(57)【要約】  本発明は、バリダマイシンとイプコナゾールとの重量比は１：６８〜４０：１である、バリダマイシンとイプコナゾールとを含有する殺菌組成物である。本発明の殺菌組成物は、ムギ類の赤かび病、ムギ類のうどんこ病、ムギ類のさび病、ムギ類の紋枯病、ムギ類の葉枯病、イモチ病、稲こうじ病、イネ紋枯病を防除するのに顕著な相乗効果を有し、特にムギ類の赤かび病を防除するのに、その相乗効果がさらに明らかであり、穀物のＤＯＮ毒素の汚染レベルを顕著に低下させることができる。本発明は農業生産において、農薬の使用量及び使用回数を大幅に低減させ、生産コストを低減し、環境汚染及び農薬残留を減らすため、社会、経済及び生態系利益を増大させるのに重要な現実的意味を有する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
バリダマイシンとイプコナゾールとの重量比が１：６８〜４０：１である、ことを特徴とするバリダマイシンとイプコナゾールとを含有する殺菌組成物。
【請求項２】
前記バリダマイシンとイプコナゾールとの重量比が１：３４〜２０：１である、ことを特徴とする請求項１に記載のバリダマイシンとイプコナゾールとを含有する殺菌組成物。
【請求項３】
前記バリダマイシンとイプコナゾールとの重量比が１：１７〜１０：１である、ことを特徴とする請求項１に記載のバリダマイシンとイプコナゾールとを含有する殺菌組成物。
【請求項４】
バリダマイシンとイプコナゾールとの合計の重量含有率は、前記殺菌組成物の総量の２〜８０％であり、残部は農薬として許容される担体及び／又は助剤である、ことを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載のバリダマイシンとイプコナゾールとを含有する殺菌組成物。
【請求項５】
前記バリダマイシンとイプコナゾールとの合計の重量含有率は、前記殺菌組成物の総量の１０〜７０％であり、残部は農薬として許容される担体及び／又は助剤である、ことを特徴とする請求項４に記載のバリダマイシンとイプコナゾールとを含有する殺菌組成物。
【請求項６】
前記殺菌組成物の製剤は、水和剤、懸濁剤、マイクロエマルション又は水和性顆粒剤である、ことを特徴とする請求項１〜５のいずれか１項に記載のバリダマイシンとイプコナゾールとを含有する殺菌組成物。
【請求項７】
前記担体は水、カオリン、珪藻土、パリゴルスカイト又は軽質炭酸カルシウムのうちの１種類又は複数種類である、ことを特徴とする請求項４又は５に記載のバリダマイシンとイプコナゾールとを含有する殺菌組成物。
【請求項８】
前記助剤はエタノール、メタノール、エチレングリコール、プロピレングリコール、ＮＮＯ−１、ＮＮＯ−７、キサンタンガム、ポリエチレングリコール、グリセリン、ネカール、ドデシル硫酸ナトリウム、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、ポリオキシエチレンアルキルフェノールエーテル、ラウリルアルコールポリオキシエチレンエーテル、フェニルエチルフェノールホルムアルデヒド樹脂ポリオキシエチルエーテル、アルキルフェノールポリオキシエチレンエーテルリン酸塩、脂肪酸ポリオキシエチレンエステル、スルホン酸ポリホルムアルデヒド縮合物、Ｎ−メチルピロリドン、アルキルベンゼンスルホン酸カルシウム、ブチルナフタレンスルホン酸ナトリウム、安息香酸、リグニンスルホン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、シリコーン系化合物、ケイ酸マグネシウムアルミニウム又はポリビニルアルコールのうちの１種類又は複数種類である、ことを特徴とする請求項４又は５に記載のバリダマイシンとイプコナゾールとを含有する殺菌組成物。
【請求項９】
ムギ類赤かび病、ムギ類紋枯病、ムギ類うどんこ病、ムギ類さび病、ムギ類葉枯病の防除における請求項１〜６のいずれか１項に記載の殺菌組成物の応用。
【請求項１０】
イモチ病、稲こうじ病、イネ紋枯病の防除における請求項１〜６のいずれか１項に記載の殺菌組成物の応用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、バリダマイシンとイプコナゾールとを含有する殺菌組成物及びその応用に関し、農薬技術分野において、使用量を減らしつつ、効果を上げる農薬組成物に属し、その有効成分はバリダマイシン及びイプコナゾールである。
【背景技術】
【０００２】
バリダマイシン（Ｖａｌｉｄａｍｙｃｉｎ又はｊｉｎｇｇａｎｇｍｙｃｉｎ）は、ラパマイシンとも称し、放線菌の二次代謝産物であり、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆの６種類のアミノグリコシド系近似の誘導体を含有する。多くの国内外の研究によると、Ａ成分はバリダマイシンの主な活性成分である。従って、本発明に係るバリダマイシンの主成分はバリダマシンＡである。バリダマイシンはインビトロ条件下で特異性を表し、担子菌のリゾクト二ア属の真菌（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ  ｓｐｐ．）先の菌糸の生育を干渉する。従って、バリダマイシンは２０世紀７０年代に発見されて以来、農業用抗生物質としてリゾクト二アによる植物病害を特異的に防除したり、或いは配合剤として、他の植物有害生物を防除する農薬と配合して、リゾクト二ア（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ  ｓｐｐ．）による病害を治したりしてきた。これらのリゾクト二ア病害は主にイネ紋枯病、ムギ紋枯病及び他の農作物の紋枯病や青枯病を含む。近年、バリダマイシンはさらに培養しにくい不完全菌（Ｕｓｔｉｌａｇｉｎｏｉｄｅａ  ｖｉｒｅｎｓ）による稲こうじ病を防除可能であることも発見された。
【０００３】
イプコナゾ−ルは、トリアゾール系エルゴステロール生合成阻害剤であり、英語通用名称はＩｐｃｏｎａｚｏｌｅであり、分子式はＣ１８Ｈ２４ＣＩＮ３Ｏであり、化学名は２−（４−クロロベンジル）−５−イソプロピル−１（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イルメチル）シクロペンタノールであり、ＣＡＳ番号は１２５２２５−２８−７である。吸引、保護及び治療的な活性を有し、子嚢菌、担子菌及び不完全菌による病害を効果的に防除でき、種処理により根から茎と葉に伝達するため、赤かび病、斑点病、青枯病の抑止に優れる。
【０００４】
農作物の生育中において、不可避的に何らかの病害が出るが、即時的に防除しないと農作物の収穫量に重大な損失を与える一方、同じ薬剤を頻繁に使用してこれらの病害を防除すると、これらの病菌に薬物耐性が生じるため、このような問題を解消するため、異なる作用メカニズムを持つ農薬を配合することで、病原菌の薬物耐性の発生を遅延させ、植物病害の防除効果を上げつつ用量を減らすことができる。バリダマイシン又はラパマイシンは、インビトロ条件下でリゾクト二アのみに対し特異的な抗菌活性を有するが、赤かび病を起すフザリウムに対しては抗菌活性を有しないため、数十年の間、リゾクト二アを対象とする、バリダマイシンの選択的メカニズムが研究されており、ラパマイシン／バリダマイシンが、リゾクト二アイノシトール及びトレハロース代謝を干渉することによって細胞壁を破壊し、リゾクト二アの植物への侵食を阻止し、良好な保護作用を奏することが分かった。
本発明者は、フザリウムによるＤＯＮ毒の生合成経路及び調和メカニズムを研究した上で、ＤＯＮ毒の生合成を抑制する化合物の大量の選別を行った。選別の際に、バリダマイシンが一定量の処理剤の下で、ムギ赤かび病菌ＤＯＮ毒の生合成の早期経路における生化学反応を強く抑制できることに驚いた。
従って、バリダマイシン単剤は、ムギ類の赤かび病を効果的に予防できないが、フザリウムの二次代謝産物−ＤＯＮ毒には一定の抑制効果を有する。本発明者は、世界的にも初めて、バリダマイシン／ラパマイシンの、フザリウムによるＤＯＮ合成に対する抑制作用、及び、他の各種殺菌剤との混合物により、田んぼでのムギ類の赤かび病を効果的に防除する処方の選別を研究し、バリダマイシンとイプコナゾールとの組成物が、ムギ類の農作物の赤かび病の防除において顕著な効果を果たし、ＤＯＮ毒による汚染を低減し、農薬の使用量の大幅削減において有益な効果があることに創造性を見出した。発明者は試験を通して本発明がイモチ病、稲こうじ病、イネ紋枯病などの稲病害の防除にも顕著な効果を有し、薬物耐性の発生を遅延し、農薬の使用量及び使用回数を減らすことで、防除コストを効果的に低減できることがさらに分かった。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、ムギ類の赤かび病を防除し、穀物のＤＯＮ毒の汚染を抑制する、バリダマイシンとイプコナゾールとを含んだ殺菌組成物を提供することにある。本発明のもう１つの目的はイモチ病、稲こうじ病、イネ紋枯病、ムギ類の真菌病害への上記殺菌組成物の応用を開示することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記発明の目的を果たすために、本発明は、バリダマイシンとイプコナゾールとの重量比が１：６８〜４０：１である、バリダマイシンとイプコナゾールとを含有する殺菌組成物を提供する。
【０００７】
本発明の好ましい実施の形態によれば、上記バリダマイシンとイプコナゾールとの重量比は１：３４〜２０：１である。
【０００８】
本発明のもう１つの好ましい実施の形態によれば、上記バリダマイシンとイプコナゾールとの重量比は１：１７〜１０：１である。
【０００９】
本発明に係るバリダマイシンとイプコナゾールとを含有する殺菌組成物において、バリダマイシンとイプコナゾールとの合計の重量含有量は、前記殺菌組成物の総含有量の２〜８０％であり、残部は農薬に許容される担体及び／又は助剤である。
【００１０】
本発明の好ましい実施の形態によれば、前記のバリダマイシンとイプコナゾールとの合計の重量含有率は、前記殺菌組成物の総量の１０〜７０％であり、残部は農薬に許容される担体及び／又は助剤である。
【００１１】
本発明のもう１つの好ましい実施の形態によれば、前記の殺菌組成物の製剤は水和剤、懸濁剤、マイクロエマルション又は水和性顆粒剤である。
【００１２】
本発明のもう１つの好ましい実施の形態によれば、前記担体は、水、カオリン、珪藻土、パリゴルスカイト又は軽質炭酸カルシウムのうちの１種類又は複数種類である。
【００１３】
本発明のもう１つの好ましい実施の形態によれば、前記助剤は、エタノール、メタノール、エチレングリコール、プロピレングリコール、ＮＮＯ−１、ＮＮＯ−７、キサンタンガム、ポリエチレングリコール、グリセリン、ネカール、ドデシル硫酸ナトリウム、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、ポリオキシエチレンアルキルフェノールエーテル、ラウリルアルコールポリオキシエチレンエーテル、フェニルエチルフェノールホルムアルデヒド樹脂ポリオキシエチルエーテル、アルキルフェノールポリオキシエチレンエーテルリン酸塩、脂肪酸ポリオキシエチレンエステル、スルホン酸ポリホルムアルデヒド縮合物、Ｎ−メチルピロリドン、アルキルベンゼンスルホン酸カルシウム、ブチルナフタレンスルホン酸ナトリウム、安息香酸、リグニンスルホン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、シリコーン系化合物、ケイ酸マグネシウムアルミニウム又はポリビニルアルコールのうちの１種類又は複数種類である。
【００１４】
本発明のもう１つの好ましい実施の形態によれば、前記の殺菌組成物はムギ類赤かび病、ムギ類紋枯病、ムギ類うどんこ病、ムギ類さび病、ムギ類葉枯病の防除に応用される。
【００１５】
本発明のもう１つの好ましい実施の形態によれば、前記の殺菌組成物はイモチ病、稲こうじ病、イネ紋枯病の防除に応用される。
【発明の効果】
【００１６】
有益な効果は以下の通りである。発明者は植物病害の発生、防除用薬剤の使用技術、効果メカニズム及び薬物耐性についての研究により、本発明に理論及び技術的基礎を提供する。本発明は、バリダマイシンとイプコナゾールとを用い、配合を選別し、その目的は効果的な処方を取得し、農薬において使用量及び使用回数を減らすことで、生産コストを低減し、防除効果を向上させ、薬物耐性を抑制することにある。
【００１７】
本発明は、室内及び田んぼでの薬力学的効果の試験を行い、その結果によると、バリダマイシンとイプコナゾールとは物理的及び化学的性質に互換性を有し、使用上安全で、薬力学的効果が顕著である。他の農薬に比べると以下の利点を有する。
【００１８】
１．本発明の殺菌組成物は殺菌スペクトルが広く、バリダマイシンとイプコナゾールとの組成により応用ターゲットを拡大することができる。ムギ類の赤かび病、うどんこ病、さび病、紋枯病及び葉枯病を効果的に防除でき、さらにイモチ病、稲こうじ病及びイネ紋枯病も防除できるため、病害による農作物の被害を減らし、農産物の生産量及び品質を向上させることができる。
【００１９】
２．本発明の殺菌組成物は防除効果が著しく、ムギ類の赤かび病、うどんこ病、紋枯病、葉枯病及びイモチ病、稲こうじ病、イネ紋枯病の防除において顕著な相乗効果を有するため、農薬の使用量を低減させ、農薬の使用コストを低減し、社会、経済及び生態系利益を増大させることができる。
【００２０】
３．本発明の殺菌組成物におけるバリダマイシンとイプコナゾールとは、それぞれ異なる効果メカニズムを有する殺菌剤であり、過去のムギ類赤かび病の防除用主流薬剤であるカルベンダジムとの交差耐性を存在させない。さらに重要なことは、当該殺菌組成物は、穀物のＤＯＮ毒による汚染を低減し、毒の汚染が人類の食糧及び食品安全に及ぼすリスクを低減することができることである。
【００２１】
４．本発明の殺菌組成物は、複合農薬に属し、互換性、高効率性、低毒性、低残留性、即効性及び持続性に優れ、環境にやさしいなどの利点を有する。
【００２２】
１．本発明の殺菌組成物は、生物と化学農薬とによる複合組成となっており、化学薬剤に対する病原菌の薬物耐性リスクレベルを低下させ、病原菌の感度を維持することに有利であり、また処方中の単剤に対して生じる病菌の薬物耐性を遅延させることができる。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
以下、具体的な実施例により本発明についてさらに説明するが、本発明は以下の実施例に限定されず、各組成成分は重量分で計って加える。
【００２４】
（実施例１）
１６％バリダマイシン・イプコナゾール水和剤
【００２５】
バリダマイシン８％、イプコナゾール８％、ＮＮＯ−１  １％、ネカール３％、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム２％、パリゴルスカイト３０％、他に軽質炭酸カルシウムを加え１００％にする。上記組成成分を十分に混ぜ、サンドミルで粉砕し、３００メッシュの篩いにかけることにより、１６％バリダマイシン・イプコナゾール水和剤が得られる。
【００２６】
（実施例２）
６０％バリダマイシン・イプコナゾール水和剤
【００２７】
バリダマイシン４０％、イプコナゾール２０％、ＮＮＯ−１  １％、ネカール３％、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム２％、パリゴルスカイト３０％、他に軽質炭酸カルシウムを加え１００％にする。上記組成成分を十分に混ぜ、サンドミルで粉砕し、３００メッシュの篩いにかけることにより、６０％バリダマイシン・イプコナゾール水和剤が得られる。
【００２８】
（実施例３）
４２％バリダマイシン・イプコナゾール水和剤
【００２９】
バリダマイシン３０％、イプコナゾール１２％、ＮＮＯ−１  １％、ネカール３％、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム２％、パリゴルスカイト３０％、他に軽質炭酸カルシウムを加え１００％にする。上記組成成分を十分に混ぜ、サンドミルで粉砕し、３００メッシュの篩いにかけることにより、４２％バリダマイシン・イプコナゾール水和剤が得られる。
【００３０】
（実施例４）
１０％バリダマイシン・イプコナゾール懸濁剤
【００３１】
バリダマイシン４％、イプコナゾール６％、エチレングリコール４％、プロピレングリコール４％、ＮＮＯ−１  １％、ＮＮＯ−７  １％分散剤、キサンタンガム接着剤０．５％、ポリエチレングリコール１％、他に水を加え１００％にし、上記組成成分を十分に混ぜ、直径≦５μｍの９０％顆粒薬になるまでサンドミルで粉砕することにより、１０％バリダマイシン・イプコナゾール懸濁剤が得られる。
【００３２】
（実施例５）
４８％バリダマイシン・イプコナゾール懸濁剤
【００３３】
バリダマイシン３６％、イプコナゾール１２％、エチレングリコール４％、プロピレングリコール４％、ＮＮＯ−１  １％、ＮＮＯ−７  １％分散剤、キサンタンガム接着剤０．５％、ポリエチレングリコール１％、他に水を加え１００％にし、上記組成成分を十分に混ぜ、直径≦５μｍの９０％顆粒薬になるまでサンドミルで粉砕することにより、４８％バリダマイシン・イプコナゾール懸濁剤が得られる。
【００３４】
（実施例６）
２４％バリダマイシン・イプコナゾールマイクロエマルション
【００３５】
バリダマイシン４％、イプコナゾール２０％、Ｎ−メチルピロリドン１％、アルキルベンゼンスルホン酸カルシウム２％、フェニルエチルフェノールホルムアルデヒド樹脂ポリオキシエチルエーテル２％、エチレングリコール１．５％、
シリコーン系化合物０．８％、キサンタンガム１％、ケイ酸マグネシウムアルミニウム１％、他に水を加え、１００％にする。
【００３６】
上記割合のバリダマイシン、イプコナゾール、溶剤Ｎ−メチルピロリドン、乳化剤アルキルベンゼンスルホン酸カルシウム及びフェニルエチルフェノールホルムアルデヒド樹脂ポリオキシエチルエーテルを混ぜ、均一な油相に溶解する。水、不凍液エチレングリコール、増粘剤キサンタンガム、消泡剤シリコーン系化合物を混ぜ、均一な水相にする。高速攪拌しながら、水相を油相に加えることにより、２４％バリダマイシン・イプコナゾールマイクロエマルションが得られる。
【００３７】
（実施例７）
２０％バリダマイシン・イプコナゾール水和性顆粒剤
【００３８】
バリダマイシン４％、イプコナゾール１６％、硫酸アンモニウム１０％、ポリオキシエチレンアルキルフェノールエーテル２．５％、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム２．５％、脂肪酸ポリオキシエチレンエステル３．５％、他に軽質炭酸カルシウムを加え１００％にし、上記組成成分を十分に混ぜ、粉に粉砕し、粉を適量の水溶液と均一に混ぜ、高速に切削し、サンドミルで研磨し、そして流動床により粒にし、乾燥させ、篩いにかけることにより、２０％バリダマイシン・イプコナゾール水和性顆粒剤が得られる。
【００３９】
（実施例８）
３０％バリダマイシン・イプコナゾール水和性顆粒剤
【００４０】
バリダマイシン１０％、イプコナゾール２０％、硫酸アンモニウム１０％、ポリオキシエチレンアルキルフェノールエーテル２．５％、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム２．５％、脂肪酸ポリオキシエチレンエステル３．５％、他に軽質炭酸カルシウムを加え１００％にし、上記組成成分を十分に混ぜ、粉に粉砕し、粉を適量の水溶液と均一に混ぜ、高速に切削し、サンドミルで研磨し、そして流動床により粒にし、乾燥させ、篩いにかけることにより、３０％バリダマイシン・イプコナゾール水和性顆粒剤が得られる。
【００４１】
（実験例１）
インビトロ条件下でフザリウム菌糸の生育を抑制するイプコナゾールに及ぼすバリダマイシンの影響
【００４２】
本発明は、殺菌剤生物測定の通常方法を用い、バリダマイシンとイプコナゾールをそれぞれ滅菌水及びメタノールで２ｍｇ／ｍＬ母液に配合し、対照群のカルベンダジム原薬を０．１Ｍ／Ｌ塩酸溶液に溶かし、フェナマクリルをメタノールに溶かし、２ｍｇ／ｍＬの母液を調製する。ポテトデキストロース寒天培（ＰＤＡ）を約４５℃の温度まで冷却したタイミングで、それぞれバリダマイシンとイプコナゾールを設計濃度（表１）まで加え、そしてペトリ皿に入れて異なる薬剤処理の平板を製造し、３皿を処理するごとに繰り返し、ムギ類赤かび病を引き起こすフザリウム・グラミネアラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ）とフザリウム・アジアティカム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ａｓｉａｔｉｃｕｍ）野生型感受性株（略称：感受性株）及びカルベンダジムとフェナマクリル（ｐｈｅｎａｍａｃｒｉｌ）耐性菌株（略称：薬物耐性菌株）の菌糸ブロックを接種し、２５℃の温度で４日間培養し、十字交差法によりコロニー直径を測定し、異なる処理により病菌生育を５０％抑制する効果濃度（ＥＣ５０）を算出し、かつ抗菌活性を比較する。
【００４３】
試験結果によると、バリダマイシンは、単剤であるかイプコナゾールとの混用であるかに関わらず、インビトロの下では、赤かび病を起すこの２種類のフザリウム感受性菌株及び薬物耐性菌株の生育に対し、活性をほとんど抑制せず、バリダマイシンが５０μｇ／ｍＬ濃度に達した場合に限って、２種類のフザリウムの生育に対し、６．５％〜７．８％の抑制効果を有する。ただし、イプコナゾールは、２種類のフザリウムの感受性菌株の菌糸生育に対し、類似の強烈な抑制効果を有し、０．１μｇ／ｍＬイプコナゾール処理による菌糸生育の抑制作用だけでも５０％を超えることが可能である。バリダマイシンは、インビトロ条件下で、菌糸の生育を抑制するイプコナゾールに対し相乗効果がない（表１）。
【００４４】
イプコナゾールの異なる投与量処理下での、フザリウム・アジアティカムとフザリウム・グラミネアラムの野生型感受性菌株、及び、カルベンダジムとフェナマクリル耐性菌株の生育抑制率により、異なる薬感受性菌株の生育を抑制するイプコナゾールの効果濃度（ＥＣ５０）を計算した結果、感受性菌株、カルベンダジム耐性菌株、フェナマクリル耐性菌株は、イプコナゾールへの感受性が類似し、ＥＣ５０が０．８９〜０．１１μｇ／ｍＬであることが分かった。試験結果は表２に示すとおりである。
【００４５】
薬剤のＥＣ５０をパラメーターとして、異なる殺菌剤がフザリウムの生育を抑制する活性を比べると、イプコナゾールの活性は感受性菌株へのカルベンダジムの活性（２種類のフザリウムのＥＣ５０はいずれも０．４５μｇ／ｍＬである）の約４．５倍、感受性菌株へのフェナマクリルの活性（２種類のフザリウムのＥＣ５０は、いずれも０．１６５μｇ／ｍＬである）の１．５倍であることが分かった。この結果は、イプコナゾールは、野生型感受性菌株及びカルベンダジムとフェナマクリルの耐性フザリウムの生育を強く抑制する活性を有し、穀物を侵食するＤＯＮ毒の汚染レベルを低下し、薬物耐性病害を防除するのに有利であることを示す。
【００４６】
【表１】
2019520320.tif 000002
＊Ｆ．ｇ及びＦ．ａはそれぞれＦｕｓａｒｉｕｍ  ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ及びＦｕｓａｒｉｕｍ  ａｓｉａｔｉｃｕｍの略語であり、以下も同様である。
【００４７】
【表２】
2019520320.tif 000003
【００４８】
（実験例２）
フザリウム毒素の生合成能力に対するバリダマイシンの抑制活性
【００４９】
バリダマイシン及びイプコナゾールへのフザリウム・グラミネアラムとフザリウム・アジアティカムの薬物感受性が同様であるため、発明者は、毒素産生をさらに研究するための素材として、毒素産生能力（菌単位量が産生するＤＯＮ重量、μｇＤＯＮ／ｇ菌糸乾燥重量）のより強いフザリウム・アジアティカムＦｕｓａｒｉｕｍ  ａｓｉａｔｉｃｕｍを選択した。ムギ類の赤かび病を起すカルベンダジム耐性フザリウム・アジアティカムを、滅菌された３％緑豆のスープに接種し、温度２５℃と１２／２４時間の散乱光の下で３ｄ培養し、コニディアを遠心収集する。コニディアを最終的に１０２／ｍＬになるように異なる投与量のバリダマイシンを含んだＧＹＥＰ培養液に接種し、温度２５℃で光を避けて振盪培養し、７ｄ、１４ｄ後に、培養物を濾過し、培養液中の毒素の含有量をそれぞれ検出し、菌糸乾燥重量を測定し、毒素産生能力（菌糸単位量が産生する毒素量）を解析する。
【００５０】
毒素測定方法は以下の通りである。
培養濾過液をそれぞれ酢酸エチルと等体積で２回抽出し、抽出液を合併した後に減圧蒸留乾燥させ、１ｍＬのアセトニトリルで溶解して新しい遠心チューブに移し、再び蒸留乾燥させ、−２０℃で保存し、測定に備えておく。検出する時に、１００μＬＴＭＳの誘導体化試薬（ＴＭＳＩ：ＴＭＣＳ＝１００：１）を加え、１０ｍｉｎ混ぜた後に１ｍＬの超純水を加え、振とうして分層した後に、上清を吸収しＧＣ注入容器に入れ、電子捕獲型検出器が装着されたガスクロマトグラフィー（ＧＣ−ＥＣＤ）で、毒素含有量を検出する。ＳｉｇｍａのＤＯＮ試薬を標準サンプルとし、標準曲線を作成し、培養液中のＤＯＮ、３ＡＤＯＮ及び１５ＡＤＯＮを含んだＤＯＮ含有量を算出する。同時に、濾過した菌糸を８０℃で一定重量に至るまで乾燥させ、菌糸乾燥重量を計る。また、３ｄ振盪培養時に、菌糸を取って毒素産生の重要な遺伝子Ｔｒｉ５の発見レベルを検出する。
【００５１】
実験結果（表３）によれば、赤かび病の菌糸の生育量は、培養時間の延長によって増加するが、異なる投与量のバリダマイシンで処理された培養基で振盪培養すると、菌糸の生育量は、コントロールグループに比べ顕著な変化がないことが分かった。これは、バリダマイシンは、液体で培養された赤かび病菌の生育に対し抑制効果がなく、ＰＤＡ平板上での線形生育率の測定結果と一致することを示す。ただし、菌単位量が産生するＤＯＮ毒素の量（μｇＤＯＮ／ｇ菌糸乾燥重量）は、バリダマイシンの処理投与量の増加によって顕著に減少することが初めて分かった。なお、ＤＯＮ合成に対するバリダマイシンの抑制効果は、培養時間の延長に伴って低下し、特に低濃度処理において、低下幅はより大きい。また、バリダマイシンは、試験時間の延長によって分解が生じる可能性があるため、毒素生合成に対する抑制効果が低下することを示す。
【００５２】
３ｄ処理時の毒素産生遺伝子の発見レベルへの解析によれば、バリダマイシンは、インビトロ条件下でフザリウムの生育及び菌糸形態に対し、悪影響はないが、処理投与量が少ない場合、ＤＯＮ毒素産生の重要な遺伝子ｔｒｉ５の発見を強く抑制し、菌体毒素生合成能力を低下させ、ＤＯＮ生合成を減少することができる。その試験結果を表４に示した。
【００５３】
【表３】
2019520320.tif 000004
【００５４】
【表４】
2019520320.tif 000005
【００５５】
（実験例３）
バリダマイシンがフザリウムＤＯＮ毒素生合成能力を抑制することに対するイプコナゾールの相乗効果
【００５６】
イプコナゾール処理により、赤かび病菌の細胞膜透過性を破壊することで、菌糸生育を抑制することができる。イプコナゾールとバリダマイシンとの組成物で処理すると、病菌が、バリダマイシンを多く吸収し、利用するようにすることができる。実験例２において、バリダマイシンがフザリウムＤＯＮ毒素生合成を抑制することを測定するとともに、０．１μｇ／ｍＬのイプコナゾールが存在し、７ｄと１４ｄ培養した場合の、Ｆｕｓａｒｉｕｍｕ  ａｓｉａｔｉｃｕｍのＤＯＮ毒素生合成能力に対するバリダマイシンの抑制効果を測定し、バリダマイシンが、ＤＯＮ毒素生合成を抑制することに対するイプコナゾールの相乗効果を解析した。ＤＯＮ検出方法は実験例２と同様である。
【００５７】
実験例１及び実験例２によれば、０．１μｇ／ｍＬのイプコナゾールのみで処理すると、赤かび病の菌糸生育に対し５０％を超えた抑制率を有する。表５から分かるように、０．１μｇ／ｍＬのイプコナゾールで７ｄと１４ｄ処理した場合、フザリウムに対する生合成能力は、コントロールグループの毒素産生能力に比べて顕著な抑制効果がないため、イプコナゾールは、生育を抑制する活性のみがあり、毒素産生能力に対する抑制効果はないことを示す。ただし、バリダマイシンの各処理濃度下で０．１μｇ／ｍＬのイプコナゾールが存在する場合、ＤＯＮ毒素生合成能力への抑制効果は大幅に向上する。また、培養時間を延長することに伴い、毒素産生能力に対するバリダマイシンの抑制効果の降下速度は、イプコナゾールがない時の対照処理より著しく低く、特に低濃度バリダマイシン処理への相乗効果及び機能延長時間はさらに著しくなる。同時に実験した表３の結果に基づき、０．１０μｇ／ｍＬ投与量のイプコナゾールが存在し、バリダマイシンを７ｄと１４ｄ処理した時にフザリウム毒素生合成を抑制することに対する相乗効果を算出し、その結果を表５に示した。これらの結果は、以下のことを示す。
（１）バリダマイシンはフザリウムＤＯＮ毒素生合成能力を強く低下させる働きを有し、イプコナゾールにはこのような働きがない。
（２）イプコナゾールはバリダマイシンがフザリウム毒素生合成を抑制することに対し明らかな相乗効果を有し、なおバリダマイシン処理投与量を低減させると、相乗効果が強くなる。
（３）イプコナゾールはフザリウム毒素産生へのバリダマイシンの抑制効果時間を延長し、処理時間を延長すればするほど相乗効果が高まる。
【００５８】
【表５】
2019520320.tif 000006
【００５９】
＊相乗効果係数計算方法：０．１μｇ／ｍＬイプコナゾールが存在する場合の毒素合成へのバリダマイシンの抑制率／バリダマイシンのみで相応投与量を処理する場合の毒素合成抑制率（表３）×１００
【００６０】
（応用実施例１）
ムギの赤かび病を防除するバリダマイシンとイプコナゾールの組成物の相乗効果及び毒素効果降下効果
【００６１】
実施例１〜８の殺菌組成物製剤について、田んぼにおけるムギの赤かび病を予防する薬力学的効果の試験を行った。試験地は、ムギの赤壁病がカルベンダジムにすでに薬物耐性が生じた江蘇淮安白馬湖農場にした。ムギ種類はそれぞれファイマイ２２号である。２０１２年１１月に種を蒔き、田んぼは通常通りに管理し、他の農薬は使用していない。２０１３年５月２日に開花初期に農稼楽１６Ｌナップザック式電動スプレーヤーで１回目の農薬を撒き、天気予防により５月９日（登熟初期）に２回目の農薬を撒いた。各区域面積は５０ｍ２で、４つが重複しており、水の使用量は５０ｋｇ／畝（１畝＝６６６．７ｍ２、
以下同じ）で、コントロールグループには農薬を撒かなかった。そしてコントロール薬剤として５０％カルベンダジム水和剤を８０ｇ／畝で処理した。２０１３年５月２６日に状況を調査し、防除効果を表６に示した。４０％バリダマイシン水和剤は浙江省桐廬匯豊生物科学技術有限会社が提供し、４０％イプコナゾールは本実験室で加工製造した。農業部が配布した殺菌剤田んぼ薬力学的効果試験基準業界標準規定の相応方法によって、乳熟期でムギの赤かび病発生状況を調査し、各処理により赤かび病の実際の防除効果に基づき、組成物の相乗効果を計算した。Ａｂｂｏｔｔ（Ａｂｂｏｔｔ、１９２５）方法により組成物の理論コントロール効果［Ｅ＝Ｘ＋（１００−Ｘ）Ｙ／１００，ここで、Ｅは理論防除効果で、Ｘはバリダマイシン単剤の防除効果で、Ｙはイプコナゾール単剤の防除効果である］及び相乗係数（組成物を応用した実際の防除効果／理論防除効果×１００）を計算した。
【００６２】
毒素測定方法：完全成熟期にサンプルとして麦穂２００個を５セット取り処理し、室内で脱穀し、乾燥させた後に３０ｇのムギ粒をランダムに抽出して粉砕した。Ｇｏｓｗａｍｉ及びＫｉｓｔｌｅｒ方法により、５ｇの小麦粉を取って遠心チューブ内に置き、２０ｍＬのアセト二トリル：水（８４：１６）抽出液を加え、ボルテックスマシンで混ぜた後にシェーカー上で２４時間振とうし、５０００ｒｐｍで１０ｍｉｎ遠心し、上清２ｍＬを取ってＥｐｐｅｎｄｏｒｆ遠心チューブに窒素で乾燥させ、−２０℃で保蔵した。検出する時に１００μＬＴＭＳの誘導体化試薬（ＴＭＳＩ：ＴＭＣＳ＝１００：１）を加え、１０ｍｉｎ混ぜた後に１ｍＬの超純水を加え、振とうして分層した後に上清を吸収してＧＣ注入容器に入れ、電子捕獲型検出器が装着されたガスクロマトグラフィー（ＧＣ−ＥＣＤ）で毒素含有量を検出し、その結果を表６に示した。
【００６３】
【表６】
2019520320.tif 000007
【００６４】
本発明によるムギの赤かび病を防除する殺菌組成物の相乗効果についての田んぼでの選別及び試験結果によれば、バリダマイシンとイプコナゾールとの組成物はムギの開花初期〜登熟期にスプレーし、実施例１〜８における一定投与量の異なる製剤はムギの赤かび病を防除するのに顕著な相乗効果（相乗係数>１００）を有する。そしてバリダマイシンとイプコナゾールとの組成物を応用すると、穀物のＤＯＮ汚染レベルを顕著に低下させる相乗効果があり、ＤＯＮ含有量を９０％以上低減し、毒素汚染レベルを１ｍｇＤＯＮ／ｋｇ穀物以下の安全レベルに制御することができる。
【００６５】
（応用実施例２）
ムギの他の病害を防除するバリダマイシンとイプコナゾールとの組成物の試験効果
【００６６】
実施例１〜８における殺菌組成物製剤について田んぼにおけるムギの病害を予防する薬力学的効果の試験を行った。試験地は江蘇塩城新洋農場にした。ムギの種類はそれぞれファイマイ３３号であり、開花初期に農稼楽１６Ｌナップザック式電動スプレーヤーで１回目の農薬を撒き、５ｄ後に２回目の農薬を撒き、水使用量は５０ｋｇ／畝で、各区域面積は５０ｍ２であり、各処理を３回重複し、コントロールグループには農薬を撒かなかった。そしてコントロール薬剤として５０％カルベンダジム水和剤を８０ｇ／畝で処理した。農業部が配布した殺菌剤田んぼ薬力学的効果試験基準業界標準規定の相応方法によって、乳熟期にムギのうどんこ病、さび病、紋枯病及び葉枯病の発生状況を調査し、病状係数及び防除効果を算出し、表７に示した。
【００６７】
【表７】
2019520320.tif 000008
【００６８】
実施例１〜８における田んぼ応用の結果によれば、バリダマイシンとイプコナゾール組成殺菌剤は、ムギの赤かび病を効果的に防除するとともに、ムギの葉枯病、うどんこ病、さび病及び紋枯病にも良好な防除効果を有し、常用のカルベンダジム（検出によると、試験地の病原菌のグループの中でカルベンダジムに対して薬物耐性を有する病菌は３７．７％を占める）より遥かに優れ、そして薬物耐性を有する赤かび病菌による赤かび病に対し顕著な相乗的な防除効果を有し、その結果は同年の白馬湖農場での田んぼ試験結果に類似する。従って、本発明の殺菌組成物は農薬使用量が少なく、コストが低く、環境にやさしく、社会的な利益が明らかであるなど多くの利点を有する。
【００６９】
（応用実施例３）
ムギ病害を防除するバリダマイシンとイプコナゾールとの組成物の防除効果及び毒素汚染を低減する効果
【００７０】
実施例１〜８における殺菌組成物製剤について田んぼでムギ病害予防の薬力学的効果の試験を行った。バリダマイシン及びイプコナゾールの異なる投与量による単剤処理を設計した。２０１４年の開花初期に１回目の農薬を撒き、５ｄ後に２回目の農薬を撒き、水使用量は５０ｋｇ／畝で、各区域面積は５０ｍ２であり、各処理を３回重複し、コントロールグループには農薬を撒かなかった。コントロール薬剤として通常薬剤のポリケトン水和剤を用いた。農業部が配布した殺菌剤田んぼ薬力学的効果試験基準業界標準規定の相応方法によって、乳熟期にムギの赤かび病、うどんこ病、さび病及び葉枯病の発生状況を調査し、病状係数及び防除効果を算出し、その結果を表８に示した。完全成熟期にサンプルとして麦穂１５０個を５セット取り処理し、室内に持ち帰り脱穀し、応用実施例１の方法によって、ムギ粒の毒素含有量を検出し算出する。薬剤処理投与量、コントロール効果及び毒素含有量への影響を表８に示した。
【００７１】
【表８】
2019520320.tif 000009
【００７２】
田んぼへの組成物の応用から分かるように、イプコナゾール単剤処理はムギの赤かび病、葉枯病、うどんこ病及びさび病に良好な防除効果を有するが、バリダマイシン単剤は、赤かび病に低い防除効果を有する以外、他の病害に対しはほとんど効果がない。表から分かるように、本発明の実施例１〜８における殺菌組成物製剤は、赤かび病、葉枯病、うどんこ病及びさび病の防除効果を大幅に向上させ、防除効果は７０％〜９０％以上に達し、コントロールとしての常用薬剤ポリケトン及び単剤の効果より優れ、相乗効果が顕著である。従って、本発明の生物―化学殺菌組成物は、化学的殺菌剤イプコナゾールの容量を大幅に低減し、農薬による環境破壊を軽減し、ムギ粒の毒素汚染を低減することができる。
【００７３】
（応用実施例４）
イネ病害を防除するバリダマイシンとイプコナゾールとの組成物の試験効果
【００７４】
実施例１〜８における殺菌組成物製剤について田んぼでイネ病害への予防薬力学的効果の試験を行った。試験地は江蘇省南京市江寧区淳化町土橋鎮にした。イネ種類はチンタオウ１８であり、各区域面積は５０ｍ２で、各処理を３回重複し、コントロールグループには農薬を撒かなかった。イネ紋枯病は、イネの分蘖末期（上の３つの葉が出ていない）に１回目の農薬を撒き、幼穂期に２回目の農薬を撒き、穂完成期に３回目の農薬を撒き、コントロールグループとして浙江省桐廬（ル）匯豊生物科学技術有限会社が生産した４０％バリダマイシン水和剤単剤を用いた。稲こうじ病は出穂５〜７日前に１回目の農薬を撒き、穂完成期に２回目の農薬を撒き、コントロールグループとしてバイエル作物科学会社が生産した４３０ｇ／Ｌのテブコナゾール懸濁液単剤を用いた。イモチ病は、イネが出穂期に１回目の農薬を撒き、穂完成期に２回目の農薬を撒き、コントロール薬剤として江蘇豊登作物保護有限会社が生産した７５％トリシクラゾール水和剤単剤を用いた。病状が治まったら発病状況を調査し、病状及びコントロール効果を算出した。
【００７５】
【表９】
2019520320.tif 000010
【００７６】
田んぼ試験結果から分かるように、バリダマイシンとイプコナゾールとを含有する組成殺菌剤はイモチ病、稲こうじ病及びイネ紋枯病の防除において優れた効果を有し、現在の常用の主流殺菌剤に比べ、顕著な防除効果を有する。本発明に係るバリダマイシンとイプコナゾールとの組成物はイモチ病、稲こうじ病及びイネ紋枯病を同時に防除できるため、防除効果を向上するほか、農薬の使用量及び農薬の使用回数を大幅に低減させ、大量の経済投入を省き、社会、経済及び生態系利益を増大させるのに重要な現実的意味を持つ。
【００７７】
（付記）
（付記１）
バリダマイシンとイプコナゾールとの重量比が１：６８〜４０：１である、ことを特徴とするバリダマイシンとイプコナゾールとを含有する殺菌組成物。
【００７８】
（付記２）
前記バリダマイシンとイプコナゾールとの重量比が１：３４〜２０：１である、ことを特徴とする付記１に記載のバリダマイシンとイプコナゾールとを含有する殺菌組成物。
【００７９】
（付記３）
前記バリダマイシンとイプコナゾールとの重量比が１：１７〜１０：１である、ことを特徴とする付記１に記載のバリダマイシンとイプコナゾールとを含有する殺菌組成物。
【００８０】
（付記４）
バリダマイシンとイプコナゾールとの合計の重量含有率は、前記殺菌組成物の総量の２〜８０％であり、残部は農薬として許容される担体及び／又は助剤である、ことを特徴とする付記１〜３のいずれか１つに記載のバリダマイシンとイプコナゾールとを含有する殺菌組成物。
【００８１】
（付記５）
前記バリダマイシンとイプコナゾールとの合計の重量含有率は、前記殺菌組成物の総量の１０〜７０％であり、残部は農薬として許容される担体及び／又は助剤である、ことを特徴とする付記４に記載のバリダマイシンとイプコナゾールとを含有する殺菌組成物。
【００８２】
（付記６）
前記殺菌組成物の製剤は、水和剤、懸濁剤、マイクロエマルション又は水和性顆粒剤である、ことを特徴とする付記１〜５のいずれか１つに記載のバリダマイシンとイプコナゾールとを含有する殺菌組成物。
【００８３】
（付記７）
前記担体は水、カオリン、珪藻土、パリゴルスカイト又は軽質炭酸カルシウムのうちの１種類又は複数種類である、ことを特徴とする付記４又は５に記載のバリダマイシンとイプコナゾールとを含有する殺菌組成物。
【００８４】
（付記８）
前記助剤はエタノール、メタノール、エチレングリコール、プロピレングリコール、ＮＮＯ−１、ＮＮＯ−７、キサンタンガム、ポリエチレングリコール、グリセリン、ネカール、ドデシル硫酸ナトリウム、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、ポリオキシエチレンアルキルフェノールエーテル、ラウリルアルコールポリオキシエチレンエーテル、フェニルエチルフェノールホルムアルデヒド樹脂ポリオキシエチルエーテル、アルキルフェノールポリオキシエチレンエーテルリン酸塩、脂肪酸ポリオキシエチレンエステル、スルホン酸ポリホルムアルデヒド縮合物、Ｎ−メチルピロリドン、アルキルベンゼンスルホン酸カルシウム、ブチルナフタレンスルホン酸ナトリウム、安息香酸、リグニンスルホン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、シリコーン系化合物、ケイ酸マグネシウムアルミニウム又はポリビニルアルコールのうちの１種類又は複数種類である、ことを特徴とする付記４又は５に記載のバリダマイシンとイプコナゾールとを含有する殺菌組成物。
【００８５】
（付記９）
ムギ類赤かび病、ムギ類紋枯病、ムギ類うどんこ病、ムギ類さび病、ムギ類葉枯病の防除における付記１〜６のいずれか１つに記載の殺菌組成物の応用。
【００８６】
（付記１０）
イモチ病、稲こうじ病、イネ紋枯病の防除における付記１〜６のいずれか１つに記載の殺菌組成物の応用。
【手続補正書】
【提出日】平成30年12月7日(2018.12.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
バリダマイシンとイプコナゾールとの重量比が１：６８〜４０：１である、ことを特徴とするバリダマイシンとイプコナゾールとを含有する殺菌組成物。
【請求項２】
前記バリダマイシンとイプコナゾールとの重量比が１：３４〜２０：１である、ことを特徴とする請求項１に記載のバリダマイシンとイプコナゾールとを含有する殺菌組成物。
【請求項３】
前記バリダマイシンとイプコナゾールとの重量比が１：１７〜１０：１である、ことを特徴とする請求項１に記載のバリダマイシンとイプコナゾールとを含有する殺菌組成物。
【請求項４】
バリダマイシンとイプコナゾールとの合計の重量含有率は、前記殺菌組成物の総量の２〜８０％であり、残部は農薬として許容される担体及び／又は助剤である、ことを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載のバリダマイシンとイプコナゾールとを含有する殺菌組成物。
【請求項５】
前記バリダマイシンとイプコナゾールとの合計の重量含有率は、前記殺菌組成物の総量の１０〜７０％であり、残部は農薬として許容される担体及び／又は助剤である、ことを特徴とする請求項４に記載のバリダマイシンとイプコナゾールとを含有する殺菌組成物。
【請求項６】
前記殺菌組成物の製剤は水和剤、懸濁剤、マイクロエマルション又は水和性顆粒剤であり、前記製剤はスプレーで使用される、ことを特徴とする請求項１〜５のいずれか１項に記載のバリダマイシンとイプコナゾールとを含有する殺菌組成物。
【請求項７】
前記担体は水、カオリン、珪藻土、パリゴルスカイト又は軽質炭酸カルシウムのうちの１種類又は複数種類である、ことを特徴とする請求項４又は５に記載のバリダマイシンとイプコナゾールとを含有する殺菌組成物。
【請求項８】
前記助剤はエタノール、メタノール、エチレングリコール、プロピレングリコール、ＮＮＯ−１、ＮＮＯ−７、キサンタンガム、ポリエチレングリコール、グリセリン、ネカール、ドデシル硫酸ナトリウム、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、ポリオキシエチレンアルキルフェノールエーテル、ラウリルアルコールポリオキシエチレンエーテル、フェニルエチルフェノールホルムアルデヒド樹脂ポリオキシエチルエーテル、アルキルフェノールポリオキシエチレンエーテルリン酸塩、脂肪酸ポリオキシエチレンエステル、スルホン酸ポリホルムアルデヒド縮合物、Ｎ−メチルピロリドン、アルキルベンゼンスルホン酸カルシウム、ブチルナフタレンスルホン酸ナトリウム、安息香酸、リグニンスルホン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、シリコーン系化合物、ケイ酸マグネシウムアルミニウム又はポリビニルアルコールのうちの１種類又は複数種類である、ことを特徴とする請求項４又は５に記載のバリダマイシンとイプコナゾールとを含有する殺菌組成物。
【請求項９】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の殺菌組成物の、ムギ類赤かび病、ムギ類紋枯病、ムギ類うどんこ病、ムギ類さび病又はムギ類葉枯病を防除するための使用。
【請求項１０】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の殺菌組成物の、イモチ病、稲こうじ病又はイネ紋枯病を防除するための使用。
【国際調査報告】
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2019520320.tif 000013
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