(57)【要約】  炎症性疾患、アレルギー性疾患および自己免疫疾患からなる群から選択される少なくとも一つの予防改善に有用であり、かつ安全性の高い紅色非硫黄細菌を提供する。  炎症性疾患、アレルギー性疾患および自己免疫疾患からなる群から選択される少なくとも一つの疾患の予防改善剤剤であって、紅色非硫黄細菌および前記紅色非硫黄細菌の培養物の少なくとも一方を含み、前記紅色非硫黄細菌が、ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ）を含むことを特徴とする。
2011102035.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
炎症性疾患、アレルギー性疾患および自己免疫疾患からなる群から選択される少なくとも一つの疾患の予防改善剤であって、
紅色非硫黄細菌および前記紅色非硫黄細菌の培養物の少なくとも一方を含み、
前記紅色非硫黄細菌が、ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ）を含むことを特徴とする予防改善剤。
【請求項２】
前記ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ）が、下記（１）〜（３０）の菌学的特徴を有する、請求の範囲１記載の予防改善剤。
（１）細胞の形：桿状形または卵形
（２）多形性：なし
（３）細胞の大きさ：０．８μｍ×１．０μｍ
（４）運動性の有無：あり
（５）胞子の有無：なし
（６）普通寒天培養における光沢：あり
（７）普通寒天培養における色素産生：あり
（８）普通ブイヨン培養における表面発育の有無：なし
（９）普通ブイヨン培養における培地の混濁の有無：あり
（１０）ゼラチン穿刺培養におけるゼラチン液化：陰性
（１１）リトマス・ミルク培養における凝固：なし
（１２）リトマス・ミルク培養における液化：なし
（１３）グラム染色性：陰性
（１４）硝酸塩の還元：なし
（１５）脱窒反応：なしまたはあり
（１６）ＭＲテスト：陰性
（１７）インドール産生：なし
（１８）硫化水素の生成：なし
（１９）デンプンの加水分解：なし
（２０）クエン酸の利用（Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ）：なし
（２１）無機窒素源の利用（アンモニウム塩）：あり
（２２）カタラーゼの生成：陽性
（２３）オキシダーゼの生成：陽性
（２４）嫌気的生育性：あり
（２５）Ｏ−Ｆテスト（酸化／発酵）：陰性／陰性
（２６）β−ガラクトシダーゼ活性：陰性
（２７）アルギニンジヒドロラーゼ活性：陰性
（２８）リジンデカルボキシラーゼ活性：陰性
（２９）トリプトファンデアミナーゼ活性：陰性
（３０）ゼラチナーゼ活性：陰性
【請求項３】
前記ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ）の１６Ｓ  ｒＲＮＡの塩基配列が、配列番号１で表される塩基配列である請求の範囲１記載の予防改善剤。
【請求項４】
前記ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ）が、ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ）ＢＰ０８９９株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−６４４）である、請求の範囲１記載の予防改善剤。
【請求項５】
紅色非硫黄細菌および前記紅色非硫黄細菌の培養物の少なくとも一方を含み、
前記紅色非硫黄細菌が、ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ）を含むことを特徴とする持久力向上剤。
【請求項６】
前記ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ）が、下記（１）〜（３０）の菌学的特徴を有する、請求の範囲５記載の持久力向上剤。
（１）細胞の形：桿状形または卵形
（２）多形性：なし
（３）細胞の大きさ：０．８μｍ×１．０μｍ
（４）運動性の有無：あり
（５）胞子の有無：なし
（６）普通寒天培養における光沢：あり
（７）普通寒天培養における色素産生：あり
（８）普通ブイヨン培養における表面発育の有無：なし
（９）普通ブイヨン培養における培地の混濁の有無：あり
（１０）ゼラチン穿刺培養におけるゼラチン液化：陰性
（１１）リトマス・ミルク培養における凝固：なし
（１２）リトマス・ミルク培養における液化：なし
（１３）グラム染色性：陰性
（１４）硝酸塩の還元：なし
（１５）脱窒反応：なしまたはあり
（１６）ＭＲテスト：陰性
（１７）インドール産生：なし
（１８）硫化水素の生成：なし
（１９）デンプンの加水分解：なし
（２０）クエン酸の利用（Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ）：なし
（２１）無機窒素源の利用（アンモニウム塩）：あり
（２２）カタラーゼの生成：陽性
（２３）オキシダーゼの生成：陽性
（２４）嫌気的生育性：あり
（２５）Ｏ−Ｆテスト（酸化／発酵）：陰性／陰性
（２６）β−ガラクトシダーゼ活性：陰性
（２７）アルギニンジヒドロラーゼ活性：陰性
（２８）リジンデカルボキシラーゼ活性：陰性
（２９）トリプトファンデアミナーゼ活性：陰性
（３０）ゼラチナーゼ活性：陰性
【請求項７】
前記ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ）の１６Ｓ  ｒＲＮＡの塩基配列が、配列番号１で表される塩基配列である請求の範囲５記載の持久力向上剤。
【請求項８】
前記ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ）が、ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ）ＢＰ０８９９株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−６４４）である、請求の範囲５記載の持久力向上剤。
【請求項９】
紅色非硫黄細菌および前記紅色非硫黄細菌の培養物の少なくとも一方を含み、
前記紅色非硫黄細菌が、ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ）を含むことを特徴とする抗疲労剤。
【請求項１０】
前記ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ）が、下記（１）〜（３０）の菌学的特徴を有する、請求の範囲９記載の抗疲労剤。
（１）細胞の形：桿状形または卵形
（２）多形性：なし
（３）細胞の大きさ：０．８μｍ×１．０μｍ
（４）運動性の有無：あり
（５）胞子の有無：なし
（６）普通寒天培養における光沢：あり
（７）普通寒天培養における色素産生：あり
（８）普通ブイヨン培養における表面発育の有無：なし
（９）普通ブイヨン培養における培地の混濁の有無：あり
（１０）ゼラチン穿刺培養におけるゼラチン液化：陰性
（１１）リトマス・ミルク培養における凝固：なし
（１２）リトマス・ミルク培養における液化：なし
（１３）グラム染色性：陰性
（１４）硝酸塩の還元：なし
（１５）脱窒反応：なしまたはあり
（１６）ＭＲテスト：陰性
（１７）インドール産生：なし
（１８）硫化水素の生成：なし
（１９）デンプンの加水分解：なし
（２０）クエン酸の利用（Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ）：なし
（２１）無機窒素源の利用（アンモニウム塩）：あり
（２２）カタラーゼの生成：陽性
（２３）オキシダーゼの生成：陽性
（２４）嫌気的生育性：あり
（２５）Ｏ−Ｆテスト（酸化／発酵）：陰性／陰性
（２６）β−ガラクトシダーゼ活性：陰性
（２７）アルギニンジヒドロラーゼ活性：陰性
（２８）リジンデカルボキシラーゼ活性：陰性
（２９）トリプトファンデアミナーゼ活性：陰性
（３０）ゼラチナーゼ活性：陰性
【請求項１１】
前記ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ）の１６Ｓ  ｒＲＮＡの塩基配列が、配列番号１で表される塩基配列である請求の範囲９記載の抗疲労剤。
【請求項１２】
前記ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ）が、ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ）ＢＰ０８９９株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−６４４）である、請求の範囲９記載の抗疲労剤。
【請求項１３】
炎症性疾患、アレルギー性疾患および自己免疫疾患からなる群から選択される少なくとも一つの疾患の予防または治療のための医薬品であって、
請求の範囲１記載の予防改善剤を含む医薬品。
【請求項１４】
請求の範囲５記載の持久力向上剤および請求の範囲９記載の抗疲労剤の少なくとも一方を含む医薬品。
【請求項１５】
炎症性疾患、アレルギー性疾患および自己免疫疾患からなる群から選択される少なくとも一つの疾患の予防または改善の機能を有する飲食品であって、
請求の範囲１記載の予防改善剤を含む飲食品。
【請求項１６】
請求の範囲５記載の持久力向上剤および請求の範囲９記載の抗疲労剤の少なくとも一方を含む飲食品。
【請求項１７】
ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ）ＢＰ０８９９株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−６４４）であることを特徴とする紅色非硫黄細菌。
【請求項１８】
炎症性疾患、アレルギー性疾患および自己免疫疾患からなる群から選択される少なくとも一つの疾患の予防改善方法であって、
紅色非硫黄細菌および前記紅色非硫黄細菌の培養物の少なくとも一方を含む予防改善剤を投与する工程を含み、
前記紅色非硫黄細菌が、ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ）を含むことを特徴とする予防改善方法。
【請求項１９】
紅色非硫黄細菌および前記紅色非硫黄細菌の培養物の少なくとも一方を含む持久力向上剤を投与する工程を含み、
前記紅色非硫黄細菌が、ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ）を含むことを特徴とする持久力向上方法。
【請求項２０】
紅色非硫黄細菌および前記紅色非硫黄細菌の培養物の少なくとも一方を含む抗疲労剤を投与する工程を含み、
前記紅色非硫黄細菌が、ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ）を含むことを特徴とする抗疲労方法。
【請求項２１】
炎症性疾患、アレルギー性疾患および自己免疫疾患からなる群から選択される少なくとも一つの疾患の予防改善方法に使用するための紅色非硫黄細菌（ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ））またはその培養物。
【請求項２２】
持久力向上方法および抗疲労方法の少なくとも一方に使用するための紅色非硫黄細菌（ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ））またはその培養物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、疾患の予防改善剤、持久力向上剤、抗疲労剤、並びにそれらを用いた医薬品および飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
生体の恒常性には、免疫系、神経系および内分泌系等のネットワークのバランスが重要であることが知られている。そして、炎症性疾患、アレルギー性疾患、自己免疫疾患、癌、感染症等の疾患の発症は、このネットワークのバランスの乱れが一因とされている。また、疲労は、悪性腫瘍、感染症、慢性疲労症候群等の重篤な疾患に伴うものから、日常生活における精神的、肉体的なストレスに由来する一般的なものまで、様々な種類がある。【０００３】
従来、炎症性疾患、アレルギー性疾患、自己免疫疾患等の予防改善剤、持久力向上剤および抗疲労剤は、効果と同時に副作用を有するものが多いことから、長期の使用は困難であった。そこで、有効性および安全性の両立を目指し、例えば、アワビタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｎｅｂｒｏｄｅｓｉｓ）を利用した予防改善剤が報告されている（例えば、特許文献１参照）。【０００４】
一方、非健常者の健康状態を改善するために、紅色光合成細菌と乳酸菌との混合培養による代謝産物を利用した健康食品が報告されている（特許文献２参照）。この健康食品は、効能および安全性に優れているが、さらに性能が向上した予防改善剤、持久力改善剤および抗疲労剤が望まれている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００６−２４１１１５号公報
【特許文献２】国際公開第０１／６０９７７号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、炎症性疾患、アレルギー性疾患または自己免疫疾患の予防および改善に有用であり、かつ安全性の高い予防改善剤、持久力向上剤および抗疲労剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
前記目的を達成するために、本発明の予防改善剤は、炎症性疾患、アレルギー性疾患および自己免疫疾患からなる群から選択される少なくとも一つの疾患の予防改善剤であって、紅色非硫黄細菌および前記紅色非硫黄細菌の培養物の少なくとも一方を含み、前記紅色非硫黄細菌が、ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ）を含むことを特徴とする。【０００８】
本発明の持久力向上剤および抗疲労剤は、紅色非硫黄細菌および前記紅色非硫黄細菌の培養物の少なくとも一方を含み、前記紅色非硫黄細菌が、ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ）を含むことを特徴とする。
【発明の効果】
【０００９】
前記目的を達成するために、本発明者は一連の研究を重ねたところ、潰瘍の抑制活性、炎症細胞浸潤の抑制、粘膜上皮腫大の抑制、上皮再生、血清中ＩｇＥ量およびヒスタミン量の低減、Ｔｈ２型サイトカイン分泌の抑制、Ｔｈ１／Ｔｈ２インバランスの改善、アレルギー性反応の抑制、自己免疫疾患の抑制、持久力向上、抗疲労等の活性を有する、新規な紅色非硫黄細菌を見出し、本発明に到達した。本発明の紅色非硫黄細菌は、炎症性疾患、アレルギー性疾患および自己免疫疾患からなる群から選択される少なくとも一つの予防および改善、持久力向上並びに抗疲労に有用である。また、本発明の紅色非硫黄細菌は、安全性が高いため、罹患前から予防の目的で投与可能であり、かつ長期にわたり投与できる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１は、実施例２における、結腸組織切片の病理組織写真である。図１（Ａ）は、実施例２の病理組織写真（倍率３２倍）であり、図１（Ｂ）は、実施例２の病理組織写真（倍率８０倍）である。
【図２】図２は、比較例１における、結腸組織切片の病理組織写真である。図２（Ａ）は、比較例１の病理組織写真（倍率３２倍）であり、図２（Ｂ）は、比較例１の病理組織写真（倍率８０倍）である。
【図３】図３は、比較例２における、結腸組織切片の病理組織写真である。図３（Ａ）は、比較例２の病理組織写真（倍率３２倍）であり、図３（Ｂ）は、比較例２の病理組織写真（倍率８０倍）である。
【図４】図４は、実施例８、比較例８−１および比較例８−２における、浮腫容積の平均値を示すグラフである。
【図５】図５は、実施例９、比較例９−１および比較例９−２における、浮腫容積の平均値を示すグラフである。
【図６】図６は、実施例９、比較例９−１および比較例９−２における、後肢の軟Ｘ線写真である。
【図７】図７は、実施例１０、比較例１０−１および比較例１０−２における、血清中ヒスタミン量の平均値を示すグラフである。
【図８】図８は、実施例１１における懸垂法の測定結果を示すグラフである。
【図９】図９は、実施例１２における懸垂法の測定結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明の予防改善剤、持久力向上剤および抗疲労剤において、ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ）は、下記（１）〜（３０）の菌学的特徴を有することが好ましい。このような菌学的特徴を有するものとして、例えば、ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ）ＢＰ０８９９株が挙げられる。なお、前記ＢＰ０８９９株は、独立行政法人製品評価技術基盤機構  特許生物寄託センター（日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８）に受託番号  ＮＩＴＥ  Ｐ−６４４で寄託され（受託日：２００８年  ９月１２日）、さらに、受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−６４４で国際寄託されている（移管日：２０１０年１０月２７日）。
（１）細胞の形：桿状形または卵形
（２）多形性：なし
（３）細胞の大きさ：０．８μｍ×１．０μｍ
（４）運動性の有無：あり
（５）胞子の有無：なし
（６）普通寒天培養における光沢：あり
（７）普通寒天培養における色素産生：あり
（８）普通ブイヨン培養における表面発育の有無：なし
（９）普通ブイヨン培養における培地の混濁の有無：あり
（１０）ゼラチン穿刺培養におけるゼラチン液化：陰性
（１１）リトマス・ミルク培養における凝固：なし
（１２）リトマス・ミルク培養における液化：なし
（１３）グラム染色性：陰性
（１４）硝酸塩の還元：なし
（１５）脱窒反応：あり
（１６）ＭＲテスト：陰性
（１７）インドール産生：なし
（１８）硫化水素の生成：なし
（１９）デンプンの加水分解：なし
（２０）クエン酸の利用（Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ）：なし
（２１）無機窒素源の利用（アンモニウム塩）：あり
（２２）カタラーゼの生成：陽性
（２３）オキシダーゼの生成：陽性
（２４）嫌気的生育性：あり
（２５）Ｏ−Ｆテスト（酸化／発酵）：陰性／陰性
（２６）β−ガラクトシダーゼ活性：陰性
（２７）アルギニンジヒドロラーゼ活性：陰性
（２８）リジンデカルボキシラーゼ活性：陰性
（２９）トリプトファンデアミナーゼ活性：陰性
（３０）ゼラチナーゼ活性：陰性
【００１２】
本発明の予防改善剤、持久力向上剤および抗疲労剤において、ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ）の１６Ｓ  ｒＲＮＡの塩基配列が、配列番号１で表される塩基配列であることが好ましい。
【００１３】
本発明の第一の医薬品は、炎症性疾患、アレルギー性疾患および自己免疫疾患からなる群から選択される少なくとも一つの疾患の予防または治療のための医薬品であって、本発明の予防改善剤を含むことを特徴とする。
【００１４】
本発明の第二の医薬品は、本発明の持久力向上剤および抗疲労剤の少なくとも一方を含むことを特徴とする。
【００１５】
本発明の第一の飲食品は、炎症性疾患、アレルギー性疾患および自己免疫疾患からなる群から選択される少なくとも一つの疾患の予防または改善の機能を有する飲食品であって、本発明の予防改善剤を含むことを特徴とする。
【００１６】
本発明の第二の飲食品は、本発明の持久力向上剤および抗疲労剤の少なくとも一方を含むことを特徴とする。
【００１７】
本発明の紅色非硫黄細菌は、ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ）ＢＰ０８９９株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−６４４）であることを特徴とする。
【００１８】
本発明の予防改善方法は、炎症性疾患、アレルギー性疾患および自己免疫疾患からなる群から選択される少なくとも一つの疾患の予防改善方法であって、紅色非硫黄細菌および前記紅色非硫黄細菌の培養物の少なくとも一方を含む予防改善剤を投与する工程を含み、前記紅色非硫黄細菌が、ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ）を含むことを特徴とする。
【００１９】
本発明の持久力向上方法は、紅色非硫黄細菌および前記紅色非硫黄細菌の培養物の少なくとも一方を含む持久力向上剤を投与する工程を含み、前記紅色非硫黄細菌が、ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ）を含むことを特徴とする。
【００２０】
本発明の抗疲労方法は、紅色非硫黄細菌および前記紅色非硫黄細菌の培養物の少なくとも一方を含む抗疲労剤を投与する工程を含み、前記紅色非硫黄細菌が、ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ）を含むことを特徴とする。
【００２１】
本発明の第一の紅色非硫黄細菌（ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ））またはその培養物は、炎症性疾患、アレルギー性疾患および自己免疫疾患からなる群から選択される少なくとも一つの疾患の予防改善方法に使用するための紅色非硫黄細菌（ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ））またはその培養物である。
【００２２】
本発明の第二の紅色非硫黄細菌（ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ））またはその培養物は、持久力向上方法および抗疲労方法の少なくとも一方に使用するための紅色非硫黄細菌（ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ））またはその培養物である。
【００２３】
本発明の第一の使用は、炎症性疾患、アレルギー性疾患および自己免疫疾患からなる群から選択される少なくとも一つの疾患の予防改善のための、紅色非硫黄細菌（ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ））またはその培養物の使用である。
【００２４】
本発明の第二の使用は、持久力向上および抗疲労の少なくとも一方のための、紅色非硫黄細菌（ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ））またはその培養物の使用である。
【００２５】
本発明について、以下に詳細に説明する。
【００２６】
本発明において、持久力向上とは、例えば、肉体的な負荷に対する持久力の低下抑制、向上等を含む。前記持久力とは、例えば、諸活動における持久力が挙げられ、具体的には、例えば、労働、スポーツ等の活動における持久力、日常生活の諸活動における持久力等が挙げられる。
【００２７】
本発明において、抗疲労とは、例えば、疲労症状の予防、低減、回復または改善を意味する。前記疲労とは、例えば、労働、スポーツ等の活動により生じる疲労、日常生活の諸活動により生じる疲労、疾患に起因する疲労等が挙げられる。前記疲労は、例えば、倦怠感を含んでもよい。
【００２８】
本発明において、前記持久力向上および前記抗疲労は、例えば、体力向上ともいえる。前記体力向上は、具体的には、例えば、体力の維持、低下抑制、向上等が挙げられる。
【００２９】
本発明において、前記持久力向上および抗疲労の効果は、例えば、前記紅色非硫黄細菌による抗炎症効果に起因してもよい。前記抗炎症効果は、例えば、前記紅色非硫黄細菌による炎症性サイトカインの発現抑制により、実現してもよい。前記炎症性サイトカインとしては、特に制限されないが、例えば、ＩＬ−１、ＩＦＮ等があげられる。
【００３０】
従来の抗疲労剤は、一般的に、例えば、栄養補給的な要素が高い。これに対して、本発明の持久力向上剤および抗疲労剤は、例えば、疲労を炎症症状の一環と捉え、抗炎症という免疫学的なアプローチから疲労原因物質を調整する剤であってもよい。
【００３１】
本発明の予防改善剤は、前述のように、炎症性疾患、アレルギー性疾患および自己免疫疾患からなる群から選択される少なくとも一つの疾患の予防改善剤であって、紅色非硫黄細菌および前記紅色非硫黄細菌の培養物の少なくとも一方を含み、前記紅色非硫黄細菌が、ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ）を含むことを特徴とする。また、本発明の持久力向上剤および抗疲労剤は、前述のように、紅色非硫黄細菌および前記紅色非硫黄細菌の培養物の少なくとも一方を含み、前記紅色非硫黄細菌が、ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ  ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ）を含むことを特徴とする。
【００３２】
＜細菌＞
本発明において、前記紅色非硫黄細菌である前記ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ）は、前述のように、下記（１）〜（３０）の菌学的特徴を有することが好ましい。このような菌学的特徴を有する前記ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ）は、例えば、本発明における前記紅色非硫黄細菌であるといえる。このような菌学的特徴を有する具体的な細菌として、前述のように、例えば、ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ）ＢＰ０８９９株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−６４４）が挙げられる。
（１）細胞の形：桿状形または卵形
（２）多形性：なし
（３）細胞の大きさ：０．８μｍ×１．０μｍ
（４）運動性の有無：あり
（５）胞子の有無：なし
（６）普通寒天培養における光沢：あり
（７）普通寒天培養における色素産生：あり
（８）普通ブイヨン培養における表面発育の有無：なし
（９）普通ブイヨン培養における培地の混濁の有無：あり
（１０）ゼラチン穿刺培養におけるゼラチン液化：陰性
（１１）リトマス・ミルク培養における凝固：なし
（１２）リトマス・ミルク培養における液化：なし
（１３）グラム染色性：陰性
（１４）硝酸塩の還元：なし
（１５）脱窒反応：あり
（１６）ＭＲテスト：陰性
（１７）インドール産生：なし
（１８）硫化水素の生成：なし
（１９）デンプンの加水分解：なし
（２０）クエン酸の利用（Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ）：なし
（２１）無機窒素源の利用（アンモニウム塩）：あり
（２２）カタラーゼの生成：陽性
（２３）オキシダーゼの生成：陽性
（２４）嫌気的生育性：あり
（２５）Ｏ−Ｆテスト（酸化／発酵）：陰性／陰性
（２６）β−ガラクトシダーゼ活性：陰性
（２７）アルギニンジヒドロラーゼ活性：陰性
（２８）リジンデカルボキシラーゼ活性：陰性
（２９）トリプトファンデアミナーゼ活性：陰性
（３０）ゼラチナーゼ活性：陰性
【００３３】
前記紅色非硫黄細菌は、暗所での好気培養条件下で、さらに、例えば、下記（３１）の表に示す性質を示してもよい。なお、同表において、「−」は産生なしを、「＋」は産生ありを示す。
【００３４】
（３１）糖類からの酸産生およびガス産生
基質          酸産生／ガス産生
Ｌ−アラビノース      −／−
Ｄ−グルコース        −／−
Ｄ−フラクトース      −／−
マルトース            −／−
ラクトース            −／−
Ｄ−ソルビトール      −／−
イノシトール          −／−
Ｄ−キシロース        −／−
Ｄ−マンノース        −／−
Ｄ−ガラクトース      −／−
サッカロース          −／−
トレハロース          −／−
グリセリン            −／−
【００３５】
前記菌学的特徴は、例えば、前培養後、さらに本培養した結果から評価してもよい。前記前培養は、例えば、普通寒天培地に前記紅色非硫黄細菌を植菌し、３０℃で２４時間培養して行ってもよい。前記本培養の条件は、各菌学的特徴の評価方法に応じて、適宜設定できる。具体的には、前記（１）〜（５）の培養条件は、例えば、普通寒天培地を用い、３０℃、暗所での好気培養であり、前記（６）〜（７）の培養条件は、例えば、普通ブイヨン培地を用い、３０℃、明所での嫌気培養であり、前記（８）〜（１２）の培養条件は、例えば、各培地を用い、３０℃、暗所での好気培養であり、前記（１３）、（１４）、（１６）、（１７）、（１９）〜（２３）、（２５）の酸化テスト、（２６）、（２９）、（３０）および（３１）は、例えば、暗所での好気培養であり、（１５）、（１８）、（２４）、（２５）の発酵テスト、（２７）および（２８）は、例えば、暗所での嫌気培養である。これらの菌学的特徴の試験方法としては、特に制限されず、従来公知の方法を採用できる。具体的には、例えば、Ｂａｒｒｏｗ  Ｇ．Ｉ．およびＦｅｌｔｈａｍ  Ｒ．Ｋ．Ａ．著「Ｃｏｗａｎ  ａｎｄ  Ｓｔｅｅｌ‘ｓ  Ｍａｎｕａｌ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｂａｃｔｅｒｉａ．」（イギリス）３ｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ  １９９３年、坂崎ら著「新  細菌培地学講座・下」（東京）第二版  近大出版  １９８８年、長谷川編著「微生物の分類と同定（下）」（東京）学会出版センター  １９８５年、土壌微生物研究会編「新編  土壌微生物学実験」（東京）養賢堂  １９９２年等に記載の方法が挙げられる。前記（１５）の試験方法は、例えば、前記「微生物の分類と同定（下）」記載の駒形らの方法、Ｇｉｌｔａｙ培地を用いた前記「新編  土壌微生物学実験」記載の方法、ＰＹＮ培地を用いた下水法等を採用できる。前記駒形らの方法は、１％硝酸ナトリウム肉汁を用いた嫌気培養条件下で、生育およびガス形成が認められたものを脱窒反応陽性と判定する。前記Ｇｉｌｔａｙ培地を用いた方法は、ダーラム管入り前記Ｇｉｌａｙ培地（ｐＨ７．０〜７．２）を用いた嫌気培養条件下で、ガス発生および濃青色に呈色したものを脱窒反応陽性と判定する。なお、前記Ｇｉｌｔａｙ培地は、Ａ液（ＫＮＯ３  １ｇ、アスパラギン１ｇ、１％ブロモチモールブルー・アルコール溶液５ｍＬおよび蒸留水５００ｍＬ）およびＢ液（クエン酸ナトリウム８．５ｇ、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ  １ｇ、ＦｅＣｌ３・６Ｈ２Ｏ  ０．０５ｇ、ＫＨ２ＰＯ４  １ｇ、ＣａＣｌ２・６Ｈ２Ｏ  ０．２ｇおよび蒸留水５００ｍＬ）を混合した培地である。また、前記試験方法には、例えば、市販の細菌同定キットを使用してもよい。前記キットとしては、特に制限されないが、例えば、細菌同定キット  ＡＰＩ２０Ｅ（ビオメリュー社製）等を使用できる。
【００３６】
前記ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ）は、例えば、さらに、下記（３２）〜（４０）の菌学的性質を有してもよい。
（３２）コロニーの色：赤色
（３３）ゼラチン穿刺培養：生育しない
（３４）ＶＰテスト：陰性
（３５）クエン酸の利用（Ｋｏｓｅｒ）：あり
（３６）無機窒素源の利用（硝酸塩）：あり
（３７）ウレアーゼ活性：陰性
（３８）生育するｐＨ範囲：５〜９
（３９）Ｄ−マンニトールからの酸産生：産生あり
（４０）Ｄ−マンニトールからのガス産生：産生なし
【００３７】
前記（３２）〜（４０）の菌学的特徴の試験方法としては、特に制限されず、従来公知の方法を採用できる。具体的には、例えば、前述の文献等に記載の方法が挙げられる。また、前記試験方法には、例えば、市販の細菌同定キットを使用してもよい。前記キットとしては、特に制限されないが、例えば、前述の細菌同定キット等を使用できる。
【００３８】
前記紅色非硫黄細菌は、例えば、さらに、ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ）以外の、他の紅色非硫黄細菌を含んでもよい。
【００３９】
前記他の紅色非硫黄細菌は、特に制限されないが、例えば、ロドスピルリム（Ｒｈｏｄｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ）属、ロドシスタ（Ｒｈｏｄｏｃｉｓｔａ）属、ロドピラ（Ｒｈｏｄｏｐｉｌａ）属、ロドミクロビウム（Ｒｈｏｄｏｍｉｃｒｏｂｉｕｍ）属、ブラストクロリス（Ｂｌａｓｔｏｃｈｌｏｒｉｓ）属、ロドプラネス（Ｒｈｏｄｏｐｌａｎｅｓ）属、ロドビウム（Ｒｈｏｄｏｂｉｕｍ）属、ロドシクルス（Ｒｈｏｄｏｃｙｃｌｕｓ）属、ロドフェラクス（Ｒｈｏｄｏｆｅｒａｘ）属、ロドシュードモナス（Ｒｈｏｄｏｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属等の細菌が挙げられる。
【００４０】
また、前記他の紅色非硫黄細菌は、例えば、前記ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ）以外のロドバクター（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ）属の細菌であってもよい。
【００４１】
前記紅色非硫黄細菌の採取源としては、特に限定されず、例えば、土壌、海水、川水、湖水、沼水等が挙げられる。また、前記土壌としては、例えば、陸地、海底、川底、湖底および沼底の土、砂および泥土等が挙げられ、特に限定されない。
【００４２】
前記紅色非硫黄細菌の単離方法としては、例えば、従来公知の採取法、培養法等を用いることができ、特に制限されない。前記単離方法としては、例えば、採取源が湖水の場合、採取した湖水をフィルター等によりろ過し、このろ液を寒天培地等で培養し、得られたコロニーから前記紅色非硫黄細菌を単離してもよい。また、例えば、採取源が泥土の場合、採取した泥土を緩衝液等により懸濁後、この懸濁液を遠心分離し、得られた上清を寒天培地等で培養し、得られたコロニーから前記紅色非硫黄細菌を単離してもよい。前記単離した紅色非硫黄細菌は、さらに、例えば、液体培地中で培養してもよい。
【００４３】
本発明の予防改善剤、持久力向上剤および抗疲労剤は、前記紅色非硫黄細菌以外に、さらに、他の細菌等を含有してもよい。前記他の細菌としては、特に制限されず、例えば、乳酸菌、酵母等が挙げられ、好ましくは、乳酸菌である。
【００４４】
前記乳酸菌としては、特に限定されないが、例えば、ラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス・カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス・ラクティス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｃｔｉｓ）、ラクトバチルス・ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、ラクトバチルス・ヘルベティクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）、ラクトバチルス・デルブリュッキ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）、ラクトバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバチルス・ブレビス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ）、ラクトコッカス・ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ）、エンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）、ストレプトコッカス・サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、ストレプトコッカス・ラクティス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ）等が挙げられ、好ましくは、ラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス・ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、ストレプトコッカス・サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、ストレプトコッカス・ラクティス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ）等が挙げられる。
【００４５】
前記酵母としては、特に限定されないが、例えば、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、サッカロマイセス・カールスベルゲンシス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃａｒｌｓｂｅｒｇｅｎｓｉｓ）、サッカロマイセス・エリプソイデウス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｅｌｌｉｐｓｏｉｄｅｕｓ）、サッカロマイセス・ロウキシ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｒｏｕｘｉｉ）等が挙げられる。
【００４６】
前記紅色非硫黄細菌の培養において、培地は、特に限定されず、例えば、低級脂肪酸添加培地、リンゴ酸添加培地、Ｌ−乾燥標品復元用培養基８０２「ダイゴ」（日本製薬社製）、ＭＹＳ培地（平石および北川、Ｂｕｌｌｅｔｉｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｊａｐａｎｅｓｅ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｆｉｓｈｅｒｉｅｓ、１９８４年、５０巻、１１号、ｐ．１９２９−１９３７）、改変ＭＹＳ培地、生育用培地等が挙げられ、好ましくは、低級脂肪酸添加培地、リンゴ酸添加培地、Ｌ−乾燥標品復元用培養基８０２「ダイゴ」（日本製薬社製）である。
【００４７】
前記低級脂肪酸添加培地および前記リンゴ酸添加培地としては、例えば、下記表１の基礎培地に、ビオチン、ビタミンＢ１、ニコチン酸、低級脂肪酸またはリンゴ酸のナトリウム塩を添加した培地が挙げられる。前記低級脂肪酸としては、特に制限されないが、例えば、酢酸、プロピオン酸、乳酸等が好ましい。
【００４８】
【表１】
2011102035.tif 000003
【００４９】
前記改変ＭＹＳ培地、生育用培地としては、例えば、下記表２および表３の組成の培地が挙げられる。
【００５０】
【表２】
2011102035.tif 000004
【００５１】
【表３】
2011102035.tif 000005
【００５２】
前記培養において、温度範囲は、特に限定されないが、例えば、２３〜３９℃であり、好ましくは、３０℃である。
【００５３】
また、前記培養において、ｐＨ範囲は、特に限定されないが、例えば、ｐＨ５．５〜８．５の範囲であり、好ましくは、ｐＨ６．０〜８．５の範囲であり、より好ましくは、ｐＨ７．０である。
【００５４】
前記培養は、例えば、好気的条件下で行ってもよく、嫌気的条件下で行ってもよく、特に制限されないが、好ましくは、嫌気的条件下である。また、前記培養時の光条件も、特に制限されず、例えば、暗黒条件でもよく、照明条件でもよいが、好ましくは、２０００ルクス〜１００００ルクスの照度下である。前記培養は、例えば、密閉照明式培養槽内で行ってもよい。また、前記密閉照明式培養槽内に備えられた撹拌装置を用いて、培養液を撹拌しながら培養してもよい。
【００５５】
前記培養時間は、特に制限されず、例えば、前記紅色非硫黄細菌の増殖が定常期に達するまでであってもよい。前記紅色非硫黄細菌の増殖が、約７２時間以内に定常期に達する培養条件下の場合、前記培養時間は、例えば、７２時間であってもよい。
【００５６】
なお、前記紅色非硫黄細菌の培養において、例えば、前記紅色非硫黄細菌のみを培養してもよく、さらに、他の細菌を同時に混合培養してもよい。前記他の細菌としては、特に制限されないが、例えば、前述の乳酸菌、酵母等が挙げられる。
【００５７】
前述のように、前記ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ）の１６Ｓ  ｒＲＮＡの塩基配列は、配列番号１で表される塩基配列であることが好ましい。このような１６Ｓ  ｒＲＮＡの塩基配列を有する具体的な紅色非硫黄細菌としては、例えば、ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ）ＢＰ０８９９株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−６４４）が挙げられる。
【００５８】
前記１６Ｓ  ｒＲＮＡの塩基配列は、例えば、前述の方法等により、単離および培養した前記紅色非硫黄細菌から、ＤＮＡを抽出し、プライマー等を用いて決定できる。前記ＤＮＡの抽出および前記塩基配列の決定方法は、例えば、常法を用いることができ、特に制限されない。また、前記プライマーは、特に制限されないが、例えば、以下のプライマー等が挙げられる。
【００５９】
（プライマー）
９Ｆ        （配列番号２）
５’−ＧＡＧＴＴＴＧＡＴＣＣＴＧＧＣＴＣＡＧ−３’
３３９Ｆ    （配列番号３）
５’−ＣＴＣＣＴＡＣＧＧＧＡＧＧＣＡＧＣＡＧ−３’
７８５Ｆ    （配列番号４）
５’−ＧＧＡＴＴＡＧＡＴＡＣＣＣＴＧＧＴＡＧＴＣ−３’
１０９９Ｆ  （配列番号５）
５’−ＧＣＡＡＣＧＡＧＣＧＣＡＡＣＣＣ−３’
５３６Ｒ    （配列番号６）
５’−ＧＴＡＴＴＡＣＣＧＣＧＧＣＴＧＣＴＧ−３’
８０２Ｒ    （配列番号７）
５’−ＴＡＣＣＡＧＧＧＴＡＴＣＴＡＡＴＣＣ−３’
１２４２Ｒ  （配列番号８）
５’−ＣＣＡＴＴＧＴＡＧＣＡＣＧＴＧＴ−３’
１５４１Ｒ  （配列番号９）
５’−ＡＡＧＧＡＧＧＴＧＡＴＣＣＡＧＣＣ−３’
【００６０】
前記（１）〜（３０）の菌学的性質、または、その塩基配列が配列番号１で表される塩基配列である１６Ｓ  ｒＲＮＡの少なくとも一方を有するロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ）は、例えば、本発明における前記紅色非硫黄細菌といえる。
【００６１】
＜培養物＞
前記紅色非硫黄細菌の培養物としては、例えば、前記紅色非硫黄細菌の菌体、前記紅色非硫黄細菌の培養上清、前記紅色非硫黄細菌の菌体抽出物等が挙げられ、特に限定されない。また、本発明の予防改善剤、持久力向上剤および抗疲労剤は、さらに、前記紅色非硫黄細菌以外の細菌の培養物を含んでいてもよい。前記紅色非硫黄細菌以外の細菌の培養物としては、特に制限されず、例えば、前述の他の細菌の菌体、前記他の細菌の培養上清、前記他の細菌の菌体抽出物等が挙げられる。前記紅色非硫黄細菌以外の細菌の培養物としては、具体的には、例えば、前述の乳酸菌、酵母等の乾燥菌体、抽出物等が挙げられる。
【００６２】
前記培養物は、例えば、前記菌体の処理物、前記培養上清の処理物、前記菌体抽出物の処理物等でもよく、特に限定されない。前記処理物としては、特に限定されないが、例えば、前記培養物の濃縮物、乾燥物、凍結乾燥物、溶媒処理物、界面活性剤処理物、酵素処理物、タンパク質分画物、超音波処理物、磨砕処理物等が挙げられる。また、前記培養物は、例えば、前記菌体、前記培養上清、前記菌体抽出物、前記菌体の処理物、前記培養上清の処理物、前記菌体抽出物の処理物等の混合物でもよい。前記混合物としては、任意の組み合わせおよび比率で混合することができ、特に制限されない。前記組み合わせとしては、特に制限されないが、例えば、前記菌体および前記培養上清の混合物等が挙げられる。
【００６３】
本発明の予防改善剤、持久力向上剤および抗疲労剤は、さらに、例えば、添加剤等の他の成分を含んでいてもよい。前記添加剤としては、特に制限されず、例えば、安定化剤等が挙げられる。前記予防改善剤、持久力向上剤および抗疲労剤の製造方法は、特に制限されず、例えば、通常用いられる製剤化技術等を採用できる。
【００６４】
本発明の予防改善剤は、前述のように、炎症性疾患、アレルギー性疾患および自己免疫疾患からなる群から選択される少なくとも一つの疾患を予防改善する予防改善剤であって、前記紅色非硫黄細菌および前記紅色非硫黄細菌の培養物の少なくとも一方を含む。なお、本発明において、予防改善とは、予防および改善のうち少なくとも一方の効果を有することをいう。したがって、本発明の予防改善剤は、「予防および改善剤」、「予防剤」および「改善剤」を含む。
【００６５】
前記炎症性疾患としては、例えば、内臓、皮膚、関節、中枢神経系等の炎症性疾患が挙げられ、特に限定されない。前記炎症性疾患の具体例としては、例えば、潰瘍性大腸炎およびクローン病等の炎症性腸疾患、乾癬および皮膚炎等の炎症性皮膚疾患、脳炎、肝炎、腎炎、肺炎、気管支炎、脈管炎、髄膜炎、甲状腺炎、糖尿病、炎症性胆汁疾患、炎症を伴う癌等が挙げられ、特に限定されない。前記炎症性疾患の予防改善における抗炎症効果により、炎症に伴う疼痛の鎮痛効果も発揮される。
【００６６】
前記アレルギー性疾患としては、特に制限されないが、例えば、Ｉ型アレルギー性疾患、ＩＩ型アレルギー性疾患、ＩＩＩ型アレルギー性疾患、ＩＶ型アレルギー性疾患、Ｖ型アレルギー性疾患等が挙げられ、好ましくは、Ｉ型アレルギー性疾患またはＩＶ型アレルギー疾患である。前記Ｉ型アレルギー性疾患としては、特に制限されないが、具体的には、例えば、蕁麻疹、花粉症、喘息、ＰＩＥ症候群、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、食物アレルギー、薬物アレルギー、アナフィラキシー等が挙げられる。前記ＩＶ型アレルギー疾患としては、特に制限されないが、具体的には、例えば、接触性皮膚炎等が挙げられる。
【００６７】
前記自己免疫疾患としては、例えば、関節リウマチ、エリテマトーデス、多発性硬化症、全身性硬化症、乾癬性関節炎、感染症、シェーングレン症候群等が挙げられ、特に限定されない。
【００６８】
本発明の予防改善剤は、例えば、前記炎症性疾患、アレルギー性疾患および自己免疫疾患のうち、少なくとも一つの疾患を予防改善すればよく、複数の疾患を予防改善していてもよい。また、本発明の予防改善剤は、さらに、他の疾患を予防改善してもよい。前記他の疾患としては、特に限定されないが、例えば、循環器系疾患、癌、感染症等が挙げられる。
【００６９】
前記循環器系疾患としては、特に制限されないが、例えば、高血圧症、心筋梗塞、狭心症、動脈硬化等が挙げられる。
【００７０】
前記癌としては、特に制限されないが、例えば、肺癌、肝臓癌、胃腸の癌、腎臓癌、膵臓癌、甲状腺癌、前立腺癌、卵巣癌、子宮癌、骨癌等が挙げられる。
【００７１】
前記感染症としては、特に制限されないが、例えば、肝炎ウイルス、インフルエンザウイルス、ヒト免疫不全ウイルス等の各種ウイルスの感染症、ＭＲＳＡ、溶連菌、マイコプラズマ等の感染症等が挙げられる。
【００７２】
＜医薬品＞
本発明の第一の医薬品は、炎症性疾患、アレルギー性疾患および自己免疫疾患からなる群から選択される少なくとも一つの疾患の予防または治療のための医薬品であって、本発明の予防改善剤を含んでいる以外は、何ら制限されない。本発明の第一の医薬品は、さらに、本発明の持久力向上剤および抗疲労剤の少なくとも一方を含んでもよい。また、本発明の第二の医薬品は、本発明の持久力向上剤および抗疲労剤の少なくとも一方を含んでいる以外は、何ら制限されない。本発明の第二の医薬品は、さらに、本発明の予防改善剤を含んでもよい。これ以降、本発明の第一の医薬品および第二の医薬品をまとめて、単に「医薬品」と言うことがある。本発明において、医薬品とは、医薬品、医薬部外品を含む。また、本発明の医薬品は、さらに、他の予防改善剤、持久力向上剤、抗疲労剤を含んでいてもよい。前記他の予防改善剤としては、特に制限されないが、例えば、前述の他の疾患の予防改善剤等が挙げられる。前記他の持久力向上剤、抗疲労剤としては、特に制限されない。
【００７３】
前記医薬品の剤形は、例えば、散剤、細粒剤、顆粒剤、錠剤、被覆錠剤、カプセル剤、トローチ剤、液剤等が挙げられ、特に制限されない。また、前記医薬品の組成は、特に制限されず、前記予防改善剤、持久力向上剤、抗疲労剤以外に、例えば、賦形剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、吸収促進剤、乳化剤、安定化剤、防腐剤等の各種添加剤等を含んでいてもよい。また、前記医薬品は、通常用いられる製剤化技術等により製造可能である。前記医薬品を投与する動物種としては、特に制限されないが、例えば、ヒト、または、サル、ウシ、ブタ、イヌ、ネコ等の非ヒトの哺乳類、ニワトリ等の鳥類、魚介類等があげられる。前記投与方法としては、特に制限されず、例えば、経口投与または非経口投与があげられ、前記非経口投与は、例えば、経皮吸収、注射、座薬投与等があげられる。前記医薬品の投与量は、例えば、動物種、年齢等に応じて適宜設定でき、特に制限されない。本発明の予防改善方法、持久力向上方法および抗疲労方法において、投与方法および投与対象等は、例えば、同様である。
【００７４】
＜飲食品＞
本発明の第一の飲食品は、炎症性疾患、アレルギー性疾患および自己免疫疾患からなる群から選択される少なくとも一つの疾患の予防または改善の機能を有する飲食品であって、本発明の予防改善剤を含んでいる以外は、何ら制限されない。本発明の第一の飲食品は、さらに、本発明の持久力向上剤および抗疲労剤の少なくとも一方を含んでもよい。また、本発明の第二の飲食品は、本発明の持久力向上剤および抗疲労剤の少なくとも一方を含んでいる以外は、何ら制限されない。本発明の第二の飲食品は、さらに、本発明の予防改善剤を含んでもよい。これ以降、本発明の第一の飲食品および第二の飲食品をまとめて、単に「飲食品」と言うことがある。本発明において、飲食品とは、一般食品、保健機能食品を含む。前記一般食品としては、特に限定されないが、例えば、穀物加工食品、野菜加工食品、果物加工食品、食肉加工食品、水産物加工食品、乳製品、飲料、健康食品等が挙げられる。また、本発明の飲食品は、前記予防改善剤、持久力向上剤、抗疲労剤を、例えば、素材、添加剤等として含んでいてもよい。前記穀物加工食品としては、特に制限されないが、例えば、小麦粉、米粉、シリアルバー、せんべい、あられ、クッキー等が挙げられる。前記野菜加工食品としては、特に制限されないが、例えば、野菜ペースト、乾燥野菜、野菜スープ等が挙げられる。前記果物加工食品としては、特に制限されないが、例えば、果物ピューレ、乾燥果物等が挙げられる。前記食肉加工食品としては、特に制限されないが、例えば、ハム、ベーコン、ソーセージ等が挙げられる。前記水産物加工食品としては、特に制限されないが、例えば、佃煮、塩干物、魚肉ソーセージ、はんぺん、かまぼこ、ちくわ等が挙げられる。前記乳製品としては、特に制限されないが、例えば、乳飲料、ヨーグルト、アイスクリーム、チーズ等が挙げられる。前記飲料としては、特に制限されないが、例えば、清涼飲料、緑茶、紅茶、コーヒー等が挙げられる。また、前記保健機能食品は、一般に、機能性食品とも称される。前記保健機能食品としては、例えば、特定保健用食品、栄養機能食品等が挙げられる。
【００７５】
前記飲食品の組成としては、特に制限されず、前記予防改善剤、持久力向上剤、抗疲労剤以外に、例えば、種々の食品素材、助剤、安定化剤等が挙げられる。また、前記飲食品は、通常用いられる製剤化技術等により製造可能である。前記飲食品の対象動物種は、特に制限されないが、例えば、ヒト、または、サル、ウシ、ブタ、イヌ、ネコ等の非ヒトの哺乳類、ニワトリ等の鳥類、魚介類等があげられる。
【実施例】
【００７６】
つぎに、本発明の実施例について説明する。ただし、本発明は、下記の実施例に限定されない。【００７７】
＜実施例１＞
本例では、デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）誘発大腸炎モデルマウスを使用し、炎症性腸疾患に対する紅色非硫黄細菌の効果を組織学的に評価した。【００７８】
（菌体の培養）
まず、下記表４に示す組成の基礎培地に、酢酸ナトリウムを０．４重量％、ショ糖を５重量％となるように添加し、ｐＨ７．０に調整して、菌体用培地を調製した。密閉照明式培養槽に、前記菌体用培地を入れ、菌濃度１×１０６細胞／ｃｍ３のロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ）ＢＰ０８９９（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−６４４）の菌液を２０容積％となるように添加し、３０℃で７日間撹拌培養した。培養終了後、得られた培養液から、連続式遠心分離機（シャープレス・タイプ）を用いて菌体を回収し、菌濃度１×１０１１細胞／ｃｍ３に調整して冷凍保存した。【００７９】
【表４】
2011102035.tif 000006
【００８０】
（菌体粉末の調製）
冷凍保存した菌体を自然解凍し、吸引瓶に分注した。前記吸引瓶内の菌体を、凍結乾燥機（株式会社宝製作所製）を用いて、−４５℃で２０分間凍結した。凍結後、この吸引瓶を−４５℃に冷却したトラップに連結し、室温（２０〜３０℃）、４〜６Ｐａ条件下で乾燥し、凍結乾燥菌体を得た。前記凍結乾燥菌体を、プロペラ式粉砕機（協立理工株式会社製）を用いて１８０００ｒｐｍのプロペラ回転数で粉砕し、菌体粉末を調製した。【００８１】
（混餌投与試験）
混餌投与試験には、５週令のＩＣＲ系雌性マウス（日本エスエルシー社製）３匹を用いた。前記マウスの大腸炎誘発用に、デキストラン硫酸ナトリウム（分子量３６０００−５００００、ＩＣＮバイオメディカルズ社製）を５ｗ／ｖ％濃度で含有させたＤＳＳ含有水を調製した。また、マウス飼育用粉末飼料（日本クレア社製、ＣＦ−２）に、０．１重量％の割合で前記菌体粉末を加え、菌体含有飼料を調製した。前記マウスに、ＤＳＳを含まない水および前記菌体含有飼料を１週間摂取させた後、前記ＤＳＳ含有水および前記菌体含有飼料を７日間摂取させた。前記ＤＳＳ含有水摂取開始８日目に、前記マウスの結腸部を摘出した。【００８２】
（組織学的評価）
摘出した結腸部を、１０ｖ／ｖ％ホルマリン液で固定し、常法によりパラフィン薄片を作製した。前記薄片を、ヘマトキシリン染色後、光学顕微鏡を用いて、組織学的に観察した。炎症細胞浸潤および粘膜上皮の腫大の組織学的所見を、下記表に示すスコアを用いて数値化し、平均値を算出した。【００８３】
（組織学的所見スコア）
所見    スコア
著変なし    ０
軽微        １
軽度        ２
中等度      ３
重度        ４【００８４】
＜実施例２＞
本例では、前記ＤＳＳを含まない水および菌体含有飼料の摂取期間を、４週間にした以外は、実施例１と同様にして、５週令のＩＣＲ系雌性マウス（日本エスエルシー社製）５匹に水および飼料を投与し、潰瘍形成および再生上皮について組織学的に評価した。【００８５】
＜比較例１＞
本例では、前記菌体含有飼料に代えて、前記紅色非硫黄細菌を含まないマウス飼育用粉末飼料（日本クレア社製、ＣＦ−２）を摂取させた以外は、実施例１と同様にして、５週令のＩＣＲ系雌性マウス（日本エスエルシー社製）４匹に水および飼料を摂取させ、潰瘍形成、炎症細胞浸潤、粘膜上皮の腫大および再生上皮について、組織学的に評価した。【００８６】
＜比較例２＞
本例では、前記ＤＳＳ含有水に代えて、前記ＤＳＳを含まない水を給水し、ＤＳＳによる大腸炎を誘発させなかった以外は、比較例１と同様にして、５週令のＩＣＲ系雌性マウス（日本エスエルシー社製）１匹に水および飼料を摂取させ、潰瘍形成、炎症細胞浸潤、粘膜上皮の腫大および再生上皮について、組織学的評価を行った。【００８７】
下記表５に、実施例１、比較例１および比較例２における、炎症細胞浸潤および粘膜上皮の腫大の組織学的所見スコアの平均値を示す。同表に示すように、実施例１は、比較例１に比べ、炎症細胞浸潤および粘膜上皮の腫大の抑制が認められた。また、実施例１において、２週間にわたり、前記菌体含有飼料を摂取させたが、副作用は認められなかった。【００８８】
【表５】
2011102035.tif 000007
【００８９】
下記表６に、実施例２、比較例１および比較例２における、潰瘍形成および再生上皮の組織学的所見スコアの平均値を示す。同表に示すように、実施例２は、比較例１に比べて、潰瘍の形成が抑制され、上皮の再生が促進された。この結果は、潰瘍の速やかな修復により、上皮の再生が促進されたためと考えられた。また、実施例２において、５週間にわたり、前記菌体含有飼料を摂取させたが、副作用は認められなかった。【００９０】
【表６】
2011102035.tif 000008
【００９１】
図１〜３に、実施例２、比較例１および比較例２における、病理組織写真を示す。図１（Ａ）は、実施例２の病理組織写真（倍率３２倍）であり、図１（Ｂ）は、実施例２の病理組織写真（倍率８０倍）である。図２（Ａ）は、比較例１の病理組織写真（倍率３２倍）であり、図２（Ｂ）は、比較例１の病理組織写真（倍率８０倍）である。図３（Ａ）は、比較例２の病理組織写真（倍率３２倍）であり、図３（Ｂ）は、比較例２の病理組織写真（倍率８０倍）である。【００９２】
図１に示すように、前記菌体含有飼料を摂取させた実施例２では、潰瘍形成が抑制され、上皮の再生が促進された。なお、図１に示す薄片は、潰瘍形成の組織学的スコアが１であり、再生上皮の組織学的スコアが４である。これに対して、図２に示すように、前記菌体含有飼料を摂取させなかった比較例１では、組織表面（楕円で囲んだ部分）に潰瘍形成が認められ、上皮の再生はほとんど促進されなかった。なお、図２に示す薄片は、潰瘍形成の組織学的スコアが４であり、再生上皮の組織学的スコアが１である。また、図３に示すように、前記菌体含有飼料および前記ＤＳＳ含有水を摂取させなかった比較例２では、潰瘍形成および上皮の再生は認められず、潰瘍形成および再生上皮共に、組織学的スコアは０であった。【００９３】
＜実施例３＞
本例では、デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）誘発大腸炎モデルマウスを使用し、炎症性腸疾患への紅色非硫黄細菌の投与量による影響を、組織学的に評価した。【００９４】
（菌体粉末の調製）
本例では、実施例１と同様にして、菌体粉末を調製した。【００９５】
（経口投与試験）
経口投与試験には、５週令のＩＣＲ系雌性マウス（日本エスエルシー社製）３群（各群２−４匹）を用いた。また、前記マウスの大腸炎誘発用に、デキストラン硫酸ナトリウム（分子量３６０００−５００００、ＩＣＮバイオメディカルズ社製）を５ｗ／ｖ％濃度で含有させたＤＳＳ含有水を調製した。前記各群のマウスに、前記ＤＳＳ含有水を自由摂取させ、実施例１と同じ菌体粉末を、所定量（１、６および１０ｍｇ／ｋｇ，ｐ．ｏ．）で、１日１回、７日間投与した。【００９６】
（組織学的評価）
摘出した結腸部を、１０ｖ／ｖ％ホルマリン液で固定し、常法によりパラフィン薄片を作製し、ヘマトキシリン染色後、光学顕微鏡を用いて、組織学的に観察した。潰瘍形成、炎症細胞浸潤、粘膜上皮の腫大、再生上皮および粘膜の過剰増生の組織学的所見を、実施例１と同じスコアを用いて数値化し、各群の平均値を算出した。【００９７】
＜比較例３＞
本例では、前記菌体粉末を経口投与しなかった以外は、実施例３と同様にして、ＤＳＳ大腸炎誘発マウス３匹に前記ＤＳＳ含有水を摂取させ、潰瘍形成、炎症細胞浸潤および再生上皮について、組織学的に評価した。【００９８】
下記表７に、実施例３および比較例３における、潰瘍形成、炎症細胞浸潤および再生上皮の組織学的所見スコアの平均値を示す。なお、同表において、かっこ内の数字は、各群に投与した菌体粉末の前記所定量（ｍｇ／ｋｇ，ｐ．ｏ．）である。同表に示すように、実施例３は、比較例３に比べ、潰瘍形成が抑制され、この抑制に対応して、再生上皮形成も抑制された。また、実施例３において、前記菌体粉末を１日あたり６または１０ｍｇ／ｋｇ，ｐ．ｏ．投与した群では、炎症細胞の浸潤の抑制も認められた。また、実施例３において、７日間にわたり、前記菌体粉末１〜１０ｍｇ／ｋｇ，ｐ．ｏ．を投与したが、副作用は認められなかった。【００９９】
【表７】
2011102035.tif 000009
【０１００】
＜実施例４＞
本例では、実施例１と同様にして調製した菌体粉末について、以下のようにして、四塩化炭素（ＴＨＣ）による肝障害誘発モデルマウスを用いた経口投与試験を行い、肝障害予防効果を評価した。【０１０１】
経口投与試験には、５週令のＩＣＲ系雌性マウス（日本エスエルシー社製）３群（各群３匹）を用いた。前記各群に、前記菌体粉末１０ｍｇ／ｋｇ，ｐ．ｏ．を、１日１回、７日間投与した。そして、肝障害を誘発させるため、最終投与２４時間後に、所定量（２０、１００および５００ｍｇ／ｋｇ，ｐ．ｏ．）の四塩化炭素（ＴＨＣ、和光純薬社製）を、前記各群に投与した。そして、前記ＴＨＣ投与２４時間後に血液を採取し、前記血液中のＧＯＴ活性（カルメン単位）を測定して、前記各群のＧＯＴ平均値を算出した。また、コントロールとして、前記菌体粉末および前記ＴＨＣを経口投与しなかった以外は前記各群と同様にして、血液中のＧＯＴ活性を測定し、ＧＯＴ平均値を算出した。そして、下記式（１）を用いて、前記各群のＧＯＴ相対活性値を算出した。
ＧＯＴ相対活性値（％）
＝（各群のＧＯＴ平均値）／（コントロールのＧＯＴ平均値）×１００
・・（１）【０１０２】
＜比較例４＞
本例では、前記菌体粉末を経口投与しなかった以外は実施例４と同様にして、経口投与試験を行った。【０１０３】
下記表８に、実施例４および比較例４における、ＴＨＣ投与量（ｍｇ／ｋｇ，ｐ．ｏ．）別のＧＯＴ相対活性値（％）を示す。なお、同表において、かっこ内の数字は、前記血液中のＧＯＴ測定値の平均値である。同表に示すように、ＴＨＣ２０ｍｇ／ｋｇ，ｐ．ｏ．投与時における前記ＧＯＴ相対活性値は、実施例４では１００．３％であったのに対し、比較例４では２００．０％であった。そして、ＴＨＣ１００ｍｇ／ｋｇ，ｐ．ｏ．投与時における前記ＧＯＴ相対活性値は、実施例４では２１６．２％であったのに対し、比較例４では４３５．４％であった。さらに、ＴＨＣ５００ｍｇ／ｋｇ，ｐ．ｏ．投与時における前記ＧＯＴ相対活性値は、実施例４では３１１．３％であったのに対し、比較例４では５７２．４％であった。すなわち、実施例４は、比較例４に比べ、ＧＯＴ活性が約１／２倍に抑制され、肝障害抑制効果が認められた。また、実施例４において、７日間にわたり、前記菌体粉末１０ｍｇ／ｋｇ，ｐ．ｏ．を投与したが、副作用は認められなかった。【０１０４】
【表８】
2011102035.tif 000010
【０１０５】
＜実施例５＞
本例では、実施例１と同様にして調製した菌体粉末について、以下のようにして、四塩化炭素（ＴＨＣ）による肝障害誘発モデルマウスを用いた経口投与試験を行い、肝障害予防効果を評価した。【０１０６】
経口投与試験には、５週令のＩＣＲ系雌性マウス（日本エスエルシー社製）３群（各群３匹）を用いた。前記各群に、所定量（３、６および１０ｍｇ／ｋｇ，ｐ．ｏ．）の前記菌体粉末を、１日１回、７日間投与した。そして、肝障害を誘発させるため、最終投与２４時間後に、四塩化炭素（ＴＨＣ、和光純薬社製）１００ｍｇ／ｋｇ，ｐ．ｏ．を投与した。そして、前記ＴＨＣ投与２４時間後に血液を採取し、前記血液中のＧＯＴ活性（カルメン単位）を測定して、前記各群のＧＯＴ平均値を算出した。また、コントロールとして、前記菌体粉末および前記ＴＨＣを経口投与しなかった以外は前記菌体粉末投与群と同様にして、血液中のＧＯＴ活性を測定し、ＧＯＴ平均値を算出した。そして、実施例４と同様にして、前記各群のＧＯＴ相対活性値を算出した。【０１０７】
＜比較例５＞
本例では、５週令のＩＣＲ系雌性マウス（日本エスエルシー社製）３匹を用い、前記菌体粉末を経口投与しなかった以外は、実施例５と同様にして経口投与試験を行い、ＧＯＴ相対活性値を算出した。【０１０８】
下記表９に、実施例５における菌体粉末投与量（ｍｇ／ｋｇ，ｐ．ｏ．）別のＧＯＴ相対活性値（％）および比較例５のＧＯＴ相対活性値（％）を示す。なお、同表において、かっこ内の数字は、前記血液中のＧＯＴ測定値の平均値である。同表に示すように、菌体粉末３〜１０ｍｇ／ｋｇ，ｐ．ｏ．を投与した実施例５の各群は、比較例５に比べ、ＧＯＴ活性が抑制され、肝障害抑制効果が認められた。また、実施例５において、７日間にわたり、前記菌体粉末３〜１０ｍｇ／ｋｇ，ｐ．ｏ．を投与したが、副作用は認められなかった。【０１０９】
【表９】
2011102035.tif 000011
【０１１０】
＜実施例６＞
本例では、実施例１と同様にして調製した菌体粉末について、以下のようにして、四塩化炭素（ＴＨＣ）による肝障害誘発モデルマウスを用いた経口投与試験を行い、その効果を組織学的に評価した。【０１１１】
（肝障害誘発モデルマウスを用いた経口投与試験）
本例では、前記菌体粉末１０ｍｇ／ｋｇ，ｐ．ｏ．を、１日１回、１日間または７日間投与し、最終投与２４時間後に、四塩化炭素（ＴＨＣ、和光純薬社製）１００ｍｇ／ｋｇ，ｐ．ｏ．を投与した以外は実施例４と同様にして、経口投与試験を行った。また、前記菌体粉末および前記ＴＨＣを経口投与しない別の群（３匹）を、コントロールとした。【０１１２】
（組織学的評価）
前記ＴＨＣ投与２４時間後に、肝臓を摘出した。そして、摘出した肝臓を、１０ｖ／ｖ％ホルマリン液で固定し、常法によりパラフィン薄片を作製し、ヘマトキシリン染色後、光学顕微鏡を用いて、組織学的に観察した。前記肝臓の小葉中心性の肝細胞壊死および炎症細胞浸潤の組織学的所見を、実施例１と同じスコアを用いて数値化し、各群およびコントロールの平均値を算出した。【０１１３】
＜比較例６＞
本例では、前記菌体粉末を経口投与しなかった以外は実施例６と同様にして、経口投与試験を行い、肝臓の小葉中心性の肝細胞壊死および炎症細胞浸潤について、組織学的に評価した。【０１１４】
下記表１０に、実施例６および比較例６における、前記肝臓の小葉中心性の肝細胞壊死および炎症細胞浸潤の組織学的所見スコアの平均値を示す。なお、同表において、かっこ内の日数は、前記菌体粉末の投与日数である。同表に示すように、実施例６は、比較例６に比べ、小葉中心性の肝細胞壊死および炎症細胞の浸潤が抑制された。すなわち、前記菌体粉末の経口投与により、ＴＨＣ誘発性肝障害が抑制された。また、実施例６において、１〜７日間にわたり、前記菌体粉末１０ｍｇ／ｋｇ，ｐ．ｏ．を投与したが、副作用は認められなかった。【０１１５】
【表１０】
2011102035.tif 000012
【０１１６】
＜実施例７＞
本例では、実施例１と同様にして調製した菌体粉末について、以下のようにして、卵アルブミンによるアレルギー反応モデルマウスを用いた経口投与試験を行い、卵アルブミンによるアレルギー反応におけるＴｈ１／Ｔｈ２バランスに与える影響を評価した。【０１１７】
（血清中ＩｇＥ測定）
まず、生理食塩水０．２ｍＬに卵アルブミン（ｇｒａｄｅ  Ｖ、シグマ社製）２ｍｇを溶解後、水酸化アルミニウムゲル（Ｎｏ．０１９−１９５０１、Ｌｏｔ  ＷＫＪ  ４４３１、和光純薬社製）２ｍｇを加えて懸濁させ、卵アルブミン／水酸化アルミニウムゲルを調製した。経口投与試験には、４週令のＢＡＬＢ／ｃ系雌性マウス（日本エスエルシー社製）５匹を用いた。前記各マウスに、前記菌体粉末１０ｍｇ／ｋｇ，ｐ．ｏ．を、１日１回、２週間投与した。そして、前記菌体粉末の最終投与日に、前記卵アルブミン／水酸化アルミニウムゲルを腹腔内に投与した。さらに、前記最終投与日から１０日後に追加免疫を行い、追加免疫から１週間後に採血した。採取した血液から血清を回収し、ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ（Ｂｅｔｈｙｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）のプロトコールに従い、前記血清中のＩｇＥ量を測定し、５匹の平均値を算出した。【０１１８】
（血清中ＩＬ−４量測定）
この測定では、４週令のＢＡＬＢ／ｃ系雌性マウス（日本エスエルシー社製）２匹を用いた以外は、前記血清中ＩｇＥ量測定と同様にして、前記菌体粉末を投与し、卵アルブミン／水酸化アルミニウムゲルを調製して投与し、採血した。そして、採取した血液から血清を回収し、ＩＬ−４、マウス、ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ（９６ウェル、Ｂｅｔｈｙｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）のプロトコールに従い、前記血清中のＩＬ−４量を測定し、２匹の平均値を算出した。【０１１９】
（脾臓細胞の培養上清中サイトカイン量測定）
この測定では、４週令のＢＡＬＢ／ｃ系雌性マウス（日本エスエルシー社製）３匹を用いた以外は、前記血清中ＩｇＥ量測定と同様にして、前記菌体粉末を投与し、卵アルブミン／水酸化アルミニウムゲルを調製して投与した。そして、追加免疫から１週間後に脾臓を採取した。前記脾臓から、脾臓細胞を採取し、卵アルブミン１００μｇ／ｍＬを添加したＲＰＭＩ  １６４０培地（Ｇｉｂｃｏ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）中に５×１０６細胞／ｍＬの密度に懸濁し、空気９５％、二酸化炭素濃度５％、３７℃条件下で３日間培養した。培養終了後、培養上清を回収し、下記表１１に示す各ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ（Ｂｅｔｈｙｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）のプロトコールに従い、上清中のＩＦＮ−γ、ＩＬ−２、ＩＬ−４およびＩＬ−５量を測定し、３匹の平均値を算出した。【０１２０】
【表１１】
2011102035.tif 000013
【０１２１】
＜比較例７＞
本例では、前記菌体粉末を経口投与しなかった以外は、実施例７と同様にして経口投与試験を行い、血清中のＩｇＥおよびＩＬ−４量を測定し、脾臓細胞の培養上清中のＩＦＮ−γ、ＩＬ−２、ＩＬ−４およびＩＬ−５量を測定し、平均値を算出した。【０１２２】
下記表１２に、実施例７および比較例７における、前記血清中のＩｇＥ量の平均値を示す。同表に示すように、菌体粉末を投与した実施例７は、未投与の比較例７に比べ、ＩｇＥ量が低減した。【０１２３】
【表１２】
2011102035.tif 000014
【０１２４】
下記表１３に、実施例７および比較例７における、前記血清中のＩＬ−４量の測定結果を示す。同表に示すように、菌体粉末を投与した実施例７は、未投与の比較例７に比べ、ＩＬ−４量が低減した。すなわち、Ｔｈ２型サイトカインであるＩＬ−４量が抑制され、さらに、前述のようにＩｇＥ量が抑制されたことから、前記菌体粉末は、Ｔｈ２型サイトカインの分泌を抑制することにより、アレルギー反応を惹起するＴｈ１／Ｔｈ２のインバランスを改善することが示唆された。【０１２５】
【表１３】
2011102035.tif 000015
【０１２６】
下記表１４に、実施例７および比較例７における、前記培養上清中のＩＦＮ−γ、ＩＬ−２、ＩＬ−４およびＩＬ−５量の測定結果を示す。同表に示すように、菌体粉末を投与した実施例７は、未投与の比較例７に比べ、Ｔｈ１型サイトカインのＩＦＮ−γおよびＩＬ−２量が増加し、Ｔｈ２型サイトカインのＩＬ−４およびＩＬ−５量が減少した。すなわち、アレルギー反応は、Ｔｈ２優位により惹起されるが、前記菌体粉末は、Ｔｈ２型サイトカインの分泌を抑制することで、Ｔｈ１／Ｔｈ２のインバランスを改善し、抗アレルギー作用を示すことが示唆された。また、実施例７において、２週間にわたり、１日１回、前記菌体粉末１０ｍｇ／ｋｇ，ｐ．ｏ．を投与したが、副作用は認められなかった。【０１２７】
【表１４】
2011102035.tif 000016
【０１２８】
＜実施例８＞
本例では、実施例１と同様にして調製した菌体粉末について、以下のようにして、卵アルブミンによる皮内炎症（浮腫）を惹起させたマウスを用いた経口投与試験を行い、抗アレルギー作用を評価した。【０１２９】
まず、卵アルブミン（ｇｒａｄｅ  Ｖ、シグマ社製）濃度を２０μｇにした以外は、実施例７と同様にして、卵アルブミン／水酸化アルミニウムゲルを調製した。４週令のＢＡＬＢ／ｃ系雌性マウス（日本エスエルシー社製）６匹を用いた以外は、実施例７と同様にして、各マウスに、前記菌体粉末および前記卵アルブミン／水酸化アルミニウムゲルを投与した。前記菌体粉末の最終投与日から１０日後に、各マウスの足蹠に前記卵アルブミン／水酸化アルミニウムゲル２０μＬを接種した。接種２４時間後に、前記足蹠に生じた浮腫の容積を、Ｖｏｌｕｍｅ  Ｍｅｔｅｒ  ＭＫ−５５０（室町機械社製）を用いて測定し、平均値を算出した。【０１３０】
＜比較例８−１＞
本例では、無処置群として、前記マウスを３匹用い、前記菌体粉末および前記卵アルブミン／水酸化アルミニウムゲル共に投与しなかった以外は、実施例８と同様にして経口投与試験を行い、前記足蹠に生じた浮腫の容積を測定し、平均値を算出した。【０１３１】
＜比較例８−２＞
本例では、菌体未投与群として、前記菌体粉末を経口投与しなかった以外は、実施例８と同様にして経口投与試験を行い、前記足蹠に生じた浮腫の容積を測定し、平均値を算出した。【０１３２】
図４のグラフに、実施例８、比較例８−１および比較例８−２における、前記浮腫容積の測定結果を示す。同図のグラフにおいて、縦軸は、前記浮腫容積の平均値（ｍＬ）である。同図に示すように、各例の浮腫容積は、比較例８−１（無処置群）が０．３５ｍＬ、比較例８−２（菌体未投与群）が０．９５ｍＬ、実施例８が０．６３ｍＬであった。したがって、菌体粉末を投与した実施例８は、未投与の比較例８−２に比べ、浮腫容積が抑制された。すなわち、前記菌体粉末は、皮内免疫によるアレルギー反応に対し、抗アレルギー作用を示した。また、実施例８において、２週間にわたり、１日１回、前記菌体粉末１０ｍｇ／ｋｇ，ｐ．ｏ．を投与したが、副作用は認められなかった。【０１３３】
＜実施例９＞
本例では、実施例１と同様にして調製した菌体粉末について、以下のようにして、関節リウマチモデルであるアジュバンド関節炎ラットを用いた経口投与試験を行い、関節リウマチ（自己免疫疾患）への影響を評価した。【０１３４】
まず、流動パラフィン（保栄化学社製）０．１ｍＬに結核菌（Ｍ．ｂｕｔｕｒｉｃｕｍ、Ｌｏｔ  ０６４０−３３、Ｄｉｆｃｏ社製）０．６ｍｇを懸濁し、コンプリートアジュバンドを調製した。経口投与試験には、５週令のＷｉｓｔａｒ系雄性ラット（日本エスエルシー社製、１５０−１６０ｇ）５匹を用いた。各ラットの後肢足蹠内に前記アジュバンド０．１ｍＬを接種した。前記各ラットに、前記接種日から、前記菌体粉末２０ｍｇ／ｋｇ，ｐ．ｏ．を、１日１回、２１日間投与した。そして、前記接種日から３、１７および２１日目に、足蹠に生じた浮腫の容積をＶｏｌｕｍｅ  Ｍｅｔｅｒ  ＭＫ−５５０（室町機械社製）を用いて測定し、平均値を算出した。また、同日に、軟Ｘ線装置を用いて、後肢の足根骨、中足骨および趾骨を撮影し、アジュバンド関節炎による骨病変像を形態観察した。【０１３５】
＜比較例９−１＞
本例では、無処置群として、前記菌体粉末を投与しなかった以外は、実施例９と同様にして経口投与試験を行い、前記浮腫容積を測定して平均値を算出し、形態観察した。【０１３６】
＜比較例９−２＞
本例では、陽性コントロール群として、前記菌体粉末に代えて、抗炎症剤であるインドメタシン（シグマ社製）０．１ｍｇ／ｋｇ，ｐ．ｏ．を投与した以外は、実施例９と同様にして経口投与試験を行い、前記浮腫容積を測定して平均値を算出し、形態観察した。【０１３７】
図５のグラフに、実施例９、比較例９−１および比較例９−２における、前記浮腫容積の測定結果を示す。同図のグラフにおいて、縦軸は、浮腫容積の平均値（ｍＬ）であり、横軸は、接種後の日数（日）である。また、各バーは、左から順に、比較例９−１、実施例９および比較例９−２の結果である。同図に示すように、接種後１７日目および２１日目において、実施例９（菌体粉末投与群）は、比較例８−２（陽性コントロール群）と同様に、比較例９−１（無処置群）に比べて、浮腫容積が抑制された。すなわち、菌体粉末を投与した実施例９では、未投与の比較例９−１に比べて、アジュバンド関節炎による浮腫形成が、インドメタシンを投与した比較例９−２と同様に抑制された。【０１３８】
図６の写真に、前記各例における後肢の骨病変像を示す。図６（Ａ）は実施例９、図６（Ｂ）は比較例９−１、図６（Ｃ）は比較例９−２の写真である。図６（Ｂ）に示すように、比較例９−１（無処置群）では、アジュバンド関節炎による骨病変（矢印部）が観察された。これに対して、図６（Ａ）および（Ｃ）に示すように、菌体粉末を投与した実施例９は、インドメタシンを投与した比較例９−２と同様に、アジュバンド関節炎による炎症および骨病変が抑制された。このように、本発明の菌体粉末は、慢性関節リウマチ等の自己免疫疾患の予防および改善に有用と考えられた。また、実施例９において、２１日間にわたり、１日１回、前記菌体粉末２０ｍｇ／ｋｇ，ｐ．ｏ．を投与したが、副作用は認められなかった。【０１３９】
＜実施例１０＞
本例では、実施例１と同様にして調製した菌体粉末について、以下のようにして、卵アルブミンによるアレルギー反応モデルマウスを用いた経口投与試験を行い、卵アルブミンによるアレルギー反応におけるヒスタミン遊離に及ぼす影響を評価した。【０１４０】
４週令のＢＡＬＢ／ｃ系雌性マウス（日本エスエルシー社製）１９匹を用いた以外は、実施例７における前記血清中ＩｇＥ量測定と同様にして、前記菌体粉末を投与し、前記卵アルブミン／水酸化アルミニウムゲルを調製して投与し、採血した。そして、採取した血液から血清を回収し、ヒスタミンＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ（Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ社製）のプロトコールに従い、前記血清中のヒスタミン量を測定し、平均値を算出した。【０１４１】
＜比較例１０−１＞
本例では、前記マウス１５匹を用い、前記菌体粉末を経口投与しなかった以外は、実施例１０と同様にして経口投与試験を行い、血清中のヒスタミン量を測定し、平均値を算出した。【０１４２】
＜比較例１０−２＞
本例では、前記マウス１３匹を用い、前記卵アルブミン／水酸化アルミニウムゲルおよび菌体粉末を経口投与しなかった以外は、実施例１０と同様にして経口投与試験を行い、血清中のヒスタミン量を測定し、平均値を算出した。【０１４３】
図７および下記表１５に、実施例１０、比較例１０−１および比較例１０−２における、前記血清中のヒスタミン量の平均値の結果を示す。図７および下記表１５に示すように、菌体粉末を投与した実施例１０は、未投与の比較例１０−１に比べ、ヒスタミン量が低減した。このように、菌体粉末の投与による、ヒスタミン遊離の抑制が確認された。【０１４４】
【表１５】
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【０１４５】
＜実施例１１＞
本例では、実施例１と同様にして調製した菌体粉末による、持久力向上・抗疲労効果を評価した。【０１４６】
４週令のｄｄＹ系雄性マウス（日本エスエルシー社製）について、以下のようにして懸垂法を行い、懸垂持続時間が４０〜６０秒のマウスを抽出した。なお、前記懸垂法は、以下のように行った。まず、水平に配置した懸垂用の棒に、体重の１０重量％に相当する重りを後足に加重した状態で、前記マウスを前足で懸垂させ、懸垂持続時間（秒）を測定した。【０１４７】
濃度が、１ｍｇ／ｍＬとなるように、前記菌体粉末を注射用生理食塩水に溶解し、試料を調製した。抽出した１０匹のマウスに、１日１回１０日間、前記試料を投与量が１０ｍｇ／ｋｇ，ｐ．ｏ．／ｄａｙとなるように、マウス体重１０ｇあたり０．１ｍＬを経口投与した。【０１４８】
試料投与１１日後、前記懸垂法により、懸垂持続時間を測定した。この測定を、１回目の測定とした。さらに、前記１回目の測定の３０分後に、再度、前記懸垂法により、懸垂持続時間を測定した。この測定を、２回目の測定とした。【０１４９】
＜比較例１１＞
本例では、前記菌体粉末を経口投与しなかった以外は、実施例１１と同様にして、経口投与し、前記懸垂法による懸垂持続時間を測定した。【０１５０】
図８に、実施例１１および比較例１１における懸垂持続時間の測定結果のグラフを示す。図８のグラフにおいて、縦軸は、懸垂持続時間（秒）であり、横軸は、左から順に、１回目の測定結果、２回目の測定結果である。また、図８のグラフにおいて、白のバーは、比較例１１（Ｎ群）の測定結果であり、黒のバーは、実施例１１（Ｔ群）の測定結果である。【０１５１】
図８に示すように、試料を１０日間投与した実施例１１（Ｔ群）の１回目の懸垂持続時間は、３９．２秒であり、比較例１１（Ｎ群）は、３１．４秒であった。すなわち、１回目の測定において、実施例１１は、比較例１１に比べて、懸垂持続時間が、１．２倍延長した。２回目の測定では、実施例１１（Ｔ群）の懸垂持続時間は、３６．８秒であり、比較例１１（Ｎ群）は、１７．２秒であった。すなわち、２回目の測定において、実施例１１は、比較例１１に比べて、懸垂持続時間が、２．１倍延長し、両者の差は、有意であった（Ｐ＝０．００３４）。このように、当該菌体粉末を含有した試料の１０日間の経口投与により、持久力向上および抗疲労効果が示された。【０１５２】
＜実施例１２＞
本例では、前記菌体粉末を含む前記試料の投与期間を２０日間とした以外は、実施例１１と同様にして、経口投与し、前記懸垂法による懸垂持続時間を測定した。【０１５３】
＜比較例１２＞
本例では、前記菌体粉末を経口投与しなかった以外は、実施例１２と同様にして、経口投与し、前記懸垂法による懸垂持続時間を測定した。【０１５４】
図９に、実施例１２および比較例１２における懸垂持続時間の測定結果のグラフを示す。図９のグラフにおいて、縦軸は、懸垂持続時間（秒）であり、横軸は、左から順に、１回目の測定結果、２回目の測定結果である。また、図９のグラフにおいて、白のバーは、比較例１２（Ｎ群）の測定結果であり、黒のバーは、実施例１２（Ｔ群）の測定結果である。【０１５５】
図９に示すように、試料を２０日間投与した実施例１２（Ｔ群）の１回目の懸垂持続時間は、６８．２秒であり、比較例１２（Ｎ群）は、５４．３秒であった。すなわち、１回目の測定において、実施例１２は、比較例１２に比べて、懸垂持続時間が、１．２倍延長した。２回目の測定では、実施例１２（Ｔ群）の懸垂持続時間は、５７．１秒であり、比較例１２（Ｎ群）は、２６．８秒であった。すなわち、２回目の測定において、実施例１２は、比較例１２に比べて、懸垂持続時間が、２．１倍延長し、両者の差は、有意であった（Ｐ＝０．０００１）。このように、当該菌体粉末を含有した試料の２０日間の経口投与により、持久力向上および抗疲労効果が示された。【０１５６】
実施例１〜１０および比較例１〜１０から明らかなように、本発明の紅色非硫黄細菌の摂取により、大腸において、潰瘍形成、炎症細胞浸潤および粘膜上皮の腫大が抑制され、さらに上皮の再生が促進され、炎症性疾患が予防および改善された。本発明の紅色非硫黄細菌の摂取により、肝臓において、小葉中心性の肝細胞壊死および炎症細胞の浸潤が抑制され、炎症性疾患が予防された。本発明の紅色非硫黄細菌の摂取により、血清中のＩｇＥ量およびヒスタミン量が低減し、Ｔｈ２型サイトカインの分泌が抑制され、Ｔｈ１／Ｔｈ２のインバランスが改善され、アレルギーが抑制された。本発明の紅色非硫黄細菌の摂取により、皮内免疫によるアレルギー反応が抑制され、また、自己免疫疾患が予防および改善された。また、実施例１１、１２および比較例１１、１２から明らかなように、本発明の紅色非硫黄細菌の摂取により、持久力が向上し、疲労が抑制された。本発明の紅色非硫黄細菌は、長期摂取による副作用がなく、高い安全性を示した。
【産業上の利用可能性】
【０１５７】
以上のように、本発明の紅色非硫黄細菌は、潰瘍形成の抑制、炎症細胞浸潤の抑制、粘膜上皮腫大の抑制、上皮再生、肝細胞壊死の抑制および肝細胞腫大の促進、血清中ＩｇＥ量およびヒスタミン量の低減、Ｔｈ２型サイトカイン分泌の抑制、Ｔｈ１／Ｔｈ２インバランスの改善、アレルギー反応の抑制、自己免疫疾患の抑制、持久力の向上、抗疲労等の各種効果を有し、炎症性疾患、アレルギー性疾患および自己免疫疾患からなる群から選択される少なくとも一つを予防および改善し、持久力を向上し、疲労を抑制することができる。また、本発明の紅色非硫黄細菌は、安全性が高いため、罹患前から予防の目的で投与可能であり、かつ長期にわたり投与できる。したがって、本発明によれば、炎症性疾患、アレルギー性疾患および自己免疫疾患からなる群から選択される少なくとも一つの予防および改善、持久力向上並びに抗疲労に、有用かつ安全性の高い予防改善剤、持久力向上剤、抗疲労剤、医薬品および飲食品を提供することができ、その適用範囲は制限されず広い。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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