(57)【要約】  本明細書では、ヒト成長分化因子１５タンパク質（以下、場合によって、「ＧＤＦ１５」と称する）に結合するモノクローナル抗体（例えば、ヒト抗体）、ならびにこれらを含む医薬組成物および処置方法が提示される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト成長分化因子１５（ＧＤＦ１５）に結合し、
Ｇ−Ｘ２−Ｘ３−Ｆ−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０（配列番号１８８）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）［配列中、Ｘ２は、ＹもしくはＧであり；Ｘ３は、ＳもしくはＴであり；Ｘ５は、Ｒ、Ｔ、もしくはＳであり；Ｘ６は、ＳもしくはＤであり；Ｘ７は、ＹもしくはＨであり；Ｘ８は、Ａ、Ｗ、もしくはＹであり；Ｘ９は、ＶもしくはＩであり；Ｘ１０は、Ｓ、Ｇ、もしくはＮである］；
Ｘ１−Ｉ−Ｘ３−Ｐ−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｙ−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｘ１４−Ｆ−Ｑ−Ｇ（配列番号１８９）のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）［配列中、Ｘ１は、Ｇ、Ｉ、もしくはＶであり；Ｘ３は、ＩもしくはＤであり；Ｘ５は、Ｉ、Ｓ、Ｇ、Ａ、もしくはＤであり；Ｘ６は、ＦもしくはＧであり；Ｘ７は、ＧもしくはＳであり；Ｘ８は、Ｔ、Ｙ、もしくはＧであり；Ｘ９は、ＡもしくはＴであり；Ｘ１０は、ＮもしくはＩであり；Ｘ１２は、ＡもしくはＳであり；Ｘ１３は、ＱもしくはＰであり；Ｘ１４は、ＫもしくはＳである］；
Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｄ−Ｘ１７（配列番号１９０）のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）［配列中、Ｘ１は、Ｇ、Ｖ、Ｙ、もしくはＦであり；Ｘ２は、Ｐ、Ｓ、もしくはＧであり；Ｘ３は、Ｉ、Ｙ、Ｒ、もしくはＳであり；Ｘ４は、Ｉ、Ｙ、もしくはＶであり；Ｘ５は、Ｍ、Ｇ、もしくはＹであり；Ｘ６は、Ｇ、Ｔ、もしくはＶであり；Ｘ７は、ＹもしくはＳであり；Ｘ８は、Ｑ、Ｆ、もしくはＲであり；Ｘ９は、Ｆ、Ｙ、もしくは非存在であり；Ｘ１０は、Ｇ、Ｓ、もしくは非存在であり；Ｘ１１は、Ｌ、Ｓ、もしくは非存在であり；Ｘ１２は、Ｆ、Ｙ、もしくは非存在であり；Ｘ１３は、Ｙもしくは非存在であり；Ｘ１４は、Ｈもしくは非存在であり；Ｘ１５は、Ｍもしくは非存在であり；Ｘ１７は、Ｈ、Ｉ、Ｙ、もしくはＶである］；
Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３（配列番号１９１）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１（ＬＣＣＤＲ１）［配列中、Ｘ１は、ＳもしくはＲであり；Ｘ２は、ＧもしくはＡであり；Ｘ３は、ＤもしくはＳであり；Ｘ４は、Ｎ、Ｑ、もしくはＳであり；Ｘ５は、Ｉ、ＳもしくはＴであり；Ｘ６は、Ｇ、Ｉ、もしくはＮであり；Ｘ７は、Ｓ、Ｉ、もしくはＹであり；Ｘ８は、Ｇもしくは非存在であり；Ｘ９は、Ｖもしくは非存在であり；Ｘ１０は、Ｈ、Ｎ、Ｌ、もしくはＲであり；Ｘ１１は、Ｉ、Ｎ、Ｙ、もしくはＳであり；Ｘ１２は、ＶもしくはＬであり；Ｘ１３は、Ｓ、Ｎ、もしくはＡである］；
Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｓ（配列番号１９２）のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２（ＬＣＣＤＲ２）［配列中、Ｘ１は、Ｄ、Ａ、Ｓ、もしくはＧであり；Ｘ２は、Ｋ、Ａ、もしくはＮであり；Ｘ３は、ＳもしくはＤであり；Ｘ４は、ＮもしくはＩであり；Ｘ５は、ＲもしくはＬであり；Ｘ６は、ＰもしくはＱである］；または
Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０（配列番号１９３）のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３（ＬＣＣＤＲ３）［配列中、Ｘ１は、Ｑ、Ｆ、もしくはＬであり；Ｘ２は、Ｔ、Ｑ、もしくはＳであり；Ｘ３は、Ｗ、Ｌ、もしくはＲであり；Ｘ４は、ＤもしくはＹであり；Ｘ５は、Ｓ、Ｈ、もしくはＴであり；Ｘ６は、ＩもしくはＳであり；Ｘ７は、Ｇ、Ｐ、もしくはＳであり；Ｘ８は、Ｓ、Ｎ、もしくは非存在であり；Ｘ９は、Ｖ、Ｆ、もしくはＹであり、Ｘ１０は、ＶもしくはＴである］
を含む、抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２】
配列番号８、１１２、３４、６０、８６、１３８、および１６４からなる群から選択されるＨＣＤＲ３を含む、請求項１に記載の抗体またはその断片。
【請求項３】
配列番号１２、１１６、３８、６４、９０、１４２、および１６８からなる群から選択されるＶＨ；ならびに／もしくは配列番号２５、１２９、５１、７７、１０３、１５５、および１８１からなる群から選択されるＶＬ、またはこれらと９７〜９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の抗体またはその断片。
【請求項４】
配列番号１２、１１６、３８、６４、９０、１４２、１６８からなる群から選択される可変重鎖配列と；
配列番号２５、１２９、５１、７７、１０３、１５５、１８１からなる群から選択される可変軽鎖配列と
を含む、請求項１から３のいずれかに記載の抗体またはその断片。
【請求項５】
配列番号３、１０７、２９、５５、８１、１３３、および１５９からなる群から選択されるＨＣＤＲ１；配列番号４、１０８、３０、５６、８２、１３４、および１６０からなる群から選択されるＨＣＤＲ２；ならびに配列番号５、１０９、３１、５７、８３、１３５、および１６１からなる群から選択されるＨＣＤＲ３と；
配列番号１６、１２０、４２、６８、９４、１４６、および１７２からなる群から選択されるＬＣＤＲ１；配列番号１７、１２１、４３、６９、９５、１４７、および１７３からなる群から選択されるＬＣＤＲ２；ならびに配列番号１８、１２２、４４、７０、９６、１４８、および１７４からなる群から選択されるＬＣＤＲ３と
を含む、請求項１から３のいずれかに記載の抗体またはその断片。
【請求項６】
配列番号６、１１０、３２、５８、８４、１３６、および１６２からなる群から選択されるＨＣＤＲ１；配列番号７、１１１、３３、５９、８５、１３７、および１６３からなる群から選択されるＨＣＤＲ２；配列番号８、１１２、３４、６０、８６、１３８、および１６４からなる群から選択されるＨＣＤＲ３と； 
配列番号１９、１２３、４５、７１、９７、１４９、および１７５からなる群から選択されるＬＣＤＲ１；配列番号２０、１２４、４６、７２、９８、１５０、および１７６からなる群から選択されるＬＣＤＲ２；ならびに配列番号２１、１２５、４７、７３、９９、１５１、および１７７からなる群から選択されるＬＣＤＲ３と
を含む、請求項１から３のいずれかに記載の抗体またはその断片。
【請求項７】
配列番号９、１１３、３５、６１、８７、１３９、１６５からなる群から選択されるＨＣＤＲ１；配列番号１０、１１４、３６、６２、８８、１４０、１６６からなる群から選択されるＨＣＤＲ２；および配列番号１１、１１５、３７、６３、８９、１４１、１６７からなる群から選択されるＨＣＤＲ３と；
配列番号２２、１２６、４８、７４、１００、１５２、１７８からなる群から選択されるＬＣＤＲ１；配列番号２３、１２７、４９、７５、１０１、１５３、１７９からなる群から選択されるＬＣＤＲ２；および配列番号２４、１２８、５０、７６、１０２、１５４、１８０からなる群から選択されるＬＣＤＲ３と
を含む、請求項１から３のいずれかに記載の抗体またはその断片。
【請求項８】
ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３、ならびにＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、
（ｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３が、配列番号３、４、および５を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３が、配列番号１６、１７、および１８を含むか；または
（ｉｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３が、配列番号１０７、１０８、および１０９を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３が、配列番号１２０、１２１、および１２２を含むか；または
（ｉｉｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３が、配列番号２９、３０、および３１を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３が、配列番号４２、４３、および４４を含むか；または
（ｉｖ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３が、配列番号５５、５６、および５７を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３が、配列番号６８、６９、および７０を含むか；または
（ｖ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３が、配列番号８１、８２、および８３を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３が、配列番号９４、９５、および９６を含むか；または
（ｖｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３が、配列番号１３３、１３４、および１３５を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３が、配列番号１４６、１４７、および１４８を含むか；または
（ｖｉｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３が、配列番号１５９、１６０、および１６１を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３が、配列番号１７２、１７３、および１７４を含む、
請求項１から３のいずれかに記載の抗体またはその断片。
【請求項９】
ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３、ならびにＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、
（ｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３が、配列番号６、７、および８を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３が、配列番号１９、２０、および２１を含むか；または
（ｉｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３が、配列番号１１０、１１１、および１１２を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３が、配列番号１２３、１２４、および１２５を含むか；または
（ｉｉｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３が、配列番号３２、３３、および３４を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３が、配列番号４５、４６、および４７を含むか；または
（ｉｖ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３が、配列番号５８、５９、および６０を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３が、配列番号７１、７２、および７３を含むか；または
（ｖ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３が、配列番号８４、８５、および８６を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３が、配列番号９７、９８、および９９を含むか；または
（ｖｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３が、配列番号１３６、１３７、および１３８を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３が、配列番号１４９、１５０、および１５１を含むか；または
（ｖｉｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３が、配列番号１６２、１６３、および１６４を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３が、配列番号１７５、１７６、および１７７を含む、
請求項１から３のいずれかに記載の抗体またはその断片。
【請求項１０】
ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３、ならびにＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、
（ｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３が、配列番号９、１０、および１１を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３が、配列番号２２、２３、および２４を含むか；または
（ｉｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３が、配列番号１１３、１１４、および１１５を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３が、配列番号１２６、１２７、および１２８を含むか；または
（ｉｉｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３が、配列番号３５、３６、および３７を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３が、配列番号４８、４９、および５０を含むか；または
（ｉｖ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３が、配列番号６１、６２、および６３を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３が、配列番号７４、７５、および７６を含むか；または
（ｖ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３が、配列番号８７、８８、および８９を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３が、配列番号１００、１０１、および１０２を含むか；または
（ｖｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３が、配列番号１３９、１４０、および１４１を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３が、配列番号１５２、１５３、および１５４を含むか；または
（ｖｉｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３が、配列番号１６５、１６６、および１６７を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３が、配列番号１７８、１７９、および１８０を含む、
請求項１から３のいずれかに記載の抗体またはその断片。
【請求項１１】
（ａ）配列番号３のＨＣＤＲ１；配列番号４のＨＣＤＲ２；配列番号５のＨＣＤＲ３；配列番号１６のＬＣＤＲ１；配列番号１７のＬＣＤＲ２；および配列番号１８のＬＣＤＲ３；または
（ｂ）配列番号１０７のＨＣＤＲ１；配列番号１０８のＨＣＤＲ２；配列番号１０９のＨＣＤＲ３；配列番号１２０のＬＣＤＲ１；配列番号１２１のＬＣＤＲ２；および配列番号１２２のＬＣＤＲ３；または
（ｃ）配列番号２９のＨＣＤＲ１；配列番号３０のＨＣＤＲ２；配列番号３１のＨＣＤＲ３；配列番号４２のＬＣＤＲ１；配列番号４３のＬＣＤＲ２；および配列番号４４のＬＣＤＲ３；または
（ｄ）配列番号５５のＨＣＤＲ１；配列番号５６のＨＣＤＲ２；配列番号５７のＨＣＤＲ３；配列番号６８のＬＣＤＲ１；配列番号６９のＬＣＤＲ２；および配列番号７０のＬＣＤＲ３；または
（ｅ）配列番号８１のＨＣＤＲ１；配列番号８２のＨＣＤＲ２；配列番号８３のＨＣＤＲ３；配列番号９４のＬＣＤＲ１；配列番号９５のＬＣＤＲ２；および配列番号９６のＬＣＤＲ３；または
（ｆ）配列番号１３３のＨＣＤＲ１；配列番号１３４のＨＣＤＲ２；配列番号１３５のＨＣＤＲ３；配列番号１４６のＬＣＤＲ１；配列番号１４７のＬＣＤＲ２；および配列番号１４８のＬＣＤＲ３；または
（ｇ）配列番号１５９のＨＣＤＲ１；配列番号１６０のＨＣＤＲ２；配列番号１６１のＨＣＤＲ３；配列番号１７２のＬＣＤＲ１；配列番号１７３のＬＣＤＲ２；および配列番号１７４のＬＣＤＲ３；または
（ｈ）配列番号６のＨＣＤＲ１；配列番号７のＨＣＤＲ２；配列番号８のＨＣＤＲ３；配列番号１９のＬＣＤＲ１；配列番号２０のＬＣＤＲ２；および配列番号２１のＬＣＤＲ３；または
（ｉ）配列番号１１０のＨＣＤＲ１；配列番号１１１のＨＣＤＲ２；配列番号１１２のＨＣＤＲ３；配列番号１２３のＬＣＤＲ１；配列番号１２４のＬＣＤＲ２；および配列番号１２５のＬＣＤＲ３；または
（ｊ）配列番号３２のＨＣＤＲ１；配列番号３３のＨＣＤＲ２；配列番号３４のＨＣＤＲ３；配列番号４５のＬＣＤＲ１；配列番号４６のＬＣＤＲ２；および配列番号４７のＬＣＤＲ３；または
（ｋ）配列番号５８のＨＣＤＲ１；配列番号５９のＨＣＤＲ２；配列番号６０のＨＣＤＲ３；配列番号７１のＬＣＤＲ１；配列番号７２のＬＣＤＲ２；および配列番号７３のＬＣＤＲ３；または
（ｌ）配列番号８４のＨＣＤＲ１；配列番号８５のＨＣＤＲ２；配列番号８６のＨＣＤＲ３；配列番号９７のＬＣＤＲ１；配列番号９８のＬＣＤＲ２；および配列番号９９のＬＣＤＲ３；または
（ｍ）配列番号１３６のＨＣＤＲ１；配列番号１３７のＨＣＤＲ２；配列番号１３８のＨＣＤＲ３；配列番号１４９のＬＣＤＲ１；配列番号１５０のＬＣＤＲ２；および配列番号１５１のＬＣＤＲ３；または
（ｎ）配列番号１６２のＨＣＤＲ１；配列番号１６３のＨＣＤＲ２；配列番号１６４のＨＣＤＲ３；配列番号１７５のＬＣＤＲ１；配列番号１７６のＬＣＤＲ２；および配列番号１７７のＬＣＤＲ３；または
（ｏ）配列番号９のＨＣＤＲ１；配列番号１０のＨＣＤＲ２；配列番号１１のＨＣＤＲ３；配列番号２２のＬＣＤＲ１；配列番号２３のＬＣＤＲ２；および配列番号２４のＬＣＤＲ３；または
（ｐ）配列番号１１３のＨＣＤＲ１；配列番号１１４のＨＣＤＲ２；配列番号１１５のＨＣＤＲ３；配列番号１２６のＬＣＤＲ１；配列番号１２７のＬＣＤＲ２；および配列番号１２８のＬＣＤＲ３；または
（ｑ）配列番号３５のＨＣＤＲ１；配列番号３６のＨＣＤＲ２；配列番号３７のＨＣＤＲ３；配列番号４８のＬＣＤＲ１；配列番号４９のＬＣＤＲ２；および配列番号５０のＬＣＤＲ３；または
（ｒ）配列番号６１のＨＣＤＲ１；配列番号６２のＨＣＤＲ２；配列番号６３のＨＣＤＲ３；配列番号７４のＬＣＤＲ１；配列番号７５のＬＣＤＲ２；および配列番号７６のＬＣＤＲ３；または
（ｓ）配列番号８７のＨＣＤＲ１；配列番号８８のＨＣＤＲ２；配列番号８９のＨＣＤＲ３；配列番号１００のＬＣＤＲ１；配列番号１０１のＬＣＤＲ２；および配列番号１０２のＬＣＤＲ３；または
（ｔ）配列番号１３９のＨＣＤＲ１；配列番号１４０のＨＣＤＲ２；配列番号１４１のＨＣＤＲ３；配列番号１５２のＬＣＤＲ１；配列番号１５３のＬＣＤＲ２；および配列番号１５４のＬＣＤＲ３；または
（ｕ）配列番号１６５のＨＣＤＲ１；配列番号１６６のＨＣＤＲ２；配列番号１６７のＨＣＤＲ３；配列番号１７８のＬＣＤＲ１；配列番号１７９のＬＣＤＲ２；および配列番号１８０の軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、請求項１から３のいずれかに記載の抗体またはその断片。
【請求項１２】
以下の特性：
（ｉ）ＧＤＦ１５のナックルドメイン内の１つもしくは複数のアミノ酸に特異的に結合する特性；
（ｉｉ）Ｂｉａｃｏｒｅにより決定される１５０ｐＭ以下のＫＤ値を有する特性；
（ｉｉｉ）ヒトＧＤＦ１５、カニクイザルＧＤＦ１５、マウスＧＤＦ１５、もしくはラットＧＤＦ−１５のうちの２つ、３つ、もしくは全てと交差反応性である特性；
（ｉｖ）８〜１０の間の等電点（ｐＩ）を有する特性；
（ｖ）対象におけるＧＤＦ１５のレベルを低減する特性；
（ｖｉ）ＧＤＦ−１５を媒介する食物摂取の抑制を軽減する特性；
（ｖｉｉ）ＧＤＦ−１５を媒介する体重減少の抑制を軽減する特性；
（ｖｉｉｉ）ＧＤＦ−１５を媒介する食欲不振を軽減する特性；または
（ｉｘ）結合について、ＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｄ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、もしくはＡＢＧＤＦ１５−Ｇのうちのいずれかの抗体と競合する特性
のうちの２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、または全てを有する、請求項１から１１のいずれかに記載の抗体またはその断片。
【請求項１３】
Ｂｉａｃｏｒｅにより測定される１１５ｐＭ以下の、または溶液平衡滴定アッセイ（ＳＥＴ）により測定される１２０ｐＭ以下の、ヒトＧＤＦ１５に対するＫＤを有する、請求項１から１２のいずれかに記載の抗体またはその断片。
【請求項１４】
配列番号１のアミノ酸２３１〜２９４内の１つまたは複数のアミノ酸に結合する、請求項１から１３のいずれかに記載の抗体またはその断片。
【請求項１５】
配列番号１のアミノ酸２３１、２８５、または２９４のうちの１つ、２つ、または全てに結合する、請求項１から１４のいずれかに記載の抗体またはその断片。
【請求項１６】
配列番号１のアミノ酸２８５および２９４、または配列番号１のアミノ酸２３１および２８５に結合する、請求項１から１５のいずれかに記載の抗体またはその断片。
【請求項１７】
ＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｄ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｇ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、およびＡＢＧＤＦ１５−Ｅからなる群から選択される、抗ＧＤＦ１５抗体またはその断片。
【請求項１８】
ＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｄ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｇ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、またはＡＢＧＤＦ１５−Ｅのうちのいずれかと同じエピトープ、または重複するエピトープに結合する、抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１９】
ヒトＧＤＦ１５タンパク質に結合し、ＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｄ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｇ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、またはＡＢＧＤＦ１５−Ｅのうちのいずれかと競合する、抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２０】
請求項１から１９のいずれかに記載の抗体またはその断片と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
【請求項２１】
ヒトＧＤＦ１５への結合が可能である抗体またはその抗原結合性断片の、ＶＨをコードする第１のヌクレオチド配列、もしくはＶＬをコードする第２のヌクレオチド配列、またはこれらの両方を含み、ＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｄ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｇ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、またはＡＢＧＤＦ１５−Ｅのうちのいずれかの、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３をコードするＶＨヌクレオチド配列、ならびに／またはＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３をコードするＶＬヌクレオチド配列を含む、単離核酸分子。
【請求項２２】
抗体またはその抗原結合性断片の、ＶＨをコードする第１のヌクレオチド配列、もしくはＶＬをコードする第２のヌクレオチド配列、またはこれらの両方を含み、前記第１のヌクレオチド配列が、配列番号１３、３９、６５、９１、１１７、１４３、もしくは１６９、またはこれらと少なくとも９０％同一なヌクレオチド配列のうちのいずれかを含み、前記第２のヌクレオチド配列が、配列番号２５、５１、７７、１０３、１２９、１５５、もしくは１８１、またはこれらと少なくとも９０％同一なヌクレオチド配列のうちのいずれかを含む、単離核酸分子。
【請求項２３】
請求項２１または２２に記載の核酸分子を含むベクター。
【請求項２４】
請求項２１から２３のいずれかに記載の核酸またはベクターを含む宿主細胞。
【請求項２５】
抗体を作製する方法であって、請求項２４に記載の宿主細胞を、遺伝子発現に適する条件下で培養するステップを含む方法。
【請求項２６】
ＧＤＦ１５関連障害の処置における使用のための、請求項１から１９のいずれかに記載の抗体もしくは断片、または請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
前記障害が、食欲不振、サルコペニア、または老化、がん、心不全、ＣＯＰＤ、腎不全、および／もしくは消耗性障害と関連する悪液質などの悪液質である、請求項２６に記載のＧＤＦ１５関連障害の処置における使用のための抗体もしくは断片、または医薬組成物。
【請求項２８】
対象における、食欲および／もしくは食物摂取の増大、体重の増大、または体重、筋肉量、食欲、もしくは食物摂取の減少のうちの１つもしくは複数の阻害もしくは軽減における使用のための、請求項１から１９のいずれかに記載の抗体もしくはその断片、または請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
前記対象が、消耗性障害、がん、慢性心不全、慢性腎疾患、ＣＯＰＤ、ＡＩＤＳ、多発性硬化症、関節リウマチ、敗血症、または結核を有する、請求項２８に記載の使用のための抗体もしくはその断片、または医薬組成物。
【請求項３０】
ＧＤＦ１５関連障害を処置する方法であって、ＧＤＦ１５関連障害に罹患している対象へと、有効量の、請求項１から１９のいずれかに記載の抗体もしくは断片、または請求項２０に記載の医薬組成物を投与するステップを含む方法。
【請求項３１】
前記対象が、食欲不振、サルコペニア、または老化、がん、心不全、ＣＯＰＤ、腎不全、および／もしくは消耗性障害と関連する悪液質のうちの１つまたは複数を有する、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
それを必要とする対象における食欲および／または食物摂取を増大させる方法であって、有効量の、請求項１から１９のいずれかに記載の抗体もしくはその断片、または請求項２０に記載の医薬組成物を、前記対象へと投与するステップを含む方法。
【請求項３３】
それを必要とする対象における体重を増大させる方法であって、有効量の、請求項１から１９のいずれかに記載の抗体もしくはその断片、または請求項２０に記載の医薬組成物を、前記対象へと投与するステップを含む方法。
【請求項３４】
それを必要とする対象における体重、筋肉量、食欲、または食物摂取の減少のうちの１つまたは複数を阻害または軽減する方法であって、有効量の、請求項１から１９のいずれかに記載の抗体もしくはその断片、または請求項２０に記載の医薬組成物を、前記対象へと投与するステップを含む方法。
【請求項３５】
前記対象が、消耗性障害、がん、慢性心不全、慢性腎疾患、ＣＯＰＤ、ＡＩＤＳ、多発性硬化症、関節リウマチ、敗血症、または結核を有する、請求項３２から３４のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１６年４月２７日に出願された、米国仮出願第６２／３２８，５６４号明細書の利益を主張する。前述の出願の内容は、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる。
【０００２】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出され、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる配列表を含有する。２０１７年４月２６日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーは、「N2067-7107WO_SL.txt」と名付けられ、１３９，６１１バイトのサイズである。本出願の本文を通して、明細書（例えば、表１）の本文と、配列表との間で齟齬がある場合は、明細書の本文を優先するものとする。
【背景技術】
【０００３】
食欲減退および体重減少は、神経性食欲不振、ヒトの老化、がん、心不全、慢性閉塞性肺障害、および腎不全を含む複数の状態における有害転帰と関連する。食欲不振は、悪液質：エネルギー摂取の低下に応じた予測を超える、脂肪量の減少を伴うかまたは伴わない、過剰な筋肉量の減少を特徴とする、複合メタボリック症候群と関連することが多い。この消耗性状態は、寿命を劇的に縮め、生活の質を低減する。
【０００４】
正常な状況下では、動物およびヒトは、複雑な神経内分泌応答を伴う栄養失調に応答し、これは、最終的に、食欲の増大、除脂肪体重の相対的温存、および脂肪蓄積の燃焼、ならびに基礎代謝率の全体的な低下をもたらす（Webber & Macdonald, 1994, Brit. J. Nutr. 71:437-447; Ahimaら、1996, Nature 382:250〜252）。これに対し、一部の疾患では、悪液質として公知の、栄養不良による重篤な病理学的状態であって、食欲の減退と、脂肪および除脂肪体重の両方の代謝率および代謝の増大との組合せによりもたらされる病理学的状態が生じ、除脂肪体重の相対的減耗をもたらす（Tisdale, 1997, J. Natl. Cancer Inst. 89: 1763-1773; Inui, 1999, Cancer Res. 59: 4493-4501; Fongら、1989, Amer. J. Phys. 256: R659-R665; Bruera, 1997, Brit. Med. J. 315: 1219〜1222; Emery, 1999, Nutrition 15: 600-603）。この組合せは、がん、嚢胞性線維症、ＡＩＤＳ、関節リウマチ、ＡＬＳ、腎不全、消耗性障害、および股関節骨折を含む、多数の障害において見出される（Tisdale, 1997, ibid.）。
【０００５】
多くの疾病における悪液質の重症度は、生活の質および最終的な死亡率のいずれにおいても、決定因子でありうる（Tisdale, 1997, ibid.; Larkin, 1998, Lancet 351: 1336）。実際、ＡＩＤＳ患者における体重保持は、疾患についての他の任意の現行の尺度より、生存との相関が大きい（Kotlerら、1989, Amer. J. Clin. Nutr. 50: 444〜447）。多くの異なる腫瘍型が研究されており、腫瘍保有動物は、転移または感染ではなく、悪液質および代謝燃料の枯渇が原因で死ぬという知見が一般的である（Svaningerら、1987, J. Natl. Cancer Inst. 78: 943〜950; Emery, 1999, Nutrition 15: 600-603; Svaningerら、1989, Eur. J. Cancer Clin. Oncol. 25: 1295〜1302; Emeryら、1984, Cancer Res. 44: 2779〜2784）。悪液質は一般に、がんを伴う患者、特に、小児個体および老齢個体において観察される（Bruera, 1997, ibid.）。結果として生じる栄養不良および除脂肪体重の減少は、罹患個体の生活の質を低減し、治療に対する忍容性の低下および手術後における合併症の増大により、回復を損なう（Larkin, 1998, ibid.; Inui, 1999, ibid.）。食欲不振の例は、ヒトの老化において生じる。虚弱な老齢患者は、典型的に、空腹時および食後時において、空腹感のほぼ完全な欠如を示す（Serra-Pratら、2013, Neurogastroenterol Motil. 25(4):291-e245）。
【０００６】
腫瘍の成長は、食欲不振−悪液質症候群の発生をもたらしうる、深刻な代謝的変化および神経化学的変化と関連する。食欲不振が、食への欲求の減退と関連するのに対し、悪液質は、骨格筋量の進行性消耗から生じ、より小さな程度で、脂肪組織の進行性減耗から生じ、体重の減少が明らかとなる前であっても生じる。がん食欲不振−悪液質症候群は、がん患者の間で高度に蔓延しており、罹患率および死亡率に対して大きな影響を及ぼし、患者の生活の質に影響する。しかし、その臨床的関与性は、しばしば、看過され、処置が試みられるのは通例、疾患が進行期に入ってからに過ぎない（Laviano A.ら、Nat. Clin. Pract. Oncol. 3:158-65 (2005)）。
【０００７】
成長分化因子１５（ＧＤＦ１５）は、ＴＧＦβスーパーファミリーの分岐メンバーであり、また、マクロファージ阻害性サイトカイン１（Ｍ１Ｃ１）（Bootcov MR, 1997, Proc Natl Acad Sci 94: 11514-9）、胎盤骨形成因子（ＰＬＡＢ）（Hromas R 1997, Biochim Biophys Acta. 1354:40-4）、胎盤形質転換成長因子ベータ（ＰＴＧＦＢ）（Lawton LN 1997, Gene. 203: 17-26）、前立腺由来因子（ＰＤＦ）（Paralkar VM 1998, J Biol Chem. 273: 13760-7）、および非ステロイド系抗炎症薬活性化遺伝子（ＮＡＧ−１）（Baek SJ 2001, J Biol Chem. 276: 33384- 92）とも称する。成熟ＧＤＦ１５ペプチドは、他のファミリーメンバーと共有する相同性が小さい（Katoh M 2006, Int J Mol Med. 17:951-5）。ＧＤＦ１５は、大型の前駆体タンパク質として合成され、これが、二塩基性の切断部位で切断されて、カルボキシ末端の成熟ペプチドを放出する。ヒト全長前駆体は、３０８アミノ酸を含有するが、ＲＧＲＲＲＡＲ（配列番号１８５）切断部位で切断されて、成熟ＧＤＦペプチドをもたらす。自然発生のＧＤＦ１５は、１つの鎖間ジスルフィド結合により、共有結合的に連結された成熟ペプチドの、２５ＫＤのホモ二量体である。
【０００８】
ＧＤＦ１５は、多数の異なる生理学的状態および病理学的状態と関与性であることが報告されている。例えば、ＧＤＦ１５ノックアウトマウスおよびＧＤＦ１５トランスジェニックマウスについての研究は、ＧＤＦ１５が、虚血／再灌流または過負荷に誘導される心損傷に対して保護的でありえ（Kempf T, 2006, Circ Res. 98:351-60；Xu J, 2006, Circ Res. 98:342-50）、老化と関連する、運動ニューロンの喪失および感覚ニューロンの喪失に対して保護的であることが可能であり（Strelau J, 2009, J Neurosci. 29: 13640-8）、腎臓における代謝性アシドーシスに対して、軽微に保護的であることが可能であり、がん患者において、悪液質を引き起こしうる（Johnen H 2007 Nat Med. 11: 1333-40）ことを示唆する。ＧＤＦ１５はまた、腸および肺において、発がん物質またはＡｐｃ突然変異により誘導される新生物に対して保護的であることも報告されている（Baek SJ 2006, Gastroenterology. 131: 1553-60; Cekanova M 2009, Cancer Prev Res 2:450-8）。
【０００９】
ＧＤＦ１５は、特に、がんにおいて、食欲減退作用を及ぼす（Brown D. A. Clinical Cancer Res 2003; 9:2642-2650; Koopmann J. Clinical Cancer Res 2006; 12:442〜446）。がん、および慢性腎不全または慢性心不全など、他の疾患における、循環ＭＩＣ−１／ＧＤＦ１５レベルの実質的上昇は、ボディーマスインデックスの低下と関連する（Breit S.N.ら、Growth factors 2011; 29:187〜195; Johnen H.ら、Nat Med. 2007; 13:1333〜1340）ことから、疾患の炎症における役割以外に、ＭＩＣ−１／ＧＤＦ１５はまた、体重の調節においても役割を果たしうることが示唆される。マウスにおける、長期にわたるＭＩＣ−１／ＧＤＦ１５の発現の上昇は、正常な食餌条件下および肥満の原因となる食餌条件下のいずれにおいても、共時的な耐糖能の改善と共に、食物摂取、体重、および過脂肪状態の低下をもたらす（Macia L.ら、PloS One 2012; 7(4): e34868）。食物摂取および体重は、様々な中枢因子および末梢因子により制御されているが、これらの過程の背後にある正確な機構は、未だ完全には理解されていない。
【００１０】
悪液質を処置するための、新たな治療剤が必要とされている。活性であり、治療特性が改善された、改善型抗ＧＤＦ１５抗体が特に必要とされている。
【発明の概要】
【００１１】
本明細書では、ヒト成長分化因子１５タンパク質（以下、場合によって、「ＧＤＦ１５」と称する）に、高アフィニティーおよび特異性で結合する抗体（例えば、モノクローナル抗体）が開示される。本明細書で提示される抗ＧＤＦ１５抗体を指すように、以下で使用される「抗体」という用語は、全長抗体およびその抗原結合性断片の両方を含む。
【００１２】
一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体は、ＧＤＦ１５、例えば、ＧＤＦ１５のナックル（knuckle）ドメインのＣ末端領域に結合することが可能である。理論に束縛されることを望まずに述べると、ある種の実施形態では、ＧＤＦ１５のＣ末端領域（例えば、ナックルドメイン）への特異的な結合は、少なくとも部分的に、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体の生物学的機能および／または臨床的効果を付与すると考えられる。
【００１３】
また、抗体をコードする核酸分子、発現ベクター、宿主細胞、および抗体を作製するための方法も提供される。また、免疫コンジュゲート、多特異性抗体または二特異性抗体、および抗体を含む医薬組成物も提供される。本明細書で開示される抗ＧＤＦ１５抗体を使用して（単独で、または他の薬剤または治療モダリティーと組み合わせて）、食欲不振または悪液質などの消耗性障害を伴うＧＤＦ１５関連障害またはＧＤＦ１５関連状態を含む、ＧＤＦ１５関連障害またはＧＤＦ１５関連状態を処置、防止、および／または診断することができる。したがって、ＧＤＦ１５を検出するための組成物および方法のほか、抗ＧＤＦ１５抗体を使用して、多様なＧＤＦ１５関連障害またはＧＤＦ１５関連状態を処置するための方法も開示される。
【００１４】
したがって、本明細書の一態様では、ＧＤＦ１５（例えば、ヒトＧＤＦ１５）に結合する抗体（例えば、単離抗体もしくは組換え抗体またはこれらの抗原結合性断片）であって、以下の特性または特徴のうちの１つまたは複数を有する抗体が提示される。
【００１５】
一部の実施形態では、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体または抗原結合性断片は、ＧＤＦ１５に、１５０ｎＭ以下の平衡解離定数（ＫＤ）で結合する。一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体または抗原結合性断片は、ヒトＧＤＦ１５またはその断片、例えば、配列番号１のアミノ酸配列を有するか、または配列番号２のヌクレオチド配列によりコードされるヒトＧＤＦ１５に結合する。例えば、本明細書で記載される抗体または抗原結合性断片は、ヒトＧＤＦ１５に、１００ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、７５０ｐＭ以下、６００ｐＭ以下、５００ｐＭ以下、４００ｐＭ以下、３００ｐＭ以下、２００ｐＭ以下、１５０ｐＭ以下、１００ｐＭ以下、７５ｐＭ以下、６５ｐＭ以下、６０ｐＭ以下、５５ｐＭ以下、５０ｐＭ以下、４５ｐＭ以下、４０ｐＭ以下、３５ｐＭ以下、３０ｐＭ以下、２５ｐＭ以下、２０ｐＭ以下、１５ｐＭ以下、１０ｐＭ以下、５ｐＭ以下、２ｐＭ以下、１ｐＭ以下、０．５ｐＭ以下、０．２ｐＭ以下、または０．１ｐＭ以下のＫＤで結合しうる。
【００１６】
一実施形態では、抗体または抗原結合性断片、例えば、ＡＢＧＤＦ１５−Ａは、ヒトＧＤＦ１５に、Ｂｉａｃｏｒｅにより測定される１１ｐＭ以下の、または溶液平衡滴定アッセイ（ＳＥＴ）により測定される１ｐＭ以下のＫＤで結合する。別の実施形態では、抗体または抗原結合性断片、例えば、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂは、ヒトＧＤＦ１５に、Ｂｉａｃｏｒｅにより測定される１１５ｐＭ以下の、またはＳＥＴにより測定される１２０ｐＭ以下のＫＤで結合する。さらに別の実施形態では、抗体または抗原結合性断片、例えば、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃは、ヒトＧＤＦ１５に、Ｂｉａｃｏｒｅにより測定される６６ｐＭ以下の、またはＳＥＴにより測定される１２０ｐＭ以下のＫＤで結合する。さらに別の実施形態では、抗体または抗原結合性断片、例えば、ＡＢＧＤＦ１５−Ｄは、ヒトＧＤＦ１５に、Ｂｉａｃｏｒｅにより測定される１９ｐＭ以下の、またはＳＥＴにより測定される０．１６ｐＭ以下のＫＤで結合する。さらに別の実施形態では、抗体または抗原結合性断片、例えば、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅは、ヒトＧＤＦ１５に、Ｂｉａｃｏｒｅにより測定される３９ｐＭ以下の、またはＳＥＴにより測定される２．３ｐＭ以下のＫＤで結合する。さらに別の実施形態では、抗体または抗原結合性断片、例えば、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆは、ヒトＧＤＦ１５に、Ｂｉａｃｏｒｅにより測定される３７ｐＭ以下の、またはＳＥＴにより測定される４．４ｐＭ以下のＫＤで結合する。さらに別の実施形態では、抗体または抗原結合性断片、例えば、ＡＢＧＤＦ１５−Ｇは、ヒトＧＤＦ１５に、Ｂｉａｃｏｒｅにより測定される２０ｐＭ以下のＫＤで結合する。
【００１７】
本明細書で記載される抗体または抗原結合性断片は、ヒトＧＤＦ１５、カニクイザルＧＤＦ１５、マウスＧＤＦ１５、またはラットＧＤＦ−１５に、表２に記載されている、例えばＢｉａｃｏｒｅにより測定される、ＫＤで結合しうる。一実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、ヒトＧＤＦ１５（例えば、天然ヒトＧＤＦ１５）に、１２０ｐＭ以下、１００ｐＭ以下、８０ｐＭ以下、６０ｐＭ以下、４０ｐＭ以下、２０ｐＭ以下、１５ｐＭ以下、または１０ｐＭ以下のＫＤで結合する。別の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、ヒトＧＤＦ（例えば、ヒトＨｉｓ−ＧＤＦ１５）に、１５０ｐＭ以下、１００ｐＭ以下、８０ｐＭ以下、６０ｐＭ以下、４０ｐＭ以下、２０ｐＭ以下、１０ｐＭ以下、５ｐＭ以下、または２ｐＭ以下のＫＤで結合する。別の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、カニクイザルＧＤＦ（例えば、カニクイザルＨｉｓ−ＧＤＦ１５）に、１２０ｐＭ以下、１００ｐＭ以下、８０ｐＭ以下、６０ｐＭ以下、４０ｐＭ以下、２０ｐＭ以下、または１０ｐＭ以下のＫＤで結合する。別の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、マウスＧＤＦ（例えば、マウスＨｉｓ−ＧＤＦ１５）に、２５０ｐＭ以下、２００ｐＭ以下、１５０ｐＭ以下、１００ｐＭ以下、８０ｐＭ以下、６０ｐＭ以下、または４０ｐＭ以下のＫＤで結合する。別の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、マウスＧＤＦ（例えば、ラットＨｉｓ−ＧＤＦ１５）に、１５０ｐＭ以下、１００ｐＭ以下、８０ｐＭ以下、６０ｐＭ以下、４０ｐＭ以下、または２０ｐＭ以下のＫＤで結合する。ある種の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、ヒトＧＤＦ１５、カニクイザルＧＤＦ１５、マウスＧＤＦ１５、またはラットＧＤＦ−１５のうちの１つ、２つ、３つ、または全てと交差反応性である。例えば、本明細書で記載される抗体または抗原結合性断片は、ヒトＧＤＦ１５およびカニクイザルＧＤＦ１５の両方と交差反応性でありうる。
【００１８】
一部の実施形態では、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体または抗原結合性断片は、８〜１０の間、例えば、８．２〜９．８の間、８．４〜９．６の間、８．６〜９．４の間、８．８〜９．２の間、８〜８．５の間、８〜９の間、８〜９．５の間、８〜５．１０の間、９〜１０の間、または９．５〜１０の間の等電点（ｐＩ）を有する。一実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体（例えば、ＡＢＧＤＦ１５−Ａ）または抗原結合性断片は、８．７（ＩｇＧとして）または９．１（Ｆａｂとして）のｐＩを有する。別の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体（例えば、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ）または抗原結合性断片は、８．９（ＩｇＧとして）または９．３（Ｆａｂとして）のｐＩを有する。別の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体（例えば、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ）または抗原結合性断片は、８．３（ＩｇＧとして）または８．８（Ｆａｂとして）のｐＩを有する。別の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体（例えば、ＡＢＧＤＦ１５−Ｄ）または抗原結合性断片は、８．６（ＩｇＧとして）または９（Ｆａｂとして）のｐＩを有する。別の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体（例えば、ＡＢＧＤＦ１５−ＥまたはＡＢＧＤＦ１５−Ｆ）または抗原結合性断片は、８．９（ＩｇＧとして）または９．２（Ｆａｂとして）のｐＩを有する。別の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体（例えば、ＡＢＧＤＦ１５−Ｇ）または抗原結合性断片は、９．３（ＩｇＧとして）または９．６（Ｆａｂとして）のｐＩを有する。ある種の実施形態では、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体または抗原結合性断片は、表４に記載されている等電点（ｐＩ）を有する。
【００１９】
一部の実施形態では、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体または抗原結合性断片は、表１に記載されている抗体分子（例えば、重鎖可変領域および軽鎖可変領域）、例えば、ＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｇ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅ、またはＡＢＧＤＦ１５−Ｄと同じであるかもしくは同様の結合アフィニティーもしくは結合特異性、またはこれらの両方を示す。諸実施形態では、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体または抗原結合性断片は、表１に示されているアミノ酸配列を有するか、または表１に示されているヌクレオチド配列によりコードされる抗体分子と同じであるかもしくは同様の結合アフィニティーもしくは結合特異性、またはこれらの両方を示す。
【００２０】
一部の実施形態では、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体または抗原結合性断片は、結合について、表１に記載されている抗体、例えば、ＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｇ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅ、またはＡＢＧＤＦ１５−Ｄと競合する。
【００２１】
諸実施形態では、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体または抗原結合性断片は、第２の抗体分子の、ＧＤＦ１５への結合を阻害する、例えば、これを競合的に阻害し、この場合、第２の抗体は、表１に記載されている抗体、例えば、ＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｇ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅ、またはＡＢＧＤＦ１５−Ｄから選択される、例えば、抗体である。
【００２２】
一部の実施形態では、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体または抗原結合性断片は、表１に記載されている抗体、例えば、ＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｇ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅ、またはＡＢＧＤＦ１５−Ｄと同じエピトープまたは実質的に同じエピトープ（例えば、重複するエピトープ）に結合する。一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体または抗原結合性断片は、ＧＤＦ１５のＣ末端領域内の１つまたは複数のアミノ酸、例えば、ＧＤＦ１５、例えば、ヒトＧＤＦ１５のナックルドメイン（例えば、Mueller, T. D. ら、FEBS Letters 586 (2012):1846〜1859に記載されているナックル領域）に結合する。諸実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体または抗原結合性断片は、配列番号１のアミノ酸２３１〜２９４内の１つまたは複数のアミノ酸に結合する。一実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体または抗原結合性断片は、ＧＤＦ１５、例えば、ヒトＧＤＦ１５（例えば、配列番号１）のアミノ酸２３１、２８５または２９４のうちの１つ、２つ、または全てに結合する。一実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体または抗原結合性断片は、ＧＤＦ１５、例えば、ヒトＧＤＦ１５（例えば、配列番号１）の、アミノ酸２８５および２９４と、任意選択で、アミノ酸２３１とに結合する。一実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体または抗原結合性断片は、ＧＤＦ１５、例えば、ヒトＧＤＦ１５（例えば、配列番号１）の、アミノ酸２３１および２８５と、任意選択で、アミノ酸２９４とに結合する。一実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体または抗原結合性断片は、ＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｄ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、またはＡＢＧＤＦ１５−Ｇと、同じであるかまたは実質的に同じエピトープに結合する、例えば、ＧＤＦ１５、例えば、ヒトＧＤＦ１５の、アミノ酸２８５または２９４の一方または両方を含むエピトープに結合する。一実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体または抗原結合性断片は、ＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｄ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、またはＡＢＧＤＦ１５−Ｇと、同じであるかまたは実質的に同じエピトープに結合し、例えば、この場合、結合は、ＧＤＦ１５、例えば、ヒトＧＤＦ１５の、アミノ酸２８５および／または２９４における突然変異（例えば、配列番号１の、Ｉ２８５Ｒおよび／またはＬ２９４Ｒの突然変異）により遮断される。一実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体または抗原結合性断片は、ＡＢＧＤＦ１５−ＢまたはＡＢＧＤＦ１５−Ｃと、同じであるかまたは実質的に同じエピトープに結合し、例えば、この場合、結合は、ＧＤＦ１５、例えば、ヒトＧＤＦ１５の、アミノ酸２３１および／または２８５における突然変異（例えば、配列番号１の、Ｓ２３１Ｒおよび／またはＩ２８５Ｒの突然変異）により遮断される。
【００２３】
本明細書で記載される抗体および抗原結合性断片の結合アフィニティーおよび結合特異性は、溶液平衡滴定（ＳＥＴ）により決定することができる。当技術分野では、ＳＥＴ法が知られており、以下でさらに詳細に記載される。代替的に、本明細書で記載される抗体または断片の結合アフィニティーは、Ｂｉａｃｏｒｅアッセイにより決定することができる。当技術分野では、Ｂｉａｃｏｒｅ反応速度アッセイのための方法が知られており、以下でさらに詳細に記載される。
【００２４】
一部の実施形態では、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体または抗原結合性断片は、表１に記載されている抗体、例えば、ＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｇ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅ、またはＡＢＧＤＦ１５−Ｄから選択される抗体の、１つまたは複数の生物学的特性を有する。例示的な生物学的特性は、（ｉ）ＧＤＦ１５の、受容体への結合を阻害する特性；（ｉｉ）循環ＧＤＦ１５のレベルを低減する、例えば、循環ＧＤＦ１５を枯渇させる特性；（ｉｉｉ）ＧＤＦ−１５を媒介する食物摂取の抑制を軽減する、例えば、これを阻止する特性；（ｉｖ）ＧＤＦ−１５を媒介する体重減少の抑制を軽減する、例えば、これを阻止する特性；または（ｖ）ＧＤＦ−１５を媒介する食欲不振または悪液質を軽減する、例えば、これを反転させる特性のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、またはこれを超える特性を含む。特定の実施形態では、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体または抗原結合性断片は、食物摂取を増大させる。特定の実施形態では、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体または抗原結合性断片は、体重を増大させる。
【００２５】
一部の実施形態では、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体または抗原結合性断片は、ＧＤＦ１５の、受容体への結合を、例えば、１００ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、３５ｎＭ以下、２５ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、または３ｎＭ以下のＥＣ５０で阻害する。
【００２６】
一部の実施形態では、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体または抗原結合性断片は、循環ＧＤＦ１５のレベルを低減する、例えば、循環ＧＤＦ１５を枯渇させる。
【００２７】
一部の実施形態では、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体または抗原結合性断片は、例えば、図１Ａ〜図１Ｂに示されている通り、対象、例えば、動物モデルにおける、ＧＤＦ−１５を媒介する食物摂取および／または体重減少の抑制を軽減する、例えば、これらを阻止する。
【００２８】
一部の実施形態では、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体または抗原結合性断片は、例えば、図２Ａ〜図３Ｂに示されている通り、対象、例えば、動物モデルにおける、ＧＤＦ−１５を媒介する食欲不振を軽減する、例えば、これを反転させる。
【００２９】
一部の実施形態では、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体または抗原結合性断片は、例えば、図４〜図５に示されている通り、対象、例えば、動物モデルにおける、ＧＤＦ−１５を媒介する体重減少を軽減する。
【００３０】
一部の実施形態では、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体または抗原結合性断片は、ヒトＧＤＦ１５に結合し、カニクイザルＧＤＦ１５と交差反応性である。
【００３１】
本明細書で記載される単離抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片は、モノクローナル抗体、ヒトまたはヒト化抗体、キメラ抗体、単鎖抗体、Ｆａｂ断片、Ｆｖ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、またはｓｃＦｖ断片、および／または、例えば本明細書で記載されるＩｇＧのアイソタイプでありうる。
【００３２】
本明細書で提示される抗体またはその抗原結合性断片のうちのいずれかは、モノクローナル抗体（例えば、ヒトモノクローナル抗体またはヒト化モノクローナル抗体）またはその抗原結合性断片でありうる。他の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、多特異性抗体、例えば、二特異性抗体である。本明細書で記載される単離抗ＧＤＦ１５抗体またはそれらの抗原結合性断片はまた、アミノ酸が、ヒトＶＨ生殖細胞系列配列またはヒトＶＬ生殖細胞系列配列のそれぞれに由来する抗体フレームワークへと置換されたフレームワークも含みうる。
【００３３】
一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片は、表１に記載されている抗体の全長重鎖および／または全長軽鎖を含む。一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断断片は、ＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｇ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅ、もしくはＡＢＧＤＦ１５−Ｄの重鎖アミノ酸配列および／もしくは軽鎖アミノ酸配列、またはこれらと実質的に同一なアミノ酸配列（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％、もしくはこれを超えてこれらと同一であるか、またはＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｇ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅ、もしくはＡＢＧＤＦ１５−Ｄの重鎖アミノ酸配列および／もしくは軽鎖アミノ酸配列と比較した、少なくとも３０、２０、１５、１０、５カ所、もしくはこれより少数の変化（例えば、置換、例えば、保存的置換）を有する）を含む。別の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｇ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅ、もしくはＡＢＧＤＦ１５−Ｄの重鎖ヌクレオチド配列および／もしくは軽鎖ヌクレオチド配列、またはこれらと実質的に同一な（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％、もしくはこれを超えてこれらと同一であるか、またはＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｇ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅ、またはＡＢＧＤＦ１５−Ｄの重鎖ヌクレオチド配列および／または軽鎖ヌクレオチド配列と比較した、少なくとも９０、６０、４５、３０、１５カ所、もしくはこれより少数の変化（例えば、置換）を有する）ヌクレオチド配列によりコードされる。諸実施形態では、上述の配列のうちのいずれも、ＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｇ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅ、またはＡＢＧＤＦ１５−Ｄの重鎖に由来する、１つ、２つ、もしくは３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）、および／またはこれらの軽鎖に由来する１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲを含む。
【００３４】
一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片は、表１に記載されている抗体の重鎖可変ドメインのうちの１つもしくは２つ、および／または１つもしくは２つの軽鎖可変ドメインを含む。一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断断片は、ＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｇ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅ、もしくはＡＢＧＤＦ１５−Ｄの重鎖可変ドメインのアミノ酸配列のうちの１つもしくは２つ、および／または軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列のうちの１つもしくは２つ、またはこれらと実質的に同一な（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％、もしくはこれを超えてこれらと同一であるか、またはＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｇ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅ、またはＡＢＧＤＦ１５−Ｄの重鎖可変ドメインのアミノ酸配列および／または軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列と比較して、少なくとも２０、１５、１０、５カ所、もしくはこれより少数の変化（例えば、置換、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｇ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅ、もしくはＡＢＧＤＦ１５−Ｄの重鎖可変ドメインのヌクレオチド配列および／もしくは軽鎖可変ドメインのヌクレオチド配列、またはこれらと実質的に同一な（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％、もしくはこれを超えてこれらと同一であるか、またはＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｇ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅ、もしくはＡＢＧＤＦ１５−Ｄの重鎖可変ドメインのヌクレオチド配列および／もしくは軽鎖可変ドメインのヌクレオチド配列と比較した、少なくとも６０、４５、３０、１５カ所、もしくはこれより少数の変化（例えば、置換）を有する）ヌクレオチド配列によりコードされる。諸実施形態では、上述の配列のうちのいずれも、ＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｇ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅ、またはＡＢＧＤＦ１５−Ｄの重鎖可変ドメインに由来する、１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、および／またはこれらの軽鎖可変ドメインに由来する１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲを含む。
【００３５】
別の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片は、表１に記載されている抗体、例えば、ＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｇ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅ、もしくはＡＢＧＤＦ１５−Ｄのうちのいずれかから選択される抗体に由来する、少なくとも１つの抗原結合性領域、例えば、可変領域もしくはその抗原結合性断片を含むか；または、表１のヌクレオチド配列；もしくは上述の配列のうちのいずれかと実質的に同一な（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％、またはこれを超えて同一な）配列によりコードされる。一部の実施形態では、上述の配列のうちのいずれも、ＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｇ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅ、またはＡＢＧＤＦ１５−Ｄの重鎖可変ドメインに由来する、１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、および／またはこれらの軽鎖可変ドメインに由来する１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲを含む。
【００３６】
さらに別の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片は、表１に記載されている抗体、例えば、ＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｇ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅ、もしくはＡＢＧＤＦ１５−Ｄのうちのいずれかから選択される抗体の重鎖可変領域に由来する、少なくとも１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、および／またはこれらの軽鎖可変領域に由来する、少なくとも１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲを含むか；あるいは、表１のヌクレオチド配列；または上述の配列のうちのいずれかと実質的に同一な（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％、またはこれを超えて同一な）配列によりコードされる。一実施形態では、ＣＤＲのうちの１つまたは複数（または、併せて、ＣＤＲの全て）は、表１に示されているか、または、表１に示されているヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列と比べて、１、２、３、４、５、６カ所、またはこれを超える変化、例えば、アミノ酸の置換または欠失を有する。一実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片のＣＤＲのうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、またはこれを超えるＣＤＲ（または、併せて、ＣＤＲの全て）は、Ｋａｂａｔらに従う（例えば、表１に示される、Ｋａｂａｔによる定義に従う、少なくとも１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ）。他の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片のＣＤＲのうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、またはこれを超えるＣＤＲ（または、併せて、ＣＤＲの全て）は、Ｃｈｏｔｈｉａらに従う（例えば、表１に示される、Ｃｈｏｔｈｉａによる定義に従う、少なくとも１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ）。さらに別の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片のＣＤＲのうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、またはこれを超えるＣＤＲ（または、併せて、ＣＤＲの全て）は、表１に示される、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａの組合せによる定義に従う。
【００３７】
一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３、２９、５５、８１、１０７、１３３、もしくは１５９から選択される重鎖ＣＤＲ１；配列番号４、３０、５６、８２、１０８、１３４、もしくは１６０から選択される重鎖ＣＤＲ２；および／または配列番号５、３１、５７、８３、１０９、１３５、もしくは１６１から選択される重鎖ＣＤＲ３（ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａの組合せによるＣＤＲ定義に従う）を含む。一実施形態では、ＣＤＲのうちの１つまたは複数（または、併せて、ＣＤＲの全て）は、上述のアミノ酸配列のうちのいずれかと比べて、１、２、３、４、５、６カ所、またはこれを超える変化、例えば、アミノ酸の置換または欠失を有する。
【００３８】
一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号６、３２、５８、８４、１１０、１３６、もしくは１６２から選択される重鎖ＣＤＲ１；配列番号７、３３、５９、８５、１１１、１３７、もしくは１６３から選択される重鎖ＣＤＲ２；および／または配列番号８、３４、６０、８６、１１２、１３８、もしくは１６４から選択される重鎖ＣＤＲ３（ＫａｂａｔによるＣＤＲ定義に従う）を含む。一実施形態では、ＣＤＲのうちの１つまたは複数（または、併せて、ＣＤＲの全て）は、上述のアミノ酸配列のうちのいずれかと比べて、１、２、３、４、５、６カ所、またはこれを超える変化、例えば、アミノ酸の置換または欠失を有する。
【００３９】
一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９、３５、６１、８７、１１３、１３９、もしくは１６５から選択される重鎖ＣＤＲ１；配列番号１０、３６、６２、８８、１１４、１４０、もしくは１６６から選択される重鎖ＣＤＲ２；および／または配列番号１１、３７、６３、８９、１１５、１４１、もしくは１６７から選択される重鎖ＣＤＲ３（ＣｈｏｔｈｉａによるＣＤＲ定義に従う）を含む。一実施形態では、ＣＤＲのうちの１つまたは複数（または、併せて、ＣＤＲの全て）は、上述のアミノ酸配列のうちのいずれかと比べて、１、２、３、４、５、６カ所、またはこれを超える変化、例えば、アミノ酸の置換または欠失を有する。
【００４０】
一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１６、４２、６８、９４、１２０、１４６、もしくは１７２から選択される軽鎖ＣＤＲ１；配列番号１７、４３、６９、９５、１２１、１４７、もしくは１７３から選択される軽鎖ＣＤＲ２；および／または配列番号１８、４４、７０、９６、１２２、１４８、もしくは１７４から選択される軽鎖ＣＤＲ３（ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａの組合せによるＣＤＲ定義に従う）を含む。一実施形態では、ＣＤＲのうちの１つまたは複数（または、併せて、ＣＤＲの全て）は、上述のアミノ酸配列のうちのいずれかと比べて、１、２、３、４、５、６カ所、またはこれを超える変化、例えば、アミノ酸の置換または欠失を有する。
【００４１】
一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１９、４５、７１、９７、１２３、１４９、もしくは１７５から選択される軽鎖ＣＤＲ１；配列番号２０、４６、７２、９８、１２４、１５０、もしくは１７６から選択される軽鎖ＣＤＲ２；および／または配列番号２１、４７、７３、９９、１２５、１５１、もしくは１７７から選択される軽鎖ＣＤＲ３（ＫａｂａｔによるＣＤＲ定義に従う）を含む。一実施形態では、ＣＤＲのうちの１つまたは複数（または、併せて、ＣＤＲの全て）は、上述のアミノ酸配列のうちのいずれかと比べて、１、２、３、４、５、６カ所、またはこれを超える変化、例えば、アミノ酸の置換または欠失を有する。
【００４２】
一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２２、４８、７４、１００、１２６、１５２、または１７８から選択される軽鎖ＣＤＲ１；配列番号２３、４９、７５、１０１、１２７、１５３、または１７９から選択される軽鎖ＣＤＲ２；および配列番号２４、５０、７６、１０２、１２８、１５４、または１８０から選択される軽鎖ＣＤＲ３（ＣｈｏｔｈｉａによるＣＤＲ定義に従う）を含む。一実施形態では、ＣＤＲのうちの１つまたは複数（または、併せて、ＣＤＲの全て）は、上述のアミノ酸配列のうちのいずれかと比べて、１、２、３、４、５、６カ所、またはこれを超える変化、例えば、アミノ酸の置換または欠失を有する。
【００４３】
一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片は、
（ｉ）配列番号３、２９、５５、８１、１０７、１３３、または１５９から選択される重鎖ＣＤＲ１；配列番号４、３０、５６、８２、１０８、１３４、または１６０から選択される重鎖ＣＤＲ２；および配列番号５、３１、５７、８３、１０９、１３５、または１６１から選択される重鎖ＣＤＲ３と；
（ｉｉ）配列番号１６、４２、６８、９４、１２０、１４６、または１７２から選択される軽鎖ＣＤＲ１；配列番号１７、４３、６９、９５、１２１、１４７、または１７３から選択される軽鎖ＣＤＲ２；および配列番号１８、４４、７０、９６、１２２、１４８、または１７４から選択される軽鎖ＣＤＲ３と（ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａの組合せによるＣＤＲ定義に従う）
を含む。
【００４４】
一実施形態では、（ｉ）および／または（ｉｉ）におけるＣＤＲのうちの１つまたは複数（または、併せて、ＣＤＲの全て）は、上述のアミノ酸配列のうちのいずれかと比べて、１、２、３、４、５、６カ所、またはこれを超える変化、例えば、アミノ酸の置換または欠失を有する。
【００４５】
一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片は、
（ｉ）配列番号６、３２、５８、８４、１１０、１３６、１６２から選択される重鎖ＣＤＲ１；配列番号７、３３、５９、８５、１１１、１３７、または１６３から選択される重鎖ＣＤＲ２；および配列番号８、３４、６０、８６、１１２、１３８、または１６４から選択される重鎖ＣＤＲ３と；
（ｉｉ）配列番号１９、４５、７１、９７、１２３、１４９、１７５から選択される軽鎖ＣＤＲ１；配列番号２０、４６、７２、９８、１２４、１５０、１７６から選択される軽鎖ＣＤＲ２；および配列番号２１、４７、７３、９９、１２５、１５１、１７７から選択される軽鎖ＣＤＲ３と（ＫａｂａｔによるＣＤＲ定義に従う）
を含む。
【００４６】
一実施形態では、（ｉ）および／または（ｉｉ）におけるＣＤＲのうちの１つまたは複数（または、併せて、ＣＤＲの全て）は、上述のアミノ酸配列のうちのいずれかと比べて、１、２、３、４、５、６カ所、またはこれを超える変化、例えば、アミノ酸の置換または欠失を有する。
【００４７】
一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片は、
（ｉ）配列番号９、３５、６１、８７、１１３、１３９、または１６５から選択される重鎖ＣＤＲ１；配列番号１０、３６、６２、８８、１１４、１４０、または１６６から選択される重鎖ＣＤＲ２；および配列番号１１、３７、６３、８９、１１５、１４１、または１６７から選択される重鎖ＣＤＲ３と；
（ｉｉ）配列番号２２、４８、７４、１００、１２６、１５２、または１７８から選択される軽鎖ＣＤＲ１；配列番号２３、４９、７５、１０１、１２７、１５３、または１７９から選択される軽鎖ＣＤＲ２；および配列番号２４、５０、７６、１０２、１２８、１５４、または１８０から選択される軽鎖ＣＤＲ３と（ＣｈｏｔｈｉａによるＣＤＲ定義に従う）
を含む。
【００４８】
一実施形態では、（ｉ）および／または（ｉｉ）におけるＣＤＲのうちの１つまたは複数（または、併せて、ＣＤＲの全て）は、上述のアミノ酸配列のうちのいずれかと比べて、１、２、３、４、５、６カ所、またはこれを超える変化、例えば、アミノ酸の置換または欠失を有する。
【００４９】
一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片は、
Ｇ−Ｘ２−Ｘ３−Ｆ−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０（配列番号１８８）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）［配列中、Ｘ２は、ＹもしくはＧであり；Ｘ３は、ＳもしくはＴであり；Ｘ５は、Ｒ、Ｔ、もしくはＳであり；Ｘ６は、ＳもしくはＤであり；Ｘ７は、ＹもしくはＨであり；Ｘ８は、Ａ、Ｗ、もしくはＹであり；Ｘ９は、ＶもしくはＩであり；Ｘ１０は、Ｓ、Ｇ、もしくはＮである］；
Ｘ１−Ｉ−Ｘ３−Ｐ−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｙ−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｘ１４−Ｆ−Ｑ−Ｇ（配列番号１８９）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）［配列中、Ｘ１は、Ｇ、Ｉ、もしくはＶであり；Ｘ３は、ＩもしくはＤであり；Ｘ５は、Ｉ、Ｓ、Ｇ、Ａ、もしくはＤであり；Ｘ６は、ＦもしくはＧであり；Ｘ７は、ＧもしくはＳであり；Ｘ８は、Ｔ、Ｙ、もしくはＧであり；Ｘ９は、ＡもしくはＴであり；Ｘ１０は、ＮもしくはＩであり；Ｘ１２は、ＡもしくはＳであり；Ｘ１３は、ＱもしくはＰであり；Ｘ１４は、ＫもしくはＳである］；
Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｄ−Ｘ１７（配列番号１９０）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）［配列中、Ｘ１は、Ｇ、Ｖ、Ｙ、もしくはＦであり；Ｘ２は、Ｐ、Ｓ、もしくはＧであり；Ｘ３は、Ｉ、Ｙ、Ｒ、もしくはＳであり；Ｘ４は、Ｉ、Ｙ、もしくはＶであり；Ｘ５は、Ｍ、Ｇ、もしくはＹであり；Ｘ６は、Ｇ、Ｔ、もしくはＶであり；Ｘ７は、ＹもしくはＳであり；Ｘ８は、Ｑ、Ｆ、もしくはＲであり；Ｘ９は、Ｆ、Ｙ、もしくは非存在であり；Ｘ１０は、Ｇ、Ｓ、もしくは非存在であり；Ｘ１１は、Ｌ、Ｓ、もしくは非存在であり；Ｘ１２は、Ｆ、Ｙ、もしくは非存在であり；Ｘ１３は、Ｙもしくは非存在であり；Ｘ１４は、Ｈもしくは非存在であり；Ｘ１５は、Ｍもしくは非存在であり；Ｘ１７は、Ｈ、Ｉ、Ｙ、もしくはＶである］；
Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３（配列番号１９１）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）［配列中、Ｘ１は、ＳもしくはＲであり；Ｘ２は、ＧもしくはＡであり；Ｘ３は、ＤもしくはＳであり；Ｘ４は、Ｎ、Ｑ、もしくはＳであり；Ｘ５は、Ｉ、ＳもしくはＴであり；Ｘ６は、Ｇ、Ｉ、もしくはＮであり；Ｘ７は、Ｓ、Ｉ、もしくはＹであり；Ｘ８は、Ｇもしくは非存在であり；Ｘ９は、Ｖもしくは非存在であり；Ｘ１０は、Ｈ、Ｎ、Ｌ、もしくはＲであり；Ｘ１１は、Ｉ、Ｎ、Ｙ、もしくはＳであり；Ｘ１２は、ＶもしくはＬであり；Ｘ１３は、Ｓ、Ｎ、もしくはＡである］；
Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｓ（配列番号１９２）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）［配列中、Ｘ１は、Ｄ、Ａ、Ｓ、もしくはＧであり；Ｘ２は、Ｋ、Ａ、もしくはＮであり；Ｘ３は、ＳもしくはＤであり；Ｘ４は、ＮもしくはＩであり；Ｘ５は、ＲもしくはＬであり；Ｘ６は、ＰもしくはＱである］；または
Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０（配列番号１９３）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）［配列中、Ｘ１は、Ｑ、Ｆ、もしくはＬであり；Ｘ２は、Ｔ、Ｑ、もしくはＳであり；Ｘ３は、Ｗ、Ｌ、もしくはＲであり；Ｘ４は、ＤもしくはＹであり；Ｘ５は、Ｓ、Ｈ、もしくはＴであり；Ｘ６は、ＩもしくはＳであり；Ｘ７は、Ｇ、Ｐ、もしくはＳであり；Ｘ８は、Ｓ、Ｎ、もしくは非存在であり；Ｘ９は、Ｖ、Ｆ、もしくはＹであり、Ｘ１０は、ＶもしくはＴである］
のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または全てを含む。
【００５０】
一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３、ならびにＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、この場合、
（ｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３は、配列番号３、４、および５を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は、配列番号１６、１７、および１８を含むか；または
（ｉｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３は、配列番号２９、３０、および３１を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は、配列番号４２、４３、および４４を含むか；または
（ｉｉｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３は、配列番号５５、５６、および５７を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は、配列番号６８、６９、および７０を含むか；または
（ｉｖ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３は、配列番号８１、８２、および８３を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は、配列番号９４、９５、および９６を含むか；または
（ｖ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３は、配列番号１０７、１０８、および１０９を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は、配列番号１２０、１２１、および１２２を含むか；または
（ｖｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３は、配列番号１３３、１３４、および１３５を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は、配列番号１４６、１４７、および１４８を含むか；または
（ｖｉｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３は、配列番号１５９、１６０、および１６１を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は、配列番号１７２、１７３、および１７４を含む。
【００５１】
一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３、ならびにＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、この場合、
（ｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３は、配列番号６、７、および８を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は、配列番号１９、２０、および２１を含むか；または
（ｉｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３は、配列番号３２、３３、および３４を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は、配列番号４５、４６、および４７を含むか；または
（ｉｉｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３は、配列番号５８、５９、および６０を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は、配列番号７１、７２、および７３を含むか；または
（ｉｖ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３は、配列番号８４、８５、および８６を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は、配列番号９７、９８、および９９を含むか；または
（ｖ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３は、配列番号１１０、１１１、および１１２を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は、配列番号１２３、１２４、および１２５を含むか；または
（ｖｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３は、配列番号１３６、１３７、および１３８を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は、配列番号１４９、１５０、および１５１を含むか；または
（ｖｉｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３は、配列番号１６２、１６３、および１６４を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は、配列番号１７５、１７６、および１７７を含む。
【００５２】
一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３、ならびにＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、この場合、
（ｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３は、配列番号９、１０、および１１を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は、配列番号２２、２３、および２４を含むか；または
（ｉｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３は、配列番号３５、３６、および３７を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は、配列番号４８、４９、および５０を含むか；または
（ｉｉｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３は、配列番号６１、６２、および６３を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は、配列番号７４、７５、および７６を含むか；または
（ｉｖ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３は、配列番号８７、８８、および８９を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は、配列番号１００、１０１、および１０２を含むか；または
（ｖ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３は、配列番号１１３、１１４、および１１５を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は、配列番号１２６、１２７、および１２８を含むか；または
（ｖｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３は、配列番号１３９、１４０、および１４１を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は、配列番号１５２、１５３、および１５４を含むか；または
（ｖｉｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３は、配列番号１６５、１６６、および１６７を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は、配列番号１７８、１７９、および１８０を含む。
【００５３】
一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１２、３８、６４、９０、１１６、１４２、または１６８の可変重鎖の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３と、配列番号２５、５１、７７、１０３、１２９、１５５、または１８１の可変軽鎖の、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３とを含む。一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１２の可変重鎖の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３と、配列番号２５の可変軽鎖の、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３とを含む。一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３８の可変重鎖の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３と、配列番号５１の可変軽鎖の、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３とを含む。一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号６４の可変重鎖の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３と、配列番号７７の可変軽鎖の、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３とを含む。一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９０の可変重鎖の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３と、配列番号１０３の可変軽鎖の、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３とを含む。一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１１６の可変重鎖の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３と、配列番号１２９の可変軽鎖の、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３とを含む。一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１４２の可変重鎖の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３と、配列番号１５５の可変軽鎖の、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３とを含む。一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１６８の可変重鎖の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３と、配列番号１８１の可変軽鎖の、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３とを含む。
【００５４】
一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片は、Ｃｈｏｔｈｉａにより規定される、配列番号１２、３８、６４、９０、１１６、１４２、または１６８の可変重鎖の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３と、配列番号２５、５１、７７、１０３、１２９、１５５、または１８１の可変軽鎖の、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３とを含む。
【００５５】
一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片は、Ｋａｂａｔにより規定される、配列番号１２、３８、６４、９０、１１６、１４２、または１６８の重鎖可変ドメイン配列の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３と、配列番号２５、５１、７７、１０３、１２９、１５５、１８１の軽鎖可変ドメイン配列の、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３とを含む。
【００５６】
さらに他の実施形態では、抗体または抗原結合性断断片は、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａの組合せにより規定される、配列番号１２、３８、６４、９０、１１６、１４２、１６８の重鎖可変ドメイン配列の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３と、配列番号２５、５１、７７、１０３、１２９、１５５、１８１の軽鎖可変ドメイン配列の、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３とを含む。
【００５７】
さらに他の実施形態では、抗体または抗原結合性断断片は、配列番号１２、３８、６４、９０、１１６、１４２、または１６８から選択される重鎖可変ドメイン配列を含む。単離抗体または抗原結合性断片は、軽鎖可変ドメイン配列をさらに含むことが可能であり、この場合、重鎖可変ドメインと、軽鎖可変ドメインとは、組み合わさってＧＤＦ１５に対する抗原結合性部位を形成する。一実施形態では、軽鎖可変ドメイン配列は、配列番号２５、５１、７７、１０３、１２９、１５５、または１８１から選択され、この場合、前記単離抗体またはその抗原結合性断片は、ＧＤＦ１５に結合する。
【００５８】
さらに他の実施形態では、抗体または抗原結合性断断片は、配列番号２５、５１、７７、１０３、１２９、１５５、または１８１から選択される軽鎖可変ドメイン配列を含み、この場合、前記抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＧＤＦ１５に結合する。抗体または抗原結合性断片は、重鎖可変ドメイン配列をさらに含むことが可能であり、この場合、軽鎖可変ドメインと、重鎖可変ドメインとは、組み合わさってＧＤＦ１５に対する抗原結合性部位を形成する。
【００５９】
一部の実施形態では、ＧＤＦ１５に結合する抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１２および２５；３８および５１；６４および７７；９０および１０３；１１６および１２９；１４２および１５５；または１６８および１８１の配列をそれぞれ含む、重鎖および軽鎖可変ドメインを含む。
【００６０】
他の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１２、３８、６４、９０、１１６、１４２、または１６８から選択される配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する、重鎖可変ドメインを含み、この場合、前記抗体は、ＧＤＦ１５に結合する。一態様では、単離抗体またはその抗原結合性断片はまた、配列番号２５、５１、７７、１０３、１２９、１５５、または１８１から選択される配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する、軽鎖可変ドメインも含む。諸実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、Ｋａｂａｔにより規定され、表１に記載されている、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。
【００６１】
他の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２５、５１、７７、１０３、１２９、１５５、または１８１からなる群から選択される配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含み、この場合、前記抗体は、ＧＤＦ１５に結合する。
【００６２】
別の実施形態では、ＧＤＦ１５に結合する単離抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１４、４０、６６、９２、１１８、１４４、または１７０の配列を含む重鎖を有しうる。単離抗体はまた、重鎖と組み合わせて、ヒトＧＤＦ１５への抗原結合性部位を形成しうる軽鎖とも含みうる。特に、軽鎖は、配列番号２７、５３、７９、１０５、１３１、１５７、または１８３を含む配列を有しうる。特に、ＧＤＦ１５に結合する単離抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１４および２７；４０および５３；６６および７９；９２および１０５；１１８および１３１；１４４および１５７；または１７０および１８３の配列をそれぞれ含む重鎖および軽鎖を有しうる。
【００６３】
本明細書で提示される他の実施形態は、配列番号１４、４０、６６、９２、１１８、１４４、１７０からなる群から選択される配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖を含む単離抗体またはその抗原結合性断片を含み、この場合、前記抗体は、ＧＤＦ１５に結合する。一態様では、単離抗体またはその抗原結合性断片はまた、配列番号２７、５３、７９、１０５、１３１、１５７、１８３からなる群から選択される配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖も含む。
【００６４】
他の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断断片は、配列番号２７、５３、７９、１０５、１３１、１５７、１８３からなる群から選択される配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖を含み、この場合、前記抗体は、ＧＤＦ１５に結合する。
【００６５】
本明細書の別の態様では、本明細書で記載される単離抗体またはその抗原結合性断片を含む組成物が提示される。本明細書ではまた、薬学的に許容される担体と組み合わせた抗体組成物も提示される。とりわけ、本明細書では、例えば、抗体のＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｇ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅ、またはＡＢＧＤＦ１５−Ｄなど、表１の抗体またはその抗原結合性断片を含む医薬組成物が提示される。本明細書ではまた、表１の単離抗体またはその抗原結合性断片のうちの２つ以上の組合せを含む医薬組成物も提示される。
【００６６】
本明細書の別の態様では、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体の重鎖および軽鎖、重鎖および軽鎖可変領域、重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲをコードするヌクレオチド配列の一方または両方を含む核酸分子が提示される。ある種の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体をコードするヌクレオチド配列は、コドン最適化されている。本明細書の一実施形態では、例えば、表１にまとめられたＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｇ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅ、もしくはＡＢＧＤＦ１５−Ｄのうちのいずれか、またはこれと実質的に同一な配列のうちの１つまたは複数から選択される抗ＧＤＦ１５抗体の重鎖および軽鎖可変領域をそれぞれコードする、第１の核酸および第２の核酸が提示される。例えば、核酸は、表１に示されるヌクレオチド配列、またはこれと実質的に同一な配列（例えば、これと、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％、またはこれを超えて同一な配列、または表１に示されている配列と、３、６、１５、３０、または４５ヌクレオチド以下分異なる配列）を含みうる。
【００６７】
他の実施形態では、核酸分子は、ＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｇ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅ、もしくはＡＢＧＤＦ１５−Ｄのアミノ酸配列、または表１に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび／または重鎖定常領域をコードするヌクレオチド配列；あるいは表１のヌクレオチド配列；あるいは上述の配列のうちのいずれかと実質的に同一な配列（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％、またはこれを超えて同一な配列）を含む。
【００６８】
他の実施形態では、核酸分子は、ＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｇ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅ、もしくはＡＢＧＤＦ１５−Ｄのアミノ酸配列、または表１に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインおよび／または軽鎖定常領域をコードするヌクレオチド配列；あるいは表１のヌクレオチド配列；あるいは上述の配列のうちのいずれかと実質的に同一な配列（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％、またはこれを超えて同一な配列）を含む。
【００６９】
抗ＧＤＦ１５重鎖および抗ＧＤＦ１５軽鎖の可変ドメインおよび定常領域をコードする上述のヌクレオチド配列は、別個の核酸分子内に存在する場合もあり、同じ核酸分子内に存在する場合もある。ある種の実施形態では、核酸分子は、リーダー配列をコードするヌクレオチド配列を含む。
【００７０】
ある種の実施形態では、核酸分子は、表１に示されるアミノ酸配列、またはこれと実質的に相同な配列（例えば、これと、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％、もしくはこれを超えて同一な配列、および／または１、２、３カ所、もしくはこれを超える置換、挿入、もしくは欠失、例えば、保存された置換を有する配列）を有する重鎖可変領域に由来する、少なくとも１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む。
【００７１】
別の実施形態では、核酸分子は、表１に示されるアミノ酸配列、またはこれと実質的に相同な配列（例えば、これと、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％、もしくはこれを超えて同一な配列、および／または１、２、３カ所、もしくはこれを超える置換、挿入、もしくは欠失、例えば、保存された置換を有する配列）を有する軽鎖可変領域に由来する、少なくとも１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む。
【００７２】
さらに別の実施形態では、核酸分子は、表１に示されるアミノ酸配列、またはこれと実質的に相同な配列（例えば、これと、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％、もしくはこれを超えて同一な配列、および／または１、２、３カ所、もしくはこれを超える置換、挿入、もしくは欠失、例えば、保存された置換を有する配列）を有する重鎖および軽鎖可変領域に由来する、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、もしくは６つのＣＤＲ、または超可変ループをコードするヌクレオチド配列を含む。
【００７３】
本明細書の他の実施形態では、配列番号１２、３８、６４、９０、１１６、１４２、または１６８から選択される配列を有する、重鎖可変領域をコードする単離核酸配列が提示される。諸実施形態では、核酸は、配列番号１３、３９、６５、９１、１１７、１４３、または１６９から選択される配列と、少なくとも９０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。ある種の実施形態では、配列は、配列番号１３、３９、６５、９１、１１７、１４３、または１６９のヌクレオチドを含む。
【００７４】
諸実施形態では、軽鎖可変領域をコードする単離核酸配列は、配列番号２５、５１、７７、１０３、１２９、１５５、または１８２から選択される配列を含む。特に、核酸は、配列番号２６、５２、７８、１０４、１３０、１５６、または１８３から選択される配列と、少なくとも９０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。ある種の実施形態では、配列は、配列番号２６、５２、７８、１０４、１３０、１５６、または１８３である。
【００７５】
他の実施形態では、重鎖をコードする単離核酸は、配列番号１４、４０、６６、９２、１１８、１４４、もしくは１７０から選択されるアミノ酸配列、またはこれと実質的に同一なヌクレオチド配列、例えば、少なくとも９０％同一なヌクレオチド配列を有する。他の実施形態では、重鎖をコードする単離核酸は、配列番号１５、４１、６７、９３、１１９、１４５、もしくは１７１から選択されるヌクレオチド配列、またはこれと実質的に同一なヌクレオチド配列、例えば、少なくとも９０％同一なヌクレオチド配列を有する。
【００７６】
他の実施形態では、軽鎖をコードする単離核酸は、配列番号２７、５３、７９、１０５、１３１、１５７、もしくは１８３から選択されるヌクレオチド配列、またはこれと実質的に同一なヌクレオチド配列、例えば、少なくとも９０％同一なヌクレオチド配列を有する。他の実施形態では、軽鎖をコードする単離核酸は、配列番号２８、５４、８０、１０６、１３２、１５８、もしくは１８４から選択されるヌクレオチド配列、またはこれと実質的に同一なヌクレオチド配列、例えば、少なくとも９０％同一なヌクレオチド配列を有する。
【００７７】
本明細書では、配列番号２８、５４、８０、１０６、１３２、１５８、または１８４から選択される配列と、少なくとも９０％の配列同一性を有する、軽鎖可変ドメインを含むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単離核酸が提示される。
【００７８】
本明細書ではまた、本明細書で記載される核酸分子のうちの１つまたは複数を含むベクターも提示される。重鎖領域および軽鎖領域は、同じベクター内に存在する場合もあり、別個のベクター内に存在する場合もある。
【００７９】
本明細書ではまた、上記で記載した抗体の重鎖をコードする組換えＤＮＡ配列と、上記で記載した抗体の軽鎖をコードする、第２の組換えＤＮＡ配列とを含み、この場合、前記ＤＮＡ配列は、プロモーターに作動可能に連結され、宿主細胞内で発現することが可能である単離宿主細胞も提示される。核酸は、単一のベクター内に存在する場合もあり、同じ宿主細胞内または別個の宿主細胞内に存在する、別個のベクター内に存在する場合もある。宿主細胞は、真核細胞、例えば、哺乳動物細胞、昆虫細胞、酵母細胞の場合もあり、または、原核細胞、例えば、大腸菌（E. coli）の場合もある。例えば、哺乳動物細胞は、培養細胞の場合もあり、細胞系の場合もある。例示的な哺乳動物細胞は、リンパ球細胞系（例えば、ＮＳＯ）、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）、ＣＯＳ細胞、卵母細胞、およびトランスジェニック動物に由来する細胞、例えば、乳腺上皮細胞を含む。抗体は、ヒト抗体でありうる。宿主細胞は、非ヒト哺乳動物細胞でありうる。
【００８０】
諸実施形態では、細胞は、ヒト細胞である。細胞は、対象中にありうる。一実施形態では、細胞は、内皮細胞である。他の実施形態では、細胞は、脂肪細胞、筋細胞、および肝細胞のうちの１つまたは複数でありうる。諸実施形態では、対象は、ヒトである。
【００８１】
別の態様では、本明細書で記載される抗体を提供する方法が開示される。方法は、ＧＤＦ１５抗原（例えば、ＧＤＦ１５エピトープの少なくとも一部を含む抗原）を用意するステップと；ＧＤＦ１５ポリペプチドに特異的に結合する抗体分子を得るステップと；抗体分子が、ＧＤＦ１５ポリペプチドに特異的に結合するのかどうかを査定するか、または抗体分子をモジュレートするとき、例えば、ＧＤＦ１５の活性を阻害するときの有効性を査定するステップとを含む。方法は、抗体分子を、対象、例えば、ヒトまたは非ヒト動物へと投与するステップをさらに含みうる。
【００８２】
本明細書の別の態様では、対象、例えば、患者におけるＧＤＦ１５関連障害を処置、改善、または防止する方法が提示される。方法は、有効量の、本明細書で記載される抗体またはその抗原結合性断片を含む組成物を、対象へと投与するステップを含む。一実施形態では、ＧＤＦ１５関連障害は、食欲不振−悪液質、高齢者の食欲不振、神経性食欲不振、がんと関連する悪液質、ＡＩＤＳと関連する悪液質、心不全と関連する悪液質、嚢胞性線維症と関連する悪液質、関節リウマチと関連する悪液質、腎疾患と関連する悪液質、ＣＯＰＤと関連する悪液質、ＡＬＳと関連する悪液質、腎不全と関連する悪液質、または股関節骨折と関連する悪液質などの消耗性障害と関連する。他の実施形態では、ＧＤＦ１５関連障害は、サルコペニア、飢餓、ならびに食欲、脂肪量、エネルギー平衡の異常、および／または不随意の体重減少と関連する障害、ならびに重篤な疾病患者の死亡率および罹患率の低減と関連する。
【００８３】
本明細書の一態様では、対象、例えば、それを必要とする対象における食欲および／または食物摂取を増大させる方法が提示される。方法は、有効量の、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体またはその断片を、対象へと投与するステップを含む。
【００８４】
本明細書の別の態様では、対象、例えば、それを必要とする対象における体重を増大させる方法が提示される。方法は、有効量の、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体またはその断片を、対象へと投与するステップを含む。
【００８５】
本明細書の別の態様では、対象、例えば、それを必要とする対象における体重、筋肉量、食欲、または食物摂取の減少のうちの１つまたは複数を阻害または軽減する方法が提示される。方法は、有効量の、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体またはその断片を、対象へと投与するステップを含む。
【００８６】
一部の実施形態では、対象は、哺乳動物、例えば、ヒトである。一実施形態では、対象は、消耗性障害、例えば、悪液質もしくはサルコペニア、またはこれらの両方を有する。他の実施形態では、対象は、がん、慢性心不全、慢性腎疾患、ＣＯＰＤ、ＡＩＤＳ、多発性硬化症、関節リウマチ、敗血症、または結核を有する。抗ＧＤＦ１５抗体またはその断片は、対象へと、全身投与（例えば、経口投与、非経口投与、皮下投与、静脈内投与、直腸内投与、筋内投与、腹腔内投与、鼻腔内投与、経皮投与、または吸入もしくは腔内植込みにより投与）することもでき、局所投与することもでき、粘膜への適用により投与することもできる。
【００８７】
本明細書の一態様では、医薬としての使用のための、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体またはその断片が提示される。
【００８８】
本明細書の別の態様では、対象、例えば、本明細書で記載される対象における、ＧＤＦ１５関連障害（例えば、本明細書で記載されるＧＤＦ１５関連障害、例えば、消耗性障害、例えば、悪液質もしくはサルコペニア、がん、慢性心不全、慢性腎疾患、ＣＯＰＤ、ＡＩＤＳ、多発性硬化症、関節リウマチ、敗血症、または結核）の、処置、改善、または防止における使用のための、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体またはその断片が提示される。
【００８９】
本明細書の一態様では、対象、例えば、本明細書で記載される対象における食欲および／または食物摂取の増大における使用のための、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体またはその断片が提示される。
【００９０】
本明細書の別の態様では、対象、例えば、本明細書で記載される対象における体重の増大における使用のための、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体またはその断片が提示される。
【００９１】
本明細書の別の実施形態では、対象、例えば、本明細書で記載される対象における体重、筋肉量、食欲、または食物摂取の減少のうちの１つまたは複数の阻害または軽減における、抗ＧＤＦ１５抗体またはその断片が提示される。
【００９２】
ある実施形態では、消耗性障害、例えば、悪液質もしくはサルコペニア、がん、慢性心不全、慢性腎疾患、ＣＯＰＤ、ＡＩＤＳ、多発性硬化症、関節リウマチ、敗血症、または結核の処置における使用のための、抗ＧＤＦ１５抗体またはその断片が提供される。
【００９３】
本明細書の別の態様では、対象、例えば、本明細書で記載される対象における、ＧＤＦ１５関連障害（例えば、本明細書で記載されるＧＤＦ１５関連障害）を処置、改善、または防止するための医薬の製造における、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体またはその断片の使用が提示される。
【００９４】
本明細書の一態様では、対象、例えば、本明細書で記載される対象における食欲および／または食物摂取を増大させるための医薬の製造における、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体またはその断片の使用が提示される。
【００９５】
本明細書の別の態様では、対象、例えば、本明細書で記載される対象における体重を増大させるための医薬の製造における、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体またはその断片の使用が提示される。
【００９６】
本明細書の別の実施形態では、対象、例えば、本明細書で記載される対象における体重、筋肉量、食欲、または食物摂取の減少のうちの１つまたは複数を阻害または軽減する方法における、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体またはその断片の使用が提示される。
【００９７】
ある実施形態では、消耗性障害、例えば、悪液質もしくはサルコペニア、がん、慢性心不全、慢性腎疾患、ＣＯＰＤ、ＡＩＤＳ、多発性硬化症、関節リウマチ、敗血症、または結核を処置するための医薬の製造における、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体またはその断片の使用が提供される。
【００９８】
抗ＧＤＦ１５抗体の投与量および治療レジメンは、当業者が決定しうる。ある種の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体を、約１〜３０ｍｇ／ｋｇ、例えば、約５〜２５ｍｇ／ｋｇ、約１０〜２０ｍｇ／ｋｇ、または約１〜５ｍｇ／ｋｇの用量で、注射（例えば、皮下注射または静脈内注射）により投与する。投与スケジュールは、例えば、毎週１回〜２、３、または４週間ごとに１回で変動しうる。
【００９９】
本明細書で記載される方法および組成物は、他の薬剤または治療モダリティーと組み合わせて使用することができる。一実施形態では、本明細書で記載される方法は、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体を、薬剤または治療手順もしくは治療モダリティーと組み合わせて、障害を処置または防止するのに有効な量で対象へと投与するステップを含む。抗ＧＤＦ１５抗体および薬剤または治療手順もしくは治療モダリティーは、同時に投与することもでき、任意の順序で、逐次的に投与することもできる。抗ＧＤＦ１５抗体分子の配列と、他の治療剤、手順、またはモダリティー（例えば、本明細書で記載される）との任意の組合せを使用することができる。抗体分子および／または他の治療剤、手順、もしくはモダリティーは、障害が活動性である期間に投与することもでき、寛解期またはそれほど疾患がより活動性でない期間に投与することもできる。抗体は、他の処置の前に投与することもでき、処置と共時的に投与することもでき、処置後に投与することもでき、障害の寛解期に投与することもできる。
【０１００】
本明細書の別の態様では、例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏにおける試料中（例えば、生物学的試料中、例えば、血清中、精液中、もしくは尿中、または組織生検中）の、ＧＤＦ１５の存在を検出する方法が提示される。本方法を使用して、対象における、本明細書で記載される障害を査定する（例えば、その処置もしくは進行をモニタリングし、診断し、かつ／または病期分類する）ことができる。方法は、（ｉ）試料（および、任意選択で、基準試料、例えば、対照試料）を、相互作用が生じることを可能とする条件下で、本明細書で記載される抗体分子と接触させるか、または対象へと投与するステップと、（ｉｉ）抗体と、試料（および、任意選択で、基準試料、例えば、対照試料）との複合体の形成を検出するステップとを含む。複合体の形成は、ＧＤＦ１５の存在を指し示し、本明細書で記載される処置の適性または必要を指し示しうる。方法は、免疫組織化学、免疫細胞化学、ＦＡＣＳ、抗体分子複合体化磁気ビーズ、ＥＬＩＳＡアッセイ、ＰＣＲ技法（例えば、ＲＴ−ＰＣＲ）を伴いうる。
【０１０１】
典型的に、ｉｎ  ｖｉｖｏおよびｉｎ  ｖｉｔｒｏの診断方法において使用される抗体は、結合したかまたは結合していない結合剤の検出を容易にするように、検出可能な物質で、直接的または間接的に標識される。適切な検出可能な物質は、多様な生体活性酵素、補欠分子族、蛍光材料、発光材料、常磁性（例えば、核磁気共鳴活性）材料、および放射性材料を含む。
【０１０２】
本明細書の別の態様では、本明細書で記載される抗体と使用のための指示書とを含む、診断用キットまたは治療用キットが提示される。
【０１０３】
別段に定義されない限り、本明細書で使用される、全ての技術用語および科学的用語は、本開示が属する技術分野の当業者により一般的に理解される意味と同じ意味を有する。本開示の実施または試験では、本明細書で記載される方法および材料と同様または同等な方法および材料を使用しうるが、下記では、適切な方法および材料について記載される。本明細書で言及される、全ての刊行物、特許出願、特許、および他の参考文献は、参照によりそれらの全体において組み込まれる。齟齬が生じる場合は、定義を含む本明細書に従う。加えて、材料、方法、および例は、例示的なものであるに過ぎず、限定を意図するものではない。
【０１０４】
本開示の他の特徴、目的、および利点は、明細書および図面から明らかであり、特許請求の範囲からも明らかであろう。
【０１０５】
用語法
別段に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術的および科学的用語は、本開示が関する技術分野の当業者により一般的に理解される意味と同じ意味を有する。ある種の用語は、下記および本出願を通して定義される。本明細書で使用される「ある（ａ）」、「ある（ａｎ）」、および「その」という冠詞は、その冠詞の、１つまたは１つを超える（例えば、少なくとも１つの）文法的目的語を指す。
【０１０６】
文脈から別段に指し示されない限り、本明細書では、「または」という用語を、「および／または」という用語を意味するように使用し、これと互換的に使用される。
【０１０７】
要素を、例えば、マーカッシュ群のフォーマットによる一覧、または「〜から選択された」一覧として提示する場合、要素の各亜群もまた開示され、任意の要素を群から除去することもできる。
【０１０８】
一般に、本発明または本発明の態様が、特定の要素および／または特徴を含むと称する場合、本発明のある種の実施形態または本発明の態様は、このような要素および／または特徴からなるか、またはこれらから本質的になる。簡便さを目的として述べると、本明細書では、これらの実施形態が、その言葉通りに、具体的に示されているわけではない。また、「〜を含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、および「〜を含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」という用語は、オープンであることを意図し、さらなる要素またはステップの包含を許容することも留意されたい。
【０１０９】
範囲を与える場合、端点を含む。さらに、別段に指し示されるか、文脈および当業者の理解から別段に明らかでない限り、範囲として表す値は、文脈により別段であることが明確に指示されない限り、本発明の異なる実施形態で言明される範囲内で、範囲の下限の単位の１０分の１までの、任意の具体的な値または部分範囲を仮定しうる。
【０１１０】
「約（Ａｂｏｕｔ）」および「約（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」とは一般に、測定値の性質および精度を踏まえ、測定される数量について許容可能な程度の誤差を意味するものとする。例示的な誤差の程度は、所与の値または値の範囲の、２０パーセント（％）以内、典型的に、１０％以内である、より典型的に、５％以内である。
【０１１１】
「ＧＤＦ１５タンパク質」または「ＧＤＦ１５抗原」または「ＧＤＦ１５」という用語は、互換的に使用され、異なる種における成長分化因子１５（ＧＤＦ１５）タンパク質を指す。例えば、表１で示される配列番号１（ＮＣＢＩ基準配列：ＮＰ＿００４８５５．２）は、ヒトＧＤＦ１５タンパク質の、例示的なアミノ酸配列を提示し、表１で示される配列番号２（ＮＣＢＩ基準配列：ＮＭ＿００４８６４．２）は、ヒトＧＤＦ１５をコードする、例示的な核酸配列を提示し、ヒトＧＤＦ１５については、先行の報告および文献でも記載されており、そこでは、ヒトＧＤＦ１５はまた、ＭＩＣ−１、ＰＬＡＢ、ＴＧＦ−ＰＬ、ＰＴＧＦＢ、ＰＤＦ、およびＮＡＧ−１としても公知である。「ＧＤＦ１５」という用語は、ヒト、カニクイザル（cyno）、齧歯類、および他の種などの哺乳動物種に由来する、自然発生の分子を含む。
【０１１２】
本明細書で記載される抗体は、ＧＤＦ１５の変異体または突然変異体に結合しうる。「ＧＤＦ１５の変異体または突然変異体」という用語は、本明細書で記載される、天然の一次構造（アミノ酸配列）と実質的に同じアミノ酸配列を有する、天然ＧＤＦ１５タンパク質の突然変異体を含む。本明細書の「実質的に同じアミノ酸配列を有する、天然ヒト成長分化因子１５（ＧＤＦ１５）タンパク質の突然変異体」という用語は、このような突然変異体タンパク質を指す。
【０１１３】
本明細書で使用される「抗体」という用語は、タンパク質、例えば、少なくとも１つの免疫グロブリン可変ドメイン配列を含む免疫グロブリン鎖またはその断片を指す。「抗体」という用語は、例えば、モノクローナル抗体（免疫グロブリンＦｃ領域を有する全長抗体を含む）を含む。一実施形態では、抗体は、全長抗体または全長免疫グロブリン鎖を含む。別の実施形態では、抗体は、全長抗体または全長免疫グロブリン鎖の抗原結合性断片（すなわち、「抗原結合性部分」）または機能的断片を含む。
【０１１４】
諸実施形態では、全長抗体は、ジスルフィド結合により相互接続される少なくとも２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質である。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書では、ＶＨと略記する）および重鎖定常領域を含む。本明細書では、「重鎖可変領域」および「重鎖可変ドメイン」という用語が、互換的に使用される。重鎖定常領域は、３つのドメインであるＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書では、ＶＬと略記する）および軽鎖定常領域を含む。本明細書では、「軽鎖可変領域」および「軽鎖可変ドメイン」という用語が、互換的に使用される。軽鎖定常領域は、１つのドメインであるＣＬを含む。ＶＨ領域およびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称するより保存的な領域を散在させた、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称する超可変性の領域へとさらに細分することができる。各ＶＨおよび各ＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端へと、以下の順序で配置される３つのＣＤＲおよび４つのＦＲ：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４からなる。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合性ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫グロブリンの、宿主組織または免疫系の多様な細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第１の成分（Ｃｌｑ）を含む因子への結合を媒介しうる。
【０１１５】
ある実施形態では、抗体は、単一特異性抗体であり、単一のエピトープに結合する。例えば、それらの各々が同じエピトープに結合する、複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列を有する単一特異性抗体である。
【０１１６】
ある実施形態では、抗体は、多特異性抗体である、例えば、抗体は、複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列を含み、この場合、複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列のうちの第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列は、第１のエピトープに対する結合特異性を有し、複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列のうちの第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列は、第２のエピトープに対する結合特異性を有する。ある実施形態では、第１のエピトープと、第２のエピトープとは、同じ抗原上、例えば、同じタンパク質（または多量体タンパク質のサブユニット）上にある。ある実施形態では、第１のエピトープと、第２のエピトープとは、重複する。ある実施形態では、第１のエピトープと、第２のエピトープとは、重複しない。ある実施形態では、第１のエピトープと、第２のエピトープとは、異なる抗原上、例えば、異なるタンパク質（または多量体タンパク質の異なるサブユニット）上にある。ある実施形態では、多特異性抗体分子は、第３の、第４の、または第５の免疫グロブリン可変ドメインを含む。ある実施形態では、多特異性抗体は、二特異性抗体、三特異性抗体、または四特異性抗体である。
【０１１７】
ある実施形態では、多特異性抗体分子は、二特異性抗体分子である。二特異性抗体は、２つを超えない抗原に対する特異性を有する。二特異性抗体分子は、第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列が、第１のエピトープに対する結合特異性を有し、第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列が、第２のエピトープに対する結合特異性を有することを特徴とする。
【０１１８】
本明細書で使用される、抗体の「抗原結合性部分」または「抗原結合性断片」という用語は、所与の抗原（例えば、ヒトＧＤＦ１５）に特異的に結合する能力を保持する、抗体の１つまたは複数の断片を指す。抗体の抗原結合性機能は、インタクトな抗体の断片により果たされうる。抗体の抗原結合性部分または抗原結合性断片という用語内に包含される結合性断片の例は、（ｉ）Ｆａｂ断片、ＶＬドメイン、ＶＨドメイン、ＣＬドメイン、およびＣＨ１ドメインからなる一価断片；（ｉｉ）ヒンジ領域においてジスルフィド架橋により連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片である、Ｆ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）ＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一のアームのＶＬドメインおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片；（ｖ）ＶＨドメインからなるダイアボディ（ｄＡｂ）断片；（ｖｉ）ラクダ科動物可変ドメインまたはラクダ化可変ドメイン；（ｖｉｉ）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）（例えば、Birdら、(1988) Science 242:423〜426；およびHustonら、(1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879〜5883を参照されたい）；（ｖｉｉｉ）ＶＨドメインまたはＶＬドメインからなる単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）断片（Wardら、1989 Nature 341:544〜546）；ならびに（ｉｘ）単離相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。これらの抗体断片は、当業者に公知の従来の技法を使用して得ることができ、断片も、インタクトな抗体と同じ形で有用性についてスクリーニングされる。
【０１１９】
さらに、Ｆｖ断片の２つのドメインであるＶＬドメインおよびＶＨドメインは、個別の遺伝子によりコードされるが、組換え法を使用して、それらを単一のタンパク質鎖として作製することを可能とする人工のペプチドリンカーにより付着することができ、この場合、ＶＬ領域およびＶＨ領域は、対合して一価分子（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として公知であり、例えば、Birdら、1988 Science 242:423〜426；およびHustonら、1988 Proc. Natl. Acad. Sci. 85:5879〜5883を参照されたい）を形成する。このような単鎖抗体は、抗体の１つまたは複数の抗原結合性部分または抗原結合性断片を含む。これらの抗体断片は、当業者に公知の従来の技法を使用して得られ、断片も、インタクトな抗体と同じ形で有用性についてスクリーニングされる。
【０１２０】
抗原結合性断片はまた、単一ドメイン抗体、マキシボディ、ミニボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ−ＮＡＲ、およびｂｉｓ−ｓｃＦｖ（例えば、HollingerおよびHudson、2005、Nature Biotechnology、23、9、1126〜1136を参照されたい）へと組み込むこともできる。抗体の抗原結合性部分は、ＩＩＩ型フィブロネクチン（Ｆｎ３）などのポリペプチド（フィブロネクチンポリペプチドモノボディについて記載する米国特許第６，７０３，１９９号明細書を参照されたい）に基づく足場へとグラフトすることができる。
【０１２１】
抗原結合性断片は、相補的な軽鎖ポリペプチドと併せて抗原結合性領域の対を形成する、タンデムＦｖセグメント（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）の対を含む単鎖分子へと組み込むことができる（Zapataら、1995 Protein Eng. 8（10）:1057〜1062；および米国特許第５，６４１，８７０号明細書）。
【０１２２】
ある実施形態では、抗体は、ダイアボディおよび単鎖分子のほか、抗体（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ）の抗原結合性断片を含む。例えば、抗体は、重（Ｈ）鎖可変ドメイン配列（本明細書では、ＶＨと略記する）と、軽（Ｌ）鎖可変ドメイン配列（本明細書では、ＶＬと略記する）とを含みうる。ある実施形態では、抗体は、重鎖および軽鎖を含むか、またはこれらからなる。別の例では、抗体は、２つの重（Ｈ）鎖可変ドメイン配列と、２つの軽（Ｌ）鎖可変ドメイン配列とを含み、これにより、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｃ、Ｆｄ、Ｆｄ’、Ｆｖ、単鎖抗体（例えば、ｓｃＦｖ）、単一可変ドメイン抗体、ダイアボディ（Ｄａｂ）（二価および二特異性）、および全抗体の修飾により作製される場合もあり、組換えＤＮＡ技術を使用してデノボで合成された抗体の場合もある、キメラ（例えば、ヒト化）抗体など、２つの抗原結合性部位を形成する。これらの機能的な抗体断片は、それらのそれぞれの抗原または受容体と選択的に結合する能力を保持する。抗体および抗体断片は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、およびＩｇＥを含むがこれらに限定されない、任意のクラスの抗体、および任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４）の抗体に由来しうる。抗体の調製物は、モノクローナル抗体分子の場合もあり、ポリクローナル抗体分子の場合もある。抗体はまた、ヒト抗体、ヒト化抗体、ＣＤＲグラフト抗体、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏで作り出された抗体でもありうる。抗体は、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４から選択される重鎖定常領域を有しうる。抗体はまた、例えば、カッパまたはラムダから選択される軽鎖も有しうる。本明細書では、「免疫グロブリン」（Ｉｇ）という用語が、「抗体」という用語と互換的に使用される。
【０１２３】
本明細書で使用される「アフィニティー」という用語は、単一の抗原性部位における抗体と抗原との間の相互作用の強度を指す。各抗原性部位内では、抗体「アーム」の可変領域は、多数の部位において、弱い非共有結合的力を介して抗原と相互作用し、相互作用が大きいほど、アフィニティーは強くなる。抗体またはその抗原結合性断片（例えば、Ｆａｂ断片）について本明細書で使用される「高アフィニティー」という用語は一般に、１０−９Ｍ以下のＫＤを有する抗体または抗原結合性断片を指す。
【０１２４】
「アミノ酸」という用語は、自然発生のアミノ酸および合成アミノ酸のほか、自然発生のアミノ酸と同様の形で機能するアミノ酸類似体およびアミノ酸模倣体も指す。自然発生のアミノ酸とは、遺伝子コードによりコードされるアミノ酸のほか、後で修飾されたアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタミン酸、およびＯ−ホスホセリンでもある。アミノ酸類似体とは、自然発生のアミノ酸と同じ基本的化学構造、すなわち、水素、カルボキシル基、アミノ基、およびＲ基、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムに結合したアルファ炭素を有する化合物を指す。このような類似体は、修飾Ｒ基（例えば、ノルロイシン）または修飾ペプチド骨格を有するが、自然発生のアミノ酸と同じ基本的化学構造を保持する。アミノ酸模倣体とは、アミノ酸の一般的な化学構造と異なる構造を有するが、自然発生のアミノ酸と同様の形で機能する化学化合物を指す。
【０１２５】
本明細書で使用される「結合特異性」という用語は、１つの抗原決定基だけと反応する個別の抗原結合部位の能力を指す。
【０１２６】
抗体（例えば、ＧＤＦ１５結合性抗体）に「特異的に（または選択的に）結合する」という語句は、タンパク質および他の生体物質の異質な集団内のコグネイト抗原（例えば、ヒトＧＤＦ１５またはカニクイザルＧＤＦ１５）の存在を決定する結合反応を指す。本明細書では、「抗原を認識する抗体」および「抗原に特異的な抗体」という語句は、「抗原に特異的に結合する抗体」という用語と互換的に使用される。
【０１２７】
「ＧＤＦ１５を媒介する」という用語は、ＧＤＦ１５が、ＴＧＦβスーパーファミリーの食欲調節メンバーとして公知であり、ＧＤＦ１５レベルの上昇が、食欲不振（例えば、食欲不振−悪液質）など、消耗性障害と関連するという事実を指す。
【０１２８】
本明細書で使用される「ＧＤＦ１５関連障害」、「ＧＤＦ１５関連状態」、または同様の用語は、ＧＤＦ１５のレベルおよび／または生物学的活性の低減が求められる、任意の数の状態または疾患を指す。これらの状態は、食欲不振−悪液質、老年性食欲不振、神経性食欲不振、がんと関連する悪液質、ＡＩＤＳと関連する悪液質、心不全と関連する悪液質、嚢胞性線維症と関連する悪液質、関節リウマチと関連する悪液質、腎疾患と関連する悪液質、ＣＯＰＤと関連する悪液質、ＡＬＳと関連する悪液質、腎不全と関連する悪液質、または股関節骨折と関連する悪液質などの消耗性障害を伴う状態を含むがこれらに限定されない。
【０１２９】
ＧＤＦ１５レベルの上昇と関連するか、またはこれから生じる、他のＧＤＦ１５関連疾患またはＧＤＦ１５関連障害は、サルコペニア、例えば、悪液質と関連する臨床状態であって、骨格筋量および筋強度の減少を特徴とする臨床状態と；飢餓とを含む。飢餓は、典型的に、不十分な食餌および／または栄養の取込みに起因する、体脂肪量および除脂肪量（non-fat mass）の減少を結果としてもたらす（Thomas (2007) Clinical Nutrition 26:389〜399）。飢餓の影響は、食餌と、栄養、例えば、タンパク質の取込みとを改善することにより反転することが多い。
【０１３０】
ＧＤＦ１５レベルの上昇と関連するか、またはこれから生じる、さらに他のＧＤＦ１５関連疾患またはＧＤＦ１５関連障害は、食欲、脂肪量、エネルギー平衡の異常、および／または不随意の体重減少と関連する障害、ならびに重篤な疾病患者の死亡率および罹患率の低減を含むがこれらに限定されない。
【０１３１】
本明細書で使用される「悪液質」とは、基礎疾患と関連し、筋肉量の不随意的減少を特徴とする、代謝性症候群を意味する。悪液質は、不随意的体重減少、脂肪量の減少、食欲不振、炎症、インスリン抵抗性、疲労、筋力低下、食欲の著明な喪失、および／または筋肉タンパク質分解の増大を伴うことが多い。悪液質は、飢餓、加齢と関連する筋肉量の減少、吸収不良、および甲状腺機能亢進と異なる。悪液質と関連する基礎疾患は、がん、慢性心不全、慢性腎疾患、ＣＯＰＤ、ＡＩＤＳ、多発性硬化症、関節リウマチ、敗血症、または結核を含む。
【０１３２】
本明細書で使用される「サルコペニア」とは、主に、骨格筋量および筋強度の減少を特徴とする、状態であると理解される。サルコペニアは、しばしば、老化と関連する。RueggおよびGlass (2011) Annual Rec. Pharmacol. Toxicol. 51:373〜395を参照されたい。１つの手法では、メートル単位の対象の身長で除した、対象の四肢骨格筋量の値が、若齢者の正常平均値を、２標準偏差下回ると、対象において、サルコペニアを同定することができる（Thomas (2007) Clin Nutr. 26(4):389〜99; Baumgartnerら、(1999) Mech. Aging Dev. 147:755〜763）。
【０１３３】
「キメラ抗体」という用語は、（ａ）抗原結合性部位（可変領域）を、クラス、エフェクター機能、および／もしくは種が異なるか、またはクラス、エフェクター機能、および／もしくは種を改変された定常領域、あるいはキメラ抗体に新たな特性を付与する全く異なる分子、例えば、酵素、毒素、ホルモン、成長因子、薬物などへと連結するように、定常領域またはその一部を、改変するか、置きかえるか、または交換した抗体分子；あるいは（ｂ）可変領域またはその一部を、抗原特異性が異なるか、または抗原特異性を改変された可変領域により改変するか、置きかえるか、またはこれと交換した抗体分子である。例えば、マウス抗体は、その定常領域を、ヒト免疫グロブリンに由来する定常領域で置きかえることにより修飾することができる。ヒト定常領域による置きかえに起因して、キメラ抗体は、ヒトにおける抗原性を、元のマウス抗体と比較して低減しながら、抗原の認識におけるその特異性を保持しうる。
【０１３４】
「保存的に修飾された変異体」という用語は、アミノ酸配列および核酸配列のいずれにも適用される。特定の核酸配列に関して、保存的に修飾された変異体とは、同一なアミノ酸配列もしくは本質的に同一なアミノ酸配列をコードする核酸、または核酸がアミノ酸配列をコードしない場合は、本質的に同一な配列を指す。遺伝子コードの縮重性のために、多数の機能的に同一な核酸が、所与の任意のタンパク質をコードする。例えば、コドンであるＧＣＡ、ＧＣＣ、ＧＣＧ、およびＧＣＵのいずれも、アミノ酸であるアラニンをコードする。したがって、アラニンがコドンにより指定されるあらゆる位置で、コードされるポリペプチドを改変せずに、コドンを、記載された対応するコドンのうちのいずれかへと改変することができる。このような核酸変異は、保存的に修飾された変異のうちの１種である「サイレント変異」である。ポリペプチドをコードする、本明細書のあらゆる核酸配列はまた、核酸のあらゆる可能なサイレント変異についても記載する。当業者は、核酸内の各コドン（通常メチオニンだけのコドンであるＡＵＧ、および通常トリプトファンだけのコドンであるＴＧＧを除く）を修飾して、機能的に同一な分子をもたらしうることを認識するであろう。したがって、記載される各配列内では、ポリペプチドをコードする核酸の各サイレント変異が含意されている。
【０１３５】
ポリペプチド配列では、「保存的に修飾された変異体」は、アミノ酸の、化学的に類似するアミノ酸による置換を結果としてもたらす、ポリペプチド配列への個別の置換、欠失、または付加を含む。当技術分野では、機能的に類似するアミノ酸を提示する保存的置換表が周知である。このような保存的に修飾された変異体は、本開示の多型変異体、種間相同体、および対立遺伝子に追加されるものであり、これらを除外するものではない。以下の８つの群：１）アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）；２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）；３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）；４）アルギニン（Ｒ）、リシン（Ｋ）；５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）；６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）；７）セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）；および８）システイン（Ｃ）、メチオニン（Ｍ）は、互いに対して保存的置換であるアミノ酸を含有する（例えば、Creighton、Proteins（1984）を参照されたい）。いくつかの実施形態では、「保存的配列修飾」という用語は、アミノ酸配列を含有する抗体の結合特徴にそれほど大きな影響を及ぼしたりこれを改変したりしないアミノ酸修飾を指すのに使用する。
【０１３６】
「エピトープ」という用語は、抗体への特異的な結合が可能なタンパク質決定基を意味する。エピトープは通例、アミノ酸または糖側鎖など、化学的に活性な表面分子群からなり、通例、特異的な三次元構造特徴のほか、特異的な電荷特徴も有する。コンフォメーショナルエピトープと非コンフォメーショナルエピトープとは、前者への結合は、変性溶媒の存在下で失われるが、後者への結合は失われないという点で区別される。
【０１３７】
本明細書で使用される「ヒト抗体」という用語は、フレームワーク領域およびＣＤＲ領域のいずれもが、ヒト由来の配列に由来する可変領域を有する抗体を含むことを意図する。さらに、抗体が定常領域を含有する場合、定常領域もまた、このようなヒト配列、例えば、ヒト生殖細胞系列配列またはヒト生殖細胞系列配列の突然変異させたバージョンに由来する。本明細書で記載されるヒト抗体は、ヒト配列によりコードされないアミノ酸残基（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるランダム突然変異誘発もしくは部位特異的突然変異誘発により導入された突然変異、またはｉｎ  ｖｉｖｏにおける体細胞突然変異により導入された突然変異）を含みうる。
【０１３８】
「ヒト化」抗体とは、ヒトにおける治療剤として投与される場合の免疫原性は小さいが、非ヒト抗体、例えば、マウスモノクローナル抗体の抗原特異的反応性を保持する抗体である。例えば、Robelloら、Transplantation, 68: 1417〜1420を参照されたい。これは、例えば、非ヒト抗原結合性領域を保持し、抗体の残りの部分を、それらのヒト対応物（すなわち、定常領域ならびに可変領域の結合に関与しない部分）で置きかえることにより達成することができる。例えば、Morrisonら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、81:6851〜6855、1984; MorrisonおよびOi、Adv. Immunol.、44:65〜92、1989; Verhoeyenら、Science、239:1534〜1536、1988; Padlan、Molec. Immun.、28:489〜498、1991；およびPadlan、Molec. Immun.、31:169〜217、1994を参照されたい。ヒト操作技術の他の例は、ＵＳ５，７６６，８８６において開示されているＸｏｍａ技術を含むがこれらに限定されない。
【０１３９】
２つ以上の核酸配列またはポリペプチド配列の文脈における「同一な」または「同一性」パーセントという用語は、２つ以上の配列または部分配列が同じであることを指す。以下の配列比較アルゴリズムのうちの１つを使用して、または手作業のアライメントおよび目視により測定される比較域または指定領域にわたり、最大の対応性について比較され、配列決定された場合の、２つの配列の、指定された百分率のアミノ酸残基またはヌクレオチドが同じであれば（すなわち、指定される領域にわたる、または、指定されない場合は、配列全体にわたる、６０％の同一性、任意選択で、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有すれば）、２つの配列は「実質的に同一」である。任意選択で、同一性は、少なくとも約５０ヌクレオチド（または１０アミノ酸）の長さの領域にわたり、またはより好ましくは、１００〜５００、または１０００ヌクレオチド以上（または２０、５０、または２００アミノ酸以上）の長さの領域にわたり存在する。
【０１４０】
配列比較では、１つの配列が、それに照らして被験配列を比較する基準配列として働くことが典型的である。配列比較アルゴリズムを使用する場合、被験配列および基準配列をコンピュータへと入力し、必要な場合は、部分配列座標を指定し、配列アルゴリズムプログラムパラメータを指定する。デフォルトのプログラムパラメータを使用することもでき、代替的なパラメータを指定することもできる。次いで、配列比較アルゴリズムにより、プログラムパラメータに基づき、被験配列について、基準配列と比べた配列同一性パーセントを計算する。
【０１４１】
本明細書で使用される「比較域」は、２つの配列を最適に配列決定した後で、配列を、同じ数の連続的な位置による基準配列と比較しうる、２０〜６００、通例約５０〜約２００、より通例では、約１００〜約１５０からなる群から選択される連続的な位置の数のうちのいずれか１つによるセグメントに対する言及を含む。当技術分野では、比較のための配列アライメント法が周知である。比較のための最適な配列アライメントは、例えば、SmithおよびWaterman （1970） Adv. Appl. Math. 2:482cによる局所相同性アルゴリズムにより行うこともでき、NeedlemanおよびWunsch、J. Mol. Biol. 48:443、1970による相同性アライメントアルゴリズムにより行うこともでき、PearsonおよびLipman、Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 85:2444、1988による類似性検索法（search for similarity method）により行うこともでき、これらアルゴリズムのコンピュータ化された実装（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ、５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩにおけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ）により行うこともでき、手作業のアライメントおよび目視（例えば、Brentら、Current Protocols in Molecular Biology、John Wiley & Sons, Inc.（Ringbou編、2003）を参照されたい）により行うこともできる。
【０１４２】
配列同一性パーセントおよび配列類似性パーセントを決定するのに適するアルゴリズムの２つの例は、それぞれ、Altschulら、Nuc. Acids Res. 25:3389〜3402、1977；およびAltschulら、J. Mol. Biol. 215:403〜410、1990において記載されている、ＢＬＡＳＴアルゴリズムおよびＢＬＡＳＴ  ２．０アルゴリズムである。ＢＬＡＳＴ解析を実施するためのソフトウェアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎにより公表されている。このアルゴリズムは、データベース配列内の同じ長さのワードで配列決定したときに、ある正の値の閾値スコアＴにマッチするかまたはこれを満たす、クエリー配列内の短いワード長Ｗを同定することにより、高スコア配列対（ＨＳＰ）をまず同定することを伴う。Ｔを、隣接ワードスコア閾値（Altschulら、前出）と称する。これらの初期の隣接ワードヒットが、これらを含有するより長いＨＳＰを見出す検索を開始するためのシードとして働く。累積アライメントスコアが増大しうる限りにおいて、ワードヒットを、各配列に沿っていずれの方向にも拡張する。累積スコアは、ヌクレオチド配列では、パラメータＭ（マッチする残基の対についてのリウォードスコア；常に＞０）およびＮ（ミスマッチ残基についてのペナルティースコア；常に＜０）を使用して計算する。アミノ酸配列では、スコアリングマトリックスを使用して、累積スコアを計算する。累積アライメントスコアが、達成されたその最大値から量Ｘだけ低下した場合；１つまたは複数の負スコア残基のアライメントの累積のために、累積スコアが、ゼロ以下に低下した場合；または配列のいずれかの末端に達した場合は、各方向へのワードヒットの拡張を停止させる。ＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメータであるＷ、Ｔ、およびＸにより、アライメントの感度および速度が決定される。ＢＬＡＳＴＮプログラム（ヌクレオチド配列の場合）では、１１のワード長（Ｗ）、１０の期待値（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝−４をデフォルトとして使用し、両方の鎖の比較を行う。アミノ酸配列のためのＢＬＡＳＴＰプログラムでは、３のワード長、および１０の期待値（Ｅ）、および５０のＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックス（HenikoffおよびHenikoff、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915、1989を参照されたい）アライメント（Ｂ）、１０の期待値（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝−４をデフォルトとして使用し、両方の鎖の比較を行う。
【０１４３】
ＢＬＡＳＴアルゴリズムはまた、２つの配列の間の類似性についての統計学的解析（例えば、KarlinおよびAltschul、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873〜5787、1993を参照されたい）も実施する。ＢＬＡＳＴアルゴリズムにより提供される類似性の１つの尺度は、２つのヌクレオチド配列間またはアミノ酸配列間のマッチングが偶然に生じる確率の指標をもたらす最小合計確率（Ｐ（Ｎ））である。例えば、被験核酸を基準核酸に照らして比較したときの最小合計確率が約０．２未満であり、より好ましくは、約０．０１未満であり、最も好ましくは、約０．００１未満であれば、核酸は基準配列と類似すると考えられる。
【０１４４】
２つのアミノ酸配列の間の同一性パーセントはまた、ＰＡＭ１２０重みづけ残基表、１２のギャップ長ペナルティー、および４のギャップペナルティーを使用するＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）へと組み込まれた、E. MeyersおよびW. Miller（Comput. Appl. Biosci.、4:11〜17、1988）によるアルゴリズムを使用しても決定することができる。加えて、２つのアミノ酸配列の間の同一性パーセントは、Ｂｌｏｓｓｏｍ  ６２マトリックスまたはＰＡＭ２５０マトリックス、および１６、１４、１２、１０、８、６、または４のギャップ重みづけ、および１、２、３、４、５、または６の長さ重みづけを使用する、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（インターネット上のgcg.comで入手可能である）内のＧＡＰプログラムへと組み込まれた、NeedlemanおよびWunsch（J. Mol, Biol. 48:444〜453、1970）によるアルゴリズムを使用しても決定することができる。
【０１４５】
上記で言及した配列同一性百分率以外の、２つの核酸配列またはポリペプチドが実質的に同一であることの別の指標は、下記で記載される通り、第１の核酸によりコードされるポリペプチドが、第２の核酸によりコードされるポリペプチドに対する抗体と免疫学的に交差反応性であることである。したがって、例えば、２つのペプチドが保存的置換だけによって異なる場合、ポリペプチドは、第２のポリペプチドと実質的に同一なことが典型的である。２つの核酸配列が実質的に同一であることの別の指標は、下記で記載される通り、２つの分子またはそれらの相補体が、厳密な条件下で、互いとハイブリダイズすることである。２つの核酸配列が実質的に同一であることのさらに別の指標は、同じプライマーを使用して配列を増幅しうることである。
【０１４６】
「単離抗体」という用語は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指す（例えば、ＧＤＦ１５に特異的に結合する単離抗体は、ＧＤＦ１５以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。しかし、ＧＤＦ１５に特異的に結合する単離抗体は、他の抗原に対する交差反応性を有しうる。さらに、単離抗体は、他の細胞内物質および／または化学物質を実質的に含まない場合もある。
【０１４７】
「アイソタイプ」という用語は、重鎖定常領域遺伝子によりもたらされる抗体クラス（例えば、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４などのＩｇＧ）を指す。アイソタイプはまた、これらのクラスのうちの１つの修飾バージョンも含み、その修飾は、Ｆｃ機能を改変する、例えば、エフェクター機能またはＦｃ受容体への結合を増強または低減するように施されている。
【０１４８】
本明細書で使用される「Ｋａｓｓｏｃ」または「Ｋａ」という用語が、特定の抗体−抗原間相互作用の会合速度を指すことを意図するのに対し、本明細書で使用される「Ｋｄｉｓ」または「Ｋｄ」という用語は、特定の抗体−抗原間相互作用の解離速度を指すことを意図する。本明細書で使用される「ＫＤ」という用語は、ＫｄのＫａに対する比（すなわち、Ｋｄ／Ｋａ）から得られる解離定数を指すことを意図し、モル濃度（Ｍ）として表す。抗体のＫＤ値は、当技術分野で十分に確立された方法を使用して決定することができる。抗体のＫＤを決定するための方法は、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）システムなどのバイオセンサーシステムを使用して表面プラズモン共鳴を測定するか、または溶液平衡滴定（ＳＥＴ）により溶液中のアフィニティーを測定するステップを含む。
【０１４９】
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」という用語は、単一の分子組成による抗体分子の調製物を指す。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対する単一の結合特異性およびアフィニティーを提示する。
【０１５０】
本明細書では、「核酸」という用語が、「ポリヌクレオチド」という用語と互換的に使用され、デオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドおよびそれらの一本鎖形態または二本鎖形態におけるポリマーを指す。「核酸」という用語は、公知のヌクレオチド類似体または修飾骨格残基もしくは修飾連結を含有する核酸であって、合成の核酸、自然発生の核酸、および非自然発生の核酸であり、基準核酸と同様の結合特性を有し、基準ヌクレオチドと同様の形で代謝される核酸を包含する。このような類似体の例は、限定なしに述べると、ホスホロチオエート、ホスホルアミデート、メチルホスホネート、キラルメチルホスホネート、２−Ｏ−メチルリボヌクレオチド、ペプチド核酸（ＰＮＡ）を含む。
【０１５１】
別段に指し示されない限りにおいて、特定の核酸配列はまた、保存的に修飾されたその変異体（例えば、縮重コドン置換）および相補的配列も暗示的に包含するほか、明示的に指し示される配列も包含する。とりわけ、下記で詳述される通り、縮重コドン置換は、１つまたは複数の選択された（または全ての）コドンの第３の位置が、混合塩基および／またはデオキシイノシン残基で置換された配列を作り出すことにより達成することができる（Batzerら、Nucleic Acid Res. 19:5081、1991; Ohtsukaら、J. Biol. Chem. 260:2605〜2608、1985；およびRossoliniら、Mol. Cell. Probes 8:91〜98、1994）。
【０１５２】
「作動可能に連結された」という用語は、２つ以上のポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ）セグメントの間の機能的関係を指す。「作動可能に連結された」という用語は、転写調節配列の、転写される配列に対する機能的関係を指すことが典型的である。例えば、プロモーター配列またはエンハンサー配列は、それが、適切な宿主細胞内または他の発現系内のコード配列の転写を刺激またはモジュレートするとき、コード配列に作動可能に連結されている。一般に、転写される配列に作動可能に連結されたプロモーター転写調節配列は、転写される配列と物理的に隣接する、すなわち、シス作用型である。しかし、エンハンサーなど、一部の転写調節配列は、その転写をそれらが増強するコード配列に物理的に隣接する必要も、近接して配置される必要もない。
【０１５３】
本明細書で使用される「最適化された」という用語は、ヌクレオチド配列を、産生細胞または産生生物、一般に、真核細胞、例えば、ピキア（Pichia）属細胞、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）、またはヒト細胞において好ましいコドンを使用してアミノ酸配列をコードするように改変していることを意味する。最適化されたヌクレオチド配列は、「親」配列としてもまた公知の出発ヌクレオチド配列により本来コードされるアミノ酸配列を、完全に、または可能な限り多く保持するように操作する。本明細書の最適化された配列は、哺乳動物細胞において好ましいコドンを有するように操作されている。しかし、本明細書ではまた、他の真核細胞または原核細胞におけるこれらの配列の最適化された発現も企図される。最適化されたヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列もまた、最適化されていると称する。
【０１５４】
本明細書では、「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語が、アミノ酸残基のポリマーを指すように互換的に使用される。「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語は、１つまたは複数のアミノ酸残基が、対応する自然発生のアミノ酸の人工の化学的模倣体であるアミノ酸ポリマーのほか、自然発生のアミノ酸ポリマーおよび非自然発生のアミノ酸ポリマーにも適用される。別段に指し示されない限りにおいて、特定のポリペプチド配列はまた、保存的に修飾されたその変異体も暗示的に包含する。
【０１５５】
本明細書で使用される「組換えヒト抗体」という用語は、ヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックまたはトランスクロモソーマルである動物（例えば、マウス）またはこれにより調製されるハイブリドーマから単離される抗体、ヒト抗体を発現させるように形質転換された宿主細胞、例えば、トランスフェクトーマから単離される抗体、組換えのコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離される抗体、およびヒト免疫グロブリン遺伝子配列の全部または一部の、他のＤＮＡ配列へのスプライシングを伴う、他の任意の手段により調製されるか、発現させるか、創出されるか、または単離される抗体など、組換え手段により調製されるか、発現させるか、創出されるか、または単離される、全てのヒト抗体を含む。このような組換えヒト抗体は、フレームワーク領域およびＣＤＲ領域が、ヒト生殖細胞系列の免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する。しかし、ある種の実施形態では、このような組換えヒト抗体は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏの突然変異誘発（または、ヒトＩｇ配列についてトランスジェニックである動物を使用する場合は、ｉｎ  ｖｉｖｏの体細胞突然変異誘発）にかけることができ、したがって、組換え抗体のＶＨ領域およびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖細胞系列のＶＨ配列およびＶＬ配列に由来し、これらに関連するが、ｉｎ  ｖｉｖｏのヒト抗体の生殖細胞系列レパートリー内で天然には存在しない可能性がある配列である。
【０１５６】
「組換え宿主細胞」（または、簡単に、「宿主細胞」）という用語は、組換え発現ベクターを導入した細胞を指す。このような用語は、特定の対象細胞だけを指すことを意図するものではなく、このような細胞の子孫細胞も指すことを意図するものであることを理解されたい。後続する世代では、突然変異または環境的影響に起因して、ある種の修飾が生じうるため、このような子孫細胞は、実のところ、親細胞と同一ではない可能性もあるが、やはり本明細書で使用される「宿主細胞」という用語の範囲内に含まれる。
【０１５７】
「対象」という用語は、ヒトおよび非ヒト動物を含む。非ヒト動物は、非ヒト霊長動物（例えば、カニクイザル）、ヒツジ、イヌ、ウシ、ニワトリ、両生類、および爬虫類など、全ての脊椎動物（例えば、哺乳動物および非哺乳動物）を含む。特記される場合を除き、本明細書では、「患者」または「対象」という用語が互換的に使用される。本明細書で使用される「カニクイザル（cyno）」または「カニクイザル（cynomolgus）」という用語は、カニクイザル（cynomolgus monkey）（カニクイザル（Macaca fascicularis））を指す。
【０１５８】
本明細書で使用される、任意の疾患または障害（例えば、ＧＤＦ１５関連障害）「〜を処置すること」またはこれらの「処置」という用語は、疾患または障害を改善すること（すなわち、疾患またはその臨床症状のうちの少なくとも１つの発症を緩徐化するか、停止させるか、または軽減すること）を指す。別の実施形態では、「〜を処置すること」または「処置」とは、患者により識別可能でない可能性があるパラメータを含む少なくとも１つの物理的パラメータを緩和または改善することを指す。さらに別の実施形態では、「〜を処置すること」または「処置」とは、疾患または障害を、物理的にモジュレートする（例えば、識別可能な症状の安定化）か、生理学的にモジュレートする（例えば、物理的パラメータの安定化）か、または物理的かつ生理学的にモジュレートすることを指す。さらに別の実施形態では、「〜を処置すること」または「処置」とは、疾患または障害の発生または発症または進行を防止するかまたは遅延させることを指す。
【０１５９】
例えばＧＤＦ１５関連障害を含む、本明細書で記載される適応に関する場合の「防止」とは、例えば、前記悪化の危険性がある患者における、下記で記載される、ＧＤＦ１５関連疾患パラメータの悪化を防止または緩徐化する任意の作用を意味する。
【０１６０】
「ベクター」という用語は、それが連結された別のポリヌクレオチドを輸送することが可能なポリヌクレオチド分子を指すことを意図する。ベクターのうちの１つの種類は、さらなるＤＮＡセグメントをライゲーションしうる、環状の二本鎖ＤＮＡループを指す「プラスミド」である。ベクターの別の種類は、さらなるＤＮＡセグメントを、ウイルスゲノムへとライゲーションしうる、アデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶまたはＡＡＶ２）などのウイルスベクターである。ある種のベクター（例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクターおよび哺乳動物のエピソームベクター）は、それらが導入された宿主細胞における自己複製が可能である。他のベクター（例えば、非哺乳動物のエピソームベクター）は、宿主細胞へと導入すると、宿主細胞のゲノムへと組み込むことができ、これにより、宿主ゲノムと共に複製する。さらに、ある種のベクターは、それらが作動的に連結された遺伝子の発現を方向付けることが可能である。本明細書では、このようなベクターを、「組換え発現ベクター」（または簡単に、「発現ベクター」）と称する。一般に、組換えＤＮＡ法において有用な発現ベクターは、プラスミドの形態にあることが多い。プラスミドはベクターの最も一般的に使用される形態であるので、本明細書では、「プラスミド」と「ベクター」とを互換的に使用することができる。しかし、本開示は、同等な機能をもたらすウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルス、およびアデノ随伴ウイルス）など、発現ベクターの他の形態も含むことを意図する。
【図面の簡単な説明】
【０１６１】
【図１Ａ】食餌誘導性肥満（ＤＩＯ）マウスにおける、ＧＤＦ１５を媒介する食物摂取の抑制および体重減少の阻止における、ＡＢＧＤＦ１５−Ａの効果の時間経過を描示する図である。ヒト全長ＧＤＦ１５発現ベクターのＤＮＡハイドロダイナミック注射（ＨＤＩ）により、ヒトＧＤＦ１５を、肝臓内で発現させ、７日目までに、約１０％の体重減少をもたらしてから、抗ＧＤＦ１５抗体の投与を行った（図中の０日目）。マウスの１つの群に、陰性対照としての空ベクター（ベクター）を注射した。個別のマウスについて、体重および血漿ヒトＧＤＦ１５レベルを決定し、同等な平均体重およびＧＤＦ１５レベルに基づき、動物を、２つの群へと分けた。抗体（ＡＢＧＤＦ１５−Ａまたは非関与性の対照抗体）を、１０ｍｇ／ｋｇで静脈内投与し、食物摂取および体重をモニタリングした。図１Ａは、注射後の日数（１、３、５、７、１０、１１、および１５日）後における、１日当たりの食物摂取（グラム）について描示する棒グラフである。３つの群の測定値を、抗体注射後の各時点について、左から右へ：ベクター＋媒体；ｈＧＤＦ１５＋対照ＩｇＧ；およびｈＧＤＦ１５＋ＡＢＧＤＦ１５−Ａと提示する。図１Ｂは、注射後の日数（１、３、５、７、１０、１１、および１５日）後における、体重のパーセント変化について描示する折れ線グラフである。３つの群の測定値を、被験注射後の各時点について、ベクター＋媒体；ｈＧＤＦ１５＋対照ＩｇＧ；およびｈＧＤＦ１５＋ＡＢＧＤＦ１５−Ａと提示する。統計学的解析は、いずれの研究についても、スチューデントのｔ検定を使用して行った［図中、＊、＊＊：ＡＢＧＤＦ１５−Ａ対媒体について、ｐ＜０．０５および０．０１；＆、＆＆、＆＆＆：ＡＢＧＤＦ１５−Ａ対対照ＩｇＧについて、ｐ＜０．０５、０．０１、および０．００１である］。
【図１Ｂ】食餌誘導性肥満（ＤＩＯ）マウスにおける、ＧＤＦ１５を媒介する食物摂取の抑制および体重減少の阻止における、ＡＢＧＤＦ１５−Ａの効果の時間経過を描示する図である。ヒト全長ＧＤＦ１５発現ベクターのＤＮＡハイドロダイナミック注射（ＨＤＩ）により、ヒトＧＤＦ１５を、肝臓内で発現させ、７日目までに、約１０％の体重減少をもたらしてから、抗ＧＤＦ１５抗体の投与を行った（図中の０日目）。マウスの１つの群に、陰性対照としての空ベクター（ベクター）を注射した。個別のマウスについて、体重および血漿ヒトＧＤＦ１５レベルを決定し、同等な平均体重およびＧＤＦ１５レベルに基づき、動物を、２つの群へと分けた。抗体（ＡＢＧＤＦ１５−Ａまたは非関与性の対照抗体）を、１０ｍｇ／ｋｇで静脈内投与し、食物摂取および体重をモニタリングした。図１Ａは、注射後の日数（１、３、５、７、１０、１１、および１５日）後における、１日当たりの食物摂取（グラム）について描示する棒グラフである。３つの群の測定値を、抗体注射後の各時点について、左から右へ：ベクター＋媒体；ｈＧＤＦ１５＋対照ＩｇＧ；およびｈＧＤＦ１５＋ＡＢＧＤＦ１５−Ａと提示する。図１Ｂは、注射後の日数（１、３、５、７、１０、１１、および１５日）後における、体重のパーセント変化について描示する折れ線グラフである。３つの群の測定値を、被験注射後の各時点について、ベクター＋媒体；ｈＧＤＦ１５＋対照ＩｇＧ；およびｈＧＤＦ１５＋ＡＢＧＤＦ１５−Ａと提示する。統計学的解析は、いずれの研究についても、スチューデントのｔ検定を使用して行った［図中、＊、＊＊：ＡＢＧＤＦ１５−Ａ対媒体について、ｐ＜０．０５および０．０１；＆、＆＆、＆＆＆：ＡＢＧＤＦ１５−Ａ対対照ＩｇＧについて、ｐ＜０．０５、０．０１、および０．００１である］。
【図２Ａ】ＨＤ１モデルにおける、ＧＤＦ１５を媒介する食欲不振の阻止における、ＡＢＧＤＦ１５−ＢおよびＡＢＧＤＦ１５−Ｃに対する親抗体の効果の、時間経過および用量応答性を描示する図である。ＨＤＩ注射により、ヒトＧＤＦ１５を、肝臓内で発現させ、７日目までに、約１０％の体重減少をもたらしてから、抗ＧＤＦ１５抗体の投与を行った（図中の０日目）。親抗体または陰性対照抗体は、表示の濃度で注射し、食物摂取および体重をモニタリングした。図２Ａ〜図２Ｂは、抗体注射後の日数（１、４、８、１２、および１６日）後における、累積食物摂取（グラム）および体重のパーセント変化のそれぞれについて描示する折れ線グラフである。図２Ａ〜図２Ｂには、以下の処置群：ベクター＋媒体；ｈＧＤＦ１５＋対照ＩｇＧ；ｈＧＤＦ１５＋親抗体（３０ｍｇ／ｋｇ）；ｈＧＤＦ１５＋親抗体（１０ｍｇ／ｋｇ）；ｈＧＤＦ１５＋親抗体（３ｍｇ／ｋｇ）；およびｈＧＤＦ１５＋親抗体（１ｍｇ／ｋｇ）を例示した。親抗体は、ＧＤＦ１５を媒介する食欲不振の影響を、用量依存的に反転させた。
【図２Ｂ】ＨＤ１モデルにおける、ＧＤＦ１５を媒介する食欲不振の阻止における、ＡＢＧＤＦ１５−ＢおよびＡＢＧＤＦ１５−Ｃに対する親抗体の効果の、時間経過および用量応答性を描示する図である。ＨＤＩ注射により、ヒトＧＤＦ１５を、肝臓内で発現させ、７日目までに、約１０％の体重減少をもたらしてから、抗ＧＤＦ１５抗体の投与を行った（図中の０日目）。親抗体または陰性対照抗体は、表示の濃度で注射し、食物摂取および体重をモニタリングした。図２Ａ〜図２Ｂは、抗体注射後の日数（１、４、８、１２、および１６日）後における、累積食物摂取（グラム）および体重のパーセント変化のそれぞれについて描示する折れ線グラフである。図２Ａ〜図２Ｂには、以下の処置群：ベクター＋媒体；ｈＧＤＦ１５＋対照ＩｇＧ；ｈＧＤＦ１５＋親抗体（３０ｍｇ／ｋｇ）；ｈＧＤＦ１５＋親抗体（１０ｍｇ／ｋｇ）；ｈＧＤＦ１５＋親抗体（３ｍｇ／ｋｇ）；およびｈＧＤＦ１５＋親抗体（１ｍｇ／ｋｇ）を例示した。親抗体は、ＧＤＦ１５を媒介する食欲不振の影響を、用量依存的に反転させた。
【図３Ａ】ＨＤ１モデルにおける、ヒトＧＤＦ１５を媒介する食欲不振の阻止における、ＡＢＧＤＦ１５−Ｄの効果の時間経過を描示する図である。ＨＤＩ注射により、ヒトＧＤＦ１５を、肝臓内で発現させ、７日目までに、約１０％の体重減少をもたらしてから、抗ＧＤＦ１５抗体の投与を行った（図中の０日目）。ＡＢＧＤＦ１５−Ｄまたは陰性対照抗体を、２０ｍｇ／ｋｇで注射し、食物摂取および体重をモニタリングした。図３Ａ〜図３Ｂは、注射後の日数後における、１日当たりの食物摂取（グラム）および体重のパーセント変化のそれぞれについて描示する折れ線グラフおよび棒グラフである。図３Ａ〜図３Ｂには、各時点について、以下の群：ベクター＋媒体；ｈＧＤＦ１５＋対照ＩｇＧ；ｈＧＤＦ１５＋ＡＢＧＤＦ１５−Ｄを例示した。ＡＢＧＤＦ１５−Ｄは、ＧＤＦ１５を媒介する食欲不振の影響を反転させた。
【図３Ｂ】ＨＤ１モデルにおける、ヒトＧＤＦ１５を媒介する食欲不振の阻止における、ＡＢＧＤＦ１５−Ｄの効果の時間経過を描示する図である。ＨＤＩ注射により、ヒトＧＤＦ１５を、肝臓内で発現させ、７日目までに、約１０％の体重減少をもたらしてから、抗ＧＤＦ１５抗体の投与を行った（図中の０日目）。ＡＢＧＤＦ１５−Ｄまたは陰性対照抗体を、２０ｍｇ／ｋｇで注射し、食物摂取および体重をモニタリングした。図３Ａ〜図３Ｂは、注射後の日数後における、１日当たりの食物摂取（グラム）および体重のパーセント変化のそれぞれについて描示する折れ線グラフおよび棒グラフである。図３Ａ〜図３Ｂには、各時点について、以下の群：ベクター＋媒体；ｈＧＤＦ１５＋対照ＩｇＧ；ｈＧＤＦ１５＋ＡＢＧＤＦ１５−Ｄを例示した。ＡＢＧＤＦ１５−Ｄは、ＧＤＦ１５を媒介する食欲不振の影響を反転させた。
【図４】ＤＩＯマウスにおける、ヒトＧＤＦ１５を媒介する体重減少の阻止における、ＡＢＧＤＦ１５−ＢおよびＡＢＧＤＦ１５−Ｃの効果の時間経過について描示する折れ線グラフである。ＧＤＦ１５は、ＨＤＩ注射により、ＤＩＯマウスにおいて、過剰発現させた。抗ＧＤＦ１５抗体を、２０ｍｇ／ｋｇで静脈内投与し、体重をモニタリングした。以下の群：ベクター＋媒体；ｈＧＤＦ１５＋対照ＩｇＧ；ｈＧＤＦ１５＋ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、およびｈＧＤＦ１５＋ＡＢＧＤＦ１５−Ｃを、各時点について比較した。ＡＢＧＤＦ１５−ＢおよびＡＢＧＤＦ１５−Ｃのいずれも、ＧＤＦ１５を媒介する体重減少を反転させた。
【図５】ＤＩＯマウスにおける、ヒトＧＤＦ１５を媒介する体重減少の阻止における、ＡＢＧＤＦ１５−Ｇの効果の時間経過について描示する折れ線グラフである。ＧＤＦ１５は、ＨＤＩ注射により、ＤＩＯマウスにおいて、持続的に過剰発現させた。ＡＢＧＤＦ１５−Ｇを、２０ｍｇ／ｋｇで静脈内投与し、体重をモニタリングした。以下の群：ベクター＋媒体；ｈＧＤＦ１５＋対照ＩｇＧ；およびｈＧＤＦ１５＋ＡＢＧＤＦ１５−Ｇを、各時点について例示した。ＡＢＧＤＦ１５−Ｇは、ＧＤＦ１５を媒介する体重減少を反転させた。
【図６】ＥＬＩＳＡを使用する、ある種のＧＤＦ１５の断片への結合の喪失、または結合の部分的な阻害と、突然変異とに基づく、抗ＧＤＦ１５抗体のエピトープマッピングについての概要である。被験抗体は、第１欄に示されている、ＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｄ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、およびＡＢＧＤＦ１５−Ｇ、ならびにＨｕ０１Ｇ０６（抗ＧＤＦ１５抗体である０１Ｇ０６のヒト化バージョン）であった。以下の野生型ＧＤＦ１５および突然変異体のＧＤＦ１５変異体：野生型ヒトＧＤＦ１５、齧歯類ＧＤＦ１５、カニクイザルＧＤＦ１５、Ｎ末端切断型ｈＧＤＦ１５（アミノ酸２１１〜３０８を有する）、ナックル領域内の突然変異（Ｌ２９４Ｒ、Ｉ２８５Ｒ、またはＳ２３１Ｒ）、リスト領域内の突然変異（Ｑ２４７Ｒ、Ｗ２２８Ｒ、またはＭ２５３Ｒ）、フィンガーチップ領域内の突然変異（Ｄ２８９Ｒ）、およびバックオブハンド内の突然変異（Ｓ２７８Ｒ）を有するＧＤＦ１５突然変異体について調べた。「ナックル」、「リスト」（wrist）、「フィンガーチップ」（finger tip）、および「バックオブハンド」（back-of-hand）とは、全てのＴＧＦｂファミリータンパク質相同な結晶構造に基づき名付けられた三次元ドメインである（出典：MuellerおよびNickel (2012) Promiscuity and specificity in BMP receptor activation. FEBS Letters 586: 1846〜1859）。ＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｄ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、およびＡＢＧＤＦ１５−Ｇの全ては、ナックルドメインに結合する。「結合の喪失」、結合の部分的な阻害（「阻害」）、および「突然変異による影響なし」を、異なる縞目の領域により描示する。
【図７】重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲのアミノ酸配列のアライメント（出現の順に、それぞれ、配列番号１９４、１９４、および１９５〜１９９）である。
【発明を実施するための形態】
【０１６２】
表についての簡単な記載
表１は、抗ＧＤＦ１５抗体分子のアミノ酸配列およびヌクレオチド配列についての概要である。重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲのアミノ酸配列およびヌクレオチド配列、重鎖および軽鎖可変領域のアミノ酸配列およびヌクレオチド配列、ならびに重鎖および軽鎖のアミノ酸配列およびヌクレオチド配列を、この表に示す。
表２は、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体の結合特徴についての概要である。各抗体について、以下のパラメータ：同定されるリガンドの各々に対する、ｋａ（１／Ｍ秒）、ｋｄ（１／秒）、ＫＤ（Ｍ）、およびＲｍａｘ（ＲＵ）を提示する。
表３は、ＳＥＴまたはＢｉａｃｏｒｅにより決定される、ＡＢＧＤＦ−Ａ〜ＡＢＧＤＦ−ＧのＫＤ値についての概要である。
表４は、ＡＢＧＤＦ−Ａ〜ＡＢＧＤＦ−ＧのｐＩ値についての概要である。
【０１６３】
発明の詳細な説明
本開示は、部分的に、ＧＤＦ１５に特異的に結合し、その消耗に関連する影響、レベル、および／もしくは活性、ならびに病理学的影響、病理学的レベル、および／もしくは病理学的活性、例えば、疾患状態において、食欲を低減し、かつ／または食物摂取、体重、および／もしくは脂肪量を低減するその能力を阻害する抗体分子の発見に基づく。本明細書では、全長ＩｇＧフォーマット抗体（例えば、ヒト抗体）、ならびにＦａｂ断片など、その抗原結合性断片の両方（例えば、抗体の、ＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｇ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅ、およびＡＢＧＤＦ１５−Ｄ）が提示される。
【０１６４】
本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体分子は、ＧＤＦ１５、例えば、ＧＤＦ１５のナックルドメインのＣ末端領域に結合することが可能である。実施例５で開示される通り、ＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｇ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅ、およびＡＢＧＤＦ１５−Ｄは、ヒトＧＤＦ１５のナックルドメインに結合する。図６は、ナックルドメインの突然変異である、Ｌ２９４ＲまたはＩ２８５Ｒが存在すると、ＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｄ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、またはＡＢＧＤＦ１５−Ｇの、ヒトＧＤＦ１５への結合が失われたことを示す。同様に、図６は、ナックルドメインの突然変異である、Ｉ２８５ＲまたはＳ２３１Ｒが存在すると、ＡＢＧＤＦ１５−ＢまたはＡＢＧＤＦ１５−Ｃの、ヒトＧＤＦ１５への結合が失われたことを示す。これと比較して、ヒトＧＤＦ１５のＮ末端の切断、ならびにリストドメイン内の突然変異（Ｑ２４７Ｒ、Ｗ２２８Ｒ、Ｍ２５３Ｒ、およびＱ２９５Ｒ）、フィンガーチップ領域内の突然変異（Ｄ２８９Ｒ）、およびバックオブハンドドメイン内の突然変異（Ｓ２７８Ｒ）は、例示的な抗ＧＤＦ１５抗体分子の結合に対して影響を及ぼさなかった。
【０１６５】
理論に束縛されることを望まずに述べると、ある種の実施形態では、ＧＤＦ１５のＣ末端領域（例えば、ナックルドメイン）への特異的な結合は、少なくとも部分的に、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体分子の生物学的機能および／または臨床的効果を付与すると考えられる。
【０１６６】
実施例６で示されている通り、ナックルドメイン結合性抗体分子、すなわち、ＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｇ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅ、およびＡＢＧＤＦ１５−Ｄは、マウス食欲不振モデルで裏付けられる通り、ＧＤＦ１５を媒介する体重減少を反転させた。本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体分子を使用して、例えば、ＧＤＦ１５関連障害を処置することもでき、食欲および／または食物摂取を増大させることもでき、体重を増大させることもでき、体重、筋肉量、食欲、または食物摂取の減少のうちの１つまたは複数を阻害または軽減することもできる。例えば、食欲不振、サルコペニア、または老化、がん、心不全、ＣＯＰＤ、および／もしくは腎不全と関連する悪液質のうちの１つもしくは複数を有する対象、または消耗性障害を有する対象は、本明細書で記載される抗体分子で処置することができる。本明細書で記載される抗体分子はまた、がん、慢性心不全、慢性腎疾患、ＣＯＰＤ、ＡＩＤＳ、多発性硬化症、関節リウマチ、敗血症、または結核を有する対象の処置にも適する。
【０１６７】
したがって、本明細書では、ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体（例えば、ヒトＧＤＦ１５）、医薬組成物、このような抗体および組成物の作製方法および使用方法が提示される。
【０１６８】
ＧＤＦ１５タンパク質
本明細書では、ＧＤＦ１５に特異的に結合し、その生物学的活性を阻害し、かつ／または遊離ＧＤＦ１５を循環から枯渇させる抗体が提示される。
【０１６９】
成長分化因子１５（ＧＤＦ１５）は、ＴＧＦβスーパーファミリーの分岐メンバーであり、また、マクロファージ阻害性サイトカイン１（ＭＩＣ１）（Bootcov MR, 1997, Proc Natl Acad Sci 94: 11514-9）、胎盤骨形成因子（ＰＬＡＢ）（Hromas R 1997, Biochim Biophys Acta. 1354:40-4）、胎盤形質転換成長因子ベータ（ＰＴＧＦＢ）（Lawton LN 1997, Gene. 203: 17-26）、前立腺由来因子（ＰＤＦ）（Paralkar VM 1998, J Biol Chem. 273: 13760-7）、および非ステロイド系抗炎症薬活性化遺伝子（ＮＡＧ−１）（Baek SJ 2001, J Biol Chem. 276: 33384- 92）とも称する。成熟ＧＤＦ１５ペプチドは、他のファミリーメンバーと共有する相同性が小さい（Katoh M 2006, Int J Mol Med. 17:951-5）。ＧＤＦ１５は、大型の前駆体タンパク質として合成され、これが、二塩基性の切断部位で切断され、カルボキシ末端の成熟ペプチドを放出する。ヒト全長前駆体は、３０８アミノ酸を含有するが、ＲＧＲＲＲＡＲ（配列番号１８５）切断部位で切断されて、成熟ＧＤＦペプチドをもたらす。自然発生のＧＤＦ１５は、１つの鎖間ジスルフィド結合により、共有結合的に連結された成熟ペプチドの、２５ＫＤのホモ二量体である。ＧＤＦ１５は、多数の異なる生理学的状態および病理学的状態と関与性であることが報告されている。例えば、ＧＤＦ１５ノックアウトマウスおよびＧＤＦ１５トランスジェニックマウスについての研究は、ＧＤＦ１５が、虚血／再灌流または過負荷に誘導される心損傷に対して保護的であることが可能であり（Kempf T, 2006, Circ Res. 98:351-60）（Xu J, 2006, Circ Res. 98:342-50）、老化と関連する、運動ニューロンの喪失および感覚ニューロンの喪失に対して保護的であることが可能であり（Strelau J, 2009, J Neurosci. 29: 13640-8）、腎臓における代謝性アシドーシスに対して、軽微に保護的であることが可能であり、がん患者において、悪液質を引き起こしうる（Johnen H 2007 Nat Med. 11: 1333-40）ことを示唆する。ＧＤＦ１５はまた、腸および肺において、発がん物質（またはＡｐｃ突然変異）により誘導される新生物に対して保護的であることも報告されている（Baek SJ 2006, Gastroenterology. 131: 1553-60; Cekanova M 2009, Cancer Prev Res 2:450-8）。
【０１７０】
ＧＤＦ１５は、例えば、フィンガードメイン、ナックルドメイン、リストドメイン、Ｎ末端のループドメイン、およびバックオブハンドドメインを含む、複数のドメインを含有する。機能に不可欠なドメインおよび残基を解明するように、一連の構造誘導性部位指向突然変異体をデザインした（例えば、国際公開第２０１５１９８１９９号パンフレットを参照されたい）。
【０１７１】
ＧＤＦ１５のアミノ末端領域を破壊するＧＤＦ１５類似体、例えば、マウス血清アルブミン（ＭＳＡ）−ＧＤＦ１５（２１１〜３０８）およびＭＳＡ−ＧＤＦ１５（Ｃ２０３Ｓ、Ｃ２１０Ｓ）が、やはり、生物学的活性を保持することから、このループは、活性に要求されないことが指し示される。
【０１７２】
ＴＧＦベータスーパーファミリーメンバーのナックル領域、フィンガー領域、およびリスト領域は、受容体の結合およびシグナル伝達に重要であることが公知である。ＧＤＦ１５のこれらの領域が、活性に重要であるのかどうかを決定するために、鍵となる表面残基を、大型の側鎖を含有するアミノ酸であるアルギニンへと突然変異させて、機能の喪失を誘導しようと試みた（例えば、国際公開第２０１５１９８１９９号パンフレットを参照されたい）。ＧＤＦ１５の残基である、ロイシン２９４（ナックル）、アスパラギン酸２８９（フィンガー）、グルタミン２４７（リスト）、およびセリン２７８（バックオブハンド）に突然変異を含有するＭＳＡ−ＧＤＦ１５融合タンパク質を作製し、次いで、肥満マウスへと皮下投与した（例えば、３ｍｇ／ｋｇでｓ．ｃ．投与した）。ＭＳＡ−ＧＤＦ１５の単回の皮下注射は、７日間にわたり、食物摂取を、媒体対照と比較して３０％低減した。食物摂取は、フィンガー領域突然変異体（Ｄ２８９Ｒ）、リスト突然変異体（Ｑ２４７Ｒ）、およびバックオブハンド突然変異体（Ｓ２７８Ｒ）によってもまた、対照と比べて、それぞれ、２２、１４、および２４％低減された。これと比較して、ナックル領域突然変異体（Ｌ２９４Ｒ）は、食物摂取を、対照と比べて、１７％増大させた。７日間にわたり、媒体処置マウスおよびＬ２９４Ｒ処置マウスでは、体重が増大した（それぞれ、２．２および６．３％）のに対し、ＭＳＡ−ＧＤＦ１５処置マウス、ＭＳＡ−ＧＤＦ１５（Ｄ２８９Ｒ）処置マウス、ＭＳＡ−ＧＤＦ１５（Ｑ２４７Ｒ）処置マウス、およびＭＳＡ−ＧＤＦ１５（Ｓ２７８Ｒ）処置マウスでは、それぞれ、６．６、５．７、５．７、および５．４％体重が低下した。これらのデータは、ＧＤＦ１５（Ｌ２９４など）のナックル領域が、活性に重要であることを指し示す。ＧＤＦ１５の他の領域内の突然変異は一般に、許容される。
【０１７３】
ＧＤＦ１５は、特に、がんにおいて、食欲減退作用を及ぼす（Brown D. A. Clinical Cancer Res 2003; 9:2642〜2650; Koopmann J. Clinical Cancer Res 2006; 12:442〜446）。がん、および慢性腎不全または慢性心不全など、他の疾患における、循環ＭＩＣ−１／ＧＤＦ１５レベルの実質的上昇は、ボディーマスインデックスの低下と関連する（Breit S.N.ら、Growth factors 2011; 29:187〜195; Johnen H.ら、Nat Med. 2007; 13:1333〜1340）ことから、疾患の炎症における役割以外に、ＭＩＣ−１／ＧＤＦ１５はまた、体重の調節においても役割を果たしうることが示唆される。マウスにおける、長期にわたるＭＩＣ−１／ＧＤＦ１５の発現の上昇は、正常な食餌条件下および肥満の原因となる食餌条件下のいずれにおいても、共時的な耐糖能の改善と共に、食物摂取、体重、および過脂肪状態の低下をもたらす（Macia L.ら、PloS One 2012; 7(4): e34868）。食物摂取および体重は、様々な中枢因子および末梢因子により制御されているが、これらの過程の背後にある正確な機構は、未だ完全には理解されていない。
【０１７４】
悪液質は、複合的で、完全には理解されていない症候群であるが、ＧＤＦ１５が、多様な疾患において、悪液質の重要なメディエーターであることは明らかである（Tsaiら、上述）。少なくとも一部の腫瘍は、ＧＤＦ１５を過剰発現させ、分泌し、血清ＧＤＦ１５レベルの上昇は、多様ながんと関連している（Johnenら、(2007) Nat. Med. 13:1333〜1340; Bauskinら、 (2006) Cancer Res. 66:4983〜4986）。ＧＤＦ１５に対するモノクローナル抗体は、潜在的な抗悪液質治療剤として認識されている。例えば、米国特許第８，１９２，７３５号明細書を参照されたい。
【０１７５】
ある種の態様では、ヒトにおける多くの食欲不振−悪液質性状態において、循環ＧＤＦ１５レベルは、顕著に上昇する。特定の実施形態では、ＧＤＦ１５レベルの正常な生理学的範囲の非限定的な例は、約１５０〜１１５０ｐｇ／ｍＬ（６〜５０ｐＭ）である。具体的な実施形態では、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体で処置される対象は、１５０ｐｇ／ｍＬを超える、または１０００ｐｇ／ｍＬを超える、または１１５０ｐｇ／ｍＬを超えるＧＤＦ１５レベルを有する。具体的な実施形態では、コミュニティーの老齢者（例えば、６５歳以上）集団の中央値の非限定的な例は、約１３７０（５５ｐＭ）であり、ＣＶＭ中央値は、約１７４０（７０ｐＭ）である。ある種の実施形態では、妊婦（例えば、妊婦のサンプリングまたは妊婦集団）における、例示的なＧＤＦ１５レベルは、最高で、約１５，０００ｐｇ／ｍＬ（６００ｐＭ）である。ある種の実施形態では、（ｉ）ベータ−サラセミアに罹患している対象は、非限定的で、例示的なＧＤＦ１５レベルであって、最高で、約６０，０００ｐｇ／ｍＬ（２，４００ｐＭ）のＧＤＦ１５レベルを有し；（ｉｉ）肺塞栓症に罹患している対象は、非限定的で、例示的なＧＤＦ１５レベルであって、最高で、約４８０００ｐｇ／ｍＬ（１，９００ｐＭ）のＧＤＦ１５レベルを有し；（ｉｉｉ）結腸直腸がんに罹患している対象は、非限定的で、例示的なＧＤＦ１５レベルであって、約１０，０００ｐｇ／ｍＬ（４００ｐＭ）のＧＤＦ１５レベルを有し；（ｉｖ）重度慢性腎疾患に罹患している対象は、非限定的で、例示的なＧＤＦ１５レベルであって、ｏｎ平均約８４００ｐｇ／ｍＬ（３６０ｐＭ）のＧＤＦ１５レベルを有し；（ｖ）膵臓がんに罹患している対象は、非限定的で、例示的な平均ＧＤＦ１５レベルであって、約５３８８ｐｇ／ｍＬ（２２０ｐＭ）の平均ＧＤＦ１５レベルを有し；（ｖｉ）神経性食欲不振に罹患している対象は、非限定的で、例示的なＧＤＦ１５レベルであって、最高で、約２０００ｐｇ／ｍＬ（８０ｐＭ）のＧＤＦ１５レベルを有し；（ｖｉ）２型糖尿病に罹患している対象は、非限定的で、例示的な平均ＧＤＦ１５レベルであって、約１２００ｐｇ／ｍＬ（５０ｐＭ）の平均ＧＤＦ１５レベルを有し；（ｖｉｉ）肥満に罹患している対象は、非限定的で、例示的な平均ＧＤＦ１５レベルであって、約５００ｐｇ／ｍＬ（２０ｐＭ）の平均ＧＤＦ１５レベルを有する。
【０１７６】
特定の実施形態では、慢性心不全に罹患している対象は、例えば、生存者の症例では、非限定的で、例示的なＧＤＦ１５レベルであって、最高で、約１，０８２（８０２〜１，５０２）（５０ｐＭ）のＧＤＦ１５レベルを有するのに対し、非生存者は、非限定的で、例示的なＧＤＦ１５レベルであって、約１，９００（１，３５７〜２，６７１）ｐｇ／ｍＬ（８０ｐＭ）のＧＤＦ１５レベルを有する。具体的な実施形態では、前立腺がん対象は、非限定的で、例示的なＧＤＦ１５レベルであって、約１２，４１６ｐｇ／ｍＬ（５００ｐＭ）のＧＤＦ１５レベルを平均で有し、悪液質を経ていない前立腺がん対象の症例では、非限定的で、例示的な平均ＧＤＦ１５レベルは、約３，２６５ｐｇ／ｍＬ（１３０ｐＭ）である。
【０１７７】
特定の実施形態では、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体および抗原結合性断片は、例えば、ＧＤＦ１５に結合し、これを中和することにより、ＧＤＦ１５のレベルおよび／または生物学的活性を低下させる。具体的な実施形態では、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体は、ＧＤＦ１５レベルの上昇を特徴とする疾患、例えば、悪液質、サルコペニアなどの急性症状および慢性症状を防止および改善することが予測される。ある種の実施形態では、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体（例えば、ＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｄ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、またはＡＢＧＤＦ１５−Ｇ）および抗原結合性断片は、対象における食欲または食物摂取を、例えば、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、または２０％増大させる。特定の実施形態では、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体（例えば、ＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｄ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、またはＡＢＧＤＦ１５−Ｇ）および抗原結合性断片は、対象における体重を、例えば、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、または２０％増大させる。本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体および抗原結合性断片は、例えば、ＧＤＦ１５に結合し、これを中和することにより、ＧＤＦ１５のレベルおよび／または生物学的活性を低下させる。これらの抗体は、ＧＤＦ１５レベルの上昇を特徴とする疾患、例えば、悪液質、サルコペニアなどの急性症状および慢性症状を防止および改善することが予測される。
【０１７８】
ＧＤＦ１５抗体および抗原結合性断片
ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体、例えば、ヒトＧＤＦ１５が開示される。前記抗体は、実施例で記載される通りに単離されたヒトモノクローナル抗体およびＦａｂを含むがこれらに限定されない。
【０１７９】
本明細書の一態様では、ＧＤＦ１５タンパク質（例えば、ヒトＧＤＦ１５）に特異的に結合する抗体であって、配列番号１２、３８、６４、９０、１１６、１４２、または１６８のアミノ酸配列を有するＶＨドメインを含む抗体が提示される。また、ＧＤＦ１５タンパク質に特異的に結合する抗体であって、前出の表１に列挙されるＶＨ  ＣＤＲのうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲを含む抗体も提示される。本明細書の一実施形態では、ＧＤＦ１５タンパク質（例えば、ヒトＧＤＦ１５）に特異的に結合する抗体であって、前出の表１に列挙されるＶＨ  ＣＤＲのうちのいずれかのアミノ酸配列を有する、１つ、２つ、３つ以上のＶＨ  ＣＤＲを含む（または、代替的に、これらからなる）抗体が提示される。
【０１８０】
一部の実施形態では、ＧＤＦ１５タンパク質に特異的に結合する抗体であって、配列番号２５、５１、７７、１０３、１２９、１５５、または１８１のアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含む抗体が提供される。また、ＧＤＦ１５タンパク質（例えば、ヒトＧＤＦ１５）に特異的に結合する抗体であって、前出の表１に列挙されるＶＬ  ＣＤＲのうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲを含む抗体も提示される。特に、ＧＤＦ１５タンパク質（例えば、ヒトＧＤＦ１５）に特異的に結合する抗体であって、前出の表１に列挙されるＶＬ  ＣＤＲのうちのいずれかのアミノ酸配列を有する、１つ、２つ、３つ以上のＶＬ  ＣＤＲを含む（または、代替的に、これらからなる）抗体が開示される。
【０１８１】
他の抗体は、突然変異させているが、なお、ＣＤＲ領域内で、表１に記載されている配列内で描示されるＣＤＲ領域と、少なくとも６０、７０、８０、８５、９０、または９５パーセントの同一性を有するアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、本発明の他の抗体は、ＣＤＲ領域内で、表１に記載されている配列内で描示されるＣＤＲ領域と比較して、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つ以下のアミノ酸を突然変異させた、突然変異体のアミノ酸配列を含む。
【０１８２】
また、ＧＤＦ１５タンパク質（例えば、ヒトＧＤＦ１５）に特異的に結合する抗体の、ＶＨ、ＶＬ、全長重鎖、および全長軽鎖をコードする核酸配列も提示される。このような核酸配列は、哺乳動物細胞内の発現のために最適化することができる（例えば、表１は、本明細書で記載される抗体の重鎖および軽鎖のために最適化された核酸配列を示す）。
【０１８３】
【表１−１】
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【０１８４】
【表１−２】
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【０１８５】
【表１−３】
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【０１８６】
【表１−４】
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【０１８７】
【表１−５】
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【０１８８】
【表１−６】
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【０１８９】
【表１−７】
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【０１９０】
【表１−８】
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【０１９１】
【表１−９】
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【０１９２】
【表１−１０】
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【０１９３】
【表１−１１】
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【０１９４】
【表１−１２】
2019521647.tif 000013
【０１９５】
【表１−１３】
2019521647.tif 000014
【０１９６】
【表１−１４】
2019521647.tif 000015
【０１９７】
【表１−１５】
2019521647.tif 000016
【０１９８】
【表１−１６】
2019521647.tif 000017
【０１９９】
【表１−１７】
2019521647.tif 000018
【０２００】
【表１−１８】
2019521647.tif 000019
【０２０１】
【表１−１９】
2019521647.tif 000020
【０２０２】
【表１−２０】
2019521647.tif 000021
【０２０３】
【表１−２１】
2019521647.tif 000022
【０２０４】
【表１−２２】
2019521647.tif 000023
【０２０５】
【表１−２３】
2019521647.tif 000024
【０２０６】
【表１−２４】
2019521647.tif 000025
【０２０７】
【表１−２５】
2019521647.tif 000026
【０２０８】
【表１−２６】
2019521647.tif 000027
【０２０９】
【表１−２７】
2019521647.tif 000028
【０２１０】
【表２】
2019521647.tif 000029
【０２１１】
表２に提示された測定値は、実施例で記載されるＢｉａｃｏｒｅ解析を使用して得た。異なるリガンドを、表２で示されている各抗体について調べた。例えば、以下のリガンド：
天然ヒトＧＤＦ１５：Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈから購入した、天然で産生されるヒトＧＤＦ１５；
ヒトＨｉｓ−ＧＤＦ１５：ＨＩＳタグ付けヒトＧＤＦ１５；
カニクイザルＨｉｓ−ＧＤＦ１５：ＨＩＳタグ付けカニクイザルＧＤＦ１５；
マウスＨｉｓ−ＧＤＦ１５：ＨＩＳタグ付けマウスＧＤＦ１５；および
ラットＨＩＳ  ＧＤＦ１５：ＨＩＳタグ付けラットＧＤＦ１５
を調べた。
【０２１２】
表３は、ＳＥＴおよびＢｉａｃｏｒｅに従い、選択された抗ＧＤＦ１５抗体の結合アフィニティー（解離定数）を提示する。
【０２１３】
【表３】
2019521647.tif 000030
【０２１４】
【表４】
2019521647.tif 000031
【０２１５】
他の抗体は、アミノ酸またはアミノ酸をコードする核酸を突然変異させているが、表１に記載されている配列となお少なくとも６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、または９５パーセントの同一性を有する抗体を含む。いくつかの実施形態は、可変領域内で、実質的に同じ抗原結合活性を保持しながら、表１に記載されている配列内で描示された可変領域と比較した場合に、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つ以下のアミノ酸を突然変異させている、突然変異体のアミノ酸配列を含む。
【０２１６】
これらの抗体の各々は、ＧＤＦ１５に結合しうるので、ＶＨ配列、ＶＬ配列、全長軽鎖配列、および全長重鎖配列（アミノ酸配列と、アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列と）を「混合し、マッチさせて」、本明細書に記載の他のＧＤＦ１５結合性抗体を創出することができる。このような「混合し、マッチさせた」ＧＤＦ１５結合性抗体および／もしくはＦＸＩａ結合性抗体は、当技術分野で公知の結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡおよび実施例節で記載される他のアッセイ）を使用して調べることができる。これらの鎖を混合し、マッチさせる場合、特定のＶＨ／ＶＬ対合に由来するＶＨ配列を、構造的に類似するＶＨ配列で置きかえるものとする。同様に、特定の全長重鎖／全長軽鎖対合に由来する全長重鎖配列を、構造的に類似する全長重鎖配列で置きかえるものとする。同様に、特定のＶＨ／ＶＬ対合に由来するＶＬ配列を、構造的に類似するＶＬ配列で置きかえるものとする。同様に、特定の全長重鎖／全長軽鎖対合に由来する全長軽鎖配列を、構造的に類似する全長軽鎖配列で置きかえるものとする。
【０２１７】
したがって、本明細書の一態様では、配列番号１２、３８、６４、９０、１１６、１４２、１６８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号２５、５１、７７、１０３、１２９、１５５および１８１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを有し、ＧＤＦ１５（例えば、ヒトＧＤＦ１５）に特異的に結合する、単離抗体またはその抗原結合性領域が提示される。
【０２１８】
より具体的に、ある種の態様では、本明細書では、それぞれ、配列番号１２および２５；３８および５１；６４および７７；９０および１０３；１１６および１２９；１４２および１５５；または１６８および１８１から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを有する、単離抗体またはその抗原結合性領域が提示される。ある種の態様では、本明細書では、配列番号１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを有する、単離抗体またはその抗原結合性領域が提示される。ある種の態様では、本明細書では、配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、配列番号５１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを有する、単離抗体またはその抗原結合性領域が提示される。ある種の態様では、本明細書では、配列番号６４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを有する、単離抗体またはその抗原結合性領域が提示される。ある種の態様では、本明細書では、配列番号９０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、配列番号１０３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを有する、単離抗体またはその抗原結合性領域が提示される。ある種の態様では、本明細書では、配列番号１１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、配列番号１２９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを有する、単離抗体またはその抗原結合性領域が提示される。ある種の態様では、本明細書では、配列番号１４２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、配列番号１５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを有する、単離抗体またはその抗原結合性領域が提示される。ある種の態様では、本明細書では、配列番号１６８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、配列番号１８１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを有する、単離抗体またはその抗原結合性領域が提示される。
【０２１９】
別の態様では、本明細書では、（ｉ）哺乳動物細胞における発現について最適化されたアミノ酸配列であって、配列番号１４、４０、６６、９２、１１８、１４４、および１７０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む全長重鎖、ならびに哺乳動物細胞における発現について最適化されたアミノ酸配列であって、配列番号２７、５３、７９、１０５、１３１、１５７、および１８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む全長軽鎖を有する単離抗体、または（ｉｉ）その抗原結合性部分を含む機能的タンパク質が提示される。より具体的に、ある種の態様では、本明細書では、それぞれ、配列番号１４および２７；４０および５３；６６および７９；９２および１０５；１１８および１３１；１４４および１５７；または１７０および１８３から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖および軽鎖を有する、単離抗体またはその抗原結合性領域が提示される。特定の態様では、本明細書では、配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、単離抗体またはその抗原結合性領域が提示される。特定の態様では、本明細書では、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、単離抗体またはその抗原結合性領域が提示される。特定の態様では、本明細書では、配列番号６６のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号７９のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、単離抗体またはその抗原結合性領域が提示される。特定の態様では、本明細書では、配列番号９２のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１０５のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、単離抗体またはその抗原結合性領域が提示される。特定の態様では、本明細書では、配列番号１１８のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１３１のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、単離抗体またはその抗原結合性領域が提示される。特定の態様では、本明細書では、配列番号１４４のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１５７のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、単離抗体またはその抗原結合性領域が提示される。特定の態様では、本明細書では、配列番号１７０のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１８３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、単離抗体またはその抗原結合性領域が提示される。
【０２２０】
本明細書で使用される「相補性決定領域」および「ＣＤＲ」という用語は、抗原特異性および抗原結合アフィニティーを付与する、抗体可変領域内のアミノ酸の配列を指す。一般に、各重鎖可変領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）内には、３つのＣＤＲがあり、各軽鎖可変領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）内には、３つのＣＤＲがある。
【０２２１】
所与のＣＤＲの正確なアミノ酸配列の境界は、Kabatら(1991), “Sequences of Proteins of Immunological Interest,” 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD（「Ｋａｂａｔ」番号付けスキーム）、Al-Lazikaniら、(1997) JMB 273, 927-948（「Ｃｈｏｔｈｉａ」番号付けスキーム）により記載されているスキームを含む、周知の多数のスキームのうちのいずれかを使用して、たやすく決定することができる。
【０２２２】
例えば、Ｋａｂａｔによれば、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）内の抗体であるＡＢＧＤＦ１５−ＡのＣＤＲアミノ酸残基は、３１〜３５（ＨＣＤＲ１）、５０〜６６（ＨＣＤＲ２）、および９９〜１０８（ＨＣＤＲ３）と番号付けされており、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）内のＣＤＲアミノ酸残基は、２４〜３４（ＬＣＤＲ１）、５０〜５６（ＬＣＤＲ２）、および８９〜９７（ＬＣＤＲ３）と番号付けされている。Ｃｈｏｔｈｉａによれば、ＶＨ内のＣＤＲアミノ酸は、２６〜３２（ＨＣＤＲ１）、５２〜５７（ＨＣＤＲ２）、および９９〜１０８（ＨＣＤＲ３）と番号付けされており、ＶＬ内のアミノ酸残基は、２６〜３２（ＬＣＤＲ１）、５０〜５２（ＬＣＤＲ２）、および９１〜９６（ＬＣＤＲ３）と番号付けされている。ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａの両方のＣＤＲ定義を組み合わせることにより、ＣＤＲは、ヒトＶＨ内のアミノ酸残基２６〜３５（ＨＣＤＲ１）、５０〜６６（ＨＣＤＲ２）、および９９〜１０８（ＨＣＤＲ３）、ならびにヒトＶＬ内のアミノ酸残基２４〜３４（ＬＣＤＲ１）、５０〜５６（ＬＣＤＲ２）、および８９〜９７（ＬＣＤＲ３）からなる。
【０２２３】
別の態様では、本明細書では、表１に記載されている、重鎖および軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、またはそれらの組合せを含むＧＤＦ１５結合性抗体が提示される。抗体のＶＨ  ＣＤＲ１のアミノ酸配列を、配列番号６、３２、５８、８４、１１０、１３６、１６２に示す。抗体のＶＨ  ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号７、３３、５９、８５、１１１、１３７、１６３に示されている。抗体のＶＨ  ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号８、３４、６０、８６、１１２、１３８、１６４に示されている。抗体のＶＬ  ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１９、４５、７１、９７、１２３、１４９、１７５に示されている。抗体のＶＬ  ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号２０、４６、７２、９８、１２４、１５０、１７６に示されている。抗体のＶＬ  ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号２１、４７、７３、９９、１２５、１５１、１７７に示されている。これらのＣＤＲ領域は、Ｋａｂａｔシステムを使用して表される。
【０２２４】
代替的に、Ｃｈｏｔｈｉａシステム（Al-Lazikaniら、（1997）、JMB 273 927〜948）を使用して規定される通り、抗体のＶＨ  ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号９、３５、６１、８７、１１３、１３９、１６５に示されている。抗体のＶＨ  ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１０、３６、６２、８８、１１４、１４０、１６６に示されている。抗体のＶＨ  ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１１、３７、６３、８９、１１５、１４１、１６７に示されている。抗体のＶＬ  ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号２２、４８、７４、１００、１２６、１５２、１７８に示されている。抗体のＶＬ  ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号２３、４９、７５、１０１、１２７、１５３、１７９に示されている。抗体のＶＬ  ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号２４、５０、７６、１０２、１２８、１５４、１８０に示されている。
【０２２５】
別の態様では、Ｋａｂａｔシステムと、Ｃｈｏｔｈｉａシステムとの番号付けの組合せを前提として、本明細書では、表１に記載されている、重鎖および軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、またはこれらの組合せを含むＧＤＦ１５結合性抗体が提示される。抗体のＶＨ  ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号３、２９、５５、８１、１０７、１３３、１５９に示されている。抗体のＶＨ  ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号４、３０、５６、８２、１０８、１３４、１６０に示されている。抗体のＶＨ  ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号５、３１、５７、８３、１０９、１３５、１６１に示されている。抗体のＶＬ  ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１６、４２、６８、９４、１２０、１４６、１７２に示されている。抗体のＶＬ  ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１７、４３、６９、９５、１２１、１４７、１７３に示されている。抗体のＶＬ  ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１８、４４、７０、９６、１２２、１４８、１７４に示されている。これらのＣＤＲ領域は、組合せシステムを使用して表される。
【０２２６】
これらの抗体の各々は、ＧＤＦ１５に結合することが可能であり、抗原結合性特異性は、主に、ＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域、およびＣＤＲ３領域によりもたらされることを踏まえれば、各抗体は、本明細書で記載される他のＧＤＦ１５結合分子を創出するのに、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、およびＶＨ  ＣＤＲ３、ならびにＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３を含有することが好ましいが、ＶＨ  ＣＤＲ１配列、ＶＨ  ＣＤＲ２配列、およびＶＨ  ＣＤＲ３配列、ならびにＶＬ  ＣＤＲ１配列、ＶＬ  ＣＤＲ２配列、およびＶＬ  ＣＤＲ３配列を「混合し、マッチさせる」ことができる（すなわち、異なる抗体に由来するＣＤＲを混合し、マッチさせることができる）。このような「混合し、マッチさせた」ＧＤＦ１５結合性抗体は、当技術分野で公知の結合アッセイ、および実施例で記載される結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ、ＳＥＴ、Ｂｉａｃｏｒｅ）を使用して調べることができる。ＶＨ  ＣＤＲ配列を混合し、マッチさせる場合、特定のＶＨ配列に由来するＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列、および／またはＣＤＲ３配列を、構造的に類似するＣＤＲ配列で置きかえるものとする。同様に、ＶＬ  ＣＤＲ配列を混合し、マッチさせる場合、特定のＶＬ配列に由来するＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列、および／またはＣＤＲ３配列を、構造的に類似するＣＤＲ配列で置きかえるものとする。当業者には、新規のＶＨ配列およびＶＬ配列を、１つまたは複数のＶＨ  ＣＤＲ領域配列および／またはＶＬ  ＣＤＲ領域配列を、モノクローナル抗体のための、本明細書で示されるＣＤＲ配列に由来する、構造的に類似する配列で置換することにより、創出しうることがたやすく明らかであろう。前出に加えて、一実施形態では、本明細書で記載される抗体の抗原結合性断片は、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、およびＶＨ  ＣＤＲ３、またはＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３を含むことが可能であり、この場合、断片は、ＧＤＦ１５に、単一の可変ドメインとして結合する。
【０２２７】
ある種の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、表１に記載されているＦａｂの重鎖および軽鎖配列を有しうる。より具体的に、抗体またはその抗原結合性断片は、ＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｇ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅ、またはＡＢＧＤＦ１５−Ｄの重鎖および軽鎖配列を有しうる。具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｄ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅ、またはＡＢＧＤＦ１５−Ｆの重鎖および軽鎖配列を有しうる。
【０２２８】
ある種の実施形態では、ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体または抗原結合性断片は、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａの組合せにより規定され、表１に記載されている、重鎖可変領域のＣＤＲ１、重鎖可変領域のＣＤＲ２、重鎖可変領域のＣＤＲ３、軽鎖可変領域のＣＤＲ１、軽鎖可変領域のＣＤＲ２、および軽鎖可変領域のＣＤＲ３を含む。他の実施形態では、ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体または抗原結合性断片は、Ｋａｂａｔにより規定され、表１に記載されている、重鎖可変領域のＣＤＲ１、重鎖可変領域のＣＤＲ２、重鎖可変領域のＣＤＲ３、軽鎖可変領域のＣＤＲ１、軽鎖可変領域のＣＤＲ２、および軽鎖可変領域のＣＤＲ３を含む。さらに他の実施形態では、ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体または抗原結合性断片は、Ｃｈｏｔｈｉａにより規定され、表１において記載されている重鎖可変領域のＣＤＲ１、重鎖可変領域のＣＤＲ２、重鎖可変領域のＣＤＲ３、軽鎖可変領域のＣＤＲ１、軽鎖可変領域のＣＤＲ２、および軽鎖可変領域のＣＤＲ３を含む。
【０２２９】
本明細書の一実施形態では、ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体であって、
（ｉ）配列番号３のＨＣＤＲ１；配列番号４のＨＣＤＲ２；配列番号５のＨＣＤＲ３；配列番号１６のＬＣＤＲ１；配列番号１７のＬＣＤＲ２；および配列番号１８のＬＣＤＲ３；または
（ｉｉ）配列番号６のＨＣＤＲ１；配列番号７のＨＣＤＲ２；配列番号８のＨＣＤＲ３；配列番号１９のＬＣＤＲ１；配列番号２０のＬＣＤＲ２；および配列番号２１のＬＣＤＲ３；または
（ｉｉｉ）配列番号９のＨＣＤＲ１；配列番号１０のＨＣＤＲ２；配列番号１１のＨＣＤＲ３；配列番号２２のＬＣＤＲ１；配列番号２３のＬＣＤＲ２；および配列番号２４のＬＣＤＲ３
を含む抗体が提示される。
【０２３０】
本明細書の一実施形態では、ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体であって、
（ｉ）配列番号１０７のＨＣＤＲ１；配列番号１０８のＨＣＤＲ２；配列番号１０９のＨＣＤＲ３；配列番号１２０のＬＣＤＲ１；配列番号１２１のＬＣＤＲ２；および配列番号１２２のＬＣＤＲ３；または
（ｉｉ）配列番号１１０のＨＣＤＲ１；配列番号１１１のＨＣＤＲ２；配列番号１１２のＨＣＤＲ３；配列番号１２３のＬＣＤＲ１；配列番号１２４のＬＣＤＲ２；および配列番号１２５のＬＣＤＲ３；または
（ｉｉｉ）配列番号１１３のＨＣＤＲ１；配列番号１１４のＨＣＤＲ２；配列番号１１５のＨＣＤＲ３；配列番号１２６のＬＣＤＲ１；配列番号１２７のＬＣＤＲ２；および配列番号１２８のＬＣＤＲ３
を含む抗体が提示される。
【０２３１】
本明細書の一実施形態では、ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体であって、
（ｉ）配列番号２９のＨＣＤＲ１；配列番号３０のＨＣＤＲ２；配列番号３１のＨＣＤＲ３；配列番号４２のＬＣＤＲ１；配列番号４３のＬＣＤＲ２；および配列番号４４のＬＣＤＲ３；または
（ｉｉ）配列番号３２のＨＣＤＲ１；配列番号３３のＨＣＤＲ２；配列番号３４のＨＣＤＲ３；配列番号４５のＬＣＤＲ１；配列番号４６のＬＣＤＲ２；および配列番号４７のＬＣＤＲ３；または
（ｉｉｉ）配列番号３５のＨＣＤＲ１；配列番号３６のＨＣＤＲ２；配列番号３７のＨＣＤＲ３；配列番号４８のＬＣＤＲ１；配列番号４９のＬＣＤＲ２；および配列番号５０のＬＣＤＲ３
を含む抗体が提示される。
【０２３２】
本明細書の一実施形態では、ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体であって、
（ｉ）配列番号５５のＨＣＤＲ１；配列番号５６のＨＣＤＲ２；配列番号５７のＨＣＤＲ３；配列番号６８のＬＣＤＲ１；配列番号６９のＬＣＤＲ２；および配列番号７０のＬＣＤＲ３；または
（ｉｉ）配列番号５８のＨＣＤＲ１；配列番号５９のＨＣＤＲ２；配列番号６０のＨＣＤＲ３；配列番号７１のＬＣＤＲ１；配列番号７２のＬＣＤＲ２；および配列番号７３のＬＣＤＲ３；または
（ｉｉｉ）配列番号６１のＨＣＤＲ１；配列番号６２のＨＣＤＲ２；配列番号６３のＨＣＤＲ３；配列番号７４のＬＣＤＲ１；配列番号７５のＬＣＤＲ２；および配列番号７６のＬＣＤＲ３
を含む抗体が提示される。
【０２３３】
本明細書の一実施形態では、ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体であって、
（ｉ）配列番号８１のＨＣＤＲ１；配列番号８２のＨＣＤＲ２；配列番号８３のＨＣＤＲ３；配列番号９４のＬＣＤＲ１；配列番号９５のＬＣＤＲ２；および配列番号９６のＬＣＤＲ３；または
（ｉｉ）配列番号８４のＨＣＤＲ１；配列番号８５のＨＣＤＲ２；配列番号８６のＨＣＤＲ３；配列番号９７のＬＣＤＲ１；配列番号９８のＬＣＤＲ２；および配列番号９９のＬＣＤＲ３；または
（ｉｉｉ）配列番号８７のＨＣＤＲ１；配列番号８８のＨＣＤＲ２；配列番号８９のＨＣＤＲ３；配列番号１００のＬＣＤＲ１；配列番号１０１のＬＣＤＲ２；および配列番号１０２のＬＣＤＲ３
を含む抗体が提示される。
【０２３４】
本明細書の一実施形態では、ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体であって、
（ｉ）配列番号１３３のＨＣＤＲ１；配列番号１３４のＨＣＤＲ２；配列番号１３５のＨＣＤＲ３；配列番号１４６のＬＣＤＲ１；配列番号１４７のＬＣＤＲ２；および配列番号１４８のＬＣＤＲ３；または
（ｉｉ）配列番号１３６のＨＣＤＲ１；配列番号１３７のＨＣＤＲ２；配列番号１３８のＨＣＤＲ３；配列番号１４９のＬＣＤＲ１；配列番号１５０のＬＣＤＲ２；および配列番号１５１のＬＣＤＲ３；または
（ｉｉｉ）配列番号１３９のＨＣＤＲ１；配列番号１４０のＨＣＤＲ２；配列番号１４１のＨＣＤＲ３；配列番号１５２のＬＣＤＲ１；配列番号１５３のＬＣＤＲ２；および配列番号１５４のＬＣＤＲ３
を含む抗体が提示される。
【０２３５】
本明細書の一実施形態では、ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体であって、
（ｉ）配列番号１５９のＨＣＤＲ１；配列番号１６０のＨＣＤＲ２；配列番号１６１のＨＣＤＲ３；配列番号１７２のＬＣＤＲ１；配列番号１７３のＬＣＤＲ２；および配列番号１７４のＬＣＤＲ３；または
（ｉｉ）配列番号１６２のＨＣＤＲ１；配列番号１６３のＨＣＤＲ２；配列番号１６４のＨＣＤＲ３；配列番号１７５のＬＣＤＲ１；配列番号１７６のＬＣＤＲ２；および配列番号１７７のＬＣＤＲ３；または
（ｉｉｉ）配列番号１６５のＨＣＤＲ１；配列番号１６６のＨＣＤＲ２；配列番号１６７のＨＣＤＲ３；配列番号１７８のＬＣＤＲ１；配列番号１７９のＬＣＤＲ２；および配列番号１８０の軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む抗体が提示される。
【０２３６】
一実施形態では、本明細書では、ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体であって、配列番号３の重鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号４の重鎖可変領域のＣＤＲ２；配列番号５の重鎖可変領域のＣＤＲ３；配列番号１６の軽鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号１７の軽鎖可変領域のＣＤＲ２；および配列番号１８の軽鎖可変領域のＣＤＲ３を含む抗体が提示される。
【０２３７】
一実施形態では、本明細書では、ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体であって、配列番号２９の重鎖可変領域のＣＤＲ１、配列番号３０の重鎖可変領域のＣＤＲ２、配列番号３１の重鎖可変領域のＣＤＲ３、配列番号４２の軽鎖可変領域のＣＤＲ１、配列番号４３の軽鎖可変領域のＣＤＲ２、および配列番号４４の軽鎖可変領域のＣＤＲ３を含む抗体が提示される。
【０２３８】
一実施形態では、本明細書では、ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体であって、配列番号５５の重鎖可変領域のＣＤＲ１、配列番号５６の重鎖可変領域のＣＤＲ２、配列番号５７の重鎖可変領域のＣＤＲ３、配列番号６８の軽鎖可変領域のＣＤＲ１、配列番号６９の軽鎖可変領域のＣＤＲ２、および配列番号７０の軽鎖可変領域のＣＤＲ３を含む抗体が提示される。
【０２３９】
一実施形態では、本明細書では、ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体であって、配列番号８１の重鎖可変領域のＣＤＲ１、配列番号８２の重鎖可変領域のＣＤＲ２、配列番号８３の重鎖可変領域のＣＤＲ３、配列番号９４の軽鎖可変領域のＣＤＲ１、配列番号９５の軽鎖可変領域のＣＤＲ２、および配列番号９６の軽鎖可変領域のＣＤＲ３を含む抗体が提示される。
【０２４０】
一実施形態では、本明細書では、ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体であって、配列番号１０７の重鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号１０８の重鎖可変領域のＣＤＲ２；配列番号１０９の重鎖可変領域のＣＤＲ３；配列番号１２０の軽鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号１２１の軽鎖可変領域のＣＤＲ２；および配列番号１２２の軽鎖可変領域のＣＤＲ３を含む抗体が提示される。
【０２４１】
一実施形態では、本明細書では、ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体であって、配列番号１３３の重鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号１３４の重鎖可変領域のＣＤＲ２；配列番号１３５の重鎖可変領域のＣＤＲ３；配列番号１４６の軽鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号１４７の軽鎖可変領域のＣＤＲ２；および配列番号１４８の軽鎖可変領域のＣＤＲ３を含む抗体が提示される。
【０２４２】
本明細書の一実施形態では、ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体であって、配列番号１５９の重鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号１６０の重鎖可変領域のＣＤＲ２；配列番号１６１の重鎖可変領域のＣＤＲ３；配列番号１７２の軽鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号１７３の軽鎖可変領域のＣＤＲ２；および配列番号１７４の軽鎖可変領域のＣＤＲ３を含む抗体が提示される。
【０２４３】
本明細書の一実施形態では、ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体であって、配列番号６の重鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号７の重鎖可変領域のＣＤＲ２；配列番号８の重鎖可変領域のＣＤＲ３；配列番号１９の軽鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号２０の軽鎖可変領域のＣＤＲ２；および配列番号２１の軽鎖可変領域のＣＤＲ３を含む抗体が提示される。
【０２４４】
本明細書の一実施形態では、ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体であって、配列番号３２の重鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号３３の重鎖可変領域のＣＤＲ２；配列番号３４の重鎖可変領域のＣＤＲ３；配列番号４５の軽鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号４６の軽鎖可変領域のＣＤＲ２；および配列番号４７の軽鎖可変領域のＣＤＲ３を含む抗体が提示される。
【０２４５】
具体的な実施形態では、本明細書では、ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体であって、配列番号５８の重鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号５９の重鎖可変領域のＣＤＲ２；配列番号６０の重鎖可変領域のＣＤＲ３；配列番号７１の軽鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号７２の軽鎖可変領域のＣＤＲ２；および配列番号７３の軽鎖可変領域のＣＤＲ３を含む抗体が提示される。
【０２４６】
具体的な実施形態では、本明細書では、ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体であって、配列番号８４の重鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号８５の重鎖可変領域のＣＤＲ２；配列番号８６の重鎖可変領域のＣＤＲ３；配列番号９７の軽鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号９８の軽鎖可変領域のＣＤＲ２；および配列番号９９の軽鎖可変領域のＣＤＲ３を含む抗体が提示される。
【０２４７】
具体的な実施形態では、本明細書では、ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体であって、配列番号１１０の重鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号１１１の重鎖可変領域のＣＤＲ２；配列番号１１２の重鎖可変領域のＣＤＲ３；配列番号１２３の軽鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号１２４の軽鎖可変領域のＣＤＲ２；および配列番号１２５の軽鎖可変領域のＣＤＲ３を含む抗体が提示される。
【０２４８】
具体的な実施形態では、本明細書では、ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体であって、配列番号１３６の重鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号１３７の重鎖可変領域のＣＤＲ２；配列番号１３８の重鎖可変領域のＣＤＲ３；配列番号１４９の軽鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号１５０の軽鎖可変領域のＣＤＲ２；および配列番号１５１の軽鎖可変領域のＣＤＲ３を含む抗体が提示される。
【０２４９】
具体的な実施形態では、本明細書では、ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体であって、配列番号１６２の重鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号１６３の重鎖可変領域のＣＤＲ２；配列番号１６４の重鎖可変領域のＣＤＲ３；配列番号１７５の軽鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号１７６の軽鎖可変領域のＣＤＲ２；および配列番号１７７の軽鎖可変領域のＣＤＲ３を含む抗体が提示される。
【０２５０】
具体的な実施形態では、本明細書では、ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体であって、配列番号９の重鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号１０の重鎖可変領域のＣＤＲ２；配列番号１１の重鎖可変領域のＣＤＲ３；配列番号２２の軽鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号２３の軽鎖可変領域のＣＤＲ２；および配列番号２４の軽鎖可変領域のＣＤＲ３を含む抗体が提示される。
【０２５１】
具体的な実施形態では、本明細書では、ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体であって、配列番号３５の重鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号３６の重鎖可変領域のＣＤＲ２；配列番号３７の重鎖可変領域のＣＤＲ３；配列番号４８の軽鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号４９の軽鎖可変領域のＣＤＲ２；および配列番号５０の軽鎖可変領域のＣＤＲ３を含む抗体が提示される。
【０２５２】
具体的な実施形態では、本明細書では、ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体であって、配列番号６１の重鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号６２の重鎖可変領域のＣＤＲ２；配列番号６３の重鎖可変領域のＣＤＲ３；配列番号７４の軽鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号７５の軽鎖可変領域のＣＤＲ２；および配列番号７６の軽鎖可変領域のＣＤＲ３を含む抗体が提示される。
【０２５３】
具体的な実施形態では、本明細書では、ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体であって、配列番号８７の重鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号８８の重鎖可変領域のＣＤＲ２；配列番号８９の重鎖可変領域のＣＤＲ３；配列番号１００の軽鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号１０１の軽鎖可変領域のＣＤＲ２；および配列番号１０２の軽鎖可変領域のＣＤＲ３を含む抗体が提示される。
【０２５４】
具体的な実施形態では、本明細書では、ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体であって、配列番号１１３の重鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号１１４の重鎖可変領域のＣＤＲ２；配列番号１１５の重鎖可変領域のＣＤＲ３；配列番号１２６の軽鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号１２７の軽鎖可変領域のＣＤＲ２；および配列番号１２８の軽鎖可変領域のＣＤＲ３を含む抗体が提示される。
【０２５５】
具体的な実施形態では、本明細書では、ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体であって、配列番号１３９の重鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号１４０の重鎖可変領域のＣＤＲ２；配列番号１４１の重鎖可変領域のＣＤＲ３；配列番号１５２の軽鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号１５３の軽鎖可変領域のＣＤＲ２；および配列番号１５４の軽鎖可変領域のＣＤＲ３を含む抗体が提示される。
【０２５６】
具体的な実施形態では、本明細書では、ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体であって、配列番号１６５の重鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号１６６の重鎖可変領域のＣＤＲ２；配列番号１６７の重鎖可変領域のＣＤＲ３；配列番号１７８の軽鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号１７９の軽鎖可変領域のＣＤＲ２；および配列番号１８０の軽鎖可変領域のＣＤＲ３を含む抗体が提示される。
【０２５７】
ある種の実施形態では、本明細書では、表１に記載されている、ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体または抗原結合性断片が提示される。特定の実施形態では、ＧＤＦ１５に結合する抗体または抗原結合性断片は、ＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｇ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅ、またはＡＢＧＤＦ１５−Ｄである。
【０２５８】
抗体の可変領域または全長鎖が、ヒト生殖細胞系列の免疫グロブリン遺伝子を使用する系から得られる場合、本明細書で使用されるヒト抗体は、特定の生殖細胞系列配列「の産物」であるかまたはこれ「に由来する」、重鎖もしくは軽鎖可変領域または全長重鎖もしくは軽鎖を含む。このような系は、ヒト免疫グロブリン遺伝子を保有するトランスジェニックマウスを、対象の抗原で免疫化するか、または対象の抗原を伴うファージ上で提示されるヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリーをスクリーニングすることを含む。ヒト生殖細胞系列の免疫グロブリン配列「の産物」であるかまたはこれ「に由来する」ヒト抗体は、ヒト抗体のアミノ酸配列を、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリンのアミノ酸配列と比較し、配列がヒト抗体の配列と最も近似する（すなわち、同一性％が最大である）ヒト生殖細胞系列の免疫グロブリン配列を選択することにより、それ自体として同定することができる。
【０２５９】
特定のヒト生殖細胞系列の免疫グロブリン配列「の産物」であるかまたはこれ「に由来する」ヒト抗体は、例えば、自然発生の体細胞突然変異または部位特異的突然変異の意図的な導入に起因して、生殖細胞系列配列と比較したアミノ酸の差異を含有しうる。しかし、ＶＨフレームワーク領域またはＶＬフレームワーク領域では、選択されたヒト抗体は、アミノ酸配列が、ヒト生殖細胞系列の免疫グロブリン遺伝子によりコードされるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一であり、ヒト抗体を、他の種の生殖細胞系列免疫グロブリンアミノ酸配列（例えば、マウス生殖細胞系列配列）と比較した場合に、ヒトとして同定するアミノ酸残基を含有することが典型的である。ある種の場合には、ヒト抗体は、アミノ酸配列が、生殖細胞系列の免疫グロブリン遺伝子によりコードされるアミノ酸配列と、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、または少なくとも９５％、なおまたは、少なくとも９６％、９７％、９８％、または９９％同一でありうる。
【０２６０】
組換えヒト抗体は、ＶＨフレームワーク領域内またはＶＬフレームワーク領域内のヒト生殖細胞系列の免疫グロブリン遺伝子によりコードされるアミノ酸配列との、１０アミノ酸以下の差異を提示することが典型的である。ある種の場合には、ヒト抗体は、生殖細胞系列の免疫グロブリン遺伝子によりコードされるアミノ酸配列との、５アミノ酸以下、なおまたは、４、３、２、または１アミノ酸以下の差異を提示しうる。ヒト生殖細胞系列の免疫グロブリン遺伝子の例は、下記で記載される生殖細胞系列の可変ドメイン断片を含むがこれらに限定されない。
【０２６１】
相同抗体
さらに別の実施形態では、本明細書では、表１に記載されている配列と相同なアミノ酸配列を含む、抗体またはその抗原結合性断片が提示されるが、抗体は、ＧＤＦ１５タンパク質（例えば、ヒトＧＤＦ１５）に結合し、表１に記載されている抗体の、所望の機能的特性を保持する。
【０２６２】
例えば、本明細書では、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む単離抗体またはその機能的な抗原結合性断片が提示され、この場合、重鎖可変ドメインは、配列番号１２、３８、６４、９０、１１６、１４２、１６８からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％同一なアミノ酸配列を含み；軽鎖可変ドメインは、配列番号２５、５１、７７、１０３、１２９、１５５、１８１からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％同一なアミノ酸配列を含み；抗体は、ＧＤＦ１５（例えば、ヒトＧＤＦ１５）に特異的に結合する。ある種の実施形態では、重鎖および軽鎖配列は、Ｋａｂａｔにより規定される、ＨＣＤＲ１配列、ＨＣＤＲ２配列、ＨＣＤＲ３配列、ＬＣＤＲ１配列、ＬＣＤＲ２配列、およびＬＣＤＲ３配列、例えば、それぞれ、配列番号６、７、８、および１９、２０、２１をさらに含む。ある種の他の実施形態では、重鎖配列および軽鎖配列は、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けにより規定される、ＨＣＤＲ１配列、ＨＣＤＲ２配列、ＨＣＤＲ３配列、ＬＣＤＲ１配列、ＬＣＤＲ２配列、およびＬＣＤＲ３配列、例えば、それぞれ、配列番号９、１０、１１、および２２、２３、２４をさらに含む。さらに他のある種の実施形態では、重鎖および軽鎖配列は、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａの両方、例えば、それぞれ、配列番号３、４、５、および配列番号１６、１７、１８を組み合わせることにより規定される、ＨＣＤＲ１配列、ＨＣＤＲ２配列、ＨＣＤＲ３配列、ＬＣＤＲ１配列、ＬＣＤＲ２配列、およびＬＣＤＲ３配列をさらに含む。
【０２６３】
他の実施形態では、ＶＨアミノ酸配列および／またはＶＬアミノ酸配列は、表１に示される配列と、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一でありうる。他の実施形態では、ＶＨアミノ酸配列および／またはＶＬアミノ酸配列は、１、２、３、４、または５カ所以下のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を除き同一でありうる。表１に記載されている抗体のＶＨ領域およびＶＬ領域と大きな（すなわち、８０％以上の）同一性を有するＶＨ領域およびＶＬ領域を有する抗体は、配列番号１３、３９、６５、９１、１１７、１４３、１６９、および配列番号２６、５２、７８、１０４、１３０、１５６、１８２のそれぞれをコードする核酸分子の突然変異誘発（例えば、部位特異的突然変異誘発またはＰＣＲ媒介突然変異誘発）の後、本明細書で記載される機能アッセイを使用して、コードされる改変抗体を、機能の保持について調べることにより得ることができる。
【０２６４】
他の実施形態では、全長重鎖アミノ酸配列および／または全長軽鎖アミノ酸配列は、表１に示される配列と、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一でありうる。配列番号１４、４０、６６、９２、１１８、１４４、１７０のうちのいずれかの全長重鎖、および配列番号２７、５３、７９、１０５、１３１、１５７、１８３のうちのいずれかの全長軽鎖と大きな（すなわち、８０％以上の）同一性を有する全長重鎖および全長軽鎖を有する抗体は、このようなポリペプチドをコードする核酸分子の突然変異誘発（例えば、部位特異的突然変異誘発またはＰＣＲ媒介突然変異誘発）の後、本明細書で記載される機能アッセイを使用して、コードされる改変抗体を、機能の保持について調べることにより得ることができる。
【０２６５】
他の実施形態では、全長重鎖および／または全長軽鎖のヌクレオチド配列は、表１に示される配列と６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一でありうる。
【０２６６】
他の実施形態では、重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域のヌクレオチド配列は、表１に示される配列と６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一でありうる。
【０２６７】
本明細書で使用される、２つの配列の間の同一性パーセントとは、２つの配列の最適なアライメントのために導入される必要があるギャップの数および各ギャップの長さを考慮する配列により共有される、同一な位置の数の関数（すなわち、同一性％＝同一な位置の数／位置の総数×１００）である。２つの配列の間の配列の比較および同一性パーセントの決定は、下記の非限定的な例で記載されている、数学的アルゴリズムを使用して達成することができる。
【０２６８】
加えて、または代替的に、本明細書で記載されるタンパク質配列は、公表されたデータベースに照らして検索を実施する、例えば、関連の配列を同定するための「クエリー配列」としてさらに使用することもできる。例えば、このような検索は、Altschulら、1990 J. Mol. Biol. 215:403〜10によるＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）を使用して実施することができる。
【０２６９】
保存的修飾を伴う抗体
ある種の実施形態では、本明細書で記載される抗体は、ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、ならびにＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域を有し、この場合、これらのＣＤＲ配列のうちの１つまたは複数は、本明細書で記載される抗体またはそれらの保存的修飾に基づき指定されたアミノ酸配列を有し、抗体は、本明細書で記載されるＧＤＦ１５結合性抗体の所望の機能的特性を保持する。
【０２７０】
したがって、本明細書では、ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、ならびにＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域からなる単離抗体またはその抗原結合性断片であって、重鎖可変領域のＣＤＲ１アミノ酸配列が、配列番号３、２９、５５、８１、１０７、１３３、および１５９、ならびにそれらの保存的修飾からなる群から選択され、重鎖可変領域のＣＤＲ２アミノ酸配列が、配列番号４、３０、５６、８２、１０８、１３４、および１６０、ならびにそれらの保存的修飾からなる群から選択され、重鎖可変領域のＣＤＲ３アミノ酸配列が、配列番号５、３１、５７、８３、１０９、１３５、および１６１、ならびにそれらの保存的修飾からなる群から選択され、軽鎖可変領域のＣＤＲ１アミノ酸配列が、配列番号１６、４２、６８、９４、１２０、１４６、および１７２、ならびにそれらの保存的修飾からなる群から選択され、軽鎖可変領域のＣＤＲ２アミノ酸配列が、配列番号１７、４３、６９、９５、１２１、１４７、および１７３、ならびにそれらの保存的修飾からなる群から選択され、軽鎖可変領域のＣＤＲ３アミノ酸配列が、配列番号１８、４４、７０、９６、１２２、１４８、および１７４、ならびにそれらの保存的修飾からなる群から選択され、ＧＤＦ１５に特異的に結合する、抗体またはその抗原結合性断片が提示される。
【０２７１】
したがって、本明細書では、ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、ならびにＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域からなる抗体またはその抗原結合性断片であって、重鎖可変領域のＣＤＲ１アミノ酸配列が、配列番号６、３２、５８、８４、１１０、１３６、および１６２、ならびにその保存的修飾からなる群から選択され；重鎖可変領域のＣＤＲ２アミノ酸配列が、配列番号７、３３、５９、８５、１１１、１３７、および１６３、ならびにその保存的修飾からなる群から選択され；重鎖可変領域のＣＤＲ３アミノ酸配列が、配列番号８、３４、６０、８６、１１２、１３８、および１６４、ならびにその保存的修飾からなる群から選択され；軽鎖可変領域のＣＤＲ１アミノ酸配列が、配列番号１９、４５、７１、９７、１２３、１４９、および１７５ならびにその保存的修飾からなる群から選択され；軽鎖可変領域のＣＤＲ２アミノ酸配列が、配列番号２０、４６、７２、９８、１２４、１５０、および１７６、ならびにその保存的修飾からなる群から選択され；軽鎖可変領域のＣＤＲ３アミノ酸配列が、配列番号２１、４７、７３、９９、１２５、１５１、および１７７、ならびにその保存的修飾からなる群から選択され；抗体またはその抗原結合性断片が、ＧＤＦ１５に特異的に結合する、抗体またはその抗原結合性断片が提示される。
【０２７２】
したがって、本明細書では、ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、ならびにＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域からなり、重鎖可変領域のＣＤＲ１アミノ酸配列が、配列番号９、３５、６１、８７、１１３、１３９、および１６５、ならびにその保存的修飾からなる群から選択され；重鎖可変領域のＣＤＲ２アミノ酸配列が、配列番号１０、３６、６２、８８、１１４、１４０、および１６６、ならびにその保存的修飾からなる群から選択され；重鎖可変領域のＣＤＲ３アミノ酸配列が、配列番号１１、３７、６３、８９、１１５、１４１、および１６７、ならびにその保存的修飾からなる群から選択され；軽鎖可変領域のＣＤＲ１アミノ酸配列が、配列番号２２、４８、７４、１００、１２６、１５２、および１７８、ならびにその保存的修飾からなる群から選択され；軽鎖可変領域のＣＤＲ２アミノ酸配列が、配列番号２３、４９、７５、１０１、１２７、１５３、および１７９、ならびにその保存的修飾からなる群から選択され；軽鎖可変領域のＣＤＲ３アミノ酸配列が、配列番号２４、５０、７６、１０２、１２８、１５４、および１８０、ならびにその保存的修飾からなる群から選択される、抗体またはその抗原結合性断片が提示され；抗体またはその抗原結合性断片はＧＤＦ１５に特異的に結合する。
【０２７３】
他の実施形態では、本明細書で記載される抗体は、哺乳動物細胞における発現について最適化されており、全長重鎖配列および全長軽鎖配列を有し、これらの配列のうちの１つまたは複数は、本明細書で記載される抗体またはそれらの保存的修飾に基づき指定されたアミノ酸配列を有し、抗体は、本明細書で記載されるＧＤＦ１５結合性抗体の所望の機能的特性を保持する。したがって、本明細書では、全長重鎖および全長軽鎖からなる、哺乳動物細胞における発現について最適化された単離抗体であって、全長重鎖が、配列番号１４、４０、６６、９２、１１８、１４４、および１７０、ならびにそれらの保存的修飾の群から選択されるアミノ酸配列を有し、全長軽鎖が、配列番号２７、５３、７９、１０５、１３１、１５７、および１８３、ならびにそれらの保存的修飾の群から選択されるアミノ酸配列を有し、ＧＤＦ１５（例えば、ヒトＧＤＦ１５）に特異的に結合する抗体が提示される。
【０２７４】
同じエピトープに結合する抗体
本明細書では、表１に記載されているＧＤＦ１５結合性抗体と同じエピトープに結合する抗体が提示される。したがって、ＧＤＦ１５結合アッセイ（実施例で記載されるＧＤＦ１５結合アッセイなど）において、本明細書で記載される他の抗体と競合する（例えば、本明細書で記載される他の抗体の結合を、統計学的に有意な形で競合的に阻害する）それらの能力に基づき、さらなる抗体を同定することができる。本明細書で記載される抗体の、ＧＤＦ１５タンパク質への結合を阻害する被験抗体の能力により、被験抗体が、その抗体と、ＧＤＦ１５の結合について競合することが可能であり、このような抗体は、非限定的な理論によれば、ＧＤＦ１５タンパク質上の、それが競合する抗体と同じであるかまたは関連の（例えば、構造的に類似するか、または空間的に近接した）エピトープに結合しうることが裏付けられる。ある種の実施形態では、本明細書で記載される抗体と同じＧＤＦ１５上のエピトープに結合する抗体は、ヒトモノクローナル抗体である。このようなヒトモノクローナル抗体は、本明細書で記載される通りに、調製および単離することができる。本明細書で使用される通り、等モル濃度の競合抗体の存在下で、競合抗体が、本明細書で記載される抗体または抗原結合性断片の、ＧＤＦ１５への結合を、５０％を超えて（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）阻害する場合、抗体は、結合について「競合する」。
【０２７５】
操作抗体および修飾抗体
出発抗体から特性を改変した修飾抗体を操作する出発材料として、本明細書で示されるＶＨ配列および／またはＶＬ配列のうちの１つまたは複数を有する抗体を使用して、本明細書で記載される抗体をさらに調製することができる。抗体は、一方または両方の可変領域（すなわち、ＶＨおよび／またはＶＬ）内、例えば、１つもしくは複数のＣＤＲ領域内、および／または１つもしくは複数のフレームワーク領域内の１つまたは複数の残基を修飾することにより操作することができる。加えて、または代替的に、抗体は、定常領域内の残基を修飾して、例えば、抗体のエフェクター機能を改変することによっても操作することができる。
【０２７６】
実施しうる可変領域操作のうちの１つの種類は、ＣＤＲグラフティングである。抗体は、主に６つの重鎖および軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）内に位置するアミノ酸残基を介して、標的抗原と相互作用する。この理由で、ＣＤＲ内のアミノ酸配列は、個別の抗体の間の多様性が、ＣＤＲの外部の配列より大きい。ＣＤＲ配列は、大半の抗体−抗原間相互作用の一因となるため、異なる特性を伴う異なる抗体に由来するフレームワーク配列へとグラフトされた特異的自然発生抗体に由来するＣＤＲ配列を含む発現ベクターを構築することにより、特異的自然発生抗体の特性を模倣する組換え抗体を発現させることが可能である（例えば、Riechmann, L.ら、1998 Nature 332:323〜327; Jones, P.ら、1986 Nature 321:522〜525; Queen, C.ら、1989 Proc. Natl. Acad. U.S.A. 86:10029〜10033；Ｗｉｎｔｅｒによる米国特許第５，２２５，５３９号明細書、ならびにＱｕｅｅｎらによる米国特許第５，５３０，１０１号明細書；同第５，５８５，０８９号明細書；同第５，６９３，７６２号明細書；および同第６，１８０，３７０号明細書を参照されたい）。
【０２７７】
したがって、本開示の別の実施形態は、配列番号６、３２、５８、８４、１１０、１３６、および１６２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１配列、配列番号７、３３、５９、８５、１１１、１３７、および１６３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２配列、配列番号８、３４、６０、８６、１１２、１３８、１６４、からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３配列のそれぞれを含む重鎖可変領域と、配列番号１９、４５、７１、９７、１２３、１４９、および１７５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１配列、配列番号２０、４６、７２、９８、１２４、１５０、および１７６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２配列、ならびに配列番号２１、４７、７３、９９、１２５、１５１、および１７７からなる群から選択されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ３配列のそれぞれを有する軽鎖可変領域とを含む単離抗体またはその抗原結合性断片に関する。したがって、このような抗体は、モノクローナル抗体のＶＨ  ＣＤＲ配列およびＶＬ  ＣＤＲ配列を含有するが、これらの抗体に由来する異なるフレームワーク配列を含有しうる。
【０２７８】
このようなフレームワーク配列は、生殖細胞系列の抗体遺伝子配列を含む公表されたＤＮＡデータベースまたは公表された参考文献から得ることができる。例えば、ヒト重鎖および軽鎖可変領域遺伝子の生殖細胞系列ＤＮＡ配列は、ヒト生殖細胞系列の配列データベースである「ＶＢａｓｅ」（インターネットのmrc-cpe.cam.ac.uk/vbaseで入手可能である）のほか、それらの各々の内容が、参照により本明細書に明示的に組み込まれる、Kabat, E. A.ら、1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest、5版、U.S. Department of Health and Human Services、NIH Publication第91-3242号; Tomlinson, I. M.ら、1992 J. Mol. Biol. 227:776〜798；およびCox, J. P. L.ら、1994 Eur. J Immunol. 24:827〜836においても見出すことができる。
【０２７９】
本明細書で記載される抗体における使用のためのフレームワーク配列の例は、本明細書で記載される選択された抗体により使用されるフレームワーク配列、例えば、本明細書で記載されるモノクローナル抗体により使用されるコンセンサス配列および／またはフレームワーク配列と構造的に類似するフレームワーク配列である。ＶＨ  ＣＤＲ１配列、ＶＨ  ＣＤＲ２配列、およびＶＨ  ＣＤＲ３配列、ならびにＶＬ  ＣＤＲ１配列、ＶＬ  ＣＤＲ２配列、およびＶＬ  ＣＤＲ３配列は、フレームワーク配列が由来する生殖細胞系列の免疫グロブリン遺伝子内で見出される配列と同一の配列を有するフレームワーク領域へとグラフトすることもでき、ＣＤＲ配列は、生殖細胞系列配列と比較して、１つまたは複数の突然変異を含有するフレームワーク領域へとグラフトすることもできる。例えば、ある種の場合には、フレームワーク領域内の残基を突然変異させて、抗体の抗原結合能力を維持または増強することが有益であると見出されている（例えば、Ｑｕｅｅｎらによる米国特許第５，５３０，１０１号明細書；同第５，５８５，０８９号明細書；同第５，６９３，７６２号明細書；および同第６，１８０，３７０号明細書を参照されたい）。本明細書で記載される抗体および抗原結合性断片をその上に構築する足場として活用されうるフレームワークは、ＶＨ１Ａ、ＶＨ１Ｂ、ＶＨ３、Ｖｋ１、Ｖｌ２、およびＶｋ２を含むがこれらに限定されない。当技術分野では、さらなるフレームワークが知られており、例えば、インターネットのvbase.mrc-cpe.cam.ac.uk/index.php?&MMN_position=1:1上のｖＢａｓｅデータベースにおいて見出すことができる。
【０２８０】
したがって、本開示の実施形態は、配列番号１２、３８、６４、９０、１１６、１４２、および１６８からなる群から選択されるアミノ酸配列、またはこのような配列のフレームワーク領域内に１、２、３、４、もしくは５カ所のアミノ酸置換、アミノ酸欠失、もしくはアミノ酸付加を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、配列番号２５、５１、７７、１０３、１２９、１５５、および１８１からなる群から選択されるアミノ酸配列、またはこのような配列のフレームワーク領域内に１、２、３、４、もしくは５カ所のアミノ酸置換、アミノ酸欠失、もしくはアミノ酸付加を有するアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域をさらに含む、単離ＧＤＦ１５結合性抗体またはそれらの抗原結合性断片に関する。
【０２８１】
可変領域修飾の別の種類は、「アフィニティー成熟」として公知の、ＶＨ  ＣＤＲ１領域内、ＶＨ  ＣＤＲ２領域内、および／もしくはＶＨ  ＣＤＲ３領域内、ならびに／またはＶＬ  ＣＤＲ１領域内、ＶＬ  ＣＤＲ２領域内、および／もしくはＶＬ  ＣＤＲ３領域内のアミノ酸残基を突然変異させて、これにより、対象の抗体の１つまたは複数の結合特性（例えば、アフィニティー）を改善することである。部位特異的突然変異誘発またはＰＣＲ媒介突然変異誘発を実施して、突然変異を導入することができ、本明細書で記載され、実施例でも提示される、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイまたはｉｎ  ｖｉｖｏアッセイにおいて、抗体結合性または他の対象の機能的特性に対する効果を査定することができる。保存的修飾（上記で論じた）を導入することができる。突然変異は、アミノ酸の置換の場合もあり、付加の場合もあり、欠失の場合もある。さらに、ＣＤＲ領域内の、典型的には１つ、２つ、３つ、４つ、または５つ以下の残基も改変する。
【０２８２】
したがって、別の実施形態では、本明細書では、配列番号３、２９、５５、８１、１０７、１３３、および１５９を有する群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号３、２９、５５、８１、１０７、１３３、および１５９と比較して、１、２、３、４、もしくは５カ所のアミノ酸置換、アミノ酸欠失、もしくはアミノ酸付加を有するアミノ酸配列からなるＶＨ  ＣＤＲ１領域、配列番号４、３０、５６、８２、１０８、１３４、および１６０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号４、３０、５６、８２、１０８、１３４、および１６０と比較して、１、２、３、４、もしくは５カ所のアミノ酸置換、アミノ酸欠失、もしくはアミノ酸付加を有するアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２領域、配列番号５、３１、５７、８３、１０９、１３５、および１６１からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号５、３１、５７、８３、１０９、１３５、および１６１と比較して、１、２、３、４、もしくは５カ所のアミノ酸置換、アミノ酸欠失、もしくはアミノ酸付加を有するアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３領域、配列番号１６、４２、６８、９４、１２０、１４６、および１７２からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１６、４２、６８、９４、１２０、１４６、および１７２と比較して、１、２、３、４、もしくは５カ所のアミノ酸置換、アミノ酸欠失、もしくはアミノ酸付加を有するアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１領域、配列番号１７、４３、６９、９５、１２１、１４７、および１７３からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１７、４３、６９、９５、１２１、１４７、および１７３と比較して、１、２、３、４、もしくは５カ所のアミノ酸置換、アミノ酸欠失、もしくはアミノ酸付加を有するアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２領域、ならびに配列番号１８、４４、７０、９６、１２２、１４８、および１７４からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１８、４４、７０、９６、１２２、１４８、および１７４と比較して、１、２、３、４、もしくは５カ所のアミノ酸置換、アミノ酸欠失、もしくはアミノ酸付加を有するアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３領域を有する重鎖可変領域からなるＧＤＦ１５結合性抗体またはそれらの抗原結合性断片が提示される。
【０２８３】
したがって、別の実施形態では、本明細書では、配列番号６、３２、５８、８４、１１０、１３６、および１６２からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号６、３２、５８、８４、１１０、１３６、および１６２と比較して、１、２、３、４、もしくは５カ所のアミノ酸置換、アミノ酸欠失、もしくはアミノ酸付加を有するアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１領域、配列番号７、３３、５９、８５、１１１、１３７、および１６３からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号７、３３、５９、８５、１１１、１３７、および１６３と比較して、１、２、３、４、もしくは５カ所のアミノ酸置換、アミノ酸欠失、もしくはアミノ酸付加を有するアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２領域、ならびに配列番号８、３４、６０、８６、１１２、１３８、および１６４からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号８、３４、６０、８６、１１２、１３８、および１６４と比較して、１、２、３、４、もしくは５カ所のアミノ酸置換、アミノ酸欠失、もしくはアミノ酸付加を有するアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３領域を有する重鎖可変領域と、配列番号１９、４５、７１、９７、１２３、１４９、および１７５からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１９、４５、７１、９７、１２３、１４９、および１７５と比較して、１、２、３、４、もしくは５カ所のアミノ酸置換、アミノ酸欠失、もしくはアミノ酸付加を有するアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１領域、配列番号２０、４６、７２、９８、１２４、１５０、および１７６からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２０、４６、７２、９８、１２４、１５０、および１７６と比較して、１、２、３、４、もしくは５カ所のアミノ酸置換、アミノ酸欠失、もしくはアミノ酸付加を有するアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２領域、ならびに配列番号２１、４７、７３、９９、１２５、１５１、および１７７からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２１、４７、７３、９９、１２５、１５１、および１７７と比較して、１、２、３、４、もしくは５カ所のアミノ酸置換、アミノ酸欠失、もしくはアミノ酸付加を有するアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３領域を有する軽鎖可変領域とからなるＧＤＦ１５結合性抗体またはそれらの抗原結合性断片が提示される。
【０２８４】
したがって、本明細書の別の実施形態では、配列番号９、３５、６１、８７、１１３、１３９、および１６５からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号９、３５、６１、８７、１１３、１３９、および１６５と比較して、１、２、３、４、もしくは５カ所のアミノ酸置換、アミノ酸欠失、もしくはアミノ酸付加を有するアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１領域；配列番号１０、３６、６２、８８、１１４、１４０、および１６６からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１０、３６、６２、８８、１１４、１４０、および１６６と比較して、１、２、３、４、もしくは５カ所のアミノ酸置換、アミノ酸欠失、もしくはアミノ酸付加を有するアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２領域；配列番号１１、３７、６３、８９、１１５、１４１、および１６７からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１１、３７、６３、８９、１１５、１４１、および１６７と比較して、１、２、３、４、もしくは５カ所のアミノ酸置換、アミノ酸欠失、もしくはアミノ酸付加を有するアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３領域；配列番号２２、４８、７４、１００、１２６、１５２、１７８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２２、４８、７４、１００、１２６、１５２、および１７８と比較して、１、２、３、４、もしくは５カ所のアミノ酸置換、アミノ酸欠失、もしくはアミノ酸付加を有するアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１領域；配列番号２３、４９、７５、１０１、１２７、１５３、１７９からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２３、４９、７５、１０１、１２７、１５３、および１７９と比較して、１、２、３、４、もしくは５カ所のアミノ酸置換、アミノ酸欠失、もしくはアミノ酸付加を有するアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２領域；ならびに配列番号２４、５０、７６、１０２、１２８、１５４、および１８０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２４、５０、７６、１０２、１２８、１５４、および１８０と比較して、１、２、３、４、もしくは５カ所のアミノ酸置換、アミノ酸欠失、もしくはアミノ酸付加を有するアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３領域とを有する重鎖可変領域からなる、ＧＤＦ１５結合性抗体またはその抗原結合性断片が提示される。
【０２８５】
抗原結合性ドメインの、代替的なフレームワークまたは足場へのグラフティング
結果として得られるポリペプチドが、ＧＤＦ１５に特異的に結合する少なくとも１つの結合性領域を含む限りにおいて、多種多様な抗体／免疫グロブリンのフレームワークまたは足場を援用することができる。このようなフレームワークまたは足場は、ヒト免疫グロブリンまたはそれらの断片の５つの主要なイディオタイプを含み、好ましくはヒト化側面を有する他の動物種の免疫グロブリンを含む。この点で、ラクダ科動物において同定される単一重鎖抗体などの単一重鎖抗体は、特に対象である。当業者により、新規のフレームワーク、足場、および断片が、発見および開発され続けている。
【０２８６】
一態様では、本開示は、本明細書で記載されるＣＤＲをグラフトしうる非免疫グロブリン足場を使用して、非免疫グロブリンベースの抗体を作り出すことに関する。それらが、標的のＧＤＦ１５タンパク質に特異的な結合性領域を含む限りにおいて、公知または将来の非免疫グロブリンフレームワークおよび非免疫グロブリン足場を援用することができる。公知の非免疫グロブリンフレームワークおよび非免疫グロブリン足場は、フィブロネクチン（Ｃｏｍｐｏｕｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）、アンキリン（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ  ＡＧ、Ｚｕｒｉｃｈ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ドメイン抗体（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｌｔｄ．、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ；およびＡｂｌｙｎｘ  ｎｖ、Ｚｗｉｊｎａａｒｄｅ、Ｂｅｌｇｉｕｍ）、リポカリン（Ｐｉｅｒｉｓ  Ｐｒｏｔｅｏｌａｂ  ＡＧ、Ｆｒｅｉｓｉｎｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、低分子モジュラー免疫医薬（Ｔｒｕｂｉｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｉｎｃ．、Ｓｅａｔｔｌｅ、ＷＡ）、マキシボディ（Ａｖｉｄｉａ，Ｉｎｃ．、Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ、ＣＡ）、プロテインＡ（Ａｆｆｉｂｏｄｙ  ＡＧ、Ｓｗｅｄｅｎ）、およびアフィリン（ガンマ−クリスタリンまたはユビキチン）（Ｓｃｉｌ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ＧｍｂＨ、Ｈａｌｌｅ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を含むがこれらに限定されない。
【０２８７】
フィブロネクチン足場は、ＩＩＩ型フィブロネクチンドメイン（例えば、ＩＩＩ型フィブロネクチンの第１０モジュール（１０  Ｆｎ３ドメイン））に基づく。ＩＩＩ型フィブロネクチンドメインは、それら自体が互いに対してパックされてタンパク質のコアを形成し、ベータ鎖を互いへと接続し、溶媒へと露出されるループもさらに含有する（ＣＤＲと類似する）、２つのベータシートの間に分配された、７つまたは８つのベータ鎖を有する。ベータシートサンドイッチの各エッジには、少なくとも３つのこのようなループがあり、エッジは、ベータ鎖の方向に対して垂直なタンパク質の境界である（ＵＳ６，８１８，４１８を参照されたい）。全体的なフォールドは、ラクダおよびラマＩｇＧ内の抗原認識単位全体を含む最小の機能的抗体断片である重鎖可変領域のフォールドと密接に関連するが、これらのフィブロネクチンベースの足場は、免疫グロブリンではない。この構造のために、非免疫グロブリン抗体は、性質およびアフィニティーが抗体の性質およびアフィニティーと類似する抗原結合特性を模倣する。これらの足場は、ｉｎ  ｖｉｖｏにおける抗体のアフィニティー成熟の工程と類似する、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるループのランダム化戦略およびシャフリング戦略において使用することができる。これらのフィブロネクチンベースの分子は、標準的なクローニング法を使用して、分子のループ領域を本明細書で記載される発明のＣＤＲで置きかえうる、足場として使用することができる。
【０２８８】
アンキリン技術は、アンキリンに由来するリピートモジュールを伴うタンパク質を、異なる標的への結合に使用しうる可変領域を保有する足場として使用することに基づく。アンキリンリピートモジュールとは、２つのアンチパラレルのα−ヘリックスおよびβ−ターンからなる、３３アミノ酸のポリペプチドである。可変領域の結合は、リボソームディスプレイを使用することにより大部分が最適化される。
【０２８９】
アビマーは、ＬＲＰ−１など、天然のＡドメイン含有タンパク質に由来する。これらのドメインは、本来、タンパク質間相互作用に使用され、ヒトでは、２５０を超えるタンパク質が、構造的にＡドメインに基づく。アビマーは、アミノ酸リンカーを介して連結された多数の（２つ〜１０の）異なる「Ａドメイン」単量体からなる。標的抗原に結合しうるアビマーは、例えば、米国特許出願公開第２００４０１７５７５６号明細書；同第２００５００５３９７３号明細書；同第２００５００４８５１２号明細書；および同第２００６０００８８４４号明細書において記載されている方法を使用して創出することができる。
【０２９０】
アフィニティーリガンドであるアフィボディとは、プロテインＡのＩｇＧ結合性ドメインのうちの１つの足場に基づく３ヘリックスバンドルからなる、低分子の単純なタンパク質である。プロテインＡとは、細菌である黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）に由来する表面タンパク質である。この足場ドメインは、それらのうちの１３が、多数のリガンド変異体を伴うアフィボディライブラリーを作り出す、ランダム化されている５８アミノ酸からなる（例えば、ＵＳ５，８３１，０１２を参照されたい）。アフィボディ分子は、抗体を模倣し、１５０ｋＤａである抗体の分子量と比較して、分子量が６ｋＤａである。その小サイズにもかかわらず、アフィボディ分子の結合部位は、抗体の結合部位と同様である。
【０２９１】
アンチカリンとは、Ｐｉｅｒｉｓ  ＰｒｏｔｅｏＬａｂ  ＡＧ社により開発された生成物である。アンチカリンは、通例、化学的に感受性の化合物または不溶性の化合物の生理学的輸送または貯蔵に関与する、広範にわたる低分子の頑健なタンパク質群であるリポカリンに由来する。いくつかの天然リポカリンは、ヒト組織内またはヒト体液中で生じる。タンパク質のアーキテクチャーは、リジッドフレームワークの上部の超可変ループを伴う免疫グロブリンを連想させる。しかし、抗体またはそれらの組換え断片とは対照的に、リポカリンは、単一の免疫グロブリンドメインよりかろうじて大きい、１６０〜１８０アミノ酸残基を伴う単一のポリペプチド鎖からなる。結合性ポケットを構成する４つのループのセットは、顕著な構造可塑性を示し、様々な側鎖を許容する。したがって、異なる形状の規定の標的分子を、高度なアフィニティーおよび特異性で認識するために、結合性部位を独自の工程で再形成することができる。４つのループのセットを突然変異誘発することによりアンチカリンを開発するのには、リポカリンファミリーの１つのタンパク質である、オオモンシロチョウ（Pieris Brassicae）のビリン結合性タンパク質（ＢＢＰ）が使用されている。アンチカリンについて記載する特許出願の１つの例は、ＰＣＴ公開国際公開第１９９９１６８７３号パンフレットにある。
【０２９２】
アフィリン分子とは、タンパク質および低分子に対する特異的なアフィニティーのためにデザインされた低分子非免疫グロブリンタンパク質である。新たなアフィリン分子は、それらの各々が、異なるヒト由来の足場タンパク質に基づく２つのライブラリーから非常に迅速に選択することができる。アフィリン分子は、免疫グロブリンタンパク質に対するいかなる構造相同性も示さない。現在、２つのアフィリン足場が援用されており、それらのうちの一方は、ヒト水晶体の構造タンパク質であるガンマクリスタリンであり、他方は、「ユビキチン」スーパーファミリータンパク質である。いずれのヒト足場も非常に小型で、高度な熱安定性を示し、ｐＨ変化および変性剤に対してほぼ耐性である。この高度な安定性は主に、タンパク質のベータシート構造の展開に起因する。ガンマクリスタリンに由来するタンパク質の例は、ＷＯ２００１０４１４４において記載されており、「ユビキチン様」タンパク質の例は、ＷＯ２００４１０６３６８において記載されている。
【０２９３】
タンパク質エピトープ模倣体（ＰＥＭ）とは、タンパク質間相互作用に関与する主要な二次構造である、タンパク質のベータ−ヘアピン二次構造を模倣する、中程度のサイズの環状ペプチド様分子（分子量：１〜２ｋＤａ）である。
【０２９４】
本明細書では、ＧＤＦ１５タンパク質に特異的に結合する完全ヒト抗体が提示される。キメラ抗体またはヒト化抗体と比較して、本明細書で記載されるヒトＧＤＦ１５結合性抗体は、ヒト対象へと投与された場合の抗原性がさらに低減されている。
【０２９５】
ラクダ科動物抗体
ラマ種（アルパカ（Lama paccos）、ラマ（Lama glama）、およびビクーニャ（Lama vicugna））などの新世界メンバーを含む、ラクダおよびヒトコブラクダ（dromedary）（フタコブラクダ（Camelus bactrianus）およびヒトコブラクダ（Calelus dromaderius））ファミリーのメンバーから得られる抗体タンパク質は、サイズ、構造的複雑性、およびヒト対象に対する抗原性に関して特徴付けられている。天然で見出されるこのファミリーの哺乳動物に由来するある種のＩｇＧ抗体は、軽鎖を欠き、したがって、他の動物に由来する抗体の場合の、２つの重鎖および２つの軽鎖を有する、典型的な４つの鎖の四次構造とは構造的に異なっている。ＰＣＴ／ＥＰ９３／０２２１４（１９９４年３月３日に公表された国際公開第９４／０４６７８号パンフレット）を参照されたい。
【０２９６】
ＶＨＨとして同定される小型の単一の可変ドメインである、ラクダ科動物抗体の領域は、標的に対して高いアフィニティーを有する低分子タンパク質をもたらすことから、「ラクダ科動物ナノボディ」として公知の低分子量抗体由来タンパク質を結果としてもたらす遺伝子操作により得ることができる。１９９８年６月２日に取得された米国特許第５，７５９，８０８号を参照されたい。また、Stijlemans, B.ら、2004 J Biol Chem 279:1256〜1261; Dumoulin, M.ら、2003 Nature 424:783〜788; Pleschberger, M.ら、2003 Bioconjugate Chem 14:440〜448; Cortez-Retamozo, V.ら、2002 Int J Cancer 89:456〜62；およびLauwereys, M.ら、1998 EMBO J 17:3512〜3520も参照されたい。ラクダ科動物抗体および抗体断片の操作ライブラリーは、例えば、Ａｂｌｙｎｘ、Ｇｈｅｎｔ、Ｂｅｌｇｉｕｍから市販されている。非ヒト由来の他の抗体と同様に、ラクダ科動物抗体のアミノ酸配列は、ヒト配列により酷似する配列を得るように、組換えにより改変することができる、すなわち、ナノボディは、「ヒト化」することができる。したがって、ヒトに対するラクダ科動物抗体の天然の小さな抗原性を、さらに低減することができる。
【０２９７】
ラクダ科動物ナノボディの分子量は、ヒトＩｇＧ分子の分子量の約１０分の１で、タンパク質の物理的直径は、数ナノメートルに過ぎない。サイズが小さいことの１つの帰結は、大型の抗体タンパク質には機能的に不可視である抗原性部位に結合するラクダ科動物ナノボディの能力である、すなわち、ラクダ科動物ナノボディは、古典的な免疫学的技法を使用するこれ以外の形では隠蔽されたままの抗原を検出する試薬として有用であり、可能な治療剤として有用である。したがって、サイズが小さいことのさらに別の帰結は、ラクダ科動物ナノボディが、標的タンパク質のグルーブ内または狭小なクレフト内の特異的部位に結合することの結果として、標的タンパク質を阻害することが可能であり、よって、古典的な抗体の機能よりも、古典的な低分子量の薬物の機能により酷似する能力において用いられうることである。
【０２９８】
低分子量およびコンパクトなサイズはさらに、熱安定性が極めて大きく、極端なｐＨおよびタンパク質分解性消化に対して安定的であり、抗原性が小さいラクダ科動物ナノボディを結果としてもたらす。別の帰結は、ラクダ科動物ナノボディが、循環系から組織へとたやすく移動し、血液脳関門もなお越え、神経組織に影響を及ぼす障害も処置しうることである。ナノボディはさらに、血液脳関門を越える薬物輸送も容易としうる。２００４年８月１９日に公表された米国特許出願第２００４０１６１７３８号明細書を参照されたい。これらの特色を、ヒトに対する抗原性が小さいことと組み合わせることにより、大きな治療的可能性が指し示される。さらに、これらの分子は、大腸菌（E. coli）などの原核細胞内で完全に発現させることができ、バクテリオファージとの融合タンパク質として発現させ、機能的である。
【０２９９】
したがって、本開示の特色は、ＧＤＦ１５に対して高いアフィニティーを有するラクダ科動物抗体またはラクダ科動物ナノボディである。本明細書のある種の実施形態では、ラクダ科動物抗体またはラクダ科動物ナノボディは、天然ではラクダ科動物において産生される、すなわち、他の抗体について本明細書で記載される技法を使用する、ＧＤＦ１５またはそのペプチド断片による免疫化の後で、ラクダ科動物により産生される。代替的に、ＧＤＦ１５結合性ラクダ科動物ナノボディは、操作されたものである、すなわち、例えば、本明細書の実施例において記載されている、標的としてのＧＤＦ１５を伴うパニング手順を使用する、適切に突然変異誘発させたラクダ科動物ナノボディタンパク質を提示するファージライブラリーからの選択によって作製される。操作されたナノボディはさらに、遺伝子操作により、レシピエント対象における半減期が、４５分間〜２週間となるようにカスタマイズすることもできる。具体的な実施形態では、ラクダ科動物抗体またはラクダ科動物ナノボディを、例えば、ＷＯ９４／０４６７８として公表されたＰＣＴ／ＥＰ９３／０２２１４において記載されている通り、本明細書に記載されるヒト抗体の重鎖または軽鎖のＣＤＲ配列を、ナノボディまたは単一ドメイン抗体フレームワーク配列へとグラフトすることにより得る。
【０３００】
二特異性分子および多価抗体
別の態様では、本開示は、本明細書で記載されるＧＤＦ１５結合性抗体またはその断片を含む二特異性分子または多特異性分子を特色とする。本明細書で記載される抗体またはその抗原結合性領域は、少なくとも２つの異なる結合性部位または標的分子に結合する二特異性分子を作り出すように誘導体化することもでき、別の機能的分子、例えば、別のペプチドまたはタンパク質（例えば、受容体に対する別の抗体またはリガンド）へと連結することもできる。本明細書で記載される抗体は実際、３つ以上の異なる結合性部位および／または標的分子に結合する多特異性分子を作り出すように誘導体化することもでき、他の２つ以上の機能的分子へと連結することもでき、このような多特異性分子はまた、本明細書で使用される「二特異性分子」という用語により包含されることも意図される。本明細書で記載される二特異性分子を創出するには、本明細書で記載される抗体を、二特異性分子が結果として得られるように、別の抗体、抗体断片、ペプチド、または結合性模倣体など、１つまたは複数の他の結合性分子へと機能的に連結する（例えば、化学的カップリング、遺伝子融合、非共有結合的会合により、またはこれら以外の形で）ことができる。
【０３０１】
したがって、本開示は、ＧＤＦ１５に対する少なくとも１つの第１の結合特異性および第２の標的エピトープに対する第２の結合特異性を含む二特異性分子を含む。例えば、第２の標的エピトープは、第１の標的エピトープと異なる、ＧＤＦ１５の別のエピトープである。
【０３０２】
加えて、二特異性分子が多特異性である本開示では、分子は、第１の標的エピトープおよび第２の標的エピトープに加えて、第３の結合特異性もさらに含みうる。
【０３０３】
一実施形態では、本明細書で記載される二特異性分子は、結合特異性として、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、または単鎖Ｆｖを含む、少なくとも１つの抗体またはその抗体断片を含む。抗体はまた、軽鎖もしくは重鎖の二量体、またはＬａｄｎｅｒら、米国特許第４，９４６，７７８号明細書において記載されている、Ｆｖもしくは単鎖構築物など、その任意の最小断片でありうる。
【０３０４】
ダイアボディとは、同じ鎖上の２つのドメインの間の対合を可能とするには短すぎるリンカーにより接続されたＶＨドメインおよびＶＬドメインを単一のポリペプチド鎖上で発現させた、二価の二特異性分子である。ＶＨドメインおよびＶＬドメインは、別の鎖の相補的なドメインと対合し、これにより、２つの抗原結合性部位を創出する（例えば、Holligerら、1993 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444〜6448; Poljakら、1994 Structure 2:1121〜1123を参照されたい）。ダイアボディは、ＶＨＡ−ＶＬＢおよびＶＨＢ−ＶＬＡ構造（ＶＨ−ＶＬ立体配置）、またはＶＬＡ−ＶＨＢおよびＶＬＢ−ＶＨＡ構造（ＶＬ−ＶＨ立体配置）を伴う２つのポリペプチド鎖を、同じ細胞内で発現させることにより作製することができる。ダイアボディの大半は、細菌内の可溶性形態で発現させることができる。単鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）は、２つのダイアボディ形成ポリペプチド鎖を、約１５アミノ酸残基のリンカーで接続することにより作製する（HolligerおよびWinter、1997 Cancer Immunol. Immunother.、45（3〜4）:128〜30; Wuら、1996 Immunotechnology、2（1）:21〜36を参照されたい）。ｓｃＤｂは、細菌内の可溶性で活性の単量体形態で発現させることができる（HolligerおよびWinter、1997 Cancer Immunol. Immunother.、45（34）:128〜30; Wuら、1996 Immunotechnology、2（1）:21〜36; PluckthunおよびPack、1997 Immunotechnology、3（2）:83〜105; Ridgwayら、1996 Protein Eng.、9（7）:617〜21を参照されたい）。ダイアボディをＦｃへと融合させて、「ジダイアボディ」を作り出すことができる（Luら、2004 J. Biol. Chem.、279（4）:2856〜65を参照されたい）。
【０３０５】
本明細書で記載される二特異性分子内で援用しうる他の抗体は、マウスモノクローナル抗体、キメラモノクローナル抗体、およびヒト化モノクローナル抗体である。
【０３０６】
二特異性分子は、当技術分野で公知の方法を使用して、構成要素である結合特異性をコンジュゲートさせることにより調製することができる。例えば、二特異性分子の各結合特異性は、個別に作り出し、次いで、互いとコンジュゲートさせることができる。結合特異性がタンパク質またはペプチドである場合は、様々なカップリング剤または架橋剤を、共有結合的コンジュゲーションに使用することができる。架橋剤の例は、プロテインＡ、カルボジイミド、Ｎ−スクシンイミジル−Ｓ−アセチル−チオアセテート（ＳＡＴＡ）、５，５’−ジチオビス（２−ニトロ安息香酸）（ＤＴＮＢ）、ｏ−フェニレンジマレイミド（ｏＰＤＭ）、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、およびスルホスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（スルホ−ＳＭＣＣ）を含む（例えば、Karpovskyら、1984 J. Exp. Med. 160:1686； Liu, MAら、1985 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:8648を参照されたい）。他の方法は、Paulus、1985 Behring Ins. Mitt. 78号、118〜132; Brennanら、1985 Science 229:81〜83；およびGlennieら、1987 J. Immunol. 139:2367〜2375において記載されている方法を含む。コンジュゲート剤は、ＳＡＴＡおよびスルホ−ＳＭＣＣであり、いずれも、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）から入手可能である。
【０３０７】
結合特異性が、抗体である場合、それらは、２つの重鎖のＣ末端ヒンジ領域をスルフヒドリル結合させることによりコンジュゲートさせることができる。特定の実施形態では、コンジュゲーションの前に、奇数のスルフヒドリル残基、例えば、１つのスルフヒドリル残基を含有するように、ヒンジ領域を修飾する。
【０３０８】
代替的に、いずれの結合特異性も、同じベクター内でコードさせ、同じ宿主細胞内で発現およびアセンブルさせることができる。この方法は、二特異性分子が、ｍＡｂ×ｍＡｂ融合タンパク質、ｍＡｂ×Ｆａｂ融合タンパク質、Ｆａｂ×Ｆ（ａｂ’）２融合タンパク質、またはリガンド×Ｆａｂ融合タンパク質である場合に、特に有用である。本明細書で記載される二特異性分子は、１つの単鎖抗体および結合決定基を含む単鎖分子の場合もあり、２つの結合決定基を含む単鎖二特異性分子の場合もある。二特異性分子は、少なくとも２つの単鎖分子を含みうる。二特異性分子を調製する方法については、例えば、米国特許第５，２６０，２０３号明細書；米国特許第５，４５５，０３０号明細書；米国特許第４，８８１，１７５号明細書；米国特許第５，１３２，４０５号明細書；米国特許第５，０９１，５１３号明細書；米国特許第５，４７６，７８６号明細書；米国特許第５，０１３，６５３号明細書；米国特許第５，２５８，４９８号明細書；および米国特許第５，４８２，８５８号明細書において記載されている。
【０３０９】
それらの特異的な標的に対する二特異性分子の結合は、例えば、酵素免疫測定アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＥＡ）、ＦＡＣＳ解析、バイオアッセイ（例えば、成長阻害アッセイ）、またはウェスタンブロットアッセイにより確認することができる。これらのアッセイの各々では一般に、対象の複合体に特異的な、標識された試薬（例えば、抗体）を援用することにより、特に対象となるタンパク質−抗体間複合体の存在が検出される。
【０３１０】
別の態様では、本明細書では、ＧＤＦ１５に結合する、本明細書で記載される抗体の少なくとも２つの同一であるかまたは異なる抗原結合性部分を含む、多価化合物が提示される。抗原結合性部分は、タンパク質の融合または共有結合的連結もしくは非共有結合的連結を介して、併せて連結することができる。代替的に、二特異性分子のための連結法も記載されている。四価化合物は、例えば、本明細書で記載される抗体を、本明細書で記載される抗体の定常領域に結合する抗体、例えば、Ｆｃ領域またはヒンジ領域と架橋することにより得ることができる。
【０３１１】
三量体化ドメインについては、例えば、Ｂｏｒｅａｎによる特許であるＥＰ１０１２２８０Ｂ１において記載されている。五量体化モジュールについては、例えば、ＷＯ９８／１８９７３として発表されたＰＣＴ／ＥＰ９７／０５８９７において記載されている。
【０３１２】
半減期を延長した抗体
本明細書では、ｉｎ  ｖｉｖｏにおける半減期を延長した、ＧＤＦ１５タンパク質に特異的に結合する抗体が提示される。
【０３１３】
多くの因子が、ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるタンパク質の半減期に影響を及ぼしうる。例えば、腎臓における濾過、肝臓における代謝、タンパク質分解性酵素（プロテアーゼ）による分解、および免疫原性応答（例えば、抗体によるタンパク質の中和およびマクロファージおよび樹状細胞による取込み）。様々な戦略を使用して、本明細書で記載される抗体の半減期を延長することができる。例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ｒｅＣＯＤＥ  ＰＥＧ、抗体足場、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、アルブミン結合性リガンド、および炭水化物シールドとの化学的連結により、アルブミン、ＩｇＧ、ＦｃＲｎ、およびトランスフェリンなどの血清タンパク質に結合するタンパク質との遺伝子融合により、ナノボディ、Ｆａｂ、ＤＡＲＰｉｎ、アビマー、アフィボディ、およびアンチカリンなど、血清タンパク質に結合する他の結合部分とカップリングする（遺伝子的または化学的に）ことにより、ｒＰＥＧ、アルブミン、アルブミンのドメイン、アルブミン結合性タンパク質、およびＦｃとの遺伝子融合により、またはナノ担体、徐放製剤、もしくは医療デバイスへの組込みにより、本発明の抗体の半減期を延長することができる。
【０３１４】
ｉｎ  ｖｉｖｏにおける抗体の血清中循環を延長するため、高分子量のＰＥＧなど、不活性のポリマー分子を、ＰＥＧの、抗体のＮ末端もしくはＣ末端への部位特異的コンジュゲーションを介して、またはリシン残基上に存在するイプシロン−アミノ基を介して、多官能性リンカーを伴うかまたは多官能性リンカーを伴わない、抗体またはそれらの断片へと付着することができる。抗体をＰＥＧ化するには、抗体またはその断片を、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の反応性エステルまたはアルデヒド誘導体などのＰＥＧと、１つまたは複数のＰＥＧ基が抗体または抗体断片に付着する条件下で反応させることが典型的である。ＰＥＧ化は、反応性ＰＥＧ分子（または類似する反応性の水溶性ポリマー）とのアシル化反応またはアルキル化反応により実行することができる。本明細書で使用される「ポリエチレングリコール」という用語は、モノ（Ｃ１〜Ｃ１０）アルコキシ−ポリエチレングリコールもしくはアリールオキシ−ポリエチレングリコールまたはポリエチレングリコール−マレイミドなど、他のタンパク質を誘導体化するのに使用されているＰＥＧの形態のうちのいずれかを包含することを意図するものである。ある種の実施形態では、ＰＥＧ化される抗体は、脱グリコシル化抗体である。直鎖状ポリマーまたは分枝状ポリマーの誘導体化であって、生物学的活性の喪失を結果として最小とする誘導体化が、使用されるであろう。コンジュゲーションの程度を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび質量分析により緊密にモニタリングして、ＰＥＧ分子の抗体への適正なコンジュゲーションを確認することができる。反応しなかったＰＥＧは、サイズ除外クロマトグラフィーまたはイオン交換クロマトグラフィーにより、抗体−ＰＥＧコンジュゲートから分離することができる。ＰＥＧ誘導体化抗体は、当業者に周知の方法を使用して、例えば、本明細書で記載されるイムノアッセイにより、結合活性ならびにｉｎ  ｖｉｖｏにおける有効性について調べることができる。当技術分野では、タンパク質をＰＥＧ化する方法が知られており、本明細書で記載される抗体に適用することができる。例えば、ＮｉｓｈｉｍｕｒａらによるＥＰ０１５４３１６およびＩｓｈｉｋａｗａらによるＥＰ０４０１３８４を参照されたい。
【０３１５】
他の改変されたＰＥＧ化技術は、ｔＲＮＡシンセターゼおよびｔＲＮＡを含む再構成系を介して、化学的に特定された側鎖を、生合成タンパク質へと組み込む、再構成化学的直交性直接操作技術（reconstituting chemically orthogonal directed engineering）（ＲｅＣＯＤＥ  ＰＥＧ）を含む。この技術は、３０を超える新たなアミノ酸の、大腸菌（E. coli）細胞内、酵母細胞内、および哺乳動物細胞内の生合成タンパク質への組込みを可能とする。ｔＲＮＡは、非天然アミノ酸を、アンバーコドンが配置される任意の位置へと組み込み、終止アンバーコドンから、化学的に特定されたアミノ酸の組込みシグナルを伝達するコドンへと転換する。
【０３１６】
組換えＰＥＧ化技術（ｒＰＥＧ）はまた、血清半減期の延長にも使用することができる。この技術は、３００〜６００アミノ酸の非構造化タンパク質テールを、既存の医薬用タンパク質へと遺伝子融合させることを伴う。このような非構造化タンパク質鎖の見かけの分子量は、その実際の分子量の約１５倍であるため、タンパク質の血清半減期は、大きく増大する。化学的コンジュゲーションおよび再精製を要求する従来のＰＥＧ化とは対照的に、製造工程は大きく簡略化され、生成物は、均質である。
【０３１７】
ポリシアリル化は、天然のポリマーであるポリシアル酸（ＰＳＡ）を使用して、活性寿命を延長し、治療用ペプチドおよび治療用タンパク質の安定性を改善する、別の技術である。ＰＳＡとは、シアル酸（糖）のポリマーである。タンパク質および治療用ペプチドの薬物送達に使用される場合、コンジュゲーション時に、ポリシアル酸は、保護的微小環境をもたらす。これは、循環内の治療用タンパク質の活性寿命を延長し、それが免疫系により認識されることを防止する。ＰＳＡポリマーは、天然では、ヒト体内で見出される。ＰＳＡは、数百万年にわたり、それらの壁をＰＳＡでコーティングするように進化したある種の細菌により採用された。次いで、これらの天然でポリシアリル化した細菌は、分子的模倣により、体内の防御系を失効化することが可能となった。自然の究極のステルス技術であるＰＳＡは、このような細菌から、大量に、かつ、所定の物理的特徴を伴って、容易に作製することができる。細菌ＰＳＡは、ヒト体内ではＰＳＡと化学的に同一であるので、タンパク質へとカップリングさせた場合でもなお、完全に非免疫原性である。
【０３１８】
別の技術は、抗体に連結されたヒドロキシエチルデンプン（「ＨＥＳ」）誘導体の使用を含む。ＨＥＳとは、蝋状トウモロコシデンプンに由来する、修飾された天然ポリマーであり、体内の酵素により代謝されうる。ＨＥＳ溶液は通例、血液量不足を補い、血液のレオロジー特性を改善するために投与される。抗体のＨＥＳ化は、分子の安定性を増大させることのほか、腎クリアランスを低減することによっても、循環半減期の延長を可能とし、生物学的活性の増大を結果としてもたらす。ＨＥＳの分子量など、異なるパラメータを改変することにより、広範にわたるＨＥＳ抗体コンジュゲートをカスタマイズすることができる。
【０３１９】
ｉｎ  ｖｉｖｏにおける半減期を延長した抗体はまた、１つまたは複数のアミノ酸修飾（すなわち、置換、挿入、または欠失）を、ＩｇＧ定常ドメインまたはそのＦｃＲｎ結合性断片（好ましくはＦｃドメイン断片またはヒンジＦｃドメイン断片）へと導入しても作り出すことができる。例えば、国際特許公開第９８／２３２８９号パンフレット、国際特許公開第９７／３４６３１号パンフレット；および米国特許第６，２７７，３７５号明細書を参照されたい。
【０３２０】
さらに、抗体または抗体断片を、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいてより安定的とするか、またはｉｎ  ｖｉｖｏにおける半減期を延長するために、抗体を、アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン；ＨＳＡ）へとコンジュゲートさせることもできる。当技術分野では、技法が周知であり、例えば、国際特許公開第９３／１５１９９号パンフレット、同第９３／１５２００号パンフレット、および同０１／７７１３７号パンフレット；ならびに欧州特許第４１３，６２２号明細書を参照されたい。加えて、上記で記載した二特異性抗体の文脈では、抗体の特異性は、抗体の１つの結合性ドメインが、ＧＤＦ１５に結合するのに対し、抗体の第２の結合性ドメインは、血清アルブミン、好ましくは、ＨＳＡに結合するようにデザインすることもできる。
【０３２１】
半減期を延長するための戦略は、ｉｎ  ｖｉｖｏにおける半減期の延長が所望される、ナノボディ、フィブロネクチンベースの結合剤、および他の抗体またはタンパク質においてとりわけ有用である。
【０３２２】
抗体コンジュゲート
本明細書では、融合タンパク質を作り出すように、異種タンパク質または異種ポリペプチドへと（またはその断片、好ましくは、少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、または少なくとも１００アミノ酸のポリペプチドへと）、組換えにより融合させるかまたは化学的にコンジュゲートさせた（共有結合的コンジュゲーションおよび非共有結合的コンジュゲーションの両方を含む）、ＧＤＦ１５タンパク質に特異的に結合する抗体またはそれらの断片が提示される。特に、本明細書では、本明細書で記載される抗体の抗原結合性断片（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、Ｆ（ａｂ）２断片、ＶＨドメイン、ＶＨ  ＣＤＲ、ＶＬドメイン、またはＶＬ  ＣＤＲ）と、異種タンパク質、異種ポリペプチド、または異種ペプチドとを含む融合タンパク質が提示される。当技術分野では、タンパク質、ポリペプチド、またはペプチドを、抗体または抗体断片と融合またはコンジュゲートさせる方法が知られている。例えば、米国特許第５，３３６，６０３号明細書、同第５，６２２，９２９号明細書、同第５，３５９，０４６号明細書、同第５，３４９，０５３号明細書、同第５，４４７，８５１号明細書、および同第５，１１２，９４６号明細書；欧州特許第３０７，４３４号明細書および同第ＥＰ３６７，１６６号明細書；国際特許公開第９６／０４３８８号パンフレットおよび同第９１／０６５７０号パンフレット；Ashkenaziら、1991、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:10535〜10539; Zhengら、1995、J. Immunol. 154:5590〜5600；およびVilら、1992、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:11337〜11341を参照されたい。
【０３２３】
さらなる融合タンパク質は、遺伝子シャフリング、モチーフシャフリング、エクソンシャフリング、および／またはコドンシャフリング（まとめて、「ＤＮＡシャフリング」と称する）の技法を介して作り出すことができる。ＤＮＡシャフリングを援用して、本明細書で記載される抗体またはそれらの断片の活性を改変する（例えば、アフィニティーが大きく、解離速度が小さい抗体またはそれらの断片）ことができる。一般に、米国特許第５，６０５，７９３号明細書、同第５，８１１，２３８号明細書、同第５，８３０，７２１号明細書、同第５，８３４，２５２号明細書、および同第５，８３７，４５８号明細書；Pattenら、1997、Curr. Opinion Biotechnol. 8:724〜33; Harayama、1998、Trends Biotechnol. 16（2）:76〜82; Hanssonら、1999、J. Mol. Biol. 287:265〜76；ならびにLorenzoおよびBlasco、1998、Biotechniques 24（2）:308〜313（これらの特許および刊行物の各々は、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる）を参照されたい。抗体もしくはそれらの断片、またはコードされる抗体もしくはそれらの断片は、組換えの前に、エラープローンＰＣＲによるランダム突然変異誘発、ランダムヌクレオチド挿入、または他の方法にかけることにより改変することができる。ＧＤＦ１５タンパク質に特異的に結合する抗体またはその断片をコードするポリヌクレオチドは、１つまたは複数の異種分子の１つまたは複数の成分、モチーフ、区間、一部、ドメイン、断片などで組み換えることができる。
【０３２４】
さらに、抗体またはそれらの断片は、精製を容易とするペプチドなどのマーカー配列へと融合させることもできる。好ましい実施形態では、マーカーのアミノ酸配列は、それらのうちの多くが市販されている中でとりわけ、ｐＱＥベクター（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．、９２５９  Ｅｔｏｎ  Ａｖｅｎｕｅ、Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ、ＣＡ、９１３１１）において提供されているタグなどのヘキサヒスチジンペプチドである。Gentzら、1989、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:821〜824において記載されている通り、例えば、ヘキサヒスチジンは、融合タンパク質の簡便な精製をもたらす。精製に有用な他のペプチドタグは、インフルエンザヘマグルチニンタンパク質に由来するエピトープ（Wilsonら、1984、Cell 37:767）に対応するヘマグルチニン（「ＨＡ」）タグ、および「フラッグ」タグを含むがこれらに限定されない。
【０３２５】
他の実施形態では、本明細書で記載される抗体またはそれらの断片を、診断剤または検出可能薬剤へとコンジュゲートさせる。このような抗体は、疾患または障害の発生、発症、進行、および／または重症度を、特定の治療の有効性を決定することなど、臨床検査手順の一部としてモニタリングまたは予後診断するのに有用でありうる。このような診断および検出は、抗体を、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ベータ−ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼなどであるがこれらに限定されない多様な酵素；ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンなどであるがこれらに限定されない補欠分子族；ウンベリフェロン、フルオレセイン、イソチオシアン酸フルオレセイン、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリド、またはフィコエリトリンなどであるがこれらに限定されない蛍光材料；ルミノールなどであるがこれらに限定されない発光材料；ルシフェラーゼ、ルシフェリン、およびエクオリンなどであるがこれらに限定されない生物発光材料；ヨウ素（１３１Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、および１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１１５Ｉｎ、１１３Ｉｎ、１１２Ｉｎ、および１１１Ｉｎ）、テクネシウム（９９Ｔｃ）、タリウム（２０１Ｔｌ）、ガリウム（６８Ｇａ、６７Ｇａ）、パラジウム（１０３Ｐｄ）、モリブデン（９９Ｍｏ）、キセノン（１３３Ｘｅ）、フッ素（１８Ｆ）、１５３Ｓｍ、１７７Ｌｕ、１５９Ｇｄ、１４９Ｐｍ、１４０Ｌａ、１７５Ｙｂ、１６６Ｈｏ、９０Ｙ、４７Ｓｃ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１４２Ｐｒ、１０５Ｒｈ、９７Ｒｕ、６８Ｇｅ、５７Ｃｏ、６５Ｚｎ、８５Ｓｒ、３２Ｐ、１５３Ｇｄ、１６９Ｙｂ、５１Ｃｒ、５４Ｍｎ、７５Ｓｅ、１１３Ｓｎ、および１１７Ｔｉｎなどであるがこれらに限定されない放射性材料；ならびに多様なポジトロン断層法を使用するポジトロン放出金属および非放射性の常磁性金属イオンを含むがこれらに限定されない検出可能な物質へとカップリングすることにより達成することができる。
【０３２６】
本開示は、治療用部分へとコンジュゲートさせた抗体またはそれらの断片の使用もさらに包含する。抗体またはその断片は、細胞毒素、例えば、細胞増殖抑制剤または殺細胞剤、治療剤または放射性金属イオン、例えば、アルファ放射体などの治療用部分へとコンジュゲートさせることができる。細胞毒素または細胞傷害剤は、細胞に有害な任意の薬剤を含む。
【０３２７】
さらに、抗体またはその断片は、所与の生物学的応答を修飾する治療用部分または薬物部分へとコンジュゲートさせることもできる。治療用部分または薬物部分は、古典的化学的治療剤に限定されるとはみなされないものとする。例えば、薬物部分は、所望の生物学的活性を保有するタンパク質、ペプチド、またはポリペプチドでありうる。このようなタンパク質は、例えば、アブリン、リシンＡ、シュードモナス属外毒素、コレラ毒素、またはジフテリア毒素などの毒素；腫瘍壊死因子、α−インターフェロン、β−インターフェロン、神経成長因子、血小板由来成長因子、組織プラスミノゲン活性化因子、アポトーシス剤、抗血管新生剤；または例えば、リンホカインなどの生体応答修飾剤などのタンパク質を含みうる。
【０３２８】
さらに、抗体は、２１３Ｂｉなどのアルファ放射体などの放射性金属イオン、１３１Ｉｎ、１３１ＬＵ、１３１Ｙ、１３１Ｈｏ、１３１Ｓｍを含むがこれらに限定されない放射性金属イオンを、ポリペプチドへとコンジュゲートするのに有用な大環状キレート化剤などの治療用部分へとコンジュゲートさせることもできる。ある種の実施形態では、大環状キレート化剤は、リンカー分子を介して抗体へと付着させうる、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’−テトラ酢酸（ＤＯＴＡ）である。当技術分野では、このようなリンカー分子が一般に公知であり、各々が参照によりそれらの全体において組み込まれる、Denardoら、1998、Clin Cancer Res. 4（10）:2483〜90; Petersonら、1999、Bioconjug. Chem. 10（4）:553〜7；およびZimmermanら、1999、Nucl. Med. Biol. 26（8）:943〜50において記載されている。
【０３２９】
治療用部分を、抗体へとコンジュゲートさせるための技法は周知であり、例えば、Arnonら、「Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy」、Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy、Reisfeldら（編）、243〜56頁（Alan R. Liss, Inc. 1985）; Hellstromら、「Antibodies For Drug Delivery」、Controlled Drug Delivery（2版）、Robinsonら（編）、623〜53頁（Marcel Dekker, Inc. 1987）; Thorpe、「Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review」、Monoclonal Antibodies 84: Biological And Clinical Applications、Pincheraら（編）、475〜506頁（1985）; 「Analysis, Results, And Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy」、Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy、Baldwinら（編）、303〜16頁（Academic Press 1985）；およびThorpeら、1982、Immunol. Rev. 62:119〜58を参照されたい。
【０３３０】
抗体はまた、特に、イムノアッセイまたは標的抗原の精製に有用な固体支持体へと付着させることもできる。このような固体支持体は、ガラス、セルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、またはポリプロピレンを含むがこれらに限定されない。
【０３３１】
抗体を作製する方法
抗体をコードする核酸
本明細書では、上記で記載したＧＤＦ１５結合性抗体鎖のセグメントまたはドメインを含むポリペプチドをコードする、実質的に精製された核酸分子が提示される。本明細書で記載される核酸のいくつかは、配列番号１３、３９、６５、９１、１１７、１４３、または１６９に示される重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列、および／または配列番号２６、５２、７８、１０４、１３０、１５６、または１８２に示される軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む。具体的な実施形態では、核酸分子は、表１において同定される核酸分子である。本明細書で記載される他のいくつかの核酸分子は、表１において同定される核酸分子のヌクレオチド配列と実質的に（例えば、少なくとも６５、８０％、９５％、または９９％）同一なヌクレオチド配列を含む。適切な発現ベクターから発現させるとき、これらのポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドは、ＧＤＦ１５抗原結合能を呈示することが可能である。
【０３３２】
本明細書ではまた、上記で示したＧＤＦ１５結合性抗体の重鎖または軽鎖に由来する少なくとも１つのＣＤＲ領域、および、通例３つ全てのＣＤＲ領域をコードするポリヌクレオチドも提示される。他のいくつかのポリヌクレオチドは、上記で示したＧＤＦ１５結合性抗体の重鎖および／または軽鎖の可変領域配列の全てまたは実質的に全てをコードする。コードの縮重性のために、様々な核酸配列は、免疫グロブリンアミノ酸配列の各々をコードするであろう。
【０３３３】
本明細書で記載される核酸分子は、抗体の可変領域および定常領域の両方をコードしうる。本明細書で記載される核酸配列のうちのいくつかは、配列番号１４、４０、６６、９２、１１８、１４４、１７０に示される重鎖配列と実質的に（例えば、少なくとも８０％、９０％、または９９％）同一な重鎖配列をコードするヌクレオチドを含む。他のいくつかの核酸配列は、配列番号２７、５３、７９、１０５、１３１、１５７、または１８３に示される軽鎖配列と実質的に（例えば、少なくとも８０％、９０％、または９９％）同一な軽鎖配列をコードするヌクレオチドを含む。
【０３３４】
ポリヌクレオチド配列は、デノボの固相ＤＮＡ合成、またはＧＤＦ１５結合性抗体またはその結合性断片をコードする既存の配列（例えば、下記の実施例で記載される配列）に対するＰＣＲによる突然変異誘発により作製することができる。核酸の直接的な化学合成は、Narangら、1979、Meth. Enzymol. 68:90によるホスホトリエステル法；Brownら、Meth. Enzymol. 68:109、1979によるホスホジエステル法；Beaucageら、Tetra. Lett., 22:1859、1981によるジエチルホスホルアミダイト法；および米国特許第４，４５８，０６６号明細書による固体支持体法など、当技術分野で公知の方法により達成することができる。ＰＣＲによる、突然変異の、ポリヌクレオチド配列への導入は、例えば、PCR Technology: Principles and Applications for DNA Amplification、H.A. Erlich（編）、Freeman Press、NY、NY、1992；PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications、Innisら（編）、Academic Press、San Diego、CA、1990; Mattilaら、Nucleic Acids Res. 19:967、1991；およびEckertら、PCR Methods and Applications 1:17、1991において記載されている通りに実施することができる。
【０３３５】
本明細書ではまた、上記で記載したＧＤＦ１５結合性抗体を作製するための発現ベクターおよび宿主細胞も提供される。多様な発現ベクターを、援用して、ＧＤＦ１５結合性抗体鎖または結合性断片をコードするポリヌクレオチドを発現させることができる。ウイルスベースの発現ベクターおよび非ウイルス発現ベクターのいずれを使用しても、哺乳動物宿主細胞内で抗体を作製することができる。非ウイルスベクターおよび非ウイルス系は、プラスミド、典型的に、タンパク質またはＲＮＡを発現させるための発現カセットを伴うエピソームベクター、およびヒト人工染色体を含む（例えば、Harringtonら、Nat Genet 15:345、1997を参照されたい）。例えば、哺乳動物（例えば、ヒト）細胞内のＧＤＦ１５結合性ポリヌクレオチドおよびＧＤＦ１５結合性ポリペプチドの発現に有用な非ウイルスベクターは、ｐＴｈｉｏＨｉｓ  Ａ、ｐＴｈｉｏＨｉｓ  Ｂ、およびｐＴｈｉｏＨｉｓ  Ｃ、ｐｃＤＮＡ３．１／Ｈｉｓ、ｐＥＢＶＨｉｓ  Ａ、ｐＥＢＶＨｉｓ  Ｂ、およびｐＥＢＶＨｉｓ  Ｃ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）、ＭＰＳＶベクター、ならびに他のタンパク質を発現させるための、当技術分野で公知の他の多数のベクターを含む。有用なウイルスベクターは、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルスに基づくベクター、ＳＶ４０に基づくベクター、パピローマウイルス、ＨＢＰエプスタインバーウイルス、ワクシニアウイルスベクター、およびセムリキ森林熱ウイルス（ＳＦＶ）を含む。Brentら、前出; Smith、Annu. Rev. Microbiol. 49:807、1995；およびRosenfeldら、Cell 68:143、1992を参照されたい。
【０３３６】
発現ベクターの選択は、その中でベクターを発現させる、意図される宿主細胞に依存する。発現ベクターは、ＧＤＦ１５結合性抗体鎖または断片をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターおよび他の調節配列（例えば、エンハンサー）を含有することが典型的である。いくつかの実施形態では、誘導条件下を除き、挿入された配列の発現を防止するのに、誘導的プロモーターを援用する。誘導的プロモーターは、例えば、アラビノース、ｌａｃＺ、メタロチオネインプロモーター、または熱ショックプロモーターを含む。形質転換された生物の培養物は、それらの発現産物が宿主細胞により良好に許容されるコード配列の集団にバイアスをかけずに、非誘導条件下で増殖させることができる。プロモーターに加えて、他の調節的エレメントもまた、ＧＤＦ１５結合性抗体鎖または断片の効率的な発現に要求または所望される可能性がある。これらのエレメントは、ＡＴＧ開始コドンおよび隣接のリボソーム結合性部位または他の配列を典型的に含む。加えて、発現の効率は、使用される細胞系に適するエンハンサーを組み入れることにより増強することもできる（例えば、Scharfら、Results Probl. Cell Differ. 20:125、1994；およびBittnerら、Meth. Enzymol., 153:516、1987を参照されたい）。例えば、ＳＶ４０エンハンサーまたはＣＭＶエンハンサーを使用して、哺乳動物宿主細胞内の発現を増大させることができる。
【０３３７】
発現ベクターはまた、挿入されたＧＤＦ１５結合性抗体配列によりコードされるポリペプチドとの融合タンパク質を形成するように、分泌シグナル配列の位置ももたらしうる。挿入されたＧＤＦ１５結合性抗体配列は、ベクター内に組み入れる前に、シグナル配列へと連結することが多い。ＧＤＦ１５結合性抗体の軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインをコードする配列を受容するのに使用されるベクターは、場合によってまた、定常領域またはそれらの一部もコードする。このようなベクターは、定常領域との融合タンパク質としての可変領域の発現を可能とし、これにより、インタクトな抗体またはそれらの断片の作製をもたらす。このような定常領域は、ヒト定常領域であることが典型的である。
【０３３８】
ＧＤＦ１５結合性抗体鎖を保有し、これを発現させるための宿主細胞は、原核細胞の場合もあり、真核細胞の場合もある。大腸菌（E. coli）は、本明細書で記載されるポリヌクレオチドをクローニングし、発現させるのに有用な１つの原核生物宿主である。使用に適する他の微生物宿主は、枯草菌（Bacillus subtilis）などの桿菌、およびサルモネラ（Salmonella）属種、セラチア（Serratia）属種、および多様なシュードモナス（Pseudomonas）属種など、他の腸内細菌科を含む。これらの原核生物宿主内ではまた、典型的に、宿主細胞と適合性の発現制御配列（例えば、複製起点）を含有する発現ベクターも作製することができる。加えて、ラクトースプロモーター系、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系、ベータ−ラクタマーゼプロモーター系、またはファージラムダに由来するプロモーター系など、任意の数の、様々な周知のプロモーターも存在する。プロモーターは、任意選択で、オペレーター配列により発現を制御することが典型的であるが、転写および翻訳を開始して終結させるためのリボソーム結合性部位配列なども有する。本明細書で記載されるＧＤＦ１５結合性ポリペプチドを発現させるのに、酵母など、他の微生物もまた援用することができる。また、バキュロウイルスベクターと組み合わせた昆虫細胞も使用することができる。
【０３３９】
いくつかの好ましい実施形態では、本明細書で記載されるＧＤＦ１５結合性ポリペプチドおよび／もしくはＦＸＩａ結合性ポリペプチドを発現させ、作製するのに、哺乳動物宿主細胞を使用する。哺乳動物宿主細胞は、任意の正常非不死化動物細胞または正常不死化動物細胞もしくは非正常不死化動物細胞またはヒト細胞を含む。例えば、ＣＨＯ細胞系、多様なＣｏｓ細胞系、ＨｅＬａ細胞、骨髄腫細胞系、および形質転換Ｂ細胞を含む、インタクトな免疫グロブリンを分泌することが可能な多数の適切な宿主細胞系が開発されている。ポリペプチドを発現させるための、哺乳動物組織細胞培養物の使用については、例えば、Winnacker、FROM GENES TO CLONES、VCH Publishers、N.Y.、N.Y.、1987において一般に論じられている。哺乳動物宿主細胞のための発現ベクターは、複製起点、プロモーター、およびエンハンサーなどの発現制御配列（例えば、Queenら、Immunol. Rev. 89:49〜68、1986を参照されたい）、ならびにリボソーム結合性部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位、および転写ターミネーター配列などの、必要なプロセシング情報部位を含みうる。
【０３４０】
これらの発現ベクターは通例、哺乳動物遺伝子に由来するプロモーターまたは哺乳動物ウイルスに由来するプロモーターを含有する。適切なプロモーターは、構成的プロモーター、細胞型特異的プロモーター、段階特異的プロモーター、および／またはモジュレート可能プロモーターもしくは調節可能プロモーターでありうる。有用なプロモーターは、メタロチオネインプロモーター、構成的アデノウイルス主要後期プロモーター、デキサメタゾン誘導性ＭＭＴＶプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＭＲＰ  ｐｏｌＩＩＩプロモーター、構成的ＭＰＳＶプロモーター、テトラサイクリン誘導性ＣＭＶプロモーター（ヒト即初期ＣＭＶプロモーターなど）、構成的ＣＭＶプロモーター、および当技術分野で公知のプロモーター−エンハンサーの組合せを含むがこれらに限定されない。
【０３４１】
対象のポリヌクレオチド配列を含有する発現ベクターを導入する方法は、細胞宿主の種類に応じて変化する。例えば、塩化カルシウムトランスフェクションが一般に原核細胞に活用されるのに対し、リン酸カルシウム処理または電気穿孔は、他の細胞宿主に使用することができる（一般に、Sambrookら、前出を参照されたい）。他の方法は、例えば、電気穿孔、リン酸カルシウム処理、リポソーム媒介型形質転換、注射およびマイクロインジェクション、遺伝子銃法、ウィロソーム、イムノリポソーム、ポリカチオン：核酸コンジュゲート、ネイキッドＤＮＡ、人工ビリオン、ヘルペスウイルス構造タンパク質であるＶＰ２２との融合体（ElliotおよびO'Hare、Cell 88:223、1997）、ＤＮＡの薬剤増強型取込み、およびｅｘ  ｖｉｖｏにおける形質導入を含む。組換えタンパク質の長期にわたる高収率作製のためには、安定的発現が所望されることが多い。例えば、ＧＤＦ１５結合性抗体鎖または結合性断片を安定的に発現させる細胞系は、ウイルス複製起点または内因性発現エレメント、および選択マーカー遺伝子を含有する、本明細書で記載される発現ベクターを使用して調製することができる。ベクターを導入した後、細胞は、強化培地中で１〜２日間にわたり成長させてから、選択培地へと切り替えることができる。選択マーカーの目的は、選択に対する耐性を付与し、その存在により細胞の成長を可能とし、これにより、導入された配列を選択培地中で発現させることに成功することである。耐性で安定的にトランスフェクトされた細胞は、細胞型に適する組織培養法を使用して増殖させることができる。
【０３４２】
フレームワークまたはＦｃの操作
本明細書で記載される操作抗体は、例えば、抗体の特性を改善するように、ＶＨおよび／またはＶＬ内のフレームワーク残基へと修飾を施した操作抗体を含む。このようなフレームワーク修飾は、抗体の免疫原性を低下させるように施すことが典型的である。例えば、１つの手法は、１つまたは複数のフレームワーク残基を、対応する生殖細胞系列配列へと「復帰突然変異させる」ことである。より具体的には、体細胞突然変異を経た抗体は、抗体が由来する生殖細胞系列配列と異なるフレームワーク残基を含有しうる。このような残基は、抗体フレームワーク配列を、抗体が由来する生殖細胞系列配列と比較することにより同定することができる。フレームワーク領域配列を、それらの生殖細胞系列の立体配置へと戻すには、例えば、部位特異的突然変異誘発により、体細胞突然変異を、生殖細胞系列配列へと「復帰突然変異させる」ことができる。このような「復帰突然変異させた」抗体もまた、本開示により包含されることを意図する。
【０３４３】
フレームワーク修飾の別の種類は、１つもしくは複数のフレームワーク領域内の残基、なおまたは、１つもしくは複数のＣＤＲ領域内の残基を突然変異させて、Ｔ細胞エピトープを除去して、これにより、抗体の潜在的な免疫原性を低減することを伴う。この手法はまた、「脱免疫化」とも称し、Ｃａｒｒらによる米国特許出願公開第２００３０１５３０４３号明細書においてさらに詳細に記載されている。
【０３４４】
フレームワーク内またはＣＤＲ領域内に施された修飾に加えて、またはこれと代替的に、本明細書で記載される抗体は、Ｆｃ領域内の修飾を含んで、典型的に、血清半減期、補体の結合、Ｆｃ受容体の結合、および／または抗原依存性細胞性細胞傷害など、抗体の１つまたは複数の機能的特性を改変するように操作することもできる。さらに、本明細書で記載される抗体は、化学的に修飾することもでき（例えば、１つまたは複数の化学的部分を抗体に付着することができる）、そのグリコシル化を改変して、ここでもまた、抗体の１つまたは複数の機能的特性を改変するように修飾することもできる。これらの実施形態の各々については、下記でさらに詳細に記載する。Ｆｃ領域内の残基の番号付けは、ＫａｂａｔによるＥＵインデックスである。
【０３４５】
一実施形態では、ヒンジ領域内のシステイン残基の数を改変する、例えば、増大または減少させるように、ＣＨ１のヒンジ領域を修飾する。この手法は、Ｂｏｄｍｅｒらによる米国特許第５，６７７，４２５号明細書においてさらに記載されている。ＣＨ１のヒンジ領域内のシステイン残基の数は、例えば、軽鎖および重鎖のアセンブリーを容易とするか、または抗体の安定性を増大もしくは低下させるように改変する。
【０３４６】
別の実施形態では、抗体のＦｃヒンジ領域を突然変異させて、抗体の生物学的半減期を短縮する。より具体的には、抗体のブドウ球菌属（Staphylococcyl）プロテインＡ（ＳｐＡ）への結合が、天然Ｆｃ−ヒンジドメインのＳｐＡへの結合と比べて損なわれるように、１つまたは複数のアミノ酸突然変異を、Ｆｃ−ヒンジ断片のＣＨ２ドメイン−ＣＨ３ドメイン間界面領域へと導入する。この手法は、Ｗａｒｄらによる米国特許第６，１６５，７４５号明細書においてさらに詳細に記載されている。
【０３４７】
別の実施形態では、抗体は、その生物学的半減期を延長するように修飾する。多様な手法が可能である。例えば、Ｗａｒｄによる米国特許第６，２７７，３７５号明細書において記載されている次の突然変異、Ｔ２５２Ｌ、Ｔ２５４Ｓ、Ｔ２５６Ｆ、のうちの１つまたは複数を導入することができる。代替的に、生物学的半減期を延長するために、抗体を、Ｐｒｅｓｔａらによる米国特許第５，８６９，０４６号明細書；および同第６，１２１，０２２号明細書において記載されている、ＩｇＧのＦｃ領域のＣＨ２ドメインの２つのループから採取されたサルベージ受容体結合性エピトープを含有するように、ＣＨ１領域内またはＣＬ領域内で改変することもできる。
【０３４８】
さらに他の実施形態では、少なくとも１つのアミノ酸残基を、抗体のエフェクター機能を改変する異なるアミノ酸残基で置きかえることにより、Ｆｃ領域を改変する。例えば、抗体が、エフェクターリガンドに対するアフィニティーを改変しているが、親抗体の抗原結合能は保持するように、１つまたは複数のアミノ酸を、異なるアミノ酸残基で置きかえることができる。それに対するアフィニティーを改変するエフェクターリガンドは、例えば、Ｆｃ受容体または補体のＣ１成分でありうる。この手法は、両方ともＷｉｎｔｅｒらによる米国特許第５，６２４，８２１号明細書；および同第５，６４８，２６０号明細書においてさらに詳細に記載されている。
【０３４９】
別の実施形態では、抗体が、Ｃ１ｑへの結合を改変し、かつ／または補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）を低減もしくは消失させるように、アミノ酸残基から選択される１つまたは複数のアミノ酸を、異なるアミノ酸残基で置きかえることができる。この手法は、Ｉｄｕｓｏｇｉｅらによる米国特許第６，１９４，５５１号明細書においてさらに詳細に記載されている。
【０３５０】
別の実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸残基を改変して、これにより、補体に結合する抗体の能力を改変する。この手法は、ＢｏｄｍｅｒらによるＰＣＴ公開国際公開第９４／２９３５１号パンフレットにおいてさらに記載されている。
【０３５１】
さらに別の実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸を修飾することにより、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介する抗体の能力を増大させ、かつ／またはＦｃγ受容体に対する抗体のアフィニティーを増大させるように、Ｆｃ領域を修飾する。この手法は、ＰｒｅｓｔａによるＰＣＴ公開国際公開第００／４２０７２号パンフレットにおいてさらに記載されている。さらに、ヒトＩｇＧ１上の、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩ、およびＦｃＲｎに対する結合性部位もマップされており、結合を改善させた変異体も記載されている（Shields, R.L.ら、2001 J. Biol. Chen. 276:6591〜6604を参照されたい）。
【０３５２】
さらに別の実施形態では、抗体のグリコシル化を修飾する。例えば、脱グリコシル化抗体（すなわち、抗体は、グリコシル化を欠く）を作製することができる。グリコシル化は、例えば、「抗原」に対する抗体のアフィニティーを増大させるように改変することができる。このような炭水化物修飾は、例えば、抗体配列内の１つまたは複数のグリコシル化部位を改変することにより達成することができる。例えば、１つまたは複数の可変領域フレームワークグリコシル化部位の消失を結果としてもたらす、１つまたは複数のアミノ酸置換を作製して、これにより、その部位におけるグリコシル化を消失させることができる。このような脱グリコシル化により、抗原に対する抗体のアフィニティーを増大させることができる。このような手法は、Ｃｏらによる米国特許第５，７１４，３５０号明細書；および同第６，３５０，８６１号明細書においてさらに詳細に記載されている。
【０３５３】
加えて、または代替的に、フコシル残基の量を低減した低フコシル化抗体または二分枝型ＧｌｃＮａｃ構造を増大させた抗体など、グリコシル化の種類を改変した抗体を作製することもできる。このようなグリコシル化パターンの改変は、抗体のＡＤＣＣ能を増大させることが裏付けられている。このような炭水化物修飾は、例えば、グリコシル化機構を改変した宿主細胞内で抗体を発現させることにより達成することができる。当技術分野では、グリコシル化機構を改変した細胞が記載されており、本明細書で記載される組換え抗体を発現させ、これにより、グリコシル化を改変した抗体を産生するための宿主細胞として使用することができる。例えば、ＨａｎｇらによるＥＰ１，１７６，１９５は、このような細胞系内で発現させた抗体が、低フコシル化を呈示するように、フコシルトランスフェラーゼをコードするＦＵＴ８遺伝子を機能的に破壊した細胞系について記載している。ＰｒｅｓｔａによるＰＣＴ公開国際公開第０３／０３５８３５号パンフレットは、フコースをＡｓｎ（２９７）連結された炭水化物へと付着する能力を低減し、また、その宿主細胞内で発現させた抗体の低フコシル化も結果としてもたらす、変異体のＣＨＯ細胞系である、Ｌｅｃｌ３細胞について記載している（また、Shields, R.L.ら、2002 J. Biol. Chem. 277:26733〜26740も参照されたい）。ＵｍａｎａらによるＰＣＴ公開国際公開第９９／５４３４２号パンフレットは、操作細胞系内で発現させた抗体が、抗体のＡＤＣＣ活性の増大を結果としてもたらす二分枝型ＧｌｃＮａｃ構造の増大を呈示するように、糖タンパク質を修飾するグリコシルトランスフェラーゼ（例えば、ベータ（１，４）−ＮアセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ））を発現させるように操作された細胞系について記載している（また、Umanaら、1999 Nat. Biotech. 17:176〜180も参照されたい）。
【０３５４】
改変抗体を操作する方法
上記で論じた通り、本明細書で示されるＶＨ配列およびＶＬ配列または全長重鎖および全長軽鎖配列を有するＧＤＦ１５結合性抗体は、全長重鎖配列および／もしくは全長軽鎖配列、ＶＨ配列および／もしくはＶＬ配列、またはこれらへと付着された定常領域を修飾することにより、新たなＧＤＦ１５結合性抗体を創出するのに使用することができる。したがって、別の態様では、本明細書で記載されるＧＤＦ１５結合性抗体の構造特色を使用して、ヒトＧＤＦ１５に結合し、ＧＤＦ１５の１つまたは複数の機能的特性もまた阻害すること（例えば、ＧＤＦ１５とＧＤＦ１５受容体の結合を阻害し、遊離ＧＤＦ１５を循環から枯渇させること）など、本明細書で記載される抗体の、少なくとも１つの機能的特性を保持する、構造的に関連するＧＤＦ１５結合性抗体を創出する。
【０３５５】
例えば、本明細書で記載される抗体の１つまたは複数のＣＤＲ領域またはそれらの突然変異は、組換えにより、公知のフレームワーク領域および／または他のＣＤＲと組み合わせて、組換えにより操作された、上記で論じた、本明細書で記載される、さらなるＧＤＦ１５結合性抗体を創出することができる。他の種類の修飾は、前出の節で記載した修飾を含む。操作法のための出発材料は、本明細書で提示されるＶＨ配列および／もしくはＶＬ配列のうちの１つもしくは複数、またはそれらの１つもしくは複数のＣＤＲ領域である。操作抗体を創出するのに、本明細書で提示されるＶＨ配列および／もしくはＶＬ配列のうちの１つもしくは複数、またはそれらの１つもしくは複数のＣＤＲ領域を有する抗体を実際に調製する（すなわち、タンパク質として発現させる）ことは必要ではない。そうではなくて、配列内に含有される情報を、元の配列に由来する「第２世代の」配列を創出するための出発材料として使用し、次いで、「第２世代の」配列を、タンパク質として調製し、発現させる。
【０３５６】
したがって、別の実施形態では、本明細書では、配列番号３、２９、５５、８１、１０７、１３３、または１５９からなる群から選択されるＣＤＲ１配列、配列番号４、３０、５６、８２、１０８、１３４、または１６０からなる群から選択されるＣＤＲ２配列、ならびに／または配列番号５、３１、５７、８３、１０９、１３５、または１６１からなる群から選択されるＣＤＲ３配列を有する重鎖可変領域の抗体配列と；配列番号１６、４２、６８、９４、１２０、１４６、または１７２からなる群から選択されるＣＤＲ１配列、配列番号１７、４３、６９、９５、１２１、１４７、または１７３からなる群から選択されるＣＤＲ２配列、ならびに／または配列番号１８、４４、７０、９６、１２２、１４８、または１７４からなる群から選択されるＣＤＲ３配列を有する軽鎖可変領域の抗体配列とからなるＧＤＦ１５結合性抗体を調製し；重鎖可変領域の抗体配列および／または軽鎖可変領域の抗体配列内の、少なくとも１つのアミノ酸残基を改変して、少なくとも１つの改変抗体配列を創出し；改変抗体配列を、タンパク質として発現させるための方法が提示される。
【０３５７】
したがって、別の実施形態では、本明細書では、配列番号６、３２、５８、８４、１１０、１３６、または１６２からなる群から選択されるＣＤＲ１配列、配列番号７、３３、５９、８５、１１１、１３７、または１６３からなる群から選択されるＣＤＲ２配列、ならびに／または配列番号８、３４、６０、８６、１１２、１３８、または１６４からなる群から選択されるＣＤＲ３配列を有する重鎖可変領域の抗体配列と；配列番号１９、４５、７１、９７、１２３、１４９、または１７５からなる群から選択されるＣＤＲ１配列、配列番号２０、４６、７２、９８、１２４、１５０、または１７６からなる群から選択されるＣＤＲ２配列、ならびに／または配列番号２１、４７、７３、９９、１２５、１５１、または１７７からなる群から選択されるＣＤＲ３配列を有する軽鎖可変領域の抗体配列とからなるＧＤＦ１５結合性抗体を調製し；重鎖可変領域の抗体配列および／または軽鎖可変領域の抗体配列内の、少なくとも１つのアミノ酸残基を改変して、少なくとも１つの改変抗体配列を創出し；改変抗体配列を、タンパク質として発現させるための方法が提示される。
【０３５８】
したがって、本明細書の別の実施形態では、配列番号９、３５、６１、８７、１１３、１３９、もしくは１６５からなる群から選択されるＣＤＲ１配列、配列番号１０、３６、６２、８８、１１４、１４０、もしくは１６６からなる群から選択されるＣＤＲ２配列、および／または配列番号１１、３７、６３、８９、１１５、１４１、もしくは１６７からなる群から選択されるＣＤＲ３配列を有する重鎖可変領域の抗体配列と；配列番号２２、４８、７４、１００、１２６、１５２、もしくは１７８からなる群から選択されるＣＤＲ１配列、配列番号２３、４９、７５、１０１、１２７、１５３、もしくは１７９からなる群から選択されるＣＤＲ２配列、および／または配列番号２４、５０、７６、１０２、１２８、１５４、もしくは１８０からなる群から選択されるＣＤＲ３配列を有する軽鎖可変領域の抗体配列とからなるＧＤＦ１５結合性抗体を調製し、重鎖可変領域の抗体配列内および／または軽鎖可変領域の抗体配列内の、少なくとも１つのアミノ酸残基を改変して、少なくとも１つの改変抗体配列を創出し；改変抗体配列を、タンパク質として発現させるための方法が提示される。
【０３５９】
したがって、別の実施形態では、本明細書では、哺乳動物細胞における発現について最適化されたＧＤＦ１５結合性抗体であって、配列番号１４、４０、６６、９２、１１８、１４４、または１７０の群から選択される配列を有する全長重鎖抗体配列と、配列番号２７、５３、７９、１０５、１３１、１５７、または１８３の群から選択される配列を有する全長軽鎖抗体配列とからなるＦＸＩａ結合性抗体を調製し、全長重鎖抗体配列および／または全長軽鎖抗体配列内の少なくとも１つのアミノ酸残基を改変して、少なくとも１つの改変抗体配列を創出し、改変抗体配列を、タンパク質として発現させるための方法を提供する。一実施形態では、重鎖または軽鎖の改変は、重鎖または軽鎖のフレームワーク領域内である。
【０３６０】
改変抗体配列はまた、ＣＤＲ３配列、またはＵＳ２００５／０２５５５５２において記載されている、最小限の不可欠な結合決定基を固定し、ＣＤＲ１配列およびＣＤＲ２配列には多様性を持たせた抗体ライブラリーをスクリーニングすることによっても調製することができる。スクリーニングは、ファージディスプレイ技術など、抗体を、抗体ライブラリーからスクリーニングするのに適切な任意のスクリーニング技術に従い実施することができる。
【０３６１】
標準的な分子生物学の技法を使用して、改変抗体配列を調製し、発現させることができる。改変抗体配列によりコードされる抗体は、ヒト、カニクイザル、ラットおよび／またはマウスＧＤＦ１５に特異的に結合すること；ならびに抗体が、Ｆ３６Ｅ細胞増殖アッセイおよび／またはＢａ／Ｆ３−ＧＤＦ１５Ｒ細胞増殖アッセイにおいて、ＧＤＦ１５依存性の細胞増殖を阻害することを含むがこれらに限定されない、本明細書で記載されるＧＤＦ１５結合性抗体の機能的特性のうちの１つ、一部、または全部を保持する抗体である。
【０３６２】
本明細書で記載される抗体を操作する方法のある種の実施形態では、ＧＤＦ１５結合性抗体コード配列の全部または一部に沿って、ランダムに、または選択的に、突然変異を導入することができ、結果として得られる修飾ＧＤＦ１５結合性抗体を、本明細書で記載される結合活性および／または他の機能的特性についてスクリーニングすることができる。当技術分野では、突然変異法が記載されている。例えば、ＳｈｏｒｔによるＰＣＴ公開国際公開第０２／０９２７８０号パンフレットは、飽和突然変異誘発、合成ライゲーションアセンブリー、またはこれらの組合せを使用して、抗体の突然変異を創出し、スクリーニングするための方法について記載している。代替的に、ＬａｚａｒらによるＰＣＴ公開国際公開第０３／０７４６７９号パンフレットは、コンピュータによるスクリーニング法を使用して、抗体の生理化学的特性を最適化する方法について記載している。
【０３６３】
ある種の実施形態では、抗体は、脱アミド化部位を除去するように操作されている。脱アミド化は、ペプチド内またはタンパク質内の構造的変化および機能的変化を引き起こすことが公知である。脱アミドは、生物学的活性の低下のほか、タンパク質医薬品の薬物動態および抗原性の改変も結果としてもたらしうる（Anal Chem. 2005年3月1日;77（5）:1432〜9）。
【０３６４】
ある種の実施形態では、抗体は、ｐＩを増大させ、それらの薬物様特性を改善するように操作されている。タンパク質のｐＩは、分子の全体的な生物物理的特性の鍵となる決定因子である。ｐＩが小さな抗体は、可溶性が小さく、安定性が小さく、凝集しやすいことが公知である。さらに、ｐＩが小さな抗体の精製は、とりわけ、臨床における使用のためのスケールアップにおいて、困難であり、問題を生じる可能性がある。本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体またはＦａｂのｐＩを増大させることにより、それらの可溶性が改善され、抗体を高濃度（＞１００ｍｇ／ｍｌ）で製剤化することが可能となった。抗体を高濃度（例えば、＞１００ｍｇ／ｍｌ）で製剤化することにより、ガラス体内注射を介して、患者の眼へと、高用量の抗体を投与することが可能であるという利点がもたらされ、これにより、消耗性障害を含む慢性疾患の処置にとって重要な利点である、投与頻度の低減を可能とすることができる。ｐＩの増大はまた、抗体のＩｇＧバージョンのＦｃＲｎを媒介するリサイクリングも増大させ、これにより、薬物が長時間にわたり体内にとどまり、要求される注射の回数を少なくすることも可能としうる。最後に、ｐＩの増大に起因して、抗体の全体的な安定性が著明に改善され、その結果として、保管寿命およびｉｎ  ｖｉｖｏにおける生物学的活性の延長がもたらされる。ｐＩは、８．２以上であることが好ましい。
【０３６５】
改変抗体の機能的特性は、実施例において示されるアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ）など、当技術分野において利用可能であり、かつ／または本明細書で記載される標準的なアッセイを使用して評価することができる。
【０３６６】
予防的使用および治療的使用
本明細書で記載される、ＧＤＦ１５に結合する抗体（例えば、ＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｄ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、またはＡＢＧＤＦ１５−Ｇ）は、有効量の、本明細書で記載される抗体または抗原結合性断片を、それを必要とする対象へと投与することにより、ＧＤＦ１５と関連する疾患または障害を処置するために、治療的に有用な濃度で使用することができる。
【０３６７】
本明細書で開示される抗体を使用して、とりわけ、ＧＤＦ１５関連状態またはＧＤＦ１５関連障害を防止処置、防止、および改善することができる。これらの状態は、食欲不振−悪液質、老年性食欲不振、神経性食欲不振、がんと関連する悪液質、ＡＩＤＳと関連する悪液質、心不全と関連する悪液質、嚢胞性線維症と関連する悪液質、関節リウマチと関連する悪液質、腎疾患と関連する悪液質、ＣＯＰＤと関連する悪液質、ＡＬＳと関連する悪液質、腎不全と関連する悪液質、または股関節骨折と関連する悪液質などの消耗性障害を伴う消耗性障害を含むがこれらに限定されない。
【０３６８】
したがって、本明細書では、有効量の、本明細書で記載される抗体を、それを必要とする対象へと投与することにより、ＧＤＦ１５関連障害、例えば、悪液質またはサルコペニアなどの消耗性障害を処置する方法が提示される。本明細書では、有効量の、本明細書で記載される抗体を、それを必要とする対象へと投与することにより、ＧＤＦ１５関連障害を処置する方法が提示される。ＧＤＦ１５レベルの上昇と関連するか、またはこれから生じる、他のＧＤＦ１５関連疾患またはＧＤＦ１５関連障害は、サルコペニア、すなわち、悪液質と関連する臨床状態であって、骨格筋量および筋強度の減少を特徴とする臨床状態と；飢餓とを含む。飢餓は、典型的に、不十分な食餌および／または栄養の取込みに起因する、体脂肪量および除脂肪量の減少を結果としてもたらす（Thomas (2007) Clinical Nutrition 26:389〜399）。飢餓の影響は、食餌と、栄養、例えば、タンパク質の取込みとを改善することにより反転することが多い。ＧＤＦ１５レベルの上昇と関連するか、またはこれから生じる、さらに他のＧＤＦ１５関連疾患またはＧＤＦ１５関連障害は、食欲、脂肪量、エネルギー平衡の異常、および／または不随意の体重減少と関連する障害、ならびに重篤な疾病患者の死亡率および罹患率の低減を含むがこれらに限定されない。
【０３６９】
一部の実施形態では、本明細書で開示される抗体を使用して、ＧＤＦ１５タンパク質レベルが異常に高く、かつ／またはＧＤＦ１５タンパク質レベルの低減が求められる、任意の数の状態または疾患を処置することができる。諸実施形態では、対象は、ＧＤＦ１５の循環レベルの上昇、例えば、血清ＧＤＦ１５レベルの上昇を有する。例えば、ＧＤＦ１５を過剰発現させ、かつ／もしくは分泌する腫瘍に罹患している対象、および／または血清ＧＤＦ１５レベルの上昇と関連するがんに罹患している対象を処置することができる。血清ＧＤＦ１５レベルの上昇を示す、例示的な障害は、ベータ−サラセミア、肺塞栓症、がん、例えば、前立腺、結腸直腸、膵臓がん、重度慢性腎疾患、神経性食欲不振、慢性心不全、肥満、火傷患者、および妊娠を含むがこれらに限定されない。具体的な態様では、本明細書では、それを必要とする対象における食欲、食物摂取、体重、および／または筋肉量を増大させる方法であって、有効量の、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体（例えば、表１で示される、ＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｄ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、またはＡＢＧＤＦ１５−Ｇ）を対象へと投与するステップを含む方法が提示される。具体的な態様では、対象は、消耗性障害（例えば、悪液質）を伴うと診断されている。特定の実施形態では、対象は、がん、慢性心不全、慢性腎疾患、ＣＯＰＤ、ＡＩＤＳ、多発性硬化症、関節リウマチ、敗血症、または結核を伴うと診断されている。具体的な実施形態では、状態／障害は、例えば、健常対象の集団内のＧＤＦ１５レベルと比べたＧＤＦ１５レベルの上昇と関連する。
【０３７０】
特定の態様では、本明細書では、それを必要とする対象における体重、筋肉量、食欲、または食物摂取の減少を阻害または軽減する方法であって、有効量の、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体（例えば、表１で示される、ＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｄ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、またはＡＢＧＤＦ１５−Ｇ）を対象へと投与するステップを含む方法が提示される。具体的な態様では、対象は、消耗性障害（例えば、悪液質）を伴うと診断されている。特定の実施形態では、対象は、がん、慢性心不全、慢性腎疾患、ＣＯＰＤ、ＡＩＤＳ、多発性硬化症、関節リウマチ、敗血症、または結核を伴うと診断されている。具体的な実施形態では、状態／障害は、例えば、健常対象の集団内のＧＤＦ１５レベルと比べたＧＤＦ１５レベルの上昇と関連する。本明細書で開示される抗体はまた、ＧＤＦ１５関連障害を防止、処置、または改善するために、他の薬剤と組み合わせて使用することもできる。例えば、ＴＮＦαおよびＩＬ−１は、炎症促進性応答の媒介に関与することが公知であり、筋肉枯渇、食欲不振、および悪液質にもまた関与しているサイトカインであり、したがって、ＴＮＦαおよび／またはＩＬ−１の阻害剤は、ＧＤＦ１５関連障害（例えば、消耗性状態）を伴う患者を処置するために、本明細書で記載されるＧＤＦ１５抗体および抗原結合性断片と組み合わせて使用することができる。
【０３７１】
下記では、例示的な障害について、より詳細に記載する。
【０３７２】
本明細書で開示される抗体を使用して、様々な障害、例えば、体重（ｗｅｉｇｈｔ）または体重（ｂｏｄｙ  ｍａｓｓ）の不随意的減少と関連する障害、例えば、消耗性障害を処置することができる。一部の実施形態では、障害は、代謝性障害である。諸実施形態では、障害は、悪液質、サルコペニア、または飢餓から選択される。一部の実施形態では、本明細書で開示される抗体を使用して、筋肉量の減少、例えば、基礎疾患と関連する、筋肉量の減少を阻害する。諸実施形態では、体重（ｂｏｄｙ  ｗｅｉｇｈｔ）または体重（ｂｏｄｙ  ｍａｓｓ）の減少と関連する障害は、がん、心血管疾患（例えば、慢性心不全）、腎疾患（例えば、慢性腎疾患）、ＣＯＰＤ、ＡＩＤＳ、多発性硬化症、関節リウマチ、敗血症、または結核を含むがこれらに限定されない。一実施形態では、障害は、がん食欲不振−悪液質症候群（ＣＡＣＳ）である。
【０３７３】
対象へと投与されると、本明細書で開示される抗体は、筋肉量の減少、例えば、基礎疾患と関連する筋肉量の減少を阻害しうる。基礎疾患は、がん、慢性心不全、慢性腎疾患、ＣＯＰＤ、ＡＩＤＳ、多発性硬化症、関節リウマチ、敗血症、および結核からなる群から選択することができる。一部の実施形態では、筋肉量の減少は、脂肪量の減少を伴いうる。開示される抗体はまた、哺乳動物における不随意的体重減少を阻害するのに使用することもできる。一部の実施形態では、開示される抗体はまた、臓器量の減少を阻害するのに使用することもできる。さらに、対象における悪液質および／またはサルコペニアを処置する方法であって、有効量の、開示される抗体のうちの１つまたは複数を、それを必要とする対象へと投与するステップを含む方法も開示される。
【０３７４】
一部の実施形態では、開示される抗体は、筋肉量および／または脂肪量の減少を、少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、または１００％阻害する。一部の実施形態では、開示される抗体は、臓器量の減少を、少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、または１００％阻害する。一部の実施形態では、臓器量の減少は、心臓、肝臓、腎臓、および／または脾臓において観察される。一部の実施形態では、臓器量の減少は、筋肉量の減少、脂肪量の減少、および／または不随意的体重減少を伴う。
【０３７５】
不随意的体重減少は、下記で記載される３つの主要な病因であって、悪液質、サルコペニア、および飢餓を含む病因へと類別することができる。
【０３７６】
悪液質は、がん、ＡＩＤＳ、慢性心不全（先天性心不全としてもまた公知である）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性腎疾患、結核、敗血症、全身性炎症、および／または急性炎症性応答を含む、多数の疾患と関連しうる、不随意的体重減少を伴う消耗性／代謝性障害である（Thomas (2007) Clin. Nutr 26: 389〜399）。悪液質は、その症状が変動するが、一般に、骨格筋量の不随意的減少と、基礎疾病の一部の形態とを伴う（Evansら、(2008) Clin. Nutr. 27: 793〜799）。脂肪量および筋肉量の減少は、悪液質の顕著な臨床的特徴である。いくつかの症例では、悪液質は、前悪液質、悪液質、および不応性悪液質と称される病期を通して進行する（Fearonら、(2011) Lancet Onc. 12: 489〜495）。２つの、異なるが、場合によって、重複する過程：（ａ）筋肉に直接作用し、その量および機能を低減する代謝性過程；ならびに（ｂ）脂肪および筋肉のいずれの減少ももたらす、食物摂取の低減過程が、悪液質の発生および進行に関与すると考えられる（Tsaiら、(2012) J. Cachexia Sarcopenia Muscle 3:239〜243）。悪液質から生じる体重減少は、多様な疾患における予後不良と関連し（Evansら、上述）、悪液質およびその帰結は、がんによる死のうちの約２０％において、死を直接引き起こすと考えられる（Tisdale (2002) Nat. Rev. Cancer 2:862〜871）。
【０３７７】
サルコペニアは、悪液質と関連する臨床状態であって、骨格筋量および筋強度の減少を特徴とする臨床状態である。筋肉量の減少は、筋力の減少を伴う身体機能障害、転倒の可能性の増大、および自律の喪失をもたらしうる。肺活量の低減により、呼吸器機能もまた、損なわれうる。代謝ストレス時に、筋肉タンパク質は、急速に動員されて、免疫系、肝臓、および消化管に、アミノ酸、特に、グルタミンをもたらす。サルコペニアは、老齢者の疾患であることが多いが、その発症はまた、筋肉の不使用および栄養不良とも関連する場合があり、悪液質と同時でありうる。サルコペニアは、筋肉量の低下および歩行速度の低下など、機能的観察に基づき診断することができる。例えば、Muscaritoliら、(2010) Clin. Nutrition 29: 154〜159を参照されたい。したがって、ある種の実施形態では、本明細書で開示される抗ＧＤＦ抗体のうちの１つまたは複数を使用して、対象が、悪液質または食欲の減退を有するか、またはこれらを伴うと診断されているのであれ、そうでないのであれ、サルコペニア、筋肉消耗性障害、および／または著明な筋肉量の減少を患うか、またはこれらを伴うと診断された対象を処置することができる。このような方法は、治療有効量の、１つまたは複数の本明細書で開示される抗体を、それを必要とする対象へと投与するステップを含む。
【０３７８】
がん
諸実施形態では、本明細書で開示される抗体を使用して、進行性であるか、または不随意的な体重減少と関連するがんを有する対象を処置することができる。進行したがんの患者は、食欲不振、栄養不良、貧血、炎症、および免疫機能の抑制と関連する進行性体重減少を経る場合がある。まとめると、この一連の複合的かつ相互関連的な症状は、がん食欲不振−悪液質症候群（ＣＡＣＳ）として記載されている。ＣＡＣＳは、筋肉量の減少および脂肪量の減少、生活の質の低下、抗がん治療への応答の低減、処置毒性の増大、および生存の低減と関連する。さらに、多様ながんを処置するのに使用される、ある種の化学療法による処置は、悪液質を誘導するか、またはこれに寄与することが示されている。例えば、カルボプラチンおよびオキサリプラチンなど、白金ベースの治療で処置される対象が、用量制限的で、有害で、場合によって、致死的な悪液質を経る場合がある。
【０３７９】
それによる処置および効果が、１つまたは複数の抗ＧＤＦ１５抗体との組合せから利益を得うる抗がん剤の例は、シスプラチン、カルボプラチン、およびオキサリプラチンなど、白金ベースの治療剤である。それによる処置および効果が、１つまたは複数の抗ＧＤＦ１５抗体との組合せから利益を得うる、他の抗がん剤は、カペシタビン、ドキソルビシン、およびゲムシタビンを含む。
【０３８０】
本明細書で開示される方法はまた、治療的処置レジメンの増強、ならびに／またはアルキル化剤、代謝拮抗剤、抗腫瘍抗生剤、トポイソメラーゼ阻害剤、有糸分裂阻害剤、コルチコステロイド、標的療法、ホルモン療法、免疫療法、およびがんワクチンを含む、他の抗がん剤で処置された対象における全生存の延長に有用でもありうる。
【０３８１】
したがって、１つまたは複数の抗がん剤と組み合わせた、抗ＧＤＦ１５抗体の使用が開示される。例示的な抗がん剤は、アナストロゾール（Ａｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標））、ビカルタミド（Ｃａｓｏｄｅｘ（登録商標））、ブレオマイシン硫酸塩（Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標））、ブスルファン（Ｍｙｌｅｒａｎ（登録商標））、ブスルファン注射剤（Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（登録商標））、カペシタビン（Ｘｅｌｏｄａ（登録商標））、Ｎ４−ペントキシカルボニル−５−デオキシ−５−フルオロシチジン、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））、シスプラチン（Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標））、クラドリビン（Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）またはＮｅｏｓａｒ（登録商標））、シタラビン、シトシンアラビノシド（Ｃｙｔｏｓａｒ−Ｕ（登録商標））、シタラビンリポソーム注射剤（ＤｅｐｏＣｙｔ（登録商標））、ダカルバジン（ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標））、ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ、コスメガン）、ダウノルビシン塩酸塩（Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標））、ダウノルビシンクエン酸塩リポソーム注射剤（ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標））、デキサメタゾン、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、ドキソルビシン塩酸塩（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）、Ｒｕｂｅｘ（登録商標））、エトポシド（Ｖｅｐｅｓｉｄ（登録商標））、フルダラビンリン酸塩（Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標））、５−フルオロウラシル（Ａｄｒｕｃｉｌ（登録商標）、Ｅｆｕｄｅｘ（登録商標））、フルタミド（Ｅｕｌｅｘｉｎ（登録商標））、テザシチビン、ゲムシタビン（ジフルオロデオキシシチジン）、ヒドロキシ尿素（Ｈｙｄｒｅａ（登録商標））、イダルビシン（Ｉｄａｍｙｃｉｎ（登録商標））、イホスファミド（ＩＦＥＸ（登録商標））、イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標））、Ｌ−アスパラギナーゼ（ＥＬＳＰＡＲ（登録商標））、ロイコボリンカルシウム、メルファラン（Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標））、６−メルカプトプリン（Ｐｕｒｉｎｅｔｈｏｌ（登録商標））、メトトレキセート（Ｆｏｌｅｘ（登録商標））、ミトキサントロン（Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標））、マイロターグ、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、フェニックス（イットリウム９０／ＭＸ−ＤＴＰＡ）、ペントスタチン、カルムスチンインプラントを伴うポリフェプロサン２０（Ｇｌｉａｄｅｌ（登録商標））、タモキシフェンクエン酸塩（Ｎｏｌｖａｄｅｘ（登録商標））、テニポシド（Ｖｕｍｏｎ（登録商標））、６−チオグアニン、チオテパ、チラパザミン（Ｔｉｒａｚｏｎｅ（登録商標））、注射用のトポテカン塩酸塩（Ｈｙｃａｍｐｔｉｎ（登録商標））、ビンブラスチン（Ｖｅｌｂａｎ（登録商標））、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標））、ビノレルビン（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標））、イブルチニブ、イデラリシブ、およびブレンツキシマブ・ベドチンを含むがこれらに限定されない。
【０３８２】
例示的なアルキル化剤は、限定なしに述べると、ナイトロジェンマスタード、エチレンイミン誘導体、スルホン酸アルキル、ニトロソウレア、およびトリアゼン：ウラシルマスタード（Ａｍｉｎｏｕｒａｃｉｌ  Ｍｕｓｔａｒｄ（登録商標）、Ｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎａｃｉｌ（登録商標）、Ｄｅｍｅｔｈｙｌｄｏｐａｎ（登録商標）、Ｄｅｓｍｅｔｈｙｌｄｏｐａｎ（登録商標）、Ｈａｅｍａｎｔｈａｍｉｎｅ（登録商標）、Ｎｏｒｄｏｐａｎ（登録商標）、Ｕｒａｃｉｌ  ｎｉｔｒｏｇｅｎ  ｍｕｓｔａｒｄ（登録商標）、Ｕｒａｃｉｌｌｏｓｔ（登録商標）、Ｕｒａｃｉｌｍｏｓｔａｚａ（登録商標）、Ｕｒａｍｕｓｔｉｎ（登録商標）、Ｕｒａｍｕｓｔｉｎｅ（登録商標））、クロルメチン（Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標）、Ｃｌａｆｅｎ（登録商標）、Ｅｎｄｏｘａｎ（登録商標）、Ｐｒｏｃｙｔｏｘ（登録商標）、Ｒｅｖｉｍｍｕｎｅ（商標））、イホスファミド（Ｍｉｔｏｘａｎａ（登録商標））、メルファラン（Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標））、クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））、ピポブロマン（Ａｍｅｄｅｌ（登録商標）、Ｖｅｒｃｙｔｅ（登録商標））、トリエチレンメラミン（Ｈｅｍｅｌ（登録商標）、Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標）、Ｈｅｘａｓｔａｔ（登録商標））、トリエチレンチオホスホラミン（triethylenethiophosphoramine）、テモゾロミド（Ｔｅｍｏｄａｒ（登録商標））、チオテパ（Ｔｈｉｏｐｌｅｘ（登録商標））、ブスルファン（Ｂｕｓｉｌｖｅｘ（登録商標）、Ｍｙｌｅｒａｎ（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、ロムスチン（ＣｅｅＮＵ（登録商標））、ストレプトゾシン（Ｚａｎｏｓａｒ（登録商標））、およびダカルバジン（ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標）を含む。さらなる例示的なアルキル化剤は、限定なしに述べると、オキサリプラチン（Ｅｌｏｘａｔｉｎ（登録商標））；テモゾロミド（Ｔｅｍｏｄａｒ（登録商標）およびＴｅｍｏｄａｌ（登録商標））；ダクチノマイシン（また、アクチノマイシン−Ｄとしても公知である；Ｃｏｓｍｅｇｅｎ（登録商標））；メルファラン（また、Ｌ−ＰＡＭ、Ｌ−サルコリシン、およびフェニルアラニンマスタードとしても公知である；Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標））；アルトレタミン（また、ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）としても公知である；Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標））；カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））；ベンダムスチン（Ｔｒｅａｎｄａ（登録商標））；ブスルファン（Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（登録商標）およびＭｙｌｅｒａｎ（登録商標））；カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））；ロムスチン（また、ＣＣＮＵとしても公知である；ＣｅｅＮＵ（登録商標））；シスプラチン（また、ＣＤＤＰとしても公知である；Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標）およびＰｌａｔｉｎｏｌ（登録商標）−ＡＱ）；クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））；シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）およびＮｅｏｓａｒ（登録商標））；ダカルバジン（また、ＤＴＩＣ、ＤＩＣ、およびイミダゾールカルボキサミドとしても公知である；ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標）��；アルトレタミン（また、ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）としても公知である；Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標））；イホスファミド（Ｉｆｅｘ（登録商標））；プレドニマスチン（Prednumustine）；プロカルバジン（Ｍａｔｕｌａｎｅ（登録商標））；メクロレタミン（また、ナイトロジェンマスタード、ムスチン、およびメクロレタミン（mechloroethamine）塩酸塩としても公知である；Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ（登録商標））；ストレプトゾシン（Ｚａｎｏｓａｒ（登録商標））；チオテパ（また、チオホスファミド（thiophosphoamide）、ＴＥＳＰＡ、およびＴＳＰＡとしても公知である；Ｔｈｉｏｐｌｅｘ（登録商標））；シクロホスファミド（Ｅｎｄｏｘａｎ（登録商標）、Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標）、Ｐｒｏｃｙｔｏｘ（登録商標）、Ｒｅｖｉｍｍｕｎｅ（登録商標））；およびベンダムスチンＨＣｌ（Ｔｒｅａｎｄａ（登録商標））を含む。
【０３８３】
例示的なアントラサイクリンは、例えば、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）およびＲｕｂｅｘ（登録商標））；ブレオマイシン（ｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標））；ダウノルビシン（ダウノルビシン（dauorubicin）塩酸塩、ダウノマイシン、およびルビドマイシン塩酸塩；Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標））；リポソーム化ダウノルビシン（ダウノルビシンリポソームクエン酸塩；ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標））；ミトキサントロン（ＤＨＡＤ、Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標））；エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（商標））；イダルビシン（Ｉｄａｍｙｃｉｎ（登録商標）、Ｉｄａｍｙｃｉｎ  ＰＦＳ（登録商標））；マイトマイシンＣ（Ｍｕｔａｍｙｃｉｎ（登録商標））；ゲルダナマイシン；ハービマイシン；ラビドマイシン；およびデスアセチルラビドマイシンを含む。
【０３８４】
例示的なビンカアルカロイドは、ビノレルビン酒石酸塩（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標））、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標））、およびビンデシン（Ｅｌｄｉｓｉｎｅ（登録商標））；ビンブラスチン（また、ビンブラスチン硫酸塩、ビンカロイコブラスチン、およびＶＬＢとしても公知である；Ａｌｋａｂａｎ−ＡＱ（登録商標）およびＶｅｌｂａｎ（登録商標））；およびビノレルビン（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標））を含むがこれらに限定されない。
【０３８５】
例示的なプロテオソーム阻害剤は、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））；カーフィルゾミブ（ＰＸ−１７１−００７、（Ｓ）−４−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−４−メチル−１−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−イル）−１−オキソペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）−２−（（Ｓ）−２−（２−モルホリノアセトアミド）−４−フェニルブタンアミド）−ペンタンアミド）；マリゾミブ（ＮＰＩ−００５２）；イキサゾミブクエン酸塩（ＭＬＮ−９７０８）；デランゾミブ（ＣＥＰ−１８７７０）；およびＯ−メチル−Ｎ−［（２−メチル−５−チアゾリル）カルボニル］−Ｌ−セリル−Ｏ−メチル−Ｎ−［（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−２−メチル−２−オキシラニル］−２−オキソ−１−（フェニルメチル）エチル］−Ｌ−セリンアミド（ＯＮＸ−０９１２）を含むがこれらに限定されない。
【０３８６】
例示的なチロシンキナーゼ阻害剤は、表皮成長因子（ＥＧＦ）経路阻害剤（例えば、表皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤）、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）経路阻害剤（例えば、血管内皮成長因子受容体（ＶＥＧＦＲ）阻害剤（例えば、ＶＥＧＦＲ−１阻害剤、ＶＥＧＦＲ−２阻害剤、ＶＥＧＦＲ−３阻害剤））、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）経路阻害剤（例えば、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦＲ）阻害剤（例えば、ＰＤＧＦＲ-β阻害剤））、ＲＡＦ−１  阻害剤、ＫＩＴ  阻害剤、およびＲＥＴ  阻害剤を含むがこれらに限定されない。一部の実施形態では、ヘッジホッグ阻害剤と組み合わせて使用した抗がん剤は：アキシチニブ（ＡＧ０１３７３６）、ボスチニブ（ＳＫＩ−６０６）、セジラニブ（ＲＥＣＥＮＴＩＮ（商標）、ＡＺＤ２１７１）、ダサチニブ（ＳＰＲＹＣＥＬ（登録商標）、ＢＭＳ−３５４８２５）、エルロチニブ（ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標））、ゲフィチニブ（ＩＲＥＳＳＡ（登録商標））、イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標）、ＣＧＰ５７１４８Ｂ、ＳＴＩ−５７１）、ラパチニブ（ＴＹＫＥＲＢ（登録商標）、ＴＹＶＥＲＢ（登録商標））、レスタウルチニブ（ＣＥＰ−７０１）、ネラチニブ（ＨＫＩ−２７２）、ニロチニブ（ＴＡＳＩＧＮＡ（登録商標））、セマキサニブ（セマキシニブ、ＳＵ５４１６）、スニチニブ（ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）、ＳＵ１１２４８）、トセラニブ（ＰＡＬＬＡＤＩＡ（登録商標））、バンデタニブ（ＺＡＣＴＩＭＡ（登録商標）、ＺＤ６４７４）、バタラニブ（ＰＴＫ７８７、ＰＴＫ／ＺＫ）、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標））、リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標））、セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標））、パニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標））、ラニビズマブ（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標））、ニロチニブ（ＴＡＳＩＧＮＡ（登録商標））、ソラフェニブ（ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標））、アレムツズマブ（ＣＡＭＰＡＴＨ（登録商標））、ゲムツズマブオゾガマイシン（ＭＹＬＯＴＡＲＧ（登録商標））、ＥＮＭＤ−２０７６、ＰＣＩ−３２７６５、ＡＣ２２０、ドビチニブ乳酸塩（ＴＫＩ２５８、ＣＨＩＲ−２５８）、ＢＩＢＷ  ２９９２（ＴＯＶＯＫ（商標））、ＳＧＸ５２３、ＰＦ−０４２１７９０３、ＰＦ−０２３４１０６６、ＰＦ−２９９８０４、ＢＭＳ−７７７６０７、ＡＢＴ−８６９、ＭＰ４７０、ＢＩＢＦ  １１２０（ＶＡＲＧＡＴＥＦ（登録商標））、ＡＰ２４５３４、ＪＮＪ−２６４８３３２７、ＭＧＣＤ２６５、ＤＣＣ−２０３６、ＢＭＳ−６９０１５４、ＣＥＰ−１１９８１、チボザニブ（ＡＶ−９５１）、ＯＳＩ−９３０、ＭＭ−１２１、ＸＬ−１８４、ＸＬ−６４７、ＸＬ２２８、ＡＥＥ７８８、ＡＧ−４９０、ＡＳＴ−６、ＢＭＳ−５９９６２６、ＣＵＤＣ−１０１、ＰＤ１５３０３５、ペリチニブ（ＥＫＢ−５６９）、バンデタニブ（ザクチマ）、ＷＺ３１４６、ＷＺ４００２、ＷＺ８０４０、ＡＢＴ−８６９（リニファニブ）、ＡＥＥ７８８、ＡＰ２４５３４（ポナチニブ）、ＡＶ−９５１（チボザニブ）、アキシチニブ、ＢＡＹ  ７３−４５０６（レゴラフェニブ）、ブリバニブアラニネート（ＢＭＳ−５８２６６４）、ブリバニブ（ＢＭＳ−５４０２１５）、セジラニブ（ＡＺＤ２１７１）、ＣＨＩＲ−２５８（ドビチニブ）、ＣＰ  ６７３４５１、ＣＹＣ１１６、Ｅ７０８０、Ｋｉ８７５１、マシチニブ（ＡＢ１０１０）、ＭＧＣＤ−２６５、モテサニブ二リン酸塩（ＡＭＧ−７０６）、ＭＰ−４７０、ＯＳＩ−９３０、パゾパニブ塩酸塩、ＰＤ１７３０７４、ソラフェニブトシル酸塩（Ｂａｙ  ４３−９００６）、ＳＵ  ５４０２、ＴＳＵ−６８（ＳＵ６６６８）、バタラニブ、ＸＬ８８０（ＧＳＫ１３６３０８９、ＥＸＥＬ−２８８０）からなる群から選択される。選択されるチロシンキナーゼ阻害剤は、スニチニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、またはソラフェニブから選択される。
【０３８７】
本明細書で開示される方法の、例示的な適応は、以下の腫瘍およびがん：乳がん；肺がん（小細胞肺がんおよび非小細胞肺がんを含む）；肛門がん、結腸がん、直腸がん、および結腸直腸がん；肝臓がん；腎臓（ｋｉｄｎｅｙ）および腎臓（ｒｅｎａｌ）がん（腎細胞癌を含む）；頭頸部がん；膵臓がん；骨がん；子宮頸がん、卵巣がん、膣がん、および外陰がん；前立腺がん、陰茎がん、および精巣がん；肛門がん；膀胱がん；白血病（ＡＭＬ；ＣＭＬ；ＡＬＬ、およびＣＬＬを含む）；胃がん（ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）（消化管間葉系腫瘍を含む）および胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）；脳腫瘍；神経膠腫；神経芽細胞腫および網膜芽細胞腫；甲状腺がん；皮膚がん（黒色腫を含む）；多発性骨髄腫（および他の形質細胞新生物）；リンパ腫（ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫を含む）；肉腫；骨髄増殖性新生物；悪性中皮腫；成年／小児軟部組織肉腫；ＡＩＤＳ関連カポジ肉腫；子宮内膜がん；妊娠性絨毛性疾患；悪性中皮腫；多中心性キャッスルマン病；骨髄増殖性新生物；平滑筋肉腫；基底細胞癌；ウィルムス腫瘍および他の小児腎臓がんを含む。
【０３８８】
ある種の実施形態では、１つまたは複数の抗悪液質剤を、本明細書で開示される抗体に加えて使用することができる。有用でありうる抗悪液質剤は、メゲストロール酢酸塩（Agilesら、(2013) Clinical Nutrition 32:319〜324）；コルチコステロイドまたはグルココルチコイド（デキサメタゾン、プレドニゾン、メチルプレドニゾロンなど）；カンナビノイド（ドロナビノールなど）；ゲレリンおよびアナモレリン；メラノコルチンアンタゴニスト；抗ＩＬ６モノクローナル抗体；選択的アンドロゲン受容体モジュレーター（ＳＡＲＳ）；サリドマイド；オキサンドロロン；アクチビン受容体ＩＩ；ＧＤＦ８（ミオスタチン）；およびＩＬ−１ａ阻害剤を含む。
【０３８９】
ある種の実施形態では、結腸または直腸のがんであって、身体の他の部分へと拡散したがん（転移性結腸直腸がん）、または手術の後における結腸がんのために、対象を、カペシタビン（例えば、Ｘｅｌｏｄａ（登録商標））で処置する。カペシタビンによる処置の前に、これと共時的に、またはこれに後続して、対象を、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体で処置する。
【０３９０】
他の実施形態では、身体の他の部分へと拡散した乳がん（転移性乳がん）のために、対象を、ドセタキセル（例えば、Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））による処置と組み合わせて、またはこの後で、カペシタビンにより処置する。カペシタビンによる処置の前に、これと共時的に、またはこれに後続して、対象を、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体で処置する。カペシタビンの投与量および投与は、臨床医学の当業者が決定しうる。典型的なレジメンは、毎日２回ずつ、２週間にわたり経口投与される１２５０ｍｇ／ｍｌ２の投与に、１週間の休薬期間を後続させる、３週間のサイクルとしての投与を含みうる。ドセタキセルと組み合わせて使用する場合、ドセタキセルのための典型的なレジメンは、３週間ごとに１時間の静脈内注入としての７５ｍｇ／ｍｌ２である。
【０３９１】
ある種の実施形態では、膵臓がんのために；卵巣がんのために、カルボプラチンと組み合わせて；乳がんのために、パクリタキセルと組み合わせて；非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）のために、シスプラチンと組み合わせて、対象を、ゲムシタビン（例えば、Gemzar（登録商標））で処置する。ゲムシタビンによる処置の前に、これと共時的に、またはこれに後続して、対象を、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体で処置する。ゲムシタビンの投与量および投与は、臨床医学の当業者が決定しうる。典型的なレジメンは、２１日間のサイクルの、各々１および８日目において；または２８日間のサイクルの、各々１、８、および１５日目において、３０分間にわたり静脈内投与される１０００〜１２５０ｍｇ／ｍｌ２の間の投与を含みうる。
【０３９２】
ある種の実施形態では、結腸または直腸のがんであって、身体の他の部分へと拡散したがん（転移性結腸直腸がん）、または手術の後における結腸がんのために、対象を、ドキソルビシン（例えば、Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標））で処置する。カペシタビンによる処置の前に、これと共時的に、またはこれに後続して、対象を、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体で処置する。
【０３９３】
ドキソルビシン（例えば、Ｄｏｘｉｌ（登録商標））はまた、卵巣がん、ＡＩＤＳ関連カポジ肉腫の処置；およびボルテゾミブと組み合わせた、多発性骨髄腫の処置のほか、急性リンパ芽球性リンパ腫（ＡＬＬ）；急性骨髄芽球性リンパ腫（ＡＭＬ）；神経芽細胞腫；乳癌；卵巣癌；ホジキン病；悪性リンパ腫；および小細胞型が、他の細胞型と比較して最も応答性が大きい気管支癌の処置にも承認されている。ドキソルビシンによる処置の前に、これと共時的に、またはこれに後続して、対象を、本明細書で記載される抗ＧＤＦ抗体で処置する。ドキソルビシンの投与量および投与は、臨床医学の当業者が決定しうる。典型的なレジメンは、４週間ごと、最低４コースにわたり静脈内投与される５０ｍｇ／ｍｌ２（卵巣がん）〜ＡＩＤＳ関連カポジ肉腫の処置のために、３週間ごとに静脈内投与される２０ｍｇ／ｍｌ２の間の投与を含みうる。多発性骨髄腫では、典型的なレジメンは、３週間ごと、１、４、８、および１１日目における静脈内ボーラス注射として、１．３ｍｇ／ｍｌ２で投与される、ボルテゾミブの投与、およびボルテゾミブの投与後４日目に、３０ｍｇ／ｍｌ２で静脈内投与される、ドキソルビシンの投与である。
【０３９４】
ある種の実施形態では、卵巣がんのために、対象を、カルボプラチン（例えば、Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））で処置する。他の実施形態では、進行した卵巣がんのために、対象を、シクロホスファミドによる処置と組み合わせて、またはこの後で、カルボプラチンで処置する。カルボプラチンによる処置の前に、これと共時的に、またはこれに後続して、対象を、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体で処置する。カルボプラチンの投与量および投与は、臨床医学の当業者が決定しうる。典型的なレジメンは、４週間ごとの１日目における、約６サイクルにわたる、３００〜３６０ｍｇ／ｍｌ２の静脈内投与を含みうる。シクロホスファミドを共投与する場合、典型的なレジメンは、４週間ごとに１日の、６サイクルにわたる、６００ｍｇ／ｍｌ２のシクロホスファミドの静脈内注入と組み合わせた、４週間ごとに１日の、６サイクルにわたる、３００ｍｇ／ｍｌ２のカルボプラチンの静脈内注入でありうる。
【０３９５】
ある種の実施形態では、転移性精巣腫瘍、転移性卵巣腫瘍、または進行した膀胱がんの処置のために、対象を、シスプラチン（例えば、Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標））で処置する。他の実施形態では、対象を、シクロホスファミドによる処置と組み合わせて、またはこの後で、シスプラチンで処置する。シスプラチンによる処置の前に、これと共時的に、またはこれに後続して、対象を、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体で処置する。シスプラチンの投与量および投与は、臨床医学の当業者が決定しうる。典型的なレジメンは、転移性精巣腫瘍のための、１サイクル当たり、５日間にわたり、毎日、２０ｍｇ／ｍｌ２の静脈内投与を含みうる。進行した膀胱がんのための、シスプラチンの典型的なレジメンは、先行する放射線治療への曝露の程度および／または先行する化学療法に応じて、３〜４週間ごとに１回ずつ、５０〜７０ｍｇ／ｍｌ２の静脈内注入を含みうる。重度に前処置された患者には、４週間ごとに１回の、５０ｍｇ／ｍｌ２の静脈内投与が典型的である。転移性卵巣腫瘍の処置のためには、４週間ごとに１回の、１サイクル当たり、７５〜１００ｍｇ／ｍｌ２の静脈内が典型的である。シスプラチンの投与を、シクロホスファミドと組み合わせる場合、シスプラチンの注射と、シクロホスファミドとを、逐次的に投与するものとする。典型的なレジメンは、４週間ごとの１日目における、６００ｍｇ／ｍｌ２のシクロホスファミドの静脈内注入でありうる。
【０３９６】
ある種の実施形態では、結腸がんもしくは進行した結腸直腸がん、または手術の後における結腸がんの処置のために、対象を、５−フルオロウラシルおよび／またはロイコボリンと組み合わせたオキサリプラチン、例えば（Ｅｌｏｘａｔｉｎ（登録商標））で処置する。オキサリプラチンによる処置の前に、これと共時的に、またはこれに後続して、対象を、本明細書で記載される抗ＧＤＦ１５抗体で処置する。オキサリプラチンの投与量および投与は、臨床医学の当業者が決定しうる。典型的なレジメンは、２００ｍｇ／ｍｌ２のロイコボリンの静脈内注入と同時の２５０〜５００ｍｌの５％デキストロース中に、８５ｍｇ／ｍｌ２のオキサリプラチンの静脈内注入による、１２０分間にわたる投与に続き、４〜６分間にわたり、静脈内ボーラスで施される、４００ｍｇ／ｍｌ２の５−フルオロウラシルを含みうる。
【０３９７】
心血管疾患
悪液質、慢性腎疾患、貧血、鉄欠損、および高血圧症は、先天性心不全または慢性心不全（ＣＨＦ）と関連しうる。したがって、本明細書で記載される抗体を使用して、それを必要とする対象における心機能を増大させることができる。諸実施形態では、有効量の抗ＧＤＦ１５抗体を投与して、対象における心機能を増大させるステップを含む方法が開示される。一部の実施形態では、対象は、心機能不全またはＣＨＦを患い、任意選択で、悪液質、慢性腎疾患、貧血、鉄欠損、または高血圧症のうちの１つまたは複数を呈示しうる。
【０３９８】
本明細書の他の実施形態では、開示される抗ＧＤＦ１５抗体を使用して、心血管疾患を処置する方法が提示される。一部の実施形態では、心血管疾患は、先天性心不全もしくは慢性心不全（ＣＨＦ）、心筋肥大もしくは心筋萎縮、急性冠動脈症候群、狭心症、または他の心障害もしくは心状態を含むがこれらに限定されない。一部の実施形態では、処置される対象は、心筋梗塞などの心事象を患ったことがあるか、または経皮的冠動脈インターベンション、冠動脈バイパス移植術、冠動脈血管形成術、またはステント留置などの心臓インターベンションを施されたことがあるか、もしくはこれらを必要とすると診断されている。
【０３９９】
ある種の実施形態では、本発明は、１つまたは複数の心関連症状であって、心血管疾患もしくは心機能不全、先天性心不全もしくは慢性心不全、心ミオパシー、心肥大、虚血／再灌流損傷、呼吸困難、特発性肺動脈性高血圧症、ＳＴ上昇型心筋梗塞（ＳＴＥＭＩ）、または他の心障害もしくは心状態の症状でありうる症状を呈示する対象を処置する方法を含む。このような心関連症状については、参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／１９６１４２号パンフレットにおいて開示されている。一部の実施形態では、本明細書で記載されるＧＤＦ抗体による処置に応答して、かつ、臨床的に適切であるとみなされた場合、投与レジメンを改変するように、対象をモニタリングすることができる。
【０４００】
ある種の実施形態では、心血管疾患または先天性心不全もしくは慢性心不全（ＣＨＦ）などの心障害を有する対象は既に、公知の心処置で処置されているが、依然として、１つまたは複数の症状を呈示している。したがって、本明細書では、上記の心関連症状のうちの少なくとも１つの発生および／または重症度を回避または軽減するための方法および組成物が提示され、上記で記載した心臓インターベンションのうちの１つに対する必要もまた、回避または軽減しうる。
【０４０１】
腎疾患
本明細書で開示される方法および組成物はまた、腎臓または腎組織の疾患、機能不全、肥大、または萎縮を伴う状態および障害を検出、防止、および処置するために有用でもありうる。このような状態は、慢性腎臓または末期腎不全、尿毒症性症候群、貧血および／または腎臓からのエリスロポエチン産生の低減、糖尿病、インスリン抵抗性、ならびに腎機能または腎サイズの低減を含むがこれらに限定されない。
【０４０２】
一部の実施形態では、対象は、慢性腎疾患（ＣＫＤ）の、１つまたは複数のさらなる症状を呈示する。諸実施形態では、対象は、食欲不振および／またはＧＤＦ１５の血漿レベルの上昇を伴うＣＫＤを有する。前記ＣＫＤの症状は、慢性腎疾患、腎不全、または腎機能不全の以下の指標：血清クレアチニンレベルの上昇、血清ビリルビンレベルの低下、尿中アルブミン濃度の上昇、尿中クレアチニンレベルの上昇、尿中アルブミン対クレアチン比（３０ｍｇ／ｇの値が重篤なＣＫＤを指し示す、女性における２５ｍｇ／ｇ以上のアルブミン対クレアチニン比、および男性における１７ｍｇ／ｇ以上のアルブミン対クレアチニン比）の上昇、尿中タンパク質対クレアチニン比（２００ｍｇ／ｇのタンパク質対クレアチニン比は大きすぎ、ＣＫＤを指し示す）の上昇、高血圧症（１４０ｍｍＨｇ以上の収縮期血圧；９０ｍｍＨｇ以上の拡張期血圧として規定される；または、現在、降圧薬処置を受けている）、糖尿病（１２６ｍｇ／ｄＬもしくはこれを超える空腹時グルコースレベルとして規定される；またはインスリンもしくは経口血糖降下薬の使用）；尿中もしくは血漿中のシスタチンＣ、または尿中のＣ反応性タンパク質（ｕＣＲＰ）の出現、尿中レチノール結合性タンパク質（ｕＲＢＰ）、ヘプシジン、クレアチニンの血清レベルの上昇、ヘモジュベリン；尿酸および／または尿素；ベータ微量タンパク質；腎臓損傷分子１（ＫＩＭ−１）；尿中Ｎ−アセチル−ベータ−（Ｄ）−グルコサミニダーゼ（ＮＡＧ）；尿中インターロイキン１８（ｕＩＬ−１８）；肝臓脂肪酸結合タンパク質１（Ｌ−ＦＡＢＰ−１）；血中尿素窒素（ＢＵＮ）；マイクロＲＮＡ２１（ｍｉＲＮＡ−２１）；および電解質のうちの１つまたは複数を含みうる。
【０４０３】
腎疾患について、対象を診断し、かつ／またはモニタリングするのに使用しうる、さらなる症状、生化学的パラメータ、および生理学的パラメータについては、参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／１９６１４５号パンフレットにおいて開示されている。
【０４０４】
諸実施形態では、本明細書で記載される抗体を使用して、腎疾患を伴う対象の処置時、例えば、透析時に、ＧＤＦ１５を低減する、例えば、これを枯渇させることができる。
【０４０５】
本明細書で開示される抗体により、障害を処置するのに使用しうる、さらなる適応および投与量については、それらの全ての内容が、参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１４／１００６８９号パンフレット、国際公開第２０１６／０４９４７０号パンフレット、国際公開第２０１５／１９６１４２号パンフレット、および国際公開第２０１５／１９６１４５号パンフレットにおいて記載されている。
【０４０６】
医薬組成物
本明細書では、薬学的に許容される担体と併せて製剤化されたＧＤＦ１５結合性抗体（インタクトなまたは結合性断片）を含む医薬組成物が提示される。組成物は加えて、例えば、消耗性障害の処置または防止に適する１つまたは複数の他の治療剤も含有しうる。薬学的に許容される担体は、組成物を増強するかもしくは安定化させるか、または、組成物の調製を容易とするのに使用することもできる。薬学的に許容される担体は、生理学的に適合性の溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを含む。
【０４０７】
本明細書で記載される医薬組成物は、当技術分野で公知の様々な方法により投与することができる。投与経路および／または投与方式は、所望される結果に応じて変化する。投与は、ガラス体内投与、静脈内投与、筋内投与、腹腔内投与、もしくは皮下投与であるか、または標的部位に近接して投与することが好ましい。薬学的に許容される担体は、ガラス体内投与、静脈内投与、筋内投与、皮下投与、非経口投与、脊髄投与、または表皮投与（例えば、注射または注入による）に適するものとする。投与経路に応じて、活性化合物、すなわち、二特異性分子および多特異性分子である抗体は、化合物を、化合物を不活化しうる酸および他の天然の状態の作用から保護する材料でコーティングすることができる。
【０４０８】
組成物は、滅菌であり、かつ、流体であるものとする。適正な流体性は、例えば、レシチンなどのコーティングを使用することにより維持することができ、分散液の場合には、要求される粒子サイズを維持し、界面活性剤を使用することにより維持することができる。多くの場合、組成物中に等張剤、例えば、糖、マンニトールまたはソルビトールなどの多価アルコール、および塩化ナトリウムを含むことが好ましい。注射用組成物の長時間吸収は、組成物中に、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムまたはゼラチンを組み入れることによりもたらすことができる。
【０４０９】
本明細書で記載される医薬組成物は、当技術分野において周知であり、日常的に実施されている方法に従い調製することができる。例えば、Remington：The Science and Practice of Pharmacy、Mack Publishing Co.、20版、2000；およびSustained and Controlled Release Drug Delivery Systems、J.R. Robinson編、Marcel Dekker, Inc.、New York、1978を参照されたい。医薬組成物は、ＧＭＰ条件下で製造することが好ましい。本明細書で記載される医薬組成物中では、ＧＤＦ１５結合性抗体の治療的に有効な用量または治療的に効果的な用量を援用することが典型的である。ＧＤＦ１５結合性抗体は、当業者に公知の従来の方法により、薬学的に許容される剤形へと製剤化する。投与レジメンは、所望される最適応答（例えば、治療的応答）をもたらすように調整する。例えば、単一のボーラスを投与することもでき、複数に分割された用量をある期間にわたり投与することもでき、治療状況の要件により指し示されるのに応じて、用量を比例的に低減するかまたは増大させることもできる。投与の容易さおよび投与量の均一性のために、非経口組成物を、投与量単位形態で製剤化することがとりわけ有利である。本明細書で使用される投与量単位形態とは、処置される対象のための単位投与量として適する、物理的に個別の単位を指す。各単位は、要求される医薬担体との関連で、所望の治療効果をもたらすように計算された、所定量の活性化合物を含有する。
【０４１０】
本明細書で記載される医薬組成物中の有効成分の実際の投与量レベルは、患者に毒性とならずに、特定の患者、組成物、および投与方式に所望される治療的応答を達成するのに有効な量の有効成分を得るように変化させることができる。選択される投与量レベルは、援用される本明細書で記載される特定の組成物、またはそれらのエステル、塩もしくはアミド、投与経路、投与時期、援用される特定の化合物の排出速度、処置の持続期間、援用される特定の組成物と組み合わせて使用される他の薬物、化合物、および／または材料、処置される患者の年齢、性別、体重、状態、全般的健康、および医療既往歴などの因子を含む様々な薬物動態因子に依存する。
【０４１１】
医師または獣医師は、医薬組成物中で援用される本明細書で記載される抗体の用量を、所望の治療効果を達成するのに要求されるレベル未満のレベルで開始し、所望の効果が達成されるまで、投与量を漸増させることができる。一般に、本明細書で記載される消耗性障害を処置するのに有効な、本明細書で記載される組成物の用量は、投与手段、標的部位、患者の生理学的状態、患者がヒトであるのか、動物であるのか、投与される他の医薬、および処置が予防的であるのか、治療的であるのかを含む、多くの異なる因子に応じて変化する。処置投与量は、安全性および有効性を最適化するように滴定することが必要である。抗体の全身投与では、投与量は、宿主の体重１ｋｇ当たり約０．０００１〜１００ｍｇ／ｋｇ、通例は約０．０１〜１５ｍｇ／ｋｇの範囲である。抗体のガラス体内投与では、投与量は、０．１ｍｇ／眼〜５ｍｇ／眼でありうる。例示的な処置レジメは、２週間ごとに１回、または毎月１回、または３〜６カ月ごとに１回の全身投与を伴う。例示的な処置レジメは、２週間ごとに１回、もしくは毎月１回、もしくは３〜６カ月ごとに１回、または必要に応じて（ＰＲＮ）の全身投与を伴う。
【０４１２】
抗体は通例、複数回投与する。単回の投与の間の間隔は、毎週、毎月、または毎年でありうる。間隔はまた、患者におけるＦＸＩ結合性抗体および／もしくはＧＤＦ１５結合性抗体の血中レベルを測定することにより指し示される通り、不規則でもありうる。加えて、医師が代替的な投与間隔を決定する場合もあり、毎月または効果的であるのに必要な間隔で投与する。全身投与のいくつかの方法では、投与量は、抗体の血漿中濃度１〜１０００μｇ／ｍｌを達成するように調整し、いくつかの方法では、２５〜５００μｇ／ｍｌを達成するように調整する。代替的に、抗体は、持続放出製剤として投与することもでき、この場合は、低頻度の投与が要求される。投与量および頻度は、患者における抗体の半減期に応じて変化する。一般に、ヒト抗体は、キメラ抗体および非ヒト抗体の半減期より長い半減期を示す。投与量および投与頻度は、処置が予防的であるのか治療的であるのかに応じて変化しうる。予防的適用では、比較的低投与量を、比較的低頻度の間隔で、長期にわたり投与する。一部の患者には、彼らの余生にわたり処置を施し続ける。治療的適用では場合によって、比較的高投与量が、疾患の進行が軽減されるか終結するまで、比較的短い間隔で要求され、好ましくは、患者が、疾患の症状の部分的または完全な改善を示すまで要求される。その後、患者には、予防的レジメを投与することができる。
【実施例】
【０４１３】
以下の実施例は、本開示をさらに例示するために提示されるものであり、その範囲を限定するために提示されるものではない。当業者には、本開示の他の変形がたやすく明らかであろうし、添付の特許請求の範囲によっても包含される。
【０４１４】
［実施例１］
抗原としての使用のための、精製組換えＨｉｓ−ＧＤＦ１５の調製
Ｈｉｓ−ＧＤＦ１５の構築物で形質転換した大腸菌（大腸菌（E. coli））ＢＬ２１（ＤＥ３）を、Ｌｕｒｉａ  Ｂｒｏｔｈ培地中で増殖させた。Ｈｉｓ−ＧＤＦ１５を含有する封入体（ＩＢ）を、６Ｍのグアニジンおよび２０ｍＭのベータ−メルカプトエタノールを含有する緩衝液中で可溶化させた。可溶化ＩＢを、Ｎｉ−ＮＴＡ−カラム上に続き、逆相クロマトグラフィー上で、さらに精製した。Ｈｉｓ−ＧＤＦ１５を含有するプールを、リフォールディング緩衝液中で、１５〜２０倍に希釈し、４℃で数日間にわたり、静かに攪拌した。リフォールディングさせたＨｉｓ−ＧＤＦ１５を、調製用逆相クロマトグラフィーにより、さらに精製した。精製Ｈｉｓ−ＧＤＦ１５プールを凍結乾燥させ、３０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液中で再構成した。
【０４１５】
［実施例２］
ヒトＦａｂファージライブラリーによるパニング
ファージディスプレイのために、ビオチニル化ヒトＧＤＦ１５を、ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ製のＨｕＣＡＬ（Ｈｕｍａｎ  Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｌｉｂｒａｒｙ）ファージライブラリーと混合し、１時間にわたり結合させた。ＧＤＦ１５／ファージ複合体は、Ｄｙｎａｌ  Ｍ２８０ストレプトアビジンビーズ上で、１０分間にわたり捕捉した。反復的なパニングラウンドの後、プールされたプラスミドＤＮＡを精製し、制限酵素であるＥｃｏＲＩおよびＸｂａＩで消化した。プラスミドＤＮＡを、アガロースゲル電気泳動により分離し、２つの遺伝子セグメント（免疫グロブリンの重鎖（ＶＨ／ＣＨ）および軽鎖（ＶＬ／ＣＬ））を含有する、１．５ｋＢのインサートを、切り出し、精製した。この１．５ｋＢの断片（Ｆａｂインサート）を、Ｍｏｒｐｈｏｓｙｓ製の発現ベクターであるｐＭＯＲＰＨＸ９＿ＦＨへとサブクローニングし、エレクトロコンピテントのＴＧ−１細胞へと形質転換した。個別のコロニーを採取し、マスタープレートを調製した。マスタープレートから接種された娘プレートを、低グルコース培地中で再増殖させ、ＩＰＴＧの存在下、一晩にわたる培養により、Ｆａｂの発現を誘導した。細胞ペレットを凍結させ、リゾチームにより溶解させ、清澄にした溶解物を、ニュートラビジンコーティングウェル（陰性対照ニュートラビジン単独）上にコーティングしたＰＥＯ−ビオチニル化ＧＤＦ１５でコーティングされたプレート上のＥＬＩＳＡにより査定した。マスタープレートを、寒天プレート上へと再画線し、再試験のために、３つの個別のコロニーを採取した後で、ＥＬＩＳＡ陽性溶解物を再度調べた。ＤＮＡシーケンシングのために、ＧＤＦ１５  Ｆａｂクローンに由来するプラスミドＤＮＡもまた調製した。固有のクローンに由来するＦａｂを、ＩＰＴＧで誘導された、リットルスケールの培養物中で調製し、次いで、ＩＭＡＣおよびサイズ除外クロマトグラフィーにより、連続的に精製した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥとカップリングさせた、Ａ２８０ｎｍの吸光度で、タンパク質濃度を決定した。
【０４１６】
［実施例３］
ＩｇＧの発現および精製
抗ＧＤＦ１５  ＦａｂのＶＨドメインおよびＶＬドメインを、ヒトＩｇＧ定常領域と共に、適切なベクター（ＣＸ２８−９８ＧＣ、ｐＰＬ１５５１）へとサブクローニングした。
【０４１７】
結果として得られるクローンの完全性を、ＤＮＡシーケンシングにより確認し、ＨＥＫ−２９３Ｔ細胞の一過性トランスフェクションにより、全長ＩｇＧの発現のために、各構築物のプラスミドＤＮＡを調製した。細胞培養物上清を、トランスフェクション後７日目に採取し、次いで、ＨｉＴｒａｐ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ上で精製した。
【０４１８】
［実施例４］
抗体操作（生殖細胞系列化および翻訳後修飾（ＰＴＭ）部位の除去）
所与のＶＨドメイン配列およびＶＬドメイン配列と最も近縁のヒト生殖細胞系列配列を選択することにより、コンピュータによる生殖細胞系列化を行った。所与の抗体のフレームワーク領域内の位置であって、最も近縁のヒト生殖細胞系列配列と異なると考えられる位置を、ヒト残基で置きかえた。次いで、生殖細胞系列化配列を、組換えにより作製し、標準的な分子生物学法を使用して調べる。
【０４１９】
抗体のＶＨドメイン配列およびＶＬドメイン配列を、ＰＴＭモチーフ、例えば、ＮＳ、ＮＧ、ＤＧ、またはＮｘＳ／Ｔの存在により走査した。同定されたＰＴＭは、重要な残基、例えば、ＮＧモチーフ内のＮまたはＧを突然変異させることにより除去することができる。置きかえられる残基は、異なる基準、例えば、この特定の位置において、生物物理的特性との関連で、同じファミリーであるか、または最も近縁の残基のＶＨ／ＶＬ配列内で、最も高頻度の残基に従い選択される。次いで、組換えにより、変異体を作製し、活性および結合について調べた。
【０４２０】
［実施例５］
抗体アフィニティー
Ｂｉａｃｏｒｅアッセイは、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）に基づき、抗体の、ＧＤＦ１５への結合アフィニティーを決定するのに使用された。
【０４２１】
表面上で、８０００〜１２，０００共鳴単位（ＲＵ）を達成するように、抗ヒトＦｃ捕捉抗体を、４つ全てのフローセル内のＣＭ５チップ上に、０．５ｍｇ／ｍｌで固定化した。抗ｈＧＤＦ１５抗体を、チップ上の流量１０ｍｌ／秒、０．２５〜０．５ｍｇ／ｍｌで捕捉して、フローセル２、３、および４内で、約３０ＲＵを得た。ＧＤＦ１５リガンドを、捕捉された抗体および基準フローセル１上、４５μｌ／秒で、６００〜１２００秒の接触時間にわたり流過させた。２０〜０．１５６ｎＭの範囲で、１対２に系列希釈された、８つの用量について調べた。全てのサイクルは、２回ずつ繰り返し、サイクルの間に、流量を１０μｌ／秒、接触時間を２０秒とする、３ＭのＭｇＣｌ２で再生させた。データは、基準フローセル結果を控除することにより標準化した。データに、ＲＩ（バルク屈折率）を０で一定とする、１：１の反応速度モデルを当てはめた。
【０４２２】
Ｋｄの結果を、表２に示す。
【０４２３】
［実施例６］
エピトープマッピング
抗体エピトープは、ＧＤＦ１５突然変異体を伴う、直接的ＥＬＩＳＡ法により決定した。９６ウェルＥＩＡプレートのウェルを、アルブミン融合ＧＤＦ１５突然変異体でコーティングした。ブロッキングの後、系列希釈された抗ｈＧＤＦ１５ヒト抗体を、ＧＤＦ１５でコーティングされたウェルへと添加するのに続き、周囲温度で、数時間にわたるインキュベーションを行った。抗体結合は、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）とコンジュゲートさせた抗ヒトＩｇＧ抗体と、ＨＲＰ基質とを使用して検出した。
【０４２４】
図６は、ＥＬＩＳＡを使用する、ＧＤＦ１５の断片への結合の喪失、または結合の部分的な阻害と、突然変異とに基づく、抗ＧＤＦ１５抗体のエピトープマッピングについての概要である。被験抗体は、第１欄に示される、ＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｄ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、およびＡＢＧＤＦ１５−Ｇ、ならびにＨｕ０１Ｇ０６（抗ＧＤＦ１５抗体である０１Ｇ０６のヒト化抗体（国際公開第２０１４／１００６８９号パンフレットを参照されたい））であり、以下の野生型ＧＤＦ１５および突然変異体のＧＤＦ１５変異体：野生型ヒトＧＤＦ１５、齧歯類ＧＤＦ１５、カニクイザルＧＤＦ１５、Ｎ末端切断型ｈＧＤＦ１５（アミノ酸２１１〜３０８を有する）、ナックル領域内の突然変異（Ｌ２９４Ｒ、Ｉ２８５Ｒ、またはＳ２３１Ｒ）、リスト領域内の突然変異（Ｑ２４７Ｒ、Ｗ２２８Ｒ、またはＭ２５３Ｒ）、フィンガーチップ領域内の突然変異（Ｄ２８９Ｒ）、およびバックオブハンド領域内の突然変異（Ｓ２７８Ｒ）を有するＧＤＦ１５突然変異体について調べた。「ナックル」、「リスト」、「フィンガーチップ」、および「バックオブハンド」とは、全てのＴＧＦβファミリータンパク質相同な結晶構造に基づき名付けられた三次元ドメイン（正確な直鎖状のアミノ酸ペプチドではない）である（出典：MuellerおよびNickel (2012) Promiscuity and specificity in BMP receptor activation. FEBS Letters 586: 1846〜1859）。Ｌ２９４Ｒ、Ｉ２８５Ｒ、およびＳ２３１Ｒなど、ナックルドメインと関連する突然変異は、結合の喪失、または結合の部分的な阻害を結果としてもたらしたので、ＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｄ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、およびＡＢＧＤＦ１５−Ｇの全ては、ナックルドメインに結合する。これに対し、Ｌ２９４Ｒ突然変異は、既に記載されているヒト化抗ＧＤＦ１５抗体である、Ｈｕ０１Ｇ０６による結合に影響を及ぼさなかった。
【０４２５】
［実施例７］
抗ＧＤＦ１５抗体の、体重に対する効果
抗ＧＤＦ１５抗体の、体重に対する効果について、マウス食欲不振モデルにおいて研究した。
【０４２６】
１３週齢のＤＩＯマウスを、Ｔａｃｏｎｉｃから購入し、研究を通じて、高脂肪食餌で維持した。マウスは、ＡＣＵＣプロトコール下、通常の明暗周期（６：００〜１８：００）で、１匹ずつ飼育した。研究の開始時、平均体重が、陰性対照群と、処置群との間で合致するように、動物を秤量し、体重に基づき群分けした。食物の重量もまた、記録した。０日目に、ＤＮＡハイドロダイナミック注射法（ＨＤＩ）（出典：Bonamassaら、(2011) Hydrodynamic gene delivery and its applications in pharmaceutical research. Pharm Res:694〜701）により、マウスに、尾静脈を介して、０．３μｇの、陰性対照としての空ベクター、またはヒト全長ＧＤＦ１５発現ベクターを注射した。ＨＤＩは、肝細胞の、発現ベクター内の目的の遺伝子へのハイドロダイナミックトランスフェクションをもたらした。血漿ｈＧＤＦ１５レベルは、６日目に決定した。７日目に、体重および食物の重量を記録した。マウスを、同等な平均ｈＧＤＦ１５レベルおよび体重に基づき、再度群分けし、それぞれのマウスに、治療用抗体、または陰性対照としての非関与性抗体を投与した。体重および食物の重量を、週に数回にわたり記録し、研究の終了時に、血漿を回収した。
【０４２７】
食餌誘導性肥満（ＤＩＯ）マウスにおける、ＧＤＦ１５を媒介する食物摂取の抑制および体重減少の阻止における、ＡＢＧＤＦ１５−Ａの効果の時間経過を、図１Ａ〜図１Ｂに示す。ヒト全長ＧＤＦ１５発現ベクターのハイドロダイナミック注射（ＨＤＩ）により、ヒトＧＤＦ１５を、肝臓内で発現させ、７日目までに、約１０％の体重減少をもたらしてから、抗ＧＤＦ１５抗体の投与を行った（図中の０日目）。マウスの１つの群に、陰性対照としての空ベクター（ベクター）を注射した。個別のマウスについて、体重および血漿ヒトＧＤＦ１５レベルを決定し、同等な平均体重およびＧＤＦ１５レベルに基づき、動物を、２つの群へと分けた。抗体（ＡＢＧＤＦ１５−Ａまたは非関与性の対照抗体）を、１０ｍｇ／ｋｇで静脈内投与し、食物摂取および体重をモニタリングした。
【０４２８】
図１Ａは、注射後の日数（１、３、５、７、１０、１１、および１５日）後における、１日当たりの食物摂取（グラム）について描示する棒グラフである。３つの群の測定値を、抗体注射後の各時点について、左から右へ：ベクター＋媒体；ｈＧＤＦ１５＋対照ＩｇＧ；およびｈＧＤＦ１５＋ＡＢＧＤＦ１５−Ａと提示する。
【０４２９】
図１Ｂは、注射後の日数（１、３、５、７、１０、１１、および１５日）後における、体重のパーセント変化について描示する折れ線グラフである。３つの群の測定値を、被験注射後の各時点について、ベクター＋媒体；ｈＧＤＦ１５＋対照ＩｇＧ；およびｈＧＤＦ１５＋ＡＢＧＤＦ１５−Ａと提示する。
【０４３０】
統計学的解析は、いずれの研究についても、スチューデントのｔ検定を使用して行った［図中、＊、＊＊：ＡＢＧＤＦ１５−Ａ対媒体について、ｐ＜０．０５および０．０１；＆、＆＆、＆＆＆：ＡＢＧＤＦ１５−Ａ対対照ＩｇＧについて、ｐ＜０．０５、０．０１、および０．００１である］。
【０４３１】
ＨＤ１モデルにおける、ＧＤＦ１５を媒介する食欲不振の阻止における、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂの効果の、時間経過および用量応答性を、図２Ａ〜図２Ｂに描示する。ＨＤＩ注射により、ヒトＧＤＦ１５を、肝臓内で発現させ、７日目までに、約１０％の体重減少をもたらしてから、抗ＧＤＦ１５抗体の投与を行った（図中の０日目）。ＡＢＧＤＦ１５−ＢおよびＡＢＧＤＦ１５−Ｃに対する親抗体、または陰性対照抗体を、表示の濃度で注射し、食物摂取および体重をモニタリングした。図２Ａ〜図２Ｂは、抗体注射後の日数（１、４、８、１２、および１６日）後における、累積食物摂取（グラム）および体重のパーセント変化のそれぞれについて描示する折れ線グラフである。図２Ａ〜図２Ｂには、以下の処置群：ベクター＋媒体；ｈＧＤＦ１５＋対照ＩｇＧ；ｈＧＤＦ１５＋親抗体（３０ｍｇ／ｋｇ）；ｈＧＤＦ１５＋親抗体（１０ｍｇ／ｋｇ）；ｈＧＤＦ１５＋親抗体（３ｍｇ／ｋｇ）；およびｈＧＤＦ１５＋親抗体（１ｍｇ／ｋｇ）を例示した。親抗体は、ＧＤＦ１５を媒介する食欲不振の影響を、用量依存的に反転させた。
【０４３２】
親被験抗体は、ＡＢＧＤＦ１５−ＢおよびＡＢＧＤＦ１５−Ｃと共に、同一な重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲを共有するが、フレームワーク領域内には、差異も存在する。親抗体の軽鎖のアミノ酸配列は、以下：
【０４３３】
【化１】
2019521647.tif 000032
の通りである。
【０４３４】
図３Ａ〜図３Ｂには、ＨＤ１モデルにおける、天然ＧＤＦ１５を媒介する食欲不振の阻止における、ＡＢＧＤＦ１５−Ｄの効果の時間経過。ＨＤＩ注射により、ヒトＧＤＦ１５を、肝臓内で発現させ、７日目までに、約１０％の体重減少をもたらしてから、抗ＧＤＦ１５抗体の投与を行った（図中の０日目）。ＡＢＧＤＦ１５−Ｄまたは陰性対照抗体を、２０ｍｇ／ｋｇで注射し、食物摂取および体重をモニタリングした。図３Ａ〜図３Ｂは、注射後の日数後における、１日当たりの食物摂取（グラム）および体重のパーセント変化のそれぞれについて描示する折れ線グラフおよび棒グラフである。図３Ａ〜図３Ｂには、以下の群：ベクター＋媒体；ｈＧＤＦ１５＋対照ＩｇＧ；ｈＧＤＦ１５＋ＡＢＧＤＦ１５−Ｄを、各時点について例示した。ＡＢＧＤＦ１５−Ｄは、ＧＤＦ１５を媒介する食欲不振の影響を反転させた。
【０４３５】
図４は、ＤＩＯマウスにおける、ヒトＧＤＦ１５を媒介する体重減少の阻止における、ＡＢＧＤＦ１５−ＢおよびＡＢＧＤＦ１５−Ｃの効果の時間経過について描示する折れ線グラフである。ＧＤＦ１５は、ＨＤＩ注射により、ＤＩＯマウスにおいて、過剰発現させた。抗ＧＤＦ１５抗体を、２０ｍｇ／ｋｇで静脈内投与し、体重をモニタリングした。以下の群：ベクター＋媒体；ｈＧＤＦ１５＋対照ＩｇＧ；ｈＧＤＦ１５＋ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、およびｈＧＤＦ１５＋ＡＢＧＤＦ１５−Ｃを、各時点について比較した。ＡＢＧＤＦ１５−ＢおよびＡＢＧＤＦ１５−Ｃのいずれも、ＧＤＦ１５を媒介する体重減少を反転させた。
【０４３６】
図５は、ＤＩＯマウスにおける、ヒトＧＤＦ１５を媒介する体重減少の阻止における、ＡＢＧＤＦ１５−Ｇの効果の時間経過について描示する折れ線グラフである。ＧＤＦ１５は、ＨＤＩ注射により、ＤＩＯマウスにおいて、持続的に過剰発現させた。ＡＢＧＤＦ１５−Ｇを、２０ｍｇ／ｋｇで静脈内投与し、体重をモニタリングした。以下の群：ベクター＋媒体；ｈＧＤＦ１５＋対照ＩｇＧ；およびｈＧＤＦ１５＋ＡＢＧＤＦ１５−Ｇを、各時点について例示した。ＡＢＧＤＦ１５−Ｇは、ＧＤＦ１５を媒介する体重減少を反転させた。
【０４３７】
下記の表は、上記で記載した同様のＨＤＩ実験の、抗体処置後のマウスにおける、対照ＩｇＧと比べた、体重および体重増大のパーセント変化の、一対一の比較についての概要を提示する。
【０４３８】
このｉｎ  ｖｉｖｏモデルを使用して、抗ＧＤＦ１５抗体の活性を比較した。
【０４３９】
【表５】
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【０４４０】
まとめると、本明細書の抗ＧＤＦ１５被験抗体、例えば、ＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｄ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、およびＡＢＧＤＦ１５−Ｇ、は、これらのマウスモデルにおいて、ＧＤＦ１５を媒介する、食物摂取の抑制および体重減少を反転させることが可能であった。
【０４４１】
参照による組込み
本明細書で引用される全ての参考文献であって、特許、特許出願、論文、教科書などを含む参考文献、およびそれらにおいて引用された参考文献は、それらについて既にではない程度において、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる。
【０４４２】
同等物
前出の明細書は、当業者が、本発明を実施することを可能とするのに十分であると考えられる。前出の記載および実施例は、本発明のある種の好ましい実施形態について詳述する。しかし、前出の記載および実施例が、本文中でいかに詳述されているように見えるとしても、本発明は、多くの様式で実施することができ、本発明は、添付の特許請求の範囲およびそれらの任意の同等物に従うとみなされるべきであることが察知されるであろう。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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