(57)【要約】  本発明は、サフラン柱頭の抽出物を含む粉体組成物であって、サフラナールを乾燥重量で０．０３％と１％の間、および種々のトランス−クロシン−４（主要異性体）、トランス−クロシン−３、トランス−クロシン−２’、シス−クロシン−４、トランス−クロシン−２、トランス−クロシン−１、および／またはいずれかの混合物であるクロシン類を乾燥重量で少なくとも３．４８％、で含むことを特徴としている。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
サフラン柱頭の抽出物を含む粉体組成物であって、ＨＰＬＣにより分析して、
ａ）サフラナールを乾燥重量で０．０３％と１％の間、
ｂ）トランス−クロシン−４、トランス−クロシン−３、トランス−クロシン−２’、シス−クロシン−４、トランス−クロシン−２、トランス−クロシン−１、および／またはいずれかの混合物であるクロシン類を乾燥重量で少なくとも３．４８％、
で含むことを特徴とする組成物。
【請求項２】
前記組成物は、
ａ）サフラナールを乾燥重量で０．０３％と０．５０％の間、
ｂ）クロシン類を乾燥重量で３．４８％と８．００％の間、
で含むことを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記組成物は、
ａ）サフラナールを乾燥重量で０．０３％と０．５０％の間、
ｂ）クロシン類を乾燥重量で３．４８％と７．００％の間、
で含むことを特徴とする請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記組成物は、
ａ）サフラナールを乾燥重量で０．０３％と０．３５％の間、
ｂ）クロシン類を乾燥重量で３．４８％と６．００％の間、
で含むことを特徴とする請求項１乃至３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
前記組成物は、前記クロシン類を前記組成物中の全クロシン類の総重量に対して、
トランス−クロシン−４を乾燥重量で４５％と６５％の間、
トランス−クロシン−３を乾燥重量で１５％と３０％の間、
トランス−クロシン−２’を乾燥重量で０．５％と５％の間、
シス−クロシン−４を乾燥重量で１％と１０％の間、
トランス−クロシン−２を乾燥重量で１％と１５％の間、
トランス−クロシン−１を乾燥重量で１％と５％の間、および／または
いずれかの混合物、
で含むことを特徴とする請求項１乃至４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
前記組成物は、さらに、ＨＰＬＣにより分析して、乾燥抽出物１００ｇあたりｐ−ニトロアニリンのグラム（ｇ）で表して少なくとも２．５％のピクロクロシンを含むことを特徴とする請求項１乃至５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
前記組成物は、さらに、フォリン−チオカルト法（Ｆｏｌｉｎ  Ｃｉｏｃａｌｔｅｕ  ｍｅｔｈｏｄ）の手法で、乾燥抽出物１００ｇあたり没食子酸のグラム（ｇ）で表して少なくとも１．０％のポリフェノール類を含むことを特徴とする請求項１乃至６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
前記組成物は、２４０μｍ以下の粒子サイズであることを特徴とする請求項１乃至７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
前記組成物は、さらに、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含むことを特徴とする請求項１乃至８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０】
請求項１乃至９のいずれか１項に記載の組成物を用いて、医薬品を製造することを特徴とする組成物の使用。
【請求項１１】
請求項１乃至９のいずれか１項に記載の組成物を用いて、抑うつに関連した気分障害を抑える医薬品を製造することを特徴とする組成物の使用。
【請求項１２】
前記組成物は、経口投与されることを特徴とする請求項１０または１１に記載の組成物の使用。
【請求項１３】
前記組成物が、１５ｍｇ／日以上の投与量で投与されることを特徴とする請求項１０から１２のいずれか１項に記載の組成物の使用。
【請求項１４】
前記組成物は、１日の投与量２０ｍｇ／日と４０ｍｇ／日の間で投与されることを特徴とする請求項１０乃至１３のいずれか１項に記載の組成物の使用。
【請求項１５】
前記組成物が、１日の投与量２８ｍｇ／日で投与されることを特徴とする請求項１０乃至１４のいずれか１項に記載の組成物の使用。
【請求項１６】
前記組成物は、錠剤、カプセル、粉体、顆粒または溶液で投与されることを特徴とする請求項１０乃至１５のいずれか１項に記載の組成物の使用。
【請求項１７】
請求項１乃至８のいずれか１項に記載の組成物が、食物サプリメントとして使用されることを特徴とする組成物の使用。
【請求項１８】
請求項１乃至８のいずれか１項に記載の組成物を含むことを特徴とする機能性食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、薬として使用するために工業的規模で得られるサフラン柱頭（ｅｓｔｉｇｍａｓ  ｄｅ  ａｚａｆｒａｎ）〔クロッカス  サティバス  エル．（Ｃｒｏｃｕｓ  ｓａｔｉｖｕｓ  Ｌ．）〕の抽出物を含む製造、使用および組成物に関するものである。とりわけ、抑うつに関連した気分障害を抑えるに有効な組成物に関するものである。
【０００２】
本発明は、医薬産業の分野、特に、抑うつに関連した気分障害の抑止分野に属するものである。
【０００３】
本発明のサフラン抽出物は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて、気分関連神経伝達物質の再取込み阻害に関連した活性物質であるサフラナールとクロシン類に標準化される。この抽出物は、複数の関連する禁忌および欠点を有する合成抗うつ薬の使用を避けるための天然代替物として提示される。本発明は、抑うつに関連した気分障害の抑止における製品効果の臨界的条件としてＨＰＬＣの手法で分析して得られ、そして１２８人の個人が参加した臨床試験によって示された最終抽出物中のサフラナールおよびクロシン類の有効投与量及び適切濃度を決めている。
【０００４】
〔発明のセクター（Ｓｅｃｔｏｒ）〕
本発明の適用は、医薬産業の分野、特に、抑うつに関連した気分障害の抑止分野にある。
【背景技術】
【０００５】
先進国では、高血圧に続いて、抑うつ障害が最も一般的な病状である（Ａｋｈｏｎｄｚａｄｅｈら、２００８）。世界保健機関（ＷＨＯ）は、抑うつ障害を、人口の高い割合に影響を与える最も一般的な医学障害と定義している。最も一般的な症状は、体重減少、不安、心気症、不眠、身体性および性的障害、罪悪感、自殺思考などである（Ｈａｍｉｌｔｏｎ、１９６０）。長時間の抑うつは、心臓病のような慢性疾患、糖尿病やホルモン異常などの代謝性疾患、その他の１つに繋がることがある。（Ｍｏｕｓｓａｖｉら、２００７；Ｂｉｓｓｃｈｏｐら、２００４）。
【０００６】
抑うつ発症の主要原因の１つは、気分関連神経伝達物質の減少である（Ｃａｒｒら、２０１１；  ＬｏｐｒｅｓｔｉとＤｒｕｍｍｏｎｄ、２０１４）ことから、現在最も広く用いられている抗うつ薬は、これら神経伝達物質の再取り込み選択的阻害剤である（Ｓｅｒｒｅｔｔｉら、２００７）。気分を左右する主要神経伝達物質の中では、セロトニン、ノルエピネフリン（ノルアドレナリン）およびドーパミンが際立っている。非常によく知られている例は、フルオキセチン（Ｎｏｏｒｂａｌａら、２００５）で、これは、シナプス前ニューロンに存在するトランスポーターによる神経伝達物質の再取り込みを阻害して、細胞外空間における神経伝達物質の濃度の上昇をもたらしている。
【０００７】
合成薬物治療の主要欠点の１つは、口渇、頭痛、吐き気、下痢などの軽度の症状から、頻脈、性機能障害、高血圧、高コレステロール血症などの重度の症状に至る副作用の発生である（Ｆｅｒｇｕｓｏｎ、２００１；Ｖａｎｄｅｒｋｏｏｙ、２００２）。さらに、これらによる治療は、他の薬剤と相互作用することがあり、直ちに中断することができず、多くの場合常用癖を引き起こす可能性がある（Ｈａｄｄａｄ、２００５）。
【０００８】
抗うつ薬を適切な投与量と期間で治療を受けている患者の２９％から４６％が、治療に対してポジティブな応答が得られていないことも注目に値する（Ｆａｖａら、１９９６，２００３）。
【０００９】
近年、抗うつ剤治療の厳しい安全要件と関連する副作用のために、精神薬理学的適用の可能性がある植物抽出物に研究の焦点が当てられている。その中に、サフランベースの製品〔クロッカス・サティブス・エル．（Ｃｒｏｃｕｓ  ｓａｔｉｇｕｓ  Ｌ．）〕が見いだされ、その効果が、実験動物でのインビボ試験と、抑うつに関連した病変を呈した人々への臨床試験の両方で科学的に示された（Ａｋｈｏｎｄｚａｄｅｈ，２００４，２００５，２００８；Ｂａｓｔｉら，２００７；Ｎｏｏｒｂａｌａら，２００５；Ｍｏｓｈｉｒｉら，２００６；Ｕｌｂｒｉｃｈｔら，２０１１；Ｋａｓｈａｎｉ，２０１３；Ｓｈａｈｍａｎｓｏｕｒｉら，２０１４）。これらの科学的試験は、試験されたサフラン抽出物中に見出されたサフラナールとクロシン類が、脳組織内神経伝達物質の濃度増加に寄与していることを示している（Ｋａｒｉｍｉら、２００１；Ｈｏｓｓｅｉｎｚａｄｅｈら、２００４；Ｎｏｏｒｂａｌａら、２００５；Ｅｔｔｅｈａｄｉら、２０１３）。クロシン類は、ドーパミンとノルエピネフリンの再取り込み阻害剤として作用し、一方、サフラナールは、セロトニンの再取り込み阻害剤として作用し（Ｈｏｓｓｅｉｎｚａｄｅｈら、２００４）、これにより、クロシン類とサフラナールの両方を適切な濃度で与えれば、サフラン抽出物で効果的な処置をすることが出来る。サフラナール（２，２，６−トリメチル−１，３−シクロヘキサジエン−１−カルボキシアルデヒド）は、サフランの香りに関係した主成分で、全芳香物質の６０％以上を占めている（ＯｒｄｕｎｄｉとＴｓｉｍｉｄｏｕ、２００４）。クロシン類は、ジカルボン酸カロテノイドクロセチンのグリコシル化エステルであり、主にトランス−およびシス−クロシン３および４であるいくつかのグリコシドエステル類によって形成されている（Ａｌｏｎｓｏら、２００１）。それらは、水への溶解性とサフランの強い赤橙色特性を有することで、他の植物起源カロテノイドとは異なっている。
【００１０】
抑うつに関連した気分障害は、しばしば高い酸化ストレスと、その結果として、外因性抗酸化物質の欠如と関連してくる（Ｍａｅｓら、２０１１；Ｍａｅｓら、２０１２；Ｐａｌｔａら、２０１４）。抑うつ状態のとき、内因性抗酸化物質として作用する主にスーパーオキシドジスムターゼ、カタラーゼ、およびグルタチオンペルオキシダーゼである酵素の濃度が減少し、一方、多価不飽和脂肪酸（４−ヒドロキシアルケナールなど）の酸化に由来するある種の生成物と共に、酸化ストレスのマーカーとして作用するマロンアルデヒド濃度が、増加してくる（Ｌｏｐｒｅｓｔｉら、２０１４）。この全てが、免疫性、炎症性、およびある場合には神経変性応答を促進する（ＬｅｏｎａｒｄとＭａｅｓ、２０１２）。全ての場合において、外因性抗酸化物質の存在は、サフラン由来の天然抽出物の場合と同様に、酸化ストレスの発生を抑えるのに役立っている（Ｍａｅｓら、２０１１；Ｍａｅｓら、２０１２；Ｐａｌｔａら、２０１４）。
【００１１】
サフランの品質を決めるために、国際標準化機構（ＩＳＯ）は、ＩＳＯ３６３２と呼ばれる分析方法を提案し（１９８０年、１９９３年）、分光光度測定により植物品質を迅速かつ容易に分類できるようにした。
【００１２】
これは、サフランの品質を左右する化合物をＩＳＯ３６３２規格で分析する方法であり、販売される製品中のこれらの活性物質の含有量を保証するものである。これは、サフラン抽出物の溶液を、２５７ｎｍ（ピクロクロシンのλｍａｘ（極大吸収波長））、３３０ｎｍ（サフラナールのλｍａｘ）および４４０ｎｍ（クロシン類のλｍａｘ）における吸光度を測定する迅速かつ容易な分光光度法である。この方法は、サフラン柱頭の品質を類別するに使用されるが、最終的にサフラン抽出物の生物活性化合物の分析に受け入れられてきた。
【００１３】
いくつかのサフランベース製品が販売されているが、これらの製品の組成はＩＳＯ３６３２規格の分光光度法で評価されているのみであるため、サフラナールとクロシンの活性化合物が表記された値より遥かに低い含有量となっている。このＩＳＯ規格は、ＩＳＯ規格が発行された後のいくつかの研究で指摘されているように、これら活性物質を決定するには十分に選択的、客観的、または正確でない（Ｔａｒａｎｔｉｌｉｓら、１９９５；ＯｒｆａｎｏｕとＴｓｉｍｉｄｏｕ、１９９６）。Ａｌｏｎｓｏら（２００１）は、ＩＳＯ３６３２規格によるピクロクロシンおよびサフラナールをそれぞれ決定する波長２５７ｎｍおよび３３０ｎｍでは、他の化合物、主にサフラン中に多いクロシン異性体が妨害して、サフラナール含有量を過大評価することになることを見出した。
【００１４】
ＩＳＯ３６３２法を使用すると、その吸光度に応じてサフラン抽出物中の活性物質の含有量を調整することができ、組成物中にサフラナールがないサフラン抽出物も３３０ｎｍの信号を出すことができる。この効果は、上記したように、主に特定のクロシン異性体に起因するものであり、実際の製品品質を隠してしまっている。このやり方は、明らかにこれら製品品質を悪く評価しており、消費者の信頼を大きく失うことになる可能性がある。
【００１５】
したがって、上記の観点から、現状では、薬物の使用に伴うネガティブな副作用を伴うことなく抑うつに関連した気分障害を効果的に抑えるために、サフラン抽出物中にクロシン類とサフラナールを客観的に分析された適切な濃度で含む天然のサフラン抽出物に基づく組成物を提供する必要がある。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１６】
【非特許文献１】Ａｌｏｎｓｏ，ＧＬ．，Ｓａｌｉｎａｓ，ＭＲ．，Ｇａｒｕｏ，Ｊ．，Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ，ＭＡ．（２００１），“スペインサフラン（クロッカス  サティブス  エル．）からのクロシン類およびピクロクロシンの組成物”，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｆｏｏｄ  Ｑｕａｌｉｔｙ，２４，２１９−２３３．
【非特許文献２】Ａｋｈｏｎｄｚａｄｅｈ，Ｓ．，Ｆａｌｌａｈ−Ｐｏｕｒ，Ｈ．，Ａｆｋｈａｍ，Ｋ．，Ｊａｍｓｈｉｄｉ，ＡＨ．，Ｋｈａｌｉｇｈｉ−Ｃｉｇａｒｏｕｄｉ，Ｆ．（２００４），“軽度から中程度の抑うつの治療におけるクロッカス・サティブス・エル．とイミプラミンの比較：パイロット二重−盲目ランダム試験”ＢＭＣ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ  ａｎｄ  Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ４，１２．
【非特許文献３】Ａｋｈｏｎｄｚａｄｅｈ，Ｓ．，Ｔａｈｍａｃｅｂｉ−Ｐｏｕｒ，Ｎ．，Ｎｏｏｒｂａｌａ，ＡＡ．，Ａｍｉｎｉ，Ｈ．，Ｆａｌｌａｈ−Ｐｏｕｒ，Ｈ．，Ｊａｍｓｈｉｄｉ，ＡＨ．，Ｋｈａｎｉ，Ｍ．（２００５），“軽度から中程度の抑うつ治療におけるクロッカス・サティブス・エル：二重−盲目、ランダムおよびプラセボ対照試験”，Ｐｈｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９，１４８−１５１．
【非特許文献４】Ａｋｈｏｎｄｚａｄｅｈ  ＢＡ．，Ｇｈｏｒｅｉｓｈｉ  ＳＡ．，Ｎｏｏｒｂａｌａ  ＡＡ．，Ａｋｈｏｎｄｚａｄｅｈ，ＳＨ．，Ｒｅｚａｚａｄｅｈ  ＳＨ．（２００８），“抑うつ治療におけるクロッカス・サティブス・エル．の花弁および柱頭：パイロット二重−盲目ランダムおよびプラセボ対照試験”，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｐｌａｎｔｓ，７，２９−３６．
【非特許文献５】Ｂａｓｔｉ，ＡＡ．，Ｍｏｓｈｉｒｉ，Ｅ．，Ｎｏｏｒｂａｌａ，ＡＡ．，Ｊａｍｓｈｉｄｉ，ＡＨ．，Ａｂｂａｓｉ，ＳＨ．，Ａｋｈｏｎｄｚａｄｅｈ，Ｓ．（２００７），“うつ病外来患者の治療におけるクロッカス・サティブス・エル．の花弁とフルオキセチンの比較：パイロット二重−盲目ランダム試験”，Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  Ｎｅｕｒｏ−Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ＆  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，３１，４３９−４４２．
【非特許文献６】Ｂｅｃｋ，ＡＴ．，Ｓｔｅｅｒ，ＲＡ．，Ｇａｒｂｉｎ，ＭＧ．（１９８８），“ベック抑うつ質問票の心理学的特性：２５年間の評価。”，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｓｙｃｈｏｌｏｇｙ  Ｒｅｖｉｅｗ，８，７７−１００．
【非特許文献７】Ｂｉｓｓｃｈｏｐ，ＭＩ．，Ｋｒｉｅｇｓｍａｎａ，ＤＭＷ．，Ｂｅｅｋｍａｎ，ＡＴＦ．，Ｄｅｅｇ，ＤＪＨ．（２００４），“慢性疾患と抑うつ：修正した心理社会的リソースの役割”，Ｓｏｃｉａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，５９，７２１−７３３．
【非特許文献８】Ｂｕｙｓｓｅ，ＤＪ．，Ｒｅｙｎｏｌｄｓ，ＣＦ．，Ｍｏｎｋ，ＴＨ．，Ｂｅｒｍａｎ，ＳＲ．，Ｋｕｐｆｅｒ，ＤＪ．（１９８９），“ピッツバーグの睡眠質指数：精神科の練習と研究のための新しい道具”，Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２８，１９３−２１３．
【非特許文献９】Ｃａｂａｌｌｅｒｏ−Ｏｒｔｅｇａ，Ｈ．，Ｐｅｒｅｄａ−Ｍｉｒａｎｄａ，Ｒ．，Ａｂｄｕｌｌａｅｖ，ＦＩ．（２００７），“１１種の異なるサフラン（クロッカス・サティブス・エル．）源由来の主要活性成分のＨＰＬＣ定量。”，Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １００，１１２６−１１３１．
【非特許文献１０】Ｃａｒｒ，ＧＶ．，Ｓｃｈｅｃｈｔｅｒ，ＬＥ．，Ｌｕｃｋｉ，Ｉ．（２０１１），“ラットにおける選択的５−ＨＴ６受容体アゴニストの抗うつおよび抗不安作用”，Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２１３，４９９−５０７．
【非特許文献１１】Ｄａｖｉｄｓｏｎ，ＲＪ．，Ｓｈｅｒｅｒ，ＫＲ．，Ｇｏｌｄｓｍｉｔｈ，ＨＨ．（２００２），“感情科学ハンドブック（第１版）”，，ＵＳＡ：Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ．
【非特許文献１２】Ｅｄｗａｒｄｓ，ＲＲ．，Ｈａｙｔｈｏｒｎｔｈｗａｉｔｅ，Ｊ．（２００４），“気分スウィング：気分状態のプロファイルを用いたときの変動”，Ｊ  Ｐａｉｎ  Ｓｙｍｐｔｏｍ  Ｍａｎａｇｅ，２８，５３４．
【非特許文献１３】Ｅｔｔｅｈａｄｉ，Ｈ．，Ｍｏｊａｂｉ，ＳＮ．，Ｒａｎｊｂａｒａｎ，Ｍ．，Ｓｈａｍｓ，Ｊ．，Ｓａｈｒａｅｉ，Ｈ．，Ｈｅｄａｙａｔｉ，Ｍ．，Ａｓｅｆｉ，Ｆ．（２０１３），“サフラン（クロッカス・サチブス）の水性抽出物は、ラットの脳ドーパミンおよびグルタメート濃度を増加させる”，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ  ａｎｄ  Ｂｒａｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，３，３１５−３１９．
【非特許文献１４】Ｆａｖａ，Ｍ．，Ｋａｔｈａｒｉｎｅ，ＭＤ．，Ｄａｖｉｄｓｏｎ，Ｇ．（１９９６），“治療抵抗性抑うつの定義と疫学”，Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  Ｃｌｉｎｉｃｓ  ｏｆ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａ，１９，１７９−２００．
【非特許文献１５】Ｆａｖａ，Ｍ．（２００３），“治療抵抗性抑うつの診断と定義”，Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，５３，６４９−６５９．
【非特許文献１６】Ｆｅｒｇｕｓｏｎ，ＪＭ．（２００１），“ＳＳＲＩ抗うつ薬：有害作用および忍容性”，Ｐｒｉｍａｒｙ  Ｃａｒｅ  Ｃｏｍｐａｎｉｏｎ  −  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，３，２２−２７．
【非特許文献１７】Ｈａｄｄａｄ，ＰＭ．（２００５），“抗うつ薬が依存性になるか？”，Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｉａ  ｅ  Ｐｓｉｃｈｉａｔｒｉａ  Ｓｏｃｉａｌｅ，１４，２．
【非特許文献１８】Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ｍ．（１９６０），“抑うつの評価尺度”，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ  ａｎｄ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，２３，５６−６２．
【非特許文献１９】Ｈｏｓｓｅｉｎｚａｄｅｈ，Ｈ．，Ｋａｒｉｍｉ，Ｇ．，Ｎｉａｐｏｏｒ，Ｍ．（２００４），“マウスにおけるクロッカス・サティバス１、柱頭抽出物およびそれらの組成物、クロシンおよびサフラナールの抗うつ効果”，Ａｃｔａ  Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｅ，６５０，４３５−４５．
【非特許文献２０】国際規格，サフラン仕様，ＩＳＯ−３６３２−１９８０（Ｅ）．“ジュネーブ国際標準化機構、国際標準、サフラン仕様”，ＩＳＯ  ３６３２−１  及び  ＩＳＯ  ３６３２−２：１９９３（Ｅ）．国際標準化機構，ジュネーブ，１９９３．
【非特許文献２１】Ｋａｒｉｍｉ，ＧＨＲ．，Ｈｏｓｓｅｉｎｚａｄｅｈ，Ｈ．，Ｋｈａｌｅｇｈ  Ｐａｎａｈ，Ｐ．（２００１），“マウスにおけるクロカス・サティバス水およびエタノール抽出物の抗うつ感情の検討”，Ｉｒａｎｉａｎ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｂａｓｉｃ  ｍｅｄｉｃａｌ  ｓｃｉｅｎｃｅｓ，４，１１−１５．
【非特許文献２２】Ｋａｓｈａｎｉ，Ｌ．，Ｒａｉｓｉ，Ｆ．，Ｓａｒｏｕｋｈａｎｉ，Ｓ．，Ｓｏｈｒａｂｉ，Ｈ．，Ｍｏｄａｂｂｅｒｎｉａ，Ａ．，Ｎａｓｅｈｉ，ＡＡ．，Ｊａｍｓｈｉｄｉ，Ａ．，Ａｓｈｒａｆｉ，Ｍ．，Ｍａｎｓｏｕｒｉ，Ｐ．，Ｇｈａｅｌｉ，Ｐ．，Ａｋｈｏｎｄｚａｄｅｈ，Ｓ．（２０１３），“女性におけるフルオキセチン−誘発の性機能不全を治療するためのサフラン：ランダム二重−盲目プラセボ対照研究”，Ｈｕｍａｎ  Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ，２８，５４−６０．
【非特許文献２３】Ｌｅｃｈ，Ｋ．，Ｗｉｔｏｗｓｋａ−Ｊａｒｏｓｚ，Ｊ．，Ｊａｒｏｓｚ，Ｍ．（２００９），“サフランイエロー：エレクトロスプレー質量分光検出を装備した高速液体クロマトグラフィーによるカロテノイドのキャラクタリゼーション”，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ，４４，１６６１−１６６７．
【非特許文献２４】Ｌｅｏｎａｒｄ，Ｂ．，Ｍａｅｓ，Ｍ．（２０１２），“単極性抑うつの病態生理学における、細胞媒介免疫活性化、炎症および酸化的および硝化的ストレス経路、およびそれらの後遺症および随伴物がどのような役割を果たすかのメカニズム説明”，Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｂｉｏｂｅｈａｖｉｏｒａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，３６，７６４−７８５．
【非特許文献２５】Ｌｏｐｒｅｓｔｉ，ＡＬ．，Ｄｒｕｍｍｏｎｄ，ＰＤ．（２０１４），“抑うつのためのサフラン（クロッカス・サティバス）：臨床研究の体系的レビューと、その根底にある抗うつ作用メカニズムの検討”，Ｈｕｍａｎ  Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ：Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ，９，５１７−５２７．
【非特許文献２６】Ｌｏｖｉｂｏｎｄ，Ｓ，Ｈ．，ａｎｄ  Ｌｏｖｉｂｏｎｄ，ＰＦ．（１９９５），“ネガティブ感情状態の構造：抑うつ不安ストレススケール（ＤＡＳＳ）とベック抑うつ不安質問票の比較。”，Ｂｅｈａｖｉｏｕｒ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｙ，３３，３３５−３４３．
【非特許文献２７】Ｍａｅｓ，Ｍ．，Ｇａｌｅｃｋｉ，Ｐ．，Ｃｈａｎｇ，ＹＳ．，Ｂｅｒｋ，Ｍ．（２０１１），“主要な抑うつにおける酸化的および硝化的ストレス（Ｏ＆ＮＳ）経路およびその病気における（神経）変性過程への可能な寄与に関する概説”，Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  Ｎｅｕｒｏ−Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ＆  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ３５，６７６−６９２．
【非特許文献２８】Ｍａｅｓ，Ｍ．，Ｆｉsａｒ，Ｚ．，Ｍｅｄｉｎａ，Ｍ．，Ｓｃａｐａｇｎｉｎｉ，Ｇ．，Ｎｏｗａｋ，Ｍ．，Ｂｅｒｋ，Ｍ．（２０１２），“抑うつの新薬ターゲット：炎症、細胞性免疫、酸化的および硝化的ストレス、ミトコンドリア、抗酸化剤、および神経進行性経路、および新薬候補−Ｎｒｆ２活性化因子およびＧＳＫ−３阻害剤”，Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  Ｉｎ  Ａｃｕｔｅ  Ａｎｄ  Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎｄ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｉｎｆｌａｍｍｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２０，１２７−１５０．
【非特許文献２９】ＭｃＮａｉｒ，ＤＭ．，Ｌｏｒｒ，Ｍ．ａｎｄ  Ｄｒｏｐｐｌｅｍａｎ，ＬＦ．（１９７１），“マニュアル：気分状態のプロフィール”，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ：Ｅｄｕｃａｔｉｏｎａｌ  ａｎｄ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  Ｔｅｓｔｉｎｇ  Ｓｅｒｖｉｃｅ．
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【非特許文献４１】Ｖａｎｄｅｒｋｏｏｙ，ＪＤ．，Ｋｅｎｎｅｄｙ，ＳＨ．，Ｂａｇｂｙ，ＲＭ．（２００２），“自然療法の治療を受けたうつ病患者の抗うつ剤副作用：ブプロピオン、モクロベミド、パロキセチン、セルトラリン、ベンラファキシンの研究。”，Ｃａｎａｄｉａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，  Ｒｅｖｕｅ  Ｃａｎａｄｉｅｎｎｅ  ｄｅ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｅ，４７，１７４−１８０．
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【発明の概要】
【００１７】
本発明は、抑うつに関連した気分障害を抑えるに有効な医薬品として使用するサフラン柱頭抽出物を含む組成物に関するものである。この抽出物は、気分を改善し、抑うつに関連した気分障害を抑え、そして複数の禁忌と副作用を有する合成抗うつ薬による治療の必要性をなくすことを目的とした天然代替物として提示される。
【００１８】
本発明は、ＨＰＬＣによって分析され、抑うつ障害の抑止に関連した主要な生物活性化合物のサフラナールとクロシン類を有する新規なサフラン抽出物を得る、標準化する、そして使用する方法を記載する。このサフラナールとクロシン類は、１次的にサフランの感覚刺激特性（それぞれ、香りと色）を形成している。本発明の抽出物は、合成抗うつ薬を用いての治療を行わないことを目的として、抑うつに関連した障害を抑える天然代替物である。
【００１９】
上記したように、現在市販されているサフラン抽出物に基づく組成物は、ＩＳＯ３６３２規格に規定された方法を適用することによって保証されてきていて、サフラナールとクロシンの活性化合物の割合が、これらの活性物質を決定するのに十分に選択的でなく、客観的または正確でない分光光度法であるために、表記された値より遥かに低くなっている（実施例２参照）。その結果、現在市販されているサフラン抽出物は、抑うつに関連した障害に対しての抑止効果を発揮するのに適切な量の活性物質を有していない。
この問題を回避するために、本発明者らは、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）の手方で前記活性物質を個々の成分に分離するための前段階を導入し、それによって治療に寄与する活性分子、すなわちサフラナール、クロシン類およびピクロクロシン類の濃度を決定した（実施例１参照）。
サフランの新規な分析法により、本発明は、抑うつに関連した気分障害に対しての抑止効果を有するサフラン抽出物を得る方法、およびそれを用いた治療での使用に関するもので、現在市販されている他の抽出物とは、これらの活性物質（サフラナール／クロシン類）が客観的に保証されている点で異なっている。この組成物は、最終抽出物中のサフラナール／クロシン類の適切なバランスを保証しており、１２８人の参加者を得て抽出物を２８ｍｇ／日で１ヶ月間投与した二重−盲目臨床試験においてさらに有効であることが示され、全体的な気分において有意な改善を示した（実施例３参照）。
【００２０】
したがって、本発明は以下の利点を有している。
【００２１】
−  ＨＰＬＣで分析された本発明の抽出物のサフラナールおよびクロシン類は、ＩＳＯ３６３２規格によった他の市販のサフラン抽出物よりも高い濃度である。
【００２２】
−  本発明の抽出物は、健康な個人において気分を改善する機能的効果を有することが見出されており、特に、被験者の緊張、抑うつ、怒り、疲労、不安、ストレス、および混乱を減少させ、活気を増大させることが示された。
【００２３】
−  本発明の抽出物は、食品添加物として使用することができる。
【００２４】
−  本発明の抽出物は、市販の合成抗うつ薬および抗不安薬に伴う副作用を有していない。
【００２５】
上記を考慮して、本発明の第１の態様は、ＨＰＬＣで分析されたサフラン柱頭抽出物を含む粉末組成物であって、以下を含んでなることを特徴とする。
【００２６】
ａ）サフラナールを乾燥重量で０．０３％と１％の間、および
ｂ）トランス−クロシン−４（主要異性体）、トランス−クロシン−３、トランス−クロシン−２’、シス−クロシン−４、トランス−クロシン−２、トランス−クロシン−１、および／またはいずれかの混合物であるクロシン類を乾燥重量で少なくとも３．４８％、を含んでいる。
【００２７】
本発明の第２の態様は、上記組成物の医薬品製剤への使用に関するものである。
【００２８】
本発明の第３の態様は、気分障害を抑える医薬品を調製するための、上記組成物の使用に関するものである。気分障害は、疲労、ストレスおよび不安、その他の抑うつに関連した障害として理解される。
【００２９】
本発明の第４の態様は、上記組成物の食品補充物としての使用に関するものである。
【００３０】
本発明の第５の態様は、上記組成物を含む機能性食品に関するものである。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】本発明サフラン抽出物のオーバーレイ表示ＨＰＬＣクロマトグラムを示している。Ｐ：ピクロクロシン、ｔ−ｃ−４：トランス−クロシン−４、ｓ：サフラナール。
【図２】５つのネガティブ尺度（Ｔ：緊張、Ｄ：抑うつ、Ａ：怒り、Ｆ：疲労、Ｃ：混乱）と１つのポジティブ尺度（Ｖ：活気）を示す平均ＰＯＭＳ値変化を示している。ＰＯＭＳ  ＭＣＳ：ＰＯＭＳの平均スコア変化、Ｐｌｂ：プラセボ。
【図３】全気分障害（Ｔｏｔａｌ  Ｍｏｏｄ  Ｄｉｓｔｕｒｂａｎｃｅ）の値を示すＰＯＭＳ値の変化を示している。ＴＭＤ  ＭＣＳ分析：全気分障害の平均スコア変化、Ｐｌｂ：プラセボ。
【図４】ポジティブ感情とネガティブ感情を評価する平均ＰＡＮＡＳ値変化である。ＰＡＮＡＳ  ＭＣＳ：ＰＡＮＡＳの平均スコア変化、Ｐｌｂ：プラセボ、ＰＡ：ポジティブ感情、ＮＡ：ネガティブ感情。
【図５】抑うつ（Ｄ）、不安（Ａｘ）およびストレス（Ｓ）を評価するための平均ＤＡＳＳ値変化である。ＤＡＳＳ  ＭＣＳ：平均ＤＡＳＳスコア変化、Ｐｌｂ：プラセボ。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
本発明のサフラン抽出物を得るために、まず、主にＨＰＬＣによるサフラナールとクロシン類の活性物質の決定と微生物負荷等に基づいて、原材料の厳格な選択を行う。
【００３３】
選ばれたサフラン柱頭の活性物質の工業的抽出は、好ましくは水、またはエタノールの割合が２０％（ｖ／ｖ）を超えない水性アルコール混合物を用いて行う。抽出プロセスでの温度制御は重要で、高温下で影響を受ける特定のクロシン異性体の劣化をなくすために７０℃を上限にしなければならない。本発明のサフラン抽出物を得るには、酢酸エチル、ヘキサン、石油エーテル、アセトン、メタノール等の有機溶剤は使用できない。
【００３４】
原料抽出物は、サフラン固有の強い香りのある濃赤色液体の形状であり、これを室温で冷却し、続いて水分を除く。この段階には、温度が７０℃を超えない限り別の乾燥技術も用いてもよい。
【００３５】
最後のステップは、乾燥抽出物を、生物活性化合物に影響を与えないように粉砕温度を常時制御しつつハンマーミルまたはナイフミルで粉砕し、そして最大メッシュ２４０μｍの篩を通して篩分けして、粒子サイズを調整する。原料抽出物を薬学的に許容される賦形剤と混合し、本発明の処方が得られる。賦形剤の限定しない例としては、デンプン、ラクトース、デキストロース、マルトデキストリン、スクロース、マンニトール、ソルビトール、グルコース、微結晶性セルロース、リン酸二および三カルシウム、硫酸カルシウム、カオリンおよび塩化ナトリウムがある。好ましくは、賦形剤は、デキストリン、マルトデキストリン、またはいずれかの混合物から得る。
【００３６】
それ故、本発明の第１の態様は、サフラン柱頭抽出物を含む粉体組成物に関するものであって、その組成物は、ＨＰＬＣで分析して、以下を含んでなることを特徴とする。
【００３７】
ａ）サフラナールを乾燥重量で０．０３％と１％の間、および、
ｂ）トランス−クロシン−４（主異性体）、トランス−クロシン−３、トランス−クロシン−２’、シス−クロシン−４、トランス−クロシン−２、トランス−クロシン−１、および／またはいずれかの混合物であるクロシン類を乾燥重量で少なくとも３．４８％、で含んでいる。好ましくは、上記組成物は、
ａ）サフラナールを乾燥重量で０．０３％と０．５０％の間、
ｂ）クロシン類を乾燥重量で３．４８％と８．００％の間、
で含んでいる。
【００３８】
より好ましくは、上記組成物は、
ａ）サフラナールを乾燥重量で０．０３％と０．５０％の間、
ｂ）クロシン類を乾燥重量で３．４８％と７．００％の間、
で含んでいる。
【００３９】
さらにより好ましくは、上記組成物含有量は、
ａ）サフラナールを乾燥重量で０．０３％と０．３５％の間、
ｂ）クロシン類を乾燥重量で３．４８％と６．００％の間、
で含んでいる。
【００４０】
上記組成物の別のより好ましい実施形態で、組成物は、クロシン類を組成物中のクロシン類の総重量に対して、トランス−クロシン−４を乾燥重量で４５％と６５％の間、トランス−クロシン−３を乾燥重量で１５％と３０％の間、トランス−クロシン−２’を乾燥重量で０．３％と５％の間、シス−クロシン−４を乾燥重量で０．３％と１０％の間、トランス−クロシン−２を乾燥重量で０．３％と１５％の間、トランス−クロシン−１を乾燥重量で０．５％と５％の間、および／またはいずれかの混合物、であることを特徴としている。
【００４１】
上記組成物の別のより好ましい実施形態では、組成物は、組成物中のクロシン類の総重量に対して、トランス−クロシン−４を乾燥重量で５３％、トランス−クロシン−３を乾燥重量で２２％、トランス−クロシン−２’を乾燥重量で１％、シス−クロシン−４を乾燥重量で２％、トランス−クロシン−２を乾燥重量で３％、トランス−クロシン−１を乾燥重量で２％、および／またはいずれかの混合物、であることを特徴としている。
【００４２】
本発明の第１の態様の別の実施形態で、組成物は、さらに、本発明の抽出物中に、Ｃａｂａｌｌｅｒｏ−Ｏｒｔｅｇａら（２００７）により提唱されたＨＰＬＣにより分析して、乾燥抽出物１００ｇ当たりｐ−ニトロアニリンのグラム（ｇ）で表して少なくとも２．５％のピクロクロシンを含んでいる。
【００４３】
本発明の第１の態様の別の実施形態で、上記組成物は、フォリン−チオカルトー試薬（Ｆｏｌｉｎ−Ｃｉｏｃａｌｔｅｕ  ｒｅａｇｅｎｔ）の手法（ＳｉｎｇｌｅｔｏｎとＲｏｓｓｉ，１９６５）で分析して、乾燥抽出物１００ｇ当たりに没食子酸として表して少なくとも１．０％の総ポリフェノール類を含んでいる。
【００４４】
本発明の第１の態様の別の実施形態で、上記組成物は、
ａ）サフラナールを乾燥重量で０．０３％と０．３５％の間、
ｂ）クロシン類を乾燥重量で３．４８％と６．００％の間、
ｃ）乾燥抽出物１００ｇ当たりｐ−ニトロアニリンのグラム（ｇ）で表して少なくとも２．５％、
ｄ）乾燥抽出物１００ｇ当たり没食子酸で少なくとも１．０％、
で含んでいる。
【００４５】
本発明の第１の態様の別の実施形態で、上記組成物は、粒子サイズが２４０μｍ以下である。
【００４６】
本発明の第１の態様の別の実施形態で、上記組成物は、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤も含有している。
【００４７】
用語「賦形剤」は、本発明製品の成分を吸収するのを助け、この成分を安定化させ、または医薬組成物の調製を助ける物質を指している。したがって、賦形剤は、デンプン、砂糖またはセルロースなどの成分を互いに結合させておく機能、甘味付与機能、着色機能、例えば薬剤を空気及び／または湿分から分離するような外部媒体からの保護機能、例えば二塩基性リン酸カルシウムのような錠剤、カプセルまたはその他任意の製剤形体のフィラー機能、腸内で組成物が分解と吸収を促進するための崩壊機能、を有することができる。しかし、この項で言及していない他のタイプの賦形剤を排除するものではない。
【００４８】
従って、用語「賦形剤」は、活性物質またはそれらの会合物に加えられて、投与形体に含まれて調製および安定化、それらの有機特性を改質する、または医薬組成物の物理的／化学的性質と生体利用性を決める物質と定義される。「薬学的に許容される」賦形剤は、医薬組成物の活性成分と相互作用してはいけない。賦形剤の例は、結合剤、フィラー、崩壊剤、潤滑剤、コーティング剤、甘味剤、着香剤および着色剤である。許容される賦形剤のより具体的な例は、限定するものではないが、デンプン、砂糖、キシリトール、ソルビトール、リン酸カルシウム、ステロイド脂肪、タルク、シリカまたはグリセリンである。
【００４９】
本発明の第１の態様の好ましい実施形態で、この組成物は医薬組成物であり、薬学的に許容される賦形剤を含んでいる。この医薬組成物は、少なくとも本発明の製品（サフラン抽出物を含む組成物）を構成する成分を組み合わせた製剤であり、被験体の身体的、生理学的および／または心理的状態を改善する少なくとも１つに適用され、健康の全般的改善と生活の質の向上を図るものである。
【００５０】
本発明において、用語「被験体」は、用語「個体」と同等であり、本発明においては、両方の用語を互換的に用いている。「被験体」は、任意の種に属する任意の動物を意味する。被験体の例は、限定するものではないが、鳥類（めんどり、ダチョウ、ニワトリ、ガチョウ、ヤマウズラなど）、ウサギ、野ウサギ、家畜（イヌ、ネコなど）などの商業的に飼育された動物、ヒツジ、ヤギ等の家畜、ブタ、イノシシ、ウマ、ポニーなど、および牛（ブル、オックスなど）などの動物がある。特定の実施形態では、被験体は、哺乳類、好ましくは霊長類、より好ましくは任意の人種、性別または年齢のヒトである。
【００５１】
本発明の第２の態様は、医薬品を調製するための上記組成物の使用に関するものである。医薬品は、この組成物を治療上有効な投与量含んでいる。ここに使用される用語「治療上有効な投与量」は、投与されたとき、以下に定義するように、病気または試験されている病的状態に明確な抑止効果を生じることができる医薬組成物の対象成分の濃度に関連している。
【００５２】
本発明の第３の態様は、抑うつに関連した気分障害を抑える医薬を調製するための上記組成物の使用に関するものである。
【００５３】
本発明において「抑止」は、特に、個体がその病理学的状態に初期罹患しているが未だ罹患していると診断されていないときに、その個体に病気または病理学的状態が発生するのを回避することを意味している。本発明において、病気または病的状態は、抑うつに関連した気分障害である。
【００５４】
「障害」は、その原因が何であれ、個々の心理的または生物学的機能不全の症状である臨床的表現の行動または心理的パターンと理解される。この症状は、不快感（例えば、痛み）と関連したとき、障害（例えば、機能領域の劣化）になる、あるいは死ぬあるいは痛くなる危険、あるいは障害、または自由を喪失する危険を大幅に増す徴候と考えられる。本発明において、「気分障害」は、ＤＳＭ  ＩＶ  ＴＲと略記される「精神障害の診断および統計マニュアル」で定義される一連の障害として理解され、その主な特徴は、個人の気分の変化である。国際疾病分類（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ）、すなわちＩＣＤ１０は、これらの障害を「気分（感情）障害」という表題で分類している。気分障害は、通常、躁病または軽躁症のエピソードが含まれているかどうかによって抑うつ障害と双極性障害の２つのグループに区別される。本発明において、上記組成物は、抑うつに関連した気分障害を抑えることを目的としている。抑うつに関連した気分障害の例は、限定するものではないが、非定型抑うつ、メランコリー型抑うつ、うつ病、緊張性抑うつ、産後抑うつ、季節性感情障害、気分変調、二重抑うつ、不特定抑うつ障害、人格抑うつ性障害、軽度再発性抑うつ障害、および軽度抑うつがある。
【００５５】
第２および第３の態様の一実施形態で、上記組成物は、経口投与される。
【００５６】
第２および第３の態様の別の実施形態で、上記組成物は、１５ｍｇ／日以上の量で投与され、好ましくは１日の投与量を２０ｍｇ／日と４０ｍｇ／日の間、より好ましくは１日の投与量を２５ｍｇ／日と３１ｍｇ／日の間、さらにより好ましくは１日の投与量を２５ｍｇ／日と２８ｍｇ／日の間、さらにより好ましくは１日の投与量を２８ｍｇ／日にする。
【００５７】
治療に適用するため、本発明の製品は、薬学的に許容されるまたは実質的に純粋な形状、すなわち、希釈剤や担体などの通常の医薬添加物を除いて、薬学的に許容される純度を有し、通常の投与量レベルで毒性と考えられる物質を含有していない。
【００５８】
本発明のサフラン抽出物の純度は、５０％以上、好ましくは７０％以上、さらに好ましくは９０％以上である。「投与形体または医薬品形体」は、活性物質と賦形剤を合わせて医薬品としたもので、医薬組成物が製造業者によって提示される形体と、それが投与される形体の組み合わせにより定義される。
【００５９】
医薬組成物は、好ましくは不活性物質である「ビヒクル」、すなわち担体を含有させてよい。ビヒクルの機能は、他の化合物の配合を容易にすること、投与と服用をし易くすること、または医薬組成物に一貫性と形状を与えることである。従って、ビヒクルは、本発明の医薬組成物の成分のいずれかを所定の容量または重量に希釈し、あるいは前記成分を希釈することなしに、より良い投与および服用を可能にし、そして医薬品に一貫性と形状を与えるに使用される物質である。この全てのために、ビヒクルは、薬学的に許容されると考えられる。抽出物が液体形体で提供されるときには、薬学的に許容されるビヒクルは希釈剤である。さらに、賦形剤およびビヒクルは、薬学的に許容されるものでなければならない。本発明の医薬組成物は、他の活性物質を含むことができる。前記薬学的組成物が他の治療剤の使用を必要とするかもしれない治療有効性の要件に加え、本発明の化合物と別の治療剤との組み合わせ使用を強く求めるまたは推奨するさらなる追加の根本的理由があるかもしれない。用語「活性物質」は、その出所が、ヒト、動物、植物、化学薬品その他に拘わらず、特定の活性により医薬品となる任意の物質である。
【００６０】
それぞれの場合において、医薬品の提供形体は、選択された投与経路で決まるものである。したがって、本発明の組成物は、溶液または臨床的に許容されるその他の服用形体で、治療上有効な投与量で提供される。本発明の医薬組成物は、錠剤、カプセル、粉体、顆粒、軟膏、溶液、坐剤、注射、吸入、ゲルシロップ、ネブライザー、マイクロスフェアまたはエアロゾルなどで、固体、半固体、液体または気体の形体で提供される。好ましくは、組成物は、経口投与するために、例えば、錠剤、カプセル、粉体、顆粒、溶液またはシロップの形体で適用される。
【００６１】
第２および第３の態様の別の実施形態で、上記組成物は、錠剤、カプセル、粉体、顆粒または溶液として服用される。
【００６２】
前述した組成物は、種々の国の薬局方および他の参考文献に記載されている従来からの方法で調製することができる。本発明の化合物および組成物は、併用治療で他の薬剤と一緒に服用できる。
【００６３】
前項に記載したことに加えて、本発明はまた、上記組成物が他の化合物と一緒に被験体に服用される可能性（上記化合物が上記組成物の一部となるか否かに拘わらず）も考えている。
【００６４】
本発明の第４の態様は、上記組成物の、食品サプリメントとしての使用に関するものである。「食品サプリメント」は、通常の食事を補うことを意図して、カプセル、錠剤、薬瓶、ハーブ茶、飲用溶液などの形態で販売されている製品として理解される。これらは、濃縮栄養源（ビタミン、ミネラル、アミノ酸、必須脂肪酸、ファイバーなど）または栄養または生理学的効果を有する他の物質から構成されている。
【００６５】
本発明の第５の態様は、上記組成物を含む機能性食品に関するものである。機能性食品は、栄養ニーズを満たすだけでなく、特定の病気に罹患するリスクを抑止または低減することに関連して、健康上に特別な有益効果を生み出すことができる食品である。この有益な効果は、主に食品中に存在する特定成分を添加、改変または除去することによって達成される。
【００６６】
本発明では、本明細書に記載されている用途と同じと考えられる処置方法も意図されている。したがって、別の態様では、本発明は、被験体の抑うつに関連した気分障害の抑止方法に関したもので、上記のように被験体に組成物を投与することを含んでいる。
【００６７】
明細書および特許請求の範囲を通して、用語「含む」およびその変えた表現は、他の技術的特徴、添加物、構成成分またはステップを排除することを意図していない。当業者であれば、本発明の他の目的、利点および特徴は、本発明の説明と実際の使用の両方から推論することができる。以下の実施例および図面は、説明する方法として提供するものであり、本発明を限定することを意味していない。
【実施例】
【００６８】
本発明を、発明者らにより行った本発明の組成物および組成物の活性を示す試験で以下に説明する。
【００６９】
〔実施例１：本発明組成物中にある生物活性化合物の濃度測定〕
先ず、サフラン柱頭を、その品質に基づいて選び〔スペインのカスティーリャ−ラ・マンチャ（Ｃａｓｔｉｌｌａ−Ｌａ  Ｍａｎｃｈａ）の作物からのサフラン〕、７０℃以下の温度で水中で柔らかにし、攪拌した。次いで、７０℃を超えないで温度で完全濃縮を行い、粗乾燥抽出物を得た。これを、デキストリンで希釈してサフラナールとクロシン類の最低濃度を乾燥ベースでそれぞれ０．０３％と３．４８％とした。
【００７０】
このようにして得たサフラン抽出物の生物活性化合物の定量分析を、「ダイオード・アレイ（Ｄｉｏｄｅ  Ａｒｒａｙ）」検出器〔アジレント・テクノロジー（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ポロ・アルト（Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ）、カルホルニア州、アメリカ合衆国〕に連結した１２６０・インフィニティー・シリーズＨＰＬＣシステム（１２６０  Ｉｎｆｉｎｉｔｙ  Ｓｅｒｉｅｓ  ＨＰＬＣ  ｓｙｓｔｅｍ）で行った。クロマトグラフィー分離は、Ｃ１８カラム（２５０ｍｍ／４．６ｍｍ／５μｍ；ＡＣＥ−５ＰＦＰ、スコットランド）により、２５℃、移動相流速１ｍＬ／分で行った。移動相は、Ａ）水：アセトニトリル（８５：１５、ｖ／ｖ）、およびＢ）メタノール、で構成されて、６０分でメタノール１０％から１００％の直線勾配とした。本発明の抽出物のサンプルおよび参照標準の両方を、メタノール：水溶液（５０：５０、ｖ／ｖ）で希釈した。ピクロクロシン、サフラナールおよびクロシン類の溶出を、それぞれ２５０ｎｍ、３１０ｎｍ、および４４０ｎｍの吸光度値でモニターした（Ｃａｂａｌｌｅｒｏ−Ｏｒｔｅｇａら、２００７）。これら化合物の定量は、ピロクロシンについてはｐ−ニトロアニリン〔シグマ・アルドリッチ（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）、セントルイス、アメリカ合衆国〕の外部較正曲線によって、サフラナールについてはサフラナール〔シグマ・アルドリッチ（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）、セントルイス、アメリカ合衆国〕によって、種々のクロシン異性体についてはトランス−クロシン−４異性体〔フィトラボ（Ｐｈｙｔｏｌａｂ）、ハンブルグ、ドイツ〕によって行った。
【００７１】
図１は、上述のクロマトグラフィー条件における、本発明のサフラン抽出物の２５０ｎｍ、３１０ｎｍ、４４０ｎｍの波長で得たオーバーレイ表示のクロマトグラムを示している。２５０ｎｍでは、保持時間（ｒｔ）７．６分でピークが見られ、これはピクロクロシンに対応し、３１０ｎｍでは、保持時間（ｒｔ）３３．９分の別のピークが見られ、これはサフラナールに対応している。可視スペクトル領域である４４０ｎｍで記録されたクロマトグラムでは、種々のクロシン異性体があり、その最大ピークがトランス−クロシン−４異性体（２２．３分）に対応している。
【００７２】
各ピークを同定するために、本発明の抽出物中に見出された各分子の質量分析も行った。これを行うために、アジレント・シリーズ１１００システム〔ポロ・アルト（Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ）、カルホルニア、アメリカ合衆国〕を、ポジティブにもネガティブにも機能するエレクトロスプレーイオン化源（ＥＳＩ）を取付けた四重極質量分析計検出器〔ヒューレット−パッカー・シリーズ１１００ＭＳＤ（Ｈｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ，ｓｅｒｉｅｓ  １１００ＭＳＤ）〕に接続して使用した。質量範囲を５０から１５００ｕに、乾燥ガス流量を１０Ｌ／分に、乾燥ガス温度を３４０℃に、ネブライザー圧力を４０ｐｓｉｇに、気化器温度を１５０℃に、キャピラリー電圧を２０００Ｖに、チャージ電圧を２０００Ｖにした。
【００７３】
下記の表１は、本発明のサフラン抽出物で、４４０ｎｍで見出された主要クロシン異性体の個々の分析を、２５０ｎｍ（ピクロクロシンとケムフェロールジグルコシド）、および３１０ｎｍ（サフラナール）で見出だされた主要生物活性化合物と共に示している。
クロシン異性体の全てのＵＶ−ＶＩＳスペクトルは、共通して２５０ｎｍ、３１０ｎｍ、および４４０ｎｍの近くで最大値を有し、分析されたこれら主要な準イオンおよびフラグメントは、Ｌｅｃｈら（２００９）によってサフランの乾燥柱頭中に見出されたものに対応している。ここでは、ＥＳＩ＋モードが、これらカロテノイドのそれぞれ１つを決定する上で最も効果的であった。ピクロクロシンは２５１ｎｍで最大値を示し、サフラナールも３１３ｎｍで単一の最大値を示すが、ケムフェロールジグルコシドは、２６５ｎｍと３４６ｎｍで最大値をもつこのフラボノイドのスペクトル特性を有している。本発明のサフラン抽出物中に見出されたその他クロシン異性体は、表１に示すようにこのカロテノイドと同じスペクトル特性を示し、約２５７ｎｍ、３３０ｎｍおよび４４０ｎｍで最大値を有している。
【００７４】
トランス−クロシン−４とサフラナールを同定するために、市販で入手可能な参照標準も用い、これから溶液を調製し、本発明の目的であるＨＰＬＣで認定した抽出物に使用したと同じ条件で分析した。
【００７５】
【表１】
2019515919.tif 000002
【００７６】
「太字」の部分は、Ｌｅｃｈらによって行われた研究（２００９）と一致する準分子イオン（９９９．４；８３７．４；６７５．２；６３３．２；６０９．０；５１３．２；５１１．２；３５３．２ｍ／ｚ）またはイオンフラグメント（１５１．１；１２３．０ｍ／ｚ）に対応している。
【００７７】
サフラナールとクロシン類が気分改善に関連した活性物質であることにより、これらを、前記したＨＰＬＣ分析から得られたクロマトグラムに従い、サフラナールと種々のクロシン異性体の合計として、乾燥物質１００ｇあたりのグラム（ｇ）（％）で一緒に定量した。サフラノールとトランス−クロシン−４の市販参照物質をそれぞれ３１０ｎｍと４４０ｎｍで分析して得られた面積単位を、濃度（ｍｇ／Ｌ）と比較して表す較正曲線を使用して、これらを定量した。本発明のサフラン抽出物中のこれらの化合物の濃度は、抽出物中の湿分および使用した参照物質の純度を考慮して、式（１）を用いて計算した。
【００７８】
【数１】
2019515919.tif 000003
【００７９】
上記の式（１）で定量された活性物質の中で、クロシン類は主要な化合物である。サフラナールは、比較して少ない割合で見出されるが、その存在は、抑うつに関連した気分障害の抑止に所望の効果を得るためにサフラン抽出物において必須である。
【００８０】
〔実施例２：ＩＳＯ３６３２規格によるサフラナールで認定した市販サフラン抽出物のＨＰＬＣ分析〕
５つの市販サフラン抽出物をＨＰＬＣで分析した。サンプルは全て、ＩＳＯ３６３２による方法でサフラノールを２重量％含有していた。ＨＰＬＣ分析は、本発明のサフラン抽出物に対する実施例１と同じ方法で行った（表２）。
【００８１】
【表２】
2019515919.tif 000004
【００８２】
表２に見られるように、全サンプルは、ＩＳＯ３６３２によるサフラノールの乾燥重量２％で標準化されているが、クロマトグラフィー分析では、サフラノール含有量がこの値よりかなり低く、分析された抽出物の１つ（サンプルＣ）には、この活性物質が全くないことが示された。さらに、全てのサンプルがＩＳＯ３６３２規格によってサフラナール２％に標準化されたにも拘わらず、クロシン濃度は大きく変動している。
【００８３】
これらのデータは、サフラン抽出物中の活性物質を評価するためには、さらに上記したＨＰＬＣ方法のような特別の定量分析を行う必要性があることを示している。
【００８４】
〔実施例３：臨床試験〕
別の好ましい様式で、抑うつに関連した気分障害を抑止するに効果がある本発明の抽出物中にある活性物質の有効投与量を決める目的で、平行したプラセボ対照の二重−盲目臨床試験を健康な参加者で行った。
【００８５】
〔方法〕
以下の例は、臨床試験で参加者が受けた錠剤の組成物を記載している。表３に見られるように、新しいサフラン抽出物を一方が２８ｍｇ／日、他方が２２ｍｇ／日とした２つの投与量で２つの処置群、そしてプラセボ群の３つの処置群を試験のために作成した。
【００８６】
【表３】
2019515919.tif 000005
【００８７】
この試験では、健康な成人における、一般的な気分を改善し、ストレス、不安、疲労の感覚を軽減し、活力を高め、睡眠の質を向上させる本発明のサフラン抽出物の有効性を調べた。
【００８８】
臨床試験では、１２８名の個人（１８歳から７７歳の健康な男女、自己診断の後に医師による確認、気分は落ち込んでいるが抑うつではない）の参加を得て、１ヶ月間の処置で新しいサフラン抽出物の効果を試験した。参加者は、３つのグループに分け、表４に見られるように本発明のサフラン抽出物をそれぞれ２８ｍｇ／日、２２ｍｇ／日の投与量で、またはプラセボ処置で錠剤形体にして与えた。被験者はそれぞれ、医師から１日２錠（昼食時に１錠、夕食時にもう１錠）を４週間服用するように正確な指示を受けた。
【００８９】
【表４】
2019515919.tif 000006
【００９０】
この試験は、クイーンズランド臨床研究倫理委員会（ｔｈｅ  Ｑｕｅｅｎｓｌａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｅｔｈｉｃｓ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）によって改訂、承認され、オーストラリアニュージーランド臨床試験登録（Ａｕｓｔｒａｌｉａｎ  Ｎｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌｓ  Ｒｅｇｉｓｔｒｙ）に登録され（承認番号：ＨＲＥＣ２０１４００２）、オーストラリア国立保健医療研究審議会（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｕｎｃｉｌ；  Ａｕｓｔｒａｌｉａ）の現行規約で保護されている。参加者は、本臨床試験の倫理委員会によって承認された包含基準および除外基準に従って医師によって評価された。
【００９１】
医師との最初のインタビューで、ＭＤＤ（大きな抑うつ障害）、双極性障害またはベック抑うつ質問票（Ｂｅｃｋ  Ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｉｎｖｅｎｔｏｒｙ）（Ｂｅｃｋら，１９８８）でポジティブな結果となるような他のタイプの障害などの気分障害ありと診断された人は除外した。通常の夜間睡眠を取ることができない不眠症の人や夜間勤務をしている人、あるいは気分変化および／またはこの試験期間中の結果を覆い隠す可能性がある痛みを伴う重度の月経前症候群の人、さらに、なんらかの神経障害がある人、あるいはセイヨウオトギリソウ（セントジョンズワート：Ｓｔ．Ｊｏｈｎ’ｓ  ｗｏｒｔ）、トリプトファン、Ｓ−アデノシルメチオニン、５−ヒドロキシトリプトファン、メラトニン、及びγ−アミノ酪酸などの気分に影響する可能性があるハーブを含む栄養補助食品を摂取している人は除外した。また、サフランサプリメントを取っていた人や、自分自身のダイエットでサフランやサフラン含有食品を排除できない人も除外した。さらに、医薬品または栄養補助食品、食品に対してなんらかの過敏性兆候を示した人、あるいは、ヘパリン、ワーファリン、ダルテパリン、エノキサパリンまたは他の同様の抗凝固薬治療を受けている人、高血圧症と診断された人、あるいは抗高血圧薬治療を受けている人、あるいは腎臓または肝不全、または他のタイプの病気、アルコール問題または薬物使用で治療を受けている人は除外した。また、過去３０日間に別の臨床試験に参加している、または参加した個人も除外した。
【００９２】
除外基準に該当しない潜在的参加者１３７人の分析した後、年齢が１８〜７７歳の間で健康な成人１２８人をランダムに指定し、３つのグループに分けた。７人の参加者が試験を辞退して、試験は、積極的な参加者１２１名、２８ｍｇ／日（ｎ＝４１）、２２ｍｇ／日（ｎ＝４２）、プラセボ（ｎ＝３８）で試験段階を終わった。
【００９３】
本発明のサフラン抽出物の効果は、医学文献および臨床心理学に広く記載されている以下の指標を用いて評価した：ＰＯＭＳ（気分プロフィール検査）、ＰＡＮＡＳ（ポジティブおよびネガティブ感情評価）およびＤＡＳＳ（抑うつ不安ストレス検査）。睡眠は、ＰＳＱＩ指数（Ｐｉｔｔｂｕｒｇｈ  Ｓｌｅｅｐ  Ｑｕａｌｉｔｙ  Ｉｎｄｅｘ）によって制御した。
【００９４】
ＰＯＭＳ（気分プロフィール検査：ＭｃＮａｉｒら）分析は、臨床試験で初期気分を評価するに使用した。これは、情緒（例えば、悲しい、怒り、幸せ）を記述する形容詞での６５項目で、それぞれ５点評価で行う。ここで、０＝全くなし、１＝少し、２＝適度に、３＝かなり、４＝極度に（逆に記録されたリラックスしている及び効果がある項目は除く）。参加者には、その瞬間にどのように感じるかを尋ね、その答えを６つの尺度に分類した；５ネガティブ（緊張、抑うつ、怒り、疲労および混乱）および１ポジティブ（活気）。参加者それぞれについて、「全気分障害」（ＴＭＤ：緊張＋抑うつ＋怒り＋疲労＋混乱−活気を含む）を計算し、個人の気分の一般的ビジョンを表現した。各群内のスコア分散を減らす目的で、各尺度について試験の開始（ベースライン）から第４週までのスコア変化を計算した（Ｄａｖｉｄｓｏｎら、２００２；ＥｄｗａｒｄｓとＨａｙｔｈｏｒｎｔｈｗａｉｔｅ、２００４）。ＴＭＤについて処置中のスコア変化は、−２３２から２００の範囲であった（正の結果は抑うつの増加を示し、負の値は抑うつの減少を示している）
【００９５】
第２の方法として、ＰＡＮＡＳ（ＷａｔｓｏｎとＣｌａｒｋ、１９９４）を用いた。これは、２０項目；１０のポジティブ用語（例えば、興奮した、誇らしい、機敏な、・・・）と、１０のネガティブ用語（例えば、敵意を持った、イライラした、恐れた、など）を、ＰＯＭＳと同じ５点でスコアをつけた。参加者には、前週に比べてどのように感じたかを尋ね、その回答を２つの尺度（ポジティブ感情：ＰＡと、ネガティブ感情：ＮＡ）に分けた。ＰＡとＮＡのスコア変化の範囲は、−４０から４０であった。
【００９６】
別の二次分析方法は、抑うつ−不安−ストレス検査（Ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｎｘｉｅｔｙ  Ｓｔｒｅｓｓ  Ｓｔａｔｅｓ）、すなわちＤＡＳＳ−２１（Ｌｏｖｉｂｏｎｄ  とＬｏｖｉｂｏｎｄ，１９９５）で、これは、２１項目からなり、抑うつ、不安、ストレスに対応する３つの尺度に分けられる（それぞれ７つの自己報告項目をもつ）。参加者は、前週にどのように感じたかが尋ねられ、各項目を０から３；１＝時々；２＝しばしば；３＝ほぼ常に、でスコアをつけた。
【００９７】
ＰＳＱＩ、すなわちピッツバーグ睡眠の質指標（Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ  Ｓｌｅｅｐ  Ｑｕａｌｉｔｙ  Ｉｎｄｅｘ）（Ｂｕｙｓｓｅら、１９８９）は、１９の自己分類質問と、試験参加者と可能な時に何時でも頻繁かつ直接に接触した人が提示した５つの質問で睡眠の質を測定するようにデザインされている。
【００９８】
統計的分析は、ＳＰＳＳ−２３．０プログラムにより有意水準α＜０．０５で行った。
気分および睡眠に関連して試験したパラメーターそれぞれの種々のスコア変化を、臨床試験に加わった参加者それぞれについて計算した（Ｄａｖｉｄｓｏｎら、２００２；ＥｄｗａｒｄｓとＨａｙｔｈｏｒｎｔｈｗａｉｔｅ、２００４）。
【００９９】
〔結果〕
［ＰＯＭＳ］
図２は、３つの試験群（サフラン抽出物の投与量２８ｍｇ／日または２２ｍｇ／日での処置、およびプラセボ）で、処置期間中に分析された感情のそれぞれについて得られた結果を示している。ガブリエル・ポスト・ホック・テスト（Ｇａｂｒｉｅｌ’ｓ  Ｐｏｓｔ  Ｈｏｃ  Ｔｅｓｔ）では、本発明のサフラン抽出物２８ｍｇ／日で処置した群が、サフラン抽出物で処置した全てのＰＯＭＳの尺度でスコア変化があり有意な改善があった。
【０１００】
「緊張」の場合には、処置期間の最後に有意な改善が認められた。Ｆ（２．１１３）＝３．８２；ｐ＝０．０２５。ガブリエル・ポスト・ホック・テストは、サフラン抽出物を２８ｍｇ／日摂取した群は、プラセボ群よりも緊張が４倍弱かったことを示している（−１．０６から−４．００の改善、図２）。
「抑うつ」尺度でも、Ｆ（２．１１３）＝９．４６、ｐ＜０．００１、ω＝０．３６（大きな効果）で同じことが起こった。すなわち、サフラン抽出物２８ｍｇ／日で処置した群は、図２に見られるようにプラセボ群と比較して処置終了時に抑うつが６倍低下して有意に改善した（−１．３３から−８．４３の改善）。
【０１０１】
同じ傾向が、「怒り」尺度でＦ（２．１１２）＝４．３９、ｐ＝０．０１０、ω＝０．２６（中程度の効果）、「疲労」でＦ（２．１１３）＝４．９２、ｐ＝０．００９、ω＝０．２５（中程度の効果）、「混乱」でＦ（２．１１３）＝７．８１、ｐ＝０．００１、ω＝０．３２（中程度の効果）が見られた。サフラン抽出物２８ｍｇ／日での処置は、プラセボ群と比較して有意な５倍の減少：怒り（−１．１４から−５．０５へ）、疲労（−１．１１から−５．００へ）および混乱（−０．８３から−４．３５へ；図２）を示した。
【０１０２】
ＰＯＭＳの「活気」尺度は、Ｆ（２．１１２）＝５．２５、ｐ＝０．００７、ω＝０．２６（中程度の効果）の値を有する逆評点で有意な改善を示した。サフラン抽出物２８ｍｇ／日で処置したこの群は、処置終了時に「活気」が有意に増加し、プラセボ群と比較して活気評点で１０倍に改善した（−０．３９から＋４．００；図２）。
【０１０３】
図３は、本発明のサフラン抽出物で処置した月の間、試験群其々について、全気分障害（Ｔｏｔａｌ  Ｍｏｏｄ  Ｄｉｓｔｕｒｂａｎｃｅ）（ＴＭＤ）分析に対応する平均変化を示している；Ｆ（２．１１１）＝９．９４、ｐ＜０．００１、ω＝０．３７（大きな効果）。特に、サフラン抽出物２８ｍｇ／日で処置した群は、ＴＭＤレベルが、プラセボ群に比べて約６倍で有意に低下した（−５．３７から−３０．８３へ；図３）。
【０１０４】
［ＰＡＮＡＳ］
図４は、ＰＡＮＡＳ分析の平均変化値を示しており、有意ではないが、「ポジティブ感情（またはポジティブ気分）」と「ネガティブ感情（またはネガティブ気分）」の明確な傾向を示しており、本発明のサフラン抽出物を２２ｍｇ／日と２８ｍｇ／日の投与量で処置した群に、１ヶ月後、プラセボ群に比較して気分の改善あることを示している。
【０１０５】
分散分折（ＡＮＯＶＡ）は、試験群間で、ネガティブ感情に関連したスコアに有意な差異を示した；Ｆ（２．１１１）＝６．９７、ｐ＝０．００１、ω＝０．３１（中程度の効果）。サフラン抽出物２８ｍｇ／日で処置した群における「ネガティブ感情」の変化は、プラセボ群に比べて３倍有意に改善した（−２．４０から−６．６３に）；ｐ＝０．００１、ｄ＝−０．４２（中程度の効果、コーエン（Ｃｏｈｅｎ）の規則に従う）。
【０１０６】
［ＤＡＳＳ］
ＤＡＳＳ試験と共にＡＮＯＶＡ処置も行い、種々の処置群内で、尺度、すなわち、抑うつ、不安およびストレスに観察された変化を分析した。ＤＡＳＳの「抑うつ」尺度の特定ケースでのスコア変化は、Ｆ（２．１１８）＝１２．９６、ｐ＜０．００１、ω＝０．４１（大きな効果）で有意な効果が認められた。図５に見られるように、本発明のサフラン抽出物２８ｍｇ／日で処置した群は、プラセボ群に対して有意に改善され、抑うつ状態に関連した症状を４倍減少した（値が−１．４２から５．６１へ）。投与量依存の効果も観察され、サフラン抽出物２８ｍｇ／日で処置した参加者は、２２ｍｇ／日で処置した参加者と比較して有意な改善が得られ、抑うつに関連した症状を半減させた（値が−２．８７から−５．６１へ）。
【０１０７】
「不安」尺度についても、この処置は有意な改善を示し、Ｆ（２．１１８）＝４．３３、ｐ＝０．０１、ω＝０．２３（中程度の効果）。ガブリエル・ポスト・ホック・テストによれば、サフラン抽出物２８ｍｇ／日で処置した群では、不安が、１ヵ月後にプラセボ群と比較して約３倍有意に減少した（−１．２３から３．２２への改善；図５）。
【０１０８】
ＤＡＳＳの「ストレス」尺度の場合には、サフラン抽出物で処置した後に有意な変化が観察された：Ｆ（２．１１８）＝１４．２９、ｐ＜０．００１、ω＝０．４２（大きな効果）。抽出物２８ｍｇ／日で処置した群は、調査した他の群と比べてストレス状態が有意に改善された。特に、処置終了時でのストレス徴候は、２２ｍｇ／日で処置した群（−３．１１から−６．１２へ減少）およびプラセボ群（−１．４９から−６．１２へ減少）群と比較して、夫々２倍および４倍減少した。
【０１０９】
「気分」成分における処置の効果と同様に、本発明のサフラン抽出物の効果は、ピッツバーグ指数（ＰＳＱＩ）で評価した「睡眠」の質に対応する成分においても顕著であった。全ＰＳＱＩのスコア変化に関してＡＮＯＶＡ統計分析を行ったところ、２８ｍｇ／日で処置した群の睡眠は、プラセボ群と比較して全ＰＳＱＩスコア変化で顕著な改善が観察された；Ｆ（２．１０６）＝４．２７、ｐ＝０．０１６。
【０１１０】
〔結論〕
臨床試験で得られた結果は、健常人で実施された最初の試験であるので科学文献を拡げるものである。さらに、産業規模でＨＰＬＣにより分析して得られた本発明のサフラン抽出物は、有機体に二次的影響または望ましくない影響を及ぼさないが、処置の最後で気分を分析するために行った全ての心理学的調査（ＰＯＭＳ−ＴＭＤ、ＰＡＮＡＳ、ＤＡＳＳおよびＰＳＱＩ）で有意なポジティブ効果が観測された。
【０１１１】
投与量に関して、調査した２つの濃度間に明確な投与量依存の関係を観察することができ、これは、この調査は、臨床的に適切で、かつ実験的に正当化された投与スケジュールであることを特定する最初の１つであることを意味する。本特許明細書の目的であるサフラン抽出物の気分に対する効果は、男女に一貫しており、効果発現または安全性パラメーターに悪い影響を及ぼすことなく行われた。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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