(57)【要約】本開示は、高マンノース型、ハイブリッド型および複合型の多様なＮ−グリカンを作製するための新規モジュール方法に関する。本開示は、酸化アルミニウムでコーティングされたスライド上にスポットされた、合成されたＮ−グリカンの例示的なアレイにも関する。これらのアレイを用いることにより、合成されたＮ−グリカンとＨＩＶ−１中和抗体等のグリカン結合分子との結合相互作用を検出および解析することができる。本開示は、アレイ上の様々なタイプの分子に結合する作用物質を特定するための方法およびそれらの作用物質に結合するアレイ上の分子の構造要素を定義することにも関する。本明細書中に提供されるアレイおよび方法は、一般的なエピトープの特定のため、創薬のため、および分析ツールとして、使用され得る。本開示は、ＨＩＶなどの病理学的疾患の検出、診断、反復モニタリングおよび予防において有用なグリカンおよびエピトープ決定基も提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１９８】
2019515876.tif 000201
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８の各々は、独立して、直交保護基または永久保護基からなる群より選択され；Ｒ６における前記直交保護基の各々は、好ましくは、パラ−メトキシベンジルエーテル（ＰＭＢ）、メトキシフェニルエーテル（ＰＭＰ）、レブリノイル（Ｌｅｖ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、アリルエーテル（ａｌｌｙｌ）およびシリルエーテルからなる群より選択され；Ｒ７とＲ８は、融合して、４−ＯＨおよび／または６−ＯＨグリカン構造を形成するように開裂され得るベンジリデン環を形成し；
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５の各々は、独立して、前記直交保護基を除去するために用いられる条件下で安定な永久保護基であり、好ましくは、ベンジル（Ｂｎ）またはアセチル（Ａｃ）であり；
Ｒ１は、前記直交保護基を除去するために用いられる条件下で安定な永久保護基であり、好ましくは、ベンジル（Ｂｎ）またはアセチル（Ａｃ）であるか；またはα１，６結合を介して接続された保護されたフコシド残基であり；
Ｘは、−ＯＲ９であり；Ｒ９は、−Ｈ、または−Ｎ３およびＮＲ１０からなる群で終結する必要に応じて置換されるＣ３−Ｃ１０アルキル鎖であり；Ｒ１０は、−Ｈまたはベンジル（Ｂｎ）またはカルボベンゾイル（Ｃｂｚ）であり；
ＹおよびＺは、−ＮＨＲ１１であり；Ｒ１１は、好ましくは、９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、アリルオキシカルボニル（ａｌｌｏｃ）、［２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル］（ｔｒｏｃ）、アセチル（Ａｃ）、フタルイミド（Ｐｈｔｈ）、カルボベンジルオキシ（Ｃｂｚ）およびｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）からなる群より選択される）
を有する、直交的に保護されたＭａｎβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１コア三糖。
【請求項２】
一般式（ＩＩ）
【化１９９】
2019515876.tif 000202
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４の各々は、−Ｈ、または前記直交保護基を除去するために用いられる条件下で安定な永久保護基であり、好ましくは、ベンジル（Ｂｎ）もしくはアセチル（Ａｃ）もしくはベンゾイル（Ｂｚ）であるか、または独立して、
【化２００】
2019515876.tif 000203
から選択され、式中、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８の各々は、−Ｈ、または独立して、前記直交保護基を除去するために用いられる条件下で安定な永久保護基であり、好ましくは、ベンジル（Ｂｎ）またはアセチル（Ａｃ）またはベンゾイル（Ｂｚ）であり；
Ｒ９およびＲ１０の各々は、−Ｈ、または独立して、前記直交保護基を除去するために用いられる条件下で安定な永久保護基であり、好ましくは、ベンジル（Ｂｎ）もしくはアセチル（Ａｃ）もしくはベンゾイル（Ｂｚ）、またはα１，３結合を介してＧｌｃＮＡｃにおよび／もしくはα１，２結合を介してガラクトースに接続された保護されたフコシド残基であり；
Ｒ１１は、−Ｈ、Ｍｅ（メチル）またはＥｔ（エチル）であり；
Ｒ１２は、−Ｈ、または独立して、前記直交保護基を除去するために用いられる条件下で安定な永久保護基であり、好ましくは、ベンジル（Ｂｎ）もしくはアセチル（Ａｃ）もしくはベンゾイル（Ｂｚ）、またはα２，６結合を介して接続された保護されたＮｅｕ５Ａｃ残基であり；
Ｒ１３は、−Ｈ、または独立して、前記直交保護基を除去するために用いられる条件下で安定な永久保護基であり、好ましくは、ベンジル（Ｂｎ）もしくはアセチル（Ａｃ）もしくはベンゾイル（Ｂｚ）であるか、または独立して、
【化２０１】
2019515876.tif 000204
から選択され、
Ｘは、−ＯＲ１４または−ＳＲ１５または脱離基であり；
Ｒ１４は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたは置換アリール；保護基、例えば、シリルまたは置換シリル、好ましくは、テキシルジメチルシリル（ＴＤＳ）、ｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＳ）、ｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）、トリメチルシリル（ＴＭＳ）またはトリエチルシリル（ＴＥＳ）；メチル（Ｍｅ）、アセチル（Ａｃ）、ベンジル（Ｂｎ）、２−ナフチルメチル（ｎａｐ）または１−ナフチルメチル（１−Ｎａｐ）；パラ−メトキシベンジルエーテル（ＰＭＢ）、メトキシフェニルエーテル（ＰＭＰ）、アリルエーテル（ａｌｌｙｌ）、またはアノマー脱離基、例えば、トリクロロアセトイミデート−Ｃ（ＮＨ）−ＣＣｌ３、フェニルトリフルオロアセトイミデート−Ｃ（ＮＰｈ）−ＣＦ３、トリフルオロアセトイミデート−Ｃ（ＮＨ）−ＣＦ３；チオアルキル、チオフェニル、より好ましくは、フルオリドであり；
Ｒ１５は、Ｈ、アルキル、アリールまたは置換アリール、好ましくは、メチル、エチル、フェニル、トシルまたはトリルであり；
Ｙは、−ＮＨＲ１６であり；Ｒ１６は、好ましくは、９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、アリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）、［２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル］（Ｔｒｏｃ）、アセチル（Ａｃ）、フタルイミド（Ｐｈｔｈ）、カルボベンジルオキシ（Ｃｂｚ）およびｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）からなる群より選択される）；
を有する、Ｄ１およびＤ２／Ｄ３アームモジュールであって、
ここで、「Ｄ１およびＤ２／Ｄ３アームモジュール」は、Ｎ−グリカンを指す、Ｄ１およびＤ２／Ｄ３アームモジュール。
【請求項３】
グリカンアレイの作製に適した多様なグリカンを合成するための方法であって、前記方法は、
ａ）請求項１に記載の直交的に保護されたコア三糖ならびに請求項２に記載のＤ１およびＤ２／Ｄ３アームモジュールを作製する工程、
ｂ）請求項１に記載の直交的に保護されたコア三糖の３−Ｏ位または／および６−Ｏ位に対して、請求項２に記載のＤ１およびＤ２／Ｄ３アームモジュールの立体選択的かつ位置選択的なグリコシル化を行う工程、
ｃ）保護基をアンマスクまたは除去して、高マンノース型グリカン、ハイブリッド型グリカンならびに二分岐、三分岐および四分岐複合型グリカンを得る工程、および
ｄ）酵素的シアリル化を行って、シアリル化されたグリカンのライブラリーを作製する工程
を含む、方法。
【請求項４】
請求項２に記載のＤ１およびＤ２／Ｄ３アームモジュールを調製する方法であって、前記方法は、化学的合成および化学酵素的合成を含む、方法。
【請求項５】
前記モジュールが、
【化２０２】
2019515876.tif 000205
からなる群より選択される、請求項２に記載のＤ１およびＤ２／Ｄ３アームモジュール。
【請求項６】
式（ＩＩＩ）
【化２０３】
2019515876.tif 000206
（式中、
Ｒ１およびＲ２の各々は、独立して、−Ｈまたはアセチル（Ａｃ）またはベンゾイル（Ｂｚ）から選択され；
Ｘは、−ＯＲ３であり、Ｒ３は、Ｈ、ベンジル（Ｂｎ）、２−ナフチルメチル（Ｎａｐ）、１−ナフチルメチル（１−Ｎａｐ）；パラ−メトキシベンジルエーテル（ＰＭＢ）、メトキシフェニルエーテル（ＰＭＰ）またはアリルエーテル（ａｌｌｙｌ）である）
を有する化学的に合成されたアクセプター基質の段階的な酵素的伸長をさらに含む、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記酵素が、独立して、β（１→４）ガラクトシルトランスフェラーゼ、α（１→３）フコシルトランスフェラーゼ、α（１→２）フコシルトランスフェラーゼ、β（１→３）Ｎ−アセチルグルコサミントランスフェラーゼ、α（２→３）シアリルトランスフェラーゼおよびα（２→６）シアリルトランスフェラーゼからなる群より選択される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
請求項３に記載の方法に従って調製された炭水化物部分のアレイであって、前記アレイは、
複数のグリカンを含み、各グリカン部分は、基材上の別個の位置に堆積されており、前記多様なグリカンは、高マンノース型、ハイブリッド型および複合型のホモおよび／または混合のＮ−グリカンを含む、アレイ。
【請求項９】
前記グリカンが、請求項３、４、６および７のいずれか１項に記載の方法によって調製された高マンノース型、ハイブリッド型および複合型のホモおよび／または混合のＮ−グリカンを含む、請求項８に記載のアレイ。
【請求項１０】
ヘテログリカンの結合挙動を検出する方法であって、請求項８に記載のアレイを１つまたは複数のヘテログリカンと接触させる工程を含む、方法。
【請求項１１】
前記グリカンが、ＨＩＶ−１広域中和抗体によって認識されるグリカンをさらに含む、請求項９に記載のアレイ。
【請求項１２】
前記基材が、酸化アルミニウムでコーティングされたガラス（ＡＣＧ）表面を含む、請求項８に記載のアレイ。
【請求項１３】
前記グリカンが、図Ｓ１１に示される化合物Ｇ１〜Ｇ３３のうちの１つもしくはそれを超える化合物および／または図Ｓ１７に示される化合物Ｉ〜ＸＩのうちのいずれか１つもしくはそれを超える化合物を含む、請求項８または１１のいずれか１項に記載のアレイ。
【請求項１４】
前記グリカンが、図Ｓ１１に示される化合物Ｇ１〜Ｇ３３のうちの１つまたはそれを超える化合物を含み得るかまたは除外し得、図Ｓ１７に示される化合物Ｉ〜ＸＩのうちのいずれか１つまたはそれを超える化合物を含み得るかまたは除外し得る、請求項９に記載のアレイ。
【請求項１５】
ワクチンの標的を作製するための方法であって、前記方法は、
ＨＩＶ−１中和抗体によって認識される最適な細胞表面グリカンをスクリーニングし、特定する工程を含み、前記方法は、前記ＨＩＶ抗体を請求項８、９、１１、１２または１３のいずれか１項に記載のアレイと接触させる工程をさらに含む、方法。
【請求項１６】
前記基材が、表面、固体表面、不透明な固体、選択された波長の可視光線もしくは非可視光線を通す固体、粒子、微小気泡またはビーズから選択される、請求項８に記載のアレイ。
【請求項１７】
前記複数のＮ−グリカンが、前記基材上にコーティングされているか、またはファンデルワールス相互作用もしくは疎水性相互作用によって前記基材に接着されている、請求項８に記載のアレイ。
【請求項１８】
基材上に固定化されたＮ−グリカンのアレイであって、前記アレイは、
（ａ）基材を提供する工程；
（ｂ）リンカーを介して前記Ｎ−グリカンを前記基材に付着する工程；および
（ｃ）複数のＮ−グリカン部分を前記基材の表面上の別個の位置に固定化する工程
を含む方法によって製作される、アレイ。
【請求項１９】
請求項１８に記載のアレイを特徴づける方法であって、前記固定化されたＮ−グリカン部分を前記グリカンに対する標識抗体と接触させる工程、前記抗体と前記グリカンとの複合体を形成する工程、および前記複合体を検出する工程を含む、方法。
【請求項２０】
前記標識抗体が、酵素、蛍光標識、化学発光標識またはナノ粒子標識を含む標識を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
ＨＩＶ抗体を検出する方法であって、前記方法は、
（ａ）請求項１８に記載のアレイを提供する工程；
（ｂ）前記アレイをＨＩＶ抗体と接触させる工程；
（ｃ）前記ＨＩＶ抗体と前記アレイ上のグリカンとの複合体を形成する工程；
（ｄ）前記ＨＩＶ抗体−グリカンアレイ複合体を標識と接触させる工程；および
（ｅ）前記標識を検出する工程
を含む、方法。
【請求項２２】
前記標識が、酵素、フルオロフォア、化学発光部分またはナノ粒子をさらに含む標識抗体である、請求項２１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本願は、２０１６年３月８日に出願された米国仮出願第６２／３０５，４４１号の優先権の利益を主張する。その内容全体が本明細書中に参照によって援用される。
【０００２】
分野
本開示は、概して、高マンノース型、ハイブリッド型および複合型の高度に多様なＮ−グリカンを合成するための化学的方法および化学酵素的方法、前記グリカンから作製されたアレイ、ならびに前記アレイの使用に関する。詳細には、本開示は、新規のＮ−グリカンモジュール合成アプローチを用いて、酸化アルミニウムでコーティングされた基材上にＮ−グリカンアレイを合成する方法、ならびにＨＩＶ広域中和抗体などのグリカン結合分子による結合反応を検出および解析するための前記Ｎ−グリカンアレイの使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
背景
タンパク質のＮ結合型グリコシル化は、真核生物と原核生物の両方に見られる基本的かつ重要な翻訳後修飾である。このタンパク質修飾は、ポリペプチド鎖のアスパラギン残基へのオリゴ糖の共有結合をもたらす。グリカンは、通常、細胞とそれらの環境の間の最も重要な境界面である。グリカンは、あらゆる生物系の極めて重大な構成物として、タンパク質フォールディング、細胞シグナル伝達、受精、胚形成、ならびに細胞の増殖およびそれらの特定組織への組織化などの必須の生物学的プロセスのほとんどに関わっている。異常な細胞表面グリコシル化および／またはグリカンプロファイルは、通常、癌およびアテローム性動脈硬化症などの疾患に結びつく。したがって、グリコシル化の変化は、ヒトの病態発生の初期の時点およびおそらく重大な時点の指標である。したがって、炭水化物を洞察することは、生物学的および病理学的なプロセスに結びつき、ヒトの疾患の診断法および治療法の開発に結びつく。
【０００４】
複合オリゴ糖の生合成は、一般に、グリカンの基本単位（単糖類）の可変かつ多彩な結合性に主に起因して、著しい複雑さおよび多様性をもたらす。細胞を特定するこれらのグリコシル化された分子としては、糖タンパク質および糖脂質が挙げられ、それらは、様々なグリカン結合分子（例えば、レクチン、抗グリカン抗体、化学的化合物ならびに他のグリカンおよび糖脂質など）によって特異的に認識される。しかしながら、これらの相互作用が桁外れに複雑であること、ならびに詳細に明らかにされたグリカンライブラリーおよび分析方法が存在しないことが、グライコミクスの発展の大きな障害であると示されている。さらに、天然に存在するグリカンは、通常、微量で単離され、異性体の混合物としてのみ存在する。したがって、前記天然に存在するグリカンの利用可能性は限られており、純度も限られているせいで、十分に特徴づけられたオリゴ糖の信頼できる起源として使用できない。したがって、新規の合成方法が、生物学的および構造的な用途のための多様なグリカンライブラリーを調製するために有用である。
【０００５】
ヌクレオチドおよびタンパク質のマイクロアレイの開発は、ゲノム、遺伝子発現およびプロテオミクスの研究に革命を起こした。同様に、グリカンのマイクロアレイの開発も、多様な範囲のグリカン結合分子の特異性の前例のないハイスループットな探索を可能にした。アレイ上にグリカンを組織的に配列することによって、多価の提示を介して低親和性のタンパク質−グリカン相互作用の効率的な探査が可能になる。それらが確立された以後、様々なタイプの「アレイ」が開発され、それらとしては、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）活性化スライドガラス上に６００種を超えるオリゴ糖を含む、Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ  ｏｆ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｌｙｃｏｍｉｃｓ（ＣＦＧ）から入手可能なものが挙げられる。しかしながら、種々のアレイ形式に使用されるスペーサー基および固定化化学は、明らかに、グリカン提示の密度、分布および配向のばらつきをもたらし、これは、グリカン−タンパク質相互作用における結合親和性およびさらには特異性に劇的に影響する。ゆえに、異なるアレイプラットフォーム間の相互比較、および検出感度、例えば、ヘテロ−リガンド結合の検出感度を改善するための新しいグリカンアレイの開発が、特に重要である。さらに、製薬会社および研究機関は、抗体、レセプターおよび他の生体分子をはじめとしたグリカン結合分子への結合に寄与するグリカンの構造要素の解析を促進するアレイをはじめ、様々なスクリーニングおよび創薬の用途に対してグリカンアレイから大いに恩恵を受けるだろう。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
要旨
本開示は、高マンノース型、ハイブリッド型および複合型の多様なＮ結合型オリゴ糖（Ｎ−グリカン）の組成物およびそれらを調製する方法を提供する。本開示の方法は、化学合成および／または酵素的合成を含む。ある特定の実施形態において、１つまたはそれを超える前記合成されたＮ−グリカンは、基材上の所与の領域にスポットされ（「スポット」として知られる）、ここで、１つまたはそれを超える前記スポットは、例えば、抗体およびウイルスなどのグリカン結合分子によって認識される最適なグリカンの結合プロファイリング、迅速スクリーニングおよび同定において使用するための、Ｎ−グリカンアレイを作製するためにプールされる。
【０００７】
１つの態様において、本開示は、「Ｄ１およびＤ２／Ｄ３アームモジュール」と呼ばれる戦略的に保護された基本単位が、直交的に保護されたＭａｎβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１コアの３−Ｏおよび／または６−Ｏ位において位置特異的および立体特異的にグリコシル化され得る方法を提供する。ある特定の実施形態において、得られたグリカンは、最終的なオリゴ糖生成物を得るために脱保護および／もしくはアンマスクされ得るか、またはある特定の実施形態において、最終的な複合オリゴ糖生成物を得るために、酵素的に選択的に伸長され得る。ある特定の実施形態において、最終的なオリゴ糖生成物は、その構造的完全性を復元するためおよびアレイ上への固定化のための柄としての機能を果たすために、還元末端にアミノアルキルリンカーが備わっているか、または代わりに、ある特定の他の実施形態において、前記生成物は、キャリアタンパク質に結合体化され得る。
【０００８】
１つの態様において、好ましい直交的に保護されたＭａｎβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１コア三糖は、少なくとも２つの直交保護基を含み、式（Ｉ）
【化１】
2019515876.tif 000002
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８の各々は、独立して、直交保護基または永久保護基からなる群より選択され；Ｒ６における直交保護基の各々は、好ましくは、パラ−メトキシベンジルエーテル（ＰＭＢ）、メトキシフェニルエーテル（ＰＭＰ）、レブリノイル（Ｌｅｖ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、アリルエーテル（Ａｌｌｙｌ）およびシリルエーテルから選択され；Ｒ７とＲ８は、融合して、４−ＯＨおよび／または６−ＯＨを形成するように開裂され得るベンジリデン環を形成し；
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５の各々は、独立して、直交保護基を除去するために用いられる条件下で安定な永久保護基であり、好ましくは、ベンジル（Ｂｎ）またはアセチル（Ａｃ）であり；
Ｒ１は、直交保護基を除去するために用いられる条件下で安定な永久保護基であり、好ましくは、ベンジル（Ｂｎ）またはアセチル（Ａｃ）であるか；またはα１，６結合を介して接続された保護されたフコシド残基であり；
Ｘは、−ＯＲ９であり；Ｒ９は、−Ｈ、または−Ｎ３もしくはＮＲ１０からなる基で終結する必要に応じて置換されるＣ３−Ｃ１０アルキル鎖であり；Ｒ１０は、−Ｈまたはベンジル（Ｂｎ）またはカルボベンゾイル（Ｃｂｚ）であり；
ＹおよびＺは、−ＮＨＲ１１であり；Ｒ１１は、好ましくは、９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、アリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）、［２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル］（Ｔｒｏｃ）、アセチル（Ａｃ）、フタルイミド（Ｐｈｔｈ）、カルボベンジルオキシ（Ｃｂｚ）またはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）からなる群より選択される）
を有する。
【０００９】
本明細書中で使用されるとき、「永久保護基」は、通常は官能基を官能化し得る条件に曝されたときに前記官能基の官能化を防ぐ化学的部分であり得る。永久保護基は、選択的に除去されて、得られた分子において官能基を露出し得る。いくつかの態様において、露出した官能基は、別の部分とさらに反応し得るか、または官能化されないままであり得る。
【００１０】
第２の態様において、好ましいＤ１およびＤ２／Ｄ３アームモジュールは、一般式（ＩＩ）
【化２】
2019515876.tif 000003
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４の各々は、−Ｈ、または直交保護基を除去するために用いられる条件下で安定な永久保護基であり、好ましくは、ベンジル（Ｂｎ）もしくはアセチル（Ａｃ）もしくはベンゾイル（Ｂｚ）であるか、または独立して、
【化３】
2019515876.tif 000004
から選択され、式中、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８の各々は、−Ｈ、または独立して、直交保護基を除去するために用いられる条件下で安定な永久保護基であり、好ましくは、ベンジル（Ｂｎ）またはアセチル（Ａｃ）またはベンゾイル（Ｂｚ）であり；
Ｒ９およびＲ１０の各々は、−Ｈ、または独立して、直交保護基を除去するために用いられる条件下で安定な永久保護基であり、好ましくは、ベンジル（Ｂｎ）もしくはアセチル（Ａｃ）もしくはベンゾイル（Ｂｚ）、またはα１，３結合を介してＧｌｃＮＡｃにおよび／もしくはα１，２結合を介してガラクトースに接続された保護されたフコシド残基であり；
Ｒ１１は、−ＨまたはＭｅ、Ｅｔであり；
Ｒ１２は、−Ｈ、または独立して、直交保護基を除去するために用いられる条件下で安定な永久保護基であり、好ましくは、ベンジル（Ｂｎ）もしくはアセチル（Ａｃ）もしくはベンゾイル（Ｂｚ）、またはα２，６結合を介して接続された保護されたＮｅｕ５Ａｃ残基であり；
Ｒ１３は、−Ｈ、または独立して、直交保護基を除去するために用いられる条件下で安定な永久保護基であり、好ましくは、ベンジル（Ｂｎ）もしくはアセチル（Ａｃ）もしくはベンゾイル（Ｂｚ）であるか、または独立して、
【化４】
2019515876.tif 000005
から選択され、
Ｘは、−ＯＲ１４または−ＳＲ１５であり、
Ｒ１４は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたは置換アリール；保護基、例えば、シリルまたは置換シリル、好ましくは、テキシルジメチルシリル（ＴＤＳ）、ｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＳ）、ｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）、トリメチルシリル（ＴＭＳ）またはトリエチルシリル（ＴＥＳ）；メチル（Ｍｅ）、アセチル（Ａｃ）、ベンジル（Ｂｎ）、２−ナフチルメチル（Ｎａｐ）または１−ナフチルメチル（１−Ｎａｐ）；パラ−メトキシベンジルエーテル（ＰＭＢ）、メトキシフェニルエーテル（ＰＭＰ）、アリルエーテル（Ａｌｌｙｌ）、またはアノマー脱離基、例えば、フルオリド−Ｆ、トリクロロアセトイミデート−Ｃ（ＮＨ）−ＣＣｌ３、フェニルトリフルオロアセトイミデート−Ｃ（ＮＰｈ）−ＣＦ３、トリフルオロアセトイミデート−Ｃ（ＮＨ）−ＣＦ３；チオアルキル、チオフェニルであり；
Ｒ１５は、Ｈ、アルキル、アリールまたは置換アリール、好ましくは、メチル、エチル、フェニル、トシルまたはトリルであり、
Ｙは、−ＮＨＲ１６であり；Ｒ１６は、好ましくは、９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、アリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）、［２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル］（Ｔｒｏｃ）、アセチル（Ａｃ）、フタルイミド（Ｐｈｔｈ）、カルボベンジルオキシ（Ｃｂｚ）またはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）からなる群より選択される）
を有する。
【００１１】
前記第２の態様によると、一般式（ＩＩ）のＤ１およびＤ２／Ｄ３アームモジュールは、化学的に、または好ましくは、化学酵素的に調製される。
【００１２】
前記第２の態様の別の実施形態において、化学的に合成されたＤ１およびＤ２／Ｄ３アームモジュールの典型は、
【化５】
2019515876.tif 000006
からなる群より選択される。
【００１３】
前記第２の態様の別の実施形態において、Ｄ１およびＤ２／Ｄ３アームモジュールの化学酵素的合成は、式（ＩＩＩ）の化学的に調製されたアクセプター基質
【化６】
2019515876.tif 000007
（式中、Ｒ１およびＲ２の各々は、独立して、−Ｈまたは保護基のアセチル（Ａｃ）もしくはベンゾイル（Ｂｚ）から選択され；
Ｘは、−ＯＲ３であり、Ｒ３は、Ｈ、ベンジル（Ｂｎ）、２−ナフチルメチル（Ｎａｐ）または１−ナフチルメチル（１−Ｎａｐ）；パラ−メトキシベンジルエーテル（ＰＭＢ）、メトキシフェニルエーテル（ＰＭＰ）、アリルエーテル（Ａｌｌｙｌ）である）
から始まった。
【００１４】
前記第２の態様の別の実施形態において、式（ＩＩＩ）の化学酵素的に調製されたアクセプター基質は、酵素的伸長に供され、ここで、それらの酵素は、独立して、β（１→４）ガラクトシルトランスフェラーゼ、α（１→３）フコシルトランスフェラーゼ、α（１→２）フコシルトランスフェラーゼ、β（１→３）Ｎ−アセチルグルコサミントランスフェラーゼ、α（２→３）シアリルトランスフェラーゼおよびα（２→６）シアリルトランスフェラーゼからなる群より選択される。
【００１５】
別の実施形態において、式（ＩＩ）の化学酵素的に調製されたモジュールは、アセテート型またはベンゾエート型に変換され得る。
【００１６】
別の実施形態において、式（ＩＩ）の完全にアセチル化されたまたはベンゾイル化されたモジュールは、還元末端修飾を受けて、アノマー脱離基（例えば、トリクロロアセトイミデート−Ｃ（ＮＨ）−ＣＣｌ３、フェニルトリフルオロアセトイミデート−Ｃ（ＮＰｈ）−ＣＦ３、トリフルオロアセトイミデート−Ｃ（ＮＨ）−ＣＦ３；チオアルキル、チオフェニルおよびより好ましいフルオリド−Ｆ）を形成し得る。
【００１７】
第３の態様において、式（ＩＩ）の化学的または化学酵素的に調製されたＤ１およびＤ２／Ｄ３アームモジュールは、独立して、式（Ｉ）のＭａｎβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１コア三糖の３−Ｏおよび／または６−Ｏ位における化学的グリコシル化のために選択される。
【００１８】
本開示は、少なくとも２つの直交保護基を含む直交的に保護されたＭａｎβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１コアも提供し、式（ＩＶ）
【化７】
2019515876.tif 000008
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６の各々は、独立して、直交保護基または永久保護基からなる群より選択され；Ｒ４における直交保護基の各々は、好ましくは、パラ−メトキシベンジルエーテル（ＰＭＢ）、メトキシフェニルエーテル（ＰＭＰ）、レブリノイル（Ｌｅｖ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、アリルエーテル（Ａｌｌｙｌ）およびシリルエーテルから選択され；Ｒ５とＲ６は、融合して、４−ＯＨおよび／または６−ＯＨを形成するように開裂され得るベンジリデン環を形成し；
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３の各々は、独立して、直交保護基を除去するために用いられる条件下で安定な永久保護基であり、好ましくは、ベンジル（Ｂｎ）またはアセチル（Ａｃ）であり；
Ｘは、−ＯＲ７であり；Ｒ７は、−Ｈまたはベンジル（Ｂｎ）またはアリル（Ａｌｌ）であり；
Ｙは、−ＮＨＲ８であり；Ｒ８は、好ましくは、９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、アリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）、［２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル］（Ｔｒｏｃ）、アセチル（Ａｃ）、フタルイミド（Ｐｈｔｈ）、カルボベンジルオキシ（Ｃｂｚ）またはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）からなる群より選択される）
を有する。
【００１９】
いくつかの実施形態において、種々の直交保護基の各々の切断を引き起こすのに有効な条件は、好ましくは、オリゴ糖基本単位上に存在する他の保護基の切断を引き起こさない。
【００２０】
Ｎ−グリカンコア構造は、必要に応じて、スペーサーまたはリンカーが備わっており、アレイ上への効率的な固定化およびキャリアタンパク質への結合体化を促進するために還元末端に−（ＣＨ２）５ＮＨ２を含む。本開示は、ホスホネート化学を介した酸化アルミニウムアレイ上への効率的な固定化を促進するためのスペーサー（例えば、−（ＣＨ２）ｎＮＨ−ＣＯ−Ｏ−［（ＣＨ２）２−Ｏ−（ＣＨ２）２］２−３−Ｏ−ＰＯ（ＯＨ）２）も提供する。
【００２１】
別の態様において、本開示は、直交的に保護されたＭａｎβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１コアを作製するための方法を提供する。
【００２２】
別の態様において、本開示は、Ｄ１およびＤ２／Ｄ３アームモジュールを作製するための化学的方法および化学酵素的方法を提供する。
【００２３】
１つの態様において、本開示は、数千の構造的に異なる複合型Ｎ結合型オリゴ糖（Ｎ−グリカン）を調製するためのストラテジーを提供し、ここで、その材料は、（１）炭水化物結合分子、例えば、レクチン、ガラクトース結合タンパク質（ガレクチン）、抗グリカン抗体、ＨＩＶ広域中和抗体、および好ましくはインフルエンザ赤血球凝集素、化学的化合物、ならびに他のグリカンおよび糖脂質の結合特異性を測定するためのグリカンアレイの開発；（２）質量分析を用いたグリカンの配列決定のための標準；（３）治療用抗体（例えば、リツキサン、ハーセプチン、それらのエフェクター機能を高めるためのヒュミラ）のＦｃ領域における多様なグリコフォームの調製；および（４）糖鎖生物学研究室のためのオリゴ糖の標準のために使用され得る。
【００２４】
１つの態様において、本開示は、基材上に固定化された炭水化物部分のアレイを含み、そのアレイは、複数のグリカンを含み、１つまたはそれを超えるグリカン部分が、その基材上の別個の位置（例えば、スポット）に堆積されており、多様なグリカンが、高マンノース型、ハイブリッド型および複合型のホモおよび／または混合のＮ−グリカンを含み、そのアレイは、ヘテログリカンの結合挙動の検出に有用である。
【００２５】
１つの態様において、本開示は、ヘテログリカンの結合挙動を検出するための方法を含み、その方法は、上記アレイを１つまたは複数のヘテログリカンと接触させる工程を含む。いくつかの態様において、それらのヘテログリカンは、ＨＩＶ−１広域中和抗体の一部であり得る。
【００２６】
ある特定の実施形態において、高マンノース型、ハイブリッド型および複合型のホモおよび／または混合のＮ−グリカンを含むグリカンは、モジュール式の化学酵素的方法によって調製される。ある特定の実施形態において、ヘテログリカンの結合挙動の検出のためにアレイを使用することは、ＨＩＶ−１広域中和抗体の結合特異性を検出する工程を含む。
【００２７】
ある特定の実施形態において、グリカンは、図Ｓ１１に示されているような化合物Ｇ１〜Ｇ３３のうちの１つまたはそれを超える化合物および／または図Ｓ１７に示されているような化合物Ｉ〜ＸＩのうちのいずれか１つまたはそれを超える化合物を含む。
【００２８】
ある特定の実施形態において、グリカンは、図Ｓ１１に示されているような化合物Ｇ１〜Ｇ３３のうちの１つまたはそれを超える化合物を含み得るかまたは除外し得、図Ｓ１７に示されているような化合物Ｉ〜ＸＩのうちのいずれか１つまたはそれを超える化合物を含むかまたは除外する。
【００２９】
別の態様において、請求項１〜６のいずれか１項に記載のグリカン部分を合成するための方法が提供され、その合成方法は、図１〜４に示されているような合成スキームに部分的または全体的に基づくかまたは由来する。
【００３０】
別の態様において、ＨＩＶ−１中和抗体によって認識される最適な細胞表面グリカンのスクリーニングおよび同定を含むワクチンの標的を作製するための方法が提供され、その方法は、ＨＩＶ抗体を請求項１〜６のいずれか１項に記載のアレイと接触させる工程をさらに含む。
【００３１】
１つの態様において、多様なセットのグリカンを含む、酸化アルミニウムでコーティングされたガラス（ＡＣＧ）スライド上またはインジウムスズ酸化物でコーティングされた（ＩＴＯ）スライドガラス上のグリカンマイクロアレイが提供され、そのマイクロアレイは、モジュール式の化学酵素的方法によって調製された高マンノース型、ハイブリッド型および複合型のホモおよび混合のＮ−グリカンを含む。ある特定の実施形態において、そのアレイは、ヘテログリカンの結合挙動の検出に有用である。
【００３２】
１つの関連する態様において、前記グリカンマイクロアレイを作製／製作する方法が提供される。ある特定の実施形態において、多様性に基づく合成ストラテジーは、いわゆる「Ｄ１およびＤ２／Ｄ３アームモジュール」のアセンブリの後、共通のコア三糖のマンノース残基の３−Ｏおよび／または６−Ｏ位におけるα特異的マンノシル化によって作製され得る。
【００３３】
ある特定の他の実施形態において、フッ化グリコシルストラテジーが、酵素的シアリル化と併用され、対称的な二分岐、三分岐および四分岐複合型合成グリカンのライブラリーを構築した５０。ある特定の実施形態において、高マンノース、ハイブリッドおよび非対称的にシアリル化された多分岐グリカンを調製するためのモジュール合成法が提供される（例えば、図１ｂ）。
【００３４】
１つの態様において、中和抗体によって認識される最適なグリカンの迅速スクリーニングおよび同定のための方法が提供される。ある特定の実施形態において、このスクリーニングは、細胞表面グリカンを標的化するＨＩＶ−１ワクチンの開発を直接促進する。
【００３５】
１つの態様において、本開示は、本明細書中に開示されるような１つまたはそれを超えるＮ−グリカンを含むアレイに結合するＮ−グリカン結合パートナーを同定するための、グリカン結合パートナーのライブラリーのスクリーニングに関する。いくつかの態様において、前記ライブラリー中の分子は、例えば、抗体、ナノボディ、抗体フラグメント、アプタマー、レクチン、ペプチド、生体分子またはコンビナトリアルライブラリー分子を含み得る。１つの実施形態において、前記スクリーニングは、検出工程を含み、その検出工程は、ＨＩＶ抗体によるＮ−グリカン結合の検出を含む。１つの実施形態において、前記ＨＩＶ抗体の検出は、本明細書中に開示されるような１つまたはそれを超えるＮ−グリカンを含むＮ−グリカンアレイの使用を含む。
【００３６】
１つの態様において、本開示は、Ｎ−グリカン結合を検出する方法（ここで、上記アレイを１種または複数種のＮ−グリカンと接触させることによって、ある複合体が形成される）およびその複合体を標識と接触させる方法に関する。いくつかの態様において、その後、その標識が検出され得る。いくつかの態様において、その標識は、標識抗体であり得る。いくつかの態様において、その標識抗体は、酵素、フルオロフォア、化学発光部分またはナノ粒子を含む標識をさらに含み得る。
【００３７】
１つの態様において、本開示は、ＨＩＶ抗体を検出する方法に関し、その方法は、本明細書中に記載されるようなＮ結合型グリカンのアレイを提供する工程、そのアレイをＨＩＶ抗体と接触させる工程；ＨＩＶ抗体とアレイ上のグリカンとの複合体を形成する工程；ＨＩＶ抗体−グリカンアレイ複合体を標識と接触させる工程；およびその標識を検出する工程を含む。いくつかの態様において、標識は、酵素、フルオロフォア、化学発光部分またはナノ粒子をさらに含む標識抗体であり得る。
【００３８】
いくつかの実施形態において、アレイは、基材、および固体支持体上の多数の規定のグリカンプローブ位置を含み、各グリカンプローブ位置は、複数コピーの１つまたはそれを超える型の同様のグリカン分子が付着した固体支持体の領域を規定している。いくつかの実施形態において、各グリカンプローブ位置は、複数コピーの１つより多い型の同様のグリカン分子が付着した固体支持体の領域を規定している。
【００３９】
ＡとＸとの相互作用は、いくつかの実施形態において、共有結合、ファンデルワールス相互作用、水素結合、イオン結合または疎水性相互作用であり得る。
【００４０】
本開示の１つまたはそれを超える実施形態の詳細を、下記の説明に示す。本開示の他の特徴または利点は、以下の図面およびいくつかの実施形態の詳細な説明、ならびに添付の請求項から明らかになる。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１】図１は、Ｎ−グリカンのモジュール合成のための例示的な一般ストラテジーを示している。考えられるグリコシド結合が多数あること、および多様な構造が特にＧｌｃＮＡｃ残基から非還元末端に生成されることに起因して、反応工程を最小するためおよびＮ−グリコシル化の性質を反映するのに十分な多様性をもたらすために、モジュール式のアプローチが用いられる。図１Ａ）多様なグリコシルドナーのモジュールセットを用いた、３−Ｏおよび６−Ｏ位における、直交的に保護されたコア三糖の位置選択的および立体選択的なグリコシド化を介した高マンノース型、ハイブリッド型および複合型Ｎ−グリカンの合成。図１Ｂ）このストラテジーによって作製され得る代表的なＮ−グリカン。図１Ｃ）アセンブリに必要な基本単位を示している高マンノース型、ハイブリッド型および複合型グリカンの逆合成的切断。
【００４２】
【図２】図２は、Ｄ１およびＤ２／Ｄ３アーム基本単位の例示的な構造を示している。全化学合成によって調製された、およびオリゴ糖のアセンブリに使用される、基本単位のモジュールセット。
【００４３】
【図３】図３は、モジュールの例示的な化学酵素的合成を示している。Ｎ−グリカンのアセンブリに不可欠な、図３Ａ、直鎖状のモジュール；図３Ｂ、対称的なモジュールおよび図３Ｃ、非対称的に分岐したモジュールの合成のための代表的な化学酵素的アプローチ。試薬および条件：ｉ）ＵＤＰ−ガラクトース、β−１，４−ＧａｌＴ；ｉｉ）ＧＤＰ−フコース、α−１，３−ＦｕｃＴ；ｉｉｉ）ＣＭＰ−Ｎｅｕ５Ａｃ、α−２，６−ＳｉａＴ；ｉｖ）ＣＭＰ−Ｎｅｕ５Ａｃ、α−２，３−ＳｉａＴ；ｖ）ＧＤＰ−フコース、α−１，２−ＦｕｃＴ；ｖｉ）ＮａＯＨ。
【００４４】
【図４】図４は、Ｎ−グリカン合成に対する化学酵素的ストラテジーの代表的な概念証明の実証である。試薬および条件。ｉ）無水酢酸、ピリジン；ｉｉ）（１）ＣＡＮ、トルエン：ＡＣＮ：Ｈ２Ｏ：トルエン；（２）ＤＡＳＴ、ＣＨ２Ｃｌ２、−３０℃；ｉｉｉ）ＡｇＯＴｆ、Ｃｐ２ＨｆＣｌ２、トルエン、４ÅＭＳ、０℃〜ｒｔ；ｉｖ）ｐ−ＴＳＡ、アセトニトリル、ｒｔ；ｖ）（１）ＬｉＯＨ、１，４−ジオキサン：Ｈ２Ｏ；９０℃、一晩；（２）Ａｃ２Ｏ、ピリジン、一晩；（３）ＮａＯＭｅ、ＭｅＯＨ、一晩；（４）Ｐｄ（ＯＨ）２、ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ：ＨＣＯＯＨ（５：３：２）Ｈ２。ＣＡＮ：硝酸アンモニウムセリウム；ＤＡＳＴ：ジエチルアミノ硫黄トリフルオリド；ＡｇＯＴｆ：トリフルオロメタンスルホン酸銀（Ｓｉｌｖｅｒ  ｔｒｉｆｌｕｒｏｍｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎａｔｅ）；Ｃｐ２ＨｆＣｌ２：ビス（シクロペンタジエニル）ハフニウムジクロリド、ＭＳ：モレキュラーシーブ。
【００４５】
【図５】図５は、ＡＣＧアレイ上でのＨＩＶ−１  ｂＮＡｂの例示的なグリカン特異性を示している。図５Ａ）酸化アルミニウムでコーティングされたガラス（ＡＣＧ）スライドにホスホネート化学を介して共有結合するために合成Ｎ−グリカンをホスホン酸テイルで化学的に改変する。図５Ｂ）、図５Ｃ）ＡＣＧスライド上にプリントされた構造Ｉ〜ＸＩに対するＰＧ９、ＰＧ１６およびＰＧＴ１４１〜１４４の結合。図５Ｄ）、図５Ｅ）隣接するグリカンの結合親和性に対する影響を測定するために、グリカン混合物の各々に対するＰＧ９およびＰＧ１６の結合を評価した。１００μＭのＭａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２または複合型グリカンをＩ〜ＸＩのすべての構造と１：１の比で混合することによって、アレイをプリントした。μＭを単位とする抗体のモル濃度を凡例に示す。そのアレイにおける５つの独立した反復に対して計算された平均シグナル強度および標準誤差が示されている。
【００４６】
【図６】図６Ａおよび６Ｂは、様々な比のＭａｎ５とＸＩとの混合物に対するＰＧ９（パネルＡ−図６Ａ）およびＰＧ１６（パネルＢ−図６Ｂ）の例示的なグリカン特異性を示している。１００μＭのリンカー、Ｍａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２（ＩＶ）、複合型グリカン（ＸＩ）、および１：１／２／３／４／５の比の（ＩＶ＋ＸＩ）または（ＸＩ＋ＩＶ）の混合物の各々によってアレイをプリントした。μＭを単位とする抗体のモル濃度を凡例に示す。そのアレイにおける８つの独立した反復に対して計算された平均シグナル強度および標準誤差が示されている。
【００４７】
【図７】図７は、本開示の例示的な構造実施形態を示している。
【００４８】
【図８】図８は、本開示の例示的な構造実施形態を示している。
【００４９】
【図９】図９は、本開示の例示的な構造実施形態を示している。
【００５０】
【図１０】図１０は、本開示の例示的な構造実施形態を示している。
【００５１】
【図１１】図１１Ａ、１１Ｂおよび１１Ｃ：図１１Ａは、本開示の例示的な構造実施形態を示している。図１１Ｂは、本開示の例示的な構造実施形態を示している。図１１Ｃは、本開示の例示的な構造実施形態を示している。
【００５２】
【図１２】図１２は、本開示の例示的な構造実施形態を示している。
【００５３】
【図１３】図１３は、本開示の例示的な構造実施形態を示している。
【００５４】
【図１４】高マンノース型、ハイブリッド型および複合型Ｎ−グリカンの例示的なモジュール合成。
【００５５】
【図１５Ａ】代表的な高マンノース型、ハイブリッド型および複合型オリゴ糖の例示的な糖残基（図１５Ａ＝高マンノース型；図１５Ｂ＝ハイブリッド型、図１５Ｃ＝複合型）。
【図１５Ｂ】代表的な高マンノース型、ハイブリッド型および複合型オリゴ糖の例示的な糖残基（図１５Ａ＝高マンノース型；図１５Ｂ＝ハイブリッド型、図１５Ｃ＝複合型）。
【図１５Ｃ】代表的な高マンノース型、ハイブリッド型および複合型オリゴ糖の例示的な糖残基（図１５Ａ＝高マンノース型；図１５Ｂ＝ハイブリッド型、図１５Ｃ＝複合型）。
【００５６】
【図１６】図１６は、本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態を示している。
【００５７】
【図１７】図１７は、本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態を示している。
【００５８】
【図１８】図１８は、本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態を示している。
【００５９】
【図１９】図１９は、本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態を示している。
【００６０】
【図２０】図２０は、本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態を示している。
【００６１】
【図２１】図２１は、本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態を示している。
【００６２】
【図２２】図２２は、本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態を示している。
【００６３】
【図２３】図２３は、本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態を示している。
【００６４】
【図２４】図２４は、本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態を示している。
【００６５】
【図２５】図２５は、本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態を示している。
【００６６】
【図２６】図２６は、本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態を示している。
【００６７】
【図２７】図２７は、本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態を示している。
【００６８】
【図２８】図２８は、本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態を示している。
【００６９】
【図２９】図２９は、本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態を示している。
【００７０】
【図３０】図３０は、本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態を示している。
【００７１】
【図３１】図３１は、本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態を示している。
【００７２】
【図３２】図３２Ａ、３２Ｂおよび３２Ｃ：図３２Ａは、本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態を示している。図３２Ｂは、本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態を示している。図３２Ｃは、本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態を示している。
【００７３】
【図３３】図３３は、本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態を示している。
【００７４】
【図３４】図３４は、本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態を示している。
【００７５】
【図３５】図３５は、本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態を示している。
【００７６】
【図３６】図３６は、本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態を示している。
【００７７】
【図３７】図３７Ａ、３７Ｂおよび３７Ｃ：図３７Ａは、本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態を示している。図３７Ｂは、本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態を示している。図３７Ｃは、本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態を示している。
【００７８】
【図３８】図３８は、本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態を示している。
【００７９】
【図３９】図３９は、本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態を示している。
【００８０】
【図４０】図４０は、本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態を示している。
【００８１】
【図４１】図４１は、本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態を示している。
【００８２】
【図４２】図４２Ａおよび４２Ｂ：図４２Ａは、本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態を示している。図４２Ｂは、本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態を示している。
【００８３】
【図４３】図４３は、本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態を示している。
【００８４】
【図４４】図４４は、本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態を示している。
【００８５】
【図４５】図４５は、本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態を示している。
【００８６】
【図４６】図４６は、本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態を示している。
【００８７】
【図４７】図４７Ａ、４７Ｂおよび４７Ｃ：図４７Ａは、本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態を示している。図４７Ｂは、本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態を示している。図４７Ｃは、本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態を示している。
【００８８】
【図４８】図４８は、本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態を示している。
【００８９】
【図４９】図４９は、本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態を示している。
【００９０】
【図５０】図５０は、本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態を示している。
【００９１】
【図５１】図５１は、本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態を示している。
【００９２】
【図５２】図５２は、本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態を示している。
【００９３】
【図５３】図５３は、本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態を示している。
【００９４】
【図５４】図５４は、本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態を示している。
【００９５】
【図５５】図５５は、本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態を示している。
【００９６】
【図５６】図５６は、本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態を示している。
【００９７】
【図５７】図５７は、本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態を示している。
【００９８】
【図５８】高マンノース型グリカンおよびそれらのフラグメントの例示的な構造。
【００９９】
【図５９】図５９Ａ：本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態。図５９Ｂ：本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態。
【０１００】
【図６０】図６０Ａ：本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態。図６０Ｂ：本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態。
【０１０１】
【図６１】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１０２】
【図６２】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１０３】
【図６３】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１０４】
【図６４】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１０５】
【図６５】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１０６】
【図６６】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１０７】
【図６７】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１０８】
【図６８】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１０９】
【図６９】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１１０】
【図７０】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１１１】
【図７１】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１１２】
【図７２】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１１３】
【図７３】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１１４】
【図７４】ハイブリッド型グリカンおよびそれらのフラグメントの例示的な構造。
【０１１５】
【図７５】図７５Ａ：本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態。図７５Ｂ：本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態。
【０１１６】
【図７６】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１１７】
【図７７】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１１８】
【図７８】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１１９】
【図７９】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１２０】
【図８０】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１２１】
【図８１】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１２２】
【図８２Ａ】図８２Ａ：本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態。図８２Ｂ：本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態。図８２Ｃ：本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態。図８２Ｄ：本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態。
【図８２Ｂ】図８２Ａ：本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態。図８２Ｂ：本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態。図８２Ｃ：本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態。図８２Ｄ：本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態。
【図８２Ｃ】図８２Ａ：本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態。図８２Ｂ：本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態。図８２Ｃ：本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態。図８２Ｄ：本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態。
【図８２Ｄ】図８２Ａ：本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態。図８２Ｂ：本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態。図８２Ｃ：本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態。図８２Ｄ：本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態。
【０１２３】
【図８３】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１２４】
【図８４】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１２５】
【図８５】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１２６】
【図８６】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１２７】
【図８７】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１２８】
【図８８】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１２９】
【図８９Ａ】図８９Ａ：本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態。図８９Ｂ：本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態。
【図８９Ｂ】図８９Ａ：本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態。図８９Ｂ：本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態。
【０１３０】
【図９０】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１３１】
【図９１】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１３２】
【図９２】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１３３】
【図９３】図９３Ａ：複合型グリカンの例示的な構造。図９３Ｂ：複合型グリカンの例示的な構造。図９３Ｃ：複合型グリカンの例示的な構造。
【０１３４】
【図９４】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１３５】
【図９５】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１３６】
【図９６】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１３７】
【図９７】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１３８】
【図９８】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１３９】
【図９９】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１４０】
【図１００】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１４１】
【図１０１】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１４２】
【図１０２Ａ】図１０２Ａ：本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態。図１０２Ｂ：本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態。
【図１０２Ｂ】図１０２Ａ：本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態。図１０２Ｂ：本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態。
【０１４３】
【図１０３】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１４４】
【図１０４】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１４５】
【図１０５】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１４６】
【図１０６】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１４７】
【図１０７】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１４８】
【図１０８】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１４９】
【図１０９】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１５０】
【図１１０】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１５１】
【図１１１】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１５２】
【図１１２】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１５３】
【図１１３】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１５４】
【図１１４】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１５５】
【図１１５】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１５６】
【図１１６】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１５７】
【図１１７】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１５８】
【図１１８Ａ】図１１８Ａ  本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態。図１１８Ｂ：本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態。図１１８Ｃ：本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態。
【図１１８Ｂ】図１１８Ａ  本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態。図１１８Ｂ：本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態。図１１８Ｃ：本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態。
【図１１８Ｃ】図１１８Ａ  本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態。図１１８Ｂ：本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態。図１１８Ｃ：本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態。
【０１５９】
【図１１９】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１６０】
【図１２０】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１６１】
【図１２１】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１６２】
【図１２２】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１６３】
【図１２３】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１６４】
【図１２４】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１６５】
【図１２５】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１６６】
【図１２６】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１６７】
【図１２７】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１６８】
【図１２８】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１６９】
【図１２９】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１７０】
【図１３０】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１７１】
【図１３１】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１７２】
【図１３２】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１７３】
【図１３４】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１７４】
【図１３５】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１７５】
【図１３６】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１７６】
【図１３７】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１７７】
【図１３８】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１７８】
【図１３９】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１７９】
【図１４０】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１８０】
【図１４１】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１８１】
【図１４２】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１８２】
【図１４３】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１８３】
【図１４４】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１８４】
【図１４５】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１８５】
【図１４６】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１８６】
【図１４７】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１８７】
【図１４８】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１８８】
【図１４９】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１８９】
【図１５０】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１９０】
【図１５１】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１９１】
【図１５２】図１５２スキームＳ２３：直鎖状モジュールの例示的な調製スキーム。
【０１９２】
【図１５３】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１９３】
【図１５４】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１９４】
【図１５５】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１９５】
【図１５６】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１９６】
【図１５７】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１９７】
【図１５８】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１９８】
【図１５９】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０１９９】
【図１６０】図１６０スキームＳ２４：対称的に分岐したモジュールの例示的な調製スキーム。
【０２００】
【図１６１】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０２０１】
【図１６２】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０２０２】
【図１６３】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０２０３】
【図１６４】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０２０４】
【図１６５】図１６５スキームＳ２５：非対称（ａｓｓｙｍｅｔｒｉｃ）モジュールの例示的な調製スキーム。
【０２０５】
【図１６６】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０２０６】
【図１６７】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０２０７】
【図１６８】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０２０８】
【図１６９】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０２０９】
【図１７０】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０２１０】
【図１７１】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０２１１】
【図１７２】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０２１２】
【図１７３】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０２１３】
【図１７４】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０２１４】
【図１７５】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０２１５】
【図１７６】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０２１６】
【図１７７】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０２１７】
【図１７８】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０２１８】
【図１７９】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０２１９】
【図１８０】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０２２０】
【図１８１】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０２２１】
【図１８２】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０２２２】
【図１８３】図１８３Ａ：本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態。図１８３Ｂ：本開示の代表的な合成スキーム実施形態における例示的な構造実施形態。
【０２２３】
【図１８４】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０２２４】
【図１８５】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０２２５】
【図１８６】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０２２６】
【図１８７】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０２２７】
【図１８８】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０２２８】
【図１８９】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０２２９】
【図１９０】本開示の例示的な構造実施形態および合成スキーム実施形態。
【０２３０】
【図１９１】図１９１図Ｓ４：陽極酸化された酸化アルミニウム（ＡＡＯ）ガラス基材の製作の概略図。
【０２３１】
【図１９２】図１９２図Ｓ５：図１９２Ａ）ＡＦＭ写真−表面の粗さ解析。Ｉｍｇ．Ｒｍｓ（Ｒｑ）２．３１９ｎｍおよび図１９２Ｂ）ＡＡＯガラス基材の断面のＳＥＭ写真。
【０２３２】
【図１９３】図１９３図Ｓ６：Ｃｙ５−ホスホン酸リンカーおよびＣｙ５−アミンリンカーの構造。
【０２３３】
【図１９４】図１９４図Ｓ８：ＡＡＯガラス基材およびＮＨＳスライドガラス上のＣｙ５−ホスホン酸およびＣｙ５−アミンの代表的な共焦点顕微鏡写真。スポット内の選択的な９００μｍ２の領域。
【０２３４】
【図１９５】図Ｓ７：１ｍＭの（図１９５Ａ）ＡＡＯガラス基材上のＣｙ５−ホスホン酸、（図１９５Ｂ）ＮＨＳスライドガラス上のＣｙ５−アミン、および（図１９５Ｃ）それらの平均２０個のスポットのＧｅｎｅＰｉｘ  Ｓｃａｎｎｉｎｇ（ＰＭＴ４５０）。
【０２３５】
【図１９６】図１９６図Ｓ９：ＡＡＯガラス基材  対  ＮＨＳ−スライドガラスのＣｏｎＡ４８８／マンノース結合の共焦点顕微鏡。
【０２３６】
【図１９７Ａ】図１９７Ａおよび１９７Ｂ図Ｓ１０：図１９７Ａ）酸化アルミニウムでコーティングされたスライドガラス、および図１９７Ｂ）ＮＨＳでコーティングされたスライドガラスにおける糖分布を示している原子間力顕微鏡像。
【図１９７Ｂ】図１９７Ａおよび１９７Ｂ図Ｓ１０：図１９７Ａ）酸化アルミニウムでコーティングされたスライドガラス、および図１９７Ｂ）ＮＨＳでコーティングされたスライドガラスにおける糖分布を示している原子間力顕微鏡像。
【０２３７】
【図１９８】図１９８図Ｓ１１：ＮＨＳでコーティングされたスライドガラス上にプリントされたＮ−グリカンの模式図。
【０２３８】
【図１９９】図１９９図Ｓ１２。ＮＨＳでコーティングされたスライドガラスを使用したＰＧ１６の結合挙動。棒グラフに表されたＮ−グリカンのパネルへのＰＧ１６の結合。
【０２３９】
【図２００】図２００図Ｓ１７。シンボル表記（Ｃａｒｔｏｏｎ）は、ＡＣＧアレイ上にプリントされたグリカンを表している。リンカーの構造が左上角に示されている。
【０２４０】
【図２０１Ａ】図２０１Ａおよび２０１Ｂ（図Ｓ１８）。ＡＣＧアレイ上のＮ−グリカンのパネルへのＰＧＴ１４１〜１４４の結合が、棒グラフに示されている。
【図２０１Ｂ】図２０１Ａおよび２０１Ｂ（図Ｓ１８）。ＡＣＧアレイ上のＮ−グリカンのパネルへのＰＧＴ１４１〜１４４の結合が、棒グラフに示されている。
【０２４１】
【図２０２Ａ】図２０２Ａおよび２０２Ｂ（図Ｓ１９）。１００μＭ濃度のグリカンＸ、ＸＩならびに混合物Ｖ＋ＸＩおよびＸ＋ＸＩＩに対して観察された抗体ＰＧ１６結合曲線。これらの曲線は、ＤｙＬｉｇｈｔ６４９に結合体化されたロバ抗ヒトＩｇＧ二次抗体を使用することによって得られた。
【図２０２Ｂ】図２０２Ａおよび２０２Ｂ（図Ｓ１９）。１００μＭ濃度のグリカンＸ、ＸＩならびに混合物Ｖ＋ＸＩおよびＸ＋ＸＩＩに対して観察された抗体ＰＧ１６結合曲線。これらの曲線は、ＤｙＬｉｇｈｔ６４９に結合体化されたロバ抗ヒトＩｇＧ二次抗体を使用することによって得られた。
【発明を実施するための形態】
【０２４２】
発明の詳細な説明
以下の説明では、実施され得る具体的な実施形態の例証として示される、本明細書の一部を形成する添付の図面を参照する。これらの実施形態は、当業者が本発明を実施できるように詳細に記載されているが、他の実施形態も用いられ得ること、および本発明の範囲から逸脱することなく、構造的、論理的および電気的な変更が行われ得ることが理解されるべきである。ゆえに、以下の例示の実施形態の説明は、限定的な意味で取られるべきでなく、本発明の範囲は、添付の請求項によって定義される。
【０２４３】
別段定義されない限り、本明細書中で使用されるすべての専門用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者が通常理解している意味と同じ意味を有する。本明細書中に記載される方法および材料と類似または等価な任意の方法および材料を本発明の実施または試験において使用できるが、ここからは、好ましい方法および材料を記載する。本明細書中で明確に言及されるすべての刊行物および特許が、それらの刊行物において報告された、本発明に関連して使用され得る化学物質、細胞株、ベクター、動物、装置、統計解析および方法論を説明および開示することを含むあらゆる目的のために参照により組み込まれる。本明細書において引用されるすべての参考文献は、当該分野の技術レベルを示すものとして受け取られるべきである。本明細書中のいかなる記載も、先行発明を理由に本発明がそのような開示に先行する権利がないことを自認するものとして解釈されるべきでない。
【０２４４】
方法論、プロトコル、材料および試薬は、変化し得るので、本発明は、説明される特定の方法論、プロトコル、材料および試薬に限定されないと、本材料および本方法を説明するのに先だって理解される。本明細書中で使用される用語は、特定の実施形態だけを説明する目的であって、添付の請求項によってのみ限定される本発明の範囲を限定する意図はないことも理解されるべきである。
【０２４５】
ある値の範囲が提供される場合、その範囲の上限と下限との間にある各値、およびその述べられた範囲内の他の任意の述べられた値またはその間にある値が、文脈が明らかに他のことを指示しない限り下限の１０分の１の単位まで本発明の範囲内に包含されると理解される。これらのより狭い範囲の上限および下限は、そのより狭い範囲内に独立して含められ得、述べられた範囲内の任意の具体的に排除される限界に従って本発明の範囲内に包含される。述べられた範囲が、一方または両方の限界を含む場合、それらの含められる限界のいずれかまたは両方を除外した範囲も本発明に含められる。
【０２４６】
本発明の実施は、別段示されない限り、当該分野の技術範囲内である、分子生物学、微生物学、組換えＤＮＡおよび免疫学の従来の手法を用いる。そのような手法は、文献に十分に説明されている。例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ  Ｅｄ．，ｅｄ．ｂｙ  Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｆｒｉｔｓｃｈ  ａｎｄ  Ｍａｎｉａｔｉｓ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９８９）；ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｖｏｌｕｍｅｓ  Ｉ  ａｎｄ  ＩＩ（Ｄ．Ｎ．Ｇｌｏｖｅｒ  ｅｄ．，１９８５）；Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌｓ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，１９８７）；Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ｃｅｌｌｓ  Ａｎｄ  Ｅｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６）；Ｂ．Ｐｅｒｂａｌ，Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  Ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４）；ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｉｓｅ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎ．Ｙ．）；Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  Ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｈ．Ｍｉｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ  ｅｄｓ．，１９８７，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）；Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｓ．１５４  ａｎｄ  １５５（Ｗｕら編），Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｍａｙｅｒ  ａｎｄ  Ｗａｌｋｅｒ，ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ，１９８７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，ｂｙ  Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅｓ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９８８）；およびＨａｎｄｂｏｏｋ  Ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅｓ  Ｉ−ＩＶ（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ  ａｎｄ  Ｃ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．，１９８６）を参照のこと。
化学的定義
【０２４７】
具体的な官能基および化学用語の定義を下記に詳細に記載する。化学元素は、元素周期表、ＣＡＳバージョン、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｐｈｙｓｉｃｓ、第７５版の内表紙に従って特定され、具体的な官能基は、その中に記載されているように一般に定義される。さらに、有機化学の通則、ならびに具体的な機能的部分および反応性は、Ｔｈｏｍａｓ  Ｓｏｒｒｅｌｌ，Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｂｏｏｋｓ，Ｓａｕｓａｌｉｔｏ，１９９９；Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｍａｒｃｈ，Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，２００１；Ｌａｒｏｃｋ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８９；およびＣａｒｒｕｔｈｅｒｓ，Ｓｏｍｅ  Ｍｏｄｅｒｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，１９８７に記載されている。
【０２４８】
本明細書中に記載される化合物は、１つまたはそれを超える不斉中心を含み得るので、様々な異性体、例えば、エナンチオマーおよび／またはジアステレオマーで存在し得る。例えば、本明細書中に記載される化合物は、個々のエナンチオマー、ジアステレオマーもしくは幾何異性体の形態であり得るか、またはラセミ混合物および１つもしくはそれを超える立体異性体に濃縮された混合物を含む、立体異性体の混合物の形態であり得る。異性体は、キラル高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）ならびにキラル塩の形成および結晶化をはじめとした当業者に公知の方法によって混合物から単離され得るか；または好ましい異性体が、不斉合成によって調製され得る。例えば、Ｊａｃｑｕｅｓら、Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ，Ｒａｃｅｍａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ（Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８１）；Ｗｉｌｅｎら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ３３：２７２５（１９７７）；Ｅｌｉｅｌ，Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｃａｒｂｏｎ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ（ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，ＮＹ，１９６２）；およびＷｉｌｅｎ，Ｔａｂｌｅｓ  ｏｆ  Ｒｅｓｏｌｖｉｎｇ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｏｐｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  ｐ．２６８（Ｅ．Ｌ．Ｅｌｉｅｌ，Ｅｄ．，Ｕｎｉｖ．ｏｆ  Ｎｏｔｒｅ  Ｄａｍｅ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｏｔｒｅ  Ｄａｍｅ，ＩＮ  １９７２）を参照のこと。本開示は、さらに、本明細書中に記載される化合物を、他の異性体を実質的に含まない個々の異性体として、あるいは、様々な異性体の混合物として包含する。
【０２４９】
値の範囲が列挙されるとき、その範囲内の各値および部分範囲を包含することが意図される。例えば、「Ｃ１−６」は、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ１−６、Ｃ１−５、Ｃ１−４、Ｃ１−３、Ｃ１−２、Ｃ２−６、Ｃ２−５、Ｃ２−４、Ｃ２−３、Ｃ３−６、Ｃ３−５、Ｃ３−４、Ｃ４−６、Ｃ４−５およびＣ５−６を包含すると意図される。
【０２５０】
「アルキル」とは、１〜２０個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖の飽和炭化水素基のラジカルのことを指す（「Ｃ１−２０アルキル」）。いくつかの実施形態において、アルキル基は、１〜１０個の炭素原子を有する（「Ｃ１−１０アルキル」）。いくつかの実施形態において、アルキル基は、１〜９個の炭素原子を有する（「Ｃ１−９アルキル」）。いくつかの実施形態において、アルキル基は、１〜８個の炭素原子を有する（「Ｃ１−８アルキル」）。いくつかの実施形態において、アルキル基は、１〜７個の炭素原子を有する（「Ｃ１−７アルキル」）。いくつかの実施形態において、アルキル基は、１〜６個の炭素原子を有する（「Ｃ１−６アルキル」）。いくつかの実施形態において、アルキル基は、１〜５個の炭素原子を有する（「Ｃ１−５アルキル」）。いくつかの実施形態において、アルキル基は、１〜４個の炭素原子を有する（「Ｃ１−４アルキル」）。いくつかの実施形態において、アルキル基は、１〜３個の炭素原子を有する（「Ｃ１−３アルキル」）。いくつかの実施形態において、アルキル基は、１〜２個の炭素原子を有する（「Ｃ１−２アルキル」）。いくつかの実施形態において、アルキル基は、１個の炭素原子を有する（「Ｃ１アルキル」）。いくつかの実施形態において、アルキル基は、２〜６個の炭素原子を有する（「Ｃ２−６アルキル」）。Ｃ１−６アルキル基の例としては、メチル（Ｃ１）、エチル（Ｃ２）、ｎ−プロピル（Ｃ３）、ｉｓｏ−プロピル（Ｃ３）、ｎ−ブチル（Ｃ４）、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｃ４）、ｓｅｃ−ブチル（Ｃ４）、ｉｓｏ−ブチル（Ｃ４）、ｎ−ペンチル（Ｃ５）、３−ペンタニル（Ｃ５）、アミル（Ｃ５）、ネオペンチル（Ｃ５）、３−メチル−２−ブタニル（Ｃ５）、第３級アミル（Ｃ５）およびｎ−ヘキシル（Ｃ６）が挙げられる。アルキル基のさらなる例としては、ｎ−ヘプチル（Ｃ７）、ｎ−オクチル（Ｃ８）などが挙げられる。別段特定されない限り、アルキル基の各場合は、独立して、必要に応じて置換され、すなわち、非置換である（「非置換アルキル」）か、または１つもしくはそれを超える置換基で置換される（「置換アルキル」）。ある特定の実施形態において、アルキル基は、非置換Ｃ１−１０アルキル（例えば、−ＣＨ３）である。ある特定の実施形態において、アルキル基は、置換Ｃ１−１０アルキルである。
【０２５１】
「アルケニル」とは、２〜２０個の炭素原子、１つまたはそれを超える炭素−炭素二重結合を有し、三重結合を有しない、直鎖または分枝鎖の炭化水素基のラジカルのことを指す（「Ｃ２−２０アルケニル」）。いくつかの実施形態において、アルケニル基は、２〜１０個の炭素原子を有する（「Ｃ２−１０アルケニル」）。いくつかの実施形態において、アルケニル基は、２〜９個の炭素原子を有する（「Ｃ２−９アルケニル」）。いくつかの実施形態において、アルケニル基は、２〜８個の炭素原子を有する（「Ｃ２−８アルケニル」）。いくつかの実施形態において、アルケニル基は、２〜７個の炭素原子を有する（「Ｃ２−７アルケニル」）。いくつかの実施形態において、アルケニル基は、２〜６個の炭素原子を有する（「Ｃ２−６アルケニル」）。いくつかの実施形態において、アルケニル基は、２〜５個の炭素原子を有する（「Ｃ２−５アルケニル」）。いくつかの実施形態において、アルケニル基は、２〜４個の炭素原子を有する（「Ｃ２−４アルケニル」）。いくつかの実施形態において、アルケニル基は、２〜３個の炭素原子を有する（「Ｃ２−３アルケニル」）。いくつかの実施形態において、アルケニル基は、２個の炭素原子を有する（「Ｃ２アルケニル」）。１つまたはそれを超える炭素−炭素二重結合は、内部に存在し得るか（例えば、２−ブテニル）または末端に存在し得る（例えば、１−ブテニル）。Ｃ２−４アルケニル基の例としては、エテニル（Ｃ２）、１−プロペニル（Ｃ３）、２−プロペニル（Ｃ３）、１−ブテニル（Ｃ４）、２−ブテニル（Ｃ４）、ブタジエニル（Ｃ４）などが挙げられる。Ｃ２−６アルケニル基の例としては、上述のＣ２−４アルケニル基、ならびにペンテニル（Ｃ５）、ペンタジエニル（Ｃ５）、ヘキセニル（Ｃ６）などが挙げられる。アルケニルのさらなる例としては、ヘプテニル（Ｃ７）、オクテニル（Ｃ８）、オクタトリエニル（Ｃ８）などが挙げられる。別段特定されない限り、アルケニル基の各場合は、独立して、必要に応じて置換され、すなわち、非置換である（「非置換アルケニル」）か、または１つもしくはそれを超える置換基で置換される（「置換アルケニル」）。ある特定の実施形態において、アルケニル基は、非置換Ｃ２−１０アルケニルである。ある特定の実施形態において、アルケニル基は、置換Ｃ２−１０アルケニルである。
【０２５２】
「アルキニル」とは、２〜２０個の炭素原子、１つまたはそれを超える炭素−炭素三重結合および必要に応じて１つまたはそれを超える二重結合を有する直鎖または分枝鎖の炭化水素基のラジカルのことを指す（「Ｃ２−２０アルキニル」）。いくつかの実施形態において、アルキニル基は、２〜１０個の炭素原子を有する（「Ｃ２−１０アルキニル」）。いくつかの実施形態において、アルキニル基は、２〜９個の炭素原子を有する（「Ｃ２−９アルキニル」）。いくつかの実施形態において、アルキニル基は、２〜８個の炭素原子を有する（「Ｃ２−８アルキニル」）。いくつかの実施形態において、アルキニル基は、２〜７個の炭素原子を有する（「Ｃ２−７アルキニル」）。いくつかの実施形態において、アルキニル基は、２〜６個の炭素原子を有する（「Ｃ２−６アルキニル」）。いくつかの実施形態において、アルキニル基は、２〜５個の炭素原子を有する（「Ｃ２−５アルキニル」）。いくつかの実施形態において、アルキニル基は、２〜４個の炭素原子を有する（「Ｃ２−４アルキニル」）。いくつかの実施形態において、アルキニル基は、２〜３個の炭素原子を有する（「Ｃ２−３アルキニル」）。いくつかの実施形態において、アルキニル基は、２個の炭素原子を有する（「Ｃ２アルキニル」）。１つまたはそれを超える炭素−炭素三重結合は、内部に存在し得るか（例えば、２−ブチニル）または末端に存在し得る（例えば、１−ブチニル）。Ｃ２−４アルキニル基の例としては、エチニル（Ｃ２）、１−プロピニル（Ｃ３）、２−プロピニル（Ｃ３）、１−ブチニル（Ｃ４）、２−ブチニル（Ｃ４）などが挙げられるがこれらに限定されない。Ｃ２−６アルケニル基の例としては、上述のＣ２−４アルキニル基、ならびにペンチニル（Ｃ５）、ヘキシニル（Ｃ６）などが挙げられる。アルキニルのさらなる例としては、ヘプチニル（Ｃ７）、オクチニル（Ｃ８）などが挙げられる。別段特定されない限り、アルキニル基の各場合は、独立して、必要に応じて置換され、すなわち、非置換である（「非置換アルキニル」）か、または１つもしくはそれを超える置換基で置換される（「置換アルキニル」）。ある特定の実施形態において、アルキニル基は、非置換Ｃ２−１０アルキニルである。ある特定の実施形態において、アルキニル基は、置換Ｃ２−１０アルキニルである。
【０２５３】
「カルボシクリル」または「炭素環式」とは、非芳香環系に３〜１０個の環炭素原子（「Ｃ３−１０カルボシクリル」）および０個のヘテロ原子を有する非芳香族環式炭化水素基のラジカルのことを指す。いくつかの実施形態において、カルボシクリル基は、３〜８個の環炭素原子を有する（「Ｃ３−８カルボシクリル」）。いくつかの実施形態において、カルボシクリル基は、３〜６個の環炭素原子を有する（「Ｃ３−６カルボシクリル」）。いくつかの実施形態において、カルボシクリル基は、３〜６個の環炭素原子を有する（「Ｃ３−６カルボシクリル」）。いくつかの実施形態において、カルボシクリル基は、５〜１０個の環炭素原子を有する（「Ｃ５−１０カルボシクリル」）。例示的なＣ３−６カルボシクリル基としては、シクロプロピル（Ｃ３）、シクロプロペニル（Ｃ３）、シクロブチル（Ｃ４）、シクロブテニル（Ｃ４）、シクロペンチル（Ｃ５）、シクロペンテニル（Ｃ５）、シクロヘキシル（Ｃ６）、シクロヘキセニル（Ｃ６）、シクロヘキサジエニル（Ｃ６）などが挙げられるがこれらに限定されない。例示的なＣ３−８カルボシクリル基としては、上述のＣ３−６カルボシクリル基、ならびにシクロヘプチル（Ｃ７）、シクロヘプテニル（Ｃ７）、シクロヘプタジエニル（Ｃ７）、シクロヘプタトリエニル（Ｃ７）、シクロオクチル（Ｃ８）、シクロオクテニル（Ｃ８）、イドロキシ［２．２．１］ヘプタニル（Ｃ７）、イドロキシ［２．２．２］オクタニル（Ｃ８）などが挙げられるがこれらに限定されない。例示的なＣ３−１０カルボシクリル基としては、上述のＣ３−８カルボシクリル基、ならびにシクロノニル（Ｃ９）、シクロノネニル（Ｃ９）、シクロデシル（Ｃ１０）、シクロデセニル（Ｃ１０）、オクタヒドロ−１Ｈ−インデニル（Ｃ９）、デカヒドロナフタレニル（Ｃ１０）、スピロ［４．５］デカニル（Ｃ１０）などが挙げられるがこれらに限定されない。前述の例が例証するように、ある特定の実施形態において、カルボシクリル基は、単環式である（「単環式カルボシクリル」）か、または縮合環系、架橋環系もしくはスピロ環系（例えば、二環式系（「二環式カルボシクリル」））を含み、飽和であり得るか、または部分不飽和であり得る。「カルボシクリル」は、炭素環が、上で定義されたように、１つまたはそれを超えるアリールまたはヘテロアリール基に縮合されており、付着点が炭素環上である、環系も含み、そのような場合、炭素数は、引き続き炭素環系における炭素数を指し示す。別段特定されない限り、カルボシクリル基の各場合は、独立して、必要に応じて置換され、すなわち、非置換である（「非置換カルボシクリル」）か、または１つもしくはそれを超える置換基で置換される（「置換カルボシクリル」）。ある特定の実施形態において、カルボシクリル基は、非置換Ｃ３−１０カルボシクリルである。ある特定の実施形態において、カルボシクリル基は、置換Ｃ３−１０カルボシクリルである。
【０２５４】
いくつかの実施形態において、「カルボシクリル」は、３〜１０個の環炭素原子を有する単環式の飽和カルボシクリル基である（「Ｃ３−１０シクロアルキル」）。いくつかの実施形態において、シクロアルキル基は、３〜８個の環炭素原子を有する（「Ｃ３−８シクロアルキル」）。いくつかの実施形態において、シクロアルキル基は、３〜６個の環炭素原子を有する（「Ｃ３−６シクロアルキル」）。いくつかの実施形態において、シクロアルキル基は、５〜６個の環炭素原子を有する（「Ｃ５−６シクロアルキル」）。いくつかの実施形態において、シクロアルキル基は、５〜１０個の環炭素原子を有する（「Ｃ５−１０シクロアルキル」）。Ｃ５−６シクロアルキル基の例としては、シクロペンチル（Ｃ５）およびシクロヘキシル（Ｃ５）が挙げられる。Ｃ３−６シクロアルキル基の例としては、上述のＣ５−６シクロアルキル基、ならびにシクロプロピル（Ｃ３）およびシクロブチル（Ｃ４）が挙げられる。Ｃ３−８シクロアルキル基の例としては、上述のＣ３−６シクロアルキル基、ならびにシクロヘプチル（Ｃ７）およびシクロオクチル（Ｃ８）が挙げられる。別段特定されない限り、シクロアルキル基の各場合は、独立して、非置換である（「非置換シクロアルキル」）か、または１つもしくはそれを超える置換基で置換される（「置換シクロアルキル」）。ある特定の実施形態において、シクロアルキル基は、非置換Ｃ３−１０シクロアルキルである。ある特定の実施形態において、シクロアルキル基は、置換Ｃ３−１０シクロアルキルである。
【０２５５】
「ヘテロシクリル」または「複素環式」とは、環炭素原子および１〜４個の環ヘテロ原子を有する３〜１０員非芳香環系のラジカルのことを指し、各ヘテロ原子は、独立して、窒素、酸素、硫黄、ホウ素、リンおよびケイ素から選択される（「３〜１０員ヘテロシクリル」）。ある特定の実施形態において、ヘテロ原子は、独立して、窒素、硫黄および酸素から選択される。１つまたはそれを超える窒素原子を含むヘテロシクリル基において、付着点は、結合価が許容するとき、炭素原子または窒素原子であり得る。ヘテロシクリル基は、単環式であり得る（「単環式ヘテロシクリル」）か、または縮合環系、架橋環系もしくはスピロ環系であり得（例えば、二環式系（「二環式ヘテロシクリル」）、飽和もしくは部分不飽和であり得る。ヘテロシクリル二環式環系は、一方または両方の環に１つまたはそれを超えるヘテロ原子を含み得る。「ヘテロシクリル」は、上で定義されたような複素環式環が１つまたはそれを超えるカルボシクリル基と縮合しており、付着点がカルボシクリル環上または複素環式環上に存在する環系、または上で定義されたような複素環式環が１つまたはそれを超えるアリールもしくはヘテロアリール基と縮合しており、付着点が複素環式環上に存在する環系も含み、そのような場合、環メンバーの数は、引き続き複素環式環系の環メンバーの数を指し示す。別段特定されない限り、ヘテロシクリルの各場合は、独立して、必要に応じて置換され、すなわち、非置換である（「非置換ヘテロシクリル」）か、または１つもしくはそれを超える置換基で置換される（「置換ヘテロシクリル」）。ある特定の実施形態において、ヘテロシクリル基は、非置換３〜１０員ヘテロシクリルである。ある特定の実施形態において、ヘテロシクリル基は、置換３〜１０員ヘテロシクリルである。
【０２５６】
いくつかの実施形態において、ヘテロシクリル基は、環炭素原子および１〜４個の環ヘテロ原子を有する５〜１０員非芳香環系であり、各ヘテロ原子は、独立して、窒素、酸素、硫黄、ホウ素、リンおよびケイ素から選択される（「５〜１０員ヘテロシクリル」）。いくつかの実施形態において、ヘテロシクリル基は、環炭素原子および１〜４個の環ヘテロ原子を有する５〜８員非芳香環系であり、各ヘテロ原子は、独立して、窒素、酸素および硫黄から選択される（「５〜８員ヘテロシクリル」）。いくつかの実施形態において、ヘテロシクリル基は、環炭素原子および１〜４個の環ヘテロ原子を有する５〜６員非芳香環系であり、各ヘテロ原子は、独立して、窒素、酸素および硫黄から選択される（「５〜６員ヘテロシクリル」）。いくつかの実施形態において、５〜６員ヘテロシクリルは、窒素、酸素および硫黄から選択される１〜３個の環ヘテロ原子を有する。いくつかの実施形態において、５〜６員ヘテロシクリルは、窒素、酸素および硫黄から選択される１〜２個の環ヘテロ原子を有する。いくつかの実施形態において、５〜６員ヘテロシクリルは、窒素、酸素および硫黄から選択される１つの環ヘテロ原子を有する。
【０２５７】
１つのヘテロ原子を含む例示的な３員ヘテロシクリル基としては、アジルジニル、オキシラニルおよびチオレニルが挙げられるがこれらに限定されない。１つのヘテロ原子を含む例示的な４員ヘテロシクリル基としては、アゼチジニル、オキセタニルおよびチエタニルが挙げられるがこれらに限定されない。１つのヘテロ原子を含む例示的な５員ヘテロシクリル基としては、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロチオフェニル、ジヒドロチオフェニル、ピロリジニル、ジヒドロピロリルおよびピロリル−２，５−ジオンが挙げられるがこれらに限定されない。２個のヘテロ原子を含む例示的な５員ヘテロシクリル基としては、ジオキソラニル、オキサスルフラニル、ジスルフラニルおよびオキサゾリジン−２−オンが挙げられるがこれらに限定されない。３個のヘテロ原子を含む例示的な５員ヘテロシクリル基としては、トリアゾリニル、オキサジアゾリニルおよびチアジアゾリニルが挙げられるがこれらに限定されない。１つのヘテロ原子を含む例示的な６員ヘテロシクリル基としては、ピペリジニル、テトラヒドロピラニル、ジヒドロピリジニルおよびチアニルが挙げられるがこれらに限定されない。２個のヘテロ原子を含む例示的な６員ヘテロシクリル基としては、ピペラジニル、モルホリニル、ジチアニルおよびジオキサニルが挙げられるがこれらに限定されない。２個のヘテロ原子を含む例示的な６員ヘテロシクリル基としては、トリアジナニルが挙げられるがこれに限定されない。１つのヘテロ原子を含む例示的な７員ヘテロシクリル基としては、アゼパニル、オキセパニルおよびチエパニルが挙げられるがこれらに限定されない。１つのヘテロ原子を含む例示的な８員ヘテロシクリル基としては、アゾカニル、オキセカニルおよびチオカニルが挙げられるがこれらに限定されない。Ｃ６アリール環に縮合した例示的な５員ヘテロシクリル基（本明細書中で５，６−二環式複素環式環とも称される）としては、インドリニル、イソインドリニル、ジヒドロベンゾフラニル、ジヒドロベンゾチエニル、ベンゾオキサゾリノニルなどが挙げられるがこれらに限定されない。アリール環に縮合した例示的な６員ヘテロシクリル基（本明細書中で６，６−二環式複素環式環とも称される）としては、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニルなどが挙げられるがこれらに限定されない。
【０２５８】
「アリール」とは、芳香環系に６〜１４個の環炭素原子および０個のヘテロ原子を有する単環式または多環式（例えば、二環式または三環式）の４ｎ＋２芳香環系（例えば、環状の配列で共有された６、１０または１４個のπ電子を有する）のラジカルのことを指す（「Ｃ６−１４アリール」）。いくつかの実施形態において、アリール基は、６個の環炭素原子を有する（「Ｃ６アリール」；例えば、フェニル）。いくつかの実施形態において、アリール基は、１０個の環炭素原子を有する（「Ｃ１０アリール」；例えば、ナフチル、例えば、１−ナフチルおよび２−ナフチル）。いくつかの実施形態において、アリール基は、１４個の環炭素原子を有する（「Ｃ１４アリール」；例えば、アントラシル）。「アリール」は、上で定義されたようなアリール環が１つまたはそれを超えるカルボシクリル基またはヘテロシクリル基と縮合しており、ラジカルまたは付着点がアリール環上に存在する環系も含み、そのような場合、炭素原子の数は、引き続きアリール環系における炭素原子の数を指し示す。別段特定されない限り、アリール基の各場合は、独立して、必要に応じて置換され、すなわち、非置換である（「非置換アリール」）か、または１つもしくはそれを超える置換基で置換される（「置換アリール」）。ある特定の実施形態において、アリール基は、非置換Ｃ６−１４アリールである。ある特定の実施形態において、アリール基は、置換Ｃ６−１４アリールである。
【０２５９】
「アリールアルキル」は、本明細書中で定義されるようなアルキルとアリールとのサブセットであり、必要に応じて置換されるアリール基で置換された、必要に応じて置換されるアルキル基のことを指す。ある特定の実施形態において、アラルキルは、必要に応じて置換されるベンジルである。ある特定の実施形態において、アラルキルは、ベンジルである。ある特定の実施形態において、アラルキルは、必要に応じて置換されるフェネチルである。ある特定の実施形態において、アラルキルは、フェネチルである。
【０２６０】
「ヘテロアリール」とは、芳香環系に環炭素原子および１〜４個の環ヘテロ原子が提供された５〜１０員の単環式または二環式の４ｎ＋２芳香環系（例えば、環状の配列で共有された６または１０個のπ電子を有する）のラジカルのことを指し、各ヘテロ原子は、独立して、窒素、酸素および硫黄から選択される（「５〜１０員ヘテロアリール」）。１つまたはそれを超える窒素原子を含むヘテロアリール基において、付着点は、結合価が許容するとき、炭素原子または窒素原子であり得る。ヘテロアリール二環式環系は、一方または両方の環に１つまたはそれを超えるヘテロ原子を含み得る。「ヘテロアリール」は、上で定義されたようなヘテロアリール環が１つまたはそれを超えるカルボシクリル基またはヘテロシクリル基と縮合しており、付着点がヘテロアリール環上に存在する環系を含み、そのような場合、環メンバーの数は、引き続きヘテロアリール環系における環メンバーの数を指し示す。「ヘテロアリール」は、上で定義されたようなヘテロアリール環が１つまたはそれを超えるアリール基と縮合しており、付着点がアリール環またはヘテロアリール環上に存在する環系も含み、そのような場合、環メンバーの数は、縮合した（アリール／ヘテロアリール）環系における環メンバーの数を指し示す。二環式ヘテロアリール基であって、ここで、一方の環は、ヘテロ原子を含まず（例えば、インドリル、キノリニル、カルバゾリルなど）、付着点は、いずれかの環、すなわち、ヘテロ原子を有する環（例えば、２−インドリル）またはヘテロ原子を含まない環（例えば、５−インドリル）上に存在し得る。
【０２６１】
いくつかの実施形態において、ヘテロアリール基は、芳香環系に環炭素原子および１〜４個の環ヘテロ原子が提供された５〜１０員芳香環系であり、各ヘテロ原子は、独立して、窒素、酸素および硫黄から選択される（「５〜１０員ヘテロアリール」）。いくつかの実施形態において、ヘテロアリール基は、芳香環系に環炭素原子および１〜４個の環ヘテロ原子が提供された５〜８員芳香環系であり、各ヘテロ原子は、独立して、窒素、酸素および硫黄から選択される（「５〜８員ヘテロアリール」）。いくつかの実施形態において、ヘテロアリール基は、芳香環系に環炭素原子および１〜４個の環ヘテロ原子が提供された５〜６員芳香環系であり、各ヘテロ原子は、独立して、窒素、酸素および硫黄から選択される（「５〜６員ヘテロアリール」）。いくつかの実施形態において、５〜６員ヘテロアリールは、窒素、酸素および硫黄から選択される１〜３個の環ヘテロ原子を有する。いくつかの実施形態において、５〜６員ヘテロアリールは、窒素、酸素および硫黄から選択される１〜２個の環ヘテロ原子を有する。いくつかの実施形態において、５〜６員ヘテロアリールは、窒素、酸素および硫黄から選択される１個の環ヘテロ原子を有する。別段特定されない限り、ヘテロアリール基の各場合は、独立して、必要に応じて置換され、すなわち、非置換である（「非置換ヘテロアリール」）か、または１つもしくはそれを超える置換基で置換される（「置換ヘテロアリール」）。ある特定の実施形態において、ヘテロアリール基は、非置換５〜１４員ヘテロアリールである。ある特定の実施形態において、ヘテロアリール基は、置換５〜１４員ヘテロアリールである。
【０２６２】
１つのヘテロ原子を含む例示的な５員ヘテロアリール基としては、ピロリル、フラニルおよびチオフェニルが挙げられるがこれらに限定されない。２個のヘテロ原子を含む例示的な５員ヘテロアリール基としては、イミダゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリルおよびイソチアゾリルが挙げられるがこれらに限定されない。３個のヘテロ原子を含む例示的な５員ヘテロアリール基としては、トリアゾリル、オキサジアゾリルおよびチアジアゾリルが挙げられるがこれらに限定されない。４個のヘテロ原子を含む例示的な５員ヘテロアリール基としては、テトラゾリルが挙げられるがこれに限定されない。１つのヘテロ原子を含む例示的な６員ヘテロアリール基としては、ピリジニルが挙げられるがこれに限定されない。２個のヘテロ原子を含む例示的な６員ヘテロアリール基としては、ピリダジニル、ピリミジニルおよびピラジニルが挙げられるがこれらに限定されない。３または４個のヘテロ原子を含む例示的な６員ヘテロアリール基としては、それぞれトリアジニルおよびテトラジニルが挙げられるがこれらに限定されない。１つのヘテロ原子を含む例示的な７員ヘテロアリール基としては、アゼピニル、オキセピニルおよびチエピニルが挙げられるがこれらに限定されない。例示的な５，６−二環式ヘテロアリール基としては、インドリル、イソインドリル、インダゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾチオフェニル、イソベンゾチオフェニル、ベンゾフラニル、ベンゾイソフラニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、ベンゾオキサジアゾリル、ベンズチアゾリル、ベンズイソチアゾリル、ベンズチアジアゾリル、インドリジニルおよびプリニルが挙げられるがこれらに限定されない。例示的な６，６−二環式ヘテロアリール基としては、ナフチリジニル、プテリジニル、キノリニル、イソキノリニル、シンノリニル、キノキサリニル、フタラジニルおよびキナゾリニルが挙げられるがこれらに限定されない。
【０２６３】
「ヘテロアラルキル」は、本明細書中で定義されるようなアルキルとヘテロアリールとのサブセットであり、必要に応じて置換されるヘテロアリール基によって置換された、必要に応じて置換されるアルキル基のことを指す。
【０２６４】
二価の架橋基である、本明細書中で定義されるようなアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリール基は、さらに、接尾辞−エン（ｅｎｅ）を用いて称され、例えば、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、カルボシクリレン、ヘテロシクリレン、アリーレンおよびヘテロアリーレンと称される。
【０２６５】
本明細書中で使用されるとき、用語「必要に応じて置換される」とは、置換された部分または非置換の部分のことを指す。
【０２６６】
本明細書中で定義されるようなアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリール基は、必要に応じて置換される（例えば、「置換」もしくは「非置換」アルキル、「置換」もしくは「非置換」アルケニル、「置換」もしくは「非置換」アルキニル、「置換」もしくは「非置換」カルボシクリル、「置換」もしくは「非置換」ヘテロシクリル、「置換」もしくは「非置換」アリールまたは「置換」もしくは「非置換」ヘテロアリール基）。一般に、用語「置換された」は、用語「必要に応じて」が前に付くか否かを問わず、ある基（例えば、炭素原子または窒素原子）上に存在する少なくとも１つの水素が、許容できる置換基、例えば、置換されたとき、安定な化合物、例えば、再配列、環化、脱離または他の反応などによって変換を自発的に起こさない化合物をもたらす置換基で置換されることを意味する。別段示されない限り、「置換された」基は、その基の１つまたはそれを超える置換可能な位置に置換基を有し、任意の所与の構造における１つより多い位置が置換されるとき、置換基は、各位置において同じであるかまたは異なる。用語「置換された」は、安定な化合物の形成をもたらす本明細書中に記載される任意の置換基である、有機化合物の許容できるすべての置換基による置換を含むと企図される。本開示は、安定な化合物に到達するために、そのような任意のおよびすべての組み合わせを企図する。この本開示の目的で、窒素などのヘテロ原子は、水素置換基、および／またはそれらのヘテロ原子の結合価を満たしかつ安定な部分の形成をもたらす本明細書中に記載されるような任意の好適な置換基を有し得る。
【０２６７】
例示的な炭素原子置換基としては、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｎ３、−ＳＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲａａ、−ＯＮ（Ｒｂｂ）２、−Ｎ（Ｒｂｂ）２、−Ｎ（Ｒｂｂ）３＋Ｘ−、−Ｎ（ＯＲｃｃ）Ｒｂｂ、−ＳＨ、−ＳＲａａ、−ＳＳＲｃｃ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒａａ、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＨＯ、−Ｃ（ＯＲｃｃ）２、−ＣＯ２Ｒａａ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒａａ、−ＯＣＯ２Ｒａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−ＮＲｂｂＣ（＝Ｏ）Ｒａａ、−ＮＲｂｂＣＯ２Ｒａａ、−ＮＲｂｂＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）Ｒａａ、−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）ＯＲａａ、−ＯＣ（＝ＮＲｂｂ）Ｒａａ、−ＯＣ（＝ＮＲｂｂ）ＯＲａａ、−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−ＯＣ（＝ＮＲｂｂ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−ＮＲｂｂＣ（＝ＮＲｂｂ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｂｂＳＯ２Ｒａａ、−ＮＲｂｂＳＯ２Ｒａａ、−ＳＯ２Ｎ（Ｒｂｂ）２、−ＳＯ２Ｒａａ、−ＳＯ２ＯＲａａ、−ＯＳＯ２Ｒａａ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒａａ、−ＯＳ（＝Ｏ）Ｒａａ、−Ｓｉ（Ｒａａ）３、−Ｏｓｉ（Ｒａａ）３−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲａａ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲａａ、−ＳＣ（＝Ｓ）ＳＲａａ、−ＳＣ（＝Ｏ）ＳＲａａ、−ＯＣ（＝Ｏ）ＳＲａａ、−ＳＣ（＝Ｏ）ＯＲａａ、−ＳＣ（＝Ｏ）Ｒａａ、−Ｐ（＝Ｏ）２Ｒａａ、−ＯＰ（＝Ｏ）２Ｒａａ、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒａａ）２、−ＯＰ（＝Ｏ）（Ｒａａ）２、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲｃｃ）２、−Ｐ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｒｂｂ）２、−ＯＰ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｒｂｂ）２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＮＲｂｂ）２、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＮＲｂｂ）２、−ＮＲｂｂＰ（＝Ｏ）（ＯＲｃｃ）２、−ＮＲｂｂＰ（＝Ｏ）（ＮＲｂｂ）２、−Ｐ（Ｒｃｃ）２、−Ｐ（Ｒｃｃ）３、−ＯＰ（Ｒｃｃ）２、−ＯＰ（Ｒｃｃ）３、−Ｂ（Ｒａａ）２、−Ｂ（ＯＲｃｃ）２、−ＢＲａａ（ＯＲｃｃ）、Ｃ１−１０アルキル、Ｃ１−１０ペルハロアルキル、Ｃ２−１０アルケニル、Ｃ２−１０アルキニル、Ｃ３−１０カルボシクリル、３〜１４員ヘテロシクリル、Ｃ６−１４アリールおよび５〜１４員ヘテロアリールが挙げられるがこれらに限定されず、ここで、各アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールは、独立して、０、１、２、３、４または５個のＲｄｄ基で置換されるか；
または炭素原子上の２つの水素は、基＝Ｏ、＝Ｓ、＝ＮＮ（Ｒｂｂ）２、＝ＮＮＲｂｂＣ（＝Ｏ）Ｒａａ、＝ＮＮＲｂｂＣ（＝Ｏ）ＯＲａａ、＝ＮＮＲｂｂＳ（＝Ｏ）２Ｒａａ、＝ＮＲｂｂまたは＝ＮＯＲｃｃで置換され；
Ｒａａの各場合は、独立して、Ｃ１−１０アルキル、Ｃ１−１０ペルハロアルキル、Ｃ２−１０アルケニル、Ｃ２−１０アルキニル、Ｃ３−１０カルボシクリル、３〜１４員ヘテロシクリル、Ｃ６−１４アリールおよび５〜１４員ヘテロアリールから選択されるか、または２つのＲａａ基が連結して、３〜１４員ヘテロシクリルまたは５〜１４員ヘテロアリール環を形成し、ここで、各アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールは、独立して、０、１、２、３、４または５個のＲｄｄ基で置換され；
Ｒｂｂの各場合は、独立して、水素、−ＯＨ、−ＯＲａａ、−Ｎ（Ｒｃｃ）２、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｃｃ）２、−ＣＯ２Ｒａａ、−ＳＯ２Ｒａａ、−Ｃ（＝ＮＲｃｃ）ＯＲａａ、−Ｃ（＝ＮＲｃｃ）Ｎ（Ｒｃｃ）２、−ＳＯ２Ｎ（Ｒｃｃ）２、−ＳＯ２Ｒｃｃ、−ＳＯ２ＯＲｃｃ、−ＳＯＲａａ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒｃｃ）２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲｃｃ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲｃｃ、−Ｐ（＝Ｏ）２Ｒａａ、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒａａ）２、−Ｐ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｒｃｃ）２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＮＲｃｃ）２、Ｃ１−１０アルキル、Ｃ１−１０ペルハロアルキル、Ｃ２−１０アルケニル、Ｃ２−１０アルキニル、Ｃ３−１０カルボシクリル、３〜１４員ヘテロシクリル、Ｃ６−１４アリールおよび５〜１４員ヘテロアリールから選択されるか、または２つのＲｂｂ基が連結して、３〜１４員ヘテロシクリルまたは５〜１４員ヘテロアリール環を形成し、ここで、各アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールは、独立して、０、１、２、３、４または５個のＲｄｄ基で置換され；
Ｒｃｃの各場合は、独立して、水素、Ｃ１−１０アルキル、Ｃ１−１０ペルハロアルキル、Ｃ２−１０アルケニル、Ｃ２−１０アルキニル、Ｃ３−１０カルボシクリル、３〜１４員ヘテロシクリル、Ｃ６−１４アリールおよび５〜１４員ヘテロアリールから選択されるか、または２つのＲｃｃ基が連結して、３〜１４員ヘテロシクリルまたは５〜１４員ヘテロアリール環を形成し、ここで、各アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールは、独立して、０、１、２、３、４または５個のＲｄｄ基で置換され；
Ｒｄｄの各場合は、独立して、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｎ３、−ＳＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲｅｅ、−ＯＮ（Ｒｆｆ）２、−Ｎ（Ｒｆｆ）２、−Ｎ（Ｒｆｆ）３＋Ｘ−、−Ｎ（ＯＲｅｅ）Ｒｆｆ、−ＳＨ、−ＳＲｅｅ、−ＳＳＲｅｅ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｅｅ、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２Ｒｅｅ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒｅｅ、−ＯＣＯ２Ｒｅｅ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｆｆ）２、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｆｆ）２、−ＮＲｆｆＣ（＝Ｏ）Ｒｅｅ、−ＮＲｆｆＣＯ２Ｒｅｅ、−ＮＲｆｆＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｆｆ）２、−Ｃ（＝ＮＲｆｆ）ＯＲｅｅ、−ＯＣ（＝ＮＲｆｆ）Ｒｅｅ、−ＯＣ（＝ＮＲｆｆ）ＯＲｅｅ、−Ｃ（＝ＮＲｆｆ）Ｎ（Ｒｆｆ）２、−ＯＣ（＝ＮＲｆｆ）Ｎ（Ｒｆｆ）２、−ＮＲｆｆＣ（＝ＮＲｆｆ）Ｎ（Ｒｆｆ）２，−ＮＲｆｆＳＯ２Ｒｅｅ、−ＳＯ２Ｎ（Ｒｆｆ）２、−ＳＯ２Ｒｅｅ、−ＳＯ２ＯＲｅｅ、−ＯＳＯ２Ｒｅｅ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒｅｅ、−Ｓｉ（Ｒｅｅ）３、−Ｏｓｉ（Ｒｅｅ）３、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒｆｆ）２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲｅｅ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲｅｅ、−ＳＣ（＝Ｓ）ＳＲｅｅ、−Ｐ（＝Ｏ）２Ｒｅｅ、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒｅｅ）２、−ＯＰ（＝Ｏ）（Ｒｅｅ）２、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲｅｅ）２、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ペルハロアルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ３−１０カルボシクリル、３〜１０員ヘテロシクリル、Ｃ６−１０アリール、５〜１０員ヘテロアリールから選択され、ここで、各アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールは、独立して、０、１、２、３、４もしくは５個のＲｇｇ基で置換されるか、または２つのＲｄｄ置換基が連結して、＝Ｏもしくは＝Ｓを形成し得；
Ｒｅｅの各場合は、独立して、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ペルハロアルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ３−１０カルボシクリル、Ｃ６−１０アリール、３〜１０員ヘテロシクリルおよび３〜１０員ヘテロアリールから選択され、ここで、各アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールは、独立して、０、１、２、３、４または５個のＲｇｇ基で置換され；
Ｒｆｆの各場合は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ペルハロアルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ３−１０カルボシクリル、３〜１０員ヘテロシクリル、Ｃ６−１０アリールおよび５〜１０員ヘテロアリールから選択されるか、または２つのＲｆｆ基が連結して、３〜１４員ヘテロシクリルまたは５〜１４員ヘテロアリール環を形成し、ここで、各アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールは、独立して、０、１、２、３、４または５個のＲｇｇ基で置換され；
Ｒｇｇの各場合は、独立して、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｎ３、−ＳＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＯＨ、−ＯＣ１−６アルキル、−ＯＮ（Ｃ１−６アルキル）２、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）２、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）３＋Ｘ−、−ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）２＋Ｘ−、−ＮＨ２（Ｃ１−６アルキル）＋Ｘ−、−ＮＨ３＋Ｘ−、−Ｎ（ＯＣ１−６アルキル）（Ｃ１−６アルキル）、−Ｎ（ＯＨ）（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨ（ＯＨ）、−ＳＨ、−ＳＣ１−６アルキル、−ＳＳ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２（Ｃ１−６アルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−ＯＣＯ２（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｃ１−６アルキル）２、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨＣＯ２（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｃ１−６アルキル）２、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（＝ＮＨ）Ｏ（Ｃ１−６アルキル）、−ＯＣ（＝ＮＨ）（Ｃ１−６アルキル）、−ＯＣ（＝ＮＨ）ＯＣ１−６アルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）Ｎ（Ｃ１−６アルキル）２、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−ＯＣ（＝ＮＨ）Ｎ（Ｃ１−６アルキル）２、−ＯＣ（ＮＨ）ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）、−ＯＣ（ＮＨ）ＮＨ２、−ＮＨＣ（ＮＨ）Ｎ（Ｃ１−６アルキル）２、−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２（Ｃ１−６アルキル）、−ＳＯ２Ｎ（Ｃ１−６アルキル）２、−ＳＯ２ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２Ｃ１−６アルキル、−ＳＯ２ＯＣ１−６アルキル、−ＯＳＯ２Ｃ１−６アルキル、−ＳＯＣ１−６アルキル、−Ｓｉ（Ｃ１−６アルキル）３、−Ｏｓｉ（Ｃ１−６アルキル）３−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｃ１−６アルキル）２、Ｃ（＝Ｓ）ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）、Ｃ（＝Ｓ）ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｓ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＣ１−６アルキル、−ＳＣ（＝Ｓ）ＳＣ１−６アルキル、−Ｐ（＝Ｏ）２（Ｃ１−６アルキル）、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）２、−ＯＰ（＝Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）２、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＣ１−６アルキル）２、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ペルハロアルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ３−１０カルボシクリル、Ｃ６−１０アリール、３〜１０員ヘテロシクリル、５〜１０員ヘテロアリールであるか；または２つのＲｇｇ置換基が連結して、＝Ｏまたは＝Ｓを形成し得；ここで、Ｘ−は、対イオンである。
【０２６８】
「ハロ」または「ハロゲン」とは、フッ素（フルオロ、−Ｆ）、塩素（クロロ、−Ｃｌ）、臭素（ブロモ、−Ｂｒ）またはヨウ素（ヨード、−Ｉ）のことを指す。
【０２６９】
「アシル」は、本明細書中で使用されるとき、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒａａ、−ＣＨＯ、−ＣＯ２Ｒａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）Ｒａａ、−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）ＯＲａａ、−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｂｂＳＯ２Ｒａａ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲａａおよび−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲａａからなる群より選択される部分のことを指し、ここで、ＲａａおよびＲｂｂは、本明細書中で定義されるとおりである。
【０２７０】
窒素原子は、結合価が許容するとき、置換され得るか、または非置換であり得、第１級、第２級、第３級および第４級窒素原子を含む。例示的な窒素原子置換基としては、水素、−ＯＨ、−ＯＲａａ、−Ｎ（Ｒｃｃ）２、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｃｃ）２、−ＣＯ２Ｒａａ、−ＳＯ２Ｒａａ、−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）Ｒａａ、−Ｃ（＝ＮＲｃｃ）ＯＲａａ、−Ｃ（＝ＮＲｃｃ）Ｎ（Ｒｃｃ）２、−ＳＯ２Ｎ（Ｒｃｃ）２、−ＳＯ２Ｒｃｃ、−ＳＯ２ＯＲｃｃ、−ＳＯＲａａ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒｃｃ）２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲｃｃ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲｃｃ、−Ｐ（＝Ｏ）２Ｒａａ、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒａａ）２、−Ｐ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｒｃｃ）２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＮＲｃｃ）２、Ｃ１−１０アルキル、Ｃ１−１０ペルハロアルキル、Ｃ２−１０アルケニル、Ｃ２−１０アルキニル、Ｃ３−１０カルボシクリル、３〜１４員ヘテロシクリル、Ｃ６−１４アリールおよび５〜１４員ヘテロアリールが挙げられるがこれらに限定されないか、または窒素原子に付着した２つのＲｃｃ基が連結して、３〜１４員ヘテロシクリルまたは５〜１４員ヘテロアリール環を形成し、ここで、各アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールは、独立して、０、１、２、３、４または５個のＲｄｄ基で置換され、Ｒａａ、Ｒｂｂ、ＲｃｃおよびＲｄｄは、上で定義されたとおりである。
【０２７１】
ある特定の実施形態において、窒素原子上に存在する置換基は、窒素保護基（アミノ保護基とも称される）である。窒素保護基としては、−ＯＨ、−ＯＲａａ、−Ｎ（Ｒｃｃ）２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｃｃ）２、−ＣＯ２Ｒａａ、−ＳＯ２Ｒａａ、−Ｃ（＝ＮＲｃｃ）Ｒａａ、−Ｃ（＝ＮＲｃｃ）ＯＲａａ、−Ｃ（＝ＮＲｃｃ）Ｎ（Ｒｃｃ）２、−ＳＯ２Ｎ（Ｒｃｃ）２、−ＳＯ２Ｒｃｃ、−ＳＯ２ＯＲｃｃ、−ＳＯＲａａ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒｃｃ）２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲｃｃ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲｃｃ、Ｃ１−１０アルキル（例えば、アラルキル、ヘテロアラルキル）、Ｃ２−１０アルケニル、Ｃ２−１０アルキニル、Ｃ３−１０カルボシクリル、３〜１４員ヘテロシクリル、Ｃ６−１４アリールおよび５〜１４員ヘテロアリール基が挙げられるがこれらに限定されず、ここで、各アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アラルキル、アリールおよびヘテロアリールは、独立して、０、１、２、３、４または５個のＲｄｄ基で置換され、Ｒａａ、Ｒｂｂ、ＲｃｃおよびＲｄｄは、本明細書中で定義されるとおりである。窒素保護基は、当該分野で周知であり、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，３ｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９９（参照により本明細書中に組み込まれる）に記載されているものを含む。
【０２７２】
例えば、アミド基などの窒素保護基（例えば、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒａａ）としては、ホルムアミド、アセトアミド、クロロアセトアミド、トリクロロアセトアミド、トリフルオロアセトアミド、フェニルアセトアミド、３−フェニルプロパンアミド、ピコリンアミド、３−ピリジルカルボキサミド、Ｎ−ベンゾイルフェニルアラニル誘導体、ベンズアミド、ｐ−フェニルベンズアミド、ｏ−ニトロフェニルアセトアミド（ｎｉｔｏｐｈｅｎｙｌａｃｅｔａｍｉｄｅ）、ｏ−ニトロフェノキシアセトアミド、アセトアセトアミド、（Ｎ’−ジチオベンジルオキシアシルアミノ）アセトアミド、３−（ｐ−ヒドロキシフェニル）プロパンアミド、３−（ｏ−ニトロフェニル）プロパンアミド、２−メチル−２−（ｏ−ニトロフェノキシ）プロパンアミド、２−メチル−２−（ｏ−フェニルアゾフェノキシ）プロパンアミド、４−クロロブタンアミド、３−メチル−３−ニトロブタンアミド、ｏ−ニトロシンナミド、Ｎ−アセチルメチオニン誘導体、ｏ−ニトロベンズアミドおよびｏ−（ベンゾイルオキシメチル）ベンズアミドが挙げられるがこれらに限定されない。
【０２７３】
カルバメート基などの窒素保護基（例えば、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲａａ）としては、メチルカルバメート、エチルカルバメート（ｅｔｈｙｌ  ｃａｒｂａｍａｎｔｅ）、９−フルオレニルメチルカルバメート（Ｆｍｏｃ）、９−（２−スルホ）フルオレニルメチルカルバメート、９−（２，７−ジブロモ）フルオロエニルメチルカルバメート、２，７−ジ−ｔ−ブチル−［９−（１０，１０−ジオキソ−１０，１０，１０，１０−テトラヒドロチオキサンチル）］メチルカルバメート（ＤＢＤ−Ｔｍｏｃ）、４−メトキシフェナシルカルバメート（Ｐｈｅｎｏｃ）、２，２，２−トリクロロエチルカルバメート（Ｔｒｏｃ）、２−トリメチルシリルエチルカルバメート（Ｔｅｏｃ）、２−フェニルエチルカルバメート（ｈＺ）、１−（１−アダマンチル）−１−メチルエチル（Ａｄｐｏｃ）、１，１−ジメチル−２−ハロエチルカルバメート、１，１−ジメチル−２，２−ジブロモエチルカルバメート（ＤＢ−ｔ−ＢＯＣ）、１，１−ジメチル−２，２，２−トリクロロエチルカルバメート（ＴＣＢＯＣ）、１−メチル−１−（４−ビフェニリル）エチルカルバメート（Ｂｐｏｃ）、１−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−１−メチルエチルカルバメート（ｔ−Ｂｕｍｅｏｃ）、２−（２’−および４’−ピリジル）エチルカルバメート（Ｐｙｏｃ）、２−（Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシルカルボキサミド）エチルカルバメート、ｔ−ブチルカルバメート（ＢＯＣ）、１−アダマンチルカルバメート（Ａｄｏｃ）、ビニルカルバメート（Ｖｏｃ）、アリルカルバメート（Ａｌｌｏｃ）、１−イソプロピルアリルカルバメート（Ｉｐａｏｃ）、シンナミルカルバメート（Ｃｏｃ）、４−ニトロシンナミルカルバメート（Ｎｏｃ）、８−キノリルカルバメート、Ｎ−ヒドロキシピペリジニルカルバメート、アルキルジチオカルバメート、ベンジルカルバメート（Ｃｂｚ）、ｐ−メトキシベンジルカルバメート（Ｍｏｚ）、ｐ−ニトロベンジル（ｎｉｔｏｂｅｎｚｙｌ）カルバメート、ｐ−ブロモベンジルカルバメート、ｐ−クロロベンジルカルバメート、２，４−ジクロロベンジルカルバメート、４−メチルスルフィニルベンジルカルバメート（Ｍｓｚ）、９−アントリルメチルカルバメート、ジフェニルメチルカルバメート、２−メチルチオエチルカルバメート、２−メチルスルホニルエチルカルバメート、２−（ｐ−トルエンスルホニル）エチルカルバメート、［２−（１，３−ジチアニル）］メチルカルバメート（Ｄｍｏｃ）、４−メチルチオフェニルカルバメート（Ｍｔｐｃ）、２，４−ジメチルチオフェニルカルバメート（Ｂｍｐｃ）、２−ホスホニオエチルカルバメート（Ｐｅｏｃ）、２−トリフェニルホスホニオイソプロピルカルバメート（Ｐｐｏｃ）、１，１−ジメチル−２−シアノエチルカルバメート、ｍ−クロロ−ｐ−アシルオキシベンジルカルバメート、ｐ−（ジヒドロキシボリル）ベンジルカルバメート、５−ベンゾイソオキサゾリルメチルカルバメート、２−（トリフルオロメチル）−６−クロモニルメチルカルバメート（Ｔｃｒｏｃ）、ｍ−ニトロフェニルカルバメート、３，５−ジメトキシベンジルカルバメート、ｏ−ニトロベンジルカルバメート、３，４−ジメトキシ−６−ニトロベンジルカルバメート、フ���ニル（ｏ−ニトロフェニル）メチルカルバメート、ｔ−アミルカルバメート、Ｓ−ベンジルチオカルバメート、ｐ−シアノベンジルカルバメート、シクロブチルカルバメート、シクロヘキシルカルバメート、シクロペンチルカルバメート、シクロプロピルメチルカルバメート、ｐ−デシルオキシベンジルカルバメート、２，２−ジメトキシアシルビニルカルバメート、ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジメチルカルボキサミド）ベンジルカルバメート、１，１−ジメチル−３−（Ｎ，Ｎ−ジメチルカルボキサミド）プロピルカルバメート、１，１−ジメチルプロピニルカルバメート、ジ（２−ピリジル）メチルカルバメート、２−フラニルメチルカルバメート、２−ヨードエチルカルバメート、イソボルニル（ｉｓｏｂｏｒｙｎｌ）カルバメート、イソブチルカルバメート、イソニコチニルカルバメート、ｐ−（ｐ’−メトキシフェニルアゾ）ベンジルカルバメート、１−メチルシクロブチルカルバメート、１−メチルシクロヘキシルカルバメート、１−メチル−１−シクロプロピルメチルカルバメート、１−メチル−１−（３，５−ジメトキシフェニル）エチルカルバメート、１−メチル−１−（ｐ−フェニルアゾフェニル）エチルカルバメート、１−メチル−１−フェニルエチルカルバメート、１−メチル−１−（４−ピリジル）エチルカルバメート、フェニルカルバメート、ｐ−（フェニルアゾ）ベンジルカルバメート、２，４，６−トリ−ｔ−ブチルフェニルカルバメート、４−（トリメチルアンモニウム）ベンジルカルバメートおよび２，４，６−トリメチルベンジルカルバメートが挙げられるがこれらに限定されない。
【０２７４】
スルホンアミド基などの窒素保護基（例えば、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒａａ）としては、ｐ−トルエンスルホンアミド（Ｔｓ）、ベンゼンスルホンアミド、２，３，６，−トリメチル−４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｒ）、２，４，６−トリメトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｂ）、２，６−ジメチル−４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｐｍｅ）、２，３，５，６−テトラメチル−４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｅ）、４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｂｓ）、２，４，６−トリメチルベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｓ）、２，６−ジメトキシ−４−メチルベンゼンスルホンアミド（ｉＭｄｓ）、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホンアミド（Ｐｍｃ）、メタンスルホンアミド（Ｍｓ）、β−トリメチルシリルエタンスルホンアミド（ＳＥＳ）、９−アントラセンスルホンアミド、４−（４’，８’−ジメトキシナフチルメチル）ベンゼンスルホンアミド（ＤＮＭＢＳ）、ベンジルスルホンアミド、トリフルオロメチルスルホンアミドおよびフェナシルスルホンアミドが挙げられるがこれらに限定されない。
【０２７５】
他の窒素保護基としては、フェノチアジニル−（１０）−アシル誘導体、Ｎ’−ｐ−トルエンスルホニルアミノアシル誘導体、Ｎ’−フェニルアミノチオアシル誘導体、Ｎ−ベンゾイルフェニルアラニル誘導体、Ｎ−アセチルメチオニン誘導体、４，５−ジフェニル−３−オキサゾリン−２−オン、Ｎ−フタルイミド、Ｎ−ジチアスクシンイミド（Ｄｔｓ）、Ｎ−２，３−ジフェニルマレイミド、Ｎ−２，５−ジメチルピロール、Ｎ−１，１，４，４−テトラメチルジシリルアザシクロペンタン付加物（ＳＴＡＢＡＳＥ）、５置換１，３−ジメチル−１，３，５−トリアザシクロヘキサン−２−オン、５置換１，３−ジベンジル−１，３，５−トリアザシクロヘキサン−２−オン、１置換３，５−ジニトロ−４−ヒドロキシル、Ｎ−メチルアミン、Ｎ−アリルアミン、Ｎ−［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチルアミン（ＳＥＭ）、Ｎ−３−アセトキシプロピルアミン、Ｎ−（１−イソプロピル−４−ニトロ−２−オキソ−３−ピロオリン−３−イル）アミン、第四アンモニウム塩、Ｎ−ベンジルアミン、Ｎ−ジ（４−メトキシフェニル）メチルアミン、Ｎ−５−ジベンゾスベリルアミン、Ｎ−トリフェニルメチルアミン（Ｔｒ）、Ｎ−［（４−メトキシフェニル）ジフェニルメチル］アミン（ＭＭＴｒ）、Ｎ−９−フェニルフルオレニルアミン（ＰｈＦ）、Ｎ−２，７−ジクロロ−９−フルオレニルメチレンアミン、Ｎ−フェロセニルメチルアミノ（Ｆｃｍ）、Ｎ−２−ピコリルアミノＮ’−オキシド、Ｎ−１，１−ジメチルチオメチレンアミン、Ｎ−ベンジリデンアミン、Ｎ−ｐ−メトキシベンジリデンアミン、Ｎ−ジフェニルメチレンアミン、Ｎ−［（２−ピリジル）メシチル］メチレンアミン、Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノメチレン）アミン、Ｎ，Ｎ’−イソプロピリデンジアミン、Ｎ−ｐ−ニトロベンジリデンアミン、Ｎ−サリチリデンアミン、Ｎ−５−クロロサリチリデンアミン、Ｎ−（５−クロロ−２−ヒドロキシフェニル）フェニルメチレンアミン、Ｎ−シクロヘキシリデンアミン、Ｎ−（５，５−ジメチル−３−オキソ−１−シクロヘキセニル）アミン、Ｎ−ボラン誘導体、Ｎ−ジフェニルボリン酸誘導体、Ｎ−［フェニル（ペンタアシルクロム−またはタングステン）アシル］アミン、Ｎ−銅キレート、Ｎ−亜鉛キレート、Ｎ−ニトロアミン、Ｎ−ニトロソアミン、アミンＮ−オキシド、ジフェニルホスフィンアミド（Ｄｐｐ）、ジメチルチオホスフィンアミド（Ｍｐｔ）、ジフェニルチオホスフィンアミド（Ｐｐｔ）、ジアルキルホスホルアミデート、ジベンジルホスホルアミデート、ジフェニルホスホルアミデート、ベンゼンスルフェンアミド、ｏ−ニトロベンゼンスルフェンアミド（Ｎｐｓ）、２，４−ジニトロベンゼンスルフェンアミド、ペンタクロロベンゼンスルフェンアミド、２−ニトロ−４−メトキシベンゼンスルフェンアミド、トリフェニルメチルスルフェンアミドおよび３−ニトロピリジンスルフェンアミド（Ｎｐｙｓ）が挙げられるがこれらに限定されない。
【０２７６】
ある特定の実施形態において、酸素原子上に存在する置換基は、酸素保護基（ヒドロキシル保護基とも称される）である。酸素保護基としては、−Ｒａａ、−Ｎ（Ｒｂｂ）２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒａａ、−ＣＯ２Ｒａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）Ｒａａ、−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）ＯＲａａ、−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒａａ、−ＳＯ２Ｒａａ、−Ｓｉ（Ｒａａ）３、−Ｐ（Ｒｃｃ）２、−Ｐ（Ｒｃｃ）３、−Ｐ（＝Ｏ）２Ｒａａ、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒａａ）２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲｃｃ）２、−Ｐ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｒｂｂ）２および−Ｐ（＝Ｏ）（ＮＲｂｂ）２が挙げられるがこれらに限定されず、ここで、Ｒａａ、ＲｂｂおよびＲｃｃは、本明細書中で定義されるとおりである。酸素保護基は、当該分野で周知であり、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，３ｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９９（参照により本明細書中に組み込まれる）に記載されているものを含む。
【０２７７】
例示的な酸素保護基としては、メチル、メトキシルメチル（ＭＯＭ）、メチルチオメチル（ＭＴＭ）、ｔ−ブチルチオメチル、（フェニルジメチルシリル）メトキシメチル（ＳＭＯＭ）、ベンジルオキシメチル（ＢＯＭ）、ｐ−メトキシベンジルオキシメチル（ＰＭＢＭ），（４−メトキシフェノキシ）メチル（ｐ−ＡＯＭ）、グアイアコールメチル（ＧＵＭ）、ｔ−ブトキシメチル、４−ペンテニルオキシメチル（ＰＯＭ）、シロキシメチル、２−メトキシエトキシメチル（ＭＥＭ）、２，２，２−トリクロロエトキシメチル、ビス（２−クロロエトキシ）メチル、２−（トリメチルシリル）エトキシメチル（ＳＥＭＯＲ）、テトラヒドロピラニル（ＴＨＰ）、３−ブロモテトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、１−メトキシシクロヘキシル、４−メトキシテトラヒドロピラニル（ＭＴＨＰ）、４−メトキシテトラヒドロチオピラニル、４−メトキシテトラヒドロチオピラニルＳ，Ｓ−ジオキシド、１−［（２−クロロ−４−メチル）フェニル］−４−メトキシピペリジン−４−イル（ＣＴＭＰ）、１，４−ジオキサン−２−イル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフラニル、２，３，３ａ，４，５，６，７，７ａ−オクタヒドロ−７，８，８−トリメチル−４，７−メタノベンゾフラン−２−イル、１−エトキシエチル、１−（２−クロロエトキシ）エチル、１−メチル−１−メトキシエチル、１−メチル−１−ベンジルオキシエチル、１−メチル−１−ベンジルオキシ−２−フルオロエチル、２，２，２−トリクロロエチル、２−トリメチルシリルエチル、２−（フェニルセレニル）エチル、ｔ−ブチル、アリル、ｐ−クロロフェニル、ｐ−メトキシフェニル、２，４−ジニトロフェニル、ベンジル（Ｂｎ）、ｐ−メトキシベンジル、３，４−ジメトキシベンジル、ｏ−ニトロベンジル、ｐ−ニトロベンジル、ｐ−ハロベンジル、２，６−ジクロロベンジル、ｐ−シアノベンジル、ｐ−フェニルベンジル、２−ピコリル、４−ピコリル、３−メチル−２−ピコリルＮ−オキシド、ジフェニルメチル、ｐ，ｐ’−ジニトロベンズヒドリル、５−ジベンゾスベリル、トリフェニルメチル、α−ナフチルジフェニルメチル、ｐ−メトキシフェニルジフェニルメチル、ジ（ｐ−メトキシフェニル）フェニルメチル、トリ（ｐ−メトキシフェニル）メチル、４−（４’−ブロモフェナシルオキシフェニル）ジフェニルメチル、４，４’，４”−トリス（４，５−ジクロロフタルイミドフェニル）メチル、４，４’，４”−トリス（レブリノイルオキシフェニル）メチル、４，４’，４”−トリス（ベンゾイルオキシフェニル）メチル、３−（イミダゾール−１−イル）ビス（４’，４”−ジメトキシフェニル）メチル、１，１−ビス（４−メトキシフェニル）−１’−ピレニルメチル、９−アントリル、９−（９−フェニル）キサンテニル、９−（９−フェニル−１０−オキソ）アントリル、１，３−ベンゾジチオラン−２−イル、ベンズイソチアゾリルＳ，Ｓ−ジオキシド、トリメチルシリル（ＴＭＳ）、トリエチルシリル（ＴＥＳ）、トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）、ジメチルイソプロピルシリル（ＩＰＤＭＳ）、ジエチルイソプロピルシリル（ＤＥＩＰＳ）、ジメチルテキシルシリル、ｔ−ブチルジメチ���シリル（ＴＢＤＭＳ）、ｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、トリベンジルシリル、トリ−ｐ−キシリルシリル、トリフェニルシリル、ジフェニルメチルシリル（ＤＰＭＳ）、ｔ−ブチルメトキシフェニルシリル（ＴＢＭＰＳ）、ホルメート、ベンゾイルホルメート、アセテート、クロロアセテート、ジクロロアセテート、トリクロロアセテート、トリフルオロアセテート、メトキシアセテート、トリフェニルメトキシアセテート、フェノキシアセテート、ｐ−クロロフェノキシアセテート、３−フェニルプロピオネート、４−オキソペンタノエート（レブリネート）、４，４−（エチレンジチオ）ペンタノエート（レブリノイルジチオアセタール）、ピバロエート、アダマントエート、クロトネート、４−メトキシクロトネート、ベンゾエート、ｐ−フェニルベンゾエート、２，４，６−トリメチルベンゾエート（メシトエート）、メチルカーボネート、９−フルオレニルメチルカーボネート（Ｆｍｏｃ）、エチルカーボネート、２，２，２−トリクロロエチルカーボネート（Ｔｒｏｃ）、２−（トリメチルシリル）エチルカーボネート（ＴＭＳＥＣ）、２−（フェニルスルホニル）エチルカーボネート（Ｐｓｅｃ）、２−（トリフェニルホスホニオ）エチルカーボネート（Ｐｅｏｃ）、イソブチルカーボネート、ビニルカーボネート、アリルカーボネート、ｔ−ブチルカーボネート（ＢＯＣ）、ｐ−ニトロフェニルカーボネート、ベンジルカーボネート、ｐ−メトキシベンジルカーボネート、３，４−ジメトキシベンジルカーボネート、ｏ−ニトロベンジルカーボネート、ｐ−ニトロベンジルカーボネート、Ｓ−ベンジルチオカーボネート、４−エトキシ−１−ナフチルカーボネート（ｎａｐｔｈｔｈｙｌ  ｃａｒｂｏｎａｔｅ）、メチルジチオカーボネート、２−ヨードベンゾエート、４−アジドブチレート、４−ニトロ−４−メチルペンタノエート、ｏ−（ジブロモメチル）ベンゾエート、２−ホルミルベンゼンスルホネート、２−（メチルチオメトキシ）エチル、４−（メチルチオメトキシ）ブチレート、２−（メチルチオメトキシメチル）ベンゾエート、２，６−ジクロロ−４−メチルフェノキシアセテート、２，６−ジクロロ−４−（１，１，３，３−テトラメチルブチル）フェノキシアセテート、２，４−ビス（１，１−ジメチルプロピル）フェノキシアセテート、クロロジフェニルアセテート、イソブチレート、モノスクシノエート、（Ｅ）−２−メチル−２−ブテノエート、ｏ−（メトキシアシル）ベンゾエート、α−ナフトエート、ニトレート、アルキルＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルホスホロジアミデート、アルキルＮ−フェニルカルバメート、ボレート、ジメチルホスフィノチオイル、アルキル２，４−ジニトロフェニルスルフェネート、スルフェート、メタンスルホネート（メシレート）、ベンジルスルホネートおよびトシレート（Ｔｓ）が挙げられるがこれらに限定されない。
【０２７８】
ある特定の実施形態において、硫黄原子上に存在する置換基は、硫黄保護基（チオール保護基とも称される）である。硫黄保護基としては、−Ｒａａ、−Ｎ（Ｒｂｂ）２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒａａ、−ＣＯ２Ｒａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）Ｒａａ、−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）ＯＲａａ、−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒａａ、−ＳＯ２Ｒａａ、−Ｓｉ（Ｒａａ）３、−Ｐ（Ｒｃｃ）２、−Ｐ（Ｒｃｃ）３、−Ｐ（＝Ｏ）２Ｒａａ、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒａａ）２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲｃｃ）２、−Ｐ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｒｂｂ）２および−Ｐ（＝Ｏ）（ＮＲｂｂ）２が挙げられるがこれらに限定されず、ここで、Ｒａａ、ＲｂｂおよびＲｃｃは、本明細書中で定義されるとおりである。用語「保護基」および特に硫黄保護基は、当該分野で周知であり、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，３ｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９９（その全体が参照により本明細書中に組み込まれる）に記載されているものを含む。
【０２７９】
本明細書中で使用されるとき、用語「脱離基」は、有機合成化学の分野におけるその通常の意味を与えられており、求核剤によって置換されることができる原子または基のことを指す。好適な脱離基の例としては、ハロゲン（例えば、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩ（ヨウ素））、アルコキシカルボニルオキシ、アリールオキシカルボニルオキシ、アルカンスルホニルオキシ、アレーンスルホニルオキシ、アルキル−カルボニルオキシ（例えば、アセトキシ）、アリールカルボニルオキシ、アリールオキシ、メトキシ、Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミノ、ピキシルおよびハロホルメートが挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの場合において、脱離基は、スルホン酸エステル（例えば、トルエンスルホネート（トシレート、−ＯＴｓ）、メタンスルホネート（メシレート、−ＯＭｓ）、ｐ−ブロモベンゼンスルホニルオキシ（ブロシレート、−ＯＢｓ）またはトリフルオロメタンスルホネート（トリフレート、−ＯＴｆ））である。いくつかの場合において、脱離基は、ブロシレート、例えば、ｐ−ブロモベンゼンスルホニルオキシである。いくつかの場合において、脱離基は、ノシレート、例えば、２−ニトロベンゼンスルホニルオキシである。いくつかの実施形態において、脱離基は、スルホネート含有基である。いくつかの実施形態において、脱離基は、トシレート基である。脱離基は、ホスフィンオキシド（例えば、光延反応中に形成される）または内部脱離基（例えば、エポキシドまたは環状スルフェート）でもあり得る。脱離基の他の非限定的な例は、水、アンモニア、アルコール、エーテル部分、チオエーテル部分、ハロゲン化亜鉛、マグネシウム部分、ジアゾニウム塩および銅部分である。
定義：
【０２８０】
本明細書中で使用されるとき、用語「グリカン」とは、多糖、オリゴ糖または単糖のことを指す。グリカンは、糖残基のモノマーまたはポリマーであり得、直鎖状または分枝状であり得る。グリカンは、天然の糖残基（例えば、グルコース、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルノイラミン酸、ガラクトース、マンノース、フコース、ヘキソース、アラビノース、リボース、キシロースなど）および／または改変された糖（例えば、２’−フルオロリボース、２’−デオキシリボース、ホスホマンノース、６’スルホＮ−アセチルグルコサミンなど）を含み得る。グリカンは、複合糖質（例えば、糖タンパク質、糖脂質、糖ペプチド、グリコプロテオーム、ペプチドグリカン、リポ多糖またはプロテオグリカン）の炭水化物部分のことを指すためにも本明細書中で使用される。グリカンは、通常、単糖の間のＯ−グリコシド結合からもっぱらなる。例えば、セルロースは、β−１，４結合したＤ−グルコースから構成されるグリカン（またはより詳細にはグルカン）であり、キチンは、β−１，４結合したＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミンから構成されるグリカンである。グリカンは、単糖残基のホモポリマーまたはヘテロポリマーであり得、直鎖状または分枝状であり得る。グリカンは、糖タンパク質およびプロテオグリカンにおけるように、タンパク質に付着された状態で見られ得る。それらは、通常、細胞の外表面上に見られる。Ｏ結合型およびＮ結合型グリカンは、真核生物において非常に共通しているが、原核生物では、見られることもあるが、それほど共通していない。
【０２８１】
本明細書中で使用されるとき、用語「フコース」、「コアフコース」および「コアフコース残基」は、交換可能に使用され、Ｎ−アセチルグルコサミンに連結したα１，６位におけるフコースのことを指す。
【０２８２】
本明細書中で使用されるとき、用語「Ｎ−グリカン」、「Ｎ結合型グリカン」、「Ｎ結合型グリコシル化」、「Ｆｃグリカン」および「Ｆｃグリコシル化」は、交換可能に使用され、Ｆｃ含有ポリペプチドにおけるアスパラギン残基のアミド窒素に連結されたＮ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）によって付着されるＮ結合型オリゴ糖のことを指す。用語「Ｆｃ含有ポリペプチド」とは、Ｆｃ領域を含む抗体などのポリペプチドのことを指す。
【０２８３】
本明細書中で使用されるとき、用語「グリコシル化パターン」および「グリコシル化プロファイル」は、交換可能に使用され、糖タンパク質または抗体から酵素的または化学的に放出され、次いで、例えば、ＬＣ−ＨＰＬＣまたはＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳなどを用いて、それらの炭水化物構造について解析された、Ｎ−グリカン種の特徴的な「フィンガープリント」のことを指す。例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌ．１，Ｎｏ．１（２００５），ｐｐ．２８−５７における概説（その全体が参照により本明細書中に組み込まれる）を参照のこと。
【０２８４】
本明細書中で使用されるとき、「ＨＩＶ−１広域中和抗体」は、複数のＨＩＶ−１ウイルス株を中和する中和抗体であり、以下の抗体の典型のうちのいずれか１つまたはそれを超えるものを含み得るかまたは除外し得る：
【表１】
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【０２８５】
本明細書中で使用される「定義されたグリカンプローブ位置」は、すべてが同様のグリカン構造を有するある密度のグリカン分子が付着した固体支持体の予め定義された領域である。用語「グリカン領域」または「選択された領域」または単に「領域」は、定義されたグリカンプローブ位置という用語に対して本明細書中で交換可能に使用される。定義されたグリカンプローブ位置は、任意の好都合な形状、例えば、円形、長方形、楕円形、楔形などを有し得る。いくつかの実施形態において、定義されたグリカンプローブ位置、およびゆえに、異なる各グリカン型または構造的に関連したグリカンの異なる群が付着した領域は、約１ｃｍ２より小さいか、または１ｍｍ２未満または０．５ｍｍ２未満である。いくつかの実施形態において、グリカンプローブ位置は、約１０，０００μｍ２未満または１００μｍ２未満の面積を有する。定義された各グリカンプローブ位置内に付着したグリカン分子は、実質的に同一である。さらに、複数コピーの各グリカン型が、定義された各グリカンプローブ位置内に存在する。定義された各グリカンプローブ位置内の各グリカン型のコピー数は、数千から数百万であり得る。
【０２８６】
本明細書中で使用されるとき、本開示のアレイは、各々が「１つの型のグリカン分子」を有する定義されたグリカンプローブ位置を有する。使用される「１つの型のグリカン分子」は、実質的に構造的に同一のグリカン分子の群または構造的に類似のグリカン分子の群であり得る。定義されたグリカンプローブ位置内のすべてのグリカン分子が、同一の構造を有する必要はない。いくつかの実施形態において、単一の定義されたグリカンプローブ位置内のグリカンは、構造異性体であるか、可変数の糖単位を有するか、またはいくらか異なる方法で分岐している。しかしながら、通常、定義されたグリカンプローブ位置内のグリカンは、実質的に同じ型の糖単位を有し、かつ／または各型の糖単位をほぼ同じ比率で有する。定義されたグリカンプローブ位置内のグリカンの糖単位上の置換基のタイプも、実質的に同じである。
【０２８７】
結合の検出は、例えば、試験分子に直接付着した標識の検出による、直接的なものであり得る。あるいは、検出は、例えば、試験分子に結合し得る、標識された二次抗体または他の標識された分子を検出することによる、間接的なものであり得る。結合した標識は、任意の利用可能な検出方法を用いて観察され得る。例えば、アレイＣＣＤ分析器を用いることにより、アレイに結合した化学発光標識された分子を検出することができる。
【０２８８】
本明細書中で使用されるとき、用語「抗原」は、免疫応答を誘発することができる任意の物質と定義される。
【０２８９】
本明細書中で使用されるとき、用語「免疫原性」とは、免疫原、抗原またはワクチンが免疫応答を刺激する能力のことを指す。
【０２９０】
本明細書中で使用されるとき、用語「エピトープ」は、抗体またはＴ細胞レセプターの抗原結合部位と接触する抗原分子の部分と定義される。
【０２９１】
本明細書中で使用されるとき、用語「ワクチン」とは、病原生物全体（殺滅されたものまたは弱めたもの）またはそのような生物の構成要素（例えば、タンパク質、ペプチドまたは多糖）からなる抗原を含む調製物のことを指し、それらの生物が引き起こす疾患に対する免疫を付与するために使用される。ワクチン調製物は、天然のものであり得るか、合成のものであり得るか、または組換えＤＮＡ技術に由来し得る。
【０２９２】
本明細書中で使用されるとき、用語「抗原特異的」とは、特定の抗原またはその抗原のフラグメントが供給されると、特異的な細胞増殖が生じるような細胞集団の特性のことを指す。
【０２９３】
本明細書中で使用されるとき、用語「特異的に結合する」とは、結合対（例えば、抗体と抗原）の間の相互作用のことを指す。様々な場合において、特異的に結合することは、約１０−６モル／リットル、約１０−７モル／リットルまたは約１０−８モル／リットルまたはそれ未満の親和性定数によって具体化され得る。
【０２９４】
「単離された」抗体は、その天然の環境の構成要素から特定され、分離され、かつ／または回収された抗体である。天然の環境の夾雑物質構成要素は、その抗体を研究、診断または治療に使用するのを干渉し得る材料であり、それらとしては、酵素、ホルモンおよび他のタンパク質性または非タンパク質性溶質が挙げられ得る。１つの実施形態において、その抗体は、（１）例えば、Ｌｏｗｒｙ法によって測定されたとき、９５重量％超の抗体にまで、いくつかの実施形態では、９９重量％超にまで精製されるか、（２）例えば、スピニングカップシークエネーターの使用によって、Ｎ末端もしくは内部のアミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度にまで精製されるか、または（３）例えば、クマシーブルー染色もしくは銀染色を用いる還元条件もしくは非還元条件下のＳＤＳ−ＰＡＧＥによって均一にまで精製される。単離された抗体には、その抗体の天然の環境の少なくとも１つの構成要素が存在しないので、組換え細胞内のインサイチュの抗体が含まれる。しかしながら、通常、単離された抗体は、少なくとも１つの精製工程によって調製され得る。
【０２９５】
本明細書中で交換可能に使用される用語「支持体」または「基材」とは、１つまたはそれを超える分子と直接または間接的に結合、付着、合成、連結、またはその他の方法で会合した１種または複数種の構成要素を含む材料または材料の群のことを指す。支持体は、生物学的、非生物学的、無機、有機またはこれらの組み合わせである材料から構築され得る。支持体は、特定の実施形態内のその用途に基づいて、任意の適切なサイズまたは配置で存在し得る。
【０２９６】
本明細書中で使用される用語「標的」とは、アッセイにおける目的の種のことを指す。標的は、天然に存在し得るか、または合成であり得るか、または組み合わせであり得る。標的は、変更されていなくてもよい（例えば、生物内またはそのサンプル内でそのまま使用されてもよい）し、そのアッセイに適切な様式で変更されてもよい（例えば、精製、増幅、濾過されてもよい）。標的は、好適な手段を介して、ある特定のアッセイ内の結合メンバーに結合され得る。標的の非限定的な例としては、特異的な抗原決定基（例えば、ウイルス、細胞または他の材料上の）と反応性の、抗体またはそのフラグメント、細胞膜レセプター、モノクローナル抗体および抗血清、薬物、オリゴヌクレオチド、核酸、ペプチド、補因子、糖、レクチン、多糖、細胞、細胞膜およびオルガネラが挙げられるがこれらに限定されない。標的は、アッセイに応じて任意の好適なサイズであり得る。
【０２９７】
句「実質的に類似の」、「実質的に同じ」、「等価な」または「実質的に等価な」は、本明細書中で使用されるとき、当業者が、２つの数値（例えば、ある分子に関連する一方の数値と参照／比較分子に関連する他方の数値）の間の差を、前記値によって計測された生物学的な特徴（例えば、Ｋｄ値、抗ウイルス効果など）の文脈の範囲内でほとんどまたはまったく生物学的有意性および／または統計的有意性が無いと考えるような、その２つの値の間の十分に高い程度の類似性を指す。前記２つの値の差は、参照／比較分子に対する値に対して、例えば、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満および／または約１０％未満である。
【０２９８】
句「実質的に低い」または「実質的に異なる」は、本明細書中で使用されるとき、当業者が、２つの数値（通常、ある分子に関連する一方の数値と参照／比較分子に関連する他方の数値）の間の差を、前記値（例えば、Ｋｄ値）によって計測された生物学的な特徴の文脈の範囲内で統計的に有意であると考えるような、その２つの値の間の十分に高い程度の差を指す。前記２つの値の差は、参照／比較分子に対する値に対して、例えば、約１０％超、約２０％超、約３０％超、約４０％超および／または約５０％超である。
【０２９９】
「結合親和性」とは、概して、ある分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合性の相互作用の総計の強度のことを指す。別段示されない限り、本明細書中で使用されるとき、「結合親和性」とは、結合対のメンバー間の（例えば、抗体と抗原との間の）１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性のことを指す。パートナーＹに対する分子Ｘの親和性は、一般に、解離定数（Ｋｄ）によって表され得る。親和性は、本明細書中に記載される方法をはじめとした当該分野で公知の一般的な方法によって計測され得る。低親和性抗体は、一般に、抗原にゆっくり結合して、迅速に解離する傾向があるのに対して、高親和性抗体は、一般に、より速く抗原に結合し、より長く結合したままである傾向がある。結合親和性を計測する種々の方法が当該分野で公知であり、本開示の目的で、それらの方法のいずれを用いることもできる。特定の例証的な実施形態は、以下に記載される。
【０３００】
「ポリヌクレオチド」すなわち「核酸」は、本明細書中で交換可能に使用されるとき、任意の長さのヌクレオチドのポリマーのことを指し、ＤＮＡおよびＲＮＡを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾ヌクレオチドもしくは塩基、および／またはそれらのアナログ、あるいはＤＮＡもしくはＲＮＡポリメラーゼまたは合成反応によってポリマーに組み込まれ得る任意の基質であり得る。ポリヌクレオチドは、修飾ヌクレオチド（例えば、メチル化ヌクレオチドおよびそれらのアナログ）を含み得る。ヌクレオチド構造への修飾は、存在する場合、ポリマーのアセンブリの前または後に付与され得る。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド構成要素によって中断され得る。ポリヌクレオチドは、合成の後に、標識との結合体化などによって、さらに修飾され得る。他のタイプの修飾としては、例えば、「キャップ」、アナログによる１つまたはそれを超える天然に存在するヌクレオチドの置換、インターヌクレオチド修飾、例えば、無電荷結合（例えば、メチルホスホネート、ホスホトリエステル、ホスホアミデート、カルバメートなど）および荷電結合（例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエートなど）を有するもの、ペンダント部分、例えば、タンパク質（例えば、ヌクレアーゼ、トキシン、抗体、シグナルペプチド、ｐｌｙ−Ｌ−リジンなど）を含むもの、介入物（例えば、アクリジン、ソラレンなど）を有するもの、キレート剤（例えば、金属、放射性金属、ホウ素、酸化金属など）を含むもの、アルキル化剤を含むもの、改変された結合を有するもの（例えば、アルファアノマー核酸など）、ならびに無修飾の形態のポリヌクレオチドが挙げられる。さらに、糖に通常存在する任意のヒドロキシル基は、例えば、ホスホネート基、リン酸基によって置換され得るか、標準的な保護基によって保護され得るか、またはさらなるヌクレオチドへのさらなる結合を準備するために活性化され得るか、または固体もしくは半固体支持体に結合体化され得る。５’および３’末端のＯＨは、リン酸化され得るか、またはアミンもしくは１〜２０個の炭素原子の有機キャッピング基部分で置換され得る。他のヒドロキシルは、標準的な保護基に誘導体化され得る。ポリヌクレオチドは、当該分野で広く公知である類似の形態のリボース糖またはデオキシリボース糖も含み得、それらとしては、例えば、２’−Ｏ−メチル−、２’−Ｏ−アリル、２’−フルオロ−または２’−アジド−リボース、炭素環式糖アナログ、α−アノマー糖、エピマー糖（例えば、アラビノース、キシロースまたはリキソース）、ピラノース糖、フラノース糖、セドヘプツロース、非環式アナログおよび基本的なヌクレオシドアナログ（例えば、メチルリボシド）が挙げられる。１つまたはそれを超えるホスホジエステル結合が、代替の連結基によって置換され得る。これらの代替の連結基としては、ホスフェートが、Ｐ（Ｏ）Ｓ（「チオエート」）、Ｐ（Ｓ）Ｓ（「ジチオエート」）、「（Ｏ）ＮＲ２（「アミデート」）、Ｐ（Ｏ）Ｒ、Ｐ（Ｏ）ＯＲ’、ＣＯまたはＣＨ２（「ホルムアセタール」）（ここで、各ＲまたはＲ’は、独立して、Ｈ、またはエーテル（−Ｏ−）結合、アリール、アルケニル、シク���アルキル、シクロアルケニルもしくはアラルジルを必要に応じて含む置換もしくは非置換アルキル（１〜２０Ｃ）である）によって置換された実施形態が挙げられるがこれらに限定されない。ポリヌクレオチドにおけるすべての結合が同一である必要はない。前述の記載は、ＲＮＡおよびＤＮＡをはじめとした本明細書中で言及されるすべてのポリヌクレオチドに適用される。
【０３０１】
「オリゴヌクレオチド」は、本明細書中で使用されるとき、概して、短い、通常は一本鎖で、通常は合成のポリヌクレオチドのことを指し、これは、通常、約２００ヌクレオチド長未満であるが、必ずしもそうであるわけではない。用語「オリゴヌクレオチド」および「ポリヌクレオチド」は、相互排他的でない。ポリヌクレオチドに対する上記の記載は、オリゴヌクレオチドにも等しくかつ十分に適用できる。
【０３０２】
「抗体」（Ａｂ）および「免疫グロブリン」（ＩＧ）は、同じ構造特徴を有する糖タンパク質である。抗体は、特異的抗原に対して結合特異性を示す一方、免疫グロブリンは、抗体と、一般に抗原特異性を欠く他の抗体様分子との両方を含む。後者の種類のポリペプチドは、例えば、リンパ系によって低レベルで、およびミエローマによって高レベルで産生される。
【０３０３】
用語「抗体」および「免疫グロブリン」は、最も広い意味において交換可能に使用され、それらには、モノクローナル抗体（例えば、完全長またはインタクトなモノクローナル抗体）、ポリクローナル抗体、一価抗体、多価抗体、多重特異性抗体（例えば、所望の生物学的活性を示す限り、二重特異性抗体）が含まれ、ある特定の抗体フラグメント（本明細書中に詳細に記載されるような）も含まれ得る。抗体は、キメラ抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体および／または親和性成熟抗体であり得る。
【０３０４】
抗体の「可変領域」または「可変ドメイン」とは、抗体の重鎖または軽鎖のアミノ末端ドメインのことを指す。これらのドメインは、通常、抗体の最も変わりやすい部分であり、抗原結合部位を含む。
【０３０５】
用語「可変」とは、可変ドメインのある特定の部分の配列が抗体間で広く異なり、その特定の部分が、特定の抗原に対する特定の各抗体の結合および特異性において用いられる事実のことを指す。しかしながら、可変性は、抗体の可変ドメイン全体にわたって均等に分布していない。可変性は、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインの両方における相補性決定領域（ＣＤＲ）または超可変領域と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク（ＦＲ）と呼ばれる。天然の重鎖および軽鎖の可変ドメインは、各々、４つのＦＲ領域を含み、これらのＦＲ領域は、大部分はベータシート配置をとり、３つのＣＤＲによって接続されており、これらのＣＤＲは、そのベータシート構造を接続するループを形成し、いくつかの場合ではそのベータシート構造の一部を形成するループを形成する。各鎖におけるＣＤＲは、ＦＲ領域によって互いにおよび他の鎖のＣＤＲと近位に保持され、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）を参照のこと）。定常ドメインは、抗体と抗原との結合には直接関わらないが、様々なエフェクター機能（例えば、抗体依存性細胞毒性における抗体の関与）を示す。
【０３０６】
抗体をパパインで消化すると、「Ｆａｂ」フラグメントと呼ばれる２つの同一の抗原結合フラグメント（各々が単一の抗原−結合部位を有する）および残りの「Ｆｃ」フラグメント（その名称は容易に結晶化する能力を反映している）が生成する。ペプシン処理すると、２つの抗原結合部位を有しなお抗原を架橋することができるＦ（ａｂ’）２フラグメントが生じる。
【０３０７】
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識部位および抗原結合部位を含む最小の抗体フラグメントである。二本鎖のＦｖ種では、この領域は、非共有結合性の密接な会合での１つの重鎖可変ドメインおよび１つの軽鎖可変ドメインの二量体からなる。一本鎖のＦｖ種では、軽鎖および重鎖が、二本鎖Ｆｖ種におけるそれと類似の「二量体」構造として会合し得るように、１つの重鎖可変ドメインおよび１つの軽鎖可変ドメインが、可動性ペプチドリンカーによって共有結合的に連結され得る。この配置では、各可変ドメインの３つのＣＤＲは、ＶＨ−ＶＬ二量体の表面上の抗原結合部位を定義するように相互作用する。これらの６つのＣＤＲが、集合的に抗体に対して抗原結合特異性をもたらす。しかしながら、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのＣＤＲだけを含むＦｖの半分）であっても、結合部位全体より低い親和性ではあるが、抗原を認識し、結合する能力を有する。
【０３０８】
Ｆａｂフラグメントは、軽鎖の定常ドメインおよび重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）も含む。Ｆａｂ’フラグメントは、抗体ヒンジ領域の１つまたはそれを超えるシステインを含む、重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端に数残基が付加されているという点でＦａｂフラグメントと異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基が遊離チオール基を有するＦａｂ’に対する本明細書中での呼称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体フラグメントは、元々、間にヒンジシステインを有するＦａｂ’フラグメントの対として生成された。抗体フラグメントの他の化学的結合も知られている。
【０３０９】
任意の脊椎動物種由来の抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパー（κ）およびラムダ（λ）と呼ばれる明確に異なる２つのタイプのうちの１つに割り当てられ得る。
【０３１０】
重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、抗体（免疫グロブリン）は、異なるクラスに割り当てられ得る。免疫グロブリンには主要なクラスが５つあり：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭ、これらのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２にさらに分けられ得る。異なるクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γおよびμと呼ばれる。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造および３次元配置は、周知であり、例えば、Ａｂｂａｓら、Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ  ｅｄ．（２０００）に広く説明されている。抗体は、１つまたはそれを超える他のタンパク質またはペプチドと抗体との共有結合性会合または非共有結合性会合によって形成されるより大きな融合分子の一部であり得る。
【０３１１】
用語「完全長抗体」、「インタクトな抗体」および「ホール抗体」は、下記で定義されるような抗体フラグメントではなく実質的にインタクトな形態の抗体のことを指すために交換可能に本明細書中で使用される。これらの用語は、特に、Ｆｃ領域を含む重鎖を有する抗体のことを指す。
【０３１２】
「抗体フラグメント」は、インタクトな抗体の一部だけを含み、ここで、その一部は、その一部がインタクトな抗体に存在するときにその一部に通常関連する、少なくとも１つの、およびほとんどまたはすべての、機能を保持する。１つの実施形態において、抗体フラグメントは、インタクトな抗体の抗原結合部位を含むので、抗原に結合する能力を保持している。別の実施形態において、抗体フラグメント、例えば、Ｆｃ領域を含む抗体フラグメントは、それがインタクトな抗体に存在するときにＦｃ領域に通常関連する生物学的機能（例えば、ＦｃＲｎ結合性、抗体半減期の調節、ＡＤＣＣ機能および補体結合）の少なくとも１つを保持している。１つの実施形態において、抗体フラグメントは、インタクトな抗体と実質的に類似のインビボ半減期を有する一価抗体である。例えば、そのような抗体フラグメントは、そのフラグメントにインビボ安定性を付与することができるＦｃ配列に連結された抗原結合アームを含み得る。
【０３１３】
本明細書中で使用される用語「モノクローナル抗体」とは、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体のことを指し、すなわち、その集団を構成する個々の抗体は、少量で存在し得る、考えられる天然に存在する変異を除いては、同一である。したがって、修飾成句「モノクローナル」は、抗体の特徴を、別々の抗体の混合物でないと示す。そのようなモノクローナル抗体は、代表的には、標的に結合するポリペプチド配列を含む抗体を含み、ここで、その標的に結合するポリペプチド配列は、複数のポリペプチド配列から単一の標的結合ポリペプチド配列を選択することを含むプロセスによって得られたものである。例えば、その選択プロセスは、複数のクローン（例えば、ハイブリドーマクローン、ファージクローンまたは組換えＤＮＡクローンのプール）からユニークなクローンを選択することであり得る。選択された標的結合配列は、例えば、標的に対する親和性を改善するため、標的結合配列をヒト化するため、細胞培養におけるその産生を改善するため、インビボにおけるその免疫原性を低下させるため、多重特異性抗体などを作製するために、さらに変更され得ること、および変更された標的結合配列を含む抗体も、本開示のモノクローナル抗体であることが、理解されるべきである。異なる決定基（エピトープ）に対して産生された代表的には異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、ある抗原上の単一の決定基に対して産生されている。モノクローナル抗体調製物は、その特異性に加えて、通常、他の免疫グロブリンが混入していないという点において有益である。修飾成句「モノクローナル」は、抗体の特徴を、実質的に均一な抗体集団から得られたと示すのであって、任意の特定の方法による抗体の作製を必要とすると解釈されるべきでない。例えば、本開示に従って使用されるモノクローナル抗体は、種々の手法によって作製され得、それらとしては、例えば、ハイブリドーマ法（例えば、Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）；Ｈａｒｌｏｗら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ  ｅｄ．１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ５６３−６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１））、組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照のこと）、ファージディスプレイ技術（例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）；Ｍａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９２）；Ｓｉｄｈｕら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９−３１０（２００４）；Ｌｅｅら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３（２００４）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０１（３４）：１２４６７−１２４７２（２００４）；およびＬｅｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８４（１−２）：１１９−１３２（２００４）を参照のこと）、��よびヒト免疫グロブリン遺伝子座またはヒト免疫グロブリン配列をコードする遺伝子の一部または全部を有する動物においてヒト抗体またはヒト様抗体を作製するための技術が挙げられる（例えば、ＷＯ９８／２４８９３；ＷＯ９６／３４０９６；ＷＯ９６／３３７３５；ＷＯ９１／１０７４１；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：２５５１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｎａｔｕｒｅ  ３６２：２５５−２５８（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎら、Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：３３（１９９３）；米国特許第５，５４５，８０７号；同第５，５４５，８０６号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；同第５，６６１，０１６号；Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ．Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３（１９９２）；Ｌｏｎｂｅｒｇら、Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８５６−８５９（１９９４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８１２−８１３（１９９４）；Ｆｉｓｈｗｉｌｄら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８４５−８５１（１９９６）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８２６（１９９６）およびＬｏｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｈｕｓｚａｒ，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３（１９９５）を参照のこと。
【０３１４】
本明細書中のモノクローナル抗体は、「キメラ」抗体を明確に含み、このキメラ抗体では、重鎖および／または軽鎖の一部が、特定の種に由来するかまたは特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一であるかまたは相同である一方で、それらの鎖の残りは、それらが所望の生物学的活性を示す限り、別の種に由来するかまたは別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体ならびにそのような抗体のフラグメントにおける対応する配列と同一または相同である（米国特許第４，８１６，５６７号；およびＭｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：６８５１−６８５５（１９８４））。
【０３１５】
「ヒト化」型の非ヒト（例えば、マウス）抗体は、非ヒト免疫グロブリン由来の最小配列を含むキメラ抗体である。１つの実施形態において、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域の残基が、所望の特異性、親和性および／または能力を有する、マウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）の超可変領域残基によって置換された、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。いくつかの場合において、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基も、対応する非ヒト残基によって置換される。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体には見られない残基を含み得る。これらの改変は、抗体の性能をさらに洗練させるために行われる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つおよび代表的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、ここで、超可変ループのすべてまたは実質的にすべてが、非ヒト免疫グロブリンの超可変ループに対応し、ＦＲのすべてまたは実質的にすべてが、ヒト免疫グロブリン配列のＦＲである。ヒト化抗体は、必要に応じて、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、代表的にはヒト免疫グロブリンの少なくとも一部も含み得る。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９（１９８８）；およびＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６（１９９２）を参照のこと。以下の総論およびそれらにおいて引用されている参考文献：Ｖａｓｗａｎｉ  ａｎｄ  Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ａｎｎ．Ａｌｌｅｒｇｙ，Ａｓｔｈｍａ  ＆  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１：１０５−１１５（１９９８）；Ｈａｒｒｉｓ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ  ２３：１０３５−１０３８（１９９５）；Ｈｕｒｌｅ  ａｎｄ  Ｇｒｏｓｓ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．５：４２８−４３３（１９９４）も参照のこと。
【０３１６】
本明細書中で使用されるとき、「正常レベル」は、例えば、正常患者または正常患者集団由来のサンプル中のＴＡＣＡ結合抗体のレベルの測定値に基づく参照値または参照範囲であり得る。「正常レベル」は、例えば、正常患者または正常患者集団由来のサンプル中のＴＡＣＡの測定値に基づく参照値または参照範囲でもあり得る。
【０３１７】
本明細書中で使用されるとき、「被験体」は、哺乳動物である。そのような哺乳動物には、家畜化された動物、家畜、実験において使用される動物、動物園の動物などが含まれる。いくつかの実施形態において、被験体は、ヒトである。
【０３１８】
「障害」は、本開示の抗体による処置から恩恵を受け得る任意の症状である。これには、哺乳動物を問題の障害にさせる病理学的な症状をはじめとした慢性および急性の障害または疾患が含まれる。本明細書中で処置されるべき障害の非限定的な例としては、ＨＩＶが挙げられる。
【０３１９】
以下の定義は、本願全体を通じて使用されるより一般的な用語である。
【０３２０】
本明細書中および添付の請求項で使用されるとき、単数形「ａ」、「および」および「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに他のことを指示しない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「輸送エンハンサー（ａ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔ  ｅｎｈａｎｃｅｒ）」は、複数の輸送エンハンサーならびに単一の輸送エンハンサーを包含する。「キレート剤（ａ  ｃｈｅｌａｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）」に対する言及は、２つまたはそれを超えるキレート剤ならびに単一のキレート剤に対する言及などを含む。本明細書および以下の請求項では、以下の意味を有すると定義されるものとするいくつかの用語に言及する：
【０３２１】
本明細書中で使用される用語「処置する」および「処置」とは、症候の重症度および／もしくは頻度を低下させるため、その症候および／もしくはそれらの根本原因を排除するため、ならびに／または損傷の改善もしくは治療を促進するための、有害な症状、障害または疾患に苦しんでいる臨床的に症候性の個体にある作用物質または製剤を投与することを指す。用語「予防する」および「予防」とは、特定の有害な症状、障害または疾患にかかりやすい臨床的に無症候性の個体にある作用物質または組成物を投与することを指し、ゆえに、症候の発生および／またはそれらの根本原因の予防に関する。別段本明細書中に明示的または暗に示されない限り、用語「処置」（または「処置する」）は、可能な予防に対する言及なしに使用される場合でも、予防が同様に包含されることが意図されている。
【０３２２】
「随意の置換基」または「必要に応じて存在する添加物」におけるような「随意の」または「必要に応じて存在する」は、その記載がその後に記載される構成要素（例えば、置換基または添加物）が存在する場合および存在しない場合を含むように、その構成要素が、存在してもよいし、存在しなくてもよいことを意味する。
【０３２３】
「薬学的に許容され得る」は、生物学的にまたはその他の方法で望ましくなくない材料を意味し、例えば、その材料は、いかなる望ましくない生物学的作用も引き起こさずに、または当該剤形の製剤の他の構成要素のいずれとも有害な様式で相互作用せずに、本開示の製剤中に組み込まれ得る。しかしながら、用語「薬学的に許容され得る」が、薬学的賦形剤のことを指すために使用されるとき、その賦形剤は、毒物学的試験および製造試験の必要な基準を満たしていること、ならびに／または米国食品医薬品局が作成したＩｎａｃｔｉｖｅ  Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ  Ｇｕｉｄｅに含められていることが暗示されている。下記でより詳細に説明されるように、「薬理学的に活性な」誘導体またはアナログにおけるような「薬理学的に活性な」（または単に「活性な」）とは、親剤と同じタイプの薬理学的活性を有する誘導体またはアナログのことを指す。
【０３２４】
本明細書中で使用されるとき、用語「抗原」は、免疫応答を誘発することができる任意の物質と定義される。
【０３２５】
本明細書中で使用されるとき、用語「免疫原」とは、抗原、または抗原の産生を誘導することができる物質（例えば、ＤＮＡワクチン）のことを指す。
【０３２６】
本開示は、どのタイプのタンパク質、レセプター、抗体、脂質、核酸、炭水化物ならびに他の分子および物質が所与のグリカン構造に結合し得るかを特定するために使用され得るグリカンのライブラリーおよびアレイを提供する。
【０３２７】
本開示のアレイおよび方法は、非常に正確な結果も提供する。本開示のライブラリーおよびアレイは、多数かつ多様なグリカンを提供する。非限定的な例として、本開示のライブラリーおよびアレイは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも１０個または少なくとも１００個のグリカンを有する。いくつかの実施形態において、本開示のライブラリーおよびアレイは、アレイ１つあたり約１〜約１００，０００個または約１〜約１０，０００個または約１〜約１，０００個または約１〜約１００個または約２〜約１００個または約２〜約１０個または約１〜約１０個の異なるグリカンを有する。そのような多数のグリカンのおかげで、数多くのグリカン型のアッセイが同時に行われる。本明細書中に記載されるように、本アレイは、種々のグリカン結合タンパク質を首尾良くスクリーニングするために使用された。本開示のアレイ上のグリカンの組成は、必要に応じて変更され得る。多くの異なる複合糖質（ｇｌｙｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ）が、本開示のアレイに組み込まれ得、それらの複合糖質としては、例えば、天然に存在するグリカンまたは合成グリカン、糖タンパク質、糖ペプチド、糖脂質、細菌細胞壁グリカンおよび植物細胞壁グリカンなどが挙げられる。
【０３２８】
本開示の様々な実施形態に従って適切に形成された例示的なアレイとしては、例えば、米国特許第８３８３５５４Ｂ２号の“Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ  ｏｆ  Ｉｎｔａｃｔ  Ｇｌｙｃｏｌｉｐｉｄ  ＣＤ１ｄ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  Ｃｅｌｌ−Ｂａｓｅｄ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ”、米国特許第８９０６８３２Ｂ２号の“ＱＵＡＮＴＩＴＡＴＩＶＥ  ＡＮＡＬＹＳＩＳ  ＯＦ  ＣＡＲＢＯＨＹＤＲＡＴＥ−ＰＲＯＴＥＩＮ  ＩＮＴＥＲＡＣＴＩＯＮＳ  ＵＳＩＮＧ  ＧＬＹＣＡＮ  ＭＩＣＲＯＡＲＲＡＹＳ：ＤＥＴＥＲＭＩＮＡＴＩＯＮ  ＯＦ  ＳＵＲＦＡＣＥ  ＡＮＤ  ＳＯＬＵＴＩＯＮ  ＤＩＳＳＯＣＩＡＴＩＯＮ  ＣＯＮＳＴＡＮＴＳ”、米国特許第８６８００２０Ｂ２号の“Ｇｌｙｃａｎ  ａｒｒａｙｓ  ｏｎ  ＰＴＦＥ−ｌｉｋｅ  ａｌｕｍｉｎｕｍ  ｃｏａｔｅｄ  ｇｌａｓｓ  ｓｌｉｄｅｓ  ａｎｄ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｍｅｔｈｏｄｓ”、米国特許第８５０７６６０Ｂ２号の“Ａｌｐｈａ−Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｓｉａｌｙｌ  Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｄｏｎｏｒｓ  Ｆｏｒ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｓｉａｌｏｓｉｄｅｓ  Ａｎｄ  Ｓｉａｌｏｓｉｄｅ  Ａｒｒａｙｓ  Ｆｏｒ  Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  Ｖｉｒｕｓ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ”、米国特許公開番号ＵＳ２０１５０１６０２１７（ＷＯ２０１１１３０３３２Ａ１としても公開されている）の“Ｇｌｙｃａｎ  Ａｒｒａｙｓ  Ｆｏｒ  Ｈｉｇｈ  Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  Ｏｆ  Ｖｉｒｕｓｅｓ”（これらのすべての全体が参照により本明細書中に組み込まれる）が挙げられる。
【０３２９】
基材は、いくつかの実施形態において、表面、固体表面、不透明な固体、選択された波長の可視光線もしくは非可視光線を通す固体、粒子、アレイ、微小気泡またはビーズであり得る。いくつかの実施形態において、ビーズは、表面上に存在し得るか、表面に包埋され得るか、または表面に接続され得る。いくつかの実施形態において、基材は、コーティングされ得る。
【０３３０】
本開示の基材は、表面であり得る。その表面は、平らである、特徴づけられている、丸い、湾曲している、粗面である、多孔性である、固体である、ゼラチン状である、ポリマーである、オリゴマーである、またはビーズである可能性がある。基材は、ガラス、ポリマーまたはプラスチックから構成され得る。ビーズは、丸い、円柱状、卵形、長円形、ほぼ丸い、円板形、正方形、六角形または任意の多面体形の実体であり得る。いくつかの実施形態において、基材は、別の分子に結合することができる表面に反応基を提示するために化学的に改変され得る。いくつかの実施形態において、その反応基は、カルボン酸であり得る。いくつかの実施形態において、ビーズは、シリカビーズであり得る。いくつかの実施形態において、ビーズは、シリカによって官能化され、コーティングされたシリカビーズであり得る。いくつかの実施形態において、シリカによる官能化は、官能化されたシラン分子とシリカビーズを接触させることによって達成される官能化であり得る。いくつかの実施形態において、官能化されたシラン分子は、官能化されたトリクロロシラン、官能化されたジクロロシラン（ｄｉｃｈｌｏｒｉｓｉｌａｎｅ）または官能化されたモノクロロシラン分子であり得る。いくつかの実施形態において、シリカによる官能化は、官能化されたトリ−アルコキシによって官能化されたシランとシリカビーズを接触させることによって達成される官能化であり得る。いくつかの実施形態において、シリカによる官能化は、官能化されたジ−アルコキシによって官能化されたシランとシリカビーズを接触させることによって達成される官能化であり得る。いくつかの実施形態において、シリカによる官能化は、官能化されたモノ−アルコキシによって官能化されたシランとシリカビーズを接触させることによって達成される官能化であり得る。官能化は、アミノ、アルデヒド、ハロゲン化物、エポキシ、ＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド）、マレイミド、アルキニル、エチニル、カルボニル（カルボキシルを含む）またはヒドロキシル官能基であり得る。いくつかの実施形態において、官能化は、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、アルコキシ基またはアリール基を介してシランと接触され得る。
【０３３１】
ある特定の態様において、種々のグリカンを本開示のアレイに付着するための固定化手順は、アレイの構築を容易に可能にするように容易に制御される。いくつかの実施形態において、各グリカンは、特定のビーズタイプとグリカン特異的会合を形成するように、その特定のビーズタイプに接着され得る。いくつかの実施形態において、ビーズは、特定のビーズタイプを他のビーズタイプと識別する異なるマーカーをさらに含み得る。いくつかの実施形態において、各々が異なるビーズタイプに接着された複数の異なるグリカンが、マルチプレックス反応において混合され得る。ビーズタイプおよびマルチプレックス反応の検出方法は、米国特許第６，６９６，３０４号およびＰＣＴ特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０３８４１６（この両方ともが参照により本明細書中に組み込まれる）に記載されている方法であり得る。
【０３３２】
いくつかの実施形態において、基材は、別の分子に結合することができる表面に反応基を提示し得る材料でコーティングされ得る。いくつかの実施形態において、その基材をコーティングする材料は、ニトロセルロース膜またはポリマーである。そのようなコーティングは、平らな表面よりも低い検出限度を可能にする、広い表面積を有する３Ｄ表面をもたらす。いくつかの実施形態において、アビジン、ストレプトアビジンまたはニュートラアビジンタンパク質が、ビオチン化された分子の付着のために、コーティングされた表面（例えば、ニトロセルロース膜コーティング）に提示され得る。いくつかの実施形態において、化学的リンカーが、表面に提示され得、表面に直接に提示され得るか、または表面に予めもたらされたコーティングに提示され得る。
【０３３３】
１つの実施形態において、本開示は、種々の用途において使用され得るリンカーを提供する。例えば、本開示のリンカーは、分子を基材（例えば、表面、固体表面、粒子、アレイまたはビーズ）に付着するために使用され得る。
【０３３４】
１つの実施形態において、本開示は、疾患の診断および創薬において使用するためのビーズに関し、そのビーズは、（ａ）各ビーズ上または各ビーズ内に、ユニークな識別子；および（ｂ）リンカー部分を介してビーズの表面に付着されたグリカンを含む。そのグリカンは、本明細書中に記載される任意の多様なグリカンであり得る。いくつかの態様において、ビーズは、均一な集団のグリカン型でコーティングされ得る。
【０３３５】
いくつかの実施形態において、本開示は、グリカン−リンカー−ビーズを作製する方法に関し、その方法は、（ａ）各ビーズ上または各ビーズ内にユニークな識別子を含むビーズを提供する工程；（ｂ）そのビーズとグリカン−リンカーを接触させる工程；および（ｃ）そのグリカン−リンカーとビーズとの結合体を形成する工程を含む。いくつかの実施形態において、各ビーズ上または各ビーズ内のユニークな識別子（ｉｎｄｅｎｔｉｆｉｅｒ）は、シリカビーズもしくはガラスビーズ内に浸透したホログラフィー像、各ビーズに付着した特定のアミノ酸配列もしくはオリゴヌクレオチド配列、または各ビーズに付着した特定のフルオロフォアであり得る。いくつかの実施形態において、各ビーズに付着した特定のアミノ酸配列またはオリゴヌクレオチド配列は、各ビーズに付着した特定のグリカンとさらに結合体化されるリンカー部分にさらに連結され得る。
【０３３６】
いくつかの実施形態において、本開示は、（ａ）各ビーズ上または各ビーズ内にユニークな識別子を含むビーズを提供する工程；（ｂ）そのビーズとグリカン−リンカーを接触させる工程；および（ｃ）そのグリカン−リンカーとビーズとの結合体を形成する工程を含むプロセスによって作製されるグリカン−リンカービーズに関する。
【０３３７】
種々のグリカンを本開示のアレイに付着するための固定化手順は、アレイの構築を容易に可能にするように容易に制御される。いくつかの実施形態において、各グリカンは、特定のビーズタイプとグリカン特異的会合を形成するように、その特定のビーズタイプに接着され得る。いくつかの実施形態において、ビーズは、特定のビーズタイプを他のビーズタイプと識別する異なるマーカーをさらに含み得る。いくつかの実施形態において、異なるマーカーは、各ビーズタイプに接触されたまたは各ビーズタイプ内の、アミノ酸配列、オリゴヌクレオチド配列、フルオロフォアまたは色素であり得る。いくつかの実施形態において、フルオロフォアまたは色素は、当該分野において公知のものであり得る。いくつかの実施形態において、アミノ酸配列またはオリゴヌクレオチド配列は、抗体、またはビーズに接触されたオリゴヌクレオチド配列に相補的な別のオリゴヌクレオチド配列によって検出され（ｄｅｔｅｃｔｅｃｔｅｄ）得る。いくつかの実施形態において、ビーズ表面に接触されたオリゴヌクレオチド配列に相補的な（ｃｏｍｐｌｉｍｅｎｔａｒｙ）オリゴヌクレオチド配列は、１種または複数種のフルオロフォアで標識され得る。それらのフルオロフォアは、当該分野で公知のもののいずれかであり得る（例えば、ＦＡＭ、Ｃｙ３、Ｃｙ５、Ｃｙ７、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５．５、ＢＨＱクエンチャー、ＴＡＭＲＡ、ＲＯＸ、Ｔｅｘａｓ  Ｒｅｄ、Ａｌｅｘａ  ｆｌｕｏｒｓ、本願の出願日時点のＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ／Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ／ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒのカタログに記載されているものなど）。いくつかの実施形態において、複数の異なるグリカン（各々が異なるビーズタイプに接着されている）は、マルチプレックス反応において混合され得る。
【０３３８】
アレイ表面の固体支持体上の定義された領域に接着された異なるグリカンのユニークなライブラリーを含むアレイは、任意の利用可能な手順によって接着され得る。一般に、アレイは、本明細書中に記載されるグリカン結合型糖ペプチド分子のライブラリーを得て、そのライブラリーのグリカン結合型糖ペプチド分子上に存在する特定の連結部分と反応するように改変された表面を有する基材を得て、そしてそのグリカン結合型糖ペプチド分子の連結部分とその基材の改変された表面との間にファンデルワールス相互作用を形成することによってそのグリカン分子をその固体支持体に付着することによって、作製される。
【０３３９】
改変試薬は、非限定的な例としてシロキサン結合を用いて（例えば、ガラスもしくは酸化ケイ素、または活性化二酸化ケイ素（ここで、その活性化二酸化ケイ素は、固体基材としてのシラン分子（例えば、参照により本明細書中に組み込まれる、本願の出願日時点のＧｅｌｅｓｔｅ，Ｉｎｃ．のカタログから入手可能なもの）の反応の結果である）を用いて）、炭素−炭素結合を介して基材に付着され得る。いくつかの実施形態において、基材の表面とのシロキサン結合は、モノ−、ジ−もしくはトリ−クロロシリルまたはモノ−、ジ−もしくはトリ−アルコキシシリル基を有する誘導体化試薬の反応を介して形成される。シラン上の非脱離（クロロ−またはアルコキシ−）基は、炭化水素であり得る。いくつかの実施形態において、非脱離基は、グリカン結合型糖ペプチドのペプチド鎖とファンデルワールス相互作用を形成するために、直鎖または分枝鎖のアルキル鎖であり得る。
【０３４０】
改変試薬は、コーティングを適用するための当業者に公知の他の堆積方法を介して基材に適用され得る。そのような方法としては、化学蒸着、液相堆積、Ｌａｎｇｍｕｉｒ−Ｂｌｏｄｇｅｔｔ薄膜形成、反応性表面分子を露出するための化学プラズマ処理、スピンコーティング、噴霧乾燥またはエレクトロスピニングが挙げられる。いくつかの実施形態において、改変試薬は、ポリマーであり得る。そのポリマーは、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリエチルイミン、ポリカプロラクチン（ｐｏｌｙｃａｐｒｏｌａｃｔｉｎｅ）、修飾ポリカプロラクトン、ポリメタクリル酸メチル、ポリアクリルアミド、ポリ−Ｎ，Ｎ−アルキルアクリルアミド、ポリアルキルメタクリレート、ポリアルキルアクリレート、多糖、またはそれらの共重合体から選択され得る。多糖は、セルロース、ニトロセルロース、キトサン、アミロース、酢酸セルロース、キサンタンガム、デキストラン、ウェランガム（ｗｅｌａｎ  ｇｕｍ）、グアーゴム、ジェランガム（ｇｅｌｌａｎ  ｇｕｍ）、デュータンガム（ｄｉｕｔａｎ  ｇｕｍ）またはプルランであり得る。多糖は、酸化基の反応によってさらに官能化され得る。いくつかの実施形態において、酸化基は、過ヨウ素酸ナトリウムであり得る。いくつかの実施形態において、グリカンは、還元剤の存在下において多糖と反応され得る。いくつかの実施形態において、還元剤は、官能化されたホウ化水素部分であり得る。いくつかの実施形態において、官能化されたホウ化水素部分は、ヒドロ−ホウ水素化物（例えば、水素化ホウ素ナトリウムまたは水素化ホウ素カリウム（ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  ｂｏｒｏｈｙｒｉｄｅ）））、シアノホウ水素化物またはアルキルホウ水素化物（ａｌｋｙｌｂｏｒｏｈｙｄｉｄｅ）部分）であり得る。
【０３４１】
いくつかの実施形態において、各タイプのグリカンが、固体支持体上の定義されたグリカンプローブ位置に接触またはプリントされ得る。様々なグリカン結合型糖ペプチドを定義されたグリカンプローブ位置に適用するために、マイクロアレイ遺伝子プリンターが使用され得る。例えば、約０．１マイクロリットル〜約１０ナノリットル（ｎＬ）または約０．５ｎＬのグリカン溶液が、定義されたグリカンプローブ位置１つあたりまたはビーズ１つあたりに適用され得る。様々な濃度のグリカン結合型糖ペプチド溶液が、固体支持体上に接触またはプリントされ得る。例えば、約０．１〜約１０００マイクロモル濃度（μＭ）のグリカン結合型糖ペプチドまたは約１．０〜約５００μＭのグリカン結合型糖ペプチドまたは約１０〜約１００μＭのグリカン結合型糖ペプチドのグリカン結合型糖ペプチド溶液が、使用され得る。通常、いくつかの（例えば、３〜６個の）定義されたグリカンプローブ位置のうちの１つに各濃度を適用することが得策であり得る。そのような各位置は、グリカン結合型糖ペプチドと試験分子との結合反応が真の結合相互作用であるか否かを確認する内部対照を提供する。
【０３４２】
検出分子のアレイは、サンプル中の複数の被検体の存在を並行して検出するのに有用である。検出分子のアレイの要素には、基材、基材上の生理活性分子のコーティングの提示、コーティングされた基材への１つまたは複数の被検体の提示、被検体と基材上の生理活性分子との複合体の形成、および検出のメカニズムが含まれる。本明細書中で使用されるとき、用語「生理活性分子」は、当該分野におけるその通常の意味を意味し、生物学もしくは化学において存在するかまたは生物学もしくは化学において公知の分子を模倣し、かつ静電気的相互作用、ファンデルワールス相互作用、疎水性相互作用、共有結合および／または水素結合を介して別の分子に結合することができる、任意の分子を意味する。
【０３４３】
本開示の基材は、表面であり得る。その表面は、平らである、特徴づけられている、丸い、湾曲している、粗面である、多孔性である、固体である、ゼラチン状である、ポリマーである、オリゴマーである、またはビーズである可能性がある。基材は、ガラス、ポリマーまたはプラスチックから構成され得る。ビーズは、丸い、円柱状、卵形、長円形、ほぼ丸い、円板形、正方形、六角形または任意の多面体形の実体であり得る。いくつかの実施形態において、基材は、別の分子に結合することができる表面に反応基を提示するために化学的に改変され得る。いくつかの実施形態において、その反応基は、カルボン酸であり得る。
【０３４４】
いくつかの実施形態において、基材は、別の分子に結合することができる表面に反応基を提示し得る材料でコーティングされ得る。いくつかの実施形態において、その基材をコーティングする材料は、ニトロセルロース膜またはポリマーである。そのようなコーティングは、平らな表面よりも低い検出限度を可能にする、広い表面積を有する３Ｄ表面をもたらす。いくつかの実施形態において、化学的リンカーは、表面に提示され得、表面に直接に提示され得るか、または表面に予めもたらされたコーティングに提示され得る。
【０３４５】
いくつかの実施形態において、基材は、本開示の出願日時点でＩｌｌｕｍｉｎａ，Ｉｎｃ．によってＢｅａｄＸｐｒｅｓｓまたはＬｕｍｉｎｅｘシステムとともに商品化されているような、官能化されたビーズであり得る。
本開示の一般的な態様
高マンノース型、ハイブリッド型および複合型Ｎ−グリカンのモジュール合成
【０３４６】
本明細書中に開示されるような例示的な方法実施形態は、いわゆる「Ｄ１およびＤ２／Ｄ３アームモジュール」のアセンブリの後、共通のコア三糖のマンノース残基の３−Ｏおよび／または６−Ｏ位におけるα特異的マンノシル化によって多様性がもたらされ得ることに基づいてデザインされる。
【化８】
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【０３４７】
Ｎ−グリカン構造（図１ｃ）の逆合成的切断に基づいて、本発明者らは、驚いたことに、極めて重要なβ−マンノシド結合を有する基本単位１〜１３およびコア三糖１４〜１５のモジュールセット（図２）を、様々なＮ−グリカンを調製するための出発物質として使用できることを発見した（Ｇ１〜３３、補足図Ｓ１１）。このストラテジーの有効性および有用性を実証するために、オリゴマンノース型（単糖から五糖、１〜５）、複合型（二糖から七糖、６〜１３）およびコア三糖（１４〜１５）基本単位をまず、フルオリドに変換する前に導入された一時的なアノマー保護基を用いて、マルチグラムスケールで化学的に合成した。高マンノースシリーズ（Ｍａｎ３／Ｍａｎ４／Ｍａｎ５／Ｍａｎ９  ＧｌｃＮＡｃ２）グリカンの場合、ドナー１および２、ならびにハイブリッドシリーズグリカンの場合、ドナー６および７を１４の３−Ｏ位に立体選択的に連結した。次いで、ベンジリデン環を除去して４，６−ジオールを得て、最後に、ドナー１〜７を用いて６−Ｏ位において位置選択的なグリコシル化を行った。グリコシル化反応の過程で、グリコシルドナーの選択に応じて様々な促進剤を使用した。すべてのグルコサミン残基におけるフタルイミド保護をアセトアミドに改変し、脱アセチル化および最後に脱ベンジル化を行って、遊離グリカンを得た（図Ｓ１：グリカン１、２、４〜９、１２）。高特異性を利用して、ハイブリッドグリカンの複合型Ｄ１アームを酵素的にシアリル化して、α−２，３／６−Ｎｅｕ５Ａｃアイソフォームを得た（図Ｓ２−グリカン１０〜１１、１３〜１４）。
【０３４８】
複合型グリカン（グリカン１５〜１７、２０〜２３、２６〜２８および３２〜３３、補足図Ｓ３）を合成する迅速な方法を確立したので、本発明者らは、より多様な非対称グリカンを作製しようと目指し、グラム量で調製された基本単位９〜１３を用いて、ＰＧ９およびＰＧ１６によって認識されるα−２，６−シアリル化された抗原に焦点を当てた（補足スキームＳ４〜Ｓ８）。次いで、フルオリドドナー８〜１３を、ＡｇＯＴｆ／Ｃｐ２ＨｆＣｌ２の促進下においてコア１５のグリコシド化に使用した。驚いたことに、これらの複合体の結合体化のすべてが、非常にクリーンであることが見出され（補足スキームＳ１４〜Ｓ１９）、立体選択性が優れていた。８のグリコシル化によって、異性体の混合物が生じた。最後に、完全な脱保護によって、二分岐、三分岐および四分岐非対称Ｎ−グリカンの天然に存在する位置異性体がもたらされた（補足図Ｓ３グリカン１８、２４、２５、２９〜３１）。コアフコースの役割を研究するために、実施例３および１９も調製した。
【０３４９】
この集中的な合成ストラテジーを適所にて用いて、Ｄ１およびＤ２／Ｄ３  Ｎ−グリカンアームドナーを合成する化学酵素的アプローチを実行することにより、多様なＮ−グリカンの迅速なアセンブリが可能になった。β−１，４−ガラクトシルトランスフェラーゼ、α−２，３／２，６シアリルトランスフェラーゼおよびα−１，３／１，２フコシルトランスフェラーゼをはじめとした様々なグリコシルトランスフェラーゼを、化学的に合成されたアクセプター１６〜２０の酵素的伸長によって直鎖および分枝鎖のモジュールを調製するために使用した（図３）。アクセプター１６のＧｌｃＮＡｃ部分を、β−１，４−ガラクトシルトランスフェラーゼおよびウリジン５’−ジホスホガラクトース（ＵＤＰ−Ｇａｌ）を使用することによってＬａｃＮＡｃに変換して２１を形成し、それを、シチジン−５’−モノホスホ−Ｎ−アセチルノイラミン酸（ａｖｅｔｙｌｎｅｕｒａｍｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）（ＣＭＰ−Ｎｅｕ５Ａｃ）の存在下においてα−２，６／２，３シアリルトランスフェラーゼによってさらに伸長して、それぞれ標的２３および２４を得た。次に、２１、２３〜２４をピロリ菌由来のα−１，３−フコシルトランスフェラーゼ（Ｈｐα１，３ＦＴ）で処理すると、ＬａｃＮＡｃおよびα−２，３−シアリルＬａｃＮＡｃが修飾されたが、２，６−シアリルＬａｃＮＡｃは修飾されず、２２および２５が得られた。さらに、α−１，３−フコシル化されたＬａｃＮＡｃは、末端のガラクトースへの酵素的なα−２，３／６−シアリル化のアクセスを制限することが見出された。アクセプター２１を、グアノシン５’−ジホスホ−β−Ｌ−フコース（ＧＤＰ−フコース）の存在下においてＨＥＫ２９３細胞由来のα−１，２−フコシルトランスフェラーゼで修飾して、２６を得た（図３ａ）。α−１，２フコシル化されたモジュール２６は、α−２，６シアリルトランスフェラーゼによって受容されて、２７が得られたが、α−２，３シアリルトランスフェラーゼは、この基質を受容できなかったことが観察された（図３ａおよび補足スキームＳ２３）。次に、対称モジュール２８〜３３をアクセプター１７〜１８から調製した（図３ｂ）。
【０３５０】
非対称モジュールの場合、分岐のうちの１つにシアル酸またはフコースを選択的に組み込むことが必要である。ゆえに、マンノース２−Ｏ位におけるＧｌｃＮＡｃが、その水溶性を保持しつつ酵素的ガラクトシル化を防ぐためにアセチル化を介して４−ヒドロキシ基をマスクすることによって４または６−Ｏ位におけるＧｌｃＮＡｃと区別されるように、アクセプター１９〜２０をデザインした。このストラテジーによって、他方をインタクトなまま維持しつつ、一方のアームの選択的な伸長が可能になった。図３ｃに描かれているように、β−１，４−ＧａｌＴによって、β−１，４／１，６マンノース枝におけるＧｌｃＮＡｃ残基にＧａｌ残基が付加された一方で、β−１，２枝におけるＧｌｃＮＡｃ残基は、インタクトなままであった。それらの特異性を利用することによって、α−１，３−ＦｕｃＴおよびα−２，６−ＳｉａＴを、精製され、十分に特徴づけられた（補足ＩＩＩ）、非対称モジュール３６〜４３および４５〜４７の調製に使用した（図３ｃおよび補足スキームＳ２５）。
【０３５１】
さらなるグリコシル化のための、化学酵素的方法によって調製されたモジュールの使用を例証するために、モジュール２１および２２を、概念証明実験（図４）に選択した。モジュール２１および２２のペルアセチル化の後、フッ化グリコシルに変換することによって、それぞれドナー５０および５１が得られた。ＡｇＯＴｆ／Ｃｐ２ＨｆＣｌ２の存在下においてフルオリド５０を用いてグリコシル化することにより、予想された六糖５２が７０％の収率で実際に得られた。次に、ベンジリデンをｐ−トルエンスルホン酸触媒の存在下において切断し、ドナー５１を６位に立体特異的に導入して、十糖５４を得、それを脱保護してグリカン５５を得た（補足スキームＳ２６およびＳ２７）。
【０３５２】
まとめると、本発明者らは、化学的ならびに化学酵素的に生成された、定義されたモジュールセットの適切な選択によって、目的の複合型Ｎ−グリカンを調製する効率的な方法を実証した。オリゴサッカリルフルオリドドナーの汎用性のおかげで、優れた立体選択性および位置選択性を有するコアに、高度に分枝鎖のモジュールをクリーンに結合体化することが可能になった。還元末端にアルキルアミンリンカーが予め導入されたオリゴ糖は、アミド結合形成を介したＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、エポキシ官能化されたスライドも機能し得るが）スライドとの反応、またはさらに改変されたアレイ形式もしくは他のアレイ形式との反応に直接使用され得るか、あるいは構造研究および機能研究のためにタンパク質に結合体化され得る。
ＮＨＳ活性化スライドガラス上および酸化アルミニウムでコーティングされたスライドガラス上のグリカンマイクロアレイ
【０３５３】
ＰＧ９、ＰＧ１６およびＰＧＴ１２８、１４１〜１４５は、強力な活性を有する循環ＨＩＶ−１分離株の７０〜８０％を中和することができることが報告されたことから２０、標的化されるエピトープは、ＨＩＶ−１バリアントの間で高度に保存されており、免疫原のデザインを導き得ることが示唆される。これらの抗体のグリカン特異性を見抜くために、本発明者らは、本発明者らの新しく開発されたアレイを使用して、ＨＩＶ−１  ｂＮＡｂのリガンドをプロファイルした。１００μＭのグリカン１〜３３の各々とのアミド結合の形成を介して、合成Ｎ−グリカンリガンドをＮＨＳ活性化スライドガラス上にプリントした（補足図Ｓ１１）。各サンプルを５反復でプリントし、ＤｙＬｉｇｈｔ６４９結合体化ロバ抗ヒトＩｇＧ抗体とのインキュベーションの後、蛍光スキャンによってスライドの像を得た。本発明者らの結果は、ＰＧ１６が、α−２，６−シアリル化された複合型オリゴ糖に結合すること（本発明者らの以前の結果５０と一致する）およびその結合親和性が、末端のシアル酸残基の数に比例することを明らかにした（補足図Ｓ１２）。さらに、本発明者らは、ＰＧ１６の結合が、コアフコースの存在によって影響されないことを見出した（グリカン１９対１６）。興味深いことに、非対称グリカン２９〜３３へのＰＧ１６の結合は、Ｄ１アーム上のシアル酸の重要性を示唆する。最後に、本発明者らは、高マンノース型グリカンＭａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２への結合を観察できなかった（補足図Ｓ１２）。さらに、ＮＨＳアレイ上のいずれのグリカンにも結合するＰＧ９およびＰＧＴ１４１〜１４５は、おそらくそれらの極端に弱い結合に起因して、検出されなかった（補足図Ｓ１３〜１５）。本発明者らの結合研究において、本発明者らは、グリカン５であるＭａｎ４ＧｌｃＡｃ２に対して強い蛍光シグナルを観察したが、これは、後に二次抗体の非特異的結合によるものであることが確認された（補足図Ｓ１６）。
【０３５４】
なぜこれらのｂＮＡｂへのグリカンの結合が、ＮＨＳでコーティングされたスライドガラス上において容易に観察されなかったのかをさらに理解するために、本発明者らは、ＡＣＧアレイを用いて特異性試験を行った。ＡＣＧでコーティングされたスライドガラスとＮＨＳでコーティングされたスライドガラスとの間の均一性の比較は、ＡＣＧスライドが、その表面上に、より均一なグリカン分布を提供したこと（補足図Ｓ４〜Ｓ９）、および原子間力顕微鏡法（ＡＦＭ）に基づくと、ＡＣＧスライド上のグリカンの構造配向が、より長い立体配座であったこと（補足図Ｓ１０）を示した。ゆえに、本発明者らは、単純にグリカンの濃度を調整することにより、ＡＣＧ表面上のグリカンの密度および距離を制御することができる。代表的なＡＣＧアレイを調製するために、グリカンＩ〜ＸＩ（図５ａ）を、ＡＣＧスライド上の自発的な共有結合性の固定化に向けて、ホスホン酸テイルに連結した（補足スキームＳ２１）。二次抗体とのインキュベーションの後、本発明者らは、目的の抗体と相互作用するグリカンの解離定数（ＫＤ．ｓｕｒｆ．）５９を測定した。ＮＨＳでコーティングされたスライドガラス上で使用された２５μｇ／ｍＬと比べて、ＡＣＧスライド上で１μｇ／ｍＬのＰＧ１６を使用することによって示されたように、ＡＣＧスライドを用いたとき、シグナル強度が増強された（図５ｂおよび補足図Ｓ１２）。二分岐複合型Ｎ−グリカン（ＸＩ）に対するＰＧ１６の結合親和性（ＫＤ＝０．３２０μＭ）は、ハイブリッド型グリカン（Ｘ）に対する結合親和性（ＫＤ＝０．９３５μＭ）よりも高かった（補足図Ｓ１９および表Ｓ２）ことから、ｇｐ１２０と複合したＰＧ１６の構造研究３０によって示唆されたように、Ａｓｎ１７３におけるこれらのグリカンの存在の提唱が支持された。
【０３５５】
ＡＣＧアレイ形式が、検出感度を高め得るかを評価するために、本発明者らは、様々な濃度のＰＧ９でリガンド特異性プロファイリングを行った。興味深いことに、ＡＣＧアレイでは、ＰＧ９は、ハイブリッド型グリカン（Ｘ）に対して明らかな特異性（図５ｂ）、ならびにＭａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２（ＩＶ）およびα２，６−シアリル化された二分岐複合型オリゴ糖（ＸＩ）への検出可能な結合を示した。以前に、ＰＧ９は、ｇｐ１２０の認識において、短いペプチド鎖とともに第１（Ａｓｎ１６０）および第２（Ａｓｎ１５６またはＡｓｎ１７３）の結合部位にＭａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２を必要とすることが示されていた２６が、後の研究３０，３１において、Ａｓｎ１５６またはＡｓｎ１７３におけるグリカンの組成は、複合型グリカンと定義された。本研究では、Ｍａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２と複合型グリカンの両方と比べて、ハイブリッド型構造とＰＧ９との強い相互作用は、ハイブリッド型グリカンまたはオリゴマンノースと複合型グリカンとが、リガンドとして近接して存在することを示唆した。それにもかかわらず、本発明者らの知る限りでは、これらの結果は、タンパク質ドメインまたはペプチドドメインを有しない炭水化物へのＰＧ９の結合の初めての証拠である。
【０３５６】
抗体ＰＧＴ１４１〜１４５２０によって認識される正確なグリカンエピトープを理解するために、ＡＣＧスライド上のグリカンＩ〜ＸＩのパネルを、解析のために調製した。結果は、ＰＧＴ１４１〜１４４が、オリゴマンノースグリカンＭａｎ３／５／９ＧｌｃＮＡｃ２を認識できること、および観察された結合親和性の傾向が、ＰＧＴ１４２＞ＰＧＴ１４４＞ＰＧＴ１４１＞ＰＧＴ１４３であることを明らかにした（図５ｃおよび補足図Ｓ１８）；しかしながら、その群のうちの最も強力なＰＧＴ１４５は、検出可能な結合を示さなかった。Ｍａｎ９ＧｌｃＮＡｃ２に対するＰＧＴ１４１〜１４４の親和性の有意な低下は、おそらく、内部のコア（Ｍａｎ３／５ＧｌｃＮＡｃ２）が末端のマンノース残基によって遮られたことに起因した。まとめると、これらの結果は、最近単離されたＨＩＶ−１  ｂＮＡｂの低親和性相互作用の検出におけるＡＣＧアレイ形式の効率を実証している。
ＰＧ９およびＰＧ１６のヘテログリカン結合
【０３５７】
ハイブリッド型グリカンと複合した状態のＰＧ９の共結晶構造が存在しないため、その相互作用の分子の詳細を決定することは困難である。構造の特徴から、ＰＧ９は、ハイブリッド型グリカンに存在する高マンノース型Ｄ２／Ｄ３アームおよび複合型Ｄ１アームを収容し得るか、またはＡｓｎ１６０においてＭａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２をおよびＡｓｎ１５６もしくは１７３において複合型グリカンを収容できる結合部位を有することが示唆される３０，３１；しかしながら、複合型グリカンとハイブリッド型グリカンの両方が、α−２，６−ＮｅｕＡｃ−Ｇａｌ−ＧｌｃＮＡｃアームを含む。
【０３５８】
ＰＧ９結合ポケットに最も適合する、ｇｐ１２０のＡｓｎ１６０およびＡｓｎ１５６／Ａｓｎ１７３におけるグリカンの組み合わせを評価するために、本発明者らは、２つの異なる混合グリカンアレイをプリントした。一方のアレイでは、Ｍａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２（ＩＶ）をＩ〜ＸＩのすべてのグリカンと１：１モル比で混合し（図５ｄ）、他方のアレイでは、二分岐複合型構造（ＸＩ）をＩ〜ＸＩのすべてのグリカンと混合した（図５ｅ）。様々な混合物に対するＰＧ９の結合プロファイルは、Ｍａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２および二分岐グリカン［（ＩＶ＋ＸＩ）または（ＸＩ＋ＩＶ）］を含む混合物が、ＩＶまたはＸＩのみと比べて、ＰＧ９とより強く相互作用したことを示唆している。さらに、本発明者らは、ＸおよびＸＩと組み合されたＭａｎ５に対する匹敵する結合も観察したことから、Ａｓｎ１６０におけるＭａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２が、第１の結合部位であり、構造ＩＸ、ＸおよびＸＩが、第２の結合部位との相互作用に複合型Ｄ１アームを使用したことが示唆される。ＰＧ９の均一なアレイの結果（図５ｂ）に基づくと、Ｍａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２  ＩＶまたは複合型グリカンＸＩのみは、十分な結合親和性を提供しないとみられた；他方で、ハイブリッド型グリカンＸは、有意な結合の増強を示した。しかしながら、混合グリカン研究（図５ｃ）において、ＩＶとＸＩとの組み合わせは、ＰＧ９に対して最も強い結合を達成し、Ｍａｎ５とハイブリッド型との組み合わせが続くと見出された。同様の様式で、本発明者らは、ＰＧ１６の結合特異性を調べた（図５ｅ）ところ、Ｍａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２と複合型Ｎ−グリカンとの組み合わせ（ＩＶ＋ＸＩ）（ＫＤ＝０．８２７μＭ）またはハイブリッドグリカンと複合グリカンとの組み合わせ（Ｘ＋ＸＩ）（ＫＤ＝０．９８８μＭ）が、複合型グリカンのみ（ＫＤ＝０．３２０μＭ）よりも弱いことが見出された（補足図Ｓ１９および表Ｓ２）。これらの結果は、以前に報告された三分岐および四分岐複合型Ｎ−グリカンをおそらく含む５０、ＰＧ１６結合部位におけるシアリル化された分岐の重要性を示唆している。
【０３５９】
混合物中のＩＶとＸＩとの正確な比をさらに理解するために、本発明者らは、段階希釈実験を行った。ＩＶをＸＩと様々な比（１：１／２／３／４／５）で混合し、その逆でも混合した。これらの混合物の各々の１００μＭ溶液を、コントロールとしてのリンカーおよびグリカンのみとともに、ＡＣＧ表面上にプリントした。興味深いことに、ＩＶを固定したときは、混合物中のＸＩ比が増加することによって、ＰＧ９結合は徐々に減少した。ＸＩを固定してＩＶ比を変化させることによって、ＰＧ９は、ＩＶ対ＸＩが１：１および２：１という比において最も強い結合を達成した（図６ａ）。これらの結果は、１：１のグリカン比が、ＰＧ９にとって最も良好なリガンドであることを示唆している。しかしながら、ＰＧ１６は、これらの混合物の各々に対して異なる様式で応答し、それらの混合物では、相互作用が、混合物中の複合型グリカンの存在によって大きく増強された（図６ｂ）。しかしながら、本発明者らは、Ｍａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２に対するＰＧ１６の結合を検出できなかった。本発明者らは、ＰＧ９が、Ｍａｎ５と複合型グリカンとの混合物を認識するのに対して、ＰＧ１６の応答を誘発するのには、複合型グリカンのみで十分であると結論づける。
結論
【０３６０】
結論として、本発明者らは、高度に純粋かつ十分な量の高マンノース型、ハイブリッド型および複合型Ｎ結合型オリゴ糖の多様なアレイを迅速に作製するためのモジュール合成ストラテジーを開発することに成功し、これにより、様々なＮ−グリカンの研究が可能になり、また、新たに発見されたＨＩＶ−１  ｂＮＡｂのグリカンの特異性を測定するための新しいグリカンアレイプラットフォームの開発が可能になった。このＡＣＧアレイは、ハイスループット様式で得られる結合測定値とともに、グリカンに対するＨＩＶ−１  ｂＮＡｂの極端に弱い結合を検出するための有効な手段を提供し、抗体によって認識される不可欠なエピトープおよびヘテロリガンドの発見および理解を可能にする。これらの知見は、ＨＩＶ−１に対する有効な炭水化物ベースのワクチンの速やかなデザインを助け得る。
方法および要旨
【０３６１】
別段述べられない限り、すべての反応は、無水状態の乾燥溶媒（ｄｒｙ  ｓｏｌｖｅｎｔｓ）を用いて不活性雰囲気下で行った。すべての新規化合物に対する十分な実験の詳細、グリカンマイクロアレイ解析および特徴付けデータ（１Ｈおよび１３Ｃ核磁気共鳴、高分解能質量分析およびＲｆ値）が、補足情報Ｉ〜ＩＩＩに含められる。
【０３６２】
本明細書中で参照または言及されるすべての特許、刊行物、科学論文、ウェブサイトならびに他の文書および資料は、本開示が属する分野の当業者の技術のレベルを示し、そのような参照された文書および資料の各々は、それが個別にその全体が参照により組み込まれるのと同程度に参照により本明細書に組み込まれるか、またはその全体が本明細書中に示される。出願人は、そのような任意の特許、刊行物、科学論文、ウェブサイト、電子的に入手可能な情報および他の参照される資料または文書からの任意のおよびすべての資料および情報を本明細書中に物理的に組み込む権利を留保する。
【０３６３】
本明細書中に記載される具体的な方法および組成物は、好ましい実施形態の代表であり、例示であって、本開示の範囲に対する限定として意図されていない。本明細書を考慮すると、当業者には他の目的、態様および実施形態が思い当たるだろうが、それらの他の目的、態様および実施形態は、請求項の範囲によって定義される本開示の真意の範囲内に包含される。本開示の範囲および真意から逸脱することなく、本明細書中に開示される本開示に対して様々な置換および改変が行われ得ることが、当業者には容易に明らかになるだろう。適切に本明細書中に例証的に記載される本開示は、必須であると本明細書中に明確に開示されていない任意のエレメントまたは限界の非存在下において実施され得る。したがって、例えば、本開示の実施形態または実施例における本明細書中の各場合において、用語「〜を含む」、「〜から本質的になる」および「〜からなる」のいずれもが、本明細書において、他の２つの用語のうちのいずれかで置き換えられてもよい。また、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」などは、拡張的に制限なく解釈されるべきである。適切に本明細書中に例示的に記載される方法およびプロセスは、異なる順序の工程で実施されてもよく、本明細書中または請求項に示された工程の順序に必ずしも限定されない。文脈が明らかに他のことを指示しない限り、本明細書中および添付の請求項において使用されるとき、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、複数の指示対象を含む。いかなる状況であっても、本特許は、本明細書中に明確に開示される特定の実施例または実施形態または方法に限定されると解釈されてはならない。いかなる状況であっても、本特許は、特許庁（Ｐａｔｅｎｔ  ａｎｄ  Ｔｒａｄｅｍａｒｋ  Ｏｆｆｉｃｅ）の任意の審査官または他の任意の役人もしくは職員が作成した陳述が、応答の書類において出願人によって明確にかつ条件または留保なしに明示的に採用されない限り、そのような任意の陳述に限定されると解釈されてはならない。
【０３６４】
使用されている用語および表現は、説明の用語として使用されているのであって、限定の用語として使用されておらず、そのような用語および表現の使用に、示されているおよび記載されている特徴またはその一部の任意の等価物を除外する意図はなく、特許請求される本開示の範囲内で様々な改変が可能であることが認識される。したがって、本開示は、好ましい実施形態および随意の特徴によって明確に開示されるが、開示される本明細書中の概念の改変およびバリエーションが、当業者によって行使され得ること、およびそのような改変およびバリエーションは、添付の請求項によって定義される本開示の範囲内であるとみなされることが理解される。
【０３６５】
本開示は、本明細書中で広くかつ一般的に記載される。属の開示の範囲内に入るより狭い種および亜属の分類の各々も、本開示の一部を形成する。このことは、削除される材料が本明細書で明確に列挙されているか否かを問わず、その属から任意の対象を除くという条件付きでまたは消極的な限定付きで、本開示の属の記載を含む。
【０３６６】
他の実施形態は、以下の請求項の範囲内である。さらに、本開示の特徴または態様が、マーカッシュ群で記載されている場合、当業者は、本開示が、そのマーカッシュ群の任意の個別のメンバーまたはメンバーのサブグループでも記載されることを認識するだろう。他の実施形態は、以下の請求項の範囲内である。さらに、本開示の特徴または態様が、マーカッシュ群で記載されている場合、当業者は、本開示が、そのマーカッシュ群の任意の個別のメンバーまたはメンバーのサブグループでも記載されることを認識するだろう。
【実施例】
【０３６７】
本明細書中の本開示および実施例は、疾患状態（例えば、ＨＩＶ−１）の判定、予測および／または診断における驚くべき有効性を達成するための、Ｎ−グリカンをアレイとして合成および作製する際の驚くべき有効性および効率の発見を記述する。
【０３６８】
以下の目次は、本開示の様々な特質の実施形態の典型を示す：
化学合成
材料および方法
【０３６９】
すべての試薬をＳｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、Ａｃｒｏｓｓから購入し、さらに精製せずに使用した。乾燥溶媒を商業的供給源から購入し、さらに蒸留しなかった。グリコシル化のための微粉状のモレキュラーシーブＭＳ−４Å（Ａｌｄｒｉｃｈ）を、３５０℃で３時間加熱することによって活性化した。反応を、ＥＭシリカゲル６０  Ｆ２５４プレートにおける分析用薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によってモニターし、ＵＶ（２５４ｎｍ）下で、および／または酸性のモリブデン酸アンモニウムセリウムもしくはｐ−アニスアルデヒド（ａｎｉｓａｄｅｈｙｄｅ）で染色することによって、可視化した。フラッシュクロマトグラフィーを、４０〜６３μｍの粒径のシリカゲル（Ｍｅｒｃｋ）において行った。１Ｈ  ＮＭＲスペクトルを、２５℃にてＢｒｕｋｅｒ  ＡＶＡＮＣＥ  ６００（６００ＭＨｚ）分光計において記録した。すべての１Ｈ化学シフト（単位はｐｐｍ）を、ＣＤＣｌ３（δ＝７．２４ｐｐｍ）およびＤ２Ｏ（δ＝４．８０ｐｐｍ）に従って割り当てた。１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルを、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＶＡＮＣＥ  ６００分光計を用いて得て、ＣＤＣｌ３（δ＝７７．００ｐｐｍ）で較正した。結合定数（Ｊ）は、ヘルツ（Ｈｚ）を単位として報告する。分裂パターンは、以下の省略形を使用することによって記載される：ｓ、シングレット；ｂｒｓ、ブロードシングレット；ｄ、ダブレット；ｔ、トリプレット；ｑ、カルテット；ｄｄ、ダブレットのダブレット；ｍ、マルチプレット。１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、以下の順序で報告される：化学シフト、多重度、結合定数およびプロトン数。すべてのＮＭＲシグナルが、１Ｈ  ＮＭＲ、ＣＯＳＹ、ＨＳＱＣ、ＨＭＱＣ、ＴＯＣＳＹおよび１３Ｃ実験に基づいて割り当てられた。高分解能ＥＳＩ質量スペクトルを、Ｂｒｕｋｅｒ  Ｄａｌｔｏｎｉｃｓ分光計において記録した。ＮＨＳでコーティングされたスライドガラスをＳＣＨＯＴＴ（Ｎｅｘｔｅｒｉｏｎ  Ｈ）から購入した。ＨＩＶ広域中和抗体ＰＧ９、ＰＧ１６およびＰＧＴ１４１〜１４５は、ＮＩＨのＰｅｔｅｒ  Ｋｗｏｎｇ教授によってその厚意により寄贈された（ＰＧ９／ＰＧ１６は、Ｐｏｌｙｍｕｎ，Ｖｉｅｎｎａ  Ａｕｓｔｒｉａからも購入した）。ＰＧＴ１２８は、ＴＳＲＩのＤｅｎｎｉｓ  Ｂｕｒｔｏｎ教授によってその厚意により寄贈された。二次抗体であるＤｙＬｉｇｈｔ６４９結合体化ロバ抗ヒトＩｇＧは、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈから購入した。シチジン５’−三リン酸（ＣＴＰ）、Ｎ−アセチルノイラミン酸（Ｎｅｕ５Ａｃ）、ＵＤＰガラクトース、Ｌ−フコースおよびホスホ（エノール）ピルビン酸（ＰＥＰ）は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから購入した。
【０３７０】
ＮＭＲ命名法。高マンノース型、ハイブリッド型および複合型オリゴ糖の個別の糖残基は、下に示されるように標識された。
【化９】
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一般的な手順  Ｓ
【０３７１】
酵素の発現、精製および反応：
α−２，３シアリルトランスフェラーゼ（ＪＴＦＡＪ−１６）１およびα−２，６シアリルトランスフェラーゼ（ＪＴ−ＩＳＨ−２２４）２の機能ドメインを、本発明者らの以前の報告３に従って得た。牛乳由来の酵素β−１，４ガラクトシルトランスフェラーゼをＳｉｇｍａから購入した。酵素α−１，２フコシルトランスフェラーゼ（ＨＥＫ−２９３細胞に由来するヒトＦｕｔ２）をＲ＆Ｄ  ＳＹＳＴＥＭＳから購入した。Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｆｒａｇｉｌｉｓ  Ｌ−フコキナーゼ／ＧＤＰ−フコースピロホスホリラーゼ（ＦＫＰ）、ピルビン酸キナーゼ（ＰＫ）、ピロホスファターゼ（ＰＰＡ）、シチジン一リン酸キナーゼ（ＣＭＫ）、ＣＭＰ−シアル酸シンテターゼ（ＣＳＳ）およびピロリ菌由来のα１−３フコシルトランスフェラーゼ（Ｈｐ１−３ＦＴΔ２６６９５）をはじめとした、本研究において使用される酵素は、本発明者らの研究室において発現および精製された好適な組換え酵素の例である。補因子再生を伴う酵素反応は、本発明者らのグループから以前に報告された手順４に従って行った。
完全な脱保護：
【０３７２】
方法１（すべてのグルコサミン残基に−Ｎフタルアミド（Ｎｐｈｔｈａｌｌａｍｉｄｅ）保護を有するグリカンの場合）：保護されたグリカン（５０ｍｍｏｌ）および１０ｍＬのエチレンジアミン：ｎＢｕＯＨ（１：４）の混合物を９０℃で一晩撹拌した。次いで、揮発性物質を蒸発させ、粗生成物を１０ｍＬのＡｃ２Ｏ／ピリジン（１：２）と一晩反応させた。溶媒を、高真空を用いて除去し、生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（アセトン：トルエン，２／８，ｖ／ｖ）によって精製した。生成物を、ナトリウムメトキシドのＭｅＯＨ溶液（１０ｍＬ）を用いて一晩、脱アセチル化した。その反応混合物を、ＩＲ−１２０を使用することによって中和し、濾過し、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（アセトン：トルエン，３／７，ｖ／ｖ）によって精製した。生成物を１０ｍＬのＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ：ＨＣＯＯＨ（６：３：１）に溶解し、Ｐｄ（ＯＨ）２（５０重量％）を加え、その反応混合物を一晩水素化した。その反応混合物をセライトで濾過し、真空中で濃縮した。残渣を、溶離剤として水を使用するＢｉｏ−Ｇｅｌ  Ｐ−２（ＢＩＯ−ＲＡＤ）カラムクロマトグラフィーによって精製し、生成物を凍結乾燥して、所望のオリゴ糖を白色粉末として得た。
【０３７３】
方法２（すべてのグルコサミン残基において−ＮＨＴｒｏｃ保護を有するグリカンの場合）：保護されたグリカン（５０ｍｍｏｌ）および水酸化リチウム（２５０ｍｍｏｌ）を含む１０ｍＬの１，４ジオキサン：Ｈ２Ｏ（４：１）の混合物を９０℃で一晩撹拌した。次いで、揮発性物質を蒸発させ、粗生成物を１０ｍＬのＡｃ２Ｏ：ピリジン（１：２）と一晩反応させた。溶媒を、高真空を用いて除去し、生成物をＣ１８ゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤としてＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ）によって精製した。生成物を、ナトリウムメトキシドのＭｅＯＨ溶液（１０ｍＬ）を用いて一晩、脱アセチル化した。その反応混合物を、ＩＲ−１２０を使用することによって中和し、濾過し、真空中で濃縮した。残渣をＣ１８ゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤としてＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ）によって精製した。生成物を、１０ｍＬのＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ：ＨＣＯＯＨ（６：３：１）に溶解し、Ｐｄ（ＯＨ）２（５０重量％）を加え、その混合物を一晩水素化した。その反応混合物をセライトで濾過し、真空中で濃縮した。残渣を、溶離剤として水を使用するＢｉｏ−Ｇｅｌ  Ｐ−２（ＢＩＯ−ＲＡＤ）カラムクロマトグラフィーによって精製した。生成物を、凍結乾燥して、所望のオリゴ糖を白色粉末として得た。
【０３７４】
補因子再生を伴う酵素的シアリル化：グリカン（５μｍｏｌ）、Ｎｅｕ５Ａｃ（１０μｍｏｌ）、ＡＴＰ（０．０５μｍｏｌ）、ＣＴＰ（１μｍｏｌ）、ホスホエノールピルベート（１０μｍｏｌ、一カリウム塩）、シチジン一リン酸キナーゼ（ＣＭＫ、８０単位）、ＣＭＰ−シアル酸シンテターゼ（ＣＳＳ，１２０単位）、ピルビン酸キナーゼ（ＰＫ，４０単位）、ピロホスファターゼ（ＰＰＡ，４０単位）およびα２，６／２，３シアリルトランスフェラーゼ（１５０単位）を５０μｍｏｌのＴｒｉｓ緩衝液（２５ｍＭ，ｐＨ７．５）に溶解した。その反応物を、静かに撹拌しながら３７℃でインキュベートした。質量分析によって出発物質の完全な消費が確認された。その反応混合物を遠心し、上清をＰ２−Ｂｉｏｇｅｌでのゲル濾過（溶離剤は水）に供した。生成物を含む画分を合わせ、凍結乾燥して、それぞれの生成物を非晶質の白色固体として得た。
酵素的なβ−１，４−ガラクトシル化：
【０３７５】
グリカン（１当量）およびＵＤＰガラクトース（ガラクトース１つあたり２当量）を、ＭｎＣｌ２（１０ｍＭ）を含むＴｒｉｓ緩衝液（２５ｍＭ，ｐＨ７．５）に溶解した。酵素β−１，４−ＧａｌＴ−１（１５０単位）を加えて、２〜５ｍＭの範囲の最終濃度のグリカンを得た。得られた反応混合物を３７℃で２４時間インキュベートした。ジガラクトシル化の場合、ＴＬＣが、モノガラクトシル化された中間体を示したら、さらなるＵＤＰ−ガラクトース（２当量）、β−１，４−ＧａｌＴ（１００単位）を加え、中間体が完全に消費されるまで３７℃でインキュベートした。その反応混合物を遠心し、上清をＰ２−Ｂｉｏｇｅｌでのゲル濾過（溶離剤は水）に供した。生成物を含む画分を合わせ、凍結乾燥して、それぞれの生成物を非晶質の白色固体として得た。
【０３７６】
酵素的なα−１，２／３−フコシル化：グリカン（５μｍｏｌ）、Ｌ−フコース（５μｍｏｌ）、ＡＴＰ（０．５μｍｏｌ）、ＧＴＰ（０．５μｍｏｌ）、ＰＥＰ（１０μｍｏｌ）および１０ｍＭ  ＭｎＣｌ２を含む２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ７．４）の溶液に、Ｌ−フコキナーゼ／ＧＤＰ−フコースピロホスホリラーゼ（ＦＫＰ、２００単位）、ＰＫ（２００単位）、ＰＰＡ（２００単位）およびα−１，２／１，３−フコシルトランスフェラーゼ（２００単位）を加え、その混合物を３７℃で一晩インキュベートした。その反応混合物を遠心し、上清をＰ２−Ｂｉｏｇｅｌでのゲル濾過（溶離剤は水）に供した。生成物を含む画分を合わせ、凍結乾燥して、それぞれの生成物を非晶質の白色固体として得た。
基本単位１〜１３の合成  Ｓ
【０３７７】
単糖、三糖および五糖基本単位１〜５の合成。マンノシルトリクロロアセトイミデート基本単位１を、報告された手順５によって得た。Ｍａｎ９ＧｌｃＮＡｃ２のＤ１アーム三糖２の調製は、２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルピリジン（ＤＴＢＰ）および銀トリフレート（ＡｇＯＴｆ）の処理におけるマンノシルクロリドＳ１ａ６およびチオグリコシドアクセプターＳ１ｂ７のグリコシル化から開始して、二糖Ｓ１ｃを得た（スキームＳ１）。２−Ｏ位におけるＳ１ｃのＺｅｍｐｌｅｎ脱アセチル化の後、ＤＴＢＰおよびＡｇＯＴｆを使用することによるＳ１ａでのグリコシル化によって、所望の三糖Ｓ１ｅを９３％収率で得た。チオグリコシドからフッ化グリコシル２へのＳ１ｅの脱離基の修飾を、Ｎ−ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）およびジエチルアミノ硫黄トリフルオリド（ＤＡＳＴ）の作用の下で行った。そのフルオリドの変換は、キトビオース三糖でのグリコシル化において、α−選択性および優れた収率に関するより良好な結果を提供した。ＡｇＯＴｆの活性化の下において、ドナーＳ１ａ６とアクセプターＳ１ｆ７との縮合を行うことにより、トリマンノース３が得られ、続いてこれを脱アセチル化し、さらにＳ１ａでジグリコシル化して、Ｄ２／Ｄ３アーム五糖５を７１％収率で得た。次に、化合物３を、ＮＢＳおよびＤＡＳＴを使用することによって脱離基修飾に供して、６８％収率でトリマンノシルフルオリド４にした。本発明者らのストラテジーの慎重な観察から、単一のマンノシルクロリドドナーＳ１ａおよびユニークなＤＴＢＰ／ＡｇＯＴｆによって媒介されるグリコシル化条件を利用して、Ｄ１、Ｄ２／Ｄ３アーム三糖および五糖中間体を優れた収率で得られることが明らかになった。
【化１０】
2019515876.tif 000012
【０３７８】
スキームＳ１：化合物１〜５の調製。ｉ、ＤＴＢＰ、ＡｇＯＴｆ、４ÅＭＳ、ＣＨ２Ｃｌ２、−３０℃〜ＲＴ、一晩；Ｓ１ｃ：９３％、Ｓ１ｅ：９１％、３：６６％、５：７４％；ｉｉ、ＮａＯＭｅ、ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２＝１／１；Ｓ１ｄ：８９％、Ｓ１ｇ：９０％；ｉｉｉ、Ｎ−ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）、ＤＡＳＴ、ＣＨ２Ｃｌ２、−３０℃〜−１０℃；２：５８％、４：６１％。ＤＴＢＰ：２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルピリジン；ＤＡＳＴ：ジエチルアミノ硫黄トリフルオリド；ＡｇＯＴｆ：トリフルオロメタンスルホン酸銀。
【化１１】
2019515876.tif 000013
【０３７９】
ｐ−トリル−２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→２）−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−１−チオ−α−Ｄ−マンノピラノシド（Ｓ１ｃ）：アクセプターＳ１ｂ（１．７０ｇ，３．０５ｍｍｏｌ）およびドナーＳ１ａ（２．３４ｇ，４．５８ｍｍｏｌ）を含む２０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２の溶液に、活性化４Åモレキュラーシーブを加え、ＲＴで１時間撹拌した。別個のフラスコにおいて、ＡｇＯＴｆ（１．１９ｇ，４．５８ｍｍｏｌ）およびＤＴＢＰ（１．０３ｍＬ，４．５８ｍｍｏｌ）を含む１０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２を４ÅＭＳとともに１時間撹拌した。ＡｇＯＴｆ／ＤＴＢＰを含むフラスコを−３０℃に冷却し、ドナーとアクセプターの混合物を含む溶液を５分間にわたって加えた。その溶液を、２４時間にわたって室温まで徐々に加温しながら撹拌した。ＴＬＣ（酢酸エチル：ヘキサン，２／８）が、出発物質の消費とともに生成物の形成を示したので、その反応物をＥｔ３Ｎでクエンチし、セライトで濾過し、濾液を、ＮａＨＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０％→１５％のＥＡのヘキサン溶液）によって精製して、Ｓ１ｃ（２．９０ｇ，９３％）を無色泡沫状物として得た。ＴＬＣ（酢酸エチル：ヘキサン＝２／８  ｖ／ｖ）：Rf  =  0.35;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.38-7.16  (m,  30H,  Ar-H),  7.11-7.09  (m,  2H,  Ar-H),  7.00  (d,  J  =  8.4  Hz,  2H,  Ar-H),  5.44  (s,  1H,  H-1a),  5.51  (d,  J  =  2.4  Hz,  1H),  5.06  (s,  1H,  H-1b),  4.88  (d,  J  =  11.8  Hz,  1H),  4.81  (d,  J  =  11.2  Hz,  1H),  4.73-4.37  (m,  10H),  4.29  (t,  J  =  8.9  Hz,  1H),  4.22  (s,  1H),  3.96-3.88  (m,  4H),  3.83-3.71  (m,  2H),  3.69-3.63  (m,  2H),  3.55  (d,  J  =  12.1  Hz,  1H),  2.26  (s,  3H,  -C(O)CH3),  2.13  (s,  3H,  -CH3  of  STol);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  170.49,  138.75,  138.67,  138.62,  138.42,  138.32,  138.24,  137.87,  132.55,  130.51,  128.77,  128.64,  128.61,  128.56,  128.52,  128.39,  128.29,  128.20,  128.15,  128.03,  127.99,  127.94,  127.78,  127.63,  99.99,  87.78,  80.19,  78.35,  76.88,  75.48,  75.32,  75.03,  74.56,  73.46,  73.08,  72.47,  72.21,  72.18,  68.48,  69.02,  68.85,  21.42,  21.36;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ６３Ｈ６６Ｏ１１Ｓに対するｍ／ｚ計算値；１０３０．４２１８；実測値１０５３．４２２８（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化１２】
2019515876.tif 000014
【０３８０】
ｐ−トリル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→２）−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−１−チオ−α−Ｄ−マンノピラノシド（Ｓ１ｄ）：化合物Ｓ１ｃ（１．０１ｇ，０．９７０ｍｍｏｌ）を含む２０ｍＬのメタノール：ＣＨ２Ｃｌ２（１／１）の溶液に、ナトリウムメトキシド（０．０２４ｇ，０．４２ｍｍｏｌ）を加え、ＴＬＣ（酢酸エチル：ヘキサン，３／７）が出発物質の消費とともに生成物の形成を示すまでＲＴで撹拌した。その反応混合物をＩＲ−１２０で中和し、濾過し、真空中で濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０％→３０％のＥＡのヘキサン溶液）によって精製して、Ｓ１ｄ（０．８５９ｇ，８９％）を無色油状物として得た。ＴＬＣ（酢酸エチル：ヘキサン＝３／７  ｖ／ｖ）：Rf  =  0.29;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.33-7.10  (m,  32H,  Ar-H),  6.96  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H,  Ar-H),  5.56  (s,  1H,  H-1),  5.11  (s,  1H,  H-1),  4.85  (d,  J  =  10.8  Hz,  1H),  4.75  (d,  J  =  10.8  Hz,  1H),  4.69-4.62  (m,  3H),  4.52-4.38  (m,  6H),  4.37  (d,  J  =  12.1  Hz,  1H),  4.25  (d,  J  =  12  Hz,  2H),  4.09  (s,  1H),  3.90-3.77  (m,  4H),  3.70  (d,  J  =  10.8  Hz,  1H),  3.62  (dd,  J  =  4.8,  8.2  Hz,  1H),  3.54  (d,  J  =  10.2  Hz,  1H),  2.23  (s,  3H,  CH3,  STol);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  138.61,  138.42,  138.33,  138.24,  137.97,  137.51,  132.18,  130.38,  129.73,  128.55,  128.47,  128.38,  128.29,  128.24,  127.93,  127.91,  127.89,  127.86,  127.85,  127.78,  127.68,  127.57,  127.48,  127.45,  127.33,  101.23,  87.62,  80.06,  79.99,  76.52,  75.18,  75.01,  74.95,  94.35,  73.21,  73.18,  72.87,  72.38,  72.18,  71.69,  69.28,  68.70,  68.56,  19.45;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ６１Ｈ６４Ｏ１０Ｓに対するｍ／ｚ計算値；９８８．４１１２；実測値１０１１．４１２５（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化１３】
2019515876.tif 000015
【０３８１】
ｐ−トリル−２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→２）−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→２）−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−１−チオ−α−Ｄ−マンノピラノシド（Ｓ１ｅ）：アクセプターＳ１ｄ（２．６ｇ，２．６２ｍｍｏｌ）およびドナーＳ１ａ（２．０１ｇ，３．９４ｍｍｏｌ）を含む１０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２の溶液に、活性化４Åモレキュラーシーブを加え、ＲＴで１時間撹拌した。別個のフラスコにおいて、ＡｇＯＴｆ（１．０２ｇ，３．９４ｍｍｏｌ）およびＤＴＢＰ（８９３μＬ，３．９４ｍｍｏｌ）を含む３０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２を活性化４Åモレキュラーシーブとともに１時間撹拌した。ＡｇＯＴｆ／ＤＴＢＰの混合物を−３０℃に冷却し、ドナーおよびアクセプターの溶液を５分間にわたって加えた。その溶液を、ＴＬＣ（酢酸エチル：ヘキサン，２／８）が出発物質の消費とともに生成物の形成を示すまで、２４時間にわたってＲＴまで徐々に加温しながら撹拌した。その反応物をＥｔ３Ｎでクエンチし、セライトで濾過した。濾液をＮａＨＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０％→２０％のＥＡのヘキサン溶液）によって精製して、Ｓ１ｅ（３．５０ｇ，９１％）を無色泡沫状物として得た。ＴＬＣ（酢酸エチル：ヘキサン＝２／８  ｖ／ｖ）：Rf  =  0.41;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.34-7.11  (m,  45H,  Ar-H),  7.05-7.03  (m,  2H,  Ar-H),  6.93  (d,  J  =  7.2  Hz,  1H,  Ar-H),  5.65  (s,  1H,  H-1),  5.50  (d,  J  =  3.0  Hz,  1H,  H-1),  5.10  (d,  J  =  3.2  Hz,  1H,  H-1),  4.82  (dd,  J  =  3.1,  10.2  Hz,  2H),  4.75  (d,  J  =  12.1  Hz,  1H),  4.68  (s,  2H),  4.60-4.54  (m,  8H),  4.35-4.19  (m,  9H),  3.90-3.84  (m,  5H),  3.78-3.72  (m,  2H),  3.66-3.63  (m,  3H),  3.55-3.52  (m,  1H),  3.46  (d,  J  =  4.2  Hz,  1H),  3.41  (dd,  J  =  3.4,  9.2  Hz,  1H),  3.31  (d,  J  =  9.8  Hz,  1H),  2.20  (s,  3H,  -C(O)CH3),  2.05  (s,  3H,  CH3,  STol);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  170.84,  139.12,  138.85,  138.79,  138.65,  138.60,  138.52,  138.37,  138.25,  137.94,  137.60,  132.30,  130.75,  129.97,  129.90,  128.98,  128.63,  128.52,  128.33,  128.20,  128.03,  127.88,  127.64,  100.79,  96.52,  88.06,  80.83,  80.45,  76.45,  76.42,  76.04,  75.65,  75.21.  75.14,  74.69,  73.63,  73.05,  73.01,  72.95,  71.99,  71.87,  71.43,  69.66,  69.51,  69.35,  68.40,  68.34,  21.40,  21.36,  21.31;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ９０Ｈ９４Ｏ１６Ｓに対するｍ／ｚ計算値；１４６２．６１５５；実測値１４８５．６１９０（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化１４】
2019515876.tif 000016
【０３８２】
２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→２）−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→２）−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−１−α−Ｄ−マンノピラノシルフルオリド（２）：三糖Ｓ１ｅ（０．６００ｇ，０．４１０ｍｍｏｌ）を含む−３０℃のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）の溶液に、ＮＢＳ（０．２１８ｍｇ，１．２３ｍｍｏｌ）を加え、１０分間撹拌した。ＤＡＳＴ（３２４μＬ，２．４６ｍｍｏｌ）をゆっくり加え、得られた反応混合物を−１０℃で６時間撹拌した。ＴＬＣ（酢酸エチル：ヘキサン，３／７）が、出発物質の消費とともに生成物の形成を示したので、その反応物をＮａＨＣＯ３水溶液でクエンチし、濾液をＮａＨＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０％→２５％のＥＡのヘキサン溶液）によって精製して、フルオリド２（０．３２０ｇ，５８％）を白色泡沫状物として、そして０．２００ｇのアルコール（アノマー−ＯＨ）を副生成物として得た。ＴＬＣ（酢酸エチル：ヘキサン＝３／７，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.31;  1H  NMR  (600  MHz,  CHCl3):  δ  7.32-7.12  (m,  45H,  Ar-H),  5.67  (d,  J  =  50.4  Hz,  1H,  Ar-H),  5.49  (s,  1H,  H-1),  5.16  (s,  1H,  H-1),  4.99  (s,  1H,  H-1),  4.82-4.77  (m,  3H),  4.65-4.38  (m,  15H),  4.30  (d,  J  =  12.1  Hz,  1H),  4.03  (s,  1H),  3.97-3.94  (m,  3H),  3.90-3.64  (m,  11H),  3.54  (d,  J  =  10.2  Hz,  1H),  2.11  (s,  3H,  -C(O)CH3);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  170.44,  138.77,  138.64,  138.60,  138.54,  138.46,  138.41,  138.28,  128.76,  128.64,  128.61,  128.54,  128.44,  128.31,  128.19,  128.13,  128.09,  128.04,  128.01,  127.95,  127.90,  127.87,  127.84,  127.79,  127.73,  107.65,  106.19,  101.04,  99.72,  78.56,  78.31,  75.45,  75.41,  75.31,  74.86,  74.59,  74.31,  74.10,  73.86,  73.68,  73.65,  73.57,  72.69,  72.49,  72.38,  72.17,  69.51,  69.31,  69.01,  68.95,  21.44;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ８３Ｈ８７ＦＯ１６に対するｍ／ｚ計算値；１３５８．５８７０；実測値１３８１．５８９１（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化１５】
2019515876.tif 000017
【０３８３】
ｐ−トリル−２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）−２，４−ジ−Ｏ−ベンジル−１−チオ−α−Ｄ−マンノピラノシド（３）：アクセプターＳ１ｆ（０．５４５ｇ，１．２３ｍｍｏｌ）およびドナーＳ１ａ（１．５７ｇ，３．０７ｍｍｏｌ）を含むＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）の溶液に、４Å活性化ＭＳを加え、室温で１時間撹拌した。別個のフラスコにおいて、ＡｇＯＴｆ（０．７８７ｇ，３．０７ｍｍｏｌ）およびＤＴＢＰ（６９０μＬ，３．０７ｍｍｏｌ）を含む１０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２をＭＳ４Åとともに撹拌した。１時間撹拌した後、ＡｇＯＴｆ／ＤＴＢＰを含むフラスコを−３０℃に冷却し、ドナーとアクセプターの混合物を含む溶液を５分間にわたって加えた。その溶液を２４時間にわたって室温まで徐々に加温しながら撹拌した。ＴＬＣ（酢酸エチル：ヘキサン，２／８）は、出発物質の消費とともに生成物の形成を示した。その反応物をＥｔ３Ｎでクエンチし、セライトで濾過し、濾液をＮａＨＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０％→２０％のＥＡのヘキサン溶液）によって精製して、３（１．１０ｇ，６６％）を無色泡沫状物として得た。ＴＬＣ（酢酸エチル：ヘキサン＝２／８，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.36;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.35-7.10  (m,  32H,  Ar-H),  7.05  (d,  J  =  8.0  Hz,  2H,  Ar-H),  5.51  (s,  1H),  5.47  (s,  1H,  H-1),  5.45  (dd,  J  =  2.0,  2.8  Hz,  1H),  5.21  (s,  1H,  H-1),  4.91  (d,  J  =  1.5  Hz,  1H,  H-1),  4.86  (t,  J  =  10.2  Hz,  2H),  4.75  (d,  J  =  11.2  Hz,  1H),  4.67-4.58  (m,  5H),  4.54-4.36  (m,  8H),  4.23  (dd,  J  =  3.9,  9.6  Hz,  1H),  4.12-4.06  (m,  2H),  4.01  (dd,  J  =  3.2,  9.2  Hz,  1H),  3.97-3.86  (m,  5H),  3.82  (t,  J  =  9.2  Hz,  1H)  3.79-3.75  (m,  1H),  3.72  (dd,  J  =  3.9,  10.7  Hz,  1H),  3.70-3.56  (m,  4H),  2.17  (s,  3H,  -C(O)CH3),  2.13  (s,  3H,  -C(O)CH3),  2.09  (s,  3H,  CH3,  STol);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  170.27,  170.10,  138.57,  138.53,  138.18,  138.16,  137.81,  137.77,  137.42,  131.46,  130.85,  129.83,  128.44,  128.42,  128.36,  128.27,  128.21,  128.06,  127.81,  127.72,  127.68,  127.63,  127.53,  127.48,  99.83,  98.17,  85.23,  78.98,  78.08,  77.76,  75.15,  74.98,  74.89,  74.32,  74.15,  73.52,  73.30,  72.23,  72.05,  71.85,  71.48,  71.43,  71.36,  69.05,  68.72,  68.60,  68.41,  66.60,  60.39,  21.15,  21.00,  20.94;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ８５Ｈ９０Ｏ１７Ｓに対するｍ／ｚ計算値；１４１４．５７９１；実測値１４３７．５８２１（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化１６】
2019515876.tif 000018
【０３８４】
ｐ−トリル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−２，４−ジ−Ｏ−ベンジル−１−チオ−α−Ｄ−マンノピラノシド（Ｓ１ｇ）：三糖３（１．３０ｇ，０．９１８ｍｍｏｌ）を含む１０ｍＬのメタノール：ＣＨ２Ｃｌ２（１／１）の溶液に、ナトリウムメトキシド（０．０２４ｇ，０．４５９ｍｍｏｌ）を加え、ＴＬＣ（酢酸エチル：ヘキサン，３／７）が出発物質の消費とともに生成物の形成を示すまでＲＴで撹拌した。その反応混合物をＩＲ−１２０で中和し、濾過し、真空中で濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０％→２５％のＥＡのヘキサン溶液）によって精製して、Ｓ１ｇ（１．１０ｇ，９０％）を無色油状物として得た。ＴＬＣ（酢酸エチル：ヘキサン＝３／７，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.26;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.36-7.12  (m,  42H,  Ar-H),  7.06  (d,  J  =  8.0  Hz,  2H,  Ar-H),  5.46  (s,  1H,  H-1),  5.24  (s,  1H,  H-1),  5.01  (d,  J  =  1.1  Hz,  1H,  H-1),  4.82  (t,  J  =  11.1  Hz,  2H),  4.69  (d,  J  =  11.6  Hz,  1H),  4.65-4.44  (m,  13H),  4.23  (dd,  J  =  4.1,  9.6  Hz,  1H),  4.16  (s,  1H),  4.07  (dd,  J  =  2.8,  9.4  Hz,  1H),  4.03  (d,  J  =  10.1  Hz,  1H),  3.96-3.88  (m,  4H),  3.87-3.81  (m,  3H),  3.80-3.75  (m,  1H),  3.73-3.64  (m,  4H),  3.62  (dd,  J  =  1.6,  10.8  Hz,  1H),  2.38  (s,  1H),  2.34  (s,  1H,  -C(O)CH3),  2.19  (s,  3H,  CH3,  STol);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  138.12,  138.11,  137.69,  131.75,  130.12,  128.82,  128.76,  128.73,  128.67,  128.63,  128.57,  128.54,  128.53,  128.41,  128.35,  128.29,  128.19,  128.12,  128.08,  128.03,  127.95,  128.92,  127.82,  124.43,  99.90,  85.55,  80.32,  80.00,  78.49,  79.46,  75.46,  75.41,  75.27,  75.19,  75.13,  74.66,  74.50,  74.39,  73.85,  73.81,  73.62,  72.32,  72.24,  71.85,  71.71,  71.40,  71.33,  69.48,  69.00,  68.96,  68.90,  68.32,  66.51,  21.15;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ８１Ｈ８６Ｏ１５Ｓに対するｍ／ｚ計算値；１３３０．５５８０；実測値１３５３．５６１４（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化１７】
2019515876.tif 000019
【０３８５】
２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）−２，４−ジ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシルフルオリド（４）：化合物３（０．２７０ｇ，０．１９７ｍｍｏｌ）を含む−３０℃のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）の溶液に、ＮＢＳ（０．０５２ｇ，０．２９６ｍｍｏｌ）を加え、１０分間撹拌した。次いで、ＤＡＳＴ（５２μＬ，０．３９５ｍｍｏｌ）をゆっくり加え、得られた反応混合物を−１０℃で４時間撹拌した。ＴＬＣ（酢酸エチル：ヘキサン，３／７）は、出発物質の消費とともに生成物の形成を示した。その反応混合物をＮａＨＣＯ３水溶液でクエンチし、濾液をＮａＨＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０％→８％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、４（０．１５０ｇ，６１％）を白色泡沫状物として得た。ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン＝１／９，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.19;  1H  NMR  (600  MHz,  CHCl3):  δ  7.29-7.10  (m,  40H,  Ar-H),  5.50  (s,  1H,  H-1),  5.47  (d,  J  =  50  Hz,  1H,  H-1),  5.46  (s,  1H,  H-1),  5.18  (s,  1H),  4.92  (s,  1H),  4.86  (d,  J  =  11.2  Hz,  1H),  4.83  (d,  J  =  10.8  Hz,  1H),  4.72  (d,  J  =  10.0  Hz,  1H),  4.72-4.56  (m,  6H),  4.48-4.40  (m,  7H),  4.10  (d,  J  =  8.9  Hz,  1H),  4.00-3.92  (m,  4H),  4.90-3.77  (m,  5H),  3.71-3.64  (m,  5H),  3.57  (d,  J  =  7.2  Hz,  1H),  2.13  (s,  3H,  -C(O)CH3),  2.06  (s,  3H,  -C(O)CH3);  13C  NMR  (150  MHz,  CHCl3):  δ  170.56,  170.36,  138.80,  138.74,  138.50,  138.39,  138.11,  138.04,  137.89,  137.88,  129.70,  128.81,  128.70,  128.68,  128.65,  128.58,  128.56,  128.54,  128.43,  128.27,  128.18,  128.12,  128.07,  128.04,  128.00,  127.97,  127.89,  127.82,  126.55,  106.66,  105.18,  100.02,  98.84,  98.81,  78.31,  77.70,  76.31,  76.03,  75.42,  75.37,  75.23,  74.62,  74.41,  74.27,  73.90,  73.80,  73.65,  73.16,  72.66,  72.14,  71.92,  71.58,  69.42,  68.96,  68.70,  68.61,  66.53,  42.20,  32.21,  29.98,  29.65,  22.98,  21.63,  21.44,  21.27,  14.71,  14.41;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ７８Ｈ８３Ｏ１７Ｆに対するｍ／ｚ計算値；１３１０．５５０７；実測値１３３３．５５３６（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化１８】
2019515876.tif 000020
【０３８６】
ｐ−トリル−２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→２）−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→２）−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−２，４−ジ−Ｏ−ベンジル−１−チオ−α−Ｄ−マンノピラノシド（５）：アクセプターＳ１ｇ（１．０１ｇ，０．７３９ｍｍｏｌ）およびドナーＳ１ａ（０．９４７ｇ，１．８４ｍｍｏｌ）を含む２０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２の溶液に、４Å活性化ＭＳを加え、室温で１時間撹拌した。別個のフラスコにおいて、ＡｇＯＴｆ（０．４７２ｇ，１．８５ｍｍｏｌ）およびＤＴＢＰ（４１５μＬ，１．８５ｍｍｏｌ）を含む１０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２をＭＳ４Åとともに撹拌した。１時間撹拌した後、ＡｇＯＴｆ／ＤＴＢＰを含むフラスコを−３０℃に冷却し、ＣＨ２Ｃｌ２中にドナーとアクセプターの混合物を含む溶液を５分間にわたって加えた。その溶液を２４時間にわたって室温まで徐々に加温しながら撹拌した。ＴＬＣ（酢酸エチル：ヘキサン，３／７）は、出発物質の消費とともに生成物の形成を示した。次いで、その反応物をＥｔ３Ｎでクエンチし、セライトで濾過し、濾液をＮａＨＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０％→２５％のＥＡのヘキサン溶液）によって精製して、５（１．２５ｇ，７４％）を白色固体として得た。ＴＬＣ（酢酸エチル：ヘキサン＝３／７，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.33;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.27-7.04  (m,  72H,  Ar-H),  7.02  (d,  J  =  8.0  Hz,  2H,  Ar-H),  5.52  (d,  J  =  1.5  Hz,  2H,  2  x  H-1),  5.46  (s,  1H,  H-1),  5.18  (s,  1H,  H-1),  5.04  (d,  J  =  8.2  Hz,  1H),  4.85  (t,  J  =  11.0  Hz,  2H),  4.78  (t,  J  =  11.1  Hz,  2H),  4.72-4.44  (m,  18H),  4.41-4.30  (m,  8H),  4.27  (d,  J  =  12.3  Hz,  2H),  4.20  (s,  2H),  4.05-3.92  (m,  6H),  3.91-3.73  (m,  8H),  3.68-3.56  (m,  6H),  3.48  (d,  J  =  10.1  Hz,  1H),  3.40  (d,  J  =  10.3  Hz,  1H),  3.34  (d,  J  =  10.5  Hz,  1H),  2.10  (s,  6H,  -C(O)CH3),  2.01  (s,  3H,  CH3,  STol);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  170.22,  152.99,  152.78,  152.57,  138.43,  138.38,  138.24,  138.05,  138.02,  137.86,  137.81,  131.15,  129.80,  128.44,  128.30,  128.20,  128.05,  127.95,  127.85,  127.72,  127.70,  127.62,  127.55,  127.53,  127.47,  127.41,  127.38,  127.35,  127.23,  126.94,  101.16,  99.37,  98.86,  84.97,  79.24,  78.07,  78.02,  75.22,  74.99,  74.87,  74.77,  74.55,  74.47,  74.29,  74.17,  73.94,  73.82,  73.38,  73.24,  73.18,  73.01,  72.58,  71.93,  71.85,  71.77,  71.60,  71.55,  71.47,  70.99,  69.41,  68.64,  68.57,  68.46,  68.01,  29.69,  21.22,  20.91;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ１３９Ｈ１４６Ｏ２７Ｓに対するｍ／ｚ計算値；２２７９．９６９８；実測値２３０２．９７４７（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０３８７】
二糖基本単位６の合成。
【０３８８】
ＮＩＳおよびＴｆＯＨによって媒介されるアクセプターＳ２ａ８とドナーＳ２ｂ９との縮合によって、もっぱらβ−結合を有する二糖Ｓ２ｃ（Ｊ１’，２’＝８．５Ｈｚ）が６４％収率で供給された。次に、化合物Ｓ２ｃを、アノマー脱アリル化に続く、ＤＡＳＴの存在下での遊離−ＯＨから−Ｆへの変換を介してフルオリド６に改変した（スキームＳ２）。
【化１９】
2019515876.tif 000021
【０３８９】
スキームＳ２：化合物６の調製。ｉ、ＮＩＳ、ＴｆＯＨ、ＣＨ２Ｃｌ２、４ÅＭＳ、−４０℃、２ｈ、６４％；ｉｉ，（１）ＰｄＣｌ２、ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２＝１／１，（２）ＤＡＳＴ、ＣＨ２Ｃｌ２、−３０℃〜−１０℃、３〜５ｈ、６１％。
【化２０】
2019515876.tif 000022
【０３９０】
アリル−Ｏ−４−Ｏ−アセチル−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−Ｏ−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシド（Ｓ２ｃ）：チオグリコシドドナーＳ２ｂ（２．３３ｇ，３．６５ｍｍｏｌ）、アクセプターＳ２ａ（１．５０ｇ，３．０５ｍｍｏｌ）および活性化４Åモレキュラーシーブ（３ｇ）の混合物を含む３０ｍＬの乾燥ＣＨ２Ｃｌ２を室温で１時間撹拌した。ＮＩＳ（１．３５ｇ，６．０１ｍｍｏｌ）およびＴｆＯＨ（６６．２μＬ，０．７５ｍｍｏｌ）を−４０℃においてゆっくり加え、ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン，１／９）が出発物質の消費とともに生成物の形成を示すまで、２時間撹拌した。その反応混合物をＥｔ３Ｎでクエンチし、セライトで濾過し、濾液をＮａＨＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）、Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液（２×５０ｍＬ）および最後にブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１０％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、Ｓ２ｃ（２．１０ｇ，６４％）を白色固体として得た。ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン＝１／９，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.29;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.52-7.50  (m,  4H,  Ar-H),  7.33-7.10  (m,  16H,  Ar-H),  7.10-7.09  (m,  4H,  Ar-H),  7.00-6.90  (m,  2H,  Ar-H),  6.89-6.81  (m,  3H,  Ar-H),  5.73-5.71  (m,  1H,  -OCH2-CH=CH2),  5.26  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H,H-1),  5.14-5.06  (m,  3H),  4.71  (t,  J  =  7.8  Hz,  2H),  4.58  (d,  J  =  12.1  Hz,  1H),  4.50-4.39  (m,  6H),  4.34  (d,  J  =  4.8  Hz,  1H),  4.32  (d,  J  =  6.6  Hz,  1H),  4.10  (t,  J  =  8.6  Hz,  1H),  4.07-4.00  (q,  2H),  3.78  (dd,  J  =  3.2,  6.1  Hz,  1H),  3.81-3.78  (m,  2H),  3.71-3.70  (dd,  J  =3.2,  6.3  Hz,  1H),  3.65-3.60  (m,  1H),  3.58  (dd,  J  =  3.1,  6.5  Hz,  1H),  3.56  (t,  J  =  8.9  Hz,  1H),  3.48  (t,  J  =  10.2  Hz,  1H),  3.39  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  2.97-2.96  (m,  1H),  1.93  (s,  3H,  -C(O)CH3);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  169.9,  138.69,  138.6,  138.5,  137.9,  137.9,  134.,  133.8,  133.7,  131.9,  130.3,  128.5,  128.4,  128.4,  128.3,  128.2,  128.0,  127.9,  127.7,  127.7,  127.6,  127.5,  127.5,  123.3,  117.5,  97.1,  96.4,  77.9,  76.9,  75.1,  74.8,  73.9,  73.8,  73.8,  73.05,  72.8,  71.9,  71.0,  70.4,  70.1,  68.1,  55.5,  28.7,  21.5,  21.1;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ６０Ｈ６１ＮＯ１３に対するｍ／ｚ計算値；１００３．４０３５  実測値１０２６．４０４３（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化２１】
2019515876.tif 000023
【０３９１】
４−Ｏ−アセチル−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−Ｏ−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシルフルオリド（６）：Ｓ２ｃ（０．７５０ｇ，０．７４７ｍｍｏｌ）を含む１０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ（１／１）の溶液に、ＰｄＣｌ２（０．０２ｇ）を加え、ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン，２／８）が出発物質の消費とともに生成物の形成を示すまで、ｒｔで一晩撹拌した。次いで、その反応混合物を真空中で濃縮し、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、アルコール（０．６ｇ，８０％）を無色泡沫状物として得た。アルコール（０．２７０ｇ，０．１９７ｍｍｏｌ）を含む−３０℃のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）の溶液に、ＤＡＳＴ（５２μＬ，０．３９５ｍｍｏｌ）であり、ＴＬＣが出発物質の消費とともに生成物の形成を示すまで、得られた反応混合物を−１０℃で８時間撹拌した。その反応物をＮａＨＣＯ３水溶液でクエンチし、濾液をＮａＨＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０％→２５％のＥＡのヘキサン溶液）によって精製して、６（０．１５０ｇ，６１％）を白色泡沫状物として得た。ＴＬＣ（酢酸エチル：ヘキサン＝３／７，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.45;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.57-7.55  (m,  4H,  Ar-H),  7.35-7.21  (m,  11H,  Ar-H),  7.07  (d,  J  =  6.4  Hz,  4H,  Ar-H),  6.99  (d,  J  =  7.2  Hz,  2H,  Ar-H),  6.88-6.82  (m,  3H,  Ar-H),  5.30  (d,  J  =  50.4  Hz,  1H,  H-1Man),  5.30  (d,  J  =  12.2  Hz,  1H,  H-1GlcNAc),  4.88  (d,  J  =  11.2  Hz,  1H),  4.80-4.71  (m,  3H),  4.64  (d,  J  =  11.3  Hz,  1H),  4.49-4.46  (m,  2H),  4.43  (d,  J  =  11.8  Hz,  2H),  4.34-4.28  (m,  3H),  4.23  (dd,  J  =  6.1,  11.3  Hz,  1H),  4.16  (s,  1H),  4.06  (d,  J  =  12.1  Hz,  1H),  4.02  (d,  J  =  12.3  Hz,  1H),  3.76-3.57  (m,  5H),  3.32  (d,  J  =  10.8  Hz,  1H),  3.02  (dd,  J  =  4.2,  11.3  Hz,  1H),  1.97  (s,  3H,  -C(O)CH3);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  170.99,  138.40,  138.28,  138.16,  137.94,  137.70,  133.94,  131.82,  128.90,  128.63,  128.57,  128.47,  128.40,  128.31,  128.27,  128.04,  127.89,  127.89,  127.76,  123.54,  106.33,  104.85,  97.45,  79.55,  78.48,  75.43,  75.23,  74.09,  73.84,  73.70,  73.16,  72.78,  72.54,  71.36,  69.18,  63.40,  55.80,  31.21,  29.98,  21.11;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ５７Ｈ５６ＦＮＯ１２に対するｍ／ｚ計算値；９６５．３６７９  実測値９８８．３６９０（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０３９２】
三糖基本単位７および８の合成。
【０３９３】
基本単位７（図２ａ）を以前の報告３に従って得た。グルコサミン残基におけるＮ−フタルアミド（ｐｔｈａｌｌａｍｉｄｅ）保護をＮＨ−Ｔｒｏｃに改変して、基本単位８を調製した（スキームＳ３）。
【化２２】
2019515876.tif 000024
【０３９４】
スキームＳ３：化合物８の調製。ｉ，（１）ＥＤＡ、ｎ−ＢｕＯＨ、９０℃，（２）Ｔｒｏｃ−Ｃｌ、ＮａＨＣＯ３、ＣＨ２Ｃｌ２、ｉｉ、Ａｃ２Ｏ、ピリジン、ＲＴ、一晩、３工程で７２％；ｉｉｉ，（１）ＰｄＣｌ２、ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２，（２）ＤＡＳＴ、ＣＨ２Ｃｌ２、−３０℃、２工程で６６％。
【化２３】
2019515876.tif 000025
【０３９５】
アリル−Ｏ−２−Ｏ−アセチル−３，４，６−Ｏ−トリ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−Ｏ−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシド（Ｓ３ｂ）：化合物Ｓ３ａ（１ｇ，０．６９３ｍｍｏｌ）および１０ｍＬのエチレンジアミン：ｎ−ＢｕＯＨ（１：４）の混合物を９０℃で一晩撹拌した。揮発性物質を蒸発させ、粗生成物を、高真空を用いて乾燥させた。次いで、それをＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）に溶解し、ＮａＨＣＯ３（０．３７６ｇ，６．９３ｍｍｏｌ）およびクロロギ酸２，２，２−トリクロロエチル（０．６６５ｍＬ，６．９３ｍｍｏｌ）を０℃で加え、ｒｔまで加温し、一晩撹拌した。ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン，２／８）は、出発物質の消費とともに生成物の形成を示した。その反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で希釈し、水（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０％→１５％のＥＡのトルエン溶液）によって精製した。次いで、ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン，２／８）が、出発物質の完全な消費を示すまで、生成物を、１０ｍＬのピリジン／無水酢酸（６：４）を用いてアセチル化した。次いで、その反応混合物を真空中で濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、Ｓ３ｂ（０．７６０ｇ，７２％）を白色泡沫状物として得た。ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン＝２／８，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.64;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.34-7.13  (m,  40H,  -Ph),  5.86-5.77  (m,  1H,  allyl  -CH),  5.30-5.28  (t,  J  =  8.2  Hz,  1H,  H2gal),  5.25  (bd,  1H,  -NHTroc),  5.16  (d,  J  =  17.6  Hz,  1H,  Troc),  5.10  (d,  J  =  10.2  Hz,  1H),  4.90  (t,  3H),  4.82-4.76  (m,  3H),  4.74  (s,  1H),  4.65-4.61  (dd,  J  =  8.4  &  2.8  Hz,  3H),  4.55-4.41  (m,  8H),  4.30  (d,  J  =  12.3  Hz,  2H),  4.20  (d,  J  =  12.2  Hz,  2H),  4.10-4.01  (m,  3H),  3.90-3.84  (m,  5H),  3.76-3.61  (m,  5H),  3.55-3.40  (m,  3H),  3.35-3.30  (m,  3H),  3.13  (d,  J  =  7.2  Hz,  1H),  1.92  (s,  3H,  -C(O)CH3)  ;  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  170.23,  154.11,  139.17,  138.98,  138.75,  138.25,  138.20,  134.04,  127.41,  100.7,  97.5,  96.80,  80.55,  78.53,  75.36,  72.87,  73.55,  72.78,  72.49,  72.10,  71.96,  69.98,  68.90,  68.65,  57.64,  41.51,  21.30.ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ８２Ｈ８８Ｃｌ３Ｎ１Ｏ１８に対するｍ／ｚ計算値；１４５８．４９６０  実測値１５０４．４９５６（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化２４】
2019515876.tif 000026
【０３９６】
２−Ｏ−アセチル−３，４，６−Ｏ−トリ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−Ｏ−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシルフルオリド（８）：ＰｄＣｌ２（０．０３０ｇ）を、Ｓ３ｂ（１．３ｇ，０．９４２ｍｍｏｌ）を含む１０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ（１：１）の溶液に加えた。ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン，２／８）が出発物質の消費とともに生成物の形成を示すまで、その反応混合物を室温で２時間撹拌した。次いで、その反応混合物をセライトで濾過し、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、１−ＯＨ化合物（０．９８０ｇ）を白色泡沫状物として得た。残渣（０．８５０ｇ，０．６０８ｍｍｏｌ）を−３０℃のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）に溶解し、次いで、ＤＡＳＴ（１６０μＬ，１．２１ｍｍｏｌ）をゆっくり加えた。得られた反応混合物を１時間撹拌した。ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン，２／８）が、出発物質の消費とともに生成物の形成を示したら、その反応物をＮａＨＣＯ３水溶液でクエンチした。濾液をＮａＨＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０％→１５％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、８（２工程で０．７００ｇ，６６％）を白色泡沫状物として得た。ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン＝２／８，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.64;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.35-7.10  (m,  40H),  4.57  (d,  J  =  51.4  Hz,  1H),  5.33  (t,  J  =  10.2  Hz,  1H),  5.22  (d,  J  =  8.2  Hz,  1H),  4.99-4.91  (m,  3H),  4.82  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H),  4.75  (t,  J  =  10.3  Hz,  1H),  4.64-4.44  (m,  12H),  4.38  (dd,  J  =  3.4  &  10.2  Hz,  2H),  4.26  (s,  2H),  4.06-4.33  (m,  5H),  3.76-3.64  (m,  4H),  3.54-3.46  (m,  2H),  3.40-3.34  (m,  3H),  3.12  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  1.65  (S,  3H);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  169.5,  154.0,  139.0,  138.8,  138.7,  138.5,  138.4,  138.3,  138.1,  129.4,  128.7,  128.6,  128.4,  128.2,  128.0,  127.9,  127.7,  127.5,  127.4,  127.2,  127.1,  125.5,  107.6,  105.4,  100.7,  98.7,  95.8,  80.5,  77.4,  74.3,  73.6,  73.3,  73.1,  72.3,  72.1,  72.0,  71.9,  68.9,  68.7,  68.3,  57.4,  41.4,  21.7,  21.2;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ７９Ｈ８３Ｃｌ３ＦＮ１Ｏ１７に対するｍ／ｚ計算値；１４４３．４６０２  実測値１４６６．４６０８（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０３９７】
複合型Ｄ１アーム四糖９の合成。
【０３９８】
シアリル化されたＤ１アームの調製は、２つの主要な基本単位Ｓ４ｃおよびＳ４ｄのカップリングによって達成された。Ｇａｌ  Ｓ４ｂのα−２，６グリコシル化のためにシアリルホスフェートドナーＳ４ａを使用することにより、完全なα−選択性１０がもたらされた。Ｓ２ｃのグルコサミンにおけるＮ−Ｐｈｔｈ保護は、ＮＨＴｒｏｃに改変され、そのようにしている間に、４−ＯＡｃ基を除去して、所望のＳ４ｄを得た。最後に、Ｓ４ｃとＳ４ｄとのカップリングによって、所望の四糖を得て、それはさらにアノマー改変を起こして、ドナー９が得られた。
【化２５】
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【化２６】
2019515876.tif 000028
【０３９９】
スキームＳ４：化合物９の調製。ｉ、ＴＭＳＯＴｆ、ＣＨ２Ｃｌ２、−５０℃、６４％；ｉｉ，（１）ＥＤＡ、ｎ−ＢｕＯＨ、９０℃，（２）Ｔｒｏｃ−Ｃｌ、ＮａＨＣＯ３、ＣＨ２Ｃｌ２、２工程で７８％；ｉｉｉ、ＮＩＳ、ＴｆＯＨ、ＣＨ２Ｃｌ２、−５０℃、６５％；ｉｖ，（１）ＰｄＣｌ２、ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２，（２）ＤＡＳＴ、ＣＨ２Ｃｌ２、−３０℃、２工程で５５％。
【化２７】
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【０４００】
メチル−５−アセトアミド−７，８，９−トリ−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−ノン−２−ウロピラノシロネート（ｕｌｏｐｙｒａｎｏｓｙｌｏｎａｔｅ）−（２→６）−ｐ−トリル−４−Ｏ−ベンジル−２，３−ジ−Ｏ−ベンゾイル−１−チオ−β−Ｄ−ガラクト（ｇｌａｃｔｏ）−ピラノシド（Ｓ４ｃ）：ドナーＳ４ａ（０．１１３ｇ，０．１７８ｍｍｏｌ）、アクセプターＳ４ｂ（０．２２０ｇ，０．１１９ｍｍｏｌ）および活性化４Åモレキュラーシーブを含む乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）の混合物をｒｔで１時間撹拌した。その反応物を−５０℃に冷却し、トリメチルシリルトリフレート（１２μＬ，０．０６ｍｍｏｌ）をゆっくり加え、得られた反応混合物を２時間撹拌した。その反応物を、Ｅｔ３Ｎを加えることによってクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、セライトで濾過し、飽和ＮａＨＣＯ３で抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→２５％のＥＡのヘキサン溶液）によって精製して、Ｓ４ｃ（０．１９０ｇ，６４％）を無色泡沫状物として得た。ＴＬＣ：（酢酸エチル：ヘキサン＝３／７，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.46;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.93  (d,  J  =  7.8  Hz,  2H),  7.89  (d,  J  =  8.4  Hz,  2H),  7.50-7.45  (m,  2H),  7.42-7.30  (m,  6H),  7.24-7.13  (m,  5H),  7.04  (d,  J  =  8.2  Hz,  2H),  5.80  (t,  J  =  10.3  Hz,  1H),  5.47  (d,  J  =  8.9  Hz,  1H),  5.37  (s,  3H),  5.32  (dd,  J  =  4.2  &  7.8  Hz,  1H),  5.12  (dd,  J  =  4.1  &  7.2  Hz,  1H),  4.90  (d,  J  =  12.2  Hz,  1H),  4.65  (d,  J  =  12.1  Hz,  1H),  4.20  (dd,  J  =  3.2  &  7.8  Hz,  1H),  4.18  (d,  J  =  6.8  Hz,  1H),  3.94-3.91  (m,  3H),  3.74-3.72  (m,  3H),  3.71  (s,  3H),  3.65  (dd,  J  =  3.2  &  7.8  Hz,  1H),  3.06  (t,  J  =  10.2  Hz,  2H),  2.87  (dd,  J  =  3.6  &  8.6  Hz,  1H),  2.33  (s,  3H),  2.17  (s,  3H),  2.15  (t,  J  =  7.8  Hz,  1H),  2.13  (s,  3H);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  171.9,  170.8,  169.8,  168.2,  166.8,  165.2,  159.2,  138.1,  133.7,  133.3,  130.0,  129.8,  129.4,  129.3,  129.2,  128.7,  128.6,  128.5,  128.4,  127.8,  127.7,  125.5,  100,  5,  86.8,  76.8,  76.1,  74.7,  73.8,  68.9,  68.5,  68.3,  67.2,  63.7,  62.0,  58.1,  53.3,  37.7,  25.88,  21.7,  21.5,  21.3,  21.0,  20.9  ;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ５１Ｈ５３ＮＯ１８Ｓに対するｍ／ｚ計算値；９９９．２８７６  実測値１０２２．２８８２（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化２８】
2019515876.tif 000030
【０４０１】
アリル−Ｏ−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ−β−Ｄ−グルコ−ピラノシル−（１→２）−Ｏ−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシド（Ｓ４ｄ）：化合物Ｓ２ｃ（２ｇ，１．９９ｍｍｏｌ）および２０ｍＬのエチレンジアミン：ｎ−ＢｕＯＨ（１：４）の混合物を９０℃で一晩撹拌した。揮発性物質を蒸発させ、粗生成物を、高真空を用いて乾燥させた。次いで、それをＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）に溶解し、ＮａＨＣＯ３（１．０５ｇ，１９．９ｍｍｏｌ）およびクロロギ酸２，２，２−トリクロロエチル（１．９ｍＬ，１９．９ｍｍｏｌ）を０℃において加え、ｒｔまで加温し、ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン，１．５／８．５）が出発物質の消費とともに生成物の形成を示すまで、一晩撹拌した。その反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で希釈し、水（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０％→１０％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、Ｓ４ｄ（１．５ｇ，７８％）を白色泡沫状物として得た。ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン＝１．５／８．５，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.44;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.30-7.15  (m,  25H),  5.87-7.78  (m,  1H),  5.33  (d,  J  =  5.2  Hz,  1H),  5.21  (d,  J  =  3.2  Hz,  1H),  5.14  (d,  J  =  7.2  Hz,  1H),  4.94  (d,  J  =  5.8  Hz,  1H),  4.80  (d,  J  =  8.5  Hz,  1H),  4.73-4.44  (m,  10H),  4.12-4.06  (m,  3H),  3.97-3.86  (m,  3H),  3.78-3.49  (m,  7H);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  153.97,  138.45,  138.37,  138.28,  137.98,  137.45,  133.63,  128.94,  128.43,  128.40,  128.26,  128.16,  127.97,  127.91,  127.78,  127.65,  127.53,  127.41,  125.20,  117.23,  97.93,  96.88,  95.50,  79.33,  79.08,  75.08,  74.47,  74.37,  73.53,  73.19,  73.00,  71.98,  71.65,  70.83,  69.16,  67.91,  57.41,  44.53;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ５３Ｈ５８Ｃｌ３ＮＯ１２に対するｍ／ｚ計算値；１００５．３０２５  実測値１００６．３０８９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【化２９】
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【０４０２】
アリル−［メチル−５−アセトアミド−７，８，９−トリ−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−ノン−２−ウロピラノシロネート］−（２→６）−４−Ｏ−ベンジル−２，３−ジ−Ｏ−ベンゾイル−１−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−Ｏ−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシド（Ｓ４ｅ）：活性化４Åモレキュラーシーブ（１ｇ）を、アクセプターＳ４ｄ（０．２０８ｇ，０．１６９ｍｍｏｌ）およびドナーＳ４ｃ（０．３１０ｇ，０．１９９ｍｍｏｌ）を含む無水ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）の溶液に加えた。その混合物を室温で１時間撹拌した。その反応混合物を−５０℃に冷却し、ＮＩＳ（０．０７６ｇ，０．３３８ｍｍｏｌ）およびＴｆＯＨ（３．７μＬ，０．０４２ｍｍｏｌ）をゆっくり加えた。得られた反応混合物を２時間撹拌した。ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン，１．５／８．５）が出発物質の消費とともに生成物の形成を示したら、その反応物を、Ｅｔ３Ｎを加えることによってクエンチし、セライトで濾過した。濾液をＮａＨＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）、Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１０％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、Ｓ４ｅ（３９０ｇ，６５％）を透明の泡沫状物として得た。ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン＝１．５／８．５，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.51;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.91-7.85  (m,  4H,  Ph),  7.50-7.46  (m,  1H,  Ph),  7.35-7.19  (m,  35H),  5.82-5.76  (m,  2H),  5.39-5.36  (m,  3H),  5.24  (d,  J  =  6.4  Hz,  1H),  5.22  (d,  J  =  7.2  Hz,  1H),  5.19  (d,  J  =  3.4  Hz,  1H),  5.15  (d,  J  =  3.4  Hz,  1H),  5.11-5.08  (dd,  J  =  6.3  &  3.1  Hz,  2H),  4.96  (d,  J  =  12.1  Hz,  2H),  4.83  (d,  J  =  12.1  Hz,  2H),  4.73-4.57  (m,  10H),  4.47-4.42  (m,  6H),  4.25-4.15  (m,  8H),  4.08-3.93  (m,  10H),  3.91  (s,  3H,),  3.39  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H),  3.21  (bd,  1H),  2.93  (t,  J  =  7.8  Hz,  1H),  2.78  (dd,  J  =  3.6  &  7.8  Hz,  1H),  2.11  (s,  3H),  2.01  (s,  3H),  1.66  (s,  3H);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  171.83,  170.84,  169.91,  168.03,  166.15,  165.43,  159.57,  154.17,  139.14,  138.85,  138.36,  134.08,  133.78,  132.66,  13.54,  129.67,  128.78,  128.43,  128.23,  127.78,  127.67,  127.56,  127.43,  127.23,  127.10,  117,53,  100.67,  100.32,  98.94,  97.18,  75.90,  78.31,  75.32,  74.95,  7.81,  74.43,  73.99,  73.58,  73.45,  73.33,  73.29,  73.23,  73.12,  69.90,  69.56,  68.66,  67.56,  58.70,  53.43,  21.28,  21.07,  20,98;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ９７Ｈ１０３Ｃｌ３Ｎ２Ｏ１３に対するｍ／ｚ計算値；１９８２．５５６２  実測値１９０５．５５５８（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化３０】
2019515876.tif 000032
【０４０３】
メチル−５−アセトアミド−７，８，９−トリ−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−ノン−２−ウロピラノシロネート−（２→６）−４−Ｏ−ベンジル−２，３−ジ−Ｏ−ベンゾイル−１−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−Ｏ−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシルフルオリド（９）：ＰｄＣｌ２（０．０５０ｇ）を、Ｓ４ｅ（２．７ｇ，１．４２ｍｍｏｌ）を含む２０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ（１：１）の溶液に加えた。ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン，２／８）が出発物質の消費とともに生成物の形成を示すまで、その反応混合物を室温で５時間撹拌した。次いで、その反応混合物をセライトで濾過し、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１５％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、１−ＯＨ化合物（２．０ｇ）を白色泡沫状物として得た。残渣（２ｇ，１．０７ｍｍｏｌ）を−３０℃のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）に溶解し、次いで、ＤＡＳＴ（２８４μＬ，２．１４ｍｍｏｌ）をゆっくり加えた。得られた反応混合物を１時間撹拌した。ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン，２／８）が出発物質の消費とともに生成物の形成を示したら、その反応物をＮａＨＣＯ３水溶液でクエンチした。濾液をＮａＨＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０％→１５％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、９（２工程で１．４５ｇ，５５％）を白色泡沫状物として得た。ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン＝２／８，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.64;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.96  (m,  4H),  7.55  (m,  2H),  7.40-7.17  (m,  34H),  5.86  (t,  J  =  10.2Hz,  1H),  5.50  (d,  J  =  52Hz,  1H),  5.44-5.40  (m,  2H),  5.29  (dd,  J  =  1.6  &  7.8  Hz,  1H),  5.15  (dd,  J  =  1.7  &  7.2  Hz,  1H),  5.05-4.99  (m,  2H),  4.84-4.44  (m,  10H),  4.33-4.20  (m,  3H),  4.27-4.20  (m,  4H),  4.03-3.90  (m,  3H),  3.72-3.65  (s,  3H),  3.70-3.06  (m,  12H),  3.46-3.30  (m,  1H),  3.00  (t,  J  =  10.2  Hz,  1H),  2.86  (dd,  J  =  3.2  &  12.3  Hz,  1H),  2.19  (s,  3H),  2.16  (s,  3H),  2.12  (t,  J  =  8.4  Hz,  1H),  2.0  (s,  3H);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  170.8,  170.0,  168.0,  166.1,  165.2,  159.5,  154.1,  138.9,  138.4,  138.2,  138.1,  133.7,  133.6,  133.4,  130.0,  129.9,  129.6,  129.3,  128.8,  128.6,  128.5,  128.4,  128.3,  128.1,  127.9,  127.5,  127.2,  125.5,  107.7,  100.7,  100.1,  99.2,  95.8,  78.1,  77.1,  76.6,  75.3,  74.9,  74.6,  74.4,  74.1,  73.9,  73.7,  73.5,  73.3,  73.0,  72.6,  72.5,  69.2,  69.0,  67.3,  63.2,  61.8,  58.1,  57.3,  53.4,  37.3,  21.7,  21.3,  21.0,  20.9  ;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ９４Ｈ９８Ｃｌ３ＦＮ２Ｏ２９に対するｍ／ｚ計算値；１８４４．５２０４  実測値１８６７．５１９２（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０４０４】
基本単位１０および１１の合成。
【０４０５】
五糖Ｓ５ａおよびＳ５ｂを、本発明者らの以前の報告３に従って得て、官能基をＮ−フタルアミドからＮ−Ｔｒｏｃにさらに改変した。最後に、アノマーのｐ−メトキシフェニル基を除去し、得られた−ＯＨを、ＤＡＳＴの存在下においてフルオリドに変更した。
【化３１】
2019515876.tif 000033
【０４０６】
スキームＳ５：化合物１０および１１の調製。ｉ，（１）ＥＤＡ、ｎ−ＢｕＯＨ、９０℃；（２）Ｔｒｏｃ−Ｃｌ、ＮａＨＣＯ３、ＣＨ２Ｃｌ２；（３）Ａｃ２Ｏ、ピリジン；ｉｉ，（１）ＣＡＮ、ＡＣＮ：トルエン：Ｈ２Ｏ；（２）ＤＡＳＴ、ＣＨ２Ｃｌ２，−３０℃。
【０４０７】
工程ｉに対する一般的な手順：化合物Ｓ５ａおよびＳ５ｂ（０．５００ｇ，０．２１２ｍｍｏｌ）および１０ｍＬのエチレンジアミン：ｎ−ＢｕＯＨ（１：４）の混合物を９０℃で一晩撹拌した。揮発性物質を蒸発させ、粗生成物を、高真空を用いて乾燥させた。次いで、それをＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）に溶解し、ＮａＨＣＯ３（０．１１４ｇ，２．１２ｍｍｏｌ）およびクロロギ酸２，２，２−トリクロロエチル（０．２ｍＬ，２．１２ｍｍｏｌ）を０℃において加え、ＲＴまで加温し、一晩撹拌した。ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン，２／８）は、出発物質の消費とともに生成物の形成を示した。その反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で希釈し、水（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０％→１５％のＥＡのトルエン溶液）によって精製した。次いで、ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン，２／８）が、出発物質の完全な消費を示すまで、生成物を、１０ｍＬのピリジン／無水酢酸（６：４）を用いてアセチル化した。次いで、その反応混合物を真空中で濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（０％→１５％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、Ｓ５ｃ（０．３３２ｇ  ６５％）およびＳ５ｄ（０．３４０ｇ，６８％）を無色泡沫状物として得た。
【化３２】
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【０４０８】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−２−Ｏ−アセチル−３，４，６−Ｏ−トリ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−［２−Ｏ−アセチル−３，４，６−Ｏ−トリ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）］−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシド（Ｓ５ｃ）：化合物Ｓ５ｃを上述の一般的な手順に従って調製した。ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン＝２／８，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.64;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.40-7.08  (m,  50H,  Ar-H),  6.92-6.72  (m,  10H,  Ar-H),  6.63-6.53  (m,  2H,  PMP-H),  5.31-5.24  (m,  2H'),  5.22  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H),  5.15  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H,),  4.94  (d,  J  =  3  Hz,),  4.88  (d,  J  =  3.6  Hz,  1H),  4.86  (d,  J  =  3.6  Hz,  1H),  4.80-4.71  (m,  7H),  4.64-4.56  (m,  3H),  4.49-4.44  (m,  10H,),  4.39-4.10  (m,  14H),  4.15-4.05  (m,  2H),  4.03  (t,  J  =  8.4  Hz,  1H),  3.98-3.86  (m,  3H),  3.79-3.72  (m,  1H),  3.69  (s,  3H),  3.58-3.56  (m,  1H),  3.49-3.25  (m,  13H),  3.08  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  3.05  (d,  J  =  8.9  Hz,  1H),  2.90  (bs,  1H),  1.93  (s,  3H),  1.92  (s,  3H);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  169.5,  169.4,  168.3,  167.8,  154.8,  150.3,  139.2,  139.1,  139.0,  138.9,  138.8,  138.5,  138.3,  138.2,  138.0,  134.0,  133.6,  132.1,  131.9,  131.7,  129.2,  128.6,  128.5,  128.3,  128.2,  128.1,  128.0,  127.9,  127.9,  127.8,  127.7,  127.6,  127.5,  127.4,  127.4,  127.3,  127.1,  127.0,  126.8,  123.5,  123.4,  123.3,  118.1,  114.4,  108.9,  100.9,  100.7,  98.5,  97.6,  97.1,  80.5,  50.5,  79.7,  77.9,  77.8,  77.7,  77.4,  77.2,  75.4,  74.9,  74.6,  74.5,  73.7,  73.6,  73.6,  73.4,  73.3,  73.0,  72.8,  72.7,  72.2,  71.9,  71.8,  71.7,  71.2,  69.2,  68.5,  68.3,  68.2,  67.6,  67.3,  56.4,  55.9,  55.7,  21.3,  21.2,  21.2;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ１３１Ｈ１３８Ｃｌ６Ｎ２Ｏ３１に対するｍ／ｚ計算値；２４４９．７４９２；実測値２４４９．７２７２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【化３３】
2019515876.tif 000035
【０４０９】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−２−Ｏ−アセチル−３，４，６−Ｏ−トリ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−［２−Ｏ−アセチル−３，４，６−Ｏ−トリ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）］−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシド（Ｓ５ｄ）：化合物Ｓ５ｄを上述の一般的な手順に従って調製した。ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン＝２／８，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.61;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.42-7.05  (m,  60H),  7.02  (d,  J  =  9.2  Hz,  2H),  6.85  (d,  J  =  9.0  Hz,  2H),  5.59  (s,  1H),  5.42  (bs,  1H),  5.39-5.29  (m,  2H),  5.15  (d,  J  =  3.8  Hz,  1H),  5.00-4.84  (m,  7H),  4.80-4.25  (m,  20H),  4.10  (dd,  J  =  3.8  &  7.8  Hz,  2H),  4.00-3.83  (m,  6H),  3.76  (s,  3H),  3.62-3.20  (m,  23H),  1.99  (s,  3H),  1.96  (s,  3H);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  169.9,  169.5,  168.5,  155.0,  154.6,  150.1,  138.9,  138.4,  138.2,  138.1,  134.3,  132.0,  129.2,  128.6,  128.4,  128.3,  128.2,  128.1,  128.0,  127.9,  127.8,  127.6,  127.5,  127.3,  125.5,  123.6,  117.8,  117.2,  114.9,  106.1,  101.5,  100.9,  100.7,  98.3,  96.4,  95.7,  80.3,  80.1,  79.4,  78.3,  77.9,  78.3,  75.6,  74.8,  74.5,  74.4,  74.3,  73.6,  73.4,  73.2,  73.0,  72.6,  72.3,  71.8,  68.9,  68.1,  67.9,  67.5,  57.9,  56.7,  55.8,  41.3,  40.4,  37.7,  29.9,  21.6,  21.2,  21.1;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ１３１Ｈ１３８Ｃｌ６Ｎ２Ｏ３１に対するｍ／ｚ計算値；２４４８．７４９２  実測値２４４９．７４１４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０４１０】
工程ｉｉに対する一般的な手順：硝酸アンモニウムセリウム（０．６１６ｇ，０．７２５ｍｍｏｌ）を、化合物Ｓ５ｃまたはＳ５ｄ（０．３５０ｇ，０．１４５ｍｍｏｌ）を含む１０ｍＬのアセトニトリル：トルエン：Ｈ２Ｏ（４：２：１）の溶液に加えた。得られた反応混合物を０℃で２時間撹拌した。その反応物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（３０×２ｍＬ）およびブライン（３０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。その生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１５％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、１−ＯＨ化合物（０．１８０ｍ）を透明の泡沫状物として得た。残渣（０．１８０ｇ，０．０７８ｍｍｏｌ）を−３０℃のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）に溶解した。次いで、ＤＡＳＴ（３０μＬ，０．２３４ｍｍｏｌ）をゆっくり加え、得られた反応混合物を１時間撹拌した。ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン，１／９）が出発物質の消費とともに生成物の形成を示したら、その反応物をＮａＨＣＯ３水溶液でクエンチした。濾液をＮａＨＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０％→８％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、１０（２工程で０．１２０ｇ，３４％）および１１（２工程で０．１５０ｇ，４２％）を得た。
【化３４】
2019515876.tif 000036
【０４１１】
２−Ｏ−アセチル−３，４，６−Ｏ−トリ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−［２−Ｏ−アセチル−３，４，６−Ｏ−トリ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクト−ピラノシル−（１→４）−Ｏ−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）］−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシルフルオリド（１０）：ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン＝１／９，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.34;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.34-7.13  (m,  60H),  5.41  (s,  1H),  5.50  (d,  J  =  51.1Hz,  1H),  5.30-5.25  (m,  2H),  5.12  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  4.92-4.85  (m,  5H),  4.69-4.38  (m,  20H),  4.32-4.14  (m,  8H),  3.91-3.77  (m,  7H),  3.70  (dd,  J  =  3.8  and  7.8  Hz,  1H),  3.60-3.56  (m,  3H),  3.49-3.24  (m,  14H),  2.03  (s,  3H),  1.98  (s,  3H);  13C  NMR  (150  MHz,  CHCl3):  δ  169.68,  169.58,  154.31,  154.09,  139.06,  138.97,  138.93,  138.32,  138.29,  138.27,  138.20,  138.17,  129.32,  128.99,  128.69,  128.63,  128.50,  128.49,  128.45,  128.27,  128.24,  128.16,  128.15,  128.07,  128.05,  128.00,  127.97,  127.94,  127.91,  127.82,  127.72,  127.60,  127.57,  127.44,  125.58,  100.64,  100.45,  95.86,  80.54,  80.51,  76.81,  76.70,  76.03,  75.34,  75.08,  86,  74.77,  74.66,  74.57,  74.47,  73.74,  73.70,  73.67,  73.64,  73.58,  73.46,  73.42,  73.27,  72.90,  72.19,  72.17,  71.99,  71.95,  68.49,  68.27,  68.14,  68.01,  57.53,  21.40,  21.27;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ１２４Ｈ１３１Ｃｌ６ＦＮ２Ｏ２９に対するｍ／ｚ計算値；２３４０．６９５３  実測値２３６３．７２００（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化３５】
2019515876.tif 000037
【０４１２】
２−Ｏ−アセチル−３，４，６−Ｏ−トリ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−［２−Ｏ−アセチル−３，４，６−Ｏ−トリ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクト−ピラノシル−（１→４）−Ｏ−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）］−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシルフルオリド（１１）：ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン＝１／９，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.38;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.33-7.09  (m,  60H),  5.60  (d,  J  =  52.1  Hz,  1H),  5.32-5.28  (m,  2H),  5.10  (d,  J  =  2.1  Hz,  1H),  4.93-4.80  (m,  5H),  4.78  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  4.74  (d,  J  =  8.2  Hz,  1H),  4.65-4.40  (m,  28H),  3.95  (dd,  J  =  8.4  Hz,  1H),  3.79-3.69  (m,  10H),  3.50-3.40  (m,  4H),  3.39-3.20  (m,  8H),  1.91  (s,  6H)  ;  13C  NMR  (150  MHz,  CHCl3):  δ  169.69,  169.56,  154.72,  154.66,  139.55,  139.02,  139.00,  138.43,  138.34,  138.27,  138.20,  138.19,  128.93,  128.80,  128.76,  128.72,  128.65,  128.45,  128.41,  128.30,  128.28,  128.21,  127.67,  127.34,  127.10,  106.45,  105.33,  101.82,  101.21,  100.00,  97.86,  97.46,  95.60,  75.46,  75.27,  74.86,  74.58,  74.26,  74.10,  73.50,  73.47,  73.10,  72.90,  72.88,  72.37,  72.30,  71.40,  71.37,  71.09,  70.57,  70.35,  70.45,  69.78,  69.46,  29.99,  25.78,  22.87,  21.36,  21.29,  15.57,  14.49,  144.42;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ１２４Ｈ１３１Ｃｌ６ＦＮ２Ｏ２９に対するｍ／ｚ計算値；２３４０．６９５３  実測値２３６２．７２２５（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０４１３】
基本単位１２の合成。
【０４１４】
ジシアリル化された分岐の調製を、ドナーＳ２ｂによるマンノシルアクセプターＳ６ａのβ−１，２およびβ−１，４グリコシル化から始めた（ｃｏｍｍｅｎｓｅｄ）。次いで、化合物Ｓ６ｂをＳ６ｃに改変し、続いて、Ｓ４ｃでグリコシル化して、所望の七糖Ｓ６ｄを得た。最後に、還元末端を改変して、ドナー１２を得た。
【化３６】
2019515876.tif 000038
【０４１５】
スキームＳ６：化合物１２の調製。ｉ、ＮＩＳ、ＴｆＯＨ、ＣＨ２Ｃｌ２、−５０℃、７６％；ｉｉ，（１）ＥＤＡ、ｎ−ＢｕＯＨ、９０℃，（２）Ｔｒｏｃ−Ｃｌ、ＮａＨＣＯ３、ＣＨ２Ｃｌ２、２工程で７２％；ｉｉｉ、ＮＩＳ、ＴｆＯＨ、ＣＨ２Ｃｌ２、−５０℃、８６％；ｉｖ，（１）ＣＡＮ、ＡＣＮ：トルエン：Ｈ２Ｏ，（２）ＤＡＳＴ、ＣＨ２Ｃｌ２、−３０℃、２工程で４０％。
【化３７】
2019515876.tif 000039
【０４１６】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−４−Ｏ−アセチル−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−［４−Ｏ−アセチル−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）］−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシド（Ｓ６ｂ）：活性化４Åモレキュラーシーブ（１ｇ）を、アクセプターＳ６ａ（０．５６０ｇ，１．１９ｍｍｏｌ）およびドナーＳ２ｂ（１．７４ｇ，２．７４ｍｍｏｌ）を含む無水ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）の溶液に加えた。その反応混合物を室温で１時間撹拌し、次いで、−５０℃に冷却した。ＮＩＳ（１．０７ｇ，４．７５ｍｍｏｌ）およびＴｆＯＨ（５２μＬ，０．５９５ｍｍｏｌ）をゆっくり加え、得られた反応混合物を２時間撹拌した。ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン，１．５／８．５）が出発物質の消費とともに生成物の形成を示したら、その反応物を、Ｅｔ３Ｎを加えることによってクエンチし、次いで、セライトで濾過した。濾液をＮａＨＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）、Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１０％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、Ｓ６ｂ（１．２７ｇ，７６％）を透明の泡沫状物として得た。ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン＝１．５／８．５，ｖ／ｖ）：Rf  =0.57;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.66-7.16  (m,  18H),  6.97  (m,  12H),  6.66-6.49  (m,  4H),  5.25  (t,  J  =  10  Hz,  2H),  5.08-5.00  (dd,  J  =  9.6  &  3.4  Hz,  2H),  4.90  (d,  J  =  4.6  Hz,  1H),  4.69  (d,  J  =  12  Hz,  1H),  4.57  (t,  3H),  4.42-4.21  (m,  10H),  4.12  (dd,  J  =  3.2  &  8.4  Hz,  2H),  3.90  (dd,  J  =  3.2  &  7.8  Hz,  1H),  3.84-3.60  (m,  7H),  3.66  (s,  3H),  3.54-3.31  (m,  7H),  3.01  (d,  J  =  7.8Hz,  1H),  1.84  (s,  3H),  1.80  (s,  3H);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  169.61,  169.12,  154.49,  150.07,  138.69,  138.21,  137.99,  137.77,  137.60,  133.52,  131.29,  128.28,  128.19,  127.99,  127.94,  127.91,  127.83,  127.68,  127.59,  127.47,  127.25,  127.08,  127.94,  123.17,  117.55,  114.08,  98.10,  97.37,  96.54,  78.89,  74.56,  73.56,  73.27,  72.98,  72.42,  72.32,  71.91,  71.43,  71.02,  69.91,  69.25,  68.90,  55.73,  55.45,  55.26,  20.80;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ７７Ｈ８２Ｃｌ６Ｎ２Ｏ２１に対するｍ／ｚ計算値；１５８５．３５８９  実測値１５８６．５６８７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【化３８】
2019515876.tif 000040
【０４１７】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−［３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）］−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシド（Ｓ６ｃ）：化合物Ｓ６ｂ（１．９ｇ，１．２７ｍｍｏｌ）および２０ｍＬのエチレンジアミン：ｎ−ＢｕＯＨ（１：４）の混合物を９０℃で一晩撹拌した。揮発性物質を蒸発させ、粗生成物を、高真空を用いて乾燥させた。次いで、それをＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）に溶解し、ＮａＨＣＯ３（０．６８７ｇ，１２．７ｍｍｏｌ）およびクロロギ酸２，２，２−トリクロロエチル（１．７５ｍＬ，１２．７ｍｍｏｌ）を０℃において加え、ｒｔまで加温し、ＴＬＣ（アセトン：トルエン，１／９）が出発物質の消費とともに生成物の形成を示すまで、一晩撹拌した。その反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で希釈し、水（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０％→８％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、Ｓ６ｃを無色固体として得た（１．３５ｇ，７２％）。ＴＬＣ（アセトン：トルエン＝１／９，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.54;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.35-7.14  (m,  30H),  6.90  (d,  J  =  8.4  Hz,  2H),  6.79  (d,  J  =  8.6  Hz,  2H),  5.32  (d,  J  =  3.2  Hz,  1H),  5.27  (d,  J  =  7.2  Hz,  1H),  4.93  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  4.73-4.58  (m,  10H),  4.48-4.43  (m,  7H),  4.19  (d,  J  =  7.2  Hz,  1H),  4.05-3.96  (m,  3H),  3.68  (s,  3H),  3.62-3.56  (m,  8H),  3.26  (q,  1H),  3.26-3.15  (m,  3H),  2.93  (m,  3H),  2.96  (s,  1H),  2.12  (s,  1H);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  155.26,  154.37,  154.27,  150.53,  138.93,  138.63,  138.48,  137.83,  137.74,  131.18,  128.96,  128.76,  128.67,  128.36,  128.21,  128.15,  127.89,  127.78,  118.00,  114,  85,  101.31,  98.79,  97.79,  95.81,  81.39,  79.59,  75.90,  74.70,  74.47,  74.01,  73.93,  73.53,  73.02,  72.83,  71.63,  71.37,  70.97,  68.99,  57.73,  57.40,  55.94  ;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ７３Ｈ７８Ｃｌ６Ｎ２Ｏ１９に対するｍ／ｚ計算値；１４９９．３３３８  実測値１４９９．３４１９。
【化３９】
2019515876.tif 000041
【０４１８】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−［メチル−５−アセトアミド−７，８，９−トリ−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−ノン−２−ウロピラノシロネート］−（２→６）−４−Ｏ−ベンジル−２，３−ジ−Ｏ−ベンゾイル−１−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリ−クロロエトキシ）カルボニルアミノ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−［メチル−５−アセトアミド−７，８，９−トリ−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−ノン−２−ウロピラノシロネート］−（２→６）−４−Ｏ−ベンジル−２，３−ジ−Ｏ−ベンゾイル−１−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−Ｏ−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシド（Ｓ６ｄ）：活性化４Åモレキュラーシーブ（１ｇ）を、アクセプターＳ６ｃ（０．５００ｇ，０．３４１ｍｍｏｌ）およびドナーＳ４ｃ（０．７７２ｇ，０．７５１ｍｍｏｌ）を含む無水ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）の溶液に加えた。その混合物をｒｔで１時間撹拌し、次いで、−５０℃に冷却した。ＮＩＳ（０．３８３ｇ，１．７０ｍｍｏｌ）およびＴｆＯＨ（１５μＬ，０．１７０ｍｍｏｌ）をゆっくり加えた。得られた反応混合物を２時間撹拌した。ＴＬＣ（アセトン：トルエン，２／８）が、出発物質の消費とともに生成物の形成を示したら、その反応物を、Ｅｔ３Ｎを加えることによってクエンチし、セライトで濾過した。濾液をＮａＨＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）、Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１５％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、Ｓ６ｄ（０．９５０ｇ，８６％）を透明の泡沫状物として得た。ＴＬＣ（アセトン：トルエン＝２／８，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.48;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.90-7.87  (m,  7H),  7.81-7.79  (m,  3H),  7.50-7.07  (m,  50H),  6.98  (d,  2H),  6.40  (d,  2H),  5.78-5.73  (m,  2H),  5.36-5.26  (m,  4H),  5.20  (d,  J  =  8.6  Hz,  1H),  5.19-5.15  (dd,  J  =  3.2  &  8.4  Hz,  2H),  5.05  (dd,  J  =  4.3  &  8.4  Hz,  2H),  4.94-4.78  (m,  4H),  4.68-4.15  (m,  30H),  3.96-3.86  (m,  6H),  3.71  (S,  6H),  3.70-3.59  (m,  15H),  3.57  (s,  3H),  3.34-3.26  (m,  5H),  2.98-2.76  (m,  4H),  2.15  (s,  3H),  2.09  (s,  3H),  2.00  (S,  3H),  1.98  (s,  3H),  1.89  (S,  3H),  1.89  (S,  3H);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  171.56,  170.89,  169.56,  167.20,  165.28,  165.00,  159.11,  154.79,  138.78,  138.56,  138.21,  137.29,  137.00,  133,67,  133.24,  130.79,  129.70,  129.60,  129.26,  128.78,  128.56,  128.42,  128.32,  128.11,  127.69,  127.56,  127.44,  127.32,  127.14,  117.78,  100.89,  100.56,  99.87,  99.68,  95.41,  79.13,  75.56,  74.18,  73.48,  73.26,  73.12,  71.00,  72.90,  72.78,  71.76,  68.78,  68.40,  68.42,  61.78,  57.78,  57.33,  55.89,  53.80,  38.90,  38.7,  30.98,  30.76,  28.87,  23.89,  22.65,  20.87,  20.65,  20.54,  14.08,  10.86;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ１６１Ｈ１６８Ｃｌ６Ｎ４Ｏ５５に対するｍ／ｚ計算値；３２５１．８６９５  実測値３２５１．８６５７（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化４０】
2019515876.tif 000042
【０４１９】
［メチル−５−アセトアミド−７，８，９−トリ−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−ノン−２−ウロピラノシロネート］−（２→６）−４−Ｏ−ベンジル−２，３−ジ−Ｏ−ベンゾイル−１−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−［メチル−５−アセトアミド−７，８，９−トリ−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−ノン−２−ウロピラノシロネート］−（２→６）−４−Ｏ−ベンジル−２，３−ジ−Ｏ−ベンゾイル−１−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−Ｏ−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシルフルオリド（１２）：硝酸アンモニウムセリウム（０．４７０ｇ，０．５５４ｍｍｏｌ）を、化合物Ｓ６ｄ（０．３００ｇ，０．０９２ｍｍｏｌ）を含む１０ｍＬのアセトニトリル：トルエン：Ｈ２Ｏ（４：２：１）の溶液に加えた。得られた反応混合物をｒｔで３時間撹拌した。その反応物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（３０×２ｍＬ）およびブライン（３０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。その生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→２０％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、１−ＯＨ化合物（０．１８０ｇ）を泡沫状物として得た。残渣（０．１８０ｇ，０．０５７ｍｍｏｌ）を−３０℃のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）に溶解した。次いで、ＤＡＳＴ（２２μＬ，０．１７１ｍｍｏｌ）をゆっくり加え、得られた反応混合物を１時間撹拌した。ＴＬＣ（アセトン：トルエン，２／８）が、出発物質の消費とともに生成物の形成を示したら、その反応物をＮａＨＣＯ３水溶液でクエンチした。濾液をＮａＨＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０％→１５％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、１３（２工程で０．１２０ｇ，４１％）を白色固体として得た。ＴＬＣ（アセトン：トルエン＝２／８，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.24;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.92-7.83  (m,  10H),  7.54-7.47  (m,  5H),  7.40-6.93  (m,  45H),  5.83  (m,  2H),  5.40-5.35  (m,  6H),  5.2  (dd,  J  =  3.2  &  7.8  Hz,  2H),  5.11  (dd,  J  =  4.3  &  8.4  Hz,  2H),  4.98-4.89  (m,  4H),  4.76-4.56  (m,  15H),  4.28-4.10  (m,  11H),  4.00-3.89  (m,  6H),  3.79-3.72  (m,  6H),  3.65  (s,  3H),  3.67  (s,  3H),  3.62-3.43  (m,  6H),  3.36-3.21  (m,  5H),  3.02-2.98  (m,  4H),  2.16  (s,  3H),  2.14  (s,  3H),  2.11  (s,  3H),  2.06  (s,  3H),  2.01  (s,  3H),  1.98  (s,  3H),  1.89-1.76  (m,  2H);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  171.80,  170.85,  170.06,  168.03,  166.12,  165.41,  159.56,  154.16,  138.75,  138.34,  133.73,  130.11,  129.94,  129.57,  129.19,  128.79,  128.72,  128.50,  128.38,  128.03,  127.75,  127.56,  100.69,  100.00,  96.67,  95,  78,  95.35,  95.12,  74.91,  74.65,  74.29,  73.00,  70.91,  69.01,  67.35,  61.87,  58.15,  57.60,  53.42,  37.17,  21.28,  20.97;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ１５４Ｈ１６１Ｃｌ６ＦＮ４Ｏ５３���対するｍ／ｚ計算値；３１４７．６５５４  実測値３１６９．８０２２（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０４２０】
基本単位１３の合成。
【０４２１】
部分的にシアリル化された分岐１３の全化学合成をスキームＳ７に示す。
【化４１】
2019515876.tif 000043
【０４２２】
スキームＳ７：化合物１３の調製。ｉ、ＮＩＳ、ＴｆＯＨ、ＣＨ２Ｃｌ２、−５０℃、８６％；ｉｉ、ＢＨ３．ＴＨＦ、Ｂｕ２ＢＯＴｆ、ＣＨ２Ｃｌ２、６５％；ｉｉｉ、ＮＩＳ、ＴｆＯＨ、ＣＨ２Ｃｌ２、−５０℃、７６％；ｉｖ，（１）ＥＤＡ、ｎ−ＢｕＯＨ、９０℃，（２）Ｔｒｏｃ−Ｃｌ、ＮａＨＣＯ３、ＣＨ２Ｃｌ２；（３）Ａｃ２Ｏ、ピリジン、３工程で６５％；ｖ、トリエチルシラン、ＴＦＡ、ＣＨ２Ｃｌ２、５８％；ｖｉ、ＮＩＳ、ＴｆＯＨ、ＣＨ２Ｃｌ２、−５０℃、７３％；ｖｉｉ，（１）ＣＡＮ、ＡＣＮ：トルエン：Ｈ２Ｏ，（２）ＤＡＳＴ、ＣＨ２Ｃｌ２、−３０℃、２工程で３０％。
【化４２】
2019515876.tif 000044
【０４２３】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−２−Ｏ−アセチル−３，４，６−Ｏ−トリ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−Ｏ−３，４−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシド（Ｓ７ｃ）：活性化４Åモレキュラーシーブ（１ｇ）を、アクセプターＳ７ａ（０．５００ｇ，１．０７ｍｍｏｌ）およびドナーＳ７ｂ（１．２１ｇ，１．２８ｍｍｏｌ）を含む無水ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）の溶液に加えた。その反応混合物を室温で１時間撹拌し、次いで、−５０℃に冷却した。ＮＩＳ（０．４８１ｇ，２．１４ｍｍｏｌ）およびＴＭＳＯＴｆ（４８μＬ，０．２６７ｍｍｏｌ）をゆっくり加え、得られた反応混合物を３時間撹拌した。ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン，１／９）が、出発物質の消費とともに生成物の形成を示したら、その反応物を、Ｅｔ３Ｎを加えることによってクエンチし、次いで、セライトで濾過した。濾液をＮａＨＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）、Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１０％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、Ｓ７ｃ（１．３０ｇ，８６％）を淡黄色固体として得た。ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン＝１／９，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.59;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.75-7.65  (m,  4H),  7.37-7.15  (m,  30H),  6.98  (d,  J  =  8.1  Hz,  2H),  6.82  (d,  J  =  8.4  Hz,  3H),  6.70  (d,  J  =  8.4  Hz,  2H),  6.60  (d,  J  =  9.2  Hz,  2H),  5.39  (s,  1H),  5.34  (t,  J  =  10.2  Hz,  1H),  5.22  (dd,  J  =  7.2  &  2.8  Hz,  1H),  5.06  (d,  J  =  3.2  Hz,  1H),  4.89  (d,  J  =  11.4  Hz,  1H),  4.82  (d,  J  =  12.1  Hz,  1H),  4.75  (d,  J  =  11.8  Hz,  1H),  4.66-4.62  (m,  3H),  4.54-4.38  (m,  6H),  4.32  (d,  J  =  11.2  Hz,  1H),  4.29  (dd,  J  =  3.1  &  7.2  Hz,  2H),  4.27  (d,  J  =  10.8  Hz,  1H),  4.19  (t,  J  =  8.3  Hz,  1H),  4.00-3.89  (m,  4H),  3.72  (s,  3H),  3.58-3.33  (m,  8H),  3.0  (t,  J  =  8.7  Hz,  1H),  2.07  (s,  3H);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  169.3,  154.9,  149.6,  138.8,  138.7,  138.6,  138.5,  138.1,  138.0,  137.9,  137.5,  133.6,  131.9,  128.7,  128.4,  128.4,  128.3,  128.2,  128.1,  128.1,  128.1,  128.0,  127.8,  127.8,  127.7,  127.7,  127.7,  127.6,  127.6,  127.5,  127.4,  127.3,  127.2,  126.8,  126.0,  123.0,  117.03,  114.5,  101.4,  100.9,  97.0,  96.2,  96.2,  80.3,  78.1,78.0,  75.6,74.9,  74.5,  74.4,  73.7,  73.4,  73.3,  72.6,  72.6,  72.0,  71.7,  71.3,  68.4,  68.1,  68.1,  64.2,  55.6,  55.6,  55.6,  21.0;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ８４Ｈ８３ＮＯ１９に対するｍ／ｚ計算値；１４０９．５５５９  実測値１４３２．５４９９（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化４３】
2019515876.tif 000045
【０４２４】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−２−Ｏ−アセチル−３，４，６−Ｏ−トリ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−Ｏ−３，４−Ｏ−ジベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシド（Ｓ７ｄ）：化合物Ｓ７ｃ（１．３０ｇ，１．０２ｍｍｏｌ）および活性化モレキュラーシーブ（１ｇ）を含む無水ＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ）の混合物に、ボラン．ＴＨＦ錯体（０．９７８ｍＬの１ＭのＴＨＦ溶液、１０．２ｍｍｏｌ）およびＢｕ２ＢＯＴｆ（０．４３９ｍＬの１ＭのＣＨ２Ｃｌ２溶液、１０．２ｍｍｏｌ）を０℃において加えた。その反応混合物を室温で４時間撹拌した。ＴＬＣ（アセトン：トルエン，１／９）が出発物質の消費とともに生成物の形成を示した。トリエチルアミンをその反応混合物に加えた後、メタノールを０℃においてゆっくり加えた。それ以上の水素が生成されなくなったら、その反応混合物をセライトで濾過し、濾液をＮａＨＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→７％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、Ｓ７ｄ（０．８５０ｇ，６５％）を透明の泡沫状物として得た。ＴＬＣ（アセトン：トルエン＝１／９，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.31;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.84-7.66  (m,  4H),  7.42-7.02  (m,  30H),  7.03  (d,  J  =  8.4  Hz,  2H),  6.87  (t,  J  =  7.8  Hz,  3H),  6.67  (d,  J  =  12.1  Hz,  2H),  6.48  (d,  J  =  12.1  Hz,  2H),  5.39  (t,  J  =  10.2  Hz,  1H),  5.17  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  4.93  (d,  J  =  12  Hz,  2H),  4.88  (d,  J  =  7.2  Hz,  1H),  4.85  (d,  J  =  12.1  Hz,  2H),  4.67  (dd,  J  =  4.3  &  8.4  Hz,  2H),  4.59-4.30  (m,  11H),  4.18  (t,  J  =  7.4  Hz,  1H),  4.01-3.96  (m,  3H),  3.84-3.78  (m,  3H),  3.76  (s,  3H),  3.68  (dd,  J  =  3.2  &  7.8  Hz,  1H),  3.54-3.34  (m,  6H),  3.25-3.20  (m,  1H),  2.01  (s,  3H)  ;  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  169.3,  167.9,  154.7,  149.6,  138.9,  138.7,  138.4,  138.2,  138.0,  138.0,  137.9,  134.1,  133.6,  131.9,  131.5,  129.0,  128.4,  128.4,  128.4,  128.3,  128.2,  128.2,  128.1,  128.1,  127.9,  127.8,  127.8,  127.7,  127.7,  127.7,  127.6,  127.6,  127.5,  127.3,  127.3,  126.8,  123.2,  123.0,  116.8,  114.4,  100.9,  97.6,  95.7,  80.3,  78.0,  76.9,  75.2,  75.1,  74.4,  74.4,  73.9,  73.6,  73.4,  73.3,  72.5,  72.3,  72.0,  71.6,  70.7,  68.6,  68.1,  62.2,  55.9,  55.6,  21.0;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ８４Ｈ８５ＮＯ１９に対するｍ／ｚ計算値；１４１１．５７１６  実測値１４１２．５７２６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【化４４】
2019515876.tif 000046
【０４２５】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−［２−Ｏ−アセチル−３，４，６−Ｏ−トリ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル］−（１→２）−Ｏ−［３−Ｏ−ベンジル−４，６−Ｏ−ベンジリジン−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル］−（１→６）−３，４−Ｏ−ジベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシド（Ｓ７ｆ）：活性化４Åモレキュラーシーブ（１ｇ）を、アクセプターＳ７ｄ（０．６００ｇ，０．４７０ｍｍｏｌ）およびドナーＳ７ｅ（０．５５７ｇ，０．９４０ｍｍｏｌ）を含む無水ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）の溶液に加えた。その反応混合物を室温で１時間撹拌し、次いで、−５０℃に冷却した。ＮＩＳ（０．２１１ｇ，０．９４０ｍｍｏｌ）およびＴｆＯＨ（１０．４μＬ，０．１１７ｍｍｏｌ）をゆっくり加え、得られた反応混合物を２時間撹拌した。ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン，２／８）が、出発物質の消費とともに生成物の形成を示したら、その反応物を、Ｅｔ３Ｎを加えることによってクエンチし、次いで、セライトで濾過した。濾液をＮａＨＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）、Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１５％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、Ｓ７ｆ（０．６１０ｇ、７６％）を透明の泡沫状物として得た。ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン＝２／８，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.49;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.66  (m,  8H),  7.38-7.15  (m,  29H),  7.10  (d,  J  =  8.4  Hz,  2H),  6.95-6.91  (m,  5H),  6.88-6.78  (m,  5H),  6.63  (d,  J  =  8.4  Hz,  2H),  6.50  (d,  J  =  8.8  Hz,  2H),  5.41  (s,  1H),  5.32  (t,  J  =  10.2  Hz,  1H),  5.11  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  4.89  (d,  J  =  4.3  Hz,  1H),  4.87  (s,  1H),  4.80  (t,  J  =  8.8  Hz,  2H),  4.73  (s,  1H),  4.70  (s,  1H),  4.60  (t,  J  =  10.8  Hz,  3H),  4.57-4.40  (m,  5H),  4.35-4,  16  (m,  8H),  4.08  (t,  J  =  10.2  Hz,  1H),  4.00-3.89  (m,  4H),  3.85  (dd,  J  =  3.6  &  7.8  Hz,  1H),  3.78  (s,  3H),  3.70-3.61  (m,  3H),  3.52-3.41  (m,  4H),  3.40-3.28  (m,  4H),  3.20  (t,  J  =  10.2  Hz,  2H),  2.98  (m,  1H),  1.98  (s,  3H);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  168.5,  164.8,  158.0,  153.0,  152.8,  151.6,  151.5,  150.6,  150.5,  149.2,  139.6,  138.9,  138.4,  138.1,  138.0,  137.4,  129.3,  129.2,  128.9,  128.9,  128.8,  128.9,  128.7,  128.5,  128.4,  128.2,  128.1,  128.0,  128.0,  127.9,  127.9,  127.7,  127.5,  127.4,  126.2,  125.5,  117.3,  114.9,  114.2,  102.2,  101.4,  100.9,  98.8,  96.5,  95.8,  95.7,  95.5,  95.3,  95.3,  95.0,  82.3,  80.6,  78.3,  76.2,  76.0,  75.8,  75.5,75.4,  75.2,74.9,  74.8,74.7,  74.7,74.2,  74.1,  73.8,  73.7,  73.5,  72.9,  72.3,  71.9,  68.9,  68.8,  68.2,  68.0,  66.4,  58.0,  57.1,  55.9,  44.3,  42.9,  40.8,  40.4,  40.3,  40.0,  21.7,  21.2;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ１１１Ｈ１０８Ｎ２Ｏ２４に対するｍ／ｚ計算値；１８８２．７２４７  実測値１８８２．７３４３。
【化４５】
2019515876.tif 000047
【０４２６】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−［２−Ｏ−アセチル−３，４，６−Ｏ−トリ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ−β−Ｄ−グルコピラノシル］−（１→２）−Ｏ−［３−Ｏ−ベンジル−４，６−Ｏ−ベンジリジン−２−（２，２，２−トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ−β−Ｄ−グルコピラノシル］−（１→６）−３，４−Ｏ−ジベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシド（Ｓ７ｇ）：化合物Ｓ７ｆ（０．９５０ｇ，０．５４５ｍｍｏｌ）および１０ｍＬのエチレンジアミン：ｎ−ＢｕＯＨ（２：８）の混合物を９０℃で一晩撹拌した。揮発性物質を蒸発させ、粗生成物を、高真空を用いて乾燥させた。次いで、それをＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）に溶解し、ＮａＨＣＯ３（０．３６３ｇ，５．４５ｍｍｏｌ）およびクロロギ酸２，２，２−トリクロロエチル（０．８６ｍＬ，５．４５ｍｍｏｌ）を０℃において加え、ｒｔまで加温し、一晩撹拌した。ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン，２／８）は、出発物質の消費とともに生成物の形成を示した。その反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で希釈し、水（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０％→１０％のＥＡのトルエン溶液）によって精製した。次いで、ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン，２／８）が、出発物質の完全な消費を示すまで、生成物を、１０ｍＬのピリジン／無水酢酸（６：４）を用いてアセチル化した。次いで、その反応混合物を真空中で濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（０％→１０％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、Ｓ７ｇを白色泡沫状物として得た（０．６５０ｇ，６５％）。ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン＝２／８，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.64;  H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.48  (d,  J  =  7.8  Hz,  2H),  7.39  (d,  J  =  8.2  Hz,  2H),  7.35-7.12  (m,  41H),  6.91  (d,  J  =  10.2  Hz,  2H),  6.87  (d,  J  =  10.3  Hz,  2H),  5.55  (s,  1H),  5.50  (s,  1H),  5.32  (t,  J  =  10.2  Hz,  1H),  4.94-4.89  (m,  8H),  4.83-4.67  (m,  10H),  4.64-4.66  (m,  5H),  4.54-4.50  (m,  3H),  4.36-4.22  (m,  6H),  4.06-3.87  (m,  6H),  3.83-3.46  (m,  10H),  3.38-3.34  (m,  3H),  3.20-3.10  (m,  2H),  2.33  (s,  3H);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  169.5,  162.8,  155.0,  155.0,  154.8,  154.6,  154.51,  150.6,  150.5,  150.2,  139.6,  138.9,  138.4,  138.3,  138.3,  138.2,  138.1,  137.5,  129.3,  129.2,  128.7,  128.6,  128.6,  128.5,  128.5,  128.4,  128.3,  128.2,  128.1,  128.0,  128.0,  127.9,  127.9,  127.7,  127.5,  127.4,  126.2,  125.5,  117.3,  114.9,  114.2,  102.2,  101.4,  100.8,  98.3,  9  6.5,  95.  8,  95.7,  95.5,  95.3,  95.3,  95.0,  82.3,  80.6,  78.3,  76.2,  76.0,  75.8,  75.5,75.4,  75.2,74.9,  74.8,74.7,  74.7,74.2,  74.1,  73.8,  73.7,  73.5,  72.9,  72.3,  71.9,  68.9,  68.8,  68.2,  68.0,  66.4,  58.0,  57.1,  55.9,  44.3,  42.9,  40.8,  40.4,  40.3,  40.0,  21.7,  21.2  ;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ１０２Ｈ１０６Ｃｌ６Ｎ２Ｏ２５に対するｍ／ｚ計算値；１９６２．６５９０  実測値１９７３．５２７８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【化４６】
2019515876.tif 000048
【０４２７】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−［２−Ｏ−アセチル−３，４，６−Ｏ−トリ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ−β−Ｄ−グルコピラノシル］−（１→２）−Ｏ−［３，６−Ｏ−ジベンジル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ−β−Ｄ−グルコピラノシル］−（１→６）−３，４−Ｏ−ジベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシド（Ｓ７ｈ）：Ｓ７ｇ（０．６００ｇ，０．３２８ｍｍｏｌ）を含む無水ＣＨ２Ｃｌ２（７０ｍＬ）の溶液に、トリエチルシラン（２．１０ｍＬ，１３．２ｍｍｏｌ）を加えた後、０℃のトリフルオロ酢酸（０．９５３ｍＬ，１３．２ｍｍｏｌ）を加えた。得られた反応混合物を２時間撹拌した。２時間後、ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン，１．５／８．５ｖ／ｖ）は、出発物質の消費とともに生成物の形成を示した。その反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３（２×５０ｍＬ）で洗浄した。水層をＣＨ２Ｃｌ２（３×３０ｍＬ）でさらに抽出し、合わせた有機層をブライン溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１０％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、Ｓ７ｈ（０．３５０ｇ，５８％）を透明の油状物として得た。ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン＝１．５／８．５，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.35;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.33-7.04  (m,  45H),  6.92  (d,  J  =  8.2  Hz,  2H),  6.80  (d,  J  =  8.3  Hz,  2H),  5.55  (s,  1H),  5.31  (t,  J  =  10.1  Hz,  1H),  5.06  (d,  J  =  3.2  Hz,  1H),  4.93-4.80  (m,  4H),  4.47-4.35  (m,  13H),  4.35-4.18  (m,  8H),  4.05  (dd,  J  =  3.2  &  7.8  Hz,  2H),  3.82  (d,  J  =  8.4  Hz,  2H),  3.80-3.62  (m,  14H),  3.49-3.20  (m,  6H),  3.10  (bs,  2H),  2.08  (s,  3H);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  169.5,  168.0,  155.3,  155.0,  154.7,  150.2,  138.9,  138.4,  138.3,  138.2,  137.8,  132.7,  131.1,  129.0,  128.7,  128.7,  128.6,  128.6,  128.6,  128.5,  128.4,  128.3,  128.2,  128.1,  128.1,  128.0,  127.9,  127.8,  127.7,  127.5,  127.4,  117.3,  114.9,  101.5,  100.8,  95.7,  80.6,  78.5,  75.8,  75.3,74.9,  74.8,  74.6,  74.1,  74.0,  73.8,  73.7,  73.64,  73.5,  72.8,  72.3,  71.9,  71.1,  68.9,  68.8,  68.4,  68.2,  67.6,  58.0,  56.5,  55.9,  41.5,  39.0,  37.3,  33.7,  32.0,  31.4,  30.6,  29.9,  29.20,  26.6,  24.0,  23.2,  22.9,  21.2,  20.1,  14.6,  14.4,  14.3,  14.3,  11.2;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ１０２Ｈ１０８Ｃｌ６Ｎ２Ｏ２５に対するｍ／ｚ計算値；１９７４．６７５０  実測値１９７５．５４３８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【化４７】
2019515876.tif 000049
【０４２８】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−［２−Ｏ−アセチル−３，４，６−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−［メチル−５−アセトアミド−７，８，９−トリ−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−ノン−２−ウロピラノシロネート］−（２→６）−４−Ｏ−ベンジル−２，３−ジ−Ｏ−ベンゾイル−１−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−Ｏ−３，４，−ジ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシド（Ｓ７ｉ）：ドナーＳ４ｃ（０．１８７ｇ，０．１８２ｍｍｏｌ）、アクセプターＳ７ｈ（０．３００ｇ，０．１５１ｍｍｏｌ）および活性化４Åモレキュラーシーブ（０．７００ｇ）を含む乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）の混合物を室温で１時間撹拌した。その反応混合物を−５０℃に冷却し、ＮＩＳ（０．０６７ｇ，０．３０２ｍｍｏｌ）およびＴｆＯＨ（４μＬ，０．０３７ｍｍｏｌ）をゆっくり加え、得られた反応混合物を２時間撹拌した。その反応物を、Ｅｔ３Ｎを加えることによってクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、セライトで濾過し、飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３に続いてＮａＨＣＯ３で抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１０％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、Ｓ７ｉ（０．３１７ｇ，７３％）を無色泡沫状物として得た。ＴＬＣ：（酢酸エチル：トルエン＝１．５／８．５，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.61;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.90  (m,  4H),  5.52-7.45  (m,  2H),  7.37-7.08  (m,  59H),  6.90  (d,  J  =  8.3  Hz,  2H),  6.80  (d,  J  =  8.3  Hz,  2H),  5.72  (t,  J  =  10.2  Hz,  1H),  5.53  (s,  1H),  5.35-5.32  (m,  3H),  5.20  (dd,  J  =  3.2  &  8.3  Hz,  1H),  5.08  (dd,  J  =  2.8  &  8.4  Hz,  2H),  4.99-4.79  (m,  7H),  4.70-4.18  (m,  26H),  4.06  (dd,  J  =  3.2  &  7.8  Hz,  1H),  3.94  (m,  2H),  3.90-3.84  (m,  10H),  3.74  (s,  3H),  2.60  (s,  3H),  2.59-2.57  (m,  3H),  3.45-3.32  (m,  6H),  3.20  (t,  J  =  9.8  Hz,  1H),  2.90  (t,  J  =  10.2  Hz,  2H),  2.83  (dd,  J  =  3.2  &  7.8  Hz,  1H),  2.08  (s,  3H),  2.06  (s,  3H),  2.02  (t,  J  =  10.1  Hz,  1H),  1.99  (s,  3H),  1.91  (s,  3H);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  171.4,  170.5,  169.7,  169.1,  167.4,  165.7,  165.1,  159.1,  154.6,  159.8,  138.5,  138.2,  138.1,  137.9,  137.4,  133.3,  133.1,  132.3,  130.2,  129.8,  129.6,  129.4,  128.7,  128.5,  128.4,  128.1,  127.9,  127.5,  127.4,  127.1,  127.08,  116.9,  114.5,  101.3,  100.6,  100.4,  100.0,  95.3,  80.2,  79.9,  77.4,  75.5,  75.3,  74.5,  74.3,  74.1,  73.7,  73.4,  73.2,  73.1,  72.5,  72.1,  71.5,  71.2,  70.8,  68.6,  68.5,  68.3,  67.8,  67.5,  67.3,  63.1,  61.5,  57.8,  56.6,  55.5,  53.1,  38.6,  37.0,  36.8,  33.3,  32.0,  31.0,  30.9,  28.8,  26.2,  25.5,  23.6,  22.8,  22.5,  20.8,  20.6,  19.7,  14.3,  13.9,  10.8;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ１４６Ｈ１５３Ｃｌ６Ｎ３Ｏ４３に対するｍ／ｚ計算値；２８５０．５０８０  実測値２８５０．８２４８。
【化４８】
2019515876.tif 000050
【０４２９】
［２−Ｏ−アセチル−３，４，６−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−［メチル−５−アセトアミド−７，８，９−トリ−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−ノン−２−ウロピラノシロネート］−（２→６）−４−Ｏ−ベンジル−２，３−ジ−Ｏ−ベンゾイル−１−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−Ｏ−３，４，−ジ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシルフルオリド（１３）：化合物Ｓ７ｉ（０．４３０ｇ，０．１５０ｍｍｏｌ）を含む１０ｍＬのアセトニトリル：トルエン：Ｈ２Ｏ（４：２：１）の溶液に、硝酸アンモニウムセリウム（０．６４１ｇ，０．７５４ｍｍｏｌ）を加え、得られた反応混合物を０℃で２時間撹拌した。その反応物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（３０×２ｍＬ）およびブライン（３０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。その生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→２０％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、１−ＯＨ化合物（０．２４０ｇ，５７％）を透明の泡沫状物として得た。残渣（０．２００ｇ，０．０７２ｍｍｏｌ）を−３０℃のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）に溶解した。次いで、ＤＡＳＴ（２９μＬ，０．２１６ｍｍｏｌ）をゆっくり加え、得られた反応混合物を２時間撹拌した。ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン，２／８）が、出発物質の消費とともに生成物の形成を示したら、その反応物をＮａＨＣＯ３水溶液でクエンチした。濾液をＮａＨＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０％→１０％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、１３（０．１０４ｇ，５０％）を白色泡沫状物として得た。ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン＝２／８，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.44;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.95-7.90  (m,  4H),  7.58-7.49  (m,  2H),  7.39-7.18  (m,  59H),  5.82  (t,  J  =  10.2Hz,  1H),  5.65  (d,  J  =  51  Hz,  1H),  5.34  (t,  J  =  10.2  Hz,  2H),  5.21  (dd,  J  =  3.6  &  7.8  Hz,  1H),  5.13-4.19  (m,  30H),  4.10-4.09  (m,  5H),  4.02-3.74  (m,  12H),  3.65  (s,  3H),  3.64-3.27  (m,  14H),  3.02  (t,  J  =  10.2  Hz,  2H),  2.87  (dd,  J  =  3.2  &  7.8  Hz,  1H),  2.12  (s,  3H),  2.10  (s,  3H),  2.09  (t,  J  =  10.2  Hz,  1H),  2.00  (s,  3H),  1.97  (s,  3H);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  171.4,  170.2,  169.7,  169.1,  167.4,  165.6,  165.1,  159.1,  154.4,  139.0,  138.8,  138.2,  138.1,  138.0,  137.7,  133.3,  129.8,  129.7,  129.2,  128.7,  128.4,  128.1,  127.9,  127.7,  127.6,  127.5,  127.4,  127.3,  127,  1,  127.0,  125.2,  101.4,  100.7,  100.4,  9.9,  97.3,  95.180.2,  79.6,  78.6,  75.5,  74.5,  74.3,  73.8,  73.5,  73.3,  73.1,  72.8,  71.3,  71.3,  70.7,  70.1,  68.6,  67.8,  66.9,  63.1,  61.5,  57.8,  53.1,  37.1,  25.5,  21.3,  20.9,  20.5;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ１３９Ｈ１４６Ｃｌ６ＦＮ３Ｏ４１に対するｍ／ｚ計算値；２７４６．３４５４  実測値２７４６．７６０４。
【０４３０】
コア三糖１４〜１５の調製  Ｓ
【０４３１】
Ｎ−フタルアミド保護を有する還元末端三糖（Ｍａｎ−β−１，４−ＧｌｃＮＡｃ−β−１，４−ＧｌｃＮＡｃ−β−リンカー）１４を本発明者らの以前の報告３に従って得た。次に、化合物１４を、スキームＳ８に示されているように１５に改変した。
【化４９】
2019515876.tif 000051
【０４３２】
スキームＳ８：化合物１５の調製。ｉ，（１）ＥＤＡ、ｎ−ＢｕＯＨ、９０℃，（２）Ｔｒｏｃ−Ｃｌ、ＮａＨＣＯ３、ＣＨ２Ｃｌ２、２工程で７２％；ｉｉ、Ａｃ２Ｏ、ピリジン、７９％；ｉｉｉ、ＤＤＱ、ＣＨ２Ｃｌ２  Ｈ２Ｏ、５８％。
【化５０】
2019515876.tif 000052
【０４３３】
５−アジドペンチル−Ｏ−２−Ｏ−アセチル−３−Ｏ−ｐ−メトキシ−ベンジル−４，６−Ｏ−ベンジリジン−β−Ｄ−マンノ−ピラノシル−（１→４）−Ｏ−（３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ−β−Ｄ−グルコピラノシド（Ｓ８ｂ）：化合物Ｓ８ａ（０．９５０ｇ，０．５４５ｍｍｏｌ）および１０ｍＬのエチレンジアミン：ｎ−ＢｕＯＨ（２：８）の混合物を９０℃で一晩撹拌した。揮発性物質を蒸発させ、粗混合物を、高真空を用いて乾燥させた。次いで、それをＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）に溶解し、ＮａＨＣＯ３（０．３６３ｇ，５．４５ｍｍｏｌ）およびクロロギ酸２，２，２−トリクロロエチル（０．８６ｍＬ，５．４５ｍｍｏｌ）を０℃において加え、ｒｔまで加温し、一晩撹拌した。ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン，２／８）は、出発物質の消費とともに生成物の形成を示した。反応物をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で希釈し、水（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０％→１０％のＥＡのトルエン溶液）によって精製した。次いで、ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン，２／８）が、出発物質の完全な消費を示すまで、生成物を、１０ｍＬのピリジン／無水酢酸（６：４）を用いてアセチル化した。次いで、その反応混合物を真空中で濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（０％→１０％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、Ｓ８ｂを白色泡沫状物として得た（０．６５０ｇ，６５％）。ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン＝２／８，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.64;  1H  NMR  (600MHz,  CDCl3):  δ  7.62-7.20  (m,  34H),  5.89  (s,  1H),  4.56  (d,  J  =  3.2  Hz,  1H),  4.23  (d,  J  =  8.9  Hz,  2H),  4.20-4.10  (m,  12H),  4.00-3.86  (m,  5H),  3.69-3.30  (m,  14H),  3.29  (s,  3H),  3.22-3.20  (m,  4H),  3.20-3.00  (m,  1H),  2.66  (s,  3H,  -C(O)CH3,1.56-1.38(m,4H,-CCH2C-,リンカー),1.21-1.23(m,2H,-CCH2C-,リンカー);13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  177.7,  169.6,  167.0,  138.5,  138.4,  138.3,  138.2,  137.2,  137.8,  137.5,  134.2,  133.2,  133.6,  131.7,  131.1,  131.45,  129.8,  129.06,  128.9,  128.2,  128.4,  128.2,  128.4,  128.7,  127.8,  127.87,  127.83,  127.4,  127.4,  127.0,  127.2,  127.29,  127.6,  127.20,  126.88,  126.24,  125.1,  123.6,  123.3,  101.5,  102.7,  99.7,  98.0,  97.1,  78.13,  78.55,  78.05,  75.82,  74.57,  75.38,  75.27,74.25,  74.30,  72.78,  72.26,  70.89,  66.85,  68,43,  68.25,  67.75,  66.87,  55.57,  53.71,  52.10,  28.97,  28.87,  23.80,  22.77,  20.12;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ７４Ｈ８３Ｃｌ６Ｎ５Ｏ２０に対するｍ／ｚ計算値：１５７５．１９３０；実測値１５７６．２３５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【化５１】
2019515876.tif 000053
【０４３４】
５−アジドペンチル−Ｏ−２−Ｏ−アセチル−４，６−Ｏ−ベンジリジン−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−Ｏ−（３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ−β−Ｄ−グルコピラノシド（１５）：Ｓ８ａ（１．０ｇ，０．６７３ｍｍｏｌ）を含む１０ｍＬ（ＣＨ２Ｃｌ２：Ｈ２Ｏ、１０／１）の溶液に、ＤＤＱ（０．１８３ｇ，０．８０８ｍｍｏｌ）を０℃において加え、ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン，２／８）が出発物質の消費とともに生成物の形成を示すまで、得られた反応混合物を撹拌した。次いで、その反応混合物を濾過し、有機層をＨ２Ｏ（２×３０ｍＬ）で洗浄した。水層をＣＨ２Ｃｌ２（２×５０ｍＬ）でさらに抽出した。合わせた有機層をブライン溶液（４０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１５％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、１５（０．６５２ｇ，７０％）を無色泡沫状物として得た。ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン＝２／８  ｖ／ｖ）：Rf  =  0.24;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.44-7.16  (m,  30H),  5.44  (s,  1H),  5.15  (d,  J  =  3.2  Hz,  1H),  4.88  (t,  J  =  8.9  Hz,  2H),  4.54-4.40  (m,  12H),  4.08-3.58  (m,  3H),  3.56-3.40  (m,  14H),  3.25-3.20  (m,  4H),  3.02-3.00  (m,  1H),  2.16  (s,  3H,  -C(O)CH3,1.51-1.47(m,4H,-CCH2C-,リンカー),1.30-0.99(m,2H,-CCH2C-,リンカー);13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  171.5,  168.6,  167.0,  138.7,  138.4,  138.38,  138.2,  137.2,  137.8,  137.5,  134.2,  133.2,  133.6,  131.7,  131.1,  131.45,  129.8,  129.06,  128.9,  128.2,  128.4,  128.2,  128.4,  128.7,  127.8,  127.87,  127.83,  127.4,  127.4,  127.0,  127.2,  127.29,  127.6,  127.20,  126.88,  126.24,  125.1,  123.6,  123.3,  101.5,  102.7,  99.7,  98.0,  97.1,  78.13,  78.55,  78.05,  75.82,  74.57,  74.37,  74.27,73.25,  73.30,  72.78,  71.26,  69.89,  68.85,  69,43,  68.25,  67.73,  66.67,  56.57,  55.71,  51.10,  28.67,  28.27,  23.00,  21.47,  21.02  ;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ６６Ｈ７５Ｃｌ６Ｎ５Ｏ１９に対するｍ／ｚ計算値：１４５５．０４２０；実測値１４７６．３０８２（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０４３５】
高マンノース型オリゴ糖（Ｇ１〜Ｇ６）の合成  Ｓ
【化５２】
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図Ｓ１：高マンノース型グリカンおよびそれらのフラグメントの構造
【０４３６】
検討中のドナー１〜５を用いて、本発明者らは、コア三糖アクセプター１４およびカップリング生成物によるそれらのグリコシル化を調べた（スキームＳ９）。公知のイミデートドナー１による１４のグリコシル化によって、四糖Ｓ９ａが７０％収率で得られる１１。Ｓ９ａの選択的なベンジリデン環の開環の後、得られた６”−ＯＨ  Ｓ９ｂを、１でグリコシル化して、Ｎ−グリカン生合成の初期の中間体およびゆえにすべてのＮ−グリカンにおいて保存されたモチーフである所望の完全に保護されたＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２五糖Ｓ９ｄを６０％収率で得た。別の経路では、ベンジリデン基Ｓ９ａの還元的開環によって、ジオールＳ９ｃが生じ、それをさらに、Ｃｐ２ＨｆＣｌ２およびＡｇＯＴｆを使用することによってトリマンノシルフルオリド４と縮合して、ゴルジ装置でのＧｌｃＮＡｃを介した分枝における中間体である七糖Ｓ９ｅを５２％収率で得た１１。
【化５３】
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【０４３７】
スキームＳ９：Ｍａｎ３およびＭａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２の調製。ａ、ＢＦ３．ＯＥｔ２、ＣＨ２Ｃｌ２、４ÅＭＳ、−４０℃、２時間、７０％；ｂ、トリエチルシラン、ＰｈＢＣｌ２、ＣＨ２Ｃｌ２、４ÅＭＳ、−７８℃、１時間、８２％；ｃ、１、ＢＦ３．ＯＥｔ２、ＣＨ２Ｃｌ２、４ÅＭＳ、−６０℃〜−２０℃、２時間、６０％；ｄ、ｐＴｓＯＨ、ＣＨ３ＣＮ、２時間、６６％；ｅ、４、ＡｇＯＴｆ、Ｃｐ２ＨｆＣｌ２、トルエン、４ÅＭＳ、−４０℃、２時間、５２％；ｆ，（１）ＮＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２、ｎＢｕＯＨ、９０℃、一晩；（２）Ａｃ２Ｏ、ピリジン、一晩；（３）ＮａＯＭｅ、ＭｅＯＨ、一晩；（４）Ｐｄ（ＯＨ）２、ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ：ＨＣＯＯＨ（５：３：２）、Ｈ２；Ｇ１：６５％；Ｇ２：５２％；Ｇ４：２９％；Ｃｐ２ＨｆＣｌ２：ビス（シクロペンタジエニル）ハフニウムジクロリド。ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０表面上に見られる主要なグリコフォームであって、広域中和抗体によって認識されるエピトープの重要な構成要素である、Ｍａｎ９ＧｌｃＮＡｃ２を合成するために、化合物１４を、Ｃｐ２ＨｆＣｌ２／ＡｇＯＴｆの促進下でのフルオリド２による３”−Ｏグリコシル化に供して、六糖Ｓ１０ａを６５％収率で得た。Ｓ１０ａのｐ−トルエンスルホン酸に媒介される還元的開環によって、ジオールＳ１０ｂが得られ、これをさらに５でグリコシル化して、十一糖Ｓ１０ｃを得た（スキームＳ１０）。
【化５４】
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【０４３８】
スキームＳ１０：Ｍａｎ４（Ｇ５）およびＭａｎ９ＧｌｃＮＡｃ２（Ｇ６）の調製。ａ、２、ＡｇＯＴｆ、Ｃｐ２ＨｆＣｌ２、トルエン、４ÅＭＳ、−４０℃、２時間、５８％；ｂ、ｐ−ＴｓＯＨ、ＣＨ３ＣＮ、２時間、６０％；ｃ、５，（ＢｒＣ６Ｈ４）３ＮＳｂＣｌ６、ＣＨ３ＣＮ、４ÅＭＳ、−１０℃〜ＲＴ、４時間、５２％；ｄ，（１）ＮＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２、ｎＢｕＯＨ、９０℃、一晩；（２）Ａｃ２Ｏ、ピリジン、一晩；（３）ＮａＯＭｅ、ＭｅＯＨ、一晩；（４）Ｐｄ（ＯＨ）２、ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ：ＨＣＯＯＨ（５：３：２）、Ｈ２；Ｇ５：４２％；ＳＧ６：２６％；（ＢｒＣ６Ｈ４）３ＮＳｂＣｌ６：トリス（４−ブロモフェニル）アミニウム（ａｍｍｏｎｉｕｍｙｌ）ヘキサクロロアンチモネート。
【化５５】
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【０４３９】
５−アミノペンチル−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（Ｇ１）：化合物１４（０．１５０ｇ，０．１１０ｍｍｏｌ）を、一般的な手順２（方法１）に従うことによって脱保護して、所望の三糖Ｇ１（０．０４５ｇ，６５％）を白色固体として得た。1H  NMR(600MHz,D2O):δ4.72(S,1H,D2Oと重複,H-1c),4.60(d,J=7.8Hz,1H,H-1a),4.49(d,J=7.8Hz,1H,H-1b),4.06(d,J=3Hz,1H),3.94-3.89(m,4H),3.86-3.58(m,14H),3.50-3.49(m,1H),3.42-3.42(m,1H),2.97(t,J=10.8Hz,2H,-CH2NH2,リンカー),2.07(s,3H,-C(O)CH3),2.03(s,3H,-C(O)CH3),1.68-1.65(m,2H,-CCH2C-,リンカー),1.60-1.58(m,2H,-CCH2C-,リンカー),1.40-1.39(m,2H,-CCH2C-,リンカー);13C  NMR  (150  MHz,  D2O):  δ  177.32,  177.17,  173.76,  104.12  (C-1a,  1  J  C,H  =  163.1),  103.80  (C-1b,  1  J  C,H  =  162.2),  102.80  (C-1c,  1  J  C,H  =  160.2),  82.07,  81.35,  79.15,  77.31,  77.25,  75.49,  75.13,  74.68,  73.23,  72.84,  69.34,  63.65,  62.83,  62.77,  57.75,  57.72,  42.05,  30.78,  29.10,  24.86,  24.84,  24.83;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ２７Ｈ４９Ｎ３Ｏ１６に対するｍ／ｚ計算値：６７１．３００５；実測値６９４．３１１５（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化５６】
2019515876.tif 000058
【０４４０】
５−アジドペンチル−Ｏ−（２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−２−Ｏ−アセチル−４，６−Ｏ−ベンジリジン−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−Ｏ−（３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコ−ピラノシド（Ｓ９１）：トリクロロアセトイミデート１（０．２７８ｇ，０．４３７ｍｍｏｌ）、キトビオースアクセプター１４（０．３００ｇ，０．２１９ｍｍｏｌ）および活性化４Åモレキュラーシーブを含む乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）の混合物を室温で１時間撹拌した。その反応物を−４０℃に冷却し、次いで、三フッ化ホウ素エチルエーテラート（１２μＬ，０．１０９ｍｍｏｌ）をゆっくり加え、得られた反応混合物を２時間撹拌した。その反応物を、Ｅｔ３Ｎを加えることによってクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、セライトで濾過し、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１５％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、Ｓ９ａ（０．３１０ｇ，７０％）を白色泡沫状物として得た。ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン＝２／８，ｖ／ｖ）：Ｒｆ＝０．４６；1H  NMR(600MHz,CDCl3):δ7.84-7.65(m,8H,Ar-H),7.38-7.31(m,2H,Ar-H),7.30-7.18(m,28H,Ar-H),6.98-6.90(m,7H,Ar-H),6.75-6.71(m,3H,Ar-H),5.45(s,1H,Ph-CH,ベンジリデン),5.43-5.43(d,J=3.4Hz,1H,H-2d),5.34(d,J=3.1Hz,1H,H-2c),5.21(d,J=8.1Hz,1H,H-1a),5.19(d,J=2.1Hz,1H,H-1d),4.90(d,J=8.1Hz,1H,H-1a),4.83-4.81(m,3H),4.67(s,1H),4.67-4.61(m,2H),4.53-4.43(m,7H),4.38-4.23(q,2H),4.22-4.16(m,1H),4.13-4.06(m,6H),3.87-3.75(m,6H),3.66-3.60(m,3H),3.53-3.45(m,3H),3.38(dd,J=4.2  &  12.0Hz,1H),3.26-3.17(m,3H),3.09-3.07(m,1H),2.87-2.82(m,2H),2.06(s,3H,-C(O)CH3),2.03(s,3H,-C(O)CH3),1.35-1.23(m,4H,-CCH2C-,リンカー),1.07-1.01(m,2H,-CCH2C-,リンカー);13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  169.87,  168.75,  167.83,  138.97,  138.47,  138.17,  137.36,  134.30,  134.10,  131.72,  129.12,  128.90,  128.64,  128.55,  128.51,  128.32,  128.23,  128.09,  127.84,  127.46,  128.14,  126.24,  123.40,  101.44,  99.38,  98.90,  98.37  (C-1d,  1  J  C,H  =  172  Hz),  97.31,  79.05,  78.84,  77.89,  76.14,7  5.02,  74.78,  73.70,  73.40,  73.06,  73.04,  72.37,  72.03,  71.00,  69.11,  69.85,  69.11,  68.85,  68.59.  68.50,  67.84,  66.70,  56.85,  55.99,  51.38,  28.95,  28.55,  23.28,  21.33,  21.16;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ１０５Ｈ１０７Ｎ５Ｏ２５に対するｍ／ｚ計算値：１８３８．７１８０；実測値１８６１．７２２３（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化５７】
2019515876.tif 000059
【０４４１】
５−アジドペンチル−Ｏ−（２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−２−Ｏ−アセチル−４−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−Ｏ−（３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド（Ｓ９ｂ）：四糖Ｓ９ａ（０．２８０ｇ，０．１５２ｍｍｏｌ）および４Å活性化モレキュラーシーブを含むＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）の混合物を室温で１時間撹拌した。反応物を−７８℃に冷却し、トリエチルシラン（７３μＬ，０．４５６ｍｍｏｌ）およびジクロロフェニルボラン（６９μＬ，０．５３２ｍｍｏｌ）を加え、１時間撹拌した。その反応物を、Ｅｔ３Ｎを加えることによってクエンチし、セライトで濾過し、真空中で濃縮した。残渣をメタノールと２〜３回共蒸留した後、フラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１５％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、６”−ＯＨ  Ｓ９ｂ（０．２３０ｇ，８２％）を得た。ＴＬＣ：（酢酸エチル：トルエン＝２／８，ｖ／ｖ）：Ｒｆ＝０．３６；1H  NMR(600MHz,CDCl3):δ7.85-7.52(m,8H,Ar-H),7.52-7.12(m,29H,Ar-H),7.00-6.88(m,9H,Ar-H),6.74-6.70(m,3H,Ar-H),5.39(d,J=1.8Hz,1H,H-2d),5.32(d,J=3.6Hz,1H,H-2c),5.21(d,J=8.4Hz,1H,H-1a),5.10(s,1H,H-1d),4.90-4.81(m,4H),4.67-4.61(m,2H,重複H-2b),4.59(s,1H,H-1c),4.59-4.44(m,9H),4.37(d,J=12Hz,2H),4.24-4.12(m,3H),4.10-4.05(m,3H),3.90-3.77(m,4H),3.69-3.58(m,7H),3.49(t,J=11.5Hz,2H),3.41-3.36(dd,J=6.1,11.2Hz,2H),3.26(dd,J=6.0,9.2Hz,1H),3.26-3.18(m,2H),3.06-2.98(m,1H),2.88-2.81(m,2H,リンカー),2.06(s,3H,-C(O)CH3),2.04(s,3H,-C(O)CH3),1.37-1.22(m,4H,リンカー),1.07-1.00(m,2H,リンカー);13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  170.45,  169.88,  168.78,  168.24,  167.86,  138.95,  138.92,  138.77,  138.58,  138.21,  138.11,  137.95,  137.37,  134.35,  134.16,  133.89,  132.09,  131.70,  128.90,  128.76,  128.71,  128.64,  128.58,  128.51,  128.41,  128.31,  128.08,  127.96,  127.81,  127.64,  127.13,  123.97,  123.46,  100.14,  98.40,  98.36,  97.36,  76.24,  75.52,  75.30,  74.96,  74.71,  74.51,  74.29,  73.41,  73.09,  72.55,  72.12,  69.41,69.20,  68.85,  68.48,  67.93,  67.71,  61.87,  56.78,  56.00,  51.38,  28.96,  28.55,  23.28,  21.37;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ１０５Ｈ１０９Ｎ５Ｏ２５に対するｍ／ｚ計算値：１８４０．７３３７；実測値１８６３．７３８３（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化５８】
2019515876.tif 000060
【０４４２】
５−アジドペンチル−Ｏ−（２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−２−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−Ｏ−（３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコ−ピラノシル）−（１→４）−Ｏ−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド（Ｓ９ｃ）：ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（０．０４５ｇ，０．２３９ｍｍｏｌ）を、四糖Ｓ９ａ（０．２２０ｇ，０．１１９ｍｍｏｌ）を含む室温のアセトニトリル（１０ｍＬ）の撹拌溶液に加えた。８時間後、その反応混合物をＥｔ３Ｎでクエンチし、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１５％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、表題のジオールＳ９ｃ（０．１４０ｇ，６６％）を白色固体として得た。ＴＬＣ：（酢酸エチル：トルエン＝２／８，ｖ／ｖ）：Ｒｆ＝０．２６；1H  NMR(600MHz,CDCl3):δ7.85-7.52(m,8H,Ar-H),7.32-7.17(m,25H,Ar-H),6.98-6.91(m,7H,Ar-H),6.75-6.71(m,3H,Ar-H),5.30(d,J=3.6Hz,1H,),5.21(d,J=8.6Hz,1H,H-1a),5.20(s,2H,重複H-1d),4.89(d,J=8.4Hz,1H,H-1b),4.85-4.82(m,3H),4.64-4.60(m,3H),4.544.46(m,7H),4.38(d,J=12.0Hz,1H),4.34(d,J=12.2Hz,1H),4.21-4.04(m,5H),3.92(m,1H),3.87-3.79(m,3H),3.70-3.59(m,5H),3.52-3.43(m,4H),3.39(dd,J=3.2,8.3Hz,1H),3.28(dd,J=3.2,8.2Hz,1H),3.29-3.19(m,2H),2.29(m,1H),2.86-2.83(m,3H),2.11(s,3H,-C(O)CH3),2.03(s,3H,-C(O)CH3),1.35-1.23(m,4H,-CCH2C-,リンカー),1.06-1.01(m,2H,-CCH2C-,リンカー);13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  170.76,  169.88,  138.92,  138.70,  138.62,  138.52,  138.12,  138.06,  134.27,  134.07,  133.81,  131.95,  131.64,  128.82,  128.64,  128.59,  128.52,  128.50,  128.39,  138.33,  128.20,  128.09,  128.06,  128.03,  128.01,  127.94,  127.81,  127.75,  127.54,  127.42,  127.29,  127.06,  123.90,  123.36,  98.51,  98.30,  98.24(C-1d,  1  J,  C,H  =  173  Hz),  97.30,  79.07,  78.38,  77.60,  76.10,  75.52,  75.03,  74.79,  74.71,  74.59,  74.51,  73.39,  73.03,  72.07,  72.01,  71.30,  69.53,  69.27,  69.05,  68.44,  67.70,  67.17,  62.44,  56.74,  55.94,  51.32,  28.89,  28.49,  23.22,  21.31,  21.22;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ９８Ｈ１０３Ｎ５Ｏ２５に対するｍ／ｚ計算値：１７５０．６８６８；実測値１７７３．６９１３（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化５９】
2019515876.tif 000061
【０４４３】
５−アジドペンチル−Ｏ−ジ−（２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３），（１→６）−２−Ｏ−アセチル−４−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−Ｏ−（３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド（Ｓ９ｄ）：ドナー１（０．１１３ｇ，０．１７８ｍｍｏｌ）、アクセプターＳ９ｂ（０．２２０ｇ，０．１１９ｍｍｏｌ）および活性化４Åモレキュラーシーブを含む乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）の混合物を室温で１時間撹拌した。その反応物を−６０℃に冷却し、三フッ化ホウ素エチルエーテラート（１２μＬ，０．１０９ｍｍｏｌ）をゆっくり加え、得られた反応混合物を−２０℃で２時間撹拌した。その反応物を、Ｅｔ３Ｎを加えることによってクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、セライトで濾過し、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→２０％のＥＡのヘキサン溶液）によって精製して、Ｓ９ｄ（０．１７０ｇ，６０％）を無色泡沫状物として得た。ＴＬＣ：（酢酸エチル：ヘキサン＝３／７，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.46;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.77-7.59  (m,  8H,  Ar-H),  7.32-7.16  (m,  43H,  Ar-H),  7.14-7.08  (m,  2H,  Ar-H),  6.91-6.89  (m,  4H,  Ar-H),  6.73-6.67  (m,  6H,  Ar-H),  5.45  (s,  1H,  H-2d),  5.34  (d,  J  =  3.1  Hz,  1H,  H-2c),  5.32  (s,  1H,  H-2d'),5.17  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H,  H-1a),  5.09  (s,  1H,  H-1d),  5.0  (s,  1H,  H-1d'),  4.87  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H,  H-1b),  4.83-4.78  (q,  2H),  4.74-4.71  (q,  2H),  4.65-4.61  (m,  4H),  4.56-4.42  (m,  15H),  4.31  (d,  J  =  9.2  Hz,  1H),  4.12-4.03  (m,  5H),  4.03-3.76  (m,  9H),  3.68-3.43  (m,  9H),  3.30  (dd,  J  =  3.2,  9.1  Hz,  1H),  3.21-3.15  (m,  2H),  3.13  (d,  J  =  9.2  Hz,  1H),  3.09  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),2.89-2.79(m,2H,-CH2N3-,リンカー),2.12(s,3H,-C(O)CH3),2.07(s,3H,-C(O)CH3),1.69(s,3H,-C(O)CH3),1.37-1.12(m,4H,-CCH2C-,リンカー),1.07-1.01(m,2H,-CCH2C-,リンカー);13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  170.45,  170.22,  170.18,  168.21,  167.71,  138.93,  138.72,  138.68,  138.50,  138.24,  138.22,  138.07,  133.83,  133.75,  128.87,  128.79,  128.67,  128.63,  128.58,  128.42,  128.21,  128.06,  127.99,  127.96,  127.81,  127.76,  127.70,  127.46,  127.08,  123.36,  100.13  (C-1a,  1  J  C,H  =  159.3  Hz),  99.39  (C-1d',  1  J  C,H  =  171.5  Hz),  98.35  (C-1b,  1  J  C,H  =  162.3  Hz),  98.31(C-1d,  1  J  C,H  =  170  Hz),  97.16,  76.20,  76.05,  75.58,  75.21,  74.97,  74.89,  74.70,  74.47,  74.28,  73.94,  73.72,  73.00,  72.25,72.20,  71.70,71.50,  69.15,69.07,  69.04,68.99,  68.50,  68.45,  67.80,  65.45,  56.83,  51.37,  29.94,  23.27,  21.31,  21.28,  20.83;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ１３４Ｈ１３９Ｎ５Ｏ３１に対するｍ／ｚ計算値：２３１４．９３７９；実測値２３３７．９４６１（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化６０】
2019515876.tif 000062
【０４４４】
５−アミノペンチル−ジ−（α−Ｄ−マンノピラノシル）−（１→３），（１→６）−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコ−ピラノシド（Ｇ２）：五糖Ｓ９ｄ（０．０９０ｇ，０．０３８ｍｍｏｌ）を、一般的な手順２（方法１）に従うことによって脱保護して、化合物Ｇ２（０．０２０ｇ，５２％）を白色粉末として得た。1H  NMR(600MHz,D2O):δ5.10(d,J=1.3Hz,1H,H-1d),5.09(d,J=1.5Hz,1H,H-1d’),4.78(s,1H,D2Oと重複,H-1c),4.59  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H,  H-1a),  4.49  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H,  H-1b),  4.25  (s,  1H),  4.01  (d,  J  =  1.5  Hz,  1H),  4.00  (d,  J  =  1.3  Hz,  1H),  3.97-3.77  (m,  8H),  3.75-3.65  (m,  20H),  3.52-3.48  (m,  2H),  2.98  (t,  J  =  11.2  Hz,  2H),  2.06  (s,  3H),2.02  (s,  3H),  1.68-1.65  (m,  2H),  1.601.57  (m,  2H),  1.49-1.40  (m,  2H);  13C  NMR  (150  MHz,  D2O):  δ  181.17,  174.69,  174.42,  102.51  (C-1d,  1  J  C,H  =  171.5  Hz),  101.34,  101.04,  100.35  (C-1d',  1  J  C,H  =  173.5  Hz),  99.60,  80.48,  79.61,  79.30,  74.49,  74.36,  74.16,  73.43,  72.66,  72.37,  71.93,  70.39,  70.31,  70.13,  70.09,  69.98,  69.85,  66.84,  66.76,  65.80,  61.12,  90.93,  60.07,  59.97,  54.97,  54.85,  39.30,  28.03,  26.35,  23.07,  22.17,  22.07;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ３９Ｈ６９Ｎ３Ｏ２６に対するｍ／ｚ計算値：９９５．４０６７；実測値１０１８．４１０６（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化６１】
2019515876.tif 000063
【０４４５】
５−アジドペンチル−Ｏ−（２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−｛２−Ｏ−アセチル３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）｝−［２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−２，４−ジ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）｝−２−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−Ｏ−（３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル）（１→４）−Ｏ−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド（Ｓ９ｅ）：銀トリフレート（０．１２７ｇ，０．４９７ｍｍｏｌ）、ビス（シクロペンタジエニル）ハフニウムジクロリド（０．１２１ｇ，０．３１９ｍｍｏｌ）および４Å活性化モレキュラーシーブを含む乾燥トルエン（１０ｍＬ）の混合物を室温で１時間撹拌した。次いで、その反応混合物を−４０℃に冷却し、ドナー４（０．１０３ｇ，０．０８５ｍｍｏｌ）およびアクセプターＳ９ｃ（０．１２５ｇ，０．０７１ｍｍｏｌ）を含む５ｍＬのトルエンの溶液を加えた。その混合物を２時間撹拌し、Ｅｔ３Ｎでクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、セライトで濾過した。濾液をＮａＨＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１５％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、Ｓ９ｅ（０．１１０ｇ，５２％）を無色泡沫状物として得た。ＴＬＣ：（アセトン：トルエン＝２／８，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.36;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.77-7.40  (m,  8H,  Ar-H),  7.32-7.07  (m,  85H,  Ar-H),  6.99-6.88  (m,  4H,  Ar-H),  6.79-6.68  (m,  6H,  Ar-H),  5.44  (s,  1H,  H-2d),  5.43  (s,  1H,  H-2e),  5.41  (s,  1H,  H-2e'),  5.29  (d,  J  =  3.4  Hz,  1H,  H-2c),  5.18  (s,  2H,  H-1d,d'),  5.  16  (s,  1H,  H-1e),  5.09  (s,  1H,  H-1e'),  4.92  (s,  1H,  H-1c),  4.91  (d,  J  =  8.5  Hz,  1H,  H-1a),  4.83-4.78  (q,  1H),  4.84-4.73  (m,  6H),  4.65-4.61  (m,  2H),  4.60-4.57  (m,  5H),  4.524.35  (m,  17H),  4.27  (d,  J  =  12.3Hz,  1H),  4.20-4.19  (m,  1H),  4.10-3.99  (m,  6H),  3.97-3.70  (m,  13H),  3.69-3.57  (m,  8H),  3.56-3.31  (m,  6H),  3.30  (dd,  J  =  3.2,  9.2  Hz,  1H),  3.30-3.18  (m,  5H),  2.97-2.96  (m,  1H),2.89-2.79(m,2H,-CCH2C-,リンカー),2.12(s,3H,-C(O)CH3),2.07(s,3H,-C(O)CH3),2.01(s,6H,-C(O)CH3),1.33-1.23(m,4H,-CCH2C-,リンカー),1.06-0.99(m,2H,-CCH2C-,リンカー);13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  170.56,  170.42,  170.26,  170.02,  168.45,  168.69,  138.95,  138.93,  138.72,  138.68,  138.58,  138.24,  138.22,  138.07,  133.83,  132.09,  131.76,  128.87,  128.79,  128.67,  128.63,  128.61,  128.58,  128.52,  128.42,  128.13,  128.06,  127.99,  127.92,  127.81,  127.76,  127.74,  127.46,  127.08,  123.71,  123.36,  100.13  (C-1e,e',  1  J  C,H  =  169.2  Hz),  99.39  (C-1b,  1  J  C,H  =  162.2  Hz),  98.35  (C-1d,  1  J  C,H  =  171.5  Hz),  98.31  (C-1a,  1  J  C,H  =  160.2  Hz),  97.16  (C-1d',  1  J  C,H  =  170.5  Hz),  76.20,  76.05,  75.42,  74.97,  74.89,  74.80,  74.70,  74.65,  74.47,  74.28,  73.94,73.68,  73.26,  72.60,  72.25,  72.20,  71.70,  71.50,  69.15,  69.07,  69.04,  68.99,  68.50,  68.45,  67.80,  65.54,  56.73,  55.90,  51.29,31.14,  29.91,  28.87,  28.47,  23.19,  21.33,  21.27,  21.19l;ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）：Ｃ１７６Ｈ１８５Ｎ５Ｏ４２に対するｍ／ｚ計算値：３０４��．２４００；実測値３０６５．２２１０（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化６２】
2019515876.tif 000064
【０４４６】
５−アミノペンチル−α−Ｄ−マンノピラノシル（１→３），［ジ−（α−Ｄ−マンノピラノシル）−（１→３），（１→６）−α−Ｄ−マンノピラノシル］（１→６）−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（Ｇ４）：七糖Ｓ９ｅ（０．１４０ｇ，０．０２４ｍｍｏｌ）を、一般的な手順２（方法１）に従うことによって脱保護して、表題化合物Ｇ４（０．０３９ｇ，２９％）を白色固体として得た。1H  NMR(600MHz,D2O):δ5.09(s,1H,H-1d),4.89(s,1H,H-1d’),4.86(d,J=1.5Hz,1H,H-1e),4.75(d,J=1.5Hz,1H,H-1e’),4.76(s,1H,D2Oと重複,H-1c),4.50(d,J=7.8Hz,1H,H-1a),4.35(d,J=7.9Hz,1H,H-1b),4.17(d,J=1.7Hz,1H),4.07-4.05(m,1H),4.00-3.97(m,2H),3.94-3.37(m,40H),2.90-2.85(m,2H,-CH2Nリンカー),1.98(s,3H,-C(O)CH3),1.94(s,3H,-C(O)CH3),1.61-1.46(m,4H,-CCH2C-,リンカー),1.35-1.26(m,2H,-CCH2C-,リンカー);13C  NMR  (150  MHz,  D2O):  δ  177.2,  172.3,  102.44,  101.44,  101.01,  100.37,  99.85,  99.25,  80.54,  79.49,  79.28,  78.58,  74.45,  74.43,72.50,  71.93,  70.64,  70.24,  70.15,  70.04,  70.01,  69.87,  69.46,  69.39,  66.69,  66.66,  65.94,65.91,  65.56,  65.13,  65.12,  60.93,  60.91,  60.43,  60.13,  60.04,  59.97,  54.90,  54.86,  39.28,27.98,  26.48,  22.08,  22.02,  21.99;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ５１Ｈ８９Ｎ３Ｏ３６に対するｍ／ｚ計算値：１３１９．５１２３；実測値１３４２．５１６５（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化６３】
2019515876.tif 000065
【０４４７】
５−アジドペンチル−Ｏ−（２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→２）−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→２）−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−２−Ｏ−アセチル−４，６−Ｏ−ベンジリデン−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−Ｏ−（３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド（Ｓ１０ａ）：銀トリフレート（０．３２８ｇ，１．２８ｍｍｏｌ）、ビス（シクロペンタジエニル）ハフニウムジクロリド（０．３４０ｇ，０．８９７ｍｍｏｌ）および４Å活性化モレキュラーシーブを含む乾燥トルエン（１０ｍＬ）の混合物をｒｔで１時間撹拌した。次いで、その反応混合物を４０℃に冷却し、ドナー２（０．３８３ｇ，０．２８２ｍｍｏｌ）およびアクセプター１４（０．３５０ｇ，０．２５６ｍｍｏｌ）を含む５ｍＬのトルエンの溶液を加えた。その混合物を２時間撹拌し、Ｅｔ３Ｎでクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、セライトで濾過した。濾液をＮａＨＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１５％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、Ｓ１０ａ（０．４０５ｇ，５８％）を無色泡沫状物として得た。ＴＬＣ：（酢酸エチル：トルエン＝２／８，ｖ／ｖ）：Ｒｆ＝０．４６；1H  NMR(600MHz,CDCl3):δ7.89-7.35(m,8H,Ar-H),7.38-7.12(m,56H,Ar-H),7.12-7.08(m,3H,Ar-H),7.03-6.88(m,7H,Ar-H),6.78-6.69(m,4H,Ar-H),5.50(s,1H,H-1f),5.37(d,J=1.4Hz,1H,H-2c),5.25(s,1H,Ph-CH-,ベンジリデン),5.23-5.17(m,3H,重複,H-1d,e,f),4.98(s,1H,H-1c),4.95(d,J=7.5Hz,1H,H-1a),4.91-4.53(m,5H),4.69-4.58(m,3H),4.554.28(m,16H),4.25-4.00(m,13H),3.95-3.91(m,1H),3.91-3.60(m,14H),3.58(d,J=12Hz,1H),3.51-3.45(m,4H),3.42-3.38(m,3H),3.29-3.10(m,3H),2.98-2.78(m,3H),2.08(s,3H,-C(O)CH3),1.99(s,3H,-C(O)CH3),1.35-1.23(m,4H,-CCH2C-,リンカー),1.07-1.00(m,2H,-CCH2C-,リンカー);13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  170.38,  169.81,  168.76,  168.26,  139.06,  138.95,  138.92,  138.87,  138.60,  137.36,  128.85,  128.66,  128.64,  128.58,  128.55,  128.48,  128.43,  128.39,  128.35,  128.26,  128.10,  128.02,  127.82,  127.71,  101.48,  100.08,  99.75,  99.39,  98.36,  97.27,  77.80,  78.75,  76.10,  75.38,  74.93,  74.82,  74.70,  73.58,  73.28,  73.21,  73.06,  72.79,  72.65,  72.57,  72.17,  71.01,  69.60,  69.10,  68.96,  68.63,  66.74,  56.85,  55.97,  51.37,  28.95,  28.54,  23.27,  21.43,  21.09;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ１５９Ｈ１６３Ｎ５Ｏ３５に対するｍ／ｚ計算値：２７０３．１０５４；実測値２７２６．１２１４（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化６４】
2019515876.tif 000066
【０４４８】
５−アミノペンチル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→２）−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→２）−α−Ｄ−マンノ−ピラノシル−（１→３）−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（Ｇ５）：六糖Ｓ１０ａ（０．１４０ｇ，０．０５１ｍｍｏｌ）を、一般的な手順２（方法１）に従うことによって脱保護して、表題化合物Ｇ５（０．０２５ｇ，４２％）を白色固体として得た。1H  NMR  (600  MHz,  D2O):  δ  5.32  (s,  1H,  H-1d),  5.27  (s,  1H,  H-1e),  5.01  (s,  1H,  H-1f),  4.74  (s,  1H,  H-1c),  4.56  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H,  H-1a),  4.63  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H,  H-1b),4.18  (d,  J  =  3.3  Hz,  1H),  4.07  (s,  1H),  4.04  (d,  J  =  3.2  Hz,  1H),  4.03  (d,  J  =  3.1  Hz,  1H),  3.32-3.33  (m,  35H),2.05(t,J=11.2Hz,2H,-CH2NH2,リンカー),2.03(s,3H,-C(O)CH3),2.00(s,3H,-C(O)CH3),1.64(m,2H,-CCH2C-,リンカー),1.50(m,2H,-CCH2C-,リンカー),1.36(m,2H,-CCH2C-,リンカー);13C  NMR  (150  MHz,  D2O):  δ  174.54,  174.38,  102.17  (C-1e,  1  J  C,H  =  170.2  Hz),  101.34  (C-1b,  1  J  C,H  =  161.2  Hz),  101.014  (C-1d,  1  J  C,H  =  169.8  Hz),  100.70  (C-1f,  1  J  C,H  =  172.2  Hz),  100.56  (C-1a,  1  J  C,H  =  160.2  Hz),  99.85,  80.50,  79.25,  78.66,  78.55,  78.47,  76.12,  74.48,  73.37,  73.13,  72.33,  71.88,  70.24,  70.17,  70.05,  69.95,  69.89,  66.95,  66.81,66.71,  65.81,  61.01,  60.97,  60.88,  60.76,  60.02,  59.92,  54.92,  39.25,  27.99,  26.32,  23.19,  22.06,  22.04;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ４５Ｈ７９Ｎ３Ｏ３１に対するｍ／ｚ計算値：１１５７．４５９０；実測値１１８０．４５９１（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化６５】
2019515876.tif 000067
【０４４９】
５−アジドペンチル−Ｏ−（２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→２）−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→２）−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−２−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−Ｏ−（３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド（Ｓ１０ｂ）：Ｓ１０ａ（０．２０５ｇ，０．０７５ｍｍｏｌ）を含む１０ｍＬのアセトニトリルの溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（０．０２０ｇ，０．１１３ｍｍｏｌ）を加え、室温で９時間撹拌した。その反応物をＥｔ３Ｎでクエンチし、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→２０％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、ジオールＳ１０ｂ（０．１２０ｇ，６０％）を得た。ＴＬＣ：（アセトン：トルエン＝２／８，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.26;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.83-7.62  (m,  8H,  Ar-H),  7.41-7.06  (m,  57H,  Ar-H),  6.95-6.89  (m,  6H,  Ar-H),  6.73-6.71  (m,  2H,  Ar-H),  5.50  (d,  J  =  4.8  Hz,  1H,  H-2f),  5.23  (d,  J  =  1.8  Hz,  1H,  H-1d),  5.22  (d,  J  =  3.8  Hz,  1H,  H-1c),  5.19  (d,  J  =  3.2  Hz,  1H,  H-1e),  5.18  (s,  1H,  H-1f),  5.03  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H,  H-1a),  4.88  (t,  J  =  7.8  Hz,  1H),  4.82-4.74  (m,  5H),  4.68-4.38  (m,  21H),  4.33  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H),  4.29  (d,  J  =  7.9  Hz,  1H),  4.20-4.00  (m,  8H),  3.95-3.71  (m,  9H),  3.69-3.53  (m,  6H),  3.52-3.33  (m,  8H),  3.29-3.15  (m,  5H),  2.90-2.79  (m,  2H),  2.08  (s,  3H,  -C(O)CH3),  1.92  (s,  3H,  -C(O)CH3),1.35-1.20(m,4H,-CCH2C-,リンカー),1.081.01(m,2H,-CCH2C-,リンカー);13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  170.40,  169.88,  168.68,  138.20,  138.94,  138.78,  138.71,  138.56,  138.48,  138.38,  138.21,  138.02,  134.30,  133.84,  132.02,  128.78,  128.65,  128.63,  128.43,  128.40,  128.38,  128.25,  128.15,  128.06,  127.94,  127.88,  127.84,  127.77,  127.69,  127.65,  127.56,  127.10,  123.90,  123.41,  100.98,  99.83,  98.34,  97.32,  78.31,  78.17,  78.11,  78.00,  76.22,  75.52,  75.28,  75.05,  74.82,  74.40,  73.98,  73.67,  73.58,  73.36,  73.06,  72.59,  72.48,  72.42,  72.09,  71.32,  70.52,  69.46,  69.09,  68.83,  68.72,  68.42,  68.20,  67..61,  62.57,  56.77,  55.98,  51.37,  29.99,  29.65,  28.94,  28.54,  23.27,  21.44,  21.13,  14.41;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ１５２Ｈ１５９Ｎ５Ｏ３５に対するｍ／ｚ計算値：１６１５．０７４１；実測値２６３８．０７５４（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化６６】
2019515876.tif 000068
【０４５０】
５−アジドペンチル−Ｏ−（２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→２）−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→２）−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−｛２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→２）−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノ−ピラノシル−（１→３）−［２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→２）−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−２，４−ジ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）｝−２−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−Ｏ−（３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコ−ピラノシル）−（１→４）−Ｏ−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド（Ｓ１０ｃ）：六糖アクセプターＳ１０ａ（０．１ｇ，０．０３８ｍｍｏｌ）、チオマンノシドドナー５（０．１０４ｇ，０．０４５ｍｍｏｌ）および活性化４Åモレキュラーシーブ（０．５ｇ）を含むＣＨ３ＣＮ（１０ｍＬ）の混合物をｒｔで１時間撹拌した。得られた混合物を−１０℃に冷却し、トリス（４−ブロモフェニル）アミニウムヘキサクロロアンチモネート（０．０９６ｇ，０．１１４ｍｍｏｌ）を加え、ｒｔｅで６時間撹拌した。ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン，２／８）が、出発物質の消費とともに生成物の形成を示したので、反応物をＥｔ３Ｎによってクエンチした。その反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、セライトで濾過した。濾液をＮａＨＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１０％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、Ｓ１０ｃ（０．０９５ｇ，５２％）を無色泡沫状物として得た。ＴＬＣ：（アセトン：トルエン＝２／８，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.41;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.77-7.50  (m,  8H,  Ar-H),  7.29-6.98  (m,  126H,  Ar-H),  6.95-6.89  (m,  4H,  Ar-H),  6.746.64  (m,  5H,  Ar-H),  5.56  (s,  1H,  H-2f),  5.53  (s,  1H,  H-2h),  5.51  (s,  1Hh'),  5.34  (s,  1H,  H-2c),  5.32  (d,  J  =  12.2  Hz,  2H),  5.18  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H),  5.12  (s,  1H),  5.08  (s,  1H),  5.04  (s,  2H),  4.59-3.75  (m,  116H),  3.26-3.16  (m,  4H),  3.08-3.02  (m,  2H),  2.93-2.83  (m,  2H),  2.12  (s,  3H),  2.06  (s,  3H),  2.06  (s,  3H),  1.97  (s,  3H),  1.39-1.26  (m,  4H),  1.07-1.05  (m,  2H);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  170.12,  170.03,  169.76,  168.14,  167.36,  138.64,  138.54,  138.45,  138.41,  138.27,  138.07,  133.68,  133.57,  131.74,  129.05,  128.62,  128.57,  128.51,  128.33,  128.23,  128.14,  128.06,  127.99,  127.94,  127.81,  127.78,  127.73,  127.45,  101.24,  99.81,  99.59,  99.48,  99.34,  99.24,  99.05,  98.02,  96.95,  79.82,  79.23,  78.33,  78.24,  78.14,  75.86,  75.22,  75.12,  75.02,  74.93,  74.77,  74.57,  74.47,  74.38,  74.30,  74.17,  73.29,  73.11,  72.50,  72.20,  71.94,  71.35,  71.25,  69.13,  69.03,  68.79,  68.53,  68.48,  68.35,  68.17,  67.40,  56.56,  55.69,  51.09,  28.66,  28.26,  22.99,  21.17,  21.12;ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）：Ｃ２８４Ｈ２９７Ｎ５Ｏ６２に対するｍ／ｚ計算値：４７７２．０２��２；実測値４７９４．９７８３（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化６７】
2019515876.tif 000069
【０４５１】
５−アミノペンチル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→２）−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→２）−α−Ｄ−マンノ−ピラノシル−（１→３）−｛α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→２）−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノ−ピラノシル−（１→２）−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）｝−β−Ｄ−マンノ−ピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（Ｇ６）：化合物Ｓ１０ｃ（０．１２０ｇ，０．０２４ｍｍｏｌ）を、一般的な手順２（方法１）に従うことによって脱保護して、Ｍａｎ９ＧｌｃＮＡｃ２  Ｇ６（０．０１２ｇ，２６％）を白色固体として得た。1H  NMR  (600  MHz,  D2O):  δ  5.40  (s,  1H,  H-1d),  5.33  (s,  1H,  H-1d'),  5.30  (s,  1H,  H-1e),  5.14  (s,  1H,  H-1),  5.05  (s,  1H,  H-1),  5.03  (d,  J  =2.4  Hz,  2H,  H-1),  4.86  (s,  1H,  H-1),  4.58  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H,  H-1a),  4.48  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H,  H-1b),  4.22  (d,  J  =  2.4  Hz,  1H),  4.14  (s,  1H),  4.143.95  (m,  12H),  3.94-3.59  (m,  54H),  3.50-3.48  (m,  1H),  3.02  (t,  J  =  9.2  Hz,  2H),  2.06  (s,  3H,  -C(O)CH3),  2.02  (s,  3H,  -C(O)CH3),1.68-1.63(m,2H,-CCH2C-,リンカー),1.59-1.56(m,2H,-CCH2C-,リンカー),1.41-1.37(m,2H,-CCH2C-,リンカー);13C  NMR  (150  MHz,  D2O):  δ  174.47,  171.01,  102.24  (C-1d,  1  J  C,H  =  171.8  Hz),  102.21  (C-1d',  1  J  C,H  =  169.0  Hz),  102.19  (C-1e,  1  J  C,H  =  173.8  Hz),  101.43,  101.03,  100.82,  100.59  (C-1a,  1  J  C,H  =  162.8  Hz),  100.21,  99.61,  97.97  (C-1b,  1  J  C,H  =  159.8  Hz),  81.86,  79.32,  78.88,  78.63,  78.45,  74.50,  74.48,  74.14,  73.39,  73.27,  73.20,  73.17,  72.69,  72.36,  71.90,  71.61,  70.21,  70.03,  69.93,  69.37,  67.01,  66.94,  66.90,  66.85,  66.81,  66.76,  65.42,  65.40,  65.07,  64.90,  61.11,  61.06,  61.01,  60.91,  60.06,  59.94,  54.95,  39.29,  38.61,  28.02,  26.34,  22.16,  22.10,  22.06;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ７５Ｈ１２９Ｎ３Ｏ５６に対するｍ／ｚ計算値：１９６７．７２３１；実測値１９９０．７２７９（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０４５２】
ハイブリッド型オリゴ糖（Ｇ７〜Ｇ１４）の合成  Ｓ
【化６８】
2019515876.tif 000070
図Ｓ２：ハイブリッド型グリカンおよびそれらのフラグメントの構造
【０４５３】
ハイブリッド型糖の合成を、ＡｇＯＴｆ／Ｃｐ２ＨｆＣｌ２によって触媒される１４と６との縮合から始めて、五糖Ｓ１１ａを６３％収率で得た（スキームＳ１１）。還元的ベンジリジン開環によって、ジオールＳ１１ｂが生じ、それをさらに、６”−Ｏにおいてトリマンノシルチオグリコシド３でグリコシル化して、Ｓ１１ｃを５５％収率で得た。Ｃｐ２ＨｆＣｌ２／ＡｇＯＴｆによって媒介されるアクセプターＳ１１ｂと６との縮合によって、Ｓ１１ｄが５８％収率で形成した。
【化６９】
2019515876.tif 000071
【０４５４】
スキームＳ１１：八糖Ｇ７および七糖Ｇ８の調製。ａ、６、ＡｇＯＴｆ、Ｃｐ２ＨｆＣｌ２、トルエン、４ÅＭＳ、−４０℃、４時間、６３％；ｂ、ｐＴｓＯＨ、ＣＨ３ＣＮ、５時間、７８％；ｃ、３、（ＢｒＣ６Ｈ４）３ＮＳｂＣｌ６、ＣＨ３ＣＮ、４ÅＭＳ、−１０℃〜ＲＴ、４時間、５５％；ｄ、６、ＡｇＯＴｆ、Ｃｐ２ＨｆＣｌ２、トルエン、４ÅＭＳ、−４０℃、４時間、５８％；ｅ，（１）ＮＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２、ｎＢｕＯＨ、９０℃、一晩；（２）Ａｃ２Ｏ、ピリジン、一晩；（３）ＮａＯＭｅ、ＭｅＯＨ、一晩；（４）Ｐｄ（ＯＨ）２、ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ：ＨＣＯＯＨ（５：３：２）、Ｈ２；Ｇ７：２６；Ｇ８：３２％。
【化７０】
2019515876.tif 000072
【０４５５】
５−アジドペンチル−Ｏ−２−Ｏ−アセチル−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコ−ピラノシル−（１→２）−Ｏ−（３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−２−Ｏ−アセチル−４，６−Ｏ−ベンジリジン−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−Ｏ−（３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド（Ｓ１１ａ）：トリクロロアセトイミデートドナー６（０．３４１ｇ，０．３０８ｍｍｏｌ）、キトビオースアクセプター１４（０．３５０ｇ，０．２５６ｍｍｏｌ）および活性化４Åモレキュラーシーブを含む乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）の混合物をｒｔで１時間撹拌した。その反応物を−４０℃に冷却し、次いで、三フッ化ホウ素エチルエーテラート（１４．８μＬ，０．１２９ｍｍｏｌ）をゆっくり加え、得られた反応混合物を２時間撹拌した。その反応物を、Ｅｔ３Ｎを加えることによってクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、セライトで濾過し、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１０％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、Ｓ１１ａ（０．３６０ｇ，６３％）を白色泡沫状物として得た。ＴＬＣ：（酢酸エチル：トルエン＝２／８，ｖ／ｖ）：Ｒｆ＝０．５６；1H  NMR(600MHz,CDCl3):δ7.84-7.55(m,12H,Ar-H),7.45-7.10(m,28H,Ar-H),7.06-6.90(m,18H,Ar-H),6.75-6.71(m,4H,Ar-H),5.37(d,J=8.4Hz,1H,H-1),5.21(d,J=8.4Hz,1H,H-1),5.19(s,1H,Ph-CH,ベンジリデン),5.09(t,J=9.0Hz,1H),4.93-4.76(m,6H),4.57(s,1H),4.54(d,J=12.0Hz,1H),4.45-4.07(m,20H),3.69-3.15(m,22H),3.02-3.00(m,1H),2.86-2.81(m,2H,リンカー),2.25(s,3H,-C(O)CH3),1.84(s,3H,-C(O)CH3),1.35-1.23(m,4H,-CCH2C-,リンカー),1.07-1.02(m,2H,-CCH2C-,リンカー);13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  170.68,  170.05,  167.88,  138.98,  138.89,  138.85,  138.71,  138.63,  138.14,  138.07,  137.78,  134.08,  133.90,  133.46,  132.06,  131.81,  129.32,  128.90,  128.83,  128.67,  128.55,  128.50,  128.34,  128.27,  127.95,  127.79,  127.70,  127.60,  101.00,  99.41,  98.38,  97.91,  97.29,  80.38,  79.02,  76.82,  76.76,  76.52,  76.14,  75.25,  74.90,  74.83,  74.67,  74.51,  74.44,  73.68,  73.52,  73.38,  73.06,  73.02,  72.93,  71.46,  70.65,  70.40,  70.03,  69.66,  69.14,  68.52,  67.56,  56.83,  55.98,  55.85,  51.37,  29.99,  28.95,  28.55,  23.28,  21.67,  21.19;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ１３３Ｈ１３２Ｎ６Ｏ３１に対するｍ／ｚ計算値：２３０９．８８６２；実測値２３３２．８８６１（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化７１】
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【０４５６】
５−アジドペンチル−Ｏ−２−Ｏ−アセチル−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコ−ピラノシル（１→２）−Ｏ−（３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−２−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−Ｏ−（３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド（Ｓ１１ｂ）：ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（０．０２０ｇ，０．１４３ｍｍｏｌ）を、Ｓ１１ａ（０．２２０ｇ，０．０９５ｍｍｏｌ）を含むアセトニトリル（２０ｍＬ）の溶液に加え、得られた反応混合物をｒｔで５時間撹拌した。その反応物を、Ｅｔ３Ｎを加えることによってクエンチし、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１５％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、ジオールＳ１１ｂ（０．１６５ｇ，７８％）を得た。ＴＬＣ：（酢酸エチル：トルエン＝２／８，ｖ／ｖ）：Ｒｆ＝０．３２；1H  NMR(600MHz,CDCl3):δ7.89-7.43(m,12H,Ar-H),7.35-7.16(m,28H,Ar-H),7.09-7.05(m,5H,Ar-H),7.03-6.89(m,9H,Ar-H),6.75-6.72(m,3H,Ar-H),5.30(d,J=8.4Hz,1H,H-1a),5.23(d,J=8.4Hz,1H,H-1b),5.12(d,J=9.0Hz,1H),5.09(t,J=9.8Hz,1H),4.95(d,J=12.0Hz,1H),4.90(d,J=8.4Hz,1H,H-1e),4.87-4.80(m,2H),4.58-4.55(m,2H),4.50-4.41(m,10H,重複,H-1d),4.37-4.34(m,3H),4.27-4.24(m,2H),4.18-4.15(m,2H),4.10-3.92(m,5H),3.73-3.70(m,2H),3.65-3.61(m,2H),3.59-3.51(m,5H),3.47-3.38(m,6H),3.23-3.17(m,4H),3.04(dd,J=3.6,9.0Hz,1H),3.01-3.98(m,1H),2.83-2.78(m,3H),2.38(s,3H,-C(O)CH3),1.90(s,3H,-C(O)CH3),1.36-1.22(m,4H,-CCH2C-,リンカー),1.06-1.01(m,2H,-CCH2C-,リンカー);13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  170.93,  170.05,  168.77,  167.86,  167.69,  138.90,  138.83,  138.65,  138.47,  138.23,  138.14,  138.07,  138.04,  134.35,  134.13,  133.91,  132.04,  131.84,  131.72,  128.81,  128.65,  128.64,  128.62,  128.54,  128.53,  128.48,  128.46,  128.36,  128.17,  128.09,  128.02,  127.99,  127.97,  127.92,  127.91,  127.83,  127.77,  127.74,  127.63,  127.13,  124.73,  123.97,  123.43,  123.08,  118.73,  100.25  (C-1e),  98.37  (C-1d),  98.21  (C-1c),  97.86  (C-1b),  97.30  (C-1a),  82.86,  80.05,  78.38,  76.92,  76.15,  75.72,  75.60,  75.45,  74.86,  74.83,  74.70,  74.42,  74.24,  73.75,  73.42,  73.38,  72.82,  70.81,  70.60,  70.27,  69.99,  69.50,  69.15,  69.13,  68.53,  67.88,  66.28,  62.98,  56.78,  55.99,  55.88,  51.37,  32.21,  29.98,  28.94,  28.54,  23.27,  21.69,  21.18;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ１２６Ｈ１２８Ｎ６Ｏ３１に対するｍ／ｚ計算値：２２２１．８５４９；実測値２２４４．８５２９（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化７２】
2019515876.tif 000074
【０４５７】
５−アジドペンチル−Ｏ−｛４−Ｏ−アセチル−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコ−ピラノシル−（１→２）｝−Ｏ−｛３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−｛２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）｝−［２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノ−ピラノシル（１→６）］−２，４−ジ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）｝−２−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−マンノ−ピラノシル−（１→４）−Ｏ−（３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド（Ｓ１１ｃ）：五糖アクセプターＳ１１ｂ（０．１５０ｇ，０．０６７ｍｍｏｌ）、チオマンノシドドナー３（０．１１０ｇ，０．０８０ｍｍｏｌ）および活性化４Åモレキュラーシーブ（０．５００ｇ）を含むＣＨ３ＣＮ（１０ｍＬ）の混合物をｒｔで１時間撹拌した。得られた混合物を−１０℃に冷却し、トリス（４−ブロモフェニル）アミニウムヘキサクロロアンチモネート（０．１７０ｇ，０．２０１ｍｍｏｌ）を加え、得られた反応物を室温で４時間撹拌した。ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン，２／８）が、出発物質の消費とともに生成物の形成を示したので、その反応物をＥｔ３Ｎによってクエンチした。その反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、セライトで濾過した。濾液をＮａＨＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１０％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、Ｓ１１ｃ（０．１３０ｇ，５５％）を無色泡沫状物として得た。ＴＬＣ：（酢酸エチル：トルエン＝１／９，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.42;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.71-7.30  (m,  8H,  Ar-H),  7.28-7.10  (m,  70H,  Ar-H),  7.97-6.86  (m,  12H,  Ar-H),  6.69  (m,  7H,  Ar-H),  5.47  (d,  J  =  8.4  Hz,  2H),  5.44  (s,  1H),  5.32  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H,  H-1a),  5.15  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H,  H-1b),  5.13-5.10  (m,  2H),  5.00  (s,  1H,  H-1d),  4.95  (s,  1H,  H-1f),  4.91  (s,  2H,  H-1g,  H-1g’),  4.87-4.73  (m,  8H),  4.62  (d,  J  =  8.7  Hz,  1H),  4.57-4.28  (m,  26H),  4.15-3.70  (m,  20H),  3.68-3.40  (m,  15H),  3.38-3.25  (m,  6H),  3.24-3.09  (m,  5H),  2.98  (dd,  J  =  2.3,  7.8Hz,  1H),  2.89-2.79  (m,  2H),  2.73-2.71  (m,  1H),  2.27  (s,  3H,  -C(O)CH3),  2.05  (s,  3H,  -C(O)CH3),  1.99  (s,  3H,  -C(O)CH3),  1.88  (s,  3H,  -C(O)CH3),1.32-1.28(m,4H,-CCH2C-,リンカー),1.07-0.98(m,2H,-CCH2C-,リンカー);13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  170.26,  168.89,  138.38,  128.47,  128.37,  128.32,  128.30,  128.26,  128.24,  128.19,  128.08,  128.04,  127.91,  127.86,  127.73,  127.56,  127.49,  127.39,  127.26,  100.35,  100.23,  99.89,  99.56,  99.23,  98.54,  98.33,  98.23,  78.43,  76.09,  75.37,  75.07,  74.08,  74.44,  74.04,  73.47,  73.31,  72.63,  68.81,  51.08,  29.71,  29.37,  28.66,  28.25,  22.98;ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）：Ｃ２０４Ｈ２１０Ｎ６Ｏ４８に対するｍ／ｚ計算値；３５１３．４１３４  実測値３５３６．４０５０（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化７３】
2019515876.tif 000075
【０４５８】
５−アミノペンチル−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３），［ジ−（α−Ｄ−マンノピラノシル）−（１→３），（１→６）−α−Ｄ−マンノピラノシル］（１→６）−β−Ｄ−マンノ−ピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（Ｇ７）：化合物Ｓ１１ｃ（０．１０５ｇ，０．０３０ｍｍｏｌ）を、一般的な手順２（方法１）に従うことによって脱保護して、表題化合物Ｇ７（０．０１２ｇ，２６％）を白色固体として得た。1H  NMR  (600  MHz,  D2O):  δ  5.09  (d,  J  =  1.2  Hz,  1H,  H-1d),  5.02  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H,  H-1a),  4.95  (s,  1H,  H-1f),  4.91  (s,  1H,  H-1g),  4.85  (s,  1H,  H-1g'),  4.78  (S,  1H,  H-1c),  4.61  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H,  H-1e),  4.51  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H,  H-1b),  4.22  (t,  J  =  10.2  Hz,  2H),  4.18  (dd,  J  =  1.8,  3.0  Hz,  1H),  4.00  (dd,  J  =  1.8,  3.1  Hz,  1H),  4.08-3.38  (m,  47H),3.03(t,J=8.2Hz,2H,-NCH2-,リンカー),2.09(s,3H,-C(O)CH3),2.08(s,3H,-C(O)CH3),2.01(s,3H,-C(O)CH3),1.71-1.66(m,2H,-CCH2C-,リンカー),1.62-1.59(m,2H,-CCH2C-,リンカー),1.44-1.40(m,2H,-CCH2C-,リンカー);13C  NMR  (150  MHz,  D2O):  δ  174.91,  174.42,  171.02,  110.64  (C-1d,  1  J  C,H  =174  Hz  ),  102.32,  101.48,  100.51  (C-1a,  1  J  C,H  =  161  Hz  ),  100.44,  100.15,  99.26,  97.58  (C-1g,  1  J  C,H  =169.6  Hz),  79.48,  78.86,  78.72,  76.64,  76.04,  75.72,  74.65,  74.51,  74.42,  73.31,  72.69,  72.35,  72.09,  71.96,  70.86,  70.57,  70.34,  70.12,  70.09,  69.94,  69.42,  67.39,  66.70,  66.36,  65.54,  65.14,  61.68,  61.02,  60.93,  39.31,  38.62,  28,03,  26.39,  22.58,  22.20,  22.11,  22.08,  21.82;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ５９Ｈ１０２Ｎ４Ｏ４１に対するｍ／ｚ計算値；１５２２．６０９２  実測値１５２３．６１４８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【化７４】
2019515876.tif 000076
【０４５９】
５−アジドペンチル−Ｏ−ジ−［｛４−Ｏ−アセチル−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコ−ピラノシ−（１→２）｝−Ｏ−｛３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル｝］−（１→３），（１→６）−２−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−Ｏ−（３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド（Ｓ１１ｄ）：銀トリフレート（０．０８０ｇ，０．３１５ｍｍｏｌ）、ビス（シクロペンタジエニル）ハフニウムジクロリド（０．０８４ｇ，０．２２０ｍｍｏｌ）および４Å活性化モレキュラーシーブを含む乾燥トルエン（１０ｍＬ）の混合物をｒｔで１時間撹拌した。次いで、その反応混合物を−４０℃に冷却し、ドナー６（０．０９１ｇ，０．０９４ｍｍｏｌ）およびアクセプターＳ１１ｂ（０．１４０ｇ，０．０６３ｍｍｏｌ）を含む５ｍＬのトルエンの溶液を加えた。その混合物を４時間撹拌し、Ｅｔ３Ｎでクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、セライトで濾過した。濾液をＮａＨＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１５％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、Ｓ１１ｄ（０．１１０ｇ，５８％）を無色泡沫状物として得た。ＴＬＣ：（アセトン：トルエン＝２／８，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.39;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.62-7.32  (m,  16H,  Ar-H),  7.27-6.87  (m,  41H,  Ar-H),  6.85-6.59  (m,  29H,  Ar-H),  5.27  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  5.16  (s,  1H),  5.14  (d,  J  =  3.6  Hz,  1H),  5.10  (d,  J  =  1.8  Hz,  1H),  4.98  (d,  J  =  3.6  Hz,  1H),  4.89-4.68  (m,  10H),  4.59-4.21  (m,  21H),  4.19-3.87  (m,  7H),  3.80  (dd,  J  =  3.2,  1.8  Hz,  1H),  3.70-3.52  (m,  7H),  3.51-3.28  (m,  8H),  3.27-3.18  (m,  5H),  3.15-3.03  (m,  3H),  3.01  (dd,  J  =  3.2,  1.8  Hz,  1H),  2.912.75  (m,  5H),  2.73-2.69  (m,  1H),  2.27  (s,  3H),  1.98  (s,  3H),  1.86  (s,  3H),  1.32-1.23  (m,  4H),  1.03-0.99  (m,  2H);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  171.09,  171.04,  170094,  167.91,  167.57,  139.19,  138.86,  138.63,  138.54,  138.42,  138.31,  138.21,  138.14,  137.93,  133.84,  133.71,  132.04,  131.80,  131.69,  128.80,  128.64,  128.39,  128.32,  128.13,  128.08,  127.79,  127.70,  127.60,  100.18,  100.00,  98.36,  97.88,  97.61,  97.30,  97.22,  80.14,  79.97,  79.31,  75.85,  75.56,  75.39,  75.30,  75.04,  74.71,  74.59,  73.95,  73.64,  73.24,  72.86,  72.14,  71.55,  71.37,  71.04,  70.53,  70.40,  70.15,  69.71,  69.12,  68.12,  65.40,  63.29,  56.34,  55.92,  51.45,  51.37,  51.27,  28.95,  28.54,  23.26,  21.13,  21.02;ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）：Ｃ１８３Ｈ１８３Ｎ７Ｏ４３に対するｍ／ｚ計算値；３１６８．２３０６  実測値３１９１．２３７５（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化７５】
2019515876.tif 000077
【０４６０】
５−アミノペンチル−ジ−［２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−α−Ｄ−マンノピラノシル］−（１→３），（１→６）−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（Ｇ８）：化合物Ｓ１１ｄ（０．１３０ｇ，０．０４１ｍｍｏｌ）を、一般的な手順２（方法１）に従うことによって脱保護して、所望の七糖Ｇ８（０．０１５ｇ，２９％）を白色固体として得た。1H  NMR  (600  MHz,  D2O):  δ  5.99  (d,  J  =  8.5Hz,  1H,  H-1a),  4.93  (s,  1H,  H-1d),  4.83  (s,  1H,  H-1d'),  4.76  (s,  1H,  H-1c),  4.60  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H,  H-1b),  4.56  (d,  J  =  7.9  Hz,  1H,  H-1e),  4.49  (d,  J  =  7.9  Hz,  1H,  H-1e'),  4.27  (s,  2H),  4.11  (d,  J  =  1.8  Hz,  1H),  3.96-3.41  (m,  41H),2.98(t,J=8.9Hz,2H,-NCH2-,リンカー),2.13(s,3H,C(O)CH3),2.09(s,3H,-C(O)CH3),2.06(s,3H,-C(O)CH3),2.01(s,3H,-C(O)CH3),1.69-1.64(m,2H,-CCH2C-,リンカー),1.60-1.57(m,2H,-CCH2C-,リンカー),1.42-1.38(m,2H,-CCH2C-,リンカー);13C  NMR  (150  MHz,  D2O):  δ  174.88,  174.78,  174.65,  174.42,  171.0,  101.39,  101.05,  100.61  (C-1c),  100.39  (C-1a),  99.55  (C-1e'),  97.60  (C-1d'),  97.20  (C-1d),  79.41,  79.28,  78.92,  76.63,  76.25,  75.79,  74.50,  73.64,  72.84,  71.95,  70.09,  69.89,  69.48,  67.39,  67.35,  66.20,  65.39,  61.66,  61.61,  60.75,  60.61,  59.96,  55.68,  54.98,  54.94,  39.30,  28.04,  26.35,  22.55,  22.31,  22.21,  22.12,  22.08;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ５５Ｈ９５Ｎ５Ｏ３６に対するｍ／ｚ計算値；１４０２．５８３０；実測値１４０３．５８６２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０４６１】
グリカンＧ１２〜Ｇ１４の調製
【０４６２】
コア三糖アクセプター１４の３−Ｏ位における三糖分岐７の立体選択的な導入を、Ｃｐ２ＨｆＣｌ２／ＡｇＯＴｆの促進下において行って、六糖Ｓ１２ａを得た。ｐ−トルエンスルホン酸によって媒介されるＳ１２ａの還元的開環によって、ジオールＳ１２ｂが生じた。第一級ヒドロキシルのより高い反応性を考慮して、Ｓ１２ｂを６−Ｏ位においてトリマンノシルチオグリコシド３でさらにグリコシル化し、次いで、安定なラジカルカチオンであるトリス（４−ブロモフェニル）アミニウムヘキサクロロアンチモネートによって一電子移動反応において活性化して、九糖Ｓ１２ｃを得た。検討中の化合物Ｓ１２ｃを用いて、一連の官能基の変換を行って、所望の完全に脱保護されたグリカンＧ１２を得た。前駆体オリゴ糖Ｇ１２は、そのより広いアクセプター特異性および固有でないシアリダーゼ活性で知られている、海洋細菌に由来するα−２，６または２，３シアリルトランスフェラーゼによるシアリル化に対する適切な出発物質である。シアリルトランスフェラーゼ（ＳｉａＴ）によって媒介されるＧ１２の酵素的な末端のシアリル化１〜４は、それぞれα−２，６およびα−２，３シアリル化されたグリカンＧ１３およびＧ１４の入手を効率的に可能にした（スキームＳ１２）。
【化７６】
2019515876.tif 000078
【０４６３】
スキームＳ１２：Ｇ１２〜Ｇ１４の調製。ｉ）７、Ｃｐ２ＨｆＣｌ２、ＡｇＯＴｆ、４ÅＭＳ、−４０℃、２時間、６３％；ｉｉ）ｐ−ＴｓＯＨ、ＣＨ３ＣＮ、５時間、７８％；ｉｉｉ）３，（ＢｒＣ６Ｈ４）３ＮＳｂＣｌ６、ＣＨ３ＣＮ、４ÅＭＳ、−１０℃〜ＲＴ、４時間、５５％；ｉｖ）（１）ＮＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２、ｎ−ＢｕＯＨ、９０℃、一晩；（２）Ａｃ２Ｏ、ピリジン、一晩；（３）ＮａＯＭｅ、ＭｅＯＨ、一晩；（４）Ｐｄ（ＯＨ）２、ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ：ＨＣＯＯＨ（５：３：２）、Ｈ２；６２％；ｖ）ＣＭＰ−β−Ｄ−シアル酸、α−２，６−または２，３−シアリルトランスフェラーゼ、Ｇ１３：６０％；Ｇ１４：５６％；Ｃｐ２ＨｆＣｌ２：ビス（シクロペンタジエニル）ハフニウムジクロリド；ＡｇＯＴｆ：トリフルオロメタンスルホン酸銀；（ＢｒＣ６Ｈ４）３ＮＳｂＣｌ６：トリス（４−ブロモフェニル）アミニウムヘキサクロロアンチモネート。
【化７７】
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【０４６４】
５−アジドペンチル−Ｏ−２−Ｏ−アセチル−３，４，６−Ｏ−トリ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−Ｏ−（３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−２−Ｏ−アセチル−４，６−Ｏ−ベンジリジン−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−Ｏ−（３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド（Ｓ１２ａ）：銀トリフレート（０．３２７ｇ，１．２８ｍｍｏｌ）、ビス（シクロペンタジエニル）ハフニウムジクロリド（０．３３９ｇ，０．８９６ｍｍｏｌ）および４Å活性化モレキュラーシーブを含む乾燥トルエン（１０ｍＬ）の混合物をｒｔで１時間撹拌した。次いで、その反応混合物を−４０℃に冷却し、ドナー７（０．４３０ｇ，０．３０７ｍｍｏｌ）およびアクセプターであるキトビオース三糖１４（０．３５ｇ，０．２５６ｍｍｏｌ）を含む５ｍＬのトルエンの溶液を加えた。その混合物を２時間撹拌し、Ｅｔ３Ｎでクエンチし、ＥｔＯＡｃで希釈し、セライトで濾過した。濾液をＮａＨＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１５％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、Ｓ１２ａ（０．５００ｇ，７１％）を白色泡沫状物として得た。ＴＬＣ：（酢酸エチル：トルエン＝２／８，ｖ／ｖ）：Ｒｆ＝０．６２；1H  NMR(600MHz,CDCl3):δ7.85-7.49(m,8H,Ar-H),7.02-7.39(m,44H,Ar-H),7.19-7.02(m,11H,Ar-H),6.99-6.90(m,6H,Ar-H),6.83-6.78(m,3H,Ar-H),6.75-6.70(m,5H,Ar-H),5.310(t,J=7.5Hz,1H,H-2f),5.27(d,J=8.1Hz,1H,H-1a),5.25(d,J=8.4Hz,1H,H-1e),5.15(d,J=2.3Hz,1H),5.01(s,1H,Ph-CH,ベンジリデン),4.90-4.80(m,7H),4.62(d,J=8.5Hz,1H),4.58-4.53(m,3H),4.52-4.38(m,10H),4.32-4.13(m,11H),4.12-4.05(m,5H),4.02(m,1H),3.89(d,J=3.2Hz,1H),3.75-3.73(m,2H),3.72-3.49(m,8H),3.48-3.37(m,5H),3.34-3.29(m,4H),3.29-3.18(m,4H),2.98(m,1H),2.89-2.79(m,2H,リンカー),2.29(s,3H,-C(O)CH3),1.99(s,3H,-C(O)CH3),1.49-1.30(m,4H,-CCH2C-),1.10-1.00(m,2H,-CCH2C-);13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  170.8,  169.4,  168.7,  167.7,  139.1,  139.9,  138.9,  138.8,  138.8,  138.5,  138.2,  138.2,  138.1,  137.9,  137.6,  134.2,  133.8,  133.1,  131.9,  131.8,  131.6,  129.1,  128.8,  128.6,  128.5,  128.4,  128.4,  128.4,  128.3,  128.3,  128.2,  128.1,  128.0,  128.0,  127.9,  127.8,  127.8,  127.7,  127.7,  127.5,  127.5,  127.4,  127.3,  127.0,  126.7,  126.1,  123.8,  123.3,  122.8,  100.88,  100.83,  99.94,  99.38,  98.43,  98.30,  97.26,  80.31,  79.00,  78.05,  77.61,  76.42,  76.31,  76.1,.  75.1,  74.8,  74.7,  74.6,  74.6,  74.4,  74.4,  74.2,  73.6,  73.4,  73.3,  72.9,  72.8,  72.2,  71.8,  71.7,  70.4,  70.0,  69.8,  69.0,  68.8,  68.4,  68.2,  67.7,  67.6,  56.7  56.0,  55.9,  51.3,  28.8,  28.4,  23.2,  21.7,  21.2;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ１６０Ｈ１６０Ｎ６Ｏ３６に対するｍ／ｚ計算値；２７４２．０７９９  実測値２７６５．０９５２（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化７８】
2019515876.tif 000080
【０４６５】
５−アジドペンチル−Ｏ−２−Ｏ−アセチル−３，４，６−Ｏ−トリ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−Ｏ−（３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−２−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−Ｏ−（３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド（Ｓ１２ｂ）：Ｓ１２ａ（０．６０１ｇ，０．２１９ｍｍｏｌ）を含むアセトニトリル（１０ｍＬ）の溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（０．０４６ｇ，０．３２８ｍｍｏｌ）を加え、ｒｔで２時間撹拌した。その反応物をＥｔ３Ｎでクエンチし、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１５％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、ジオールＳ１２ｂ（０．４６０ｇ，７８％）を得た。ＴＬＣ：（アセトン：トルエン＝２／８，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.32;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.91-7.42  (m,  12H,  Ar-H),  7.39-7.12  (m,  41H,  Ar-H),  7.10-6.93  (m,  13H,  Ar-H),  6.85-6.81  (m,  3H,  Ar-H),  6.78-6.73  (m,  3H,  Ar-H),  5.33  (t,  J  =  7.8  Hz,  1H,  H-2f),  5.23  (t,  J  =  8.4  Hz,  2H,  H-1),  5.08  (d,  J  =  6.2  Hz,  1H),  4.97  (d,  J  =  8.9  Hz,  1H,  H-1),  4.94-4.80  (m,  5H),  4.64-4.60  (m,  2H),  4.49-4.21  (m,  21H),  4.19-4.15  (m,  2H),  4.15-3.89  (m,  8H),  3.89  (d,  J  =  6.2  Hz,  1H),  3.78  (d,  J  =  5.8  Hz,  1H),  3.69  (dd,  J  =  6.3,  12.1  Hz,  1H),  3.65-3.64  (m,  1H),  3.56-3.32  (m,  15H),  3.29  (dd,  J  =  6.6,  12.5  Hz,  1H),  3.29-3.23  (m,  3H),  3.00-2.99  (m,  2H),  2.87-2.82  (m,  2H),  2.74  (t,  J  =  9.5Hz,  1H),  2.28  (s,  3H,  -C(O)CH3),  1.98  (s,  3H,  -C(O)CH3),  1.37-1.22  (m,  4H,  -CCH2C-),  1.07-1.00  (m,  2H,  -CCH2C-);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  171.29,  169.57,  168.78,  168.58,  168.03,  167.90,  139.01,  138.92,  138.84,  138.68,  138.45,  138.39,  138.36,  138.22,  138.14,  137.98,  134.35,  134.15,  134.02,  133.89,  132.04,  131.95,  131.68,  130.10,  129.54,  129.46,  128.80,  128.70,  128.66,  128.62,  128.60,  128.52,  128.47,  128.46,  128.39,  128.30,  128.15,  128.07,  128.01,  127.98,  127.94,  127.91,  127.83,  127.72,  127.60,  127.39,  127.20,  126.96,  123.90,  123.46,  122.88,  101.11,  100.87,  98.87,  98.33,  83.75,  80.57,  80.14,  78.58,  78.29,  76.15,  75.78,  75.45,  74.11,  74.96,  74.83,  74.70,  74.61,  74.44,  74.10,  73.77,  73.73,  73.59,  73.43,  73.38,  73.03,  72.30,  71.97,  70.61,  70.29,  69.82,  69.14,  69.08,  68.54,  68.38,  67.94,  66.94,  66.47,  63.21,  56.80,  56.09,  56.01,  51.37,  31.71,  31.21,  30.97,  30.59,  29.99,  29.65,  28.55,  27.87,  27.29,  26.96,  26.24,  25.59,  25.36,  24.26,  23.27,  22.98,  21.86,  21.32,  20.80,  20.49,  18.94,  16.76,  15.95,  15.44,  15.10,  14.40,  14.07,  13.67,  13.47;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ１５３Ｈ１５６Ｎ６Ｏ３６に対するｍ／ｚ計算値；１３２７．０１８９；実測値１３５０．０２０７（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化７９】
2019515876.tif 000081
【０４６６】
５−アジドペンチル−Ｏ−｛２−Ｏ−アセチル−３，４，６−Ｏ−トリ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）｝−Ｏ−｛３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）｝−Ｏ−｛３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−｛２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）｝−［２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−２，４−ジ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノ−ピラノシル−（１→６）｝−２−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−Ｏ−（３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド（Ｓ１２ｃ）：六糖アクセプターＳ１２ｂ（０．４０ｇ，０．１５ｍｍｏｌ）、チオマンノシドドナー３（０．２２９ｇ，０．２２６ｍｍｏｌ）および活性化４Åモレキュラーシーブ（０．５０ｇ）を含むＣＨ３ＣＮ（１０ｍＬ）の混合物をｒｔで１時間撹拌した。得られた混合物を−１０℃に冷却し、トリス（４−ブロモフェニル）アミニウムヘキサクロロアンチモネート（０．２５４ｇ，０．３０ｍｍｏｌ）を加え、ｒｔで３時間撹拌した。ＴＬＣが、出発物質の消費とともに生成物の形成を示したので、次いで、その反応物をＥｔ３Ｎによってクエンチした。その反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、セライトで濾過した。濾液をＮａＨＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１０％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、Ｓ１２ｃ（０．３３５ｇ，５５％）を無色泡沫状物として、そしてアクセプター９（０．１０３ｇ）を得た。ＴＬＣ：（酢酸エチル：トルエン＝１／９，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.46;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.72-7.45  (m,  11H,  Ar-H),  7.37-7.28  (m,  5H,  Ar-H),  7.28-7.12  (m,  67H,  Ar-H),  7.09-7.02  (m,  12H,  Ar-H),  6.94-6.90  (m,  7H,  Ar-H),  6.80-6.78  (m,  4H,  Ar-H),  6.696.68  (m,  3H,  Ar-H),  6.62-6.61  (m,  3H,  Ar-H),  5.49  (s,  1H),  5.48  (s,  1H),  5.35  (t,  J  =  8.4  Hz,  1H),  5.28  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H,  H-1),  5.17  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H,  H-1),  5.09  (d,  J  =  6.2  Hz,  1H),  5.00  (s,  1H,  H-1),  4.92  (d,  J  =  3.1  Hz,  1H),  4.90-4.72  (m,  12H),  4.69-4.72  (m,  23H),  4.26-4.17  (m,  5H),  4.133.97  (m,  12H),  3.89-3.82  (m,  12H),  3.72  (t,  1H),  3.68-3.62  (m,  1H),  3.65-3.55  (m,  7H),  3.54-3.45  (m,  4H),  3.43-3.40  (m,  4H),  3.40-3.29  (m,  9H),  3.23-3.19  (m,  3H),  3.17-3.09  (m,  2H),  2.91-2.79  (m,  3H),  2.68  (s,  1H),  2.28  (s,  3H,  -C(O)CH3),  2.05  (s,  3H,  -C(O)CH3),  2.01  (s,  3H,  -C(O)CH3),  1.99  (s,  3H,  -C(O)CH3),1.34-1.22(m,4H,リンカー),1.06-1.00(m,2H,リンカー);13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  171.37,  170.38,  170.29,  169.54,  168.49,  168.23,  167.97,  167.53,  139.28,  139.11,  139.03,  138.97,  138.94,  138.67,  138.63,  138.58,  138.53,  138.41,  138.38,  138.25,  138.10,  128.74,  128.70,  128.67,  128.63,  128.58,  128.55,  128.53,  128.51,  128.48,  128.44,  128.40,  128.37,  128.34,  128.30,  128.15,  128.03,  128.00,  127.95,  127.92,  127.84,  127.77,  127.75,  127.70,  127.64,  127.61,  101.17,  100.92,  98.84,  98.28,  97.71,  97.45,  75.49,  75.36,  75.26,  75.17,  75.06,  74.96,  74.82,  74.75,  74.65,  74.60,  74.38,  74.30,  73.99,  73.77,  73.73,  73.59,  73.25,  73.25,  73.06,  72.99,  72.91,  72.26,  72.18,  71.98,  71.82,  71.57,  71.45,  70.52,  70.03,  69.92,  69.56,  69.10,  68.90,  68.85,  68.57,  68.48,  68.37,  66.64,  66.06,  56.75,  56.09,  55.99,  51.37,  34.25,  29.99,  28.94,  28.54,  25.90,  23.27,  21.86,  21.42,  21.33;ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）：Ｃ２３１Ｈ２３８Ｎ６Ｏ５３に対するｍ／ｚ計算値；３９４５．６０７１；実測値３９６８．６００６（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化８０】
2019515876.tif 000082
【０４６７】
５−アミノペンチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−［２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコ−ピラノシル−（１→２）−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３），［ジ−（α−Ｄ−マンノピラノシル）−（１→３），（１→６）−α−Ｄ−マンノ−ピラノシル］（１→６）−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコ−ピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（Ｇ１２）：化合物Ｓ１２ｃ（０．１６ｇ，０．０４８ｍｍｏｌ）を、一般的な手順２（方法１）に従うことによって脱保護して、所望の九糖Ｇ１２（０．０５２ｇ，６２％）を得た。1H  NMR  (600  MHz,  D2O):  δ  5.10  (s,  1H,  H-1d),  5.07  (d,  J  =  9.5  Hz,  1H,  H-1a),  4.91  (s,  2H,  H-1h,h'),  4.84  (s,  1H,  H-1f),  4.61(s,  1H,  H-1c),  4.50  (d,  J  =  9.2  Hz,  1H,  H-1b),  4.49  (d,  J  =  8.1  Hz,  1H,  H-1e),  4.31  (s,  2H),  4.19  (bs,  1H),  4.07  (bs,  1H),  4.023.51  (m,  53H),3.40-3.30(m,2H)2.99(t,J=11.2Hz,2H,-NCH2-,リンカー),2.08(s,3H,-C(O)CH3),2.07(s,3H,-C(O)CH3),2.04(s,3H,-C(O)CH3),1.70-1.65(m,2H,-CCH2C-,リンカー),1.62-1.58(m,2H,-CCH2C-,リンカー),1.48-1.38(m,2H,-CCH2C-,リンカー);13C  NMR  (150  MHz,  D2O):  δ  177.60,  177.17,  105.68  (C-1b),  105.05  (C-1d),  104.23,  104.04,  103.79,  103.37,  103.18,  102.88,  102.23  (C-1h'),  102.03  (C-1h),  100.24  (C-1g),  82.20,  82.06,  82.01,  81.58,  81.51,  81.40,  79.38,  78.70,  78.08,  77.43,  77.37,  77.18,  77.03,  76.07,  75.66,  75.43,  75.23,  75.11,  75.06,  74.96,  74.83,  74.71,  73.72,  73.65,  73.33,  73.20,  73.11,  72.95,  72.89,  72.84,  72.69,  72.18,  71.28,  70.15,  68.50,  69.46,  69.36,  69.01,  68.31,  67.90,  67.86,  64.45,  63.75,  63.69,  63.61,  62.87,  62.82,  62.75,  57.94,  57.72,  42.06,  30.78,  29.10,  25.35,  25.30,  24.96,  24.87,  24.83;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ６５Ｈ１１２Ｎ４Ｏ４６に対するｍ／ｚ計算値；１６８４．６６２０  実測値１６８５．６９６８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【化８１】
2019515876.tif 000083
【０４６８】
５−アミノペンチル−５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノ−シロネート−（２→６）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−［２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３），［ジ−（α−Ｄ−マンノピラノシル）−（１→３），（１→６）−α−Ｄ−マンノ−ピラノシル］（１→６）−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（Ｇ１３）：化合物Ｇ１２（５ｍｇ，０．００２９ｍｍｏｌ）を、一般的な手順３に従うことによってα−２，６−シアリルトランスフェラーゼを用いて２日間シアリル化して、所望の表題化合物Ｇ１３（３．５ｍｇ，６０％）を白色固体として得た。1H  NMR  (600  MHz,  D2O):  δ  5.07  (s,  1H,  H-1d),  5.06  (d,  J  =  8.5  Hz,  1H,  H-1a),  4.92  (s,  1H,  H-1h),  4.90  (s,  1Hi),  4.89  (s,  1H,  H-1i'),  4.78  (s,  1H,  H-1c),  4.58  (d,  J  =  7.2  Hz,  1H,  H-1f),  4.46  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H,  H-1b),  4.41  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H,  H-1e),  4.25-4.24  (m,  2H),  4.12  (s,  1H),  4.04  (d,  J  =  4.7  Hz,  1H),  4.04-3.42  (m,  61H),  3.40  (t,  J  =  10.8  Hz,  1H),  3.39-3.35  (m,  1H),  2.95  (t,  J  =  10.9  Hz,  2H),2.64(dd,J=4.2,12.2Hz,1H,H-3エクアトリアル  g),2.04(s,3H,-C(O)CH3),2.04(s,3H,-C(O)CH3),2.00(s,3H,-C(O)CH3),2.00(s,3H,-C(O)CH3),1.71-1.61(m,3H,-CCH2C-,リンカーおよびＨ−３アキシャル  g),1.58-1.54(m,2H,-CCH2C-,リンカー),1.39-1.35(m,2H,-CCH2C-,リンカー);13C  NMR  (150  MHz,  D2O):  δ  174.90,  174.79,  174.38,  173.47,  103.42,  102.29  (C-1d,  1  J  C,H  =  170.9  Hz),  101.48,  101.01,  100.41,  100.18  (C-1a,  1  J  C,H  =  162.9  Hz),  100.15,  99.24  ((C-1h,  1  J  C,H  =  171.3  Hz)),  97.87,  97.27,  80.78,  79.59,  79.20,  78.72,  78.36,  76.61,  75.81,  74.79,  74.48,  74.36,  73.63,  73.28,  72.63,  72.52,  72.35,  72.30,  72.09,  71.94,  71.65,  70.82,  70.69,  70.53,  70.31,  70.12,  70.05,  69.89,  69.41,  68.33,  68.17,  67.32,  67.17,  66.66,  65.47,  65.09,  63.30,  62.62,  61.66,  60.98,  60.89,  60.32,  60.02,  59.94,  57.95,  54.91,  51.81,  40.01,  39.27,  28.00,  26.37,  23.62,  23.19,  22.59,  22.17,  22.05,  22.00;ＥＳＩ−ＭＳ（ネガティブモード）：Ｃ７６Ｈ１２９Ｎ５Ｏ５４に対するｍ／ｚ計算値；１９７５．７４１８  実測値１９７４．７６００（Ｍ−Ｈ）−。
【化８２】
2019515876.tif 000084
【０４６９】
５−アミノペンチル−５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノ−シロネート−（２→３）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−［２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３），［ジ−（α−Ｄ−マンノピラノシル）−（１→３），（１→６）−α−Ｄ−マンノ−ピラノシル］（１→６）−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（Ｇ１４）：化合物Ｇ１２（５ｍｇ，０．００２９ｍｍｏｌ）を、一般的な手順３に従うことによってα−２，３−シアリルトランスフェラーゼを用いて８日間シアリル化して、所望の表題化合物Ｇ１４（３．１ｍｇ，５６％）を白色固体として得た。1H  NMR  (600  MHz,  D2O):  δ  5.01  (s,  1H,  H-1d),  4.97  (dd,  J  =  3.2,  7.2  Hz,  1H,  H-1a),  4.84  (s,  1H,  H-1h),  4.81  (s,  1H,  H-1i),  4.75  (s,  1H,  H-1i'),  4.62  (s,  1H,  H-1c),  4.52  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H,  H-1f),  4.97  (d,  J  =  9.2  Hz,  1H,  H-1b),  4.42  (d,  J  =  8.3  Hz,  1H,  H-1e),  4.39  (d,  J  =  8.3  Hz,  1H),  4.22  (t,  J  =  7.8  Hz,  2H),  4.09  (s,  1H),  4.06  (d,  J  =  7.4  Hz,  1H),  4.03  (d,  J  =  7.3  Hz,  1H),  4.00  (d,  J  =  3.2  Hz,  1H),  3.96-3.85  (m,  10H),  3.85-3.71  (m,  19H),  3.72-3.52  (m,  26H),  3.51-3.48  (m,  2H,),  3.38-3.370  (m,  2H),2.90(t,J=7.9Hz,2H,-NCH2-,リンカー),2.68(dd,J=4.8,12.0Hz,1H,H-3エカトリアル  g),2.01(s,3H,-C(O)CH3),1.99(s,3H,-C(O)CH3),1.96(s,3H,-C(O)CH3),1.95(s,3H,-C(O)CH3),1.73(t,J=8.6Hz,1H,H-3アキシャル  g),1.61-1.56(m,2H,-CCH2C-,リンカー),1.54-1.46(m,2H,-CCH2C-,リンカー),1.34-1.33(m,2H,-CCH2C-,リンカー);13C  NMR  (150  MHz,  D2O):  δ  171.94,  171.81,  171.37,  170.80,  113.44,  99.86,  99.53,  99.27,  98.42,  97.99,  97.38,  97.08,  96.74,  96.21,  75.74,  75.66,  75.52,  73.56,  72.85,  72.41,  72.10,  71.62,  71.45,  71.36,  70.27,  69.81,  69.62,  69.28,  69.14,  69.02,  68.90,  68.69,  67.91,  67.82,  67.50,  67.20,  67.08,  66.87,  66.36,  65.46,  65.29,  65.01,  64.39,  64.32,  63.68,  62.47,  62.09,  61.02,  59.50,  59.39,  58.64,  57.96,  57.87,  57.10,  56.91,  52.12,  51.91,  48.60,  42.85,  40.32,  36.54,  36.25,  35.04,  25.27,  24.98,  23.34,  20.60,  19.53,  19.13,  19.03,  18.95,  13.70;ＥＳＩ−ＭＳ（ネガティブモード）：Ｃ７６Ｈ１２９Ｎ５Ｏ５４に対するｍ／ｚ計算値；１９７５．７４１８  実測値１９７４．７６７１（Ｍ−Ｈ）−。
【０４７０】
グリカンＧ９〜Ｇ１１の調製
【化８３】
2019515876.tif 000085
【０４７１】
スキームＳ１３：Ｇ９〜Ｇ１１の調製。ｉ）（１）ＮＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２、ｎ−ＢｕＯＨ、９０℃、一晩；（２）Ａｃ２Ｏ、ピリジン、一晩；（３）ＮａＯＭｅ、ＭｅＯＨ、一晩；（４）Ｐｄ（ＯＨ）２、ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ：ＨＣＯＯＨ（５：３：２）、Ｈ２；５１％；ｉｉ）ＣＭＰ−β−Ｄ−シアル酸、α−２，６／２，３−シアリルトランスフェラーゼ，Ｇ１０：７７％；Ｇ１１：５２％
【化８４】
2019515876.tif 000086
【０４７２】
５−アミノペンチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−α−Ｄ−マンノピラノシル］−（１→３）−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−βＤ−グルコピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（Ｇ１０）：六糖Ｓ１２ａ（０．１１０ｇ，０．０４１ｍｍｏｌ）を、一般的な手順２（方法１）に従うことによって脱保護して、所望の化合物Ｇ１０（０．０２５ｇ，５１％）を白色固体として得た。1H  NMR  (600  MHz,  D2O):  δ  5.04  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H,  H-1a),  4.84  (s,  1H,  H-1d),  4.78  (s,  1H,  H-1c),  4.60  (d,  J  =  8.2  Hz,  1H,  H-1e),  4.51  (d,  J  =  8.1  Hz,  1H,  H-1b),  4.46  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H,  H-1f),  4.28  (d,  J  =  3.3  Hz,  1H),  4.26  (d,  J  =  3.6  Hz,  1H),  4.10-3.82  (m,  9H),  3.82-3.56  (m,  23H),  3.52-3.38  (m,  5H),2.97(t,J=7.8Hz,2H,-NCH2-,リンカー),2.07(s,3H,-C(O)CH3),2.05(s,3H,-C(O)CH3),2.03(s,3H,-C(O)CH3),1.701.65(m,2H,-CCH2C-,リンカー),1.62-1.58(m,2H,-CCH2C-,リンカー),1.48-1.41(m,2H,-CCH2C-,リンカー);13C  NMR  (150  MHz,  D2O):  δ  177.64,  177.32,  177.17,  173.74,  105.65,  104.13,  103.80,  103.18,  102.70,  100.08,  82.05,  81.50,  81.37,  79.38,  79.04,  78.85,  78.09,  77.42,  77.28,  77.24,  75.23,  75.13,  75.06,  74.80,  74.67,  73.69,  72.84,  71.27,  70.14,  70.07,  68.12,  64.43,  63.74,  63.61,  62.85,  62.82,  62.75,  57.91,  57.78,  57.73,  42.05,  30.78,  29.10,  25.27,  24.87,  24.85,  24.83;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ４７Ｈ８２Ｎ４Ｏ３に対するｍ／ｚ計算値；１１９８．４８５５  実測値１２２１．５２２３（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化８５】
2019515876.tif 000087
【０４７３】
５−アミノペンチル−［５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノ−シロネート−（２→６）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−α−Ｄ−マンノピラノシル］−（１→３）−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコ−ピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（Ｇ１０）：化合物Ｇ９（１０ｍｇ，０．００８３ｍｍｏｌ）を、一般的な手順３に従うことによってα−２，６−シアリルトランスフェラーゼを用いて２日間シアリル化して、所望の表題化合物Ｇ１０（９．５ｍｇ，７７％）を白色固体として得た。1H  NMR  (600  MHz,  D2O):  δ  5.06  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H,  H-1a),  4.80  (s,  1H,  H-1d),  4.78  (s,  1H,  H-1c),  4.60  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H,  H-1e),  4.49  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H,  H-1b),  4.43  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H,  H-1f),  4.27  (d,  J  =  3.6  Hz,  1H),  4.25  (d,  J  =  3.6  Hz,  1H),  4.08-3.38  (m,  45H),2.98(t,J=11.2Hz,2H,-NCH2-,リンカー),2.60(dd,J=4.8,12.0Hz,1H,H-3エカトリアル  g),2.08(s,6H,-C(O)CH3)2.05(s,3H,-C(O)CH3),2.03(s,3H,-C(O)CH3,1.71(t,J=7.8Hz,1H,H-3アキシャル  g),1.69-1.69(m,2H,-CCH2C-,リンカー),1.611.56(m,2H,-CCH2C-,リンカー),1.41-1.37(m,2H,-CCH2C-,リンカー);13C  NMR  (150  MHz,  D2O):    δ  174.94,  174.83,  174.56,  174.40,  103.50,  101,37,  101.03,  100.31,  100.12,  99.92,  97.31,  80.99,  79.28,  78.63,  78.59,  76.61,  76.32,  76.07,  74.51,  74.48,  74.38,  73.67,  72.52,  72.38,  72.36,  72.08,  71.90,  71.66,  70.70,  70.06,  68.37,  68.34,  67.33,  63.35,  62.63,  61.67,  60.88,  60.09,  59.98,  54.99,  54.87,  51.85,  40.02,  39.30,  28.01,  26.36,  22.56,  22.10,  22.08,  21.99;ＥＳＩ−ＭＳ（ネガティブモード）：Ｃ５８Ｈ９９Ｎ５Ｏ３９に対するｍ／ｚ計算値；１４８９．５８３３  実測値１４８８．５９４９（Ｍ−Ｈ）−。
【化８６】
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【０４７４】
５−アミノペンチル−［５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノ−シロネート−（２→３）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−α−Ｄ−マンノピラノシル］−（１→３）−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコ−ピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（Ｇ１１）：化合物Ｇ９（７ｍｇ，０．００５８ｍｍｏｌ）を、一般的な手順３に従うことによってα−２，３−シアリルトランスフェラーゼを用いて４日間シアリル化して、所望の表題化合物Ｇ１１（４．６ｍｇ，５２％）を白色固体として得た。1H  NMR  (600  MHz,  D2O):  δ  5.06  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H,  H-1a),  4.79  (s,  1H,  H-1d),  4.75  (s,  1H,  H-1c),  4.62  (d,  J  =  6.6  Hz,  1H,  H-1e),  4.56  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H,  H-1b),  4.51  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H,  H-1f),  4.28  (d,  J  =  8.4  Hz,  2H),  4.13  (d,  J  =  9.6  Hz,  1H),  3.99-3.83  (m,  12H),  3.82-3.57  (m,  27H),  3.53-3.39  (m,  4H),  2.99  (t,  J  =  7.8  Hz,  2H),2.77(dd,J=4.8,2.0Hz,1H,H-3エカトリアル  g),2.12(s,3H,-C(O)CH3)2.09(s,3H,-C(O)CH3),2.05(s,3H,-C(O)CH3),2.03(s,3H,-C(O)CH3),1.80(t,J=7.8Hz,1H,H-3アキシャル  g),1.71-1.66(m,2H,-CCH2C-,リンカー),1.62-1.59(m,2H,-CCH2C-,リンカー),1.44-1.41(m,2H,-CCH2C-,リンカー);13C  NMR  (150  MHz,  D2O):  δ  174.88,  174.53,  174.46,  174.40,  102.50,  102,37,  101.65,  101.31,  100.12,  99.86,  98.31,  80.32,  79.67,  78.78,  78.56,  76.66,  75.32,  75.07,  74.51,  74.48,  74.38,  73.67,  72.52,  72.38,  72.36,  72.08,  71.90,  71.66,  70.70,  70.06,  68.37,  68.34,  67.33,  63.35,  62.63,  61.67,  60.88,  60.09,  59.98,  54.99,  54.87,  51.85,  40.02,  39.30,  28.01,  26.36,  22.56,  22.10,  22.08,  21.27  20.27;ＥＳＩ−ＭＳ（ネガティブモード）：Ｃ５８Ｈ９９Ｎ５Ｏ３９に対するｍ／ｚ計算値；１４８９．５８３３  実測値１４８８．５９４４（Ｍ−Ｈ）−。
【０４７５】
複合型オリゴ糖の合成  Ｓ
【化８７】
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図Ｓ３：複合型グリカンの構造。
【０４７６】
以前に、本発明者らは、α−２，６またはα−２，３結合を介して接続された末端のＮ−アセチルノイラミン酸残基を有するおよび有しない二分岐（Ｇ１５、Ｇ１６およびＧ１７）、三分岐（Ｇ２０〜Ｇ２２、Ｇ２３、Ｇ２５およびＧ２６）および四分岐（Ｇ２８、Ｇ３２およびＧ３３）複合型Ｎ−グリカンを迅速に生成するための効率的な化学酵素的ストラテジーを開発していた。さらに、本発明者らは、コア三糖１５に対する立体選択的および位置選択的（ｒｅｇｉｏｎ−ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ）なグリコシル化のためにグリコシルドナー（１〜１３）のモジュールセットを利用した全化学合成ストラテジーを開発していた。しかしながら、酵素による、非対称的に（ａｓｓｙｍｅｔｒｉｃａｌｌｙ）シアリル化されたグリカンの合成は、それらの特異性のせいで複雑である。このため、本発明者らは、非対称な複合型グリカンを調製するためのフッ化グリコシルの有用性を実証した。はじめに（Ｉｎｔｉｔｉａｌｌｙ）、本発明者らは、分岐とコア三糖の両方の全グルコサミン残基のＣ２−アミンにおけるフタルアミド保護から開始したが（１４）、しかしながら、予め導入されたシアル酸の存在下では、完全な脱保護のプロセスは、複雑であると見出された。この困難を克服するために、全グルコサミン残基のＣ２−アミンにおけるフタルアミド保護を、トリクロロエチルカーボネート（ｔｒｏｃ）で置き換えた。
【０４７７】
グリカンＧ１８の合成。
【０４７８】
３−Ｏ部位におけるコア１５での、シアリル化された分岐９のグリコシル化は、所望の七糖Ｓ１４ａを６３％収率でもたらした。ベンジリデンをｐ−ＴＳＡの存在下において除去して、４，６−ジオールＳ１４ｂを得て、それを、８を用いて６−Ｏ位においてさらにアルファグリコシル化して、所望のＳ１４ｃをα型とβ型の混合物（７／３の単離収率）として得た。主要なα異性体をカラムクロマトグラフィーによって単離し、最後に脱保護して、Ｇ１８を白色固体として得た。
【化８８】
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【０４７９】
スキームＳ１４：Ｇ１８の調製。ｉ、９、ＡｇＯＴｆ、Ｃｐ２ＨｆＣｌ２、トルエン、−２０℃〜０℃、６３％；ｉｉ、ｐＴＳＡ、アセトニトリル、５９％；ｉｉｉ、８、ＡｇＯＴｆ、Ｃｐ２ＨｆＣｌ２、トルエン、−４０℃〜−２０℃、５８％；ｉｖ，（１）ＬｉＯＨ、１、４−ジオキサン：Ｈ２Ｏ、９０℃，（２）Ａｃ２Ｏ、ピリジン，（３）ＮａＯＭｅ、ＭｅＯＨ，（４）Ｐｄ（ＯＨ）２、ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ、Ｈ２、２５％。
【化８９】
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【０４８０】
化合物Ｓ１４ａ：銀トリフレート（０．０８７ｇ，０．３４ｍｍｏｌ）、ビス（シクロペンタジエニル）ハフニウムジクロリド（０．０９０ｇ，０．２３ｍｍｏｌ）および４Å活性化モレキュラーシーブを含む乾燥トルエン（１０ｍＬ）の混合物をｒｔで１時間撹拌した。次いで、その反応混合物を−２０℃に冷却し、ドナー９（０．１５３ｇ，０．０８２ｍｍｏｌ）およびアクセプターであるキトビオース三糖１５（０．１００ｇ，０．０６８ｍｍｏｌ）を含む５ｍＬのトルエンの溶液を加えた。その混合物を０℃で２時間撹拌し、Ｅｔ３Ｎでクエンチし、ＥｔＯＡｃで希釈し、セライトで濾過した。濾液をＮａＨＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１０％のアセトンのトルエン溶液）によって精製して、Ｓ１４ａ（０．１４０ｇ，６３％）を白色泡沫状物として得た。ＴＬＣ：（アセトン：トルエン＝１．５／８．５，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.52;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.89  (d,  J  =  7.8  Hz,  4H),  7.49-7.46  (m,  2H),  7.37-7.06  (m,  59H),  5.77  (t,  J  =  10.8  Hz,  1H),  5.35-5.37  (m,  2H),  5.26  (s,  1H),  5.18  (dd,  J  =  3.8  &  7.7  Hz,  1H),  5.08  (d,  J  =  3.2  Hz,  1H),  5.07  (dd,  J  =  3.2  &  8.4  Hz,  1H),  4.97  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  4.91  (d,  J  =  9.1  Hz,  1H),  4.86  (d,  J  =  8.7  Hz,  3H),  4.73-4.13  (m,  32H),  4.02-3.30  (m,  29H),  3.20  (t,  J  =  10.8  Hz,  2H),  3.10  (d,  J  =  8.7  Hz,  1H),  2.98  (t,  J  =  9.2  Hz,  1H),  2.87-2.85  (m,  1H),  2.80  (dd,  J  =  3.2  &  7.8  Hz,  1H),  2.10  (s,  6H),  2.08  (t,  J  =  9.3  Hz,  1H),  2.00  (s,  6H),  1.40-1.17  (m,  4H),  0.87-0.82  (m,  2H);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  171.9,  170.8,  170.2,  170.0,  167.9,  166.1,  165.5,  159.5,  154.5,  154.3,  154.1,  138.2,  130.1,  129.8,  129.6,  129.4,  128.9,  128.8,  128.7,  128.6,  128.5,  128.4,  128.3,  128.2,  128.1,  127.9,  127.8,  127.6,  127.0,  100.8,  100.5,  98.0,  95.8,  76.8,  76.7,  75.5,  74.8,  74.6,  74.4,  74.3,  74.1,  73.8,  73.7,  73.4,  73.2,  69.9,  69.7,  69.5,  68.7,  67.5,  66.7,  61.9,  58.9,  57.6,  53.4,  37.4,  29.9,  29.2,  28.8,  23.4,  21.3,  21.2,  21.0,  20.9,  14.3;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ１６０Ｈ１７２Ｃｌ９Ｎ７Ｏ４８に対するｍ／ｚ計算値；３２７８．８３４３  実測値３２７８．８１２７。
【化９０】
2019515876.tif 000092
【０４８１】
化合物Ｓ１４ｂ：ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（０．００４ｇ，０．０２２ｍｍｏｌ）を、Ｓ１４ａ（０．１５０ｇ，０．０４５ｍｍｏｌ）を含むアセトニトリル（２０ｍＬ）の溶液に加え、得られた反応混合物を室温で５時間撹拌した。その反応物を、Ｅｔ３Ｎを加えることによってクエンチし、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１５％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、ジオールＳ１４ｂ（０．０８５ｇ，５９％）を得た。ＴＬＣ：（アセトン：トルエン＝２／８，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.32  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.89-7.86  (m,  4H),  7.49-7.37  (m,  2H),  7.30-7.09  (m,  54H),  5.78  (t,  J  =  10.2  Hz,  1H),  5.51  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H),  5.37  (dt,  J  =  2.4  &  7.2  Hz,  1H),  5.26  (s,  1H),  5.19  (dd,  J  =  2.4  &  10.8  Hz,  1H),  5.12  (d,  J  =  3.6  Hz,  1H),  4.95-4.85  (m,  5H),  4.75-4.12  (m,  25H),  4.08-4.03  (m,  3H),  3.96-3.89  (m,  7H),  3.74-3.67  (m,  8H),  3.63-3.30  (m,  20H),  3.20  (t,  J  =  10.2  Hz,  2H),  3.10  (d,  J  =  8.9  Hz,  2H),  2,89  (s,  1H),  2.76  (dd,  J  =  3.6  &  7.9  Hz,  1H),  2.08  (s,  3H),  2.05  (s,  3H),  1.99  (s,  3H),  1.95  (s,  3H),  1.41-1.31  (m,  5H),  1.27-1.17  (m,  2H);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  172.4,  172.3,  171.3,  171.2,  170.7,  170.3,  170.0,  168.4,  168.3,  166.1,  165.5,  154.5,  154.3,  154.1,  153.9,  138.5,  138.4,  138.1,  138.0,  133.7,  133.3,  130.1,  129.8,  129.7,  129.5,  129.3,  128.9,  128.8,  128.7,  128.6,  128.6,  128.5,  128.4,  128.3,  128.2,  128.1,  128.0,  127.9,  101.1,  100.8,  100.6,  100.4,  99.7,  99.2,  96.0,  95.8,  76.3,  76.1,  75.7,  75.5,  74.9,  74.8,  74.5,  74.3,  74.0,  73.7,  73.4,  73.3,  73.2,  73.1,  73.0,  72.6,  72.3,  72.1,  71.3,  71.0,  69.9,  69.6,  69.4,  69.3,  68.4,  67.8,  66.1,  66.2,  62.8,  62.2,  59.2,  57.7,  53.4,  51.5,  36.9,  29.9,  29.2,  28.8,  25.0,  23.4,  21.4,  21.3,  21.2,  21.1,  15.5,  14.4;ＥＳＩ−ＭＳ（ネガティブモード）：Ｃ１５３Ｈ１６８Ｃｌ９Ｎ７Ｏ４８に対するｍ／ｚ計算値；３１９１．８１０５  実測値３２３６．８０３３（Ｍ＋２Ｎａ）−。
【化９１】
2019515876.tif 000093
【０４８２】
化合物Ｓ１４ｃ：銀トリフレート（０．０６７ｇ，０．２７ｍｍｏｌ）、ビス（シクロペンタジエニル）ハフニウムジクロリド（０．０７１ｇ，０．１８ｍｍｏｌ）および４Å活性化モレキュラーシーブを含む乾燥トルエン（１０ｍＬ）の混合物をｒｔで１時間撹拌した。次いで、その反応混合物を−４０℃に冷却し、ドナー８（０．０９７ｇ，０．０６８ｍｍｏｌ）およびアクセプターＳ１４ｂ（０．１７５ｇ，０．０５４ｍｍｏｌ）を含む５ｍＬのトルエンの溶液を加えた。その混合物を−２０℃で２時間撹拌し、Ｅｔ３Ｎでクエンチし、ＥｔＯＡｃで希釈し、セライトで濾過した。濾液をＮａＨＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１０％のアセトンのトルエン溶液）によって精製して、αおよびβ異性体の混合物を分離して、Ｓ１４ｃ（０．１４９ｇ，５８％）を白色泡沫状物として得た。ＴＬＣ：（アセトン：トルエン＝１．５／８．５，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.52;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.90  (d,  J  =  7.2  Hz,  2H),  7.83  (d,  J  =  7.8  Hz,  2H),  7.51-7.41  (m,  4H),  7.34-7.06  (m,  92H),  5.83  (t,  J  =  10.2  Hz,  1H),  5.48-5.03  (m,  3H),  5.00-4.75  (m,  13H),  4.60-4.08  (m,  41H),  3.99-3.07  (m,  53H),  2.96  (t,  J  =  10.2  Hz,  2H),  2.80  (dd,  J  =  3.8  &  7.9  Hz,  1H),  2.15  (s,  3H),  2.10  (s,  3H),  2.07  (s,  3H),  2.00  (s,  3H),  1.93  (s,  3H),  1.40-1.17  (m,  5H),  0.91-0.81  (m,  2H);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  170.9,  170.6,  170.4,  169.9,  169.4,  166.5,  159.5,  154.7,  154.4,  139.8,  138.8,  138.7,  138.6,  138.4,  138.2,  133.7,  130.9,  130.7,  129.7,  129.6,  129.4,  129.2,  129.0,  128.7,  128.6,  128.6,  128.4,  128.3,  128.2,  127.9,  127.6,  127.3,  100.4,  100.2,  99.8,  99.4,  74.9,  74.7,  74.5,  73.3,  73.2,  66.1,  60.6,  51.5,  32.1,  29.8,  29.7,  29.6,  29.3,  28.7,  23.7,  22.8,  22.4,  22.0,  21.6,  21.4,  21.2,  20.9,  15.4,  14.3,  14.2,  14.0,  11.3,  10.2;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ２３２Ｈ２５０Ｃｌ１２Ｎ８Ｏ６５に対するｍ／ｚ計算値；４６０７．２７６５  実測値２３３０．６２６１（Ｍ＋Ｎａ）２＋。
【化９２】
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【０４８３】
５−アミノペンチル−［５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノ−シロネート−（２→６）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−α−Ｄ−マンノピラノシル］−（１→３），−［β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−α−Ｄ−マンノピラノシル］−（１→６）−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシドＧ１８：化合物Ｓ１４ｃ（０．１３５ｇ，０．０２９ｍｍｏｌ）を、一般的な手順２（方法２）に従うことによって脱保護して、所望のグリカンＧ１８（０．０１５ｇ，２５％）を得た。1H  NMR  (600  MHz,  D2O):  δ  5.11  (s,  1H,  H-1d),  4.89  (s,  1H,  H-1d'),  4.73  (s,  1H,  H-1c),  4.57  (dt,  J  =  10.2  Hz,  2H,  H-1f,f'),  4.47  (d,  J  =  7.8  Hz,  2H,  H-1a,b),  4.47  (d,  J  =  8.4  Hz,  2H,  H-1e,e'),  4.23  (s,  1H),  4.17  (s,  1H),  4.09  (d,  J  =  1.3  Hz,  1H),  4.03-3.48  (m,  61H),2.98(t,J=10.2Hz,2H,-CH2-リンカー),2.65(dd,J=4.8  &  12.6Hz,1H,H-3エカトリアル  g),2.10(s,3H),2.09(s,3H),2.07(s,3H),2.02(s,6H),1.72-1.64(m,3H,H-3アキシャル  g,リンカー-CH2-),1.63-1.54(m,2H),1.39-1.35(m,2H);13C  NMR  (150  MHz,  D2O):  δ  177.7,  177.5,  177.4,  177.1,  176.2,  176.1,  106.2,  106.1,  104.1,  103.7,  103.5,  103.1,  102.9,  102.9,  99.5,  83.6,  83.1,  82.2,  82.1,  81.7,  79.4,  79.1,  78.9,  77.3,  77.2,  76.8,  76.4,  75.3,  75.1,  74.8,  74.5,  73.5,  73.4,  72.8,  71.2,  70.9,  70.0,  67.6,  66.0,  65.6,  65.4,  64.5,  62.8,  57.7,  57.3,  55.0,  54.6,  54.0,  42.8,  42.3,  42.0,  41.78,  30.7,  30.5;ＥＳＩ−ＭＳ（ネガティブモード）：Ｃ７８Ｈ１３２Ｎ６Ｏ５４に対するｍ／ｚ計算値２０１６．７７６７；実測値１００７．３７９９（Ｍ−Ｈ）２−。
【０４８４】
グリカンＧ２４の合成。
【０４８５】
化合物Ｓ１４ｂは、Ｇ１８とＧ２４の両方に対する共通のアクセプターとして作用する。６−Ｏ部位におけるＳ１４ｂのグリコシル化によって、所望のＳ１５ａを１０％のアクセプター回収率で得た。最後に、完全な脱保護によって、所望のグリカンＧ２４を得た。
【化９３】
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【０４８６】
スキームＳ１５：Ｇ２４の調製。ｉ、１２、ＡｇＯＴｆ、Ｃｐ２ＨｆＣｌ２、トルエン、−４０℃、６３％；ｉｉ，（１）ＬｉＯＨ、１，４−ジオキサン、９０℃，（２）Ａｃ２Ｏ、ピリジン，（３）ＮａＯＭｅ、ＭｅＯＨ，（４）Ｐｄ（ＯＨ）２、ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ、Ｈ２、４２％。
【化９４】
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【０４８７】
化合物Ｓ１５ａ：銀トリフレート（０．０５８ｇ，０．２３ｍｍｏｌ）、ビス（シクロペンタジエニル）ハフニウムジクロリド（０．０６１ｇ，０．２３ｍｍｏｌ）および４Å活性化モレキュラーシーブを含む乾燥トルエン（１０ｍＬ）の混合物をｒｔで１時間撹拌した。次いで、その反応混合物を−４０℃に冷却し、ドナー１２（０．１３５ｇ，０．０５６ｍｍｏｌ）およびアクセプターＳ１４ｂ（０．１５０ｇ，０．０４６ｍｍｏｌ）を含む５ｍＬのトルエンの溶液を加えた。その混合物を−２０℃で２時間撹拌し、Ｅｔ３Ｎでクエンチし、ＥｔＯＡｃで希釈し、セライトで濾過した。濾液をＮａＨＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１０％のアセトンのトルエン溶液）によって精製して、Ｓ１５ａ（０．１６５ｇ，６３％）を白色泡沫状物として得た。ＴＬＣ：（アセトン：トルエン＝１．５／８．５，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.58;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  8.00-7.80  (m,  4H),  7.50-6.80  (m,  116H),  5.80  (t,  J  =  10.2  Hz,  1H),  5.40-5.30  (m,  7H),  5.10-4.08  (m,  65H),  4.00-3.05  (m,  65H),  2.98  (dd,  J  =  3.2  &  8.5  Hz,  1H),  2.15  (s,  6H),  2.10  (s,  6H),  2.00  (s,  6H),  1.37-1.17  (m,  5H),  0.87-0.84  (m,  2H);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  170.8,  167.9  154.1,  139.1,  139.0,  138.9,  138.8,  138.6,  138.3,  138.1,  138.0,  129.8,  129.6,  129.3,  128.9,  128.8,  128.7,  128.7,  128.6,  128.5,  128.4,  128.2,  128.0,  127.7,  127.4,  127.3,  127.2,  127.1,  127.0,  100.8,  100.0,  74.9,  74.8,  74.5,  74.4,  73.6,  73.3,  72.6,  53.5,  29.9,  29.2,  23.4,  21.3,  21.2,  21.0,  20.9,  15.5,  14.4;ＥＳＩ−ＭＳ（ネガティブモード）：Ｃ２７７Ｈ２９８Ｃｌ１５Ｎ９Ｏ７７に対するｍ／ｚ計算値；５５１７．１６７０  実測値２８０３．７４４２（Ｍ＋２Ｎａ）２−。
【化９５】
2019515876.tif 000097
【０４８８】
５−アミノペンチル−［５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノ−シロネート−（２→６）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−α−Ｄ−マンノピラノシル］−（１→３），−［β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２），（１→６）−α−Ｄ−マンノピラノシル］−（１→６）−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシドＧ２４：化合物Ｓ１５ａ（０．０９０ｇ，０．０１６ｍｍｏｌ）を、一般的な手順２（方法２）に従うことによって脱保護して、所望のグリカンＧ２４（０．０１６ｇ，４２％）を白色固体として得た。1H  NMR  (600  MHz,  D2O):  δ  5.14  (s,  1H,  H-1d),  4.88  (s,  1H,  H-1d'),  4.60  (t,  J  =  10.2  Hz,  3H,  H-  1e,f,e'),  4.55  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  4.48  (dd,  J  =  3.2  &  8.6  Hz,  4H),  4.45  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H),  4.26  (s,  1H),  4.20  (s,  1H),  4.09  (s,  1H),  4.01-3.50  (m,  71H),2.97(t,J=10.2Hz,2H,リンカー-CH2-),2.68(dd,J=3.8  &  8.3Hz,1H,H-３エカトリアル  g),2.08(s,3H,-C(O)CH3),2.07(s,3H,-C(O)CH3),2.04(s,3H,-C(O)CH3),2.03(s,6H,-C(O)CH3),1.72(t,J=10.2Hz,1H,H-3アキシャル  g),1.67-1.65(m,2H),1.60-1.56(m,2H,リンカー-CH2-),1.40-1.39(m,2H,リンカー-CH2-);13C  NMR  (150  MHz,  D2O):  δ  174.9,  174.7,  174.6,  174.5,  174.4,  174.1,  173.5,  103.6,  103.5,  102.9,  102.8,  101.5,  101.4,  101.0,  100.3,  100.1,  99.5,  99.3,  80.7,  80.4,  79.5,  79.3,  79.2,  78.5,  76.5,  75.4,  75.2,  74.7,  74.5,  74.4,  74.3,  73.7,  73.4,  72.5,  72.4,  72.3,  72.1,  71.9,  71.6,  71.3,  70.9,  70.8,  70.5,  70.3,  69.5,  69.4,  68.5,  68.3,  68.2,  67.5,  67.3,  65.4,  63.3,  62.5,  61.7,  61.0,  60.2,  60.1,  59.8,  55.08,  54.9,  54.8,  54.6,  51.0,  40.9,  39.4,  28.0,  26.7,  22.5,  22.4,  22.3,  22.2,  22.1,  22.0,  21.09  ;ＥＳＩ−ＭＳ（ネガティブモード）：Ｃ９２Ｈ１５５Ｎ７Ｏ６４に対するｍ／ｚ計算値；２３８３．２３７０  実測値１２１３．４４８３（Ｍ＋Ｎａ）２−。
【０４８９】
グリカンＧ２５の合成。
【化９６】
2019515876.tif 000098
【０４９０】
スキームＳ１６：Ｇ２５の調製。ｉ、１２、ＡｇＯＴｆ、Ｃｐ２ＨｆＣｌ２、トルエン、−４０℃、６４％；ｉｉ、ｐＴＳＡ、アセトニトリル、５６％；ｉｉｉ、８、ＡｇＯＴｆ、Ｃｐ２ＨｆＣｌ２、トルエン、−７８℃、４９％；ｉｖ，（１）ＬｉＯＨ、１，４−ジオキサン、９０℃，（２）Ａｃ２Ｏ、ピリジン，（３）ＮａＯＭｅ、ＭｅＯＨ，（４）Ｐｄ（ＯＨ）２、ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ、Ｈ２、３８％。
【化９７】
2019515876.tif 000099
【０４９１】
化合物１６ａ：銀トリフレート（０．０８７ｇ，０．３４ｍｍｏｌ）、ビス（シクロペンタジエニル）ハフニウムジクロリド（０．０９０ｇ，０．２３ｍｍｏｌ）および４Å活性化モレキュラーシーブを含む乾燥トルエン（１０ｍＬ）の混合物をｒｔで１時間撹拌した。次いで、その反応混合物を−４０℃に冷却し、ドナー１２（０．２５９ｇ，０．０８２ｍｍｏｌ）およびアクセプター１５（０．１００ｇ，０．０６８ｍｍｏｌ）を含む５ｍＬのトルエンの溶液を加えた。その混合物を−１０℃で３時間撹拌し、Ｅｔ３Ｎでクエンチし、ＥｔＯＡｃで希釈し、セライトで濾過した。濾液をＮａＨＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→２０％のアセトンのトルエン溶液）によって精製して、Ｓ１６ａ（０．２０１ｇ，６４％）を白色泡沫状物として得た。ＴＬＣ：（アセトン：トルエン＝２．５／７．５，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.50;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.92-7.83  (m,  9H),  7.69-7.67  (m,  2H),  7.52-7.44  (m,  6H),  7.37-6.96  (m,  63H),  5.345.32  (m,  2H),  5.26-5.24  (m,  4H),  5.20-5.10  (m,  3H),  5.08  (d,  J  =  9.8  Hz,  3H),  4.59-4.40  (m,  8H),  4.75-4.50  (m,  20H),  4.49-4.00  (m,  20H),  3.98-3.60  (m,  16H),  3.48-3.06  (m,  16H),  2.98  (t,  J  =  10.7  Hz,  2H),  2.76  (dd,  J  =  3.8  &  7.8  Hz,  2H),  2.08  (s,  3H),  2.07  (s,  3H),  2.06  (s,  6H),  1.99  (s,  9H),  1.37-1.17  (m,  6H),  0.89-0.84  (m,  2H);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  171.8,  171.7,  171.6,  169.8,  169.4,  168.0,  167.6,  166.6,  166.4,  166.2,  165.4,  165.3,  159.7,  159.4,  154.3,  154.2,  139.8,  139.7,  139.6,  139.4,  139.2,  138.7,  138.6,  138.5,  138.4,  138.3,  138.2,  133.9,  132.7,  131.9,  131.2,  130.6,  129.8,  129.6,  129.4,  129.3,  129.2,  129.0,  128.8,  128.7,  128.6,  128.6,  128.4,  128.2,  128.1,  128.0,  127.9,  127.8,  127.7,  127.6,  127.5,  127.4,  127.3,  127.2,  127.0,  102.7,  102.4,  101.9,  101.8,  100.8,  100.7,  100.4,  100.2,  100.0,  99.2,  99.4,  98.4,  96.5,  95.9,  74.3,  74.1,  74.0,  73.8,  73.7,  73.5,  73.4,  73.2,  73.1,  72.7,  72.5,  72.1,  71.3,  70.9,  70.4,  69.5,  69.4,  68.5,  68.4,  68.3,  68.1,  67.9,  67.4,  53.4,  51.6,  37.5,  33.9,  32.2,  31.8,  29.9,  28.8,  26.5,  23.4,  22.9,  21.2,  21.0,  20.0,  14.6,  14.3;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ２２０Ｈ２３５Ｃｌ１２Ｎ９Ｏ７２に対するｍ／ｚ計算値；４５８２．６９１０  実測値９１５．６６８４（Ｍ＋Ｈ）５＋。
【化９８】
2019515876.tif 000100
【０４９２】
化合物１６ｂ：ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（０．００２ｇ，０．００８ｍｍｏｌ）を、Ｓ１４ａ（０．２００ｇ，０．０４３ｍｍｏｌ）を含むアセトニトリル（１０ｍＬ）の溶液に加え、得られた反応混合物をｒｔで一晩撹拌した。反応物を、Ｅｔ３Ｎを加えることによってクエンチし、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→２０％のアセトンのトルエン溶液）によって精製して、ジオールＳ１６ｂ（０．１１０ｇ，５６％）を得た。ＴＬＣ：（アセトン：トルエン＝２．５／７．５，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.32;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.90-7.80  (m,  7H),  7.79  (d,  J  =  8.4  Hz,  2H),  7.69-7.46  (m,  5H),  7.41-7.04  (m,  65H),  5.78  (t,  J  =  10.1  Hz,  1H),  5.73  (t,  J  =  10.7  Hz,  1H),  5.35-5.25  (m,  7H),  5.20  (dd,  J  =  3.2  &  7.9  Hz,  1H),  5.15  (dd,  J  =  3.8  &  8.4  Hz,  1H),  5.08  (t,  J  =  10.8  Hz,  2H),  4.90-4.80  (m,  5H),  4.794.50  (m,  15H),  4.48-4.30  (m,  8H),  4.20-4.10  (m,  15H),  3.92-3.20  (m,  35H),  3.2  (t,  J  =  8.8  Hz,  2H),  3.18-3.05  (m,  3H),  3.0-2.95  (m,  3H),  2.81-2.70  (m,  3H),  2.08  (s,  6H),  2.07  (s,  6H),  2.03  (s,  6H),  1.92  (s,  6H),  1.32-1.17  (m,  6H),  0.89-0.83  (m,  2H);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  171.8,  170.7,  168.0,  166.1,  159.6,  138.1,  133.7,  132.7,  131.1,  130.1,  129.9,  129.7,  129.4,  128.9,  128.8,  128.7,  128.6,  128.4,  128.3,  128.2,  127.8,  127.7,  127.6,  74.9,  74.7,  74.6,  73.9,  68.8,  66.1,  53.4,  51.6,  37.3,  32.4,  31.4,  29.9,  29.8,  29.7,  28.7,  28.4,  23.4,  22.3,  20.9,  20.7,  20.4,  15.5,  14.6,  14.2  ;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ２１３Ｈ２３１Ｃｌ１２Ｎ９Ｏ７２に対するｍ／ｚ計算値；４４９４．５８２０  実測値６８１．２９５３（Ｍ＋Ｋ）７＋。
【化９９】
2019515876.tif 000101
【０４９３】
化合物１６ｃ：銀トリフレート（０．０６８ｇ，０．３４ｍｍｏｌ）、ビス（シクロペンタジエニル）ハフニウムジクロリド（０．０６５ｇ，０．１７ｍｍｏｌ）および４Å活性化モレキュラーシーブを含む乾燥トルエン（１０ｍＬ）の混合物をｒｔで１時間撹拌した。次いで、その反応混合物を−７８℃に冷却し、ドナー８（０．１０９ｇ，０．０７６ｍｍｏｌ）およびアクセプター１６ｂ（０．２３０ｇ，０．０５１ｍｍｏｌ）を含む５ｍＬのトルエンの溶液を加えた。その混合物を−２０℃で３時間撹拌し、Ｅｔ３Ｎでクエンチし、ＥｔＯＡｃで希釈し、セライトで濾過した。濾液をＮａＨＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→２０％のアセトンのトルエン溶液）によって精製して、Ｓ１６ｃ（０．１４８ｇ，４９％）を白色泡沫状物として得た。ＴＬＣ：（アセトン：トルエン＝２．５／７．５，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.50;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.90  (m,  10H),  7.52-6.80  (m,  110H),  5.79  (t,  J  =  10.2  Hz,  2H),  5.48  (dd,  J  =  4.2  &  8.7  Hz,  2H),  5.34-5.14  (m,  10H),  4.98-3.10  (m,  129H),  2.85  (t,  J  =  10.2  Hz,  2H),  2.30  (dd,  J  =  3.4  &  8.2  Hz,  2H),  2.01  (s,  3H),  2.00  (s,  6H),  1.95  (s,  6H),  1.94  (s,  6H),  1.91  (s,  3H),  1.39-1.29  (m,  6H),  1.26-1.91  (m,  2H);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  172.1,  170.8,  170.3,  170.1,  170.0,  169.3,  169.2,  168.0,  167.3,  166.5,  165.8,  165.1,  165.0,  154.0,  153.8,  153.7,  153.7,  139.0,  138.9,  138.8,  138.7,  138.6,  138.3,  138.2,  138.1,  137.9,  137.4,  133.4,  133.2,  132.0,  130.3,  129.8,  129.7,  129.4,  129.3,  129.2,  129.1,  128.9,  128.8,  128.5,  128.3,  128.2,  128.1,  128.0,  127.9,  100.4,  100.2,  99.3,  75.8,  75.6,  75.4,  75.3,  75.2,  75.1,  74.8,  74.7,  74.6,  74.5,  74.4,  74.3,  74.2,  74.2,  74.1,  73.5,  73.4,  73.3,  73.2,  73.1,  73.0,  72.9,  72.6,  72.2,  71.9,  71.7,  71.6,  71.3,  71.1,  70.1,  69.9,  69.8,  68.5,  68.3,  68.2,  63.4,  58.8,  58.3,  58.0,  53.4,  51.3,  31.9,  30.3,  30.0,  29.8,  29.7,  29.5,  28.7,  28.5,  28.3,  27.1,  24.5,  24.1,  23.8,  22.7,  22.1,  21.7,  20.9,  20.7,  20.6,  14.1,  14.0,  10.9  ;ＥＳＩ−ＭＳ（ネガティブモード）：Ｃ２９２Ｈ３１３Ｃｌ１５Ｎ１０Ｏ８９に対するｍ／ｚ計算値；５９１８．４４７０  実測値１４８６．４７４６（Ｍ＋６Ｈ）４＋。
【化１００】
2019515876.tif 000102
【０４９４】
５−アミノペンチル−ジ−［５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノ−シロネート−（２→６）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２），（１→４）−α−Ｄ−マンノピラノシル］−（１→３），−［β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−α−Ｄ−マンノピラノシル］−（１→６）−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシドＧ２５：化合物Ｓ１６ｃ（０．１１５ｇ，０．０１９ｍｍｏｌ）を、一般的な手順２（方法２）に従うことによって脱保護して、所望のグリカンＧ２５（０．０２０ｇ，３８％）を得た。1H  NMR  (600  MHz,  D2O):  δ  5.15  (d,  1H,  H-1d),  4.94  (s,  1H,  H-1d'),  4.63  (d,  J  =  8.4  Hz,  2H,  H-1a,b),  4.58  (d,  J  =  7.8  Hz,  2H,  H-1e,e'),  4.52  (d,  J  =  7.8  Hz,  2H,  H-1e",f'),  4.50  (s,  1H,  H-1c),  4.42  (dd,  J  =  3.2  &  10.2  Hz,  2H,  H-1f,f"),  4.23  (s,  2H),  4.08  (s,  1H),  3.92  (dd,  J  =  3.2  &  7.8  Hz,  2H),  3.90-3.45  (m,  75H),3.01(t,J=10.2Hz,2H,リンカー  CH2),2.69(dd,J=3.6  &  12.1Hz,2H,H-3エカトリアル  g,g’),2.12(s,3H),2.10(s,3H),2.09(s,3H),2.07(s,3H),2.05(s,9H),1.77-1.66(m,4H,H-3アキシャル.g,g’およびリンカーCH2),1.62-1.60(m,2H),1.42-1.40(m,2H);13C  NMR  (150  MHz,  D2O):  δ  177.6,  177.4,  177.3,  177.1,  176.1,  106.3,  105.6,  104.2,  104.1,  103.7,  103.1,  102.8,  102.1,  101.8,  99.8,  78.7,  78.0,  77.4,  77.2,  77.1  76.4,  75.5,  75.2,  75.1,  75.0,  74.8,  74.4,  74.0,  73.7,  73.4,  73.0,  72.8,  72.1,  71.5,  70.9,  70.8,  70.0,  68.4,  66.0,  65.4,  64.3,  64.0,  63.7,  63.1,  63.8,  62.6,  57.7,  57.6,  57.5,  57.3,  54.6,  42.7,  42.0,  30.7,  29.0,  25.3,  25.0,  24.9,  24.8,  24.7;ＥＳＩ−ＭＳ（ネガティブモード）：Ｃ１０３Ｈ１７２Ｎ８Ｏ７２に対するｍ／ｚ計算値；２６７４．４９３０  実測値１３３５．９９４８（Ｍ−２Ｈ）２−。
【０４９５】
グリカンＧ２９の合成。
【０４９６】
グリカンＧ２９は、モノシアリル化された四分岐複合型構造である。その合成は、１５の３−Ｏ位におけるドナー（ｄｏｎｏｔ）１１のグリコシル化によるＤ１アームの構築から開始して、化合物Ｓ１７ａを得た。その反応の進行を、スキームＳ１７に示されているようにＴＬＣによって確認した。ベンジリデン（ｂｅｎｚｙｌｅｄｅｎｅ）の除去の後、６−Ｏグリコシル化によって、所望の十四糖Ｓ１７ｃを得た。最後に、完全な脱保護によって、所望のグリカンＧ２９を得た。
【化１０１】
2019515876.tif 000103
【０４９７】
スキームＳ１７：Ｇ２９の調製。ｉ、１１、ＡｇＯＴｆ、Ｃｐ２ＨｆＣｌ２、トルエン、−４０℃、７７％；ｉｉ、ｐＴＳＡ、アセトニトリル、７３％；ｉｉｉ、１３、ＡｇＯＴｆ、Ｃｐ２ＨｆＣｌ２、トルエン、−４０℃、５７％；ｉｖ，（１）ＬｉＯＨ、１，４−ジオキサン、９０℃，（２）Ａｃ２Ｏ、ピリジン，（３）ＮａＯＭｅ、ＭｅＯＨ，（４）Ｐｄ（ＯＨ）２、ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ、Ｈ２、３４％。
【化１０２】
2019515876.tif 000104
【０４９８】
化合物Ｓ１７ａ：銀トリフレート（０．１７３ｇ，０．６７５ｍｍｏｌ）、ビス（シクロペンタジエニル）ハフニウムジクロリド（０．１７７ｇ，０．４６９ｍｍｏｌ）および４Å活性化モレキュラーシーブを含む乾燥トルエン（１０ｍＬ）の混合物を室温で１時間撹拌した。次いで、その反応混合物を−５０℃に冷却し、ドナー１１（０．３４５ｇ，０．４７０ｍｍｏｌ）およびアクセプター１５（０．１９５ｇ，０．１３４ｍｍｏｌ）を含む５ｍＬのトルエンの溶液を加えた。その混合物を−１０℃で２時間撹拌し、Ｅｔ３Ｎでクエンチし、ＥｔＯＡｃで希釈し、セライトで濾過した。濾液をＮａＨＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１０％のアセトンのトルエン溶液）によって精製して、Ｓ１７ａ（０．３８０ｇ，７７％）を白色泡沫状物として得た。ＴＬＣ：（アセトン：トルエン＝１／９，ｖ／ｖ）：Ｒｆ＝０．６０  NMR(600MHz,CDCl3):δ7.30-7.12(m,60H),7.08-6.72(m,25H),5.39(t,J=10.2Hz,1H),5.29(t,J=10.3Hz,1H’),5.16(d,J=4.2Hz,1H),5.09(d,J=8.4Hz,1H),4.91-4.72(m,18H,重複）,4.63-4.56  (m,  5H),  4.01-4.80  (m,  30H),  3.80-3.95  (m,  10H),  3.60-3.75  (m,  4H),  3.52-3.48  (m,  6H),  3.41-3.15  (m,  20H),  2.98  (d,  J  =  9.6Hz,  1H),  2.90-2.76  (m,  3H),  2.662.62  (m,  1H),  1.95  (s,  3H),  1.93  (s,  3H),  1.87  (s,  3H),  1.38-1.23  (m,  4H,  -CCH2C-),  1.08-1.01  (m,  2H,  -CCH2C-);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  172.1,  171.9,  170.5,  156.7,  156.6,  142.0,  141.8,  141.6,  141.5,  141.4,  141.3,  141.3,  141.1,  140.8,  140.6,  140.5,  139.8,  135.2,  133.6,  133.2,  131.8,  131.5,  131.3,  131.1,  130.6,  130.5,  130.2,  130.1,  129.8,  129.0,  127.3,  104.8,  104.8,  103.2,  102.9,  77.7,7  7.5,77.3,  77.2,  77.1,  76.9,  76.2,  76.1,  76.0,  75.9,  75.5,  75.4,  74.8,,  74.6,  74.5,  74.4,  74.3,  71.0,  70.8,  70.6,  54.0,  31.7,  31.3,  25.9,  23.9,  23.8,  23.7,  23.6,  17.2,  17.1,  16.8,  16.7,  13.7,  13.6;ＨＲＭＳ（ネガティブモード）：Ｃ１９０Ｈ２０５Ｃｌ１２Ｎ７Ｏ４８に対するｍ／ｚ計算値；３７７８．９９８１  実測値３８２４．９９６９（Ｍ＋２Ｎａ）−。
【化１０３】
2019515876.tif 000105
【０４９９】
化合物Ｓ１７ｂ：ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（０．００４ｇ，０．０２ｍｍｏｌ）を、Ｓ１７ａ（０．３７７ｇ，０．１０２ｍｍｏｌ）を含むアセトニトリル（１０ｍＬ）の溶液に加え、得られた反応混合物をｒｔで一晩撹拌した。その反応物を、Ｅｔ３Ｎを加えることによってクエンチし、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１０％のアセトンのトルエン溶液）によって精製して、ジオールＳ１７ｂ（０．２７０ｇ，７３％）を得た。ＴＬＣ：（アセトン：トルエン＝１．５／８．５，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.32;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.34-7.11  (m,  80H),  5.37  (s,  1H),  5.29  (t,  J  =  10.2  Hz,  1H),  5.22  (t,  J  =  9.8  Hz,  1H),  5.02  (d,  J  =  3.6  Hz,  2H),  4.92-4.74  (m,  7H),  4.70-4.21  (m,  34H),  3.93-3.51  (m,  17H),  3.65-3.20  (m,  30H),  3.20  (t,  J  =  10.2  Hz,  4H),  2.98  (d,  J  =  3.8  Hz,  2H),  2.89  (s,  1H),  2.11  (s,  3H),  1.94  (s,  3H),  1.90  (s,  3H),  1.40-1.17  (m,  4H),  091-0.84  (m,  2H);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  170.1,  170.0,  169.6,  168.0,  154.3,  154.1,  139.6,  139.1,  139.0,  138.9,  138.7,  138.5,  138.3,  138.1,  138.0,  132.7,  131.1,  129.6,  129.4,  129.3,  129.0,  128.7,  128.6,  128.5,  128.4,  128.3,  128.2,  128.1,  128.0,  127.9,  127.6,  127.5,  127.3,  127.1,  127.0,  100.9,  100.6,  100.5,  98.6,  95.9,  95.8,  76.75,  76.3,  75.6,  74.8,  74.6,  74.5,  74.3,  74.2,  73.8,  73.7,  73.5,  73.2,  72.8,  72.5,  72.1,  69.6,  68.8,  68.5,  68.4,  68.2,  68.1,  62.8,  62.1,  57.6,  39.0,  37.3,  33.7,  32.5,  31.4,  30.6,  29.9,  29.2,  28.8,  26.6,  24.0,  23.4,  23.2,  22.9,  21.5,  21.3,  20.1,  15.5,  14.6,  14.4,  14.3,  11.2;ＨＲＭＳ（ネガティブモード）：Ｃ１８３Ｈ２０１Ｃｌ１２Ｎ７Ｏ４８に対するｍ／ｚ計算値；３６９２．０２２２  実測値３７３７．９６４５（Ｍ＋２Ｎａ）２−。
【化１０４】
2019515876.tif 000106
【０５００】
化合物Ｓ１７ｃ：銀トリフレート（０．０４６ｇ，０．１８０ｍｍｏｌ）、ビス（シクロペンタジエニル）ハフニウムジクロリド（０．０４８ｇ，０．１２６ｍｍｏｌ）および４Å活性化モレキュラーシーブを含む乾燥トルエン（５ｍＬ）の混合物をｒｔで１時間撹拌した。次いで、その反応混合物を−５０℃に冷却し、ドナー１３（０．１００ｇ，０．３６ｍｍｏｌ）およびアクセプターＳ１７ｂ（０．１１８ｇ，０．０３２ｍｍｏｌ）を含む５ｍＬのトルエンの溶液を加えた。その混合物を−１０℃で３時間撹拌し、Ｅｔ３Ｎでクエンチし、ＥｔＯＡｃで希釈し、セライトで濾過した。濾液をＮａＨＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１０％のアセトン（ａｃｔｏｎｅ）のトルエン溶液）によって精製して、Ｓ１７ｃ（０．１２０ｇ，５７％）を白色泡沫状物として得た。ＴＬＣ：（アセトン：トルエン＝１／９，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.60;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.58-7.54  (m,  6H),  7.50-6.98  (m,  134H),  5.57  (t,  J  =  10.3  Hz,  4H),  5.42-5.30  (m,  24H),  5.01-4.70  (m,  35H),  4.65-4.10  (m,  50H),  4.0-2.90  (m,  52H),  2.80  (d,  J  =  9.8  Hz,  2H),  2.15  (s,  3H),  2.09  (s,  3H),  2.07  (s,  3H),  1.96  (s,  3H),  1.93  (s,  3H),  1.88  (s,  3H),  1.86  (s,  3H),  1.34-1.17  (m,  5H),  0.89-0.81  (m,  2H);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  139.1,  139.0,  138.3,  138.2,  138.1,  130.1,  129.9,  129.1,  129.0,  128.9,  128.8,  128.7,  128.6,  128.4,  128.3,  128.1,  128.0,  127.9,  127.8,  127.6,  127.4,  74.8,  74.6,  73.7,  73.6,  71.9  ;ＨＲＭＳ（ネガティブモード）：Ｃ３２２Ｈ３４６Ｃｌ１８Ｎ１０Ｏ８９に対するｍ／ｚ計算値；６４１８．３９１０  実測値３２５３．３５５５（Ｍ＋２Ｎａ）２−。
【化１０５】
2019515876.tif 000107
【０５０１】
５−アミノペンチル−ジ−［β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２），（１→４）−α−Ｄ−マンノピラノシル］−（１→３），−［５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノ−シロネート−（２→６）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−α−Ｄ−マンノピラノシル］−（１→６）−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシドＧ２９：化合物Ｓ１７ｃ（０．０９５ｇ，０．０１５ｍｍｏｌ）を、一般的な手順２（方法２）に従うことによって脱保護して、所望のグリカンＧ２９（０．０１４ｇ，３４％）を白色粉末として得た。1H  NMR  (600  MHz,  D2O):  δ  4.99  (s,  1H,  H-1d),  4.75  (s,  1H,  H-1d’),  4.72  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H,  H-1e),  4.62  (d,  1H,  J  =  7.8  Hz,  1H,  H-1e’),  4.63  (s,  1H,  H-1c),  4.45  (dd,  J  =  3.6  &  7.8  Hz,  4H,  H-1e”,e’”,  f,f’),  4.36-4.31  (m,  4H),  4.09  (s,  3H),3.98-3.04(m,85H),2.83(t,J=10.2Hz,2H,リンカー),2.56(dd,J=3.2  &  8.4Hz,1H,H-3エカトリアル  g’),1.95(s,3H,-C(O)CH3),1.94(s,3H,-C(O)CH3),1.93(s,3H,-C(O)CH3),1.92(s,3H,-C(O)CH3),1.92(s,3H,-C(O)CH3),1.90(s,3H,-C(O)CH3),1.89(s,3H,-C(O)CH3),1.61-1.42(m,5H,H-3アキシャル  ｇ’およびリンカーＣＨ２),1.30-1.24(m,2H,リンカー);13C  NMR  (150  MHz,  D2O):  δ  186.6,  174.7,  174.3,  174.2,  103.3,  102.7,  101.8,  100.8,  99.9,  98.5,  97.3,  78.9,  78.1,  77.8,  75.1,  74.4,  74.2,  74.1,  72.2,  71.7,  71.5,  70.7,  69.8,  68.3,  68.1,  63.1,  62.4,  60.8,  60.2,  59.7,  54.9,  54.6,  51.6,  39.9,  39.1,  27.8,  26.1,  22.2,  21.8,  17.6;ＥＳＩ−ＭＳ（ネガティブモード）：Ｃ１０６Ｈ１７８Ｎ８Ｏ７４に対するｍ／ｚ計算値；２７４７．０４１１  実測値１３９６．０１７７（Ｍ＋Ｎａ）２−。
【０５０２】
グリカンＧ３０の合成。
【０５０３】
スキームＳ１８に描かれているように、スキームＳ１６からの前駆体（ｐｒｅｃｕｓｓｏｒ）Ｓ１６ｂを、銀トリフレートおよびハフノセンジクロリドの促進下において、ドナー１１を用いた６−Ｏグリコシル化に対するアクセプターとして使用して、所望のＳ１８ａを得た。最後の脱保護によって、ジシアリル化された四分岐複合グリカンＧ３０を得た。
【化１０６】
2019515876.tif 000108
【０５０４】
スキームＳ１８：Ｇ３０の調製。ｉ、１１、ＡｇＯＴｆ、Ｃｐ２ＨｆＣｌ２、トルエン、−４０℃、３７％；ｉｉ，（１）ＬｉＯＨ、１，４−ジオキサン、９０℃，（２）Ａｃ２Ｏ、ピリジン，（３）ＮａＯＭｅ、ＭｅＯＨ，（４）Ｐｄ（ＯＨ）２、ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ、Ｈ２、４５％。
【化１０７】
2019515876.tif 000109
【０５０５】
化合物Ｓ１８ａ：銀トリフレート（０．０５１ｇ，０．２００ｍｍｏｌ）、ビス（シクロペンタジエニル）ハフニウムジクロリド（０．０５３ｇ，０．１４０ｍｍｏｌ）および４Å活性化モレキュラーシーブを含む乾燥トルエン（５ｍＬ）の混合物を室温で１時間撹拌した。次いで、その反応混合物を−５０℃に冷却し、ドナー１１（０．１４４ｇ，０．０６０ｍｍｏｌ）およびアクセプターＳ１６ｂ（０．１８０ｇ，０．０４０ｍｍｏｌ）を含む５ｍＬのトルエンの溶液を加えた。その混合物を−１０℃で３時間撹拌し、Ｅｔ３Ｎでクエンチし、ＥｔＯＡｃで希釈し、セライトで濾過した。濾液をＮａＨＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１０％のアセトンのトルエン溶液）によって精製して、Ｓ１８ａ（０．１０３ｇ，３７％）を白色泡沫状物として得た。ＴＬＣ：（アセトン：トルエン＝２／８，ｖ／ｖ）：Ｒｆ＝０．５３；1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.69-7.52  (m,  20H),  7.33-7.06  (m,  130H),  5.60  (m,  17H),  4.80-4.30  (m,  40H),  4.20-4.00  (m,  50H),  3.99-3.02  (m,  25H),  2.08  (s,  9H),  2.07  (s,  6H),  2.05  (s,  6H),  2.02  (s,  6H),  1.78-1.74  (m,  6H),  0.91-0.84  (m,  2H);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  170.9,  170.4,  170.2,  169.8,  169.4,  169.3,  132.7,  131.1,  129.0,  128.7,  128.4,  128.3,  128.2,  128.0,  127.8,  127.7,  127.6,  127.5,  68.8,  68.4,  39.0,  37.3,  33.7,  31.4,  30.6,  29.9,  29.2,  26.6,  26.0,  24.0,  23.2,  22.9,  20.1,  14.6,  14.2,  11.40;ＥＳＩ−ＭＳ（ネガティブモード）：Ｃ３３７Ｈ３６１Ｃｌ１８Ｎ１１Ｏ１０１に対するｍ／ｚ計算値；６８０６．６７１０  実測値７２３．５９６９（Ｍ＋Ｋ）１０−。
【化１０８】
2019515876.tif 000110
【０５０６】
５−アミノペンチル−ジ−［５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノ−シロネート−（２→６）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２），（１→４）−α−Ｄ−マンノピラノシル］−（１→３），−ジ−［−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６），（１→２）−α−Ｄ−マンノピラノシル］−（１→６）−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシドＧ３０：化合物Ｓ１８ａ（０．０７５ｇ，０．０１０ｍｍｏｌ）を、一般的な手順２（方法２）に従うことによって脱保護して、所望のグリカンＧ３０（０．０１５ｍｇ，４５％）を得た。1H  NMR(600MHz,D2O):δ5.12(s,1H,H-1d),4.86-4.74(m,3H,H-1d’,c,b,D2Oと重複),4.59-4.55(m,5H,H-1e,e’,e”,e’”,a),1.48-4.42(m,4H,H-1f,f’,f”,f’”),4.21-4.06(m,5H),3.98-3.3.20(m,91H),2.98(t,J=10.7Hz,2H,リンカーCH2),2.66(dd,J=3.7  &  10.1Hz,2H,2xH-3エカトリアル  g,g’),2.12(s,3H),2.09(s,3H,-C(O)CH3),2.06(s,3H,-C(O)CH3),2.05(s,3H,-C(O)CH3),2.03(s,12H,-C(O)CH3),1.75-1.54(m,6H,2xH-3アキシャル．ｇ，ｇ’およびリンカーCH2),1.42-1.36(m,2H,リンカー);13C  NMR  (150  MHz,  D2O):  δ  174.7,  174.2,  174.1,  103.4,  102.7,  101.3,  101.2,  101.0,  100.8,  100.6,  99.9,  98.9,  97.9,  78.1,  75.1,  74.3,  73.4,  72.3,  72.1,  71.7,  70.7,  70.4,  69.8,  68.3,  68.0,  59.9,  59.7,  54.7,  51.6,  39.9,  27.8,  22.7,  22.0,  21.9,  21.8;ＥＳＩ−ＭＳ（ネガティブモード）：Ｃ１１７Ｈ１９５Ｎ９Ｏ８２に対するｍ／ｚ計算値；３０３９．８２８０  実測値１５１８．５５８５（Ｍ−Ｈ）２−。
【０５０７】
グリカンＧ３１の合成。
【０５０８】
スキームＳ１６に由来する中間体（Ｉｎｔｅｒｍｉｄｉａｔｅ）Ｓ１６ｂを、ＡｇＯＴｆ／Ｃｐ２ＨｆＣｌ２の存在下においてドナー１３を使用するα選択的なグリコシル化のために使用して、Ｓ１９ａを７４％収率で得た。しかしながら、新しく形成された生成物は、ＴＬＣにおいてアクセプターと重複した（スキームＳ１９）。次いで、Ｓ１９ａをさらに脱保護して、グリカンＧ３１を得た。
【化１０９】
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【０５０９】
スキームＳ１９：Ｇ３１の調製。ｉ、１３、ＡｇＯＴｆ、Ｃｐ２ＨｆＣｌ２、トルエン、−５０℃、７４％；ｉｉ，（１）ＬｉＯＨ、１，４−ジオキサン、９０℃，（２）Ａｃ２Ｏ、ピリジン，（３）ＮａＯＭｅ、ＭｅＯＨ，（４）Ｐｄ（ＯＨ）２、ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ、Ｈ２、４７％。
【化１１０】
2019515876.tif 000112
【０５１０】
化合物Ｓ１９ａ：銀トリフレート（０．０４２ｇ，０．１６５ｍｍｏｌ）、ビス（シクロペンタジエニル）ハフニウムジクロリド（０．０４３ｇ，０．１１５ｍｍｏｌ）および４Å活性化モレキュラーシーブを含む乾燥トルエン（５ｍＬ）の混合物をｒｔで１時間撹拌した。次いで、その反応混合物を−５０℃に冷却し、ドナー１３（０．１００ｇ，０．０３６ｍｍｏｌ）およびアクセプターＳ１６ｂ（０．１５０ｇ，０．０３３ｍｍｏｌ）を含む５ｍＬのトルエンの溶液を加えた。その反応混合物を−２０℃で２時間撹拌し、Ｅｔ３Ｎでクエンチし、ＥｔＯＡｃで希釈し、セライトで濾過した。濾液をＮａＨＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１５％のアセトンのトルエン溶液）によって精製して、Ｓ１９ａ（０．１８３ｇ，７４％）を白色泡沫状物として得た。ＴＬＣ：（アセトン：トルエン＝２／８，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.50;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.90-7.83  (m,  9H),  7.69-7.67  (m,  3H),  7.57-7.50  (m,  3H),  7.38-7.04  (m,  125H),  5.77  (t,  J  =  10.2  Hz,  4H),  5.54-5.40  (m,  20H),  5.39  (t,  J  =  8.4  Hz,  4H),  5.08  (t,  J  =  7.8  Hz,  4H),  4.98-4.60  (m,  25H),  4.53-4.42  (m,  31H),  4.30-4.10  (m,  35H),  4.00-3.80  (m,  42H),  3.21-3.18  (m,  64H),  2.93-2.78  (m,  4H),  2.08  (s,  6H),  2.07  (s,  6H),  2.05  (s,  3H),  2.02  (s,  3H),  1.98  (s,  6H),  1.94  (s,  6H),  1.74-1.18  (m,  7H),  0.91-0.84  (m,  2H);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  171.8,  171.7,  170.8,  169.9,  169.8,  168.5,  168.0,  166.1,  165.4,  159.5,  132.7,  131.7,  130.1,  129.9,  129.2,  128.9,  128.8,  128.7,  128.6,  128.4,  128.3,  128.2,  128.1,  128.0,  127.9,  127.8,  127.7,  127.6,  127.5,  100.7,  100.6,  100.4,  95.8,  74.9,  74.6,  74.2,  73.9,  73.7,  73.6,  73.2,  72.9,  72.2,  71.9,  71.0,  70.5,  69.3,  68.5,  68.3,  68.0,  67.3,  66.1,  65.3,  62.3,  61.2,  53.4,  51.5,  39.0,  37.3,  33.7,  32.4,  32.2,  30.6,  29.9,  29.6,  29.4,  29.3,  28.8,  26.6,  24.0,  23.9,  23.5,  23.4,  23.1,  21.2,  20.1,  15.5,  14.6,  14.4,  14.3,  11.2;ＨＲＭＳ（ネガティブモード）：Ｃ３５２Ｈ３７６Ｃｌ１８Ｎ１２Ｏ１１３に対するｍ／ｚ計算値；７２２０．９５１０  実測値３６５４．９２２０（Ｍ＋２Ｎａ）２−。
【化１１１】
2019515876.tif 000113
【０５１１】
５−アミノペンチル−ジ−［５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノ−シロネート−（２→６）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２），（１→４）−α−Ｄ−マンノピラノシル］−（１→３），−［５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノ−シロネート−（２→６）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−α−Ｄ−マンノピラノシル］−（１→６）−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシドＧ３１：化合物Ｓ１９ａ（０．１８０ｇ，０．０２４ｍｍｏｌ）を、一般的な手順２（方法２）に従うことによって脱保護して、所望のグリカンＧ３１（０．０３９ｇ，４７％）を得た。1H  NMR(600MHz,D2O):δ5.12(s,1H,H-1d),4.87(s,2H,H-1d’,c),4.75(d,J=8.4Hz,2H,H-1b,e),5.59-4.55(m,5H,重複H-1a,e’,e’”,e””,f),4.49-4.42(m,5H,重複H-1f’-f””),4.21-4.19(m,4H),4.06-3.54(m,95H),2.97(t,J=10.2Hz,2H,リンカー-CH2),2.66(dd,J=3.2  &  7.8Hz,3H,H-3g,g’,g’”エカトリアル),2.09(s,3H),2.06(s,9H),2.04(s,3H),2.02(s,12H),1.74(m,2H,リンカー),1.64(t,J=10.2Hz,3H,H-3g,g’,g’”アキシャル),1.59-1.57(m,2H,リンカー),1.39-1.37(m,2H,リンカー);13C  NMR  (150  MHz,  D2O):  δ  174.8,  174.7,  174.5,  174.4,  174.3,  174.1,  173.3,  103.5,  102.9,  101.7,  101.4,  101.2,  100.2,  100.0,  99.8,  99.6,  99.3,  80.8,  80.6,  80.3,  79.3,  78.4,  78.3,  76.7,  75.3,  74.3,  74.2,  74.1,  74.0,  73.8,  72.9,  72.8,  72.6,  72.4,  72.3,  72.2,  72.1,  72.0,  71.9,  71.7,  71.3,  70.8,  70.4,  70.3,  70.2,  68.4,  68.4,  63.4,  62.9,  60.4,  60.3,  60.2,  59.8,  54.8,  54.3,  54.2,  51.8,  51.0,  43.7,  43.3,  39.8,  39.5,  34.4,  27.5,  26.3,  22.6,  22.4,  22.4,  22.2,  22.0,  21.9  ;ＥＳＩ−ＭＳ（ネガティブモード）：Ｃ１２８Ｈ２１２Ｎ１０Ｏ９０に対するｍ／ｚ計算値；３３３１．０８４０  実測値１６６４．１１０８（Ｍ−Ｈ）２−。
【０５１２】
コアのフコシル化されたグリカンＧ３およびＧ１９の合成  Ｓ
【０５１３】
コアフコースを有する少マンノース型構造Ｇ３１２を、ドナーＳ２０ｉによるジオールアクセプターＳ２０ｊのフコシル化を介して、還元末端二糖Ｓ２０ｋからアセンブルした（スキームＳ２０）。Ｌｅｍｉｅｕｘおよび共同研究者１４によって初めて開発されたインサイチュアノマー化（ａｎｏｍａｒｉｚａｔｉｏｎ）プロトコル（ＣｕＢｒ２、臭化テトラブチルアンモニウム）によってα−選択性を高めて、二糖Ｓ２０ｋを６７％収率で得て、その位置化学および立体化学がＮＭＲ解析によって確認された。スルホキシドドナーＳ２０ａ１３およびアクセプターＳ２０ｂを用いた重要なβ−マンノシル結合の形成を、ＤＴＢＰおよびＴｆ２Ｏを使用して行って、二糖Ｓ２０ｃを６７％収率、１：７のα／β比で得た。３”におけるｐ−メトキシベンジルエーテル保護を、ＤＤＱを使用することによって除去して、３”−ＯＨ  Ｓ２０ｄを得て、これをさらに、ＢＦ３．ＯＥｔ２の促進下においてイミデート１を使用することによる３”−Ｏ  α−マンノシル化に供して、三糖Ｓ２０ｅを得た。Ｓ２０ｅの選択的なベンジリデン開環によって、Ｓ２０ｆが生成され、それはさらに６”−Ｏ位においてα−マンノシル化を起こして、四糖Ｓ２０ｇをもたらした。次いで、化合物Ｓ２０ｇを、ＰｄＣｌ２、次いで、トリクロロアセトイミデートおよびＤＢＵで処理することによってグリコシルイミデートＳ２０ｈに変換した。最後に、ＢＦ３．ＯＥｔ２の存在下におけるイミデートＳ２０ｈと二糖Ｓ２０ｋ１２との縮合によって、所望の六糖Ｓ２０ｉを得た。完全な脱保護によって、少マンノース型オリゴ糖Ｇ３を得た。
【化１１２】
2019515876.tif 000114
【０５１４】
スキームＳ２０：グリカンＧ３の調製。ｉ、ＤＴＢＰ、Ｔｆ２Ｏ、ＣＨ２Ｃｌ２、−６０℃、３時間、６７％（α／β  １：７）；ｉｉ、ＤＤＱ、ＣＨ２Ｃｌ２：Ｈ２０＝１０／１、３時間、７０％；ｉｉｉ、１、ＢＦ３．ＯＥｔ２、ＣＨ２Ｃｌ２、４ÅＭＳ、−４０℃、１時間、８１％；ｉｖ、トリエチルシラン（Ｔｒｉｅｔｈｙｌ  ｓｉｌｌａｎｅ）、ＰｈＢＣｌ２、ＣＨ２Ｃｌ２、１時間、７３％；ｖ、ＢＦ３．ＯＥｔ２、ＣＨ２Ｃｌ２、４ÅＭＳ、−２０℃、２時間、６５％；ｖｉ，（ｉ）ＰｄＣｌ２、ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２、ＲＴ、６時間，（ｉｉ）ＤＢＵ、トリクロロアセトニトリル、ＣＨ２Ｃｌ２、２工程で６３％；ｖｉｉ、Ｃｕ（ＩＩ）Ｂｒ、ＴＢＡＢ、ＤＭＦ：ＣＨ２Ｃｌ２、４ÅＭＳ，０℃〜ＲＴ、一晩、７６％；ｖｉｉｉ、ＢＦ３．ＯＥｔ２、ＣＨ２Ｃｌ２、４ÅＭＳ，−７０℃、２時間、４５％；ｉｘ，（ｉ）ＮＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２、ｎＢｕＯＨ、１００℃；（ｉｉ）Ａｃ２Ｏ、ピリジン、０℃〜ＲＴ；（ｉｉｉ）ＮａＯＭｅ、ＭｅＯＨ；（ｉｖ）Ｐｄ（ＯＨ）２、ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ：ＨＣＯＯＨ（５：３：２）、Ｈ２、４工程で２２％。ＴＢＡＢ＝臭化テトラブチルアンモニウム。
【化１１３】
2019515876.tif 000115
【０５１５】
アリル−Ｏ−２−Ｏ−ベンジル−３−Ｏ−ｐ−メトキシ−ベンジル−４，６−Ｏ−ベンジリジン−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−Ｏ−（３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド（Ｓ２０ｃ）：ドナーＳ２０ａ（０．２７２ｇ，０．４８３ｍｍｏｌ）および活性化４Åモレキュラーシーブ（０．５ｇ）を含むＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）の混合物をｒｔで１時間撹拌した。その反応混合物を−６０℃に冷却し、２，６−ジ−ｔｅｒ−ブチルピリジン（２６８μＬ，１．２４ｍｍｏｌ）の後、Ｔｆ２Ｏ（７９μＬ，０．４８３ｍｍｏｌ）を加え、４０分間撹拌した。アクセプターＳ２０ｂ（０．２ｇ，０．３７８ｍｍｏｌ）を含むＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）の溶液をゆっくり加え、ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン，１／９）が出発物質の消費とともに生成物の形成を示すまで、得られた反応混合物を１時間撹拌した。その反応混合物をＥｔ３Ｎでクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、セライトで濾過し、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１０％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、Ｓ２０ｃ（０．２３０ｇ，６７％）を白色固体として得た。ＴＬＣ：（酢酸エチル：トルエン＝１／９，ｖ／ｖ）：Ｒｆ＝０．５２；１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．６５−７．４５（ｍ，８Ｈ，Ａｒ−Ｈ），７．３５−７．２１（ｍ，１３Ｈ，Ａｒ−Ｈ），６．９１−６．９０（ｍ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ），６．９０−６．８１（ｍ，５Ｈ，Ａｒ−Ｈ），５．６７−５．６５（ｍ，１Ｈ，アリル），５．４９（ｓ，１Ｈ，Ｐｈ−ＣＨ，ベンジリデン），5.13  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H,  H-1a),  5.07  (d,  J  =  8.8  Hz,  1H),  4.99  (d,  J  =  10.4  Hz,  1H),  4.87-4.82  (m,  3H),  4.65  (d,  J  =  5.4  Hz,  1H),  4.63  (d,  J  =  5.4  Hz,  1H),  4.53  (s,  1H),  4.50  (d,  J  =  12.0  Hz,  1H),  4.41  (d,  J  =  6.0  Hz,  1H),  4.39  (d,  J  =  6.0  Hz,  1H),  4.24-4.21  (m,  2H),  4.05-3.96  (m,  3H),3.81(s,3H,PMBのOMe),3.71  (d,  J  =  3.0  Hz,  1H),  3.64  (d,  J  =  10.8  Hz,  1H),  3.56-3.52  (m,  2H),  3.45-3.47  (d,  J  =  10.0  Hz,  1H),  3.40  (dd,  J  =  3.0,  6.6  Hz,  1H),  3.13-3.12  (m,  1H);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  159.46,  139.08,  138.99,  138.12,  138.00,  134.05,  130.93,  129.37,  129.22,  128.84,  128.60,  128.54,  128.47,  128.45,  128.26,  128.12,  128.09,  128.07,  127.83,  127.21,  126.41,  117.60,  114.04,  102.28,  101.63,  97.70,  79.85,  78.99,  78.33,  77.44,  75.29,  75.03,  74.95,  73.86,  72.61,  69.99,  68.86,  68.84,  67.66,  55.96,  55.58;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ５９Ｈ５９ＮＯ１３に対するｍ／ｚ計算値：９８９．３８７９；実測値１０１２．３８８８（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化１１４】
2019515876.tif 000116
【０５１６】
アリル−Ｏ−２−Ｏ−ベンジル−４，６−Ｏ−ベンジリジン−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−Ｏ−（３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド（Ｓ２０ｄ）：Ｓ２０ｃ（０．５ｇ，０．５０５ｍｍｏｌ）を含む１０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２：Ｈ２Ｏ（１０：１）の溶液に、ＤＤＱ（０．２１９ｇ、１．０１ｍｍｏｌ）を０℃において加え、得られた反応混合物を３時間撹拌した。次いで、その反応混合物を濾過し、有機層をＨ２Ｏ（２×３０ｍＬ）で洗浄した。水層をＣＨ２Ｃｌ２（２×５０ｍＬ）でさらに抽出した。合わせた有機層をブライン溶液（４０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１０％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、Ｓ２０ｄ（０．３０８ｇ，７０％）を無色泡沫状物として得た。ＴＬＣ：（酢酸エチル：トルエン＝２／８，ｖ／ｖ）：Ｒｆ＝０．４２；1H  NMR(600MHz,CDCl3):δ7.65-7.44(m,6H,Ar-H),7.43-7.28(m,13H,Ar-H),6.92-6.90(m,2H,Ar-H),6.83-6.81(m,3H,Ar-H),5.68-5.64(m,1H,アリル),5.42(s,1H,Ph-CH,ベンジリデン),5.14  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H,  H-1a),  5.08  (d,  J  =  12.8  Hz,  1H),  5.01-4.98  (m,  2H),  4.85  (d,  J  =  12.6  Hz,  1H),  4.74  (d,  J  =  12.0  Hz,  1H),  4.65  (d,  J  =  12.0  Hz,  1H),  4.62  (s,  1H,  H-1b),  4.84  (d,  J  =  12.0  Hz,  1H),  4.40  (d,  J  =  12.0  Hz,  1H),  4.25-4.16  (t,  J  =  9.6  Hz,  1H),  3.99  (dd,  J  =  13.0  &  6.3  Hz,  1H),  3.73-3.65  (m,  4H),  3.54-3.47  (m,  3H),  3.13-3.09  (m,  1H);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  138.97,  138.44,  137.93,  137.56,  133.98,  129.37,  128.92,  128.79,  128.53,  128.43,  128.35,  128.26,  128.21,  128.10,  127.99,  127.27,  126.58,  117.64,  102.33,  102.25,  97.66,  79.91,  79.42,  79.15,  77.43,  76.00,  75.03,  74.89,  74.01,  71.24,  69.99,  68.78,  68.67,  67.17,  55.90;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ５１Ｈ５１ＮＯ１２に対するｍ／ｚ計算値：８６９．３３０３；実測値８９２．３３１４（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化１１５】
2019515876.tif 000117
【０５１７】
アリル（Ａｌｌｙ）−Ｏ−（２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−２−Ｏ−ベンジル−４，６−Ｏ−ベンジリジン−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−Ｏ−（３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド（Ｓ２０ｅ）：ドナー１（０．５３７ｇ，０．８６３ｍｍｏｌ）、アクセプターＳ２０ｄ（０．５０ｇ，０．５７４ｍｍｏｌ）および活性化４Åモレキュラーシーブを含む乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）の混合物をｒｔで３０分間撹拌した。その反応物を−４０℃に冷却し、次いで、三フッ化ホウ素エチルエーテラート（３２μＬ，０．２８８ｍｍｏｌ）をゆっくり加え、得られた反応混合物を１時間撹拌した。その反応物を、Ｅｔ３Ｎを加えることによってクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、セライトで濾過し、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→２０％のＥＡのヘキサン溶液）によって精製して、Ｓ２０ｅ（０．６３０ｇ，８１％）を無色油状物として得た。ＴＬＣ：（酢酸エチル：ヘキサン＝３／７，ｖ／ｖ）：Ｒｆ＝０．６２；1H  NMR(600MHz,CDCl3):δ7.41-7.39(m,4H,Ar-H),7.39-7.25(m,30H,Ar-H),7.16-6.82(m,5H,Ar-H),5.57-5.57(m,1H,アリル),5.59(d,J=3.0Hz,1H),5.47(s,1H,Ph-CH,ベンジリデン),5.29  (d,  J  =  2.1  Hz,  1H,  H-1c),  5.13  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H,  H-1a),  5.08  (dd,  J  =  6.0  &  12.2  Hz,  1H),  5.00  (dd,  J  =  6.0,  10.2  Hz,  1H),  4.87-4.82  (m,  2H),  4.79-4.78  (m,  2H),  4.66-4.59  (m,  3H),  4.54  (s,  1H,  H-  1b),  4.46-4.44  (m,  3H),  4.22-4.20  (m,  2H),  4.17-4.14  (m,  2H),  4.03-3.93  (m,  4H),  3.82-3.71  (m,  5H),  3.64-3.62  (m,  2H),  3.60-3.52  (m,  2H),  3.50  (d,  J  =  8.2Hz,  1H),  3.19  (m,  1H),  2.34  (s,  3H,  -  C(O)CH3);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  170.26,  163.58,  162.83,  138.98,  138.77,  138.60,  138.40,  138.09,  138.04,  137.58,  133.97,  131.97,  129.01,  128.79,  128.71,  128.64,  128.62,  128.56,  128.52,  128.38,  128.32,  128.24,  128.12,  128.05,  127.97,  127.94,  127.84,  127.18,  126.26,  123.57,  117.58,  101.76,  101.35,  98.96,  97.63,  79.24,  78.91,  78.56,  78.22,  75.76,  75.62,  75.03,  74.77,  74.44,  73.75,  72.55,  71.83,  69.94,  69.32,  68.64,  68.54,  68.39,  67.16,  55.88,  36.75,  31.70,  21.27;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ８０Ｈ８１ＮＯ１８に対するｍ／ｚ計算値：１３４３．５３４６；実測値１３６６．５３６９（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化１１６】
2019515876.tif 000118
【０５１８】
アリル−Ｏ−（２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−２，４−Ｏ−ジ−ベンジル−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−Ｏ−（３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド（Ｓ２０ｆ）：化合物Ｓ２０ｅ（０．６３０ｇ，０．４６８ｍｍｏｌ）および活性化４Åモレキュラーシーブを含む２０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２の混合物をｒｔで１時間撹拌した。その反応混合物を−７８℃に冷却し、トリエチルシラン（１４８μＬ，０．９４６ｍｍｏｌ）の後、ジクロロフェニルボラン（１４６μＬ，１．１８ｍｍｏｌ）を加え、１時間撹拌した。その反応物をＥｔ３Ｎ、メタノールによってクエンチし、セライトで濾過し、真空中で濃縮した。残渣をメタノールと２〜３回共蒸留した後、フラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１０％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、アルコールＳ２０ｆ（０．４６０ｇ，７３％）を得た。ＴＬＣ：（酢酸エチル：トルエン＝２／８，ｖ／ｖ）：Rf=  0.42;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.73-7.57  (m,  4H,  Ar-H),  7.50-7.08  (m,  31H,  Ar-H),  6.83-6.81  (m,  4H,  Ar-H),  5.76-5.69  (m,  1H,  Allyl),  5.44  (t,  J  =  3.0  Hz,  1H),  5.13  (s,  1H,  H-1c),  5.12  (s,  1H),  5.08  (d,  J  =  7.8Hz,  1H,  H-  1a),  5.01  (d,  J  =  11Hz,  1H),  4.93  (d,  J  =  11.0  Hz,  1H),  4.87  (d,  J  =  8.6  Hz,  1H),  4.83  (d,  J  =  8.0  Hz,  1H),  4.76  (d,  J  =  12.0  Hz,  1H),  4.69  (d,  J  =  11.0  Hz,  1H),  4.62  (t,  J  =  8.6  Hz,  1H),  4.57  (t,  J  =  7.8  Hz,  2H),  4.50  (d,  J  =  10.8  Hz,  1H),  4.44  (d,  J  =  2.5  Hz,  1H),  4.42  (s,  1H),  4.40  (d,  J  =  8.0  Hz,  1H),  4.35  (d,  J  =  12.0  Hz,  1H),  4.22-4.181  (m,  3H),  4.00-3.99  (m,  2H),  4.90-3.91  (s,  1H),  3.83-3.82  (m,  1H),  3.83  (d,  J  =  2.4  Hz,  1H),  3.77-3.78  (m,  2H),  3.64-3.54  (m,  6H),  3.41-3.39  (m,  2H),  3.19-3.18  (m,  1H),  2.08  (s,  3H);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ170.34,  138.90,  138.77,  138.73,  138.36,  138.14,  138.07,  138.03,  135.91,  134.50,  134.03,  133.86,  132.97,  131.94,  131.40,  129.31,  128.86,  128.68,  128.66,  128.61,  128.57,  128.50,  128.45,  128.38,  128.26,  128.20,  128.12,  128.11,  128.03,  127.97,  127.94,  127.79,  127.76,  127.72,  127.47,  127.35,  123.50,  117.59,  101.04,  99.89,  97.61,  80.92,  78.64,  78.48,  78.41,  78.21,  75.93,  75.26,  75.20,  75.19,  75.16,  74.82,  74.59,  74.52,  73.78,  73.75,  72.61,  72.11,  69.91,  69.50,  68.99,  68.43,  62.25,  55.86,  21.29;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ８０Ｈ８３ＮＯ１８に対するｍ／ｚ計算値：１３４５．５５０２；実測値１３６８．５５２７（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化１１７】
2019515876.tif 000119
【０５１９】
アリル−Ｏ−ジ−（２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３），（１→６）−２，４−Ｏ−ジ−ベンジル−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−Ｏ−（３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド（Ｓ２０ｇ）：ドナー１（０．４２９ｇ，０．６９０ｍｍｏｌ）、アクセプターＳ２０ｆ（０．４６０ｇ，０．３４５ｍｍｏｌ）および活性化４Åモレキュラーシーブを含む乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）の混合物をｒｔで３０分間撹拌した。その反応物を−２０℃に冷却し、次いで、三フッ化ホウ素エチルエーテラート（１９μＬ，０．１７３ｍｍｏｌ）をゆっくり加え、得られた反応混合物を２時間撹拌した。その反応物を、Ｅｔ３Ｎを加えることによってクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、セライトで濾過し、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→２０％のＥＡのヘキサン溶液）によって精製して、Ｓ５７（０．３８０ｇ，６５％）を無色泡沫状物として得た。ＴＬＣ：（酢酸エチル：ヘキサン＝３／７，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.56;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):δ  7.60-7.29  (m,  4H,  Ar-H),  7.28-7.08  (m,  37H,  AR-H),  7.07-7.08  (m,  8H,  Ar-H),  7.07-6.93  (d,  J  =  8.0  Hz,  1H,  Ar-H),  6.82-6.59  (m,  3H,  Ar-H),  5.61-5.59  (m,  1H,  Allyl),  5.43  (d,  J  =  6.0  Hz,  1H,  H-2c),  5.31  (d,  J  =  6.0  Hz,  1H,  H-2d),  5.10  (d,  J  =  3.0  Hz,  1H,  H-  1c),  5.06  (d,  J  =  8.0  Hz,  1H,  H-1a),  4.99  (d,  J  =  10.0  Hz,  1H),  4.85  (d,  J  =  8.0  Hz,  1H),  4.83  (s,  1H,  H-1d),  4.67  (d,  J  =  8.0  Hz,  1H),  4.64-4.62  (q,  4H),  4.56  (d,  J  =  3.0  Hz,  1H,  H-1b),  4.55-4.45  (m,  8H),  4.45-4.39  (m,  9H),  4.38  (d,  J  =  10.0  Hz,  1H),  4.21  (d,  J  =  9.0  Hz,  1H),  4.19-4.10  (m,  2H),  4.08-3.70  (m,  10H),  3.69-3.49  (m,  7H),  3.39  (d,  J  =  9.1  Hz,  1H),  3.19  (d,  J  =  9.1  Hz,  1H),  2.07  (s,  3H,  -C(O)CH3),  1.82  (s,  3H,  -C(O)CH3);  13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  170.31,  170.11,  163.43,  139.07,  138.93,  138.83,  138.80,  138.65,  138.35,  138.32,  138.21,  138.09,  134.08,  133.77,  132.00,  128.87,  128.76,  128.66,  128.56,  128.43,  128.37,  128.16,  127.99,  127.91,  127.82,  127.73,  127.13,  123.46,  117.45,  102.07,  99.92,  99.74,  98.62,  97.55,  81.40,  79.81,  78.31,  78.23,  76.84,  75.87,  75.77,  75.66,  74.87,  74.65,  74.44,  74.38,  31.21,  21.29,  21.23;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ１０９Ｈ１１３ＮＯ２４に対するｍ／ｚ計算値：１８２０．７５７８；実測値１８４３．７６７６（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化１１８】
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【０５２０】
ジ−（２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３），（１→６）−２，４−Ｏ−ジ−ベンジル−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−Ｏ−（３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコ−ピラノシルトリクロロアセトイミデート（Ｓ２０ｈ）：Ｓ２０ｇ（０．２ｇ，０．１０９ｍｍｏｌ）を含む１０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ（１／１）の溶液に、ＰｄＣｌ２（２０ｍｇ）を加え、ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン，２／８）が出発物質の消費とともに生成物の形成を示すまで、室温で６時間撹拌した。次いで、その反応混合物を真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１０％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、アルコール（０．１４０ｇ，６０％）を無色泡沫状物として得た。アルコール（０．１５０ｇ，０．０８４ｍｍｏｌ）を含むＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）の溶液に、トリクロロアセトアミデート（３３μＬ，０．３３６ｍｍｏｌ）の後、ＤＢＵ（１２μＬ，０．０３３ｍｍｏｌ）を０℃において加え、ｒｔで８時間撹拌した。その反応物をＥｔ３Ｎでクエンチし、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１０％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、Ｓ２０ｈ（０．１２１ｇ，６７％）を無色油状物として得た。ＴＬＣ：（酢酸エチル：トルエン＝２／８，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.47;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  8.51  (s,  1H,  C=NH),  7.53-7.42  (m,  4H,  Ar-H),  7.40-7.00  (m,  49H,  Ar-H),  6.58  (d,  J  =  6.6  Hz,  2H,  Ar-H),  6.52-6.50  (m,  3H,  Ar-H),  5.43  (s,  1H,  H-1a),  5.32  (s,  1H,  H-1c),  5.03  (s,  1H),  5.01  (t,  J  =  7.8  Hz,  1H),  4.90-4.78  (m,  6H),  4.67-4.45  (m,  7H),  4.43-4.30  (m,  9H),  4.28-4.20  (m,  2H),  4.10  (t,  J  =  7.8  Hz,  1H),  3.39-3.42  (m,  18H),  3.19  (d,  J  =  9.3  Hz,  1H),  2.09  (s,  3H,  -  C(O)CH3),  1.83  (s,  3H,  -C(O)CH3).
【化１１９】
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【０５２１】
５−アジドペンチル−Ｏ−２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル−（１→６）−３−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド（Ｓ２０ｋ）：ＣｕＢｒ２（０．４５０ｇ，２．０１ｍｍｏｌ）、Ｂｕ４ＮＢｒ（０．６５５ｇ，２．０３ｍｍｏｌ）および活性化４Åモレキュラーシーブを含む１０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２：ＤＭＦ（２／１）の混合物を撹拌し、氷水浴で冷却した。ドナーＳ２０ｉ（０．５ｇ，０．９２５ｍｍｏｌ）およびアクセプターＳ２０ｊ（０．４５０ｇ，０．８８２ｍｍｏｌ）を含むＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）の溶液を滴下し、得られた反応混合物をｒｔで一晩撹拌した。ＴＬＣ（酢酸エチル：ヘキサン，４／６）は、出発物質の消費とともに生成物の形成を示した。その反応物をＮａＨＣＯ３水溶液でクエンチし、酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈し、セライトで濾過した。濾液をＮａＨＣＯ３水溶液、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。有機層を真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→３０％のＥＡのヘキサン溶液）によって精製して、Ｓ２０ｋ（０．６０４ｇ，７６％）を無色油状物として得た。ＴＬＣ：（酢酸エチル：ヘキサン＝４／６，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.47;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.80-7.64  (m,  4H,  Ar-H),  7.41-7.23  (m,  15H,  Ar-  H),  7.00-6.98  (m,  2H,  Ar-H),  6.90-6.87  (m,  3H,  Ar-H),  5.06  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H,  H-1a),  4.96  (d,  J  =  11.4  Hz,  1H),  4.86  (d,  J  =  11.4  Hz,  1H),  4.82-4.72  (m,  4H),  4.67  (d,  J  =  12.0  Hz,  1H),  4.64  (d,  J  =  12.0  Hz,  1H),  4.48  (d,  J  =  12.6  Hz,  1H),  4.16-4.13  (m,  1H),  4.08-4.05  (m,  2H),  3.39-3.95  (m,  2H),  3.90-3.83  (m,  3H),  3.78  (m,  1H),  3.73-3.69  (m,  2H),  3.56-3.53  (m,  1H),  3.35-3.21  (m,  1H),2.00-2.03(m,2H,-CCH2C-,リンカー),1.38-1.30(m,4H,-CCH2C-,リンカー),1.12(d,J=8.4Hz,3H,フコースのＭｅ),1.00-0.96(m,2H,-CCH2C-,リンカー);13C  NMR  (150,  MHz,  CDCl3):  δ  138.83,  138.77,  138.36,  134.13,  128.90,  128.77,  128.67,  128.60,  128.52,  128.31,  128.26,  128.17,  127.93,  127.88,  127.52,  123.64,  98.81,  98.59,  79.60,  78.07,  77.77,  76.67,  75.22,  74.54,  74.51,  74.24,  73.35,  73.20,  69.37,  68.79,  67.15,  55.88,  51.39,  29.00,  28.58,  23.30,  16.89;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ５３Ｈ５８Ｎ４Ｏ１１に対するｍ／ｚ計算値：９２６．３９９４；実測値９４９．３９９８（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化１２０】
2019515876.tif 000122
【０５２２】
５−アジドペンチル−Ｏ−２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）−（２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３））−２，４−ジ−Ｏ−ベンジル−β−マンノピラノシル−（１→４）−Ｏ−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル−（１→６））−３−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド（Ｓ２０ｌ）：ドナーＳ２０ｈ（０．０５０ｇ，０．０２５ｍｍｏｌ）、アクセプターＳ２０ｋ（０．０２８ｇ，０．０３１ｍｍｏｌ）および活性化４Åモレキュラーシーブを含む乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）の混合物をｒｔで３０分間撹拌した。その反応物を−７０℃に冷却し、次いで、三フッ化ホウ素エチルエーテラート（０．７２５μＬ，０．００６２ｍｍｏｌ）をゆっくり加え、得られた反応混合物を２時間撹拌した。その反応物を、Ｅｔ３Ｎを加えることによってクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、セライトで濾過し、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→２０％のＥＡのヘキサン溶液）によって精製して、Ｓ２０ｌ（０．０２７ｇ，４５％）を白色泡沫状物として得た。ＴＬＣ：（酢酸エチル：ヘキサン＝３／７，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.50;  1H  NMR  (600  MHz,  CDCl3):  δ  7.83-7.62  (m,  7H,  Ar-H),  7.49-7.30  (m,  8H,  Ar-H),  7.30-7.10  (m,  47H,  Ar-  H),  7.09-7.03  (m,  10H,  AR-H),  7.03-6.99  (m,  1H,  Ar-H),  6.93  (d,  J  =  8.9  Hz,  2H,  AR-H),  6.79-6.63  (m,  6H,  AR-H),  6.55  (t,  J  =  7.8  Hz,  2H,  H-2d,d'),  5.40  (s,  1H,  H-1d),  5.29-5.29  (m,  1H),  5.09  (d,  J  =  1.3  Hz,  1H,  H1d’),  4.88-4.76  (m,  13H),  4.67-4.65  (m,  2H),  4.58-5.48  (m,  9H),  4.42-4.40  (m,  3H),  4.36-4.30  (m,  5H),  4.20-4.10  (m,  5H),  4.05-4.00  (m,  2H),  3.92-3.80  (m,  7H),  3.79-3.60  (m,  7H),  3.62-3.41  (m,  10H),  3.25(dd,  J  =  3.2,  8.2  Hz,  1H),  3.18-3.17  (m,  2H),  2.85-2.79  (m,  2H),  2.06  (s,  3H,  -C(O)CH3),  1.76  (s,  3H,  -C(O)CH3,1.42-1.34(m,4H,-CCH2C-,リンカー),1.03-0.99(m,5H,-CCH2C-,リンカーおよびフコースのＣＨ３);13C  NMR  (150  MHz,  CDCl3):  δ  170.30,  169.91,  168.15,  167.76,  139.16,  138.99,  138.88,  138.82,  138.77,  138.54,  138.28,  138.21,  138.10,  138.08,  138.05,  133.86,  132.02,  131.72,  128.80,  128.62,  128.60,  128.57,  128.55,  128.33,  128.23,  128.40,  127.98,  127.92,  127.70,  127.55,  127.26,  127.06,  123.33,  101.97,  99.62,  98.41,  97.95,  97.09,  97.05,  81.42,  79.71,  78.36,  74.98,  74.75,  74.68,  73.65,  72.57,  72.51,  72.03,  71.38,  68.93,  68.86,  68.12,  66.63,  66.12,  56.76,  56.01,  51.26,  28.82,  28.56,  23.20,  21.23,  20.91;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ１５９Ｈ１６５Ｎ５Ｏ３４に対するｍ／ｚ計算値：２６８９．１２６１；実測値２７１２．１３３８（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化１２１】
2019515876.tif 000123
【０５２３】
５−アミノペンチル−ジ−（α−Ｄ−マンノピラノシル）−（１→３），（１→６）−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−（α−Ｌ−フコピラノシル−（１→６）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（Ｇ３）：化合物Ｓ２０ｈ（０．０３０ｇ，０．０１１ｍｍｏｌ）を、一般的な手順２（方法１）に従うことによって脱保護して、表題化合物Ｇ３（０．００７ｇ，２２％）を白色粉末として得た。1H  NMR  (600  MHz,  D2O):  δ  5.09  (s,  1H,  H-1d),  4.91  (s,  1H,  H-1d'),  4.89  (d,  J  =  3.2  Hz,  1H,  H-1e),  4.78  (s,  1H,  H-1c),  4.65  (d,  J  =  7.8  HZ,  1H,  H-1a),  4.49  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H,  H-  1b),  4.25  (s,  1H),  4.15-4.10  (m,  1H),  4.05  (s,  1H),  3.95  (s,  1H),  3.95-3.80  (m,  8H),  3.80-3.50  (m,  23H),  3.00  (m,  2H),  2.10  (s,  3H,  -C(O)CH3),  2.09  (s,  3H,  -C(O)CH3,  1.67-1.60  (m,  2H,  -CCH2C-),  1.60-1.57  (m,  2H,  -CCH2C-),  1.41-1.37  (m,  2H,  -CCH2C-),1.25(d,J=7.8Hz,3H,フコースの-CH3);13C  NMR  (150  MHz,  D2O):  δ  174.67,  174.39,  170.97,  102.51,  101.10,  101.04,  100.38,  99.60,  99.39,  80.46,  79.72,  78.60,  74.33,  74.15,  73.42,  72.65,  72.30,  71.95,  71.85,  70.29,  70.12,  70.00,  69.97,  69.85,  69.45,  68.15,  66.77,  66.14,  65.85,  65.80,  61.11,  60.92,  59.97,  55.05,  54.86,  46.66,  39.28,  38.61,  28.05,  26.36,  22.27,  22.15,  21.08,  21.50,  15.37,  15.34;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ４５Ｈ８０Ｎ３Ｏ３０に対するｍ／ｚ計算値；１１４１．４８２１；実測値１１４２．４８２７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【化１２２】
2019515876.tif 000124
【０５２４】
５−アミノペンチル−ジ−［５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノ−シロネート−（２→６）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−α−Ｄ−マンノピラノシル］−（１→３），（１→６）−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−（α−Ｌ−フコピラノシル−（１→６）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（Ｇ１９）：コアフコースグリカンＧ１９を有するシアリル化された二分岐を、報告された手順１１，１２を用いることによって調製した。1H  NMR  (600  MHz,  D2O):  δ  4.90  (s,  1H,  H-1d),  4.72  (s,  1H,  H-  1d'),  4.66  (d,  J  =  3.6  Hz,  1H,  H-1c),  4.56  (s,  1H),  4.43  (d,  J  =  7.2  Hz,  1H,  H-1b),  4.37  (d,  J  =  7.2  Hz,  2H,  H-1e,e'),  4.25  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H,  H-1a),  4.21  (d,  J  =  7.8  Hz,  2H,  H-1f),  4.04  (s,  1H),  3.97  (s,  1H),  3.90  (t,  J  =  10.1  Hz,  2H),  3.76-3.25  (m,  65H),2.74(t,J=7.8Hz,2H,リンカー),2.43(dd,J=3.8  &  7.2Hz,1H,H-3エカトリアル  g,g’),1.87(s,3H),1.84(s,3H,-C(O)CH3),1.83(s,3H,-C(O)CH3),1.80(s,6H,-C(O)CH3),1.51(t,J=12H,2H,H-3アキシャル  g,g’),1.46-1.41(m,2H),1.37-1.34(m,2H),1.18-1.15(m,2H),1.00(d,J=6.6Hz,3H,フコースの-CH3);13C  NMR  (150  MHz,  D2O):  δ  174.5,  174.3,  174.1,  173.3,  103.3,  100.9,  100.7,  100.2,  99.7,  99.6,  99.3,  99.1,  98.9,  96.5,  80.2,  79.5,  77.8,  75.9,  75.6,  74.0,  73.3,  73.2,  73.1,  72.4,  72.2,  71.8,  71.7,  71.3,  70.3,  69.9,  69.7,  69.3,  69.1,  68.0,  67.9,  67.0,  66.9,  66.5,  65.7,  65.4,  63.0,  62.2,  61.4,  61.3,  59.8,  59.4,  54.7,  54.4,  54.2,  51.5,  39.7,  38.9,  27.7,  26.1,  22.1,  22.0,  22.0,  21.8,  21.7,  15.1  ;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ９５Ｈ１５９Ｎ７Ｏ６６に対するｍ／ｚ計算値；２４５１．９１２１；実測値１２２６．４５１３（Ｍ−Ｈ）２−。
【０５２５】
ホスホン酸テイルを有するグリカンの合成  Ｓ
【０５２６】
一般的な手順：アミンテイルを有する糖（３〜５μｍｏｌ）を含むＤＭＦ（４００μＬ）の溶液に、リンカー［２（２（２（ビス（ベンジルオキシ）ホスホリル）エトキシエトキシ）エチル（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）カーボネート］（１５〜２５μｍｏｌ）を加え、得られた反応混合物をｒｔで５時間撹拌した。ＤＭＦを、高真空を使用することによって除去し、生成物を、Ｂｉｏ−Ｇｅｌ  Ｐ−２クロマトグラフィー（溶離剤Ｈ２Ｏ）を使用することによって精製した。固体を２ｍＬのＨ２Ｏに溶解し、Ｐｄ（ＯＨ）２（５０重量％）を加え、一晩水素化した。その反応混合物をセライトで濾過し、真空中で濃縮した。残渣を、溶離剤として水を使用するＢｉｏ−Ｇｅｌ  Ｐ−２（ＢＩＯ−ＲＡＤ）カラムクロマトグラフィーによって精製した。生成物を凍結乾燥して（ｌｙｐｈｏｌｙｓｅｄ）、ホスホン酸テイルを有する所望の糖を白色粉末として得た。
【化１２３】
2019515876.tif 000125
【０５２７】
スキームＳ２１：ホスホン酸リンカーを有する糖の調製。ｉ，（１）リンカー、ＤＭＦ、ＲＴ、５時間；（２）Ｐｄ（ＯＨ）２、Ｈ２Ｏ、Ｈ２、ＲＴ、一晩。
【化１２４】
2019515876.tif 000126
【０５２８】
β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（Ｉ）：化合物Ｓ２３（３．５ｍｇ，５．４μｍｏｌ）を、上記の一般的な手順によって改変して、化合物Ｉ（２．２ｍｇ，６１％）を白色固体として得た。ＴＬＣ（ＭｅＯＨ：ＥＡ：ＡｃＯＨ：Ｈ２Ｏ、７／１／１／１，ｖ／ｖ）。1H  NMR  (600  MHz,  D2O):  δ  4.60  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  4.48  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H),  4.19  (s,  2H),  4.05  (d,  J  =  3.2  Hz,  1H),  3.93-3.49  (m,  33H),  1.75  (t,  J  =  7.8  Hz,  2H),  2.06  (s,  3H),  1.95  (s,  3H),  1.95-1.92  (m,  2H),  1.58-1.54  (m,  2H),  1.50-1.47  (m,  2H),  1.33-1.30  (m,  2H).    ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）：Ｃ３４Ｈ５９Ｎ３Ｏ２３Ｐに対するｍ／ｚ計算値；９０８．３０６７  実測値９５４．３０９９（Ｍ＋２Ｎａ）＋。
【化１２５】
2019515876.tif 000127
【０５２９】
（ホスホネート−トリ−（エチレングリコール）−カルボニル−アミノ）−ペンチル−α−Ｄ−マンノ−ピラノシル（１→３）−α−Ｄ−マンノピラノシル］−（１→６）−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（ＩＩ）：グリカンＧ２（４ｍｇ，２．３μｍｏｌ）を、上記の一般的な手順によって改変して、化合物ＩＩ（３．２ｍｇ，７１％）を白色固体として得た。ＴＬＣ（ＭｅＯＨ：ＥＡ：ＡｃＯＨ：Ｈ２Ｏ、７／１／１／１，ｖ／ｖ）。1H  NMR  (600  MHz,  D2O):  δ  5.01  (s,  1H),  4.83  (s,  1H),  4.51  (d,  J  =  6.1  Hz,  1H),  4.40  (d,  J  =  6.2  Hz,  1H),  4.17  (s,  1H),  4.11  (s,  2H),  3.98  (s,  1H),  3.88-3.39  (m,  52H),  3.03  (t,  J  =  7.8  Hz,  2H),  1.99  (s,  3H),  1.95  (s,  3H),  1.95-1.91  (m,  2H),  1.50-1.45  (m,  2H),  1.42-1.38  (m,  2H),  1.26-1.22  (m,  2H).ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）ネガティブモード：Ｃ５８Ｈ１０２Ｎ３Ｏ４３Ｐに対するｍ／ｚ計算値；１２３４．４４８４  実測値１２７８．５００１（Ｍ＋２Ｎａ−２Ｈ）−。
【化１２６】
2019515876.tif 000128
【０５３０】
（ホスホネート−トリ−（エチレングリコール）−カルボニル−アミノ）−ペンチル−α−Ｄ−マンノ−ピラノシル（１→３）−α−Ｄ−マンノピラノシル］−（１→６）−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−）−（α−Ｌ−フコピラノシル−（１→６）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド）（ＩＩＩ）：グリカンＧ３（１．２ｍｇ，１．０μｍｏｌ）を、上記の一般的な手順によって改変して、化合物ＩＩＩ（１．０ｍｇ，９１％）を白色固体として得た。ＴＬＣ（ＭｅＯＨ：ＥＡ：ＡｃＯＨ：Ｈ２Ｏ、７／１／１／１，ｖ／ｖ）。1H  NMR  (600  MHz,  D2O):  δ  5.09  (s,  1H),  4.90  (s,  1H),  4.88  (d,  J  =  7.4  Hz,  1H),  4.66  (d,  J  =  7.5  Hz,  1H),  4.48  (d,  J  =  7.2  Hz,  1H),  4.25  (s,  1H),  4.19  (s,  2H),  4.12-4.10  (m,  1H),  4.06  (s,  1H),  3.95  (s,  1H),  3.92-3.84  (m,  10H),  3.79-3.69  (m,  31H),  3.11-3.09  (m,  2H),  2.08  (s,  3H),  2.02  (s,  3H),  1.99-1.93  (m,  2H),  1.58-1.53  (m,  2H),  1.49-1.47  (m,  2H),  1.34-1.30  (m,  2H),  1.22  (d,  3H).    ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）：Ｃ３４Ｈ５９Ｎ３Ｏ２３Ｐに対するｍ／ｚ計算値；１３８１．５７０９．３０６７  実測値１４５０．５７０９（Ｍ＋３Ｎａ）＋。
【化１２７】
2019515876.tif 000129
【０５３１】
（ホスホネート−トリ−（エチレングリコール）−カルボニル−アミノ）−ペンチル−α−Ｄ−マンノ−ピラノシル（１→３），［ジ−（α−Ｄ−マンノピラノシル）−（１→３），（１→６）−α−Ｄ−マンノピラノシル］−（１→６）−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（ＩＶ）：グリカンＧ４（４ｍｇ，３．１μｍｏｌ）を、上記の一般的な手順によって改変して、化合物ＩＶ（３．７ｍｇ，７８％）を白色固体として得た。ＴＬＣ（ＭｅＯＨ：ＥＡ：ＡｃＯＨ：Ｈ２Ｏ、７／１／１／１，ｖ／ｖ）。1H  NMR  (600  MHz,  D2O):  δ  5.10  (d,  J  =  9.6  Hz,  2H),  4.93  (s,  1H),  4.70  (s,  1H),  4.57  (d,  J  =  7.2  Hz,  1H),  4.48  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H),  4.24  (d,  J  =  3.2  Hz,  2H),  4.19-4.13  (m,  4H),  4.06-4.04  (m,  3H),  3.95-3.40  (m,  45H),  3.38-3.37  (m,  1H),  2.10  (t,  J  =  7.8  Hz,  2H),  2.07  (s,  6H),  2.02  (s,  6H),  1.98-1.93  (m,  2H),  1.58-1.47  (m,  2H),  1.34-1.29  (m,  2H),  1.27-1.25  (m,  2H);ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）：Ｃ５８Ｈ１０２Ｎ３Ｏ４３Ｐに対するｍ／ｚ計算値；１５６０．３９８５  実測値１６０７．０４５２（Ｍ＋２Ｎａ＋Ｈ）＋。
【化１２８】
2019515876.tif 000130
【０５３２】
（ホスホネート−トリ−（エチレングリコール）−カルボニル−アミノ）−ペンチル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→２）−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→２）−α−Ｄ−マンノ−ピラノシル−（１→３）−β−Ｄ−マンノ−ピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（Ｖ）：グリカンＧ５（５ｍｇ，４．４μｍｏｌ）を、上記の一般的な手順によって改変して、化合物Ｖ（３．５ｍｇ，５８％）を白色固体として得た。ＴＬＣ（ＭｅＯＨ：ＥＡ：ＡｃＯＨ：Ｈ２Ｏ、７／１／１／１，ｖ／ｖ）。1H  NMR  (600  MHz,  D2O):  δ  5.34  (s,  1H),  5.29  (s,  1H),  5.03  (s,  1H),  4.58  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H),  4.47  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H),  4.20  (bs,  3H),  4.09-4.05  (m,  3H),  3.90-3.20  (m,  41H),  3.10  (t,  J  =  7.8  Hz,  2H),  2.05  (s,  3H),  2.01  (s,  3H),  2.00-1.92  (m,  2H),  1.56-1.53  (m,  2H),  1.49-1.46  (m,  2H),  1.33-1.30  (m,  2H);ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）：Ｃ５２Ｈ９２Ｎ３Ｏ３８Ｐに対するｍ／ｚ計算値；１３９８．２５７９  実測値１４４４．５４７０（Ｍ＋２Ｎａ）＋。
【化１２９】
2019515876.tif 000131
【０５３３】
（ホスホネート−トリ−（エチレングリコール）−カルボニル−アミノ）−ペンチル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→２）−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→２）−α−Ｄ−マンノ−ピラノシル−（１→３）−｛α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→２）−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノ−ピラノシル−（１→２）−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）｝−β−Ｄ−マンノ−ピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（ＶＩ）：グリカンＧ６（４ｍｇ，２．０μｍｏｌ）を、上記の一般的な手順（ｐｒｏｃｅｓｕｒｅ）によって改変して、化合物ＶＩ（３．７ｍｇ，６６％）を白色固体として得た。ＴＬＣ（ＭｅＯＨ：ＥＡ：ＡｃＯＨ：Ｈ２Ｏ、７／１／１／１，ｖ／ｖ）。1H  NMR  (600  MHz,  D2O):  δ  5.53  (s,  1H),  5.39  (d,  J  =  10.2  Hz,  1H),  5.26  (d,  J  =  9.8  Hz,  1H),  5.23  (s,  1H),  5.16  (d,  J  =  4.8  Hz,  1H),  5.08-5.05  (m,  5H),  4.60  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H),  4.50  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H),  2.08  (s,  3H),  2.02  (s,  3H),  1.38-1.03  (m,  2H),  1.58-1.56  (m,  2H),  1.52-1.48  (m,  2H),  1.35-1.32  (m,  2H);ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）：Ｃ８２Ｈ１４２Ｎ３Ｏ６３Ｐに対するｍ／ｚ計算値；２２０９．０３１０  実測値２２５７．０８１２（Ｍ＋２Ｎａ）＋。
【化１３０】
2019515876.tif 000132
【０５３４】
（ホスホネート−トリ−（エチレングリコール）−カルボニル−アミノ）−ペンチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−α−Ｄ−マンノピラノシル］−（１→３）−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（ＶＩＩ）：グリカンＧ９（６．０ｍｇ，５．１μｍｏｌ）を、上記の一般的な手順によって改変して、化合物ＶＩＩ（３．５ｍｇ，５０％）を白色固体として得た。ＴＬＣ（ＭｅＯＨ：ＥＡ：ＡｃＯＨ：Ｈ２Ｏ、７／１／１／１，ｖ／ｖ）。1H  NMR  (600  MHz,  D2O):  δ  5.03  (d,  J  =  8.4  Hz,  2H),  4.58  (d,  J  =  7.2  Hz,  1H),  4.48  (d,  J  =  7.2  Hz,  1H),  4.45  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H),  4.26  (dd,  J  =  3.0  &  9.2  Hz,  2H),  4.19  (bs,  2H),  4.00-3.38  (m,  48H),  3.11  (t,  J  =  7.8  Hz,  2H),  2.06  (s,  3H),  2.05  (s,  3H),  2.02  (s,  3H),  1.99-1.93  (m,  2H),  1.56-1.54  (m,  2H),  1.50-1.48  (m,  2H),  1.31-1.27  (m,  2H);ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）：Ｃ５４Ｈ９２Ｎ４Ｏ３８Ｐに対するｍ／ｚ計算値；１４３５．４９１７  実測値１４８１．５０６９（Ｍ＋２Ｎａ）＋。
【化１３１】
2019515876.tif 000133
【０５３５】
（ホスホネート−トリ−（エチレングリコール）−カルボニル−アミノ）−ペンチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−［２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコ−ピラノシル−（１→２）−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３），［ジ−（α−Ｄ−マンノピラノシル）−（１→３），（１→６）−α−Ｄ−マンノ−ピラノシル］（１→６）−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコ−ピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（ＶＩＩＩ）：グリカンＧ１２（５．０ｍｇ，３．０μｍｏｌ）を、上記の一般的な手順によって改変して、化合物ＶＩＩＩ（３．１ｍｇ，５４％）を白色固体として得た。ＴＬＣ（ＭｅＯＨ：ＥＡ：ＡｃＯＨ：Ｈ２Ｏ、７／１／１／１，ｖ／ｖ）。1H  NMR  (600  MHz,  D2O):  δ  5.11  (s,  2H),  5.02  (d,  J  =  7.8Hz,  2H),  4.68  (d,  J  =  3.2  Hz,  2H),  4.48  (d,  J  =  7.2  Hz,  1H),  4.45  (d,  J  =  7.2  Hz,  1H),  4.27  (s,  2H),  4.22  (s,  2H),  4.15  (s,  1H),  4.08  (s,  2H),  4.00-3.30  (m,  60H),  3.10  (t,  J  =  7.8  Hz,  2H),  2.08  (s,  3H),  2.05  (s,  3H),  2.02  (s,  3H),  1.93-1.87  (m,  2H),  1.56-1.54  (m,  2H),  1.51-1.47  (m,  2H),  1.33-1.30  (m,  2H);ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）：Ｃ７２Ｈ１２２Ｎ４Ｏ５３Ｐに対するｍ／ｚ計算値；１９２１．６５０２  実測値１９６７．６６２２（Ｍ＋２Ｎａ）＋。
【化１３２】
2019515876.tif 000134
【０５３６】
ホスホネート−トリ−（エチレングリコール）−カルボニル−アミノ）−ペンチル−［５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノ−シロネート−（２→６）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−α−Ｄ−マンノピラノシル］−（１→３）−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコ−ピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（ＩＸ）：グリカンＧ１０（５．０ｍｇ，２．５μｍｏｌ）を、上記の一般的な手順によって改変して、化合物ＩＸ（３．８ｍｇ，６３％）を白色固体として得た。ＴＬＣ（ＭｅＯＨ：ＥＡ：ＡｃＯＨ：Ｈ２Ｏ、７／１／１／１，ｖ／ｖ）。1H  NMR  (600  MHz,  D2O):  δ  5.08  (d,  J  =  8.4  Hz,  2H),  4.93  (s,  1H),  4.62  (d,  J  =  7.2  Hz,  1H),  4.51  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H),  4.45  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H),  4.30  (d,  J  =  3.2  Hz,  1H),  4.28  (s,  1H),  4.22  (s,  2H),  4.02-3.30  (m,  53H),  3.13  (t,  J  =  7.8  Hz,  2H),  2.68  (dd,  J  =  3.2,  7.8  Hz,  1H),  2.09  (s,  6H),  2.05  (s,  6H),  2.01-1.93  (m,  2H),  1.74  (t,  J  =  12.1  Hz,  1H),  1.60-1.57  (m,  2H),  1.54-1.51  (m,  2H),  1.35-1.32  (m,  2H);ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）：Ｃ６５Ｈ１０９Ｎ５Ｏ４６Ｐに対するｍ／ｚ計算値；１７２６．５８７１  実測値１７７２．５８１７（Ｍ＋２Ｎａ）＋。
【化１３３】
2019515876.tif 000135
【０５３７】
（ホスホネート−トリ−（エチレングリコール）−カルボニル−アミノ）−ペンチル−５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノ−シロネート−（２→６）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−［２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３），［ジ−（α−Ｄ−マンノピラノシル）−（１→３），（１→６）−α−Ｄ−マンノ−ピラノシル］（１→６）−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（Ｘ）：グリカンＧ１３（４．０ｍｇ，２．３μｍｏｌ）を、上記の一般的な手順によって改変して、化合物Ｘ（３．２ｍｇ，７１％）を白色固体として得た。ＴＬＣ（ＭｅＯＨ：ＥＡ：ＡｃＯＨ：Ｈ２Ｏ、７／１／１／１，ｖ／ｖ）。1H  NMR  (600  MHz,  D2O):  δ  5.08  (d,  J  =  10.2  Hz,  1H),  5.03  (s,  1H),  4.94  (s,  2H),  4.91  (s,  1H),  4.62  (s,  1H),  4.51  (d,  J  =  6.6  Hz,  1H),  4.46  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H),  4.30  (s,  2H),  4.25  (s,  2H),  4.17  (s,  1H),  4.06  (s,  1H),  4.00-3.20  (m,  70H),  2.70  (dd,  J  =  3.2,  7.8  Hz,  1H),  2.11  (s,  6H),  2.05  (s,  6H),  2.03-1.97  (m,  2H),  1.14  (t,  J  =  12.6  Hz,  1H),  1.58-1.51  (m,  4H),  1.36-1.31  (m,  2H).ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）：Ｃ８３Ｈ１４４Ｎ５Ｏ６１Ｐに対するｍ／ｚ計算値；１１０２．２３０１  実測値１１４８．２９４６（Ｍ＋２Ｎａ）２−。
【化１３４】
2019515876.tif 000136
【０５３８】
ホスホネート−トリ−（エチレングリコール）−カルボニル−アミノ）−ペンチル−ジ−［５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノ−シロネート−（２→６）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−α−Ｄ−マンノピラノシル］−（１→３），（１→６）−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（ＸＩ）：グリカンＧ１６（３．５ｍｇ，１．５μｍｏｌ）を、上記の一般的な手順によって改変して、化合物ＸＩ（２．６ｍｇ，６９％）を白色固体として得た。ＴＬＣ（ＭｅＯＨ：ＡｃＯＨ：Ｈ２Ｏ、８／１／１，ｖ／ｖ）。1H  NMR  (600  MHz,  D2O):  δ  5.05  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  4.63  (d,  J  =  6.6  Hz,  1H),  4.51  (s,  1H),  4.46  (t,  J  =  7.8  Hz,  2H),  4.32  (s,  1H),  4.29  (s,  2H),  4.22  (s,  2H),  4.09-3.48  (m,  79H),  3.13  (t,  J  =  7.8  Hz,  2H),  2.74-2.68  (m,  2H),  2.10  (s,  9H),  2.05  (s,  9H),  2.12-2.00  (m,  2H),  1.76-1.73  (m,  2H),  1.58-1.55  (m,  2H),  1.51-1.50  (m,  2H),  1.35-1.29  (m,  2H);ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦネガティブモード）：Ｃ９６Ｈ１６２Ｎ７Ｏ６９Ｐに対するｍ／ｚ計算値；２５４７．９０９６  実測値１２９４．９６８５（Ｍ＋Ｎａ）２−。
【０５３９】
Ｄ１およびＤ２／Ｄ３アームモジュールの化学酵素的合成  Ｓ
【０５４０】
本発明者らの化学酵素的ストラテジーは、アクセプター基質１６〜２０の調製から開始した。スキームＳ２２に描かれているように、マンノシルアクセプターＳ２２ｂを、ＮＩＳ／ＴｆＯＨの存在下においてドナーＳ２２ａを用いてグリコシル化して、二糖Ｓ２２ｃを６０％収率で得た。Ｓ２２ｃのベンジリデン（Ｂｅｎｚｙｌｅｄｉｎｅ）環を、種々の反応条件下において、Ｓ２２ｄの４−ＯＨまたはＳ２２ｇの６−ＯＨの両方において開環した。ドナーＳ２２ｅを、Ｓ２２ｄおよびＳ２２ｇのそれぞれの４−Ｏおよび６−Ｏ位に別々に導入した。最後に、中間体（ｉｎｔｅｒｍｉｄｉａｔｅｓ）Ｓ２２ｃ、Ｓ２２ｆおよびＳ２２ｈの完全な脱保護を行った。化合物Ｓ２２ｊおよびＳ２２ｌの場合、Ｍａｎ４および６−Ｏ位におけるＧｌｃＮＡｃ残基を、非対称モジュールを調製するための、４−ＯＨのアセチル化を介する２−Ｏ  ＧｌｃＮＡｃと区別した（ｄｉｆｆｉｒｅｎｃｉａｔｅｄ）。
【化１３５】
2019515876.tif 000137
【０５４１】
スキームＳ２２：アクセプター基質の調製。ｉ、ＮＩＳ、ＴｆＯＨ、ＣＨ２Ｃｌ２、−５０℃、３時間；ｉｉ、トリエチルシラン、ＴＦＡ、４ÅＭＳ，ＣＨ２Ｃｌ２、０℃、２時間、５８％；ｉｉｉ、ＢＨ３．ＴＨＦ、Ｂｕ２ＢＯＴｆ、ＣＨ２Ｃｌ２、４ÅＭＳ、−１０℃、１時間、７１％；ｉｖ，（１）ＮＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２、ｎＢｕＯＨ、１００℃；（２）Ａｃ２Ｏ、ピリジン、０℃〜ＲＴ；（３）Ｐｄ（ＯＨ）２、ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ：ＨＣＯＯＨ（５：３：２）、Ｈ２；
【化１３６】
2019515876.tif 000138
【０５４２】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−［４−Ｏ−アセチル−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコ−ピラノシル−（１→２）−Ｏ−４，６−Ｏ−ベンジリデン−３−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシド（Ｓ２２ｃ）：活性化４Åモレキュラーシーブ（１ｇ）をアクセプターＳ２２ｂ（０．２５０ｇ，０．５３６ｍｍｏｌ）およびドナーＳ２２ａ（０．４１０ｇ，０．６４３ｍｍｏｌ）を含む無水ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）の溶液に加えた。その反応混合物をｒｔで１時間撹拌し、次いで、−５０℃に冷却した。ＮＩＳ（０．２４１ｇ，１．０７ｍｍｏｌ）およびＴｆＯＨ（１１．８μＬ，０．１３４ｍｍｏｌ）をゆっくり加え、得られた反応混合物を１時間撹拌した。ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン，２／８）が、出発物質の消費とともに生成物の形成を示したら、その反応物を、Ｅｔ３Ｎを加えることによってクエンチし、次いで、セライトで濾過した。濾液をＮａＨＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）、Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１０％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、Ｓ２２ｃ（０．４０３ｇ，７６％）を白色泡沫状物として得た。ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン＝２／８，ｖ／ｖ）；Rf  =  0.49;  1H  NMR  (400  MHz,  CDCl3):  δ  7.69-3.56  (m,  4H),  7.  36-7.22  (m,  15H),  7.  20-6.96  (m,  5H),  6.53  (d,  J  =  8.4  Hz,  2H),  6.50  (d,  J  =  8.2  Hz,  2H),  5.41  (s,  1H),  5.24  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H),  5.10  (t,  1H),  4.93  (s,  1H),  4.73-4.43  (m,  10H),  4.00-3.20  (m,  5H),  1.98  (s,  3H)  ;  13C  NMR  (150  MHz,  CHCl3):  δ  169.2,  152.3,  135.1,  134.9,  133.9,  128.7,  128.6,  128.4,  128.1,  128.1,  128.0,  127.7,  127.6,  127.5,  117.8,  114.7,  97.1,  96.3,74.0,  73.9,  73.1,  72.9,  72.8,  72.8,  72.5,  72.2,  71.4,  65.7,  55.4,  54.2,  22.5;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ５７Ｈ５５ＮＯ１４に対するｍ／ｚ計算値；９７７．３６２３  実測値１０００．３４９０（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化１３７】
2019515876.tif 000139
【０５４３】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−［４−Ｏ−アセチル−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコ−ピラノシル−（１→２）−Ｏ−３，６−Ｏ−ジベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシド（Ｓ２２ｄ）：Ｓ２２ｃ（１．０１ｇ，１．０２ｍｍｏｌ）を含む無水ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）の溶液に、トリエチルシラン（１．６３ｍＬ，１０．２ｍｍｏｌ）の後、トリフルオロ酢酸（ｔｒｉｆｌｕｒｏａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ）（０．７５８ｍＬ，１０．２ｍｍｏｌ）を０℃において加えた。得られた反応混合物を３時間撹拌した。３時間後、ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン，１．５／８．５  ｖ／ｖ）は、出発物質の消費とともに生成物の形成を示した。その反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３（２×５０ｍＬ）で洗浄した。水層をＣＨ２Ｃｌ２（３×３０ｍＬ）でさらに抽出し、合わせた有機層をブライン溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１０％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、Ｓ２２ｄ（０．５８０ｇ，６５％）を透明の油状物として得た。ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン＝１．５／８．５，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.35;  1H  NMR  (400  MHz,  CDCl3):  δ  7.63-7.35  (m,  4H),  7.  30-7.10  (m,  14H),  7.02-6.97  (m,  3H),  6.93-6.86  (m,  3H),  6.72-6.66  (m,  4H),  5.27  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  5.11  (t,  J  =  10.2  Hz,  1H),  5.02  (d,J  =  2.8  Hz,  1H),  4.88  (s,  2H),  4.80  (s,  1H),  4.60  (d,  J  =  10.2  Hz,  2H),  4.58-4.24  (m,  6H),  4.01  (s,  2H),  3.79-3.74  (m,  2H),  3.72  (s,  3H),  3.64-3.56  (m,  3H),  3.35  (dd,  J  =  2.8  &  8  Hz,  1H),  2.93  (dd,  J  =  2.3  &  7.8  Hz,  1H),  1.94  (s,  3H);  13C  NMR  (150  MHz,  CHCl3):  δ  150.33,  138.18,  137.98,  133.96,  128.70,  128.65,  128.42,  128.18,  128.12,  128.02,  127.76,  127.62,  127.52,  117.89,  114.71,  97.19,  96.33,74.08,  73.96,  73.10,  72.95,  72.80,  71.86,  70.96,  70.75,  70.48,  67.72,  55.89,  55.69,  21.21;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ５７Ｈ５７ＮＯ１４に対するｍ／ｚ計算値；９７９．３７７９  実測値１００２．３６６０（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化１３８】
2019515876.tif 000140
【０５４４】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−４−Ｏ−アセチル−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−［−Ｏ−４，６−Ｏ−ベンジリデン−３−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）］−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシド（Ｓ３３ｆ）：活性化４Åモレキュラーシーブ（１ｇ）をアクセプターＳ２２ｄ（０．５８０ｇ，０．５９０ｍｍｏｌ）およびドナーＳ２２ｅ（０．５２５ｇ，０．８８０ｍｍｏｌ）を含む無水ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）の溶液に加えた。その反応混合物をｒｔで１時間撹拌し、次いで、−５０℃に冷却した。ＮＩＳ（０．２６５ｇ，１．１４ｍｍｏｌ）およびＴｆＯＨ（１３μＬ，０．１４７ｍｍｏｌ）をゆっくり加え、得られた反応混合物を２時間撹拌した。ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン，１．５／８．５）が、出発物質の消費とともに生成物の形成を示したら、その反応物を、Ｅｔ３Ｎを加えることによってクエンチし、次いで、セライトで濾過した。濾液をＮａＨＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）、Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１０％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、Ｓ２２ｆ（０．７３０ｇ，８５％）を淡黄色固体として得た。ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン＝１．５／８．５，ｖ／ｖ）：Rf  =0.60;  1H  NMR  (400  MHz,  CDCl3):  δ  7.69-  6.67  (m,  8H),  7.59-7.18  (m,  20H),  6.96-6.75  (m,  10H),  6.57-6.52  (m,  4H),  5.44  (s,  1H),  5.27  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  5.21  (d,  J  =  8.8  Hz,  1H),  5.11  (t,  J  =  10.7  Hz,  1H),  3.29-3.24  (m,  1H),  4.94  (d,J  =  8.4  Hz,  1H),  4.76-4.69  (m,  2H),  4.57  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H),  4.53  (d,  J  =  7.2  Hz,  1H),  4.45-4.19  (m,  9H),  4.10-4.06  (m,  2H),  3.99-3.94  (m,  2H),  3.63  (s,  3H),  3.56  -3.48  (m,  8H),3.00(dd,J=2.3および7.8Hz,2H),1.99  (s,  3H);  13C  NMR  (150  MHz,  CHCl3):  δ  169.98,  168.04,  138.94,  138.46,  138.14,  137.96,  133.90,  131.78,  129.24,  128.69,  128.52,  128.34,  128.25,  128.18,  128.08,  127.72,  127.33,  126.38,  123.56,  117.90,  114.47,  101.43.  99.38,  83.11,  78.85,  74.79,  74.27,  73.94,  73.76,  72.80,  72.34,  71.43,  70.26,  69.23,  68.90,  66.00,  56.49,  55.85,  55.70,  21.70;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ８５Ｈ８０Ｎ２Ｏ２０に対するｍ／ｚ計算値；１４４８．５１５３  実測値１４７１．５１５６（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化１３９】
2019515876.tif 000141
【０５４５】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−［４−Ｏ−アセチル−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコ−ピラノシル−（１→２）−Ｏ−３，４−Ｏ−ジベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシド（Ｓ２２ｇ）：化合物Ｓ２２ｃ（０．８００ｇ，０．８１６ｍｍｏｌ）および活性化モレキュラーシーブ（１ｇ）を含む無水ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）の混合物に、ボラン．ＴＨＦ錯体（０．７８１ｍＬの１ＭのＴＨＦ溶液，８．１５ｍｍｏｌ）およびＢｕ２ＢＯＴｆ（０．３５１ｍＬの１ＭのＣＨ２Ｃｌ２溶液，１．６３ｍｍｏｌ）を０℃において加えた。その反応混合物を室温で３時間撹拌した。ＴＬＣ（アセトン：トルエン，１／９）は、出発物質の消費とともに生成物の形成を示した。トリエチルアミンを、その反応混合物に加えた後、メタノールを０℃においてゆっくり加えた。それ以上の水素が生成されなくなったら、その反応混合物をセライトで濾過した。濾液をＮａＨＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１０％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、Ｓ２２ｇ（０．５００ｇ，６２％）を透明の泡沫状物として得た。ＴＬＣ（アセトン：トルエン＝２／８，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.41;  1H  NMR  (400  MHz,  CDCl3):  δ  7.84-7.55  (m,  4H),  7.  40-6.90  (m,  10H),  6.87-6.80  (m,  7H),  6.93-6.86  (m,  3H),  6.72-6.66  (m,  4H),  5.27  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  5.11  (t,  J  =  10.2  Hz,  1H),  5.02  (d,J  =  2.8  Hz,  1H),  4.88  (s,  2H),  4.80  (s,  1H),  4.60  (d,  J  =  10.2  Hz,  2H),  4.58-4.24  (m,  6H),  4.01  (s,  2H),  3.79-3.74  (m,  2H),  3.72  (s,  3H),  3.64-3.56  (m,  3H),  3.35  (dd,  J  =  2.8  &  8  Hz,  1H),  2.93  (dd,  J  =  2.3  &  7.8  Hz,  1H),  1.94  (s,  3H);  13C  NMR  (150  MHz,  CHCl3):  δ  154.2,  138.6,  136.5,  133.5,  128.  0,  127.5  127.4,  128.18,  127.1,  127.0,  126.7,  126.6,  126.5,  117.89,  114.71,  97.19,  96.33,74.08,  73.96,  73.10,  72.9,  72.8,  72.5,  72.6,  71.9,  71.4,  65.7,  56.8,  56.6,  21.9;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ５７Ｈ５７ＮＯ１４に対するｍ／ｚ計算値；９７９．２６４０；実測値９７９．２０１２。
【化１４０】
2019515876.tif 000142
【０５４６】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−４−Ｏ−アセチル−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−［−Ｏ−４，６−Ｏ−ベンジリデン−３−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）］−３，６−Ｏ−ジ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシド（Ｓ２２ｈ）：活性化４Åモレキュラーシーブ（１ｇ）をアクセプターＳ２２ｇ（０．５００ｇ，０．５０９ｍｍｏｌ）およびドナーＳ２２ｅ（０．４５２ｇ，０．７６３ｍｍｏｌ）を含む無水ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）の溶液に加えた。その反応混合物を室温で１時間撹拌し、次いで、−５０℃に冷却した。ＮＩＳ（０．２２９ｇ，１．０１ｍｍｏｌ）およびＴｆＯＨ（２２μＬ，０．２５０ｍｍｏｌ）をゆっくり加え、得られた反応混合物を１時間撹拌した。ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン，１／９）が、出発物質の消費とともに生成物の形成を示したら、その反応物を、Ｅｔ３Ｎを加えることによってクエンチし、次いで、セライトで濾過した。濾液をＮａＨＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）、Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１０％のＥＡのトルエン溶液）によって精製して、Ｓ２２ｈ（０．６１０ｇ，８２％）を淡黄色固体として得た。ＴＬＣ（酢酸エチル：トルエン＝１／９，ｖ／ｖ）：1H  NMR  (400  MHz,  CDCl3):  δ  7.75-7.50  (m,  8H),  7.47-7.05  (m,  25H),  7.02-6.82  (m,  10H),  6.66  (d,  J  =  8.5  Hz,  2H),  6.48  (d,  J  =  8.6  Hz,  2H),  5.38  (s,  1H),  5.17  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  5.21  (t,  J  =  10.3  Hz,  1H),  4.85  (d,  J  =  8.6  Hz,  1H),  3.29-3.24  (m,  1H),  4.94  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  4.76-4.69  (m,  2H),  4.57  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H),  4.53  (d,  J  =  7.2  Hz,  1H),  4.45-4.19  (m,  9H),  4.10-4.06  (m,  2H),  3.99-3.94  (m,  2H),  3.63  (s,  3H),  3.56  -  3.55  (m,  6H),  3.44-3.25  (m,  2H),  3.00  (t,  J  =  10.3  Hz,  2H),  1.99  (s,  3H);  13C  NMR  (150  MHz,  CHCl3):  δ  170.0,  154.9,  150.7,  146.8,  138.6,  137.9,  137.4,  137.1,  136.9,  133.9,  132.7,  129.24,  128.69,  128.52,  128.34,  128.25,  127.9,  127.72,  127.33,  126.38,  123.56,  117.90,  114.47,  101.43.  99.38,  83.11,  78.85,  74.79,  74.27,  73.94,  73.76,  72.80,  72.34,  71.43,  70.26,  69.23,  68.90,  66.00,  58.49,  56.8,  56.7,  55.90,  55.8,  21.8;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ８５Ｈ８０Ｎ２Ｏ２０に対するｍ／ｚ計算値；１４４８．５１５３  実測値１４４９．５６７８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【化１４１】
2019515876.tif 000143
【０５４７】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−α−Ｄ−マンノピラノシド（１６）：化合物Ｓ２２ｃ（０．１０５ｇ，０．１０７ｍｍｏｌ）を、一般的な手順２（方法１）に従うことによって脱保護して、表題化合物１６（０．０３５ｇ，６６％）を白色固体として得た。1H  NMR  (400  MHz,  D2O):  δ  7.  08  (d,  J  =  9.6  Hz,  2H),  6.92  (d,  J  =  9.1  Hz,  2H),  5.43  (s,  1H),  4.60  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  4.25  (t,  J  =  2.3  Hz,  1H),  4.01  (dd,  J  =  3.2  &  10.1  Hz,  1H),  3.87  (dd,  J  =  3.1  &  12.2  Hz,  1H),  3.80  (dd,  J  =  3.0  &  12.8  Hz,  1H),  3.78  (s,  3H),  3.72-  3.67  (m,  3H),  3.61-3.52  (m,  3H),  3.46-  3.40  (m,  2H),  1.99  (s,  3H),  13C  NMR  (150  MHz,  D2O):  δ  174.64,  170.85,  154.46,  149.57,  118.60,  114.83,  99.57,  96.50,  76.24,  75.67,  73.35,  73.10,  69.67,  69.28,  66.90,  61.14,  60.40,  55.55,  55.20;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ２１Ｈ３１ＮＯ１に対するｍ／ｚ計算値；４８９．１７３８  実測値５１２．１７１５（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化１４２】
2019515876.tif 000144
【０５４８】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−ジ−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→２），（１→４）−α−Ｄ−マンノピラノシド（１７）：化合物Ｓ２２ｆ（０．１２５ｇ，０．０８６ｍｍｏｌ）を、一般的な手順２（方法１）に従うことによって脱保護して、表題化合物１７（０．４２ｇ，６６％）を白色固体として得た。1H  NMR  (400  MHz,  D2O):  δ  7.  10  (d,  J  =  8.8  Hz,  2H),  7.08  (d,  J  =  8.2  Hz,  2H),  5.39  (s,  1H),  4.53  (d,  J  =  8.2  Hz,  1H),  4.50  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H),  4.25  (s,  1H),  4.20  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H),  4.00  (dd,  J  =  3.2  and  7.2  Hz,  1H),  3.71  (s,  3H),  3.67-3.74  (m,  9H),  2.02  (s,  3H),  1.91  (s,  3H);  13C  NMR  (150  MHz,  D2O):  δ  174.48,  147.04,  154.49,  149.86,  118.53,  114.97,  100.80,  99.64,  96.55,  76.40,  75.71,  75.66,  73.74,  73.01,  72.63,  69.74,  69.27,  69.19,  67.32,  60.72,  60.60,  60.45,  59.05,  55.62,  55.34,  55.22,  22.24,  22.01;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ２９Ｈ４４Ｎ２Ｏ１７に対するｍ／ｚ計算値；６９３．２７１３  実測値６９３．２６８８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【化１４３】
2019515876.tif 000145
【０５４９】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−ジ−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→２），（１→６）−α−Ｄ−マンノピラノシド（１８）：化合物Ｓ２２ｈ（０．２００ｇ，０．１３８ｍｍｏｌ）を、一般的な手順２（方法１）に従うことによって脱保護して、表題化合物１８（０．６０ｇ，６３％）を白色固体として得た。1H  NMR  (400  MHz,  D2O):  δ  7.10  (d,  J  =  8.8Hz,  2H),  6.96  (d,  J  =  8.2  Hz,  2H),  5.44  (s,  1H),  4.60  (d,  J  =  7.5Hz,  1H),  4.52  (d,  J  =  7.3Hz,  1H),  4.31  (s,  1H),  4.18  (d,  J  =  2.8  Hz,  1H),  3.90  (t,  J  =  10.7  Hz,  2H),  3.80  (s,  3H),  3.77-3.70  (m,  7H),  3.56-3.44  (m,  8H),  2.02  (s,  6H);  13C  NMR  (150  MHz,  CHCl3):  δ  172.7,  171.9,  157.9,  150.3,  118.5,  114.9,  100.2,  99.4,  99.0,  75.74,  74.2,  73.9,  72.1,  70.3,  68.7,  68.3,  68.2,  55.9,  55.6,  55.1,  20.1;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ２９Ｈ４４Ｎ２Ｏ１７に対するｍ／ｚ計算値；６９２．２５３２  実測値７１５．２５１８（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化１４４】
2019515876.tif 000146
【０５５０】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−（４−Ｏ−アセチル−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→２）−Ｏ−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−α−Ｄ−マンノピラノシド（１９）：Ｓ２２ｆ（０．６１０ｇ，０．４２１ｍｍｏｌ）および１０ｍＬのエチレンジアミン：ｎＢｕＯＨ（１：４）の混合物を９０℃で一晩撹拌した。次いで、揮発性物質を蒸発させ、粗生成物を１０ｍＬのＡｃ２Ｏ／ピリジン（１：２）と一晩反応させた。溶媒を、高真空を用いて除去し、生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（アセトン：トルエン，２／８，ｖ／ｖ）によって精製した。生成物を、１０ｍＬのＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ：ＨＣＯＯＨ（６：３：１）に溶解し、Ｐｄ（ＯＨ）２（５０重量％）を加え、その反応混合物を一晩水素化した。その反応混合物をセライトで濾過し、真空中で濃縮した。残渣を、溶離剤として水を使用するＢｉｏ−Ｇｅｌ  Ｐ−２（ＢＩＯ−ＲＡＤ）カラムクロマトグラフィーによって精製し、生成物を凍結乾燥して、１９（０．２１０ｇ，６７％）を白色粉末として得た。1H  NMR  (400  MHz,  D2O):  δ  7.  01  (d,  J  =  9.2  Hz,  2H),  6.90  (d,  J  =  9.8  Hz,  2H),  5.40  (s,  1H),  4.61  (d,  J  =  8.0  Hz,  1H),  4.52  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  4.25  (d,  J  =  2.1  Hz,  1H),  4.73  (dd,  J  =  1.2  &  7.2  Hz,  1H),  3.92  (d,  J  =  12.3  Hz,  1H),  3.74  (s,  3H),  3.72-3.67  (m,  8H),  3.60-3.41  (m,  7H),  2.12  (s,  3H),  2.03  (s,  6H);  13C  NMR  (150  MHz,  D2O):  δ  174.67,  174  17,  172.91,  154.43,  149.58,  118.53,  118.37,  114.81,  101.48,  99.70,  96.04,77.51,  76.00,  75.75,  73.50,  73.39,  71.74,  71.06,  70.93,  69.57,  69.34,  68.04,  60.58,  60.47,  60.00,  55.55,  55.39,  55.13,  22.24,  21.95,  20.17,  20.03;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ３１Ｈ４６Ｎ２Ｏ１８に対するｍ／ｚ計算値；７３５．２８１８  実測値７３５．２７８０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【化１４５】
2019515876.tif 000147
【０５５１】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−（４−Ｏ−アセチル−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→２）−Ｏ−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→６）−α−Ｄ−マンノピラノシド（２０）：Ｓ２２ｈ（０．３５０ｇ，０．２４１ｍｍｏｌ）および１０ｍＬのエチレンジアミン：ｎＢｕＯＨ（１：４）の混合物を９０℃で一晩撹拌した。次いで、揮発性物質を蒸発させ、粗生成物を１０ｍＬのＡｃ２Ｏ／ピリジン（１：２）と一晩反応させた。溶媒を、高真空を用いて除去し、生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（アセトン：トルエン，２／８，ｖ／ｖ）によって精製した。生成物を、１０ｍＬのＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ：ＨＣＯＯＨ（６：３：１）に溶解し、Ｐｄ（ＯＨ）２（５０重量％）を加え、その反応混合物を一晩水素化した。その反応混合物をセライトで濾過し、真空中で濃縮した。残渣を、溶離剤として水を使用するＢｉｏ−Ｇｅｌ  Ｐ−２（ＢＩＯ−ＲＡＤ）カラムクロマトグラフィーによって精製し、生成物を凍結乾燥して、２０（０．１２０ｇ，７０％）を白色粉末として得た。1H  NMR  (400  MHz,  D2O):  δ  7.  08  (d,  J  =  8.4  Hz,  2H),  6.91  (d,  J  =  8.2  Hz,  2H),  5.38  (s,  1H),  4.66  (d,  J  =  8.0  Hz,  1H),  4.48  (d,  J  =  8.2  Hz,  1H),  4.38-4.27  (m,  2H),  4.19  (t,  J  =  2.8  Hz,  1H),  4.09  (d,  J  =  12.2  Hz,  1H),3.98(dd,J=2.8および7.8Hz,1H),3.84  (d,  J  =  12.3  Hz,  2H),  3.75  (s,  3H),  3.67-3.33  (m,  11H),  1.93  (s,  3H),  1.91  (s,  3H),  1.78  (s,  3H);  13C  NMR  (150  MHz,  D2O):  δ  174.41,  173.93,  173.75,  154.47,  149.86,  118.53,  118.48,  114.93,  100.84,  99.71,  96.50,  76.76,  75.66,  73.75,  73.27,  72.74,  72.60,  69.76,  69.47,  69.24,  69.12,  67.28,62.94,  60.62,  55.60,  55.32,  55.22,  22.30,  22.06,  20.03;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ３１Ｈ４６Ｎ２Ｏ１８に対するｍ／ｚ計算値；７３５．２８１８  実測値７３５．２７６９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０５５２】
直鎖モジュールの調製。スキームＳ２３に描かれているように、直鎖モジュールの調製を、アクセプター１６のＧｌｃＮＡｃ残基の酵素的なβ−１，４−ガラクトシル化（ｇａｌｃｔｏｓｙｌａｔｉｏｎ）から始めて、ＬａｃＮＡｃ部分２１を形成した。次いで、モジュール２１は、α−１，３−フコシルトランスフェラーゼ、α−２，６−シアリルトランスフェラーゼ、α−２，３−シアリルトランスフェラーゼおよびα−１，３−フコシルトランスフェラーゼの作用を受けて、それぞれモジュール２２、２３、２４および２５を生じた。ＧｌｃＮＡｃ上のα−１，３フコース残基の存在（Ｐｒｅｓｎｅｃｅ）が、３位と６位の両方における、隣接するガラクトース上のシアル酸の付加を制限する。興味深いことに（Ｉｎｔｅｒｓｔｉｎｇｌｙ）、α−２，３−シアリル化されたＬａｃＮＡｃ２４は、２５をもたらすα−１，３−フコシルトランスフェラーゼの基質であると見出されたが、α−２，６−シアリル化されたＬａｃＮＡｃ２３は、そうではなかった。本発明者の興味をより引いたのは、α−１，２−フコシル化されたＬａｃＮＡｃ２６が、α−２，６−シアリルトランスフェラーゼの基質であったが、α−２，３−シアリルトランスフェラーゼの基質ではなかったことである。ＦｕｃＴおよびＳｉａＴのユニークな基質特異性のおかげで、本発明者らは、Ｎ−グリカンを合成するためのより多様なタイプのモジュールへの迅速なアクセスを確立することができた。
【化１４６】
2019515876.tif 000148
【０５５３】
スキームＳ２３：直鎖モジュールの調製。ｉ、ＵＤＰ−ガラクトース、β１，４−ＧａｌＴ；ｉｉ、ＧＤＰ−フコース、α１，３−ＦｕｃＴ；ｉｉｉ、ＣＭＰ−Ｎｅｕ５Ａｃ、α２，６−ＳｉａＴ；ｉｖ、ＣＭＰ−Ｎｅｕ５Ａｃ、α２，３−ＳｉａＴ；ｖ、ＧＤＰ−フコース、α１，２−ＦｕｃＴ。
【化１４７】
2019515876.tif 000149
【０５５４】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−α−Ｄ−マンノピラノシド（２１）：化合物１６（１００ｍｇ，０．２０４ｍｍｏｌ）を、一般的な手順４を用いることによってガラクトシル化して、２１（１１５ｍｇ，８６％）を非晶質の白色固体として得た。1H  NMR  (400  MHz,  D2O):  δ  7.10  (d,  J  =  8.8  Hz,  2H),  6.96  (d,  J  =  8.1  Hz,  2H),  5.44  (s,  1H),  4.59  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  4.49  (d,  J  =  8.2  Hz,  1H),  4.45  (s,  1H),  4.00-3.75  (m,  17H),  3.60  (s,  3H),  2.01  (s,  3H);ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ２７Ｈ４１ＮＯ１７に対するｍ／ｚ計算値；６５２．２４４７  実測値６７４．２２６２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【化１４８】
2019515876.tif 000150
【０５５５】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−［α−Ｌ−フコピラノシル−（１→３）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル］−（１→２）−α−Ｄ−マンノピラノシド（２２）：化合物２１（８０ｍｇ，０．１２２ｍｍｏｌ）を、一般的な手順５を用いることによってフコシル化して、２２（８２ｍｇ，８４％）を凍結乾燥後に白色固体として得た。1H  NMR  (400  MHz,  D2O):  δ  7.15  (d,  J  =  9.2  Hz,  2H),  7.00  (d,  J  =  9.1  Hz,  2H),  5.45  (s,  1H),  5.12  (d,  J  =  4.1  Hz,  1H),  4.67  (d,  J  =  7.8  Hz,  2H),  4.44  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  4.05  (s,  1H),4.01(dd,J=3.2および7.8Hz,1H)、3.98  (t,  J  =  10.2  Hz,  2H),  3.80-3.70  (m,  6H),  3.79  (s,  3H),  3.70-3.40  (m,  11H),  2.06  (s,  3H),  1.18  (d,  J  =  6.4  Hz,  3H);ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ３３Ｈ５１ＮＯ２１に対するｍ／ｚ計算値；７９７．７５７０  実測値８２０．２８３７（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化１４９】
2019515876.tif 000151
【０５５６】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−［５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノ−シロネート−（２→６）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−α−Ｄ−マンノピラノシド（２３）：化合物２１（１５０ｍｇ，０．１８４ｍｍｏｌ）を、一般的な手順３を用いることによってα２，６−シアリル化して、２３（１６９ｍｇ，９０％）を凍結乾燥後に白色固体として得た。1H  NMR  (400  MHz,  D2O):  δ  7.  10  (d,  J  =  9.2  Hz,  2H),  7.08  (d,  J  =  9.1  Hz,  2H),  5.49  (s,  1H),  4.64  (d,  J  =  8.1  Hz),  1H,  4.40  (d,  J  =  8.2  Hz,  1H),  4.26  (t,  J  =  2.1  Hz,  1H),  4.01-3.80  (m,  7H),  3.74  (s,  3H),  3.66-3.58  (m,  20H),２．６３（ｄｄ，Ｊ＝４．４および１２．８Ｈｚ，１Ｈ），２．０７（ｓ，３Ｈ），１．９７（ｓ，３Ｈ），１．６８（ｔ，１Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ３８Ｈ５８Ｎ２Ｏ２５に対するｍ／ｚ計算値；９４２．３２４５  実測値９４１．３２６９（Ｍ−Ｈ）−。
【化１５０】
2019515876.tif 000152
【０５５７】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−［５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノ−シロネート−（２→３）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−α−Ｄ−マンノピラノシド（２４）：化合物２１（１０ｍｇ，１５．３μｍｏｌ）を、一般的な手順３を用いることによってα２，３−シアリル化して、２４（１１．５ｍｇ，８０％）を凍結乾燥後に白色固体として得た。1H  NMR  (400  MHz,  D2O):  δ  7.  16  (d,  J  =  9.2  Hz,  2H),  7.03  (d,  J  =  9.5  Hz,  2H),  5.49  (s,  1H),  4.67  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  4.56  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  4.32  (t,  J  =  2.1  Hz,  1H),  4.15  (dd,  J  =  3.2  &  7.5  Hz,  1H),  4.10-3.98  (m,  4H),  3.95-3.85  (m,  6H),  3.84  (s,  3H),  3.80-3.50  (m,  13H),２．７９（ｄｄ，Ｊ＝４．８および１２．１Ｈｚ，１Ｈ），２．０９（ｓ，３Ｈ），２．０７（ｓ，３Ｈ），１．８５（ｔ，１Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ３８Ｈ５８Ｎ２Ｏ２５に対するｍ／ｚ計算値；９４２．３２４５  実測値９４１．３３１２（Ｍ−Ｈ）−。
【化１５１】
2019515876.tif 000153
【０５５８】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−［５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノ−シロネート−（２→３）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−［α−Ｌ−フコピラノシル−（１→３）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル］−（１→２）−α−Ｄ−マンノピラノシド（２５）：化合物２４（８ｍｇ，８．５μｍｏｌ）を、一般的な手順５を用いることによってフコシル化して、２５（６．５ｍｇ，７０％）を凍結乾燥後に白色固体として得た。1H  NMR  (400  MHz,  D2O):  δ  7.  14  (d,  J  =  6.8  Hz,  2H),  6.98  (d,  J  =  7.2  Hz,  2H),  5.46  (s,  1H),  5.12  (d,  J  =  4.2  Hz,  1H),  4.67  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  4.30  (t,  J  =  2.3  Hz,  1H),  4.10  (dd,  J  =  3.0  &  7.8  Hz,  1H),  4.00-3.80  (m,  14H),  3.79  (s,  3H),  3.75-3.50  (m,  13H),２．７５（ｄｄ，Ｊ＝４．０および１２．０Ｈｚ，１Ｈ），２．０３（ｓ，３Ｈ），２．０１（ｓ，３Ｈ），１．７６（ｔ，１Ｈ），１．１７（ｄ，３Ｈ，Ｆｕｃ−Ｍｅ）；ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ４４Ｈ６８Ｎ２Ｏ２９に対するｍ／ｚ計算値；１０８８．３８５７  実測値１０８７．３８５０（Ｍ−Ｈ）−。
【化１５２】
2019515876.tif 000154
【０５５９】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−［α−Ｌ−フコピラノシル−（１→２）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル］−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル］−（１→２）−α−Ｄ−マンノピラノシド（２６）：化合物２１（３ｍｇ，４．６μｍｏｌ）を、一般的な手順５を用いることによってフコシル化して、２６（２．１ｍｇ，５３％）を凍結乾燥後に白色固体として得た。1H  NMR  (400  MHz,  D2O):  δ  7.17  (d,  J  =  7.2  Hz,  2H),  7.01  (d,  J  =  10.1  Hz,  2H),  5.49  (s,  1H),  5.33  (s,  1H),  4.67  (d,  J  =  8.2  Hz,  1H),  4.56  (d,  J  =  8.2  Hz,  1H),  4.33  (m,  1H),  4.25  (q,  1H),３．９８（ｄｄ，Ｊ＝３．１および７．２Ｈｚ，１Ｈ），３．９６（ｄｄ，Ｊ＝１．８および７．２Ｈｚ，１Ｈ），３．８５−３．５０（ｍ，２０Ｈ），３．４０（ｍ，１Ｈ），１．９７（ｓ，３Ｈ），１．１４（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ３３Ｈ５１ＮＯ２１に対するｍ／ｚ計算値；７９７．２９５４  実測値８２０．２９２２（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化１５３】
2019515876.tif 000155
【０５６０】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−［５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノ−シロネート−（２→６）−［α−Ｌ−フコピラノシル−（１→２）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル］−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル］−（１→２）−α−Ｄ−マンノピラノシド（２７）：化合物２６（２．０ｍｇ，２．７μｍｏｌ）を、一般的な手順３を用いることによってα２，６−シアリル化して、２７（１．８ｍｇ，６６％）を凍結乾燥後に白色固体として得た。1H  NMR  (400  MHz,  D2O):  δ  7.08  (d,  J  =  9.5  Hz,  2H),  6.91  (d,  J  =  9.2  Hz,  2H),  5.49  (s,  1H),  5.27  (s,  1H),  4.59  (d,  J  =  8.2  Hz,  1H),  4.47  (d,  J  =  8.1  Hz,  1H),  4.22  (bs,  1H),  4.12  (d,  J  =  6.8  Hz,  1H),  4.00-3.49  (m,  30H),２．６３（ｄｄ，Ｊ＝３．２および１２．０Ｈｚ，１Ｈ），２．０１（ｓ，３Ｈ），１．９７（ｓ，３Ｈ），１．６７（ｔ，１Ｈ），１．１９（ｄ，３Ｈ，Ｆｕｃ−Ｍｅ）；ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ４４Ｈ６８Ｎ２Ｏ２９に対するｍ／ｚ計算値；１０８８．３８５７  実測値１０８７．３８１４（Ｍ−Ｈ）−。
【０５６１】
対称的に分岐したモジュールの調製。
【化１５４】
2019515876.tif 000156
【０５６２】
ｉ、β−１，４ＧａｌＴ、ＵＤＰ−Ｇａｌ；ｉｉ、α１，３−フコシルトランスフェラーゼ、ＧＤＰ−フコース；ｉｉｉ、α２，６−シアリルトランスフェラーゼ、ＣＭＰ−β−Ｄ−シアル酸。
【化１５５】
2019515876.tif 000157
【０５６３】
化合物２８および２９：化合物１７（１０ｍｇ，１４．３μｍｏｌ）および１８（１０ｍｇ，１４．３μｍｏｌ）を、一般的な手順４を用いることによってガラクトシル化して、２８（１０ｍｇ，７１％）および２９（９ｍｇ，６１％）を非晶質の白色固体として得た。
【０５６４】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−ジ−［β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル］−（１→２），（１→４）−α−Ｄ−マンノピラノシド（２８）：1H  NMR  (400  MHz,  D2O):  δ  7.11  (d,  J  =  9.2  Hz,  2H),  6.95  (d,  J=  8.5  Hz,  2H),  5.44  (s,  1H),  4.65  (d,  J  =  8.9  Hz,  1H),  4.58  (d,  J  =  9.2  Hz,  1H),  4.45  (dd,  J  =  3.8  &  9.2  Hz,  2H),  4.30  (t,  J  =  2.1  &  6.5  Hz,  1H),  4.18  (dd,  J  =  3.2  &  7.8  Hz,  1H),  4.00  (t,  J  =  10.8  Hz,  2H),  3.90  (d,  J  =  8.2  Hz,  2H),  3.78  (s,  3H),  3.75-3.64  (m,  20H),  3.58-3.49  (m,  4H),  2.02  (s,  3H),  2.01  (s,  3H);ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ４１Ｈ６４Ｎ２Ｏ２７に対するｍ／ｚ計算値；１０１６．９５６４  実測値１０３９．３６０７（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０５６５】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−ジ−［β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル］−（１→２），（１→６）−α−Ｄ−マンノピラノシド（２９）：1H  NMR  (400  MHz,  D2O):  δ  7.02  (d,  J  =  9.0  Hz,  2H),  6.92  (d,  J  =  9.0  Hz,  2H),  5.32  (s,  1H),  4.55  (d,  J  =  4.3  Hz,  1H),  4.41  (d,  J  =  8.2  Hz,  1H),  4.34  (dd,  J  =  13.1,  7.9  Hz,  2H),  4.16  (s,  1H),  4.00  (d,  J  =  11.0  Hz,  1H),  3.84-3.95  (m,  2H),  3.70-3.81  (m,  9H),  3.49-3.68  (m,  16H),  3.37-3.44  (m,  4H),  1.94  (s,  3H),  1.82  (s,  3H);ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ４１Ｈ６４Ｎ２ＮａＯ２７に対するｍ／ｚ計算値；１０３９．３５９４  実測値１０３９．３５５１。
【化１５６】
2019515876.tif 000158
【０５６６】
化合物３０および３１：化合物２８（８ｍｇ，７．３μｍｏｌ）および２９（８ｍｇ，７．３μｍｏｌ）を、一般的な手順３を用いることによってシアリル化して、３０（９ｍｇ，７８％）および３１（７．５ｍｇ，６５％）を凍結乾燥後に白色固体として得た。
【０５６７】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−ジ−［５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノ−シロネート−（２→６）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル］−（１→２），（１→４）−α−Ｄ−マンノピラノシド（３０）：1H  NMR  (400  MHz,  D2O):  δ  7.12  (d,  J  =  9.8  Hz,  2H),  6.98  (d,  J  =  9.3  Hz,  2H),  5.46  (s,  1H),  4.63  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  4.58  (d,  J  =  8.2  Hz,  1H),  4.42  (d,  J  =  7.8  Hz,  2H),  4.32  (t,  J  =  3.2  Hz,  1H),  4.20  (dd,  J  =  3.2  &  7.2  Hz,  1H,  4.03-3.85  (m,  4H),  3.82-3.40  (m,  43H),  2.58  (dd,  2H,  J  =  3.2  &  10.3  Hz),  2.05  (s,  3H),  2.04  (s,  3H),  2.02  (s,  3H),  2.00  (s,  3H),  1.53  (m,  2H)  ;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ６３Ｈ９８Ｎ４Ｏ４３に対するｍ／ｚ計算値；１５９９．４６２０  実測値７９８．２７７５（Ｍ−Ｈ）２−。
【０５６８】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−ジ−［５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノ−シロネート−（２→６）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル］−（１→２），（１→５）−α−Ｄ−マンノピラノシド（３１）：1H  NMR  (600  MHz,  D2O):  δ  7.05  (d,  J  =  9.2  Hz,  2H),  6.95  (d,  J  =  9.2  Hz,  2H),  5.36  (d,  J  =  1.6  Hz,  1H),  4.59  (d,  J  =  8.2  Hz,  1H),  4.46  (d,  J  =  8.1  Hz,  1H),  4.36  (d,  J  =  7.9  Hz,  1H),  4.32  (d,  J  =  7.9  Hz,  1H),  4.20  (dd,  J  =  3.4,  1.8  Hz,  1H),  4.06  (d,  J  =  10.3  Hz,  1H),  3.86-3.98  (m,  4H),  3.64-3.86  (m,  19H),  3.53-3.62  (m,  13H),  3.37-3.50  (m,  9H),  2.58  (ddd,  J  =  12.0,  4.4,  2.1  Hz,  2H),  1.98  (s,  3H),  1.94  (s,  3H),  1.94  (s,  3H),  1.87  (s,  3H),  1.63  (td,  J  =  12.2,  8.6  Hz,  2H);ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ６３Ｈ９８Ｎ４ＮａＯ４３に対するｍ／ｚ計算値；１６２１．５４７９  実測値１６２１．５４７３。
【化１５７】
2019515876.tif 000159
【０５６９】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−ジ−｛β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−［α−Ｌ−フコピラノシル−（１→３）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル］｝−（１→２），（１→４）−α−Ｄ−マンノピラノシド（３２）：化合物２８（１５ｍｇ，１４．７μｍｏｌ）を、一般的な手順５を用いることによってフコシル化して、３２（１４ｍｇ，７３％）を非晶質の白色固体として得た。1H  NMR  (400  MHz,  D2O):  δ  7.  13  (d,  J  =  9.2  Hz,  2H),  6.99  (d,  J  =  9.0  Hz,  2H),  5.44  (d,  J  =  3.2  Hz,  1H),  5.12  (d,  J  =  4.1  Hz,  1H),  5.10  (d,  J  =  4.0  Hz,  1H),  4.81  (d,  J  =  8.4  Hz,  2H),  4.68  (d,  J  =  7.4  Hz,  1H),  4.58  (d,  J  =  7.2  Hz,  1H),  4.45  (dd,  J  =  3.2  &  8.4  Hz,  2H),  4.31  (t,  J  =  3.2  Hz,  1H),  4.20  (dd,  J  =  3.2  &  8.4  Hz,  1H),  4.09-3.84  (m,  14H),  3.82  (s,  3H),  3.80-3.40  (m,  14H),  2.06  (s,  6H),  1.17  (d,  J  =  6.4  Hz,  6H);ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ５３Ｈ８４Ｎ２Ｏ３５に対するｍ／ｚ計算値；１３０８．４８５５  実測値１３０９．４９１１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【化１５８】
2019515876.tif 000160
【０５７０】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−ジ−｛β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−［α−Ｌ−フコピラノシル−（１→３）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル］｝−（１→２），（１→６）−α−Ｄ−マンノピラノシド（３３）：化合物２９（１５ｍｇ，１４．７μｍｏｌ）を、一般的な手順５を用いることによってフコシル化して、３３（１５．５ｍｇ，８１％）を非晶質の白色固体として得た。1H  NMR  (400  MHz,  D2O):  δ  7.17  (d,  J  =  8.2  Hz,  2H),  7.06  (d,  J  =  8.0  Hz,  2H),  5.42  (s,  1H),  5.14  (d,  J  =  4.0  Hz,  1H),  5.09  (d,  J  =  4.0  Hz,  1H),  4.87-4.85  (m,  2H),  4.60  (d,  J  =  7.2  Hz,  1H),  4.56  (q,  2H),  4.30  (m,  1H),  4.15  (d,  J  =  12.2  Hz,  1H),  4.06  (dd,  J  =  3.2  &  7.8  Hz,  1H),  4.00-3.45  (m,  37),  2.06  (s,  3H),  1.95  (s,  3H),  1.19  (d,  J  =  6.5  Hz,  6H) ;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ５３Ｈ８４Ｎ２Ｏ３５に対するｍ／ｚ計算値；１３０８．４８５５  実測値１３３１．３５６１（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０５７１】
非対称的に分岐したモジュールの調製。
【化１５９】
2019515876.tif 000161
【０５７２】
スキームＳ２５：非対称モジュールの調製。ＵＤＰ−ガラクトース、β１，４−ＧａｌＴ；ｉｉ、ＧＤＰ−フコース  α１，３−ＦｕｃＴ；ｉｉｉ、ＣＭＰ−Ｎｅｕ５Ａｃ、α２，６−ＳｉａＴ；ｖｉ、ＮａＯＨ。
【化１６０】
2019515876.tif 000162
【０５７３】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−（４−Ｏ−アセチル−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→２）−Ｏ−（β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−α−Ｄ−マンノピラノシド（３４）：化合物１９（１５ｍｇ，２０．４μｍｏｌ）を、一般的な手順４を用いることによってガラクトシル化して（ｇａｌａｃｔｏｓｙａｌａｔｅｄ）、３４（１２．５ｍｇ，６８％）を非晶質の白色固体として得た。1H  NMR  (600  MHz,  D2O)  δ  7.01  (d,  J  =  9.2  Hz,  2H),  6.88  (d,  J  =  9.2  Hz,  1H),  5.34  (d,  J  =  1.8  Hz,  1H),  4.56  (d,  J  =  8.5  Hz,  1H),  4.45  (d,  J  =  8.1  Hz,  1H),  4.37  (d,  J  =  7.7  Hz,  1H),  4.20-4.33  (m,  2H),  4.16-4.20  (m,  1H),  4.07  (dd,  J  =  8.7,  3.0  Hz,  1H),  3.86-3.94  (m,  1H),  3.81  (d,  J  =  3.4  Hz,  1H),  3.31-3.78  (m,  21H),  2.03  (s,  3H),  1.93  (s,  3H),  1.92  (s,  3H);ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ３７Ｈ５６Ｎ２ＮａＯ２３に対するｍ／ｚ計算値；９１９．９１６６  実測値９１９．３１５６。
【化１６１】
2019515876.tif 000163
【０５７４】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−（４−Ｏ−アセチル−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→２）−Ｏ−（β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→６）−α−Ｄ−マンノピラノシド（Ｓ２７ａ）：化合物２０（８ｍｇ，１０．９μｍｏｌ）を、一般的な手順４を用いることによってガラクトシル化して、３５（５ｍｇ，７５％）を非晶質の白色固体として得た。1H  NMR  (600  MHz,  D2O):  δ  7.12  (d,  J  =  9.1  Hz,  2H),  7.01  (d,  J  =  9.8  Hz,  2H),  5.40  (s,  1H),  4.67  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  4.49  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  4.40  (d,  J  =  8.3  Hz,  2H),  4.31  (dd,  J  =  3.1  &  7.8  Hz,  1H),  4.21  (t,  J  =  3.1  Hz,  1H),  4.08  (d,  J  =  12.3  Hz,  2H),  4.00  (dd,  J  =  3.2  &  8.1  Hz,  1H),  3.90-3.  48  (m,  3H),  3.80  (s,  3H),  3.75-3.47  (m,  16H),  2.15  (s,  3H),  2.0  (s,  3H),  1.98  (s,  3H);ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ３７Ｈ５６Ｎ２Ｏ２３に対するｍ／ｚ計算値；８９６．３１６２  実測値９１９．３１６４（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化１６２】
2019515876.tif 000164
【０５７５】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−（４−Ｏ−アセチル−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→２）−Ｏ−（５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノ−シロネート−（２→６）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−α−Ｄ−マンノピラノシド（３６）：化合物３４（１０ｍｇ，１１．１μｍｏｌ）を、一般的な手順３を用いることによってα２，６−シアリル化して、３６（１１．２ｍｇ，８４％）を凍結乾燥後に白色固体として得た。1H  NMR  (600  MHz,  D2O):  δ  7.02  (d,  J  =  9.2  Hz,  2H),  6.89  (d,  J  =  9.2  Hz,  2H),  5.35  (d,  J  =  2.0  Hz,  1H),  4.55  (dd,  J  =  18.4,  8.4  Hz,  1H),  4.48  (d,  J  =  7.9  Hz,  1H),  4.17-4.37  (m,  4H),  4.05-4.12  (m,  1H),  3.29-3.97  (m,  36H),  2.56  (dd,  J  =  12.4,  4.7  Hz,  1H),  2.04  (s,  3H),  1.96  (s,  3H),  1.92  (s,  3H),  1.92  (s,  3H),  1.60  (t,  J  =  12.2  Hz,  1H);ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ４８Ｈ７２Ｎ３Ｏ３１に対するｍ／ｚ計算値；１１８６．４１５５  実測値１１８６．４１７５。
【化１６３】
2019515876.tif 000165
【０５７６】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−（４−Ｏ−アセチル−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→２）−Ｏ−（５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノ−シロネート−（２→６）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→６）−α−Ｄ−マンノピラノシド（３７）：化合物３５を、一般的な手順３を用いることによってα２，６−シアリル化して、３７（５．１ｍｇ，７７％）を凍結乾燥後に白色固体として得た。1H  NMR  (600  MHz,  D2O):  δ  7.11  (d,  J  =  9.1  Hz,  2H),  7.00  (d,  J  =  9.2  Hz,  2H),  5.38  (s,  1H),  4.50  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  4.36  (d,  J  =  8.2  Hz,  1H),  4.22  (t,  J  =  2.1  Hz,  1H),  4.10  (dd,  J  =  3.1  &  7.8  Hz,  1H),  3.97-3.  85  (m,  4H),  3.77  (s,  3H),  3.73-3.46  (m,  25H),2.63(dd,J=3.2および7.8Hz,1H),2.09(s,3H),2.01(s,3H),1.99(s,3H),1.94(s,3H),1.65(t,1H)；ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ４８Ｈ７３Ｎ３Ｏ３１に対するｍ／ｚ計算値；１１８７．４１４４  実測値１１８６．４１３３（Ｍ−Ｈ）−。
【化１６４】
2019515876.tif 000166
【０５７７】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−（β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→２）−Ｏ−（５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノ−シロネート−（２→６）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−α−Ｄ−マンノピラノシド（４０）：化合物３６（７ｍｇ，５．８μｍｏｌ）を含む０．５ｍＬのＨ２Ｏの溶液に、ＮａＯＨ（９．４ｍｇ，２３．６μｍｏｌ）を加え、４時間撹拌した。反応物を中和し、生成物をＢｉｏ−Ｇｅｌ  Ｐ−２クロマトグラフィー（溶離剤Ｈ２Ｏ）によって精製して（ｐｕｔｉｆｉｅｄ）、３８（６．１ｍｇ，８９％）を凍結乾燥後に白色固体として得た。化合物３８（６ｍｇ，５．３μｍｏｌ）およびＵＤＰガラクトース（６．４ｍｇ，１０．６μｍｏｌ）をＴｒｉｓ緩衝液（２５ｍＭ，ｐＨ７．５）およびＭｎＣｌ２（２０ｍＭ）に溶解した。ＧａｌＴ−１（１５０単位）を、グリカンの最終濃度が５ｍＭとなるように加えた。得られた反応混合物を３７℃で４８時間インキュベートした。その反応混合物を遠心し、上清をＰ２−Ｂｉｏｇｅｌでのゲル濾過（溶離剤は水）に供した。生成物を含む画分を合わせ、凍結乾燥して、４０（５ｍｇ，７３％）を非晶質の白色固体として得た。1H  NMR  (400  MHz,  D2O)  δ  7.02  (d,  J  =  9.2  Hz,  2H),  6.88  (d,  J  =  9.2  Hz,  2H),  5.35  (d,  J  =  1.8  Hz,  1H),  4.56  (d,  J  =  7.9  Hz,  1H),  4.48  (d,  J  =  7.9  Hz,  1H),  4.35  (dd,  J  =  9.6,  7.7  Hz,  2H),  4.27-4.30  (m,  2H),  4.21-4.24  (m,  1H),  4.02-4.20  (m,  6H),  3.87-3.92  (m,  3H),  3.39-3.85  (m,  28H),  2.56  (dd,  J  =  12.4,  4.6  Hz,  1H),  1.96  (s,  3H),  1.93  (s,  3H),  1.92  (s,  3H),  1.60  (t,  J  =  12.2  Hz,  1H);ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ５２Ｈ８０Ｎ３Ｏ３５に対するｍ／ｚ計算値；１３０６．４５７８  実測値１３０６．４６１７。
【化１６５】
2019515876.tif 000167
【０５７８】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−（β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→２）−Ｏ−（５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノ−シロネート−（２→６）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→６）−Ｏ−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−α−Ｄ−マンノピラノシド（４１）：化合物３７（５ｍｇ，４．２μｍｏｌ）を含む０．５ｍＬのＨ２Ｏの溶液に、ＮａＯＨ（６．７ｍｇ，１６．８μｍｏｌ）を加え、４時間撹拌した。反応物を中和し、生成物をＢｉｏ−Ｇｅｌ  Ｐ−２クロマトグラフィー（溶離剤Ｈ２Ｏ）によって精製して、３９（３．８ｍｇ，７９％）を凍結乾燥後に白色固体として得た。化合物３９（３．５ｍｇ，３．０μｍｏｌ）およびＵＤＰガラクトース（３．９ｍｇ，６．１μｍｏｌ）をＴｒｉｓ緩衝液（２５ｍＭ，ｐＨ７．５）およびＭｎＣｌ２（２０ｍＭ）に溶解した。ＧａｌＴ−１（１５０単位）を、グリカンの最終濃度が５ｍＭとなるように加えた。得られた反応混合物を３７℃で４８時間インキュベートした。その反応混合物を遠心し、上清をＰ２−Ｂｉｏｇｅｌでのゲル濾過（溶離剤は水）に供した。生成物を含む画分を合わせ、凍結乾燥して、４１（３．３ｍｇ，７５％）を非晶質の白色固体として得た。1H  NMR  (400  MHz,  D2O):  δ  7.11  (d,  J  =  9.1  Hz,  2H),  7.00  (d,  J  =  9.2  Hz,  2H),  5.38  (s,  1H),  4.64  (d,  J  =  8.1  Hz,  1H),  4.50  (d,  J  =  8.2  Hz,  1H),  4.23  (d,  J  =  8.3  Hz,  1H),  4.38  (d,  J  =  8.0  Hz,  1H),  4.22  (t,  J  =  2.1  Hz,  1H),  4.10  (d,  J  =  12.2  Hz,  1H),  4.01-3.  95  (m,  4H),  3.87-3.  63  (m,  26H),  3.52-3.45  (m,  8H),2.63(dd,J=2.1および7.8Hz,1H),2.63(dd,J=3.2および7.8Hz,1H),2.01(s,3H),1.99(s,3H),1.93(s,3H),1.67(t,1H)；ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ５２Ｈ８１Ｎ３Ｏ３５に対するｍ／ｚ計算値；１３０７．４５６７  実測値１３０６．４６０９（Ｍ−Ｈ）−。
【化１６６】
2019515876.tif 000168
【０５７９】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−（β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−［α−Ｌ−フコピラノシル−（１→３）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル］−（１→２）−Ｏ−（５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノ−シロネート−（２→６）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−α−Ｄ−マンノピラノシド（４２）：化合物４０（２ｍｇ，１．５２μｍｏｌ）を、一般的な手順５を用いることによってα１，３−フコシル化して、４２（２ｍｇ，８５％）を非晶質の白色固体として得た。1H  NMR  (400  MHz,  D2O):  δ  7.16  (d,  J  =  8.8  Hz,  2H),  7.06  (d,  J  =  8.1  Hz,  2H),  5.45  (s,  1H),  5.08  (d,  J  =  4.1  Hz,  1H),  4.60  (d,  J  =  4.2  Hz,  1H),  4.44  (dd,  J  =  3.5  &  7.9  Hz,  2H),  4.30  (bs,  1H),  4.15  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  4.09-3.40  (m,  40H),  2.70  (d,  J  =  11.2  Hz,  1H),  2.08  (s,  3H),  2.05  (s,  3H),  1.93  (s,  3H),  1.74  (t,  1H),  1.20  (d,  J  =  6.4  Hz,  3H);ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ５８Ｈ９１Ｎ３Ｏ３９に対するｍ／ｚ計算値；１４５３．５２４５  実測値１４５２．５１５７（Ｍ−Ｈ）−。
【化１６７】
2019515876.tif 000169
【０５８０】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−（β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−［α−Ｌ−フコピラノシル−（１→３）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル］−（１→２）−Ｏ−（５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノ−シロネート−（２→６）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→６）−α−Ｄ−マンノピラノシド（４３）：化合物４１（４ｍｇ，３．０５μｍｏｌ）を、一般的な手順５を用いることによってα１，３−フコシル化して、４３（３．２ｍｇ，７２％）を非晶質の白色固体として得た。1H  NMR  (400  MHz,  D2O):  δ  7.21  (d,  J  =  8.2  Hz,  2H),  7.06  (d,  J  =  8.0  Hz,  2H),  5.74  (s,  1H),  5.72  (d,  J  =  8.1  Hz,  2H),  5.52  (dd,  J  =  3.1  &  7.2  Hz,  1H),  5.40  (s,  1H),  5.01  (d,  J  =  4.2  Hz,  1H),  4.50-3.25  (m,  42H),  2.50  (dd,  J  =  3.1  &  7.2  Hz,  1H),  2.01  (s,  3H),  1.99  (s,  6H),  1.56  (t,  1H),  1.05  (d,  3H,  Fuc-Me);ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ５８Ｈ９１Ｎ３Ｏ３９に対するｍ／ｚ計算値；１４５３．５２４５  実測値１４５２．５４４５（Ｍ−Ｈ）−。
【化１６８】
2019515876.tif 000170
【０５８１】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→２）−Ｏ−（β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→６）−α−Ｄ−マンノピラノシド（４４）：化合物３５（２０ｍｇ，２２．３μｍｏｌ）を含む０．５ｍＬのＨ２Ｏの溶液に、ＮａＯＨ（３．５７ｍｇ，８９．２μｍｏｌ）を加え、４時間撹拌した。反応物を中和し、生成物をＢｉｏ−Ｇｅｌ  Ｐ−２クロマトグラフィー（溶離剤Ｈ２Ｏ）によって精製して、４４（１５．３ｍｇ，８０％）を凍結乾燥後に白色固体として得た。1H  NMR  (400  MHz,  D2O):  δ  7.15  (d,  J  =  9.2  Hz,  2H),  7.06  (d,  J  =  9.8  Hz,  2H),  5.42  (s,  1H),  4.67  (d,  J  =  8.2  Hz,  1H),  4.54  (d,  J  =  8.0  Hz,  1H),  4.47(d,  J  =  8.2  Hz,  1H),  4.32  (t,  J  =  2.1  Hz,  1H),  4.10  (d,  J  =  12.2  Hz,  1H),  4.09  (dd,  J  =  3.2  &  8.2  Hz,  1H),  4.01-3.91(m,  4H),  3.85  (s,  3H),  3.80-3.  40  (m,  21H),  2.03  (s,  3H),  1.98  (s,  3H);ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ３５Ｈ５４Ｎ２Ｏ２２に対するｍ／ｚ計算値；８５４．３１２５  実測値８７７．３０６２（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化１６９】
2019515876.tif 000171
【０５８２】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→２）−Ｏ−（β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−［α−Ｌ−フコピラノシル−（１→３）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル］−（１→６）−α−Ｄ−マンノピラノシド（４５）：化合物４４（８ｍｇ，９．３μｍｏｌ）を、一般的な手順５を用いることによってα１，３−フコシル化して、４５（６ｍｇ，６６％）を凍結乾燥後に白色固体として得た。1H  NMR  (400  MHz,  D2O):  δ  7.14  (d,  J  =  8.2  Hz,  2H),  7.02  (d,  J  =  8.1  Hz,  2H),  5.41  (s,  1H),  5.07  (d,  J  =  4.0  Hz,  1H),  4.64  (d,  J  =  8.2  Hz,  2H),  4.58  (d,  J  =  7.4  Hz,  1H),  4.44  (d,  J  =  8.5  Hz,  1H),  4.28  (t,  J  =  2.1  Hz,  1H),  4.10  (d,  J  =  12.2  Hz,  1H),  4.05  (dd,  J  =  3.1  &  7.2  Hz,  1H),  3.95-3.85  (m,  8H),  3.82  (s,  3H),  3.80-3.33  (m,  17H),  2.04  (s,  3H),  1.93  (s,  3H),  1.17  (d,  J  =  6.8  Hz,  3H);ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ４１Ｈ６４Ｎ２Ｏ２６に対するｍ／ｚ計算値；１０００．２３５６  実測値１０２３．３５９９（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化１７０】
2019515876.tif 000172
【０５８３】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−（β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→２）−Ｏ−（β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−［α−Ｌ−フコピラノシル−（１→３）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル］−（１→６）−α−Ｄ−マンノピラノシド（４６）：化合物４５（７ｍｇ，７．２μｍｏｌ）を、一般的な手順４を用いることによってβ１，４−ガラクトシル化して、４６（６．５ｍｇ，８０％）を非晶質の白色固体として得た。1H  NMR  (400  MHz,  D2O):  δ  7.16  (d,  J  =  9.4  Hz,  2H),  7.05  (d,  J  =  9.3  Hz,  2H),  5.43  (s,  1H),  5.09  (d,  J  =  4.2  Hz,  1H),  4.83  (d,  J  =  7.5  Hz,  1H),  4.78  (d,  J  =  7.2  Hz,  1H),  4.58  (d,  J  =  8.2  Hz,  1H),  4.48  (d,  J  =  9.5  Hz,  1H),  4.42  (d,  J  =  8.5  Hz,  1H),  4.30  (dd,  J  =  2.1  &  3.4  Hz,  1H),  4.14  (s,  1H),  4.09-3.92  (m,  14H),  3.85  (s,  3H),  3.84-3.50  (m,  17H),  2.06  (s,  3H),  1.95  (s,  3H),  1.20  (d,  J  =  6.5  Hz.  3H);ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ４７Ｈ７４Ｎ２Ｏ３１に対するｍ／ｚ計算値；１１６２．４３０９  実測値１１８５．４０７６（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化１７１】
2019515876.tif 000173
【０５８４】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−（β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−［α−Ｌ−フコピラノシル−（１→３）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル］−（１→６）−Ｏ−（５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノ−シロネート−（２→６）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→２）−α−Ｄ−マンノピラノシド（４７）：化合物４６（５ｍｇ，４．３１μｍｏｌ）を、一般的な手順３を用いることによってα２，６−シアリル化して、４７（５．２ｍｇ，８３％）を非晶質の白色固体として得た。1H  NMR  (400  MHz,  D2O):  δ  7.08  (d,  J  =  8.1  Hz,  2H),  6.97  (d,  J  =  8.0  Hz,  2H),  5.48  (s,  1H),  5.10  (d,  J  =  5.1  Hz,  1H),  4.50  (d,  J  =  7.2  Hz,  1H),  4.43  (dd,  J  =  3.1  &  8.2  Hz,  2H),  4.32  (bs,  1H),  4.08  (d,  J  =  8.1  Hz,  1H),  4.09-3.40  (m,  41H),  2.60  (dd,  J  =  3.2  &  9.2  Hz,  1H),  1.97  (s,  3H),  1.95  (s,  3H),  1.90  (s,  3H),  1.54  (t,  1H),  1.18  (d,  J  =  6.4  Hz,  3H);ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ５８Ｈ９１Ｎ３Ｏ３９に対するｍ／ｚ計算値；１４５３．５２４５  実測値１４５２．５１０１（Ｍ−Ｈ）−。
【０５８５】
化学酵素的に調製されたモジュールの化学誘導体化。次いで、化学酵素的方法によって生成されたモジュール２１および２２を、Ａｃ２Ｏ／ピリジンの存在下においてペルアセチル化した。次いで、還元末端のｐ−メトキシフェニルエーテル保護を、硝酸アンモニウムセリウムを用いて切断し、遊離ヒドロキシルをフルオリドに変更して、ドナー５０および５１を得た（スキームＳ２８）。
【化１７２】
2019515876.tif 000174
【０５８６】
スキームＳ２６：試薬および条件。ｉ、Ａｃ２Ｏ、ピリジン、ＲＴ、一晩；ｉｉ，（１）ＣＡＮ、ＡＣＮ：トルエン：Ｈ２Ｏ，（２）ＤＡＳＴ、ＣＨ２Ｃｌ２、−３０℃。ＣＡＮ：硝酸アンモニウムセリウム；ＤＡＳＴ：ジエチルアミノ硫黄トリフルオリド。
【化１７３】
2019515876.tif 000175
【０５８７】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−［２，３，４，６−Ｏ−テトラアセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル］−（１→４）−［３，６−Ｏ−ジアセチル−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル］−（１→２）−３，４，６−Ｏ−トリアセチル−α−Ｄ−マンノピラノシド（４８）：２１（０．２３０ｇ，０．３６０ｍｍｏｌ）を含む０℃の１０ｍＬのピリジンの溶液に、無水酢酸（６ｍＬ）を加え、ＲＴで一晩撹拌した。次いで、反応混合物を濃縮し、５０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３で抽出した。合わせた有機層を蒸発させ、生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０％→２０％のアセトンのトルエン溶液）によって精製して、所望の４８（０．２６０ｇ，７２％）を得た。ＴＬＣ（アセトン：トルエン＝３／７，ｖ／ｖ）、Rf  =  0.34;  1H  NMR  (400  MHz,  CHCl3):  δ  7.00  (d,  J  =  9.1  Hz,  2H),  6.82  (d,  J  =  9.1  Hz,  2H),  5.74  (d,  J  =  8.7  Hz,  1H),  5.33-5.35  (m,  2H),  5.27-5.30  (m,  2H),  5.22  (dd,  J  =  9.6,  8.2  Hz,  1H),  5.10  (dd,  J  =  10.5,  7.9  Hz,  1H),  4.96  (dd,  J  =  10.5,  3.4  Hz,  1H),  4.72  (d,  J  =  7.5  Hz,  1H),  4.47  (d,  J  =  7.9  Hz,  1H),  4.41  (dd,  J  =  11.8,  2.7  Hz,  1H),  4.31  (t,  J  =  2.2  Hz,  1H),  3.98-4.21  (m,  6H),  3.81-3.91  (m,  2H),  3.72-3.79  (m,  4H),  3.63  (ddd,  J  =  8.6,  5.6,  2.7  Hz,  1H),  2.14  (s,  3H),  2.11  (s,  3H),  2.08  (s,  3H),  2.06  (s,  2H),  2.03  (s,  3H),  2.03  (s,  6H),  2.02  (s,  3H),  1.96  (s,  6H);ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ４５Ｈ５９ＮＯ２６に対するｍ／ｚ計算値；１０２９．９４８０  実測値１０３０．４５８７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【化１７４】
2019515876.tif 000176
【０５８８】
［２，３，４，６−Ｏ−テトラアセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル］−（１→４）−［３，６−Ｏ−ジアセチル−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル］−（１→２）−３，４，６−Ｏ−トリアセチル−α−Ｄ−マンノピラノシルフルオリド（５０）：硝酸アンモニウムセリウム（０．２ｇ，０．５５４ｍｍｏｌ）を、化合物４８（０．２００ｇ，０．２０３ｍｍｏｌ）を含む１０ｍＬのアセトニトリル：トルエン：Ｈ２Ｏ（４：２：１）の溶液に加えた。得られた反応混合物をＲＴで３時間撹拌した。その反応物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（３０×２ｍＬ）およびブライン（３０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。その生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→２５％のアセトンのトルエン溶液）によって精製して、−ＯＨ化合物（０．１２０ｇ）を泡沫状物として得た。残渣（０．１２０ｇ，０．１３０ｍｍｏｌ）を−３０℃のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）に溶解した。次いで、ＤＡＳＴ（３４μＬ，０．２６０ｍｍｏｌ）をゆっくり加え、得られた反応混合物を１時間撹拌した。ＴＬＣ（アセトン：トルエン，３／７）が、出発物質の消費とともに生成物の形成を示したら、その反応物をＮａＨＣＯ３水溶液でクエンチした。濾液をＮａＨＣＯ３水溶液（２×３０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０％→２０％のアセトンのトルエン溶液）によって精製して、５０（２工程で０．０８０ｇ，５１％）を白色固体として得た。ＴＬＣ（アセトン：トルエン＝３／７，ｖ／ｖ）、Rf  =  0.34;  1H  NMR  (600  MHz,  CHCl3):  δ  5.50  (d,  J  =  49.6  Hz,  1H),  5.30  (d,  J  =  3.8  Hz,  1H),  2.26  (t,  J  =  7.8  Hz,  1H),  5.05-4.89  (m,  4H),  4.55  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  4.40  (d,  J  =  8.2  Hz,  1H),  4.32  (s,  2H),4.18(dd,J=3.2および7.8Hz,1H),4.05-4.01  (m,  6H),  3.81  (t,  J  =7.8  Hz,  1H),  3.71  (t,  J  =7.1  Hz,  1H),  3.50  (t,  J  =  3.1  Hz,  1H),  2.29  (s,  3H),  2.08  (s,  3H),  2.07  (s,  3H),  2.06  (s,  3H),  2.02  (s,  3H),  1.99  (s,  3H),  1.98  (s,  3H),  1.96  (s,  3H),  1.91  (s,  3H),  1.82  (s,  3H),  13C  NMR  (150  MHz,  CHCl3):  171.29,  171.10,  170.66,  170.56,  170.35,  170.30,  169.50,  129.21,  128.40,  125.47,  106.54,  104.31,  101.05,  100.31,  76.07,  72.82,  72.64,  72.36,  71.16,  70.95,70.71,  69.41,  69.28,  66.86,  64.92,  62.38,  62.13,  61.04,  53.12,  23.13,  21.64,  21.22,  20.95,  20.87,  20.77,  20.68,  20.62;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ３８Ｈ５２ＦＮＯ２４に対するｍ／ｚ計算値；９２５．８１４５  実測値９２５．８３５４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【化１７５】
2019515876.tif 000177
【０５８９】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−［２，３，４，６−Ｏ−テトラアセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル］−（１→４）−［２，３，４−Ｏ−トリアセチル−α−Ｌ−フコピラノシル−（１→３）−３，６−Ｏ−ジアセチル−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル］−（１→２）−３，４，６−Ｏ−トリアセチル−α−Ｄ−マンノピラノシド（４９）：２２（０．１００ｇ，０．１２５ｍｍｏｌ）を含む０℃の６ｍＬのピリジンの溶液に、無水酢酸（４ｍＬ）を加え、ｒｔで一晩撹拌した。次いで、反応混合物を濃縮し、５０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３で抽出した。合わせた有機層を蒸発させ、生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０％→１０％のアセトンのＣＨ２Ｃｌ２溶液）によって精製して、所望の４９（０．１３５ｇ，８５％）を得た。ＴＬＣ（アセトン：ＣＨ２Ｃｌ２＝１／９，ｖ／ｖ）、Rf  =  0.31;  1H  NMR  (400  MHz,  CHCl3):  δ  7.00  (d,  J  =  6.8  Hz,  2H),  6.83  (d,  J  =  6.8  Hz,  2H),  5.43  (d,  J  =  3.2  Hz,  1H),  4.42  (d,  J  =  3.2  Hz,  1H),  3.98  (d,  J  =  2.1  Hz,  2H),  5.25  (dd,  J  =  3.2  &  8.2  Hz,  2H),  5.19  (dd,  J  =  3.8  &  8.5  Hz,  2H),  5.10  (t,  J  =  9.8  Hz,  2H),  4.89  (d,  J  =  6.3  Hz,  1H),  4.85  (d,  J  =  2.2  Hz,  1H),  4.70  (d,  J  =  9.8  Hz,  2H),  4.61  (d,  J  =  1.2  Hz,  1H),  4.40  (dd,  J  =  3.2  &  7.2  Hz,  1H),  4.31  (m,  3H),  4.22-3.89  (m,  6H),  3.80  (m,  2H),  3.78  (s,  3H),  3.60  (m,  1H),  2.10  (s,  3H),  2.08  (s,  3H),  2.08  (s,  3H),  2.02  (s,  3H),  2.00  (s,  3H),  1.99  (s,  3H),  1.98  (s,  3H),  1.96  (s,  3H),  1.93  (s,  3H),  1.90  (s,  3H),  1.89  (s,  3H),  1.88  (s,  3H),  1.11  (d,  3H);ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ５５Ｈ７３ＮＯ３２に対するｍ／ｚ計算値；１２５９．４１１６  実測値１２８２．３９７４（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化１７６】
2019515876.tif 000178
【０５９０】
［２，３，４，６−Ｏ−テトラアセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル］−（１→４）−［２，３，４−Ｏ−トリアセチル−α−Ｌ−フコピラノシル−（１→３）−３，６−Ｏ−ジアセチル−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル］−（１→２）−３，４，６−Ｏ−トリアセチル−α−Ｄ−マンノピラノシルフルオリド（５０）：硝酸アンモニウムセリウム（０．１２１ｇ，０．１４２ｍｍｏｌ）を、化合物４９（０．０９０ｇ，０．０７１ｍｍｏｌ）を含む７ｍＬのアセトニトリル：トルエン：Ｈ２Ｏ（４：２：１）の溶液に加えた。得られた反応混合物をｒｔで３時間撹拌した。その反応物をＥｔＯＡｃ（４０ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（１０×２ｍＬ）およびブライン（１０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。その生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１５％のアセトンのＣＨ２Ｃｌ２溶液）によって精製して、−ＯＨ化合物（０．０６５ｇ）を泡沫状物として得た。残渣（０．０６０ｇ，０．０５２ｍｍｏｌ）を−３０℃のＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）に溶解した。次いで、ＤＡＳＴ（１１．６μＬ，０．１０４ｍｍｏｌ）をゆっくり加え、得られた反応混合物を１時間撹拌した。ＴＬＣ（アセトン：ＣＨ２Ｃｌ２、１／９）が、出発物質の消費とともに生成物の形成を示したら、その反応物をＮａＨＣＯ３水溶液でクエンチした。濾液をＮａＨＣＯ３水溶液（２×１０ｍＬ）およびブライン（１０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０％→１０％のアセトンのＣＨ２Ｃｌ２溶液）によって精製して、５１（２工程で０．０５５ｇ，６７％）を白色固体として得た。ＴＬＣ（アセトン：ＣＨ２Ｃｌ２＝１／９，ｖ／ｖ）、Rf  =  0.44;  1H  NMR  (400  MHz,  CHCl3):  δ  5.55  (d,  J  =  52.1  Hz,  1H),  5.40  (dt,  J  =  3.2  &  7.8  Hz,  3H),  5.21  (dd,  J  =  2.1  &  8.2  Hz,  2H),  5.18-5.04  (m,  3H),  5.0  (bs,  1H),  4.60  (s,  2H),  4.40  (dd,  J  =  5.6  &  8.5  Hz,  1H),  4.38-4.00  (m,  7H),  3.80  (m,  2H),  3.60  (m,  1H),  2.16  (s,  3H),  2.14  (s,  3H),  2.13  (s,  3H),  2.10  (s,  3H),  2.09  (s,  3H),  2.07  (s,  3H),  2.06  (s,  3H),  2.06  (s,  3H),  2.05  (s,  3H),  2.04  (s,  3H),  2.00  (s,  3H),  1.95  (s,  3H),  1.94  (s,  3H),  1.17  (d,  J  =  6.4  Hz,  3H)  ;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ４８Ｈ６６ＦＮＯ３０に対するｍ／ｚ計算値；１１５５．０３１４  実測値１１７８．３４９１（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０５９１】
コア三糖への化学的グリコシル化：この段階において、本発明者らは、フルオリドドナー５０および５１とコア三糖１５とのカップリング効率を調べられる状態にある。スキームＳ２９に描かれているように、ＡｇＯＴｆ／Ｃｐ２ＨｆＣｌ２の存在下においてコアの３−Ｏ位に５０を立体選択的（ｓｔｅｒｅｏ−ｓｅｌｃｔｉｖｅ）に結合体化することによって、予想される六糖５２が５６％収率で得られた。触媒のｐ−トルエンスルホン酸を用いたベンジリジン環の還元的切断によって、４，６−ジオール５３を得た。次いで、その反応性を利用して、５３の第一級ヒドロキシル基を、５１を用いて選択的にグリコシル化して、完全に保護された十糖５４を中程度の収率で得た。最後に、完全な脱保護によって、所望の選択的にフコシル化された二分岐複合型グリカン５５を得た。
【化１７７】
2019515876.tif 000179
【０５９２】
スキームＳ２７：試薬および条件。ｉ、ＡｇＯＴｆ、Ｃｐ２ＨｆＣｌ２、トルエン、４ÅＭＳ、０℃〜ＲＴ；ｉｉ、ｐ−ＴＳＡ、アセトニトリル、ＲＴ；ｉｉｉ，（１）ＬｉＯＨ、１，４−ジオキサン：Ｈ２Ｏ；９０℃、一晩；（２）Ａｃ２Ｏ、ピリジン、一晩；（３）ＮａＯＭｅ、ＭｅＯＨ、一晩；（４）Ｐｄ（ＯＨ）２、ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ：ＨＣＯＯＨ（５：３：２）、Ｈ２。
【０５９３】
ＡｇＯＴｆ：トリフルオロメタンスルホン酸銀；Ｃｐ２ＨｆＣｌ２：ビス（シクロペンタジエニル）ハフニウムジクロリド、ＭＳ：モレキュラーシーブ。
【化１７８】
2019515876.tif 000180
【０５９４】
５−アジドペンチル−Ｏ−｛［２，３，４，６−Ｏ−テトラアセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル］−（１→４）−［３，６−Ｏ−ジアセチル−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル］−（１→２）−［３，４，６−Ｏ−トリアセチル−α−Ｄ−マンノピラノシル］｝−（１→３）−［２−Ｏ−アセチル−４，６−Ｏ−ベンジリジン−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−Ｏ−（３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ−β−Ｄ−グルコピラノシド（５２）。銀トリフレート（０．０３９ｇ，０．１５５ｍｍｏｌ）、ビス（シクロペンタジエニル）ハフニウムジクロリド（０．０４１ｇ，０．１０８ｍｍｏｌ）および４Å活性化モレキュラーシーブを含む乾燥トルエン（３ｍＬ）の混合物をＲＴで１時間撹拌した。次いで、その反応混合物を０℃に冷却し、ドナー５０（０．０４３ｇ，０．０４６ｍｍｏｌ）およびアクセプター１５（０．０４５ｇ，０．０３１ｍｍｏｌ）を含む３ｍＬのトルエンの溶液を加えた。その混合物をＲＴで３時間撹拌し、Ｅｔ３Ｎでクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、セライトで濾過した。濾液をＮａＨＣＯ３水溶液（２×２０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１０％のアセトンのＣＨ２Ｃｌ２溶液）によって精製して、５２（０．０５１ｇ，７０％）を無色泡沫状物として得た。ＴＬＣ：（アセトン：ＣＨ２Ｃｌ２＝１．５／８．５，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.46;  1H  NMR  (400  MHz,  CHCl3):  δ  7.46-7.16  (m,  25H),  5.41  (s,  1H),  5.32  (d,  J  =  9.8  Hz,  1H),  5.29  (d,  J  =  7.2  Hz,  1H),  5.20  (t,  J  =  10.2  Hz,  1H),  5.09  (t,  J  =  10.3  Hz,  1H),  4.93-4.87  (m,  5H),  4.82-4.57  (m,  5H),  4.50  (d,  J  =  12.2  Hz,  2H),  4.41-4.22  (m,  4H),  4.13-3.56  (m,  8H),  3.43-3.36  (m,  4H),  3.20  (t,  J  =  10.3  Hz,  4H),  3.19  (t,  J  =  10.2  Hz,  1H),  2.20  (s,  3H),  2.18  (s,  3H),  2.13  (s,  3H),  2.06  (s,  3H),  2.05  (s,  3H),  2.04  (s,  3H),  2.03  (s,  3H),  1.98  (s,  3H),  1.96  (s,  3H),  1.90  (s,  3H),  1.81  (s,  3H),  1.58-1.51  (m,  4H),  1.40-1.34  (m,  2H);  13C  NMR  (150  MHz,  CHCl3):  δ  171.28,  170.80,  170.69,  170.49,  170.43,  170.36,  169.97,  169.68,  169.41,  154.30,  154.13,  138.83,  138.18,  137.44,  131.28,  129.25,  129.11,  128.91,  128.63,  128.54,  128.37,  128.18,  128.10,  128.00,  127.79,  127.71,  126.47,  102.55,  101.37,  100.84,  100.44,  98.60,  95.82,  76.07,  74.74,  74.61,  74.51,  74.19,  73.83,  73.59,  72.35,  71.24,  70.95,  70.79,  70.03,  69.62,  69.52,  69.37,  68.66,  68.42,  66.92,  66.41,  65.51,  62.42,  62.02,  61.15,  57.88,  57.23,  53.60,  51.58,  29.27,  28.82,  23.46,  23.29,  21.10,  20.96,  20.82;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ１０４Ｈ１２６Ｃｌ６Ｎ６Ｏ４１に対するｍ／ｚ計算値；２３６０．８５１０  実測値２３６１．６１３１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【化１７９】
2019515876.tif 000181
【０５９５】
５−アジドペンチル−Ｏ−｛［２，３，４，６−Ｏ−テトラアセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル］−（１→４）−［３，６−Ｏ−ジアセチル−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル］−（１→２）−［３，４，６−Ｏ−トリアセチル−α−Ｄ−マンノピラノシル］｝−（１→３）−［２−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−Ｏ−（３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ−β−Ｄ−グルコピラノシド（５３）：ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（０．００１ｇ，０．００８ｍｍｏｌ）を、５２（０．０４０ｇ，０．０１６ｍｍｏｌ）を含むアセトニトリル：ＭｅＯＨ  ２／１（３ｍＬ）の溶液に加え、得られた反応混合物をＲＴで５時間撹拌した。その反応物を、Ｅｔ３Ｎを加えることによってクエンチし、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１５％のアセトンのＣＨ２Ｃｌ２溶液）によって精製して、ジオール５３（０．０２２ｇ，５７％）を得た。ＴＬＣ：（アセトン：ＣＨ２Ｃｌ２＝１．５／８．５，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.32;  1H  NMR  (400  MHz,  CDCl3):  δ  7.43-7.17  (m,  20H),  5.33  (d,  J  =  3.2  Hz,  1H),  5.25  (d,  J  =  3.2  Hz,  1H),  5.19-5.04  (m,  4H),  4.98  (d,  J  =  3.2  Hz,  1H),  4.95  (d,  J  =  3.1  Hz,  1H),  4.94-4.89  (m,  2H),  4.72-4.55  (m,  8H),  4.50-4.28  (m,  9H),  4.20-3.30  (m,  30H),  3.20  (t,  5H),  2.15  (s,  3H),  2.14  (s,  3H),  2.12  (s,  3H),  2.09  (s,  3H),  2.07  (s,  3H),  2.06  (s,  3H),  2.04  (s,  3H),  2.03  (s,  3H),  2.02  (s,  3H),  2.01  (s,  3H),  2.00  (s,  3H),  1.95  (s,  3H),  1.94  (s,  3H),  1.56-1.51  (m,  4H),  1.40-1.34  (m,  2H);ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ９７Ｈ１２２Ｃｌ６Ｎ６Ｏ４３に対するｍ／ｚ計算値；２２７２．７４２０  実測値２２９５．５５２２（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【化１８０】
2019515876.tif 000182
【０５９６】
５−アジドペンチル−Ｏ−｛［２，３，４，６−Ｏ−テトラアセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル］−（１→４）−［３，６−Ｏ−ジアセチル−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル］−（１→２）−［３，４，６−Ｏ−トリアセチル−α−Ｄ−マンノピラノシル］｝−（１→３）−｛２，３，４，６−Ｏ−テトラアセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル］−（１→４）−［２，３，４−Ｏ−トリアセチル−α−Ｌ−フコピラノシル−（１→３）−３，６−Ｏ−ジアセチル−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル］−（１→２）−３，４，６−Ｏ−トリアセチル−α−Ｄ−マンノピラノシル｝−（１→６）−［２−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−Ｏ−（３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−（２，２，２−トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ−β−Ｄ−グルコピラノシド（５３）：銀トリフレート（０．０１１ｇ，４４．１μｍｏｌ）、ビス（シクロペンタジエニル）ハフニウムジクロリド（０．０１２ｇ，３０．８μｍｏｌ）および４Å活性化モレキュラーシーブを含む乾燥トルエン（３ｍＬ）の混合物をＲＴで１時間撹拌した。次いで、その反応混合物を０℃に冷却し、ドナー５０（０．０１５ｇ，１３．２μｍｏｌ）およびアクセプター１５（０．０２０ｇ，８．８０μｍｏｌ）を含む２ｍＬのトルエンの溶液を加えた。その混合物をＲＴで５時間撹拌し、Ｅｔ３Ｎでクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、セライトで濾過した。濾液をＮａＨＣＯ３水溶液（２×１０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０％→１５％のアセトンのＣＨ２Ｃｌ２溶液）によって精製して、５２（０．０１０ｇ，３４％）を無色泡沫状物として得た。ＴＬＣ：（アセトン：ＣＨ２Ｃｌ２＝１．５／８．５，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.41;  1H  NMR  (400  MHz,  CHCl3):  δ  7.48-7.20  (m,  20H),  5.40-4.51  (m,  24H),  4.50-4.00  (m,  10H),  3.98-3.50  (m,  30H),  3.49-3.10  (m,  20H),  2.18  (s,  3H),  2.16  (s,  3H),  2.15  (s,  3H),  2.14  (s,  3H),  2.13  (s,  3H),  2.12  (s,  3H),  2.11  (s,  3H),  2.10  (s,  3H),  2.09  (s,  3H),  2.07  (s,  3H),  2.06  (s,  3H),  2.05  (s,  3H),  2.04  (s,  3H),  2.03  (s,  3H),  2.02  (s,  3H),  2.01  (s,  3H),  2.00  (s,  3H),  1.99  (s,  3H),  1.97  (s,  3H),  1.95  (s,  3H),  1.94  (s,  3H),  1.93  (s,  3H),  1.33-1.23  (m,  4H),  1.20-1.15  (m,  2H);ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ１４５Ｈ１８７Ｃｌ６Ｎ７Ｏ７３に対するｍ／ｚ計算値；３４０８．７６７０  実測値１１７６．３８５５（Ｍ＋Ｋ）３＋。
【化１８１】
2019515876.tif 000183
【０５９７】
５−アミノペンチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−α−Ｄ−マンノピラノシル］−（１→３），−［β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−（α−Ｌ−フコピラノシル−（１→３）−２−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→２）−α−Ｄ−マンノピラノシル］−（１→６）−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（５５）：５４（０．０１０ｇ，２．９μｍｏｌ）および水酸化リチウム（０．００５ｇ，５０重量％）を含む２ｍＬの１，４ジオキサン：Ｈ２Ｏ（４：１）の混合物を９０℃で一晩撹拌した。次いで、揮発性物質を蒸発させ、粗生成物を３ｍＬのＡｃ２Ｏ：ピリジン（１：２）と一晩反応させた。溶媒を、高真空を用いて除去し、生成物をＣ１８ゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤としてＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ）によって精製した。生成物を、ナトリウムメトキシドのＭｅＯＨ溶液（３ｍＬ）を用いて一晩、脱アセチル化した。その反応混合物を、ＩＲ−１２０を使用することによって中和し、濾過し、真空中で濃縮した。残渣をＣ１８ゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤としてＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ）によって精製した。生成物を、３ｍＬのＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ：ＨＣＯＯＨ（６：３：１）に溶解し、Ｐｄ（ＯＨ）２（５０重量％）を加え、その混合物を一晩水素化した。その反応混合物をセライトで濾過し、真空中で濃縮した。残渣を、溶離剤として水を使用するＢｉｏ−Ｇｅｌ  Ｐ−２（ＢＩＯ−ＲＡＤ）カラムクロマトグラフィーによって精製した。生成物を凍結乾燥して、所望のオリゴ糖５５（０．００２ｇ，３６％）を白色粉末として得た。ＴＬＣ：（ｎ−ＢｕＯＨ：ＡｃＯＨ：Ｈ２Ｏ＝１／１／１，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.32;  1H  NMR  (400  MHz,  D2O):  δ  5.15  (d,  J  =  4.2  Hz,  1H),  4.94  (s,  1H),  4.60  (m,  3H),  4.45  (q,  3H),  4.30  (s,  1H),  4.21  (d,  J  =  2.1  Hz,  1H),  4.13  (d,  J  =  2.0  Hz,  1H),  4.05-3.40  (m,  58H),3.01(t,2H,リンカー),2.10(s,3H,-Ac),2.07(s,3H,-Ac),2.06(s,3H,-Ac),2.05(s,3H,-Ac),1.76-1.58(m,4H,リンカー(liner)),1.45-1.36(m,2H，リンカー),1.21(d,J=6.5Hz,3H,Fuc-Me);13C  NMR  (100  MHz,  CHCl3):  δ  174.6,  174.4,  102.9,  101.8,  101.0,  99.4,  99.1,  98.5,  96.8,  80.3,  79.6,  79.3,  78.4,  76.4,  75.3,  75.2,  74.7,  74.6,  74.5,  74.3,  73.5,  72.8,  72.4,  71.9,  71.0,  70.9,  70.0,  69.5,  69.4,  69.1,  68.5,  68.3,  67.7,  67.2,  66.7,  65.8,  61.4,  60.9,  59.6,  59.5,  55.6,  54.9,  54.8,  39.3,  28.0,  26.3,  22.3,  22.2,  22.0,  15.3;ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ７３Ｈ１２５Ｎ５Ｏ５０に対するｍ／ｚ計算値；１８７１．７５４５  実測値１８７２．７４７７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０５９８】
シアリル化されたモジュールの化学誘導体化。シアリル化された分岐の調製は、シアル酸化学に関連する複雑さに起因して、特に重要である。本発明者らは、シアリル化されていないモジュールの合成プロトコル（スキームＳ２８）を確立したので、シアリル化されたモジュール２２に着眼した。カルボン酸官能基を、遊離ヒドロキシル基に影響を与えずにトリメチルシリルジアゾメタンの存在下においてエステル化した。次に、無水酢酸およびピリジンを用いてペルアセチル化を行って、Ｓ３０ａを得た。そのペルアセチル化工程は、アノマー基の除去の前にオリゴ糖材料の精製を可能にする。最後に、還元末端の変換を行って、アノマーフルオリドドナーＳ３０ｂを得た。
【化１８２】
2019515876.tif 000184
【０５９９】
スキームＳ２８：試薬および条件。ｉ，（１）トリメチルシリルジアゾメタン、ＭｅＯＨ；（２）Ａｃ２Ｏ、ピリジン、ＲＴ、一晩；ｉｉ，（１）ＣＡＮ、ＡＣＮ：トルエン：Ｈ２Ｏ，（２）ＤＡＳＴ、ＣＨ２Ｃｌ２、−３０℃、２工程で３４％。
【化１８３】
2019515876.tif 000185
【０６００】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−［３，７，８，９−Ｏ−テトラアセチル−５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノ−シロネート］−（２→６）−Ｏ−［２，３，４，６−Ｏ−テトラアセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル］−（１→４）−［３，６−Ｏ−ジアセチル−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル］−（１→２）−３，４，６−Ｏ−トリアセチル−α−Ｄ−マンノピラノシド（Ｓ２８ａ）：化合物２３（３０ｍｇ，０．０３１ｍｍｏｌ）を含むＭｅＯＨ（３ｍＬ）の溶液に、トリメチルシリルジアゾメタン（１Ｍのヘキサン溶液，０．０４６ｍＬ，０．３１ｍｍｏｌ）を加えた。得られた反応混合物をＲＴで一晩撹拌した。出発物質の完全な消費が、ＮＭＲおよびマスによって確認された。その反応混合物を濃縮乾固し、Ｃ１８（溶離剤ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ）によって精製した。ＴＬＣ：（ｎ−ブタノール：Ｈ２Ｏ：酢酸＝２／１／１，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.45;  1H  NMR  (400  MHz,  MeOD):  δ  7.14  (d,  J  =  9.5  Hz,  2H),  6.97  (d,  J  =  9.8  Hz,  2H),  5.50  (s,  1H),  4.68  (d,  J  =  8.5  Hz),  1H,  4.45  (d,  J  =  8.0  Hz,  1H),  4.36  (s,  1H),  4.20-3.90  (m,  10H),  3.84  (s,  3H),  3.76-3.58  (m,  17H),  3.51  (s,  3H),  2.66  (dd,  J  =  3.8  and  11.5  Hz,  1H),  2.00  (s,  3H),  1.96  (s,  3H),  1.60  (t,  1H);ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ３９Ｈ６０Ｎ２Ｏ２５に対するｍ／ｚ計算値；９４２．３２４５  実測値９８７．３０３３（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０６０１】
メチルエステル（０．０２５ｍｇ，０．０２５ｍｍｏｌ）を含むピリジン（２ｍＬ）および無水酢酸（１．５ｍＬ）の溶液をｒｔで一晩撹拌した。次いで、反応物を濃縮乾固し、ジクロロメタン（ｄｉｃｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ）に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液で抽出し、乾燥させ、濃縮した。生成物をＣ１８カラム（ＭｅＯＨ：水が溶離剤）によって精製して、Ｓ２８ａ（０．０３０ｍｇ，７４％）を白色固体として得た。ＴＬＣ：（アセトン：ＣＨ２Ｃｌ２  ４／６，ｖ／ｖ）：Rf  =  0.42;  1H  NMR  (400  MHz,  MeOD):  δ  7.07  (d,  J  =  8.5  Hz,  2H),  6.88  (d,  J  =  8.9  Hz,  2H),  5.45  (s,  1H),  5.40  (d,  J  =  7.2  Hz,  1H),  5.36  (t,  J  =  10.3  Hz,  1H),  5.30  (d,  J  =  7.5  Hz,  1H),  5.28  (d,  J  =  7.0  Hz,  1H),  5.26  (s,  1H),  5.23  (s,  1H),  5.19  (d,  J  =  8.6  Hz,  1H),  5.17  (t,  J  =  10.3  Hz,  1H),  5.11-5.07  (m,  5H),  5.00-4.95  (m,  3H),  4.70  (dd,  J  =  4.2  &  7.8  Hz,  2H),  4.46-4.35  (m,  4H),  4.30-4.13  (m,  3H),  4.08-3.97  (m,  8H),  3.76  (s,  3H),  3.75  (s,  3H),  3.60-3.56  (m,  3H),  2.58  (dd,  J  =  4.2  &  8.5  Hz,  1H),  2.13  (s,  3H),  2.12  (s,  3H),  2.11  (s,  3H),  2.10  (s,  6H),  2.07  (s,  3H),  2.05  (s,  6H),  2.02  (s,  6H),  1.99  (s,  3H),  1.98  (s,  3H),  1.91  (s,  6H),  1.84  (t,  J  =  10.2  Hz,  1H);ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ６３Ｈ８４Ｎ２Ｏ３７に対するｍ／ｚ計算値；１４６１．３４２０  実測値１４８６．４８６４（Ｍ＋２Ｈ＋Ｎａ）＋。
【化１８４】
2019515876.tif 000186
【０６０２】
ｐ−メトキシフェニル−Ｏ−［３，７，８，９−Ｏ−テトラアセチル−５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノ−シロネート］−（２→６）−Ｏ−［２，３，４，６−Ｏ−テトラアセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル］−（１→４）−［３，６−Ｏ−ジアセチル−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル］−（１→２）−３，４，６−Ｏ−トリアセチル−α−Ｄ−マンノピラノシルフルオリド（Ｓ２８ｂ）：硝酸アンモニウムセリウム（０．０３７ｇ，０．０６５ｍｍｏｌ）を、化合物Ｓ２８ａ（０．０２０ｍｇ，０．０１３ｍｍｏｌ）を含む２ｍＬのアセトニトリル：トルエン：Ｈ２Ｏ（４：２：１）の溶液に加えた。得られた反応混合物をＲＴで３時間撹拌した。その反応物をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（１０×２ｍＬ）およびブライン（１０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。生成物をＣ１８カラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏが溶離剤）によって精製して、１−ＯＨ化合物（１１ｍｇ）を得た。残渣（１０ｍｇ，０．００７ｍｍｏｌ）を−３０℃のＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）に溶解した。次いで、ＤＡＳＴ（３μＬ，０．０２１ｍｍｏｌ）をゆっくり加え、得られた反応混合物を１時間撹拌した。ＴＬＣ（アセトン：ＣＨ２Ｃｌ２、４／６）が、出発物質の消費とともに生成物の形成を示したら、その反応物をＮａＨＣＯ３水溶液でクエンチした。濾液をＮａＨＣＯ３水溶液（２×５ｍＬ）およびブライン（５ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をＣ１８カラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏが溶離剤）によって精製して、Ｓ３０ｂ（２工程で０．００７ｇ，３８％）を得た。ＴＬＣ（アセトン：ＣＨ２Ｃｌ２＝６／６，ｖ／ｖ）、Rf  =  0.24;  1H  NMR  (400  MHz,  CHCl3):  δ  5.99  (d,  J  =  10.2  Hz,  1H),  5.50  (d,  J  =  52.2  Hz,  1H),  5.39  (d,  J  =  10.3  Hz,  1H),  5.33-5.17  (m,  7H),  4.87-4.81  (m,  2H),  4.61  (d,  J  =  10.2  Hz,  1H),  4.52  (d,  J  =  10.3  Hz,  1H),  4.40-4026  (m,  5H),  4.21-3.83  (m,  4H),  3.70  (s,  3H),  3.49-3.47  (m,  2H),  2.54  (dd,  J  =  3.8  &  8.1  Hz,  1H),  2.19  (s,  6H),  2.17  (s,  6H),  2.14  (s,  6H),  2.10  (s,  3H),  2.05  (s,  6H),  2.02  (s,  6H),  1.98  (s,  3H),  1.97  (s,  6H),  1.23  (t,  J  =  10.1Hz,  1H);ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ５６Ｈ７７ＦＮ２Ｏ３５に対するｍ／ｚ計算値；１３５７．２０９４  実測値１３３９．３９７８（Ｍ＋Ｎａ）＋。
グリカンアレイ解析
マイクロアレイ製作
【０６０３】
ａ）Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドでコーティングされたスライドガラスの製作：一価のグリカン（Ｇ１〜３３）をすべて１０ｍＭ濃度で個別に調製し、使用溶液（ｗｏｒｋｉｎｇ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）を調製するためにプリント緩衝液で希釈される母液（ｍｏｔｈｅｒ  ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）とした。３８４ウェルプレートから、ＮＨＳでコーティングされたスライドガラス上への、１００μＭ濃度のアミン含有グリカンを含む約０．６ｎＬのプリント緩衝液のロボットピン（ＳＭＰ３：ＴｅｌｅＣｈｅｍ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）堆積によって、マイクロアレイをプリントした（ＢｉｏＤｏｔ  Ｃａｒｔｅｓｉａｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）。プリントされたスライドを８０％湿度の雰囲気において１時間反応させた後、一晩乾燥させた。これらのスライドは、１枚のスライドにおいて１６グリッドで設計され、使用前はデシケーター内にて室温で保存した。結合アッセイの前に、これらのスライドをブロッキング溶液で３時間ブロッキングした。次いで、それらのスライドを、使用前にＰＢＳＴ−ＢＳＡ緩衝液で洗浄した。別段述べられない限り、試薬は、商業的供給業者から入手し、精製せずに使用した。すべての水溶液を、Ｍｉｌｌｉ−Ｑ精製システムで濾過して０．２μｍフィルターで濾過滅菌した蒸留脱イオン水から調製した。この実験において使用した緩衝液としては、プリント緩衝液（０．０５％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ−２０を含むｐＨ８．５，３００ｍＭリン酸緩衝液）、ブロッキング緩衝液（ＰＢＳ中のｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋブロッキング緩衝液，Ｐｉｅｒｃｅ）、洗浄緩衝液（ＰＢＳＴ緩衝液；ＰＢＳおよび０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０）および結合緩衝液（ＰＢＳＴ−ＢＳＡ緩衝液；ＰＢＳＴ緩衝液および３％ＢＳＡ）が挙げられる。プリント緩衝液、ブロッキング緩衝液および結合緩衝液は、使用前に新たに調製した。
【０６０４】
ｂ）酸化アルミニウムでコーティングされたスライドガラスの製作。酸化アルミニウムガラス基材は、質量分析と蛍光スキャニングの両方によって評価されることができるという利点を提供する。さらに、それらの基材上での糖とタンパク質との結合の蛍光強度は、透明のスライドガラスにおけるものより高感度であると見出された１５。陽極酸化された酸化アルミニウムのミクロンからナノのポア構造の表面を説明している多くの報告がある。しかしながら、表面陽極酸化の処理中の酸化アルミニウムの初期平面層（ｉｎｉｔｉａｌ  ｐｌａｎａｒ  ｌａｙｅｒ）について言及した論文はほんのわずかである１６。ＡＡＯガラス基材の開発では、コンピュータ実験計画プログラム（Ｄｅｓｉｇｎ  Ｅｘｐｅｒｔ  ８．０）を用いることにより、グリカンマイクロアレイにおいて最も適切に使用される、表面が陽極酸化された酸化アルミニウムの平面層が最適化されてきた１７。
【化１８５】
2019515876.tif 000187
図Ｓ４：陽極酸化された酸化アルミニウム（ＡＡＯ）ガラス基材の製作の概略図。
【０６０５】
図Ｓ４に示されているように、およそ３００ｎｍより大きい、アルミニウムでコーティングされたスライドガラス（１×７５．５×２４．５ｍｍ）を、Ｔｈｅ  Ｔｈｉｎ  Ｆｉｌｍ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ，Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｅｎｔｅｒ  ａｔ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｈｓｉｎｃｈｕ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐａｒｋ，Ｈｓｉｎｃｈｕ，Ｔａｉｗａｎ，Ｒ．Ｏ．Ｃ．）がＥ−Ｂｅａｍ  ＶＤＰコーターを用いて製作した。Ａｌコーティング後のスライドを、気密な積層箔袋に直ちに詰め（容器１つあたり１枚のスライド）、表面陽極酸化のときまで真空包装した。アルミニウムでコーティングされたスライドガラスの表面陽極酸化を、４℃チャンバー内で、０．３Ｍシュウ酸水溶液における電気化学反応によって社内で行った。この陽極酸化反応は、電圧および反応時間によって制御された。適切な反応条件下では、滑らかな陽極酸化された酸化アルミニウム（ＡＡＯ）のおよそ５０〜６５ｎｍ（厚さ）の層を、アルミニウムでコーティングされたスライドガラス上にむらなく成長させることができる。図Ｓ５Ａに示されているＡＦＭ写真のような、ポアのある従来の陽極酸化アルミニウム表面とは異なり、本発明者らは、スライドガラスの表面（＜３ｎｍ）と類似のＲｓｍ表面粗さ（２．３ｎｍ）を有する滑らかなＡＡＯガラス基材を開発した。代表的なＡＡＯガラス基材の断面写真を図Ｓ５Ｂに示す。図Ｓ５に示されている物理的特性を有する最適化されたＡＡＯガラス基材を得るために、コンピュータプログラムによって生成された要因計画および応答曲面法を用いる詳細な実験を行い、それらを、別個の項目で報告する。
【化１８６】
2019515876.tif 000188
図Ｓ５：（Ａ）ＡＦＭ写真−表面の粗さの解析。Ｉｍｇ．Ｒｍｓ（Ｒｑ）２．３１９ｎｍおよび（Ｂ）ＡＡＯガラス基材の断面のＳＥＭ写真。
【０６０６】
ＡＡＯガラス基材とＮＨＳ活性化スライドガラスとの表面の比較  Ｓ
【０６０７】
ＮＨＳスライドガラスは、本発明者らのグループおよび他のグループにおけるグリカンマイクロアレイに広く使用されている。糖誘導体のアミンとＮＨＳ官能基とのアミド形成を表面上で起こした。その最初の化学反応は、官能化されたガラス表面のカルボキシル基に共有結合的に結合することであった。ＡＡＯガラス基材は、ホスホネートを形成するためのグリカン誘導体のホスホン酸テイルとの化学反応の準備が整っている表面上に非晶質の酸化アルミニウムの安定なポリマーネットワークの層を含む。金属酸化物（酸化アルミニウムまたは酸化チタンのいずれか）上のホスホン酸の界面反応は、自発的であり、得られるアレイは、より均一であり、密度および分布は、ＮＨＳスライド上の反応よりも容易に制御できる。界面共有結合に利用可能な反応性の部位を特定するために、Ｃｙ５−ホスホン酸およびＣｙ５−アミンが、表面上のマイクロアレイに直接使用されている。これらの色素（図Ｓ６）は、Ｃｙ５−ＮＨＳエステル（Ｌｕｍｉｐｒｏｂｅ  Ｃｏｒｐ．Ｉｔｅｍ  Ｎｏ．６３０２０）から出発して、社内で合成された。
【化１８７】
2019515876.tif 000189
図Ｓ６：Ｃｙ５−ホスホン酸リンカーおよびＣｙ５−アミンリンカーの構造
【０６０８】
色素であるＣｙ５−ホスホン酸およびＣｙ５−アミンを、それぞれ６および８．５にｐＨ調整した、７：３比のエチレングリコール／水混合物（１ｍＭ）に溶解した。アレイスライドを、５％メタノール水溶液の混合物で十分に洗浄し、スピンドライした後、ＧｅｎｅＰｉｘ（４３００Ａ）Ｓｃａｎｎｉｎｇに供した。図Ｓ７は、ＡＡＯガラス基材上のＣｙ５−ホスホン酸（図Ｓ７Ａ）、ＮＨＳ−スライドガラス上のＣｙ５−アミン（図Ｓ７Ｂ）のマイクロアレイの写真およびそれらの２０個のスポットの平均蛍光強度（図Ｓ７Ｃ）を示している。これらのアレイのスポットの代表的な共焦点顕微鏡写真は、図Ｓ８に与えられている。より高い充填能力およびより均一に分布したＣｙ５−分子が、グリカンマイクロアレイおよび糖／タンパク質結合において通常見られるものと同様に観察された。
【化１８８】
2019515876.tif 000190
図Ｓ７：１ｍＭの（Ａ）ＡＡＯガラス基材上のＣｙ５−ホスホン酸、（Ｂ）ＮＨＳスライドガラス上のＣｙ５−アミンのＧｅｎｅＰｉｘ  Ｓｃａｎｎｉｎｇ（ＰＭＴ４５０）および（Ｃ）それらの２０個のスポットの平均蛍光強度。
【化１８９】
2019515876.tif 000191
図Ｓ８：ＡＡＯガラス基材およびＮＨＳスライドガラス上のＣｙ５−ホスホン酸およびＣｙ５−アミンの代表的な共焦点顕微鏡写真。スポット内の選択的な９００μｍ２領域。
【０６０９】
共焦点顕微鏡を用いたＡＣＧおよびＮＨＳスライドの表面均一性の比較
【０６１０】
ＡＣＧおよびＮＨＳ活性化スライドガラス上のグリカンアレイの密度および均一性を評価するために、本発明者らは、マンノース単糖によって形成されたグリカンアレイをモデルとして使用した。１００μＭのマンノース溶液をアレイするのに使用し、５０μｇ／ｍＬのＣｏｎＡ４８８の溶液を糖／タンパク質結合において使用した。共焦点顕微鏡によって観察されたＣｏｎＡ４８８／マンノース結合の画像から、ＡＡＯガラス基材が、より高密度かつより均一に分布した共有結合的に結合した糖を有することがさらに確認された。図Ｓ９は、ＡＡＯガラス基材対ＮＨＳスライドガラス上のＣｏｎＡ４８８／マンノース結合の共焦点顕微鏡（Ｌｅｉｃａ  ＳＰ５）によって観察された画像を示している。
【化１９０】
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図Ｓ９：ＡＡＯガラス基材  対  ＮＨＳスライドガラス上のＣｏｎＡ４８８／マンノース結合の共焦点顕微鏡。
【０６１１】
酸化アルミニウムでコーティングされたスライドガラス上およびＮＨＳでコーティングされたスライドガラス上の糖分布の原子間力顕微鏡画像は、ＡＡＯガラス基材（図Ｓ１０ａ）が、ＮＨＳスライドガラスよりも、共有結合的に結合した糖のより均一な分布を提供することを示唆している（図Ｓ１０ａ）。これらの画像の粒子数は、粒子の最大高さの半分の幅分布の高さにわたって粒子を数えることによって得られた。マンノース誘導体は、活性化された官能基が表面上で利用可能であるスライド上でのみ共有結合的に結合できる。ガラスの原料物質のＲｍｓの差に関係なく、ＡＡＯガラス基材は、ＮＨＳスライドガラスよりも均一な分布を提供する。
【化１９１】
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図Ｓ１０：ａ）酸化アルミニウムでコーティングされたスライドガラス、およびｂ）ＮＨＳでコーティングされたスライドガラス上の糖分布を示している原子間力顕微鏡画像
【０６１２】
抗体結合アッセイ
【０６１３】
抗体ＰＧ９、ＰＧ１６およびＰＧＴ１４１〜１４５を、使用前に結合緩衝液で１００μｇ／ｍＬに希釈した。次いで、ＤｙＬｉｇｈｔ６４９結合体化ロバ抗ヒトＩｇＧ抗体を１次抗体と予め複合体化した。予め複合体化した溶液の最終濃度を結合緩衝液で５０μｇ／ｍＬに調整した。プリントしたスライドガラスを、ＦＡＳＴ（登録商標）フレームスライドホルダー（Ｗｈａｔｍａｎ（登録商標））にアセンブルし、次いで、８０μＬの予め複合体化した抗体溶液を各ウェルにしかるべく適用した。抗体の結合プロセスを、静かに振盪しつつ、４℃で維持し、次いで、６時間のインキュベーションの後、抗体溶液を慎重にピペットで取り出した。スライドガラスを１００μＬのＰＢＳＴ洗浄緩衝液で静かに洗浄し、次いで、３分間スピンドライした。
【０６１４】
画像処理およびデータ解析
【０６１５】
スライドを、マイクロアレイ蛍光チップリーダー（ＧｅｎｅＰｉｘ（登録商標）４３００Ａ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を用いて６３５ｎｍでスキャンした。スキャンした画像を、ＧｅｎｅＰｉｘ  Ｐｒｏ  ６．０解析ソフトウェア（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）で解析した。画像解像度を、１ピクセルあたり５μｍに設定した。スポットを、直径が１００μｍと定義された円形の特徴と定義した。全強度の値を、Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ（登録商標）６．０を用いて行ったデータ処理のために選択した。それらの強度を計算し、平均した。エラーバーは、報告されたすべてのデータポイントに対する標準偏差を表す。
【０６１６】
ＮＨＳでコーティングされたスライドガラス上でのＨＩＶ−１  ｂＮＡｂのグリカン結合特異性の解析
【０６１７】
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドでコーティングされた表面上に共有結合形成を介してグリカンＧ１〜３３（図Ｓ１１）をプリントすることによって、ＰＧ９、ＰＧ１６およびＰＧＴ１４１〜１４５を研究するためのスライドを調製した。二次抗体とのインキュベーションの後に蛍光スキャンによってスライドの画像を得た。
【化１９２】
2019515876.tif 000194
図Ｓ１１：ＮＨＳでコーティングされたスライドガラス上にプリントされたＮ−グリカンの模式図。
【０６１８】
多様なＨＩＶ−１  ｇｐ１２０に関連するＮ−グリカンを本発明者らのアレイに組み込んだ後、本発明者らは、次に、それらのグリカンに対するＰＧ１６の結合挙動を特徴づけることに進む。本発明者らの結果は、本発明者らが以前に報告したデータと一致し、そのデータでは、ＰＧ１６の結合が、末端におけるα２，６−Ｎｅｕ５Ａｃ数に比例する（図Ｓ１２）。本発明者らの研究の簡潔な結論は、ジ−シアリル化された分岐が、規定された配向で存在することが、ＰＧ１６結合ポケットにおける結合を決定するということである。
【化１９３】
2019515876.tif 000195
図Ｓ１２．ＮＨＳでコーティングされたスライドガラスを用いたＰＧ１６の結合挙動。Ｎ−グリカンのパネルへのＰＧ１６の結合が棒グラフに表されている。
【０６１９】
抗体ＰＧ９およびＰＧＴ１４１〜４５に結合する規定のセットのグリカンの結合。本発明者らは、本発明者らのＮＨＳでコーティングされたスライドガラスアレイ上でＰＧ９およびＰＧＴ１４１〜１４５をスクリーニングした。
【０６２０】
図Ｓ１３．ＮＨＳでコーティングされたスライドガラスを用いたＰＧ９の結合挙動。
【０６２１】
図Ｓ１４．ＮＨＳでコーティングされたスライドガラスを用いたＰＧＴ１４１〜１４３の結合挙動。ここで使用した抗体濃度は、２５μｇ／ｍＬである。
【０６２２】
図Ｓ１５．ＮＨＳでコーティングされたスライドガラスを用いたＰＧＴ１４〜１４５の結合挙動。ここで使用した抗体濃度は、２５μｇ／ｍＬである。
【０６２３】
本発明者らは、アレイ上にプリントされたいずれかのグリカンに対する抗体ＰＧ９（図Ｓ１３）およびＰＧＴ１４１〜１４５（図Ｓ１４〜１５）の低レベルの結合を観察した。
【０６２４】
ＡＣＧスライド上でのＨＩＶ−１  ｂＮＡｂのグリカン結合特異性の解析。
【０６２５】
本発明者らは、グリカン密度およびシグナル強度の増強に関して、ＮＨＳでコーティングされたスライドにまさるＡＣＧスライドの適用可能性を実証したので、ホスホネート化学を用いてグリカンＩ〜ＸＩをＡＣＧアレイ上にプリントした（図Ｓ１７）。ＰＧＴ１４１〜１４４の結合特異性を下記に示す。
【化１９４】
2019515876.tif 000196
図Ｓ１７．シンボル表記は、ＡＣＧアレイ上にプリントされたグリカンを表している。リンカーの構造が左上角に示されている。
【０６２６】
ＰＧＴ１４１〜１４４の結合特異性を図Ｓ１８に示す。しかしながら、本発明者らは、おそらくその弱いグリカン結合親和性が原因で、ＡＣＧアレイ上でＰＧＴ１４５の結合を見出すことができなかった。
【化１９５】
2019515876.tif 000197
図Ｓ１８．ＡＣＧアレイ上のＮ−グリカンのパネルに対するＰＧＴ１４１〜１４４の結合を棒グラフで示している。
【０６２７】
ＡＣＧスライド上の表面解離定数（ＫＤ．ｓｕｒｆ）の測定
【０６２８】
解離定数を測定するための、酸化アルミニウムでコーティングされたスライドガラスに、１００および５０μＭ濃度のグリカンＭａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２（Ｖ）、ハイブリッド型（ＸＩ）、二分岐複合型（ＸＩＩ）、Ｖ＋ＸＩ（１：１モル比）、Ｖ＋ＸＩＩおよびＸＩ＋ＸＩＩをスポットした。抗体ＰＧ１６を、３％ＢＳＡ−ＰＢＳＴ緩衝液で３．３２、１．６６、０．８３３、０．４１５、０．２０７、０．１０３、０．０５１および０．０２５μＭに段階希釈した。ＤｙＬｉｇｈｔ６４９結合体化ロバ抗ヒトＩｇＧ抗体を、１次抗体ＰＧ１６と予め複合体化した（重量基準で１：１）。その予め複合体化した溶液（１００μＬ）を各ウェルに適用し、４℃で６時間、暗所にてインキュベートした。最後に、スライドをＰＢＳＴで洗浄し、スピンドライし、マイクロアレイ蛍光チップリーダーを用いて４５０ｎｍでスキャンした。スキャンした画像を、ＧｅｎｅＰｉｘ  Ｐｒｏ  ６．０解析ソフトウェアで解析した。Ｍａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２（Ｖ）およびＶ＋ＸＩの混合物（１：１モル比）に対するＰＧ１６の結合のシグナル強度は、弱すぎてＫＤを測定できなかった。アレイ上にプリントされた残りのサンプルに対する結合曲線を図Ｓ１９に示し、ＫＤ値を表Ｓ２にまとめる。
【０６２９】
ＰＧ９の場合、その非常に弱いグリカン結合親和性のせいで、本発明者らは、結合定数を計測するためのシグナルの飽和を達成することができなかったが、しかしながら、ＰＧ９の濃度を７００μｇ／ｍＬに高めると、アレイ表面上に沈殿が生じた。
【化１９６】
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【化１９７】
2019515876.tif 000199
図Ｓ１９．グリカンＸ、ＸＩ、ならびに１００μＭ濃度の混合物Ｖ＋ＸＩおよびＸ＋ＸＩＩに対して観察された抗体ＰＧ１６結合曲線。これらの曲線は、ＤｙＬｉｇｈｔ６４９結合体化ロバ抗ヒトＩｇＧ二次抗体を使用することによって得られた。
【０６３０】
表Ｓ２．抗体ＰＧ１６およびグリカンＸ、ＸＩならびに混合物Ｖ＋ＸＩおよびＸ＋ＸＩのＫＤ，ｓｕｒｆ（μＭ）値。
【表２】
2019515876.tif 000200
追加実施例
【０６３１】
Ｐ３−１からＰ３−７という名称をつけた追加実施例を別個の書類として添付する。
【０６３２】
追加実施例：（Ｐ３−１）
化合物４２は、混合された化合物４および化合物２０の変換物であり、ここで、これも、化合物４と化合物２０との混合物を認識し結合する抗ＨＩＶ−１広域中和モノクローナル抗体（ｂｎＭＡｂ）、例えば、ＰＧ９およびＰＧ１６によって認識され、結合される。
【０６３３】
追加実施例：（Ｐ３−２）
ＮＨＳでコーティングされたスライドガラス上にプリントされたＮ−グリカンの模式図
【０６３４】
追加実施例：（Ｐ３−３）
化合物４２の合成
【０６３５】
追加実施例：（Ｐ３−４）
【０６３６】
３アームのＭａｎ３／Ｍａｎ５グリカンおよび６アームの複合グリカンを用いてハイブリッドグリカンを合成するための一般的な例示的手順
【０６３７】
追加実施例：（Ｐ３−５）
【０６３８】
６アームのＭａｎ３／Ｍａｎ５グリカンおよび３アームの複合グリカンを用いてハイブリッドグリカンを合成するための一般的な例示的手順
【０６３９】
追加実施例：（Ｐ３−６）
【０６４０】
合成による例示的なハイブリッドグリカン
【０６４１】
追加実施例：（Ｐ３−７）
【０６４２】
合成による例示的なハイブリッドグリカン
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１５Ｃ】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２Ａ】
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【図３２Ｂ】
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【図３２Ｃ】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７Ａ】
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【図３７Ｂ】
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【図３７Ｃ】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２Ａ】
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【図４２Ｂ】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６】
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【図４７Ａ】
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【図４７Ｂ】
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【図４７Ｃ】
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【図４８】
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【図４９】
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【図５０】
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【図５１】
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【図５２】
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【図５３】
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【図５４】
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【図５５】
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【図５６】
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【図５７】
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【図５８】
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【図５９Ａ】
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【図５９Ｂ】
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【図６０Ａ】
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【図６０Ｂ】
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【図６１】
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【図６２】
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【図６３】
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【図６４】
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【図６５】
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【図６６】
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【図６７】
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【図６８】
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【図６９】
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【図７０】
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【図７１】
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【図７２】
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【図７３】
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【図７４】
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【図７５Ａ】
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【図７５Ｂ】
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【図７６】
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【図７７】
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【図７８】
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【図７９】
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【図８０】
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【図８１】
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【図８２Ａ】
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【図８２Ｂ】
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【図８２Ｃ】
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【図８２Ｄ】
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【図８３】
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【図８４】
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【図８５】
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【図８６】
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【図８７】
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【図８８】
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【図８９Ａ】
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【図８９Ｂ】
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【図９０】
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【図９１】
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【図９２】
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【図９３Ａ】
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【図９３Ｂ】
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【図９３Ｃ】
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【図９４】
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【図９５】
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【図９６】
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【図９７】
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【図９８】
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【図９９】
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【図１００】
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【図１０１】
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【図１０２Ａ】
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【図１０２Ｂ】
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【図１０３】
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【図１０４】
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【図１０５】
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【図１０６】
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【図１０７】
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【図１０８】
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【図１０９】
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【図１１０】
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【図１１１】
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【図１１２】
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【図１１３】
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【図１１４】
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【図１１５】
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【図１１６】
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【図１１７】
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【図１１８Ａ】
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【図１１８Ｂ】
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【図１１８Ｃ】
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【図１１９】
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【図１２０】
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【図１２１】
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【図１２２】
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【図１２３】
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【図１２４】
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【図１２５】
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【図１２６】
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【図１２７】
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【図１２８】
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【図１２９】
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【図１３０】
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【図１３１】
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【図１３２】
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【図１３３】
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【図１３４】
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【図１３５】
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【図１３６】
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【図１３７】
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【図１３８】
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【図１３９】
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【図１４０】
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【図１４１】
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【図１４２】
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【図１４３】
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【図１４４】
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【図１４５】
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【図１４６】
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【図１４７】
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【図１４８】
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【図１４９】
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【図１５０】
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【図１５１】
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【図１５２】
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【図１５３】
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【図１５４】
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【図１５５】
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【図１５６】
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【図１５７】
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【図１５８】
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【図１５９】
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【図１６０】
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【図１６１】
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【図１６２】
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【図１６３】
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【図１６４】
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【図１６５】
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【図１６６】
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【図１６７】
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【図１６８】
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【図１６９】
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【図１７０】
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【図１７１】
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【図１７２】
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【図１７３】
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【図１７４】
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【図１７５】
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【図１７６】
2019515876.tif 000405
【図１７７】
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【図１７８】
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【図１７９】
2019515876.tif 000408
【図１８０】
2019515876.tif 000409
【図１８１】
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【図１８２】
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【図１８３Ａ】
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【図１８３Ｂ】
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【図１８４】
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【図１８５】
2019515876.tif 000415
【図１８６】
2019515876.tif 000416
【図１８７】
2019515876.tif 000417
【図１８８】
2019515876.tif 000418
【図１８９】
2019515876.tif 000419
【図１９０】
2019515876.tif 000420
【図１９１】
2019515876.tif 000421
【図１９２】
2019515876.tif 000422
【図１９３】
2019515876.tif 000423
【図１９４】
2019515876.tif 000424
【図１９５】
2019515876.tif 000425
【図１９６】
2019515876.tif 000426
【図１９７Ａ】
2019515876.tif 000427
【図１９７Ｂ】
2019515876.tif 000428
【図１９８】
2019515876.tif 000429
【図１９９】
2019515876.tif 000430
【図２００】
2019515876.tif 000431
【図２０１Ａ】
2019515876.tif 000432
【図２０１Ｂ】
2019515876.tif 000433
【図２０２Ａ】
2019515876.tif 000434
【図２０２Ｂ】
2019515876.tif 000435
【国際調査報告】
2019515876.tif 000436
2019515876.tif 000437
2019515876.tif 000438
2019515876.tif 000439