(57)【要約】  本発明は、グルカゴン受容体選択的類似体である単離ポリペプチド及びそのペプチド誘導体に関する。これらの類似体は、ヒトグルカゴン受容体に選択的であり、ネイティブの内在性グルカゴンと比較して溶解性、熱安定性及び物理化学的特性が改善されている。本発明は、様々な治療的及び診断的徴候におけるそのようなポリペプチドの使用方法ならびにそのようなポリペプチドの生成方法にも関する。これらの類似体は、肥満、糖尿病、代謝障害及び他の障害または疾患の治療方法において、単体で、または他の治療的ペプチドと組み合わせて有用である。
2019520329.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アミノ酸配列：Ｘ１Ｘ２Ｘ３ＧＴＦＴＳＤＸ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３ＬＸ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８ＡＱＥＦＸ２３Ｘ２４Ｘ２５ＬＥＤＥ−Ｚ尾部−（ＯＨ／ＮＨ２）（配列番号１）を含む単離ポリペプチドであって、
Ｘ１はＹまたはＷであり、
Ｘ２はＳ、ＧまたはＴであり、
Ｘ３はＱまたはＨであり、
Ｘ１０はＹまたはＨであり、
Ｘ１１はＳまたはＴであり、
Ｘ１２はＫまたはＲであり、
Ｘ１３はＹ、ＬまたはＷであり、
Ｘ１５はＤまたはＥであり、
Ｘ１６はＳ、２−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、Ａ、Ｅ、Ｌ、Ｑ、ＫまたはＩであり、
Ｘ１７はＫ、Ｅ、Ｓ、ＴまたはＡであり、
Ｘ１８はＡ、Ｒ、Ｓ、Ｅ、Ｌ、ＴまたはＹであり、
Ｘ２３はＴまたはＶであり、
Ｘ２４はＫ、Ｉ、ＬまたはＡｉｂであり、
Ｘ２５はＨまたはＷであり、
Ｚ尾部は存在しないか、ＥＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号４）、ＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号５）、ＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号６）、ＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号７）、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号８）、ＫＲＮＫＮＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号９）、ＫＲＮＫＮＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１０）、ＫＲＮＫＰＰＩＡ−ＯＨ（配列番号１１）、ＫＲＮＫＰＰＰＡ−ＯＨ（配列番号１５０）、ＫＲＮＫＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１２）、ＫＳＳＧＫＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１３）、ＰＥＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１４）、ＰＫＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１５）、ＰＫＳＫＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１６）、ＰＫＳＫＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１７）、ＰＫＳＫＥＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１８）、ＰＫＳＫＥＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１９）、ＰＫＳＫＱＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号２０）、ＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号２１）、ＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号２２）、ＰＲＮＫＮＮＰＰＳ−ＯＨ（配列番号２３）、ＰＳＫＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号２４）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳＥ−ＯＨ（配列番号２５）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号２６）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号２７）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳＳ−ＯＨ（配列番号２８）、ＰＳＳＧＥＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号２９）、ＰＳＳＧＫＫＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３０）、ＰＳＳＧＫＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号３１）、ＰＳＳＧＫＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３２）、ＰＳＳＧＳＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３３）、ＰＳＳＫＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３４）、ＰＳＳＫＥＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３５）、ＰＳＳＫＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３６）、ＰＳＳＫＱＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３７）、ＰＳＳＫＳＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３８）、ＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３９）及びＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号４０）から成る群から選択される、前記単離ポリペプチド。
【請求項２】
配列番号４１〜１３６及び１４３〜１４９から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項３】
配列番号４１〜１３６及び１４３〜１４９から成る群から選択されるアミノ酸配列から成る、請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項４】
アミノ酸配列：Ｘ１Ｘ２Ｘ３ＧＴＦＴＳＤＸ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３ＬＸ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８ＡＱＥＦＶＸ２４ＷＬＥＤＥ−Ｚ尾部−（ＯＨ／ＮＨ２）（配列番号２）を含む単離ポリペプチドであって、
Ｘ１はＹまたはＷであり、
Ｘ２はＳまたはＧであり、
Ｘ３はＱまたはＨであり、
Ｘ１０はＹまたはＨであり、
Ｘ１１はＳまたはＴであり、
Ｘ１２はＫまたはＲであり、
Ｘ１３はＹ、ＬまたはＷであり、
Ｘ１５はＤまたはＥであり、
Ｘ１６は２−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、ＡまたはＳであり、
Ｘ１７はＡまたはＫであり、
Ｘ１８はＲ、Ｓ、ＬまたはＹであり、
Ｘ２４はＫ、ＩまたはＡｉｂであり、
Ｘ２５はＨまたはＷであり、
Ｚ尾部は存在しないか、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号２６）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号２７）及びＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号２１）から成る群から選択される、前記単離ポリペプチド。
【請求項５】
配列番号４１〜４３及び１４３〜１４９から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項４に記載の単離ポリペプチド。
【請求項６】
配列番号４１〜４３及び１４３〜１４９から成る群から選択されるアミノ酸配列から成る、請求項４に記載の単離ポリペプチド。
【請求項７】
アミノ酸配列：ＹＳＸ３ＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＸ１６Ｘ１７Ｘ１８ＡＱＥＦＶＸ２４ＷＬＥＤＥ−Ｚ尾部−（ＯＨ／ＮＨ２）（配列番号３）を含む単離ポリペプチドであって、
Ｘ３はＱまたはＨであり、
Ｘ１６は２−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）またはＡであり、
Ｘ１７はＡまたはＫであり、
Ｘ１８はＲ、ＳまたはＹであり、
Ｘ２４はＫまたはＡｉｂであり、
Ｚ尾部は、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号２７）及びＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号２１）から成る群から選択される、前記単離ポリペプチド。
【請求項８】
配列番号４１〜４３から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項７に記載の単離ポリペプチド。
【請求項９】
配列番号４１のアミノ酸配列を含む、請求項７に記載の単離ポリペプチド。
【請求項１０】
配列番号４２のアミノ酸配列を含む、請求項７に記載の単離ポリペプチド。
【請求項１１】
配列番号４３のアミノ酸配列を含む、請求項７に記載の単離ポリペプチド。
【請求項１２】
配列番号４１〜４３から成る群から選択されるアミノ酸配列から成る、請求項７に記載の単離ポリペプチド。
【請求項１３】
配列番号４４〜４６から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項７に記載の単離ポリペプチド。
【請求項１４】
配列番号４４のアミノ酸配列を含む、請求項７に記載の単離ポリペプチド。
【請求項１５】
配列番号４５のアミノ酸配列を含む、請求項７に記載の単離ポリペプチド。
【請求項１６】
配列番号４６のアミノ酸配列を含む、請求項７に記載の単離ポリペプチド。
【請求項１７】
配列番号４７〜１３６から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む、単離ポリペプチド。
【請求項１８】
配列番号４７〜１３６から成る群から選択されるアミノ酸から成る、単離ポリペプチド。
【請求項１９】
アミノ酸配列：ＹＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＸ１７ＲＡＱＸ２１ＦＶＸ２４ＷＬＸ２７Ｘ２８Ｔ−ＯＨ（配列番号１３７）を含む単離ポリペプチドであって、
Ｘ１７はＫ＊であり、Ｋ＊はＸ２１におけるＥ＊とのラクタム架橋中にあり、
Ｘ２１はＥ＊であり、Ｅ＊はＸ１７におけるＫ＊とのラクタム架橋中にあり、
Ｘ２４はＫまたはＫ＊＊であり、Ｋ＊＊はＸ２８におけるＥ＊＊とのラクタム架橋中にあり、
Ｘ２７はＱまたはＤであり、
Ｘ２８はＥまたはＥ＊＊であり、Ｅ＊＊はＸ２４におけるＫ＊＊とのラクタム架橋中にある、前記単離ポリペプチド。
【請求項２０】
前記ポリペプチドが配列番号１３８または配列番号１３９のアミノ酸配列を含む、請求項１９に記載の単離ポリペプチド。
【請求項２１】
前記ポリペプチドが配列番号１３８または配列番号１３９のアミノ酸配列から成る、請求項１９に記載の単離ポリペプチド。
【請求項２２】
請求項１〜２１のいずれか１項に記載の単離ポリペプチドを含む、医薬組成物。
【請求項２３】
前記組成物がさらなる薬剤をさらに含む、請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
前記さらなる薬剤が第２のポリペプチドである、請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
前記第２のポリペプチドがインスリン分泌性ポリペプチドである、請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
前記第２のポリペプチドがエクセナチド、エクセナチドの誘導体、エクセナチドの類似体、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、ＧＬＰ−１の誘導体及びＧＬＰ−１の類似体から成る群から選択される、請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
前記第２のポリペプチドがエクセナチドである、請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項２８】
前記エクセナチドが合成エクセナチドである、請求項２７に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
前記合成エクセナチドが配列番号１４２のアミノ酸配列を含む、請求項２８に記載の医薬組成物。
【請求項３０】
前記第２のポリペプチドがＧＬＰ−１類似体である、請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項３１】
前記ＧＬＰ−１類似体が合成ＧＬＰ−１類似体である、請求項３０に記載の医薬組成物。
【請求項３２】
少なくとも１つの安定化成分をさらに含む、請求項２２〜３１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項３３】
前記安定化成分が１種または複数の炭水化物、１種または複数の抗酸化剤、１種または複数のアミノ酸、１種または複数の緩衝液、１種または複数の無機化合物、１種または複数の界面活性剤及びこれらの組み合わせから成る群から選択される、請求項３２に記載の医薬組成物。
【請求項３４】
請求項１〜２１のいずれか１項に記載の単離ポリペプチドまたは請求項２２〜３１のいずれか１項に記載の医薬組成物及び少なくとも１つの安定化成分を含む、粒子製剤。
【請求項３５】
前記安定化成分が１種または複数の炭水化物、１種または複数の抗酸化剤、１種または複数のアミノ酸、１種または複数の緩衝液、１種または複数の無機化合物、１種または複数の界面活性剤及びこれらの組み合わせから成る群から選択される、請求項３４に記載の粒子製剤。
【請求項３６】
請求項３４または請求項３５に記載の粒子製剤及び懸濁ビヒクルを含む、懸濁製剤。
【請求項３７】
前記懸濁ビヒクルが１種または複数の界面活性剤、１種または複数の抗酸化剤、１種または複数の可溶性化合物またはこれらの組み合わせを含む、請求項３６に記載の懸濁製剤。
【請求項３８】
請求項１〜２１のいずれか１項に記載の単離ポリペプチドまたは請求項２２〜３３のいずれか１項に記載の医薬組成物または請求項３４もしくは請求項３５に記載の粒子製剤または請求項３６もしくは請求項３７に記載の懸濁製剤を含む、浸透圧性送達装置。
【請求項３９】
内面及び外面ならびに第１及び第２の開口端を含む不浸透性リザーバー、
前記リザーバーの前記第１の開口端と密封関係の半透膜、
前記リザーバー内の浸透圧性エンジン及び隣接する前記半透膜、
前記浸透圧性エンジンに隣接するピストンであって、前記ピストンは前記リザーバーの前記内面と可動性の密閉を形成し、前記ピストンは前記リザーバーを第１のチャンバーと第２のチャンバーに分け、前記第１のチャンバーは浸透圧性エンジンを含む前記ピストン、
懸濁製剤であって、前記第２のチャンバーは前記懸濁製剤を含み、前記懸濁製剤は流動可能であり、前記単離ポリペプチドを含む前記懸濁製剤、及び
前記リザーバーの前記第２の開口端に挿入された拡散モデレーターであって、前記拡散モデレーターは前記懸濁製剤に隣接する、前記拡散モデレーター
を含む、請求項３８に記載の浸透圧性送達装置。
【請求項４０】
前記リザーバーがチタンまたはチタン合金を含む、請求項３９に記載の浸透圧性送達装置。
【請求項４１】
前記懸濁製剤が請求項３４または請求項３５に記載の粒子製剤及び懸濁ビヒクルを含む、請求項３９に記載の浸透圧性送達装置。
【請求項４２】
前記懸濁ビヒクルが１種または複数の界面活性剤、１種または複数の抗酸化剤、１種または複数の可溶性化合物及びこれらの組み合わせを含む、請求項４１に記載の浸透圧性送達装置。
【請求項４３】
それらを必要とする対象における異常なグルカゴン活性と関連する疾患または障害の症状の治療または緩和の方法であって、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の単離ポリペプチドまたは請求項２２〜３３のいずれか１項に記載の医薬組成物または請求項３４もしくは請求項３５に記載の粒子製剤または請求項３６もしくは請求項３７に記載の懸濁製剤を投与することを含む、前記方法。
【請求項４４】
前記疾患または障害が２型糖尿病である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記対象がヒトである、請求項４３または請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記単離ポリペプチドまたは医薬組成物が非経口、経口、経皮、経粘膜及び直腸内投与から成る群から選択される経路による投与のために製剤化される、請求項４３に記載の方法。
【請求項４７】
前記単離ポリペプチドまたは医薬組成物が静脈内投与、皮内投与、真皮下投与、皮下投与またはこれらの組み合わせによる投与のために製剤化される、請求項４３に記載の方法。
【請求項４８】
請求項１〜２１のいずれか１項に記載の単離ポリペプチドまたは請求項２２〜３３のいずれか１項に記載の医薬組成物または請求項３４もしくは請求項３５に記載の粒子製剤または請求項３６もしくは請求項３７に記載の懸濁製剤をそれらを必要とする対象に投与することを含む、代謝障害の治療方法。
【請求項４９】
請求項１〜２１のいずれか１項に記載の単離ポリペプチドまたは請求項２２〜３３のいずれか１項に記載の医薬組成物または請求項３４もしくは請求項３５に記載の粒子製剤または請求項３６もしくは請求項３７に記載の懸濁製剤をそれらを必要とする対象に投与することを含む、肥満の治療方法。
【請求項５０】
患者における血中グルコースの上昇と関連する代謝疾患または障害の治療または予防の方法であって、治療的または予防的に有効な量の請求項１〜２１のいずれか１項に記載の単離ポリペプチドまたは請求項２２〜３３のいずれか１項に記載の医薬組成物または請求項３４もしくは請求項３５に記載の粒子製剤または請求項３６もしくは請求項３７に記載の懸濁製剤を前記患者に投与することを含む、前記方法。
【請求項５１】
グルカゴンとＧＬＰ−１受容体の両方での共アゴニズムが所望される疾患もしくは障害の治療、そうした疾患もしくは障害の予防、そうした疾患もしくは障害の発症の遅延、そうした疾患もしくは障害の進行の遅延、またはそうした疾患もしくは障害の症状の改善の方法であって、治療的または予防的に有効な量の請求項１〜２１のいずれか１項に記載の単離ポリペプチドまたは請求項２２〜３３のいずれか１項に記載の医薬組成物または請求項３０もしくは請求項３１に記載の粒子製剤または請求項３６もしくは請求項３７に記載の懸濁製剤をそれらを必要とする対象に投与することを含み、前記疾患または障害が、慢性疼痛、血液障害、血友病、内分泌障害、代謝障害、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、アルツハイマー病、心血管疾患、無自覚性低血糖、拘束性肺疾患、慢性閉塞性肺疾患、脂肪萎縮症、メタボリックシンドローム、白血病、肝炎、腎不全、自己免疫疾患、ショック、消耗性障害及びこれらの組み合わせから成る群から選択される、前記方法。
【請求項５２】
前記自己免疫疾患がグレーブス病、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症または関節リウマチである、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
長期にわたる治療を必要とする感染症の治療、そうした感染症の予防、そうした感染症の発症の遅延、そうした感染症の進行の遅延、またはそうした感染症の症状の改善の方法であって、治療的または予防的に有効な量の請求項１〜２１のいずれか１項に記載の単離ポリペプチドまたは請求項２２〜３３のいずれか１項に記載の医薬組成物または請求項３４もしくは請求項３５に記載の粒子製剤または請求項３６もしくは請求項３７に記載の懸濁製剤をそれらを必要とする対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項５４】
前記対象がヒトである、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記単離ポリペプチドまたは医薬組成物が非経口、経口、経皮、経粘膜及び直腸内投与から成る群から選択される経路による投与のために製剤化される、請求項４８〜５４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５６】
前記単離ポリペプチドまたは医薬組成物が静脈内投与、皮内投与、真皮下投与、皮下投与またはこれらの組み合わせによる投与のために製剤化される、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
アミノ酸配列：Ｘ１ＳＸ３ＧＴＦＴＳＤＸ１０ＳＫＹＬＤＸ１６Ｘ１７Ｘ１８ＡＱＸ２１ＦＶＸ２４ＷＬＥＤＥＰＸ３１ＳＸ３３Ｘ３４ＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１５１）を含む単離ポリペプチドであって
Ｘ１＝ＹまたはＷであり、
Ｘ３＝ＨまたはＱであり、
Ｘ１０＝Ｙ、ＫまたはＫ＊＊＊あり、
Ｘ１６＝Ａ、Ｓ、Ａｉｂ、ＫまたはＫ＊＊＊であり、
Ｘ１７＝Ａ、Ｋ、ＡｉｂまたはＫ＊＊＊であり、
Ｘ１８＝Ｙ、ＳまたはＲであり、
Ｘ２１＝Ｅ、ＫまたはＫ＊＊＊であり、
Ｘ２４＝Ｉ、Ａｉｂ、ＫまたはＫ＊＊＊であり、
Ｘ３１＝Ｓ、ＫまたはＫ＊＊＊であり、
Ｘ３３＝Ｇ、ＫまたはＫ＊＊＊であり、
Ｘ３４＝ＡまたはＳであり、
Ｋ＊＊＊はリジンであり、リジン側鎖のε−アミノ基は場合によりスペーサーを介して親油性置換基に共有結合している、前記単離ポリペプチド。
【請求項５８】
前記親油性置換基のそれぞれがスペーサーを介して前記ペプチドに共有結合しており、前記親油性置換基及びスペーサーが式ＩＩ：
【化１】
2019520329.tif 000033
のものである、請求項５７に記載の単離ポリペプチド。
【請求項５９】
前記親油性置換基のそれぞれがスペーサーを介して前記ペプチドに共有結合しており、前記親油性置換基及びスペーサーが式ＩＩＩ：
【化２】
2019520329.tif 000034
のものである、請求項５７に記載の単離ポリペプチド。
【請求項６０】
化合物Ｂ１〜Ｂ４８から成る群から選択される、請求項５７に記載の単離ポリペプチド。
【請求項６１】
化合物Ｂ３、化合物Ｂ６、化合物Ｂ７、化合物Ｂ９、化合物Ｂ１０、化合物Ｂ１１、化合物Ｂ１４、化合物Ｂ１５、化合物Ｂ１７、化合物Ｂ２１、化合物Ｂ２２、化合物Ｂ３４、化合物Ｂ３７、化合物Ｂ３８、化合物Ｂ３９及び化合物Ｂ４１から成る群から選択される、請求項６０に記載の単離ポリペプチド。
【請求項６２】
前記単離ペプチドが化合物Ｂ９、Ｂ１４またはＢ１５である、請求項６１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項６３】
配列番号１５２〜配列番号１９９によって代表されるアミノ酸配列のうちのいずれかから成る群から選択される、請求項５７に記載の単離ポリペプチド。
【請求項６４】
請求項１〜２１または５７〜６３のいずれか１項に記載の単離ポリペプチド及び医薬的に許容される塩を含む、医薬組成物。
【請求項６５】
前記医薬的に許容される塩がトリフルオロ酢酸塩、酢酸塩または塩酸塩である、請求項６４に記載の医薬組成物。
【請求項６６】
前記単離ポリペプチドがグルカゴン類似体であり、前記組成物がエクセナチド、エクセナチドの誘導体、エクセナチドの類似体、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、ＧＬＰ−１の誘導体及びＧＬＰ−１の類似体から成る群から選択されるさらなる薬剤をさらに含む、請求項１〜２１または５７〜６３のいずれか１項に記載の単離ポリペプチドを含む医薬組成物。
【請求項６７】
前記さらなる薬剤がエクセナチドである、請求項６６に記載の医薬組成物。
【請求項６８】
前記グルカゴン類似体が化合物Ａ１〜Ａ１０５から成る群から選択される、請求項６６に記載の医薬組成物。
【請求項６９】
前記グルカゴン類似体が化合物Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、Ａ５及びＡ６から成る群から選択される、請求項６８に記載の医薬組成物。
【請求項７０】
前記グルカゴン類似体が化合物Ｂ１〜Ｂ４８から成る群から選択される、請求項６６に記載の医薬組成物。
【請求項７１】
前記グルカゴン類似体が化合物Ｂ３、化合物Ｂ６、化合物Ｂ７、化合物Ｂ９、化合物Ｂ１０、化合物Ｂ１１、化合物Ｂ１４、化合物Ｂ１５、化合物Ｂ１７、化合物Ｂ２１、化合物Ｂ２２、化合物Ｂ３４、化合物Ｂ３７、化合物Ｂ３８、化合物Ｂ３９及び化合物Ｂ４１から成る群から選択される、請求項７０に記載の医薬組成物。
【請求項７２】
前記グルカゴン類似体が１０００：１〜１：１０００のグルカゴン類似体：エクセナチドの固定比率でエクセナチドと組み合わせて製剤化される、請求項６６に記載の医薬組成物。
【請求項７３】
前記グルカゴン類似体が１００：１〜１：１００のグルカゴン類似体：エクセナチドの固定比率でエクセナチドと組み合わせて製剤化される、請求項６６に記載の医薬組成物。
【請求項７４】
前記グルカゴン類似体が１０：１〜１：１０のグルカゴン類似体：エクセナチドの固定比率でエクセナチドと組み合わせて製剤化される、請求項６６に記載の医薬組成物。
【請求項７５】
化合物Ａ１〜Ａ１０５から成る群から選択され、場合によりスペーサーを介して親油性置換基に共有結合している、単離ポリペプチド。
【請求項７６】
化合物Ａ１〜Ａ６から成る群から選択される、請求項７５に記載の単離ポリペプチド。
【請求項７７】
前記親油性置換基がスペーサーを介して前記ペプチドに共有結合しており、前記親油性置換基及びスペーサーが式ＩＩ：
【化３】
2019520329.tif 000035
のものである、請求項７５または７６に記載の単離ポリペプチド。
【請求項７８】
前記親油性置換基がスペーサーを介して前記ペプチドに共有結合しており、前記親油性置換基及びスペーサーが式ＩＩＩ：
【化４】
2019520329.tif 000036
のものである、請求項７５または７６に記載の単離ポリペプチド。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１６年５月１６日に出願された米国特許仮出願第６２／３３７，００５号、２０１６年１０月２８日に出願された米国特許仮出願第６２／４１４，１４６号及び２０１６年１１月１１日に出願された米国特許仮出願第６２／４２０，９３７号の利益を主張し、これらのそれぞれの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、グルカゴン受容体選択的類似体である単離ポリペプチド及びそのペプチド誘導体に関する。これらの類似体及びペプチド誘導体は、ネイティブの内在性グルカゴンと比較して、溶解性、熱安定性及び物理化学的特性が向上している。本発明は、様々な治療的及び診断的徴候におけるそのようなポリペプチドの使用方法ならびにそのようなポリペプチドの生成方法にも関する。これらの類似体は、肥満、糖尿病、代謝障害及び他の疾患または障害の治療方法で有用である。
【背景技術】
【０００３】
膵臓のアルファ細胞が産生するペプチドホルモンであるグルカゴン及び神経ペプチドであるグルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）は、プレ−プログルカゴン、すなわち、様々な組織でプロセッシングを受けていくつかの異なるプログルカゴン由来ペプチドを形成する１５８アミノ酸の前駆ポリペプチドに由来する。例えば、グルカゴン、ＧＬＰ−１、グルカゴン様ペプチド−２（ＧＬＰ−２）及びオキシントモジュリン（ＯＸＭ）を含めたこれらのプログルカゴン由来ペプチドは、グルコース恒常性、インスリン分泌、胃内容排出及び腸の成長ならびに食物摂取の調節を含めた多種多様の生理機能に関与する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】米国特許仮出願第６２／３３７，００５号
【特許文献２】米国特許仮出願第６２／４１４，１４６号
【特許文献３】米国特許仮出願第６２／４２０，９３７号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
したがって、ＧＬＰ−１及び／またはグルカゴン活性を模倣する治療剤及び療法の必要性が存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、グルカゴン受容体選択的類似体である単離ポリペプチド及びそのペプチド誘導体に関する。グルカゴンは、膵臓でアルファ細胞が産生し、グルカゴン受容体（「ＧＣＧＲ」）と相互作用する、２９アミノ酸のペプチドホルモンである。
【０００７】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、グルカゴン受容体（ＧＣＧＲ）に結合し、選択的グルカゴン受容体アゴニストである、グルカゴン類似体である。本開示のこれらの単離ポリペプチドは、強力であり、安定的であり、可溶性である。この単離ポリペプチドは、ネイティブのグルカゴン、例えばヒトグルカゴンと比較して、及びＧＬＰ−１受容体に結合する能力と比較して、グルカゴン受容体に選択的に結合する。この単離ポリペプチドは、代謝安定性の向上及びネイティブのグルカゴン、例えばヒトグルカゴンに対する糸球体濾過速度に近い速度での腎臓からの薬物のクリアランスを示す。この単離ポリペプチドは、ネイティブのグルカゴン、例えばヒトグルカゴンと比較して、溶解性の向上を示す、好ましい実施形態では、この単離ポリペプチドは、少なくとも２００ｍｇ／ｍｌの溶解性の向上を示す。この単離ポリペプチドは、室温で及びより高い温度、例えば３７℃またはそれ以上で、化学的安定性の向上を示す。
【０００８】
本開示の単離ポリペプチドは、選択性、溶解性及び腎臓からの分子のクリアランスの向上を与える部類に由来する。この部類は、（ａ）グルカゴン受容体に対する選択性に必要とされる重要な構造の決定、（ｂ）溶解性の向上をもたらす一方で、ヒトグルカゴンの効能を増強するまたは少なくとも維持する重要なアミノ酸及び二次構造モチーフの特定ならびに（ｃ）選択的グルカゴン受容体アゴニストに対して化学的安定性を与えるアミノ酸置換の特定に基づく。
【０００９】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、ヒトグルカゴンのアミノ酸配列：ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＭＮＴ−ＯＨ（配列番号１４０）に基づく改変アミノ酸配列を含み、ここでは、改変アミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸置換、少なくとも２つのアミノ酸置換、少なくとも３つのアミノ酸置換、少なくとも４つのアミノ酸置換、少なくとも５つのアミノ酸置換、少なくとも６つのアミノ酸置換、少なくとも７つのアミノ酸置換、少なくとも８つのアミノ酸置換、少なくとも９つのアミノ酸置換、少なくとも１０個のアミノ酸置換、少なくとも１１個のアミノ酸置換、少なくとも１２個のアミノ酸置換、少なくとも１３個のアミノ酸置換、少なくとも１４個のアミノ酸置換、少なくとも１５個のアミノ酸置換、少なくとも１６個のアミノ酸置換、少なくとも１７個のアミノ酸置換、少なくとも１８個のアミノ酸置換、少なくとも１９個のアミノ酸置換、少なくとも２０個のアミノ酸置換、少なくとも２１個のアミノ酸置換、少なくとも２２個のアミノ酸置換、少なくとも２３個のアミノ酸置換、少なくとも２４個のアミノ酸置換、少なくとも２５個のアミノ酸置換、少なくとも２６個のアミノ酸置換、少なくとも２７個のアミノ酸置換、少なくとも２８個のアミノ酸置換及び／または少なくとも２９個のアミノ酸置換を含み、但し、改変アミノ酸配列を有する単離ポリペプチドが選択的グルカゴン類似体として機能する能力を保持するという条件である。
【００１０】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、ヒトグルカゴンのアミノ酸配列：ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＭＮＴ−ＯＨ（配列番号１４０）に基づく改変アミノ酸配列を含み、ここでは、改変アミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸置換、少なくとも２つのアミノ酸置換、少なくとも３つのアミノ酸置換、少なくとも４つのアミノ酸置換、少なくとも５つのアミノ酸置換、少なくとも６つのアミノ酸置換、少なくとも７つのアミノ酸置換、少なくとも８つのアミノ酸置換、少なくとも９つのアミノ酸置換、少なくとも１０個のアミノ酸置換、少なくとも１１個のアミノ酸置換、少なくとも１２個のアミノ酸置換、少なくとも１３個のアミノ酸置換、少なくとも１４個のアミノ酸置換、少なくとも１５個のアミノ酸置換または少なくとも１６個のアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換（複数可）は、以下から成る群から選択される：
（ｉ）Ｙ及びＷから成る群から選択される位置１におけるアミノ酸置換、
（ｉｉ）Ｇ及びＴから成る群から選択される位置２におけるアミノ酸置換、
（ｉｉｉ）Ｈとの位置３におけるアミノ酸置換、
（ｉｖ）Ｈとの位置１０におけるアミノ酸置換、
（ｖ）Ｔとの位置１１におけるアミノ酸置換、
（ｖｉ）Ｒとの位置１２におけるアミノ酸置換、
（ｖｉｉ）Ｌ及びＷから成る群から選択される位置１３におけるアミノ酸置換、
（ｖｉｉｉ）Ｅとの位置１５におけるアミノ酸置換、
（ｉｘ）２−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、Ａ、Ｅ、Ｉ、Ｋ、Ｌ及びＱから成る群から選択される位置１６におけるアミノ酸置換、
（ｘ）Ａ、Ｅ、Ｋ、Ｓ及びＴから成る群から選択される位置１７におけるアミノ酸置換、
（ｘｉ）Ａ、Ｅ、Ｌ及びＴから成る群から選択される位置１８におけるアミノ酸置換、
（ｘｉｉ）Ｅとの位置２１におけるアミノ酸置換、
（ｘｉｉｉ）Ｔとの位置２３におけるアミノ酸置換、
（ｘｉｖ）２−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、Ｋ及びＬから成る群から選択される位置２４におけるアミノ酸置換、
（ｘｖ）Ｈとの位置２５におけるアミノ酸置換及び
（ｘｖｉ）ＥＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号４）、ＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号５）、ＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号６）、ＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号７）、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号８）、ＫＲＮＫＮＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号９）、ＫＲＮＫＮＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１０）、ＫＲＮＫＰＰＩＡ−ＯＨ（配列番号１１）、ＫＲＮＫＰＰＰＡ−ＯＨ（配列番号１５０）、ＫＲＮＫＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１２）、ＫＳＳＧＫＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１３）、ＰＥＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１４）、ＰＫＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１５）、ＰＫＳＫＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１６）、ＰＫＳＫＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１７）、ＰＫＳＫＥＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１８）、ＰＫＳＫＥＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１９）、ＰＫＳＫＱＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号２０）、ＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号２１）、ＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号２２）、ＰＲＮＫＮＮＰＰＳ−ＯＨ（配列番号２３）、ＰＳＫＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号２４）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳＥ−ＯＨ（配列番号２５）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号２６）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号２７）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳＳ−ＯＨ（配列番号２８）、ＰＳＳＧＥＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号２９）、ＰＳＳＧＫＫＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３０）、ＰＳＳＧＫＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号３１）、ＰＳＳＧＫＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３２）、ＰＳＳＧＳＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３３）、ＰＳＳＫＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３４）、ＰＳＳＫＥＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３５）、ＰＳＳＫＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３６）、ＰＳＳＫＱＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３７）、ＰＳＳＫＳＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３８）、ＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３９）及びＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号４０）から成る群から選択されるＺ尾部との位置３０におけるアミノ酸置換、ならびに
（ｘｖｉｉ）これらの組み合わせ
（但し、改変アミノ酸配列を有する単離ポリペプチドが選択的グルカゴン受容体アゴニストとして機能する能力を保持するという条件である）。
【００１１】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、配列番号１：
Ｘ１Ｘ２Ｘ３ＧＴＦＴＳＤＸ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３ＬＸ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８ＡＱＥＦＸ２３Ｘ２４Ｘ２５ＬＥＤＥ−Ｚ尾部−（ＯＨ／ＮＨ２）（配列番号１）のコンセンサス配列によって代表されるアミノ酸配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を含み、ここでは、
Ｘ１はＹまたはＷであり、
Ｘ２はＳ、ＧまたはＴであり、
Ｘ３はＱまたはＨであり、
Ｘ１０はＹまたはＨであり、
Ｘ１１はＳまたはＴであり、
Ｘ１２はＫまたはＲであり、
Ｘ１３はＹ、ＬまたはＷであり、
Ｘ１５はＤまたはＥであり、
Ｘ１６はＳ、２−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、Ａ、Ｅ、Ｌ、Ｑ、ＫまたはＩであり、
Ｘ１７はＫ、Ｅ、Ｓ、ＴまたはＡであり、
Ｘ１８はＡ、Ｒ、Ｓ、Ｅ、Ｌ、ＴまたはＹであり、
Ｘ２３はＴまたはＶであり、
Ｘ２４はＫ、Ｉ、ＬまたはＡｉｂであり、
Ｘ２５はＨまたはＷであり、
Ｚ尾部は存在しないか、ＥＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号４）、ＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号５）、ＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号６）、ＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号７）、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号８）、ＫＲＮＫＮＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号９）、ＫＲＮＫＮＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１０）、ＫＲＮＫＰＰＩＡ−ＯＨ（配列番号１１）、ＫＲＮＫＰＰＰＡ−ＯＨ（配列番号１５０）、ＫＲＮＫＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１２）、ＫＳＳＧＫＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１３）、ＰＥＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１４）、ＰＫＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１５）、ＰＫＳＫＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１６）、ＰＫＳＫＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１７）、ＰＫＳＫＥＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１８）、ＰＫＳＫＥＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１９）、ＰＫＳＫＱＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号２０）、ＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号２１）、ＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号２２）、ＰＲＮＫＮＮＰＰＳ−ＯＨ（配列番号２３）、ＰＳＫＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号２４）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳＥ−ＯＨ（配列番号２５）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号２６）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号２７）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳＳ−ＯＨ（配列番号２８）、ＰＳＳＧＥＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号２９）、ＰＳＳＧＫＫＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３０）、ＰＳＳＧＫＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号３１）、ＰＳＳＧＫＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３２）、ＰＳＳＧＳＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３３）、ＰＳＳＫＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３４）、ＰＳＳＫＥＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３５）、ＰＳＳＫＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３６）、ＰＳＳＫＱＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３７）、ＰＳＳＫＳＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３８）、ＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３９）及びＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号４０）から成る群から選択される。
【００１２】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、配列番号２：
Ｘ１Ｘ２Ｘ３ＧＴＦＴＳＤＸ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３ＬＸ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８ＡＱＥＦＶＸ２４ＷＬＥＤＥ−Ｚ尾部−（ＯＨ／ＮＨ２）（配列番号２）のコンセンサス配列によって代表されるアミノ酸配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を含み、ここでは、
Ｘ１はＹまたはＷであり、
Ｘ２はＳまたはＧであり、
Ｘ３はＱまたはＨであり、
Ｘ１０はＹまたはＨであり、
Ｘ１１はＳまたはＴであり、
Ｘ１２はＫまたはＲであり、
Ｘ１３はＹ、ＬまたはＷであり、
Ｘ１５はＤまたはＥであり、
Ｘ１６は２−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、ＡまたはＳであり、
Ｘ１７はＡまたはＫであり、
Ｘ１８はＲ、Ｓ、ＬまたはＹであり、
Ｘ２４はＫ、ＩまたはＡｉｂであり、
Ｘ２５はＨまたはＷであり、
Ｚ尾部は存在しないか、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号２６）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号２７）及びＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号２１）から成る群から選択される。
【００１３】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、配列番号３：
ＹＳＸ３ＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＸ１６Ｘ１７Ｘ１８ＡＱＥＦＶＸ２４ＷＬＥＤＥ−Ｚ尾部−（ＯＨ／ＮＨ２）（配列番号３）のコンセンサス配列によって代表されるアミノ酸配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を含み、ここでは、
Ｘ３はＱまたはＨであり、
Ｘ１６は２−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）またはＡであり、
Ｘ１７はＡまたはＫであり、
Ｘ１８はＲ、ＳまたはＹであり、
Ｘ２４はＫまたはＡｉｂであり、
Ｚ尾部は、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号２７）及びＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号２１）から成る群から選択される。
【００１４】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＹＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号４１）（本明細書では、化合物Ａ１とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＳＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号４２）（本明細書では、化合物Ａ２とも称される）、
ＹＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＡＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号４３）（本明細書では、化合物Ａ３とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶＩＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号４４）（本明細書では、化合物Ａ４とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号４５）（本明細書では、化合物Ａ５とも称される）及び
ＷＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号４６）（本明細書では、化合物Ａ６とも称される）
から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００１５】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＹＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号４１）を含む。いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＳＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号４２）を含む。いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＡＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号４３）を含む。いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶＩＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号４４）を含む。いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号４５）を含む。いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＷＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号４６）を含む。
【００１６】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＹＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号４１）から成る。いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＳＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号４２）から成る。いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＡＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号４３）から成る。いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶＩＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号４４）から成る。いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号４５）から成る。いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＷＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号４６）から成る。
【００１７】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＡＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１４３）（本明細書では、化合物Ａ９７とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＴＲＬＬＥＳＫＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１４４）（本明細書では、化合物Ａ９８とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１４５）（本明細書では、化合物Ａ９９とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥ−ＯＨ（配列番号１４６）（本明細書では、化合物Ａ１００とも称される）、
ＹＧＨＧＴＦＴＳＤＨＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥ−ＯＨ（配列番号１４７）（本明細書では、化合物Ａ１０１とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＷＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥ−ＯＨ（配列番号１４８）（本明細書では、化合物Ａ１０２とも称される）及び
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＡＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１４９）（本明細書では、化合物Ａ１０３とも称される）
から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００１８】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＡＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１４３）（本明細書では、化合物Ａ９７とも称される）を含む。
【００１９】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＴＲＬＬＥＳＫＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１４４）（本明細書では、化合物Ａ９８とも称される）を含む。
【００２０】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１４５）（本明細書では、化合物Ａ９９とも称される）を含む。
【００２１】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥ−ＯＨ（配列番号１４６）（本明細書では、化合物Ａ１００とも称される）を含む。
【００２２】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＧＨＧＴＦＴＳＤＨＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥ−ＯＨ（配列番号１４７）（本明細書では、化合物Ａ１０１とも称される）を含む。
【００２３】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＷＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥ−ＯＨ（配列番号１４８）（本明細書では、化合物Ａ１０２とも称される）を含む。
【００２４】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＡＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１４９）（本明細書では、化合物Ａ１０３とも称される）を含む。
【００２５】
いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１４３〜１４９から成る群から選択されるアミノ酸配列から成る。
【００２６】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、以下から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む：
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＡＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号４７）（本明細書では、化合物Ａ７とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号４８）（本明細書では、化合物Ａ８とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＥＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号４９）（本明細書では、化合物Ａ９とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号５０）（本明細書では、化合物Ａ１０とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＥＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号５１）（本明細書では、化合物Ａ１１とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号５２）（本明細書では、化合物Ａ１２とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号５３）（本明細書では、化合物Ａ１３とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号５４）（本明細書では、化合物Ａ１４とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＳＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号５５）（本明細書では、化合物Ａ１５とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＴＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号５６）（本明細書では、化合物Ａ１６とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＥＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号５７）（本明細書では、化合物Ａ１７とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＷＬＤ（Ａｉｂ）ＡＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号５８）（本明細書では、化合物Ａ１８とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＷＬＤ（Ａｉｂ）ＳＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号５９）（本明細書では、化合物Ａ１９とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＫＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号６０）（本明細書では、化合物Ａ２０とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＥＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号６１）（本明細書では、化合物Ａ２１とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＳＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号６２）（本明細書では、化合物Ａ２２とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＫＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号６３）（本明細書では、化合物Ａ２３とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＫＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号６４）（本明細書では、化合物Ａ２４とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳＳ−ＯＨ（配列番号６５）（本明細書では、化合物Ａ２５とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳＥ−ＯＨ（配列番号６６）（本明細書では、化合物Ａ２６とも称される）、
ＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号６７）（本明細書では、化合物Ａ２７とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号６８）（本明細書では、化合物Ａ２８とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＫＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号６９）（本明細書では、化合物Ａ２９とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＫＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号７０）（本明細書では、化合物Ａ３０とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＥＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号７１）（本明細書では、化合物Ａ３１とも称される）、
ＹＴＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＷＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号７２）（本明細書では、化合物Ａ３２とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＨＳＫＷＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号７３）（本明細書では、化合物Ａ３３とも称される）、
ＹＴＨＧＴＦＴＳＤＨＳＫＷＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号７４）（本明細書では、化合物Ａ３４とも称される）、
ＹＴＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＷＬＤ（Ａｉｂ）ＡＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号７５）（本明細書では、化合物Ａ３５とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＨＳＫＷＬＤ（Ａｉｂ）ＡＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号７６）（本明細書では、化合物Ａ３６とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号７７）（本明細書では、化合物Ａ３７とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＷＬＤＳＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号７８）（本明細書では、化合物Ａ３８とも称される）、
ＹＴＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＷＬＤＳＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号７９）（本明細書では、化合物Ａ３９とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＨＳＫＷＬＤＳＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号８０）（本明細書では、化合物Ａ４０とも称される）、
ＹＴＨＧＴＦＴＳＤＨＳＫＷＬＤＥＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号８１）（本明細書では、化合物Ａ４１とも称される）、
ＹＴＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＷＬＤＳＫＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号８２）（本明細書では、化合物Ａ４２とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＫＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号８３）（本明細書では、化合物Ａ４３とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＱＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号８４）（本明細書では、化合物Ａ４４とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＫＲＮＫＰＰＰＡ−ＯＨ（配列番号８５）（本明細書では、化合物Ａ４５とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＫＲＮＫＰＰＩＡ−ＯＨ（配列番号８６）（本明細書では、化合物Ａ４６とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＫＲＮＫＮＰＰＳ−ＯＨ（配列番号８７）（本明細書では、化合物Ａ４７とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＫＲＮＫＮＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号８８）（本明細書では、化合物Ａ４８とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＲＮＫＮＮＰＰＳ−ＯＨ（配列番号８９）（本明細書では、化合物Ａ４９とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＫＲＮＫＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号９０）（本明細書では、化合物Ａ５０とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＬＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号９１）（本明細書では、化合物Ａ５１とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＩＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号９２）（本明細書では、化合物Ａ５２とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶＬＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号９３）（本明細書では、化合物Ａ５３とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＫＥＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号９４）（本明細書では、化合物Ａ５４とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＫＳＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号９５）（本明細書では、化合物Ａ５５とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＫＳＫＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号９６）（本明細書では、化合物Ａ５６とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＫＳＫＱＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号９７）（本明細書では、化合物Ａ５７とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号９８）（本明細書では、化合物Ａ５８とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＫＱＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号９９）（本明細書では、化合物Ａ５９とも称される）、
ＹＴＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＫＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１００）（本明細書では、化合物Ａ６０とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＳＳＧＫＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１０１）（本明細書では、化合物Ａ６１とも称される）、
ＹＴＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１０２）（本明細書では、化合物Ａ６２とも称される）、
ＹＴＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１０３）（本明細書では、化合物Ａ６３とも称される）、
ＹＴＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＡＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１０４）（本明細書では、化合物Ａ６４とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＫＳＫＥＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１０５）（本明細書では、化合物Ａ６５とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１０６）（本明細書では、化合物Ａ６６とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＡＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１０７）（本明細書では、化合物Ａ６７とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＡＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＫＳＫＥＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１０８）（本明細書では、化合物Ａ６８とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＫＳＫＥＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１０９）（本明細書では、化合物Ａ６９とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１１０）（本明細書では、化合物Ａ７０とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＫＳＫＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１１１）（本明細書では、化合物Ａ７１とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＫＳＫＥＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１１２）（本明細書では、化合物Ａ７２とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１１３）（本明細書では、化合物Ａ７３とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＫＳＫＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１１４）（本明細書では、化合物Ａ７４とも称される）、
ＷＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１１５）（本明細書では、化合物Ａ７５とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＡＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１１６）（本明細書では、化合物Ａ７６とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＴＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１１７）（本明細書では、化合物Ａ７７とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＬＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１１８）（本明細書では、化合物Ａ７８とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＥＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１１９）（本明細書では、化合物Ａ７９とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＡＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１２０）（本明細書では、化合物Ａ８０とも称される）、
ＹＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１２１）（本明細書では、化合物Ａ８１とも称される）、
ＹＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＫＳＫＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１２２）（本明細書では、化合物Ａ８２とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＡＲＡＱＥＦＴＫＷＬＥＤＥＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１２３）（本明細書では、化合物Ａ８３とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＡＲＡＱＥＦＶＫＨＬＥＤＥＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１２４）（本明細書では、化合物Ａ８４とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＫＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１２５）（本明細書では、化合物Ａ８５とも称される）、
ＹＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＫＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１２６）（本明細書では、化合物Ａ８６とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＫＳＳＧＫＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１２７）（本明細書では、化合物Ａ８７とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＫＫＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１２８）（本明細書では、化合物Ａ８８とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＨＬＥＤＥＰＳＳＧＫＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１２９）（本明細書では、化合物Ａ８９とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＡＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＫＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１３０）（本明細書では、化合物Ａ９０とも称される）、
ＷＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＫＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１３１）（本明細書では、化合物Ａ９１とも称される）、
ＷＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＡＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１３２）（本明細書では、化合物Ａ９２とも称される）、
ＷＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＡＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＫＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１３３）（本明細書では、化合物Ａ９３とも称される）、
ＹＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１３４）（本明細書では、化合物Ａ９４とも称される）、
ＹＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＡＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１３５）（本明細書では、化合物Ａ９５とも称される）及び
ＹＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＡＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＫＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１３６）（本明細書では、化合物Ａ９６と称される）。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号４７〜１３６から成る群から選択されるアミノ酸配列から成る。
【００２７】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、配列番号１３７：ＹＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＸ１７ＲＡＱＸ２１ＦＶＸ２４ＷＬＸ２７Ｘ２８Ｔ−ＯＨ（配列番号１３７）のコンセンサス配列によって代表されるアミノ酸配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を含み、ここでは、
Ｘ１７はＫ＊であり、Ｋ＊はＸ２１におけるＥ＊とのラクタム架橋中にあり、
Ｘ２１はＥ＊であり、Ｅ＊はＸ１７におけるＫ＊とのラクタム架橋中にあり、
Ｘ２４はＫまたはＫ＊＊であり、Ｋ＊＊はＸ２８におけるＥ＊＊とのラクタム架橋中にあり、
Ｘ２７はＱまたはＤであり、
Ｘ２８はＥまたはＥ＊＊であり、Ｅ＊＊はＸ２４におけるＫ＊＊とのラクタム架橋中にある。
【００２８】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、ＹＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＫ＊ＲＡＱＥ＊ＦＶＫ＊＊ＷＬＤＥ＊＊Ｔ−ＯＨ（配列番号１３８）（本明細書では、化合物Ａ１０４と称される）及びＹＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＫ＊ＲＡＱＥ＊ＦＶＫ＊＊ＷＬＱＥ＊＊Ｔ−ＯＨ（配列番号１３９）（本明細書では、化合物Ａ１０５と称される）から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１３８及び１３９から成る群から選択されるアミノ酸配列から成る。
【００２９】
本開示の単離ポリペプチドは、ネイティブのヒトグルカゴン分子と比較した場合のグルカゴン受容体選択的類似体の溶解性及び／または安定性、例えば代謝安定性などの特性の維持を可能にするアミノ酸モチーフ、ならびにＧＬＰ−１を超えるグルカゴン選択性などのさらなる特性維持を可能にするアミノ酸モチーフを含む。
【００３０】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドのＣ末端は、血清アルブミン、例えばヒト血清アルブミンに結合する配列を用いて延長される。いくつかの実施形態で本開示の単離ポリペプチドのＣ末端は、ＥＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号４）、ＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号５）、ＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号６）、ＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号７）、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号８）、ＫＲＮＫＮＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号９）、ＫＲＮＫＮＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１０）、ＫＲＮＫＰＰＩＡ−ＯＨ（配列番号１１）、ＫＲＮＫＰＰＰＡ−ＯＨ（配列番号１５０）、ＫＲＮＫＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１２）、ＫＳＳＧＫＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１３）、ＰＥＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１４）、ＰＫＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１５）、ＰＫＳＫＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１６）、ＰＫＳＫＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１７）、ＰＫＳＫＥＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１８）、ＰＫＳＫＥＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１９）、ＰＫＳＫＱＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号２０）、ＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号２１）、ＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号２２）、ＰＲＮＫＮＮＰＰＳ−ＯＨ（配列番号２３）、ＰＳＫＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号２４）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳＥ−ＯＨ（配列番号２５）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号２６）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号２７）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳＳ−ＯＨ（配列番号２８）、ＰＳＳＧＥＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号２９）、ＰＳＳＧＫＫＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３０）、ＰＳＳＧＫＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号３１）、ＰＳＳＧＫＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３２）、ＰＳＳＧＳＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３３）、ＰＳＳＫＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３４）、ＰＳＳＫＥＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３５）、ＰＳＳＫＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３６）、ＰＳＳＫＱＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３７）、ＰＳＳＫＳＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３８）、ＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３９）及びＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号４０）から成る群から選択される配列を用いて延長される。
【００３１】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基のカルボキシル基はアミド化される。いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基のカルボキシル基は修飾されていない。
【００３２】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される単離ポリペプチドは、グルカゴン活性のアゴニストである。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される単離ポリペプチドは、グルカゴン受容体に結合することができる。いくつかの実施形態では、グルカゴン受容体はヒトグルカゴン受容体である。いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、（本明細書に記載の）１ｎＭ〜５００マイクロモル範囲で開始する１１点の曲線を使用するｃＡＭＰアッセイにおいて、約９．０を越える範囲のｐＥＣ５０でヒトグルカゴン受容体に結合する。いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、（本明細書に記載の）１ｎＭ〜５００マイクロモル範囲で開始する１１点の曲線を使用するｃＡＭＰアッセイにおいて、約１１．０を越える範囲のｐＥＣ５０でヒトグルカゴン受容体に結合する。
【００３３】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドはヒトグルカゴン受容体に結合するが、ヒトＧＬＰ−１受容体に実質的に結合しない。本明細書で使用する場合、用語「実質的に結合しない」及びその変形形態は、ヒトＧＬＰ−１受容体に対して低い親和性から親和性なしを示すポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、ヒトＧＬＰ−１受容体に対する同じ単離ポリペプチドの親和性よりも少なくとも１００倍大きい親和性で、ヒトグルカゴン受容体に結合する。好ましい実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、ヒトＧＬＰ−１受容体に対する同じ単離ポリペプチドの親和性よりも少なくとも１，０００倍大きい親和性で、ヒトグルカゴン受容体に結合する。いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、１ｎＭ〜５００マイクロモル範囲で開始する１１点の曲線を使用するｃＡＭＰアッセイにおいて、約９．０を越える範囲のｐＥＣ５０でヒトグルカゴン受容体に結合し、本開示の単離ポリペプチドは、ｃＡＭＰアッセイにおいて、約１０．０未満であるｐＥＣ５０でヒトＧＬＰ−１受容体に結合する。いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、１ｎＭ〜５００マイクロモル範囲で開始する１１点の曲線を使用するｃＡＭＰアッセイにおいて、約１１．０を越える範囲のｐＥＣ５０でヒトグルカゴン受容体に結合し、本開示の単離ポリペプチドは、ｃＡＭＰアッセイにおいて、約９．０未満のｐＥＣ５０でヒトＧＬＰ−１受容体に結合する。
【００３４】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される単離ポリペプチドは、ポリペプチドに結合した異種部分をさらに含むことができる。いくつかの実施形態では、異種部分は、タンパク質、ペプチド、タンパク質ドメイン、リンカー、有機ポリマー、無機ポリマー、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ビオチン、アルブミン、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ＨＳＡ  ＦｃＲｎ結合部分、抗体、抗体のドメイン、抗体断片、単鎖抗体、ドメイン抗体、アルブミン結合ドメイン、酵素、リガンド、受容体、結合ペプチド、非ＦｎＩＩＩスキャフォールド、エピトープタグ、組換えポリペプチドポリマー、サイトカインまたはそのような部分の２つ以上の任意の組み合わせである。
【００３５】
本明細書で提供される単離ポリペプチドは、例えばグルカゴン受容体に結合することによって、グルカゴン受容体アゴニスト活性を示す。本明細書で提供される単離ポリペプチドは、グルカゴン受容体と結合または相互作用する際に、グルカゴン活性を完全にまたは部分的にアゴナイズまたは刺激する。グルカゴン受容体アゴニストとグルカゴン受容体の間の相互作用の際に、グルカゴンによる生物機能の刺激またはモジュレーションは、完全であるか、部分的である。
【００３６】
選択的グルカゴン受容体アゴニストである本開示のこれらの単離ポリペプチドは、単体で、または少なくとも第２の薬剤と組み合わせで、有用である。好ましい実施形態では、第２の薬剤はポリペプチドである。好ましい実施形態では、第２のポリペプチドはインスリン分泌性ペプチドである。例えば、インスリン分泌性ポリペプチドは、エクセナチド、エクセナチドの誘導体、エクセナチドの類似体、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、ＧＬＰ−１の誘導体及びＧＬＰ−１の類似体から成る群から選択される。
【００３７】
好ましい実施形態では、インスリン分泌性ポリペプチドは、エクセナチド、エクセナチドの誘導体またはエクセナチドの類似体である。好ましい実施形態では、エクセナチドは合成エクセナチドである。好ましい実施形態では、合成エクセナチドは、アミノ酸配列Ｈ−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２（配列番号１４２）を含む。
【００３８】
併用療法では、選択的グルカゴン類似体の使用は、グルカゴン及び任意のＧＬＰ−１受容体アゴニストの適切な治療量の用量設定を可能にする。これは、血中グルコースの有害なスパイクなしで、グルカゴン／ＧＬＰ−１アゴニズムの所望の効果（すなわち、体重減少、エネルギー消費の増大）を可能にする。
【００３９】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される単離ポリペプチド及びさらなる薬剤は、単一の治療用組成物に製剤化され、単離ポリペプチド及びさらなる薬剤は同時に投与される。いくつかの実施形態では、単離ポリペプチド及びさらなる薬剤は互いに分離され、例えば、それぞれが別々の治療用組成物に製剤化され、単離ポリペプチド及びさらなる薬剤は同時に投与されるか、単離ポリペプチド及びさらなる薬剤は治療レジメン中の異なる時間に投与される。例えば、単離ポリペプチドはさらなる薬剤の投与より前に投与されるか、単離ポリペプチドはさらなる薬剤の投与の後に投与されるか、単離ポリペプチド及びさらなる薬剤は交互に投与される。本明細書に記載のように、単離ポリペプチド及びさらなる薬剤は単回用量または複数回用量で投与される。
【００４０】
異常なグルカゴン活性によって引き起こされる、異常なグルカゴン活性を特徴とする、もしくは異常なグルカゴン活性と関連する疾患もしくは状態を治療する、そうした疾患もしくは状態の発症を遅らせる、そうした疾患もしくは状態の進行を遅らせる、またはそうした疾患もしくは状態の症状を改善する方法も本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、疾患または状態は２型糖尿病である。
【００４１】
本開示の単離ポリペプチドまたは本明細書に記載の任意の医薬組成物をそれらを必要とする対象に投与することによる、代謝障害の治療方法も本明細書で提供される。
【００４２】
本開示の単離ポリペプチドまたは本明細書に記載の任意の医薬組成物をそれらを必要とする対象に投与することによる、肥満の治療方法も本明細書で提供される。
【００４３】
本開示の単離ポリペプチドまたは本明細書に記載の任意の医薬組成物をそれらを必要とする患者に投与することによって、患者における血中グルコースの上昇と関連する代謝疾患もしくは障害を治療する、そうした代謝疾患もしくは障害を予防する、そうした代謝疾患もしくは障害の発症を遅らせる、そうした代謝疾患もしくは障害の進行を遅らせる及び／またはそうした代謝疾患もしくは障害の症状改善する方法も本明細書で提供される。
【００４４】
グルカゴン受容体におけるアゴニズムが所望される疾患もしくは障害を治療する、そうした疾患もしくは障害を予防する、そうした疾患もしくは障害の発症を遅らせる、そうした疾患もしくは障害の進行を遅らせる、及び／またはそうした疾患もしくは障害の症状を改善する方法も本明細書で提供され、そうした疾患もしくは障害は、例えば、非限定例として、慢性疼痛、血友病及び他の血液障害、内分泌障害、代謝障害、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、アルツハイマー病、心血管疾患、無自覚性低血糖、拘束性肺疾患、慢性閉塞性肺疾患、脂肪萎縮症、メタボリックシンドローム、白血病、肝炎、腎不全、自己免疫疾患（例えば、グレーブス病、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症及び関節リウマチ）、ショック及び／または消耗性障害、膵炎ならびに神経性の障害及び疾患、例えばパーキンソン病である。
【００４５】
長期にわたる治療（複数可）を必要とする感染症を治療する、そうした感染症を予防する、そうした感染症の発症を遅らせる、そうした感染症の進行を遅らせる、及び／またはそうした感染症の症状を改善する方法も本明細書で提供される。
【００４６】
本明細書に開示される方法では、本開示の単離ポリペプチド及び／または本明細書に記載の医薬組成物は、単回または複数回用量のいずれかで、単体で、または医薬的に許容される担体及び／または賦形剤及び／またはポリマー及び／または有機溶媒と組み合わせて投与される。
【００４７】
本発明による医薬組成物は、適切な担体とともに本開示のポリペプチドを含むことができる。これらの医薬組成物を、キット、例えば診断キットなどに含めることができる。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】ヒトグルカゴン、ＧＬＰ−１（７−３７）及び２つのグルカゴン受容体選択的ペプチドアゴニストによる、ヒトグルカゴン受容体（ＧＣＧＲ）及びヒトＧＬＰ−１受容体（ＧＬＰ−１Ｒ）におけるペプチド受容体活性化プロファイルを示す、一連のグラフである。図１Ａは、化合物Ａ２及び化合物Ａ１と本明細書で言及するペプチドならびにグルカゴンはＧＣＧＲに対してほぼ等効能であるが、ＧＬＰ−１（７−３７）ははるかに低い効能でＧＣＧＲを活性化することを示す。図１Ｂは、図１Ａの結果と対照的に、ペプチド化合物Ａ２及び化合物Ａ１はＧＬＰ−１Ｒに対して不活性であることを示し、これは、ＧＣＧＲ選択的アゴニストとしてのペプチド化合物Ａ２及び化合物Ａ１のプロファイルを示すものである。
【図２Ａ】０．３ｍｇ／ｋｇ用量での３時間の静脈内注入後の雄のラットにおける様々なグルカゴン類似体の平均血漿濃度対時間のプロットを示す一連のグラフ及び表である。図２Ａは、化合物Ａ９９（配列番号１４５）、化合物Ａ１０２（配列番号１４８）、化合物Ａ９８（配列番号１４４）、化合物Ａ１００（配列番号１４６）及び化合物Ａ１０１（配列番号１４７）と本明細書で言及するグルカゴン類似体を示し、ｎ＝３〜６であり、グラフ中のエラーバーは標準誤差を示し、表中のＣＬ値を平均±標準誤差（ｎ＝３〜６）として示す。
【図２Ｂ】０．３ｍｇ／ｋｇ用量での３時間の静脈内注入後の雄のラットにおける様々なグルカゴン類似体の平均血漿濃度対時間のプロットを示す一連のグラフ及び表である。図２Ｂは、化合物Ａ２、化合物Ａ１、化合物Ａ５、化合物Ａ６、化合物Ａ４及び化合物Ａ３と本明細書で言及するグルカゴン類似体を示し、ｎ＝３〜５であり、グラフ中のエラーバーは標準誤差を示し、表中のＣＬ値を平均±標準誤差（ｎ＝３〜５）として示す。
【図３Ａ】１３日後のＤＩＯラットの体重変化によって測定した場合の様々なグルカゴン類似体の効力を示す一連のグラフである。具体的には、図３Ａは、単体で（すなわち単独で）またはエキセンディン−４と組み合わせて投与される場合の、本明細書で化合物Ａ１０４と称されるグルカゴン類似体の効力を示す。すべてのグラフについて、ビヒクル対照と比較してｐ＜０．０５である。
【図３Ｂ】１３日後のＤＩＯラットの体重変化によって測定した場合の様々なグルカゴン類似体の効力を示す一連のグラフである。図３Ｂは、化合物Ａ２と本明細書で言及するグルカゴン類似体の効力を示す。すべてのグラフについて、ビヒクル対照と比較してｐ＜０．０５である。
【図３Ｃ】１３日後のＤＩＯラットの体重変化によって測定した場合の様々なグルカゴン類似体の効力を示す一連のグラフである。図３Ｃは、化合物Ａ１と本明細書で言及するグルカゴン類似体の効力を示す。すべてのグラフについて、ビヒクル対照と比較してｐ＜０．０５である。
【図４Ａ】本明細書で化合物Ａ１０４と称される循環ペプチドグルカゴンの類似体の化学構造の概略図である。
【図４Ｂ】本明細書で化合物Ａ１０５と称される循環ペプチドグルカゴンの類似体の化学構造の概略図である。
【図５】エクセナチド（丸）及びＧＬＰ−１（三角形）のＸ軸の静脈内注入速度に対してＹ軸に定常状態の血漿濃度をプロットし、これらの相関をイヌリン（糸球体濾過によってクリアランスされる）のものと比較するグラフである。図５のデータはエクセナチドの定常状態の血漿濃度がイヌリンのものに近づき、エクセナチドが主に糸球体濾過によってクリアランスされることと矛盾がないことを示す。
【図６】エクセナチド（丸）及びＧＬＰ−１（三角形）に加えてグルカゴン（逆三角形）ならびに化合物Ａ１及びＡ２（グルカゴン類似体、正方形）のＸ軸の静脈内注入速度に対してＹ軸に定常状態血漿濃度をさらにプロットする図５のグラフである。これらの相関は、（糸球体濾過速度の推定値として）イヌリンに対するものと比較して示される。図６のデータは、化合物Ａ１及びＡ２の定常状態の血漿濃度がイヌリンのものに近づき、これらの化合物が主に糸球体濾過によってクリアランスされることと矛盾がないことを示す。
【図７】グルカゴン、化合物Ａ１、Ａ２及びＡ３（ＧＦＲに最も近い３点）ならびに他のグルカゴン類似体に対するクリアランス値をプロットする図である。クリアランス値がｙ軸に沿って減少することに注意されたい。比較のために、上の破線（ＧＦＲに近い）はエクセナチドに対するクリアランス速度を示し、下の破線（ＧＦＲから遠い）はグルカゴンに対するクリアランス速度を示す。図７は、化合物Ａ１、Ａ２及びＡ３を含めたある種のグルカゴン類似体のクリアランスがエクセナチド及びグルカゴンのものより低いことを示す。
【図８】エクセナチドまたは化合物Ａ１のいずれかの皮下投与際の雄のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ系ラットについての体重減少の用量依存性を比較するグラフである。
【図９】化合物Ａ１、Ａ２またはＡ３の皮下投与の際の雄のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ系ラットについての体重減少の用量依存性を比較するグラフである。
【図１０】様々な用量で２７日間にわたるエクセナチド、グルカゴン（「ＧＣＧ」）類似体、化合物Ａ１またはエクセナチドとＧＣＧ類似体の組み合わせの投与後のＤＩＯ  ＬＥラットにおける体重減少を比較するグラフである。
【図１１】図１０に示すデータを別の方法として示す棒グラフである。
【図１２】化合物Ａ１０４を単体でまたはエクセナチドと組み合わせて投与してから１４日後のズッカー糖尿病肥満（ＺＤＦ）ラットにおける血清トリグリセリドレベルを比較するグラフである。
【図１３】様々な用量の化合物Ａ１０４を投与してから１４日後のズッカー糖尿病肥満（ＺＤＦ）ラットにおける血清肝脂肪量及び肝重量を比較するグラフである。肝重量は白丸として左Ｙ軸にプロットされることに注意されたい。肝脂肪は黒三角形として右Ｙ軸にプロットされる。
【図１４】エクセナチドまたはグルカゴン類似体の継続投与の際のＤＩＯ  ＬＥラットにおける体重減少の３−Ｄ描写を示す図である。
【図１５】エクセナチド／グルカゴン類似体の組み合わせの継続投与の際のＤＩＯ  ＬＥラットにおける体重減少の３−Ｄ評価を示す図である。
【図１６】固定比率のエクセナチド／グルカゴン類似体の組み合わせの継続投与の際のＤＩＯ  ＬＥラットにおける体重減少の３−Ｄ評価を示す図である。
【図１７】様々な固定比率のエクセナチド／グルカゴン類似体の組み合わせの、薬物の単位総量あたりの効果と定義されるインビボ効能のグラフ的評価を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００４９】
本発明は、グルカゴン受容体選択的類似体である単離ポリペプチド及びそのペプチド誘導体に関する。グルカゴンは膵臓で生成され、グルカゴン受容体（「ＧＣＧＲ」）と相互作用する。いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは選択的グルカゴン受容体アゴニストである。いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、グルカゴン受容体に結合する。
【００５０】
定義
本明細書で使用される術語は、特定の実施形態を説明することのみを目的とし、制限することを意図したものではないことを理解されたい。本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用する場合、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈において別段明記しない限り、複数の指示物を含む。したがって、例えば、「１つの溶媒（ａ  ｓｏｌｖｅｎｔ）」への言及は、２つ以上のそのような溶媒の組み合わせを含み、「１つのペプチド（ａ  ｐｅｐｔｉｄｅ）」への言及は、１つまたは複数のペプチドまたはペプチドの混合物を含み、「１つの薬物（ａ  ｄｒｕｇ）」への言及は、１つまたは複数の薬物を含み、「浸透圧性送達装置（ａｎ  ｏｓｍｏｔｉｃ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｄｅｖｉｃｅ）」への言及は、１つまたは複数の浸透圧性送達装置を含むなどである。特に記載のない限り、または文脈から明らかでない限り、本明細書で使用する場合、用語「または」は、包括的であり、「または」と「及び」の両方をカバーすると理解される。 
【００５１】
特に記載のない限り、または文脈から明らかでない限り、本明細書で使用する場合、用語「約」は、当技術分野で通常の許容誤差の範囲内、例えば、平均の２標準偏差内と理解される。約は、記載される値の１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％、０．０５％または０．０１％内と理解され得る。文脈から特に明らかでない限り、本明細書で提供されるすべての数値は、用語「約」によって修飾される。
【００５２】
特に記載のない限り、または文脈から明らかでない限り、本明細書で使用する場合、用語「実質的に」は、狭い範囲内の変動または当技術分野で通常の許容誤差と理解される。実質的には、記載される値の５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％、０．０５％、０．０１％または０．００１％内と理解され得る。
【００５３】
別段定義されない限り、本明細書で使用するすべての技術用語及び科学用語は、本発明が属する分野の当業者が一般に理解するものと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと同様または同等の他の方法及び材料を本発明の実施において使用することができるが、好ましい材料及び方法は本明細書に記載される。
【００５４】
本発明の説明及び請求において、次の術語は、以下に述べる定義に従って使用される。
【００５５】
用語「薬物」、「治療剤」及び「有益な薬剤」は、互換的に使用されて、対象に送達されて所望の有益効果をもたらす任意の治療的に活性な物質を指す。本発明の一実施形態では、薬物はポリペプチドである。本発明の別の実施形態では、薬物は小分子、例えば、アンドロゲンまたはエストロゲンなどのホルモンである。本発明の装置及び方法は、タンパク質、小分子及びこれらの組み合わせの送達によく適している。
【００５６】
用語「ペプチド」、「ポリペプチド」及び「タンパク質」は本明細書で互換的に使用され、典型的には、２つ以上のアミノ酸（例えば、最も典型的にはＬ−アミノ酸であるが、例えば、Ｄ−アミノ酸、修飾アミノ酸、アミノ酸類似体及びアミノ酸模倣体も含める）の鎖を含む分子を指す。ペプチドは、天然に存在していてもよいし、合成的に生成されてもよいし組換えで発現されてもよい。ペプチドは、アミノ酸鎖を修飾するさらなる基、例えば、翻訳後修飾によって付加された官能基を含むこともできる。翻訳後修飾の例としては、限定されないが、アセチル化、アルキル化（メチル化を含める）、ビオチン化、グルタミル化、グリシル化、グリコシル化、イソプレニル化、リポイル化、ホスホパンテテイニル化、リン酸化、セレン化及びＣ末端アミド化が挙げられる。用語ペプチドは、アミノ末端及び／またはカルボキシ末端の修飾を含むペプチドも含む。末端アミノ基の修飾としては、限定されないが、デスアミノ、Ｎ−低級アルキル、Ｎ−ジ−低級アルキル及びＮ−アシル修飾が挙げられる。末端カルボキシ基の修飾としては、限定されないが、アミド、低級アルキルアミド、ジアルキルアミド及び低級アルキルエステル修飾（例えば、ここでは、低級アルキルはＣ１〜Ｃ４アルキルである）が挙げられる。用語ペプチドは、限定されないが、上記のもののような、アミノ末端とカルボキシ末端の間にあるアミノ酸の修飾を含む。一実施形態では、ペプチドは、小分子薬物を付加することによって修飾することができる。
【００５７】
ペプチド鎖の一方の端の末端アミノ酸は、典型的には、遊離アミノ基を有する（すなわち、アミノ末端）。この鎖の他方の端の末端アミノ酸は、典型的には、遊離カルボキシル基を有する（すなわち、カルボキシ末端）。典型的には、ペプチドを構成するアミノ酸は、ペプチドのアミノ末端で始まり、カルボキシ末端の方向に増加する順序で番号付けされる。
【００５８】
本明細書で使用する場合、フレーズ「アミノ酸残基」は、アミド結合またはアミド結合の模倣型によってペプチド中に組み込まれるアミノ酸を指す。
【００５９】
本明細書で使用する場合、用語「インスリン分泌性」は、典型的には、化合物、例えばペプチドが、インスリンの生成及び／または活性を刺激するか、これらに影響を及ぼす能力を指す（例えば、インスリン分泌性ホルモン）。そのような化合物は、典型的には、対象におけるインスリンの分泌または生合成を刺激するか、これらに影響を及ぼす。したがって、「インスリン分泌性ペプチド」は、インスリンの分泌または生合成に刺激するか、これらに影響を及ぼすことができるアミノ酸含有分子である。
【００６０】
本明細書で使用する場合、用語「インスリン分泌性ペプチド」には、限定されないが、グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）ならびにそれらの誘導体及び類似体、エクセナチド、配列番号１のアミノ酸配列を有するエクセナチドならびにそれらの誘導体及び類似体が含まれる。
【００６１】
本明細書で使用する場合、フレーズ「インクレチン模倣物」には、限定されないが、ＧＬＰ−１ペプチド、ＧＬＰ−１のペプチド誘導体、ＧＬＰ−１のペプチド類似体、エクセナチド、配列番号１のアミノ酸配列を有するエクセナチド、エクセナチドペプチド、エクセナチドのペプチド誘導体及びエクセナチドのペプチド類似体が含まれる。インクレチン模倣物の好ましい例としては、エクセナチド、エキセンディン−４（天然に存在する形態のエクセナチドであり、配列番号１のアミノ酸配列を有する）のアミノ酸配列を有するエクセナチド、エクセナチド−ＬＡＲ、リキシセナチド、ＧＬＰ−１（７−３６）、リラグルチド、セマグルチド、デュラグルチド、アルビグルチド及びタスポグルチドが挙げられる。インクレチン模倣物は、本明細書では「インスリン分泌性ペプチド」とも称される。文献において、「ＧＬＰ−１受容体アゴニスト」として、ＧＬＰ−１受容体を標的にするインクレチン模倣物も知られている。
【００６２】
本明細書で使用する場合、用語「エクセナチド」には、限定されないが、エクセナチド、配列番号１のアミノ酸配列を有するエクセナチド、ネイティブのエキセンディン−４、エクセナチドペプチド、エクセナチドペプチド類似体及びエクセナチドペプチド誘導体が含まれる。
【００６３】
用語「ＧＬＰ−１」は、主に回腸及び結腸に位置するＬ−細胞が産生し、程度は低いが十二指腸及び空腸のＬ−細胞が産生するポリペプチドを指す。ＧＬＰ−１はβ細胞のＧ結合タンパク質受容体に対する調節ペプチドであり、アデニルシクラーゼ活性及びｃＡＭＰの産生を介して、腸から吸収される栄養素に対するインスリン応答を刺激する［Ｂａｇｇｉｏ  ２００７，“Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｉｎｃｒｅｔｉｎｓ：ＧＬＰ−１  ａｎｄ  ＧＩＰ，”Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．１３２（６）：２１３１−５７、Ｈｏｌｓｔ  ２００８，“Ｔｈｅ  ｉｎｃｒｅｔｉｎ  ｓｙｓｔｅｍ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｒｏｌｅ  ｉｎ  ｔｙｐｅ  ２  ｄｉａｂｅｔｅｓ  ｍｅｌｌｉｔｕｓ，”Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．２９７（１−２）：１２７−３６］。ＧＬＰ−１Ｒアゴニズムの効果は多様である。ＧＬＰ−１は、内在性グルコース依存性インスリン分泌を増強すること、β細胞にグルコース受容能力を与え、ＧＬＰ−１に対して感受性にすること、グルカゴン放出を抑制すること、第１相及び第２相のインスリン分泌を回復させること、胃内容排出を遅くすること、食物摂取を低下させること、ならびに満腹度を増大させることによって、グルコース恒常性を維持する［Ｈｏｌｓｔ  ２００８  Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、Ｋｊｅｍｓ  ２００３“Ｔｈｅ  ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ  ｏｆ  ＧＬＰ−１  ｏｎ  ｇｌｕｃｏｓｅ−  ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ：ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｎ  ｂｅｔａ−ｃｅｌｌ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｔｙｐｅ  ２  ａｎｄ  ｎｏｎｄｉａｂｅｔｉｃ  ｓｕｂｊｅｃｔｓ”，Ｄｉａｂｅｔｅｓ，ｖｏｌ．５２（２）：３８０−８６、Ｈｏｌｓｔ  ２０１３“Ｉｎｃｒｅｔｉｎ  ｈｏｒｍｏｎｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｓａｔｉａｔｉｏｎ  ｓｉｇｎａｌ”，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｏｂｅｓ（Ｌｏｎｄ），ｖｏｌ．３７（９）：１１６１−６９、Ｓｅｕｆｅｒｔ  ２０１４，“Ｔｈｅ  ｅｘｔｒａ−ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ＧＬＰ−１  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｇｏｎｉｓｔｓ：ａ  ｆｏｃｕｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ，ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ａｎｄ  ｃｅｎｔｒａｌ  ｎｅｒｖｏｕｓ  ｓｙｓｔｅｍｓ”，Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｏｂｅｓ  Ｍｅｔａｂ，ｖｏｌ．１６（８）：６７３−８８］。ＧＬＰ−１の作用様式を考慮すると、低血糖の危険性は最低限である。
【００６４】
用語「グルカゴン」は、膵臓のアルファ細胞が産生し、ＧＣＧＲと相互作用する２９アミノ酸のペプチドホルモンを指す。グルカゴンのアミノ酸配列はＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＭＮＴ−ＯＨ（配列番号１４０）である。
【００６５】
本明細書で使用する場合、用語「グルカゴン類似体」は、グルカゴンに対する構造的類似性を含意し、用語「グルカゴン受容体アゴニスト」は、機能的に、グルカゴン受容体のアゴニストである化合物を説明する。用語「グルカゴン類似体」及び「グルカゴン受容体アゴニスト」は二者択一的に使用されて、本明細書に開示されるペプチドを説明する。 
【００６６】
グルカゴンは、ペプチドホルモンＧＬＰ−１、ＧＬＰ−２、オキシントモジュリン、グリセンチン及び組織特異的プロセシングによるグリセンチン関連膵臓ポリペプチドの前駆体としても作用する１５８アミノ酸のプレ−プログルカゴンペプチドから生じる。グルカゴンは、前駆体ペプチドのアミノ酸残基３３〜６１に対応し、主に肝臓中に位置するクラスＢ７回膜貫通Ｇタンパク質結合受容体との相互作用を介して作用する。免疫染色によって、腎臓、消化管、心臓、脾臓、脳、脂肪細胞及びリンパ芽球においてグルカゴン受容体の存在が示された。低血中グルコースレベルに応答して、グルカゴンは放出され、グリコーゲン分解及び糖新生を介して、肝臓のグルコース生産を刺激する。グルカゴンはインスリンのグルコース低下効果の対立物として作用し、２つのホルモン間のフィードバックシステムによる厳密な調節によって、効果的なグルコース恒常性が可能になる。
【００６７】
血中グルコースレベルに対するその効果に加えて、グルカゴンはエネルギー消費及び熱産生を増大させることも知られている。シグナリングの増大は、トリグリセリド、遊離脂肪酸、アポリポタンパク質及び胆汁酸代謝の調節に対して直接の効果がある。グルカゴンの現在の治療的使用は、低血糖エピソードに対するレスキュー剤としてのその使用に主に着目している。しかし、最近の研究は、エネルギーバランス及び脂質代謝に影響を及ぼすホルモンの能力を活用して、様々な代謝障害に対する潜在的な治療をもたらしている。
【００６８】
グルカゴンの不十分な溶解性（水溶液または生理食塩水緩衝液中で＜１．０ｍｇ／ｍｌ）が、連続注入による長期にわたる研究の機会を妨げてきた。グルカゴンの溶解性ならびにｃＡＭＰアッセイで決定したグルカゴン受容体（ＧＬＵＲ）及びＧＬＰ１に対するｐＥＣ５０値の概要を以下の表１に示す：
【表１】
2019520329.tif 000003
【００６９】
本明細書で使用する場合、用語「ビヒクル」は化合物、例えば薬物または薬物を含む粒子を輸送するのに使用される媒体を指す。本発明のビヒクルは、典型的には、ポリマー及び溶媒などの成分を含む。本発明の懸濁ビヒクルは、典型的には、薬物粒子製剤をさらに含む懸濁製剤を調製するのに使用される溶媒及びポリマーを含む。
【００７０】
本明細書で使用する場合、フレーズ「相分離」は、懸濁ビヒクルが水性環境に接触する場合のような、懸濁ビヒクルにおける複数の相（例えば、液相及びゲル相）の形成を指す。本発明のいくつかの実施形態では、懸濁ビヒクルは、およそ１０％未満の水を有する水性環境に接触する際に相分離を示すように製剤化される。
【００７１】
本明細書で使用する場合、フレーズ「単相」は、全体にわたって物理的及び化学的に均一な、固体、半固体または液体の均質な系を指す。
【００７２】
本明細書で使用する場合、用語「分散される」は、化合物、例えば薬物粒子製剤を懸濁ビヒクル中に溶解すること、分散させること、懸濁させること、または分配することを指す。
【００７３】
本明細書で使用する場合、フレーズ「化学的に安定的」は、化学的経路、例えば脱アミド（通常、加水分解による）、凝集または酸化によって一定期間にわたって生成される、許容されるパーセンテージの分解産物が製剤中に形成されることを指す。
【００７４】
本明細書で使用する場合、フレーズ「物理的に安定」は、許容されるパーセンテージの凝集物（例えば、二量体及び他の高分子量生成物）が製剤中に形成されることを指す。さらに、物理的に安定な製剤は、例えば液体から固体または非結晶形から結晶形のように、その物理的状態を変えることがない。
【００７５】
本明細書で使用する場合、用語「粘度」は、典型的には、ずり応力対ずり速度の比から決定される値（例えば、Ｃｏｎｓｉｄｉｎｅ，Ｄ．Ｍ．＆  Ｃｏｎｓｉｄｉｎｅ，Ｇ．Ｄ．，Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｖａｎ  Ｎｏｓｔｒａｎｄ，Ｒｅｉｎｈｏｌｄ，Ｎ．Ｙ．，１９８４を参照されたい）を指し、本質的に以下の通りである：
Ｆ／Ａ＝μ＊Ｖ／Ｌ                 （式１）
式中、Ｆ／Ａ＝ずり応力（単位面積あたりの力、
μ＝比例定数（粘度）及び
Ｖ／Ｌ＝層厚あたりの速度（ずり速度）。
【００７６】
この関係から、ずり応力対ずり速度の比は粘度を定める。ずり応力及びずり速度の測定値は、典型的には、選択された条件（例えば、約３７℃の温度）下で行われる平行板流動測定法を使用して決定される。粘度決定の他の方法としては、粘度計、例えば、キャノン・フェンスケ粘度計、キャノン・フェンスケ不透明溶液のためのウベローデ粘度計またはオストワルド粘度計を使用する動粘度の測定が挙げられる。一般に、本発明の懸濁ビヒクルは、その中に懸濁している粒子製剤が貯蔵の間に沈殿するのを防ぐのに十分であり、且つ送達方法で、例えば埋め込み式の薬物送達装置で使用するのに十分である粘度を有する。
【００７７】
本明細書で使用する場合、用語「非水性」は、典型的には約１０ｗｔ％以下、例えば、約７ｗｔ％以下、約５ｗｔ％以下及び／または約４ｗｔ％未満の、例えば懸濁製剤の全体の水分含量を指す。さらに、本発明の粒子製剤は約１０ｗｔ％未満、例えば約５ｗｔ％未満の残留水分を含む。
【００７８】
本明細書で使用する場合、用語「対象」は、限定されないが、ヒト及び他の霊長類、例えば非ヒト霊長類、例えば、アカゲザル及び他のサル種ならびにチンパンジー及び他の類人猿種；家畜、例えば、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ及びウマ；飼育哺乳動物、例えば、イヌ及びネコ；実験動物、例えばげっ歯類、例えば、マウス、ラット及びモルモット；鳥、例えば、飼育鳥、野生の鳥及び猟鳥、例えば、ニワトリ、シチメンチョウ及び他のキジ目の鳥、アヒル、ガチョウなどを含めた、脊索動物亜門の任意のメンバーを指す。この用語は、特定の年齢または性別を意味しない。したがって、成体個体及び新生個体の両方がカバーされることが意図される。
【００７９】
本明細書で使用する場合、用語「浸透圧性送達装置」は、典型的には、対象への薬物（例えば、単離されたグルカゴン特異的アゴニストポリペプチド）の送達に使用される装置を指し、ここでは、装置は、例えば、薬物（例えば、単離されたグルカゴン特異的アゴニストポリペプチド）及び浸透圧剤配合物を含む懸濁製剤を含む内腔を有する（例えばチタン合金から作られた）リザーバーを含む。内腔に位置するピストンアセンブリーは、浸透圧剤配合物から懸濁製剤を分離する。半透膜は、浸透圧剤配合物に隣接する、リザーバーの第１の遠位端に位置し、拡散モデレーター（これは懸濁製剤が装置から出る送達オリフィスを規定する）は、懸濁製剤に隣接する、リザーバーの第２の遠位端に位置する。典型的には、浸透圧性送達装置は、例えば、真皮下または皮下（例えば、上腕の内側、外側または後ろ側及び腹部領域）において対象内に埋め込まれる。例示的浸透圧性送達装置は、ＤＵＲＯＳ（登録商標）（ＡＬＺＡ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ、Ｃａｌｉｆ．）送達装置である。「浸透圧性送達装置」に同義の用語の例としては、限定されないが、「浸透圧性薬物送達装置」、「浸透圧性薬物送達システム」、「浸透圧性装置」、「浸透圧性送達装置」、「浸透圧性送達システム」、「浸透圧ポンプ」、「埋め込み式薬物送達装置」、「薬物送達システム」、「薬物送達装置」、「埋め込み式浸透圧ポンプ」、「埋め込み式薬物送達システム」及び「埋め込み式送達システム」が挙げられる。「浸透圧性送達装置」に関する他の用語は当技術分野で既知である。
【００８０】
本明細書で使用する場合、用語「連続送達」は、典型的には、浸透圧性送達装置から埋め込み部位の近くの組織、例えば、真皮下及び皮下組織への薬物の実質的に連続的な放出を指す。例えば、浸透圧性送達装置は、浸透の原理に基づいて本質的に所定の速度で薬物を放出する。細胞外の流体は、半透膜を通って浸透圧性送達装置に入り、浸透圧性エンジンに直接入り、この浸透圧性エンジンが拡張して、遅く且つ一定の速度の運動でピストンを動かす。ピストンの運動が、拡散モデレーターのオリフィスを介して薬物製剤を放出させる。したがって、浸透圧性送達装置からの薬物の放出は、ゆっくりとした、制御された、一定の速度である。
【００８１】
本明細書で使用する場合、用語「実質的な定常状態送達」は、典型的には、標的濃度で、または標的濃度近くでの一定期間にわたる薬物の送達を指し、ここでは、浸透圧性送達装置から送達される薬物の量は、実質的にゼロ次送達である。活性薬剤（例えば、単離されたグルカゴン特異的類似体）の実質的なゼロ次送達は、送達される薬物の速度が一定であり、送達システムで利用可能な薬物と無関係であることを意味し、例えば、ゼロ次送達については、送達される薬物の速度が時間に対してグラフ化され、ラインがデータに適合される場合、標準的な方法（例えば、線形回帰）によって決定した場合に、ラインはおよそゼロの傾きを有する。
【００８２】
本明細書で使用する場合、フレーズ「薬物半減期」は、薬物がその濃度の半分まで血漿から排除されるのにどれくらい時間がかかるかを指す。薬物の半減期は、通常、注射によって、または静脈内に投与される場合に、薬物がどのように劣化するかをモニターすることによって測定される。薬物は、通常、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、クロマトグラフィー方法、電気化学発光（ＥＣＬ）アッセイ、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）または免疫酵素サンドイッチアッセイ（ＩＥＭＡ）を使用して検出される。
【００８３】
用語「μｇ」及び「ｍｃｇ」及び「ｕｇ」は、「マイクログラム」を意味すると理解される。同様に、用語「μｌ」及び「ｕＬ」は「マイクロリットル」を意味すると理解され、用語「μＭ」及び「ｕＭ」は「マイクロモル」を意味すると理解される。
【００８４】
用語「血清」は、物質が検出され得る任意の血液生成物を意味することが意図される。したがって、用語、血清には、少なくとも全血、血清及び血漿が含まれる。例えば、「対象の血清中の［物質］の量」は、「対象の血漿中の［物質］の量」をカバーするであろう。
【００８５】
ベースラインは、（薬物またはプラセボを含む）浸透圧性送達装置の最初の設置の日または前日の最後の評価と定義される。
【００８６】
２．０．０本発明の全体的概要
本発明を詳細に説明する前に、本発明は薬物送達装置の特定のタイプ、薬物の特定の供給源、特定の溶媒、特定のポリマーなどに限定されないことを理解されたい。これは、そのような個々の事柄の使用は、本明細書の教示を考慮して選択され得るからである。本明細書で使用される術語は特定の本発明の実施形態を説明する目的のためだけであり、制限することを意図したものではないことも理解されたい。
【００８７】
第１の態様では、本発明は、グルカゴン受容体選択的類似体である単離ポリペプチド及びそのペプチド誘導体に関する。いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは選択的グルカゴン受容体アゴニストである。いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドはグルカゴン受容体（ＧＣＧＲ）に結合する。
【００８８】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、ヒトグルカゴンのアミノ酸配列：ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＭＮＴ−ＯＨ（配列番号１４０）に基づく改変アミノ酸配列を含み、ここでは、改変アミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸置換、少なくとも２つのアミノ酸置換、少なくとも３つのアミノ酸置換、少なくとも４つのアミノ酸置換、少なくとも５つのアミノ酸置換、少なくとも６つのアミノ酸置換、少なくとも７つのアミノ酸置換、少なくとも８つのアミノ酸置換、少なくとも９つのアミノ酸置換、少なくとも１０個のアミノ酸置換、少なくとも１１個のアミノ酸置換、少なくとも１２個のアミノ酸置換、少なくとも１３個のアミノ酸置換、少なくとも１４個のアミノ酸置換、少なくとも１５個のアミノ酸置換、少なくとも１６個のアミノ酸置換、少なくとも１７個のアミノ酸置換、少なくとも１８個のアミノ酸置換、少なくとも１９個のアミノ酸置換、少なくとも２０個のアミノ酸置換、少なくとも２１個のアミノ酸置換、少なくとも２２個のアミノ酸置換、少なくとも２３個のアミノ酸置換、少なくとも２４個のアミノ酸置換、少なくとも２５個のアミノ酸置換、少なくとも２６個のアミノ酸置換、少なくとも２７個のアミノ酸置換、少なくとも２８個のアミノ酸置換及び／または少なくとも２９個のアミノ酸置換を含み、但し、改変アミノ酸配列を有する単離ポリペプチドが選択的グルカゴン類似体として機能する能力を保持するという条件である。
【００８９】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、ヒトグルカゴンのアミノ酸配列：ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＭＮＴ−ＯＨ（配列番号１４０）に基づく改変アミノ酸配列を含み、ここでは、改変アミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸置換、少なくとも２つのアミノ酸置換、少なくとも３つのアミノ酸置換、少なくとも４つのアミノ酸置換、少なくとも５つのアミノ酸置換、少なくとも６つのアミノ酸置換、少なくとも７つのアミノ酸置換、少なくとも８つのアミノ酸置換、少なくとも９つのアミノ酸置換、少なくとも１０個のアミノ酸置換、少なくとも１１個のアミノ酸置換、少なくとも１２個のアミノ酸置換、少なくとも１３個のアミノ酸置換、少なくとも１４個のアミノ酸置換、少なくとも１５個のアミノ酸置換または少なくとも１６個のアミノ酸置換含み、ここでは、アミノ酸置換（複数可）は、以下から成る群から選択される：
（ｉ）Ｙ及びＷから成る群から選択される位置１におけるアミノ酸置換、
（ｉｉ）Ｇ及びＴから成る群から選択される位置２におけるアミノ酸置換、
（ｉｉｉ）Ｈとの位置３におけるアミノ酸置換、
（ｉｖ）Ｈとの位置１０におけるアミノ酸置換、
（ｖ）Ｔとの位置１１におけるアミノ酸置換、
（ｖｉ）Ｒとの位置１２におけるアミノ酸置換、
（ｖｉｉ）Ｌ及びＷから成る群から選択される位置１３におけるアミノ酸置換、
（ｖｉｉｉ）Ｅとの位置１５におけるアミノ酸置換、
（ｉｘ）２−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、Ａ、Ｅ、Ｉ、Ｋ、Ｌ及びＱから成る群から選択される位置１６におけるアミノ酸置換、
（ｘ）Ａ、Ｅ、Ｋ、Ｓ及びＴから成る群から選択される位置１７におけるアミノ酸置換、
（ｘｉ）Ａ、Ｅ、Ｌ及びＴから成る群から選択される位置１８におけるアミノ酸置換、
（ｘｉｉ）Ｅとの位置２１におけるアミノ酸置換、
（ｘｉｉｉ）Ｔとの位置２３におけるアミノ酸置換、
（ｘｉｖ）２−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、Ｋ及びＬから成る群から選択される位置２４におけるアミノ酸置換、
（ｘｖ）Ｈとの位置２５におけるアミノ酸置換、
（ｘｖｉ）ＥＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号４）、ＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号５）、ＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号６）、ＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号７）、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号８）、ＫＲＮＫＮＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号９）、ＫＲＮＫＮＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１０）、ＫＲＮＫＰＰＩＡ−ＯＨ（配列番号１１）、ＫＲＮＫＰＰＰＡ−ＯＨ（配列番号１５０）、ＫＲＮＫＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１２）、ＫＳＳＧＫＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１３）、ＰＥＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１４）、ＰＫＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１５）、ＰＫＳＫＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１６）、ＰＫＳＫＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１７）、ＰＫＳＫＥＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１８）、ＰＫＳＫＥＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１９）、ＰＫＳＫＱＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号２０）、ＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号２１）、ＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号２２）、ＰＲＮＫＮＮＰＰＳ−ＯＨ（配列番号２３）、ＰＳＫＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号２４）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳＥ−ＯＨ（配列番号２５）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号２６）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号２７）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳＳ−ＯＨ（配列番号２８）、ＰＳＳＧＥＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号２９）、ＰＳＳＧＫＫＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３０）、ＰＳＳＧＫＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号３１）、ＰＳＳＧＫＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３２）、ＰＳＳＧＳＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３３）、ＰＳＳＫＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３４）、ＰＳＳＫＥＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３５）、ＰＳＳＫＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３６）、ＰＳＳＫＱＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３７）、ＰＳＳＫＳＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３８）、ＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３９）及びＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号４０）から成る群から選択されるＺ尾部との位置３０におけるアミノ酸置換、ならびに
（ｘｖｉｉ）これらの組み合わせ
（但し、改変アミノ酸配列を有する単離ポリペプチドが選択的グルカゴン受容体アゴニストとして機能する能力を保持するという条件である）。
【００９０】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、配列番号１：
Ｘ１Ｘ２Ｘ３ＧＴＦＴＳＤＸ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３ＬＸ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８ＡＱＥＦＸ２３Ｘ２４Ｘ２５ＬＥＤＥ−Ｚ尾部−（ＯＨ／ＮＨ２）（配列番号１）のコンセンサス配列によって代表されるアミノ酸配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を含み、ここでは、
Ｘ１はＹまたはＷであり、
Ｘ２はＳ、ＧまたはＴであり、
Ｘ３はＱまたはＨであり、
Ｘ１０はＹまたはＨであり、
Ｘ１１はＳまたはＴであり、
Ｘ１２はＫまたはＲであり、
Ｘ１３はＹ、ＬまたはＷであり、
Ｘ１５はＤまたはＥであり、
Ｘ１６はＳ、２−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、Ａ、Ｅ、Ｌ、Ｑ、ＫまたはＩであり、
Ｘ１７はＫ、Ｅ、Ｓ、ＴまたはＡであり、
Ｘ１８はＡ、Ｒ、Ｓ、Ｅ、Ｌ、ＴまたはＹであり、
Ｘ２３はＴまたはＶであり、
Ｘ２４はＫ、Ｉ、ＬまたはＡｉｂであり、
Ｘ２５はＨまたはＷであり、
Ｚ尾部は存在しないか、ＥＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号４）、ＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号５）、ＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号６）、ＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号７）、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号８）、ＫＲＮＫＮＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号９）、ＫＲＮＫＮＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１０）、ＫＲＮＫＰＰＩＡ−ＯＨ（配列番号１１）、ＫＲＮＫＰＰＰＡ−ＯＨ（配列番号１５０）、ＫＲＮＫＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１２）、ＫＳＳＧＫＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１３）、ＰＥＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１４）、ＰＫＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１５）、ＰＫＳＫＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１６）、ＰＫＳＫＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１７）、ＰＫＳＫＥＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１８）、ＰＫＳＫＥＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１９）、ＰＫＳＫＱＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号２０）、ＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号２１）、ＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号２２）、ＰＲＮＫＮＮＰＰＳ−ＯＨ（配列番号２３）、ＰＳＫＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号２４）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳＥ−ＯＨ（配列番号２５）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号２６）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号２７）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳＳ−ＯＨ（配列番号２８）、ＰＳＳＧＥＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号２９）、ＰＳＳＧＫＫＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３０）、ＰＳＳＧＫＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号３１）、ＰＳＳＧＫＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３２）、ＰＳＳＧＳＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３３）、ＰＳＳＫＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３４）、ＰＳＳＫＥＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３５）、ＰＳＳＫＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３６）、ＰＳＳＫＱＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３７）、ＰＳＳＫＳＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３８）、ＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号３９）及びＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号４０）から成る群から選択される。
【００９１】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、配列番号２：
Ｘ１Ｘ２Ｘ３ＧＴＦＴＳＤＸ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３ＬＸ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８ＡＱＥＦＶＸ２４ＷＬＥＤＥ−Ｚ尾部−（ＯＨ／ＮＨ２）（配列番号２）のコンセンサス配列によって代表されるアミノ酸配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を含み、ここでは、
Ｘ１はＹまたはＷであり、
Ｘ２はＳまたはＧであり、
Ｘ３はＱまたはＨであり、
Ｘ１０はＹまたはＨであり、
Ｘ１１はＳまたはＴであり、
Ｘ１２はＫまたはＲであり、
Ｘ１３はＹ、ＬまたはＷであり、
Ｘ１５はＤまたはＥであり、
Ｘ１６は２−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、ＡまたはＳであり、
Ｘ１７はＡまたはＫであり、
Ｘ１８はＲ、Ｓ、ＬまたはＹであり、
Ｘ２４はＫ、ＩまたはＡｉｂであり、
Ｘ２５はＨまたはＷであり、
Ｚ尾部は存在しないか、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号２６）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号２７）及びＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号２１）から成る群から選択される。
【００９２】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、配列番号３：
ＹＳＸ３ＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＸ１６Ｘ１７Ｘ１８ＡＱＥＦＶＸ２４ＷＬＥＤＥ−Ｚ尾部−（ＯＨ／ＮＨ２）（配列番号３）のコンセンサス配列によって代表されるアミノ酸配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を含み、ここでは、
Ｘ３はＱまたはＨであり、
Ｘ１６は２−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）またはＡであり、
Ｘ１７はＡまたはＫであり、
Ｘ１８はＲ、ＳまたはＹであり、
Ｘ２４はＫまたはＡｉｂであり、
Ｚ尾部は、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号２７）及びＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号２１）から成る群から選択される。
【００９３】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＹＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号４１）（本明細書では、化合物Ａ１とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＳＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号４２）（本明細書では、化合物Ａ２とも称される）、
ＹＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＡＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号４３）（本明細書では、化合物Ａ３とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶＩＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号４４）（本明細書では、化合物Ａ４とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号４５）（本明細書では、化合物Ａ５とも称される）及び
ＷＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号４６）（本明細書では、化合物Ａ６とも称される）
から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００９４】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＹＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号４１）を含む。いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＳＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号４２）を含む。いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＡＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号４３）を含む。いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶＩＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号４４）を含む。いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号４５）を含む。いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＷＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号４６）を含む。
【００９５】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＹＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号４１）から成る。いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＳＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号４２）から成る。いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＡＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号４３）から成る。いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶＩＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号４４）から成る。いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号４５）から成る。いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＷＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号４６）から成る。
【００９６】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、以下から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む：
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＡＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号４７）（本明細書では、化合物Ａ７とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号４８）（本明細書では、化合物Ａ８とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＥＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号４９）（本明細書では、化合物Ａ９とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号５０）（本明細書では、化合物Ａ１０とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＥＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号５１）（本明細書では、化合物Ａ１１とも称される）
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号５２）（本明細書では、化合物Ａ１２とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号５３）（本明細書では、化合物Ａ１３とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号５４）（本明細書では、化合物Ａ１４とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＳＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号５５）（本明細書では、化合物Ａ１５とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＴＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号５６）（本明細書では、化合物Ａ１６とも称される）
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＥＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号５７）（本明細書では、化合物Ａ１７とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＷＬＤ（Ａｉｂ）ＡＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号５８）（本明細書では、化合物Ａ１８とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＷＬＤ（Ａｉｂ）ＳＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号５９）（本明細書では、化合物Ａ１９とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＫＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号６０）（本明細書では、化合物Ａ２０とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＥＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号６１）（本明細書では、化合物Ａ２１とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＳＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号６２）（本明細書では、化合物Ａ２２とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＫＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号６３）（本明細書では、化合物Ａ２３とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＫＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号６４）（本明細書では、化合物Ａ２４とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳＳ−ＯＨ（配列番号６５）（本明細書では、化合物Ａ２５とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳＥ−ＯＨ（配列番号６６）（本明細書では、化合物Ａ２６とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号６７）（本明細書では、化合物Ａ２７とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号６８）（本明細書では、化合物Ａ２８とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＫＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号６９）（本明細書では、化合物Ａ２９とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＫＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号７０）（本明細書では、化合物Ａ３０とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＥＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号７１）（本明細書では、化合物Ａ３１とも称される）、
ＹＴＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＷＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号７２）（本明細書では、化合物Ａ３２とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＨＳＫＷＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号７３）（本明細書では、化合物Ａ３３とも称される）、
ＹＴＨＧＴＦＴＳＤＨＳＫＷＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号７４）（本明細書では、化合物Ａ３４とも称される）、
ＹＴＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＷＬＤ（Ａｉｂ）ＡＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号７５）（本明細書では、化合物Ａ３５とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＨＳＫＷＬＤ（Ａｉｂ）ＡＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号７６）（本明細書では、化合物Ａ３６とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号７７）（本明細書では、化合物Ａ３７とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＷＬＤＳＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号７８）（本明細書では、化合物Ａ３８とも称される）、
ＹＴＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＷＬＤＳＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号７９）（本明細書では、化合物Ａ３９とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＨＳＫＷＬＤＳＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号８０）（本明細書では、化合物Ａ４０とも称される）、
ＹＴＨＧＴＦＴＳＤＨＳＫＷＬＤＥＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号８１）（本明細書では、化合物Ａ４１とも称される）、
ＹＴＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＷＬＤＳＫＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号８２）（本明細書では、化合物Ａ４２とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＫＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号８３）（本明細書では、化合物Ａ４３とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＱＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号８４）（本明細書では、化合物Ａ４４とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＫＲＮＫＰＰＰＡ−ＯＨ（配列番号８５）（本明細書では、化合物Ａ４５とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＫＲＮＫＰＰＩＡ−ＯＨ（配列番号８６）（本明細書では、化合物Ａ４６とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＫＲＮＫＮＰＰＳ−ＯＨ（配列番号８７）（本明細書では、化合物Ａ４７とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＫＲＮＫＮＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号８８）（本明細書では、化合物Ａ４８とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＲＮＫＮＮＰＰＳ−ＯＨ（配列番号８９）（本明細書では、化合物Ａ４９とも称される）、ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＫＲＮＫＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号９０）（本明細書では、化合物Ａ５０とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＬＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号９１）（本明細書では、化合物Ａ５１とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＩＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号９２）（本明細書では、化合物Ａ５２とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶＬＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号９３）（本明細書では、化合物Ａ５３とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＫＥＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号９４）（本明細書では、化合物Ａ５４とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＫＳＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号９５）（本明細書では、化合物Ａ５５とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＫＳＫＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号９６）（本明細書では、化合物Ａ５６とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＫＳＫＱＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号９７）（本明細書では、化合物Ａ５７とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号９８）（本明細書では、化合物Ａ５８とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＫＱＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号９９）（本明細書では、化合物Ａ５９とも称される）、
ＹＴＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＫＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１００）（本明細書では、化合物Ａ６０とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＳＳＧＫＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１０１）（本明細書では、化合物Ａ６１とも称される）、
ＹＴＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１０２）（本明細書では、化合物Ａ６２とも称される）、
ＹＴＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１０３）（本明細書では、化合物Ａ６３とも称される）、
ＹＴＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＡＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１０４）（本明細書では、化合物Ａ６４とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＫＳＫＥＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１０５）（本明細書では、化合物Ａ６５とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１０６）（本明細書では、化合物Ａ６６とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＡＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１０７）（本明細書では、化合物Ａ６７とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＡＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＫＳＫＥＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１０８）（本明細書では、化合物Ａ６８とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＫＳＫＥＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１０９）（本明細書では、化合物Ａ６９とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１１０）（本明細書では、化合物Ａ７０とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＫＳＫＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１１１）（本明細書では、化合物Ａ７１とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＫＳＫＥＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１１２）（本明細書では、化合物Ａ７２とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１１３）（本明細書では、化合物Ａ７３とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＫＳＫＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１１４）（本明細書では、化合物Ａ７４とも称される）、
ＷＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１１５）（本明細書では、化合物Ａ７５とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＡＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１１６）（本明細書では、化合物Ａ７６とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＴＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１１７）（本明細書では、化合物Ａ７７とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＬＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１１８）（本明細書では、化合物Ａ７８とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＥＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１１９）（本明細書では、化合物Ａ７９とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＡＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１２０）（本明細書では、化合物Ａ８０とも称される）、
ＹＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１２１）（本明細書では、化合物Ａ８１とも称される）、
ＹＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＫＳＫＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１２２）（本明細書では、化合物Ａ８２とも称される）、ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＡＲＡＱＥＦＴＫＷＬＥＤＥＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１２３）（本明細書では、化合物Ａ８３とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＡＲＡＱＥＦＶＫＨＬＥＤＥＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１２４）（本明細書では、化合物Ａ８４とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＫＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１２５）（本明細書では、化合物Ａ８５とも称される）、
ＹＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＫＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１２６）（本明細書では、化合物Ａ８６とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＫＳＳＧＫＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１２７）（本明細書では、化合物Ａ８７とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＫＫＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１２８）（本明細書では、化合物Ａ８８とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＨＬＥＤＥＰＳＳＧＫＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１２９）（本明細書では、化合物Ａ８９とも称される）、
ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＡＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＫＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１３０）（本明細書では、化合物Ａ９０とも称される）、
ＷＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＫＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１３１）（本明細書では、化合物Ａ９１とも称される）、
ＷＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＡＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１３２）（本明細書では、化合物Ａ９２とも称される）、
ＷＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＡＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＫＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１３３）（本明細書では、化合物Ａ９３とも称される）、
ＹＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１３４）（本明細書では、化合物Ａ９４とも称される）、
ＹＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＡＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１３５）（本明細書では、化合物Ａ９５とも称される）及び
ＹＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＡＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＫＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１３６）（本明細書では、化合物Ａ９６と称される）。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号４７〜１３６から成る群から選択されるアミノ酸配列から成る。
【００９７】
いくつかの実施形態では、単離ポリペプチドは、化合物Ａ１、化合物Ａ２、化合物Ａ３、化合物Ａ４、化合物Ａ５及び化合物Ａ６から成る群から選択される。いくつかの実施形態では、単離ポリペプチドは化合物Ａ１である。いくつかの実施形態では、単離ポリペプチドは化合物Ａ２である。いくつかの実施形態では、単離ポリペプチドは化合物Ａ３である。いくつかの実施形態では、単離ポリペプチドは化合物Ａ４である。いくつかの実施形態では、単離ポリペプチドは化合物Ａ５である。いくつかの実施形態では、単離ポリペプチドは化合物Ａ６である。
【００９８】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、配列番号１３７：
ＹＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＸ１７ＲＡＱＸ２１ＦＶＸ２４ＷＬＸ２７Ｘ２８Ｔ−ＯＨ（配列番号１３７）
のコンセンサス配列によって代表されるアミノ酸配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を含み、
ここでは、
Ｘ１７はＫ＊であり、Ｋ＊はＸ２１におけるＥ＊とのラクタム架橋中にあり、
Ｘ２１はＥ＊であり、Ｅ＊はＸ１７におけるＫ＊とのラクタム架橋中にあり、
Ｘ２４はＫまたはＫ＊＊であり、Ｋ＊＊はＸ２８におけるＥ＊＊とのラクタム架橋中にあり、
Ｘ２７はＱまたはＤであり、
Ｘ２８はＥまたはＥ＊＊であり、Ｅ＊＊はＸ２４におけるＫ＊＊とのラクタム架橋中にある。
【００９９】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、ＹＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＫ＊ＲＡＱＥ＊ＦＶＫ＊＊ＷＬＤＥ＊＊Ｔ−ＯＨ（配列番号１３８）（本明細書では、化合物Ａ１０４と称される）及びＹＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＫ＊ＲＡＱＥ＊ＦＶＫ＊＊ＷＬＱＥ＊＊Ｔ−ＯＨ（配列番号１３９）（本明細書では、化合物Ａ１０５と称される）から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１３８及び１３９から成る群から選択されるアミノ酸配列から成る。
【０１００】
場合によりスペーサーを介する、いずれかのペプチドへの親油性置換基のコンジュゲーション
いくつかの実施形態では、開示されるペプチドは、それぞれ場合により二価のスペーサーを介して、１つまたは複数の親油性置換基によって場合により置換されている。
【０１０１】
それぞれ場合により二価のスペーサーを介する、開示されるペプチドへの１つまたは複数の親油性置換基のコンジュゲーションは、血清アルブミンへの結合を促進すること、及びコンジュゲートされたペプチドの腎クリアランスの遅延によって、ペプチドの作用を延ばすことが意図される。本出願人は、アルブミンへの親和性及びヒトにおける延長した排除半減期を有するある種の開示されるペプチドが、埋め込み式浸透圧性薬物送達装置を介する開示される投与方法に特に受け入れられることを発見した。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、開示されるペプチドは、皮下投与の後少なくとも約５時間の、ヒトにおける排除半減期（ｔ１／２）を有する。いくつかの実施形態では、開示されるペプチドは、皮下投与の後少なくとも約８時間、１０時間、１２時間、１６時間、２４時間またはそれ以上の、ヒトにおける排除半減期（ｔ１／２）を有する。
【０１０３】
本明細書で使用する場合、「親油性置換基」は、４〜４０個の炭素原子、８〜２５個の炭素原子または１２〜２２個の炭素原子を含有する置換基を含む。親油性置換基は、親油性置換基のカルボキシル基または場合によりスペーサーのアミノ基（このスペーサーは次にこれが結合するアミノ酸（例えば、リジン）残基のアミノ基とアミド結合を形成する）によって、ペプチドのアミノ基（例えば、リジン残基のε−アミノ基）に結合することができる。いくつかの実施形態では、ペプチドは、それぞれ随意のスペーサーを有するまたは有さない３つ、２つまたは好ましくは１つの親油性置換基を含む。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、親油性置換基は、直鎖または分枝アルキル基を含む。いくつかの実施形態では、親油性置換基は直鎖または分枝脂肪酸のアシル基である。いくつかの実施形態では、親油性置換基は式ＣＨ３（ＣＨ２）ｎＣＯ−−のアシル基であり、式中、ｎは４〜３８の整数、４〜２４の整数であり、例えば、ＣＨ３（ＣＨ２）６ＣＯ−−、ＣＨ３（ＣＨ２）８ＣＯ−−、ＣＨ３（ＣＨ２）１０ＣＯ−−、ＣＨ３（ＣＨ２）１２ＣＯ−−、ＣＨ３（ＣＨ２）１４ＣＯ−−、ＣＨ３（ＣＨ２）１６ＣＯ−−、ＣＨ３（ＣＨ２）１８ＣＯ−−、ＣＨ３（ＣＨ２）２０ＣＯ−−またはＣＨ３（ＣＨ２）２２ＣＯ−−である。いくつかの実施形態では、ｎは６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０または２２である。いくつかの実施形態では、親油性置換基は式ＣＨ３（ＣＨ２）１４ＣＯ−−のアシル基である。
【０１０５】
いくつかの実施形態では、親油性置換基は直鎖または分枝脂肪酸のアシル基であり、これは、さらに、１つまたは複数のカルボン酸及び／またはヒドロキサム酸基で置換されている。いくつかの実施形態では、親油性置換基は式ＨＯＯＣ（ＣＨ２）ｍＣＯ−−のアシル基であり、式中、ｍは４〜３８の整数、４〜２４の整数であり、例えば、ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ−−、ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ−−、ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１８ＣＯ−−、ＨＯＯＣ（ＣＨ２）２０ＣＯ−−またはＨＯＯＣ（ＣＨ２）２２ＣＯ−−である。いくつかの実施形態では、親油性置換基はＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ−−である。いくつかの実施形態では、ｍは６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０または２２である。
【０１０６】
いくつかの実施形態では、親油性置換基は二価の「スペーサー」によって親ペプチドに結合している。いくつかの実施形態では、スペーサーは式Ｉの二価の基を含む：
−Ｎ（Ｒ１）（ＣＨＲ２）ｐＣＯ−−［Ｎ（Ｒ３）（（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ）ｑ（ＣＨ２）ＣＯ−−］ｒ
（式Ｉ）
（式中、
各Ｒ１及びＲ３は水素またはＣ１−Ｃ４アルキルであり、
各Ｒ２はＨまたはＣＯ２Ｈであり、
ｐは１、２、３、４、５または６であり、
ｑは１、２または３であり、
ｒは０または１である）。
このスペーサーは、開示されるペプチドのアミノ基と親油性置換基のＣＯ−−基の間に架橋を形成する。
【０１０７】
いくつかの実施形態では、各Ｒ１は水素である。いくつかの実施形態では、各Ｒ３は水素である。いくつかの実施形態では、各Ｒ１及び各Ｒ３は水素である。
【０１０８】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＲ２はＣＯ２Ｈである。いくつかの実施形態では、１つのＲ２はＣＯ２Ｈである。
【０１０９】
いくつかの実施形態では、ｐは１である。いくつかの実施形態では、ｐは２である。いくつかの実施形態では、ｐは３である。いくつかの実施形態では、ｐは４である。いくつかの実施形態では、ｐは５である。いくつかの実施形態では、ｐは６である。
【０１１０】
いくつかの実施形態では、ｑは１である。いくつかの実施形態では、ｑは２である。いくつかの実施形態では、ｑは３である。
【０１１１】
いくつかの実施形態では、ｒは０である。いくつかの実施形態では、ｒは１である。
【０１１２】
いくつかの実施形態では、スペーサーはγ−グルタミル、すなわち、−ＮＨ（ＣＨＣＯ２Ｈ）（ＣＨ２）２ＣＯ−−である。いくつかの実施形態では、スペーサーはγ−アミノブタノイル、すなわち、−ＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯ−−である。いくつかの実施形態では、スペーサーはβ−アスパラギル、すなわち、−ＮＨ（ＣＨＣＯ２Ｈ）（ＣＨ２）ＣＯ−−である。いくつかの実施形態では、スペーサーは−ＮＨ（ＣＨ２）２ＣＯ−−である。いくつかの実施形態では、スペーサーはグリシルである。いくつかの実施形態では、スペーサーはβ−アラニルである。いくつかの実施形態では、以下に記載の配列番号１５１のペプチドが提供され、ここでは、親油性置換基はスペーサーを介してリジンのε−アミノ基に連結している。
【０１１３】
いくつかの実施形態では、スペーサーは−ＮＨＣＨ（ＣＯ２Ｈ）（ＣＨ２）２ＣＯ−−［Ｎ（Ｒ３）（（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ）ｑ（ＣＨ２）ＣＯ−−］ｒである。いくつかの実施形態では、スペーサーは−ＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯ−−［Ｎ（Ｒ３）（（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ）ｑ（ＣＨ２）ＣＯ−−］ｒである。いくつかの実施形態では、スペーサーは−ＮＨＣＨ（ＣＯ２Ｈ）（ＣＨ２）２ＣＯ−ＮＨ（（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ）２（ＣＨ２）ＣＯ−である。いくつかの実施形態では、スペーサーは−ＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯ−ＮＨ（（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ）２（ＣＨ２）ＣＯ−である。いくつかの実施形態では、スペーサーは−ＮＨＣＨ（ＣＯ２Ｈ）ＣＨ２ＣＯ−−［Ｎ（Ｒ３）（（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ）ｑ（ＣＨ２）ＣＯ−−］ｒである。いくつかの実施形態では、スペーサーは−ＮＨ（ＣＨ２）２ＣＯ−−［Ｎ（Ｒ３）（（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ）ｑ（ＣＨ２）ＣＯ−−］ｒである。 
【０１１４】
いくつかの実施形態では、スペーサーはアミノ酸、例えばＬｙｓ、ＧｌｕもしくはＡｓｐまたはジペプチド、例えばＧｌｙ−Ｌｙｓである。いくつかの実施形態では、スペーサーがＬｙｓ、ＧｌｕまたはＡｓｐである場合、スペーサーの１つのカルボキシル基は、開示されるペプチドのアミノ基とアミド結合を形成することができ、スペーサーのアミノ基は、親油性置換基のカルボキシル基とアミド結合を形成することができる。
【０１１５】
いくつかの実施形態では、親油性置換基及びスペーサーは結合して、式ＩＩの構造： 
【化１】
2019520329.tif 000004
を形成する。
【０１１６】
いくつかの実施形態では、親油性置換基及びスペーサーは結合して、式ＩＩＩの構造： 
【化２】
2019520329.tif 000005
を形成する。
【０１１７】
いくつかの実施形態では、各親油性置換基は、場合によりスペーサーを介して、親ペプチドに含まれるリジンのε−アミノ基残基に結合している。
【０１１８】
例えば、いくつかの実施形態では、単離ポリペプチドが提供され、ここでは、単離ポリペプチドは化合物Ａ１〜Ａ１０５から成る群から選択され、単離ポリペプチドは、場合によりスペーサーを介して親油性置換基に共有結合している。
【０１１９】
いくつかの実施形態では、単離ポリペプチドは化合物Ａ１〜Ａ６から成る群から選択され、単離ポリペプチドは、場合によりスペーサーを介して親油性置換基に共有結合している。
【０１２０】
いくつかの実施形態では、単離ポリペプチドは化合物Ａ９７〜Ａ１０３から成る群から選択され、単離ポリペプチドは、場合によりスペーサーを介して親油性置換基に共有結合している。 
【０１２１】
いくつかの実施形態では、親油性置換基は、スペーサーを介して、化合物Ａ１〜Ａ１０５のいずれかのペプチド、例えば、化合物Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、Ａ５またはＡ６のいずれかと共有結合しており、親油性置換基及びスペーサーは式ＩＩのものである。
【０１２２】
いくつかの実施形態では、親油性置換基は、スペーサーを介して、化合物Ａ１〜Ａ１０５のいずれかのペプチド、例えば、化合物Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、Ａ５またはＡ６のいずれかに共有結合しており、親油性置換基及びスペーサーは式ＩＩＩのものである。
【０１２３】
いくつかの実施形態では、親油性置換基は、スペーサーを介して、化合物Ａ１〜Ａ１０５のいずれかのペプチド、例えば、化合物Ａ９７、Ａ９８、Ａ９９、Ａ１００、Ａ１０１、Ａ１０２またはＡ１０３のいずれかに共有結合しており、親油性置換基及びスペーサーは式ＩＩのものである。
【０１２４】
いくつかの実施形態では、親油性置換基は、スペーサーを介して、化合物Ａ１〜Ａ１０５のいずれかのペプチド、例えば、化合物Ａ９７、Ａ９８、Ａ９９、Ａ１００、Ａ１０１、Ａ１０２またはＡ１０３のいずれかに共有結合しており、親油性置換基及びスペーサーは式ＩＩＩのものである。
【０１２５】
いくつかの実施形態では、単離ポリペプチドはリジンを含み、リジンのε−アミノ基は、場合によりスペーサーを介して親油性置換基に共有結合している。
【０１２６】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、配列番号１５１：
Ｘ１ＳＸ３ＧＴＦＴＳＤＸ１０ＳＫＹＬＤＸ１６Ｘ１７Ｘ１８ＡＱＸ２１ＦＶＸ２４ＷＬＥＤＥＰＸ３１ＳＸ３３Ｘ３４ＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１５１）のコンセンサス配列によって代表されるアミノ酸配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０１２７】
Ｘ１＝ＹまたはＷである。
【０１２８】
Ｘ３＝ＨまたはＱである。
【０１２９】
Ｘ１０＝Ｙ、ＫまたはＫ＊＊＊である。
【０１３０】
Ｘ１６＝Ａ、Ｓ、Ａｉｂ、ＫまたはＫ＊＊＊である。
【０１３１】
Ｘ１７＝Ａ、Ｋ、ＡｉｂまたはＫ＊＊＊である。
【０１３２】
Ｘ１８＝Ｙ、ＳまたはＲである。
【０１３３】
Ｘ２１＝Ｅ、ＫまたはＫ＊＊＊である。
【０１３４】
Ｘ２４＝Ｉ、Ａｉｂ、ＫまたはＫ＊＊＊である。 
【０１３５】
Ｘ３１＝Ｓ、ＫまたはＫ＊＊＊である。
【０１３６】
Ｘ３３＝Ｇ、ＫまたはＫ＊＊＊である。
【０１３７】
Ｘ３４＝ＡまたはＳである。
【０１３８】
ここでは、Ｋ＊＊＊はリジンであり、リジン側鎖のε−アミノ基は、場合によりスペーサーを介して親油性置換基に共有結合しており、両方とも本明細書で定義される通りである。
【０１３９】
いくつかの実施形態では、Ｋ＊＊＊はリジンであり、リジン側鎖のε−アミノ基はスペーサーを介して親油性置換基に共有結合している。いくつかの実施形態では、Ｋ＊＊＊はリジンであり、リジン側鎖のε−アミノ基はスペーサーの非存在下で（すなわち、なしで）親油性置換基に共有結合している。
【０１４０】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、配列番号１５１のコンセンサス配列によって代表されるアミノ酸配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０１４１】
Ｘ１＝ＹまたはＷである。
【０１４２】
Ｘ３＝ＨまたはＱである。
【０１４３】
Ｘ１０＝ＹまたはＫ＊＊＊である。
【０１４４】
Ｘ１６＝Ａ、Ｓ、ＡｉｂまたはＫ＊＊＊である。
【０１４５】
Ｘ１７＝Ａ、ＫまたはＡｉｂである。
【０１４６】
Ｘ１８＝Ｙ、ＳまたはＲである。
【０１４７】
Ｘ２１＝ＥまたはＫ＊＊＊である。
【０１４８】
Ｘ２４＝Ｉ、ＡｉｂまたはＫ＊＊＊である。
【０１４９】
Ｘ３１＝ＳまたはＫ＊＊＊である。
【０１５０】
Ｘ３３＝Ｇ、ＫまたはＫ＊＊＊である。
【０１５１】
Ｘ３４＝ＡまたはＳである。
【０１５２】
ここでは、Ｋ＊＊＊はリジンであり、リジン側鎖のε−アミノ基は、場合によりスペーサーを介して親油性置換基に共有結合しており、両方とも本明細書で定義される通りである。
【０１５３】
いくつかの実施形態では、Ｋ＊＊＊はリジンであり、リジン側鎖のε−アミノ基はスペーサーを介して親油性置換基に共有結合している。いくつかの実施形態では、Ｋ＊＊＊はリジンであり、リジン側鎖のε−アミノ基はスペーサーの非存在下で（すなわち、なしで）親油性置換基に共有結合している。
【０１５４】
いくつかの実施形態では、Ｘ１＝Ｙである。いくつかの実施形態では、Ｘ１＝Ｗである。
【０１５５】
いくつかの実施形態では、Ｘ３＝Ｈである。いくつかの実施形態では、Ｘ３＝Ｑである。
【０１５６】
いくつかの実施形態では、Ｘ１０＝Ｙである。いくつかの実施形態では、Ｘ１０＝Ｋである。いくつかの実施形態では、Ｘ１０＝Ｋ＊＊＊である。
【０１５７】
いくつかの実施形態では、Ｘ１６＝Ａである。いくつかの実施形態では、Ｘ１６＝Ｓである。いくつかの実施形態では、Ｘ１６＝Ａｉｂである。いくつかの実施形態では、Ｘ１６＝Ｋである。いくつかの実施形態では、Ｘ１６＝Ｋ＊＊＊である。
【０１５８】
いくつかの実施形態では、Ｘ１７＝Ａである。いくつかの実施形態では、Ｘ１７＝Ｋである。いくつかの実施形態では、Ｘ１７＝Ａｉｂである。いくつかの実施形態では、Ｘ１７＝Ｋ＊＊＊である。
【０１５９】
いくつかの実施形態では、Ｘ１８＝Ｙである。いくつかの実施形態では、Ｘ１８＝Ｓである。いくつかの実施形態では、Ｘ１８＝Ｒである。
【０１６０】
いくつかの実施形態では、Ｘ２１＝Ｅである。いくつかの実施形態では、Ｘ２１＝Ｋである。いくつかの実施形態では、Ｘ２１＝Ｋ＊＊＊である。
【０１６１】
いくつかの実施形態では、Ｘ２４＝Ｉである。いくつかの実施形態では、Ｘ２４＝Ａｉｂである。いくつかの実施形態では、Ｘ２４＝Ｋである。いくつかの実施形態では、Ｘ２４＝Ｋ＊＊＊である。
【０１６２】
いくつかの実施形態では、Ｘ３１＝Ｓである。いくつかの実施形態では、Ｘ３１＝Ｋである。いくつかの実施形態では、Ｘ３１＝Ｋ＊＊＊である。
【０１６３】
いくつかの実施形態では、Ｘ３３＝Ｇである。いくつかの実施形態では、Ｘ３３＝Ｋである。いくつかの実施形態では、Ｘ３３＝Ｋ＊＊＊である。
【０１６４】
いくつかの実施形態では、Ｘ１６はＫ＊＊＊であり、いくつかの実施形態では、Ｘ２１はＫ＊＊＊であり、いくつかの実施形態では、Ｘ２４はＫ＊＊＊であり、いくつかの実施形態では、Ｘ３３はＫ＊＊＊であり、ここでは、Ｋ＊＊＊はリジンであり、リジンのε−アミノ基は、式ＩＩ： 
【化３】
2019520329.tif 000006
の親油性置換基及びスペーサーに共有結合している。
【０１６５】
いくつかの実施形態では、Ｘ１６はＫ＊＊＊であり、いくつかの実施形態では、Ｘ２１はＫ＊＊＊であり、いくつかの実施形態では、Ｘ２４はＫ＊＊＊であり、いくつかの実施形態では、Ｘ３３はＫ＊＊＊であり、ここでは、Ｋ＊＊＊はリジンであり、リジンのε−アミノ基は式ＩＩＩ： 
【化４】
2019520329.tif 000007
の親油性置換基及びスペーサーに共有結合している。
【０１６６】
いくつかの実施形態では、Ｘ１０、Ｘ１６、Ｘ１７、Ｘ２１、Ｘ２４、Ｘ３１またはＸ３３の１つまたは複数はＫ＊＊＊であり、ここでは、Ｋ＊＊＊はリジンであり、リジンのε−アミノ基は式ＩＩの親油性置換基及びスペーサーに共有結合している。
【０１６７】
いくつかの実施形態では、Ｘ１０、Ｘ１６、Ｘ１７、Ｘ２１、Ｘ２４、Ｘ３１またはＸ３３の１つまたは複数はＫ＊＊＊であり、ここでは、Ｋ＊＊＊はリジンであり、リジンのε−アミノ基は式ＩＩＩの親油性置換基及びスペーサーに共有結合している。
【０１６８】
いくつかの実施形態では、Ｘ１０、Ｘ１６、Ｘ１７、Ｘ２１、Ｘ２４、Ｘ３１またはＸ３３のうちの１つはＫ＊＊＊であり、ここでは、Ｋ＊＊＊はリジンであり、リジンのε−アミノ基は式ＩＩの親油性置換基及びスペーサーに共有結合している。
【０１６９】
いくつかの実施形態では、Ｘ１０、Ｘ１６、Ｘ１７、Ｘ２１、Ｘ２４、Ｘ３１またはＸ３３のうちの１つはＫ＊＊＊であり、ここでは、Ｋ＊＊＊はリジンであり、リジンのε−アミノ基は式ＩＩＩの親油性置換基及びスペーサーに共有結合している。
【０１７０】
いくつかの実施形態では、トリフルオロ酢酸塩、酢酸塩または塩酸塩として製剤化された開示されるペプチドのうちのいずれかを含む医薬組成物が提供される。いくつかの実施形態では、トリフルオロ酢酸塩として製剤化された開示されるペプチドのうちのいずれかを含む医薬組成物が提供される。いくつかの実施形態では、酢酸塩として製剤化された開示されるペプチドのうちのいずれかを含む医薬組成物が提供される。いくつかの実施形態では、塩酸塩として製剤化された開示されるペプチドのうちのいずれかを含む医薬組成物が提供される。
【０１７１】
いくつかの実施形態では、トリフルオロ酢酸塩、酢酸塩または塩酸塩として製剤化された開示されるペプチドのうちのいずれかを含む医薬組成物が提供され、ペプチドは配列番号１５１のコンセンサス配列によって代表されるアミノ酸配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、トリフルオロ酢酸塩として製剤化された開示されるペプチドのうちのいずれかを含む医薬組成物が提供され、ペプチドは配列番号１５１のコンセンサス配列によって代表されるアミノ酸配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、酢酸塩として製剤化された開示されるペプチドのうちのいずれかを含む医薬組成物が提供され、ペプチドは配列番号１５１のコンセンサス配列によって代表されるアミノ酸配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、塩酸塩として製剤化された開示されるペプチドのうちのいずれかを含む医薬組成物が提供され、ペプチドは配列番号１５１のコンセンサス配列によって代表されるアミノ酸配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、配列番号１５１のペプチドでは、Ｘ１０、Ｘ１６、Ｘ１７、Ｘ２１、Ｘ２４、Ｘ３１またはＸ３３のうちの１つはＫ＊＊＊であり、ここでは、Ｋ＊＊＊はリジンであり、リジンのε−アミノ基は式ＩＩの親油性置換基及びスペーサーに共有結合している。いくつかの実施形態では、配列番号１５１のペプチドでは、Ｘ１０、Ｘ１６、Ｘ１７、Ｘ２１、Ｘ２４、Ｘ３１またはＸ３３のうちの１つはＫ＊＊＊であり、ここでは、Ｋ＊＊＊はリジンであり、リジンのε−アミノ基は式ＩＩＩの親油性置換基及びスペーサーに共有結合している。
【０１７２】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドのうちのいずれかが提供され、ここでは、ポリペプチドは１つまたは複数のアミノ酸残基を含み、これらのそれぞれは、場合によりスペーサーを介して親油性置換基に共有結合しており、両方とも本明細書で定義される通りである。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸残基のそれぞれは式ＩＩまたはＩＩＩの親油性置換基及びスペーサーに共有結合している。
【０１７３】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドのうちのいずれかが提供され、ここでは、ポリペプチドは少なくとも１つのリジン残基を含み、リジン側鎖のε−アミノ基は、場合によりスペーサーを介して親油性置換基に共有結合しており、両方とも本明細書で定義される通りである。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのリジン残基のそれぞれは、式ＩＩまたはＩＩＩの親油性置換基及びスペーサーに共有結合しているε−アミノ基を有する。
【０１７４】
いくつかの実施形態では、単離ポリペプチドは化合物Ｂ１〜Ｂ４８から成る群から選択される。
【０１７５】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＹＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＫ＊＊＊＊ＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１５２）（本明細書では、化合物Ｂ１とも称される）を含む。
【０１７６】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＹＡＱＥＦＶＫ＊＊＊＊ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１５３）（本明細書では、化合物Ｂ２とも称される）を含む。
【０１７７】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＫ＊＊＊＊ＫＹＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１５４）（本明細書では、化合物Ｂ３とも称される）を含む。
【０１７８】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＫ＊＊＊＊ＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＹＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１５５）（本明細書では、化合物Ｂ４とも称される）を含む。
【０１７９】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＹＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＫ＊＊＊＊＊ＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１５６）（本明細書では、化合物Ｂ５とも称される）を含む。 
【０１８０】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＹＡＱＥＦＶＫ＊＊＊＊＊ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１５７）（本明細書では、化合物Ｂ６とも称される）を含む。
【０１８１】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＫ＊＊＊＊＊ＫＹＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１５８）（本明細書では、化合物Ｂ７とも称される）を含む。
【０１８２】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＫ＊＊＊＊＊ＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＹＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１５９）（本明細書では、化合物Ｂ８とも称される）を含む。
【０１８３】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＳＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＫ＊＊＊＊ＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１６０）（本明細書では、化合物Ｂ９とも称される）を含む。
【０１８４】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＳＡＱＥＦＶＫ＊＊＊＊ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１６１）（本明細書では、化合物Ｂ１０とも称される）を含む。
【０１８５】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＫ＊＊＊＊ＫＳＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１６２）（本明細書では、化合物Ｂ１１とも称される）を含む。
【０１８６】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＫ＊＊＊＊ＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＳＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１６３）（本明細書では、化合物Ｂ１２とも称される）を含む。
【０１８７】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＳＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＫ＊＊＊＊＊ＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１６４）（本明細書では、化合物Ｂ１３とも称される）を含む。
【０１８８】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＳＡＱＥＦＶＫ＊＊＊＊＊ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１６５）（本明細書では、化合物Ｂ１４とも称される）を含む。
【０１８９】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＫ＊＊＊＊＊ＫＳＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１６６）（本明細書では、化合物Ｂ１５とも称される）を含む。
【０１９０】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＫ＊＊＊＊＊ＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＳＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１６７）（本明細書では、化合物Ｂ１６とも称される）を含む。
【０１９１】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＷＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＫ＊＊＊＊ＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１６８）（本明細書では、化合物Ｂ１７とも称される）を含む。
【０１９２】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＷＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶＫ＊＊＊＊ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１６９）（本明細書では、化合物Ｂ１８とも称される）を含む。
【０１９３】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＷＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＫ＊＊＊＊ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１７０）（本明細書では、化合物Ｂ１９とも称される）を含む。
【０１９４】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＷＳＱＧＴＦＴＳＤＫ＊＊＊＊ＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１７１）（本明細書では、化合物Ｂ２０とも称される）を含む。
【０１９５】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＷＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＫ＊＊＊＊＊ＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１７２）（本明細書では、化合物Ｂ２１とも称される）を含む。
【０１９６】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＷＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶＫ＊＊＊＊＊ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１７３）（本明細書では、化合物Ｂ２２とも称される）を含む。
【０１９７】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＷＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＫ＊＊＊＊＊ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１７４）（本明細書では、化合物Ｂ２３とも称される）を含む。
【０１９８】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＷＳＱＧＴＦＴＳＤＫ＊＊＊＊＊ＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶ（Ａｉｂ）ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１７５）（本明細書では、化合物Ｂ２４とも称される）を含む。
【０１９９】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶＩＷＬＥＤＥＰＳＳＫ＊＊＊＊ＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１７６）（本明細書では、化合物Ｂ２５とも称される）を含む。
【０２００】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＫ＊＊＊＊ＫＲＡＱＥＦＶＩＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１７７）（本明細書では、化合物Ｂ２６とも称される）を含む。
【０２０１】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＫ＊＊＊＊ＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶＩＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１７８）（本明細書では、化合物Ｂ２７とも称される）を含む。
【０２０２】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＫ＊＊＊＊ＦＶＩＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１７９）（本明細書では、化合物Ｂ２８とも称される）を含む。
【０２０３】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶＩＷＬＥＤＥＰＳＳＫ＊＊＊＊＊ＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１８０）（本明細書では、化合物Ｂ２９とも称される）を含む。
【０２０４】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＫ＊＊＊＊＊ＦＶＩＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１８１）（本明細書では、化合物Ｂ３０とも称される）を含む。
【０２０５】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＫ＊＊＊＊＊ＫＲＡＱＥＦＶＩＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１８２）（本明細書では、化合物Ｂ３１とも称される）を含む。
【０２０６】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＫ＊＊＊＊＊ＳＫＹＬＤ（Ａｉｂ）ＫＲＡＱＥＦＶＩＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＯＨ（配列番号１８３）（本明細書では、化合物Ｂ３２とも称される）を含む。
【０２０７】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＡＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＫＳＫ＊＊＊＊ＳＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１８４）（本明細書では、化合物Ｂ３３とも称される）を含む。
【０２０８】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＡＡＲＡＱＥＦＶＫ＊＊＊＊ＷＬＥＤＥＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１８５）（本明細書では、化合物Ｂ３４とも称される）を含む。
【０２０９】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＫ＊＊＊＊ＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１８６）（本明細書では、化合物Ｂ３５とも称される）を含む。
【０２１０】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＱＧＴＦＴＳＤＫ＊＊＊＊ＳＫＹＬＤＡＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１８７）（本明細書では、化合物Ｂ３６とも称される）を含む。
【０２１１】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＡＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＫＳＫ＊＊＊＊＊ＳＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１８８）（本明細書では、化合物Ｂ３７とも称される）を含む。
【０２１２】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＡＡＲＡＱＥＦＶＫ＊＊＊＊＊ＷＬＥＤＥＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１８９）（本明細書では、化合物Ｂ３８とも称される）を含む。
【０２１３】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＫ＊＊＊＊＊ＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１９０）（本明細書では、化合物Ｂ３９とも称される）を含む。
【０２１４】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＱＧＴＦＴＳＤＫ＊＊＊＊＊ＳＫＹＬＤＡＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＫＳＫＳＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１９１）（本明細書では、化合物Ｂ４０とも称される）を含む。
【０２１５】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＳＳＫ＊＊＊＊ＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１９２）（本明細書では、化合物Ｂ４１とも称される）を含む。
【０２１６】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＡＲＡＱＥＦＶＫ＊＊＊＊ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１９３）（本明細書では、化合物Ｂ４２とも称される）を含む。
【０２１７】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＫ＊＊＊＊ＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１９４）（本明細書では、化合物Ｂ４３とも称される）を含む。
【０２１８】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＫ＊＊＊＊ＳＫＹＬＤＳＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１９５）（本明細書では、化合物Ｂ４４とも称される）を含む。
【０２１９】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＳＳＫ＊＊＊＊＊ＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１９６）（本明細書では、化合物Ｂ４５とも称される）を含む。
【０２２０】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＡＲＡＱＥＦＶＫ＊＊＊＊＊ＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１９７）（本明細書では、化合物Ｂ４６とも称される）を含む。
【０２２１】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＫ＊＊＊＊＊ＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１９８）（本明細書では、化合物Ｂ４７とも称される）を含む。
【０２２２】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、アミノ酸配列ＹＳＨＧＴＦＴＳＤＫ＊＊＊＊＊ＳＫＹＬＤＳＡＲＡＱＥＦＶＫＷＬＥＤＥＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２（配列番号１９９）（本明細書では、化合物Ｂ４８とも称される）を含む。
【０２２３】
上記の実施形態では、開示される化合物中の示されるペプチド残基に位置するリジン残基（Ｋ＊＊＊＊）の各ε−アミノ基は、式ＩＩ： 
【化５】
2019520329.tif 000008
の示されるカルボニルに共有結合して、アミドを形成する。
【０２２４】
上記の実施形態では、開示される化合物中の示されるペプチド残基に位置するリジン残基（Ｋ＊＊＊＊＊）の各ε−アミノ基は、式ＩＩＩ： 
【化６】
2019520329.tif 000009
の示されるカルボニルに共有結合して、アミドを形成する。
【０２２５】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、配列番号１５２から配列番号１９９によって代表されるアミノ酸配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０２２６】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは化合物Ｂ１から化合物Ｂ８から成る群から選択される。
【０２２７】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは化合物Ｂ９から化合物Ｂ１６から成る群から選択される。
【０２２８】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは化合物Ｂ１７から化合物Ｂ２４から成る群から選択される。
【０２２９】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは化合物Ｂ２５から化合物Ｂ３２から成る群から選択される。
【０２３０】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは化合物Ｂ３３から化合物Ｂ４０から成る群から選択される。
【０２３１】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは化合物Ｂ４１から化合物Ｂ４８から成る群から選択される。
【０２３２】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、配列番号１５４、配列番号１５７、配列番号１５８、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２、配列番号１６５、配列番号１６６、配列番号１６８、配列番号１７２、配列番号１７３、配列番号１８５、配列番号１８８、配列番号１８９、配列番号１９０及び配列番号１９２によって代表されるアミノ酸配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０２３３】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、配列番号１６０、配列番号１６５及び配列番号１６６によって代表されるアミノ酸配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０２３４】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは化合物Ｂ１から化合物Ｂ４８から成る群から選択される。
【０２３５】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは化合物Ｂ３、化合物Ｂ６、化合物Ｂ７、化合物Ｂ９、化合物Ｂ１０、化合物Ｂ１１、化合物Ｂ１４、化合物Ｂ１５、化合物Ｂ１７、化合物Ｂ２１、化合物Ｂ２２、化合物Ｂ３４、化合物Ｂ３７、化合物Ｂ３８、化合物Ｂ３９及び化合物Ｂ４１から成る群から選択される。
【０２３６】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは化合物Ｂ９、化合物Ｂ１４及び化合物Ｂ１５から成る群から選択される。
【０２３７】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは化合物Ｂ９である。いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは化合物Ｂ１４である。いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは化合物Ｂ１５である。
【０２３８】
いくつかの実施形態では、本開示の単離ポリペプチドは、化合物Ｂ１から化合物Ｂ４８によって代表されるアミノ酸配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０２３９】
２．０．２ペプチドの組み合わせ
いくつかの実施形態では、本開示の単離されたグルカゴン類似体ポリペプチドは、選択的グルカゴン受容体アゴニストであり、オキシントモジュリン、エクセナチド、エクセナチドの誘導体、エクセナチドの類似体、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、ＧＬＰ−１の誘導体及びＧＬＰ−１の類似体から成る群から選択される第２の薬剤と組み合わせて共製剤化される。いくつかの実施形態では、本開示のグルカゴン類似体のうちのいずれかはエクセナチドと組み合わせて共製剤化される。
【０２４０】
いくつかの実施形態では、本開示のグルカゴン類似体のうちのいずれかはエクセナチドと組み合わせて製剤化され、ここでは、グルカゴン類似体は、本明細書に記載のような親油性置換基及びスペーサーに共有結合していない。
【０２４１】
いくつかの実施形態では、本開示のグルカゴン類似体はエクセナチドと組み合わせて製剤化され、ここでは、グルカゴン類似体は、化合物Ａ１〜Ａ１０５から成る群から選択される。いくつかの実施形態では、本開示のグルカゴン類似体はエクセナチドと組み合わせて製剤化され、ここでは、グルカゴン類似体は化合物Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、Ａ５及びＡ６から成る群から選択される。いくつかの実施形態では、本開示のグルカゴン類似体はエクセナチドと組み合わせて製剤化され、ここでは、グルカゴン類似体は化合物Ａ１である。いくつかの実施形態では、本開示のグルカゴン類似体はエクセナチドと組み合わせて製剤化され、ここでは、グルカゴン類似体は化合物Ａ２である。いくつかの実施形態では、本開示のグルカゴン類似体はエクセナチドと組み合わせて製剤化され、ここでは、グルカゴン類似体は化合物Ａ３である。いくつかの実施形態では、本開示のグルカゴン類似体はエクセナチドと組み合わせて製剤化され、ここでは、グルカゴン類似体は化合物Ａ４である。いくつかの実施形態では、本開示のグルカゴン類似体はエクセナチドと組み合わせて製剤化され、ここでは、グルカゴン類似体は化合物Ａ５である。いくつかの実施形態では、本開示のグルカゴン類似体はエクセナチドと組み合わせて製剤化され、ここでは、グルカゴン類似体は化合物Ａ６である。
【０２４２】
いくつかの実施形態では、本開示のグルカゴン類似体のうちのいずれかはエクセナチドと組み合わせて製剤化され、ここでは、グルカゴン類似体は、本明細書に記載のような親油性置換基及びスペーサーに共有結合している少なくとも１つのアミノ酸を有する。いくつかの実施形態では、本開示のグルカゴン類似体のうちのいずれかはエクセナチドと組み合わせて製剤化され、ここでは、グルカゴン類似体は、式ＩＩまたはＩＩＩの親油性置換基及びスペーサーに共有結合しているε−アミノ基を有する少なくとも１つのリジン残基を有する。
【０２４３】
いくつかの実施形態では、本開示のグルカゴン類似体はエクセナチドと組み合わせて製剤化され、ここでは、グルカゴン類似体は化合物Ｂ１〜Ｂ４８から成る群から選択される。いくつかの実施形態では、本開示のグルカゴン類似体のうちのいずれかはエクセナチドと組み合わせて製剤化され、ここでは、グルカゴン類似体は配列番号１５２〜配列番号１９９によって代表されるアミノ酸配列から成る群から選択される。
【０２４４】
いくつかの実施形態では、本開示のグルカゴン類似体はエクセナチドと組み合わせて製剤化され、ここでは、グルカゴン類似体は化合物Ｂ３、化合物Ｂ６、化合物Ｂ７、化合物Ｂ９、化合物Ｂ１０、化合物Ｂ１１、化合物Ｂ１４、化合物Ｂ１５、化合物Ｂ１７、化合物Ｂ２１、化合物Ｂ２２、化合物Ｂ３４、化合物Ｂ３７、化合物Ｂ３８、化合物Ｂ３９及び化合物Ｂ４１から成る群から選択される。
【０２４５】
いくつかの実施形態では、本開示のグルカゴン類似体はエクセナチドと組み合わせて製剤化され、ここでは、グルカゴン類似体は化合物Ｂ９、化合物Ｂ１４及び化合物Ｂ１５から成る群から選択される。
【０２４６】
いくつかの実施形態では、本開示のグルカゴン類似体はエクセナチドと組み合わせて製剤化され、ここでは、グルカゴン類似体は化合物Ｂ９である。いくつかの実施形態では、本開示のグルカゴン類似体はエクセナチドと組み合わせて製剤化され、ここでは、グルカゴン類似体は化合物Ｂ１４である。いくつかの実施形態では、本開示のグルカゴン類似体はエクセナチドと組み合わせて製剤化され、ここでは、グルカゴン類似体は化合物Ｂ１５である。
【０２４７】
いくつかの実施形態では、本開示のグルカゴン類似体のうちのいずれかは、１０００：１〜１：１０００のグルカゴン類似体：エクセナチドの固定比率でエクセナチドと組み合わせて製剤化される。いくつかの実施形態では、本開示のグルカゴン類似体のうちのいずれかは、５００：１〜１：５００のグルカゴン類似体：エクセナチドの固定比率でエクセナチドと組み合わせて製剤化される。いくつかの実施形態では、本開示のグルカゴン類似体のうちのいずれかは１００：１〜１：１００のグルカゴン類似体：エクセナチドの固定比率でエクセナチドと組み合わせて製剤化される。いくつかの実施形態では、本開示のグルカゴン類似体のうちのいずれかは、５０：１〜１：５０のグルカゴン類似体：エクセナチドの固定比率でエクセナチドと組み合わせて製剤化される。いくつかの実施形態では、本開示のグルカゴン類似体のうちのいずれかは、２５：１〜１：２５のグルカゴン類似体：エクセナチドの固定比率でエクセナチドと組み合わせて製剤化される。いくつかの実施形態では、本開示のグルカゴン類似体のうちのいずれかは、１０：１〜１：１０のグルカゴン類似体：エクセナチドの固定比率でエクセナチドと組み合わせて製剤化される。いくつかの実施形態では、本開示のグルカゴン類似体のうちのいずれかは、１：１〜１：１０のグルカゴン類似体：エクセナチドの固定比率でエクセナチドと組み合わせて製剤化される。いくつかの実施形態では、本開示のグルカゴン類似体のうちのいずれかは、１０：１〜１：１のグルカゴン類似体：エクセナチドの固定比率でエクセナチドと組み合わせて製剤化される。いくつかの実施形態では、本開示のグルカゴン類似体のうちのいずれかは、５：１〜１：５のグルカゴン類似体：エクセナチドの固定比率でエクセナチドと組み合わせて製剤化される。いくつかの実施形態では、本開示のグルカゴン類似体のうちのいずれかは、１：１〜１：５のグルカゴン類似体：エクセナチドの固定比率でエクセナチドと組み合わせて製剤化される。いくつかの実施形態では、本開示のグルカゴン類似体のうちのいずれかは、５：１〜１：１のグルカゴン類似体：エクセナチドの固定比率でエクセナチドと組み合わせて製剤化される。
【０２４８】
本発明は、治療を必要としている対象において２型糖尿病を治療する方法も提供する。この方法は、本開示の単離されたグルカゴン受容体選択的アゴニストポリペプチドの１つまたは複数を提供することを含む。いくつかの実施形態では、この方法は、浸透圧性送達装置からの単離されたグルカゴン受容体選択的アゴニストポリペプチドの連続送達を提供することを含み、ここでは、治療濃度での、単離されたグルカゴン特異的アゴニストポリペプチドの実質的な定常状態送達は、対象に浸透圧性送達装置を埋め込んでから約７日またはそれ以下の期間内に達成される。浸透圧性送達装置からの単離されたグルカゴン特異的アゴニストポリペプチドの実質的な定常状態送達は、投与期間にわたって連続的である。ヒトは本発明の実施に好ましい対象である。
【０２４９】
本発明のいくつかの実施形態では、投与期間は、例えば、少なくとも約３か月、少なくとも約３か月〜約１年、少なくとも約４か月〜約１年、少なくとも約５か月〜約１年、少なくとも約６か月〜約１年、少なくとも約８か月〜約１年、少なくとも約９か月〜約１年、少なくとも約１０か月〜約１年、少なくとも約１年〜約２年、少なくとも約２年〜約３年である。
【０２５０】
本発明のいくつかの実施形態では、治療濃度での、単離されたグルカゴン特異的アゴニストポリペプチドの実質的な定常状態送達は、対象に浸透圧性送達装置を埋め込んでから約５日もしくはそれ以下の内に、対象に浸透圧性送達装置を埋め込んでから約４日もしくはそれ以下の内に、対象に浸透圧性送達装置を埋め込んでから約３日もしくはそれ以下の内に、対象に浸透圧性送達装置を埋め込んでから約２日もしくはそれ以下の内に、または対象に浸透圧性送達装置を埋め込んでから約１日もしくはそれ以下の内に達成される。本発明の好ましい実施形態では、治療濃度での、単離されたグルカゴン特異的アゴニストポリペプチドの実質的な定常状態送達は対象に浸透圧性送達装置を埋め込んでから約２日またはそれ以下の内に、より好ましくは約１日またはそれ以下の内に達成される。
【０２５１】
さらなる実施形態では、本発明の治療方法は対象に浸透圧性送達装置を埋め込んでから約７日もしくはそれ以下、対象に浸透圧性送達装置を埋め込んでから約６日もしくはそれ以下の内に、対象に浸透圧性送達装置を埋め込んでから約５日もしくはそれ以下の内に、対象に浸透圧性送達装置を埋め込んでから約４日もしくはそれ以下の内に、対象に浸透圧性送達装置を埋め込んでから約３日もしくはそれ以下の内に、対象に浸透圧性送達装置を埋め込んでから約２日もしくはそれ以下の内に、または対象に浸透圧性送達装置を埋め込んでから約１日もしくはそれ以下の内に達成される、（浸透圧性送達装置を埋め込む前の対象の空腹時血漿グルコース濃度と比較して）対象に浸透圧性送達装置を埋め込んでからの対象の空腹時血漿グルコース濃度の有意な低下をもたらす。本発明の好ましい実施形態では、埋め込み前の対象の空腹時血漿グルコース濃度と比較した、浸透圧性送達装置を埋め込んでからの対象の空腹時血漿グルコース濃度の有意な低下は、対象に浸透圧性送達装置を埋め込んでから約２日もしくはそれ以下の内に、好ましくは、対象に浸透圧性送達装置を埋め込んでから約１日もしくはそれ以下の内に、またはより好ましくは、対象に浸透圧性送達装置を埋め込んでから約１日以内に達成される。空腹時血漿グルコースの有意な低下は、典型的には、適切な統計的検定を用いることによって示される場合に統計学的に有意であり、または医師によって、対象にとって有意であるとみなされる。埋め込み前のベースラインと比較した、空腹時血漿グルコースの有意な低下は、典型的には、投与期間にわたって維持される。
【０２５２】
本発明の第１の態様のさらに別の実施形態では、治療方法は、グルカゴン特異的アゴニストポリペプチドの濃度が、連続送達が終了してから、グルカゴン特異的アゴニストポリペプチドの約６半減期以内に、連続送達が終了してから、グルカゴン特異的アゴニストポリペプチドの約５半減期以内に、連続送達が終了してから、グルカゴン特異的アゴニストポリペプチドの約４半減期以内に、または連続送達が終了してから、グルカゴン特異的アゴニストポリペプチドの約３半減期以内に、対象の血液試料中で実質的に検出限界以下になるように、グルカゴン特異的アゴニストポリペプチドの連続送達を終了する能力をさらに含む。グルカゴン特異的アゴニストポリペプチドは、例えば、ＲＩＡ、クロマトグラフィー方法、ＥＣＬアッセイ、ＥＬＩＳＡまたはＩＥＭＡによって検出することができる。連続送達の終了は、例えば、対象から浸透圧性送達装置を除去することによって、達成することができる。
【０２５３】
本発明の関連した実施形態では、治療方法は、このポリペプチドの濃度が、連続送達が終了してから約７２時間未満で、連続送達が終了してから約４８時間未満で、連続送達が終了してから約２４時間未満で、連続送達が終了してから約１８時間未満で、連続送達が終了してから約１４時間未満で、連続送達が終了してから約１２時間未満で、連続送達が終了してから約６時間未満で、または連続送達が終了してから約４時間未満で対象の血液試料中で実質的に検出限界以下になるように、グルカゴン受容体選択的アゴニストポリペプチドの連続送達を終了する能力をさらに含む。好ましい実施形態では、グルカゴン特異的アゴニストポリペプチドは、連続送達が終了してから約２４時間未満で、連続送達が終了してから約１８時間未満で、またはより好ましくは連続送達が終了してから約１４時間未満で対象の血液試料中で実質的に検出限界以下になる。
【０２５４】
いくつかの実施形態では、グルカゴン受容体選択的アゴニストポリペプチドは、懸濁製剤に製剤化される。いくつかの実施形態では、懸濁製剤は、グルカゴン受容体選択的アゴニストポリペプチドを含む粒子製剤及びビヒクル製剤を含む。いくつかの実施形態では、グルカゴン受容体選択的アゴニストポリペプチドは、本開示の単離ポリペプチド、そのペプチド類似体またはそのペプチド誘導体を含む。いくつかの実施形態では、グルカゴン受容体選択的アゴニストポリペプチドは、配列番号１、配列番号２、配列番号３または配列番号１３７のアミノ酸配列によって包含されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、グルカゴン受容体選択的アゴニストポリペプチドは、配列番号４〜１３９から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０２５５】
２型糖尿病の治療方法に関する本発明の全態様の実施形態では、この方法で使用するための懸濁製剤は、例えば、単離されたグルカゴン受容体選択的アゴニストポリペプチドを含む粒子製剤及びビヒクル製剤を含むことができる。
【０２５６】
浸透圧性送達装置のリザーバーは、例えば、チタンまたはチタン合金を含むことができる。
【０２５７】
第５の態様では、本発明は、治療を必要としている対象において疾患または状態を治療する方法に関する。この方法は、浸透圧性送達装置からの薬物の連続送達をもたらすことを含み、ここでは、治療濃度での薬物の実質的な定常状態送達は、対象に浸透圧性送達装置を埋め込んでから約７日またはそれ以下の期間内に達成される。浸透圧性送達装置からの薬物の実質的な定常状態送達は、少なくとも約３か月の投与期間にわたって連続的である。薬物は、典型的な対象において既知のまたは決定された半減期を有する。ヒトは本発明の実施に好ましい対象である。本発明は、疾患または状態の治療に効果的な薬物及び治療を必要としている対象において疾患または状態を治療する本方法で使用するための薬物を含有する浸透圧性送達装置を含む。本発明の利点は、ピーク関連薬物毒性の軽減及びトラフと関連する最適以下の薬物療法の減弱を含む。
【０２５８】
本発明のいくつかの実施形態では、投与期間は、例えば、少なくとも約３か月、少なくとも約３か月〜約１年、少なくとも約４か月〜約１年、少なくとも約５か月〜約１年、少なくとも約６か月〜約１年、少なくとも約８か月〜約１年、少なくとも約９か月〜約１年または少なくとも約１０か月〜約１年である。
【０２５９】
本発明の本態様のいくつかの実施形態では、治療濃度での薬物の実質的な定常状態送達は、対象に浸透圧性送達装置を埋め込んでから約７日もしくはそれ以下、対象に浸透圧性送達装置を埋め込んでから約５日もしくはそれ以下、対象に浸透圧性送達装置を埋め込んでから約４日もしくはそれ以下、対象に浸透圧性送達装置を埋め込んでから約３日もしくはそれ以下、対象に浸透圧性送達装置を埋め込んでから約２日もしくはそれ以下、または対象に浸透圧性送達装置を埋め込んでから約１日もしくはそれ以下の期間内に達成される。
【０２６０】
本発明の本態様のいくつかの実施形態では、対象に浸透圧性送達装置を埋め込んでからの治療濃度での薬物の実質的な定常状態送達の確立は、より長い期間、例えば、装置を埋め込んでから、約２週間以下または対象内の薬物の約６半減期未満内の期間を要し得る。
【０２６１】
本発明は、それらを必要とする対象において体重減少を促進する方法、それらを必要とする対象において過体重もしくは肥満を治療する方法、及び／またはそれらを必要とする対象において食欲を抑制方法も提供する。この方法は単離されたグルカゴン受容体選択的アゴニストポリペプチドの送達をもたらすことを含む。いくつかの実施形態では、単離されたグルカゴン受容体選択的アゴニストポリペプチドは浸透圧性送達装置から連続的に送達され、ここでは、治療濃度でのグルカゴン受容体選択的アゴニストポリペプチドの実質的な定常状態送達は、対象に浸透圧性送達装置を埋め込んでから約７日またはそれ以下の期間内に達成される。浸透圧性送達装置からのグルカゴン受容体選択的アゴニストポリペプチドの実質的な定常状態送達は、投与期間にわたって連続的である。ヒトは本発明の実施に好ましい対象である。本発明は、治療を必要としている対象において本方法で使用するために、単離されたグルカゴン受容体選択的アゴニストポリペプチド及び単離されたグルカゴン受容体選択的アゴニストポリペプチドを含有する浸透圧性送達装置を含む。対象は２型糖尿病を有していてもよい。それらを必要とする対象は１０．０％を越えるベースラインＨｂＡ１ｃ％を有していてもよく、すなわち、高ベースライン（ＨＢＬ）対象でもよい。対象は、２型糖尿病を治療するための薬物を以前に与えられていなくてもよい。
【０２６２】
本発明のいくつかの実施形態では、投与期間は、例えば、少なくとも約３か月、少なくとも約３か月〜約１年、少なくとも約４か月〜約１年、少なくとも約５か月〜約１年、少なくとも約６か月〜約１年、少なくとも約８か月〜約１年、少なくとも約９か月〜約１年または少なくとも約１０か月〜約１年、少なくとも約１年〜約２年または少なくとも約２年〜約３年である。
【０２６３】
さらなる実施形態では、本発明の治療方法は、対象に浸透圧性送達装置を埋め込んでから約７日もしくはそれ以下の内に、対象に浸透圧性送達装置を埋め込んでから約６日もしくはそれ以下の内に、対象に浸透圧性送達装置を埋め込んでから約５日もしくはそれ以下の内に、対象に浸透圧性送達装置を埋め込んでから約４日またはもしくはそれ以下の内に、対象に浸透圧性送達装置を埋め込んでから約３日もしくはそれ以下の内に、対象に浸透圧性送達装置を埋め込んでから約２日もしくはそれ以下の内に、または対象に浸透圧性送達装置を埋め込んでから約１日もしくはそれ以下の内に達成される、（浸透圧性送達装置を埋め込む前の対象の空腹時血漿グルコース濃度と比較して）対象に浸透圧性送達装置を埋め込んでからの対象の空腹時血漿グルコース濃度の有意な低下をもたらす。本発明の好ましい実施形態では、埋め込み前の対象の空腹時血漿グルコース濃度と比較した、浸透圧性送達装置を埋め込んでからの対象の空腹時血漿グルコース濃度の有意な低下は、対象に浸透圧性送達装置を埋め込んでから約２日もしくはそれ以下の内に、好ましくは、対象に浸透圧性送達装置を埋め込んでから約１日もしくはそれ以下の内に、またはより好ましくは、対象に浸透圧性送達装置を埋め込んでから約１日以内に達成される。空腹時血漿グルコースの有意な低下は、典型的には、適切な統計的検定を用いることによって示される場合に統計学的に有意であり、または医師によって、対象にとって有意であるとみなされる。埋め込み前のベースラインと比較した、空腹時血漿グルコースの有意な低下は、典型的には、投与期間にわたって維持される。
【０２６４】
対象における疾患または状態の治療方法に関する本発明の全態様の実施形態では、例示的浸透圧性送達装置は以下を含む：内面及び外面ならびに第１及び第２の開口端を含む不浸透性リザーバー；リザーバーの第１の開口端と密封関係の半透膜；リザーバー内の浸透圧性エンジン及び隣接する半透過膜；浸透圧性エンジンに隣接するピストン（ここでは、ピストンはリザーバーの内面と可動性の密閉を形成し、ピストンはリザーバーを第１のチャンバー及び第２のチャンバーに分け、第１のチャンバーは浸透圧性エンジンを含む）；薬物製剤または薬物を含む懸濁製剤（ここでは、第２のチャンバーは薬物製剤または懸濁製剤を含み、薬物製剤または懸濁製剤は流動可能である）；ならびにリザーバーの第２の開口端に挿入された拡散モデレーター（拡散モデレーターは懸濁製剤に隣接する）。好ましい実施形態では、リザーバーはチタンまたはチタン合金を含む。
【０２６５】
対象における疾患または状態の治療方法に関する本発明の全態様の実施形態では、薬物製剤は、薬物及びビヒクル製剤を含むことができる。あるいは、懸濁製剤がこの方法で使用され、例えば、薬物を含む粒子製剤及びビヒクル製剤を含むことができる。本発明の懸濁製剤を形成するのに使用するためのビヒクル製剤は、例えば、溶媒及びポリマーを含むことができる。
【０２６６】
浸透圧性送達装置のリザーバーは、例えば、チタンまたはチタン合金を含むことができる。
【０２６７】
本発明の全態様の実施形態では、埋め込まれた浸透圧性送達装置を使用して皮下送達をもたらすことができる。
【０２６８】
本発明の全態様の実施形態では、連続送達は、例えば、ゼロ次の、制御された、連続的な送達でもよい。
【０２６９】
上記の態様及び実施形態のいずれも、本明細書で開示される任意の他の態様または実施形態と組み合わせることができる。
【０２７０】
３．０．０製剤及び組成物
本発明の実施で使用するための薬物は、典型的には、懸濁製剤を形成するために、懸濁ビヒクル中に均一に懸濁、溶解または分散される。
【０２７１】
本開示の単離ポリペプチド（本明細書では、「活性化合物」とも称される）ならびにその誘導体、断片、類似体及び相同体を、投与に適した医薬組成物に組み込むことができる。そのような組成物は、典型的には、融合タンパク質及び医薬的に許容される担体を含む。本明細書で使用する場合、用語「医薬的に許容される担体」は、医薬投与に適合するありとあらゆる溶媒、分散媒、被覆剤、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤などを含むことが意図される。適切な担体は、この分野で標準的な参考テキストであるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓの最新版に記載されており、これは、参照によって本明細書に組み込まれる。そのような担体または希釈剤の好ましい例としては、限定されないが、水、生理食塩水、リンゲル溶液、デキストロース溶液及び５％ヒト血清アルブミンが挙げられる。リポソーム及び非水性ビヒクル、例えば不揮発性油を使用することもできる。医薬的に活性な物質のためのそのような媒体及び薬剤の使用は当技術分野で周知である。任意の従来の媒体または薬剤が活性化合物と不適合である場合を除いて、組成物におけるそれらの使用が意図される。追加の活性化合物を組成物に組み込むこともできる。
【０２７２】
本発明の医薬組成物は、意図された投与経路に適合するように製剤化される。投与経路の例としては、非経口、例えば、静脈内、皮内、真皮下、皮下、経口（例えば、吸入）、経皮（すなわち、局所）、経粘膜、直腸またはこれらの組み合わせが挙げられる。いくつかの実施形態では、医薬組成物または本開示の単離ポリペプチドは、局所投与による投与のために製剤化される。いくつかの実施形態では、医薬組成物または本開示の単離ポリペプチドは、吸入投与による投与のために製剤化される。いくつかの実施形態では、医薬組成物、真皮下または皮下の埋め込みに適し、且つ医薬組成物を皮下に送達する装置または他の適切な送達機構による投与のために製剤化される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、真皮下または皮下の埋め込みに適し、且つ医薬組成物を皮下に送達する埋め込み装置による投与のために製剤化される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、浸透圧性送達装置、例えば、真皮下または皮下の設置にまたは他の埋め込み適し、且つ医薬組成物を皮下に送達する埋め込み式浸透圧性送達装置による投与のために製剤化される。非経口投与、皮内投与、真皮下投与、皮下投与またはこれらの組み合わせに使用される溶液または懸濁液は、以下の成分を含むことができる：無菌の希釈剤、例えば、注射用水、生理食塩水、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒；抗菌剤、例えばベンジルアルコールまたはメチルパラベン；抗酸化剤、例えばアスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウム；キレート剤、例えばエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）；緩衝液、例えば、酢酸、クエン酸またはリン酸及び浸透圧調整のための薬剤、例えば、塩化ナトリウムまたはデキストロース。ｐＨは、酸または塩基、例えば、塩酸または水酸化ナトリウムを用いて調整することができる。非経口調製物は、ガラスまたはプラスチックでできているアンプル、使い捨ての注射器または複数回用量のバイアル中に封入することができる。
【０２７３】
注射使用に適した医薬組成物は、無菌の注射可能な溶液または分散体の即時調製用の無菌水溶液（水溶性の場合）または分散体及び無菌粉末を含む。静脈内投与については、適切な担体としては、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、Ｎ．Ｊ．）またはリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。すべての場合において、組成物は無菌でなければならず、容易に注射できる程度に流動性であるべきである。これは製造及び貯蔵条件下で安定していなければならず、細菌及び真菌などの微生物汚染作用から保護されなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール及び液状ポリエチレングリコールなど）ならびにこれらの適切な混合物を含む溶媒または分散媒でもよい。例えば、被覆剤、例えばレシチンの使用によって、分散体の場合には必要とされる粒径の維持によって、及び界面活性剤の使用によって、適切な流動性を維持することができる。様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどによって、微生物作用を防止することができる。多くの場合、等張剤、例えば、糖、ポリアルコール、例えばマンニトール、ソルビトール、塩化ナトリウムを組成物中に含むことが好ましい。吸収を遅らせる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを組成物中に含むことによって、注射用組成物の持続性吸収をもたらすことができる。
【０２７４】
無菌の注射可能な溶液は、必要に応じて、上で列挙した成分の１つまたは組み合わせとともに、必要量の活性化合物を適切な溶媒に組み入れ、続いて濾過滅菌することによって、調製することができる。一般に、分散体は、基本的な分散媒及び上で列挙したものからの必要とされる他の成分を含む無菌ビヒクルに活性化合物を組み入れることによって調製される。無菌の注射可能な溶液を調製するための無菌粉末の場合には、調製方法は、活性成分と任意のさらなる所望の成分の粉末をこれらの前もって濾過滅菌した溶液からもたらす、真空乾燥及びフリーズドライである。
【０２７５】
経口組成物は、一般に、不活性な希釈剤または食用担体を含む。これらは、ゼラチンカプセル中に封入するか、錠剤中に圧縮することができる。経口的な治療的投与の目的で、賦形剤とともに活性化合物を組み込むことができ、錠剤、トローチ剤またはカプセル剤の形態で使用することができる。口腔洗浄薬として使用するために、流体担体を使用して経口組成物を調製することもでき、ここでは、流体担体中の化合物は経口的に投与され、口の中でごろごろされ（ｓｗｉｓｈｅｄ）、吐き出されるか、飲み込まれる。医薬的に適合性の結合剤及び／または補助剤物質を組成物の一部として含むことができる。錠剤、丸剤、カプセル剤、トローチ剤などは、以下の成分のうちのいずれかまたは同様の性質の化合物を含むことができる：結合剤、例えば、微結晶セルロース、トラガカントガムもしくはゼラチン；賦形剤、例えば、デンプンもしくはラクトース、崩壊剤、例えば、アルギン酸、Ｐｒｉｍｏｇｅｌもしくはコーンスターチ；潤滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウムもしくはＳｔｅｒｏｔｅｓ；流動促進剤、例えばコロイド状二酸化ケイ素；甘味剤、例えば、ショ糖もしくはサッカリン；または着香剤、例えば、ペパーミント、ハッカ、サリチル酸メチルまたはオレンジ香料。
【０２７６】
吸入による投与については、化合物は、適切な噴射剤、例えば二酸化炭素などの気体を含む加圧容器もしくはディスペンサーまたはネブライザーからエアゾールスプレーの形態で送達される。
【０２７７】
全身投与も経粘膜的または経皮的手段によってもよい。経粘膜的または経皮的投与のために、浸透することになるバリアに適した浸透剤が製剤で使用される。そのような浸透剤は一般に当技術分野で既知であり、例えば、経粘膜的投与については、デタージェント、胆汁酸塩及びフシジン酸誘導体が挙げられる。経粘膜的投与は、経鼻噴霧剤または坐剤を使用して達成することができる。経皮投与については、活性化合物は、一般に当技術分野で既知のように、軟膏剤、膏薬、ゲル剤またはクリーム剤に製剤化される。
【０２７８】
化合物は、（例えばココアバター及び他のグリセリドなどの従来の坐剤基剤を用いる）坐剤または直腸送達のための停留浣腸の形態で調製することもできる。
【０２７９】
一実施形態では、活性化合物は、埋め込み体及びマイクロカプセル化送達系を含めた制御放出製剤のように、体からの急速な排除から化合物を保護する担体とともに調製される。エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル及びポリ乳酸のような、生分解性の生体適合性ポリマーを使用することができる。そのような製剤の調製方法は当業者には明白である。材料は、Ａｌｚａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ及びＮｏｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．から市販品として入手することもできる。リポソームの懸濁液も医薬的に許容される担体として使用することができる。これらは、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号に記載されているような当業者に知られている方法に従って調製することができる。
【０２８０】
投与の容易さ及び投薬量の均一性の理由で、投薬単位形態で経口または非経口組成物を製剤化することは特に有利である。本明細書で使用する場合、投薬単位形態は、治療される対象に対する単位投薬量として適する、物理的に別々の単位を指し、各単位は、必要とされる医薬担体とともに、所望の治療効果をもたらすように計算された所定量の活性化合物を含む。本発明の投薬単位形態の仕様は、活性化合物の特有な特性及び達成されるべき特定の治療効果ならびに個体の治療のためのそのような活性化合物を配合する技術に付随する制限によって決まり、これらに直接的に依存している。
【０２８１】
投与のための指示書とともに医薬組成物を容器、パックまたはディスペンサーに含めることができる。
【０２８２】
３．１．０薬物粒子製剤
一態様では、本発明は医薬的使用のための薬物粒子製剤を提供する。粒子製剤は、典型的には薬物を含み、１種または複数の安定化成分（本明細書では、「賦形剤」とも称される）を含む。安定化成分の例としては、限定されないが、炭水化物、抗酸化剤、アミノ酸、緩衝液、無機化合物及び界面活性剤が挙げられる。
【０２８３】
実施形態のうちのいずれかでは、粒子製剤は、約５０ｗｔ％〜約９０ｗｔ％の薬物、約５０ｗｔ％〜約８５ｗｔ％の薬物、約５５ｗｔ％〜約９０ｗｔ％の薬物、約６０ｗｔ％〜約９０ｗｔ％の薬物、約６５ｗｔ％〜約８５ｗｔ％の薬物、約６５ｗｔ％〜約９０ｗｔ％の薬物、約７０ｗｔ％〜約９０ｗｔ％の薬物、約７０ｗｔ％〜約８５ｗｔ％の薬物、約７０ｗｔ％〜約８０ｗｔ％の薬物または約７０ｗｔ％〜約７５ｗｔ％の薬物を含むことができる。
【０２８４】
実施形態のうちのいずれかでは、粒子製剤は、上記の薬物及び１種または複数の安定化剤を含む。安定化剤は、例えば、炭水化物、抗酸化剤、アミノ酸、緩衝液、無機化合物または界面活性剤でもよい。粒子製剤中の安定化剤の量は、本明細書の教示を考慮して、安定化剤の活性及び製剤の所望の特性に基づいて実験的に決定することができる。
【０２８５】
典型的には、製剤中の炭水化物の量は、凝集の問題によって決定される。一般に、炭水化物量は、薬物に結合していない過剰な炭水化物による、水の存在下での結晶成長の促進を回避するために、高すぎてはならない。
【０２８６】
典型的には、製剤中の抗酸化剤の量は酸化問題によって決定されるが、製剤中のアミノ酸の量は、酸化問題及び／または噴霧乾燥間の粒子の成形性によって決定される。
【０２８７】
典型的には、製剤中の緩衝液の量は、前処理問題、安定性問題及び噴霧乾燥間の粒子の成形性によって決定される。緩衝液は、すべての安定化剤が可溶化される場合に、処理、例えば、溶液調製及び噴霧乾燥の間に薬物を安定化するのに必要とされ得る。
【０２８８】
粒子製剤に含まれ得る炭水化物の例としては、限定されないが、単糖類（例えば、フルクトース、マルトース、ガラクトース、グルコース、Ｄ−マンノース及びソルボース）、二糖類（例えば、ラクトース、ショ糖、トレハロース及びセロビオース）、多糖類（例えば、ラフィノース、メレチトース、マルトデキストリン、デキストラン及びデンプン）ならびにアルジトール（非環式ポリオール；例えば、マンニトール、キシリトール、マルチトール、ラクチトール、キシリトール、ソルビトール、ピラノシルソルビトール及びミオイノシトール）が挙げられる。適切な炭水化物としては、二糖類及び／または非還元糖、例えば、ショ糖、トレハロース及びラフィノースが挙げられる。
【０２８９】
粒子製剤に含まれ得る抗酸化剤の例としては、限定されないが、メチオニン、アスコルビン酸、チオ硫酸ナトリウム、カタラーゼ、白金、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、クエン酸、システイン、チオグリセロール、チオグリコール酸、チオソルビトール、ブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシルトルエン及び没食子酸プロピルが挙げられる。さらに、容易に酸化するアミノ酸、例えば、システイン、メチオニン及びトリプトファンを抗酸化剤として使用することができる。
【０２９０】
粒子製剤に含まれ得るアミノ酸の例としては、限定されないが、アルギニン、メチオニン、グリシン、ヒスチジン、アラニン、Ｌ−ロイシン、グルタミン酸、イソ−ロイシン、Ｌ−スレオニン、２−フェニルアミン、バリン、ノルバリン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、セリン、アスパラギン、システイン、チロシン、リジン及びノルロイシンが挙げられる。適切なアミノ酸としては、容易に酸化するもの、例えば、システイン、メチオニン及びトリプトファンが挙げられる。
【０２９１】
粒子製剤に含まれ得る緩衝液の例としては、限定されないが、クエン酸、ヒスチジン、コハク酸、リン酸、マレイン酸、トリス、酢酸、炭水化物及びｇｌｙ−ｇｌｙが挙げられる。適切な緩衝液としては、クエン酸、ヒスチジン、コハク酸及びトリスが挙げられる。
【０２９２】
粒子製剤に含まれ得る無機化合物の例としては、限定されないが、ＮａＣｌ、Ｎａ２ＳＯ４、ＮａＨＣＯ３、ＫＣｌ、ＫＨ２ＰＯ４、ＣａＣｌ２及びＭｇＣｌ２が挙げられる。
【０２９３】
さらに、粒子製剤は、他の安定化剤／賦形剤、例えば、界面活性剤及び塩を含むことができる。界面活性剤の例としては、限定されないが、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）（ＢＡＳＦ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｍｏｕｎｔ  Ｏｌｉｖｅ、Ｎ．Ｊ．）Ｆ６８及びドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）が挙げられる。塩の例としては、限定されないが、塩化ナトリウム、塩化カルシウム及び塩化マグネシウムが挙げられる。
【０２９４】
３．１．１例示的薬物
薬物粒子製剤は薬物を含む。薬物は、任意の生理的または薬理学的に活性な物質、特にヒトまたは動物の体に送達されることが知られているものでもよい。
【０２９５】
適切な薬物としては、限定されないが、ペプチド、タンパク質、ポリペプチドまたはこれらの種の合成類似体及びこれらの混合物が挙げられる。
【０２９６】
一実施形態では、好ましい薬物としては巨大分子が挙げられる。そのような巨大分子としては、限定されないが、薬理学的に活性なペプチド、タンパク質またはポリペプチドが挙げられる。本発明の実施に有用な多数のペプチド、タンパク質またはポリペプチドが本明細書に記載される。記載されるペプチド、タンパク質またはポリペプチドに加えて、これらのペプチド、タンパク質またはポリペプチドの改変体も当業者に知られており、本明細書に提供されるガイダンスに従って本発明の実施で使用することができる。そのような改変体としては、限定されないが、アミノ酸類似体、アミノ酸模倣体、類似体ポリペプチドまたは誘導体ポリペプチドが挙げられる。さらに、本明細書に開示される薬物は、単独で、または組み合わせて（例えば、薬物の混合物または複数の装置を使用して；米国特許公開第２００９／０２０２６０８号）製剤化または投与することができる。
【０２９７】
本発明のいくつかの実施形態は、配列番号４〜１３６、１３８、１３９及び１４３〜１４９のポリペプチドの使用を含む。
【０２９８】
本発明のいくつかの実施形態は、第２のポリペプチド、例えば、非限定例として、インスリン分泌性ペプチド、ペプチドホルモン、例えば、グルカゴン及びインクレチン模倣物（例えば、ＧＬＰ−１及びエクセナチド）ならびにこれらのペプチド類似体及びペプチド誘導体；ＰＹＹ（ペプチドＹＹ、ペプチドチロシンチロシンとしても知られる）ならびにそのペプチド類似体及びペプチド誘導体、例えば、ＰＹＹ（３−３６）；オキシントモジュリンならびにそのペプチド類似体及びペプチド誘導体；ならびに胃抑制ペプチド（ＧＩＰ）ならびにそのペプチド類似体及びペプチド誘導体と組み合わせたグルカゴン受容体選択的アゴニストポリペプチドの使用を含む。
【０２９９】
３形態のペプチド、ＧＬＰ−１（１−３７）、ＧＬＰ−１（７−３７）及びＧＬＰ−１（７−３６）アミドを含めたＧＬＰ−１ならびにＧＬＰ−１のペプチド類似体は、インスリン分泌を刺激する（すなわち、インスリン分泌性である）ことが示されており、これは細胞によるグルコースの取り込みを含み、その結果、血清グルコース濃度の低下をもたらす（例えば、Ｍｏｊｓｏｖ，Ｓ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，４０：３３３−３４３（１９９２）を参照されたい）。
【０３００】
インスリン分泌作用を示す多数のＧＬＰ−１ペプチド誘導体及びペプチド類似体が当技術分野で既知であり（例えば、米国特許第５，１１８，６６６号、第５，１２０，７１２号、第５，５１２，５４９号、第５，５４５，６１８号、第５，５７４，００８号、第５，５７４，００８号、第５，６１４，４９２号、第５，９５８，９０９号、第６，１９１，１０２号、第６，２６８，３４３号、第６，３２９，３３６号、第６，４５１，９７４号、第６，４５８，９２４号、第６，５１４，５００号、第６，５９３，２９５号、第６，７０３，３５９号、第６，７０６，６８９号、第６，７２０，４０７号、第６，８２１，９４９号、第６，８４９，７０８号、第６，８４９，７１４号、第６，８８７，４７０号、第６，８８７，８４９号、第６，９０３，１８６号、第７，０２２，６７４号、第７，０４１，６４６号、第７，０８４，２４３号、第７，１０１，８４３号、第７，１３８，４８６号、第７，１４１，５４７号、第７，１４４，８６３及び第７，１９９，２１７号を参照されたい）、ならびに臨床試験中である（例えば、タスポグルチド及びアルビグルチド）。本発明の実施に有用なＧＬＰ−１ペプチド誘導体の一例はＶｉｃｔｏｚａ（登録商標）（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ  Ａ／Ｓ、Ｂａｇｓｖａｅｒｄ  ＤＫ）（リラグルチド；米国特許第６，２６８，３４３号、第６，４５８，９２４号及び第７，２３５，６２７号）である。１日１回注射可能なＶｉｃｔｏｚａ（登録商標）（リラグルチド）は米国、欧州及び日本で市販されている。参照の便宜上、本明細書では、インスリン分泌活性を有するＧＬＰ−１ペプチド、ＧＬＰ−１ペプチド誘導体及びＧＬＰ−１ペプチド類似体のファミリーは、まとめて「ＧＬＰ−１」と称される。
【０３０１】
エクセナチド分子はエキセンディン−４（Ｋｏｌｔｅｒｍａｎ  Ｏ．Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．８８（７）：３０８２−９（２００３））のアミノ酸配列を有し、化学合成または組換発現によって生成される。１日２回注射可能なエクセナチドは米国及び欧州で市販されており、Ｂｙｅｔｔａ（登録商標）（Ａｍｙｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．）の商品名で販売されている。エキセンディン−３及びエキセンディン−４は当技術分野で既知であり、Ｈｅｌｏｄｅｒｍａ種から最初に単離された（Ｅｎｇ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６５：２０２５９−６２（１９９０）；Ｅｎｇ．，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ，２６７：７４０２−０５（１９９２））。２型糖尿病の治療及び高血糖の予防のためのエキセンディン−３及びエキセンディン−４の使用が提案された（例えば、米国特許第５，４２４，２８６号を参照されたい）。（例えば、エキセンディン−４アゴニストを含めた）多数のエクセナチドペプチド誘導体及びペプチド類似体が当技術分野で既知である（例えば、米国特許第５，４２４，２８６号、第６，２６８，３４３号、第６，３２９，３３６号、第６，５０６，７２４号、第６，５１４，５００号、第６，５２８，４８６号、第６，５９３，２９５号、第６，７０３，３５９号、第６，７０６，６８９号、第６，７６７，８８７号、第６，８２１，９４９号、第６，８４９，７１４号、第６，８５８，５７６号、第６，８７２，７００号、第６，８８７，４７０号、第６，８８７，８４９号、第６，９２４，２６４号、第６，９５６，０２６号、第６，９８９，３６６号、第７，０２２，６７４号、第７，０４１，６４６号、第７，１１５，５６９号、第７，１３８，３７５号、第７，１４１，５４７号、第７，１５３，８２５及び第７，１５７，５５５号を参照されたい）。本発明の実施に有用なエクセナチド誘導体の一例はリキシセナチド（ＺＰ１０、ＡＶＥ００１０としても知られる）（例えば、米国特許第６，５２８，４８６号を参照されたい）であり、これは臨床試験中である。参照の便宜上、本明細書では、エクセナチドペプチド（例えば、エキセンディン−３、エキセンディン−４及びエキセンディン−４−アミドを含める）、エクセナチドペプチド誘導体及びエクセナチドペプチド類似体のファミリーは、「エクセナチド」とまとめて称される。
【０３０２】
ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）は３６アミノ酸残基のペプチドアミドである。ＰＹＹは腸の運動性及び血流を阻害し（Ｌａｂｕｒｔｈｅ，Ｍ．，Ｔｒｅｎｄｓ  ＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌＭｅｔａｂ．１（３）：１６８−７４（１９９０）、腸分泌を媒介し（Ｃｏｘ，Ｈ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  １０１（２）：２４７−５２（１９９０）、Ｐｌａｙｆｏｒｄ，Ｒ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ  ３３５（８７０５）：１５５５−７（１９９０））、正味吸収を刺激する（ＭａｃＦａｙｄｅｎ，Ｒ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅｓ  ７（３）：２１９−２７（１９８６））。２つの主要なインビボ変異体、ＰＹＹ（１−３６）及びＰＹＹ（３−３６）が同定されている（例えばＥｂｅｒｌｅｉｎ，Ｇ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  １０（４），７９７−８０３（１９８９））。ＰＹＹの配列ならびにそのペプチド類似体及びペプチド誘導体は当技術分野で既知である（例えば、米国特許第５，５７４，０１０号及び第５，５５２，５２０号）。
【０３０３】
オキシントモジュリンは、食欲を抑制し、体重減少を促進することが分かっている、結腸に見られる天然に存在する３７アミノ酸のペプチドホルモンである（Ｗｙｎｎｅ  Ｋ，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｏｂｅｓ（Ｌｏｎｄ）３０（１２）：１７２９−３６（２００６））。オキシントモジュリンの配列ならびにそのペプチド類似体及びペプチド誘導体は当技術分野で既知である（例えば、Ｂａｔａｉｌｌｅ  Ｄ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ２（Ｓｕｐｐｌ  ２）：４１−４４（１９８１）及び米国特許公開第２００５／００７０４６９号及び第２００６／００９４６５２号）。
【０３０４】
胃抑制ペプチド（ＧＩＰ）はインスリン分泌性ペプチドホルモンである（Ｅｆｅｎｄｉｃ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｈｏｒｍ  Ｍｅｔａｂ  Ｒｅｓ．３６：７４２−６（２００４））であり、インスリンを分泌するように膵臓を刺激する吸収された脂肪及び炭水化物に応答して、十二指腸及び空腸の粘膜によって分泌される。ＧＩＰは、生物学的に活性な４２アミノ酸のペプチドとして循環する。ＧＩＰはグルコース依存的インスリン分泌タンパク質としても知られる。ＧＩＰは、グルコースの存在下で膵ベータ細胞からのインスリン分泌を刺激する、４２アミノ酸の胃腸調節ペプチドである（Ｔｓｅｎｇ，Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ９０：１９９２−１９９６（１９９３））。ＧＩＰの配列ならびにそのペプチド類似体及びペプチド誘導体は当技術分野で既知である（例えば、Ｍｅｉｅｒ  Ｊ．Ｊ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｍｅｔａｂ  Ｒｅｓ  Ｒｅｖ．２１（２）：９１−１１７（２００５）及びＥｆｅｎｄｉｃ  Ｓ．，Ｈｏｒｍ  Ｍｅｔａｂ  Ｒｅｓ．３６（１１−１２）：７４２−６（２００４））。
【０３０５】
グルカゴンは膵臓のアルファ細胞で産生されるペプチドホルモンであり、血流のグルコース濃度を上げる。その効果は、グルコース濃度を低下させるインスリンの効果の逆である。膵臓は、血流のグルコース濃度が低下しすぎた場合にグルカゴンを放出する。グルカゴンは肝臓に貯蔵グリコーゲンをグルコースに変換させ、これが血流に放出される。高血中グルコースレベルはインスリンの放出を刺激する。インスリンによって、グルコースがインスリン依存的組織によって取り込まれ、使用されることが可能になる。したがって、グルカゴン及びインスリンは、血中グルコースレベルを安定レベルに維持するフィードバックシステムの一部である。
【０３０６】
グルカゴン様ペプチド−２（ＧＬＰ−２）は、ヒトにおいて配列ＨＡＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤ（配列番号２００）を有する、３３アミノ酸のペプチドである。ＧＬＰ−２は、関連したグルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）も遊離するプロセスにおいて、プログルカゴンの特異的翻訳後タンパク質分解性切断によって生成される。ＧＬＰ−２は、腸内分泌Ｌ細胞によって、及び中枢神経系の様々なニューロンによって産生される。腸のＧＬＰ−２は、栄養素摂取の際にＧＬＰ−１とともに共分泌される。外部から投与される場合、ＧＬＰ−２は、ヒト及びげっ歯類において、腸の成長、腸機能の増強、骨破壊の低減及び神経保護を含めたいくつかの効果をもたらす。ＧＬＰ−２は、腸の成長と栄養素摂取をともなう代謝とを結びつけるように、内分泌様式で作用することができる。
【０３０７】
一部のペプチドの半減期の例は以下の通りである：エクセナチド、およそ２．５時間；ＧＬＰ−１、およそ２分間；ＧＩＰ、およそ５分；ＰＹＹ、およそ８分；グルカゴン、およそ６分；オキシントモジュリン、およそ６分；及びＧＬＰ−２、およそ６分。
【０３０８】
薬物はまた、限定されないが、以下を含めた様々な形態であってもよい：無電荷分子；分子複合体の成分；及び薬理学的に許容される塩、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、ラウリン酸塩、パルミチン酸塩、リン酸塩、硝酸塩、ホウ酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩またはサリチル酸塩。酸性の薬物については、金属の塩、アミンまたは有機陽イオン、例えば、四級アンモニウムを用いることができる。さらに、本発明の目的に適する溶解特性を有する、薬物の単純誘導体、例えば、エステル、エーテル、アミドなどを本明細書で使用することもできる。
【０３０９】
上記の薬物及び当業者に既知の他の薬物は、限定されないが、以下を含めた様々な状態の治療方法に有用である：慢性疼痛、血友病及び他の血液障害、内分泌障害、代謝障害、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、アルツハイマー病、心血管疾患（例えば、心不全、アテローム性動脈硬化症及び急性冠動脈症候群）、リウマチ性障害、糖尿病（１型、２型糖尿病、ヒト免疫不全ウイルス治療誘導性、成人潜在性自己免疫性糖尿病及びステロイド誘導性を含める）、無自覚性低血糖、拘束性肺疾患、慢性閉塞性肺疾患、脂肪萎縮症、メタボリックシンドローム、白血病、肝炎、腎不全、感染症（細菌感染症、ウイルス感染症（例えば、ヒト免疫不全ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、黄熱病ウイルス、西ナイルウイルス、デングウイルス、マールブルグウイルス及びエボラウイルスによる感染症）ならびに寄生虫感染を含める）、遺伝性疾患（例えば、セレブロシダーゼ欠損症及びアデノシンデアミナーゼ欠損症）、高血圧、敗血症性ショック、自己免疫疾患（例えば、グレーブス病、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症及び関節リウマチ）、ショック及び消耗性障害、嚢胞性線維症、乳糖不耐症、クローン病、炎症性腸疾患、胃腸癌（結腸癌及び直腸癌を含める）、乳癌、白血病、肺癌、膀胱癌、腎臓癌、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、甲状腺癌、子宮内膜癌及び他の癌。さらに、上記の薬剤のいくつかは、限定されないが、結核、マラリア、リーシュマニア症、トリパノソーマ症（睡眠病及びシャーガス病）ならびに寄生虫を含めた、長期にわたる治療を必要とする感染症の治療に有用である。
【０３１０】
薬物粒子製剤中の薬物の量は、薬物が送達される対象において所望の治療結果を達成するために治療有効量の薬剤を送達するのに必要な量である。実際には、これは例えば、特定の薬剤、状態の重症度及び所望の治療効果のような変数によって変動する。有益な薬剤及びその投薬単位量は、Ｇｏｏｄｍａｎ  ＆  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，１１ｔｈ  Ｅｄ．，（２００５），ＭｃＧｒａｗ  Ｈｉｌｌ；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  １８ｔｈ  Ｅｄ．，（１９９５），Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、及びＭａｒｔｉｎ’ｓ  Ｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１．００ｅｄｉｔｉｏｎ（２００５），Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓにおける従来技術で既知である。さらに、非常に濃縮された薬物粒子が、米国特許公開第２０１０／００９２５６６号に記載されている。典型的には、浸透圧性送達システムについては、薬物製剤を含むチャンバーの容量は、約１００μｌ〜約１０００μｌの間、より好ましくは約１４０μｌ及〜約２００μｌの間である。一実施形態では、薬物製剤を含むチャンバーの容量は約１５０μｌである。
【０３１１】
本発明の薬物粒子製剤は、好ましくは、送達温度で少なくとも１か月、好ましくは少なくとも３か月、より好ましくは少なくとも６か月、より好ましくは少なくとも１２か月にわたって化学的及び物理的に安定である。送達温度は、典型的には、通常のヒト体温、例えば約３７℃、またはそれよりわずかに高い、例えば約４０℃である。さらに、本発明の薬物粒子製剤は、好ましくは、貯蔵温度で少なくとも３か月、好ましくは少なくとも６か月、より好ましくは少なくとも１２か月にわたって化学的及び物理的に安定である。貯蔵温度の例としては、冷蔵温度、例えば約５℃、または室温、例えば約２５℃が挙げられる。
【０３１２】
薬物粒子製剤は、送達温度で約３か月後、好ましくは約６か月後、好ましくは約１２か月後に、及び貯蔵温度で約６か月後、約１２か月後及び好ましくは約２４か月後に、薬物粒子の約２５％未満、好ましくは約２０％未満、より好ましくは約１５％未満、より好ましくは約１０％未満、より好ましくは約５％未満の分解産物が形成される場合、化学的に安定であると考えることができる。
【０３１３】
薬物粒子製剤は、送達温度で約３か月後、好ましくは約６か月後に、及び貯蔵温度で約６か月後に、好ましくは約１２か月後に、約１０％未満、好ましくは約５％未満、より好ましくは約３％未満、より好ましくは１％未満の薬物の凝集物が形成される場合、物理的に安定であると考えることができる。
【０３１４】
薬物粒子製剤中の薬物がタンパク質である場合、タンパク質溶液は凍結状態で維持され、凍結乾燥または噴霧乾燥されて、固体状態にされる。Ｔｇ（ガラス転移温度）は、安定的なタンパク質組成物を達成するうえで考慮する１つの因子であり得る。いかなる特定の理論にも束縛されることを意図するものではないが、ペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質を安定化するための高Ｔｇ非結晶固体の形成の理論が医薬品産業で利用されている。一般に、非結晶固体が１００℃などのより高いＴｇを有するならば、ペプチド生成物は、室温でまたはさらに４０℃で貯蔵される場合、貯蔵温度がＴｇより低いので、可動性を有さないであろう。分子情報を使用する計算によって、ガラス転移温度が５０℃の貯蔵温度より高い場合、分子についてゼロ可動性が存在することが示された。分子のゼロ可動性はより優れた安定性と相関する。Ｔｇは、製品製剤中の水分濃度にも依存する。一般に、水分が多いほど組成物のＴｇは低下する。
【０３１５】
したがって、本発明のいくつかの態様では、安定性を向上させるために、より高いＴｇを有する賦形剤、例えば、ショ糖（Ｔｇ＝７５℃）及びトレハロース（Ｔｇ＝１１０℃）をタンパク質製剤中に含めることができる。好ましくは、粒子製剤は、噴霧乾燥、凍結乾燥、乾燥、フリーズドライ、粉砕、顆粒化、超音波ドロップ形成、結晶化、沈殿または成分の混合物から粒子を形成するために当技術分野で利用可能な他の技法などの方法を使用して、粒子に形成可能である。本発明の一実施形態では、粒子は噴霧乾燥される。粒子は、好ましくは形状及びサイズが実質的に均一である。
【０３１６】
粒子は、典型的には、埋め込み式浸透圧性送達装置を介して粒子が送達され得るようにサイズ設定される。粒子の均一な形状及びサイズは、典型的には、そのような送達装置からの一定且つ均一な放出速度をもたらすのに役立つが、非正規の粒径分布プロファイルを有する粒子調製物を使用することもできる。例えば、送達オリフィスを有する典型的な埋め込み式浸透圧性送達装置では、粒子サイズは、送達オリフィスの直径の約３０％未満、より好ましくは約２０％未満、より好ましくは約１０％未満である。埋め込み体の送達オリフィスの直径が約０．５ｍｍである、浸透圧性送達システムを用いて使用するための粒子製剤の一実施形態では、粒径は、例えば、約１５０ミクロン未満〜約５０ミクロンでもよい。埋め込み体の送達オリフィスの直径が約０．１ｍｍである、浸透圧性送達システムを用いて使用するための粒子製剤の一実施形態では、粒径は、例えば、約３０ミクロン未満〜約１０ミクロンでもよい。一実施形態では、オリフィスは約０．２５ｍｍ（２５０ミクロン）であり、粒径は約２ミクロン〜約５ミクロンである。
【０３１７】
粒子の集団は粒径分布の原理に従うことを当業者なら認識するであろう。広く使用されている、当分野で認められた粒径分布を説明する方法としては、例えば、平均直径及びＤ値、例えばＤ５０値が挙げられ、これは、所与の試料の粒径の範囲の平均直径を示すのに一般に使用される。
【０３１８】
粒子製剤の粒子は、約２ミクロン〜約１５０ミクロンの間の直径、例えば、１５０ミクロン未満の直径、１００ミクロン未満の直径、５０ミクロン未満の直径、３０ミクロン未満の直径、１０ミクロン未満の直径、５ミクロン未満の直径及び約２ミクロンの直径を有する。好ましくは、粒子は約２ミクロン〜約５０ミクロンの間の直径を有する。
【０３１９】
単離されたグルカゴン特異的アゴニストポリペプチドを含む粒子製剤の粒子は、約０．３ミクロン〜約１５０ミクロンの間の平均直径を有する。単離されたグルカゴン特異的アゴニストポリペプチドを含む粒子製剤の粒子は、約２ミクロン〜約１５０ミクロンの間の平均直径、例えば、１５０ミクロン未満の平均直径、１００ミクロン未満の平均直径、５０ミクロン未満の平均直径、３０ミクロン未満の平均直径、１０ミクロン未満の平均直径、５ミクロン未満の平均直径及び約２ミクロンの平均直径を有する。いくつかの実施形態では、粒子は、約０．３ミクロン〜５０ミクロンの間、例えば、約２ミクロン〜約５０ミクロンの間の平均直径を有する。いくつかの実施形態では、粒子は、０．３ミクロン〜５０ミクロンの間、例えば、約２ミクロン〜約５０ミクロンの間の平均直径を有し、ここでは、各粒子は約５０ミクロン未満の直径である。
【０３２０】
典型的には、粒子製剤の粒子は、懸濁ビヒクルに組み込まれる場合、送達温度で、約３か月未満では沈降せず、好ましくは約６か月未満では沈降せず、より好ましくは約１２か月未満では沈降せず、より好ましくは約２４か月未満では沈降せず、最も好ましくは、送達温度で約３６か月未満では沈降しない。懸濁ビヒクルは、典型的には、約５，０００〜約３０，０００ポアズの間、好ましくは約８，０００〜約２５，０００ポアズの間、より好ましくは約１０，０００〜約２０，０００ポアズの間の粘度を有する。一実施形態では、懸濁ビヒクルは、約１５，０００ポアズ±約３，０００ポアズの粘度を有する。一般的に言えば、小さい粒子ほど、大きな粒子よりも、粘性懸濁ビヒクルにおける沈降速度が低い傾向がある。したがって、ミクロン〜ナノサイズの粒子が典型的には望ましい。粘性懸濁製剤では、シミュレーションモデリング研究に基づくと、本発明の約２ミクロン〜約７ミクロンの粒子は室温で少なくとも２０年間沈降しないであろう。本発明の粒子製剤の一実施形態では、埋め込み式浸透圧性送達装置で使用するために、約５０ミクロン未満、より好ましくは約１０ミクロン未満、より好ましくは約２ミクロン〜約７ミクロンの範囲のサイズの粒子を含む。
【０３２１】
一実施形態では、薬物粒子製剤は、上記の薬物、１種または複数の安定化剤及び場合により緩衝液を含む。安定化剤は、例えば、炭水化物、抗酸化剤、アミノ酸、緩衝液、無機化合物または界面活性剤でもよい。粒子製剤中の安定化剤及び緩衝液の量は、本明細書の教示を考慮して、安定化剤及び緩衝液の活性ならびに製剤の所望の特性に基づいて、実験的に決定することができる。典型的には、製剤中の炭水化物の量は、凝集の問題によって決定される。一般に、炭水化物量は、薬物に結合していない過剰な炭水化物による、水の存在下での結晶成長の促進を回避するために、高すぎてはならない。典型的には、製剤中の抗酸化剤の量は酸化問題によって決定されるが、製剤中のアミノ酸の量は、酸化問題及び／または噴霧乾燥間の粒子の成形性によって決定される。典型的には、製剤中の緩衝液の量は、前処理問題、安定性問題及び噴霧乾燥間の粒子の成形性によって決定される。緩衝液は、すべての賦形剤が可溶化される場合に、処理、例えば、溶液調製及び噴霧乾燥の間に薬物を安定化するのに必要とされ得る。
【０３２２】
粒子製剤に含まれ得る炭水化物の例としては、限定されないが、単糖類（例えば、フルクトース、マルトース、ガラクトース、グルコース、Ｄ−マンノース及びソルボース）、二糖類（例えば、ラクトース、ショ糖、トレハロース及びセロビオース）、多糖類（例えば、ラフィノース、メレチトース、マルトデキストリン、デキストラン及びデンプン）ならびにアルジトール（非環式ポリオール；例えば、マンニトール、キシリトール、マルチトール、ラクチトール、キシリトール、ソルビトール、ピラノシルソルビトール及びミオイノシトール）が挙げられる。好ましい炭水化物としては、二糖類及び／または非還元糖、例えば、ショ糖、トレハロース及びラフィノースが挙げられる。
【０３２３】
粒子製剤に含まれ得る抗酸化剤の例としては、限定されないが、メチオニン、アスコルビン酸、チオ硫酸ナトリウム、カタラーゼ、白金、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、クエン酸、システイン、チオグリセロール、チオグリコール酸、チオソルビトール、ブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシルトルエン及び没食子酸プロピルが挙げられる。さらに、容易に酸化するアミノ酸、例えば、システイン、メチオニン及びトリプトファンを抗酸化剤として使用することができる。
【０３２４】
粒子製剤に含まれ得るアミノ酸の例としては、限定されないが、アルギニン、メチオニン、グリシン、ヒスチジン、アラニン、Ｌ−ロイシン、グルタミン酸、イソ−ロイシン、Ｌ−スレオニン、２−フェニルアミン、バリン、ノルバリン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、セリン、アスパラギン、システイン、チロシン、リジン及びノルロイシンが挙げられる。
【０３２５】
粒子製剤に含まれ得る緩衝液の例としては、限定されないが、クエン酸、ヒスチジン、コハク酸、リン酸、マレイン酸、トリス、酢酸、炭水化物及びｇｌｙ−ｇｌｙが挙げられる。
【０３２６】
粒子製剤に含まれ得る無機化合物の例としては、限定されないが、ＮａＣｌ、Ｎａ２ＳＯ４、ＮａＨＣＯ３、ＫＣｌ、ＫＨ２ＰＯ４、ＣａＣｌ２及びＭｇＣｌ２が挙げられる。
【０３２７】
さらに、粒子製剤は、他の賦形剤、例えば、界面活性剤及び塩を含むことができる。界面活性剤の例としては、限定されないが、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）（ＢＡＳＦ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｍｏｕｎｔ  Ｏｌｉｖｅ、Ｎ．Ｊ．）Ｆ６８及びドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）が挙げられる。塩の例としては、限定されないが、塩化ナトリウム、塩化カルシウム及び塩化マグネシウムが挙げられる。
【０３２８】
粒子製剤に含まれるすべての成分は、典型的には、哺乳動物、特にヒトにおける医薬用途について許容される。
【０３２９】
要約すると、選択される薬物または薬物の組み合わせは、固体状態の乾燥粉末剤に製剤化され、これは薬物の最大の化学的及び生物学的安定性を保持する。粒子製剤は高温での長期貯蔵安定性を与えるので、安定的且つ生物学的に効果的な薬物の対象への長期間の送達を可能にする。
【０３３０】
３．２．０ビヒクル製剤及び懸濁製剤
一態様では、懸濁ビヒクルは、薬物粒子製剤が分散される安定的な環境をもたらす。薬物粒子製剤は、懸濁ビヒクル中で（上記のように））化学的及び物理的に安定である。懸濁ビヒクルは、典型的には、薬物を含む粒子を均一に懸濁させるのに十分な粘度の溶液を形成する１種または複数のポリマー及び１種または複数の溶媒を含む。懸濁ビヒクルは、限定されないが、ビヒクルに可溶性である界面活性剤、抗酸化剤及び／または他の化合物を含めた、さらなる成分を含むことができる。
【０３３１】
懸濁ビヒクルの粘度は、典型的には、薬物粒子製剤を貯蔵の間に沈降するのを防ぐのに十分であり、且つ送達方法で、例えば、埋め込み式の浸透圧性送達装置で使用するのに十分である。懸濁ビヒクルは、懸濁ビヒクルが生物環境に応じて、ある期間をかけて崩壊または分解するという点において生分解性であり、一方で、薬物粒子は生物環境で溶解され、粒子中の活性医薬成分（すなわち、薬物）が吸収される。
【０３３２】
実施形態では、懸濁ビヒクルは「単相」懸濁ビヒクルであり、これは、全体にわたって物理的及び化学的に均一な固体、半固体または液体の均質な系である。
【０３３３】
ポリマーが溶解される溶媒は、懸濁製剤の特性、例えば、貯蔵の間の薬物粒子製剤の挙動に影響を及し得る。溶媒は、得られる懸濁ビヒクルが水性環境に接触した際に相分離を示すように、ポリマーと組み合わせて選択することができる。本発明のいくつかの実施形態では、溶媒は、得られる懸濁ビヒクルがおよそ約１０％未満の水を有する水性環境に接触した際に相分離を示すように、ポリマーと組み合わせて選択することができる。
【０３３４】
溶媒は、水と混和性でない許容される溶媒でもよい。溶媒は、高濃度で、例えば約３０％を越えるポリマー濃度で、溶媒に可溶性であるように、選択することができる。本発明の実施に有用な溶媒の例としては、限定されないが、ラウリルアルコール、ベンジル安息香酸、ベンジルアルコール、乳酸ラウリル、デカノール（デシルアルコールとも呼ばれる）、乳酸エチルヘキシル及び長鎖（Ｃ８〜Ｃ２４）脂肪族アルコール、エステルまたはこれらの混合物が挙げられる。懸濁ビヒクルで使用される溶媒は、これが低水分含量を有するという点において「乾燥」していてもよい。懸濁ビヒクルの製剤で使用するのに好ましい溶媒としては、乳酸ラウリル、ラウリルアルコール、ベンジル安息香酸及びこれらの混合物が挙げられる。
【０３３５】
本発明の懸濁ビヒクルの製剤のためのポリマーの例としては、限定されないが、ポリエステル（例えば、ポリ乳酸及びポリ乳酸のポリグリコール酸）、ピロリドンを含むポリマー（例えば、およそ２，０００〜およそ１，０００，０００の範囲の分子量を有するポリビニルピロリドン）、不飽和アルコールのエステルまたはエーテル（例えば、酢酸ビニル）、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロックコポリマーまたはこれらの混合物が挙げられる。ポリビニルピロリドンは、粘度指数であるそのＫ値（例えば、Ｋ−１７）で特徴づけすることができる。一実施形態では、ポリマーは２，０００〜１，０００，０００の分子量を有するポリビニルピロリドンである。好ましい実施形態では、ポリマーはポリビニルピロリドンＫ−１７（典型的には、７，９００〜１０，８００のおよその平均分子量範囲を有する）である。懸濁ビヒクルで使用されるポリマーは、１種または複数の異なるポリマーを含むことができ、または異なるグレードの単一ポリマーを含むことができる。懸濁ビヒクルで使用されるポリマーは、乾燥していてもよいし、低水分含量を有していてもよい。
【０３３６】
一般的に言えば、本発明で使用するための懸濁ビヒクルは、所望の性能特性に基づいて組成が変わり得る。一実施形態では、懸濁ビヒクルは、約４０ｗｔ％〜約８０ｗｔ％のポリマー（複数可）及び約２０ｗｔ％〜約６０ｗｔ％の溶媒（複数可）を含むことができる。懸濁ビヒクルの好ましい実施形態は、以下の比：約２５ｗｔ％の溶媒及び約７５ｗｔ％のポリマー、約５０ｗｔ％の溶媒及び約５０ｗｔ％のポリマー、約７５ｗｔ％の溶媒及び約２５ｗｔ％のポリマーで混合されたポリマー（複数可）と溶媒（複数可）から形成されるビヒクルを含む。したがって、いくつかの実施形態では、懸濁ビヒクルは選択された成分を含むことができ、他の実施形態では、選択された成分から本質的に成る。
【０３３７】
懸濁ビヒクルはニュートン挙動を示し得る。懸濁ビヒクルは、典型的には、所定の期間にわたって粒子製剤の均一な分散を維持する粘度をもたらすように製剤化される。この援助は、薬物粒子製剤に含まれる薬物の制御送達をもたらすように調整された懸濁製剤の作製を容易にする。懸濁ビヒクルの粘度は、所望の用途、粒子製剤のサイズ及びタイプならびに懸濁ビヒクル中への粒子製剤の装填によって変動し得る。懸濁ビヒクルの粘度は、使用する溶媒またはポリマーのタイプまたは相対量を変更することによって変えることができる。
【０３３８】
懸濁ビヒクルは、約１００ポアズ〜約１，０００，０００ポアズ、好ましくは約１，０００ポアズ〜約１００，０００ポアズの範囲の粘度を有し得る。好ましい実施形態では、懸濁ビヒクルは、典型的には、３３℃で、約５，０００〜約３０，０００ポアズの間、好ましくは約８，０００〜約２５，０００ポアズの間、より好ましくは約１０，０００〜約２０，０００ポアズの間の粘度を有する。一実施形態では、懸濁ビヒクルは、３３℃で、約１５，０００ポアズ±約３，０００ポアズの粘度を有する。粘度は、平行板レオメーターを使用して、１０−４／秒のずり速度で、３３℃で測定することができる。
【０３３９】
懸濁ビヒクルは、水性環境と接触する場合に相分離を示し得るが、典型的には、懸濁ビヒクルは、温度に応じて実質的に相分離を示さない。例えば、およそ０℃〜およそ７０℃の範囲の温度で、及び４℃〜３７℃〜４℃のサイクルなどの温度サイクルの際に、懸濁ビヒクルは、典型的には、相分離を示さない。
【０３４０】
懸濁ビヒクルは、例えば乾燥箱中などの乾燥条件で、ポリマーと溶媒を混合することによって調製することができる。ポリマーと溶媒をおよそ４０℃〜およそ７０℃などの昇温で混合し、液化させ、単相を形成することができる。乾燥成分から発生する気泡を除去するように、成分を真空下で混ぜることができる。およそ４０ｒｐｍの速度に設定された従来の混合機、例えば二重螺旋刃または同様の混合機を使用して成分を混合することができる。しかし、より速い速度を使用して成分を混合することもできる。一旦成分の液体溶液が得られれば、懸濁ビヒクルを室温に冷却することができる。示差走査熱量測定計（ＤＳＣ）を使用して、懸濁ビヒクルが単相であることを確認することができる。さらに、過酸化物を実質的に低減するまたは実質的に除去するように、ビヒクルの成分（例えば、溶媒及び／またはポリマー）を処理することができる（例えば、メチオニンを用いる処理による；例えば、米国特許出願公開第２００７−００２７１０５号を参照されたい）。
【０３４１】
懸濁製剤を形成するために、薬物粒子製剤が懸濁ビヒクルに加えられる。いくつかの実施形態では、懸濁製剤は薬物粒子製剤及び懸濁ビヒクルを含むことができ、他の実施形態では、薬物粒子製剤及び懸濁ビヒクルから本質的に成る。
【０３４２】
懸濁製剤は、懸濁ビヒクル中に粒子製剤を分散させることによって調製することができる。懸濁ビヒクルを加熱することができ、乾燥条件下で粒子製剤を懸濁ビヒクルに加えることができる。約４０℃〜約７０℃などの昇温で、真空下において、成分を混合することができる。懸濁ビヒクル中で粒子製剤の均一な分散を達成するために、約４０ｒｐｍ〜約１２０ｒｐｍなどの十分な速度で、約１５分などの十分な時間にわたって、成分を混合することができる。混合機は二重螺旋刃でもよいし、他の適切な混合機でもよい。得られた混合物を混合機から取り出し、水が懸濁製剤を汚染することを防ぐために乾燥容器中に密閉し、埋め込み式の薬物送達装置、単位用量容器または複数回用量容器への装填などのさらなる使用前に室温に冷却させることができる。
【０３４３】
懸濁製剤は、典型的には、約１０ｗｔ％未満、好ましくは約５ｗｔ％未満、より好ましくは約４ｗｔ％未満の全体の水分含量を有する。
【０３４４】
好ましい実施形態では、本発明の懸濁製剤は、浸透圧性送達装置から対象に薬物粒子製剤を送達するために、実質的に均質であり、流動可能である。
【０３４５】
要約すると、懸濁ビヒクルの成分は生体適合性を提供する。懸濁ビヒクルの成分は、薬物粒子製剤の安定な懸濁液を形成するのに適した化学−物理的特性を与える。これらの特性としては、限定されないが、以下が挙げられる：懸濁液の粘度、ビヒクルの純度、ビヒクルの残留水分、ビヒクルの密度、乾燥粉末との適合性、埋め込み式装置との適合性、ポリマーの分子量、ビヒクルの安定性ならびにビヒクルの疎水性及び親水性。例えば、ビヒクル組成を変化させること及び懸濁ビヒクルで使用される成分の比を操作することによって、これらの特性を操作及び制御することができる。
【０３４６】
４．０．０懸濁製剤の送達
長期間にわたる、例えば、数週、数か月または約１年までまたはそれ以上にわたるゼロ次の、連続的な、制御された、持続的な化合物の送達を提供するために、本明細書に記載の懸濁製剤を埋め込み式の浸透圧性送達装置で使用することができる。そのような埋め込み式浸透圧性送達装置は、典型的には、所望の流速で所望の期間にわたって、薬物を含む懸濁製剤を送達することができる。従来の技法によって、懸濁製剤を埋め込み式の浸透圧性送達装置に装填することができる。
【０３４７】
一般に、装置を埋め込んでからの対象内の薬物の約６半減期未満内で薬物の所望の血中濃度を達成するように、用量及び送達速度を選択することができる。薬物の血中濃度は、薬物の最適な治療効果を与えるが、薬物の過剰な濃度によって誘導され得る望ましくない副作用を回避し、同時に薬物のピークまたはトラフ血漿濃度と関連する副作用を誘導し得るピーク及びトラフを回避するように、選択される。
【０３４８】
埋め込み式の浸透圧性送達装置は、典型的には、懸濁製剤が送達される少なくとも１つのオリフィスを有するリザーバーを含む。リザーバー内に懸濁製剤を貯蔵することができる。好ましい実施形態では、埋め込み式の薬物送達装置は浸透圧性送達装置であり、ここでは、薬物の送達は浸透圧的に駆動される。いくつかの浸透圧性送達装置及びそれらの構成部品、例えば、ＤＵＲＯＳ（登録商標）送達装置または同様の装置が記載されている（例えば、米国特許第５，６０９，８８５号、第５，７２８，３９６号、第５，９８５，３０５号、第５，９９７，５２７号、第６，１１３，９３８号、第６，１３２，４２０号、第６，１５６，３３１号、第６，２１７，９０６号、第６，２６１，５８４号、第６，２７０，７８７号、第６，２８７，２９５号、第６，３７５，９７８号、第６，３９５，２９２号、第６，５０８，８０８号、第６，５４４，２５２号、第６，６３５，２６８号、第６，６８２，５２２号、第６，９２３，８００号、第６，９３９，５５６号、第６，９７６，９８１号、第６，９９７，９２２号、第７，０１４，６３６号、第７，２０７，９８２号及び第７，１１２，３３５号、第７，１６３，６８８；米国特許公開第２００５／０１７５７０１号、第２００７／０２８１０２４号、第２００８／００９１１７６号及び第２００９／０２０２６０８号を参照されたい）。
【０３４９】
浸透圧性送達装置は、典型的には、浸透圧性エンジン、ピストン及び薬物製剤を含む円筒形のリザーバーから成る。リザーバーは、一方の端部で、制御された速度の半透膜で覆われ、他方の端部で、薬物を含む懸濁製剤が薬物リザーバーから放出される拡散モデレーターで覆われる。ピストンは薬物製剤を浸透圧性エンジンから分離し、密閉を利用して、浸透圧性エンジンコンパートメント中の水が薬物リザーバーに入るのを防止する。拡散モデレーターは、薬物製剤とあわせて、オリフィスを通って体液が薬物リザーバーに入るのを防止するように設計される。
【０３５０】
浸透圧性装置は、浸透の原理に基づいて、所定の速度で薬物を放出する。細胞外流体は、半透過膜を通って浸透圧性送達装置に入り、塩エンジンに直接入り、この塩エンジンが拡張して、遅く且つ一定の送達速度でピストンを動かす。ピストンの運動によって、薬物製剤がオリフィスまたは出口ポートを通して所定のずり速度で放出される。本発明の一実施形態では、浸透圧性装置のリザーバーは懸濁製剤が装填され、ここでは、装置は、長期間（例えば、約１、約３、約６、約９、約１０及び約１２か月）にわたって、治療的に有効な所定の送達速度で、懸濁製剤を対象に送達することができる。
【０３５１】
浸透圧性送達装置からの薬物の放出速度は、典型的には、所定の標的用量の薬物、例えば、１日の間に送達される治療的に有効な１日量を対象に提供し、すなわち、装置からの薬物の放出速度は、対象への治療濃度の薬物の実質的な定常状態送達を提供する。
【０３５２】
典型的には、浸透圧性送達装置については、有益な薬物製剤を含む有益な薬剤チャンバーの容量は、約１００μｌ〜約１０００μｌの間、より好ましくは約１２０μｌ及び約５００μｌの間、より好ましくは約１５０μｌ〜約２００μｌの間である。
【０３５３】
典型的には、浸透圧性送達装置は、皮下薬物送達を提供するために、対象内に、例えば、真皮下または皮下に埋め込まれる。装置（複数可）を、いずれかまたは両方の腕（例えば、上腕の内側、外側または後ろ側）または腹部に、真皮下にまたは皮下に埋め込むことができる。腹部領域の好ましい部位は、肋骨より下及びベルトラインより上に広がる腹部の皮膚の下である。腹部内に１つまたは複数の浸透圧性送達装置を埋め込むためのいくつかの部位を提供するために、腹壁を以下のように４つの四半分に分けることができる：右肋骨より少なくとも２〜３センチメートル下、例えば右肋骨より少なくとも約５〜８センチメートル下及び正中線の右側に少なくとも２〜３センチメートル、例えば、正中線の右側に少なくとも約５〜８センチメートルに広がる右上四半分；ベルトラインから少なくとも２〜３センチメートル上、例えば、ベルトラインから少なくとも約５〜８センチメートル上及び正中線の右側に少なくとも２〜３センチメートル、例えば、正中線の右側に少なくとも約５〜８センチメートルに広がる右下四半分；左肋骨より少なくとも２〜３センチメートル下、例えば、左肋骨より少なくとも約５〜８センチメートル下及び正中線の左側に少なくとも２〜３センチメートル、例えば、正中線の左側に少なくとも約５〜８センチメートルに広がる左上四半分；ならびにベルトラインから少なくとも２〜３センチメートル上、例えば、ベルトラインから少なくとも約５〜８センチメートル上及び正中線の左側に少なくとも２〜３センチメートル、例えば、正中線の左側に少なくとも約５〜８センチメートルに広がる左下四半分。これは、１回または複数回の機会に１つまたは複数の装置の埋め込みに利用可能な複数の部位を提供する。浸透圧性送達装置の埋め込み及び除去は、一般に、局部麻酔（例えば、リドカイン）を使用して、医療専門家によって行われる。
【０３５４】
対象からの浸透圧性送達装置の除去による治療の終了は簡単であり、対象への薬物送達の即時の中止という重要な利点を提供する。
【０３５５】
好ましくは、浸透圧性送達装置は、薬物製剤が送達される排出口（拡散モデレーター）の詰まりまたは閉塞のような理論的状況における偶発性の薬物の過剰またはボーラス送達を防止するために、フェイルセーフ機構を有する。偶発性の薬物の過剰またはボーラス送達を防止するために、浸透圧性送達装置は、リザーバーから拡散モデレーターを部分的にまたは完全に追い出すまたは排出するのに必要とされる圧力が、リザーバーを減圧するのに必要な程度まで半透膜を部分的にまたは完全に追い出すまたは排出するのに必要とされる圧力を超えるように設計及び構築される。そのようなシナリオでは、圧力が他の端部で外側に半透膜を押し、それによって浸透圧を解放するまで、装置内で圧力が高まるであろう。次いで、浸透圧性送達装置は静的になり、もはや薬物製剤を送達しないが、但しピストンがリザーバーと密閉にあるという条件である。
【０３５６】
懸濁製剤は、注入ポンプ、例えば、実験動物（例えば、マウス及びラット）の連続投薬用の微小の注入ポンプであるＡＬＺＥＴ（登録商標）（ＤＵＲＥＣＴ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｃｕｐｅｒｔｉｎｏ、Ｃａｌｉｆ．）浸透圧ポンプで使用することもできる。
【実施例】
【０３５７】
以下の実施例は、本発明の実施方法を当業者に完全に開示及び説明するために提供され、本発明者らが本発明とみなすものの範囲を限定することは意図されない。使用される数（例えば、量、濃度及びパーセント変化）について正確性を確実にするように努力したが、いくらかの実験上の誤差及び偏差が考慮されるべきである。別段指示がない限り、温度は摂氏度であり、圧力は大気圧または大気圧付近である。
【０３５８】
本発明の方法を実施するのに使用される組成物は、医薬製品に必要とされる含有量及び純度に関する仕様を満たす。
【０３５９】
実施例１：グルカゴン受容体選択的アゴニストポリペプチドの生成
表３に提供する本発明のグルカゴンポリペプチドを、固相方法によって、Ｐｒｅｌｕｄｅペプチド合成機（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．、Ｔｕｃｓｏｎ、ＡＺ）で合成し、これは、Ｆｍｏｃストラテジーを使用し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中の２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウラニウムヘキサフルオロリン酸（ＨＢＴＵ）または２−（６−クロロ−１−Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルアミニウムヘキサフルオロリン酸（ＨＣＴＵ）の活性化（５倍モル過剰）及び塩基としてのＮ’Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）、Ｆｍｏｃ脱保護用の２０％ピペリジン／ＤＭＦを用いた。樹脂はＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡ  ＬＬ（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ）またはＮ−α−Ｆｍｏｃ保護され、予め装填されたＷａｎｇ  ＬＬ（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ）であり、２０〜４００μｍｏｌスケールで０．２９〜０．３５ｍｍｏｌ／ｇを装填した。最終的な脱保護及び固体支持体からのペプチドの切断を、（９２．５％のＴＦＡ、２．５％のフェノール、２．５％の水及び２．５％のトリイソプロピルシラン）で２〜３時間樹脂を処理することによって行った。切断したペプチドを冷却ジエチルエーテルを使用して沈殿させた。ジエチルエーテルをデカントし、冷却ジエチルエーテルで固形物を再び粉砕し、遠心分離によってペレット化し、凍結乾燥した。凍結乾燥した固形物を０．１％ＴＦＡ（１０〜１５ｍＬ）を含むアセトニトリル／水の１：１溶液中に再溶解し、３０〜４５分にわたって、３０ｍＬ／ｍｉｎの流速、λ−２１５ｎｍで、０．１％のＴＦＡを含む５〜７５％のアセトニトリル／水の範囲内の３０勾配を使用して、Ｗａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ（商標）ＢＥＨ１３０、ＣＩＳ、１０ｐｍ、１３０Å、３０×２５０ｍｍ  ＩＤカラムで、逆相ＨＰＬＣにより精製した。精製生成物を凍結乾燥し、ＥＳＩ−ＬＣ／ＭＳ及び分析的ＨＰＬＣで分析し、純粋（＞９８％）であることが示された。質量の結果はすべて計算値と一致した。
【０３６０】
ペプチド類似体の特性評価を、３つの方法Ａまたは方法Ｂまたは方法Ｃのうちの１つを使用して、Ｃ１８  ＨＰＬＣ及びＬＣ／ＭＳ分析（Ａｃｑｕｉｔｙ  ＳＱＤ  Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐ、Ｍｉｌｆｏｒｄ、ＭＡ）及び２１５ｎｍと２８０ｎｍの二重吸光度シグナルによりもたらされるＵＶ検出によって行った。
【０３６１】
ＬＣ／ＭＳ条件：方法Ａ：３０分にわたって、流速０．５ｍＬ／ｍｉｎ、λ−２１５ｎｍ、２８０ｎｍで、０．０５％のＴＦＡを含む５〜６５％のアセトニトリル／水を使用して、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  ＵＰＬＣ  Ａｅｒｉｓ（商標）ペプチドＸＢ  Ｃ１８  ３５カラム、１．７ｐｍ、２．１×１００ｍｍまたはＡＣＱＵｉＴＹ  ＢＥＨ３００もしくはＢＥＨ１３０  ＣＴ８カラム、１．７７ｐｍ、２．１×１００ｍｍで行った。
【０３６２】
Ｃ１８  ＨＰＬＣ条件：方法Ａ：２５℃、３０分にわたる０．０５％のＴＦＡを含む５〜６５％のアセトニトリル／水、流速０．５ｍＬ／ｍｉｎ、λ２１５ｎｍ、λ２８０ｎｍで、Ａｃｑｕｉｔｙ  ＢＥＨ１３０、Ｃ１８カラム、１．７μｍ、１００×２．１０ｍｍカラムでＵＰＬＣ分析を行った。
【０３６３】
方法Ｂ：２５℃、２０分にわたる０．０５％のＴＦＡを含む５〜６５％のアセトニトリル／水、流速０．５ｍＬ／ｍｉｎ、λ２１５ｎｍ、λ２８０ｎｍで、Ａｃｑｕｉｔｙ  ＢＥＨ１３０、Ｃ１８カラム、１．７μｍ、１００×２．１０ｍｍカラムでＵＰＬＣ分析を行った。
【０３６４】
方法Ｃ：２５℃、１０分にわたる０．０５％のＴＦＡを含む５〜６５％のアセトニトリル／水、流速０．５ｍＬ／ｍｉｎ、λ２１５ｎｍ、λ２８０ｎｍで、Ａｃｑｕｉｔｙ  ＢＥＨ１３０、Ｃ１８カラム、１．７μｍ、１００×２．１０ｍｍカラムでＵＰＬＣを分析を行った。ＰＬＮＯ（ニードルオーバーフィルをともなう部分ループ）注入モードを使用して、５．０ｕＬの試料を注入した。
【０３６５】
表３は、化合物Ａ４（配列番号４４）、化合物Ａ５（配列番号４５）、化合物Ａ６（配列番号４６）、化合物Ａ２（配列番号４２）、化合物Ａ１（配列番号４１）、化合物Ａ３（配列番号４３）、化合物Ａ９７（配列番号１４３）、化合物Ａ９８（配列番号１４４）、化合物Ａ９９（配列番号１４５）、化合物Ａ１００（配列番号１４６）、化合物Ａ１０１（配列番号１４７）、化合物Ａ１０２（配列番号１４８）及び化合物Ａ９７（配列番号１４９）と本明細書で言及する選択的グルカゴン受容体類似体を含めた本開示の選択的グルカゴン受容体類似体に関するアミノ酸配列及び実験データを提供する。
【０３６６】
実施例２：ラクタム架橋されたグルカゴン受容体選択的アゴニストポリペプチドの生成
合成、精製及び分析の方法は、以下の修正を用いて実施例１に記載されているように行った。表３に提供する本発明のグルカゴンポリペプチドを、固相方法によって、Ｐｒｅｌｕｄｅペプチド合成機（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．、Ｔｕｃｓｏｎ、ＡＺ））で合成し、これは、Ｆｍｏｃストラテジーを使用し、Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡ  ＬＬ（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ）またはＮ−α−Ｆｍｏｃ保護され、予め装填されたＷａｎｇ  ＬＬ（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ）を使用し、２０〜４００μｍｏｌスケールで０．２９〜０．３５ｍｍｏｌ／ｇを装填した。４．０当量のＨＢＴＵ、４．０当量のＨＯＢＴ、８．０当量のＤＩＥＡを使用してＦｍｏｃアミノ酸（４．０当量、１．０ｍｍｏｌ）残基を活性化し、これを樹脂に１時間結合させた。２０％（ｖ／ｖ）ピペリジンのジメチルホルムアミド溶液で処理することによって、Ｆｍｏｃ基を除去した。使用した側鎖保護基は、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｃｙｓ及びＨｉｓについてはＴｒｔであり、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ及びＴｙｒについてはｔ−Ｂｕであり、Ｌｙｓ及びＴｒｐについてはＢｏｃであり、Ａｓｐ及びＧｌｕについてはＯｔ−Ｂｕであり、ＡｒｇについてはＰｂｆであった。
【０３６７】
オルソゴナルに保護されたリジン（Ａｌｌｏｃ）１７及びＧｌｕ（Ａｌｌｙｌ）２１を使用して、位置１７〜２１の間及び位置２４〜２７の間のラクタム架橋を導入し、Ｇｌｕ（Ａｌｌｙｌ）２４及びリジン（Ａｌｌｏｃ）２７を配列中の括弧内にＥで表し、リジン（Ａｌｌｏｃ）を配列番号１９及び配列番号２０に示される配列中の括弧内にＫで表す。
【０３６８】
固体支持体上でＣ末端からＮ末端まで合成した。第１のラクタム架橋（残基１７〜残基２１）を組み込むために、Ｐｈｅ２１で合成を一時停止した。前もって窒素で３０分間フラッシュしたＤＣＭ（６×１０ｍｌ）で樹脂を洗浄した。次に、パラジウムテトラキス、Ｐｄ（ＰＰｈ３）３（３当量）をＣＨＣｌ３／ＡｃＯＨ／ＮＭＭ（３７：２：１）の溶液に加えた。固形物のすべてが溶解して濃いこはく色の溶液になるまで、溶液に窒素をバブリングさせた。この溶液をアミノ酸ボトルに移し、ここでさらに５分間窒素で脱気した。次いで、これをｐｒｅｌｕｄｅ合成機に設置した。２０ｍｌのパラジウム溶液を各ＲＶに加え、この反応混合物を３時間撹拌した。標準的なプロトコールを使用して合成を続けた。第２のラクタム架橋（残基２４〜残基２８）を組み込むために、Ｌｅｕ１４で合成を一時停止し、ラクタム架橋形成のための上記の手を繰り返した。
【０３６９】
樹脂からペプチドを切断する前に、Ｐｄ（ＰＰｈ３）３のＣＨＣｌ３／ＡｃＯＨ／ＮＭＭ（３７：２：１）溶液中でアリル保護基を除去した。ラクタムへの環化は、Ｐｙｂｏｐ（６当量）、ＨＯＢＴ（６当量）及びＤＩＥＡ（１２当量）を使用して行った。次いで、樹脂をＤＭＦで洗浄し、窒素下で１５分間真空乾燥した。
【０３７０】
試薬Ｂ（９２．５％のＴＦＡ、２．５％のフェノール、２．５％の水及び２．５％のトリイソプロピルシラン）で２〜３時間樹脂を処理することによって、最終的な脱保護及び固体支持体からのペプチドの切断を行った。切断したペプチドを冷却ジエチルエーテルを使用して沈殿させ、ジエチルエーテルをデカントし、冷却ジエチルエーテルで固形物を再び粉砕し、遠心分離によってペレット化し、凍結乾燥した。このペレットを水（１０〜１５ｍＬ）に再溶解し、濾過し、３０〜４５分にわたって、３０ｍＬ／ｍｉｎの流速、λ−２１５ｎｍで、０．１％  ＴＦＡを含む５〜７５％のアセトニトリル／水の範囲内の３０勾配を使用して、Ｗａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ（商標）ＢＥＨ１３０、ＣＩＳ、１０ｐｍ、１３０Å、３０×２５０ｍｍ  ＩＤカラムを使用して、逆相ＨＰＬＣにより精製した。あるいは、精製は、３０〜４５分にわたって、３０ｍＬ／ｍｉｎの流速、λ−２１５ｎｍで、０．１％ＴＦＡを含む５〜４５％のアセトニトリル／水の勾配範囲で、Ｗａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  ＢＥＨ  １３０、Ｃ１８、１０μｍ、１３０Å、３０×２５０ｍｍ  ＩＤカラムを使用して、逆相クロマトグラフィーを介するＧｉｌｓｏｎ分取ＨＰＬＣシステムを使用して行った。精製生成物を凍結乾燥し、ＥＳＩ−ＬＣ／ＭＳ及び分析的ＨＰＬＣで分析し、純粋（＞９８％）であることが示される。質量の結果はすべて計算値と一致した。
【０３７１】
ペプチド類似体の特性評価を、３つの方法Ａまたは方法Ｂまたは方法Ｃのうちの１つを使用して、Ｃ１８  ＨＰＬＣ及びＬＣ／ＭＳ分析（Ａｃｑｕｉｔｙ  ＳＱＤ  Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐ、Ｍｉｌｆｏｒｄ、ＭＡ）及び２１５ｎｍと２８０ｎｍの二重吸光度シグナルによりもたらされるＵＶ検出によって行った。
【０３７２】
化合物Ａ１０４の化学構造を図４Ａに示し、化合物Ａ１０５の化学構造を図４Ｂに示す。
【０３７３】
実施例３：グルカゴン受容体選択的アゴニストポリペプチドの安定性及び溶解性
グルカゴン及び本明細書に記載の類似体、例えば、化合物Ａ９８、化合物Ａ９９、化合物Ａ１００、化合物Ａ１０１、化合物Ａ１０２、化合物Ａ２、化合物Ａ１、化合物Ａ５、化合物Ａ６、化合物Ａ３、化合物Ａ４４及び化合物Ａ９７を、５％ＮａＣｌ生理食塩水（すなわち、バイオアッセイバッファー）におけるまたは水溶液（すなわち水）における安定性について試験した。グルカゴン及びこれらの類似体を３７℃及び室温でインキュベートした。試料を３０日にわたって一定の間隔で取り出し、ＬＣ／ＭＳ及びＨＰＬＣによって分析して、純度及び分解生成物の質量について決定した。この分析の結果を表３に示す。
【０３７４】
グルカゴン及び本明細書に記載の類似体、例えば、化合物Ａ９８、化合物Ａ９９、化合物Ａ１００、化合物Ａ１０１、化合物Ａ１０２、化合物Ａ２、化合物Ａ１、化合物Ａ５、化合物Ａ６、化合物Ａ３、化合物Ａ４４及び化合物Ａ９７を、室温で、５％ＮａＣｌ生理食塩水（すなわち、バイオアッセイバッファー）におけるまたは水溶液における溶解性について試験した。試料の透明性、混濁または曇りの任意の出現について試料を視覚的に検査した。この分析の結果を表３に示す。
【０３７５】
実施例４：類似体、ペプチド受容体媒介性ｃＡＭＰ蓄積のインビトロスクリーニング
ヒトＧＣＧＲ（ＮＭ＿０００１６０）及びヒトＧＬＰ−１Ｒ（ＮＭ＿００２０６２）をコードするＣＭＶプロモーター駆動性プラスミドを、リポフェクタミン２０００を使用して、ＣＨＯ−Ｋ１細胞に３６時間トランスフェクトした。トランスフェクションに続いて、細胞ディスラプション培地を使用して細胞をフラスコから取り出し、これを５ｕＬの刺激緩衝液中のウェルあたり１０００細胞で、白色３８４ウェルプレートに分注した。製造業者のプロトコール（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）に従ってＬＡＮＣＥ  Ｕｌｔｒａ  ｃＡＭＰ検出キットを使用して、ペプチド受容体活性を決定した。刺激緩衝液中でペプチドを段階希釈し、５ｕＬの各ペプチド希釈物を細胞に加え、室温で３０分間インキュベートした。表２Ａに示す結果については、試験濃度は、ＧＣＧＲ及びＧＬＰ−１Ｒアッセイにおいて１ｎｍ〜１５ｆＭの範囲であった。表２Ｂに示す結果については、試験濃度は、ＧＣＧＲアッセイについて１ｕＭ〜０．１ｆＭの範囲であり、ＧＬＰ−１Ｒアッセイについ５００ｕＭ〜１０ｆＭであった。ペプチドのインキュベーションに続いて、５ｕＬのユーロピウム標識ｃＡＭＰ及び５ｕＬのＵｌｉｇｈｔ（商標）抗ｃＡＭＰ抗体をウェルに加え、さらに６０分間インキュベートした。Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（登録商標）蛍光プレートリーダーでプレートを読み取り、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（登録商標）を使用してデータを分析した。式：Ｙ＝底部＋（上部−底部）／（１＋１０Λ（（ＬｏｇＩＣ５０−Ｘ）＊ヒル勾配））（ヒル勾配は−１．０に制限される）を使用して、ベースライン補正した適合曲線から効能を決定した。
【表２Ａ】
2019520329.tif 000010
【表２Ｂ】
2019520329.tif 000011
【０３７６】
いくつかの実施形態では、化合物Ａ９７、Ａ９８、Ａ９９、Ａ１００、Ａ１０１、Ａ１０２またはＡ１０３に対応する本開示の単離ポリペプチドが提供される。
【０３７７】
ヒトグルカゴン、ＧＬＰ−１（７−３７）及び２つのグルカゴン受容体選択的ペプチドアゴニストによるヒトグルカゴン受容体（ＧＣＧＲ）及びヒトＧＬＰ−１受容体（ＧＬＰ−１Ｒ）におけるペプチド受容体活性化プロファイル。図１Ａは、ペプチド化合物Ａ２、化合物Ａ１及びグルカゴンはＧＣＧＲに対してほぼ等効能であるが、ＧＬＰ−１（７−３７）ははるかに低い効能でＧＣＧＲを活性化することを示す。図１Ｂは、図１Ａに示す結果と対照的に、ペプチド化合物Ａ２及び化合物Ａ１はＧＬＰ−１Ｒに対して不活性であることを示し、これは、ＧＣＧＲ選択的アゴニストとしてのペプチド化合物Ａ２及び化合物Ａ１のプロファイルを実証する。すべての類似体のデータを表３に記載する。
【０３７８】
合成したグルカゴン受容体アゴニストペプチドの配列及びｃＡＭＰアッセイで決定されたそれらのｐＥＣ５０値を以下の表３に示す。 
【表３−１】
2019520329.tif 000012
【表３−２】
2019520329.tif 000013
【表３−３】
2019520329.tif 000014
【表３−４】
2019520329.tif 000015
【表３−５】
2019520329.tif 000016
【表３−６】
2019520329.tif 000017
【表３−７】
2019520329.tif 000018
【表３−８】
2019520329.tif 000019
【表３−９】
2019520329.tif 000020
【表３−１０】
2019520329.tif 000021
【０３７９】
実施例５：静脈内注入：腎臓からのペプチドクリアランス（ＣＬ）を評価するための薬物動態研究
ペプチドを無菌生理食塩水中に配合し、絶食させていない雄のＷｉｓｔａｒ  ＨａｎまたはＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ系ラット（群当たりｎ＝３）に、０．３または０．１ｍｇ／ｋｇの最終用量で、頸静脈カニューレを介して、３時間静脈内注入として投与した。製剤は１．６７ｍＬ／ｋｇ／ｈの速度で投与した。抗凝固薬としてのＫ２ＥＤＴＡ及び２５ｕＬのプロテアーゼ阻害剤カクテルを含むマイクロティナチューブ中に注入開始後１、２、３、３．１７、３．３３、３．５、４、４．５、５及び６時間で、大腿静脈カニューレを介して、血液試料（およそ２５０ｕＬ）を薬物動態解析用に採取した。遠心分離によって血漿を調製し、分析するまで−８０℃で貯蔵した。
【０３８０】
実施例６：皮下注入：腎臓からのペプチドクリアランス（ＣＬ）を評価するための薬物動態研究
ペプチドを無菌生理食塩水中に配合し、絶食させていない雄のＷｉｓｔａｒ  ＨａｎまたはＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ系ラット（群当たりｎ＝３）に、０．３または０．１ｍｇ／ｋｇの最終用量で、肩甲骨間の皮下空間に設置したカニューレを介して、３時間皮下注入として投与した。製剤は０．１４５ｍＬ／ｋｇ／ｈの速度で投与した。抗凝固薬としてのＫ２ＥＤＴＡ及び２５ｕＬのプロテアーゼ阻害剤カクテルを含むマイクロティナチューブ中に注入開始後１、２、３、３．１７、３．３３、３．５、４、４．５、５及び６時間で、頸静脈カニューレを介して、血液試料（およそ２５０ｕＬ）を薬物動態解析用に採取した。遠心分離によって血漿を調製し、分析するまで−８０℃で貯蔵した。この分析の結果を以下の表３ならびに図２Ａ及び２Ｂに示す。
【０３８１】
実施例７：静脈内ボーラス注射：腎臓からのペプチドクリアランス（ＣＬ）循環ペプチドグルカゴン類似体を評価するための薬物動態研究
絶食させていない雄のＷｉｓｔａｒ  Ｈａｎラット（群当たりｎ＝３）に、頸静脈カニューレを介して、単回静脈内ボーラス用量としてペプチドを投与した。化合物は、無菌生理食塩水、酸性化生理食塩水（ｐＨ２．０または４．５）または５％ＤＭＳＯ水溶液のいずれかに入れた溶液剤として製剤化し、１．５ｍＬ／ｋｇの量及び０．１ｍｇ／ｋｇの最終用量で投与した。抗凝固薬としてのＫ２ＥＤＴＡ及び２５ｕＬのプロテアーゼ阻害剤カクテルを含むマイクロティナチューブに投与後０．０８３、０．１６７、０．２５、０．３３、０．５、１、２、４、８、１２及び２４時間で、大腿静脈カニューレを介して、血液試料（およそ２５０ｕＬ）を薬物動態解析用に採取した。遠心分離によって血漿を調製し、分析するまで−８０℃で貯蔵した。この分析の結果を以下の表４に示す。
【表４】
2019520329.tif 000022
【０３８２】
いくつかの実施形態では、化合物Ａ１０４またはＡ１０５に対応する本開示の単離ポリペプチドが提供される。
【０３８３】
実施例８：薬物動態研究のための血漿試料調製の一般的方法
タンパク質沈殿：ペプチドの非特異的結合を軽減するために、すべての９６ウェルプレートをブロッキング剤でコーティングした。０．１％ＴＦＡを含有する２００ｕＬの２：１エタノール：アセトニトリルを含む９６ウェルプレートに血漿試料（７５ｕＬ）を加え、吸引によって十分に混合した。プレートに蓋をかぶせ、ボルテックスして混合し、遠心分離した。上清（２１５ｕＬ）をきれいな９６ウェルプレートに移し、窒素流下で蒸発乾固させ、次いで、０．１％ギ酸を含む２０％アセトニトリル水溶液７５μＬ中で再構成した。
【０３８４】
固相抽出：試料を５％ＮＨ４ＯＨ（水溶液）で３倍希釈し、それぞれ２００ｕＬのメタノール及び５％ＮＨ４ＯＨ（水溶液）で前もって調節されたＯａｓｉｓ  ＭＡＸ  ｍｉｃｒｏＥｌｕｔｉｏｎプレート（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐ、Ｍｉｌｆｏｒｄ、ＭＡ）に装填した。このプレートを２００ｕＬの５％ＮＨ４ＯＨ（水溶液）で洗浄し、続いて、２００ｕＬの２０％アセトニトリル水溶液で洗浄した。５％ギ酸のメタノール溶液２００ｕＬを使用してペプチドを溶出し、窒素流下で蒸発させた。０．１％ギ酸水溶液８０ｕＬ中で試料を再構成した。
【０３８５】
実施例９：血漿中のペプチドのＬＣ／ＭＳ定量化
Ｋ２ＥＤＴＡ及びプロテアーゼ阻害剤カクテルを含む対照ラット血漿中ですべてのキャリブレーション標準を調製した。ＣＴＣ  ＨＴＳ  ＰＡＬ自動インジェクター（Ｌｅａｐ、Ｃａｒｒｂｏｒｏ、ＮＣ）、カラムオーブンを有するＡｇｉｌｅｎｔ  Ｉｎｆｉｎｉｔｙ  １２９０システム（Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ、ＣＡ）、Ｖａｌｃｏスイッチング弁（Ｈｏｕｓｔｏｎ、ＴＸ）及びＡＢ  Ｓｃｉｅｘ  ＡＰＩ５６００  ＴｒｉｐｌｅＴＯＦ（商標）またはＳｃｉｅｘ  ＡＰＩ４０００ＱＴｒａｐ質量分析計（Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ、ＭＡ）のいずれかから成るシステムを使用して、ＴｕｒｂｏＩｏｎＳｐｒａｙ（商標）ＵＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって試料及び標準を分析した。２．１×５０ｍｍの逆相Ｃ１８分析カラム、典型的には、Ｗａｔｅｒｓ  ＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ（商標）ＨＳＳ  Ｔ３、１．８μｍ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｍｉｌｆｏｒｄ、ＭＡ）または同様のものに試料を注入した。移動相として０．１％ギ酸を含む水（Ａ）及び０．１％ギ酸を含むアセトニトリル（Ｂ）を使用する勾配方法を用いて、クロマトグラフィー分離を行った。最初の条件は９５％Ａ及び５％Ｂから成っていた。ペプチドに応じて、３〜４分かけて有機成分を９５％Ｂまで直線的に増大させた。典型的な流速は６００μＬ／ｍｉｎであった。カラム温度は４０または４５℃で一定に保った。多重荷電親イオンから生成された１つまたは複数の生成物をモニタリングすることによって、ペプチドを定量化した。
【０３８６】
実施例１０：体重減少をともなうグルカゴン類似体のインビボ効力
単独での及び抗肥満剤としてのエキセンディン−４と組み合わせた実施例１１及び１２の効力及び持続力を調べるために、肥満についてのげっ歯類モデル（食餌誘導性肥満（ＤＩＯ）Ｌｏｎｇ  Ｅｖａｎｓラット）において、長期にわたる（１３日）インビボ効力研究を行った。
【０３８７】
雄の食餌誘導性肥満（ＤＩＯ）Ｌｏｎｇ  Ｅｖａｎｓ（ＬＥ）ラットを使用し（Ｈａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｉｎｃ．、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）、離乳初期（約３週齢）に、高脂肪食（Ｔｅｋｌａｄ  ＴＤ  ９５２１７、脂肪由来４０％キロカロリー、Ｈａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）をラットに与えた。ラットは、研究開始時に１５〜１７週齢であった。ラットをケージあたり１匹飼育し、高脂肪食（Ｈａｒｌａｎ  ＴＤ．９５２１７、４．３キロカロリー／ｇ）及び水に自由にアクセスさせ、２１℃及び５０％相対湿度で、午前５：００から午後５：００までの１２時間明／暗周期で維持し、手術前に少なくとも１０日間順応させた。ＱＭＲ機器（Ｅｃｈｏ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｈｏｕｓｔｏｎ、ＴＸ）を使用して、ペプチド注入の開始の３日前に、ベースライン脂肪量及び非脂肪量の測定を行った。体重測定は、手術の３日前から開始して２回／週行った。ラットをそのパーセント体脂肪量及び／または体重にしたがって様々な処理群（ｎ＝４〜６ラット／群）にランダム化した。手術の１日前に、Ａｌｚｅｔミニ浸透圧ポンプ（２週；モデル２００２、Ｄｕｒｅｃｔ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｃｕｐｅｒｔｉｎｏ、ＣＡ）を無菌条件下でビヒクルまたはペプチドのいずれかで満たした。手術当日に、ラットにイソフルラン下で麻酔をかけ、背部皮膚表面を剃り清潔にした。ラットにフルネキシン（２．５ｍｇ／ｋｇ）をＳＣ注射した。肩甲骨の間に１〜２ｃｍの外科的な切開を行った。鈍的切開を使用して、２〜３ｃｍの皮下トンネルを生成し、ここに、無菌の満たされたミニ浸透圧ポンプを導入した。皮膚開口部を皮膚ステープルで閉じた。それらの処理群にしたがってビヒクルまたはペプチドを含む１つまたは２つのいずれかの浸透圧ポンプを各ラットに移植した。すべてのデータは平均±ＳＥＭとして提供した。一元配置ＡＮＯＶＡを使用して、Ｅｘｃｅｌ及び／またはＰｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｌａ  Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）でデータを分析して、各群を適切な対照群と比較した。＜０．０５のＰ値を処理群間で有意差を示すとみなした。
【０３８８】
動物は、国際的に認証されたケア及び使用プログラムであるＡＡＡＬＡＣで飼育及び維持した。すべての手順は、ＵＳＤＡの規則である動物福祉法を順守して行い、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅまたはＭｉｓｐｒｏの機関内動物ケア及び使用委員会のいずれかによって承認された。
【０３８９】
実施例１１：効力：１３日後のＤＩＯラットの体重変化
ＤＩＯ  ＬＥラットでは、化合物Ａ２及び化合物Ａ１の連続投薬は、１３日後に体重の用量依存的な減少をもたらした。ビヒクル対照と比較した場合、０．０１、０．０３、０．１及び０．３ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ用量の化合物Ａ２において、それぞれ、３．７、３．９、８．６及び２３．７％の体重減少という有意な効力が達成された（ｐ＜０．０５）（図３Ｂ）。一方、化合物Ａ１は、ビヒクル対照と比較した場合、０．０１、０．０３、０．１及び０．３ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ用量において、それぞれ、５．６、３．５、１０及び２２．６％という体重減少を達成した（ｐ＜０．０５）（図３Ｃ）。
【０３９０】
実施例１２．ＤＩＯ  ＬＥラットにおける、単独でのまたはエキセンディン−４と組み合わせた化合物Ａ１０４の効力
化合物Ａ１０４の連続投薬は、ＤＩＯ  ＬＥラットにおいて、１３日間の投薬後に体重の用量依存的な減少をもたらした。ビヒクル対照と比較した場合、０．１、０．３及び１．０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ用量の化合物Ａ１０４において、それぞれ、４．２％、１６．５％及び２５．２％の体重減少というが有意な効力が達成された（ｐ＜０．０５）（図３Ａ、左パネル）。次いで、エキセンディン−４と組み合わせて環状ペプチドグルカゴン類似体を使用し、ポリペプチドは、アミノ酸配列Ｈ−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２（配列番号１４２）を含んでいた。０．０１ｍｇ／ｋｇ／ｄ（単独で２．５％の体重減少）のエキセンディン−４と組み合わせた場合、ＤＩＯ  ＬＥラットにおいて１３日後に、０．０３、０．１、０．３及び１ｍｇ／ｋｇ／ｄ化合物Ａ１０４の用量が、ビヒクル対照と比較して、６．７、１１．７、２４．３及び２９．７％の体重減少を達成した（ｐ＜０．０５）（図３Ａ、右パネル）。
【０３９１】
実施例１３．エクセナチド及びＧＬＰ−１についての定常状態の血漿濃度及び静脈内注入速度
方法：図５のグラフを参照すると、３５０〜３７０ｇの体重がある雄のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ系ラット（Ｈａｒｌａｎ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）を実験の１８時間前まで水に自由にアクセスさせ、食物（Ｄｉｅｔ  ＬＭ−４８５、Ｔｅｋｌａｄ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）に自由にアクセスさせた。右伏在静脈（ペプチド注入用）及び右大腿動脈（採血及び動脈圧のモニタリング用）のカテーテル挿入の間、ハロタンで動物に麻酔をかけた。結腸の温度を測定し、制御した。エクセナチドまたはＧＬＰ−１−（７−３６）アミドを、３注入速度、０．５、５または５０ｎｍｏｌ／ｈのうちの１つで、３時間にわたって連続的に注入した（各群についてｎ＝４〜６）。ヘパリン処理したＮａｔｅｌｓｏｎ毛細管に動脈試料を３０分毎に採取し、卓上遠心分離機で血漿を分離し、次いで、アッセイまで−２０℃で凍結した。ＧＬＰ−１測定用に採取した血液試料にプロテアーゼ阻害剤を加え、これをＬｉｎｃｏ、キット番号ＥＧＬＰ−３５Ｋを使用してアッセイした。エクセナチドは、２サイトサンドイッチアッセイを使用してアッセイした。
【０３９２】
結果：０．０５、０．５、５及び５０ｎｍｏｌ／ｈの注入の間のエキセンディン−４及びＧＬＰ−１の血漿濃度は、約３０分以内に定常状態に近づいた。両方のペプチドの定常状態の血漿濃度は、それぞれ注入速度依存的であった。注入速度と定常状態の血漿濃度（最後の２時間の値の平均）の間の関係はＧＦＲより最も下にある３つのデータ点によって示され、エクセナチドとの関係はＧＦＲに最も近い３つのデータ点によって示される（Ｘ軸とＹ軸の両方は対数単位であることに注意されたい）。これらの関係によって、各薬剤のクリアランスの計算が可能になった。エクセナチドの血漿クリアランス速度は３．７±０．５〜８．３±０．７ｍＬ／ｍｉｎに及んだ。ＧＬＰ−１のクリアランスは３４±４〜３８±３ｍＬ／ｍｉｎに及び、エクセナチドのものよりも約１２倍高かった。エクセナチドのクリアランスは、イヌリン（糸球体濾過速度のマーカー）の報告されたクリアランスに近づいた。インスリン（糸球体濾過、ＧＦＲによってのみクリアランスされる）に対して期待される定常状態濃度と注入速度の間の関係は、黒色破線として示される。
【０３９３】
実施例１４．選択されたグルカゴン類似体についての定常状態の血漿濃度及び静脈内注入速度
図６のグラフを参照すると、これらのデータは、図５のグラフで示されたものを含み、さらに、ネイティブのグルカゴンが、（実施例１３に記載されている手順を使用して）麻酔をかけたラットに２つの異なる注入速度で静脈内に注入された場合は、その定常状態濃度（逆三角形）を含む。ＧＦＲに最も近い正方形のデータ点は、２つのグルカゴン類似体（化合物Ａ１及びＡ２）を浸透圧ミニポンプを介して皮下空間に連続的に投与した場合のこれらの測定血漿濃度を示す。ＧＦＲの破線への正方形のデータ点の近接は、（ａ）皮下の生物学的利用能が高かったこと、及び（ｂ）血管コンパートメントからのクリアランスが糸球体濾過を介することと矛盾がなかったことを示す。
【０３９４】
実施例１５．選択されたグルカゴン類似体についてのクリアランス値
図７の図示を参照すると、静脈内注入速度は均一に１０ｍｃｇ／ｋｇ／ｈｒであったことを除いては、（実施例１４について）上記のように行った多数の実験においてクリアランスを決定した。そのような実験から得られたｍＬ／ｍｉｎ／ｋｇ体重で表した、クリアランスに対する選択された値を以下の表５に示す。
【表５】
2019520329.tif 000023
【０３９５】
ＧＦＲに最も近い、分布の最上部にある３つの濃い点は表５の行１、２及び５からであり、化合物Ａ１、Ａ２及びＡ３に対応する。行３及び４の重複実験は、行１及び２のものと非常に類似した値を返した。縦軸は対数であり、反転しており、その結果、最も低いクリアランスのリガンドが散布図の最上部にあることに注意されたい。ＧＦＲという標識が付けられた実線は、ラットで公表された値を示す。行１、２及び５からの値はこの境界に近く、これらの類似体が糸球体濾過を介して血漿からクリアランスされたことと矛盾がない。ＧＦＲから最も遠い、「グルカゴン」という標識が付けられた点線上の他の濃い点は、本研究でネイティブの（ヒト／ラット）のグルカゴンについて得られた値を示す。ＧＦＲに最も近い、「エクセナチド」という標識が付けられた他の点線は、このモデル系で得られたエクセナチドの公表値に由来する。エクセナチドのクリアランスは糸球体濾過に近く、ごく一部が糸球体濾過以外の手段によってクリアランスされたように思われる。いくつかの類似体は、クリアランスのそれらの制限モードとして、糸球体濾過に近づいて、エクセナチドを超えた。理論に拘束されないが、これらの類似体はエクセナチドよりもさらにペプチダーゼ消化に抵抗性であり得る。いくつかの類似体はネイティブのグルカゴンよりも高いクリアランスを有しており、これは、配列中のすべての変化が必ずしも有利であったとは限らないことを示す。
【０３９６】
実施例１６．エクセナチドまたは選択されたグルカゴン類似体の継続投与の際のラットにおける体重減少の用量依存性の比較
図８のグラフを参照すると、黒丸は、（実施例１０について記載したように）化合物Ａ１を送達するミニポンプが埋め込まれた食餌誘導性肥満ラットにおける、初期体重のパーセントとして表した、１３日間にわたる体重の平均変化をプロットする。記号は、平均±ＳＥＭ（ｎ＝４／用量群）である。皮下空間への送達速度は１０、３０、１００、２００、３００及び１０００ｍｃｇ／ｋｇ／ｄａｙであった。体重のパーセント変化は、ビヒクル注入群（Ｘ軸のゼロ）に対するものである。データ点の丸に基づく曲線は最良適合４−パラメーターシグモイド関数であり、ビヒクル応答を０に制限し、最大応答を−２８％に制限する。得られたＥＤ５０は６５．７ｍｃｇ／ｋｇ／ｄａｙであった。ヒル勾配は−１．２６であった。
【０３９７】
同じモデルで試験したエクセナチドのデータを逆三角形として示す。エクセナチド注入速度は、３、１０、４０、１００、１５０及び５００ｍｃｇ／ｋｇ／ｄａｙであった。データ点の三角形に基づいて生じた曲線は最良適合４−パラメーターシグモイド関数であり、ビヒクル応答を０に制限する。得られた最大応答は−１２．２％の体重減少であった。ＥＤ５０は１０．４ｍｃｇ／ｋｇ／ｄａｙであり、ヒル勾配は−１．８５であった。
【０３９８】
以下の表６のデータで例示するように、単体で投与される化合物Ａ１はエクセナチドとほとんど同じくらいインビボで強力であり、エクセナチドより２．３倍大きい最大体重減少をもたらした。
【表６】
2019520329.tif 000024
【０３９９】
実施例１７．選択されたグルカゴン類似体の継続投与の際のラットにおける体重減少の用量依存性の比較
図９のグラフを参照すると、記号は、食餌誘導性肥満ラット（図８と同様）への化合物Ａ１（丸）、化合物Ａ２（正方形）または化合物Ａ３（三角形）の１３日間の注入にわたる体重のパーセント変化の平均±ＳＥＭを示す。化合物Ａ１の注入速度は０、１０、３０、１００、２００、３００及び１０００ｍｃｇ／ｋｇ／ｄａｙであった。化合物Ａ２については、注入速度は０、３、１０、３０、１００、２００及び３００ｍｃｇ／ｋｇ／ｄａｙであり、化合物Ａ３については、０、３、１０、３０、１００及び３００ｍｃｇ／ｋｇ／ｄａｙであった。
【０４００】
３つの曲線は、各データセットに対する最良適合４−パラメーターシグモイド曲線を示す。適合は、ビヒクル群に対して同じ体重のパーセント変化を共有するように制限された。すべてが共通の（グルカゴンシグナリング）経路を介して機能していたので、これらは、１３日間を通して２７．２％として生じた共通の最大体重減少応答を共有するように制限された。化合物Ａ１、Ａ２及びＡ３について、ＥＤ５０はそれぞれ５１、２７１及び５３５ｍｃｇ／ｋｇ／ｄａｙであった。ヒル勾配はそれぞれ−１．４３、−１．２５及び−１．１２であった。この実験は、各類似体が薬物動態特性について最適化されたにもかかわらず、インビボ効力は異なっていたこと、及び最高のインビボ効能を有する類似体を選択する実験を必要としたことを示す。
【０４０１】
実施例１８．単体での、またはエクセナチドと組み合わせた選択されたグルカゴン類似体の継続投与の際のラットにおける体重減少の用量依存性の比較
図１０のグラフに関するデータは、２７日間の処理にわたる食餌誘導性肥満ラットの体重の平均（±ＳＥＭ）パーセンテージ変化を図示する。平均初期体重は５６４±４ｇであった。動物（ｎ＝８／用量群）に、（実施例１０について記載したように）１０ｍｃｇ／ｋｇ／ｄａｙのエクセナチドの同時送達をともなって、またはともなわずに化合物Ａ１を送達する浸透圧性ミニポンプを移植した。化合物Ａ１は、０、７．５、２４または５０ｍｃｇ／ｋｇ／ｄａｙの速度で送達した。したがって、化合物Ａ１について２つの用量応答実験（１つはエクセナチドをともなわず、もう１つはエクセナチドをともなう）が存在した。さらなる群、すなわち、化合物Ａ１  ５０ｍｃｇ／ｋｇ／ｄａｙ＋エクセナチド１０ｍｃｇ／ｋｇ／ｄａｙで処理された群が前日に摂食したのと同量の食物が毎日与えられる、「ペアフェッド」が存在した。ペアフェッド群の目的は、他の機構を介するものと対比して、カロリー摂取量の低減に起因し得る、後者の群の体重減少量を推定することである。
【０４０２】
黒丸は、化合物Ａ１単体（またはビヒクル）で処理した動物における２７日間の体重の変化をプロットする。ビヒクルまたは７．５及び２４ｍｃｇ／ｋｇ／ｄａｙの化合物Ａ１を注入した動物は、約４％というわずかな体重増加を示したが、最高の注入速度は１６．８％の低下を示した。
【０４０３】
三角形は、同様に処理したが、１０ｍｃｇ／ｋｇ／ｄａｙのエクセナチドを加えた群における、２７日間の体重のパーセント変化を示す。この注入は、そのままで、４．２％の体重減少、７．９％というビヒクルのみの群との相対的差異をもたらした。正方形は、エクセナチドのみに期待される７．９％の減少を示し、化合物Ａ１のみの群で観察された体重変化に加えられ、これにより、各成分の応答の算術的合計が示される。
【０４０４】
点線は、この方法で得られた算術的に合計した応答を介して適合させたシグモイド曲線である。期待される応答（単一薬剤の応答の算術的合計である）と対照的に、２つの最高の注入速度の化合物Ａ１（２４及び５０ｍｃｇ／ｋｇ／ｄａｙ）とエクセナチドの組み合わせの観察された応答は、予測より大きい体重減少を与えた。すなわち、超相加的（相乗的）効果があった。最大体重減少応答は、約２７％ではなく、それどころか約４７％であった。
【０４０５】
実施例１９．２７日後のＤＩＯ  ＬＥラットにおける体重減少に対するグルカゴン類似体的の効果
上記の手順を使用して、エクセナチド、得られたＥＤ１０、ＥＤ３０及びＥＤ５０値でのグルカゴン（「ＧＣＧ」）類似体またはエクセナチドと得られたＥＤ１０、ＥＤ３０及びＥＤ５０値でのＧＣＧ類似体との組み合わせの投与の際のＤＩＯ  ＬＥラットの体重減少をモニターした。体重減少パーセンテージを、処理してから２７日後に計算した（図１１）。図１１は、図１０に示すデータを別の方法として示す棒グラフである。
【０４０６】
実施例２０．１４日後のズッカー糖尿病肥満（ＺＤＦ）ラットにおける血清トリグリセリド、肝脂肪量及び肝重量に対するグルカゴン類似体的の効果
雄のズッカー糖尿病肥満（ＺＤＦ）ラットを６週齢で得て（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ、Ｒａｌｅｉｇｈ、ＮＣ）、８週齢で研究に使用した。受け取り次第、アルファドライ床敷（Ｓｈｅｐｈｅｒｄ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ  Ｐａｐｅｒｓ，  Ｉｎｃ．、Ｋａｌａｍａｚｏｏ、ＭＩ）上でケージあたり１匹でラットを飼育し、Ｐｕｒｉｎａ  ５００８固形飼料（Ｌａｂ  Ｄｉｅｔ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）及び水に自由にアクセスさせ、２１℃及び５０％相対湿度で、午前５：００から午後５：００までの１２時間明／暗周期で維持し、研究開始前に９日間順応させた。
【０４０７】
エクセナチド（１０％ＤＭＳＯ／水中に０．０１ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）及び／またはグルカゴン類似体、化合物Ａ１０４（１０％ＤＭＳＯ／水中に０．０３、０．１、０．３、１．０または３．０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）を、皮下（ｓ．ｃ．）に設置したＡｌｚｅｔ浸透圧ポンプ、モデル２００２（ＤＵＲＥＣＴ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｃｕｐｅｒｔｉｎｏ、ＣＡ）を介して、ラットに投与した。手術当日に、無菌条件下で、Ａｌｚｅｔポンプをビヒクル（１０％ＤＭＳＯ／滅菌水）またはエクセナチドのいずれかで満たした。イソフルラン下でラットに麻酔をかけ、背部皮膚表面を剃り、クロルヘキシジン及び滅菌水で清潔にした。リドカイン（鎮痛剤、０．１ｍｌの０．１２５％リドカイン）をラットにＩＤ注射した。肩甲骨の間に１〜２ｃｍの外科的な切開を行った。鈍的切開を使用して、２〜３ｃｍの皮下トンネルを生成した、ここに、無菌の満たされたミニ浸透圧ポンプを導入した。皮膚開口部を皮膚ステープルで閉じた。イソフルラン麻酔からの回復について、手術後にラットをモニターした。
【０４０８】
トリグリセリドレベルを測定するために、ベースライン出血（３日目）用に血液試料を尾静脈から得た。イソフルラン麻酔下での心臓穿刺によって最終的な血液試料を採取した（１４日目）。それぞれ、ＥＤＴＡ及びＴ−ＭＧ管を使用して、製造業者［Ｔｅｒｕｍｏ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｅｌｋｔｏｎ、ＭＤ］のプロトコールにしたがって、血清を調製した。最終出血後に、肝臓を採取し、秤量し、ホモジナイズして、生化学分析を行った（図１３）。血清試料及び肝臓ホモジネートの臨床化学分析は、トリグリセリドアッセイについて製造業者が説明しているプロトコール及び方法パラメーターを用いて、Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＡＵ６４０臨床化学分析機（Ｏｌｙｍｐｕｓ  Ａｍｅｒｉｃａ  Ｉｎｃ．、Ｍｅｌｖｉｌｌｅ、ＮＹ）を使用することによって行った。
【０４０９】
動物は、国際的に認証されたケア及び使用プログラムであるＡＡＡＬＡＣで飼育維持した。すべての手順は、ＵＳＤＡの規則である動物福祉法を順守して行い、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅまたはＭｉｓｐｒｏのいずれかの機関内動物ケア及び使用委員会によって承認された。
【０４１０】
ＺＤＦラットでは、単独での及びエクセナチド（Ｅｘ４）と組み合わせた化合物Ａ１０４の連続投薬は、１４日後に血清トリグリセリドの用量依存的低下をもたらした（図１２）。化合物Ａ１０４は１４日後に用量依存的に肝脂肪量及び肝重量も低減させた（図１３）。
【０４１１】
実施例２１．式ＩＩの親油性置換基及びスペーサーの取り付けのための一般的合成方法
式ＩＩの親油性置換基及びスペーサーを開示される多数のペプチドに組み込んだ：
【化７】
2019520329.tif 000025
ここでは、式ＩＩの構造に示されるカルボニルが開示されるペプチドのリジン残基のε−アミノ基に共有結合して、アミド結合を形成した。
【０４１２】
直鎖ペプチド配列を、固相方法によって、Ｐｒｅｌｕｄｅペプチド合成機（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．、Ｔｕｃｓｏｎ、ＡＺ））で合成し、これは、Ｆｍｏｃストラテジーを使用し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中の２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウラニウムヘキサフルオロリン酸（ＨＢＴＵ）または２−（６−クロロ−１−Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルアミニウムヘキサフルオロリン酸（ＨＣＴＵ）の活性化（５倍モル過剰）及び塩基としてのＮ’Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）、Ｆｍｏｃ脱保護用の２０％ピペリジン／ＤＭＦを用いた。樹脂はＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡ  ＬＬ（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ）またはＮ−α−Ｆｍｏｃ保護され、予め装填されたＷａｎｇ  ＬＬ（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ）であり、２０〜４００μｍｏｌスケールで０．２９〜０．３５ｍｍｏｌ／ｇを装填した。アシル鎖置換について所望される位置で、ＦＭＯＣ−Ｌｙｓ（Ａｌｌｏｃ）−ＯＨをペプチド鎖に優先的に置換した。次に、Ｂｏｃ−Ｔｙｒ（ｔｂｕ）−ＯＨまたはＢｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨをＮ末端アミノ酸残基として使用した。合成が完了したら、樹脂をジクロロメタン（ＤＣＭ）で洗浄し、真空下で３０分間乾燥した。次に、パラジウムテトラキスの（ＣＨＣｌ３／酢酸／Ｎ−メチルモルホリン、３７：２：１の比）溶液を使用して、Ａｌｌｏｃ保護基を除去した。続いて、ＤＭＦ中のナトリウムジエチルジチオカルバメート三水和物の０．５％溶液、続いてＤＭＦ中のＤＩＥＡの０．５％溶液、最後にＤＭＦで樹脂を洗浄した。次に、通常の固相条件を使用して、ＦＭＯＣ−Ｇｌｕ（Ｏｔｂｕ）−ＯＨを遊離リジン側鎖に結合させた。通常の固相方法下でパルミチン酸を使用して、Ｃ−１６アシル側鎖を付加した。最終的な脱保護及び固体支持体からのペプチドの切断を、（９２．５％のＴＦＡ、２．５％のフェノール、２．５％の水及び２．５％のトリイソプロピルシラン）で２〜３時間樹脂を処理することによって行った。切断したペプチドを冷却ジエチルエーテルを使用して沈殿させた。ジエチルエーテルをデカントし、冷却凍結乾燥した固形物を０．１％ＴＦＡ（１０〜１５ｍＬ）を含むアセトニトリル／水の１：１溶液に再溶解し、３０分にわたって、３０ｍＬ／ｍｉｎの流速、λ−２１５ｎｍで、０．１％ＴＦＡを含む５〜７５％のアセトニトリル／水の範囲内の勾配を使用して、Ｗａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ（商標）ＢＥＨ  １３０、Ｃ１８、１０ｕｍ、１３０Å、３０×２５０ｍｍ  ＩＤカラムで、逆相ＨＰＬＣによって精製した。カラムヒーターは６０℃に設定した。精製生成物を凍結乾燥し、ＥＳＩ−ＬＣ／ＭＳ及び分析的ＨＰＬＣで分析し、純粋（＞９８％）であることが示された。質量の結果はすべて計算値と一致した。
【０４１３】
ＨＰＬＣ分析の条件：以下の勾配（１５分にわたる２０％〜１００％及び２０分まで１００％での維持）で分析用Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００を使用する、４．６×２５０ｍｍ  ＸＢｒｉｄｇｅ  ＢＥＨ１３０、５ｕｍ、Ｃ１８カラム。カラム温度は４０℃に設定した。流速は１．０ｍＬ／ｍｉｎに設定した。溶媒はＡ＝Ｈ２Ｏ＋０．１％ＴＦＡ及びＢ＝アセトニトリル＋０．１％ＴＦＡから成っていた。粗製の及び最終的なＬＣＭＳを観察し、生成物の質量を以下の条件（２１５及び２８０ｎｍに設定されたＵＶ検出）を使用して特定した。
【０４１４】
ＬＣＭＳ分析の条件：以下の勾配（１０分にわたる２０％Ｂ〜９５％Ｂ、１．２分にわたってカラムを洗浄するために９５％で維持）でＡＰＩ−４０００  Ｓｃｉｅｘ  ＬＣ／ＭＳ／ＭＳシステムと組み合わせた分析用Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００を使用する、４．６×２５０ｍｍ  ＸＢｒｉｄｇｅ  ＢＥＨ１３０、５ｕｍ、Ｃ１８カラム。１２．５分まで５％Ｂ、９５％Ａでカラムを平衡化する。カラム温度は４０℃に設定した。流速は１．５ｍＬ／ｍｉｎに設定した。溶媒はＡ＝Ｈ２Ｏ＋０．１％ＴＦＡ及びＢ＝アセトニトリル＋０．１％ＴＦＡから成っていた。ＵＶ検出を２１５及び２８０ｎｍに設定した。方法＝Ｑ１  ＭＳ。シリンジサイズ１００ｕＬ、ＵＶ域１９０〜４００ｎｍ、スリット幅＝４ｍｍ、サンプリング速度＝＞２０Ｈｚ．、イオン源：Ｔｕｒｂｏスプレー、極性＝正。
【０４１５】
実施例２２．式ＩＩＩの親油性置換基及びスペーサーの取り付けのための一般的合成方法
式ＩＩＩの親油性置換基及びスペーサーを開示される多数のペプチドに組み込んだ：
【化８】
2019520329.tif 000026
ここでは、式ＩＩＩの構造に示されるカルボニルが開示されるペプチドのリジン残基のε−アミノ基に共有結合して、アミド結合を形成した。
【０４１６】
直鎖ペプチド配列を、固相方法によって、Ｐｒｅｌｕｄｅペプチド合成機（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．、Ｔｕｃｓｏｎ、ＡＺ））で合成し、これは、Ｆｍｏｃストラテジーを使用し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中の２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウラニウムヘキサフルオロリン酸（ＨＢＴＵ）または２−（６−クロロ−１−Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルアミニウムヘキサフルオロリン酸（ＨＣＴＵ）の活性化（５倍モル過剰）及び塩基としてのＮ’Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）、Ｆｍｏｃ脱保護用の２０％ピペリジン／ＤＭＦを用いた。樹脂はＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡ  ＬＬ（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ）またはＮ−α−Ｆｍｏｃ保護され、予め装填されたＷａｎｇ  ＬＬ（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ）であり、２０〜４００μｍｏｌスケールで０．２９〜０．３５ｍｍｏｌ／ｇを装填した。アシル鎖置換について所望される部位で、ＦＭＯＣ−Ｌｙｓ（Ａｌｌｏｃ）−ＯＨをペプチド鎖に優先的に置換した。次に、Ｂｏｃ−Ｔｙｒ（ｔｂｕ）−ＯＨまたはＢｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨをＮ末端アミノ酸残基として使用した。合成が完了したら、樹脂をジクロロメタン（ＤＣＭ）で洗浄し、真空下で３０分間乾燥した。次に、パラジウムテトラキスの（ＣＨＣｌ３／酢酸／Ｎ−メチルモルホリン、３７：２：１の比）溶液を使用して、Ａｌｌｏｃ保護基を除去した。続いて、ＤＭＦ中のナトリウムジエチルジチオカルバメート三水和物の０．５％溶液、続いてＤＭＦ中のＤＩＥＡの０．５％溶液、最後にＤＭＦで樹脂を洗浄した。次に、スペーサー領域の伸長を、通常の固相条件を使用して、｛２−［２−（Ｆｍｏｃ−アミノエトキシ｝酢酸、続いて、ＦＭＯＣ−Ｇｌｕ（Ｏｔｂｕ）−ＯＨのカップリングを用いて進めた。Ｃ−１８、酸末端側鎖を、通常の固相方法下でオクタデカン二酸を使用して付加した。最終的な脱保護及び固体支持体からのペプチドの切断を、（９２．５％のＴＦＡ、２．５％のフェノール、２．５％の水及び２．５％のトリイソプロピルシラン）で２〜３時間樹脂を処理することによって行った。切断したペプチドを冷却ジエチルエーテルを使用して沈殿させた。ジエチルエーテルをデカントし、冷却ジエチルエーテルで固形物を再び粉砕し、遠心分離によってペレット化し、凍結乾燥した。凍結乾燥した固形物を０．１％ＴＦＡ（１０〜１５ｍＬ）を含むアセトニトリル／水の１：１溶液に再溶解し、３０分にわたって、３０ｍＬ／ｍｉｎの流速、λ−２１５ｎｍで、０．１％ＴＦＡを含む５〜７５％のアセトニトリル／水の範囲内の勾配を使用して、Ｗａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ（商標）ＢＥＨ  １３０、Ｃ１８、１０ｕｍ、１３０Å、３０×２５０ｍｍ  ＩＤカラムで、逆相ＨＰＬＣによって精製した。カラムヒーターは６０℃に設定した。精製生成物を凍結乾燥し、ＥＳＩ−ＬＣ／ＭＳ及び分析的ＨＰＬＣで分析し、純粋（＞９８％）であることが示された。質量の結果はすべて計算値と一致した。
【０４１７】
ＨＰＬＣ分析の条件：以下の勾配（１５分にわたる５％〜７０％及び２０分まで７０％での維持）で分析用Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００を使用する、４．６×２５０ｍｍ  ＸＢｒｉｄｇｅ  ＢＥＨ１３０、５ｕｍ、Ｃ１８カラム。カラム温度は４０℃に設定した。流速は１．５ｍＬ／ｍｉｎに設定した。溶媒はＡ＝Ｈ２Ｏ＋０．１％ＴＦＡ及びＢ＝アセトニトリル＋０．１％ＴＦＡから成っていた。粗製の及び最終的なＬＣＭＳを観察し、生成物の質量を以下の条件（２１５及び２８０ｎｍに設定したＵＶ検出）を使用して特定した。
【０４１８】
ＬＣＭＳ分析の条件：以下の勾配（１０分にわたる５％〜６５％、１分にわたってカラムを洗浄するために９５％までランピング及び１２．５分まで５％有機物に戻して平衡化）でＡＰＩ−４０００  Ｓｃｉｅｘ  ＬＣ／ＭＳ／ＭＳシステムと組み合わせた分析用Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００を使用する、４．６×２５０ｍｍ  ＸＢｒｉｄｇｅ  ＢＥＨ１３０、５ｕｍ、Ｃ１８カラム。カラム温度は４０℃に設定した。流速は１．５ｍＬ／ｍｉｎに設定した。溶媒はＡ＝Ｈ２Ｏ＋０．１％ＴＦＡ及びＢ＝アセトニトリル＋０．１％ＴＦＡから成っていた。ＵＶ検出を２１５及び２８０ｎｍに設定した。方法＝Ｑ１  ＭＳ。シリンジサイズ１００ｕＬ、ＵＶ域１９０〜４００ｎｍ、スリット幅＝４ｍｍ、サンプリング速度＝＞２０Ｈｚ．、イオン源：Ｔｕｒｂｏスプレー、極性＝正。
【表７−１】
2019520329.tif 000027
【表７−２】
2019520329.tif 000028
【表７−３】
2019520329.tif 000029
【０４１９】
開示される化合物中の示されるペプチド残基に位置するリジン残基（Ｋ＊＊＊＊）の各ε−アミノ基は、式ＩＩの構造の示されるカルボニルに共有結合して、アミドを形成する：
【化９】
2019520329.tif 000030
【０４２０】
開示される化合物中の示されるペプチド残基に位置するリジン残基（ｋ＊＊＊＊＊）の各ε−アミノ基は式ＩＩＩの構造の示されるカルボニルに共有結合して、アミドを形成する：
【化１０】
2019520329.tif 000031
【０４２１】
実施例２３．静脈内注入後の腎臓からのペプチドのクリアランス（ＣＬ）
ペプチドを無菌生理食塩水中に配合し、絶食させていない雄のＷｉｓｔａｒ  ＨａｎまたはＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ系ラット（群当たりｎ＝３）に、０．３または０．１ｍｇ／ｋｇの最終用量で、頸静脈カニューレを介して、３時間静脈内注入として投与した。製剤は１．６７ｍＬ／ｋｇ／ｈの速度で投与した。抗凝固薬としてのＫ２ＥＤＴＡ及び２５ｕＬのプロテアーゼ阻害剤カクテルを含むマイクロティナチューブ中に注入開始後１、２、３、３．１７、３．３３、３．５、４、４．５、５及び６時間で、大腿静脈カニューレを介して、血液試料（およそ２５０ｕＬ）を薬物動態解析用に採取した。遠心分離によって血漿を調製し、分析するまで−８０℃で貯蔵した。
【０４２２】
アシル化ペプチドを無菌生理食塩水中に配合し、絶食させていない雄のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ系ラット（群当たりｎ＝３）に、０．０３３ｍｇ／ｋｇの最終用量で、頸静脈カニューレを介して、１時間静脈内注入として投与した。製剤は１．６７ｍＬ／ｋｇ／ｈの速度で投与した。大腿静脈カニューレを介して、抗凝固薬としてのＫ２ＥＤＴＡ及び２５ｕＬのプロテアーゼ阻害剤カクテルを含むマイクロティナチューブ中に注入開始後０、０．２５、０．５、１、１．１７、１．３３、１．５、２、４、６、８、２４、３０及び４８時間で、血液試料（およそ２５０ｕＬ）を薬物動態解析用に採取した。遠心分離によって血漿を調製し、分析するまで−８０℃で貯蔵した。代表的な結果を以下の表８に示す。
【表８】
2019520329.tif 000032
【０４２３】
実施例２４．エクセナチドまたはグルカゴン類似体の継続投与の際のラットの体重減少
初期体重が５８６±８６（平均±ＳＤ）である食餌誘導性肥満のＬＥラットそれぞれに、（実施例１０で記載して用に）それぞれエクセナチドまたはグルカゴン類似体、すなわち、選択的グルカゴン受容体アゴニストを送達する２つの浸透圧ミニポンプ（Ａｌｚｅｔ）を移植した。処理群は、エクセナチドとグルカゴン類似体の３０の異なる組み合わせを含み、各群に１０〜２０匹の動物を有していた。
【０４２４】
体重を７日毎に測定した。結果を、２１日の連続投薬後の初期体重のパーセンテージとして、縦（Ｚ）軸上の体重減少の３−Ｄプロットとして図１４に図示する。したがって、基準平面化から出現するライザーの頂部の丸として示される正の体重減少は、処理前の体重に対する体重の減少を示す。明確性を保つために、エラーバーを示さない。
【０４２５】
図１４の横軸は、エクセナチド及びグルカゴン類似体シングレトンのそれぞれに対するマイクログラム／ｋｇ体重／ｄａｙの単位の１日量の対数に関する。−１のエクセナチド対数用量は、エクセナチド用量がゼロ（グルカゴン類似体のみの処理）であった処理を示し、グルカゴン対数用量軸の−１は、グルカゴンが投与されなかった（エクセナチドのみの処理）を処理を示す。したがって、左最前面及び右最前面の一連の点は、それぞれ、エクセナチド単体及びグルカゴン類似体単体に対する用量応答を示す。
【０４２６】
２１日間の処理後のエクセナチド単体に対する体重減少応答は、１２．５％の体重減少の最大応答、９．６μｇ／ｋｇ／ｄａｙのＥＤ５０を有し、０．８８のヒル勾配を有する４−パラメーターシグモイド曲線によって説明することができる。グルカゴン類似体単体については、２１日間の体重減少に対するパラメーターは、２８．５％の最大応答（ｍａｘｉｍｕｍ）、４５μｇ／ｋｇ／ｄａｙのＥＤ５０及び２．７のヒル勾配であった。
【０４２７】
実施例２５．エクセナチド／グルカゴン類似体の組み合わせの評価
エクセナチド／グルカゴン類似体の組み合わせに対する応答のある種の重要な特色の特性評価を可能にするために、図１４の生データを連続関数に適合させた。連続応答面の一般形式は、
組み合わせに対する応答＝（ａ＊ＲｅｓｐＥｘ）＋（ｂ＊ＲｅｓｐＧＧＮ）＋（ｃ＊ＲｅｓｐＥｘ＊ＲｅｓｐＧＧＮ）
であった。ここでは、ＲｅｓｐＥｘ及びＲｅｓｐＧＧＮは、各シングルトンで観察された用量依存的応答を示す。
【０４２８】
組み合わせの応答を、これが１００％の体重減少を超えることができないように、さらに双曲線形相関によって制限した。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ｖ７．０（ＧｒａｐｈＰａｄ  ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を使用して、上記のユーザー定義の式の最小二乗逐次近似法によって、最良適合連続応答面（Ｒ＝０．９）を得た。Ｃ＞０の場合、乗法的（超相加的）成分が存在した。
【０４２９】
各処理群を示す記号を、図１５の最良適合面の網目内に埋め込まれた球として示す。エクセナチドのみの平面とグルカゴン類似体のみの平面をつなぐ４本の破線の曲線は、１つの薬剤が等しい有効量のもう１つに置換される場合に、相加的相互作用により得られるであろう等しい効果（イソボール）の線を示す（期待される２％、４％、６％及び８％の体重減少のイソボールを示す）。４本の太い実線は、代わりに観察されたものを示し、そのような用量置換に対応する応答面である。実線（観察された）と破線（期待される）の差異は、相乗的相互作用を規定する。予測される効果の各レベルについて、効果がピークに達し、相乗作用が最大である用量比が存在した。
【０４３０】
実施例２６．エクセナチド／グルカゴン類似体の固定比率の組み合わせの評価
組み合わせ生成物は固定比率で投与される薬剤を含むことができるので、漸増用量の固定比率混合物の観点から応答面を分析した。
【０４３１】
固定用量比を、対数エクセナチド（「ＥＸ」）対対数グルカゴン類似体（「ＧＧＮ」）の基準平面上の平行な対角平面として図１６に示す。各混合物の用量応答を、応答面が各平面と交差する一連の黒色曲線として示す。面上の４本の灰色曲線（図１５で太い黒色線として示される）は、１つの薬剤が等しい有効量のもう１つに置換される（いわゆる「用量比スキャン」）場合に観察される応答である。
【０４３２】
固定用量比の灰色の平面が応答面と交差する太い黒色線は、それらの最適の用量比近くで４本の灰色線を横断するように思われる。灰色の平面は、３：１のＧＧＮ：ＥＸ用量比を規定する。１０：１及び１：１のＧＧＮ：ＥＸの混合物も十分に機能した。
【０４３３】
実施例２７．インビボ効力の評価
エクセナチド／グルカゴン類似体の様々な固定比率の組み合わせについて、薬物の単位総量あたりの効果と定義されるインビボ効力の評価を試みた。
【０４３４】
薬物リザーバーの容量が限られているミニ浸透圧ポンプなどのいくつかの適用については、最高の見かけ上のインビボ効能を有する混合物が最も有利である。異なる混合物の見かけ上のインビボ効能は、薬物の単位総量あたりの（またはより厳密には、製剤の体積あたりの）効果と定義することができる。
【０４３５】
そのため、図１５及び図１６において面として示す混合物に対する応答を、図１７に示す２−Ｄ用量応答に下げることができる。図１７のＸ軸は単一の薬剤の用量ではないが、固定比率混合物の両方の薬剤の量である。
【０４３６】
異なる混合物についての容量応答のファミリーには、最少の組み合わせ用量が所与の効果（横矢印で示されるように、２０％の体重減少で例示される）を誘起するものが含まれる。このようにして特定された有望な混合は、ＧＧＮ：ＥＸのおよそ３：１の混合物であった。最高の見かけ上の効能を示すこの混合物に対する応答を破線として示す。
【０４３７】
他の実施形態
本発明をそれらの詳細な説明とともに説明してきたが、前述の説明は、例示することを意図するものであり、添付の特許請求の範囲の範囲内によって定められる本発明の範囲を制限すること意図しない。他の態様、利点及び修正は以下の特許請求の範囲の範囲内である。
【図１】
2019520329.tif 000037
【図２Ａ】
2019520329.tif 000038
【図２Ｂ】
2019520329.tif 000039
【図３Ａ】
2019520329.tif 000040
【図３Ｂ】
2019520329.tif 000041
【図３Ｃ】
2019520329.tif 000042
【図４Ａ】
2019520329.tif 000043
【図４Ｂ】
2019520329.tif 000044
【図５】
2019520329.tif 000045
【図６】
2019520329.tif 000046
【図７】
2019520329.tif 000047
【図８】
2019520329.tif 000048
【図９】
2019520329.tif 000049
【図１０】
2019520329.tif 000050
【図１１】
2019520329.tif 000051
【図１２】
2019520329.tif 000052
【図１３】
2019520329.tif 000053
【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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