(57)【要約】  本発明は、ゼデロンを安定して含む組成物を提供する。  より詳しくは、ゼデロンと、美白剤、キレート剤、抗酸化剤、ポリフェノール、植物抽出液、防腐剤、ビタミン、紫外線吸収剤、１,２−オクタンジオール及び２−エチルヘキシルグリセリルエーテルよりなる群から選択される一種又は二種以上の成分と、所望によりそれらの成分の溶解を補助する溶媒とを含む組成物、ならびに美白用の皮膚外用剤である組成物を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離したゼデロンと、美白剤、キレート剤、抗酸化剤、ポリフェノール、植物抽出液、防腐剤、ビタミン、紫外線吸収剤、１,２−オクタンジオール及び２−エチルヘキシルグリセリルエーテルよりなる群から選択される一種又は二種以上の成分とを含む組成物。
【請求項２】
単離したゼデロンと、テトラ２−ヘキシルデカン酸アスコルビル、コウジ酸、アルブチン及びリン酸アスコビルマグネシウムよりなる群から選択される一種又は二種以上の美白剤；ヒノキチオール、酒石酸、クエン酸、エデト酸二ナトリウム、トリポリリン酸及びヘキサメタリン酸よりなる群から選択される一種又は二種以上のキレート剤；ｄ−δ−トコフェロール、フェルラ酸、α−リポ酸、チオタウリン、システイン及びグルタチオンよりなる群から選択される一種又は二種以上の抗酸化剤；没食子酸及びレスベラトロールよりなる群から選択される一種又は二種以上のポリフェノール；ヒマワリ種子エキス、イタドリ根エキス、サキシマボタンヅルエキス及びバラ花エキスよりなる群から選択される一種又は二種以上の植物抽出液；グルコン酸クロルヘキシジン、２−フェノキシエタノール、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル、イソプロピルメチルフェノール、安息香酸及びサリチル酸よりなる群から選択される一種又は二種以上の防腐剤；塩酸ピリドキシン、ニコチン酸アミド、チアミン塩酸塩及びニコチン酸よりなる群から選択される一種又は二種以上のビタミン類；２,４,６−トリス[４−（２−エチルヘキシルオキシカルボニル）アニリノ]−１,３,５−トリアジン、２−シアノ−３,３−ジフェニルプロパ−２−エン酸２−エチルヘキシルエステル、ジエチルアミノヒドロキシベンゾイル安息香酸ヘキシル及びパラメトキシケイ皮酸２−エチルヘキシルよりなる群から選択される一種又は二種以上の紫外線吸収剤、ならびに、１,２−オクタンジオール及び２−エチルヘキシルグリセリルエーテル、よりなる群から選択される一種又は二種以上の成分とを含む請求項１記載の組成物。
【請求項３】
約0.000001〜1.0質量％の単離したゼデロンを含む請求項１または２記載の組成物。
【請求項４】
約0.001〜0.1質量％の単離したゼデロンを含む請求項３記載の組成物。
【請求項５】
単離したゼデロンがガジュツ（Curcuma zedoaria）から単離したものである請求項１ないし４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
美白用の皮膚外用剤である請求項１ないし５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
約0.05〜0.2質量％の単離したゼデロンを含む組成物であって、遮光下40℃にて2ヶ月保存後のゼデロンの残存量が4℃にて2ヶ月保存後の残存量に対して約88％以上である請求項１ないし６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
約0.05〜0.2質量％の単離したゼデロンを含む組成物であって、遮光下60℃にて1ヶ月保存後のゼデロンの残存量が4℃にて1ヶ月保存後の残存量に対して約89％以上である請求項１ないし７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
約0.05〜0.2質量％の単離したゼデロンを含む組成物であって、遮光下40℃にて2ヶ月保存後のゼデロンの残存量が4℃にて2ヶ月保存後の残存量に対して約92％以上である請求項１ないし８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０】
約0.05〜0.2質量％の単離したゼデロンを含む組成物であって、遮光下60℃にて1ヶ月保存後のゼデロンの残存量が4℃にて1ヶ月保存後の残存量に対して約93％以上である請求項１ないし９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１】
約0.05〜0.2質量％の単離したゼデロンを含む組成物であって、遮光下、室温にて1年保存後のゼデロンの残存量が4℃にて1年保存後の残存量に対して約88％以上である請求項１ないし１０のいずれか１項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はゼデロンを安定して含む組成物、詳細にはゼデロンを安定して含む美白用の皮膚外用剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来から、皮膚の色黒やシミ、ソバカス等を改善する各種の美白用外用剤が提供されてきた。美白剤の有効成分として配合される美白成分として、アルブチンやコウジ酸、アスコルビン酸及びこれらの誘導体、グルタチオン、コロイドイオウなどが周知の物質として用いられており、近年では、４−ＭＳＫ（４−メトキシサリチル酸カリウム塩）やルシノール（登録商標）、マグノリグナン（登録商標）、エラグ酸やリノール酸などが市販の美白用外用剤の有効成分として用いられている。【０００３】
本出願人は、これら従来の美白剤の有効成分よりも美白効果に優れた成分が、ガジュツ（我朮、Curcuma zedoaria Roscoe (Zingiberaceae)：別名紫ウコン）に含まれるゼデロンなどであることを明かにし、ガジュツから精製したゼデロンなどを有効成分として含む組成物をすでに特許出願している（国際特許出願  PCT／JP2009／070535）。【０００４】
しかしながら、ゼデロンは長期での保存安定性が悪く、製剤中では他の物質に変換されて美白効果が経時的に低下するということが明かになってきた。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は上記の背景技術に鑑みてなされたものであって、本発明の目的はゼデロンを安定して含む組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは上記の背景技術の下、鋭意努力したところ、ゼデロンと、特定の成分とを混合することによりゼデロンの安定性を高め得ることを見いだし、本願発明を完成するに至った。すなわち、本発明は【０００７】
［１］  単離したゼデロンと、美白剤、キレート剤、抗酸化剤、ポリフェノール、植物抽出液、防腐剤、ビタミン、紫外線吸収剤、１,２−オクタンジオール及び２−エチルヘキシルグリセリルエーテルよりなる群から選択される一種又は二種以上の成分とを含む組成物；
［２］  単離したゼデロンと、テトラ２−ヘキシルデカン酸アスコルビル、コウジ酸、アルブチン及びリン酸アスコビルマグネシウムよりなる群から選択される一種又は二種以上の美白剤；ヒノキチオール、酒石酸、クエン酸、エデト酸二ナトリウム、トリポリリン酸及びヘキサメタリン酸よりなる群から選択される一種又は二種以上のキレート剤；ｄ−δ−トコフェロール、フェルラ酸、α−リポ酸、チオタウリン、システイン及びグルタチオンよりなる群から選択される一種又は二種以上の抗酸化剤；没食子酸及びレスベラトロールよりなる群から選択される一種又は二種以上のポリフェノール；ヒマワリ種子エキス、イタドリ根エキス、サキシマボタンヅルエキス及びバラ花エキスよりなる群から選択される一種又は二種以上の植物抽出液；グルコン酸クロルヘキシジン、２−フェノキシエタノール、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル、イソプロピルメチルフェノール、安息香酸及びサリチル酸よりなる群から選択される一種又は二種以上の防腐剤；塩酸ピリドキシン、ニコチン酸アミド、チアミン塩酸塩及びニコチン酸よりなる群から選択される一種又は二種以上のビタミン類；２,４,６−トリス[４−（２−エチルヘキシルオキシカルボニル）アニリノ]−１,３,５−トリアジン、２−シアノ−３,３−ジフェニルプロパ−２−エン酸２−エチルヘキシルエステル、ジエチルアミノヒドロキシベンゾイル安息香酸ヘキシル及びパラメトキシケイ皮酸２−エチルヘキシルよりなる群から選択される一種又は二種以上の紫外線吸収剤、ならびに、１,２−オクタンジオール及び２−エチルヘキシルグリセリルエーテル、よりなる群から選択される一種又は二種以上の成分とを含む前記［１］記載の組成物；
［３］  約0.000001〜1.0質量％の単離したゼデロンを含む前記［１］または［２］記載の組成物；
［４］  約0.001〜0.1質量％の単離したゼデロンを含む前記［３］記載の組成物；
［５］  単離したゼデロンがガジュツ（Curcuma zedoaria）から単離したものである前記［１］ないし［４］のいずれか１に記載の組成物；
［６］  美白用の皮膚外用剤である前記［１］ないし［５］のいずれか１に記載の組成物；
［７］  約0.05〜0.2質量％の単離したゼデロンを含む組成物であって、遮光下40℃にて2ヶ月保存後のゼデロンの残存量が4℃にて2ヶ月保存後の残存量に対して約88％以上である前記［１］ないし［６］のいずれか１に記載の組成物；
［８］  約0.05〜0.2質量％の単離したゼデロンを含む組成物であって、遮光下60℃にて1ヶ月保存後のゼデロンの残存量が4℃にて1ヶ月保存後の残存量に対して約89％以上である前記［１］ないし［７］のいずれか１に記載の組成物；
［９］  約0.05〜0.2質量％の単離したゼデロンを含む組成物であって、遮光下40℃にて2ヶ月保存後のゼデロンの残存量が4℃にて2ヶ月保存後の残存量に対して約92％以上である前記［１］ないし［８］のいずれか１に記載の組成物；
［１０］  約0.05〜0.2質量％の単離したゼデロンを含む組成物であって、遮光下60℃にて1ヶ月保存後のゼデロンの残存量が4℃にて1ヶ月保存後の残存量に対して約93％以上である前記［１］ないし［９］のいずれか１に記載の組成物；及び
［１１］  約0.05〜0.2質量％の単離したゼデロンを含む組成物であって、遮光下、室温にて1年保存後のゼデロンの残存量が4℃にて1年保存後の残存量に対して約88％以上である前記［１］ないし［１０］のいずれか１に記載の組成物
を提供するものである。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によると、高い美白効果を発揮するゼデロンを長期間にわたって安定して製剤系に配合することができる。したがって、本発明によると極めて高い美白効果を安定的に発揮する美白用の皮膚外用剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】ガジュツエキス末（Ａ)から液々分配による分画を示すフロー図である。
【図２】ガジュツエキス末（Ａ)の液々分配物によるメラニン生成抑制効果を示す写真であって、（ａ）はコントロール、（ｂ）はアルブチン、（ｃ）はガジュツエキス末（Ａ）、（ｄ）はヘキサン画分（Ｂ）、（ｅ）は酢酸エチル画分（Ｃ）、（ｆ）は水画分（Ｄ）の結果である。
【図３】分取薄層クロマトグラフィーによるクロマトグラムである。
【図４】分取薄層クロマトグラフィーにより得られた各画分のクロマトグラムである。
【図５】分取薄層クロマトグラフィーにより得られた画分のメラニン生成抑制効果を示す写真であって、（ａ）はコントロール、（ｂ）はアルブチン、（ｃ）はガジュツエキス末（Ａ）、（ｄ）はヘキサン画分（Ｂ）、（ｅ）は試料Ｂ−１（バンドＳ１）、（ｆ）は試料Ｂ−２（バンドＳ２）、（ｇ）は試料Ｂ−３（バンドＳ３〜Ｓ５）、（ｈ）は試料Ｂ−４（バンドＳ６〜Ｓ８）の結果である。
【図６】精製されたメラニン生成抑制物質（ゼデロン）の紫外部吸収スペクトルである。
【図７】精製されたメラニン生成抑制物質（ゼデロン）のＩＲによるチャートである。
【図８】精製されたメラニン生成抑制物質（ゼデロン）のマススペクトルである。
【図９】精製されたメラニン生成抑制物質（ゼデロン）の1Ｈ−ＮＭＲスペクトルである。
【図１０】精製されたメラニン生成抑制物質（ゼデロン）の13Ｃ−ＮＭＲスペクトルである。
【図１１】ガジュツエキス末（Ａ)のヘキサン−酢酸エチル（８：２）溶出画分のＨＰＬＣチャートである。
【図１２】製造例１の製造物によるメラニン生成抑制効果を示す写真であって、（ａ）はコントロール、（ｂ）はアルブチン、（ｃ）はガジュツエキス末（Ａ）、（ｄ）は製造例１の結果である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明は、第１の態様において、単離したゼデロンと、美白剤、キレート剤、抗酸化剤、ポリフェノール、植物抽出液、防腐剤、ビタミン、紫外線吸収剤、１,２−オクタンジオール及び２−エチルヘキシルグリセリルエーテルよりなる群から選択される一種又は二種以上の成分とを含む組成物を提供する。
本発明の組成物に有効成分として用いるゼデロンは、式（１）：【００１１】
【化１】
2011158331.tif 000002
で表される。【００１２】
このゼデロンは、ガジュツ（Curcuma zedoaria Roscoe (Zingiberaceae)：別名紫ウコン）の根や茎、葉などの各部位又は全草、好ましくはその根茎から各種有機溶媒にて抽出され、活性炭、スチレン−ジビニルベンゼン系合成吸着剤（例えば、三菱化成社製：ＨＰ−２０）、オクタデシルシリル化シリカゲルやシリカゲルを用いて精製を行うことによって得ることができる。このとき、抽出溶媒としては、水やメタノール、エタノールなどの炭素数１〜４程度の低級アルコール又はそれらの水溶液、アセトンやメチルエチルケトンなどのケトン類、酢酸メチルや酢酸エチル、酢酸ブチルなどのエステル類、ｎ−ペンタンやｎ−ヘキサン、シクロヘキサン、ベンゼン又はトルエンなど直鎖、分岐を問わず各種の飽和、不飽和炭化水素などより選択される一種又は二種以上の溶媒を用いることができる。そして、これら溶媒を適宜使い分け、例えば、植物からの抽出には非極性溶媒よりは極性溶媒を用いるのが好ましく、その後、極性を低めることにより分画することができる。【００１３】
より詳細には、本発明の組成物に用いるゼデロンは、
（１）ガジュツ（Curcuma zedoaria）の乾燥物を溶媒に浸漬してガジュツ抽出液を調製し、
（２）ガジュツ抽出液の溶媒を減圧下にて留去し、
（３）生成した結晶分を少量の溶媒で洗浄し、ついで
（４）得られた結晶分を溶媒から再結晶化する
工程を含む製造方法により得ることができる。【００１４】
また、本発明の組成物に用いるゼデロンは、
（１）ガジュツの乾燥物を溶媒に浸漬してガジュツ抽出液を調製し、
（２）ガジュツ抽出液の溶媒を減圧下にて留去し、
（３）得られた乾固物を溶媒に溶解して、シリカゲルを充填剤とするカラムクロマトグラフィーによる分画を行い、ついで
（４）画分の溶媒留去物を溶媒から結晶化する
工程を含む製造方法により得ることができる。【００１５】
好ましい形態において、ガジュツ抽出液の調製は、約１：５０〜約１：３（容量比）、好ましくは約１：１０〜約１：４（容量比）のガジュツ乾燥物：溶媒の浴比で、約１０℃ないし抽出溶媒の沸点まで、好ましくは室温ないし溶媒の沸点より約１０℃低い温度にて約２時間〜約１４日間、好ましくは約７日間、攪拌、ソックスレー抽出又は静置して行う。【００１６】
好ましい形態において、抽出、吸着、液々分配、結晶化、クロマトグラフィーの移動相などの操作に用いる溶媒は、水、メタノール、エタノール、３０〜９５％（v/v）のメタノール水溶液若しくはエタノール水溶液、ヘキサン又は酢酸エチルであり、これらの溶媒は一種又は二種以上を混合して用いることもできる。【００１７】
好ましい形態において、クロマトグラフィーの条件は以下のとおりである。
カラム：Chemcobond  5-ODS-W（6.0×150（6A））（株式会社ケムコ社）
移動相：75%（v/v）メタノール水溶液
カラム温度：55℃
流速：1.0mL／min
注入量：10μL
モニター：UV  280nm  吸光度【００１８】
好ましい形態において、本発明の組成物に含まれるゼデロンは、
（１）ガジュツの根茎乾燥物を酢酸エチルに浸漬して室温下で放置して抽出し、
（２）抽出液をフィルター（ADVANTEC No.131）にて濾過し、濾液を減圧下にて溶媒を留去し、
（３）乾固物を移動相をヘキサンと酢酸エチルの混液（容量比７：３）を用いて、シリカゲルを充填剤とするカラムクロマトグラフィー（上記分析条件と同じ）に付して波長210nmによる紫外部吸収を指標として分画を行い、
（４）吸収が認められた画分を収集して減圧下にて溶媒を留去し、ついで
（５）留去物をヘキサンを用いて再結晶してゼデロンを得る
工程を含む製法により得ることができる。【００１９】
もっとも、本発明の組成物に用いるゼデロンは、単一の純粋な成分にまで精製する必要はなく、下記実施例において述べるように、各種の溶媒を用いた抽出、吸着、液々分配、結晶化、クロマトグラフィー分画などの操作によって比較的高濃度の、例えば、６０％（w/w）以上、６５％以上、７０％以上、７５％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは８５％以上、さらにより好ましくは９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上、最も好ましくは９９.５％以上の純度の成分を含む粗精製物として入手することも可能である。【００２０】
また、このゼデロンは、本明細書中に記載する方法により得られるもののほか、市販されているものを用いることも可能である。【００２１】
本発明の組成物に有効成分として含まれるゼデロンは、メラニン生成抑制効果が高いとされているアルブチンに比べて、約４００倍の作用、つまりアルブチンの使用量の約１／４００の使用量で同等のメラニン生成抑制作用を示す（国際特許出願  PCT／JP2009／070535）。【００２２】
本発明の組成物には、ゼデロンを組成物全体に対して約０.０００００１〜１.０質量％、好ましくは約０.００００１〜０.５質量％、最も好ましくは約０.０００１〜０.１質量％含ませることができる。組成物におけるゼデロンの量が約０.０００００１質量％未満の場合は有効な美白効果を発揮することができず、一方１.０質量％を超えて含ませてもそれ以上の効果を得ることができない。
なお、ガジュツからのゼデロンの抽出効率が最もよかった７０％（v/v）エタノール水溶液抽出物をＨＰＬＣ分析した結果（示さず）に基づくと、ガジュツ中にはその乾燥物に対して約０.３％のゼデロンが含まれると考えられる。化粧品原料に用いることができるガジュツ抽出エキスは水抽出物やエタノール抽出物、水／エタノール混液による抽出物である。これらの抽出物においては、原植物乾燥物１ｋｇから少なくとも約２５ｇの抽出乾燥物（ガジュツ乾燥エキス）が得られる。そうすると、化粧料中に配合されるガジュツエキス（乾燥物に換算して）中には約１０質量％程度のゼデロンしか含まれない。匂いや着色を考慮するとガジュツエキスの配合量は乾燥物に換算して化粧料中に概ね０.０１質量％、多くとも約０.０５％質量以下である。従って、これまでの公知である化粧料中のゼデロン含有量は多く見積もっても約０.００５質量％程度である。そこで、本発明の美白用の皮膚外用剤においては約０.００５質量％以上のゼデロン、さらに好ましくは約０.０１質量％以上のゼデロンを配合するのが好ましい。これにより従来の美白化粧料にはない美白効果を発揮することができる。【００２３】
本発明の組成物において、前記したゼデロンの安定性を維持する成分には、美白剤、キレート剤、抗酸化剤、ポリフェノール、植物抽出液、防腐剤、ビタミン類、紫外線吸収剤、１,２−オクタンジオール及び２−エチルヘキシルグリセリルエーテルが含まれる。
好ましい美白剤には、テトラ２−ヘキシルデカン酸アスコビル、コウジ酸、アルブチン及びリン酸アスコビルマグネシウムが含まれ、より好ましくはコウジ酸及びアルブチンであり、最も好ましくはコウジ酸である。
好ましいキレート剤には、ヒノキチオール、酒石酸、クエン酸、エデト酸二ナトリウム、トリポリリン酸及びヘキサメタリン酸が含まれ、より好ましくはヒノキチオール、クエン酸、トリポリリン酸及びエデト酸二ナトリウムであり、最も好ましくはヒノキチオールである。
好ましい抗酸化剤には、ｄ−δ−トコフェロール、フェルラ酸、α−リポ酸、チオタウリン、システイン及びグルタチオンが含まれ、より好ましくはフェルラ酸、α−リポ酸及びチオタウリンであり、最も好ましくはチオタウリンである。
好ましいポリフェノールには、没食子酸及びレスベラトロールが含まれ、より好ましくは没食子酸である。
好ましい植物抽出液には、ヒマワリ種子エキス、イタドリ根エキス、サキシマボタンヅルエキス及びバラ花エキスが含まれ、より好ましくはヒマワリ種子エキス、イタドリ根エキス及びバラ花エキスであり、最も好ましくはイタドリ根エキスである。
好ましい防腐剤には、グルコン酸クロルヘキシジン、２−フェノキシエタノール、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル、イソプロピルメチルフェノール、安息香酸及びサリチル酸が含まれ、より好ましくは２−フェノキシエタノール、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル及びイソプロピルメチルフェノールであり、最も好ましくは２−フェノキシエタノールである。
好ましいビタミン類には、塩酸ピリドキシン、ニコチン酸アミド、チアミン塩酸塩及びニコチン酸が含まれ、より好ましくは塩酸ピリドキシン及びニコチン酸であり、最も好ましくは塩酸ピリドキシンである。
好ましい紫外線吸収剤には、２,４,６−トリス[４−（２−エチルヘキシルオキシカルボニル）アニリノ]−１,３,５−トリアジン、２−シアノ−３,３−ジフェニルプロパ−２−エン酸２−エチルヘキシルエステル、ジエチルアミノヒドロキシベンゾイル安息香酸ヘキシル及びパラメトキシケイ皮酸２−エチルヘキシルが含まれ、より好ましくは２,４,６−トリス[４−（２−エチルヘキシルオキシカルボニル）アニリノ]−１,３,５−トリアジン及びパラメトキシケイ皮酸２−エチルヘキシルであり、最も好ましくは２,４,６−トリス[４−（２−エチルヘキシルオキシカルボニル）アニリノ]−１,３,５−トリアジンである。【００２４】
本発明の組成物には、これらの安定性を維持する成分を単独又は組み合わせて組成物全体に対して約０.００５〜１０.０質量％、好ましくは約０.０１〜５.０質量％、最も好ましくは約０.０５〜１.０質量％含ませることができる。組成物におけるこれらの成分の量が約０.００５質量％未満の場合はゼデロンの安定性を維持することができず、一方１０.０質量％を超えて含ませてもそれ以上の維持効果を得ることができない。【００２５】
また、本発明の組成物には、前記したゼデロン及びゼデロンの安定性を維持する成分に加えて、両成分の溶解を補助する成分として所望により溶媒を用いることができる。用いることができる溶媒は、化粧料や外用医薬に配合して用いられ、かつ、前記したゼデロンと前記した成分を溶解し得るものであれば限定されるものではないが、例えば、水、エタノール、１,３−ブチレングリコール、プロピレングリコール（１,２−プロパンジオール）、１,３−プロパンジオール、ジプロピレングリコール、エトキシジグリコール、メトキシエタノールなどの極性溶媒及びそれらの混液が含まれ、好ましくは水、エタノール、エタノール水溶液、１,３−ブチレングリコール、１,３−ブチレングリコール水溶液であり、最も好ましくはエタノール水溶液である。これらの溶媒は単独又は組み合わせて組成物全体に対して約０〜９９.９質量％、好ましくは約０〜７０.０質量％、最も好ましくは約０〜５０.０質量％含ませることができる。【００２６】
本発明の組成物は、ゼデロン又は安定性を維持する成分のいずれか一方を溶媒に溶解した後に、他方の成分をその溶液に溶解して調製することができる。【００２７】
本発明は、第２の態様において、前記したゼデロンと、その安定性を維持する成分とを含む組成物を含む美白用の皮膚外用剤を提供する。
本発明の皮膚外用剤は、通例、前記した本発明の組成物を各種の化粧料用基剤や外用医薬用基剤に配合して用いられ、例えば、クリーム、乳液、化粧水、パック剤、洗顔料などの各種基礎化粧料、ファンデーション、ほほ紅、白粉などの各種メーキャップ化粧料、洗髪料、養毛剤、シャンプー、リンスなどの各種頭髪用化粧料及び石鹸、美爪料、オーデコロンなどのその他化粧料並びに皮膚に適用される医薬部外品及び医療用外用剤などを包含する皮膚外用剤として提供される。【００２８】
当該化粧料用基剤や外用医薬用基剤としては、例えば、液状、固体状を問わず、油脂やロウ、炭化水素油、高級脂肪酸、エステル油、シリコーン油などの各種の油性原料、水、アルコール、多価アルコールが含まれる。また、前記化粧料や医療用外用剤などには、前記基剤の他に、アニオン界面活性剤、カチオン界面活性剤、両性界面活性剤、非イオン界面活性剤、ｐＨ調整剤、各種水溶性高分子、増粘剤、紫外線吸収剤、金属イオン封鎖剤（キレート剤）、糖類、アミノ酸、有機アミン、高分子エマルジョン、ビタミン類、酸化防止剤、酸化防止助剤、保湿剤、抗炎症剤、抗菌剤、細胞賦活剤、香料、顔料や色素などの着色剤、防腐剤など、本発明の組成物に必須の成分以外の添加剤を配合することができる。【００２９】
本発明の皮膚外用剤は、化粧料や医療用外用剤などとしての剤型も特に制限されるものではなく、例えば液状やエマルジョン、軟膏、ゾル、ゲル、パウダー、スプレーなどの剤型が例示される。このような化粧料や医療用外用剤として用いることにより、美白効果を発揮することができる。【００３０】
本発明の皮膚外用剤には、各剤型に応じて美白効果を発揮する有効量のゼデロン、その安定性を維持する成分及び溶媒が配合される。【００３１】
本発明の皮膚外用剤におけるゼデロンの配合量は、皮膚外用剤全体に対して約０.０００００１〜１.０質量％、好ましくは約０.００００１〜０.５質量％であり、最も好ましくは約０.０００１〜０.１質量％である。皮膚外用剤におけるゼデロンの量が約０.０００００１質量％未満の場合は有効な美白効果を発揮することができず、一方、約１.０質量％を超えて配合してもそれ以上の効果を得ることができない。【００３２】
また、本発明の皮膚外用剤におけるゼデロンの安定性を維持する成分の配合量は、単独又は組み合わせて皮膚外用剤全体に対して約０.００５〜１０.０質量％、好ましくは約０.０１〜５.０質量％、最も好ましくは約０.０５〜１.０質量％である。皮膚外用剤におけるこれらの成分の量が約０.００５質量％未満の場合はゼデロンの安定性を維持することができず、一方、約１０.０質量％を超えて含ませてもそれ以上の維持効果を得ることができない。【００３３】
また、本発明の皮膚外用剤において所望により用いることができる溶媒の配合量は、単独又は組み合わせて皮膚外用剤全体に対して約０〜９９.９質量％、好ましくは約０〜５０.０質量％、最も好ましくは約０〜２０.０質量％である。【００３４】
本発明の皮膚外用剤は、上記基剤に天然物から単離されたゼデロン又は合成されたゼデロンを長期間にわたって安定して配合した皮膚外用剤であって、かかる天然物から単離されるゼデロンを含む天然物抽出物を含まないものである。つまり、ゼデロンを含む天然物抽出物を用いることなく、単離されたゼデロンを有効成分として配合して得られたこの皮膚外用剤は美白用剤として好ましく用いられる。もっとも、本発明は、単離又は合成されたゼデロンをメラニン生成抑制剤として使用することに特徴を有するものであって、ゼデロンのみを人為的に加えた皮膚外用剤又はゼデロンが含まれる天然物抽出物に加えてさらに単離又は合成されたゼデロンを人為的に配合した皮膚外用剤を使用することにより美白作用を発揮させることに技術的特徴を有する。【００３５】
次に、下記実施例に基づいて本発明についてさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例の内容に制限されるものではない。
【実施例１】
【００３６】
〔ガジュツからの抽出・分画精製〕
ガジュツからの本発明に係るメラニン生成抑制剤の抽出、精製に当たり、まず図１に示す方法により分画操作を行い、各分画について美白作用を調べた。美白作用は下記に示すようにメラニンの生成抑制作用を調べることによって行った。なお、ガジュツは新和物産株式会社より入手したものを用いた。【００３７】
３００ｇのガジュツ（Curcuma zedoaria Roscoe (Zingiberaceae)）の根茎乾燥物に５０％（v/v）エタノール水溶液１８００ｍＬを加え、室温で５日間放置した。その後、濾過して１６００ｍＬの抽出液を得た。抽出液を減圧濃縮し乾固物７.５ｇを得た（ガジュツエキス末（Ａ））。その乾固物１ｇを少量の５０％（v/v）エタノール水溶液に溶解した上で分液漏斗へ投入し、更に、水とヘキサン（容量比で１：１）を加えてよく振り混ぜ、静置する。下層の水層を取り出し、上層のヘキサン層を別のフラスコに分取した。取り出した水層を再び分液漏斗に戻し、水層とほぼ同容量のヘキサンを加え、同様の操作をさらに２回繰り返した。次いで、水層を再び、分液漏斗に戻し、水層とほぼ同容量の酢酸エチルを加えて分液操作を行った。上層の酢酸エチル層を集め、取り出した水層を再び分液漏斗に戻し、再び水層とほぼ同容量の酢酸エチルを加え、同様の操作をさらに２回繰り返した。集めたヘキサン層、酢酸エチル層及び残部の水層は減圧下、濃縮を行い、メラニン生成抑制試験の試料とした（試料（Ａ）〜（Ｄ））。【００３８】
（メラニン生成抑制試験）
メラニン生成抑制試験として、三次元培養皮膚モデルによる試験とその際に生成されたメラニン量及びタンパク量を指標にした試験を行った。
メラニン生成抑制試験は、市販されている三次元培養皮膚モデル（ＭＥＬ-３００キットＡｓｉａｎ  ｄｏｎｏｒ：クラボウ社)を用いて行った。キットの使用方法に従い、ＭＥＬ-３００皮膚モデルカップを６ウエルプレートの各ウエルにセットし、３７℃インキュベーターで温めたキット用維持培地（ＥＰＩ−１００：培地添加時にＳＣＦを最終濃度１０ｎｇ/ｍＬになるように添加した）を皮膚モデルカップに無菌的に５ｍＬずつ入れた。皮膚モデルカップの内部に直接的に各試料の溶液を１００μＬずつ加え、皮膚モデルカップの入った６ウエルプレートをインキュベーター（３７℃、５％ＣＯ２、加湿状態）に入れ、１４日間培養した。２日毎に新しい培地と培地交換を行い、交換の都度、各試料の溶液１００μＬを皮膚モデルカップに加えた。なお、各試料の溶液の調製には細胞培養用のＰＢＳ（−）を用いた。【００３９】
培養後、ＭＥＬ-３００皮膚モデルカップをＰＢＳ（−）で３回洗浄後、細胞部分を剥離して１.５ｍＬエッペンドルフチューブに入れ、０.５ｍＬの２ｍｏｌ/Ｌ−ＮａＯＨを添加し、室温下で一晩放置した。１５分間煮沸後、各サンプル２５０μＬを９６ウエルプレートに移し、405nmでメラニンを定量した。【００４０】
さらに、上記煮沸後のメラニン定量用サンプル４０μＬを９６ウエルプレートに移し、タンパク定量用のＢＣＡ試薬（商品名：タカラバイオ（株）社）２００μＬを各ウエルに入れて、３７℃で３０分間インキュベートした後、540nmの吸光度を測定した。【００４１】
また、コントロールとしてＰＢＳ（−）と、陽性対照としてアルブチン−ＰＢＳ（−）溶液（２.０％（w/v））を用いて同様の試験を行い、コントロールを１００としたときのメラニン量（相対比）及びタンパク量（相対比）を算出し、メラニン生成抑制度を調べた。その結果を表１に示す。また、そのときの三次元培養皮膚モデルの結果を示す写真を図２に示す。【００４２】
【表１】
2011158331.tif 000003
【００４３】
（ＴＬＣによる分画精製）
表１及び図２の結果から、図１の（Ｂ）に示されるヘキサン抽出画分が最も強いメラニン生成抑制度を示すことが分かった（図２の（ｄ））。そこで、この画分をさらに分取ＴＬＣ（分取薄層クロマトグラフィー）を用いて精製を進めた。【００４４】
ヘキサン抽出層から溶媒を留去した後、その濃縮物を少量のヘキサンに溶解し、分取用薄層プレート（シリカゲル６０・Ｆ２５４、メルク社、厚さ２ｍｍ）にて、ヘキサン及び酢酸エチルの混液（容量比７：３）を展開溶媒として分画を行った。検出は目視及び波長254／366nmのＵＶランプにより行った。その結果を図３に示す。図３に示すように、明確な３つのバンド（Ｓ１〜Ｓ３）とうっすらと観察された２つのバンド（Ｓ５、Ｓ７）並びに原点からテーリングした１つのバンド（Ｓ８）が観察された。そこで、図に示すように８つのバンド（バンドＳ１〜バンドＳ８）に分画した。分画された各バンド部分をかき取って酢酸エチルにて抽出した後、酢酸エチルを留去し、各分画成分を得た。【００４５】
次に上記分画成分について分画状況をＴＬＣにより確認した。各分画濃縮物の少量を再び少量のヘキサンに溶解した後、薄層プレート（シリカゲル６０・Ｆ２５４、厚さ０.２ｍｍ（メルク社））を用いて上記の展開溶媒による展開を行った。この結果を図４に示す。左側から順にバンドＳ１、Ｓ２、Ｓ３、・・Ｓ７、Ｓ８のヘキサン溶液をスポットしたレーンを示す。この結果、バンドＳ２では単一のスポットが検出された（ヨウ素による検出）。【００４６】
（メラニン生成抑制試験）
次に分画された試料についてメラニン生成抑制試験を行った。試験に際し、このＴＬＣの結果に基づいて、バンドＳ１、Ｓ２については各バンドをそれぞれ試料（試料Ｂ−１、試料Ｂ−２）として用い、バンドＳ３〜バンドＳ５、バンドＳ６〜Ｓ８については前記バンドをまとめたものをそれぞれ試料（試料Ｂ−３、試料Ｂ−４）として用いた。メラニン量及びタンパク量から求めたメラニン生成抑制度の結果を表２に示す。また、参考として、ガジュツエキス末（Ａ）及びヘキサン層の濃縮物（Ｂ）についても試験を行った。この結果、単一スポットが得られた試料Ｂ−２の画分が最も強いメラニン生成抑制度を示した。また、このときの三次元培養皮膚モデルの結果を示す写真を図５に示す。【００４７】
【表２】
2011158331.tif 000004
【００４８】
〔メラニン生成抑制物質の構造決定〕
表２に示すとおり、バンドＳ２の画分が最も強いメラニン生成抑制度を示し、また紫外部吸収による検出、ヨウ素による検出においても単一のスポットが確認できたので、この画分に存在するメラニン生成抑制物質の構造決定を行った。構造決定は、紫外部吸収スペクトルによる分析（溶媒：ヘキサン）、赤外吸収分析（ＩＲ）、質量分析、1Ｈ−ＮＭＲ（溶媒：CDCl3）及び13Ｃ−ＮＭＲ（溶媒：CDCl3）に基づき行った。その結果は次のとおりであり、各分析によるチャートを図６〜図１０に示す。また、ＮＭＲによる帰属を表３に示した。これらの結果から、生成されたメラニン生成抑制物質は、ゼデロンであると同定された。この物質のメラニン生成抑制度は、表２から理解されるように、これまで美白効果があるとされてきたアルブチンと対比して、アルブチン濃度の約１／４００の濃度でほぼ同等の効果を示し、その作用はアルブチンの約４００倍の強さがあると言える。【００４９】
性状：白色の結晶性固体
紫外部吸収：極大吸収波長（λmax）281nm
質量分析：246(m/e)
赤外吸収スペクトル（cm-1）:1662,1523,1427,1400,1232,1066,1020,929,881,863.【００５０】
【表３】
2011158331.tif 000005
【００５１】
【化２】
2011158331.tif 000006
【００５２】
〔安定性の確認〕
上記方法で得たゼデロン１００ｍｇを５０％（v/v）エタノール水溶液２００ｍＬに溶解した液を高温（６０℃）下で、また、この液に０.５ｍｏｌ／Ｌ−ＮａＯＨを加え終濃度０.１２５ｍｏｌ／Ｌ−ＮａＯＨとした液並びに０.５ｍｏｌ／Ｌ−ＨＣｌを加え終濃度０.１２５ｍｏｌ／Ｌ−ＨＣｌとした液を室温下で、それぞれ保存し、安定性の確認を行った。また、コントロールには同上のエタノール溶液を４℃で保管したものを使用した。安定性は、下記条件による高速液体クロマトグラフィーを行い、ピーク面積による百分率から残存率を求めることにより測定した。なお、アルカリ保存、酸保存したサンプル溶液はそれぞれ中和後に測定を行った。【００５３】
（分析条件）
カラム：Chemcobond  5-ODS-W（6.0×150（6A））（株式会社ケムコ社）
移動相：メタノール
カラム温度：55℃
流速：1.0mL／min
注入量：10μL
モニター：UV  280nm  吸光度【００５４】
その結果を表４に示した。アルブチンやエラグ酸などフェノール性の化合物はアルカリ域で褐変することはよく知られているが、ゼデロンに変化は認められなかった。また、酸性域では若干の低下が見られるもののアルカリ域及び高温条件下でも安定であることが判明し、ゼデロンは様々な物理的条件の組成物に配合することができ、また、様々な条件下で使用し得ることが明らかになった。【００５５】
【表４】
2011158331.tif 000007
【実施例２】
【００５６】
次に、下記製造法に従い本発明の組成物に有効成分として含まれるゼデロンを調製した。
〔製造例１〕ゼデロン
ガジュツ（Curcuma zedoaria）の根茎乾燥物１ｋｇをヘキサン６Ｌに浸漬し、室温下で７日間放置して抽出した。その抽出液をフィルター（ADVANTEC No.131）にて濾過し、濾液を減圧下にて溶媒を留去した後、冷暗所で放置した。生成してきた結晶分を分取し、これを少量のヘキサンで洗浄した。更に、得た結晶分をヘキサンで再結晶を行い、ゼデロン３００ｍｇ（純度約９５％）を得た。純度は、上記液体クロマトグラフィーの条件で操作して求めた。実施例１で得られたゼデロンを標準品として用い、検出波長220nmにおけるピーク高さ比からゼデロンの定量を行った（製造例２においても同じ）。【００５７】
〔製造例２〕ゼデロン
ガジュツの根茎乾燥物１ｋｇを酢酸エチル６Ｌに浸漬し、室温下で４日間放置して抽出した。その抽出液をフィルター（ADVANTEC No.131）にて濾過し、濾液を減圧下にて溶媒を留去した後、移動層をヘキサンと酢酸エチルの混液（容量比７：３）を用いて、シリカゲルを充填剤とするカラムクロマトグラフィー（上記分析条件と同じ）による精製を行った。分画はフラクションコレクターにより行い、各フラクション毎に測定した波長280nmによる紫外部吸収を指標として分画を行った。吸収が見られた画分の溶媒留去物をヘキサンを用いて再結晶し、白色結晶２２００ｍｇ（ゼデロン含量２０００ｍｇ）を得た。【００５８】
〔ヒト・メラノサイトを用いたメラニン生成抑制試験〕
（ヒト・メラノサイトの培養）
ヒト・メラノサイト（ＮＨＥＭ（Moderately）、クラボウ社）を、Medium254培地（成長因子ＨＭＧＳ−２含有）１０００μＬを入れた１２ウエルプレートに１ウエルあたり２.５×１０４個ずつ播き、翌日、培地に幹細胞増殖因子（ＳＣＦ、最終濃度１０ｎｇ／ｍＬ）、そして４時間後に被検試料を添加した。それを３７℃でインキュベートし、３日後に培地を交換して、ＳＣＦ（最終濃度１０ｎｇ／ｍＬ）を再添加後、４時間後に被検試料を添加し、３７℃にて７日間インキュベートした。その後、以下の方法に従ってメラニン量及びタンパク量を測定した。【００５９】
（メラニンの定量）
ウエル中の培地を取り除き、ＰＢＳ（−）５００μＬで細胞を３回洗浄した後にＰＢＳ（−）を完全に取り除いた。洗浄した細胞に２ｍｏｌ／Ｌ−ＮａＯＨ  ４００μＬを加えて細胞を溶解し、シェ−カーで３０分間振動させて細胞溶解物を調製した。各細胞溶解物を１.５ｍＬエッペンドルフチューブに移して１０分間沸騰湯で加熱し、Voltexミキサーで激しく攪拌した。その３５０μＬを９６ウエルに移し、405nmで吸光度を測定した。【００６０】
（タンパクの定量）
上記で得た細胞溶解物４０μＬをＢＣＡ溶液２００μＬと混合して、３７℃にて３０分間インキュベートした後、540nmで吸光度を測定した。【００６１】
〔製造例１〕で得られたゼデロンについて、上述したメラニン及びタンパクの定量を指標としたメラニン生成抑制試験を行った。各成分によるメラニン及びタンパク量を表５に示す。〔製造例１〕で得られたゼデロンは、薄層クロマトグラフィーにより単離されたゼデロンとほぼ同程度ないしそれを超えるメラニン生成抑制効果が認められた。【００６２】
【表５】
2011158331.tif 000008
【００６３】
ゼデロンは、美白効果を持つことで知られているアルブチンと比較して、細胞に対する毒性は弱く、極めて低い濃度で美白効果を示すことが確認された。【００６４】
また、上述した（メラニン生成抑制試験）と同様に、三次元皮膚培養モデルを用いて〔製造例１〕で得られたゼデロンについてメラニン生成抑制試験を行った。その結果を表６及び図１２に示す。〔製造例１〕で得られたゼデロンには、薄層クロマトグラフィーにより単離されたゼデロンとほぼ同程度のメラニン生成抑制効果が認められた。【００６５】
【表６】
2011158331.tif 000009
【実施例３】
【００６６】
〔官能評価試験〕
（被験者の選定）
健常肌を有する男性（２０〜５０歳）を６名選出した。【００６７】
（試料製剤）
（ｉ）アルブチン溶液（陽性対照；７質量％）
（ｉｉ）ゼデロン（２濃度；０.０１質量％、０.００２５質量％）
（ｉｉｉ）ガジュツエキス末（Ａ）（抽出乾燥物０.０５質量％）
（ｉｖ）有効成分−非含有
上記の合計５試料を用いて、８質量％の１,３−ブチレングリコール、５質量％のグリセリン、０.３質量％のポリオキシエチレンヤシ油脂肪酸ソルビタン（20E.O.）、０.２質量％のパラベン及び残余量の精製水と共に、自体公知の方法によって化粧水を調製し、試料製剤とした。【００６８】
（ヒトへの紫外線照射）
被験者６名の腹部皮膚に、紫外線照射部位（１.５×１.５ｃｍ）を設定し、最小紅斑量の１.５倍の中波長領域紫外線（デルマレイＭ−ＤＭＲ  ８０型、東芝医療用品）を照射した。照射日より、試料製剤を１日の朝夜に各１回ずつ４週間毎日の塗布を行った。紫外線照射から４週間後にそれぞれの部分を肉眼判定により、有効成分−非含有製剤（対照）の塗布部と各試料製剤の塗布部の色素沈着の回復度を以下の評価基準により判定した。【００６９】
（判定方法）
照射日より、４週間後に写真撮影及び、写真を評価基準に従い効果の判定を行った。
（評価基準）
【表７】
2011158331.tif 000010
【００７０】
（測定実施方法）
（１）まずはじめに、前回と同じ位置関係（状態）で写真撮影を行う。（前回データを見ながら：１回目の撮影は任意で行う）
（２）専門判定者１０名により、効果の判定を行った。【００７１】
（結果）
【表８】
2011158331.tif 000011
【００７２】
表８に示すように、ゼデロンには、美白効果を持つことが知られているアルブチンと比較して、極めて低い濃度で色素沈着の回復が認められ、実際のヒトの日焼け状態にある皮膚に対しても優れた美白効果を示すことが確認された。また、被験者の試料塗布部位においては、紅斑や湿疹等の皮膚刺激反応は認められず、ゼデロンが製剤の形態でも安全性が高いものであることが確認された。
【実施例４】
【００７３】
〔安定性試験〕
実施例１ではゼデロンが単独の成分として短期間では安定なことが示されたが、製剤系における長期安定性を調べたところ経時的に他の物質に変換されることが判明した。
そこで、ゼデロンの安定性を向上し得る物質について、皮膚外用剤として配合可能な物質の中からスクリーニングした。
（試料溶液の調製）
下記の試料０.２ｇをとり、１０ｍＬの溶媒（水または９９.５％（v/v）エタノール）に溶解した。また、植物抽出物は１０質量％に相当する量を取り、１０ｍＬの５０％（v/v）エタノール水溶液で希釈した。
（検討試料）
美白剤：アスコルビン酸グルコシド（林原生物化学研究所）、テトラ２−ヘキシルデカン酸アスコルビル、リノール酸、コウジ酸、アルブチン及びリン酸アスコビルマグネシウム
キレート剤：ヒノキチオール、酒石酸、クエン酸、エデト酸二ナトリウム、トリポリリン酸及びヘキサメタリン酸
抗酸化剤：ｄ−δ−トコフェロール、フェルラ酸、α−リポ酸、チオタウリン、システイン及びグルタチオン
ポリフェノール：没食子酸及びレスベラトロール
植物抽出液：ヒマワリ種子エキス、イタドリ根エキス、サキシマボタンヅルエキス及びバラ花エキス
防腐剤：グルコン酸クロルヘキシジン、２−フェノキシエタノール（東邦化学工業社）、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル（上野製薬社）、イソプロピルメチルフェノール、安息香酸及びサリチル酸
ビタミン類：塩酸ピリドキシン、アスコルビン酸、ニコチン酸アミド、チアミン塩酸塩及びニコチン酸
紫外線防止剤：２,４,６−トリス[４−（２−エチルヘキシルオキシカルボニル）アニリノ]−１,３,５−トリアジン（Ｕｖｉｎｕｌ  Ｔ１５０、ＢＡＳＦジャパン）、２−シアノ−３,３−ジフェニルプロパ−２−エン酸２−エチルヘキシルエステル（ＵｖｉｎｕｌＮ５３９Ｔ、ＢＡＳＦジャパン社）、ジエチルアミノヒドロキシベンゾイル安息香酸ヘキシル（Ｕｖｉｎｕｌ  Ａ  Ｐｌｕｓ  Ｇｒａｍｕｌａ、ＢＡＳＦジャパン社)及びパラメトキシケイ皮酸２−エチルヘキシル（ノムコートＴＡＢ、日清オイリオグループ社）
保湿剤：１,３−ブチレングリコール、グリセリン、乳酸、グリコール酸、トレハロース、マルチトール
その他：１,２−オクタンジオール、２−エチルヘキシルグリセリルエーテル、リン酸、白金コロイド【００７４】
なお、植物抽出液は下記の方法により取得した。
ヒマワリ種子エキス
乾燥ヒマワリ（Helianthus annuus L（Helianthus））種子１００ｇを粉砕し、５０％  １,３−ブチレングリコール１０００ｇを加え、９０℃で１時間抽出を行った。抽出物を冷却後、濾過（ADVANTEC No.131)し、濾液（ヒマワリ種子エキス）８００ｇを得た。【００７５】
イタドリ根エキス
乾燥イタドリ（Polygonium cuspidatum Sieb.et Zucc.（Polygonaceae））根茎１００ｇに５０％エタノール１０００ｍＬを加え、室温で４日間抽出を行った。抽出液を濾過（ADVANTEC No.131)し、濾液（イタドリ根エキス）８５０ｍＬを得た。【００７６】
サキシマボタンズルエキス
乾燥サキシマボタンズル（Clematis chinensis（Ranunculaceae））根茎１００ｇに水５００ｍＬを加え、６０℃で３時間抽出を行った。抽出物を冷却後、濾過（ADVANTEC No.131)し、濾液４００ｇを得た。１,３−ブチレングリコール８００ｇを加え、４℃で４日間放置後、濾過（メンブランフィルター0.45μm（ADVANTEC社）し、サキシマボタンズルエキス７５０ｇを得た。【００７７】
バラ花エキス
乾燥バラ（Rosa centifolia Linne（Rosaceae））花弁１００ｇに水１０００ｍＬを加え、６０℃で３時間抽出を行った。抽出液を冷却後、濾過（ADVANTEC No.131)し、濾液８００ｇを得た。１,３−ブチレングリコール８００ｇを加え、４℃で４日間放置後、濾過（メンブランフィルター０.４５μｍ（ADVANTEC社）し、バラエキス１５５０ｇを得た。【００７８】
（長期安定性試験）
０.００５質量％のゼデロンを含む５０％（v/v）エタノール水溶液を作製し、その４.５ｍＬに０.５ｍＬの試料溶液を加えた。植物抽出液以外の試料は最終濃度が０.２質量％又は０.０５質量％となるよう、植物抽出液の試料は最終濃度が１質量％又は０.２５質量％となるように加えた。
調製した試料溶液の代わりに同量の５０％（v/v）エタノール水溶液を加えた対照溶液を、遮光下、４０℃にて２ヶ月又６０℃にて１ヶ月静置保存した。１ヶ月又は２ヶ月保存後に、試料溶液５０μＬを取り、内部標準（０.１ｍｇ／ｍＬ  トリクロサンエタノール溶液）５０μＬを加え、さらに９００μＬの７０％（v/v）メタノール水溶液を加えてメンブランフィルターで濾過したものを試料溶液としてゼデロンの量を液体クロマトグラフィーを用いて下記の条件で分析した。その結果を、遮光下、４℃にて同期間保存した後のゼデロン量に対する相対比として表９に示す。【００７９】
液体クロマトグラフィー条件
カラム：Chemcobond  5-ODS-W（6.0×150（6A））（株式会社ケムコ社）
移動相：メタノール：水＝75：25
カラム温度：55℃
流速：1.0mL／min
検出：UV  280nm  吸光度
注入量：10μL
【００８０】
【表９Ａ】
2011158331.tif 000012
【００８１】
【表９Ｂ】
2011158331.tif 000013
【００８２】
５０％（v/v）エタノール水溶液を加えた対照区では４０℃、２ヶ月後に８３.３％までゼデロン相対比が低下していることから、ゼデロン相対比で８８％以上を示す試料はゼデロンの安定性を約２５％向上したということができ、９２％以上を示す試料はゼデロンの安定性を約５０％向上したということができる。
また、６０℃、１ヶ月後の対照区では８５.１％までゼデロン相対比が低下していることから、ゼデロン相対比で８９％以上を示す試料はゼデロンの安定性を約２５％向上したということができ、約９３％以上を示す試料はゼデロンの安定性を５０％向上したということができる。【００８３】
本発明の組成物または皮膚外用剤において用いる、ゼデロンの安定性を向上する成分は、好ましくは４０℃、２ヶ月保存後に約８８％以上または６０℃、１ヶ月保存後に約８９％以上のゼデロン相対比を示すものであり、より好ましくは４０℃、２ヶ月保存後に約９２％以上または６０℃、１ヶ月保存後に約９３％以上のゼデロン相対比を示すものである。【００８４】
したがって、試験した成分のうち、美白剤、キレート剤、抗酸化剤、ポリフェノール、植物抽出液、防腐剤、ビタミン、紫外線吸収剤、１,２−オクタンジオール及び２−エチルヘキシルグリセリルエーテルについて、ゼデロンの長期安定性を高めることが明らかとなった。特に、テトラ２−ヘキシルデカン酸アスコルビル、コウジ酸、アルブチン及びリン酸アスコビルマグネシウム；ヒノキチオール、酒石酸、クエン酸、エデト酸二ナトリウム、トリポリリン酸及びヘキサメタリン酸；ｄ−δ−トコフェロール、フェルラ酸、α−リポ酸、チオタウリン、システイン及びグルタチオン；没食子酸及びレスベラトロール；ヒマワリ種子エキス、イタドリ根エキス、サキシマボタンヅルエキス及びバラ花エキス；グルコン酸クロルヘキシジン、２−フェノキシエタノール、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル、イソプロピルメチルフェノール、安息香酸及びサリチル酸；塩酸ピリドキシン、ニコチン酸アミド、チアミン塩酸塩及びニコチン酸；２,４,６−トリス[４−（２−エチルヘキシルオキシカルボニル）アニリノ]−１,３,５−トリアジン、２−シアノ−３,３−ジフェニルプロパ−２−エン酸２−エチルヘキシルエステル、ジエチルアミノヒドロキシベンゾイル安息香酸ヘキシル及びパラメトキシケイ皮酸２−エチルヘキシル、ならびに、１,２−オクタンジオール及び２−エチルヘキシルグリセリルエーテルについてゼデロンの長期安定性を高めることが明らかとなった。【００８５】
さらに、前記の試験において安定性を高める効果が示された複数の成分を組み合わせて製剤系に配合した場合の効果を検討した。その結果を表１０に示す。【００８６】
【表１０】
2011158331.tif 000014
【００８７】
表１０から明らかなように、これらの成分は製剤系において複数を組み合わせて配合した場合にもゼデロンの長期安定性を高めることが示された。【００８８】
以下に、本発明のゼデロンを安定して含有する皮膚外用剤の処方例を挙げる。
【実施例５】
【００８９】
＜処方例  ＞化粧水                                      （質量％）
ゼデロン                                                  ０.００１
グリセリン                                                ５.０
ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート（２０Ｅ．０．）１.５
エタノール                                                ８.０
クエン酸トリエチル                                        ２.０
ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル                              ０.１０
エデト酸Na                                                ０.０５
精製水                                                    残  部
合  計                                                １００.０
【実施例６】
【００９０】
＜処方例  ＞化粧水                                      （質量％）
ゼデロン                                                  ０.０２０
グリセリン                                                ２.０
１，３−ブチレングリコール                                ７.０
ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート（２０Ｅ．０．）１.５
２−エチルヘキシルグリセリルエーテル                      ０.０５
ヘキサメタリンサンNa                                      ０.０５
防腐剤・酸化防止剤                                        適  量
精製水                                                    残  部
合  計                                                １００.０
【実施例７】
【００９１】
＜処方例  ＞乳液                                        （質量％）
ゼデロン                                                  ０.０１０
スクワラン                                                ８.０
ワセリン                                                  ２.０
ミツロウ                                                  ０.５
ソルビタンセスキオレエート                                ０.８
ポリオキシエチレンオレイルエーテル（２０Ｅ．０．）        １.２
カルボキシビニルポリマー                                  ０.２
グリセリン                                                １.５
水酸化カリウム                                            ０.１
エタノール                                                ７.０
ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル                              ０.１０
コウジ酸                                                  ０.５０
精製水                                                    残  部
合  計                                                １００.０
【実施例８】
【００９２】
＜処方例  ＞乳液                                        （質量％）
ゼデロン                                                  ０.００５
スクワラン                                                ８.０
ワセリン                                                  ２.０
ミツロウ                                                  ０.５
ソルビタンセスキオレエート                                ０.８
ポリオキシエチレンオレイルエーテル（２０Ｅ．０．）        １.２
カルボキシビニルポリマー                                  ０.２
１，３−ブチレングリコール                                ５.０
水酸化カリウム                                            ０.１
２−エチルヘキシルグリセリルエーテル                      ０.０５
バラエキス                                                ０.５０
精製水                                                    残  部
合  計                                                １００.０
【実施例９】
【００９３】
＜処方例  ＞美容液                                      （質量％）
ゼデロン                                                  ０.０１
ＰＯＢ（３）ＰＯＥ（８）ＰＯＰ（５）グリセリルエーテル    ５.０
スクワラン                                                ８.０
ワセリン                                                  ２.０
ミツロウ                                                  ０.５
ソルビタンセスキオレエート                                ０.８
カルボキシビニルポリマー                                  ０.２
グリセリン                                                １.５
エタノール                                                ７.０
ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル                              ０.１０
フェルラ酸                                                ０.０５
水酸化カリウム                                            適  量
精製水                                                    残  部
合  計                                                １００.０
【実施例１０】
【００９４】
＜処方例  ＞美容液                                      （質量％）
ゼデロン                                                  ０.０１
モノステアリン酸グリセリル                                ０.７
セスキオレイン酸ソルビタン                                １.７
ステアリン酸                                              ０.３
セラミド                                                  ０.０５
スクワラン                                                ３.５
グリチルレチン酸エステル                                  ０.０５
ヒドロキシステアリン酸コレステリル                        １.０
メドフォーム油                                            ６.０
ホホバ油                                                  ３.５
ラウロイルグルタミン酸ジ（オクチルドデシル／
フィトステアリル／ベヘニル）                          １.０
寒天                                                      ０.２５
ショ糖脂肪酸エステル                                      ０.２０
１，３−ブチレングリコール                                ６.０
グリセリン                                                ４.５
トリメチルグリシン                                        １.５
シリコン樹脂                                              ０.０５
ヒアルロン酸（０．５％水溶液）                            ０.５
チオタウリン                                              ０.０５
２−エチルヘキシルグリセリルエーテル                      ０.０５
サキシマボタンズルエキス                                  ０.５０
精製水                                                    残  部
合  計                                                １００.０
【実施例１１】
【００９５】
＜処方例  ＞パック剤                                  （質量％）
ゼデロン                                                ０.００５
酢酸ビニル樹脂エマルジョン                            １５.０
ポリビニルアルコール                                  １０.０
ホホバ油                                                ３.０
グリセリン                                              ５.０
酸化チタン                                              ８.０
カオリン                                                ７.０
エタノール                                              ５.０
１，２−オクタンジオール                                ０.０５
イタドリエキス                                          ０.２０
精製水                                                  残  部
合  計                                              １００.０
【実施例１２】
【００９６】
＜処方例  ＞軟膏                                      （質量％）
ゼデロン                                                ０.００５
ステアリルアルコール                                  １８.０
モクロウ                                              ２０.０
グリセリンモノステアリン酸エステル                      ０.３
ワセリン                                              ３３.０
２−フェノキシエタノール                                ０.２０
ヒノキチオール                                          ０.０２
精製水                                                  残  部
合  計                                              １００.０
【実施例１３】
【００９７】
＜処方例  ＞クリームファンデーション                  （質量％）
ゼデロン                                                ０.００１
タルク                                                  ５.０
セリサイト                                              ８.０
酸化チタン                                              ５.０
色顔料                                                  適  量
モノイソステアリン酸ポリグリセリル                      ３.０
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油                          １.５
イソノナン酸イソトリデシル                            １０.０
１，３−ブチレングリコール                              ５.０
２−エチルヘキシルグリセリルエーテル                    ０.０５
２−フェノキシエタノール                                ０.１０
トリポリリン酸Na                                        ０.０５
精製水                                                  残  部
合  計                                              １００.０
【実施例１４】
【００９８】
＜処方例  ＞日焼け止め化粧料                          （質量％）
ゼデロン                                                ０.００５
パラメトキシケイ皮酸２−エチヘキシル                    ４.０
酸化チタン                                            １０.０
酸化亜鉛                                              １０.０
ＰＥＧ−９ポリジメチルシロキシエチルジメチコン          １.５
ラウリルＰＥＧ−９ポリジメチルシロキシエチルジメチコン  １.５
シクロペンタシロキサン                                ２０.０
ジメチコン                                            １０.０
（ジメチコン／ビニルジメチコン）クロスポリマー          ０.５
セチルジメチコン                                        ０.２５
グリチルレチン酸エステル                                ０.０５
メチルグルセス−２０                                    １.０
１，３−ブチレングリコール                            １０.０
２−エチルヘキシルグリセリルエーテル                    ０.０５
エデト酸Ｎａ                                            ０.０１
塩化ナトリウム                                          適  量
精製水                                                  残  部
合  計                                              １００.０
【産業上の利用可能性】
【００９９】
本発明は、ゼデロンの安定性に優れ、極めて高い美白効果を発揮する組成物及びそれを含む皮膚外用剤の分野に関する。
【図１】
2011158331.tif 000015
【図３】
2011158331.tif 000016
【図４】
2011158331.tif 000017
【図６】
2011158331.tif 000018
【図７】
2011158331.tif 000019
【図８】
2011158331.tif 000020
【図９】
2011158331.tif 000021
【図１０】
2011158331.tif 000022
【図１１】
2011158331.tif 000023
【図２】
2011158331.tif 000024
【図５】
2011158331.tif 000025
【図１２】
2011158331.tif 000026
【国際調査報告】
2011158331.tif 000027
2011158331.tif 000028