(57)【要約】  本発明は、下記式の化合物：2019525908.tif 000075（式中、ＲおよびＲ１〜Ｒ３は、本明細書において記載されるとおりである）、特定のタイプの自己免疫疾患および癌について患者を治療する方法、ならびに化合物を調製する方法を提供する。
2019525908.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式の化合物またはその薬学的に許容される塩
【化１】
2019525908.tif 000065
［式中、Ｒが、Ｈ、−Ｃ１−３アルキル、−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、または−Ｃ２−３アルキル−Ｏ−ＣＨ３、
【化２】
2019525908.tif 000066
から選択され、
Ｒ１が、Ｈ、−ＣＨ３、−ＯＣＨ３から選択され、
Ｒ２が−ＣＨＦ２または−ＣＦ３であり、
Ｒ３が、Ｈまたは−ＣＨ３であり、
但し、Ｒ２が−ＣＦ３であり、Ｒ３がＨであるとき、ＲまたはＲ１のいずれかは−ＣＨ３であり得るが、それらの両方がそうならない］。
【請求項２】
式の化合物またはその薬学的に許容される塩
【化３】
2019525908.tif 000067
［式中、
Ｒが、Ｈ、−Ｃ１−３アルキル、−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、または−Ｃ２−３アルキル−Ｏ−ＣＨ３、
【化４】
2019525908.tif 000068
から選択され、
Ｒ１が、Ｈ、−ＣＨ３、−ＯＣＨ３から選択され、
Ｒ２が、−ＣＨＦ２または−ＣＦ３であり、
Ｒ３が、Ｈまたは−ＣＨ３であり、
但し、Ｒ２が−ＣＦ３であり、Ｒ３が−ＣＨ３であるとき、ＲまたはＲ１のいずれかは−ＣＨ３であり得るが、それらの両方がそうならない］。
【請求項３】
Ｒが、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、および
【化５】
2019525908.tif 000069
から選択される、請求項１または２に記載の化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項４】
Ｒが、−ＣＨ３または−ＣＨ２ＣＨ３である、
請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項５】
Ｒが、
【化６】
2019525908.tif 000070
である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項６】
Ｒ１が、Ｈ、−ＣＨ３、および−ＯＣＨ３から選択される、請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項７】
Ｒ２が−ＣＦ３である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項８】
Ｒ３が、ＣＨ３である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項９】
【化７】
2019525908.tif 000071
である、請求項１または２に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１０】
【化８】
2019525908.tif 000072
である、請求項１または２に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１１】
【化９】
2019525908.tif 000073
である、請求項１または２に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１２】
【化１０】
2019525908.tif 000074
である、請求項１または２に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１３】
（２Ｒ）−１，１，１−トリフルオロ−３−（｛シス−４−［（１−メチル−４−｛［１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アミノ｝−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル）オキシ］シクロヘキシル｝アミノ）プロパン−２−オール  ２−ヒドロキシプロパン−１，２，３−トリカルボキシレート水和物である化合物。
【請求項１４】
（２Ｒ）−１，１，１−トリフルオロ−３−（｛シス−４−［（１−メチル−４−｛［１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アミノ｝−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル）オキシ］シクロヘキシル｝アミノ）プロパン−２−オールである化合物であって、
ａ）２θにおいて、１５．５、１８．１、１８．３、２０．５、および２２．９＋／−０．２°、または
ｂ）２θにおいて、１３．２、１５．５、１８．１、１８．３、１８．５、２０．５、２２．９、および２３．６、２３．７、＋／−０．２°、または
ｃ）２θにおいて、１３．２、１５．５、１８．１、１８．３、１８．５、１９．０、２０．５、２２．９、２３．６、２３．６、２３．７、２４．７、および２６．５＋／−０．２°
のピークを含む、ＣｕＫα源（λ＝１．５４０５６Å）から得られるＸ線粉末回折パターンによって特徴付けられる結晶形を有する、化合物。
【請求項１５】
（２Ｒ）−１，１，１−トリフルオロ−３−（｛シス−４−［（１−メチル−４−｛［１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アミノ｝−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル）オキシ］シクロヘキシル｝アミノ）プロパン−２−オール  ２−ヒドロキシプロパン−１，２，３−トリカルボキシレート水和物である化合物であって、
ａ）２θにおいて、１８．６、１９．１、２１．０、および２２．４＋／−０．２°、または
ｂ）２θにおいて、７．４、１１．０、１８．６、１９．１、２１．０、２１．９、２２．４、および２６．２＋／−０．２°、または
ｃ）２θにおいて、７．４、１１．０、１２．７、１６．８、１８．６、１９．１、２１．０、２１．９、２２．４、および２６．２＋／−０．２°
のピークを含む、ＣｕＫα源（λ＝１．５４０５６Å）から得られるＸ線粉末回折パターンによって特徴付けられる結晶形を有する、化合物。
【請求項１６】
請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物、および薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む、薬学的組成物。
【請求項１７】
８０％（ｗ／ｗ）を超える、結晶形の（２Ｒ）−１，１，１−トリフルオロ−３−（｛シス−４−［（１−メチル−４−｛［１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アミノ｝−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−６−イル）オキシ］シクロヘキシル｝アミノ）プロパン−２−オール  ２−ヒドロキシプロパン−１，２，３−トリカルボキシレート水和物である化合物を含む、薬学的組成物。
【請求項１８】
９０％（ｗ／ｗ）を超える、結晶形の（２Ｒ）−１，１，１−トリフルオロ−３−（｛シス−４−［（１−メチル−４−｛［１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アミノ｝−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−６−イル）オキシ］シクロヘキシル｝アミノ）プロパン−２−オール  ２−ヒドロキシプロパン−１，２，３−トリカルボキシレート水和物である化合物を含む、薬学的組成物。
【請求項１９】
関節炎の治療を必要とする患者を治療する方法であって、有効量の、請求項１５〜１８のいずれか１項に記載の薬学的組成物を前記患者に投与することを含む、方法。
【請求項２０】
関節炎の治療を必要とする患者を治療する方法であって、有効量の、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩を前記患者に投与することを含む、方法。
【請求項２１】
治療において使用するための、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２２】
関節炎の治療において使用するための、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２３】
関節炎を治療するための薬剤の製造における、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
本発明は、ヤヌスキナーゼ１（ＪＡＫ１）を阻害する、ベンズイミダゾール化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩、その化合物を含む薬学的組成物、および特定のタイプの自己免疫疾患および癌を治療するためのその化合物の使用方法、およびその化合物の調製プロセスに関する。
【０００２】
ヤヌスキナーゼのファミリー（ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、およびＴＹＫ２）は、ヤヌスキナーゼシグナル伝達性転写因子（ＪＡＫ−ＳＴＡＴ）経路を介して、免疫機能、炎症、および造血に必須の役割を有する細胞内タンパク質チロシンキナーゼである。ヤヌスキナーゼは、Ｉ型およびＩＩ型サイトカインなどの細胞外ポリペプチドに応答して、様々なエフェクターのチロシンリン酸化を調節し、異なる生理学的応答を誘導する下流のシグナル伝達経路の活性化を開始する。具体的には、ＪＡＫ１アイソフォームは、Ｉ型およびＩＩ型インターフェロンシグナル伝達において重要な役割を果たし、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、インターロイキン−４（ＩＬ−４）、糖タンパク質１３０（ｇｐ１３０）、およびクラスＩＩ受容体ファミリーからのシグナルを誘発する。このように、ＪＡＫ１の小分子阻害は、腫瘍学、炎症、および自己免疫疾患に関与するシグナル伝達経路に介入する可能性がある。Ｇｈｏｒｅｓｃｈｉ  Ｋ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  ２００９，２２８，２７３−２８７およびＺａｋ  Ｍ．ｅｔ  ａｌ．ＭｅｄＣｈｅｍ．２０１３，５６，４７６４−４７８５。
【０００３】
ＪＡＫ阻害剤の最近の成功にもかかわらず、単一のＪＡＫアイソフォームを選択的に標的化する阻害剤を発見し、開発する必要性が依然として存在する。これは、オフターゲットの影響を軽減することができる。
【０００４】
ヤヌスキナーゼ阻害剤化合物は、文献において知られている。例えば、ＵＳ２０１５／０２０３４５５は、ＪＡＫ阻害剤であり、とりわけ、自己免疫疾患、炎症性疾患、および増殖性疾患を治療するのに有用であるとうたわれている特定のベンズイミダゾール化合物を開示している。
【０００５】
特に関節炎、関節リウマチ、および糖尿病性腎症のような免疫疾患のための自己免疫疾患の治療のための代替的なＪＡＫ１阻害剤を提供する必要性が依然として存在する。さらに、選択的ＪＡＫ１阻害剤を提供する必要性が依然として存在する。本発明は、これらの必要性の１つ以上に対処することができるＪＡＫ１の特定の阻害剤を提供する。
【０００６】
本発明は、式１による化合物またはそれらの薬学的に許容される塩を提供し、
【化１】
2019525908.tif 000003
式中、Ｒは、Ｈ、−Ｃ１−３アルキル、−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、または−Ｃ２−３アルキル−Ｏ−ＣＨ３、
【化２】
2019525908.tif 000004
から選択され、Ｒ１は、Ｈ、−ＣＨ３、および−ＯＣＨ３から選択され、
Ｒ２は、−ＣＨＦ２または−ＣＦ３であり、Ｒ３は、Ｈまたは−ＣＨ３であり、但し、Ｒ２が−ＣＦ３であり、Ｒ３がＨであるとき、ＲまたはＲ１のいずれかは−ＣＨ３であり得るが、それらの両方がそうならないという条件である。
【化３】
2019525908.tif 000005
として示される結合は、分子の残りの部分に対するテトラヒドロピラン環またはピリジン環の結合点を示す。
【０００７】
本発明は、式２による化合物またはそれらの薬学的に許容される塩を提供し、
【化４】
2019525908.tif 000006
式中、Ｒは、Ｈ、−Ｃ１−３アルキル、−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、または−Ｃ２−３アルキル−Ｏ−ＣＨ３、
【化５】
2019525908.tif 000007
から選択され、Ｒ１は、Ｈ、−ＣＨ３、および−ＯＣＨ３から選択され、
Ｒ２は、−ＣＨＦ２または−ＣＦ３であり、Ｒ３は、Ｈまたは−ＣＨ３であり、但し、Ｒ２が−ＣＦ３であり、Ｒ３がＣＨ３であるとき、ＲまたはＲ１のいずれかは−ＣＨ３であり得るが、それらの両方がそうならないという条件である。
【０００８】
一形態において、本発明は、式１または２による化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩を提供し、式中、Ｒは、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、および
【化６】
2019525908.tif 000008
から選択される。ある実施形態において、Ｒは−ＣＨ３または−ＣＨ２ＣＨ３である。他の実施形態において、Ｒが
【化７】
2019525908.tif 000009
である。
【０００９】
別の形態において、本発明は、式１または２による化合物を提供し、ここで、Ｒは
【化８】
2019525908.tif 000010
として図示される結合が分子の残りの部分に対する結合点を示す。別の形態において、本発明は、式１または２による化合物を提供し、ここで、Ｒは
【化９】
2019525908.tif 000011
である。
【００１０】
一形態において、本発明は、式１または２による化合物を提供し、式中、Ｒ１は、Ｈ、−ＣＨ３、および、−ＯＣＨ３から選択される。ある実施形態において、Ｒ１は、Ｈまたは−ＣＨ３である。他の実施形態において、Ｒ１は−ＯＣＨ３である。
【００１１】
別の形態において、本発明は、式１または２による化合物を提供し、Ｒ２は−ＣＦ３である。この形態のある実施形態において、Ｒは、−ＣＨ３または−ＣＨ２ＣＨ３である、Ｒ１は、−ＣＨ３または−ＯＣＨ３である。この形態の他の実施形態において、Ｒは
【化１０】
2019525908.tif 000012
であり、Ｒ１はＨである。
【００１２】
別の形態において、本発明は、式１または２による化合物を提供し、式中、Ｒ３は、−ＣＨ３である。ある実施形態において、ＲはＨであり、Ｒ１はＨであり、Ｒ２はＣＨ３である。
【００１３】
一実施形態において、本発明は、式３の化合物
【化１１】
2019525908.tif 000013
またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【００１４】
別の実施形態において、本発明は、式４の化合物
【化１２】
2019525908.tif 000014
またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【００１５】
さらに別の実施形態において、本発明は、式５の化合物
【化１３】
2019525908.tif 000015
またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【００１６】
別の実施形態において、本発明は、式５Ａの化合物
【化１４】
2019525908.tif 000016
またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【００１７】
別の実施形態において、本発明は、式５Ｂの化合物
【化１５】
2019525908.tif 000017
またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【００１８】
また別の実施形態において、本発明は、式６の化合物
【化１６】
2019525908.tif 000018
またはその薬学的に許容される塩を提供する。一実施形態において、薬学的組成物は、遊離塩基または双性イオンとしての中性化合物としての式６の化合物を含む。一実施形態において、本発明は、クエン酸塩として式６の化合物を提供する。さらにまた別の実施形態において、本発明は、結晶形の遊離塩基として式６の化合物を提供し、この結晶形は、２シータ角において１５．５、１８．１、１８．３、２０．５、および２２．９＋／−０．２°、または２シータ角において１３．２、１５．５、１８．１、１８．３、１８．５、２０．５、２２．９、および２３．６、２３．７、＋／−０．２°、または２シータ角において１３．２、１５．５、１８．１、１８．３、１８．５、１９．０、２０．５、２２．９、２３．６、２３．６、２３．７、２４．７、および２６．５＋／−０．２°でピークを含む、ＣｕＫα源（λ＝１．５４０５６Å）から得られたＸ線粉末回折パターンを特徴とする。
【００１９】
更にまた別の実施形態において、本発明は、結晶形の（２Ｒ）−１，１，１−トリフルオロ−３−（｛シス−４−［（１−メチルｌ−４−｛［１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アミノ｝−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル）オキシ］シクロヘキシル｝アミノ）プロパン−２−オール２−ヒドロキシプロパン−１，２，３−トリカルボキシレート水和物（１：１：１）としての式６の化合物を提供し、この結晶形は、２シータ角において１８．６、１９．１、２１．０、および２２．４＋／−０．２°、または２シータ角において７．４、１１．０、１８．６、１９．１、２１．０、２１．９、２２．４、および２６．２＋／−０．２°、または２シータ角において７．４、１１．０、１２．７、１６．８、１８．６、１９．１、２１．０、２１．９、２２．４、および２６．２＋／−０．２°でピークを含む、ＣｕＫα源（λ＝１．５４０５６Å）から得られたＸ線粉末回折パターンを特徴とする。
【００２０】
別の形態において、本発明は、実質的に純粋な、結晶形の（２Ｒ）−１，１，１−トリフルオロ−３−（｛シス−４−［（１−メチル−４−｛［１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アミノ｝−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−６−イル）オキシ］シクロヘキシル｝アミノ）プロパン−２−オール２−ヒドロキシプロパン−１，２，３−トリカルボキシレート水和物（１：１：１）を含む組成物を提供する。好ましくは、組成物は、８０％（重量／重量）を超える、結晶形の（２Ｒ）−１，１，１−トリフルオロ−３−（｛シス−４−［（１−メチル−４−｛［１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アミノ｝−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−６−イル）オキシ］シクロヘキシル｝アミノ）プロパン−２−オール２−ヒドロキシプロパン−１，２，３−トリカルボキシレート水和物（１：１：１）を含む。より好ましくは、９０％（重量／重量）を超える、結晶形の（２Ｒ）−１，１，１−トリフルオロ−３−（｛シス−４−［（１−メチル−４−｛［１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アミノ｝−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−６−イル）オキシ］シクロヘキシル｝アミノ）プロパン−２−オール２−ヒドロキシプロパン−１，２，３−トリカルボキシレート水和物（１：１：１）を含む。さらにより好ましくは、９５％（重量／重量）を超える、結晶形の（２Ｒ）−１，１，１−トリフルオロ−３−（｛シス−４−［（１−メチル−４−｛［１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アミノ｝−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−６−イル）オキシ］シクロヘキシル｝アミノ）プロパン−２−オール２−ヒドロキシプロパン−１，２，３−トリカルボキシレート水和物（１：１：１）を含む。
【００２１】
別の形態において、本発明は、式１〜６のいずれか１つによる化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩と、少なくとも１つの、薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤とを含む、薬学的組成物を提供する。
【００２２】
一実施形態において、薬学的組成物は、中性化合物または双性イオンとして、式１〜６の化合物を含む。別の実施形態において、薬学的組成物は、薬学的に許容される塩として、式１〜６の化合物を含む。さらに別の実施形態において、薬学的組成物は、クエン酸塩として、式１〜６の化合物を含む。
【００２３】
別の形態において、本発明は、関節炎、より好ましくはリューマチ性関節炎の治療を必要とする患者を治療する方法を提供する。本方法は、有効量の、式１〜６のうちの１つによる化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩を含む薬学的組成物を患者に投与することを含む。
【００２４】
別の形態において、本発明は、糖尿病性腎症について患者を治療する方法を提供する。本方法は、有効量の、式１〜６のうちの１つによる化合物、またはその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む。
【００２５】
別の形態において、本発明は、糖尿病性腎症について患者を治療する方法を提供する。本方法は、有効量の、式１〜６のうちの１つによる化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩を含む薬学的組成物の化合物を患者に投与することを含む。
【００２６】
別の形態において、本発明は、炎症性腸疾患について患者を治療する方法を提供する。本方法は、有効量の、式１〜６のうちの１つによる化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩を含む薬学的組成物の化合物を患者に投与することを含む。
【００２７】
別の形態において、本発明は、ＪＡＫ１阻害によって媒介される自己免疫状態について、治療を必要とする患者において治療する方法を提供する。治療は、有効量の、式１〜６の化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む。
【００２８】
ＪＡＫ１阻害により媒介され、本発明によって治療することができる状態の例は、糖尿病性腎症およびループス、より好ましくは全身性エリテマトーデス、シェーグレン症候群、および炎症性腸疾患、より好ましくはクローン病、および潰瘍性大腸炎を含む。
【００２９】
別の形態において、本発明は、関節炎の治療を必要とする患者を治療する方法を提供する。本方法は、有効量の、式１〜６の任意の１つによる化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩を必要とする患者に投与することを含む。関節炎を治療するより好ましい方法は、関節リウマチについて患者を治療することを含む。
【００３０】
別の形態において、本発明は、糖尿病性腎症、ループス、より好ましくは全身性エリテマトーデス、シェーグレン症候群、および炎症性腸疾患、より好ましくは、クローン病および潰瘍性大腸炎から選択される状態の治療を必要とする患者を治療する方法を提供する。本方法は、有効量の、任意の１つの式１〜６による化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む。
【００３１】
別の形態において、本発明は、癌の治療を必要とする患者を治療する方法を提供する。本方法は、有効量の、式１〜６の任意の１つによる化合物をそれらを必要とする患者に投与することを含む。
【００３２】
別の形態において、本発明は、治療に使用するための式１〜６の任意の１つによる化合物を提供する。
【００３３】
一実施形態において、式１〜６の任意の１つによる化合物を使用することができる治療法は、関節炎、より好ましくは関節リウマチ、糖尿病性腎症、ループス、より好ましくは全身性エリテマトーデス、シェーグレン症候群、および炎症性腸疾患、より好ましくはクローン病および潰瘍性大腸炎から選択される。
【００３４】
別の形態において、本発明は、医薬品の製造における式１〜６の任意の１つによる化合物の使用を提供する。
【００３５】
一実施形態において、医薬品は関節炎を治療するのに有用である。別の実施形態において、医薬品は関節リウマチの治療に有用である。さらに別の実施形態において、医薬品は、糖尿病性腎症、ループス、より好ましくは全身性エリテマトーデス、シェーグレン症候群、および炎症性腸疾患、より好ましくは、クローン病および潰瘍性大腸炎から選択される状態の治療に有用である。さらに別の実施形態において、医薬品は、糖尿病性腎症の治療に有用である。さらに別の実施形態において、医薬品はループスを治療するのに有用である。さらに別の実施形態において、医薬品はシェーグレン症候群の治療に有用である。さらにまた別の実施形態において、医薬品は、炎症性腸疾患を治療するために有用である。
【００３６】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される塩」という用語は、臨床的および／または獣医学的使用に許容されると見なされる本発明の化合物の塩を指す。それらを調製するための薬学的に許容される塩および一般的な方法の例は、Ｐ．Ｓｔａｈｌ，ｅｔ  ａｌ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｕｓｅ，２ｎｄ  Ｒｅｖｉｓｅｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，２０１１、およびＳ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅ，ｅｔ  ａｌ．，”Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ，”Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｖｏｌ．６６，Ｎｏ．１，Ｊａｎｕａｒｙ１９７７に見ることができる。
【００３７】
本発明の薬学的組成物は、薬学的に許容される添加剤を用いて当該技術分野において既知の手順で調製することができる。本明細書において薬学的組成物のために用いられる「薬学的に許容される添加剤」という用語は、製剤内の他の成分と互換性があり、患者に有害でない１つ以上の担体、希釈剤、および賦形剤を指す。薬学的組成物およびそれらの調製プロセスは既知であり、例はＬｏｙｄ，Ｖ．，ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ２２ｎｄＥｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，２０１２に見ることができる。薬学的に許容される担体、希釈剤、および賦形剤の非限定的な例には、以下のものが挙げられる：生理的食塩水、水、デンプン、糖、マンニトール、およびシリカ誘導体、カルボキシメチルセルロースおよび他のセルロース誘導体、アルギン酸塩、ゼラチン、ならびにポリビニルピロリドンなどの結合剤、カオリンおよびベントナイト、ポリエチルグリコール。
【００３８】
好ましい薬学的組成物は、経口投与のための錠剤、カプセル剤、もしくは溶液、または注射可能な溶液として製剤化することができる。錠剤、カプセル、または溶液は、治療を必要とする患者を治療するための有効量にて本発明の化合物を含むことができる。
【００３９】
本明細書において用いられるとき、「有効量」という用語は、関節炎、自己免疫疾患、または癌などの障害を治療するのに有効な用量である量を指す。当業者としての主治医または獣医師は、従来技術を使用することによって、および類似の状況下で得られた結果を観察することによって、有効量を容易に決定することができる。有効量または用量を決定する際、どのような化合物、またはその塩が投与されるか、使用される場合、他の薬剤の同時投与、患者の種、患者のサイズ、年齢、および全体的な健康状態、障害の併発の程度もしくは重篤度、個々の患者の応答、投与様式、投与される製剤の生物学的利用率特性、選択される投与計画、他の併用薬物の使用、ならびに他の関連する状況を含むがこれらに限定されない、多くの因子が考慮される。
【００４０】
本明細書で使用されるとき、用語「患者」は、哺乳動物、家禽または魚類を指す。好ましい哺乳動物には、ヒト、イヌまたはネコなどのコンパニオン哺乳動物、または、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、およびヤギなどの家畜化動物もしくは家畜が含まれる。
【００４１】
「実質的に純粋な」という用語は、重量基準で８０％を超えた純度、より好ましくは９０％を超えた純度、さらにより好ましくは９５％を超えた純度の組成物を指す。
【００４２】
本発明の化合物は、単独で、または１つ以上のさらなる治療薬と組み合わせて使用することができる。例えば、本発明の化合物は、炎症および／または自己免疫疾患の治療のための薬剤と組み合わせることができる。例には、イブプロフェン、アスピリン、アセトアミノフェン、セレコキシブ、ナプロキセン、およびケトプロフェンなどのＮＳＡＩＤまたはＣＯＸ−２阻害剤、オピオイド、例えばオキシコドンおよびフェンタニル、メトトレキサート、ならびにヒドロコルチゾン、プレドニゾロン、プレドニゾンなどのコルチコステロイドが挙げられる。
【００４３】
化合物はまた、癌を治療するために有効な１つ以上のさらなる治療剤と組み合わせることもできる。例としては、シスプラチン、カルボプラチン、エトポシド、ゲムシタビン、パクリタキセル、ビノレルビン、トポテカン、イリノテカン、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、およびメトトレキサートが挙げられる。
【００４４】
例示した化合物および追加の治療薬（複数可）は、同じ送達経路および単一の丸薬、カプセル、もしくは錠剤などの手段を介して一緒に投与するか、または別々の送達手段で同時に投与するか、もしくは逐次的に投与することができる。
【００４５】
化学セクション
本発明の化合物、またはその塩は、様々な手順で調製することができ、それらのいくつかを以下の調製物および実施例に例示する。以下の手順における各々のステップの産物は、抽出、蒸発、沈殿、クロマトグラフィー、ろ過、粉末化、および結晶化を含む、従来の方法によって回収することできる。試薬および出発物質は、当業者にとって容易に入手可能である。以下に記載する調製において、アミン置換基を保護して、本明細書において記載される化合物の合成を促進することができる。
【００４６】
本明細書において使用されるとき、以下の用語は、示される意味を有する：「ＡｃＯＨ」は氷酢酸を指し、「ＥＣ５０」は所定の陽性対照化合物（絶対値ＥＣ５０）と比較した標的活性の５０％応答を生じる薬剤の濃度を指し、「ＥｔＯＡｃ」は酢酸エチルを指し、「ＥＳ／ＭＳ」はエレクトロスプレー質量分析法を指し、「ＤＣＭ」はジクロロメタンを指し、「ＤＭＦ」は、Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミドを指し、「ＤＭＳＯ」はジメチルスルホキシドを指し、「ＧＣ−ＭＳ」は、ガスクロマトグラフィー−質量分析法を指し、「ＧＦＰ」は緑色蛍光タンパク質をを指し、「ＨＥＰＥＳ」は４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸を指し、「ｈｒ」または「ｈｒｓ」は時間を指し、「ＩＣ５０」は、その薬剤（相対ＩＣ５０）に対して可能な最大阻害応答の５０％を生じる薬剤の濃度、またはプラセボ対照（絶対ＩＣ５０）と比較した標的活性の５０％阻害を生じる薬剤の濃度を指し、「ＬＣ−ＭＳ」は、液体クロマトグラフィー−質量分析法を指し、「ＭｅＯＨ」はメタノールを指し、「ｍｉｎ」は分を指し、「ＭＳ」は質量分析を指し、「ＭＴＢＥ」はメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルを指し、「ＯＡｃ」はアセテートまたはアセテートアニオンを指し、「ＱＤ」とは１日１回を指し、「ＲＴまたはｒｔ」は室温を指し、「ＳＴＡＴ１」はシグナル伝達性転写因子を指し、「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランを指し、「ＴＲ−ＦＲＥＴ」は時間分解蛍光エネルギー移動を指す。
【００４７】
様々なアミン保護官能基が当分野で知られており、Ｃ１〜５アルキルカルバメート、Ｃ３〜６シクロアルキルカルバメート、好ましくは、ｔ−ブチルカルバメート（ＢＯＣ）またはベンジルカルバメート（ＣＢＺ）などのカルバメート；Ｃ１〜３アルキルアミド、Ｃ１〜３ハロアルキルアミド、ホルムアミドまたはアセトアミド、クロロアセトアミド、トリフルオリドアセトアミドなどのアミド；およびベンジルアミンを含む。アミン保護官能基、保護されたアミン官能基を調製する方法、およびアミン置換基を脱保護する方法のさらなる例は、“Ｇｒｅｅｎｅ’ｓ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｗｕｔｓ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．，Ｅｄｓ．Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，２０１４に見ることができる。当業者は、容易にアミン基に変換することができる他の官能基を使用できることを認識するであろう。そのような官能基、これらの基の調製、および変換は、“Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ：Ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｒｏｕｐ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ”ｂｙ  Ｌａｒｏｃｋ．Ｒ．Ｃ，Ｗｉｌｅｙ  ＶＣＨ，１９９９、および“Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ”Ｓｍｉｔｈ，Ｍ．Ｂ．，Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，７ｔｈ  Ｅｄ．，２０１３に見ることができる。
【００４８】
調製１
（２Ｒ）−２−（トリフルオロメチル）オキシラン
酢酸（０．８９ｍＬ、０．０５２当量）を、トルエン（１６．６５ｍＬ）中の（１Ｓ，２Ｓ）−（＋）−１，２−シクロヘキサンジアミノ−Ｎ，Ｎ’−ビス（３，５−ジ−ｔ−ブチルサリシリデン）コバルト（ＩＩ）（０．９０ｇ、０．００５０当量）の溶液に添加する。室温で３０分間撹拌する。真空中で溶媒を除去する。トルエン（２０ｍＬ）を添加し、真空濃縮する。０℃まで冷却し、２−（トリフルオロメチル）オキシラン（３７．００ｇ、３３０ｍｍｏｌ、８０．０％ｅｅ、（２Ｒ）が主エナンチオマー）を添加する。５分間撹拌し、水（０．８０ｍＬ、０．１５当量）を滴下する。室温まで加温し、一晩撹拌する。室温で真空蒸留し、淡黄色の油状物としての表題化合物（２８．１０ｇ、７６％、９９．８％ｅｅ）を冷却されたフラスコに回収する。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ２．９２−２．９４（ｍ，１Ｈ），２．９８−３．０１（ｍ，１Ｈ），３．４１−３．４６（Ｍ，１Ｈ）。
【００４９】
表題化合物（０．１３ｇ、１．１６ｍｍｏｌ）とメタノール（１．３ｍＬ）とを混合する。０℃まで冷却し、トリエチルアミン（０．１７ｍＬ、１．１０当量）およびチオフェノール（０．１２ｍＬ、１．０５当量）を添加する。混合物を３０分間撹拌する。１，１，１−トリフルオロ−３−フェニルスルファニル−プロパン−２−オール、ｍ／ｚ＝２２２の形成についてＧＣ−ＭＳによって反応をモニターする。キラルＬＣ−ＭＳによる生成物の分析は、生成物の異性体純度が９９．８％ｅｅであり、（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロ−３−フェニルスルファニル−プロパン−２−オールが主エナンチオマーであることを示している。
【００５０】
調製２
１−ブロモ−３，５−ジフルオロ−２−ニトロベンゼン
硝酸（発煙、２０ｍＬ）を、０℃の硫酸（５０ｍＬ）中の１−ブロモ−３，５−ジフルオロベンゼン（３５．００ｍＬ、３０４ｍｍｏｌ）の溶液に滴下する。室温まで加温し、一晩撹拌する。反応混合物を、氷と水との混合物（６００ｍＬ）に注ぐ。室温までゆっくりと加温する。ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）およびヘキサン（１００ｍＬ）を添加する。すべての固体が溶解するまで撹拌する。層を分離する。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、真空濃縮し、黄色の油状物として表題化合物をもたらす（５７．３７ｇ、７９％）。ＧＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ＝（７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）２３７，２３９（Ｍ＋Ｈ）。
【００５１】
調製３
３−ブロモ−５−フルオロ−Ｎ−メチル−２−ニトロアニリン
テトラヒドロフラン（９２ｍＬ、２．００当量）中の２Ｍモノメチルアミンを、１，４−ジオキサン（９２ｍＬ）中の１−ブロモ−３，５−ジフルオロ−２−ニトロベンゼン（２１．９０ｇ、９２ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。室温で４５分間撹拌する。水を添加し、次いでＥｔＯＡｃで抽出する。有機抽出物を回収し、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄する。無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、ろ液を真空濃縮して残渣をもたらす。残渣を順相クロマトグラフィーに供し、ヘキサン中の２０〜４０％のＤＣＭの勾配で溶離し、橙色の固体として表題化合物をもたらす（１６．９５ｇ、７４％）。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝（７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）２４９／２５１（Ｍ＋Ｈ）。
【００５２】
調製物４
｛シス−４−［３−ブロモ−５−（メチルアミノ）−４−ニトロフェノキシ］シクロヘキシル｝カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル
【化１７】
2019525908.tif 000019
ＤＣＭ（９７５ｍＬ）および５Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（２４１ｍＬ）中で、３−ブロモ−５−フルオロ−Ｎ−メチル−２−ニトロアニリン（７５．０４ｇ、３０１ｍｍｏｌ）、（シス−４−ヒドロキシシクロヘキシル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（８９．５２ｇ、１．３８当量）、および重硫酸テトラ（ｎ−ブチル）アンモニウム（１５．５８ｇ、０．１５当量）を混合する。窒素下、３７℃で５日間高速で撹拌する。室温に冷却する。ＤＣＭ（２００ｍＬ）および水（４００ｍＬ）で希釈する。層を分離する。水層をＤＣＭ（３×１００ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、ろ液を真空濃縮して残渣をもたらす。残渣を順相クロマトグラフィーに供し、ヘキサン中の０〜４０％のＥｔＯＡｃの勾配で溶離し、橙色の固体として表題化合物をもたらす（６８．５７ｇ、５１％）。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝（７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）４４２／４４４（Ｍ−Ｈ）。
【００５３】
調製５
｛シス−４−［（４−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル）オキシ］シクロヘキシル｝カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル
【化１８】
2019525908.tif 000020
Ｐａｒｒ反応器（登録商標）において、テトラヒドロフラン（９２３ｍＬ）中で、｛シス−４−［３−ブロモ−５−（メチルアミノ）−４−ニトロフェノキシ］シクロヘキシル｝カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（７６．９２ｇ、１７３ｍｍｏｌ）と白金（硫化炭素上で５％、３．８５ｇ）とを混合する。Ｈ２（４１４ｋＰａ）下、室温で３日間撹拌する。珪藻土を通してろ過する。珪藻土をＴＨＦで洗浄する。オルトギ酸トリメチル（１６５ｍＬ、８．７０当量）を合わせたＴＨＦろ液に添加する。２２時間６３℃で撹拌する。反応混合物の大部分を真空濃縮する。水（４００ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）で希釈する。炭酸ナトリウム水溶液で塩基性化し、ｐＨを９に調整する。層を分離する。水層をＥｔＯＡｃ（２×２００ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、ろ液を真空濃縮する。残渣をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（４００ｍＬ）で希釈し、３０分間超音波処理する。ろ過し、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルで洗浄し、減圧下で乾燥させ、淡褐色の固体として表題化合物を（５２．０２ｇ、７１％）得る。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝（７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）４２４／４２６（Ｍ＋Ｈ）。
【００５４】
調製６
シス−４−［（４−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル）オキシ］シクロヘキサンアミン
【化１９】
2019525908.tif 000021
トリフルオロ酢酸（６６６ｍＬ）を、０℃のＤＣＭ（１１１０ｍＬ）中の｛シス−４−［（４−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル）オキシ］シクロヘキシル｝カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２２２ｇ、４９７ｍｍｏｌ）の溶液にゆっくりと添加する。混合物を室温までゆっくりと加温し、一晩撹拌する。混合物を真空濃縮する。水（２５０ｍＬ）を添加し、５０％水酸化ナトリウム水溶液で塩基性化し、ｐＨを１０に調整する。水（２５０ｍＬ）を添加する。ＤＣＭ中の２０％のメタノール（１５００ｍＬ、次に５００ｍＬ、次に２５０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物を２Ｍ水酸化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、ろ液を濃縮し、褐色の固体として表題化合物をもたらす（１５５ｇ、９１％）。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝（７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）３２４／３２６（Ｍ＋Ｈ）。
【００５５】
調製物７
（２Ｒ）−３−（｛シス−４−［（４−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル）オキシ］シクロヘキシル｝アミノ）−１，１，１−トリフルオロプロパン−２−オール
【化２０】
2019525908.tif 000022
（２Ｒ）−２−（トリフルオロメチル）オキシラン（７３．２９ｇ、１．５０当量）を、ＭｅＯＨ（１０５３ｍＬ）中のシス−４−［（４−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル）オキシ］シクロヘキサンアミン（１５０．４ｇ、４３６ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。一晩室温で撹拌する。反応混合物を真空濃縮して残渣をもたらす。残渣を順相クロマトグラフィーに供し、ＤＣＭ中の０〜１０％のＥｔＯＨの勾配で溶離し、オフホワイトの固体として表題化合物をもたらす（９８．１０ｇ、５２％）。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝（７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）４３６／４３８（Ｍ＋Ｈ）。
【００５６】
調製物８
１−（３−メトキシプロピル）−５−メチル−３−ニトロ−１Ｈ−ピラゾール
５−メチル−３−ニトロ−１Ｈ−ピラゾール（３．０ｇ、２２ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（６．２ｇ、２．０当量）、および１−ブロモ−３−メトキシプロパン（３．８ｇ、１．１当量）の混合物にアセトニトリル（５６ｍＬ）を添加する。６５℃で一晩撹拌する。室温に冷却する。ＥｔＯＡｃ（約５０ｍＬ）を添加し、ろ過する。ろ液を真空濃縮する。残渣を順相クロマトグラフィーに供し、ヘキサン中の３５％のＥｔＯＡｃで溶離し、表題化合物をもたらす（３．３ｇ、７０％）。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝２００（Ｍ＋Ｈ）。
【００５７】
調製物９
１−（３−メトキシプロピル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン
パラジウム炭（５％ｗ／ｗ、０．３８ｇ）を５００ｍＬのＰａｒｒ（登録商標）反応器に添加する。反応器をＮ２でパージし、ＥｔＯＨ（１００ｍＬ）を添加する。ＥｔＯＨ（１００ｍＬ）中の１−（３−メトキシプロピル）−５−メチル−３−ニトロ−１Ｈ−ピラゾール（３．３ｇ、１７ｍｍｏｌ）の溶液を添加する。Ｈ２（６０ｐｓｉ）下、室温で２時間撹拌する。珪藻土を通してろ過する。ろ液を真空濃縮して、橙色の油状物として表題化合物（２．７ｇ、９６％）をもたらす。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝１７０（Ｍ＋Ｈ）。
【００５８】
調製１０
１−（２−メトキシエチル）−５−メチル−３−ニトロ−１Ｈ−ピラゾール
５−メチル−３−ニトロ−１Ｈ−ピラゾール（０．９５ｇ、７．１ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（２．０ｇ、２．０当量）、および１−ブロモ−２−メトキシエタン（２．０ｍＬ、３．０当量）の混合物にアセトニトリル（３５ｍｌ）を添加する。７５℃で３時間撹拌する。室温に冷却する。ジエチルエーテル（約３５ｍＬ）を添加し、ろ過する。固体をＥｔＯＡｃ（２×２５ｍＬ）ですすぐ。ろ液を真空濃縮して残渣をもたらす。残渣を順相クロマトグラフィーに供し、ヘキサン中の０〜１００％のＥｔＯＡｃの勾配で溶離し、黄色の油状物として表題化合物をもたらす（１．１ｇ、６４％）。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝１８６（Ｍ＋Ｈ）。
【００５９】
調製１１
１−（２−メトキシエチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン
パラジウム炭（１０％ｗ／ｗ、０．３８ｇ）をフラスコに添加する。Ｎ２でパージし、ＥｔＯＨ（１０ｍＬ）を添加する。ＥｔＯＨ（４０ｍＬ）中の１−（２−メトキシエチル）−５−メチル−３−ニトロ−１Ｈ−ピラゾール（０．８６ｇ、４．６ｍｍｏｌ）の溶液を添加する。Ｈ２（バルーン）下、室温で一晩撹拌する。珪藻土を通してろ過する。ろ液を真空濃縮して、褐色の油状物として表題化合物（０．６８ｇ、８４％）をもたらす。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝１５６（Ｍ＋Ｈ）。
【００６０】
調製１２
１−（５−メチル−３−ニトロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロパン−２−オール
５−メチル−３−ニトロ−１Ｈ−ピラゾール（２．０ｇ、１５ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（４．１ｇ、２．０当量）、および１−クロロ−２−プロパノール（３．８ｍＬ、３．０当量）の混合物にアセトニトリル（７５ｍＬ）を添加する。８５℃で一晩撹拌する。室温に冷却する。固体をろ過し、ＥｔＯＡｃですすぐ。ろ液を真空濃縮して残渣をもたらす。残渣を順相クロマトグラフィーに供し、ヘキサン中の５０％のＥｔＯＡｃで溶離し、表題化合物をもたらす（２．０ｇ、６５％）。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝１８６（Ｍ＋Ｈ）。
【００６１】
調製物１３
１−（３−アミノ−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロパン−２−オール
パラジウム炭（１０％ｗ／ｗ、０．３５ｇ）をフラスコに添加する。Ｎ２でパージし、ＥｔＯＨ（５０ｍＬ）を添加する。ＥｔＯＨ（１５０ｍＬ）中の１−（５−メチル−３−ニトロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロパン−２−オール（２．０ｇ、１１ｍｍｏｌ）の溶液を添加する。Ｈ２（バルーン）下、室温で一晩撹拌する。珪藻土を通してろ過する。ろ液を真空濃縮して、ピンク色の油状物として表題化合物（１．２ｇ、６９％）をもたらす。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝１５６（Ｍ＋Ｈ）。
【００６２】
調製物１４
（２Ｓ）−１−（５−メチル−３−ニトロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロパン−２−オール
【化２１】
2019525908.tif 000023
５−メチル−３−ニトロ−１Ｈ−ピラゾール（１．２ｇ、９．０ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（２．５ｇ、２．０当量）、および（Ｓ）−１−クロロ−２−プロパノール（０．９８ｇ、１．２当量）の混合物にアセトニトリル（４５ｍＬ）を添加する。８５℃で４日間撹拌する。室温に冷却する。ろ過して固体を回収し、固体をＥｔＯＡｃですすぎ、次いで固体を廃棄する。ろ液を回収し、真空濃縮して残渣をもたらす。残渣を順相クロマトグラフィーに供し、ヘキサン中の５０％のＥｔＯＡｃで溶離し、白色の固体として表題化合物をもたらす（１．１ｇ、６７％）。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝１８６（Ｍ＋Ｈ）。
【００６３】
調製物１５
（２Ｓ）−１−（３−アミノ−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロパン−２−オール
【化２２】
2019525908.tif 000024
パラジウム炭（１０％ｗ／ｗ、０．２２ｇ）をフラスコに添加する。ＥｔＯＨ（５０ｍＬ）中の（２Ｓ）−１−（５−メチル−３−ニトロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロパン−２−オール（１．１ｇ、６．０ｍｍｏｌ）の溶液を添加する。Ｈ２（バルーン）下、室温で一晩撹拌する。珪藻土を通してろ過する。ＭｅＯＨで固体を洗浄する。ろ液を真空濃縮して、表題化合物（０．８９ｇ、９５％）をもたらす。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝１５６（Ｍ＋Ｈ）。
【００６４】
調製物１６
（２Ｒ）−１−（５−メチル−３−ニトロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロパン−２−オール
【化２３】
2019525908.tif 000025
５−メチル−３−ニトロ−１Ｈ−ピラゾール（１．１ｇ、８．２ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（２．３ｇ、２．０当量）、および（Ｒ）−１−クロロ−２−プロパノール（０．９２ｍＬ、１．３当量）の混合物にアセトニトリル（４１ｍＬ）を添加する。８５℃で一晩撹拌する。室温に冷却する。固体をろ過し、ＥｔＯＡｃですすぐ。ろ液を真空濃縮して残渣をもたらす。残渣を順相クロマトグラフィーに供し、ヘキサン中の５０％のＥｔＯＡｃで溶離し、白色の固体として表題化合物をもたらす（０．７４ｇ、４８％）。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝１８６（Ｍ＋Ｈ）。
【００６５】
調製物１７
（２Ｒ）−１−（３−アミノ−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロパン−２−オール
【化２４】
2019525908.tif 000026
パラジウム炭（１０％ｗ／ｗ、０．１５ｇ）をフラスコに添加する。ＥｔＯＨ（３３ｍＬ）中の（２Ｒ）−１−（５−メチル−３−ニトロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロパン−２−オール（０．７４ｇ、４．０ｍｍｏｌ）の溶液を添加する。Ｈ２（バルーン）下、室温で一晩撹拌する。珪藻土を通してろ過する。ＭｅＯＨで固体を洗浄する。ろ液を真空濃縮して、黄色固体として標記化合物を得る（０．５８ｇ、９５％）。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝１５６（Ｍ＋Ｈ）。
【００６６】
調製１８
エチル８−メチル−１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカン−８−カルボキシラート
【化２５】
2019525908.tif 000027
ジイソプロピルアミン（５５ｍＬ、１．３６当量）および２−メチルテトラヒドロフラン（５００ｍＬ）を混合する。Ｎ２下で、−２０℃に冷却する。ヘキサン中の２．５Ｍのｎ−ブチルリチウム（１５０ｍＬ、１．３０当量）を１０分間にわたって滴下し、次いで、溶液を−２０℃でさらなる１５分間撹拌する。−４０℃で、溶液を、２−メチルテトラヒドロフラン（５００  ｍＬ）中のエチル１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカン−８−カルボキシレート（５０ｍＬ、２８７ｍｍｏｌ）の溶液に、カニューラを介して２０分間にわたって移送する。溶液を１０分間、−４０℃において撹拌する。２−メチルテトラヒドロフラン（６０ｍＬ）中のヨードメタン（３０ｍＬ、１．６８当量）の溶液を１０分間かけて滴下する。−４０℃で１時間撹拌する。室温になるようゆっくりと加温し、一晩撹拌する。飽和塩化アンモニウム水溶液（１５０ｍＬ）でクエンチする。層を分離する。水層をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（５０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、真空濃縮し、黄色の油状物として表題化合物をもたらす（６３．３ｇ、９７％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１．１６（ｓ，３Ｈ），１．２０−１．２５（ｍ，３Ｈ），１．４２−１．６６（ｍ，６Ｈ），２．０７−２．１４（ｍ，２Ｈ），３．９１（ｓ，４Ｈ），４．０８−４．１５（ｍ，２Ｈ）。
【００６７】
調製物１９
８−メチル−１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカン−８−カルボン酸
【化２６】
2019525908.tif 000028
エチル８−メチル−１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカン−８−カルボキシレート（２０ｇ、８８ｍｍｏｌ）、ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）、および水中３Ｍの水酸化ナトリウム（１４０ｍｌ）を混合する。反応混合物を一晩還流しながら加熱する。真空濃縮し、水（１５０ｍＬ）およびメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（５０ｍＬ）で希釈する。層を分離し、有機層を廃棄する。水層を３％ｗ／ｗの塩酸水溶液で酸性化してｐＨを２に調整する。メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（３×１００ｍＬ）で抽出する。合わせた有機物を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、真空濃縮し、黄色の油状固体として表題化合物をもたらす（１２．６ｇ、７２％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１．２５（ｓ，３Ｈ），１．４７−１．６０（ｍ，２Ｈ），１．６５−１．７０（ｍ，４Ｈ），２．０８−２．１７（ｍ，２Ｈ），３．９３（ｓ，４Ｈ）。
【００６８】
調製２０
プロパ−２−エン−１−イル（８−メチル−１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカ−８−イル）カルバメート
【化２７】
2019525908.tif 000029
８−メチル−１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカン−８−カルボン酸（１２ｇ、６０ｍｍｏｌ）およびアセトニトリル（２００ｍｌ）を混合する。トリエチルアミン（２５．５ｍＬ、３．１１当量）およびジフェニルホスホリルアジド（１５ｍＬ、１．１８当量）を添加する。Ｎ２下、室温で２時間撹拌する。アリルアルコール（２５ｍＬ、６．２５当量）を添加する。反応混合物を一晩還流しながら加熱する。真空濃縮し、水（１５０ｍＬ）およびメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１５０ｍＬ）で希釈する。層を分離する。水層をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２×１００ｍＬ）で抽出する。合わせた有機物を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、真空濃縮し、褐色の油状物として表題化合物をもたらす（１０．８ｇ、７１％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１．３４（ｓ，３Ｈ），１．５７−１．６９（ｍ，６Ｈ），１．９８−２．１１（ｍ，２Ｈ），３．９２−３．９３（ｍ，４Ｈ），４．４８−４．６６（ｍ，３Ｈ），５．１６−５．３２（ｍ，２Ｈ），５．８２−５．９９（ｍ，１Ｈ）。
【００６９】
調製２１
プロパ−２−エン−１−イル（１−メチル−４−オキソシクロヘキシル）カルバメート
【化２８】
2019525908.tif 000030
プロパ−２−エン−１−イル（８−メチル−１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカ−８−イル）カルバメート（１０．５ｇ、４１ｍｍｏｌ）、アセトン（３０ｍＬ）および水（３ｍＬ）を混合する。３５％塩酸（２．７ｍＬ）を添加する。一晩室温で撹拌する。反応混合物を真空濃縮してアセトンを除去する。メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１００ｍＬ）で希釈する。６Ｍの炭酸カリウム水溶液で塩基性化し、ｐＨを８に調整する。層を分離する。水層をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２×２０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機物を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、真空濃縮して残渣をもたらす。残渣を順相クロマトグラフィーに供し、ヘキサン中の２０〜１００％のメチルｔｅｒｔ−ブチルの勾配で溶離し、無色の油状物として表題化合物をもたらす（６．０ｇ、６９％）。１Ｈ  ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）δ１．４４（ｓ，３Ｈ），１．７６−１．８８（ｍ，２Ｈ），２．２４−２．５１（ｍ，６Ｈ），４．５４（ｄ，２Ｈ），４．７８（ｓ，１Ｈ），５．２０−５．３５（ｍ，２Ｈ），５．８５−６．００（ｍ，１Ｈ）。
【００７０】
調製物２２
プロパ−２−エン−１−イル（シス−４−ヒドロキシ−１−メチルシクロヘキシル）カルバメート
【化２９】
2019525908.tif 000031
イソプロパノール（１１０ｍＬ）中のプロパ−２−エン−１−イル（１−メチル−４−オキソシクロヘキシル）カルバメート（３２．８ｇ、１５５ｍｍｏｌ）の溶液に対し、０．１Ｍの一カリウムリン酸塩緩衝液（ｐＨ７、５００ｍＬ）、ＭｇＳＯ４（０．１２ｇ）、ＮＡＤＰ（０．２７ｇ）、およびケトレダクターゼ−Ｐ１−Ｂ１０（０．３２ｇ）を添加する。３５℃で２４時間撹拌する。ＥｔＯＡｃで抽出する。有機物を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、ろ液を真空濃縮し、黄色の油状物として表題化合物をもたらす（３２．４１ｇ、９８％）。１Ｈ  ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）δ１．１８−１．５０（ｍ，７Ｈ），１．５７−１．８８（ｍ，３Ｈ），１．９８−２．１４（ｍ，２Ｈ），３．５５−３．６５（ｍ，１Ｈ），４．４６−４．６６（ｍ，３Ｈ），５．１７−５．３２（ｍ，２Ｈ），５．８３−５．９６（ｍ，１Ｈ）。３．５５〜３．６５ｐｐｍのプロトン多重線は、シス配置であることが知られている。
【００７１】
調製物２３
プロパ−２−エン−１−イル｛シス−４−［（４−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−６−イル）オキシ］−１−メチルシクロヘキシル｝カルバメート
【化３０】
2019525908.tif 000032
ＤＣＭ（３００ｍＬ）中の３−ブロモ−５−フルオロ−Ｎ−メチル−２−ニトロアニリン（３０．００ｇ、１２０ｍｍｏｌ）およびプロパ−２−エン−１−イル（シス−４−ヒドロキシ−１−メチルシクロヘキシル）カルバメート（３３．００ｇ、１．２８当量）の溶液に、５Ｍの水酸化ナトリウム水溶液（２７０ｍＬ）およびテトラ（ｎ−ブチル）重硫酸アンモニウム（７．５０ｇ、０．１８当量）を添加する。混合物を室温で２４時間、急速に撹拌する。硫酸水素テトラブチルアンモニウム（７．５０ｇ、０．１８当量）を添加する。一晩室温で急速に撹拌する。水（２０ｍＬ）で希釈する。層を分離する。水層をＤＣＭ（２×１５０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物を５％ｗ／ｗ塩化ナトリウム水溶液（２００ｍＬ）および水（２００ｍＬ）で洗浄し、次いで有機抽出物を真空濃縮する。濃縮有機抽出物と酢酸（６５０ｍＬ）を混合する。オルトギ酸トリメチル（４５ｍＬ）を添加する。窒素下において、９０℃で２．５時間撹拌する。ＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）で希釈する。珪藻土のパッドを通してろ過する。パッドをＥｔＯＡｃで洗浄する。合わせたろ液を真空濃縮する。２Ｍのリン酸二カリウム水溶液（６０ｍＬ）および２−メチルテトラヒドロフラン（６０ｍＬ）で希釈する。２０分間撹拌し、次いで珪藻土を通してろ過する。層を分離する。水層を２−メチルテトラヒドロフラン（２×２０ｍＬ）で抽出する。有機抽出物を合わせ、水で洗浄し、真空濃縮する。１−メチル−２−ピロリジノン（１００ｍＬ）で希釈し、撹拌して均質な混合物を得る。混合物を水（１２００ｍＬ）に３０分かけて滴下する。３０分間撹拌し、ろ過して固体を集め、固体を水で洗浄する。固体を２−メチルテトラヒドロフラン（２５０ｍＬ）に溶解し、真空濃縮する。溶液をイソプロパノール（３×１５０ｍＬ）で希釈し、真空濃縮する。溶液を２−メチルテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）で希釈し、真空濃縮して、油状の褐色の残渣（３１．５ｇ、７４％）として表題化合物をもたらす。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝（７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）４２２／４２４（Ｍ＋Ｈ）。
【００７２】
調製物２４
シス−４−［（４−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−６−イル）オキシ］−１−メチルシクロヘキサンアミン
【化３１】
2019525908.tif 000033
２−メチルテトラヒドロフラン（７００ｍＬ）中で、プロパ−２−エン−１−イル｛シス−４−［（４−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−６−イル）オキシ］−１−メチルシクロヘキシル｝カルバメート（３０ｇ、７１ｍｍｏｌ）、ビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム（０．５０ｇ、０．０１７当量）、１，４−ビス（ジフェニルホスフィノ）ブタン（０．５０ｇ、０．０２２当量）、およびチオサリチル酸（１５ｇ、１．９０当量）を混合する。５０℃で１時間反応混合物を加熱する。水（３００ｍＬ）およびメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（３００ｍＬ）で希釈する。３５％塩酸で酸性化し、ｐＨを２に調整する。層を分離し、有機層を廃棄する。水層をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で希釈し、１０分間撹拌する。層を分離して有機物を廃棄する。水層をＤＣＭ（１５０ｍＬ）で希釈し、１０分間撹拌する。層を分離し、有機層を捨てる。水層を水酸化ナトリウムで塩基性化する。ろ過し、固体を回収し、次いで生じる固体を、順相クロマトグラフィーに供して、ＤＣＭ中の５％の２Ｍアンモニア化ＭｅＯＨで溶離し、標記化合物（１２．０ｇ、５０％）をもたらす。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝（７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）３３８／３４０（Ｍ＋Ｈ）。
【００７３】
調製２５
（２Ｒ）−３−（｛シス−４−［（４−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−６−イル）オキシ］−１−メチルシクロヘキシル｝アミノ）−１，１，１−トリフルオロプロパン−２−オール
【化３２】
2019525908.tif 000034
ガラス圧力反応器中で、シス−４−［（４−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル）オキシ］−１−メチルシクロヘキサンアミン（１１．６ｇ、３４ｍｍｏｌ）、（２Ｒ）−２−（トリフルオロメチル）オキシラン（４．００ｇ、１．０５当量）、ＥｔＯＨ（４５ｍＬ）、および水（４５ｍＬ）を混合する。密封し、反応混合物を１時間９０℃で加熱する。室温に冷却する。（２Ｒ）−２−（トリフルオロメチル）オキシラン（０．４４ｇ、０．１２当量）を添加する。密封し、反応混合物を１時間９０℃で加熱する。真空濃縮する。水（１００ｍＬ）、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２０ｍＬ）、およびＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で希釈する。３５％塩酸水溶液で酸性化し、ｐＨを２に調整し、完全な溶液を達成するまで撹拌する。層を分離し、有機層を廃棄する。水層をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（４０ｍＬ）で希釈する。層を分離し、有機層を廃棄する。水層を５０重量／重量％の水酸化ナトリウム水溶液で塩基性化し、ｐＨを１０に調整する。水層をＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で抽出する。有機抽出物を合わせ、真空濃縮する。ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）から固体を結晶化させる。ろ過して固体を集め、次いで得られた固体をＥｔＯＡｃで洗浄して、白色固体として標題化合物をもたらす（６．３ｇ、４１％）。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝（７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）４５０／４５２（Ｍ＋Ｈ）。
結晶化母液からろ液を濃縮して残渣をもたらす。残渣を順相クロマトグラフィーに供し、ＥｔＯＡｃ中の５％の２Ｍアンモニア化ＭｅＯＨで溶離し、オフホワイトの固体として表題化合物をもたらす（３．３ｇ、２１％）。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝（７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）４５０／４５２（Ｍ＋Ｈ）。
【００７４】
調製２６
（２Ｒ）−２−（ジフルオロメチル）−１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカン
【化３３】
2019525908.tif 000035
ＤＣＭ（８０ｍＬ）中に（３Ｒ）−１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカン−３−カルバルデヒド（１５．９８ｇ、８９．１９ｍｍｏｌ）を溶解する。Ｎ２下に置き、溶液を０℃に冷却する。慎重に、ジエチルアミノ硫黄トリフルオリド（１５ｍＬ、１．２当量）を滴下する。室温になるようゆっくりと加温し、一晩撹拌する。混合物を、砕いた氷、飽和重炭酸ナトリウム水溶液、およびＤＣＭの撹拌混合物にゆっくりと注ぐ。ｐＨを７〜８に維持しつつ、それ以上の泡立ちが観察されなくなるまで、リン酸二カリウム（５ｇ）を添加し、炭酸カリウムを少しずつ添加する。２０分間撹拌する。層を分離する。水層をＤＣＭ（３×）で抽出する。合わせた有機抽出物を１Ｍ重亜硫酸ナトリウム水溶液および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄する。有機物を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、ろ液を真空濃縮して、琥珀色の油状物として表題化合物をもたらす（１７．３７ｇ、９３％）。ＧＣ−ＭＳ  Ｍ／Ｚ＝１９２
【００７５】
調製２７
（２Ｒ）−３，３−ジフルオロ−２−ヒドロキシプロピル４−メチルベンゼンスルホネート
【化３４】
2019525908.tif 000036
ＭｅＯＨ（２５０ｍＬ）中に（２Ｒ）−２−（ジフルオロメチル）−１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカン（９．０８ｇ、４７．２ｍｍｏｌ）を溶解する。ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（０．７０ｇ、０．１当量）を添加する。室温で１週間撹拌する。重炭酸ナトリウム（０．６０ｇ）を添加する。１時間撹拌する。シリカゲルおよびトリメチルアミン（３ｍＬ）を添加する。１０分間撹拌する。真空濃縮し、ヘキサン中の１５−１００％のＥｔＯＡｃ勾配で溶離する順相クロマトグラフィーにより精製して、黄色油状物として（２Ｒ）−３，３−ジフルオロプロパン−１，２−ジオールをもたらす（２．９５ｇ）。
【００７６】
ＤＣＭ（４０ｍＬ）中に（２Ｒ）−３，３−ジフルオロプロパン−１，２−ジオール（２．０ｇ、１５．２ｍｍｏｌ）を溶解する。窒素下に置き、溶液を０℃に冷却する。２，６−ルチジン（８．０ｍＬ、４．５当量）を添加する。Ｐ−トルエンスルホニルクロリド（３．０ｇ、１．０当量）を少しずつ添加する。室温になるようゆっくりと加温して、２日間撹拌する。−７８℃に冷却し、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（１．５ｍＬ、０．５当量）を滴下する。０℃になるよう４０分かけて加温する。トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（１．５ｍＬ、０．５当量）を滴下する。３０分間撹拌し、ＭｅＯＨ（５ｍＬ）でクエンチする。ＤＣＭで希釈し、水（７５ｍＬ）中のリン酸ナトリウム（４．９ｇ）の溶液を添加する。２Ｍ重硫酸カリウム水溶液でｐＨを約３に調整する。層を分離する。水層をジエチルエーテルで抽出する。有機抽出物を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、ろ液を真空濃縮する。エチレングリコール（１ｍＬ）およびシリカゲル（約２０ｇ）を添加する。真空濃縮して残渣をもたらす。残渣を順相クロマトグラフィーに供し、Ａ中の２０〜１００％のＢの勾配で溶離し（Ａ：ヘキサン、Ｂ：６：３：１のヘキサン：ＤＣＭ：ＴＨＦ）、表題化合物をもたらす（１．３７ｇ、１６％）。ＧＣ−ＭＳ  Ｍ／Ｚ＝２６６
【００７７】
調製２８
６−［（シス−４−アミノシクロヘキシル）オキシ］−Ｎ−（１，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１−メチル−１Ｈ−ベンズイミダゾール−４−アミン
【化３５】
2019525908.tif 000037
ｔｅｒｔ−ブチルアルコール（２５０ｍＬ）中で、シス−４−［（４−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル）オキシ］シクロヘキサナミン（２５．７０ｇ，７９．２７ｍｍｏｌ）、１，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン（９．０８ｇ、１．０当量）、炭酸カリウム（２８．４８ｇ、２．６当量）、２−（ジシクロヘキシルホスフィノ）３，６−ジメトキシ−２′，４′，６′−トリイソプロピル−１，１′−ビフェニル（８．６０ｇ、０．２０当量）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（３．６３ｇ、０．０５０当量）、および酢酸（０．１４ｍＬ）を混合する。還流させながら一晩加熱する。反応混合物を真空濃縮する。ＤＣＭと水を添加し、層を分離する。有機物を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、真空濃縮する。ＥｔＯＡｃおよびヘキサンから粉末化して黄褐色固体をもたらす。黄褐色固体を順相クロマトグラフィーに供し、ヘキサン、次いでＤＣＭ中の５％ＭｅＯＨ、次いでＤＣＭ中の２０％２Ｍアンモニア化ＭｅＯＨで溶離して、黄褐色固体として表題化合物をもたらす（２１．７１ｇ、７７％）。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝３５５（Ｍ＋Ｈ）。
【００７８】
調製２９
２−（３−ニトロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピリジン
【化３６】
2019525908.tif 000038
二つの個別のバイアルの各々において、１−メチル−２−ピロリジノン（２０ｍＬ）中で、３−ニトロ−１Ｈ−ピラゾール（３．０ｇ、２７ｍｍｏｌ）、２−フルオロピリジン（２．９ｍＬ、１．３当量）、およびトリエチルアミン（４．６ｍＬ、１．２当量）を混合する。密封し、１８０℃で一晩撹拌する。室温に冷却する。反応混合物を合わせ、水で希釈する。ろ過して固体を回収し、固体を水で洗浄し、真空下で乾燥させて、標記化合物をもたらす（５．９ｇ、５８％）。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝１９１（Ｍ＋Ｈ）。
【００７９】
調製３０
１−ピリジン−２−イル−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン
パラジウム炭（１０％ｗ／ｗ、１．９ｇ）をフラスコに添加する。Ｎ２でパージし、ＥｔＯＨ（２００ｍＬ）を添加する。２−（３−ニトロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピリジン（２．５ｇ、１３ｍｍｏｌ）を添加する。Ｈ２（バルーン）下、室温で一晩撹拌する。少量の珪藻土を加え、５分間撹拌する。珪藻土のパッドを通してろ過し、パッドをＥｔＯＨで洗浄する。ろ液を真空濃縮して、褐色の固体として表題化合物をもたらす（１．８ｇ、８５％）。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝１６１（Ｍ＋Ｈ）。
【００８０】
調製３１
１−（メチルスルホニル）−３−ニトロ−１Ｈ−ピラゾール
ＤＣＭ（２０ｍＬ）中で、３−ニトロ−１Ｈ−ピラゾール（３．０ｇ、２７ｍｍｏｌ）、メタンスルホニルクロリド（２．５ｍＬ、１．２当量）、およびトリエチルアミン（４．４ｍＬ、１．２当量）を混合する。室温で２時間撹拌する。ＤＣＭおよび飽和重炭酸ナトリウム水溶液で希釈する。層を分離する。有機層を水およびブラインで洗浄する。有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、ろ液を真空濃縮して、褐色固体として表題化合物をもたらす（３．７ｇ、７３％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ３．７４（ｓ，３Ｈ），７．３０（ｄ，Ｊ＝２．９  Ｈｚ，１Ｈ），８．５５（ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ，１Ｈ）。
【００８１】
調製物３２
３−ニトロ−１−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル−１Ｈ−ピラゾール
【化３７】
2019525908.tif 000039
アセトニトリル（４０ｍＬ）中で、テトラヒドロピラン−３−オール（１．３ｇ、１３ｍｍｏｌ）、１−（メチルスルホニル）−３−ニトロ−１Ｈ−ピラゾール（２．４ｇ、１．０当量）、および炭酸セシウム（４．８ｇ、１．２当量）を混合する。９０℃で一晩撹拌する。混合物を真空濃縮する。ＥｔＯＡｃで希釈し、珪藻土のパッドを通してろ過する。ろ液を真空濃縮して残渣をもたらす。残渣をＣ−１８逆相クロマトグラフィーに供して、（水中の０．１％ギ酸）中０％〜１００％の（アセトニトリル中の０．１％ギ酸）の勾配で溶離して、表題化合物をもたらす（０．３５ｇ、１４％）。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝１９８（Ｍ＋Ｈ）。
【００８２】
調製物３３
１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン
【化３８】
2019525908.tif 000040
パラジウム炭（１０％ｗ／ｗ、０．１０ｇ）をフラスコに添加する。Ｎ２でパージし、ＥｔＯＨ（２０ｍＬ）を添加する。３−ニトロ−１−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル−１Ｈ−ピラゾール（０．３０ｇ、１．５ｍｍｏｌ）を添加する。Ｈ２（バルーン）下、室温で２時間撹拌する。珪藻土を通してろ過し、ＥｔＯＨで洗浄する。ろ液を真空濃縮して、灰色の固体として表題化合物をもたらす（０．２４ｇ、９４％）。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝１６８（Ｍ＋Ｈ）。
【００８３】
実施例１
（２Ｒ）−１，１，１−トリフルオロ−３−（｛シス−４−［（４−｛［１−（３−メトキシプロピル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アミノ｝−１−メチル−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル）オキシ］シクロヘキシル｝アミノ）プロパン−２−オール
【化３９】
2019525908.tif 000041
ｔｅｒｔ−ブチルアルコール（４６ｍＬ）中で、（２Ｒ）−３−（｛シス−４−［（４−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル）オキシ］シクロヘキシル｝アミノ）−１，１，１−トリフルオロプロパン−２−オール（４．０ｇ、９．２ｍｍｏｌ）、１−（３−メトキシプロピル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン（２．２ｇ、１．４当量）、炭酸カリウム（３．２ｇ、２．５当量）、２−（ジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィノ）−２’，４’，６’−トリイソプロピル−３，６−ジメトキシ−１，１’−ビフェニル（０．９２ｇ、０．２０当量）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（０．８７ｇ、０．１０当量）、および酢酸（０．０１ｍＬ）を混合する。９０℃で一晩加熱する。珪藻土のパッドを通してろ過し、パッドをＥｔＯＡｃで洗浄する。ろ液を真空濃縮して残渣をもたらす。残渣を順相クロマトグラフィーに供し、ＤＣＭ中の５％のＭｅＯＨで溶離し、粗生成物をもたらす。さらに粗生成物を逆相クロマトグラフィーにより精製し、Ａ中の１５〜６０％のＢの勾配で溶離する（Ａ：ＭｅＯＨ中の１０ｍＭ重炭酸アンモニウム、Ｂ：アセトニトリル）。生成物を含む画分を濃縮して、アセトニトリルの大部分を除去する。ＥｔＯＡｃを添加し、層を分離する。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、ろ液を真空濃縮する。生成物を順相クロマトグラフィーに供し、ＤＣＭ中の５％のＭｅＯＨで溶離し、白色の固体として表題化合物をもたらす（２．４ｇ、４９％）。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝５２５（Ｍ＋Ｈ）。
【００８４】
実施例２
（２Ｒ）−１，１，１−トリフルオロ−３−（｛シス−４−［（４−｛［１−（２−メトキシエチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アミノ｝−１−メチル−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル）オキシ］シクロヘキシル｝アミノ）プロパン−２−オール
【化４０】
2019525908.tif 000042
ｔｅｒｔ−ブチルアルコール（３２ｍＬ）中で、（２Ｒ）−３−（｛シス−４−［（４−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル）オキシ］シクロヘキシル｝アミノ）−１，１，１−トリフルオロプロパン−２−オール（１．４ｇ、３．２ｍｍｏｌ）、１−（２−メトキシエチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン（０．６９ｇ、１．４当量）、炭酸カリウム（１．１ｇ、２．６当量）、２−（ジシクロヘキシルホスフィノ）３，６−ジメトキシ−２’，４’，６’−トリイソプロピル−１，１’−ビフェニル（０．３５ｇ、０．２０当量）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（０．１５ｇ、０．０５０当量）、および酢酸（０．０１ｍＬ）を混合する。還流させながら一晩加熱する。反応混合物を真空濃縮する。ＤＣＭと水を添加し、層を分離する。有機層をＩＳＯＬＵＴＥ（登録商標）ＨＭ−Ｎ物質を通してろ過し、ＤＣＭおよびＥｔＯＡｃで洗浄する。ろ液を真空濃縮して残渣をもたらす。残渣を順相クロマトグラフィーに供し、Ａ中の３０〜１００％のＢの勾配で溶離し（Ａ：ＤＣＭ、Ｂ：ＤＣＭ中の１５％の２Ｍのアンモニウム化ＭｅＯＨ）、オフホワイトの固体として表題化合物をもたらす（０．９１ｇ、５６％）。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝５１１（Ｍ＋Ｈ）。
【００８５】
実施例３
（２Ｒ）−１，１，１−トリフルオロ−３−［（シス−４−｛［４−（｛１−（２−ヒドロキシプロピル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル｝アミノ）−１−メチル−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル］オキシ｝シクロヘキシル）アミノ］プロパン−２−オール
【化４１】
2019525908.tif 000043
ｔｅｒｔ−ブチルアルコール（５．３ｍＬ）中で、（２Ｒ）−３−（｛シス−４−［（４−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル）オキシ］シクロヘキシル｝アミノ）−１，１，１−トリフルオロプロパン−２−オール（０．３５ｇ、０．８０ｍｍｏｌ）、１−（３−アミノ−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロパン−２−オール（０．１４ｇ、１．１当量）、炭酸カリウム（０．２８ｇ、２．５当量）、２−（ジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィノ）−２′，４′，６′−トリイソプロピル−３，６−ジメトキシ−１，１′−ビフェニル（０．１２ｇ、０．３０当量）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（０．０５５ｇ、０．０７５当量）、および酢酸（０．０１ｍＬ）を混合する。１００℃で一晩加熱する。反応混合物を真空濃縮して残渣をもたらす。残渣をＣ−１８逆相クロマトグラフィーに供し、（メタノール中の１０ｍＭ重炭酸アンモニウム中）中の０％〜８０％のアセトニトリルの勾配で溶離する。（異性体の混合物として）生成物を含有する画分を真空濃縮して、白色固体として標題化合物をもたらす（０．２９ｇ、７１％）。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝５１１（Ｍ＋Ｈ）。
【００８６】
以下のキラルクロマトグラフィー条件を用いて混合物中の異性体を分離して次のものをもたらす：
第１の溶離エナンチオマー１（０．１２ｇ、９９％ｅｅ）。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝５１１（Ｍ＋Ｈ）、７５％／２５％ＣＯ２／イソプロパノール、５ｍＬ／分、４．６×１５０ｍｍ、Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ−Ｈ
第２の溶離エナンチオマー２（０．１１ｇ、９７％ｅｅ）。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝５１１（Ｍ＋Ｈ）、７５％／２５％ＣＯ２／イソプロパノール、５ｍＬ／分、４．６×１５０ｍｍ、Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ−Ｈ
【００８７】
実施例４
（２Ｒ）−１，１，１−トリフルオロ−３−［（シス−４−｛［４−（｛１−（（２Ｓ）−２−ヒドロキシプロピル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル｝アミノ）−１−メチル−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル］オキシ｝シクロヘキシル）アミノ］プロパン−２−オール
【化４２】
2019525908.tif 000044
ｔｅｒｔ−ブチルアルコール（１０ｍＬ）中で、（２Ｒ）−３−（｛シス−４−［（４−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル）オキシ］シクロヘキシル｝アミノ）−１，１，１−トリフルオロプロパン−２−オール（０．４０ｇ、０．９２ｍｍｏｌ）、（２Ｓ）−１−（３−アミノ−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロパン−２−オール（０．１７ｇ、１．２当量）、炭酸カリウム（０．３３ｇ、２．６当量）、２−（ジシクロヘキシルホスフィノ）３，６−ジメトキシ−２′，４′，６′−トリイソプロピル−１，１′−ビフェニル（０．０９９ｇ、０．２０当量）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（０．０４２ｇ、０．０５０当量）、および酢酸（０．０１ｍＬ）を合わせる。クリンプキャップで密封する。混合物をマイクロ波反応器中、１４０℃で６０分間加熱する。反応混合物を真空濃縮する。ＤＣＭと水を添加し、層を分離する。有機層をＩＳＯＬＵＴＥ（登録商標）ＨＭ−Ｎ物質を通してろ過し、物質をＤＣＭおよびＥｔＯＡｃで洗浄する。ろ液を真空濃縮して残渣をもたらす。残渣をＥｔＯＡｃ／ヘキサンで粉末化して、表題化合物をもたらす（０．４４ｇ、９５％）。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝５１１（Ｍ＋Ｈ）。
【００８８】
実施例５
（２Ｒ）−１，１，１−トリフルオロ−３−［（シス−４−｛［４−（｛１−（（２Ｒ）−２−ヒドロキシプロピル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル｝アミノ）−１−メチル−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル］オキシ｝シクロヘキシル）アミノ］プロパン−２−オール
【化４３】
2019525908.tif 000045
ｔｅｒｔ−ブチルアルコール（１０ｍＬ）中で、（２Ｒ）−３−（｛シス−４−［（４−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル）オキシ］シクロヘキシル｝アミノ）−１，１，１−トリフルオロプロパン−２−オール（０．１５ｇ、０．３４ｍｍｏｌ）、（２Ｒ）−１−（３−アミノ−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロパン−２−オール（０．０６４ｇ、１．２当量）、炭酸カリウム（０．１２ｇ、２．６当量）、２−（ジシクロヘキシルホスフィノ）３，６−ジメトキシ−２′，４′，６′−トリイソプロピル−１，１′−ビフェニル（０．０３７ｇ、０．２０当量）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（０．０１６ｇ、０．０５０当量）、および酢酸（０．０１ｍｌ）を混合する。クリンプキャップで密封する。混合物をマイクロ波反応器中、１４０℃で６０分間加熱する。混合物を真空濃縮して残渣をもたらす。残渣にＤＣＭと水を添加し、層を分離する。有機層をＩＳＯＬＵＴＥ（登録商標）ＨＭ−Ｎ物質を通してろ過し、物質をＤＣＭおよびＥｔＯＡｃで洗浄する。ろ液を真空濃縮する。ＥｔＯＡｃ／ヘキサンから粉末化して、黄褐色固体として表題化合物をもたらす（０．１１ｇ、６２％）。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝５１１（Ｍ＋Ｈ）。
【００８９】
実施例６
（２Ｒ）−１，１，１−トリフルオロ−３−｛［シス−４−（｛４−［（５−メトキシ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ］−１−メチル−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル｝オキシ）シクロヘキシル］アミノ｝プロパン−２−オール
【化４４】
2019525908.tif 000046
（２Ｒ）−３−（｛シス−４−［（４−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル）オキシ］シクロヘキシル｝アミノ）−１，１，１−トリフルオロプロパン−２−オール（１０ｇ、２２．９ｍｍｏｌ）、５−メトキシ−１−メチル−ピラゾール−３−アミン（３．６ｇ、２８．８ｍｍｏｌ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム−（０）（１．８ｇ、２ｍｍｏｌ）、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（２’，４’，６’−トリイソプロピル−３，６−ジメトキシ−［１，１’−ビフェニル］−２−イル）ホスフィン（１．３ｇ、２．４ｍｍｏｌ）、および炭酸カリウム（９ｇ、６５ｍｍｏｌ）の混合物に２−メチルブタン−２−オール（１２０ｍＬ）を添加する。混合物にＮ２ガスを通気することによって混合物を脱気し、次いで酢酸（１１８μＬ、２ｍｍｏｌ）を添加する。混合物をＮ２下で１００℃で２０時間加熱し、撹拌する。室温に冷却し、溶媒を蒸発させ、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）、水（５０ｍＬ）、および木炭（１ｇ）を添加する。混合物を１５分間撹拌し、混合物を珪藻土を通してろ過する。ろ液を回収し、有機層を分離する。水（１００ｍＬ）および濃塩酸を添加してｐＨを２に調整する。木炭（１．５ｇ）を添加し、混合物を３０分間撹拌し、混合物を珪藻土を通してろ過する。ろ液を分離漏斗に移し、水層を単離する。水層に濃水酸化アンモニウム溶液を添加してｐＨを１０に調整し、淡いクリーム色の固体をもたらす。固体をシリカゲルクロマトグラフィーに供して、塩化メチレンとＭｅＯＨ（９５：５）の混合物で溶離する。所望の画分を回収し、溶媒を蒸発させて、淡いクリーム色の物質として表題化合物を収率６４％でもたらす（６．５ｇ、１３ｍｍｏｌ）。
【００９０】
シクロペンチルメチルエーテル（４５ｍＬ）から表題化合物を結晶化し、（２Ｒ）−１，１，１−トリフルオロ−３−［［４−［７−［（５−メトキシ−１−メチル−ピラゾール−３−イル）アミノ］−３−メチル−ベンズイミダゾール−５−イル］オキシシクロヘキシル］アミノ］プロパン−２−オール（３．２ｇ、６．５ｍｍｏｌ）をもたらす。混合物を２２℃で１８時間撹拌する。溶媒を蒸発させ、白色固体を一定重量まで乾燥して、白色固体として表題化合物を収率９９％でもたらす（３．２ｇ、６．４ｍｍｏｌ）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４８３．２（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００．１６  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：８．１３（ｓ，１Ｈ），７．９０（ｓ，１Ｈ），７．４６（ｄ，Ｊ＝１．９  Ｈｚ，１Ｈ），６．４６（ｄ，Ｊ＝１．９  Ｈｚ，１Ｈ），５．４９（ｓ，１Ｈ），４．４５（ｓ，１Ｈ），３．８３（ｓ，３Ｈ），３．７３（ｓ，３Ｈ），３．４７（ｓ，３Ｈ），２．７５−２．６７（ｍ，２Ｈ），１．９９−１．９１（ｍ，２Ｈ），１．６７−１．５４（ｍ，７Ｈ）。
【００９１】
実施例７
（２Ｒ）−３−｛［シス−４−（｛４−［（エチル−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ］−１−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−６−イル｝オキシ）シクロヘキシル］アミノ｝−１，１，１−トリフルオロプロパン−２−オール
【化４５】
2019525908.tif 000047
ｔｅｒｔ−ブチルアルコール（３０ｍＬ）中で、（２Ｒ）−３−（｛シス−４−［（４−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル）オキシ］シクロヘキシル｝アミノ）−１，１，１−トリフルオロプロパン−２−オール（１．３６ｇ、３．１２ｍｍｏｌ）、１−エチル−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン（０．７８ｇ、２．０当量）、炭酸カリウム（１．１２ｇ、２．６当量）、２−（ジシクロヘキシルホスフィノ）３，６−ジメトキシ−２’，４’，６’−トリイソプロピル−１，１’−ビフェニル（０．３４ｇ、０．２０当量）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（０．１４ｇ、０．０５０当量）、および酢酸（０．０１ｍＬ）を混合する。還流させながら一晩加熱する。反応混合物を真空濃縮する。ＤＣＭと水を添加し、層を分離する。有機層をＩＳＯＬＵＴＥ（登録商標）ＨＭ−Ｎ物質を通してろ過し、ＤＣＭで洗浄する。ろ液を真空濃縮して残渣をもたらす。残渣をＥｔＯＡｃおよびヘキサン中で粉末化して、表題化合物をもたらす（１．４０ｇ、９４％）。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝４８１（Ｍ＋Ｈ）。
【００９２】
実施例８
（２Ｒ）−１，１，１−トリフルオロ−３−［（シス−１−メチル−４−｛［１−メチル−４−（１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル］オキシ｝シクロヘキシル）アミノ］プロパン−２−オール
【化４６】
2019525908.tif 000048
ｔｅｒｔ−ブチルアルコール（２０ｍＬ）中で、（２Ｒ）−３−（｛シス−４−［（４−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル）オキシ］メチルシクロヘキシル｝アミノ）−１，１，１−トリフルオロプロパン−２−オール（０．９１ｇ、２．０２ｍｍｏｌ）、３−アミノピラゾール（０．２９ｇ、１．７０当量）、炭酸カリウム（０．７３ｇ、２．６当量）、２−（ジシクロヘキシルホスフィノ）３，６−ジメトキシ−２’，４’，６’−トリイソプロピル−１，１’−ビフェニル（０．２２ｇ、０．２０当量）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（０．０９３ｇ、０．０５０当量）、および酢酸（０．０１ｍＬ）を混合する。混合物を一晩還流する。混合物を真空濃縮する。ＤＣＭと水を添加し、層を分離する。有機層をＩＳＯＬＵＴＥ（登録商標）ＨＭ−Ｎ物質を通してろ過し、ＤＣＭで洗浄する。ろ液を真空濃縮して残渣をもたらす。残渣を順相クロマトグラフィーに供し、Ａ中の５０〜１００％のＢの勾配で溶離し（Ａ：メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、Ｂ：１５％の、ＤＣＭ中の７Ｍのアンモニウム化ＭｅＯＨ）、表題化合物をもたらす（０．６７ｇ、７４％）。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝４５３（Ｍ＋Ｈ）。
【００９３】
実施例９
（２Ｒ）−３−｛［シス−４−（｛４−［（１，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ］−１−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−６−イル｝オキシ）シクロヘキシル］アミノ｝−１，１−ジフルオロプロパン−２−オール
【化４７】
2019525908.tif 000049
アセトニトリル（３ｍＬ）および２−プロパノール（３ｍＬ）中で、（２Ｒ）−３，３−ジフルオロ−２−ヒドロキシプロピル４−メチルベンゼンスルホネート（０．３８ｇ、１．３１ｍｍｏｌ）と６−［（シス−４−アミノシクロヘキシル）オキシ］−Ｎ−（１，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１−メチル−１Ｈ−ベンズイミダゾール−４−アミン（０．６１ｇ、１．３０当量）を混合する。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．５０ｍＬ、２．０当量）およびヨウ化ナトリウム（０．０１５ｇ、０．１当量）を添加する。６５℃で一晩加熱する。（２Ｒ）−３，３−ジフルオロ−２−ヒドロキシプロピル４−メチルベンゼンスルホネート（０．０６５ｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を添加し、６５℃で一晩加熱する。珪藻土を通してろ過する。固体をＥｔＯＡｃで洗浄する。ろ液を真空濃縮する。逆相クロマトグラフィーにより精製し、水中の０〜９０％のアセトニトリルで溶離する。生成物を含有する画分を真空濃縮して、オフホワイトの固体として標題化合物をもたらす（０．４０ｇ、６７％）。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝４４９（Ｍ＋Ｈ）。
【００９４】
実施例１０
（２Ｒ）−１，１，１−トリフルオロ−３−（｛シス−４−［（１−メチル−４−｛［１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アミノ｝−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル）オキシ］シクロヘキシル｝アミノ）プロパン−２−オール
【化４８】
2019525908.tif 000050
ｔｅｒｔ−ブチルアルコール（２２ｍＬ）中で、（２Ｒ）−３−（｛シス−４−［（４−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル）オキシ］シクロヘキシル｝アミノ）−１，１，１−トリフルオロプロパン−２−オール（１．８ｇ、４．１ｍｍｏｌ）、１−ピリジン−２−イル−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン（０．８６ｇ、１．３当量）、炭酸カリウム（１．７ｇ、２．９当量）、２−（ジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィノ）−２′，４′，６′−トリイソプロピル−３，６−ジメトキシ−１，１′−ビフェニル（０．８３ｇ、０．４１当量）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（０．３８ｇ、０．１０当量）、および酢酸（０．０３ｍＬ）を合わせる。９０℃で３時間反応混合物を加熱する。混合物を室温まで冷却する。珪藻土のパッドを通してろ過し、パッドをＥｔＯＡｃで洗浄する。ろ液を真空濃縮して残渣をもたらす。残渣を順相クロマトグラフィーに供し、ＤＣＭ中の０〜１０％のＭｅＯＨの勾配で溶離し、表題化合物をもたらす（１．３４ｇ、６３％）。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝５１６（Ｍ＋Ｈ）。
【００９５】
結晶性遊離塩基物質は、２ブタノン（１００質量％）中で、上記のように実質的に調製された固体物質を溶解させることによって得ることができ、次いで生じる混合物を６５℃に加熱する。混合物を２０℃になるよう冷却し、ヘプタン（１００質量％）を添加して参加を誘発する。生じる固体を回収し、ヘプタンで洗浄し、１５分間風乾し、次いで４０℃のオーブンで一晩乾燥させて、無水結晶性遊離塩基として表題化合物を６２％の収率でもたらす。
【００９６】
実施例１０のＸ線粉末回折
結晶性固体のＸＲＤパターンは、ＣｕＫａ源（λ＝１．５４０６０Å）およびＶａｎｔｅｃ検出器を備えた、３５ｋＶおよび５０ｍＡで動作しているＢｒｕｋｅｒ  Ｄ４  Ｅｎｄｅａｖｏｒ  Ｘ線粉末回折計で得られる。試料は、２θにおける０．００８７°のステップサイズおよび０．５秒／ステップの走査速度で、０．６ｍｍの発散スリット、５．２８ｍｍの固定散乱防止スリット、および９．５ｍｍ検出スリットを用いて、２θにおける４〜４０°で走査される。乾燥粉末を石英試料ホルダに充填し、ガラススライドを使用して滑らかな表面を得る。所定の結晶型について、回折ピークの相対強度が、結晶形態および晶癖などの要因からの結果として生じる好ましい配向に起因して変化し得ることが結晶学技術分野において周知である。好ましい配向の効果が存在する場合、ピーク強度は変化するが、多形体の特徴的なピーク位置は変化しない。例えば、Ｔｈｅ  Ｕ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ  ３８−Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ  ３５  Ｃｈａｐｔｅｒ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅ  ａｎｄ  ｐａｒｔｉａｌｌｙ  ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅ  ｓｏｌｉｄｓ  ｂｙ  Ｘ−ｒａｙ  ｐｏｗｄｅｒ  ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ（ＸＲＰＤ）Ｏｆｆｉｃｉａｌ  Ｍａｙ  １，２０１５を参照のこと。さらに、結晶学分野では、任意の所与の結晶形に関して、ピークの角度位置が若干変化し得ることもまた周知である。例えば、ピーク位置は、試料が分析される温度もしくは湿度の変動、試料の位置ずれ、または内部標準の有無に起因してシフトし得る。本発明の場合、２θの±０．２のピーク位置の変動は、示された結晶形の明確な同定を妨げることなくこれらの起こり得る変動として考慮される。結晶形の確認は、特徴的なピーク（°２θの単位で）、典型的にはより顕著なピークの任意の固有の組み合わせに基づいて行われ得る。周囲温度および相対湿度にて収集された結晶形回折パターンは、８．８５および２６．７７°２θで、ＮＩＳＴ６７５標準ピークに基づき調整する。
【００９７】
したがって、実施例１０の遊離塩基化合物の調製された試料は、ＣｕＫａ線を用いるＸＲＤパターンによって、以下の表１に記載されるような回析ピーク（２シータ値）を有するものとして特徴付けられる。このパターンは、０．２度の回折角の公差で１５．５、１８．１、１８．３、１８．５、２２．９、および２３．６からなる群から選択される１つ以上のピークと組み合わせて、２０．５におけるピークを含む。
【表１−１】
2019525908.tif 000051
【表１−２】
2019525908.tif 000052
【００９８】
実施例１１Ａおよび１１Ｂ
（２Ｒ）−１，１，１−トリフルオロ−３−［（シス−４−｛［１−メチル−４−（｛１−［（３Ｒ）−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］−１Ｈ−ピラゾール−３−イル｝アミノ）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル］オキシ｝シクロヘキシル）アミノ］プロパン−２−オール
【化４９】
2019525908.tif 000053
（２Ｒ）−１，１，１−トリフルオロ−３−［（シス−４−｛［１−メチル−４−（｛１−［（３Ｓ）−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］−１Ｈ−ピラゾール−３−イル｝アミノ）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル］オキシ｝シクロヘキシル）アミノ］プロパン−２−オール
【化５０】
2019525908.tif 000054
最初にラセミ混合物としての化合物を調製する。ｔｅｒｔ−ブチルアルコール（６ｍＬ）中で、（２Ｒ）−３−（｛シス−４−［（４−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル）オキシ］シクロヘキシル｝アミノ）−１，１，１−トリフルオロプロパン−２−オール（０．６２ｇ、１．２当量）、１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン（０．２０ｇ、１．２ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（０．４２ｇ、２．５当量）、２−（ジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィノ）−２′，４′，６′−トリイソプロピル−３，６−ジメトキシ−１，１′−ビフェニル（０．１８ｇ、０．３０当量）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（０．０８５ｇ、０．０７５当量）、および酢酸（０．０２ｍＬ）を混合する。１００℃で７時間加熱する。反応混合物を室温になるよう冷却する。反応混合物を真空濃縮する。ＥｔＯＡｃで希釈する。珪藻土のパッドを通してろ過し、パッドをＥｔＯＡｃで洗浄する。ろ液に飽和重炭酸ナトリウム水溶液を添加する。層を分離する。有機層を水およびブラインで洗浄する。有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、ろ液を真空濃縮して残渣をもたらす。残渣を順相クロマトグラフィーに供し、ＤＣＭ中の０〜３０％のＭｅＯＨの勾配で溶離し、表題化合物をもたらす（０．３１ｇ、４９％）。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝５２３（Ｍ＋Ｈ）。
【００９９】
最初に５−（トリフルオロメチル）オキサゾリジン−２−オン誘導体を調製することにより異性体を分離する：
（５Ｒ）−３−（シス−４−｛［１−メチル−４−（｛１−［（３Ｒ）−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］−１Ｈ−ピラゾール−３−イル｝アミノ）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル］オキシ｝シクロヘキシル）−５−
（トリフルオロメチル）−１，３−オキサゾリジン−２−オン、
【化５１】
2019525908.tif 000055
および
（５Ｒ）−３−（シス−４−｛［１−メチル−４−（｛１−［（３Ｓ）−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］−１Ｈ−ピラゾール−３−イル｝アミノ）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル］オキシ｝シクロヘキシル）−５−
（トリフルオロメチル）−１，３−オキサゾリジン−２−オン
【化５２】
2019525908.tif 000056
ＤＣＭ（２ｍＬ）中で、（２Ｒ）−１，１，１−トリフルオロ−３−（｛シス−４−［（１−メチル−４−｛［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アミノ｝−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル）オキシ］シクロヘキシル｝アミノ）プロパン−２−オール（０．２５ｇ、０．４２ｍｍｏｌ）、１，１’−カルボニルジイミダゾール（０．１４ｇ、２．０当量）、および４−ジメチルアミノピリジン（０．０１１ｇ、０．２１当量）を混合する。室温で３日間撹拌する。真空濃縮して残渣をもたらす。残渣を順相クロマトグラフィーに供し、ＤＣＭ中の０〜２０％のＭｅＯＨの勾配で溶離し、（５Ｒ）−３−（シス−４−｛［１−メチル−４−（｛１−［テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］−１Ｈ−ピラゾール−３−イル｝アミノ）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル］オキシ｝シクロヘキシル）−５−（トリフルオロメチル）−１，３−オキサゾリジン−２−オンのラセミ混合物をもたらす。６０％／４０％のＣＯ２／イソプロパノール、５ｍＬ／分、４．６×１５０ｍｍ、Ｌｕｘ  Ａｍｙｌｏｓｅ−２を用いるキラルクロマトグラフィーにより異性体を分離する。
異性体１（０．１０ｇ、９９％ｅｅ）。残留時間２．９８分。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝５４９（Ｍ＋Ｈ）
異性体２（０．１０ｇ、９９％ｅｅ）。残留時間４．８３分。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝５４９（Ｍ＋Ｈ）
【０１００】
異性体１
（２Ｒ）−１，１，１−トリフルオロ−３−（｛シス−４−［（１−メチル−４−｛［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アミノ｝−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル）オキシ］シクロヘキシル｝アミノ）プロパン−２−オール
ＴＨＦ（２ｍＬ）中で、（５Ｒ）−３−（シス−４−｛［１−メチル−４−（｛１−［テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］−１Ｈ−ピラゾール−３−イル｝アミノ）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル］オキシ｝シクロヘキシル）−５−（トリフルオロメチル）−１，３−オキサゾリジン−２−オン（異性体１）（０．０８０ｇ、０．１５ｍｍｏｌ）とカリウムトリメチルシラノレート（０．０４１ｇ、２．０当量）を混合する。６５℃で３日間撹拌する。カリウムトリメチルシラノレート（０．０１８ｇ、１．０当量）を添加する。６５℃で一晩撹拌する。室温になるよう冷却する。数滴の水で希釈し、真空濃縮する。（メタノール中の１０ｍＭ重炭酸アンモニウム）中０％〜１００％のアセトニトリルの勾配を用いるＣ−１８逆相クロマトグラフィーにより精製して、表題化合物をもたらす（０．０５５ｇ、７２％）。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝５２３（Ｍ＋Ｈ）。
【０１０１】
異性体２
（２Ｒ）−１，１，１−トリフルオロ−３−（｛シス−４−［（１−メチル−４−｛［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アミノ｝−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル）オキシ］シクロヘキシル｝アミノ）プロパン−２−オール
ＴＨＦ（２ｍＬ）中で、（５Ｒ）−３−（シス−４−｛［１−メチル−４−（｛１−［テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］−１Ｈ−ピラゾール−３−イル｝アミノ）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル］オキシ｝シクロヘキシル）−５−（トリフルオロメチル）−１，３−オキサゾリジン−２−オン（異性体２）（０．０８０ｇ、０．１５ｍｍｏｌ）とカリウムトリメチルシラノレート（０．０４０ｇ、２．０当量）を混合する。６５℃で３日間撹拌する。カリウムトリメチルシラノレート（０．０１８ｇ、１．０当量）を添加する。６５℃で一晩撹拌する。室温になるよう冷却する。数滴の水で希釈し、真空濃縮する。（メタノール中の１０ｍＭ重炭酸アンモニウム）中０％〜１００％のアセトニトリルの勾配を用いるＣ−１８逆相クロマトグラフィーにより精製して、表題化合物をもたらす（０．０５８ｇ、７６％）。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝５２３（Ｍ＋Ｈ）。
【０１０２】
実施例１２
（２Ｒ）−１，１，１−トリフルオロ−３−（｛シス−４−［（１−メチル−４−｛［１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アミノ｝−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル）オキシ］シクロヘキシル｝アミノ）プロパン−２−オール２−ヒドロキシプロパン−１，２，３−トリカルボキシレート水和物（１：１：１）
【化５３】
2019525908.tif 000057
１０００ｒｐｍ／７０℃で撹拌しながら、１．２３ｇの（２Ｒ）−１，１，１−トリフルオロ−３−（｛シス−４−［（１−メチル−４−｛［１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−−ピラゾール−３−イル］アミノ｝−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル）オキシ］シクロヘキシル｝アミノ）プロパン−２−オールを１０ｍＬの８８％アセトンに添加して、白色スラリーを得る。５１０ｍｇのクエン酸を滴下する。白色スラリーは透明な黄色溶液に変わる。加熱と撹拌を中止する。次の１時間にわたって、黄色の固体がゆっくりと形成される。淡黄色固体を真空ろ過により単離する。試料を空気流下でフィルタ上で２０分間乾燥させて、表題化合物を得る。（１．６２ｇ、９３．６％）
【０１０３】
実施例１２のＸ線粉末回折：
結晶性固体のＸＲＤパターンは、ＣｕＫａ源（λ＝１．５４０６０Å）およびＶａｎｔｅｃ検出器を備えた、３５ｋＶおよび５０ｍＡで動作しているＢｒｕｋｅｒ  Ｄ４  Ｅｎｄｅａｖｏｒ  Ｘ線粉末回折計で得られる。試料は、２θにおける０．００８７°のステップサイズおよび０．５秒／ステップの走査速度で、０．６ｍｍの発散スリット、５．２８ｍｍの固定散乱防止スリット、および９．５ｍｍ検出スリットを用いて、２θにおける４〜４０°で走査される。乾燥粉末を石英試料ホルダに充填し、ガラススライドを使用して滑らかな表面を得る。所定の結晶型について、回折ピークの相対強度が、結晶形態および晶癖などの要因からの結果として生じる好ましい配向に起因して変化し得ることが結晶学技術分野において周知である。好ましい配向の効果が存在する場合、ピーク強度は変化するが、多形体の特徴的なピーク位置は変化しない。例えば、Ｔｈｅ  Ｕ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ  ３８−Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ  ３５  Ｃｈａｐｔｅｒ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅ  ａｎｄ  ｐａｒｔｉａｌｌｙ  ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅ  ｓｏｌｉｄｓ  ｂｙ  Ｘ−ｒａｙ  ｐｏｗｄｅｒ  ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ（ＸＲＰＤ）Ｏｆｆｉｃｉａｌ  Ｍａｙ  １，２０１５を参照のこと。さらに、結晶学分野では、任意の所与の結晶形に関して、ピークの角度位置が若干変化し得ることもまた周知である。例えば、ピーク位置は、試料が分析される温度もしくは湿度の変動、試料の位置ずれ、または内部標準の有無に起因してシフトし得る。本発明の場合、２θの±０．２のピーク位置の変動は、示された結晶形の明確な同定を妨げることなくこれらの起こり得る変動として考慮される。結晶形の確認は、特徴的なピーク（°２θの単位で）、典型的にはより顕著なピークの任意の固有の組み合わせに基づいて行われ得る。周囲温度および相対湿度にて収集された結晶形態回折パターンは、８．８５および２６．７７°２θで、ＮＩＳＴ６７５標準ピークに基づき調整する。
【０１０４】
ＣｕＫａ線を使用した（２Ｒ）−１，１，１−トリフルオロ−３−（｛シス−４−［（１−メチル−４−｛［１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アミノ｝−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル）オキシ］シクロヘキシル｝アミノ）プロパン−２−オール２−ヒドロキシプロパン−１，２，３−トリカルボキシレート水和物（１：１：１）のＸＲＤパターンは、以下の表２に記載されるように、回折ピーク（２シータ値）をもたらし、０．２度の回折角の公差で２６．１、２６．６、および２２．７からなる群から選択される１つ以上のピークと組み合わせて、特に１７．９におけるピークを有する。
【表２】
2019525908.tif 000058
【０１０５】
生物学セクション
ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、およびＪＡＫ３インビトロ酵素アッセイ
ＪＡＫ  ＬａｎｔｈａＳｃｒｅｅｎ（商標）Ｋｉｎａｓｅ  Ａｓｓａｙ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、およびＪＡＫ３キナーゼ活性を阻害する試験化合物の能力を決定する。長寿命のテルビウム標識抗体をドナー種として、およびＧＦＰ−ＳＴＡＴ１をアクセプター種として使用する、ＴＲ−ＦＲＥＴアッセイ形式がある。ＪＡＫキナーゼ活性を観察するために、ＧＦＰ−ＳＴＡＴ１のリン酸化の増加がＴＲ−ＦＲＥＴ比の増加をもたらすＴＲ−ＦＲＥＴ比を使用する。浅い黒色３８４ウェルＰｒｏｘｉｐｌａｔｅ（登録商標）において、１２．５μｌの反応容量を用いてキナーゼ反応を実施する。試薬を添加し、５０ｍｌのＨＥＰＥＳ  ｐＨ、１．７６ｍＭのＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、ＡＴＰ（ＪＡＫ１およびＪＡＫ３について２０．０μＭまたはＪＡＫ２について５μＭ）酵素アッセイ、１０．０ｍＭのＭｇＣｌ２、１ｍＭのＥＧＴＡおよび０．０１％Ｂｒｉｊ−３５、０．０５ｍＭのＧＦＰ−ＳＴＡＴ１、ＪＡＫ１について１４ｎＭのＪＡＫ１酵素、ＪＡＫ２について１．０ｎＭ、またはＪＡＫ３酵素アッセイについて２．５ｎＭ、および４％ＤＭＳＯ、ならびに試験化合物の系列希釈物（２０，０００〜１ｎＭまで１：３で希釈）の最終反応条件を得る。ＡＴＰ／ＧＦＰ−ＳＴＡＴ１添加後、アッセイプレートを毎分１０００回転（ＲＰＭ）で１分間遠心分離する。プレートを室温で６０分間インキュベートした後、２０ｍＭのＥＤＴＡ、２ｎＭのテルビウム抗リン酸化シグナル伝達性転写因子［リン酸化チロシン７０１アミノ酸］抗体（Ｔｂ抗ｐＳＴＡＴ１［ｐＴｙｒ７０１］、０．６７ｍＭのトリス（ヒドロキシメチル）アミノエタン塩酸塩（Ｔｒｉｚｍａ（登録商標））ｐＨ７．５、０．０２％ＮａＮ３、および０．０１％ノニルフェニルポリエチレングリコール（Ｎｏｎｉｄｅｔ（登録商標）Ｐ４０）を含有する１２．５μｌの停止バッファを添加する。室温で９０分間インキュベートし、ＥｎＶｉｓｉｏｎ（登録商標）プレートリーダーにおいて３４０ｎｍ波長励起フィルタならびに５２０ｎｍおよび４９５ｎｍ波長の発光フィルタで読み取る。（Ｔｂ抗ｐＳＴＡＴ１［ｐＴｙｒ７０１］についての４９５ｎｍでの発光に対する、５２０ｎｍで測定されるＧＦＰ−ＳＴＡＴ１について、発光波長から比を導き出す。プレート上の対照（トファシチニブにより２．０ｍＭで阻害された酵素に対する活性酵素）と比較した反応データから計算される阻害パーセントデータを用い、各化合物のＩＣ５０値を導き出す。ＡＣＴＩＶＩＴＹＢＡＳＥ（登録商標）４．０を使用し、阻害パーセントおよび１０点の化合物濃度データを、４パラメータロジスティック方程式に当てはめる。
【０１０６】
本質的に上述の手順に従って、本明細書の実施例の化合物は、試験された。実施例の化合物は、８ｎＭ未満のＪＡＫ１に対するＩＣ５０を示し、インビトロにおいて、ＪＡＫ２またはＪＡＫ３よりもＪＡＫ１の選択的阻害剤である。実施例１および６〜１０の化合物は、表３に列挙される活性を示した。
【表３】
2019525908.tif 000059
【０１０７】
データは、実施例の化合物が、ＪＡＫ１酵素の阻害剤であり、インビトロでＪＡＫ２およびＪＡＫ３よりもＪＡＫ１に対して選択的であることを示している。
【０１０８】
ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ  ＳｕｒｅＦｉｒｅプロトコル  ｐ−ＳＴＡＴ３−（ｐ−Ｔｙｒ７０５）−ＩＬ６−ＴＦ−１−ＪＡＫ１細胞ベースアッセイ
試験化合物のＪＡＫ１の細胞の効力を決定するのに、下に記載されているＪＡＫ１細胞系のアッセイが使用される。
【０１０９】
細胞の調製：ＴＦ−１細胞を、３７℃の０．５％２６４００（ＦＢＳ）および１倍Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐを含むＤＭＥＭ培地において飢餓させる。透明底を有するＢＤ９６ウェル黒色プレートにおいて、１ウェル当たり１００，０００個の細胞を播種する。プレートを、３７℃および５％ＣＯ２で一晩インキュベートする前に、室温で３０〜６０分間維持する。Ｖｉ−Ｃｅｌｌカウンタを使用して細胞数を計数し、１００個の細胞／ｍＬの細胞懸濁液を使用して、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｂｉｏｃｏａｔプレート（カタログ番号３５４６４０）中に１００μＬ／ウェルで播種した。
【０１１０】
試験化合物調製および処理：化合物を、ＤＭＳＯ中の１：３系列希釈で調製し、培地でさらに希釈する。２０，０００〜１ｎＭの１０点濃度の範囲内の化合物を試験する。希釈された化合物を対応する細胞プレートに添加する。プレートを３７℃で２０分間インキュベートする。３０ｎｇ／ｍＬの最終濃度のＩＬ６溶液を、対応する細胞プレートに添加し、３７℃で３０分間インキュベートを継続する。培地を除去し、５０μＬの１倍溶解バッファを各ウェルに添加する。
【０１１１】
ｐＳＴＡＴ３の検出：下記の工程を順次実施する。アクセプター混合物（活性化バッファ／反応バッファ／アクセプタービーズ）を作製する。４μＬの溶解物を９６ウェルプレートから３８４ウェルＰｒｏｘｉｐｌａｔｅに移す。５μＬのアクセプター混合物を３８４Ｐｒｏｘｉｐｌａｔｅのプレート（複数可）に添加し、プレートをアルミシールで密封する。プレートシェーカー上で１〜２分振盪する。プレートを室温で２時間穏やかに振盪しながらインキュベートする。ドナー混合物（希釈バッファ中のドナービーズ）を作製する。２μＬのドナー混合物をアッセイプレートに添加する。プレートをアルミシールで密封する。プレートシェーカー上で１〜２分振盪する。室温で２時間穏やかに振盪しながらインキュベートする。プレートをＥｎｖｉｓｉｏｎで読み取る。ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ  Ｓｕｒｅｆｉｒｅ  ３８４の手順を実施する。
【０１１２】
本質的に上述の手順に従って、実施例１、２、および６の化合物を試験し、以下の表４に示すような以下の活性を示した。
【表４】
2019525908.tif 000060
【０１１３】
表４のデータは、実施例１、２および６の化合物が細胞系のアッセイにおいてＪＡＫ１酵素を阻害することを実証し、実施例の化合物もまた細胞内のＪＡＫ１酵素を阻害するという裏付けを提供する。
【０１１４】
ヒト全血アッセイ：リンパ球および単球におけるｐＳＴＡＴ３（ＪＡＫ１）およびｐＳＴＡＴ５（ＪＡＫ２）の決定。
ヒト全血（ＨＷＢ）アッセイは、試験化合物のＪＡＫ１とＪＡＫ２の選択性を決定するために、開発および検証された。
【０１１５】
試験化合物を、１００％ＤＭＳＯによって、段階的にＰＢＳ＋０．１％ＢＳＡまで１０点、（１：３）希釈する。データを標準化するために、各プレートにおける参照化合物および最大シグナル（刺激されたウェル）としてのトファシチニブと、最小シグナル（刺激されていないウェル）とを使用する。４人の異なる健康なドナーからＨＷＢのプールを入手する。血液を、９６ウェルプレートにおいて、Ｔｅｃａｎ  Ｅｖｏ  ９６ｗを使用して播種し、試験化合物と１時間室温でインキュベートする。この時間のインキュベーション後、ＨＷＢを、ＩＬ６（２０６−ＩＬ、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍ）およびＧＭ−ＣＳＦ（ＰＨＣ２０１５、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）の両方で１５分間以上刺激する。Ｔｅｃａｎ  Ｅｖｏ  ９６ｗ（５倍混合）を使用して、生細胞識別色素（６５−０８６５、ｅＢｉｏｓｉｃｉｅｎｃｅ）（１：１０００）を添加する。
【０１１６】
アッセイにおける最終濃度は、下記のとおり、化合物について１００μＭ、トファシチニブについて５０μＭ、０．１μｇ／ｍＬのＩＬ６、０．０３８μｇ／ｍＬのＧＭ−ＣＳＦ、および１％のＤＭＳＯである。Ｔｅｃａｎ  Ｅｖｏ  ９６ｗ（１０倍高速混合）を使用して９００μＬの溶解バッファを添加することにより、Ｌｙｓｅ／ｆｉｘバッファ（５５８０４９、Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用してＨＷＢを溶解および固定する。ＨＷＢを浴中において３７℃で１０分間インキュベートする。ＨＷＢを５００Ｇ、８分で遠心分離し、上澄みを廃棄する。細胞を透過化するために、Ｔｅｃａｎ  Ｅｘｏ  ９６ｗを使用して冷ＭｅＯＨを添加する。血液細胞を氷上で３０分間インキュベートする。この後、細胞を、染色バッファ（５５４６５６、Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用して２回洗浄し、３０００ｒｐｍで２分回転させ、上澄みを廃棄し、下記の抗体、抗ヒトＣＤ４  ＰＥ、１：１００（１２−００４８、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、抗ヒトＣＤ３３  ｅＦｌｕｏｒ（登録商標）４５０、１：５０（４８−０３３７、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＳＴＡＴ５（Ｔｙｒ６９４）（Ｃ７１Ｅ５）ウサギｍＡｂ、１：１００（Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８複合体）（３９３９、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）、およびＰｈｏｓｐｈｏ−ＳＴＡＴ３（Ｔｙｒ７０５）（Ｄ３Ａ７）ＸＰ（商標）ウサギｍＡｂ、１：２００（Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７複合体）（４３２４、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）を添加する。抗体を１時間、暗室、室温でインキュベートした後、細胞を２回洗浄し、サイトメーターＭａｃｓｑｕａｎｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）で読み取る。ＣＤ４＋（リンパ球）およびＣＤ４ＬｏｗＣＤ３３Ｈｉ（単球）についてのデータをゲーティングし、ｐＳＴＡＴ３およびｐＳＴＡＴ５を発現する細胞からの蛍光強度をそれぞれ測定する。データを、ＦｌｏｗＪｏ  ｖ１０を使用して分析し、蛍光の中央値を最大および最小シグナルに対して標準化してＩＣ５０を決定する。Ｇｒａｐｈ  Ｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ５（商標）を使用し、用量応答曲線を表す。
【０１１７】
本質的に上述の手順に従って、本明細書の実施例の化合物を試験した。実施例の化合物は、ＪＡＫ２よりもＪＡＫ１に対してより大きな選択性を示した。実施例６〜１０の化合物の活性を表５に列挙する。
【表５】
2019525908.tif 000061
【０１１８】
表５のデータは、実施例の化合物が、ヒト全血アッセイにおいてＪＡＫ２よりもＪＡＫ１に対してより強力であることを実証する。
【０１１９】
ラットＰＫ／ＰＤアッセイ
２６５〜２８５グラムのオスのＷｉｓｔａｒラット（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ）強制経口投与のために使用した。１．８２ｍＬ／ｋｇ（２７５グラムあたり０．５ｍＬ）で動物（強制経口投与）に投与する。インサイチュ塩を形成するための１．１モル当量のメタンスルホン酸と共に０．２５％Ｔｗｅｅｎ８０および０．０５％消泡剤を含有する１％ＨＥＣビヒクル中で化合物を製剤化する。化合物を一週間に１回製剤化し、４℃で保存する。様々な時点で、Ｍｕｌｔｉｖｅｔｔｅ６００μｌＥＤＴＡ採血管（ｃａｔ＃１５１６７１１００ＰＫ１００、Ｓａｒｓｔｅｄｔ  Ｉｎｃ）中で尾静脈出血によってラット全血を採血し、エクスビボのＪＡＫ１およびＪＡＫ２アッセイに使用する。各ラットから１００μｌの血液を、９６ウェル丸底プレートに分注する。室温で１２分間、組換えＩＬ−６（１００ｎｇ／ｍｌ）および組換えマウスＧＭ−ＣＳＦ（カタログ番号４１５−ＭＬ、ロット番号、Ｒ＆Ｄ）によって全血を刺激する。サイトカイン刺激の後、全血をミニチューブラック中のＬｙｓｅ／ｆｉｘ（ｃａｔ＃５５８０４９、ｌｏｔ＃、ＢＤ）に添加し、５回よく混合する。室温で１０分間インキュベートする。ミニチューブラックを６００ｇで４分間回転させる。１２チャネルマニホールドで吸引する。ミニチューブラックの内容物を９６ウェル丸底プレートに移す。細胞を３０００ｒｐｍで１分間遠沈し、上清を廃棄する。ウェル中の細胞を１００μｌの氷冷ＭｅＯＨと混合し、氷上で３０分間インキュベートする。各ウェルに１５０μｌのＰＢＳ＋２％ＦＣＳを添加し、３０００ｒｐｍで２分間遠沈する。細胞を２×２５０μｌのＰＢＳ＋２％ＦＣＳで洗浄する。細胞表面および細胞内染色のために、すべての抗体を混合し、各ウェルに添加し、暗所で室温で１時間インキュベートする。染色に使用される抗体は、以下のとおりである：ｐＳＴＡＴ３、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７（カタログ番号４３２４ｓ、ロット、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）、ｐＳＴＡＴ５、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８（カタログ番号３９３９ｓ、ロット番号、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）、抗ラットＣＤ４、Ｖ４５０（カタログ番号５６１５７９、ロット番号、ＢＤ）、抗ラットＣＤ１１ｂ、Ｐｅｒｃｐ  ｅＦｌｕｏｒ７１０（カタログ番号１２−０１１０−８２、ロット番号、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）。抗体で細胞を染色した後、プレートをＰＢＳ＋２％ＦＣＳで２回洗浄し、最後に同一の１５０μｌの溶液中に再懸濁する。生細胞識別色素７８０（カタログ番号６５−０８６５−１４、ロット番号、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）によって細胞生存率を評価する。ＦＯＲＴＥＳＳＡを用いてサイトメトリーアッセイを行う。
【０１２０】
本質的に上述の手順に従って、実施例４、および６〜１０の化合物を試験し、データを表６に列挙する。
【表６】
2019525908.tif 000062
【０１２１】
このデータは実施例の化合物の活性を裏付け、インビボにおいてラットのＪＡＫ２よりもＪＡＫ１に対してより強力であることを示している。
【０１２２】
ラットコラーゲン誘導性関節炎（ＣＩＡ）モデル
このプロトコルでは、Ｃｈａｒｌｅｓ  ＲｉｖｅｒのＬｅｗｉｓラット（体重１５０−１７５グラム）を使用する。０日目に、イソフルランでラットを麻酔する。１日目に、コラーゲンエマルジョンで下腰部の２つの部位、尾の付け根より上で皮内免疫化する。投与量は注射部位あたり最低０．４ｍＬである。８日目に、イソフルランでラットを麻酔し、コラーゲンエマルジョンで下腰部の２つの部位、尾の付け根より上で皮内免疫化する。後肢の炎症（発赤および／または腫脹）に基づいて、ラットを１２日目に処理群に登録する。ブロックランダム化割り当てツールを使用して、足首測定値および体重に基づいて治療段階の動物を無作為化する。１日目、８日目、１１日目、その後、登録後、剖検の日を含めて１週間に３回、足首の腫脹を記録する。化合物を、１２日目（無作為化後）から開始して２５日目まで１日１回経口投与する。実施例６および７の化合物は、本質的に上述の手順に従って評価した。これらの結果を以下の表７に列挙する。
【表７】
2019525908.tif 000063
【０１２３】
表７のデータは、実施例６および７の化合物が、ラットにおける足腫脹の容量応答性阻害を示すことを実証し、実施例の化合物が関節炎の治療に有効であり得ることの裏付けを与える。
【０１２４】
ラットアジュバント誘発性関節炎（ＡＩＡ）モデル
多発性関節炎の炎症および足関節の骨の侵食に対する化合物の影響は、ラットアジュバント誘発性関節炎（ＡＩＡ）モデルにおいて評価することができる。試験のために平均体重１８５ｇのオスＬｅｗｉｓラットを使用する。１００μＬのアジュバント懸濁免疫化エマルジョンオイルでの尾の付け根における皮膚内注射によって関節炎を誘発する。１０日目の平均足厚および体重に基づいて動物を、各群８匹のラットの試験群に無作為化する。精製水中の１％ＨＥＣ／０．２５％Ｐ８０／０．０５％ＡＦで化合物を調製し、１４日間の免疫化後１１日目から強制経口投与により毎日投与する。両方の足首のカリパス測定で足の厚さを定量化する。一元配置ＡＮＯＶＡを用いて群の差異を評価し、続いてビヒクル対照に対する複数の比較についてＤｕｎｎｅｔｔの事後検定を行う。実施例１０の化合物は、本質的に上述の手順に従って評価した。これらの結果を以下の表８に列挙する。
【表８】
2019525908.tif 000064
【０１２５】
表８のデータは、実施例１０の化合物がラットにおける足腫脹の用量応答阻害を実証し、実施例の化合物が関節炎の治療に有効であり得るという裏付けを与える。
【手続補正書】
【提出日】平成30年12月25日(2018.12.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式の化合物またはその薬学的に許容される塩
【化１】
2019525908.tif 000076
［式中、Ｒが、Ｈ、−Ｃ１−３アルキル、−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、または−Ｃ２−３アルキル−Ｏ−ＣＨ３、
【化２】
2019525908.tif 000077
から選択され、
Ｒ１が、Ｈ、−ＣＨ３、および−ＯＣＨ３から選択され、
Ｒ２が−ＣＨＦ２または−ＣＦ３であり、
Ｒ３が、Ｈまたは−ＣＨ３であり、
但し、Ｒ２が−ＣＦ３であり、Ｒ３がＨであるとき、ＲまたはＲ１のいずれかは−ＣＨ３であり得るが、それらの両方がそうならない］。
【請求項２】
式の化合物またはその薬学的に許容される塩
【化３】
2019525908.tif 000078
［式中、
Ｒが、Ｈ、−Ｃ１−３アルキル、−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、または−Ｃ２−３アルキル−Ｏ−ＣＨ３、
【化４】
2019525908.tif 000079
から選択され、
Ｒ１が、Ｈ、−ＣＨ３、および−ＯＣＨ３から選択され、
Ｒ２が、−ＣＨＦ２または−ＣＦ３であり、
Ｒ３が、Ｈまたは−ＣＨ３であり、
但し、Ｒ２が−ＣＦ３であり、Ｒ３が−ＣＨ３であるとき、ＲまたはＲ１のいずれかは−ＣＨ３であり得るが、それらの両方がそうならない］。
【請求項３】
Ｒが、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、および
【化５】
2019525908.tif 000080
から選択される、請求項２に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項４】
Ｒが、−ＣＨ３または−ＣＨ２ＣＨ３である、
請求項３に記載の化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項５】
Ｒが、
【化６】
2019525908.tif 000081
である、請求項３に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項６】
Ｒ１が、Ｈ、−ＣＨ３、および−ＯＣＨ３から選択される、請求項５に記載の化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項７】
Ｒ２が−ＣＦ３である、請求項６に記載の化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項８】
Ｒ３が、−ＣＨ３である、請求項７に記載の化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項９】
【化７】
2019525908.tif 000082
である、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１０】
【化８】
2019525908.tif 000083
である、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１１】
【化９】
2019525908.tif 000084
である、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１２】
【化１０】
2019525908.tif 000085
である、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１３】
（２Ｒ）−１，１，１−トリフルオロ−３−（｛シス−４−［（１−メチル−４−｛［１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アミノ｝−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル）オキシ］シクロヘキシル｝アミノ）プロパン−２−オール  ２−ヒドロキシプロパン−１，２，３−トリカルボキシレート水和物である化合物。
【請求項１４】
（２Ｒ）−１，１，１−トリフルオロ−３−（｛シス−４−［（１−メチル−４−｛［１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アミノ｝−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル）オキシ］シクロヘキシル｝アミノ）プロパン−２−オールである化合物であって、
ａ）２θにおいて、１５．５、１８．１、１８．３、２０．５、および２２．９＋／−０．２°、または
ｂ）２θにおいて、１３．２、１５．５、１８．１、１８．３、１８．５、２０．５、２２．９、および２３．６、２３．７、＋／−０．２°、または
ｃ）２θにおいて、１３．２、１５．５、１８．１、１８．３、１８．５、１９．０、２０．５、２２．９、２３．６、２３．６、２３．７、２４．７、および２６．５＋／−０．２°
のピークを含む、ＣｕＫα源（λ＝１．５４０５６Å）から得られるＸ線粉末回折パターンによって特徴付けられる結晶形を有する、化合物。
【請求項１５】
（２Ｒ）−１，１，１−トリフルオロ−３−（｛シス−４−［（１−メチル−４−｛［１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アミノ｝−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル）オキシ］シクロヘキシル｝アミノ）プロパン−２−オール  ２−ヒドロキシプロパン−１，２，３−トリカルボキシレート水和物である化合物であって、
ａ）２θにおいて、１８．６、１９．１、２１．０、および２２．４＋／−０．２°、または
ｂ）２θにおいて、７．４、１１．０、１８．６、１９．１、２１．０、２１．９、２２．４、および２６．２＋／−０．２°、または
ｃ）２θにおいて、７．４、１１．０、１２．７、１６．８、１８．６、１９．１、２１．０、２１．９、２２．４、および２６．２＋／−０．２°
のピークを含む、ＣｕＫα源（λ＝１．５４０５６Å）から得られるＸ線粉末回折パターンによって特徴付けられる結晶形を有する、化合物。
【請求項１６】
請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物、および薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む、薬学的組成物。
【請求項１７】
８０％（ｗ／ｗ）を超える、結晶形の（２Ｒ）−１，１，１−トリフルオロ−３−（｛シス−４−［（１−メチル−４−｛［１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アミノ｝−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−６−イル）オキシ］シクロヘキシル｝アミノ）プロパン−２−オール  ２−ヒドロキシプロパン−１，２，３−トリカルボキシレート水和物である化合物を含む、薬学的組成物。
【請求項１８】
９０％（ｗ／ｗ）を超える、結晶形の（２Ｒ）−１，１，１−トリフルオロ−３−（｛シス−４−［（１−メチル−４−｛［１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アミノ｝−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−６−イル）オキシ］シクロヘキシル｝アミノ）プロパン−２−オール  ２−ヒドロキシプロパン−１，２，３−トリカルボキシレート水和物である化合物を含む、薬学的組成物。
【請求項１９】
有効量の、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩を含む、患者の関節炎を治療するための、薬学的組成物。
【請求項２０】
治療において使用するための、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２１】
関節炎の治療において使用するための、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２２】
関節炎を治療するための薬剤の製造における、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【国際調査報告】
2019525908.tif 000086
2019525908.tif 000087