(57)【要約】  本発明は、光安定性ホップ抽出物を調製する方法に関し、前記方法は、乾燥物の重量で少なくとも１０％のイソ−アルファ酸を含むプレ異性化ホップ抽出物を用意すること、および任意にプレ異性化ホップ抽出物の希釈の後に、プレ異性化ホップ抽出物に照光することを含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
光安定性ホップ抽出物を調製する方法であって、前記方法が：
・乾燥物の重量で少なくとも１０％のイソ−アルファ酸を含むプレ異性化ホップ抽出物を用意すること、
・任意にプレ異性化ホップ抽出物の希釈の後に、少なくとも５０Ｗ／ｍ2の照光強度で少なくとも３０分、プレ異性化ホップ抽出物に照光すること、
を含む方法。
【請求項２】
前記プレ異性化ホップ抽出物に、２００〜８００ｎｍの範囲、好ましくは２５０〜６００ｎｍの範囲、最も好ましくは３００〜５００ｎｍの範囲の波長に最大強度を有する光を照光する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記プレ異性化ホップ抽出物に、１００Ｗ／ｍ2を越える照光強度、好ましくは２００Ｗ／ｍ2を越える照光強度で照光する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記プレ異性化ホップ抽出物に、指定の照光強度で少なくとも１時間、好ましくは２〜４８時間照光する、先行する請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
照光中にホップ抽出物の温度が、０〜１００℃の範囲内、好ましくは１５〜８０℃の範囲内にとどまる、先行する請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記方法が：
・プレ異性化抽出物を水で希釈して水溶液を生成すること；および
・プレ異性化ホップ抽出物の水溶液に照光すること、
を含む、先行する請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記プレ異性化ホップ抽出物の水性希釈溶液が、照光開始時に０．２〜２００ｇ／ｌ、好ましくは０．５〜７０ｇ／ｌ、より好ましくは１〜２５ｇ／ｌの範囲で、イソ−アルファ酸含量を有する、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記プレ異性化ホップ抽出物の水性希釈溶液が、少なくとも８０重量％の水、好ましくは少なくとも９０重量％の水、より好ましくは少なくとも９５重量％の水を含有する、請求項６または７に記載の方法。
【請求項９】
先行する請求項のいずれか一項に記載の方法によって得られ得る、好ましくは得られる、光安定性プレ異性化ホップ抽出物。
【請求項１０】
前記ホップ抽出物が、乾燥物の重量で少なくとも１％のイソ−アルファ酸を含有する、請求項９に記載のホップ抽出物。
【請求項１１】
前記ホップ抽出物が、乾燥物の重量で０〜１０％、好ましくは乾燥物の重量で０〜３％、より好ましくは乾燥物の重量で０．０１〜２％の濃度でアルファ酸を含有する、請求項９または１０に記載のホップ抽出物。
【請求項１２】
前記ホップ抽出物が、乾燥物の重量で０〜１０％、好ましくは乾燥物の重量で０〜５％の濃度でベータ酸を含有する、請求項９から１１のいずれか一項に記載のホップ抽出物。
【請求項１３】
前記ホップ抽出物は、イソ−アルファ酸の１０重量％を越えない、好ましくはイソ−アルファ酸の３重量％を越えない濃度で、還元イソ−アルファ酸を含有し；前記還元イソ−アルファ酸が、ジヒドロ−イソ−アルファ酸、テトラヒドロ−イソ−アルファ酸、ヘキサヒドロ−イソ−アルファ酸およびこれらの組み合わせから選択される、請求項９から１２のいずれか一項に記載のホップ抽出物。
【請求項１４】
ビールを調製する方法であって、請求項９から１３のいずれか一項に記載の光安定性プレ異性化ホップ抽出物を導入することを含む、方法。
【請求項１５】
前記ホップ抽出物が、少なくとも２ｍｇ／ｌの濃度で、好ましくは５〜２００ｍｇ／ｌの濃度で、より好ましくは１０〜１５０ｍｇ／ｌの濃度で麦汁またはビールへ導入される、請求項１４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の分野】
【０００１】
本発明は、光安定性ホップ抽出物、およびこうしたホップ抽出物のビールでの利用に関する。本発明は、こうした光安定性ホップ抽出物を調製する方法をさらに提供し、前記方法は、プレ異性化ホップ抽出物に照光することを含む。
【発明の背景】
【０００２】
ホップは、ホップ植物フムルスルプルス（Humulus lupulus）の雌花である。ホップはビール中での成分として使用され、ホップによってビールに苦くピリッとする風味が付与される。ホップは、醸造プロセスで使用する前に乾燥窯で通常乾燥される。醸造プロセスでは、麦汁（麦芽から生成された糖質に富む液体）をホップとともに煮沸し、次に冷却し、酵母を添加して、発酵を開始する。
【０００３】
ホップとともに麦汁を煮沸すると、甘い麦汁へ、アルファ酸（フムロン類、例えば、フムロン、アドフムロン、コフムロン、ポストフムロンおよびプレフムロン）が抽出され、アルファ酸は、温度の影響下（熱的な異性化）で、対応するイソ−アルファ酸（イソフムロン）に部分的に異性化される。これらのイソ−アルファ酸は、ホップを加えたビールの特徴的な苦味の原因である。麦汁煮沸開始時の麦汁中の典型的なアルファ酸レベルは、０．０１重量％未満（１００ｐｐｍ未満）である。苦味を付与するこの従来のホップを加えるアプローチの欠点は、典型的には４０％未満のイソ−アルファ酸収率という結果になる、非効率的なアルファ酸抽出および異性化である。
【０００４】
醸造プロセスの外でアルファ酸の異性化を実施することによって、ホップの利用を著しく改善することができる。この目的のために、プレ異性化ホップ生成物が開発されてきた。これらのプレ異性化ホップ生成物は、ホップ抽出物から開始して生成される。
【０００５】
ホップ抽出物は、通常は液体または超臨界的な二酸化炭素抽出を介して得られる。二酸化炭素ホップ抽出物は、主にアルファ酸（フムロン）、その次にベータ酸（ルプロン）を提供し、アルファ酸に富むホップ抽出物を得るためにさらに分別することができる。これらのアルファ酸含有抽出物から開始し、アルカリ金属および／またはアルカリ土類金属系化合物を使用し、２つのアプローチを介して、醸造（麦汁煮沸）プロセスの外でのアルファ酸の「オフライン」プレ異性化を達成することができる。第１のアプローチは溶媒不含の反応媒体を適用し、一方、他のアプローチでは、純水あるいは有機溶媒と混合した水のいずれかの溶媒を添加後に変換を実施する。
【０００６】
光分解によって、アルファ酸をイソ−アルファ酸に異性化することは公知である。例えば、オーストラリア公開特許７５４０２８１号は、ホップからの苦味物質、より具体的には、特に液体二酸化炭素での処理によって高度に精製されたホップ抽出物から得た、事実上純粋なアルファおよびベータ酸の品質改良方法について記載しており、該方法は、最適な収率（quantic yield）を生成するのに適応させた条件下、好ましくは６０℃に近い適切な温度条件下で、所定の時間、アルファおよび／またはベータ酸を日光による光分解に供し、各々イソ−アルファ酸およびデオキシ−アルファ酸を得る点を特徴とする。
【０００７】
米国特許第４，７６７，６４０号は、還元イソフムロンならびに０．５％未満の未還元イソフムロンおよび非イソフムロン不安定生成物から本質的になる光安定性ホップ生成物を調製する方法について記載している。例１は、異性化したホップ抽出物を還元し、続いて酸性化し、水性層および油性層を分離するプロセスについて記載している。そのように得た油性抽出物は、７０％の還元イソフムロン、６．５％のバックグラウンド材料および０．５％未満の未還元イソフムロンを含有する。例３は、油性抽出物をどのようにさらに精製して、「精製後水性相」および「精製後油性相」をもたらしたかについて記載している。例４は、例１の油性抽出物の、３つの留分へのクロマトグラフ分離について記載している。例５は、前述の精製抽出物（「精製後水性相」および「精製後油性相」）ならびに３つのクロマトグラフ留分の光安定性を評価した実験について記載している。これは、ビールにこれらの材料を添加し、６００フートキャンドルの蛍光灯で２時間照光して行った。
【０００８】
国際公開第９３／０２１７７号は、麦芽飲料用の気泡安定剤および苦味剤を生成する方法について記載しており、該方法は、アドプレフムロン（adprehumulone）に富む留分の分離および回収を促進する条件下でホップを抽出すること、ならびにアドプレフムロン留分を光異性化に供してイソ−アドプレフムロンを生成することを特徴とする。
【０００９】
ビールの風味品質が光への曝露によって損なわれることは周知であり、一般に「感光された（lightstruck）」または「日射された（sunstruck）」風味と呼ばれ、イソ−アルファ酸の光誘発分解が引き起こす現象である。
【００１０】
可視光線へ曝露の際の、イソフムロン、リボフラビンおよびシステインから構成されるモデル系でのビールの感光された風味形成の正式な仕組みは、すでに１９６３年にＫｕｒｏｉｗａ他によって示唆されている。光励起リボフラビンは、イソフムロンの４−メチルペント−３−エノイルラジカルへの開裂を誘発し、これは３−メチルブト−２−エニルラジカルへの脱カルボニルを起こす。システインから誘導されたチオールラジカルによるこの安定化アリルラジカルの捕捉は、感光された風味の原因物質である３−メチルブト−２−エン−１−チオール（３−ＭＢＴ）の形成につながる。３−ＭＢＴは、およそ１ｐｐｔまたはそれ未満の非常に低い風味しきい値を有する。
【００１１】
イソ−アルファ酸のほかに３−ＭＢＴ形成がビールで生じるためには、反応は、３００〜５５０ｎｍ範囲のスペクトルの光エネルギー、光増感剤（例えば、リボフラビン、すなわちビタミンＢ２）、および硫黄供給源（例えば、硫黄含有アミノ酸）を必要とする。
【００１２】
イソ−アルファ酸分子でのイソ−３−ヘキセノイル側鎖の存在の結果として、イソ−アルファ酸の光分解が生じる。イソ−アルファ酸の分子構造を修飾することによって、とりわけイソ−３−ヘキセノイル側鎖でのＣ＝Ｃおよび／またはＣ＝Ｏ結合を還元することによって、ビール中の実質的な３−ＭＢＴの形成を防ぐことができる。
【００１３】
市販されている還元イソ−アルファ酸誘導体は、ジヒドロ−、テトラヒドロ−および／またはヘキサヒドロ−イソ−アルファ酸を含有し、醸造プロセスの第１発酵段階の後に通常添加される。ジヒドロ−イソ−アルファ酸（ロー−イソ−アルファ酸とも呼ばれる）は、一般に還元剤としてアルカリ金属ボロヒドリドを使用して、前述のイソ−３−ヘキセノイル鎖でのカルボニル基の水酸基への還元によって得られる。前述のイソ−３−ヘキセノイル側鎖およびイソペンテニル側鎖でのＣ＝Ｃ結合の水素化を介して、テトラヒドロ−イソ−アルファ酸は得られる。前述の還元および水素化プロセスを組み合わせることによって、ヘキサヒドロ−イソ−アルファ酸が生成される。
【００１４】
光安定性である、すなわち、光に曝露されたビールで実質的に３−ＭＢＴ形成に寄与しないが、化学的に還元／水素化されていない、プレ異性化ホップ抽出物への要求がある。
【発明の概要】
【００１５】
本発明者らは、プレ異性化ホップ抽出物に日光を照光することによって、こうしたホップ抽出物の光安定性を実質的に改善しうることを、予想外にも発見した。本発明者らは理論によって拘束されることを望まないが、この照光の結果、イソ−アルファ酸はビール中での３−ＭＢＴ形成の原因と同じタイプの光分解を起こすと考えられる。しかしながら、重要な反応物（チオール含有物質など）の非存在下で、さもなければ３−ＭＢＴ形成に関与するであろう照光中に形成される反応中間体分解生成物が、ビールの風味または風味安定性に悪影響を及ぼさない他の反応生成物に転化される。
【００１６】
本発明によるプレ異性化ホップ抽出物への照光は、ホップ抽出物の光安定性を非常に改善するが、驚くべきことに、ホップ抽出物の苦みおよび望ましい風味の特性上に、限定された以上の影響を有さない。
【００１７】
したがって、本発明の１つの側面は、光安定性ホップ抽出物を調製する方法に関し、前記方法は：
・乾燥物の重量で少なくとも１０％のイソ−アルファ酸を含むプレ異性化ホップ抽出物を用意すること、および
・任意にプレ異性化ホップ抽出物の希釈の後に、プレ異性化ホップ抽出物に照光すること、を含む。
【００１８】
本発明は、前述の方法によって得ることができる光安定性ホップ抽出物、およびこの光安定性ホップ抽出物のビール生成での使用にも関する。
【発明の詳細な説明】
【００１９】
したがって、本発明の第１の側面は、光安定性ホップ抽出物を調製する方法に関し、前記方法は：
・乾燥物の重量で少なくとも１０％のイソ−アルファ酸を含むプレ異性化ホップ抽出物を用意すること、
・任意にプレ異性化ホップ抽出物の希釈の後に、少なくとも５０Ｗ／ｍ2の照光強度で少なくとも３０分、プレ異性化ホップ抽出物に照光すること
を含む。
【００２０】
本明細書で使用する「イソ−アルファ酸」という用語は、イソフムロン、イソアドフムロン（isoadhumulone）、イソコフムロン（isocohumulone）、プレイソフムロン、ポストイソフムロンおよびこれらの組み合わせの群から選択される物質を意味する。「イソ−アルファ酸」という用語は、異なる立体異性体（シス−イソ−アルファ酸およびトランス−イソ−アルファ酸）を包含する。
【００２１】
本明細書で使用する「アルファ酸」という用語は、フムロン、アドフムロン、コフムロン、プレフムロン、ポストフムロンおよびこれらの組み合わせの群から選択される物質を意味する。
【００２２】
本明細書で使用する「ベータ酸」という用語は、ルプロン、アドルプロン、コルプロン、プレルプロン、およびポストルプロンならびにこれらの組み合わせの群から選択される物質を意味する。
【００２３】
本明細書で使用する「ビール」という用語は、アルコール含有およびノンアルコールビールの両方を包含する。
【００２４】
本方法の特に好ましい態様によれば、２００〜８００ｎｍの範囲、より好ましくは２５０〜６００ｎｍ、最も好ましくは３００〜５００ｎｍの範囲の波長に最大強度を有する光を、プレ異性化ホップ抽出物に照光する。
【００２５】
本方法で用いる照光強度は、好ましくは５０Ｗ／ｍ2を越える。より好ましくは、前記照光強度は１００Ｗ／ｍ2を越え、最も好ましくは２００Ｗ／ｍ2を越える。
【００２６】
プレ異性化ホップ抽出物に、典型的には少なくとも３０分、より好ましくは少なくとも１時間、最も好ましくは２〜４８時間、前述の照光強度で照光する。
【００２７】
照光中に、ホップ抽出物の温度は典型的には０〜１００℃、より好ましくは１５〜８０℃の範囲内にとどまる。
【００２８】
水で希釈した後にプレ異性化ホップ抽出物を照光に曝露すると、特に良好な結果を得ることができることを、本発明者らは見出した。したがって特に好ましい態様によれば、本方法は、次の工程を含む：
・水でプレ異性化抽出物を希釈して水溶液を生成すること；および
・プレ異性化ホップ抽出物の水溶液に照光すること。
【００２９】
プレ異性化ホップ抽出物の水性希釈溶液は、典型的には照光開始時に０．２〜２００ｇ／ｌ、より好ましくは０．５〜７０ｇ／ｌ、最も好ましくは１〜２５ｇ／ｌの範囲で、イソ−アルファ酸含量を有する。
【００３０】
プレ異性化ホップ抽出物の水性希釈溶液は、典型的には少なくとも８０重量％の水を含有する。より一層好ましくは、前記希釈液は少なくとも９０重量％の水を含有する。最も好ましくは、少なくとも９５重量％の水を含有する。
【００３１】
本発明の別の側面は、本明細書に記載する方法によって得ることができる光安定性プレ異性化ホップ抽出物に関する。好ましくは、光安定性プレ異性化ホップ抽出物は、前記方法によって実際に得られる。
【００３２】
本発明の光安定性ホップ抽出物は、典型的には乾燥物の重量で少なくとも１％、より好ましくは少なくとも２％、最も好ましくは少なくとも３％のイソ−アルファ酸を含有する。
【００３３】
アルファ酸は、典型的には乾燥物の重量で０〜１０％、より好ましくは０〜３％、最も好ましくは０．０１〜２％の濃度で、光安定性ホップ抽出物に含有される。
【００３４】
本発明の光安定性ホップ抽出物は、典型的には乾燥物の重量で０〜１０％のベータ酸、より好ましくは乾燥物の重量で０〜５％のベータ酸を含有する。
【００３５】
光安定性ホップ抽出物中の還元イソ−アルファ酸（ジヒドロ−イソ−アルファ酸、テトラヒドロ−イソ−アルファ酸およびヘキサヒドロ−イソ−アルファ酸）の量は、好ましくはイソ−アルファ酸の１０重量％を越えない。より一層好ましくは、還元イソ−アルファ酸の量は、イソ−アルファ酸の３重量％を越えない。
【００３６】
光安定性ホップ抽出物は、好ましくは、液体または超臨界的二酸化炭素による抽出によってホップから単離されたホップ抽出物である。
【００３７】
本発明の光安定性ホップ抽出物は、好ましくはプレ異性化ホップ抽出物、より好ましくはイソ−アルファ酸およびアルファ酸を１０：１を越える重量比で、最も好ましくは２０：１を越える重量比で含有するプレ異性化ホップ抽出物である。
【００３８】
光安定性ホップ抽出物は、好ましくは少なくとも３０重量％の水分含量、より好ましくは少なくとも５０重量％、最も好ましくは少なくとも７０重量％の水分含量を有する。
【００３９】
本発明のさらに別の側面は、光安定性ビールを調製する方法に関し、前記方法は、本発明のホップ抽出物を導入することを含む。
【００４０】
本明細書において先に説明したように、ビール中の３−ＭＢＴの光誘発形成に、リボフラビンは重要な役割を果たす。リボフラビンはビール中に生来存在し、非常に急速な光分解を起こす。実際のところ、通常のビールではリボフラビンはイソ−アルファ酸よりはるかに早く光分解する。したがって、感光されたビールでは、イソ−アルファ酸の著しい割合が光分解する前でさえ、リボフラビン含量は、通常せいぜい元来の含量の割合まで低減される。
【００４１】
本方法で生成する光安定性ビールのリボフラビン含量は、好ましくは少なくとも６０μｇ／ｌである。最も好ましくは、リボフラビン含量は８０〜２，０００μｇ／ｌの範囲にある。
【００４２】
本方法は好ましくは、少なくとも０．１ｍｇ／ｌ、より好ましくは少なくとも０．３ｍｇ／ｌ、より一層好ましくは少なくとも０．６ｍｇ／ｌ、最も好ましくは少なくとも１ｍｇ／ｌのイソ−アルファ酸を含有する光安定性ビールをもたらす。典型的には、ビール中のイソ−アルファ酸のレベルは３０ｍｇ／ｌを越えない。
【００４３】
本方法は、典型的には、１００ｎｇ／ｌ未満の３−メチル−２−ブテン−１−チオール（３−ＭＢＴ）を含有する光安定性ビールを生成する。より一層好ましくは、３−ＭＢＴ含量は５０ｎｇ／ｌ未満、最も好ましくは３０ｎｇ／ｌ未満である。３−ＭＢＴの濃度は、Ｈｕｇｈｅｓ他が記載した方法によって適切に決定することができる（Ｈｕｇｈｅｓ  Ｐ．Ｓ．，Ｂｕｒｋｅ  Ｓ．ａｎｄ  Ｍｅａｃｈａｍ  Ａ．Ｅ．（１９９７）「Ａｓｐｅｃｔｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｌｉｇｈｔｓｔｒｕｃｋ  ｃｈａｒａｃｔｅｒ  ｏｆ  ｂｅｅｒ」．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｂｒｅｗｉｎｇ，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ６ｔｈ  Ｃｅｎｔｒａｌ  ａｎｄ  Ｓｏｕｔｈ  Ａｆｒｉｃａ  Ｓｅｃｔｉｏｎ，ｐｐ．１２３〜１２８）。
【００４４】
本方法では、光安定性ホップ抽出物は、好ましくは清澄の前、すなわち同伴固形物および酵母を発酵ビールから除去する前に、麦汁またはビールに添加される。典型的には、発酵したビールの清澄はろ過によって達成される。
【００４５】
前述の方法で光安定性ホップ抽出物は、好ましくは少なくとも２ｍｇ／ｌの濃度で、より好ましくは５〜２００ｍｇ／ｌの濃度で、最も好ましくは１０〜１５０ｍｇ／ｌの濃度で、麦汁またはビールへ導入される。
【００４６】
光安定性ホップ抽出物の麦汁への添加に続いて、麦汁は：
・ビール酵母の助けを借りて麦汁を発酵させること；
・発酵したビールを清澄すること；および
・パッケージすること
を含むさらなる処理工程に供される。
【００４７】
以下の非限定的実施例によって本発明をさらに説明する。
【００４８】
［実施例］
リボフラビンの濃度を決定する方法
ビール中のリボフラビンの濃度は、以下に記載する機器、材料および条件を使用して、ＵＰＬＣ−ＦＬＲによって決定することができる。
機器：
ＵＰＬＣシステム：ＢＥＨ  Ｃ１８カラム（１．７μｍ、２．１ｍｍｘ１５０ｍｍ；Ｗａｔｅｒｓ製品番号：１８６００２３５３）を装備したＡｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ）
検出器：Ａｃｑｕｉｔｙ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ（ＦＬＲ）検出器（Ｗａｔｅｒｓ）
化学薬品：
Ｍｉｌｌｉ−Ｑ（登録商標）Ｕｌｔｒａｐｕｒｅ  Ｗａｔｅｒ
アセトニトリル≧９９．９％（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ製品番号：３４９９８）
リン酸≧８５．０％（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ製品番号：３０４１７）
リボフラビン（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ製品番号：Ｒ−７６４９）
リン酸二水素ナトリウム一水塩（Ｍｅｒｃｋ製品番号：１０６３４６）
ｐＨ緩衝液２．７（２００ｍＬ超純水中、７．５ｇのリン酸二水素ナトリウム一水塩＋１０００ｍＬ超純水中、１ｍＬリン酸）
ＵＰＬＣ機器条件：
カラム温度：４０℃
注入体積：１０μＬ
試料温度：１０℃
ランタイム：１５分
溶離液Ａ＝ｐＨ緩衝液２．７
溶離液Ｂ＝アセトニトリル
【００４９】
【表１】
2019504630.tif 000002
【００５０】
検出器条件：
λex＝４４４ｎｍ
λem＝５２５ｎｍ
試料は分析前に脱気する。
【００５１】
例１
プレ異性化ホップ抽出物（Ｂａｒｔｈ−Ｈａａｓ  Ｇｒｏｕｐから得たいわゆる「Ｉｓｏｈｏｐ」）を出発物質として使用した。このホップ抽出物は以下の特性を有した（Ｂａｒｔｈ−Ｈａａｓ  Ｇｒｏｕｐからの製品説明シートによる）：
・３０±０．５重量％のイソ−アルファ酸を含有
・＜０．７％のアルファ酸を含有
・＜０．３％のベータ酸を含有。
【００５２】
プレ異性化ホップ抽出物を「Ｍｉｌｌｉ−Ｑ（登録商標）Ｕｌｔｒａｐｕｒｅ  Ｗａｔｅｒ」（１：５０ｗ／ｗ）で希釈した。１６ｍＬの希釈ホップ抽出物を、ねじ蓋を伴うガラス管へ導入した（Ｄｕｒａｎガラス、管の径は１６ｍｍ、管長さは１６０ｍｍ）。これらのガラス管３０本に、キセノンランプを使用して、Ｓｕｎｔｅｓｔ  ＸＬＳ＋装置（ＡＴＬＡＳ）の内部で、３２時間の間、同時に照光した。照光中に、以下の条件が適用可能であった：
・キセノンランプの電力は１７００Ｗ
・管は、水平にＳｕｎｔｅｓｔ  ＸＬＳ＋装置の内部に配置
・ガラス管とランプの間の距離は２５ｃｍ
・試料レベルでの放射照度の量を７６５Ｗ／ｍ2にセット
・希釈ホップ抽出物の温度は、周囲温度からおよそ５０℃に増加（照光中、冷却も加熱も意図的には適用しなかった）。
【００５３】
例２
例１の照光した抽出物および照光しなかったホップ抽出物を、ホップのないビール（緑色瓶中３００ｍＬのホップのないビール）に添加した。第１のビール（参照ビール）は、２０ｍｇ／Ｌの光を照光しなかったホップ抽出物を添加することによって調製した。第２のビール（光安定性ビール）は、６０ｍｇ／Ｌの光を照光したホップ抽出物を添加することによって調製した。照光したホップ抽出物は、照光の結果生じた苦味強度の損失を補うために、より高い濃度で適用した。照光したホップ抽出物を含有するビールの風味プロファイルは、照光しなかったホップ抽出物を含有するビールに非常に類似した風味プロファイルを有した。
【００５４】
Ｓｕｎｔｅｓｔ  ＸＬＳ＋装置に瓶を水平に置き、２４時間の間それらに照光することによって、両方のビールを人工太陽光に曝露した。照光中、例１と同じ条件を適用した。
【００５５】
人工太陽光への曝露の前および途中で、以下の物質の濃度を両方のビールで決定した：
・イソ−アルファ酸、
・リボフラビン、および
・３−ＭＢＴ。
【００５６】
ビール中のイソ−アルファ酸の決定は、ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｂｒｅｗｉｎｇ  Ｃｈｅｍｉｓｔｓ  （ＡＳＢＣ）  ｉｎ  ２００９（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ａｎａｌｙｓｉｓ，１４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ）：「Ｍｅｔｈｏｄ  Ｂｅｅｒ  ２３（ｓｅｃｔｉｏｎ  Ｅ：Ｉｓｏ−ａｌｐｈａ  ａｃｉｄｓ  ｉｎ  ｂｅｅｒ  ｂｙ  ＨＰＬＣ）」に記載された方法によって実施した。３−ＭＢＴ含量は、Ｈｕｇｈｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（「Ａｓｐｅｃｔｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｌｉｇｈｔｓｔｒｕｃｋ  ｃｈａｒａｃｔｅｒ  ｏｆ  ｂｅｅｒ」．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｂｒｅｗｉｎｇ，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ６th  Ｃｅｎｔｒａｌ  ａｎｄ  Ｓｏｕｔｈ  Ａｆｒｉｃａ  Ｓｅｃｔｉｏｎ  （１９９７），ｐｐ．１２３〜１２８）に記載された方法を使用して決定した。
【００５７】
これらの分析の結果を表３に要約する：
【００５８】
【表２】
2019504630.tif 000003
【手続補正書】
【提出日】平成30年10月10日(2018.10.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
光安定性ホップ抽出物を調製する方法であって、前記方法が：
・乾燥物の重量で少なくとも１０％のイソ−アルファ酸を含むプレ異性化ホップ抽出物を用意し、ここで前記イソ−アルファ酸は、イソフムロン、イソアドフムロン、イソコフムロン、プレイソフムロン、ポストイソフムロンおよびこれらの組み合わせの群から選択され、
・任意にプレ異性化ホップ抽出物の希釈の後に、少なくとも５０Ｗ／ｍ2の照光強度で少なくとも３０分、プレ異性化ホップ抽出物に照光すること、
を含む方法。
【請求項２】
前記プレ異性化ホップ抽出物に、２００〜８００ｎｍの範囲、好ましくは２５０〜６００ｎｍの範囲、最も好ましくは３００〜５００ｎｍの範囲の波長に最大強度を有する光を照光する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記プレ異性化ホップ抽出物に、１００Ｗ／ｍ2を越える照光強度、好ましくは２００Ｗ／ｍ2を越える照光強度で照光する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記プレ異性化ホップ抽出物に、指定の照光強度で少なくとも１時間、好ましくは２〜４８時間照光する、先行する請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
照光中にホップ抽出物の温度が、０〜１００℃の範囲内、好ましくは１５〜８０℃の範囲内にとどまる、先行する請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記方法が：
・プレ異性化抽出物を水で希釈して水溶液を生成すること；および
・プレ異性化ホップ抽出物の水溶液に照光すること、
を含む、先行する請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記プレ異性化ホップ抽出物の水性希釈溶液が、照光開始時に０．２〜２００ｇ／ｌ、好ましくは０．５〜７０ｇ／ｌ、より好ましくは１〜２５ｇ／ｌの範囲で、イソ−アルファ酸含量を有する、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記プレ異性化ホップ抽出物の水性希釈溶液が、少なくとも８０重量％の水、好ましくは少なくとも９０重量％の水、より好ましくは少なくとも９５重量％の水を含有する、請求項６または７に記載の方法。
【請求項９】
先行する請求項のいずれか一項に記載の方法によって得られ得る、好ましくは得られる、光安定性プレ異性化ホップ抽出物。
【請求項１０】
前記ホップ抽出物が、乾燥物の重量で少なくとも１％のイソ−アルファ酸を含有する、請求項９に記載のホップ抽出物。
【請求項１１】
前記ホップ抽出物が、乾燥物の重量で０〜１０％、好ましくは乾燥物の重量で０〜３％、より好ましくは乾燥物の重量で０．０１〜２％の濃度でアルファ酸を含有する、請求項９または１０に記載のホップ抽出物。
【請求項１２】
前記ホップ抽出物が、乾燥物の重量で０〜１０％、好ましくは乾燥物の重量で０〜５％の濃度でベータ酸を含有する、請求項９から１１のいずれか一項に記載のホップ抽出物。
【請求項１３】
前記ホップ抽出物は、イソ−アルファ酸の１０重量％を越えない、好ましくはイソ−アルファ酸の３重量％を越えない濃度で、還元イソ−アルファ酸を含有し；前記還元イソ−アルファ酸が、ジヒドロ−イソ−アルファ酸、テトラヒドロ−イソ−アルファ酸、ヘキサヒドロ−イソ−アルファ酸およびこれらの組み合わせから選択される、請求項９から１２のいずれか一項に記載のホップ抽出物。
【請求項１４】
ビールを調製する方法であって、請求項９から１３のいずれか一項に記載の光安定性プレ異性化ホップ抽出物を導入することを含む、方法。
【請求項１５】
前記ホップ抽出物が、少なくとも２ｍｇ／ｌの濃度で、好ましくは５〜２００ｍｇ／ｌの濃度で、より好ましくは１０〜１５０ｍｇ／ｌの濃度で麦汁またはビールへ導入される、請求項１４に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５８】
【表２】
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以下に、出願当初の請求項を実施の態様として記載する。
［１］  光安定性ホップ抽出物を調製する方法であって、前記方法が：
・乾燥物の重量で少なくとも１０％のイソ−アルファ酸を含むプレ異性化ホップ抽出物を用意すること、
・任意にプレ異性化ホップ抽出物の希釈の後に、少なくとも５０Ｗ／ｍ2の照光強度で少なくとも３０分、プレ異性化ホップ抽出物に照光すること、
を含む方法。
［２］  前記プレ異性化ホップ抽出物に、２００〜８００ｎｍの範囲、好ましくは２５０〜６００ｎｍの範囲、最も好ましくは３００〜５００ｎｍの範囲の波長に最大強度を有する光を照光する、［１］に記載の方法。
［３］  前記プレ異性化ホップ抽出物に、１００Ｗ／ｍ2を越える照光強度、好ましくは２００Ｗ／ｍ2を越える照光強度で照光する、［１］または［２］に記載の方法。
［４］  前記プレ異性化ホップ抽出物に、指定の照光強度で少なくとも１時間、好ましくは２〜４８時間照光する、先行する請求項のいずれか一項に記載の方法。
［５］  照光中にホップ抽出物の温度が、０〜１００℃の範囲内、好ましくは１５〜８０℃の範囲内にとどまる、先行する請求項のいずれか一項に記載の方法。
［６］  前記方法が：
・プレ異性化抽出物を水で希釈して水溶液を生成すること；および
・プレ異性化ホップ抽出物の水溶液に照光すること、
を含む、先行する請求項のいずれか一項に記載の方法。
［７］  前記プレ異性化ホップ抽出物の水性希釈溶液が、照光開始時に０．２〜２００ｇ／ｌ、好ましくは０．５〜７０ｇ／ｌ、より好ましくは１〜２５ｇ／ｌの範囲で、イソ−アルファ酸含量を有する、［６］に記載の方法。
［８］  前記プレ異性化ホップ抽出物の水性希釈溶液が、少なくとも８０重量％の水、好ましくは少なくとも９０重量％の水、より好ましくは少なくとも９５重量％の水を含有する、［６］または［７］に記載の方法。
［９］  入手可能である、好ましくは先行する請求項のいずれか一項に記載の方法によって入手される、光安定性プレ異性化ホップ抽出物。
［１０］  前記ホップ抽出物が、乾燥物の重量で少なくとも１％のイソ−アルファ酸を含有する、［９］に記載のホップ抽出物。
［１１］  前記ホップ抽出物が、乾燥物の重量で０〜１０％、好ましくは乾燥物の重量で０〜３％、より好ましくは乾燥物の重量で０．０１〜２％の濃度でアルファ酸を含有する、［９］または［１０］に記載のホップ抽出物。
［１２］  前記ホップ抽出物が、乾燥物の重量で０〜１０％、好ましくは乾燥物の重量で０〜５％の濃度でベータ酸を含有する、［９］から［１１］のいずれか一項に記載のホップ抽出物。
［１３］  前記ホップ抽出物は、イソ−アルファ酸の１０重量％を越えない、好ましくはイソ−アルファ酸の３重量％を越えない濃度で、還元イソ−アルファ酸を含有し；前記還元イソ−アルファ酸が、ジヒドロ−イソ−アルファ酸、テトラヒドロ−イソ−アルファ酸、ヘキサヒドロ−イソ−アルファ酸およびこれらの組み合わせから選択される、［９］から［１２］のいずれか一項に記載のホップ抽出物。
［１４］  ビールを調製する方法であって、［９］から［１３］のいずれか一項に記載の光安定性プレ異性化ホップ抽出物を導入することを含む、方法。
［１５］  前記ホップ抽出物が、少なくとも２ｍｇ／ｌの濃度で、好ましくは５〜２００ｍｇ／ｌの濃度で、より好ましくは１０〜１５０ｍｇ／ｌの濃度で麦汁またはビールへ導入される、［１４］に記載の方法。
【国際調査報告】
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