(57)【要約】  本発明は、活性物質を含有するコアを含むマイクロカプセルに関し、このマイクロカプセルは、２層のシェラック、およびこれらの２層のシェラックの間に設けられたｐＨ調節物質を含むコーティング層系を特徴とする。
2019515917.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
活性物質を含有するコア（１）、ならびにシェラックの内側層（２）、シェラックの外側層（３）、およびシェラックの２層（２、３）の間に設けられているｐＨ調節物質（４）を含むコーティング層系を含むマイクロカプセルであって、ただし活性物質はビタミンＢ３ではない、マイクロカプセル。
【請求項２】
活性物質含有コアが全体として酸性であり、ｐＨ調節物質が、炭酸水素塩、炭酸塩、酢酸塩およびそれらの混合物からなる群から好ましくは選択される、塩基性物質を含む、またはそれからなることを特徴とする、請求項１に記載のマイクロカプセル。
【請求項３】
活性物質含有コアが全体として中性または塩基性であり、ｐＨ調節物質が、有機酸、無機酸およびそれらの混合物からなる群から好ましくは選択される、酸性物質を含む、またはそれからなることを特徴とする、請求項１に記載のマイクロカプセル。
【請求項４】
ｐＨ調節物質が、炭酸水素ナトリウム（重炭酸ナトリウム）を含む、またはそれからなることを特徴とする、請求項１または２に記載のマイクロカプセル。
【請求項５】
ｐＨ調節物質が、クエン酸を含む、またはそれからなることを特徴とする、請求項１または３に記載のマイクロカプセル。
【請求項６】
活性物質が、色素内視鏡検査に好適な色素を含む、またはそれからなることを特徴とする、請求項１から５のいずれか一項に記載のマイクロカプセル。
【請求項７】
活性物質が、アルラレッドＡＣ／ＦＤ＆Ｃレッド番号４０（Ｅ１２９）；アルファズリン；アルミナ；アラマンス（Ｅ１２３）；アナゾレンナトリウム；アナトー／ビクシン／ノルビクシン（Ｅ１６０ｂ）；アントシアニン（Ｅ１６３）；ビートルートレッド／ベタニン（Ｅ１６２）；β−アポ−８’−カロテナール（Ｅ１６０ｅ）；ブリリアントブラックＢＮ／ブラックＰＮ（Ｅ１５１）；ブリリアントブルーＦＣＦ／ＦＤ＆Ｃブルー番号１（Ｅ１３３）；ブラウンＦＫ（Ｅ１５４）；ブラウンＨＴ（Ｅ１５５）；炭酸カルシウム（Ｅ１７０）；カンタキサンチン（Ｅ１６１ｇ）；カプサンチアン／カプソルビン／パプリカ（Ｅ１６０ｃ）；カルモイシン／アゾルビン（Ｅ１２２）；カロテン（Ｅ１６０ａ）；カラメル（Ｅ１５０ａ−ｄ）；コチニール／カルミン酸／カルミン（Ｅ１２０）；カロテン；カルタミン；クロロフィル／クロロフィリン（Ｅ１４０）；クロロフィルおよび／またはクロロフィリンの銅錯体（Ｅ１４１）；シトラスレッド番号２；コチニールレッドＡ／ポンソー４Ｒ（Ｅ１２４）；コンゴーレッド；クルクミン（Ｅ１００）；クレシルバイオレット；Ｄ＆Ｃグリーン番号５；Ｄ＆Ｃイエロー番号１０；ジヨードフルオレセイン；エオシン／Ｄ＆Ｃレッド番号２２；エリスロシン／ＦＤ＆Ｃレッド番号３（Ｅ１２７）；エバンスブルー；ファストグリーンＦＣＦ（Ｅ１４３）；ＦＤ＆Ｃグリーン番号３；フラミングレッド／Ｄ＆Ｃレッド番号３６；フルオレセイン／ウラニン；グリーンＳ（Ｅ１４２）；ヘリンドンピンクＣＮ／Ｄ＆Ｃレッド番号３０；インダンスレーンブルー（Ｅ１３０）；インジゴチン／インジゴカルミン／ＦＤ＆Ｃブルー番号２（Ｅ１３２）；インドシアニングリーン；酸化鉄および水酸化鉄；イソスルファンブルー；リソールルビンＢ／Ｄ＆Ｃレッド番号６；リソールルビンＢ  Ｃａ／Ｄ＆Ｃレッド番号７；リソールルビンＢＫ（Ｅ１８０）；ルゴール溶液；ルテイン（Ｅ１６１ｂ）；リコペン（Ｅ１６０ｄ）；メチルブルー；メチレンブルー；オレンジＢ；パテントブルーＶ（Ｅ１３１）；パテントブルーＶＦ／スルファンブルー；フェノールレッド；フロキシンＢ／Ｄ＆Ｃレッド番号２８；キノリンイエロー（Ｅ１０４）；リボフラビン／リボフラビン−５’−ホスフェート（Ｅ１０１）；サフラン（Ｅ１６４）；スピルリナ抽出物；スダンブラックＢ；サンセットイエローＦＣＦ／オレンジイエローＳ／ＦＤ＆Ｃイエロー番号６（Ｅ１１０）；テトラジン／ＦＤ＆Ｃイエロー番号５（Ｅ１０２）；テトラブロモフルオレセイン／Ｄ＆Ｃレッド番号２１；テトラクロロクロロテトラブロモフルオレセイン／Ｄ＆Ｃレッド番号２７；二酸化チタン（Ｅ１７１）；トルイジンブルー／塩化トロニウム；ターメリック（Ｅ１００）；ベジタブルカーボン（Ｅ１５３）；ならびにそれらの誘導体、等価物および混合物からなる群から選択される色素を含む、またはそれからなることを特徴とする、請求項１から６のいずれか一項に記載のマイクロカプセル。
【請求項８】
医薬、医療製品、診断製品、栄養補強食品、栄養補助食品、食品成分または食品として使用するための、請求項１から７のいずれか一項に記載のマイクロカプセル。
【請求項９】
腸上皮および／または腸粘膜および／または腸壁における、腸炎、形成異常、発がんおよび／もしくは変化に関連するおよび／またはこれらを伴う疾患および／または症候群の診断、治療および／または予防のため、小腸および／または大腸の色素内視鏡検査に使用するための、請求項１から８のいずれか一項に記載のマイクロカプセル。
【請求項１０】
小腸および／または結腸の炎症および／または悪性疾患；炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、不確定大腸炎；過敏性腸症候群；憩室炎；小腸のがん；結腸直腸がん；小腸および／または結腸の腺癌；カルチノイド腫瘍；リンパ腫；消化管間質腫瘍；肉腫；平滑筋肉腫；黒色腫；扁平上皮癌、ならびに腸上皮および／または腸粘膜および／または腸壁における、腸炎、形成異常、発がんおよび／もしくは変化に関連するおよび／またはそれらに伴う他の疾患および／または症候群からなる群から選択される、疾患および／または症候群の診断、治療および／または予防のため、小腸および／または大腸の色素内視鏡検査に使用するための、請求項１から９のいずれか一項に記載のマイクロカプセル。
【請求項１１】
請求項１から１０のいずれか一項に記載のマイクロカプセルを含む、組成物。
【請求項１２】
活性物質の制御放出および／または遅延放出を有して、経口投与向けに製剤化されている、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
小腸および／または結腸の炎症および／または悪性疾患；炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、不確定大腸炎；過敏性腸症候群；憩室炎；小腸のがん；結腸直腸がん；小腸および／または結腸の腺癌；カルチノイド腫瘍；リンパ腫；消化管間質腫瘍；肉腫；平滑筋肉腫；黒色腫；扁平上皮癌、ならびに腸上皮および／または腸粘膜および／または腸壁における、腸炎、形成異常、発がんおよび／もしくは変化に関連するおよび／またはそれらに伴う他の疾患および／または症候群からなる群から選択される、疾患および／または症候群の診断、治療および／または予防のために、小腸および／または大腸の色素内視鏡検査に使用するための、請求項１１または１２に記載の組成物。
【請求項１４】
１種または複数の他の活性物質および／または組成物を含む変動用量組合せおよび／または固定用量組合せを含む、請求項１から１０のいずれか一項に記載のマイクロカプセルまたは請求項１１から１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
ａ．活性物質を含む、またはそれからなるコア材料を用意するステップ、
ｂ．このコア材料を第１のシェラック層によりコーティングするステップ、
ｃ．ｐＨ調節物質を用意するステップ、
ｄ．第１のシェラック層の上にｐＨ調節物質を塗布するステップ、および
ｅ．第２のシェラック層を塗布するステップ
を含む、請求項１から１０のいずれか一項に記載のマイクロカプセルまたは請求項１１から１４のいずれか一項に記載の組成物を生成する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、活性物質を含有するコアを含むマイクロカプセル、医薬、医療製品、診断製品、栄養補強食品、栄養補助食品、食品成分または食品としてのこのようなマイクロカプセルの使用、ならびに腸上皮および／または腸粘膜および／または腸壁における、腸炎、形成異常、発がんおよび／もしくは変化に関連するおよび／またはこれらを伴う疾患および／または症候群の診断、治療および／または予防のための小腸および／または大腸の色素内視鏡検査向けのこのようなマイクロカプセルの使用に関する。本発明は、このようなマイクロカプセルを含む製剤および組成物、ならびにこのようなマイクロカプセルを製造するための方法にさらに関する。
【背景技術】
【０００２】
大部分の医薬製剤は、栄養補強食品、栄養補助食品または機能性食品として使用され得ず、これらは、将来的な個別の医療および予防の中心になり得る。栄養製剤では、添加物のすべてが、食品添加物として承認されていなければならないか、またはＧＲＡＳ（一般に、安全と認識されている）ステータスを有していなければならない。多数の医薬品において使用される合成ポリマーとは対照的に、天然構成成分から誘導される腸溶コーティングは、生分解性であり、比較的豊富であり、かつ１日あたりの摂取制限量がない（Ｃｚａｒｎｏｃｋａ＆Ａｌｈｎａｎ  ２０１５年、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．４８６巻：１６７頁）。しかし、最近の比較研究により、「ＧＲＡＳグレードのコーティングのいずれも、遅延放出コーティング系の様々な生物学的要求と十分に適合しない」と結論づけられた（Ｃｚａｒｎｏｃｋａ＆Ａｌｈｎａｎ  ２０１５年、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．４８６巻：１６７頁）。
【０００３】
シェラックコーティングは、栄養的または医療的目的のための活性物質の全身性送達を目的とする製剤における、１つの選択肢として記載されている（例えば、ＰＣＴ／ＵＳ１９９８／０１５９９０；ＰＣＴ／ＥＰ２００１／００３１９２；ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０５１６６２；Ｌｉｍｍａｔｖａｐｉｒａｔら  ２００７年、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｐｈａｒｍ．６７巻：６９０頁；Ｆａｒａｇ＆Ｌｅｏｐｏｌｄ  ２０１１年、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．４２巻：４００頁；Ｃｚａｒｎｏｃｋａ＆Ａｌｈｎａｎ  ２０１５年、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．４８６巻：１６７頁を参照されたい）。
【０００４】
シェラックは、天然の樹脂ラック、すなわちカイガラムシであるラックカイガラムシ（Ｋｅｒｒｉａ  ｌａｃｃａ）の樹脂分泌物の精製形態である（Ｂｕｃｈら  ２００９年、Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ．Ｉｎｄ．Ｐｈａｒｍ．３５巻：６９４頁；Ｃｈｅｎら  ２０１１年、Ｊ．Ｉｎｓｅｃｔ  Ｓｃｉ．１１巻：１０６頁）。シェラックは、良好なコーティング特性およびＧＲＡＳステータスを有する（Ｃｚａｒｎｏｃｋａ＆Ａｌｈｎａｎ  ２０１５年、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．４８６巻：１６７頁）。さらに、シェラックの解離は、ｐＨ依存的であり、その酸性性質により、胃液に対して良好な耐性を有する（Ｌｉｍｍａｔｖａｐｉｒａｔら  ２００７年、Ｅｕｒ．Ｊ  Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｐｈａｒｍ．６７巻：６９０頁；Ｃｚａｒｎｏｃｋａ＆Ａｌｈｎａｎ  ２０１５年、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．４８６巻：１６７頁）。他の食品グレード腸溶コーティングとは対照的に、シェラックは、酸性の胃の環境から下部小腸の中性に近いｐＨまでのｐＨ変化後に、長期薬物放出を本来有する（Ｌｉｍｍａｔｖａｐｉｒａｔら  ２００７年、Ｅｕｒ．Ｊ  Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｐｈａｒｍ．６７巻：６９０頁；Ｃｚａｒｎｏｃｋａ＆Ａｌｈｎａｎ  ２０１５年、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．４８６巻：１６７頁）。しかし、さらなる添加剤または修飾なしに、内因性溶出がｐＨ約７．３であるシェラックコーティングは、保護物質の結腸標的にしか好適ではない（Ｆａｒａｇ＆Ｌｅｏｐｏｌｄ  ２０１１年、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．４２巻：４００頁）。
【０００５】
シェラックをベースとする放出制御製剤に関する文献を詳細に見ると、様々なコーティングおよび部分コーティング戦略が明らかになる。Ｃｚａｒｎｏｃｋａ＆Ａｌｈｎａｎ（２０１５年、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．４８６巻：１６７頁）は、腸溶性シェラックコーティングにより保護された薬物コアの相互作用を防止するため、１０％（ｗ／ｖ）の腸管に不活発なセルロースエーテルＭｅｔｈｏｃｅｌ  Ｅ５（２．０％の重量増加）により部分コーティングを行った。Ｆａｒａｇ＆Ｌｅｏｐｏｌｄ（２０１１年、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．４２巻：４００頁）は、シェラック向けの様々な部分コーティングを検討し、例えば、シェラックコーティングの膨潤および溶出の開始により、下にあるクエン酸の部分解離が可能になり、これにより、部分コーティング界面におけるｐＨ低下がもたらされ、ひいては、酸により安定化されたシェラックコーティングの解離を低下させるので、クエン酸の部分コーティング（担体としてポリビニルピロリドンを用いる）は、ｐＨ６．８において遅延放出することを見出した。この研究とは対照的に、Ｐｅａｒｎｃｈｏｂら（２００４年、Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ９４巻：３１３頁）は、エタノール性および水性シェラック系における細孔形成剤および可塑剤として、有機酸（ソルビン酸、安息香酸、フマル酸、アジピン酸またはクエン酸）を添加すると、ｐＨ６．８において、放出をむしろ加速することを見出した。重要な態様は、コーティングの欠損であり、これは、シェラック顆粒の放出プロファイルにとって制限となり得る。Ｆｏｒｍｅｒら（２００６年、Ｐｈａｒｍａｚｉｅ  ６１巻：１００５頁）は、可塑剤として酒石酸１０％を含有する、エタノール性シェラック溶液を使用し、結合剤および最終コーティングとして、エタノール性シェラック溶液によるノンパレイルペレット（ｎｏｎｐａｒｅｉｌ  ｐｅｌｌｅｔ）上へのアスコルビン酸の粉末の層化により、２〜３ｍｍのフィルム厚さになるペレットを調製した。精製されたタルク粉末が付着防止剤として使用された。興味深いことに、シェラックフィルムに完全に取り込まれなかった蓄積したタルク粒子は、表面に欠損を引き起こし、ペレットの放出プロファイルを最終的に規定した（Ｆｏｒｍｅｒら  ２００６年、Ｐｈａｒｍａｚｉｅ  ６１巻：１００５頁）。Ｉｃｈｉｋａｗａら（１９９１年、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．８０巻：１０６２頁）は、いくつかの他の構成成分の中で、やはりシェラックを含有する、膨張可能な層の下の発泡層において、炭酸水素ナトリウム（重炭酸ナトリウム）を二酸化炭素源として使用した。しかし、上記の有機酸の使用とは対照的に、重炭酸ナトリウムは、この手法において、ｐＨの修正に使用されなかった。
【０００６】
要約すると、Ｓｅｎｓｉｅｎｔ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、米国）のＰＲＯＴＥＣＴ（商標）システムのような専門的なシェラックをベースとするコーティングでさえも、いくつかの深刻な欠点が存在し、同等の薬物放出および耐酸崩壊試験が失敗に帰している（Ｃｚａｒｎｏｃｋａ＆Ａｌｈｎａｎ  ２０１５年、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．４８６巻：１６７頁）。さらに、Ｆａｒａｇ＆Ｌｅｏｐｏｌｄ（２０１１年、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．４２巻：４００頁）により記載されているクエン酸部分コーティングのような従来技術の有利な部分コーティング戦略でさえも、全身性曝露のための長期持続性放出プロファイルしかもたらさず、腸上皮の標的化された局所曝露を好適に調節することができなかった。
【０００７】
したがって、やはり、医薬、医療製品、診断製品、栄養補強食品、栄養補助食品、食品成分または食品として長期投与するための、（１）小腸の始めから結腸までの胃腸管の任意の区域において、保護された活性物質を放出するように微調節することができる、および／または（２）生成コストが低い、および／または（３）都合のよい副作用プロファイルを有する、好ましくは栄養となるシェラック製剤に対する満たされていない高い必要性が存在する。
【０００８】
結腸がん検出の分野において、様々な色素の使用（色素をベースとする色素内視鏡検査）による内視鏡検査（色素内視鏡検査）の前またはその間の、結腸粘膜の染色、またはデジタルコントラストおよび標準的な内視鏡検査（少量色素による色素内視鏡検査）の色調増強により、粘膜構造のコントラストが増強される（Ｔｏｎｔｉｎｉら  ２０１６年、Ｗｏｒｌｄ  Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．２２巻：１２４６頁）。特に、結腸直腸がん発症の著しく高いリスクを有する潰瘍性大腸炎のような炎症性腸疾患では、標的とする生検を含む結腸の色素内視鏡検査は形成異常の検出を改善することが示されているので、保健局および大部分の消化器病学専門学会により推奨されている（Ｂａｒｋｉｎら  ２０１２年、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｈｅｐａｔｏｌ．８巻：７９６頁；Ｔｒｉｖｅｄｉ＆Ｂｒａｄｅｎ  ２０１３年、Ｑ．Ｊ．Ｍｅｄ．１０６巻：１１７頁；Ｓａｎｄｕｌｅａｎｕら  ２０１６年、Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔ．Ｅｎｄｏｓｃ．８３巻：２１３頁；Ｔｏｎｔｉｎｉら、２０１６年、Ｗｏｒｌｄ  Ｊ，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．２２巻：１２４６頁）。しかし、色素結腸内視鏡検査による腺腫検出率の著しい増加はまた、結腸内視鏡検査の決まった手順のスクリーニングのため、十分に確立されてきた（Ｐｏｈｌら  ２０１１年、Ｇｕｔ  ６０巻：４８５頁；Ｂｒｏｗｎら  ２０１６年、Ｃｏｃｈｒａｎｅ  Ｄａｔａｂａｓｅ  Ｓｙｓｔ．Ｒｅｖ．４巻：ＣＤ００６４３９）。腸の色素をベースとする色素内視鏡検査における現状の技術は、噴霧用カテーテルを使用する、様々な色素および腸粘膜上に噴霧される染色用溶液の経験的な臨床的使用（Ｓａｎｄｕｌｅａｎｕら  ２０１６年、Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔ．Ｅｎｄｏｓｃ．８３巻：２１３頁）、およびＣｏｓｍｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓによる経口メチレンブルーＭＭＸ（登録商標）錠剤の最近開始された臨床的開発を特徴としている（Ｒｅｐｉｃｉら  ２０１２年、Ｃｏｎｔｅｍｐ．Ｃｌｉｎ．Ｔｒｉａｌｓ．３３巻：２６０頁）。
【０００９】
色素をベースとする色素内視鏡検査は、３種のタイプの活性物質：増感性、吸収性および反応性のものを使用する（Ｂａｒｋｉｎら  ２０１２年、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｈｅｐａｔｏｌ．８巻：７９６頁；Ｔｒｉｖｅｄｉ＆Ｂｒａｄｅｎ  ２０１３年、Ｑ．Ｊ．Ｍｅｄ．１０６巻：１１７頁；Ｓａｎｄｕｌｅａｎｕら  ２０１６年、Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔ．Ｅｎｄｏｓｃ．８３巻：２１３頁）。コンゴーレッドおよびフェノールレッドのような反応性色素は、局部ｐＨ差異により活性化され、したがって、結腸においてよりも胃において有用である。吸収性色素（最も幅広く使用されているものはメチレンブルー（通常、０．１％溶液として）である）は、健常な腸上皮に比べると、形成異常によってそれほど吸収されず、それにより、不均質な染色領域または非染色領域として、形成異常病変が強調される。吸収性色素のさらなる例は、ルゴール溶液、トルイジンブルーおよびクレシルバイオレットである。幅広く使用されているインジゴカルミン（通常、０．１〜０．８％溶液として）のような非吸収性増感色素は、溝および裂け目に貯まることによって、粘膜異常を高める。
【００１０】
技術の現状には、いくつかの欠点がある。噴霧用カテーテルを使用する色素内視鏡検査は、がん検出に関して優れていることが証明されているにもかかわらず、多数の臨床家は、その手順が「困難すぎて、あまりに面倒で、長すぎる」ことが分かっているので、幅広く使用されるにはほど遠い（Ｓａｎｄｕｌｅａｎｕら  ２０１６年、Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔ．Ｅｎｄｏｓｃ．８３巻：２１３頁）。腸管前処置中のメチレンブルーＭＭＸ（登録商標）錠剤（Ｃｏｓｍｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）の経口投与は、第１相および第２相臨床試験に首尾よく、合格した（Ｒｅｐｉｃｉら  ２０１２年、Ｃｏｎｔｅｍｐ．Ｃｌｉｎ．Ｔｒｉａｌｓ．３３巻：２６０頁；Ｄａｎｅｓｅら  ２０１３年、第８回Ｃｏｎｇｒｅｓｓ  ｏｆ  ＥＣＣＯ、ポスター発表：Ｃｌｉｎｉｃａｌ：Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｏｕｔｃｏｍｅ、１９４頁；ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ：ＮＣＴ０１５２０３３７；ＮＣＴ０１５２０３２４）。主張された主な利点は、色素により長く曝露されるために良好な染色となること（この場合、正常組織および新生物組織または炎症組織では、色素は異なって蓄積する）、腸が正常位であるために一層均質な染色となること（従来的な色素結腸内視鏡検査の間、患者は一方の側に横になっている）、ならびに患者および内視鏡検査者にとって、より迅速かつより苦痛のない手順であることであった。しかし、メチレンブルーは、いくつかの副作用を備えた医薬品であり、メチレンブルーは腸細胞に進入して、著しい全身性曝露をもたらす（Ｒｅｐｉｃｉら  ２０１２年、Ｃｏｎｔｅｍｐ．Ｃｌｉｎ．Ｔｒｉａｌｓ．３３巻：２６０頁）。動物モデルにおいて観察されたメチレンブルーの、周知の酸化的ＤＮＡ損傷特性が、メチレンブルーＭＭＸ錠剤の場合に依然として観察されていない場合でさえも（Ｒｅｐｉｃｉら  ２０１５年、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １４８巻：Ｓ８２７〜８頁）、メチレンブルーのような吸収性色素は、細胞核に進入し、発がん性物質のような挙動をする恐れがあるという懸念が依然として存在する（Ｂａｒｋｉｎら  ２０１２年、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｈｅｐａｔｏｌ．８巻：７９６頁；Ｔｒｉｖｅｄｉ＆Ｂｒａｄｅｎ  ２０１３年、Ｑ．Ｊ．Ｍｅｄ．１０６巻：１１７頁）。
【００１１】
メチレンブルーとは対照的に、非吸収性の食品着色剤のインジゴカルミン（Ｅ１３２）は、結腸細胞にＤＮＡ損傷を引き起こさない（Ｄａｖｉｅｓら  ２００７年、Ｇｕｔ  ５６巻：１５５頁）。しかし、インジゴカルミンの吸収が弱い場合でさえも、腸内細菌により一部、代謝されて、イサチン−５−硫酸および５−スルホアントラニル酸のような分解生成物をもたらし、これらは、続いて、身体により吸収される（ＥＦＳＡパネル  ２０１４年、ＥＦＳＡ  Ｊ．１２巻：３７６８頁）。同様に、インタクトな食品着色剤であるブリリアントブラックＢＮ（Ｅ１５１）はわずかしか吸収されないが、胃腸管におけるブリリアントブラックＢＮのアゾ還元により、スルホン化芳香族アミンが生成し、このアミンは、十分に吸収され、体循環に到達する（ＥＦＳＡパネル２０１０年、ＥＦＳＡ  Ｊ．８巻：１５４０頁）。これらの物質のいずれも毒性作用または遺伝毒性作用を有さないことが予期されるが、理想的な非吸収色素はまた、吸収性生成物にやはり代謝されるべきではない。パテントブルーＶ（Ｅ１３１）は、最小限の吸収および全身アベイラビリティを示し、代謝されないで便中に主に排出されるので、これらの要件に近い（ＥＦＳＡパネル２０１３年、ＥＦＳＡ  Ｊ．１１巻：２８１８頁）。欧州食品安全局（ＥＦＳＡ）によれば、食品の着色剤であるインジゴカルミン、ブリリアントブラックＢＮおよびパテントブルーＶの許容可能な１日摂取量（ＡＤＩ）は、少なくとも９０％純度の場合、調製物に対して５ｍｇ／ｋｇ（体重）である（ＥＦＳＡパネル２０１０年、ＥＦＳＡ  Ｊ．８巻：１５４０頁；ＥＦＳＡパネル２０１３年、ＥＦＳＡ  Ｊ．１１巻：２８１８頁；ＥＦＳＡパネル２０１４年、ＥＦＳＡ  Ｊ．１２巻：３７６８頁）。米国では、インジゴカルミンしか、食品および薬物における使用に承認されていない（ＦＤＡ着色添加物の現状一覧表、２０１５年１２月）。一般に、食品着色剤は、色素搭載量をより多くし、かつ全身性副作用をより少なくすることができると思われる。
【００１２】
従来技術は、色素内視鏡検査のための食品用着色剤の使用を含む。Ｃｏｓｍｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓの特許ポートフォリオには、色素内視鏡検査用色素の多重マトリックス（ＭＭＸ）技法において組み込まれた、色素内視鏡検査用色素であるメチレンブルー、コンゴーレッド、インジゴカルミン、トルイジンブルーまたはそれらの混合物のいくつかの実施形態が記載されており、最も好ましいものは、臨床候補であるメチレンブルーＭＭＸである（例えば、ＵＳ８５４５８１１、ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７００６０）。ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０１６４８８は、色素内視鏡検査向けのインジゴカルミン（カプセル）の経口投与に関する、従来技術から不満足な結果となることを報告しており、ポリエチレングリコールと混合されたインジゴカルミンの薬学的に許容される液状組成物の経口投与法を記載している。ＰＣＴ／ＥＰ２０１１／００１１８３、ＰＣＴ／ＡＵ２０１２／００１３１５およびＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０６８７３８は、パテントブルーＶ、ブリリアントブラックＢＮまたはインジゴカルミンのような食品着色剤を含む、様々な色素による、腸洗浄および色素内視鏡検査用に染色するための様々な組成物を記載している。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
しかし、このような色素を送達するのは難しい。好ましくは、この送達は、食品グレードの化学物質のみで調製され、かつ送達される色素および腸の標的領域の両方に応じて微調節され得る製剤で行われるべきである。したがって、（１）少なくとも活性物質を除いて、栄養的な構成成分を大部分もしくはこれのみ含有する、かつ／または（２）胃腸管にほとんどもしくは全く吸収および／もしくは代謝されず、こうして、低い全身性副作用を誘発する、またはそれを全く誘発しない、１種または複数の活性物質、とりわけ１種または複数の色素を含有する、小腸および／または大腸を染色するための色素の経口用製剤に関して、色素内視鏡検査の分野における、満たされていない大きな必要性が存在する。このような製剤は小腸および／または大腸、より好ましくは小腸に、１種または複数の活性物質、とりわけ、１種または複数の色素を好ましくは送達し、次いで、結腸の大部分の範囲にわたって、持続放出すべきである。
【００１４】
シェラック製剤を系統的に検討すると、本出願の発明者らは、驚くべきことに、非経験的なコーティング修飾および部分コーティング修飾を発見および開発し、これらにより、具体的には、このような製剤の開発が可能になった。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明の目的は、好ましくは、小腸および／または大腸（結腸）に、活性物質、例えば色素内視鏡検査のための色素を腸送達するための改善された製剤および組成物を提供することであった。
【００１６】
広い意味では、本発明は、活性物質を含有するコアを含むマイクロカプセル、医薬、医療製品、診断製品、栄養補強食品、栄養補助食品、食品成分または食品としてのこのようなマイクロカプセルの使用に関する。
【００１７】
好ましい一実施形態は、腸上皮および／または腸粘膜および／または腸壁における、腸炎、形成異常、発がんおよび／もしくは変化に関連するおよび／またはこれらを伴う疾患および／または症候群の診断、治療および／または予防のための、小腸および／または大腸の色素内視鏡検査に好適な１種または複数の色素を含有する、このようなマイクロカプセルの使用である。
【００１８】
本発明のマイクロカプセル（図１）は、活性物質を含有するコア（１）、ならびにシェラックの内側層（２）、シェラックの外側層（３）、およびシェラックの２層（２、３）の間に設けられているｐＨ調節物質（４）を含むコーティング層系を特徴とするが、ただし活性物質はビタミンＢ３（すなわち、ニコチン酸および／またはニコチンアミド）ではない。
【００１９】
ビタミンＢ３を除いて、活性物質は、胃腸管により活性物質が吸収された後に、胃腸管に直接影響を及ぼす、および／または身体に間接的に影響を及ぼす、任意の化学物質、化合物、組合せ、組成物または混合物を含む。好ましい実施形態では、活性物質は、色素内視鏡検査に好適な１種または複数の色素を含む。
【００２０】
ｐＨ調節物質は、ｐＨをモジュレートすることができる、任意の化学物質、化合物、組合せ、組成物、混合物または緩衝系を含む。それは、２つのシェラックコーティング層の間に中間層として設けられていてもよく、シェラックコーティングを微調整し、その崩壊を制御する機能を有する。ｐＨ調節物質は、コア中の活性物質および／または添加剤のｐＨ、およびマイクロカプセルの所望の放出プロファイルに応じて、全体が酸性または塩基性となるよう選択することができる。例えば、下部小腸における放出が望まれる場合、下部小腸において支配的なｐＨにおいて直ぐに活性物質の放出を可能にするために、全体として塩基性のｐＨ調節物質が、シェラックコーティング上の全体的に酸性のコアの安定化作用を部分的に中和して制御することができる一方、全体的に塩基性コアである場合、全体的に酸性のｐＨ調節物質により、早期放出を防止するため、シェラックコーティングの崩壊をわずかに低減することができる。本発明のすべてのマイクロカプセルにおいて、シェラックの第２（内側）の層を新規に追加すると、製剤の性能の驚くほどの、非経験的な改善がもたらされた。
【００２１】
これらの製剤および組成物は、特に、腸上皮および／または腸粘膜および／または腸壁における、腸炎、形成異常、発がんおよび／もしくは変化に関連するおよび／またはこれらを伴う疾患および／または症候群の診断、治療および／または予防のための、小腸および／または大腸の色素内視鏡検査のために、ヒトまたは動物疾患の診断、予防および／または治療に使用することができる。
【００２２】
本発明によれば、背景技術の節において規定した課題は、特許請求の範囲において定義し、本明細書において一層詳細に記載した、製剤もしくは組成物、または診断レジメンもしくは処置レジメンもしくは予防レジメンにより解決され、これは、小腸および／または結腸における活性物質の制御放出を含む。好ましい実施形態では、活性物質は、例えば、パテントブルーＶ、インジゴカルミン、ブリリアントブラックＢＮ、メチレンブルー、トルイジンブルー、クレシルバイオレットおよび／もしくはコンゴーレッドのような、色素内視鏡検査に好適な１種もしくは複数の色素を含む、またはそれらからなる。特に好ましい実施形態では、色素は、例えば、パテントブルーＶ（Ｅ１３１）、インジゴカルミン（Ｅ１３２）および／またはブリリアントブラックＢＮ（Ｅ１５１）などの食品着色剤である。
【００２３】
さらに、１種超の活性物質を含有する組成物が提供される。これらの２種以上の活性物質は、個々に、または組み合わされて作用することがある。２種以上の活性物質の組合せは、同一または個別の剤形中に存在してもよく、この剤形は、同時に、逐次にまたは個別の機会に投与することができる。好ましい実施形態では、本組成物は、小腸および／または結腸において、特定の局部または局所有効性のための、活性成分の制御放出および／または遅延放出を伴う経口投与に好適である。特に好ましい実施形態では、活性物質は、色素内視鏡検査に好適な１種もしくは複数の色素を含む、またはそれらからなる。
【００２４】
本発明はまた、本明細書に記載されているマイクロカプセルおよび／または組成物を用いて、本明細書に記載されている腸上皮および／もしくは腸粘膜および／もしくは腸壁の変化に関連するまたはそれらに伴う疾患および／または状態のうちの１つまたは複数を診断する、および／または処置する、および／または予防する方法を含む。さらに、本発明は、本明細書に記載されている疾患および状態のうちの１つまたは複数を診断する、および／または処置する、および／または予防するための、医薬、および／または医療製品、および／または診断製品、および／または栄養補助食品の製造における、本明細書に記載されているマイクロカプセルおよび／または組成物の使用を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】活性物質を含有するコア（１）、ならびにシェラックの内側層（２）、シェラックの外側層（３）、およびシェラックの２層（２、３）の間に設けられているｐＨ調節物質（４）を含むコーティング層系を特徴とする、本発明のマイクロカプセルの概略図を示す。
【図２】コーティング直後、および室温に保管し、かつ光から保護した、最大１２か月後（パテントブルーＶ）または６か月後（ブリリアントブラックＢＮ）の、ヒト初回投与研究に使用するための、マイクロカプセルバッチに由来する、パテントブルーＶ（Ａ）またはブリリアントブラックＢＮ（Ｂ）のｐＨを適合させたインビトロでの放出プロファイルを示す。グラフは、平均値±ＳＤ（ｎ＝２）を表わす。放出百分率とは、マイクロカプセル中の色素の総質量を指す。
【図３】対照患者（Ａ）、色素結腸内視鏡検査向けの本発明の色素マイクロカプセルを使用した後の、パテントブルーＶにより染色した上行結腸の区域（Ｂ）、およびさらなる染色例（Ｃ、典型的外観；Ｄ、染色された腺腫）に由来する、従来的な結腸内視鏡検査中の、上行結腸の非染色区域を比較した例示的な写真を示す。
【図４】ゼラチン硬質カプセルにカプセル封入する前およびその後の、添加剤であるＨＰＭＣおよびＮＡＭ（実施例１）を含有するヒト初回投与研究に使用したマイクロカプセルバッチに由来する、ならびに造粒のために添加剤としてＰＶＡを用いて生成したマイクロカプセルバッチ（実施例４）に由来する、パテントブルーＶのｐＨを適合させたインビトロでの放出プロファイルを示す。グラフは、平均値±ＳＤ（ｎ＝２）を表わす。放出百分率とは、マイクロカプセル中のパテントブルーＶの総質量を指す。
【図５】コーティング後、および室温で保管し、光から保護した最大９か月後の、造粒のために添加剤としてＰＶＡを用いて生成したマイクロカプセルバッチ（実施例４）に由来するパテントブルーＶのｐＨを適合させたインビトロでの放出プロファイルを示す図である。グラフは、平均値±ＳＤ（ｎ＝２）を表わす。放出百分率とは、マイクロカプセル中のパテントブルーＶの総質量を指す。
【図６】コーティング後の、造粒のために添加剤としてＰＶＡを用いて生成したマイクロカプセルバッチ（実施例５）に由来するパテントブルーＶ（Ａ）およびインジゴカルミン（Ｂ）のｐＨを適合させたインビトロでの放出プロファイルを示す。グラフは、平均値±ＳＤ（ｎ＝２）を表わす。放出百分率とは、マイクロカプセル中の色素の総質量を指す。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
本発明のコアは、活性物質を含有するコア（１）、ならびにシェラックの内側層（２）、シェラックの外側層（３）、およびシェラックの２層（２、３）の間に設けられているｐＨ調節物質（４）を含むコーティング層系を含むマイクロカプセルであるが、ただし活性物質はビタミンＢ３ではない。
【００２７】
本明細書において、用語「活性物質」は、胃腸管により活性物質が吸収された後に、胃腸管に直接影響を及ぼす、および／または身体に間接的に影響を及ぼす、任意の化学物質、化合物、組合せ、組成物または混合物を含む。好ましい実施形態では、活性物質は、色素内視鏡検査に好適な１種または複数の色素を含む。
【００２８】
本明細書において、用語「ビタミンＢ３」とは、単独または組合せでの両方のニコチン酸および／またはニコチンアミドを指し、活性物質は、明示的にビタミンＢ３ではない。活性物質としてビタミンＢ３を除外することは、活性物質としてビタミンＢ３を含むマイクロカプセルを記載した並行出願が出願されているので、単に法的理由であり、技術的理由ではない。
【００２９】
本明細書において、用語「ｐＨ調節物質」は、ｐＨをモジュレートすることができる、任意の化学物質、化合物、組合せ、組成物、混合物または緩衝系を含む。本発明では、ｐＨ調節物質は、シェラックコーティングを微調整する、およびその崩壊を制御する機能を有する。ｐＨ調節物質は、例えば、２つのシェラックコーティング層の間の中間層として、添加剤を含んでまたは含まないで供給されてもよい。やはり性質が異なる、２種以上のｐＨ調節性化学物質の組合せ（例えば、ｐＫａおよび／またはｐＫｂが異なる酸性および／または塩基性物質、弱酸および強酸ならびに／または弱塩基および強塩基の組合せ）もまた、本発明の範囲内にある。したがって、用語「塩基性物質」または「酸性物質」とは、本明細書で使用する場合、このような物質が、塩基性または酸性の構成成分のみそれぞれ含有すべきである点で限定的ではないが、ｐＨ調節物質の全体的な作用および特性を指す。例えば、このような物質はまた、ｐＨ中性、塩基性（全体として酸性物質の場合）、または酸性（全体として、塩基性物質の場合）とすることができる、構成成分を含んでもよい。
【００３０】
本明細書において、「下部小腸」は、小腸の第２の半分（長さ）である。
【００３１】
本明細書において、語「好ましい」または「好ましくは」とは、ある特定の状況下において、ある特定の有益性を有することがある実施形態を指すが、他の実施形態はまた、同一または他の状況下でも好ましいことがある。１つまたは複数の好ましい実施形態の列挙は、本発明の範囲から他の有用な実施形態を除外することを意味するものではない。「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」のような用語、およびその変化形は、本説明および特許請求の範囲における限定的な意味を有するものではない。文献からの文書のある特定の節を列挙しているのは、このような文書のそれ以外のものは関連性がない、または参照により組み込まれていないことを意味するものではない。１つまたは２つの端点による数値範囲の列挙は、その範囲内に含まれるすべての数を含む（例えば、「１〜１０」は、１，２．４、４．５７６などを含み、「１未満」とは、１よりも小さなすべての数を含む）。個別のステップを含む、本明細書において開示または引用されている任意の方法に関すると、これらのステップは、任意に実施可能な順序で行ってもよく、２つ以上のステップのいずれかの組合せを同時に行ってもよい。任意の例、または例の一覧表示は、任意の種類の制限として、または排他的な一覧表示として解釈されるべきではない。
【００３２】
マイクロカプセルの活性物質含有コアが、全体として酸性である場合、ｐＨ調節物質は、結腸で長期放出を伴うまたは伴わず、例えば小腸において支配的なｐＨで、直ぐに活性物質の放出を可能にするために、シェラックコーティング上のコアの酸性の安定化作用を部分中和する、およびそれを制御することができるよう、全体が塩基性となり得る。二重シェラック層に加えて、塩基性ｐＨ調節物質の使用は、現状の技術を超えたやはり新規なものである。このような塩基性ｐＨ調節物質の構成成分は、炭酸水素塩、炭酸塩および／または酢酸塩、例えば、炭酸水素ナトリウム（重炭酸ナトリウム）、炭酸ナトリウム、炭酸水素カリウム（重炭酸カリウム）、炭酸カリウム、炭酸水素アンモニウム（重炭酸アンモニウム）、炭酸アンモニウム、炭酸水素カルシウム（重炭酸カルシウム）、炭酸カルシウム、酢酸ナトリウムおよび／または酢酸カルシウムから好ましくは選択される。
【００３３】
したがって、本発明によるマイクロカプセルの一実施形態は、活性物質含有コアが全体として酸性であることを特徴とし、ｐＨ調節物質は、炭酸水素塩、炭酸塩、酢酸塩およびそれらの混合物からなる群から好ましくは選択される、塩基性物質を含む、またはそれからなる。好ましい実施形態では、塩基性物質は、炭酸水素ナトリウム（重炭酸ナトリウム）を含む、またはそれからなる。
【００３４】
マイクロカプセルの活性物質含有コアが、全体として中性または塩基性である場合、ｐＨ調節物質は、シェラックコーティングの崩壊をわずかに低減するよう全体として酸性であってもよく、腸の所望の部分に到達するまで、シェラックの長期安定性をもたらし、例えば、結腸において継続的な放出を伴うまたは伴わないで、小腸で活性物質の勢いのよい放出をもたらす。このような酸性のｐＨ調節物質の構成成分は、有機酸および／または無機酸、例えばクエン酸、リンゴ酸、酒石酸、アスコルビン酸、ソルビン酸、乳酸、酢酸および／またはリン酸から好ましくは選択される。
【００３５】
したがって、本発明によるマイクロカプセルの一実施形態は、活性物質含有コアが全体として中性または塩基性であることを特徴とし、ｐＨ調節物質は、有機酸、無機酸およびそれらの混合物からなる群から好ましくは選択される、酸性物質を含む、またはそれからなる。好ましい実施形態では、酸性物質は、クエン酸を含む、またはそれからなる。
【００３６】
本発明はまた、本明細書に記載されているマイクロカプセルおよび／または組成物を生成する方法であって、
ａ）活性物質を含む、またはそれからなるコア材料を用意するステップ、
ｂ）コア材料を第１のシェラック層によりコーティングするステップ、
ｃ）ｐＨ調節物質を用意するステップ、
ｄ）例えば、中間層の形態で、第１のシェラック層上にｐＨ調節物質を塗布するステップ、および
ｅ）第２のシェラック層を塗布するステップ
を含む、方法を指す。
【００３７】
活性物質を含む、またはそれからなるコアは、添加剤および／もしくは他の物質を含むもしくは含まないで、例えば、１種もしくは複数の活性物質の造粒により生成することができるか、またはそれは、添加剤および／もしくは他の物質を含むもしくは含まない活性物質がその上もしくはその中に、例えばスプレーコーティングにより塗布される添加剤構造体（例えば、セレットコア（Ｃｅｌｌｅｔ  ｃｏｒｅ））を含有することができる。さらに、１種もしくは複数の活性物質を含む、またはそれらからなるコアはまた、同一または他の活性物質によってコーティングされてもよい。
【００３８】
コアを生成するために、シェラック層および／またはｐＨ調節物質、多数の添加剤、例えば、以下に限定されないが、マルトデキストリン、グリセロール、セルロースエーテル［例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、メチルセルロース、エチルセルロースおよび／またはカルボキシメチルセルロース］、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ、例えば、ＰＶＡ４−８８）、ポリエチレンオキシド、カルボポールポリマー、ポリアクリル酸、多糖類（例えば、キサンタンガム、グアーガム、キトサン、アルギネート、ペクチン、カラゲナン、トラガカントおよび／または様々なタイプのデンプン、例えばエンドウマメデンプンおよび／またはライスデンプン）、ポリビニルピロリドンおよび／または二酸化ケイ素を使用することができる。このような手順および得られたマイクロカプセルのための２つの非限定例は、実施例１に提示されている。
【００３９】
コアのサイズ、構造および重量に応じて、各ステップにおいて塗布される、シェラックおよび／またはｐＨ調節物質の量は、マイクロカプセルの重量増加率、および得られたサイズ、および特性に影響を及ぼす。その元来の組成物および構造に関係なく、コアが小さくなり、その表面構造が不均質になるほど、コアはその体積と関係して大きな表面を有し、所望の特性を有する内側シェラック層を形成するために、コアの重量に関連して、より多量のシェラックが塗布されなければならない可能性がある。さらに、シェラック層およびｐＨ調節物質は、例えば、所期の放出プロファイル、マイクロカプセルを消化することになる対象の種（ヒトまたは動物、以下を参照されたい）、ならびに／または使用されるコアおよびコーティング材料の構造および組成（例えば、シェラックバッチの特定の特性および規格、ｐＨ調節物質ならびに／または添加剤）に応じて、様々な量、厚さおよび重量増加率で塗布され得る。本明細書において、各工程ステップの重量増加率は、この工程ステップにおいて使用される、出発原料の重量に関する。例えば、外側シェラック層を塗布することによる１０％の重量増加とは、この工程ステップにより生成される、コア、内側シェラック層およびｐＨ調節物質を既に含んでいるマイクロカプセルが、このステップの出発原料よりも１０％多い重量を有することを意味する。
【００４０】
マイクロカプセルのコア構造体が、１種もしくは複数の活性物質を含む、またはそれらからなる例では、内側シェラック層を塗布することに起因する重量増加率は、０．１〜１００％、好ましくは０．２５〜９０％、より好ましくは０．５〜８０％、最も好ましくは２〜６０％である。１種または複数の活性物質が、コア構造体、例えばセレットコア上に噴霧される例では、内側シェラック層を塗布することに起因する重量増加率は、０．１〜１００％、好ましくは０．２〜５０％、より好ましくは０．３〜４０％、最も好ましくは０．５〜３０％である。ｐＨ調節物質を塗布する重量増加率は、０．１〜３０％、好ましくは０．１〜２５％、最も好ましくは０．２〜２０％である。最後に、外側シェラック層の塗布に起因する重量増加率は、０．１〜１００％、好ましくは０．５〜８０％、より好ましくは１〜６０％、最も好ましくは２〜４０％である。
【００４１】
本発明によるマイクロカプセルの好ましい実施形態は、活性物質が、色素内視鏡検査に好適な色素を含む、またはそれからなることを特徴とする。好ましい実施形態では、活性物質は、アルラレッドＡＣ／ＦＤ＆Ｃレッド番号４０（Ｅ１２９）；アルファズリン；アルミナ；アラマンス（Ｅ１２３）；アナゾレンナトリウム；アナトー／ビクシン／ノルビクシン（Ｅ１６０ｂ）；アントシアニン（Ｅ１６３）；ビートルートレッド／ベタニン（Ｅ１６２）；β−アポ−８’−カロテナール（Ｅ１６０ｅ）；ブリリアントブラックＢＮ／ブラックＰＮ（Ｅ１５１）；ブリリアントブルーＦＣＦ／ＦＤ＆Ｃブルー番号１（Ｅ１３３）；ブラウンＦＫ（Ｅ１５４）；ブラウンＨＴ（Ｅ１５５）；炭酸カルシウム（Ｅ１７０）；カンタキサンチン（Ｅ１６１ｇ）；カプサンチアン／カプソルビン／パプリカ（Ｅ１６０ｃ）；カルモイシン／アゾルビン（Ｅ１２２）；カロテン（Ｅ１６０ａ）；カラメル（Ｅ１５０ａ−ｄ）；コチニール／カルミン酸／カルミン（Ｅ１２０）；カロテン；カルタミン；クロロフィル／クロロフィリン（Ｅ１４０）；クロロフィルおよび／またはクロロフィリンの銅錯体（Ｅ１４１）；シトラスレッド番号２；コチニールレッドＡ／ポンソー４Ｒ（Ｅ１２４）；コンゴーレッド；クルクミン（Ｅ１００）；クレシルバイオレット；Ｄ＆Ｃグリーン番号５；Ｄ＆Ｃイエロー番号１０；ジヨードフルオレセイン；エオシン／Ｄ＆Ｃレッド番号２２；エリスロシン／ＦＤ＆Ｃレッド番号３（Ｅ１２７）；エバンスブルー；ファストグリーンＦＣＦ（Ｅ１４３）；ＦＤ＆Ｃグリーン番号３；フラミングレッド／Ｄ＆Ｃレッド番号３６；フルオレセイン／ウラニン；グリーンＳ（Ｅ１４２）；ヘリンドンピンクＣＮ／Ｄ＆Ｃレッド番号３０；インダンスレーンブルー（Ｅ１３０）；インジゴチン／インジゴカルミン／ＦＤ＆Ｃブルー番号２（Ｅ１３２）；インドシアニングリーン；酸化鉄および水酸化鉄；イソスルファンブルー；リソールルビンＢ／Ｄ＆Ｃレッド番号６；リソールルビンＢ  Ｃａ／Ｄ＆Ｃレッド番号７；リソールルビンＢＫ（Ｅ１８０）；ルゴール溶液；ルテイン（Ｅ１６１ｂ）；リコペン（Ｅ１６０ｄ）；メチルブルー；メチレンブルー；オレンジＢ；パテントブルーＶ（Ｅ１３１）；パテントブルーＶＦ／スルファンブルー；フェノールレッド；フロキシンＢ／Ｄ＆Ｃレッド番号２８；キノリンイエロー（Ｅ１０４）；リボフラビン／リボフラビン−５’−ホスフェート（Ｅ１０１）；サフラン（Ｅ１６４）；スピルリナ抽出物；スダンブラックＢ；サンセットイエローＦＣＦ／オレンジイエローＳ／ＦＤ＆Ｃイエロー番号６（Ｅ１１０）；テトラジン／ＦＤ＆Ｃイエロー番号５（Ｅ１０２）；テトラブロモフルオレセイン／Ｄ＆Ｃレッド番号２１；テトラクロロクロロテトラブロモフルオレセイン／Ｄ＆Ｃレッド番号２７；二酸化チタン（Ｅ１７１）；トルイジンブルー／塩化トロニウム；ターメリック（Ｅ１００）；ベジタブルカーボン（Ｅ１５３）；ならびにそれらの誘導体、等価物および混合物からなる群から選択される色素を含む、またはそれからなる。
【００４２】
特に好ましい実施形態では、活性物質は、パテントブルーＶ、イソスルファンブルー、インジゴカルミン、ブリリアントブラックＢＮ、メチレンブルー、トルイジンブルー、クレシルバイオレットおよび／もしくはコンゴーレッドからなる群から選択される、１種もしくは複数の色素を含む、またはそれらからなる。
【００４３】
別の好ましい実施形態では、マイクロカプセルのコアは、色素の組合せを含むまたはそれからなる。
【００４４】
さらに別の好ましい実施形態では、１つの色素（例えば、ブリリアントブラックＢＮ）を含む、またはそれからなるコアは、内側シェラック層を塗布する前に、添加剤を含むまたは含まない、別の色素（例えば、パテントブルーＶ）によりコーティングされてもよい。
【００４５】
さらに別の好ましい実施形態では、制限された光スペクトル（例えば、狭帯域画像化内視鏡）を使用する内視鏡検査技法の性能を高めるために、直接蛍光（例えば、メチレンブルー、パテントブルーＶ）、間接蛍光（例えば、タンパク質に結合している場合のパテントブルーＶ）、または上記の群からの色素の蛍光消光特性（例えば、ブリリアントブラックＢＮ）が都合よく使用され得る。
【００４６】
コア、活性物質およびそれらの特性（例えば、それらのｐＨ）、ｐＨ調節物質の組成、ならびに二重シェラック層の構成に応じて、本発明はまた、医薬、医療製品、診断製品、栄養補強食品、栄養補助食品、食品成分または食品としてのマイクロカプセルの使用を含む。例えば、マイクロカプセルを含む製剤は、薬理学的活性物質、栄養補助食品、プロバイオティクス、プレバイオティクス、シンバイオティクス、色素、および／または腸の任意の部分に対する他の活性物質として有用な物質を送達するために使用することができ、この場合、それらは、局部的（例えば、腸壁を染色することによる、または腸内細菌および／または腸とのそれらの相互作用を改変することによる）、および／または全身的（例えば、循環への吸収による、および／または腸への局部的な作用によりきっかけとなる間接的な全身性作用よる）に作用することができる。
【００４７】
説明のために、本発明者らは、以下の定義を使用する。
【００４８】
プロバイオティクス：胃腸管に生存してこれを移動し、その腸内細菌のバランスを改善することにより、宿主に有益な作用をもたらす、消化可能な生存微生物培養物。プロバイオティクスの一例は、ＶＳＬ＃３である。
【００４９】
プレバイオティクス：宿主の良好な生活状態および健康にとって有益な、胃腸内細菌の組成および／または活動の特異的な変化を可能にする、非消化性で選択性のある発酵食品成分または補助物。プレバイオティクスの例は、抵抗性デンプン、フルクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、キシロオリゴ糖、ポリデキストロース、ラクツロース、イヌリンまたは水溶性繊維（例えば、サイリウムハスクまたはアカシア繊維）である。
【００５０】
シンバイオティクス：プロおよびプレバイオティクスの組合せ。
【００５１】
特に、本発明は、腸上皮および／または腸粘膜および／または腸壁における、腸炎、形成異常、発がんおよび／もしくは変化に関連するおよび／またはこれらを伴う疾患および／または症候群の診断、治療および／または予防のための、小腸および／または大腸の色素内視鏡検査用のマイクロカプセルの使用に関する。
【００５２】
診断用のマイクロカプセルの使用は、この文脈では言うまでもないが、この使用は、間接的に、このような疾患および／または症候群の、予防（例えば、腸の前がんもしくはがん性構造、および／または病変の検出を可能にすることによる）、および／または治療（例えば、その標的除去を可能にすることによる）における使用を意味する。このような疾患および／または症候群に関する非限定例は、小腸および／または結腸の炎症および／または悪性疾患；炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、不確定大腸炎；過敏性腸症候群；憩室炎；小腸のがん；結腸直腸がん；小腸および／または結腸の腺癌；カルチノイド腫瘍；リンパ腫；消化管間質腫瘍；肉腫；平滑筋肉腫；黒色腫；扁平上皮癌、ならびに腸上皮および／または腸粘膜および／または腸壁における、腸炎、形成異常、発がんおよび／もしくは変化に関連するおよび／またはそれらに伴う他の疾患および／または症候群からなる群から選択される１つまたは複数のものである。
【００５３】
本明細書で使用する場合、用語「治療」、「処置」および「処置する」とは、本明細書に記載されている疾患もしくは障害、またはそれらの１つもしくは複数の症状を反転させる、軽減する、それらの発症を遅延させる、またはそれらの進行を阻害することを指す。一部の実施形態では、１つまたは複数の症状を発症した後、このような処置が行われ得る。他の実施形態では、処置は、症状の非存在下で行われてもよい。例えば、処置は、症状の発症前に、感受性の高い個体に投与されてもよい（例えば、症状歴に照らし合わせて、および／または遺伝的もしくは他の感受性因子に照らし合わせて）。処置はまた、症状が解決した後に、例えば、慢性再発性障害の寛解維持において、その再発を防止または遅延させるために、継続してもよい。
【００５４】
本明細書で使用する場合、用語「予防（ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ）」、「予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）」および「予防する」とは、未処置対照集団と比較して、疾患もしくは障害、またはそれらの１つもしくは複数の症状の発症を遅延させる、またはそれらを発症する可能性を低減することを指す。
【００５５】
したがって、本発明はまた、小腸および／または結腸の炎症および／または悪性疾患；炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、不確定大腸炎；過敏性腸症候群；憩室炎；小腸のがん；結腸直腸がん；小腸および／または結腸の腺癌；カルチノイド腫瘍；リンパ腫；消化管間質腫瘍；肉腫；平滑筋肉腫；黒色腫；扁平上皮癌、ならびに腸上皮および／または腸粘膜および／または腸壁における、腸炎、形成異常、発がんおよび／もしくは変化に関連するおよび／またはそれらに伴う他の疾患および／または症候群からなる群から選択される、疾患および／または症候群の診断、治療および／または予防のための、小腸および／または大腸の色素内視鏡検査用のマイクロカプセルの使用に関する。
【００５６】
特許請求されているマイクロカプセルは、ヒトおよび他の哺乳動物の両方、特に、家畜および有用な動物における類似の発生を伴う、疾患および／または症候群の診断および／または治療および／または予防に等しく利用可能である。そのような動物の例は、客観的制限なしに、イヌ、ネコ、ウマ、ラクダ、ウシまたはブタである。
【００５７】
さらに、本発明はまた、本発明のマイクロカプセルを含む組成物を指す。好ましい実施形態では、このような組成物は、活性物質の制御放出および／または遅延放出を有して、経口投与向けに製剤化され、その結果、この製剤は、小腸および／または結腸において、放出（例えば、部分放出、選択的放出）する。
【００５８】
本発明では、用語「製剤」または「組成物」または「処置」または「予防」、および特に、用語「組成物」は、薬学的および／または栄養学的および／または生理学的に許容される製剤、組成物、および／または前記活性物質の投与形式という幅広い意味を有しており、これらには、以下に限定されないが、やはり活性物質の用量、および製剤の性質に応じて、医薬（薬物）、医療製品、診断製品、栄養補強食品、栄養補助食品、食品成分および／または食品の意味での医薬製剤を含む。好ましいものは、医薬、医療製品、診断製品、栄養補強食品および栄養補助食品である。
【００５９】
用語「制御放出剤（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｒｅｌｅａｓｅ）」は、長期にわたり（時間依存的放出）および／またはある特定の生理的条件下（例えば、ｐＨ依存的放出）で、１種または複数の活性成分を放出または送達する、医薬製剤またはその構成成分を好ましくは指す。ある特定の実施形態では、期間、または生理的条件（例えば、ｐＨ）による放出は、小腸（例えば、下部小腸）および／または結腸において、製剤中の活性物質の少なくとも一部が放出されるのに十分である。
【００６０】
用語「遅延放出」とは、遅延期間の後に、活性成分を放出する医薬製剤に好ましくは関する。ある特定の実施形態では、遅延は、小腸（例えば、下部小腸）および／または結腸において、製剤中の活性物質の少なくとも一部が放出されるのに十分である。
【００６１】
疾患または状態の性質および重症度、ならびに個々の患者または対象の特徴に応じて、剤形は、毎日１回もしくは複数回で、または医薬、医療製品、診断製品の場合、医師により選択される別の投与量レジメンで、または栄養補強食品および／もしくは栄養補助食品の場合、消費者への指示書により規定されている別の投与量レジメンで投与される。
【００６２】
本発明によるマイクロカプセルおよび／または組成物で投与される色素内視鏡検査に好適な１種または複数の色素の合計投与量は、染色プロトコルに依存するが、好ましくは、現在の法に従って、各色素に対してＡＤＩまたはそれ未満になろう。
【００６３】
非限定例として、好ましい食品着色剤である、パテントブルーＶ、インジゴカルミンおよびブリリアントブラックＢＮの欧州ＡＤＩは、少なくとも９０％純度を有する調製物の場合、５ｍｇ／ｋｇ（体重）である（ＥＦＳＡパネル２０１０年、ＥＦＳＡ  Ｊ．８巻：１５４０頁；ＥＦＳＡパネル２０１３年、ＥＦＳＡ  Ｊ．１１巻：２８１８頁；ＥＦＳＡパネル２０１４年、ＥＦＳＡ  Ｊ．１２巻：３７６８頁；背景技術を参照されたい）。
【００６４】
好ましい実施形態では、本発明のマイクロカプセルおよび／または組成物の使用は、例えば、欧州消化器内視鏡学会（Ｈａｓｓａｎら  ２０１３年、Ｅｎｄｏｓｃｏｐｙ  ４５巻：１４２頁）および／または米国消化器内視鏡学会（ＡＳＧＥ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  ｏｆ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ２０１５年、Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔ．Ｅｎｄｏｓｃ．８１巻：７８１頁）の現在のガイドラインに従い、内視鏡検査、好ましくは、結腸内視鏡検査のために、腸管前処理を伴うであろう。
【００６５】
非限定例として、本発明による結腸内視鏡検査用の腸管前処置は、分割用量（例えば、結腸内視鏡検査の前日の午後および夕方に２Ｌ、ならびに結腸内視鏡検査が行われる当日の午後になる前の早朝に２Ｌ）で、４Ｌの腸管前処置溶液を４Ｌ飲むことにより行うことができる。次に、このようなマイクロカプセルを含有するマイクロカプセルおよび／または組成物の第１の用量は、例えば、夕方の第１の２Ｌの後に服用され得る一方、３Ｌ後の第２の用量、および４Ｌ後の第３の用量が翌朝に服用される。さらなる非限定例として、腸管前処置溶液の用量は、結腸内視鏡検査の前日に３Ｌおよび当日に１Ｌに分割してもよく、または腸管前処置溶液全部を結腸内視鏡検査の当日に服用してもよく（例えば、結腸内視鏡検査が午後に行われる場合）、または腸管前処置溶液の全体積を、より少なく（例えば、２Ｌ）または多く（５Ｌ）してもよい。さらに、マイクロカプセルおよび／または組成物のタイミングおよび／または投与レジメンは、腸管前処置溶液のタイミングおよび／または投与レジメンと自由におよび個別に適合させてもよく、その逆であってもよい。
【００６６】
本発明による腸管前処置溶液および／または色素内視鏡検査色素および／またはマイクロカプセルおよび／または製剤および／または組成物のためのこのような投与レジメンの変形はまた、例えば、このような腸管前処置溶液の種類および／または組成、個々の患者要件、好ましくは染色される腸領域、使用される色素の性質、患者が罹患している疾患および／または症候群の種類、製剤（単位）中に含有されるマイクロカプセルの用量、ならびに当業者に明白な多数の他の因子に依存することがある。しかし、本文中に明示的に記載されている投与レジメンが、一部の場合、好ましいことがある。
【００６７】
経口投与に関すると、本発明のマイクロカプセルは、さらなる添加剤と一緒になった、単なる錠剤もしくはコーティング錠剤またはドラジェ剤に製剤化されているか、またはカプセルもしくはサシェに充填された遊離形態（例えば、食品、飲料、プロバイオティクス、プレバイオティクスまたはシンバイオティクスと混合して）で、例えば投与されてもよい。錠剤は、通常、丸みがあるか、または両凸である。錠剤を分離することが可能な、長方形の錠剤形態も可能である。
【００６８】
本組成物はまた、結合剤、充填剤、流動促進剤、滑沢剤および／または流量調節剤などの、さらなる添加剤物質を含有することもできる。本発明による組成物は、適切な場合、さらなる活性物質、ならびに医薬組成物および／または栄養組成物において慣用的な添加剤、例えば、滑石、アラビアガム、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、カカオ脂、水性および非水性担体、動物もしくは植物起源の脂質構成成分、パラフィン誘導体、グリコール（特に、ポリエチレングリコール）、様々な可塑剤、分散剤、乳化剤、保存剤、および／または例えば、以下の実施例に指定されている他の添加剤と共に製剤化され得る。
【００６９】
したがって、本発明はまた、小腸および／または結腸の炎症および／または悪性疾患；炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、不確定大腸炎；過敏性腸症候群；憩室炎；小腸のがん；結腸直腸がん；小腸および／または結腸の腺癌；カルチノイド腫瘍；リンパ腫；消化管間質腫瘍；肉腫；平滑筋肉腫；黒色腫；扁平上皮癌、ならびに腸上皮および／または腸粘膜および／または腸壁における、腸炎、形成異常、発がんおよび／もしくは変化に関連するおよび／またはそれらに伴う他の疾患および／または症候群からなる群から選択される、疾患および／または症候群の診断、治療および／または予防のため、小腸および／または大腸の色素内視鏡検査に使用するための組成物に関する。
【００７０】
別の好ましい実施形態では、本発明はまた、（ａ）本発明による物質の同じ群から選択される、１種または複数の活性物質（例えば、２種以上の色素の変動用量組合せまたは固定用量組合せ）、および（ｂ）本発明による１つの群から選択される１種または複数の活性物質（例えば、上記の色素）の本発明による物質の別の群から選択される１種または複数の活性物質（例えば、内視鏡検査のための腸管前処置後の腸内細菌の再生成を支援するためのプロバイオティクス、プレバイオティクスもしくはシンバイオティクスとの変動用量組合せまたは固定用量組合せ）との組合せ調製物を含む。本明細書に記載されている組合せは、同一または個別の剤形中に存在してもよく、この剤形は、同時に、逐次にまたは個別の機会に投与することができる。
【００７１】
本発明による組成物および／またはマイクロカプセルは、１種または複数の活性物質と１種または複数の追加の構成成分との両方を含むことが本発明により好ましいが、それぞれが、処置レジメンまたは予防レジメン下で、同時または逐次に投与される１種または複数の活性物質を含む、個別の組成物を有することが有益となることがある。注記すべきこととして、このような一式の組成物は、本発明による組成物のこのような適用に関する定義にもよる。
【００７２】
本明細書で使用する場合、用語「変動用量組合せ」とは、医薬、医療製品、診断製品、栄養補強食品または栄養補助食品における、２種以上の活性物質の組合せを指し、こうして、これらの物質のそれぞれが、個別の組成物、例えば、２種の単一剤形の形態で適用される。個別の組成物は、投与レジメンにより、同時に、逐次に、または個別の機会に投与され得る。好ましい実施形態では、１種または複数の活性物質を含有する本発明のマイクロカプセルは、変動用量組合せで組み合わされてもよく、個別の組成物と同時に、逐次にまたは個別の機会で投与されてもよい。これらの変動用量組合せは、慣用的に入手可能な組成物を使用してもよく、または例えばカスタマイズされた多剤併用もしくはコンパウンディングにより実現することもできる。
【００７３】
変動用量組合せとは対照的に、「固定用量組合せ」は、単一剤形中で混合された、２種以上の活性成分、例えば活性物質を含む、製剤である組合せ医薬、医療製品、診断製品、栄養補強食品または栄養補助食品として定義され、これは、ある特定の個別の固定用量で製造され、流通される。固定用量組合せはほとんどの場合、活性物質および個々の投与量の所定の組合せを有する大量生産製品を指す（例えば、カスタマイズされた多剤併用またはコンパウンドとは反対である）。例えば、１種または複数の活性物質を含有する本発明のマイクロカプセルは、より大きな剤形、例えばカプセル剤、錠剤またはサシェ剤中に、特定の比のこれらのマイクロカプセルを含ませることによる、固定用量組合せで一緒にされてもよい。
【００７４】
したがって、本発明のマイクロカプセルは、活性物質の組合せを含むよう製剤化され得るが、本発明はまた、このようなマイクロカプセルの他の活性物質および／または組成物との組合せを包含する。例えば、構成成分はまた、一層容易な投与とするために、例えば、マイクロカプセルをプロバイオティクス、プレバイオティクス、シンバイオティクス、または任意の他の物質もしくは組成物に添加することにより、あるいは本発明によるマイクロカプセル、および１種もしくは複数の制御放出製剤または遅延放出製剤、例えば、他の活性物質のマイクロカプセルまたは顆粒を１個のカプセルに充填することによって、同一剤形内であっても物理的に分離されてもよい。したがって、本発明はまた、活性物質単独の制御放出製剤および／もしくは遅延放出製剤である組成物、または活性物質の制御放出製剤および／もしくは遅延放出製剤のプロバイオティクス、プレバイオティクス、シンバイオティクスもしくは任意の他の物質との変動用量組合せ、もしくは好ましくは固定用量組合せに関し、このような物質は、制御放出および／または遅延放出するよう、好ましくは製剤化されている。
【００７５】
したがって、本発明はまた、１種または複数の他の活性物質および／または組成物との、変動および／または固定用量組合せを含むマイクロカプセルおよび組成物に関する。
【００７６】
本明細書に記載されている本発明のさらなる態様は、処置される個体の遺伝的パラメータおよび／または微生物学的パラメータおよび／または血液パラメータおよび／または他のバイオマーカーデータ、ならびに特定の必要性に基づいて、特許請求されている医薬、医療製品、診断製品、栄養補強食品、栄養補助食品、食品成分または食品の効率的な使用である。例えば、すべてのタイプの疾患に関する個体の遺伝子的疾病素質、および遺伝薬理学への新しい洞察により、関連するリスク遺伝子、ならびにやはり例えば、活性物質および／またはその代謝産物、および／またはその下流エフェクタと相互作用する、例えば、細胞表面受容体、トランスポータータンパク質、代謝酵素またはシグナル伝達タンパク質をコードする遺伝子の遺伝的解析を含む、証拠に基づく個別化医療は、本明細書に記載されている医薬、医療製品、診断製品、栄養補強食品、栄養補助食品、食品成分または食品の使用のタイプ、用途形式、使用時間、用量および／または投与量レジメンに関する情報ならびに改善に寄与することができることが示される。この個別化された処置から恩恵を受けることができる個体は、血液バイオマーカーおよび／または他のバイオマーカーの疾患特異的または非特異的な変化を有するものを含む。これは、特に、大便試料が微生物相の変化を示す場合に、腸内細菌の解析にも同様に当てはまる。したがって、本発明はまた、本発明による医薬、医療製品、診断製品、栄養補強食品、栄養補助食品、食品成分もしくは食品に特に感受性がある、もしくはこれらから恩恵を受ける個体を特定するために、ならびに／または個体の状況に本発明によるそれらの使用を適合させるために、好適な遺伝的パラメータおよび／または微生物学的パラメータおよび／または血液パラメータおよび／または他のバイオマーカーの試験方法の使用を含む。これはまた、個体の遺伝的および微生物学的特性に応じて、様々な投与形式での、活性物質、または他の活性物質とのそれらの組合せの使用を明示的に含む。これらの目的のために、大便試料を採取するため、または血液、尿もしくは他の体液中の好適なパラメータを分析するために、医師、ユーザーおよび／または患者により使用されることになる、実験室試験および／または好適な試験キット、ならびにまた測定方法、デバイスおよび／またはキットを使用することが可能である。特に、本発明はまた、本明細書に記載されている処置もしくは予防のための患者選択もしくは対象選択を支援するため、本明細書に記載されている組成物および／もしくは処置および／もしくは予防を個別化および適合させるため、ならびに／または本明細書に記載されている組成物および／もしくは処置および／もしくは予防のためのエンドポイントおよび有効性の指標を決定するための、バイオマーカーとしての腸内細菌の一部および／またはその全体（マイクロバイオウム）の使用に関する。
【実施例】
【００７７】
本発明の教示を有利にも開発、およびさらに開発するための様々な可能性が存在する。この目的のために、例示的に本発明を記載する、以下の実施例を参照する。
【００７８】
特に示されていない場合、「％」の意味は「重量％」である。
【実施例１】
【００７９】
色素マイクロカプセルの生成および特性評価
本発明の一実施形態は、食品着色剤であるパテントブルーＶおよび／またはブリリアントブラックＢＮを活性物質として含むコアは、ｐＨ調節物質の中間層により隔離されている、２層のシェラックによりコーティングされているものである（図１）。本実施例におけるパテントブルーＶおよび／またはブリリアントブラックＢＮの使用は、二重の目的の働きをした。機構的視点から、腸の標的部分におけるこれらの色素の目視可能な放出は、本発明のより広い範囲による任意の活性物質の放出の原理の証拠であった。同時に、この実施例はまた、本発明の特定の一実施形態による、結腸の色素内視鏡検査用の色素含有マイクロカプセルの使用に成功したことを例示するためにも必要であった。この実施例において使用したマイクロカプセルでは、ニコチンアミドは、安定なｐＨ特性（ｐＨ６．６１）を有しており、この系では、活性物質としてではなく、良好な造粒特性であることが以前に証明された食品グレードの添加剤として使用した。クエン酸は、色素含有マイクロカプセルのシェラック解離を制御するための酸性ｐＨ調節物質として使用した。
【００８０】
装置および物質
【００８１】
【表１】
2019515917.tif 000003
【００８２】
【表２】
2019515917.tif 000004
【００８３】
【表３】
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【００８４】
方法
コーティング溶液の調製
各製剤部分の組成は、表４に列挙されている。水道水（Ｈ２Ｏ）中での適度な撹拌下、成分を室温で溶解した。
【００８５】
【表４】
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【００８６】
色素マイクロカプセルの生成
顆粒コアの生成のため、水中の１５％色素（パテントブルーＶまたはブリリアントブラックＢＮ）および１５％ニコチンアミドおよび１．２％ｐｈａｒｍａｃｏａｔ６０６（ＨＰＭＣ；乾燥重量に対して４％）を含有する噴霧溶液を調製し（表４）、１５０ｇのマルトデキストリンＤＥ１５を出発原料として供給し、ＰｒｏＣｅｌｌ００５噴流床インサートを備えたＰｒｏＣｅｌｌ造粒器で連続造粒過程を実施した。添加剤のニコチンアミドのみを含有する顆粒（データは図示せず）と比較して、色素顆粒は、一層粘着性があり、非対称的な形状であった。得られた顆粒の平均サイズは、３５８μｍであった。次のステップにおいて、０．５ｍｍの２方式ノズルおよび０．５５〜０．６ｂａｒの噴霧空気圧を使用し、ボトムスプレー（Ｇｌａｔｔ、Ｂｉｎｚｅｎ、ドイツ）を装備したＭｉｎｉ  Ｇｌａｔｔ流動床コーターで色素顆粒（直径３１５〜４００μｍ）１００ｇに、内側シェラックコーティング剤を塗布した。入り口空気圧力を０．３５〜０．５ｂａｒに調節し、入り口空気温度を４０℃に設定し、これにより、約３３．８℃の生成物温度になった。噴霧速度を０．３６〜０．６４ｇ／分に上昇させた。最終重量増加は、約４６．５％（パテントブルーＶ顆粒）または４８．０％（ブリリアントブラックＢＮ顆粒）であった。この第１のシェラックコーティングステップの後、マイクロカプセルを乾燥オーブン中、５０℃で１時間、乾燥し、５００μｍ超の直径を有する凝集物をふるいにかけることにより除去した。クエン酸の中間コーティングは、以下の条件下で、シェラックコーティング済み色素顆粒１３０ｇに塗布した：噴霧空気圧０．５３〜０．６５ｂａｒ、入り口空気圧０．４１〜０．５５ｂａｒ、入り口空気温度４１〜４２℃、生成物温度約３６．３℃および噴霧速度の上昇０．３６ｇ／分から０．５２ｇ／分まで。算出重量増加は、１％（クエン酸に関する）および１０％（マルトデキストリンを含む合計乾燥質量に関する）であった。外側シェラックコーティングを、重量増加があるために、より高い入り口空気圧（０．５２〜０．５８ｂａｒ）および噴霧空気圧（０．６２〜０．６６ｂａｒ）であることを除いて、内側シェラックコーティングとして、同一条件下で塗布した。算出重量増加は、外側シェラックコーティングの場合、１０％（第１のシェラックコーティングステップ後のマイクロカプセルの重量を指す）であり、クエン酸および外側シェラック層の場合の測定した合計重量増加は、１８．８５％の合計となった（２０％の算出重量増加が付与されたことと比較すると、１．１５％の喪失）。第２のシェラックコーティングステップの後、マイクロカプセルを乾燥オーブン中、５０℃で１時間、再度、乾燥し、５００μｍ超の直径を有する凝集物をふるいにかけることにより除去した。胃での不十分な耐性を示したこの手順の第１の試験後に、外側シェラック層を、パテントブルーＶを含むマイクロカプセルの場合、さらに１０％の算出重量増加および９．３％の測定重量増加、またはブリリアントブラックＢＮを含むマイクロカプセルの場合、さらに５％の算出重量増加および３．９％の測定重量増加によるさらなる実験に展開した。
【００８７】
インビトロ溶出試験
溶出試験は、１００ｒｐｍで標準パドル装置を使用して、２５０ｍｌの疑似胃液（ｐＨ１．４、表５）、クエン酸緩衝液（ｐＨ４．５；表５）またはリン酸緩衝液（ｐＨ６．８または７．４；表５）中で、０．５ｇの色素マイクロカプセルを用いて３７℃で行った。溶出実験は、ｐＨ１．４で１時間、ｐＨ４．５で０．５時間、ｐＨ６．８で２時間、およびｐＨ７．４で１．５時間、実施した。３０分間毎に、色素放出を４１６ｎｍ（ｐＨ１．４中のパテントブルーＶ）、６３７ｎｍ（他の緩衝液中のパテントブルーＶ）または５７１ｎｍ（ブリリアントブラックＢＮ）において、石英キュベットを使用して分光光度法により記録した。各測定の前に、試料を希釈した（パテントブルーＶ：１：５０；ブリリアントブラックＢＮ：１：１２．５）。
【００８８】
【表５】
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【００８９】
コーティング済みマイクロカプセル中のパテントブルーＶまたはブリリアントブラックＢＮの全含有量の決定
色素放出率を計算するため、マイクロカプセル中のパテントブルーＶまたはブリリアントブラックＢＮの全含有量を、３７℃および１００ｒｐｍにおいて、標準パドル装置で、２５０ｍｌのリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）中、０．５ｇのマイクロカプセルを用いて三連で、６３７ｎｍ（パテントブルーＶ）または５７１ｎｍ（ブリリアントブラックＢＮ）において、分光光度法により決定した。３０、６０および９０分後、試料を採取し、希釈し（パテントブルーＶ：１：５０；ブリリアントブラックＢＮ：１：１２．５）、測定した。
【００９０】
カプセル充填
パテントブルーＶまたはブリリアントブラックＢＮを含有しているマイクロカプセルは、６０個のカプセルについて、手作業でのカプセル充填を使用して、標準サイズ０のゼラチンカプセルに充填した。最大で約０．５３ｇのマイクロカプセルが、１個のゼラチンカプセルに収まった。ＦＩＭ研究では、異なる投与を、様々な量のカプセルを投与することにより行った。
【００９１】
結果および議論
パテントブルーＶ（図２Ａ）およびブリリアントブラックＢＮ（図２Ｂ）に関して得られた放出プロファイル間の比較は、かなり小さな重量増加差（パテントブルーＶマイクロカプセルに対して、わずか約５％多いシェラック）によって、本発明のマイクロカプセルの放出プロファイルがどのようにモジュレートされ得るか、およびｐＨ調節物質による中間コーティングを有する二重シェラック層が、技術の現状で報告されているシェラックコーティングの重要な問題を解決するシェラックを用いると、通常、達成されない多様な所望のｐＨ依存性放出プロファイルをどのように実現することができるかを例示している（Ｌｉｍｍａｔｖａｐｉｒａｔら  ２００７年、Ｅｕｒ．Ｊ  Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｐｈａｒｍ．６７巻：６９０頁；Ｃｚａｒｎｏｃｋａ＆Ａｌｈｎａｎ  ２０１５年、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．４８６巻：１６７頁）。分光光度法により決定されたマイクロカプセルの全色素含有量は、それぞれ、マイクロカプセル１グラムあたりパテントブルーＶ１８４．６±０．４３ｍｇ（平均値±ＳＤ；ｎ＝３）、およびマイクロカプセル１グラムあたりブリリアントブラックＢＮが２０６．６±０．８７ｍｇ（平均値±ＳＤ；ｎ＝３）であった。ヒト初回投与（ＦＩＭ）研究の間の曝露および結果が比較可能となることを確実とするために（実施例２を参照されたい）、マイクロカプセルの放出プロファイルの安定性をモニタリングした。図２に示されている通り、パテントブルーＶマイクロカプセルの放出プロファイルは、最大１２か月間の保管時間にわたり、有意に変化しなかった。ブリリアントブラックＢＮマイクロカプセルの場合、６か月の保管のみ検討し、いかなる有意な劣化も示さなかった。総合すると、色素マイクロカプセルの特徴および安定性の解析により、ＦＩＭ研究において、パテントブルーＶまたはブリリアントブラックＢＮの制御放出が好適であることが明らかに支持された。
【実施例２】
【００９２】
ヒト初回投与（ＦＩＭ）研究
研究の目的
ＦＩＭ研究では、パテントブルーＶまたはブリリアントブラックＢＮを含有するマイクロカプセルの十分に特徴づけがなされたバッチで充填したサイズ０のゼラチンカプセル（実施例１を参照されたい）を、胃腸管の内視鏡検査を受ける外来患者に投与した。この研究の目的は、（１）色素マイクロカプセルのインビトロでの放出プロファイルが、適切なインビボ放出につながるかどうかを検討すること（本発明のマイクロカプセルに関する概念の一般的な証明）および（２）結腸の色素内視鏡検査用の色素マイクロカプセルの好適性を解析すること（活性物質として、代表的な食品グレードの色素内視鏡検査に関する概念の特別な証拠）であった。
【００９３】
研究目的（２）に関すると、主目的は、結腸全体に十分な染色があることを実証することであり、二次目的は、考えられる副作用をメチレンブルーＭＭＸ（登録商標）錠剤の公開されている率（Ｒｅｐｉｃｉら  ２０１２年、Ｃｏｎｔｅｍｐ．Ｃｌｉｎ．Ｔｒｉａｌｓ．３３巻：２６０頁）と間接的に比較することであった。主要評価項目は、ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７００６０（実施例５）に従う、ＴＳＣ／ＮＳＡスコアによる腸上皮の染色の評点であり、少なくとも１０の平均染色スコア（ＴＳＣ、方法の節中の定義を参照されたい）、および≧２の染色スコア（引用した実施例中の２００ｍｇの投与スケジュールＪを参照されたい）を有する、少なくとも２つの染色領域の平均（４つの領域である上行結腸、横行結腸、下行結腸およびＳ字／直腸のうち）となった。二次評価項目は、＜４０％の患者における、Ｒｅｐｉｃｉら（Ｃｏｎｔｅｍｐ．Ｃｌｉｎ．Ｔｒｉａｌｓ．３３巻：２６０頁、２０１２年）によって定義される有害事象率とした。
【００９４】
方法
研究集団および設計
研究は、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ  Ｓｃｈｌｅｓｗｉｇ−Ｈｏｌｓｔｅｉｎ、Ｃａｍｐｕｓ  Ｋｉｅｌ（Ｋｉｅｌ、ドイツ）の内科１のＩｎｔｅｒｄｉｓｃｉｐｌｉｎａｒｙ  Ｅｎｄｏｓｃｏｐｙ  Ｕｎｉｔで行った。この研究は、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｋｉｅｌ（参照番号：Ｄ４３９／１５）の倫理委員会により承認を受け、研究番号ＮＣＴ０２６３１７９８でＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖに登録した。各患者から書面のインフォームドコンセントを得た。
【００９５】
表６に要約されている通り、結腸内視鏡検査のスクリーニングを予定した８名の患者ボランティアが含まれ、２回分の用量レベルのマイクロカプセル封入されたパテントブルーＶ（Ｅ１３１）および／または１回用量レベルのマイクロカプセル封入されたブリリアントブラックＢＮ（Ｅ１５１）を服用する以下の群に割り当てた（実施例１を参照されたい）。
【００９６】
【表６】
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【００９７】
処置および投与レジメン：
パテントブルーＶ（Ｅ１３１）およびブリリアントブラックＢＮ（Ｅ１５１）（ＥＦＳＡパネル２０１０年、ＥＦＳＡ  Ｊ．８巻：１５４０頁；ＥＦＳＡパネル２０１３年、ＥＦＳＡ  Ｊ．１１巻：２８１８頁）の両方に関して、全身的服用の上限値が５ｍｇ／ｋｇであること、ならびに回腸を標的とするインビトロでの放出プロファイルおよび類似の制御放出マイクロカプセルを用いたヒトデータ（図示せず）の両方から予期される全身性曝露が低いことから、色素および１日あたり約４００ｍｇの最大用量を選択した。投与を容易にするため、Ｅ１３１およびＥ１５１マイクロカプセルを、サイズ０のゼラチン硬質カプセル（Ｃｏｎｉｓｎａｐ、Ｃａｐｓｕｇｅｌ）で投与した（実施例１）。マイクロカプセルは、以下の色素含有量を有した：Ｅ１３１：１８４．６ｍｇ／ｇ±０．４３（平均値±標準偏差；ｎ＝３）；Ｅ１５１：２０６．６ｍｇ／ｇ±０．８７（平均値±標準偏差；ｎ＝３）（実施例１）。カプセルあたり０．５１〜０．５３ｇのマイクロカプセルを用い、各カプセルは、約１００ｍｇの色素を含有した（以下を参照されたい）。以下のマイクロカプセルのバッチを、２０１５年１０月０５〜０８日にＩｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｆｏｏｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｋｉｅｌにおいて生成し、２０１５年１２月０２日にカプセルに充填した。
【００９８】
Ｅ１３１−０２Ｄｅｃ１５−１：カプセルあたり０．５１２ｇのマイクロカプセル、すなわちカプセルあたり約９４．５ｍｇのＥ１３１；カプセル６０個；
Ｅ１５１−０２Ｄｅｃ１５−１：カプセルあたり０．５３０ｇのマイクロカプセル、すなわちカプセルあたり約１０９．５ｍｇのＥ１５１；カプセル１１２個。
【００９９】
本発明の新規なマイクロカプセルから放出がある時のＥ１３１およびＥ１５１の染色効率は未知であり、本研究において最初に検討した。したがって、計画した試料サイズは、統計的検出力計算から導かなかった。試験投与計画は、様々な研究および刊行物からの手順および結果に基づいた（Ｒｅｐｉｃｉら  ２０１２年、Ｃｏｎｔｅｍｐ．Ｃｌｉｎ．Ｔｒｉａｌｓ．３３巻：２６０頁；Ｄａｎｅｓｅら  ２０１３年、第８回Ｃｏｎｇｒｅｓｓ  ｏｆ  ＥＣＣＯ、ポスター発表：Ｃｌｉｎｉｃａｌ：Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｏｕｔｃｏｍｅ、１９４頁；ＵＳ８５４５８１１；ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７００６０）。
【０１００】
緩下剤のＫｌｅａｎ−Ｐｒｅｐ（Ｎｏｒｇｉｎｅ、Ｍａｒｂｕｒｇ、ドイツ）は、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ  Ｓｃｈｌｅｓｗｉｇ−Ｈｏｌｓｔｅｉｎ、Ｃａｍｐｕｓ  Ｋｉｅｌ（Ｋｉｅｌ、ドイツ）の内科１のＩｎｔｅｒｄｉｓｃｉｐｌｉｎａｒｙ  Ｅｎｄｏｓｃｏｐｙ  Ｕｎｉｔにおいて、患者に、Ｋｌｅａｎ−Ｐｒｅｐのマニュアルに従い投与した。患者は、結腸内視鏡検査の前日の１７：００時に開始して、３時間以内に、３ＬのＫｌｅａｎ−Ｐｒｅｐを飲んだ（理想的には、１５分毎に２５０ｍＬ）。結腸内視鏡検査の当日の０６：００時〜０７：００に、患者は、Ｋｌｅａｎ−Ｐｒｅｐを最後の１Ｌ飲んだ。プロトコルからの逸脱、ならびに効果および副作用の観察は、患者の日記に文書化した。
【０１０１】
十分な染色を可能にするため、最後のカプセルを消化してから少なくとも５時間が経過するまで、結腸内視鏡検査を行わなかった（すなわち、０７：００時における計画に従いカプセルを服用した場合、結腸内視鏡検査は、１２：００時またはそれより後に開始した）。
【０１０２】
４個のカプセルを投与した場合、患者は、Ｋｌｅａｎ−Ｐｒｅｐ（２Ｌ後；１９：００時）の第２の１／４の後に１個のカプセルを服用し、第３の１／４の後に１個のカプセルを服用（３Ｌ後；２０：００時）し、腸管前処置の終わりに２個のカプセル（４Ｌ後；０７：００時）を服用した。
【０１０３】
８個のカプセルを投与した場合、患者は、Ｋｌｅａｎ−Ｐｒｅｐ（２Ｌ後；１９：００時）の第２の１／４の後に２個のカプセルを服用し、第３の１／４の後に２個のカプセルを服用（３Ｌ後；２０：００時）し、翌朝の腸管前処置の終わりに４個のカプセル（４Ｌ後；０７：００時）を服用した。
【０１０４】
選択基準
・  ３０〜８０歳の年齢の、結腸内視鏡検査、場合により上部胃腸管の内視鏡検査をスクリーニングする計画がある、健常な男性および閉経後の女性；
・  体重≧６０ｋｇ；
・  病歴、身体検査、１２誘導心電図（ＥＣＧ）および定型手順の血液学および血液化学的試験に基づき、良好な健康状態にある；
・  プロトコルを理解し、これに従うことができる；
・  書面のインフォームドコンセントがある。
【０１０５】
除外基準
・  新規薬物の生体利用率予測に関する標準診断基準、すなわち（ｉ）なんらかの医薬を服用している、（ｉｉ）薬物、カフェイン（＞５カップのコーヒー／お茶／日）またはタバコ（≧１０本のタバコ／日）乱用歴、（ｉｉｉ）男性では１日あたり２杯を超え、女性では１日あたり１杯を超えるアルコール消費歴；
・  食品着色剤、とりわけＥ１３１またはＥ１５１に対して過敏性があることが分かっているか、または疑われる；
・  胃腸管閉塞または穿孔がある；
・  深刻な心血管、腎臓または肝臓疾患がある；
・  プロトロンビン時間が長い、ＩＮＲが高い（国際標準化比）；
・  血清クレアチニンが高い；
・  任意の他の重症な根底にある医療状態がある。
【０１０６】
分析および評点：
カプセルの服用を決定するために、患者の日記を研究対象によって完成させた。結腸内視鏡検査をスクリーニングする標準評価に加えて、染色効率は、検討した各結腸区域（上行結腸、横行結腸、下行結腸およびＳ字／直腸）について、０〜５（０、「染色なし」；１、「微量」、すなわち、弱い色素跡；２、「検出可能」、適切に染色された領域が２５〜５０％；３、「許容可能」、適切に染色された領域が５０〜７５％；４、「良好」、適切に染色された領域が７５〜１００％；５、「過度染色」、内視鏡検査者が、領域の１００％において十分な正確性で粘膜表面を観察することができない、過度な染色）の範囲の、個々の染色スコアの合計として算出した、０〜２０の間の数を用いてＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７００６０の実施例５から誘導されるシステムを用いて評点した。したがって、最適な結果は、結腸の４つの領域すべてにおいてスコア４で、１６であった。
【０１０７】
さらに、内視鏡検査者は、単純な評点システムを用いる以下の診断基準に従い、色素カプセルの性能を判断するために質問を受けた（＋は、良好／はい；ｏは、平均的／決まらず；−は、不良／いいえ；ｎ／ａは適用不可）：「一般的な染色強度」、「病変のコントラスト」、「ポリープのコントラスト」、「扁平腺腫のコントラスト」、「噴霧技法よりも良好」および「機器の清浄度」。
【０１０８】
結果および議論
８名の患者のうちの６名が、プロトコルに従って研究を完了した（表６）。表７に要約された結果より、本マイクロカプセルは、背景技術に規定した課題を解決したことが確認される：
（１）研究は、平均結腸染色スコア＞１０（実際：１３．３）、および染色スコア＞２（実際：３．７）を有する結腸の２つの染色区域（ＮＳＡ）の平均を有して、主要評価項目を満足した。粘膜への染色効率は、平均で３．３（４のうち）であり、従来技術によれば病変検出が最も困難な上行結腸では、最良の染色（４のうちの４）となった。
（２）有害事象は観察されなかった。したがって、この研究はまた、二次評価項目も満足し、＜４０％の患者における、Ｒｅｐｉｃｉら（Ｃｏｎｔｅｍｐ．Ｃｌｉｎ．Ｔｒｉａｌｓ．３３巻：２６０頁、２０１２年）によって定義される有害事象率であった。
（３）上部および下部胃腸管の両方の検査を受けた５名の患者のうちの４名において、マクロカプセルは、下部小腸（回腸）および結腸において、計画通り、選択的かつ排他的に放出した。患者４名における胃の染色により、ゼラチンカプセルへのカプセル封入の間に、一部のマイクロカプセルに機械的な破損があることが示され、これは、保持していた試料を用いた対照のインビトロ実験において再現することができなかった（データは図示せず）。
（４）６名の患者のうちの４名において、染色結果は、従来的な噴霧技法の場合に通常、観察されるものよりも良好であり、６名の患者の残りの２名では、処置標準と類似した。患者８において、標準噴霧色素内視鏡検査が４日早く行われ、これにより、２つの手順間の直接比較、および内視鏡検査者により報告されている通り、マイクロカプセル染色手順の明確な有意性が可能になった。
（５）扁平腺腫を有するどちらの患者でも、腺腫は、本発明による染色によって十分に強調された。
（６）病変または他の診断上の重要な領域を潜在的に隠してしまう恐れがある過度染色は観察されなかった。
（７）手順の期間は、慣用的な結腸内視鏡検査と同じであった。対照的に、噴霧用カテーテルを使用する色素内視鏡検査は、約２倍の時間を必要とした（さらに２０分間）。
（８）機器の清浄度は、慣用的な噴霧色素内視鏡検査の場合よりも良好であった。
【０１０９】
【表７】
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【０１１０】
図３は、慣用的な結腸内視鏡検査の間の上行結腸の非染色区域と、色素結腸内視鏡検査用の本発明の色素マイクロカプセルを使用した後の、上行結腸の染色区域との間の例示的な比較を示している。
【０１１１】
要約すると、これらの結果は、現在の臨床診察と比較して、本発明のマイクロカプセルからの標的放出という一般概念、および色素内視鏡検査用のこのようなマイクロカプセルの優れた有用性の特別な概念のどちらも支持している。
【実施例３】
【０１１２】
メチレンブルーおよびインジゴカルミンを用いるマイクロカプセルの生成
実施例１に記載されている技法は、本発明による好ましい他の色素、すなわちメチレンブルーおよびインジゴカルミンを含む、さらなるタイプのマイクロカプセルを生成するために有利に使用される。シェラックマイクロカプセルから放出された後に、溝および裂け目に貯まるコントラスト色素であるインジゴカルミンとは対照的に、メチレンブルーは、腸上皮によって吸収され、メチレンブルーマイクロカプセルによる染色は、過度の流体摂取により損なわれる可能性が低いとう利点がある。
【実施例４】
【０１１３】
造粒添加剤であるポリビニルアルコールを用いるパテントブルーＶマイクロカプセルの生成および特性評価
造粒過程をさらに最適化するため、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）を代替添加剤として試験した。
【０１１４】
方法
色素マイクロカプセルの生成
ＰＶＡコアを有するパテントブルーＶマイクロカプセルを、以下の修正を実施した以外は、実施例１に記載されているＨＰＭＣ／ＮＡＭコアの場合の１つに類似した過程を用いて調製した。
（１）パテントブルーＶのバッチ番号は、ＦＩ２３４９７であった；
（２）造粒用の添加剤として、ＨＰＭＣとニコチンアミドとの組合せの代わりに、ＰＶＡ（Ｍｏｗｉｏｌ４−８８；物品番号０７１３；Ｃａｒｌ  Ｒｏｔｈ、Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ、ドイツ）を使用した；
（３）噴霧溶液は、水（８９．５５％）中に９．５％のパテントブルーＶおよび０．９５％のＰＶＡ（パテントブルーＶの乾燥重量に対して１０％ＰＶＡ）を含有した；
（４）２５％のＨＰＭＣを有する別の実験に由来するパテントブルーＶ顆粒を出発原料として使用した；
（５）連続造粒過程用の造粒器は、Ｖａｒｉｏ３噴流床インサートを特徴とした。
【０１１５】
得られた顆粒コアの平均サイズは、３１５〜４００μｍの間であった。
【０１１６】
次のステップにおいて、０．５ｍｍの２方式ノズルおよび０．６ｂａｒの噴霧空気圧を使用する、ボトムスプレー（Ｇｌａｔｔ、Ｂｉｎｚｅｎ、ドイツ）を装備したＭｉｎｉ  Ｇｌａｔｔ流動床コーターで、内側シェラックコーティングをパテントブルーＶ顆粒１００ｇに塗布した。入り口空気圧力を０．３５〜０．４５ｂａｒに調節し、入り口空気温度を４０℃に設定し、これにより、約３３．８℃の生成物温度になった。噴霧速度を０．３６〜０．６４ｇ／分に上昇させた。重量増加は５０．０％であった。この第１のシェラックコーティングステップの後、マイクロカプセルを乾燥オーブン中、５０℃で１時間、乾燥し、２５０μｍ未満の直径を有する粒子をふるいにかけることにより除去した。凝集物は観察されなかった。クエン酸の中間コーティングは、以下の条件下で、シェラックコーティング済みパテントブルーＶ顆粒９５ｇに塗布した：噴霧空気圧０．４ｂａｒ、入り口空気圧０．５５ｂａｒ、入り口空気温度４２〜４４℃、生成物温度約３６．０℃および噴霧速度の上昇０．３８ｇ／分から０．５６ｇ／分まで。算出重量増加は、１％（クエン酸に関する）および１０％（マルトデキストリンを含む合計乾燥質量に関する）であった。外側シェラックコーティングは、内側シェラックコーティングと同じ条件下で塗布した。算出重量増加は、外側シェラックコーティングの場合、１８％であり、クエン酸および外側シェラック層の場合の測定した合計重量増加は、合計で２６，３２％となった（２８％の算出重量増加が付与されたことと比較すると、１．６８％の喪失）。第２のシェラックコーティングステップの後、マイクロカプセルを乾燥オーブン中、５０℃で１時間、再度、乾燥した。
【０１１７】
パテントブルーＶのインビトロでの溶出試験およびその全含有量の決定
１つの例外を除いて、実施例１に記載されている通り溶出試験を行った：各測定前に、試料を１：１００に希釈した。
【０１１８】
結果および議論
ＰＶＡ造粒過程で得られたパテントブルーＶコアは、実施例１に記載されているＨＰＭＣ／ＮＡＭコアのそれに匹敵するほどの丸みがあることが示された。対照実験では、ＮＡＭのないＨＰＭＣを造粒に使用したが、溶液粘度がより高いため、ＰＶＡと比べて最適には及ばない結果が生じた（データは図示せず）。実施例１に記載されている通り、添加剤としてＨＰＭＣおよびＮＡＭを比較すると、カプセルのパテントブルーＶ含有量は、ＰＶＡの場合に改善された。分光光度法により決定された、マイクロカプセルのパテントブルーＶの全含有量は、造粒結合剤としてＨＰＭＣを用いた実施例１からのマイクロカプセルでは、マイクロカプセル中、１８４．６±０．４３ｍｇ（平均値±ＳＤ；ｎ＝３）であるのに比べて、造粒結合剤としてＰＶＡを用いた場合、パテントブルーＶは、マイクロカプセル１グラムあたり３９９．４±２．８６ｍｇであった。
【０１１９】
各中間生成物と比べた、コーティングステップにおける重量増加は、以下の通りであった：
ＨＰＭＣ／ＮＡＭマイクロカプセル：１００プラス４６．５％の重量増加（内側コーティング）プラス１８．８５％の重量増加（中間および外側コーティング）プラス９．３％の重量増加（拡張した外側コーティング）であり、これは、９０．３％のコーティングの全重量増加になった（４６．５％プラス２７．６％プラス１６．２％は、１００％として設定したパテントブルーＶコアを指す）。
【０１２０】
ＰＶＡマイクロカプセル：１００プラス５０．０％の重量増加（内側コーティング）プラス２６．３２％の重量増加（中間および外側コーティング）であり、これは、８９．５％のコーティングの全重量増加になった（５０．０％プラス３９．５％は、１００％として設定したパテントブルーＶコアを指す）。
【０１２１】
したがって、コーティングによる全体的な重量増加は、ＨＰＭＣ（９０．３％）およびＰＶＡ（８９．５％）の場合、実質的に同一であり、個々のステップにおける差異は、生成過程全体にわたって相殺された。
【０１２２】
２つのタイプのマイクロカプセルのコア中のパテントブルーＶの理論的割合を、以下の通り算出した：
ＨＰＭＣ／ＮＡＭマイクロカプセルコア：１５％のパテントブルーＶ、１５％のニコチンアミド、１．２％のｐｈａｒｍａｃｏａｔ６０６（ＨＰＭＣ）；乾燥重量のパテントブルーＶの割合：１５／３１．２＝４８．１％。
【０１２３】
ＰＶＡマイクロカプセルコア：９．５％のパテントブルーＶ、０．９５％のＰＶＡ；乾燥重量のパテントブルーＶの割合：９．５／１０．４５＝９０．９％。
【０１２４】
したがって、ＨＰＭＣマイクロカプセルと比較した、ＰＶＡマイクロカプセルのパテントブルーＶ含有量の理論的増加量は、コーティングステップによりほぼ同一の重量増加であったことを考慮すると、約１．８９倍（９０．９％／４８．１％）以下と予測された。
【０１２５】
しかし、驚くべきことに、ＰＶＡマイクロカプセルのパテントブルーＶ含有量は、ＨＰＭＣマイクロカプセル（３９９．４ｍｇ／ｇ対１８４．６ｍｇ／ｇ、上記を参照されたい）のそれよりも約２．１６倍、高かった。パテントブルーＶ含有量のこの予想外の１４％の増加（１．８９倍の代わりに２．１６倍）は、パテントブルーＶの必要量がより少ない量のマイクロカプセルで送達され得るので、本発明のマイクロカプセルにとって有利である。この特徴は、製品コストの低下、およびカプセルの包装をより小さくする（これにより、飲み込みが一層、容易になる）ことができることによる患者の快適さおよび服薬遵守の向上の両方をもたらす可能性を有している。
【０１２６】
実施例１からのＨＰＭＣ／ＮＡＭ／パテントブルーＶマイクロカプセルおよび代替のＰＶＡ／パテントブルーＶマイクロカプセルに関して得られた放出プロファイルの間の比較により、回腸末端の条件下で、＞９０％の急激な放出というほとんど同一の放出特性となることが実証された（図４）。
【０１２７】
興味深いことに、ごく少量のＨＰＭＣ／ＮＡＭコア（実施例１）を有するマイクロカプセルは、ゼラチン硬質カプセルへのカプセル封入の間に機械的に破損した一方（実施例２）、このような破損は、ＰＶＡ含有コアを有するマイクロカプセルの場合、観察されなかった（充填したゼラチンカプセルから取り出した後の試験バッチの例示的な放出プロファイルは、図４に示されている）。
【０１２８】
最後に、図５は、ＰＶＡ／パテントブルーＶマイクロカプセルの放出プロファイルは、最大９か月間の保管時間にわたり変化しなかったことを示している。
【実施例５】
【０１２９】
造粒添加剤であるポリビニルアルコール（ＰＶＡ）を用いるパテントブルーＶおよびインジゴブルーマイクロカプセルの生成および特性評価
添加剤ＰＶＡを用いて造粒したコアからのパテントブルーＶおよびインジゴカルミンの放出プロファイル（実施例４）を比較するため、新しいマイクロカプセルバッチをコーティングして、連続して試験した。
【０１３０】
方法
色素マイクロカプセルの生成
パテントブルーＶコアは、実施例４に記載されているものと同一とした。インジゴカルミンコアは、９０％のインジゴカルミンコアおよび１０％のＰＶＡからなる２０％の乾燥質量を有する噴霧溶液を使用して、実施例４に記載されている通り造粒した。粒剤サイズは、３１５〜４００μｍの間で様々であった。３種のコーティング層を、実施例４に記載されているものと同一の方法で塗布した。
【０１３１】
パテントブルーＶおよびインジゴカルミンのインビトロでの溶出試験およびその全含有量の決定
以下の例外を除いて、実施例１に記載されている通り、溶出試験を行った：各測定前に、パテントブルーＶの試料を１：１００に希釈し、インジゴカルミン試料を１：２５に希釈して、６１０ｎｍの波長で測定した。
【０１３２】
結果および議論
造粒過程で得られたインジゴカルミンコアは、実施例４に記載されているパテントブルーＶコアのそれに匹敵するほどの丸みがあることが示された。パテントブルーＶマイクロカプセルの放出プロファイルと比較すると、インジゴカルミンマイクロカプセルの放出プロファイルは、ｐＨ７．４ではわずかに遅延した（図６）。分光光度法により決定されたマイクロカプセルの全色素含有量は、マイクロカプセル１グラムあたりパテントブルーＶが３７９．３９±０．８７ｍｇであり、マイクロカプセル１グラムあたりインジゴカルミンが４６５．２９±２．４２ｍｇ（平均値±ＳＤ；ｎ＝３）であった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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