(57)【要約】  選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の新規な使用が記載される。
2019504029.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象において腫瘍内の骨髄性細胞の数を増加させる方法であって、前記対象に選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤を投与することを含んでなり、その接触が腫瘍内の骨髄性細胞数の増加を引き起こす、方法。
【請求項２】
前記接触後に、骨髄性細胞が下記遺伝子：ＩＳＧ２０、ＯＡＳＬ、ＣＸＣＬ１０、ＴＮＦＳＦ１０、ＣＦＢ、ＣＤ６９、ＩＬ２ＲＢ、ＸＣＬ１、ＲＳＡＤ２、ＵＳＰ１８、ＣＭＰＫ２、ＰＴＧＳ２、およびＧＰＲ１８のうち１以上の発現の増強を示す、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記接触後に、骨髄性細胞が下記遺伝子：Ｃｄ７、Ｒｓａｄ２、Ｃｄ６９、Ｃｄ８ａ、Ｉｌ２ｒｂ、Ｉｔｇａｅ、Ｃｄ９６、Ｃｔｓｗ、Ｘｃｌ１、Ｉｌ１２ｂ、Ｋｌｒａ５、Ｔｎｆｓｆ１０、Ｌｙ６ｇ５ｂ、Ｇｌｙｃａｍ１、Ｇｚｍｃ、およびＣｄ１６０のうち１以上の発現の増強を示す、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記骨髄性細胞が単球である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記骨髄性細胞がマクロファージである、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記骨髄性細胞が樹状細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記対象が前記腫瘍に対する癌治療を受けている、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記腫瘍が固形腫瘍を含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記腫瘍が乳癌を含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
腫瘍内の骨髄性細胞の数の増加を必要とするとして対象を選択または特定する工程を含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
対象において癌治療の有効性を増進する方法であって、対象に選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤を投与することを含んでなり、前記対象が癌治療を受け、かつ選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の投与が癌治療の有効性を増進する、方法。
【請求項１２】
前記癌治療が化学療法を含んでなる、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記化学療法がパクリタキセルを含んでなる、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記化学療法がカルボプラチンを含んでなる、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記癌治療が放射線療法を含んでなる、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
前記癌治療が免疫療法を含んでなる、請求項１１に記載の方法。
【請求項１７】
前記対象が腫瘍を有する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１８】
前記対象が固形腫瘍を有する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１９】
前記対象が乳癌を有する、請求項１１に記載の方法。
【請求項２０】
癌治療の有効性の増進を必要とする対象を選択または特定する工程を含んでなる、請求項１１に記載の方法。
【請求項２１】
腫瘍を有する対象において転移の数を低減する方法であって、対象に選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤を投与することを含んでなり、ここで選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤を投与することが前記対象において転移数の低減を引き起こす、方法。
【請求項２２】
前記対象が前記腫瘍に対する癌治療を受けている、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記対象が固形腫瘍を有する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
前記対象が乳癌を有する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】
前記転移が肺転移である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２６】
転移の数の低減を必要する対象を選択または特定する工程を含んでなる、請求項２１に記載の方法。
【請求項２７】
対象において腫瘍の血管系を改善する方法であって、対象に選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤を投与することを含んでなり、ここで選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の投与が腫瘍の血管系を改善する、方法。
【請求項２８】
前記対象がその腫瘍に対する癌治療を受けている、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記対象が固形腫瘍を有する、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
前記対象が乳癌を有する、請求項２７に記載の方法。
【請求項３１】
腫瘍の血管系の改善を必要とする対象を選択または特定する工程を含んでなる、請求項２７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の参照】
【０００１】
本出願は、２０１５年１２月２２日出願の米国特許出願第６２／２７０，８３５号；２０１６年６月１５日出願の米国特許出願第６２／３５０，２２４号；および２０１６年９月２３日出願の米国特許出願第６２／３９９，１４９号の優先権を主張するものである。これらの先行出願の開示は、本出願の開示の一部とされる（引用することにより本明細書の一部とされる）。
【０００２】
発明の分野
本発明は、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の使用方法に関する。
【０００３】
背景技術
クロマチンの構成は、ヒストンオクタマーに巻き付いたＤＮＡを含み、これがヌクレオソームを形成している。稠密なヌクレオソームコア粒子から伸びるＮ末端テールを有するコアヒストンは、εリシン残基でアセチル化または脱アセチル化されて、ヒストン−ＤＮＡおよびヒストン−非ヒストンタンパク質の相互作用に影響を与えることができる。ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）は、ヒストンおよび非ヒストンタンパク質の脱アセチル化を触媒し、エピジェネティック調節に重要な役割を果たす。現在、１８の既知のＨＤＡＣが存在し、それらは、主として核に局在するクラスＩＨＤＡＣ（ＨＤＡＣ１、ＨＤＡＣ２、ＨＤＡＣ３、ＨＤＡＣ８およびＨＤＡＣ１１）；核と細胞質の間を往復するクラスＩＩ  ＨＤＡＣ（ＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣ５、ＨＤＡＣ６、ＨＤＡＣ７、ＨＤＡＣ９およびＨＤＡＣ１０）；およびその細胞局在が様々なオルガネラを含むクラスＩＩＩ  ＨＤＡＣ（ＳＩＲＴ１−７）の３つのクラスに編成される。
【０００４】
クラスＩＩ  ＨＤＡＣは、さらにクラスＩＩａ  ＨＤＡＣおよびクラスＩＩｂ  ＨＤＡＣとして特徴付けられる。クラスＩＩａ  ＨＤＡＣは、ＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣ５、ＨＤＡＣ７、およびＨＤＡＣ９である。
【０００５】
発明の概要
本開示は、１つには、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の新規な使用に基づく。出願人らは、驚くことに、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤がマクロファージを活性化して、例えば腫瘍退縮を誘導すること、および転移を低減することができることを見出した。さらに、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の使用は、化学療法などの癌治療の有効性および持続性を増進することもできる。出願人らはまた、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤がＣＤ８＋Ｔ細胞に影響を与えて、例えばグランザイムＢの産生を増大させることも見出した。
【０００６】
いくつかの態様では、本開示は、対象（例えば、ヒト）において腫瘍内の骨髄性細胞の数を増加させる方法であって、対象に選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、治療上有効量の阻害剤）（例えば、その医薬組成物）を投与することを含んでなり、その接触が、例えば選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の投与前の腫瘍に存在する骨髄性細胞の数に比べて、腫瘍内の骨髄性細胞の数に（例えば、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％またはそれを超える）増加を引き起こす方法を提供する。
【０００７】
いくつかの実施形態では、接触後に、骨髄性細胞は、図２０に示される一遺伝子（または複数の遺伝子、例えば２５％、５０％、７５％、または１００％の遺伝子）の発現に、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤と接触させる前の前記遺伝子（または複数の遺伝子）の発現レベルに比べて増強（例えば、１．６倍以上の増強または例えば本明細書に記載されるように計算されるδ係数＞１．５を有する）を示す。発現の増強は、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤と接触させた集団（例えば、複数）の骨髄性細胞の平均発現レベルにおける、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤と接触させていない集団（例えば、複数）の骨髄性細胞内の前記遺伝子の平均発現レベルと比べての、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤と接触させる前の集団（例えば、複数）の骨髄性細胞内の前記遺伝子の平均発現レベルと比べての増強であり得る。いくつかの実施形態では、接触後に、骨髄性細胞は、下記遺伝子：ＩＳＧ２０、ＯＡＳＬ、ＣＸＣＬ１０、ＴＮＦＳＦ１０、ＣＦＢ、ＣＤ６９、ＩＬ２ＲＢ、ＸＣＬ１、ＲＳＡＤ２、ＵＳＰ１８、ＣＭＰＫ２、ＰＴＧＳ２、およびＧＰＲ１８のうち１以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、または総て）の発現に、例えば選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤と接触させていない骨髄性細胞内の前記遺伝子の発現レベルに比べて、増強（例えば、１．６倍以上の増強）を示す。いくつかの実施形態では、接触後に、骨髄性細胞は、下記遺伝子：Ｃｄ７、Ｒｓａｄ２、Ｃｄ６９、Ｃｄ８ａ、Ｉｌ２ｒｂ、Ｉｔｇａｅ、Ｃｄ９６、Ｃｔｓｗ、Ｘｃｌ１、Ｉｌ１２ｂ、Ｋｌｒａ５、Ｔｎｆｓｆ１０、Ｌｙ６ｇ５ｂ、Ｇｌｙｃａｍ１、Ｇｚｍｃ、およびＣｄ１６０のうち１以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または総て）の発現に、例えば選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤と接触させていない骨髄性細胞内の前記遺伝子の発現レベルに比べて増強を示す（例えば、本明細書に記載されるように計算される例えばδ係数＞１．５を有する）。
【０００８】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞は単球である。
【０００９】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞はマクロファージである。
【００１０】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞は樹状細胞である。
【００１１】
いくつかの実施形態では、対象は腫瘍に対する癌治療を受けている。
【００１２】
いくつかの実施形態では、癌治療は化学療法を含んでなる。
【００１３】
いくつかの実施形態では、化学療法はパクリタキセルを含んでなる。
【００１４】
いくつかの実施形態では、化学療法はカルボプラチンを含んでなる。
【００１５】
いくつかの実施形態では、癌治療は放射線療法を含んでなる。
【００１６】
いくつかの実施形態では、癌治療は、免疫療法（例えば、免疫刺激性アゴニスト抗体（例えば、モノクローナル抗体）、例えば、抗ＣＤ１３７、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ４０、または抗ＯＸ４０アゴニスト抗体による処置；あるいはチェックポイント阻害剤、例えば、ＰＤ−１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体（例えば、ペンブロリズマブ（キートルーダ（商標））もしくはニボルマブ（オプジーボ（商標）））、またはＣＴＬＡ−４阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、イピリムマブ（ヤーボイ（商標）））、またはＰＤ−Ｌ１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体）による処置）を含んでなる。
【００１７】
いくつかの実施形態では、腫瘍は固形腫瘍を含んでなる。
【００１８】
いくつかの実施形態では、腫瘍は乳癌を含んでなる。
【００１９】
いくつかの実施形態では、本方法は、場合により、腫瘍内の骨髄性細胞の数の増加を必要とする対象、例えば、腫瘍を有すると診断された対象、または癌治療に応答しない腫瘍を有する対象（例えば、対象が癌治療を受けているにもかかわらず、腫瘍が成長し続けている、転移の数が増加している、または腫瘍成長の速度が変化しないか、もしくは増大している）を選択または特定する工程を含んでなる。
【００２０】
いくつかの態様では、本開示は、対象（例えば、ヒト）において腫瘍内の貪食骨髄性細胞の数を増加させる方法であって、対象に選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、治療上有効量の阻害剤）（例えば、その医薬組成物）を投与することを含んでなり、その接触が、腫瘍内の貪食骨髄性細胞の数を、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の投与前に腫瘍に存在する貪食骨髄性細胞の数に比べて、（例えば、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％またはそれを超える）増加を引き起こす方法を提供する。貪食骨髄性細胞は、腫瘍内の骨髄性細胞（例えば、マクロファージ）において、例えば、組織学的分析により、例えば、本明細書に記載されるように、アポトーシス小体、例えば、可染小体を検出することにより検出することができる。
【００２１】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞は単球である。
【００２２】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞はマクロファージである。
【００２３】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞は樹状細胞である。
【００２４】
いくつかの実施形態では、対象は腫瘍に対する癌治療を受けている。
【００２５】
いくつかの実施形態では、癌治療は化学療法を含んでなる。
【００２６】
いくつかの実施形態では、化学療法はパクリタキセルを含んでなる。
【００２７】
いくつかの実施形態では、化学療法はカルボプラチンを含んでなる。
【００２８】
いくつかの実施形態では、癌治療は放射線療法を含んでなる。
【００２９】
いくつかの実施形態では、癌治療は、免疫療法（例えば、免疫刺激性アゴニスト抗体（例えば、モノクローナル抗体）、例えば、抗ＣＤ１３７、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ４０、または抗ＯＸ４０アゴニスト抗体による処置；あるいはチェックポイント阻害剤、例えば、ＰＤ−１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体（例えば、ペンブロリズマブ（キートルーダ（商標））もしくはニボルマブ（オプジーボ（商標）））、またはＣＴＬＡ−４阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、イピリムマブ（ヤーボイ（商標）））、またはＰＤ−Ｌ１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体）による処置）を含んでなる。
【００３０】
いくつかの実施形態では、腫瘍は固形腫瘍を含んでなる。
【００３１】
いくつかの実施形態では、腫瘍は乳癌を含んでなる。
【００３２】
いくつかの実施形態では、本方法は、場合により、腫瘍内の貪食骨髄性細胞の数の増加を必要とする対象、例えば、腫瘍を有すると診断された対象、または癌治療に応答しない腫瘍を有する対象（例えば、対象が癌治療を受けているにもかかわらず、腫瘍が成長し続けている、転移の数が増加している、または腫瘍成長の速度が変化しないか、もしくは増大している）を選択または特定する工程を含んでなる。
【００３３】
いくつかの態様では、本開示は、対象（例えば、ヒト）において、グランザイムＢを発現する腫瘍内のＣＤ８＋Ｔ細胞の数を増加させる方法であって、対象に選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、治療上有効量の阻害剤）（例えば、その医薬組成物）を投与することを含んでなり、その接触がグランザイムＢを発現する腫瘍内のＣＤ８＋Ｔ細胞の数に、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の投与前のグランザイムＢを発現する腫瘍内のＣＤ８＋Ｔ細胞の数に比べて、（例えば、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％またはそれを超える）増加を引き起こす方法を提供する。
【００３４】
いくつかの実施形態では、対象は腫瘍に対する癌治療を受けている。
【００３５】
いくつかの実施形態では、癌治療は化学療法を含んでなる。
【００３６】
いくつかの実施形態では、化学療法はパクリタキセルを含んでなる。
【００３７】
いくつかの実施形態では、化学療法はカルボプラチンを含んでなる。
【００３８】
いくつかの実施形態では、癌治療は放射線療法を含んでなる。
【００３９】
いくつかの実施形態では、癌治療は、免疫療法（例えば、免疫刺激性アゴニスト抗体（例えば、モノクローナル抗体）、例えば、抗ＣＤ１３７、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ４０、または抗ＯＸ４０アゴニスト抗体による処置；あるいはチェックポイント阻害剤、例えば、ＰＤ−１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体（例えば、ペンブロリズマブ（キートルーダ（商標））もしくはニボルマブ（オプジーボ（商標）））、またはＣＴＬＡ−４阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、イピリムマブ（ヤーボイ（商標）））、またはＰＤ−Ｌ１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体）による処置）を含んでなる。
【００４０】
いくつかの実施形態では、腫瘍は固形腫瘍を含んでなる。
【００４１】
いくつかの実施形態では、腫瘍は乳癌を含んでなる。
【００４２】
いくつかの実施形態では、本方法は、場合により、グランザイムＢを発現する腫瘍内のＣＤ８＋Ｔ細胞の数の増加を必要とする対象、例えば、腫瘍を有すると診断された対象、または癌治療に応答しない腫瘍を有する対象（例えば、対象が癌治療を受けているにもかかわらず、腫瘍が成長し続けている、転移の数が増加している、または腫瘍成長の速度が変化しないか、もしくは増大している）を選択または特定する工程を含んでなる。
【００４３】
いくつかの態様では、本開示は、対象（例えば、ヒト）において、癌治療に対する応答の持続性を増大させる（例えば、増進する）方法であって、対象に選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、治療上有効量の阻害剤）（例えば、その医薬組成物）を投与することを含んでなり、前記対象が癌治療を受けており、かつ、択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤を投与することが、癌治療に対する応答の持続性に、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の投与の不在下での応答の持続性、例えば、同じ癌治療を受けている（かつ、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は用いない）対象のコホートの応答の平均持続性に比べて、（例えば、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％またはそれを超える）増大を引き起こす方法を提供する。本明細書で使用する場合、応答の持続性は、所与の処置に対して有利な応答（例えば、寛解または腫瘍サイズの退縮または腫瘍成長の減速）がどのくらい続くかを意味する。例えば、対象は一定の期間、癌治療に有利に応答（例えば、腫瘍成長の減速）し得るが、その後、腫瘍は進行、例えば、サイズを増し始め得ることが知られている。癌治療に対する応答の持続性を増大させる（例えば、増進する）薬剤は、対象が癌治療に有利に応答する、例えば、対象に影響を与える期間（例えば、５年または１０年生存率）を延長する。選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、応答の持続性が低下している（例えば、有利な応答が低下している、例えば、腫瘍成長速度が増大している）場合の対象に、または対象が癌治療に応答している間に持続性を増大させるために投与することができる。
【００４４】
いくつかの実施形態では、癌治療は化学療法を含んでなる。
【００４５】
いくつかの実施形態では、化学療法はパクリタキセルを含んでなる。
【００４６】
いくつかの実施形態では、化学療法はカルボプラチンを含んでなる。
【００４７】
いくつかの実施形態では、癌治療は放射線療法を含んでなる。
【００４８】
いくつかの実施形態では、癌治療は、免疫療法（例えば、免疫刺激性アゴニスト抗体（例えば、モノクローナル抗体）、例えば、抗ＣＤ１３７、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ４０、または抗ＯＸ４０アゴニスト抗体による処置；あるいはチェックポイント阻害剤、例えば、ＰＤ−１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体（例えば、ペンブロリズマブ（キートルーダ（商標））もしくはニボルマブ（オプジーボ（商標）））、またはＣＴＬＡ−４阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、イピリムマブ（ヤーボイ（商標）））、またはＰＤ−Ｌ１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体）による処置）を含んでなる。
【００４９】
いくつかの実施形態では、対象は腫瘍を有する。
【００５０】
いくつかの実施形態では、対象は固形腫瘍を有する。
【００５１】
いくつかの実施形態では、対象は乳癌を有する。
【００５２】
いくつかの実施形態では、本方法は、場合により、対象において、例えば、応答の持続性が低下している（例えば、有利な応答が低下している、例えば、腫瘍成長速度が増大している）場合に、癌治療に対する応答の持続性の増大(例えば、増進）を必要とする対象を選択または特定する工程を含んでなる。
【００５３】
いくつかの態様では、本開示は、対象（例えば、ヒト）において癌治療の有効性を増進する方法であって、対象に選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、治療上有効量の阻害剤）（例えば、その医薬組成物）を投与することを含んでなり、前記対象が癌治療を受けており、かつ、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤を投与することが、癌治療の有効性を、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の投与の不在下で癌治療の有効性、例えば、同じ癌治療を受けている（かつ、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は用いない）対象のコホートの平均有効性に比べて、（例えば、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％またはそれを超えて）増進する方法を提供する。本明細書で使用する場合、有効性は、癌治療が腫瘍（例えば、腫瘍サイズの退縮または転移の数もしくは数の低減）にどのくらい強く影響を与えるかを意味する。選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、癌治療の有効性が低下している（例えば、腫瘍サイズが増大している、もしくは転移の数が増加している）場合に、または対象が癌治療に応答している間に有効性を増大させるために対象に投与することができる。
【００５４】
いくつかの実施形態では、癌治療は化学療法を含んでなる。
【００５５】
いくつかの実施形態では、化学療法はパクリタキセルを含んでなる。
【００５６】
いくつかの実施形態では、化学療法はカルボプラチンを含んでなる。
【００５７】
いくつかの実施形態では、癌治療は放射線療法を含んでなる。
【００５８】
いくつかの実施形態では、癌治療は、免疫療法（例えば、免疫刺激性アゴニスト抗体（例えば、モノクローナル抗体）、例えば、抗ＣＤ１３７、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ４０、または抗ＯＸ４０アゴニスト抗体による処置；あるいはチェックポイント阻害剤、例えば、ＰＤ−１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体（例えば、ペンブロリズマブ（キートルーダ（商標））もしくはニボルマブ（オプジーボ（商標）））、またはＣＴＬＡ−４阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、イピリムマブ（ヤーボイ（商標）））、またはＰＤ−Ｌ１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体）による処置）を含んでなる。
【００５９】
いくつかの実施形態では、対象は腫瘍を有する。
【００６０】
いくつかの実施形態では、対象は固形腫瘍を有する。
【００６１】
いくつかの実施形態では、対象は乳癌を有する。
【００６２】
いくつかの実施形態では、本方法は、場合により、例えば、対象において癌治療の有効性が低下している（例えば、腫瘍サイズが増大している、もしくは転移の数が増加している）場合に、癌治療の有効性の増進を必要とする対象を選択または特定する工程を含んでなる。
【００６３】
いくつかの態様では、本開示は、腫瘍を有する対象（例えば、ヒト）において転移の数を低減する方法であって、対象に選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、治療上有効量の阻害剤）（例えば、その医薬組成物）を投与することを含んでなり、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤を投与することが、転移の数に、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の投与の不在下での転移の数、例えば、同じ腫瘍タイプを有する（かつ、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の投与は行わない）対象のコホートの平均転移数または選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の投与前の対象の転移の数に比べて、（例えば、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％またはそれを超える）低下を引き起こす方法を提供する。
【００６４】
いくつかの実施形態では、対象は腫瘍に対する癌治療を受けている。
【００６５】
いくつかの実施形態では、癌治療は化学療法を含んでなる。
【００６６】
いくつかの実施形態では、化学療法はパクリタキセルを含んでなる。
【００６７】
いくつかの実施形態では、化学療法はカルボプラチンを含んでなる。
【００６８】
いくつかの実施形態では、癌治療は放射線療法を含んでなる。
【００６９】
いくつかの実施形態では、癌治療は、免疫療法（例えば、免疫刺激性アゴニスト抗体（例えば、モノクローナル抗体）、例えば、抗ＣＤ１３７、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ４０、または抗ＯＸ４０アゴニスト抗体による処置；あるいはチェックポイント阻害剤、例えば、ＰＤ−１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体（例えば、ペンブロリズマブ（キートルーダ（商標））もしくはニボルマブ（オプジーボ（商標）））、またはＣＴＬＡ−４阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、イピリムマブ（ヤーボイ（商標）））、またはＰＤ−Ｌ１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体）による処置）を含んでなる。
【００７０】
いくつかの実施形態では、対象は固形腫瘍を有する。
【００７１】
いくつかの実施形態では、対象は乳癌を有する。
【００７２】
いくつかの実施形態では、転移は肺転移である。
【００７３】
いくつかの実施形態では、本方法は、場合により、例えば、対象において転移が検出される場合に、転移の数の低減を必要する対象を選択または特定する工程を含んでなる。
【００７４】
いくつかの態様では、本開示は、腫瘍を有する対象（例えば、ヒト）においてを転移のサイズを低減する方法であって、対象に選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、治療上有効量の阻害剤）（例えば、その医薬組成物）を投与することを含んでなり、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤を投与することが、転移のサイズに、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の投与の不在下での転移のサイズ（例えば、平均サイズ）、例えば、同じ腫瘍タイプを有する（かつ、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の投与は行わない）対象のコホートの転移の平均サイズまたは選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の投与前の対象の転移のサイズに比べて、（例えば、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％またはそれを超える）低減を引き起こす方法を提供する。
【００７５】
いくつかの実施形態では、対象は腫瘍に対する癌治療を受けている。
【００７６】
いくつかの実施形態では、癌治療は化学療法を含んでなる。
【００７７】
いくつかの実施形態では、化学療法はパクリタキセルを含んでなる。
【００７８】
いくつかの実施形態では、化学療法はカルボプラチンを含んでなる。
【００７９】
いくつかの実施形態では、癌治療は放射線療法を含んでなる。
【００８０】
いくつかの実施形態では、癌治療は、免疫療法（例えば、免疫刺激性アゴニスト抗体（例えば、モノクローナル抗体）、例えば、抗ＣＤ１３７、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ４０、または抗ＯＸ４０アゴニスト抗体による処置；あるいはチェックポイント阻害剤、例えば、ＰＤ−１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体（例えば、ペンブロリズマブ（キートルーダ（商標））もしくはニボルマブ（オプジーボ（商標）））、またはＣＴＬＡ−４阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、イピリムマブ（ヤーボイ（商標）））、またはＰＤ−Ｌ１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体）による処置）を含んでなる。
【００８１】
いくつかの実施形態では、対象は固形腫瘍を有する。
【００８２】
いくつかの実施形態では、対象は乳癌を有する。
【００８３】
いくつかの実施形態では、転移は肺転移である。
【００８４】
いくつかの実施形態では、本方法は、場合により、転移、例えば、対象において転移が検出される場合に、転移のサイズの低減を必要とする対象を選択または特定する工程を含んでなる。
【００８５】
いくつかの態様では、本開示は、対象（例えば、ヒト）において、腫瘍の血管系を改善する方法であって、対象に選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、治療上有効量の阻害剤）（例えば、その医薬組成物）を投与することを含んでなり、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤を投与することが、腫瘍の血管系を、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の投与の不在下での腫瘍の血管系に比べて、例えば、阻害剤の投与前の腫瘍血管系に比べて、または例えば、同じ腫瘍タイプを有する（かつ、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は用いない）対象のコホートの腫瘍の血管系の平均外観に比べて改善する方法を提供する。本明細書で使用する場合、腫瘍血管系の改善は、下記パラメーター：腫瘍内の血流の増加、腫瘍血管漏出の低減、腫瘍血管拡張の低減、腫瘍血管の分岐の低減、または死滅末端腫瘍血管の数の低減のうち１以上により判定することができる。
【００８６】
いくつかの実施形態では、対象は腫瘍に対する癌治療を受けている。
【００８７】
いくつかの実施形態では、癌治療は化学療法を含んでなる。
【００８８】
いくつかの実施形態では、化学療法はパクリタキセルを含んでなる。
【００８９】
いくつかの実施形態では、化学療法はカルボプラチンを含んでなる。
【００９０】
いくつかの実施形態では、癌治療は放射線療法を含んでなる。
【００９１】
いくつかの実施形態では、癌治療は、を免疫療法（例えば、免疫刺激性アゴニスト抗体（例えば、モノクローナル抗体）、例えば、抗ＣＤ１３７、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ４０、または抗ＯＸ４０アゴニスト抗体による処置；あるいはチェックポイント阻害剤、例えば、ＰＤ−１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体（例えば、ペンブロリズマブ（キートルーダ（商標））もしくはニボルマブ（オプジーボ（商標）））、またはＣＴＬＡ−４阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、イピリムマブ（ヤーボイ（商標）））、またはＰＤ−Ｌ１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体）による処置）含んでなる。
【００９２】
いくつかの実施形態では、対象は固形腫瘍を有する。
【００９３】
いくつかの実施形態では、対象は乳癌を有する。
【００９４】
いくつかの実施形態では、転移は肺転移である。
【００９５】
いくつかの実施形態では、本方法は、場合により、腫瘍の血管系の改善を必要とする対象を選択または特定する工程を含んでなり、例えば、対象において下記：腫瘍内の血流の増加、腫瘍血管漏出の低減、腫瘍血管拡張の低減、腫瘍血管の分岐の低減、死滅末端腫瘍血管の数の低減のうち１以上が必要とされ（もしくは望まれ）、または腫瘍は、腫瘍内の血流の低下、腫瘍血管漏出の増大、腫瘍血管拡張の増大、腫瘍血管の分岐の増加、死滅末端腫瘍血管の増加を示す。
【００９６】
いくつかの態様では、本開示は、骨髄性細胞（例えば、単球またはマクロファージまたは樹状細胞）において抗腫瘍表現型を誘導する方法であって、骨髄性細胞を選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、治療上有効量の阻害剤）（例えば、その医薬組成物）と接触させることを含んでなり、その接触が骨髄性細胞に抗腫瘍表現型を呈させる（例えば、マクロファージの集団においては、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の不在下で抗腫瘍表現型を呈するマクロファージの集団の割合に比べて大きな割合が抗腫瘍表現型を呈する）方法を提供する。本明細書で使用する場合、抗腫瘍表現型を有する骨髄性細胞は、骨髄性細胞が、図２０に示される一遺伝子（または複数の遺伝子、例えば、２５％、５０％、７５％、または１００％の遺伝子）の発現に、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤と接触させる前の前記遺伝子（または複数の遺伝子）の発現レベルに比べて増強（例えば、１．６倍以上の増強または例えば、本明細書に記載されるように計算されるδ係数＞１．５を有する）を示すことにより同定される。いくつかの実施形態では、抗腫瘍表現型を有する骨髄性細胞は、下記遺伝子：ＩＳＧ２０、ＯＡＳＬ、ＣＸＣＬ１０、ＴＮＦＳＦ１０、ＣＦＢ、ＣＤ６９、ＩＬ２ＲＢ、ＸＣＬ１、ＲＳＡＤ２、ＵＳＰ１８、ＣＭＰＫ２、ＰＴＧＳ２、およびＧＰＲ１８のうち１以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、または総て）の発現に、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤と接触させていない骨髄性細胞内の前記遺伝子の発現レベルに比べて増強（例えば、１．６倍以上の増強）を示す。いくつかの実施形態では、接触後に、抗腫瘍表現型を有する骨髄性細胞は、下記遺伝子：Ｃｄ７、Ｒｓａｄ２、Ｃｄ６９、Ｃｄ８ａ、Ｉｌ２ｒｂ、Ｉｔｇａｅ、Ｃｄ９６、Ｃｔｓｗ、Ｘｃｌ１、Ｉｌ１２ｂ、Ｋｌｒａ５、Ｔｎｆｓｆ１０、Ｌｙ６ｇ５ｂ、Ｇｌｙｃａｍ１、Ｇｚｍｃ、およびＣｄ１６０のうち１以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または総て）の発現に、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤と接触させていない骨髄性細胞内の前記遺伝子の発現レベルに比べて増強（例えば、本明細書に記載されるように計算される例えばδ係数＞１．５）を示す。
【００９７】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞は単球である。
【００９８】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞はマクロファージである。
【００９９】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞は樹状細胞である。
【０１００】
いくつかの実施形態では、接触は、ｅｘ  ｖｉｖｏで、例えば、対象（例えば、ヒト）から採取された骨髄性細胞で行われる。いくつかの実施形態では、接触させた骨髄性細胞は、接触後に対象に移植される。
【０１０１】
いくつかの実施形態では、接触は、ｉｎ  ｖｉｖｏで、例えば、対象（例えば、ヒト）、例えば、それを必要とする対象、例えば、癌治療下の対象において行われる。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、癌治療は化学療法を含んでなる。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、化学療法はパクリタキセルを含んでなる。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、化学療法はカルボプラチンを含んでなる。
【０１０５】
いくつかの実施形態では、癌治療は放射線療法を含んでなる。
【０１０６】
いくつかの実施形態では、癌治療は、免疫療法（例えば、免疫刺激性アゴニスト抗体（例えば、モノクローナル抗体）、例えば、抗ＣＤ１３７、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ４０、または抗ＯＸ４０アゴニスト抗体による処置；あるいはチェックポイント阻害剤、例えば、ＰＤ−１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体（例えば、ペンブロリズマブ（キートルーダ（商標））もしくはニボルマブ（オプジーボ（商標）））、またはＣＴＬＡ−４阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、イピリムマブ（ヤーボイ（商標）））、またはＰＤ−Ｌ１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体）による処置）を含んでなる。
【０１０７】
いくつかの実施形態では、対象は腫瘍を有する。
【０１０８】
いくつかの実施形態では、腫瘍は固形腫瘍を含んでなる。
【０１０９】
いくつかの実施形態では、腫瘍は乳癌を含んでなる。
【０１１０】
いくつかの実施形態では、接触は、ｅｘ  ｖｉｖｏで、例えば、癌治療を受けている対象に行われる。接触後、抗腫瘍表現型を有する骨髄性細胞は、対象（例えば、ヒト）、例えば、それを必要とする対象、例えば、癌治療下の対象に投与することができる（例えば、静脈内（ＩＶ））。
【０１１１】
いくつかの実施形態では、癌治療は化学療法を含んでなる。
【０１１２】
いくつかの実施形態では、化学療法はパクリタキセルを含んでなる。
【０１１３】
いくつかの実施形態では、化学療法はカルボプラチンを含んでなる。
【０１１４】
いくつかの実施形態では、癌治療は放射線療法を含んでなる。
【０１１５】
いくつかの実施形態では、癌治療は、免疫療法（例えば、免疫刺激性アゴニスト抗体（例えば、モノクローナル抗体）、例えば、抗ＣＤ１３７、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ４０、または抗ＯＸ４０アゴニスト抗体による処置；あるいはチェックポイント阻害剤、例えば、ＰＤ−１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体（例えば、ペンブロリズマブ（キートルーダ（商標））もしくはニボルマブ（オプジーボ（商標）））、またはＣＴＬＡ−４阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、イピリムマブ（ヤーボイ（商標）））、またはＰＤ−Ｌ１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体）による処置）を含んでなる。
【０１１６】
いくつかの実施形態では、腫瘍は固形腫瘍を含んでなる。
【０１１７】
いくつかの実施形態では、腫瘍は乳癌を含んでなる。
【０１１８】
いくつかの実施形態では、本方法は、場合により、骨髄性細胞において抗腫瘍表現型の誘導を必要とする対象を選択または特定する工程を含んでなり、例えば、対象は腫瘍を有すると診断されている。
【０１１９】
いくつかの態様では、本開示は、
選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、治療上有効量の阻害剤）（例えば、その医薬組成物）を骨髄性細胞と接触させること；および
接触させた骨髄性細胞をＴ細胞療法のＴ細胞と共培養すること
を含んでなる、Ｔ細胞療法の方法を提供する。
【０１２０】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞は単球である。
【０１２１】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞はマクロファージである。
【０１２２】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞は樹状細胞である。
【０１２３】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞療法は癌療法である。
【０１２４】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞療法は、養子Ｔ細胞移植（ＡＣＴ）療法である。
【０１２５】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞療法は、腫瘍浸潤リンパ球療法である。
【０１２６】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞療法は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）Ｔ細胞療法である。
【０１２７】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞療法は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法である。
【０１２８】
いくつかの実施形態では、接触は、ｉｎ  ｖｉｖｏで、例えば、対象（例えば、ヒト）、例えば、それを必要とする対象、例えば、癌治療下の対象で行われる。例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、Ｔ細胞が移植される前、移植中、および／または移植された後に対象（例えば、対象の骨髄性細胞）に投与される。
【０１２９】
いくつかの実施形態では、共培養は、ｉｎ  ｖｉｖｏで、例えば、対象（例えば、ヒト）、例えば、それを必要とする対象、例えば、癌治療下の対象で行われる。例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、Ｔ細胞が移植される前、移植中、および／または移植された後に対象（例えば、対象の骨髄性細胞）に投与される。
【０１３０】
いくつかの実施形態では、対象は癌治療を必要とするものである。
【０１３１】
いくつかの実施形態では、対象は腫瘍を有する。
【０１３２】
いくつかの実施形態では、腫瘍は固形腫瘍を含んでなる。
【０１３３】
いくつかの実施形態では、腫瘍は乳癌を含んでなる。
【０１３４】
いくつかの実施形態では、接触は、ｅｘ  ｖｉｖｏで、例えば、対象（例えば、ヒト）から採取された骨髄性細胞に行われる。いくつかの実施形態では、接触後に、接触させた骨髄性細胞が対象に移植される。いくつかの実施形態では、共培養はｅｘ  ｖｉｖｏで行われる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ｅｘ  ｖｉｖｏで骨髄性細胞と共培養された後に対象に移植される。
【０１３５】
いくつかの態様では、本開示は、Ｔ細胞療法を改善する方法であって、
選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、治療上有効量の阻害剤）（例えば、その医薬組成物）を骨髄性細胞と接触させること；および
接触させた骨髄性細胞をＴ細胞療法のＴ細胞と共培養すること
を含んでなる方法を提供する。例えば、そこで選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤と接触させることは、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の投与の不在下でのＴ細胞療法の質に比べて、例えば、阻害剤の投与前のＴ細胞療法の質に比べて、または例えば、同じ腫瘍タイプを有する（選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は用いない）対象のコホートのＴ細胞療法の平均的な質に比べて、Ｔ細胞療法を改善する。
【０１３６】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞は単球である。
【０１３７】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞はマクロファージである。
【０１３８】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞は樹状細胞である。
【０１３９】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞療法は癌療法である。
【０１４０】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞療法は、養子Ｔ細胞移植（ＡＣＴ）療法である。
【０１４１】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞療法は、腫瘍浸潤リンパ球療法である。
【０１４２】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞療法は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）Ｔ細胞療法である。
【０１４３】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞療法は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法である。
【０１４４】
いくつかの実施形態では、接触は、ｉｎ  ｖｉｖｏで、例えば、対象（例えば、ヒト）、例えば、それを必要とする対象、例えば、癌治療下の対象で行われる。例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、  Ｔ細胞が移植される前、移植中、および／または移植された後に対象（例えば、対象の骨髄性細胞）に投与される。
【０１４５】
いくつかの実施形態では、共培養は、ｉｎ  ｖｉｖｏで、例えば、対象（例えば、ヒト）、例えば、それを必要とする対象、例えば、癌治療下の対象で行われる。例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、Ｔ細胞が移植される前、移植中、および／または移植された後に、対象（例えば、対象の骨髄性細胞）に投与される。
【０１４６】
いくつかの実施形態では、対象は癌治療を必要とするものである。
【０１４７】
いくつかの実施形態では、対象は腫瘍を有する。
【０１４８】
いくつかの実施形態では、腫瘍は固形腫瘍を含んでなる。
【０１４９】
いくつかの実施形態では、腫瘍は乳癌を含んでなる。
【０１５０】
いくつかの実施形態では、接触は、ｅｘ  ｖｉｖｏで、例えば、対象（例えば、ヒト）から採取された骨髄性細胞で行われる。いくつかの実施形態では、接触後に、接触させた骨髄性細胞が対象に移植される。
【０１５１】
いくつかの実施形態では、共培養はｅｘ  ｖｉｖｏで行われる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ｅｘ  ｖｉｖｏで骨髄性細胞と共培養された後に対象に移植される。
【０１５２】
いくつかの態様では、本開示は、
選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、治療上有効量の阻害剤）（例えば、その医薬組成物）を対象（例えば、ヒト）（例えば、それを必要とする対象、例えば、癌、例えば、腫瘍を有する対象）に投与すること；および
癌ワクチンを前記対象に投与すること
を含んでなる、癌ワクチン療法の方法を提供する。
【０１５３】
いくつかの実施形態では、癌ワクチン療法はＧＶＡＸワクチンである。
【０１５４】
いくつかの実施形態では、癌ワクチンはペプチドワクチンである。
【０１５５】
いくつかの実施形態では、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、癌ワクチン療法が対象に投与される前、投与中、および／または投与された後に対象に投与される。
【０１５６】
いくつかの実施形態では、対象は腫瘍を有する。
【０１５７】
いくつかの実施形態では、腫瘍は固形腫瘍を含んでなる。
【０１５８】
いくつかの実施形態では、腫瘍は乳癌を含んでなる。
【０１５９】
いくつかの態様では、本開示は、癌ワクチン療法を改善する方法であって、
選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、治療上有効量の阻害剤）（例えば、その医薬組成物）を対象（例えば、ヒト）（例えば、それを必要とする対象、例えば、癌、例えば、腫瘍を有する対象）投与すること；および
癌ワクチンを前記対象に投与すること
を含んでなる方法を提供する。例えば、そこで選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤を投与することは、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の投与の不在下での癌ワクチン療法の質に比べて、例えば、阻害剤の投与前の癌ワクチン療法の質に比べて、または例えば、同じ腫瘍タイプを有する（選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は用いない）対象のコホートの癌ワクチン療法の平均的な質に比べて癌ワクチン療法を改善する。
【０１６０】
いくつかの実施形態では、癌ワクチン療法はＧＶＡＸワクチンである。
【０１６１】
いくつかの実施形態では、癌ワクチンはペプチドワクチンである。
【０１６２】
いくつかの実施形態では、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、癌ワクチン療法が対象に投与される前、投与中、および／または投与された後に対象に投与される。
【０１６３】
いくつかの実施形態では、対象は腫瘍を有する。
【０１６４】
いくつかの実施形態では、腫瘍は固形腫瘍を含んでなる。
【０１６５】
いくつかの実施形態では、腫瘍は乳癌を含んでなる。
【０１６６】
いくつかの態様では、本開示は、対象（例えば、ヒト）において腫瘍内の骨髄性細胞の数を、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の投与前の腫瘍中に存在する骨髄性細胞の数に比べて（例えば、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％またはそれを超えて）増加させる上で使用するための選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、治療上有効量の阻害剤）（例えば、その医薬組成物）を提供する。
【０１６７】
いくつかの実施形態では、接触後に、骨髄性細胞は、図２０に示される一遺伝子（または複数の遺伝子、例えば、２５％、５０％、７５％、または１００％の遺伝子）の発現に、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤と接触させる前の前記遺伝子（または複数の遺伝子）の発現レベルに比べて増強（例えば、１．６倍以上の増強または例えば、本明細書に記載されるように計算されるδ係数＞１．５を有する）を示す。発現の増強は、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤と接触させた集団（例えば、複数）の骨髄性細胞の平均発現レベルにおける、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤と接触させていない集団（例えば、複数）の骨髄性細胞内の遺伝子の平均発現レベルに比べての、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤と接触させる前の集団（例えば、複数）の骨髄性細胞内の前記遺伝子の平均発現レベルに比べての増強であり得る。いくつかの実施形態では、接触後に、骨髄性細胞は、下記遺伝子：ＩＳＧ２０、ＯＡＳＬ、ＣＸＣＬ１０、ＴＮＦＳＦ１０、ＣＦＢ、ＣＤ６９、ＩＬ２ＲＢ、ＸＣＬ１、ＲＳＡＤ２、ＵＳＰ１８、ＣＭＰＫ２、ＰＴＧＳ２、およびＧＰＲ１８のうち１以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、または総て）の発現に、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤と接触させていない骨髄性細胞内の遺伝子の発現レベルに比べて増強（例えば、１．６倍以上の増強）を示す。いくつかの実施形態では、接触後に、骨髄性細胞は、下記遺伝子：Ｃｄ７、Ｒｓａｄ２、Ｃｄ６９、Ｃｄ８ａ、Ｉｌ２ｒｂ、Ｉｔｇａｅ、Ｃｄ９６、Ｃｔｓｗ、Ｘｃｌ１、Ｉｌ１２ｂ、Ｋｌｒａ５、Ｔｎｆｓｆ１０、Ｌｙ６ｇ５ｂ、Ｇｌｙｃａｍ１、Ｇｚｍｃ、およびＣｄ１６０のうち１以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または総て）の発現に、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤と接触させていない骨髄性細胞内の遺伝子の発現レベルに比べて増強（例えば、本明細書に記載されるように計算される例えばδ係数＞１．５を有する）を示す。
【０１６８】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞は単球である。
【０１６９】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞はマクロファージである。
【０１７０】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞は樹状細胞である。
【０１７１】
いくつかの実施形態では、対象は腫瘍に対する癌治療を受けている。
【０１７２】
いくつかの実施形態では、癌治療は化学療法を含んでなる。
【０１７３】
いくつかの実施形態では、化学療法はパクリタキセルを含んでなる。
【０１７４】
いくつかの実施形態では、化学療法はカルボプラチンを含んでなる。
【０１７５】
いくつかの実施形態では、癌治療は放射線療法を含んでなる。
【０１７６】
いくつかの実施形態では、癌治療は、免疫療法（例えば、免疫刺激性アゴニスト抗体（例えば、モノクローナル抗体）、例えば、抗ＣＤ１３７、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ４０、または抗ＯＸ４０アゴニスト抗体による処置；あるいはチェックポイント阻害剤、例えば、ＰＤ−１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体（例えば、ペンブロリズマブ（キートルーダ（商標））もしくはニボルマブ（オプジーボ（商標）））、またはＣＴＬＡ−４阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、イピリムマブ（ヤーボイ（商標）））、またはＰＤ−Ｌ１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体）による処置）を含んでなる。
【０１７７】
いくつかの実施形態では、腫瘍は固形腫瘍を含んでなる。
【０１７８】
いくつかの実施形態では、腫瘍は乳癌を含んでなる。
【０１７９】
いくつかの実施形態では、本方法は、場合により、腫瘍内の骨髄性細胞の数の増加を必要とする対象、例えば、腫瘍を有すると診断された対象、または癌治療に応答しない腫瘍を有する対象（例えば、対象が癌治療を受けているにもかかわらず、腫瘍が成長し続けている、転移の数が増加している、または腫瘍成長の速度が変化しないか、もしくは増大している）を選択または特定する工程を含んでなる。
【０１８０】
いくつかの態様では、本開示は、対象（例えば、ヒト）において、腫瘍内の貪食骨髄性細胞の数を、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の投与前に腫瘍中に存在する貪食骨髄性細胞の数に比べて（例えば、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％またはそれを超えて）増加させる上で使用するための選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、治療上有効量の阻害剤）（例えば、その医薬組成物）を提供する。貪食骨髄性細胞は、腫瘍内の骨髄性細胞（例えば、マクロファージ）において、例えば、組織学的分析により、例えば、本明細書に記載されるように、アポトーシス小体、例えば、可染小体を検出することにより検出することができる。
【０１８１】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞は単球である。
【０１８２】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞はマクロファージである。
【０１８３】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞は樹状細胞である。
【０１８４】
いくつかの実施形態では、対象は腫瘍に対する癌治療を受けている。
【０１８５】
いくつかの実施形態では、癌治療は化学療法を含んでなる。
【０１８６】
いくつかの実施形態では、化学療法はパクリタキセルを含んでなる。
【０１８７】
いくつかの実施形態では、化学療法はカルボプラチンを含んでなる。
【０１８８】
いくつかの実施形態では、癌治療は放射線療法を含んでなる。
【０１８９】
いくつかの実施形態では、癌治療は、免疫療法（例えば、免疫刺激性アゴニスト抗体（例えば、モノクローナル抗体）、例えば、抗ＣＤ１３７、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ４０、または抗ＯＸ４０アゴニスト抗体による処置；あるいはチェックポイント阻害剤、例えば、ＰＤ−１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体（例えば、ペンブロリズマブ（キートルーダ（商標））もしくはニボルマブ（オプジーボ（商標）））、またはＣＴＬＡ−４阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、イピリムマブ（ヤーボイ（商標）））、またはＰＤ−Ｌ１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体）による処置）を含んでなる。
【０１９０】
いくつかの実施形態では、腫瘍は固形腫瘍を含んでなる。
【０１９１】
いくつかの実施形態では、腫瘍は乳癌を含んでなる。
【０１９２】
いくつかの実施形態では、本方法は、場合により、腫瘍内の貪食骨髄性細胞の数の増加を必要とする対象、例えば、腫瘍を有すると診断された対象、または癌治療に応答しない腫瘍を有する対象（例えば、対象が癌治療を受けているにもかかわらず、腫瘍が成長し続けている、転移の数が増加している、または腫瘍成長の速度が変化しないか、もしくは増大している）を選択または特定する工程を含んでなる。
【０１９３】
いくつかの態様では、本開示は、対象（例えば、ヒト）においてグランザイムＢを発現する腫瘍内のＣＤ８＋Ｔ細胞の数を、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の投与前のグランザイムＢを発現する腫瘍内のＣＤ８＋Ｔ細胞の数に比べて（例えば、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％またはそれを超えて）増加させる上で使用するための選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、治療上有効量の阻害剤）（例えば、その医薬組成物）を提供する。
【０１９４】
いくつかの実施形態では、対象は腫瘍に対する癌治療を受けている。
【０１９５】
いくつかの実施形態では、癌治療は化学療法を含んでなる。
【０１９６】
いくつかの実施形態では、化学療法はパクリタキセルを含んでなる。
【０１９７】
いくつかの実施形態では、化学療法はカルボプラチンを含んでなる。
【０１９８】
いくつかの実施形態では、癌治療は放射線療法を含んでなる。
【０１９９】
いくつかの実施形態では、癌治療は、免疫療法（例えば、免疫刺激性アゴニスト抗体（例えば、モノクローナル抗体）、例えば、抗ＣＤ１３７、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ４０、または抗ＯＸ４０アゴニスト抗体による処置；あるいはチェックポイント阻害剤、例えば、ＰＤ−１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体（例えば、ペンブロリズマブ（キートルーダ（商標））もしくはニボルマブ（オプジーボ（商標）））、またはＣＴＬＡ−４阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、イピリムマブ（ヤーボイ（商標）））、またはＰＤ−Ｌ１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体）による処置）を含んでなる。
【０２００】
いくつかの実施形態では、腫瘍は固形腫瘍を含んでなる。
【０２０１】
いくつかの実施形態では、腫瘍は乳癌を含んでなる。
【０２０２】
いくつかの実施形態では、本方法は、場合により、グランザイムＢを発現する腫瘍内のＣＤ８＋Ｔ細胞の数の増加を必要とする対象、例えば、腫瘍を有すると診断された対象、または癌治療に応答しない腫瘍を有する対象（例えば、対象が癌治療を受けているにもかかわらず、腫瘍が成長し続けている、転移の数が増加している、または腫瘍成長の速度が変化しないか、もしくは増大している）を選択または特定する工程を含んでなる。
【０２０３】
いくつかの態様では、本開示は、対象（例えば、ヒト）において癌治療に対する応答の持続性を、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の投与の不在下での応答の持続性、例えば、同じ癌治療を受けている対象（かつ、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は用いない）のコホートの応答の平均的な持続性に比べて（例えば、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％またはそれを超えて）増大させる（例えば、増進する）上で使用するための選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、治療上有効量の阻害剤）（例えば、その医薬組成物）を提供する。本明細書で使用する場合、応答の持続性は、所与の処置に対して有利な応答（例えば、寛解または腫瘍サイズの退縮または腫瘍成長の減速）がどのくらい続くかを意味する。例えば、対象は一定の期間、癌治療に有利に応答（例えば、腫瘍成長の減速）し得るが、その後、腫瘍は進行、例えば、サイズを増し始め得ることが知られている。癌治療に対する応答の持続性を増大させる（例えば、増進する）薬剤は、対象が癌治療に有利に応答する、例えば、対象に影響を与える期間（例えば、５年または１０年生存率）を延長する。選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、応答の持続性が低下している（例えば、有利な応答が低下している、例えば、腫瘍成長速度が増大している）場合の対象に、または対象が癌治療に応答している間に持続性を増大させるために投与することができる。
【０２０４】
いくつかの実施形態では、癌治療は化学療法を含んでなる。
【０２０５】
いくつかの実施形態では、化学療法はパクリタキセルを含んでなる。
【０２０６】
いくつかの実施形態では、化学療法はカルボプラチンを含んでなる。
【０２０７】
いくつかの実施形態では、癌治療は放射線療法を含んでなる。
【０２０８】
いくつかの実施形態では、癌治療は、免疫療法（例えば、免疫刺激性アゴニスト抗体（例えば、モノクローナル抗体）、例えば、抗ＣＤ１３７、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ４０、または抗ＯＸ４０アゴニスト抗体による処置；あるいはチェックポイント阻害剤、例えば、ＰＤ−１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体（例えば、ペンブロリズマブ（キートルーダ（商標））もしくはニボルマブ（オプジーボ（商標）））、またはＣＴＬＡ−４阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、イピリムマブ（ヤーボイ（商標）））、またはＰＤ−Ｌ１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体）による処置）を含んでなる。
【０２０９】
いくつかの実施形態では、対象は腫瘍を有する。
【０２１０】
いくつかの実施形態では、対象は固形腫瘍を有する。
【０２１１】
いくつかの実施形態では、対象は乳癌を有する。
【０２１２】
いくつかの実施形態では、本方法は、場合により、対象において、例えば、応答の持続性が低下している（例えば、有利な応答が低下している、例えば、腫瘍成長速度が増大している）場合に、癌治療に対する応答の持続性の増大（例えば、増進）を必要とする対象を選択または特定する工程を含んでなる。
【０２１３】
いくつかの態様では、本開示は、対象（例えば、ヒト）において癌治療の有効性を、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の投与の不在下での癌治療の有効性、例えば、同じ癌治療を受けている（かつ、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は用いない）対象のコホートの平均有効性に比べて（例えば、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％またはそれを超えて）増進する上で使用するための選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、治療上有効量の阻害剤）（例えば、その医薬組成物）を提供する。本明細書で使用する場合、有効性は、癌治療が腫瘍にどれだけ強く影響を与えるか（例えば、腫瘍サイズの退縮または転移の数もしくは数の低減）を意味する。選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、癌治療の有効性が低下している（例えば、腫瘍サイズが増大しているまたは転移の数が増加している）場合に、または対象が癌治療に応答している間に有効性を増大させるために対象に投与することができる。
【０２１４】
いくつかの実施形態では、癌治療は化学療法を含んでなる。
【０２１５】
いくつかの実施形態では、化学療法はパクリタキセルを含んでなる。
【０２１６】
いくつかの実施形態では、化学療法はカルボプラチンを含んでなる。
【０２１７】
いくつかの実施形態では、癌治療は放射線療法を含んでなる。
【０２１８】
いくつかの実施形態では、癌治療は、免疫療法（例えば、免疫刺激性アゴニスト抗体（例えば、モノクローナル抗体）、例えば、抗ＣＤ１３７、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ４０、または抗ＯＸ４０アゴニスト抗体による処置；あるいはチェックポイント阻害剤、例えば、ＰＤ−１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体（例えば、ペンブロリズマブ（キートルーダ（商標））もしくはニボルマブ（オプジーボ（商標）））、またはＣＴＬＡ−４阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、イピリムマブ（ヤーボイ（商標）））、またはＰＤ−Ｌ１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体）による処置）を含んでなる。
【０２１９】
いくつかの実施形態では、対象は腫瘍を有する。
【０２２０】
いくつかの実施形態では、対象は固形腫瘍を有する。
【０２２１】
いくつかの実施形態では、対象は乳癌を有する。
【０２２２】
いくつかの実施形態では、本方法は、場合により、対象において、例えば、癌治療の有効性が低下している（例えば、腫瘍サイズが増大しているまたは転移の数が増加している）場合に、癌治療の有効性の増進を必要とする対象を選択または特定する工程を含んでなる。
【０２２３】
いくつかの態様では、本開示は、腫瘍を有する対象（例えば、ヒト）において転移の数を、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の投与の不在下での転移の数、例えば、同じ腫瘍タイプを有する（かつ、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の投与は行わない）対象のコホートの転移の平均数、または選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の投与前の対象における転移の数に比べて（例えば、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％またはそれを超えて）低減する上で使用するための選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、治療上有効量の阻害剤）（例えば、その医薬組成物）を提供する。
【０２２４】
いくつかの実施形態では、対象は腫瘍に対する癌治療を受けている。
【０２２５】
いくつかの実施形態では、癌治療は化学療法を含んでなる。
【０２２６】
いくつかの実施形態では、化学療法はパクリタキセルを含んでなる。
【０２２７】
いくつかの実施形態では、化学療法はカルボプラチンを含んでなる。
【０２２８】
いくつかの実施形態では、癌治療は放射線療法を含んでなる。
【０２２９】
いくつかの実施形態では、癌治療は、免疫療法（例えば、免疫刺激性アゴニスト抗体（例えば、モノクローナル抗体）、例えば、抗ＣＤ１３７、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ４０、または抗ＯＸ４０アゴニスト抗体による処置；あるいはチェックポイント阻害剤、例えば、ＰＤ−１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体（例えば、ペンブロリズマブ（キートルーダ（商標））もしくはニボルマブ（オプジーボ（商標）））、またはＣＴＬＡ−４阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、イピリムマブ（ヤーボイ（商標）））、またはＰＤ−Ｌ１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体）による処置）を含んでなる。
【０２３０】
いくつかの実施形態では、対象は固形腫瘍を有する。
【０２３１】
いくつかの実施形態では、対象は乳癌を有する。
【０２３２】
いくつかの実施形態では、転移は肺転移である。
【０２３３】
いくつかの実施形態では、本方法は、場合により、例えば、対象において転移が検出される場合に、転移の数の低減を必要する対象を選択または特定する工程を含んでなる。
【０２３４】
いくつかの態様では、本開示は、腫瘍を有する対象（例えば、ヒト）において転移のサイズを、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の投与の不在下での転移のサイズ（例えば、平均サイズ）、例えば、同じ腫瘍タイプを有する（かつ、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の投与は行わない）対象のコホートの転移の平均サイズ、または選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の投与前の対象における転移のサイズに比べて（例えば、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％またはそれを超えて）低減する上で使用するための選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、治療上有効量の阻害剤）（例えば、その医薬組成物）を提供する。
【０２３５】
いくつかの実施形態では、対象は腫瘍に対する癌治療を受けている。
【０２３６】
いくつかの実施形態では、癌治療は化学療法を含んでなる。
【０２３７】
いくつかの実施形態では、化学療法はパクリタキセルを含んでなる。
【０２３８】
いくつかの実施形態では、化学療法はカルボプラチンを含んでなる。
【０２３９】
いくつかの実施形態では、癌治療は放射線療法を含んでなる。
【０２４０】
いくつかの実施形態では、癌治療は、免疫療法（例えば、免疫刺激性アゴニスト抗体（例えば、モノクローナル抗体）、例えば、抗ＣＤ１３７、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ４０、または抗ＯＸ４０アゴニスト抗体による処置；あるいはチェックポイント阻害剤、例えば、ＰＤ−１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体（例えば、ペンブロリズマブ（キートルーダ（商標））もしくはニボルマブ（オプジーボ（商標）））、またはＣＴＬＡ−４阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、イピリムマブ（ヤーボイ（商標）））、またはＰＤ−Ｌ１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体）による処置）を含んでなる。
【０２４１】
いくつかの実施形態では、対象は固形腫瘍を有する。
【０２４２】
いくつかの実施形態では、対象は乳癌を有する。
【０２４３】
いくつかの実施形態では、転移は肺転移である。
【０２４４】
いくつかの実施形態では、本方法は、場合により、例えば、対象において転移が検出される場合に、転移のサイズの低減を必要とする対象を選択または特定する工程を含んでなる。
【０２４５】
いくつかの態様では、本開示は、対象（例えば、ヒト）において腫瘍の血管系を、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の投与の不在下での腫瘍の血管系に比べて、例えば、阻害剤の投与前の腫瘍血管系に比べて、または例えば、同じ腫瘍タイプを有する（かつ、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は用いない）対象のコホートの腫瘍の血管系の平均外観に比べて改善する上で使用するための選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、治療上有効量の阻害剤）（例えば、その医薬組成物）を提供する。本明細書で使用する場合、腫瘍血管系の改善は、下記パラメーター：腫瘍内の血流の増加、腫瘍血管漏出の低減、腫瘍血管拡張の低減、腫瘍血管の分岐の低減、または死滅末端腫瘍血管の数の低減のうち１以上により判定することができる。
【０２４６】
いくつかの実施形態では、対象は腫瘍に対する癌治療を受けている。
【０２４７】
いくつかの実施形態では、癌治療は化学療法を含んでなる。
【０２４８】
いくつかの実施形態では、化学療法はパクリタキセルを含んでなる。
【０２４９】
いくつかの実施形態では、化学療法はカルボプラチンを含んでなる。
【０２５０】
いくつかの実施形態では、癌治療は放射線療法を含んでなる。
【０２５１】
いくつかの実施形態では、癌治療は、免疫療法（例えば、免疫刺激性アゴニスト抗体（例えば、モノクローナル抗体）、例えば、抗ＣＤ１３７、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ４０、または抗ＯＸ４０アゴニスト抗体による処置；あるいはチェックポイント阻害剤、例えば、ＰＤ−１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体（例えば、ペンブロリズマブ（キートルーダ（商標））もしくはニボルマブ（オプジーボ（商標）））、またはＣＴＬＡ−４阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、イピリムマブ（ヤーボイ（商標）））、またはＰＤ−Ｌ１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体）による処置）を含んでなる。
【０２５２】
いくつかの実施形態では、対象は固形腫瘍を有する。
【０２５３】
いくつかの実施形態では、対象は乳癌を有する。
【０２５４】
いくつかの実施形態では、転移は肺転移である。
【０２５５】
いくつかの実施形態では、本方法は、場合により、腫瘍の血管系の改善を必要とする対象を選択または特定する工程を含んでなり、対象において、例えば、下記：腫瘍内の血流の増加、腫瘍血管漏出の低減、腫瘍血管拡張の低減、腫瘍血管の分岐の低減、死滅末端腫瘍血管の数の低減のうち１以上が必要とされ（もしくは望まれ）、または腫瘍は、腫瘍内の血流の低下、腫瘍血管漏出の増大、腫瘍血管拡張の増大、腫瘍血管の分岐の増加、死滅末端腫瘍血管の増加を示す。
【０２５６】
いくつかの態様では、本開示は、骨髄性細胞（例えば、単球またはマクロファージまたは樹状細胞）において抗腫瘍表現型を誘導する上で使用するための選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、治療上有効量の阻害剤）（例えば、その医薬組成物）を提供し、例えば、マクロファージの集団においては、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の不在下で抗腫瘍表現型を呈するマクロファージの集団の割合に比べて大きな割合が抗腫瘍表現型を呈する。本明細書で使用する場合、抗腫瘍表現型を有する骨髄性細胞は、骨髄性細胞が、図２０に示される一遺伝子（または複数の遺伝子、例えば、２５％、５０％、７５％、または１００％の遺伝子）の発現に、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤と接触させる前の前記遺伝子（または複数の遺伝子）の発現レベルに比べて増強（例えば、１．６倍以上の増強または例えば、本明細書に記載されるように計算されるδ係数＞１．５を有する）を示すことにより同定される。  いくつかの実施形態では、抗腫瘍表現型を有する骨髄性細胞は、下記遺伝子：ＩＳＧ２０、ＯＡＳＬ、ＣＸＣＬ１０、ＴＮＦＳＦ１０、ＣＦＢ、ＣＤ６９、ＩＬ２ＲＢ、ＸＣＬ１、ＲＳＡＤ２、ＵＳＰ１８、ＣＭＰＫ２、ＰＴＧＳ２、およびＧＰＲ１８のうち１以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、または総て）の発現に、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤と接触させていない骨髄性細胞内の前記遺伝子の発現レベルに比べて増強（例えば、１．６倍以上の増強）を示す。いくつかの実施形態では、接触後に、抗腫瘍表現型を有する骨髄性細胞は、下記遺伝子：Ｃｄ７、Ｒｓａｄ２、Ｃｄ６９、Ｃｄ８ａ、Ｉｌ２ｒｂ、Ｉｔｇａｅ、Ｃｄ９６、Ｃｔｓｗ、Ｘｃｌ１、Ｉｌ１２ｂ、Ｋｌｒａ５、Ｔｎｆｓｆ１０、Ｌｙ６ｇ５ｂ、Ｇｌｙｃａｍ１、Ｇｚｍｃ、およびＣｄ１６０のうち１以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または総て）の発現に、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤と接触させていない骨髄性細胞内の前記遺伝子の発現レベルに比べて増強（例えば、本明細書に記載されるように計算される例えばδ係数＞１．５を有する）を示す。
【０２５７】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞は単球である。
【０２５８】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞はマクロファージである。
【０２５９】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞は樹状細胞である。
【０２６０】
いくつかの実施形態では、接触は、ｅｘ  ｖｉｖｏで、例えば、対象（例えば、ヒト）から採取された骨髄性細胞で行われる。いくつかの実施形態では、接触後に、接触させた骨髄性細胞が対象に移植される。
【０２６１】
いくつかの実施形態では、接触は、ｉｎ  ｖｉｖｏで、例えば、対象（例えば、ヒト）、例えば、それを必要とする対象、例えば、癌治療下の対象で行われる。
【０２６２】
いくつかの実施形態では、癌治療は化学療法を含んでなる。
【０２６３】
いくつかの実施形態では、化学療法はパクリタキセルを含んでなる。
【０２６４】
いくつかの実施形態では、化学療法はカルボプラチンを含んでなる。
【０２６５】
いくつかの実施形態では、癌治療は放射線療法を含んでなる。
【０２６６】
いくつかの実施形態では、癌治療は、免疫療法（例えば、免疫刺激性アゴニスト抗体（例えば、モノクローナル抗体）、例えば、抗ＣＤ１３７、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ４０、または抗ＯＸ４０アゴニスト抗体による処置；あるいはチェックポイント阻害剤、例えば、ＰＤ−１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体（例えば、ペンブロリズマブ（キートルーダ（商標））もしくはニボルマブ（オプジーボ（商標）））、またはＣＴＬＡ−４阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、イピリムマブ（ヤーボイ（商標）））、またはＰＤ−Ｌ１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体）による処置）を含んでなる。
【０２６７】
いくつかの実施形態では、対象は腫瘍を有する。
【０２６８】
いくつかの実施形態では、腫瘍は固形腫瘍を含んでなる。
【０２６９】
いくつかの実施形態では、腫瘍は乳癌を含んでなる。
【０２７０】
いくつかの実施形態では、接触は、ｅｘ  ｖｉｖｏで、例えば、癌治療を受けている対象で行われる。接触後、抗腫瘍表現型を有する骨髄性細胞は、対象（例えば、ヒト）、例えば、それを必要とする対象、例えば、癌治療下の対象に投与することができる（例えば、静脈内（ＩＶ））。
【０２７１】
いくつかの実施形態では、癌治療は化学療法を含んでなる。
【０２７２】
いくつかの実施形態では、化学療法はパクリタキセルを含んでなる。
【０２７３】
いくつかの実施形態では、化学療法はカルボプラチンを含んでなる。
【０２７４】
いくつかの実施形態では、癌治療は放射線療法を含んでなる。
【０２７５】
いくつかの実施形態では、癌治療は、免疫療法（例えば、免疫刺激性アゴニスト抗体（例えば、モノクローナル抗体）、例えば、抗ＣＤ１３７、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ４０、または抗ＯＸ４０アゴニスト抗体による処置；あるいはチェックポイント阻害剤、例えば、ＰＤ−１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体（例えば、ペンブロリズマブ（キートルーダ（商標））もしくはニボルマブ（オプジーボ（商標）））、またはＣＴＬＡ−４阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、イピリムマブ（ヤーボイ（商標）））、またはＰＤ−Ｌ１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体）による処置）を含んでなる。
【０２７６】
いくつかの実施形態では、腫瘍は固形腫瘍を含んでなる。
【０２７７】
いくつかの実施形態では、腫瘍は乳癌を含んでなる。
【０２７８】
いくつかの実施形態では、本方法は、場合により、骨髄性細胞における抗腫瘍表現型の誘導を必要とする対象を選択または特定する工程を含んでなり、例えば、対象は腫瘍を有すると診断されている。
【０２７９】
いくつかの態様では、本開示は、Ｔ細胞療法において使用するための選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、治療上有効量の阻害剤）（例えば、その医薬組成物）を提供し、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、治療上有効量の阻害剤）（例えば、その医薬組成物）は骨髄性細胞と接触され、かつ、接触された骨髄性細胞はＴ細胞療法のＴ細胞と共培養される。
【０２８０】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞は単球である。
【０２８１】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞はマクロファージである。
【０２８２】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞は樹状細胞である。
【０２８３】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞療法は癌療法である。
【０２８４】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞療法は、養子Ｔ細胞移植（ＡＣＴ）療法である。
【０２８５】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞療法は、腫瘍浸潤リンパ球療法である。
【０２８６】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞療法は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）Ｔ細胞療法である。
【０２８７】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞療法は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法である。
【０２８８】
いくつかの実施形態では、接触は、ｉｎ  ｖｉｖｏで、例えば、対象（例えば、ヒト）、例えば、それを必要とする対象、例えば、癌治療下の対象で行われる。例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、Ｔ細胞が移植される前、移植中、および／または移植された後に対象（例えば、対象の骨髄性細胞）に投与される。
【０２８９】
いくつかの実施形態では、共培養は、ｉｎ  ｖｉｖｏで、例えば、対象（例えば、ヒト）、例えば、それを必要とする対象、例えば、癌治療下の対象で行われる。例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、Ｔ細胞が移植される前、移植中、および／または移植された後に対象（例えば、対象の骨髄性細胞）に投与される。
【０２９０】
いくつかの実施形態では、対象は癌治療を必要とする。
【０２９１】
いくつかの実施形態では、対象は腫瘍を有する。
【０２９２】
いくつかの実施形態では、腫瘍は固形腫瘍を含んでなる。
【０２９３】
いくつかの実施形態では、腫瘍は乳癌を含んでなる。
【０２９４】
いくつかの実施形態では、接触は、ｅｘ  ｖｉｖｏで、例えば、対象（例えば、ヒト）から採取された骨髄性細胞で行われる。  いくつかの実施形態では、接触後に、接触させた骨髄性細胞が対象に移植される。いくつかの実施形態では、共培養はｅｘ  ｖｉｖｏで行われる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ｅｘ  ｖｉｖｏで骨髄性細胞と共培養された後に対象に移植される。
【０２９５】
いくつかの態様では、本開示は、Ｔ細胞療法を、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の使用の不在下でのＴ細胞療法の質に比べて、例えば、阻害剤の使用前のＴ細胞療法の質に比べて、または例えば、同じ腫瘍タイプを有する（かつ、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は用いない）対象のコホートのＴ細胞療法の平均的な質に比べて改善する上で使用するための選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、治療上有効量の阻害剤）（例えば、その医薬組成物）を提供し、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、治療上有効量の阻害剤）（例えば、その医薬組成物）は骨髄性細胞と接触され、かつ、接触された骨髄性細胞はＴ細胞と共培養される。
【０２９６】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞は単球である。
【０２９７】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞はマクロファージである。
【０２９８】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞は樹状細胞である。
【０２９９】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞療法は癌療法である。
【０３００】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞療法は、養子Ｔ細胞移植（ＡＣＴ）療法である。
【０３０１】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞療法は、腫瘍浸潤リンパ球療法である。
【０３０２】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞療法は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）Ｔ細胞療法である。
【０３０３】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞療法は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法である。
【０３０４】
いくつかの実施形態では、接触は、ｉｎ  ｖｉｖｏで、例えば、対象（例えば、ヒト）、例えば、それを必要とする対象、例えば、癌治療下の対象で行われる。例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、Ｔ細胞が移植される前、移植中、および／または移植された後に対象（例えば、対象の骨髄性細胞）に投与される。
【０３０５】
いくつかの実施形態では、共培養は、ｉｎ  ｖｉｖｏで、例えば、対象（例えば、ヒト）、例えば、それを必要とする対象、例えば、癌治療下の対象で行われる。例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、Ｔ細胞が移植される前、移植中、および／または移植された後に対象（例えば、対象の骨髄性細胞）に投与される。
【０３０６】
いくつかの実施形態では、対象は癌治療を必要とする。
【０３０７】
いくつかの実施形態では、対象は腫瘍を有する。
【０３０８】
いくつかの実施形態では、腫瘍は固形腫瘍を含んでなる。
【０３０９】
いくつかの実施形態では、腫瘍は乳癌を含んでなる。
【０３１０】
いくつかの実施形態では、接触は、ｅｘ  ｖｉｖｏで、例えば、対象（例えば、ヒト）から採取された骨髄性細胞で行われる。いくつかの実施形態では、接触後に、接触させた骨髄性細胞が対象に移植される。
【０３１１】
いくつかの実施形態では、共培養はｅｘ  ｖｉｖｏで行われる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ｅｘ  ｖｉｖｏで骨髄性細胞と共培養された後に対象に移植される。
【０３１２】
いくつかの態様では、本開示は、癌ワクチン療法において使用するための選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、治療上有効量の阻害剤）（例えば、その医薬組成物）を提供し、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤が対象に投与され、かつ、癌ワクチンが前記対象に投与される。
【０３１３】
いくつかの実施形態では、癌ワクチン療法はＧＶＡＸワクチンである。
【０３１４】
いくつかの実施形態では、癌ワクチンはペプチドワクチンである。
【０３１５】
いくつかの実施形態では、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、癌ワクチン療法が対象に投与される前、投与中、および／または投与された後に対象に投与される。
【０３１６】
いくつかの実施形態では、対象は腫瘍を有する。
【０３１７】
いくつかの実施形態では、腫瘍は固形腫瘍を含んでなる。
【０３１８】
いくつかの実施形態では、腫瘍は乳癌を含んでなる。
【０３１９】
いくつかの態様では、本開示は、癌ワクチン療法を、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の使用の不在下の癌ワクチン療法の質に比べて、例えば、阻害剤の使用前の癌ワクチン療法の質に比べて、または例えば、同じ腫瘍タイプを有する（かつ、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は用いない）対象のコホートの癌ワクチン療法の平均的な質に比べて改善する上で使用するための選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、治療上有効量の阻害剤）（例えば、その医薬組成物）を提供し、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤が対象に投与され、かつ、癌ワクチンが前記対象に投与される。
【０３２０】
いくつかの実施形態では、癌ワクチン療法はＧＶＡＸワクチンである。
【０３２１】
いくつかの実施形態では、癌ワクチンはペプチドワクチンである。
【０３２２】
いくつかの実施形態では、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、癌ワクチン療法が対象に投与される前、投与中、および／または投与された後に対象に投与される。
【０３２３】
いくつかの実施形態では、対象は腫瘍を有する。
【０３２４】
いくつかの実施形態では、腫瘍は固形腫瘍を含んでなる。
【０３２５】
いくつかの実施形態では、腫瘍は乳癌を含んでなる。
【０３２６】
いくつかの態様では、本開示は、対象（例えば、ヒト）において腫瘍内の骨髄性細胞の数を、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の投与前に腫瘍中に存在する骨髄性細胞の数に比べて（例えば、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％またはそれを超えて）増加させるための薬剤の製造のための選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、治療上有効量の阻害剤）（例えば、その医薬組成物）の使用を提供する。
【０３２７】
いくつかの実施形態では、接触後に、骨髄性細胞は、図２０に示される一遺伝子（または複数の遺伝子、例えば、２５％、５０％、７５％、または１００％の遺伝子）の発現に、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤と接触させる前の前記遺伝子（または複数の遺伝子）の発現レベルに比べて増強（例えば、１．６倍以上の増強または例えば、本明細書に記載されるように計算されるδ係数＞１．５を有する）を示す。発現の増強は、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤と接触させた集団（例えば、複数）の骨髄性細胞の平均発現レベルにおける、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤と接触させていない集団（例えば、複数）の骨髄性細胞内の前記遺伝子の平均発現レベルに比べての、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤と接触させる前の集団（例えば、複数）の骨髄性細胞内の前記遺伝子の平均発現レベルに比べての増強であり得る。いくつかの実施形態では、接触後に、骨髄性細胞は、下記遺伝子：ＩＳＧ２０、ＯＡＳＬ、ＣＸＣＬ１０、ＴＮＦＳＦ１０、ＣＦＢ、ＣＤ６９、ＩＬ２ＲＢ、ＸＣＬ１、ＲＳＡＤ２、ＵＳＰ１８、ＣＭＰＫ２、ＰＴＧＳ２、およびＧＰＲ１８のうち１以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、または総て）の発現に、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤と接触させていない骨髄性細胞内の前記遺伝子の発現レベルに比べて増強（例えば、１．６倍以上の増強）を示す。いくつかの実施形態では、接触後に、骨髄性細胞は、下記遺伝子：Ｃｄ７、Ｒｓａｄ２、Ｃｄ６９、Ｃｄ８ａ、Ｉｌ２ｒｂ、Ｉｔｇａｅ、Ｃｄ９６、Ｃｔｓｗ、Ｘｃｌ１、Ｉｌ１２ｂ、Ｋｌｒａ５、Ｔｎｆｓｆ１０、Ｌｙ６ｇ５ｂ、Ｇｌｙｃａｍ１、Ｇｚｍｃ、およびＣｄ１６０のうち１以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または総て）の発現に、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤と接触させていない骨髄性細胞内の前記遺伝子の発現レベルに比べて増強（例えば、本明細書に記載されるように計算される例えばδ係数＞１．５を有する）を示す。
【０３２８】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞は単球である。
【０３２９】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞はマクロファージである。
【０３３０】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞は樹状細胞である。
【０３３１】
いくつかの実施形態では、対象は腫瘍に対する癌治療を受けている。
【０３３２】
いくつかの実施形態では、癌治療は化学療法を含んでなる。
【０３３３】
いくつかの実施形態では、化学療法はパクリタキセルを含んでなる。
【０３３４】
いくつかの実施形態では、化学療法はカルボプラチンを含んでなる。
【０３３５】
いくつかの実施形態では、癌治療は放射線療法を含んでなる。
【０３３６】
いくつかの実施形態では、癌治療は、免疫療法（例えば、免疫刺激性アゴニスト抗体（例えば、モノクローナル抗体）、例えば、抗ＣＤ１３７、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ４０、または抗ＯＸ４０アゴニスト抗体による処置；あるいはチェックポイント阻害剤、例えば、ＰＤ−１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体（例えば、ペンブロリズマブ（キートルーダ（商標））もしくはニボルマブ（オプジーボ（商標）））、またはＣＴＬＡ−４阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、イピリムマブ（ヤーボイ（商標）））、またはＰＤ−Ｌ１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体）による処置）を含んでなる。
【０３３７】
いくつかの実施形態では、腫瘍は固形腫瘍を含んでなる。
【０３３８】
いくつかの実施形態では、腫瘍は乳癌を含んでなる。
【０３３９】
いくつかの実施形態では、本方法は、場合により、腫瘍内の骨髄性細胞の数の増加を必要とする対象、例えば、腫瘍を有すると診断された対象、または癌治療に応答しない腫瘍を有する対象（例えば、対象が癌治療を受けているにもかかわらず、腫瘍が成長し続けている、転移の数が増加している、または腫瘍成長の速度が変化しないか、もしくは増大している）を選択または特定する工程を含んでなる。
【０３４０】
いくつかの態様では、本開示は、対象（例えば、ヒト）において腫瘍内の貪食骨髄性細胞の数を、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の投与前の腫瘍中に存在する貪食骨髄性細胞の数に比べて（例えば、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％またはそれを超えて）増加させるための薬剤の製造のための選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、治療上有効量の阻害剤）（例えば、その医薬組成物）の使用を提供する。貪食骨髄性細胞は、腫瘍内の骨髄性細胞（例えば、マクロファージ）において、例えば、組織学的分析により、例えば、本明細書に記載されるように、アポトーシス小体、例えば、可染小体を検出することにより検出することができる。
【０３４１】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞は単球である。
【０３４２】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞はマクロファージである。
【０３４３】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞は樹状細胞である。
【０３４４】
いくつかの実施形態では、対象は腫瘍に対する癌治療を受けている。
【０３４５】
いくつかの実施形態では、癌治療は化学療法を含んでなる。
【０３４６】
いくつかの実施形態では、化学療法はパクリタキセルを含んでなる。
【０３４７】
いくつかの実施形態では、化学療法はカルボプラチンを含んでなる。
【０３４８】
いくつかの実施形態では、癌治療は放射線療法を含んでなる。
【０３４９】
いくつかの実施形態では、癌治療は、免疫療法（例えば、免疫刺激性アゴニスト抗体（例えば、モノクローナル抗体）、例えば、抗ＣＤ１３７、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ４０、または抗ＯＸ４０アゴニスト抗体による処置；あるいはチェックポイント阻害剤、例えば、ＰＤ−１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体（例えば、ペンブロリズマブ（キートルーダ（商標））もしくはニボルマブ（オプジーボ（商標）））、またはＣＴＬＡ−４阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、イピリムマブ（ヤーボイ（商標）））、またはＰＤ−Ｌ１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体）による処置）を含んでなる。
【０３５０】
いくつかの実施形態では、腫瘍は固形腫瘍を含んでなる。
【０３５１】
いくつかの実施形態では、腫瘍は乳癌を含んでなる。
【０３５２】
いくつかの実施形態では、本方法は、場合により、腫瘍内の貪食骨髄性細胞の数の増加を必要とする対象、例えば、腫瘍を有すると診断された対象、または癌治療に応答しない腫瘍を有する対象（例えば、対象が癌治療を受けているにもかかわらず、腫瘍が成長し続けている、転移の数が増加している、または腫瘍成長の速度が変化しないか、もしくは増大している）を選択または特定する工程を含んでなる。
【０３５３】
いくつかの態様では、本開示は、対象（例えば、ヒト）においてグランザイムＢを発現する腫瘍内のＣＤ８＋Ｔ細胞の数を、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の投与前のグランザイムＢを発現する腫瘍内のＣＤ８＋Ｔ細胞の数に比べて（例えば、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％またはそれを超えて）増加させるための薬剤の製造のための選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、治療上有効量の阻害剤）（例えば、その医薬組成物）の使用を提供する。
【０３５４】
いくつかの実施形態では、対象は腫瘍に対する癌治療を受けている。
【０３５５】
いくつかの実施形態では、癌治療は化学療法を含んでなる。
【０３５６】
いくつかの実施形態では、化学療法はパクリタキセルを含んでなる。
【０３５７】
いくつかの実施形態では、化学療法はカルボプラチンを含んでなる。
【０３５８】
いくつかの実施形態では、癌治療は放射線療法を含んでなる。
【０３５９】
いくつかの実施形態では、癌治療は、免疫療法（例えば、免疫刺激性アゴニスト抗体（例えば、モノクローナル抗体）、例えば、抗ＣＤ１３７、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ４０、または抗ＯＸ４０アゴニスト抗体による処置；あるいはチェックポイント阻害剤、例えば、ＰＤ−１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体（例えば、ペンブロリズマブ（キートルーダ（商標））もしくはニボルマブ（オプジーボ（商標）））、またはＣＴＬＡ−４阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、イピリムマブ（ヤーボイ（商標）））、またはＰＤ−Ｌ１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体）による処置）を含んでなる。
【０３６０】
いくつかの実施形態では、腫瘍は固形腫瘍を含んでなる。
【０３６１】
いくつかの実施形態では、腫瘍は乳癌を含んでなる。
【０３６２】
いくつかの実施形態では、本方法は、場合により、グランザイムＢを発現する腫瘍内のＣＤ８＋Ｔ細胞の数の増大を必要とする対象、例えば、腫瘍を有すると診断された対象、または癌治療に応答しない腫瘍を有する対象（例えば、対象が癌治療を受けているにもかかわらず、腫瘍が成長し続けている、転移の数が増加している、または腫瘍成長の速度が変化しないか、もしくは増大している）を選択または特定する工程を含んでなる。
【０３６３】
いくつかの態様では、本開示は、対象（例えば、ヒト）において癌治療に対する応答の持続性を、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の投与の不在下での応答の持続性に比べて、例えば、同じ癌治療を受けている対象（かつ、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は用いない）のコホートの応答の平均持続性に比べて（例えば、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％またはそれを超えて）増大させる（例えば、増進する）ための薬剤の製造のための選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、治療上有効量の阻害剤）（例えば、その医薬組成物）の使用を提供する。本明細書で使用する場合、応答の持続性は、所与の処置に対して有利な応答（例えば、寛解または腫瘍サイズの退縮または腫瘍成長の減速）がどのくらい続くかを意味する。例えば、対象は一定の期間、癌治療に有利に応答（例えば、腫瘍成長の減速）し得るが、その後、腫瘍は進行、例えば、サイズを増し始め得ることが知られている。癌治療に対する応答の持続性を増大させる（例えば、増進する）薬剤は、対象が癌治療に有利に応答する、例えば、対象に影響を与える期間（例えば、５年または１０年生存率）を延長する。選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、応答の持続性が低下している（例えば、有利な応答が低下している、例えば、腫瘍成長速度が増大している）場合の対象に、または対象が癌治療に応答している間に持続性を増大させるために投与することができる。
【０３６４】
いくつかの実施形態では、癌治療は化学療法を含んでなる。
【０３６５】
いくつかの実施形態では、化学療法はパクリタキセルを含んでなる。
【０３６６】
いくつかの実施形態では、化学療法はカルボプラチンを含んでなる。
【０３６７】
いくつかの実施形態では、癌治療は放射線療法を含んでなる。
【０３６８】
いくつかの実施形態では、癌治療は、免疫療法（例えば、免疫刺激性アゴニスト抗体（例えば、モノクローナル抗体）、例えば、抗ＣＤ１３７、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ４０、または抗ＯＸ４０アゴニスト抗体による処置；あるいはチェックポイント阻害剤、例えば、ＰＤ−１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体（例えば、ペンブロリズマブ（キートルーダ（商標））もしくはニボルマブ（オプジーボ（商標）））、またはＣＴＬＡ−４阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、イピリムマブ（ヤーボイ（商標）））、またはＰＤ−Ｌ１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体）による処置）を含んでなる。
【０３６９】
いくつかの実施形態では、対象は腫瘍を有する。
【０３７０】
いくつかの実施形態では、対象は固形腫瘍を有する。
【０３７１】
いくつかの実施形態では、対象は乳癌を有する。
【０３７２】
いくつかの実施形態では、本方法は、場合により、対象において、例えば、応答の持続性が低下している（例えば、有利な応答が低下している、例えば、腫瘍成長速度が増大している）場合に、癌治療に対する応答の持続性の改善（例えば、増進）を必要とする対象を選択または特定する工程を含んでなる。
【０３７３】
いくつかの態様では、本開示は、対象（例えば、ヒト）において癌治療の有効性を、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の投与の不在下での癌治療の有効性、例えば、同じ癌治療を受けている（かつ、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は用いない）対象のコホートの平均有効性に比べて（例えば、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％またはそれを超えて）増進するための薬剤の製造のための選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、治療上有効量の阻害剤）（例えば、その医薬組成物）の使用を提供する。本明細書で使用する場合、有効性は、癌治療が腫瘍（例えば、腫瘍サイズの退縮または転移の数もしくは数の低減）にどのくらい強く影響を与えるかを意味する。選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、癌治療の有効性が低下している（例えば、腫瘍サイズが増大している、もしくは転移の数が増加している）場合に、または対象が癌治療に応答している間に有効性を増大させるために対象に投与することができる。
【０３７４】
いくつかの実施形態では、癌治療は化学療法を含んでなる。
【０３７５】
いくつかの実施形態では、化学療法はパクリタキセルを含んでなる。
【０３７６】
いくつかの実施形態では、化学療法はカルボプラチンを含んでなる。
【０３７７】
いくつかの実施形態では、癌治療は放射線療法を含んでなる。
【０３７８】
いくつかの実施形態では、癌治療は、免疫療法（例えば、免疫刺激性アゴニスト抗体（例えば、モノクローナル抗体）、例えば、抗ＣＤ１３７、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ４０、または抗ＯＸ４０アゴニスト抗体による処置；あるいはチェックポイント阻害剤、例えば、ＰＤ−１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体（例えば、ペンブロリズマブ（キートルーダ（商標））もしくはニボルマブ（オプジーボ（商標）））、またはＣＴＬＡ−４阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、イピリムマブ（ヤーボイ（商標）））、またはＰＤ−Ｌ１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体）による処置）を含んでなる。
【０３７９】
いくつかの実施形態では、対象は腫瘍を有する。
【０３８０】
いくつかの実施形態では、対象は固形腫瘍を有する。
【０３８１】
いくつかの実施形態では、対象は乳癌を有する。
【０３８２】
いくつかの実施形態では、本方法は、場合により、対象において癌治療、例えば、癌治療の有効性が低下している（例えば、腫瘍サイズが増大しているまたは転移の数が増加している）場合に有効性の増進を必要とする対象を選択または特定する工程を含んでなる。
【０３８３】
いくつかの態様では、本開示は、腫瘍を有する対象（例えば、ヒト）において転移の数を、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の投与の不在下での転移の数、例えば、同じ腫瘍タイプを有する（かつ、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の投与は行わない）対象のコホートの転移の平均数、または選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の投与前の対象における転移の数に比べて、（例えば、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％またはそれを超えて）低減するための薬剤の製造のための選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、治療上有効量の阻害剤）（例えば、その医薬組成物）の使用を提供する。
【０３８４】
いくつかの実施形態では、対象は腫瘍に対する癌治療を受けている。
【０３８５】
いくつかの実施形態では、癌治療は化学療法を含んでなる。
【０３８６】
いくつかの実施形態では、化学療法はパクリタキセルを含んでなる。
【０３８７】
いくつかの実施形態では、化学療法はカルボプラチンを含んでなる。
【０３８８】
いくつかの実施形態では、癌治療は放射線療法を含んでなる。
【０３８９】
いくつかの実施形態では、癌治療は、免疫療法（例えば、免疫刺激性アゴニスト抗体（例えば、モノクローナル抗体）、例えば、抗ＣＤ１３７、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ４０、または抗ＯＸ４０アゴニスト抗体による処置；あるいはチェックポイント阻害剤、例えば、ＰＤ−１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体（例えば、ペンブロリズマブ（キートルーダ（商標））もしくはニボルマブ（オプジーボ（商標）））、またはＣＴＬＡ−４阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、イピリムマブ（ヤーボイ（商標）））、またはＰＤ−Ｌ１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体）による処置）を含んでなる。
【０３９０】
いくつかの実施形態では、対象は固形腫瘍を有する。
【０３９１】
いくつかの実施形態では、対象は乳癌を有する。
【０３９２】
いくつかの実施形態では、転移は肺転移である。
【０３９３】
いくつかの実施形態では、前記方法は、場合により、例えば、対象において転移が検出される場合に、転移の数の低減を必要する対象を選択または特定する工程を含んでなる。
【０３９４】
いくつかの態様では、本開示は、腫瘍を有する対象（例えば、ヒト）において転移のサイズを、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の投与の不在下での転移のサイズ（例えば、平均サイズ）、例えば、同じ腫瘍タイプを有する（かつ、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の投与は行わない）対象のコホートの転移の平均サイズ、または選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の投与前の対象における転移のサイズに比べて（例えば、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％またはそれを超えて）低減するための薬剤の製造のための選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、治療上有効量の阻害剤）（例えば、その医薬組成物）の使用を提供する。
【０３９５】
いくつかの実施形態では、対象は腫瘍に対する癌治療を受けている。
【０３９６】
いくつかの実施形態では、癌治療は化学療法を含んでなる。
【０３９７】
いくつかの実施形態では、化学療法はパクリタキセルを含んでなる。
【０３９８】
いくつかの実施形態では、化学療法はカルボプラチンを含んでなる。
【０３９９】
いくつかの実施形態では、癌治療は放射線療法を含んでなる。
【０４００】
いくつかの実施形態では、癌治療は、免疫療法（例えば、免疫刺激性アゴニスト抗体（例えば、モノクローナル抗体）、例えば、抗ＣＤ１３７、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ４０、または抗ＯＸ４０アゴニスト抗体による処置；あるいはチェックポイント阻害剤、例えば、ＰＤ−１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体（例えば、ペンブロリズマブ（キートルーダ（商標））もしくはニボルマブ（オプジーボ（商標）））、またはＣＴＬＡ−４阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、イピリムマブ（ヤーボイ（商標）））、またはＰＤ−Ｌ１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体）による処置）を含んでなる。
【０４０１】
いくつかの実施形態では、対象は固形腫瘍を有する。
【０４０２】
いくつかの実施形態では、対象は乳癌を有する。
【０４０３】
いくつかの実施形態では、転移は肺転移である。
【０４０４】
いくつかの実施形態では、本方法は、場合により、例えば、対象において転移が検出される場合に、転移のサイズの低減を必要とする対象を選択または特定する工程を含んでなる。
【０４０５】
いくつかの態様では、本開示は、対象（例えば、ヒト）において腫瘍の血管系を、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の投与の不在下での腫瘍の血管系に比べて、例えば、阻害剤の投与前の腫瘍血管系に比べて、または例えば、同じ腫瘍タイプを有する（かつ、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は用いない）対象のコホートの腫瘍の血管系の平均外観に比べて改善するための薬剤の製造のための選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、治療上有効量の阻害剤）（例えば、その医薬組成物）の使用を提供する。本明細書で使用する場合、腫瘍血管系の改善は、下記パラメーター：腫瘍内の血流の増加、腫瘍血管漏出の低減、腫瘍血管拡張の低減、腫瘍血管の分岐の低減、または死滅末端腫瘍血管の数の低減のうち１以上により判定することができる。
【０４０６】
いくつかの実施形態では、対象は腫瘍に対する癌治療を受けている。
【０４０７】
いくつかの実施形態では、癌治療は化学療法を含んでなる。
【０４０８】
いくつかの実施形態では、化学療法はパクリタキセルを含んでなる。
【０４０９】
いくつかの実施形態では、化学療法はカルボプラチンを含んでなる。
【０４１０】
いくつかの実施形態では、癌治療は放射線療法を含んでなる。
【０４１１】
いくつかの実施形態では、癌治療は、免疫療法（例えば、免疫刺激性アゴニスト抗体（例えば、モノクローナル抗体）、例えば、抗ＣＤ１３７、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ４０、または抗ＯＸ４０アゴニスト抗体による処置；あるいはチェックポイント阻害剤、例えば、ＰＤ−１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体（例えば、ペンブロリズマブ（キートルーダ（商標））もしくはニボルマブ（オプジーボ（商標）））、またはＣＴＬＡ−４阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、イピリムマブ（ヤーボイ（商標）））、またはＰＤ−Ｌ１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体）による処置）を含んでなる。
【０４１２】
いくつかの実施形態では、対象は固形腫瘍を有する。
【０４１３】
いくつかの実施形態では、対象は乳癌を有する。
【０４１４】
いくつかの実施形態では、転移は肺転移である。
【０４１５】
いくつかの実施形態では、本方法は、場合により、腫瘍の血管系の改善を必要とする対象を選択または特定する工程を含んでなり、例えば、対象において下記：腫瘍内の血流の増加、腫瘍血管漏出の低減、腫瘍血管拡張の低減、腫瘍血管の分岐の低減、死滅末端腫瘍血管の数の低減のうち１以上が必要とされ（もしくは望まれ）、または腫瘍は、腫瘍内の血流の低下、腫瘍血管漏出の増大、腫瘍血管拡張の増大、腫瘍血管の分岐の増加、または死滅末端腫瘍血管の増加を示す。
【０４１６】
いくつかの態様では、本開示は、骨髄性細胞（例えば、単球またはマクロファージまたは樹状細胞）において抗腫瘍表現型を誘導するための薬剤の製造のための選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、治療上有効量の阻害剤）（例えば、その医薬組成物）の使用を提供し、例えば、マクロファージの集団においては、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の不在下で抗腫瘍表現型を呈するマクロファージの集団の割合に比べて大きな割合が抗腫瘍表現型を呈する。本明細書で使用する場合、抗腫瘍表現型を有する骨髄性細胞は、骨髄性細胞が、図２０に示される一遺伝子（または複数の遺伝子、例えば、２５％、５０％、７５％、または１００％の遺伝子）の発現に、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤と接触させる前の前記遺伝子（または複数の遺伝子）の発現レベルに比べて増強（例えば、１．６倍以上の増強または例えば、本明細書に記載されるように計算されるδ係数＞１．５を有する）を示すことにより同定される。いくつかの実施形態では、抗腫瘍表現型を有する骨髄性細胞は、下記遺伝子：ＩＳＧ２０、ＯＡＳＬ、ＣＸＣＬ１０、ＴＮＦＳＦ１０、ＣＦＢ、ＣＤ６９、ＩＬ２ＲＢ、ＸＣＬ１、ＲＳＡＤ２、ＵＳＰ１８、ＣＭＰＫ２、ＰＴＧＳ２、およびＧＰＲ１８のうち１以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、または総て）の発現に、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤と接触させていない骨髄性細胞内の前記遺伝子の発現レベルに比べて増強（例えば、１．６倍以上の増強）を示す。いくつかの実施形態では、接触後に、抗腫瘍表現型を有する骨髄性細胞は、下記遺伝子：Ｃｄ７、Ｒｓａｄ２、Ｃｄ６９、Ｃｄ８ａ、Ｉｌ２ｒｂ、Ｉｔｇａｅ、Ｃｄ９６、Ｃｔｓｗ、Ｘｃｌ１、Ｉｌ１２ｂ、Ｋｌｒａ５、Ｔｎｆｓｆ１０、Ｌｙ６ｇ５ｂ、Ｇｌｙｃａｍ１、Ｇｚｍｃ、およびＣｄ１６０のうち１以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または総て）の発現に、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤と接触させていない骨髄性細胞内の前記遺伝子の発現レベルに比べて増強（例えば、本明細書に記載されるように計算される例えばδ係数＞１．５を有する）を示す。
【０４１７】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞は単球である。
【０４１８】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞はマクロファージである。
【０４１９】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞は樹状細胞である。
【０４２０】
いくつかの実施形態では、接触は、ｅｘ  ｖｉｖｏで、例えば、対象（例えば、ヒト）から採取された骨髄性細胞で行われる。いくつかの実施形態では、接触後に、接触させた骨髄性細胞が対象に移植される。
【０４２１】
いくつかの実施形態では、接触は、ｉｎ  ｖｉｖｏで、例えば、対象（例えば、ヒト）、例えば、それを必要とする対象、例えば、癌治療下の対象で行われる。
【０４２２】
いくつかの実施形態では、癌治療は化学療法を含んでなる。
【０４２３】
いくつかの実施形態では、化学療法はパクリタキセルを含んでなる。
【０４２４】
いくつかの実施形態では、化学療法はカルボプラチンを含んでなる。
【０４２５】
いくつかの実施形態では、癌治療は放射線療法を含んでなる。
【０４２６】
いくつかの実施形態では、癌治療は、免疫療法（例えば、免疫刺激性アゴニスト抗体（例えば、モノクローナル抗体）、例えば、抗ＣＤ１３７、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ４０、または抗ＯＸ４０アゴニスト抗体による処置；あるいはチェックポイント阻害剤、例えば、ＰＤ−１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体（例えば、ペンブロリズマブ（キートルーダ（商標））もしくはニボルマブ（オプジーボ（商標）））、またはＣＴＬＡ−４阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、イピリムマブ（ヤーボイ（商標）））、またはＰＤ−Ｌ１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体）による処置）を含んでなる。
【０４２７】
いくつかの実施形態では、対象は腫瘍を有する。
【０４２８】
いくつかの実施形態では、腫瘍は固形腫瘍を含んでなる。
【０４２９】
いくつかの実施形態では、腫瘍は乳癌を含んでなる。
【０４３０】
いくつかの実施形態では、接触は、ｅｘ  ｖｉｖｏで、例えば、癌治療を受けている対象で行われる。接触後、抗腫瘍表現型を有する骨髄性細胞は、対象（例えば、ヒト）、例えば、それを必要とする対象、例えば、癌治療下の対象に投与することができる（例えば、静脈内（ＩＶ））。
【０４３１】
いくつかの実施形態では、癌治療は化学療法を含んでなる。
【０４３２】
いくつかの実施形態では、化学療法はパクリタキセルを含んでなる。
【０４３３】
いくつかの実施形態では、化学療法はカルボプラチンを含んでなる。
【０４３４】
いくつかの実施形態では、癌治療は放射線療法を含んでなる。
【０４３５】
いくつかの実施形態では、癌治療は、免疫療法（例えば、免疫刺激性アゴニスト抗体（例えば、モノクローナル抗体）、例えば、抗ＣＤ１３７、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ４０、または抗ＯＸ４０アゴニスト抗体による処置；あるいはチェックポイント阻害剤、例えば、ＰＤ−１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体（例えば、ペンブロリズマブ（キートルーダ（商標））もしくはニボルマブ（オプジーボ（商標）））、またはＣＴＬＡ−４阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、イピリムマブ（ヤーボイ（商標）））、またはＰＤ−Ｌ１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体）による処置）を含んでなる。
【０４３６】
いくつかの実施形態では、腫瘍は固形腫瘍を含んでなる。
【０４３７】
いくつかの実施形態では、腫瘍は乳癌を含んでなる。
【０４３８】
いくつかの実施形態では、本方法は、場合により、骨髄性細胞における抗腫瘍表現型の誘導を必要とする対象を選択または特定する工程を含んでなり、例えば、対象は腫瘍を有すると診断されている。
【０４３９】
いくつかの態様では、本開示は、Ｔ細胞療法のための薬剤の製造のための選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、治療上有効量の阻害剤）（例えば、その医薬組成物）の使用を提供し、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、治療上有効量の阻害剤）（例えば、その医薬組成物）が骨髄性細胞に接触され、かつ、接触された骨髄性細胞がＴ細胞療法のＴ細胞と共培養される。
【０４４０】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞は単球である。
【０４４１】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞はマクロファージである。
【０４４２】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞は樹状細胞である。
【０４４３】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞療法は癌療法である。
【０４４４】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞療法は、養子Ｔ細胞移植（ＡＣＴ）療法である。
【０４４５】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞療法は、腫瘍浸潤リンパ球療法である。
【０４４６】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞療法は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）Ｔ細胞療法である。
【０４４７】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞療法は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法である。
【０４４８】
いくつかの実施形態では、接触は、ｉｎ  ｖｉｖｏで、例えば、対象（例えば、ヒト）、例えば、それを必要とする対象、例えば、癌治療下の対象で行われる。例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、Ｔ細胞が移植される前、移植中、および／または移植された後に対象（例えば、対象の骨髄性細胞）に投与される。
【０４４９】
いくつかの実施形態では、共培養は、ｉｎ  ｖｉｖｏで、例えば、対象（例えば、ヒト）、例えば、それを必要とする対象、例えば、癌治療下の対象で行われる。例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、Ｔ細胞が移植される前、移植中、および／または移植された後に対象（例えば、対象の骨髄性細胞）に投与される。
【０４５０】
いくつかの実施形態では、対象は癌治療を必要とするものである。
【０４５１】
いくつかの実施形態では、対象は腫瘍を有する。
【０４５２】
いくつかの実施形態では、腫瘍は固形腫瘍を含んでなる。
【０４５３】
いくつかの実施形態では、腫瘍は乳癌を含んでなる。
【０４５４】
いくつかの実施形態では、接触は、ｅｘ  ｖｉｖｏで、例えば、対象（例えば、ヒト）から採取された骨髄性細胞で行われる。いくつかの実施形態では、接触後に、接触させた骨髄性細胞が対象に移植される。
【０４５５】
いくつかの実施形態では、共培養はｅｘ  ｖｉｖｏで行われる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ｅｘ  ｖｉｖｏで骨髄性細胞と共培養された後に対象に移植される。
【０４５６】
いくつかの態様では、本開示は、Ｔ細胞療法を、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の使用の不在下でのＴ細胞療法の質に比べて、例えば、阻害剤の使用前のＴ細胞療法の質に比べて、または例えば、同じ腫瘍タイプを有する（かつ、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は用いない）対象のコホートのＴ細胞療法の平均的な質に比べて改善するための薬剤の製造のための選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、治療上有効量の阻害剤）（例えば、その医薬組成物）の使用を提供し、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、治療上有効量の阻害剤）（例えば、その医薬組成物）が骨髄性細胞に接触され、かつ、接触された骨髄性細胞がＴ細胞療法のＴ細胞と共培養される。
【０４５７】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞は単球である。
【０４５８】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞はマクロファージである。
【０４５９】
いくつかの実施形態では、骨髄性細胞は樹状細胞である。
【０４６０】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞療法は癌療法である。
【０４６１】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞療法は、養子Ｔ細胞移植（ＡＣＴ）療法である。
【０４６２】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞療法は、腫瘍浸潤リンパ球療法である。
【０４６３】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞療法は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）Ｔ細胞療法である。
【０４６４】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞療法は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法である。
【０４６５】
いくつかの実施形態では、接触は、ｉｎ  ｖｉｖｏで、例えば、対象（例えば、ヒト）、例えば、それを必要とする対象、例えば、癌治療下の対象で行われる。例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、Ｔ細胞が移植される前、移植中、および／または移植された後に対象（例えば、対象の骨髄性細胞）に投与される。
【０４６６】
いくつかの実施形態では、共培養は、ｉｎ  ｖｉｖｏで、例えば、対象（例えば、ヒト）、例えば、それを必要とする対象、例えば、癌治療下の対象で行われる。例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、Ｔ細胞が移植される前、移植中、および／または移植された後に対象（例えば、対象の骨髄性細胞）に投与される。
【０４６７】
いくつかの実施形態では、対象は癌治療を必要とするものである。
【０４６８】
いくつかの実施形態では、対象は腫瘍を有する。
【０４６９】
いくつかの実施形態では、腫瘍は固形腫瘍を含んでなる。
【０４７０】
いくつかの実施形態では、腫瘍は乳癌を含んでなる。
【０４７１】
いくつかの実施形態では、接触は、ｅｘ  ｖｉｖｏで、例えば、対象（例えば、ヒト）から採取された骨髄性細胞で行われる。いくつかの実施形態では、接触後に、接触させた骨髄性細胞が対象に移植される。いくつかの実施形態では、共培養はｅｘ  ｖｉｖｏで行われる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ｅｘ  ｖｉｖｏで骨髄性細胞と共培養された後に対象に移植される。
【０４７２】
いくつかの態様では、本開示は、癌ワクチン療法のための薬剤の製造のための選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、治療上有効量の阻害剤）（例えば、その医薬組成物）の使用を提供し、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤が対象に投与され、かつ、癌ワクチンが前記対象に投与される。
【０４７３】
いくつかの実施形態では、癌ワクチン療法はＧＶＡＸワクチンである。
【０４７４】
いくつかの実施形態では、癌ワクチンはペプチドワクチンである。
【０４７５】
いくつかの実施形態では、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、癌ワクチン療法が対象に投与される前、投与中、および／または投与された後に対象に投与される。
【０４７６】
いくつかの実施形態では、対象は腫瘍を有する。
【０４７７】
いくつかの実施形態では、腫瘍は固形腫瘍を含んでなる。
【０４７８】
いくつかの実施形態では、腫瘍は乳癌を含んでなる。
【０４７９】
いくつかの態様では、本開示は、癌ワクチン療法を、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の使用の不在下での癌ワクチン療法の質に比べて、例えば、阻害剤の使用前の癌ワクチン療法の質に比べて、または例えば、同じ腫瘍タイプを有する（かつ、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は用いない）対象のコホートの癌ワクチン療法の平均的な質に比べ手改善するための薬剤の製造のための選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、治療上有効量の阻害剤）（例えば、その医薬組成物）の使用を提供し、例えば、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤が対象に投与され、かつ、癌ワクチンが前記対象に投与される。
【０４８０】
いくつかの実施形態では、癌ワクチン療法はＧＶＡＸワクチンである。
【０４８１】
いくつかの実施形態では、癌ワクチンはペプチドワクチンである。
【０４８２】
いくつかの実施形態では、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、癌ワクチン療法が対象に投与される前、投与中、および／または投与された後に対象に投与される。
【０４８３】
いくつかの実施形態では、対象は腫瘍を有する。
【０４８４】
いくつかの実施形態では、腫瘍は固形腫瘍を含んでなる。
【０４８５】
いくつかの実施形態では、腫瘍は乳癌を含んでなる。
【図面の簡単な説明】
【０４８６】
【図１】ＴＭＰ１９５は、乳房腫瘍においてマクロファージを調節する。マウスを、示されたように５日間処置した。ａ、ＦＡＣＳダブルソート腫瘍浸潤白血球から得られた遺伝子発現データセットのボルカノプロット。総てのプローブセットを示し、差次的に発現される（δ係数＞１．５）プローブセットに適用される強調色は、各プロットの横のヒートマップに挙げられている。ｂ〜ｃ、腫瘍は、単球およびマクロファージの浸潤を評価するための、ｂでは骨髄性マーカーＣＤ１１ｂ、ｃでは成熟マクロファージマーカーＭａｃ−２に対する免疫組織化学（ＩＨＣ）に関して得られたものである。各群５〜１０個体のマウスを用いた２回の独立した実験からの代表的な定量および画像を示す。スケールバーは１００μｍである。ｄ〜ｈ、腫瘍全体を処理して単細胞とし、腫瘍への免疫細胞浸潤の程度を決定するためにフローサイトメトリーを行った。各群３〜５個体の動物の少なくとも３回の独立した実験からの代表的なグラフを示す。（ｆ）３回の異なる実験からの１３個体のマウスを示す。ｈ、ＴＭＰ１９５処置マウス由来の腫瘍におけるＭＨＣＩＩ＋ＣＤ１１ｂｌｏ（ＴＡＭ）細胞集団の減少およびＭＨＣＩＩ＋ＣＤ１１ｂｈｉ（ＭＴＭ）細胞集団の増加を示す代表的なフローサイトメトリープロット。グラフは、各処置群３〜５個体の動物が存在する５回の独立した実験からの結果を示す。ｉ、ＴＭＰ１９５処置動物由来の腫瘍では、既存のマクロファージではなく新規なマクロファージの増加が見られる。各処置群ｎ＝３の２回の独立した実験からの代表的なグラフ（対応のないｔ検定）。ｊ、ＴＭＰ１９５処置マウスでは、ＩＶ注射したＣＤ１１ｂ＋ＣＦＳＥ＋単球の腫瘍への動員の有意な増加が見られる。グラフは２回の独立した実験からの結果を示す（応のないｔ検定）。総てのグラフは平均を示し、エラーバーはＳ．Ｅ．Ｍ．を表す。有意性：＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１。
【図２】ＴＭＰ１９５活性化骨髄性細胞は貪食能が高く、乳房腫瘍において細胞死および血管系正常化を誘導する。マウスを示されたように５日間処置した。ＩＨＣは、（ａ）黒い矢印で示される可染体マクロファージ（ＴＢＭ）を同定するためのマクロファージ特異的マーカーＦ４８０、および（ｂ）マクロファージ内のアポトーシス小体を同定するための切断型カスパーゼ３を用いて行った。乳房腫瘍細胞の貪食作用は、乳房腫瘍細胞のマーカーである細胞内ＥＰＣＡＭを含むＦ４８０＋マクロファージの割合の、（ｃ）フローサイトメトリー、（ｄ）免疫蛍光による計算により定量した。活性化マクロファージの割合は、（ｅ）ＣＤ４５＋ＭＨＣＩＩ＋集団の細胞のＦ４８０＋ＣＤ４０＋を用いたフローサイトメトリーを用いて特定した。ｆ、ＣＤ４０＋細胞を同定するためにＩＨＣを行った。ｇ、グランザイムＢ＋であるＣＤ４５＋ＣＤ３＋ＣＤ８＋細胞の割合をフローサイトメトリーにより特定した。３回の独立した実験からの結果を示す。血管密度および強度を（ｈ）内皮細胞マーカーＣＤ３４を用いたＩＨＣおよび（ｉ）ＩＶ注射したデキストランの局在を利用する免疫蛍光によって評価した。（ｊ）腫瘍細胞増殖（Ｋｉ６７）および（ｋ）ＣＣ３を用いてアポトーシス腫瘍細胞を同定するためにＩＨＣを行った。ＩＨＣについては、各群５〜１０個体のマウスを用いた２回の独立した実験からの代表的定量および画像を示す。スケールバーは１００μｍを表す。グラフは総て平均を示し、エラーバーはＳ．Ｅ．Ｍ．を表す。総ての統計値について対応のないｔ検定を行った。有意性：＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１。
【図３】ＴＭＰ１９５は腫瘍量のマクロファージ依存性低減を誘導し、肺転移を軽減する。担癌ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴマウスを無作為に処置群に配置し、毎日、ビヒクルまたは５０ｍｇ／ｋｇのＴＭＰ１９５のＩＰ注射を行った。処置を示す。腫瘍を測定し、平均総腫瘍量±ＳＥＭとしてプロットした。ａ、各群５〜１３個体のマウスを用いた３回の独立した実験を示す。ｂ、１４日の処置後、肺を摘出し、ヘマトキシリンおよびエオジン（Ｈ＆Ｅ）染色を行った。２個体のビヒクル処置マウスおよび２個体のＴＭＰ１９５処置マウスからの代表的な切片を示す。肺当たりの転移病巣の数を方法に記載のとおりに定量し、平均を±ＳＥＭで示す。スケールバーは１００μｍを表す。ｃ、ＣＳＦ−１に対する抗体を、マクロファージを除去するために使用した。１個体のマウスがＴＭＰ１９５＋抗ＣＳＦ１群では無関連の実験的理由のために死に至り、グラフに示す。ｄ、ｅ、ＣＤ８、ＣＤ４、またはＩＦＮγに対する抗体をそれぞれ、ＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞を除去するため、またはＩＦＮγを中和するために使用した。ｄ、マウスを示されたように6日間処置した。相対腫瘍量を示す。ｅ、グランザイムＢ＋であるＣＤ４５＋ＣＤ３＋ＣＤ８＋細胞の割合を、（ｄ）に示されたマウスに関してフローサイトメトリーにより特定した。ｆ、（ｄ）に示された表示マウスで血管の組織化を評価するためにＣＤ３４を用いてＩＨＣを行った。図１８の画像を参照。有意性：＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１。
【図４】ＴＭＰ１９５は、化学療法およびチェックポイント遮断の有効性を改善し、持続的応答を誘導する。同等の総腫瘍量を有する担癌ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴマウスを無作為に処置群に配置した。ａ、マウスにビヒクル（ＤＭＳＯ＋Ｄｅｘ５水）または５０ｍｇ／ｋｇのＴＭＰ１９５単独のＩＰ注射または５０ｍｇ／ｋｇのカルボプラチン（Ｃａｒｂｏ）のＩＶ注射との組合せを毎日施し、処置計画を示す。腫瘍体積を測定し、平均総腫瘍量としてプロットした。ｂ、マウスをビヒクル（ＤＭＳＯ）または５０ｍｇ／ｋｇのＴＭＰ１９５単独のＩＰ注射または１０ｍｇ／ｋｇのパクリタキセル（ＰＴＸ）のＩＶ注射との組合せを毎日施し、処置計画を示す。腫瘍体積を測定し、平均総腫瘍量としてプロットした。ＴＭＰ１９５とＰＴＸの組合せは少なくとも１か月間持続する。ｃ〜ｄ、マウスにＤＭＳＯまたは５０ｍｇ／ｋｇのＴＭＰ１９５単独のＩＰ注射または２５０μｇの抗ＰＤ−１のＩＰ注射との組合せを毎日施した。ｄ、ＤＭＳＯ対照と比較した２１日目の総腫瘍量がプロットされている。統計は対応のないスチューデントのｔ検定を表す。関連のない実験的理由のために死に至ったマウスをグラフに示す。有意性：＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１。総てのマウス実験の統計は二元配置ＡＮＯＶＡを用いて行った。エラーバーはＳ．Ｅ．Ｍ．を表す。
【図５】ＴＭＰ１９５は乳房腫瘍においてＣＤ１１ｂ＋細胞を調節する。ａ．ダブルソーティング腫瘍細胞懸濁液のためのゲート設定戦略。ＦＳＣ−ＡとＳＳＣ−Ａに基づきゲートを設定した単核細胞に、次に、単細胞（ＦＳＣ−Ｈ対ＦＳＣ−Ｗ、次いでＳＳＣ−Ｈ対ＳＳＣ−Ｗ）を選択するためのゲート設定を行った。その後、単細胞に、生ＣＤ４５＋（７−ＡＡＤ対ＣＤ４５）を選択するためのゲート設定を行った。次に、生ＣＤ４５＋細胞にＣＤ１９−細胞（ＣＤ１９対ＣＤ３）を選択するためのゲート設定を行った。その後、生／ＣＤ４５＋／ＣＤ１９−細胞に、ＣＤ１１ｂ＋またはＣＤ３＋細胞（ＣＤ１１ｂ対ＣＤ３）を選択するためのゲート設定を行った。腫瘍懸濁液をＢＤ  Ａｒｉａ  ＩＩにてＣＤ１１ｂ＋またはＣＤ３＋画分へとソートした。これらの画分を遠心分離により濃縮し、各集団の純度を上げるために同じゲート設定戦略でもう一度ソートを行った。これらのダブルソート集団の純度を各サンプルでＲＮＡ単離の前に確認した。ダブルソートＣＤ３＋（ｂ）およびＣＤ１１ｂ＋（ｃ）集団の代表的な純度確認を示す。ｄ．Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ転写プロファイリングデータの平均と発現値プロット。総てのプローブセットを示し、強調はδ係数＞１．５のプローブセットにのみ適用する。
【図６】５日のＴＭＰ１９５処置は、腫瘍常在ＣＤ１１ｂ＋細胞において活性化された免疫細胞遺伝子セットの発現を増強する。５日のＴＭＰ１９５処置によって最も影響を受けた（δ係数＞１．５）遺伝子のリストで始め、本発明者らは、ＰＡＮＴＨＥＲ  ＧＯ−Ｓｌｉｍ遺伝子オントロジーデータベースにおいてそれらの生体プロセスに疑問を持ち、ゲノム内に表される生体プロセスの分布と比較した。ａ、ＴＭＰ１９５処置により誘導された遺伝子は、円グラフおよび埋め込みの統計表で示されるオントロジーの有意な過大または過少表現を有していた。総てのプローブセットのＧＳＥＡによる、ＴＭＰ１９５により誘導される差次的遺伝子発現の不偏分析により、ボルカノプロット（Ｙ軸＝スチューデントのｔ検定  Ｐ値）上で強調されるような５つの遺伝子セットの発現値の分布に有意な偏り（χ２  Ｐ値＜０．０５）が明らかになった（Subramanian, A. et al. (2005)参照）。ｂ〜ｆ、本発明者らが選択したδ係数リストとＧＳＥＡ遺伝子セットの両方でプローブセット提示遺伝子をそのプローブセットに相当する遺伝子記号とともに表示する。
【図７】ＴＭＰ１９５は腫瘍浸潤白血球の動員を誘導する。担癌ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴマウスを無作為に処置群に配置し、示された日数の間、毎日、ビヒクル（ＤＭＳＯ）または５０ｍｇ／ｋｇのＴＭＰ１９５の腹腔内（ＩＰ）注射を施した。ＩＨＣは、腫瘍切片に対して、骨髄性マーカーＣＤ１１ｂ、およびｂ、マクロファージ特異的マーカーＦ４８０に関して行った。全組織に対するパーセントとしての定量値を各代表的切片の右に示す。ビヒクル（５日のＤＭＳＯ）および５日  ＴＭＰ１９５の定量を参照に対して図１ａおよび２ａから行った。スケールバーは１００μｍを表す。有意性：ｔ検定  ＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１。ｃ、ＣＤ４０  ＩＨＣ染色の陰性対照（図２ｆ）を示す。ＴＭＰ１９５処置腫瘍においてウサギＩｇＧ対照および一次抗体無しの対照の両方を示し、バックグラウンドシグナルまたは非特異的陽性シグナルが無いことを明らかにする。
【図８】図８ａ〜ｉ  ＴＭＰ１９５は、腫瘍浸潤白血球の動員を誘導する。担癌ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴマウスを無作為に処置群に配置し、５日間毎日、ビヒクル（ＤＭＳＯ；ｎ＝５）または５０ｍｇ／ｋｇのＴＭＰ１９５（ｎ＝５）の腹腔内（ＩＰ）注射を施した。腫瘍全体を処理して単細胞とし、腫瘍への免疫細胞浸潤の程度を決定するためにフローサイトメトリーを行った。各群３〜５個体の動物のｓ少なくとも３回の独立した実験からの代表的なグラフを示す。有意性：ｔ検定  ＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１。
【図９】フローサイトメトリーゲート設定戦略。担癌ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴマウスを無作為に処置群に配置し、５日間毎日、ビヒクル（ＤＭＳＯ）または５０ｍｇ／ｋｇのＴＭＰ１９５のＩＰ注射を施した。腫瘍全体を処理して単細胞とし、腫瘍への免疫細胞浸潤の程度を決定するためにフローサイトメトリーを行った。ａ、ＭＨＣＩＩ＋ＣＤ１１ｂｌｏ対ＭＨＣＩＩ＋ＣＤ１１ｂｈｉのゲート設定戦略、これは図１ｈと一致する。ｂ、５個体のビヒクル処置マウスおよび５個体のＴＭＰ１９５処置マウスの代表的なＭＴＭ対ＴＡＭプロット。ｃおよびｄ、（ｂ）からのプロット定量。
【図１０】ＴＭＰ１９５は腫瘍において新規マクロファージの数を増加させる。担癌ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴマウスを無作為に処置群に配置した。ａ〜ｂ、既存腫瘍マクロファージと新規腫瘍マクロファージを識別するために、マウスをマクロファージにより摂取されるＡｌｅｘａ５５５標識デキストランで前処置した。次に、マウスを５日間ビヒクルまたはＴＭＰ１９５で処置した。マウスにＡｌｅｘａ５９４標識デキストランを注射した後に犠牲にした。腫瘍全体を処理して単細胞とし、フローサイトメトリーを行った。ｂ、注、新規マクロファージはＭＨＣＩＩ＋ＣＤ１１ｂｈｉ（ＭＴＭ）である。有意性：ｔ検定  ＊Ｐ＜０．０５。ｃ、マウスにビヒクル（ＤＭＳＯ）または５０ｍｇ／ｋｇのＴＭＰ１９５のＩＰ注射を１回施した。翌日、マウスにＣＦＳＥ標識ＣＤ１１ｂ＋細胞をＩＶ注射した。次に、マウスをさらに５日間ビヒクルまたは化合物で処置した。腫瘍全体を処理して単細胞とし、フローサイトメトリーを行った。
【図１１】ＴＭＰ１９５活性化骨髄性細胞は貪食能が高く、乳房腫瘍細胞を飲み込む。マウスを５日間、ビヒクルまたは５０ｍｇ／ｋｇのＴＭＰ１９５で処置した。腫瘍全体を処理して単細胞とし、フローサイトメトリーを行った。ａ、フローサイトメトリーが行われ、Ｆ４８０＋マクロファージ内の細胞内のＥＰＣＡＭシグナルを示す代表的フローサイトメトリープロットが示され、これは図２ｃと一致する。ｂ〜ｄ、ＣＤ１１ｂ＋細胞を腫瘍から単離し、スライドガラス上でサイトスピンを行った。貪食された乳房腫瘍細胞を同定するために免疫蛍光を行った（図２ｄと一致）。ｅ、ＣＤ４０＋ＣＤ１１ｂ＋単球の代表的なフローサイトメトリープロットおよび定量。
【図１２】ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＴＭＰ１９５処置は、ＩＬ−４／ＧＭ−ＣＳＦにおいて分化した単球の補助刺激の補助刺激活性を増進する。末梢血から精製したヒト単球を５日間、３００ｎＭ  ＴＭＰ１９５または対照として０．１％ＤＭＳＯの存在下、ＩＬ−４およびＧＭ−ＣＳＦで分化させた。ａ、ＣＤ８０およびＣＤ８６のＦＡＣＳ分析は、補助刺激分子ＣＤ８６を発現する細胞の割合に増加を示す。ｂ、５日の分化の後、ポリクローナルＴ細胞増殖アッセイ（１分化単球当たり１０個のＣＦＳＥ標識ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞）において単球をＡＰＣとして使用し、Ｔ細胞は、３００ｎＭ  ＴＭＰ１９５中で分化させた単球と共培養した際にＤＭＳＯ対照単球に比べて高い程度の増殖を示す（Ｄｉｖｉｓｉｏｎ  Ｉｎｄｅｘ、ＦｌｏｗＪｏ、Ｔｒｅｅｓｔａｒ  Ｉｎｃ．）。データは、それぞれ実験当たり２名のユニークな血液提供者を有する３回の独立した実験に代表的なものである。有意性：ｔ検定  ＊＊Ｐ＜０．０１。
【図１３】ＴＭＰ１９５処置は腫瘍環境の変化と相関がある。担癌ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴマウスを無作為に処置群に配置した。マウスに５日間ビヒクル（ＤＭＳＯ）または１、３、もしくは５日間５０ｍｇ／ｋｇのＴＭＰ１９５のＩＰ注射を毎日施した。ＩＨＣは、腫瘍切片に対して、血管系のマーカーＣＤ３４、ｂ、増殖のマーカーＫｉ６７、およびｃ、アポトーシスのマーカー切断型カスパーゼ３（ＣＣ３）に関して行った。全組織に対するパーセントとしての定量値を各代表的切片の右に示す。ビヒクル（５日のＤＭＳＯ）および５日目のＴＭＰ１９５定量は参照として図２から得る。ＩＨＣに関して、代表的定量および画像を各群５〜１０個体のマウスを用いる２回の独立した実験から示す。スケールバーは１００μｍを表す。有意性：ｔ検定  ＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１および＊＊＊Ｐ＜０．０００１。ｄ、全組織溶解液を、アポトーシスのマーカーであるＰａｒｐおよび切断型カスパーゼ３を用いる免疫ブロット法分析のための溶解液を作製するために使用した。
【図１４】ＴＭＰ１９５は、直接的に細胞傷害性でない。ヒトまたはマウス乳房腫瘍細胞を播種し、漸増濃度のａ、ＴＭＰ１９５（０、０．１、１、１０μＭ）、ｂ、不活性異性体ＴＭＰ０５８（０、０．１、１、１０μＭ）、ｃ、スタウロスポリン（０、１、１０、１００ｎｇ／ｍＬ）、またはｄ、エトポシド（０、１０、５０、１００μＭ）で４８時間処理した。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏを用いて細胞生存率を評価した。エラーバーは３回の独立した実験の平均を表す。平均で示し、エラーバーはＳ．Ｅ．Ｍ．を表す。
【図１５】ＴＭＰ１９５は腫瘍量の低減を誘導し、肺転移を軽減する。ａ、ＴＭＰ１９５の単剤有効性試験する３回の独立した実験の処置計画。ｂ、１５０〜８００ｍｍ３の間の総腫瘍量を有するマウスをＤＭＳＯ（ｎ＝１２）または５０ｍｇ／ｋｇのＴＭＰ１９５（ｎ＝１３）で１３日間処置した。腫瘍体積を測定し、総腫瘍量±ＳＥＭとしてプロットした。ｃ、腫瘍が１５０〜４００ｍｍ３の間で始まったマウスに２４日目まで療法を維持した（ＤＭＳＯ  ｎ＝５；ＴＭＰ１９５  ｎ＝６）。２４日目に、それらのマウスの肺を摘出し、肺転移を評価するためにＨ＆Ｅを行った。ｄ、肺切片当たりの転移病巣の数を定量し、平均を±ＳＥＭで示す。有意性：ｔ検定  Ｐ  ＊＊＊Ｐ＜０．０００１。（ｄ）ｅ，ｆ、ＴＭＰ１９５の単剤有効性を試験するために２回のさらなる独立した実験を行った。
【図１６】２週間のＴＭＰ１９５処置は、選択細胞種シグネチャーの偏向分布をもたらす。ａ、腫瘍全体から単離されたＲＮＡにおけるＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘ遺伝子発現のボルカノプロット（各処置群ｎ＝３マウス）は、これらのサンプルにおいて全体的に差次的遺伝子発現が無いことを示す。しかしながら、ＩｍｍＧｅｎ細胞種シグネチャー遺伝子セットの偏向濃縮に関する分析は、（ｂ）に示されるように、また、ボルカノプロット（ｃ〜ｇ）に示されるように、ＴＭＰ１９５処置により有意に（χ２  Ｐ値＜０．０５）影響を受けたものとして、５集団の細胞だけを特定する。参照の視覚的な点として、影響を受けていないナチュラルキラー遺伝子シグネチャーがボルカノプロットで強調される（ｈ）。ボルカノプロットｙ軸は、スチューデントのｔ検定のＰ値である。
【図１７】マクロファージはＴＭＰ１９５の有効性に必要とされる。担癌ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴマウスを無作為に処置群に配置した。マウスにビヒクル（ＤＭＳＯ）または５０ｍｇ／ｋｇのＴＭＰ１９５を（ａ、ｂおよびｈ、ｉ）骨髄性細胞除去抗体（α−ＣＤ１１ｂ）または（ｃ〜ｇ）マクロファージ除去抗体（α−ＣＳＦ−１）と組み合わせ、毎日ＩＰ注射を施した。ａ、腫瘍体積を測定し、平均総腫瘍量±ＳＥＭとしてプロットした。ｂ、ＣＤ１１ｂ除去実験の終了時に動物から腫瘍を摘出し、ＩＨＣを用いて腫瘍組織において骨髄性細胞の除去を確認した。ｃ〜ｇ、図３ｃと一致して、実験の終了時に、動物から腫瘍を摘出し、フローサイトメトリーを用いて腫瘍組織においてマクロファージの除去を確認した。ｆ、ＭＨＣＩＩ＋ＣＤ１１ｂｈｉであるがＭＨＣＩＩ＋ＣＤ１１ｂｌｏでないマクロファージ集団は、α−ＣＳＦ−１除去戦略に応答して有意に除去された。ｈ，ｉ、図１６ａと一致して、実験の終了時に、動物から腫瘍を摘出し、ＩＨＣを用いて、ｈ、細胞死およびｉ、細胞増殖を評価した。
【図１８】ＣＤ８＋であるがＣＤ４＋でないＴ細胞が最適なＴＭＰ１９５有効性のために必要とされる。ａ、野生型ＦＶＢ／Ｎおよびｂ、免疫不全無胸腺ヌードマウスにＭＭＴＶ−ＰｙＭＴトランスジェニックマウス由来の腫瘍塊を移植し、それぞれ１６日間または２０日間、毎日、ビヒクル（ＤＭＳＯ）または５０ｍｇ／ｋｇのＴＭＰ１９５で処置した。無胸腺ヌードマウスはまた、陽性対照としてパクリタキセル（ＰＴＸ）でも処置した。腫瘍量（ａ）または相対腫瘍量（ｂ）を各マウスについて示す。ｃ、同等の総腫瘍量を有する担癌ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴマウスを無作為に処置群に配置し、ビヒクルまたは５０ｍｇ／ｋｇのＴＭＰ１９５をＩｇＧ、α−ＣＤ８、α−ＣＤ４またはα−ＩＦＮγと組み合わせて、６日間毎日、ＩＰ注射を施した（図３ｄに一致）。実験の終了時に腫瘍を摘出し、単細胞懸濁液にフローサイトメトリーを行って腫瘍においてＴ細胞の除去を確認した。ｄ，ｅ  同等の総腫瘍量を有する担癌ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴマウスを無作為に処置群に配置し、ビヒクルまたは５０ｍｇ／ｋｇのＴＭＰ１９５をＩｇＧまたはα−ＣＤ８と組み合わせて、１４日間毎日、ＩＰ注射を施した。ｅ、ＣＤ８＋Ｔ細胞の除去をフローサイトメトリーにより確認した。ｆ、マウスに、ＤＭＳＯまたはＴＭＰ１９５をアイソタイプまたは中和抗ＩＦＮγ抗体と組み合わせて、５日間処置を施し、それらの腫瘍を採取した。ＩＨＣを行って血管系の組織化の程度を確認した。
【図１９】ＴＭＰ１９５療法を行った、および行わなかったＭＭＴＶ−ＰｙＭＴ乳房腫瘍の表示。ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴトランスジェニックマウスの乳房腫瘍は、漏出性の血管系と、単球およびＣＤ８  Ｔ細胞の機能を抑制する腫瘍誘発性(pro-tumor)マクロファージを含有する（左側）。ＴＭＰ１９５による処置の際（右側）、腫瘍マクロファージはＣＤ４０を発現する活性型となり、貪食能が高くなる（描写されている腫瘍細胞の貪食）。ＣＤ８＋Ｔ細胞は、腫瘍細胞死滅能を示すグランザイムＢ＋となる。腫瘍血管系は、より組織化され、漏出が減る。加えて、腫瘍体積の減少が見られる。
【図２０】ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴ腫瘍から単離されたＣＤ１９−ＣＤ３−ＣＤ１１ｂ＋細胞において５日のＴＭＰ１９５処置によって影響を受けた遺伝子。ＴＭＰ１９５処置のためにδ係数＞１．５を有するＣＤ１１ｂ＋細胞ＲＮＡにおけるプローブセットの正規化発現値。
【図２１】ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴ腫瘍から単離されたＣＤ１９−／ＣＤ３＋／ＣＤ１１ｂ−細胞において５日のＴＭＰ１９５処置によって影響を受けた遺伝子。ＴＭＰ１９５処置のためにδ係数＞１．５を有するＣＤ３＋細胞ＲＮＡにおけるプローブセットの正規化発現値。
【発明の具体的説明】
【０４８７】
マクロファージは腫瘍の主要な成分であり、一般に、腫瘍進行を促進する。多大な製薬努力がマクロファージの機能および腫瘍への動員を阻害するために用いられてきた。もう１つの戦略は、腫瘍誘発性マクロファージを抗腫瘍表現型へ変換することである。ここで、初めて、本発明者らが、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、抗腫瘍免疫応答を助長するように単球および腫瘍マクロファージを活性化できることを示す。マウス乳癌モデルを用い、本発明者らは、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤が新規な、高貪食性マクロファージを腫瘍組織に動員し、これが腫瘍量および肺転移の軽減と相関することを示す。加えて、ＣＤ８＋Ｔ細胞は、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤により活性化されたマクロファージによって活性化される。選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤とパクリタキセルまたはカルボプラチンの併用療法は、少なくとも１か月間持続性がある腫瘍量の劇的な低減を誘導する。
【０４８８】
クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤
選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、本明細書では、トリフルオロアセチル−リシン基質を用いるクラスＩＩａ  ＨＤＡＣ活性の生化学アッセイにおいて、クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ（ＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣ５、ＨＤＡＣ７、またはＨＤＡＣ９）を、アセチル−リシン基質を用いるクラスＩ  ＨＤＡＣ活性の生化学アッセイにおけるＨＤＡＣ１、ＨＤＡＣ２、またはＨＤＡＣ３のその阻害の少なくとも１０倍の効力（ＩＣ５０またはｋｉ）で阻害する薬剤（例えば、化合物）と定義される。Bradner et al., Nature Chemical Biology 6: 238-243 (2010)参照。
【０４８９】
本明細書に記載の方法とともに使用可能な選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の例としては、例えば、国際特許出願公開第２０１１／０８８１８１号、同第２０１１／０８８１８７号、および同第２０１１／０８８１９２号に記載されているものが挙げられる。
【０４９０】
選択的クラスＩＩＡ  ＨＤＡＣ阻害剤の例としては、式Ｉ：
【化１】
2019504029.tif 000003
［式中、
Ｒ１は、ハロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキルであり、ここで、前記ハロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキルは少なくとも２個のハロ基を含み；
Ｙは、結合であり、かつ、Ｘ１はＯ、ＮまたはＮＨであり、Ｘ２はＮまたはＣＨであり、かつ、Ｘ３はＮまたはＮＨであるか、
あるいはＹは−Ｃ（Ｏ）−であり、かつ、Ｘ１およびＸ２はＣＨまたはＮであり、Ｘ３はＯまたはＳであり、
あるいはＹは−Ｃ（Ｏ）−であり、かつ、Ｘ１はＯであり、Ｘ２はＣＨまたはＮであり、Ｘ３はＣＨまたはＮであり；
Ａは、置換されていてもよい（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、フェニル、ナフチル、４〜７員ヘテロシクロアルキル、５〜６員ヘテロアリール、または９〜１０員ヘテロアリールであり、
ここで、置換されていてもよいシクロアルキル、フェニル、ナフチル、ヘテロシクロアルキル、またはヘテロアリールはいずれも、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、ハロゲン、シアノ、ハロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、−ＮＲＡＲＡおよび−（（Ｃ１−Ｃ４）アルキル）ＮＲＡＲＡから独立に選択される１〜３個の基で置換されていてもよく；
Ｚは、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＸ−、−ＮＲＸＣ（＝Ｏ）ＮＲＸ、−ＮＲＸＣ（＝Ｏ）−、−ＳＯ２−、−ＳＯ２ＮＲＸ−、−ＮＲＸＳＯ２−、−ＮＨＣＨ（ＣＦ３）−、−ＣＨ（ＣＦ３）ＮＨ−、−ＣＨ（ＣＦ３）−、−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−、−ＮＲＸ−、または−（Ｃ１−Ｃ３）アルキル−ＮＲＸ−であり；
ｎは、０〜４であり；
ｎが０である場合、Ｒ２およびＲ３は、Ｈならびに置換されていてもよい（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、アリール（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−、および（Ｃ３−Ｃ７）シクロアルキル（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−から独立に選択される、
ｎが１〜４である場合、Ｒ２およびＲ３は、Ｈ、フルオロ、および置換されていてもよい（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、アリール（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−、および（Ｃ３−Ｃ７）シクロアルキル（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−から独立に選択され、ここで、ｎが１であり、Ｒ２がＦであり、かつ、Ｒ３がＨである場合、Ｚは、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＸ−、−ＮＲＸＣ（＝Ｏ）ＮＲＸ、−ＳＯ２ＮＲＸ−、−ＮＨＣＨ（ＣＦ３）−、−ＣＨ（ＣＦ３）ＮＨ−、−ＣＨ（ＣＦ３）−、−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−、−ＮＲＸ−、または−（Ｃ１−Ｃ３）アルキル−ＮＲＸ−であり、かつ、
ｎは１〜４である場合、Ｒ２は、−ＮＲＡＲＢ、−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＮＲＡＲＢ、−ＣＯＮＲＡＲＢ、−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＮＲＡＲＢ、−ＣＯ２Ｈ、−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯ２Ｈ、ヒドロキシル、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−、（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシ、および（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−から選択され、かつ、Ｒ３は、Ｈならびに置換されていてもよい（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、アリール（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−、および（Ｃ３−Ｃ７）シクロアルキル（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−から選択され、
ここで、Ｒ２およびＲ３いずれかの前記アリール、シクロアルキルならびに前記置換されていてもよい（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、アリール（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−、および（Ｃ３−Ｃ７）シクロアルキル（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−の各（Ｃ１−Ｃ４）アルキル部分は、ハロゲン、シアノ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、−ＮＲＡＲＡ、−（（Ｃ１−Ｃ４）アルキル）ＮＲＡＲＡ、およびヒドロキシルから独立に選択される１、２または３個の基で置換されていてもよく；
あるいはＲ２およびＲ３はそれらが結合している原子と一緒に、置換されていてもよい４、５、６、または７員シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル基を形成し、ここで、前記ヘテロシクロアルキル基は、Ｎ、ＯおよびＳから独立に選択される１または２個のヘテロ原子を含み、かつ、前記置換されていてもよいシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル基は、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、ハロゲン、シアノ、アリール（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−、（Ｃ３−Ｃ７）シクロアルキル（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−、−ＯＲＹ、−ＮＲＹＲＹ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＹ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＹＲＹ、ＮＲＹＣ（＝Ｏ）ＲＹ、−ＳＯ２ＮＲＹＲＹ、−ＮＲＹＳＯ２ＲＹ、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲＹＲＹ、−ＮＲＹＣ（＝Ｏ）ＯＲＹ、および−ＮＲＹＣ（＝Ｏ）ＮＲＹＲＹから独立に選択される１、２または３個の置換基で置換されていてもよく；かつ
Ｌは、Ｒ４で置換された５〜６員ヘテロアリールまたはフェニルであり、かつ、さらに置換されていてもよく、
ここで、Ｌがさらに置換される場合、Ｌは、ハロゲン、シアノおよび（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから独立に選択される１または２個の置換基で置換され；
Ｒ４は、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、ハロ、ハロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、（（Ｃ１−Ｃ４）アルキル）（（Ｃ１−Ｃ４）アルキル）Ｎ（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、（（Ｃ１−Ｃ４）アルキル）（（Ｃ１−Ｃ４）アルキル）Ｎ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−、（Ｃ１−Ｃ４）ハロアルコキシ−、（Ｃ１−Ｃ４）アルキルアミノ、置換されていてもよい（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、置換されていてもよいフェニル、置換されていてもよい５〜６員ヘテロシクロアルキル、または置換されていてもよい５〜６員ヘテロアリールであり、
ここで、前記置換されていてもよいシクロアルキル、フェニル、ヘテロシクロアルキルまたはヘテロアリールは、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、ハロゲン、シアノ、ハロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキルチオ−、ハロ（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、ヒドロキシル、−ＮＲＡＲＣおよび−（（Ｃ１−Ｃ４）アルキル）ＮＲＡＲＣから独立に選択される１、２または３個の基で置換されていてもよく；
あるいはＬ−Ｒ４は一緒に、１，３−ベンゾジオキソリル、２，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾジオキシニル、ベンゾフラニル、テトラヒドロイソキノリルまたはイソインドリニル基を形成し、ここで、前記ベンゾフラニル、テトラヒドロイソキノリルまたはイソインドリニル基は、Ｃ１−Ｃ４）アルキル、ハロゲン、シアノ、ハロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキルチオ−、ハロ（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、ヒドロキシル、−-ＮＲＡＲＣおよび−（（Ｃ１−Ｃ４）アルキル）ＮＲＡＲＣから独立に選択される１、２または３個の基で置換されていてもよく；
ここで、各ＲＡは、Ｈおよび（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから独立に選択され；
ＲＢは、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（（Ｃ１−Ｃ４）アルキル）（（Ｃ１−Ｃ４）アルキル）、−ＳＯ２（Ｃ１−Ｃ４）アルキルであり、またはＲＡおよびＲＢはそれらが結合している原子と一緒に、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個の付加的ヘテロ原子を含んでいてもよく、かつ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキルで置換されていてもよい４〜６員複素環式環を形成し；
ＲＣは、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、フェニル、５〜６員ヘテロシクロアルキル、または５〜６員ヘテロアリールであり、あるいはＲＡおよびＲＣはそれらが結合している原子と一緒に、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個の付加的ヘテロ原子を含んでもよく、かつ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキルで置換されていてもよい４〜８員複素環式環を形成し；
各ＲＸは、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、および置換されていてもよい（Ｃ２−Ｃ６）アルキルから独立に選択され、ここで、前記置換されていてもよい（Ｃ２−Ｃ６）アルキルは、ヒドロキシル、シアノ、アミノ、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル）ＮＨ−、または（（Ｃ１−Ｃ４）アルキル）（（Ｃ１−Ｃ４）アルキル）Ｎ−で置換されていてもよく；かつ
各ＲＹは、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、フェニル、および−（Ｃ１−Ｃ４）アルキルフェニルから独立に選択される］
に従う化合物、またはその塩、もしくその塩、特に、その薬学上許容される塩が挙げられ、さらに式Ｉの化合物、またはその塩を含んでなる医薬組成物を対象とする。
【０４９１】
選択的クラスＩＩＡ  ＨＤＡＣ阻害剤の例としては、式ＩＩ：
【化２】
2019504029.tif 000004
［式中、
Ｒ１は、ハロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキルであり、ここで、前記ハロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキルは、少なくとも２個のハロ基を含む（Ｒ１はジ−ハロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキルである）；
Ｙは結合であり、かつ、Ｘ１はＯであり、Ｘ２はＮまたはＣＨであり、Ｘ３はＮまたはＮＨであり、
あるいはＹは−Ｃ（Ｏ）−であり、かつ、Ｘ１およびＸ２はＣＨまたはＮであり、Ｘ３はＯまたはＳであり、
あるいはＹは−Ｃ（Ｏ）−であり、かつ、Ｘ１はＯであり、Ｘ２はＣＨまたはＮであり、Ｘ３はＣＨまたはＮであり；
ｎは０〜４であり；
Ａは、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＸ−、−（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＸ−、−（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）ＮＲＸＣ（＝Ｏ）ＮＲＸ、−（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）ＮＲＸＣ（＝Ｏ）−、−（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）ＳＯ２−、−ＳＯ２ＮＲＸ−、−（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）ＳＯ２ＮＲＸ−、−（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）ＮＲＸＳＯ２−、−（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）ＮＨＣＨ（ＣＦ３）−、−ＣＨ（ＣＦ３）ＮＨ−、−（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）ＣＨ（ＣＦ３）ＮＨ−、−ＣＨ（ＣＦ３）−、−（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）ＣＨ（ＣＦ３）−、または−（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）ＮＲＸ−であり；
ｎが０である場合、Ｒ２およびＲ３は、Ｈならびに置換されていてもよい（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、アリール（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−、および（Ｃ３−Ｃ７）シクロアルキル（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−から独立に選択され、
ｎが１〜４である場合、Ｒ２およびＲ３は、Ｈ、フルオロ、ならびに置換されていてもよい（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、アリール（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−、および（Ｃ３−Ｃ７）シクロアルキル（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−から独立に選択され、ここで、ｎが１であり、Ｒ２がＦであり、かつ、Ｒ３がＨである場合、Ｚは、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＸ−、−ＮＲＸＣ（＝Ｏ）ＮＲＸ、−ＳＯ２ＮＲＸ−、−ＮＨＣＨ（ＣＦ３）−、−ＣＨ（ＣＦ３）ＮＨ−、−ＣＨ（ＣＦ３）−、−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−、−ＮＲＸ−、または−（Ｃ１−Ｃ３）アルキル−ＮＲＸ−であり、かつ
ｎが１〜４である場合、Ｒ２は、−ＮＲＡＲＢ、−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＮＲＡＲＢ、−ＣＯＮＲＡＲＢ、−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＮＲＡＲＢ、−ＣＯ２Ｈ、−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯ２Ｈ、ヒドロキシル、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−、（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシ、および（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−から選択され、かつ、Ｒ３は、Ｈならびに置換されていてもよい（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、アリール（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−、および（Ｃ３−Ｃ７）シクロアルキル（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−から選択され、
ここで、Ｒ２およびＲ３いずれかの前記アリール、シクロアルキル、ならびに前記置換されていてもよい（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、アリール（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−、および（Ｃ３−Ｃ７）シクロアルキル（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−の各（Ｃ１−Ｃ４）アルキル部分は、ハロゲン、シアノ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、−ＮＲＡＲＡ、−（（Ｃ１−Ｃ４）アルキル）ＮＲＡＲＡ、およびヒドロキシルから独立に選択される１、２または３個の基で置換されていてもよく；
あるいはＲ２およびＲ３はそれらが結合している原子と一緒に、置換されていてもよい４、５、６、または７員シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル基を形成し、ここで、前記ヘテロシクロアルキル基は、Ｎ、ＯおよびＳから独立に選択される１または２個のヘテロ原子を含み、かつ、前記置換されていてもよいシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル基は、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、ハロゲン、シアノ、アリール（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−、（Ｃ３−Ｃ７）シクロアルキル（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−、−ＯＲＹ、−ＮＲＹＲＹ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＹ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＹＲＹ、−ＮＲＹＣ（＝Ｏ）ＲＹ、−ＳＯ２ＮＲＹＲＹ、−ＮＲＹＳＯ２ＲＹ、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲＹＲＹ、−ＮＲＹＣ（＝Ｏ）ＯＲＹ、および−ＮＲＹＣ（＝Ｏ）ＮＲＹＲＹから独立に選択される１、２または３個の置換基で置換されていてもよく；かつ、
Ｌは、Ｒ４で置換された５〜６員ヘテロアリールまたはフェニルであり、かつ、さらに置換されていてもよく、
ここで、Ｌがさらに置換されている場合、Ｌは、ハロゲン、シアノおよび（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから独立に選択される１または２個の置換基で置換され；
Ｒ４は、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、ハロ、ハロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、（（Ｃ１−Ｃ４）アルキル）（（Ｃ１−Ｃ４）アルキル）Ｎ（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、（（Ｃ１−Ｃ４）アルキル）（（Ｃ１−Ｃ４）アルキル）Ｎ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−、（Ｃ１−Ｃ４）ハロアルコキシ−、（Ｃ１−Ｃ４）アルキルアミノ、置換されていてもよい（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、置換されていてもよいフェニル、置換されていてもよい５〜６員ヘテロシクロアルキル、または置換されていてもよい５〜６員ヘテロアリールであり、
ここで、前記置換されていてもよいシクロアルキル、フェニル、ヘテロシクロアルキルまたはヘテロアリールは、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、ハロゲン、シアノ、ハロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキルチオ−、ハロ（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、ヒドロキシル、−ＮＲＡＲＣおよび−（（Ｃ１−Ｃ４）アルキル）ＮＲＡＲＣから独立に選択される１、２または３個の基で置換されていてもよく；
あるいはＬ−Ｒ４は一緒に１，３−ベンゾジオキソリル、２，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾジオキシニル、ベンゾフラニル、テトラヒドロイソキノリルまたはイソインドリニル基を形成し、ここで、前記ベンゾフラニル、テトラヒドロイソキノリルまたはイソインドリニル基は、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、ハロゲン、シアノ、ハロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキルチオ−、ハロ（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、ヒドロキシル、−ＮＲＡＲＣおよび−（（Ｃ１−Ｃ４）アルキル）ＮＲＡＲＣから独立に選択される１、２または３個の基で置換されていてもよく；
ここで、各ＲＡは、Ｈおよび（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから独立に選択され；
ＲＢは、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（（Ｃ１−Ｃ４）アルキル）（（Ｃ１−Ｃ４）アルキル）、−ＳＯ２（Ｃ１−Ｃ４）アルキルであり、またはＲＡおよびＲＢはそれらが結合している原子と一緒に、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個の付加的ヘテロ原子を含んでもよく、かつ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキルで置換されていてもよい４〜６員複素環式環を形成し；
ＲＣは、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、フェニル、５〜６員ヘテロシクロアルキル、または５〜６員ヘテロアリールであり、またはＲＡおよびＲＣはそれらが結合している原子と一緒に、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個の付加的ヘテロ原子を含んでもよく、かつ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキルで置換されていてもよい４〜８員複素環式環を形成し；
各ＲＸは、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、および置換されていてもよい（Ｃ２−Ｃ６）アルキルから独立に選択され、ここで、前記置換されていてもよい（Ｃ２−Ｃ６）アルキルは、ヒドロキシル、シアノ、アミノ、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル）ＮＨ−、または（（Ｃ１−Ｃ４）アルキル）（（Ｃ１−Ｃ４）アルキル）Ｎ−で置換されていてもよく；かつ
各ＲＹは、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、フェニル、および−（Ｃ１−Ｃ４）アルキルフェニルから独立に選択され；
ただし、Ｙが−Ｃ（Ｏ）−であり、かつ、Ａが−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＸ−または−ＳＯ２ＮＲＸ−である場合、Ｒ２およびＲ３のうち少なくとも一方はＨでない（Ｒ２およびＲ３のうちいずれか一方または両方がＨでない）］
に従う化合物に従う化合物、またはその塩、特に薬学上許容される塩が挙げられ、さらに式ＩＩの化合物、またはその塩を含んでなる医薬組成物を対象とする。
【０４９２】
選択的クラスＩＩＡ  ＨＤＡＣ阻害剤の例としては、式ＩＩＩ：
【化３】
2019504029.tif 000005
［式中、
Ｒ１は、少なくとも２個のフルオロ原子を含むフルオロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキルであり；
Ｙは結合であり、かつ、Ｘ１はＯ、ＮまたはＮＨであり、Ｘ２はＮまたはＣＨであり、Ｘ３はＮまたはＮＨであり、
あるいはＹは−Ｃ（Ｏ）−であり、かつ、Ｘ１およびＸ２はＣＨまたはＮであり、Ｘ３はＯまたはＳであり、
あるいはＹは−Ｃ（Ｏ）−であり、かつ、Ｘ１はＯであり、Ｘ２はＣＨまたはＮであり、Ｘ３はＣＨまたはＮであり；
ＱはＡ−ＺまたはＥであり、ここで、
Ａは、置換されていてもよい（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、フェニル、ナフチル、４〜７員ヘテロシクロアルキル、５〜６員ヘテロアリール、または９〜１０員ヘテロアリールであり、
ここで、前記置換されていてもよい（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、フェニル、ナフチル、４〜７員ヘテロシクロアルキル、５〜６員ヘテロアリール、または９〜１０員ヘテロアリールは、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、ハロゲン、シアノ、ハロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、−ＮＲＡＲＢおよび−（（Ｃ１−Ｃ４）アルキル）ＮＲＡＲＢから独立に選択される１、２または３個の基で置換されていてもよく；かつ
Ｚは、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＳＯ２−、−ＮＲＸＣ（＝Ｏ）−、−ＣＨ（ＣＦ３）−、−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−であり；かつ
Ｅは、−（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）Ｃ（＝Ｏ）−、−（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）ＳＯ２−、−（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）ＮＲＸＣ（＝Ｏ）−、−ＣＨ（ＣＦ３）−、−（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）ＣＨ（ＣＦ３）−であり；
Ｘは、ＮＲＸまたは結合であり；
Ｂは、フェニル、ピリジル、またはＮ、ＯおよびＳから独立に選択される１もしくは２個のヘテロ原子を含む４〜１０員ヘテロシクロアルキルであり、
ここで、前記フェニル、ピリジルまたはヘテロシクロアルキルは、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、ハロゲン、シアノ、アリール（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−、（Ｃ３−Ｃ７）シクロアルキル（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−、−ＯＲＹ、−（Ｃ１−Ｃ４）ＯＲＹ、−ＮＲＹＲＹ、−（Ｃ１−Ｃ４）ＮＲＹＲＹ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＹ、−（Ｃ１−Ｃ４）Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＹ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＹＲＹ、−（Ｃ１−Ｃ４）Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＹＲＹ、−ＮＲＹＣ（＝Ｏ）ＲＹ、−（Ｃ１−Ｃ４）ＮＲＹＣ（＝Ｏ）ＲＹ、−ＳＯ２ＮＲＹＲＹ、−（Ｃ１−Ｃ４）ＳＯ２ＮＲＹＲＹ、−ＮＲＹＳＯ２ＲＹ、−（Ｃ１−Ｃ４）ＮＲＹＳＯ２ＲＹ、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲＹＲＹ、−（Ｃ１−Ｃ４）ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲＹＲＹ、−ＮＲＹＣ（＝Ｏ）ＯＲＹ、−（Ｃ１−Ｃ４）ＮＲＹＣ（＝Ｏ）ＯＲＹ、−ＮＲＹＣ（＝Ｏ）ＮＲＹＲＹ、および−（Ｃ１−Ｃ４）ＮＲＹＣ（＝Ｏ）ＮＲＹＲＹから独立に選択される１、２または３個の基で置換されていてもよく、
ここで、Ｂがヘテロシクロアルキルである場合、ＸおよびＬは異なる環原子と結合し；
Ｌは、結合または（Ｃ１−Ｃ４）アルキルであり；
Ｒ２は、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、−ＮＲＡＲＢ、−ＮＲＡＣ（＝Ｏ）ＲＢ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲＡＲＢ、５〜６員ヘテロアリール、９〜１０員ヘテロアリール、３〜７員ヘテロシクロアルキル、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、フェニル、−Ｃ（Ｏ）−（５〜６員ヘテロアリール）、−Ｃ（Ｏ）−（９〜１０員ヘテロアリール）、−Ｃ（Ｏ）−（３〜７員ヘテロシクロアルキル）、−Ｃ（Ｏ）−（（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル）、または−Ｃ（Ｏ）−フェニルであり、
ここで、前記５〜６員ヘテロアリール、９〜１０員ヘテロアリール、３〜７員ヘテロシクロアルキル、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、またはフェニル基はいずれも、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、ハロゲン、シアノ、ニトロ、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキルチオ−，ハロ（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、（（Ｃ１−Ｃ４）アルキル）（（Ｃ１−Ｃ４）アルキル）Ｎ（Ｃ２−Ｃ４）アルコキシ、ヒドロキシル、−ＮＲＡＲＢ、（（Ｃ１−Ｃ４）アルキル）ＮＲＡＲＢ、および置換されていてもよい５〜６員ヘテロアリールまたはフェニル基から独立に選択される１、２または３個の基で置換されていてもよく、ここで、前記置換されていてもよいヘテロアリールまたはフェニル基は、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、ハロゲン、シアノ、ハロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、ヒドロキシル、−ＮＲＡＲＢおよび−（（Ｃ１−Ｃ４）アルキル）ＮＲＡＲＢから独立に選択される１、２または３個の基で置換されていてもよく；
かつ、ここで、
各ＲＡおよびＲＢは、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、フェニル、５〜６員ヘテロシクロアルキル、および５〜６員ヘテロアリールから独立に選択され、またはＲＡおよびＲＢはそれらが結合している原子または原子団と一緒に、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１つの付加的ヘテロ原子を含んでいてもよい、置換されていてもよい４〜８員複素環式環を形成し；
各ＲＸは、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、または置換されていてもよい（Ｃ２−Ｃ６）アルキルから独立に選択され、ここで、前記置換されていてもよい（Ｃ２−Ｃ６）アルキルは、ヒドロキシル、シアノ、アミノ、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル）ＮＨ−、または（（Ｃ１−Ｃ４）アルキル）（（Ｃ１−Ｃ４）アルキル）Ｎ−で置換されていてもよく；かつ
各ＲＹは、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、フェニル、および−（Ｃ１−Ｃ４）アルキルフェニルから独立に選択される］
に従う化合物に従う化合物、またはその塩、またはその塩、特に、薬学上許容される塩が挙げられ、さらに式ＩＩＩの化合物、またはその塩を含んでなる医薬組成物を対象とする。
【０４９３】
選択的クラスＩＩＡ  ＨＤＡＣ阻害剤のさらなる例としては、
６−（４−｛３−［５−（トリフルオロメチル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］ベンゾイル｝ピペラジン−１−イル）ピリジン−３−カルボニトリル；
Ｎ−｛［４−（４−フェニル−１，３−チアゾール−２−イル）オキサン−４−イル］メチル｝−３−［５−（トリフルオロメチル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］ベンズアミド；
Ｎ−｛［４−（４−フェニル−１，３−チアゾール−２−イル）オキサン−４−イル］メチル｝−３−［５−（トリフルオロメチル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］ベンズアミド；
Ｎ−［２−メチル−２−（４−フェニル−１，３−チアゾール−２−イル）プロピル］−３−［５−（トリフルオロメチル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］ベンズアミド；
Ｎ−｛［１−メチル−４−（４−フェニル−１，３−チアゾール−２−イル）ピペリジン−４−イル］メチル｝−３−［５−（トリフルオロメチル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］ベンズアミド；
Ｎ−｛２−［４−（４−フルオロフェニル）−１，３−チアゾール−２−イル］エチル｝−３−［５−（トリフルオロメチル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］ベンズアミド；
Ｎ−ヒドロキシ−９Ｈ−キサンテン−９−カルボキサミド；
Ｎ−［２−メチル−２−（２−フェニル−１，３−オキサゾール−４−イル）プロピル］−３−［５−（トリフルオロメチル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］ベンズアミド；
Ｎ−｛２−［（５−シアノピリジン−２−イル）（メチル）アミノ］エチル｝−３−［５−（トリフルオロメチル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］ベンズアミド；
Ｎ−｛２−［２−（４−フルオロフェニル）−１，３−オキサゾール−４−イル］−２−メチルプロピル｝−５−［５−（トリフルオロメチル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］ピリジン−３−カルボキサミド；
［（１−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル）メチル］［（１−｛５−［５−（トリフルオロメチル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］ピリジン−２−イル｝ピペリジン−４−イル）メチル］アミン塩酸塩；
１−メチル−３−［（４−｛５−［５−（トリフルオロメチル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］ピリジン−２−イル｝ピペラジン−１−イル）メチル］−１Ｈ−インドール塩酸塩；および
１−｛３−［５−（トリフルオロメチル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］ベンゾイル｝−４−［５−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］−１，４−ジアゼパン
が挙げられる。
【０４９４】
本明細書に記載の方法とともに使用可能な他の選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤のさらなる例としては、例えば、
【化４】
2019504029.tif 000006
（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ）−２−（４−（５−フルオロピリミジン−２−イル）フェニル）−Ｎ−ヒドロキシ−３−フェニルシクロプロパンカルボキサミド、および
【化５】
2019504029.tif 000007
（１Ｓ，２Ｓ，３Ｓ）−１−フルオロ−２−（４−（５−フルオロピリミジン−２−イル）フェニル）−Ｎ−ヒドロキシ−３−フェニルシクロプロパンカルボキサミド
が挙げられる。
【０４９５】
また、DiGiorgio et al. (Cell. Mol. Life Sci. 72:73-86 (2015))およびLuckhurst et al. (ACS Med. Chem. Lett. 2015, “Potent, selective and CNS-penetrant tetrasubstituted cyclopropane class IIa histone deacetylase (HDAC) inhibitors”, epublished December 10. 2105)も参照。
【０４９６】
本発明において有用であり得る他の化合物は、全般的、具体的に、ｓ米国仮特許出願第６１／２９４５７５号；同第６１／２９４６４３号；および同第６１／２９４６２６号、および国際特許出願公開第２０１３／０６６８３１号；同第２０１３／０６６８３２号；同第２０１３／０６６８３３号；同第２０１３／０６６８３４号；同第２０１３／０６６８３５号；同第２０１３／０６６８３６号；同第２０１３／０６６８３８号；および同第２０１３／０６６８３９号に記載されている。
【０４９７】
癌
骨髄性細胞（例えば、単球、マクロファージ、および／または樹状細胞）および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞に対するその効果のために、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、例えば、ヒト対象における癌、例えば、固形腫瘍（および／またはどの転移）または血液癌の処置において有用であり得る。実際に、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、例えば、骨髄性細胞（例えば、単球、マクロファージ、および／もしくは樹状細胞）ならびに／またはＣＤ８＋Ｔ細胞に対するその効果のために、癌療法（すなわち、癌治療）の有効性を増強し得る。選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、例えば、骨髄性細胞（例えば、単球、マクロファージ、および／もしくは樹状細胞）ならびに／またはＣＤ８＋Ｔ細胞に対するその効果のために、癌療法への応答の持続性を増進し得る。選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は単独で、または癌療法の有効性を増強するため、および／もしくは処置への応答の持続性を増進するために癌治療と組み合わせて使用可能である。結果として、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、下記の種類の癌、および／またはその転移のための癌治療と併用可能である。
【０４９８】
固形腫瘍の例としては、とりわけ前立腺癌、肺癌、乳癌、卵巣癌、胃癌、膵癌、喉頭癌、食道癌、精巣癌、肝癌、耳下腺癌、胆道癌、結腸癌、直腸癌、頸部癌、口腔癌、咽喉癌、脳癌、子宮癌、子宮内膜癌、腎癌、膀胱癌、甲状腺癌；原発腫瘍および転移、黒色腫；膠芽腫、カポジ肉腫；平滑筋肉腫、非小細胞肺癌、および結腸直腸癌が挙げられる。
【０４９９】
血液癌は通常、２つの主要な血液細胞系譜：骨髄性細胞系譜およびリンパ性細胞系譜のいずれかに由来する。骨髄性細系譜は通常、顆粒球、赤血球、血小板、マクロファージおよび肥満細胞を産生し；リンパ性細胞系譜は、Ｂ細胞、Ｔ細胞、ＮＫ細胞および形質細胞を産生する。リンパ腫、リンパ性白血病、および骨髄腫は、リンパ性系譜に由来し、急性および慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群および骨髄増殖性疾患は骨髄起源である。血液疾患の例としては、限定されるものではないが、白血病、例えばとりわけ急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、ＭＤＳ（骨髄異形成症候群）、ＭＰＮ（骨髄増殖性新生物）、ＭＤＳ／ＭＰＮ重複、および好酸球増加を伴うＰＤＧＦＲ／ＦＧＦＲ１再構成骨髄性／リンパ性新生物、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性単球性白血病（ＡＭＯＬ）、ホジキンリンパ腫（４つ総てのサブタイプ）、および非ホジキンリンパ腫などのリンパ腫が挙げられる。
【０５００】
障害を「処置する」（または障害の処置）には、基礎にある病態生理学が影響を受けなくても、特定の疾患または病態の少なくとも１つの症状を緩和することを含む。処置の有効性は、例えば、標準と比較して評価することができ、例えば、処置前のパラメーターの値または質に比べて場合のパラメーターの値または質（例えば、視力、例えば、中間視力または夜間視力）の改善である。別の例として、処置の有効性は、例えば、標準と比較して評価することができ、例えば、処置を受けていないコホートにおける障害の通常の経過に比べての、または障害進行に対する組織学的データに比べてのその障害の進行の減速である。障害を処置するにはまた、その進行を減速すること；および／またはその障害を軽減すること、例えば、その障害の退縮を引き起こすことも含む。
【０５０１】
選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、単独でまたは抗癌計画と組み合わせて使用することができる。よって、別の実施形態では、本開示は、ＨＤＡＣクラスＩＩａの阻害剤および癌細胞の増殖を停止または低減するためのそれらの使用を対象とする。下記の癌種に見られる癌細胞の増殖は、本発明の化合物による処置によって低減され得る：癌腫（例えば、腺癌）、肝細胞癌、肉腫、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）、多発性骨髄腫における骨疾患の処置、白血病、小児急性リンパ芽球性白血病およびリンパ腫（例えば、皮膚細胞リンパ腫）、および腺扁平上皮癌、混合性中胚葉腫瘍、癌肉腫、および奇形癌などの混合型の癌。本発明の１つの態様において、乳癌または前立腺癌または腫瘍は本発明のＨＤＡＣ阻害剤を用いて処置される。本発明の化合物を用いて処置可能な他の癌としては、限定されるものではないが、膀胱癌、乳癌、前立腺癌、胃癌、肺癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、肝癌、子宮内膜癌、膵癌、子宮頸癌、卵巣癌；頭頸部癌、および黒色腫が挙げられる。
【０５０２】
本発明はさらに、Ｂ細胞リンパ腫、特に、脱アセチル化酵素に関連するＢ細胞リンパ腫を処置する方法であって、それを必要とする患者に選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤を投与することを含んでなる方法を対象とする。本開示の方法を用いて処置可能な脱アセチル化酵素に関連するＢ細胞リンパ腫の例としては、バーキットリンパ腫、慢性リンパ球性白血病／小リンパ球性リンパ腫（ＣＬＬ／ＳＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、免疫芽球性大細胞リンパ腫、前駆体Ｂリンパ芽球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、およびワルデンストレームマクログロブリン血症（リンパ形質細胞性リンパ腫）が挙げられる。より具体的には、本開示は、バーキットリンパ腫、慢性リンパ球性白血病／小リンパ球性リンパ腫（ＣＬＬ／ＳＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、免疫芽球性大細胞リンパ腫、前駆体Ｂリンパ芽球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、およびワルデンストレームマクログロブリン血症（リンパ形質細胞性リンパ腫）の処置方法であって、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、その治療上有効量）を患者（例えば、対象）、具体的には、それを必要とするヒトに投与することを含んでなる方法を対象とする。
【０５０３】
いくつかの実施形態では、癌は乳癌である。
【０５０４】
いくつかの実施形態では、癌は乳癌およびその転移である。
【０５０５】
いくつかの実施形態では、癌は乳癌およびその肺転移である。
【０５０６】
Ｔ細胞に基づく療法
骨髄性細胞（例えば、単球、マクロファージ、および／もしくは樹状細胞）ならびに／またはＣＤ８＋Ｔ細胞に対するその効果のために、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、例えば、ヒト対象においてＴ細胞に基づく療法を増強するために有用であり得る。選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、Ｔ細胞に基づく療法に対する対象の応答を増強するためにｉｎ  ｖｉｖｏおよび／またはｅｘ  ｖｉｖｏで使用され得る。選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、例えば、ヒト対象におけるＴ細胞に基づく療法において有用であり得る。選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、  Ｔ細胞に基づく療法の一部としてｉｎ  ｖｉｖｏおよび／またはｅｘ  ｖｉｖｏで使用可能である。
【０５０７】
本明細書に提供されるデータは、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、その有効量、例えば、その治療上有効量）で処理された（例えば、活性化された）マクロファージは、例えば非処理マクロファージが使用される場合のＴ細胞の活性化の程度に比べてＴ細胞の活性化を増強することを示す。これは例えば、Ｔ細胞療法に対する対象において応答の増強をもたらし得る。
【０５０８】
Ｔ細胞療法としては、例えば、腫瘍浸潤リンパ球、遺伝的に操作されたＴ細胞、および免疫チェックポイント阻害抗体（例えば、抗ＣＴＬＡ、抗ＰＤ−１、または抗ＰＤ−Ｌ１抗体）の養子細胞移入などの、癌のためのＴ細胞療法を含む。例えば、Houot et al., Cancer Immunol. Res. 3:1115-1122 (2015)参照。これらのリンパ球は、切除された腫瘍から単離された非改変（すなわち、天然）Ｔ細胞（腫瘍浸潤リンパ球ＴＩＬ）または腫瘍抗原を認識する遺伝的に操作されたＴ細胞（例えば、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）もしくはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ））に由来し得る。遺伝的に操作されたチェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、またはＣＴＬＡ−４阻害剤）および二重特異性抗体（例えば、ＣＤ１９／ＣＤ３またはＨＥＲ２／ＣＤ３二重特異性抗体）を含む抗体を用いる患者のリンパ球の直接ｉｎ  ｖｉｖｏ刺激。
【０５０９】
養子Ｔ細胞移入（ＡＣＴ）では、例えば、腫瘍抗原の高アビディティー認識を有する抗腫瘍Ｔ細胞をｉｎ  ｖｉｔｒｏで多数に拡大培養し、遺伝的に操作し、かつ／または抗腫瘍機能を獲得させるためにｅｘ  ｖｉｖｏで活性化することができる。対象は、（例えば、ＡＣＴの前、最中および／または後に）選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、その有効量、例えば、その治療上有効量）で処置することができる。あるいはまたは加えて、対象にＴ細胞を移入する前にＴ細胞を活性化させるためにＴ細胞を、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、その有効量、例えば、その治療上有効量）で処理されたマクロファージとｅｘ  ｖｉｖｏで接触させることができる。さらに、サプレッサー細胞（例えば、制御性Ｔリンパ球および骨髄由来サプレッサー細胞）を排除するため、また、同じ生存因子および刺激因子（特に、ＩＬ７およびＩＬ１５などのサイトカイン）に関して競合するサイトカインシンクのように挙動し得る内因性リンパ球を排除することにより移入されたリンパ球のｉｎ  ｖｉｖｏ拡大増殖（恒常的拡大増殖による）を促進するために、細胞移入前に対象に条件付けを行うこともできる。ＡＣＴの際に注入されたリンパ球は、長期保護を誘導し得る「生きた薬物(living drugs)」として機能する。選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤はＡＣＴの効果を増強し得る。
【０５１０】
腫瘍浸潤リンパ球は、腫瘍性病変内に見られるヘテロな細胞集団であり、主としてＴ細胞から構成される。ＴＩＬの画分は、ユニークなまたは共通の腫瘍関連抗原に対するＴＣＲ（Ｔ細胞受容体）を発現し、悪性細胞に対する細胞傷害作用を発揮する。これらのＴＩＬは、切除された腫瘍から単離し、選別し、ｅｘ  ｖｉｖｏで拡大培養した後、対象に再導入することができる。対象は、（例えば、ＴＩＬの再導入の前、最中、および／または後に）選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、その有効量、例えば、その治療上有効量）で処置することができる。あるいはまたは加えて、対象にＴＩＬを移入する前にＴＩＬを活性化させるために、Ｔ細胞を選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、その有効量、例えば、その治療上有効量）で処理されたマクロファージとｅｘ  ｖｉｖｏで接触させることができる。選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、対象においてＴＩＬの効果を増強し得る。
【０５１１】
Ｔ細胞特異性を向け直すためには、（ｉ）腫瘍関連抗原に対するＴＣＲによる遺伝子改変、および（ｉｉ）ＣＡＲの導入の、２つの一般的アプローチがある。自己Ｔ細胞を腫瘍細胞に向け直すためには理論的に種々のタイプの抗原を使用することができる：組織特異的分化抗原、例えば、黒色腫では、メラノサイト分化抗原（ＭＤＡ）；例えば、ｇｐ１００またはＭＡＲＴ１、およびＢ細胞悪性腫瘍ではＣＤ１９、癌精巣（生殖細胞）抗原（例えば、ＮＹ−ＥＳＯ−１）（これらは多くの腫瘍で検出されるが、精巣以外の正常成体組織では検出されない（１１））、過剰発現自己タンパク質（例えば、ＨＥＲ２）、突然変異抗原（例えば、ＢＲＡＦ−Ｖ６００Ｅ）、およびウイルス抗原（例えば、ホジキン病のＥＢＶおよび子宮頸癌のＨＰＶ）。
【０５１２】
遺伝的に改変されたＴ細胞（ＴＣＲまたはＣＡＲ）は、ウイルスベクター（レトロウイルスもしくはレンチウイルス）またはトランスポゾン系（例えば、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙ）を用いてトランスフェクトされる。トランスフェクション後、遺伝的に改変されたＴ細胞を拡大培養し、ＴＩＬプロトコールで用いたものと同様の条件付けリンパ除去で処置した対象に移入する。対象は、（例えば、ＴＣＲ療法の前、最中、および／または後に）選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、その有効量、例えば、その治療上有効量）で処置することができる。あるいはまたは加えて、対象に改変Ｔ細胞を移入する前に改変Ｔ細胞を活性化させるために、Ｔ細胞を選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、その有効量、例えば、その治療上有効量）で処理したマクロファージとｅｘ  ｖｉｖｏで接触させることができる。選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、対象においてＴＣＲ療法の効果を増強し得る。
【０５１３】
ＴＣＲ  Ｔ細胞は、腫瘍抗原に対して特異性を有する可変α鎖およびβ鎖が患者または腫瘍抗原で免疫されたヒト化マウスのいずれかに由来するＴＣＲでクローニングされたＴ細胞である。このようなＴ細胞は、ＭＨＣに関して発現される処理されたペプチド抗原を認識する。
【０５１４】
ＣＡＲ  Ｔ細胞は、抗体由来単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）とＴ細胞細胞内シグナル伝達ドメインを融合することによって構築される。このようなＴ細胞は、非ＭＨＣ拘束様式で細胞表面抗原を認識する。それらは抗原処理および提示に依存しない。第一世代ＣＡＲは、ＣＤ３ξの細胞内シグナル伝達ドメインに連結されたｓｃＦｖからなった。注入されるＴ細胞の持続性および増殖を改善するために、エンドドメイン内に１または複数の補助刺激分子、例えば、ＣＤ２８、ＯＸ４０、および４−１ＢＢ（「二次シグナルを再生する」）の細胞内ドメインを組み込んだ第二世代および第三世代ＣＡＲが開発された。対象は、（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞療法の前、最中、および／または後に）選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、その有効量、例えば、その治療上有効量）で処置することができる。あるいはまたは加えて、対象に改変Ｔ細胞を移入する前に改変Ｔ細胞を活性化させるために、Ｔ細胞を、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、その有効量、例えば、その治療上有効量）で処理したマクロファージと接触させることができる。選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、対象においてＣＡＲ  Ｔ細胞療法の効果を導入し得る。
【０５１５】
癌ワクチン療法
骨髄性細胞（例えば、単球、マクロファージ、および／もしくは樹状細胞）ならびに／またはＣＤ８＋Ｔ細胞に対するその効果のために、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、例えば、ヒト対象において癌ワクチン療法を増強するために有用であり得る。選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、癌ワクチン療法に対する対象の応答を増強するためにｉｎ  ｖｉｖｏおよび／またはｅｘ  ｖｉｖｏで使用され得る。選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、例えば、ヒト対象における癌ワクチン療法において有用であり得る。選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、癌ワクチン療法の一部としてｉｎ  ｖｉｖｏおよび／またはｅｘ  ｖｉｖｏで使用され得る。
【０５１６】
本明細書に提供されるデータは、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、その有効量、例えば、その治療上有効量）で処理された（例えば、活性化された）マクロファージが、例えば、非処理マクロファージの表現型に比べた場合に、炎症誘発性表現型を有することを示す。これは例えば、癌ワクチン療法に対する対象の応答の増強をもたらし得る。癌ワクチン療法を受けている対象は、（例えば、癌ワクチン療法の前、最中、および／または後に）選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、その有効量、例えば、その治療上有効量）で処置することができる。
【０５１７】
癌ワクチン療法には、例えば、ＧＶＡＸおよびペプチドワクチンが含まれる。
【０５１８】
ＧＶＡＸは、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）遺伝子でトランスフェクトされた腫瘍細胞ワクチンである。例えば、Nemunaitis, Expert Review of Vaccines 4:259-274 (2005)参照。
【０５１９】
ペプチドワクチンは、標的性の高い免疫応答の誘導を工作し、その結果、アレルゲン配列および／または反応原性配列を回避するために短いペプチドフラグメントの利用に頼る、特異的免疫応答を惹起するために魅力的な戦略である。ペプチドワクチンは、１以上の短いまたは長いアミノ酸配列を腫瘍抗原として組み込み、ワクチンアジュバントと合わせることができる。よって、ペプチドワクチンは、広義には、ワクチンとともにタンパク質、タンパク質サブユニット、ＤＮＡ、またはＲＮＡを使用する、定義された抗原ワクチンのカテゴリーに入る。ペプチドワクチンには、合成長鎖ペプチド（ＳＬＰ）ワクチンが含まれる。例えば、van der Sluis et al., Cancer Immunol. Res 3:1042-1051 (2015); Li et al., Vaccines, 2:515-536 (2014); Slingluff et al., Cancer J., 17:343-350 (2011)参照。
【０５２０】
医薬製剤および送達
本発明の阻害剤は単独で使用してもよいし、または標準的な抗癌治療と併用してもよい。
【０５２１】
選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、全身投与および局所投与の両方を含む好適な投与経によって投与され得る。全身投与には、経口投与、非経口投与、経皮投与、直腸投与、および吸入による投与が含まれる。非経口投与は、腸内投与、経皮投与、または吸入による投与以外の投与経路を意味し、一般に注射または注入による。非経口投与には、静脈内、筋肉内、および皮下注射または注入が含まれる。吸入は、口腔を介する吸入または鼻道を介する吸入であれ患者の肺への投与を意味する。局所投与には、皮膚への適用が含まれる。選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、腫瘍内投与され得る。
【０５２２】
選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、１回でまたは複数の用量が所与の期間の間に種々の時間間隔で投与される投与計画に従って投与することができる。例えば、用量は１日に１回、２回、３回、または４回投与することができる。用量は所望の治療効果が達成されるまで、または所望の治療効果を維持するために無期限に投与することができる。本発明の化合物の好適な投与計画は、吸収、分布、および半減期などのその化合物の薬物動態特性によって異なり、当業者によって決定することができる。加えて、本発明の化合物の好適な投与計画は、このような計画が投与される期間を含め、処置される病態、処置される病態の重篤度、処置される患者の年齢および生理状態、処置される患者の病歴、併用療法の性質、所望の治療効果、ならびに当業者の知識および専門性の範囲内の類似の因子によって異なる。さらに、好適な投与計画は、投与計画に対する個々の患者の応答が示されれば、または個々の患者が変化を必要とすれば経時的に調整を必要とし得ることが当業者により理解されるであろう。
【０５２３】
癌の処置は、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤を単剤療法として使用し、または二剤もしくは多剤併用療法で、例えば、他の薬剤と組み合わせて、例えば、当技術分野で知られるような有効量で投与される、例えば、下記薬剤：ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ阻害剤、アセチルトランスフェラーゼエンハンサー、プロテアソームまたはＨＳＰ９０阻害剤、ならびに限定されるものではないが、コルチコステロイド、ラパマイシン、アザチオプリン、ミコフェノラート、シクロスポリン、メルカプトプリン（６−ＭＰ）、バシリキシマブ、ダクリズマブ、シロリムス、タクロリムス、ムロモナブ−ＣＤ３、シクロホスファミド、およびメトトレキサートを含む制御性Ｔ細胞を活性化しない１以上の免疫抑制剤、または本明細書に記載の他の薬剤のうち１以上と組み合わせて達成することができる。
【０５２４】
選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、必ずしも必要ではないが通常には、患者（例えば、対象）に投与する前に医薬組成物へと処方される。よって、別の態様では、本開示は、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤と薬学的に許容可能な賦形剤とを含んでなる医薬組成物を対象とする。
【０５２５】
選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、バルク形態で調製および包装してもよく、そこから有効量の選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤を抽出した後、散剤、シロップ、および注射溶液などとともに患者に与えることができる。あるいは、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤を含有する医薬組成物は単位投与形で調製し、包装してもよい。経口適用では、例えば、１以上の錠剤またはカプセル剤が投与され得る。医薬組成物の用量は、少なくとも有効量（例えば、治療上有効量）の選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤を含有する。単位投与形で調製される場合、本医薬組成物は、１ｍｇ〜１０００ｍｇの選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤を含有し得る。
【０５２６】
本医薬組成物は一般に、１種類の選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤を含有する。しかしながら、本特定の実施形態では、医薬組成物は、２種類以上の選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤を含有する。加えて、本医薬組成物は、１種類以上の付加的な薬学上有効な化合物を場合によりさらに含んでなってもよい。
【０５２７】
本明細書で使用する場合、「薬学的に許容可能な賦形剤」は、組成物に形態または稠度を与える上で含まれる材料、組成物またはビヒクルを意味する。各賦形剤は、患者に投与された際に本発明の化合物の有効性を実質的に低下させる相互作用および薬学的に許容可能でない医薬組成物をもたらす相互作用は回避されるように、混合した際に医薬組成物の他の成分と適合しなければならない。加えて、各賦形剤は、当然のことながら、それを薬学的に許容可能とするに十分高い純度でなければならない。
【０５２８】
選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤および薬学的に許容可能な賦形剤または賦形剤は一般に、所望の投与経路によって患者（例えば、対象）に投与するのに適合した投与形に処方される。従来の投与形には、（１）錠剤、カプセル剤、カプレット剤、丸剤、トローチ剤、散剤、シロップ剤、エリキシル剤、懸濁液、溶液、エマルション、サシェ剤、およびカシェ剤などの経口投与に適合したもの；（２）無菌溶液、懸濁液、および再構成用散剤などの非経口投与に適合したもの；（３）経皮パッチなどの経皮投与に適合したもの；（４）坐剤などの直腸投与に適合したもの；（５）エアゾールおよび溶液などの吸入に適合したもの；ならびに（６）クリーム、軟膏、ローション、溶液、ペースト、スプレー、フォーム、およびゲルなどの局所投与に適合したものが含まれる。
【０５２９】
好適な薬学的に許容可能な賦形剤は、選択される特定の投与形によって異なる。加えて、好適な薬学的に許容可能な賦形剤は、それらが組成物中で働き得る特定の機能のために選択され得る。例えば、ある種の薬学的に許容可能な賦形剤は、均一な投与形の製造を助けるそれらの能力のために選択され得る。ある種の薬学的に許容可能な賦形剤は、安定な投与形の製造を助けるそれらの能力のために選択され得る。ある種の薬学的に許容可能な賦形剤は、患者に投与された際に本発明の１または複数の化合物をある器官または身体部分から別の器官または身体部分に運搬または輸送するのを助けるそれらの能力のために選択され得る。ある種の薬学的に許容可能な賦形剤は、患者のコンプライアンスを高めるそれらの能力のために選択され得る。
【０５３０】
好適な薬学的に許容可能な賦形剤としては、下記の種の賦形剤：希釈剤、増量剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、流動促進剤、造粒剤、被覆剤、湿潤剤、溶媒、補助溶媒、沈殿防止剤、乳化剤、甘味剤、香味剤、矯味剤、着色剤、固化防止剤、保湿剤、キレート剤、可塑剤、増粘剤、抗酸化剤、保存剤、安定剤、界面活性剤、および緩衝剤が含まれる。当業者ならば、ある種の薬学的に許容可能な賦形剤が２つ以上の機能を果たす場合があり、どのくらいの賦形剤が処方物中に存在するか、および他にどんな成分が処方物中に存在するかによって別の機能を果たす場合があることを認識するであろう。
【０５３１】
当業者は、本発明で使用するための適当な量で好適な薬学的に許容可能な賦形剤を選択できるだけの知識と技量を有する。加えて、薬学的に許容可能な賦形剤を記載し、好適な薬学的に許容可能な賦形剤の選択に有用であり得る、当業者に利用可能ないくつかの情報源がある。例としては、Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company)、The Handbook of Pharmaceutical Additives (Gower Publishing Limited)、およびThe Handbook of Pharmaceutical Excipients (the American Pharmaceutical Association and the Pharmaceutical Press)が挙げられる。
【０５３２】
本発明の医薬組成物は、当業者に公知の技術および方法を用いて調製される。当技術分野で慣用される方法のいくつかはRemington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company)に記載されている。
【０５３３】
１つの態様では、本開示は、有効量の本発明の化合物と希釈剤または増量剤とを含んでなる、錠剤またはカプセル剤などの固体経口投与形の使用を対象とする。好適な希釈剤および増量剤としては、ラクトース、スクロース、デキストロース、マンニトール、ソルビトール、デンプン（例えば、コーンスターチ、ジャガイモデンプン、およびアルファー化デンプン）、セルロースおよびその誘導体（例えば、微晶質セルロース）、硫酸カルシウムおよび第二リン酸カルシウムが含まれる。経口固体投与形は、結合剤をさらに含んでなり得る。好適な結合剤としては、デンプン（例えば、コーンスターチ、ジャガイモデンプン、およびアルファー化デンプン）、ゼラチン、アラビアガム、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸、トラガカントガム、グアーガム、ポビドン、およびセルロースおよびその誘導体（例えば、微晶質セルロース）が含まれる。経口固体投与形は、崩壊剤をさらに含んでなり得る。好適な崩壊剤としては、クロスポビドン、グリコール酸ナトリウムデンプン、クロスカルメロース、アルギン酸、およびカルボキシメチルセルロースナトリウムが含まれる。経口固体投与形は、滑沢剤をさらに含んでなり得る。好適な滑沢剤としては、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、およびタルクが含まれる。
【０５３４】
選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害を評価するための実験技術
所与の薬剤が選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤であるかどうかを評価するために使用可能な技術には、例えば、Lobera et al. (Nat. Chem. Biol. 9:319-325 (2013)およびＷＯ２０１１／０８８１８１に記載されているものが含まれる。
【０５３５】
ヒストン脱アセチル化酵素９（ＨＤＡＣ９）阻害アッセイ。新規なヒストン脱アセチル化酵素９（ＨＤＡＣ９）阻害剤は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ生化学機能アッセイで特性決定を行うことができる。このアッセイでは、蛍光基質のＨＤＡＣ９による脱アセチル化のための蛍光シグナルの増強を測定する。市販の基質はクラスＩＩａ  ＨＤＡＣ特異的であり、かつ、アセチル化リシン残基を含み、脱アセチル化後のトリプシン切断時に蛍光シグナルを放出する。
【０５３６】
具体的には、１００％ＤＭＳＯで種々の濃度に希釈した試験化合物をまず３８４ウェルアッセイプレートに分注する。次に、Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ  Ｃｏｍｂｉ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用い、完全アッセイバッファー（５０ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ８．０、１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、２．７ｍＭ  ＫＣｌ、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０．０５％ＢＳＡおよび０．００５％ツィーン２０）中の組換えＨＤＡＣ９アイソフォーム４（ＢＰＳ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅから購入）を各ウェルに加え（５ｕＬ／ウェル）（ｕＬ＝マイクロリットル）、その後、５ｕＬ／ウェルの基質（ＢＰＳ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅから購入、最終４．５ｕＭ（マイクロモル））を加える。室温で４５分のインキュベーション後、１０ｕＬ  ２×現像溶液（４０ｕＭトリプシンおよび２０ｕＭトリコスタチンＡを含むアッセイバッファー）を加える。次に、これらのプレートを室温で１時間インキュベートした後、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）プレートリーダーにて４５０ｎｍの蛍光強度モードで読み取る。各試験ウェルにおける化合物によるＨＤＡＣ９活性の阻害パーセントを、ＤＭＳＯ単独を含有する対照ウェルの蛍光シグナルに対して正規化することにより計算する。試験化合物のｐＩＣ５０値は、１００ｕＭ最終化合物濃度から始めた１１点３倍希釈系から、ＡｃｔｉｖｉｔｙＢａｓｅ５データ分析ツール（ＩＤＢＳ）を用い、非線形曲線フィッティングから計算する。
【０５３７】
用量応答実験については、正規化データを、式ｙ＝ａ＋（ｂ−ａ）／（１＋（１０＾ｘ／１０＾ｃ）＾ｄ）（式中、ａは最小活性％であり、ｂは最大活性％であり、ｃはｐＩＣ５０であり、ｄはヒル勾配である）を用いて、ＡＢＡＳＥ／ＸＣ５０によりフィッティングする。
【０５３８】
ｐＩＣ５０は、最低２回の実験の平均値を出すように平均をとる。例えば、この方法を使用すれば、ＷＯ２０１１／０８８１８１の実施例１〜１４１の化合物は４．８を超えるｐＩＣ５０を示した。ＷＯ２０１１／０８８１８１の実施例２１、３２、７８、１１０および１３２の化合物は、この方法においてＨＤＡＣ９を平均ｐＩＣ５０＞６で阻害した。
【０５３９】
ＨＤＡＣ選択性アッセイ。用量応答試験は、反応混合物中、最大最終化合物濃度１００ｕＭから３倍希釈系の１０濃度で行い、Ｒｅａｃｔｉｏｎ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｃｏｒｐ．（マルバーン、ペンシルバニア州）で行った。アッセイは総て、ＨＤＡＣによる蛍光ペプチド基質上のアセチル化またはトリフルオロアセチル化リシン残基の脱アセチル化という同じ原理に基づいた。ＨＤＡＣ１、ＨＤＡＣ２、ＨＤＡＣ３、ＨＤＡＣ６、ＨＤＡＣ１０およびＨＤＡＣ１１は、ｐ５３の残基３７９〜３８２（Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ（Ａｃ））に基づく基質を用いた。ＨＤＡＣ８の場合は、ｐ５３の残基３７９〜３８２（Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−Ｌｙｓ（Ａｃ））に基づくジアセチル化ペプチド基質を使用した。ＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣ５、ＨＤＡＣ７およびＨＤＡＣ９アッセイでは、クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ特異的蛍光基質（Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（トリフルオロアセチル）−ＡＭＣ）を使用した。反応は総て、終濃度１％ＤＭＳＯを含有するアッセイバッファー（５０ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ８．０、１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、２．７ｍＭ  ＫＣｌ、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ）中５０μＭ  ＨＤＡＣ基質で行い、２時間３０℃でインキュベートし、トリコスタチンＡおよびトリプシンで現像した。
【０５４０】
併用療法
骨髄性細胞（例えば、単球、マクロファージ、および／もしくは樹状細胞）ならびに／またはＣＤ８＋Ｔ細胞に対するその効果のために、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、例えば、ヒト対象における癌、例えば、固形腫瘍（および／もしくはその転移）または血液癌の処置に有用であり得る。実際に、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、例えば、単球、マクロファージおよび／またはＣＤ８＋Ｔ細胞に対するその効果のために癌療法（すなわち、抗癌療法または癌治療）の有効性を増強し得る。選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、例えば、骨髄性細胞（例えば、単球、マクロファージ、および／もしくは樹状細胞）ならびに／またはＣＤ８＋Ｔ細胞に対するその効果のために、癌療法に対する応答の持続性を増進し得る。選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、単独で、または癌療法の有効性を増強するため、および／もしくは処置に対する応答の持続性を増進するために癌治療と組み合わせて使用することができる。結果として、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、下記癌治療のうち１以上と併用可能である。
【０５４１】
用語「組合せ」は、同じ適応に関連する理由で同じ患者（対象）を処置するための２以上の療法の使用を意味し（例えば、その組合せの療法は、同じ適応またはそれに関連する適応および副作用もしくは症状を処置するために使用される）、それらの療法の使用または作用は時間的に重なる。それらの療法は同時に（例えば、患者に投与される単一の処方物としてもしくは同時に投与される２つの別個の処方物として）または任意の順序で逐次に投与することができる。逐次投与は、異なる時点で与えられる投与である。ある療法と別の療法の投与間の時間は、数分、数時間、数日、または数週間であり得る。選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤はまた、別の療法の用量を低減するために、例えば、投与される別の薬剤に関連する副作用を軽減するために、およびその逆で使用され得る。よって、組合せは、第２の薬剤を、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の不在下で使用されるよりも少なくとも１０、２０、３０、または５０％低い用量で、およびその逆で投与することを含み得る。
【０５４２】
その実施形態では、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、癌治療の他の療法と併用可能である。特に、抗癌療法（例えば、癌治療）では、他の化学療法薬、ホルモン、抗体薬剤ならびに本明細書で具体的に述べられたもの以外の外科的および／または放射線処置との併用療法が想定される。
【０５４３】
１つの実施形態では、付加的抗癌療法は、外科的および／または放射線療法である。
【０５４４】
１つの実施形態では、付加的抗癌療法は、少なくとも１つの付加的抗癌剤である。
【０５４５】
処置される感受性腫瘍（または血液癌）に対して活性を有する抗癌剤が組合せにおいて使用され得る。有用な抗癌剤（例えば、化学療法）としては、限定されるものではないが、ジテルペノイドおよびビンカアルカロイドなどの抗微小管剤；白金錯体；ナイトロジェンマスタード、オキシアザホスホリン、アルキルスルホネート、ニトロソ尿素、およびトリアゼンなどのアルキル化剤；アントラサイクリン、アクチノマイシンおよびブレオマイシンなどの抗生物質薬；エピポドフィロトキシンなどのトポイソメラーゼＩＩ阻害剤；プリンおよびピリミジン類似体ならびに葉酸拮抗化合物などの代謝拮抗物質；カンプトテシンなどのトポイソメラーゼＩ阻害剤；ホルモンおよびホルモン類似体；シグナル伝達経路阻害剤；非受容体型チロシンキナーゼ血管新生阻害剤；免疫治療薬；アポトーシス促進薬；および細胞周期シグナル伝達阻害剤が含まれる。
【０５４６】
１つの実施形態では、本発明の組合せは、ＨＤＡＣ阻害剤と微小管阻害剤、白金錯体、アルキル化剤、抗生物質薬、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、代謝拮抗物質、トポイソメラーゼＩ阻害剤、ホルモンおよびホルモン類似体、シグナル伝達経路阻害剤、非受容体型チロシンＭＥＫ血管新生阻害剤(non-receptor tyrosine MEKngiogenesis inhibitors)、免疫治療薬、アポトーシス促進薬、および細胞周期シグナル伝達阻害剤から選択される少なくとも１種類の抗癌剤とを含んでなる。
【０５４７】
１つの実施形態では、本発明の組合せは、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤とジテルペノイドおよびビンカアルカロイドから選択される微小管阻害剤である少なくとも１種類の抗癌剤とを含んでなる。
【０５４８】
さらなる実施形態では、少なくとも１種類の抗癌剤は、ジテルペノイドである。
【０５４９】
さらなる実施形態では、少なくとも１種類の抗癌剤は、ビンカアルカロイドである。
【０５５０】
１つの実施形態では、本発明の組合せは、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤と白金錯体である少なくとも１種類の抗癌薬剤とを含んでなる。
【０５５１】
さらなる実施形態では、少なくとも１種類の抗癌剤は、パクリタキセル、カルボプラチン、またはビノレルビンである。
【０５５２】
さらなる実施形態では、少なくとも１種類の抗癌剤は、カルボプラチンである。
【０５５３】
さらなる実施形態では、少なくとも１種類の抗癌剤は、ビノレルビンである。
【０５５４】
さらなる実施形態では、少なくとも１種類の抗癌剤は、パクリタキセルである。
【０５５５】
１つの実施形態では、本発明の組合せは、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤とシグナル伝達経路阻害剤である少なくとも１種類の抗癌剤とを含んでなる。
【０５５６】
さらなる実施形態では、シグナル伝達経路阻害剤は、増殖因子受容体キナーゼＶＥＧＦＲ２、ＴＩＥ２、ＰＤＧＦＲ、ＢＴＫ、ｅｒｂＢ２、ＥＧＦｒ、ＩＧＦＲ−１、ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、ＴｒｋＣ、またはｃ−ｆｍｓの阻害剤である。
【０５５７】
さらなる実施形態では、シグナル伝達経路阻害剤は、セリン／トレオニンキナーゼｒａｆｋ、ａｋｔ、またはＰＫＣ−ζの阻害剤である。
【０５５８】
さらなる実施形態では、シグナル伝達経路阻害剤は、ｓｒｃファミリーキナーゼから選択される非受容体チロシンキナーゼの阻害剤である。
【０５５９】
さらなる実施形態では、シグナル伝達経路阻害剤は、ｃ−ｓｒｃの阻害剤である。
【０５６０】
さらなる実施形態では、シグナル伝達経路阻害剤は、ファルネシルトランスフェラーゼおよびゲラニルゲラニルトランスフェラーゼの阻害剤から選択されるＲａｓ癌遺伝子の阻害剤である。
【０５６１】
さらなる実施形態では、シグナル伝達経路阻害剤は、ＰＩ３Ｋからなる群から選択されるセリン／トレオニンキナーゼの阻害剤である。
【０５６２】
さらなる実施形態では、シグナル伝達経路阻害剤は、二重ＥＧＦｒ／ｅｒｂＢ２阻害剤、例えば、下記構造のＮ−｛３−クロロ−４−［（３−フルオロベンジル）オキシ］フェニル｝−６−［５−（｛［２−（メタンスルホニル）エチル］アミノ｝メチル）−２−フリル］−４−キナゾリンアミンである。
【化６】
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【０５６３】
１つの実施形態では、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤および細胞周期シグナル伝達阻害剤である少なくとも１種類の抗癌剤が使用される。
【０５６４】
さらなる実施形態では、細胞周期シグナル伝達阻害剤は、ＣＤＫ２、ＣＤＫ４またはＣＤＫ６の阻害剤である。
【０５６５】
さらなる実施形態では、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、免疫療法、例えば、チェックポイント阻害剤、例えば、ＰＤ−１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体（例えば、ペンブロリズマブ（キートルーダ（商標））もしくはニボルマブ（オプジーボ（商標）））、またはＣＴＬＡ−４阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、イピリムマブ（ヤーボイ（商標）））、またはＰＤ−Ｌ１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体と併用される。
【０５６６】
さらなる実施形態では、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤は、ＰＤ−１阻害剤、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体（例えば、ペンブロリズマブ（キートルーダ（商標））もしくはニボルマブ（オプジーボ（商標）））と併用される。
【０５６７】
さらなる実施形態では、付加的抗癌剤は、免疫療法、例えば、免疫刺激性アゴニスト抗体（例えば、モノクローナル抗体）、例えば、抗ＣＤ１３７、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ４０、または抗ＯＸ４０アゴニスト抗体である。
【０５６８】
さらなる実施形態では、付加的抗癌剤はエピルビシンである。
【０５６９】
さらなる実施形態では、付加的抗癌剤はイダルビシンである。
【０５７０】
さらなる実施形態では、付加的抗癌剤はデシタビンである。
【０５７１】
さらなる実施形態では、付加的抗癌剤はアザシチジンである。
【０５７２】
本明細書に記載の方法において、選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤と併用可能な他の抗癌剤は、下記のものから選択することができる。
微小管阻害剤または有糸分裂阻害剤：微小管阻害剤または有糸分裂阻害剤は、細胞周期のＭ期、すなわち有糸分裂期の間に腫瘍細胞の微小管に対して活性である細胞周期特異的薬剤である。微小管阻害剤の例としては、限定されるものではないが、ジテルペノイドおよびビンカアルカロイドが挙げられる。
【０５７３】
ジテルペノイドは、天然源に由来し、細胞周期のＧ２／Ｍ期に作用する細胞周期特異的抗癌剤である。ジテルペノイドは、微小管のβ−チューブリンサブユニットと結合することによりこのタンパク質を安定化させると考えられている。その後タンパク質の分解が阻害され、有糸分裂が停止し、細胞死をたどると思われる。ジテルペノイドの例としては、限定されるものではないが、パクリタキセルおよびその類似体であるドセタキセルが挙げられる。
【０５７４】
パクリタキセル、５β，２０−エポキシ−１，２α，４，７β，１０β，１３α−ヘキサ−ヒドロキシタクス−１１−エン−９−オン４，１０−ジアセテート２−ベンゾエートの（２Ｒ，３Ｓ）−Ｎ−ベンゾイル−３−フェニルイソセリンとの１３−エステルは、タイヘイヨウイチイ(Taxus brevifolia)から単離された天然ジテルペン生成物であり、注射液タキソール(TAXOL)（商標）として市販されている。パクリタキセルは、テルペンのタキサンファミリーのメンバーである。パクリタキセルは、米国における難治性卵巣癌の治療に用(Markman et al., Yale Journal of Biology and Medicine, 64:583, 1991; McGuire et al., Ann. lntem, Med., 111:273,1989)および乳癌の治療(Holmes et al., J. Nat. Cancer Inst., 83:1797,1991)に承認されている。パクリタキセルは、皮膚における新生物(Einzig et. al., Proc. Am. Soc. Clin. Oncol., 20:46)および頭頸部癌(Forastire et. al., Sem. Oncol., 20:56, 1990)の治療のための潜在的候補である。またこの化合物は、多発性嚢胞腎疾患(Woo et. al., Nature, 368:750. 1994)、肺癌、およびマラリアの治療にも可能性を示している。パクリタキセルで患者を治療すると、閾値濃度（５０ｎＭ）を超える投与期間に関連して(Kearns, C.M. et. al., Seminars in Oncology, 3(6) p.16-23, 1995)、骨髄抑制が起こる（複数の細胞系譜、Ignoff, R.J. et. al, Cancer Chemotherapy Pocket Guide, 1998）。
【０５７５】
ドセタキセル、（２Ｒ，３Ｓ）−Ｎ−カルボキシ−３−フェニルイソセリン，Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルエステルの５β−２０−エポキシ−１，２α，４，７β，１０β，１３α−ヘキサヒドロキシタクス−１１−エン−９−オン４−アセテート２−ベンゾエートとの１３−エステルの三水和物は、注射液としてタキソテール(TAXOTERE)（商標）として市販されている。ドセタキセルは、乳癌の治療に指示される。ドセタキセルは、ヨーロッパイチイの針葉から抽出した天然の前駆物質１０−デアセチル−バッカチンＩＩＩを使用して製造された、パクリタキセル（前項参照）の半合成誘導体である。
【０５７６】
ビンカアルカロイドは、ニチニチソウ由来の細胞周期特異的抗新生物薬である。ビンカアルカロイドは、チューブリンと特異的に結合することによって細胞周期のＭ期（有糸分裂）に作用する。その結果、結合されたチューブリン分子は、重合して微小管になることができない。有糸分裂は中期で停止し、細胞死をたどると考えられている。ビンカアルカロイドの例としては、限定されるものではないが、ビンブラスチン、ビンクリスチン、およびビノレルビンが挙げられる。
【０５７７】
ビンブラスチン、硫酸ビンカロイコブラスチンは、注射液としてベルバン(VELBAN)（商標）として市販されている。ビンブラスチンは、種々の固形腫瘍の第二選択療法として指示される可能性があるが、精巣癌、ならびにホジキン病、リンパ球性および組織球性リンパ腫を含む種々のリンパ腫の治療に主として指示される。骨髄抑制がビンブラスチンの用量制限副作用である。
【０５７８】
ビンクリスチン、ビンカロイコブラスチンの２２−オキソ−硫酸塩は、注射液としてオンコビン(ONCOVIN)（商標）として市販されている。ビンクリスチンは、急性白血病の治療に指示されており、ホジキンおよび非ホジキン悪性リンパ腫の治療計画の中でも使用されている。
【０５７９】
酒石酸ビノレルビンの注射液（ナベルビン(NAVELBINE)（商標））として市販されているビノレルビン、３’，４’−ジデヒドロ−４’−デオキシ−Ｃ’−ノルビンカロイコブラスチン［Ｒ−（Ｒ＊，Ｒ＊）−２，３−ジヒドロキシブタン二酸（１：２）（塩）］は、半合成ビンカアルカロイドである。ビノレルビンは、単剤として、またはシスプラチンなどの他の化学療法薬と組み合わせて、種々の固形腫瘍、特に、非小細胞肺癌、進行性乳癌、およびホルモン不応性前立腺癌の治療に指示される。
【０５８０】
白金錯体：白金配位錯体は、非細胞周期特異的抗癌剤であり、ＤＮＡと相互作用する。白金錯体は、腫瘍細胞に侵入し、アクア化を受け、ＤＮＡとの鎖内架橋および鎖間架橋を形成し、腫瘍に対して有害な生物学的作用を引き起こす。白金配位錯体の例としては、限定されるものではないが、オキサリプラチン、シスプラチンおよびカルボプラチンが挙げられる。
【０５８１】
シスプラチン、シス−ジアンミンジクロロ白金は、注射液としてプラチノール(PLATINOL)（商標）として市販されている。シスプラチンは、主として転移性の精巣癌および卵巣癌ならびに進行性膀胱癌の治療に指示される。
【０５８２】
カルボプラチン、ジアンミン［１，１−シクロブタン−ジカルボキシレート（２−）−Ｏ，Ｏ’］白金は、注射液としてパラプラチン(PARAPLATIN)（商標）として市販されている。カルボプラチンは、主として進行性卵巣癌の第一選択および第二選択治療に指示される。
【０５８３】
アルキル化剤：アルキル化剤は、非細胞周期特異的抗癌剤(non-phase anti-cancer specific agents)であり、かつ、強力な求電子試薬である。一般に、アルキル化剤は、アルキル化によって、リン酸基、アミノ基、スルフヒドリル基、ヒドロキシル基、カルボキシル基、およびイミダゾール基などのＤＮＡ分子の求核部分を介してＤＮＡと共有結合を形成する。このようなアルキル化によって核酸機能が破壊され細胞死に至る。アルキル化剤の例としては、限定されるものではないが、シクロホスファミド、メルファラン、およびクロラムブシルなどのナイトロジェンマスタード；ブスルファンなどのスルホン酸アルキル；カルムスチンなどのニトロ尿素；ならびにダカルバジンなどのトリアゼンが挙げられる。
【０５８４】
シクロホスファミド、２−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］テトラヒドロ−２Ｈ−１，３，２−オキシアザホスホリン２−オキシド一水和物は、注射液または錠剤としてシトキサン(CYTOXAN)（商標）として市販されている。シクロホスファミドは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、悪性リンパ腫、多発性骨髄腫、および白血病の治療に指示される。
【０５８５】
メルファラン、４−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］−Ｌ−フェニルアラニンは、注射液または錠剤としてアルケラン(ALKERAN)（商標）として市販されている。メルファランは、多発性骨髄腫および切除不能な卵巣上皮癌の待機的治療に指示される。骨髄抑制がメルファランの最も一般的な用量制限副作用である。
【０５８６】
クロラムブシル、４−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］ベンゼンブタン酸は、ロイケラン(LEUKERAN)（商標）錠剤として市販されている。クロラムブシルは、慢性リンパ性白血病、ならびにリンパ肉腫、巨大濾胞性リンパ腫、およびホジキン病などの悪性リンパ腫の待機的治療に指示される。
【０５８７】
ブスルファン、ジメタンスルホン酸１，４−ブタンジオールは、マイレラン(MYLERAN)（商標）錠剤として市販されている。ブスルファンは、慢性骨髄性白血病の待機的治療に指示される。
【０５８８】
カルムスチン、１，３−［ビス（２−クロロエチル）−１−ニトロソ尿素は、ＢＩＣＮＵ（商標）として凍結乾燥物質の単一バイアルとして市販されている。カルムスチンは、脳腫瘍、多発性骨髄腫、ホジキン病、および非ホジキンリンパ腫用に、単剤として、または他の薬剤と組み合わせて、待機的治療に指示される。
【０５８９】
ダカルバジン、５−（３，３−ジメチル−１−トリアゼノ）−イミダゾール−４−カルボキサミドは、材料の単一バイアルとしてＤＴＩＣ−ＤＯＭＥ（商標）として市販されている。ダカルバジンは、転移性悪性黒色腫の治療、および他の薬剤と組み合わせてホジキン病の第二選択治療に指示される。
【０５９０】
抗生物質系抗新生物薬：抗生物質系抗新生物薬は、非細胞周期特異的薬剤であり、ＤＮＡと結合するかまたはＤＮＡにインターカレートする。一般に、このような作用によって安定なＤＮＡ複合体かまたは鎖の切断が生じ、それにより核酸の通常機能が乱れ、細胞死に至る。抗生物質系抗新生物薬の例としては、限定されるものではないが、ダクチノマイシンなどのアクチノマイシン；ダウノルビシンおよびドキソルビシンなどのアントロサイクリン；ならびにブレオマイシンが挙げられる。
【０５９１】
ダクチノマイシンは、アクチノマイシンＤとしても知られ、注射液の形態でコスメゲン(COSMEGEN)（商標）として市販されている。ダクチノマイシンは、ウィルムス腫瘍および横紋筋肉腫の治療に指示される。
【０５９２】
ダウノルビシン、（８Ｓ−シス−）−８−アセチル−１０−［（３−アミノ−２，３，６−トリデオキシ−α−Ｌ−リクソ−ヘキソピラノシル）オキシ］−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６，８，１１−トリヒドロキシ−１−メトキシ−５，１２ナフタセンジオン塩酸塩は、リポソーム注射形態としてダウノキソーム(DAUNOXOME)（商標）として、または注射液としてセルビジン(CERUBIDINE)（商標）として市販されている。ダウノルビシンは、急性非リンパ球性白血病および進行性ＨＩＶ関連カポジ肉腫の治療における寛解導入に指示される。
【０５９３】
ドキソルビシン、（８Ｓ，１０Ｓ）−１０−［（３−アミノ−２，３，６−トリデオキシ−α−Ｌ−リクソ−ヘキソピラノシル）オキシ］−８−グリコロイル，７，８，９，１０−テトラヒドロ−６，８，１１−トリヒドロキシ−１−メトキシ−５，１２ナフタセンジオン塩酸塩は、注射可能な形態としてルベックス(RUBEX)（商標）またはアドリアマイシンＲＤＦ(ADRIAMYCIN RDF)（商標）として市販されている。ドキソルビシンは、主として急性リンパ芽球性白血病および急性骨髄芽球性白血病の治療に指示されるが、いくつかの固形腫瘍およびリンパ腫の治療における有用成分でもある。
【０５９４】
ブレオマイシン、ストレプトミセス・ヴェルチシルス(Streptomyces verticillus)の株から単離された細胞傷害性グリコペプチド系抗生物質の混合物は、ベレノキサン(BLENOXANE)（商標）として市販されている。ブレオマイシンは、単剤として、または他の薬剤と組み合わせて、扁平上皮癌、リンパ腫、および精巣癌の待機的治療に指示される。
【０５９５】
トポイソメラーゼＩＩ阻害剤：トポイソメラーゼＩＩ阻害剤としては、限定されるものではないが、エピポドフィロトキシンが挙げられる。
【０５９６】
エピポドフィロトキシンは、マンドレイク植物由来の細胞周期特異的抗新生物薬である。エピポドフィロトキシンは、一般に、トポイソメラーゼＩＩとＤＮＡとの三元複合体を形成してＤＮＡ鎖の切断を引き起こすことによって、細胞周期のＳ期およびＧ２期において細胞に影響を及ぼす。この鎖切断が蓄積し、細胞死をたどる。エピポドフィロトキシンの例としては、限定されるものではないが、エトポシドおよびテニポシドが挙げられる。
【０５９７】
エトポシド、４’−デメチル−エピポドフィロトキシン９［４，６−０−（Ｒ）−エチリデン−β−Ｄ−グルコピラノシド］は、注射液またはカプセル剤としてベプシド(VEPESID)（商標）として市販されており、一般にＶＰ−１６として知られている。エトポシドは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、精巣癌および非小細胞肺癌の治療に指示される。
【０５９８】
テニポシド、４’−デメチル−エピポドフィロトキシン９［４，６−０−（Ｒ）−テニリデン−β−Ｄ−グルコピラノシド］は、注射液としてブモン(VUMON)（商標）として市販されており、一般にＶＭ−２６として知られている。テニポシドは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、小児における急性白血病の治療に指示される。
【０５９９】
代謝拮抗性抗新生物薬：代謝拮抗性抗新生物薬は、ＤＮＡ合成を阻害すること、またはプリンもしくはピリミジン塩基の合成を阻害し、それによりＤＮＡ合成を制限することによって細胞周期のＳ期（ＤＮＡ合成）に作用する、細胞周期特異的抗新生物薬である。結果として、Ｓ期は進行せず、細胞死となる。代謝拮抗性抗新生物薬の例としては、限定されるものではないが、フルオロウラシル、メトトレキサート、シタラビン、メカプトプリン、チオグアニン、およびゲムシタビンが挙げられる。
【０６００】
５−フルオロウラシル、５−フルオロ−２，４−（１Ｈ，３Ｈ）ピリミジンジオンは、フルオロウラシルとして市販されている。５−フルオロウラシルを投与すると、チミジル酸合成が阻害され、またＲＮＡおよびＤＮＡの両方に組み込まれる。その結果は一般に細胞死である。５−フルオロウラシルは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、乳癌、結腸癌、直腸癌、胃癌、および膵癌の治療に指示される。他のフルオロピリミジン類似体としては、５−フルオロデオキシウリジン（フロクスウリジン）および５−フルオロデオキシウリジン一リン酸が挙げられる。
【０６０１】
シタラビン、４−アミノ−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−２（１Ｈ）−ピリミジノンは、シトサール−Ｕ(CYTOSAR-U)（商標）として市販されており、一般にＡｒａ−Ｃとして知られている。シタラビンは、成長中のＤＮＡ鎖へのシタラビンの末端組み込みによってＤＮＡ鎖の伸長を阻害することにより、Ｓ期で細胞期特異性を示すと考えられている。シタラビンは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、急性白血病の治療に指示される。他のシチジン類似体としては、５−アザシチジンおよび２’，２’−ジフルオロデオキシシチジン（ゲムシタビン）が挙げられる。
【０６０２】
メルカプトプリン、１，７−ジヒドロ−６Ｈ−プリン−６−チオン一水和物は、プリントール(PURINETHOL)（商標）として市販されている。メルカプトプリンは、現時点でまだ特定されていないメカニズムによってＤＮＡ合成を阻害することにより、Ｓ期で細胞期特異性を示す。メルカプトプリンは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、急性白血病の治療に指示される。有用なメルカプトプリン類似体はアザチオプリンである。
【０６０３】
チオグアニン、２−アミノ−１，７−ジヒドロ−６Ｈ−プリン−６−チオンは、タブロイド(TABLOID)（商標）として市販されている。チオグアニンは、現時点でまだ特定されていないメカニズムによってＤＮＡ合成を阻害することにより、Ｓ期で細胞期特異性を示す。チオグアニンは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、急性白血病の治療に指示される。他のプリン類似体としては、ペントスタチン、エリスロヒドロキシノニルアデニン、リン酸フルダラビン、およびクラドリビンが挙げられる。
【０６０４】
ゲムシタビン、２’−デオキシ−２’，２’−ジフルオロシチジン一塩酸塩（β−異性体）は、ジェムザール(GEMZAR)（商標）として市販されている。ゲムシタビンは、Ｓ期にて、またＧ１／Ｓ境界を通る細胞の進行を遮断することによって、細胞期特異性を示す。ゲムシタビンは、シスプラチンと組み合わせて局所進行性非小細胞肺癌の治療に指示され、また単独で局所進行性膵癌の治療に指示される。
【０６０５】
メトトレキサート、Ｎ−［４［［（２，４−ジアミノ−６−プテリジニル）メチル］メチルアミノ］ベンゾイル］−Ｌ−グルタミン酸は、メトトレキサートナトリウムとして市販されている。メトトレキサートは、プリンヌクレオチドおよびチミジル酸の合成に必要とされるジヒドロ葉酸レダクターゼの阻害を介して、ＤＮＡの合成、修復、および／または複製を阻害することによって、特にＳ期に細胞周期作用を示す。メトトレキサートは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、絨毛癌、髄膜白血病、非ホジキンリンパ腫、ならびに乳癌、頭部癌、頸部癌、卵巣癌、および膀胱癌の治療に指示される。
【０６０６】
トポイソメラーゼＩ阻害剤：カンプトテシンおよびカンプトテシン誘導体を含むカンプトテシン類は、トポイソメラーゼＩ阻害剤として入手可能または開発中である。カンプトテシン細胞傷害活性は、そのトポイソメラーゼＩ阻害活性に関連すると考えられている。カンプトテシンの例としては、限定されるものではないが、イリノテカン、トポテカン、および下記の７−（４−メチルピペラジノ−メチレン）−１０，１１−エチレンジオキシ−２０−カンプトテシンの種々の光学形態が挙げられる。
【０６０７】
イリノテカンＨＣｌ、（４Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−９−［（４−ピペリジノピペリジノ）カルボニルオキシ］−１Ｈ−ピラノ［３’，４’，６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−３，１４（４Ｈ，１２Ｈ）−ジオン塩酸塩は、注射液カンプトサール(CAMPTOSAR)（商標）として市販されている。イリノテカンは、その活性代謝物ＳＮ−３８とともにトポイソメラーゼＩ−ＤＮＡ複合体と結合する、カンプトテシンの誘導体である。細胞傷害性は、トポイソメラーゼＩ：ＤＮＡ：イリンテカンまたはＳＮ−３８の三元複合体と複製酵素との相互作用により引き起こされる回復不能な二本鎖切断の結果として生じると考えられている。イリノテカンは、結腸または直腸の転移性癌の治療に指示される。
【０６０８】
トポテカンＨＣｌ、（Ｓ）−１０−［（ジメチルアミノ）メチル］−４−エチル−４，９−ジヒドロキシ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’，６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−３，１４−（４Ｈ，１２Ｈ）−ジオン一塩酸塩は、注射液ハイカムチン(HYCAMTIN)（商標）として市販されている。トポテカンは、トポイソメラーゼＩ−ＤＮＡ複合体と結合して、ＤＮＡ分子のねじれ歪みに応答してトポイソメラーゼＩにより引き起こされる一本鎖切断の再連結を妨げるカンプトテシンの誘導体である。トポテカンは、転移性の卵巣癌および小細胞肺癌の第二選択治療に指示される。
【０６０９】
ホルモンおよびホルモン類似体：
ホルモンおよびホルモン類似体は、ホルモンと癌の増殖および／または増殖の欠如との間に関係がある癌を処置するために有用な化合物である。癌処置に有用なホルモンおよびホルモン類似体の例としては、限定されるものではないが、小児の悪性リンパ腫および急性白血病の処置において有用なプレドニゾンおよびプレドニゾロンなどの副腎皮質ステロイド；副腎皮質癌およびエストロゲン受容体を含むホルモン依存性乳癌の処置において有用な、アミノグルテチミドおよびその他のアロマターゼ阻害剤、例えば、アナストロゾール、レトラゾール、ボラゾール、およびエキセメスタン；ホルモン依存性乳癌および子宮内膜癌の処置において有用な酢酸メゲストロールなどのプロゲクチン；前立腺癌および良性前立腺肥大の処置において有用なエストロゲン、アンドロゲン、および抗アンドロゲン作用薬、例えば、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、酢酸シプロテロンおよび５α−レダクターゼ、例えば、フィナステリドおよびデュタステライド；ホルモン依存性乳癌およびその他の感受性癌の処置において有用なタモキシフェン、トレミフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、ヨードキシフェンなどの抗エストロゲン作用薬、ならびに米国特許第５，６８１，８３５号、同第５，８７７，２１９号、および同第６，２０７，７１６号に記載されているものなどの選択的エストロゲン受容体調節薬（ＳＥＲＭＳ）；ならびに前立腺癌の処置のために黄体形成ホルモン（ＬＨ）および／または卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の放出を刺激するゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）およびその類似体、例えば、ＬＨＲＨアゴニストおよびアンタゴニスト、例えば、酢酸ゴセレリンおよびルプロリドが挙げられる。
【０６１０】
シグナル伝達経路阻害剤：シグナル伝達経路阻害剤は、細胞内変化を引き起こす化学プロセスを遮断または阻害する阻害剤である。本明細書で使用する場合、この変化は細胞増殖または分化である。本発明において有用なシグナル伝達阻害剤としては、限定されるものではないが、受容体チロシンキナーゼ、非受容体型チロシンキナーゼ、ＳＨ２／ＳＨ３ドメイン遮断剤、セリン／トレオニンキナーゼ、ホスファチジルイノシトール−３キナーゼ、ミオイノシトールシグナル伝達およびＲａｓ癌遺伝子の阻害剤が含まれる。
【０６１１】
いくつかのタンパク質チロシンキナーゼは、細胞増殖の調節に関与する種々のタンパク質の特定のチロシル残基のリン酸化を触媒する。このようなタンパク質チロシンキナーゼは、大きく受容体または非受容体型キナーゼとして分類することができる。
【０６１２】
受容体チロシンキナーゼは、細胞外リガンド結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびチロシンキナーゼドメインを有する膜貫通タンパク質である。受容体チロシンキナーゼは細胞増殖の調節に関与し、一般に、増殖因子受容体と呼ばれる。これらのキナーゼの多くの不適当なまたは制御を欠いた活性化、すなわち、例えば、過剰発現または突然変異による異常なキナーゼ増殖因子受容体活性は、制御を欠いた細胞増殖をもたらすことが示されている。よって、このようなキナーゼの異常な活性は悪性組織増殖に関連付けられている。結果として、このようなキナーゼの阻害剤は癌処置法を提供することができる。増殖因子受容体には、例えば、上皮細胞増殖因子受容体（ＥＧＦｒ）、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦｒ）、ｅｒｂＢ２、ｅｒｂＢ４、ｒｅｔ、血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦｒ）、免疫グロブリン様および上皮細胞増殖因子同一性ドメインを有するチロシンキナーゼ(tyrosine kinase with immunoglobulin-like and epidermal growth factor homology domains)（ＴＩＥ−２）、インスリン増殖因子−Ｉ（ＩＧＦＩ）受容体、マクロファージコロニー刺激因子（ｃｆｍｓ）、ＢＴＫ、ｃｋｉｔ、ｃｍｅｔ、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）受容体、Ｔｒｋ受容体（ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、およびＴｒｋＣ）、エフリン（ｅｐｈ）受容体、およびＲＥＴ癌原遺伝子が挙げられる。増殖受容体のいくつかの阻害剤が開発下にあり、リガンドアンタゴニスト、抗体、チロシンキナーゼ阻害剤およびアンチセンスオリゴヌクレオチドが含まれる。増殖因子受容体および増殖因子受容体機能を阻害する薬剤は、例えば、Kath, John C., Exp. Opin. Ther. Patents (2000) 10(6):803-818; Shawver et al DDT Vol 2, No. 2 February 1997；およびLofts, F. J. et al, “Growth factor receptors as targets”, New Molecular Targets for Cancer Chemotherapy, Workman, Paul and Kerr, David編, CRC press 1994, Londo
nに記載されている。
【０６１３】
増殖因子受容体キナーゼでないチロシンキナーゼは、非受容体型チロシンキナーゼである。抗癌薬の標的または潜在的標的となる、本発明において有用な非受容体型チロシンキナーゼには、ｃＳｒｃ、Ｌｃｋ、Ｆｙｎ、Ｙｅｓ、Ｊａｋ、ｃＡｂｌ、ＦＡＫ（接着斑キナーゼ）、ブルトン型チロシンキナーゼ、およびＢｃｒ−Ａｂｌが含まれる。このような非受容体型キナーゼおよび非受容体型チロシンキナーゼ機能を阻害する薬剤は、Sinh, S. and Corey, S.J., (1999) Journal of Hematotherapy and Stem Cell Research 8 (5): 465-80;およびBolen, J.B., Brugge, J.S., (1997) Annual review of Immunology. 15: 371-404に記載されている。
【０６１４】
ＳＨ２／ＳＨ３ドメイン遮断剤は、ＰＩ３−Ｋ  ｐ８５サブユニット、Ｓｒｃファミリーキナーゼ、アダプター分子（Ｓｈｃ、Ｃｒｋ、Ｎｃｋ、Ｇｒｂ２）およびＲａｓ−ＧＡＰをはじめとする、様々な酵素またはアダプタータンパク質においてＳＨ２またはＳＨ３ドメイン結合を混乱させる薬剤である。抗癌薬の標的としてのＳＨ２／ＳＨ３ドメインは、Smithgall, T.E. (1995), Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 34(3) 125-32に記載されている。
【０６１５】
セリン／トレオニンキナーゼの阻害剤、例えば、ＭＡＰキナーゼカスケード遮断剤、これには、Ｒａｆキナーゼ（ｒａｆｋ）、マイトジェンまたは細胞外調節キナーゼ(Mitogen or Extracellular Regulated Kinase)（ＭＥＫ）、および細胞外調節キナーゼ（ＥＲＫ）の遮断剤；およびＰＫＣ（α、β、γ、ε、μ、λ、ι、ζ）の遮断剤を含むタンパク質キナーゼＣファミリーメンバー遮断剤が含まれる。ＩｋＢキナーゼファミリー（ＩＫＫａ、ＩＫＫｂ）、ＰＫＢファミリーキナーゼ、ａｋｔキナーゼファミリーメンバー、およびＴＧＦβ受容体キナーゼ。このようなセリン／トレオニンキナーゼおよびそれらの阻害剤は、Yamamoto, T., Taya, S., Kaibuchi, K., (1999), Journal of Biochemistry. 126 (5) 799-803; Brodt, P, Samani, A., and Navab, R. (2000), Biochemical Pharmacology, 60. 1101-1107; Massague, J., Weis-Garcia, F. (1996) Cancer Surveys. 27:41-64; Philip, P.A., and Harris, A.L. (1995), Cancer Treatment and Research. 78: 3-27, Lackey, K. et al Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, (10), 2000, 223-226;米国特許第6,268,391号;およびMartinez-Iacaci, L., et al, Int. J. Cancer (2000), 88(1), 44-52に記載されている。
【０６１６】
ＰＩ３−キナーゼ、ＡＴＭ、ＤＮＡ−ＰＫ、およびＫの遮断剤を含むホスファチジルイノシトール−３キナーゼファミリーメンバーの阻害剤もまた本発明において有用である。このようなキナーゼは、Abraham, R.T. (1996), Current Opinion in Immunology. 8 (3) 412-8; Canman, C.E., Lim, D.S. (1998), Oncogene 17 (25) 3301-3308; Jackson, S.P. (1997), International Journal of Biochemistry and Cell Biology. 29 (7):935-8; and Zhong, H. et al, Cancer res, (2000) 60(6), 1541-1545に記載されている。
【０６１７】
また、ホスホリパーゼＣ遮断剤およびミオイノシトール類似体などのミオイノシトールシグナル伝達阻害剤も本発明において有用である。このようなシグナル阻害剤は、Powis, G., and Kozikowski A., (1994) New Molecular Targets for Cancer Chemotherapy, Paul Workman and David Kerr編, CRC press 1994, Londonに記載されている。
【０６１８】
シグナル伝達経路阻害剤の別の群は、Ｒａｓ癌遺伝子の阻害剤である。このような阻害剤には、ファルネシルトランスフェラーゼ、ゲラニル−ゲラニルトランスフェラーゼ、およびＣＡＡＸプロテアーゼの阻害剤、ならびにアンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイムおよび免疫療法が含まれる。このような阻害剤は、野生型突然変異ｒａｓを含有する細胞においてｒａｓ活性化を遮断し、それにより抗増殖薬として作用することが示されている。Ｒａｓ癌遺伝子阻害は、Scharovsky, O.G., Rozados, V.R., Gervasoni, S.I. Matar, P. (2000), Journal of Biomedical Science. 7(4) 292-8; Ashby, M.N. (1998), Current Opinion in Lipidology. 9 (2) 99-102;およびBioChim. Biophys. Acta, (19899) 1423(3):19-30で考察されている。
【０６１９】
受容体キナーゼリガンド結合に対する抗体アンタゴニストもまたシグナル伝達阻害剤として働き得る。この群のシグナル伝達経路阻害剤には、受容体チロシンキナーゼの細胞外リガンド結合ドメインに対するヒト化抗体の使用が含まれる。例えば、Ｉｍｃｌｏｎｅ  Ｃ２２５  ＥＧＦＲ特異的抗体（Green, M.C. et al, Monoclonal Antibody Therapy for Solid Tumors, Cancer Treat. Rev., (2000), 26(4), 269-286参照）ハーセプチン（商標）ｅｒｂＢ２抗体（Tyrosine Kinase Signalling in Breast cancer:erbB Family Receptor Tyrosine Kinases, Breast cancer Res., 2000, 2(3), 176-183参照）；および２ＣＢ  ＶＥＧＦＲ２特異的抗体（Brekken, R.A. et al, Selective Inhibition of VEGFR2 Activity by a monoclonal Anti-VEGF antibody blocks tumor growth in mice, Cancer Res. (2000) 60, 5117-5124参照）。
【０６２０】
抗血管新生薬：非受容体型ＭＥＫ血管新生阻害剤(non-receptorMEKngiogenesis inhibitors)をはじめとする抗血管新生薬も有用であり得る。例えば、血管内皮細胞(vascular edothelial)増殖因子の効果を阻害するもの（例えば、抗血管内皮細胞増殖因子抗体ベバシズマブ（アバスチン（商標））、およびその他の機構によって働く化合物（例えば、リノミド、インテグリンαｖβ３機能の阻害剤、エンドスタチンおよびアンギオスタチン）などの抗血管新生薬。
【０６２１】
免疫治療薬：例えば患者の腫瘍細胞の免疫原性を高めるためのｅｘ−ｖｉｖｏおよびｉｎ−ｖｉｖｏアプローチを含む免疫療法アプローチ、例えば、インターロイキン２、インターロイキン４または顆粒球マクロファージコロニー刺激因子などのサイトカインによるトランスフェクション、Ｔ細胞アネルギーを低減するアプローチ、サイトカイントランスフェクト樹状細胞などのトランスフェクト免疫細胞を使用するアプローチ、サイトカイントランスフェクト腫瘍細胞株を使用するアプローチおよび抗イディオタイプ抗体を使用するアプローチ。
【０６２２】
アポトーシス促進薬：アポトーシス促進計画で使用される薬剤（例えば、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴヌクレオチド、小分子ＢＨ３模倣剤、ＳＭＡＣ模倣剤、またはＴＲＡＩＬ類似体）。
【０６２３】
細胞周期シグナル伝達阻害剤：細胞周期シグナル伝達阻害剤は、細胞周期の制御に関与する分子を阻害する。サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）と呼ばれるタンパク質キナーゼファミリーおよびそれらとサイクリンと呼ばれるタンパク質ファミリーとの相互作用が、真核細胞周期の進行を制御している。細胞周期の正常な進行には、種々のサイクリン／ＣＤＫ複合体の協調した活性化および不活化が不可欠である。細胞周期シグナル伝達のいくつかの阻害剤が開発下にある。例えば、ＣＤＫ２、ＣＤＫ４、およびＣＤＫ６をはじめとするサイクリン依存性キナーゼおよびそれらの阻害剤の例は、例えば、Rosania et al, Exp. Opin. Ther. Patents (2000) 10(2):215-230に記載されている。
【０６２４】
１つの実施形態では、本方法および使用は、哺乳動物（例えば、哺乳動物対象）、例えば、ヒトを処置するために使用される。
【０６２５】
示されるように、治療上有効な量の本開示の組合せがヒトに投与される。一般に、投与される本発明の薬剤の治療上有効な量は、例えば、対象の齢および体重、処置を必要とする厳密な病態、病態の重篤度、処方物の性質、および投与経路を含むいくつかの因子によって異なる。最終的に、治療上有効な量は、主治医の裁量にある。
【０６２６】
本明細書に記載される総ての刊行物、特許出願、特許、およびその他の参照文献は、引用することによりそれらの全内容が本明細書の開示の一部とされる。齟齬する場合には、定義を含め本明細書が優先する。加えて、材料、方法、および例は単に例示であって、限定を意図するものではない。
【実施例】
【０６２７】
実施例１：選択的Ｃｌａｓｓ  ＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤ＴＭＰ１９５
ＴＭＰ１９５は、Ｎ−（２−メチル−２−（２−フェニルオキサゾール−４−イル）プロピル）−３−（５−（トリフルオロメチル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）ベンズアミドである。
【０６２８】
Ｎ−（２−メチル−２−（２−フェニルオキサゾール−４−イル）プロピル）−３−（５−（トリフルオロメチル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）ベンズアミドの合成
【化７】
2019504029.tif 000009
【０６２９】
４−（クロロメチル）−２−フェニルオキサゾール
【化８】
2019504029.tif 000010
トルエン（６００ｍＬ）中、ベンズアミド（６０ｇ、０．４９ｍｏｌ）および１，３−ジクロロアセトン（１２５．８ｇ、０．９９ｍｏｌ）の混合物を１００℃で２４時間加熱した。次に、溶媒を減圧下で除去し、粗生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル６０〜１２０メッシュ、溶出剤  石油エーテル中４％ＥｔＯＡｃ）により精製し、４−（クロロメチル）−２−フェニルオキサゾール（６５ｇ、収率６８％）を白色固体として得た。1H NMR (300MHz, CDCl3) δ 8.06 - 8.04 (m, 2H), 7.72 (m, 1H), 7.49 - 7.46 (m, 3H), 4.59 (d, J = 1.1 Hz, 2H)。LCMS-B (ESI) m/z:C10H8ClNOの理論値: 193.03;実測値: 194.2 (M+H)+
【０６３０】
２−（２−フェニルオキサゾール−４−イル）アセトニトリル
【化９】
2019504029.tif 000011
室温で、乾燥ＤＭＦ（５００ｍＬ）中、化合物４−（クロロメチル）−２−フェニルオキサゾール（５０ｇ、０．２６ｍｏｌ）の溶液にＫＩ（１７２ｇ、１．０４ｍｏｌ）を加え、６０分間撹拌した（ＴＬＣ、溶出剤  石油エーテル：ＥｔＯＡｃ  ９：１によりモニタリングした）。この反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、水およびブラインで洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。得られた粗ヨード中間体をＤＭＦ（５００ｍＬ）に溶かした。この溶液にシアン化ナトリウム（２５．３ｇ、０．５２ｍｍｏｌ）を加え、この反応混合物を室温で２時間撹拌した。次に、この混合物を水で急冷し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層をＨ２Ｏおよびブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。得られた粗生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル６０〜１２０メッシュ、溶出剤  石油エーテル中５〜１０％ＥｔＯＡｃ）により精製し、化合物２−（２−フェニルオキサゾール−４−イル）アセトニトリル（２４ｇ、収率５０％）を白色固体として得た。1H NMR (300MHz, CDCl3) δ 8.04 - 8.01 (m, 2H), 7.74 (t, J = 1.2 Hz, 1H), 7.49 - 7.46 (m, 3H), 3.74 (d, J = 1.1 Hz, 2H)。LCMS-B (ESI) m/z: C11H8N2Oの理論値: 184.06;実測値: 185.2 (M+H)+
【０６３１】
２−メチル−２−（２−フェニルオキサゾール−４−イル）プロパンニトリル
【化１０】
2019504029.tif 000012
ＮａＨ（２６ｇ、０．６５ｍｏｌ、油中６０％分散物）を、０℃に冷却した乾燥ＴＨＦ（２４０ｍＬ）中、化合物２−（２−フェニルオキサゾール−４−イル）アセトニトリル（２４ｇ、０．１３ｍｏｌ）の溶液に５分かけて少量ずつ加えた。得られた反応混合物を室温で２０分間撹拌し、再び０℃に冷却した。次に、ヨウ化メチル（４０ｍＬ、０．６５ｍｍｏｌ）を滴下した。この反応混合物をさらに室温で１時間撹拌した後、氷冷水で急冷した。得られた混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、有機層をＨ２Ｏおよびブラインで洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカ６０〜１２０メッシュ、溶出剤  石油エーテル中２〜５％ＥｔＯＡｃ）により精製し、２−メチル−２−（２−フェニルオキサゾール−４−イル）プロパンニトリル（１８ｇ、収率６５％）を黄色固体として得た。1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.06 - 8.03 (m, 2H), 7.68 (s, 1H), 7.48 - 7.46 (m, 3H), 1.77 (s, 6H)。LCMS-B (ESI) m/z: C13H12N2Oの理論値: 212.09; 実測値: 213.2 (M+H)+
【０６３２】
２−メチル−２−（２−フェニルオキサゾール−４−イル）プロパン−１−アミン
【化１１】
2019504029.tif 000013
０℃で、乾燥ＴＨＦ（１５０ｍＬ）中、ＬｉＡｌＨ４（５．７３ｇ、１５０．９ｍｍｏｌ）の懸濁液に、乾燥ＴＨＦ（４００ｍＬ）中、２−メチル−２−（２−フェニルオキサゾール−４−イル）プロパンニトリル（１８ｇ、８４．８ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。この反応混合物を室温で１時間撹拌した後、水で注意深く急冷した。得られた混合物をＥｔＯＡｃで希釈した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。有機層を焼結漏斗で濾過し、ＥｔＯＡｃで十分に洗浄した。合わせた濾液および洗液を減圧下で濃縮し、化合物２−メチル−２−（２−フェニルオキサゾール−４−イル）プロパン−１−アミン（１６．２ｇ、粗）を得、これをそれ以上精製せずに遂行した。LCMS-B (ESI) m/z: C13H16N2Oの理論値: 216.13; 実測値: 217.2 (M+H)+
【０６３３】
３−（Ｎ’−ヒドロキシカルバミミドイル）安息香酸（１０）
【化１２】
2019504029.tif 000014
５０ｍＬエタノール中、３−シアノ安息香酸（１ｇ、６．８ｍｍｏｌ）の溶液に、８−ヒドロキシキノリン（５ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物に、まず、水（８ｍＬ）中、ヒドロキシルアミン塩酸（９５０ｍｇ、１３．６ｍｍｏｌ）、次いで、水（１２ｍＬ）中、炭酸ナトリウム（１．２ｇ、１０．９ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を４時間加熱還流した。減圧下でエタノールを除去した後、残基を水で希釈し、水溶液を１０％ＨＣｌでｐＨ約３に酸性化した。白色沈澱を濾過し、水およびアセトンで洗浄した後、減圧下で乾燥させ、化合物３−（Ｎ’−ヒドロキシカルバミミドイル）安息香酸（１  ｇ、収率８２％）を得た：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 13.03 (br s, 1H), 9.76 (s, 1H), 8.27-8.26 (m, 1H), 7.95-7.89 (m, 2H), 7.53 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 5.94 (br s, 2H)。LCMS-B (ESI) m/z: C8H8N2O3の理論値: 180.05; 実測値: 180.9 (M+H)+。
【０６３４】
３−（５−（トリフルオロメチル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）安息香酸
【化１３】
2019504029.tif 000015
無水ピリジン（１５ｍＬ）中、化合物３−（Ｎ’−ヒドロキシカルバミミドイル）安息香酸（１ｇ、５．６ｍｍｏｌ）の溶液を０℃に冷却し、無水トリフルオロ酢酸（２．３ｍＬ、１６．７ｍｍｏｌ）を滴下した。この反応混合物をゆっくり室温まで温め、さらに３時間５０℃まで加熱した。反応混合物を氷水に注ぎ、１．５Ｎ  ＨＣｌを添加してｐＨ約４に調整した。この生成物をＥｔＯＡｃで抽出し、減圧下で溶媒を除去した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー［シリカゲル６０〜１２０メッシュ、溶出剤：石油エーテル中１０％ＥｔＯＡｃ］により精製し、３−（５−（トリフルオロメチル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）安息香酸（４００ｍｇ、収率２８％）を得た：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 13.44 (br s, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.30 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 8.21 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.78 (t, J = 7.8 Hz, 1H)。LCMS-B (ESI) m/z: C10H5F3N2O3の理論値: 258.03; 実測値: 257 (M-H)-。
【０６３５】
Ｎ−（２−メチル−２−（２−フェニルオキサゾール−４−イル）プロピル）−３−（５−（トリフルオロメチル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）ベンズアミド
【化１４】
2019504029.tif 000016
乾燥ＤＭＦ（２５０ｍＬ）中、酸３−（５−（トリフルオロメチル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）安息香酸（１９．３ｇ、７４．８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＡＴＵ（３４．１ｇ、８９．７６ｍｍｏｌ）を加えた後、０℃で、２−メチル−２−（２−フェニルオキサゾール−４−イル）プロパン−１−アミン（１６．２ｇ、７４．９ｍｍｏｌ）およびＮＭＭ（２４．７ｍＬ、２２４．４ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物をゆっくり室温まで温め、さらに４時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、有機層を水およびブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。得られた粗生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカ６０〜１２０メッシュ、溶出剤  石油エーテル中８％ＥｔＯＡｃ）により精製した後、冷ペンタンで摩砕し、Ｎ−（２−メチル−２−（２−フェニルオキサゾール−４−イル）プロピル）−３−（５−（トリフルオロメチル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）ベンズアミド（１５ｇ、収率４４％）を白色固体として得た。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.66 (t, J = 1.5 Hz, 1H), 8.29 - 8.26 (m, 2H), 8.20 - 8.17 (dt, J = 8.0 Hz, 1.2 Hz, 1H), 8.09 - 8.06 (m, 2H), 7.68 - 7.64 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.47- 7.40 (m, 3H), 3.66 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 1.43 (s, 6H)。13C NMR (101 MHz, クロロホルム-d) δ 168.7, 166.04, 165.99 161.8, 149.2, 136.2, 133.0, 131.2, 130.6, 130.4, 129.5, 128.7, 127.2, 126.4, 125.8, 125.3, 115.9, 50.7, 34.2, 25.3。LCMS-B (ESI) m/z: C23H19F3N4O3の理論値: 456.14; 実測値: 457.2 (M+H)+
【０６３６】
実施例２：クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害は、乳房腫瘍の退縮を誘導し転移を阻害する抗腫瘍マクロファージ表現型を促進する
腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）は多くの場合、正味の腫瘍誘導効果を有するが１、それらの埋め込まれた位置およびそれらの未利用の能力は、それらを腫瘍に向けるための戦略を見出すことに対してはずみをつける。本発明者らは最近、最初に、クラス選択的クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤（ＴＭＰ１９５）がｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいてコロニー刺激因子ＣＳＦ−１およびＣＳＦ−２に対するヒト単球応答に影響を与えたことを報告した２。ここで、本発明者らは、ｉｎ  ｖｉｖｏ  ＴＭＰ１９５処置が腫瘍微小環境に変化を与え、マクロファージの調節を介して腫瘍量および肺転移を低減することを証明するために、乳癌のマクロファージ依存性自発的マウスモデルを使用する。ＴＭＰ１９５は、腫瘍内で貪食性および刺激性が高いマクロファージの動員および分化を誘導する。さらに、このモデルにおけるＴＭＰ１９５と化学療法計画またはＴ細胞チェックポイント遮断の組合せは、腫瘍退縮の持続性を有意に増進する。これらのデータは、癌療法を増進するためにマクロファージの抗腫瘍能を利用する新規な手段としてクラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害を提示する。
【０６３７】
癌細胞を攻撃するために免疫系を操作するという概念は一世紀近くの間遂行されてきたが、主要な焦点は、適応免疫系、主としてＴ細胞の操作にあった。このアプローチは、少数派の患者にだけであったが、大きな臨床的成功を見た。従って、免疫系の自然面と適応面の両方を利用すれば、より優れた腫瘍の退縮および排除が得られる可能性がある。ＴＡＭを除去する治療薬（αＣＳＦ−１、ＣＳＦ−１Ｒ阻害）３，４または刺激する治療薬（促進性αＣＤ４０、阻害性αＣＤ４７）５，６の活発な研究および成功にもかかわらず、骨髄性細胞集団の多様性および可塑性は、付加的な治療機序の発見への挑戦および機会を与える。ここで、本発明者らは、ＴＡＭの抗腫瘍能を利用するための新規な機序としてのクラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害を報告する２。
【０６３８】
クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ（ＨＤＡＣ４、５、７および９）は、それらはアセチル化リシンを「読む」ことができるが「消す」ことはできない７，８、およびそれらはヒストンテールにはめったに会合しない９という点で、クラスＩ（ＨＤＡＣ１、２、３および８）およびクラスＩＩｂ（ＨＤＡＣ６および１０）の両方とは異なる２。本発明者らの以前の報告に、クラスＩＩａ  ＨＤＡＣのアセチルリシン結合部位を占有する選択的競合阻害剤（例えば、ＴＭＰ１９５）の発見が記載されている２。クラスＩ選択的ＨＤＡＣ阻害剤ボリノスタットとは異なり、ＴＭＰ１９５は、リンパ球の遺伝子発現には影響を及ぼさずに単球の遺伝子発現を変化させた２。メチルトランスフェラーゼおよびクラスＩ  ＨＤＡＣなどのエピジェネティック標識の阻害は、Ｔｈ１適応Ｔ細胞応答の促進を介して抗腫瘍免疫応答を増強することが示されている１０，１１。メチルトランスフェラーゼおよびクラスＩ  ＨＤＡＣ阻害剤の作用機序はクラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤の作用とは異なるが、免疫系に対するそれらの効果は、腫瘍退縮を誘導するためにＴｈ１応答を活性化することの重要性を強調する。実際に、クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害はまた、Ｔｈ１サイトカイン暴露の勾配によって単球を炎症誘発性表現型へ偏向させた２。ゆえに、本発明者らは、クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤がｉｎ  ｖｉｖｏにおいて腫瘍退縮を果たし得る抗腫瘍自然免疫応答を誘導するという仮説を検証するためのモデル系を探した。本発明者らは、ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴトランスジェニックマウスは、後期発癌および肺転移がＣＳＦ−１およびマクロファージによって調節される１２、ルミナルＢ型乳癌の急速進行性自発モデルを提供することから、それを選択した。
【０６３９】
腫瘍内の骨髄性細胞（ＣＤ１１ｂ＋）およびＴリンパ球（ＣＤ３＋）集団の遺伝子発現の全身性クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害の効果を決定するために、担癌トランスジェニックマウスをビヒクル（ＤＭＳＯ）またはＴＭＰ１９５のいずれかで５日間毎日処置した。本発明者らの事前のｉｎ  ｖｉｔｒｏ分析２と一致して、ＴＭＰ１９５処置は骨髄性細胞において差次的遺伝子発現を選択的に誘導した（ＣＤ３＋での３プローブに対して、ＣＤ１１ｂ＋では２６プローブで最大４．８倍の増加  δ係数１３＞１．５（図１ａ；図５ａ〜ｄ；図２０；および図２１））。ＣＤ１１ｂ＋細胞においてこれらの基準を満たすプローブの組成は、免疫細胞の活性化に関連する転写産物が有意に濃縮されていた（図６ａ）。さらに、最高の濃縮度を認めた全データセットに対するＧｅｎｅ  Ｓｅｔ  Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ  Ａｎａｌｙｓｉｓ（ＧＳＥＡ）１４を適用する偏向分析は、活性化された免疫細胞に対応するシグネチャーを持っていた（図６ｂ〜ｆ）。腫瘍内の骨髄性細胞の活性化状態に対するＴＭＰ１９５処置の偏向効果はまた、本発明者らが検討した腫瘍浸潤免疫細胞の割合に影響を及ぼすこと無く、ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴ腫瘍において骨髄性（ＣＤ１１ｂ＋）および成熟マクロファージ（Ｍａｃ−２＋、ＣＤ１１５＋、Ｆ４８０＋）の両方の割合を増加させたことも根拠とした（図１ｂ〜ｇ；図７ａ〜ｃおよび８ａ〜ｉ）。
【０６４０】
ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴ腫瘍由来のＣＤ４５＋ＭＨＣＩＩ＋細胞のサイトメトリー分析は、ＣＤ１１ｂの差次的発現に基づいて恒常性乳房組織マクロファージ（ＭＴＭ）からＮｏｔｃｈ依存性腫瘍誘導性ＴＡＭを識別することが記載されている（ＴＡＭ＝ＣＤ１１ｂｌｏ；ＭＴＭ＝ＣＤ１１ｂｈｉ）１５。このゲート設定戦略の適用は、５日のＴＭＰ１９５処置が腫瘍誘導性「ＴＡＭ」の割合に有意な低下をもたらすことを明らかにする（図１ｈおよび図９ａ〜ｄ）。腫瘍内の既存マクロファージと新規マクロファージを追跡する縦断研究１６（図１０ａ）は、ＴＭＰ１９５処置が、ＴＭＰ１９５前に存在していたものの数に影響を及ぼさずに、新規マクロファージの数を増加させることを明らかにする（図１ｉ）。興味深いことに、上記のように定義される場合、新規マクロファージのうちあるとしても極めて少数がＴＡＭである（図１０ｂ）。さらに、本発明者らは、静脈内に（ＩＶ）注射したＣＦＳＥ標識単球由来ＣＤ１１ｂ＋骨髄の腫瘍への動員を測定した。レシピエントマウスのＴＭＰ１９５処置は、腫瘍内のＣＤ１１ｂｈｉＣＦＳＥ＋単球の割合を有意に増大させた（図１ｊおよび図１０ｃ）。これらのことを考え合わせると、全身性クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害は骨髄性細胞を選択的に標的とし、腫瘍浸潤骨髄性細胞、具体的には、炎症誘発性表現型を有するマクロファージに増加をもたらす。
【０６４１】
腫瘍微小環境におけるマクロファージに対するＴＭＰ１９５処置の効果をさらに検討するために、本発明者らは、腫瘍の組織病理学的分析を行った。本発明者らは、成熟マクロファージのマーカーとしてのＦ４８０を用い、ビヒクル処置マウスに比べてＴＭＰ１９５処置腫瘍で、可染体マクロファージ（ＴＢＭ）様の細胞の顕著な出現を認めた（図２ａ）。ＴＢＭは一般に、胚中心（ＧＣ）反応中に負の選択を受ける１７だけでなく、特定の高悪性度腫瘍にも関連付けられた１８アポトーシスリンパ球を貪食する。ＴＢＭはユニークな形態を持ち、アポトーシス細胞残渣がマクロファージ内に見て取ることができる。ＩＨＣを用い、本発明者らは、ＴＭＰ１９５処置が腫瘍マクロファージ内に存在するアポトーシス小体の出現をもたらすことを確認した（図２ｂ）。ＥＰＣＡＭ抗体が細胞内抗原を識別するために使用される場合、Ｆ４８０＋およびＣＤ１１ｂ＋の両細胞はＥＰＣＡＭ＋として同時に染まることから、本発明者らは、これらのアポトーシス小体が貪食された乳房腫瘍細胞であると結論付ける（図２ｃ、ｄ、図１１ａ〜ｅ）。二次リンパ系組織において、ＴＢＭはＧＣ反応の消散におけるそれらの役割およびそれらのｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいてＴ細胞の活性化を阻害する能力のために免疫抑制であると考えられる１９。しかしながら、ＴＭＰ１９５処置マウス腫瘍におけるＣＤ１１ｂ＋細胞のトランスクリプトームは炎症誘発性シグネチャーを示唆したことから、本発明者らは、ｉｎ  ｖｉｖｏおよびｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるＴＭＰ１９５処置の後の補助刺激活性の特徴を検討した。ＴＭＰ１９５処置マウス由来の腫瘍は、それらの炎症誘発性遺伝子シグネチャーと一致して、ＣＤ４０＋を発現したＦ４８０＋およびＣＤ１１ｂ＋細胞の割合が高かった（図２ｅ、ｆおよび図１１ｅ）。同様に、ＴＭＰ１９５は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＩＬ−４およびＧＭ−ＣＳＦにより抗原提示細胞へと分化したヒト単球においてＴ細胞補助刺激機能を促進した（図１２ａ、ｂ）。これに一致して、本発明者らは、ＴＭＰ１９５処置が、ビヒクル処置に比べて、腫瘍内の細胞傷害性Ｔリンパ球の存在量を有意に増加させることを認める（図２ｇ）。これらの所見を合わせると、クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害がマクロファージの貪食機能および免疫刺激機能を促進し、それらを、細胞傷害性Ｔリンパ球を活性化される能力が増強された抗腫瘍表現型に向かわせるという結論が支持される。
【０６４２】
免疫抑制性であることに加え、腫瘍誘導性ＴＡＭは、一体となって腫瘍血行力学および薬物送達に影響を及ぼす不十分な血流、漏出および拡張、過度の分岐、およびデッドエンド血管を特徴とする、構造的および機能的に異常な腫瘍血管系に寄与する２０−２３。これに対し、抗腫瘍マクロファージは、血管の刈り込みおよび正常化２４を含む、抗血管新生機構に関連し、これらは他の癌治療の治療効力を実質的に増進することができる２５。本発明者らは、５日のＴＭＰ１９５処置の後のｉｎ  ｖｉｖｏマクロファージ分極の指標として血管系を特徴付けることに目を向けた。ＴＭＰ１９５処置マウスの腫瘍血管系は、細長いＣＤ３４＋血管構造の存在および異常分岐血管系の不在により示されるように、ＤＭＳＯ処置マウスの場合よりも高い組織化が見られる（図２ｈおよび図１３ａ）。加えて、本発明者らは、静脈注射した重デキストラン分子を保持する血管系の能力を測定することにより、腫瘍血管の漏出を試験した。本発明者らは、重デキストラン分子がＴＭＰ１９５処置マウスの腫瘍血管系に留まっていたことを見出し、このことは、ビヒクル受容マウスに明らかな漏出に比べ、腫瘍血管系の強度が有意に改善されたことを示す（図２ｉ）。これらの結果は、ＴＭＰ１９５活性化細胞が腫瘍微小環境を変化させるというさらなる証拠を与える。
【０６４３】
ＴＭＰ１９５活性化細胞はまた、腫瘍細胞自体にも変化をもたらした。ＴＭＰ１９５処置は、最も顕著には腫瘍の先端における増殖マーカーＫｉ６７の組織学的分析で示されるように、増殖中の腫瘍細胞で有意な低下をもたらした（図２ｊおよび図１３ｂ）。本発明者らはまた、切断型カスパーゼ３の組織学的評価（ＣＣ３；図２ｋ；および図１３ｃ）ならびにアポトーシス（ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）切断およびＣＣ３の免疫ブロット分析（図１３ｄ）により示されるような、腫瘍内の細胞死の増加を認めた。本発明者らは従前に、ＴＭＰ１９５はヒト単球、ＴまたはＢ細胞に対して直接の細胞傷害性は無いことを報告した２。ここで、本発明者らは、ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴ担癌マウスから６つの異なる細胞株を作製し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいてそれらのＴＭＰ１９５感受性を試験した。本発明者らは、この化合物はｉｎ  ｖｉｔｒｏで供試した６つのマウスＭＭＴＶ−ＰｙＭＴ細胞株または６つのヒト乳癌細胞株のいずれについても細胞生存率に影響を及ぼさない（図１４ａ〜ｄ）ことから、ｉｎ  ｖｉｖｏにおける細胞死の誘導はおそらく腫瘍に対するＴＭＰ１９５の直接的細胞傷害作用によるものではないと認める。
【０６４４】
本発明者らは５日のＴＭＰ１９５処置に応答して細胞死の増加および増殖の減少を認めたことから、本発明者らは、ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴモデルにおいてＴＭＰ１９５処置は全腫瘍量を低下させるとの仮説を立てた。ＴＭＰ１９５の単剤有効性を試験するために、３回の独立した試験を行った。まず、広範な総腫瘍量（１５０〜８００ｍｍ３）を示すマウスを、ＤＭＳＯ（ビヒクル）またはＴＭＰ１９５のいずれかによる処置に関して無作為化した。１３日の処置後、ＴＭＰ１９５は有意に腫瘍成長速度を減じた（図３ａおよび図１５ａ〜ｃ）。初期総腫瘍量が処置開始の時点で最低であった（＜４００ｍｍ３）マウスのサブセットを全２４日の継続的処置のために選択し、２４日の時点で本発明者らは肺の転移病巣の有意な減少を確認した（図１５ｄ）。この所見によって情報が得られたので、さらに２回の独立した実験で、本発明者らは、総腫瘍量が２００〜６００ｍｍ３の間の処置マウスをビヒクルまたはＴＭＰ１９５のいずれかで処置した。この場合にもまた、本発明者らは、転移性肺病巣の減少と相関した腫瘍量の有意な減少を確認した（図３ａ、ｂおよび図１５ｅ、ｆ）。
【０６４５】
本発明者らは、２週間ビヒクルまたはＴＭＰ１９５のいずれかで処置したマウス由来の腫瘍全体から単離したＲＮＡにおける差次的遺伝子発現を試験した（図１６ａ）。十分に確立された細胞種シグネチャー２６の偏向発現に基づいて細胞の部分集団への選択的影響に関するデータセットを詳細に調べると、２０のＩｍｍＧｅｎ細胞種シグネチャーのうち５つだけ（リンパおよび血液内皮細胞、Ｂ細胞前駆体、マクロファージ、および単球）がＴＭＰ１９５処置による有意な偏向を有する（χ２  Ｐ値＜０．０５）ことが明らである（図１６ｂ〜ｈ）。重要なこととして、他の浸潤白血球集団（特に、ＣＤ１１ｂ＋であり得るもの）は、この分析によっては確認されなかった（図１６ｂ〜ｈ）。これらの所見は、５日の処置後に得られた所見に匹敵し、さらにＴＭＰ１９５が骨髄性細胞に影響を与え、正常化された血管系を有する抗腫瘍微小環境を確立するという結論を裏づける。
【０６４６】
ＴＭＰ１９５の抗腫瘍効果が骨髄性細胞、またはより具体的にはマクロファージを必要とするかどうかを決定するために、本発明者らは、２つの独立した細胞除去試験を行った。骨髄性細胞を、ＣＤ１１ｂ（総ての骨髄性細胞集団の除去）またはＣＳＦ−１（マクロファージの除去）のいずれかに対する抗体を用い、ｉｎ  ｖｉｖｏで選択的に除去した。いずれかの細胞集団の除去は、ＴＭＰ１９５の有効性を排除し（図３ｃおよび図１７ａ）、ＴＭＰ１９５処置の細胞および組織学的徴候の出現を妨げた（図１７ｂ〜ｉ）。これらの結果は、クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害の抗腫瘍作用には、ＴＭＰ１９５処置から生じる活性化されたマクロファージが必要とされるという証拠を与える。
【０６４７】
自発的ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴモデルにおけるＴＭＰ１９５の有効性のためにはマクロファージが必要とされること、および処置された腫瘍では細胞傷害性Ｔリンパ球が活性化されることが確認されたので、本発明者らは、遺伝学的アプローチおよびさらなる細胞除去アプローチによって作用機序における適応免疫の役割を探索した。本発明者らはまず、ドナーＭＭＴＶ−ＰｙＭＴ腫瘍片（５０〜１００ｍｍ３）のＴ細胞欠損無胸腺ヌード（Ｆｏｘｎ１ｎｕ）レシピエントマウス（または野生型ＦＶＢＮ対照マウス）への正所移植により、適応免疫系の必要を試験した。腫瘍量は野生型レシピエントでは減少したが（図１８ａ）、ＴＭＰ１９５は、Ｆｏｘｎ１ｎｕマウスでは移植片の成長を阻害することができず、一方、パクリタキセルは効能があった（図１８ｂ）。この所見を詳細にするために、本発明者らは、ＣＤ８＋またはＣＤ４＋いずれかのＴ細胞除去に関して腫瘍量を低減するＴＭＰ１９５の能力を試験した。ＴＭＰ１９５は、ＣＤ４＋細胞が除去された場合、ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴ自発性腫瘍量を低減したが、ＣＤ８＋細胞の除去はＴＭＰ１９５の単剤有効性を妨げた（図３ｄおよび図１８ｃ〜ｅ）。抗腫瘍応答の媒介におけるＣＤ８＋Ｔ細胞の役割は、腫瘍内のＣＤ８＋Ｔ細胞の割合はＴＭＰ１９５処置時に変化しないが（図８）、グランザイムＢ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の増加（図２ｇ）が同定されることによって確認される。
【０６４８】
ＴＭＰ１９５が腫瘍常在ＣＤ１１ｂ＋細胞においてＩＦＮγ応答遺伝子シグネチャーを誘導したこと、およびＴＭＰ１９５の有効性にＣＤ８＋細胞の必要があることを考え、本発明者らは、ＩＦＮγの中和もＴＭＰ１９５の抗腫瘍作用を排除すると仮定した。抗ＩＦＮγ抗体処置は単独で、ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴ腫瘍における血管の無秩序化を劇的に増大し、このＴｈ１サイトカイン無しでは、ＴＭＰ１９５は腫瘍切片においてＣＤ３４染色を中和できなかった（図３ｆ、図１８ｆもまた参照）。さらに、ＩＦＮγの中和はＴＭＰ１９５が腫瘍量を低減するために必要であり（図３ｄ）、この有効性の欠如は、ＣＤ８＋Ｔ細胞の割合が同じままであっても（図１８ｃ）、腫瘍におけるグランザイムＢ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の消失と一致している（図３ｅ）。これらのことを考え合わせ、本発明者らは、マクロファージ、ＩＦＮγおよびＣＤ８＋Ｔ細胞がＴＭＰ１９５処置により惹起される抗腫瘍微小環境に必要とされることを実証する（図１９）。しかしながら、本発明者らは他の非マクロファージ骨髄性細胞集団が比例的にまたは全腫瘍遺伝子シグネチャー分析により、ＴＭＰ１９５処置時の腫瘍で変化していることを見出していないが、本発明者らはそれらの関与を除外することはできない。本発明者らは、ここには示さないが、多くの異なる細胞種が複雑な抗腫瘍免疫応答の協調に関与にしているのではないかと考え、これらの除去試験は、クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤はマクロファージがＩＦＮγ軸に応答するとともに、ＩＦＮγ軸に腫瘍微小環境を変化させ、機能的適応抗腫瘍免疫応答を活性化するように指示を与えることを可能とすることを実証する。
【０６４９】
ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴマウスにおいてＴＭＰ１９５により誘導される貪食性および免疫刺激性の抗腫瘍マクロファージ表現型を考慮して、本発明者らは、これらの活性化が、腫瘍細胞アポトーシスを誘導するが、このモデルでは持続的応答をもたらさない３標準的な化学療法計画の有効性を増進するのではいかと推論した。本発明者らがＭＭＴＶ−ＰｙＭＴマウスをカルボプラチン（Ｃａｒｂｏ）またはパクリタキセル（ＰＴＸ）と組み合わせたＴＭＰ１９５で処置した場合、この併用療法はいずれかの単剤療法と比べて腫瘍量に有意な低減をもたらした（図４ａ、ｂ）。さらに、ＴＭＰ１９５とＰＴＸの組合せ処置によって見られた有効性は少なくとも２９日間持続し、ＰＴＸ単独が腫瘍量に有意な効果を有した時点を過ぎて延長した（図４ｂ）。本発明者らはまた、ＴＭＰ１９５の有効性にＣＤ８＋Ｔ細胞が必要であることを考慮して、自然免疫に向けられるＴＭＰ１９５と適応免疫に向けられるチェックポイント遮断戦略のコンビナトリアル効果があるのではないかと推論した。正所性ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴ腫瘍で行われた研究２７と同様に、本発明者らは、ＰＤ−１の中和が自発型のモデルにおいて腫瘍量に影響を与えるのに十分であることを見出した（図４ｃ、ｄ）。しかしながら、驚くべきことに、抗ＰＤ−１計画へのＴＭＰ１９５の付加は、ＴＭＰ１９５単独よりも腫瘍量に有意に大きな低減をもたらす（図４ｃ、ｄ）。これらのことを考え合わせると、ＴＭＰ１９５処置により誘導される抗腫瘍マクロファージ表現型は、この乳癌マウスモデルにおいて標準的な化学療法薬計画とＴ細胞志向チェックポイント遮断免疫療法の両方の有効性および持続性を増進するように共働する。これらの試験は、自然免疫応答の増強がチェックポイント遮断療法耐性腫瘍を感受性状態に変換する実行可能な戦略であるという主張を裏づける証拠を与える。
【０６５０】
本研究では、本発明者らは、ｉｎ  ｖｉｖｏ状況のマクロファージ生物学に対するクラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害の効果を検討するために複雑かつ不均質な腫瘍微小環境を有する自発性癌モデルを使用した。癌療法のためのＴＡＭを除去または阻害する戦略３，４，２０は、ネオアンチゲン提示ならびに最適な腫瘍クリアランスおよび排出５，２５，２６のためのマクロファージの重要な役割によって弱体化される。例えば、ＴＡＭの除去を意図した化合物（例えば、ＣＳＦ−１受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）阻害剤およびＣＳＦ−１またはＣＳＦ−１Ｒのいずれかに対するモノクローナル抗体）は、ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴモデルにおいて詳細に特性決定が行われてきた。これらの戦略は腫瘍からマクロファージを排除するが、単剤として原発腫瘍に対する効果はほとんど無いか全く無い。むしろ、これらのＴＡＭ除去アプローチは、抗腫瘍効果を発揮するためには化学療法と組み合わせなければならない３。驚くべきことに、クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害剤ＴＭＰ１９５は、抗腫瘍、高貪食性および補助刺激性の表現型を有するＴＡＭの動員を介し、単剤として自発性ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴの腫瘍量に有意な低減をもたらす。ＴＡＭの除去とは異なり、クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害は、腫瘍に対抗するためにマクロファージのエフェクター機能に影響を及ぼす機会を与え、それらはｍＡｂ処置２８およびチェックポイント遮断２９，３０に応答して抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）および癌の死滅化を果たし、治療ペプチドワクチン３１の有効性を媒介する。さらに、促進性αＣＤ４０５療法または阻害性αＣＤ４７３２療法などのマクロファージの利用をねらいとした戦略は、マクロファージを抗腫瘍表現型へと調節することから大きな利益を受け得る。
【０６５１】
クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ阻害が腫瘍微小環境においてマクロファージの刺激能に影響を及ぼすという新事実は、ＴＡＭ除去の欠点を克服し、免疫調節的な癌治療アプローチとして差別的な機会を与える。癌免疫療法の分野はチェックポイント遮断療法に耐性のある腫瘍を感受性状態に変換するための実行可能な戦略を探し求めているので、これらの研究は、自然免疫細胞の覚醒が、抑制された適応免疫細胞のロック解除とともに癌の認識および拒絶のために共働し得るという主張を裏づける証拠を与える。
【０６５２】
参照文献
2019504029.tif 000017
2019504029.tif 000018
2019504029.tif 000019
【０６５３】
材料および方法
マウス実験：
総てのトランスジェニックマウス実験について、乳癌ウイルス（ＭＭＴＶ）プロモーターの制御下にポリオーマミドルＴ（ＰｙＭＴ）導入遺伝子を保有する処女雌ＦＶＢ／Ｎトランスジェニックマウスを使用した。総てのマウスをダナ・ファーバー癌研究所(Dana-Farber Cancer Center)（ＤＣＦＩ）動物施設内で飼育し、動物を含む総て実験は、実験動物の管理、福祉および処置に関するＧＳＫポリシーに従って実施し、ＤＦＣＩ所内動物実験委員会(Institutional Animal Care and Use Committee)により検証および承認されたものである。ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴトランスジェニックマウスはＴｈｅ  Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（００２３７４）から入手した。そうではないことが記載されない限り、およそ８０日齢のマウスをそれらの腫瘍量が３００〜６００ｍｍ３の間となった際に登録した。雌マウスは１０の乳房脂肪体を有するが、乳房脂肪体５位および１０位からの腫瘍を総ての実験および分析から除外した。ノギス測定を使用し、［（長さ×幅２）／２］を用いて各乳癌から腫瘍体積を計算した。一マウスの各腫瘍からの体積の合計を合わせて「総腫瘍量」とした。示された時点で動物をＣＯ２チャンバー内で安楽死させた後、生理食塩水で心灌流を行った。次に、分析のために肺および腫瘍を摘出した。
【０６５４】
２つの移植実験を行い、ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴマウスから腫瘍を取り出し、５０〜１００ｍｍ３片を野生型ＦＶＢＮマウスまたは無胸腺ヌードＦｏｘｎ１ｎｕマウスのいずれかの第４乳房脂肪体に挿入した。移植５日後にマウスを無作為に処置群に配置し、示されたように処置した。
【０６５５】
免疫組織化学：
腫瘍を取り出し、１０％ホルマリン中で一晩固定した。腫瘍をパラフィンに包埋し、ハーバード・メディカル・スクールの齧歯類病理学コアで切片とした。免疫組織化学染色に先立って、腫瘍切片にＨｉｓｔｏ−Ｃｌｅａｒ  ＩＩ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、カタログ番号＃ＨＳ−２０２）で２回の洗浄、１００％エタノールで２回の洗浄、次いで、９０％、８０％、７０％、および５０％エタノール洗浄による水和を行った。抗原の露出は、切片を１０ｍＭクエン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ６．０）中で加熱することにより達成した。冷却後、切片をｄＨ２０中で洗浄し、３％過酸化水素中、室温で１０分間インキュベートし、ｄＨ２０中で再び洗浄した後、１×ＰＢＳ中で洗浄した。抗原のブロッキングは、切片を０．５％ツィーン、１％ＢＳＡおよび５％血清を含有するＰＢＳバッファー中、室温で１時間インキュベートすることにより行った。次に、切片を一次抗体（抗マウスＦ４／８０、クローンＢＭ８、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄカタログ番号１２３１０１、１：５０；抗マウスＣＤ１１ｂ、クローンＥＰＲ１３４４、Ａｂｃａｍ（商標）カタログ番号ａｂ１３３３５７、１：５０；抗マウス切断型カスパーゼ−３（Ａｓｐ１７５）、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙカタログ番号９６６１Ｓ、１：３００；抗マウスＣＤ３４、クローンＭＥＣ１４．７、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄカタログ番号１１９３０１、１：１００；抗マウスＫｉ−６７、クローンＤ３Ｂ５、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄカタログ番号１２２０２Ｓ、１：４００；ＣＤ４０  Ａｂｃａｍ（ａｂ１３５４５）１：２００）；１：２００  Ｍａｃ−２（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄカタログ番号１２５４０３、クローンＭ３／３８）を含有するブロックバッファー中、暗所、４℃、湿潤チャンバー内で一晩染色した。翌日、切片を１×ＰＢＳ中で３回洗浄し、室温で１時間、ＰＢＳブロックバッファー中、二次ビオチン化抗体で染色した。切片を１×ＰＢＳで３回洗浄し、Ｅｌｉｔｅ  Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ  ＡＢＣキット（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ＰＫ−６１００）を、製造者の説明に従い、暗所、室温で３０分間適用した。切片を１×ＰＢＳで洗浄し、ＤＡＢ試薬（ペルオキシダーゼ基質キット、Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、カタログ番号ＳＫ４１００）で現像し、ヘマトキシリンで対比染色した。次に、切片に、ｄＨ２０で２回の洗浄、１×ＰＢＳで１回の洗浄、次いで、脱水のための漸増エタノール濃度での洗浄、その後、Ｈｉｓｔｏ−Ｃｌｅａｒ  ＩＩ中でのインキュベーションを行った。スライドガラスにＶｅｃｔａＭｏｕｎｔ永久封入剤（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｈ−５０００）およびＮｏ．１カバーガラス（Ｄｅｎｖｉｌｌｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号Ｍ１１００−０２）を載せ、２４時間硬化させた。切片をＯｌｙｍｐｕｓ  ＢＸ４３  Ｔｒｉｎｏｃｕｌａｒ顕微鏡で観察した。総てのＩＨＣ定量化について、各処置群で少なくとも４つの異なる腫瘍から無作為に選択した１０視野を用い、ＩｍａｇｅＪソフトウエアを用い、各マーカーに陽性の組織のパーセントを定量した３２。画像をグレースケール赤−緑−青（ＲＧＢ）スタックに変換した。「青」グレー��ケール画像の陽性染色を適当な閾値で、染色に関して陽性の総画像面積の％として定量した。全組織のパーセントとしての定量値を各代表的切片の右に示す。
【０６５６】
肺転移分析：
肺を上記のように動物から摘出した。肺を一晩、１０％緩衝ホルマリン中で固定し、パラフィン包理、切片化、およびヘマトキシリンおよびエオジン（Ｈ＆Ｅ）染色のためにハーバード・メディカル・スクールの齧歯類病理学コアに送った。転移病巣の数を全肺で１００ｕＭごとにとった切片で求め３，３３、定量は物病理学者のよる盲検で行った。
【０６５７】
腫瘍消化：
腫瘍を取り出し、細断した。腫瘍組織をｇｅｎｔｌｅＭＡＣＳ  Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｏｒ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉカタログ番号１３０−０９３−２３５）でさらにブレンドし、マウス用のＭＡＣＳ  Ｍｉｌｔｅｎｙｉ腫瘍解離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃカタログ番号１３０−０９６−７３０）で、製造者の説明に従って消化した。解離した腫瘍細胞をＲＰＭＩ  Ｍｅｄｉｕｍ  １６４０（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓカタログ番号１１８７５−０９３）で洗浄し、ＲＢＣ  Ｌｙｓｉｓ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｑｉａｇｅｎカタログ番号１５８９０４）で溶解させた。
【０６５８】
投与：
総てのマウス実験について、マウスを毎日、５０μＬのビヒクルジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）または１００％ＤＭＳＯに終濃度５０ｍｐｋで溶解させた５０μＬのＴＭＰ１９５の腹腔内（ＩＰ）注射で処置した。パクリタキセルおよびカルボプラチンはダナ・ファーバー癌研究所の薬局から入手し、５日ごとに静脈内（ＩＶ）注射によりそれぞれ１０ｍｐｋおよび５０ｍｐｋｆで投与した。ＰＤ−１チェックポイント遮断については、マウスを、２日目、５日目および８日目に２５０μｇの抗ＰＤ−１（ＢｉｏＸＣｅｌｌクローンＲＭＰ１−１４；カタログ番号ＢＥ０１４６）の３回の注射で処置した。投与の長さを各実験で示す。
【０６５９】
免疫細胞化学：
腫瘍細胞を３回のＤＭＳＯおよび３回のＴＭＰ１９５で５日処置した自発性ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴマウスから取得した。ＣＤ１１ｂ＋細胞を、オートマックス（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）自動装置を製造者のプロトコールに従って用いて精製した。ＣＤ１１ｂ細胞をＣＤ１１ｂ−ビオチン抗体（１０１２０４、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）で標識し、超純粋ビオチンビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  １３０−１０５−６３７）で賦活化した。精製後、ＣＤ１１ｂ＋細胞にスライドガラス上、３００ｒｐｍで５分間サイトスピンを行った。細胞を４％ＰＦＡ／スクロース溶液中、室温で５間固定し、使用準備まで４℃で保存した。実験の際、０．０３％トリトン−Ｘで１０分間、スライドに透過処理を施した後、１×ＰＢＳで５分間、３回すすいだ。サンプルを室温で１時間、１×ＰＢＳ中、１０％正常ヤギ血清（ＮＧＳ）でブロッキングした。次に、細胞を下記抗体、抗マウス／ヒトＣＤ１１ｂ（１０１２０１、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、抗マウスＦ４／８０（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、ＭＣＡ４９７Ｒ）、およびＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５９４抗マウスＣＤ３２６（Ｅｐ−ＣＡＭ）（１１８２２２、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）に関してそれぞれ１％ＮＧＳ／１×ＰＢＳ中１：１００、１：５０および１：２５希釈で４℃にて一晩染色した。翌朝、サンプルを１×ＰＢＳで各５分間３回すすぎ、１％ＮＧＳ中１：２００希釈のＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８ヤギ抗ラットＩｇＧ（４０５４１８、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）に置き換え、室温で１時間インキュベートした。総てのサンプルを１％ＮＧＳ中１：１０００希釈のＤａｐｉ（Ｐ３６９３０、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で対比染色した。次に、これらのサンプルを１×ＰＢＳで各５分間３回すすいだ。スライドを９５％エタノールで２回、１００％エタノールで１回脱水した。Ｐｒｏｌｏｎｇ  Ｇｏｌｄ退色防止剤（９３６９３０、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いてカバーガラスをかけ、Ｌｅｉｃａ  ＳＰ５Ｘ：Ｌａｓｅｒ  Ｓｃａｎｎｉｎｇ共焦顕微鏡を用い、４０倍で画像を得た。分析のため、免疫細胞化学画像を、共局在ピペリンを使用することにより評価した。一般に、ピペリンは一次画像（核）および二次画像（ＣＤ１１ｂ＋）を識別する。重複画像を「細胞」として識別した。バックグラウンドシグナルを回避するために、対象タンパク質（ＣＤ１１ｂ、Ｆ４８０およびＥＰＣＡＭ）に関して最小閾値を適用し、所与のダイナミックレンジに入ったマスクされたオブジェクトだけをＣＤ１１ｂまたはＦ４８０陽性と見なした。最後に、「細胞」として識別した重畳画像をＥＰＣＡＭの閾値画像でマスクした。ＣＤ１１ｂおよびＥＰＣＡＭまたはＦ４８０およびＥＰＣＡＭに関して陽性として識別されたオブジェクトを、画像当たりのＣＤ１１ｂまたはＦ４８０陽性細胞の数に対して正規化し、平均パーセンテージとして描写した。各処置群から合計６０の個々のＣＤ１１ｂ＋細胞と合計１００の個々のＦ４８０＋細胞を分析した。
【０６６０】
除去実験：
ＣＳＦ１除去については、ビヒクルまたは化合物による処置の１日前に、マウスに１ｍｇの抗ＣＳＦ１（ＢｉｏＸＣｅｌｌ  ＢＥ０２０４；クローン５Ａ１）を、その後、５日間毎日０．５ｍｇをＩＰ注射した３。ビヒクルまたは化合物による処置の１日前に、ＣＤ１１ｂ除去マウスに１００μｇの抗ＣＤ１１ｂ（クローンＭ１／７０；ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ  １０１２３１）を、その後は１日おきにＩＰ注射した３４。ＣＤ８免疫細胞除去については、マウスに１日目に１ｍｇの抗ＣＤ８免疫グロブリン（ＢｉｏＸＣｅｌｌ  ＢＥ０１１７；クローンＹＴＳ１６９．４）または対照ＩｇＧ２ｂ（ＢｉｏＸＣｅｌｌ  ＢＥ００９０；クローンＴＦ−２）を、その後は２週間の試験の間５日ごとに０．５ｍｇをＩＰ注射した。６日の実験については、マウスにＩｇＧ１（ＢｉｏＸＣｅｌｌ  ＢＥ００８８；クローンＨＲＰＮ）、α−ＣＤ８（ＢｉｏＸＣｅｌｌ  ＢＥ０１１７；クローンＹＴＳ１６９．４）、α−ＣＤ４（ＢｉｏＸＣｅｌｌ  ＢＥ００３３−１；クローンＧＫ１．５）およびα−ＩＮＦγ（ＢｉｏＸＣｅｌｌ  ＢＥ００５５；クローンＸＭＧ１．２）を、０日目に４００μｇおよび４日目に４００μｇを投与したα−ＣＤ４以外は、０日目に１ｍｇおよび４日目に０．５ｍｇ投与した。
【０６６１】
単球追跡実験：
単球追跡は、Ｑｉａｎら３５から適合および改変した。骨髄細胞をおよそ８０日齢の野生型ＦＶＢ／Ｎ処女雌から単離した。ＣＤ１１ｂ＋細胞を、ＬＳ磁気分離（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ  １３０−０４２−４０１）を製造者の説明に従って用い、ＣＤ１１ｂマイクロビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ  １３０−０４９−６０１）で単離した。ＣＤ１１ｂ＋細胞を１０μＭのＣＦＳＥ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｃ３４５５４）とともに３７℃で１５分間インキュベートした。細胞を洗浄し、ＤＭＳＯまたはＴＭＰ１９５で１日処置したマウスにＩＶ注射した。マウスをさらに５日間処置し、腫瘍を採取した。ＣＤ１１ｂ＋ＣＦＳＥ＋二重陽性細胞のパーセントをフローサイトメトリーによって評価した。
【０６６２】
新規マクロファージと既存マクロファージのデキストラン実験：
ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴ担癌マウスに、０．２５ｍｇ／マウス（１０ｍｐｋ）の、貪食細胞によって容易に取り込まれる低分子量（１０，０００ＭＷ）Ａｌｅｘａ５５５標識デキストラン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｄ３４６７９）を注射した。次に、マウスを連続５日間ＤＭＳＯまたはＴＭＰ１９５で処置した。マウスを犠牲にする２時間前に、マウスに０．２５ｍｇ／マウスの別の低分子量（１０，０００ＭＷ）デキストラン（今回はＡｌｅｘａ５９４（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｄ２２９１３）１４で標識した）を注射した。上記のように腫瘍を採取し、フローサイトメトリーを行った。実験の終了時に多数のＡｌｅｘａ５５５＋マクロファージが存在し、Ａｌｅｘａ５９４＋もまた存在したことから、１回目の注射からＡｌｅｘａ５５５標識デキストランを取り込んだマクロファージは少なくとも５日間生存した。本発明者らは、Ｆ４８０＋Ａｌｅｘａ５５５＋Ａｌｅｘａ５９４＋細胞が１回目および２回目のデキストラン注射に対して存在したことから、これらのマクロファージを既存マクロファージと呼称した。１回目のデキストラン注射（Ａｌｅｘａ５５５−）に関して陰性であったが２回目のデキストラン（Ａｌｅｘ５９４＋）に関しては陽性であったＦ４８０＋細胞は、１回目のデキストラン注射に関しては存在していなかったことから、新規マクロファージと定義した。これらのデキストランコンジュゲートのうち一方だけを受容したマウスをフローサイトメトリーの対照として使用した。
【０６６３】
重デキストラン漏出血管系実験：
ビヒクルまたはＴＭＰ１９５で５日間処置した担癌マウスに、ＦＩＴＣ３６で標識した分子量の重い（２５０ｋＤａ；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  ＦＤ２５０Ｓ）デキストランを注射した。１０分後、マウスを犠牲にした。この場合、マウスに心灌流は行わなかった。腫瘍を摘出し、４％ＰＢＳ／パラホルムアルデヒド溶液中で一晩置いた後、２０％スクロース溶液に一晩包埋した。腫瘍を最適切片温度（ＯＣＴ）溶液中に包埋し、切片化および染色まで−８０℃で保存した。血管系を介して浸透した重デキストランの程度を免疫蛍光により可視化した。
【０６６４】
ウエスタンブロット解析：
腫瘍はナイフを用いて手動で分離した後、完全ＲＩＰＡ溶解バッファー中、４℃で２時間溶解させた。完全ＲＩＰＡは、ＲＩＰＡ溶解バッファーとプロテアーゼ阻害剤とフェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）の組合せである。ＲＩＰＡ中でインキュベートした後、溶解液を１０，０００ｒｃｆで１０分間遠心分離し、分析のために上清を採取した。タンパク質濃度は、ビシンコニン酸（ＢＣＡ）アッセイを製造者の説明に従って用いて測定した。等タンパク質濃度をＮｕＰＡＧＥ  ＬＤＳサンプルバッファー、βメルカプトエタノール（ＢＭＥ）、および完全ＲＩＰＡバッファーに混合した後に９０℃で１０分間加熱してタンパク質を変性させた。これらのゲルを１５ウェルの４〜１２％ビス−トリスタンパク質ゲル上、１１０ボルトで２時間泳動させた後、ＰＶＤＦ膜に転写した。これらのブロットを５％ミルクおよびＰＢＳＴ溶液中でブロッキングし、一次抗体中に一晩置いた。次に、ブロットを二次抗体中で１時間インキュベートした後、スーパーシグナルウエストＰＩＣＯ化学発光基質およびＦＥＭＴＯスーパーシグナル最大感受性基質で現像した。Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｉｍａｇｅ  Ａｎａｌｙｚｅｒ  ＬＡＳ−４０００を用いてブロットを現像した。Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙから購入した一次抗体を使用した：切断型カスパーゼ３（Ｄ１７５）、ＰＡＲＰ（９５４２Ｓ）およびアクチン。抗体を１％ＢＳＡ中１：１０００溶液となるように希釈し、アジ化ナトリウムを１：５００に希釈した。二次マウス抗体（ＮＡ９３１）、および二次ウサギ抗体（ＮＡ９３４）をｌｉｆｅ  ｓｃｉｅｎｃｅｓから購入し、５％ミルクＰＢＳＴ溶液で１：６０００濃度とした。
【０６６５】
免疫蛍光：
腫瘍を取り出し、４％ＰＦＡ中で固定し、２０％スクロース中で低温保存し、Ｏ．Ｃ．Ｔ．化合物（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ番号４５８５）中で急速冷凍した。冷凍組織をハーバード・メディカル・スクールの齧歯類病理学コアで凍結切片とした。免疫蛍光染色に先立ち、切片を−２０℃に予冷したアセトン中で１０分間固定し、氷冷１×ＰＢＳ中で３回洗浄し、１×ＰＢＳ中、１０％ＢＳＡで、室温にて１時間ブロッキングした。切片を暗所、４℃、湿潤チャンバー内で一晩、蛍光色素結合抗体（抗マウスＥＰＣＡＭ  Ａｌｅｘａ  ＦＬＵＯＲ（商標）５９４、クローンＧ８．８、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄカタログ番号１１８２２２、１：２００；抗マウスＦ４／８０  Ａｌｅｘａ  ＦＬＵＯＲ（商標）６４７、クローンＢＭ８、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ  １２３１２１、１：５０）で染色した。翌日、切片を冷１×ＰＢＳ中で３回洗浄し、０．５μｇ／ｍｌのＤＡＰＩ（ＦｌｕｏｒＰｕｒｅＴＭ  Ｇｒａｄｅ、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓカタログ番号Ｄ２１４９０）で８分間対比染色した。１×ＰＢＳでのさらなる洗浄の後、切片にＰｒｏｌｏｎｇ  Ｇｏｌｄ封入媒体およびＮｏ．１．５カバーガラス（Ｃｏｒｎｉｎｇ、カタログ番号２８７０−２２）を載せ、暗所、室温で２４時間硬化させた。切片をＬｅｉｃａ  ＳＰ５Ｘ  Ｌａｓｅｒ  Ｓｃａｎｎｉｎｇ共焦顕微鏡で画像化し、Ｌｅｉｃａ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｓｕｉｔｅソフトウエアを用いてｚ−スタックをキャプチャーした。ＩｍａｇｅＪソフトウエア１を用いて重畳平坦画像を得た。
【０６６６】
フローサイトメトリー：
腫瘍を取り出し、上記のように処理した後、フローサイトメトリー分析のために、２％ＦＢＳおよび２ｍＭ  ＥＤＴＡ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈカタログ番号Ｅ７８８９）を含有するリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓカタログ番号１００１０−０２３）バッファーに再懸濁させた。Ｚｏｍｂｉｅ  ＡＱＵＡ（商標）Ｆｉｘａｂｌｅ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ｋｉｔ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄカタログ番号４２３１０１）を、抗マウスＣＤ１６／ＣＤ３２  Ｆｃγ受容体ＩＩ／ＩＩＩ阻止抗体（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘカタログ番号１４−０１６１）と組み合わせて暗所、氷上で１５分間適用した。細胞を洗浄し、製造者の推奨希釈率の蛍光色素結合抗体（抗マウスＣＤ４５  Ａｌｅｘａ  Ｆｌｏｕｒ（商標）４８８、クローン３０−Ｆ１１、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄカタログ番号１０３１２１；抗マウスＦ４／８０、クローンＢＭ８、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ  ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５カタログ番号１２３１２７；抗マウスＣＤ１１ｂ  ＡＰＣ、クローンＭ１／７０、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄカタログ番号１０１２１１；抗マウスＣＳＦ−１Ｒ／ＣＤ１１５、クローンＡＦＳ９８、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄカタログ番号１３５５１７；抗マウスＩ−Ａ／Ｉ−Ｅ、クローンＭ５／１１４．１５．２、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄカタログ番号１０７６３１）とともに暗所、氷上で３０分間インキュベートした。細胞内染色（ＩＣＳ）を必要とするサンプルについては、細胞を室温で３０分間、固定／透過処理希釈剤（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅカタログ番号００−５２２３−５６）で固定し、透過処理バッファー（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅカタログ番号００−８３３３−５６）で２回洗浄し、暗所、室温で３０分間、透過処理バッファー中、抗体（抗マウスＥＰＣＡＭ  ＡＰＣ／Ｃｙ７、クローン、Ｇ８．８、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄカタログ番号１１８２１７；抗マウスＣＤ２０６、クローンＣ０６８６２、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄカタログ番号１４１７０５）とともにインキュベートした。染色後、細胞を再び透過処理バッファーで洗浄し、次いで、ＰＢＳで洗浄し、ダナ・ファーバー癌研究所の血液新生物フローサイトメトリーコアで、ＢＤ  ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ  Ｘ−２０に対するフローサイトメトリー分析のためにＰＢＳバッファーに再懸濁させた。マウス当たりサンプル当たり１億〜５億個の細胞を、ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｄｉｖａソフトウエアを用いて分析した。
【０６６７】
セルソーティング：
従前に記載されたように腫瘍細胞を単離し、処理した。ＣＤ４５＋免疫細胞を濃縮するために、ＥＰＣＡＭ＋腫瘍細胞除去を行った。全腫瘍細胞懸濁液をビオチン化抗ＥＰＣＡＭ抗体（ＭＡＣＳ  Ｍｉｌｔｅｎｙｉカタログ番号１３０−１０１−８５９、クローンｃａａ７−９Ｇ８）とともに１０分間インキュベートした後、抗ビオチンマイクロビーズ（ＭＡＣＳ  Ｍｉｌｔｅｎｙｉカタログ番号１３０−０９０−４８５）とともに暗所、４℃で１５分間インキュベートした。細胞を０．５％ＢＳＡおよび２ｍＭ  ＥＤＴＡ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈカタログ番号Ｅ７８８９）（ｐＨ７．２）を含有する氷冷ＰＢＳ中で洗浄し、ＭｉｄｉＭＡＣＳセパレーターマグネット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉカタログ番号１３０−０４２−３０２）上に適宜取り付けたＭＡＣＳ分離カラムＬＳ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉカタログ番号１３０−０４２−４０１）にロードした。負の選択の後、ＥＰＣＡＭ除去細胞を抗マウスＣＤ４５  Ａｌｅｘ  ＦＬＵＯＲ（商標）４８８（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄカタログ番号１０３１２１、クローン３０−Ｆ１１）、抗マウスＣＤ３  ＢＶ４２１（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄカタログ番号１００２２７、クローン  １７Ａ２）、抗マウスＣＤ１１ｂ  ＡＰＣ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄカタログ番号１０１２１１、クローンＭ１／７０）、および抗マウスＣＤ１９（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄカタログ番号１１５５０７、クローン６Ｄ５）に関して染色した。７−ＡＡＤ生存率染色溶液（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄカタログ番号４２０４０３）を細胞に１０分間適用した後、ＢＤ  ＦＡＣＳＡｒｉａでソートした。ＣＤ４５＋／ＣＤ１９−／７−ＡＡＤ−／ＣＤ３＋細胞およびＣＤ４５＋／ＣＤ１９−／７−ＡＡＤ−／ＣＤ１１ｂ＋細胞を、４℃で２％ＦＢＳを含有するＤＭＥＭ培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓカタログ番号１１９９５−０６５）中にソートした。細胞をペレットとし、すぐに２−メルカプトエタノールを含有するＲＮＥＡＳＹ（商標）ＲＬＴバッファー（ＲＮＥＡＳＹ（商標）Ｍｉｎｉ  Ｐｌｕｓキット、Ｑｉａｇｅｎカタログ番号７４１３４）に溶解させた。ＲＮＥＡＳＹ（商標）説明に従い、ＲＮアーゼフリーＤＮアーゼセット（Ｑｉａｇｅｎカタログ番号７９２５４）標準プロトコールと組み合わせてＲＮＡを単離し、質をＮａｎｏｄｒｏｐＴＭ分光光度計で確認した。十分な量のＲＮＡを得るために、各「サンプル」について５個体のマウスからの腫瘍をプールした。
【０６６８】
遺伝子アレイ実験：
総ての手順はボストン大学マイクロアレイリソース施設で、ＧＥＮＥＣＨＩＰ（商標）Ｗｈｏｌｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ（ＷＴ）  Ｐｌｕｓ  Ｒｅａｇｅｎｔ  Ｋｉｔ  Ｍａｎｕａｌ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ、Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ、ＣＡ）に記載の通りに行った。簡単に述べれば、全ＲＮＡを、ＲＮＥＡＳＹ（商標）キット（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて単離し、サンプル強度は、Ａｇｉｌｅｎｔ  ２１００  Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で実施するＲＮＡ  ６０００  Ｐｉｃｏ  Ａｓｓａｙ  ＲＮＡチップを用いて確認した。全ＲＮＡ（２００ｎｇ）を、ＧＥＮＥＣＨＩＰ（商標）ＷＴ  ＰＬＵＳ試薬キット（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）を用いて逆転写させた。得られたｃＤＮＡを、ＧＥＮＥＣＨＩＰ（商標）ＷＴ発現キット（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いるｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写のための鋳型として使用した。得られたアンチセンスｃＲＮＡを、核酸結合ビーズ（ＧＥＮＥＣＨＩＰ（商標）ＷＴ  ＰＬＵＳ試薬キット、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）を用いて精製し、センス配向で一本鎖ＤＮＡを産生するために逆転写用の鋳型として使用した。このステップ中、ｄＵＴＰが組み込まれた。次に、ＤＮＡを、ウラシルＤＮＡグリコシラーゼ（ＵＤＧ）および脱プリン／脱ピリミジンエンドヌクレアーゼ１（ＡＰＥ  １）を用いて断片化し、末端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ、ＧＥＮＥＣＨＩＰ（商標）ＷＴ  ＰＬＵＳ試薬キット、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）を用い、ビオチンに共有結合されたＤＮＡ標識試薬で標識した。ＩＶＴおよびｃＤＮＡの断片化の品質管理は、Ａｇｉｌｅｎｔ  ２１００  ＢｉｏａｎａｌｙｚｅｒでｍＲＮＡ  Ｐｉｃｏアッセイを実施することにより行った。
【０６６９】
標識された断片化ＤＮＡを、ＧＥＮＥＣＨＩＰ（商標）ハイブリダイゼーションオーブン６４０にて回転（６０ｒ．ｐ．ｍ．）させながら４５℃で１６〜１８時間、遺伝子アレイ１．０Ｓとハイブリダイズさたせた。ハイブリダイズサンプルを洗浄し、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘフルイディクスステーション４５０を製造者の説明に従って用いて染色した（ハイブリダイゼーション、洗浄、および染色キット、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）。マイクロアレイをすぐにＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘ遺伝子アレイスキャナー３０００  ７Ｇプラス（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）を用いてスキャンした。データはＧｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ＯｍｎｉｂｕｓレポジトリにレコードＧＳＥ８７１６４として保管する。
【０６７０】
２つの集団ａおよびｂについて、δ係数はδスコア１１を若干変形させたものであり、次のように定義される。
【０６７１】
【数１】
2019504029.tif 000020
（式中、μおよびσｐ（ａ，ｂ）はそれぞれ幾何平均およびプールされた幾何標準偏差である）。それは本質的に、観測された分散を超える２つのクラス間の差次的発現の量を反映する分散補正変化倍率値であり、元の変化倍率値（すなわち、倍率）として同じ対数スケールで表される。
【０６７２】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ抗原提示細胞（ＡＰＣ）およびＴ細胞の増殖実験：
血液を健康なドナーから米国血液銀行協会のガイドラインに従い、ＩＲＢにより承認されたインフォームドコンセントフォーム下で採取され、Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ（ボストン、ＭＡ）から購入した。ヒト単球を軟膜調製から、製造者の説明に従い（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ＃１８０５８）正の選択によって単離した。ＧＬＵＴＡＭＡＸ（商標）（ＧＩＢＣＯ）、ウシ胎児血清（１０％ｖ／ｖ）、ＩＬ−４（１０ｎｇ／ｍｌ）、ＧＭ−ＣＳＦ（５０ｎｇ／ｍｌ）、ペニシリン（１００Ｕ／ｍｌ）、およびストレプトマイシン（１００ｕｇ／ｍｌ）を添加したＲＰＭＩ培地１６４０中、  ０．１％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯまたは３００ｎＭ  ＴＭＰ１９５の存在下で５日間、単球を抗原提示細胞に分化させた。ＣＤ８０（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ  ＃３０５２０８）およびＣＤ８６（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ  ＃３０５４１８）のフローサイトメトリー分析の前に、細胞を洗浄およびＰＢＳ中５ｍＭ  ＥＤＴＡの溶液（Ｃａ２＋およびＭｇ２＋不含）でのインキュベーションにより回収した。あるいは、採取したＡＰＣを計数し、培養培地（ＤＭＳＯ不含または阻害剤存在）中、１０：１  Ｔ細胞：ＡＰＣ比でＣＥＬＬＴＲＡＣＥ（商標）ＣＦＳＥ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  カタログ＃Ｃ３４５５４）で標識した異種ＣＤ４＋Ｔ細胞（製造者の説明に従い、バフィーコートから負の選択により単離、ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ＃１５０６２）とともに共培養した。Ｔ細胞増殖を２００ｐｇ／ｍｌ抗ＣＤ３（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ  カタログ＃３１７３２６）の添加により刺激し、７２時間の共培養後に、ＦｌｏｗＪｏソフトウエア（バージョン９．４、Ｔｒｅｅｓｔａｒ，Ｉｎｃ．）を用いたＣＦＳＥの希釈により増殖を定量した。
【０６７３】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞死アッセイ：
ヒト乳癌細胞株（ＢＴ２０、ＭＣＦ７、ＨＣＣ２０２、Ｔ４７Ｄ、ＭＤＡ−ＭＢ−４５３およびＭＤＡ−ＭＢ−４３６）をＡＴＣＣから入手した。使用前に、ダナ・ファーバー癌研究所でのＳＴＲプロファイリングによるかまたはブロード研究所でのＳＮＰパネルを用いたＦｌｕｉｄｉｇｍに基づくフィンガープリント法によって細胞株の認証を行った。細胞株を、ＭｙｃｏＡｌｅｒｔ  ＰＬＵＳマイコプラズマ検出キット（Ｌｏｎｚａ  ＬＴ０７）を製造者の説明に従って用いてマイコプラズマに関して検査した。マウス乳癌細胞株を、４つの異なるＭＭＴＶ−ＰｙＭＴ担癌マウスから樹立した。マウス乳癌細胞株７３３３を野生型同腹子に移植し、腫瘍が形成したところでそれを摘出し、腫瘍細胞株「ＭＭＴＶ」の作製に使用した。総ての細胞を９６ウェルプレートに１Ｅ４細胞／ウェルで播種した。細胞を４８時間処理し、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏを用いて細胞生存率を評価した。
【０６７４】
統計分析：
比較様式に応じて適当な統計分析を行い、テキストおよび図の凡例に示した。そうではないことが記載されない限り、スチューデントのＴ検定をＰｒｉｓｍバージョン７（Ｇｒａｐｈｐａｄ，Ｉｎｃ．）にて行い、Ｐ値を＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１として表示する。エラーバーはＳ．Ｅ．Ｍ．を表す。
【０６７５】
材料および方法の参照文献
2019504029.tif 000021
【図１ａ】
2019504029.tif 000022
【図１ｂ−ｃ】
2019504029.tif 000023
【図１ｄ−ｇ】
2019504029.tif 000024
【図１Ｈ】
2019504029.tif 000025
【図１Ｉ】
2019504029.tif 000026
【図１Ｊ】
2019504029.tif 000027
【図２ａ−ｃ】
2019504029.tif 000028
【図２ｄ−ｆ】
2019504029.tif 000029
【図２ｇ−ｉ】
2019504029.tif 000030
【図２ｊ−ｋ】
2019504029.tif 000031
【図３Ａ】
2019504029.tif 000032
【図３Ｂ】
2019504029.tif 000033
【図３Ｃ】
2019504029.tif 000034
【図３Ｄ】
2019504029.tif 000035
【図３ｅ−ｆ】
2019504029.tif 000036
【図４ａ−ｂ】
2019504029.tif 000037
【図４ｃ−ｄ】
2019504029.tif 000038
【図５Ａ】
2019504029.tif 000039
【図５Ｂ】
2019504029.tif 000040
【図５Ｃ】
2019504029.tif 000041
【図５ｄ】
2019504029.tif 000042
【図６Ａ】
2019504029.tif 000043
【図６ｂ】
2019504029.tif 000044
【図６ｃ】
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【図６ｄ】
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【図６ｅ】
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【図６ｆ】
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【図７】
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【図８】
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【図９ａ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９ｃ−ｄ】
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【図１０ａ−ｂ】
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【図１０ｃ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１１Ｄ】
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【図１１Ｅ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１３ａ−ｂ】
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【図１３ｃ−ｄ】
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【図１４ａ−ｂ】
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【図１４ｃ−ｄ】
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【図１５ａ−ｄ】
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【図１５ｅ−ｆ】
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【図１６ａ】
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【図１６ｂ】
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【図１６ｃ−ｅ】
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【図１６ｆ−ｈ】
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【図１７ａ−ｂ】
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【図１７ｃ−ｇ】
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【図１７ｈ−ｉ】
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【図１８ａ−ｂ】
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【図１８ｃ】
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【図１８ｄ−ｆ】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【国際調査報告】
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