１】
ｂ）（３Ｓ）−２−［（２Ｓ）−３，３−ジメチル−２−［［（２Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパノイル］アミノ］ブタノイル］−７−［［６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−１−［２−［（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］インドリン−３−カルボニル］アミノ］−Ｎ−［（１Ｒ）−テトラリン−１−イル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド
2019518727.tif 000055
（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（３−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）プロパンアミド）−３，３−ジメチルブタノイル）−３−（（（Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−１−イル）カルバモイル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−イル）カルバモイル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（３９ｍｇ、３１．４μｍｏｌ、当量：１）を、酢酸エチル（１ｍｌ）中でジオキサン４Ｍ（７００μｌ、２．８ｍｍｏｌ、当量：８９．１）中ＨＣｌと室温で一晩撹拌した。沈殿物を濾別し、ジエチルエーテルで洗浄した。固体を高減圧下で乾燥させ、（３Ｓ）−２−（（Ｓ）−３，３−ジメチル−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）ブタノイル）−７−（６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド）−Ｎ−（（Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−１−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド（３０ｍｇ、８３％）をオフホワイトの固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１０４０．６２
【０２２２】
実施例６
（３Ｓ）−２−（（Ｓ）−３，３−ジメチル−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）ブタノイル）−７−（２−（６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド）アセトアミド）−Ｎ−（（Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−１−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド  
ａ）ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［３−［［２−［［（３Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパノイル］アミノ］−３，３−ジメチル−ブタノイル］−３−［［（１Ｒ）−テトラリン−１−イル］カルバモイル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−７−イル］アミノ］−２−オキソ−エチル］カルバモイル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート
2019518727.tif 000056
２−（１−（２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−カルボキサミド）酢酸（４０ｍｇ、５７．５μｍｏｌ、当量：１）を、酢酸エチル（３５０μｌ）中でｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（Ｓ）−７−アミノ−３−（（（Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−１−イル）カルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）−３，３−ジメチル−１−オキソブタン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメート（３５．６ｍｇ、５７．５μｍｏｌ、当量：１）、Ｎ−メチルモルホリン（５８．１ｍｇ、６３．２μｌ、５７５μｍｏｌ、当量：１０）及びＥｔＯＡｃ  ５０％（１１０ｍｇ、１０３μｌ、１７２μｍｏｌ、当量：３）中Ｔ３Ｐと室温で一晩撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ３溶液を添加し、酢酸エチルで３回抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、エバポレートした。粗物質をシリカゲルに適用し、溶出剤として酢酸エチルを使用したカラムクロマトグラフィーにより精製し、ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［３−［［２−［［（３Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパノイル］アミノ］−３，３−ジメチル−ブタノイル］−３−［［（１Ｒ）−テトラリン−１−イル］カルバモイル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−７−イル］アミノ］−２−オキソ−エチル］カルバモイル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート（４０ｍｇ、５３．６％）をオフホワイトの固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１２９７．７４
【０２２３】
ｂ）（３Ｓ）−２−［（２Ｓ）−３，３−ジメチル−２−［［（２Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパノイル］アミノ］ブタノイル］−７−［［２−［［６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−１−［２−［（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］インドリン−３−カルボニル］アミノ］アセチル］アミノ］−Ｎ−［（１Ｒ）−テトラリン−１−イル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド
2019518727.tif 000057
（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（３−（（２−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）プロパンアミド）−３，３−ジメチルブタノイル）−３−（（（Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−１−イル）カルバモイル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−イル）アミノ）−２−オキソエチル）カルバモイル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（３６ｍｇ、２７．７μｍｏｌ、当量：１）を酢酸エチル（８００μＬ）中でジオキサン４Ｍ（６５０μｌ、２．６ｍｍｏｌ、当量：９３．７）中ＨＣｌと室温で一晩撹拌した。沈殿した固形物を濾別し、ジエチルエーテルで洗浄した。固体を高減圧下で乾燥させ、（３Ｓ）−２−（（Ｓ）−３，３−ジメチル−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）ブタノイル）−７−（２−（６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド）アセトアミド）−Ｎ−（（Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−１−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド  （２４．５ｍｇ、７３．２％）をオフホワイトの固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１０９７．６３
【０２２４】
実施例７
Ｎ１−（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−５−イル）−Ｎ３−（３−（６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−イル）プロピル）マロンアミド  トリヒドロクロリド  
ａ）ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（２−シアノエチル）−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−カルボキシレート
2019518727.tif 000058
（ｄｐｐｆ）ＰｄＣｌ２．ＣＨ２Ｃｌ２（２２．４ｍｇ、２７．４μｍｏｌ、当量：０．０１）と、ＴＨＦ（１１ｍｌ、５．４８ｍｍｏｌ、当量：２）中（４−フルオロベンジル）塩化亜鉛（ＩＩ）０．５Ｍの溶液とを、ＴＨＦ（１０ｍｌ）中ｔｅｒｔ−ブチル  ６−ブロモ−３−（２−シアノエチル）−３−メチルインドリン−１−カルボキシレート（１０００ｍｇ、２．７４ｍｍｏｌ、当量：１）（国際公開第２００９１５８０１１号に記載）の明黄色の溶液に添加した。シールド管を密閉し、暗褐色の懸濁液を９０℃に加熱し、２時間撹拌した。水を数滴添加した後、粗混合物をシリカゲルに適用し、溶出剤としてヘプタン／酢酸エチル（０−３０％酢酸エチル）を使用したカラムクロマトグラフィーにより精製し、ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（２−シアノエチル）−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−カルボキシレート（１．００３ｇ、９２．９％）を明黄色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ−ＢＯＣ＋Ｈ）＋＝２９５．２
【０２２５】
ｂ）３−［６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−３−イル］プロパンニトリル
2019518727.tif 000059
ジオキサン（１０．６ｍｌ、４２．６ｍｍｏｌ、当量：１６）中ＨＣｌ  ４Ｍを、メタノール（１０ｍｌ）中ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（２−シアノエチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−１−カルボキシレート（１．０５０ｇ、２．６６ｍｍｏｌ、当量：１）の明黄色の懸濁液に室温で添加した。黄色の溶液を室温で２時間撹拌した。溶媒をエバポレートし、黄色の油を酢酸エチルで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で抽出した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、エバポレートして、３−［６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−３−イル］プロパンニトリル（７６３ｍｇ、９７．４％）をオレンジ色の油として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝２９５．２
【０２２６】
ｃ）ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［３−（２−シアノエチル）−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート
2019518727.tif 000060
３−（６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−イル）プロパンニトリル（７６３ｍｇ、２．５９ｍｍｏｌ、当量：１）を酢酸エチル（１０ｍｌ）に溶解し、２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）酢酸（９６３ｍｇ、２．５９ｍｍｏｌ、当量：１）、ＥｔＯＡｃ  ５０％（４．９５ｇ、４．５８ｍｌ、７．７８ｍｍｏｌ、当量：３）中Ｔ３Ｐ及びＮ−メチルモルホリン（２．６２ｇ、２．８５ｍｌ、２５．９ｍｍｏｌ、当量：１０）を添加し、反応物を室温で一晩撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄し、Ｍｇ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。粗残留物をシリカゲルに適用し、溶出剤として酢酸エチル／ヘプタン（５０−１００％酢酸エチル）を使用したカラムクロマトグラフィーにより精製し、ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［３−（２−シアノエチル）−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート（９８３ｍｇ、５８．５％）を白色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝６４８．４
【０２２７】
ｄ）ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［３−（３−アミノプロピル）−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート
2019518727.tif 000061
（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（３−（２−シアノエチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（８５０ｍｇ、１．３１ｍｍｏｌ、当量：１）をＭｅＯＨ  ７Ｎ（１５．７ｇ、２０ｍｌ、１４０ｍｍｏｌ、当量：１０７）中アンモニアに溶解し、スパチュラを用いてラネーニッケル（１．３１ｍｍｏｌ、当量：１）を触媒量で添加した。反応器を脱気し、水素でパージし（３回）、反応物を５０℃に加熱し、水素雰囲気下で８時間激しく撹拌した。反応物を室温に一晩冷ました。反応混合物をデカライト（ｄｅｃａｌｉｔｅ）で濾過し、メタノールで洗浄してエバポレートした。粗残留物をシリカゲルに適用し、溶出剤としてジクロロメタン／メタノール（０−５％メタノールを使用したカラムクロマトグラフィーにより精製し、ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［３−（３−アミノプロピル）−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート（４３６ｍｇ、５１％）を白色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝６５２．４
【０２２８】
ｅ）ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［３−［３−［（３−ベンジルオキシ−３−オキソ−プロパノイル）アミノ］プロピル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート
2019518727.tif 000062
（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（３−（３−アミノプロピル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（５０ｍｇ、７６．７μｍｏｌ、当量：１）、３−（ベンジルオキシ）−３−オキソプロパン酸（１７．２ｍｇ、８４．４μｍｏｌ、当量：１．１）、ＨＡＴＵ（３２．１ｍｇ、８４．４μｍｏｌ、当量：１．１）及びＤＩＰＥＡ（１９．８ｍｇ、２６．８μｌ、１５３μｍｏｌ、当量：２）をＤＭＦ（１ｍｌ）に溶解し、明黄色の溶液を室温で一晩撹拌した。酢酸エチルを添加し、混合物を水及びブラインで抽出した。粗残留物をシリカゲルに適用し、溶出剤として酢酸エチル／ヘプタン（０−１００％酢酸エチル）を使用したカラムクロマトグラフィー（塩基性シリカ）により精製し、ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［３−［３−［（３−ベンジルオキシ−３−オキソ−プロパノイル）アミノ］プロピル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート（４８ｍｇ、７５．６％）を無色の油として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝８２８．５
【０２２９】
ｆ）３−［３−［１−［２−［（２Ｓ，５Ｒ）−４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−３−イル］プロピルアミノ］−３−オキソ−プロパン酸
2019518727.tif 000063
Ｐｄ−Ｃ（１４．５ｍｇ、１３．６μｍｏｌ、当量：０．２５）を、メタノール（０．５ｍｌ）中（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（３−（３−（３−（ベンジルオキシ）−３−オキソプロパンアミド）プロピル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（４５ｍｇ、５４．３μｍｏｌ、当量：１）の透明な溶液に添加し、反応物を水素雰囲気下室温で６時間撹拌した。反応混合物をデカライトで濾過し、メタノールで洗浄した。濾液をエバポレートし、３−［３−［１−［２−［（２Ｓ，５Ｒ）−４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−３−イル］プロピルアミノ］−３−オキソ−プロパン酸（３３ｍｇ、８２．３％）を明黄色の泡として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝７３８．４
【０２３０】
ｇ）ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［３−［３−［［３−［［（３Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］イソインドリン−５−イル］アミノ］−３−オキソ−プロパノイル］アミノ］プロピル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート
2019518727.tif 000064
３−（（３−（１−（２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−イル）プロピル）アミノ）−３−オキソプロパン酸（３０ｍｇ、４０．７μｍｏｌ、当量：１）、ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−６−アミノ−１−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−２−イル）−２−オキソ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメート（２５ｍｇ、４０．７μｍｏｌ、当量：１；中間体２）、ＥｔＯＡｃ（７７．６ｍｇ、７２．６μｌ、１２２μｍｏｌ、当量：３）中Ｔ３Ｐ  ５０％及びＮ−メチルモルホリン（４１．１ｍｇ、４４．７μｌ、４０７μｍｏｌ、当量：１０）を合わせて酢酸エチル（０．３ｍｌ）に溶解し、黄色の溶液を室温で一晩撹拌した。溶媒をエバポレートし、粗残留物をシリカゲルに適用し、酢酸エチル／メタノール（０−１０％メタノール）を使用したカラムクロマトグラフィーにより精製し、ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［３−［３−［［３−［［（３Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］イソインドリン−５−イル］アミノ］−３−オキソ−プロパノイル］アミノ］プロピル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート（１３ｍｇ、２３．９％）を黄色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１３３５．７
【０２３１】
ｈ）Ｎ’−［（３Ｓ）−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］イソインドリン−５−イル］−Ｎ−［３−［６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−１−［２−［（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］インドリン−３−イル］プロピル］プロパンジアミド  トリヒドロクロリド
2019518727.tif 000065
ジオキサン（２４．６ｍｇ、２０．５μｌ、６７４μｍｏｌ、当量：１００）中ＨＣｌ  ４Ｎを、酢酸エチル（０．５ｍｌ）中（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（３−（３−（３−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−３−オキソプロパンアミド）プロピル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（９ｍｇ、６．７４μｍｏｌ、当量：１）の黄色の溶液に添加し、反応物を室温で一晩撹拌した。沈殿物を濾別し、ジエチルエーテルで洗浄し、真空中で乾燥させて、Ｎ１−（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−５−イル）−Ｎ３−（３−（６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−イル）プロピル）マロンアミド  トリヒドロクロリド  （５．６ｍｇ、６６．８％）を明黄色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１１３５．６
【０２３２】
実施例８
（３Ｓ）−Ｎ−［２−［［（３Ｓ）−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］イソインドリン−５−イル］アミノ］−２−オキソ−エチル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−１−［２−［（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド
ａ）ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［（３Ｓ）−３−［［２−［［（３Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］イソインドリン−５−イル］アミノ］−２−オキソ−エチル］カルバモイル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート
2019518727.tif 000066
２−（（Ｓ）−１−（２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−カルボキサミド）酢酸（１４０ｍｇ、２０１μｍｏｌ、当量：１）を、酢酸エチル（１．１ｍｌ）中でｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−６−アミノ−１−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−２−イル）−２−オキソ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメート（１２４ｍｇ、２０１μｍｏｌ、当量：１；中間体２）、Ｎ−メチルモルホリン（２０４ｍｇ、２２１μｌ、２．０１ｍｍｏｌ、当量：１０）及びＥｔＯＡｃ  ５０％（３８４ｍｇ、３５９μｌ、６０４μｍｏｌ、当量：３）中Ｔ３Ｐと室温で３時間撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ３を添加し、酢酸エチルで３回抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、エバポレートした。粗物質をシリカゲルに適用し、溶出剤として酢酸エチル／メタノール（０−１０％メタノール）を使用したカラムクロマトグラフィーにより精製し、ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［（３Ｓ）−３−［［２−［［（３Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］イソインドリン−５−イル］アミノ］−２−オキソ−エチル］カルバモイル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート（１９５ｍｇ、７４．９％）を明黄色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１２９３．７
【０２３３】
ｂ）（３Ｓ）−Ｎ−［２−［［（３Ｓ）−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］イソインドリン−５−イル］アミノ］−２−オキソ−エチル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−１−［２−［（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド
2019518727.tif 000067
（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（（Ｓ）−３−（（２−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−２−オキソエチル）カルバモイル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（１８８ｍｇ、１４５μｍｏｌ、当量：１）を、酢酸エチル（３ｍｌ）中でジオキサン４Ｍ（３ｍｌ、１２ｍｍｏｌ、当量：８２．６）中ＨＣｌと室温で一晩撹拌した。沈殿物を濾別し、ジエチルエーテルで洗浄し、高減圧下で乾燥させて、（３Ｓ）−Ｎ−［２−［［（３Ｓ）−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］イソインドリン−５−イル］アミノ］−２−オキソ−エチル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−１−［２−［（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド（１６１ｍｇ、９２．１％）を白色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１０９３．５
【０２３４】
実施例９
（３Ｒ）−Ｎ−［２−［［（３Ｓ）−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］イソインドリン−５−イル］アミノ］−２−オキソ−エチル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−１−［２−［（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド
ａ）（Ｒ）−１−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−メチル  ６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−１，３−ジカルボキシレート  
2019518727.tif 000068
ラセミ体のｔｅｒｔ−ブチル−メチル  ６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１，３−ジカルボキシレート（１．２１ｇ、３．０３ｍｍｏｌ、当量：１）をキラル分離し、（Ｒ）−１−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−メチル  ６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−１，３−ジカルボキシレート（５７１ｍｇ、４７．２％）を無色の油として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｍ＋＝３９９．２０
【０２３５】
ｂ）メチル（３Ｒ）−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−３−カルボキシレート
2019518727.tif 000069
（Ｒ）−１−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−メチル  ６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−１，３−ジカルボキシレートを使用して、実施例１ｃ）と同じ方法で生成物を調製し、メチル（３Ｒ）−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−３−カルボキシレート（３７３ｍｇ、９５．４％）を明黄色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝３００．１４
【０２３６】
ｃ）（３Ｒ）−１−［２−［（２Ｓ，５Ｒ）−４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−３−カルボキシレート
2019518727.tif 000070
（Ｒ）−メチル  ６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−カルボキシレート（３１４ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ、当量：１）及び２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）酢酸（３９０ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ、当量：１）を出発物質として使用して、実施例１ｄ）と同じ方法で生成物を調製し、メチル（３Ｒ）−１−［２−［（２Ｓ，５Ｒ）−４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−３−カルボキシレート（５０５ｍｇ、７３．７％）を明黄色の油として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝６５３．３７
【０２３７】
（Ｒ）−１−（２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−カルボン酸  
2019518727.tif 000071
（Ｒ）−メチル  １−（２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−カルボキシレート（５００ｍｇ、７６６μｍｏｌ、当量：１）を出発物質として使用して、実施例１ｅ）と同じ方法で生成物を調製し、（Ｒ）−１−（２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−カルボン酸（４４１ｍｇ、６９０μｍｏｌ、９０．１％）をオフホワイトの泡として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝６３９．３６
【０２３８】
ｄ）（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（（Ｒ）−６−（４−フルオロベンジル）−３−（（２−メトキシ−２−オキソエチル）カルバモイル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート
2019518727.tif 000072
（Ｒ）−１−（２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−カルボン酸（４３０ｍｇ、６７３μｍｏｌ、当量：１）を出発物質として使用して、実施例２ａ）と同じ方法で生成物を調製し、（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（（Ｒ）−６−（４−フルオロベンジル）−３−（（２−メトキシ−２−オキソエチル）カルバモイル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（４５５ｍｇ、６４１μｍｏｌ、９５．２％）を明黄色の油として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝７１０．４
【０２３９】
ｅ）２−［［（３Ｒ）−１−［２−［（２Ｓ，５Ｒ）−４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−３−カルボニル］アミノ］酢酸
2019518727.tif 000073
（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（（Ｒ）−６−（４−フルオロベンジル）−３−（（２−メトキシ−２−オキソエチル）カルバモイル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（４３５ｍｇ、６１３μｍｏｌ、当量：１）を出発物質として使用して、実施例２ｂ）と同じ方法で生成物を調製し、２−［［（３Ｒ）−１−［２−［（２Ｓ，５Ｒ）−４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−３−カルボニル］アミノ］酢酸  （２８３ｍｇ、６６．４％）を明黄色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝６９６．３７９３
【０２４０】
ｆ）ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［（３Ｒ）−３−［［２−［［（３Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］イソインドリン−５−イル］アミノ］−２−オキソ−エチル］カルバモイル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート
2019518727.tif 000074
２−（（Ｒ）−１−（２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−カルボキサミド）酢酸（１４０ｍｇ、２０１μｍｏｌ、当量：１）を、酢酸エチル（１．１ｍｌ）中でｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−６−アミノ−１−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−２−イル）−２−オキソ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメート（１２４ｍｇ、２０１μｍｏｌ、当量：１；中間体２）、Ｎ−メチルモルホリン（２０４ｍｇ、２２１μｌ、２．０１ｍｍｏｌ、当量：１０）及びＥｔＯＡｃ  ５０％（３８４ｍｇ、３５９μｌ、６０４μｍｏｌ、当量：３）中Ｔ３Ｐと室温で一晩撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ３溶液を添加し、酢酸エチルで３回抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、エバポレートした。粗物質をシリカゲルに適用し、溶出剤として酢酸エチル／メタノール（０−１０％メタノール）を使用したカラムクロマトグラフィーにより精製し、（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（（Ｒ）−３−（（２−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−２−オキソエチル）カルバモイル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（１７７ｍｇ、６８％）を明黄色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１２９３．６６
【０２４１】
ｇ）（３Ｒ）−Ｎ−［２−［［（３Ｓ）−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］イソインドリン−５−イル］アミノ］−２−オキソ−エチル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−１−［２−［（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド
2019518727.tif 000075
（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（（Ｒ）−３−（（２−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−２−オキソエチル）カルバモイル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（１７８ｍｇ、１３８μｍｏｌ、当量：１）を、酢酸エチル（３ｍｌ）中でジオキサン４Ｍ（３ｍｌ、１２ｍｍｏｌ、当量：８７．２）中ＨＣｌと室温で一晩撹拌した。沈殿物を濾別し、ジエチルエーテルで洗浄した。高減圧下で固体を乾燥させ、（３Ｒ）−Ｎ−［２−［［（３Ｓ）−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］イソインドリン−５−イル］アミノ］−２−オキソ−エチル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−１−［２−［（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド（１４３ｍｇ、８６．４％）を白色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１０９３．５５
【０２４２】
実施例１０
（３Ｓ）−２−［（２Ｓ）−３，３−ジメチル−２−［［（２Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパノイル］アミノ］ブタノイル］−７−［［２−［［（３Ｓ）−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−１−［２−［（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］インドリン−３−カルボニル］アミノ］アセチル］アミノ］−Ｎ−［（１Ｒ）−テトラリン−１−イル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド
ａ）（Ｓ）−１−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−メチル  ６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−１，３−ジカルボキシレート  
2019518727.tif 000076
ラセミ体のｔｅｒｔ−ブチル−メチル  ６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１，３−ジカルボキシレート（１．２１ｇ、３．０３ｍｍｏｌ、当量：１）をキラル分離し、（Ｓ）−１−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−メチル  ６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−１，３−ジカルボキシレート（５５５ｍｇ、４５．９％）を無色の油として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｍ＋＝３９９．２
【０２４３】
ｂ）メチル（３Ｓ）−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−３−カルボキシレート
2019518727.tif 000077
（Ｓ）−１−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−メチル  ６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−１，３−ジカルボキシレートを使用して実施例１ｃ）と同じ方法で生成物を調製し、メチル（３Ｓ）−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−３−カルボキシレート（３６５ｍｇ、９５．５％）を明黄色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝３００．１
【０２４４】
ｃ）メチル（３Ｓ）−１−［２−［（２Ｓ，５Ｒ）−４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−３−カルボキシレート
2019518727.tif 000078
（Ｓ）−メチル  ６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−カルボキシレート（３０３ｍｇ、１．０１ｍｍｏｌ、当量：１）を使用して、実施例１ｄ）と同じ方法で生成物を調製し、メチル（３Ｓ）−１−［２−［（２Ｓ，５Ｒ）−４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−３−カルボキシレート（４４５ｍｇ、６７．３％）を明黄色の油として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝６５３．４
【０２４５】
ｄ）（３Ｓ）−１−［２−［（２Ｓ，５Ｒ）−４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−３−カルボン酸
2019518727.tif 000079
（Ｓ）−メチル  １−（２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−カルボキシレート（４４０ｍｇ、６７４μｍｏｌ、当量：１）を使用して、実施例１ｅ）と同じ方法で生成物を調製し、（Ｓ）−１−（２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−カルボン酸（４２０ｍｇ、９７．６％）を白色の泡として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝６３９．４
【０２４６】
ｅ）（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（（Ｓ）−６−（４−フルオロベンジル）−３−（（２−メトキシ−２−オキソエチル）カルバモイル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート  
2019518727.tif 000080
（Ｓ）−１−（２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−カルボン酸（４１０ｍｇ、６４２μｍｏｌ、当量：１）を使用して、実施例２ａ）と同じ方法で生成物を調製し、（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（（Ｓ）−６−（４−フルオロベンジル）−３−（（２−メトキシ−２−オキソエチル）カルバモイル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（５０８ｍｇ、１１１％）を明黄色の油として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝７１０．４
【０２４７】
ｆ）２−［［（３Ｓ）−１−［２−［（２Ｓ，５Ｒ）−４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−３−カルボニル］アミノ］酢酸
2019518727.tif 000081
（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（（Ｓ）−６−（４−フルオロベンジル）−３−（（２−メトキシ−２−オキソエチル）カルバモイル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（５００ｍｇ、７０４μｍｏｌ、当量：１）を使用して、実施例２ｂ）と同じ方法で生成物を調製し、２−（（Ｓ）−１−（２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−カルボキサミド）酢酸（３８９ｍｇ、７９．４％）を明黄色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝６９６．４
【０２４８】
ｇ）ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［（３Ｓ）−３−［［２−［［（３Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパノイル］アミノ］−３，３−ジメチル−ブタノイル］−３−［［（１Ｒ）−テトラリン−１−イル］カルバモイル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−７−イル］アミノ］−２−オキソ−エチル］カルバモイル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート
2019518727.tif 000082
ＥｔＯＡｃ（１３７ｍｇ、１２８μｌ、２１６μｍｏｌ、当量：３）中Ｔ３Ｐ  ５０％及びＮ−メチルモルホリン（７２．７ｍｇ、７９μｌ、７１９μｍｏｌ、当量：１０）を、酢酸エチル（１ｍｌ）中、２−（（Ｓ）−１−（２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−カルボキサミド）酢酸（５０ｍｇ、７１．９μｍｏｌ、当量：１）及びｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（Ｓ）−７−アミノ−３−（（（Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−１−イル）カルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）−３，３−ジメチル−１−オキソブタン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメート（４４．５ｍｇ、７１．９μｍｏｌ、当量：１）（国際公開第２０１３／１９２２８６号に記載）の白色の懸濁液に添加した。室温で１５分間撹拌した後、全てを溶解し、明黄色の溶液を一晩撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を添加し、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、エバポレートした。粗残留物を、溶出剤として酢酸エチル／メタノール（０−１０％メタノール）を使用したフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［（３Ｓ）−３−［［２−［［（３Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパノイル］アミノ］−３，３−ジメチル−ブタノイル］−３−［［（１Ｒ）−テトラリン−１−イル］カルバモイル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−７−イル］アミノ］−２−オキソ−エチル］カルバモイル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート（６４ｍｇ、６８．６％）を白色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１２９７．７
【０２４９】
ｈ）（３Ｓ）−２−［（２Ｓ）−３，３−ジメチル−２−［［（２Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパノイル］アミノ］ブタノイル］−７−［［２−［［（３Ｓ）−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−１−［２−［（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］インドリン−３−カルボニル］アミノ］アセチル］アミノ］−Ｎ−［（１Ｒ）−テトラリン−１−イル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド
2019518727.tif 000083
ジオキサン中ＨＣｌ  ４Ｍ（１．２ｇ、１ｍｌ、４ｍｍｏｌ、当量：８８）を、酢酸エチル（０．５ｍｌ）中（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（（Ｓ）−３−（（２−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）プロパンアミド）−３，３−ジメチルブタノイル）−３−（（（Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−１−イル）カルバモイル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−イル）アミノ）−２−オキソエチル）カルバモイル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（５９ｍｇ、４５．５μｍｏｌ、当量：１）の明黄色の溶液に添加し、反応混合物を室温で２時間撹拌した。白色の沈殿物を濾別し、ジエチルエーテルで洗浄し、真空中で乾燥させて、（３Ｓ）−２−［（２Ｓ）−３，３−ジメチル−２−［［（２Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパノイル］アミノ］ブタノイル］−７−［［２−［［（３Ｓ）−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−１−［２−［（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］インドリン−３−カルボニル］アミノ］アセチル］アミノ］−Ｎ−［（１Ｒ）−テトラリン−１−イル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド（４８ｍｇ、８７．５％）を白色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１０９７．６
【０２５０】
実施例１１
（３Ｓ）−２−［（２Ｓ）−３，３−ジメチル−２−［［（２Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパノイル］アミノ］ブタノイル］−７−［［２−［［（３Ｒ）−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−１−［２−［（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］インドリン−３−カルボニル］アミノ］アセチル］アミノ］−Ｎ−［（１Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−１−イル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド
ａ）ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［（３Ｒ）−３−［［２−［［（３Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパノイル］アミノ］−３，３−ジメチル−ブタノイル］−３−［［（１Ｒ）−テトラリン−１−イル］カルバモイル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−７−イル］アミノ］−２−オキソ−エチル］カルバモイル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート
2019518727.tif 000084
ＥｔＯＡｃ（１３７ｍｇ、１２８μｌ、２１６μｍｏｌ、当量：３）中Ｔ３Ｐ  ５０％及びＮ−メチルモルホリン（７２．７ｍｇ、７９μｌ、７１９μｍｏｌ、当量：１０）を、酢酸エチル（１ｍｌ）中２−（（Ｒ）−１−（２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−カルボキサミド）酢酸（５０ｍｇ、７１．９μｍｏｌ、当量：１）及びｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（Ｓ）−７−アミノ−３−（（（Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−１−イル）カルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）−３，３−ジメチル−１−オキソブタン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメート（４４．５ｍｇ、７１．９μｍｏｌ、当量：１）の白色の懸濁液に添加した。室温で１５分間撹拌した後、全てを溶解し、明黄色の溶液を一晩撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を添加し、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、エバポレートした。粗残留物を、溶出剤として酢酸エチル／メタノール（０−１０％メタノール）を使用したフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［（３Ｒ）−３−［［２−［［（３Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパノイル］アミノ］−３，３−ジメチル−ブタノイル］−３−［［（１Ｒ）−テトラリン−１−イル］カルバモイル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−７−イル］アミノ］−２−オキソ−エチル］カルバモイル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート（５４ｍｇ、５７．９％）を白色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１２９７．７
【０２５１】
ｂ）（３Ｓ）−２−［（２Ｓ）−３，３−ジメチル−２−［［（２Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパノイル］アミノ］ブタノイル］−７−［［２−［［（３Ｒ）−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−１−［２−［（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］インドリン−３−カルボニル］アミノ］アセチル］アミノ］−Ｎ−［（１Ｒ）−テトラリン−１−イル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド
2019518727.tif 000085
ジオキサン中ＨＣｌ  ４Ｍ（９６３μｌ、３．８５ｍｍｏｌ、当量：１００）を、酢酸エチル（０．５ｍｌ）中（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（（Ｒ）−３−（（２−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）プロパンアミド）−３，３−ジメチルブタノイル）−３−（（（Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−１−イル）カルバモイル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−イル）アミノ）−２−オキソエチル）カルバモイル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（５０ｍｇ、３８．５μｍｏｌ、当量：１）の明黄色の溶液に添加し、反応混合物を室温で２時間撹拌した。白色の沈殿物を濾別し、ジエチルエーテルで洗浄し、真空中で乾燥させて、（３Ｓ）−２−［（２Ｓ）−３，３−ジメチル−２−［［（２Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパノイル］アミノ］ブタノイル］−７−［［２−［［（３Ｒ）−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−１−［２−［（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］インドリン−３−カルボニル］アミノ］アセチル］アミノ］−Ｎ−［（１Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン  −１−イル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド（４０ｍｇ、８６％）を白色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１０９７．６
【０２５２】
実施例１２
（Ｒ）−Ｎ−（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−５−イル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド  
ａ）ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［（３Ｒ）−３−［［（３Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］イソインドリン−５−イル］カルバモイル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート
2019518727.tif 000086
（Ｒ）−１−（２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−カルボン酸（８０ｍｇ、１２５μｍｏｌ、当量：１）を、酢酸エチル（４８０μｌ）中でｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−６−アミノ−１−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−２−イル）−２−オキソ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメート（７７．１ｍｇ、１２５μｍｏｌ、当量：１；中間体２）、Ｎ−メチルモルホリン（１２７ｍｇ、１３８μｌ、１．２５ｍｍｏｌ、当量：１０）及びＥｔＯＡｃ  ５０％（２３９ｍｇ、２２４μｌ、３７６μｍｏｌ、当量：３）中Ｔ３Ｐと室温で週末にわたって撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ３溶液を添加し、混合物を酢酸エチルで３回抽出した。有機層を、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、エバポレートした。粗物質をシリカゲルに適用し、溶出剤として酢酸エチルを使用したカラムクロマトグラフィーにより精製し、ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［（３Ｒ）−３−［［（３Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］イソインドリン−５−イル］カルバモイル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート（９６ｍｇ、６２％）を白色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１２３６．６
【０２５３】
ｂ）（３Ｒ）−Ｎ−［（３Ｓ）−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］イソインドリン−５−イル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−１−［２−［（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド
2019518727.tif 000087
ジオキサン（１．８２ｍｌ、７．２８ｍｍｏｌ、当量：１００）中ＨＣｌ  ４Ｍを、酢酸エチル（１ｍｌ）中（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（（Ｒ）−３−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−５−イル）カルバモイル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（９０ｍｇ、７２．８μｍｏｌ、当量：１）の透明な溶液に添加し、反応混合物を室温で２時間撹拌した。沈殿物を濾別し、ジエチルエーテルで洗浄し、乾燥させて、（Ｒ）−Ｎ−（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−５−イル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド  （７８ｍｇ、９３．５％）を  オフホワイトの固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１０３６．５
【０２５４】
実施例１３
ａ）（３Ｓ）−Ｎ−（２，６−ジフルオロフェニル）−７−（２−（６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド）アセトアミド）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド  ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［３−［［２−［［（３Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−７−イル］アミノ］−２−オキソ−エチル］カルバモイル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート
2019518727.tif 000088
Ｎ−メチルモルホリン（１１６ｍｇ、１２６μｌ、１．１５ｍｍｏｌ、当量：１０）及びＥｔＯＡｃ中Ｔ３Ｐ  ５０％（２１９ｍｇ、２０５μｌ、３４５μｍｏｌ、当量：３）を、酢酸エチル（１．５ｍｌ）中２−（１−（２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−カルボキサミド）酢酸（８０ｍｇ、１１５μｍｏｌ、当量：１）及びｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−７−アミノ−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）−２−オキソ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメート（７２．４ｍｇ、１１５μｍｏｌ、当量：１；中間体３）の白色の懸濁液に添加した。室温で１５分間撹拌した後、全てを溶解し、明黄色の溶液を一晩撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を添加し、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、エバポレートした。粗残留物を、溶出剤として酢酸エチル／メタノール（０−１０％メタノール）を使用したフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（３−（（２−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−イル）アミノ）−２−オキソエチル）カルバモイル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（２９ｍｇ、１９．３％）をオフホワイトの固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１３０７．７
【０２５５】
ｂ）（３Ｓ）−Ｎ−（２，６−ジフルオロフェニル）−７−［［２−［［６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−１−［２−［（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］インドリン−３−カルボニル］アミノ］アセチル］アミノ］−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド
2019518727.tif 000089
（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（３−（（２−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−イル）アミノ）−２−オキソエチル）カルバモイル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（２５ｍｇ、１９．１μｍｏｌ、当量：１）を、酢酸エチル（６００μＬ）中でジオキサン  ４Ｍ（４００μｌ、１．６ｍｍｏｌ、当量：８３．７）中ＨＣｌと室温で一晩撹拌した。沈殿物を濾別し、ジエチルエーテルで洗浄し、高減圧下で乾燥させて、（３Ｓ）−Ｎ−（２，６−ジフルオロフェニル）−７−（２−（６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド）アセトｔアミド）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド  （１４ｍｇ、６０．２％）を白色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１１０７．６
【０２５６】
実施例１４
Ｎ−（２−（４−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−１−カルボキサミド）ベンズアミド）エチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  ジヒドロクロリド
ａ）ベンジル  ３−［［（１Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］イソインドリン−１−カルボニル］アミノ］−４−フルオロ−ベンゾエート
2019518727.tif 000090
（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−１−カルボン酸（５００ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ、当量：１；中間体１）、ベンジル  ３−アミノ−４−フルオロベンゾエート（２７６ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ、当量：１．１）及びＥｔＯＡｃ（１．３ｇ、１．２２ｍｌ、２．０４ｍｍｏｌ、当量：２）中Ｔ３Ｐ  ５０％を酢酸エチル（３．５ｍｌ）中に溶解した。ピリジン（１．７５ｍｌ）を添加し、黄色の溶液を室温で一晩撹拌した。反応混合物を酢酸エチルに注ぎ、希釈ＨＣｌ及びブラインで抽出した。有機層を、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、エバポレートした。粗物質を、溶出剤として酢酸エチル／ヘプタン（０−１００％酢酸エチル）を使用したフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、ベンジル  ３−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−１−カルボキサミド）−４−フルオロベンゾエート（５１０ｍｇ、６９．７％）を白色の泡として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝７１７．３３
【０２５７】
ｂ）３−［［（１Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］イソインドリン−１−カルボニル］アミノ］−４−フルオロ−安息香酸
2019518727.tif 000091
Ｐｄ−Ｃ  １０％（６５ｍｇ、６１．１μｍｏｌ、当量：０．０９７３）を、メタノール（１５ｍｌ）中ベンジル  ３−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−１−カルボキサミド）−４−フルオロベンゾエート（４５０ｍｇ、６２８μｍｏｌ、当量：１）の透明な溶液に添加し、反応物を水素雰囲気下で一晩撹拌した。反応混合物をデカライトで濾過し、濃縮して、３−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−１−カルボキサミド）−４−フルオロ安息香酸（３７５ｍｇ、９５．３％）を白色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝６２７．２８
【０２５８】
ｃ）ｔｅｒｔ−ブチル  Ｎ−［（１Ｓ）−２−［［（１Ｓ）−２−［（１Ｓ）−１−［［５−［２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）エチルカルバモイル］−２−フルオロ−フェニル］カルバモイル］イソインドリン−２−イル］−２−オキソ−１−テトラヒドロピラン−４−イル−エチル］アミノ］−１−メチル−２−オキソ−エチル］−Ｎ−メチル−カルバメート
2019518727.tif 000092
３−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−１−カルボキサミド）−４−フルオロ安息香酸（１２０ｍｇ、１９１μｍｏｌ、当量：１）を、ベンジル（２−アミノエチル）カルバメート  ヒドロクロリド（４４．２ｍｇ、１９１μｍｏｌ、当量：１）、ＤＩＰＥＡ（９９ｍｇ、１３４μｌ、７６６μｍｏｌ、当量：４）及びＤＭＦ（１．７ｍｌ）中ＨＡＴＵ（９４．７ｍｇ、２４９μｍｏｌ、当量：１．３）と室温で一晩撹拌した。０．５Ｍ  ＨＣｌを添加し、酢酸エチルで３回抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、エバポレートした。粗物質をシリカゲル上に適用し、溶出剤として酢酸エチル／メタノール（０−５％メタノール）を使用したカラムクロマトグラフィーにより精製し、ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−１−（（５−（（２−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）エチル）カルバモイル）−２−フルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−２−イル）−２−オキソ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメート（１５３ｍｇ、９９．５％）を無色の油として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝８０３．３８
【０２５９】
ｄ）ｔｅｒｔ−ブチル  Ｎ−［（１Ｓ）−２−［［（１Ｓ）−２−［（１Ｓ）−１−［［５−（２−アミノエチルカルバモイル）−２−フルオロ−フェニル］カルバモイル］イソインドリン−２−イル］−２−オキソ−１−テトラヒドロピラン−４−イル−エチル］アミノ］−１−メチル−２−オキソ−エチル］−Ｎ−メチル−カルバメート
2019518727.tif 000093
ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−１−（（５−（（２−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）エチル）カルバモイル）−２−フルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−２−イル）−２−オキソ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメート（１２０ｍｇ、１４９μｍｏｌ、当量：１）を、メタノール（５ｍｌ）中パラジウム炭素１０％（１６ｍｇ、１５μｍｏｌ、当量：０．１０１）と水素雰囲気下室温で一晩撹拌した。触媒を濾別し、溶媒をエバポレートして、ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−１−（（５−（（２−アミノエチル）カルバモイル）−２−フルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−２−イル）−２−オキソ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメート（９０ｍｇ、９０％）を明黄色の油として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝６６９．３４
【０２６０】
ｅ）ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［３−［２−［［３−［［（１Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］イソインドリン−１−カルボニル］アミノ］−４−フルオロ−ベンゾイル］アミノ］エチルカルバモイル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート
2019518727.tif 000094
ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−１−（（５−（（２−アミノエチル）カルバモイル）−２−フルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−２−イル）−２−オキソ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメート（８５ｍｇ、１２７μｍｏｌ、当量：１）を、ＤＩＰＥＡ（６５．７ｍｇ、８８．８μｌ、５０８μｍｏｌ、当量：４）及びＤＭＦ（１ｍｌ）中ＨＡＴＵ（６２．８ｍｇ、１６５μｍｏｌ、当量：１．３）の存在下、１−（２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−カルボン酸（８１．２ｍｇ、１２７μｍｏｌ、当量：１）と室温で一晩撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ３  ｓｏｌ．  ａｑ．を添加し、硫酸エチルで３回抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、エバポレートした。粗物質をシリカゲルに適用し、溶出剤として酢酸エチル／メタノール（０−５％メタノール）を使用したカラムクロマトグラフィーにより精製し、（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（３−（（２−（３−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−１−カルボキサミド）−４−フルオロベンズアミド）エチル）カルバモイル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（３１ｍｇ、１８．９％）を白色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１２８９．６８
【０２６１】
ｆ）Ｎ−［２−［［４−フルオロ−３−［［（１Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］イソインドリン−１−カルボニル］アミノ］ベンゾイル］アミノ］エチル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−１−［２−［（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］インドリン−３−カルボキサミド  ジヒドロクロリド
2019518727.tif 000095
（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（３−（（２−（３−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−１−カルボキサミド）−４−フルオロベンズアミド）エチル）カルバモイル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（３０ｍｇ、２３．３μｍｏｌ、当量：１）を、酢酸エチル（５００μＬ）中で、ジオキサン４Ｍ（５００μｌ、２ｍｍｏｌ、当量：８６）中ＨＣｌと室温で週末にわたって撹拌し、沈殿した固体を濾別し、ジエチルエーテルで洗浄し、高減圧下で乾燥させて、Ｎ−［２−［［４−フルオロ−３−［［（１Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］イソインドリン−１−カルボニル］アミノ］ベンゾイル］アミノ］エチル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−１−［２−［（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］インドリン−３−カルボキサミド  ジヒドロクロリド（２３．１６ｍｇ、８５．７％）を白色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１０８９．５８
【０２６２】
実施例１５
ａ）（Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−５−イル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［（３Ｓ）−３−［［（３Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］イソインドリン−５−イル］カルバモイル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート
2019518727.tif 000096
（Ｓ）−１−（２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−カルボン酸（８０ｍｇ、１２５μｍｏｌ、当量：１）を、酢酸エチル（５００μｌ）中でｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−６−アミノ−１−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−２−イル）−２−オキソ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメート（７７．１ｍｇ、１２５μｍｏｌ、当量：１；中間体２）、Ｎ−メチルモルホリン（１２７ｍｇ、１３８μｌ、１．２５ｍｍｏｌ、当量：１０）及びＥｔＯＡｃ  ５０％（２３９ｍｇ、２２４μｌ、３７６μｍｏｌ、当量：３）中Ｔ３Ｐと室温で週末にわたって撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ３溶液を添加し、混合物を酢酸エチルで３回抽出した。有機層を、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、エバポレートした。粗物質をシリカゲルに適用し、溶出剤として酢酸エチルを使用したカラムクロマトグラフィーにより精製し、ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［（３Ｓ）−３−［［（３Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］イソインドリン−５−イル］カルバモイル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート（７６ｍｇ、４９．１％）を白色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１２３６．６
【０２６３】
ｂ）（３Ｓ）−Ｎ−［（３Ｓ）−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］イソインドリン−５−イル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−１−［２−［（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］インドリン−３−カルボキサミド
2019518727.tif 000097
ジオキサン（１．３７ｍｌ、５．５ｍｍｏｌ、当量：１００）中ＨＣｌ  ４Ｍを、酢酸エチル（０．５ｍｌ）中（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（（Ｓ）−３−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−５−イル）カルバモイル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（６８ｍｇ、５５μｍｏｌ、当量：１）の明黄色の溶液に添加し、反応物を室温で２時間撹拌した。沈殿物を濾別し、ジエチルエーテルで洗浄し、乾燥させた。物質を分取ＨＰＬＣにより精製し、（Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−５−イル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド（２３ｍｇ、４０．４％）を明黄色の非晶質として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１０３６．５
【０２６４】
実施例１６
Ｎ−（４−（４−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−１−カルボキサミド）ベンズアミド）フェニル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド
ａ）ｔｅｒｔ−ブチル  Ｎ−［（１Ｓ）−２−［［（１Ｓ）−２−［（１Ｓ）−１−［［５−［［４−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）フェニル］カルバモイル］−２−フルオロ−フェニル］カルバモイル］イソインドリン−２−イル］−２−オキソ−１−テトラヒドロピラン−４−イル−エチル］アミノ］−１−メチル−２−オキソ−エチル］−Ｎ−メチル−カルバメート
2019518727.tif 000098
３−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−１−カルボキサミド）−４−フルオロ安息香酸（１２０ｍｇ、１９１μｍｏｌ、当量：１）を、酢酸エチル（２．５ｍｌ）中でベンジル（４−アミノフェニル）カルバメート（５３．４ｍｇ、２２０μｍｏｌ、当量：１．１５）、Ｎ−メチルモルホリン（１９４ｍｇ、２１１μｌ、１．９１ｍｍｏｌ、当量：１０）及びＥｔＯＡｃ（３６６ｍｇ、３４２μｌ、５７４μｍｏｌ、当量：３）中Ｔ３Ｐ  ５０％と室温で一晩撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ３ａｑ．を添加し、硫酸エチルで３回抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、エバポレートした。粗物質をシリカゲルに適用し、溶出剤として酢酸エチル／メタノール（０−５％メタノール）を使用したカラムクロマトグラフィーにより精製し、ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−１−（（５−（（４−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）フェニル）カルバモイル）−２−フルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−２−イル）−２−オキソ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメート（１０３ｍｇ、６３．２％）を白色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ−Ｈ）−＝８４９．３６
【０２６５】
ｂ）ｔｅｒｔ−ブチル  Ｎ−［（１Ｓ）−２−［［（１Ｓ）−２−［（１Ｓ）−１−［［５−［（４−アミノフェニル）カルバモイル］−２−フルオロ−フェニル］カルバモイル］イソインドリン−２−イル］−２−オキソ−１−テトラヒドロピラン−４−イル−エチル］アミノ］−１−メチル−２−オキソ−エチル］−Ｎ−メチル−カルバメート
2019518727.tif 000099
ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−１−（（５−（（４−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）フェニル）カルバモイル）−２−フルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−２−イル）−２−オキソ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメート（９７ｍｇ、１１４μｍｏｌ、当量：１）を、メタノール（２．８ｍｌ）中でＰｄ−Ｃ  １０％（１５ｍｇ、１４．１μｍｏｌ、当量：０．１２４）と水素雰囲気下室温で週末にわたって撹拌した。触媒を濾別し、溶媒をエバポレートし、高減圧下で乾燥させて、ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−１−（（５−（（４−アミノフェニル）カルバモイル）−２−フルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−２−イル）−２−オキソ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメート（８２ｍｇ、１００  ％）を白色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝７１７．３４
【０２６６】
ｃ）ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［３−［［４−［［３−［［（１Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］イソインドリン−１−カルボニル］アミノ］−４−フルオロ−ベンゾイル］アミノ］フェニル］カルバモイル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート
2019518727.tif 000100
ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−１−（（５−（（４−アミノフェニル）カルバモイル）−２−フルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−２−イル）−２−オキソ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメート（７８ｍｇ、１０９μｍｏｌ、当量：１）を、酢酸エチル（１．５ｍｌ）中で１−（２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−カルボン酸（７６．５ｍｇ、１２０μｍｏｌ、当量：１．１）、Ｎ−メチルモルホリン（１１０ｍｇ、１２０μｌ、１．０９ｍｍｏｌ、当量：１０）及びＥｔＯＡｃ（１０４ｍｇ、９７．２μｌ、３２６μｍｏｌ、当量：３）中Ｔ３Ｐ  ５０％と室温で一晩撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ３溶液を添加し、酢酸エチルで３回抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、エバポレートした。粗物質をシリカゲルに適用し、溶出剤として酢酸エチル／メタノール（０−５％メタノール）を使用したカラムクロマトグラフィーにより精製し、（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（３−（（４−（３−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−１−カルボキサミド）−４−フルオロベンズアミド）フェニル）カルバモイル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（７５ｍｇ、５１．５％）をオフホワイトの固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１３３７．６８
【０２６７】
ｄ）Ｎ−［４−［［４−フルオロ−３−［［（１Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］イソインドリン−１−カルボニル］アミノ］ベンゾイル］アミノ］フェニル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−１−［２−［（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド
2019518727.tif 000101
（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（３−（（４−（３−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−１−カルボキサミド）−４−フルオロベンズアミド）フェニル）カルバモイル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（６５ｍｇ、４８．６μｍｏｌ、当量：１）を、酢酸エチル（１ｍｌ）中でジオキサン  ４Ｍ  （１ｍｌ、４ｍｍｏｌ、当量：８２．３）中ＨＣｌと室温で一晩撹拌した。沈殿した固形物を濾別し、ジエチルエーテルで洗浄した。固体を高減圧下で乾燥させ、Ｎ−（４−（４−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−１−カルボキサミド）ベンズアミド）フェニル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド（５６ｍｇ、９２．４％）を白色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１１３７．５８
【０２６８】
実施例１７
ａ）（Ｓ）−Ｎ−（３−（（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−３−オキソプロピル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド  ｔｅｒｔ−ブチル  Ｎ−［（１Ｓ）−２−［［（１Ｓ）−２−［（１Ｓ）−５−［３−（ベンジルアミノ）プロパノイルアミノ］−１−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］イソインドリン−２−イル］−２−オキソ−１−テトラヒドロピラン−４−イル−エチル］アミノ］−１−メチル−２−オキソ−エチル］−Ｎ−メチル−カルバメート
2019518727.tif 000102
ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−６−アミノ−１−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−２−イル）−２−オキソ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメート（１００ｍｇ、１６２μｍｏｌ、当量：１、中間体２）を、ＥｔＯＡｃ  ５０％（２５８ｍｇ、２４２μｌ、４０６μｍｏｌ、当量：２．５）中Ｔ３Ｐ及びピリジン（３００μｌ）の存在下、酢酸エチル（６００μｌ）中で３−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）プロパン酸（３６．３ｍｇ、１６２μｍｏｌ、当量：１）と室温で一晩撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ３溶液を添加し、酢酸エチルで３回抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、エバポレートした。粗物質をシリカゲルに適用し、溶出剤として酢酸エチル／メタノール（０−５％メタノール）を使用したカラムクロマトグラフィーにより精製し、ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−６−（３−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）−１−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−２−イル）−２−オキソ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメート（１１８ｍｇ、８８．５％）を明黄色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝８２１．４
【０２６９】
ｂ）ｔｅｒｔ−ブチル  Ｎ−［（１Ｓ）−２−［［（１Ｓ）−２−［（１Ｓ）−６−（３−アミノプロパノイルアミノ）−１−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］イソインドリン−２−イル］−２−オキソ−１−テトラヒドロピラン−４−イル−エチル］アミノ］−１−メチル−２−オキソ−エチル］−Ｎ−メチル−カルバメート
2019518727.tif 000103
ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−１−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−６−（３−（２−フェニルアセトアミド）プロパンアミド）イソインドリン−２−イル）−２−オキソ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメート（１８０ｍｇ、２２４μｍｏｌ、当量：１）を、水素雰囲気下メタノール（８ｍｌ）中でパラジウム炭素１０％（２３．８ｍｇ、２２．４μｍｏｌ、当量：０．１）と室温で一晩撹拌した。触媒を濾別し、溶媒を真空中でエバポレートし、高減圧下で乾燥させて、ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−６−（３−アミノプロパンアミド）−１−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−２−イル）−２−オキソ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメート（９３ｍｇ、６０．６％）を白色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝６８７．３
【０２７０】
ｃ）ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［（３Ｓ）−３−［［３−［［（３Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］イソインドリン−５−イル］アミノ］−３−オキソ−プロピル］カルバモイル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート
2019518727.tif 000104
ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−６−（３−アミノプロパンアミド）−１−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−２−イル）−２−オキソ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメート（８７ｍｇ、１２７μｍｏｌ、当量：１）を、酢酸エチル（７００μｌ）及びピリジン（３５０μｌ）中で、（Ｓ）−１−（２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−カルボン酸（８０．９ｍｇ、１２７μｍｏｌ、当量：１）、ＥｔＯＡｃ  ５０％（１０１ｍｇ、９４．３μｌ、３１７μｍｏｌ、当量：２．５）中Ｔ３Ｐと室温で一晩撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ３溶液を添加し、酢酸エチルで３回抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、エバポレートした。粗物質をシリカゲルに適用し、溶出剤として酢酸エチル／メタノール（０−５％メタノール）を使用したカラムクロマトグラフィーにより精製し、（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（（Ｓ）−３−（（３−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−３−オキソプロピル）カルバモイル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（７０ｍｇ、４２．３％）を白色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１３０７．７
【０２７１】
ｄ）（３Ｓ）−Ｎ−［３−［［（３Ｓ）−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］イソインドリン−５−イル］アミノ］−３−オキソ−プロピル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−１−［２−［（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド
2019518727.tif 000105
（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（（Ｓ）−３−（（３−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−３−オキソプロピル）カルバモイル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（６４ｍｇ、４８．９μｍｏｌ、当量：１）を酢酸エチル（１ｍｌ）中でジオキサン  ４Ｍ（１ｍｌ、４ｍｍｏｌ、当量：８１．７）中ＨＣｌと室温で一晩撹拌した。沈殿した固体を濾別し、ジエチルエーテルで洗浄し、高減圧下で乾燥させて、（Ｓ）−Ｎ−（３−（（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−３−オキソプロピル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド（５５．５ｍｇ、４５．６μｍｏｌ、収率９３．２％）を白色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１１０７．５７
【０２７２】
実施例１８
ａ）（Ｓ）−Ｎ−（４−（（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−４−オキソブチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド  ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［（３Ｓ）−３−［（４−ベンジルオキシ−４−オキソ−ブチル）カルバモイル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート
2019518727.tif 000106
ベンジル  ４−アミノブタノエート（２８．３ｍｇ、１４６μｍｏｌ、当量：１．１）を、酢酸エチル（０．８５ｍｌ）中（Ｓ）−１−（２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−カルボン酸（８５ｍｇ、１３３μｍｏｌ、当量：１）の明黄色の懸濁液に添加した。Ｎ−メチルモルホリン（１３５ｍｇ、１４６μｌ、１．３３ｍｍｏｌ、当量：１０）及びＥｔＯＡｃ（２５４ｍｇ、２３８μｌ、３９９μｍｏｌ、当量：３）中Ｔ３Ｐ  ５０％を添加し、反応物を室温で一晩撹拌した。反応物を酢酸エチルに注ぎ、水で抽出した。有機層を、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、エバポレートした。粗残留物をシリカゲルに適用し、溶出剤として酢酸エチル／ヘプタン（８０−１００％酢酸エチル）を使用したフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［（３Ｓ）−３−［（４−ベンジルオキシ−４−オキソ−ブチル）カルバモイル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート（６７ｍｇ、６１．９％）を無色の油として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝８１４．４６
【０２７３】
ｂ）４−［［（３Ｓ）−１−［２−［（２Ｓ，５Ｒ）−４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−３−カルボニル］アミノ］ブタン酸
2019518727.tif 000107
Ｐｄ−Ｃ（８．５ｍｇ、７．９９μｍｏｌ、当量：０．１）を、メタノール（０．５ｍｌ）中（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（（Ｓ）−３−（（４−（ベンジルオキシ）−４−オキソブチル）カルバモイル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（６５ｍｇ、７９．９μｍｏｌ、当量：１）の透明な溶液に添加し、反応物を水素雰囲気下室温で６時間撹拌した。触媒を濾別し、濾液をエバポレートして、４−［［（３Ｓ）−１−［２−［（２Ｓ，５Ｒ）−４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−３−カルボニル］アミノ］ブタン酸（５８ｍｇ、１００％）を白色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝７２４．４
【０２７４】
ｃ）ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［（３Ｓ）−３−［［４−［［（３Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］イソインドリン−５−イル］アミノ］−４−オキソ−ブチル］カルバモイル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート
2019518727.tif 000108
ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−６−アミノ−１−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−２−イル）−２−オキソ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメート（４６．８ｍｇ、７６μｍｏｌ、当量：１；中間体２）、ピリジン（３００μｌ）及びＥｔＯＡｃ（１４５ｍｇ、１３６μｌ、２２８μｍｏｌ、当量：３）中Ｔ３Ｐ  ５０％を、酢酸エチル（０．６ｍｌ）中４−（（Ｓ）−１−（２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−カルボキサミド）ブタン酸（５５ｍｇ、７６μｍｏｌ、当量：１）の白色の懸濁液に添加し、明黄色の溶液を室温で一晩撹拌した。反応物を数滴のａｑ．  ＨＣｌ  １Ｎでクエンチし、酢酸エチル及び水で抽出した。有機層を、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空中でエバポレートした。粗残留物をシリカゲルに適用し、溶出剤としてジクロロメタン／メタノール（０−２０％メタノール）を使用したフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［（３Ｓ）−３−［［４−［［（３Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］イソインドリン−５−イル］アミノ］−４−オキソ−ブチル］カルバモイル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート（１３ｍｇ、１２．９％）を白色の非晶質として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１３２１．７
【０２７５】
ｄ）（３Ｓ）−Ｎ−［４−［［（３Ｓ）−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］イソインドリン−５−イル］アミノ］−４−オキソ−ブチル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−１−［２−［（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド
2019518727.tif 000109
ジオキサン（２０８μｌ、８３２μｍｏｌ、当量：１００）中ＨＣｌ  ４Ｍを、酢酸エチル（０．２ｍｌ）中（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（（Ｓ）−３−（（４−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−４−オキソブチル）カルバモイル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（１１ｍｇ、８．３２μｍｏｌ、当量：１）の明黄色の溶液に添加し、反応物を室温で２時間撹拌した。ジエチルエーテルを添加し、白色の沈殿物を濾過し、ジエチルエーテルで洗浄し、乾燥させて、（Ｓ）−Ｎ−（４−（（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−４−オキソブチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド（９．４ｍｇ、９１．８％）を白色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１１２１．６
【０２７６】
実施例１９
ａ）（Ｓ）−Ｎ−（２−（（（Ｓ）−１−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−２−オキソエチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド  ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［（３Ｓ）−３−［［２−［［（１Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］−１−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］イソインドリン−５−イル］アミノ］−２−オキソ−エチル］カルバモイル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート
2019518727.tif 000110
２−（（Ｓ）−１−（２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−カルボキサミド）酢酸（５０ｍｇ、７１．９μｍｏｌ、当量：１）を、酢酸エチル（５００μｌ）及びピリジン（２５０μｌ）中で、ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−５−アミノ−１−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−２−イル）−２−オキソ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメート（４４．２ｍｇ、７１．９μｍｏｌ、当量：１；中間体４）及びＥｔＯＡｃ  ５０％（１３７ｍｇ、１２８μｌ、２１６μｍｏｌ、当量：３）中Ｔ３Ｐと室温で一晩撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ３溶液を添加し、酢酸エチルで３回抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、エバポレートした。粗物質をシリカゲルに適用し、溶出剤として酢酸エチル／メタノール（０−１０％メタノール）を使用したカラムクロマトグラフィーにより精製した。分離された生成物をさらなる精製のために分取ＨＰＬＣに供し、ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［（３Ｓ）−３−［［２−［［（１Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］−１−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］イソインドリン−５−イル］アミノ］−２−オキソ−エチル］カルバモイル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート（７ｍｇ、７．５％）を無色の非晶質として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１２９３．８
【０２７７】
ｂ）（３Ｓ）−Ｎ−［２−［［（１Ｓ）−１−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパノイル］アミノ］−２−テトラヒドロピラン−４−イル−アセチル］イソインドリン−５−イル］アミノ］−２−オキソ−エチル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−１−［２−［（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド
2019518727.tif 000111
ジオキサン（１３５μｌ、５４１μｍｏｌ、当量：１００）中ＨＣｌ  ４Ｍを、酢酸エチル（２００μｌ）中（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（（Ｓ）−３−（（２−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）−１−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−２−オキソエチル）カルバモイル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（７ｍｇ、５．４１μｍｏｌ、当量：１）の無色の溶液に添加し、反応物を室温で一晩撹拌した。沈殿物を濾別し、ジエチルエーテルで洗浄し、真空中で乾燥させて、（Ｓ）−Ｎ−（２−（（（Ｓ）−１−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−２−オキソエチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド（３．７ｍｇ、５６．９％）を白色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１０９３．５４
【０２７８】
実施例２０
（Ｓ）−Ｎ−（２−（（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（２Ｓ，３Ｒ）−３−メトキシ−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）ブタノイル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−２−オキソエチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド
ａ）ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［（３Ｓ）−３−［［２−［［（３Ｓ）−２−［（２Ｓ，３Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパノイル］アミノ］−３−メトキシ−ブタノイル］−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］イソインドリン−５−イル］アミノ］−２−オキソ−エチル］カルバモイル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート
2019518727.tif 000112
２−（（Ｓ）−１−（２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−カルボキサミド）酢酸（７０ｍｇ、１０１μｍｏｌ、当量：１）を、酢酸エチル（７００μｌ）及びピリジン（３５０μｌ）中で、ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（２Ｓ，３Ｒ）−１−（（Ｓ）−６−アミノ−１−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−２−イル）−３−メトキシ−１−オキソブタン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメート（５９．３ｍｇ、１０１μｍｏｌ、当量：１；中間体５）及びＥｔＯＡｃ  ５０％（１９２ｍｇ、１８０μｌ、３０２μｍｏｌ、当量：３）中Ｔ３Ｐと室温で一晩撹拌した。反応混合物をＨＣｌ  ａｑ．  １Ｎ、飽和ＮａＨＣＯ３及びブラインで抽出した。有機層を、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、エバポレートした。粗物質をシリカゲルに適用し、溶出剤として酢酸エチル／メタノール（０−２０％メタノール）を使用したカラムクロマトグラフィーにより精製し、ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［（３Ｓ）−３−［［２−［［（３Ｓ）−２−［（２Ｓ，３Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパノイル］アミノ］−３−メトキシ−ブタノイル］−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］イソインドリン−５−イル］アミノ］−２−オキソ−エチル］カルバモイル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート（１００ｍｇ、７８．４％）を白色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１２６７．６
【０２７９】
ｂ）（３Ｓ）−Ｎ−［２−［［（３Ｓ）−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］−２−［（２Ｓ，３Ｒ）−３−メトキシ−２−［［（２Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパノイル］アミノ］ブタノイル］イソインドリン−５−イル］アミノ］−２−オキソ−エチル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−１−［２−［（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド
2019518727.tif 000113
ジオキサン（１．８７ｍｌ、７．５ｍｍｏｌ、当量：１００）中ＨＣｌ  ４Ｍを、酢酸エチル（１ｍｌ）中（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（（Ｓ）−３−（（２−（（（Ｓ）−２−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）プロパンアミド）−３−メトキシブタノイル）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−２−オキソエチル）カルバモイル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（９５ｍｇ、７５μｍｏｌ、当量：１）の無色の溶液に添加した。反応物を室温で４５分間撹拌した。白色の沈殿物を濾別し、ジエチルエーテルで洗浄し、真空中で乾燥させて、（Ｓ）−Ｎ−（２−（（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（２Ｓ，３Ｒ）−３−メトキシ−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）ブタノイル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−２−オキソエチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド  （７６ｍｇ、８６．２％）を白色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１０６７．５
【０２８０】
実施例２１
ａ）（Ｓ）−Ｎ−（２−（（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（２Ｓ，３Ｓ）−３−メチル−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）ペンタノイル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−２−オキソエチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド  ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［（３Ｓ）−３−［［２−［［（３Ｓ）−２−［（２Ｓ，３Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパノイル］アミノ］−３−メチル−ペンタノイル］−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］イソインドリン−５−イル］アミノ］−２−オキソ−エチル］カルバモイル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート
2019518727.tif 000114
２−（（Ｓ）−１−（２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−カルボキサミド）酢酸（４０ｍｇ、５７．５μｍｏｌ、当量：１）を、酢酸エチル（０．５ｍｌ）及びピリジン（２５０μｌ）中で、ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（２Ｓ，３Ｓ）−１−（（Ｓ）−６−アミノ−１−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−２−イル）−３−メチル−１−オキソペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメート（３３．８ｍｇ、５７．５μｍｏｌ、当量：１；中間体６）及びＥｔＯＡｃ  ５０％（１１０ｍｇ、１０３μｌ、１７２μｍｏｌ、当量：３）中Ｔ３Ｐと室温で一晩撹拌した。反応混合物を飽和水性ＮａＨＣＯ３及びブラインで抽出した。有機層を、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、エバポレートした。粗物質をシリカゲルに適用し、溶出剤として酢酸エチル／メタノール（０−２０％メタノール）を使用したカラムクロマトグラフィーにより精製し、ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［（３Ｓ）−３−［［２−［［（３Ｓ）−２−［（２Ｓ，３Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパノイル］アミノ］−３−メチル−ペンタノイル］−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］イソインドリン−５−イル］アミノ］−２−オキソ−エチル］カルバモイル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート（４１ｍｇ、５６．４％）を黄色の非晶質として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１２６５．７
【０２８１】
ｂ）（３Ｓ）−Ｎ−［２−［［（３Ｓ）−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］−２−［（２Ｓ，３Ｓ）−３−メチル−２−［［（２Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパノイル］アミノ］ペンタノイル］イソインドリン−５−イル］アミノ］−２−オキソ−エチル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−１−［２−［（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド
2019518727.tif 000115
ジオキサン（６９１μｌ、２．７７ｍｍｏｌ、当量：１００）中ＨＣｌ  ４Ｍを、酢酸エチル（０．５ｍｌ）中（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（（Ｓ）−３−（（２−（（（Ｓ）−２−（（２Ｓ，３Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）プロパンアミド）−３−メチルペンタノイル）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−２−オキソエチル）カルバモイル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（３５ｍｇ、２７．７μｍｏｌ、当量：１）の明黄色の溶液に添加し、反応物を室温で２時間撹拌した。オフホワイトの沈殿物を濾別し、ジエチルエーテルで洗浄し、真空中で乾燥させて、（Ｓ）−Ｎ−（２−（（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（２Ｓ，３Ｓ）−３−メチル−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）ペンタノイル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−２−オキソエチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド（２５ｍｇ、７７％）をオフホワイトの固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１０６５．５５
【０２８２】
実施例２２
ａ）（Ｓ）−Ｎ−（２−（（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−３，３−ジメチル−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）ブタノイル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−２−オキソエチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド  ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［（３Ｓ）−３−［［２−［［（３Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパノイル］アミノ］−３，３−ジメチル−ブタノイル］−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］イソインドリン−５−イル］アミノ］−２−オキソ−エチル］カルバモイル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート
2019518727.tif 000116
２−（（Ｓ）−１−（２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−カルボキサミド）酢酸（７１ｍｇ、１０２μｍｏｌ、当量：１）を、酢酸エチル（８００μｌ）及びピリジン（４００μｌ）中で、ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（Ｓ）−６−アミノ−１−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−２−イル）−３，３−ジメチル−１−オキソｂｕｔａｎ−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメート（６０ｍｇ、１０２μｍｏｌ、当量：１；中間体７）及びＥｔＯＡｃ  ５０％（１９５ｍｇ、１８２μｌ、３０６μｍｏｌ、当量：３）中Ｔ３Ｐと室温で一晩撹拌した。反応混合物をＨＣｌ  ａｑ．  １Ｎ、飽和ＮａＨＣＯ３及びブラインで抽出した。有機層を、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、エバポレートした。粗物質をシリカゲルに適用し、溶出剤として酢酸エチル／メタノール（０−５％メタノール）を使用したカラムクロマトグラフィーにより精製し、ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［（３Ｓ）−３−［［２−［［（３Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパノイル］アミノ］−３，３−ジメチル−ブタノイル］−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］イソインドリン−５−イル］アミノ］−２−オキソ−エチル］カルバモイル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート（８６ｍｇ、６６．６％）を得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１２６５．７
【０２８３】
ｂ）（３Ｓ）−Ｎ−［２−［［（３Ｓ）−３−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］−２−［（２Ｓ）−３，３−ジメチル−２−［［（２Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパノイル］アミノ］ブタノイル］イソインドリン−５−イル］アミノ］−２−オキソ−エチル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−１−［２−［（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］アセチル］インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド
2019518727.tif 000117
（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（（Ｓ）−３−（（２−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）プロパンアミド）−３，３−ジメチルブタノイル）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−２−オキソエチル）カルバモイル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（８０ｍｇ、６３．２μｍｏｌ、当量：１）を、酢酸エチル（１ｍｌ）中でジオキサン  ４Ｍ（１ｍｌ、４ｍｍｏｌ、当量：６３．３）中ＨＣｌと室温で２時間撹拌した。沈殿した固体を濾別し、ジエチルエーテルで洗浄し、高減圧下で乾燥させて、（Ｓ）−Ｎ−（２−（（（Ｓ）−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−２−（（Ｓ）−３，３−ジメチル−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）ブタノイル）イソインドリン−５−イル）アミノ）−２−オキソエチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  トリヒドロクロリド  （４５ｍｇ、６０．６％）を白色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝１０６５．５５
【０２８４】
モノマーＡ
Ｎ−（２−アミノエチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  ジヒドロクロリド
ａ）ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［３−［２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）エチルカルバモイル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート
2019518727.tif 000118
１−（２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−カルボン酸（３００ｍｇ、４７０μｍｏｌ、当量：１）を、ＤＩＰＥＡ（２４３ｍｇ、３２８μｌ、１．８８ｍｍｏｌ、当量：４）及びＨＡＴＵ（２３２ｍｇ、６１１μｍｏｌ、当量：１．３）と室温で一晩撹拌した。反応混合物を０．５Ｍ  ＨＣｌ  ａｑ．に注ぎ、酢酸エチルで３回抽出し、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、エバポレートした。粗物質をシリカゲルに適用し、溶出剤として酢酸エチル／メタノール（０−５％メタノール）を使用したカラムクロマトグラフィーにより精製し、ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［３−［２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）エチルカルバモイル］−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート（４８２ｍｇ、１００％）を明黄色の油として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝８１５．４５
【０２８５】
ｂ）ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［３−（２−アミノエチルカルバモイル）−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート
2019518727.tif 000119
（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（３−（（２−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）エチル）カルバモイル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（３７５ｍｇ、４６０μｍｏｌ、当量：１）を、水素雰囲気下メタノール（１５ｍｌ）中でパラジウム炭素１０％（４９ｍｇ、４６μｍｏｌ、当量：０．１）と室温で一晩撹拌した。５滴の酢酸を添加し、水素雰囲気下室温で撹拌を３時間続けた。触媒を濾別し、溶媒をエバポレートした。重炭酸水素ナトリウム溶液を添加し、混合物を酢酸エチルで３回抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、エバポレートして、ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［３−（２−アミノエチルカルバモイル）−６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート（２８１ｍｇ、８９．７％）を明黄色の泡として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝６８１．４２
【０２８６】
ｃ）Ｎ−（２−アミノエチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  ジヒドロクロリド
2019518727.tif 000120
（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（３−（（２−アミノエチル）カルバモイル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（５０ｍｇ、７３．４μｍｏｌ、当量：１）を、酢酸エチル（１ｍｌ）中でジオキサン４Ｍ（１ｍｌ、４ｍｍｏｌ、当量：５４．５）中ＨＣｌと室温で一晩撹拌した。沈殿した固体を濾別し、ジエチルエーテルで洗浄し、高減圧下で乾燥させて、Ｎ−（２−アミノエチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド  ジヒドロクロリド（３５．５ｍｇ、７４％）を白色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝５８１．３６
【０２８７】
モノマーＢ
（Ｓ）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボン酸  ジヒドロクロリド
ジオキサン（１．９６ｍｌ、７．８３ｍｍｏｌ、当量：１００）中ＨＣｌ  ４Ｍを、酢酸エチル（０．５ｍｌ）中（Ｓ）−１−（２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−カルボン酸（５０ｍｇ、７８．３μｍｏｌ、当量：１）の黄色の懸濁液に添加し、反応物を室温で３時間撹拌した。白色の沈殿物を濾別し、ジエチルエーテルで洗浄し、真空中で乾燥させて、（Ｓ）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボン酸  ジヒドロクロリド  （３０ｍｇ、６２．７  ％）をオレンジの固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝５３９．３
【０２８８】
モノマーＣ
１−（６−（４−フルオロベンジル）−３−（ヒドロキシメチル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）エタノン  ジヒドロクロリド
ａ）ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−（ヒドロキシメチル）−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート
2019518727.tif 000121
水素化ホウ素ナトリウム（８５．８ｍｇ、２．２７ｍｍｏｌ、当量：２）を、ＴＨＦ（５．８６ｍｌ）及びメタノール（５．８６ｍｌ）中メチル  １−（２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−カルボキシレート（７４０ｍｇ、１．１３ｍｍｏｌ、当量：１）の透明な溶液に０℃で添加した。反応物を０℃で５時間撹拌し、その後、室温まで温め、一晩撹拌した。Ａｑ．  ｓａｔ．  炭酸ナトリウムを添加し、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、エバポレートした。粗残留物をシリカゲルに適用し、溶出剤として酢酸エチル／ヘプタン（５０−１００％酢酸エチル）を使用したフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｓ）−４−［２−［６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−（ヒドロキシメチル）−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−オキソ−エチル］−２−メチル−５−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート（６１６ｍｇ、８７％）を白色の泡として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝６２５．４
【０２８９】
ｂ）１−［６−［（４−フルオロフェニル）メチル］−３−（ヒドロキシメチル）−３−メチル−インドリン−１−イル］−２−［（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−［［（３Ｒ）−３−メチルモルホリン−４−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］エタノン  ジヒドロクロリド
2019518727.tif 000122
ジオキサン（２ｍｌ、８ｍｍｏｌ、当量：１００）中ＨＣｌ  ４Ｍを、酢酸エチル（０．５ｍｌ）中（２Ｒ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（６−（４−フルオロベンジル）−３−（ヒドロキシメチル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−メチル−５−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（５０ｍｇ、８０μｍｏｌ、当量：１）の透明な溶液に添加し、反応混合物を室温で３時間撹拌した。沈殿物を濾別し、ジエチルエーテルで完全に洗浄し（非常に吸湿性がある）、真空中で乾燥させて、１−（６−（４−フルオロベンジル）−３−（ヒドロキシメチル）−３−メチルインドリン−１−イル）−２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）エタノンジヒドロクロリド  （４３ｍｇ、８９．９  ％）をオレンジの固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝５２５．３
【０２９０】
モノマーＤ
４−（６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド）安息香酸  ジヒドロクロリド
４−（１−（２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−カルボキサミド）安息香酸（２８ｍｇ、３６．９μｍｏｌ、当量：１）を、酢酸エチル（０．７５ｍｌ）中でジオキサン  ４Ｍ（０．７５ｍｌ、３ｍｍｏｌ、当量：８１．２）中ＨＣｌと室温で一晩撹拌した。沈殿した固体を濾別し、ジエチルエーテルで洗浄し、高減圧下で乾燥させて、４−（６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド）安息香酸ジヒドロクロリド  （２０ｍｇ、７４．１  ％）を白色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝６５８．３
【０２９１】
モノマーＥ
２−（６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド）酢酸  ジヒドロクロリド
２−（１−（２−（（２Ｓ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）−６−（４−フルオロベンジル）−３−メチルインドリン−３−カルボキサミド）酢酸（５０ｍｇ、７１．９μｍｏｌ、当量：１）を、エチルエーテル（１ｍｌ）中でジオキサン  ４Ｍ（１ｍｌ、４ｍｍｏｌ、当量：５５．７）中ＨＣｌと室温で一晩撹拌した。沈殿した固体を濾別し、ジエチルエーテルで洗浄し、高減圧下で乾燥させて、２−（６−（４−フルオロベンジル）−３−メチル−１−（２−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−メチル−２−（（（Ｒ）−３−メチルモルホリノ）メチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）インドリン−３−カルボキサミド）酢酸  ジヒドロクロリド（３９ｍｇ、８１．２％）を白色の固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝５９６．３
【０２９２】
中間体１
（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−１−カルボン酸
2019518727.tif 000123
ａ）（Ｓ）−１−ベンジル  ２−ｔｅｒｔ−ブチル  イソインドリン−１，２−ジカルボキシレート  
2019518727.tif 000124
２５ｍＬの丸底フラスコで、（１Ｓ）−２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルイソインドリン−１−カルボン酸（ＣＡＳ  １０９３６５１−９３−４；２２０ｍｇ、８３６μｍｏｌ、当量：１）及び重炭酸カリウム（１６７ｍｇ、１．６７ｍｍｏｌ、当量：２）をＤＭＦ（３ｍｌ）と合わせた。臭化ベンジル（２１４ｍｇ、１４９μｌ、１．２５ｍｍｏｌ、当量：１．５）を添加した。反応混合物を、室温で２時間撹拌し、明褐色の懸濁液を形成した。反応混合物を酢酸エチルに注ぎ、希釈水性塩酸及びブラインで抽出した。有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、１２ｇ、０％から４０％ヘプタン中ＥｔＯＡｃ）により精製した：１９４ｍｇの無色の油、ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ−Ｃ６Ｈ５ＣＨ２ＯＣＯ）＋＝２１８．１。
【０２９３】
ｂ）（Ｓ）−ベンジル  イソインドリン−１−カルボキシレート  ２，２，２−トリフルオロアセテート  
2019518727.tif 000125
５０ｍＬの丸底フラスコで、（Ｓ）−１−ベンジル  ２−ｔｅｒｔ−ブチル  イソインドリン−１，２−ジカルボキシレート（１９０ｍｇ、５３８μｍｏｌ、当量：１）をジクロロメタン（６ｍｌ）と合わせた。トリフルオロ酢酸（３ｍｌ）を添加した。混合物を室温で２時間撹拌し、その際、明黄色の溶液が形成された。反応混合物を真空中で濃縮し、２３５ｍｇの黄色の油を得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝２５４．２
【０２９４】
ｃ）（Ｓ）−ベンジル  ２−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−１−カルボキシレート  
2019518727.tif 000126
２５ｍＬの丸底フラスコで、（Ｓ）−ベンジル  イソインドリン−１−カルボキシレート  ２，２，２−トリフルオロアセテート（２３０ｍｇ、５２６μｍｏｌ、当量：１），（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）酢酸（１５０ｍｇ、５７９μｍｏｌ、当量：１．１）及びＤＩＰＥＡ（３４０ｍｇ、４５９μｌ、２．６３ｍｍｏｌ、当量：５）をＤＭＦ（５ｍｌ）と合わせ、その後、ＨＡＴＵ（２６０ｍｇ、６８４μｍｏｌ、当量：１．３）を添加した。混合物を室温で３時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチルに注ぎ、希釈ＨＣｌ及びブラインで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空中で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、１２ｇ、０％から５０％ヘプタン中酢酸エチル）により精製して、１８８ｍｇの白色の固体を得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ−Ｃ４Ｈ８）＋＝４３９．３
【０２９５】
ｄ）（Ｓ）−ベンジル  ２−（（Ｓ）−２−アミノ−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−１−カルボキシレート  ２，２，２−トリフルオロアセテート  
2019518727.tif 000127
５０ｍＬの丸底フラスコで、（Ｓ）−ベンジル  ２−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−１−カルボキシレート（１８５ｍｇ、３７４μｍｏｌ、当量：１）をジクロロメタン（６ｍｌ）と合わせて、無色の溶液を得た。トリフルオロ酢酸（３ｍｌ）を添加した。反応混合物を室温で１時間撹拌し、その後真空中で濃縮した：２８３ｍｇの無色の油。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝３９５．３  
【０２９６】
ｅ）（Ｓ）−ベンジル  ２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−１−カルボキシレート  
2019518727.tif 000128
２５ｍＬの丸底フラスコで、（Ｓ）−ベンジル  ２−（（Ｓ）−２−アミノ−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−１−カルボキシレート  ２，２，２−トリフルオロアセテート（２８０ｍｇ、３６９μｍｏｌ、当量：１．００）及びＢｏｃ−Ｎ−メチル−Ｌ−ａｌａｎｉｎｅ（８２．５ｍｇ、４０６μｍｏｌ、当量：１．１）をＤＭＦ（４ｍｌ）と合わせて、黄色の溶液を得た。ＤＩＰＥＡ（２８６ｍｇ、３８７μｌ、２．２１ｍｍｏｌ、当量：６）及びＨＡＴＵ（１６８ｍｇ、４４３μｍｏｌ、当量：１．２）を添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物を酢酸エチルに注ぎ、希釈ＨＣｌ、ブラインで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空中で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、１２ｇ、０％から１００％ヘプタン中酢酸エチル）により精製した：１６６ｍｇの白色の固体。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝５８０．４
【０２９７】
ｆ）（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−１−カルボン酸  
2019518727.tif 000129
５０ｍＬの丸底フラスコで、（Ｓ）−ベンジル  ２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）プロパンアミド）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）イソインドリン−１−カルボキシレート（１６０ｍｇ、２７６μｍｏｌ、当量：１）をメタノール（１０ｍｌ）中に溶解した。アルゴンを反応混合物中に５分間吹き込んだ。パラジウム炭（Ｐｄ−Ｃ  １０％、２９．４ｍｇ、２７．６μｍｏｌ、当量：０．１）を添加した。水素を５分間吹き込んだ。反応混合物を水素雰囲気下で２時間撹拌した。反応混合物をセライトを通して濾過し、真空中で濃縮し、１６４ｍｇの黄色の油を得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝４９０．２５５
【０２９８】
中間体２
ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−６−アミノ−１−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−２−イル）−２−オキソ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメート
2019518727.tif 000130
ａ）（Ｓ）−６−ニトロイソインドリン−１−カルボン酸
2019518727.tif 000131
（Ｓ）−イソインドリン−１−カルボン酸  ヒドロクロリド（２ｇ、１０ｍｍｏｌ、当量：１）を濃縮したＨ２ＳＯ４（９．８３ｇ、５．３４ｍｌ、１００ｍｍｏｌ、当量：１０）に添加し、混合物を撹拌して褐色の溶液を得た。反応混合物を−１５℃に冷却し（氷／ＮａＣｌ浴）、その後、６５％の水性硝酸（１．９４ｇ、１．３９ｍｌ、２０ｍｍｏｌ、当量：２）を添加した。反応混合物を２時間撹拌し、同時に−１５℃から室温へゆっくりと温めて、明黄色の溶液を得た。ＬＣ−ＭＳは、反応が完結したことを示した。反応混合物を氷上に注ぎ、１７ｍｌの２５％アンモニア水を０℃で滴下して、褐色の溶液（ｐＨ８）を得た。反応混合物を真空中で濃縮し、１５．５ｇのダークグレーの固体を得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝２０９．１
【０２９９】
ｂ）（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−６−ニトロイソインドリン−１−カルボン酸
2019518727.tif 000132
ＴＨＦ（８０ｍｌ）及び水（８０ｍｌ）中（Ｓ）−６−ニトロイソインドリン−１−カルボン酸（１５．５ｇ、９．９ｍｍｏｌ、当量：１）及び重炭酸ナトリウム（３．３３ｇ、３９．６ｍｍｏｌ、当量：４）の溶液に、Ｂｏｃ無水物（４．３２ｇ、４．６ｍｌ、１９．８ｍｍｏｌ、当量：２）を添加した。反応混合液を室温で一晩撹拌した。その後、飽和Ｎａ２ＣＯ３水溶液を添加し、混合物をＥｔＯＡｃで２回抽出した。２Ｎ  ａｑ．  ＨＣｌを水層（ｐＨ１）に滴下し、水層をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮し、２．１５ｇの褐色の泡を得て、それ以上精製することなく次の工程に使用した。
【０３００】
ｃ）（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  １−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−６−ニトロイソインドリン−２−カルボキシレート
2019518727.tif 000133
ＥｔＯＡｃ（１０ｍｌ）中（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−６−ニトロイソインドリン−１−カルボン酸（２．１５ｇ、６．９７ｍｍｏｌ、当量：１）の撹拌された溶液に、２，６−ジフルオロアニリン（１．０８ｇ、８４６μｌ、８．３７ｍｍｏｌ、当量：１．２）、ピリジン（５ｍｌ）及びＥｔＯＡｃ中Ｔ３Ｐ（８．８８ｇ、８．３ｍｌ、１３．９ｍｍｏｌ、当量：２）の  ５０％溶液を連続して添加した。反応混合物を室温で１時間撹拌して、黄色の溶液を得た。ＬＣ−ＭＳは、反応が完結したことを示した。反応混合物をＥｔＯＡｃに注ぎ、１Ｎ  ａｑ．  ＨＣｌ及び飽和ブラインで連続して抽出した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、８０ｇ、０％から１００％ヘプタン中ＥｔＯＡｃ）により精製して、２．１６ｇの明褐色の固体を得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ−Ｃ４Ｈ８）＋＝３６４．１
【０３０１】
ｄ）（Ｓ）−Ｎ−（２，６−ジフルオロフェニル）−６−ニトロイソインドリン−１−カルボキサミド
2019518727.tif 000134
ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍｌ）中（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  １−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−６−ニトロイソインドリン−２−カルボキシレート（２．１ｇ、５．０１ｍｍｏｌ、当量：１）の溶液に、ＴＦＡ（１４．８ｇ、１０ｍｌ、１３０ｍｍｏｌ、当量：２６）を添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した。その後、反応混合物を真空中で濃縮し、残留物をＥｔＯＡｃに溶解し、飽和水性ＮａＨＣＯ３及び飽和ブラインで連続して抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮し、１．４１ｇの褐色の固体を得て、それ以上精製することなく次の工程に使用した。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝３２０．１
【０３０２】
ｅ）ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−１−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−６−ニトロイソインドリン−２−イル）−２−オキソ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）カルバメート  
2019518727.tif 000135
ＤＭＦ（１０ｍｌ）中（Ｓ）−Ｎ−（２，６−ジフルオロフェニル）−６−ニトロイソインドリン−１−カルボキサミド（１．４ｇ、４．３９ｍｍｏｌ、当量：１），（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）酢酸（１．１９ｇ、４．６ｍｍｏｌ、当量：１．０５）及びＤＩＰＥＡ（１．１３ｇ、１．５３ｍｌ、８．７７ｍｍｏｌ、当量：２）の溶液に、ＨＡＴＵ（２．１７ｇ、５．７ｍｍｏｌ、当量：１．３）を添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。その後、反応混合物をＥｔＯＡｃに注ぎ、０．５Ｎ  ａｑ．  ＨＣｌ及び飽和ブラインで連続して抽出した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、８０ｇ、ヘプタン／ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ）により精製して、２．２７ｇの黄色の泡を得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝５６１．２
【０３０３】
ｆ）（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アミノ−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）−Ｎ−（２，６−ジフルオロフェニル）−６−ニトロイソインドリン−１−カルボキサミド
2019518727.tif 000136
ＣＨ２Ｃｌ２（１２ｍｌ）中ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−１−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−６−ニトロイソインドリン−２−イル）−２−オキソ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）カルバメート（２．２７ｇ、４．０５ｍｍｏｌ、当量：１）の溶液にＴＦＡ（９．２４ｇ、６．２４ｍｌ、８１ｍｍｏｌ、当量：２０）を添加し、反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、残留物をＥｔＯＡｃに溶解し、水性ＮａＨＣＯ３及び飽和ブラインで連続して抽出した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮して、１．６８ｇの暗黄色の固体を得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝４６１．２
【０３０４】
ｇ）ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−１−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−６−ニトロイソインドリン−２−イル）−２−オキソ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメート  
2019518727.tif 000137
ＤＭＦ（８ｍｌ）中（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アミノ−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アセチル）−Ｎ−（２，６−ジフルオロフェニル）−６−ニトロイソインドリン−１−カルボキサミド（１．６８ｇ、３．６５ｍｍｏｌ、当量：１）、ＢＯＣ−ＭＥＡＬＡ−ＯＨ（８１６ｍｇ、４．０１ｍｍｏｌ、当量：１．１）及びＤＩＰＥＡ（１．４１ｇ、１．９１ｍｌ、１０．９ｍｍｏｌ、当量：３）の溶液に、ＨＡＴＵ（１．８ｇ、４．７４ｍｍｏｌ、当量：１．３）を添加した。反応混合物を室温で４時間撹拌した。ＬＣ−ＭＳ、ＴＬＣは、反応が完結したことを示した。反応混合物をＥｔＯＡｃに注ぎ、０．５Ｎ  ａｑ．  ＨＣｌ及び飽和ブラインで連続して抽出した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、８０ｇ、ヘプタン／ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ）により精製して、２．０ｇのオフホワイトの泡を得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ−Ｈ）−＝６４４．４
【０３０５】
ｈ）ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−６−アミノ−１−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−２−イル）−２−オキソ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメート  
2019518727.tif 000138
メタノール（５ｍｌ）中ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−１−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−６−ニトロイソインドリン−２−イル）−２−オキソ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメート（２ｇ、３．１ｍｍｏｌ、当量：１）の溶液を、アルゴンで１０分間パージした。１０％Ｐｄ−Ｃ（３３０ｍｇ、３１０μｍｏｌ、当量：０．１）を添加した。反応混合物をＨ２で１０分間パージし、その後、Ｈ２のバルーン下で１時間撹拌した。ＴＬＣは反応が完結したことを示した。反応混合物をセライトを通して濾過した。９ｇのシリカゲルを濾液に添加し、混合物を真空中で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、８０ｇ、０％から１０％ＣＨ２Ｃｌ２中ＭｅＯＨ）により精製して、１．５７ｇの白色の固体を得た。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝６１６．
【０３０６】
中間体３
ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−７−アミノ−３−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）−２−オキソ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメート  
2019518727.tif 000139
（Ｓ）−イソインドリン−１−カルボン酸  ヒドロクロリドの代わりに（Ｓ）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸から出発して、中間体２と同様に標題化合物を調製した。黄色の固体。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝６３０．３
【０３０７】
中間体４
ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−５−アミノ−１−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−２−イル）−２−オキソ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメート  
2019518727.tif 000140
ａ）ｔｅｒｔ−ブチル（（２Ｓ）−１−（（（１Ｓ）−２−（５−アミノ−１−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−２−イル）−２−オキソ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメート  
2019518727.tif 000141
（Ｓ）−６−ニトロイソインドリン−１−カルボン酸の代わりに５−ニトロイソインドリン−１−カルボン酸  ヒドロクロリドから出発して、中間体２工程（ｂ）−（ｈ）と同様に、標題化合物を調製した。褐色の固体。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）−＝６１４．５
【０３０８】
ｂ）ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−５−アミノ−１−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−２−イル）−２−オキソ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメート  
2019518727.tif 000142
ｔｅｒｔ−ブチル（（２Ｓ）−１−（（（１Ｓ）−２−（５−アミノ−１−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−２−イル）−２−オキソ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメートを、キラルＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ  Ｃｈｉｒａｌ−ＮＲ；溶出剤：ＮＨ４ＯＡｃ／ＥｔＯＨ／ヘプタンのグラジエント）により分離し、以下を得た：
（＋）−エピマー、保持時間＝１１分、ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−２−（（Ｒ）−５−アミノ−１−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−２−イル）−２−オキソ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメート。黄色の固体。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ−Ｈ）−＝６１４．５。
（−）−エピマー、保持時間＝２１分、ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−５−アミノ−１−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−２−イル）−２−オキソ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメート。オフホワイトの固体。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ−Ｈ）−＝６１４．５。
【０３０９】
中間体５
ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（２Ｓ，３Ｒ）−１−（（Ｓ）−６−アミノ−１−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−２−イル）−３−メトキシ−１−オキソブタン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメート
2019518727.tif 000143
（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）酢酸の代わりにＮ−Ｂｏｃ−Ｏ−メチル−Ｌ−スレオニンを使用して、中間体２と同様に標題化合物を調製した。白色の固体。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝５９０．２７
【０３１０】
中間体６
ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（２Ｓ，３Ｓ）−１−（（Ｓ）−６−アミノ−１−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）イソインドリン−２−イル）−３−メチル−１−オキソペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバメート  
2019518727.tif 000144
（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）酢酸の代わりに  Ｂｏｃ−Ｌ−イソロイシンを使用して、中間体２と同様に標題化合物を調製した。明黄色の固体。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝５８８．３
【０３１１】
中間体７
ｔｅｒｔ−ブチル  Ｎ−［（１Ｓ）−２−［［（１Ｓ）−１−［（１Ｓ）−６−アミノ−１−［（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル］イソインドリン−２−カルボニル］−２，２−ジメチル−プロピル］アミノ］−１−メチル−２−オキソ−エチル］−Ｎ−メチル−カルバメート
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（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）酢酸の代わりに  Ｂｏｃ−Ｌ−ｔｅｒｔ−ロイシンを使用して、中間体２と同様に標題化合物を調製した。明黄色の油。ＭＳ：ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝５８８．３
【図１】
2019518727.tif 000153
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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2019518727.tif 000158