(57)【要約】  本発明は医薬化学分野に属する。具体的には、本発明は、ＪＡＫ阻害剤としてのピロロピリミジン化合物（式Ｉ）の結晶Ａ及び結晶Ｂに関し、さらに前記結晶Ａ及び結晶Ｂの製造方法、前記結晶Ａ又は結晶Ｂを含む結晶組成物、前記結晶Ａ又は結晶Ｂ又はその結晶組成物を含む医薬組成物、並びにそれらの医薬用途に関する。本発明に係る結晶Ａ及び結晶Ｂは、純度が高く、結晶度が高く、安定性が良い等の利点を有する。【化１】2019521980.tif 000033【選択図】なし
2019521980.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ化合物の結晶Ａであって、
【化１】
2019521980.tif 000031
そのＸ線回折パターンは、２θが９．３５°±０．２°、１１．９３°±０．２°、１６．３２°±０．２°、２１．２３°±０．２°、２３．１３°±０．２°及び２５．５８°±０．２°である回折ピークを有し、
典型的には、２θが９．３５°±０．２°、１１．９３°±０．２°、１６．３２°±０．２°、１８．８２°±０．２°、２０．５４°±０．２°、２１．２３°±０．２°、２３．１３°±０．２°及び２５．５８°±０．２°である回折ピークを有し、
より典型的には、２θが９．３５°±０．２°、１０．９３°±０．２°、１１．９３°±０．２°、１４．４６°±０．２°、１６．３２°±０．２°、１８．８２°±０．２°、２０．５４°±０．２°、２１．２３°±０．２°、２１．６６°±０．２°、２３．１３°±０．２°、２５．５８°±０．２°及び２６．３４°±０．２°である回折ピークを有し、
さらに典型的には、２θが９．３５°±０．２°、１０．９３°±０．２°、１１．９３°±０．２°、１４．４６°±０．２°、１６．３２°±０．２°、１７．２８°±０．２°、１８．８２°±０．２°、１９．２５°±０．２°、２０．５４°±０．２°、２１．２３°±０．２°、２１．６６°±０．２°、２２．１５°±０．２°、２３．１３°±０．２°、２４．０９°±０．２°、２５．５８°±０．２°及び２６．３４°±０．２°である回折ピークを有する、
式Ｉ化合物の結晶Ａ。
【請求項２】
請求項１記載の式Ｉ化合物の結晶Ａの製造方法であって、
（１）式Ｉ化合物を結晶化溶媒に溶解する工程であって、前記結晶化溶媒は、メタノール、エタノール、ｎ-プロパノール、イソプロパノール、ｎ-ブタノール、イソブタノール、ｔ-ブタノール、エチレングリコールモノメチルエーテル、ジエチルエーテル、イソプロピルエーテル、メチルｔ-ブチルエーテル、ジオキサン、テトラヒドロフラン、２-メチルテトラヒドロフラン、アセトン、１-ブタノン、２-ブタノン、酢酸エチル、ギ酸エチル、酢酸メチル、酢酸イソプロピル、ジクロロメタン、クロロホルム、水、及びこれらのうちの任意２種以上の混合溶媒からなる群より選ばれるものである、工程と、
（２）式Ｉ化合物を結晶化する工程とを含む、製造方法。
【請求項３】
請求項２に記載の製造方法であって、
前記結晶化溶媒は、エタノール、イソプロピルエーテル、酢酸エチル、アセトン、ジクロロメタン、水、及びこれらのうちの任意２種以上の混合溶媒からなる群より選ばれるものであり、好ましくは、エタノール、エタノール−酢酸エチル混合溶媒、エタノール−水混合溶媒、エタノール−イソプロピルエーテル混合溶媒、アセトン、酢酸エチル又はジクロロメタンである、製造方法。
【請求項４】
請求項１に記載の式Ｉ化合物の結晶Ａは、結晶組成物の重量の５０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、最も好ましくは９５％以上を占める、結晶組成物。
【請求項５】
有効量の請求項１に記載の式Ｉ化合物の結晶Ａ或いは請求項４に記載の結晶組成物を含む、医薬組成物。
【請求項６】
請求項１に記載の式Ｉ化合物の結晶Ａ、或いは請求項４に記載の結晶組成物、或いは請求項５に記載の医薬組成物の、ヤヌスキナーゼ媒介性疾患を治療又は予防するための医薬の製造における使用。
【請求項７】
式Ｉ化合物の結晶Ｂであって、
【化２】
2019521980.tif 000032
そのＸ線回折パターンは、２θが８．９７°±０．２°、９．３９°±０．２°、１２．９０°±０．２°、１７．７０°±０．２°、２０．３１°±０．２°及び２３．６３°±０．２°である回折ピークを有し、
典型的には、２θが８．９７°±０．２°、９．３９°±０．２°、１２．９０°±０．２°、１６．５４°±０．２°、１７．７０°±０．２°、１９．２０°±０．２°、２０．３１°±０．２°、２２．７８°±０．２°及び２３．６３°±０．２°である回折ピークを有し、
より典型的には、２θが８．９７°±０．２°、９．３９°±０．２°、１１．２４°±０．２°、１２．９０°±０．２°、１４．５６°±０．２°、１６．５４°±０．２°、１７．７０°±０．２°、１９．２０°±０．２°、２０．３１°±０．２°、２２．２３°±０．２°、２２．７８°±０．２°、２３．６３°±０．２°及び２５．５５°±０．２°である回折ピークを有する、
式Ｉ化合物の結晶Ｂ。
【請求項８】
前記式Ｉ化合物のアセトニトリル溶媒和物であり、前記式Ｉ化合物とアセトニトリルとのモル比は、１：０．５〜１：２．０の範囲内であり、好ましくは１：０．５、１：１、１：１．５又は１：２．０である、請求項７に記載の式Ｉ化合物の結晶Ｂ。
【請求項９】
請求項７又は８に記載の式Ｉ化合物の結晶Ｂの製造方法であって、
（１）式Ｉ化合物をアセトニトリルに溶解させる工程と、
（２）式Ｉ化合物を結晶化する工程とを含む、製造方法。
【請求項１０】
請求項７又は８に記載の式Ｉ化合物の結晶Ｂは、結晶組成物の重量の５０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、最も好ましくは９５％以上を占める、結晶組成物。
【請求項１１】
有効量の請求項７又は８に記載の式Ｉ化合物の結晶Ｂ或いは請求項１０に記載の結晶組成物を含む、医薬組成物。
【請求項１２】
請求項７又は８に記載の式Ｉ化合物の結晶Ｂ、或いは請求項１０に記載の結晶組成物、或いは請求項１１に記載の医薬組成物の、ヤヌスキナーゼ媒介性疾患を治療又は予防するための医薬の製造における使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本願は、２０１６年６月１６日に中国国家知的財産局に出願された出願番号がＣＮ２０１６１０４３５９４７．４である中国特許出願に基づく優先権及び利益を主張し、当該中国特許出願の内容のすべてを本願に援用する。
【０００２】
本発明は医薬化学分野に属する。具体的には、本発明は、ＪＡＫ阻害剤としてのピロロピリミジン化合物の（３Ｒ）-３-［３-アミノ-４-（７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン-４-イル）-１Ｈ-ピラゾール-１-イル］-３-シクロペンチルプロピオニトリルの結晶、結晶組成物、医薬組成物、並びにその製造方法及び使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
ヤヌスキナーゼ（Ｊａｎｕｓ  ｋｉｎａｓｅ：ＪＡＫ）は、非受容体型チロシンキナーゼ（ＰＴＫ）の一種であり、細胞内に存在し、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路により、サイトカインの刺激シグナルを伝達する。ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路は、細胞外の化学シグナルを細胞膜により細胞核内に位置するＤＮＡにおける遺伝子プロモーターに伝達し、最終的に、細胞におけるＤＮＡ転写と活性レベルとの変更を影響する。ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路は、（１）受容体、（２）ヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）、および（３）シグナル伝達および転写活性化因子（ＳＴＡＴ）の３つの要素からなる。前記受容体は、インターフェロン、インターロイキン、増殖因子または他の化学的メッセンジャーにより活性化され、活性化でＪＡＫ自己リン酸化をもたらし、続いてＳＴＡＴタンパク質とリン酸化受容体とを結合し、これにより、ＳＴＡＴはＪＡＫリン酸化され、その後、リン酸化ＳＴＡＴタンパク質が受容体から解離し、二量化して細胞核に移行し、特定のＤＮＡ部位に結合して転写を変更する（Ｓｃｏｔｔ，Ｍ．Ｊ．，Ｃ．Ｊ．Ｇｏｄｓｈａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）．  「Ｊａｋｓ，ＳＴＡＴｓ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ，  ａｎｄ  Ｓｅｐｓｉｓ」  Ｃｌｉｎ  Ｄｉａｇｎ  Ｌａｂ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ９（６）：１１５３−９）。
【０００４】
ＪＡＫファミリーは、免疫応答に関与する細胞の増殖および機能のサイトカイン依存性制御において役割を果たしている。現在、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３およびＴＹＫ２（Ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅ  ２）という４つの哺乳類ＪＡＫファミリーメンバーが知られている。ＪＡＫタンパク質は、サイズが１２０〜１４０ｋＤａの範囲であり、７つの保存されたＪＡＫホモロジー（ＪＨ）ドメインを含み、それらの１つは、機能的触媒キナーゼドメインであり、もう１つは、制御機能を有効に果たす、および／または、ＳＴＡＴのためのドッキング部位として作用する偽キナーゼ（ｐｓｅｕｄｏｋｉｎａｓｅ）ドメインである（Ｓｃｏｔｔ，  Ｇｏｄｓｈａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．  ２００２，ｓｕｐｒａ）。
【０００５】
現在、複数のヤヌスキナーゼ阻害剤が報告されており、その中で、出願日が２０１４年１２月１６日である出願番号２０１４１０７８４４６１．２の中国特許出願には、複数のＪＡＫ阻害剤（ここで参照のために全文として本明細書に組み込む）が開示され、下記式Ｉで表される（３Ｒ）-３-［３-アミノ-４-（７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン-４-イル）-１Ｈ-ピラゾール-１-イル］-３-シクロペンチルプロピオニトリル化合物を含む。
【化１】
2019521980.tif 000003
【０００６】
治療効果の他、医薬研究開発者は、医薬としての性質を有する活性分子の適切な形式を提供することを試みる。商業的に実行可能な製造方法を得る観点から、または活性化合物を含む医薬組成物を製造する観点から、活性成分の化学的な安定性、固形安定性および貯蔵寿命は、いずれも非常に重要な要素である。そのため、必要な性質を有する形式を提供することは、医薬研究開発に極めて重要である。
【発明の概要】
【０００７】
本発明の一態様では、式Ｉ化合物（下記式Ｉで表される化合物、以下同じ）の結晶Ａを提供する。
【化２】
2019521980.tif 000004
前記式Ｉ化合物の結晶ＡのＸ線回折（ＸＲＤ）パターンは、２θが９．３５°±０．２°、１１．９３°±０．２°、１６．３２°±０．２°、２１．２３°±０．２°、２３．１３°±０．２°及び２５．５８°±０．２°である回折ピークを有する。
【０００８】
本発明の他の態様では、（１）式Ｉ化合物を結晶化溶媒に溶解する工程であって、前記結晶化溶媒は、メタノール、エタノール、ｎ-プロパノール、イソプロパノール、ｎ-ブタノール、イソブタノール、ｔ-ブタノール、エチレングリコールモノメチルエーテル、エチルエーテル、イソプロピルエーテル、メチルｔ-ブチルエーテル、ジオキサン、テトラヒドロフラン、２-メチルテトラヒドロフラン、アセトン、１-ブタノン、２-ブタノン、酢酸エチル、ギ酸エチル、酢酸メチル、酢酸イソプロピル、ジクロロメタン、クロロホルム、水、及びこれらのうちの任意２種以上の混合溶媒からなる群より選ばれるものである、工程と、（２）式Ｉ化合物を結晶化する工程とを含む、式Ｉ化合物の結晶Ａの製造方法を提供する。
【０００９】
本発明の他の態様では、式Ｉ化合物の結晶Ａが前記結晶組成物の重量の５０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、最も好ましくは９５％以上を占める、結晶組成物を提供する。
【００１０】
本発明の他の態様では、有効量の式Ｉ化合物の結晶Ａ、又は式Ｉ化合物の結晶Ａの結晶組成物を含む、医薬組成物を提供する。  
【００１１】
本発明の他の態様では、前記式Ｉ化合物の結晶Ａ、又は上記結晶組成物、又は上記医薬組成物の、ヤヌスキナーゼ媒介性疾患を治療又は予防するための医薬の製造における使用を提供する。
【００１２】
本発明の更なる態様では、式Ｉ化合物の結晶Ｂを提供する。
【化３】
2019521980.tif 000005
前記式Ｉ化合物の結晶ＢのＸ線回折（ＸＲＤ）パターンは、２θが８．９７°±０．２°、９．３９°±０．２°、１２．９０°±０．２°、１７．７０°±０．２°、２０．３１°±０．２°及び２３．６３°±０．２°である回折ピークを有する。
本発明の他の態様では、（１）式Ｉ化合物をアセトニトリルに溶解させる工程と、（２）式Ｉ化合物を結晶化する工程とを含む、式Ｉ化合物の結晶Ｂの製造方法を提供する。
【００１３】
本発明の他の態様では、式Ｉ化合物の結晶Ｂが前記結晶組成物の重量の５０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、最も好ましくは９５％以上を占める、結晶組成物を提供する。
【００１４】
本発明の他の態様では、有効量の式Ｉ化合物の結晶Ｂ、又は式Ｉ化合物の結晶Ｂの結晶組成物を含む、医薬組成物を提供する。
【００１５】
本発明の他の態様では、前記式Ｉ化合物の結晶Ｂ、又は上記結晶組成物、又は上記医薬組成物の、ヤヌスキナーゼ媒介性疾患を治療又は予防するための医薬の製造における使用を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】式Ｉ化合物の結晶Ａ（実施例２の方法１）のＸＲＤパターンである。
【図２】式Ｉ化合物の結晶Ａ（実施例２の方法１）のＤＳＣパターンである。
【図３】式Ｉ化合物の結晶Ａ（実施例２の方法２、エタノール−酢酸エチル（４：１））のＸＲＤパターンである。
【図４】式Ｉ化合物の結晶Ａ（実施例２の方法３）のＸＲＤパターンである。
【図５】式Ｉ化合物の結晶Ｂ（実施例３）のＸＲＤパターンである。
【図６】式Ｉ化合物の結晶Ｂ（実施例３）のＤＳＣパターンである。
【発明の詳細な説明】
【００１７】
本発明の更なる態様では、式Ｉ化合物の結晶Ａを提供する。
【化４】
2019521980.tif 000006
前記式Ｉ化合物の結晶ＡのＸ線回折（ＸＲＤ）パターンは、２θが９．３５°、１１．９３°、１６．３２°、２１．２３°、２３．１３°及び２５．５８°±０．２°である回折ピークを有し、典型的には、２θが９．３５°、１１．９３°、１６．３２°、１８．８２°、２０．５４°、２１．２３°、２３．１３°及び２５．５８°±０．２°である回折ピークを有し、より典型的には、２θが９．３５°、１０．９３°、１１．９３°、１４．４６°、１６．３２°、１８．８２°、２０．５４°、２１．２３°、２１．６６°、２３．１３°、２５．５８°及び２６．３４°±０．２°である回折ピークを有し、さらに典型的には、２θが９．３５°、１０．９３°、１１．９３°、１４．４６°、１６．３２°、１７．２８°、１８．８２°、１９．２５°、２０．５４°、２１．２３°、２１．６６°、２２．１５°、２３．１３°、２４．０９°、２５．５８及び２６．３４°±０．２°である回折ピークを有する。
【００１８】
本発明のいくつかの実施形態において、本発明に係る式Ｉ化合物の結晶ＡのＸ線回折（ＸＲＤ）パターンには、相対強度の最大のピークは、２θが１１．９３°、１６．３２°又は２１．２３°±０．２°である回折ピークに位置し、好ましくは、相対強度の最大のピークは、２θが１１．９３°±０．２°である回折ピークに位置する。
【００１９】
本発明のいくつかの実施形態において、本発明に係る式Ｉ化合物の結晶ＡのＸ線回折（ＸＲＤ）パターンには、相対強度の上位の３つのピークは、２θが９．３５°、１１．９３°、１６．３２°、２１．２３°、２３．１３°又は２５．５８°±０．２°である回折ピークに位置する。
【００２０】
本発明のいくつかの実施形態において、本発明に係る式Ｉ化合物の結晶ＡのＸ線回折ピークは、以下のような特徴を有する。
【表１】
2019521980.tif 000007
【００２１】
本発明のいくつかの実施形態において、本発明に係る式Ｉ化合物の結晶ＡのＸ線回折パターンは、図１に示される。
本発明のいくつかの実施形態において、本発明に係る式Ｉ化合物の結晶ＡのＤＳＣパターンは、図２に示される。
本発明のいくつかの実施形態において、本発明に係る式Ｉ化合物の結晶ＡのＸ線回折パターンは、図３に示される。
本発明のいくつかの実施形態において、本発明に係る式Ｉ化合物の結晶ＡのＸ線回折パターンは、図４に示される。
【００２２】
本発明の他の態様では、式Ｉ化合物の結晶Ａの製造方法であって、
（１）式Ｉ化合物を結晶化溶媒に溶解する工程であって、前記結晶化溶媒は、メタノール、エタノール、ｎ-プロパノール、イソプロパノール、ｎ-ブタノール、イソブタノール、ｔ-ブタノール、エチレングリコールモノメチルエーテル、エチルエーテル、イソプロピルエーテル、メチルｔ-ブチルエーテル、ジオキサン、テトラヒドロフラン、２-メチルテトラヒドロフラン、アセトン、１-ブタノン、２-ブタノン、酢酸エチル、ギ酸エチル、酢酸メチル、酢酸イソプロピル、ジクロロメタン、クロロホルム、水、及びこれらのうちの任意２種以上の混合溶媒からなる群より選ばれるものである、工程と、
（２）結晶化し、且つ必要に応じてろ過、洗浄及び／又は乾燥する工程とを含む、
製造方法を提供する。
【００２３】
本発明のいくつかの実施形態において、式Ｉ化合物の結晶Ａを製造するための結晶化溶媒は、エタノール、イソプロピルエーテル、酢酸エチル、アセトン、ジクロロメタン、水、及びこれらのうちの任意２種以上の混合溶媒からなる群より選ばれるものである。好ましくは、エタノール、エタノール−酢酸エチル混合溶媒、エタノール−水混合溶媒、エタノール−イソプロピルエーテル混合溶媒、アセトン、酢酸エチル又はジクロロメタンである。
【００２４】
本発明のいくつかの実施形態において、式Ｉ化合物の結晶Ａを製造するための結晶化溶媒は、好ましくは、エタノール又はエタノール含有混合溶媒である。さらに好ましくは、前記エタノール含有混合溶媒における他の溶媒は、メタノール、ｎ-プロパノール、イソプロパノール、ｎ-ブタノール、イソブタノール、ｔ-ブタノール、エチレングリコールモノメチルエーテル、エチルエーテル、イソプロピルエーテル、メチルｔ-ブチルエーテル、ジオキサン、テトラヒドロフラン、２-メチルテトラヒドロフラン、アセトン、１-ブタノン、２-ブタノン、酢酸エチル、ギ酸エチル、酢酸メチル、酢酸イソプロピル、ジクロロメタン、クロロホルム、及び水からなる群より選ばれるものである。
【００２５】
本発明のいくつかの実施形態において、式Ｉ化合物の結晶Ａを製造する場合、式Ｉ化合物（重量単位ｇで計算）が結晶化溶媒の用量（体積単位ｍＬで計算）に対する割合は１：５〜１：５０の範囲内であり、好ましくは、１：７．５、１：１０、１：１２、１：１５、１：１８、１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５又は１：５０であり、より好ましくは１：７．５〜１：３０である。
【００２６】
本発明のいくつかの実施形態において、式Ｉ化合物の結晶Ａを製造するための結晶化溶媒がエタノール含有混合溶媒からなる群より選ばれる場合、エタノールの含有量（体積基準）は、１０％〜９０％であり、好ましくは、１０％、２０％、２５％、３０％、３３％、４０％、５０％、６０％、６６％、７０％、７５％、８０％又は９０％である。
【００２７】
本発明のいくつかの実施形態において、前記式Ｉ化合物の結晶Ａを製造するための結晶化溶媒がエタノール含有混合溶媒からなる群より選ばれる場合、エタノールとその他の溶媒との割合（体積基準）は、９：１〜１：９、好ましくは９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８又は１：９である。
【００２８】
本発明のいくつかの実施形態において、冷却により、例えば０〜５℃まで冷却して結晶化することができる。本発明のいくつかの実施形態において、減圧濃縮により結晶化することができる。
【００２９】
本発明の他の一態様では、式Ｉ化合物の結晶Ａを含む結晶組成物を提供する。本発明のいくつかの実施形態において、式Ｉ化合物の結晶Ａは、結晶組成物の重量の５０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、最も好ましくは９５％以上を占める。
【００３０】
本発明の他の態様では、式Ｉ化合物の結晶Ａを含む医薬組成物を提供する。該医薬組成物は、有効量の式Ｉ化合物の結晶Ａを含み、又は式Ｉ化合物の結晶Ａの結晶組成物を含む。また、当該医薬組成物は、さらに薬理学的に許容される担体、賦形剤及び／又は媒質を含有してもよく、含有しなくてもよい。
【００３１】
本発明の他の態様では、前記式Ｉ化合物の結晶Ａ、又は上記結晶組成物、又は上記医薬組成物の、ヤヌスキナーゼ媒介性疾患を治療又は予防するための医薬の製造における使用を提供する。
【００３２】
本発明の他の態様では、治療有効量の上記式Ｉ化合物の結晶Ａ、又は上記結晶組成物、又は上記医薬組成物を、それを必要とする哺乳類に投与することを含む、ヤヌスキナーゼ媒介性疾患を治療又は予防する方法を提供する。
【００３３】
本発明の他の態様では、ヤヌスキナーゼ媒介性疾患を治療又は予防するための上記式Ｉ化合物の結晶Ａ、又は上記結晶組成物、又は上記医薬組成物を提供する。
【００３４】
本発明の更なる態様では、式Ｉ化合物の結晶Ｂであって、
【化５】
2019521980.tif 000008
前記式Ｉ化合物の結晶ＢのＸ線回折（ＸＲＤ）パターンは、２θが８．９７°、９．３９°、１２．９０°、１７．７０°、２０．３１°及び２３．６３°±０．２°である回折ピークを有し、典型的には、２θが８．９７°、９．３９°、１２．９０°、１６．５４°、１７．７０°、１９．２０°、２０．３１°、２２．７８°及び２３．６３°±０．２°である回折ピークを有し、さらに典型的には、２θが８．９７°、９．３９°、１１．２４°、１２．９０°、１４．５６°、１６．５４°、１７．７０°、１９．２０°、２０．３１°、２２．２３°、２２．７８°、２３．６３°及び２５．５５°±０．２°である回折ピークを有する、式Ｉ化合物の結晶Ｂを提供する。
【００３５】
本発明のいくつかの実施形態において、本発明に係る式Ｉ化合物の結晶ＢのＸ線回折（ＸＲＤ）パターンには、相対強度の最大のピークは、２θが９．３９°、１７．７０°又は２３．６３°±０．２°である回折ピークに位置し、好ましくは、相対強度の最大のピークは、２θが１７．７０°±０．２°である回折ピークに位置する。
【００３６】
本発明のいくつかの実施形態において、本発明に係る式Ｉ化合物の結晶ＢのＸ線回折ピークは、以下のような特徴を有する。
【表２】
2019521980.tif 000009
【００３７】
本発明のいくつかの実施形態において、本発明に係る式Ｉ化合物の結晶ＢのＸ線回折パターンは、図５に示される。
【００３８】
本発明のいくつかの実施形態において、本発明に係る式Ｉ化合物の結晶ＢのＤＳＣパターンは、図６に示される。
【００３９】
2019521980.tif 000010
【００４０】
本発明の他の態様では、式Ｉ化合物の結晶Ｂの製造方法であって、
（１）式Ｉ化合物をアセトニトリルに溶解させる工程と、
（２）結晶化し、且つ必要に応じてろ過、洗浄及び／又は乾燥する工程とを含む、
製造方法を提供する。
【００４１】
本発明のいくつかの実施形態において、式Ｉ化合物の結晶Ｂを製造する場合、式Ｉ化合物（重量単位ｇで計算）が結晶化溶媒アセトニトリルの用量（体積単位ｍＬで計算）に対する割合は１：５〜１：５０の範囲内であり、好ましくは、１：７．５、１：１０、１：１２、１：１５、１：１８、１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５又は１：５０であり、より好ましくは１：１０〜１：２５である。
【００４２】
本発明のいくつかの実施形態において、冷却により、例えば０〜５℃まで冷却して結晶化することができる。
【００４３】
本発明の他の一態様では、式Ｉ化合物の結晶Ｂを含む結晶組成物を提供する。本発明のいくつかの実施形態において、式Ｉ化合物の結晶Ｂは、結晶組成物の重量の５０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、最も好ましくは９５％以上を占める。
【００４４】
本発明の他の態様では、式Ｉ化合物の結晶Ｂを含む医薬組成物を提供する。該医薬組成物は、有効量の式Ｉ化合物の結晶Ｂを含み、又は式Ｉ化合物の結晶Ｂの結晶組成物を含む。また、当該医薬組成物は、さらに薬理学的に許容される担体、賦形剤及び／又は媒質を含有してもよく、含有しなくてもよい。
【００４５】
本発明の他の態様では、前記式Ｉ化合物の結晶Ｂ、又は上記結晶組成物、又は上記医薬組成物の、ヤヌスキナーゼ媒介性疾患を治療又は予防するための医薬の製造における使用を提供する。
【００４６】
本発明の他の態様では、治療有効量の上記式Ｉ化合物の結晶Ｂ、又は上記結晶組成物、又は上記医薬組成物を、それを必要とする哺乳類に投与することを含む、ヤヌスキナーゼ媒介性疾患を治療又は予防する方法を提供する。
【００４７】
本発明の他の態様では、ヤヌスキナーゼ媒介性疾患を治療又は予防するための上記式Ｉ化合物の結晶Ｂ、又は上記結晶組成物、又は上記医薬組成物を提供する。
【００４８】
本発明において、Ｘ線回折パターンは、下記方法により測定される。機器はＢｒｕｋｅｒ  Ｄ８  ＡＤＶＡＮＣＥ  Ｘ線回折機であり、方法はターゲット：Ｃｕ：Ｋ−Ａｌｐｈａであり、波長λ＝１．５４１７９Å、管電圧Ｖｏｌｔａｇｅは４０ｋＶであり、管電流Ｃｕｒｒｅｎｔは４０ｍＡであり、スキャン範囲は４〜４０°であり、スキャン速度はステップ毎に０．１秒、ステップ毎に０．０２°である。
本発明において、示差走査熱量分析（ＤＳＣ）は、下記方法により測定される。機器はＭＥＴＴＬＥＲ  ＤＳＣ−１示差走査熱量分析機であり、方法は試料（〜５ｍｇ）を取ってＤＳＣアルミ鍋に入れてテストし、その中で、温度が３０℃〜３００℃であり、昇温速度が１０℃／ｍｉｎである。
【００４９】
なお、Ｘ線回折スペクトルにおいて、結晶化合物から得られる回折スペクトルは、特定の結晶形に関して特徴的なものである場合が多いが、スペクトル帯（特に低角度において）の相対強度は、結晶条件、粒径及びその他の測定条件の相違により生じる優位配向効果（ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｏｒｉｅｎｔａｔｉｏｎ  ｅｆｆｅｃｔｓ）によって変化する可能性がある。したがって、回折ピークの相対強度は、相応の結晶形に対して特徴的ではなく、既知の結晶形と同じか否かを判断する際に、ピークの相対強度ではなくピークの相対位置をさらに注意すべきである。また、いかなる所定の結晶形に対して、ピークの位置に少しの誤差が存在する可能性があることは、結晶学分野に周知である。例えば、サンプルを分析する際の温度の変化、サンプルの移動、または計器の較正等により、ピークの位置が移動することができ、２θ値の測定誤差は、約±０．２°となる場合がある。そのため、それぞれの結晶形の構造を同定する場合、このような誤差を考慮すべきである。ＸＲＤパターンにおいて、通常、２θ角または格子面間隔ｄでピーク位置を示し、両方の間に簡単な換算関係：ｄ＝λ／２ｓｉｎθを持っており、その中で、ｄは格子面間隔を表し、λは入射Ｘ線の波長を表し、θは回折角を表す。同種の化合物の同種の結晶形には、それらのＸＲＤパターンのピーク位置が全体的に類似性を有し、相対強度の誤差は比較的大きい可能性がある。特に注意すべきは、混合物の同定において、含有量低下等の要素に起因して一部の回折線の欠失を引き起こし、この際に、高純度サンプルから観察された全てのスペクトル帯に頼る必要がなく、ひいては、所定の結晶に対して１本のスペクトル帯だけでも特徴的なものになる可能性がある。
【００５０】
なお、ＤＳＣでは、結晶がその結晶構造に変化を生じたり、結晶が熔融により熱を吸収又は放出したりする際の転移温度を測定する。同一種類の化合物の同一種類の結晶形について、連続的な分析において、熱転移温度及び融点の誤差は、典型的に約５℃以内にある。ある化合物がある所定のＤＳＣピーク又は融点を有するという場合、当該ＤＳＣピーク又は融点±５℃を意味する。ＤＳＣは異なる結晶形を判別するための補助方法を提供する。異なる結晶形は、それらの異なる転移温度の特徴によって識別することができる。
【００５１】
本明細書に記載のヤヌスキナーゼ媒介性疾患は、腫瘍（例えば、リンパ腫、白血病）を含むが、これらに限らない。本明細書に記載のリンパ腫は、ホジキン病（Ｈｏｄｇｋｉｎｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）または非ホジキンリンパ腫（Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎｓｌｅｕｋｅｍｉａ）を含んでもよいが、これらに限らなく、前記非ホジキンリンパ腫は、Ｂ細胞リンパ腫（Ｂ−ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ）またはＴ細胞リンパ腫（Ｔ−ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ）を含んでもよいが、これらに限らない。本明細書に記載の白血病は、急性リンパ性白血病（Ａｃｕｔｅ  ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）、慢性リンパ性白血病（Ｃｈｒｏｎｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）、急性骨髄性白血病（Ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）、慢性骨髄性白血病（Ｃｈｒｏｎｉｃ  ｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）を含むが、これらに限らない。
【００５２】
本発明において、用語「医薬組成物」とは、一種又は複数種の本発明の化合物と、本分野において通常に許容される、生物活性化合物を有機体（例えば、ヒト）に送達するための担体、賦形剤及び／又は媒質からなる製剤を意味する。医薬組成物は、本発明の化合物を有機体に投与することに有利となる目的とする。
【００５３】
用語「担体」は、化合物を細胞や組織に導入することに有利である化合物として定義される。例えば、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）は、ある有機化合物を生体の細胞や組織に導入しやすいため、一般的に担体として用いられる。
【００５４】
「薬学的に許容される担体」は、ヒトや家畜に用いられることが国家薬品管理機関により許可された佐剤、賦形剤、流動促進剤、甘味剤、希釈剤、防腐剤、染剤／着色剤、香味剤、界面活性剤、湿潤剤、分散剤、懸濁剤、安定剤、等張剤、溶媒又は、乳化剤を含むが、これらに限られない。
【００５５】
「治療有効量」とは、本発明に係る化合物が哺乳類（好ましくは、ヒト）に投与される際に、下記定義されるように哺乳類（好ましくは、ヒト）にウイルス感染に対する治療の実現に十分な量を意味する。「治療有効量」となる本発明に係る化合物の量は、化合物、疾患状況とその重症度、投与方式及び治療しようとする哺乳類の年齢によって変わるが、当業者は、その自身の持つ知識及び本発明に開示された内容により通常的に決めることができる。
【００５６】
本発明で用いられる用語「治療」は、ウイルス感染を患う哺乳類（好ましくは、ヒトのウイルス感染）への治療を包含し、且つ
（ｉ）ウイルス感染を阻害し、すなわちその進行を阻止すること、
（ｉｉ）ウイルス感染を寛解し、すなわちウイルス感染の回復を引き起こすこと、或いは
（ｉｉｉ）ウイルス感染で引き起こされた症状を寛解すること、を含む。
【００５７】
本発明に用いられる全ての溶媒は、市販品であり、更なる精製の必要がなく、そのまま使用されてもよい。反応は、通常、不活性の窒素ガスの条件下で無水溶媒の中に行われる。
【００５８】
本発明において、プロトン核磁気共鳴データは、「ＢＲＵＫＥＲ  ＡＶＡＮＣＥ  III  ＨＤ  ５００  Ｍ」分光計で記録され、化学シフトは、テトラメチルシラン低磁場側の（ｐｐｍ）で示され、質量スペクトルは、Ｗａｔｅｒｓ  ＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ＋ＸＥＶＯ  Ｇ２  ＱＴｏｆで測定される。質量分析計は、正又は負のモードで動作されるエレクトロスプレーイオン源（ＥＳＩ）を一つ備える。
【００５９】
本発明に係る式Ｉ化合物の結晶Ａ及び結晶Ｂは、純度が高く、結晶度が高く、安定性が良い等の利点を有すると共に、本発明に係る式Ｉ化合物の結晶Ａ及び結晶Ｂの製造方法は簡単であり、溶媒が安価で入手しやすく、結晶条件が穏やかであり、工業化生産に適する。
【００６０】
以下の実施形態では、本発明の技術案をさらに非限定的に詳細に説明する。これらは本発明の例示的な説明と典型的な代表に過ぎず、本発明の範囲を制限するものではない。本発明で用いられる溶剤、試薬及び原料等は、いずれも市販の化学的にまたは分析的に純粋な製品である。
【００６１】
実施例１：  （３Ｒ）−３−｛３−アミノ−４−｛７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル｝−１Ｈ−ピラゾール−１−イル｝−３−シクロペンチルプロピオニトリル（Ｉ）
【化６】
2019521980.tif 000011
ステップＡ：３−シクロペンチルアクリル酸
【化７】
2019521980.tif 000012
５Ｍのマロン酸（３１２ｇ、３．０ｍｏｌ、１．０ｅｑ．）を入れたピリジン溶液に、シクロペンチルカルバルデヒド（３４４．４ｇ、３．５１ｍｏｌ、１．１７ｅｑ．）を室温で滴下し、滴下終了後、１０分間撹拌し、ピペリジン（６．２ｇ、０．０７５ｍｏｌ、０．０２５ｅｑ．）を徐々に滴下し、滴下終了後、室温で１時間撹拌しながら反応させた。得られた混合物を７０〜８０℃まで加熱して撹拌しながら８時間反応させ、減圧下で濃縮して溶媒を蒸発除去させ、残渣を濃塩酸でｐＨ３．０まで調整し、酢酸エチルで３回抽出して有機層（有機相）を合わせ、２．５Ｍの水酸化ナトリウム溶液で５回洗浄し、水層（水相）を濃塩酸でｐＨ３．０まで調整し、酢酸エチルで３回抽出して有機層を合わせ、水で３回洗浄し、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して３−シクロペンチルアクリル酸（３９１．２ｇ、収率９３％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ  （５００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ：７．０８  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  １５．６，  ８．１  Ｈｚ，  １Ｈ）、５．８１  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  １５．６，  １．１  Ｈｚ，  １Ｈ）、１１．２５  （ｓ，  １Ｈ）、２．６４  （ｍ，  １Ｈ）、１．６３  （ｍ，  ２Ｈ）、１．４２  （ｍ，  ２Ｈ）、１．８６  （ｍ，  ２Ｈ）、１．７２  （ｍ，２Ｈ）；ＨＲＭＳ  （ＥＳＩ）  ｃａｌｃｄ．  ｆｏｒ  Ｃ８Ｈ１２Ｏ２［Ｍ−Ｈ］−  １３９．０７６５；Ｆｏｕｎｄ：１３９．０７６０。
【００６２】
ステップＢ：  ５−シクロペンチルピラゾリジン−３−オン
【化８】
2019521980.tif 000013
８０％のヒドラジン水和物（２５３．５ｇ、４．０５ｍｏｌ、１．５ｅｑ．）を室温で撹拌しながら、シクロペンチルアクリル酸（３７８ｇ、２．７ｍｏｌ、１．０ｅｑ．）に滴下した。得られた混合物を７０〜８０℃まで加熱し、６時間撹拌し、０〜１０℃まで冷却し、撹拌しながら結晶化させてろ過した。ろ過ケーキを水で２回洗浄し、４５℃で１２時間送風乾燥して５−シクロペンチルピラゾリジン−３−オン（２９２．５ｇ、収率６８％）を得た。
【００６３】
ステップＣ：  Ｒ−５−シクロペンチルピラゾリジン−３−オンーＤ−酒石酸塩
【化９】
2019521980.tif 000014
Ｄ-酒石酸（１３５ｇ、０．９ｍｏｌ、０．５ｅｑ．）を室温で撹拌しながら５-シクロペンチルピラゾリジン-３-オン（２７８ｇ、１．８ｍｏｌ、１．０ｅｑ．）のアセトン溶液に加え、撹拌しながら２時間反応させた後、結晶化してろ過した。ろ過ケーキを、アセトンで５回叩解して洗練し（ｒｅｆｉｎｅｄ）、５０℃の送風乾燥してＲ−５−シクロペンチルピラゾリジン−３−オン−Ｄ−酒石酸塩（２４１ｇ、収率８８％、ｅｅ値９９．５％）を得た。
【００６４】
ステップＤ：  Ｒ−５−シクロペンチルピラゾリジン−３−オン
【化１０】
2019521980.tif 000015
Ｒ-５-シクロペンチルピラゾリジン-３-オン-Ｄ-酒石酸塩（２２８ｇ、０．７５ｍｏｌ、１．０ｅｑ．）を室温で撹拌しながら４Ｍの水酸化ナトリウム（５２．２ｇ、２．６１ｍｏｌ、１．７４ｅｑ．）の溶液に加え、得られた混合物をジクロロメタンで抽出して有機層を合わせ、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、ろ液を減圧下で濃縮してＲ-５-シクロペンチルピラゾリジン-３-オン（１００．６ｇ、収率８５．２％、ｅｅ値９９．５％）を得た。１Ｈ−ＮＭＲ  （５００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）δ８．９３  （ｓ，  １Ｈ）、５．１５  （ｓ，  １Ｈ）、１．８９（ｍ，１Ｈ）、１．６７  （ｍ，２Ｈ）、１．５５  （ｍ，  ２Ｈ）、１．４７  （ｍ，  ２Ｈ）、１．２６  （ｍ，１Ｈ）、１．１４（ｍ，１Ｈ）；ＨＲＭＳ  （ＥＳＩ）  ｃａｌｃｄ．  ｆｏｒ  Ｃ８Ｈ１４Ｎ２Ｏ  ［Ｍ＋Ｈ］＋  １５５．１１７９；Ｆｏｕｎｄ：１５５．１１８３。
【００６５】
ステップＥ：  ４−クロロ−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
【化１１】
2019521980.tif 000016
氷浴中で、４-クロロピロロ［２，３  -  ｄ］ピリミジン（２００ｇ、１．３ｍｏｌ、１．０ｅｑ．）のＮ、Ｎ-ジメチルホルムアミド溶液に、６０％ＮａＨ（６２．４ｇ、１．５６ｍｏｌ、１．２ｅｑ．）に加えた後、室温で１時間撹拌して反応させ、２-（トリメチルシリル）エトキシメチルクロリド（ＳＥＭＣｌ、２６０ｇ、１．５６ｍｏｌ、１．２ｅｑ．）を、氷浴で冷却しながら徐々に滴下した。滴下終了後、得られた混合物を氷浴中で１時間撹拌して反応させ、そして反応を水でクエンチした。得られた混合物を酢酸エチルで抽出して有機相（有機層）を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、ろ液を減圧濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、４−クロロ−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（３１２．２ｇ、収率９１．８％）を得た。１Ｈ−ＮＭＲ  （５００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）：δ８．６４  （ｓ，  １Ｈ）、７．３８  （ｄ，  Ｊ  ＝  ３．６  Ｈｚ，  １Ｈ）、６．６５  （ｄ，  Ｊ  ＝  ３．６  Ｈｚ，  １Ｈ）、５．６４  （ｓ，  ２Ｈ）、３．５２  （ｔ，  Ｊ  ＝  ８．２  Ｈｚ，  ２Ｈ）、０．９０（ｔ，  Ｊ  ＝  ８．２  Ｈｚ，  ２Ｈ）、−０．０７  （ｓ，  ９Ｈ）；ＨＲＭＳ  （ＥＳＩ）  ｃａｌｃｄ．  ｆｏｒ  Ｃ１２Ｈ１８Ｎ３ＯＳｉ  ［Ｍ＋Ｈ］＋  ２８４．０９８０；Ｆｏｕｎｄ：２８４．０９９５。
【００６６】
ステップＦ：  ２-シアノ-２-｛７−｛［２-（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝-７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン-４-イル｝酢酸エチル
【化１２】
2019521980.tif 000017
炭酸カリウム（２０７ｇ、１．５ｍｏｌ、３．０ｅｑ．）を室温で撹拌しながら４-クロロ-７−｛［２-（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝-７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン（１４２ｇ、０．５ｍｏｌ、１．０ｅｑ．）及びシアノ酢酸エチル（８５ｇ、０．７５ｍｏｌ、１．５１．０ｅｑ．）のＤＭＦ溶液に加え、得られた混合物を１２０℃まで加熱し、４時間撹拌して反応させ、室温まで冷却した。反応を水でクエンチし、撹拌して結晶化させてろ過した。ろ過ケーキを水で洗浄し、５０℃で送風乾燥させて２-シアノ-２-｛７−｛［２-（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝-７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン-４-イル｝酢酸エチル（１６７ｇ、収率９２．６％）を得た。１Ｈ−ＮＭＲ  （５００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）：δ  １３．４６  （ｓ，  １Ｈ）、８．４５  （ｓ，  １Ｈ）、７．５６  （ｄ，  Ｊ  ＝  ３．６  Ｈｚ，  １Ｈ）、７．１８  （ｄ，  Ｊ  ＝  ３．６  Ｈｚ，  １Ｈ）、５．５６  （ｓ，  ２Ｈ）、４．３２  （ｑ，  Ｊ  ＝  ７．１  Ｈｚ，  ２Ｈ）、３．５２  （ｔ，  Ｊ  ＝  ８．２  Ｈｚ，  ２Ｈ）、１．２７  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．１Ｈｚ，  ３Ｈ）、０．８３  （ｔ，  Ｊ  ＝  ８．２  Ｈｚ，  ２Ｈ）、−０．０８  （ｓ，  ９Ｈ）；ＨＲＭＳ  （ＥＳＩ）  ｃａｌｃｄ．  ｆｏｒ  Ｃ１７Ｈ２４Ｎ４Ｏ３Ｓｉ  ［Ｍ＋Ｈ］＋  ３６１．１６９０；Ｆｏｕｎｄ：３６１．１６９９。
【００６７】
ステップＧ：  ２−｛７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル｝アセトニトリル
【化１３】
2019521980.tif 000018
塩化ナトリウム（２６３ｇ、４．５ｍｏｌ、１０ｅｑ．）を室温で撹拌しながら２-シアノ-２-｛７−｛［２-（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝-７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン-４-イル｝酢酸エチル（１６２．２ｇ、０．４５ｍｏｌ、１．０ｅｑ．）のＮ-メチルピロリドンと水との混合溶液に加え、１６０〜１７０℃まで加熱し、撹拌して３０時間反応させた。反応を水でクエンチした。得られた混合物を酢酸エチルで抽出して有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、２-（７−｛［２-（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝-７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン-４-イル）アセトニトリル（９８．６ｇ、収率７６％）を得た。１Ｈ−ＮＭＲ  （５００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）：δ８．１８  （ｓ，  １Ｈ）、７．７７  （ｄ，  Ｊ  ＝  ３．４  Ｈｚ，  １Ｈ）、６．８３  （ｄ，  Ｊ  ＝  ３．４  Ｈｚ，  １Ｈ）、５．６５  （ｓ，  ２Ｈ）、４．５６  （ｓ，  ２Ｈ）、３．５２  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ，  ２Ｈ）、０．８２  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ，  ２Ｈ）、−０．１０  （ｓ，  ９Ｈ）；ＨＲＭＳ  （ＥＳＩ）  ｃａｌｃｄ．  ｆｏｒＣ１４Ｈ２０Ｎ４ＯＳｉ  ［Ｍ＋Ｈ］＋  ２８９．１４７９；Ｆｏｕｎｄ：２８９．１４９８。
【００６８】
ステップＨ：  ３−（ジメチルアミノ）−２−｛７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル｝アクリロニトリル
【化１４】
2019521980.tif 000019
ＤＭＦ-ＤＭＡ（１１９ｇ、１．０ｍｏｌ、３．０当量）を２-｛７−｛［２-（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝-７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン-４-イル｝アセトニトリル（９５ｇ、０．３３ｍｏｌ、１．０ｅｑ．）のＤＭＦ溶液に加え、加熱還流して２時間反応させた後、室温まで冷却した。水を加えて得られた混合物を撹拌して結晶化させ、ろ過した。ろ過ケーキを水で洗浄し、５０℃で送風乾燥させて３-（ジメチルアミノ）-２-（７−｛［２-（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝-７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン-４-イル）アクリロニトリル（１０６．５ｇ、収率９４％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ  （５００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）：δ  ８．５０  （ｓ，  １Ｈ）、８．３８  （ｓ，  １Ｈ）、７．２６  （ｄ，  Ｊ  ＝  ３．７  Ｈｚ，  １Ｈ）、７．１８  （ｄ，  Ｊ  ＝  ３．７  Ｈｚ，  １Ｈ）、５．５６  （ｓ，  ２Ｈ）、３．４９  （ｔ，  Ｊ  ＝  ８．４  Ｈｚ，  ２Ｈ）、３．４３  （ｓ，  ３Ｈ）、３．２３  （ｓ，  ３Ｈ）、０．８７  （ｔ，  Ｊ  ＝  ８．４  Ｈｚ，  ２Ｈ）、−０．１０  （ｓ，  ９Ｈ）；；ＨＲＭＳ  （ＥＳＩ）  ｃａｌｃｄ．  ｆｏｒ  Ｃ１７Ｈ２５Ｎ５ＯＳｉ  ［Ｍ＋Ｈ］＋  ３４４．１９０１；Ｆｏｕｎｄ：３４４．１９０７。
【００６９】
ステップＩ：  （Ｒ）-３-｛３-アミノ-４-｛７−｛［２-（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝-７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン-４-イル｝-１Ｈ-ピラゾール-１−イル｝−３−シクロペンチルプロピオン酸
【化１５】
2019521980.tif 000020
酢酸カリウム（１．５ｅｑ．）を室温で撹拌しながら３-（ジメチルアミノ）-２-｛７−｛［２-（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝-７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン-４-イル］アクリロニトリル（６８．７ｇ、０．２ｍｏｌ、１．０ｅｑ．）及びＲ-５-シクロペンチル−ピラゾリジン-３-オン（３７．０ｇ、０．２４ｍｏｌ、１．２ｅｑ．）のＮ-メチルピロリドン溶液に加え、得られた混合物を１２０〜１３０℃まで加熱し、撹拌して１２時間反応させた。反応を水でクエンチし、酢酸エチルで抽出して有機層を水で３回洗浄し、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。ろ過し、減圧濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、（Ｒ）-３-｛３-アミノ-４-｛７−｛［２-（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン-４-イル｝-１Ｈ-ピラゾール-１-イル｝-３-シクロペンチル−プロピオン酸（３７．６ｇ、４０．１％収率、ｅｅ値９９．８％）を得た。１Ｈ−ＮＭＲ  （５００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）：δ  ８．７４  （ｓ，  １Ｈ）、７．９６  （ｓ，  １Ｈ）、７．３２  （ｄ，  Ｊ  ＝  ３．４  Ｈｚ，  １Ｈ）、６．６７  （ｄ，  Ｊ  ＝  ３．４  Ｈｚ，  １Ｈ）、５．６３  （ｍ，  ２Ｈ）、４．１９  （ｔ，  Ｊ  ＝  ８．２  Ｈｚ，  ２Ｈ）、３．５２  （ｍ，  １Ｈ）、３．５２  （ｔ，  Ｊ  ＝  ８．４  Ｈｚ，  ２Ｈ）、３．０９  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  １６．７，  ８．２  Ｈｚ，  １Ｈ）、２．８７  （ｄ，  Ｊ  ＝  １６．７  Ｈｚ，  １Ｈ）、２．４１  （ｍ，  １Ｈ）、１．８７  （ｍ，  １Ｈ）、１．６９  （ｍ，  １Ｈ）、１．６０  （ｍ，  ２Ｈ）、１．５１  （ｍ，  ２Ｈ）、１．１５  （ｍ，  １Ｈ）、０．９１  （ｔ，  Ｊ  ＝  ８．４  Ｈｚ，  ２Ｈ）、−０．０６  （ｓ，  ９Ｈ）；ＨＲＭＳ  （ＥＳＩ）  ｃａｌｃｄ．  ｆｏｒ  Ｃ１７Ｈ２５Ｎ５ＯＳｉ  ［Ｍ＋Ｈ］＋  ４７１．２５３４；Ｆｏｕｎｄ：４７１．２５３８。
【００７０】
ステップＪ：  （Ｒ）-３-｛３-（２，５-ジオキソピロール-１-イル）-４-｛７−｛［２-（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝-７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン−４-イル｝-１Ｈ-ピラゾール-１-イル｝-３-シクロペンチルプロピオン酸
【化１６】
2019521980.tif 000021
無水コハク酸（１０．４ｇ、１０４ｍｍｏｌ、１．４ｅｑ．）を室温で攪拌しながら０．２Ｍの（Ｒ）-３-｛３-アミノ-４-｛７−｛［２-（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝-７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン-４-イル｝-１Ｈ-ピラゾール-１-イル｝-３-シクロペンチル−プロピオン酸（３５．０ｇ、７４．３ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ．）のメチルベンゼン溶液に加え、得られた混合物を窒素ガスの保護下で加熱還流して１４時間反応（分水）させた。減圧下で濃縮して溶媒を蒸発除去させ、残渣を酢酸エチルに溶解し、水で洗浄し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸ナトリウム及び活性炭を酢酸エチル層に加えて撹拌しながら乾燥して脱色し、ろ過し、減圧下で濃縮して（Ｒ）-３-｛３-（２，５-ジオキソピロール-１-イル）-４-｛７−｛［２-（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝-７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン-４-イル｝-１Ｈ-ピラゾール-１-イル｝-３-シクロペンチルプロピオン酸（３９ｇ、７０．６ｍｍｏｌ、収率９５％）を得た。１Ｈ−ＮＭＲ  （５００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）：δ  ８．６５  （ｓ，  １Ｈ）、８．２８  （ｓ，  １Ｈ）、７．２８  （ｄ，  Ｊ  ＝  ３．７  Ｈｚ，  １Ｈ）、６．６２  （ｄ，  Ｊ  ＝  ３．７  Ｈｚ，  １Ｈ）、５．５９  （ｄ，  Ｊ  ＝  １１．１  Ｈｚ，  １Ｈ）、５．５３  （ｄ，  Ｊ  ＝  １１．１  Ｈｚ，  １Ｈ）、４．４４  （ｔｄ，  Ｊ  ＝  ９．９，  ３．２  Ｈｚ，  １Ｈ）、３．４８  （ｍ，  ２Ｈ）、  ３．０２  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  １６．８，  １０．０  Ｈｚ，  １Ｈ）、２．８３  （ｍ，  １Ｈ）、２．４３  （ｍ，  １Ｈ）、１．７８  （ｍ，  １Ｈ）、１．６９  （ｍ，  １Ｈ）、１．６１  （ｍ，  １Ｈ）、１．５２  （ｍ，  １Ｈ）、１．５１  （ｍ，  １Ｈ）、１．５０  （ｍ，  ２Ｈ）、１．１４  （ｍ，  １Ｈ）、０．８８  （ｍ，  ２Ｈ）、−０．０７  （ｓ，  ９Ｈ）；ＨＲＭＳ  （ＥＳＩ）  ｃａｌｃｄ．  ｆｏｒ  Ｃ２７Ｈ３６Ｎ６Ｏ５Ｓｉ  ［Ｍ＋Ｈ］＋  ５５３．２５８９；Ｆｏｕｎｄ：５５３．２６０３。
【００７１】
ステップＫ：  （Ｒ）-３-シクロペンチル-３-［３-（２，５-ジオキソピロール-１-イル）-４-（７−｛［２-（トリメチルシリル）エトキシ］メチル）-７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン-４-イル）-１Ｈ-ピラゾール-１-イル］プロパンアミド
【化１７】
2019521980.tif 000022
塩化オキサリル（２０．０ｇ、１５８ｍｍｏｌ、２．５ｅｑ．）を氷浴、窒素ガスの保護下で撹拌しながら０．１８Ｍの（Ｒ）-３-｛３-（２，５-ジオキソピロール-１-イル）-４-｛７−｛［２-（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝-７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン-４-イル｝-１Ｈ-ピラゾール-１-イル｝-３-シクロペンチルプロピオン酸（３５．０ｇ、６３．３ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ．）のジクロロメタン溶液に滴下した。滴下終了後、ＤＭＦ（０．１ｇ、１．３ｍｍｏｌ、０．０２ｅｑ．）を滴下し、得られた混合物を室温で撹拌して１時間反応させ、減圧下で濃縮して溶媒を蒸発除去させた。得られた混合物を、ナトリウム線で乾燥し再蒸留させたＴＨＦに溶解し、２Ｍのアンモニア水溶液（２０．０、０．３２ｍｏｌ、５．０ｅｑ．）のＴＨＦ溶液に滴下し、氷浴中で撹拌して３０分間反応させ、減圧下で濃縮してＴＨＦを蒸発除去させ、氷浴中で２時間冷却して結晶化させ、ろ過し、ろ過ケーキを水で洗浄し、５０℃で送風乾燥して、（Ｒ）-３-シクロペンチル-３-｛３-（２，５-ジオキソピロール-１-イル）-４-｛７−｛［２-（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝-７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン-４-イル｝-１Ｈ-ピラゾール-１-イル｝プロパンアミド（２９．８ｇ、収率８５．５％）を得た。
【００７２】
１Ｈ−ＮＭＲ  （５００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）：δ  ８．６５  （ｓ，  １Ｈ）、８．２４  （ｓ，  １Ｈ）、７．３２  （ｄ，  Ｊ  ＝  ３．７  Ｈｚ，  １Ｈ）、６．６３  （ｄ，  Ｊ  ＝  ３．７，  １Ｈ）、６．１２  （ｓ，  １Ｈ）、５．６０  （ｄ，  Ｊ  ＝  １１．１  Ｈｚ，  １Ｈ）、５．５６  （ｄ，  Ｊ  ＝  １１．１  Ｈｚ，  １Ｈ）、５．４４  （ｓ，  １Ｈ）、４．４０  （ｔｄ，  Ｊ  ＝  １０．６，  ３．２  Ｈｚ，  １Ｈ）、３．４７  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ９．１，  ７．５  Ｈｚ，  ２Ｈ）、２．９９  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  １４．４，  １１．０  Ｈｚ，  １Ｈ）、２．９１  （ｓ，  ４Ｈ）、２．６７  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  １４．４，  ３．３  Ｈｚ，  １Ｈ）、２．４８  （ｍ，  １Ｈ）、１．８４  （ｍ，  １Ｈ）、１．６６  （ｍ，  １Ｈ）、１．５８  （ｍ，  ２Ｈ）、１．５７  （ｍ，  １Ｈ）、１．５０  （ｍ，  １Ｈ）、１．３１  （ｍ，  １Ｈ）、１．２１  （ｍ，  １Ｈ）、０．８８  （ｄｄ，  ９．１，  ７．５，  ２Ｈ）、−０．０８  （ｓ，  ９Ｈ）；；ＨＲＭＳ  （ＥＳ）  ｃａｌｃｄ．  ｆｏｒ  Ｃ２７Ｈ３７Ｎ７Ｏ４Ｓｉ  ［Ｍ＋Ｈ］＋  ５５２．２７４９；Ｆｏｕｎｄ：５５２．２７５９。
【００７３】
ステップＬ：  （Ｒ）-３-シクロペンチル-３-［３-（２，５-ジオキソピロール-１-イル）-４-（７−｛［２-（トリメチルシリル）エトキシ］メチル）-７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン-４-イル）-１Ｈ-ピラゾール-１-イル］プロピオニトリル
【化１８】
2019521980.tif 000023
オキシ塩化リン（２７．８ｇ、１８１ｍｍｏｌ、４．０ｅｑ．）を氷浴中で撹拌しながら０．２Ｍの（Ｒ）-３-シクロペンチル-３-｛３-（２，５-ジオキソピロール-１-イル）-４-｛７−｛［２-（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝-７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン-４-イル｝-１Ｈ-ピラゾール-１-イル｝プロパンアミド（２５ｇ、４５．３ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ．）のジクロロメタン溶液に滴下した。滴下終了後、得られた混合物を室温で撹拌しながら２時間反応させた。反応を水でクエンチした。有機層を水洗し、無水硫酸マグネシウム及び活性炭を入れて撹拌しながら乾燥、脱色した。ろ過し、減圧下で濃縮して溶媒を除去し、（Ｒ）-３-シクロペンチル-３-｛３-（２，５-ジオキソピロール-１-イル）-４-｛７−｛［２-（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝-７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン-４-イル｝-１Ｈ-ピラゾール-１-イル｝プロピオニトリル（２２．２ｇ、４１．７ｍｍｏｌ、収率９２％）を得た。
【００７４】
１Ｈ−ＮＭＲ  （５００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）：δ  ８．７０  （ｓ，  １Ｈ）、８．３５  （ｓ，  １Ｈ）、７．３５  （ｄ，  Ｊ  ＝  ３．７  Ｈｚ，  １Ｈ）、６．６６  （ｄ，  Ｊ  ＝  ３．７  Ｈｚ，  １Ｈ）、５．６２  （ｄ，  Ｊ  ＝  １０．８  Ｈｚ，  １Ｈ）、５．５８  （ｄ，  Ｊ  ＝  １０．８  Ｈｚ，  １Ｈ）、４．３０  （ｍ，  １Ｈ）、３．５０  （ｍ，  ２Ｈ）、３．０９  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  １６．８，  ４．３  Ｈｚ，  １Ｈ）、３．０１  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  １６．８，  ４．３  Ｈｚ，  １Ｈ）、２．９４  （ｓ，  ４Ｈ）、２．６２  （ｍ，  １Ｈ）、１．９６  （ｍ，  １Ｈ）、１．６９  （ｍ，  ２Ｈ）、１．６０  （ｍ，  １Ｈ）、１．５８  （ｍ，  ２Ｈ）、１．２７  （ｍ，  ２Ｈ）、０．９０  （ｔ，  Ｊ  ＝  ８．３  Ｈｚ，  ２Ｈ）、−０．０６  （ｓ，  ９Ｈ）；ＨＲＭＳ  （ＥＳＩ）  ｃａｌｃｄ．  ｆｏｒ  Ｃ２７Ｈ３５Ｎ７Ｏ３Ｓｉ  ［Ｍ＋Ｈ］＋  ５３４．２６４３；Ｆｏｕｎｄ：５３４．２６５７。
【００７５】
ステップＭ：  （Ｒ）-３-シクロペンチル-３-｛３-（２，５-ジオキソピロール-１-イル）-４−｛（７-ヒドロキシメチル）-７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン-４-イル｝-１Ｈ-ピラゾール-１-イル｝プロピオニトリル
【化１９】
2019521980.tif 000024
４７％の三フッ化ホウ素（３４ｇ、１１２．５ｍｍｏｌ、３．０ｅｑ．）のジエチルエーテル溶液を、氷浴中で撹拌しながら０．２Ｍの（Ｒ）-３-シクロペンチル-３-｛３-（２，５-ジオキソピロール−１-イル）-４-｛７−｛［２-（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝-７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン-４-イル｝-１Ｈ-ピラゾール-１-イル｝プロピオニトリル（２０ｇ、３７．５ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ．）のジクロロメタン溶液に滴下した。滴下終了後、得られた混合物を室温で撹拌しながら４時間反応させた。反応を水でクエンチして得られた混合物を１０％ＮａＯＨ溶液でｐＨ６〜７に調整し、そして酢酸エチルで抽出した。有機層を水洗し、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで撹拌しながら乾燥した。ろ過後、ろ液を減圧下で濃縮して（Ｒ）-３-シクロペンチル-３-［３-（２，５-ジオキソピロール-１-イル）-４-（７-ヒドロキシメチル）-７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン-４-イル）-１Ｈ-ピラゾール-１-イル］プロピオニトリル（１４．４ｇ、収率８８．５％）を得た。
【００７６】
１Ｈ−ＮＭＲ  （５００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）：δ  ８．５４  （ｓ，  １Ｈ）、８．３１  （ｓ，  １Ｈ）、７．３１（ｄ，  Ｊ  ＝  ３．７  Ｈｚ，  １Ｈ）、６．５２  （ｄ，  Ｊ  ＝  ３．７  Ｈｚ，  １Ｈ）、５．６８  （ｄ，  Ｊ  ＝  １０．９  Ｈｚ，  １Ｈ）、５．６１  （ｄ，  Ｊ  ＝  １０．９  Ｈｚ，  １Ｈ）、４．３２  （ｍ，  １Ｈ）、３．１３  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  １７．２，  ７．９  Ｈｚ，  １Ｈ）、３．０３  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  １７．２，  ４．３  Ｈｚ，  １Ｈ）、２．９４  （ｓ，  ４Ｈ）、２．６２  （ｍ，  １Ｈ）、１．９８  （ｍ，  １Ｈ）、１．７４  （ｍ，  １Ｈ）、１．６５  （ｍ，  １Ｈ）、１．６４  （ｍ，  ２Ｈ）、１．３０  （ｍ，  １Ｈ）、１．２９  （ｍ，  ２Ｈ）；ＨＲＭＳ  （ＥＳＩ）  ｃａｌｃｄ．  ｆｏｒ  Ｃ２２Ｈ２３Ｎ７Ｏ３  ［Ｍ＋Ｈ］＋  ４３４．１９３５；Ｆｏｕｎｄ：４３４．１９４４。
【００７７】
ステップＮ：  （Ｒ）-３-［３-アミノ-４-（７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン-４-イル）-１Ｈ-ピラゾール-１-イル］-３-シクロペンチルプロパンニトリル（Ｉ）
【化２０】
2019521980.tif 000025
８０％ヒドラジン水和物（８．７ｇ、１３８ｍｍｏｌ、５．０ｅｑ．）を、室温で撹拌しながら０．２Ｍの（Ｒ）-３-｛３-（２，５-ジオキソピロール-１-イル）-４−｛（７−ヒドロキシメチル）-７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン-４-イル｝-１Ｈ-ピラゾール-１-イル｝-３-シクロペンチルプロパンニトリル（１２ｇ、２７．７ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ．）のメタノール溶液に滴下しし、滴下終了後、加熱還流して８時間反応させた後、減圧濃縮して溶媒を留去した。残渣を酢酸エチルに溶解し、水で洗浄し、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで一晩乾燥した。ろ過後、ろ液を減圧かで濃縮して（Ｒ）-３-［３-アミノ-４-（７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン-４-イル）-１Ｈ-ピラゾール-１-イル］-３-シクロペンチルプロパンニトリル（Ｉ）（７．７ｇ、収率８７％、ｅｅ値９９．８％））を得た。
【００７８】
１Ｈ−ＮＭＲ  （５００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）：δ  １１．７３  （ｓ，  １Ｈ）、８．７９  （ｓ，  １Ｈ）、８．０６  （ｓ，  １Ｈ）、７．３２（ｄ，  Ｊ  ＝  ３．５  Ｈｚ，  １Ｈ）、６．６２  （ｄ，  Ｊ  ＝  ３．５  Ｈｚ，  １Ｈ）、５．０３  （ｓ，  ２Ｈ）、４．０５  （ｔｄ，  Ｊ  ＝  ９．５，  ３．５  Ｈｚ，  １Ｈ）、３．１２  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  １７．１，  ８．９  Ｈｚ，  １Ｈ）、２．９１  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  １７．１，  ３．６  Ｈｚ，  １Ｈ）、２．５４  （ｍ，  １Ｈ）、１．７４  （ｍ，  １Ｈ）、１．６３  （ｍ，  ４Ｈ）、１．２７  （ｍ，  １Ｈ）、１．２６（ｍ，  ２Ｈ）；ＨＲＭＳ  （ＥＳＩ）  ｃａｌｃｄ．  ｆｏｒ  Ｃ１７Ｈ１９Ｎ７  ［Ｍ＋Ｈ］＋  ３２２．１７７５；Ｆｏｕｎｄ：３２２．１７８３。
【００７９】
実施例２  式Ｉ化合物の結晶Ａ
方法１
実施例１で得られた式Ｉ化合物２．０ｇを無水エタノール２４ｍＬに加えて得られた混合物を、加熱還流して清澄化溶液を得、０〜５℃まで冷却し、４時間撹拌して結晶化させ、ろ過し、ろ過ケーキを無水エタノール２ｍＬで溶離し、５０℃で減圧乾燥して生成物（１．６２ｇ、収率８１％）を得た。
【００８０】
方法２
実施例１で得られた式Ｉ化合物２．０ｇを合計４部で取ってそれぞれ無水エタノール−酢酸エチル（４：１、２：１、１：１、１：４）２０ｍＬを加え、得られた混合物を加熱還流して清澄化溶液を得、０〜５℃まで冷却し、４時間撹拌して結晶化させ、そしてろ過した。ろ過ケーキを酢酸エチル２ｍＬで溶離し、５０℃で減圧乾燥してそれぞれ１．３４ｇ、１．０６ｇ、１．００ｇ及び１．６０ｇの生成物（収率６７％、５３％、５０％、８０％）を得た。
【００８１】
方法３
実施例１で得られた式Ｉ化合物２．０ｇを無水エタノール−水（４：１）の混合溶液２０ｍＬに加えて得られた混合物を、加熱還流して清澄化溶液を得、０〜５℃まで冷却し、４時間撹拌して結晶化させ、ろ過し、ろ過ケーキを無水エタノール２ｍＬで溶離し、５０℃で減圧乾燥して生成物（１．６ｇ、収率８１％）を得た。
【００８２】
方法４
実施例１で得られた式Ｉ化合物２．０ｇをアセトン１５ｍＬに加えて得られた混合物を、加熱還流して清澄化溶液を得、０〜５℃まで冷却し、４時間撹拌して結晶化させ、ろ過し、ろ過ケーキをアセトン２ｍＬで溶離し、５０℃で減圧乾燥して生成物（１．２２ｇ、収率６１％）を得た。
【００８３】
方法５
実施例１で得られた式Ｉ化合物２．０ｇを取って、酢酸エチル５０ｍＬに加えて得られた混合物を加熱還流して清澄化溶液を得、減圧化で濃縮して溶媒を留去し、生成物（１．９８ｇ、収率９９％）を得た。
【００８４】
方法６
実施例１で得られた式Ｉ化合物２．０ｇを取ってジクロロメタン６０ｍＬに加えて得られた混合物を加熱還流して清澄化溶液を得、減圧化で濃縮して溶媒を留去し、生成物（２．０ｇ、収率１００％）を得た。
【００８５】
方法７
実施例１で得られた式Ｉ化合物２．０ｇを無水エタノール２４ｍＬに加えて得られた混合物を、加熱還流して清澄化溶液を得、イソプロピルエーテル１２０ｍＬを滴下した。０〜５℃まで冷却し、４時間撹拌して結晶化させ、ろ過し、ろ過ケーキをイソプロピルエーテル２ｍＬで溶離し、５０℃で減圧乾燥して生成物（１．５６ｇ、収率７８％）を得た。
【００８６】
式Ｉ化合物の結晶Ａの典型的なＸＲＤパターン及び典型的なＤＳＣパターンは、それぞれ図１及び図２に示す（実施例２の方法１）。
式Ｉ化合物の結晶Ａの別の典型的なＸＲＤパターンは図３に示す（実施例２の方法２、エタノール−酢酸エチル（４：１））。
式Ｉ化合物の結晶Ａの他の典型的なＸＲＤパターンは、図４に示す（実施例２の方法３）。
【００８７】
実施例３  式Ｉ化合物の結晶Ｂ
実施例１で得られた式Ｉ化合物２．０ｇをアセトニトリル２５ｍＬに加えて得られた混合物を、加熱還流して清澄化溶液を得、０〜５℃まで冷却し、４時間撹拌して結晶化させ、ろ過し、ろ過ケーキをアセトニトリル２ｍＬで溶離し、５０℃で減圧乾燥して生成物（１．８２ｇ、収率９１％）を得た。
【００８８】
2019521980.tif 000026
【００８９】
実施例４  安定性実験
実施例２の方法１で得られた結晶Ａと実施例３で得られた結晶Ｂとを開放の清浄な容器に入れて６０℃で置き、それぞれ５日目及び１０日目にサンプリングして検出し、検出結果を０日目の初期検出結果と比較し、試験結果を下記表に示す。
【００９０】
【表３】
2019521980.tif 000027
【００９１】
実施例５  生物学的活性実験
１．化合物の酵素学的活性（ＩＣ５０）の検出
均一時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）法を用いてＪＡＫ２（野生型）のキナーゼ活性検出プラットフォームを構築し、化合物活性の測定を行った。均一時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）法を用いてＪＡＫ２（野生型およびＶ６１７Ｆ突然変異型）のキナーゼ活性検出プラットフォームを構築し、化合物活性の測定を行った。化合物を１ｍＭから１００％  ＤＭＳＯで３倍段階希釈し（合計で１１個の濃度）、各濃度を４μＬ取って反応緩衝液（５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＥＧＴＡ、０．０１％  Ｔｗｅｅｎ−２０、０．００５％  ＢＡＳ、２ｍＭ  ＤＴＴ）  ９６μＬに加えて均一に混合し、その後２．５μＬを取って３８４ウェルプレート（ＯｐｔｉＰｌａｔｅ−３８４、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒから購入された）に加え、その後ＪＡＫ２キナーゼ（Ｃａｒｎａから購入された）５μＬを加えて遠心で均一に混合し、さらにＡＴＰ（最終濃度は、相応するＫｍ値である）とＴＫ  ｐｅｐｔｉｄｅ（ＨＴＲＦ（登録商標）  ＫｉｎＥＡＳＥ（商標）−ＴＫ、Ｃｉｓｂｉｏから購入された）との混合物２．５μＬを加えて反応（総反応体積は１０μＬである）を開始した。３８４ウェルプレートをインキュベータに入れ、２３℃で１２０分間反応させ、その後、Ｅｕ３＋  ｃｒｙｐｔａｔｅ−ｌａｂｌｅｄ  ａｎｔｉ−ｐｈｏｓｐｈｏｔｙｒｏｓｉｎｅ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  （Ｃｉｓｂｉｏから購入された）  ５μＬ、Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ−ＸＬ−６６５  （ＨＴＲＦ（登録商標）  ＫｉｎＥＡＳＥ（商標）−ＴＫ、Ｃｉｓｂｉｏから購入された）  ５μＬを加えて反応を停止させた。インキュベータにおいて１時間インキュベートした後、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ  （ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒから購入された）から蛍光値（３２０ｎｍで励起し、６６５ｎｍおよび６２０ｎｍの出射光を検出し、両方の比率は酵素活性である）を読み取った。１１個の濃度で酵素活性を測定し、ソフトウェアＧｒａＦｉｔ  ６．０（Ｅｒｉｔｈａｃｕｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を用いてデータを計算し、式Ｉ化合物のＩＣ５０値を得た。結果から分かるように、式Ｉ化合物と対照のＲｕｘｏｌｉｔｉｎｉｂ（ルキソリチニブ）とのＩＣ５０値のいずれも２０ｎＭ未満であった。
【００９２】
２．  マウス皮下異種移植腫瘍モデルにおける有効性の測定
ＳＰＦレベルＢａｌｂ／ｃヌードマウス、雌、５〜６週齢。無血清培地を懸濁したＢａ／Ｆ３−ＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ細胞懸濁液０．１ｍＬ（１×１０７  ｃｅｌｌｓを含有し、５０％  ＭａｔｒｉＧｅｌ）を、各マウスの右側面に皮下注射した。平均腫瘍体積が約５００ｍｍ３に達した場合、担癌マウスを犠牲させ、腫瘍組織を滅菌で摘み取り、小さな塊に切り、Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスの左右両側の皮下に移植し、また、平均腫瘍体積が約１００ｍｍ３に達した場合、各モウスに対して一連番号によって標識を付け、その腫瘍の大きさおよび体重をそれぞれ計量し、腫瘍体積により小から大まで無作為に群分け、かつ、各群の動物の平均体重も同じレベルになるように適当に調整された。５群は、それぞれ、陰性対照群、陽性対照群、低用量群、中用量群、および高用量群である。各群はマウス５匹で、群分けの当日から投与を始め、毎日２回投与し、連続で１４日間投与し、その期間に腫瘍体積および体重を週に２回計量した。実験終了時、マウスを犠牲させ、脾臓を分離して秤量した。
【００９３】
試験過程において、腫瘍の最長径（Ｌ）および垂直方向の最大横径（Ｗ）を測定し、腫瘍体積（Ｖ）を、Ｖ（ｍｍ３）＝Ｌ×Ｗ２／２で計算した。腫瘍増殖阻害率ＴＧＩ（％）＝１００％×（１−（Ｔｔ−Ｔ０）／（Ｖｔ−Ｖ０））において、Ｔｔは治療群の毎回計量時の平均腫瘍体積であり、Ｔ０は治療群の群分け時の平均腫瘍体積であり、Ｖｔは対照群の毎回計量時の平均腫瘍体積であり、Ｖ０は対照群の群分け時の平均腫瘍体積である。
【００９４】
結果を次の表に示す。
【表４】
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【００９５】
表に示すデータによれば、Ｂａ／Ｆ３−ＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ担癌マウスモデルにおいて、式Ｉ化合物の塩酸塩は、動物体内における腫瘍阻害効果を測定したところ、Ｂａ／Ｆ３−ＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ腫瘍増殖に対して用量依存的な阻害効果が示され、腫瘍阻害効果が非常に顕著であることを見出した。式Ｉ化合物の塩酸塩（１００ｍｇ／ｋｇ）を、１日２回（ＢＩＤ）経口（ＰＯ）投与して１４日間投与した後、腫瘍増殖阻害率（ＴＧＩ）は８５．８％に達し、同じ条件下で陽性対照品Ｒｕｘｏｌｉｔｉｎｉｂ（１００ｍｇ／ｋｇ）の腫瘍増殖阻害率（ＴＧＩ）はただ６４．５％に達した。式Ｉ化合物の塩酸塩５０ｍｇ／ｋｇの方は、腫瘍阻害効果も、とても顕著であり、ＴＧＩが６８．４％に達し、陽性対照品Ｒｕｘｏｌｉｔｉｎｉｂ  １００ｍｇ／ｋｇの方に比べると、腫瘍阻害効果に相当した。
【００９６】
３．成年の雄／雌ＳＤラットにおける薬物動態学的測定
健全な成年（成熟）の雌ＳＤラットは、北京維通利華実験動物技術有限公司により得られ、ラットを２群に分け、群ごとに３匹があり、それぞれ経口投与で被検サンプルの懸濁液（３０ｍｇ／ｋｇ）を単回胃内投与した。実験前に動物を一晩絶食させ、絶食時間は投与前１０時間から投与後４時間までである。投与後０．２５、０．５、１、２、４、６、８時間、および２４時間で採血した。小動物麻酔機を用いてイソフルランで麻酔した後、眼底静脈叢により全血０．４ｍＬを取り、ヘパリン抗凝固管に入れ、サンプルを４℃、４，０００ｒｐｍで５ｍｉｎ遠心し、血漿を遠心管に移動し、かつ−８０℃に置いて分析までに保存した。血漿におけるサンプルをタンパク質沈殿法により抽出し、抽出液をＬＣ／ＭＳ／ＭＳにより分析した。
【００９７】
【表５】
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付注：ａ．アメリカ食品医薬品局ＦＤＡに公開された薬理学的概観によるデータ。
【００９８】
ラット（３０ｍｇ／ｋｇ  ＰＯ）のＰＫデータは、式Ｉ化合物のデータがＲｕｘｏｌｉｔｉｎｉｂ（ルキソリチニブ）よりも優れたことが明らかにされた。
【００９９】
４．成年ビーグル犬における薬物動態学的測定
研究用の４匹の健全な成年ビーグル犬は、北京瑪斯生物技術有限公司から入手された。研究は、２回に分けて行い、１回目に、動物（雌雄いずれも２匹）を単回静脈注射投与し、用量が５ｍｇ／ｋｇであり、２回目に、一週間後、同じ群の動物（雌雄いずれも２匹）を単回胃内投与し、用量が１０ｍｇ／ｋｇである。実験前に、胃内投与される動物を一晩絶食させ、絶食時間は投与前１０時間から投与後４時間までである。静脈投与群の動物に食物の制限がない。静脈投与群は、投与後０．０８３、０．２５、０．５、１、２、４、６、８時間および２４時間で採血し、胃内投与群は投与後０．２５、０．５、１、２、４、６、８時間および２４時間で採血した。動物をイソフルランで浅麻酔させ、ガラス採血管を用いて眼窩静脈叢から全血を約０．４ｍＬ採血し、ヘパリン抗凝固管に入れ、サンプルを４℃、４，２００ｒｐｍで５ｍｉｎ遠心し、血漿を遠心管に移動し、かつ−８０℃に置いて分析まで保存した。血漿におけるサンプルをタンパク質沈殿法により抽出し、抽出液をＬＣ／ＭＳ／ＭＳにより分析した。
【０１００】
【表６】
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付注：ａ．アメリカ食品医薬品局ＦＤＡに公開された薬理学的概観によるデータ。
【０１０１】
犬（１０ｍｇ／ｋｇ  ＰＯ、５ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ）のＰＫデータより、式Ｉ化合物を静注(ＩＶ)投与した後、ＡＵＣが陽性対照Ｒｕｘｏｌｉｔｉｎｉｂに相当したが、経口投与の生物学的利用率は、さらに優れた（１１４％対５７％）ことが明らかにされる。  
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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