(57)【要約】  本発明は、ジウルノシド、セストルモシドおよびそれらの混合物から選択されるプロテインキナーゼＣ阻害剤を含む動物飼料添加剤に関する。
2019504626.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ジウルノシド、セストルモシドおよびそれらの混合物から選択される有効物質を含むことを特徴とする、プロテインキナーゼＣ阻害のための動物飼料添加剤。
【請求項２】
ジウルノシド、セストルモシドまたはそれらの混合物を、マグノロール、ホノキオールおよびそれらの混合物、アスペルギルス・ニガーの菌糸体、アスペルギルス・オリゼの菌糸体ならびにケレリトリンから選択される１つまたは複数のさらに別の成分と組み合わせて含むことを特徴とする、請求項１に記載の動物飼料添加剤。
【請求項３】
ジウルノシド、セストルモシドまたはそれらの混合物を、マグノロールおよび／またはホノキオールと組み合わせて含むことを特徴とする、請求項２に記載の動物飼料添加剤。
【請求項４】
ジウルノシド、セストルモシドまたはそれらの混合物を、アスペルギルス・ニガーまたはアスペルギルス・オリゼの菌糸体と組み合わせて含むことを特徴とする、請求項２に記載の動物飼料添加剤。
【請求項５】
ジウルノシド、セストルモシドまたはそれらの混合物を、ケレリトリンと組み合わせて含むことを特徴とする、請求項２に記載の動物飼料添加剤。
【請求項６】
産業動物、ペットおよび娯楽動物における、軟骨形成不全症、骨軟骨症および／または脚弱症の予防のためにあるいは尿石症の予防のために使用するための、請求項１〜５のいずれか１つに記載の動物飼料添加剤。
【請求項７】
ジウルノシド、セストルモシドおよびそれらの混合物から選択される有効物質が、好ましくはカルシフェジオールおよびカルシトリオールから選択される、ビタミンＤ３代謝産物と組み合わせて存在することを特徴とする、請求項１〜６のいずれか１つに記載の動物飼料添加剤。
【請求項８】
ジウルノシド、セストルモシドおよびそれらの混合物から選択される有効物質と、好ましくはカルシフェジオールおよびカルシトリオールから選択される、ビタミンＤ３代謝産物との比が、１：１０００〜１０００：１の範囲、好ましくは１：１００〜１００：１の範囲にあることを特徴とする、請求項７に記載の動物飼料添加剤。
【請求項９】
ジウルノシド、セストルモシドおよびそれらの混合物から選択される有効物質が、動物飼料添加剤１ｋｇあたり０．１ｍｇ〜２００００ｍｇの用量で存在することを特徴とする、請求項１に記載の動物飼料添加剤。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１つに記載の動物飼料添加剤を、タンパク質担体、炭水化物担体、粗飼料、貯蔵牧草、脂肪、ビタミン、鉱物性物質および微量元素からなる群から選択される少なくとも１つの飼料成分と一緒に含むことを特徴とする動物飼料。
【請求項１１】
産業動物、ペットおよび娯楽動物における、軟骨形成不全症、骨軟骨症および／または脚弱症の予防のためにあるいは尿石症の予防のために使用するための、請求項１０に記載の動物飼料。
【請求項１２】
ジウルノシド、セストルモシドおよびそれらの混合物から選択される有効物質を、８８％乾燥物質を有する飼料を基準として、飼料１ｋｇあたり０．０００１ｍｇ〜３ｍｇの用量で含むことを特徴とする、請求項１０または１１に記載の動物飼料。
【請求項１３】
請求項１〜９のいずれか１つに記載の動物飼料添加剤を、タンパク質担体、炭水化物担体、粗飼料、貯蔵牧草、脂肪、ビタミン、鉱物性物質および微量元素からなる群から選択される少なくとも１つの飼料成分と一緒に含むことを特徴とする、請求項１０に記載の動物飼料の製造のためのプレミックス。
【請求項１４】
産業動物、ペットおよび娯楽動物における、軟骨形成不全症、骨軟骨症および／または脚弱症の予防のためのあるいは尿石症の予防のための、動物飼料添加剤におけるジウルノシド、セストルモシドおよびそれらの混合物の使用。
【請求項１５】
ジウルノシド、セストルモシドまたはそれらの混合物から選択される有効物質が、マグノロール、ホノキオールおよびそれらの混合物、アスペルギルス・ニガーの菌糸体、アスペルギルス・オリゼの菌糸体ならびにケレリトリンから選択される１つまたは複数のさらに別の成分と組み合わせて存在する、請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
ジウルノシド、セストルモシドおよびそれらの混合物から選択される有効物質を動物に、１日あたり体重１ｋｇあたり０．００００１ｍｇ〜０．３ｍｇの量で投与することを特徴とする、請求項１４に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、プロテインキナーゼＣ阻害用の動物飼料添加剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
骨軟骨症／軟骨形成不全症および脚弱症は、ブロイラー、産卵鶏、七面鳥、肥育豚、飼育雌豚、反芻動物では高い経済的損失、ウマおよびイヌでも高い治療コストを引き起こすよく見られる関節疾患である。骨軟骨症／軟骨形成不全症および脚弱症の正確な原因はこれまで明確に特定できていないが、結果は、最も多くの場合、全ての動物種において骨の変形、その後の跛行である。これらの一連の問題は、特に、体の発育が非常に速い動物において生じる。
【０００３】
実際には、骨軟骨症／軟骨形成不全症および脚弱症は、さほど良好でない成功をもって、いわゆる非ステロイド系消炎薬で処置されている。これは例えば、アセチルサリチル酸であり、高量で特に家禽およびブタにおいて使用されている。しかしながら、産卵鶏および泌乳牛には、この有効物質は使用できない。別の農場用の家畜種の場合、非ステロイド系消炎薬に関しては、いわゆる休薬期間が存在し、すなわち当該有効物質は、動物の屠殺の前のいくらかの期間投与できない。しかしながら、経験上、骨軟骨症／軟骨形成不全症および脚弱症に伴う問題は、動物がすでに高い体重に達している場合、特に肥育期間の最後に生じることが明らかとなっている。この期間は、多くの場合に休薬期間と重なる。基本的に、農場および立法者は、農場用の家畜種における薬剤の使用を減らすことに懸命である。従って、経済的な観点から、予防的に骨軟骨症／軟骨形成不全症および脚弱症の発生を阻止できる有効物質に対する需要が存在し、なぜなら変化の発生時点で既に著しい経済的な損失が生じるからである。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
尿石症は、特に家禽において多くの場合に発生する病理学的現象であり、尿生殖路の領域において鉱物性物質複合体が堆積する。尿石症は輸出尿路の閉塞を引き起こし、多くの場合に、引き続いて腎臓の障害を引き起こす。尿石症の経済的な意味は特に産卵鶏において重大であり、なぜならそれは一方では産卵能力の低下を引き起こし、他方では死亡率の増加も引き起こすからである。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
驚くべきことに、ジウルノシド（Ｄｉｕｒｎｏｓｉｄ）、セストルモシド（Ｃｅｓｔｒｕｍｏｓｉｄ）およびそれらの混合物から選択されるプロテインキナーゼＣの植物系阻害剤（ＰＫｃ阻害剤）が含まれる動物飼料添加剤／動物飼料の投与が、骨軟骨症／軟骨形成不全症および脚弱症（ｌｅｇ  ｗｅａｋｎｅｓｓ）の発症の顕著な減少をもたらすことが見出された。驚くべきことにまた、上記の動物飼料添加剤／動物飼料の投与が、特に商業用家禽において、尿石症の有病率の顕著な低下をもたらすことが見出された。
【０００６】
従って、本発明は、１つの態様において、産業動物、ペットおよび娯楽動物における、軟骨形成不全症、骨軟骨症および／または脚弱症の予防のために、または尿石症の予防のために使用するための動物飼料添加剤に関し、当該動物飼料添加剤は、ジウルノシド、セストルモシドおよびそれらの混合物から選択されるプロテインキナーゼＣ阻害剤を含む。
【０００７】
有効物質であるジウルノシドおよびセストルモシドは高価であるという事実に基づき、ジウルノシドおよびセストルモシドの経済的な使用を可能にする物質を探索した。種々の実験シリーズの範囲内で、種々の物質を試験した。
【０００８】
驚くべきことに、ジウルノシドおよび／またはセストルモシドの使用すべき量を、これらの有効物質を、マグノロール、ホノキオールおよびそれらの混合物、アスペルギルス・ニガーの菌糸体、アスペルギルス・オリゼの菌糸体およびケレリトリンから選択される１つまたは複数の任意成分と組み合わせて使用すると、同じ効果で、例えば同じバイオアベイラビリティで減らせることが見出された。上記の任意成分の助けにより、セストルモシドおよびジウルノシドの有効な用量を半分以上減らすことがうまくいく。この手法により、実際に経済的な使用が可能となった。
【０００９】
従って、本発明は、１つの実施形態において、ジウルノシド、セストルモシドおよびそれらの混合物から選択される有効物質を、マグノロール、ホノキオールおよびこれらの混合物、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）の菌糸体、またはアスペルギルス・オリゼ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）の菌糸体およびケレリトリン（Ｃｈｅｌｅｒｙｔｈｒｉｎ）から選択される１つまたは複数のさらに別の成分と組み合わせて含む動物飼料添加剤に関する。
【００１０】
本発明の１つの実施形態において、動物飼料添加剤は、ジウルノシド、セストルモシドおよびそれらの混合物から選択される有効物質を、マグノロールおよび／またはホノキオールと組み合わせて含む。
【００１１】
本発明のさらに別の実施形態において、動物飼料添加剤は、ジウルノシド、セストルモシドおよびそれらの混合物から選択される有効物質を、アスペルギルス・ニガーまたはアスペルギルス・オリゼの菌糸体と組み合わせて含む。
【００１２】
本発明のさらに別の実施形態において、動物飼料添加剤は、ジウルノシド、セストルモシドおよびそれらの混合物から選択される有効物質を、ケレリトリンと組み合わせて含む。
【００１３】
本発明の動物飼料添加剤に含まれるＰＫｃ阻害剤および任意選択的に含まれる成分は、天然または合成源であることができる。天然源のＰＫｃ阻害剤または任意選択的に含まれる成分は、例えば、植物性材料および／または植物抽出物の形態であることができる。植物抽出物の製造は、公知の方法に従って、例えば、水、熱水もしくは蒸気を用いるか、または有機溶媒、例えばエタノールもしくはメタノールを用いるか、または溶媒混合物もしくは上記の溶媒と水との混合物を用いる固液抽出によって、あるいは超臨界ＣＯ２を抽出剤として用いる抽出によって、行うことができる。好ましくは、抽出は２０℃〜１６０℃の範囲の温度で行われる。上記抽出物は、個々のバッチの混合により、または不活性担体物質との混合により、所望の有効物質含有量に調節される。作用物質含有量の分析は、ＨＰＬＣにより行われる。
【００１４】
１つの実施態様において、上記動物飼料添加剤は、ジウルノシド、セストルモシドおよびそれらの混合物から選択されるＰＫｃ阻害剤を、好ましくはカルシフェジオールおよびカルシトリオールから選択される、ビタミンＤ３代謝産物と組み合わせて含む。好ましくは、ＰＫｃ阻害剤とビタミンＤ３代謝産物との比は、１：１０００〜１０００：１の範囲、より好ましくは１：１００〜１００：１の範囲にある。
【００１５】
本発明の動物飼料添加剤は、ジウルノシドおよび／またはセストルモシドから選択されるＰＫｃ阻害剤（これは任意選択的に、マグノロール、ホノキオールおよびそれらの混合物、アスペルギルス・ニガーの菌糸体、アスペルギルス・オリゼの菌糸体およびケレリトリンから選択される１つまたは複数のさらに別の成分と組み合わせて存在する）を、有効物質のより簡単な投与のために、賦形剤と一緒に含む。この賦形剤は、例えば植物性または鉱物性の賦形剤、例えば粉末飼料（Ｆｕｔｔｅｒｍｅｈｌ）、ミドリング、植物性牧草食（Ｇｒｕｅｎｍｅｈｌｅ）、ふすま、粘土鉱物、ゼオライト、ケイ酸塩等から選択することができる。
【００１６】
ジウルノシド、セストルモシドおよびそれらの混合物から選択されるＰＫｃ阻害剤は、本発明の動物飼料添加剤において、好ましくは、動物飼料添加剤１ｋｇあたり、０．１ｍｇ〜２００００ｍｇ、より好ましくは１ｍｇ〜１０００ｍｇの用量で存在する。
【００１７】
本発明の動物飼料添加剤におけるマグノロールおよび／またはホノキオールの用量は、好ましくは、動物飼料添加剤１ｋｇあたり０．５ｇ〜５０ｇの範囲である。
【００１８】
本発明の動物飼料添加剤におけるアスペルギルス・ニガーまたはアスペルギルス・オリゼの菌糸体の用量は、好ましくは、動物飼料添加剤１ｋｇあたり５０００００ｍｇ〜９９９９９９．９ｍｇの範囲である。
【００１９】
本発明の動物飼料添加剤におけるケレリトリンの用量は、好ましくは、動物飼料添加剤１ｋｇあたり０．１ｇ〜１０ｇの範囲である。
【００２０】
本発明はまた、産業動物、ペットおよび娯楽動物における、軟骨形成不全症、骨軟骨症および／または脚弱症の予防のためにまたは尿石症の予防のために使用するための上記のような動物飼料添加剤を、タンパク質担体、炭水化物担体、粗飼料、貯蔵牧草、脂肪、ビタミン、鉱物性物質および微量元素からなる群から選択される少なくとも１つの飼料成分と一緒に含む、動物飼料に関する。
【００２１】
本発明に従う動物飼料は、ジウルノシド、セストルモシドおよびそれらの混合物から選択されるＰＫｃ阻害剤を、８８％乾燥物質を有する飼料を基準として、好ましくは、飼料１ｋｇあたり０．０００１ｍｇ〜３ｍｇの用量で含む。より高い用量が可能であり有効であるが、飼料における使用コストを上昇させる。
【００２２】
さらなる実施形態において、本発明の動物飼料は、ジウルノシド、セストルモシドおよびそれらの混合物から選択されるＰＫｃ阻害剤を、マグノロール、ホノキオールおよびこれらの混合物、アスペルギルス・ニガーの菌糸体、アスペルギルス・オリゼの菌糸体およびケレリトリンから選択される１つまたは複数の任意成分と組み合わせて含む。
【００２３】
上記動物飼料におけるマグノロールおよび／またはホノキオールの用量は、好ましくは、飼料１ｋｇあたり０．１ｍｇ〜１０ｍｇの範囲、より好ましくは飼料１ｋｇあたり０．３ｍｇ〜３ｍｇの範囲である（８８％乾燥物質を有する飼料を基準として）。
【００２４】
上記動物飼料における  アスペルギルス・ニガーまたはアスペルギルス・オリゼの菌糸体の用量は、好ましくは、飼料１ｋｇあたり５０ｍｇ〜５０００ｍｇの範囲、より好ましくは飼料１ｋｇあたり２００ｍｇ〜２０００ｍｇの範囲である（８８％乾燥物質を有する飼料を基準として）。
【００２５】
上記動物飼料におけるケレリトリンの用量は、好ましくは、飼料１ｋｇあたり０．０５ｍｇ〜５ｍｇの範囲である（８８％乾燥物質を有する飼料を基準として）。
【００２６】
本発明はまた、動物飼料の製造のためのプレミックスに関する。該プレミックスは、本発明の動物飼料添加剤を、タンパク質担体、炭水化物担体、粗飼料、貯蔵牧草、脂肪、ビタミン、鉱物性物質および微量元素からなる群から選択される少なくとも１つの飼料成分と一緒に含む。
【００２７】
さらなる特徴に従うと、本発明は、産業動物、ペットおよび娯楽動物における、軟骨形成不全症、骨軟骨症および／または脚弱症の予防のための、または尿石症の予防のための、動物飼料添加剤または飲料水添加剤におけるジウルノシドおよび／またはセストルモシドから選択されるプロテインキナーゼＣ阻害剤の使用に関する。プロテインキナーゼＣ阻害剤は、好ましくは、１日当たり、体重１ｋｇあたり０．００００１ｍｇ〜０．３ｍｇの量で、動物に投与される。
【００２８】
本発明はまた、産業動物、ペットおよび娯楽動物における、軟骨形成不全症、骨軟骨症および／または脚弱症の予防のための、または尿石症の予防のための、動物飼料添加剤または飲料水添加剤における、マグノロール、ホノキオールおよびそれらの混合物、アスペルギルス・ニガーまたはアスペルギルス・オリゼの菌糸体およびケレリトリンから選択される１つまたは複数の任意成分と組み合わせた、ジウルノシドおよび／またはセストルモシドから選択されるプロテインキナーゼＣ阻害剤の使用に関する。
【００２９】
マグノロールおよび／またはホノキオールは、好ましくは、１日当たり、体重１ｋｇあたり０．００４ｍｇ〜１ｍｇの量で、動物に投与される。
【００３０】
アスペルギルス・ニガーまたはアスペルギルス・オリゼの菌糸体は、好ましくは、１日当たり、体重１ｋｇあたり２ｍｇ〜５００ｍｇの量で、動物に投与される。
【００３１】
ケレリトリンは、好ましくは、１日当たり、体重１ｋｇあたり０．００２ｍｇ〜０．５ｍｇの量で、動物に投与される。
【００３２】
本発明の動物飼料添加剤は、飲料水添加剤であってもよい。有効物質および任意成分の適切な投与量は、上記で挙げた１日あたり体重１ｋｇあたりの量と一致することができる。
【００３３】
本発明はまた、産業動物、ペットおよび娯楽動物における、軟骨形成不全症、骨軟骨症および／または脚弱症の予防のために、または尿石症の予防のために使用するための動物飼料添加剤または動物飼料または動物飼料プレミックスまたは飲料水添加剤の製造のための、任意選択的に、マグノロール、ホノキオールおよびそれらの混合物、アスペルギルス・ニガーまたはアスペルギルス・オリゼの菌糸体およびケレリトリンから選択される１つまたは複数の任意成分と組み合わせた、ジウルノシドおよび／またはセストルモシドから選択されるプロテインキナーゼＣ阻害剤の使用に関する。
【００３４】
以下、図を参照しながら、例に基づいて本発明をより詳細に説明する。
【図面の簡単な説明】
【００３５】
【図１】図１は、ブロイラーを用いた給餌試験における、本発明の動物飼料添加剤の使用下での、ゼロ対照群、カルシトリオールを用いたコントロール群およびカルシフェジオールを用いたコントロール群と比較した、骨軟骨症の発生を示す；
【図２】図２は、ブロイラーを用いた給餌試験における、本発明の動物飼料添加剤の使用下での、コントロール群と比較した、骨軟骨症の発生を示す；
【図３】図３は、ブロイラーを用いた給餌試験における、本発明の動物飼料添加剤の使用下での、コントロール群と比較した、尿石症の発生を示す；
【図４】図４は、ブロイラーを用いた給餌試験における、本発明の動物飼料添加剤の使用下での、コントロール群と比較した、骨軟骨症の発生を示す；
【図５】図５は、ブロイラーを用いた給餌試験における、本発明の動物飼料添加剤の使用下での、コントロール群と比較した、尿石症の発生を示す；
【図６】図６は、ブロイラーを用いた給餌試験における、本発明の動物飼料添加剤の使用下での、コントロール群と比較した、骨軟骨症の発生を示す；
【図７】図７は、産卵鶏を用いた給餌試験における、本発明の動物飼料添加剤の使用下での、コントロール群と比較した、尿石症の発生を示す；
【図８】図８は、産卵鶏を用いた給餌試験における、本発明の動物飼料添加剤の使用下での、コントロール群と比較した、脚弱症の指標である胸部水腫の発生を示す；
【図９】図９は、肥育豚を用いた給餌試験における、本発明の動物飼料添加剤の使用下での、コントロール群と比較した、骨軟骨症の発生を示す；
【図１０】図１０は、肥育豚を用いた給餌試験における、本発明の動物飼料添加剤の使用下での、コントロール群と比較した、骨軟骨症の発生を示す。
【実施例】
【００３６】
例
例１
商用の養ブロイラー施設において、それぞれ約４３０００の動物を有する５つの畜舎を、骨軟骨症／軟骨形成不全症の発症に関して、野外試験において比較した。全ての畜舎に、ＧｅｆｌｕｅｇｅｌｍａｓｔＫｏｒｎ（登録商標）（Ｇａｒａｎｔ  Ｔｉｅｒｎａｈｒｕｎｇ社）の名称で販売されている慣用のブロイラー肥育飼料を給餌し、畜舎Ｋ１（コントロール）では、さらなる添加物質は使用しなかった。
【００３７】
畜舎Ｋ２（コントロール群カルシトリオール）のために、ブロイラー肥育飼料に、２０ｐｐｍカルシトリオールの含有量を有する飼料添加剤を１５０ｐｐｍの量で混合した（８８％乾燥物質を有する飼料を基準として）。
【００３８】
畜舎Ｋ２（コントロール群カルシフェジオール）のために、ブロイラー肥育飼料に、２００ｐｐｍカルシフェジオールの含有量を有する飼料添加剤を１５０ｐｐｍの量で混合した（８８％乾燥物質を有する飼料を基準として）。
【００３９】
畜舎Ｖ１（試験群ジウルノシド＋カルシトリオール）のために、ブロイラー肥育飼料に、１００ｐｐｍジウルノシドおよび１０ｐｐｍカルシトリオールの含有量を有する本発明の飼料添加剤を１５０ｐｐｍの量で混合した（８８％乾燥物質を有する飼料を基準として）。
【００４０】
畜舎Ｖ２（試験群セストルモシド＋カルシフェジオール）のために、ブロイラー肥育飼料に、２０ｐｐｍセストルモシドおよび１００ｐｐｍカルシフェジオールの含有量を有する本発明の飼料添加剤を１５０ｐｐｍの量で混合した（８８％乾燥物質を有する飼料を基準として）。
【００４１】
生後１日目に畜舎へ入れた時に試験を開始し、生後３０日目に動物を屠殺して試験を終了した。屠殺後、各畜舎から１００体の屠殺体を無作為に採取した。これらの５００体の屠殺体で、骨軟骨症に関して病理試験を実施した。結果を図１に示す。図１から、本発明の動物飼料添加剤が、養ブロイラー施設における骨軟骨症／軟骨形成不全症の発生率を、通常の生産条件下で、有意に減少できたことがわかる。さらに、カルシトリオールおよびカルシフェジオールに関する有効な使用用量を半分減少できたことがわかる。関連の施設において、試験物質を使用下すると動物の活動性がゼロ対象群より大幅に改善することを確認できた。 
【００４２】
例２
商用の養ブロイラー施設において、それぞれ約４３０００の動物を有する５つの畜舎を、骨軟骨症／軟骨形成不全症および尿石症の発症に関して、野外試験において比較した。全ての畜舎に、ＧｅｆｌｕｅｇｅｌｍａｓｔＫｏｒｎ（登録商標）（Ｇａｒａｎｔ  Ｔｉｅｒｎａｈｒｕｎｇ社）の名称で販売されている慣用のブロイラー肥育飼料を給餌し、畜舎Ｋ（コントロール）では、さらなる添加物質は使用しなかった。
【００４３】
畜舎Ｖ１（試験群ジウルノシド）のために、ブロイラー肥育飼料に、１００ｐｐｍジウルノシドの含有量を有する本発明の飼料添加剤を１５０ｐｐｍの量で混合した（８８％乾燥物質を有する飼料を基準として）。
【００４４】
畜舎Ｖ２（試験群セストルモシド）のために、ブロイラー肥育飼料に、２０ｐｐｍセストルモシドの含有量を有する本発明の飼料添加剤を１５０ｐｐｍの量で混合した（８８％乾燥物質を有する飼料を基準として）。
【００４５】
畜舎Ｖ３（試験群ジウルノシド＋マグノロール／ホノキオール）のために、ブロイラー肥育飼料に、１００ｐｐｍジウルノシドの含有量およびマグノロール／ホノキオールからなる２％の混合物（マグノロール／ホノキオールの比２：１）を有する本発明の飼料添加剤を５０ｐｐｍの量で混合した（８８％乾燥物質を有する飼料を基準として）。
【００４６】
畜舎Ｖ４（試験群セストルモシド＋マグノロール／ホノキオール）のために、ブロイラー肥育飼料に、２０ｐｐｍセストルモシドの含有量およびマグノロール／ホノキオールからなる２％の混合物（マグノロール／ホノキオールの比２：１）を有する本発明の飼料添加剤を５０ｐｐｍの量で混合した（８８％乾燥物質を有する飼料を基準として）。
【００４７】
生後１日目に畜舎へ入れた時に試験を開始し、生後３０日目に動物を屠殺して試験を終了した。屠殺後、各畜舎から１００体の屠殺体を無作為に採取した。これらの５００体の屠殺体で、骨軟骨症および尿石症（肉眼で識別可能な尿結石形成）に関して病理試験を実施した。結果を図２および３に示す。図２から、本発明の動物飼料添加剤が、養ブロイラー施設における骨軟骨症／軟骨形成不全症の発生率を、通常の生産条件下で、有意に減少できたことがわかる。関連の施設において、試験物質を使用すると動物の活動性がコントロール群より大幅に改善することを確認できた。図３から、本発明の動物飼料添加剤が、養ブロイラー施設における尿石症の発生率を、通常の生産条件下で、有意に減少できたことがわかる。 
【００４８】
例３
商用養ブロイラー施設において、それぞれ約４３０００の動物を有する５つの畜舎を、骨軟骨症／軟骨形成不全症および尿石症の発症に関して、野外試験において比較する。全ての畜舎に、ＧｅｆｌｕｅｇｅｌｍａｓｔＫｏｒｎ（登録商標）（Ｇａｒａｎｔ  Ｔｉｅｒｎａｈｒｕｎｇ社）の名称で販売されている慣用のブロイラー肥育飼料を給餌し、畜舎Ｋ（コントロール）では、さらなる添加物質は使用しなかった。
【００４９】
畜舎Ｖ１（試験群ジウルノシド＋アスペルギルス・ニガー）のために、ブロイラー肥育飼料に、１０ｐｐｍジウルノシドの含有量および９０％のアスペルギルス・ニガーの菌糸体の含有量を有する本発明の飼料添加剤を５００ｐｐｍの量で混合した（８８％乾燥物質を有する飼料を基準として）。
【００５０】
畜舎Ｖ２（試験群セストルモシド＋アスペルギルス・オリゼ）のために、ブロイラー肥育飼料に、２ｐｐｍセストルモシドの含有量および９０％のアスペルギルス・オリゼの菌糸体の含有量を有する本発明の飼料添加剤を５００ｐｐｍの量で混合した（８８％乾燥物質を有する飼料を基準として）。
【００５１】
畜舎Ｖ３（試験群ジウルノシド＋ケレリトリン）のために、ブロイラー肥育飼料に、１００ｐｐｍジウルノシドおよび１％ケレリトリンの含有量を有する本発明の飼料添加剤を５０ｐｐｍの量で混合した（８８％乾燥物質を有する飼料を基準として）。
【００５２】
畜舎Ｖ４（試験群セストルモシド＋ケレリトリン）のために、ブロイラー肥育飼料に、２０ｐｐｍセストルモシドおよび１ｐｐｍケレリトリンの含有量を有する本発明の飼料添加剤を５０ｐｐｍの量で混合した（８８％乾燥物質を有する飼料を基準として）。
【００５３】
生後１日目に畜舎へ入れた時に試験を開始し、生後３０日目に動物を屠殺して試験を終了した。屠殺後、各畜舎から１００体の屠殺体を無作為に採取した。これらの５００体の屠殺体で、骨軟骨症および尿石症に関して病理試験を実施した。結果を図４および５に示す。図４から、本発明の動物飼料添加剤が、養ブロイラー施設における骨軟骨症／軟骨形成不全症の発生率を、通常の生産条件下で、有意に減少できたことがわかる。関連の施設において、試験物質を使用すると動物の活動性がコントロール群より大幅に改善することを確認できた。図５から、本発明の動物飼料添加剤が、養ブロイラー施設における尿石症の発生率を、通常の生産条件下で、有意に減少できたことがわかる。
【００５４】
例４
商用養ブロイラー施設において、それぞれ約４３０００の動物を有する３つの畜舎を、骨軟骨症／軟骨形成不全症および尿石症の発症に関して、野外試験において比較した。全ての畜舎に、ＧｅｆｌｕｅｇｅｌｍａｓｔＫｏｒｎ（登録商標）（Ｇａｒａｎｔ  Ｔｉｅｒｎａｈｒｕｎｇ社）の名称で販売されている慣用のブロイラー肥育飼料を給餌し、畜舎Ｋ（コントロール）では、さらなる添加物質は使用しなかった。
【００５５】
畜舎Ｖ１（試験群ジウルノシド＋セストルモシド＋マグノロール／ホノキオール＋アスペルギルス・ニガー）のために、ブロイラー肥育飼料に、１０ｐｐｍジウルノシド、２ｐｐｍセストルモシド、マグノロール／ホノキオールからなる１，０００ｐｐｍの混合物（マグノロール／ホノキオールの比２：１）の含有量および９０％のアスペルギルス・ニガーの菌糸体の含有量を有する本発明の飼料添加剤を５００ｐｐｍの量で混合した（８８％乾燥物質を有する飼料を基準として）。
【００５６】
畜舎Ｖ２（試験群ジウルノシド＋セストルモシド＋アスペルギルス・オリゼ）のために、ブロイラー肥育飼料に、１０ｐｐｍジウルノシド、２ｐｐｍセストルモシドの含有量および９０％のアスペルギルス・オリゼの菌糸体の含有量を有する本発明の飼料添加剤を５００ｐｐｍの量で混合した（８８％乾燥物質を有する飼料を基準として）。
【００５７】
生後１日目に畜舎へ入れた時に試験を開始し、生後３０日目に動物を屠殺して試験を終了した。屠殺後、各畜舎から１００体の屠殺体を無作為に採取した。これらの３００体の屠殺体で、骨軟骨症および尿石症に関して病理試験を実施した。結果を図６および７に示す。図６から、本発明の動物飼料添加剤が、養ブロイラー施設における骨軟骨症／軟骨形成不全症の発生率を、通常の生産条件下で、有意に減少できたことがわかる。関連の施設において、試験物質を使用すると動物の活動性がコントロール群より大幅に改善することを確認できた。図７から、本発明の動物飼料添加剤が、養ブロイラー施設における尿石症の発生率を、通常の生産条件下で、有意に減少できたことがわかる。
【００５８】
例５
試験畜舎において、１群あたりそれぞれ５０匹の動物を有する４つの群の産卵鶏を、脚弱症の発生に関して比較した。全ての試験群に、ＬｅｇｅＫｏｒｎ（登録商標）（Ｇａｒａｎｔ  Ｔｉｅｒｎａｈｒｕｎｇ社）の名称で販売されている慣用の産卵鶏飼料を給餌し、コントロール群の飼料にはさらなる添加物質は使用しなかった。
【００５９】
試験群１のために、産卵用飼料に、１００ｐｐｍジウルノシドの含有量を有する本発明の飼料添加剤を１５０ｐｐｍの量で混合した（８８％乾燥物質を有する飼料を基準として）。
【００６０】
試験群２のために、産卵用飼料に、２０ｐｐｍセストルモシドの含有量を有する本発明の飼料添加剤を１５０ｐｐｍの量で混合した（８８％乾燥物質を有する飼料を基準として）。
【００６１】
試験群３のために、産卵用飼料に、５０ｐｐｍジウルノシドおよび１０ｐｐｍセストルモシドの含有量を有する本発明の飼料添加剤を１５０ｐｐｍの量で混合した（８８％乾燥物質を有する飼料を基準として）。
【００６２】
動物の生後１９週目で試験を開始した。動物を畜舎の４つのセクションにおいて、寝床としての藁上で飼育した。産卵用の巣は分離し、同様に寝床材としてわらを備えつけた。１５月後に動物の屠殺で試験を終了した。屠殺後、全ての屠殺体を胸部水腫形成に関する巨視的な病理検査に付した。胸骨とその上にある皮膚との間の嚢胞を胸部水腫と呼び、これは胸領域で横たわるのが増加することによって生じる。この種の横たわりは、脚弱症を有する家禽において健康な動物より頻繁に生じるので、胸部水腫の発生率を制限された活動のおよび従って脚弱症の指標として用いた。試験の結果を図８に示す。図８は、当該試験物質を使用すると、脚弱症の指標である胸部水腫が、コントロール群よりも顕著に低下していたことを示す。 
【００６３】
例６
試験畜舎において、１群あたりそれぞれ２０匹の動物を有する５つの群の雄の飼育豚を、骨軟骨症の発生に関して比較した。群あたり３０ｋｇの平均重量で動物を畜舎に入れた。全ての試験群に、ＳｃｈｗｅｉｎｅｍａｓｔＫｏｒｎ（登録商標）ＯＧＴ（Ｇａｒａｎｔ  Ｔｉｅｒｎａｈｒｕｎｇ社）の名称で販売されている慣用の豚肥育飼料を給餌し、コントロール群の飼料にはさらなる添加物質は使用しなかった。
【００６４】
試験群１のために、豚肥育飼料に、１００ｐｐｍジウルノシドの含有量を有する本発明の飼料添加剤を１００ｐｐｍの量で混合した（８８％乾燥物質を有する飼料を基準として）。
【００６５】
試験群２のために、豚肥育飼料に、２０ｐｐｍセストルモシドの含有量を有する本発明の飼料添加剤を１００ｐｐｍの量で混合した（８８％乾燥物質を有する飼料を基準として）。
【００６６】
試験群３のために、豚肥育飼料に、１０ｐｐｍジウルノシドの含有量および９０％のアスペルギルス・オリゼの菌糸体の含有量を有する本発明の飼料添加剤を５００ｐｐｍの量で混合した（８８％乾燥物質を有する飼料を基準として）。
【００６７】
試験群４のために、豚肥育飼料に、２ｐｐｍセストルモシドの含有量および９０％のアスペルギルス・ニガーの菌糸体の含有量を有する本発明の飼料添加剤を５００ｐｐｍの量で混合した（８８％乾燥物質を有する飼料を基準として）。
【００６８】
群あたり１００ｋｇの平均重量まで動物を肥育した。動物の屠殺で試験を終了した。屠殺後、全ての屠殺体において、それぞれ右の膝関節（Ａｒｔｉｃｕｌａｔｉｏ  ｇｅｎｕｓ）を、骨軟骨症に関して巨視的な病理検査に付した。試験の結果を図９に示す。図９は、右の膝関節における骨軟骨症の発生率が、本発明の物質を使用すると、コントロール群よりも顕著に低かったことを示す。傾向として、これらの試験群において活動障害（座っている）を有する動物がより少ないことも観察された。 
【００６９】
例７
試験畜舎において、１群あたりそれぞれ２０匹の動物を有する３つの群の雄の飼育豚を、骨軟骨症の発生に関して比較した。群あたり３０ｋｇの平均重量で動物を畜舎に入れた。全ての試験群に、ＳｃｈｗｅｉｎｅｍａｓｔＫｏｒｎ（登録商標）ＯＧＴ（Ｇａｒａｎｔ  Ｔｉｅｒｎａｈｒｕｎｇ社）の名称で販売されている慣用の豚肥育飼料を給餌し、コントロール群の飼料にはさらなる添加物質は使用しなかった。
【００７０】
試験群１のために、豚肥育飼料に、１００ｐｐｍジウルノシドおよび１０ｐｐｍカルシフェジオールの含有量を有する本発明の飼料添加剤を１００ｐｐｍの量で混合した（８８％乾燥物質を有する飼料を基準として）。
【００７１】
試験群２のために、豚肥育飼料に、２０ｐｐｍセストルモシドおよび１０ｐｐｍカルシトリオールの含有量を有する本発明の飼料添加剤を１００ｐｐｍの量で混合した（８８％乾燥物質を有する飼料を基準として）。
【００７２】
群あたり１００ｋｇの平均重量まで動物を肥育した。動物の屠殺で試験を終了した。屠殺後、全ての屠殺体において、それぞれ右の膝関節（Ａｒｔｉｃｕｌａｔｉｏ  ｇｅｎｕｓ）を、骨軟骨症に関して巨視的な病理検査に付した。試験の結果を図１０に示す。図１０は、本発明の動物飼料添加剤が養豚において骨軟骨症の発生の顕著な減少をもたらしたことを示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【国際調査報告】
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