(57)【要約】  本明細書では、インターロイキン４誘導１（ＩＬ４Ｉ１）活性を低減または阻害することにより慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）などの呼吸器疾患を治療または予防するための方法が提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物において呼吸器疾患または呼吸器感染を治療または予防する方法であって、哺乳動物においてインターロイキン４誘導１（ＩＬ４Ｉ１）活性を低減または阻害することを含んでなる、方法。
【請求項２】
呼吸器疾患の治療または予防のための薬剤の製造における、ＩＬ４Ｉ１活性を低減または阻害するアンタゴニストの使用。
【請求項３】
呼吸器疾患の治療または予防において使用するための、ＩＬ４Ｉ１活性を低減または阻害するアンタゴニスト。
【請求項４】
ＩＬ４Ｉ１活性を低減または阻害する１以上のアンタゴニストを少なくとも１つの医薬担体、希釈剤または賦形剤とともに含んでなる、呼吸器疾患の治療または予防するための医薬組成物。
【請求項５】
哺乳動物に治療上有効な量の、ＩＬ４Ｉ１活性を低減または阻害する１以上のアンタゴニストを投与することを含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
ＩＬ４Ｉ１がヒトＩＬ４Ｉ１である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
呼吸器疾患が慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、ＣＯＰＤ増悪、喘息、気管支炎、気腫、嚢胞性線維症、急性呼吸窮迫症候群および気管支拡張症のうち１以上である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
ＣＯＰＤ増悪が呼吸器感染に起因する、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
呼吸器感染が細菌感染である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
細菌感染がモラクセラ・カタラーリス、インフルエンザ菌、肺炎連鎖球菌、および／または、結核菌などのマイコバクテリアのうち１以上による感染である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
呼吸器感染がウイルス感染である、請求項１または８に記載の方法。
【請求項１２】
ウイルス感染がＨＲＶまたはＲＳＶによる感染である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
呼吸器感染が二次的細菌感染である、請求項８に記載の方法。
【請求項１４】
ＩＬ４Ｉ１活性が１以上のＩＬ４Ｉ１タンパク質のアンタゴニストにより阻害される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
１以上のＩＬ４Ｉ１タンパク質のアンタゴニストが、１以上のＩＬ４Ｉ１タンパク質に特異的である、抗体、抗体フラグメント、抗体コンジュゲート、アプタマー、小分子、治療タンパク質、ドメイン抗体またはｄＡｂ（商標）、またはそれらの組合せを含んでなる、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
哺乳動物がヒトである、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
哺乳動物に、呼吸器疾患を治療または予防するための１以上の付加的治療アンタゴニストを投与することをさらに含んでなる、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
呼吸器疾患を治療または予防するためのＩＬ４Ｉ１活性のアンタゴニストのスクリーニング方法であって、そのアンタゴニストがＩＬ４Ｉ１経路を阻害するかどうかを決定する工程を含んでなる、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、引用することにより本明細書の一部とされる２０１６年４月２６日に出願された米国仮出願第６２／３２７，７１８号の優先権を主張するものである。
【０００２】
分野
本願は、インターロイキン４誘導１(interleukin 4 induced 1)（ＩＬ４Ｉ１）活性を低減または阻害することにより、例えば、ＩＬ４Ｉ１タンパク質または、その下流産物もしくは標的に特異的なアンタゴニストの使用によって、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）などの呼吸器疾患を治療または予防する方法に関する。
【０００３】
共同研究契約の当事者
Ｆｉｖｅ  Ｐｒｉｍｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．およびＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅが本明細書に開示される発明を管理する共同研究契約の当事者である。
【０００４】
背景
インターロイキン４誘導１（ＩＬ４Ｉ１）は、ＦＩＧ１としても知られ、当初はＩＬ４で処理した後のＢ細胞で確認された。ＩＬ４Ｉ１は、リソソームタンパク質であり、樹状細胞によっても発現および分泌され得る。ＩＬ４Ｉ１は、Ｌ−アミノ酸オキシダーゼとの類似性を有し、基質であるフェニルアラニンに高い特異性を有する。この遺伝子の２つの選択的にスプライシングされる転写変異体は２つの明瞭に異なるアイソフォームをコードすることが報告されている。
【０００５】
報告されているＩＬ４Ｉ１タンパク質の活性には、リソソーム抗原プロセシングおよび提示、Ｔｈ１、Ｔｈ２およびＴｈ１７応答の抑制、ならびにＭ２マクロファージ表現型の増強が含まれる。
【０００６】
概要
本明細書のデータは、ＣＯＰＤなどの呼吸器疾患におけるＩＬ４Ｉ１の役割を実証する。これらの所見に基づき、対象に治療上有効な量の、ＩＬ４Ｉ１活性を低減または阻害する１以上のアンタゴニスト（例えば、ＩＬ４Ｉ１タンパク質または、その下流産物もしくは標的に特異的なアンタゴニスト）、例えば、ＩＬ４Ｉ１のシグナル伝達、発現、もしくは活性を変更するアンタゴニスト（例えば、ＩＬ４Ｉ１に特異的な阻害分子）、またはＩＬ４Ｉ１の少なくとも１つの下流標的のシグナル伝達、発現、もしくは活性を変更するアンタゴニストを投与することを含む、対象において呼吸器疾患を治療または予防する方法が提供される。よって、呼吸器疾患の治療または予防のための薬剤の製造における、ＩＬ４Ｉ１活性を低減または阻害する１以上のアンタゴニストの使用も提供される。また、呼吸器疾患を治療または予防するための、ＩＬ４Ｉ１活性を低減または阻害するアンタゴニストも提供される。また、呼吸器疾患を治療または予防するための医薬組成物も提供され、その組成物は、ＩＬ４Ｉ１活性を低減または阻害する１以上のアンタゴニストを少なくとも１つの医薬担体、希釈剤または賦形剤ともに含む。
【０００７】
開示される方法および組成物で治療または予防することができる例示的呼吸器疾患としては、限定されるものではないが、ＣＯＰＤ、増悪ＣＯＰＤ、喘息、気管支炎、気腫、嚢胞性線維症、急性呼吸窮迫症候群、気管支拡張症、またはそれらの組合せが含まれる。いくつかの例では、ＣＯＰＤ増悪は、細菌感染 (bacterial infection)（例えば、モラクセラ・カタラーリス(Moraxella catarrhalis)、インフルエンザ菌(Haemophilus influenzae)、肺炎連鎖球菌(Streptococcus pneumoniae)および／または、結核菌(Mycobacterium tuberculosis)などのマイコバクテリア、のうち１以上による感染）またはウイルス感染（例えば、ヒトライノウイルス（ＨＲＶ）もしくは呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）による感染）などの呼吸器感染(a respiratory infection)に起因する。幾つかの例では、呼吸器感染は、二次的細菌感染である。よって、対象は、ＣＯＰＤ、増悪ＣＯＰＤ、喘息、気管支炎、気腫、嚢胞性線維症、急性呼吸窮迫症候群、気管支拡張症、またはそれらの組合せを有し得る。いくつかの例では、対象は、細菌感染（例えば、モラクセラ・カタラーリス、インフルエンザ菌、肺炎連鎖球菌および／または、結核菌などのマイコバクテリア、のうち１以上による感染）またはウイルス感染（例えば、ＨＲＶもしくはＲＳＶによる感染）によるなどの呼吸器感染を有する。
【０００８】
一つの実施態様では、ＩＬ４Ｉ１活性は、ＩＬ４Ｉ１タンパク質および／または核酸分子の１以上のアンタゴニストにより低減または阻害される。別の実施態様では、ＩＬ４Ｉ１核酸分子のアンタゴニストは、ＩＬ４Ｉ１核酸分子に特異的なアンチセンス核酸分子、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、短鎖ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、リボザイム、またはそれらの組合せなどの阻害核酸分子を含んでなる。一例では、ＩＬ４Ｉ１タンパク質のアンタゴニストは、ＩＬ４Ｉ１タンパク質に特異的な抗体、抗体フラグメント、抗体コンジュゲート、ドメイン抗体またはｄＡｂ（商標）、小有機分子、小無機分子、またはそれらの組合せを含んでなる。いくつかの例では、ＩＬ４Ｉ１活性は、ＩＬ４Ｉ１の下流標的の１以上のアンタゴニストにより低減または阻害される。
【０００９】
また、呼吸器疾患の治療または予防に使用するための、ＩＬ４Ｉ１活性のアンタゴニストのスクリーニング方法も提供される。
【００１０】
本開示の以上およびその他の目的および特徴は、添付の図面を参照しつつ進行する以下の詳細な説明からより明らかとなる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は、健常気管支上皮細胞（ＢＥＣ）に比べて、ＣＯＰＤのＢＥＣとともに共培養した後に健常単球由来ＤＣ（ｍｏＤＣ）に誘導された、差次的に発現される遺伝子（ＣＸＣＬ５、ＰＴＧＥＳ、Ｓ１００Ａ８、ＳＥＲＰＩＮＢ２、およびＴＨＢＳ１）のの選択を示す一連のチャートを含む。
【図２】図２は、ＣＯＰＤ患者由来の上皮細胞との共培養においてｍｏＤＣをＩＬ４Ｉ１で処理すると、ＣＸＣＬ５、ＰＴＧＥＳ、Ｓ１００Ａ８、ＳＥＲＰＩＮＢ２、およびＴＨＢＳ１などの樹状細胞遺伝子のｍＲＮＡ発現が増加することを示す、一連のチャートを含む。
【発明の具体的説明】
【００１２】
以下の用語および方法の説明は、本開示をより良く説明するため、また、本開示の実施において当業者に指針を与えるために提供される。単数形「１つの(a)」、「１つの(an)」および「その(the)」は、内容がそうではないことを明示しない限り、１または複数を指す。例えば、用語「細胞を含んでなる」は、単数または複数の細胞を含み、「少なくとも１つの細胞を含んでなる」という句と等価と見なされる。用語「または」は、内容がそうではないことを明示しない限り、記載された選択的要素のうち単一の要素または２以上の要素の組合せを指す。本明細書で使用される場合、「含んでなる」は、「含む」を意味する。よって、「ＡまたはＢを含んでなる」は、付加的要素を排除することなく、「Ａ、Ｂ、またはＡとＢを含む」ことを意味する。
【００１３】
そうではないことが説明されない限り、本明細書で使用される総ての技術用語および科学用語は、本開示が属する技術分野の熟練者に一般に理解されているものと同じ意味を有する。本明細書に記載されているものと類似または等価な方法および材料は本開示の実施または試験において使用可能であるが、好適な方法および材料が以下に記載される。材料、方法、および例は、例示に過ぎず、限定を意図するものではない。
【００１４】
本開示の種々の実施態様の再検証を助けるために、以下に特定の用語の説明を示す。
投与：対象に、ＩＬ４Ｉ１活性を低減または阻害する１以上のアンタゴニスト（例えば、１以上のＩＬ４Ｉ１核酸分子もしくはタンパク質または、その下流産物もしくは標的に特異的なアンタゴニスト）などのアンタゴニストを効果的な経路で提供するまたは与えること。例示的投与経路としては、限定されるものではないが、経口、注射（例えば、皮下、筋肉内、皮内、腹腔内、静脈内、および腫瘍内）、舌下、直腸の、経皮的な、鼻腔内、膣および吸入経路が含まれる。
【００１５】
抗体：ＩＬ４Ｉ１などの抗原、またはそのフラグメントのエピトープを特異的に認識して結合する少なくとも軽鎖または重鎖免疫グロブリン可変領域を含むポリペプチド。抗体は重鎖および軽鎖から構成され、それらはそれぞれ、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域と呼ばれる可変領域を有する。ＶＨ領域およびＶＬ領域は一緒に、抗体により認識される抗原の結合を担う。本開示の抗体は、ＩＬ４Ｉ１に特異的なものを含み、いくつかの例では、ＩＬ４Ｉ１タンパク質の生物活性の低減または阻害もする。
【００１６】
抗体という用語には、完全な免疫グロブリン、ならびにその変異体および一部、例えば、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ）’２フラグメント、一本鎖Ｆｖタンパク質（「ｓｃＦｖ」）、およびジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（「ｄｓＦｖ」）が含まれる。ｓｃＦｖタンパク質は、免疫グロブリンの軽鎖可変領域と免疫グロブリンの重鎖可変領域がリンカーにより結合された融合タンパク質であるが、ｄｓＦｖｓでは、それらの鎖が、鎖の会合を安定化させるためにジスルフィド結合を導入するように変異されている。この用語にはまた、キメラ抗体（例えば、ヒト化マウス抗体）、ヘテロコンジュゲート抗体（例えば、二重特異性抗体）などの遺伝的に操作された形態も含まれる。また、Pierce Catalog and Handbook, 1994-1995 (Pierce Chemical Co., Rockford, IL); Kuby, J., Immunology, 第3版, W.H. Freeman & Co., New York, 1997も参照。
【００１７】
一般に、天然免疫グロブリンは、ジスルフィド結合により相互接続された重（Ｈ）鎖および軽（Ｌ）鎖を有する。軽鎖にはガンマ（λ）とカッパ（κ）の２種類が存在する。５つの主要な重鎖クラス（またはアイソタイプ）が存在し、それらは抗体分子の機能活性を決定する：ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥ。
【００１８】
各重鎖および軽鎖は、定常領域と可変領域を含む（これらの領域は「ドメイン」としても知られる）。組合せにおいて、重鎖および軽鎖可変領域は抗原と特異的に結合する。軽鎖および重鎖可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」とも呼ばれる３つの超可変領域が挿入された「フレームワーク」領域を含む。フレームワーク領域およびＣＤＲの範囲は定義されている（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Department of Health and Human Services, 1991参照）。Ｋａｂａｔデータベースは現在オンラインで維持管理されている。異なる軽鎖または重鎖のフレームワーク領域の配列は比較的種内で保存されている。抗体のフレームワーク領域、すなわち、構成要素である軽鎖と重鎖のフレームワーク領域を合わせたものは、三次元空間でＣＤＲの位置を定め、配列する働きをする。
【００１９】
ＣＤＲは主として抗原のエピトープへの結合を担う。各鎖のＣＤＲは一般に、Ｎ末端から始めて順に番号を付け、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と呼ばれ、一般に特定のＣＤＲが位置している鎖によって特定されもする。よって、ＶＨ  ＣＤＲ３は、それが見出される抗体の重鎖の可変ドメインに位置し、ＶＬ  ＣＤＲ１は、それが見出される抗体の軽鎖の可変ドメインに由来するＣＤＲ１である。標的タンパク質と結合する抗体は、特定のＶＨ領域およびＶＬ領域配列、よって、特異的ＣＤＲ配列を有する。特異性の異なる抗体（例えば、異なる抗原に対する異なる結合部位）は異なるＣＤＲを有する。それは抗体ごとに違ったＣＤＲであるが、ＣＤＲ内の限られた数のアミノ酸だけが抗原結合に直接関わる。ＣＤＲ内のこれらの位置は特異性決定残基（ＳＤＲ）と呼ばれる。
【００２０】
「ＶＨ」または「ＶＨ」という場合には、免疫グロブリン重鎖の可変領域を指し、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖまたはＦａｂの可変領域を含む。「ＶＬ」または「ＶＬ」という場合には、免疫グロブリン軽鎖の可変領域を指し、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖまたはＦａｂの可変領域を含む。
【００２１】
「モノクローナル抗体」は、Ｂリンパ球の単一のクローンにより、または単一の抗体の軽鎖および重鎖遺伝子がトランスフェクトされた細胞により生産される抗体である。モノクローナル抗体は、当業者に公知の方法によって、例えば、骨髄腫細胞と免疫脾細胞の融合からハイブリッド抗体形成細を作出することによって生産される。モノクローナル抗体としては、ヒト化モノクローナル抗体を含む。
【００２２】
「ポリクローナル抗体」は、異なるＢ細胞系統に由来する抗体である。ポリクローナル抗体は、それぞれが異なるエピトープを認識する、特定の抗原に対して分泌された免疫グロブリン分子の混合物である。これらの抗体は、当業者に公知の方法によって、例えば、  抗原に特異的なＩｇＧ免疫グロブリンを生産するようにＢリンパ球を誘導する、好適な哺乳動物（例えば、マウス、ウサギまたはヤギ）への抗原の注射によって生産され、次にその哺乳動物の血清から精製される。
【００２３】
「キメラ抗体」は、ある種、例えばヒトに由来するフレームワーク残基と別の種に由来するＣＤＲ（一般に抗原結合を付与する）とを有し、例えば、ＩＬ４Ｉ１と特異的に結合するマウス抗体である。
【００２４】
「ヒト化」免疫グロブリンは、ヒトフレームワーク領域と非ヒト（例えば、マウス、ラット、または合成）免疫グロブリン由来の１以上のＣＤＲを含む免疫グロブリンである。ＣＤＲを提供する非ヒト免疫グロブリンは「ドナー」と呼ばれ、フレームワークを提供するヒト免疫グロブリンは「アクセプター」と呼ばれる。一例では、ヒト化免疫グロブリンにおいて、総てのＣＤＲがドナー免疫グロブリンに由来する。定常領域は存在する必要はないが、存在する場合、それらはヒト免疫グロブリン定常領域と実質的に同一であり、例えば、少なくとも約８５〜９０％、例えば、約９５％以上同一である。ゆえに、ヒト化免疫グロブリンの、存在し得るＣＤＲを除く総ての部分が、天然ヒト免疫グロブリン配列の相当する部分と実質的に同一である。ヒト化免疫グロブリンは、遺伝子工学の手段によって構築することができる（例えば、米国特許第５，５８５，０８９号参照）。
【００２５】
単一可変ドメイン：用語「単一可変ドメイン」は、抗体可変ドメインに特徴的な配列を含んでなる折り畳まれたポリペプチドドメインを指す。よって、それには、ＶＨ、ＶＨＨおよびＶＬなどの完全な抗体可変ドメイン、ならびに例えば１以上のループが抗体可変ドメインには特徴的でない配列に置き換えられた修飾抗体可変ドメイン、または末端切断された、もしくはＮ末端もしくはＣ末端延長を含んでなる抗体可変ドメイン、ならびに全長ドメインの少なくとも結合活性と特異性を保持する可変ドメインの折り畳まれたフラグメントが含まれる。単一可変ドメインは、可変領域またはドメインの違いによらず抗原またはエピトープと結合することができる。「ドメイン抗体」または「ｄＡｂ（商標）」は、「単一可変ドメイン」と同じと見なせる。単一可変ドメインは、ヒト単一可変ドメインであり得るが、齧歯類またはラクダ科動物ＶＨＨ  ｄＡｂ（商標）などの他種由来の単一可変ドメインも含む。ラクダ科動物ＶＨＨは、天然に軽鎖を欠いた重鎖抗体を生産するラクダ、ラマ、アルパカ、ヒトコブラクダ、およびグアナコを含む種に由来する免疫グロブリン単一可変ドメインポリペプチドである。このようなＶＨＨドメインは、当技術分野で利用可能な標準的技術に従ってヒト化可能であり、このようなドメインは「単一可変ドメイン」と見なされる。本明細書で使用される場合、ＶＨは、ラクダ科動物ＶＨＨドメインを含む。
【００２６】
結合：２つの物質または分子間の会合、例えば、ある核酸分子と別の核酸分子（またはそれ自体）のハイブリダイゼーション、抗体もしくは機能的核酸（例えば、アプタマー）とタンパク質もしくは小有機分子の会合、またはあるタンパク質と別のタンパク質もしくは核酸分子の会合。結合は、限定されるものではないが、ウエスタンブロット、免疫ブロット、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、免疫沈降、表面プラズモン共鳴、化学発光、蛍光偏光、燐光、免疫組織化学分析法、マトリックス支援レーザー脱離イオン化タイム・オブ・フライト型質量分析、マイクロサイトメトリー、マイクロアレイ、顕微鏡、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）、およびフローサイトメトリーを含む、当業者に公知のいずれかの手順によって検出することができる。
【００２７】
ある分子は、特定のアンタゴニスト（「特異的結合アンタゴニスト」）が特定の標的と特異的に反応し得るが無関連の分子とは結合しない場合に、別の分子と「特異的に結合する」、例えば、標的と特異的に免疫反応する、標的と特異的にハイブリダイズする、または標的と特異的に結合すると言われる。例えば、ＩＬ４Ｉ１特異的結合アンタゴニストは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏでＩＬ４Ｉ１タンパク質とのみ実質的に結合する。この結合は、例えば、特異的結合アンタゴニスト（例えば、抗体またはその機能的フラグメント、タンパク質、核酸分子または機能的核酸分子）と標的（例えば、細胞、タンパク質、ＤＮＡまたはＲＮＡ）の間の、無作為でない結合反応である。結合特異性は、特異的結合アンタゴニストの、標的および無関連分子に差次的に結合する能力、従って、２つの異なる分子間を識別する能力の基準点から決定することができる。例えば、オリゴヌクレオチド分子は、結合の検出を可能とするのに十分な量オリゴヌクレオチド分子が塩基対を形成するか、またはその標的核酸分子とハイブリダイズされる場合に、標的核酸分子と結合する、または安定に結合する。
【００２８】
いくつかの例では、分子（例えば、抗体）は、標的（例えば、タンパク質）と、サンプルまたは対象中の他の分子に対する結合定数よりも少なくとも１０３Ｍ−１大きい、１０４Ｍ−１大きいまたは１０５Ｍ−１大きい結合定数で特異的に結合する。特定の例では、２つの化合物は、成分間の複合体形成に関する結合定数が少なくとも１０４Ｌ／ｍｏｌ、例えば、少なくとも１０６Ｌ／ｍｏｌ、少なくとも１０８Ｌ／ｍｏｌ、または少なくとも１０１０Ｌ／ｍｏｌである場合に、特異的に結合すると言われる。２成分の結合定数は、当技術分野で周知の方法を用いて決定することができる。
【００２９】
アプタマー：アプタマーは、古典的ワトソン−クリックの塩基対形成以外の相互作用を介した分子との特異的結合親和性を有する核酸分子である。ファージディスプレーまたはモノクローナル抗体（ＭＡｂ）により作製されたペプチドなどのアプタマーは、選択された標的と特異的に結合し、結合を介してそれらの標的の機能する能力を遮断することができる。ランダム配列オリゴヌクレオチドのプールからｉｎ  ｖｉｔｒｏ選択プロセスにより作り出された場合、アプタマーは、増殖因子、転写因子、酵素、免疫グロブリン、および受容体を含む１００を超えるタンパク質に対して生成したものである。典型的なアプタマーは、１０〜１５ｋＤａ（３０〜４５ヌクレオチド）のサイズであり、その標的とサブノモルの親和性で結合し、密接に関連のある標的を識別する（例えば、一般に、同じ遺伝子ファミリー由来の他のタンパク質とは結合しない）。一連の構造研究では、アプタマーは、抗体−抗原複合体において親和性および特異性をもたらす同じタイプの結合相互作用（水素結合、静電相補性、疎水性接触、立体障害など）を使用できることが示されている。
【００３０】
アプタマーは、高い特異性および親和性、生物学的有効性、ならびに優れた薬物動態特性を含む、治療薬として使用するために望ましいいくつかの特徴を有する。加えて、それらは、例えば、以下のように、抗体およびその他のタンパク質生物製剤に優る特定の競合的利点を与える。
１）速度および制御。アプタマーは、完全にｉｎ  ｖｉｔｒｏ工程によって生産され、最初の治療リードの迅速な作製を可能とする。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ選択は、アプタマーの特異性および親和性を厳格に制御することを可能とし、毒性および非免疫原性の両標的に対するリードの作製を可能とする。
２）毒性および免疫原性。１つのクラスとしてのアプタマーは、毒性または免疫原性をほとんどまたは全く示さなかった。ラットまたはウッドチャックの高レベルアプタマー（１日１０ｍｇ／ｋｇで９０日間）による長期投与では、いずれの臨床、細胞、または生化学的指標によっても毒性は見られない。多くのモノクローナル抗体の有効性は抗体それ自体に対する免疫応答により著しく制限を受け得るが、アプタマーに対して抗体を誘導することは極めて難しい（アプタマーはＭＨＣを介してＴ細胞により提示できず、免疫応答は一般に核酸フラグメントを認識しないように訓練されているためである可能性が最も高い）。
３）投与。現在承認されている抗体治療薬は総て静注（一般に、２〜４時間にわたる）により投与されるが、アプタマーは皮下注射により投与できる。この違いは、主として、比較的低い溶解度のためであり、従って、ほとんどの治療用ＭＡｂには大容量が必要である。良好な溶解度（＞１５０ｍｇ／ｍｌ）および比較的低い分子量（アプタマー：１０〜５０ＫＤ；抗体：１５０ＫＤ）を有するので、週間用量のアプタマーが０．５ｍｌより少ない容量での注射によって送達可能である。加えて、小型のアプタマーは、抗体または抗体フラグメントには浸透できない立体配座の狭窄領域にも浸透を可能とし、アプタマーに基づく治療薬または予防薬のさらに別の利点を提供する。
４）スケーラビリティおよびコスト。治療用アプタマーは化学的に合成され、結果として、製造需要を満たすために、要すれば容易に規模を拡大することができる。拡大製造の難しさは現在、いくつかの生物製剤の利用可能性を限定しており、また、大規模タンパク質製造プラントの資本コストは莫大であるが、一つの大規模合成装置で年間１００ｋｇを超えるオリゴヌクレオチドを生産でき、比較的軽い初期投資ですむ。キログラムスケールでのアプタマー合成の物資の現在のコストは、高度に最適化された抗体のコストに匹敵する＄５００／ｇと見積もられる。プロセス開発の絶え間ない改良は、物資のコストを５年で＄１００／ｇを下回るまでに引き下げると思われる。
５）安定性。治療用アプタマーは、化学的にロバストである。治療用アプタマーは、熱、変性剤などに曝された後に活性を保持するように本質的に適合されており、凍結乾燥粉末として室温で長期間（＞１年）保存することができる。これに対し、抗体は冷蔵保存しなければならない。
【００３１】
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）：一般に経時的に増悪する、慢性的な空気流の不足を特徴とする閉塞性肺疾患の一種。例示的症状としては、息切れ、咳、および痰生成が含まれる。慢性気管支炎を有する一部の人はＣＯＰＤを有する。ＣＯＰＤの原因としては、喫煙、大気汚染、および遺伝学を含み得る。ＣＯＰＤの増悪、すなわち、ベースラインＣＯＰＤ症状の突発的悪化または再燃は、ＣＯＰＤを有する人での息切れ（呼吸困難）の増加、痰生成の増加、透明から緑もしくは黄色への痰の色の変化、および／または咳の増加を証拠とすることができる。これは、頻呼吸、速い心拍数、発汗、首の筋肉の活発な使用、皮膚の蒼白、および極めて重篤な増悪では錯乱または好戦的な振る舞いなどの呼吸仕事量の増大を呈し得る。また、Ｃ聴診器による検査では肺にラ音が聞こえることがある。場合によっては、急性増悪は、感染（例えば、細菌、ウイルス、または両方）、環境汚染物質、または投薬の不適切な使用によって引き起こされる。
【００３２】
ＩＬ４Ｉ１：ＩＬ４Ｉ１発現は、ＩＬ４処理の後に特異的細胞種（例えば、Ｔリンパ球でも肥満細胞でもなく、Ｂ細胞）に誘導され得る。ＩＬ４Ｉ１は、基質結合および触媒作用に重要ないくつかの残基を含む。ＩＬ４Ｉ１は、Ｎ末端シグナルペプチド、非哺乳動物Ｌ−アミノ酸オキシダーゼと相同性を有する中央領域、およびＦＡＤ結合に関与し得る３つの保存されたドメインを含む。ＩＬ４Ｉ１は、芳香族アミノ酸基質、特に、フェニルアラニンに選好性を有する。ＩＬ４Ｉ１は、胚中心マクロファージおよび炎症性骨髄様細胞に存在する分泌型のＮ−グリコシル化酵素である。ＩＬ４Ｉ１は、リソソーム色素と共局在し、ｐＨでより高い酵素活性を示し、リソソーム抗原プロセシングおよび提示において潜在的役割を示す。また、ＩＬ４Ｉ１はＴｈ１、Ｔｈ２およびＴｈ１７応答の抑制に関連し、Ｍ２マクロファージ表現型を増強するという証拠もある。
【００３３】
ＩＬ４Ｉ１活性：用語「ＩＬ４Ｉ１活性」は、ＩＬ４Ｉ１のアンタゴニストの使用によって、例えば、ＩＬ４Ｉ１の触媒活性を低減すること、ならびに／またはＩＬ４Ｉ１および／もしくは下流標的からのシグナル伝達を妨げることによって、低減または阻害され得る生物活性を指す。
【００３４】
単離された：「単離された」生物学的成分（例えば、ＩＬ４Ｉ１タンパク質、抗体、または核酸分子）は、その成分が存在する生物の細胞内の他の生物学的成分、例えば、他の染色体および染色体外ＤＮＡおよびＲＮＡ、ならびにタンパク質から実質的に分離された、別に生産されたか、または精製されたものである。従って、「単離された」核酸分子およびタンパク質には、標準的精製法によって精製された核酸およびタンパク質が含まれる。この用語はまた、宿主細胞での組換え発現により作製された核酸分子およびタンパク質、ならびに化学的に合成された核酸も包含する。精製または単離された細胞、抗体、タンパク質、または核酸分子は、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の純度であり得る。
【００３５】
哺乳動物：この用語にはヒトおよび非ヒト両方の哺乳動物が含まれる。同様に、用語「対象」には、ヒトおよび獣医学的の両対象（例えば、ネコ、イヌ、ウマ、ウシ、およびブタ）ならびに齧歯類（例えば、マウスおよびラット）が含まれる。
【００３６】
薬学的に許容可能な担体：本発明において有用な薬学的に許容可能な担体は従来ものである。Remington’s Pharmaceutical Sciences, by E. W. Martin, Mack Publishing Co., Easton, PA, 第15版 (1975)には、ＩＬ４Ｉ１活性を低減または阻害する１以上のアンタゴニスト（例えば、ＩＬ４Ｉ１核酸分子もしくはタンパク質またはその下流産物もしく標的に特異的なアンタゴニスト）などの本明細書で提供されるアンタゴニストの医薬送達に好適な組成物および処方物が記載されている。
【００３７】
一般に、担体の性質は、使用される特定の投与様式によって決まる。例えば、非経口製剤は通常、水、生理食塩水、平衡塩溶液、デキストロース水溶液、またはグリセロールなどの薬学的および生理学的に許容可能な液体をビヒクルとして含む注射液を含んでなる。固体組成物（例えば、散剤、丸剤、錠剤、またはカプセル剤形）の場合、従来の非毒性固体担体は、例えば、製薬等級のマンニトール、ラクトース、デンプン、またはステアリン酸マグネシウムを含み得る。生物学的に中立な担体に加え、投与される医薬組成物は、湿潤または乳化拮抗剤、保存剤、およびｐＨ緩衝剤など、例えば、酢酸ナトリウムまたはモノラウリン酸ソルビタンなどの、微量の非毒性補助物質を含むことができる。
【００３８】
精製された：精製されたという用語は、絶対的な純度を必要とせず、むしろ相対的な用語として意図される。よって、例えば、精製されたペプチドまたは抗体調製物は、ペプチドまたはタンパク質が、そのペプチドまたはタンパク質が細胞内でのその天然環境にあるよりも濃縮されているものである。一つの実施態様では、調製物は、そのタンパク質または抗体がその調製物の総抗体またはタンパク質含量の少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％を占めるように精製される。
【００３９】
呼吸器疾患：上気道、気管支、細気管支、肺胞、胸膜、および／または胸腔の病状に関連する疾患。いくつかの例では、呼吸器疾患は、好中球総数の上昇を特徴とするもの（例えば、喘息、気腫、ＣＯＰＤ、嚢胞性線維症、および急性呼吸窮迫症候群）などの炎症性肺疾患である。いくつかの例では、呼吸器疾患は感染により引き起こされ、例えば、上気道または下気道感染、例えば、ウイルスまたは細菌感染によるものである。一例では、呼吸器疾患は肺の癌または腫瘍によるものではない。開示される方法によって治療または予防可能な呼吸器疾患の例としては、ＣＯＰＤ、増悪ＣＯＰＤ、喘息、気管支炎、気腫、嚢胞性線維症、急性呼吸窮迫症候群、および気管支拡張症などのうち１以上が含まれる。
【００４０】
小分子：一般に、約１０００ダルトン未満、またはいくつかの実施態様では、約５００ダルトン未満の分子量を有する分子、この分子は、ＩＬ４Ｉ１などの標的分子の活性を、ある測定可能な程度まで調節することができる。
【００４１】
特異的結合アンタゴニスト：標的タンパク質または核酸分子などの定義された標的とのみ実質的にまたは優先的に結合するアンタゴニスト。一例では、「特異的結合アンタゴニスト」は、ＩＬ４Ｉ１と結合し得る。他の例では、特異的結合アンタゴニストは、ＩＬ４Ｉ１の下流標的またはＩＬ４Ｉ１により調節される因子と結合し得る。タンパク質特異的結合アンタゴニストは、標的タンパク質、またはタンパク質内の特異的領域とのみ実質的に結合する。例えば、「特異的結合アンタゴニスト」には、抗体、抗体フラグメント、および特定のポリペプチドと実質的に結合する他のアンタゴニスト、例えば、小分子、アプタマーまたは他の機能的核酸分子が含まれる。特定のアンタゴニストが特異的ポリペプチドとのみ実質的に結合するという判定は、常法を使用するまたは適合させることによって容易に行うことができる。ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイに好適なものでは、ウエスタンブロット法を使用する（Harlow and Lane, Using Antibodies: A Laboratory Manual, CSHL, New York, 1999を含む多くの標準的教本に記載されている）。
【００４２】
治療上有効な量：ＩＬ４Ｉ１活性を低減または阻害する１以上のアンタゴニスト（例えば、ＩＬ４Ｉ１核酸分子もしくはタンパク質またはその下流産物もしくは標的に特異的な）アンタゴニストの、単独でまたは付加的治療アンタゴニストとともに、障害もしくは疾患のいずれかの症状および／または基礎にある原因を回避、治療（予防を含む）、軽減および／または改善するのに十分な量。一つの実施態様では、「有効量」は、呼吸器疾患（例えば、ＣＯＰＤまたは増悪ＣＯＰＤ）などの疾患の症状を、例えば、好中球総数の低減、痰生産の低減、息切れの軽減、咳の軽減、肺機能の改善、またはそれらの組合せによって軽減または除去するのに十分なものである。
【００４３】
ＩＬ４Ｉ１活性を低減または阻害する１以上のアンタゴニスト（例えば、ＩＬ４Ｉ１核酸分子もしくはタンパク質またはその下流産物もしくは標的に特異的なアンタゴニスト）の治療上有効な量は、例えば、治療コース中に毎日、単回用量、または複数回用量で投与することができる。しかしながら、治療上有効な量は、治療される対象、治療される病態の重篤度およびタイプ、投与様式および投与される治療用アンタゴニストのタイプによって異なり得る。
【００４４】
組織：複数の機能的に関連する細胞。組織は、懸濁液、半固体、または固体であり得る。組織は、肺などの対象から採取された細胞を含む。
【００４５】
疾患の治療：「治療」は、発症し始めた後の疾患または病態の徴候または症状、例えば、呼吸器疾患（例えば、ＣＯＰＤまたは増悪ＣＯＰＤ）の徴候または症状を改善する治療的介入を指す。治療はまた呼吸器疾患などの病態の寛解または治癒も誘導し得る。疾患の予防は、病状が発症するリスクを低減することを目的とした、疾患の徴候を示していないまたは初期徴候のみを示す対象に対する治療的介入を指し、従って、療法は、呼吸器疾患（例えば、ＣＯＰＤまたは増悪ＣＯＰＤ）の発症の予防など、疾患の完全な発症を阻害するかまたは遅延させる。疾患の治療および予防は、疾患の完全な不在を必要としない。例えば、少なくとも２０％または少なくとも５０％の軽減で十分であり得る。有益な効果は、例えば、感受性対象における疾患の臨床症状の発症の遅延、疾患のいくつかもしくは総ての臨床症状の重篤度の軽減、疾患進行の緩徐化、対象の全般的健康もしくは安寧の改善、または特定の疾患に特異的な当技術分野で周知の他のパラメーターを証拠とし得る。
【００４６】
十分な条件下：所望の活性を可能とするいずれの環境も表すために使用される句。一例では、細胞または対象に所望の活性を可能とするのに十分な治療用アンタゴニストを投与することを含む。特定の例では、所望の活性とは、ＩＬ４Ｉ１の活性を表す。
【００４７】
呼吸器疾患を治療または予防する方法
対象において呼吸器疾患を治療または予防する方法が提供される。このような方法は、対象に治療上有効な量の、ＩＬ４Ｉ１活性を低減または阻害する１以上のアンタゴニスト（例えば、Ｌ４Ｉ１核酸分子もしくはタンパク質またはその下流産物もしくは標的に特異的なアンタゴニスト）、例えば、ＩＬ４Ｉ１の発現もしくは活性を変更するアンタゴニスト（例えば、ＩＬ４Ｉ１に特異的な阻害分子）またはＩＬ４Ｉ１の少なくとも１つの下流標的の発現もしくは活性を変更するアンタゴニストを投与することを含み得る。よって、また、呼吸器疾患の治療または予防のための薬剤の製造における、ＩＬ４Ｉ１活性を低減または阻害する１以上のアンタゴニストの使用も提供される。また、呼吸器疾患を治療または予防するための、ＩＬ４Ｉ１活性を低減または阻害するアンタゴニストも提供される。また、呼吸器疾患を治療または予防するための医薬組成物も提供され、その組成物は、ＩＬ４Ｉ１活性を低減または阻害する１以上のアンタゴニストを少なくとも１つの医薬担体、希釈剤または賦形剤とともに含む。
【００４８】
いくつかの例では、このような方法および組成物は、ＩＬ４Ｉ１活性を、対照（例えば、ＩＬ４Ｉ１のアンタゴニストによる処置の不在下のまたはＩＬ４Ｉ１のアンタゴニストによる処置前のＩＬ４Ｉ１活性の量）に比べて、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％低減する（例えば、４０％〜９０％、４０％〜８０％または５０％〜９５％の低減）。いくつかの実施態様では、開示される方法は、ＩＬ４Ｉ１の活性を測定すること、例えば、特定の切断産物のレベルを測定することによってＩＬ４Ｉ１の酵素活性をモニタリングすることを含む。別の実施態様では、開示される方法は、遺伝子発現変化、タンパク質発現または機能的応答により免疫細胞応答に対するＩＬ４Ｉ１の効果をモニタリングすることによってＩＬ４Ｉ１の活性を測定することを含む。
【００４９】
いくつかの例では、このような方法および組成物は、ＩＬ４Ｉ１の発現（例えば、ＩＬ４Ｉ１核酸またはタンパク質の発現）を、対照（例えば、ＩＬ４Ｉ１のアンタゴニストによる処置の不在下のまたはＩＬ４Ｉ１のアンタゴニストによる処置前の発現量）に比べて、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％低減する（例えば、４０％〜９０％、４０％〜８０％または５０％〜９５％の低減）。いくつかの実施態様では、開示される方法は、ＩＬ４Ｉ１の核酸またはタンパク質発現を測定することを含む。
【００５０】
一例では、ＩＬ４Ｉ１の発現および／または活性は、開示される組成物および方法を使用することによって低減される。開示される阻害剤／アンタゴニストは、ＩＬ４Ｉ１遺伝子配列、コード配列、およびタンパク質配列に特異的であり得る。開示される方法および組成物で標的化可能な例示的配列は既知である（例えば、核酸およびタンパク質配列のＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）データベース、その例は本明細書に示されている）。加えて、当業者ならば、ＩＬ４Ｉ１活性を保持する変異体配列が標的化可能であることを認識するであろう。例えば、このような変異体としては、１以上の欠失、置換、または付加（またはそれらの組合せ）、例えば１〜５０のこのような変化（例えば、１〜４０、１〜３０、１〜２０、または１〜１０のこのような変化）を有するタンパク質をコードするものを含み得る。特定の例では、開示される方法または組成物によって標的化されるＩＬ４Ｉ１核酸配列またはタンパク質配列は、既知のＩＬ４Ｉ１配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有する。
【００５１】
開示される方法および組成物で治療または予防可能な例示的呼吸器疾患としては、限定されるものではないが、ＣＯＰＤ、増悪ＣＯＰＤ、喘息、気管支炎、気腫、嚢胞性線維症、急性呼吸窮迫症候群、気管支拡張症、またはそれらの組合せが含まれる。いくつかの例では、ＣＯＰＤ増悪は、細菌感染（例えば、モラクセラ・カタラーリス、インフルエンザ菌、肺炎連鎖球菌、および／または、結核菌などのマイコバクテリアのうち１以上による感染）またはウイルス感染（例えば、ＨＲＶもしくはＲＳＶによる感染）などの呼吸器感染に起因する。いくつかの例では、呼吸器感染は、二次的細菌感染である。よって、対象は、ＣＯＰＤ、増悪ＣＯＰＤ、喘息、気管支炎、気腫、嚢胞性線維症、急性呼吸窮迫症候群、気管支拡張症、またはそれらの組合せを有し得る。いくつかの例では、対象は、細菌感染（例えば、Ｍ．カタラーリス、インフルエンザ菌、肺炎連鎖球菌、および／または、結核菌などのマイコバクテリアのうち１以上による感染）またはウイルス感染（例えば、ＨＲＶもしくはＲＳＶによる感染）などの呼吸器感染を有する。
【００５２】
ＩＬ４Ｉ１活性と拮抗するまたは阻害することによる（例えば、ＩＬ４Ｉ１の発現または活性を低減することによる）ＣＯＰＤまたは増悪ＣＯＰＤなどの呼吸器疾患の治療は、対象において呼吸器疾患の発症を遅延させること（例えば、増悪ＣＯＰＤの発症を予防すること）を含み得る。呼吸器疾患の治療はまた、呼吸器疾患に関連する徴候または症状を軽減すること（例えば、好中球総数の低減、痰生産の低減、息切れの軽減、咳の軽減、肺機能の改善、またはそれらの組合せによる）も含む。いくつかの例では、好中球総数、痰生産、息切れ、咳のうち１以上の少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の低減が開示される組成物および方法により達成される。いくつかの例では、肺機能は、開示される組成物および方法により少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも２００％または少なくとも５００％改善される。
【００５３】
対象は、ヒト対象、非ヒト霊長類、実験哺乳動物、および獣医学的対象、例えば、ウマ、ネコおよびイヌを含むいずれの哺乳動物対象であってもよい。対象は小児または成人であり得る。いくつかの例では、対象は喫煙者である。いくつかの例では、本方法は、呼吸器疾患、例えば、ＣＯＰＤ、増悪ＣＯＰＤ、喘息、気管支炎、気腫、嚢胞性線維症、急性呼吸窮迫症候群、気管支拡張症、またはそれらの組合せを有する対象を選択することを含む。これらの対象は、例えば、ＩＬ４Ｉ１遺伝子発現、タンパク質発現、および／または生物活性を低減することによってＩＬ４Ｉ１活性を低減する１以上のアンタゴニストによる治療のために選択され得る。
【００５４】
開示される方法は、ＩＬ４Ｉ１活性を阻害する１以上のアンタゴニストの使用を含む。このようなアンタゴニストは、所望の応答（例えば、呼吸器疾患の治療または予防）を誘導する治療上有効な量で対象に投与される。いくつかの実施態様では、ＩＬ４Ｉ１のアンタゴニストは、特異的結合アンタゴニスト、例えば、抗体またはそのフラグメント、機能的核酸（例えば、アプタマー）、アンチセンス分子（または他の阻害核酸分子、例えば、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡおよびリボザイム）、阻害タンパク質、ペプチド模倣剤、阻害リガンド、または小分子阻害剤などである。このようなアンタゴニストは、対象分子（例えば、ＩＬ４Ｉ１）に対して、他の分子よりも高い親和性で結合することができる。一例では、アンタゴニストはＩＬ４Ｉ１を阻害し、本明細書で提供される方法を用いて同定されるものである。
【００５５】
一例では、ＩＬ４Ｉ１のアンタゴニストは、ＩＬ４Ｉ１の発現を低減する。いくつかの例では、ＩＬ４Ｉ１アンタゴニストの組合せが使用される。このようなアンタゴニストは、核酸配列（例えば、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、もしくはｍＲＮＡ）および／またはタンパク質の発現を変更することができる。いくつかの例では、ＩＬ４Ｉ１に特異的な阻害核酸分子、例えば、アンチセンス核酸分子、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、短鎖ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、リボザイム、またはそれらの組合せが使用される。
【００５６】
他の例では、ＩＬ４Ｉ１のアンタゴニストは、ＩＬ４Ｉ１の生物活性を低減する。いくつかの例では、ＩＬ４Ｉ１アンタゴニストの組合せが使用される。いくつかの例では、ＩＬ４Ｉ１に特異的な抗体、抗体フラグメント、抗体コンジュゲート、小有機分子、小無機分子、機能的核酸分子（例えば、アプタマー）、それらの組合せが使用される。
【００５７】
ＩＬ４Ｉ１を阻害する１以上のアンタゴニストが、経口、静脈内、筋肉内、腹膜内、鼻腔内、皮内、くも膜下腔内、皮下、吸入または坐剤を含む任意の手段によってヒトまたは他の哺乳動物（例えば、獣医学的哺乳動物、例えば、マウス、ラット、チンパンジー、無尾猿、ならびにイヌおよびネコなどのペット）に投与され得る。一つの限定されない例では、本組成物は注射により投与される。いくつかの例では、本組成物の部位特異的投与は、例えば、ＩＬ４Ｉ１と拮抗するまたは阻害する１以上のアンタゴニストを肺組織に投与することにより（例えば、吸入器を使用することによる）使用することができる。
【００５８】
アンタゴニストによるＩＬ４Ｉ１生物活性の低減
一例では、ＩＬ４Ｉ１生物活性は、ＩＬ４Ｉ１のアンタゴニストの使用によって低減または阻害される。例えば、アンタゴニストは、例えば、ＩＬ４Ｉ１の触媒活性を低減すること、ならびに／またはＩＬ４Ｉ１および／もしくは下流標的からのシグナル伝達を妨げることによって、ＩＬ４Ｉ１の活性を低減または阻害するために使用することができる。このような低減は、タンパク質のアップレギュレーション（またはタンパク質活性の増強）が疾患を引き起こすまたは生じる場合に望ましい。
【００５９】
ＩＬ４Ｉ１の生物活性および／または発現を低減または阻害するために使用可能なアンタゴニストの例としては、限定されるものではないが、ＩＬ４Ｉ１の活性および／または発現を例えば、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、または少なくとも９０％低減または阻害する、ＩＬ４Ｉ１に対して特異性を有する抗体（例えば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ラクダ科動物抗体、またはヒト化抗体）、抗体フラグメント、アプタマー、治療タンパク質、ドメイン抗体またはｄＡｂ（商標）、または他のいずれかの特異的結合アンタゴニストが含まれる。アンタゴニストはＩＬ４Ｉ１活性を１００％阻害する必要はない。いくつかの例では、アンタゴニストは、ＩＬ４Ｉ１の生物活性を、例えば、アンタゴニストの不在下でのこのような活性に比べて少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％低減する。
【００６０】
一例では、アンタゴニストは、ＩＬ４Ｉ１活性を低減または除去するために使用することができる。いくつかの例では、このような方法は、ＩＬ４Ｉ１活性を、対照（例えば、処置前の量）に比べて、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％低減する（例えば、４０％〜９０％、４０％〜８０％または５０％〜９５％の低減）。例示的ＩＬ４Ｉ１アンタゴニストは、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受託番号ＣＡＩ５４２９１．１、ＣＡＩ５４２９２．１、ＡＩ５４２９３．１、ＡＡＺ３２７１１．１、ＡＡＩ０６６０１．１、ＡＡＭ１５５３０．２、ＮＭ＿１５２８９９．１、ＮＭ＿１７２３７４．２、ＮＭ＿００１２５８０１７．１、ＮＭ＿００１２５８０１８．１、ＮＲ＿０４７５７７．１、ＤＱ０７９５８９．１、ＡＪ８８０３８６．１、またはＮＭ＿０１０２１５．３に示されるＩＬ４Ｉ１配列（またはこのような配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する配列）を標的とする。ＩＬ４Ｉ１活性を低減するために使用可能なアンタゴニストの例としては、限定されるものではないが、ＩＬ４Ｉ１タンパク質と特異的に結合してその活性を低減する、抗体、抗体フラグメント、アプタマー、小分子、または他のいずれかの特異的結合アンタゴニストが含まれる。
【００６１】
例示的治療応答
本明細書に開示される調製物は、治療上有効な量で投与される。「有効量」は、呼吸器疾患（例えば、ＣＯＰＤまたは増悪ＣＯＰＤ）の症状を、例えば、好中球総数の低減、痰生産の低減、息切れの軽減、咳の軽減、肺機能の改善、またはそれらの組合せによって軽減または除去するのに１以上のアンタゴニストの量である。よって、いくつかの例では、開示される方法は、好中球総数、痰生産、息切れ、咳、肺機能、またはそれらの組合せを、例えば、一定の期間にわたって（例えば、治療用アンタゴニストの投与の前後）測定することを含む。特定の例では、好中球総数、痰生産、息切れ、咳、または肺機能の変化は、より早期の時点での（例えば、処置前の）対象の好中球総数、痰生産、息切れ、咳、または肺機能と比較して決定される。
【００６２】
一例では、本明細書に提供される方法および組成物は、呼吸器疾患の進行、例えば、このような進行の速度を、例えば、ＩＬ４Ｉ１活性を低減または阻害する１以上のアンタゴニストの無投与または投与前に比べて低下させる（例えば、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、または少なくとも５０％の低下）。
【００６３】
以下の実施例はある特定の特徴および／または実施態様を例示するために示す。これらの実施例は、記載されている特定の特徴または実施態様に本開示を限定すると解釈されるべきではない。
【実施例】
【００６４】
実施例１
ＣＯＰＤ気管支上皮細胞（ＢＥＣ）による健常ｍｏＤＣのコンディショニングは遺伝子発現プロフィールの変更を誘導する
ｉｎ  ｖｉｔｒｏで気道上皮を分化させるために、健常喫煙者由来の気管支上皮細胞（Ｌｏｎｚａロット＃７Ｆ３８３３，４８９，２３７４４０，８９９；Ｅｐｉｔｈｅｌｉｘロット＃１３０８６）およびＣＯＰＤ患者由来気管支上皮細胞（Ｌｏｎｚａロット＃３３１３，４９８，３２０７，３３７９；Ｅｐｉｔｈｅｌｉｘロット＃ＡＢ６３，４７２）を、以下の改変を施したＬｏｎｚａプロトコールに従って拡大培養した：細胞に、Widdicombe et al. (BioTechniques 39:249-255, August 2005)に報告されているように添加を行ったＬｏｎｚａ  ＢＥＢＭ培地で２回の継代培養を行った。細胞を、コラーゲンをコーティングした０．４ｕｍ  ９６トランスウェルプレートに、上記培地７５μｌ当たり１５，０００細胞で播種し、２３５μｌの同じ培地をバソラテラルレシーバープレートに加えた。３日後（同じ容量の上層培地を１回交換）、上層の培地をエアーリフト内で完全に除去した。次に、分化を誘導するために、細胞をＰｎｅｕｍａＣｕｌｔ−ＡＬＩ培地（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、＃０５００１）で１８日間培養した。
【００６５】
ＤＣは以下のように作製した。単球は、１３名の健常ボランティア血液ドナー由来のバフィーコートから、ＡｕｔｏＭＡＣＳ  ＰｒｏでのＰＢＭＣに対するＣＤ１４陽性選択（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  ＃１３０−０５０−２０１）を用いて単離し、３０ｎｇ／ｍｌ  ＧＭ−ＣＳＦおよび２０ｎｇ／ｍｌ  ＩＬ−４（両方ともＲ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ）を含むＤＣ培地（ＲＰＭＩ  １６４０、１０％熱失活ＦＢＳ、５５μＭ  βＭＥ、非必須アミノ酸）に、フラスコ中に１０６細胞／ｍｌで再懸濁させ、その後、３７℃で６日間インキュベートした。単球およびＤＣ純度および表現型は、表面マーカーフローサイトメトリーで確認した。ＤＣの単独培養および共培養は、ＤＣを９６ウェルプレートに５０，０００細胞／ウェルで播種して以下のように行った。共培養を始めるために、気管支上皮細胞（ＢＥＣ）を含有するトランスウェル部分を、ＤＣを播種したレシーバープレートに移した。４８時間の細胞培養の後、ＤＣを溶解させ、ｍＲＮＡレベルをマイクロアレイにより測定した。サンプルをＧｅｎｅＣｈｉｐ（登録商標）Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｕ１３３  Ｐｌｕｓ  ２．０アレイにハイブリダイズさせ、Ａｒｒａｙ  Ｓｔｕｄｉｏ  ｖ７．１で分析を行った。選択された遺伝子（ＣＸＣＬ５、ＰＴＧＥＳ、Ｓ１００Ａ８、ＳＥＲＰＩＮＢ２、ＴＨＢＳ１）のＤＣ発現に及ぼす、健常ＢＥＣと比べた場合のＣＯＰＤ  ＢＥＣの疾患効果は、値が０．０５を超え、変化倍率が１．５を超えた場合に統計的に有意であると見なし、個々のデータ点は独立した健常ｍｏＤＣドナーを表す。
【００６６】
実施例２
ＣＯＰＤ患者由来の気管支上皮細胞との共培養においてｍｏＤＣをＩＬ４Ｉ１で処理すると樹状細胞遺伝子のｍＲＮＡ発現が増加する
共培養は上記のように開始した。ヒトＩＬ４Ｉ１（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ＃５６８４−ＡＯ）を気道上皮培養物のバソラテラル培地（１：１比でＤＭＥＭと混合したＢＥＢＭ  ２３５μｌ）中に連続希釈した。２４時間のインキュベーションの後、ＢＥＣ（ＣＯＰＤドナー＃ＡＢ６３）を含有するトランスウェル部分を、５０，０００  ＤＣ／ウェルを播種し、一致したＩＬ４Ｉ１用量および培地条件のレシーバープレートに移した。２４時間の共培養の後、ＤＣを溶解させ、ＦｌｅｘＭａｐ  ３Ｄ装置にてＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘ  Ｑｕａｎｔｉｇｅｎｅマルチプレックスパネルを用いてｍＲＮＡレベルを測定した。各遺伝子について、相対発光をハウスキーパー遺伝子ＧＡＰＤＨに対して正規化した。
【００６７】
上皮細胞のＤＣとの相互作用は、ＤＣ成熟および続いて自然免疫応答および適応免疫応答に影響を及ぼす。ＣＯＰＤでは、上皮細胞からのシグナルは、Ｔ細胞応答および炎症誘発性カスケードの変化を誘導するようにＤＣをプライムし得る。図２に示されるように、ＣＯＰＤ患者由来の上皮細胞との共培養においてｍｏＤＣをＩＬ４Ｉ１で処理すると、好中球動員、病原体認識、免疫寛容、およびＴ細胞応答を含む一定範囲の機能に関連するＣＸＣＬ５、ＰＴＧＥＳ、Ｓ１００Ａ８、ＳＥＲＰＩＮＢ２、ＴＨＢＳ１などのＤＣ遺伝子の発現が増加する。本開示の原理が適用可能な多くの可能性のある実施態様を考えれば、例示されている実施態様は単に本開示の例であると認識されるべきであり、本発明の範囲を限定するものと見なされるべきでない。むしろ、本開示の範囲は以下の特許請求の範囲によって定義される。よって、本発明者らは、これらの特許請求の範囲のおよび趣旨内に入る総てを本発明者らの発明として特許請求する。
【図１】
2019518724.tif 000002
【図２】
2019518724.tif 000003
【国際調査報告】
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2019518724.tif 000005
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