(57)【要約】  本発明は、一般式（Ｉ）で表される２，４，６−三置換−１，３，５−トリアジン化合物又はその薬学的に許容される塩、プロドラッグ又は溶媒和物、その製造方法、並びにそれらの化合物の、プロテインキナーゼやビメンチンの調節異常、細胞空胞化に関連する疾患を予防又は治療するための、特に癌の増殖と転移、組織の繊維化及びアテローム性動脈硬化を治療又は予防するための薬物の調製における使用を提供する。2019515049.tif 000028
2019515049.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）で表される化合物、その薬学的に許容される塩、プロドラッグ又は溶媒和物。
【化１】
2019515049.tif 000026
式中、
Ｒ１は水素、ハロゲン、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、Ｃ１−Ｃ１２アルキル基、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ基、Ｃ１−Ｃ６アルキルアミノ基、ジＣ１−Ｃ６アルキルアミノ基、ヒドロキシメチル基又はアミノメチル基であり；
Ｒ２は−ＮＲ４Ｒ５であり、Ｒ４とＲ５は独立に水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル基及びＣ１−Ｃ６ハロアルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ４とＲ５はそれらが結合する窒素原子と共に、ＮＲ６、Ｏ及びＳから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有する４〜６員飽和又は不飽和ヘテロ環を形成し、前記ヘテロ環はヒドロキシ基、ハロゲン、ニトロ基、アミノ基又はＣ１−Ｃ６アルキル基に置換されてもよく、ただし、Ｒ６は水素、ヒドロキシ基、Ｃ１−Ｃ６アルキル基又はＣ１−Ｃ６ハロアルキル基であり；
Ｒ３は水素、ハロゲン、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、Ｃ１−Ｃ１２アルキル基、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ基、Ｃ１−Ｃ６アルキルアミノ基、ジＣ１−Ｃ６アルキルアミノ基、ヒドロキシメチル基、アミノメチル基又は−ＣＯＲａであり；
ＲａはＯＨ又はＮＲ７Ｒ８であり、Ｒ７とＲ８は独立に水素、ハロゲン及びＮＲ９Ｒ１０から選ばれる一つ又は複数の置換基に任意に置換されるＣ１−Ｃ６アルキル基、及び３−（Ｃ２−Ｃ６アルキニル）−３Ｈ−ジアジリニル基に置換されるＣ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ７とＲ８はそれらが結合する窒素原子と共に、Ｎ、Ｏ及びＳから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有し且つＣ１−Ｃ６アルキル基に任意に置換される４〜６員ヘテロ環を形成し；
Ｒ９とＲ１０は独立に水素及びＣ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ９とＲ１０はそれらが結合する窒素原子と共に、Ｎ、Ｏ、Ｓから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有する４〜６員ヘテロ環を形成し；及び
ＸはＮＨ又はＯであり、フェニル基とメタ位又はパラ位で結合する。
【請求項２】
Ｒ１は水素、ハロゲン又はニトロ基であり；及び／又は
Ｒ２は−ＮＲ４Ｒ５であり、Ｒ４とＲ５は独立に水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル基及びＣ１−Ｃ６ハロアルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ４とＲ５はそれらが結合する窒素原子と共に、ＮＲ６、Ｏ及びＳから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有する４〜６員飽和又は不飽和ヘテロ環を形成し、前記ヘテロ環はヒドロキシ基、ハロゲン、ニトロ基、アミノ基又はＣ１−Ｃ６アルキル基に置換されてもよく、ただし、Ｒ６は水素、ヒドロキシ基又はＣ１−Ｃ６アルキル基であり；及び／又は
Ｒ３は水素、ハロゲン、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、ヒドロキシメチル基、アミノメチル基又は−ＣＯＲａであり、ただし、ＲａはＯＨ又はＮＲ７Ｒ８であり、Ｒ７とＲ８は独立に水素、ハロゲン及びＮＲ９Ｒ１０から選ばれる一つ又は複数の置換基に任意に置換されるＣ１−Ｃ６アルキル基、及び３−（Ｃ２−Ｃ６アルキニル）−３Ｈ−ジアジリニル基に置換されるＣ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ７とＲ８はそれらが結合する窒素原子と共に、Ｎ、Ｏ及びＳから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有し且つＣ１−Ｃ６アルキル基に任意に置換される４〜６員ヘテロ環を形成し；Ｒ９とＲ１０は独立に水素及びＣ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ９とＲ１０はそれらが結合する窒素原子と共に、Ｎ、Ｏ、Ｓから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有する４〜６員ヘテロ環を形成し；及び／または
ＸはＮＨであり、フェニル基とパラ位又はメタ位で結合する、
請求項１に記載の化合物、その薬学的に許容される塩、プロドラッグ又は溶媒和物。
【請求項３】
Ｒ２は−ＮＲ４Ｒ５であり、Ｒ４とＲ５は独立に水素及びＣ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ４とＲ５はそれらが結合する窒素原子と共に、ＮＲ６、Ｏ及びＳから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有する４〜６員飽和ヘテロ環を形成し、前記ヘテロ環はヒドロキシ基、ハロゲン、ニトロ基、アミノ基又はＣ１−Ｃ６アルキル基に置換されてもよく、ただし、Ｒ６は水素又はＣ１−Ｃ６アルキル基であり；好ましくは、Ｒ４とＲ５はそれらが結合する窒素原子と共に、ＮＲ６及びＯから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有する４〜６員飽和ヘテロ環を形成し、前記ヘテロ環はヒドロキシ基及びＣ１−Ｃ６アルキル基から選ばれる置換基に任意に置換され、ただし、Ｒ６は水素又はＣ１−Ｃ６アルキル基であり；及び／又は
Ｒ３はハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ基又は−ＣＯＲａであり、ＲａはＯＨ又はＮＲ７Ｒ８であり、Ｒ７とＲ８は独立にＮＲ９Ｒ１０に任意に置換されるＣ１−Ｃ６アルキル基、及び３−（Ｃ２−Ｃ６アルキニル）−３Ｈ−ジアジリニル基に置換されるＣ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ７とＲ８はそれらが結合する窒素原子と共に、Ｎ及びＯから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有し且つＣ１−Ｃ６アルキル基に任意に置換される４〜６員飽和ヘテロ環を形成し；Ｒ９とＲ１０は独立に水素及びＣ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ９とＲ１０はそれらが結合する窒素原子と共に、Ｎ及びＯから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有する４〜６員飽和ヘテロ環を形成する、
請求項２に記載の化合物、その薬学的に許容される塩、プロドラッグ又は溶媒和物。
【請求項４】
Ｒ１は水素、ハロゲン又はニトロ基であり；
Ｒ２は−ＮＲ４Ｒ５であり、Ｒ４とＲ５はそれらが結合する窒素原子と共に、ＮＲ６及びＯから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有する４〜６員飽和ヘテロ環を形成し、前記ヘテロ環はヒドロキシ基及びＣ１−Ｃ６アルキル基から選ばれる置換基に任意に置換され、ただし、Ｒ６は水素又はＣ１−Ｃ６アルキル基であり；
Ｒ３はハロゲン又は−ＣＯＲａであり、ＲａはＯＨ又はＮＲ７Ｒ８であり、Ｒ７とＲ８は独立にＮＲ９Ｒ１０に任意に置換されるＣ１−Ｃ６アルキル基、及び３−（Ｃ２−Ｃ６アルキニル）−３Ｈ−ジアジリニル基に置換されるＣ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ７とＲ８はそれらが結合する窒素原子と共に、Ｎ及びＯから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有し且つＣ１−Ｃ６アルキル基に任意に置換される４〜６員飽和ヘテロ環を形成し；Ｒ９とＲ１０は独立に水素及びＣ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ９とＲ１０はそれらが結合する窒素原子と共に、Ｎ及びＯから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有する４〜６員飽和ヘテロ環を形成し；及び
ＸはＮＨであり、フェニル基とパラ位又はメタ位で結合する、
請求項１に記載の化合物、その薬学的に許容される塩、プロドラッグ又は溶媒和物。
【請求項５】
前記化合物は下記式（Ｉ−１）、式（Ｉ−２）又は式（Ｉ−３）で表される構造を有する、請求項１に記載の化合物、その薬学的に許容される塩、プロドラッグ又は溶媒和物。
【化２】
2019515049.tif 000027
式（Ｉ−１）又は式（Ｉ−２）において、
Ｒ１はＨ、ハロゲン及びニトロ基からなる群から選ばれ；
Ｒ２はヒドロキシ基又はＣ１−Ｃ６アルキル基に任意に置換されるモルホリニル基、ピロリジニル基、ピペラジニル基及びアゼチジニル基からなる群から選ばれ；及び
Ｒ３はハロゲン又は−ＣＯＲａであり；ただし、ＲａはＯＨ又はＮＲ７Ｒ８であり、Ｒ７とＲ８は独立にＮＲ９Ｒ１０に任意に置換されるＣ１−Ｃ６アルキル基、及び３−（Ｃ２−Ｃ６アルキニル）−３Ｈ−ジアジリニル基に置換されるＣ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ７とＲ８はそれらが結合する窒素原子と共に、Ｎ及びＯから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有し且つＣ１−Ｃ６アルキル基に任意に置換される４〜６員飽和ヘテロ環を形成し；Ｒ９とＲ１０は独立に水素及びＣ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ９とＲ１０はそれらが結合する窒素原子と共に、Ｎ及びＯから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有する４〜６員飽和ヘテロ環を形成し；
式（Ｉ−３）において、
Ｒ１はＨであり；
Ｒ２はモルホリニル基であり；
ＲａはＯＨ又はＮＲ７Ｒ８であり、Ｒ７とＲ８は独立にＮＲ９Ｒ１０に任意に置換されるＣ１−Ｃ６アルキル基、及び３−（Ｃ２−Ｃ６アルキニル）−３Ｈ−ジアジリニル基に置換されるＣ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ７とＲ８はそれらが結合する窒素原子と共に、Ｎ及びＯから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有し且つＣ１−Ｃ６アルキル基に任意に置換される４〜６員飽和ヘテロ環を形成し；Ｒ９とＲ１０は独立に水素及びＣ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ９とＲ１０はそれらが結合する窒素原子と共に、Ｎ及びＯから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有する４〜６員飽和ヘテロ環を形成する。
【請求項６】
式（Ｉ−１）において、
Ｒ１はＨ、ハロゲン及びニトロ基からなる群から選ばれ；
Ｒ２はモルホリニル基であり；及び
Ｒ３はハロゲン又は−ＣＯＲａであり；ただし、ＲａはＯＨ又はＮＲ７Ｒ８であり、Ｒ７とＲ８は独立にＮＲ９Ｒ１０に任意に置換されるＣ１−Ｃ６アルキル基、及び３−（Ｃ２−Ｃ６アルキニル）−３Ｈ−ジアジリニル基に置換されるＣ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ７とＲ８はそれらが結合する窒素原子と共に、Ｎ及びＯから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有し且つＣ１−Ｃ６アルキル基に任意に置換される４〜６員飽和ヘテロ環を形成し；Ｒ９とＲ１０は独立に水素及びＣ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ９とＲ１０はそれらが結合する窒素原子と共に、Ｎ及びＯから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有する４〜６員飽和ヘテロ環を形成し；
好ましくは、Ｒ１は水素以外の置換基である場合、Ｒ３とそれぞれ独立にフェニル基のメタ位又はパラ位に位置し；
より好ましくは、Ｒ１は水素以外の置換基である場合、フェニル基のメタ位に位置し、Ｒ３はフェニル基のパラ位に位置し；前記飽和ヘテロ環はピペラジニル基、ピペリジニル基、ピロリジニル基及びモルホリニル基からなる群から選ばれる
請求項５に記載の化合物、その薬学的に許容される塩、プロドラッグ又は溶媒和物。
【請求項７】
前記化合物は、
（Ｅ）−１−（４−クロロフェニル）−３−（４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア（Ｌ１）；
（Ｅ）−１−（４−フルオロフェニル）−３−（４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア（Ｌ２）；
（Ｅ）−１−（４−クロロフェニル）−３−（４−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア；
（Ｅ）−１−（４−フルオロフェニル）−３−（４−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア；
（Ｅ）−１−（４−クロロフェニル）−３−（４−（４−（３−ヒドロキシアゼチジン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア；
（Ｅ）−１−（４−クロロフェニル）−３−（４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−（３−クロロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア；
（Ｅ）−１−（４−フルオロフェニル）−３−（４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−（３−クロロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア；
（Ｅ）−１−（４−クロロフェニル）−３−（４−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−６−（３−クロロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア；
（Ｅ）−１−（４−フルオロフェニル）−３−（４−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−６−（３−クロロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア；
（Ｅ）−１−（４−クロロフェニル）−３−（４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−（４−クロロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア；
（Ｅ）−１−（４−フルオロフェニル）−３−（４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−（４−クロロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア；
（Ｅ）−１−（３−フルオロフェニル）−３−（４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−（４−クロロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア；
（Ｅ）−１−（４−クロロフェニル）−３−（４−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−６−（４−クロロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア；
（Ｅ）−１−（４−フルオロフェニル）−３−（４−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−６−（４−クロロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア；
（Ｅ）−１−（３−フルオロフェニル）−３−（４−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−６−（４−クロロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア；
（Ｅ）−１−（４−クロロフェニル）−３−（４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−（３−ニトロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア；
（Ｅ）−１−（４−フルオロフェニル）−３−（４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−（３−ニトロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア；
（Ｅ）−１−（４−クロロフェニル）−３−（４−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−６−（３−ニトロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア；
（Ｅ）−１−（４−フルオロフェニル）−３−（４−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−６−（３−ニトロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア；
（Ｅ）−１−（４−クロロフェニル）−３−（４−（４−ジメチルアミノ−６−（３−ニトロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア；
（Ｅ）−１−（４−クロロフェニル）−３−（４−（４−（テトラヒドロピロール−１−イル）−６−（３−ニトロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア；
（Ｅ）−１−（４−クロロフェニル）−３−（４−（４−（３−ヒドロキシアゼチジン−１−イル）−６−（３−ニトロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア；
（Ｅ）−１−（４−クロロフェニル）−３−（３−（４−（モルホリン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア；
（Ｅ）−１−（４−クロロフェニル）−３−（３−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア；
（Ｅ）−１−（４−クロロフェニル）−３−（３−（４−（モルホリン−１−イル）−６−（３−クロロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア；
（Ｅ）−１−（４−クロロフェニル）−３−（３−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−６−（３−クロロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア；
（Ｅ）−１−（４−クロロフェニル）−３−（３−（４−（モルホリン−１−イル）−６−（３−ニトロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア；
（Ｅ）−１−（４−クロロフェニル）−３−（３−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−６−（３−ニトロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア；
（Ｅ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−（３−（４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア）ベンズアミド；
（Ｅ）−１−（４−（（４−メチルピペリジン−１−イル）ホルミル）フェニル）−３−（４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア；
（Ｅ）−１−（４−（（４−メチルピペラジン−１−イル）ホルミル）フェニル）−３−（４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア；
（Ｅ）−Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−４−（３−（４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア）ベンズアミド；
（Ｅ）−Ｎ−（２−（ジエチルアミノ）エチル）−４−（３−（４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア）ベンズアミド；
（Ｅ）−Ｎ−（３−（ジメチルアミノ）プロピル）−４−（３−（４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア）ベンズアミド；
（Ｅ）−Ｎ−（２−（テトラヒドロピロール−１−イル）エチル）−４−（３−（４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア）ベンズアミド；
（Ｅ）−Ｎ−（２−（ピペリジン−１−イル）エチル）−４−（３−（４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア）ベンズアミド；
（Ｅ）−Ｎ−（２−（モルホリン−１−イル）エチル）−４−（３−（４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア）ベンズアミド；
（Ｅ）−１−（４−メトキシフェニル）−３−（４−（（４−（モルホリン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−イル）オキシ）フェニル）ウレア；
（Ｅ）−１−（４−クロロフェニル）−３−（４−（（４−（モルホリン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−イル）オキシ）フェニル）ウレア；
（Ｅ）−１−（４−フルオロフェニル）−３−（４−（（４−（モルホリン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−イル）オキシ）フェニル）ウレア；
（Ｅ）−Ｎ−（２−（３−（１−ブチン−４−イル）−３Ｈ−ジアジリン−３−イル）エチル）−４−（３−（４−（（４−（モルホリン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジン−２−イル）アミノ）フェニル）ウレア）ベンズアミド；及び
（Ｅ）−１−（４−カルボキシフェニル）−３−（４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア
からなる群から選ばれる、請求項１に記載の化合物、その薬学的に許容される塩、プロドラッグ又は溶媒和物。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれかに記載の化合物、その薬学的に許容される塩、プロドラッグ又は溶媒和物と、薬学的に許容される担体とを含有する医薬組成物。
【請求項９】
請求項１〜７のいずれかに記載の化合物、その薬学的に許容される塩、プロドラッグ又は溶媒和物の、固形腫瘍及び血液腫瘍を治療及び予防するための薬物の調製における使用；
好ましくは、前記固形腫瘍は、結腸癌、膵癌、卵巣癌、胃癌、乳癌、甲状腺癌、肝癌、腎癌、肺癌、前立腺癌、肉腫及び膠腫からなる群から選ばれ；前記血液腫瘍は、白血病及び多発性骨髄腫からなる群から選ばれる。
【請求項１０】
請求項１〜７のいずれかに記載の化合物、その薬学的に許容される塩、プロドラッグ又は溶媒和物の、細胞内の小胞の形成、輸送および細胞外への放出に関連する疾患を診断、治療及び予防する薬物の調製における使用、或いは細胞のメシュオーシスを促進する薬物の調製における使用、或いはビメンチン仲介疾患を治療又は予防する薬物の調製における使用；
好ましくは、前記疾患は、上皮間葉転換に関連する疾患、幹細胞の分化、腫瘍の浸潤性増殖、転移、薬剤耐性と再発、組織の線維化、感染性疾患及び心血管疾患からなる群から選ばれ；
好ましくは、前記疾患は、結腸癌、膵癌、卵巣癌、胃癌、乳癌、甲状腺癌、肝癌、腎癌、肺癌、前立腺癌、肉腫及び膠腫のような固形腫瘍；白血病及び多発性骨髄腫のような血液腫瘍；並びにアテローム性動脈硬化からなる群から選ばれる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一類の２，４，６−三置換−１，３，５−トリアジン（ｓ−トリアジン若しくはｓｙｍ−トリアジン、s-triazineともいう）化合物又はその薬学的に許容される塩、プロドラッグ又は溶媒和物、並びにその製造方法および使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、アポトーシス、壊死及びオートファジー等の通常の死亡形態以外に、「メシュオーシス」（空胞を伴う細胞死、Methuosis）という新規な細胞死形態が発見された。このような死亡形態の特徴は、マクロピノソーム（macropinosome）の空胞が細胞に取り込まれて形成される巨大な液状小胞により、正常の細胞質が転位し、細胞がこれで代謝能と細胞膜完全性を喪失することであるが、アポトーシスに関連する細胞萎縮と核崩壊が無いし、壊死及びオートファジーとも顕著な差異がある（Maltese et al. Methuosis: nonapoptotic cell death associated with vacuolization of macropinosome and endosome compartments. Am J Pathol. 2014;184（6）:1630-42）。メシュオーシスとアポトーシスのメカニズムの相違を鑑みて、細胞メシュオーシスによる薬物は、細胞アポトーシスによる薬物又は他のメカニズムによる薬物に対する腫瘍細胞の耐性を克服できる可能性があり、人類の癌対策の新規手段になる（Robinson et al. Synthesis and evaluation of indole-based chalcones as inducers of methuosis, a novel type of nonapoptotic cell death. J Med Chem. 2012;55（5）:1940-56; Kitambi et al. Vulnerability of glioblastoma cells to catastrophic vacuolization and death induced by a small molecule. Cell. 2014;157(2):313-28; Trabbic et al. Synthesis and biological evaluation of indolyl-pyridinyl- propenones having either methuosis or microtubule disruption activity. J Med Chem. 2015;58（5）:2489-512）。
【０００３】
ビメンチンは間葉細胞であり、結合組織、筋肉、血管内皮及び血液細胞の主要な中間径フィラメントタンパク質を含む。高度な進化的保存性及び異なる発生段階における動的発現はいずれも、ビメンチンの生理的機能の重要性を示す。中間径フィラメントは、微小管及びアクチンフィラメントと共に細胞骨格を構成する。ビメンチンは、細胞の機械的強度を増加することで、細胞の外形、細胞骨格の完全性及び細胞下構造の空間分布の秩序性を維持する作用を奏する以外に、インテグリン（integrin）の機能を調節することで、細胞の接着と移動に影響を与えること；微小管やマイクロフィラメント等のダイニンと結合することで、小胞の膜輸送に影響を与えること；受容体及びプロテインキナーゼの足場としてシグナルの伝達に影響を与えること等もできる（Ivaska et al. Novel functions of vimentin in cell adhesion, migration, and signaling. Exp Cell Res. 2007;313（10）:2050-62）。
ビメンチンは脂質代謝と密切に関連し、リソソームから低比重リポタンパク質（LDL）由来のコレステロールをそのエステル化部位に転送する輸送過程を制御している（Sarria et al. A functional role for vimentin intermediate filaments in the metabolism of lipoprotein-derived cholesterol in human SW-13 cells. J Biol Chem. 1992 Sep 25;267（27）:19455-63）。血管内皮及び平滑筋細胞におけるビメンチンの高発現を鑑みて、ビメンチンを標的としてアテローム性動脈硬化等の心血管疾患を治療又は予防する新規薬物を開発する策は、試す価値があるかもしれない。ビメンチンの発現は、上皮間葉転換（EMT）の標識である。EMTは胚発生や組織修復等の正常な生理的過程だけでなく、器官の線維化や腫瘍の発生・進行等の病理的過程においても、経由しなければならない経路である（Gonzalez et al. Signaling mechanisms of the epithelial-mesenchymal transition. Sci Signal. 2014;7（344）:re8）。従って、ビメンチンを標的としてEMTの過程に介入することで、組織再生を促進し、器官退化に対抗し、組織線維化を治療し、腫瘍転移を防止することなどができる新規薬物を開発する可能性がある（Davis et al. Targeting EMT in cancer: opportunities for pharmacological intervention. Trends Pharmacol Sci. 2014;35（9）:479-88）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Maltese et al. Methuosis: nonapoptotic cell death associated with vacuolization of macropinosome and endosome compartments. Am J Pathol. 2014;184（6）:1630-42
【非特許文献２】Robinson et al. Synthesis and evaluation of indole-based chalcones as inducers of methuosis, a novel type of nonapoptotic cell death.
【非特許文献３】J Med Chem. 2012;55（5）:1940-56
【非特許文献４】Kitambi et al. Vulnerability of glioblastoma cells to catastrophic vacuolization and death induced by a small molecule. Cell. 2014;157(2):313-28
【非特許文献５】Trabbic et al. Synthesis and biological evaluation of indolyl-pyridinyl- propenones having either methuosis or microtubule disruption activity. J Med Chem. 2015;58（5）:2489-512
【非特許文献６】Ivaska et al. Novel functions of vimentin in cell adhesion, migration, and signaling. Exp Cell Res. 2007;313（10）:2050-62
【非特許文献７】Sarria et al. A functional role for vimentin intermediate filaments in the metabolism of lipoprotein-derived cholesterol in human SW-13 cells. J Biol Chem. 1992 Sep 25;267（27）:19455-63
【非特許文献８】Gonzalez et al. Signaling mechanisms of the epithelial-mesenchymal transition. Sci Signal. 2014;7（344）
【非特許文献９】Davis et al. Targeting EMT in cancer: opportunities for pharmacological intervention. Trends Pharmacol Sci. 2014;35（9）:479-88
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本出願は構造活性相関研究により、細胞メシュオーシス作用を誘発する特異的で且つ強力な化合物を獲得し、それに基づいてプローブにより標的タンパク質を釣り出す信頼的で且つ高効率な方法を採用し、メシュオーシスを誘発する化合物の標的タンパク質を分離・同定し、且つそれがビメンチンであることを証明した。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
よって、本出願は、一類の２，４，６−三置換ｓ−トリアジン化合物及びその製造方法、並びにそれらの化合物の、プロテインキナーゼ、ビメンチンの調節に関与し且つ細胞メシュオーシスを誘発するための使用を提供する。
【０００７】
本出願によれば、前記２，４，６−三置換ｓ−トリアジン化合物は下記式（Ｉ）で表される。
【化１】
2019515049.tif 000003
ただし、
Ｒ１は水素、ハロゲン、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、Ｃ１−Ｃ１２アルキル基、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ基、Ｃ１−Ｃ６アルキルアミノ基、ジＣ１−Ｃ６アルキルアミノ基、ヒドロキシメチル基又はアミノメチル基であり；
Ｒ２は−ＮＲ４Ｒ５であり、Ｒ４とＲ５は独立に水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル基及びＣ１−Ｃ６ハロアルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ４とＲ５はそれらが結合する窒素原子と共に、ＮＲ６、Ｏ及びＳから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有する４〜６員飽和又は不飽和ヘテロ環を形成し、前記ヘテロ環はヒドロキシ基、ハロゲン、ニトロ基、アミノ基又はＣ１−Ｃ６アルキル基に置換されてもよく、ただし、Ｒ６は水素、ヒドロキシ基、Ｃ１−Ｃ６アルキル基又はＣ１−Ｃ６ハロアルキル基であり；
Ｒ３は水素、ハロゲン、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、Ｃ１−Ｃ１２アルキル基、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ基、Ｃ１−Ｃ６アルキルアミノ基、ジＣ１−Ｃ６アルキルアミノ基、ヒドロキシメチル基、アミノメチル基又は−ＣＯＲａであり；
ＲａはＯＨ又はＮＲ７Ｒ８であり、Ｒ７とＲ８は独立に水素、ハロゲン及びＮＲ９Ｒ１０から選ばれる一つ又は複数の置換基に任意に置換されるＣ１−Ｃ６アルキル基、及び３−（Ｃ２−Ｃ６アルキニル）−３Ｈ−ジアジリニル基に置換されるＣ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ７とＲ８はそれらが結合する窒素原子と共に、Ｎ、Ｏ及びＳから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有し且つＣ１−Ｃ６アルキル基に任意に置換される４〜６員ヘテロ環を形成し；
Ｒ９とＲ１０は独立に水素及びＣ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ９とＲ１０はそれらが結合する窒素原子と共に、Ｎ、Ｏ、Ｓから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有する４〜６員ヘテロ環を形成し；及び
ＸはＮＨ又はＯであり、フェニル基とメタ位又はパラ位で結合する。
【０００８】
本出願は、式（Ｉ）で表される化合物の薬学的に許容される塩、プロドラッグ又は溶媒和物も含む。
【０００９】
一つ又は複数の実施形態において、Ｒ１は水素、ハロゲン又はニトロ基である。
一つ又は複数の実施形態において、Ｒ２は−ＮＲ４Ｒ５であり、Ｒ４とＲ５は独立に水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル基及びＣ１−Ｃ６ハロアルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ４とＲ５はそれらが結合する窒素原子と共に、ＮＲ６、Ｏ及びＳから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有する４〜６員飽和又は不飽和ヘテロ環を形成し、前記ヘテロ環はヒドロキシ基、ハロゲン、ニトロ基、アミノ基又はＣ１−Ｃ６アルキル基に置換されてもよく、ただし、Ｒ６は水素、ヒドロキシ基又はＣ１−Ｃ６アルキル基である。
一つ又は複数の実施形態において、Ｒ２は−ＮＲ４Ｒ５であり、Ｒ４とＲ５は独立に水素及びＣ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ４とＲ５はそれらが結合する窒素原子と共に、ＮＲ６、Ｏ及びＳから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有する４〜６員飽和ヘテロ環を形成し、前記ヘテロ環はヒドロキシ基、ハロゲン、ニトロ基、アミノ基又はＣ１−Ｃ６アルキル基に置換されてもよく、ただし、Ｒ６は水素又はＣ１−Ｃ６アルキル基である。
【００１０】
一つ又は複数の実施形態において、Ｒ２は−ＮＲ４Ｒ５であり、Ｒ４とＲ５はそれらが結合する窒素原子と共に、ＮＲ６及びＯから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有する４〜６員飽和ヘテロ環を形成し、前記ヘテロ環はヒドロキシ基及びＣ１−Ｃ６アルキル基から選ばれる置換基に任意に置換され、ただし、Ｒ６は水素又はＣ１−Ｃ６アルキル基である。
【００１１】
一つ又は複数の実施形態において、Ｒ３は水素、ハロゲン、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、ヒドロキシメチル基、アミノメチル基又は−ＣＯＲａであり、ただし、ＲａはＯＨ又はＮＲ７Ｒ８であり、Ｒ７とＲ８は独立に水素、ハロゲン及びＮＲ９Ｒ１０から選ばれる一つ又は複数の置換基に任意に置換されるＣ１−Ｃ６アルキル基、及び３−（Ｃ２−Ｃ６アルキニル）−３Ｈ−ジアジリニル基に置換されるＣ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ７とＲ８はそれらが結合する窒素原子と共に、Ｎ、Ｏ及びＳから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有し且つＣ１−Ｃ６アルキル基に任意に置換される４〜６員ヘテロ環を形成し；Ｒ９とＲ１０は独立に水素及びＣ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ９とＲ１０はそれらが結合する窒素原子と共に、Ｎ、Ｏ、Ｓから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有する４〜６員ヘテロ環を形成する。
【００１２】
一つ又は複数の実施形態において、Ｒ３はハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ基又は−ＣＯＲａであり、ＲａはＯＨ又はＮＲ７Ｒ８であり、Ｒ７とＲ８は独立にＮＲ９Ｒ１０に任意に置換されるＣ１−Ｃ６アルキル基、及び３−（Ｃ２−Ｃ６アルキニル）−３Ｈ−ジアジリニル基に置換されるＣ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ７とＲ８はそれらが結合する窒素原子と共に、Ｎ及びＯから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有し且つＣ１−Ｃ６アルキル基に任意に置換される４〜６員飽和ヘテロ環を形成し；Ｒ９とＲ１０は独立に水素及びＣ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ９とＲ１０はそれらが結合する窒素原子と共に、Ｎ及びＯから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有する４〜６員飽和ヘテロ環を形成する。
【００１３】
一つ又は複数の実施形態において、ＸはＮＨであり、フェニル基とパラ位又はメタ位で結合する。
【００１４】
一つ又は複数の実施形態において、前記式（Ｉ）において、
Ｒ１は水素、ハロゲン又はニトロ基であり；
Ｒ２は−ＮＲ４Ｒ５であり、Ｒ４とＲ５は独立に水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル基及びＣ１−Ｃ６ハロアルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ４とＲ５はそれらが結合する窒素原子と共に、ＮＲ６、Ｏ及びＳから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有する４〜６員飽和又は不飽和ヘテロ環を形成し、前記ヘテロ環はヒドロキシ基、ハロゲン、ニトロ基、アミノ基又はＣ１−Ｃ６アルキル基に置換されてもよく、ただし、Ｒ６は水素、ヒドロキシ基又はＣ１−Ｃ６アルキル基であり；及び
Ｒ３は水素、ハロゲン、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、ヒドロキシメチル基、アミノメチル基又は−ＣＯＲａであり、ただし、ＲａはＯＨ又はＮＲ７Ｒ８であり、Ｒ７とＲ８は独立に水素、ハロゲン及びＮＲ９Ｒ１０から選ばれる一つ又は複数の置換基に任意に置換されるＣ１−Ｃ６アルキル基、及び３−（Ｃ２−Ｃ６アルキニル）−３Ｈ−ジアジリニル基に置換されるＣ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ７とＲ８はそれらが結合する窒素原子と共に、Ｎ、Ｏ及びＳから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有し且つＣ１−Ｃ６アルキル基に任意に置換される４〜６員ヘテロ環を形成し；Ｒ９とＲ１０は独立に水素及びＣ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ９とＲ１０はそれらが結合する窒素原子と共に、Ｎ、Ｏ、Ｓから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有する４〜６員ヘテロ環を形成する。
【００１５】
一つ又は複数の実施形態において、前記式（Ｉ）において、
Ｒ１は水素、ハロゲン又はニトロ基であり；
Ｒ２は−ＮＲ４Ｒ５であり、Ｒ４とＲ５はそれらが結合する窒素原子と共に、ＮＲ６及びＯから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有する４〜６員飽和ヘテロ環を形成し、前記ヘテロ環はヒドロキシ基及びＣ１−Ｃ６アルキル基から選ばれる置換基に任意に置換され、ただし、Ｒ６は水素又はＣ１−Ｃ６アルキル基であり；
Ｒ３はハロゲン又は−ＣＯＲａであり、ＲａはＯＨ又はＮＲ７Ｒ８であり、Ｒ７とＲ８は独立にＮＲ９Ｒ１０に任意に置換されるＣ１−Ｃ６アルキル基、及び３−（Ｃ２−Ｃ６アルキニル）−３Ｈ−ジアジリニル基に置換されるＣ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ７とＲ８はそれらが結合する窒素原子と共に、Ｎ及びＯから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有し且つＣ１−Ｃ６アルキル基に任意に置換される４〜６員飽和ヘテロ環を形成し；Ｒ９とＲ１０は独立に水素及びＣ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ９とＲ１０はそれらが結合する窒素原子と共に、Ｎ及びＯから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有する４〜６員飽和ヘテロ環を形成し；及び
ＸはＮＨであり、フェニル基とパラ位又はメタ位で結合する。
【００１６】
ある実施形態において、好ましくは、
Ｒ１は水素、ハロゲン又はニトロ基であり；
Ｒ２は−ＮＲ４Ｒ５であり、Ｒ４、Ｒ５は独立に水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、Ｃ１−Ｃ６ハロアルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ４とＲ５はそれらが結合する窒素原子と共に、ＮＲ６、Ｏ、Ｓから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有する４〜６員飽和又は不飽和ヘテロ環を形成し、前記ヘテロ環はヒドロキシ基、ハロゲン、ニトロ基、アミノ基又はＣ１−Ｃ６アルキル基に置換されてもよく、ただし、Ｒ６は水素、ヒドロキシ基、Ｃ１−Ｃ６アルキル基であり；
Ｒ３は水素、ハロゲン、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、ヒドロキシメチル基、アミノメチル基、−ＣＯＮＲ７Ｒ８であり、ただし、Ｒ７、Ｒ８は独立に水素、任意に置換されるＣ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ７とＲ８はそれらが結合する窒素原子と共に、Ｎ、Ｏ、Ｓから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有する４〜６員ヘテロ環を形成し；ただし、Ｃ１−Ｃ６アルキル基は一つ又は複数のハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキルアミノ基、ジＣ１−Ｃ６アルキルアミノ基に任意に置換されてもよく；
Ｘ基はメタ位及びパラ位のＮＨ又はＯである。
【００１７】
ある実施形態において、より好ましくは、
Ｒ１は水素、ハロゲン又はニトロ基であり；
Ｒ２は−ＮＲ４Ｒ５であり、Ｒ４、Ｒ５は独立に水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ４とＲ５はそれらが結合する窒素原子と共に、ＮＲ６、Ｏ、Ｓから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有する４〜６員飽和ヘテロ環を形成し、前記ヘテロ環はヒドロキシ基、ハロゲン、ニトロ基、アミノ基又はＣ１−Ｃ６アルキル基に置換されてもよく、Ｒ６は水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル基であり；
Ｒ３は水素、ハロゲン、−ＣＯＮＲ７Ｒ８であり、ただし、Ｒ７、Ｒ８は独立に水素、任意に置換されるＣ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ７とＲ８はそれらが結合する窒素原子と共に、Ｎ、Ｏ、Ｓから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有する４〜６員飽和ヘテロ環を形成し；ただし、Ｃ１−Ｃ６アルキル基は一つ又は複数のＣ１−Ｃ６アルキルアミノ基、ジＣ１−Ｃ６アルキルアミノ基に任意に置換されてもよく；
Ｘ基はメタ位及びパラ位のＮＨ又はＯである。
【００１８】
好ましくは、前記式（Ｉ）化合物は、
（Ｅ）−１−（４−クロロフェニル）−３−（４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア（Ｌ１）；
（Ｅ）−１−（４−フルオロフェニル）−３−（４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア（Ｌ２）；
（Ｅ）−１−（４−クロロフェニル）−３−（４−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア（Ｌ３）；
（Ｅ）−１−（４−フルオロフェニル）−３−（４−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア（Ｌ４）；
（Ｅ）−１−（４−クロロフェニル）−３−（４−（４−（３−ヒドロキシアゼチジン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア（Ｌ５）；
（Ｅ）−１−（４−クロロフェニル）−３−（４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−（３−クロロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア（Ｌ６）；
（Ｅ）−１−（４−フルオロフェニル）−３−（４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−（３−クロロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア（Ｌ７）；
（Ｅ）−１−（４−クロロフェニル）−３−（４−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−６−（３−クロロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア（Ｌ８）；
（Ｅ）−１−（４−フルオロフェニル）−３−（４−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−６−（３−クロロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア（Ｌ９）；
（Ｅ）−１−（４−クロロフェニル）−３−（４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−（４−クロロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア（Ｌ１０）；
（Ｅ）−１−（４−フルオロフェニル）−３−（４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−（４−クロロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア（Ｌ１１）；
（Ｅ）−１−（３−フルオロフェニル）−３−（４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−（４−クロロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア（Ｌ１２）；
（Ｅ）−１−（４−クロロフェニル）−３−（４−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−６−（４−クロロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア（Ｌ１３）；
（Ｅ）−１−（４−フルオロフェニル）−３−（４−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−６−（４−クロロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア（Ｌ１４）；
（Ｅ）−１−（３−フルオロフェニル）−３−（４−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−６−（４−クロロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア（Ｌ１５）；
（Ｅ）−１−（４−クロロフェニル）−３−（４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−（３−ニトロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア（Ｌ１６）；
（Ｅ）−１−（４−フルオロフェニル）−３−（４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−（３−ニトロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア（Ｌ１７）；
（Ｅ）−１−（４−クロロフェニル）−３−（４−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−６−（３−ニトロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア（Ｌ１８）；
（Ｅ）−１−（４−フルオロフェニル）−３−（４−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−６−（３−ニトロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア（Ｌ１９）；
（Ｅ）−１−（４−クロロフェニル）−３−（４−（４−ジメチルアミノ−６−（３−ニトロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア（Ｌ２０）；
（Ｅ）−１−（４−クロロフェニル）−３−（４−（４−（テトラヒドロピロール−１−イル）−６−（３−ニトロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア（Ｌ２１）；
（Ｅ）−１−（４−クロロフェニル）−３−（４−（４−（３−ヒドロキシアゼチジン−１−イル）−６−（３−ニトロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア（Ｌ２２）；
（Ｅ）−１−（４−クロロフェニル）−３−（３−（４−（モルホリン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア（Ｌ２３）；
（Ｅ）−１−（４−クロロフェニル）−３−（３−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア（Ｌ２４）；
（Ｅ）−１−（４−クロロフェニル）−３−（３−（４−（モルホリン−１−イル）−６−（３−クロロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア（Ｌ２５）；
（Ｅ）−１−（４−クロロフェニル）−３−（３−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−６−（３−クロロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア（Ｌ２６）；
（Ｅ）−１−（４−クロロフェニル）−３−（３−（４−（モルホリン−１−イル）−６−（３−ニトロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア（Ｌ２７）；
（Ｅ）−１−（４−クロロフェニル）−３−（３−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−６−（３−ニトロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア（Ｌ２８）；
（Ｅ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−（３−（４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア）ベンズアミド（Ｌ２９）；
（Ｅ）−１−（４−（（４−メチルピペリジン−１−イル）ホルミル）フェニル）−３−（４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア（Ｌ３０）；
（Ｅ）−１−（４−（（４−メチルピペラジン−１−イル）ホルミル）フェニル）−３−（４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア（Ｌ３１）；
（Ｅ）−Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−４−（３−（４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア）ベンズアミド（Ｌ３２）；
（Ｅ）−Ｎ−（２−（ジエチルアミノ）エチル）−４−（３−（４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア）ベンズアミド（Ｌ３３）；
（Ｅ）−Ｎ−（３−（ジメチルアミノ）プロピル）−４−（３−（４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア）ベンズアミド（Ｌ３４）；
（Ｅ）−Ｎ−（２−（テトラヒドロピロール−１−イル）エチル）−４−（３−（４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア）ベンズアミド（Ｌ３５）；
（Ｅ）−Ｎ−（２−（ピペリジン−１−イル）エチル）−４−（３−（４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア）ベンズアミド（Ｌ３６）；
（Ｅ）−Ｎ−（２−（モルホリン−１−イル）エチル）−４−（３−（４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア）ベンズアミド（Ｌ３７）；
（Ｅ）−１−（４−メトキシフェニル）−３−（４−（（４−（モルホリン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−イル）オキシ）フェニル）ウレア（Ｌ３８）；
（Ｅ）−１−（４−クロロフェニル）−３−（４−（（４−（モルホリン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−イル）オキシ）フェニル）ウレア（Ｌ３９）；
（Ｅ）−１−（４−フルオロフェニル）−３−（４−（（４−（モルホリン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−イル）オキシ）フェニル）ウレア（Ｌ４０）；
（Ｅ）−Ｎ−（２−（３−（１−ブチン−４−イル）−３Ｈ−ジアジリン−３−イル）エチル）−４−（３−（４−（（４−（モルホリン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジン−２−イル）アミノ）フェニル）ウレア）ベンズアミド（７９）；及び
（Ｅ）−１−（４−カルボキシフェニル）−３−（４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア（１４）
を含む。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】異なる種類の腫瘍細胞に対する化合物の生体外抑制作用。 異なる構造特徴を持つ８つの化合物（＃３８〜＃４５、順番にＬ２０、Ｌ２１、Ｌ１６、Ｌ１８、Ｌ１４、Ｌ１０、Ｌ１３及びＬ１１である）を選択し、異なる細胞から由来する１１種類の腫瘍細胞に対し、異なる腫瘍細胞における同一の化合物の活性、及び異なる構造特徴を持つ化合物に対する同一の腫瘍の感受性を計測した。それぞれの化合物について、カラムは左から右へ、順番にＨ５２２、ＨＣＴ１５、Ｈｅｌａ、ＨｅｐＧ２、ＨＴ１０８０、ＫＧ１、ＬＮＣａｐ、ＭＣＦ７、ＯＶＣＡＲ３、ＳＫ−ｍｅｌ２８及びＵ８７に対するものである。データは３つの独立な実験から由来するものであり、平均値±標準偏差として表記される。
【図２】腫瘍細胞の空胞化。 １０３ヒト結腸腺癌細胞（ＨＣＴ１５）又はヒト脳膠腫細胞（Ｕ８７）と、コントロールとしての溶媒ＤＭＳＯ又は１００ナノモルの＃４０化合物（Ｌ１６）とを含有する１００マイクロリットルの培地（ＲＰＭＩ１６４０、２ミリモルのグルタミン、１０％ウシ胎児血清）を９６ウェル細胞培養プレートに接種し、５％ＣＯ２、３７ｏＣで９６時間培養した後、相差顕微鏡で細胞形態を撮影した。 １００ナノモルの＃４０化合物で処理されたＨＣＴ５細胞（右上）及びＵ８７細胞（右下）はいずれも顕著に空胞化した。
【図３】供試化合物の細胞増殖抑制能と細胞空胞化誘発能は関連性が無い。 ３７つの化合物（Ｌ１〜Ｌ３７）のヒト膠腫Ｕ８７細胞に対する増殖抑制能と空胞化誘発能を計測した。 ＃５０化合物（Ｌ１）は最も強力な細胞空胞化誘発能を有する。
【図４】プローブにより標的タンパク質を釣り出すプロトコルの概念図。 プローブによる釣り出しの過程は、プローブ化合物が生細胞のタンパク質と原位置で特異的に結合することと、プローブ化合物の感光性基がＵＶ照射で標的タンパク質と原位置で共有結合により架橋することと、プローブ化合物のアルキニル基が分離化合物のアジド基とクリック反応により特異的に連結することと、分離化合物のビオチンとストレプトアビジン−アガロースビーズによってプローブ化合物と特異的に結合する標的タンパク質を釣り出すことと、を含む。
【図５】プローブにより標的タンパク質を釣り出すツール化合物。 試験を行った化合物のうち、＃５０化合物の細胞空胞化誘発能が最も強力である。 構造活性相関に対する解析によれば、図面に示される＃５０化合物の部位に感光性基を連結してプローブである＃７９化合物を得ることで、＃５０化合物の生物的活性を影響しないかもしれない。 実験によっても証明されたように、＃７９化合物は＃５０化合物と同様な細胞表現型を誘発できる。固相分離に有利となり、非特異性を低減させるために、設計される＃８０化合物は、ビオチンとクリック反応用のアジド基とを連結する長鎖を含む。
【図６】標的タンパク質の分離と同定。 ＃７９化合物をプローブとして標的タンパク質と細胞内で原位置で結合させ、且つ光により共有結合を促進し、さらに＃８０化合物と反応させることで、標的タンパク質を固相分離精製した。 Ａ．左：ウェスタンブロッティングにより検出された、＃７９化合物と特異的に結合できるタンパク質（矢印で示されるもの）；右：クマシーブルー染色により示された、ＰＡＧＥゲル電気泳動で分離された特異的な標的タンパク質。 Ｂ．標的タンパク質のＭＡＬＤＩ質量分析ペプチドマッピング及び配列解析（ＭＡＬＤＩ−ＭＳ／ＭＳ）であり、データベースにおける既知タンパク質の配列と一致する。 太字で下線の部分は一致する配列である。 分離された約６０ＫＤ及び約２００ＫＤの２つのタンパク質は、同一の既知タンパク質の配列と一致する(SEQ ID NO:1)。 Ｃ．一致するタンパク質の情報から分かるように、化合物の標的タンパク質はビメンチン（vimentin）である。
【図７−１】＃５０化合物と標的タンパク質のドッキング結果。 Ａ：ＰＤＢデータベース（protein data bank）から由来する四量体ビメンチンである３ＫＬＴ（該タンパク質の登録番号であり、中央の球状部分は該タンパク質の活性領域である）；Ｂ：ドッキング用の＃５０化合物；Ｃ：ソフトウェアＤｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｓｔｕｄｉｏ  ３．０及びそれにおけるＬｉｂＤｏｃｋドッキング方法を用いて、３ＫＬＴと＃５０化合物をドッキングして得られるベストテンの＃５０化合物の立体配座の採点結果。
【図７−２】Ｄ：＃５０化合物の点数の一番高い立体配座（紫赤色で示される）とビメンチンの作用の図；Ｅ：タンパク質を除去した後で＃５０化合物と水素結合を形成するアミノ酸、２つのアミノ酸：Ａｒｇ２７３及びＴｙｒ２７６は＃５０化合物におけるトリアジン環と水素結合を形成する。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本出願の範囲内において、上記各実施形態に限定される各技術特徴（例えば各基のそれぞれの範囲）及び以下（例えば実施例）で具体的に説明される各技術特徴はいずれも、互いに組み合わせて好ましい技術方案を構成できることは、理解すべきである。
【００２１】
本出願において、「アルキル基」とは、Ｃ１−Ｃ１２アルキル基、例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｉ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｉ−ブチル基、ｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基等のようなＣ１−Ｃ６アルキル基を指す。
【００２２】
「ヘテロ環」とは、Ｎ、Ｏ及びＳから選ばれるヘテロ原子を任意に含有する４〜６員ヘテロ環を指す。ヘテロ環は飽和ヘテロ環又は不飽和ヘテロ環であってもよい。例示的なヘテロ環は、例えばモルホリニル基、ピロリジニル基、ピペラジニル基、ピペリジニル基、アゼチジニル基、ピラゾリル基等を含むが、それらに限定されるものではない。
【００２３】
「ハロゲン」は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩを含む。「カルボキシ基」とは、−ＣＯＯＨを指す。
【００２４】
「３−（Ｃ２−Ｃ６アルキニル）−３Ｈ−ジアジリニル基」において、Ｃ２−Ｃ６アルキニル基のアルキニル基の位置は通常１位にある。ある実施形態において、前記「３−（Ｃ２−Ｃ６アルキニル）−３Ｈ−ジアジリニル基」は「３−（１−ブチン−４−イル）−３Ｈ−ジアジリン−３−イル基」である。
【００２５】
本出願において、ＮＲ７Ｒ８及びＮＲ９Ｒ１０はモノＣ１−Ｃ６アルキルアミノ基又はジＣ１−Ｃ６アルキルアミノ基であってもよく、前記Ｃ１−Ｃ６アルキル基は任意に置換されてもよく、例えば一つ又は複数のハロゲン、モノＣ１−Ｃ６アルキルアミノ基又はジＣ１−Ｃ６アルキルアミノ基に置換され、或いはＮと任意の他のＮ又はＯとを含有する４〜６員飽和ヘテロ環に置換されてもよい。それらのヘテロ環は、ピペリジニル基、ピペラジニル基、ピロリジニル基、モルホリニル基等を含むが、それらに限定されるものではない。前記ヘテロ環は任意に置換されてもよく、例えばＣ１−Ｃ６アルキル基に置換されてもよい。
【００２６】
本出願において、基が置換された場合、置換基の数は例えば１、２、３又は４などであってもよい。通常、特に断らない限り、置換基は、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、アミノ基、モノＣ１−Ｃ６アルキルアミノ基、ジＣ１−Ｃ６アルキルアミノ基、ニトロ基、３−（Ｃ２−Ｃ６アルキニル）−３Ｈ−ジアジリニル基、ヘテロ環基（例えばモルホリニル基、ピロリジニル基、ピペラジニル基、ピペリジニル基、アゼチジニル基、ピラゾリル基等）及びＣ６−Ｃ１４芳基（例えばフェニル）等からなる群から選ばれるものであってもよい。
【００２７】
また、本出願に用いられる「異性体」、「ラセミ体」、「プロドラッグ」、「溶媒和物」のような関連用語は、本分野における前記用語の一般的な意味と顕著な相違が無い。当業者ならそれらの用語の意味を知っているはず。例えば、用語の「異性体」とは、分子の組成が同一であるが、構造と性質が異なる２種類又は複数種の化合物のうちのひとつを指す。用語の「ラセミ体」とは、旋光性を有するキラル分子とそのエナンチオマーの等モル量混合物を指す。用語の「プロドラッグ」は、ドラッグ前駆体、薬物前駆体、前駆体薬物等とも言われ、生体内で変換された後で薬理的作用を有するようになる化合物を指す。用語の「溶媒和物」とは、溶媒と化合物からなる混合物を指す。
【００２８】
本出願は腫瘍の可塑性と不均一性に対し、腫瘍細胞の増殖と死亡に明確に関連する複数のシグナル伝達経路を標的として、それらのシグナル伝達経路に作用する標的分子の薬効基を導入し、一類の新規化合物、即ちジアリールウレア、アリールビニル基及び飽和アザ（オキサ)ヘテロ環から置換によって形成されるｓ−トリアジン化合物を提出した；それらの化合物の構造は下記式（Ｉ）で表される。
【化２】
2019515049.tif 000004
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＸは前記のようである。
ある実施形態において、Ｒ１は水素、ハロゲン又はニトロ基であり；より好ましくはＨ、Ｆ、Ｃｌ又はニトロ基である。
【００２９】
本出願の各構造式において、Ｒ１は水素以外の基である場合、通常はベンゼン環のメタ位又はパラ位に位置する。
【００３０】
ある実施形態において、Ｒ２において、Ｒ４とＲ５は独立に水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル基及びＣ１−Ｃ６ハロアルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ４とＲ５はそれらが結合する窒素原子と共に、ＮＲ６、Ｏ及びＳから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有する４〜６員飽和又は不飽和ヘテロ環を形成し、前記ヘテロ環はヒドロキシ基、ハロゲン、ニトロ基、アミノ基又はＣ１−Ｃ６アルキル基に置換されてもよく、ただし、Ｒ６は水素、ヒドロキシ基又はＣ１−Ｃ６アルキル基である。ある実施形態において、Ｒ４とＲ５は独立に水素及びＣ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ４とＲ５はそれらが結合する窒素原子と共に、ＮＲ６、Ｏ及びＳから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有する４〜６員飽和ヘテロ環を形成し、前記ヘテロ環はヒドロキシ基、ハロゲン、ニトロ基、アミノ基又はＣ１−Ｃ６アルキル基に置換されてもよく、ただし、Ｒ６は水素又はＣ１−Ｃ６アルキル基である。ある実施形態において、Ｒ２は−ＮＲ４Ｒ５であり、Ｒ４とＲ５はそれらが結合する窒素原子と共に、ＮＲ６及びＯから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有する４〜６員飽和ヘテロ環を形成し、前記ヘテロ環はヒドロキシ基及びＣ１−Ｃ６アルキル基から選ばれる置換基に任意に置換され、ただし、Ｒ６は水素又はＣ１−Ｃ６アルキル基である。ある実施形態において、前記４〜６員飽和ヘテロ環は、モルホリニル基、ピロリジニル基、ピペラジニル基、ピペリジニル基及びアゼチジニル基を含むが、それらに限定されるものではない。
【００３１】
ある実施形態において、Ｒ３は水素、ハロゲン、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、ヒドロキシメチル基、アミノメチル基又は−ＣＯＲａであり、ただし、ＲａはＯＨ又はＮＲ７Ｒ８であり、Ｒ７とＲ８は独立に水素、ハロゲン及びＮＲ９Ｒ１０から選ばれる一つ又は複数の置換基に任意に置換されるＣ１−Ｃ６アルキル基、及び３−（Ｃ２−Ｃ６アルキニル）−３Ｈ−ジアジリニル基に置換されるＣ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ７とＲ８はそれらが結合する窒素原子と共に、Ｎ、Ｏ及びＳから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有し且つＣ１−Ｃ６アルキル基に任意に置換される４〜６員ヘテロ環を形成し；Ｒ９とＲ１０は独立に水素及びＣ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ９とＲ１０はそれらが結合する窒素原子と共に、Ｎ、Ｏ、Ｓから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有する４〜６員ヘテロ環を形成する。ある実施形態において、Ｒ３はハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ基又は−ＣＯＲａであり、ＲａはＯＨ又はＮＲ７Ｒ８であり、Ｒ７とＲ８は独立にＮＲ９Ｒ１０に任意に置換されるＣ１−Ｃ６アルキル基、及び３−（Ｃ２−Ｃ６アルキニル）−３Ｈ−ジアジリニル基に置換されるＣ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ７とＲ８はそれらが結合する窒素原子と共に、Ｎ及びＯから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有し且つＣ１−Ｃ６アルキル基に任意に置換される４〜６員飽和ヘテロ環を形成し；Ｒ９とＲ１０は独立に水素及びＣ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ９とＲ１０はそれらが結合する窒素原子と共に、Ｎ及びＯから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有する４〜６員飽和ヘテロ環を形成する。ある実施形態において、Ｒ７とＲ８はそれらが結合する窒素原子と共に形成されるヘテロ環、並びにＲ９とＲ１０はそれらが結合する窒素原子と共に形成されるヘテロ環は、ピペリジニル基、ピペラジニル基、ピロリジニル基及びモルホリニル基を含むが、それらに限定されるものではない。
【００３２】
本出願の各構造式において、Ｒ３はＨ以外の置換基である場合、通常はフェニル基のメタ位又はパラ位に位置する。
【００３３】
ある実施形態において、ＸはＮＨであり、フェニル基とパラ位又はメタ位で結合する。他の実施形態において、ＸはＯであり、フェニル基とパラ位で結合する。
【００３４】
前記のように、本出願の各実施形態における各置換基又は各技術特徴は、式（Ｉ）の構造範囲内で任意に組み合わせてもよい。よって、一例を挙げると、ある実施形態において、前記式（Ｉ）において：Ｒ１は水素、ハロゲン又はニトロ基であり；Ｒ２は−ＮＲ４Ｒ５であり、Ｒ４とＲ５は独立に水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル基及びＣ１−Ｃ６ハロアルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ４とＲ５はそれらが結合する窒素原子と共に、ＮＲ６、Ｏ及びＳから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有する４〜６員飽和又は不飽和ヘテロ環を形成し、前記ヘテロ環はヒドロキシ基、ハロゲン、ニトロ基、アミノ基又はＣ１−Ｃ６アルキル基に置換されてもよく、ただし、Ｒ６は水素、ヒドロキシ基又はＣ１−Ｃ６アルキル基であり；及びＲ３は水素、ハロゲン、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、ヒドロキシメチル基、アミノメチル基又は−ＣＯＲａであり、ただし、ＲａはＯＨ又はＮＲ７Ｒ８であり、Ｒ７とＲ８は独立に水素、ハロゲン及びＮＲ９Ｒ１０から選ばれる一つ又は複数の置換基に任意に置換されるＣ１−Ｃ６アルキル基、及び３−（Ｃ２−Ｃ６アルキニル）−３Ｈ−ジアジリニル基に置換されるＣ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ７とＲ８はそれらが結合する窒素原子と共に、Ｎ、Ｏ及びＳから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有し且つＣ１−Ｃ６アルキル基に任意に置換される４〜６員ヘテロ環を形成し；Ｒ９とＲ１０は独立に水素及びＣ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いＲ９とＲ１０はそれらが結合する窒素原子と共に、Ｎ、Ｏ、Ｓから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有する４〜６員ヘテロ環を形成する。他の実施形態において、前記式（Ｉ）において：Ｒ１は水素、ハロゲン又はニトロ基であり；Ｒ２は−ＮＲ４Ｒ５であり、Ｒ４とＲ５はそれらが結合する窒素原子と共に、ＮＲ６及びＯから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有する４〜６員飽和ヘテロ環を形成し、前記ヘテロ環はヒドロキシ基及びＣ１−Ｃ６アルキル基から選ばれる置換基に任意に置換され、ただし、Ｒ６は水素又はＣ１−Ｃ６アルキル基であり；Ｒ３はハロゲン又は−ＣＯＲａであり、ＲａはＯＨ又はＮＲ７Ｒ８であり、Ｒ７とＲ８は独立にＮＲ９Ｒ１０に任意に置換されるＣ１−Ｃ６アルキル基、及び３−（Ｃ２−Ｃ６アルキニル）−３Ｈ−ジアジリニル基に置換されるＣ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ７とＲ８はそれらが結合する窒素原子と共に、Ｎ及びＯから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有し且つＣ１−Ｃ６アルキル基に任意に置換される４〜６員飽和ヘテロ環を形成し；Ｒ９とＲ１０は独立に水素及びＣ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ９とＲ１０はそれらが結合する窒素原子と共に、Ｎ及びＯから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有する４〜６員飽和ヘテロ環を形成し；及びＸはＮＨであり、フェニル基とパラ位又はメタ位で結合する。
【００３５】
ある実施形態において、本出願における式（Ｉ）化合物は下記式（Ｉ−１）又は下記式（Ｉ−２）で表される構造を有する：
【化３】
2019515049.tif 000005
式中、
Ｒ１はＨ、ハロゲン及びニトロ基からなる群から選ばれ；
Ｒ２はヒドロキシ基又はＣ１−Ｃ６アルキル基に任意に置換されるモルホリニル基、ピロリジニル基、ピペラジニル基及びアゼチジニル基からなる群から選ばれ；及び
Ｒ３はハロゲン又は−ＣＯＲａであり；ただし、ＲａはＯＨ又はＮＲ７Ｒ８であり、Ｒ７とＲ８は独立にＮＲ９Ｒ１０に任意に置換されるＣ１−Ｃ６アルキル基、及び３−（Ｃ２−Ｃ６アルキニル）−３Ｈ−ジアジリニル基に置換されるＣ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ７とＲ８はそれらが結合する窒素原子と共に、Ｎ及びＯから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有し且つＣ１−Ｃ６アルキル基に任意に置換される４〜６員飽和ヘテロ環を形成し；Ｒ９とＲ１０は独立に水素及びＣ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ９とＲ１０はそれらが結合する窒素原子と共に、Ｎ及びＯから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有する４〜６員飽和ヘテロ環を形成する。
【００３６】
前記式（Ｉ−２）のある実施形態において、Ｒ３はハロゲンである。
【００３７】
ある実施形態において、本出願における式（Ｉ）化合物は下記式（Ｉ−３）で表される構造を有する：
【化４】
2019515049.tif 000006
式中、
Ｒ１はＨであり；
Ｒ２はモルホリニル基であり；
ＲａはＯＨ又はＮＲ７Ｒ８であり、Ｒ７とＲ８は独立にＮＲ９Ｒ１０に任意に置換されるＣ１−Ｃ６アルキル基、及び３−（Ｃ２−Ｃ６アルキニル）−３Ｈ−ジアジリニル基に置換されるＣ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ７とＲ８はそれらが結合する窒素原子と共に、Ｎ及びＯから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有し且つＣ１−Ｃ６アルキル基に任意に置換される４〜６員飽和ヘテロ環を形成し；Ｒ９とＲ１０は独立に水素及びＣ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ９とＲ１０はそれらが結合する窒素原子と共に、Ｎ及びＯから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有する４〜６員飽和ヘテロ環を形成する。
【００３８】
式（Ｉ−１）のある実施形態において、Ｒ１はＨ、ハロゲン及びニトロ基からなる群から選ばれ；Ｒ２はモルホリニル基であり；Ｒ３はハロゲン又は−ＣＯＲａであり；ただし、ＲａはＯＨ又はＮＲ７Ｒ８であり、Ｒ７とＲ８は独立にＮＲ９Ｒ１０に任意に置換されるＣ１−Ｃ６アルキル基、及び３−（Ｃ２−Ｃ６アルキニル）−３Ｈ−ジアジリニル基に置換されるＣ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ７とＲ８はそれらが結合する窒素原子と共に、Ｎ及びＯから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有し且つＣ１−Ｃ６アルキル基に任意に置換される４〜６員飽和ヘテロ環を形成し；Ｒ９とＲ１０は独立に水素及びＣ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選ばれ、或いはＲ９とＲ１０はそれらが結合する窒素原子と共に、Ｎ及びＯから選ばれる他のヘテロ原子を任意に含有する４〜６員飽和ヘテロ環を形成する。ある実施形態において、それらの化合物の中で、Ｒ１（水素以外の置換基である場合）とＲ３はそれぞれ独立にフェニル基のメタ位又はパラ位に位置する。ある実施形態において、それらの化合物の中で、Ｒ１は水素以外の置換基である場合、フェニル基のメタ位に位置し、Ｒ３はフェニル基のパラ位に位置する。ある実施形態において、それらの化合物の中で、前記飽和ヘテロ環はピペラジニル基、ピペリジニル基、ピロリジニル基及びモルホリニル基を含むが、それらに限定されるものではない。ある実施形態において、それらの化合物は、腫瘍細胞中で小胞の蓄積を引き起こし、細胞のメシュオーシスを誘発することに特に有用である。
【００３９】
本出願における２，４，６−三置換ｓ−トリアジン化合物は、以下の方法を用いて合成できる：
合成スキーム１：ｍ−フェニレンジアミン又はｐ−フェニレンジアミン（１）を開始原料として、（Ｂｏｃ）２Ｏ（二炭酸ジ−ｔ−ブチル）で一つのアミノ基を保護して、中間体２を得て、各種の置換フェニルイソシアネートと反応させて、中間体３を得て、トリフルオロ酢酸でＢｏｃ（ｔ−ブトキシカルボニル）保護基を離脱させて、中間体４を得て；シアヌル酸クロリド（５）とメチルマグネシウムブロミド（ＣＨ３ＭｇＢｒ）を反応させて、中間体６を得て、濃塩酸還流条件下で各種の置換ベンズアルデヒドと反応させて、中間体７を得て、オキシ塩化リンで塩素化して８を得て、それと４からジイソプロピルエチルアミンの触媒作用で中間体９を得て、９とモルホリンやメチルピペラジン等の複素環アミンからそれぞれジイソプロピルエチルアミンの触媒作用で標的化合物を得る。
【００４０】
合成スキーム１の反応式は以下のようである。
【化５】
2019515049.tif 000007
ただし、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は前記のようである。
前記合成スキームの反応式における試薬は、（ａ）塩基、好ましくは炭酸カリウム、（Ｂｏｃ）２Ｏ、水、テトラヒドロフラン、ＤＭＦ；（ｂ）置換フェニルイソシアネート、ジクロロメタン；（ｃ）トリフルオロ酢酸、ジクロロメタン；（ｄ）メチルマグネシウムブロミドのテトラヒドロフラン溶液；（ｅ）置換ベンズアルデヒド、濃塩酸；（ｆ）オキシ塩化リン；（ｇ）ジイソプロピルエチルアミン、テトラヒドロフラン；（ｈ）複素環アミン、ジイソプロピルエチルアミン、テトラヒドロフランである。
【００４１】
合成スキーム１の標的化合物の構造式は、以下のものを含んでもよい：
【化６】
2019515049.tif 000008
【表１−１】
2019515049.tif 000009
【表１−２】
2019515049.tif 000010
【化７】
2019515049.tif 000011
【表２】
2019515049.tif 000012
【００４２】
合成スキーム２：ｍ−フェニレンジアミン又はｐ−フェニレンジアミン（１）を開始原料として、（Ｂｏｃ）２Ｏで一つのアミノ基を保護して、中間体２を得て、ｐ−アミノ安息香酸メチルとトリホスゲンの作用下で反応させて、中間体１０を得て、トリフルオロ酢酸でＢｏｃ保護基を離脱させて、中間体１１を得て；シアヌル酸クロリド（５）とメチルマグネシウムブロミドを反応させて、中間体６を得て、濃塩酸還流条件下で各種の置換ベンズアルデヒドと反応させて、中間体７を得て、オキシ塩化リンで塩素化して８を得て、それと１１からジイソプロピルエチルアミンの触媒作用で中間体１２を得て、さらにそれとモルホリンやメチルピペラジン等の複素環アミンからそれぞれジイソプロピルエチルアミンの触媒作用で化合物１３を得て、水酸化リチウム一水和物の作用下で加水分解させて、塩酸で酸型化させることで、中間体１４を得て、最終にＨＯＢｔ（１−ヒドロキシベンゾトリアゾール）、ＥＤＣｌ［１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩］の触媒作用でそれぞれ各種のアミンと縮合して、標的化合物を得る。
【００４３】
合成スキーム２の反応式は以下のようである。
【化８】
2019515049.tif 000013
ただし、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は前記のようである。
【００４４】
前記合成スキームの反応式における試薬は、（ａ）塩基、好ましくは炭酸カリウム、（Ｂｏｃ）２Ｏ、水、テトラヒドロフラン、ＤＭＦ；（ｂ）トリホスゲン、トリエチルアミン、ｐ−アミノ安息香酸メチル、ジクロロメタン；（ｃ）トリフルオロ酢酸、ジクロロメタン；（ｄ）メチルマグネシウムブロミドのテトラヒドロフラン溶液；（ｅ）置換ベンズアルデヒド、濃塩酸、１２時間の還流；（ｆ）オキシ塩化リン、１６時間の還流；（ｇ）ジイソプロピルエチルアミン、テトラヒドロフラン；（ｈ）複素環アミン、ジイソプロピルエチルアミン、テトラヒドロフラン；（ｉ）水酸化リチウム一水和物、テトラヒドロフラン、水、濃塩酸；（ｊ）ＨＯＢｔ、ＥＤＣＩ、トリエチルアミン、置換アミン、ＤＭＦである。
【００４５】
合成スキーム２の標的化合物の構造式は、以下の例で表わされる：
【化９】
2019515049.tif 000014
【表３】
2019515049.tif 000015
【００４６】
合成スキーム３：シアヌル酸クロリド（５）とメチルマグネシウムブロミドを反応させて、中間体６を得て、濃塩酸還流条件下で各種の置換ベンズアルデヒドと反応させて、中間体７を得て、オキシ塩化リンで塩素化して８を得て、それとｐ−ニトロフェノールナトリウムから中間体１５を得て、１５とモルホリンやメチルピペラジン等の複素環アミンからそれぞれジイソプロピルエチルアミンの触媒作用で化合物１６を得る。化合物１６を鉄粉、塩化アンモニウム系中で還元させて、中間体１７を得て、各種の置換フェニルイソシアネートと反応させて、標的化合物を得る。
【００４７】
合成スキーム３の反応式は以下のようである。
【化１０】
2019515049.tif 000016
ただし、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は前記のようである。ある実施形態において、Ｒ１は水素；ハロゲン、ニトロ基等の電子吸引性基；アルキル基、アミノ基、ヒドロキシ基、ヒドロキシメチル基、アミノメチル基、アミノホルミル基等の電子供与性基であり；Ｒ２はアミノ基、アルキルアミノ基、アリールアミノ基、ヘテロアリールアミノ基であり；Ｒ３は水素；ハロゲン、ニトロ基等の電子吸引性基；アルキル基、アミノ基、ヒドロキシ基、ヒドロキシメチル基、アミノメチル基等の電子供与性基である。
前記合成スキームの反応式における試薬は、（ａ）メチルマグネシウムブロミドのテトラヒドロフラン溶液；（ｂ）置換ベンズアルデヒド、濃塩酸、１２時間の還流；（ｃ）オキシ塩化リン、１６時間の還流；（ｄ）水、テトラヒドロフラン、ｐ−ニトロフェノールナトリウム；（ｅ）複素環アミン、ジイソプロピルエチルアミン、テトラヒドロフラン；（ｆ）鉄粉、塩化アンモニウム、エタノール、水、３時間の還流；（ｇ）置換フェニルイソシアネート、ジクロロメタンである。
【００４８】
合成スキーム３の標的化合物の構造式は、以下の例で表わされる：
【化１１】
2019515049.tif 000017
【表４】
2019515049.tif 000018
【００４９】
前記化合物の具体的な取り扱い手順は実施例で詳細に説明する。
当業者は収率を向上させるように前記手順を変更することができ、本分野の基本的な知識によって合成スキームを決定でき、例えば反応物、溶媒及び温度を選択でき、各種の通常の保護基により副反応の発生を避けて収率を向上させることができる。
【００５０】
本出願は、式（Ｉ）化合物の薬学的に許容される塩、プロドラッグ又は溶媒和物も含む。薬学的に許容される塩の例は、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、硫酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、マンデル酸塩及び蓚酸塩のような無機及び有機酸塩；並びにナトリウムヒドロキシド、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ、トロメタミン）及びＮ−メチルグルカミンのような塩基と形成される無機及び有機塩基塩を含む。プロドラッグの例は、カルボン酸含有化合物の単純エステル；ヒドロキシ基含有化合物のエステル；アミノ基含有化合物のイミン；アミノ基含有化合物のカルバミン酸エステル；アルコール含有化合物のアセタール又はケタールを含む。
【００５１】
本出願は、式（Ｉ）化合物の薬学的に許容される塩、プロドラッグ又は溶媒和物を含有する医薬組成物も含む。医薬組成物は、さらに医薬組成物の調製に通常適用される各種の薬学的に許容される担体を含有してもよい。本出願において、「薬学的に許容される担体」とは、固体、半固体、液状充填剤、希釈剤、コーティング材、製剤佐剤又は賦形剤のような不活性成分を指し、本出願の化合物と併用して、対象に投与される「医薬組成物」を構成する。薬学的に許容される担体の使用時の投与量及び濃度は、投与対象にとって無毒であり、且つ製剤における他の成分と相溶できる。薬学的に許容される担体は、適用される製剤にとって適切である。例えば、治療剤を経口投与すると、担体はゲルカプセルであってもよい。治療剤を皮下投与すると、担体は皮膚に刺激を与えず且つ注射部位に反応を引き起こさないものが望ましい。医薬組成物は任意の適切な製剤形態、例えばタブレット剤、錠剤及びカプセルであってもよい。
【００５２】
通常、医薬組成物は、治療又は予防有効量の本出願の（Ｉ）化合物の薬学的に許容される塩、プロドラッグ又は溶媒和物を含有する。本出願において、「有効量」とは、疾患の予防又は治療で有効に治療又は予防をできる前記化合物、その薬学的に許容される塩、プロドラッグ又は溶媒和物の量を指す。該「有効量」は、投与される活性成分、投与形態、疾患及びその重篤度、健康、年齢、体重、家族歴、遺伝子組成、病理的進行段階、投与前に及び投与と同時に行われる治療の類型等、及び治療する対象の他の個体的特徴に応じて変更できる。
【００５３】
本出願に開示される化合物は、複数種の異なるタイプの腫瘍細胞に対して強力な抑制作用を奏する。よって、本出願の式（Ｉ）化合物及び式（Ｉ−１）、（Ｉ−２）と（Ｉ−３）化合物は、各種の固形腫瘍と血液腫瘍の予防及び治療に適用することができ、肺癌（例えば非小細胞肺癌）、結腸癌、子宮頸癌、肝癌、線維肉腫、赤白血病、前立腺癌、乳癌、膵癌、卵巣癌、黒色腫及び脳膠腫等を含むが、それらに限定されるものではない。
【００５４】
本出願のある化合物は、腫瘍細胞の非アポトーシス死亡であるメシュオーシスを誘発できる。このような死亡形態は、該種類の化合物と細胞の中間径フィラメントであるビメンチンの特異的な結合から由来する。従って、本出願は、本出願に開示される化合物による、ビメンチン機能に関連する病理的・生理的過程及びそれに関連する疾患の治療に対する介入にも関し、上皮間葉転換、幹細胞の分化、腫瘍の浸潤性増殖、転移、薬剤耐性と再発、組織の線維化、感染性疾患及び心血管疾患（例えばアテローム性動脈硬化）等を含むが、それらに限定されるものではない。ある実施形態において、本出願は、本出願の前記化合物の、ビメンチン調節異常、小胞の形成、輸送と分泌、及び／又は細胞空胞化に関連する哺乳動物疾患を予防又は治療する薬物の調製における使用を提供する。さらに、前記ビメンチン調節異常、小胞の形成、輸送と分泌、及び／又は細胞空胞化に関連する哺乳動物疾患は、癌、神経変性疾患、組織の線維化及びアテローム性動脈硬化を含む。さらにまた、前記ビメンチン調節異常、小胞の形成、輸送と分泌、及び／又は細胞空胞化に関連する哺乳動物疾患は、結腸癌、膵癌、卵巣癌、胃癌、乳癌、甲状腺癌、肝癌、腎癌、肺癌、前立腺癌、肉腫、膠腫等の複数種の異なる固形腫瘍及び白血病、多発性骨髄腫等を含む。ある実施形態において、本出願の前記感染性疾患は、ウィルス感染による疾患、例えばＣ型肝炎ウィルス、ＳＡＲＳウィルス、ＨＩＶ及びデング熱ウィルス等の感染による疾患を含むが、それらに限定されるものではない。
【００５５】
よって、ある実施形態において、本出願は、本出願の式（Ｉ）で表される化合物、その薬学的に許容される塩、プロドラッグ又は溶媒和物の、腫瘍を治療又は予防する薬物の調製における使用を提供する。ある実施形態において、本出願は、腫瘍を治療又は予防するための、式（Ｉ）で表される化合物、その薬学的に許容される塩、プロドラッグ又は溶媒和物を提供する。前記腫瘍は前記のようである。
【００５６】
ある実施形態において、本出願は、本出願の式（Ｉ）で表される化合物、その薬学的に許容される塩、プロドラッグ又は溶媒和物の、細胞の小胞の輸送および細胞外への放出を阻害する薬物の調製における使用、或いは細胞のメシュオーシスを促進する薬物の調製における使用、或いはビメンチン仲介疾患を治療又は予防する薬物の調製における使用を提供する。或いは、ある実施形態において、本出願は、細胞の小胞の輸送および細胞外への放出を阻害し、細胞のメシュオーシスを促進し、ビメンチン仲介疾患を治療又は予防するための、式（Ｉ）で表される化合物、その薬学的に許容される塩、プロドラッグ又は溶媒和物を提供する。特に、前記ビメンチン仲介疾患は、上皮間葉転換に関連する疾患、幹細胞の分化、腫瘍の転移、薬剤耐性と再発、組織の線維化及び心血管疾患（例えばアテローム性動脈硬化）を含む。さらにまた、前記腫瘍は、結腸癌、膵癌、卵巣癌、胃癌、乳癌、甲状腺癌、肝癌、腎癌、肺癌、前立腺癌、肉腫、膠腫等の複数種の異なる固形腫瘍及び白血病、多発性骨髄腫等の血液腫瘍を含む。
【００５７】
ある実施形態において、本出願はさらに、固形腫瘍及び血液腫瘍を含む腫瘍を治療又は予防する方法であって、治療有効量の本出願の前記式（Ｉ）で表される化合物又はその医薬組成物を投与することを含む方法を提供する。本出願はさらに、細胞の小胞の輸送および細胞外への放出を阻害し、細胞のメシュオーシスを促進し、或いはビメンチン仲介疾患を治療又は予防する方法であって、治療有効量の本出願の前記式（Ｉ）で表される化合物又はその医薬組成物を投与することを含む方法を提供する。適切な経路で投与することで、所望の目的を達成できる。例えば、腸管外、皮下、静脈内、筋肉、腹腔内、経皮、経口、鞘内、頭蓋内、鼻腔内又は外用経路を通じて投与することができる。薬物の投与量は、患者の年齢、健康と体重、併用治療のタイプ、治療の頻度、及び所望の治療ベネフィットによって決定される。
【００５８】
以下、本発明の技術内容をより良く説明するように、具体的な実施例により本発明をさらに説明するが、それらに限定されるものではない。式（Ｉ）化合物を言及する時、本出願の前記式（Ｉ−１）、（Ｉ−２）と（Ｉ−３）で表される化合物を含むことは、理解すべきである。特に断らない限り、実施例で用いられた方法と試薬は本分野の通常の方法と試薬である。
【００５９】
下記化合物合成の実施例において、通常の後処理方法は、反応完了後、反応液に適量の水を加え、有機相と水相を分離し、有機相を合併することである。必要があれば、順番に５％  ＨＣｌ溶液及び／又は飽和ＮａＳＯ４で乾燥し、濾過した後、減圧で回転乾燥し、粗品を得、さらにカラムクロマトグラフィーにより分離・精製することで、最終産物を得る。
【００６０】
実施例１：Ｌ１６の合成
１）４−（（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）アニリンの調製（２）
ｐ−フェニレンジアミン（３．２４  ｇ、３０．０  ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（１．５２ｇ、１１  ．０ｍｍｏｌ）を１０  ｍＬのＤＭＦ及び５  ｍＬの水に溶解させた。室温下で、（Ｂｏｃ）２Ｏ（２．１８  ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（３０  ｍＬ）溶液を滴下した。滴下完了後、引き続き室温で４時間攪拌して反応させた。反応液を１００ｍＬの氷水に流し、ジクロロメタン（２００ｍＬ）で抽出し、順番に水、飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を蒸発乾燥し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより白色固体を１．７９ｇ得、収率は８６％であった。
【００６１】
２）１−（４−クロロフェニル）−３−（４−（（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）フェニル）ウレアの調製（３）
室温条件下で、中間体２（６２５ｍｇ、３．０  ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１０ｍＬ）溶液にｐ−クロロフェニルイソシアネート（４６１ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５ｍＬ）溶液をゆっくり滴下し、滴下完了後、室温下で５時間攪拌した。反応液を直接に吸引濾過し、ケーキを乾燥し、白色固体を９７７ｍｇ得、収率は９０％であった。
【００６２】
３）１−（４−クロロフェニル）−３−（４−アミノフェニル）ウレアの調製（４）
室温条件下で、中間体３（１８８ｍｇ、０．５２  ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１０ｍＬ）溶液にトリフルオロ酢酸（４７ｍｇ、４．１６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５ｍＬ）溶液をゆっくり滴下し、滴下完了後、室温下で３時間攪拌した。反応液を直接に回転乾燥し、飽和炭酸ナトリウムでｐＨを弱塩基性に調節した。酢酸エチルで抽出し、順番に水、飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を蒸発乾燥し、白色固体を１２９ｍｇ得、収率は９５％であった。1H NMR（300 MHz, DMSO）:δ8.63（s,1H,NH）; 8.16（s,1H,NH）; 7.45（d,2H,J=8.8Hz）; 7.29（d,2H, J=8.8Hz）; 7.06（d,2H,J=8.6Hz）; 6.50（d,2H,J=8.6Hz）; 4.80（s,2H,-NH2）。
【００６３】
４）２−メチル−４，６−ジクロロ−１，３，５−トリアジン（６）
窒素ガス保護で、−２０度の条件下で、シアヌル酸クロリド（１．３８ｇ、７．５ｍｍｏｌ）の８ｍＬテトラヒドロフラン溶液にメチルマグネシウムブロミドのジエチルエーテル溶液（３ｍＬ、９ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下し、滴下完了後、常温に放置して２時間攪拌して反応させた後、反応を停止させた。２０ｍＬの飽和塩化アンモニウムを加えて反応をクエンチした。２０ｍＬの酢酸エチル・２０ｍＬの飽和塩化ナトリウムで二回抽出し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより白色固体を６１５ｍｇ得、収率は５０％であった。1H NMR（CDCl3）δ:2.71（s,3H,CH3）。
【００６４】
５）２，４−ジヒドロキシ−６−（３−ニトロスチリル）−１，３，５−トリアジン（７）
中間体６（１．６０ｇ、９．７６  ｍｍｏｌ）、３−ニトロベンズアルデヒド（１．４７ｇ、９．７６  ｍｍｏｌ）を３０ｍＬの濃塩酸に溶解させ、１００度に加熱し、引き続き１２時間攪拌して反応させた。反応を停止させ、温度を室温まで降下し、反応液を６０ｍＬの氷水に流し、吸引濾過し、順番に１０ｍＬの酢酸エチル、１０ｍＬの水・石油エーテルで洗浄し、ケーキを乾燥し、白色粗品を２．０１ｇ得、収率は７９．２％であった。
【００６５】
６）２，４−ジクロロ−６−（３−ニトロスチリル）−１，３，５−トリアジン（８）
中間体７（９６０ｍｇ、３．６９  ｍｍｏｌ）、オキシ塩化リン（１０ｍＬ）の混合液を１４０度に加熱し、引き続き１９時間攪拌して反応させた。反応を停止させ、温度を室温まで降下し、反応液を回転乾燥し、残り物を６０ｍＬの氷水に流し、６０ｍＬの酢酸エチルで抽出し、順番に水、飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を蒸発乾燥し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより白色固体を６６０ｍｇ得、収率は６０．２％であった。 
【００６６】
７）１−（４−クロロフェニル）−３−（４−クロロ−６−（３−ニトロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア（９）
窒素ガス保護条件下で、中間体４（３４２ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ）、中間体８（３００ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（１４９ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ）を５０ｍＬのテトラヒドロフランに溶解させ、室温で５時間攪拌して反応させ、反応完了後、半分の溶媒を回転乾燥し、残り物を６０ｍＬの水に流し、１２０ｍＬの酢酸エチルで抽出し、順番に水、飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を蒸発乾燥し、２ｍＬの無水エタノールを加え、３０秒超音波処理し、吸引濾過し、ケーキを乾燥し、粗品を５２２ｍｇ得、収率は８６．９％であった。
【００６７】
８）１−（４−クロロフェニル）−３−（４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−（３−ニトロスチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア（Ｌ１６）
窒素ガス保護条件下で、中間体９（２７０ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）、モルホリン（１８１ｍｇ、２．０８ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（２０２ｍｇ、１．５６ｍｍｏｌ）を６０ｍＬのテトラヒドロフランに溶解させ、室温で４時間攪拌して反応させ、反応完了後、半分の溶媒を回転乾燥し、残り物を１００ｍＬの水に流し、１００ｍＬの酢酸エチルで抽出し、順番に水、飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を蒸発乾燥し、１ｍＬの無水エタノールを加え、３０秒超音波処理し、吸引濾過し、ケーキを乾燥し、薄黄色固体を２０６ｍｇ得、収率は６９．０％であった。1H NMR（300 MHz, DMSO-d6）: δ 9.46（s, 1H）, 9.19（s, 1H）, 8.96（s, 1H）, 8.40（s, 1H）, 8.10（d, J = 8.0Hz, 2H）,7.95（d, J = 15.9Hz, 1H）, 7.62（d, J = 8.0Hz, 2H）, 7.53 -7.58（m, 1H）, 7.39（d, J = 8.6Hz, 2H）, 7.31（d, J = 8.6Hz, 2H）, 7.21（d, J = 8.6Hz, 2H）6.95（d, J = 15.9Hz, 1H）, 3.73（m, 4H ）,3.59（m, 4H） ppm。HRMS 計算値 C28H26ClN8O4 [M+H]+, 573.1760, 実測値 573.1750。
【００６８】
実施例２：Ｌ３１の合成
１）４−（（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）アニリンの調製（２）
ｐ−フェニレンジアミン（３．２４  ｇ、３０．０  ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（１．５２ｇ、１１  ．０ｍｍｏｌ）を１０  ｍＬのＤＭＦ及び５  ｍＬの水に溶解させた。室温下で、（Ｂｏｃ）２Ｏ（２．１８  ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（３０  ｍＬ）溶液をゆっくり滴下した。滴下完了後、引き続き室温で４時間攪拌して反応させた。反応液を１００ｍＬの氷水に流し、ジクロロメタン（２００ｍＬ）で抽出し、順番に水、飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を蒸発乾燥し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより白色固体を１．７９ｇ得、収率は８６％であった。
【００６９】
２）４−（３−（４−（（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）フェニル）ウレア安息香酸メチルの調製（１０）
氷浴条件下で、トリホスゲン（９８０．１ｍｇ、３．３  ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１０ｍＬ）溶液にｐ−アミノ安息香酸メチル（５００ｍｇ、３．３ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５ｍＬ）溶液をゆっくり滴下し、滴下完了後、引き続きトリエチルアミン（６６７ｍｇ、６．６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５ｍＬ）溶液を滴下し、滴下完了後、反応液における溶媒を回転乾燥し、ジクロロメタン（２０ｍＬ）を加え直し、中間体２（６１８ｍｇ、２．９７ｍｍｏｌ）を加え、室温下で５時間攪拌した。反応液に飽和炭酸ナトリウムを加えてｐＨを弱塩基性に調節し、酢酸エチルで抽出し、順番に水、飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を蒸発乾燥し、体積比で酢酸エチル／石油エーテル＝１／４で洗浄し、吸引濾過し、ケーキを乾燥し、白色固体を６００ｍｇ得、収率は５２．４％であった。1H NMR（300 MHz, DMSO） δ 9.20（s, 1H）, 9.01（s, 1H）, 8.64（s, 1H）, 7.88（d, J = 8.7 Hz, 2H）, 7.58（d, J = 8.7 Hz, 2H）, 7.41−7.30（m, 4H）, 3.82（s, 3H）, 1.47（s, 9H）ppm。
【００７０】
３）４−（３−（４−アミノフェニル）ウレア安息香酸メチルの調製（１１）
室温条件下で、中間体１０（２００ｍｇ、０．５２  ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１０ｍＬ）溶液にトリフルオロ酢酸（４７ｍｇ、４．１６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５ｍＬ）溶液をゆっくり滴下し、滴下完了後、室温下で３時間攪拌した。反応液を直接に回転乾燥し、飽和炭酸ナトリウムでｐＨを弱塩基性に調節した。酢酸エチルで抽出し、順番に水、飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を蒸発乾燥し、白色固体を１４１ｍｇ得、収率は９５％であった。1H NMR（300 MHz, DMSO）:δ8.63（s,1H）; 8.16（s,1H）; 7.45（d, J=8.8Hz，2H,）; 7.29（d, , J=8.8Hz，2H）; 7.06（d, 8.6Hz ，2H）; 6.50（d, J=8.6Hz，2H）; 4.80（s, 2H ），3.82（s, 3H）。
【００７１】
４）２−メチル−４，６−ジクロロ−１，３，５−トリアジン（６）
窒素ガス保護で、−２０度の条件下で、シアヌル酸クロリド（１．３８ｇ、７．５ｍｍｏｌ）の８ｍＬテトラヒドロフラン溶液にメチルマグネシウムブロミドのジエチルエーテル溶液（３ｍＬ、９ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下し、滴下完了後、常温に放置して２時間攪拌して反応させた後、反応を停止させた。２０ｍＬの飽和塩化アンモニウムを加えて反応をクエンチした。２０ｍＬの酢酸エチル・２０ｍＬの飽和塩化ナトリウムで二回抽出し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより白色固体を６１５ｍｇ得、収率は５０％であった。1H NMR（CDCl3）δ:2.71（s,3H,CH3）。
【００７２】
５）２，４−ジヒドロキシ−６−スチリル−１，３，５−トリアジン（７）
中間体６（１．６０ｇ、９．７６  ｍｍｏｌ）、ベンズアルデヒド（１．０４ｇ、９．７６  ｍｍｏｌ）を３０ｍＬの濃塩酸に溶解させ、１００度に加熱し、引き続き１２時間攪拌して反応させた。反応を停止させ、温度を室温まで降下し、反応液を６０ｍＬの氷水に流し、吸引濾過し、順番に１０ｍＬの酢酸エチル、１０ｍＬの水・石油エーテルで洗浄し、ケーキを乾燥し、白色粗品を１．６６ｇ得、収率は７９．２％であった。
【００７３】
６）２，４−ジクロロ−６−スチリル−１，３，５−トリアジン（８）
中間体７（７９４ｍｇ、３．６９  ｍｍｏｌ）、オキシ塩化リン（１０ｍＬ）の混合液を１４０度に加熱し、引き続き１９時間攪拌して反応させた。反応を停止させ、温度を室温まで降下し、反応液を回転乾燥し、残り物を６０ｍＬの氷水に流し、６０ｍＬの酢酸エチルで抽出し、順番に水、飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を蒸発乾燥し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより白色固体を５６０ｍｇ得、収率は６０．２％であった。 
【００７４】
７）１−（４−（メトキシカルボニル）フェニル）−３−（４−クロロ−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア（１２）
窒素ガス保護条件下で、中間体１１（４４１ｍｇ、１．７５ｍｍｏｌ）、中間体８（５００ｍｇ、１．７５ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（２２６ｍｇ、１．７５ｍｍｏｌ）を５０ｍＬのテトラヒドロフランに溶解させ、室温で５時間攪拌して反応させ、反応完了後、半分の溶媒を回転乾燥し、残り物を６０ｍＬの水に流し、１２０ｍＬの酢酸エチルで抽出し、順番に水、飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を蒸発乾燥し、２ｍＬの無水エタノールを加え、３０秒超音波処理し、吸引濾過し、ケーキを乾燥し、粗品を７６２ｍｇ得、収率は８６．９％であった。
【００７５】
８）１−（４−（メトキシカルボニル）フェニル）−３−（４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア（１３）
窒素ガス保護条件下で、中間体１２（８４０ｍｇ、１．６８ｍｍｏｌ）、モルホリン（５８４ｍｇ、６．７２ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（６５１ｍｇ、５．０４ｍｍｏｌ）を６０ｍＬのテトラヒドロフランに溶解させ、室温で４時間攪拌して反応させ、反応完了後、半分の溶媒を回転乾燥し、残り物を１００ｍＬの水に流し、１００ｍＬの酢酸エチルで抽出し、順番に水、飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を蒸発乾燥し、１ｍＬの無水エタノールを加え、３０秒超音波処理し、吸引濾過し、ケーキを乾燥し、薄黄色固体を６３９ｍｇ得、収率は６９．０％であった。1H NMR（300 MHz, DMSO） δ 9.61（s, 1H）, 9.37（s, 1H）, 8.98（s, 1H）, 7.95（d, J = 15.9 Hz, 1H）, 7.89（d, J = 8.7 Hz, 2H）, 7.75−7.64（m, 4H）, 7.60（d, J = 8.7 Hz, 2H）, 7.42（t, J = 7.6 Hz, 5H）, 6.89（d, J = 15.9 Hz, 1H）, 3.82（s, 7H）, 3.69（s, 4H）ppm。
【００７６】
９）４−（３−（４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア）安息香酸の調製（１４）
室温条件下で、中間体１３（３００ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）、水酸化リチウム一水和物（６８．５ｍｇ、１．６３ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）、メタノール（５ｍＬ）及び水（１ｍＬ）に溶解させ、還流まで加熱し、引き続き１２攪拌して反応させ、反応完了後、吸引濾過し、ケーキを２Ｍ塩酸でｐＨ４に調節し、吸引濾過し、ケーキを乾燥し、１ｍＬの無水エタノールを加え、３０秒超音波処理し、吸引濾過し、ケーキを乾燥し、薄黄色固体を１７１ｍｇ得、収率は５９．０％であった。1H NMR（300 MHz, DMSO） δ 12.33（s, 1H）, 9.59（s, 1H）, 9.41（s, 1H）, 9.09（s, 1H）, 7.94（d, J = 15.9 Hz, 1H）, 7.88（d, J = 8.3 Hz, 2H）, 7.77−7.63（m, 4H）, 7.59（d, J = 8.3 Hz, 2H）, 7.51−7.36（m, 5H）, 6.89（d, J = 15.9 Hz, 1H）, 3.83（s, 4H）, 3.69（s, 4H）ppm。
【００７７】
１０）１−（４−（（４−メチルピペラジン−１−イル）ホルミル）フェニル）−３−（４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア（Ｌ３１）
室温条件下で、順番に中間体１４（１００ｍｇ、０．１８６ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（３２．７ｍｇ、０．２４２ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（２ｍＬ）、ＥＤＣＩ（５３．５ｍｇ、０．２７９ｍｍｏｌ）、４−甲基ピペラジン（２４．２ｍｇ、０．２４２ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（３７．６ｍｇ、０．３７２ｍｍｏｌ）を２５ｍＬの反応フラスコに入れ、引き続き８時間攪拌して反応させ、反応完了後、反応液を１０ｍＬの氷水に流し、ジクロロメタン（２０ｍＬ）で抽出し、順番に水、飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を蒸発乾燥し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより薄黄色固体を８７．６ｍｇ得、収率は７６％であった。1H NMR（300 MHz, DMSO-d6）: δ 9.60（s, 1H）, 8.91（s, 1H）, 8.67（s, 1H）, 7.95（d, J = 15.9Hz, 1H）, 7.65 -7.72（m, 4H） , 7.52（d, J = 8.5Hz, 2H）, 7.41 -7.43（m, 5H）, 7.34（d, J = 8.5Hz, 2H）, 6.89（d, J = 15.9Hz, 1H）3.83（m, 4H ）,3.69（m, 4H）, 3.50（m, 4H）,2.33（m, 4H）, 2.21（s, 3H）ppm。13C NMR (75 MHz, DMSO-d6)δ: 169.98, 168.92, 164.41, 152.41, 141.17, 138.65, 135.20, 134.18, 134.09, 129.45, 128.91, 128.55, 128.18, 127.76, 127.14, 120.57, 118.71, 117.30, 65.96, 54.78, 53.58, 47.60, 45.50, 43.38. HRMS 計算値 C34H38N9O3 [M+H]+,620.3092, 実測値 620.3105。
【００７８】
実施例３：Ｌ３９の合成
1）２−メチル−４，６−ジクロロ−１，３，５−トリアジン（６）
窒素ガス保護で、−２０度の条件下で、シアヌル酸クロリド（１．３８ｇ、７．５ｍｍｏｌ）の８ｍＬテトラヒドロフラン溶液にメチルマグネシウムブロミドのジエチルエーテル溶液（３ｍＬ、９ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下し、滴下完了後、常温に放置して２時間攪拌して反応させた後、反応を停止させた。２０ｍＬの飽和塩化アンモニウムを加えて反応をクエンチした。２０ｍＬの酢酸エチル・２０ｍＬの飽和塩化ナトリウムで二回抽出し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより白色固体を６１５ｍｇ得、収率は５０％であった。1H NMR（CDCl3）δ:2.71（s,3H,CH3）。
【００７９】
２）２，４−ジヒドロキシ−６−（３−ニトロスチリル）−１，３，５−トリアジン（７）
中間体６（１．６０ｇ、９．７６  ｍｍｏｌ）、３−ニトロベンズアルデヒド（１．４７ｇ、９．７６  ｍｍｏｌ）を３０ｍＬの濃塩酸に溶解させ、１００度に加熱し、引き続き１２時間攪拌して反応させた。反応を停止させ、温度を室温まで降下し、反応液を６０ｍＬの氷水に流し、吸引濾過し、順番に１０ｍＬの酢酸エチル、１０ｍＬの水・石油エーテルで洗浄し、ケーキを乾燥し、白色粗品を２．０１ｇ得、収率は７９．２％であった。
【００８０】
３）２，４−ジクロロ−６−（３−ニトロスチリル）−１，３，５−トリアジン（８）
中間体７（９６０ｍｇ、３．６９  ｍｍｏｌ）、オキシ塩化リン（１０ｍＬ）の混合液を１４０度に加熱し、引き続き１９時間攪拌して反応させた。反応を停止させ、温度を室温まで降下し、反応液を回転乾燥し、残り物を６０ｍＬの氷水に流し、６０ｍＬの酢酸エチルで抽出し、順番に水、飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を蒸発乾燥し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより白色固体を６６０ｍｇ得、収率は６０．２％であった。 
【００８１】
４）２−クロロ−４−（４−ニトロフェノキシ）−６−（スチリル）−１，３，５−トリアジン（１５）
窒素ガス保護条件下で、中間体８（７８ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）を５ｍＬのテトラヒドロフランに溶解させ、ｐ−ニトロフェノールナトリウム（５０ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）を５ｍＬの水に溶解させ、ｐ−ニトロフェノールナトリウム水溶液を中間体８の混合液にゆっくり滴下し、室温で３時間攪拌して反応させ、反応完了後、半分の溶媒を回転乾燥し、残り物を２０ｍＬの水に流し、，５０ｍＬの酢酸エチルで抽出し、順番に水、飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を蒸発乾燥し、０．５ｍＬの無水エタノールを加え、３０秒超音波処理し、吸引濾過し、ケーキを乾燥し、粗品を８４ｍｇ得、収率は７６．９％であった。
【００８２】
５）２−（モルホリン−１−イル）−４−（４−ニトロフェノキシ）−６−（スチリル）−１，３，５−トリアジン（１６）
窒素ガス保護条件下で、中間体１５（８４ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）、モルホリン（６３ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（９３ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）を１５ｍＬのテトラヒドロフランに溶解させ、室温で４時間攪拌して反応させ、反応完了後、半分の溶媒を回転乾燥し、残り物を３０ｍＬの水に流し、３０ｍＬの酢酸エチルで抽出し、順番に水、飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を蒸発乾燥し、０．５ｍＬの無水エタノールを加え、３０秒超音波処理し、吸引濾過し、ケーキを乾燥し、薄黄色固体を８４ｍｇ得、収率は８６．０％であった。
【００８３】
６）４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジン−２−オキシ）−アニリン（１７）
鉄粉（１００ｍｇ、１．７９ｍｍｏｌ）、塩化アンモニウム（４０ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのエタノール水溶液（エタノールと水の体積比８：２）に溶解させ、還流まで加熱し、中間体１６（１００ｍｇ、０．２４７ｍｍｏｌ）を前記反応液に迅速に加え、引き続き２時間還流して反応させ、反応完了後、吸引濾過し、濾液におけるエタノールを回転乾燥し、残り物を３０ｍＬの水に流し、３０ｍＬの酢酸エチルで抽出し、順番に水、飽和食塩水で洗浄した。有機相を収集し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、砂にし、カラムにローディングし、溶出液を石油エーテル：酢酸エチル＝３：１にした。精製品を８５ｍｇ得、収率は９１．５％であった。1H NMR（300 MHz, DMSO）：δ 7.95（d, J = 15.9 Hz, 1H）, 7.73（d, J = 7.6 Hz, 2H）, 7.43−7.41（m, 3H）, 6.92（d, J = 15.9 Hz, 1H）, 6.87（d, J = 8.7 Hz, 2H）, 6.58（d, J = 8.7 Hz, 2H）, 5.04（s, 2H）, 3.87（s, 2H）, 3.66-3.60（m, 4H）ppm.
【００８４】
７）（Ｅ）−１−（４−クロロフェニル）−３−（４−（（４−（モルホリン−１−イル）−６−（スチリル）−１，３，５−トリアジニル−２−イル）オキシ）フェニル）ウレア（Ｌ３９）
室温条件下で、中間体１７（９２．５ｍｇ、０．２４６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５ｍＬ）溶液にｐ−クロロフェニルイソシアネート（３７．８ｍｇ、０．３４６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（３ｍＬ）溶液をゆっくり滴下し、滴下完了後、室温下で５時間攪拌した。反応液を直接に吸引濾過し、ケーキを乾燥し、白色固体を１１７ｍｇ得、収率は９０％であった。1H NMR（300 MHz, DMSO-d6）: δ 8.86（s, 1H）, 8.80（s, 1H）, 7.96（d, J = 15.9Hz, 1H）, 7.73-7.11（m, 2H）, 7.52-7.45（m, 4H）, 7.42 -7.40（m, 3H）, 7.34（d, J = 8.7Hz, 2H）, 7.17（d, J = 8.7Hz, 2H）, 6.93（d, J = 15.9Hz, 1H）, 3.89（s, 2H）, 3.67（s, 2H）, 3.60（s, 4H） ppm。
【００８５】
実施例４：化合物Ｌ１−Ｌ１５、Ｌ１７−Ｌ３０、Ｌ３２−Ｌ３８及びＬ４０の調製
実施例１と同様な方法及び相応の材料を用いて、化合物Ｌ１−Ｌ１５及びＬ１７−Ｌ２８を調製し；実施例２と同様な方法及び相応の材料を用いて、化合物Ｌ２９−Ｌ３０及びＬ３２−Ｌ３７を調製し；実施例３と同様な方法及び相応の材料を用いて、化合物Ｌ３８及びＬ４０を調製した。得られた化合物の関連データは以下に示す：
L1（#50）： 
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ: 9.57 (s, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.59(s, 1H), 7.93(d, J = 15.9Hz, 1H), 7.70 (d, J = 8.7Hz, 2H), 7.65 (d, J = 8.7Hz, 2H), 7.49 (d, J = 8.7Hz, 2H), 7.43 -7.38(m, 5H), 7.32 (d, J = 8.7Hz, 2H), 6.88(d, J = 15.9Hz, 1H),3.82 (m, 4H ),3.68 (m, 4H) ppm. 13C NMR (75 MHz, DMSO-d6)δ:169.99, 164.43, 163.80, 152.46, 138.83, 138.63, 135.22, 134.17, 134.11, 129.44, 128.90, 128.55, 127.76, 127.16, 125.13, 120.58, 119.58, 118.75, 65.96, 43.37. HRMS 計算値 C28H27ClN7O2 [M+H]+,528.1909;実測値 528.1918.
【００８６】
L2（#52）：
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ: 9.65 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.66(s, 1H), 7.95(d, J = 15.9Hz, 1H), 7.71 (d, J = 6.6Hz, 2H), 7.62 (d, J = 8.5Hz, 2H), 7.48 -7.38(m, 7H), 7.11 (t, J = 8.5Hz, 2H), 6.90(d, J = 15.9Hz, 1H), 3.82 (m, 4H ),3.69 (m, 4H) ppm. HRMS 計算値 C28H27FN7O2 [M+H]+, 512.2205,実測値 512.2215.
【００８７】
L3（#51）
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ: 9.53 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 8.61(s, 1H), 7.93(d, J = 15.9Hz, 1H), 7.71 (d, J = 8.7Hz, 2H), 7.66 (d, J = 8.7Hz, 2H), 7.50 (d, J = 8.7Hz, 2H), 7.44 -7.39(m, 5H), 7.32 (d, J = 8.7Hz, 2H), 6.88(d, J = 15.9Hz, 1H),3.83 (m, 4H ), 2.39 (m, 4H), 2.23(s, 3H) ppm. 13C-NMR (75 MHz, DMSO-d6)δ: 169.99, 164.28, 163.80, 152.47, 138.83, 138.51, 135.24, 134.25, 134.05, 129.40, 128.89, 128.55, 127.75, 127.27, 125.12, 120.52, 119.57, 118.76, 54.34, 45.74, 42.73. HRMS 計算値 C29H30ClN8O [M+H]+,541.2175,実測値 541.2190.
【００８８】
L4（#53）：
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ: 9.55 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.56(s, 1H), 7.92(d, J = 15.9Hz, 1H), 7.70 (d, J = 6.6Hz, 2H), 7.64 (d, J = 8.5Hz, 2H), 7.48 -7.38(m, 7H), 7.12 (t, J = 8.5Hz, 2H), 6.88(d, J = 15.9Hz, 1H), 3.83 (m, 4H ), 2.39 (m, 4H), 2.23(s,3H) ppm. HRMS 計算値 C29H30FN8O [M+H]+,525.2521,実測値 525.2534.
【００８９】
L5（#57）：
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ: 9.56 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.68(s, 1H), 8.50(s, 1H), 8.22 (d, J = 8.0Hz, 2H), 7.98(d, J = 15.9Hz, 1H), 7.74 -7.69(m, 3H), 7.49 (d, J = 8.0Hz, 2H), 7.39 (d, J = 8.7Hz, 2H), 7.32 (d, J = 8.7Hz, 2H), 7.08(d, J = 15.9Hz, 1H), 5.78 (d, J = 6.6Hz, 1H), 4.61-4.59 (m, 1H ), 4.37-4.32 (m, 2H ), 3.90-3.86 (m, 2H ) ppm. 13C-NMR (75 MHz, DMSO-d6)δ: 169.8, 165.4, 163.5, 152.5, 138.6, 135.2, 134.4, 133.9, 129.4, 128.9, 128.6, 127.8, 127.2, 125.1, 120.3, 119.5, 118.7, 60.9, 59.2. HRMS 計算値 C27H25ClN7O2 [M+H]+,514.1753, 実測値 514.1765.
【００９０】
L6（#54）：
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ: 9.56 (s, 1H), 8.81 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 7.90 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.66 (d, J = 9.0 Hz, 3H), 7.50 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.43 (dd, J = 13.2, 6.6 Hz, 4H), 7.33 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.96 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 3.82 (m, 4H ),3.69 (m, 4H) ppm. HRMS 計算値 C28H26Cl2N7O2 [M+H]+, 562.1520, 実測値 562.1505.
【００９１】
L7（#60）：
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ: 9.56 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.70(s, 1H), 7.91(d, J = 15.9Hz, 1H) 7. 81 (s, 1H), 7.63 -7.69(m, 3H), 7.44 -7.49(m, 4H) ,7.40 (d, J = 8.8Hz, 2H), 7.12 (t, J = 8.8Hz, 2H), 6.95(d, J = 15.9Hz, 1H), 3.82(m, 4H ),3.69(m, 4H) ppm. 13C NMR (75 MHz, DMSO-d6)δ: 169.74, 164.37, 163.83, 158.75, 155.60,152.72, 137.54,137.07, 136.23, 134.43, 133.91, 133.72, 130.63, 129.00, 127.36, 126.32, 120.67, 119.72, 119.62,118.55, 115.33, 115.03, 65.95, 43.35. HRMS 計算値 C28H26Cl FN7O2 [M+H]+, 546.1815, 実測値 546.1821.
【００９２】
L8（#55）：
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ: 9.56 (s, 1H), 8.81 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 7.90 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.66 (d, J = 9.0 Hz, 3H), 7.50 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.43 (dd, J = 13.2, 6.6 Hz, 4H), 7.33 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.96 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 3.84 (m, 4H), 2.39 (m, 4H), 2.23 (s, 3H). 13C-NMR (75 MHz, DMSO-d6)δ:169.75, 164.23, 163.84, 152.47, 138.83, 137.57, 136.96, 134.19, 134.10, 133.71, 130.63, 128.98, 128.55, 127.37, 127.31, 125.13, 120.59, 119.59, 118.78, 54.34, 45.73, 42.74. HRMS 計算値 C29H29 Cl2N8O [M+H]+, 575.1836, 実測値 575.1840.
【００９３】
L9（#61）：
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ: 9.50 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8. 55 (s, 1H), 7.89(d, J = 15.9Hz, 1H) 7. 82 (s, 1H), 7.63 -7.69(m, 3H), 7.44 -7.49(m, 4H) ,7.39 (d, J = 8.8Hz, 2H), 7.12 (t, J = 8.8Hz, 2H), 6.95(d, J = 15.9Hz, 1H), 3.84(m, 4H ),2.39 (m, 4H), 2.23(s, 3H)ppm. 13C-NMR (75 MHz, DMSO-d6)δ: 169.7, 164.2, 163.8, 158.8, 155.6, 152.8, 137.5, 136.9, 134.3, 133.7, 130.6, 129.0, 127.4, 126.3, 120.6, 119.8, 119.7, 118.6, 115.4, 115.1, 54.3, 45.7, 42.7. HRMS 計算値 C29H29Cl FN8O [M+H]+,559.2131,実測値 559.2144.
【００９４】
L10（#43）：
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ: 10.46 (s, 1H), 10.22 (s, 1H), 9.52(s, 1H), 7.90(d, J = 15.9Hz, 1H),7.75 (d, J = 8.0Hz, 2H), 7.53 -7.61(m, 4H), 7.44 -7.52(m, 4H), 7.28 (d, J = 8.8Hz, 1H) , 6.89(d, J = 15.9Hz, 1H), 3.83(m, 4H ), 3.68 (m, 4H) ppm. HRMS 計算値 C28H26Cl2N7O2 [M+H]+,562.152, 実測値 562.1517.
【００９５】
L11（#45）：
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ: 9.6(s, 1H), 8.66(s, 1H), 8.54(s, 1H), 7.88(d, J = 15.9Hz, 1H),7.75 (d, J = 8.4Hz, 2H), 7.63 (d, J = 8.4Hz, 1H) ,7.43-7.49(m, 4H), 7.38 (d, J = 8.8Hz, 2H), 7.11 (t, J = 8.8Hz, 1H) ,6.89(d, J = 15.9Hz, 1H), 3.82(m, 4H ), 3.68 (m, 4H) ppm. HRMS 計算値 C28H26Cl FN7O2 [M+H]+, 546.1815, 実測値 546.1822.
【００９６】
L12（#49）：
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ: 9.60(s, 1H), 8.86 (s, 1H), 8.62(s, 1H), 7.91(d, J = 15.9Hz, 1H), 7.75 (d, J = 8.0Hz, 2H), 7.53 -7.58(m, 1H), 7.39 (d, J = 8.6Hz, 2H), 7.31 (d, J = 8.6Hz, 2H), 7.21 (d, J = 8.6Hz, 2H), 6.95 (d, J = 15.9Hz, 1H), 3.73 (m, 4H ),3.59 (m, 4H) ppm. 13C NMR (75 MHz, DMSO-d6)δ: 169.8, 164.0, 152.4, 141.8, 141.6, 137.3, 134.2, 134.0, 133.9, 130.3, 130.2, 129.5, 128.9, 120.6, 118.8, 113.7, 108.0, 107.8, 104.8, 104.5, 65.9, 43.3. HRMS 計算値 C28H26ClFN7O2 [M+H]+, 546.1815, 実測値 546.1823.
【００９７】
L13（#44）：
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ: 9.50 (s, 1H), 8.84 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 7.89(d, J = 15.9Hz, 1H),7.75 (d, J = 8.6Hz, 2H), 7.64 (d, J = 8.6Hz, 2H), 7.46 -7.50(m, 4H), 7.39 (d, J = 8.9Hz, 2H), 7.32 (d, J = 8.9Hz, 1H) , 6.91(d, J = 15.9Hz, 1H), 3.83(m, 4H ), 2.38 (m, 4H), 2.23 (s, 3H)ppm. 13C NMR (75 MHz, DMSO-d6)δ: 169.9, 164.5, 163.8, 152.5, 138.9, 137.1, 134.2, 133.8, 129.5, 128.9, 128.6, 128.1, 125.1, 120.5, 119.5, 118.7, 54.3, 45.7, 42.7. HRMS 計算値 C29H29Cl2N8O [M+H]+, 575.1836, 実測値 575.1837.
【００９８】
L14（#42）：
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ: 9.51 (s, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.66 (s, 1H), 7.89(d, J = 15.9Hz, 1H),7.78 (d, J = 8.6Hz, 2H), 7.64 (d, J = 8.6Hz, 2H), 7.51 -7.47(m, 4H), 7.39 (d, J = 8.9Hz, 2H), 7.32 (d, J = 8.9Hz, 1H) , 6.91(d, J = 15.9Hz, 1H), 3.85(m, 4H ), 2.38 (m, 4H), 2.25 (s, 3H)ppm. HRMS 計算値 C29H29Cl FN8O [M+H]+, 559.2131, 実測値 559.2134.
【００９９】
L15（#48）：
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ: 9.61 (s, 1H), 9.37 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 7.95(d, J = 15.9Hz, 1H) ,7.89 (d, J = 8.8Hz, 2H), 7.66 -7.72(m, 4H), 7.60 (d, J = 8.8Hz, 2H),7.39 -7.44(m, 4H) , 6.89(d, J = 15.9Hz, 1H), 3.82(m, 4H ), 3.82(s, 3H ),3.69 (m, 4H)ppm. 13C-NMR (75 MHz, DMSO-d6)δ: 164.2, 163.8, 160.8, 152.4, 141.7, 137.2, 134.2, 134.0, 133.8, 130.3, 130.2, 129.5, 118.7, 113.7, 107.7, 104.8, 104.4, 54.0, 45.3, 42.3. HRMS 計算値 C29H29ClFN8O [M+H]+, 559.2131, 実測値 559.2136.
【０１００】
L17（#62）：
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ: 9.58 (s, 1H), 8.84 (s, 1H), 8. 72 (s, 1H), 8. 52 (s, 1H), 8.22 (d, J = 8.0Hz, 2H),8.06(d, J = 15.9Hz, 1H), 7.74(d, J = 8.0Hz, 1H) , 7.63 -7.69(m, 2H) , 7.44 -7.49(m, 2H) ,7.40 (d, J = 8.8Hz, 2H), 7.13 (d, J = 8.8Hz, 2H),7.07 (d, J = 15.9Hz, 1H), 3.84(m, 4H ),3.70 (m, 4H) ppm. 13C NMR (75 MHz, DMSO-d6)δ: 164.33, 163.86, 158.69, 152.79, 148.33, 137.14, 136.31, 134.58, 133.76, 133.56, 130.31, 130.13, 123.60, 122.39, 120.71, 119.57, 119.46, 118.39, 115.32, 115.03, 65.96, 43.36. HRMS 計算値 C28H26FN8O4 [M+H]+, 557.2056, 実測値 557.2060.
【０１０１】
L18（#41）：
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ: 9.53 (s, 1H), 8.84 (s, 1H), 8.66(s, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.20 (d, J = 7.6Hz, 2H),8.03(d, J = 15.9Hz, 1H), 7.73 -7.64(m, 3H), 7.50 (d, J = 8.5Hz, 2H), 7.41 (d, J = 8.5Hz, 2H), 7.31 (d, J = 8.5Hz, 2H), 7.05 (d, J = 15.9Hz, 1H), 3.84 (m, 4H ),2.39 (m, 4H), 2.23(s,3H) ppm. 13C NMR (75 MHz, DMSO-d6)δ: 169.53, 164.18, 163.86, 152.48, 148.31, 138.85, 137.15, 136.20, 134.16, 133.55, 130.28, 128.53, 125.09, 123.58, 122.37, 120.60, 119.56, 118.74, 54.33, 45.72, 42.72. HRMS 計算値 C29H29ClN9O3 [M+H]+, 586.2076,実測値 586.2082. 
【０１０２】
L19（#63）：
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ: 9.52 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8. 55 (s, 1H), 8. 51 (s, 1H), 8.22 (d, J = 8.0Hz, 2H),8.04(d, J = 15.9Hz, 1H), 7.73(d, J = 8.0Hz, 1H) , 7.64 -7.69(m, 2H) , 7.44 -7.49(m, 2H) ,7.40 (d, J = 8.8Hz, 2H), 7.13 (d, J = 8.8Hz, 2H),7.06 (d, J = 15.9Hz, 1H), 3.85(m, 4H ),2.40 (m, 4H), 2.24(s, 3H)ppm. 13C NMR (75 MHz, DMSO-d6)δ: 169.6, 164.2, 158.8, 152.7, 148.3, 137.2, 136.2, 134.3, 134.0, 133.6, 130.3, 123.6, 122.4, 120.6, 119.8, 119.7, 118.7, 115.4, 115.1, 54.4, 45.7, 42.7. HRMS 計算値 C29H29FN9O3 [M+H]+, 570.2372, 実測値 570.2384.
【０１０３】
L20（#38）：
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ:9.50 (s, 1H), 8.81 (s, 1H), 8.62(s, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.21 (dd, J = 8.0Hz, J=1.8Hz, 2H),8.03(d, J = 15.9Hz, 1H), 7.74 -7.69(m, 3H), 7.49 (d, J = 8.9Hz, 2H), 7.40 (d, J = 8.9Hz, 2H), 7.32 (d, J = 8.5Hz, 2H), 7.06 (d, J = 15.9Hz, 1H), 3.23-3.17 (m, 6H ) ppm. 13C NMR (75 MHz, DMSO-d6)δ: 169.19, 164.90, 163.64, 152.48, 148.35, 138.86, 137.19, 135.97, 134.36, 133.98, 133.59, 130.32, 128.55, 125.09, 123.56, 122.29, 120.41, 119.56, 118.74, 35.86. HRMS 計算値 C28H24ClN8O3 [M+H]+, 531.1654, 実測値 531.1667.
【０１０４】
L21（#39）：
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ: 9.49 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.59(s, 1H), 8.49 (s, 1H), 8.21 (dd, J = 8.0Hz, J=1.8Hz, 2H), 8.01(d, J = 15.9Hz, 1H), 7.77 -7.69(m, 3H), 7.49 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.39 (d, J = 8.9Hz, 2H), 7.32 (d, J = 8.5Hz, 2H), 7.06 (d, J = 15.9Hz, 1H), 3.62-3.57 (m, 4H ), 1.96-1.94 (m, 4H ) ppm. 13C NMR (75 MHz, DMSO-d6): 162.87, 152.47, 148.35, 138.85, 137.19, 134.55, 133.83, 133.61, 130.33, 128.55, 125.09, 123.55, 122.24, 120.21, 119.55, 118.75, 45.99, 24.76. HRMS 計算値 C28H26ClN8O3 [M+H]+, 557.1811, 実測値 557.1816.
【０１０５】
L22（#58）：
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ: 9.56 (s, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.69(s, 1H), 8. 50 (s, 1H), 8.22 (d, J = 8.0Hz, 2H),7.98(d, J = 15.9Hz, 1H), 7.68 -7.74(m, 3H), 7.49 (d, J = 8.8Hz, 2H), 7.39 (d, J = 8.8Hz, 2H), 7.32 (d, J = 8.8Hz, 2H),7.08 (d, J = 15.9Hz, 1H), 5.78 (d, J = 6.6Hz, 1H),4.58-4.61(m, 1H ),4.32-4.37 (m, 2H), 3.86-3.90(m, 2H) ppm. 13C NMR (75 MHz, DMSO-d6)δ: 169.36, 165.26, 163.55, 152.51, 148.31, 138.88, 137.09, 136.14, 134.29, 134.05, 133.65, 130.27, 128.54, 125.06, 123.57, 122.25, 120.42, 119.49, 118.67, 60.93, 59.23. HRMS 計算値 C27H24ClN8O4 [M+H]+, 559.1604, 実測値 559.1609.
【０１０６】
L23（#64）：
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ: 9.63 (s, 1H), 8.81(s, 1H), 8. 70 (s, 1H), 8. 32 (s, 1H) 8.01 (d, J = 15.9Hz, 1H), 7.69 -7.71(m, 2H), 7.49 (d, J = 8.8Hz, 2H) ,7.39(m, 3H), 7.33 (d, J = 8.8Hz, 2H), 7.25 -7.16(m, 2H), 6.93(m, 1H), 6.89 (d, J = 15.9Hz, 1H), 3.87 (m, 4H ), 3.69(m, 4H) ppm. 13C NMR (75 MHz, DMSO-d6)δ: 170.09, 164.44, 163.90, 152.30, 140.28, 139.66, 138.92, 138.71, 135.25, 129.42, 128.85, 128.55, 127.77, 127.06, 125.28, 119.68, 113.68,112.19, 109.91, 66.03, 43.41. HRMS 計算値 C28H27ClN7O2 [M+H]+,528.1909,実測値 528.1916.
【０１０７】
L24（#65）：
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ: 9.58 (s, 1H), 8.90 (s, 1H), 8. 76 (s, 1H), 8. 34 (s, 1H) 8.00 (d, J = 15.9Hz, 1H), 7.69 -7.71(m, 2H) 7.50 (d, J = 8.8Hz, 2H) 7.38 (m, 3H) 7.32 (d, J = 8.8Hz, 2H) 7.18 -7.21(m, 2H) ,6.94(m, 1H), 6.89 (d, J = 15.9Hz, 1H), 3.87 (m, 4H ),2.39 (m, 4H), 2.23 (s, 3H) ppm. 13C-NMR (75 MHz, DMSO-d6)δ: 170.1, 164.3, 163.9, 152.3, 140.3, 139.7, 138.8, 135.3, 129.4, 128.8, 128.6, 128.5, 127.8, 127.1, 125.2, 119.6, 113.6, 112.1, 109.9, 54.5, 45.8, 42.8. HRMS 計算値 C29H30ClN8O [M+H]+, 541.2226, 実測値 541.2236.
【０１０８】
L25（#59）：
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ: 9.64 (s, 1H), 8.82(s, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.31 (s, 1H) 7.98 (d, J = 15.9Hz, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.68(d, J = 7.0Hz, 1H), 7.43 -7.50(m, 4H), 7.32 (d, J = 8.8Hz, 2H), 7.16 -7.26(m, 2H) , 6.96 (d, J = 15.9Hz, 1H), 6.94 (d, J = 7.0Hz, 1H), 3.88 (m, 4H ), 3.69 (m, 4H) ppm. 13C NMR (75 MHz, DMSO-d6)δ: 169.84, 164.38, 163.91, 152.30, 140.20, 139.67, 138.72, 137.55, 137.36, 133.71, 130.57, 129.01, 128.76, 128.61, 128.53, 127.32, 126.37, 125.25, 119.62, 113.72, 112.23, 109.94, 66.02, 43.40. HRMS 計算値 C28H26Cl2N7O2 [M+H]+, 562.1520, 実測値 562.1530.
【０１０９】
L26（#56）：
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ: 9.62 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 8. 72 (s, 1H), 8. 52(s, 1H) 8. 34 (s, 1H) 8.22 (d, J = 8.0Hz, 2H), 8.12 (d, J = 15.9Hz, 1H), 7.67(t, J = 7.0Hz, 1H), 7.50 (d, J = 8.0Hz, 2H), 7.17 -7.34(m, 4H) , 7.06 (d, J = 15.9Hz, 1H), 6.94 (t, J = 7.0Hz, 1H), 3.91 (m, 4H ),2.41 (m, 4H), 2.25(s, 3H)ppm. 13C NMR (75 MHz, DMSO-d6)δ: 169.8, 164.2, 163.9, 152.3, 140.3, 139.7, 138.7, 137.6, 137.2, 133.7, 130.6, 129.0, 128.9, 128.6, 127.3, 126.4, 125.3, 119.6, 113.7, 112.2, 109.9, 54.5, 45.8, 42.8. HRMS 計算値 C29H29Cl2N8O [M+H]+, 575.1836, 実測値 575.1842.
【０１１０】
L27（#66）：
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ: 9.62 (s, 1H), 8.83(s, 1H), 8. 72 (s, 1H), 8. 47 (s, 1H) 8. 30 (s, 1H) 8.18 (d, J = 8.0Hz, 2H), 8.11 (d, J = 15.9Hz, 1H), 7.65(t, J = 7.0Hz, 1H) 7.45 (d, J = 8.0Hz, 2H),7.14 -7.32(m, 4H) , 7.05 (d, J = 15.9Hz, 1H), 6.93 (t, J = 7.0Hz, 1H), 3.87 (m, 4H ),3.67 (m, 4H) ppm. 13C-NMR (75 MHz, DMSO-d6)δ:169.63, 164.37, 163.94, 152.32, 148.28, 140.18, 139.95, 139.70, 138.72, 137.13, 136.59, 133.59, 130.21, 129.96, 128.60, 128.49, 125.24, 123.56, 122.31, 119.59, 113.72, 112.22, 109.91, 66.03, 43.42, 30.37. HRMS 計算値 C28H26Cl2N8O4 [M+H]+, 573.1687, 実測値 573.1760. 
【０１１１】
L28（#67）：
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ: 9.60 (s, 1H), 8.81 (s, 1H), 8. 70 (s, 1H), 8. 50 (s, 1H) 8. 33 (s, 1H) 8.20 (d, J = 8.0Hz, 2H), 8.12 (d, J = 15.9Hz, 1H), 7.67(t, J = 7.0Hz, 1H) 7.48 (d, J = 8.0Hz, 2H)7.17 -7.34(m, 4H) , 7.06 (d, J = 15.9Hz, 1H), 6.94 (t, J = 7.0Hz, 1H), 3.89 (m, 4H ),2.39 (m, 4H), 2.23(s, 3H)ppm. 13C NMR (75 MHz, DMSO-d6)δ: 169.6, 164.2, 163.9, 152.3, 148.3, 140.2, 139.7, 138.7, 137.1, 133.6, 130.2, 130.0, 128.6, 128.5, 123.6, 122.4, 119.6, 113.7, 112.1, 109.9, 54.5, 45.8, 42.8. HRMS 計算値 C29H29ClN9O3 [M+H]+, 586.2076, 実測値 586.2085.
【０１１２】
L29（#70）：
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ: 9.60 (s, 1H), 8.86 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 7.94 (d, J = 15.9Hz, 1H), 7.72 -7.65(m, 4H) , 7.51 (d, J = 8.5Hz, 2H), 7.46 -7.40(m, 5H), 7.36 (d, J = 8.5Hz, 2H), 6.89 (d, J = 15.9Hz, 1H),3.83 (m, 4H ),3.69 (m, 4H), 2.97(s, 6H) ppm. 13C NMR (75 MHz, DMSO-d6)δ: 170.0, 164.4, 163.8, 152.4, 141.0, 138.7, 135.2, 134.1, 129.5, 129.2, 128.9, 128.2, 127.8, 120.6, 118.7, 117.2, 66.0, 43.4. HRMS 計算値 C31H33N8O3 [M+H]+,565.1670,実測値 565.2676.
【０１１３】
L30（#76）：
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ: 9.56 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.62(s, 1H), 7.94 (d, J = 15.9Hz, 1H), 7.71 -7.64(m, 4H) , 7.50 (d, J = 8.5Hz, 2H), 7.44 -7.39(m, 5H), 7.30 (d, J = 8.5Hz, 2H), 6.88 (d, J = 15.9Hz, 1H), 3.82 (m, 4H ),3.69 (m, 4H), 3.33(m, 2H), 2.89(m, 1H), 2.73(m, 1H), 1.63-1.61(m, 3H), 1.12-1.01(m, 2H), 0.92(d, J=6.1Hz, 3H)ppm. 13C NMR (75 MHz, DMSO-d6)δ: 168.85, 164.44, 163.81, 152.42, 140.92, 135.22, 134.18, 134.11, 129.25, 128.91, 128.08, 127.87, 127.76, 120.59, 118.72, 117.34, 65.96, 43.37, 30.47, 21.57. HRMS 計算値 C35H39N8O3 [M+H]+,619.3140,実測値 619.3151.
【０１１４】
L32（#73）：
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ: 9.64 (s, 1H), 9.11 (s, 1H), 8.84 (s, 1H), 8.37(t, J=5.4Hz, 1H), 7.99 (d, J = 15.9Hz, 1H), 7.85 (d, J = 8.5Hz, 2H), 7.77 -7.70(m, 4H), 7.58 (d, J = 8.5Hz, 2H), 7.52 -7.45(m, 5H), 6.93 (d, J = 15.9Hz, 1H), 3.88 (m, 4H ),3.74 (m, 4H), 3.49-3.45(m,2H), 2.67(t, J=6.1Hz,2H), 2.41(s, 6H)ppm. 13C NMR (75 MHz, DMSO-d6)δ: 165.83, 164.45, 163.81, 152.38, 142.63, 138.65, 134.21, 134.08, 129.44, 128.91, 128.13, 127.75, 127.19, 120.59, 118.70, 116.90, 65.96, 57.73, 44.50, 43.37, 36.55. HRMS 計算値 C33H38N9O3 [M+H]+, 608.3092, 実測値 608.3104.
【０１１５】
L33（#74）：
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ: 9.61 (s, 1H), 9.54 (s, 1H), 9.25 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.95 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.72 (d, J = 6.7 Hz, 2H), 7.66 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.55 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.43 (d, J = 5.8 Hz, 5H), 6.89 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 3.82 (s, 4H), 3.70 (s, 4H), 3.00 (dd, J = 14.2, 7.0 Hz, 4H), 2.85 (s, 4H), 1.17 (t, J = 7.2 Hz, 6H). HRMS 計算値 C35H42N9O3 [M+H]+,636.3405, 実測値 636.3417.
【０１１６】
L34（#77）：
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ: 9.61 (s, 1H), 9.02 (s, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.37(t, J=5.4Hz, 1H), 7.94 (d, J = 15.9Hz, 1H), 7.77 (d, J = 8.5Hz, 2H), 7.72 -7.64(m, 4H), 7.52 (d, J = 8.5Hz, 2H), 7.43 -7.41(m, 5H), 6.88 (d, J = 15.9Hz, 1H), 3.82 (m, 4H ),3.69 (m, 4H), 3.29-3.24(m,2H), 2.27(t, J=6.9Hz,2H), 2.15(s, 6H), 1.69-1.62(m,2H)ppm. 13C NMR (75 MHz, DMSO-d6)δ: 165.6, 164.4, 152.4, 142.5, 135.2, 134.2, 134.1, 129.5, 128.9, 128.0, 127.8, 127.5, 120.6, 118.7, 116.9, 65.9, 56.9, 45.1, 43.3, 37.6, 27.1. HRMS 計算値 C34H40N9O8 [M+H]+,662.3249,実測値 662.3255.
【０１１７】
L35（#75）：
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ: 9.61 (s, 1H), 9.51 (s, 1H), 9.23 (s, 1H), 8.43 (s, 1H), 7.95 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.69 (dd, J = 17.5, 7.5 Hz, 4H), 7.54 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.43 (d, J = 4.6 Hz, 5H), 6.89 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 3.83 (s, 4H), 3.70 (s, 4H), 3.44 (d, J = 5.4 Hz, 2H), 2.83 (d, J = 45.5 Hz, 6H), 1.76 (s, 4H). 13C NMR (75 MHz, DMSO-d6)δ: 169.95, 165.83, 164.41, 163.77, 152.51, 142.80, 138.66, 135.21, 134.26, 134.05, 129.44, 128.91, 128.19, 127.76, 127.15, 126.95, 124.86, 120.59, 118.41, 116.69, 65.96, 54.46, 53.48, 45.44, 43.35, 37.46, 29.27, 29.00, 22.89. HRMS 計算値 C35H40N9O3 [M+H]+,634.3249,実測値 634.3264.
【０１１８】
L36（#72）：
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ: 9.66 (s, 1H), 9.50 (s, 1H), 9.22 (s, 1H), 8.52(s,1H), 7.99 (d, J = 15.9Hz, 1H), 7.87 (d, J = 8.5Hz, 2H), 7.77 -7.70(m, 4H) , 7.60 (d, J = 8.5Hz, 2H), 7.49 -7.43(m, 5H), 6.94 (d, J = 15.9Hz, 1H), 3.87 (m, 4H ), 3.74 (m, 4H), 3.54 -3.52 (m, 2H), 2.80(m, 6H), 1.66(m, 4H), 1.49(m,2H)ppm. 13C NMR (75 MHz, DMSO-d6)δ: 169.98, 165.91, 164.40, 163.76, 152.47, 142.80, 138.62, 135.19, 134.19, 134.10, 129.43, 128.91, 128.20, 127.75, 127.12,126.92, 120.58, 118.49, 116.76, 65.96, 56.77, 53.26, 43.35, 35.56,24.15, 22.77. HRMS 計算値 C36H42N9O3 [M+H]+,648.3405,実測値 648.3423.
【０１１９】
L37（#71）：
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ: 9.60 (s, 1H), 8.93 (s, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.27(t,J=5.2Hz,1H),7.94 (d, J = 15.9Hz, 1H), 7.78 (d, J = 8.5Hz, 2H), 7.65 -7.72(m, 4H) , 7.52 (d, J = 8.5Hz, 2H), 7.40 -7.46(m, 5H), 7.34 (d, J = 8.5Hz, 2H), 6.89 (d, J = 15.9Hz, 1H),3.83 (m, 4H ),3.69 (m, 4H), 3.56 -3.59 (m, 4H),3.35(m, 2H), 2.43 -2.50(m, 6H)ppm. 13C-NMR (75 MHz, DMSO-d6)δ: 169.99, 165.67, 164.41, 163.78, 152.34, 142.49, 138.67, 135.19, 134.23, 134.01, 129.45, 128.91, 128.08, 127.76, 127.40, 127.12, 120.56, 118.77, 116.98, 66.15, 65.96, 57.44, 53.27, 43.35, 36.41. HRMS 計算値 C35H40N9O4 [M+H]+,650.3198,実測値 650.3212.
【０１２０】
L38（#84）：
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 8.67 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.96(d, J = 15.9Hz, 1H), 7.74-7.72 (m, 2H), 7.49 (d, J = 8.9Hz, 2H), 7.42 -7.40(m, 2H), 7.36(d, J = 8.9Hz, 2H), 7.14 (d, J = 8.9Hz, 2H), 6.94 (d, J = 15.9Hz, 1H), 6.88 (d, J = 8.9Hz, 2H), 3.72(s,3H), 3.67 (s, 2H), 3.60 (s, 4H) ppm；
【０１２１】
L39（#85）：
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 8.86 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 7.96(d, J = 15.9Hz, 1H), 7.73-7.11 (m, 2H), 7.52-7.45 (m, 4H), 7.42 -7.40(m, 3H), 7.34 (d, J = 8.7Hz, 2H), 7.17 (d, J = 8.7Hz, 2H), 6.93 (d, J = 15.9Hz, 1H), 3.89 (s, 2H), 3.67 (s, 2H), 3.60 (s, 4H) ppm；
【０１２２】
L40（#86）：
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 8.76 (s, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.70 (s, 1H),7.96(d, J = 15.9Hz, 1H), 7.72-7.70 (m, 2H), 7.50-7.45 (m, 5H), 7.42 -7.40(m, 2H), 7.15 -7.10(m, 4H), 6.94 (d, J = 15.9Hz, 1H), 3.89 (s, 2H), 3.67 (s, 2H), 3.60 (s, 4H) ppm.
【０１２３】
実施例５：化合物の生体外抗腫瘍細胞活性の計測（ＭＴＴ試験）
１）試験材料：
ＭＴＴ、ＲＰＭ１６４０培地、ウシ胎児血清、９６ウェルプレート、ＣＯ２恒温インキュベータ、米国ＢＩＯ−ＲＡＤ６８０型マイクロプレートリーダー、ヒト非小細胞肺癌細胞株（Ｈ５２２）及びヒト脳膠腫細胞株（Ｕ８７）は、いずれも市販で入手した。
【０１２４】
２）試験手順：
（１）細胞の接種は、１０％ウシ胎児血清含有培地で単独細胞懸濁液に調製し、１ウェルにつき５０００細胞の量で９６ウェルプレートに接種し、１ウェルにつき体積を１００μＬにし、一晩培養した。
（２）化合物溶液の調製は、クリーンベンチ中で、化合物のＤＭＳＯ保存液を培地で５つの供試濃度に希釈し、隣接する濃度の間は２倍で希釈された。
（３）異なる濃度の化合物溶液を一晩培養された９６ウェルプレートに、１ウェルにつき１００μＬの量で加え、１つの濃度につき３つの重複ウェルを設けた。周辺は、エッジ効果があって細菌に感染されやすいため、細胞も化合物も加えず、１００μＬの培地を空白として加えた。さらに１００％ウェル、即ち細胞及び化合物非含有培地１００μＬを加えたウェルを設け、３７度恒温インキュベータ中で４８時間インキュベートした。
（４）染色は、９６ウェルプレートに１０μＬのＭＴＴ溶液（５ｍｇ／ｍＬ、ＰＢＳで調製）を加えて染色し、４時間インキュベートした後、２５００ｒｐｓで１０分間遠心し、その後、ピペットチップを下向きにして細胞を吸い出さないように注意しながら、マルチチャンネルピペットで培地をウェルから吸出し、１５０μＬのＤＭＳＯを加え、振盪機で５〜１０分間振盪し、ホルマザンを十分に溶解させ、マイクロプレートリーダーによって５７０ｎｍで各ウェルのＯＤ値を計測した。以下のように抑制率を算出した：
【数１】
2019515049.tif 000019
【０１２５】
化合物の試験結果は下表に示す：
【表５−１】
2019515049.tif 000020
【表５−２】
2019515049.tif 000021
【０１２６】
「ＮＡ」は、試験最高濃度（３１．６μＭ）で、腫瘍細胞増殖に対する化合物の抑制作用が殆どなかった（＜２０％）ことを意味する。
【０１２７】
「＞３０」は、試験最高濃度（３１．６μＭ）で、化合物が腫瘍細胞増殖に対して一定の抑制作用を有したが、抑制率が＜５０％であったことを意味する。
【０１２８】
実施例６：化合物による腫瘍細胞抑制の広域性と選択性
８つの化合物（＃３８〜＃４５、順番にＬ２０、Ｌ２１、Ｌ１６、Ｌ１８、Ｌ１４、Ｌ１０、Ｌ１３及びＬ１１である）を選択し、１１種類の異なるヒト腫瘍細胞の増殖に対するそれらの抑制能を計測した。方法は実施例５と同様であった。供試細胞株は、ヒト非小細胞肺癌細胞株（Ｈ５２２）、ヒト結腸腺癌細胞株（ＨＣＴ１５）、ヒト子宮頸癌細胞株（Ｈｅｌａ）、ヒト肝癌細胞株（ＨｅｐＧ２）、ヒト線維肉腫細胞株（ＨＴ１０８０）、ヒト赤白血病細胞株（ＫＧ１）、ヒト前立腺癌細胞株（ＬＮＣａＰ）、ヒト乳癌細胞株（ＭＣＦ７）、ヒト卵巣癌細胞株（ＯＶＡＲ３）、ヒト黒色腫細胞株（ＳＫ−ｍｅｌ２８）及びヒト脳膠腫細胞株（Ｕ８７）であった。試験結果は図１に示す。
【０１２９】
実施例７：腫瘍細胞の空胞化及びメシュオーシス
多種の腫瘍細胞は、ある特定の構造の化合物で処理された後、いずれも細胞質において大量の小胞の蓄積が現れ、細胞が空胞化形態を示し、一部の細胞が段々に丸くなり、最終に破裂した。それらの変化は、細胞メシュオーシスの特徴に一致している（図２）。
【０１３０】
異なる化合物の細胞空胞化誘発能を比較するために、１０３のヒト膠腫Ｕ８７細胞と、最終濃度がそれぞれ０．０１、０．０３１６、０．１、０．３１６、１．０、３．１６０マイクロモルである供試化合物とを含有する１００マイクロリットルの培地（ＲＰＭＩ１６４０、２ミリモルのグルタミン、１０％ウシ胎児血清）を９６ウェル培養プレートに接種し、５％ＣＯ２、３７ｏＣで９６時間培養した後、高倍率顕微鏡で細胞形態を観察し、化合物の細胞空胞化誘発能について採点した。１０ナノモルだけで顕著な空胞化が現れたものを５と、３１．６ナノモルのものを４と、１００ナノモルのものを３と、３１６ナノモルのものを２と、１０００ナノモルのものを１と、いずれの濃度でも空胞化が無いものを０と採点した。
【０１３１】
図３は、異なる構造の化合物の細胞空胞化誘発能及びその細胞増殖抑制能を示す。具体的な結果は以下に示す：
【表６】
2019515049.tif 000022
備考：化合物＃５１は図３に示されていない；化合物＃６８は化合物Ｌ１６（＃４０）の塩酸塩である：
【化１２】
2019515049.tif 000023
【０１３２】
また、本実施例に記載の方法で実施例８における化合物７９及び１４について試験を行ったが、それらの空胞化得点はそれぞれ４．５分と１．５分であった。
【０１３３】
実施例８：標的タンパク質のプローブによる釣り出し
細胞空胞化を誘発する化合物の標的タンパク質の分離及び同定方法は図４に概括し、関連する手順は以下に簡単に説明する。
【０１３４】
プローブの合成（図５）：
＃７９化合物の合成スキームと合成：
【化１３】
2019515049.tif 000024
【０１３５】
式中、側鎖Ｃ１は文献（Li, Z., Hao P., Li L. et al. Design and synthesis of minimalist terminal alkyne-containing diazirine photo-crosslinkers and their incorporation into kinase inhibitors for cell- and tissue-based proteome profiling. Angew. Chem.Int. Ed.,2013, 52, 8551-8556）における方法を参照して調製した。
【０１３６】
実施例２の方法及び相応の材料を用いて、化合物１４（（Ｅ）−１−（４−カルボキシフェニル）−３−（４−（４−（モルホリン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジニル−２−アミノ）フェニル）ウレア）を調製し、その質量分析データは以下のようであった：
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ: 12.33 (s, 1H), 9.59 (s, 1H), 9.41 (s, 1H), 9.09 (s, 1H), 7.94 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 7.88 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.77−7.63 (m, 4H), 7.59 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.51−7.36 (m, 5H), 6.89 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 3.83 (s, 4H), 3.69 (s, 4H)ppm。
【０１３７】
（Ｅ）−Ｎ−（２−（３−（１−ブチン−４−イル）−３Ｈ−ジアジリン−３−イル）エチル）−４−（３−（４−（（４−（モルホリン−１−イル）−６−スチリル−１，３，５−トリアジン−２−イル）アミノ）フェニル）ウレア）ベンズアミド（７９）
【０１３８】
室温条件下で、順番に中間体１４（１００ｍｇ、０．１８６ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（３２．７ｍｇ、０．２４２ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（２ｍＬ）、ＥＤＣＩ（５３．５ｍｇ、０．２７９ｍｍｏｌ）、Ｃ１（３３．０ｍｇ、０．２４２ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（３７．６ｍｇ、０．３７２ｍｍｏｌ）を２５ｍＬの反応フラスコに入れ、引き続き８時間攪拌して反応させ、反応完了後、反応液を１０ｍＬの氷水に流し、ジクロロメタン（２０ｍＬ）で抽出し、順番に水、飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を蒸発乾燥し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより薄黄色固体を９２．８ｍｇ得、収率は７６％であった。1H NMR（300 MHz, DMSO-d6）: δ 9.62（s, 1H）, 8.94（s, 1H）, 8.68（s, 1H）, 8.34（t, J = 5.2Hz, 1H）, 7.96（d, J = 15.9Hz, 1H）, 7.80（d, J = 8.6Hz, 2H）,7.67 -7.74（m, 4H）, 7.55（d, J = 8.6Hz, 2H）, 7.42 -7.48（m, 5H）, 6.90（d, J = 15.9Hz, 1H）, 3.84（m, 4H ）, 3.71（m, 4H）, 3.13-3.20（m, 2H）, 2.87（d, J = 2.5Hz, 1H）, 2.04（td, J = 7.4Hz , J = 2.5Hz, 2H）, 1.62-1.69（m, 4H）ppm。13C NMR (75 MHz, DMSO-d6)δ: 170.05, 165.66, 164.41, 163.87, 152.16, 142.45, 140.30, 139.59, 138.91, 135.22, 129.44, 128.87, 128.63, 128.07, 127.77, 127.40, 127.01, 117.02, 113.69, 112.13, 109.78, 83.13, 71.72, 66.05, 43.41, 34.27, 31.99, 31.30, 27.28, 12.67. ES-MSm/Z: 655.5[M-H]-, C36H36N10O3(MW=656.7)。
【０１３９】
＃８０化合物の合成スキームと合成：
【化１４】
2019515049.tif 000025
式中、試薬のＮ１とビオチンは市販品として購入した。
【０１４０】
Ｎ−（２−（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）エトキシ）エタン−１−イル）ビオチンアミド（８０）
室温条件下で、順番にビオチン（９４ｍｇ、０．３８５ｍｍｏｌ、ｂｉｏｔｉｎ）、ＨＯＢｔ（７４．５ｍｇ、０．５５１ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（２ｍＬ）、ＥＤＣｌ（１０６ｍｇ、０．５５１ｍｍｏｌ）、Ｎ１［８０ｍｇ、０．３６７ｍｍｏｌ、名称は：２−（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）エトキシ）エタン−１−アミンである］及びトリエチルアミン（５５．７ｍｇ、０．５５１ｍｍｏｌ）を２５ｍＬの反応フラスコに入れ、引き続き８時間攪拌して反応させ、反応完了後、反応液を１０ｍＬの氷水に流し、ジクロロメタン（２０ｍＬ）で抽出し、順番に水、飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を蒸発乾燥し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより薄黄色固体を１２３ｍｇ得、収率は７２％であった。 1H NMR（300 MHz, DMSO-d6） δ: 4.31（m, 1 H, CH-1-biotin）, 4.14（m, 1 H, CH-4-biotin）, 3.55-3.52（m, 8 H, O（CH2CH2O）-PEG）, 3.40-3.38（m 4 H, CH2NH 及び CH2N3-PEG）, 3.10（m, 1 H, CH-3-biotin）, 2.83（dd, 1 H, J = 4.8, 12.3 Hz, CH-2a-biotin）, 2.60-2.56（m, 1 H, CH-2b-biotin）, 2.07（t, 2 H, J =7.2 Hz, CH2CO-biotin）, 1.50-1.30（m, 6 H,（CH2）3-biotin）。
【０１４１】
細胞培養：所定の数量のヒト膠腫細胞Ｕ８７を１５０ｃｍ２培養ディッシュに接種し、４８時間培養し、細胞を７５〜９０％融合状態にした。予め暖めた０．５マイクロモル濃度のプローブ（＃７９化合物）又はコントロールとしての同等体積のＤＭＳＯを含有する培地で培地を交換し、引き続き３時間培養した。 
【０１４２】
紫外線による架橋：予め冷却したリン酸緩衝液（ＰＢＳ）で細胞を２回洗浄した。細胞培養ディッシュを氷上に置き、上部から紫外線（出力１００ワットの紫外線ランプ、波長３５０  ｎｍ又は３１５〜３８５  ｎｍ）を１時間照射し、或いは細胞培養ディッシュに予め冷却したＰＢＳ（１０ｍｌ／１５０ｃｍ２）を十分に少ない量で加え、培養ディッシュを紫外線照射器に置き、細胞を培養ディッシュの底部から３０分間の照射（波長３１５〜３８５  ｎｍ、紫外線の出力に応じて時間を調整した）を受けさせた。
【０１４３】
細胞溶解液の調製：細胞をトリプシンで処理して脱着・分散させ、遠心で沈殿させ、ＰＢＳで２回洗浄した。細胞ペレットをＨＥＰＥＳ溶解緩衝液（２５ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、２ｍＭ塩化マグネシウム、０．１％  ＮＰ−４０、プロテアーゼ阻害剤、ｐＨ７．５）に再懸濁し、一旦超音波でホモジェナイズし（省略可能）、４℃で３０分間回転して混合し、その後４℃で１０分間高速遠心し、Ｂｒａｄｆｏｒｄ法により溶解液のタンパク質濃度を計測した。
【０１４４】
予備除去：１ｍＬの細胞溶解液（１〜２ｍｇ／ｍＬ）を取り、ＨＥＰＥＳ緩衝液（２５ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、２ｍＭ塩化マグネシウム、ｐＨ７．５）で予め平衡化されたストレプトアビジン−アガロースビーズ（Agarose-streptavidin）を加え、４℃で２時間若しくは一晩回転して混合し、遠心し、液相を保存した。
【０１４５】
クリック反応（Click Reaction）：前記細胞溶解液を９４０マイクロリットル取り、新鮮に調製した反応混合物（２０μＬ  ５０ｍＭ  ＣｕＳＯ４、１０μＬ調製直後の１０ｍＭ  ＴＢＴＡ即ちＴｒｉｓ［（１−ベンジル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル］アミン、２０μＬ  ５０ｍＭ  ＴＣＥＰ即ちｔｒｉｓ（２−カルボキシエチル）ホスフィン、及び１０μＬ  １ｍＭ  ＃８０化合物）を加え、室温で２時間優しく混合し、２倍体積の−２０℃に予め冷却したアセトンを加えて反応を中止させ、４℃で（１３０００ｒｐｍ）１０分間高速遠心してタンパク質を沈殿させ、５００マイクロリットルの予め冷却したメタノールで２回洗浄し、超音波で１ｍＬ  ０．１％ＳＤＳ  ＰＢＳに溶解させた。
【０１４６】
標的タンパク質の精製：前記再懸濁したタンパク質溶液に、ＰＢＳで平衡化されたストレプトアビジン−アガロースビーズ（２００マイクロリットルの沈殿物）を加え、４℃で２時間若しくは一晩回転して混合し、アガロースビーズを遠心して沈殿させ、０．１％ＳＤＳ  ＰＢＳで１回洗浄し、ＰＢＳで４回洗浄し、１倍体積の２ｘＳＤＳローディングバッファーを加え、１５分間沸騰させ、遠心して溶液を取り、１０％  ＳＤＳ−ＰＡＧＥでタンパク質を分離した。２０ｍＬのクマシーブルー溶液でゲルを１時間染色し、２×５００ｍｌの再蒸留水で２×１時間脱色し、特異的なタンパク質バンドを切り出した（図６、Ａ）。
【０１４７】
標的タンパク質の同定：ＭＡＬＤＩ質量分析ペプチドマッピング及び配列解析（ＭＡＬＤＩ−ＭＳ／ＭＳ）により、精製されたタンパク質を同定した。計測されたペプチド配列とデータベースのアライメントにより、精製されたタンパク質を同定したところ、ビメンチン（vimentin）であった（図６、Ｂ、Ｃ）。
【０１４８】
実施例９：＃５０化合物と標的タンパク質のドッキング結果
ソフトウェアＤｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｓｔｕｄｉｏ  ３．０を選択し、それにおけるＬｉｂＤｏｃｋドッキング方法を用いて、ＰＤＢデータベース（protein data bank）から由来する四量体ビメンチンである３ＫＬＴ（図７におけるＡ）と＃５０化合物（図７におけるＢ）をドッキングした。３ＫＬＴ自身が持つリガンドを参考にして、前記ピンク色の球形活性ポケットを構築し、半径を１０Åにし、格子点数を１０００にし、立体配座の生成方法をＢｅｓｔにし、小分子立体配座の生成数量最大値を２５５にし、他のパラメータをデフォルト値にした。ベストテンの＃５０化合物の立体配座の採点結果（図７におけるＣ）を得て；それにより＃５０化合物の点数の一番高い立体配座とビメンチンの作用の図（図７におけるＤ）、及びタンパク質を除去した後で、＃５０化合物と水素結合を形成するアミノ酸（図７におけるＥ）を示し、それらから、２つのアミノ酸：Ａｒｇ２７３及びＴｙｒ２７６は＃５０化合物におけるトリアジン環と水素結合を形成することが分かった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７−１】
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【図７−２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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