(57)【要約】本発明は、免疫細胞を含有する細胞懸濁液を狭窄部に通すことによって、抗原への寛容性を誘導するかまたは抗原への免疫応答を抑制するための方法であって、抗原および／または寛容原性因子が細胞に入り、それによって寛容原性および／または免疫抑制免疫細胞が生成されるように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、方法を提供する。一部の実施形態では、前記寛容原性および／または免疫抑制免疫細胞は、個体に送達され、前記抗原の提示は、該抗原への寛容性を誘導するおよび／または該抗原への免疫応答を抑制する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
個体において抗原への寛容性を誘導するための方法であって、
ａ．免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、該細胞と接触した抗原が該免疫細胞に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、該細胞の摂動を引き起こす、ステップと、
ｂ．該免疫細胞を該個体に導入するステップであって、該免疫細胞が寛容原性免疫細胞であり、該抗原の提示が該抗原への寛容性を誘導する、ステップと
を含む方法。
【請求項２】
個体において抗原への寛容性を誘導するための方法であって、
ａ．免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、該細胞と接触した抗原および寛容原性因子が該免疫細胞に入り、それによって、該抗原を含む寛容原性免疫細胞を生成するように、該狭窄部が該細胞を変形させ、該細胞の摂動を引き起こす、ステップと、
ｂ．該寛容原性免疫細胞を該個体に導入するステップであって、該抗原の提示が該抗原への寛容性を誘導する、ステップと
を含む方法。
【請求項３】
個体において抗原への免疫応答を抑制するための方法であって、
ａ．免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、該細胞と接触した抗原が該免疫細胞に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、該細胞の摂動を引き起こす、ステップと、
ｂ．該免疫細胞を該個体に導入するステップであって、該免疫細胞が寛容原性免疫細胞であり、該抗原の提示が該抗原への免疫応答を抑制する、ステップと
を含む方法。
【請求項４】
個体において抗原への免疫応答を抑制するための方法であって、
ａ．免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、該細胞と接触した抗原および寛容原性因子が該免疫細胞に入り、それによって、該抗原を含む免疫抑制免疫細胞を生成するように、該狭窄部が該細胞を変形させ、該細胞の摂動を引き起こす、ステップと、
ｂ．該免疫抑制免疫細胞を該個体に導入するステップであって、該抗原の提示が該抗原への免疫応答を抑制する、ステップと
を含む方法。
【請求項５】
個体において抗原への寛容性を誘導するための方法であって、該抗原を含む寛容原性免疫細胞を該個体に導入するステップであって、該抗原の提示が該抗原への寛容性を誘導するステップを含み、該寛容原性免疫細胞またはその前駆体を狭窄部に通すことによって該抗原が該寛容原性免疫細胞に導入され、ここで、該抗原が該寛容原性免疫細胞またはその前駆体に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、方法。
【請求項６】
個体において抗原への寛容性を誘導するための方法であって、該抗原および寛容原性因子を含む寛容原性免疫細胞を該個体に導入するステップであって、該抗原の提示が該抗原への寛容性を誘導するステップを含み、該寛容原性免疫細胞またはその前駆体を狭窄部に通すことによって該抗原および該寛容原性因子が該寛容原性免疫細胞に導入され、ここで、該抗原および該寛容原性因子が該寛容原性免疫細胞またはその前駆体に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、方法。
【請求項７】
個体において抗原への免疫応答を抑制するための方法であって、該抗原を含む免疫抑制免疫細胞を該個体に導入するステップであって、該抗原の提示が該抗原への免疫応答を抑制するステップを含み、該免疫抑制免疫細胞またはその前駆体を狭窄部に通すことによって該抗原が該免疫抑制免疫細胞に導入され、ここで、該抗原が該免疫抑制免疫細胞またはその前駆体に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、方法。
【請求項８】
個体において抗原への免疫応答を抑制するための方法であって、該抗原および寛容原性因子を含む免疫抑制免疫細胞を該個体に導入するステップであって、該抗原の提示が該抗原への免疫応答を抑制するステップを含み、該免疫抑制免疫細胞またはその前駆体を狭窄部に通すことによって該抗原および該寛容原性因子が該免疫抑制免疫細胞に導入され、ここで、該抗原および該寛容原性因子が該免疫抑制免疫細胞またはその前駆体に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、方法。
【請求項９】
寛容原性免疫細胞を生成するための方法であって、免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップを含み、該細胞と接触した寛容原性因子が該免疫細胞に入り、それによって、該寛容原性免疫細胞を生成するように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、方法。
【請求項１０】
免疫抑制免疫細胞を生成するための方法であって、免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、該細胞と接触した寛容原性因子が該免疫細胞に入り、それによって、該免疫抑制免疫細胞を生成するように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こすステップを含む、方法。
【請求項１１】
前記細胞と接触した寛容原性因子および抗原が前記免疫細胞に入るように、前記狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、請求項９または１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記免疫細胞が第２の狭窄部にさらに通され、前記細胞と接触した抗原が該免疫細胞に入るように、該第２の狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、請求項９または１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記免疫細胞が抗原提示細胞である、請求項９〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
抗原を含む寛容原性抗原提示細胞を生成する方法であって、寛容原性抗原提示細胞が狭窄部に通され、ここで、該細胞と接触した抗原が該抗原提示細胞に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、該細胞の摂動を引き起こす、方法。
【請求項１５】
抗原を含む免疫抑制抗原提示細胞を生成する方法であって、免疫抑制抗原提示細胞が狭窄部に通され、ここで、該細胞と接触した抗原が該抗原提示細胞に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、該細胞の摂動を引き起こす、方法。
【請求項１６】
寛容原性表現型を生成する寛容原性因子を免疫細胞に送達するための方法であって、該免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、該寛容原性因子が該細胞に入ることができるように、該狭窄部が該免疫細胞を変形させ、該細胞の摂動を引き起こす、ステップと、該細胞懸濁液を該寛容原性因子と接触させるステップであって、該寛容原性因子が免疫賦活因子の発現および／もしくは活性を阻害し、免疫抑制分子の発現および／もしくは活性を増強し、炎症性分子の発現および／もしくは活性を阻害し、ならびに／または抗炎症分子の発現および／もしくは活性を増強する、ステップとを含む方法。
【請求項１７】
寛容原性免疫細胞に抗原を送達するための方法であって、該寛容原性免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、該抗原が該細胞に入ることができるように、該狭窄部が該寛容原性免疫細胞を変形させ、該細胞の摂動を引き起こす、ステップと、該細胞懸濁液を該抗原と接触させるステップとを含む方法。
【請求項１８】
免疫抑制表現型を生成する寛容原性因子を免疫細胞に送達するための方法であって、該免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、該寛容原性因子が該細胞に入ることができるように、該狭窄部が該免疫細胞を変形させ、該細胞の摂動を引き起こす、ステップと、該細胞懸濁液を該寛容原性因子と接触させるステップであって、該寛容原性因子が免疫賦活因子の発現および／もしくは活性を阻害し、免疫抑制分子の発現および／もしくは活性を増強し、炎症性分子の発現および／もしくは活性を阻害し、ならびに／または抗炎症分子の発現および／もしくは活性を増強する、ステップとを含む方法。
【請求項１９】
免疫抑制免疫細胞に抗原を送達するための方法であって、該免疫抑制免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、該抗原が該細胞に入ることができるように、該狭窄部が該免疫抑制免疫細胞を変形させ、該細胞の摂動を引き起こす、ステップと、該細胞懸濁液を該抗原と接触させるステップとを含む方法。
【請求項２０】
個体において抗原への免疫応答を抑制するための方法であって、
ａ．第１の免疫細胞を含む第１の細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、該細胞と接触した抗原が該免疫細胞に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、該細胞の摂動を引き起こす、ステップと、
ｂ．第２の免疫細胞を含む第２の細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、該細胞と接触した寛容原性因子が該免疫細胞に入り、それによって免疫抑制免疫細胞を生成するように、該狭窄部が該細胞を変形させ、該細胞の摂動を引き起こす、ステップと、
ｃ．該第１の免疫細胞および第２の免疫細胞を該個体に導入するステップであって、該抗原の提示が該抗原への免疫応答を抑制する、ステップと
を含む方法。
【請求項２１】
前記第１または第２の免疫細胞による前記抗原の提示が、該抗原への免疫応答を抑制する、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記第２の免疫細胞が前記第１の免疫細胞に免疫抑制表現型を付与し、それによって免疫抑制性の第１の免疫細胞を生成し、該免疫抑制性の第１の免疫細胞による前記抗原の提示が該抗原への免疫応答を抑制する、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
個体において抗原への寛容性を誘導するための方法であって、
ａ．第１の免疫細胞を含む第１の細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、該細胞と接触した抗原が該免疫細胞に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、該細胞の摂動を引き起こす、ステップと、
ｂ．第２の免疫細胞を含む第２の細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、該細胞と接触した寛容原性因子が該免疫細胞に入り、それによって寛容原性免疫細胞を生成するように、該狭窄部が該細胞を変形させ、該細胞の摂動を引き起こす、ステップと、
ｃ．該第１の免疫細胞および第２の免疫細胞を該個体に導入するステップであって、該抗原の提示が該抗原への免疫応答を抑制する、ステップとを含む方法。
【請求項２４】
前記第１または第２の免疫細胞による前記抗原の提示が、該抗原への寛容性を誘導する、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記第２の免疫細胞が前記第１の免疫細胞に寛容原性表現型を付与し、それによって寛容原性の第１の免疫細胞を生成し、該寛容原性の第１の免疫細胞による前記抗原の提示が該抗原への寛容性を誘導する、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
前記第１の免疫細胞および前記第２の免疫細胞が、前記個体に同時に導入される、請求項２０〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記第１の免疫細胞および前記第２の免疫細胞が、前記個体に逐次的に導入される、請求項２０〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記寛容原性免疫細胞またはその前駆体が、アジュバントと接触していない、請求項１、２、５、６、９、１１〜１４、１６、１７および２３〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記免疫抑制免疫細胞またはその前駆体が、アジュバントと接触していない、請求項３、４、７、８、１０〜１３、１５、１８〜２２、２６および２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記アジュバントが、ＴＬＲ３およびＲＬＲリガンド、ＴＬＲ４リガンド、ＴＬＲ５リガンド、ＴＬＲ７／８リガンド、ＴＬＲ９リガンド、ＮＯＤ２リガンド、ミョウバン、油中水型エマルジョン、ｒｈＩＬ−２、抗ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＩＬ−１２ならびに環状ジヌクレオチドからなる群から選択される、請求項２８または２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記寛容原性免疫細胞が、該寛容原性免疫細胞の非寛容原性前駆体と比較して１つまたは複数の共刺激シグナルを提供する低減された能力を含む、請求項１、２、５、６、９、１１〜１４、１６、１７および２３〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記免疫抑制免疫細胞が、該免疫抑制免疫細胞の非免疫抑制前駆体と比較して１つまたは複数の共刺激シグナルを提供する低減された能力を含む、請求項３、４、７、８、１０〜１３、１５、１８〜２２、２６、２７および２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記１つまたは複数の共刺激シグナルが、ＣＤ４０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ５４、ＣＤ８３、ＣＤ７９およびＩＣＯＳリガンドからなる群から選択される分子によって媒介される、請求項３１または３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記寛容原性免疫細胞が、該寛容原性免疫細胞の非寛容原性前駆体と比較して１つまたは複数の炎症性シグナルを提供する低減された能力を含む、請求項１、２、５、６、９、１１〜１４、１６、１７、２３〜２８および３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
前記免疫抑制免疫細胞が、該免疫抑制免疫細胞の非免疫抑制前駆体と比較して１つまたは複数の炎症性シグナルを提供する低減された能力を含む、請求項３、４、７、８、１０〜１３、１５、１８〜２２、２６、２７、２９および３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
前記１つまたは複数の炎症性シグナルが、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ−ガンマ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、ＮＦ−κＢ、インターフェロン調節因子（ＩＲＦ）、およびＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達経路に関連した分子からなる群から選択される分子によって媒介される、請求項３４または３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記寛容原性因子が、免疫賦活因子の発現および／もしくは活性を阻害し、免疫抑制分子の発現および／もしくは活性を増強し、炎症性分子の発現および／もしくは活性を阻害し、ならびに／または抗炎症分子の発現および／もしくは活性を増強する、請求項２、４、６、８〜１１、１６、１８、２０および２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記抗原が、該寛容原性免疫細胞によって提示される、請求項１、２、５、６、１１〜１４、１７、２３〜２８および３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
前記抗原が、前記免疫抑制免疫細胞によって提示される、請求項３、４、７、８、１１〜１３、１５、１９〜２２、２６、２７、２９および３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
少なくとも１つの他の抗原への寛容性が誘導される、請求項２、６、９、１１〜１３、１６、２３〜２８および３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
少なくとも１つの他の抗原への免疫応答が抑制される、請求項４、８、１０〜１３、１８、２０〜２２、２６、２７、２９および３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
少なくとも１つのさらなる抗原が、前記細胞に導入される、請求項１〜８、１１、１２、１４、１５、１７、１９および２０〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
少なくとも１つのさらなる寛容原性因子が、前記細胞に導入される、請求項２、４、６、８、９〜１１、１６、１８、２０および２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
個体において免疫応答を抑制するための方法であって、
ａ．免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、該細胞と接触した非機能的サイトカイン結合タンパク質をコードする化合物が該免疫細胞に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、該細胞の摂動を引き起こす、ステップと、
ｂ．該免疫細胞を該個体に導入するステップであって、該非機能的サイトカイン結合タンパク質が発現され、該非機能的サイトカイン結合タンパク質が遊離炎症性サイトカインを結合する、ステップと
を含む方法。
【請求項４５】
前記非機能的サイトカイン結合タンパク質が、非機能的サイトカイン受容体を含む、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記非機能的サイトカイン受容体が、細胞質シグナル伝達ドメインを欠いている、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記非機能的サイトカイン結合タンパク質が、標的サイトカインを切断するタンパク分解部位を含む、請求項４４に記載の方法。
【請求項４８】
前記非機能的サイトカイン結合タンパク質が、抗サイトカイン抗体を含む、請求項４４に記載の方法。
【請求項４９】
前記非機能的サイトカイン結合タンパク質が、抗サイトカインＢ細胞受容体を含む、請求項４４に記載の方法。
【請求項５０】
前記免疫細胞が、前記個体に由来する、請求項１〜７および２０〜４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
前記免疫細胞が、異なる個体に由来する、請求項１〜７および２０〜４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
前記狭窄部が、マイクロ流体チャネルの中に含有される、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
前記狭窄部が孔であるか、または孔の中に含有される、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
前記孔が、表面に含有される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記表面が、フィルターである、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記表面が、膜である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５７】
前記狭窄部サイズが、前記免疫細胞の直径の関数である、請求項１〜５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
前記狭窄部サイズが、前記細胞直径の約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％または約９９％である、請求項１〜５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５９】
前記チャネルが、約１０μｍの狭窄部長および約４μｍの狭窄部幅を含む、請求項１〜５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６０】
前記孔径が、約０．４μｍ、約３μｍ、約４μｍ、約５μｍ、約８μｍ、約１０μｍ、約１２μｍまたは約１４μｍである、請求項１〜５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６１】
約−５℃〜約４５℃の間で実行される、請求項１〜６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６２】
前記細胞懸濁液が、混合細胞集団を含む、請求項１〜４、９、１０および１６〜６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６３】
前記細胞懸濁液が、全血である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
前記細胞懸濁液が、末梢血単核細胞を含む、請求項６２に記載の方法。
【請求項６５】
前記細胞懸濁液が、精製された細胞集団を含む、請求項１〜４、９、１０および１６〜６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６６】
前記細胞懸濁液が、哺乳動物細胞を含む、請求項１〜４、９、１０および１６〜６５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６７】
前記細胞懸濁液が、サル細胞、マウス細胞、イヌ細胞、ネコ細胞、ウマ細胞、ラット細胞、ヒツジ細胞、ヤギ細胞、ブタ細胞またはウサギ細胞を含む、請求項１〜４、９、１０および１６〜６６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６８】
前記細胞懸濁液が、ヒト細胞を含む、請求項１〜４、９、１０および１６〜６６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６９】
前記細胞懸濁液が、非哺乳動物細胞を含む、請求項１〜４、９、１０および１６〜６５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７０】
前記細胞懸濁液が、細菌細胞、酵母細胞、ニワトリ細胞、カエル細胞、昆虫細胞、魚類細胞または線虫細胞を含む、請求項１〜４、９、１０、１６〜６５および６９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７１】
前記免疫細胞が、哺乳動物細胞である、請求項１〜１３および１６〜６８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７２】
前記免疫細胞が、サル細胞、マウス細胞、イヌ細胞、ネコ細胞、ウマ細胞、ラット細胞、ヒツジ細胞、ヤギ細胞、ブタ細胞またはウサギ細胞である、請求項１〜１３、１６〜６８および７１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７３】
前記免疫細胞が、ヒト細胞である、請求項１〜１３、１６〜６８および７１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７４】
前記免疫細胞が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、単球、マクロファージ、ＮＫ細胞、自然リンパ球、好中球、好塩基球、好酸球、骨髄由来サプレッサー細胞または肥満細胞である、請求項１〜１３および１６〜７３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７５】
前記抗原提示細胞が、哺乳動物細胞である、請求項１４、１５および５０〜７４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７６】
前記抗原提示細胞が、サル、マウス、イヌ、ネコ、ウマ、ラット、ヒツジ、ヤギ、ブタまたはウサギの細胞である、請求項１４、１５および５０〜７５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７７】
前記抗原提示細胞が、ヒト細胞である、請求項１４、１５および５０〜７５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７８】
前記抗原提示細胞が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、単球、マクロファージ、ＮＫ細胞、自然リンパ球、好中球、好塩基球、好酸球、骨髄由来サプレッサー細胞または肥満細胞である、請求項１４、１５および５０〜７７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７９】
前記抗原が、外来抗原である、請求項１〜１５、２０〜４３および５０〜７８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８０】
前記抗原が、自己抗原である、請求項１〜１５、２０〜４３および５０〜７８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８１】
前記抗原が、同種移植抗原である、請求項１〜１５、２０〜４３および５０〜７８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８２】
前記抗原が、タンパク質またはポリペプチドである、請求項１〜１５、２０〜４３および５０〜７８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８３】
前記抗原が、溶解物である、請求項１〜１５、２０〜４３および５０〜７８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８４】
前記抗原が、修飾抗原である、請求項１〜１５、２０〜４３および５０〜８３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８５】
前記修飾抗原が、治療剤と融合した抗原を含む、請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
前記修飾抗原が、ターゲティングペプチドと融合した抗原を含む、請求項８４に記載の方法。
【請求項８７】
前記細胞懸濁液が、前記狭窄部を通る前に、それと同時にまたはその後に前記抗原と接触する、請求項１〜４、９、１０および１６〜８６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８８】
前記寛容原性因子が、共刺激分子の活性を阻害する、請求項１〜４３および５０〜８７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８９】
前記寛容原性因子が、共刺激分子の発現を低下させる、請求項１〜４３および５０〜８８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９０】
前記寛容原性因子が、共刺激分子の発現をモジュレートする核酸を欠失させる、請求項１〜４３および５０〜８９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９１】
前記寛容原性因子が、共刺激分子を阻害する、請求項１〜４３および５０〜８８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９２】
前記寛容原性因子が、共刺激分子の発現を抑制する転写レギュレーターの活性を増加させる、請求項１〜４３および５０〜９１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９３】
前記寛容原性因子が、共刺激分子の発現を抑制するタンパク質インヒビターの活性を増加させる、請求項１〜４３および５０〜９１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９４】
前記寛容原性因子が、前記共刺激分子のサプレッサーをコードする核酸を含む、請求項１〜４３および５０〜８８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９５】
前記共刺激分子が、ＣＤ８０またはＣＤ８６である、請求項８８〜９４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９６】
前記寛容原性因子が、免疫抑制因子の活性を増強する、請求項１〜４３および５０〜９５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９７】
前記免疫抑制因子が、共阻害分子、転写レギュレーターまたは免疫抑制分子である、請求項９６に記載の方法。
【請求項９８】
前記寛容原性因子が、共阻害分子の活性を増強する、請求項１〜４３、５０〜８７、９６および９７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９９】
前記寛容原性因子が、共阻害分子の発現を増加させる、請求項１〜４３、５０〜８７および９６〜９８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１００】
前記寛容原性因子が、共阻害分子をコードする、請求項１〜４３、５０〜８７および９６〜９９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０１】
前記寛容原性因子が、共阻害分子の活性を増加させる、請求項１〜４３、５０〜８７および９６〜１００のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０２】
前記寛容原性因子が、共阻害分子の発現を増強する転写レギュレーターの活性を増加させる、請求項１〜４３、５０〜８７および９６〜９８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０３】
前記寛容原性因子が、共阻害分子の発現を増加させるポリペプチドの活性を増加させる、請求項１〜４３、５０〜８７、９６〜９８および１０２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０４】
前記寛容原性因子が、共阻害分子のエンハンサーをコードする核酸を含む、請求項１〜４３、５０〜８７、９６〜９８および１０２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０５】
前記共阻害分子が、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２またはＣＴＬＡ−４である、請求項９７〜１０４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０６】
前記寛容原性因子が、前記免疫抑制分子の活性を増強する、請求項１〜４３、５０〜８７、９６および９７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０７】
前記寛容原性因子が、免疫抑制分子の発現を増加させる、請求項１〜４３、５０〜８７、９６、９７および１０６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０８】
前記寛容原性因子が、免疫抑制分子をコードする、請求項１〜４３、５０〜８７、９６、９７および１０６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０９】
前記寛容原性因子が、免疫抑制分子の活性を増加させる、請求項１〜４３、５０〜８７、９６、９７および１０６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１０】
前記寛容原性因子が、免疫抑制分子の発現を増強する転写レギュレーターの活性を増加させる、請求項１〜４３、５０〜８７、９６、９７および１０６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１１】
前記寛容原性因子が、免疫抑制分子の発現を増強するポリペプチドの活性を増加させる、請求項１〜４３、５０〜８７、９６、９７および１０６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１２】
前記寛容原性因子が、免疫抑制分子のエンハンサーをコードする核酸を含む、請求項１〜４３、５０〜８７、９６、９７および１０６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１３】
前記免疫抑制分子が、ＡＲＧ１、ＮＯ、ＮＯＳ２、ＩＤＯ、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−３５、ＩＦＮαまたはＴＧＦβである、請求項９７または１０６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１４】
前記寛容原性因子が、炎症性分子の活性を阻害する、請求項１〜４３および５０〜８７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１５】
前記炎症性分子が、炎症性転写因子である、請求項１１４に記載の方法。
【請求項１１６】
前記寛容原性因子が、炎症性転写因子を阻害する、請求項１〜４３、５０〜８７、１１４および１１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１７】
前記寛容原性因子が、炎症性転写因子の発現を低下させる、請求項１〜４３、５０〜８７および１１４〜１１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１８】
前記寛容原性因子が、炎症性転写因子をコードする核酸を欠失させる、請求項１〜４３、５０〜８７および１１４〜１１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１９】
のいずれか一項  前記寛容原性因子が、炎症性転写因子の発現を抑制する転写レギュレーターの活性を増加させる、請求項１〜４３、５０〜８７および１１４〜１１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２０】
前記寛容原性因子が、炎症性転写因子の発現を抑制するタンパク質インヒビターの活性を増加させる、請求項１〜４３、５０〜８７および１１４〜１１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２１】
前記寛容原性因子が、炎症性転写因子のサプレッサーをコードする核酸を含む、請求項１〜４３、５０〜８７および１１４〜１１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２２】
前記炎症性転写因子が、ＮＦ−κＢ、インターフェロン調節因子、またはＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達経路に関連した分子である、請求項１１５〜１２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２３】
前記寛容原性因子が、１つまたは複数の炎症性サイトカインの産生および／または分泌を減少させる、請求項１〜４３、５０〜８７および１１４〜１１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２４】
前記１つまたは複数の炎症性サイトカインが、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、ＩＬ−１２およびＩＬ−１８、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ−ガンマ）、ならびに顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）からなる群から選択される、請求項１２３に記載の方法。
【請求項１２５】
前記寛容原性因子が、１つまたは複数の抗炎症性サイトカインの産生および／または分泌を増加させる、請求項１〜４３、５０〜８７および１１４〜１１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２６】
前記１つまたは複数の抗炎症性サイトカインが、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−３５、ＩＦＮ−αおよびトランスフォーミング成長因子ベータ（ＴＧＦβ）からなる群から選択される、請求項１２５に記載の方法。
【請求項１２７】
前記寛容原性因子が、抗原に結合すると免疫抑制サイトカインの産生を誘発する細胞質シグナル伝達ドメインを含有する改変されたＴＣＲをコードする、請求項１〜４３および５０〜８７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２８】
前記寛容原性因子が、抗原に結合すると免疫抑制サイトカインの産生を誘発する細胞質シグナル伝達ドメインを含有するキメラ抗原受容体をコードする、請求項１〜４３および５０〜８７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２９】
前記寛容原性因子が、核酸を含む、請求項１〜４３および５０〜１２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３０】
前記寛容原性因子が、ｓｉＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｌｎｃＲＮＡ、ｔＲＮＡまたはｓｈＲＮＡをコードする核酸を含む、請求項１〜４３および５０〜１２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３１】
前記寛容原性因子が、プラスミドである、請求項１〜４３および５０〜１３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３２】
前記寛容原性因子が、タンパク質核酸複合体を含む、請求項１〜４３および５０〜１２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３３】
前記寛容原性因子が、Ｃａｓ９ポリペプチドおよびガイドＲＮＡまたはドナーＤＮＡを含む、請求項１〜４３、５０〜１２８および１３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３４】
前記寛容原性因子が、Ｃａｓ９ポリペプチドおよびガイドＲＮＡまたはドナーＤＮＡをコードする核酸を含む、請求項１〜４３および５０〜１２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３５】
前記寛容原性因子が、ポリペプチドを含む、請求項１〜４３および５０〜１２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３６】
前記ポリペプチドが、ヌクレアーゼ、ＴＡＬＥＮタンパク質、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、メガヌクレアーゼまたはＣＲＥリコンビナーゼである、請求項１〜４３、５０〜１２８および１３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３７】
前記ポリペプチドが、トランスポザーゼまたはインテグラーゼ酵素である、請求項１〜４３、５０〜１２８および１３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３８】
前記ポリペプチドが、抗体である、請求項１〜４３、５０〜１２８および１３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３９】
前記ポリペプチドが、転写因子である、請求項１〜４３、５０〜１２８および１３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４０】
前記寛容原性因子が、小分子である、請求項１〜４３および５０〜１２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４１】
前記寛容原性因子が、ナノ粒子である、請求項１〜４３および５０〜１２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４２】
前記細胞懸濁液が、前記狭窄部を通る前に、それと同時にまたはその後に前記寛容原性因子と接触する、請求項１〜４３および５０〜１４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４３】
前記免疫応答が、少なくとも約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約７５％、約８０％、約９０％または約１００％抑制される、請求項３、４、７、８および１０〜１４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４４】
前記抑制された免疫応答が、１つまたは複数の炎症性サイトカインの減少した産生および／または分泌を含む、請求項３、４、７、８および１０〜１４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４５】
前記１つまたは複数の炎症性サイトカインが、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、ＩＬ−１２およびＩＬ−１８、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ−ガンマ）ならびに顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）からなる群から選択される、請求項１４４に記載の方法。
【請求項１４６】
前記抑制された免疫応答が、１つまたは複数の抗炎症性サイトカインの増加した産生および／または分泌を含む、請求項３、４、７、８および１０〜１４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４７】
前記１つまたは複数の抗炎症性サイトカインが、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−３５、ＩＦＮ−αおよびトランスフォーミング成長因子ベータ（ＴＧＦβ）からなる群から選択される、請求項１４６に記載の方法。
【請求項１４８】
前記抑制された免疫応答が、Ｔ細胞応答の減少を含む、請求項３、４、７、８および１０〜１４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４９】
前記Ｔ細胞応答の減少が、Ｔ細胞活性化の減少を含む、請求項１４８に記載の方法。
【請求項１５０】
前記Ｔ細胞応答の減少が、Ｔ細胞生存の減少を含む、請求項１４８〜１４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５１】
前記Ｔ細胞応答の減少が、Ｔ細胞増殖の減少を含む、請求項１４８〜１５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５２】
前記Ｔ細胞応答の減少が、Ｔ細胞機能性の減少を含む、請求項１４８〜１５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５３】
前記抑制された免疫応答が、Ｔｒｅｇ応答の増強を含む、請求項３、４、７、８および１０〜１５２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５４】
前記抑制された免疫応答が、Ｂ細胞応答の減少を含む、請求項３、４、７、８および１０〜１５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５５】
前記Ｂ細胞応答の減少が、抗体産生の減少を含む、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１５６】
前記抑制された免疫応答が、サイトカイン産生の減少を含む、請求項３、４、７、８および１０〜１５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５７】
前記抑制された免疫応答が、自己免疫応答の減少を含む、請求項３、４、７、８および１０〜１５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５８】
前記抑制された免疫応答が、アレルギー応答の減少を含む、請求項３、４、７、８および１０〜１５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５９】
前記抗原が、移植組織に関連した抗原である、請求項１〜１５、２０〜４３および５０〜７８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６０】
前記抑制された免疫応答が、前記移植組織に対する免疫応答の減少を含む、請求項３、４、７、８および１０〜１５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６１】
前記抗原が、ウイルスに関連する、請求項１〜１５、２０〜４３および５０〜７８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６２】
前記抑制された免疫応答が、前記ウイルスへの病原性免疫応答の減少を含む、請求項３、４、７、８および１０〜１６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６３】
前記抑制された免疫応答が、治療剤に対する免疫応答の減少を含む、請求項３、４、７、８および１０〜１６２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６４】
前記抑制された免疫応答が、治療ビヒクルに対する免疫応答の減少を含む、請求項３、４、７、８および１０〜１６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６５】
前記寛容性が、１つまたは複数の炎症性サイトカインの産生および／または分泌の減少を含む、請求項１、２、５、６、２３〜４３および５０〜１４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６６】
前記１つまたは複数の炎症性サイトカインが、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、ＩＬ−１２およびＩＬ−１８、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ−ガンマ）ならびに顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）からなる群から選択される、請求項１６５に記載の方法。
【請求項１６７】
前記寛容性が、１つまたは複数の抗炎症性サイトカインの産生および／または分泌の増加を含む、請求項１、２、５、６、２３〜４３および５０〜１４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６８】
前記１つまたは複数の抗炎症性サイトカインが、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−３５、ＩＦＮ−αおよびトランスフォーミング成長因子ベータ（ＴＧＦβ）からなる群から選択される、請求項１６７に記載の方法。
【請求項１６９】
前記寛容性が、Ｔ細胞応答の減少を含む、請求項１、２、５、６、２３〜４３および５０〜１４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７０】
前記Ｔ細胞応答の減少が、Ｔ細胞活性化の減少を含む、請求項１６９に記載の方法。
【請求項１７１】
前記Ｔ細胞応答の減少が、Ｔ細胞生存の減少を含む、請求項１６９〜１７０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７２】
前記Ｔ細胞応答の減少が、Ｔ細胞増殖の減少を含む、請求項１６９〜１７１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７３】
前記Ｔ細胞応答の減少が、Ｔ細胞機能性の減少を含む、請求項１６９〜１７２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７４】
前記Ｔ細胞応答の減少が、Ｔ細胞表現型の変化を含む、請求項１６９〜１７３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７５】
前記寛容性が、Ｔ細胞の非共刺激活性化を含む、請求項１、２、５、６、２３〜４３、５０〜１４２および１６９〜１７４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７６】
前記寛容性が、Ｔｒｅｇ応答の増強を含む、請求項１、２、５、６、２３〜４３、５０〜１４２および１６９〜１７５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７７】
前記寛容性が、Ｂ細胞応答の減少を含む、請求項１、２、５、６、２３〜４３、５０〜１４２および１６９〜１７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７８】
前記Ｂ細胞応答の減少が、抗体産生の減少を含む、請求項１７７に記載の方法。
【請求項１７９】
前記寛容性が、サイトカイン産生の減少を含む、請求項１、２、５、６、２３〜４３、５０〜１４２および１６９〜１７８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８０】
前記寛容性が、自己免疫性応答の減少を含む、請求項１、２、５、６、２３〜４３、５０〜１４２および１６９〜１７９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８１】
前記寛容性が、アレルギー応答の減少を含む、請求項１、２、５、６、２３〜４３、５０〜１４２および１６９〜１８０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８２】
前記寛容性が、前記移植組織に対する免疫応答の減少を含む、請求項１、２、５、６、２３〜４３、５０〜１４２および１６９〜１８１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８３】
前記寛容性が、前記ウイルスへの病原性免疫応答の減少を含む、請求項１、２、５、６、２３〜４３、５０〜１４２および１６９〜１８２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８４】
前記寛容性が、治療剤に対する免疫応答の減少を含む、請求項１、２、５、６、２３〜４３、５０〜１４２および１６９〜１８３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８５】
前記寛容性が、治療ビヒクルに対する免疫応答の減少を含む、請求項１、２、５、６、２３〜４３、５０〜１４２および１６９〜１８４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８６】
少なくとも１、２、３、４、５または６回繰り返される、請求項１〜１８５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８７】
前記方法の任意の２回の繰り返しの間の時間間隔が、少なくとも１日、１週、１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、６カ月または１年である、請求項１８６に記載の方法。
【請求項１８８】
請求項１〜４３および５０〜１８７のいずれか一項に記載の方法で使用するための、前記狭窄部、免疫細胞、抗原および／または寛容原性因子を含む系。
【請求項１８９】
請求項４４〜１８７のいずれか一項に記載の方法で使用するための、前記狭窄部、免疫細胞および非機能的サイトカイン結合タンパク質をコードする化合物を含む系。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１６年５月３日に出願された米国仮出願第６２／３３１，３８４号に対する優先権を請求し、その全体が、参照によって、本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本開示は、概して、細胞懸濁液を細胞変形狭窄部に通すことにより細胞中に化合物を送達することによって、免疫応答を抑制するかまたは寛容性を誘導するための方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
望ましくない免疫応答は、自己免疫、移植拒絶反応、アレルギーおよび抗薬物応答に寄与する。生物体が抗自己応答を開始するときに、通常自己抗原に対する免疫応答の調節不全の結果として自己免疫が発生する。自己免疫疾患には、例えば、Ｉ型糖尿病、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、自己免疫性溶血性貧血および多発性硬化症が含まれる。受容生物体にドナー器官を移植した後の病原性免疫応答は、移植片の拒絶反応および患者の生存期間の低下につながる可能性がある。さらに、食品抗原および環境抗原に対する望まれない免疫応答は、アレルギー性疾患、例えば喘息、食物アレルギーおよびアトピー性皮膚炎を促進する。したがって、抗原への免疫寛容を確立するアプローチは、熱心な治療的開発の焦点である。
【０００４】
現在の細胞内送達方法は、抗原特異的寛容性を誘導するために細胞の表現型または機能をモジュレートするのに有効でない。したがって、自己免疫疾患および移植片拒絶反応の根底にある病原性免疫応答の処置のために、細胞の細胞質に抗原および寛容原性因子を送り込み、強力な免疫抑制応答を促進することができる細胞内送達技術に対する満たされていないニーズがある。細胞に化合物を送達するためにマイクロ流体狭窄部を使用する方法を記載する参考文献には、ＷＯ２０１３０５９３４３、ＷＯ２０１５０２３９８２、ＷＯ２０１６０７０１３６、ＷＯ２０１６０７７７６１およびＰＣＴ／ＵＳ２０１６／１３１１３が含まれる。
【０００５】
特許出願および公開を含む本明細書で引用される全ての参考文献は、参照によりその全体が組み込まれる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】国際公開第２０１３／０５９３４３号
【特許文献２】国際公開第２０１５／０２３９８２号
【特許文献３】国際公開第２０１６／０７０１３６号
【特許文献４】国際公開第２０１６／０７７７６１号
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、個体において抗原への寛容性を誘導するための方法であって、免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、抗原および／または寛容原性因子が該免疫細胞に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こし、寛容原性免疫細胞が生成される、ステップと、該免疫細胞を該個体に導入するステップとを含む方法を提供する。一部の実施形態では、前記寛容原性免疫細胞は、例えば該寛容原性免疫細胞による前記抗原の提示によって、該抗原への寛容性を誘導することが可能である。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、共刺激分子の活性および／もしくは発現をモジュレートし、免疫抑制分子の活性および／もしくは発現をモジュレートし、炎症性分子の活性および／もしくは発現をモジュレートし、ならびに／または別の免疫細胞の活性をモジュレートする（module）。
【０００８】
本発明のある特定の態様は、個体において免疫応答を抑制するための方法であって、免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、抗原および／または寛容原性因子が該免疫細胞に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こし、免疫抑制免疫細胞が生成される、ステップと、該免疫細胞を該個体に導入するステップとを含む方法を提供する。一部の実施形態では、前記免疫抑制免疫細胞による前記抗原の提示は、該抗原への免疫応答を抑制する。
【０００９】
本発明のある特定の態様は、個体において抗原への寛容性を誘導するための方法であって、抗原および／または寛容原性因子を含む免疫細胞を該個体に導入するステップを含み、該免疫細胞を狭窄部に通すことによって該抗原および該寛容原性因子が該免疫細胞に導入され、ここで、該抗原および／または該寛容原性因子が該免疫細胞に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、方法を提供する。
【００１０】
本発明のある特定の態様は、個体において免疫応答を抑制するための方法であって、抗原および／または寛容原性因子を含む免疫細胞を該個体に導入するステップを含み、該免疫細胞を狭窄部に通すことによって該抗原および該寛容原性因子が該免疫細胞に導入され、ここで、該抗原および／または該寛容原性因子が該免疫細胞に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、方法を提供する。
【００１１】
本発明のある特定の態様は、寛容原性免疫細胞を生成するための方法であって、免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、寛容原性因子が該免疫細胞に入り、それによって寛容原性免疫細胞を生成するように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こすステップを含む、方法を提供する。
【００１２】
本発明のある特定の態様は、免疫抑制免疫細胞を生成するための方法であって、免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、寛容原性因子が該免疫細胞に入り、それによって免疫抑制免疫細胞を生成するように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こすステップを含む、方法を提供する。
【００１３】
本発明のある特定の態様は、寛容原性抗原提示免疫細胞を生成する方法であって、寛容原性免疫細胞が第２の狭窄部にさらに通され、ここで、抗原が該免疫細胞に入るように、該第２の狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、方法を提供する。一部の実施形態では、前記抗原は、前記寛容原性免疫細胞によって提示される。
【００１４】
本発明のある特定の態様は、免疫抑制抗原提示免疫細胞を生成する方法であって、免疫抑制免疫細胞が第２の狭窄部にさらに通され、ここで、抗原が該免疫細胞に入るように、該第２の狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、方法を提供する。一部の実施形態では、前記抗原は、前記免疫抑制免疫細胞によって提示される。
【００１５】
本発明のある特定の態様は、寛容原性抗原提示細胞を生成する方法であって、抗原提示細胞が狭窄部に通され、ここで、寛容原性因子が該抗原提示細胞に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、方法を提供する。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、免疫調節因子（immunomodulatory  agent）（例えば、免疫賦活因子（immunostimulatory  agent）（例えば、共刺激分子）、免疫抑制因子（immunosuppressive  agent）または炎症性もしくは抗炎症分子）の発現および／または活性をモジュレートする。一部の実施形態では、前記抗原提示細胞は、前記免疫抑制分子の導入の前にｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで生成される。
【００１６】
本発明のある特定の態様は、免疫抑制抗原提示細胞を生成する方法であって、抗原提示細胞が狭窄部に通され、ここで、寛容原性因子が該抗原提示細胞に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、方法を提供する。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、免疫調節因子（例えば、免疫賦活因子（例えば、共刺激分子）、免疫抑制因子または炎症性もしくは抗炎症分子）の発現および／または活性をモジュレートする。一部の実施形態では、前記抗原提示細胞は、前記寛容原性因子の導入の前にｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで生成される。
【００１７】
本発明のある特定の態様は、寛容原性表現型を生成する寛容原性因子を免疫細胞に送達するための方法であって、該免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、該寛容原性因子が該細胞に入るように、該狭窄部が該免疫細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こすステップを含み、ここで、該細胞懸濁液が該寛容原性因子と接触する、方法を提供する。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、免疫調節因子（例えば、免疫賦活因子（例えば、共刺激分子）、免疫抑制因子または炎症性もしくは抗炎症分子）の発現および／または活性をモジュレートする。
【００１８】
本発明のある特定の態様は、免疫抑制表現型を生成する寛容原性因子を免疫細胞に送達するための方法であって、該免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、免疫抑制表現型を生成する該寛容原性因子が該細胞に入るように、該狭窄部が該免疫細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こすステップを含み、ここで、該細胞懸濁液が該寛容原性因子と接触する、方法を提供する。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、免疫調節因子（例えば、免疫賦活因子（例えば、共刺激分子）、免疫抑制因子または炎症性もしくは抗炎症分子）の発現および／または活性をモジュレートする。
【００１９】
本発明のある特定の態様は、個体において免疫応答を抑制するための方法であって、第１の免疫細胞を含む第１の細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、抗原が該免疫細胞に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、ステップと、第２の免疫細胞を含む第２の細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、寛容原性因子が該免疫細胞に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こし、免疫抑制免疫細胞が生成される、ステップと、該第１の免疫細胞および第２の免疫細胞を該個体に導入するステップとを含む方法を提供する。一部の実施形態では、前記第１または第２の免疫細胞による前記抗原の提示は、該抗原への免疫応答を抑制する。一部の実施形態では、前記第１の免疫細胞および前記第２の免疫細胞は、前記個体に同時に導入される。一部の実施形態では、前記第１の免疫細胞および前記第２の免疫細胞は、前記個体に逐次的に導入される。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、免疫調節因子（例えば、免疫賦活因子（例えば、共刺激分子）、免疫抑制因子または炎症性もしくは抗炎症分子）の発現および／または活性をモジュレートする。
【００２０】
本発明のある特定の態様は、個体において抗原への寛容性を誘導するための方法であって、第１の免疫細胞を含む第１の細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、抗原が該免疫細胞に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、ステップと、第２の免疫細胞を含む第２の細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、寛容原性因子が該免疫細胞に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こし、寛容原性免疫細胞が生成される、ステップと、該第１の免疫細胞および第２の免疫細胞を該個体に導入するステップとを含む方法を提供する。一部の実施形態では、前記第１のまたは第２の免疫細胞による前記抗原の提示は、該抗原への寛容性を誘導する。一部の実施形態では、前記第１の免疫細胞および前記第２の免疫細胞は、前記個体に同時に導入される。一部の実施形態では、前記第１の免疫細胞および前記第２の免疫細胞は、前記個体に逐次的に導入される。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、免疫調節因子（例えば、免疫賦活因子（例えば、共刺激分子）、免疫抑制因子または炎症性もしくは抗炎症分子）の発現および／または活性をモジュレートする。
【００２１】
本発明のある特定の態様は、個体において免疫応答を抑制するための方法であって、免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、非機能的サイトカイン結合タンパク質をコードする化合物が該免疫細胞に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、ステップと、該免疫細胞を該個体に導入するステップであって、該非機能的サイトカイン結合タンパク質が発現され、該非機能的サイトカイン結合タンパク質が遊離炎症性サイトカインに結合し、それによって、例えば炎症性免疫細胞を阻害することによって免疫応答を抑制する、ステップとを含む方法を提供する。一部の実施形態では、前記非機能的サイトカイン結合タンパク質は、非機能的サイトカイン受容体を含む。一部の実施形態では、前記非機能的サイトカイン受容体は、細胞質シグナル伝達ドメインを欠いている。一部の実施形態では、前記非機能的サイトカイン結合タンパク質は、標的サイトカインを切断するタンパク分解部位を含む。一部の実施形態では、前記非機能的サイトカイン結合タンパク質は、抗サイトカイン抗体を含む。一部の実施形態では、前記非機能的サイトカイン結合タンパク質は、抗サイトカインＢ細胞受容体を含む。
【００２２】
以前の実施形態と組み合わせることができる一部の実施形態では、前記免疫細胞は、前記個体に由来する。一部の実施形態では、前記免疫細胞は、異なる個体に由来する。一部の実施形態では、前記免疫細胞は、複数の個体に由来する細胞のプールに由来する。
【００２３】
以前の実施形態と組み合わせることができる一部の実施形態では、前記狭窄部は、マイクロ流体チャネルの中に含有される。一部の実施形態では、前記狭窄部は孔であるか、または孔の中に含有される。一部の実施形態では、前記孔は、表面に含有される。一部の実施形態では、前記表面は、フィルターである。一部の実施形態では、前記表面は、膜である。一部の実施形態では、前記狭窄部サイズは、前記免疫細胞の直径の関数である。一部の実施形態では、前記狭窄部サイズは、前記細胞直径の約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％または約９９％である。一部の実施形態では、前記チャネルは、約１０μｍの狭窄部長および約４μｍの狭窄部幅を含む。一部では、前記孔径は、約０．４μｍ、約３μｍ、約４μｍ、約５μｍ、約８μｍ、約１０μｍ、約１２μｍまたは約１４μｍである。一部の実施形態では、前記方法は、約−５℃〜約４５℃の間で実行される。
【００２４】
特に明記しない限り、無核細胞の直径への言及は、狭窄部に通す前、例えば該細胞が該狭窄部に接近するときの液中の該細胞の直径を意味する。
【００２５】
以前の実施形態と組み合わせることができる一部の実施形態では、前記細胞懸濁液は、混合細胞集団を含む。一部の実施形態では、前記細胞懸濁液は、全血である。一部の実施形態では、前記細胞懸濁液は、末梢血単核細胞を含む。一部の実施形態では、前記細胞懸濁液は、精製された細胞集団を含む。一部の実施形態では、前記細胞懸濁液は、哺乳動物細胞を含む。一部の実施形態では、前記細胞懸濁液は、サル細胞、マウス細胞、イヌ細胞、ネコ細胞、ウマ細胞、ラット細胞、ヒツジ細胞、ヤギ細胞、ブタ細胞またはウサギ細胞を含む。一部の実施形態では、前記細胞懸濁液は、ヒト細胞を含む。一部の実施形態では、前記細胞懸濁液は、非哺乳動物細胞を含む。一部の実施形態では、前記細胞懸濁液は、細菌細胞、酵母細胞、ニワトリ細胞、カエル細胞、昆虫細胞、魚類細胞または線虫細胞を含む。一部の実施形態では、前記免疫細胞は、哺乳動物細胞である。一部の実施形態では、前記免疫細胞は、サル細胞、マウス細胞、イヌ細胞、ネコ細胞、ウマ細胞、ラット細胞、ヒツジ細胞、ヤギ細胞、ブタ細胞またはウサギ細胞である。一部の実施形態では、前記免疫細胞は、ヒト細胞である。一部の実施形態では、前記免疫細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、単球、マクロファージ、ＮＫ細胞、自然リンパ球、好中球、好塩基球、好酸球、骨髄由来サプレッサー細胞または肥満細胞である。一部の実施形態では、前記抗原提示細胞は、哺乳動物細胞である。一部の実施形態では、前記抗原提示細胞は、サル細胞、マウス細胞、イヌ細胞、ネコ細胞、ウマ細胞、ラット細胞、ヒツジ細胞、ヤギ細胞、ブタ細胞またはウサギ細胞である。一部の実施形態では、前記抗原提示細胞は、ヒト細胞である。一部の実施形態では、前記抗原提示細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、単球、マクロファージ、ＮＫ細胞、自然リンパ球、好中球、好塩基球、好酸球、骨髄由来サプレッサー細胞または肥満細胞である。
【００２６】
以前の実施形態と組み合わせることができる一部の実施形態では、前記抗原は、外来抗原である。一部の実施形態では、前記抗原は、自己抗原である。一部の実施形態では、前記抗原は、同種移植抗原（allograft  transplantation  antigen）である。一部の実施形態では、前記抗原は、修飾抗原である。一部の実施形態では、修飾抗原は、治療剤と融合した抗原を含む。一部の実施形態では、修飾抗原は、ターゲティングペプチドと融合した抗原を含む。一部の実施形態では、前記細胞懸濁液は、前記狭窄部を通る前に、それと同時にまたはその後に抗原と接触する。
【００２７】
以前の実施形態と組み合わせることができる一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、共刺激分子の活性を阻害する。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、共刺激分子の発現を低下させる。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記共刺激分子の発現をモジュレートする核酸を欠失させる。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記共刺激分子を阻害する。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記共刺激分子の発現を抑制する転写レギュレーターの活性を増加させる。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記共刺激分子の発現を抑制するタンパク質インヒビターの活性を増加させる。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記共刺激分子のサプレッサーをコードする核酸を含む。一部の実施形態では、前記共刺激分子は、ＣＤ８０またはＣＤ８６である。
【００２８】
以前の実施形態と組み合わせることができる一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、免疫抑制因子の活性を増強する。一部の実施形態では、前記免疫抑制因子は、共阻害分子、転写レギュレーターまたは免疫抑制分子である。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記共阻害分子の活性を増強する。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記共阻害分子の発現を増加させる。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記共阻害分子をコードする。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記共阻害分子の活性を増加させる。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、共刺激分子の発現を増強する転写レギュレーターの活性を増加させる。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、共刺激分子の発現を増加させるポリペプチドの活性を増加させる。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、共刺激分子のエンハンサーをコードする核酸を含む。一部の実施形態では、前記共阻害分子は、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２またはＣＴＬＡ−４である。
【００２９】
一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記免疫抑制分子の活性を増強する。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記免疫抑制分子の発現を増加させる。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記免疫抑制分子をコードする。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記免疫抑制分子の活性を増加させる。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記免疫抑制分子の発現を増強する転写レギュレーターの活性を増加させる。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記免疫抑制分子の発現を増強するポリペプチドの活性を増加させる。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記免疫抑制分子のエンハンサーをコードする核酸を含む。一部の実施形態では、前記免疫抑制分子は、アルギナーゼ−１（ＡＲＧ１）、一酸化窒素（ＮＯ）、一酸化窒素シンターゼ２（ＮＯＳ２）、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−３５、ＩＦＮαまたはＴＧＦβである。
【００３０】
一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、炎症性分子の活性を阻害する。一部の実施形態では、炎症性分子は、炎症性転写因子である。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記炎症性転写因子を阻害する。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、炎症性転写因子の発現を低下させる。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記炎症性転写因子をコードする核酸を欠失させる。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記炎症性転写因子の発現を抑制する転写レギュレーターの活性を増加させる。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記炎症性転写因子の発現を抑制するタンパク質インヒビターの活性を増加させる。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記炎症性転写因子のサプレッサーをコードする核酸を含む。一部の実施形態では、炎症性転写因子は、ＮＦ−κＢ、インターフェロン調節因子、またはＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達経路に関連した分子である。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、抗原に結合すると免疫抑制サイトカインの産生を誘発する細胞質シグナル伝達ドメインを含有する改変されたＴＣＲをコードする。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、抗原に結合すると免疫抑制サイトカインの産生を誘発する細胞質シグナル伝達ドメインを含有するキメラ抗原受容体をコードする。
【００３１】
以前の実施形態と組み合わせることができる一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、核酸を含む。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、ｓｉＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｌｎｃＲＮＡ、ｔＲＮＡまたはｓｈＲＮＡをコードする核酸を含む。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、プラスミドである。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、タンパク質核酸複合体を含む。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、ＣａｓポリペプチドおよびガイドＲＮＡまたはドナーＤＮＡを含む。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、ＣａｓポリペプチドおよびガイドＲＮＡまたはドナーＤＮＡをコードする核酸を含む。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、Ｃａｓ９ポリペプチドおよびガイドＲＮＡまたはドナーＤＮＡを含む。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、Ｃａｓ９ポリペプチドおよびガイドＲＮＡまたはドナーＤＮＡをコードする核酸を含む。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、ポリペプチドを含む。一部の実施形態では、前記ポリペプチドは、ヌクレアーゼ、ＴＡＬＥＮタンパク質、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、メガヌクレアーゼまたはＣＲＥリコンビナーゼである。一部の実施形態では、前記ポリペプチドは、トランスポザーゼまたはインテグラーゼ酵素である。一部の実施形態では、前記ポリペプチドは、抗体である。一部の実施形態では、前記ポリペプチドは、転写因子である。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、小分子である。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、ナノ粒子である。一部の実施形態では、前記細胞懸濁液は、前記狭窄部を通る前に、それと同時にまたはその後に前記寛容原性因子と接触する。
【００３２】
免疫応答が抑制される実施形態では、前記免疫応答は、少なくとも約２５％、約５０％、約７５％、約１００％、約１５０％、約２００％または約２００％を超えて抑制される。一部の実施形態では、前記抑制された免疫応答は、Ｔ細胞応答の減少を含む。一部の実施形態では、前記Ｔ細胞応答の減少は、Ｔ細胞活性化の減少を含む。一部の実施形態では、前記Ｔ細胞応答の減少は、Ｔ細胞生存の減少を含む。一部の実施形態では、前記Ｔ細胞応答の減少は、Ｔ細胞増殖の減少を含む。一部の実施形態では、前記Ｔ細胞応答の減少は、Ｔ細胞機能性の減少を含む。一部の実施形態では、前記Ｔ細胞応答の減少は、Ｔ細胞表現型の変化を含む。一部の実施形態では、前記抑制された免疫応答は、Ｔ細胞の非共刺激活性化を含む。一部の実施形態では、前記抑制された免疫応答は、Ｔｒｅｇ応答の増強を含む。一部の実施形態では、前記抑制された免疫応答は、Ｂ細胞応答の減少を含む。一部の実施形態では、前記Ｂ細胞応答の減少は、抗体産生の減少を含む。一部の実施形態では、前記抑制された免疫応答は、サイトカイン産生の減少を含む。一部の実施形態では、前記抑制された免疫応答は、自己免疫応答の減少を含む。一部の実施形態では、前記抑制された免疫応答は、アレルギー応答の減少を含む。一部の実施形態では、前記抗原は、移植組織に関連した抗原である。一部の実施形態では、前記抑制された免疫応答は、前記移植組織に対する免疫応答の減少を含む。一部の実施形態では、前記抗原は、ウイルスに関連する。一部の実施形態では、前記抑制された免疫応答は、ウイルスへの病原性免疫応答の減少を含む。一部の実施形態では、前記抗原は、細菌に関連する。一部の実施形態では、前記抑制された免疫応答は、前記細菌への病原性免疫応答の減少を含む。一部の実施形態では、前記抗原は、真菌に関連する。一部の実施形態では、前記抑制された免疫応答は、前記真菌への病原性免疫応答の減少を含む。一部の実施形態では、前記抑制された免疫応答は、治療剤に対する免疫応答の減少を含む。一部の実施形態では、前記抑制された免疫応答は、治療ビヒクルに対する免疫応答の減少を含む。
【００３３】
寛容性が誘導される実施形態では、前記寛容性は、Ｔ細胞応答の減少を含むことができる。一部の実施形態では、前記Ｔ細胞応答の減少は、Ｔ細胞活性化の減少を含む。一部の実施形態では、前記Ｔ細胞応答の減少は、Ｔ細胞生存の減少を含む。一部の実施形態では、前記Ｔ細胞応答の減少は、Ｔ細胞増殖の減少を含む。一部の実施形態では、前記Ｔ細胞応答の減少は、Ｔ細胞機能性の減少を含む。一部の実施形態では、前記Ｔ細胞応答の減少は、Ｔ細胞表現型の変化を含む。一部の実施形態では、前記寛容性は、Ｔ細胞の非共刺激活性化を含む。一部の実施形態では、前記寛容性は、Ｔｒｅｇ応答の増強を含む。一部の実施形態では、前記寛容性は、Ｂ細胞応答の減少を含む。一部の実施形態では、前記Ｂ細胞応答の減少は、抗体産生の減少を含む。一部の実施形態では、前記寛容性は、サイトカイン産生の減少を含む。一部の実施形態では、前記寛容性は、自己免疫応答の減少を含む。一部の実施形態では、前記寛容性は、アレルギー応答の減少を含む。一部の実施形態では、前記寛容性は、移植組織に対する免疫応答の減少を含む。一部の実施形態では、前記寛容性は、前記ウイルスへの病原性免疫応答の減少を含む。一部の実施形態では、前記寛容性は、治療剤に対する免疫応答の減少を含む。一部の実施形態では、前記寛容性は、治療ビヒクルに対する免疫応答の減少を含む。
【００３４】
改変された免疫細胞が個体に投与される一部の実施形態では、前記方法は、上記のとおり改変された免疫細胞の少なくとも１回の（例えば、少なくとも２、３、４、５、６回またはそれより多い）さらなる投与をさらに含む。一部の実施形態では、任意の２回の投与の間の時間間隔（duration  of  time）は、少なくとも１日、１週、１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、６カ月または１年である。
【００３５】
本発明のある特定の態様は、上記の方法のいずれか１つで使用するための、前記狭窄部、免疫細胞、抗原および／または寛容原性因子を含む系に関する。本発明のある特定の態様は、上記の方法のいずれか１つで使用するための、前記狭窄部、免疫細胞および非機能的サイトカイン結合タンパク質をコードする化合物を含む系に関する。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】図１は、処置スケジュールの図解を示す。
【００３７】
【図２】図２は、４つの処置群からのマウスでの１２日目のＯＴ−Ｉ特異的Ｔ細胞およびＯＴ−ＩＩ特異的Ｔ細胞の数を示す。
【００３８】
【図３】図３は、高レベルのＩＦＮ−γを発現した脾臓Ｔ細胞のパーセント（左）およびＩＦＮ−γ産生レベル（右）を示す。
【００３９】
【図４】図４は、ＥＬＩＳｐｏｔにより決定したＩＦＮ−γ産生ＯＴ−Ｉ  Ｔ細胞の数を示す。
【００４０】
【図５】図５は、各処置群についてのＴＣＲＶａ２＋脾臓ＯＴ−Ｉ  Ｔ細胞およびリンパ節ＯＴ−ＩＩ  Ｔ細胞の代表的なフローサイトグラムを示す。
【００４１】
【図６】図６は、高いＩＦＮ−γおよびＣＤ４４抗原活性化マーカーを有するＯＴ−Ｉ細胞の代表的なフローサイトグラムを示す。
【００４２】
【図７】図７は、処置スケジュールの図解を示す。
【００４３】
【図８】図８は、４つの処置群からのマウスでの１２日目のＯＴ−Ｉ特異的Ｔ細胞およびＯＴ−ＩＩ特異的Ｔ細胞の数を示す。
【００４４】
【図９】図９は、高レベルのＩＦＮ−γを発現した脾臓Ｔ細胞のパーセントを示す。
【００４５】
【図１０】図１０は、ＣＤ８＋  Ｔ細胞と対比したＯＴ−Ｉ  Ｔ細胞数（上図）の、およびＣＤ４４抗原活性化マーカーと対比した高ＩＦＮ−γの細胞（下図）の代表的なフローサイトグラムを示す。
【００４６】
【図１１】図１１Ａおよび１１Ｂは、代表的な処置スケジュールの図解を示す。
【００４７】
【図１２】図１２Ａおよび１２Ｂは、代表的な処置スケジュールの図解を示す。
【発明を実施するための形態】
【００４８】
本発明は、免疫細胞を含有する細胞懸濁液を狭窄部に通し、該免疫細胞への抗原および／または寛容原性因子の送達を可能にすることによって、個体において寛容性を誘導するおよび／または免疫応答を抑制するための方法を提供する。一部の実施形態では、前記狭窄部は、マイクロ流体チャネルの中に含有される。一部の実施形態では、前記狭窄部は、孔であるかまたは孔の中に含有される。
【００４９】
本開示のある特定の態様は、個体において抗原への寛容性を誘導するおよび／または抗原への免疫応答を抑制するための方法であって、免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、抗原が該免疫細胞に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、ステップと、該免疫細胞を該個体に導入するステップとを含む方法に関する。一部の実施形態では、寛容原性細胞における前記抗原の提示は、該抗原への寛容性を誘導するおよび／または該抗原への免疫応答を抑制する。一部の実施形態では、前記抗原は、寛容原性環境で提示される。一部の実施形態では、前記抗原は、寛容原性環境でプロセシングされる。一部の実施形態では、前記寛容性および／または免疫抑制は、抗原特異的である。一部の実施形態では、複数の抗原への寛容性および／または免疫応答の抑制を含めて、前記寛容性および／または免疫抑制は非特異的である。
【００５０】
本開示のある特定の態様は、個体において抗原への寛容性を誘導するおよび／または抗原への免疫応答を抑制するための方法であって、免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、抗原および寛容原性因子が該免疫細胞に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、ステップと、該免疫細胞を該個体に導入し、それによって該抗原への寛容性を誘導するおよび／または該抗原への免疫応答を抑制するステップとを含む方法に関する。一部の実施形態では、前記抗原は、寛容原性環境で提示される。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、寛容原性環境を生成し、ここで、該寛容原性環境での該抗原の提示は、該抗原への寛容性を誘導するおよび／または該抗原への免疫応答を抑制する。一部の実施形態では、前記抗原は、寛容原性環境でプロセシングされる。一部の実施形態では、前記寛容性および／または免疫抑制は、抗原特異的である。一部の実施形態では、複数の抗原への寛容性および／または免疫応答の抑制を含めて、寛容性および／または免疫抑制は非特異的である。
【００５１】
本開示のある特定の態様は、個体において抗原への寛容性を誘導するおよび／または抗原への免疫応答を抑制するための方法であって、免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、寛容原性因子が該免疫細胞に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、ステップと、該免疫細胞を該個体に導入し、それによって抗原への寛容性を誘導するおよび／または抗原への免疫応答を抑制するステップとを含む方法に関する。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、寛容原性環境を生成し、ここで、該寛容原性環境での抗原の提示は、該抗原への寛容性を誘導するおよび／または該抗原への免疫応答を抑制する。一部の実施形態では、前記寛容性および／または免疫抑制は、抗原特異的である。一部の実施形態では、複数の抗原への寛容性および／または免疫応答の抑制を含めて、前記寛容性および／または免疫抑制は非特異的である。
【００５２】
本開示のある特定の態様は、寛容原性および／または免疫抑制抗原提示細胞を生成するための方法であって、該抗原提示細胞が狭窄部に通され、ここで、寛容原性因子が該抗原提示細胞に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、方法に関する。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、免疫調節因子（例えば、免疫賦活因子（例えば、共刺激分子）、免疫抑制因子または炎症性もしくは抗炎症分子）の発現および／または活性をモジュレートする。
Ｉ．一般技術
【００５３】
本明細書で記載または参照される技術および手順は、一般によく理解されており、当業者によって従来の方法論、例えば、Molecular  Cloning:  A  Laboratory  Manual（Sambrookら、第４版、Cold  Spring  Harbor  Laboratory  Press、Cold  Spring  Harbor、N.Y.、２０１２年）；Current  Protocols  in  Molecular  Biology（F.M.  Ausubelら編、２００３年）；Methods  in  Enzymologyシリーズ（Academic  Press,  Inc.）；PCR  2:  A  Practical  Approach（M.J.  MacPherson、B.D.  HamesおよびG.R.  Taylor編、１９９５年）；Antibodies,  A  Laboratory  Manual（HarlowおよびLane編、１９８８年）；Culture  of  Animal  Cells:  A  Manual  of  Basic  Technique  and  Specialized  Applications（R.I.  Freshney、第６版、J.  Wiley  and  Sons、２０１０年）；Oligonucleotide  Synthesis（M.J.  Gait編、１９８４年）；Methods  in  Molecular  Biology、Humana  Press；Cell  Biology:  A  Laboratory  Notebook（J.E.  Cellis編、Academic  Press、１９９８年）；Introduction  to  Cell  and  Tissue  Culture（J.P.  MatherおよびP.E.  Roberts、Plenum  Press、１９９８年）；Cell  and  Tissue  Culture:  Laboratory  Procedures（A.  Doyle、J.B.  GriffithsおよびD.G.  Newell編、J.  Wiley  and  Sons、１９９３〜８年）；Handbook  of  Experimental  Immunology（D.M.  WeirおよびC.C.  Blackwell編、１９９６年）；Gene  Transfer  Vectors  for  Mammalian  Cells（J.M.  MillerおよびM.P.  Calos編、１９８７年）；PCR:  The  Polymerase  Chain  Reaction（Mullisら編、１９９４年）；Current  Protocols  in  Immunology（J.E.  Coliganら編、１９９１年）；Short  Protocols  in  Molecular  Biology（Ausubelら編、J.  Wiley  and  Sons、２００２年）；Immunobiology（C.A.  Janewayら、２００４年）；Antibodies（P.  Finch、１９９７年）；Antibodies:  A  Practical  Approach（D.  Catty.編、IRL  Press、１９８８〜１９８９年）；Monoclonal  Antibodies:  A  Practical  Approach（P.  ShepherdおよびC.  Dean編、Oxford  University  Press、２０００年）；Using  Antibodies:  A  Laboratory  Manual（E.  HarlowおよびD.  Lane、Cold  Spring  Harbor  Laboratory  Press、１９９９年）；The  Antibodies（M.  ZanettiおよびJ.  D.  Capra編、Harwood  Academic  Publishers、１９９５年）；およびCancer:  Principles  and  Practice  of  Oncology（V.T.  DeVitaら編、J.B.  Lippincott  Company、２０１１年）に記載される広く利用される方法論などを使用して普通に用いられる。
ＩＩ．定義
【００５４】
この明細書の解釈のために、以下の定義が適用され、該当する限り、単数で使用される用語は複数形も含み、逆もまた同じである。下に示される任意の定義が参照により本明細書に組み込まれる任意の文献と矛盾する場合には、示される定義が優先される。
【００５５】
本明細書で使用する場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は、特に明記しない限り複数の参照物を含む。
【００５６】
本明細書に記載される本発明の態様および実施形態は、態様および実施形態を「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」および「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」ことを含むものと理解される。
【００５７】
本明細書で使用される用語「約」は、この技術分野の当業者に容易に分かる、それぞれの値の通常の誤差範囲を指す。本明細書で「約」のついた値またはパラメーターへの言及は、その値またはパラメーター自体を対象とする実施形態を含む（および記載する）。
【００５８】
本明細書で使用される用語「孔」は、材料の中の穴、裂け目、空洞、開口、亀裂、空隙または穿孔を限定されずに含む、開口部を指す。一部の例では、（示される場合）用語は本開示の表面の中の孔を指す。他の例では、（示される場合）孔は、細胞膜中の孔を指すことができる。
【００５９】
本明細書で使用される用語「膜」は、孔を含有する選択的障壁またはシートを指す。用語は、境界またはライニングとして作用する柔軟なシート様構造を含む。一部の例では、用語は、孔を含有する表面またはフィルターを指す。この用語は、用語「細胞膜」とは異なる。
【００６０】
本明細書で使用される用語「フィルター」は、孔を通した選択的通過を可能にする多孔性物品を指す。一部の例では、用語は、孔を含有する表面または膜を指す。
【００６１】
本明細書で使用される用語「不均一な」は、構造または組成が混成しているかまたは均一でない物を指す。一部の例では、用語は、所与の表面の中の様々なサイズ、形または分布を有する孔を指す。
【００６２】
本明細書で使用される用語「均一な」は、構造または組成全体が一貫しているかまたは均一である物を指す。一部の例では、用語は、所与の表面の中の一貫したサイズ、形または分布を有する孔を指す。
【００６３】
本明細書で使用される用語「異種」は、異なる生物体に由来する分子を指す。一部の例では、用語は、所与の生物体の中で通常は見出されないかまたは発現されない核酸またはタンパク質を指す。
【００６４】
本明細書で使用する場合、用語「阻害する」は、特定の標的の存在または活性を遮断する、低減する、排除する、さもなければ拮抗する作用を指すことができる。阻害は、部分的な阻害または完全な阻害を指すことができる。例えば、免疫応答を阻害することは、免疫応答の遮断、低減、排除または任意の他の拮抗につながる任意の作用を指すことができる。他の例では、核酸の発現の阻害には、これらに限定されないが、核酸の転写の低減、ｍＲＮＡ存在度の低減（例えば、ｍＲＮＡ転写サイレンシング）、ｍＲＮＡの分解、ｍＲＮＡ翻訳の阻害などを含めることができる。他の例では、タンパク質の発現の阻害には、これらに限定されないが、タンパク質をコードする核酸の転写の低減、タンパク質をコードするｍＲＮＡの安定性の低減、タンパク質の翻訳の阻害、タンパク質の安定性の低減などを含めることができる。
【００６５】
本明細書で使用する場合、用語「抑制する」は、特定の標的の存在または活性を低下させる、低減する、妨げる、制限する、減少させる、さもなければ減弱させる作用を指すことができる。抑制は、部分的な抑制または完全な抑制を指すことができる。例えば、免疫応答を抑制することは、免疫応答を低下させる、低減する、妨げる、制限する、減少させる、さもなければ減弱させることにつながる任意の作用を指すことができる。他の例では、核酸の発現の抑制には、これらに限定されないが、核酸の転写の低減、ｍＲＮＡ存在度の低減（例えば、ｍＲＮＡ転写サイレンシング）、ｍＲＮＡの分解、ｍＲＮＡ翻訳の阻害などを含めることができる。他の例では、タンパク質の発現の抑制には、これらに限定されないが、タンパク質をコードする核酸の転写の低減、タンパク質をコードするｍＲＮＡの安定性の低減、タンパク質の翻訳の阻害、タンパク質の安定性の低減などを含めることができる。
【００６６】
本明細書で使用する場合、用語「増強する」は、特定の標的の存在または活性を向上させる、増進する、強化する、さもなければ増加させる行為を指すことができる。例えば、免疫応答を増強することは、免疫応答を向上させる、増進する、強化する、さもなければ増加させることにつながる任意の作用を指すことができる。他の例では、核酸の発現を増強することには、これらに限定されないが、核酸の転写の増加、ｍＲＮＡ存在度の増加（例えば、ｍＲＮＡの転写の増加）、ｍＲＮＡの分解の減少、ｍＲＮＡ翻訳の増加などを含めることができる。他の例では、タンパク質の発現を増強することには、これらに限定されないが、タンパク質をコードする核酸の転写の増加、タンパク質をコードするｍＲＮＡの安定性の増加、タンパク質の翻訳の増加、タンパク質の安定性の増加などを含めることができる。
【００６７】
本明細書で使用する場合、用語「誘導する」は、結果を開始する、促進する、刺激する、確立する、さもなければ生じさせる作用を指すことができる。例えば、免疫応答を誘導することは、所望の免疫応答を開始する、促進する、刺激する、確立する、さもなければ生じさせることにつながる任意の作用を指すことができる。他の例では、核酸の発現を誘導することには、これらに限定されないが、核酸の転写の開始、ｍＲＮＡの翻訳の開始などを含めることができる。他の例では、タンパク質の発現を誘導することには、これらに限定されないが、タンパク質をコードする核酸の転写の増加、タンパク質をコードするｍＲＮＡの安定性の増加、タンパク質の翻訳の増加、タンパク質の安定性の増加などを含めることができる。
【００６８】
本明細書で使用される用語「同種」は、同じ生物体に由来する分子を指す。一部の例では、用語は、所与の生物体の中で通常見出されるかまたは発現される核酸またはタンパク質を指す。
【００６９】
本明細書で使用される用語「ポリヌクレオチド」または「核酸」は、リボヌクレオチドおよびデオキシリボヌクレオチドを含む任意の長さのヌクレオチドのポリマー形を指す。したがって、この用語には、これらに限定されないが、一本鎖、二本鎖もしくは多重鎖のＤＮＡもしくはＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッド、またはプリン塩基およびピリミジン塩基を含むポリマー、または他の天然の、化学的もしくは生化学的に修飾された、非天然のもしくは誘導体化されたヌクレオチド塩基が含まれる。ポリヌクレオチドの骨格は、（ＲＮＡまたはＤＮＡで一般的に見出され得る）糖およびリン酸基、または修飾もしくは置換された糖もしくはリン酸基を含むことができる。ポリヌクレオチドの骨格は、ペプチド結合によって連結される、Ｎ−（２−アミノエチル）−グリシンなどの反復単位を含むことができる（すなわち、ペプチド核酸）。あるいは、ポリヌクレオチドの骨格は、ホスホロアミデートなどの合成サブユニットのポリマーを含むことができ、したがって、オリゴデオキシヌクレオシドホスホロアミデート（Ｐ−ＮＨ２）または混合されたホスホロアミデート−ホスホジエステルオリゴマーであってよい。さらに、二本鎖ポリヌクレオチドは、相補鎖を合成し、適当な条件下で鎖をアニールすることによるか、または適当なプライマーによるＤＮＡポリメラーゼを使用して相補鎖を新規に合成することによるかのいずれかで、化学合成の一本鎖ポリヌクレオチド生成物から得ることができる。
【００７０】
用語「ポリペプチド」および「タンパク質」は、アミノ酸残基のポリマーを指すために互換的に使用され、最小長に限定されない。アミノ酸残基のそのようなポリマーは、天然または非天然のアミノ酸残基を含有することができ、これらに限定されないが、アミノ酸残基のペプチド、オリゴペプチド、二量体、三量体および多量体が含まれる。完全長タンパク質およびその断片の両方は、定義により包含される。用語は、ポリペプチドの発現後の修飾、例えば、グリコシル化、シアリル化、アセチル化、リン酸化なども含む。さらに、本発明のために、「ポリペプチド」は、タンパク質が所望の活性を維持する限り、天然の配列への改変、例えば欠失、付加および置換（一般的に本来保存的な）を含むタンパク質を指す。これらの改変は、部位特異的変異誘発を通じて意図的であってもよく、または、例えばタンパク質を産生する宿主の変異もしくはＰＣＲ増幅によるエラーを通じて偶然であってもよい。
【００７１】
本明細書に記載される構造的および機能的特徴のいずれかについて、これらの特徴を決定する方法は、当技術分野で公知である。
ＩＩＩ．免疫抑制および寛容性
【００７２】
ある特定の態様では、本発明は、個体において免疫応答を抑制するおよび／または寛容性を誘導するための方法であって、免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、抗原および／または寛容原性因子が該免疫細胞に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こし、寛容原性または免疫抑制免疫細胞が生成される、ステップと、該免疫細胞を該個体に導入するステップであって、該抗原の提示が、該抗原への寛容性を誘導するおよび／または該抗原への免疫応答を抑制する、ステップとを含む方法を提供する。
【００７３】
寛容原性免疫細胞は、寛容原性の様式で抗原を提示する（例えば、該寛容原性免疫細胞による該抗原の提示は該抗原への寛容性を誘導する）ことが可能であり、または、別の細胞、例えば別の抗原提示細胞に寛容原性表現型を付与することが可能であり、それによって寛容原性抗原提示細胞を生成する免疫細胞として特徴付けられる。免疫抑制免疫細胞は、免疫抑制性の様式で抗原を提示する（例えば、免疫抑制免疫細胞による抗原の提示は該抗原への免疫応答を抑制する）ことが可能であり、または、別の細胞、例えば別の抗原提示細胞に免疫抑制表現型を付与することが可能であり、それによって免疫抑制抗原提示細胞を生成する免疫細胞として特徴付けられる。
【００７４】
一部の実施形態では、本明細書に記載される寛容原性および／もしくは免疫抑制免疫細胞、またはその前駆体は、アジュバントと接触しなかった。一部の実施形態では、アジュバントは、パターン認識受容体（ＰＲＲ）（例えば、ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）、ＮＯＤ様受容体（ＮＬＲ）、ＲＩＧ−Ｉ様受容体（ＲＬＲ）およびＣ型レクチン受容体（ＣＬＲ））、および病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）のためのリガンドを含む。一部の実施形態では、アジュバントは、ＴＬＲ３およびＲＬＲリガンド（例えば、ポリ（Ｉ：Ｃ）などのｄｓＲＮＡの合成類似体）、ＴＬＲ４リガンド（例えば、リポ多糖（ＬＰＳ）、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬＡ））、ＴＬＲ５リガンド（例えば、細菌性フラジェリン（単独または抗原に融合））、ＴＬＲ７／８リガンド（例えば、イミダゾキノリン、例えばイミキモド、ガーディキモド、およびＲ８４８）、ＴＬＲ９リガンド（例えば、特異的ＣｐＧモチーフを含有するオリゴデオキシヌクレオチド、例えば、ＯＤＮ  １８２６およびＯＤＮ  ２００６などのＣｐＧ  ＯＤＮ）、ＮＯＤ２リガンド（例えば、細菌細胞壁断片、例えばムラミルジペプチド（ＭＤＰ））、ミョウバン、油中水型エマルジョン（フロインド不完全アジュバント、ＭＦ５９）、ｒｈＩＬ−２、抗ＣＤ４０またはＣＤ４０Ｌ、ＩＬ−１２ならびに環状ジヌクレオチドからなる群から選択される。
【００７５】
一部の実施形態では、本明細書に記載される寛容原性および／または免疫抑制免疫細胞は、非寛容原性および／または非免疫抑制前駆体と比較して１つまたは複数の共刺激シグナルを提供する能力の低減を含む。一部の実施形態では、ＣＤ４０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ５４、ＣＤ８３、ＣＤ７９またはＩＣＯＳリガンドを通したシグナル伝達を含む共刺激シグナル。
【００７６】
一部の実施形態では、本明細書に記載される寛容原性および／または免疫抑制免疫細胞は、非寛容原性および／または非免疫抑制前駆体と比較して１つまたは複数の炎症性シグナルを提供する能力の低減を含む。一部の実施形態では、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ−ガンマ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、ＮＦ−κＢ、インターフェロン調節因子（ＩＲＦ）またはＪＡＫ−ＳＴＡＴを通したシグナル伝達を含む炎症性シグナル。
【００７７】
免疫寛容は、寛容性が誘導される抗原によるチャレンジへの、免疫学的不応答性である。寛容性は、寛容性誘導抗原による以降のチャレンジに対して被験体が不応答性であるときに実証される。寛容性は、自己反応性細胞のアポトーシス、アネルギーの誘導またはリンパ球表現型の偏向を含む、いくつかの異なる機構によって媒介されることがある。一部の実施形態では、前記寛容性は、特異抗原への免疫応答の脱活性化を引き起こすＴ細胞非応答性を含むことができる。寛容性は、免疫抑制サイトカインの分泌を通した調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）によって、および細胞表面分子または細胞傷害性因子との接触依存性相互作用を介して媒介される場合もある。寛容原性機構の欠陥は、自己免疫疾患、移植拒絶反応、抗薬物応答およびウイルス感染への病原性応答に寄与し得る。免疫抑制は、免疫応答の活性の減少である。例えば、免疫抑制には、限定されずに、抗原によるチャレンジへの応答性の減少、免疫細胞活性化および増殖の減少、モジュレートされたサイトカイン産生および／または分泌、免疫細胞生存の減少、または免疫細胞エフェクター機能の低下を含めることができる。
【００７８】
一部の実施形態では、本発明は、免疫細胞への送達のための方法であって、該細胞が哺乳動物細胞である、方法を提供する。一部の実施形態では、前記細胞は、初代細胞、または細胞系細胞である。一部の実施形態では、前記細胞は、血液細胞である。一部の実施形態では、前記血液細胞は、免疫細胞である。一部の実施形態では、前記免疫細胞は、リンパ球である。一部の実施形態では、前記免疫細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、樹状細胞（ＤＣ）、ＮＫＴ細胞、肥満細胞、単球、マクロファージ、好塩基球、好酸球または好中球である。一部の実施形態では、前記免疫細胞は、Ｔ細胞またはＢ細胞などの適応免疫細胞である。一部の実施形態では、前記免疫細胞は、ｅｘ  ｖｉｖｏで生成される細胞（例えば、ｅｘ  ｖｉｖｏで生成される樹状細胞）である。例示的なｅｘ  ｖｉｖｏで生成される細胞には、幹細胞または前駆体細胞（例えば、自己幹細胞または前駆体細胞）から生成される免疫細胞が含まれる。一部の実施形態では、前記免疫細胞は、自然免疫細胞である。例示的な自然免疫細胞には、自然リンパ球（ＩＬＣ１、ＩＬＣ２、ＩＬＣ３）、好塩基球、好酸球、肥満細胞、ＮＫ細胞、好中球および単球が含まれる。一部の実施形態では、前記免疫細胞は、記憶細胞である。一部の実施形態では、前記免疫細胞は、初代ヒトＴ細胞である。一部の実施形態では、前記細胞は、マウス細胞、イヌ細胞、ネコ細胞、ウマ細胞、ラット細胞、ヤギ細胞、サル細胞またはウサギ細胞である。一部の実施形態では、前記細胞は、ヒト細胞である。一部の実施形態では、前記細胞懸濁液は、非哺乳動物細胞を含む。一部の実施形態では、前記細胞は、ニワトリ細胞、カエル細胞、昆虫細胞、魚類細胞または線虫細胞である。
【００７９】
ある特定の態様では、本発明は、個体において抗原への寛容性を誘導するための方法であって、免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、該細胞と接触した抗原が該免疫細胞に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、ステップと、該免疫細胞を該個体に導入するステップであって、該免疫細胞が寛容原性免疫細胞であり、該抗原の提示が該抗原への寛容性を誘導する、ステップとを含む方法を提供する。一部の実施形態では、前記抗原は、前記寛容原性免疫細胞によって提示されて、該抗原への寛容性を誘導する。一部の実施形態では、前記寛容原性免疫細胞は、別の抗原提示細胞に寛容原性表現型を付与し、それによって寛容原性抗原提示細胞を生成し、前記抗原は、該寛容原性抗原提示細胞によって提示されて、該抗原への寛容性を誘導する。一部の実施形態では、前記寛容性は、抗原特異的である。
【００８０】
ある特定の態様では、本発明は、個体において抗原への寛容性を誘導するための方法であって、免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、該細胞と接触した抗原および寛容原性因子が該免疫細胞に入り、それによって、該抗原を含む寛容原性免疫細胞を生成するように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こすステップと、該寛容原性免疫細胞を該個体に導入するステップであって、該抗原の提示が該抗原への寛容性を誘導する、ステップとを含む方法を提供する。一部の実施形態では、前記抗原は、前記寛容原性免疫細胞によって提示されて、該抗原への寛容性を誘導する。一部の実施形態では、前記寛容原性免疫細胞は、別の抗原提示細胞に寛容原性表現型を付与し、それによって寛容原性抗原提示細胞を生成し、前記抗原は、該寛容原性抗原提示細胞によって提示されて、該抗原への寛容性を誘導する。一部の実施形態では、前記寛容性は、抗原特異的である。
【００８１】
ある特定の態様では、本発明は、個体において抗原への免疫応答を抑制するための方法であって、免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、該細胞と接触した抗原が該免疫細胞に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、ステップと、該免疫抑制免疫細胞を該個体に導入するステップであって、該免疫細胞が免疫抑制免疫細胞であり、該抗原の提示が該抗原への免疫応答を抑制する、ステップとを含む方法を提供する。一部の実施形態では、前記抗原は、前記免疫抑制免疫細胞によって提示されて、該抗原への免疫応答を抑制する。一部の実施形態では、前記免疫抑制免疫細胞は、別の抗原提示細胞に免疫抑制表現型を付与し、それによって免疫抑制抗原提示細胞を生成し、前記抗原は、該免疫抑制抗原提示細胞によって提示されて、該抗原への免疫応答を抑制する。一部の実施形態では、前記免疫抑制は、抗原特異的である。
【００８２】
ある特定の態様では、本発明は、個体において抗原への免疫応答を抑制するための方法であって、免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、該細胞と接触した抗原および寛容原性因子が該免疫細胞に入り、それによって、該抗原を含む免疫抑制免疫細胞を生成するように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、ステップと、該免疫抑制免疫細胞を該個体に導入するステップであって、該抗原の提示が該抗原への免疫応答を抑制する、ステップとを含む方法を提供する。一部の実施形態では、前記抗原は、前記免疫抑制免疫細胞によって提示されて、該抗原への免疫応答を抑制する。一部の実施形態では、前記免疫抑制免疫細胞は、別の抗原提示細胞に免疫抑制表現型を付与し、それによって免疫抑制抗原提示細胞を生成し、前記抗原は、該免疫抑制抗原提示細胞によって提示されて、該抗原への免疫応答を抑制する。一部の実施形態では、前記免疫抑制は、抗原特異的である。
【００８３】
ある特定の態様では、本発明は、個体において抗原への寛容性を誘導するための方法であって、寛容原性免疫細胞を該個体に導入するステップであって、該寛容原性免疫細胞が抗原を含み、該抗原の提示が該抗原への寛容性を誘導するステップを含み、ここで、該寛容原性免疫細胞またはその前駆体を狭窄部に通すことによって該抗原が該寛容原性免疫細胞に導入され、ここで、該抗原が該寛容原性免疫細胞またはその前駆体に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、方法を提供する。一部の実施形態では、前記抗原は、前記寛容原性免疫細胞によって提示されて、該抗原への寛容性を誘導する。一部の実施形態では、前記寛容原性免疫細胞は、別の抗原提示細胞に寛容原性表現型を付与し、それによって寛容原性抗原提示細胞を生成し、前記抗原は、寛容原性抗原提示細胞によって提示されて、該抗原への寛容性を誘導する。一部の実施形態では、前記寛容性は、抗原特異的である。
【００８４】
ある特定の態様では、本発明は、個体において抗原への寛容性を誘導するための方法であって、寛容原性免疫細胞を該個体に導入するステップであって、該寛容原性免疫細胞が抗原および寛容原性因子を含み、該抗原の提示が該抗原への寛容性を誘導するステップを含み、該寛容原性免疫細胞またはその前駆体を狭窄部に通すことによって該抗原および該寛容原性因子が該寛容原性免疫細胞に導入され、ここで、該抗原および該寛容原性因子が該寛容原性免疫細胞またはその前駆体に入るように、該狭窄部は該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、方法を提供する。一部の実施形態では、前記抗原は、前記寛容原性免疫細胞によって提示されて、該抗原への寛容性を誘導する。一部の実施形態では、前記寛容原性免疫細胞は、別の抗原提示細胞に寛容原性表現型を付与し、それによって寛容原性抗原提示細胞を生成し、前記抗原は、該寛容原性抗原提示細胞によって提示されて、該抗原への寛容性を誘導する。一部の実施形態では、前記寛容性は、抗原特異的である。
【００８５】
ある特定の態様では、本発明は、個体において抗原への免疫応答を抑制するための方法であって、免疫抑制免疫細胞を該個体に導入するステップであって、該免疫抑制免疫細胞が抗原を含み、該抗原の提示が該抗原への免疫応答を抑制するステップを含み、該免疫抑制免疫細胞またはその前駆体を狭窄部に通すことによって該抗原が該免疫抑制免疫細胞に導入され、ここで、該抗原が該免疫抑制免疫細胞またはその前駆体に入るように、該狭窄部は該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、方法を提供する。一部の実施形態では、前記抗原は、前記免疫抑制免疫細胞によって提示されて、該抗原への免疫応答を抑制する。一部の実施形態では、前記免疫抑制免疫細胞は、別の抗原提示細胞に免疫抑制表現型を付与し、それによって免疫抑制抗原提示細胞を生成し、前記抗原は、該免疫抑制抗原提示細胞によって提示されて、該抗原への免疫応答を抑制する。一部の実施形態では、前記免疫抑制は、抗原特異的である。
【００８６】
ある特定の態様では、本発明は、個体において抗原への免疫応答を抑制するための方法であって、免疫抑制免疫細胞を該個体に導入するステップであって、該免疫抑制免疫細胞が抗原および寛容原性因子を含み、該抗原の提示が該抗原への免疫応答を抑制するステップを含み、該免疫抑制免疫細胞またはその前駆体を狭窄部に通すことによって該抗原および該寛容原性因子が該免疫抑制免疫細胞に導入され、ここで、該抗原および該寛容原性因子が該免疫抑制免疫細胞またはその前駆体に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、方法を提供する。一部の実施形態では、前記抗原は、前記免疫抑制免疫細胞によって提示されて、該抗原への免疫応答を抑制する。一部の実施形態では、前記免疫抑制免疫細胞は、別の抗原提示細胞に免疫抑制表現型を付与し、それによって免疫抑制抗原提示細胞を生成し、前記抗原は、前記免疫抑制抗原提示細胞によって提示されて、該抗原への免疫応答を抑制する。一部の実施形態では、前記免疫抑制は、抗原特異的である。
【００８７】
ある特定の態様では、本発明は、寛容原性免疫細胞を生成するための方法であって、免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、該細胞と接触した寛容原性因子が該免疫細胞に入り、それによって該寛容原性免疫細胞を生成するように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こすステップを含む、方法を提供する。ある特定の態様では、本発明は、寛容原性抗原提示免疫細胞を生成するための方法であって、該寛容原性免疫細胞が第２の狭窄部にさらに通され、ここで、該細胞と接触した抗原が該免疫細胞に入るように、該第２の狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こすステップを含み、ここで、該抗原が該寛容原性免疫細胞によって提示される、方法を提供する。
【００８８】
ある特定の態様では、本発明は、免疫抑制免疫細胞を生成するための方法であって、免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、該細胞と接触した寛容原性因子が該免疫細胞に入り、それによって該免疫抑制免疫細胞を生成するように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こすステップを含む、方法を提供する。ある特定の態様では、本発明は、免疫抑制抗原提示免疫細胞を生成するための方法であって、前記免疫抑制免疫細胞が第２の狭窄部にさらに通され、該細胞と接触した抗原が該免疫細胞に入るように、該第２の狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こすステップを含み、ここで、該抗原が該免疫抑制免疫細胞によって提示される、方法を提供する。
【００８９】
一部の実施形態では、前記免疫抑制および／または寛容性は、免疫調節因子（例えば、共刺激分子、免疫抑制因子または炎症性もしくは抗炎症分子）の発現および／または活性のモジュレーションを含む。一部の実施形態では、前記免疫抑制および／または寛容性は、免疫賦活因子（例えば、共刺激分子）の発現および／もしくは活性の阻害、免疫抑制因子の発現および／もしくは活性の増強、炎症性分子の発現および／もしくは活性の阻害、ならびに／または抗炎症分子の発現および／もしくは活性の増強を含む。
【００９０】
一部の実施形態では、前記免疫抑制および／または寛容性は、免疫賦活因子（例えば、共刺激分子）の発現および／または活性の阻害を含む。一部の実施形態では、前記免疫賦活因子は、共刺激分子である。最適なＴ細胞増殖および分化を刺激するためにＴＣＲシグナル伝達を持続させ、統合するために、共刺激分子とそれらのリガンドの間の相互作用が重要である。一部の実施形態では、前記免疫抑制および／または寛容性は、前記共刺激分子の発現の低下を含む。抗原提示細胞で発現される例示的な共刺激分子には、限定されずに、ＣＤ４０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ５４、ＣＤ８３、ＣＤ７９またはＩＣＯＳリガンドが含まれる。一部の実施形態では、前記共刺激分子は、ＣＤ８０またはＣＤ８６である。一部の実施形態では、前記免疫抑制および／または寛容性は、前記共刺激分子を発現するかまたはその発現をモジュレートする核酸の発現の阻害を含む。一部の実施形態では、前記共刺激分子を発現するかまたはその発現をモジュレートする核酸は欠失している。一部の実施形態では、前記共刺激分子を発現するかまたはその発現をモジュレートする核酸の欠失は、遺伝子編集を介して達成される。一部の実施形態では、前記免疫抑制および／または寛容性は、前記共刺激分子の阻害を含む。一部の実施形態では、前記免疫抑制および／または寛容性は、前記共刺激分子の発現または機能の阻害を含む。一部の実施形態では、前記免疫抑制および／または寛容性は、前記共刺激分子の発現を抑制する転写レギュレーターの活性の増加を含む。一部の実施形態では、前記免疫抑制および／または寛容性は、前記共刺激分子の発現を抑制するタンパク質インヒビターの活性の増加を含む。一部の実施形態では、前記免疫抑制および／または寛容性は、前記共刺激分子の分解を含む。一部の実施形態では、前記免疫抑制および／または寛容性は、破壊のための共刺激分子の標識を含む。例えば、免疫抑制および／または寛容性は、前記共刺激分子のユビキチン化を含むことができ、それによってそれを破壊の標的にする。
【００９１】
一部の実施形態では、前記免疫抑制および／または寛容性は、免疫抑制因子の発現および／または活性の増強を含む。一部の実施形態では、前記免疫抑制因子は、共阻害分子、転写レギュレーターまたは免疫抑制分子である。共阻害分子は、リンパ球の活性化を負に調節する。例示的な共阻害分子には、限定されずに、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＨＶＥＭ、Ｂ７−Ｈ３、ＴＲＡＩＬ、免疫グロブリン様転写物（ＩＬＴ）受容体（ＩＬＴ２、ＩＬＴ３、ＩＬＴ４）、ＦａｓＬ、ＣＴＬＡ４、ＣＤ３９、ＣＤ７３およびＢ７−Ｈ４が含まれる。一部の実施形態では、前記共阻害分子は、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２である。一部の実施形態では、前記免疫抑制および／または寛容性は、前記共阻害分子の活性の増加を含む。一部の実施形態では、前記免疫抑制および／または寛容性は、共阻害分子の発現の増加を含む。一部の実施形態では、前記免疫抑制および／または寛容性は、前記共阻害分子の発現を増強する転写レギュレーターの活性の増加を含む。一部の実施形態では、前記免疫抑制および／または寛容性は、前記共阻害分子の発現を増加させるポリペプチドの活性の増加を含む。一部の実施形態では、前記免疫抑制および／または寛容性は、共阻害分子のインヒビターの阻害を含む。
【００９２】
一部の実施形態では、前記免疫抑制および／または寛容性は、免疫抑制分子の発現および／または活性の増加を含む。例示的な免疫抑制分子には、限定されずに、アルギナーゼ−１（ＡＲＧ１）、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）、誘導性一酸化窒素シンターゼ（ｉＮＯＳ）、一酸化窒素（ＮＯ）、一酸化窒素シンターゼ２（ＮＯＳ２）、ＴＳＬＰ、血管作動性腸管ペプチド（ＶＩＰ）、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）、ＴＧＦβ、ＩＦＮα、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３およびＩＬ−３５が含まれる。一部の実施形態では、前記免疫抑制分子は、ＮＯまたはＩＤＯである。一部の実施形態では、前記免疫抑制および／または寛容性は、前記免疫抑制分子の活性の増加を含む。一部の実施形態では、前記免疫抑制および／または寛容性は、前記免疫抑制分子の発現を増強する転写レギュレーターの活性の増加を含む。一部の実施形態では、前記免疫抑制および／または寛容性は、前記免疫抑制分子の発現を増強するポリペプチドの活性の増加を含む。一部の実施形態では、前記免疫抑制および／または寛容性は、免疫抑制分子の負のレギュレーターの阻害を含む。
【００９３】
一部の実施形態では、前記免疫抑制および／または寛容性は、炎症性分子の発現および／または活性の阻害を含む。一部の実施形態では、前記炎症性分子は、炎症性サイトカインである。一部の実施形態では、前記炎症性サイトカインは、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、ＩＬ−１２およびＩＬ−１８、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ−ガンマ）ならびに顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）から選択される。一部の実施形態では、前記炎症性分子は、炎症性転写因子である。一部の実施形態では、前記免疫抑制および／または寛容性は、前記炎症性転写因子の阻害を含む。一部の実施形態では、前記免疫抑制および／または寛容性は、炎症性転写因子の発現の低下を含む。一部の実施形態では、前記炎症性転写因子は、ＮＦ−κＢ、インターフェロン調節因子（ＩＲＦ）、またはＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達経路に関連した分子である。前記ＮＦ−κＢ経路は、サイトカイン、ケモカインおよび接着分子を含む炎症誘発性遺伝子の発現を媒介する原型的な炎症誘発性シグナル伝達経路である。インターフェロン調節因子（ＩＲＦ）は、炎症誘発性遺伝子の発現を調節することができる転写因子のファミリーを構成する。前記ＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達経路は、細胞外サイトカインシグナルから核に情報を伝達し、免疫細胞の増殖および分化に関与する遺伝子のＤＮＡ転写および発現をもたらす。前記ＪＡＫ−ＳＴＡＴ系は、細胞表面受容体、ヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）、ならびにシグナル伝達兼転写活性化因子（ＳＴＡＴ）タンパク質からなる。例示的なＪＡＫ−ＳＴＡＴ分子には、限定されずに、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、Ｔｙｋ２、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５（ＳＴＡＴ５ＡおよびＳＴＡＴ５Ｂ）およびＳＴＡＴ６が含まれる。一部の実施形態では、前記免疫抑制および／または寛容性は、サイトカインシグナル伝達（ＳＯＣＳ）タンパク質のサプレッサーの発現の増強を含む。ＳＯＣＳタンパク質は、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路を通したシグナル伝達を阻害することができる。一部の実施形態では、前記免疫抑制および／または寛容性は、炎症性転写因子をコードする核酸の発現の阻害を含む。一部の実施形態では、前記炎症性転写因子をコードする核酸は、欠失している。一部の実施形態では、前記免疫抑制および／または寛容性は、前記炎症性転写因子の発現を抑制する転写レギュレーターの活性の増加を含む。一部の実施形態では、前記免疫抑制および／または寛容性は、前記炎症性転写因子の発現を抑制するタンパク質インヒビターの活性の増加を含む。
【００９４】
一部の実施形態では、前記免疫抑制および／または寛容性は、抗炎症分子の発現および／または活性の増強を含む。一部の実施形態では、前記抗炎症分子は、抗炎症性サイトカインである。一部の実施形態では、前記抗炎症性サイトカインは、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＦＮ−アルファおよびトランスフォーミング成長因子ベータ（ＴＧＦβ）から選択される。一部の実施形態では、前記抗炎症分子は、抗炎症性転写因子である。一部の実施形態では、前記免疫抑制および／または寛容性は、抗炎症性転写因子の増強を含む。一部の実施形態では、前記免疫抑制および／または寛容性は、抗炎症性転写因子の発現の増加を含む。一部の実施形態では、前記免疫抑制および／または寛容性は、前記抗炎症性転写因子をコードする核酸の発現の増強を含む。一部の実施形態では、前記抗炎症性転写因子をコードする核酸は、欠失している。一部の実施形態では、前記免疫抑制および／または寛容性は、前記抗炎症性転写因子の発現を抑制する転写レギュレーターの活性の低下を含む。一部の実施形態では、前記免疫抑制および／または寛容性は、前記抗炎症性転写因子の発現を抑制するタンパク質インヒビターの活性の低下を含む。
【００９５】
ある特定の態様では、本発明は、抗原を含む寛容原性抗原提示細胞を生成するための方法であって、寛容原性抗原提示細胞が狭窄部に通され、ここで、該抗原が該寛容原性抗原提示細胞に入り、それによって該抗原を含む該寛容原性抗原提示細胞を生成するように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、方法を提供する。
【００９６】
ある特定の態様では、本発明は、寛容原性抗原提示細胞を生成するための方法であって、抗原提示細胞が狭窄部に通され、ここで、寛容原性因子が該抗原提示細胞に入り、それによって該寛容原性抗原提示細胞を生成するように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、方法を提供する。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、免疫調節因子（例えば、免疫賦活因子（例えば、共刺激分子）、免疫抑制因子または炎症性もしくは抗炎症分子）の発現および／または活性をモジュレートする。
【００９７】
ある特定の態様では、本発明は、抗原を含む寛容原性抗原提示細胞を生成するための方法であって、抗原提示細胞が狭窄部に通され、ここで、該抗原および寛容原性因子が抗原提示細胞に入り、それによって該抗原を含む寛容原性抗原提示細胞を生成するように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、方法を提供する。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、免疫調節因子（例えば、免疫賦活因子（例えば、共刺激分子）、免疫抑制因子または炎症性もしくは抗炎症分子）の発現および／または活性をモジュレートする。
【００９８】
ある特定の態様では、本発明は、抗原を含む免疫抑制抗原提示細胞を生成するための方法であって、免疫抑制抗原提示細胞が狭窄部に通され、ここで、該抗原が該免疫抑制抗原提示細胞に入り、それによって該抗原を含む該免疫抑制抗原提示細胞を生成するように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、方法を提供する。
【００９９】
ある特定の態様では、本発明は、免疫抑制抗原提示細胞を生成するための方法であって、抗原提示細胞が狭窄部に通され、ここで、寛容原性因子が該抗原提示細胞に入り、それによって該免疫抑制抗原提示細胞を生成するように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、方法を提供する。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、免疫調節因子（例えば、免疫賦活因子（例えば、共刺激分子）、免疫抑制因子または炎症性もしくは抗炎症分子）の発現および／または活性をモジュレートする。
【０１００】
ある特定の態様では、本発明は、抗原を含む免疫抑制抗原提示細胞を生成するための方法であって、抗原提示細胞が狭窄部に通され、ここで、該抗原および寛容原性因子が該抗原提示細胞に入り、それによって該抗原を含む該免疫抑制抗原提示細胞を生成するように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、方法を提供する。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、免疫調節因子（例えば、免疫賦活因子（例えば、共刺激分子）、免疫抑制因子または炎症性もしくは抗炎症分子）の発現および／または活性をモジュレートする。
【０１０１】
ある特定の態様では、本発明は、第１の免疫細胞（例えば、寛容原性免疫細胞）に抗原を送達するための方法であって、該第１の免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、該抗原が該細胞に入るように、該狭窄部が該第１の免疫細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こすステップを含み、ここで、該細胞懸濁液が該抗原と接触する、方法を提供する。一部の実施形態では、寛容原性因子は、本明細書に開示される方法によって前記第１の免疫細胞に送達され、それによって該第１の免疫細胞に寛容原性表現型を付与する。一部の実施形態では、前記抗原は、寛容原性の様式で、例えば前記第１の免疫細胞によって提示される。一部の実施形態では、前記抗原は、寛容原性の様式で別の免疫細胞、例えば第２の免疫細胞、例えば第１の免疫細胞の特性によって付与される寛容原性表現型を有する免疫細胞、または、前記第１の免疫細胞から独立して寛容原性表現型を有する免疫細胞によって提示される。一部の実施形態では、前記抗原はプロセシングされ、寛容原性免疫細胞によって（例えば、前記第１または第２の免疫細胞によって）クラスＩ  ＭＨＣによって提示される。一部の実施形態では、前記抗原はプロセシングされ、寛容原性免疫細胞によって（例えば、前記第１または第２の免疫細胞によって）クラスＩＩ  ＭＨＣによって提示される。
【０１０２】
ある特定の態様では、本発明は、寛容原性表現型を生成する寛容原性因子を第１の免疫細胞に送達するための方法であって、該第１の免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、該寛容原性因子が該細胞に入るように、該狭窄部が該免疫細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こすステップを含み、ここで、該細胞懸濁液が該寛容原性因子と接触し、それによって寛容原性免疫細胞を生成する、方法を提供する。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、免疫調節因子（例えば、免疫賦活因子（例えば、共刺激分子）、免疫抑制因子または炎症性もしくは抗炎症分子）の発現および／または活性をモジュレートする。一部の実施形態では、抗原は、前記第１の免疫細胞または前記寛容原性免疫細胞による飲食運動によって取り込まれる。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法のいずれかによって、抗原は前記第１の免疫細胞または前記寛容原性免疫細胞に送達される。一部の実施形態では、前記抗原は、寛容原性の様式で、例えば前記寛容原性免疫細胞によって提示される。一部の実施形態では、前記抗原は、寛容原性の様式で別の免疫細胞、例えば第２の免疫細胞、例えば前記寛容原性免疫細胞の特性によって付与される寛容原性表現型を有する免疫細胞、または、該寛容原性免疫細胞から独立して寛容原性表現型を有する免疫細胞によって提示される。一部の実施形態では、前記抗原はプロセシングされ、寛容原性免疫細胞によって（例えば、該寛容原性免疫細胞または前記第２の免疫細胞によって）クラスＩ  ＭＨＣによって提示される。一部の実施形態では、前記抗原はプロセシングされ、寛容原性免疫細胞によって（例えば、該寛容原性免疫細胞または前記第２の免疫細胞によって）クラスＩＩ  ＭＨＣによって提示される。
【０１０３】
ある特定の態様では、本発明は、抗原および寛容原性表現型を生成する寛容原性因子を第１の免疫細胞に送達するための方法であって、該第１の免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、該抗原および該寛容原性因子が該細胞に入るように、該狭窄部が該免疫細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こすステップを含み、ここで、該細胞懸濁液が該抗原および該寛容原性因子と接触し、それによって該抗原を含む該寛容原性免疫細胞を生成する、方法を提供する。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、免疫調節因子（例えば、免疫賦活因子（例えば、共刺激分子）、免疫抑制因子または炎症性もしくは抗炎症分子）の発現および／または活性をモジュレートする。一部の実施形態では、前記抗原は、寛容原性の様式で、例えば前記寛容原性免疫細胞によって提示される。一部の実施形態では、前記抗原は、寛容原性の様式で別の免疫細胞、例えば第２の免疫細胞、例えば前記寛容原性免疫細胞の特性によって付与される寛容原性表現型を有する免疫細胞、または、該寛容原性免疫細胞から独立して寛容原性表現型を有する免疫細胞によって提示される。一部の実施形態では、前記抗原はプロセシングされ、寛容原性免疫細胞によって（例えば、該寛容原性免疫細胞または前記第２の免疫細胞によって）クラスＩ  ＭＨＣによって提示される。一部の実施形態では、前記抗原はプロセシングされ、寛容原性免疫細胞によって（例えば、該寛容原性免疫細胞または前記第２の免疫細胞によって）クラスＩＩ  ＭＨＣによって提示される。
【０１０４】
ある特定の態様では、本発明は、第１の免疫細胞（例えば、免疫抑制免疫細胞）に抗原を送達するための方法であって、該第１の免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、該抗原が該細胞に入るように、該狭窄部が該第１の免疫細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こすステップを含み、ここで、該細胞懸濁液が該抗原と接触する、方法を提供する。一部の実施形態では、寛容原性因子は、本明細書に開示される方法によって前記第１の免疫細胞に送達され、それによって該第１の免疫細胞に免疫抑制表現型を付与する。一部の実施形態では、前記抗原は、免疫抑制性の様式で、例えば前記第１の免疫細胞によって提示される。一部の実施形態では、前記抗原は、免疫抑制性の様式で別の免疫細胞、例えば第２の免疫細胞、例えば前記第１の免疫細胞の特性によって付与される免疫抑制表現型を有する免疫細胞、または、該第１の免疫細胞から独立して免疫抑制表現型を有する免疫細胞によって提示される。一部の実施形態では、前記抗原はプロセシングされ、免疫抑制免疫細胞によって（例えば、前記第１または第２の免疫細胞によって）クラスＩ  ＭＨＣによって提示される。一部の実施形態では、前記抗原はプロセシングされ、免疫抑制免疫細胞によって（例えば、前記第１または第２の免疫細胞によって）クラスＩＩ  ＭＨＣによって提示される。
【０１０５】
ある特定の態様では、本発明は、免疫抑制表現型を生成する寛容原性因子を免疫細胞に送達するための方法であって、該免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、免疫抑制表現型を生成する該寛容原性因子が該細胞に入るように、該狭窄部が該免疫細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こすステップを含み、ここで、該細胞懸濁液が該寛容原性因子と接触し、それによって免疫抑制免疫細胞を生成する、方法を提供する。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、免疫調節因子（例えば、免疫賦活因子（例えば、共刺激分子）、免疫抑制因子または炎症性もしくは抗炎症分子）の発現および／または活性をモジュレートする。一部の実施形態では、抗原は、前記第１の免疫細胞または前記免疫抑制免疫細胞による飲食運動によって取り込まれる。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法のいずれかによって、抗原は前記第１の免疫細胞または前記免疫抑制免疫細胞に送達される。一部の実施形態では、前記抗原は、免疫抑制性の様式で、例えば前記免疫抑制免疫細胞によって提示される。一部の実施形態では、前記抗原は、免疫抑制性の様式で別の免疫細胞、例えば第２の免疫細胞、例えば前記免疫抑制免疫細胞の特性によって付与される免疫抑制表現型を有する免疫細胞、または、該免疫抑制免疫細胞から独立して寛容原性表現型を有する免疫細胞によって提示される。一部の実施形態では、前記抗原はプロセシングされ、免疫抑制免疫細胞によって（例えば、該免疫抑制免疫細胞または前記第２の免疫細胞によって）クラスＩ  ＭＨＣによって提示される。一部の実施形態では、前記抗原はプロセシングされ、免疫抑制免疫細胞によって（例えば、該免疫抑制免疫細胞または前記第２の免疫細胞によって）クラスＩＩ  ＭＨＣによって提示される。
【０１０６】
ある特定の態様では、本発明は、抗原および免疫抑制表現型を生成する寛容原性因子を第１の免疫細胞に送達するための方法であって、該第１の免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、該抗原および該寛容原性因子が該細胞に入るように、該狭窄部が該免疫細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こすステップを含み、ここで、該細胞懸濁液が該抗原および該寛容原性因子と接触し、それによって該抗原を含む免疫抑制免疫細胞を生成する、方法を提供する。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、免疫調節因子（例えば、免疫賦活因子（例えば、共刺激分子）、免疫抑制因子または炎症性もしくは抗炎症分子）の発現および／または活性をモジュレートする。一部の実施形態では、前記抗原は、免疫抑制性の様式で、例えば前記免疫抑制免疫細胞によって提示される。一部の実施形態では、前記抗原は、免疫抑制性の様式で別の免疫細胞、例えば第２の免疫細胞、例えば前記免疫抑制免疫細胞の特性によって付与される免疫抑制表現型を有する免疫細胞、または、該免疫抑制免疫細胞から独立して免疫抑制表現型を有する免疫細胞によって提示される。一部の実施形態では、前記抗原はプロセシングされ、免疫抑制免疫細胞によって（例えば、該免疫抑制免疫細胞または前記第２の免疫細胞によって）クラスＩ  ＭＨＣによって提示される。一部の実施形態では、前記抗原はプロセシングされ、免疫抑制免疫細胞によって（例えば、該免疫抑制免疫細胞または前記第２の免疫細胞によって）クラスＩＩ  ＭＨＣによって提示される。
【０１０７】
ある特定の態様では、本発明は、個体において免疫応答を抑制するための方法であって、第１の免疫細胞を含む第１の細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、抗原が該免疫細胞に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、ステップと、第２の免疫細胞を含む第２の細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、寛容原性因子が該免疫細胞に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こし、免疫抑制免疫細胞が生成される、ステップと、該第１の免疫細胞および第２の免疫細胞を該個体に導入するステップであって、該抗原が免疫抑制性の様式で提示され、該抗原への免疫応答を抑制する、ステップとを含む方法を提供する。一部の実施形態では、前記抗原は、前記第１の免疫細胞で提示される。一部の実施形態では、前記第１の免疫細胞は、前記第２の免疫細胞の特性によって付与される寛容原性表現型を有する。一部の実施形態では、前記抗原は、前記第２の免疫細胞によって提示される。一部の実施形態では、前記抗原は、第３の免疫細胞、例えば、前記第２の免疫細胞の特性によって付与される寛容原性表現型を有する免疫細胞によって提示される。一部の実施形態では、前記第３の免疫細胞は、前記第２の免疫細胞の特性とは無関係に、寛容原性表現型を有する（例えば、該第３の免疫細胞は、該個体への該第２の免疫細胞の導入の前に寛容原性表現型を有していた）。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、免疫調節因子（例えば、免疫賦活因子（例えば、共刺激分子）、免疫抑制因子または炎症性もしくは抗炎症分子）の発現および／または活性をモジュレートする。一部の実施形態では、前記第１の免疫細胞および第２の免疫細胞は、同時に導入される。一部の実施形態では、前記第１の免疫細胞および前記第２の免疫細胞は、前記個体への導入の前に細胞懸濁液中で合わせられる。一部の実施形態では、前記第１の免疫細胞および第２の免疫細胞は、逐次的に導入される。一部の実施形態では、前記第１の免疫細胞は、前記第２の免疫細胞の導入の前に前記個体に導入される。一部の実施形態では、前記第１の免疫細胞は、前記第２の免疫細胞の導入より前に、約１分、５分、１０分、１５分、３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、１２時間または２４時間のいずれかより長い時間、前記個体に導入される。一部の実施形態では、前記第２の免疫細胞は、前記第１の免疫細胞の導入の前に前記個体に導入される。一部の実施形態では、前記第２の免疫細胞は、前記第１の免疫細胞の導入より前に、約１分、５分、１０分、１５分、３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、１２時間または２４時間のいずれかより長い時間、前記個体に導入される。一部の実施形態では、前記第２の細胞への前記寛容原性因子の送達は、分泌機能を該第２の細胞に付与する。例えば、前記第２の細胞は、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＦＮαおよび／またはＴＧＦβを分泌することができ、それによって免疫抑制微小環境を増強する。一部の実施形態では、前記免疫抑制微小環境は、前記第１の細胞による抗原の寛容原性提示を可能にする。
【０１０８】
ある特定の態様では、本発明は、個体において抗原特異的寛容性を誘導するための方法であって、第１の免疫細胞を含む第１の細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、抗原が該免疫細胞に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、ステップと、第２の免疫細胞を含む第２の細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、寛容原性因子が該免疫細胞に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、ステップと、該第１の免疫細胞および第２の免疫細胞を該個体に導入するステップであって、該抗原が寛容原性の様式で提示され、該抗原への免疫応答を抑制する、ステップとを含む方法を提供する。一部の実施形態では、前記抗原は、前記第１の免疫細胞で提示される。一部の実施形態では、前記第１の免疫細胞は、前記第２の免疫細胞の特性によって付与される寛容原性表現型を有する。一部の実施形態では、前記抗原は、前記第２の免疫細胞によって提示される。一部の実施形態では、前記抗原は、第３の免疫細胞、例えば、前記第２の免疫細胞の特性によって付与される寛容原性表現型を有する免疫細胞によって提示される。一部の実施形態では、前記第３の免疫細胞は、前記第２の免疫細胞の特性とは無関係に、寛容原性表現型を有する（例えば、該第３の免疫細胞は、前記個体への該第２の免疫細胞の導入の前に寛容原性表現型を有していた）。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、免疫調節因子（例えば、免疫賦活因子（例えば、共刺激分子）、免疫抑制因子または炎症性もしくは抗炎症分子）の発現および／または活性をモジュレートする。一部の実施形態では、前記第１の免疫細胞および第２の免疫細胞は、同時に導入される。一部の実施形態では、前記第１の免疫細胞および第２の免疫細胞は、逐次的に導入される。一部の実施形態では、前記第１の免疫細胞および前記第２の免疫細胞は、前記個体への導入の前に細胞懸濁液中で合わせられる。一部の実施形態では、前記第１の免疫細胞は、前記第２の免疫細胞の導入の前に前記個体に導入される。一部の実施形態では、前記第１の免疫細胞は、前記第２の免疫細胞の導入より前に、約１分、５分、１０分、１５分、３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、１２時間または２４時間のいずれかより長い時間、前記個体に導入される。一部の実施形態では、前記第２の免疫細胞は、前記第１の免疫細胞の導入の前に前記個体に導入される。一部の実施形態では、前記第２の免疫細胞は、前記第１の免疫細胞の導入より前に、約１分、５分、１０分、１５分、３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、１２時間または２４時間のいずれかより長い時間、前記個体に導入される。一部の実施形態では、前記第２の細胞への前記寛容原性因子の送達は、分泌機能を該第２の細胞に付与する。例えば、前記第２の細胞は、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＦＮαおよび／またはＴＧＦβを分泌することができ、それによって免疫抑制微小環境を増強する。一部の実施形態では、前記免疫抑制微小環境は、前記第１の細胞による抗原の寛容原性提示を可能にする。
【０１０９】
ある特定の態様では、本発明は、個体において免疫応答を抑制するための方法であって、免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、非機能的サイトカイン結合タンパク質をコードする化合物が該免疫細胞に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、ステップと、該免疫細胞を該個体に導入するステップであって、該非機能的サイトカイン結合タンパク質が発現され、該非機能的サイトカイン結合タンパク質が遊離炎症性サイトカインに結合し、それによって免疫応答を抑制する、ステップとを含む方法を提供する。例えば、前記非機能的サイトカイン結合タンパク質は、遊離炎症性サイトカインに結合および／またはそれを隔離することができ、それによってそれらが機能的サイトカイン受容体に結合して下流のシグナル伝達を誘発することを阻止する。一部の実施形態では、前記サイトカインは、前記非機能的サイトカイン結合タンパク質の内在化および細胞内プロセシングによって破壊される。一部の実施形態では、非機能的サイトカイン結合タンパク質は、非機能的サイトカイン受容体を含む。一部の実施形態では、前記非機能的サイトカイン受容体は、細胞質シグナル伝達ドメインを欠いている。一部の実施形態では、前記非機能的サイトカイン結合タンパク質は、標的サイトカインを切断するタンパク分解部位を含む。例えば、前記非機能的サイトカイン結合タンパク質は、結合の後に前記サイトカインを切断または分解する酵素を含有することができる。一部の実施形態では、前記非機能的サイトカイン結合タンパク質は、抗サイトカイン抗体を含む。一部の実施形態では、前記非機能的サイトカイン結合タンパク質は、Ｂ細胞受容体を含む。前記非機能的サイトカイン受容体によって結合することができる例示的なサイトカインには、限定されずに、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＴＮＦ□、ＩＬ−１およびＩＦＮγが含まれる。
【０１１０】
一部の実施形態では、前記免疫応答は、少なくとも約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約７５％、約８０％、約９０％または約１００％のいずれかまで抑制される。一部の実施形態では、前記抑制された免疫応答および／または誘導された寛容性は、Ｔ細胞応答の減少を含む。例えば、Ｔ細胞応答の減少には、限定されずに、Ｔ細胞活性化もしくは増殖の減少、Ｔ細胞生存の減少、または細胞機能性の減少を含めることができる。一部の実施形態では、前記Ｔ細胞応答の減少は、Ｔ細胞活性化の減少を含む。一部の実施形態では、前記Ｔ細胞応答の減少は、Ｔ細胞生存の減少を含む。一部の実施形態では、前記Ｔ細胞応答の減少は、Ｔ細胞増殖の減少を含む。一部の実施形態では、前記Ｔ細胞応答の減少は、Ｔ細胞機能性の減少を含む。例えば、Ｔ細胞機能性の減少には、限定されずに、サイトカイン分泌のモジュレーション、炎症部位へのＴ細胞移動の減少およびＴ細胞細胞傷害活性の低下を含めることができる。一部の実施形態では、前記抑制された免疫応答および／または誘導された寛容性は、炎症性サイトカインの産生および／もしくは分泌の減少、ならびに／または抗炎症性サイトカインの産生および／もしくは分泌の増加を含む。一部の実施形態では、前記抑制された免疫応答および／または誘導された寛容性は、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、ＩＬ−１２およびＩＬ−１８、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ−ガンマ）ならびに顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）から選択される１つまたは複数の炎症性サイトカインの産生および／または分泌の減少を含む。一部の実施形態では、前記抑制された免疫応答および／または誘導された寛容性は、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−３５、ＩＦＮ−アルファおよびトランスフォーミング成長因子ベータ（ＴＧＦβ）から選択される１つまたは複数の抗炎症性サイトカインの産生および／または分泌の減少を含む。一部の実施形態では、前記抑制された免疫応答および／または誘導された寛容性は、Ｔ細胞表現型の変化を含む。例えば、前記Ｔ細胞の状態は、炎症誘発性表現型から調節性または抗炎症性の表現型に変化することができる。一部の実施形態では、前記抑制された免疫応答および／または誘導された寛容性は、Ｔ細胞の非共刺激活性化を含み、それは細胞死にその後つながる可能性がある。一部の実施形態では、前記抑制された免疫応答および／または誘導された寛容性は、調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）応答の増強を含む。一部の実施形態では、前記抑制された免疫応答および／または誘導された寛容性は、調節性Ｂ細胞（Ｂｒｅｇ）、寛容原性単球、骨髄由来サプレッサー細胞または寛容原性マクロファージ応答の増強を含む。一部の実施形態では、前記抑制された免疫応答および／または誘導された寛容性は、Ｂ細胞応答の減少を含む。一部の実施形態では、前記Ｂ細胞応答の減少は、抗体産生の減少を含む。
【０１１１】
一部の実施形態では、前記抑制された免疫応答および／または誘導された寛容性は、自己免疫応答の減少を含む。例えば、前記自己免疫応答の減少には、限定されずに、Ｉ型糖尿病、関節リウマチ、乾癬、多発性硬化症、クローン病または潰瘍性大腸炎に関連した抗原に対する免疫応答の減少または寛容性の誘導を含めることができる。一部の実施形態では、前記抑制された免疫応答および／または誘導された寛容性は、アレルギー応答の減少を含む。例えば、前記アレルギー応答の減少には、アレルギー性喘息、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎（花粉症）または食物アレルギーに関連した抗原に対する免疫応答の減少または寛容性の誘導を含めることができる。一部の実施形態では、前記抗原は、移植組織に関連した抗原である。一部の実施形態では、前記抑制された免疫応答および／または誘導された寛容性は、前記移植組織に対する免疫応答の減少または寛容性の誘導を含む。一部の実施形態では、前記抗原は、ウイルスに関連する。一部の実施形態では、前記抑制された免疫応答および／または誘導された寛容性は、前記ウイルスへの病原性免疫応答の減少または寛容性の誘導を含む。例えば、病原性免疫応答には、ある特定のウイルス感染によって生成されるサイトカインストームを含めることができる。サイトカインストームは、サイトカインと白血球の間の正のフィードバックループからなる潜在的に致命的な免疫反応である。
【０１１２】
一部の実施形態では、前記抑制された免疫応答は、治療剤に対する免疫応答の減少を含む。一部の実施形態では、前記治療剤は凝固因子である。例示的な凝固因子には、限定されずに、第ＶＩＩＩ因子および第ＩＸ因子が含まれる。一部の実施形態では、前記治療剤は、抗体である。例示的な治療抗体には、限定されずに、抗ＴＮＦα、抗ＶＥＧＦ、抗ＣＤ３、抗ＣＤ２０、抗ＩＬ−２Ｒ、抗Ｈｅｒ２、抗ＲＳＶＦ、抗ＣＥＡ、抗ＩＬ−１ベータ、抗ＣＤ１５、抗ミオシン、抗ＰＳＭＡ、抗４０ｋＤａ糖タンパク質、抗ＣＤ３３、抗ＣＤ５２、抗ＩｇＥ、抗ＣＤ１１ａ、抗ＥＧＦＲ、抗Ｃ５、抗アルファ−４インテグリン、抗ＩＬ−１２／ＩＬ−２３、抗ＩＬ−６Ｒおよび抗ＲＡＮＫＬが含まれる。一部の実施形態では、前記治療剤は、成長因子である。例示的な治療成長因子には、限定されずに、エリスロポイエチン（ＥＰＯ）ならびに巨核球の分化および成長因子（ＭＤＧＦ）が含まれる。一部の実施形態では、前記治療剤は、ホルモンである。例示的な治療ホルモンには、限定されずに、インスリン、ヒト成長ホルモンおよび卵胞刺激ホルモンが含まれる。一部の実施形態では、前記治療剤は、組換えサイトカインである。例示的な治療組換えサイトカインには、限定されずに、ＩＦＮβ、ＩＦＮαおよびＧＭ−ＣＳＦが含まれる。一部の実施形態では、前記抑制された免疫応答は、治療ビヒクルに対する免疫応答の減少を含む。一部の実施形態では、前記治療ビヒクルは、遺伝子療法のために使用されるウイルス、例えばアデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、バキュロウイルス、ヘルペスウイルスまたはレトロウイルスである。一部の実施形態では、前記治療ビヒクルは、脂質をベースとしたビヒクル、例えばリポソームである。一部の実施形態では、前記治療ビヒクルは、ナノ粒子である。
【０１１３】
ＩＶ．細胞を変形させる狭窄部を提供するためのマイクロ流体チャネル
一部の実施形態では、本発明は、細胞懸濁液を狭窄部に通すことによって免疫応答を抑制するまたは寛容性を誘導する方法であって、抗原または寛容原性因子が免疫細胞に入るように、マイクロ流体チャネルの中に含有される該狭窄部が該免疫細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、方法を提供する。一部の実施形態では、複数の狭窄部が、前記マイクロ流体チャネルの中に並列的におよび／または直列的に配置されていてもよい。本明細書に開示する方法に使用するための細胞を変形させる狭窄部を含有する例示的なマイクロ流体チャネルは、ＷＯ２０１３０５９３４３に記載されている。本明細書に開示する方法に使用するための孔を有する例示的な表面は、２０１５年９月４日に出願された米国仮出願第６２／２１４，８２０号に記載されている。
【０１１４】
一部の実施形態では、前記マイクロ流体チャネルは内腔を含み、かつ緩衝液中に懸濁された細胞が通過できるように構成されており、該マイクロ流体チャネルは狭窄部を含む。前記マイクロ流体チャネルは、シリコン、金属（例えば、ステンレス鋼）、プラスチック（例えば、ポリスチレン）、セラミック、ガラス、結晶性基材、非晶性基材、またはポリマー（例えば、ポリメチルメタクリレート（ＰＭＭＡ）、ＰＤＭＳ、環状オレフィンコポリマー（ＣＯＣ）など）などの多数の材料のうちのいずれか１つから作られたものであってよい。前記マイクロ流体チャネルの製作は、ドライエッチング、ウエットエッチング、フォトリソグラフィー、射出成形、レーザーアブレーション、またはＳＵ−８マスクなどの当技術分野で公知の任意の方法によって行うことができる。
【０１１５】
一部の実施形態では、前記マイクロ流体チャネルの中の前記狭窄部は、入口部分、中央部分、および出口部分を含む。一部の実施形態では、前記マイクロ流体チャネルの中の前記狭窄部の長さ、深さ、および幅は、変わり得る。一部の実施形態では、前記マイクロ流体チャネルの中の前記狭窄部の直径は、前記細胞または細胞クラスターの直径の関数である。一部の実施形態では、前記マイクロ流体チャネルの中の前記狭窄部の直径は、前記細胞の直径の約２０％から約９９％である。一部の実施形態では、前記狭窄部サイズは、前記細胞の直径の約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９９％である。一部の実施形態では、前記狭窄部サイズは、前記細胞の最小断面距離の約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９９％である。一部の実施形態では、前記チャネルは、約２μｍから約１０μｍの間の狭窄部幅またはこれらの間の任意の幅もしくは幅の範囲を含む。例えば、前記狭窄部幅は、約２μｍ、約３μｍ、約４μｍ、約５μｍ、約６μｍ、または約７μｍのうちのいずれか１つであってよい。一部の実施形態では、前記チャネルは、約１０μｍの狭窄部長および約４μｍの狭窄部幅を含む。前記チャネル、前記入口部分、前記中央部分、および前記出口部分の断面も変動してよい。例えば、前記断面は、円形、楕円形、細長いスリット、四角形、六角形、または三角形の形状であってよい。前記入口部分は狭窄部角度を規定し、該狭窄部角度は前記チャネルの詰まりを低減するように最適化され、かつ前記細胞への化合物の送達を増強するために最適化される。前記出口部分の角度も変動してよい。例えば、前記出口部分の角度は、非層流を生じさせ得る乱流の可能性を低減するように構成される。一部の実施形態では、前記入口部分および／または前記出口部分の壁は直線状である。その他の実施形態では、前記入口部分および／または前記出口部分の壁は湾曲している。
【０１１６】
Ｖ．細胞を変形させる狭窄部を提供するための孔を有する表面
一部の実施形態では、本発明は、細胞懸濁液を狭窄部に通すことによって免疫応答を抑制するまたは寛容性を誘導する方法であって、抗原および／または寛容原性因子が免疫細胞に入るように、孔であるか、または孔の中に含有される該狭窄部が該免疫細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、方法を提供する。一部の実施形態では、前記孔は表面に含有される。本明細書に開示する方法に使用するための孔を有する例示的な表面は、２０１５年９月４日に出願された米国仮出願第６２／２１４，８２０号に記載されている。
【０１１７】
本明細書に開示する表面は、いくつかの材料のいずれか１つから作られたものであってよく、またいくつかの形態のいずれか１つを取ることができる。一部の実施形態では、前記表面はフィルターである。一部の実施形態では、前記表面は膜である。一部の実施形態では、前記フィルターはタンジェンシャルフローフィルターである。一部の実施形態では、前記表面はスポンジまたはスポンジ様マトリックスである。一部の実施形態では、前記表面はマトリックスである。
【０１１８】
一部の実施形態では、前記表面は、曲がりくねった経路の表面である。一部の実施形態では、前記曲がりくねった経路の表面は酢酸セルロースを含む。一部の実施形態では、前記表面は、以下に限定されないが、合成または天然ポリマー、ポリカーボネート、シリコン、ガラス、金属、合金、硝酸セルロース、銀、酢酸セルロース、ナイロン、ポリエステル、ポリエーテルスルホン、ポリアクリロニトリル（ＰＡＮ）、ポリプロピレン、ＰＶＤＦ、ポリテトラフルオロエチレン（polytetrafluorethylene）、混合セルロースエステル、磁器、およびセラミックから選択される材料を含む。
【０１１９】
本明細書に開示する表面は、当技術分野で公知の任意の形状、例えば三次元形状を有することができる。前記表面の二次元形状は、以下に限定されないが、円形、楕円、丸形、四角形、星形、三角形、多角形、五角形、六角形、七角形、または八角形であってよい。一部の実施形態では、前記表面は丸形の形状である。一部の実施形態では、前記表面の三次元形状は、円筒形、円錐形、または立方形である。
【０１２０】
前記表面は、様々な断面幅および断面厚さを有することができる。一部の実施形態では、前記表面の断面幅は約１ｍｍから約１ｍの間またはこれらの間の任意の断面幅もしくは断面幅の範囲である。一部の実施形態では、前記表面は、規定された厚さを有する。一部の実施形態では、前記表面の厚さは均一である。一部の実施形態では、前記表面の厚さは可変である。例えば、一部の実施形態では、前記表面の部分は、該表面のその他の部分よりも厚いまたは薄い。一部の実施形態では、前記表面の厚さは、約１％から約９０％またはこれらの間の任意のパーセンテージもしくはパーセンテージの範囲で変動する。一部の実施形態では、前記表面は、約０．０１μｍから約５ｍｍの厚さまたはこれらの間の任意の厚さもしくは厚さの範囲である。
【０１２１】
一部の実施形態では、前記狭窄部は、孔であるか、または孔の中に含有される。前記孔の断面幅は、処理される細胞の種類に関係する。一部の実施形態では、前記孔径は、処理される細胞または細胞クラスターの直径の関数である。一部の実施形態では、前記孔径は、細胞が該孔を通過する際に摂動されるようなものである。一部の実施形態では、前記孔径は前記細胞の直径未満である。一部の実施形態では、前記孔径は、前記細胞の直径の約１０％から約９９％である。一部の実施形態では、前記孔径は、前記細胞の直径の約１０％、約１５％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９９％である。最適な孔径または孔の断面幅は、応用および／または細胞型に基づいて変動し得る。一部の実施形態では、前記孔径は約２μｍから約１４μｍである。一部の実施形態では、前記孔径は、約２μｍ、約３μｍ、約４μｍ、約５μｍ、約８μｍ、約１０μｍ、約１２μｍ、または約１４μｍである。一部の実施形態では、前記断面幅は約２μｍから約１４μｍである。一部の実施形態では、前記孔の断面は、約２μｍ、約３μｍ、約４μｍ、約５μｍ、約８μｍ、約１０μｍ、約１２μｍ、または約１４μｍである。
【０１２２】
前記孔の通路の入口および出口は様々な角度を有してもよい。前記孔の角度は、細胞が通過している間の孔の詰まりを最小化するように選択することができる。一部の実施形態では、前記表面を通る流速は、約０．００１ｍＬ／ｃｍ２／秒から約１００Ｌ／ｃｍ２／秒の間またはこれらの間の任意の速度もしくは速度の範囲である。例えば、前記入口部分または出口部分の角度は約０°から約９０°の間であってもよい。一部の実施形態では、入口部分または出口部分は９０°より大きくてもよい。一部の実施形態では、前記孔は、同一の入口角度および出口角度を有する。一部の実施形態では、前記孔は、異なる入口角度および出口角度を有する。一部の実施形態では、前記孔の縁部は滑らかであり、例えば丸形であるかまたは湾曲している。滑らかな孔の縁部は、出っ張り、隆起、または凹凸の部分なしで、連続的な、平らな、かつ凹凸のない表面を有する。一部の実施形態では、前記孔の縁部はとがっている。とがった孔の縁部は、とがったまたは鋭角の細い縁を有する。一部の実施形態では、前記孔の通路は直線的である。直線的な孔の通路は、湾曲、屈曲、角度、またはその他の不規則性を含有しない。一部の実施形態では、前記孔の通路は湾曲している。湾曲した孔の通路は、屈曲しているか、または直線から逸脱している。一部の実施形態では、前記孔の通路は、複数の湾曲、例えば、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれより多くの湾曲を有する。
【０１２３】
前記孔は、二次元または三次元形状などの当技術分野で公知の任意の形状を有することができる。前記孔の形状（例えば、前記断面形状）は、以下に限定されないが、円形、楕円、丸形、四角形、星形、三角形、多角形、五角形、六角形、七角形、および八角形であってもよい。一部の実施形態では、前記孔の断面は丸形の形状である。一部の実施形態では、前記孔の三次元形状は円筒形または円錐形である。一部の実施形態では、前記孔は、溝付きの入口および出口の形状を有する。一部の実施形態では、前記孔の形状は、所与の表面の中の孔の間で均一（すなわち、一貫したまたは規則的）である。一部の実施形態では、前記孔の形状は、所与の表面の中の孔の間で不均一（すなわち、混合的または可変）である。
【０１２４】
本明細書に記載する表面は、広範な合計の孔数を有することができる。一部の実施形態では、前記孔は、総表面積の約１０％から約８０％に及ぶ。一部の実施形態では、前記表面は、合計で約１．０×１０５個から約１．０×１０３０個の孔またはこれらの間の任意の数または数の範囲を含有する。一部の実施形態では、前記表面は、１ｍｍ２の表面積あたり約１０から約１．０×１０１５個の孔を含む。
【０１２５】
前記孔は、所与の表面の中で多数の様式で分布することができる。一部の実施形態では、前記孔は、所与の表面の中で並列に分布する。一つのそのような例では、前記孔は、同一方向に並んで分布し、かつ所与の表面の中で同じ距離だけ離れている。一部の実施形態では、前記孔の分布は、規則正しいまたは均一である。一つのそのような例では、前記孔は、規則的な系統的パターンで分布しており、または所与の表面の中で同じ距離だけ離れている。一部の実施形態では、前記孔の分布は、ランダムまたは不均一である。一つのそのような例では、前記孔は、不規則で無秩序なパターンで分布しており、または所与の表面の中で異なる距離だけ離れている。一部の実施形態では、複数の表面が、列をなして分布する。前記複数の表面は、表面サイズ、形状、および／または粗さについて均一または不均一であってよい。前記複数の表面は、均一または不均一な孔径、形状、および／または数の孔をさらに含有し、それによって異なる細胞型への一連の化合物の同時の送達を可能とすることができる。
【０１２６】
一部の実施形態では、個々の孔は、一様な幅寸法（すなわち、該孔の通路の長さに沿って一定の幅）を有する。一部の実施形態では、個々の孔は、可変の幅（すなわち、該孔の通路の長さに沿って増加または減少する幅）を有する。一部の実施形態では、所与の表面の中の孔は、同じ個々の孔の深さを有する。一部の実施形態では、所与の表面の中の孔は、異なる個々の孔の深さを有する。一部の実施形態では、前記孔は、互いにすぐ隣にある。一部の実施形態では、前記孔は、ある距離だけ互いに離れている。一部の実施形態では、前記孔は、約０．００１μｍから約３０ｍｍの距離またはこれらの間の任意の距離もしくは距離の範囲だけ互いに離れている。
【０１２７】
一部の実施形態では、前記表面は材料でコーティングされている。前記材料は、以下に限定されないが、Ｔｅｆｌｏｎ、粘着剤コーティング、界面活性剤、タンパク質、接着分子、抗体、抗凝固剤、細胞機能をモジュレートする因子、核酸、脂肪、炭水化物、または膜貫通タンパク質などの当技術分野で公知の任意の材料から選択することができる。一部の実施形態では、前記表面はポリビニルピロリドンでコーティングされている。一部の実施形態では、前記材料は前記表面に共有結合的に付着している。一部の実施形態では、前記材料は前記表面に非共有結合的に付着している。一部の実施形態では、前記表面分子は、前記細胞が前記孔を通過する際に放出される。
【０１２８】
一部の実施形態では、前記表面は、改質された化学的特性を有する。一部の実施形態では、前記表面は極性である。一部の実施形態では、前記表面は親水性である。一部の実施形態では、前記表面は非極性である。一部の実施形態では、前記表面は疎水性である。一部の実施形態では、前記表面は帯電している。一部の実施形態では、前記表面は正および／または負に帯電している。一部の実施形態では、前記表面は、一部の領域で正に帯電し、かつその他の領域で負に帯電していてもよい。一部の実施形態では、前記表面は、全体として正または全体として負の電荷を有する。一部の実施形態では、前記表面は、平滑であるか、電解研磨されているか、粗いか、またはプラズマ処理されているかのいずれか１つであってもよい。一部の実施形態では、前記表面は、両性イオンまたは二極性化合物を含む。一部の実施形態では、前記表面はプラズマ処理されている。
【０１２９】
一部の実施形態では、前記表面は、より大きなモジュールの中に含有される。一部の実施形態では、前記表面は、プラスチックまたはガラスシリンジなどのシリンジの中に含有される。一部の実施形態では、前記表面は、プラスチックフィルターホルダーの中に含有される。一部の実施形態では、前記表面は、ピペットチップの中に含有される。
【０１３０】
ＶＩ．細胞の摂動
一部の実施形態では、本発明は、細胞懸濁液を狭窄部に通すことによって免疫応答を抑制するまたは寛容性を誘導する方法であって、抗原または寛容原性因子が免疫細胞に入るように、該狭窄部が該免疫細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こし、ここで、該細胞の該摂動が、材料が該細胞の外側から該細胞の中に移動するのを可能にする該細胞の破れ口（breach）（例えば、穴、裂け目、空洞、開口、孔、破れ、空隙、穿孔）である、方法を提供する。前記変形は、例えば、機械的歪みおよび／またはせん断力によって誘導された圧力によって引き起こすことができる。一部の実施形態では、前記摂動は前記細胞膜の中の摂動である。一部の実施形態では、前記摂動は一時的なものである。一部の実施形態では、前記細胞の摂動は、約１．０×１０−９秒から約２時間またはこれらの間の任意の時間もしくは時間の範囲にわたって続く。一部の実施形態では、前記細胞の摂動は、約１．０×１０−９秒から約１秒、約１秒から約１分、または約１分から約１時間にわたって続く。一部の実施形態では、前記細胞の摂動は、約１．０×１０−９秒から約１．０×１０−１秒、約１．０×１０−９秒から約１．０×１０−２秒、約１．０×１０−９秒から約１．０×１０−３秒、約１．０×１０−９秒から約１．０×１０−４秒、約１．０×１０−９秒から約１．０×１０−５秒、約１．０×１０−９秒から約１．０×１０−６秒、約１．０×１０−９秒から約１．０×１０−７秒、または約１．０×１０−９秒から約１．０×１０−８秒のいずれか１つの間にわたって続く。一部の実施形態では、前記細胞の摂動は、約１．０×１０−８秒から約１．０×１０−１秒、約１．０×１０−７秒から約１．０×１０−１秒、約１．０×１０−６秒から約１．０×１０−１秒、約１．０×１０−５秒から約１．０×１０−１秒、約１．０×１０−４秒から約１．０×１０−１秒、約１．０×１０−３秒から約１．０×１０−１秒、または約１．０×１０−２秒から約１．０×１０−１秒のいずれか１つにわたって続く。本明細書に記載する方法によって作られた前記細胞の摂動（例えば、孔または穴）は、補体（complement）または細菌ヘモリシンによって作られるものなどの多量体の孔構造物を形成するタンパク質サブユニットのアセンブリーの結果として形成されるものではない。
【０１３１】
前記細胞が前記狭窄部を通過する際に該狭窄部は該細胞膜に一時的に損傷を与え、それが前記摂動を通じて材料の受動拡散を引き起こす。一部の実施形態では、細胞のシグナル伝達機構を通じてアポトーシス経路を活性化する可能性を最小化するために、前記細胞は１００μｓのオーダーの短期間のみ変形するが、その他の継続期間も可能である（例えば、数ナノ秒から数時間かに及ぶ）。一部の実施形態では、前記細胞は、約１．０×１０−９秒から約２時間またはこれらの間の任意の時間もしくは時間の範囲にわたって変形する。一部の実施形態では、前記細胞は、約１．０×１０−９秒から約１秒、約１秒から約１分、または約１分から約１時間にわたって変形する。一部の実施形態では、前記細胞は、約１．０×１０−９秒から約１．０×１０−１秒、約１．０×１０−９秒から約１．０×１０−２秒、約１．０×１０−９秒から約１．０×１０−３秒、約１．０×１０−９秒から約１．０×１０−４秒、約１．０×１０−９秒から約１．０×１０−５秒、約１．０×１０−９秒から約１．０×１０−６秒、約１．０×１０−９秒から約１．０×１０−７秒、または約１．０×１０−９秒から約１．０×１０−８秒のいずれか１つの間にわたって変形する。一部の実施形態では、前記細胞は、約１．０×１０−８秒から約１．０×１０−１秒、約１．０×１０−７秒から約１．０×１０−１秒、約１．０×１０−６秒から約１．０×１０−１秒、約１．０×１０−５秒から約１．０×１０−１秒、約１．０×１０−４秒から約１．０×１０−１秒、約１．０×１０−３秒から約１．０×１０−１秒、または約１．０×１０−２秒から約１．０×１０−１秒のいずれか１つにわたって変形する。一部の実施形態では、前記細胞を変形させることは、以下に限定されないが、約１μｓから少なくとも約７５０μｓに及ぶ時間、例えば、少なくとも約１μｓ、１０μｓ、５０μｓ、１００μｓ、５００μｓ、または７５０μｓにわたって該細胞を変形させることを含む。
【０１３２】
一部の実施形態では、前記細胞への前記化合物の通過は、該細胞による前記狭窄部の通過および／または該細胞の摂動と同時に起こる。一部の実施形態では、前記細胞への前記化合物の通過は、該細胞が前記狭窄部を通過した後に起こる。一部の実施形態では、前記細胞への前記化合物の通過は、該細胞が前記狭窄部を通過してから分のオーダーで起こる。一部の実施形態では、前記細胞への前記化合物の通過は、該細胞が前記狭窄部を通過してから約１．０×１０−２秒から少なくとも約３０分後に起こる。例えば、前記細胞への前記化合物の通過は、該細胞が前記狭窄部を通過してから約１．０×１０−２秒から約１秒後、約１秒から約１分後、または約１分から約３０分後に起こる。一部の実施形態では、前記細胞への前記化合物の通過は、該細胞が前記狭窄部を通過してから約１．０×１０−２秒から約１０分後、約１．０×１０−２秒から約５分後、約１．０×１０−２秒から約１分後、約１．０×１０−２秒から約５０秒後、約１．０×１０−２秒から約１０秒後、約１．０×１０−２秒から約１秒後、または約１．０×１０−２秒から約０．１秒後に起こる。一部の実施形態では、前記細胞への前記化合物の通過は、該細胞が前記狭窄部を通過してから約１．０×１０−１秒から約１０分後、約１秒から約１０分後、約１０秒から約１０分後、約５０秒から約１０分後、約１分から約１０分後、または約５分から約１０分後に起こる。一部の実施形態では、前記細胞が前記狭窄部を通過した後の該細胞の摂動は、該細胞が該狭窄部を通過してから約５分のオーダー以内に矯正される。
【０１３３】
一部の実施形態では、前記狭窄部を通過した後の前記細胞生存率は、約５％から約１００％である。一部の実施形態では、前記狭窄部を通過した後の前記細胞生存率は、少なくとも約５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％である。一部の実施形態では、前記細胞生存率は、該細胞が前記狭窄部を通過してから約１．０×１０−２秒から少なくとも約１０日後に測定される。例えば、前記細胞生存率は、該細胞が前記狭窄部を通過してから約１．０×１０−２秒から約１秒後、約１秒から約１分後、約１分から約３０分後、または約３０分から約２時間後に測定される。一部の実施形態では、前記細胞生存率は、該細胞が前記狭窄部を通過してから約１．０×１０−２秒から約２時間後、約１．０×１０−２秒から約１時間後、約１．０×１０−２秒から約３０分後、約１．０×１０−２秒から約１分後、約１．０×１０−２秒から約３０秒後、約１．０×１０−２秒から約１秒後、または約１．０×１０−２秒から約０．１秒後に測定される。一部の実施形態では、前記細胞生存率は、該細胞が前記狭窄部を通過してから約１．５時間から約２時間後、約１時間から約２時間後、約３０分から約２時間後、約１５分から約２時間後、約１分から約２時間後、約３０秒から約２時間後、または約１秒から約２時間後に測定される。一部の実施形態では、前記細胞生存率は、該細胞が前記狭窄部を通過してから約２時間から約５時間後、約５時間から約１２時間後、約１２時間から約２４時間後、または約２４時間から約１０日後に測定される。
【０１３４】
ＶＩＩ．送達のパラメーター
本明細書に記載する方法によって免疫応答を抑制するまたは寛容性を誘導するための細胞への化合物の送達にはいくつかのパラメーターが影響し得る。一部の実施形態では、前記細胞懸濁液は、前記狭窄部を通る前に、それと同時にまたはその後に前記化合物と接触させられる。前記細胞は、送達するための前記化合物を含む溶液中に懸濁されて前記狭窄部を通過してもよいが、該細胞が該狭窄部を通過した後に該化合物を前記細胞懸濁液に加えてもよい。一部の実施形態では、送達される前記化合物は前記狭窄部上でコーティングされる。
【０１３５】
前記細胞への前記化合物の送達に影響し得るパラメーターの例としては、以下に限定されないが、前記狭窄部の寸法、該狭窄部の入口角度、該狭窄部の表面特性（例えば、粗さ、化学修飾、親水性、疎水性など）、作動する流速（operating  flow  speed）（例えば、該狭窄部を通る細胞通過時間）、該細胞濃度、該細胞懸濁液中の該化合物濃度が挙げられ、また、該狭窄部を通過した後に該細胞を回収またはインキュベートする時間量は、該細胞に送達される該化合物の通過に影響し得る。前記細胞への前記化合物の送達に影響する追加のパラメーターとしては、前記狭窄部中での該細胞の速度、該狭窄部中でのせん断速度、該細胞懸濁液の粘度、流れ速度に垂直な速度成分、および該狭窄部中での時間を挙げることができる。前記化合物の送達を制御するためにそのようなパラメーターを設計することができる。一部の実施形態では、前記細胞濃度は、１ｍｌあたり約１０から少なくとも約１０１２個の細胞またはこれらの間の任意の濃度もしくは濃度の範囲に及ぶ。一部の実施形態では、送達化合物の濃度は、約１０ｎｇ／ｍｌから約１ｇ／ｍＬまたはこれらの間の任意の濃度もしくは濃度の範囲に及ぶことができる。一部の実施形態では、送達化合物の濃度は、約１ｐＭから少なくとも約２Ｍまたはこれらの間の任意の濃度もしくは濃度範囲に及ぶことができる。
【０１３６】
本開示の方法に使用される温度を調整して、化合物の送達および細胞生存率に影響を及ぼすことができる。一部の実施形態では、本方法は、約−５℃から約４５℃の間で実行される。例えば、本方法は、室温（例えば、約２０℃）、生理的温度（例えば、約３７℃）、生理的温度より高い温度（例えば、約３７℃より高い温度から４５℃またはさらに高い温度）、または低下させた温度（例えば、約−５℃から約４℃）、あるいはこれらの例示的な温度の間の温度で実行することができる。
【０１３７】
様々な方法を利用して、前記細胞が前記狭窄部を通るのを推進することができる。例えば、前記入口側にポンプによって圧力を加えてもよく（例えば、ガスシリンダーまたはコンプレッサー）、前記出口側に真空ポンプによって真空を適用してもよく、チューブを通じて毛管作用を適用してもよく、かつ／または前記系は重力供給してもよい。排出ベースのフローシステム（displacement  based  flow  system）を使用することもできる（例えば、シリンジポンプ、蠕動運動ポンプ、手動のシリンジまたはピペット、ピストンなど）。一部の実施形態では、前記細胞は、陽圧または陰圧によって前記狭窄部に通される。一部の実施形態では、前記細胞は、一定圧力または可変圧力によって前記狭窄部に通される。一部の実施形態では、シリンジを使用して圧力を加える。一部の実施形態では、ポンプを使用して圧力を加える。一部の実施形態では、前記ポンプは蠕動運動ポンプまたはダイアフラムポンプである。一部の実施形態では、真空を使用して圧力を加える。一部の実施形態では、前記細胞は重力によって前記狭窄部に通される。一部の実施形態では、前記細胞は遠心力によって前記狭窄部に通される。一部の実施形態では、前記細胞は毛管圧力によって前記狭窄部に通される。
【０１３８】
一部の実施形態では、流体流れは、前記細胞を、前記狭窄部を通るように方向付ける。一部の実施形態では、前記流体流れは、前記細胞が前記狭窄部を通過する前に乱流である。乱流は、所与の点における速度の大きさおよび方向が不規則に変動する流体流れである。一部の実施形態では、前記狭窄部を通る流体流れは、層流である。層流は、あらゆる点での流れの方向が一定のままである固体境界近くの流体の連続した流れを伴う。一部の実施形態では、前記流体流れは、前記細胞が前記狭窄部を通過した後に乱流である。前記細胞が前記狭窄部を通過する速度は可変であってよい。一部の実施形態では、前記細胞は、一様な細胞速度で前記狭窄部を通過する。一部の実施形態では、前記細胞は、変動する細胞速度で前記狭窄部を通過する。
【０１３９】
その他の実施形態では、細胞懸濁液を狭窄部に通す（ここで、抗原または寛容原性因子が免疫細胞に入るように、該狭窄部が該免疫細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす）ことによって、免疫応答を抑制するまたは寛容性を誘導するために組合せ処理が使用される、例えば、本明細書中に記載する方法の後に該狭窄部の下流の電場への曝露が続く。一部の実施形態では、前記細胞は、前記狭窄部を通過した後に少なくとも１つの電極によって生成された電場に通される。一部の実施形態では、前記電場は、細胞核などの前記細胞内の第２の位置への化合物の送達を助ける。例えば、細胞を変形させる狭窄部と電場との組合せは、抗体をコードするプラスミドを前記細胞（例えば、細胞核）に送達し、抗体の新たな産生を生じさせる。一部の実施形態では、１つまたは複数の電極が、前記細胞を変形させる狭窄部に近接して置かれて電場を生成する。一部の実施形態では、前記電場は、約０．１ｋＶ／ｍから約１００ＭＶ／ｍまたはこれらの間の任意の数または数の範囲である。一部の実施形態では、電気信号を与えて電極を駆動するために集積回路が使用される。一部の実施形態では、前記細胞は、約１ｎｓから約１ｓの間のパルス幅および約１００ｎｓから約１０ｓの間の期間またはこれらの間の任意の時間もしくは時間の範囲で前記電場に曝露される。
【０１４０】
ＶＩＩＩ．免疫細胞への送達用の細胞懸濁液
前記細胞懸濁液は、混合のまたは精製された細胞集団であってよい。一部の実施形態では、前記細胞懸濁液は、全血などの混合の細胞集団である。一部の実施形態では、前記細胞懸濁液は、精製された免疫細胞集団などの精製された細胞集団である。
【０１４１】
前記細胞懸濁液の組成（例えば、容量オスモル濃度、塩濃度、血清含有量、細胞濃度、ｐＨなど）は、免疫応答を抑制するまたは寛容性を誘導するための前記化合物の送達に影響することがある。一部の実施形態では、懸濁液は全血を含む。あるいは、細胞懸濁液は、生理食塩水溶液中または血液以外の生理的媒体中の細胞の混合物である。一部の実施形態では、前記細胞懸濁液は水溶液を含む。一部の実施形態では、前記水溶液は、細胞培養培地、ＰＢＳ、塩、糖、成長因子、動物由来産物、増量剤（bulking  material）、界面活性剤、潤滑剤、ビタミン、アミノ酸、タンパク質、細胞周期インヒビター、および／またはアクチン重合に影響を及ぼす剤を含む。一部の実施形態では、前記細胞培養培地は、ＤＭＥＭ、Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ（登録商標）、ＩＭＤＭ、またはＲＰＭＩである。さらに、緩衝溶液は、１つまたは複数の潤滑剤（プルロニックまたはその他の界面活性剤）を含んでもよく、これは、例えば、表面の詰まりを低減または除去し、かつ細胞生存率を向上させるように設計されたものであってよい。例示的な界面活性剤は、以下に限定されないが、ポロキサマー、ポリソルベート、糖または糖アルコール（マンニトール、ソルビトールなど）、動物由来血清、およびアルブミンタンパク質が挙げられる。
【０１４２】
ある特定の種類の細胞を伴う一部の構成では、該細胞は、該細胞内への前記化合物の送達を補助する１つまたは複数の溶液中でインキュベートされてもよい。一部の実施形態では、前記水溶液は、アクチン重合に影響を及ぼす剤を含む。一部の実施形態では、アクチン重合に影響を及ぼす剤は、ラトランクリンＡ、サイトカラシン、および／またはコルヒチンである。例えば、送達前に前記細胞をラトランクリンＡ（Lantrunculin  A）（０．１μｇ／ｍｌ）などの解重合溶液中で１時間インキュベートして、アクチン細胞骨格を解重合させることができる。追加の例として、送達前に前記細胞を１０μＭコルヒチン（Ｓｉｇｍａ）中で２時間インキュベートして、微小管ネットワークを解重合させることができる。
【０１４３】
一部の実施形態では、前記細胞集団は、開示する方法において使用する前に富化される。例えば、細胞を体液（例えば、末梢血）から得、それを必要に応じて富化または精製してＢ細胞を濃縮する。細胞は、以下に限定されないが、磁気細胞分離、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）、または密度勾配遠心分離などの当技術分野で公知の任意の方法によって富化することができる。
【０１４４】
前記細胞懸濁液の粘度もまた、本明細書に開示する方法に影響し得る。一部の実施形態では、前記細胞懸濁液の粘度は、約８．９×１０−４Ｐａ．ｓから約４．０×１０−３Ｐａ．ｓまたはこれらの間の任意の値または値の範囲に及ぶ。一部の実施形態では、前記粘度は、約８．９×１０−４Ｐａ．ｓから約４．０×１０−３Ｐａ．ｓの間、約８．９×１０−４Ｐａ．ｓから約３．０×１０−３Ｐａ．ｓの間、約８．９×１０−４Ｐａ．ｓから約２．０×１０−３Ｐａ．ｓの間、または約８．９×１０−３Ｐａ．ｓから約１．０×１０−３Ｐａ．ｓの間のいずれか１つに及ぶ。一部の実施形態では、前記粘度は、約０．８９ｃＰから約４．０ｃＰの間、約０．８９ｃＰから約３．０ｃＰの間、約０．８９ｃＰから約２．０ｃＰの間、または約０．８９ｃＰから約１．０ｃＰの間のいずれか１つに及ぶ。一部の実施形態では、ずり流動化効果が観察され、前記細胞懸濁液の粘度はせん断歪みの条件下で減少する。粘度は、以下に限定されないが、ガラスキャピラリー粘度計などの粘度計またはレオメーターなどの当技術分野で公知の任意の方法によって測定することができる。粘度計は１つの流れ状態下での粘度を測定するが、レオメーターは流れ状態が変化する粘度を測定するために使用される。一部の実施形態では、前記粘度は、血液などのずり流動化溶液について測定される。一部の実施形態では、前記粘度は、約−５℃から約４５℃の間で測定される。例えば、前記粘度は、室温（例えば、約２０℃）、生理的温度（例えば、約３７℃）、生理的温度より高い温度（例えば、約３７℃より高い温度から４５℃またはさらに高い温度）、または低下させた温度（例えば、約−５℃から約４℃）、あるいはこれらの例示的な温度の間の温度で測定される。
【０１４５】
ＩＸ．免疫応答を抑制するまたは寛容性を誘導するための抗原および寛容原性因子
一部の実施形態では、本発明は、免疫応答を抑制するまたは寛容性を誘導するための抗原の送達を提供し、ここで、該抗原は、本明細書に記載するいずれかの方法によって前記細胞に送達される。一部の実施形態では、前記抗原は単一の抗原である。一部の実施形態では、前記抗原は、抗原の混合物である。抗原は、細胞または抗体媒介性の免疫応答などの特異的な免疫応答を刺激する物質である。抗原は、特定の抗原に特異的な、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）などの免疫細胞によって発現された受容体に結合する。抗原と受容体の結合はその後に、細胞内シグナル伝達経路を誘発し、それが細胞活性化、サイトカイン産生、細胞遊走、細胞毒性因子の分泌、および抗体産生などの下流の免疫エフェクター経路に繋がる。
【０１４６】
一部の実施形態では、前記抗原はポリペプチド抗原である。一部の実施形態では、前記化合物は、疾患に関連した抗原を含む。一部の実施形態では、前記抗原は、細菌、真菌、ウイルス、またはアレルゲンなどの外来の源に由来する。一部の実施形態では、前記抗原は、自己タンパク質（すなわち、自己抗原）などの内的な源に由来する。一部の実施形態では、前記抗原は細胞溶解物に存在する。自己抗原は、生物体の自身の細胞上または細胞中に存在する抗原である。自己抗原は、免疫応答を通常刺激しないが、Ｉ型糖尿病または関節リウマチなどの自己免疫疾患の状況では免疫応答を刺激することがある。一部の実施形態では、前記抗原は治療剤である。一部の実施形態では、前記抗原は、治療用ポリペプチドまたは治療用ポリペプチドの断片である。一部の実施形態では、前記治療剤は凝固因子である。例示的な凝固因子としては、以下に限定されないが、第ＶＩＩＩ因子および第ＩＸ因子が挙げられる。例えば、前記抗原は、血友病の処置に使用される第ＶＩＩＩ因子タンパク質であり得る。一部の実施形態では、前記治療剤は、抗体である。例示的な治療抗体には、限定されずに、抗ＴＮＦα、抗ＶＥＧＦ、抗ＣＤ３、抗ＣＤ２０、抗ＩＬ−２Ｒ、抗Ｈｅｒ２、抗ＲＳＶＦ、抗ＣＥＡ、抗ＩＬ−１ベータ、抗ＣＤ１５、抗ミオシン、抗ＰＳＭＡ、抗４０ｋＤａ糖タンパク質、抗ＣＤ３３、抗ＣＤ５２、抗ＩｇＥ、抗ＣＤ１１ａ、抗ＥＧＦＲ、抗Ｃ５、抗アルファ−４インテグリン、抗ＩＬ−１２／ＩＬ−２３、抗ＩＬ−６Ｒおよび抗ＲＡＮＫＬが含まれる。一部の実施形態では、前記治療剤は成長因子である。例示的な治療成長因子には、限定されずに、エリスロポイエチン（ＥＰＯ）ならびに巨核球の分化および成長因子（ＭＤＧＦ）が含まれる。一部の実施形態では、前記治療剤は、ホルモンである。例示的な治療ホルモンには、限定されずに、インスリン、ヒト成長ホルモンおよび卵胞刺激ホルモンが含まれる。一部の実施形態では、前記治療剤は、組換えサイトカインである。例示的な治療組換えサイトカインには、限定されずに、ＩＦＮβ、ＩＦＮαおよびＧＭ−ＣＳＦが含まれる。
【０１４７】
一部の実施形態では、前記抗原は同種移植抗原である。同種移植は、同じ種の遺伝的に非同一のドナーからレシピエントへの細胞、組織、または器官の移入である。一部の実施形態では、前記抗原は修飾抗原である。例えば、抗原を治療剤またはターゲティングペプチドと融合することができる。一部の実施形態では、前記修飾抗原はポリペプチドと融合している。一部の実施形態では、前記修飾抗原は脂質と融合している。一部の実施形態では、前記抗原は、脂質、糖脂質、または多糖などの非タンパク質抗原である。一部の実施形態では、前記抗原は、インタクトな細菌などの微生物全体である。
【０１４８】
一部の実施形態では、前記抗原はウイルスに関連する。一部の実施形態では、前記抗原はウイルス抗原である。例示的なウイルス抗原としては、ＳＡＲＳ−ＣｏＶ抗原およびインフルエンザ抗原が挙げられる。一部の実施形態では、前記化合物は、未知の病原体に感染した組織からの細胞溶解物を含む。一部の実施形態では、前記抗原は治療ビヒクルである。一部の実施形態では、前記治療ビヒクルは、遺伝子療法のために使用されるアデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、バキュロウイルス、ヘルペスウイルス、またはレトロウイルスなどのウイルスである。一部の実施形態では、前記治療ビヒクルはリポソームである。一部の実施形態では、治療ビヒクルはナノ粒子である。
【０１４９】
一部の実施形態では、前記抗原は微生物（例えば、細菌）に関連する。一部の実施形態では、前記抑制された免疫応答および／または誘導された寛容性は、減少した病原性免疫応答または前記微生物（例えば、細菌）への誘導された寛容性を含む。一部の実施形態では、前記微生物は、前記個体のマイクロバイオームの部分である。一部の実施形態では、前記微生物は、前記個体のマイクロバイオームに利益を与え得る。
【０１５０】
ある特定の態様では、本発明は、免疫細胞に抗原を送達するための方法であって、該免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、該抗原が該免疫細胞に入るように、該狭窄部が該免疫細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こすスッテップを含み、ここで、該細胞懸濁液が該抗原と接触する、方法を提供する。一部の実施形態では、寛容原性環境での前記抗原のプロセシングおよび提示は、該抗原に対する免疫応答を抑制する。一部の実施形態では、寛容原性環境での前記抗原のプロセシングおよび提示は、該抗原に対する寛容性を誘導する。一部の実施形態では、前記抗原は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、ｅｘ  ｖｉｖｏで、またはｉｎ  ｖｉｖｏで前記免疫細胞に送達される。
【０１５１】
一部の実施形態では、本発明は、免疫応答を抑制するまたは寛容性を誘導するための寛容原性因子の送達を提供し、ここでは、該寛容原性因子が、本明細書に記載する任意の方法によって該細胞に送達される。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、抗原に対する免疫応答の抑制を増強し、または抗原に対する寛容性の誘導を増強する。例えば、前記寛容原性因子は、抗原提示細胞による前記抗原の寛容原性の提示を促進し得る。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記抗原と同時に導入される。一部の実施形態では、前記寛容原性因子および抗原は、逐次的に導入される。
【０１５２】
ある特定の態様では、本発明は、抗原を含む免疫抑制抗原提示免疫細胞を生成するための方法であって、該免疫抑制免疫細胞が狭窄部に通され、ここで、抗原が該免疫細胞に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こし、それによって、該抗原を含む該免疫抑制免疫細胞が生成される、方法を提供する。
【０１５３】
一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、免疫調節因子（例えば、免疫賦活因子（例えば、共刺激分子）、免疫抑制因子、または炎症性もしくは抗炎症性分子など）の発現および／または活性をモジュレートする。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、免疫賦活因子（例えば、共刺激分子）の発現および／または活性を阻害し、免疫抑制分子の発現および／または活性を増強し、炎症性分子の発現および／または活性を阻害し、かつ／または抗炎症性分子の発現および／または活性を増強する。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、共刺激分子の活性を阻害する。共刺激分子とそれらのリガンドとの間の相互作用は、ＴＣＲシグナル伝達を維持および統合して、最適なＴ細胞の増殖および分化を刺激するために重要である。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、共刺激分子の発現を減少させる。抗原提示細胞上で発現される例示的な共刺激分子としては、以下に限定されないが、ＣＤ４０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ５４、ＣＤ８３、ＣＤ７９、またはＩＣＯＳリガンドが挙げられる。一部の実施形態では、前記共刺激分子はＣＤ８０またはＣＤ８６である。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記共刺激分子を発現するまたはその発現をモジュレートする核酸の発現を阻害する。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記共刺激分子を発現するまたはその発現をモジュレートする核酸を欠失させる。一部の実施形態では、前記共刺激分子を発現するまたはその発現をモジュレートする前記核酸の欠失は、遺伝子編集を通じて達成される。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は前記共刺激分子を阻害する。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記共刺激分子を阻害するｓｉＲＮＡである。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記共刺激分子の発現を抑制する転写レギュレーターの活性を増加させる。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、共刺激分子の発現を抑制するタンパク質インヒビターの活性を増加させる。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記共刺激分子のサプレッサーをコードする核酸を含む。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は前記共刺激分子を分解させる。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、破壊のために前記共刺激分子を標識する。例えば、寛容原性因子は、前記共刺激分子のユビキチン化を増強し、それによってそれを破壊の標的にし得る。
【０１５４】
一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、免疫抑制分子の発現および／または活性を増強する。一部の実施形態では、前記免疫抑制分子は、共阻害分子、転写レギュレーター、または免疫抑制分子である。共阻害分子は、リンパ球の活性化を負に調節する。例示的な共阻害分子としては、以下に限定されないが、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＨＶＥＭ、Ｂ７−Ｈ３、ＴＲＡＩＬ、免疫グロブリン様転写物（ＩＬＴ）受容体（ＩＬＴ２、ＩＬＴ３、ＩＬＴ４）、ＦａｓＬ、ＣＴＬＡ４、ＣＤ３９、ＣＤ７３、およびＢ７−Ｈ４が挙げられる。一部の実施形態では、前記共阻害分子はＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２である。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記共阻害分子の活性を増加させる。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、共阻害分子の発現を増加させる。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は前記共阻害分子をコードする。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記共阻害分子の活性を増加させる。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記共阻害分子の発現を増強する転写レギュレーターの活性を増加させる。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記共阻害分子の発現を増加させるポリペプチドの活性を増加させる。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記共阻害分子のエンハンサーをコードする核酸を含む。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、共阻害分子のインヒビターを阻害する。
【０１５５】
一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、免疫抑制分子の発現および／または活性を増加させる。例示的な免疫抑制分子としては、以下に限定されないが、アルギナーゼ−１（ＡＲＧ１）、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）、誘導型一酸化窒素シンターゼ（ｉＮＯＳ）、一酸化窒素（ＮＯ）、一酸化窒素シンターゼ２（ＮＯＳ２）、胸腺間質性リンパ球新生因子（ＴＳＬＰ）、血管作動性腸管ペプチド（ＶＩＰ）、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）、トランスフォーミング成長因子ベータ（ＴＧＦβ）、ＩＦＮα、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、およびＩＬ−３５が挙げられる。一部の実施形態では、前記免疫抑制分子はＮＯまたはＩＤＯである。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記免疫抑制分子をコードする。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記免疫抑制分子の活性を増加させる。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記免疫抑制分子の発現を増強する転写レギュレーターの活性を増加させる。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記免疫抑制分子の発現を増強するポリペプチドの活性を増加させる。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記免疫抑制分子のエンハンサーをコードする核酸を含む。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、免疫抑制分子の負の調節因子を阻害する。
【０１５６】
一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、炎症性分子の発現および／または活性を阻害する。一部の実施形態では、前記炎症性分子は炎症性転写因子である。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は前記炎症性転写因子を阻害する。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、炎症性転写因子の発現を減少させる。一部の実施形態では、前記炎症性転写因子は、ＮＦ−κＢ、インターフェロン調節因子（ＩＲＦ）、またはＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達経路に関連した分子である。前記ＮＦ−κＢ経路は、サイトカイン、ケモカイン、および接着分子などの炎症誘発性遺伝子の発現を媒介する原型的な炎症誘発性シグナル伝達経路である。インターフェロン調節因子（ＩＲＦ）は、炎症誘発性遺伝子の発現を調節できる転写因子のファミリーを構成する。前記ＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達経路は、細胞外サイトカインシグナルからの情報を核に伝達し、免疫細胞の増殖および分化に関与する遺伝子のＤＮＡ転写および発現を生じさせる。ＪＡＫ−ＳＴＡＴ系は、細胞表面受容体、ヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）、およびシグナル伝達兼転写活性化因子（ＳＴＡＴ）タンパク質からなる。例示的なＪＡＫ−ＳＴＡＴ分子としては、以下に限定されないが、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、Ｔｙｋ２、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５（ＳＴＡＴ５ＡおよびＳＴＡＴ５Ｂ）、およびＳＴＡＴ６が挙げられる。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、サイトカインシグナル伝達のサプレッサー（ＳＯＣＳ）タンパク質の発現を増強する。ＳＯＣＳタンパク質は、前記ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路を通じたシグナル伝達を阻害し得る。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記炎症性転写因子をコードする核酸の発現を阻害する。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記炎症性転写因子をコードする核酸を欠失させる。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記炎症性転写因子の発現を抑制する転写レギュレーターの活性を増加させる。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記炎症性転写因子の発現を抑制するタンパク質インヒビターの活性を増加させる。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記炎症性転写因子のサプレッサーをコードする核酸を含む。
【０１５７】
一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、抗炎症性分子の発現および／または活性を増強する。一部の実施形態では、前記抗炎症性分子は抗炎症性転写因子である。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は前記抗炎症性転写因子を増強する。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、抗炎症性転写因子の発現を増加させる。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記抗炎症性転写因子をコードする核酸の発現を増強する。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記抗炎症性転写因子の発現を抑制する転写レギュレーターの活性を減少させる。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記抗炎症性転写因子の発現を抑制するタンパク質インヒビターの活性を減少させる。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、前記抗炎症性転写因子のエンハンサーをコードする核酸を含む。
【０１５８】
一部の実施形態では、前記寛容原性因子は核酸を含む。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は核酸である。例示的な核酸としては、以下に限定されないが、組換え核酸、ＤＮＡ、組換えＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓａＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｌｎｃＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ガイドＲＮＡ、およびｓｈＲＮＡが挙げられる。一部の実施形態では、前記核酸は、前記細胞中の核酸と同種である。一部の実施形態では、前記核酸は、前記細胞中の核酸とは異種である。一部の実施形態では、前記寛容原性因子はプラスミドである。一部の実施形態では、前記核酸は治療用核酸である。一部の実施形態では、前記核酸は治療用ポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、ｓｉＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｌｎｃＲＮＡ、ｔＲＮＡ、またはｓｈＲＮＡをコードする核酸を含む。例えば、寛容原性因子は、炎症性遺伝子の発現をノックダウンするためのｓｉＲＮＡを含み得る。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、ＮＦκＢに結合し、ＮＦκＢの活性化および下流のシグナル伝達を防止するＤＮＡ配列である。
【０１５９】
一部の実施形態では、前記寛容原性因子はポリペプチドを含む。一部の実施形態では、前記寛容原性因子はポリペプチドである。一部の実施形態では、前記タンパク質またはポリペプチドは、治療用タンパク質、抗体、融合タンパク質、抗原、合成タンパク質、レポーターマーカー、または選択マーカーである。一部の実施形態では、前記タンパク質は、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、メガヌクレアーゼ、ＣＲＥリコンビナーゼ、トランスポザーゼ、ＣＡＳ９酵素、またはインテグラーゼ酵素などの遺伝子編集用タンパク質またはヌクレアーゼである。一部の実施形態では、前記融合タンパク質は、以下に限定されないが、抗体薬物コンジュゲートなどのキメラタンパク質薬物またはＧＳＴもしくはストレプトアビジンでタグ化されたタンパク質などの組換え融合タンパク質を含み得る。一部の実施形態では、前記化合物は転写因子である。例示的な転写因子としては、以下に限定されないが、Ｏｃｔ５、Ｓｏｘ２、ｃ−Ｍｙｃ、Ｋｌｆ−４、Ｔ−ｂｅｔ、ＧＡＴＡ３、ＦｏｘＰ３、およびＲＯＲγｔが挙げられる。一部の実施形態では、前記ポリペプチドは、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−３５、ＩＦＮα、またはＴＧＦβである。一部の実施形態では、前記ポリペプチドは治療用ポリペプチドである。一部の実施形態では、前記ポリペプチドは治療用ポリペプチドの断片である。一部の実施形態では、前記ポリペプチドはペプチド核酸（ＰＮＡ）である。
【０１６０】
一部の実施形態では、前記寛容原性因子はタンパク質核酸複合体を含む。一部の実施形態では、前記寛容原性因子はタンパク質核酸複合体である。一部の実施形態では、規則的な間隔をもってクラスター化された短鎖反復回文配列（ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ  ｒｅｇｕｌａｒｌｙ  ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ  ｓｈｏｒｔ  ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ  ｒｅｐｅａｔｓ）（ＣＲＩＳＰＲ）−Ｃａｓ９などのタンパク質核酸複合体は、ゲノム編集での応用において使用される。これらの複合体は、非特異的ＤＮＡ切断ヌクレアーゼと組み合わせて配列特異的ＤＮＡ結合ドメインを含有する。これらの複合体は、特定の遺伝子の配列の付加、破壊、または変更などの標的ゲノム編集を可能とする。一部の実施形態では、標的遺伝子の転写をブロックまたは誘導するために、無能力化されたＣＲＩＳＰＲが使用される。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、Ｃａｓ９タンパク質およびガイドＲＮＡまたはドナーＤＮＡを含有する。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸およびガイドＲＮＡまたはドナーＤＮＡを含む。一部の実施形態では、前記遺伝子編集複合体は、共刺激分子（例えば、ＣＤ８０および／またはＣＤ８６）の発現を標的にする。
【０１６１】
一部の実施形態では、前記寛容原性因子はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む。一部の実施形態では、前記寛容原性因子はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。一部の実施形態では、前記ＣＡＲは、細胞外認識ドメイン（例えば、抗原結合ドメイン）、膜貫通ドメイン、および１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインの融合物である。抗原が結合すると、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達部分は、免疫細胞内での免疫抑制または寛容原性に関連した応答を開始することができる。一部の実施形態では、前記ＣＡＲはキメラＴ細胞抗原受容体である。一部の実施形態では、前記ＣＡＲの抗原結合ドメインは一本鎖抗体可変断片（ｓｃＦｖ）である。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、抗原に結合すると免疫抑制サイトカインの産生を誘発する細胞質シグナル伝達ドメインを含有する改変されたＴＣＲをコードする。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、抗原に結合すると免疫抑制サイトカインの産生を誘発する細胞質シグナル伝達ドメインを含有するキメラ抗原受容体をコードする。
【０１６２】
一部の実施形態では、前記寛容原性因子は小分子を含む。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は小分子である。一部の実施形態では、前記小分子は、共刺激分子の活性を阻害する、共阻害分子の活性を増強する、および／または炎症性分子の活性を阻害する。例示的な小分子としては、以下に限定されないが、医薬品、代謝物、および放射性核種または放射性核種含有分子が挙げられる。一部の実施形態では、前記医薬品は、治療薬および／または細胞毒性剤である。一部の実施形態では、前記化合物はナノ粒子を含む。ナノ粒子としては、例えば、金ナノ粒子、量子ドット、カーボンナノチューブ、ナノシェル、デンドリマー、およびリポソームが挙げられる。一部の実施形態では、前記ナノ粒子は、治療用分子を含有するまたは治療用分子に（共有結合的または非共有結合的に）連結されている。一部の実施形態では、前記ナノ粒子は、ｍＲＮＡまたはｃＤＮＡなどの核酸を含有する。
【０１６３】
ある特定の態様では、本発明は、免疫細胞に寛容原性因子を送達するための方法であって、免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、該寛容原性因子が該細胞に入るように、該狭窄部が該免疫細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こすステップウィ含み、ここで、該細胞懸濁液は、該寛容原性因子と接触する、方法を提供する。一部の実施形態では、前記寛容原性因子は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、ｅｘ  ｖｉｖｏで、またはｉｎ  ｖｉｖｏで前記免疫細胞に送達される。
【０１６４】
一部の実施形態では、送達される前記化合物は精製されている。一部の実施形態では、前記化合物は、少なくとも約６０重量％（乾燥重量）の目的の化合物である。一部の実施形態では、前記精製された化合物は、少なくとも約７５％、９０％、または９９％の目的の化合物である。一部の実施形態では、前記精製された化合物は、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９８％、９９％、または１００％（ｗ／ｗ）の目的の化合物である。純度は、以下に限定されないが、カラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、ＨＰＬＣ分析、ＮＭＲ、質量分析、またはＳＤＳ−ＰＡＧＥなどの任意の公知の方法によって決定される。精製されたＤＮＡまたはＲＮＡは、外因性の核酸、炭水化物、および脂肪を含まないＤＮＡまたはＲＮＡとして定義される。
【０１６５】
一部の実施形態では、前記化合物は中間体化合物である。前記中間体化合物は、先行する中間体から形成され、さらに反応して最終反応生成物を与える分子的実体であり得る。一部の実施形態では、前記中間体化合物は、酵素によって切断されて、タンパク質の成熟した機能的形態を産生するタンパク質前駆体、またはプロタンパク質である。一部の実施形態では、前記中間体化合物は、活性酵素を産生するために修飾または切断を必要とする不活性の酵素前駆体、またはチモーゲンである。
【０１６６】
Ｘ．応用
一部の態様では、本発明は、化合物が免疫細胞に入るように狭窄部に通すことによって改変された該免疫細胞を患者に導入することによって該患者を処置する方法を提供する。一部の実施形態では、前記処置は、そのような改変された免疫細胞を前記患者に導入する複数回（２回、３回、４回、５回、６回、またはそれより多くの回数のいずれかなど）のステップを含む。一部の実施形態では、前記細胞は、患者から単離され、開示した方法にしたがって改変され、再び該患者に導入される。例えば、免疫細胞の集団が患者から単離され、化合物の送達を達成するために前記狭窄部に通され、次いで治療的免疫応答を増大させるために該患者に再注入される。一部の実施形態では、前記細胞が個体から単離され、開示した方法にしたがって改変され、再び該個体に導入される。例えば、免疫細胞の集団が個体から単離され、化合物の送達を達成するために前記狭窄部に通され、次いで該個体において免疫応答を抑制するまたは寛容性を誘導するために該患者に再注入される。
【０１６７】
一部の実施形態では、本発明は、化合物が細胞に入るように狭窄部に通すことによって改変された該細胞を個体に導入することによって該個体を処置する方法を提供する。一部の実施形態では、前記細胞は自己の細胞である。例えば、前記免疫細胞が個体（例えば、患者）から単離され、開示した方法にしたがって改変され、再び該個体に導入される。一部の実施形態では、前記細胞が個体から単離され、開示した方法にしたがって改変され、再び同じ個体に導入される。一部の実施形態では、前記細胞は同種細胞である。例えば、前記細胞が異なる個体から単離され、開示した方法にしたがって改変され、第１の個体（例えば、患者）に導入される。一部の実施形態では、複数の個体からの細胞プールが開示した方法にしたがって改変され、第１の個体（例えば、患者）に導入される。一部の実施形態では、前記細胞が個体から単離され、開示した方法にしたがって改変され、異なる個体に導入される。一部の実施形態では、細胞の集団が個体（患者）または異なる個体から単離され、新たな抗体産生を誘導する化合物の送達を達成するために前記狭窄部に通され、次いで治療的応答を増大させるために患者に注入される。
【０１６８】
一部の実施形態では、前記処置は、本明細書中に記載する改変された免疫細胞を前記個体に投与する複数回（２回、３回、４回、５回、６回、またはそれより多くの回数のいずれかなど）のステップを含む。例えば、一部の実施形態では、化合物が細胞に入るように狭窄部に通すことによって改変された該細胞を個体に２回、３回、４回、５回、６回、またはそれより多くの回数投与することによって該個体を処置する方法が提供される。一部の実施形態では、前記細胞の任意の２回の連続する投与の間の時間間隔は、少なくとも約１日（例えば、列挙する値の間の任意の範囲を含めて、少なくともおおよそ、２日、３日、４日、５日、６日、１週、２週、３週、１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、６カ月、７カ月、８カ月、９カ月、１０カ月、１１カ月、１年、またはより長い期間のいずれか）である。
【０１６９】
上記の方法のいずれについても、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、ｅｘ  ｖｉｖｏで、またはｉｎ  ｖｉｖｏで実行される。ｉｎ  ｖｉｖｏでの応用のために、デバイスを血管内腔に埋め込むことができ、例えば、インラインのステントが動脈または静脈に埋め込まれる。一部の実施形態では、本方法は、患者細胞のｅｘ−ｖｉｖｏ処理および該患者への該細胞の即時の再導入のためのベッドサイドシステムの部分として使用される。そのような方法は、個体において免疫応答を抑制するまたは寛容性を誘導する手段として用いられ得る。一部の実施形態では、本方法は、ごくわずかに訓練された技師を有する典型的な病院の試験室で実行することができる。一部の実施形態では、患者操作処置システム（patient  operated  treatment  system）が使用され得る。一部の実施形態では、本方法は、インラインの血液処理システムを使用して実行され、該システムでは、血液が患者から直接的に採取され、前記狭窄部に通されて血液細胞への化合物送達を生じ、そして処理後に該患者に再び直接的に輸血される。
【０１７０】
ＸＩ．システムおよびキット
一部の態様では、本発明は、前記狭窄部、細胞懸濁液、および本明細書中に開示する方法に使用するための化合物を含むシステムを提供する。前記システムは、上記に開示した方法について記載した任意の実施形態を含むことができ、該実施形態には、マイクロ流体チャネルまたは細胞を変形させる狭窄部を提供するための孔を有する表面、細胞懸濁液、細胞の摂動、送達のパラメーター、化合物、および／または応用などが含まれる。一部の実施形態では、前記細胞を変形させる狭窄部は、免疫細胞への送達のためのサイズとなっている。一部の実施形態では、作動する流速、細胞および化合物濃度、前記狭窄部中での前記細胞の速度、および前記細胞懸濁液の組成（例えば、容量オスモル濃度、塩濃度、血清含有量、細胞濃度、ｐＨなど）などの送達のパラメーターは、免疫応答を抑制するまたは寛容性を誘導するための化合物の応答を最大にするために最適化される。
【０１７１】
免疫応答を抑制するまたは寛容性を誘導するための化合物の送達に使用するためのキットまたは物品も提供される。一部の実施形態では、前記キットは、好適な包装中に本明細書中に記載する組成物（例えば、マイクロ流体チャネルまたは孔を含有する表面、細胞懸濁液、および／または化合物）を含む。好適な包装材料は当技術分野で公知であり、例えば、バイアル（密封バイアルなど）、容器、アンプル、ボトル、瓶、軟包装（例えば、密封マイラーまたはプラスチック袋）などが挙げられる。これらの製品は、さらに滅菌および／または密封されていてもよい。
【０１７２】
本発明は、本明細書に記載の方法の構成部分を含むキットも提供し、免疫応答を抑制するまたは寛容性を誘導するために前記方法を実行するための指示（複数可）をさらに含んでもよい。本明細書に記載のキットは、その他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、および包装挿入物などのその他の材料を、本明細書に記載の任意の方法を実行するための指示（例えば、免疫応答を抑制するまたは寛容性を誘導するための指示）と共にさらに含んでもよい。
ＸＩＩ．例示的な実施形態
【０１７３】
実施形態１．個体において抗原への寛容性を誘導するための方法であって、
ａ．免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、該細胞と接触した抗原が該免疫細胞に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、該細胞の摂動を引き起こす、ステップと、
ｂ．該免疫細胞を該個体に導入するステップであって、該免疫細胞が寛容原性免疫細胞であり、該抗原の提示が該抗原への寛容性を誘導する、ステップと
を含む方法。
【０１７４】
実施形態２．個体において抗原への寛容性を誘導するための方法であって、
ａ．免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、該細胞と接触した抗原および寛容原性因子が該免疫細胞に入り、それによって、該抗原を含む寛容原性免疫細胞を生成するように、該狭窄部が該細胞を変形させ、該細胞の摂動を引き起こす、ステップと、
ｂ．該寛容原性免疫細胞を該個体に導入するステップであって、該抗原の提示が該抗原への寛容性を誘導する、ステップと
を含む方法。
【０１７５】
実施形態３．個体において抗原への免疫応答を抑制するための方法であって、
ａ．免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、該細胞と接触した抗原が該免疫細胞に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、該細胞の摂動を引き起こす、ステップと、
ｂ．該免疫細胞を該個体に導入するステップであって、該免疫細胞が寛容原性免疫細胞であり、該抗原の提示が該抗原への免疫応答を抑制する、ステップと
を含む方法。
【０１７６】
実施形態４．個体において抗原への免疫応答を抑制するための方法であって、
ａ．免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、該細胞と接触した抗原および寛容原性因子が該免疫細胞に入り、それによって、該抗原を含む免疫抑制免疫細胞を生成するように、該狭窄部が該細胞を変形させ、該細胞の摂動を引き起こす、ステップと、
ｂ．該免疫抑制免疫細胞を該個体に導入するステップであって、該抗原の提示が該抗原への免疫応答を抑制する、ステップと
を含む方法。
【０１７７】
実施形態５．個体において抗原への寛容性を誘導するための方法であって、抗原を含む寛容原性免疫細胞を該個体に導入するステップであって、該抗原の提示が該抗原への寛容性を誘導するステップを含み、該寛容原性免疫細胞またはその前駆体を狭窄部に通すことによって該抗原が該寛容原性免疫細胞に導入され、ここで、該抗原が該寛容原性免疫細胞またはその前駆体に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、方法。
【０１７８】
実施形態６．個体において抗原への寛容性を誘導するための方法であって、抗原および寛容原性因子を含む寛容原性免疫細胞を該個体に導入するステップであって、該抗原の提示が該抗原への寛容性を誘導するステップを含み、該寛容原性免疫細胞またはその前駆体を狭窄部に通すことによって該抗原および該寛容原性因子が寛容原性免疫細胞に導入され、ここで、該抗原および該寛容原性因子が該寛容原性免疫細胞またはその前駆体に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、方法。
【０１７９】
実施形態７．個体において抗原への免疫応答を抑制するための方法であって、該抗原を含む免疫抑制免疫細胞を該個体に導入するステップであって、該抗原の提示が該抗原への免疫応答を抑制するステップを含み、該免疫抑制免疫細胞またはその前駆体を狭窄部に通すことによって該抗原が該免疫抑制免疫細胞に導入され、ここで、該抗原が該免疫抑制免疫細胞またはその前駆体に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、方法。
【０１８０】
実施形態８．個体において抗原への免疫応答を抑制するための方法であって、該抗原および寛容原性因子を含む免疫抑制免疫細胞を該個体に導入するステップであって、該抗原の提示が該抗原への免疫応答を抑制するステップを含み、該免疫抑制免疫細胞またはその前駆体を狭窄部に通すことによって該抗原および該寛容原性因子が該免疫抑制免疫細胞に導入され、ここで、該抗原および該寛容原性因子が該免疫抑制免疫細胞またはその前駆体に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、方法。
【０１８１】
実施形態９．寛容原性免疫細胞を生成するための方法であって、免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、該細胞と接触した寛容原性因子が該免疫細胞に入り、それによって、該寛容原性免疫細胞を生成するように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こすステップを含む、方法。
【０１８２】
実施形態１０．免疫抑制免疫細胞を生成するための方法であって、免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、該細胞と接触した寛容原性因子が該免疫細胞に入り、それによって、該免疫抑制免疫細胞を生成するように、該狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こすステップを含む、方法。
【０１８３】
実施形態１１．前記細胞と接触した寛容原性因子および抗原が前記免疫細胞に入るように、前記狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、実施形態９または１０に記載の方法。
【０１８４】
実施形態１２．前記免疫細胞が第２の狭窄部にさらに通され、該細胞と接触した抗原が該免疫細胞に入るように、該第２の狭窄部が該細胞を変形させ、それによって該細胞の摂動を引き起こす、実施形態９または１０に記載の方法。
【０１８５】
実施形態１３．前記免疫細胞が抗原提示細胞である、実施形態９〜１２のいずれか１つに記載の方法。
【０１８６】
実施形態１４．抗原を含む寛容原性抗原提示細胞を生成する方法であって、寛容原性抗原提示細胞が狭窄部に通され、ここで、該細胞と接触した抗原が該抗原提示細胞に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、該細胞の摂動を引き起こす、方法。
【０１８７】
実施形態１５．抗原を含む免疫抑制抗原提示細胞を生成する方法であって、免疫抑制抗原提示細胞が狭窄部に通され、ここで、該細胞と接触した抗原が該抗原提示細胞に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、該細胞の摂動を引き起こす、方法。
【０１８８】
実施形態１６．寛容原性表現型を生成する寛容原性因子を免疫細胞に送達するための方法であって、該免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、該寛容原性因子が該細胞に入ることができるように、該狭窄部が該免疫細胞を変形させ、該細胞の摂動を引き起こす、ステップと、該細胞懸濁液を該寛容原性因子と接触させるステップであって、該寛容原性因子が免疫賦活因子の発現および／もしくは活性を阻害し、免疫抑制分子の発現および／もしくは活性を増強し、炎症性分子の発現および／もしくは活性を阻害し、ならびに／または抗炎症分子の発現および／もしくは活性を増強する、ステップとを含む方法。
【０１８９】
実施形態１７．寛容原性免疫細胞に抗原を送達するための方法であって、該寛容原性免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、該抗原が該細胞に入ることができるように、該狭窄部が該寛容原性免疫細胞を変形させ、該細胞の摂動を引き起こす、ステップと、該細胞懸濁液を該抗原と接触させるステップとを含む方法。
【０１９０】
実施形態１８．免疫抑制表現型を生成する寛容原性因子を免疫細胞に送達するための方法であって、該免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、該寛容原性因子が該細胞に入ることができるように、該狭窄部が該免疫細胞を変形させ、該細胞の摂動を引き起こす、ステップと、該細胞懸濁液を該寛容原性因子と接触させるステップであって、該寛容原性因子が免疫賦活因子の発現および／もしくは活性を阻害し、免疫抑制分子の発現および／もしくは活性を増強し、炎症性分子の発現および／もしくは活性を阻害し、ならびに／または抗炎症分子の発現および／もしくは活性を増強する、ステップとを含む方法。
【０１９１】
実施形態１９．免疫抑制免疫細胞に抗原を送達するための方法であって、該免疫抑制免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、該抗原が該細胞に入ることができるように、該狭窄部が該免疫抑制免疫細胞を変形させ、該細胞の摂動を引き起こす、ステップと、該細胞懸濁液を該抗原と接触させるステップとを含む方法。
【０１９２】
実施形態２０．個体において抗原への免疫応答を抑制するための方法であって、
ａ．第１の免疫細胞を含む第１の細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、該細胞と接触した抗原が該免疫細胞に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、該細胞の摂動を引き起こす、ステップと、
ｂ．第２の免疫細胞を含む第２の細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、該細胞と接触した寛容原性因子が該免疫細胞に入り、それによって免疫抑制免疫細胞を生成するように、該狭窄部が該細胞を変形させ、該細胞の摂動を引き起こす、ステップと、
ｃ．該第１の免疫細胞および第２の免疫細胞を該個体に導入するステップであって、該抗原の提示が該抗原への免疫応答を抑制する、ステップと
を含む方法。
【０１９３】
実施形態２１．前記第１または第２の免疫細胞による前記抗原の提示が、該抗原への免疫応答を抑制する、実施形態２０に記載の方法。
【０１９４】
実施形態２２．前記第２の免疫細胞が前記第１の免疫細胞に免疫抑制表現型を付与し、それによって免疫抑制性の第１の免疫細胞を生成し、該免疫抑制性の第１の免疫細胞による該抗原の提示が該抗原への免疫応答を抑制する、実施形態２０に記載の方法。
【０１９５】
実施形態２３．個体において抗原への寛容性を誘導するための方法であって、
ａ．第１の免疫細胞を含む第１の細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、該細胞と接触した抗原が該免疫細胞に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、該細胞の摂動を引き起こす、ステップと、
ｂ．第２の免疫細胞を含む第２の細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、該細胞と接触した寛容原性因子が該免疫細胞に入り、それによって寛容原性免疫細胞を生成するように、該狭窄部が該細胞を変形させ、該細胞の摂動を引き起こす、ステップと、
ｃ．該第１の免疫細胞および第２の免疫細胞を該個体に導入するステップであって、該抗原の提示が該抗原への免疫応答を抑制する、ステップとを含む方法。
【０１９６】
実施形態２４．前記第１または第２の免疫細胞による前記抗原の提示が、該抗原への寛容性を誘導する、実施形態２３に記載の方法。
【０１９７】
実施形態２５．前記第２の免疫細胞が前記第１の免疫細胞に寛容原性表現型を付与し、それによって寛容原性の第１の免疫細胞を生成し、該寛容原性の第１の免疫細胞による該抗原の提示が該抗原への寛容性を誘導する、実施形態２３に記載の方法。
【０１９８】
実施形態２６．前記第１の免疫細胞および前記第２の免疫細胞が、前記個体に同時に導入される、実施形態２０〜２５のいずれか１つに記載の方法。
【０１９９】
実施形態２７．前記第１の免疫細胞および前記第２の免疫細胞が、前記個体に逐次的に導入される、実施形態２０〜２５のいずれか１つに記載の方法。
【０２００】
実施形態２８．前記寛容原性免疫細胞またはその前駆体が、アジュバントと接触していない、実施形態１、２、５、６、９、１１〜１４、１６、１７および２３〜２７のいずれか１つに記載の方法。
【０２０１】
実施形態２９．前記免疫抑制免疫細胞またはその前駆体が、アジュバントと接触していない、実施形態３、４、７、８、１０〜１３、１５、１８〜２２、２６および２７のいずれか１つに記載の方法。
【０２０２】
実施形態３０．前記アジュバントが、ＴＬＲ３およびＲＬＲリガンド、ＴＬＲ４リガンド、ＴＬＲ５リガンド、ＴＬＲ７／８リガンド、ＴＬＲ９リガンド、ＮＯＤ２リガンド、ミョウバン、油中水型エマルジョン、ｒｈＩＬ−２、抗ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＩＬ−１２ならびに環状ジヌクレオチドからなる群から選択される、実施形態２８または２９に記載の方法。
【０２０３】
実施形態３１．前記寛容原性免疫細胞が、該寛容原性免疫細胞の非寛容原性前駆体と比較して１つまたは複数の共刺激シグナルを提供する低減された能力を含む、実施形態１、２、５、６、９、１１〜１４、１６、１７および２３〜２８のいずれか１つに記載の方法。
【０２０４】
実施形態３２．前記免疫抑制免疫細胞が、該免疫抑制免疫細胞の非免疫抑制前駆体と比較して１つまたは複数の共刺激シグナルを提供する低減された能力を含む、実施形態３、４、７、８、１０〜１３、１５、１８〜２２、２６、２７および２９のいずれか１つに記載の方法。
【０２０５】
実施形態３３．前記１つまたは複数の共刺激シグナルが、ＣＤ４０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ５４、ＣＤ８３、ＣＤ７９およびＩＣＯＳリガンドからなる群から選択される分子によって媒介される、実施形態３１または３２に記載の方法。
【０２０６】
実施形態３４．前記寛容原性免疫細胞が、該寛容原性免疫細胞の非寛容原性前駆体と比較して１つまたは複数の炎症性シグナルを提供する低減された能力を含む、実施形態１、２、５、６、９、１１〜１４、１６、１７、２３〜２８および３１のいずれか１つに記載の方法。
【０２０７】
実施形態３５．前記免疫抑制免疫細胞が、該免疫抑制免疫細胞の非免疫抑制前駆体と比較して１つまたは複数の炎症性シグナルを提供する低減された能力を含む、実施形態３、４、７、８、１０〜１３、１５、１８〜２２、２６、２７、２９および３２のいずれか１つに記載の方法。
【０２０８】
実施形態３６．前記１つまたは複数の炎症性シグナルが、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ−ガンマ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、ＮＦ−κＢ、インターフェロン調節因子（ＩＲＦ）、およびＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達経路に関連した分子からなる群から選択される分子によって媒介される、実施形態３４または３５に記載の方法。
【０２０９】
実施形態３７．前記寛容原性因子が、免疫賦活因子の発現および／もしくは活性を阻害し、免疫抑制分子の発現および／もしくは活性を増強し、炎症性分子の発現および／もしくは活性を阻害し、ならびに／または抗炎症分子の発現および／もしくは活性を増強する、実施形態２、４、６、８〜１１、１６、１８、２０および２３のいずれか１つに記載の方法。
【０２１０】
実施形態３８．前記抗原が、前記寛容原性免疫細胞によって提示される、実施形態１、２、５、６、１１〜１４、１７、２３〜２８および３１のいずれか１つに記載の方法。
【０２１１】
実施形態３９．前記抗原が、前記免疫抑制免疫細胞によって提示される、実施形態３、４、７、８、１１〜１３、１５、１９〜２２、２６、２７、２９および３２のいずれか１つに記載の方法。
【０２１２】
実施形態４０．少なくとも１つの他の抗原への寛容性が誘導される、実施形態２、６、９、１１〜１３、１６、２３〜２８および３１のいずれか１つに記載の方法。
【０２１３】
実施形態４１．少なくとも１つの他の抗原への免疫応答が抑制される、実施形態４、８、１０〜１３、１８、２０〜２２、２６、２７、２９および３２のいずれか１つに記載の方法。
【０２１４】
実施形態４２．少なくとも１つのさらなる抗原が、前記細胞に導入される、実施形態１〜８、１１、１２、１４、１５、１７、１９および２０〜２５のいずれか１つに記載の方法。
【０２１５】
実施形態４３．少なくとも１つのさらなる寛容原性因子が、前記細胞に導入される、実施形態２、４、６、８、９〜１１、１６、１８、２０および２３のいずれか１つに記載の方法。
【０２１６】
実施形態４４．個体において免疫応答を抑制するための方法であって、
ａ．免疫細胞を含む細胞懸濁液を狭窄部に通すステップであって、該細胞と接触した非機能的サイトカイン結合タンパク質をコードする化合物が該免疫細胞に入るように、該狭窄部が該細胞を変形させ、該細胞の摂動を引き起こす、ステップと、
ｂ．該免疫細胞を該個体に導入するステップであって、該非機能的サイトカイン結合タンパク質が発現され、該非機能的サイトカイン結合タンパク質が遊離炎症性サイトカインを結合する、ステップと
を含む方法。
【０２１７】
実施形態４５．前記非機能的サイトカイン結合タンパク質が、非機能的サイトカイン受容体を含む、実施形態４４に記載の方法。
【０２１８】
実施形態４６．前記非機能的サイトカイン受容体が、細胞質シグナル伝達ドメインを欠いている、実施形態４５に記載の方法。
【０２１９】
実施形態４７．前記非機能的サイトカイン結合タンパク質が、標的サイトカインを切断するタンパク分解部位を含む、実施形態４４に記載の方法。
【０２２０】
実施形態４８．前記非機能的サイトカイン結合タンパク質が、抗サイトカイン抗体を含む、実施形態４４に記載の方法。
【０２２１】
実施形態４９．前記非機能的サイトカイン結合タンパク質が、抗サイトカインＢ細胞受容体を含む、実施形態４４に記載の方法。
【０２２２】
実施形態５０．前記免疫細胞が、前記個体に由来する、実施形態１〜７および２０〜４４のいずれか１つに記載の方法。
【０２２３】
実施形態５１．前記免疫細胞が、異なる個体に由来する、実施形態１〜７および２０〜４４のいずれか１つに記載の方法。
【０２２４】
実施形態５２．前記狭窄部が、マイクロ流体チャネルの中に含有される、実施形態１〜５１のいずれか１つに記載の方法。
【０２２５】
実施形態５３．前記狭窄部が孔であるか、または孔の中に含有される、実施形態１〜５１のいずれか１つに記載の方法。
【０２２６】
実施形態５４．前記孔が、表面に含有される、実施形態５３に記載の方法。
【０２２７】
実施形態５５．前記表面が、フィルターである、実施形態５４に記載の方法。
【０２２８】
実施形態５６．前記表面が、膜である、実施形態５４に記載の方法。
【０２２９】
実施形態５７．前記狭窄部サイズが、前記免疫細胞の直径の関数である、実施形態１〜５６のいずれか１つに記載の方法。
【０２３０】
実施形態５８．前記狭窄部サイズが、前記細胞直径の約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％または約９９％である、実施形態１〜５７のいずれか１つに記載の方法。
【０２３１】
実施形態５９．前記チャネルが、約１０μｍの狭窄部長および約４μｍの狭窄部幅を含む、実施形態１〜５８のいずれか１つに記載の方法。
【０２３２】
実施形態６０．前記孔径が、約０．４μｍ、約３μｍ、約４μｍ、約５μｍ、約８μｍ、約１０μｍ、約１２μｍまたは約１４μｍである、実施形態１〜５９のいずれか１つに記載の方法。
【０２３３】
実施形態６１．約−５℃〜約４５℃の間で実行される、実施形態１〜６０のいずれか１つに記載の方法。
【０２３４】
実施形態６２．前記細胞懸濁液が、混合細胞集団を含む、実施形態１〜４、９、１０および１６〜６１のいずれか１つに記載の方法。
【０２３５】
実施形態６３．前記細胞懸濁液が、全血である、実施形態６２に記載の方法。
【０２３６】
実施形態６４．前記細胞懸濁液が、末梢血単核細胞を含む、実施形態６２に記載の方法。
【０２３７】
実施形態６５．前記細胞懸濁液が、精製された細胞集団を含む、実施形態１〜４、９、１０および１６〜６１のいずれか１つに記載の方法。
【０２３８】
実施形態６６．前記細胞懸濁液が、哺乳動物細胞を含む、実施形態１〜４、９、１０および１６〜６５のいずれか１つに記載の方法。
【０２３９】
実施形態６７．前記細胞懸濁液が、サル細胞、マウス細胞、イヌ細胞、ネコ細胞、ウマ細胞、ラット細胞、ヒツジ細胞、ヤギ細胞、ブタ細胞またはウサギ細胞を含む、実施形態１〜４、９、１０および１６〜６６のいずれか１つに記載の方法。
【０２４０】
実施形態６８．前記細胞懸濁液が、ヒト細胞を含む、実施形態１〜４、９、１０および１６〜６６のいずれか１つに記載の方法。
【０２４１】
実施形態６９．前記細胞懸濁液が、非哺乳動物細胞を含む、実施形態１〜４、９、１０および１６〜６５のいずれか１つに記載の方法。
【０２４２】
実施形態７０．前記細胞懸濁液が、細菌細胞、酵母細胞、ニワトリ細胞、カエル細胞、昆虫細胞、魚類細胞または線虫細胞を含む、実施形態１〜４、９、１０、１６〜６５および６９のいずれか１つに記載の方法。
【０２４３】
実施形態７１．前記免疫細胞が、哺乳動物細胞である、実施形態１〜１３および１６〜６８のいずれか１つに記載の方法。
【０２４４】
実施形態７２．前記免疫細胞が、サル細胞、マウス細胞、イヌ細胞、ネコ細胞、ウマ細胞、ラット細胞、ヒツジ細胞、ヤギ細胞、ブタ細胞またはウサギ細胞である、実施形態１〜１３、１６〜６８および７１のいずれか１つに記載の方法。
【０２４５】
実施形態７３．前記免疫細胞が、ヒト細胞である、実施形態１〜１３、１６〜６８および７１のいずれか１つに記載の方法。
【０２４６】
実施形態７４．前記免疫細胞が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、単球、マクロファージ、ＮＫ細胞、自然リンパ球、好中球、好塩基球、好酸球、骨髄由来サプレッサー細胞または肥満細胞である、実施形態１〜１３および１６〜７３のいずれか１つに記載の方法。
【０２４７】
実施形態７５．前記抗原提示細胞が、哺乳動物細胞である、実施形態１４、１５および５０〜７４のいずれか１つに記載の方法。
【０２４８】
実施形態７６．前記抗原提示細胞が、サル細胞、マウス細胞、イヌ細胞、ネコ細胞、ウマ細胞、ラット細胞、ヒツジ細胞、ヤギ細胞、ブタ細胞またはウサギ細胞である、実施形態１４、１５および５０〜７５のいずれか１つに記載の方法。
【０２４９】
実施形態７７．前記抗原提示細胞が、ヒト細胞である、実施形態１４、１５および５０〜７５のいずれか１つに記載の方法。
【０２５０】
実施形態７８．前記抗原提示細胞が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、単球、マクロファージ、ＮＫ細胞、自然リンパ球、好中球、好塩基球、好酸球、骨髄由来サプレッサー細胞または肥満細胞である、実施形態１４、１５および５０〜７７のいずれか１つに記載の方法。
【０２５１】
実施形態７９．前記抗原が、外来抗原である、実施形態１〜１５、２０〜４３および５０〜７８のいずれか１つに記載の方法。
【０２５２】
実施形態８０．前記抗原が、自己抗原である、実施形態１〜１５、２０〜４３および５０〜７８のいずれか１つに記載の方法。
【０２５３】
実施形態８１．前記抗原が、同種移植抗原である、実施形態１〜１５、２０〜４３および５０〜７８のいずれか１つに記載の方法。
【０２５４】
実施形態８２．前記抗原が、タンパク質またはポリペプチドである、実施形態１〜１５、２０〜４３および５０〜７８のいずれか１つに記載の方法。
【０２５５】
実施形態８３．前記抗原が、溶解物である、実施形態１〜１５、２０〜４３および５０〜７８のいずれか１つに記載の方法。
【０２５６】
実施形態８４．前記抗原が、修飾抗原である、実施形態１〜１５、２０〜４３および５０〜８３のいずれか１つに記載の方法。
【０２５７】
実施形態８５．前記修飾抗原が、治療剤と融合した抗原を含む、実施形態８４に記載の方法。
【０２５８】
実施形態８６．前記修飾抗原が、ターゲティングペプチドと融合した抗原を含む、実施形態８４に記載の方法。
【０２５９】
実施形態８７．前記細胞懸濁液が、前記狭窄部を通る前に、それと同時にまたはその後に前記抗原と接触する、実施形態１〜４、９、１０および１６〜８６のいずれか１つに記載の方法。
【０２６０】
実施形態８８．前記寛容原性因子が、共刺激分子の活性を阻害する、実施形態１〜４３および５０〜８７のいずれか１つに記載の方法。
【０２６１】
実施形態８９．前記寛容原性因子が、共刺激分子の発現を低下させる、実施形態１〜４３および５０〜８８のいずれか１つに記載の方法。
【０２６２】
実施形態９０．前記寛容原性因子が、共刺激分子の発現をモジュレートする核酸を欠失させる、実施形態１〜４３および５０〜８９のいずれか１つに記載の方法。
【０２６３】
実施形態９１．前記寛容原性因子が、共刺激分子を阻害する、実施形態１〜４３および５０〜８８のいずれか１つに記載の方法。
【０２６４】
実施形態９２．前記寛容原性因子が、共刺激分子の発現を抑制する転写レギュレーターの活性を増加させる、実施形態１〜４３および５０〜９１のいずれか１つに記載の方法。
【０２６５】
実施形態９３．前記寛容原性因子が、共刺激分子の発現を抑制するタンパク質インヒビターの活性を増加させる、実施形態１〜４３および５０〜９１のいずれか１つに記載の方法。
【０２６６】
実施形態９４．前記寛容原性因子が、前記共刺激分子のサプレッサーをコードする核酸を含む、実施形態１〜４３および５０〜８８のいずれか１つに記載の方法。
【０２６７】
実施形態９５．前記共刺激分子が、ＣＤ８０またはＣＤ８６である、実施形態８８〜９４のいずれか１つに記載の方法。
【０２６８】
実施形態９６．前記寛容原性因子が、免疫抑制因子の活性を増強する、実施形態１〜４３および５０〜９５のいずれか１つに記載の方法。
【０２６９】
実施形態９７．前記免疫抑制因子が、共阻害分子、転写レギュレーターまたは免疫抑制分子である、実施形態９６に記載の方法。
【０２７０】
実施形態９８．前記寛容原性因子が、共阻害分子の活性を増強する、実施形態１〜４３、５０〜８７、９６および９７のいずれか１つに記載の方法。
【０２７１】
実施形態９９．前記寛容原性因子が、共阻害分子の発現を増加させる、実施形態１〜４３、５０〜８７および９６〜９８のいずれか１つに記載の方法。
【０２７２】
実施形態１００．前記寛容原性因子が、共阻害分子をコードする、実施形態１〜４３、５０〜８７および９６〜９９のいずれか１つに記載の方法。
【０２７３】
実施形態１０１．前記寛容原性因子が、共阻害分子の活性を増加させる、実施形態１〜４３、５０〜８７および９６〜１００のいずれか１つに記載の方法。
【０２７４】
実施形態１０２．前記寛容原性因子が、共阻害分子の発現を増強する転写レギュレーターの活性を増加させる、実施形態１〜４３、５０〜８７および９６〜９８のいずれか１つに記載の方法。
【０２７５】
実施形態１０３．前記寛容原性因子が、共阻害分子の発現を増加させるポリペプチドの活性を増加させる、実施形態１〜４３、５０〜８７、９６〜９８および１０２のいずれか１つに記載の方法。
【０２７６】
実施形態１０４．前記寛容原性因子が、共阻害分子のエンハンサーをコードする核酸を含む、実施形態１〜４３、５０〜８７、９６〜９８および１０２のいずれか１つに記載の方法。
【０２７７】
実施形態１０５．前記共阻害分子が、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２またはＣＴＬＡ−４である、実施形態９７〜１０４のいずれか１つに記載の方法。
【０２７８】
実施形態１０６．前記寛容原性因子が、前記免疫抑制分子の活性を増強する、実施形態１〜４３、５０〜８７、９６および９７のいずれか１つに記載の方法。
【０２７９】
実施形態１０７．前記寛容原性因子が、免疫抑制分子の発現を増加させる、実施形態１〜４３、５０〜８７、９６、９７および１０６のいずれか１つに記載の方法。
【０２８０】
実施形態１０８．前記寛容原性因子が、免疫抑制分子をコードする、実施形態１〜４３、５０〜８７、９６、９７および１０６のいずれか１つに記載の方法。
【０２８１】
実施形態１０９．前記寛容原性因子が、免疫抑制分子の活性を増加させる、実施形態１〜４３、５０〜８７、９６、９７および１０６のいずれか１つに記載の方法。
【０２８２】
実施形態１１０．前記寛容原性因子が、免疫抑制分子の発現を増強する転写レギュレーターの活性を増加させる、実施形態１〜４３、５０〜８７、９６、９７および１０６のいずれか１つに記載の方法。
【０２８３】
実施形態１１１．前記寛容原性因子が、免疫抑制分子の発現を増強するポリペプチドの活性を増加させる、実施形態１〜４３、５０〜８７、９６、９７および１０６のいずれか１つに記載の方法。
【０２８４】
実施形態１１２．前記寛容原性因子が、免疫抑制分子のエンハンサーをコードする核酸を含む、実施形態１〜４３、５０〜８７、９６、９７および１０６のいずれか１つに記載の方法。
【０２８５】
実施形態１１３．前記免疫抑制分子が、ＡＲＧ１、ＮＯ、ＮＯＳ２、ＩＤＯ、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−３５、ＩＦＮαまたはＴＧＦβである、実施形態９７および１０６のいずれか１つに記載の方法。
【０２８６】
実施形態１１４．前記寛容原性因子が、炎症性分子の活性を阻害する、実施形態１〜４３および５０〜８７のいずれか１つに記載の方法。
【０２８７】
実施形態１１５．前記炎症性分子が、炎症性転写因子である、実施形態１１４に記載の方法。
【０２８８】
実施形態１１６．前記寛容原性因子が、炎症性転写因子を阻害する、実施形態１〜４３、５０〜８７、１１４および１１５のいずれか１つに記載の方法。
【０２８９】
実施形態１１７．前記寛容原性因子が、炎症性転写因子の発現を低下させる、実施形態１〜４３、５０〜８７および１１４〜１１６のいずれか１つに記載の方法。
【０２９０】
実施形態１１８．前記寛容原性因子が、炎症性転写因子をコードする核酸を欠失させる、実施形態１〜４３、５０〜８７および１１４〜１１６のいずれか１つに記載の方法。
【０２９１】
実施形態１１９．前記寛容原性因子が、炎症性転写因子の発現を抑制する転写レギュレーターの活性を増加させる、実施形態１〜４３、５０〜８７および１１４〜１１６のいずれか１つに記載の方法。
【０２９２】
実施形態１２０．前記寛容原性因子が、炎症性転写因子の発現を抑制するタンパク質インヒビターの活性を増加させる、実施形態１〜４３、５０〜８７および１１４〜１１６のいずれか１つに記載の方法。
【０２９３】
実施形態１２１．前記寛容原性因子が、炎症性転写因子のサプレッサーをコードする核酸を含む、実施形態１〜４３、５０〜８７および１１４〜１１６のいずれか１つに記載の方法。
【０２９４】
実施形態１２２．前記炎症性転写因子が、ＮＦ−κＢ、インターフェロン調節因子、または前記ＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達経路に関連した分子である、実施形態１１５〜１２１のいずれか１つに記載の方法。
【０２９５】
実施形態１２３．前記寛容原性因子が、１つまたは複数の炎症性サイトカインの産生および／または分泌を減少させる、実施形態１〜４３、５０〜８７および１１４〜１１６のいずれか１つに記載の方法。
【０２９６】
実施形態１２４．前記１つまたは複数の炎症性サイトカインが、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、ＩＬ−１２およびＩＬ−１８、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ−ガンマ）、ならびに顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）からなる群から選択される、実施形態１２３に記載の方法。
【０２９７】
実施形態１２５．前記寛容原性因子が、１つまたは複数の抗炎症性サイトカインの産生および／または分泌を増加させる、実施形態１〜４３、５０〜８７および１１４〜１１６のいずれか１つに記載の方法。
【０２９８】
実施形態１２６．前記１つまたは複数の抗炎症性サイトカインが、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−３５、ＩＦＮ−αおよびトランスフォーミング成長因子ベータ（ＴＧＦβ）からなる群から選択される、実施形態１２５に記載の方法。
【０２９９】
実施形態１２７．前記寛容原性因子が、抗原に結合すると免疫抑制サイトカインの産生を誘発する細胞質シグナル伝達ドメインを含有する改変されたＴＣＲをコードする、実施形態１〜４３および５０〜８７のいずれか１つに記載の方法。
【０３００】
実施形態１２８．前記寛容原性因子が、抗原に結合すると免疫抑制サイトカインの産生を誘発する細胞質シグナル伝達ドメインを含有するキメラ抗原受容体をコードする、実施形態１〜４３および５０〜８７のいずれか１つに記載の方法。
【０３０１】
実施形態１２９．前記寛容原性因子が、核酸を含む、実施形態１〜４３および５０〜１２８のいずれか１つに記載の方法。
【０３０２】
実施形態１３０．前記寛容原性因子が、ｓｉＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｌｎｃＲＮＡ、ｔＲＮＡまたはｓｈＲＮＡをコードする核酸を含む、実施形態１〜４３および５０〜１２９のいずれか１つに記載の方法。
【０３０３】
実施形態１３１．前記寛容原性因子が、プラスミドである、実施形態１〜４３および５０〜１３０のいずれか１つに記載の方法。
【０３０４】
実施形態１３２．前記寛容原性因子が、タンパク質核酸複合体を含む、実施形態１〜４３および５０〜１２８のいずれか１つに記載の方法。
【０３０５】
実施形態１３３．前記寛容原性因子が、Ｃａｓ９ポリペプチドおよびガイドＲＮＡまたはドナーＤＮＡを含む、実施形態１〜４３、５０〜１２８および１３２のいずれか１つに記載の方法。
【０３０６】
実施形態１３４．前記寛容原性因子が、Ｃａｓ９ポリペプチドおよびガイドＲＮＡまたはドナーＤＮＡをコードする核酸を含む、実施形態１〜４３および５０〜１２９のいずれか１つに記載の方法。
【０３０７】
実施形態１３５．前記寛容原性因子が、ポリペプチドを含む、実施形態１〜４３および５０〜１２８のいずれか１つに記載の方法。
【０３０８】
実施形態１３６．前記ポリペプチドが、ヌクレアーゼ、ＴＡＬＥＮタンパク質、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、メガヌクレアーゼまたはＣＲＥリコンビナーゼである、実施形態１〜４３、５０〜１２８および１３５のいずれか１つに記載の方法。
【０３０９】
実施形態１３７．前記ポリペプチドが、トランスポザーゼまたはインテグラーゼ酵素である、実施形態１〜４３、５０〜１２８および１３５のいずれか１つに記載の方法。
【０３１０】
実施形態１３８．前記ポリペプチドが、抗体である、実施形態１〜４３、５０〜１２８および１３５のいずれか１つに記載の方法。
【０３１１】
実施形態１３９．前記ポリペプチドが、転写因子である、実施形態１〜４３、５０〜１２８および１３５のいずれか１つに記載の方法。
【０３１２】
実施形態１４０．前記寛容原性因子が、小分子である、実施形態１〜４３および５０〜１２８のいずれか１つに記載の方法。
【０３１３】
実施形態１４１．前記寛容原性因子が、ナノ粒子である、実施形態１〜４３および５０〜１２８のいずれか１つに記載の方法。
【０３１４】
実施形態１４２．前記細胞懸濁液が、前記狭窄部を通る前に、それと同時にまたはその後に前記寛容原性因子と接触する、実施形態１〜４３および５０〜１４１のいずれか１つに記載の方法。
【０３１５】
実施形態１４３．前記免疫応答が、少なくとも約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約７５％、約８０％、約９０％または約１００％抑制される、実施形態３、４、７、８および１０〜１４２のいずれか１つに記載の方法。
【０３１６】
実施形態１４４．前記抑制された免疫応答が、１つまたは複数の炎症性サイトカインの減少した産生および／または分泌を含む、実施形態３、４、７、８および１０〜１４３のいずれか１つに記載の方法。
【０３１７】
実施形態１４５．前記１つまたは複数の炎症性サイトカインが、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、ＩＬ−１２およびＩＬ−１８、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ−ガンマ）ならびに顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）からなる群から選択される、実施形態１４４に記載の方法。
【０３１８】
実施形態１４６．前記抑制された免疫応答が、１つまたは複数の抗炎症性サイトカインの増加した産生および／または分泌を含む、実施形態３、４、７、８および１０〜１４３のいずれか１つに記載の方法。
【０３１９】
実施形態１４７．前記１つまたは複数の抗炎症性サイトカインが、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−３５、ＩＦＮ−αおよびトランスフォーミング成長因子ベータ（ＴＧＦβ）からなる群から選択される、実施形態１４６に記載の方法。
【０３２０】
実施形態１４８．前記抑制された免疫応答が、Ｔ細胞応答の減少を含む、実施形態３、４、７、８および１０〜１４３のいずれか１つに記載の方法。
【０３２１】
実施形態１４９．前記Ｔ細胞応答の減少が、Ｔ細胞活性化の減少を含む、実施形態１４８に記載の方法。
【０３２２】
実施形態１５０．前記Ｔ細胞応答の減少が、Ｔ細胞生存の減少を含む、実施形態１４８〜１４９のいずれか１つに記載の方法。
【０３２３】
実施形態１５１．前記Ｔ細胞応答の減少が、Ｔ細胞増殖の減少を含む、実施形態１４８〜１５０のいずれか１つに記載の方法。
【０３２４】
実施形態１５２．前記Ｔ細胞応答の減少が、Ｔ細胞機能性の減少を含む、実施形態１４８〜１５１のいずれか１つに記載の方法。
【０３２５】
実施形態１５３．前記抑制された免疫応答が、Ｔｒｅｇ応答の増強を含む、実施形態３、４、７、８および１０〜１５２のいずれか１つに記載の方法。
【０３２６】
実施形態１５４．前記抑制された免疫応答が、Ｂ細胞応答の減少を含む、実施形態３、４、７、８および１０〜１５３のいずれか１つに記載の方法。
【０３２７】
実施形態１５５．前記Ｂ細胞応答の減少が、抗体産生の減少を含む、実施形態１５４に記載の方法。
【０３２８】
実施形態１５６．前記抑制された免疫応答が、サイトカイン産生の減少を含む、実施形態３、４、７、８および１０〜１５５のいずれか１つに記載の方法。
【０３２９】
実施形態１５７．前記抑制された免疫応答が、自己免疫応答の減少を含む、実施形態３、４、７、８および１０〜１５６のいずれか１つに記載の方法。
【０３３０】
実施形態１５８．前記抑制された免疫応答が、アレルギー応答の減少を含む、実施形態３、４、７、８および１０〜１５７のいずれか１つに記載の方法。
【０３３１】
実施形態１５９．前記抗原が、移植組織に関連した抗原である、実施形態１〜１５、２０〜４３および５０〜７８のいずれか１つに記載の方法。
【０３３２】
実施形態１６０．前記抑制された免疫応答が、前記移植組織に対する免疫応答の減少を含む、実施形態３、４、７、８および１０〜１５９のいずれか１つに記載の方法。
【０３３３】
実施形態１６１．前記抗原が、ウイルスに関連する、実施形態１〜１５、２０〜４３および５０〜７８のいずれか１つに記載の方法。
【０３３４】
実施形態１６２．前記抑制された免疫応答が、前記ウイルスへの病原性免疫応答の減少を含む、実施形態３、４、７、８および１０〜１６１のいずれか１つに記載の方法。
【０３３５】
実施形態１６３．前記抑制された免疫応答が、治療剤に対する免疫応答の減少を含む、実施形態３、４、７、８および１０〜１６２のいずれか１つに記載の方法。
【０３３６】
実施形態１６４．前記抑制された免疫応答が、治療ビヒクルに対する免疫応答の減少を含む、実施形態３、４、７、８および１０〜１６３のいずれか１つに記載の方法。
【０３３７】
実施形態１６５．前記寛容性が、１つまたは複数の炎症性サイトカインの産生および／または分泌の減少を含む、実施形態１、２、５、６、２３〜４３および５０〜１４２のいずれか１つに記載の方法。
【０３３８】
実施形態１６６．前記１つまたは複数の炎症性サイトカインが、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、ＩＬ−１２およびＩＬ−１８、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ−ガンマ）ならびに顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）からなる群から選択される、実施形態１６５に記載の方法。
【０３３９】
実施形態１６７．前記寛容性が、１つまたは複数の抗炎症性サイトカインの産生および／または分泌の増加を含む、実施形態１、２、５、６、２３〜４３および５０〜１４２のいずれか１つに記載の方法。
【０３４０】
実施形態１６８．前記１つまたは複数の抗炎症性サイトカインが、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−３５、ＩＦＮ−αおよびトランスフォーミング成長因子ベータ（ＴＧＦβ）からなる群から選択される、実施形態１６７に記載の方法。
【０３４１】
実施形態１６９．前記寛容性が、Ｔ細胞応答の減少を含む、実施形態１、２、５、６、２３〜４３および５０〜１４２のいずれか１つに記載の方法。
【０３４２】
実施形態１７０．前記Ｔ細胞応答の減少が、Ｔ細胞活性化の減少を含む、実施形態１６９に記載の方法。
【０３４３】
実施形態１７１．前記Ｔ細胞応答の減少が、Ｔ細胞生存の減少を含む、実施形態１６９〜１７０のいずれか１つに記載の方法。
【０３４４】
実施形態１７２．前記Ｔ細胞応答の減少が、Ｔ細胞増殖の減少を含む、実施形態１６９〜１７１のいずれか１つに記載の方法。
【０３４５】
実施形態１７３．前記Ｔ細胞応答の減少が、Ｔ細胞機能性の減少を含む、実施形態１６９〜１７２のいずれか１つに記載の方法。
【０３４６】
実施形態１７４．前記Ｔ細胞応答の減少が、Ｔ細胞表現型の変化を含む、実施形態１６９〜１７３のいずれか１つに記載の方法。
【０３４７】
実施形態１７５．前記寛容性が、Ｔ細胞の非共刺激活性化を含む、実施形態１、２、５、６、２３〜４３、５０〜１４２および１６９〜１７４のいずれか１つに記載の方法。
【０３４８】
実施形態１７６．前記寛容性が、Ｔｒｅｇ応答の増強を含む、実施形態１、２、５、６、２３〜４３、５０〜１４２および１６９〜１７５のいずれか１つに記載の方法。
【０３４９】
実施形態１７７．前記寛容性が、Ｂ細胞応答の減少を含む、実施形態１、２、５、６、２３〜４３、５０〜１４２および１６９〜１７６のいずれか１つに記載の方法。
【０３５０】
実施形態１７８．前記Ｂ細胞応答の減少が、抗体産生の減少を含む、実施形態１７７に記載の方法。
【０３５１】
実施形態１７９．前記寛容性が、サイトカイン産生の減少を含む、実施形態１、２、５、６、２３〜４３、５０〜１４２および１６９〜１７８のいずれか１つに記載の方法。
【０３５２】
実施形態１８０．前記寛容性が、自己免疫応答の減少を含む、実施形態１、２、５、６、２３〜４３、５０〜１４２および１６９〜１７９のいずれか１つに記載の方法。
【０３５３】
実施形態１８１．前記寛容性が、アレルギー応答の減少を含む、実施形態１、２、５、６、２３〜４３、５０〜１４２および１６９〜１８０のいずれか１つに記載の方法。
【０３５４】
実施形態１８２．前記寛容性が、前記移植組織に対する免疫応答の減少を含む、実施形態１、２、５、６、２３〜４３、５０〜１４２および１６９〜１８１のいずれか１つに記載の方法。
【０３５５】
実施形態１８３．前記寛容性が、前記ウイルスへの病原性免疫応答の減少を含む、実施形態１、２、５、６、２３〜４３、５０〜１４２および１６９〜１８２のいずれか１つに記載の方法。
【０３５６】
実施形態１８４．前記寛容性が、治療剤に対する免疫応答の減少を含む、実施形態１、２、５、６、２３〜４３、５０〜１４２および１６９〜１８３のいずれか１つに記載の方法。
【０３５７】
実施形態１８５．前記寛容性が、治療ビヒクルに対する免疫応答の減少を含む、実施形態１、２、５、６、２３〜４３、５０〜１４２および１６９〜１８４のいずれか１つに記載の方法。
【０３５８】
実施形態１８６．少なくとも１、２、３、４、５または６回繰り返される、実施形態１〜１８５のいずれか１つに記載の方法。
【０３５９】
実施形態１８７．前記方法の任意の２回の繰り返しの間の時間間隔が、少なくとも１日、１週、１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、６カ月または１年である、実施形態１８６に記載の方法。
【０３６０】
実施形態１８８．実施形態１〜４３および５０〜１８７のいずれか１つに記載の方法で使用するための、前記狭窄部、免疫細胞、抗原および／または寛容原性因子を含む系。
【０３６１】
実施形態１８９．実施形態４４〜１８７のいずれか１つに記載の方法で使用するための、前記狭窄部、免疫細胞および非機能的サイトカイン結合タンパク質をコードする化合物を含む系。
【実施例】
【０３６２】
以下の実施例は、本開示の様々な実施形態を例に挙げて説明する目的で与えるものであり、どのような形でも本開示を限定することを意図するものではない。当業者であれば、本開示が目的（object）を実行し、記載した結果および利点を得るため、ならびに本明細書に固有の目的、結果、および利点に十分に適合していることを容易に理解するであろう。請求項の範囲によって規定される本開示の精神の範囲内に包含されるその変更およびその他の使用を当業者は想起するであろう。
【０３６３】
（実施例１）
寛容性を誘導するためのＢ細胞への抗原および寛容原性因子の狭窄媒介性の送達
モデル抗原およびトランスジェニックＴ細胞を使用して、寛容性の誘導を実証するための一連の実験に着手する。
【０３６４】
Ｂ細胞を寛容原性因子およびＯＶＡ抗原＋／−寛容原性因子と混合し、マイクロ流体チャネルの中の前記狭窄部、または孔を含有する表面に通す（そのような狭窄媒介性の送達もＳＱＺと称する）。送達を達成するために圧力、温度、および緩衝液組成を最適化する。ＣＦＳＥ標識されたＯＴ−ＩまたはＯＴ−ＩＩ  Ｔ細胞をＣＤ４５．１マウスに移入した後、ＯＶＡおよび寛容原性因子保有Ｂ細胞を移入する。その後、ＯＶＡ＋ＬＰＳの皮内注射によってマウスをチャレンジする。流入領域膝窩リンパ節を回収し、ＯＴ−ＩまたはＯＴ−ＩＩ  Ｔ細胞の増殖（expansion）を測定する。
【０３６５】
（実施例２）
寛容性を誘導するためのＢ細胞への抗原の狭窄媒介性の送達
本研究では、抗原の狭窄媒介性の送達によって生成された細胞内抗原を含有するＢ細胞抗原提示細胞（ＡＰＣ）の、ｉｎ  ｖｉｖｏで抗原依存的寛容性を誘導する能力を評価した。マウスに抗原特異的Ｔ細胞を接種し、Ｂ細胞ＡＰＣの注射により寛容化し、抗原特異的Ｔ細胞の数および炎症性サイトカインＩＦＮ−γのレベルを決定した。
【０３６６】
材料および方法
０日目に雌ドナーマウスからＣ５７ＢＬ／６Ｊレシピエントマウス（ＣＤ４５．１＋）にマウス毎にＯＶＡ特異的ＣＤ８＋  ＯＴ−Ｉ細胞（１×１０６）およびＣＤ４＋  ＯＴ−ＩＩ  Ｔ細胞（１×１０６）（共にＣＤ４５．２＋）を養子移入した。１日目にＣ５７ＢＬ／６ＪマウスからＢ細胞を回収し、狭窄なし（without  constriction）（Ｂ細胞−Ｅｎｄｏ）またはＯＶＡタンパク質の狭窄媒介性細胞内送達（Ｂ細胞−ＳＱＺ）ありのいずれかで全長ＯＶＡタンパク質と共にインキュベートした。次いで、５×１０６個の各々のＢ細胞／マウスをレシピエントマウスに注射した。対照動物にＰＢＳ（チャレンジ対照）または１０μｇの遊離ＯＶＡ（寛容性対照）のいずれかの注射を与えた。８日目に１０μｇのＯＶＡタンパク質＋５０ｎｇのＬＰＳ／マウスの皮内注射で抗原チャレンジを行った。１２日目に各マウスの流入リンパ節および脾臓を分析し、抗原チャレンジに対するＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩ  Ｔ細胞応答をＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩ  Ｔ細胞数、ＩＦＮ−γ細胞内染色についてのフローサイトメトリー、およびＥＬＩＳｐｏｔアッセイによって測定した。処置スケジュールの図解を図１に示し、処置群を表１に要約する。
【表１】
2019518009.tif 000002
【０３６７】
結果
１２日目に４つの処置群のマウスにおいてＯＴ−Ｉ特異的Ｔ細胞およびＯＴ−ＩＩ特異的Ｔ細胞の数を測定した。流入リンパ節由来の細胞（ＣＤ３＋／ＣＤ８＋でゲートまたはＣＤ３＋／ＣＤ４＋でゲート）および脾臓由来の細胞（ＣＤ３＋／ＣＤ８＋でゲート）を抗原提示細胞のマーカーとしてＴ細胞受容体（ＴＣＲ）Ｖアルファ２（ＴＣＲＶａ２）およびドナーＴ細胞のマーカーとしてＣＤ４５．２を染色してフローサイトメトリーにより分析した。ＣＤ８＋  ＯＴ−Ｉ  Ｔ細胞（ＴＣＲＶａ２＋／ＣＤ４５．２＋）のパーセンテージの減少によって示されるように、チャレンジ対照と比べて、ＯＶＡタンパク質の狭窄媒介性の送達を有するＢ細胞でプライミングしたマウスにおいて、流入リンパ節および脾臓の両方でＯＴ−Ｉ  Ｔ細胞の活性化および増殖が有意に阻害された（＊Ｐ＜０．０５）（図２左および中央パネル）。狭窄なしでＯＶＡとインキュベートしたＢ細胞でプライミングしたマウスと比べてＢ細胞−ＳＱＺ動物ではＣＤ８＋  ＯＴ−Ｉ  Ｔ細胞のレベルが減少していたため（＊＊Ｐ＜０．０１）、この効果は狭窄媒介性細胞内抗原送達に依存した。ＣＤ４＋ＯＴ−ＩＩ細胞（ＴＣＲＶａ２＋／ＣＤ４５．２＋）のパーセンテージも、チャレンジ対照と比べてＢ細胞−ＳＱＺ動物のリンパ節で有意に阻害された（図２右パネル；＊Ｐ＜０．０５）。処置群間で脾臓ＯＴ−ＩＩレベルに有意差はなかったが（データ示さず）、Ｂ細胞−ＳＱＺ動物はチャレンジ後にＢ細胞−Ｅｎｄｏと比べてＯＴ−ＩＩのパーセンテージのわずかな減少を示し、有意性に向かう傾向が見られた。
【０３６８】
Ｔ細胞機能に対するＢ細胞ＳＱＺ媒介性の寛容性の機能的効果を評価するために、ＳＩＩＮＦＥＫＬペプチド（配列番号１）（ＣＤ８＋活性ＯＶＡエピトープ）で再刺激したＯＴ−Ｉ  Ｔ細胞のうちの高レベルのＩＦＮ−γを発現する脾臓Ｔ細胞のパーセント（図３左）および細胞あたりのＩＦＮ−γ産生レベル（図３右；ＴＣＲＶａ２＋／ＣＤ４５．２＋／ＣＤ４４ｈｉ細胞に基づくＭＦＩ）を細胞内サイトカインの染色によって全ての群について評価した。Ｂ細胞−ＳＱＺマウスのＯＴ−Ｉ  Ｔ細胞は、ＩＦＮ−γ高発現細胞のパーセンテージおよびＩＦＮ−γ産生の両方において、チャレンジ対照と比べて（＊＊＊Ｐ＜０．０００５）ならびにＢ細胞−Ｅｎｄｏ処置マウスと比べて（＊＊＊Ｐ＜０．０００５、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１）、減少を示した。興味深いことに、Ｂ細胞−ＳＱＺマウスは、寛容性対照と比べても高ＩＦＮ−γ細胞のパーセンテージにおいて有意な減少を示した（＊Ｐ＜０．０５）。ＩＦＮ−γ産生ＯＴ−Ｉ  Ｔ細胞の数をＥＬＩＳｐｏｔによってさらに確認した（図４）。フローサイトメトリーデータと相関して、Ｂ細胞−ＳＱＺ動物は、チャレンジ対照（＊＊Ｐ＜０．０１）およびＢ細胞−Ｅｎｄｏ（＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１）と比べて有意に少ない数のＩＦＮ−γ陽性Ｔ細胞を産生した。
【０３６９】
各処置群についてのＴＣＲＶａ２＋脾臓ＯＴ−Ｉ  Ｔ細胞およびリンパ節ＯＴ−ＩＩ  Ｔ細胞の代表的なフローサイトグラムは、Ｂ細胞−ＳＱＺマウスはチャレンジ対照およびＢ細胞−Ｅｎｄｏと比べてより少数のＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩを有することを示す（図５、表２）。高いＩＦＮ−γおよびＣＤ４４抗原活性化マーカーを有するＯＴ−Ｉ細胞の代表的なＩＣＳフローサイトグラムは、Ｂ細胞−ＳＱＺ試料はチャレンジ対照およびＢ細胞−Ｅｎｄｏと比べてより少数のＩＦＮ−γ−ｈｉｇｈ  Ｔ細胞を有したことを示す（図６、表３）。
【表２】
2019518009.tif 000003
【表３】
2019518009.tif 000004
【０３７０】
（実施例３）
寛容性を誘導するためのＴ細胞への抗原の狭窄媒介性の送達
抗原の狭窄媒介性の送達によって生成された細胞内抗原を含有するＴ細胞抗原提示細胞（ＡＰＣ）の、ｉｎ  ｖｉｖｏで抗原依存的寛容性を誘導する能力を決定するために、抗原特異的Ｔ細胞の数および炎症性サイトカインＩＦＮ−γのレベルをフローサイトメトリーによって測定した。
【０３７１】
材料および方法
０日目に雌ＯＴ−Ｉドナーマウス（ＣＤ４５．２）からＣ５７ＢＬ／６Ｊレシピエントマウス（ＣＤ４５．１）にマウス毎に２．５×１０６個のＯＶＡ特異的ＯＴ−Ｉ  Ｔ細胞を養子移入した。同日に、狭窄なしでの免疫原性ＯＶＡエピトープ（ＳＩＩＮＦＥＫＬペプチド、配列番号１）の存在下でインキュベートしたＴ細胞または全長ＯＶＡタンパク質の狭窄媒介性の送達を伴うＴ細胞のいずれかの、５×１０６個のＴ  ＡＰＣ細胞（ＣＤ９０．１）もマウスに注射した。８日目に、ナイーブ（Ｔ  ＡＰＣ細胞なし、抗原なし）と対比して、チャレンジ動物において１０μｇのＯＶＡタンパク質（抗原）＋５０ｎｇのＬＰＳ（アジュバント）／マウスの皮内注射で抗原チャレンジを行った。１２日目に、抗原チャレンジへのＯＴ−Ｉ  Ｔ細胞応答をＯＴ−Ｉ  Ｔ細胞数およびＩＦＮ−γ細胞内染色についてのフローサイトメトリーによって測定した。処置スケジュールの図解を図７に示し、処置群を表４に要約する。
【表４】
2019518009.tif 000005
【０３７２】
結果
１２日目に、４つの処置群のマウスでＯＴ−Ｉ特異的Ｔ細胞の数を測定した。チャレンジ対照と比べてＯＶＡタンパク質の狭窄媒介性の送達を伴うＴ細胞でプライミングしたマウスにおいて流入リンパ節および脾臓の両方でＯＴ−Ｉ  Ｔ細胞の活性化および増殖は有意に阻害された（＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１）（図８）。これらのマウスでは、ナイーブマウスまたは遊離ＯＶＡ寛容性対照と類似のＯＴ−Ｉ  Ｔ細胞数が見られた。
【０３７３】
ＯＴ−Ｉ特異的Ｔ細胞の機能に対するＴ細胞−ＳＱＺ  ＡＰＣ媒介性の寛容性の機能的効果を評価するために、遊離ＳＩＩＮＦＥＫＬペプチドで再刺激したＯＴ−Ｉ  Ｔ細胞のＩＦＮ−γ産生レベルを全ての群について評価した（図９）。チャレンジ対照と比べて、Ｔ細胞−ＳＱＺマウスのＯＴ−Ｉ  Ｔ細胞は、寛容性対照と同様に（＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１）、高ＩＦＮ−γ発現細胞のパーセンテージの大きな減少を示した（＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１）。
【０３７４】
ＣＤ８＋  Ｔ細胞数と対比したＯＴ−Ｉ  Ｔ細胞数（図１０上パネル）およびＣＤ４４抗原活性化マーカーを有すると対比した高ＩＦＮ−γを有する細胞のパーセンテージ（図１０下パネル）の代表的なフローサイトグラムは、Ｔ細胞−ＳＱＺ動物はチャレンジ対照と比べてＯＴ−Ｉ  Ｔ細胞およびＩＦＮ−γ産生の両方についてより小さい数を有したことを示す（表５）。
【表５】
2019518009.tif 000006
【０３７５】
（実施例４Ａ）
マウスＩ型糖尿病モデルにおける予防
序
ＳＱＺによって送達された抗原を含有する抗原提示細胞（ＡＰＣ、例えばＢ細胞および／またはＴ細胞）の、マウスＩ型糖尿病の予防ｉｎ  ｖｉｖｏモデルにおいて抗原依存的寛容性を誘導する能力を決定するために、寛容性誘導後に経時的に毎週血液グルコースレベルを測定する。
【０３７６】
材料および方法
１０週齢時にＮＯＤ／ＳｈｉｌｔＪマウスをＡＰＣで処置する。０日目に、ＮＯＤ／ＳｈｉｌｔＪマウスからＡＰＣを回収し、狭窄なしでインスリンＢ鎖ペプチド９〜２３（ＩｎｓＢ９〜２３：ＣＫＫＧＳＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧ、配列番号２）とインキュベートするか、またはＩｎｓＢ９〜２３をＳＱＺ条件によって送達した後、レシピエントマウスに５Ｍ  ＡＰＣ／マウスを注射する。対照動物にはＰＢＳを注射する（チャレンジ対照）。処置後７日目（１１週齢）に開始して、血液グルコース測定を毎週実行する。Ｂａｙｅｒ  Ｃｏｎｔｏｕｒ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｍｅｔｅｒ／Ｇｌｕｃｏｓｅ  Ｔｅｓｔ  Ｓｔｒｉｐによる測定で血液グルコースレベルが２６０ｍｇ／ｄＬを超えたときにマウスは糖尿病であるとみなす。代表的な処置スケジュールの図解を図１１Ａに示し、処置群を表６に要約する。
【表６】
2019518009.tif 000007
【０３７７】
（実施例４Ｂ）
マウスＩ型糖尿病モデルの治療
序
ＳＱＺによって送達された抗原を含有する抗原提示細胞（ＡＰＣ、例えばＢ細胞および／またはＴ細胞）の、マウスＩ型糖尿病の治療ｉｎ  ｖｉｖｏモデルにおいて抗原依存的寛容性を誘導する能力を決定するために、マウスでの寛容性誘導後に経時的に毎週血液グルコースレベルを測定する。
【０３７８】
材料および方法
レシピエントでＴ１Ｄの迅速な発症を誘導するために、ＢＤＣ２．５  ＮＯＤマウスからＣＤ４  Ｔ細胞を回収し、ｐ３１ミメトープ（mimetope）ペプチド（ＹＶＲＰＬＷＶＲＭＥ、配列番号３）で４日間ｅｘ  ｖｉｖｏで活性化し、正常血糖のＮＯＤレシピエントに養子移入する（５Ｍ細胞／マウス）。養子移入の８時間後に寛容性誘導を開始し、３日毎、計３回の投与となるように繰り返す。レシピエントをＰＢＳ（チャレンジ対照）またはｐ３１とインキュベートした（ＡＰＣ−Ｅｎｄｏ）もしくはｐ３１をＳＱＺによって送達した（ＡＰＣ−ＳＱＺ）５Ｍ  ＡＰＣで処置する。Ｂａｙｅｒ  Ｃｏｎｔｏｕｒ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｍｅｔｅｒ／Ｇｌｕｃｏｓｅ  Ｔｅｓｔ  Ｓｔｒｉｐによって血液グルコースを毎日測定する。血液グルコースレベルが２６０ｍｇ／ｄＬを超えたときにマウスを糖尿病とみなす。代表的な処置スケジュールの図解を図１１Ｂに示し、処置群を表７に要約する。
【表７】
2019518009.tif 000008
【０３７９】
（実施例５Ａ）
マウスＭＳ型自己免疫障害の予防
序
ＳＱＺによって送達された抗原を含有する抗原提示細胞（ＡＰＣ、例えばＢ細胞および／またはＴ細胞）の、マウスＭＳ型自己免疫障害のｉｎ  ｖｉｖｏ予防モデルにおいて抗原依存的寛容性を誘導する能力を決定するために、運動性の臨床スコアを経時的に毎日評価する。
【０３８０】
材料および方法
雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス（１０〜１２週齢）を実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）の誘導前にＡＰＣで処置する。−７日目にＣ５７ＢＬ／６マウスからＡＰＣを回収し、狭窄なしでミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質ペプチド３５〜５５（ＭＯＧ３５〜５５：ＭＥＶＧＷＹＲＳＰＦＳＲＶＶＨＬＹＲＮＧＫＧＳ、配列番号４）とインキュベートするか、またはＭＯＧ３５〜５５もしくはＯＶＡ３２３〜３３９ペプチド（陰性対照：ＩＳＱＡＶＨＡＡＨＡＥＩＮＥＡＧＲＧＳ、配列番号５）をＳＱＺ条件によってＡＰＣに送達した後、レシピエントマウスに５Ｍ  ＡＰＣ／マウスを注射する。０日目に、ＣＦＡ中のＭＯＧ３５〜５５およびＰＢＳ中の百日咳毒素（Ｈｏｏｋｅ  ｋｉｔ）の投与によってＥＡＥを誘導する。７日目に開始してマウスを毎日スコア付けする。臨床スコアは以下の通りに定義する：１．尾の引きずり；２．部分的な後肢の麻痺；３．完全な後肢の麻痺；４．完全な後肢および部分的な前肢の麻痺；および５．瀕死。代表的な処置スケジュールの図解を図１２Ａに示し、処置群を表８に要約する。
【表８】
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【０３８１】
（実施例５Ｂ）
マウスＭＳ型自己免疫障害の治療
序
ＳＱＺによって送達された抗原を含有する抗原提示細胞（ＡＰＣ、例えばＢ細胞および／またはＴ細胞）の、確立されたマウスＭＳ型自己免疫障害のｉｎ  ｖｉｖｏモデルにおいて抗原依存的寛容性を誘導する能力を決定するために、運動性の臨床スコアを経時的に毎日評価する。
【０３８２】
材料および方法
雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス（１０〜１２週齢）において、０日目にＣＦＡ中のＭＯＧ３５〜５５およびＰＢＳ中の百日咳毒素（Ｈｏｏｋｅ  ｋｉｔ）の投与によって実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）を誘導する。次いで、下記の運動性基準に基づいてマウスが１以上のスコアとなった日であるＥＡＥの発症日に、マウスをＡＰＣで処置する。約１１／１２日目にＣ５７ＢＬ／６マウスからＢ細胞を回収し、狭窄なしでミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質ペプチド３５〜５５（ＭＯＧ３５〜５５：ＭＥＶＧＷＹＲＳＰＦＳＲＶＶＨＬＹＲＮＧＫＧＳ、配列番号４）とインキュベートするか、またはＭＯＧ３５〜５５もしくはＯＶＡ３２３〜３３９ペプチド（陰性対照：ＩＳＱＡＶＨＡＡＨＡＥＩＮＥＡＧＲＧＳ、配列番号５）をＳＱＺ条件によってＡＰＣに送達した後、レシピエントマウスに５Ｍ  ＡＰＣ／マウスを注射する。１９日目に開始してマウスを毎日スコア付けする。臨床スコアは以下の通りに定義する：１．尾の引きずり；２．部分的な後肢の麻痺；３．完全な後肢の麻痺；４．完全な後肢および部分的な前肢の麻痺；および５．瀕死。代表的な処置スケジュールの図解を図１２Ｂに示し、処置群を表９に要約する。
【表９】
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【表１０】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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