【手続補正書】
【提出日】令和3年12月6日(2021.12.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
免疫組織化学（ＩＨＣ）染色のための固体の抗原／担体タンパク質ゲルを生成する方法であって：
（ａ）精製抗原をアルブミンタンパク質、卵白タンパク質または卵白タンパク質の混合物、及びゼラチンからなる群から選択される担体タンパク質を含む液体溶液と混合して、抗原／担体タンパク質液体溶液を生成することと；
（ｂ）前記抗原／担体タンパク質液体溶液を加熱して、前記固体の抗原／担体タンパク質ゲルを形成することと、を含む、前記方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法であって、
（１）（ｂ）の後に：前記固体の抗原／担体タンパク質ゲルを脱水することと、前記脱水した固体の抗原／担体タンパク質ゲルをパラフィンブロックに包埋することと、をさらに含む、
（２）（ｂ）の後に：前記固体の抗原／担体タンパク質ゲルを液体包埋媒体中でインキュベートすることと、前記固体の抗原／担体タンパク質ゲルを前記包埋媒体中で凍結することとをさらに含む、または
（３）（ｂ）の後に：前記固体の抗原／担体タンパク質ゲルをプラスチック樹脂中に包埋することをさらに含む、
方法。
【請求項３】
前記脱水された固体の抗原／担体タンパク質ゲルを前記パラフィンブロックに包埋した後に：前記抗原／担体タンパク質ゲルを含むコアを前記パラフィンブロックからレシピエント組織マイクロアレイ（ＴＭＡ）ブロックに移すことをさらに含む、請求項２の（１）に記載の方法。
【請求項４】
（１）（ｂ）の後に：前記固体の抗原／担体タンパク質ゲルを、約３０ｎｍ〜約５０μｍの厚さを有する１つ以上の固体の抗原／担体タンパク質ゲルの切片に薄切することをさらに含む、
（２）前記固体の抗原／担体タンパク質ゲルが、約２μｍ〜約３０μｍの厚さを有する１つ以上の固体の抗原／担体タンパク質ゲルの切片に薄切される、
（３）前記固体の抗原／担体タンパク質ゲルが、約３０ｎｍ〜約１００ｎｍの厚さを有する１つ以上の固体の抗原／担体タンパク質ゲル切片に薄切される、及び／または
（４）（ｂ）の前に、前記抗原／担体タンパク質液体溶液に固定剤を含めることをさらに含む、
請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記固定剤がホルムアルデヒドを含む、または
前記固定剤が、グルタルアルデヒド、Ｄａｖｉｄｓｏｎの固定剤、Ｂｏｕｉｎの固定剤、１／２強度のＫａｒｎｏｖｓｋｉの固定剤、または亜鉛塩を含む、
請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記抗原／担体タンパク質液体溶液が、少なくとも約１％の最終濃度でホルムアルデヒドを含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記固体の抗原／担体タンパク質ゲルを抗原賦活化に供することをさらに含む、請求項４〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記固体の抗原／担体タンパク質ゲルを抗原賦活化に供することが、前記固体の抗原／担体タンパク質ゲルを液体溶液中で加熱することを含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
（１）（ｂ）の前に、前記抗原／担体タンパク質液体溶液に固定剤を含めることと；
（ｂ）の後に、前記固体の抗原／担体タンパク質ゲルを脱水することと；
前記脱水された固体の抗原／担体タンパク質ゲルをパラフィンブロックに包埋することと；
前記包埋された抗原／担体タンパク質ゲルを含む前記パラフィンブロックを、約３０ｎｍ〜約５０μｍの厚さを有する１つ以上の切片に薄切することと；
前記包埋された固体の抗原／担体タンパク質ゲルの前記１つ以上の切片を抗原賦活化に供することと；
抗原賦活化の後に、前記包埋された固体の抗原／担体タンパク質ゲルの前記１つ以上の切片をブロッキングすることと、をさらに含む、または
（２）（ｂ）の後に、前記固体の抗原／担体タンパク質ゲルを液体包埋媒体中でインキュベートすることと；
前記固体の抗原／担体タンパク質ゲルを前記包埋媒体中で凍結することと；
前記凍結した抗原／担体タンパク質ゲルを、約３０ｎｍ〜約５０μｍの厚さを有する１つ以上の切片に薄切することと；
前記凍結した固体の抗原／担体タンパク質ゲルの前記１つ以上の切片をブロッキングすることと、をさらに含む、
請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗原がポリペプチド抗原である、
前記抗原がポリペプチド抗原であり、前記抗原がＮ末端チロシン、Ｃ末端システイン、またはその両方を含む、または
前記抗原がポリペプチド抗原であり、前記抗原がＮ末端チロシン、Ｃ末端システイン、またはその両方を含み、（ｂ）の前に、前記抗原をシステイン反応性試薬を使用して前記担体タンパク質と架橋することをさらに含む、
請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記抗原が非ポリペプチド抗原を含む、
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記担体タンパク質が血清アルブミンタンパク質である、または
前記担体タンパク質が卵白タンパク質または卵白タンパク質の混合物である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記血清アルブミンタンパク質が、ウシ、ヤギ、ウマ、またはヒトの血清アルブミンである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
（ａ）で生成された前記抗原／担体タンパク質液体溶液が、２％（ｗ／ｖ）以上の濃度の前記担体タンパク質を含む、または
（ａ）で生成された前記抗原／担体タンパク質液体溶液が、約２５％（ｗ／ｖ）以下の最終濃度の前記担体タンパク質を含む、
請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記担体タンパク質がゼラチンであり、
（１）前記方法が、（ｂ）の後に、前記加熱された抗原／担体タンパク質液体溶液を冷却して前記固体の抗原／担体タンパク質ゲルを形成することをさらに含む、
（２）前記方法が、前記加熱された抗原／担体タンパク質液体溶液を冷却した後に：
前記固体の抗原／担体タンパク質ゲルを固定剤と共にインキュベートして固定された抗原／担体タンパク質ゲルを形成することと；
前記固定された抗原／担体タンパク質ゲルを脱水することと、をさらに含む、及び／または
（３）（ａ）で生成された前記抗原／担体タンパク質液体溶液が、約０．５％（ｗ／ｖ）以上の濃度の前記担体タンパク質を含む、
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記抗原／担体タンパク質液体溶液が、（ｂ）において少なくとも約６５℃まで加熱される、または
前記抗原／担体タンパク質溶液が（ｂ）において少なくとも約６５℃に少なくとも６分間加熱される、
請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
免疫組織化学（ＩＨＣ）染色のための固体の抗原／担体タンパク質ゲル。
【請求項１８】
少なくとも第１の固体の抗原／担体タンパク質ゲルと、第２の固体の抗原／担体タンパク質ゲルとを含む、組織マイクロアレイ（ＴＭＡ）。
【請求項１９】
免疫組織化学（ＩＨＣ）染色のための固体の抗原／担体タンパク質ゲルであって、アルブミンタンパク質、卵白タンパク質または卵白タンパク質の混合物、及びゼラチンからなる群から選択される担体タンパク質に架橋された精製抗原を含む、前記固体の抗原／担体タンパク質ゲル。
【請求項２０】
前記固体のゲルが約３０ｎｍ〜約５０μｍの厚さを有する、
前記固体のゲルが約２μｍ〜約３０μｍの厚さを有する、または
前記固体のゲルが約３０ｎｍ〜約１００ｎｍの厚さを有する、
請求項１９に記載の固体のゲル。
【請求項２１】
前記固体のゲルが包埋媒体中で凍結されている、
前記固体のゲルがパラフィン中に包埋されている、または
前記固体のゲルがプラスチック樹脂中に包埋されている、
請求項１９または２０に記載の固体のゲル。
【請求項２２】
前記固体のゲルが固体基体に固定されている、または
前記固体のゲルが固定剤中に固定されている、
請求項１９〜２１のいずれか１項に記載の固体のゲル。
【請求項２３】
前記固定剤がホルムアルデヒドを含む、請求項２２に記載の固体のゲル。
【請求項２４】
前記固定剤が少なくとも約１％の濃度でホルムアルデヒドを含む、または
前記固定剤が、グルタルアルデヒド、Ｄａｖｉｄｓｏｎの固定剤、Ｂｏｕｉｎの固定剤、１／２強度のＫａｒｎｏｖｓｋｉの固定剤、または亜鉛塩を含む、
請求項２３に記載の固体のゲル。
【請求項２５】
前記固体のゲルが抗原賦活化に供されている、請求項１９〜２４のいずれか１項に記載の固体のゲル。
【請求項２６】
前記抗原がポリペプチド抗原である、
前記抗原がポリペプチド抗原であり、前記抗原がＮ末端チロシン、Ｃ末端システイン、またはその両方を含む、または
前記抗原がポリペプチド抗原であり、前記抗原がＮ末端チロシン、Ｃ末端システイン、またはその両方を含み、前記Ｎ末端チロシン及び／またはＣ末端システインは、前記担体タンパク質に架橋されている、
請求項１９〜２５のいずれか１項に記載の固体のゲル。
【請求項２７】
前記抗原が非ポリペプチド抗原を含む、請求項１９〜２５のいずれか１項に記載の固体のゲル。
【請求項２８】
前記担体タンパク質が血清アルブミンタンパク質である、または
前記担体タンパク質が、卵白タンパク質または卵白タンパク質の混合物である、請求項１９〜２７のいずれか１項に記載の固体のゲル。
【請求項２９】
前記血清アルブミンタンパク質が、ウシ、ヤギ、ウマ、またはヒトの血清アルブミンである、請求項２８に記載の固体のゲル。
【請求項３０】
前記固体のゲルが、２％以上の濃度の前記担体タンパク質を含む、または
前記固体のゲルが約２５％以下の濃度で前記担体タンパク質を含む、
請求項２８または２９に記載の固体のゲル。
【請求項３１】
前記担体タンパク質がゼラチンである、請求項１９〜２７のいずれか１項に記載の固体のゲル。
【請求項３２】
前記固体のゲルが、０．５％以上の濃度の前記担体タンパク質を含む、及び／または
前記固体のゲルが、少なくとも約２５ｎＭの濃度の前記抗原を含む、
請求項３１に記載の固体のゲル。
【請求項３３】
少なくとも第１及び第２の固体の抗原／担体タンパク質ゲルを含む組織マイクロアレイ（ＴＭＡ）であって、前記第１及び第２の固体の抗原／担体タンパク質ゲルが両方とも、アルブミンタンパク質、卵白タンパク質または卵白タンパク質の混合物、及びゼラチンからなる群から選択される担体タンパク質に架橋された精製抗原を含む、前記組織マイクロアレイ（ＴＭＡ）。
【請求項３４】
前記第１の固体の抗原／担体タンパク質ゲルが第１の精製抗原を含み、前記第２の固体の抗原／担体タンパク質ゲルが前記第１の精製抗原とは異なる第２の精製抗原を含む、または
前記第１の固体の抗原／担体タンパク質ゲルが第１の濃度で第１の精製抗原を含み、前記第２の固体の抗原／担体タンパク質ゲルが前記第１の濃度とは異なる第２の濃度で前記第１の精製抗原を含む、
請求項３３に記載のＴＭＡ。
【請求項３５】
抗原の免疫組織化学（ＩＨＣ）染色のための方法であって：
請求項１９〜３２のいずれか１項に記載の固体の抗原／担体タンパク質ゲルを提供することであって、前記固体の抗原／担体タンパク質ゲルは、前記抗原を含有する前記提供すること；
試料を提供することと；
前記固体の抗原／担体タンパク質ゲル及び前記試料を前記抗原に特異的に結合する一次抗体と接触させることと；
前記固体の抗原／担体タンパク質ゲル及び前記試料を前記一次抗体と接触させた後に、前記固体の抗原／担体タンパク質ゲル及び前記試料を前記一次抗体に特異的に結合する二次抗体と接触させることであって、検出可能な部分が前記二次抗体にコンジュゲートされている前記接触させることと；
前記固体の抗原／担体タンパク質ゲルからの前記検出可能な部分のシグナルを検出することと；
前記試料からの前記検出可能な部分のシグナルを検出することと、を含み、前記固体の抗原／担体タンパク質ゲルから検出された前記シグナルと比較した前記試料からのシグナルの検出が、前記試料中の前記抗原の存在を示す、前記方法。
【請求項３６】
前記試料が組織試料である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
対照の抗原の免疫組織化学（ＩＨＣ）染色のための方法であって：
第１及び第２の固体の抗原／担体タンパク質ゲルを提供することであって、前記第１及び前記第２の固体の抗原／担体タンパク質ゲルの各々が、請求項１９〜３２のいずれか１項によるものであり、前記第１の固体の抗原／担体タンパク質ゲルが、第１の濃度で前記抗原を含み、前記第２の固体の抗原／担体タンパク質ゲルが前記第１の濃度よりも高い第２の濃度で前記抗原を含む、前記提供することと；
前記第１及び前記第２の固体の抗原／担体タンパク質ゲルを前記抗原に特異的に結合する一次抗体と接触させることと；
前記第１及び前記第２の固体の抗原／担体タンパク質ゲルを前記一次抗体と接触させた後に、前記第１及び前記第２の固体の抗原／担体タンパク質ゲルを、前記一次抗体に特異的に結合する二次抗体と接触させることであって、検出可能な部分が前記二次抗体にコンジュゲートされている、前記接触させることと；
前記第１の固体の抗原／担体タンパク質ゲルからの前記検出可能な部分の第１のシグナルを検出することと；
前記第２の固体の抗原／担体タンパク質ゲルからの前記検出可能な部分の第２のシグナルを検出することと、を含み、前記第１のシグナルよりも大きい第２のシグナルの検出が、前記抗原の対照のＩＨＣ染色を示す、前記方法。
【請求項３８】
前記第１の濃度が０ｎＭであり、第１のシグナルの欠如の検出が、前記抗原の対照のＩＨＣ染色を示す、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
試料を提供することと；
前記試料を前記一次抗体と接触させることと；
前記試料を前記一次抗体と接触させた後に、前記試料を前記二次抗体と接触させることと；
前記試料からの前記検出可能な部分の第３のシグナルを検出することと；
前記第３のシグナルを前記第１及び前記第２のシグナルと比較することと、をさらに含み、前記第１及び前記第２のシグナルの量と比較した前記第３のシグナルの量が、前記第１及び前記第２の固体の抗原／担体タンパク質ゲル中の前記抗原の量と比較した前記試料中の前記抗原の存在量を示す、請求項３７または請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
対照の二次抗体による免疫組織化学（ＩＨＣ）染色のための方法であって：
第１及び第２の固体の抗原／担体タンパク質ゲルを提供することであって、前記第１及び前記第２の固体の抗原／担体タンパク質ゲルの各々が、請求項１９〜３２のいずれか１項によるものであり、前記第１の固体の抗原／担体タンパク質ゲルが、第１のアイソタイプを有する第１の抗体を含み、前記第２の固体の抗原／担体タンパク質ゲルが前記第１のアイソタイプとは異なる第２のアイソタイプを有する第２の抗体を含む、前記提供することと；
前記第１及び前記第２の固体の抗原／担体タンパク質ゲルを前記第１のアイソタイプに特異的に結合する二次抗体と接触させることであって、検出可能な部分が前記二次抗体にコンジュゲートされる、前記接触させることと；
前記第１の固体の抗原／担体タンパク質ゲルからの前記検出可能な部分のシグナルを検出することと；
前記第２の固体の抗原／担体タンパク質ゲルからの前記検出可能な部分の前記シグナルの欠如を検出することと、を含み、前記第１の固体の抗原／担体タンパク質ゲルと関連する前記シグナル及び前記第２の固体の抗原／担体タンパク質ゲルと関連する前記シグナルの前記欠如の検出が、対照の前記二次抗体による染色を示す、前記方法。
【請求項４１】
前記検出可能な部分が酵素を含み、前記検出可能な部分の前記シグナルを検出することが、前記検出可能な部分を前記酵素の発色基質に曝露することと、前記酵素との反応時の前記発色基質からのシグナルを検出することと、を含む、または
前記検出可能な部分が、フルオロフォア、金属粒子、金属イオン、放射性同位元素、核酸、電気化学発光レポーター、または量子ドットを含む、
請求項３５〜４０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４２】
対照の抗原の免疫組織化学（ＩＨＣ）染色のためのキットであって：
（ａ）アルブミンタンパク質、卵白タンパク質または卵白タンパク質の混合物、及びゼラチンからなる群から選択される担体タンパク質に架橋された精製抗原を含む第１の固体のゲルであって、前記精製抗原が、第１の濃度で前記第１の固体のゲルに存在する、前記第１の固体のゲルと；
（ｂ）前記担体タンパク質に架橋された前記精製抗原を含む第２の固体のゲルであって、前記精製抗原が、前記第１の濃度とは異なる第２の濃度で前記第２の固体のゲルに存在する、前記第２の固体ゲルと、を含む、前記キット。
【請求項４３】
（１）前記第１及び前記第２の固体のゲルが、それぞれ約３０ｎｍ〜約５０μｍの厚さに薄切されている、
（２）前記第１及び前記第２の固体のゲルが、１つ以上の固体基体に固定されている、及び／または
（３）（ｃ）前記担体タンパク質を含む第３の固体のゲルであって、前記精製抗原を含まない前記第３の固体のゲルをさらに含む、
請求項４２に記載のキット。
【請求項４４】
前記第３の固体のゲルが、それぞれ約３０ｎｍ〜約５０μｍの厚さに薄切されている、請求項４３に記載のキット。
【請求項４５】
前記第３の固体のゲルが固体基体に固定されている、請求項４３または４４に記載のキット。