【手続補正書】
【提出日】令和3年12月6日(2021.12.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
基礎培地中の0.5mM〜5mMのL-グルタミンのジペプチド形態；
0.5mM〜5mMのL-グルタミン；および
少なくとも1つのタンパク質
を含み、
血清を含まない、
無血清培地。
【請求項２】
L-グルタミンのジペプチド形態がL-アラニル-L-グルタミンである、請求項1に記載の無血清培地。
【請求項３】
L-グルタミンのジペプチド形態の濃度が、それぞれ両端を含めて、0.5mM〜5mM、0.5mM〜4mM、0.5mM〜3mM、0.5mM〜2mM、0.5mM〜1mM、1mM〜5mM、1mM〜4mM、1mM〜3mM、1mM〜2mM、2mM〜5mM、2mM〜4mM、2mM〜3mM、3mM〜5mM、3mM〜4mMもしくは4mM〜5mM、または約0.5mM〜5mM、約0.5mM〜4mM、約0.5mM〜3mM、約0.5mM〜2mM、約0.5mM〜1mM、約1mM〜5mM、約1mM〜4mM、約1mM〜3mM、約1mM〜2mM、約2mM〜5mM、約2mM〜4mM、約2mM〜3mM、約3mM〜5mM、約3mM〜4mMもしくは約4mM〜5mMである、および/もしくは
無血清培地中のL-グルタミンのジペプチド形態の濃度が、0.5mM、1mM、2mM、3mM、4mMもしくは5mM、または約0.5mM、約1mM、約2mM、約3mM、約4mMもしくは約5mMである、請求項1または2に記載の無血清培地。
【請求項４】
無血清培地中のL-グルタミンの濃度が、それぞれ両端を含めて、0.5mM〜5mM、0.5mM〜4mM、0.5mM〜3mM、0.5mM〜2mM、0.5mM〜1mM、1mM〜5mM、1mM〜4mM、1mM〜3mM、1mM〜2mM、2mM〜5mM、2mM〜4mM、2mM〜3mM、3mM〜5mM、3mM〜4mMもしくは4mM〜5mM、または約0.5mM〜5mM、約0.5mM〜4mM、約0.5mM〜3mM、約0.5mM〜2mM、約0.5mM〜1mM、約1mM〜5mM、約1mM〜4mM、約1mM〜3mM、約1mM〜2mM、約2mM〜5mM、約2mM〜4mM、約2mM〜3mM、約3mM〜5mM、約3mM〜4mMもしくは約4mM〜5mMである、および/もしくは
無血清培地中のL-グルタミンの濃度が、0.5mM、1mM、2mM、3mM、4mMもしくは5mM、または約0.5mM、約1mM、約2mM、約3mM、約4mMもしくは約5mMである、請求項1〜3のいずれか一項に記載の無血清培地。
【請求項５】
少なくとも1つのタンパク質がヒトタンパク質および/または組換え型タンパク質である、請求項1〜4のいずれか一項に記載の無血清培地。
【請求項６】
少なくとも1つのタンパク質が、アルブミン、インスリンまたはトランスフェリンの1つもしくは複数を含む、請求項1〜5のいずれか一項に記載の無血清培地。
【請求項７】
無血清培地中のアルブミンの濃度が約2.5mg/mL〜約7.5mg/mLである、任意で約5mg/mLである、請求項6に記載の無血清培地。
【請求項８】
無血清培地中のトランスフェリンの濃度が約50mg/L〜約200mg/Lである、任意で、約100mg/Lである、請求項6または7に記載の無血清培地。
【請求項９】
無血清培地中のインスリンの濃度が約5mg/L〜約20mg/Lである、任意で約10mg/Lである、請求項6〜8のいずれか一項に記載の無血清培地。
【請求項１０】
無機塩、糖、アミノ酸の1つまたは複数を含み、任意でビタミン、有機酸、酸化防止剤、および/または緩衝剤も含む、および/もしくは
脂質、成長因子、N-アセチルシステイン、エタノールアミン、および/またはアルブミンを含む、
請求項1〜9のいずれか一項に記載の無血清培地。
【請求項１１】
基礎培地が、ダルベッコ改変イーグル培地（DMEM）、最小必須培地（MEM）、イーグル基礎培地（BME）、F-10、F-12、RPMI 1640、グラスゴー最小必須培地（GMEM）、アルファ最小必須培地（アルファMEM）、イスコフ改変ダルベッコ培地、またはM199を含む、請求項1〜10のいずれか一項に記載の無血清培地。
【請求項１２】
基礎培地および/または無血清培地がフェノールレッドを含まない、請求項1〜11のいずれか一項に記載の無血清培地。
【請求項１３】
1つまたは複数のサイトカインを含む、任意で、該1つまたは複数のサイトカインが、IL-2、IL-7またはIL-15から選択される、請求項1〜12のいずれか一項に記載の無血清培地。
【請求項１４】
初代細胞および/または免疫細胞、任意でT細胞の拡大増殖を支援する、請求項1〜13のいずれか一項に記載の無血清培地。
【請求項１５】
L-グルタミンのジペプチド形態を含む基礎培地であって、L-グルタミンおよびタンパク質を含まない、基礎培地。
【請求項１６】
少なくとも1つのタンパク質およびL-グルタミンを含むサプリメントであって、該サプリメントと組み合わされた基礎細胞培養培地が細胞の拡大増殖を支援することができる、サプリメント。
【請求項１７】
無血清培地を調製するための方法であって、請求項15に記載の基礎培地と請求項16に記載のサプリメントとを組み合わせる工程を含む、方法。
【請求項１８】
無血清培地配合物を調製するための方法であって、以下：
（a）L-グルタミンのジペプチド形態を含む基礎培地であって、無血清基礎培地が液体配合物であり、かつ/または組み合わせる工程の前に凍結されていない、基礎培地；ならびに
（b）L-グルタミンおよび少なくとも1つのタンパク質を含むサプリメント
を組み合わせる工程を含む、方法。
【請求項１９】
サプリメントが、組み合わせる工程の前に凍結されている、および/または
方法が、組み合わせる工程の前に、サプリメントを解凍する工程を含む、
請求項17または18に記載の方法。
【請求項２０】
基礎培地中のL-グルタミンのジペプチド形態の濃度が、それぞれ両端を含めて、0.5mM〜5mM、0.5mM〜4mM、0.5mM〜3mM、0.5mM〜2mM、0.5mM〜1mM、1mM〜5mM、1mM〜4mM、1mM〜3mM、1mM〜2mM、2mM〜5mM、2mM〜4mM、2mM〜3mM、3mM〜5mM、3mM〜4mMもしくは4mM〜5mM、または約0.5mM〜5mM、約0.5mM〜4mM、約0.5mM〜3mM、約0.5mM〜2mM、約0.5mM〜1mM、約1mM〜5mM、約1mM〜4mM、約1mM〜3mM、約1mM〜2mM、約2mM〜5mM、約2mM〜4mM、約2mM〜3mM、約3mM〜5mM、約3mM〜4mMもしくは約4mM〜5mMである、および/もしくは
基礎培地中のL-グルタミンのジペプチド形態の濃度が、少なくとも0.5mM、1mM、2mM、3mM、4mMもしくは5mM、または少なくとも約0.5mM、約1mM、約2mM、約3mM、約4mMもしくは約5mM、または0.5mM、1mM、2mM、3mM、4mMもしくは5mM、または約0.5mM、約1mM、約2mM、約3mM、約4mMもしくは約5mMである、
請求項17〜19のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
L-グルタミンのジペプチド形態がL-アラニル-L-グルタミンである、請求項17〜20のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
サプリメント中のL-グルタミンの濃度が20mM〜100mMまたは約20mM〜約100mMである、および/もしくは
サプリメント中のL-グルタミンの濃度が少なくとも40mM、50mM、60mM、70mM、80mMもしくは90mM、または少なくとも約40mM、約50mM、約60mM、約70mM、約80mMもしくは約90mM、または40mM、50mM、60mM、70mM、80mMもしくは90mM、または約40mM、約50mM、約60mM、約70mM、約80mMもしくは約90mMである、請求項17〜21のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
少なくとも1つのタンパク質が、ヒトタンパク質および/または組換え型タンパク質、任意で、アルブミン、トランスフェリン、および/またはインスリンを含む、請求項17〜22のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
無血清培地配合物が、90％〜97.5％（v/v）の基礎培地および1.25％〜5％（v/v）のサプリメントを含む、請求項17〜23のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
サプリメントが第1のサプリメントであり、方法が、（c）1つまたは複数の酸化防止剤、1つまたは複数のアルブミンまたはアルブミン代替品、1つまたは複数の脂質剤、1つまたは複数のインスリンまたはインスリン代替品、1つまたは複数のトランスフェリンまたはトランスフェリン代替品、1つまたは複数の成長因子、1つまたは複数の微量元素、および1つまたは複数のグルココルチコイドからなる群より選択される1つまたは複数の成分を含み、任意で、脂質、成長因子、N-アセチルシステイン、エタノールアミン、および/またはアルブミンを含む、第2のサプリメント
を組み合わせる工程
をさらに含む、請求項17〜24のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
無血清培地配合物が、1.25％〜5％（v/v）の第2のサプリメントを含む、請求項25に記載の方法。
【請求項２７】
請求項17〜26のいずれか一項に記載の方法により調製された、無血清培地配合物。
【請求項２８】
細胞を含む組成物を、請求項1〜14のいずれか一項に記載の無血清培地、または請求項27記載の無血清培地配合物中でインキュベーションする工程を含む、細胞を培養する方法。
【請求項２９】
前記培養が、以下から選択される1つまたは複数のステップ：
刺激剤または刺激条件の存在下での細胞の活性化；
異種タンパク質をコードする作用物質の導入；または
細胞の培養もしくは拡大増殖
に関連して行われる、請求項28に記載の方法。
【請求項３０】
遺伝子操作された細胞を産生するための方法であって、以下の工程：
（a）細胞を含む細胞集団と、異種タンパク質をコードする核酸分子を含む作用物質とを、該異種タンパク質をコードする核酸を該集団の細胞に導入する条件下で、接触させる工程；ならびに
（b）該接触させる工程の前、間および/または後に、刺激条件の存在下で該細胞をインキュベーションする工程であって、該刺激条件が、該細胞の刺激、活性化および/または拡大増殖に作用する一次シグナルを誘導する、インキュベーションする工程
を含み、
ここで、（a）および（b）の一方または両方が、請求項1〜14のいずれか一項に記載の無血清培地、または請求項27記載の無血清培地配合物中で行われる、方法。
【請求項３１】
前記細胞が初代細胞および/または免疫細胞である、任意で、
前記細胞がCD3+、CD4+および/またはCD8+T細胞である、もしくは全CD3+、CD4+および/またはCD8+T細胞で濃縮されている、もしくは
前記細胞がCD4対CD8細胞1:2〜2:1の比率を含み、任意で、該比率が1:1である、または約1:1である、
請求項28〜30のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
刺激条件が、TCR複合体の1つもしくは複数の成分の1つもしくは複数の細胞内シグナル伝達ドメインおよび/または1つもしくは複数の共刺激分子の1つもしくは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを活性化できる刺激試薬とのインキュベーションを含む、および/もしくは
刺激条件が、IL-2、IL-15およびIL-7から選択されるサイトカインを含む、
請求項29〜31のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
刺激試薬が、TCR複合体のメンバーに特異的に結合する一次作用物質およびT細胞共刺激分子に特異的に結合する二次作用物質を含む、請求項32に記載の方法。
【請求項３４】
一次作用物質がCD3に特異的に結合し、かつ/または共刺激分子がCD28、CD137（4-1-BB）、OX40、もしくはICOSからなる群より選択される、請求項33に記載の方法。
【請求項３５】
一次および二次作用物質が抗体を含む、請求項33または34に記載の方法。
【請求項３６】
作用物質が、異種タンパク質をコードするウイルスベクター、任意でレンチウイルスベクターまたはガンマレトロウイルスベクターである、請求項29〜35のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
異種タンパク質が組換え受容体、任意でキメラ抗原受容体である、請求項29〜36のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
インキュベーションの開始時の細胞数と比較して、少なくとも約5倍、10倍、20倍、30倍、40倍、50倍またはそれ以上の細胞の拡大増殖をもたらす、および/もしくは
インキュベーション後に約80％、85％、または90％より高い生存率を有する細胞をもたらす、
請求項28〜37のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
請求項28〜38のいずれか一項に記載の方法によって産生された、細胞組成物。
【請求項４０】
請求項1〜14のいずれか一項に記載の無血清培地；請求項27に記載の無血清培地配合物；請求項15に記載の基礎培地；または請求項16に記載のサプリメントと、
該組成物を作製または使用するための説明書と
を含む、製造物品。