(57)【要約】  本発明は、アンタゴニスティックかつアゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体ならびに抗体断片を提供する。これらのアンタゴニスト抗体および抗体断片は、Ｔ細胞免疫に対するＶＩＳＴＡの抑制効果を阻害または遮断するために使用され得、それによりＴ細胞免疫を促進する。これらのアゴニスト抗体および抗体断片は、Ｔ細胞免疫に対するＶＩＳＴＡの抑制効果を強化もしくは模倣するために使用され得、それによりＴ細胞免疫を抑制する。これらのアンタゴニスト抗体および抗体断片は、癌および感染性状態の治療において特に有用である。これらのアゴニスト抗体および抗体断片は、自己免疫、アレルギー、炎症状態、ＧＶＨＤ、敗血症、および移植レシピエントの治療において特に有用である。これらのアゴニストを特定するためのスクリーニングアッセイも提供される。【選択図】図１
2019525943.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離された抗体またはその抗体断片であって、Ｔ細胞活性化のヒトＩｇＶドメイン抑制因子（ヒトＶＩＳＴＡ）に特異的に結合する抗原結合領域を含み、前記抗体または抗体断片は、ＶＩＳＴＡの免疫への作用のうちの１つ以上を刺激するかまたは促進する、単離された抗体またはその抗体断片。
【請求項２】
ヒトＩｇＧ２定常領域またはヒトＩｇＧ２のＦｃ領域を含む、請求項１に記載の単離された抗体。
【請求項３】
前記ヒトＩｇＧ２定常領域またはヒトＩｇＧ２のＦｃ領域が、ヒトＣＤ３２Ａを含むＦｃガンマ受容体に結合している、請求項２に記載の単離された抗体。
【請求項４】
前記ＩｇＧ２定常領域またはＩｇＧ２のＦｃ領域が、Ｆｃガンマ受容体に結合したネイティブのヒトＩｇＧ２を含む、請求項２に記載の単離された抗体。
【請求項５】
前記ＦｃｙＲが、ｈＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃｙＲＩＩＡまたはｈＦｃｙＲＩＩＢ（ＣＤ３２またはＣＤ３２Ａ）、およびＦｃγＲｌｌｌＡ（ＣＤ１６Ａ）またはＦｃγＲｌｌｌＢ（ＣＤ１６Ｂ）のうちの１つ以上を含む、請求項４に記載の単離された抗体。
【請求項６】
図４の配列を有する抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体のいずれかと結合するエピトープを含むかまたはそれらと重なるＶＩＳＴＡエピトープと競合するかまたはそれに結合する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の単離された抗体または抗体断片。
【請求項７】
ＬＬＤＳＧＬＹＣＣＬＶＶＥＩＲＨＨＨＳＥＨＲＶＨの残基を含むエピトープの１つ以上の残基に結合するか、またはそれと相互作用する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の単離された抗体または抗体断片。
【請求項８】
７９ＥＶＱＴＣＳＥＲＲＰＩＲ９０、４８ＮＶＴＬＴＣＲＬＬＧＰＶ６０、１５３ＨＨＨＳＥＨＲＶＨＧＡＭ１６４、５２ＬＴＣＲＬＬＧＰＶ６０、５６ＬＬＧＰＶＤＫＧＨＤＶＴＦＹＫ７０、１１３ＬＡＱＲＨＧＬＥＳＡＳＤＨＨＧ１２７、１５３ＨＨＨＳＥＨＲＶＨＧＡＭ１６４、９３ＴＦＱＤＬＨＬＨＨＧＧＨＱＡＡ１０７、１４６ＣＬＶＶＥＩＲＨＨＨＳＥＨ１５８、５３ＴＣＲＬＬＧＰＶＤＫＧ６３、１２３ＳＤＨＨＧ１２７、および／または１５３ＨＨＨＳＥＨＲＶＨＧＡＭ１６４の１つ以上の残基を含むエピトープの１つ以上の残基に結合するか、またはそれと相互作用する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の単離された抗体または抗体断片。
【請求項９】
７９ＥＶＱＴＣＳＥＲＲＰＩＲ９０の１つ以上の残基を含むエピトープの１つ以上の残基に結合するか、またはそれと相互作用する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の単離された抗体または抗体断片。
【請求項１０】
ヒトＶＩＳＴＡの免疫への少なくとも１つの効果、例えば、Ｔ細胞免疫、単球の活性化、Ｔ細胞増殖の誘導；サイトカイン発現の誘導または抑制、単球生存の増加、細胞発現ＶＩＳＴＡにおける抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の誘導および細胞発現ＶＩＳＴＡにおける抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）の誘導、のうちのいずれか１つ以上への前記ヒトＶＩＳＴＡの抑制効果を促進するか強化する、請求項１〜９のいずれか一項に記載のアゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体または抗体断片。
【請求項１１】
単離されたアゴニスティックまたはアンタゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体またはその抗体断片であって、ヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗原結合領域を含み、前記抗体または抗体断片は、図４に示されるＣＤＲおよび可変重ペプチドおよび可変軽ペプチドを有する前記抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体のうちのいずれか１つと同一のＣＤＲポリペプチドを有する可変重配列および可変軽配列を含むが、但し、前記抗体または断片がアンタゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体または抗体断片を含む場合、前記抗体または抗体断片は、ＶＳＴＢ１１２、ＶＳＴＢ１１６、ＶＳＴＢ９５、ＶＳＴＢ５０、ＶＳＴＢ５３、またはＶＳＴＢ６０のうちのいずれの１つとも同じＣＤＲを含まないことを条件とする、単離されたアゴニスティックまたはアンタゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体またはその抗体断片。
【請求項１２】
ＶＳＴＢ４９〜ＶＳＴＢ１１６から選択される抗体と同じＣＤＲを含むが、但し、前記抗体または断片がアンタゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体または断片を含む場合、前記抗体または抗体断片は、ＶＳＴＢ１１２、ＶＳＴＢ１１６、ＶＳＴＢ９５、ＶＳＴＢ５０、ＶＳＴＢ５３、またはＶＳＴＢ６０のうちのいずれの１つとも同じＣＤＲを含まないことを条件とする、請求項１１に記載の単離された抗体または抗体断片。
【請求項１３】
ＶＳＴＢ４９〜ＶＳＴＢ１１６のうちのいずれか１つから選択される抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体の配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する可変重ポリペプチドおよび／または可変軽ポリペプチドを含み、その可変重ポリペプチド配列および可変軽ポリペプチド配列は、図４に示されるが、但し、前記抗体または断片がアンタゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体または断片を含む場合、前記抗体または抗体断片は、ＶＳＴＢ１１２、ＶＳＴＢ１１６、ＶＳＴＢ９５、ＶＳＴＢ５０、ＶＳＴＢ５３、またはＶＳＴＢ６０のうちのいずれの１つとも同じＣＤＲを含まないことを条件とする、請求項１１または１２に記載の単離された抗体または抗体断片。
【請求項１４】
ＶＳＴＢ４９〜ＶＳＴＢ１１６のうちのいずれか１つから選択される抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体の配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する可変重ポリペプチドおよび／または可変軽ポリペプチドを含み、その可変重ポリペプチド配列および可変軽ポリペプチド配列は図４に示されるが、但し前記抗体または断片がアンタゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体または抗体断片を含む場合、前記抗体または抗体断片は、ＶＳＴＢ１１２、ＶＳＴＢ１１６、ＶＳＴＢ９５、ＶＳＴＢ５０、ＶＳＴＢ５３、またはＶＳＴＢ６０のうちのいずれの１つとも同じＣＤＲを含まないことを条件とする、請求項１１または１２に記載の単離された抗体または抗体断片。
【請求項１５】
ＶＳＴＢ４９〜ＶＳＴＢ１１６のうちのいずれか１つから選択される抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体の配列と少なくとも９６〜９９％の配列同一性を有する可変重ポリペプチドおよび／または可変軽ポリペプチドを含み、その可変重ポリペプチド配列および可変軽ポリペプチド配列は図４に示されるが、但し前記抗体または断片がアンタゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体または抗体断片を含む場合、前記抗体または抗体断片は、ＶＳＴＢ１１２、ＶＳＴＢ１１６、ＶＳＴＢ９５、ＶＳＴＢ５０、ＶＳＴＢ５３、またはＶＳＴＢ６０のうちのいずれの１つとも同じＣＤＲを含まないことを条件とする、請求項１１または１２に記載の単離された抗体または抗体断片。
【請求項１６】
ＶＳＴＢ４９〜ＶＳＴＢ１１６のうちの１つから選択される抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体の配列と同一である可変重ポリペプチドおよび／または可変軽ポリペプチドを含み、その可変重ポリペプチド配列および可変軽ポリペプチド配列は図４に示されるが、但し前記抗体または断片がアンタゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体または抗体断片を含む場合、前記抗体または抗体断片は、ＶＳＴＢ１１２、ＶＳＴＢ１１６、ＶＳＴＢ９５、ＶＳＴＢ５０、ＶＳＴＢ５３、またはＶＳＴＢ６０のうちのいずれの１つとも同じＣＤＲを含まないことを条件とする、請求項１１または１２に記載の単離された抗体または抗体断片。
【請求項１７】
ヒトＶＩＳＴＡの免疫への少なくとも１つの効果に拮抗するか、またはそれを遮断する、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の単離された抗体または抗体断片。
【請求項１８】
ヒトＶＩＳＴＡの免疫への少なくとも１つの作用を刺激するか、または遮断する、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の単離された抗体または抗体断片。
【請求項１９】
ヒト定常ドメインを含む、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の単離された抗体または抗体断片。
【請求項２０】
任意で、欠失変異、置換変異、もしくは付加変異、またはそれらの任意の組み合わせにより変性されたＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４から選択されるヒト定常ドメインを含む、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の単離された抗体または抗体断片。
【請求項２１】
前記抗体断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、もしくはｓｃＦｖ抗体断片を含むか、またはそれである、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片。
【請求項２２】
例えば、Ｔ細胞免疫、単球の活性化、またはＴ細胞増殖；サイトカイン発現の誘導または抑制、単球生存の増加、細胞発現ＶＩＳＴＡの抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の抑制；および細胞発現ＶＩＳＴＡの抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）の抑制、へのヒトＶＩＳＴＡの抑制効果から選択される、前記ヒトＶＩＳＴＡの免疫への効果のうちの少なくとも１つを遮断するかまたは抑制する、請求項１〜２１のいずれか一項に記載のアンタゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体または抗体断片。
【請求項２３】
例えば、ヒトＶＩＳＴＡの抑制効果Ｔ細胞免疫、単球の活性化、Ｔ細胞増殖の抑制；サイトカイン発現の誘導または抑制、細胞発現ＶＩＳＴＡにおける単球生存の増加、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の抑制および細胞発現ＶＩＳＴＡの抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）の抑制、から選択される、前記ヒトＶＩＳＴＡの免疫への効果のうちの少なくとも１つを促進するかまたは強化する、請求項１〜２２のいずれか一項に記載のアゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体または抗体断片。
【請求項２４】
ヒトＩｇＧ２定常領域またはヒトＩｇＧ２のＦｃ領域を含む、請求項２３に記載のアゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体または抗体断片。
【請求項２５】
ヒトＶＩＳＴＡの免疫への抑制効果、例えば、Ｔ細胞免疫、単球の活性化、Ｔ細胞増殖；サイトカイン発現、単球生存、細胞発現ＶＩＳＴＡにおける抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；および細胞発現ＶＩＳＴＡにおける抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）のうちのいずれか１つ以上への前記ヒトＶＩＳＴＡへの効果を促進するかまたは強化する、請求項２３または２４に記載のアゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体または抗体断片。
【請求項２６】
Ｔ細胞免疫および／または炎症誘発性サイトカイン発現を阻害する、請求項２３〜２５のいずれか一項に記載のアゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体または抗体断片。
【請求項２７】
ヒトＦｃ領域を含むヒト抗体、ヒト化抗体、もしくはキメラ抗体、例えば、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ３、およびヒトＩｇＧ４、またはそれらうちのいずれかのキメラである、請求項１〜２６のいずれか一項に記載のアゴニスト抗体または抗体断片。
【請求項２８】
キメラアゴニスト抗体、ヒトアゴニスト抗体、またはヒト化アゴニスト抗体である、請求項１〜２７のいずれか一項のいずれか一項に記載のアゴニスト抗体。
【請求項２９】
潜在的に変異している可能性がある、ヒトＩｇＧ２定常ドメインまたはヒトＩｇＧ２のＦｃ領域を含む、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項３０】
ヒトＩｇＧ２定常ドメインもしくはその断片、またはｈｌｇＧ１、ｈＩｇＧ３、ｈＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、もしくはＩｇＭを含み、前記抗体のヒンジ全体または実質的にヒンジ全体およびＣＨ１ドメイン、ならびに任意で軽鎖定常領域全体または実質的に軽鎖定常領域全体が、ｈｌｇＧ２の対応する軽鎖全体または実質的に軽鎖全体、ならびにヒンジおよびＣＨ１ドメイン（「Ｈ２領域」または「Ｈ２ドメイン」）で置換されている、請求項１〜２９のいずれか一項のいずれか一項に記載のアゴニスト抗体。
【請求項３１】
（ｉ）ＩｇＧ２のＦｃ領域を含み、１２７位の重鎖システイン残基および２１４位の軽鎖システイン残基（番号はＫａｂａｔによる）のいずれかまたは両方が、欠失しているかまたは異なるアミノ酸残基に変更されており、結果として、それらの残基が変更されていない抗体と比較して、得られた変性抗体のアゴニスティックな特性が増加しており、（ｉｉ）前記抗体の前記Ｈ２領域の２１４位の前記システイン残基が、変異しているかもしくは別のアミノ酸で置換されており、かつ／または前記重鎖の１２７位、２３２位、もしくは２３３位の前記システイン残基のうちの１つ以上が欠失しているか、もしくは別のアミノ酸で置換されており、（ｉｉｉ）少なくとも１つのシステイン残基が欠失しているか、または別のアミノ酸に変更されているヒトＩｇＧ２定常ドメインを含み、（ｉｖ）ＶＳＴＢ９５（図４に示される可変重配列および可変軽配列）と同じ、ヒトＶＩＳＴＡ上のエピトープと競合するか、またはそれと結合する、請求項１〜３０のいずれか一項のいずれか一項に記載のアゴニスト抗体。
【請求項３２】
（ｉ）配列番号１００、１０１、および１０２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号１０３、１０４、および１０５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｉｉ）配列番号１１０、１１１、および１１２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号１１３、１１４、および１１５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｉｉｉ）配列番号１２０、１２１、および１２２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号１２３、１２４、および１２５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｉｖ）配列番号１３０、１３１、および１３２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号１３３、１３４、および１３５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｖ）配列番号１４０、１４１、および１４２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号１４３、１４４、および１４５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｖｉ）配列番号１５０、１５１、および１５２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号１５３、１５４、および１５５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｖｉｉ）配列番号１６０、１６１、および１６２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号１６３、１６４、および１６５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｖｉｉｉ）配列番号１７０、１７１、および１７２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号１７３、１７４、および１７５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｉｘ）配列番号１８０、１８１、および１８２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号１８３、１８４、および１８５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘ）配列番号１９０、１９１、および１９２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号１９３、１９４、および１９５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｉ）配列番号２００、２０１、および２０２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号２０３、２０４、および２０５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｉｉ）配列番号２１０、２１１、および２１２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号２１３、２１４、および２１５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｉｉｉ）配列番号２２０、２２１、および２２２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号２２３、２２４、および２２５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｉｖ）配列番号２３０、２３１、および２３２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号２３３、２３４、および２３５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｖ）配列番号２４０、２４１、および２４２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号２４３、２４４、および２４５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｖｉ）配列番号２５０、２５１、および２５２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号２５３、２５４、および２５５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｖｉｉ）配列番号２６０、２６１、および２６２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号２６３、２６４、および２６５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｖｉｉｉ）配列番号２７０、２７１、および２７２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号２７３、２７４、および２７５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｉｘ）配列番号２８０、２８１、および２８２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号２８３、２８４、および２８５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｘ）配列番号２９０、２９１、および２９２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号２９３、２９４、および２９５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｘｉ）配列番号３００、３０１、および３０２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号３０３、３０４、および３０５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｘｉｉ）配列番号３１０、３１１、および３１２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号３１３、３１４、および３１５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｘｉｉｉ）配列番号３２０、３２１、および３２２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号３２３、３２４、および３２５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｘｉｖ）配列番号３３０、３３１、および３３２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号３３３、３３４、および３３５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｘｖ）配列番号３４０、３４１、および３４２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号３４３、３４４、および３４５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｘｖｉ）配列番号３５０、３５１、および３５２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号３５３、３５４、および３５５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｘｖｉｉ）配列番号３６０、３６１、および３６２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号３６３、３６４、および３６５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｘｖｉｉｉ）配列番号３７０、３７１、および３７２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号３７３、３７４、および３７５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｘｉｘ）配列番号３８０、３８１、および３８２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号３８３、３８４、および３８５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｘｘ）配列番号３９０、３９１、および３９２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号３９３、３９４、および３９５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｘｘｉ）配列番号４００、４０１、および４０２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号４０３、４０４、および４０５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｘｘｉｉ）配列番号４１０、４１１、および４１２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号４１３、４１４、および４１５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｘｘｉｉｉ）配列番号４２０、４２１、および４２２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号４２３、４２４、および４２５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｘｘｉｖ）配列番号４３０、４３１、および４３２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号４３３、４３４、および４３５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｘｘｖ）配列番号４４０、４４１、および４４２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号４４３、４４４、および４４５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｘｘｖｉ）配列番号４５０、４５１、および４５２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号４５３、４５４、および４５５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｘｘｖｉｉ）配列番号４６０、４６１、および４６２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号４６３、４６４、および４６５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｘｘｖｉｉｉ）配列番号４７０、４７１、および４７２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号４７３、４７４、および４７５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｘｘｉｘ）配列番号４８０、４８１、および４８２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号４８３、４８４、および４８５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｌ）配列番号４９０、４９１、および４９２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号４９３、４９４、および４９５のＶＬＣＤＲポリペプチドを含み、
（ｘｌｉ）配列番号５００、５０１、および５０２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号５０３、５０４、および５０５のＶＬＣＤＲポリペプチドを含み、
（ｘｌｉｉ）配列番号５１０、５１１、および５１２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号５１３、５１４、および５１５のＶＬＣＤＲポリペプチドを含み、
（ｘｌｉｉｉ）配列番号５２０、５２１、および５２２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号５２３、５２４、および５２５のＶＬＣＤＲポリペプチドを含み、
（ｘｌｉｖ）配列番号５３０、５３１、および５３２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号５３３、５３４、および５３５のＶＬＣＤＲポリペプチドを含み、
（ｘｌｖ）配列番号５４０、５４１、および５４２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号５４３、５４４、および５４５のＶＬＣＤＲポリペプチドを含み、
（ｘｌｖｉ）配列番号５５０、５５１、および５５２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号５５３、５５４、および５５５のＶＬＣＤＲポリペプチドを含み、
（ｘｌｖｉｉ）配列番号５６０、５６１、および５６２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号５６３、５６４、および５６５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｌｖｉｉｉ）配列番号５７０、５７１、および５７２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号５７３、５７４、および５７５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｌｉｘ）配列番号５８０、５８１、および５８２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号５８３、５８４、および５８５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌ）配列番号５９０、５９１、および５９２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号５９３、５９４、および５９５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｉ）配列番号６００、６０１、および６０２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号６０３、６０４、および６０５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｉｉ）配列番号６１０、６１１、および６１２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号６１３、６１４、および６１５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｉｉｉ）配列番号６２０、６２１、および６２２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号６２３、６２４、および６２５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｉｖ）配列番号６３０、６３１、および６３２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号６３３、６３４、および６３５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｖ）配列番号６４０、６４１、および６４２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号６４３、６４４、および６４５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｖｉ）配列番号６５０、６５１、および６５２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号６５３、６５４、および６５５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｖｉｉ）配列番号６６０、６６１、および６６２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号６６３、６６４、および６６５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｖｉｉｉ）配列番号６７０、６７１、および６７２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号６７３、６７４、および６７５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｉｘ）配列番号６８０、６８１、および６８２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号６８３、６８４、および６８５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｘ）配列番号６９０、６９１、および６９２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号６９３、６９４、および６９５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｘｉ）配列番号７００、７０１、および７０２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号７０３、７０４、および７０５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｘｉｉ）配列番号７１０、７１１、および７１２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号７１３、７１４、および７１５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｘｉｉｉ）配列番号７２０、７２１、および７２２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号７２３、７２４、および７２５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｘｉｖ）配列番号７３０、７３１、および７３２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号７３３、７３４、および７３５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｘｖ）配列番号７４０、７４１、および７４２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号７４３、７４４、および７４５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｘｖｉ）配列番号７５０、７５１、および７５２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号７５３、７５４、および７５５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｘｖｉｉ）配列番号７６０、７６１、および７６２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号７６３、７６４、および７６５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｘｖｉｉｉ）配列番号７７０、７７１、および７７２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号７７３、７７４、および７７５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｘｉｘ）配列番号７８０、７８１、および７８２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号７８３、７８４、および７８５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｘｘ）配列番号７９０、７９１、および７９２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号７９３、７９４、および７９５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｘｘｉ）配列番号８００、８０１、および８０２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号８０３、８０４、および８０５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｘｘｉｉ）配列番号８１０、８１１および、８１２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号８１３、８１４、および８１５のＶＬＣＤＲを含む、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片。
【請求項３３】
（ｉ）配列番号１０６のＶＨポリペプチドおよび配列番号１０８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｉｉ）配列番号１１６のＶＨポリペプチドおよび配列番号１１８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｉｉｉ）配列番号１２６のＶＨポリペプチドおよび配列番号１２８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｉｖ）配列番号１３６のＶＨポリペプチドおよび配列番号１３８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｖ）配列番号１４６のＶＨポリペプチドおよび配列番号１４８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｖｉ）配列番号１５６のＶＨポリペプチドおよび配列番号１５８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｖｉｉ）配列番号１６６のＶＨポリペプチドおよび配列番号１６８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｖｉｉｉ）配列番号１７６のＶＨポリペプチドおよび配列番号１７８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｉｘ）配列番号１８６のＶＨポリペプチドおよび配列番号１８８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘ）配列番号１９６のＶＨポリペプチドおよび配列番号１９８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｉ）配列番号２０６のＶＨポリペプチドおよび配列番号２０８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｉｉ）配列番号２１６のＶＨポリペプチドおよび配列番号２１８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｉｉｉ）配列番号２２６のＶＨポリペプチドおよび配列番号２２８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｉｖ）配列番号２３６のＶＨポリペプチドおよび配列番号２３８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｖ）配列番号２４６のＶＨポリペプチドおよび配列番号２４８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｖｉ）配列番号２５６のＶＨポリペプチドおよび配列番号２５８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｖｉｉ）配列番号２６６のＶＨポリペプチドおよび配列番号２６８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｖｉｉｉ）配列番号２７６のＶＨポリペプチドおよび配列番号２７８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｉｘ）配列番号２８６のＶＨポリペプチドおよび配列番号２８８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｘ）配列番号２９６のＶＨポリペプチドおよび配列番号２９８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｘｉ）配列番号３０６のＶＨポリペプチドおよび配列番号３０８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｘｉｉ）配列番号３１６のＶＨポリペプチドおよび配列番号３１８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｘｉｉｉ）配列番号３２６のＶＨポリペプチドおよび配列番号３２８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｘｉｖ）配列番号３３６のＶＨポリペプチドおよび配列番号３３８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｘｖ）配列番号３４６のＶＨポリペプチドおよび配列番号３４８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｘｖｉ）配列番号３５６のＶＨポリペプチドおよび配列番号３５８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｘｖｉｉ）配列番号３６６のＶＨポリペプチドおよび配列番号３６８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｘｖｉｉｉ）配列番号３７６のＶＨポリペプチドおよび配列番号３７８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｘｉｘ）配列番号３８６のＶＨポリペプチドおよび配列番号３８８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｘｘ）配列番号３９６のＶＨポリペプチドおよび配列番号３９８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｘｘｉ）配列番号４０６のＶＨポリペプチドおよび配列番号４０８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｘｘｉｉ）配列番号４１６のＶＨポリペプチドおよび配列番号４１８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｘｘｉｉｉ）配列番号４２６のＶＨポリペプチドおよび配列番号４２８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｘｘｉｖ）配列番号４３６のＶＨポリペプチドおよび配列番号４３８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｘｘｖ）配列番号４４６のＶＨポリペプチドおよび配列番号４４８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｘｘｖｉ）配列番号４５６のＶＨポリペプチドおよび配列番号４５８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｘｘｖｉｉ）配列番号４６６のＶＨポリペプチドおよび配列番号４６８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｘｘｖｉｉｉ）配列番号４７６のＶＨポリペプチドおよび配列番号４７８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｘｘｉｘ）配列番号４８６のＶＨポリペプチドおよび配列番号４８８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｌ）配列番号４９６のＶＨポリペプチドおよび配列番号４９８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｌｉ）配列番号５０６のＶＨポリペプチドおよび配列番号５０８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｌｉｉ）配列番号５１６のＶＨポリペプチドおよび配列番号５１８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｌｉｉｉ）配列番号５２６のＶＨポリペプチドおよび配列番号５２８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｌｉｖ）配列番号５３６のＶＨポリペプチドおよび配列番号５３３、５３４、および５３５のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｌｖ）配列番号５４６のＶＨポリペプチドおよび配列番号５４８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｌｖｉ）配列番号５５６のＶＨポリペプチドおよび配列番号５５８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｌｖｉｉ）配列番号５６６のＶＨポリペプチドおよび配列番号５６８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｌｖｉｉｉ）配列番号５７６のＶＨポリペプチドおよび配列番号５７８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｌｉｘ）配列番号５８６のＶＨポリペプチドおよび配列番号５８８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌ）配列番号５９６のＶＨポリペプチドおよび配列番号５９８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｉ）配列番号６０６のＶＨポリペプチドおよび配列番号６０８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｉｉ）配列番号６１６のＶＨポリペプチドおよび配列番号６１８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｉｉｉ）配列番号６２６のＶＨポリペプチドおよび配列番号６２８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｉｖ）配列番号６３６のＶＨポリペプチドおよび配列番号６３８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｖ）配列番号６４６のＶＨポリペプチドおよび配列番号６４８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｖｉ）配列番号６５６のＶＨポリペプチドおよび配列番号６５８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｖｉｉ）配列番号６６６のＶＨポリペプチドおよび配列番号６６８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｖｉｉｉ）配列番号６７６のＶＨポリペプチドおよび配列番号６７８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｉｘ）配列番号６８６のＶＨポリペプチドおよび配列番号６８８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｘ）配列番号６９６のＶＨポリペプチドおよび配列番号６９８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｘｉ）配列番号７０６のＶＨポリペプチドおよび配列番号７０８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｘｉｉ）配列番号７１６のＶＨポリペプチドおよび配列番号７１８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｘｉｉｉ）配列番号７２６のＶＨポリペプチドおよび配列番号７２８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｘｉｖ）配列番号７３６のＶＨポリペプチドおよび配列番号７３８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｘｖ）配列番号７４６のＶＨポリペプチドおよび配列番号７４８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｘｖｉ）配列番号７５６のＶＨポリペプチドおよび配列番号７５８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｘｖｉｉ）配列番号７６６のＶＨポリペプチドおよび配列番号７６８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｘｖｉｉｉ）配列番号７７６のＶＨポリペプチドおよび配列番号７７８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｘｉｘ）配列番号７８６のＶＨポリペプチドおよび配列番号７８８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｘｘ）配列番号７９６のＶＨポリペプチドおよび配列番号７９８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｘｘｉ）配列番号８０６のＶＨポリペプチドおよび配列番号８０８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｘｘｉｉ）配列番号８１６のＶＨポリペプチドおよび配列番号８１８のＶＬポリペプチドを含む、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片。
【請求項３４】
任意で少なくとも１つのシステイン残基が欠失しているかまたは別のアミノ酸に変更されたヒトＩｇＧ２定常ドメインを含む、請求項３２または３３に記載の抗体。
【請求項３５】
以下の免疫阻害効果（ｉ）免疫応答の減少、（ｉｉ）Ｔ細胞活性化の減少、（ｉｉｉ）細胞傷害性Ｔ細胞活性の減少、（ｉｖ）ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞活性の減少、（ｖ）Ｔ細胞活性の減少、（ｖｉ）炎症誘発性サイトカイン分泌の減少、（ｖｉｉ）ＩＬ−２分泌の減少、（ｖｉｉｉ）インターフェロン−γ産生の減少、（ｉｘ）Ｔｈ１応答の減少、（ｘ）Ｔｈ２応答の減少、（ｘｉ）細胞数および／もしくは制御性Ｔ細胞の活性の減少、（ｘｉｉ）制御性細胞活性および／もしくは骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）、ｉＭＣ、間葉系間質細胞、ＴＩＥ２発現単球のうちの１つ以上の増加、（ｘｉｉｉ）制御性細胞活性および／もしくは骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）、ｉＭＣ、間葉系間質細胞、ＴＩＥ２発現単球のうちの１つ以上の活性の増加、（ｘｉｉｉ）Ｍ２マクロファージの増加、（ｘｉｖ）Ｍ２マクロファージ活性の増加、（ｘｖ）Ｎ２好中球の増加、（ｘｖｉ）Ｎ２好中球活性の増加、（ｘｖｉｉ）Ｔ細胞活性化阻害の増加、（ｘｖｉｉｉ）ＣＴＬ活性化阻害の増加、（ｘｉｘ）ＮＫ細胞活性化阻害の増加、（ｘｘ）Ｔ細胞枯渇の増加、（ｘｘｉ）Ｔ細胞応答の減少、（ｘｘｉｉ）細胞傷害性細胞活性の減少、（ｘｘｉｉｉ）抗原特異的メモリー応答の減少、（ｘｘｉｖ）細胞のアポトーシスもしくは溶解の阻害、（ｘｘｖ）細胞への細胞傷害性効果もしくは細胞増殖抑制効果の減少、（ｘｘｖｉ）直接細胞死滅の減少、（ｘｘｖｉｉ）Ｔｈｌ７活性の減少、ならびに／または（ｘｘｖｉｉｉ）補体依存性細胞傷害および／もしくは抗体依存性細胞媒介性細胞傷害の減少、のうちのいずれか１つ、またはそれらのうちの少なくとも１つの組み合わせを媒介するが、但し、前記抗ＶＩＳＴＡ抗体または抗原結合断片は、（ｉ）〜（ｘｘｖｉｉｉ）のうちの１つ以上と逆の効果を誘発し得ることを条件とし、任意で、自己免疫、アレルギー、炎症、移植、または敗血症を治療するために使用される、請求項１〜３４のいずれか一項に記載のアゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体または抗体断片。
【請求項３６】
請求項１〜３５のいずれか一項に記載の少なくとも１つのアンタゴニスティックまたはアゴニスティックな抗体または抗体断片を含む、医薬組成物または診断用組成物。
【請求項３７】
治療および／もしくは診断方法、または診断もしくは治療で使用するための請求項１〜３６のいずれか一項に記載の少なくとも１つのアンタゴニスティックな抗体もしくは抗体断片を含有する組成物の使用であって、前記方法または使用は、治療および／または診断を必要とする対象に少なくとも一用量、あるいは治療的もしくは診断に有効な量の、請求項１〜３６のいずれか一項に記載の少なくとも１つの少なくとも１つのアンタゴニスティックな抗体もしくは抗体断片を含む組成物、または請求項１〜３６のいずれか一項に従って含有する組成物を投与することを含む、治療および／もしくは診断方法、または使用。
【請求項３８】
癌または感染性障害を治療するための、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記癌が、血液癌または固形腫瘍、例えば、骨髄細胞、Ｔ細胞、または骨髄細胞とＴ細胞の組み合わせを含む腫瘍間質によって取り巻かれたものである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
白血病、リンパ腫、骨髄異形成症候群もしくは骨髄腫、肺癌、またはそれらの組み合わせから選択される癌を治療するための、請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】
前記白血病が、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性（ｍｙｅｌｏｉｄ）（骨髄性（ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ））白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性（ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ）白血病（ＣＭＬ）、有毛細胞白血病、Ｔ細胞前リンパ球性白血病、大顆粒リンパ球性白血病、または成人Ｔ細胞白血病を含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
治療および／もしくは診断方法、または診断もしくは治療で使用するための請求項１〜４１のいずれか一項に記載の少なくとも１つのアゴニスティックな抗体もしくは抗体断片を含有する組成物の使用であって、前記方法または使用は、治療および／または診断を必要とする対象に少なくとも一用量、あるいは治療的もしくは診断に有効な量の、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の少なくとも１つの少なくとも１つのアゴニスティックな抗体もしくは抗体断片を含む組成物、または請求項１〜４１のいずれか一項に従って含有する組成物を投与することを含む、治療および／もしくは診断方法、または使用。
【請求項４３】
以下の免疫阻害効果（ｉ）免疫応答の減少、（ｉｉ）Ｔ細胞活性化の減少、（ｉｉｉ）細胞傷害性Ｔ細胞活性の減少、（ｉｖ）ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞活性の減少、（ｖ）Ｔ細胞活性の減少、（ｖｉ）炎症誘発性サイトカイン分泌の減少、（ｖｉｉ）ＩＬ−２分泌の減少、（ｖｉｉｉ）インターフェロン−γ産生の減少、（ｉｘ）Ｔｈ１応答の減少、（ｘ）Ｔｈ２応答の減少、（ｘｉ）細胞数および／もしくは制御性Ｔ細胞の活性の減少、（ｘｉｉ）制御性細胞活性および／もしくは骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）、ｉＭＣ、間葉系間質細胞、ＴＩＥ２発現単球のうちの１つ以上の増加、（ｘｉｉｉ）制御性細胞活性および／もしくは骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）、ｉＭＣ、間葉系間質細胞、ＴＩＥ２発現単球のうちの１つ以上の活性の増加、（ｘｉｉｉ）Ｍ２マクロファージの増加、（ｘｉｖ）Ｍ２マクロファージ活性の増加、（ｘｖ）Ｎ２好中球の増加、（ｘｖｉ）Ｎ２好中球活性の増加、（ｘｖｉｉ）Ｔ細胞活性化阻害の増加、（ｘｖｉｉｉ）ＣＴＬ活性化阻害の増加、（ｘｉｘ）ＮＫ細胞活性化阻害の増加、（ｘｘ）Ｔ細胞枯渇の増加、（ｘｘｉ）Ｔ細胞応答の減少、（ｘｘｉｉ）細胞傷害性細胞活性の減少、（ｘｘｉｉｉ）抗原特異的メモリー応答の減少、（ｘｘｉｖ）細胞のアポトーシスもしくは溶解の阻害、（ｘｘｖ）細胞への細胞傷害性効果もしくは細胞増殖抑制効果の減少、（ｘｘｖｉ）直接細胞死滅の減少、（ｘｘｖｉｉ）Ｔｈｌ７活性の減少、ならびに／または（ｘｘｖｉｉｉ）補体依存性細胞傷害および／もしくは抗体依存性細胞媒介性細胞傷害の減少、のうちのいずれか１つ、またはそれらのうちの少なくとも１つの組み合わせをインビトロおよび／またはインビボでもたらすためであるが、但し、前記抗ＶＩＳＴＡ抗体または抗原結合断片は、（ｉ）〜（ｘｘｖｉｉｉ）のうちの１つ以上と逆の効果を誘発し得ることを条件とし、任意で、自己免疫、アレルギー、炎症、移植、または敗血症を治療するために使用される、請求項１〜４２のいずれか一項に記載の方法またはいずれかのアゴニスティックな抗体もしくは抗体断片の使用。
【請求項４４】
アレルギー、自己免疫、移植、遺伝子療法、炎症、癌、ＧＶＨＤ、もしくは敗血症の治療または予防に使用されるか、あるいは炎症、自己免疫、もしくはヒト対象において前述のいずれかに関連するアレルギー性副作用を治療または予防するために使用される、請求項３７〜４３のいずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項４５】
ＣＴＬＡ４、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、ＢＴＬＡ、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ３、ＶＩＳＴＡのうちの１つ以上を標的とする免疫阻害抗体もしくは融合タンパク質、および／またはＣＤ４０、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、もしくはＩＣＯＳのうちの１つ以上を標的とするアゴニスティックな抗体または融合タンパク質から選択される別の免疫調節抗体または融合タンパク質を更に含む、請求項１〜４４のいずれか一項に記載の抗ＶＩＳＴＡ抗体もしくは抗原結合断片または組成物、あるいは方法または使用。
【請求項４６】
治療の前、同時、および／または後に、個体の細胞によるＶＩＳＴＡタンパク質または体液中のＶＩＳＴＡタンパク質をアッセイすることを含む、請求項１〜４５のいずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項４７】
造血細胞に対するＶＩＳＴＡレベルをアッセイすることを含む、請求項１〜４６のいずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項４８】
骨髄系統細胞および／またはリンパ球、単球、もしくは好中球、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、またはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞のうちのいずれか１つ以上から選択される、造血細胞に対するＶＩＳＴＡレベルをアッセイすることを含む、請求項１〜４７のいずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項４９】
前記アゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体または断片が、ＶＳＴＢ４９〜ＶＳＴＢ１１６および任意に変異されていてもよいヒトＩｇＧ２Ｆｃ領域から選択される抗体と同じＣＤＲを含む、請求項１〜４８のいずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項５０】
前記ＩｇＧ２定常またはＦｃ領域が、天然ＦｃＲ結合および／またはＣＤ３２Ａに結合する能力を保持する、請求項４９に記載の方法または使用。
【請求項５１】
前記抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体または断片が、３７℃で表面プラズモン共鳴によって決定されるとき、５０Ｍ以下のヒトＶＩＳＴＡの親和性またはＫＤを含む、請求項１〜５０のいずれか一項に記載の抗体、組成物、方法、または使用。
【請求項５２】
前記抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体または断片が、３７℃で表面プラズモン共鳴によって決定されるとき、１ｎＭ以下のヒトＶＩＳＴＡの親和性またはＫＤを含む、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の抗体、組成物、方法、または使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１６年４月１５日に出願された米国仮出願第６２／３２３，１９３号、２０１６年５月３１日に出願された同第６２／３４３，３５５号、２０１６年８月９日に出願された同第６２／３７２，３６２号、２０１６年９月９日に出願された同第６２／３８５，６２７号、２０１６年１１月２２日に出願された同第６２／４２５，１８４号、２０１６年７月１９日に出願された同第６２／３６３，９２９号、２０１６年７月２１日に出願された同第６２／３６５，０８５号、２０１６年９月９日に出願された同第６２／３８５，８０５号、２０１６年７月１９日に出願された同第６２／３６３，９３１号、２０１６年７月２１日に出願された同第６２／３６５，１０２号、２０１６年９月９日に出願された同第６２／３８５，８７１号、２０１６年７月１９日に出願された同第同６２／３６３，９１７号、２０１６年７月２１日に出願された同第６２／３６５，０８１号、２０１６年９月９日に出願された同第６２／３８５，８８８号、２０１６年７月１９日に出願された同第６２／３６４，０７３号、２０１６年７月２１日に出願された同第６２／３６５，１６６号、２０１６年９月９日に出願された同第６２／３８５，８９３号、２０１６年７月１９日に出願された同第６２／３６３，９２５号、２０１６年７月２１日に出願された同第６２／３６５，０８７号、２０１６年９月９日に出願された同第６２／３８５，７８５号、２０１６年１０月１１日に出願された同第６２／４０６，６３２号に対して優先権を主張し、これらの各々および全ては、参照により本明細書に組み込まれる。本出願は、参照により組み込まれ、優先権も主張される、２０１７年４月＿＿＿日に出願されたＰＣＴ出願＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿「ＡＮＴＩ−ＨＵＭＡＮ  ＶＩＳＴＡ  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ  ＡＮＤ  ＵＳＥ  ＴＨＥＲＥＯＦ」（代理人番号４３２６０．２２１４）に関する。
【０００２】
本発明は、新規抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体および抗体断片、すなわち、抗ヒトＶＩＳＴＡ（Ｔ細胞活性化（１）の免疫グロブリンＶ領域含有抑制因子）（「ＶＩＳＴＡ」）抗体および抗体断片の特定に関する。より具体的には、本出願は、新規ヒトＶＩＳＴＡアゴニスト、すなわち、免疫、特にＴ細胞免疫へのヒトＶＩＳＴＡの抑制効果を刺激するか、または促進する抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体および抗体断片を提供する。また、本発明は、ＣＤ４＋もしくはＣＤ８＋Ｔ細胞増殖、ＣＤ４＋もしくはＣＤ８＋Ｔ細胞活性化へのＶＩＳＴＡの抑制効果、および免疫サイトカイン、特に炎症誘発性サイトカインの産生へのＶＩＳＴＡの抑制効果など、ＶＩＳＴＡの免疫への抑制効果を強化するか、または模倣するためのかかるアゴニストの使用にも関する。本発明はまた、特に、自己免疫、炎症、アレルギー障害、敗血症、ＧＶＨＤなどの、Ｔ細胞免疫および炎症誘発性サイトカインの発現の予防もしくは阻害が治療的に有益である状態の治療、または癌などのいくつかの状態の炎症性副作用の軽減における、予防薬または治療薬としてのこれらのアゴニスティック抗体および抗体断片の特定の使用にも関する。
【０００３】
本出願はまた、新規アンタゴニスト、すなわち、ヒトＶＩＳＴＡの免疫への抑制効果、特にＴ細胞免疫へのＶＩＳＴＡの効果に拮抗するか、またはそれを阻害する抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体および抗体断片も提供する。また、本発明は、ＶＩＳＴＡの免疫への抑制効果、すなわち、ＣＤ４＋もしくはＣＤ８＋Ｔ細胞増殖、ＣＤ４＋もしくはＣＤ８＋Ｔ細胞活性化、および免疫サイトカインの産生へのＶＩＳＴＡの抑制効果を遮断するか、または阻害するためのかかる新規アンタゴニストの使用にも関する。また、本発明は、特に、癌および感染性疾患の治療などの、Ｔ細胞免疫の促進が治療的に有益である状態の治療における、予防薬または治療薬としてのこれらのアンタゴニスティックな抗体および抗体断片の特定の使用にも関する。
【背景技術】
【０００４】
免疫陰性チェックポイント調節因子（ＮＣＲ）経路は、ヒト免疫関連疾患の治療において特別な臨床標的であることが証明されている。腫瘍免疫を強化するためにモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を使用した２つのＮＣＲ、ＣＴＬＡ−４およびＰＤ−１の遮断は、癌の治療に革命を起こし、ヒト疾患の臨床的に検証された標的としてこれらの経路を確立した。ＮＣＲ経路をもたらすＮＣＲリガンドの可溶性バージョンも、自己免疫を治療するための免疫抑制薬（すなわち、関節リウマチのＡＭＰ−１１０／Ｂ７−Ｈ４−Ｉｇ）として診療所に配置された。
【０００５】
ＶＩＳＴＡ（参照１を参照のこと）は、その最も近い系統学的近縁種がＰＤ−Ｌ１である、ＮＣＲリガンドである。ＶＩＳＴＡは、ＰＤ−Ｌ１に対して相同性を有するが、造血区画に限定される独特の発現パターンを示す。具体的には、ＶＩＳＴＡは、ＣＤ１１ｂｈｉｇｈ骨髄細胞上に構成的かつ高度に発現し、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞上により低いレベルで発現する。ＰＤ−Ｌ１同様、ＶＩＳＴＡは免疫を強く抑制するリガンドであり（参照１）、ＰＤ−Ｌ１同様、ＶＩＳＴＡの遮断は、前臨床腫瘍学モデルにおいて、癌に対する治療免疫を獲得することを可能にする（参照２を参照のこと）。ＶＩＳＴＡの遮断は、免疫、特にＣＤ８＋およびＣＤ４＋媒介Ｔ細胞免疫を強化するが、ＶＩＳＴＡの細胞外ドメインの可溶性Ｉｇ融合タンパク質（ＶＩＳＴＡ−Ｉｇ）での治療は、免疫を抑制し、自己免疫疾患の複数のマウスモデルの進行を停止させることが示されている。
【０００６】
はっきりとした科学的証拠は、ＶＩＳＴＡが強いＴ細胞抑制を誘導するリガンドであることを示した。多数のアンタゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体は、Ｄａｒｔｍｏｕｔｈ  ＣｏｌｌｅｇｅおよびＪａｎｎｓｅｎを含む異なるグループによって報告されている。これらの抗体は、癌および感染などの、ＶＩＳＴＡのＴ細胞免疫への免疫抑制効果の抑制が望ましい状態の治療において有用である。しかしながら、本発明者らの知る限りでは、ヒトＶＩＳＴＡの作用を刺激する抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体または抗体断片は、これまでは特定されていない。かかるアゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体および抗体断片は、免疫、特にＴ細胞免疫の抑制が望ましい状態、および／またはＶＩＳＴＡの発現が異常に下方制御される状態の治療に望ましいであろう。
【発明の概要】
【０００７】
ヒトＶＩＳＴＡおよびその変異型に特異的に結合する新規抗体および抗体断片、例えば、ヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合し、ヒトＶＩＳＴＡの免疫への作用を促進するか、または模倣するキメラ、ヒト、ヒト化、もしくは多重特異性抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体を提供することが、本発明の目的である。
【０００８】
アゴニスティックな抗体または抗体断片が、図４に示されるＣＤＲならびに可変重ポリペプチドおよび可変軽ポリペプチドを有する抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体のうちのいずれか１つと同じかまたは重なるエピトープに結合する、ヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗原結合領域を含むアゴニスティックな抗体またはその抗体断片を提供することが、本発明の具体的な目的である。
【０００９】
抗体または抗体断片がＶＩＳＴＡの免疫への作用のうちの１つ以上を刺激するか、または促進する、Ｔ細胞活性化のヒトＩｇＶドメイン抑制因子（ヒトＶＩＳＴＡ）に特異的に結合する抗原結合領域を含む、例えば、任意で、ヒトＩｇＧ２定常領域またはＦｃ領域が、ヒトＣＤ３２Ａを含み、かつ／またはＦｃガンマ受容体に結合するネイティブのヒトＩｇＧ２および／またはｈＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃｙＲＩＩＡもしくはｈＦｃｙＲＩＩＢ、（ＣＤ３２もしくはＣＤ３２Ａ）、およびＦｃγＲｌｌｌＡ（ＣＤ１６Ａ）、またはＦｃγＲｌｌｌＢ（ＣＤ１６Ｂ）のうちの１つ以上を含むＦｃｙＲに結合するＩｇＧ２を含むヒトＩｇＧ２定常領域もしくはＦｃ領域を含有するＦｃガンマ受容体に結合する、ヒトＩｇＧ２定常領域またはヒトＩｇＧ２Ｆｃ領域を含む、単離された抗体またはその抗体断片を提供することが、本発明の具体的な目的である。
【００１０】
アゴニスティックな抗体または抗体断片が、図４の配列を有する抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体のうちのいずれかによって結合されるエピトープを含むか、またはそれと重なるＶＩＳＴＡエピトープに結合する、ヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗原結合領域を含むアゴニスティックな抗体またはその抗体断片を提供することが、本発明の具体的な目的である。
【００１１】
アゴニスティックな抗体または抗体断片が、ＬＬＤＳＧＬＹＣＣＬＶＶＥＩＲＨＨＨＳＥＨＲＶＨの残基を含むエピトープのより多くの残基のうちの１つに結合するか、またはそれと相互作用する、ヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗原結合領域を含むアゴニスティックな抗体またはその抗体断片を提供することが、本発明の具体的な目的である。
【００１２】
アゴニスティックな抗体または抗体断片が、７９ＥＶＱＴＣＳＥＲＲＰＩＲ９０、４８ＮＶＴＬＴＣＲＬＬＧＰＶ６０、１５３ＨＨＨＳＥＨＲＶＨＧＡＭ１６４、５２ＬＴＣＲＬＬＧＰＶ６０、５６ＬＬＧＰＶＤＫＧＨＤＶＴＦＹＫ７０、１１３ＬＡＱＲＨＧＬＥＳＡＳＤＨＨＧ１２７、１５３ＨＨＨＳＥＨＲＶＨＧＡＭ１６４、９３ＴＦＱＤＬＨＬＨＨＧＧＨＱＡＡ１０７、１４６ＣＬＶＶＥＩＲＨＨＨＳＥＨ１５８、５３ＴＣＲＬＬＧＰＶＤＫＧ６３、１２３ＳＤＨＨＧ１２７、および／または１５３ＨＨＨＳＥＨＲＶＨＧＡＭ１６４のうちの１つ以上の残基を含むエピトープのより多くの残基のうちの１つに結合するか、またはそれと相互作用する、ヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗原結合領域を含むアゴニスティックな抗体またはその抗体断片を提供することが、本発明の具体的な目的である。
【００１３】
アゴニスティックな抗体または抗体断片が、７９ＥＶＱＴＣＳＥＲＲＰＩＲ９０の１つ以上の残基を含むエピトープのより多くの残基のうちの１つに結合するか、またはそれと相互作用する、ヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗原結合領域を含むアゴニスティックな抗体またはその抗体断片を提供することが、本発明の具体的な目的である。
【００１４】
アゴニスティックな抗体または抗体断片が、ヒトＶＩＳＴＡの免疫への少なくとも１つの効果、例えば、Ｔ細胞免疫、単球の活性化、Ｔ細胞増殖の誘導；サイトカイン発現の誘導または抑制、単球生存の増加、細胞発現ＶＩＳＴＡにおける抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の誘導；および細胞発現ＶＩＳＴＡにおける抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）の誘導、のうちのいずれか１つ以上へのヒトＶＩＳＴＡの抑制効果を促進するか、または強化する、ヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗原結合領域を含むアゴニスティックな抗体またはその抗体断片を提供することが、本発明の具体的な目的である。
【００１５】
ヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗原結合領域を含み、アゴニスティックな抗体またはその抗体断片が、ヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗原結合領域を含み、可変重配列および可変軽配列を含む抗体または抗体断片は、図４に示されるＣＤＲならびに可変重ポリペプチドおよび可変軽ポリペプチドを有する抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体のうちのいずれか１つと同一のＣＤＲポリペプチドを有するが、但し、該抗体または断片がアンタゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体または抗体断片を含む場合、抗体または抗体断片は、ＶＳＴＢ１１２、ＶＳＴＢ１１６、ＶＳＴＢ９５、ＶＳＴＢ５０、ＶＳＴＢ５３、またはＶＳＴＢ６０のうちのいずれの１つとも同じＣＤＲを含まないことを条件とする、ヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗原結合領域を含むアゴニスティックな抗体またはその抗体断片を提供することが、本発明の具体的な目的である。
【００１６】
アゴニスティックな抗体またはアンタゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体もしくは断片を含む抗体の場合、抗体または抗体断片は、ＶＳＴＢ１１２、ＶＳＴＢ１１６、ＶＳＴＢ９５、ＶＳＴＢ５０、ＶＳＴＢ５３、またはＶＳＴＢ６０のうちのいずれの１つとも同じＣＤＲを含まない、ヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗原結合領域を含むアゴニスティックな抗体またはその抗体断片を提供することが、本発明の具体的な目的である。
【００１７】
アゴニスティックな抗体または抗体断片がＶＳＴＢ４９〜ＶＳＴＢ１１６のうちのいずれか１つから選択される抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体の配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する可変重ポリペプチドおよび／または可変軽ポリペプチドを含み、その可変重ポリペプチド配列および可変軽ポリペプチド配列は、図４に示されるが、但し、該抗体または断片がアンタゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体または断片を含む場合、抗体または抗体断片は、ＶＳＴＢ１１２、ＶＳＴＢ１１６、ＶＳＴＢ９５、ＶＳＴＢ５０、ＶＳＴＢ５３、またはＶＳＴＢ６０のうちのいずれの１つとも同じＣＤＲを含まないことを条件とする、ヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗原結合領域を含むアゴニスティックな抗体またはその抗体断片を提供することが、本発明の具体的な目的である。
【００１８】
アゴニスティックな抗体または抗体がヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗原結合領域を含み、このアゴニスティックな抗体または抗体断片はＶＳＴＢ４９〜ＶＳＴＢ１１６のうちのいずれか１つから選択される抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体の配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する可変重ポリペプチドおよび／または可変軽ポリペプチドを含み、その可変重ポリペプチド配列および可変軽ポリペプチド配列は、図４に示されるが、但し、該抗体または断片がアンタゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体または断片を含む場合、抗体または抗体断片は、ＶＳＴＢ１１２、ＶＳＴＢ１１６、ＶＳＴＢ９５、ＶＳＴＢ５０、ＶＳＴＢ５３、またはＶＳＴＢ６０のうちのいずれの１つとも同じＣＤＲを含まないことを条件とする、ヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗原結合領域を含むアゴニスティックな抗体またはその抗体断片を提供することが、本発明の具体的な目的である。
【００１９】
アゴニスティックな抗体または抗体断片がＶＳＴＢ４９〜ＶＳＴＢ１１６のうちのいずれか１つから選択される抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体の配列と少なくとも９６〜９９％の配列同一性を有する可変重ポリペプチドおよび／または可変軽ポリペプチドを含み、その可変重ポリペプチド配列および可変軽ポリペプチド配列は、図４に示されるが、但し、該抗体または断片がアンタゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体または抗体断片を含む場合、抗体または抗体断片は、ＶＳＴＢ１１２、ＶＳＴＢ１１６、ＶＳＴＢ９５、ＶＳＴＢ５０、ＶＳＴＢ５３、またはＶＳＴＢ６０のうちのいずれの１つとも同じＣＤＲを含まないことを条件とする、ヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗原結合領域を含むアゴニスティックな抗体またはその抗体断片を提供することが、本発明の具体的な目的である。
【００２０】
アゴニスティックな抗体または抗体断片がＶＳＴＢ４９〜ＶＳＴＢ１１６のうちの１つから選択される抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体の配列と同一である可変重ポリペプチドおよび／または可変軽ポリペプチドを含み、その可変重ポリペプチド配列および可変軽ポリペプチド配列は、図４に示されるが、但し、該抗体または断片がアンタゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体または抗体断片を含む場合、抗体または抗体断片は、ＶＳＴＢ１１２、ＶＳＴＢ１１６、ＶＳＴＢ９５、ＶＳＴＢ５０、ＶＳＴＢ５３、またはＶＳＴＢ６０のうちのいずれの１つとも同じＣＤＲを含まないことを条件とする、ヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗原結合領域を含むアゴニスティックな抗体またはその抗体断片を提供することが、本発明の具体的な目的である。
【００２１】
ヒトＶＩＳＴＡの免疫への少なくとも１つの効果に拮抗するか、またはそれを遮断する前述のいずれかに記載のヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗原結合領域を含むアンタゴニスティックな抗体またはその抗体断片を提供することが、本発明の具体的な目的である。
【００２２】
ヒトＶＩＳＴＡの免疫への少なくとも１つの作用を刺激するか、または促進する前述のいずれかに記載のヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗原結合領域を含むアゴニスティックな抗体またはその抗体断片を提供することが、本発明の具体的な目的である。
【００２３】
ヒト定常ドメインを含む前述のいずれかに記載のヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗原結合領域を含むアゴニスティックな抗体またはその抗体断片を提供することが、本発明の具体的な目的である。
【００２４】
例えば、欠失、置換、もしくは付加変異により、または前述のいずれかの組み合わせによって任意で修飾される、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４から選択されるヒト定常ドメインを含む前述のいずれかに記載のヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗原結合領域を含むアゴニスティックな抗体またはその抗体断片を提供することが、本発明の具体的な目的である。
【００２５】
抗体断片がＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖ抗体断片を含むか、またはそれである、前述のいずれかに記載のヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗原結合領域を含むアゴニスティックな抗体またはその抗体断片を提供することが、本発明の具体的な目的である。
【００２６】
例えば、Ｔ細胞免疫、単球の活性化、もしくはＴ細胞増殖へのヒトＶＩＳＴＡの抑制効果；サイトカイン発現の誘導または抑制、単球生存の増加、細胞発現ＶＩＳＴＡの抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の抑制；および細胞発現ＶＩＳＴＡの抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）の抑制から選択される、ヒトＶＩＳＴＡの免疫への作用のうちの少なくとも１つを遮断するか、または抑制する前述のいずれかに記載のヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗原結合領域を含むアンタゴニスティックな抗体またはその抗体断片を提供することが、本発明の具体的な目的である。
【００２７】
例えば、ヒトＶＩＳＴＡの抑制効果Ｔ細胞免疫、単球の活性化、もしくはＴ細胞増殖の抑制；サイトカイン発現の誘導または抑制、単球生存の増加、細胞発現ＶＩＳＴＡにおける抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の抑制；および細胞発現ＶＩＳＴＡの抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）の抑制から選択される、ヒトＶＩＳＴＡの免疫への効果のうちの少なくとも１つを促進するかまたは強化する前述のいずれかに記載のヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗原結合領域を含むアゴニスティックな抗体またはその抗体断片を提供することが、本発明の具体的な目的である。
【００２８】
ヒトＩｇＧ２定常領域またはＦｃ領域を含む前述のいずれかに記載のヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗原結合領域を含むアゴニスティックな抗体またはその抗体断片を提供することが、本発明の具体的な目的である。
【００２９】
ヒトＶＩＳＴＡの免疫への抑制効果、例えば、Ｔ細胞免疫、単球の活性化、Ｔ細胞増殖；サイトカイン発現、単球生存、細胞発現ＶＩＳＴＡにおける抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；および細胞発現ＶＩＳＴＡにおける抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）、のうちのいずれか１つ以上へのヒトＶＩＳＴＡの効果を促進するか、または強化する前述のいずれかに記載のヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗原結合領域を含むアゴニスティックな抗体またはその抗体断片を提供することが、本発明の具体的な目的である。
【００３０】
Ｔ細胞免疫および／または炎症誘発性サイトカイン発現を阻害する前述のいずれかに記載のヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗原結合領域を含むアゴニスティックな抗体またはその抗体断片を提供することが、本発明の具体的な目的である。
【００３１】
ヒトＦｃ領域、例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４、または前述のいずれかのキメラを含む、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体である前述のいずれかに記載のヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗原結合領域を含むアゴニスティックな抗体またはその抗体断片を提供することが、本発明の具体的な目的である。
【００３２】
キメラ、ヒト、またはヒト化である前述のいずれかに記載のヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗原結合領域を含むアゴニスティックな抗体またはその抗体断片を提供することが、本発明の具体的な目的である。
【００３３】
潜在的に変異され得るヒトＩｇＧ２定常ドメインまたはＦｃ領域を含む前述のいずれかに記載のヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗原結合領域を含むアゴニスティックな抗体またはその抗体断片を提供することが、本発明の具体的な目的である。
【００３４】
ヒトＩｇＧ２定常ドメインもしくはその断片、またはｈｌｇＧ１、ｈＩｇＧ３、ｈＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、もしくはＩｇＭを含み、抗体のヒンジ全体または実質的にヒンジ全体およびＣＨ１ドメイン、ならびに任意で軽鎖定常領域全体または実質的に軽鎖定常領域全体が、ｈｌｇＧ２の対応する軽鎖全体または実質的に軽鎖全体、ならびにヒンジおよびＣＨ１ドメイン（「Ｈ２領域」または「Ｈ２ドメイン」）で置換されている、前述のいずれかに記載のヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗原結合領域を含むアゴニスティックな抗体またはその抗体断片を提供することが、本発明の具体的な目的である。
【００３５】
（ｉ）ＩｇＧ２のＦｃ領域を含み、１２７位の重鎖システイン残基および２１４位の軽鎖システイン残基（番号はＫａｂａｔによる）のいずれかまたは両方が、欠失しているかまたは異なるアミノ酸残基に変更されており、結果として、それらの残基が変更されていない抗体と比較して、得られた変性抗体のアゴニスティックな特性が増加しており、（ｉｉ）該抗体のＨ２領域の２１４位のシステイン残基が、変異しているかもしくは別のアミノ酸で置換されており、かつ／または重鎖の１２７位、２３２位、もしくは２３３位のシステイン残基のうちの１つ以上が欠失しているか、もしくは別のアミノ酸で置換されており、（ｉｉｉ）少なくとも１つのシステイン残基が欠失しているか、または別のアミノ酸に変更されているヒトＩｇＧ２定常ドメインを含み、（ｉｖ）ＶＳＴＢ９５（図４に示される可変重配列および可変軽配列）と同じ、ヒトＶＩＳＴＡ上のエピトープと競合するか、またはそれと結合する、前述のいずれかに記載のヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗原結合領域を含むアゴニスティックな抗体またはその抗体断片を提供することが、本発明の具体的な目的である。
【００３６】
（ｉ）配列番号１００、１０１、および１０２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号１０３、１０４、および１０５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｉｉ）配列番号１１０、１１１、および１１２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号１１３、１１４、および１１５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｉｉｉ）配列番号１２０、１２１、および１２２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号１２３、１２４、および１２５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｉｖ）配列番号１３０、１３１、および１３２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号１３３、１３４、および１３５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｖ）配列番号１４０、１４１、および１４２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号１４３、１４４、および１４５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｖｉ）配列番号１５０、１５１、および１５２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号１５３、１５４、および１５５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｖｉｉ）配列番号１６０、１６１、および１６２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号１６３、１６４、および１６５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｖｉｉｉ）配列番号１７０、１７１、および１７２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号１７３、１７４、および１７５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｉｘ）配列番号１８０、１８１、および１８２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号１８３、１８４、および１８５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘ）配列番号１９０、１９１、および１９２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号１９３、１９４、および１９５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｉ）配列番号２００、２０１、および２０２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号２０３、２０４、および２０５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｉｉ）配列番号２１０、２１１、および２１２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号２１３、２１４、および２１５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｉｉｉ）配列番号２２０、２２１、および２２２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号２２３、２２４、および２２５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｉｖ）配列番号２３０、２３１、および２３２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号２３３、２３４、および２３５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｖ）配列番号２４０、２４１、および２４２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号２４３、２４４、および２４５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｖｉ）配列番号２５０、２５１、および２５２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号２５３、２５４、および２５５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｖｉｉ）配列番号２６０、２６１、および２６２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号２６３、２６４、および２６５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｖｉｉｉ）配列番号２７０、２７１、および２７２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号２７３、２７４、および２７５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｉｘ）配列番号２８０、２８１、および２８２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号２８３、２８４、および２８５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｘ）配列番号２９０、２９１、および２９２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号２９３、２９４、および２９５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｘｉ）配列番号３００、３０１、および３０２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号３０３、３０４、および３０５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｘｉｉ）配列番号３１０、３１１、および３１２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号３１３、３１４、および３１５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｘｉｉｉ）配列番号３２０、３２１、および３２２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号３２３、３２４、および３２５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｘｉｖ）配列番号３３０、３３１、および３３２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号３３３、３３４、および３３５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｘｖ）配列番号３４０、３４１、および３４２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号３４３、３４４、および３４５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｘｖｉ）配列番号３５０、３５１、および３５２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号３５３、３５４、および３５５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｘｖｉｉ）配列番号３６０、３６１、および３６２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号３６３、３６４、および３６５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｘｖｉｉｉ）配列番号３７０、３７１、および３７２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号３７３、３７４、および３７５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｘｉｘ）配列番号３８０、３８１、および３８２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号３８３、３８４、および３８５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｘｘ）配列番号３９０、３９１、および３９２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号３９３、３９４、および３９５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｘｘｉ）配列番号４００、４０１、および４０２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号４０３、４０４、および４０５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｘｘｉｉ）配列番号４１０、４１１、および４１２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号４１３、４１４、および４１５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｘｘｉｉｉ）配列番号４２０、４２１、および４２２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号４２３、４２４、および４２５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｘｘｉｖ）配列番号４３０、４３１、および４３２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号４３３、４３４、および４３５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｘｘｖ）配列番号４４０、４４１、および４４２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号４４３、４４４、および４４５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｘｘｖｉ）配列番号４５０、４５１、および４５２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号４５３、４５４、および４５５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｘｘｖｉｉ）配列番号４６０、４６１、および４６２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号４６３、４６４、および４６５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｘｘｖｉｉｉ）配列番号４７０、４７１、および４７２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号４７３、４７４、および４７５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｘｘｉｘ）配列番号４８０、４８１、および４８２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号４８３、４８４、および４８５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｌ）配列番号４９０、４９１、および４９２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号４９３、４９４、および４９５のＶＬ  ＣＤＲポリペプチドを含み、
（ｘｌｉ）配列番号５００、５０１、および５０２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号５０３、５０４、および５０５のＶＬ  ＣＤＲポリペプチドを含み、
（ｘｌｉｉ）配列番号５１０、５１１、および５１２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号５１３、５１４、および５１５のＶＬ  ＣＤＲポリペプチドを含み、
（ｘｌｉｉｉ）配列番号５２０、５２１、および５２２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号５２３、５２４、および５２５のＶＬ  ＣＤＲポリペプチドを含み、
（ｘｌｉｖ）配列番号５３０、５３１、および５３２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号５３３、５３４、および５３５のＶＬ  ＣＤＲポリペプチドを含み、
（ｘｌｖ）配列番号５４０、５４１、および５４２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号５４３、５４４、および５４５のＶＬ  ＣＤＲポリペプチドを含み、
（ｘｌｖｉ）配列番号５５０、５５１、および５５２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号５５３、５５４、および５５５のＶＬ  ＣＤＲポリペプチドを含み、
（ｘｌｖｉｉ）配列番号５６０、５６１、および５６２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号５６３、５６４、および５６５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｌｖｉｉｉ）配列番号５７０、５７１、および５７２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号５７３、５７４、および５７５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｘｌｉｘ）配列番号５８０、５８１、および５８２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号５８３、５８４、および５８５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌ）配列番号５９０、５９１、および５９２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号５９３、５９４、および５９５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｉ）配列番号６００、６０１、および６０２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号６０３、６０４、および６０５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｉｉ）配列番号６１０、６１１、および６１２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号６１３、６１４、および６１５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｉｉｉ）配列番号６２０、６２１、および６２２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号６２３、６２４、および６２５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｉｖ）配列番号６３０、６３１、および６３２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号６３３、６３４、および６３５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｖ）配列番号６４０、６４１、および６４２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号６４３、６４４、および６４５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｖｉ）配列番号６５０、６５１、および６５２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号６５３、６５４、および６５５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｖｉｉ）配列番号６６０、６６１、および６６２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号６６３、６６４、および６６５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｖｉｉｉ）配列番号６７０、６７１、および６７２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号６７３、６７４、および６７５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｉｘ）配列番号６８０、６８１、および６８２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号６８３、６８４、および６８５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｘ）配列番号６９０、６９１、および６９２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号６９３、６９４、および６９５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｘｉ）配列番号７００、７０１、および７０２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号７０３、７０４、および７０５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｘｉｉ）配列番号７１０、７１１、および７１２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号７１３、７１４、および７１５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｘｉｉｉ）配列番号７２０、７２１、および７２２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号７２３、７２４、および７２５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｘｉｖ）配列番号７３０、７３１、および７３２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号７３３、７３４、および７３５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｘｖ）配列番号７４０、７４１、および７４２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号７４３、７４４、および７４５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｘｖｉ）配列番号７５０、７５１、および７５２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号７５３、７５４、および７５５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｘｖｉｉ）配列番号７６０、７６１、および７６２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号７６３、７６４、および７６５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｘｖｉｉｉ）配列番号７７０、７７１、および７７２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号７７３、７７４、および７７５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｘｉｘ）配列番号７８０、７８１、および７８２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号７８３、７８４、および７８５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｘｘ）配列番号７９０、７９１、および７９２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号７９３、７９４、および７９５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｘｘｉ）配列番号８００、８０１、および８０２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号８０３、８０４、および８０５のＶＬＣＤＲを含み、
（ｌｘｘｉｉ）配列番号８１０、８１１，および８１２のＶＨＣＤＲ、ならびに配列番号８１３、８１４、および８１５のＶＬＣＤＲを含む、前述のいずれかに記載のヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗原結合領域を含むアゴニスティックな抗体またはその抗体断片を提供することが、本発明の具体的な目的である。
【００３７】
（ｉ）配列番号１０６のＶＨポリペプチドおよび配列番号１０８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｉｉ）配列番号１１６のＶＨポリペプチドおよび配列番号１１８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｉｉｉ）配列番号１２６のＶＨポリペプチドおよび配列番号１２８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｉｖ）配列番号１３６のＶＨポリペプチドおよび配列番号１３８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｖ）配列番号１４６のＶＨポリペプチドおよび配列番号１４８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｖｉ）配列番号１５６のＶＨポリペプチドおよび配列番号１５８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｖｉｉ）配列番号１６６のＶＨポリペプチドおよび配列番号１６８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｖｉｉｉ）配列番号１７６のＶＨポリペプチドおよび配列番号１７８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｉｘ）配列番号１８６のＶＨポリペプチドおよび配列番号１８８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘ）配列番号１９６のＶＨポリペプチドおよび配列番号１９８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｉ）配列番号２０６のＶＨポリペプチドおよび配列番号２０８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｉｉ）配列番号２１６のＶＨポリペプチドおよび配列番号２１８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｉｉｉ）配列番号２２６のＶＨポリペプチドおよび配列番号２２８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｉｖ）配列番号２３６のＶＨポリペプチドおよび配列番号２３８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｖ）配列番号２４６のＶＨポリペプチドおよび配列番号２４８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｖｉ）配列番号２５６のＶＨポリペプチドおよび配列番号２５８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｖｉｉ）配列番号２６６のＶＨポリペプチドおよび配列番号２６８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｖｉｉｉ）配列番号２７６のＶＨポリペプチドおよび配列番号２７８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｉｘ）配列番号２８６のＶＨポリペプチドおよび配列番号２８８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｘ）配列番号２９６のＶＨポリペプチドおよび配列番号２９８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｘｉ）配列番号３０６のＶＨポリペプチドおよび配列番号３０８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｘｉｉ）配列番号３１６のＶＨポリペプチドおよび配列番号３１８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｘｉｉｉ）配列番号３２６のＶＨポリペプチドおよび配列番号３２８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｘｉｖ）配列番号３３６のＶＨポリペプチドおよび配列番号３３８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｘｖ）配列番号３４６のＶＨポリペプチドおよび配列番号３４８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｘｖｉ）配列番号３５６のＶＨポリペプチドおよび配列番号３５８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｘｖｉｉ）配列番号３６６のＶＨポリペプチドおよび配列番号３６８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｘｖｉｉｉ）配列番号３７６のＶＨポリペプチドおよび配列番号３７８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｘｉｘ）配列番号３８６のＶＨポリペプチドおよび配列番号３８８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｘｘ）配列番号３９６のＶＨポリペプチドおよび配列番号３９８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｘｘｉ）配列番号４０６のＶＨポリペプチドおよび配列番号４０８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｘｘｉｉ）配列番号４１６のＶＨポリペプチドおよび配列番号４１８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｘｘｉｉｉ）配列番号４２６のＶＨポリペプチドおよび配列番号４２８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｘｘｉｖ）配列番号４３６のＶＨポリペプチドおよび配列番号４３８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｘｘｖ）配列番号４４６のＶＨポリペプチドおよび配列番号４４８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｘｘｖｉ）配列番号４５６のＶＨポリペプチドおよび配列番号４５８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｘｘｖｉｉ）配列番号４６６のＶＨポリペプチドおよび配列番号４６８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｘｘｖｉｉｉ）配列番号４７６のＶＨポリペプチドおよび配列番号４７８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｘｘｉｘ）配列番号４８６のＶＨポリペプチドおよび配列番号４８８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｌ）配列番号４９６のＶＨポリペプチドおよび配列番号４９８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｌｉ）配列番号５０６のＶＨポリペプチドおよび配列番号５０８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｌｉｉ）配列番号５１６のＶＨポリペプチドおよび配列番号５１８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｌｉｉｉ）配列番号５２６のＶＨポリペプチドおよび配列番号５２８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｌｉｖ）配列番号５３６のＶＨポリペプチドおよび配列番号５３３、５３４、および５３５のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｌｖ）配列番号５４６のＶＨポリペプチドおよび配列番号５４８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｌｖｉ）配列番号５５６のＶＨポリペプチドおよび配列番号５５８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｌｖｉｉ）配列番号５６６のＶＨポリペプチドおよび配列番号５６８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｌｖｉｉｉ）配列番号５７６のＶＨポリペプチドおよび配列番号５７８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｘｌｉｘ）配列番号５８６のＶＨポリペプチドおよび配列番号５８８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌ）配列番号５９６のＶＨポリペプチドおよび配列番号５９８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｉ）配列番号６０６のＶＨポリペプチドおよび配列番号６０８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｉｉ）配列番号６１６のＶＨポリペプチドおよび配列番号６１８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｉｉｉ）配列番号６２６のＶＨポリペプチドおよび配列番号６２８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｉｖ）配列番号６３６のＶＨポリペプチドおよび配列番号６３８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｖ）配列番号６４６のＶＨポリペプチドおよび配列番号６４８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｖｉ）配列番号６５６のＶＨポリペプチドおよび配列番号６５８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｖｉｉ）配列番号６６６のＶＨポリペプチドおよび配列番号６６８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｖｉｉｉ）配列番号６７６のＶＨポリペプチドおよび配列番号６７８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｉｘ）配列番号６８６のＶＨポリペプチドおよび配列番号６８８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｘ）配列番号６９６のＶＨポリペプチドおよび配列番号６９８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｘｉ）配列番号７０６のＶＨポリペプチドおよび配列番号７０８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｘｉｉ）配列番号７１６のＶＨポリペプチドおよび配列番号７１８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｘｉｉｉ）配列番号７２６のＶＨポリペプチドおよび配列番号７２８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｘｉｖ）配列番号７３６のＶＨポリペプチドおよび配列番号７３８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｘｖ）配列番号７４６のＶＨポリペプチドおよび配列番号７４８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｘｖｉ）配列番号７５６のＶＨポリペプチドおよび配列番号７５８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｘｖｉｉ）配列番号７６６のＶＨポリペプチドおよび配列番号７６８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｘｖｉｉｉ）配列番号７７６のＶＨポリペプチドおよび配列番号７７８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｘｉｘ）配列番号７８６のＶＨポリペプチドおよび配列番号７８８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｘｘ）配列番号７９６のＶＨポリペプチドおよび配列番号７９８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｘｘｉ）配列番号８０６のＶＨポリペプチドおよび配列番号８０８のＶＬポリペプチドを含み、
（ｌｘｘｉｉ）配列番号８１６のＶＨポリペプチドおよび配列番号８１８のＶＬポリペプチドを含む、前述のいずれかに記載のＶＩＳＴＡアゴニストを提供することが、本発明の目的である。
【００３８】
任意で、少なくとも１つのシステイン残基が欠失しているか、または別のアミノ酸に変更されている、ヒトＩｇＧ２定常ドメインを含む前述のいずれかに記載のヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗原結合領域を含むアゴニスティックな抗体またはその抗体断片を提供することが、本発明の具体的な目的である。
【００３９】
以下の免疫阻害効果（ｉ）免疫応答の減少、（ｉｉ）Ｔ細胞活性化の減少、（ｉｉｉ）細胞傷害性Ｔ細胞活性の減少、（ｉｖ）ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞活性の減少、（ｖ）Ｔ細胞活性の減少、（ｖｉ）炎症誘発性サイトカイン分泌の減少、（ｖｉｉ）ＩＬ−２分泌の減少、（ｖｉｉｉ）インターフェロン−γ産生の減少、（ｉｘ）Ｔｈ１応答の減少、（ｘ）Ｔｈ２応答の減少、（ｘｉ）制御性Ｔ細胞の細胞数および／もしくは活性の増加、（ｘｉｉ）制御性細胞活性および／もしくは骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）、ｉＭＣ、間葉系間質細胞、ＴＩＥ２発現単球のうちの１つ以上の増加、（ｘｉｉｉ）制御性細胞活性および／もしくは骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）、ｉＭＣ、間葉系間質細胞、ＴＩＥ２発現単球のうちの１つ以上の活性の増加、（ｘｉｉｉ）Ｍ２マクロファージの増加、（ｘｉｖ）Ｍ２マクロファージ活性の増加、（ｘｖ）Ｎ２好中球の増加、（ｘｖｉ）Ｎ２好中球活性の増加、（ｘｖｉｉ）Ｔ細胞活性化阻害の増加、（ｘｖｉｉｉ）ＣＴＬ活性化阻害の増加、（ｘｉｘ）ＮＫ細胞活性化阻害の増加、（ｘｘ）Ｔ細胞枯渇の増加、（ｘｘｉ）Ｔ細胞応答の減少、（ｘｘｉｉ）細胞傷害性細胞活性の減少、（ｘｘｉｉｉ）抗原特異的メモリー応答の減少、（ｘｘｉｖ）細胞のアポトーシスもしくは溶解の阻害、（ｘｘｖ）細胞への細胞傷害性効果もしくは細胞増殖抑制効果の減少、（ｘｘｖｉ）直接細胞死滅の減少、（ｘｘｖｉｉ）Ｔｈｌ７活性の減少、ならびに／または（ｘｘｖｉｉｉ）補体依存性細胞傷害および／もしくは抗体依存性細胞媒介性細胞傷害の減少、のうちのいずれか１つ、またはそれらのうちの少なくとも１つの組み合わせを媒介するが、但し、該抗ＶＩＳＴＡ抗体または抗原結合断片は、（ｉ）〜（ｘｘｖｉｉｉ）のうちの１つ以上と逆の効果を誘発し得ることを条件とし、任意で、自己免疫、アレルギー、炎症、移植、または敗血症を治療するために使用される、前述のいずれかに記載のヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗原結合領域を含むアゴニスティックな抗体またはその抗体断片を提供することが、本発明の具体的な目的である。
【００４０】
前述のいずれかに記載のヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗原結合領域を含むアゴニスティックな抗体またはその抗体断片を含む医薬組成物または診断用組成物を提供することが、本発明の具体的な目的である。
【００４１】
治療および／もしくは診断方法、または診断もしくは治療で使用するための前述の請求項のいずれかに記載の少なくとも１つのアンタゴニスティックな抗体もしくは抗体断片を含有する組成物の使用を提供することが、本発明の具体的な目的であり、この方法または使用は、例えば、癌または感染性障害などの治療および／または診断を必要とする対象に少なくとも一用量、あるいは治療的もしくは診断に有効な量の、前述のいずれかに記載の少なくとも１つの少なくとも1つのアンタゴニスティックな抗体もしくは抗体断片を含む組成物を投与することを含み、任意で、癌は、血液癌または固形腫瘍、例えば、骨髄細胞、Ｔ細胞、もしくは骨髄細胞とＴ細胞の組み合わせを含む腫瘍間質によって取り巻かれたもの、または白血病、リンパ腫、骨髄異形成症候群もしくは骨髄腫、肺癌、もしくはそれらの組み合わせから選択される癌、または急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性（ｍｙｅｌｏｉｄ）（骨髄性（ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ））白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性（ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ）白血病（ＣＭＬ）、有毛細胞白血病、Ｔ細胞前リンパ球性白血病、大顆粒リンパ球性白血病、または成人Ｔ細胞白血病を含む白血病である。
【００４２】
治療および／もしくは診断方法、または診断もしくは治療で使用するための前述の請求項のいずれかに記載の少なくとも１つのアゴニスティックな抗体もしくは抗体断片を含有する組成物の使用を提供することが、本発明の具体的な目的であり、この方法または使用は、治療および／または診断を必要とする対象に少なくとも一用量、あるいは治療的もしくは診断に有効な量の、前述のいずれかに記載の少なくとも１つの少なくとも1つのアゴニスティックな抗体もしくは抗体断片を含む組成物、または前述のいずれかに従って含有する組成物を投与することを含む。
【００４３】
以下の免疫阻害効果（ｉ）免疫応答の減少、（ｉｉ）Ｔ細胞活性化の減少、（ｉｉｉ）細胞傷害性Ｔ細胞活性の減少、（ｉｖ）ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞活性の減少、（ｖ）Ｔ細胞活性の減少、（ｖｉ）炎症誘発性サイトカイン分泌の減少、（ｖｉｉ）ＩＬ−２分泌の減少、（ｖｉｉｉ）インターフェロン−γ産生の減少、（ｉｘ）Ｔｈ１応答の減少、（ｘ）Ｔｈ２応答の減少、（ｘｉ）制御性Ｔ細胞の細胞数および／もしくは活性の増加、（ｘｉｉ）制御性細胞活性および／もしくは骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）、ｉＭＣ、間葉系間質細胞、ＴＩＥ２発現単球のうちの１つ以上の増加、（ｘｉｉｉ）制御性細胞活性および／もしくは骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）、ｉＭＣ、間葉系間質細胞、ＴＩＥ２発現単球のうちの１つ以上の活性の増加、（ｘｉｉｉ）Ｍ２マクロファージの増加、（ｘｉｖ）Ｍ２マクロファージ活性の増加、（ｘｖ）Ｎ２好中球の増加、（ｘｖｉ）Ｎ２好中球活性の増加、（ｘｖｉｉ）Ｔ細胞活性化阻害の増加、（ｘｖｉｉｉ）ＣＴＬ活性化阻害の増加、（ｘｉｘ）ＮＫ細胞活性化阻害の増加、（ｘｘ）Ｔ細胞枯渇の増加、（ｘｘｉ）Ｔ細胞応答の減少、（ｘｘｉｉ）細胞傷害性細胞活性の減少、（ｘｘｉｉｉ）抗原特異的メモリー応答の減少、（ｘｘｉｖ）細胞のアポトーシスもしくは溶解の阻害、（ｘｘｖ）細胞への細胞傷害性効果もしくは細胞増殖抑制効果の減少、（ｘｘｖｉ）直接細胞死滅の減少、（ｘｘｖｉｉ）Ｔｈｌ７活性の減少、ならびに／または（ｘｘｖｉｉｉ）補体依存性細胞傷害および／もしくは抗体依存性細胞媒介性細胞傷害の減少、のうちのいずれか１つ、またはそれらのうちの少なくとも１つの組み合わせを媒介するが、但し、該抗ＶＩＳＴＡ抗体または抗原結合断片は、（ｉ）〜（ｘｘｖｉｉｉ）のうちの１つ以上と逆の効果を誘発し得ることを条件とし、任意で、自己免疫、アレルギー、炎症、移植、または敗血症を治療するために使用される、前述のいずれかに記載のヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗原結合領域を含むアゴニスティックな抗体またはその抗体断片を提供することが、本発明の具体的な目的である。
【００４４】
アレルギー、自己免疫、移植、遺伝子療法、炎症、癌、ＧＶＨＤ、もしくは敗血症の治療または予防に使用されるか、あるいは炎症、自己免疫、もしくはヒト対象において前述のいずれかに関連するアレルギー性副作用の治療または予防に使用される方法、または前述のいずれかに記載のいずれかのアゴニスティックな抗体もしくは抗体断片の使用を提供することが、本発明の具体的な目的である。
【００４５】
ＣＴＬＡ４、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、ＢＴＬＡ、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ３、ＶＩＳＴＡのうちの１つ以上を標的とする免疫阻害抗体もしくは融合タンパク質、および／またはＣＤ４０、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、もしくはＩＣＯＳのうちの１つ以上を標的とするアゴニスティックな抗体または融合タンパク質から選択される別の免疫調節抗体または融合タンパク質を更に含む、前述のいずれかに記載の抗ＶＩＳＴＡ抗体もしくは抗原結合断片または組成物、あるいは方法または使用。
【００４６】
治療の前、同時、および／または後に、個体の細胞によるＶＩＳＴＡタンパク質または体液中のＶＩＳＴＡタンパク質をアッセイすることを含む、前述のいずれかに記載の方法または使用。
【００４７】
造血細胞に対するＶＩＳＴＡレベルをアッセイすることを含む、前述のいずれかに記載の方法または使用。
【００４８】
骨髄系統細胞および／またはリンパ球、単球、もしくは好中球、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、またはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞のうちのいずれか１つ以上から選択される、造血細胞に対するＶＩＳＴＡレベルをアッセイすることを含む、前述のいずれかに記載の方法または使用。
【００４９】
アゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体または断片が、ＶＳＴＢ４９〜ＶＳＴＢ１１６および任意で変異されていてもよいヒトＩｇＧ２Ｆｃ領域から選択される抗体と同じＣＤＲを含むか、またはＩｇＧ２定常領域またはＦｃ領域が、天然ＦｃＲ結合および／もしくはＣＤ３２Ａに結合する能力を保持する、前述のいずれかに記載の方法または使用。
【００５０】
抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体または断片が、３７℃で表面プラズモン共鳴によって決定されるとき、５０Ｍ以下のヒトＶＩＳＴＡの親和性またはＫＤを含む、前述のいずれかに記載の抗体、組成物、方法、または使用。
【００５１】
抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体または断片が、３７℃で表面プラズモン共鳴によって決定されるとき、１ｎＭ以下のヒトＶＩＳＴＡの親和性またはＫＤを含む、前述のいずれかに記載の抗体、組成物、方法、または使用。
【００５２】
抗体または抗体断片が、図４に示される配列を有する抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体のうちのいずれか１つのＣＤＲポリペプチドを有する可変重配列および可変軽配列を含むが、但し、該抗体または断片がアンタゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体または抗体断片を含む場合、抗体または抗体断片は、ＶＳＴＢ１１２、ＶＳＴＢ１１６、ＶＳＴＢ９５、ＶＳＴＢ５０、ＶＳＴＢ５３、またはＶＳＴＢ６０のうちのいずれの１つとも同じＣＤＲを含まないことを条件とする、ヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗原結合領域を含む、単離されたアンタゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体およびアゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体、ならびにアゴニスティックな抗体断片を提供することが、本発明の具体的な目的である。
【００５３】
抗体または抗体断片がＶＳＴＢ４９−ＶＳＴＢ１１６から選択される抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体のＣＤＲポリペプチドを有する可変重配列および可変軽配列を含むが、但し、該抗体または断片がアンタゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体または抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体断片を含む場合、抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体または抗体断片は、ＶＳＴＢ１１２、ＶＳＴＢ１１６、ＶＳＴＢ９５、ＶＳＴＢ５０、ＶＳＴＢ５３、またはＶＳＴＢ６０のうちのいずれの１つとも同じＣＤＲを含まないことを条件とする、ヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗原結合領域を含む、単離されたアンタゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体およびアゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体、ならびにアゴニスティックな抗体断片を提供することが、本発明の具体的な目的である。
【００５４】
ＶＳＴＢ４９〜ＶＳＴＢ１１６の可変重ポリペプチド配列および可変軽ポリペプチド配列と少なくとも９０％、９５％、または９６〜９９％の配列同一性を有する可変重ポリペプチドおよび／または可変軽ポリペプチドを含むが、但し、該抗体または断片がアンタゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体または断片を含む場合、抗体または抗体断片は、ＶＳＴＢ１１２、ＶＳＴＢ１１６、ＶＳＴＢ９５、ＶＳＴＢ５０、ＶＳＴＢ５３、またはＶＳＴＢ６０のうちのいずれの１つとも同じＣＤＲを含まないことを条件とする、ＶＳＴＢ４９〜ＶＳＴＢ１１６から選択される抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体のＣＤＲを含む、単離されたアンタゴニスティックな抗体およびアゴニスティックな抗体、ならびに抗体断片を提供することが、本発明の別の具体的な目的である。
【００５５】
ＶＳＴＢ４９〜ＶＳＴＢ１１６の可変重ポリペプチド配列および可変軽ポリペプチド配列と同一である可変重ポリペプチドおよび／または可変軽ポリペプチドを含むが、但し、該抗体または断片がアンタゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体または断片を含む場合、抗体または抗体断片は、ＶＳＴＢ１１２、ＶＳＴＢ１１６、ＶＳＴＢ９５、ＶＳＴＢ５０、ＶＳＴＢ５３、またはＶＳＴＢ６０のうちのいずれの１つとも同じＣＤＲを含まないことを条件とする、ＶＳＴＢ４９〜ＶＳＴＢ１１６の同じＣＤＲのいずれか１つを含む、単離されたアンタゴニスティックな抗体およびアゴニスティックな抗体、または抗体断片を提供することが、本発明の別の具体的な目的である。
【００５６】
アゴニスティックな抗体またはその抗体断片が、ヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗原結合領域を含み、この抗体または抗体断片は、図４に開示されるＣＤＲならびに可変重ポリペプチドおよび可変軽ポリペプチドを含む抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体のうちのいずれか１つとしてＣＤＲポリペプチドを有する可変重配列および可変軽配列を含むが、但し、該抗体または断片がアンタゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体または抗体断片を含む場合、抗体または抗体断片は、ＶＳＴＢ１１２、ＶＳＴＢ１１６、ＶＳＴＢ９５、ＶＳＴＢ５０、ＶＳＴＢ５３、またはＶＳＴＢ６０のうちのいずれの１つとも同じＣＤＲを含まないことを条件とする、ヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗原結合領域を含む、単離されたアゴニスティックまたはアゴニスティックなキメラ、ヒト、ヒト化、多重特異性（例えば、二重特異性）抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体または抗体断片を提供することが、本発明の別の具体的な目的である。
【００５７】
新規免疫抑制剤、すなわち、抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体および抗体断片、例えば、ヒトＩｇＧ２定常ドメインまたはＩｇＧ２Ｆｃ領域を含有するものを提供することが、本発明の別の具体的な目的であり、任意で、ヒトＩｇＧ２定常ドメインまたはＩｇＧ２Ｆｃ領域のＦｃＲ結合能力は、ヒトＶＩＳＴＡの免疫への効果、例えば、Ｔ細胞活性、分化、および増殖へのヒトＶＩＳＴＡの抑制効果、ならびに炎症誘発性サイトカインの発現へのヒトＶＩＳＴＡの抑制効果を刺激するか、誘発するか、または模倣する、野生型ヒトＩｇＧ２定常ドメインまたはＩｇＧ２Ｆｃ領域と比較して維持されるか、または強化される。
【００５８】
新規アンタゴニスト、すなわち、ヒトＶＩＳＴＡの免疫への効果、特に、Ｔ細胞活性、分化、および増殖へのヒトＶＩＳＴＡの抑制効果、ならびに炎症誘発性サイトカインの発現へのヒトＶＩＳＴＡの抑制効果に拮抗するか、またはそれらを遮断する新規抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体および抗体断片を提供することが、本発明の別の具体的な目的である。
【００５９】
ＶＩＳＴＡのＴ細胞免疫への抑制効果を強化するか、または模倣する、すなわち、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞増殖、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞活性化、ならびに免疫サイトカイン、特に、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＴＮＦ−α、および／またはＧＭ−ＣＳＦ（顆粒球マクロファージコロニー刺激因子）などの炎症誘発性サイトカインの産生へのＶＩＳＴＡの抑制、ならびにＫＣ（ケラチノサイト走化性因子）またはＭＩＰ−２（マクロファージ炎症性タンパク質２）などのケモカインまたは走化性因子の発現へのＶＩＳＴＡの促進効果を抑制する、新規免疫抑制抗体および抗体断片を提供することが、本発明の別の具体的な目的である。
【００６０】
ＶＩＳＴＡのＴ細胞免疫への抑制効果を遮断するか、または減少させる、すなわち、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞増殖、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞活性化、ならびに炎症誘発性免疫サイトカイン、特に、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＴＮＦ−α、および／またはＧＭ−ＣＳＦ（顆粒球マクロファージコロニー刺激因子）などの炎症誘発性サイトカインの産生へのＶＩＳＴＡの抑制効果、ならびにＫＣ（ケラチノサイト走化性因子）またはＭＩＰ−２（マクロファージ炎症性タンパク質２）などのケモカインまたは走化性因子の発現へのＶＩＳＴＡの促進効果を強化する、新規抗体および抗体断片を提供することが、本発明の別の具体的な目的である。
【００６１】
特定のエピトープ特異性の、またはヒトＶＩＳＴＡへの結合に関して特定の抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体と競合する、新規免疫抑制抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体またはアゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体および抗体断片を提供することが、本発明の別の具体的な目的である。
【００６２】
ＶＩＳＴＡの免疫への抑制効果、例えば、Ｔ細胞免疫へのＶＩＳＴＡの抑制効果、すなわち、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞増殖、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞活性化の抑制効果を刺激し（強化する、誘発する、または模倣する）、かつ／またはＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＴＮＦ−α、および／もしくはＧＭ−ＣＳＦ（顆粒球マクロファージコロニー刺激因子）などの炎症誘発性サイトカインの産生、ならびにＫＣ（ケラチノサイト走化性因子）またはＭＩＰ−２（マクロファージ炎症性タンパク質２）などのケモカインまたは走化性因子の発現へのＶＩＳＴＡの促進効果を抑制する、特定のエピトープ特異性の、またはヒトＶＩＳＴＡへの結合に関して特定の抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体と競合する、新規免疫抑制抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体またはアゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体および抗体断片を提供することが、本発明の別の具体的な目的である。
【００６３】
また、本発明は、特に免疫反応の予防または阻害または減少が治療的に望ましく、なお特に、Ｔ細胞免疫、またはより具体的にはＣＤ４＋もしくはＣＤ８＋媒介Ｔ細胞免疫の予防または阻害または減少が、自己免疫、炎症、アレルギー性障害、敗血症、ＧＶＨＤなどの治療的に有益である状態の治療に、および／または移植もしくは細胞療法レシピエント、例えば、ＣＡＲ−Ｔレシピエントの治療に、あるいは癌などのいくつかの状態の炎症性副作用の軽減における予防薬または治療薬としての、これらのアゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体および抗体断片の具体的な使用にも関する。
【００６４】
また、本発明は、特に、免疫の促進が所望される、例えば、Ｔ細胞免疫またはＣＤ４＋もしくはＣＤ８＋媒介Ｔ細胞免疫が癌および感染性疾患など治療的に有益である状態の治療における予防薬または治療薬としての、新規のアンタゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体および抗体断片の使用にも関する。
【００６５】
検出可能な標識、リンカー、または治療部分に結合される、本発明によるアゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体またはアンタゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体を提供することが、本発明の別の具体的な目的である。
【００６６】
本発明による診断にまたは治療的に有効な量のアゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体またはアンタゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体、例えば、静脈内、皮下、または筋肉内投与可能な組成物などのヒト治療に使用するのに適した、図４に示される配列を有する抗体のいずれかと同じＣＤＲを含有するものを含む診断用組成物または医薬組成物を提供することが、本発明の別の具体的な目的である。
【００６７】
別の免疫アゴニスト、例えば、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１アゴニストと共とに本発明によるアゴニスト抗体を使用する診断または治療方法を提供することが、本発明の別の具体的な目的であり、例えば、ＰＤ−１もしくはＰＤ−Ｌ１アゴニストは、抗ＰＤ−１抗体もしくは抗体断片、抗ＰＤ−Ｌ１抗体もしくは抗体断片、一価もしくは多量体であり得るＰＤ−Ｌ１ポリペプチドまたはその断片、一価もしくは多量体であり得るＰＤ−１ポリペプチドまたはその断片、あるいは前述のいずれかを含む複合体または融合タンパク質から選択される。
【００６８】
別の免疫アンタゴニスト、例えば、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１アンタゴニストとともに本発明によるアンタゴニスト抗体を使用する診断または治療方法を提供することが、本発明の別の具体的な目的であり、例えば、ＰＤ−１もしくはＰＤ−Ｌ１アゴニストは、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体または抗体断片、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体または抗体断片から選択される。
【００６９】
インビトロまたはインビボで、免疫細胞、例えばヒト免疫細胞を、本発明によるアンタゴニスト抗体またはアゴニスト抗体と接触させる方法を提供することが、本発明の別の具体的な目的であり、例えば、接触させた細胞は、癌もしくは感染性疾患を有する対象、または炎症状態、アレルギー、もしくは自己免疫状態を有する対象など、ヒト対象に注入される。
【図面の簡単な説明】
【００７０】
【図１Ａ−Ｄ】抑制性ＶＩＳＴＡ  ｍＡｂを特定するために使用され得るインビトロおよびインビボスクリーニングアッセイを示す。Ａ）精製されたＴ細胞を、示されるｍＡｂの存在下で７２時間、抗ＣＤ３の上で平板培養した。Ｈ３組み込みによって増殖を測定した。Ｂ）精製されたＤＯ１１．１０Ｔ細胞を、示される抗体の存在下で６日間、ＩＳＱパルスＡＰＣにより刺激した。増殖をＣＴＶ希釈色素を使用して測定した。Ｃ）ＧＶＨＤは、Ｃ５７ＢＬ／６細胞を照射されたＢＡＬＢ／ｃレシピエントに移入することにより誘発された。移入後０、２、および４日目に２００μｇの抗体をマウスにＩ．Ｐ．注射し、生存を分析した。Ｄ）ＣｏｎＡ（１５ｍｐｋ）の投与３時間前に、１０ｍｐｋの示される抗体でマウスを処置し、Ｌｕｍｉｎｅｘにより６で血漿中のＩＬ−２を分析した。
【図２Ａ−Ｆ】アゴニストＶＩＳＴＡ抗体が複数の自己免疫疾患モデルにおいて免疫抑制性であることを示す。Ａ）２５週目から開始して実験の終わり終了まで、８Ｇ８またはＨａｍ  Ｉｇ（２００μｇ）のいずれかで、３Ｘ／週でＮＺＢ／Ｗ  Ｆ１マウスを処置した。「Ｘ」は、対照処置群全てが屠殺された時点を示す。Ｂ）１５ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）のＣｏｎＡの投与３時間前に、２００μｇの抗体でマウスを処置し、生存を８０時間追跡した。Ｃ）コラーゲンＩＩ  ｍＡｂ、続いてＬＰＳで順次マウスを処置し、足の腫れを測定することによって関節炎を測定した。８Ｇ８およびＨａｍ−Ｉｇを１日毎に３×投与した（２００μｇ）。Ｄ）マウスの耳にイミキモドを毎日適用した。１４日目に、８Ｇ８またはＨａｍ−Ｉｇ（２００μｇ）を１日毎に投与し、耳の厚さをキャリパスで測定した。Ｅ、Ｆ）マウスの背中にイミキモドを毎日適用した。９日目にマウスを安楽死させ、皮膚を切片し、ＩＨＣによりＣＤ３発現に関して染色した。
【図３】ＷＴおよびｈＶ−ＫＩマウスにおけるＶＩＳＴＡの発現を示す。ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、Ｔｒｅｇ（ＣＤ４＋ＦｏｘＰ３＋）、および単球ＣＤ１１ｂ＋、Ｌｙ６Ｃ＋、Ｌｙ６Ｇ−を、ＷＴおよびＶＩＳＴＡ  ＫＩマウスのリンパ節から単離し、それぞれ、マウスまたはヒトタンパク質に対してαＶＩＳＴＡ抗体で染色した。
【図４】ＩＮＸ８００、ＩＮＸ８０１、およびＩＮＸ９００〜ＩＮＸ９１９のものを含む、異なる抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体の配列を含有する。
【図５】異なるサイトカイン、ケモカイン、および走化性因子の発現への抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体の効果を評価するＣｏｎＡ肝炎モデルにおける例示的な抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体、すなわち、ＩＮＸ８００およびＩＮＸ８０１の効果を示す。
【図６】インビボ移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）動物モデルにおける例示的な抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体、すなわち、ＩＮＸ８００およびＩＮＸ８０１の効果を示す。
【図７】例示的なアゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体、すなわち、ＩＮＸ８００またはＩＮＸ８０１のＣＤ３駆動Ｔ細胞免疫応答への効果を示す。
【図８】例示的なアゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体、すなわち、ＩＮＸ８００またはＩＮＸ８０１の特定のＴ細胞集団の数または総Ｔ細胞数への効果を示す。
【図９】ＣｏｎＡアッセイにおける例示的な抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体の、ならびに選択炎症誘発性サイトカイン、および炎症マーカー、すなわち、ＩＬ−２、γインターフェロン、およびＩＬ−１２ｐ７０の発現への効果を比較する。
【図１０Ａ−１０Ｃ】異なるＩｇＧ２アイソフォームを示す。（Ａ）ジスルフィドシャフリングは、Ａ／Ｂの移行とともに、アイソフォームＡおよびＢをもたらす（図はＺｈａｎｇ，Ａら、２０１５から）。（Ｂ）アイソフォームはＲＰ−ＨＰＬＣにより区別可能である。（Ｃ）ＩＮＸ９０１の観察されたＲＰ−ＨＰＬＣクロマトグラム。
【図１１】ＩｇＧ２ＡまたはＢのアイソフォームの化学濃縮を示す。（黒色線、上部）クロマトグラムはＢ形態を画定する優勢な最左ピークを示す。（赤色線、下部）クロマトグラムはＡ形態を画定する優勢な右ピークを示す。
【図１２】ジスルフィドシャフリングに関してＩＮＸ９０１Ｆｃサイレント変異型を比較する。（上部）ＩｇＧ２骨格上のＩＮＸ９０１は、Ａ、Ａ／Ｂ、およびＢのアイソフォームの予想される混合物を示す。（中央）サイレントＩｇＧ１骨格上のＩＮＸ９０１Ｓｉは、単一アイソフォームとして存在する。（下部）ＩＮＸ９０１ＨＳｉは、天然ＩｇＧ２に等しいジスルフィドシャフリングを可能にする、ＩｇＧ２からのＣＨ１／ヒンジを有するＩｇＧ１サイレントＦｃ領域を有する。
【図１３】生化学的に歪められたＩＮＸ９０１形態は、依然としてＭＬＲにおけるサイトカイン産生を減少させることができる。７２時間の時点でのサイトカイン産生に関して、２つの別個のＭＬＲの上清をＬｕｍｉｎｅｘ分析により分析した。ＩＮＸ９０１親、Ａ歪み、およびＢ歪みは全て、用量依存様式でＴＮＦαおよびＩＬ−２の産生を減少させた。
【図１４】遺伝的にロックされたＩＮＸ９０１形態は、依然としてＭＬＲにおけるサイトカイン産生を減少させることができるが、Ｆｃサイレント変異型は減少させることができない。７２時間の時点でのサイトカイン産生に関して、各ＭＬＲの上清をＬｕｍｉｎｅｘ分析により分析した。ＩＮＸ９０１親、Ａロック、およびＢロックは全て、用量依存様式でＴＮＦαおよびＩＬ−２の産生を減少させた。Ｆｃドメインを発現停止させる変異を含有するＳｉおよびＨＳｉ変異型は、サイトカイン産生を一貫して抑制しなかった。
【図１５】遺伝的にロックされたＩＮＸ９０８形態は、依然としてＭＬＲにおけるサイトカイン産生を減少させることができるが、Ｆｃサイレント変異型は減少させることができない。７２時間の時点でのサイトカイン産生に関して、各ＭＬＲの上清をＬｕｍｉｎｅｘ分析により分析した。ＩＮＸ９０８親、Ａロック、およびＢロックは全て、用量依存様式でＴＮＦαおよびＩＬ−２の産生を減少させた。Ｆｃドメインを発現停止させる変異を含有するＳｉおよびＨＳｉ変異型は、サイトカイン産生を一貫して抑制しなかった。
【図１６】アゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体によって結合された直鎖および不連続のエピトープを特定するために使用されるＰｅｐｓｃａｎ（登録商標）技術を概略的に記載する。
【図１７】アゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体が同じコア配列に結合することを示す。
【図１８】本発明による異なる抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体のエピトープ分析を要約する。
【図１９】アゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体によって結合されるエピトープを示し、結合に関与する重要な残基を更に特定する。
【発明を実施するための形態】
【００７１】
別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する当業者に一般に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと同様または同等の方法および材料が本発明および本発明の試験において使用され得るが、好適な方法および材料が本明細書に記載される。材料、方法、および実施例は単に例示であり、限定することを意図していない。本明細書に記載される分析化学、合成有機化学、ならびに医薬および薬化学に関して利用される名称、ならびにそれらの実験手順および技法は、当該技術分野で周知であり、一般に使用されるものである。標準的な技法は、化学合成、化学分析、医薬調製物、製剤、および送達、ならびに患者の治療のために使用され得る。
【００７２】
本明細書の説明および後の特許請求の範囲を通して使用される場合、「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」の意味は、文脈が別途明らかに示さない限り、複数の指示対象を含む。
【００７３】
本明細書で使用される場合、「活性化受容体」は、抗原、複合抗原（例えば、ＭＨＣ分子の文脈において）、Ｉｇ融合タンパク質、リガンド、または抗体に結合する免疫細胞受容体を広く指す。活性化受容体は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）、サイトカイン受容体、ＬＰＳ受容体、補体受容体、およびＦｃ受容体であるが、これらに限定されない。例えば、Ｔ細胞受容体は、Ｔ細胞上に存在し、ＣＤ３分子に関連する。Ｔ細胞受容体は、ＭＨＣ分子の文脈において抗原によって（ならびにポリクローナルＴ細胞活性化試薬によって）刺激される。ＴＣＲを介したＴ細胞活性化は、多数の変化、例えば、タンパク質リン酸化、膜脂質変化、イオン流、環状ヌクレオチド変更、ＲＮＡ転写変化、タンパク質合成変化、および細胞体積変化をもたらす。例えば、Ｔ細胞受容体は、Ｔ細胞上に存在し、ＣＤ３分子に関連する。Ｔ細胞受容体は、ＭＨＣ分子の文脈において抗原によって（ならびにポリクローナルＴ細胞活性化試薬によって）刺激される。ＴＣＲを介したＴ細胞活性化は、多数の変化、例えば、タンパク質リン酸化、膜脂質変化、イオン流、環状ヌクレオチド変更、ＲＮＡ転写変化、タンパク質合成変化、および細胞体積変化をもたらす。
【００７４】
本明細書で使用される場合、「アジュバント」は、それ自体いずれの特定の抗原効果を有することなく、免疫系を刺激し、ワクチンへの応答を増加させるために使用される薬剤を指す。
【００７５】
本明細書において、「アゴニスト」は、特定の分子の免疫への効果を強化または模倣する分子、一般的には抗体または融合タンパク質を指す。一般的に本出願において、これは、ヒトＶＩＳＴＡの免疫への効果、特にＴ細胞免疫（ＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞免疫）へのＶＩＳＴＡの抑制効果、炎症誘発性サイトカインの発現、ならびに特定のケモカインおよび走化性因子の発現のＶＩＳＴＡの効果を強化するか、または模倣する抗ヒトＶＩＳＴＡアゴニスト抗体および抗体断片を指す。
【００７６】
本明細書の疾患の「診断に役立つ」または「検出に役立つ」は、対象が特定の疾患状態もしくは特定の疾患状態の発症に特有の細胞を有するか、あるいはＶＩＳＴＡの発現を特徴とする免疫抑制、または例えば慢性および非慢性疾患を有する個体において、自己免疫応答、炎症応答、もしくはアレルギー応答中など、ＶＩＳＴＡレベルの減少を有する細胞を特徴とする異常な免疫上方制御などの免疫機能障害を含むかどうかを評価するために、特定のマーカーポリペプチドの発現レベルまたは発現ＲＮＡが単独でまたは１つ以上の他のマーカーに関連して検出されることを意味する。
【００７７】
本明細書で使用される場合、「アレルギー疾患」は、アレルギー反応を伴う疾患を広く指す。より具体的には、「アレルギー疾患」は、アレルゲンが、そのアレルゲンへの曝露と病理学的変化の発症との間に強力な相関性があり、その病理学的変化が免疫学的機序を有すると証明されていることが特定される疾患として定義される。本明細書において、免疫学的機序は、白血球がアレルゲン刺激に免疫応答を示すことを意味する。
【００７８】
本明細書で使用される場合、「アミノ酸」は、天然に存在するアミノ酸および合成アミノ酸、ならびに天然に存在するアミノ酸と同様の様式で機能するアミノ酸類似体およびアミノ酸模倣物を広く指す。天然に存在するアミノ酸は、遺伝子コードによりコードされるもの、ならびに後に修飾されるそれらのアミノ酸（例えば、ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタメート、およびＯ−ホスホセリン）である。アミノ酸類似体は、天然に存在するアミノ酸（すなわち、水素、カルボキシル基、アミノ基に結合される炭素）、およびＲ基（例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウム）と同じ塩基性化学構造を有する化合物を指す。類似体は、修飾されたＲ基（例えば、ノルロイシン）、または修飾されたペプチド骨格を有するが、天然に存在するアミノ酸と同じ化学構造を保持する。アミノ酸模倣物は、アミノ酸の一般的な化学構造とは異なる構造を有するが、天然に存在するアミノ酸と類似の様式で機能する化学化合物を指す。
【００７９】
本明細書で使用される場合、「アネルギー」もしくは「寛容」、または「長期の抗原特異的Ｔ細胞抑制」もしくは「延長された免疫抑制」は、活性化受容体媒介刺激に対する屈折度を広く指す。屈折度は一般的に、抗原特異的であり、寛容性抗原（ｔｏｌｅｒｉｚｉｎｇ  ａｎｔｉｇｅｎ）への曝露を中止した後も持続する。例えば、Ｔ細胞におけるアネルギー（無応答性とは反対に）は、サイトカイン産生、例えばＩＬ−２の欠如を特徴とする。Ｔ細胞アネルギーは、Ｔ細胞が抗原に曝露され、第２のシグナル（共刺激シグナル）の不在下で第１のシグナル（Ｔ細胞受容体またはＣＤ−３媒介シグナル）を受けるときに生じる。これらの条件下で、細胞が同じ抗原に再曝露（再曝露が共刺激分子の存在下で生じる場合であっても）されることによりサイトカインを産生することができなくなり、よって増殖できなくなる。しかしながら、アネルギーＴ細胞は、無関係の抗原への応答を高めることができ、サイトカイン（例えばＩＬ−２）とともに培養される場合、増殖することができる。例えば、Ｔ細胞アネルギーは、ＥＬＩＳＡまたは指標細胞株を使用する増殖アッセイにより測定されるとき、Ｔリンパ球によるＩＬ−２産生の欠如によっても観察され得る。代替的に、レポーター遺伝子構築物が使用され得る。例えば、アネルギーＴ細胞は、５’ＩＬ−２遺伝子エンハンサーの制御下で異種プロモーターにより、またはエンハンサー内に見出され得るＡＰＩ配列の多量体により誘導されるＩＬ−２遺伝子転写を開始することができない（Ｋａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５７：１１３４）。共刺激シグナルの調節は、免疫細胞のエフェクター機能の調節をもたらす。
【００８０】
本明細書において、「アンタゴニスト」は、分子、一般的には、特定の分子の免疫への作用を遮断するか、または減少させる抗体または融合タンパク質を指す。一般的に、本出願において、これは、ヒトＶＩＳＴＡの免疫への効果、特にＴ細胞免疫（ＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞免疫）へのＶＩＳＴＡの抑制効果、炎症誘発性サイトカインの発現、ならびに特定のケモカインおよび走化性因子の発現のＶＩＳＴＡの効果を遮断するか、または減少させる抗ヒトＶＩＳＴＡアンタゴニスト抗体および抗体断片を指す。
【００８１】
本明細書で使用される場合、「抗体」は、抗体の「抗原結合部分」（「抗体部分」、「抗原結合断片」、「抗体断片」とも互換的に使用される）、ならびに全抗体分子を広く指す。本明細書で使用される場合、「抗原結合部分」という用語は、抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ以上の断片（例えば、ＶＩＳＴＡまたはその特定の部分）を指す。本明細書で言及される場合、「抗体」という用語は、全ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体、ならびに任意の抗原結合断片（すなわち、「抗原結合部分」）またはその単一鎖、ならびに二重特異性抗体および多重特異性抗体、例えば、複数の抗原または複数の抗原エピトープに結合するものを含む。「抗体」は、ジスルフィド結合によって相互接続される少なくとも２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖、またはその抗原結合部分を含む糖タンパク質を指す。各重鎖は、少なくとも１つの重鎖可変領域（本明細書でＶＨと略される）および重鎖定常領域で構成される。重鎖定常領域は、３つのドメインＣＨ１、Ｃｍ、およびＣｍ−で構成される。各軽鎖は、少なくとも１つの軽鎖可変領域（本明細書でＶＬと略される）および軽鎖定常領域で構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメインＣＬ−で構成される。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存的な領域が散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域に更に細分化され得る。各ＶＨおよびＶＬは、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、およびＦＲ４の順序でアミノ末端からカルボキシ末端に配置される３つのＣＤＲおよび４つのＦＲで構成される。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）を含む、免疫グロブリンの宿主組織または因子への結合を媒介し得る。より一般的に、「抗体」という用語は、１つ以上の非共有結合相互作用が分子構造とエピトープとの間の複合体を安定させる、エピトープに適合し、それを認識する特定の形状を有する任意のポリペプチド鎖含有分子構造を含むことを意図する。原型抗体分子は免疫グロブリンであり、全ての源、例えば、ヒト、ゲッ歯類、ウサギ、ウシ、ヒツジ、ブタ、イヌ、他の哺乳類、ニワトリ、他の鳥類などからの全ての種類の免疫グロブリンＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤなどが、「抗体」と見なされる。
【００８２】
抗体の抗原結合機能は、完全長抗体の断片によって実施され得る。抗体の「抗原結合部分」という用語に包含される抗原結合断片の非限定的な例としては、（ａ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、およびＣＨ１ドメインからなる一価の断片であるＦａｂ断片、（ｂ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価の断片であるＦ（ａｂ’）２断片、（ｃ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、（ｄ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｅ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ，ｅｔ  ａｌ）．（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６）、ならびに（ｆ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。更に、Ｆｖ断片ＶＬおよびＶＨの２つのドメインは別個の遺伝子によってコードされるが、それらは、それらがＶＬ領域およびＶＨ領域が対合して一価の分子を形成する単一タンパク質鎖（単一鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる）として作製されることを可能にする合成リンカーによって組換え方法を使用して接合され得る。例えば、Ｂｉｒｄ，ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６，Ｈｕｓｔｏｎ，ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３およびＯｓｂｏｕｒｎ，ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６：７７８を参照のこと。単一鎖抗体はまた、抗体の「抗原結合部分」という用語に包含されることが意図される。特定のｓｃＦｖの任意のＶＨおよびＶＬ配列は、完全なＩｇＧ分子または他のアイソタイプをコードする発現ベクターを生成するために、ヒト免疫グロブリン定常領域ｃＤＮＡまたはゲノム配列に連結され得る。ＶＨおよびＶＬはまた、タンパク質化学または組換えＤＮＡ技術のいずれかを使用して、免疫グロブリンのＦａｂ、Ｆｖ、または他の断片の生成に使用することもできる。ダイアボディなどの他の形態の単一鎖抗体のも包含される。ダイアボディは、ＶＨおよびＶＬドメインが単一のポリペプチド鎖上で発現するが、同じ鎖上の２つのドメイン間の対合を可能にするには短すぎるリンカーを使用し、それにより、ドメインを別の鎖の相補的ドメインと対合させ、２つの抗原結合部位を創出する、二価の二重特異性抗体である。例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８、Ｐｏｌｊａｋ，ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２：１１２１−１１２３を参照のこと。また更に、抗体またはその抗原結合部分（抗原結合断片、抗体断片、抗体部分）は、抗体または抗体部分と１つ以上の他のタンパク質またはペプチドとの共有結合または非共有結合によって形成される、より大きい免疫接着分子の一部であり得る。免疫接着分子の例としては、四量体ｓｃＦｖ分子を作製するためのストレプトアビジンコア領域の使用（Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ，ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｈｕｍ．Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ６：９３−１０１）、ならびに二価およびビオチン化ｓｃＦｖ分子を作製するためのシステイン残基、マーカーペプチド、およびＣ末端ポリヒスチジンタグの使用が挙げられる。Ｋｉ���ｒｉｙａｎｏｖ，ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３１：１０４７−１０５８。ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片などの抗体部分は、それぞれ、全抗体のパパインまたはペプシン消化などの従来の技法を使用して全抗体から調製され得る。更に、抗体、抗体部分、および免疫接着分子は、本明細書に記載される標準的な組換えＤＮＡ技法を使用して得ることができる。抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、異種抗体、同種抗体、同系抗体、またはそれらの修飾形態、例えば、ヒト化抗体、キメラ抗体、二重特異性抗体、または多重特異性抗体であり得る。
【００８３】
「抗原を認識する抗体」および「抗原に特異的な抗体」は、本明細書において「抗原に特異的に結合する抗体」という用語と互換的に使用され、抗原に特異的に結合する免疫グロブリンまたはその断片を指す。
【００８４】
本明細書で使用される場合、「抗原」は、その抗原のエピトープに結合することが可能な抗体を産生するように動物を誘導することが更に可能な抗体によって結合されることが可能な分子または分子の一部分を広く指す。抗原は、１つのエピトープを有するか、または２つ以上のエピトープを有し得る。本明細書に言及される特定の反応は、抗原が高度に選択的な様式でその対応する抗体と反応し、他の抗原によって誘起され得る多数の他の抗体とは反応しないことを示す。目的の特定の抗原に対する所望の強化された免疫応答の場合、抗原としては、例示的なものとして保護免疫応答が誘発され得る感染性疾患抗原が挙げられるが、これに限定されない。
【００８５】
本明細書で使用される場合、「抗原提示細胞」は、プロフェッショナル抗原提示細胞（例えば、Ｂリンパ球、単球、樹状細胞、およびランゲルハンス細胞）、ならびに他の抗原提示細胞（例えば、ケラチノサイト、内皮細胞、星状細胞、線維芽細胞、および乏突起膠細胞）を広く指す。
【００８６】
本明細書で使用される場合、「アンチセンス核酸分子」は、ｍＲＮＡ配列に相補的な、または遺伝子のコード鎖に相補的なタンパク質をコードする「センス」核酸に相補的（例えば、二本鎖ｃＤＮＡ分子のコード鎖に相補的）であるヌクレオチド配列を広く指す。したがって、アンチセンス核酸分子は、センス核酸分子に水素結合し得る。
【００８７】
本明細書で使用される場合、「アポトーシス」は、当該技術分野で既知の技法を使用して特徴付けることができるプログラムされた細胞死を広く指す。アポトーシス細胞死は、細胞萎縮、膜小庖形成、および細胞断片化となるクロマチン凝集を特徴とし得る。アポトーシスを受ける細胞は、ヌクレオソーム間ＤＮＡ切断の特徴的なパターンも提示する。
【００８８】
本明細書で使用される場合、「自己免疫」または「自己免疫疾患または状態」は、個体自体の組織またはその共分離もしくは顕在化から生じ、それに対して指向される疾患もしくは障害、またはそれからの結果として生じる状態または障害を広く指し、含む。本明細書において、自己免疫状態は、炎症状態またはアレルギー状態、例えば、関節リウマチなどの組織破壊に潜在的に関連する自己抗原に対する宿主免疫反応を特徴とする慢性疾患を含む。
【００８９】
本明細書で使用される場合、「Ｂ細胞受容体」（ＢＣＲ）」は、Ｂ細胞上に見出される膜Ｉｇ（ｍＩｇ）と他の膜貫通ポリペプチド（例えば、ＩｇＡおよびＩｇ）との間の複合体を広く指す。ｍｌｇのシグナル伝達機能は、オリゴマー抗原または多量体抗原による受容体分子の架橋によって引き起こされる。Ｂ細胞は、抗免疫グロブリン抗体によっても活性化され得る。ＢＣＲ活性化により、Ｂ細胞においてチロシンリン酸化を含む多数の変化が生じる。
【００９０】
本明細書で使用される場合、「癌」は、悪性成長または腫瘍（例えば、未制御の細胞成長）を生じる異常かつ無制御の細胞分裂を特徴とする任意の腫瘍性疾患（侵襲性または転移性に関わらず）を広く指す。本明細書で使用される場合、「癌」または「癌性」という用語は、本明細書に記載される非限定的な例である悪性成長または腫瘍を生じる異常かつ無制御の細胞分裂を特徴とする任意の腫瘍性疾患（侵襲性、非侵襲性、または転移性に関わらず）を包含すると理解されたい。これには、未制御細胞成長を典型的に特徴とする哺乳動物における任意の生理学的状態が含まれる。癌の例は実施例において例示される。更なる癌としては、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、および白血病が挙げられるが、これらに限定されない。かかる癌のより具体的な例としては、扁平上皮細胞癌、肺癌（小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌、および肺の扁平上皮癌を含む）、腹膜の癌、肝細胞癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）もしくは胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）（胃腸癌を含む）、膵臓癌、膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝癌、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌もしくは子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌（ｋｉｄｎｅｙ  ｃａｎｃｅｒ）もしくは腎臓癌（ｒｅｎａｌ  ｃａｎｃｅｒ）、肝臓癌、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、肝癌（ｈｅｐａｔｉｃ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、および様々な種類の頭頸部癌、ならびにＢ細胞リンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ；巨大腫瘤病変ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫およびワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症を含む）；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）；有毛細胞白血病；慢性骨髄芽球白血病；多発性骨髄腫および移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）が挙げられる。本発明による治療に適している他の癌としては、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、および白血病またはリンパ性悪性腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない。かかる癌のより具体的な例としては、直腸結腸癌、膀胱癌、卵巣癌、黒色腫、扁平上皮細胞癌、肺癌（小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌、および肺の扁平上皮癌を含む）、腹膜の癌、肝細胞癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）もしくは胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）（胃腸癌を含む）、膵臓癌、膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝癌、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌もしくは子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌（ｋｉｄｎｅｙ  ｃａｎｃｅｒ）もしくは腎臓癌（ｒｅｎａｌ  ｃａｎｃｅｒ）、肝臓癌、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、肝癌（ｈｅｐａｔｉｃ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、および様々な種類の頭頸部癌、ならびにＢ細胞リンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ；巨大腫瘤病変ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；Ａ���ＤＳ関連リンパ腫およびワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症を含む）；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）；有毛細胞白血病；慢性骨髄芽球性白血病；および移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症に関連する異常な血管増殖、浮腫（脳腫瘍に関連するものなど）、およびメグズ症候群が挙げられる。好ましくは、癌は、結腸直腸癌、乳癌、結腸直腸癌、直腸癌、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、腎細胞癌、前立腺癌、肝臓癌、膵臓癌、軟組織肉腫、カポジ肉腫、カルチノイド癌腫、頭頸部癌、黒色腫、卵巣癌、中皮腫、および多発性骨髄腫からなる群から選択される。例示的な実施形態において、癌は、初期または進行性（転移性を含む）膀胱、卵巣、または黒色腫である。別の実施形態において、癌は、結腸直腸癌である。本発明の治療に適している癌性状態は、ＶＩＳＴＡを発現するかまたは発現しない癌を含み、更に非転移性または非浸潤性、ならびに浸潤性または転移性の癌を含み、免疫、間質、もしくは疾患細胞によるＶＩＳＴＡの発現は、抗腫瘍応答および抗浸潤性免疫応答を抑制する。本発明の方法は、血管形成腫瘍の治療に特に適している。本発明による癌は、ＶＩＳＴＡを発現するかまたは発現しない癌を含み、更に非転移性または非浸潤性、ならびに浸潤性または転移性の癌を含み、免疫、間質、もしくは疾患細胞によるＶＩＳＴＡの発現は、抗腫瘍応答および抗浸潤性免疫応答、ならびに血管形成腫瘍を特徴とするものを抑制する。
【００９１】
本明細書で使用される場合、「キメラ抗体」は、抗原結合部位（可変領域）が異なるもしくは変更されたクラス、エフェクター機能、および／または種の定常領域、または新しい特性をキメラ抗体に付与する完全に異なる分子に連結されるように、定常領域またはその一部が変更、置換、または交換される、例えば、酵素、毒素、ホルモン、成長因子、薬物、可変領域、またはその一部が、異なるもしくは変更された抗原特異性を有する可変領域で変更されるか、置換されるか、または交換される、抗体分子を広く指す。
【００９２】
本明細書で使用される場合、「コード領域」は、アミノ酸残基に翻訳されるコドンを含むヌクレオチド配列の領域を広く指すが、「非コード領域」という用語は、アミノ酸に翻訳されないヌクレオチド配列の領域（例えば、５’および３’非翻訳領域）を指す。
【００９３】
本明細書で使用される場合、「保存的に修飾された変異型」は、アミノ酸配列および核酸配列の両方に適用され、特定の核酸配列に関して、同一または本質的に同一のアミノ酸配列をコードするそれらの核酸を指すか、または核酸がアミノ酸配列をコードしない場合、本質的に同一の配列を指す、保存的に修飾された変異型を広く指す。遺伝子コードの縮重のため、多数の機能的に同一の核酸が任意の所与のタンパク質をコードする。「サイレント変異」は、保存的に修飾された核酸変異の一種である。ポリペプチドをコードする本明細書の全ての核酸配列は、全ての可能な核酸のサイレント変異も説明する。当業者は、機能的に同一の分子を得るために、核酸における各コドン（通常メチオニンの唯一のコドンであるＡＵＧ、および通常トリプトファンの唯一のコドンであるＴＧＧを除く）が修飾され得ることを認識する。
【００９４】
本明細書で使用される場合、「相補性決定領域」、「超可変領域」、または「ＣＤＲ」は、抗体の軽鎖または重鎖の可変領域に見出される超可変領域または相補性決定領域（ＣＤＲ）のうちの１つ以上を広く指す。Ｋａｂａｔ，ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．を参照のこと。これらの表現は、Ｋａｂａｔ，ｅｔ  ａｌ．（１９８３）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓによって定義される超可変領域、または抗体の３次元構造の超可変ループを含む。Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７。各鎖におけるＣＤＲはフレームワーク領域によって近接して保持され、他の鎖からのＣＤＲは抗原結合部位の形成に寄与する。ＣＤＲ内で、抗体−抗原相互作用においてＣＤＲによって使用される重要接触残基を表す選択性決定領域（ＳＤＲ）として記載された選択アミノ酸がある。（Ｋａｓｈｍｉｒｉ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：２５−３４（２００５））。
【００９５】
本明細書で使用される場合、「対照量」は、マーカーの試験量と比較される任意の量またはその量の範囲であり得るマーカーを広く指す。例えば、マーカーの対照量は、特定の疾患もしくは状態を有する患者、またはかかる疾患もしくは状態を有しない個人におけるマーカーの量であり得る。対照量は、絶対量（例えばマイクログラム／ｍｌ）または相対量（例えばシグナルの相対強度））のいずれかであり得る。
【００９６】
本明細書で使用される場合、「共刺激受容体」は、免疫細胞、例えばＣＤ２８またはＩＣＯＳに共刺激シグナルを伝達する受容体を広く指す。本明細書で使用される場合、「阻害性受容体」という用語は、免疫細胞、例えばＴ細胞またはＮＫ細胞に負のシグナルを伝達する受容体を含む。
【００９７】
本明細書で使用される場合、「共刺激」は、増殖またはエフェクター機能を誘導する第２の非活性化受容体媒介シグナル（「共刺激シグナル」）を提供する共刺激分子の能力を広く指す。例えば、共刺激シグナルは、サイトカイン分泌（例えば、Ｔ細胞−受容体媒介シグナルを受けたＴ細胞において）をもたらし得る細胞受容体媒介シグナルを受けた免疫細胞（例えば、活性化受容体を介して）は、本明細書で「活性化免疫細胞」と称され得る。Ｔ細胞に関して、Ｔ細胞への共刺激シグナルの伝達は、シクロサポリンＡによって阻害されないシグナル伝達経路を伴う。加えて、共刺激シグナルは、Ｔ細胞においてサイトカイン分泌（例えば、ＩＬ−２および／またはＩＬ−１０）を誘導し、かつ／またはＴ細胞における抗原への無応答性の誘導、アネルギーの誘導、または細胞死の誘導を阻止することができる。
【００９８】
本明細書において「共刺激ポリペプチド」または「共刺激分子」は、Ｔ細胞上の細胞表面分子との相互作用時にＴ細胞応答を調節するポリペプチドを指す。
【００９９】
本明細書で使用される場合、「共刺激シグナル伝達」は、抗原特異的Ｔ細胞応答中の抗原提示細胞上の共刺激ポリペプチドとＴ細胞上のそれらの受容体との間の相互作用に起因するシグナル伝達活性である。単一の仮説によって限定されることを望むものではないが、抗原特異的Ｔ細胞応答は、１）Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）のＭＨＣの文脈において提示される抗原ペプチドとの会合（シグナル１）、および２）異なる共刺激受容体／リガンド対間の接触により送達される第２の抗原依存シグナル（シグナル２）の、２つのシグナルによって媒介されると考えられる。単一の仮説によって限定されることを望むものではないが、この「第２のシグナル」は、Ｔ細胞応答の種類（活性化対阻害）、ならびにその応答の強度および持続時間の決定に重要であり、タンパク質のＢ７ファミリーなどの共刺激分子からの正および負の両方のシグナルによって制御される。
【０１００】
本明細書において「Ｂ７」ポリペプチドは、Ｂ７−１、Ｂ７−２、Ｂ７−ＤＣ、Ｂ７−Ｈ５、Ｂ７−Ｈｌ、Ｂ７−Ｈ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ６、Ｂ７−Ｓ３、および生物学的に活性な断片、ならびに／またはそれらの変異型を含むがこれらに限定されない、Ｔ細胞を共刺激するタンパク質のＢ７ファミリーのメンバーを意味する。代表的な生物学的に活性な断片としては、Ｔ細胞を共刺激する細胞外ドメインまたは細胞外ドメインの断片が挙げられる。
【０１０１】
本明細書で使用される場合、「細胞質ドメイン」は、細胞の細胞質に及ぶタンパク質の一部を広く指す。
【０１０２】
本明細書で使用される場合、「診断」は、病理学的状態の存在または性質を特定することを広く指す。診断方法は、それらの感度および特異度が異なる。診断アッセイの「感度」は、陽性の試験結果を有する疾患のある個体の割合（「真陽性」のパーセント）である。アッセイによって検出されない疾患のある個体は、「偽陰性」である。罹患がなく、アッセイにおいて陰性の試験結果を有する対象は、「真陰性」と称される。診断アッセイの「特異度」は１−偽陽性率であり、ここで、「偽陽性」率は、陽性の試験結果を有する疾患がないものの割合として定義される。特定の診断方法は、状態の確定診断を提供しない場合があるが、その方法が診断に役立つ陽性表示を提供する場合、それは十分である。
【０１０３】
本明細書で使用される場合、「診断すること」または「診断に役立つ」は、疾患もしくは症状を分類すること、ならびに／または個体が疾患状態を有する可能性を決定すること（例えば、ＶＩＳＴＡ発現の不在もしくは存在、および／または免疫による発現の増加もしくは減少、および／または推定疾患細胞に基づく）、疾患の重症度を決定すること、疾患の進行を監視すること、疾患の転帰および／もしくは回復の見込みを予測することを広く指す。「検出すること」という用語は、任意に、前述のいずれをも包含し得る。本発明による疾患の診断は、いくつかの実施形態において、対象から得られた生体試料において、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドのレベルを決定することによって影響を受ける場合があり、決定されたレベルは、疾患素因、または疾患の存在もしくは不在と相関し得る。「対象から得られた生体試料」は、対象から物理的に除去されていない試料を任意に含んでもよいことに留意するべきである。
【０１０４】
本明細書で使用される場合、「有効量」は、疾患を治療するために患者に投与されるとき、疾患のかかる治療をもたらすのに十分である化合物、抗体、抗原、または細胞の量を広く指す。有効量は、予防に有効な量であり、かつ／または防止に有効な量である。有効量は、徴候／症状の発生を防止する、徴候／症状の発生の重症度を減少させる、徴候／症状の発生を排除する、徴候／症状の発生の発達を遅延する、徴候／症状の発生の発達を防止する、および／または徴候／症状の発生の予防をもたらすのに有効な量である、減少に有効な量であってもよい。「有効量」は、治療される患者の疾患およびその重症度、ならびに年齢、体重、病歴、感受性、および既存の状態に応じて異なり得る。「有効量」という用語は、本発明の目的に関して、「治療有効量」と同義である。
【０１０５】
本明細書で使用される場合、「細胞外ドメイン」または「ＥＣＤ」は、細胞の表面に及ぶタンパク質の一部を広く指す。
【０１０６】
本明細書で使用される場合、「発現ベクター」は、原核生物、酵母、真菌、植物、昆虫、または哺乳類細胞を含む任意の細胞において、インビトロまたはインビボで、構成的または誘導的に本発明の核酸配列を発現する目的に関して、任意の組換え発現系を広く指す。本用語は、直鎖または環状発現系を含む。本用語は、エピソームのままであるか、または宿主細胞ゲノムに組み込まれる発現系を含む。発現系は、自己複製する能力を有しても有さなくてもよい、すなわち、細胞において一過性の発現のみを駆動する。本用語は、組換え核酸の転写に必要な最小要素のみを含有する組換え発現カセットを含む。
【０１０７】
本明細書で使用される場合、「ファミリー」は、本発明のポリペプチドおよび核酸分子を広く指し、共通の構造ドメインもしくはモチーフを有し、かつ本明細書に定義される十分なアミノ酸もしくはヌクレオチド配列相同性を有する、２つ以上のポリペプチドまたは核酸分子を意味することを意図する。ファミリーメンバーは、天然であるか、または天然に存在しなくてもよく、同じまたは異なる種のいずれかからであってもよい。例えば、ファミリーは、ヒト起源の第１のポリペプチド、ならびにヒト起源の他の異なるポリペプチドを含有し得るか、または代替的に、非ヒト起源（例えばサルのポリペプチド）の相同体を含有し得る。ファミリーのメンバーはまた、共通の機能特徴を有してもよい。
【０１０８】
本明細書で使用される場合、「Ｆｃ受容体」（ＦｃＲ）は、免疫グロブリン分子（Ｉｇ）のＦｃ部分の細胞表面受容体を広く指す。Ｆｃ受容体は免疫応答に関与する多くの細胞上に見出される。今までに特定されたヒトＦｃＲの中では、ＩｇＧ（ＦｃｙＲと指定される）、ＩｇＥ（ＦｃｅＲｌ）、ＩｇＡ（ＦｃａＲ）、および重合ＩｇＭ／Ａ（ＦｃεμＲ）を認識するものである。ＦｃＲは、ＦｃｅＲＩ（マスト細胞）、ＦｃｅＲＩＩ（多くの白血球）、ＦｃａＲ（好中球）、およびＦｃμＲ（腺上皮、肝細胞）の細胞型において見出される。（Ｈｏｇｇ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  ９：１８５−８６（１９８８））。広く研究されたＦｃｙＲは、細胞性免疫防御の中心であり、自己免疫疾患の原因に関与する炎症のメディエーターおよび加水分解酵素の放出の刺激に関与する。（Ｕｎｋｅｌｅｓｓ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：２５１−８７（１９８８））。マクロファージ／単球、多核白血球、およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞ＦｃｙＲはＩｇＧによって媒介される特定の認識の要素を付与するため、ＦｃｙＲは、エフェクター細胞とＩｇを分泌するリンパ球との間に重要な連結を提供する。ヒト白血球は、ＩｇＧのための少なくとも３つの異なる種類のＦｃｙＲ：ｈＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）（単球／マクロファージ上に見出される）、ｈＦｃｙＲＩＩＡまたはｈＦｃｙＲＩＩＢ（ＣＤ３２またはＣＤ３２Ａ）（単球、好中球、好酸球、血小板、おそらくＢ細胞、およびＫ５６２細胞株上に見出される）、およびＦｃγＲｌｌｌＡ（ＣＤ１６Ａ）またはＦｃγＲｌｌｌＢ（ＣＤ１６Ｂ）（ＮＫ細胞、好中球、好酸球、およびマクロファージ上に見出される）を有する。
【０１０９】
本明細書で使用される場合、「フレームワーク領域」または「ＦＲ」は、抗体の軽鎖および重鎖の可変領域内のフレームワーク領域のうちの１つ以上を広く指す。Ｋａｂａｔ，ｅｔ  ａｌ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ（１９８７）を参照のこと。これらの表現は、抗体の軽鎖および重鎖の可変領域内のＣＤＲ間に介在するそれらのアミノ酸配列領域を含む。
【０１１０】
本明細書で使用される場合、「異種」は、核酸が自然界において互いに同じ関係で見出されない２つ以上のサブ配列を含むことを示す核酸の部分を広く指す。例えば、新たな機能性核酸を作製するために配置された無関係の遺伝子（例えば、１つの源からのプロモーターおよび別の源からのコード領域）からの２つ以上の配列を有する核酸は、典型的に、組換えにより産生される。同様に、異種タンパク質は、タンパク質が自然界において互いに同じ関係で見出されない２つ以上のサブ配列を含む（例えば、融合タンパク質）ことを示す。
【０１１１】
本明細書で使用される場合、「高親和性」は、標的抗原または受容体に関して少なくとも１０−６Ｍ、より好ましくは１０−７Ｍ、更により好ましくは少なくとも１０−８Ｍ、および更により好ましくは少なくとも１０−９Ｍ、１０−１０Ｍ、１０−１１Ｍ、もしくは１０−１２ＭのＫＤを有する抗体または融合タンパク質を広く指す。本明細書のＩｇＧ抗体または融合タンパク質の「高親和性」は、標的抗原または受容体に関して少なくとも１０−６Ｍ以下、より好ましくは１０−７Ｍ以下、好ましくは１０−８Ｍ以下、より好ましくは１０−９Ｍ以下、および更により好ましくは１０−１０Ｍ、１０−１１Ｍ、もしくは１０−１２Ｍ以下のＫＤを有する抗体を指す。特に抗体に関して、「高親和性」結合は、異なる抗体アイソタイプに関して異なってもよい。例えば、ＩｇＭ  アイソタイプの「高親和性」結合は、１０−７Ｍ以下、より好ましくは１０−８Ｍ以下のＫＤを有する抗体を指す。
【０１１２】
本明細書で使用される場合、「相同性」は、核酸配列と参照核酸配列との間またはポリペプチド配列と参照ポリペプチド配列との間の類似度を広く指す。相同性は、部分的または完全であり得る。完全な相同性は、核酸またはアミノ酸の配列が同一であることを示す。部分的に相同の核酸またはアミノ酸配列は、参照核酸またはアミノ酸配列と同一ではないものである。相同性の程度は、デフォルトパラメータを使用して、例えば、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｏｆ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）のＢｌａｓｔＰソフトウェアを使用して、配列比較によって決定され得る。「配列同一性」という用語は、「相同性」と互換的に使用され得る。
【０１１３】
本明細書で使用される場合、「宿主細胞」は、本発明の組換え発現ベクターなど、本発明の核酸分子が導入される細胞を広く指す。宿主細胞は、原核細胞（例えばＥ．ｃｏｌｉ）、または酵母、昆虫（例えばＳＦ９）などの真核細胞、両生類、またはＣＨＯ、ＨｅＬａ、ＨＥＫ−２９３などの哺乳類細胞、例えば、培養された細胞、外植片、およびインビボ細胞であり得る。「宿主細胞」および「組換え宿主細胞」という用語は、本明細書において互換的に使用される。かかる用語は、特定の対象細胞だけでなく、かかる細胞の子孫または潜在的な子孫も指すことを理解するべきである。ある特定の修飾は、変異または環境の影響のいずれかによって続く世代において生じ得るため、子孫は、実際には、親細胞と同一ではないが、依然として本明細書で使用される用語の範囲内に含まれる。
【０１１４】
「ヒトモノクローナル抗体」は、フレームワークおよびＣＤＲ領域の両方がヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する単一の結合特異性を示す抗体を指す。一実施形態において、ヒトモノクローナル抗体は、トランスジェニック非ヒト動物、例えば、ヒト重鎖導入遺伝子および不死化細胞に融合された軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有するトランスジェニックマウスから得られる、Ｂ細胞を含むハイブリドーマによって産生される。これは、完全ヒトモノクローナル抗体、ならびにそのコンジュゲートおよびその変異型を含み、例えば、これは治療薬または診断薬などのエフェクター剤に結合される。
【０１１５】
本明細書で使用される場合、「ヒト化抗体」は、ヒト細胞によって作製されるであろう抗体によく似ているように変更された可変領域および定常領域を有する非ヒト細胞によって作製される抗体を含むことを広く指す。例えば、非ヒト抗体のアミノ酸を変更することにより、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に見出されるアミノ酸を組み込む。本発明のヒト化抗体は、例えばＣＤＲにおいて、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでのランダムもしくは部位特異的変異誘発により、またはインビボでの体細胞変異により導入される変異）を含み得る。本明細書で使用される場合、「ヒト化抗体」という用語は、マウスなどの別の哺乳類種の生殖系列に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列に移植された抗体も含む。
【０１１６】
本明細書で使用される場合、「ハイブリダイゼーション」は、鎖が互いに逆平行に配置されたとき、相補ヌクレオチド間の水素結合の形成による相補（部分的相補を含む）ポリヌクレオチド鎖の物理的相互作用を広く指す。
【０１１７】
本明細書で使用される場合、「ＩｇＶドメイン」および「ＩｇＣドメイン」は、Ｉｇスーパーファミリーメンバードメインを広く指す。これらのドメインは、Ｉｇ折り畳みと呼ばれる異なる折り畳みパターンを有する構造単位に対応する。Ｉｇ折り畳みは、それぞれが、全てではないがほとんどのドメインにおいて２つのシート間に保存されたジスルフィド結合を有する５〜１０個のアミノ酸の逆平行β鎖からなる、２つのβシートのサンドイッチで構成されている。Ｉｇ、ＴＣＲ、およびＭＨＣ分子のＩｇＣドメインは、同じ種類の配列パターンを共有し、Ｉｇスーパーファミリー内のＣＩセットと呼ばれる。他のＩｇＣドメインは他のセット内にある。ＩｇＶドメインも配列パターンを共有し、Ｖセットドメインと呼ばれる。ＩｇＶドメインはＣドメインよりも長く、追加のβ鎖の対を形成する。
【０１１８】
本明細書で使用される場合、「免疫細胞」は、造血起源のものであり、免疫応答において役割を果たす細胞を広く指す。免疫細胞としては、Ｂ細胞およびＴ細胞などのリンパ球、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞、ならびに骨髄細胞、例えば単球、マクロファージ、好酸球、マスト細胞、好塩基球、および顆粒球などの骨髄細胞が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１９】
本明細書で使用される場合、「イムノアッセイ」は、抗原に特異的に結合する抗体を使用するアッセイを広く指す。イムノアッセイは、抗原を単離、標的、および／または定量化する特定の抗体の特定の結合特性の使用を特徴とし得る。
【０１２０】
本明細書で使用される場合、「免疫関連疾患（または障害もしくは状態）」は、急性および慢性の器官移植、同種幹細胞移植、自家幹細胞移植、骨髄移植の拒絶、および移植片対宿主病などの移植片の移植拒絶に関連する自己免疫疾患、炎症性障害、および免疫障害を含むがこれらに限定されない群から選択される任意の疾患障害または状態を包含することを理解するべきである。
【０１２１】
本明細書で使用される場合、「免疫応答」は、Ｔ細胞共刺激の調節によって影響を受けるＴ細胞媒介および／またはＢ細胞媒介免疫応答を広く指す。例示的な免疫応答としては、Ｂ細胞応答（例えば抗体産生）Ｔ細胞応答（例えば、サイトカイン産生および細胞傷害）、およびサイトカイン応答性細胞、例えばマクロファージの活性化が挙げられる。本明細書で使用される場合、免疫応答に関して「下方調節」という用語は、任意の１つ以上の免疫応答の減少を含み、一方で、免疫応答に関して「上方調節」という用語は、任意の１つ以上の免疫応答の増加を含む。１つの種類の免疫応答の上方調節は、別の種類の免疫応答の対応する下方調節につながり得ることを理解する。例えば、ある特定のサイトカイン（例えば、ＩＬ−１０）の産生の上方調節は、細胞免疫応答の下方調節につながり得る。
【０１２２】
本明細書において「免疫性」、「免疫学的」、または「免疫」応答は、レシピエント患者のペプチドに対して指向される液性（抗体媒介）および／または細胞（抗原特異的Ｔ細胞またはそれらの分泌産物によって媒介される）応答の獲得を指す。かかる応答は、免疫原の投与により誘導される能動的応答か、または抗体もしくはプライムされたＴ細胞の投与により誘導される受動的応答であってもよい。単一の仮説によって限定されることを望むものではないが、細胞免疫応答は、クラスＩＩまたはクラスＩのＭＨＣ分子に関してポリペプチドエピトープの提示により誘発されて、それぞれ、抗原特異的ＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞および／またはＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞を活性化する。応答はまた、単球、マクロファージ、ＮＫ細胞、好塩基球、樹状細胞、星状細胞、ミクログリア細胞、好酸球の活性化、好中球もしくは他の先天性免疫の構成要素の活性化または動員も伴い得る。細胞媒介性免疫学的応答の存在は、増殖アッセイ（ＣＤ４＋Ｔ細胞）またはＣＴＬ（細胞傷害性Ｔリンパ球）アッセイによって決定され得る。免疫原の保護効果または治療効果への液性および細胞応答の相対的寄与は、抗体およびＴ細胞を免疫化した同系動物から別個に単離し、第２の対象において保護効果または治療効果を測定することによって区別することができる。
【０１２３】
「免疫原性剤」または「免疫原」は、任意でアジュバントとともに、哺乳動物への投与において、それ自体に対して免疫学的応答を誘導することができる部分である。
【０１２４】
本明細書で互換的に使用される「炎症性障害」、「炎症状態」、および／または「炎症」は、慢性または急性炎症性疾患を広く指し、炎症性自己免疫疾患および炎症性アレルギー状態を明確に含む。これらの状態としては、病原体、損傷細胞、または刺激剤などの有害刺激に対する調節不全の免疫応答を特徴とする炎症異常の例が挙げられる。炎症性障害は、多種多様なヒト疾患の基礎をなす。炎症プロセスにおける病因の非免疫疾患としては、癌、アテローム性動脈硬化、および虚血性心疾患が挙げられる。炎症に関連する障害の例としては、慢性前立腺癌、糸球体腎炎、過敏症、骨盤内炎症性疾患、再灌流傷害、サルコイドーシス、血管炎、間質性膀胱炎、低補体血症性蕁麻疹様血管炎、心膜炎、筋炎、抗シンテターゼ症候群、強膜炎、マクロファージ活性化症候群、ベーチェット症候群、ＰＡＰＡ症候群、ブラウ症候群、痛風、成人および若年性スティル疾患、クリオピリン関連周期熱症候群（ｃｒｙｒｏｐｙｒｉｎｏｐａｔｈｙ）、マックル−ウェルズ症候群、家族性低温誘導性自己炎症性症候群、新生児発症多臓器系炎症性疾患、家族性地中海熱、慢性乳児神経、皮膚、関節症候群、全身型若年性特発性関節炎、高ＩｇＤ症候群、シュニッツラー症候群、ＴＮＦ受容体関連周期性症候群（ＴＲＡＰＳＰ）、歯肉炎、歯周炎、肝炎、硬変、膵炎、心筋炎、血管炎、胃炎、痛風、痛風関節炎、ならびに乾癬、アトピー性皮膚炎、湿疹、酒さ、蕁麻疹、およびざ瘡からなる群から選択される炎症性皮膚障害が挙げられる。
【０１２５】
本明細書で使用される場合、「阻害シグナル」は、免疫細胞上の阻害受容体分子を介して伝達されるシグナルを広く指す。シグナルは、活性化受容体を介して（例えば、ＴＣＲ、ＣＤ３、ＢＣＲ、もしくはＦｃ分子を介して）シグナルに拮抗し、第２のメッセンジャーの生成、増殖、または免疫細胞におけるエフェクター機能の阻害、例えば、食作用、抗体産生、もしくは細胞傷害の減少、またはメディエーター（例えば、サイトカイン（例えばＩＬ−２）および／もしくはアレルギー応答のメディエーター）を産生する免疫細胞の減退、あるいはアネルギーの獲得をもたらし得る。
【０１２６】
本明細書で使用される場合、「単離された」は、天然に存在するその元の環境から取り除かれた材料を広く指し、したがって、その天然環境から人の手によって変更され、「組換え」ポリペプチドを含む。単離された材料は、例えば、ベクター系に含まれる外因性核酸、宿主細胞内に含有される外因性核酸、またはその元の環境から取り除かれ、したがって、人の手によって変更された任意の材料（例えば、「単離された抗体）であり得る。例えば、本明細書で使用される場合、「単離された」または「精製された」は、細胞材料、または生物学的物質が由来する細胞もしくは組織源からの他の汚染タンパク質を実質的に含まない、あるいは化学的に合成されるとき、化学物質前駆体もしくは他の化学物質を実質的に含まない、タンパク質、ＤＮＡ、抗体、ＲＮＡ、またはそれらの生物活性部分を広く指す。本明細書において使用される場合、「単離された」という用語は、化合物が天然に存在するものとは異なる環境にある、例えば、自然界で見出されない濃度までペプチドを濃縮することによってなど、その天然環境から分離された、目的の化合物（例えば、ポリヌクレオチドまたはポリペプチド）を指す。「単離された」は、目的の化合物に関して実質的に濃縮され、かつ／または目的の化合物が部分的または実質的に精製される試料中にある化合物を含む。
【０１２７】
本明細書において使用される場合、「単離された抗体」は、ＶＩＳＴＡ以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体（例えば、VISTAに特異的に結合する単離された抗体）を指すものとする。更に、単離された抗体は、他の細胞物質および／または化学物質を実質的に含まなくてもよい。
【０１２８】
本明細書において「アイソタイプ」は、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる抗体クラス（例えば、ＩｇＭまたはＩｇＧ１）を指す。
【０１２９】
本明細書で使用される場合、「Ｋ−ａｓｓｏｃ」または「Ｋａ」は、特定の抗体−抗原相互作用の会合速度を広く指す一方で、本明細書で使用される場合、「Ｋｄｉｓｓ」または「Ｋｄ」という用語は、特定の抗体−抗原相互作用の解離速度を指す。
【０１３０】
本明細書で使用される場合、「ＫＤ」という用語は、Ｋｄ対Ｋａ（すなわち、Ｋｄ／Ｋａ）の比率から得られる解離定数を指すものとし、モル濃度（Ｍ）として表される。抗体のＫＤ値は、プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標））、ＥＬＩＳＡ、およびＫＩＮＥＸＡなどの当該技術分野において十分に確立された方法を使用して決定され得る。抗体のＫＤを決定するための好ましい方法は、表面プラズモン共鳴を使用する、好ましくはＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）系などのバイオセンサ系を使用するか、またはＥＬＩＳＡによるものである。典型的には、これらの方法は、２５℃または３７℃で達成される。治療用途のための抗体は一般的に、２５℃または３７℃で表面プラズモン共鳴により決定されるとき、５０ｎＭ以下、またはより典型的には１ｎＭ以下のＫＤを有する。
【０１３１】
本明細書で使用される場合、「ラベル」または「検出可能な部分」は、分光学的手段、光化学的手段、生化学的手段、免疫化学的手段、化学的手段、または他の物理的手段によって検出可能な組成物を広く指す。
【０１３２】
本明細書で使用される場合、「低ストリンジェンシー条件」、「中ストリンジェンシー条件」、「高ストリンジェンシー条件」、または「非常に高いストリンジェンシー条件」は、核酸のハイブリダイゼーションおよび洗浄の条件を広く指す。ハイブリダイゼーション反応を実施するためのガイダンスは、Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（５ｔｈ  Ｅｄ．）Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ（２００２）に見出すことができる。例示的な具体的なハイブリダイゼーション条件としては、（１）約４５℃で６Ｘ塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）、続いて少なくとも５０℃で０．２ＸＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中で２回洗浄を行う低ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件（洗浄の温度は、低ストリンジェンシー条件に関して、５５℃まで増加することができる）、（２）約４５℃で６ＸＳＳＣ、続いて６０℃で０．２ＸＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中で１回以上洗浄を行う中ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件、（３）約４５℃で６ＸＳＳＣ、続いて６５℃で０．２Ｘ．ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中で１回以上洗浄を行う高ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件、ならびに（４）非常に高いストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件は、６５℃で０．５Ｍリン酸ナトリウム、７％ＳＤＳ、続いて６５℃で０．２ＸＳＳＣおよび１％ＳＤＳで１回以上洗浄を行う、が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１３３】
本明細書で使用される場合、「哺乳動物」は、毛で覆われている皮膚、および女性／雌において、幼児を育てるために乳汁を産生する乳腺を特徴とする、ヒトを含む哺乳綱の任意のおよび全ての温血脊椎動物を広く指す。哺乳動物の例としては、アルパカ、アルマジロ、カピバラ、ネコ、ラクダ、チンパンジー、チンキラ、ウシ、イヌ、ヤギ、ゴリラ、ハムスター、ウマ、ヒト、キツネザル、ラマ、マウス、非ヒト霊長類、ブタ、ラット、ヒツジ、トガリネズミ、リス、バク、およびハタネズミが挙げられるが、これらに限定されない。哺乳動物としては、ウシ、イヌ、ウマ、ネコ、マウス、ヒツジ、ブタ、霊長類、およびゲッ歯類の種が挙げられるが、これらに限定されない。哺乳動物は、Ｍａｍｍａｌ  Ｓｐｅｃｉｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｗｏｒｌｄ  ｍａｉｎｔａｉｎｅｄ  ｂｙ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｍｕｓｅｕｍ  ｏｆ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｈｉｓｔｏｒｙ，Ｓｍｉｔｈｓｏｎｉａｎ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃ．に列記されている任意のおよび全てのものも含む。
【０１３４】
「多重特異性抗体」は、２つ以上の抗原結合領域を有する抗体を指す。これは二重特異性抗体を含む。これらの抗原結合領域は、異なる抗原または同じ抗原の異なるエピトープに結合し得る。
【０１３５】
本明細書で使用される場合、「天然に存在する核酸分子」は、自然界で生じるヌクレオチド配列を有する（例えば、天然のタンパク質をコードする）ＲＮＡまたはＤＮＡを広く指す。
【０１３６】
本明細書で使用される場合、「核酸」または「核酸配列」は、単一鎖または二本鎖形態のいずれかのデオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドオリゴヌクレオチドを広く指す。本用語は、核酸、すなわち、天然ヌクレオチドの既知の類似体を含有するオリゴヌクレオチドを包含する。本用語は、合成骨格を有する核酸様構造も包含する。別段の指示がない限り、特定の核酸配列は、その保存的に修飾された変異型（例えば、縮重コドン置換）および相補的配列、ならびに明示的に示される配列も暗黙に包含する。核酸という用語は、遺伝子、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、オリゴヌクレオチド、およびポリヌクレオチドと互換的に使用される。
【０１３７】
本明細書で使用される場合、「作動可能に連結される」は、２つのＤＮＡ断片によりコードされるアミノ酸配列がフレーム内にあるように、２つのＤＮＡ断片が接合されるときを広く指す。
【０１３８】
本明細書で使用される場合、「パラトープ」は、抗原（例えば、抗体の抗原結合部位）を認識する抗体の部分を広く指す。パラトープは、抗体のＦｖ領域の小領域（例えば、１５〜２２個のアミノ酸）であり得、抗体の重鎖および軽鎖の部分を含み得る。Ｇｏｌｄｓｂｙ，ｅｔ  ａｌ．Ａｎｔｉｇｅｎｓ（Ｃｈａｐｔｅｒ  ３）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（５ｔｈ  Ｅｄ）．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：  Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ，ｐａｇｅｓ  ５７−７５を参照のこと。
【０１３９】
「患者」または「対象」または「レシピエント」、「個体」または「治療個体」は、本明細書において互換的に使用され、疾患状態を緩和するか，または疾患状態を軽減するか、または疾患状態の発生もしくは再発を予防するかのいずれかの治療を必要とする任意の動物を広く指す。また、本明細書で使用される場合、「患者」は、既往歴、感受性、症状、および徴候の危険因子を有するか、以前に診断を受けたか、疾患の危険にあるか、または疾患の患者集団のメンバーである、任意の動物を広く指す。患者は、ヒト、またはコンパニオン動物、家畜化動物、家畜動物、外来動物、もしくは動物園動物などの臨床患者であってもよい。
【０１４０】
「ポリペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」は、互換的に使用され、修飾（例えば、リン酸化またはグリコシル化）に関わらず、任意の長さのアミノ酸残基のポリマーを広く指す。本用語は、１つ以上のアミノ酸残基が対応する天然に存在するアミノ酸の類似体もしくは模倣物であるアミノ酸ポリマー、ならびに天然に存在するアミノ酸ポリマーに適用される。本用語は、１つ以上のアミノ酸残基が対応する天然に存在するアミノ酸の人工化学模倣物であるアミノ酸ポリマー、ならびに天然に存在するアミノ酸ポリマーおよび天然に生じないアミノ酸ポリマーに適用される。ポリペプチドは、例えば、糖タンパク質を形成するために炭水化物残基を付加することにより修飾され得る。「ポリペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」という用語は、糖タンパク質ならびに非糖タンパク質を明確に含む。
【０１４１】
本明細書で使用される場合、「プロモーター」は、核酸の転写を指向する核酸配列のアレイを広く指す。本明細書で使用される場合、プロモーターは、ポリメラーゼＩＩ型プロモーターの場合、ＴＡＴＡ要素などの転写開始部位の近くの必要な核酸配列を含む。プロモーターは任意に、転写開始部位から数千塩基対に位置し得る、遠位のエンハンサー要素またはリプレッサー要素も含む。構成的」プロモーターは、大半の環境および発達条件下で活性であるプロモーターである。「誘導性」プロモーターは、環境または発達制御下で活性であるプロモーターである。
【０１４２】
本明細書で使用される場合、「予防的に有効な量」は、疾患の予防または疾患の再発防止のために患者に投与されるとき、疾患または再発のためにかかる予防をもたらすのに十分である化合物の量を広く指す。予防的に有効な量は、兆候および／または症状の発生を防止するのに有効な量であってもよい。「予防的に有効な量」は、治療される患者の疾患、ならびにその重症度および年齢、体重、病歴、状態の素因、既存の状態に応じて異なり得る。
【０１４３】
「予防ワクチン」および／または「予防ワクチン接種」は、癌または感染性状態などの疾患または疾患に関連する症状を防止するために使用されるワクチンを指す。
【０１４４】
本明細書で使用される場合、「予防」は、徴候および／もしくは症状が患者に存在しない、寛解にある、または患者に以前に存在した療法の過程を広く指す。予防は、患者における疾患の治療後に生じる疾患を防止することを含む。更に、防止は、疾患を発症する可能性がある患者、特に疾患になりやすい患者（例えば、特許集団のメンバー、危険因子を有する人、または疾患を発症する危険にある人）を治療することを含む。
【０１４５】
本明細書で使用される場合、「組換え」は、産物、例えば、細胞、または核酸、タンパク質、またはベクターに関して、細胞、核酸、タンパク質、またはベクターが異種核酸もしくはタンパク質の導入または天然核酸もしくはタンパク質の変更によって修飾されているか、あるいは細胞がそのように修飾された細胞に由来するものであることを広く指し、示す。したがって、例えば、組換え細胞は、細胞の天然（非組換え）形態内で見出されない遺伝子を発現するか、またはさもなければ異常に発現されるか、低発現されるか、もしくは全く発現されない天然遺伝子を発現する。
【０１４６】
本明細書で使用される場合、「組換えヒト抗体」という用語は、（ａ）ヒト免疫グロブリン遺伝子のトランスジェニックもしくは導入染色体、またはそれから調製されたハイブリドーマ（以下に更に説明される）である、動物（例えばマウス）から単離された抗体、（ｂ）ヒト抗体を発現するように形質転換された宿主細胞から、例えば、トランスフェクトーマから単離された抗体、（ｃ）組み換え、コンビナトリアルヒト抗体ライブラリから単離された抗体、ならびに（ｄ）ヒト免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを伴う任意の他の手段によって調製、発現、創出、または単離された抗体など、組換え手段により調製、発現、創出、または単離される全てのヒト抗体を含む。かかる組換えヒト抗体は、フレームワークおよびＣＤＲ領域がヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する。しかしながら、ある特定の実施形態において、かかる組換えヒト抗体は、インビトロ変異誘発（またはヒトＩｇ配列の動物トランスジェニックが使用されるとき、インビボ体細胞変異誘発）を受けることができ、したがって、組換え抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨおよびＶＬ配列に由来し関連するが、インビボでヒト抗体生殖系列レパートリー内に天然に存在しない場合がある配列である。
【０１４７】
本明細書で使用される場合、「シグナル配列」または「シグナルペプチド」は、分泌および膜結合ポリペプチドのＮ末端で生じ、多数の疎水性アミノ酸残基を含有する、約１５個以上のアミノ酸を含有するペプチドを広く指す。例えば、シグナル配列は、少なくとも約１０〜３０個のアミノ酸残基、好ましくは約１５〜２５個のアミノ酸残基、より好ましくは約１８〜２０個のアミノ酸残基、および更により好ましくは約１９個のアミノ酸残基を含有し、少なくとも約３５〜６５％、好ましくは約３８〜５０％、より好ましくは約４０〜４５％の疎水性アミノ酸残基（例えば、バリン、ロイシン、イソロイシン、またはフェニルアラニン）を有する。「シグナルペプチド」としても当該技術分野で称される「シグナル配列」は、かかる配列を含有するポリペプチドを脂質二重層に指向する役割を果たし、分泌される際に切断される。
【０１４８】
本明細書で使用される場合、抗体に「特異的に（または選択的に）結合する」または「〜と特異的に（または選択的に）免疫反応性がある」または「特異的に相互作用するかまたは結合する」は、タンパク質またはペプチド（または他のエピトープ）を広く指し、いくつかの実施形態において、タンパク質および他の生物の異種集団におけるタンパク質の存在を決定する結合反応を指す。例えば、指定されたイムノアッセイ条件下で、特定された抗体は、バックグラウンド（不特定のシグナル）よりも少なくとも２倍大きい特定のタンパク質に結合し、試料中に存在する他のタンパク質に有意な量で実質的に結合しない。典型的には、特定のまたは選択的反応は、バックグラウンドシグナルまたはノイズの少なくとも２倍、より典型的にはバックグラウンドの約１０〜１００回倍超である。
【０１４９】
本明細書で使用される場合、「特異的にハイブリダイズ可能」および「相補的」は、従来のワトソン−クリックまたは他の非伝統的な種類のいずれかによる別の核酸配列と水素結合（複数可）を形成することができる核酸を広く指す。その相補的配列を有する核酸分子の結合自由エネルギーは、核酸の関連機能、例えばＲＮＡｉ活性を進行させるのに十分である。核酸分子の結合自由ネルギーの決定は当該技術分野で周知である。（例えば、Ｔｕｒｎｅｒ，ｅｔ  ａｌ．ＣＳＨ  Ｓｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．ＬＩＩ：１２３−３３（１９８７）、Ｆｒｉｅｒ，ｅｔ  ａｌ．ＰＮＡＳ  ８３：９３７３−７７  １９８６）、Ｔｕｒｎｅｒ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０９：３７８３−８５（１９８７）を参照のこと）。相補性パーセントは、第２の核酸配列と水素結合を形成することができる（例えば、ワトソン−クリック塩基対合）核酸分子における近接残基の割合を示す（例えば、１０のうち少なくとも約５、６、７、８、９、１０が少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、および１００％（全て含む）相補的である）。「完全に相補的」または１００％相補性は、第２の核酸配列における同じ数の近接残基と水素結合する核酸配列の近接残基の全てを広く指す。
【０１５０】
「実質的な相補性」は、非相補的であるように選択されるオーバーハングなどのポリヌクレオチド鎖の領域を除く、少なくとも約９０％の相補性を示すポリヌクレオチド鎖を指す。特異的結合は、特異的結合が所望される条件下で、すなわち、インビボアッセイまたは治療処置の場合、生理学的条件下で、またはインビトロアッセイの場合、アッセイが実施される条件下で、オリゴマー化合物の非標的配列への非特異的結合を回避するのに十分な相補度を必要とする。非標的配列は、典型的には、ヌクレオチドが少なくとも５つ異なり得る。
【０１５１】
本明細書で使用される場合、疾患の「徴候」は、疾患の主観的な指標である症状とは対照的に疾患の客観的指標である、患者の検査で判断可能な疾患を示すあらゆる異常を広く指す。
【０１５２】
本明細書で使用される場合、「固体支持体」、「支持体」、および「基材」は、滑らかな支持体（例えば、金属、ガラス、プラスチック、シリコン、およびセラミック表面）を含むがこれらに限定されない、別の材料を結合することができる固体または半固体構造、ならびに加工材料および多孔質材料を提供する任意の材料を広く指す。
【０１５３】
本明細書で使用される場合、ＶＩＳＴＡの「可溶性外部ドメイン（ＥＣＤ）」または「外部ドメイン」または「可溶性ＶＩＳＴＡタンパク質（複数可）／分子（複数可）」は、非細胞表面結合ＶＩＳＴＡ分子またはその任意の部分を意味し、これには、ＶＩＳＴＡの細胞外ドメインまたはその断片が免疫グロブリン（Ｉｇ）部分に融合されて、融合分子に可溶性を付与する、ＶＩＳＴＡ融合タンパク質もしくはＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ−Ｉｇ融合タンパク質、またはその断片および誘導体、パピローマウイルスＥ７遺伝子産物、黒色腫関連抗原ｐ９７もしくはＨＩＶエンベロープタンパク質などの生物学的に活性なタンパク質もしくは化学的に活性なタンパク質の一部と融合されるかもしくは接合されるＶＩＳＴＡの細胞外ドメインを有するタンパク質、またはその断片および誘導体；ＶＩＳＴＡ−Ｉｇなどのハイブリッド（キメラ）融合タンパク質、またはその断片および誘導体が含まれるが、これらに限定されない。かかる融合タンパク質は以下により詳細に記載される。
【０１５４】
本明細書において「可溶性ＶＩＳＴＡタンパク質（複数可）／分子（複数可）」は、タンパク質可溶性を付与するために取り除かれた膜貫通ドメインを有するＶＩＳＴＡ分子、またはその断片および誘導体；その断片、部分、または誘導体、および可溶性ＶＩＳＴＡ変異体分子も含む。本発明の少なくともいくつかの実施形態による方法において使用される可溶性ＶＩＳＴＡ分子は、シグナル（リーダー）ペプチド配列を含んでも含まなくてもよい。
【０１５５】
本明細書における療法または診断の文脈において「対象」または「患者」または「個体」は、任意のヒトまたは非ヒト動物を含む。「非ヒト動物」という用語は、全ての脊椎動物、例えば、哺乳動物、および非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ニワトリ、両生類、爬虫類などの非哺乳動物、すなわち、トリおよび哺乳類対象を含むがこれらに限定されない、本発明により治療されるのに適したあらゆるものを含み、好ましくは哺乳類である。本発明による治療を必要とする任意の哺乳類対象が適している。両性別およびあらゆる発達段階のヒト対象（すなわち、新生児、乳児、若年、青年、および成人）が本発明により治療され得る。本発明は、動物対象、特に獣医学的目的、ならびに薬物のスクリーニングおよび薬物開発目的のためのマウス、ラット、イヌ、ネコ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、およびウマなどの哺乳類対象にも行われてもよい。「対象」は、「個体」および「患者」と互換的に使用される。
【０１５６】
本明細書で使用される場合、「化学物質前駆体もしくは他の化学物質を実質的に含まない」は、タンパク質がタンパク質の合成に関与する化学物質前駆体または他の化学物質から分離されるＶＩＳＴＡタンパク質の調製物を広く指す。一実施形態において、「化学物質前駆体もしくは他の化学物質を実質的に含まない」という用語は、約３０％未満（乾燥重量）の化学物質前駆体または非ＶＩＳＴＡ化学物質、より好ましくは約２０％未満の化学物質前駆体または非ＶＩＳＴＡ化学物質、更により好ましくは約１０％未満の化学物質前駆体または非ＶＩＳＴＡ化学物質、最も好ましくは約５％未満の化学物質前駆体または非ＶＩＳＴＡ化学物質を有するＶＩＳＴＡタンパク質の調製物を含む。
【０１５７】
本明細書で使用される場合、疾患の「症状」は、患者によって経験され、かつ疾患を示す、構造、機能、または感覚における任意の病的徴候または正常からの逸脱を広く指す。
【０１５８】
本明細書で使用される場合、「Ｔ細胞」は、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞を広く指す。Ｔ細胞という用語は、Ｔヘルパー１型Ｔ細胞およびＴヘルパー２型Ｔ細胞の両方も含む。
【０１５９】
本明細書で使用される場合、「療法」、「治療的」、「治療すること」、または「治療」は、疾患を治療すること、疾患もしくはその臨床症状の発達を停止または減少させること、および／あるいは疾患を緩和すること、疾患もしくはその臨床症状の退縮をもたらすことを広く指す。療法は、疾患、疾患の徴候および／もしくは症状の予防、治療、救済、減少、軽減、および／またはそれからの解放をもたらすことを包含する。療法は、進行中の疾患兆候および／または症状（例えば、炎症、疼痛）を有する患者における兆候および／または症状の軽減を包含する。療法はまた「予防」も包含する。療法の目的に関して、「減少」という用語は、兆候および／または症状の臨床的に有意な減少を広く指す。療法は、再発もしくは反復の兆候および／または症状（例えば、炎症、疼痛）の治療を含む。療法は、常に出現する兆候および／または症状の排除、ならびに既存の兆候および／または症状の減少、ならびに既存の兆候および／または症状の排除を包含するがこれらに限定されない。療法は、慢性疾患（「維持」）および急性疾患の治療を含む。例えば、治療は、兆候および／または症状（例えば、炎症、疼痛）の再発または反復の治療または予防を含む。
【０１６０】
本明細書で使用される場合、「Ｔｒｅｇ細胞」（時折、抑制因子Ｔ細胞または誘導性Ｔｒｅｇ細胞もしくはｉＴｒｅｇとも称される）は、免疫系を調節し、自己抗原への寛容を維持するＴ細胞のサブ集団を指し、自己免疫疾患を抑止することができる。Ｆｏｘｐ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）は、正常な条件下で末梢寛容を維持する際に重要である。
【０１６１】
本明細書で使用される場合、「膜貫通ドメイン」は、形質膜に及ぶ長さが約１５個のアミノ酸残基のアミノ酸配列を広く指す。より好ましくは、膜貫通ドメインは、少なくとも約２０、２５、３０、３５、４０、または４５個のアミノ酸残基を含み、形質膜に及ぶ。膜貫通ドメインは、疎水性残基が豊富であり、典型的には、αヘリックス構造を有する。一実施形態において、膜貫通ドメインの少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％以上のアミノ酸、例えば、ロイシン、イソロイシン、チロシン、またはトリプトファンは、疎水性である。膜貫通ドメインは、例えば、Ｚａｇｏｔｔａ，ｅｔ  ａｌ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１９：２３５−２６３（１９９６）に記載されている。
【０１６２】
本明細書で使用される場合、「トランスジェニック動物」は、動物の細胞のうちの１つ以上が「導入遺伝子」を含む、非ヒト動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはマウスを広く指す。「遺伝子導入」という用語は、トランスジェニック動物が発達する細胞のゲノムに組み込まれ、成熟動物のゲノムに残存する、例えば、トランスジェニック動物の１つ以上の細胞型または組織においてコードされた遺伝子産物の発現を指向する、外因性ＤＮＡを指す。
【０１６３】
本明細書で使用される場合、「無応答性」は、免疫細胞の刺激、例えば、および活性化受容体またはサイトカインを介した刺激への屈折度を広く指す。無応答性は、例えば、免疫抑制剤または高用量の抗原への曝露のために生じ得る。
【０１６４】
本明細書で使用される場合、「可変領域」または「ＶＲ」は、抗体の抗原への結合に直接関与する抗体の軽鎖および重鎖の各対内のドメインを広く指す。各重鎖は、一端に可変ドメイン（ＶＨ）、続いていくつかの定常ドメインを有する。各軽鎖は、一端に可変ドメイン（ＶＬ）、およびそのもう一端に定常ドメインを有し、軽鎖の定常ドメインは重鎖の第１の定常ドメインと整合し、軽鎖可変ドメインは、重鎖の可変ドメインと整合する。
【０１６５】
本明細書で使用される場合、「ベクター」は、それが連結される別の核酸分子を輸送することができる核酸分子を広く指す。ベクターの１つの種類は「プラスミド」であり、これは追加のＤＮＡセグメントがライゲーションされ得る環状二本鎖ＤＮＡループを指す。ベクターの別の種類はウイルスベクターであり、追加のＤＮＡセグメントがウイルスゲノムにライゲーションされ得る。ある特定のベクターは、それらが導入される宿主細胞内で自己複製することができる（例えば、細菌複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソーム哺乳類ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳類ベクター）は、宿主細胞への導入時に宿主細胞のゲノムに組み込まれ、それにより、宿主ゲノムとともに複製される。更に、ある特定のベクターは、それらが作動可能に連結される遺伝子の発現を指向することができる。本明細書においてベクターは、「組換え発現ベクター」または単に「発現ベクター」と称される。一般的に、組み換えＤＮＡ技法において有用な発現ベクターは、プラスミドの形態である場合が多い。本明細書において、「プラスミド」および「ベクター」は、プラスミドが最も一般的に使用されるベクターの形態であるため、互換的に使用されてもよい。しかしながら、本発明は、同等の機能を果たすウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルス、およびアデノ関連ウイルス）などのかかる他の形態の発現ベクターを含むことが意図されている。技法および手順は、一般的に、当該技術分野で周知の従来の方法により、ならびに本明細書全体を通じて引用され論じられる様々な一般的な参考文献およびより具体的な参考文献に記載されるように実施される。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌｅｃ．Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ｌａｂ．Ｍａｎｕａｌ［３ｒｄ  Ｅｄ］Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（２００１）を参照のこと。標準的な技法は、組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成および組織培養、ならびに形質転換（例えば、電気穿孔、リポフェクション）のために使用され得る。酵素反応および精製技法は、製造業者の仕様に従うか、または当該技術分野では一般に達成されるように、または本明細書に記載されるように実施され得る。
【０１６６】
本出願において使用されるある特定の用語および語句を定義したため、本発明により包含される抗ＶＩＳＴＡ抗体および抗原結合抗体断片ならびにその産生方法および使用方法を以下に更に記載する。
【０１６７】
本発明は、Ｔ細胞活性化のＩｇＶドメイン抑制因子（ＶＩＳＴＡ）に結合する抗原結合領域を含む抗体および抗体断片に関する。ＶＩＳＴＡは、免疫応答を負に抑制するチェックポイント制御因子である。Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，“ＶＩＳＴＡ，ａ  ｎｏｖｅｌ  ｍｏｕｓｅ  Ｉｇ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ｌｉｇａｎｄ  ｔｈａｔ  ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ，”Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，２０８（３）５７７−９２（２０１１）を参照のこと。このタンパク質は、正常なヒト好中球、単球、およびＴ細胞サブセット上に発現される。加えて、カニクイザル細胞は、正常なヒト細胞に類似するパターンでＶＩＳＴＡを発現する。ＶＩＳＴＡは、例えば癌患者の末梢血細胞においても発現される。
【０１６８】
本発明によるアンタゴニスト抗ＶＩＳＴＡ抗体または抗体断片のＶＩＳＴＡへの結合は、ＶＩＳＴＡの免疫への効果のうちの少なくとも１つに拮抗し、それにより免疫、例えば、Ｔ細胞免疫および／またはサイトカイン発現へのＶＩＳＴＡの抑制効果を抑制する。対照的に、本発明によるアゴニスト抗ＶＩＳＴＡ抗体または抗体断片のＶＩＳＴＡへの結合は、ＶＩＳＴＡの免疫への効果のうちの少なくとも１つを刺激するか、誘発するか、または模倣し、それによりＶＩＳＴＡの免疫への抑制効果のうちの少なくとも１つ、例えば、Ｔ細胞免疫の抑制または特定の炎症誘発性サイトカインの発現の抑制、またはある特定の走化性因子およびケモカインの発現へのその促進効果を促進する。
【０１６９】
かかる抗体断片としては、例として、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、およびｓｃＦｖ抗体断片が挙げられる。これらの抗体または抗体断片は、抗体定常領域、またはその断片もしくは変異型を含み得る。かかる抗体および抗体断片としては、造血細胞および他の細胞上、例えば、骨髄細胞および／もしくはリンパ球、単球、好中球、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、腫瘍細胞、ならびに／または腫瘍微小環境（ＴＭＥ）細胞上に発現されるＶＩＳＴＡタンパク質に結合するものが挙げられる。腫瘍微小環境は、腫瘍の細胞環境である。それは、周囲免疫細胞、線維芽細胞、血管、他の細胞、シグナル伝達分子、および細胞外マトリックスを含む。
【０１７０】
ＶＩＳＴＡの効果を遮断または阻害する抗体は、ヒト免疫応答、特に悪性腫瘍および感染への免疫応答を強化するために使用され得る。可溶性ＶＩＳＴＡなどのＶＩＳＴＡを刺激する対照分子によって、例えば、ＶＩＳＴＡ−Ｉｇおよび対象アゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体ならびに断片は、自己免疫、アレルギー、ＧＶＨＤ、敗血症、または望ましくない炎症免疫応答などの望ましくないヒト免疫応答を抑制するために使用され得る。
【０１７１】
対象適用は、図４に示される配列を有する抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体のうちのいずれかと同じＣＤＲを含むものを含む、新規アンタゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体およびアゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体を提供する。本発明以前にいくつかのアンタゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体が文献において報告されているが、アゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体または抗体断片は報告されていない。
【０１７２】
以下の実験例に開示されるように、本発明者らは、最初に、それぞれ、未修飾ＩｇＧ２ヒト定常領域またはＩｇＧ２定常領域を含有するマウス抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体（図４の配列を有する１Ｅ８）に由来する２つのキメラ抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体を産生し、ここで、カッパ鎖の１２７位のシステイン残基がセリン残基に変更された。本明細書に参照される実施例および図に示されるように、両抗体は、少なくとも（ｉ）ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、および腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）などのある特定の炎症誘発性サイトカインの発現を減少させる能力、ならびにＫＣ（ケラチノサイト由来ケモカイン）またはＭＩＰ−２（マクロファージ炎症性タンパク質−２）などのある特定のケモカインまたは走化性因子の発現の減少、（ｉｉ）ＧＶＨＤモデルにおけるＴ細胞活性を抑制する能力、ならびに（ｉｉｉ）ＣＤ３駆動Ｔ細胞応答を抑制する能力に基づく、ＶＩＳＴＡの免疫への抑制効果を刺激するか、または模倣することが分かった。
【０１７３】
加えて、これら２つのアゴニスト抗体の単離後、ヒトＩｇＧ２定常領域またはＦｃ領域を含有する別の１０キメラアゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体を、類似の方法を用いて得た。これらの抗体は、本明細書において、ＧＧ８、ＶＳＴＢ９５（ＩＮＸ９０３）、ＶＳＴＢ１０３（ＩＮＸ９０４）、ＶＳＴＢ５３（ＩＮＸ９０５）、ＶＳＴＢ９２（ＩＮＸ９０８）、ＶＳＴＢ５０（ＩＮＸ９００）、ＶＳＴＢ５６（ＩＮＸ９０１）、ＶＳＴＢ６３（ＩＮＸ９０２）、ＶＳＴＢ５４（ＩＮＸ９０６）、およびＶＳＴＢ６６（ＩＮＸ９０７）（図４の配列を有する）と称される抗体に由来した。
【０１７４】
特に、これらのキメラ抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体は、図４に示される可変配列と、ヒトＩｇＧ２定常領域とを有する。要約表１および２（以下参照）に報告されるように、これらの抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体は、抗体ビニングの使用によって評価されるとき、群１および群２と指定される２つの異なるエピトープ群に結合することが分かった。図４に記載されるように、群２に対応するエピトープは、ヒトＶＩＳＴＡに存在する２つの異なるペプチド、すなわち、ＮＬＴＬＬＤＳＧＬおよびＶＱＴＧＫＤＡＰＳＮＣの残基を含む。
【０１７５】
表１および２（以下参照）に示されるように、これらの１２の異なる抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体は、免疫抑制の少なくとも１つのモデルにおいて、およびいくつかの免疫抑制モデルの多くにおいて免疫抑制性であることがわかった。特に、ＩＮＸ９０５、ＩＮＸ９０８、ＩＮＸ９０１、ＩＮＸ９０２、およびＩＮＸ９０６は、２つの異なるアッセイ形式において免疫抑制性であることが示された。これらの抗体の全てが免疫抑制性であり、ＶＩＳＴＡの免疫抑制効果を誘発するか、促進するか、または刺激するように思われるが、ＩＮＸ９０１、ＩＮＸ９０２、およびＩＮＸ９０６、ならびにＩＮＸ９０８が最も免疫抑制性であるように思われる。
【０１７６】
また、図４に示される他の抗ＶＩＳＴＡ抗体の可変配列を含有するヒトＩｇＧ２定常ドメインを含む他のキメラ抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体は、それらの免疫抑制特性、ならびに免疫抑制性およびヒトＶＩＳＴＡの他の効果を刺激するか、または模倣するそれらの能力についてスクリーニングされる。今までに得られた結果に基づき、このスクリーニングは、他のアゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体、特に同じエピトープに結合するものを特定するはずである。加えて、本発明によるアゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体は、関節炎、狼瘡、もしくはＳＬＥ、ＧＶＨＤ、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）もしくは大腸炎、慢性および急性感染性疾患、または肝毒性および乾癬動物モデルを含む、多くの自己免疫および炎症性動物疾患モデルにおいて有効（免疫抑制性）であることが示された。それに基づき、対象抗ヒトＶＩＳＴＡアゴニスト抗体は、自己免疫、アレルギー、および炎症状態の治療上の処置および予防的治療に使用するのに十分に適しているはずである。
【０１７７】
記載されるように、図４に示される配列を有するキメラＩｇＧ２抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体は、免疫抑制の異なるモデルにおいて免疫抑制性であることが示された。これらの抗体は更に、特定の種類のＴ細胞の枯渇をもたらすことによる、または一般にＴ細胞を枯渇させることによるよりも、特定の免疫調節様式でこれらの免疫抑制効果を誘発する。
【０１７８】
実施例に更に示されるように、ヒンジ領域に変異を含有するキメラＩｇＧ２のアゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体は、免疫に対して実質的に同じ抑制効果を誘発する、すなわち、ＩｇＧ２定常領域内の変異は、試験された実験条件下で抑制の強化を誘発しないように思われる。むしろ、ＩｇＧ２ＡおよびＩｇＧ２Ｂの形態の両方ならびにそれらの混合物は、同じ免疫抑制効果を誘発した。加えて、実施例に開示される実験に基づき、ＦｃγＲ結合が対象抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体のアゴニスト特性に寄与し得るように思われるであろう。特に、サイレントＩｇＧ２定常領域を含むことにより、試験されたアゴニスト抗体の免疫抑制特性が除去されたことが分かった。これらの結果に基づき、１つ以上のＦｃγＲがこれらの抗体のアゴニスティックな特性に影響を及ぼすことが仮定され、特にＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２またはＣＤ３２Ａ）またはＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）結合が対象アゴニスト抗体のアゴニスト特性に関与し得ることが仮定される。
【０１７９】
これらの同じ方法を用いて、他のアゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ  ＩｇＧ２抗体、例えば、図４に示される配列を有する抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体に由来する他のものが得られることが予想される。述べたように、図４に含有される配列を有するものを含む、１２のアゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体が今までに得られた。これらの結果に基づき、他のアゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体が生成され、免疫抑制性であることが示され得ることが予想される。また、同じまたは重なるエピトープに結合し、かつ／または図４に示される配列を含有する抗体のうちのいずれかと競合する他のアゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体が生成され得ることが予想される。例示的な実施形態において、これらの抗体は、群１または群２の抗体に対応するエピトープに結合するか、またはかかる抗体を有するヒトＶＩＳＴＡへの結合に関して競合する。
【０１８０】
抗体により結合される特定のエピトープ（複数可）を特定するための方法は、当該技術分野で既知である。実施例において、出願人は、本発明によるいくつかの抗ＶＩＳＴＡ抗体により結合されるエピトープの解明を開示する。したがって、例示的な実施形態において、本発明によるアゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体は、Ａ形態、Ｂ形態、または前述の混合物のＩｇＧ２定常領域またはその断片含む。例示的な実施形態において、これらの抗体は、１つ以上のＦｃγＲに結合する、例えば、それらは、無傷または野生型ヒトＩｇＧ２  Ｆｃ領域として同じＦｃγＲに結合する。他の例示的な実施形態において、抗体は、ＣＤ３２（ＣＤ３２Ａおよび／またはＣＤ３２Ｂ）に結合する。これは、ＣＤ３２（ＣＤ３２Ａおよび／またはＣＤ３２Ｂ）に結合する野生型または修飾されたＩｇＧ２定常領域の使用により達成され得る。更に、アゴニスト抗体は、ＣＤ３２Ａおよび／またはＣＤ３２ＢなどのＦｃγＲに結合する別のＦｃポリペプチドまたは抗原結合領域などの別のポリペプチドを組み込むように修飾され得る。
【０１８１】
本発明のアゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体に含有されるＩｇＧ２  Ｆｃ領域または定常領域は、例えば、エフェクター機能を変更するために、例えば、ＦｃＲ結合、ＦｃＲＮ結合、補体結合、グリコシル化などを変更するために、任意で修飾され得る。特に、本発明のアゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体に含有されるＩｇＧ２Ｆｃ領域または定常領域は、任意で、２７位におけるシステインの変換により、または更に任意で、例えば、ヒンジ領域において、別のシステイン残基または他の残基の別のアミノ酸、例えばセリンへの変換により修飾され得る。他の可能なＦｃ修飾は以下に開示される。
【０１８２】
これらのＶＩＳＴＡアゴニスト抗体は、Ｔ細胞免疫の抑制または炎症誘発性サイトカインの発現ならびにまたはケモカインおよび走化性因子の発現の増加が治療的にまたは予防的に有益である状態の治療または防止において、疾患状態の治療または防止に使用されるか、またはそれに関連する病理学的作用、例えば炎症の治療、または減少、回復のために使用され得る。これらの状態には、特に、自己免疫、アレルギー、炎症障害、敗血症、ＧＶＨＤ、およびＣＡＲ−Ｔ細胞もしくは遺伝子療法構築物または細胞含有などの移植細胞、組織、または器官に対する望ましくないＴ細胞免疫応答の阻害のためが含まれる。
【０１８３】
述べたように、本発明によるアゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体を使用する治療的または予防的に治療され得る例示的な状態は、自己免疫状態、アレルギー状態、炎症状態、ＧＶＨＤ、移植、および敗血症を含む。また述べたように、本発明によるアゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体は、治療的に有効であり、関節炎、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、狼瘡、ＧＶＨＤ、慢性急性感染／肝毒性、および乾癬疾患モデルを含む、多くの動物疾患モデルにおいて免疫抑制性であることが示されている。したがって、本発明の抗体は、免疫、特に、Ｔ細胞免疫の抑制が治療的に望ましい状態の治療に使用するのに十分に適しているはずである。
Ａ．療法および診断におけるアゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体またはアンタゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体および断片の使用
【０１８４】
本発明によるアゴニストを含有する組成物は、Ｔ細胞免疫を阻害し、これが自己免疫、アレルギー、または炎症状態などの治療的に望ましい状態を治療するために使用され得る。これらの組成物は、ＶＩＳＴＡのＴ細胞活性化または増殖またはサイトカイン発現または他の効果を抑制することを必要とする対象における、それを行うのに有効な本発明によるアゴニスト抗体または抗体断片の量を含む。かかる自己免疫、炎症、およびアレルギー状態には、例えば、関節リウマチなどの関節炎状態、乾癬性関節炎、乾癬、強皮症、多発性硬化症、狼瘡、ＩＢＤ、ＩＴＰ、糖尿病、ＧＶＨＤ、サルコイドーシス、アレルギー性喘息、肝毒性に関連する肝炎、およびＣＡＲ−Ｔ細胞もしくは遺伝子療法構築物または細胞含有などの移植細胞、組織、または器官に対する望ましくないＴ細胞免疫応答の阻害のためが含まれる。
【０１８５】
本発明の抗体が単独で、または他の治療薬、特に他の免疫抑制分子と関連して使用され得る具体的な状態としては、
後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、後天性脾臓萎縮、急性前部ブドウ膜炎、急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、急性痛風性関節炎、急性壊死性出血性白質脳炎、急性もしくは慢性副鼻腔炎、急性化膿性髄膜炎（または他の中枢神経系炎症障害）、急性の重篤な炎症、アジソン病、副腎炎、成人発症型真性糖尿病（ＩＩ型糖尿病）、成人発症型特発性副甲状腺機能低下症（ＡＯＩＨ）、無ガンマグロブリン血症、無顆粒球症、脈管炎（血管炎、任意に大型血管炎、任意にリウマチ性多発筋痛症、および巨細胞性（タカヤス）動脈炎を含む）、アレルギー状態、アレルギー性接触皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、アレルギー性肉芽腫性血管炎、アレルギー性過敏性障害、アレルギー性神経炎、アレルギー反応、円形脱毛症、全頭脱毛症、アルポート症候群、肺胞炎、任意にアレルギー性肺胞炎もしくは線維性肺胞炎、アルツハイマー病、アミロイドーシス、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ；ルー・ゲーリッグ病）、好酸球関連障害、任意に好酸球増加症、アナフィラキシー、強直性脊椎炎、血管拡張症、抗体媒介性腎炎、抗ＧＢＭ／抗ＴＢＭ腎炎、抗原−抗体複合体媒介性疾患、抗糸球体基底膜疾患、抗リン脂質抗体症候群、抗リン脂質症候群（ＡＰＳ）、アフタ、アフタ性口内炎、再生不良性貧血、不整脈、動脈硬化症、動脈硬化障害、関節炎、任意に急性関節炎などの関節リウマチ、もしくは慢性関節リウマチ、進行性慢性関節炎（ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｃｈｒｏｎｉｃａ  ｐｒｏｇｒｅｄｉｅｎｔｅ）、変形性関節炎、
回虫症、アスペルギルス腫、肉芽腫含有好酸球、アスペルギルス症、アスペルミオジェネース（ａｓｐｅｒｍｉｏｇｅｎｅｓｅ）、喘息、任意に気管支喘息（ａｓｔｈｍａ  ｂｒｏｎｃｈｉａｌｅ）、気管支喘息（ｂｒｏｎｃｈｉａｌ  ａｓｔｈｍａ）、もしくは自己免疫喘息、毛細血管拡張性運動失調症、失調性硬化症、アテローム性動脈硬化症、自閉症、自己免疫性血管性浮腫、自己免疫性再生不良性貧血、自己免疫性萎縮性胃炎、自己免疫性糖尿病、自己免疫精巣炎および卵巣炎を含む精巣および卵巣の自己免疫疾患、膠原病に関連する自己免疫障害、自己免疫性自律神経障害、自己免疫性耳疾患、任意に自己免疫性内耳疾患（ＡＧＥＤ）、自己免疫性甲状腺炎などの甲状腺炎を含む自己免疫性内分泌疾患、自己免疫性腸疾患症候群、自己免疫性性腺機能不全、自己免疫性難聴、自己免疫性溶血、自己免疫性肝炎、自己免疫性肝臓学的疾患、自己免疫性高脂血症、自己免疫性免疫不全、自己免疫性内耳疾患（ＡＩＥＤ）、自己免疫性心筋炎、自己免疫性好中球減少症、自己免疫性膵炎、自己免疫性多腺性内分泌障害、多腺性自己免疫症候群１型、自己免疫性網膜症、自己免疫性血小板減少性紫斑病（ＡＴＰ）、自己免疫性甲状腺疾患、自己免疫性蕁麻疹、自己免疫媒介性胃腸疾患、軸索型＆神経型ニューロパチー、バロー病、ベーチェット病、良性家族性および虚血再灌流障害、良性リンパ球性血管炎、ベルガー病（ＩｇＡ腎症）、
鳥飼病、失明、ベック病、閉塞性細気管支炎（非移植）ｖｓ  ＮＳＩＰ、気管支炎、気管支肺アスペルギルス症、ブルトン病、水疱性類天疱瘡、カプラン症候群、心筋症、心血管虚血、キャッスルマン症候群、セリアック病、セリアックスプルー（グルテン腸症）、小脳変性症、脳虚血および血管新生を伴う疾患、シャーガス疾患、チャネル病、任意にてんかん、ＣＮＳのチャネル病、脈絡網膜炎、脈絡膜炎、自己免疫性血液障害、慢性活動性肝炎もしくは自己免疫性慢性活動性肝炎、慢性接触性皮膚炎、慢性好酸球性肺炎、慢性疲労症候群、慢性肝炎、慢性過敏性肺炎、慢性過敏性間質性肺炎、慢性炎症性関節炎、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー（ＣＩＤＰ）、慢性難治性炎症、慢性粘膜皮膚カンジダ症、慢性ニューロパチー、任意にＩｇＭ多発ニューロパチーもしくはＩｇＭ媒介性ニューロパチー、慢性閉塞性気道疾患、慢性肺炎症性疾患、慢性再発性多巣性骨髄炎（ＣＲＭＯ）、慢性甲状腺炎（橋本甲状腺炎）もしくは亜急性甲状腺炎、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡／良性粘膜類天疱瘡、ＣＮＳ炎症性疾患、ＣＮＳ血管炎、セリアック病、コガン症候群、寒冷凝集素症、ポリープ性大腸炎（ｃｏｌｉｔｉｓ  ｐｏｌｙｐｏｓａ）、潰瘍性大腸炎（ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ  ｃｏｌｉｔｉｓ）、潰瘍性大腸炎（ｃｏｌｉｔｉｓ  ｕｌｃｅｒｏｓａ）、コラーゲン大腸炎などの大腸炎、Ｔ細胞の浸潤および慢性炎症応答を伴う状態、先天性心ブロック、先天性風疹感染症、クームス陽性貧血、冠状動脈疾患、コクサッキー心筋炎、ＣＲＥＳＴ症候群（石灰化症、レイノー現象）、クローン病、クリオグロブリン血症、クッシング症候群、毛様体炎、任意で慢性毛様体炎、異虹彩色性毛様体炎、虹彩毛様体炎、もしくはフックス毛様体炎、嚢胞性線維症、サイトカイン誘導性毒性、聴覚消失、変形性関節症、脱髄性疾患、任意に自己免疫脱髄性疾患、脱髄性ニューロパシー、デング熱、疱疹状皮膚炎およびアトピー性皮膚炎、皮膚炎（接触性皮膚炎、皮膚筋炎、急性炎症性要素を伴う皮膚疾患を含む）、デビック病（視神経脊髄炎）、糖尿病性大動脈障害、糖尿病性ニューロパシー、糖尿病性網膜症、ダイヤモンドブラックファン貧血、びまん性間質性肺線維症、拡張型心筋症、円板状狼瘡、白血球遊出を伴う疾患、ドレスラー症候群、デュピュイトラン拘縮、エコーウイルス感染症、アレルギー性湿疹もしくはアトピー性湿疹を含む湿疹、ラスムッセン脳炎ならびに辺縁脳炎および／もしくは脳幹脳炎などの脳炎、脳脊髄炎、任意にアレルギー性脳脊髄炎もしくは脳脊髄炎アレルギー、および実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）、動脈内過形成（ｅｎｄａｒｔｅｒｉａｌ  ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ）、心内膜炎、内分泌性眼症、子宮内膜症、心内膜心筋線維症、水晶体過敏性眼内炎（ｅｎｄｏｐｈｔｈａｌｍｉａ  ｐｈａｃｏａｎａｐｈｙｌａｃｔｉｃａ）、眼内炎、アレルギー性腸炎、好酸球増多筋痛症候群、好酸球性筋膜炎、流行性角結膜炎、後天性表皮水疱症（ＥＢＡ）、上強膜、上強膜炎、エプスタイン・バーウイルス感染症、持続性隆起性紅斑（ｅｒｙｔｈｅｍａ  ｅｌｅｖａｔｕｍ  ｅｔ  ｄｉｕｔｉｎｕｍ）、多形性紅斑、らい性結節性紅斑、結節性紅斑、胎児赤芽球症、食道蠕動低下、本態性混合型クリオグロブリン血症、篩状、エバン症候群、実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）、第ＶＩＩＩ因子欠乏症、農夫肺、リウマチ熱（ｆｅｂｒｉｓ  ｒｈｅｕｍａｔｉｃａ）、フェルティ症候群、線維筋痛症、線維性肺胞炎、フィラリア症、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、食中毒、前面胃萎縮（ｆｒｏｎｔａｌ，ｇａｓｔｒｉｃ  ａｔｒｏｐｈｙ）、巨細胞関節炎（時間的関節炎）、巨細胞肝炎、巨細胞多発性筋痛、糸球体腎炎（ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｎｅｐｈｒｉｔｉｄｅｓ）、慢性もしくは急性糸球体腎炎（例えば一次ＧＮ）などの、ネフローゼ症候群を有する、および有しない糸球体腎炎（ＧＮ）、グッドパスチャー症候群、痛風性関節炎、
顆粒球輸血関連の症候群、リンパ腫様肉芽腫症を含む肉芽腫症、多発性血管炎を伴う肉芽腫症（ＧＰＡ）、肉芽腫性ぶどう膜炎、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、滴状乾癬、発作性血色素尿症（ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎｕｒｉａ  ｐａｒｏｘｙｓｍａｔｉｃａ）、ハーマン・リッチ病、橋本病、橋本脳炎、橋本甲状腺炎、ヘモクロマトーシス、溶血性貧血もしくは免疫性溶血性貧血（自己免疫性溶血性貧血（ＡＩＨＡ）、溶血性貧血を含む）、血友病Ａ、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、妊娠性疱疹、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染症、痛覚過敏症、低ガンマグロブリン血症、性腺機能低下症、副甲状腺機能低下症、特発性尿崩症、特発顔面神経麻痺、特発性甲状腺機能低下症、特発性ＩｇＡ腎症、特発性膜性ＧＮもしくは特発性膜性腎症、特発性腎炎症候群、特発性肺線維症、特発性スプルー、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡ腎症、ＩｇＥ媒介性疾患、任意にアナフィラキシーおよびアレルギー性もしくはアトピー性鼻炎、ＩｇＧ４関連硬化性疾患、限局性回腸炎、免疫複合体腎炎、サイトカインおよびＴリンパ球によって媒介される急性および遅延過敏症を伴う免疫応答、免疫媒介性ＧＮ、免疫調節性リポタンパク質（成人もしくは急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）を含む）、封入体筋炎、感染性関節炎、抗精子抗体による不妊症、ブドウ膜の全てまたは一部の炎症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、炎症性増殖過剰皮膚病、炎症性筋障害、インスリン依存性糖尿病（１型）、膵島炎、間質性膀胱炎、間質性肺疾患、間質性肺線維症、虹彩炎、虚血性再潅流障害、関節炎、若年性関節炎、若年性皮膚筋炎、若年性糖尿病、若年発症型（Ｉ型）真性糖尿病（小児性インスリン依存性真性糖尿病（ＩＤＤＭ）を含む）、若年発症型関節リウマチ、川崎症候群、乾性角結膜炎、キパノソミアシス（ｋｙｐａｎｏｓｏｍｉａｓｉｓ）、ランバート・イートン症候群、リーシュマニア症、ハンセン病、白血球減少症、白血球接着不全、白血球破壊性血管炎、白血球減少症、扁平苔癬、硬化性萎縮性、木質性結膜炎、線状ＩｇＡ皮膚、線状ＩｇＡ疾患（ＬＡＤ）、レフラー症候群、ルポイド肝炎、狼瘡（腎炎、脳炎、小児性、非腎性、腎外、円盤状、脱毛症を含む）、狼瘡（ＳＬＥ）、播種性紅斑性狼瘡（ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ  ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔｕｓ）、ライム関節炎、ライム病、リンパ様間質性肺炎、マラリア、男性および女性自己免疫性不妊症、上顎の中程度の血管炎（川崎病および結節性多発性動脈炎を含む）、膜性もしくは膜状増殖性ＧＮ（ＭＰＧＮ）、（Ｉ型およびＩＩ型、ならびに急速進行性ＧＮ、膜状ＧＮ（膜状腎症）を含む）、メニエール病、髄膜炎、顕微鏡的大腸炎、顕微鏡的多発性血管炎、片頭痛、微小変化型腎症、混合性結合組織病（ＭＣＴＤ）、伝染性単核球症、モーレン潰瘍、ミュシャー・ハーバーマン病、多巣性運動ニューロパチー、複数の内分泌不全、敗血症、外傷もしくは出血に続くものなどの多器官傷害症候群、多器官傷害症候群、脊椎−眼ＭＳなどの多発性硬化症（ＭＳ）、多発性硬化症、ムンプス、筋疾患、胸腺腫関連重症筋無力症などの重症筋無力症、重症筋無力症、心筋炎、筋炎、ナルコレプシー、壊死性腸炎、および経壁大腸炎、ならびに自己免疫性炎症性腸疾患、壊死性、皮膚性もしくは過敏性血管炎、新生児性狼瘡症候群（ＮＬＥ）、腎症、ネフローゼ症候群、神経学的疾患、視神経脊髄炎（デビック）、視神経脊髄炎、神経性筋強直症、好中球減少症、非癌性リンパ球増加症、非肉芽腫性ブドウ膜炎、非悪性胸腺腫、眼および眼窩炎症性障害、眼性瘢痕性類天疱瘡、卵巣炎、交感性眼炎、オプソクローヌス・ミオクローヌス症候群（ＯＭＳ）、オプソクローヌもしくはオプソクローヌス・ミオクローヌス症候群（ＯＭＳ）、および二次ニューロパシー、視神経炎、肉芽腫性精巣炎（ｏｒｃｈｉｔｉｓ  ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｏｓａ）、変形性関節症、回帰性リウマチ、膵炎、汎血球減少症、ＰＡＮＤＡＳ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓに関連する小児性自己免疫神経精神病学的疾患）、傍腫瘍性小脳変性症、腫瘍随伴症候群、腫瘍随伴症候群（神経性腫瘍随伴症候群を含む）、任意にランバート・イートン筋無力症候群もしくはイートン・ランバート症候群、寄生虫疾患（例えばリーシュマニア症）、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、パリーロンバーグ症候群、毛様体扁平部炎（末梢ぶどう膜炎）、パーソナージュ（Ｐａｒｓｏｎｎａｇｅ）・ターナー症候群、パルボウイルス感染症、水疱性類天疱瘡および皮膚類天疱瘡などの類天疱瘡、天疱瘡（尋常性天疱瘡を含む）、紅斑性天疱瘡、落葉状天疱瘡、天疱瘡粘液−膜類天疱瘡、天疱瘡、消化性潰瘍、周期性麻痺、末梢性ニューロパチー、静脈周囲脳脊髄炎、悪性貧血（ｐｅｒｎｉｃｉｏｕｓ  ａｎｅｍｉａ）（悪性貧血（ａｎｅｍｉａ  ｐｅｒｎｉｃｉｏｓａ））、悪性貧血、水晶体抗原性ブドウ膜炎、肺硬変、ＰＯＥＭＳ症候群、結節性多発性動脈炎、Ｉ型、ＩＩ型、およびＩＩＩ型多発性関節炎慢性プリマリア、多発性軟骨炎（例えば、不応性もしくは再発性多発性軟骨炎）、多内分泌自己免疫疾患、多内分泌不全、多腺性症候群、任意に自己免疫性多腺性症候群（もしくは多腺性内分泌異常症候群）、
リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎、多発性筋炎／皮膚筋炎、多発ニューロパシー、急性多発性神経根炎（ｐｏｌｙｒａｄｉｃｕｌｉｔｉｓ  ａｃｕｔａ）、心臓切開後症候群、後部ブドウ膜炎、もしくは自己免疫性ぶどう膜炎、心筋梗塞後症候群、心膜切開後症候群、連鎖球菌感染後腎炎、予防接種後症候群、初老期認知症、原発性胆汁性肝硬変、原発性甲状腺機能低下症、原発性特発性粘液水腫、原発性リンパ球増加症（モノクローナルＢ細胞リンパ球増加症を含む）、任意に良性単クローン性免疫グロブリン血症および意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症、ＭＧＵＳ、原発性粘液水腫、原発性進行性ＭＳ（ＰＰＭＳ）、および再発性寛解型ＭＳ（ＲＲＭＳ）、原発性硬化性胆管炎、プロゲステロン皮膚炎、全身性進行性硬化症、増殖性関節炎、乾癬（尋常性乾癬、乾癬、乾癬性関節炎など）、肺胞タンパク症、肺浸潤好酸球増加症、真正赤血球性貧血もしくは形成不全（ＰＲＣＡ）、赤芽球癆、化膿性もしくは非化膿性副鼻腔炎、爪の膿疱性乾癬および乾癬、腎盂炎、壊疽性膿皮症、ケルバン甲状腺炎、レイノー現象、反応性関節炎、反復流産、血圧応答の低下、反射性交感神経性ジストロフィー、不応性スプルー、ライター病もしくはライター症候群、再発性多発性軟骨炎、心筋もしくは他の組織の再潅流傷害、再灌流傷害、呼吸促迫症候群、下肢静止不能症候群、網膜自己免疫、後腹膜線維化症、レイノー症候群、リウマチ疾患、リウマチ熱、リウマチ、関節リウマチ、リウマチ性脊椎炎、風疹ウイルス感染症、サンプター症候群、サルコイドーシス、住血吸虫症、シュミット症候群、ＳＣＩＤおよびエプスタイン・バールウイルス関連疾患、強膜、強膜炎、強指症（ｓｃｌｅｒｏｄａｃｔｙｌ）、強皮症、任意に全身性強皮症、硬化性胆管炎、播種性硬化症、硬化症（全身性硬化症など）、感覚神経性難聴、血清反応陰性脊椎関節炎、シーハン症候群、シュルマン症候群、ケイ肺症、シェーグレン症候群、精子および精巣自己免疫、蝶形骨洞炎、スティーブンス・ジョンソン症候群、スティッフマン（もしくはスティッフパーソン）症候群、亜急性細菌性心内膜炎（ＳＢＥ）、亜急性皮膚エリテマトーデス、突然の難聴、スザック症候群、シデナム舞踏病、交感性眼炎、全身性エリテマトーデス（ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ）（ＳＬＥ）もしくは全身性エリテマトーデス（ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｄｅｓ）、皮膚ＳＬＥ、全身性壊死性血管炎、ＡＮＣＡ関連血管炎、任意のチャーグ・ストラウス血管炎もしくは症候群（ＣＳＳ）、脊髄癆、高安動脈炎、毛細血管拡張症、側頭動脈炎／巨細胞動脈炎、閉塞性血栓性血管炎、血小板減少症（血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）および自己免疫もしくは免疫媒介性血小板減少症、例えば特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）（慢性もしくは急性（ＩＴＰ）を含む）、血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）を含む）、甲状腺中毒症、組織傷害、トロサ・ハント症候群、中毒性表皮性表皮壊死症、毒性ショック症候群、輸血反応、乳児の一過性低ガンマグロブリン血症、横行性脊髄炎、横断性脊髄炎、熱帯性肺好酸球増加症、結核、潰瘍性大腸炎、未分化結合組織疾患（ＵＣＴＤ）、蕁麻疹、任意に慢性アレルギ��性蕁麻疹および慢性特発性蕁麻疹（慢性自己免疫性蕁麻疹を含む）、ブドウ膜炎、前部ブドウ膜炎、網膜ぶどう膜炎、弁膜炎、血管機能不全、血管炎、椎骨関節炎、小水疱性皮膚症、白斑、ヴェゲナー肉芽腫症（多発血管炎を伴う肉芽腫症（ＧＰＡ））、ウィスコット・アルドリッチ症候群、またはｘ連鎖性高ＩｇＭ症候群が挙げられる。
【０１８６】
対照的に、本発明によるＶＩＳＴＡアンタゴニスト抗体を含有する組成物は、Ｔ細胞免疫を促進し、これが癌、ならびにウイルス感染、細菌感染、酵母感染、真菌感染、原虫感染、および寄生虫感染症などの感染性状態など、治療上価値のある状態を治療するために使用され得る。これらの組成物は、ＶＩＳＴＡのＴ細胞活性化または増殖またはサイトカイン発現または他の効果を促進することを必要とする対象における、それを行うのに有効な本発明によるアンタゴニストの量を含む。かかる癌状態としては、例えば、白血病、リンパ腫、骨髄異形成症候群、骨髄腫、肺癌、および本明細書で特定される他の癌などの、血液癌および固形腫瘍が挙げられる。
【０１８７】
本明細書で特定される疾患状態は例示的なものであり、完全ではないことを理解するべきである。
【０１８８】
対象アゴニストおよびアンタゴニストは、同じまたは異なる時点で、同じまたは異なる組成物において投与され得る他の治療剤と組み合わされてもよい。例えば、対象アゴニストは、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１アゴニスト、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、サイトカイン、サイトカインアゴニスト、もしくはアンタゴニスト、または別の受容体アゴニストもしくはアンタゴニストの投与を含む治療レジメンにおいて投与され得る。
免疫応答の下方制御
【０１８９】
ＶＩＳＴＡポリペプチドの阻害機能の上方制御または強化は、免疫応答を下方制御するために使用されてもよい。下方制御は、既に進行している免疫応答の阻害または遮断の形態であり得るか、または免疫応答の誘導の防止を伴い得る。活性化免疫細胞の機能は、免疫細胞応答を下方制御することによって、または免疫細胞における特定のアネルギーを誘導することによって、またはそれら両方によって阻害され得る。例えば、ＶＩＳＴＡアゴニスト抗体は、様々な免疫細胞上で発現されるＶＩＳＴＡポリペプチドに結合し得、それにより免疫応答を下方制御する。このアゴニスト抗体は、単一特異性または多重特異性であってもよく、例えば、それは、ＢｉＴＥなどの二重特異性抗体を含み得る。例えば、かかる抗体は、ＶＩＳＴＡ抗原結合部分および別の抗原結合部分を含んでもよく、例えば、これは、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、または骨髄細胞上の細胞表面受容体を標的とする。かかる抗体は、ＶＩＳＴＡ抗原結合部位を含むことに加えて、分子が特定の細胞集団を標的とするために、Ｂ細胞抗原受容体、Ｔ細胞抗原受容体、またはＦｃもしくは他の受容体に結合する結合部位を含み得る。二重特異性抗体に対するこの第２の抗原の選択は、標的とされる細胞集団の選択に柔軟性を提供する。ＶＩＳＴＡ活性を促進するか、または模倣するＶＩＳＴＡアゴニスト抗体は、ＶＩＳＴＡとその天然結合パートナーとの相互作用を強化し得る。本明細書に開示されるように、他のヒトＶＩＳＴＡ活性化またはアゴニスト抗体は、Ｔ細胞活性もしくは増殖を阻害するそれらの能力によって、および／あるいはインビトロにおける免疫抑制効果または炎症、アレルギー、もしくは自己免疫疾患モデルに基づいて特定され得る。
【０１９０】
いくつかの当該技術において認識されている細胞活性化の読み取りを用いて、例えば、活性化剤の存在下で、細胞増殖またはエフェクター機能（例えば、抗体産生、サイトカイン産生、食作用）を測定することができる。ヒトＶＩＳＴＡの作用を刺激するか、または促進し、それにより、この活性化を遮断する試験抗体の能力は、測定される増殖またはエフェクター機能の減少に影響を与える薬剤の能力を測定することによって容易に決定することができる。したがって、免疫抑制性があり、免疫活性化を遮断する試験抗体の能力は、異なる濃度の抗原におけるサイトカイン産生および／または増殖を測定することによって決定することができる。
【０１９１】
本発明によるＶＩＳＴＡアゴニスト抗体と抗原を共投与することにより、特異的抗原に対する寛容が誘導され得る。例えば、免疫応答が望ましくないアレルゲンまたは外来ポリペプチドへの特異的ポリペプチド免疫応答に対する寛容が誘導される。例えば、第ＶＩＩＩ因子を受ける患者は、この凝固因子に対する抗体を頻繁に生成する。組換え第ＶＩＩＩ因子との、ＶＩＳＴＡ活性、またはその天然結合パートナーとの相互作用を刺激するか、または模倣する、本発明によるＶＩＳＴＡアゴニスト抗体の共投与は、この望ましくない免疫応答を抑制し得る。
【０１９２】
本発明によるＶＩＳＴＡアゴニスト抗体は、免疫応答を下方制御するために、免疫細胞上の共刺激受容体の活性を遮断するか、または免疫細胞上に発現される別の免疫抑制受容体またはリガンドの活性を刺激する別の薬剤と組み合わせて使用することができる。例示的な分子としては、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１アゴニスト、ＣＴＬＡ−４の可溶性形態、抗Ｂ７−１抗体、抗Ｂ７−２抗体、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、ＢＴＬＡ、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７Ｈ３などのうちの１つ以上を標的とするアンタゴニスティックな抗体、および／またはＣＤ４０、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、もしくはＩＣＯＳのうちの１つ以上を標的とするアゴニスティックな抗体、またはそれらの組み合わせが挙げられる。これらの部分は、単一の組成物または化合物、例えば、本発明によるＶＩＳＴＡアゴニスト抗体を含有し、更に別の免疫アゴニスト抗体を含む二重特異性抗体に組み込まれ得るか、または別の免疫抑制ポリペプチドもしくは他の活性剤に融合される、本発明によるＶＩＳＴＡアゴニスト抗体を含有する融合ポリペプチドを含み得る。代替的に、これらの部分は、対象における免疫細胞媒介免疫応答を下方制御するために、同じまたは異なる組成物において別個のまたは別の実体として（同時にまたは順次）投与され得る。
【０１９３】
本発明によるＶＩＳＴＡアゴニスト抗体と組み合わせることができる特定の免疫阻害分子の例としては、共刺激シグナルを遮断する抗体（例えば、ＣＤ２８またはＩＣＯＳに対して）、ＣＴＬＡ４を介して阻害シグナルを活性化する抗体、ならびに／または他の免疫細胞マーカー（例えば、ＣＤ４０、ＣＤ４０リガンド、またはサイトカインに対して）、融合タンパク質（例えば、ＣＴＬＡ４−ＦｃまたはＰＤ−１−Ｆｃ）、および免疫抑制薬（例えば、ラパマイシン、シクロスポリンＡ、またはＦＫ５０６）に対する抗体が挙げられる。
【０１９４】
更なる実施形態において、本発明によるＶＩＳＴＡアゴニスト抗体を含有する二重特異性抗体は、例えば、ある特定の細胞型、例えば、Ｂリンパ球、単球、樹状細胞、またはランゲルハンス細胞上にのみ見出されるマーカーを使用して、特定の細胞集団を標的とするのに有用である。ＶＩＳＴＡ活性またはＶＩＳＴＡ−免疫細胞相互作用を活性化することによって免疫応答を下方制御する（したがって、ＶＩＳＴＡの負のシグナル伝達機能を刺激する）ことは、免疫応答の下方制御において、例えば、組織、皮膚、および器官移植の場合において、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）もしくはアレルギーにおいて、または全身性エリテマトーデス、ＩＢＤ、ＲＡ、乾癬、および多発性硬化症などの自己免疫疾患および炎症性疾患において有用である。例えば、免疫細胞機能を遮断することにより、組織移植における組織破壊の減少がもたらされる。典型的には、組織移植において、移植片の拒絶は、免疫細胞、による異物としてのその認識、続いて移植片を破壊する免疫反応を通して開始される。移植前または移植時に、免疫細胞上のＶＩＳＴＡの活性またはＶＩＳＴＡのその天然結合パートナー（複数可）との相互作用を促進する分子の単独投与、または別の下方調節剤と組み合わせた投与は、共刺激シグナルの生成を阻害することができる。更に、ＶＩＳＴＡ活性の促進は、免疫細胞をアネルギー化するのにも十分であり、それにより対象に寛容を誘導することができる。
【０１９５】
いくつかの疾患またはいくつかの対象において十分な免疫抑制または耐性を達成するために、他の分子の共刺激機能を遮断する必要があり得る。例えば、移植前または移植時に、これらの抗原のそれぞれの活性を有するか、またはこれらの抗原に対する抗体を遮断するペプチドの組み合わせの可溶性形態を投与することによって（別個にまたは単一組成物において一緒に）、Ｂ７−１およびＢ７−２の機能を遮断することが望ましい場合がある。代替的に、ＶＩＳＴＡの阻害活性を促進し、Ｂ７−１および／またはＢ７−２の共刺激活性を更に阻害することが望ましい場合がある。
【０１９６】
対象抗ヒトＶＩＳＴＡアゴニスト抗体は、自己免疫疾患の治療に特に有用である。多くの自己免疫障害は、自己組織に対して反応性であり、疾患の病理に関与するサイトカインおよび自己抗体の産生を促進する免疫細胞の不適切な活性化の結果である。自己反応性免疫細胞の活性化を防止することにより、疾患症状を減少または排除することができる。ＶＩＳＴＡの活性またはＶＩＳＴＡのその天然結合パートナー（複数可）との相互作用を促進する対象抗ヒトＶＩＳＴＡアゴニスト抗体の投与は、疾患の長期緩和をもたらし得る自己反応性免疫細胞の抗原特異的寛容を誘導し得る。更に、Ｂ７分子の共刺激受容体との受容体−リガンド相互作用を破壊することにより免疫細胞の共刺激を遮断する薬剤の共投与は、疾患プロセスに関与し得る自己抗体またはサイトカインの産生を防止するための免疫細胞活性化の阻害に有用であり得る。
【０１９７】
対象抗ヒトＶＩＳＴＡアゴニスト抗体を使用する、ＶＩＳＴＡ活性またはＶＩＳＴＡのその天然結合パートナー（複数可）との相互症の刺激を介した免疫応答の下方制御は、自家組織の自己免疫攻撃の治療においても有用であり得る。したがって、自己免疫攻撃によって引き起こされるか、または悪化する状態（例えば、心臓疾患、心筋梗塞、またはアテローム性動脈硬化）は、ＶＩＳＴＡ活性またはＶＩＳＴＡのその自然結合パートナーへの結合を増加させることによって回復または改善され得る。したがって、対象抗ヒトＶＩＳＴＡアゴニスト抗体を使用してＶＩＳＴＡ活性またはＶＩＳＴＡのその対抗受容体との相互作用を刺激することにより、自己免疫障害（ならびに心臓疾患、心筋梗塞、およびアテローム性動脈硬化などの状態）などの自己免疫攻撃によって悪化する状態を調節することは、本発明の範囲内である。
【０１９８】
前述のように、自己免疫および炎症性障害を予防するか、または軽減するための本発明によるアゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体の有効性は、ヒト自己免疫および炎症性疾患のいくつかの十分に特徴付けされた動物モデルを使用して決定され得る。例としては、マウス実験的自己免疫脳炎、ＭＲＬ／ｌｐｒ／ｌｐｒマウスまたはＮＺＢハイブリッドマウスにおける全身性エリテマトーデス、マウス自己免疫コラーゲン関節炎、ＮＯＤマウスおよびＢＢラットにおける真性糖尿病、ならびにマウス実験的重症筋無力症が挙げられる。Ｐａｕｌ  ｅｄ．，Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８９，ｐａｇｅｓ  ８４０−８５６を参照のこと。
【０１９９】
免疫細胞活性化の阻害は、例えば、ＩｇＥ産生を阻害することにより、アレルギーおよびアレルギー反応の治療において治療的に更に有用である。ＶＩＳＴＡ活性またはＶＩＳＴＡのその天然結合パートナー（複数可）との相互作用を促進するか、または模倣する対象抗ヒトＶＩＳＴＡアゴニスト抗体は、対象における免疫細胞媒介性アレルギー応答を阻害するために、アレルギー対象に投与され得る。ＶＩＳＴＡ活性またはその天然結合パートナー（複数可）との相互作用の刺激は、適切なＭＨＣ分子とともにアレルゲンに曝露することを伴い得る。アレルギー反応は、アレルゲンの侵入経路およびマスト細胞または好塩基球上のＩｇＥ沈着のパターンに応じて、本質的に、全身性または局所性であり得る。したがって、免疫細胞媒介性アレルギー応答は、対象抗ヒトＶＩＳＴＡアゴニスト抗体の投与により局所的または全身的に阻害され得る。
同じエピトープに結合する抗ＶＩＳＴＡ抗体の選択
【０２００】
ある特定の実施形態において、本発明によるアゴニスティックな抗ＶＩＳＴＡ抗体は、免疫刺激および関連機能の調節などの所望の機能特性を有する。図４に示され、実施例に開示されるように、本発明によるいくつかの抗ヒトＶＩＳＴＡアゴニスト抗体のエピトープ特異性が明らかにされた。同じエピトープに結合することが示されたいくつかの抗体が免疫抑制性であることが分かったため、同じまたは重なるエピトープに結合する他のＶＩＳＴＡアゴニスト抗体が特定され得る、すなわち、それらは、例示的なＶＩＳＴＡアゴニスト抗体と結合するヒトＶＩＳＴＡポリペプチドのアミノ酸残基のうちの１つ以上と相互作用すると予測される。同じエピトープ特異性を有する他の抗体、および／または所望の抗体とＶＩＳＴＡ抗原への結合に関して交差競合する能力を有するものが選択され得る。例えば、所望の抗体のエピトープ特異性は、全ＶＩＳＴＡポリペプチドを含む重なるペプチドのライブラリを使用して決定され得、例えば、ライブラリ内の同じペプチドもしくはその１つ以上の残基に結合するＶＩＳＴＡおよび抗体の所望のエピトープを含有する一部分を構成する１５量体または重なるペプチドライブラリは、同じ線状または立体構造エピトープに結合することが決定される。実施例において、エピトープ特異性は、線状および立体構造エピトープを特定するために使用され得るＰｅｐｓｃａｎ（登録商標）方法を使用して決定された。
【０２０１】
本発明によるアゴニスト抗体の修飾
加えて、またはフレームワーク領域もしくはＣＤＲ領域内で行われる修飾の代替として、本発明の少なくともいくつかの実施形態による抗体は、Ｆｃ領域内に修飾を含むように、典型的には、血清半減期、補体結合、Ｆｃ受容体結合、および／または抗原依存性細胞傷害性などの抗体の１つ以上の機能特性を変更するために操作され得る。更に、本発明の少なくともいくつかの実施形態による抗体は、化学的に修飾される（例えば、１つ以上の化学部分が抗体に結合され得る）か、またはやはり、抗体の１つ以上の機能特性を変更するために、そのグリコシル化を変更するように修飾されてもよい。かかる実施形態は以下に更に説明される。Ｆｃ領域における残基の付番は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスのものである。
【０２０２】
一実施形態において、ＣＨ１のヒンジ領域は、ヒンジ領域内のシステイン残基の数が変更されるように、例えば、増加するか、または減少するように修飾される。このアプローチは、Ｂｏｄｍｅｒらによる米国特許第５，６７７，４２５号に更に記載されている。ＣＨＩのヒンジ領域におけるシステイン残基の数は、例えば、軽鎖および重鎖のアセンブリを容易にするために、または抗体の安定性を増加させるか、または減少させるために変更される。
【０２０３】
別の実施形態において、抗体のＦｃヒンジ領域は、抗体の生物学的半減期を減少させるために変異される。より具体的には、抗体が傷害性ＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌプロテインＡ（ＳｐＡ）結合を天然Ｆｃ−ヒンジドメインＳｐＡ結合に対して有するように、１つ以上のアミノ酸変異がＦｃ−ヒンジ断片のＣＨ２−ＣＨ３ドメインインターフェース領域に導入される。このアプローチは、Ｗａｒｄらによる米国特許第６，１６５，７４５号に更に詳細に記載されている。
【０２０４】
別の実施形態において、抗体は、その生物学的半減期を増加させるように修飾される。様々なアプローチが可能である。例えば、以下の変異のうちの１つ以上を導入することができる：Ｗａｒｄに対する米国特許第６，２７７，３７５号に記載されるように、Ｔ２５２Ｌ、Ｔ２５４Ｓ、およびＴ２５６Ｆ。代替的に、生物学的半減期を増加させるために、抗体は、Ｐｒｅｓｔａらによる米国特許第５，８６９，０４６号および同第６，１２１，０２２号に記載されるように、ＩｇＧのＦｃ領域のＣＨ２ドメインの２つのループから得られるサルベージ受容体結合エピトープを含有するようにＣＨＩまたはＣＬ領域内で変更され得る。
【０２０５】
更に他の実施形態において、Ｆｃ領域は、抗体のエフェクター機能を変更するために、少なくとも１つのアミノ酸を異なるアミノ酸残基と置き換えることによって変更される。例えば、アミノ酸残基２３４、２３５、２３６、２３７、２９７、３１８、３２０、および３２２から選択される１つ以上のアミノ酸は、抗体がエフェクターリガンドに対して変更された親和性を有するが、親抗体の抗原結合能力を保持するように、異なるアミノ酸残基に置き換えられ得る。親和性が変更されるエフェクターリガンドは、例えば、Ｆｃ受容体または補体のＣ１成分であり得る。このアプローチは、両方ともＷｉｎｔｅｒらによる米国特許第５，６２４，８２１号および同第５，６４８，２６０号に更に詳細に記載されている。
【０２０６】
別の例において、アミノ酸残基３２９、３３１、および３２２から選択される１つ以上のアミノ酸は、抗体が変更されたＣ１ｑ結合および／または減少したもしくは消失した補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を有するように、異なるアミノ酸残基に置き換えられ得る。このアプローチは、Ｉｄｕｓｏｇｉｅらによる米国特許第６，１９４，５５１号に更に詳細に記載されている。
【０２０７】
別の例において、アミノ酸２３１位および２３９位内の１つ以上のアミノ酸残基は変更され、これにより抗体が補体を固定する能力を変更する。このアプローチは、ＢｏｄｍｅｒらによるＰＣＴ公開第ＷＯ９４／２９３５１号に更に記載されている。
【０２０８】
更に別の例において、Ｆｃ領域は、以下の位置で１つ以上のアミノ酸を修飾することにより、Ｆγ受容体に対する抗体の親和性を増加させるように修飾される：２３８、２３９、２４８、２４９、２５２、２５４、２５５、２５６、２５８、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７６、２７８、２８０、２８３、２８５、２８６、２８９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１２、３１５、３２０、３２２、３２４、３２６、３２７、３２９、３３０、３３１、３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３４０、３６０、３７３、３７６、３７８、３８２、３８８、３８９、３９８、４１４、４１６、４１９、４３０、４３４、４３５、４３７、４３８、または４３９。このアプローチは、ＰｒｅｓｔａによるＰＣＴ公開第ＷＯ００／４２０７２号に更に記載されている。更に、ＦｃｙＲＩ、ＦｃｙＲＩＩ、ＦｃｙＲＩＩＩ、およびＦｃＲｎのためのヒトＩｇＧｌ上の結合部位がマッピングされており、改善された結合を有する変異型が記載されている（Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１−６６０４を参照のこと）。２５６位、２９０位、２９８位、３３３位、３３４位、および３３９位の特異的変異は、ＦｃｙＲＩＩＩへの結合を改善することが示されている。更に、以下の組み合わせ変異体がＦｃｙＲＩＩＩ結合を改善することが示されている：Ｔ２５６Ａ／Ｓ２９８Ａ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ、Ｓ２９８Ａ／Ｋ２２４Ａ、およびＳ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ。更に、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６ＥまたはＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓなどの変異は、ＦｃＲｎへの結合を改善し、抗体循環半減期を増加させる（Ｃｈａｎ  ＣＡ  ａｎｄ  Ｃａｒｔｅｒ  ＰＪ（２０１０）Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １０：３０１−３１６を参照のこと）。
【０２０９】
また別の実施形態において、抗体は、インビボ  Ｆａｂアーム交換を抑止するように修飾され得る。具体的には、このプロセスは、機能的に一価であるｂ特異的抗体を効果的にもたらす他のＩｇＧ４抗体間でのＩｇＧ４半分子（１つの重鎖＋１軽鎖）の交換を伴う。重鎖のヒンジ領域および定常ドメインへの変異は、この交換を抑止することができる（Ａａｌｂｅｒｓｅ，ＲＣ，Ｓｃｈｕｕｒｍａｎ  Ｊ．，２００２，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １０５：９−１９を参照のこと）。
【０２１０】
また別の実施形態において、抗体のグリコシル化が修飾される。例えば、非グリコシル化抗体を作製することができる（すなわち、抗体はグリコシル化を欠く）。グリコシル化を変更して、例えば、抗体の抗原に対する親和性を増加させることができる。かかる炭水化物修飾は、例えば、抗体配列内のグリコシル化の１つ以上の部位を変更することによって達成することができる。例えば、１つ以上の可変領域フレームワークグリコシル化部位の排除をもたらし、それによりその部位でのグリコシル化を排除する、１つ以上のアミノ酸置換を行うことができる。かかるアグリクロシル化は、抗原に対する抗体の親和性を増加させ得る。かかるアプローチは、Ｃｏらによる米国特許第５，７１４，３５０号および同第６，３５０，８６１号に更に詳細に記載されている。
【０２１１】
更にまたは代替的に、低減された量のフコシル残基を有する低フコシル化抗体または増加した二分ＧｌｃＮａｃ構造を有する抗体などの変更された種類のグリコシル化を有する抗体を作製することができる。かかる変更されたグリコシル化パターンは、抗体のＡＤＣＣ能力を増加させることが示された。かかる炭水化物修飾は、例えば、変更されたグリコシル化機構を有する宿主細胞において抗体を発現させることによって達成することができる。変更されたグリコシル化機構を有する細胞は当該技術分野で説明されており、本発明の少なくともいくつかの実施形態により組換え抗体を発現する宿主細胞として使用され、それにより変更されたグリコシル化を有する抗体を産生することができる。例えば、細胞株Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５、およびＭｓ７０９は、Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５、およびＭｓ７０９細胞株において発現される抗体がそれらの炭水化物でフコースを欠くように、フコシルトランスフェラーゼ遺伝子ＦＵＴ８（ａ（１，６）フコシルトランスフェラーゼ）を欠いている。Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５、およびＭｓ７０９  ＦＵＴ８細胞株は、２つの交換ベクターを使用して、ＣＨＯ／ＤＧ４４細胞におけるＦＵＴ８遺伝子の標的分布により創出される（Ｙａｍａｎｅらによる米国特許出願公開第２００４／０１１０７０４号およびＹａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ  ８７：６１４−２２を参照のこと）。別の例として、ＨａｎａｉらによるＥＰ１，１７６，１９５は、かかる細胞株において発現される抗体がａ１，６結合関連酵素を減少させるか、または排除することによって低フコシル化を呈するように、フコシルトランスフェラーゼをコードする機能的に破壊されたＦＵＴ８遺伝子を有する細胞株を説明している。Ｈａｎａｉらはまた、抗体のＦｃ領域に結合するＮ−アセチルグルコサミンにフコースを付加するための低酵素活性を有するか、または酵素活性を有さない細胞株、例えばラット骨髄腫細胞株ＹＢ２／０（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６６２）も説明している。ＰｒｅｓｔａによるＰＣＴ公開第ＷＯ０３／０３５８３５号は、フコースをＡｓｎ（２９７）連結炭水化物に結合する能力が減少し、その宿主細胞において発現された抗体の低フコシル化ももたらす変異型ＣＨＯ細胞株Ｌｅｃｌ３細胞を説明している（Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２６７３３−２６７４０も参照のこと）。ＵｍａｎａらのＰＣＴ公開第ＷＯ９９／５４３４２号は、操作された細胞株において発現される抗体が抗体の増加したＡＤＣＣ活性をもたらす増加した二分ＧｌｃＮａｃ構造を呈するように、糖タンパク質修飾グリコシルトランスフェラーゼ（例えば、Ｐ（ｌ，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトフェントランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ））を発現するように操作された細胞株を説明している（Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ（１９９９）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：１７６−１８０も参照のこと）。代替的に、抗体のフコース残基は、フコシダーゼ酵素を使用して切断され得る。例えば、フコシダーゼα−Ｌ−フコシダーゼは、抗体からフコシル残基を除去する（Ｔａｒｅｎｔｉｎｏ，Ａ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（１９７５）Ｂｉｏｃｈｅｍ．１４：５５１６−２３）。
【０２１２】
本発明により想到される本明細書における抗体の別の修飾は、例えば半減期を強化するための、ペグル化または他の水溶性部分、典型的にはポリマーの付加である。抗体は、例えば、抗体の生物学的（例えば血清）半減期を増加させるためにペグ化され得る。抗体をペグ化するために、抗体またはその断片は典型的には、１つ以上のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）基が抗体または抗体断片に結合される条件下で、ＰＥＧの反応性エステルまたはアルデヒド誘導体などのＰＥＧと反応させられる。好ましくは、ペグ化は、反応性ＰＥＧ分子（または類似の反応性水溶性ポリマー）とのアシル化反応またはアルキル化反応を介して行われる。本明細書で使用される場合、「ポリエチレングリコール」という用語は、モノ（Ｃｉ−Ｃｉｏ）アルコキシ−もしくはアリールオキシ−ポリエチレングリコールまたはポリエチレングリコール−マレイミドなどの他のタンパク質を誘導体化するために使用されたＰＥＧの形態のいずれかを包含することが意図される。ある特定の実施形態において、ペグ化される抗体は、非グリコシル化抗体である。タンパク質をペグ化するための方法は当該技術分野で既知であり、本発明の少なくともいくつかの実施形態による抗体に適用することができる。例えば、ＮｉｓｈｉｍｕｒａらによるＥＰ０１５４３１６およびＩｓｈｉｋａｗａらによるＥＰ０４０１３８４を参照のこと。
【０２１３】
抗体の操作方法
ある特定の実施形態において、ＶＨおよびＶＬ配列を有する本発明によるアゴニスト抗ＶＩＳＴＡ抗体は、それぞれ、ＶＨおよび／もしくはＶＬ配列、またはそれに結合した定常領域を修飾することによって新たな抗ＶＩＳＴＡ抗体を創出するために使用され得る。したがって、本発明の少なくともいくつかの実施形態による別の態様において、本発明の少なくともいくつかの実施形態による抗ＶＩＳＴＡ抗体は、本発明の少なくともいくつかの実施形態による抗体の少なくとも１つの機能特性、例えば、ヒトＶＩＳＴＡへの結合などを保持する構造的に関連する抗ＶＩＳＴＡ抗体を創出するために使用される。例えば、１つのＶＩＳＴＡ抗体またはその変異の１つ以上のＣＤＲ領域は、上述のように、既知のフレームワーク領域および／または他のＣＤＲと組換えにより組み合わされて、本発明の少なくともいくつかの実施形態による追加の組換え操作された抗ＶＩＳＴＡ抗体を創出することができる。他の種類の修飾には、前の項に記載されるものが含まれる。操作方法のための出発材料は、本明細書に提供されるＶＨおよび／もしくはＶＬ配列のうちの１つ以上、またはその１つ以上のＣＤＲ領域である。操作された抗体を創出するために、本明細書に提供されるＶＨおよび／もしくはＶＬ配列のうちの１つ以上、またはその１つ以上のＣＤＲ領域を有する抗体を実際に調製する（すなわち、タンパク質として発現する）必要はない。むしろ、配列に含まれる情報は、元の配列に由来する「第２世代」の配列を創出するための出発材料として使用され、次いで「第２世代」の配列が調製され、タンパク質として発現される。
【０２１４】
標準的な分子生物学技法は、変更された抗体配列を調製し、発現するために使用され得る。好ましくは、変更された抗体配列によってコードされる抗ＶＩＳＴＡ抗体は、それぞれ、本明細書に提供される方法により産生され、配列を有する、抗ＶＩＳＴＡ抗体の機能特性のうちの１つ、いくつか、または全てを保持するものであり、この機能特性は、特定のＫＤレベル以下を有するＶＩＳＴＡ抗原への結合、および／または免疫応答の調節、および／または例えばＶＩＳＴＡ抗原を発現するなどの所望の標的細胞への選択的結合を含む。
【０２１５】
変更された抗体の機能特性は、当該技術分野で利用可能であり、かつ／または本明細書に記載される標準的なアッセイを使用して評価することができる。本発明の少なくともいくつかの実施形態による抗体の操作方法のある特定の実施形態において、変異は、抗ＶＩＳＴＡ抗体コード配列の全てまたは一部とともにランダムにまたは選択的に導入され得、得られる修飾された抗ＶＩＳＴＡ抗体は、結合活性および／または他の所望の機能特性についてスクリーニングされ得る。
【０２１６】
変異方法は当該技術分野で説明されている。例えば、ＳｈｏｒｔによるＰＣＴ公開第ＷＯ０２／０９２７８０号は、飽和変異誘発、合成ライゲーションアセンブリ、またはこれらの組み合わせを使用して抗体変異を創出およびスクリーニングするための方法を記載している。代替的に、ＬａｚａｒらによるＰＣＴ公開第ＷＯ０３／０７４６７９号は、抗体の生理化学的特性を最適化するために計算スクリーニング方法を使用する方法を記載している。
【０２１７】
抗体をコードする核酸分子
本発明は、本発明による抗ＶＩＳＴＡ抗体、またはその断片もしくはコンジュゲートをコードする核酸を更に提供する。核酸は、全細胞に、細胞溶解物中に、または部分的に精製された形態もしくは実質的に純粋な形態で存在し得る。核酸は、アルカリ／ＳＤＳ処理、ＣｓＣｌバンド形成、カラムクロマトグラフィー、アガロースゲル電気泳動、ならびに当該技術分野で周知のその他を含む標準的な技術により、他の細胞成分または他の汚染物、例えば、他の細胞核酸またはタンパク質から精製されたとき、「単離される」か、または「実質的に純粋となる」。Ｆ．Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．（１９８７）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照のこと。本発明の少なくともいくつかの実施形態による核酸は、例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡであり得、イントロン配列を含有しても含有しなくてもよい。好ましい実施形態において、核酸はｃＤＮＡ分子である。
【０２１８】
本発明の少なくともいくつかの実施形態による核酸は、標準的な分子生物学技法を使用して得ることができる。ハイブリドーマ（例えば、以下に更に記載されるように、ヒト免疫グロブリン遺伝子を有するトランスジェニックマウスから調製されたハイブリドーマ）によって発現される抗体に関して、ハイブリドーマによって作製された抗体の軽鎖および重鎖をコードするｃＤＮＡは、標準的なＰＣＲ増幅またはｃＤＮＡクローニング技法によって得ることができる。免疫グロブリン遺伝子ライブラリから得られた抗体に関して（例えば、ファージディスプレイ技法を使用して）、抗体をコードする核酸は、ライブラリから回収され得る。
【０２１９】
ＶＨおよびＶＬセグメントをコードするＤＮＡ断片が得られたら、これらのＤＮＡ断片を、標準的な組換えＤＮＡ技法によって更に操作して、例えば、可変領域遺伝子を完全長抗体鎖遺伝子に、Ｆａｂ断片遺伝子に、またはｓｃＦｖ遺伝子に変換することができる。これらの操作において、ＶＬ−またはＶＨ−コードＤＮＡ断片は、抗体定常領域または可撓性リンカーなどの別のタンパク質をコードする別のＤＮＡ断片に作動可能に連結される。前に定義されるように、「作動可能に連結される」とは、２つのＤＮＡ断片によりコードされるアミノ酸配列がフレーム内にあるように、２つのＤＮＡ断片が接合されることを意味する。
【０２２０】
ＶＨ領域をコードする単離されたＤＮＡは、ＶＨ−コードＤＮＡを、重鎖定常領域（ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ  ３）をコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結することによって完全長重鎖遺伝子に変換され得る。ヒト重鎖定常領域遺伝子の配列は、当該技術分野で既知であり（例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｌ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２を参照のこと）、これらの領域を包含するＤＮＡ断片は、標準的なＰＣＲ増幅によって得ることができる。重鎖定常領域は、ＩｇＧｌ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、またはＩｇＤ定常領域であり得るが、最も好ましくは、ＩｇＧｌ、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４定常領域である。Ｆａｂ断片重鎖遺伝子に関して、ＶＨコードＤＮＡは、重鎖ＣＨ１定常領域のみをコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結され得る。
【０２２１】
ＶＬ領域をコードする単離されたＤＮＡは、ＶＬコードＤＮＡを、軽鎖定常領域ＣＬ−をコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結することによって完全長軽鎖遺伝子（ならびにＦａｂ軽鎖遺伝子）に変換され得る。ヒト軽鎖定常領域遺伝子の配列は、当該技術分野で既知であり（例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２を参照のこと）、これらの領域を包含するＤＮＡ断片は、標準的なＰＣＲ増幅によって得ることができる。軽鎖定常領域は、カッパ（κ）またはラムダ（λ）定常領域であり得るが、最も好ましくは、κ定常領域である。
【０２２２】
ｓｃＦｖ遺伝子を創出するために、ＶＨ−およびＶＬコードＤＮＡ断片は、ＶＨおよびＶＬ配列が近接単一鎖タンパク質として発現され得るように、可撓性リンカーをコードする、例えばアミノ酸配列（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）３をコードする別の断片に作動可能に連結され、ＶＬおよびＶＨ領域は可撓性リンカーによって接合される（例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６、Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４を参照のこと）。
【０２２３】
抗ＶＩＳＴＡモノクローナル抗体の産生
本発明による抗ＶＩＳＴＡモノクローナル抗体（ｍＡｂ）および抗原結合断片は、従来のモノクローナル抗体方法論、例えば、Ｋｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５の標準的な体細胞ハイブリダイゼーション技法を含む様々な技法によって産生することができる。体細胞ハイブリダイゼーション手順が好ましいが、原理上、モノクローナル抗体を産生するための他の技法、例えば、Ｂリンパ球のウイルス性または癌性形質転換を用いることができる。
【０２２４】
ハイブリドーマを調製するための好ましい動物系はマウス系である。マウスにおけるハイブリドーマ産生は、十分に確立された手順である。免疫化プロトコルおよび融合のための免疫化した脾細胞の単離技法は、当該技術分野で既知である。融合パートナー（例えば、マウス骨髄腫細胞）および融合手順も既知である。本発明のキメラ抗体またはヒト化抗体は、上述のように調製されたマウスモノクローナル抗体の配列に基づいて調製することができる。重鎖および軽鎖免疫グロブリンをコードするＤＮＡは、目的のマウスハイブリドーマから得られ、標準的な分生物学技法を使用して、非マウス（例えば、ヒト）免疫グロブリン配列を含有するように操作され得る。例えば、キメラ抗体を創出するために、当該技術分野で既知の方法を使用して、マウス可変領域を、ヒト定常領域に連結することができる（例えば、Ｃａｂｉｌｌｙらに対する米国特許第４，８１６，５６７号を参照のこと）。ヒト化抗体を創出するために、当該技術分野で既知の方法を使用して、マウスＣＤＲ領域を、ヒトフレームワークに挿入することができる（例えば、Ｗｉｎｔｅｒに対する米国特許第５，２２５，５３９号、Ｑｕｅｅｎらに対する米国特許第５，５３０，１０１号、同第５，５８５，０８９号、同第５，６９３，７６２号、および同第６，１８０，３７０号を参照のこと）。
【０２２５】
本発明の少なくともいくつかの実施形態によると、抗体はヒトモノクローナル抗体である。ＶＩＳＴＡに対して指向されるかかるヒトモノクローナル抗体は、マウス系ではなくヒト免疫系の部分を有するトランスジェニックまたはトランスクロモソミック（ｔｒａｎｓｃｈｒｏｍｏｓｏｍｉｃ）マウスを使用して生成され得る。これらのトランスジェニックおよびトランスクロモソミックマウスは、本明細書において、それぞれ、ＨｕＭＡｂ  Ｍｏｕｓｅ（商標）およびＫＭ  Ｍｏｕｓｅ（商標）と称されるマウスを含み、本明細書において、集合的に「ヒトＩｇマウス」と称される。ＨｕＭＡｂ  Ｍｏｕｓｅ（商標）（Ｍｅｄａｒｅｘ  Ｉｎｃ．）は、内因性μ鎖およびγならびにκ鎖遺伝子座を不活性化する標的変異と一緒に、再配置されていないヒト重鎖μおよびγならびにκ軽鎖免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子ミニ遺伝子座を含有する（例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇ，ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ  ３６８（６４７４）：８５６−８５９を参照のこと）。したがって、マウスは、低減されたマウスＩｇＭまたはκの発現を呈し、免疫化に応答して、導入されたヒト重鎖および軽鎖導入遺伝子は、クラススイッチおよび体細胞変異を受けて、高親和性ヒトＩｇＧ  κモノクローナルを生成する（Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ｅｔ  ａｌ．（１９９４）（上記）、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．（１９９４）Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １１３：４９−１０１において概説される、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ａｎｄ  Ｈｕｓｚａｒ，Ｄ．（１９９５）Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３、およびＨａｒｄｉｎｇ，Ｆ．ａｎｄ  Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．（１９９５）Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７６４：５３６−５４６）。ＨｕＭａｂ  Ｍｏｕｓｅ（登録商標）の調製および使用、ならびにかかるマウスによって行われたゲノム修飾は、Ｔａｙｌｏｒ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２０：６２８７−６２９５、Ｃｈｅｎ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ５：６４７−６５６、Ｔｕａｉｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：３７２０−３７２４、Ｃｈｏｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ４：１１７−１２３；、Ｃｈｅｎ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（１９９３）ＥＭＢＯ  Ｊ．１２：８２１−８３０、Ｔｕａｉｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：２９１２−２９２０、Ｔａｙｌｏｒ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ６：５７９−５９１、およびＦｉｓｈｗｉｌｄ，Ｄ．ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：８４５−８５１に更に記載されており、それらの全ての内容は、参照によりそれらの全体が本明細書に具体的に組み込まれる。更に、全てＬｏｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｋａｙに対する米国特許第５，５４５，８０６号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号、同第５，７８９，６５０号、同第５，���７７，３９７号、同第５，６６１，０１６号、同第５，８１４，３１８号、同第５，８７４，２９９号、および同第５，７７０，４２９号、Ｓｕｒａｎｉに対する米国特許第５，５４５，８０７号、全てＬｏｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｋａｙに対するＰＣＴ公開第ＷＯ９２／０３９１８号、同第ＷＯ９３／１２２２７号、同第ＷＯ９４／２５５８５号、同第ＷＯ９７／１３８５２号、同第ＷＯ９８／２４８８４号、および同第ＷＯ９９／４５９６２号、ならびにＫｏｒｍａｎらに対するＰＣＴ公開第ＷＯ０１／１４４２４号を参照のこと。
【０２２６】
別の実施形態において、本発明の少なくともいくつかの実施形態によるヒト抗体は、ヒト重鎖導入遺伝子およびヒト軽鎖導入染色体を有するマウスなど、導入遺伝子および導入染色体上にヒト免疫グロブリン配列を有するマウスを使用して産生することができる。本明細書において「ＫＭマウス（商標）」と称されるかかるマウスは、Ｉｓｈｉｄａに対するＰＣＴ公開第ＷＯ０２／４３４７８号に詳細に記載されている。
【０２２７】
また更に、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現する代替トランスジェニック動物系は、当該技術分野で利用可能であり、本発明の少なくともいくつかの実施形態による抗ＶＩＳＴＡ抗体を産生するために使用され得る。例えば、Ｘｅｎｏｍｏｕｓｅ（Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ）と称される代替トランスジェニック系を使用することができ、かかるマウスは、例えば、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉらに対する米国特許第５，９３９，５９８号、同第６，０７５，１８１号、同第６，１１４，５９８号、同第６，１５０，５８４号、および同第６，１６２，９６３号に記載されている。
【０２２８】
更に、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現する代替トランスクロムソミック動物系は、当該技術分野で利用可能であり、本発明の少なくともいくつかの実施形態による抗ＶＩＳＴＡ抗体を産生するために使用され得る。例えば、「ＴＣマウス」と称される、ヒト重鎖導入染色体およびヒト軽鎖導入染色体の両方を有するマウスを使用することができ、かかるマウスは、Ｔｏｍｉｚｕｋａ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９７：７２２−７２７に記載されている。更に、ヒト重鎖および軽鎖導入染色体を有するウシが当該技術分野で記載されており（Ｋｕｒｏｉｗａ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２０：８８９−８９４）、本発明の少なくともいくつかの実施形態による抗ＶＩＳＴＡ抗体を産生するために使用され得る。
【０２２９】
本発明の少なくともいくつかの実施形態によるヒトモノクローナル抗体はまた、ヒト免疫グロブリン遺伝子のライブラリをスクリーニングするためのファージディスプレイ法を使用して調製することもできる。ヒト抗体を単離するためのかかるファージディスプレイ法は、当該技術分野で確立されている。例えば、Ｌａｄｎｅｒに対する米国特許第５，２２３，４０９号、同第５，４０３，４８４号、および同第５，５７１，６９８号、Ｄｏｗｅｒらに対する米国特許第５，４２７，９０８号および同第５，５８０，７１７号、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙらに対する米国特許第５，９６９，１０８号および同第６，１７２，１９７号、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓらに対する米国特許第５，８８５，７９３号、同第６，５２１，４０４号、同第６，５４４，７３１号、同第６，５５５，３１３号、同第６，５８２，９１５号、および同第６，５９３，０８１号を参照のこと。
【０２３０】
本発明の少なくともいくつかの実施形態によるヒトモノクローナル抗体はまた、ヒト抗体応答が免疫化時に生成され得るようにヒト免疫細胞が再構成されているＳＣＩＤマウスを使用して調製することもできる。かかるマウスは、例えば、Ｗｉｌｓｏｎらに対する米国特許第５，４７６，９９６号および同第５，６９８，７６７号に記載されている。
ヒトＩｇマウスの免疫化
【０２３１】
いくつかの実施形態において、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ  ３６８（６４７４）：８５６−８５９、Ｆｉｓｈｗｉｌｄ，Ｄ．ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：８４５−８５１、ならびにＰＣＴ公開第ＷＯ９８／２４８８４号および同第ＷＯ０１／１４４２４号に記載されるように、ヒトＩｇマウスは、例えば、かかるマウスを、ＶＩＳＴＡ抗原および／もしくは組換えＶＩＳＴＡの精製または濃縮された調製物、またはＶＩＳＴＡ融合タンパク質で免疫化することによって、本発明によるヒト抗ＶＩＳＴＡ抗体を産生するために使用され得る。好ましくは、マウスは、最初の注入時に６〜１６週齢であろう。例えば、ＶＩＳＴＡ抗原の精製されたまたは組換え調製物（．５〜５００μｇの範囲の用量）を使用して、ヒトＩｇマウスを腹腔内免疫化することができる。
【０２３２】
一般的に、トランスジェニックマウスは、最初に完全フロイントアジュバント中の抗原で腹腔内（ＩＰ）免疫化され、続いて２週間毎に不完全フロイントアジュバント中の抗原でＩＰ免疫化する（最大合計６回）とき、応答する。しかしながら、フロイント以外のアジュバントも効果的であることも分かっている。加えて、アジュバントの不在下での全細胞は、高度に免疫原性であることが分かっている。免疫応答は、後眼窩出血によって得られる血漿試料での免疫化プロトコルの過程にわたって監視され得る。血漿は、ＥＬＩＳＡ（以下に記載される）によってスクリーニングされ、抗ＶＩＳＴＡヒト免疫グロブリンの十分な力価を有するマウスが、融合のために使用される。マウスは、屠殺および脾臓除去の３日前に静脈内ブーストされ得る。各免疫化のための２〜３回の融合が実施される必要があることが予想される。６〜２４匹のマウスは、典型的には、各抗原に対して免疫化される。通常、ＨＣｏ７およびＨＣｏｌ２株の両方が使用される。加えて、ＨＣｏ７およびＨＣｏｌ２導入遺伝子の両方が一緒に育種されて、２つの異なるヒト重鎖導入遺伝子（ＨＣｏ７／ＨＣｏ１２）を有する単一のマウスになり得る。代替的に、または加えて、ＫＭ  Ｍｏｕｓｅ（商標）株を使用することができる。例示的な実施形態において、これらのマウスは、ヒトＩｇＧ２抗体を選択的に産生するように操作される。
ヒトモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマの生成
【０２３３】
ある特定の実施形態では、本発明によるヒトモノクローナル抗ＶＩＳＴＡ抗体を産生するハイブリドーマは、免疫化マウスからの脾細胞および／またはリンパ節細胞を使用して生成され得、単離され、マウス骨髄腫細胞株などの適切な不死化細胞株に融合され得る。得られるハイブリドーマは、抗原特異的抗体の産生についてスクリーニングされ得る。例えば、免疫化マウスからの脾臓リンパ球の単一細胞懸濁液は、５０％ＰＥＧでＰ３Ｘ６３−Ａｇ８．６５３非分泌マウス骨髄腫細胞（ＡＴＣＣ、ＣＲＬ１５８０）の数の６分の１に融合され得る。細胞は、平底マイクロタイタープレートに約２Ｘ１０５で平板培養され、続いて、２０％胎児クローン血清、１８％「６５３」条件培地、５％オリゲン（ＩＧＥＮ）、４ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、０．０５５ｍＭ  ２−メルカプトエタノール、５０単位／ｍｌのペニシリン、５０ｍｇ／ｍｌのストレプトマイン、５０ｍｇ／ｍｌのゲンタマイシン、およびＩＸ  ＨＡＴ（Ｓｉｇｍａ；ＨＡＴが融合の２４時間後に添加される）を含有する選択培地中で２週間インキュベートされる。約２週間後、細胞を、ＨＡＴがＨＴに交換される培地中で培養することができる。次いで、個々のウェルは、ヒトモノクローナルＩｇＭおよびＩｇＧ抗体について、ＥＬＩＳＡによりスクリーニングされ得る。広範なハイブリドーマ成長が生じたら、通常１０〜１４日後、培地を観察することができる。ハイブリドーマを分泌する抗体は、再度平板培養され、再びスクリーニングされ、ヒトＩｇＧに依然として陽性である場合、モノクローナル抗体が限界希釈により少なくとも２回サブクローニングされ得る。次いで、安定したサブクローンをインビトロで培養して、特徴付けのために組織培養培地中で少量の抗体を生成することができる。
【０２３４】
ヒトモノクローナル抗体を精製するために、選択されたハイブリドーマを、モノクローナル抗体精製用の２リットルのスピナーフラスコ中で成長させることができる。プロテインＡ−セファロース（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）を用いた親和性クロマトグラフィーの前に、上清を濾過し、濃縮することができる。溶出されたＩｇＧは、純度を確実にするために、ゲル電気泳動および高速液体クロマトグラフィーによりチェックすることができる。緩衝溶液をＰＢＳに交換することができ、１．４３の吸光係数を使用して、ＯＤ２８０により濃度を決定することができる。モノクローナル抗体は、アリコートされ、−８０℃で保存され得る。
【０２３５】
ヒトモノクローナル抗体を産生するトランスフェクトーマの生成
ある特定の実施形態において、本発明による抗ＶＩＳＴＡ抗体は、例えば、当該技術分野で周知の組換え  ＤＮＡ技法および遺伝子トランスフェクション方法の組み合わせを使用して、宿主細胞トランスフェクトーマにおいて産生され得る（例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２）。例えば、抗体またはその抗体断片を発現するために、部分または完全長の軽鎖および重鎖をコードするＤＮＡは、標準的な分子生物学技法（例えば、目的の抗体を発現するハイブリドーマを使用したＰＣＲ増幅またはｃＤＮＡクローニング）により得ることができ、ＤＮＡは、遺伝子が転写および翻訳制御配列に作動可能に連結されるように発現ベクターに挿入することができる。この文脈において、「作動可能に連結される」という用語は、ベクター内の転写および翻訳制御配列が抗体遺伝子の転写および翻訳を制御するそれらの意図される機能を果たすように、抗体遺伝子がベクター内にライゲーションされることを意味することが意図される。発現ベクターおよび発現制御配列は、使用される発現宿主細胞と適合性であるように選択される。抗体の軽鎖遺伝子および抗体の重鎖遺伝子は、別個のベクターに挿入され得、またはより典型的には、両方の遺伝子が同じ発現ベクター内に挿入される。抗体遺伝子は、標準的な方法（例えば、抗体遺伝子断片およびベクター上の相補的制限部位のライゲーション、または制限部位が存在しない場合、平滑末端ライゲーション）により発現ベクター内に挿入される。本明細書に記載される抗体の軽鎖可変領域および重鎖可変領域は、ＶＨセグメントがベクター内のＣＨセグメントに作動可能に連結され、ＶＬセグメントがベクター内のＣＬセグメントに作動可能に連結されるように所望のアイソタイプの重鎖定常領域および軽鎖定常領域を既にコードする発現ベクター内にそれらを挿入することにより、任意の抗体アイソタイプの完全長抗体遺伝子を創出するために使用され得る。加えて、または代替的に、組換え発現ベクターは、宿主細胞から抗体鎖の分泌を容易にするシグナルペプチドをコードし得る。抗体鎖遺伝子は、シグナルペプチドが抗体鎖遺伝子のアミノ末端にフレーム内で連結されるようにベクター内にクローニングされ得る。シグナルペプチドは、免疫グロブリンシグナルペプチドまたは異種シグナルペプチド（すなわち、非免疫グロブリンタンパク質からのシグナルペプチド）であり得る。
【０２３６】
抗原への抗体結合の特徴付け
ある特定の実施形態において、本発明によるアゴニスティックな抗ＶＩＳＴＡ抗体の結合特異性は、ＥＬＩＳＡなどの既知の抗体結合アッセイ技法によって決定される。例示的なＥＬＩＳＡにおいて、マイクロタイタープレートを、ＰＢＳ中０．２５μｇ／ｍｌで、精製された抗原、本明細書において、ＶＩＳＴＡでコーティングし、次いで、ＰＢＳ中５％ウシ血清アルブミンで遮断した。抗体の希釈物（例えば、−免疫化マウスからの血漿の希釈物）を各ウェルに添加し、３７℃で１〜２時間インキュベートする。プレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎで洗浄し、次いで、３７℃で１時間アルカリホスファターゼにコンジュゲートされた二次試薬（例えば、ヒト抗体に関して、ヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ特異的ポリクローナル試薬）とともにインキュベートした。洗浄後、プレートをｐＮＰＰ基質（１ｍｇ／ｍｌ）とともに展開し、４０５〜６５０のＯＤで分析した。好ましくは、最高力価を獲得するマウスが融合のために使用される。
【０２３７】
上述のＥＬＩＳＡアッセイを使用して、ＶＩＳＴＡ免疫原に陽性反応性を示すハイブリドーマをスクリーニングすることもできる。ＶＩＳＴＡに高い結合力で結合するハイブリドーマをサブクローニングし、更に特徴付けする。親細胞の反応性を保持する（ＥＬＩＳＡにより）各ハイブリドーマからの１つのクローンが、−１４０℃で保存される５〜１０のバイアル細胞バンクを作製するため、および抗体精製のために選択され得る。
【０２３８】
抗ＶＩＳＴＡ抗体を精製するために、選択されたハイブリドーマを、モノクローナル抗体精製用の２リットルのスピナーフラスコ中で成長させることができる。プロテインＡ−セファロース（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）を用いた親和性クロマトグラフィーの前に、上清を濾過し、濃縮することができる。溶出されたＩｇＧは、純度を確実にするために、ゲル電気泳動および高速液体クロマトグラフィーによりチェックすることができる。緩衝溶液をＰＢＳに交換することができ、１．４３の吸光係数を使用して、ＯＤ２８０により濃度を決定することができる。モノクローナル抗体は、アリコートされ、−８０℃で保存され得る。
【０２３９】
選択された抗ＶＩＳＴＡモノクローナル抗体が独特のエピトープに結合するかを決定するために、市販の試薬（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌ．）を使用して、各抗体がビオチン化され得る。非標識モノクローナル抗体およびビオチン化モノクローナル抗体を使用する競合研究は、上述のように、ＶＩＳＴＡコーティングされたＥＬＩＳＡプレートを使用して実施することができる。ビオチン化ｍＡｂ結合は、ストレプ−アビジン−アルカリホスファターゼプローブで検出され得る。
【０２４０】
精製された抗体のアイソタイプを決定するために、アイソタイプＥＬＩＳＡは、特定のアイソタイプ、例えばＩｇＧ２の抗体に特異的な試薬を使用して実施され得る。例えば、ヒトモノクローナル抗体のアイソタイプを決定するために、マイクロタイタープレートのウェルは、４℃で一晩、＾ｇ／ｍｌの抗ヒト免疫グロブリンでコーティングされ得る。１％ＢＳＡで遮断した後、プレートを、周囲温度で１〜２時間、１ｍｕｇ／ｍｌ以下の試験モノクローナル抗体または精製されたアイソタイプ対照と反応させる。次いで、ウェルを、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＭ特異的アルカリホスファターゼコンジュゲートプローブのいずれかと反応させることができる。上述のようにプレートを展開し、分析する。
【０２４１】
抗ＶＩＳＴＡヒトＩｇＧは、それぞれ、ウェスタンブロットにより、ＶＩＳＴＡ抗原との反応性について更に試験され得る。簡潔に、ＶＩＳＴＡ抗原を調製し、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動に供する。電気泳動後、分離した抗原をニトロセルロース膜に移し、１０％のウシ胎仔血清で遮断し、試験されるモノクローナル抗体でプローブする。ヒトＩｇＧ結合は、抗ヒトＩｇＧアルカリホスファターゼを使用して検出され、ＢＣＩＰ／ＮＢＴ基質錠剤（ＳｉｇｍａＣｈｅｍ．Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．）とともに展開され得る。
【０２４２】
別の態様において、本発明は、ペイロード薬物に連結された抗体（または単一鎖可変断片（ｓｃＦｖ）などの抗体断片（多くの場合細胞傷害）からなる抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を特徴とする。抗体は、ＡＤＣを標的癌細胞に結合させる。多くの場合、ＡＤＣは、次いで、細胞によって内在化され、薬物は細胞内に放出される。標的化のため、副作用はより低く、より広い治療域を提供する。親水性リンカー（例えばＰＥＧ４Ｍａｌ）は、薬物がＭＤＲ（多剤耐性）トランスポーターにより耐性癌細胞から排出されることを防止するのを助ける。
【０２４３】
別の態様において、本発明は、細胞毒、薬物（例えば免疫抑制剤）、または放射性毒素などの治療薬にコンジュゲートされる、抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその断片を含むイムノコンジュゲートを特徴とする。かかる複合体は、本明細書において、「イムノコンジュゲート」と称される。１つ以上の細胞毒を含むイムノコンジュゲートは、「免疫毒素」と称される。細胞毒または細胞傷害性薬は、細胞に有害である（例えば死滅させる）任意の薬剤を含む。例としては、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テニポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミスラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびピューロマイシン、ならびにそれらの類似体または相同体が挙げられる。治療薬には、例えば、代謝拮抗薬（例えば、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオテパクロランブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、およびロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、およびシス−ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（以前のダウノマイシン）およびドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（以前のアクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミスラマイシン、およびアントラマイシン（ＡＭＣ））、ならびに抗有糸分裂剤（例えば、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）も含まれる。
【０２４４】
本発明の少なくともいくつかの実施形態による抗体にコンジュゲートされ得る治療細胞毒の他の例としては、デュオカルマイシン、カリケアマイシン、マイタンシン、およびアウリスタチン、ならびにそれらの誘導体が挙げられる。カリケアマイシン抗体コンジュゲートの一例は、市販されている（Ｍｙｌｏｔａｒｇ（商標）Ｗｙｅｔｈ）である。
【０２４５】
細胞毒は、当該技術分野で利用可能なリンカー技術を使用して、本発明の少なくともいくつかの実施形態による抗体にコンジュゲートされ得る。細胞毒を抗体にコンジュゲートするために使用されたリンカーの種類の例としては、ヒドラゾン、チオエーテル、エステル、ジスルフィド、およびペプチド含有リンカーが挙げられるが、これらに限定されない。例えば、リソソーム区画内の低ｐＨによる切断を受けやすいか、またはカテプシン（例えば、カテプシンＢ、Ｃ、Ｄ）などの腫瘍組織において優先的に発現されるプロテアーゼなど、プロテアーゼによる切断を受けやすいリンカーが選択され得る。細胞毒の種類、治療薬を抗体にコンジュゲートするためのリンカーおよび方法の更なる考察に関しては、Ｓａｉｔｏ，Ｇ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５５：１９９−２１５、Ｔｒａｉｌ，Ｐ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５２：３２８−３３７、Ｐａｙｎｅ，Ｇ．（２００３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ３：２０７−２１２、Ａｌｌｅｎ，Ｔ．Ｍ．（２００２）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ  ２：７５０−７６３、Ｐａｓｔａｎ，Ｉ．ａｎｄ  Ｋｒｅｉｔｍａｎ，Ｒ．Ｊ．（２００２）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ  ３：１０８９−１０９１、Ｓｅｎｔｅｒ，Ｐ．Ｄ．ａｎｄ  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｃ．Ｊ．（２００１）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５３：２４７−２６４も参照のこと。
【０２４６】
本発明の抗体は、放射性イムノコンジュゲートとも称される細胞傷害性放射性医薬品を生成するために、放射性同位体にもコンジュゲートされ得る。診断用途または治療用途に使用するための抗体にコンジュゲートされ得る放射性同位体の例としては、ヨウ素１３１、インジウム１１１、イットリウム９０、およびルテチウム１７７が挙げられるが、これらに限定されない。放射性イムノコンジュゲートを調製するための方法は、当該技術分野において確立されている。Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標）（ＢｉｏｇｅｎｌＤＥＣ）およびＢｅｘｘａｒ（登録商標）（Ｃｏｒｉｘａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）を含む放射性イムノコンジュゲートが市販されており、同様の方法が、本発明の少なくともいくつかの実施形態による抗体を使用して、放射性イムノコンジュゲートを調製するために使用され得る。
【０２４７】
本発明の少なくともいくつかの実施形態によるアゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体およびコンジュゲートを使用して、所与の生物学的応答を修飾することができ、薬物部分は、古典的な化学治療薬に限定されるものとして解釈されるべきではない。例えば、薬物部分は、所望の生物学的活性を有するタンパク質またはポリペプチドであってもよい。かかるタンパク質には、例えば、アブリン、リシンＡ、ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素、もしくはジフテリア毒素などの酵素的に活性な毒素もしくはその活性断片；腫瘍壊死因子もしくはインターフェロン−γなどのタンパク質；または例えば、リンホカイン、インターロイキン−１（「ＩＬ−１」）、インターロイキン−２（「ＩＬ−２」）、インターロイキン−６（「ＩＬ−６」）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（「ＧＭ−ＣＳＦ」）、顆粒球コロニー刺激因子（「Ｇ−ＣＳＦ」）、もしくは他の成長因子などの生物学的応答修飾物質が含まれ得る。
【０２４８】
かかる治療部分を抗体にコンジュゲートするための技法は周知であり、例として、Ａｒｎｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ”，ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｒｅｉｓｆｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．２４３−５６（Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．１９８５）、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，“Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ”，ｉｎ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（２ｎｄ  Ｅｄ．），Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．６２３−５３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．１９８７）、Ｔｈｏｒｐｅ，“Ｃａｒｒｉｅｒｓ  Ｏｆ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ”，ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｐｉｎｃｈｅｒａ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．４７５−５０６（１９８５）、“Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，Ａｎｄ  Ｆｕｔｕｒｅ  Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｕｓｅ  Ｏｆ  Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ”，ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂａｌｄｗｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．３０３−１６（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  １９８５）、およびＴｈｏｒｐｅ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｔｈｅ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  Ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｔｏｘｉｎ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ”，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．，６２：１１９−５８（１９８２）を参照のこと。
【０２４９】
二重特異性分子
本発明の少なくともいくつかの実施形態によると、多重特異性抗ＶＩＳＴＡアゴニスト抗体も包含される。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位に結合特異性を有するモノクローナル抗体である。別の態様において、本発明は、本発明の少なくともいくつかの実施形態による抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその断片を含む二重特異性分子を特徴とする。本発明の少なくともいくつかの実施形態による抗体、またはその抗原結合部分は、別の機能分子、例えば、別のペプチドまたはタンパク質（例えば、受容体の別の抗体またはリガンド）に誘導体化または連結されて、少なくとも２つの異なる結合部位または標的分子に結合する二重特異性分子を生成することができる。本発明の少なくともいくつかの実施形態による抗体は、実際に、２つ以上の他の機能分子に誘導体化または連結されて、３つ以上の異なる結合部位および／または標的分子に結合する多重特異性分子を生成することができ、かかる多重特異性分子は、本明細書で使用される場合、「二重特異性分子」という用語によって包含されることも意図される。本発明の少なくともいくつかの実施形態による二重特異性分子を創出するために、抗体は、二重特異性分子がもたらされるように、別の抗体、抗体断片、ペプチド、もしくは結合模倣物などの１つ以上の他の結合分子に機能的に連結され得る（例えば、化学カップリング、遺伝子融合、非共有結合、ないしは別の方法により）。ある特定の実施形態において、二重特異性抗体の結合特異性のうちの１つは、ＶＩＳＴＡに対してであり、もう一方は任意の他の抗原に対してである。ある特定の実施形態において、二重特異性抗体は、ＶＩＳＴＡの２つの異なるエピトープに結合し得る。二重特異性抗体をまた使用して、細胞傷害性薬を、ＶＩＳＴＡを発現する細胞に限局化させてもよい。二重特異性抗体は、完全長抗体または抗体断片として調製することができる。
【０２５０】
本発明の少なくともいくつかの実施形態による二重特異性抗体は、異なる構造のものである２つの標的に同時に結合し得る抗体である。本発明の少なくともいくつかの実施形態による二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）および二重特異性抗体断片（ｂｓＦａｂ）は、Ｂ細胞抗原またはエピトープに特異的に結合する少なくとも１つのアームと、標的可能なコンジュゲートに特異的に結合する少なくとも１つの他のアームとを有する。
【０２５１】
少なくともいくつかの実施形態によると、本発明は、同じまたは異なる特異性を有する２つ以上の異なる単一鎖抗体または抗体断片セグメントが連結される組換え産生された抗原結合分子である融合抗体タンパク質も包含する。様々な二重特異性融合抗体タンパク質が分子操作を使用して産生され得る。一形態において、二重特異性融合抗体タンパク質は、例えば、１つの抗原に対して単一の結合部位を有するセント（ｓｅｎｔ）、および第２の抗原に対して単一の結合部位を有するＦａｂ断片からなる一価である。別の形態において、二重特異性融合抗体タンパク質は、例えば、１つの抗原に対して２つの結合部位を有するＩｇＧ、および第２の抗原に対して２つの結合部位を有する２つのｓｃＦｖからなる二価である。
【０２５２】
本発明は、「オクトパス抗体」（例えば、ＵＳ２００６／００２５５７６Ａ１を参照のこと）、およびＶＩＳＴＡならびに別の異なる抗原に結合する抗原結合部位を含む「二重作用ＦＡｂ」または「ＤＡＦ」抗体（例えば、ＵＳ２００８／００６９８２０を参照のこと）を含む、３つ以上の機能性抗原結合部位を有する操作された抗体を更に包含する。したがって、本発明は、ＶＩＳＴＡに対して少なくとも１つの第１の結合特異性、および第２の標的エピトープに対して第２の結合特異性を含む二重特異性分子を含む。本発明の少なくともいくつかの実施形態によると、第２の標的エピトープは、Ｆｃ受容体、例えば、ヒトＦｃｙＲＩ（ＣＤ６４）またはヒトＦｃαＲ受容体（ＣＤ８９）である。したがって、本発明は、両方を、それぞれ、ＦｃｙＲ、ＦｃαＲ、またはＦｃｓＲ発現エフェクター細胞（例えば、単球、マクロファージ、または多形核細胞（ＰＭＮ））、およびＶＩＳＴＡを発現する標的細胞に結合することが可能な二重特異性分子を含む。これらの二重特異性分子は、ＶＩＳＴＡ発現細胞をエフェクター細胞に標的化し、かつＶＩＳＴＡ発現細胞の食作用、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、サイトカイン放出、またはスーパーオキシドアニオンの生成などのＦｃ受容体媒介エフェクター細胞活性を引き起こす。
【０２５３】
二重特異性分子が多重特異性である本発明の少なくともいくつかの実施形態によると、分子は、抗Ｆｃ結合特異性に加えて、第３の結合特異性を更に含み得る。一実施形態において、第３の結合特異性は、抗増強因子（ＥＦ）部分、例えば、細胞傷害活性に関与する表面タンパク質に結合し、それにより、標的細胞に対する免疫応答を増加させる分子である。
【０２５４】
「抗増強因子部分」は、所与の分子、例えば、抗原または受容体に結合し、それにより、Ｆｃ受容体または標的細胞抗原に対する結合決定基の効果の増強をもたらす、抗体、機能性抗体断片、またはリガンドであり得る。「抗増強因子部分」は、Ｆｃ受容体または標的細胞抗原に結合することができる。代替的に、抗増強因子部分は、第１および第２の結合特異性が結合する実体とは異なる実体に結合することができる。例えば、抗増強因子部分は、細胞傷害性Ｔ細胞（例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＩＣＡＭ−１、または標的細胞に対して増加した免疫応答をもたらす他の免疫細胞を介して）に結合することができる。
【０２５５】
本発明の少なくともいくつかの実施形態によると、二重特異性分子は、結合特異性として、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、または単一鎖Ｆｖを含む、少なくとも１つの抗体、またはその抗体断片を包含する。抗体はまた、Ｌａｄｎｅｒらの米港特許第４，９４６，７７８号（その内容は、参照により明示的に組み込まれる）に記載されるように、軽鎖もしくは重鎖二量体、またはその任意の最小断片（Ｆｖもしくは単一鎖構築物など）であってもよい。
【０２５６】
一実施形態において、Ｆｃγ受容体に対する結合特異性は、モノクローナル抗体によって提供され、その結合はヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）によって遮断されない。本明細書で使用される場合、「ＩｇＧ受容体」という用語は、染色体１に位置する８つのγ鎖遺伝子のうちのいずれかを指す。これらの遺伝子は、３つのＦｃγ受容体クラス：ＦｃｙＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、およびＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）に分類される合計１２の膜貫通または可溶性受容体アイソフォームをコードする。１つの好ましい実施形態において、Ｆｃγ受容体はヒト高親和性ＦｃｙＲＩである。ヒトＦｃｙＲＩは、単量体ＩｇＧに高親和性を示す、７２ｋＤａ分子である。ある特定の好ましい抗Ｆｃγモノクローナル抗体の産生および特徴付けは、ＦａｎｇｅｒらのＰＣＴ公開第ＷＯ８８／０００５２号、および米国特許第４，９５４，６１７号により記載されており、それらの教示は、参照により本明細書に完全に組み込まれる。これらの抗体は、受容体のＦｅｙ結合部位とは異なる部位でＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、またはＦｃγＲＩＩＩのエピトープに結合し、したがって、それらの結合は、ＩｇＧの生理学的レベルによって実質的に遮断されない。既知の抗ＦｃｙＲＩ抗体には、ｍＡｂ２２、ｍＡｂ３２、ｍＡｂ４４、ｍＡｂ６２、およびｍＡｂ１９７が含まれる。ｍＡｂ３２を産生するハイブリドーマは、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、ＡＴＣＣ受託番号ＨＢ９４６９から入手可能である。他の実施形態において、抗Ｆｃγ受容体抗体は、モノクローナル抗体２２（Ｈ２２）のヒト化形態である。Ｈ２２抗体の産生および特徴付けは、Ｇｒａｚｉａｎｏ，Ｒ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５（１０）：４９９６−５００２およびＰＣＴ公開第ＷＯ９４／１０３３２号に記載されている。Ｈ２２抗体産生細胞株は、ＨＡ０２２ＣＬＩの名称のもとＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託されており、受託番号ＣＲＬ  １１１７７を有する。
【０２５７】
また他の実施形態において、Ｆｃ受容体の結合特異性は、ヒトＩｇＡ受容体、例えば、Ｆｃ−α受容体（ＦｃαＲＩ（ＣＤ８９））に結合する抗体によって提供され、その結合は、好ましくは、ヒト免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）によって遮断されない。「ＩｇＡ受容体」という用語は、染色体１９に位置するａ−遺伝子（ＦｃαＲＩ）の遺伝子産物を含むことが意図される。この遺伝子は、５５〜１０ｋＤａのいくつかの代替的にスプライスされた貫通膜アイソフォームをコードすることが既知である。ＦｃαＲＩ（ＣＤ８９）は、単球／マクロファージ、好酸球、および好中球性顆粒球上で構成的に発現されるが、非エフェクター細胞集団上では発現されない。Ｆｃ  αＲＩは、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２の両方に中程度の親和性（約５×１０−７Ｍ−１）を有し、これは、Ｇ−ＣＳＦまたはＧＭ−ＣＳＦなどのサイトカインへの曝露により増加する（Ｍｏｒｔｏｎ，Ｈ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １６：４２３−４４０）。ＩｇＡリガンド結合ドメインの外でＦｃαＲＩに結合するＡ３、Ａ５９、Ａ６２、およびＡ７７として特定される４つのＦｃαＲＩ特異的モノクローナル抗体が記載されている（Ｍｏｎｔｅｉｒｏ，Ｒ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１７６４）。
【０２５８】
ヒトモノクローナル抗体が好ましいが、本発明の少なくともいくつかの実施形態による二重特異性分子に用いられ得る他の抗体は、マウス、キメラ、およびヒト化モノクローナル抗体である。本発明の二重特異性分子は、当該技術分野で既知の方法を用いて、成分結合特異性、例えば、抗ＦｃＲおよび抗ＶＩＳＴＡ結合特異性をコンジュゲートすることによって調製することができる。例えば、各二重特異性分子の結合特異性は、別個に生成され得、次いで互いにコンジュゲートされ得る。結合特異性がタンパク質またはペプチドである場合、様々なカップリング剤または架橋剤を共有結合コンジュゲーションに使用することができる。架橋剤の例としては、プロテインＡ、カルボジイミド、Ｎ−スクシンイミジル−Ｓ−アセチル−チオアセテート（ＳＡＴＡ）、５，５’−ジチオビス（２−ニトロ安息香酸）（ＤＴＮＢ）、ｏ−フェニレンジマレイミド（ｏＰＤＭ）、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルド−ジチオプロピオネート（ＳＰＤＰ）、およびスルホスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（スルホ−ＳＭＣＣ）が挙げられる（例えば、Ｋａｒｐｏｖｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９８４）Ｊ．Ｅｘｐ．“Ｍｅｄ．“１６０：１６８６、Ｌｉｕ，Ｍ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：８６４８を参照のこと）。他の方法としては、Ｐａｕｌｕｓ（１９８５）Ｂｅｈｒｉｎｇ  Ｉｎｓ．Ｍｉｔｔ．Ｎｏ．７８，１１８−１３２、Ｂｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１−８３）、およびＧｌｅｎｎｉｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：２３６７−２３７５）に記載されるものが挙げられる。好ましい結合剤は、ＳＡＴＡおよびスルホ−ＳＭＣＣであり、両方とも、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌ．）から入手可能である。結合部分が抗体である場合、それらは、２つの重鎖のＣ末端ヒンジ領域のスルフヒドリル結合を介してコンジュゲートされ得る。特に好ましい実施形態において、ヒンジ領域は、奇数のスルフヒドリル残基、好ましくはコンジュゲート前に１つを含有するように修飾される。
【０２５９】
代替的に、両方の結合特異性は、同じベクターにコードされ、同じ宿主細胞において発現され、組み立てられ得る。この方法は、二重特異性分子がｍＡｂＸｍＡｂ、ｍＡｂＸＦａｂ、ＦａｂＸＦ（ａｂ’）２、またはリガンドＸＦａｂ融合タンパク質である場合に特に有用である。本発明の少なくともいくつかの実施形態による二重特異性分子は、１つの単一鎖抗体および結合決定基を含む単一鎖分子、または２つの結合決定基を含む単一鎖二重特異性分子であり得る。二重特異性分子は、少なくとも２つの単一鎖分子を含み得る。二重特異性分子の調製方法は、例えば、米国特許第５，２６０，２０３号、米国特許第５，４５５，０３０号、米国特許第４，８８１，１７５号、米国特許第５，１３２，４０５号、米国特許第５，０９１，５１３号、米国特許第５，４７６，７８６号、米国特許第５，０１３，６５３号、米国特許第５，２５８，４９８号、および米国特許第５，４８２，８５８号に記載されている。
【０２６０】
多重特異性抗体を作製するための技法としては、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の組み換え共発現（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ  ３０５：５３７（１９８３））、ＷＯ９３／０８８２９、およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：３６５５（１９９１）を参照のこと）、および「ノブインホール」操作（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号を参照のこと）が挙げられるが、これらに限定されない。多重特異性抗体は、抗体Ｆｃ−ヘテロ二量体分子を作製するために静電ステアリング効果を操作すること（ＷＯ２００９／０８９００４Ａ１）；制御されたＦａｂアーム交換（Ｌａｂｒｉｊｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １１０（１３）：５１４５−５０（２０１３）を参照のこと）；２つ以上の抗体または断片を架橋すること（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号およびＢｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照のこと）；ロイシンジッパーを使用して、二重特異性抗体を産生すること（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）を参照のこと）；二重特異性抗体断片を作製するために「ダイアボディ」技術を使用すること（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照のこと）；および単一鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体を使用すること（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４））、ならびに例えば、Ｔｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）に記載される三重特異性抗体を調製することによっても作製することができる。
【０２６１】
それらの特定の標的への二重特異性分子の結合は、例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、ＦＡＣＳ分析、バイオアッセイ（例えば、成長阻害）、またはウェスタンブロットアッセイによって確認することができる。これらのアッセイの各々は、一般的に、目的の複合体に特異的な標識された試薬（例えば、抗体）を用いることによって、特に目的のタンパク質−抗体複合体の存在を検出する。例えば、ＦｃＲ−抗体複合体は、例えば、抗体−ＦｃＲ複合体を認識し、それに特異的に結合する酵素連結抗体または抗体断片を使用して検出され得る。代替的に、複合体は、様々な他のイムノアッセイのうちのいずれかを使用して検出することができる。例えば、抗体は、放射性標識され、放射免疫測定法（ＲＩＡ）で使用され得る（例えば、Ｗｅｉｎｔｒａｕｂ，Ｂ．，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ，Ｓｅｖｅｎｔｈ  Ｔｒａｉｎｉｎｇ  Ｃｏｕｒｓｅ  ｏｎ  Ｒａｄｉｏｌｉｇａｎｄ  Ａｓｓａｙ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｔｈｅ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｍａｒｃｈ，１９８６を参照のこと。これは参照により本明細書に組み込まれる）。放射性同位体は、γカウンターまたはシンチレーションカウンターの使用などの手段により、またはオートラジオグラフィーにより検出することができる。
【０２６２】
アンタゴニスト抗体および含有する医薬組成物の使用
癌免疫療法
腫瘍成長および発達に重要な分子経路を阻害し、かつ／または腫瘍細胞を枯渇することを目的とする腫瘍標的療法とは異なり、癌免疫療法は、癌細胞を排除するために患者自身の免疫系を刺激し、長命の腫瘍の破壊を提供することを目的とする。癌免疫療法において、様々なアプローチが使用されてもよく、それらの中では、腫瘍特異的Ｔ細胞応答を誘導する治療用癌ワクチン、および免疫抑制経路を除去する免疫刺激抗体（すなわち、阻害性受容体＝免疫チェックポイントのアンタゴニスト）がある。
【０２６３】
標的療法または従来の抗癌療法による臨床応答は、癌細胞が抵抗を発達させるため、一過性の傾向があり、腫瘍再発が起こる。しかしながら、過去数年における癌免疫療法の臨床使用は、この種類の療法が永続性のある臨床応答を有し得ることを示し、長期生存に劇的な影響を示す。しかしながら、応答は長期であるが、少数の患者のみが応答する（多数の患者が応答するが応答は一過性である、従来の療法または標的療法とは対照的に）。
【０２６４】
腫瘍が臨床的に検出されるまでに、腫瘍は、免疫耐性特性および免疫抑制特性を取得し、様々な機序および様々な免疫細胞を通して免疫抑制性腫瘍微小環境を作り出すことによって免疫防御系を既に逃れている。したがって、癌免疫療法において、療法の組み合わせが臨床有効性に必要とされることがますます明らかとなっている。
【０２６５】
組み合わせアプローチは、必要であり、また免疫療法から利益を得る患者の数を増加させて応答性の癌の数および種類を拡大し、単独療法として免疫チェックポイント遮断の有効性を現在示している初期適応症を十分に超えるチェックポイント剤の潜在的な癌適応症を拡大することが予想される。免疫調節アプローチの組み合わせは、転帰を最大にし、単一アプローチに対する大半の腫瘍の耐性機序を克服することを意味する。したがって、従来非免疫原性として考えられる腫瘍は、免疫原性となる可能性があり、免疫療法に応答し得るが、患者の抗腫瘍免疫応答を増加させるように設計された前免疫原性療法の共投与。潜在的なプライミング剤は以下に詳述される。
【０２６６】
組み合わせ療法の劇的に増加した有効性の根本的な科学的根拠は、経路が遮断されるときに「解放される」既存の強い抗腫瘍免疫応答があるときにのみ、単独療法としての免疫チェックポイント遮断が腫瘍縮小を誘導することを主張している。本発明の少なくともいくつかの実施形態によると、ＶＩＳＴＡ特異的抗体、抗体断片、コンジュゲート、およびそれらを含む組成物は、組み合わせ療法において、癌免疫療法における全ての種類の癌の治療のために使用される。
【０２６７】
本明細書で使用される場合、「治療」という用語は、治療的処置および予防的または防止措置の両方を指し、この実施例において、癌の治療炎症性副作用の治療に関する。かしながら、以下に記載されるように、抗体および医薬組成物の使用は、感染性疾患、敗血症、および／もしくは自己免疫状態の治療のため、ならびに／または遺伝子療法に続く望ましくない免疫活性化の阻害のためにも提供される。治療を必要とするものには、癌を既に有するもの、ならびに癌が予防されるべきものが含まれる。したがって、本明細書で治療される哺乳動物は、癌を有すると診断されたか、または癌の素因があるか、もしくは癌になりやすい可能性がある。本明細書で使用される場合、「治療すること」という用語は、上述の癌性疾患、障害、または状態の識別可能な症状の予防、その発症の遅延、治癒、反転、減衰、軽減、最小化、抑制、その有害な作用の停止、または安定化を指す。上述の癌を管理することも含まれる。「管理する」とは、疾患の重症度の減少、疾患のエピソードの頻度の減少、かかるエピソードの持続期間の減少、かかるエピソードの重症度の減少、癌細胞の成長もしくは増殖の緩徐／減少、少なくとも１つの症状の進行の緩徐、少なくとも１つの測定可能な身体的パラメータの回復を意味する。例えば、免疫刺激抗ＶＩＳＴＡ抗体は、標的細胞、例えば癌、感染細胞、または病原体細胞に対するＴ細胞またはＮＫまたはサイトカインの免疫を促進し、それにより、疾患状態に関与する細胞を枯渇させることによって癌または感染疾患を治療するはずである。アゴニスティックな抗ＶＩＳＴＡ抗体は、Ｔ細胞もしくはＮＫ活性、および／またはまたは自己免疫、炎症、もしくはアレルギー状態などのある免疫疾患の疾患病理に関与する炎症誘発性サイトカインの分泌を減少させ、それにより、かかる状態に関連し得る疾患病理および組織破壊（例えば、関節リウマチ状態に関連付けられる関節破壊）を治療または回復させるはずである。
【０２６８】
治療の目的のための「哺乳動物」は、ヒト、家畜動物、および農場動物、ならびにイヌ、ウマ、ネコ、ウシなどの、動物園の動物、スポーツ用動物、またはペット動物を含む、哺乳動物に分類される任意の動物を指す。好ましくは、哺乳動物はヒトである。好ましくは、哺乳動物は、上述の疾患、障害、または状態のうちの１つと診断されるヒトであるか、または代替的に少なくとも１つの種類の癌の素因があるものである。
【０２６９】
「治療有効量」は、哺乳動物において疾患または障害を治療するのに有効である、本発明による薬剤の量を指す。本発明の治療薬は、対象単独で、またはそれらが薬学的に許容される担体と混合される医薬組成物の一部として提供され得る。
【０２７０】
本発明の少なくともいくつかの実施形態による、本明細書に記載される抗ＶＩＳＴＡ抗体、その断片、コンジュゲート、および／またはそれを含む医薬組成物はまた、併用療法、すなわち、他の増強剤および／または他の療法と組み合わせて投与され得る。少なくともいくつかの実施形態によると、抗ＶＩＳＴＡ抗体は、癌治療の標準療法の分野において既知（例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖ／ｃａｎｃｅｒｔｏｐｉｃｓに見出すことができる）の治療のうちのいずれかと組み合わせて使用され得る。
【０２７１】
例えば、併用療法は、本明細書に記載される少なくとも１つの他の治療薬もしくは免疫調節剤、他の化合物もしくは免疫療法剤、または免疫刺激戦略と同じ組み合わせた、抗ＶＩＳＴＡ抗体、その断片、コンジュゲート、および／または医薬組成物を含み得る。
【０２７２】
アンタゴニスティックなＶＩＳＴＡ抗体は、イピリムマブ、トレメリムマブなどの抗ＣＴＬＡ４  ｍＡｂ；ニボルマブＢＭＳ−９３６５５８／ＭＤＸ−１１０６／ＯＮＯ−４５３８、ＡＭＰ２２４、ＣＴ−０１１、ＭＫ−３４７５などの抗ＰＤ−１、およびＢＭＳ−９３６５５９／ＭＤＸ−１１０５、ＭＥＤＩ４７３６、ＲＧ−７４４６／ＭＰＤＬ３２８０Ａなどの抗ＰＤＬ−１アンタゴニスト；ＩＭＰ−３２１）などの抗ＬＡＧ−３、抗ＴＩＭ−３、抗ＢＴＬＡ、抗Ｂ７−Ｈ４、抗Ｂ７−Ｈ３；ＣＰ−８７０，８９３、ルカツムマブ（ｌｕｃａｔｕｍｕｍａｂ）、ダセツズマブなどの抗ＣＤ４０  ｍＡｂを含む免疫刺激タンパク質を標的とするアゴニスティックな抗体；ＢＭＳ−６６３５１３、ウレルマブ、ＰＦ−０５０８２５６６などの抗ＣＤ１３７ｍＡｂ；抗ＯＸ４０などの抗ＯＸ４０ｍＡｂ；ＴＲＸ５１８などの抗ＧＩＴＲ  ｍＡｂ；ＣＤＸ−１１２７などの抗ＣＤ２７ｍＡｂ；ならびに抗ＩＣＯＳ  ｍＡｂを含む、免疫チェックポイントを標的とするアゴニスティックな抗体と組み合わせて使用され得る。
【０２７３】
サイトカインは、免疫系の細胞が、標的抗原に対して協調的で頑健であるが、自己制限された応答を生成するために互いに通信することを可能にする分子メッセンジャーである。サイトカインに基づく療法は、癌を拒否するために患者自身の免疫系を刺激する直接的な試みを具体化する。癌を根絶するために免疫系を利用する過去２０年間にわたる関心の高まりは、癌治療を開発するために、サイトカインを特徴付け、それらの巨大なシグナル伝達ネットワークを利用する多大な努力を伴った。サイトカインは、腫瘍部位における免疫エフェクター細胞および間質細胞を直接刺激し、細胞傷害性エフェクター細胞による腫瘍細胞認識を強化する。多数の動物腫瘍モデル研究は、サイトカインが広い抗腫瘍活性を有し、これが、癌療法へのいくつかのサイトカインに基づくアプローチにつながっていることを示した（Ｌｅｅ  ａｎｄ  Ｍａｒｇｏｌｉｎ  ２０１１，Ｃａｎｃｅｒｓ  ３（４）：３８５６−９３）。多くののサイトカインは、癌免疫療法のための抗腫瘍免疫応答を増強する薬剤として、前臨床中または臨床開発中であり、とりわけ、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、およびＩＬ−２１、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮα（インターフェロンα）、ＩＦＮβ、ならびにＩＦＮγを含む。
【０２７４】
アンタゴニスト抗ＶＩＳＴＡ抗体および含有する医薬組成物はまた、他の化合物または免疫療法と併せて投与され得る。例えば、併用療法は、腫瘍ワクチン、養子Ｔ細胞療法、Ｔｒｅｇ枯渇、抗体（例えば、ベバシズマブ、アービタックス）、ペプチド、ペプチボディ、小分子、細胞傷害性剤および細胞増殖抑制剤などの化学療法剤（例えば、パクリタキセル、シスプラチン、ビノレルビン、ドセタキセル、ゲムシタビン、テモゾロミド、イリノテカン、５ＦＵ、カルボプラチン）、インターフェロンおよびインターロイキンなどの免疫修飾因子、免疫刺激性抗体、成長ホルモンまたは他のサイトカイン、葉酸、ビタミン、ミネラル、アロマターゼ阻害剤、ＲＮＡｉ、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、プロテアソーム阻害剤などを含むがこれらに限定されない、少なくとも１つの他の治療調節剤もしくは免疫調節剤、または免疫刺激戦略と組み合わせた本発明の化合物を含み得る。
【０２７５】
少なくともいくつかの実施形態によると、免疫細胞、好ましくはＴ細胞は、免疫応答を調節するために、対象治療薬とインビボまたはエクスビボで接触させてもよい。治療薬と接触させられるＴ細胞は、α／βおよびγ／δＴ細胞受容体を含む、Ｔ細胞受容体を発現する任意の細胞であり得る。Ｔ細胞には、ＣＤ４およびＣＤＳも発現するＴ細胞サブセットを含む、ＣＤ３を発現する全ての細胞が含まれる。Ｔ細胞には、ナイーブ細胞およびメモリー細胞、ならびにＣＴＬなどのエフェクター細胞が含まれる。Ｔ細胞はまた、Ｔｈ１、Ｔｅｌ、Ｔｈ２、Ｔｈ２、Ｔｈ３、Ｔｈｌ７、Ｔｈ２２、Ｔｒｅｇ、およびＴｒｌ細胞などの細胞も含む。Ｔ細胞はまた、ＮＫＴ細胞およびＴ細胞系統の類似の独特のクラスも含む。
【０２７６】
自己免疫疾患の治療のためのアゴニスティックな抗ＶＩＳＴＡ抗体および含有する医薬組成物の使用
少なくともいくつかの実施形態によると、ＶＩＳＴＡ刺激治療薬として機能する、本明細書に記載される抗ＶＩＳＴＡ抗体、その断片、コンジュゲート、またはそれらを含有する医薬は、免疫系関連疾患の治療に使用され得る。
【０２７７】
任意で、免疫系関連状態は、免疫関連状態、本明細書に列挙される自己免疫疾患、移植片拒絶、および移植片対宿主病、ならびに／または本明細書に列挙されるＶＩＳＴＡ免疫関連疾患により媒介される免疫刺激を遮断もしくは促進するため、ならびに／または免疫療法のため（免疫刺激を促進または阻害）を含む。
【０２７８】
任意で、免疫状態は、自己免疫疾患、移植片拒絶、炎症性疾患、アレルギー状態、または移植片対宿主病から選択される。任意で、治療は、免疫関連状態の治療に有用な別の部分と組み合わされる。
【０２７９】
したがって、本発明の少なくともいくつかの実施形態による薬剤を使用する多発性硬化症の治療は、例えば、任意で本明細書に記載されるように、多発性硬化症を治療するための任意の既知の治療薬または方法と組み合わせることができる。
【０２８０】
したがって、対象アゴニスト抗体を使用する関節リウマチまたは他の関節炎状態の治療は、例えば、任意で本明細書に記載されるように、関節リウマチを治療するための任意の既知の治療薬または方法と組み合わせることができる。
【０２８１】
したがって、対象アゴニスト抗体を使用するＩＢＤの治療は、例えば、任意で本明細書に記載されるように、ＩＢＤを治療するための任意の既知の治療薬または方法と組み合わせることができる。
【０２８２】
したがって、対象アゴニスト抗体を使用する乾癬の治療は、例えば、任意で本明細書に記載されるように、乾癬を治療するための任意の既知の治療薬または方法と組み合わせることができる。
【０２８３】
したがって、対象アゴニスト抗体を使用する１型糖尿病の治療は、例えば、任意で本明細書に記載されるように、１型糖尿病を治療するための任意の既知の治療薬または方法と組み合わせることができる。
【０２８４】
したがって、対象アゴニスト抗体を使用するぶどう膜炎の治療は、例えば、任意で本明細書に記載されるように、ぶどう膜炎を治療するための任意の既知の治療薬または方法と組み合わせることができる。
【０２８５】
したがって、対象アゴニスト抗体を使用する乾癬の治療は、例えば、任意で本明細書に記載されるように、乾癬を治療するための任意の既知の治療薬または方法と組み合わせることができる。
【０２８６】
したがって、対象アゴニスト抗体を使用するシェーグレン症候群の治療は、例えば、任意で本明細書に記載されるように、シェーグレン症候群を治療するための任意の既知の治療薬または方法と組み合わせることができる。
【０２８７】
したがって、対象アゴニスト抗体を使用する全身性エリテマトーデスの治療は、例えば、任意で本明細書に記載されるように、全身性エリテマトーデスを治療するための任意の既知の治療薬または方法と組み合わせることができる。
【０２８８】
したがって、対象アゴニスト抗体を使用するＧＶＨＤの治療は、例えば、任意で本明細書に記載されるように、ＧＶＨＤを治療するための任意の既知の治療薬または方法と組み合わせることができる。
【０２８９】
したがって、対象アゴニスト抗体を使用する、慢性もしくは急性感染および／またはそれに関連する肝毒性、例えば肝炎は、例えば、任意で本明細書に記載されるように、慢性もしくは急性感染および／またはそれに関連する肝毒性を治療するための任意の既知の治療薬または方法と組み合わせることができる。
【０２９０】
上述の療法において、好ましくは、前述の、または他の自己免疫もしくは炎症性状態のうちの１つを有する対象は、本明細書に開示される免疫阻害抗ＶＩＳＴＡ抗体、または本発明による抗原結合断片を投与され、この抗体は、免疫への少なくとも１つのＶＩＳＴＡ媒介作用を模倣するか、または刺激し、例えば、疾患病理に関与する細胞傷害性Ｔ細胞、またはＮＫ活性、および／または炎症誘発性サイトカインの産生を抑制し、それにより、例えば、Ｔ細胞寛容または長期にわたる免疫抑制を誘発するＴｒｅｇの誘導のため、疾患症状を予防または回復させ、潜在的に長期にわたる疾患の寛解をもたらす。
【０２９１】
本発明の少なくともいくつかの実施形態による、本明細書に列挙される治療薬および／またはそれを含む医薬組成物は、例えば、同種または異種移植片の急性もしくは慢性拒絶、または炎症性障害もしくは自己免疫障害の治療または予防のために、あるいは寛容を誘導するために、唯一の活性成分として、または免疫調節レジメンにおいて他の薬物と一緒に、または他の抗炎症剤と一緒に投与され得る。
【０２９２】
敗血症の治療のためのアゴニスティックな抗ＶＩＳＴＡ抗体および含有する医薬組成物の使用
少なくともいくつかの実施形態によると、本明細書に記載されるＶＩＳＴＡ抗体、その断片、コンジュゲート、および／または医薬組成物は、敗血症を治療するために使用され得る。敗血症は、潜在的な生命を脅かす合併感染症である。敗血症は、感染に対する初期宿主応答が不適切に増幅され、調節不全となり、宿主に有害となるときに発症する複雑な臨床症候群を表す。敗血症における初期過炎症相（「サイトカインストーム」）の後に免疫抑制の状態が続く（Ｈｏｔｃｈｋｉｓｓ  ｅｔ  ａｌ  ２０１３  Ｌａｎｃｅｔ  Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１３：２６０−２６８）。「免疫麻痺」とも称されるこの免疫障害の後期段階は、一次感染や、ＨＳＶおよびサイトメガロウイルスなどのウイルスの再活性化、ならびに、多くの場合免疫適応性患者に特に毒性がない生物による新しい二次感染の発症がクリアされなかった場合に現れる。現在の敗血症患者の大部分は、その後の数日から数週間にわたって敗血症誘導性多器官機能障害を伴って、最終的に集中治療室でのみこれらの初期過炎症の発作を生き延びる。敗血症誘導性免疫抑制は、これらの脆弱な患者における最も重大な免疫機能障害としてますます認識されている。一次感染後の病原体クリアランス不良および／または二次感染に対する感受性は、敗血症に関連する高罹患率および高死亡率に寄与する。
【０２９３】
本発明の少なくともいくつかの実施形態によると、本明細書に列挙されるように、治療薬および／またはそれを含む医薬組成物、ならびに敗血症の治療に有効な既知の治療薬の組み合わせの使用が提供される。
【０２９４】
本発明の少なくともいくつかの実施形態によると、敗血症の標準治療もしくは新たな治療、敗血症の初期過炎症相におけるサイトカインストームを遮断する療法、および／または敗血症誘導性免疫抑制相を克服するための免疫刺激作用を有する療法と組み合わせることができる、本明細書に列挙される治療薬および／またはそれを含む医薬組成物の使用が提供される。
【０２９５】
「Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｆｏｒ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｓｅｖｅｒｅ  Ｓｅｐｓｉｓ  ａｎｄ  Ｓｅｐｔｉｃ  Ｓｈｏｃｋ」（Ｄｅｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ  ２０１３  Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  ３９：１６５−２２８）によって推奨される、敗血症の標準治療の治療法との組み合わせのうちのいくつかを以下に記載する。
１．全ての可能性のある病原体に対して活性を有する広域抗生物質（細菌および／または真菌−治療は敗血症が診断されたときに開始するが、特定の病原体は特定されていない）−例  セフォタキシム（Ｃｌａｆｏｒａｎ（登録商標））、チカルシリンおよびクラブラネート（Ｔｉｍｅｎｔｉｎ（登録商標））、ピペラシリンおよびタゾバクタム（Ｚｏｓｙｎ（登録商標））、イミペネムおよびシラスタチン（Ｐｒｉｍａｘｉｎ（登録商標））、メロペネム（Ｍｅｒｒｅｍ（登録商標））、クリンダマイシン（Ｃｌｅｏｃｉｎ）、メトロニダゾール（Ｆｌａｇｙｌ（登録商標））、セフトリアキソン（Ｒｏｃｅｐｈｉｎ（登録商標））、シプロフロキサシン（Ｃｉｐｒｏ（登録商標））、セフェピム（Ｍａｘｉｐｉｍｅ（登録商標））、レボフロキサシン（Ｌｅｖａｑｕｉｎ（登録商標））、バンコマイシン、または列記された薬物の任意の組み合わせ。
２．昇圧剤：例  ノルエピネフリン、ドーパミン、エピネフリン、バソプレシン
３．ステロイド：例  ヒドロコルチゾン、デキサメタゾン、またはフルドロコルチゾン、静脈内またはそうでなければ変力療法：例  心筋機能不全を有する敗血症患者のためのドブタミン
４．ドロトレコギンアルファ（活性化）（ＤｒｏｔＡＡ）などの組換えヒト活性化プロテインＣ（ｒｈＡＰＣ）。
５．β−遮断薬は加えて局所および全身性炎症を減少させる。
６．ピルビン酸塩、コハク酸塩、または高用量インスリン置換などの代謝介入。
遺伝子もしくは細胞療法または移植後の望ましくない免疫活性化を減少させるための抗ＶＩＳＴＡ抗体および含有する医薬的組成物の使用
【０２９６】
本明細書において使用される場合、「遺伝子療法」という用語は、任意の種類の遺伝子療法、ベクター媒介遺伝子療法、遺伝子移入、ウイルス媒介遺伝子移入を包含し、ある特定の細胞療法、例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞療法およびＣＡＲ  ＮＫ細胞療法を更に包含する。本発明の少なくともいくつかの実施形態によると、ＶＩＳＴＡを標的とし、免疫応答に対して阻害活性を有する本明細書に記載されるアゴニストＶＩＳＴＡ抗体、その断片、コンジュゲート、および／または医薬組成物は、様々な遺伝子疾患の治療のために使用される遺伝子療法もしくは細胞療法後の望ましくない免疫活性化を減少させるための治療薬として使用され得る。単一の仮説によって限定されることを望むものではないが、かかる抗体は、免疫応答に対してＶＩＳＴＡ様阻害活性を有し、かつ／または任意で、病原性Ｔ細胞および／もしくはＮＫ細胞の阻害によってＶＩＳＴＡ免疫阻害活性を強化する。
【０２９７】
遺伝子疾患の治療のための多くの遺伝子治療用製品は現在臨床治験中である。近年の研究は、遺伝子治療ベクターを使用したいくつかの遺伝子疾患に対する治療的成功を記述している。遺伝子治療戦略は、３つの重要な要素、移入される遺伝子、遺伝子が導入される標的組織、および遺伝子の標的組織への侵入を容易にするために使用されるベクター（遺伝子送達ビヒクル）を特徴とする。遺伝子治療臨床治験の大部分は、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス、偽型ウイルス、および単純ヘルペスウイルスを含む、非常に効率的な送達ビヒクルとしてウイルスベクターを活用している。しかしながら、ヒト免疫系と遺伝子療法ベクターの全ての成分との間の相互作用は、持続治療有効性に対する主な制限のうちの１つを表すように思われる。ヒト研究は、ウイルスベクターへの宿主免疫応答の可能性が高いことを示した。中和抗体の形成および／または細胞傷害性細胞による形質導入された細胞の破壊をもたらすウイルスまたは導入遺伝子産物自体へのかかる免疫応答は、治療有効性を大いに妨害し得る（Ｓｅｒｅｇｉｎ  ａｎｄ  Ａｍａｌｆｉｔａｎｏ  ２０１０  Ｖｉｒｕｓｅｓ  ２：２０１３、Ｍｉｎｇｏｚｚｉ  ａｎｄ  Ｈｉｇｈ  ２０１３  Ｂｌｏｏｄ  １２２：２３、Ｍａｓａｔ  ｅｔ  ａｌ  ２０１３  Ｄｉｓｃｏｖ  Ｍｅｄ．１５：３７９）。したがって、免疫応答を回避し、トランスジェニック治療タンパク質の長期発現を容易にするための戦略を開発することは、臨床における遺伝子療法成功のための主な課題のうちの１つである。
【０２９８】
ウイルスベクターによってコードされるトランスジェニックタンパク質に対する免疫応答に影響を与える因子としては、投与経路、ベクター用量、トランスジェニックタンパク質の免疫原性、宿主の炎症状態、およびカプシド血清型が挙げられる。これらの因子は、先天性免疫、サイトカイン産生、ＡＰＣ成熟、抗原提示、および最終的に、機能性エフェクターに対するナイーブＴリンパ球のプライミングを引き起こすことによって免疫原性に影響を与えると考えられる（Ｍｉｎｇｏｚｚｉ  ａｎｄ  Ｈｉｇｈ  ２０１３  Ｂｌｏｏｄ  １２２：２３）。したがって、まさにこれらの機序を妨害することによって免疫活性化を弱めるという考えは、短期免疫抑制を誘導し、ベクター投与に続く早期免疫プライミングを回避し、長期寛容を促進する目的で論理的に現れた。
【０２９９】
遺伝子療法後、特に複数の注射後の望ましくない免疫活性化を阻害するための戦略として、ベクター送達時点での免疫応答の２つの非冗長チェックポイントを標的とすることによる免疫調節治療を動物モデルで試験した。マウスまたはサルの肺に滴下注入されたアデノウイルスベクターに対するベクター媒介性免疫応答の研究は、抗ＣＤ４０Ｌ抗体による一過性の治療がアデノウイルス誘導性免疫応答の抑制をもたらし、結果的に、動物はアデノウイルスベクターで再投与され得ることを示した。このＡｂでの短い治療は、Ａｂ効果が既に有意ではない時点を十分に超えて、免疫機能に対する長期効果およびアデノウイルス特異的液性応答の長期阻害をもたらし、遺伝子移入ベクターの投与を可能にするための免疫調節レジメンとしてのこの共刺激経路の遮断における治療可能性を指し示す（Ｓｃａｒｉａ  ｅｔ  ａｌ．１９９７  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．４：６１１；  Ｃｈｉｒｍｕｌｅ  ｅｔ  ａｌ  ２０００  Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７４：３３４５）。他の研究は、一次ベクター投与前後でのＣＴＬＡ４−Ｉｇおよび抗ＣＤ４０Ｌ  Ａｂの共投与がベクターへの免疫応答を減少させ、長期アデノウイルス媒介遺伝子発現を延長させ、またこれらの薬剤の免疫抑制効果がもはや存在しない後でさえ二次アデノウイルス媒介遺伝子移入を可能にしたことを示し、一過性の免疫抑制療法で、持続性ならびに二次アデノウイルス媒介遺伝子移入を得ることが可能であり得ることを示した（Ｋａｙ  ｅｔ  ａｌ  １９９７  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９４：４６８６）。別の研究において、治療が各遺伝子移入注射中に投与されたならば、ＣＴＬＡ４−Ｉｇおよび抗ＣＤ４０Ｌ  Ａｂの類似の投与は、ベクターに対する中和Ａｂの形成を抑止し、遺伝子移入発現を可能にした（Ｌｏｒａｉｎ  ｅｔ  ａｌ  ２００８  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １６：５４１）。更に、マウスへのＣＴＬＡ４−Ｉｇの投与は、単一投与であっても、早期時点での免疫応答の抑制および延長された導入遺伝子発現をもたらした（Ａｄｒｉｏｕｃｈ  ｅｔ  ａｌ  ２０１１  Ｆｒｏｎｔ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２：１９９）。しかしながら、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ単独は、導入遺伝子産物に対して免疫応答を恒久的に一掃するのに十分ではなかった。２つの免疫チェックポイントをＣＴＬＡ４−ＩｇおよびＰＤ−Ｌ１またはＰＤＬ−２で標的化する組み合わせ治療は、おそらく免疫調節の２つの非冗長機序を標的とすることにより、後の時点で導入遺伝子寛容の相乗的改善をもたらし、長期導入遺伝子持続性および発現をもたらした（Ａｄｒｉｏｕｃｈ  ｅｔ  ａｌ  ２０１１  Ｆｒｏｎｔ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２：１９９）。
【０３００】
本発明の少なくともいくつかの実施形態によると、対象アゴニストは、遺伝子療法に対する免疫応答の限界を克服するために使用され得、単独でまたは他の活性剤との遺伝子療法に続く望ましくない免疫活性化を減少させるために使用され得る。現在のアプローチとしては、送達ベクターに対する抗体を有する患者の除外、高ベクター用量の投与、後のベクター形質導入を可能にする抗ベクター抗体を吸着するための空カプシドの使用、免疫グロブリンを吸着し、抗ベクター抗体価を減少させるための血漿交換（プラスマフェレーシス）サイクルの反復が挙げられる。
【０３０１】
これらの制限を克服することを試みる新規アプローチは、Ａｄベクター自体の選択的修飾および宿主の予防的な免疫調節という２つの幅広いカテゴリーに分けることができる（Ｓｅｒｅｇｉｎ  ａｎｄ  Ａｍａｌｆｉｔａｎｏ  ２０１０  Ｖｉｒｕｓｅｓ  ２：２０１３）。第１のカテゴリーは、（１）特定の阻害剤またはリガンドのＡｄ−カプシド表示、（２）全Ａｄベクターカプシド部分の共有結合修飾、（３）組織特異的プロモーターおよび局所投与経路の使用、（４）ゲノム修飾されたＡｄの使用、ならびに（５）キメラもしくは代替血清型Ａｄの開発を含む、いくつかの画期的な戦略を含む。
【０３０２】
第２のカテゴリーの方法は、ウイルスベクターによって誘導されることが知られている重要な免疫経路を遮断するための免疫抑制薬または特定の化合物の使用を含む。免疫抑制剤は、前臨床研究において試験されており、移入ベクターおよび導入遺伝子産物への免疫応答の予防または根絶において有効性を示した。これらには、シクロスポリンＡ；シクロホスファミド；ＦＫ５０６；グルココルチコイドもしくはデキサメタゾンなどのステロイド；ＴＬＲ９アンタゴニストオリゴヌクレオチドＯＤＮ−２０８８などのＴＬＲ９遮断；ＴＮＦ−ａ抗体もしくはＴＮＦＲ−Ｉｇ抗体でのＴＮＦ−ａ遮断、Ｕ０１２６などのＥｒｋおよび他のシグナル伝達阻害剤などの一般的な免疫抑制剤が含まれる。臨床設定において、グルココルチコイドの投与は、ヒト第ＩＸ因子導入遺伝子を発現するアデノウイルス関連ウイルス（ＡＡＶ）ベクターの、重度の血友病Ｂ患者への肝臓遺伝子移入時にウイルスカプシドに対して指向されるＴ細胞応答を鈍らせるために良好に使用された（Ｎａｔｈｗａｎｉ  ｅｔ  ａｌ  ２０１１  Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６５：２３５７）。
【０３０３】
宿主を「包括的に」および非特異的に免疫抑制する傾向がある薬物を利用する以前のアプローチとは対照的に、より選択的な免疫抑制アプローチが開発されている。これらには、ＣＤ４０とＣＤ１５４、ＩＣＯＳとＩＣＯＳＬ、ＣＤ２８とＣＤ８０もしくはＣＤ８６（ＣＴＬＡ４−Ｉｇを含む）、ＮＫＧ２ＤとＮＫＧ２Ｄリガンド、ＬＦＡ−１とＩＣＡＭ、ＬＦＡ−３とＣＤ２、４−１ＢＢと４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０とＯＸ４０Ｌ、ＧＩＴＲとＧＩＴＲＬとの間など、正の共刺激相互作用の遮断を提供する薬剤の使用、ならびにＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＢＴＬＡ、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−１、ＴＥＶＩ−３、ＫＩＲなどの負の共刺激受容体、ならびにＢ７−Ｈ４およびＢ７−Ｈ３の受容体を刺激する薬剤の使用が含まれる。これらのうちのいくつかは、前臨床または臨床移植研究で利用されている（Ｐｉｌａｔ  ｅｔ  ａｌ  ２０１１  Ｓｅｍ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：２９３）。
【０３０４】
上述の遺伝子もしくは細胞療法において、または移植適応症の治療において、好ましくは、細胞療法もしくは遺伝子療法、または移植組織もしくは移植器官を有するか、またはそれらを受ける対象は、本明細書に開示される免疫阻害抗ＶＩＳＴＡ抗体、または本発明による抗原結合断片を投与され、この抗体は、免疫への少なくとも１つのＶＩＳＴＡ媒介効果、例えば、細胞傷害性Ｔ細胞もしくはＮＫ活性に対するその阻害効果、および／または炎症誘発性サイトカインの産生に対するその阻害効果、またはＴｒｅｇに対するその刺激効果を強化、刺激、または模倣し、それにより、療法に使用された細胞もしくは遺伝子に対する宿主免疫応答、または移植細胞、器官、もしくは組織に対する望ましくない免疫応答を防止または減少させる。好ましくは、治療は、移植もしくは注入細胞、組織、または器官に対する延長された免疫寛容を誘発する。いくつかの場合において、例えば、免疫細胞を含有する移植細胞、組織、または器官の場合において、本明細書に開示される免疫阻害抗ＶＩＳＴＡ抗体または抗原結合断片は、注入または移植前に細胞、組織、または器官と、ならびに／または免疫細胞を寛容化し、望ましくない免疫応答もしくはＧＶＨＤ免疫反応を防止するために、潜在的に移植レシピエントの免疫細胞と接触させられてもよい。
【０３０５】
医薬組成物
別の態様において、本発明は、組成物、例えば、本発明による抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体および任意で別の免疫抑制剤もしくは他の活性剤のうちの１つ、またはそれらの組み合わせを含有する医薬組成物を提供する。したがって、本発明の少なくともいくつかの実施形態による治療有効量の抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体を含む医薬組成物を特徴とする。特に、本発明は、本発明による治療有効［免疫抑制］量の少なくとも１つのアゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体または抗体断片を含む医薬組成物を特徴とする。
【０３０６】
本発明の少なくともいくつかの実施形態による医薬組成物［すなわち、本明細書に開示されるＶＩＳＴＡアンタゴニスト抗体の場合］は、癌の治療のため（癌は、非転移性、侵襲性、または転移性である）、ならびに／または免疫関連障害、自己免疫、アレルギー、ＧＶＨＤ、炎症、または感染障害に関連する肝毒性、および／または敗血症［すなわち、本明細書に開示されるＶＩＳＴＡアゴニスト抗体の場合］の治療のために使用され得る。「治療」は、治療的処置および予防もしくは防止措置の両方を指す。治療を必要とするものには、障害を既に有するもの、ならびに障害が予防されるものが含まれる。したがって、本明細書で治療される哺乳動物は、障害を有すると診断されたか、または障害の素因があるか、もしくは障害になりやすい可能性がある。治療の目的のための「哺乳動物」は、ヒト、家畜動物、および農場動物、ならびにイヌ、ウマ、ネコ、ウシなどの、動物園の動物、スポーツ用動物、またはペット動物を含む、哺乳動物に分類される任意の動物を指す。好ましくは、哺乳動物はヒトである。
【０３０７】
「治療有効量」という用語は、哺乳動物において疾患または障害を治療するのに有効である、本発明による薬剤の量を指す。本発明の治療薬は、対象単独で、またはそれらが薬学的に許容される担体と混合される医薬組成物の一部として提供され得る。多くの場合において、本発明によるアゴニスト抗ＶＩＳＴＡ抗体またはアンタゴニスト抗ＶＩＳＴＡ抗体は、特定の状態の治療に有用な他の免疫治療薬または他の治療薬と組み合わせて使用される。
【０３０８】
組成物は、その投与がレシピエント者患者によって許容され得る場合、「薬学的に許容される担体」であると言われる。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」は、生理学的に適合性である、任意かつ全ての溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤、ならびに吸収遅延剤などを含む。好ましくは、担体は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄、または表皮投与（例えば、注射または注入による）に適している。
【０３０９】
かかる組成物としては、滅菌水、緩衝食塩水（例えば、トリス−ＨＣｌ、酢酸塩、リン酸塩）、ｐＨおよびイオン強度、ならびに任意で、洗剤および可溶化剤（例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０）、酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸、メタ重亜硫酸ナトリウム）、防腐剤（例えば、チメロサール、ベンジルアルコール）、ならびに増量物質（例えば、ラクトース、マンニトール）などの添加剤を含む。非水性溶媒またはビヒクルも、以下に詳述されるように使用され得る。
【０３１０】
本発明の少なくともいくつかの実施形態による医薬組成物において用いられ得る好適な水性および非水性担体の例としては、水、エタノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、およびそれらの好適な混合物、オリーブ油などの植物油、ならびにオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルが挙げられる。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材料の使用によって、分散液の場合には必要な粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって維持され得る。投与経路に応じて、ＶＩＳＴＡタンパク質のいずれか１つまたは二重特異性分子に特異的に結合する活性化合物、すなわち、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体、およびそれを含有する抗原結合断片、ならびにコンジュゲート、および／または代替的な足場は、化合物を不活性化し得る酸および他の自然条件の作用から化合物を保護する材料でコーティングされ得る。本発明の少なくともいくつかの実施形態による薬学的化合物は、１つ以上の薬学的に許容される塩を含み得る。「薬学的に許容される塩」は、親化合物の所望の生物学的活性を保持し、任意の望ましくない毒性作用を付与しない塩を指す（例えば、Ｂｅｒｇｅ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．（１９７７）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１−１９を参照のこと）。かかる塩の例としては、酸付加塩および塩基付加塩が挙げられる。酸付加塩としては、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素、ヨウ化水素酸、亜リン酸などの非毒性無機酸、ならびに脂肪族モノおよびジカルボン酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、芳香族酸、脂肪族および芳香族スルホン酸などの非毒性有機酸に由来するものが挙げられる。塩基付加塩としては、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなどのアルカリ土類金属、ならびにΝ，Ν−ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、プロカインなどの非毒性の有機アミンに由来するものが挙げられる。
【０３１１】
本発明の少なくともいくつかの実施形態による医薬組成物は、薬学的に許容される酸化防止剤を含み得る。薬学的に許容される酸化防止剤の例としては、（１）アスコルビン酸、システイン塩酸塩、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなどの）水溶性酸化防止剤、（２）パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、ｐ−トコフェノールなどの油溶性抗酸化剤、および（３）クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸などの金属キレート剤が挙げられる。
【０３１２】
これらの組成物はまた、保存剤、湿潤剤、乳化剤、および分散剤などのアジュバントも含有し得る。微生物の存在の防止は、上記の減菌手順により、ならびに様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、ソルビン酸フェノールなどを含めることによる両方によって確実にされ得る。また、糖、塩化ナトリウムなどの等張剤を組成物中に含むことも望ましい場合がある。加えて、注射可能な薬学的形態の長期吸収は、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの吸収を遅延させる薬剤の包含によってもたらされ得る。
【０３１３】
薬剤的に許容される担体には、滅菌水溶液または分散液、および滅菌注射溶液または分散液の即時調製のための滅菌粉末が挙げられる。薬学的活性物質のためのかかる媒体および薬剤の使用は、当該技術分野で既知である。任意の従来の媒体または薬剤が活性化合物と不適合である場合を除き、本発明の少なくともいくつかの実施形態による医薬組成物におけるその使用が想到される。補助的活性化合物もまた、組成物に組み込むことができる。
【０３１４】
治療用組成物は、典型的には、製造および保管条件下で減菌であり、安定していなければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルション、リポソーム、または高い薬物濃度に適した他の秩序構造として製剤化され得る。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、およびこれらの好適な混合物を含有する溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材料の使用によって、分散液の場合には必要な粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって維持され得る。多くの場合には、等張剤、例えば、糖、マンニトール、ソルビトールなどのポリアルコール、または塩化ナトリウムを組成物中に含むのが好ましいであろう。注射可能な組成物の長期吸収は、吸収を遅らせる薬剤、例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンを組成物中へ含めることによってもたらされ得る。減菌の注射可能な溶液は、必要量の活性化合物を、上に列挙した成分のうちの１つまたは組み合わせを有する適切な溶媒中に組み込むことによって調製され得、必要に応じて減菌化精密ろ過が続く。一般的に、分散液は、活性化合物を、塩基性分散媒および上で列挙したものから必要な他の成分を含有する減菌ビヒクルに組み込むことによって調製される。滅菌の注射可能な溶液の調製のための減菌粉末の場合、好ましい調製方法は、活性成分＋以前に減菌濾過された溶液からの任意の追加の所望の成分の粉末をもたらす真空乾燥および凍結乾燥（凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ））である。
【０３１５】
減菌の注射可能な溶液は、必要量の活性化合物を、上に列挙した成分のうちの１つまたは組み合わせを有する適切な溶媒中に組み込むことによって調製され得、必要に応じて減菌化精密ろ過が続く。一般的に、分散液は、活性化合物を、塩基性分散媒および上で列挙したものから必要な他の成分を含有する減菌ビヒクルに組み込むことによって調製される。滅菌の注射可能な溶液の調製のための減菌粉末の場合、好ましい調製方法は、活性成分＋以前に減菌濾過された溶液からの任意の追加の所望の成分の粉末をもたらす真空乾燥および凍結乾燥（凍結乾燥）である。
【０３１６】
本発明の組成物は、当該技術分野で既知の様々な方法のうちの１つ以上を使用して、１つ以上の投与経路を介して投与され得る。当業者に理解されるように、投与経路および／または投与様式は、所望の結果に応じて異なる。本発明の少なくともいくつかの実施形態による治療薬の好ましい投与経路は、血管内送達（例えば、注射または注入）、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、皮下、脊髄、経口、腸内、直腸、肺（例えば、吸入）、経鼻、局所（経皮、頬側、および舌下を含む）、膀胱内、硝子体内、腹腔内、膣内、脳送達（例えば、脳室内、脳内、および対流強化拡散）、ＣＮＳ送達（例えば、くも膜下腔内、脊髄周囲（ｐｅｒｉｓｐｉｎａｌ）、および脊髄内）、または非経口（皮下、筋肉内、静脈内、および皮内）、経粘膜（例えば、舌下投与）、投与もしくは埋め込み物を介した投与、または他の非経口投与、例えば、注射または注入によって、または当該技術分野で既知の他の送達経路および／もしくは投与形態を含む。本明細書で使用される場合、「非経口投与」という語句は、腸内および局所投与以外、通常、注射による投与様式を意味し、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、関節内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、脊髄内、硬膜外、および胸骨内注射および注入を含むが、これらに限定されない。具体的な実施形態において、本発明の少なくともいくつかの実施形態によるタンパク質、治療薬、または医薬組成物は、腹腔内または静脈内に投与され得る。
【０３１７】
代替的に、本発明によるＶＩＳＴＡ特異的抗体は、例えば、鼻腔内、経口、経膣、直腸、舌下、または局所など、局所、表皮、または粘膜投与経路などの非経口経路から投与され得る。
【０３１８】
活性化合物は、化合物を急速な放出から保護する担体、例えば、埋め込み物、経皮パッチ、およびマイクロカプセル化送達系を含む徐放性製剤とともに調製され得る。エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸などの生分解性、生体適合性ポリマーが使用され得る。かかる製剤の調製のための多くの方法が特許取得され、当業者に一般に知られている。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９７８を参照のこと。
【０３１９】
治療用組成物は、当該技術分野で既知の医療用デバイスで投与され得る。例えば、好ましい実施形態において、本発明の少なくともいくつかの実施形態による治療用組成物は、米国特許第５，３９９，１６３号、同第５，３８３，８５１号、同第５，３１２，３３５号、同第５，０６４，４１３号、同第４，９４１，８８０号、同第４，７９０，８２４号、または同第４，５９６，５５６号などの針皮下注射デバイスで投与され得る。本発明に有用な埋め込み物およびモジュールの例としては、米国特許第４，４８７，６０３号（制御速度で薬剤を分配するための埋め込み可能なマイクロ注入ポンプを開示している）、米国特許第４，４８６，１９４号（皮膚を通して薬剤を投与するための治療用デバイスを開示している）、米国特許第４，４４７，２３３号（正確な注入速度で薬剤を送達するための薬剤注入ポンプを開示している）、米国特許第４，４４７，２２４号（連続薬物送達のための変流量の埋め込み可能な注入器具を開示している）、米国特許第４，４３９，１９６号（マルチチャンバコンパートメントを有する浸透圧薬物送達系を開示している）、米国特許第４，４７５，１９６号（浸透圧薬物送達系を開示している）が挙げられる。これらの特許は、参照により本明細書に組み込まれる。多くの他のかかる埋め込み物、送達系、およびモジュールが当業者に既知である。
【０３２０】
ある特定の実施形態において、抗ＶＩＳＴＡ抗体は、インビボでの適切な分布を確実にするように製剤化され得る。例えば、血液脳関門（ＢＢＢ）は、多くの非常に親水性の化合物を排除する。本発明の少なくともいくつかの実施形態による治療用化合物がＢＢＢを横断することを確実にするために（所望の場合）、それらは、例えばリポソームに製剤化され得る。リポソームを製造する方法については、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号、同第５，３７４，５４８号、および同第５，３９９，３３１号を参照のこと。リポソームは、特定の細胞または器官に選択的に輸送される１つ以上の部分を含むことにより、標的化された薬物送達を強化し得る（例えば、Ｖ．Ｖ．Ｒａｎａｄｅ（１９８９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２９：６８５を参照のこと）。例示的な標的部分としては、葉酸塩またはビオチン（例えば、Ｌｏｗらに対する米国特許第５，４１６，０１６号）、マンノシド（Ｕｍｅｚａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１５３：１０３８）、抗体（Ｐ．Ｇ．Ｂｌｏｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．３５７：１４０、Ｍ．Ｏｗａｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．３９：１８０）、界面活性剤プロテインＡ受容体（Ｂｒｉｓｃｏｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）  Ａｍ．Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．１２３３：１３４）、ｐｌ２０（Ｓｃｈｒｅｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：９０９０）、Ｋ．Ｋｅｉｎａｎｅｎ；Ｍ．Ｌ．Ｌａｕｋｋａｎｅｎ（１９９４）ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．３４６：１２３、Ｊ．Ｊ．Ｋｉｌｌｉｏｎ、およびＩ．Ｊ．Ｆｉｄｌｅｒ（１９９４）Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ  ４：２７３が挙げられる。
【０３２１】
更に別の実施形態において、化合物（例えば、治療薬、標識、細胞毒、放射毒素  免疫抑制剤）を、かかる化合物を本明細書に開示される抗体に連結することによってＶＩＳＴＡ細胞表面受容体を有する細胞に標的化するために、本発明の免疫コンジュゲートが使用され得る。したがって、本発明は、ＶＩＳＴＡを発現するエクスビボまたはインビボ細胞を（例えば、放射性同位体、蛍光化合物、酵素、または酵素共因子などの検出可能な標識で）局在化するための方法も提供する。代替的に、免疫コンジュゲートは、細胞毒または放射線毒素をＶＩＳＴＡ抗原に標的化することによってＶＩＳＴＡ細胞表面受容体を有する細胞を死滅させるために使用することができる。
【０３２２】
本明細書で使用される場合、「医薬的に許容される担体」は、生理学的に適合性である、任意かつ全ての溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤、ならびに吸収遅延剤を含む。好ましくは、担体は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄、または表皮投与（例えば、注射または注入による）に適している。投与経路に応じて、活性化合物、すなわち、ＶＩＳＴＡ抗原の外部ドメインを含有する可溶性ポリペプチドコンジュゲート、抗体、免疫コンジュゲート、代替的な足場、および／または二重特異性分子は、化合物を不活性化し得る酸および他の自然条件の作用から化合物を保護する材料でコーティングされ得る。本発明の少なくともいくつかの実施形態による薬学的化合物は、１つ以上の薬学的に許容される塩を含み得る。「薬学的に許容される塩」は、親化合物の所望の生物学的活性を維持し、任意の望ましくない毒性作用を付与しない塩を指す（例えば、Ｂｅｒｇｅ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．（１９７７）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１−１９を参照のこと）。かかる塩の例としては、酸付加塩および塩基付加塩が挙げられる。酸付加塩としては、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素、ヨウ化水素酸、亜リン酸などの非毒性無機酸、ならびに脂肪族モノおよびジカルボン酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、芳香族酸、脂肪族および芳香族スルホン酸などの非毒性有機酸に由来するものが挙げられる。塩基付加塩としては、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなどのアルカリ土類金属、ならびにΝ，Ν−ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、プロカインなどの非毒性の有機アミンに由来するものが挙げられる。
【０３２３】
本発明の少なくともいくつかの実施形態による医薬組成物は、薬学的に許容される酸化防止剤を含み得る。学的に許容される  酸化防止剤の例としては、（１）アスコルビン酸、システイン塩酸塩、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなどの）水溶性酸化防止剤、（２）パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、ｐ−トコフェノールなどの油溶性抗酸化剤、および（３）クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸などの金属キレート剤が挙げられる。本発明の少なくともいくつかの実施形態による医薬組成物において用いられ得る好適な水性および非水性担体の例としては、水、エタノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、およびそれらの好適な混合物、オリーブ油などの植物油、ならびにオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルが挙げられる。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材料の使用によって、分散液の場合には必要な粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって維持され得る。
【０３２４】
これらの組成物はまた、保存剤、湿潤剤、乳化剤、および分散剤などのアジュバントも含有し得る。微生物の存在の防止は、上記の減菌手順により、ならびに様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、ソルビン酸フェノールなどを含めることによる両方によって確実にされ得る。また、糖、塩化ナトリウムなどの等張剤を組成物中に含むことも望ましい場合がある。加えて、注射可能な薬学的形態の持続吸収は、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの吸収を遅延させる薬剤の包含によってもたらされ得る。
【０３２５】
薬剤的に許容される担体には、滅菌水溶液または分散液、および滅菌注射溶液または分散液の即時調製のための滅菌粉末が挙げられる。薬学的活性物質のためのかかる媒体および薬剤の使用は、当該技術分野で既知である。任意の従来の媒体または薬剤が活性化合物と不適合である場合を除き、本発明の少なくともいくつかの実施形態による薬学的組成物におけるその使用が想到される。補助的活性化合物もまた、組成物に組み込むことができる。
【０３２６】
治療用組成物は、典型的には、製造および保管条件下で減菌であり、安定していなければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルション、リポソーム、または高い薬物濃度に適した他の秩序構造として製剤化され得る。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、およびこれらの好適な混合物を含有する溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材料の使用によって、分散液の場合には必要な粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって維持され得る。多くの場合には、等張剤、例えば、糖、マンニトール、ソルビトールなどのポリアルコール、または塩化ナトリウムを組成物中に含むのが好ましいであろう。注射可能な組成物の持続吸収は、吸収を遅らせる薬剤、例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンを組成物中へ含めることによってもたらされ得る。減菌の注射可能な溶液は、必要量の活性化合物を、上に列挙した成分のうちの１つまたは組み合わせを有する適切な溶媒中に組み込むことによって調製され得、必要に応じて減菌化精密ろ過が続く。一般的に、分散液は、活性化合物を、塩基性分散媒および上で列挙したものから必要な他の成分を含有する減菌ビヒクルに組み込むことによって調製される。滅菌の注射可能な溶液の調製のための減菌粉末の場合、好ましい調製方法は、活性成分＋以前に減菌濾過された溶液からの任意の追加の所望の成分の粉末をもたらす真空乾燥および凍結乾燥（凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ））である。
【０３２７】
減菌の注射可能な溶液は、必要量の活性化合物を、必要に応じて、上に列挙した成分のうちの１つまたは組み合わせを有する適切な溶媒中に組み込み、次いで、減菌化精密ろ過することによって調製され得る。一般的に、分散液は、活性化合物を、塩基性分散媒および上で列挙したものから必要な他の成分を含有する減菌ビヒクルに組み込むことによって調製される。滅菌の注射可能な溶液の調製のための減菌粉末の場合、好ましい調製方法は、活性成分＋以前に減菌濾過された溶液からの任意の追加の所望の成分の粉末をもたらす真空乾燥および凍結乾燥（凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ））である。
【０３２８】
担体材料と組み合わせて単一の剤形をもたらし得る活性成分の量は、治療される対象および特定の投与様式に応じて異なる。担体材料と組み合わせて単一の剤形をもたらし得る活性成分の量は、一般的に、治療効果をもたらすその組成物の量である。一般的に、１００パーセント中、この量は、薬学的に許容される担体と組み合わせて、約０．０１パーセント〜約９９パーセントの活性成分、好ましくは約０．１パーセント〜約７０パーセント、最も好ましくは約Ｉパーセント〜約３０パーセントの活性成分の範囲である。
【０３２９】
投与レジメンは、最適な所望の応答（例えば、治療応答）を提供するように調整される。例えば、単一ボーラスが投与され得るか、いくつかの分離用量が経時的に投与され得るか、または、治療状況の緊急事態によって示されるように、用量を比例して減少または増加され得る。投与の容易性および投与の均一性のための投与単位形態に非経口組成物を製剤化することが得に有益である。本明細書で使用される用量単位形態は、治療される対象の単位投与量として適した物理的に別の単位を指し、各単位は、所望の治療効果をもたらすように計算された、予め決められた活性化合物の量を必要な薬学的に許容される担体とともに含有するものである。本発明の少なくともいくつかの実施形態による投与単位形態のための仕様は、（ａ）活性化合物の独特の特徴および達成される特定の治療効果、ならびに（ｂ）個体の感受性の治療のためのかかる活性化合物を配合する技術に特有の制限によって定められ、直接それらに依存する。
【０３３０】
本明細書に開示されるＶＩＳＴＡ抗体の投与に関して、投与量は、宿主の体重の約０．０００１〜１００ｍｇ／ｋｇ、より通常には０．０１〜５ｍｇ／ｋｇの範囲である。例えば、投与量は、０．３ｍｇ／ｋｇ体重、１ｍｇ／ｋｇ体重、３ｍｇ／ｋｇ体重、５ｍｇ／ｋｇ体重、もしくは１０ｍｇ／ｋｇ体重、または１〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲内であり得る。例示的な治療レジームは、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、１ヶ月に１回、３ヶ月に１回、または６ヶ月に１回の投与を伴う。本発明の少なくともいくつかの実施形態による本明細書に開示される抗体の好ましい投与レジメンは、静脈内投与を介して１ｍｇ／ｋｇ体重または３ｍｇ／ｋｇ体重を含み、本明細書に開示される抗体は、以下の投薬スケジュール：（ｉ）４週間に１回を６投与、次いで３ヶ月に１回、（ｉｉ）３週間に１回、（ｉｉｉ）３ｍｇ／ｋｇ体重を１回、続いて、１ｍｇ／ｋｇ体重を３週間に１回、のうちの１つを使用して、与えられる。
【０３３１】
いくつかの方法では、異なる結合特異性を有する２つ以上のモノクローナル抗体が同時に投与され、その場合、本明細書に開示される各抗体の投与量は、示される範囲内である。本明細書に開示される抗体は、通常、複数回投与される。単一投与量間の間隔は、例えば、毎日、毎週、毎月、３ヶ月毎、または毎年であり得る。間隔はまた、患者の標的抗原への抗体の血液レベルを測定することによって示されるように不規則であってもよい。いくつかの方法では、投与量は，約１〜１０００ｍｕｇ／ｍｌの血漿抗体濃度を達成するように調整され、いくつかの方法において、約２５〜３００マイクログラム／ｍｌである。
【０３３２】
代替的に、治療薬は、持続放出製剤として投与され得、その場合、頻繁な投与が必要とされない。投与量および頻度は、患者における治療薬の半減期により異なる。一般的に、ヒト抗体は、最も長い半減期を示し、その後にヒト化抗体、キメラ抗体、および非ヒト抗体が続く。融合タンパク質の半減期は広く異なり得る。投与の投与量および頻度は、治療が予防的または治療的かどうかに応じて異なり得る。予防的用途において、比較底低い用量が、長時間にわたって比較的低頻度の間隔で投与される。中には残りの人生の間治療を受け続ける患者がいる。治療の適用において、比較的短い間隔で比較的高い投与量が、疾患の進行が減少または終了するまで、好ましくは患者が疾患の症状の部分的または完全な回復を示すまで必要とされる場合がある。したがって、患者は、予防レジームを投与され得る。
【０３３３】
本発明の医薬組成物中の活性成分の実際の投与量レベルは、患者に毒性であることなく、特定の患者、組成物、および投与様式の所望の治療応答を達成するのに有効な量の活性成分を得るように異なり得る。選択された投与量レベルは、用いられる本発明の特定の組成物、またはそのエステル、塩、もしくはアミドの活性、投与経路、投与時間、用いられる特定の化合物の排泄速度、治療期間、用いられる特定の組成物と組み合わせて使用される他の薬剤、化合物および／もしくは材料、治療される患者の年齢、性別、体重、状態、全般的な健康状態、および以前の病歴、ならびに医学分野でよく知られているような要因を含む様々な薬物動態因子に依存する。
【０３３４】
本発明を記載したが、以下の実施例は、本発明およびその固有の利点を更に図示するために提供される。
【実施例】
【０３３５】
実施例１：免疫抑制抗マウスＶＩＳＴＡ  Ａｂをスクリーニングするためのアッセイの使用
本発明者らは、推定上のアゴニスティックな抗マウスＶＩＳＴＡ抗体をスクリーニングするための様々なアッセイを開発した。図１に示されるように、インビトロおよびインビボスクリーニングアッセイを使用して、免疫抑制抗ＶＩＳＴＡ  ｍＡｂを特定した。図１Ａの実験において、精製されたＴ細胞を、示されるｍＡｂの存在下で、抗ＣＤ３の上で７２時間平板培養した。Ｈ３組み込みによって増殖を測定した。図１Ｂの実験において、精製されたＤＯ１１．１０Ｔ細胞を、示される抗体の存在下で６日間、ＩＳＱパルスＡＰＣにより刺激した。増殖をＣＴＶ希釈色素を使用して測定した。図１Ｃの実験において、ＧＶＨＤは、Ｃ５７ＢＬ／６細胞を照射されたＢＡＬＢ／ｃレシピエントに移入することにより誘発された。移入後０、２、および４日目に２００μｇの抗体をマウスにＩ．Ｐ．注射し、生存を分析した。図１Ｄの実験において、ＣｏｎＡ（１５ｍｐｋ）の投与３時間前に、１０ｍｐｋの示される抗体でマウスを処置し、Ｌｕｍｉｎｅｘにより６で血漿中のＩＬ−２を分析した。
【０３３６】
より具体的には、第１のアッセイにおいて、ＣＤ４＋Ｔ細胞を単離し、抗ＣＤ３コーティングされたプレートに添加する前に、Ａｂ１、Ａｂ２、またはＡｂ３とともにインキュベートした。培養３日後、細胞を増殖することによって組み込まれるトリチウム標識したチミジンで、Ｔ細胞をパルスした。注目すべきことに、Ａｂ１およびＡｂ２の両方がＴ細胞の増殖速度の著しい減少を誘発し、一方Ａｂ３は効果がなかった（図１）。トランスジェニックＴ細胞が代わりに抗原パルスＡＰＣで刺激された類似のアッセイにおいて、Ｔ細胞が増殖性色素希釈によって測定された。抗ＣＤ３アッセイと同様に、Ａｂ１は、抗原特異的Ｔ細胞増殖を約５０％抑制した（図１Ｂ）。これらのデータは、Ａｂ３  ｍＡｂがｍＶＩＳＴＡ機能を遮断する（すなわち、免疫応答を強化する）一方で、Ａｂ１およびＡｂ３は、ｍＶＩＳＴＡ機能を刺激し、主要な免疫応答を下方制御することを示す。
【０３３７】
我々はまた、Ａｂ３およびＡｂ１がインビボ動物モデル、特にＧＶＨＤおよびＣｏｎＡ肝炎モデルを使用して区別され得るかどうかも決定した。対照抗体（Ｈａｍ  Ｉｇ）で処置されたＧＶＨＤを有するマウスは、進行性疾患を有し、予想されていた通りに、移植の４週間後までに安楽死される必要があった（図１Ｃ）。Ａｂ３処置マウスもＧＶＨＤになりやすく、実際、大半のマウスは対照処置群の前に死亡し、Ａｂ３は疾患を悪化させる可能性があることを示す。逆に、Ａｂ１処置されたマウスの全てがＧＶＨＤの明白な症状を示さず、ほぼ全てが少なくとも４０日間健康であった。具体的に、これらの実験において、対照抗体（Ｈａｍ  Ｉｇ）で処置されたＧＶＨＤを有するマウスは、進行性疾患を有し、予想されていた通りに、移植の４週間後までに安楽死される必要があった（図１Ｃ）。Ａｂ３処置マウスもＧＶＨＤになりやすく、実際、大半のマウスは対照処置群の前に死亡し、Ａｂ３は疾患を悪化させる可能性があることを示す。逆に、Ａｂ１処置されたマウスの全てがＧＶＨＤの明白な症状を示さず、ほぼ全てが少なくとも４０日間健康であった。
【０３３８】
ＣｏｎＡモデルにおいて、本発明者らは、各ＶＩＳＴＡ抗体がＣｏｎＡに対する十分に特徴付けされたＴ細胞サイトカイン応答に影響を与えるかどうかを試験した。注目すべきことに、Ａｂ１はＩＬ−２の血漿サイトカインレベルの減少を誘導したが、Ａｂ３は減少させなかった（図１Ｄ）。具体的には、ＣｏｎＡモデルにおいて、本発明者らは、各ＶＩＳＴＡ抗体がＣｏｎＡに対する十分に特徴付けされたＴ細胞サイトカイン応答に影響を与えるかどうかを試験した。注目すべきことに、Ａｂ１はＩＬ−２の血漿サイトカインレベルの減少を誘導したが、Ａｂ３は減少させなかった（図１Ｄ）。
【０３３９】
したがって、これらの結果は、両抗ＶＩＳＴＡ  ｍＡｂ（Ａｂ１およびＡｂ２）が免疫抑制性であることを示し、かかる免疫抑制性抗マウスＶＩＳＴＡ抗体が炎症性免疫抑制性抗マウスＶＩＳＴＡ抗体（Ａｂ３）と区別され得ることも示した。図１に示されるように、Ａｂ１は、ＧＶＨＤ、ＮＺＢ／Ｗ  Ｆ１狼瘡様糸球体腎炎、コンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）誘導性肝炎、コラーゲン抗体誘導性関節炎（ＣＡＩＡ）、およびイミキモド誘導性乾癬を含む、複数の炎症モデルにおいて効果的（免疫抑制性）である。これらの疾患の各々において、疾患の進行中のＡｂ１の投与は、病理および／または死亡率を大幅に減少させた。列記される各モデルは、疾患進行のためにＴ細胞に独特の要求を有する。ＧＶＨＤおよびＣｏｎＡは両方とも、Ｔｈ１  Ｔ細胞応答によって駆動される。
【０３４０】
実施例２：異なる自己免疫疾患モデルにおいて自己免疫を抑制する抗ＶＩＳＴＡ  Ａｂの特定
図２Ａ〜Ｆの実験において、異なる抗マウスＶＩＳＴＡ  Ａｂの効果が再度異なる疾患モデルにおいて比較された。図２Ａの実験において、２５週目から開始して実験の終わり終了まで、Ａｂ１またはＨａｍ  Ｉｇ（２００μｇ）のいずれかで、３Ｘ／週でＮＺＢ／Ｗ  Ｆ１マウスを処置した。「Ｘ」は、対照処置群全てが屠殺された時点を示す。図２Ｂの実験において、１５ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）のＣｏｎＡの投与３時間前に、２００μｇの抗体でマウスを処置し、生存を８０時間追跡した。図２Ｃの実験において、コラーゲンＩＩ  ｍＡｂ、続いてＬＰＳで順次マウスを処置し、足の腫れを測定することによって関節炎を測定した。実験において、Ａｂ１およびＨａｍ−Ｉｇを１日毎に３×投与した（２００μｇ）。図２Ｄの実験において、マウスの耳にイミキモドを毎日適用した。１４日目に、Ａｂ１またはＨａｍ−Ｉｇ（２００μｇ）を１日毎に投与し、耳の厚さをキャリパスで測定した。同じ図２Ｅ〜Ｆの実験において、マウスの背中にイミキモドを毎日適用した。９日目にマウスを安楽死させ、皮膚を切片し、ＩＨＣによりＣＤ３発現に関して染色した。
【０３４１】
図２Ａ〜Ｆに示されるように、これらの実験の各々において、特定の疾患の進行中のＡｂ１の投与は、病理および／または死亡率を大幅に減少させた。列記される各モデルは、疾患進行のためにＴ細胞に独特の要求を有する。ＧＶＨＤおよびＣｏｎＡは両方とも、Ｔｈ１  Ｔ細胞応答によって駆動される。
【０３４２】
イミキモド誘導性乾癬は、Ｔ細胞が皮膚の皮層に動員されるＩＬ−１７／２３駆動疾患である。Ａｂ１は、真皮のＣＤ３＋細胞の数を劇的に減少させるが（図２ＥおよびＦ）、脾臓Ｔ細胞集団には影響を与えず（データ示さず）、この抗マウスＶＩＳＴＡ  Ａｂが炎症病変で免疫を優先的に抑制したことを示す。
【０３４３】
ＮＺＢ／Ｗ  Ｆ１狼瘡は、Ｂ細胞、Ｔ細胞、および骨髄細胞からの寄与を有する多因子疾患である。このモデルにおいて、Ａｂ１の治療投与は、腎臓への損傷の減少を示すタンパク尿レベルを減少させた。最後に、ＣＡＩＡは適応免疫を伴わず、代わりにマクロファージおよび顆粒球によって駆動される。このモデルにおける抗ＶＩＳＴＡによる抑制は、抗体が骨髄区画にも影響を及ぼし得ることを示す。したがって、抑制性ＶＩＳＴＡ  ｍＡｂは、Ｔ細胞および先天性免疫区画の両方に対する効果を媒介するように思える。
【０３４４】
したがって、図１および図２に示されるように、モノクローナルハムスター抗マウスＶＩＳＴＡ  ＡｂのＡｂ１およびＡＢ２の両方は、Ｔ細胞の増殖速度の著しい減少を誘導したが、Ａｂ３は効果を有さなかった（図１）。トランスジェニックＴ細胞が抗原パルスＡＰＣで刺激された同様のアッセイにおいて、Ｔ細胞活性化は、増殖性色素希釈によって測定された。抗ＣＤ３アッセイと同様に、Ａｂ１は、抗原特異的Ｔ細胞増殖を約５０％抑制した（図１Ｂ）。これらのデータは、Ａｂ１およびＡｂ２がＶＩＳＴＡ機能を刺激し、それにより主要な免疫応答を下方制御することを示唆する。
【０３４５】
特に、Ａｂ１、ハムスター抗マウスＶＩＳＴＡ抗体は、ＧＶＨＤ、ＮＺＢ／Ｗ  Ｆ１狼瘡様糸球体腎炎、コンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）誘導性肝炎、コラーゲン抗体誘導性関節炎（ＣＡＩＡ）、およびイミキモド誘導性乾癬を含む、複数の炎症モデルにおいて効果的であった（図１および２）。これらの疾患の各々において、疾患の進行中のＡｂ１の投与は、病理および／または死亡率を大幅に減少させた。列記される各モデルは、疾患進行のためにＴ細胞に独特の要求を有する。ＧＶＨＤおよびＣｏｎＡは両方とも、Ｔｈ１  Ｔ細胞応答によって駆動される。上述のように、イミキモド誘導性乾癬は、Ｔ細胞が皮膚の皮層に動員されるＩＬ−１７／２３駆動疾患である。したがって、この特定の自己免疫モデルにおけるＡｂ１による抑制は、この抗体が骨髄区画にも影響を及ぼし得ることを示す。したがって、これらの免疫抑制性抗マウスＶＩＳＴＡ  ｍＡｂは、Ｔ細胞および先天性免疫区画の両方に対する効果を媒介するように思える。
【０３４６】
実施例３：アゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ  Ａｂのスクリーニングに使用するためのヒトＶＩＳＴＡノックインマウスの開発
先の実施例は、アゴニスティックな抗マウスＶＩＳＴＡ  Ａｂの単離および特徴付けに関する。今まで、アゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ  Ａｂは、文献において報告されたことがない。非常に多くのアンタゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体が本譲受人および他のグループによって特定されているという事実があってもである。したがって、本発明の前に、アゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体が特定されるかどうかは不明であった。
【０３４７】
現在、免疫応答を抑制するためのＮＣＲの自然機能を利用する承認されているヒト治療薬は存在しないため、かかる抗体は非常に有益であろう。Ｏｒｅｎｃｉａ（ＣＴＬＡ４−Ｉｇ）は有効であるが、ＣＤ２８−Ｂ７相互作用および経路を遮断することによってのみ作用し、下方制御経路を刺激することによっては機能しない。続く実施例に示される２つの異なるアゴニスティックな抗ＶＩＳＴＡ  ｍＡｂの強力な免疫抑制効果によって図示されるように、この経路の係合は、異なるヒト自己免疫疾患の管理における革命であることを証明し得る。更に、適応性および先天性の両方の自己免疫エフェクター機序に対する抗ＶＩＳＴＡの免疫抑制の影響は、多くの他の抗炎症剤と区別される。
【０３４８】
前述に関して、アゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ  Ａｂのスクリーニングにおける望ましく、必要な試薬はヒトＶＩＳＴＡノックインマウスであると仮定した。ヒトＶＩＳＴＡノックインマウスは、本譲受人により創出された（「ｈＶ−ＫＩ  Ｍｏｕｓｅ」）。これらのｈＶ−ＫＩマウスは、マウスＶＩＳＴＡの代わりにヒトＶＩＳＴＡを発現する。特に、図３に示されるように、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、Ｔｒｅｇ（ＣＤ４＋ＦｏｘＰ３＋）、および単球ＣＤ１１ｂ＋、Ｌｙ６Ｃ＋、Ｌｙ６Ｇ−を、ＷＴおよびＶＩＳＴＡ  ＫＩマウスのリンパ節から単離し、それぞれ、マウスまたはヒトタンパク質に対してαＶＩＳＴＡ抗体で染色した。ｈＶ−ＫＩの発現パターンは、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞としてＷＴマウスにおいて見られるものと同一であり、制御Ｔ細胞および単球は全て、２つの株間で一貫した量の表面タンパク質を発現する（図３を参照のこと）。
【０３４９】
加えて、ｈＶ−ＫＩマウスは、ＶＩＳＴＡ  ＫＯマウスにおいて観察される炎症性疾患のいかなる兆候も発症せず、ｈＶＩＳＴＡがマウス免疫系内で完全に機能することを示す（データ示さず）。したがって、このマウスモデルは、免疫抑制性ｍＡｂをスクリーニングするために、異なるアッセイで使用され得る。
【０３５０】
実施例４：推定上のアゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体の合成
異なる抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体の配列は、図４に含まれる。これらの抗体は、ヒトＶＩＳＴＡ、例えばＶＳＴＢ４９−ＶＳＴＢ１１６に特異的に結合し、ＶＩＳＴＡアンタゴニスト特性を有する、すなわち、これらの抗体は、ＩｇＧ１フォーマットであるとき、例えば、抗体が野生型、すなわち未修飾であるＩｇＧ１  Ｆｃ領域を含む場合、ＶＩＳＴＡの免疫への抑制効果を阻害する。
【０３５１】
抗体の中でも図４で特定されるのは１Ｅ８である。このマウス抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体は、以下に記載される可変重鎖および軽鎖ポリペプチドを含み、本発明者らにより２つのヒトキメラ形態に変換された。本明細書においてＩＮＸ８００と称される第１のキメラ抗体は、ヒトＩｇＧ２重鎖および軽鎖定常領域ポリペプチドの１Ｅ８可変重鎖および軽鎖ポリペプチドへの結合によって得られた。この第１のキメラ抗体において、ＩｇＧ２定常領域内のアミノ酸残基のいずれも修飾されなかった。
【０３５２】
本明細書においてＩＮＸ８０１と称される第２のキメラ抗体は、同様に、ヒトＩｇＧ２重鎖および軽鎖定常領域ポリペプチドの１Ｅ８可変重鎖および軽鎖ポリペプチドへの結合によって得られた。この第２のキメラ抗体において、ヒトＩｇＧ２カッパ鎖内の１２７位のシステイン残基をセリンに変換した。さもなければ、ＩｇＧ２定常領域内のアミノ酸残基のいずれも修飾されなかった。
ＩＥ８  ＶＨポリペプチド
ＥＶＫＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＤＦＳＲＹＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＥＶＹＰＤＳＳＴＩＮＹＴＰＳＬＫＤＫＦＩＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＩＫＶＲＳＥＤＴＡＬＹＹＣＡＲＧＲＧＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ（配列番号：５７）
ＩＥ８ＶＬポリペプチド
ＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳＬＳＡＳＶＧＥＴＶＴＩＴＣＲＡＳＧＮＩＨＮＹＬＳＷＹＨＱＫＱＧＫＳＰＱＬＬＶＹＮＡＫＴＬＡＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＱＹＳＬＫＩＮＳＬＱＰＥＤＦＧＳＹＹＣＱＮＦＷＳＴＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫＲ．（配列番号５８）
【０３５３】
実施例５：ＣｏｎＡ動物モデルにおける推定上のアゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体の評価
キメラＩｇＧ２抗体および対照抗体両方の効果を、コンカバリンＡ肝炎モデルにおいて比較した。このインビボモデルにおいて、異なる動物を、コンカバリンＡ投与の３時間前に、１０ｍｇ／ｋｇのいずれかのキメラＩｇＧ２抗体（ＩＮＸ８００またはＩＮＸ８０１）、または対照抗体で前投薬した。抗体投与３時間後、マウスを、１２ｍｇ／ｋｇのＣｏｎＡで投薬した。次いで、これらの動物および対照を、ＣｏｎＡ投薬６時間後に心穿刺により出血させた。マウスの全ては良好であるように見え、明らかな罹患または死亡はなかった。
【０３５４】
次いで、サイトカイン発現について血液を分析した。特に、慣例的にサイトカイン分析に使用される従来の方法およびサイトカイン試験キットを使用して、収集した血液試料から得た血漿を使用して、３２−ｐｌｅｘを実行した。図５に示されるように、いくつかの炎症誘発性サイトカインの発現は、対照動物と比較して、ＩＮＸ８００またはＩＮＸ８０１の抗体を投与された動物において著しく抑制された。特に、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、およびＴＮＦ−αレベルは全て、対照と比較して、ＩＮＸ８００またはＩＮＸ８０１処置動物において著しく低かった。これらのサイトカインの発現の［減少］は、ＩＮＸ８００またはＩＮＸ８０１処置動物において実質的に同一であった。
【０３５５】
また、ある特定のケモカイン（ケラチノサイト由来ケモカインまたは「ＫＣ」）およびマクロファージ炎症性タンパク質２（ＭＩＰ−２）の発現は、対照と比較して、ＩＮＸ８００またはＩＮＸ８０１処置動物において実質的に増加した。同様に、これらのタンパク質の発現の［増加］は、ＩＮＸ８００またはＩＮＸ８０１処置動物において実質的に同一であった。これらの結果に基づいて、ＩＮＸ８００およびＩＮＸ８０１の両方は、ＶＩＳＴＡが様々な炎症性サイトカインの発現を誘発する類似の免疫抑制効果を誘発するように思われるため、強力なＶＩＳＴＡアゴニストであるように思われる。
【０３５６】
実施例６：移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）動物モデルにおける推定上のアゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体の評価
同じ推定上のアゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体ＩＮＸ８００およびＩＮＸ８０１の効果も、未処置の動物または無関係な抗体で処置された対照と比較した移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）動物モデルにおいて比較された。この動物モデルにおいて、Ｔ細胞を照射宿主に養子移入し、体重を疾患の読み取りとして測定した。ＧＶＨＤ疾患の進行に基づいて、対照マウスの全て（８／８）を安楽死させなければならなかった。これらの動物研究の結果を図６に示す。示されるように、ＩＮＸ８００またはＩＮＸ８０１抗体での処置の結果、ＧＶＨＤは大幅に抑制されていたため、ＩＮＸ８００またはＩＮＸ８０１処置マウスのいずれ［０／８］も安楽死させる必要がなかった。これらの結果に基づいて、ＩＮＸ８００およびＩＮＸ８０１の両方は、ＧＶＨＤ免疫応答を強力に抑制するように思われるため、強力なＶＩＳＴＡアゴニストであるように思われる。
実施例７：ＣＤ３駆動Ｔ細胞免疫応答に対する推定上のアゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体の効果
【０３５７】
同じアゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体ＩＮＸ８００およびＩＮＸ８０１の効果も、ＣＤ３駆動Ｔ細胞免疫応答を抑制するそれらの可能性に関して比較された。これらの実験において、プレートをＯＫＴ３（２．５μｇ／ｍｌ）でコーティングした。Ｔ細胞を、抗体とともに３０分間事前インキュベートした。次いで、抗体処理されたＴ細胞を、ＯＫＴ３コーティングしたプレートに添加し、これらのプレート上で７２時間、Ｔ細胞を培養した。ＣＤ３駆動Ｔ細胞免疫応答に対する抗体の可能な効果の読み取りとして、Ｔ細胞増殖を検出するための十分に受け入れられている方法であるトリチウム組み込み方法を使用して、Ｔ細胞増殖を決定した。図７に示されるように、Ｔ細胞増殖は、対照Ｔ細胞培養物と比較して、ＩＮＸ８００またはＩＮＸ８０１抗体で処理した培養Ｔ細胞において大幅に減少した。
【０３５８】
実施例８：特定のＴ細胞集団およびＴ細胞総数に対する推定上のアゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体の効果
実験は、同じ抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体ＩＮＸ８００およびＩＮＸ８０１の、特定のＴ細胞の数ならびにＴ細胞総数への可能な効果を比較するために影響を受けた。これらの実験は、サイトカインおよびＴ細胞に対する対象抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体の観察された効果が、特異的ＶＩＳＴＡ媒介免疫抑制効果の促進に基づく免疫抑制効果を誘発するこれらの抗体ではなく、細胞枯渇（非特異的効果）に起因し得るかどうかを評価するために行われた。
【０３５９】
アゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体ＩＮＸ８００およびＩＮＸ８０１の両方は、特定のＴ細胞集団の数またはＴ細胞総数に有意な効果を有さなかった。更に、ＩＮＸ８００およびＩＮＸ８０１抗体の両方の結果は、実質的に同じであった。例示的な実験の結果を図８に示す。
【０３６０】
これに基づき、ＩＮＸ８００およびＩＮＸ８０１の観察されたアゴニスティックな効果は、細胞枯渇に起因するように思われない。むしろ、これらの抗体の両方は、Ｔ細胞活性化／増殖に対する免疫抑制効果、ＧＶＨＤ免疫応答、および免疫へのそれらの特異的ＶＩＳＴＡ媒介免疫抑制効果の促進に基づく炎症誘発性サイトカインの発現を誘発するように思われる。
実施例９：異なる免疫モデルにおける異なるアゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ  Ａｂの効果の要約
【０３６１】
以下の表１および２に示されるように、図４にある配列を有する配列を有する異なる抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体のアゴニスティックな効果または免疫抑制効果が評価された。今までに、１２の異なるキメラ抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体が免疫抑制性であることが示されている。得られた結果のうちのいくつかを表に要約する。ビン１の抗体全てがヒトＶＩＳＴＡへの結合に関して競合するが、ビン２の抗体とはＶＩＳＴＡ結合に関して競合しない。逆に、ビン２の抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体全てが互いにヒトＶＩＳＴＡへの結合に関して競合するが、ビン１の抗体とは競合しない。
【０３６２】
「不確定」と表示される表２の抗体は、同じアッセイにおける免疫抑制効果を含む異なる効果を誘発したか、または他の理由のため曖昧な結果を誘発した。表１および２に示されるように、ＭＬＲアッセイもしくはＣｏｎＡアッセイならびに／または他のインビトロアッセイおよびインビボアッセイにおいて、あるいは自己免疫疾患、炎症性疾患、もしくはＧＶＨＤ疾患モデルにおいて免疫抑制性であり、ヒトＶＩＳＴＡの免疫抑制効果を模倣するか、または刺激する、合計１２の抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体が単離された。これらの結果に基づき、他の抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体が、同じまたは異なるＶＩＳＴＡエピトープ特異性を有するものを含む類似の方法によって得ることができることが予想される。
【０３６３】
また、図９の実験は、ＣｏｎＡアッセイにおける、異なる抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体の、ならびに選択炎症誘発性サイトカインおよび炎症マーカー、すなわち、ＩＬ−２、γインターフェロン、およびＩＬ−１２ｐ７０の発現への効果を比較する。
【表１−１】
2019525943.tif 000003
【表１−２】
2019525943.tif 000004
【表１−３】
2019525943.tif 000005
【表２】
2019525943.tif 000006
【０３６４】
実施例１０：Ｂ細胞エピトープマッピングによる抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体のエピトープの決定
いくつかの推定上のアゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体のエピトープ特異性は、独自の方法［ＰｒｏＡｒｒａｙ  Ｕｌｔｒａ（商標）］を使用して、ヒトＶＩＳＴＡの断片を使用したカスタムペプチドアレイを使用して決定された。本質的に、ペプチド−抗体結合の決定は、ＰｒｏＡｒｒａｙ  Ｕｌｔｒａ（商標）ペプチドマイクロアレイとともに抗体試料をインキュベートし、続いて、蛍光標識された二次抗体とともにインキュベートすることにより行われた。いくつかの洗浄ステップの後、ＰｒｏＡｒｒａｙ  Ｕｌｔｒａ（商標）アレイを乾燥させ、高解像度蛍光マイクロアレイ走査を使用して走査した。
【０３６５】
全てのペプチド（下に列記される）は、別個に合成され、次いで、ＰｒｏＩｍｍｕｎｅ独自の技術を使用して、ＰｒｏＡｒｒａｙ  Ｕｌｔｒａ（商標）スライド表面に結合される。この最適化プロセスは、ペプチドが、対応するタンパク質領域の特性を厳密に模倣するような様式でアレイ上に提示され、遊離ペプチド自体の固有の生理化学的差異を回避し、適合性のある組み合わされたペプチドおよびタンパク質アレイプラットホームを作製することを確実にする。試験分析物（ペプチドおよびタンパク質）は、別のスポットのＰｒｏＡｒｒａｙ  Ｕｌｔｒａ（商標）スライド上に分配され、適切なｇａｌファイルは、得られるアレイ特徴の正確な整列を沈着させた分析物に戻すことができる。
【０３６６】
ペプチド−抗体結合は、ＰｒｏＡｒｒａｙ  Ｕｌｔｒａ（商標）スライドとともに抗体試料（顧客によって提供される）をインキュベートし、続いて、蛍光標識された二次抗体とともにインキュベートすることによって決定される。最終インキュベーションおよび洗浄ステップ後、マイクロアレイを乾燥させ、高解像度マイクロアレイ走査システムにおいて走査する。
【０３６７】
蛍光標識されたＰｒｏＡｒｒａｙ  Ｕｌｔｒａ（商標）スライドを走査した後、スキャナは、走査したマイクロアレイスライド上の各蛍光スポットに関連する蛍光強度のレベルの解釈および定量化を可能にする画像分析ソフトウェアを使用して評価される画像を記録する。ペプチドマイクロアレイは、ヒトＶＩＳＴＡポリペプチド配列から合成される重なるペプチドライブラリに基づいた。配列に基づき、１２個のアミノ酸が重なる１５量体マイクロアレイペプチドを、ＰｒｏＩｍｍｕｎｅ’ｓ  ＰｒｏＡｒｒａｙ  Ｕｌｔｒａ（商標）技術を使用して生成した。合成されたペプチドの詳細は、表３（以下）に列記される。「位置」は、ペプチドが由来するポリペプチド配列内の開始および終了アミノ酸を指す。合成ペプチドは、６つ組スポットにおいて、それぞれ試験ペプチドおよび対照特徴を含む、２４の同一のサブアレイのＰｒｏＡｒｒａｙ  Ｕｌｔｒａ（商標）スライド上に固定された。ペプチドは、以下の表３に示される。
【表３−１】
2019525943.tif 000007
【表３−２】
2019525943.tif 000008
【表３−３】
2019525943.tif 000009
【表３−４】
2019525943.tif 000010
【０３６８】
特定の抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体でのこのエピトープ分析の結果は、図４に要約される。
【０３６９】
実施例１１：エピトープ結合アッセイ
加えて、図４に示される配列を有するいくつかの抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体のエピトープ結合特性は、これらの抗体を、以下に記載されるように、それぞれの結合特徴に基づく異なるエピトープ「ビン」に配置することによって特徴付けられた。
【０３７０】
方法：エピトープビニングを実施するために、ＰｒｏｔｅＯｎ  ＸＰＲ３６システム（ＢｉｏＲａｄ）を使用した。ＰｒｏｔｅＯｎ  ＧＬＣチップ（ＢｉｏＲａｄ、カタログ＃１７６−５０１１）を、アミンカップリング化学物質（ＢｉｏＲａｄ、カタログ＃１７６−２４１０）の製造業者の指示を用いて、２セットの６つのモノクローナル抗体（ｍＡｂ）でコーティングした。競合ｍＡｂを、室温で４時間、ヒトＶＩＳＴＡとともに過剰（２５０ｎＭ最終濃度）で事前インキュベートし、同時に６つが、４分間の会合時間、続いて５分間の解離時間で、コーティングされたｍＡｂのパネルでコーティングされたチップ上で実行された。各実行後、チップを１００ｎＭリン酸で再生した。
【０３７１】
データ分析は、全てのセンサグラムをリガンドにより分類し、ＸおよびＹ軸アラインメントを自動的に実施するアラインメントウィザード、およびアーチファクト除去を適用することを伴う。次いで、Ｉｎｔｅｒｓｐｏｔ補正をデータに適用した。
【０３７２】
非競合ｍＡｂは、同じまたは＞Ａｌシグナル（ヒトＶＩＳＴＡのみへの結合）の結合シグナルを有すると定義された。競合ｍＡｂは、≪Ａｌシグナル（すなわち、ヒトＶＩＳＴＡのみへの結合）の結合シグナルを有すると定義された。例えば、ＶＩＳＴＡと複合体化されたＶＳＴＢ４９およびＶＳＴＢ５１は、チップ上にコーティングされたＶＳＴＢ８５に結合しなかったため、ＶＳＴＢ８５とＶＩＳＴＡ上の同じ結合部位に関して競合すると分類された。特定の抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体でのこのビニング分析の結果は、図４に要約される。
【０３７３】
実施例１２：水素／重水素（Ｈ  Ｄ）交換研究を使用した抗ＶＩＳＴＡ抗体のエピトープマッピング
抗ＶＩＳＴＡ抗体の抗体エピトープは、アラニンスキャニングおよび水素／重水素（Ｈ  Ｄ）交換ならびに前の実施例に記載される重なるペプチドアレイなどの様々な方法によって特定され得る。推定上のアゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体のエピトープを特定するための別の例示的な手段が以下に記載される。
【０３７４】
ヒトＶＩＳＴＡ上のＶＳＴＢ５０、６０、９５、および１１２についてのエピトープを特定するために、対応するＦａｂを使用して、溶液水素／重水素交換質量分析法（ＨＤＸ−ＭＳ）を実施した。Ｈ／Ｄ交換に関して、Ｆａｂ摂動を分析するために使用される手順は、以前に記載されるものと類似し（Ｈａｍｕｒｏ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １４：１７１−１８２，２００３、Ｈｏｒｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４５：８４８８−８４９８，２００６）、いくつかの修正を伴う。Ｆａｂは、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｆａｂ調製キット（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ＃４４９８５）を使用してパパイン消化およびプロテインＡ捕捉を用いてＩｇＧから調製された。ヒトＶＩＳＴＡタンパク質配列は、６つのＮ連結グリコシル化部位を含有する。配列占有率を改善するために、タンパク質をＰＮＧａｓｅ  Ｆで脱グリコシル化した。脱グリコシル化ＶＩＳＴＡタンパク質を重水素化水溶液中で既定の時間の間インキュベートし、交換可能な水素原子において重水素組み込みをもたらした。重水素化ＶＩＳＴＡタンパク質を、４℃で３０秒間、２分間、１０分間、および６０分間、４６重水（Ｄ２０）において、ＶＳＴＢ５０、ＶＳＴＢ６０、ＶＳＴＢ９５、またはＶＳＴＢ１１２のＦａｂと複合体化した。交換反応を低ｐＨでクエンチし、タンパク質をペプシンで消化した。特定されたペプチドにおける重水素レベルを、ＬＣ−ＭＳでの質量シフトから監視した。参照対照として、Ｆａｂ分子と複合体化されなかったことを除いて、ＶＩＳＴＡ  タンパク質を同様に処理した。Ｆａｂに結合する領域は、交換から比較的保護されたそれらの部位であると推測されるため、参照ＶＩＳＴＡタンパク質よりも高い分画の重水素を含有する。約９４％のタンパク質が特定のペプチドにマッピングされ得る。
【０３７５】
ＶＳＴＢ５０／ＶＳＴＢ６０およびＶＳＴＢ９５／ＶＳＴＢ１１２とのＶＩＳＴＡの溶液ＨＤＸ−ＭＳ摂動マップをマッピングし、２つのエピトープ群を特定した。抗ＶＩＳＴＡ  ＶＳＴＢ５０はＶＳＴＢ６０と同じエピトープを認識し、ＶＳＴＢ９５は、ＶＳＴＢ１１２がＶＩＳＴＡ上で結合するのとは別のエピトープ領域に結合する。抗ＶＩＳＴＡ  ＶＳＴＢ５０および６０は、セグメント１０３  ＮＬＴＬＬＤＳＧＬ１１１（配列番号５９）を含む同じエピトープを共有し、１３６ＶＱＴＧＫＤＡＰＳＮＣ１４６（配列番号６０）抗ＶＩＳＴＡ  ＶＳＴＢ９５およびＶＳＴＢ１１２は、セグメント２７ＰＶＤＫＧＨＤＶＴＦ３６（配列番号６１）および５４ＲＲＰＩＲＤＬＴＦＱＤＬ６５（配列番号６２）を含む類似のエピトープを標的とするように思われる。これらのＨＤＸ−ＭＳの結果は、図４に特定される配列を有する例示的な抗ＶＩＳＴＡ抗体のペプチドレベルエピトープを提供する。重なるエピトープ領域はこれら２つの領域のエピトープ群にはなかった。これらの結果は、それらが互いに競合しないという点で前の競合ビニングデータと一致する。再度、本明細書に記載されるように分析された様々な抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体のエピトープ分析結果は、図４に要約される。
実施例１３：アゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体を特定するためのアッセイ
【０３７６】
本明細書に開示されるように、我々は１２のアゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体を特定しており、前述の免疫モデルにおける更なる実証的実験が他の抗体で行われるか、または繰り返されると、他を把握するはずである。「ＶＳＴＢ」と指定される図４において特定される抗体は、本明細書に記載される多数のアゴニスティックな抗ヒト抗体の良好な単離に基づいて他のアゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体、具体的にはエピトープ群１または２に結合する他の特定をもたらすはずである、完全ヒト高親和性カニクイザル交差反応性抗ＶＩＳＴＡ抗体（ライブラリ親和性はヒトにおいて２９８〜２４ｐＭ、カニクイザルにおいて４４３〜２６ｐＭの範囲である）である。これらの方法は以下に記載される。
インビトロでの機能スクリーニング
【０３７７】
直接ＣＤ４媒介：このアプローチにおいて、ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ｈＶ−ＫＩ脾細胞からの負の選択によって単離される。次いで、１×１０５Ｔ細胞を、５０ＶＩＳＴＡ  ｍＡｂ（２０μｇ／ｍｌ）またはアイソタイプ対照のそれぞれとともに、氷上で３０分間インキュベートする。次いで、Ｔ細胞および抗体を、抗ＣＤ３コーティングされた９６ウェル平底プレオート上に設置し、７２時間培養する。７２時間時点で、トリチウム標識したチミジンを培養物に８時間添加して、Ｈ３組み込みにより増殖を測定する。このアッセイを使用して、技術的３つ組の単一実験で、５０全てのｍＡｂをスクリーニングすることができる。各抗体は、活性を確認するために、３つの独立した実験において試験される。アイソタイプ対照と比較して、増殖を統計的に有意な程度まで減少させるＭＡｂは、「抑制性」として特定される。次いで、初期スクリーニングで特定された全ての抑制性ｍＡｂを同じアッセイで再試験して、用量応答曲線を生成する。各抗体は半対数希釈（３０μｇ／ｍｌ→０．０１μｇ／ｍｌ）で試験され、ＩＣ５０値は増殖について計算される。ｈＶ−ＫＩアッセイにおいて抑制性として特定される全ての抗体は、初代ヒトＴ細胞で確認され、増殖についてＩＣ５０スコアによってランク付けされる。
【０３７８】
ＮＨＰ交差反応性アッセイ：このアッセイにおいて、我々は、強力なＴ細胞増殖を駆動するＣＤ３クローンＳＰ３４の使用を通して、マウスおよびヒトに関して記載された同一のＣＤ３媒介増殖アッセイにより、関連毒性種であるＭａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ（以後、非ヒト霊長類または「ＮＨＰ」と称される）において機能活性についてスクリーニングする。ＮＨＰからの全血はＷｏｒｌｄ  Ｗｉｄｅ  Ｐｒｉｍａｔｅｓ（Ｆｌｏｒｉｄａ，ＵＳＡ）から得、Ｔ細胞は磁気分離により単離される。Ｔ細胞を抗体とともにインキュベートし、ＣＤ３コーティングされたプレート上で７２時間培養する。増殖はトリチウム組み込みによって測定され、ＩＣ５０スコアは各抗体について生成される。
インビボ動物モデルを使用する機能的スクリーニング
【０３７９】
１．コンカナバリンＡ誘導性肝炎動物モデルにおける本発明によるＶＩＳＴＡアゴニスト抗体の試験
自己免疫性肝炎（ＡＩＨ）は、肝臓に対するＢ細胞およびＴ細胞応答をもたらす自己寛容の喪失を特徴とする肝臓の慢性炎症性疾患である。ＣｏｎＡモデルは、ＡＩＨの原因を理解するための最良の特徴付けされた系を表す。ＣｏｎＡは、肝臓において富化される特定の糖部分に結合するレクチンである。ＣｏｎＡによるこれらの糖残基の修飾は、肝臓マクロファージによって発現される修飾されたＭＨＣ構造との相互作用を通して迅速なＣＤ４＋Ｔ細胞活性化をもたらす。強いが一過性であるサイトカイン産生は、４〜６時間以内にピーク血漿レベルに達する最も標準的なＴ細胞サイトカイン（ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＦＮγ、およびＴＮＦα）で生じる。注目すべきことに、ＣｏｎＡ誘導性炎症は、ＣＤ４＋Ｔ細胞を枯渇させることによって遮断される。ｈＶ−ＫＩマウスを有するＣｏｎＡモデルを使用して、本発明によるアゴニスティックな抗ＶＩＳＴＡ  ｍＡｂの抑制活性を確認することができる。マウスを量り、１５ｍｐｋのＣｏｎＡを注射する３時間前に、１０ｍｐｋの抗ＶＩＳＴＡ抗体または適切なアイソタイプ対照で処置した。抗ＶＩＳＴＡ  ｍＡｂはＩＰ投与される一方で、ＣｏｎＡはこれらのマウスにおいて尾静脈を介して注射される。ＣｏｎＡ投与６時間後の時点で、マウスを安楽死させ、血液を収集する。次いで、血漿画分を、３２のサイトカインの多重アッセイにより、血漿サイトカインに関して分析した。各抗体は、活性を確認するために、独立した実験において２回試験される。３２−ｐｌｅｘの各サイトカインに関して、各抗ＶＩＳＴＡ抗体をアイソタイプ対照と比較するために、Ｄｕｎｎｅｔｔ事後検定試験を用いて、一元配置ＡＮＯＶＡが実施される。試験された抗ＶＩＳＴＡ  ｍＡｂは、サイトカイン抑制の有効性（抑制されたサイトカインがどれくらいであるか）および変動性（各実験内および実験間の抑制がどのくらい一貫しているか）に基づいてランク付けされる。Ｔ細胞活性化に標準的に関連付けられているサイトカインを抑制するｍＡｂに更に重点が置かれる。
【０３８０】
同日付出願された、および上記の関連ＰＣＴ出願に開示されるように、本発明によるいくつかの抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体を、ＣｏｎＡモデルにおいてスクリーニングすると、その中で有効（免疫抑制性）であった、すなわち、それらはＣｏｎＡ誘発性サイトカイン産生を抑制し、生存を促進し、特に、ＩＬ−２を含むＴ細胞活性化に関与するサイトカインの発現を抑制した。特に、本発明者らは、ＩＮＸ８００、ＩＮＸ８０１、ならびにＩＮＸ９０３およびＩＮＸ９０４、ならびにアゴニスト抗マウスＶＩＳＴＡ抗体を試験し、全てＣｏｎＡ肝炎モデルにおいて有効（免疫抑制性）であった。したがって、本発明によるアゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体は、肝炎などのいくつかの慢性および急性感染状態に関連する炎症および肝毒性の治療／予防において有用なはずである。
【０３８１】
２．移植片対宿主病動物モデルにおける本発明によるＶＩＳＴＡアゴニスト抗体の試験
ＧＶＨＤは、照射宿主への同種Ｔ細胞の養子移入によって媒介される全身性疾患である。ＧＶＨＤの原因において重要な５つの主要なステップがある：１）Ｔ細胞移入に先行する照射事象の形態で最も一般的である、宿主への損傷、２）宿主およびドナーＡＰＣの両方による同種Ｔ細胞の活性化、３）リンパ節および脾臓におけるＴ細胞の拡大、４）皮膚、腸、肝臓、および肺などの末梢部位内への輸送、ならびに５）Ｔ細胞およびまた動員された骨髄細胞により駆動される宿主への損傷。Ｆ１→親株などのある特定のモデルにおいて、マウスは抗核ｍＡｂおよび免疫複合体媒介性糸球体腎炎を発症するため、狼瘡に好適なモデルである慢性ＧＶＨＤが生じる。注目すべきことに、ドナーＴ細胞からのＶＩＳＴＡの遺伝子欠失は、ＷＴ  Ｔ細胞を受容するマウスに見られるよりも侵襲的な形態のＧＨＶＤをもたらす。
【０３８２】
このアッセイを使用して、アゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ候補のアゴニズムを特定し、ランク付けすることができる。また、このアッセイを使用して、本発明によるアゴニスト抗体がＧＶＨＤを治療するかまたは予防するために使用され得ることを確認することができる。このモデルにおいて、ＢＡＬＢ／ｃマウスは、ＧＶＨＤを誘導するために致死的に照射され、かつｈＶ−ＫＩマウスからの同種骨髄細胞および脾臓Ｔ細胞を与えられ、１つの群は陰性対照としてＴ細胞を受容しない。同種Ｔ細胞を受容するマウスは、対照Ｉｇ群および治療群に分けられる。最大４つの独特のＶＩＳＴＡ  ｍＡｂが、１群当たり８匹のマウスの単一実験で使用され、２つの反復実験を行う。１０ｍｐｋまたは別の用量の抗体がＴ細胞移入時に、ならびに移入後２日目および４日目に投与される。各マウスの体重を追跡し、２０％を超える初期出発体重を失う任意のマウスは屠殺される。各実験についてカプラン・マイヤー曲線が、各抗ＶＩＳＴＡ抗体と対照を比較するログランク統計検定を用いて生成される。４つ全てのＶＩＳＴＡ  ｍＡｂがＧＶＨＤから完全に保護される場合、用量応答アッセイが、１０、３、１、および０．３ｍｐｋの抗体で処置される群のＧＶＨＤモデルにおいて実行される。ＬＤ５０値が各抗体について計算される。
【０３８３】
同日付で出願された、および上記の関連出願に開示されるように、本発明によるいくつかのアゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体をこの動物モデルにおいて評価した。これらの試験された抗体は全て、このモデルにおいて有効（免疫抑制性）であった、すなわち、それらは疾患の症状を減少させ、疾患の進行を緩徐し、疾患関連体重損失を減少させ、生存を促進した。特に、ＩＮＸ８００、ＩＮＸ８０１、ＩＮＸ９０１、ＩＮＸ９０２、ＩＮＸ９０３、およびＩＮＸ９０４の各々を評価し、この動物モデルにおける疾患症状を軽減または予防することを示した。また、Ａ形態およびＢ形態のいずれかがＧＶＨＤ動物モデルにおいて同様に効果的であったＩＮＸ９０１のＡ形態およびＢ形態を使用して決定された。
【０３８４】
３．炎症性腸疾患の動物モデルにおける本発明によるＶＩＳＴＡアゴニスト抗体の試験
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、および潰瘍性大腸炎は、宿主免疫応答、遺伝的感受性、環境因子、および腸内腔内容物間の、不完全に定義された複雑な相互作用から生じる。近年のゲノムワイド関連研究は、免疫細胞制御遺伝子とＩＢＤ感受性との間の関連性を報告している。先天性および適応免疫細胞の内因性遺伝子の両方が、これらの研究において表され、ＩＢＤの原因におけるこれらの細胞集団の中心的役割を示す。現在、ヒトＩＢＤの５０を超える動物モデルが存在する。１つのモデルがヒトＩＢＤを完全に模写しないが、多くは、疾患の発症および進行ならびに創傷治癒応答を含む、ヒト疾患の様々な態様の研究に有用である。
【０３８５】
１つの十分に確立されたＩＢＤモデルにおいて、腸炎症は、Ｔ細胞およびＢ細胞欠損レシピエントマウスへの同系脾臓ＣＤ４＋  ＣＤ４５ＲＢｈｉＴ細胞養子移入で開始される。ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＢｈｉ  Ｔ細胞集団は、慢性小腸炎症および結腸炎症を誘導することができる活性化のためにプライムされたナイーブＴ細胞を主に含有する。この方法は、研究者が、疾患原因に関連する生物学的に関連する質問に答えるために、先天性および適応免疫細胞集団の両方を含む主な実験変数を修正することを可能にする。加えて、この方法は、マウスにおける疾患進行の臨床的特徴の動態研究を可能にする疾患発症の正確な開始、および十分に特徴付けされた実験時間経過を提供する。この方法によって誘導される腸炎症は、慢性大腸壁性炎症および小腸貫壁性炎症、ＴＮＦおよびＩＬ−１２などのサイトカインによって駆動される原因、ならびに消耗などの全身症状を含む、ヒトＩＢＤと多くの特徴を共有する。したがって、これはヒトＩＢＤの原因を研究するための理想的なモデル系である。
【０３８６】
同日付で出願された関連ＰＣＴ出願に開示されるように、本発明によるアゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体（ＩＮＸ９０１）は、このＩＢＤモデルにおいて試験され、有効であることが示された。特に、このアゴニスト抗体は、サイトカインレベルを抑制し、（ｉ）大腸炎関連体重減少、（ｉｉ）大腸炎の進行に関連する体重減少、（ｉｉｉ）結腸の短縮、（ｉｖ）結腸への炎症性浸潤物の動員、および（ｖ）大腸炎の発達を効果的に予防するかまたは阻害することが示された。したがって、本発明によるアゴニストＶＩＳＴＡ抗体は、ＩＢＤならびに関連炎症状態および腸状態の治療に使用され得る。
【０３８７】
４．狼瘡動物モデルにおける本発明によるＶＩＳＴＡアゴニスト抗体の試験
狼瘡は、腎臓炎症、タンパク尿の増加、および脾腫を含む症状を有する自己免疫状態または炎症状態である。狼瘡には４種類があり、このうち、全身性エリテマトーデスまたは（「ＳＬＥ」）が最も一般的な形態である。この疾患は、軽度または重度であり得、主要器官系に影響を及ぼす可能性がある。狼瘡は、血液から廃棄物を濾過する能力に影響を及ぼす可能性がある、ループス腎炎と呼ばれる腎臓の炎症をもたらし得る原因不明の自己免疫状態であり、かつまたは重度の場合、透析または腎臓移植を必要とする腎臓損傷をもたらし得る。また、ＳＬＥは、呼吸困難を引き起こし得る、肺高血圧症と呼ばれる肺の血圧の増加をもたらし得る。更なるＳＬＥは、記憶障害、混乱、頭痛、および脳卒中を引き起こし得る神経系および脳の炎症を引き起こし得る。更なるＳＬＥは、脳の血管内での炎症をもたらし得、これは高熱、発作、および行動変化を引き起こし得る。また、ＳＬＥは、心臓発作につながり得る、冠動脈壁上の沈着物の蓄積である、動脈の硬化または冠動脈疾患をもたらし得る。
【０３８８】
同日付で出願された関連ＰＣＴ出願に開示されるように、本発明によるアゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体（ＩＮＸ９０３、ＩＮＸ９０１、ＩＮＸ９０１−Ａ、およびＩＮＸ９０１−Ｂ）および抗マウスＶＩＳＴＡ抗体が試験され、ＭＲＬ／ｌｐｒ狼瘡モデル、ＮＺＢＷＦ−１狼瘡モデル、およびＢ６Ｄ２Ｆモデルを含む異なる狼瘡モデルにおいて有効であることが示された。Ｂ６Ｄ２Ｆモデルはマウスモデルであり、ＳＬＥはヒトＶＩＳＴＡノックインＤＤＥ１ＣＤ８枯渇脾細胞（ドナー）のＢ６Ｄ２Ｆ１宿主（レシピエント）への移入によって誘発される。このモデルにおいて、ドナーＣＤ４Ｔ細胞ポリクローナル活性化は、腎疾患につながる同族の宿主Ｂ細胞活性化、拡大、および自己抗体の産生を駆動する。Ｂ６Ｄ２Ｆ１モデルに移入されたＣＤ８枯渇されたＢ６の狼瘡様特徴は、（１）免疫複合体糸球体腎炎、（２）抗核ａｂ、（３）抗ｄｓＤＮＡ  ａｂ、および（４）抗ＲＢＣ  ａｂ（クームズ陽性）を含む。加えて、このモデルは、腎疾患重症度において性別に基づく相違を満たす。
【０３８９】
３つの異なる狼瘡モデルにおいて、アゴニスティックな抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体およびマウスＶＩＳＴＡ抗体は、有効であり、狼瘡疾患発症の発生率を減少させる、疾患の進行を減少させる、タンパク尿レベルを減少させる、腎炎および腎臓損傷を阻害する、Ｔ細胞活性化および蓄積を減少させる、Ｂ細胞活性化および蓄積を減少させる、ならびに自己抗体産生を阻害することが示された。特に、ＩＮＸ９０３、ＩＮＸ９０１、ＩＮＸ９０１−Ａ、およびＩＮＸ９０１−Ｂは、（ｉ）Ｔ細胞増殖および活性化を低減させる、（ｉｉ）同族のＢ細胞活性化（ＭＨＣＩＩ発現）および蓄積を減少させる、脾腫を減少させる、抗ｄｓＤＮＡ  ＩｇＧ自己抗体産生を減少させる、ならびにＩ型インターフェロンシグネチャを減少させることが示された。また、これらの免疫抑制効果は、抗体のヒトＩｇＧ２定常領域がＡ形態またはＢ形態であったかどうかによって影響を受けなかった。したがって、本発明によるアゴニストＶＩＳＴＡ抗体は、狼瘡ならびに関連炎症状態および自己免疫状態の治療に使用され得る。
【０３９０】
５．乾癬動物モデルにおけるＶＩＳＴＡアゴニスト抗体の試験
イミキモド（ＩＭＱＤ）誘導性乾癬モデル
乾癬を治療する抗ＶＩＳＴＡ抗体の能力は、イミキモド（ＩＭＱＤ）誘導性乾癬モデルを使用して評価された。イミキモド（ＩＭＱＤ）は、ウイルス感染および黒色腫などの皮膚科的状態に広く使用されるＴＬＲ７／８アゴニストを含有する市販のクリームである。複数日にわたる皮膚へのＩＭＱＤの適用は、ケラチノサイトの増殖を介して表皮の肥厚をもたらす。更に、真皮層への免疫学的浸潤がＴ細胞および骨髄細胞両方の集団で生じる。ＩＭＱＤの反復投与は、乾癬を有する患者において観察されるものと類似の皮膚病変を創出する。ＩＬ−１７およびＩＬ−２３は、ＩＭＱＤへの免疫応答に関与する主要なサイトカインであると考えられる。
【０３９１】
同日付で出願された関連ＰＣＴ出願に開示されるように、アゴニスティックな抗ＶＩＳＴＡ抗体は、この乾癬モデルにおいて試験され、有効であることが示された。特に、この抗体はイミキモド処置された皮膚を浸潤するＣＤ３＋Ｔ細胞の数を減少させた。観察された結果に基づき、ＶＩＳＴＡアゴニスト抗体は、乾癬および他のＴ細胞媒介性自己免疫状態または炎症性皮膚状態の治療または予防に使用され得る。
【０３９２】
６．関節炎動物モデルにおけるＶＩＳＴＡアゴニスト抗体の試験
関節炎を治療するための抗ＶＩＳＴＡ抗体の免疫抑制効果が異なる動物モデルにおいて試験され得る。同日付で出願された関連ＰＣＴ出願に開示されるように、アゴニスティックな抗マウスＶＩＳＴＡ抗体および抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体が試験され、十分に容認されている関節炎モデル、すなわち、コラーゲン誘導関節炎またはＣＩＡモデルにおいて有効であることが示された。ＩＮＸ８００、ＩＮＸ９０１、ＩＮＸ９０２、およびＩＮＸ９０３、ならびにハムスター抗マウス抗ＶＩＳＴＡ抗体は、この関節炎モデルにおいて全て試験された。疾患の発症は、罹患した関節における炎症の腫れを経時的に測定することによって評価された。臨床的スコア化は、腫れた各指について１のスコア、腫れた足蹠について５のスコア、腫れた手首または足首について５のスコアを与えることにより（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｓ採点システム）達成され、各動物に関して、合わせて最大６０のスコアが与えられる。
【０３９３】
このＰＣＴ出願に示されるように、これらの抗体の各々は関節炎疾患を減少させ、ＩＮＸ９０１およびＩＮＸ９０２は疾患範囲を有意に減少させた。これらの結果に基づいて、抗ヒトＶＩＳＴＡアゴニスト抗体は、関節リウマチおよび他の炎症性状態または自己免疫状態の治療または予防に使用され得る。
【０３９４】
実施例１４：異なるインビトロモデルおよびインビボモデルにおけるα−ヒトＶＩＳＴＡ抗体ＩＮＸ９０１アゴニスト上のヒトＩｇＧ２骨格の役割／免疫抑制活性の評価
ネイティブなヒトＩｇＧ２骨格上の抗体は、重鎖ヒンジ、ＣＨ１、および軽鎖に存在するシステイン間のジスルフィド結合シャフリングによって生じたアイソフォームの混合物として存在する（Ｚｈａｎｇ，Ａ．，（２０１５），“Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ２  ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ  ｉｓｏｆｏｒｍｓ  ｒｅｖｅａｌｅｄ  ｂｙ  ｈｙｄｒｏｇｅｎ／ｄｅｕｔｅｒｉｕｍ  ｅｘｃｈａｎｇｅ  ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ”，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５４（１０），１９５６−１９６２；Ｆｉｇｕｒｅ  １０）。これらのアイソフォームは、Ｄｉｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｒｅｖｅｒｓｅｄ−ｐｈａｓｅ  ｈｉｇｈ−ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ／ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ  ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｉｎｇ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｙ  ａｎｄ  ｓｔａｂｉｌｉｔｙ”，Ｊ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  Ａ，１１２０（１），１１２−１２０によって開発された方法に基づいて、ＲＰ−ＨＰＬＣ（図  １０）によって評価された。最適化方法は、Ｄｉｌｌｏｎ（同上）のものと比較して、より浅くかつより高い有機移動相Ｂ含量を使用した。ＩＮＸ９０１から濃縮された別個のＡ形態およびＢ形態は、Ｄｉｌｌｏｎ（同上）に報告される条件に厳密に従って調製されたが、ＤＰＢＳに交換し戻された緩衝液と組み合わされ、内毒素除去手順が濃縮反応後に用いられた（図１１）。
【０３９５】
これらの実験を調製する過程において、Ａ濃縮形態の復帰が予想より迅速に、かつ予想より低い残留酸化還元試薬濃度で生じることが観察された。したがって、高速スピン、サイズ排除に基づく脱塩手順の利用が用いられ、これにより、この復帰が大幅に防止されるように思われた。図１０のパネル（Ａ）に示されるように、ジスルフィドシャフリングは、Ａ／Ｂの移行とともに、アイソフォームＡおよびＢをもたらす（Ｚｈａｎｇ，Ａら、２０１５から再現された）。（Ｂ）アイソフォームは、ＲＰ−ＨＰＬＣにより区別可能である（Ｚｈａｎｇ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．，２０１５からの図）。（Ｃ）ＩＮＸ９０１の観察されたＲＰ−ＨＰＬＣクロマトグラム。
【０３９６】
ＩｇＧ２アイソフォームを検出するための発明者らの最適化ＲＰ−ＨＰＬＣ方法を以下に記載する。図１１において：（黒色線、上部）クロマトグラムはＢ形態を画定する優勢な最左ピークを示す。（赤色線、下部）クロマトグラムはＡ形態を画定する優勢な右ピークを示す。
アイソフォーム検出のための最適化ＲＰ−ＨＰＬＣ方法
移動相Ａの調製（水中０．１％ｖ／ｖ  ＴＦＡ）：
１．１．０Ｌのメスシリンダーに１．０ＬのＭｉｌｌｉ−Ｑ水を量り入れた
２．１ｍＬのガラスのＨａｍｉｌｔｏｎシリンジを使用して、１Ｌの水に１．０ｍＬのＴＦＡを添加した
３．溶液を１Ｌ瓶に移し、十分に混合した。
４．使用期限は調製の２週間後である
移動相Ｂの調製（７０％ｖ／ｖ  ＩＰＡ、２０％ｖ／ｖ  ＡＣＮ、９．９％ｖ／ｖ水、０．１％ｖ／ｖ  ＴＦＡ）：
１．１．０Ｌのメスシリンダーに７００ｍＬのＩＰＡを量り入れた
２．２５０ｍＬのメスシリンダーに２００ｍＬのＡＣＮを量り入れ、７００ｍＬのＩＰＡを含有する１．０Ｌのメスシリンダーに移した
３．液体が１．０Ｌのマークに達するまで、７００ｍＬのＩＰＡおよび２００ｍＬのＡＣＮを含有する１．０ＬのメスシリンダーにＭｉｌｌｉ−Ｑ水を添加した
４．１ｍＬのガラスのＨａｍｉｌｔｏｎシリンジを使用して、１Ｌの水に１．０ｍＬのＴＦＡを添加した
５．溶液を１Ｌ瓶に移し、十分に混合した。
６．使用期限は調製の２週間後である
ＲＰ−ＨＰＬＣクロマトグラフィー条件
１．カラムＡ（大口径）：Ｚｏｒｂａｘ  ３００ＳＢ−Ｃ８、５μｍ、２．１ｘ１５０ｍｍ、＜＜ＯＲ＞＞
２．カラムＢ（狭口径）：Ｚｏｒｂａｘ  ３００ＳＢ−Ｃ８、３．５μｍ、１ｘ５０ｍｍ
３．移動相Ａ：水中０．１ｖ／ｖ  ＴＦＡ
４．移動相Ｂ：７０％ｖ／ｖ  ＩＰＡ、２０％ｖ／ｖ  ＡＣＮ、９．９％ｖ／ｖ水、０．１％ｖ／ｖ  ＴＦＡ
５．流量：カラムＡについては０．５ｍＬ／分、またはカラムＢについては０．２５ｍＬ／分
６．カラムコンパートメント：７５．０±１．０℃
７．検出：２１４ｎｍ
８．ＲＰ−ＨＰＬＣ移動相勾配（以下の表）
【表４】
2019525943.tif 000011
ＩＮＸ９０１ジスルフィドアイソフォーム濃縮方法
Ｂ形態濃縮
１．内毒素不含非発熱性チューブに、以下を添加する：
２．１ｍＬのＩＮＸ９０１（５．６６ｍｇ／ｍＬ）
７９２．６μＬの１ＭトリスｐＨ８．０
４９５．４μＬの内毒素不含水
３９６．３の追加の内毒素不含水
２３７．８μＬの１００ｍＭシステイン
３９．６μＬの１００ｍＭシスタミン
２．フィンガーボルテックス（軽く）、次いで２〜８℃で２４時間キャップする
３．室温で２時間、０．３Ｍ  ＮａＯＨ中にＰａｌｌ  ｍｉｃｒｏｓｅｐスピンコンセントレータを浸漬し、次いで１０×ＤＰＢＳで３×、その後内毒素不含水で３回すすいだ。使用前にＢＳＣで風乾させた
４．０．５ｍＬの内毒素除去カラムを再生するための製造業者の指示に従い、０．２Ｎ  ＮａＯＨ／９５％エタノール（室温で２時間）を使用する。ステップ３のオプション：最終平衡化緩衝液として１×ＤＰＢＳを使用した
５．別個のＰＡＬＬ  ｍｉｃｒｏｓｅｐ（上で調製されるように）において、約４，０２０μＬの反応物（ステップ２から）を濃縮した。
６．３５分間、２，５００Ｘ  Ｇで０．４ｍＬ（≧１０Ｘ）に濃縮し、次いで４ｍＬの１×ＤＰＢＳで再希釈し、更に２回繰り返した
７．１５分間、２，５００Ｘ  Ｇで２ｍＬ未満に濃縮し、次いで１×ＤＰＢＳを添加して２ｍＬに戻した
８．２ｍＬの緩衝液交換試料全てを、再生し、スピン乾燥させ、底部キャップした内毒素除去カラムに添加し、上部をしっかりキャップし、倒置し、室温に設置し、約２０分間毎に更に３回倒置し、次いで試料を非発熱性チューブにスピンアウトさせ（製造業者の指示のとおり、５００  Ｘ  Ｇで１分間）、２〜８℃に設置した。
Ａ形態濃縮
１．内毒素不含非発熱性チューブに、以下を添加する：
１７５０μＬのＩＮＸ９０１（６．２ｍｇ／ｍＬ）
３７０μＬの内毒素不含水
７００μＬの  １ＭトリスｐＨ８．０
４３５μＬの８Ｍ  ＧｄＣｌ
２１０μＬの０．１ＭシステインＨＣｌ（１Ｍストックから新たに作製）
３５μＬの０．１Ｍシスタミン−２ＨＣｌ（１Ｍ  のストックから新たに作製）
（最終容量３５００μＬ）
２．フィンガーボルテックス（軽く）、次いで２〜８℃で２４時間キャップする
３．製造業者の指示のとおり、＃７−２ｍＬ  Ｚｅｂａスピンカラム（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｐ／Ｎ  ８９８９０）を調製し、１Ｘダルベッコリン酸緩衝食塩水（ＤＰＢＳ）中に平衡化した。
４．５００μＬの上記の反応混合物を＃７の各々に充填し、１０００Ｘ  Ｇ（同様に製造業者の指示のとおり）で２分間スピンし、清潔な発熱物質不含チューブに収集した。
５．脱発熱化ＰＡＬＬ  ｍｉｃｒｏｓｅｐに設置し、合計１時間１０分スピンし、約５ｍｇ／ｍＬで約１．７ｍＬに濃縮した
６．上記の約１．７ｍＬ全てを、製造業者の指示のとおり（室温で、０．２Ｍ  ＮａＯＨで一晩を含む）調製された１つの０．５ｍＬの内毒素除去スピンカラム（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｐ／Ｎ  ８８２７４）に添加し、１ＸＤＰＢＳ中に平衡化した。室温で約１時間放置し、次いで更に約１時間４℃に設置し、両方の場合において、キャップしたチューブを約１５分毎に倒置した。
７．５００Ｘ  Ｇで１分間スピンことによって調製物を回収した（同様に製造業者の指示のとおり）。
８．回収した容量：４．６１ｍｇ／ｍＬで約１．３ｍＬ（全ての濃度は０．７３のＮａｎｏＤｒｏｐ’ｓ内蔵ＩｇＧ吸光係数に基づく）
【０３９７】
ＩｇＧ２  Ａ−およびＢロック変異型
ＩｇＧ２のアミノ酸配列に対する特定の置換は、ジスルフィドシャフリングを防止することができ、変異に応じて、Ａ様またはＢ様のいずれかであるロック立体構造をもたらす（Ｍａｒｔｉｎｅｚ，ｅｔ  ａｌ．，（２００８）．“Ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ  ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｇ２  ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｉｓｏｆｏｒｍｓ”，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４７（２８），７４９６−７５０８、Ａｌｌｅｎ，ｅｔ  ａｌ．，（２００９），“Ｉｎｔｅｒｃｈａｉｎ  ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ  ｂｏｎｄｉｎｇ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ２  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｐｒｏｂｅｄ  ｂｙ  ｓｉｔｅ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ”，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４８（１７），３７５５−３７６６。
【０３９８】
したがって、本発明者らは、Ｗｈｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５），“Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｇ２  ｈｉｎｇｅ  ｉｍｐａｒｔｓ  ｓｕｐｅｒａｇｏｎｉｓｔｉｃ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｔｏ  ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ”，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ，２７（１），１３８−１４８によって使用されるＩｇＧ２変異型と一致するように、Ｃ２３３Ｓ（Ａ−ロック）またはＣ１２７Ｓ（Ｂ−ロック）変異（Ｅｕ付番）のいずれかを有するＩＮＸ９０１およびＩＮＸ９０８変異型を設計した。定常重鎖配列を以下に列記する。
ＩｇＧ２  Ｃ２３３Ｓ（Ａ−ロック）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳ
ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＳＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦ
ＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲ
ＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮ
ＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮ
ＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号６３）
ＩｇＧ２  Ｃ１２７Ｓ（Ｂ−ロック）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳ
ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦ
ＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲ
ＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮ
ＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮ
ＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号６４）
【０３９９】
サイレントＦｃ変異型
本発明者らは、ＩｇＧ１骨格上に次の点変異を導入することによって、サイレントＦｃ領域を有するＩＮＸ９０１およびＩＮＸ９０８変異型を設計した。Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ａ／Ｈ２６８Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ（ＭｃＣａｒｔｈｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５）米国特許出願第１４／８１８８６４号。Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ：Ｕ．Ｓ．。一種類の変異型（ＩＮＸ９０１ＳｉおよびＩＮＸ９０８Ｓｉ）において、重定常領域のＣＨ１／ヒンジ領域は、天然ＩｇＧ２のジスルフィドシャフリングを支持しない天然ＩｇＧ１である（図１２、中央）。第２の種類の変異型（ＩＮＸ９０１ＨＳｉおよびＩＮＸ９０８ＨＳｉ）において、ＣＨ１／ヒンジ領域は、ジスルフィドシャフリングを支持する天然ＩｇＧ２である（Ｗｈｉｔｅ，Ａ．Ｌ．ら、２０１５）（図１２、下部）。両方の種類の変異型の定常重鎖配列を以下に列記する。
サイレントＦｃを有するＩｇＧ１（ＩＮＸ９０１ＳｉおよびＩＮＸ９０８Ｓｉ）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳ
ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡ
ＳＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＡＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮ
ＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥ
ＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷ
ＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号６５）
ＩｇＧ２  ＣＨ１／ヒンジ＋ＩｇＧ１サイレントＦｃ（ＩＮＸ９０１ＨＳｉおよびＩＮＸ９０８ＨＳｉ）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳ
ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＳＳＶ
ＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＡＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹ
ＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫ
ＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧ
ＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号６６）
【０４００】
図１２の実験は、ジスルフィドシャフリングに関するＩＮＸ９０１  Ｆｃサイレント変異型の免疫特性を比較する。（上部）ＩｇＧ２骨格上のＩＮＸ９０１は、Ａ、Ａ／Ｂ、およびＢのアイソフォームの予想される混合物を示す。（中央）サイレントＩｇＧ１骨格上のＩＮＸ９０１Ｓｉは、単一アイソフォームとして存在する。（下部）ＩＮＸ９０１ＨＳｉは、天然ＩｇＧ２に等しいジスルフィドシャフリングを可能にする、ＩｇＧ２からのＣＨ１／ヒンジを有するＩｇＧ１サイレントＦｃ領域を有する。これらの結果は、ＦｃＲ結合が本発明の抗体のアゴニスト特性に影響を及ぼすと思われることを示す。
【０４０１】
実施例１５：ヒンジおよびＦｃ領域の要件を決定するための様々なＩｇ骨格におけるＩＮＸ９０１およびＩＮＸ９０８の機能
我々は、抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体ＩＮＸ９０１およびＩＮＸ９０８の重鎖のＣＨ１／ヒンジおよびＦｃ領域の機能的要件を評価するための実験を行った。それらの元の状態において、両分子はネイティブなヒトＩｇＧ２骨格上にあり、したがって、ジスルフィドシャフリングをもたらす立体構造的に異なるアイソフォームの混合物である。前のデータが、このアッセイがＩＮＸ９０１およびＩＮＸ９０８の両方の機能性の頑強な読み取りを提供することを示すため、高細胞密度混合リンパ球反応（ＭＬＲ）がこれらの研究のために選択された。特定のアイソフォームが、ＡまたはＢアイソフォームのいずれかへの生化学的歪み、Ａ形態またはＢ形態に立体構造を「ロック」するための遺伝子修飾、ならびにＦｃが発現停止され、ＣＨ１／ヒンジ領域がＩｇＧ１（ジスルフィドシャフリングが生じない）またはＩｇＧ２（天然ジスルフィドシャフリングを可能にする）のいずれかに由来するキメラ分子の機能に関与するかを調査するために、ＩＮＸ９０１および／またはＩＮＸ９０８の以下の修飾が行われた。
【０４０２】
アッセイの結果は、ＩＮＸ９０１およびＩＮＸ９０８が、Ａ形態、Ｂ形態、または天然ＩｇＧ２を特徴付ける形態の混合物に関わらず機能を保持することを示す。更に、ＩＮＸ９０１およびＩＮＸ９０８の両方は、機能性のための活性Ｆｃ領域を必要とする。
【０４０３】
ＭＬＲは、同種Ｔ細胞応答を駆動するためにＭＨＣクラスＩおよびＩＩミスマッチに依存する標準的な免疫学的アッセイである。末梢血単核細胞は、２つのミスマッチ個体から単離され、一緒にインキュベートされ、これらのミスマッチの結果として、増殖およびサイトカイン産生が生じる。高細胞密度条件（ＨＣＤ）（＞１×１０７細胞／ｍｌを有する培養物を意味する）は、インビトロでの抗体のアゴニスティックな機能を解明するために以前に報告された。我々の前のデータは、ＩＮＸ９０１およびＩＮＸ９０８の両方がＭＬＲのＨＣＤ条件下でＴＮＦαの発現を抑制することができることを示す。
【０４０４】
ＨＣＤ  ＭＬＲアッセイを使用して、各抗体のＩｇＧ２ジスルフィドアイソフォームおよび／またはＦｃ発現停止に関して、遺伝子修飾または生化学的修飾のいずれかの後にＩＮＸ９０１およびＩＮＸ９０８の機能を評価した。ＭＬＲを実行する前に、各抗体が、ＥＬＩＳＡにより組換えＶＩＳＴＡに結合することを確認した。ＩＮＸ９０１は、Ｅｌｉｏｎ，ＬＬＣ（Ｌｏｕｉｓｖｉｌｌｅ，ＣＯ）に送られ、ここで、主にＡ形態（ＩＮＸ９０１  Ａ歪み）またはＢ形態（ＩＮＸ９０１  Ｂ歪み）のいずれかであるように酸化還元により修飾された。前の例に記載されるように、歪みはＲＰ−ＨＰＬＣによって確認された。（図１１）。各抗体ならびに親ＩＮＸ９０１を、用量応答でＨＣＤ  ＭＬＲに希釈し、サイトカイン産生をＬｕｍｉｎｅｘにより測定した。前のデータは、ＴＮＦαおよび／またはＩＬ−２が親ＩＮＸ９０１抗体の抗体機能のための頑強な読み取りであることを示した。２つの別個のＭＬＲにおいて、ＴＮＦαおよびＩＬ−２の両方は、ＩｇＧ２対照と比較して、ＩＮＸ９０１親、ＩＮＸ９０１  Ａ歪み、およびＩＮＸ  ９０１  Ｂ歪みにより還元された（図１３）。
【０４０５】
図１３からのデータを確認するために、ＩＮＸ９０１の追加の変異型を変異により作製し、Ａ形態またはＢ形態のいずれかのロック変異型を生成した。加えて、ＩＮＸ９０１のキメラ変異形を完全にサイレントＦｃ領域で作製し、Ｆｃドメインの機能を試験した。ＩＮＸ９０１Ｓｉは、完全にサイレントＩｇＧ１抗体である。ＩＮＸ９０１ＨＳｉは、完全にサイレントＩｇＧ１  Ｆｃを有するが、天然ＩｇＧ２と区別不可能であるジスルフィドシャフリングを可能にするＩｇＧ２  ＣＨ１／ヒンジ領域も有する。ＭＬＲを実行する前に、各抗体が、ＥＬＩＳＡにより組換えＶＩＳＴＡに結合することを確認した。生化学的歪みからのデータを確認すると、ＩＮＸ９０１のＡロック形およびＢロック形の両方は、ＩＬ−２およびＴＮＦα両方の産生を減少させることができた（図１４）。対照的に、ＩＮＸ９０１のＳｉおよびＨＳｉ形の両方は、ＩＬ−２およびＴＮＦαの産生を減少させることができなかった（図１４）。
【０４０６】
図１４からのデータを確認するために、同一の変異をＩＮＸ９０８抗体に行い、Ａ形態またはＢ形態のいずれかのロック変異型を生成した。加えて、ＩＮＸ９０８のキメラ変異形を完全にサイレントＦｃ領域で作製し、Ｆｃドメインの機能を試験した。ＩＮＸ９０８Ｓｉは、完全にサイレントＩｇＧ１抗体である。ＩＮＸ９０８ＨＳｉは、完全にサイレントＩｇＧ１  Ｆｃを有するが、ＩｇＧ２  ＣＨ１／ヒンジ領域を含有する。ＭＬＲを実行する前に、各抗体が、ＥＬＩＳＡにより組換えＶＩＳＴＡに結合することを確認した。ＩＮＸ９０１変異型のデータを確認すると、ＩＮＸ９０８のＡロック形およびＢロック形の両方は、ＩＬ−２およびＴＮＦα両方の産生を減少させることができた（図１５）。対照的に、ＩＮＸ９０８のＳｉおよびＨＳｉ形の両方は、ＩＬ−２およびＴＮＦαの産生を減少させることができなかった（図１５）。
【０４０７】
実施例１５：ＰＥＰＰＳＣＡＮ方法を使用したアゴニスト抗体の不連続エピトープマッピング
Ｐｅｐｓｃａｎは、直鎖および不連続エピトープの両方を決定するためにペプチド配列を使用する。この方法論は、抗体エピトープの確認のために、多くの研究者および会社によって使用が認められている方法である。図１６は、本発明による様々なアゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体によって結合された直鎖および不連続のエピトープを特定するために使用されるＰｅｐｓｃａｎ（登録商標）技術を概略的に記載する。
【０４０８】
ＣＬＩＰＳ技術の原理
ＣＬＩＰＳ技術は、画定された３次元構造にペプチドを構造的に固定する。これは、最も複雑な結合部位でさえもその機能的模倣物をもたらす。現在、ＣＬＩＰＳ技術は、ペプチドライブラリを、単一、二重、または三重ループ構造、ならびにシートおよびらせん様折り畳み構造に成形するために日常的に使用される。ＣＬＩＰＳ反応は、ＣＬＩＰＳ足場のブロモ基とシステインのチオール側鎖との間に起こる。反応は軽度の条件下で迅速かつ特異的である。この洗練された化学を使用して、天然タンパク質配列は、広範な構造を有するＣＬＩＰＳ構築物に形質転換される。
【０４０９】
詳細なコンビナトリアルＣＬＩＰＳライブラリスクリーニング
ＣＬＩＰＳライブラリスクリーニングは、コンビナトリアルマトリックス設計を使用して、標的タンパク質の、最大１０，０００の重なるペプチド構築物のライブラリへの変換で始まる。固体担体上で、直鎖ペプチドのマトリックスが合成され、その後、空間的に定義されたＣＬＩＰＳ構築物に成形される。正しい立体構造において不連続エピトープの両方の部分を表す構築物は、高い親和性で抗体に結合し、これは検出され、定量化される。不完全なエピトープを提示する構築物は低親和性で抗体に結合し、一方エピトープを含有しない構築物は全く結合しない。親和性情報は、エピトープの配列および立体構造を詳細に定義するために反復スクリーンで使用される。このエピトープ分析の結果を以下に要約する。
【０４１０】
抗体ＩＮＸ９０１、ＩＮＸ９０２、ＩＮＸ９０４、ＩＮＸ９０６、ＩＮＸ９０７、ＩＮＸ９０８
中程度のストリンジェンシー条件下で試験したとき、抗体ＩＮＸ９０１、ＩＮＸ９０２、ＩＮＸ９０４、ＩＮＸ９０６、ＩＮＸ９０７、ＩＮＸ９０８は、直鎖および立体構造エピトープ模倣物に強く結合した。結合ペプチドは、コア配列４８ＮＶＴＬＴＣＲＬＬＧＰＶ６０（配列番号６７）、７９ＥＶＱＴＣＳＥＲＲＰＩＲ９０（配列番号６８）、１２３ＳＤＨＨＧＮＦＳ１３０（配列番号６９）、および１５３ＨＨＨＳＥＨ１５８（配列番号７０）を含有し、ここで、ペプチド伸張７９ＥＶＱＴＣＳＥＲＲＰＩＲ９０（配列番号６８）は、エピトープの優勢部分である。
【０４１１】
直鎖エピトープ模倣物で記録されたデータの更なる分析により、ある特定の位置上の二重Ａｌａ変異体が顕著にシグナル強度を減少させたため、ＩＮＸ９０４、ＩＮＸ９０６、ＩＮＸ９０７、およびＩＮＸ９０８の結合に重要な残基を特定することが可能であった。特に、４８ＮＶＴＬＴＣＲＬＬＧＰＶ６０（配列番号７１）内の残基ＣＲの置換は、ＩＮＸ９０６、ＩＮＸ９０７、およびＩＮＸ９０８の結合に影響を及ぼす。また、７９ＥＶＱＴＣＳＥＲＲＰＩＲ９０（配列番号６８）内の残基ＴＣの置換は、ＩＮＸ９０４およびＩＮＸ９０７の結合に顕著に影響を及ぼす。
【０４１２】
抗体ＩＮＸ８００
中程度のストリンジェンシー条件下で試験したとき、抗体ＩＮＸ８００は、直鎖および単純に制限されたエピトープ模倣物に検出可能に結合しなかったが、不連続エピトープ模倣物と検出可能な結合を示した。不連続エピトープ模倣物で得られたデータの分析は、抗体ＩＮＸ８００がコア配列５３ＴＣＲＬＬＧＰＶＤＫＧ６３（配列番号７２）、１０１ＨＧＧＨＱＡＡ１０７（配列番号７３）、１２１ＳＡＳＤＨＨＧＮＦＳ１３０（配列番号７４）、および１５３ＨＨＨＳＥＨＲＶＨＧＡＭ１６４（配列番号７５）を有する不連続エピトープを認識することを示唆し、ここで、配列１５３ＨＨＨＳＥＨＲＶＨＧＡＭ１６４（配列番号７６）は優勢認識部位を表す。
【０４１３】
抗体ＩＮＸ８０３およびＩＮＸ８０４
高ストリンジェンシー条件下で試験したとき、ＩＮＸ８０３およびＩＮＸ８０４は、アレイ上に存在するいずれのペプチドにも結合しなかった。中程度のストリンジェンシー条件下で試験したとき、両方の抗体は、不連続エピトープ模倣物に結合した。結合プロファイルの累積分析は、両方の抗体がペプチド伸張５２ＬＴＣＲＬＬＧＰＶ６０（配列番号７７）、７９ＥＶＱＴＣＳＥＲＲＰＩＲ９０（配列番号７８）、９８ＨＬＨＨＧＧＨＱＡＡ１０７（配列番号７９）、１２３ＳＤＨＨＧＮＦＳ１３０（配列番号８０）、１５３ＨＨＨＳＥＨＲＶＨＧＡＭ１６４（配列番号８１）を同様に認識することを示唆し、ここで、領域５２ＬＴＣＲＬＬＧＰＶ６０（配列番号７７）は、優勢認識部位である。
【０４１４】
抗体ＩＮＸ９００
高ストリンジェンシー条件下で試験したとき、抗体ＩＮＸ９００は、コア配列７９ＥＶＱＴＣＳＥＲＲＰＩＲ９０（配列番号６８）を有する直鎖エピトープ模倣物に非常に弱く結合した。顕著に高い結合は、配列７９ＥＶＱＴＣＳＥＲＲＰＩＲ９０（配列番号６８）に加えて、コア配列５６ＬＬＧＰＶＤＫＧＨＤＶＴＦＹＫ７０（配列番号８２）、１１３ＬＡＱＲＨＧＬＥＳＡＳＤＨＨＧ１２７（配列番号８３）、１５３ＨＨＨＳＥＨＲＶＨＧＡＭ１６４（配列番号８４）を含有する不連続エピトープ模倣物で観察された。
【０４１５】
抗体ＩＮＸ９０３
高トリンジェンシー条件下で試験したとき、抗体ＩＮＸ９０３は、直鎖エピトープ模倣物に結合しなかったが、立体構造のエピトープ模倣物と弱く結合した。記録された強度プロファイルの分析は、抗体がコア配列７９ＥＶＱＴＣＳＥＲＲ８７（配列番号８５）、９３ＴＦＱＤＬＨＬＨＨＧＧＨＱＡＡ１０７（配列番号８６）、１４６ＣＬＶＶＥＩＲＨＨＨＳＥＨ１５８（配列番号８７）で構成される不連続エピトープを認識することを示唆し、ここで、配列７９ＥＶＱＴＣＳＥＲＲ８７（配列番号８５）は、エピトープのコアである。
【０４１６】
抗体ＩＮＸ９０５
高ストリンジェンシー条件下で試験したとき、抗体ＩＮＸ９０５は、コア配列７９ＥＶＱＴＣＳＥＲＲＰ８８（配列番号８８）を有する直鎖エピトープに結合した。二重Ａｌａ変異体で取得されたデータは、７９ＥＶＱＴＣＳＥＲＲＰ８８（配列番号８８）内のモチーフＲＲが認識に重要であることを示す。不連続エピトープ模倣物で記録された強度プロファイルは、ペプチド配列５３ＴＣＲＬＬＧＰＶＤＫＧ６３（配列番号８９）、１２３ＳＤＨＨＧ１２７（配列番号９０）、および１５３ＨＨＨＳＥＨＲＶＨＧＡＭ１６４（配列番号９１）の追加が抗体の結合を増強することを示唆する。図１７は、大半のアゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体が同じコア配列に結合することを示す。図１８は、エピトープの結果も要約する。図１９は、本発明による例示的なアゴニスト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体によって結合されるエピトープを示し、結合に関与する重要な残基を特定する。
本出願に引用される参考文献
本出願において引用される以下の参考文献および他の参考文献は、参照によりそれらの全体が組み込まれる。
１  Ｄｏｎｇ，Ｃ．，Ｊｕｅｄｅｓ，Ａ．Ｅ．，Ｔｅｍａｎｎ，Ｕ．Ａ．，Ｓｈｒｅｓｔａ，Ｓ．，Ａｌｌｉｓｏｎ，Ｊ．Ｐ．，Ｒｕｄｄｌｅ，Ｎ．Ｈ．ａｎｄ  Ｆｌａｖｅｌｌ，Ｒ．Ａ．，ＩＣＯＳ  ｃｏ−ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｉｓ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｆｏｒ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ  ２００１．４０９：９７−１０１．
２  Ｓｕｈ，Ｗ．Ｋ．，Ｇａｊｅｗｓｋａ，Ｂ．Ｕ．，Ｏｋａｄａ，Ｈ．，Ｇｒｏｎｓｋｉ，Ｍ．Ａ．，Ｂｅｒｔｒａｍ，Ｅ．Ｍ．，Ｄａｗｉｃｋｉ，Ｗ．，Ｄｕｎｃａｎ，Ｇ．Ｓ．，Ｂｕｋｃｚｙｎｓｋｉ，Ｊ．，Ｐｌｙｔｅ，Ｓ．，Ｅｌｉａ，Ａ．，Ｗａｋｅｈａｍ，Ａ．，Ｉｔｉｅ，Ａ．，Ｃｈｕｎｇ，Ｓ．，Ｄａ  Ｃｏｓｔａ，Ｊ．，Ａｒｙａ，Ｓ．，Ｈｏｒａｎ，Ｔ．，Ｃａｍｐｂｅｌｌ，Ｐ．，Ｇａｉｄａ，Ｋ．，Ｏｈａｓｈｉ，Ｐ．Ｓ．，Ｗａｔｔｓ，Ｔ．Ｈ．，Ｙｏｓｈｉｎａｇａ，Ｓ．Ｋ．，Ｂｒａｙ，Ｍ．Ｒ．，Ｊｏｒｄａｎａ，Ｍ．ａｎｄ  Ｍａｋ，Ｔ．Ｗ．，Ｔｈｅ  Ｂ７  ｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  Ｂ７−Ｈ３  ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ  ｄｏｗｎ−ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｔ  ｈｅｌｐｅｒ  ｔｙｐｅ  １−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ．Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００３．４：８９９−９０６．
３  Ｂｏｒｒｉｅｌｌｏ，Ｆ．，Ｓｅｔｈｎａ，Ｍ．Ｐ．，Ｂｏｙｄ，Ｓ．Ｄ．，Ｓｃｈｗｅｉｔｚｅｒ，Ａ．Ｎ．，Ｔｉｖｏｌ，Ｅ．Ａ．，Ｊａｃｏｂｙ，Ｄ．，Ｓｔｒｏｍ，Ｔ．Ｂ．，Ｓｉｍｐｓｏｎ，Ｅ．Ｍ．，Ｆｒｅｅｍａｎ，Ｇ．Ｊ．ａｎｄ  Ｓｈａｒｐｅ，Ａ．Ｈ．，Ｂ７−１  ａｎｄ  Ｂ７−２  ｈａｖｅ  ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ，ｃｒｉｔｉｃａｌ  ｒｏｌｅｓ  ｉｎ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｃｌａｓｓ  ｓｗｉｔｃｈｉｎｇ  ａｎｄ  ｇｅｒｍｉｎａｌ  ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １９９７．６：３０３−３１３．
４  Ｃｈａｍｂｅｒｓ，Ｃ．Ａ．，Ｓｕｌｌｉｖａｎ，Ｔ．Ｊ．ａｎｄ  Ａｌｌｉｓｏｎ，Ｊ．Ｐ．，Ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ＣＴＬＡ−４−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｍｉｃｅ  ｉｓ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＣＤ４＋  Ｔ  ｃｅｌｌｓ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １９９７．７：８８５−８９５．
５  Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅ，Ｐ．，Ｐｅｎｎｉｎｇｅｒ，Ｊ．Ｍ．，Ｔｉｍｍｓ，Ｅ．，Ｗａｋｅｈａｍ，Ａ．，Ｓｈａｈｉｎｉａｎ，Ａ．，Ｌｅｅ，Ｋ．Ｐ．，Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｃ．Ｂ．，Ｇｒｉｅｓｓｅｒ，Ｈ．ａｎｄ  Ｍａｋ，Ｔ．Ｗ．，Ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ  ｗｉｔｈ  ｅａｒｌｙ  ｌｅｔｈａｌｉｔｙ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｉｎ  Ｃｔｌａ−４．Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９５．２７０：９８５−９８８．
６  Ｔｉｖｏｌ，Ｅ．Ａ．，Ｂｏｒｒｉｅｌｌｏ，Ｆ．，Ｓｃｈｗｅｉｔｚｅｒ，Ａ．Ｎ．，Ｌｙｎｃｈ，Ｗ．Ｐ．，Ｂｌｕｅｓｔｏｎｅ，Ｊ．Ａ．ａｎｄ  Ｓｈａｒｐｅ，Ａ．Ｈ．，Ｌｏｓｓ  ｏｆ  ＣＴＬＡ−４  ｌｅａｄｓ  ｔｏ  ｍａｓｓｉｖｅ  ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｆａｔａｌ  ｍｕｌｔｉｏｒｇａｎ  ｔｉｓｓｕｅ  ｄｅｓｔｒｕｃｔｉｏｎ，ｒｅｖｅａｌｉｎｇ  ａ  ｃｒｉｔｉｃａｌ  ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ＣＴＬＡ−４．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １９９５．３：５４１−５４７．
７  Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ，Ｈ．，Ｎｏｓｅ，Ｍ．，Ｈｉａｉ，Ｈ．，Ｍｉｎａｔｏ，Ｎ．ａｎｄ  Ｈｏｎｊｏ，Ｔ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｌｕｐｕｓ−ｌｉｋｅ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｄｉｓｅａｓｅｓ  ｂｙ  ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＰＤ−１  ｇｅｎｅ  ｅｎｃｏｄｉｎｇ  ａｎ  ＩＴＩＭ  ｍｏｔｉｆ−ｃａｒｒｙｉｎｇ  ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １９９９．１１：１４１−１５１．
８  Ｋｅｉｒ，Ｍ．Ｅ．，Ｌｉａｎｇ，Ｓ．Ｃ．，Ｇｕｌｅｒｉａ，Ｉ．，Ｌａｔｃｈｍａｎ，Ｙ．Ｅ．，Ｑｉｐｏ，Ａ．，Ａｌｂａｃｋｅｒ，Ｌ．Ａ．，Ｋｏｕｌｍａｎｄａ，Ｍ．，Ｆｒｅｅｍａｎ，Ｇ．Ｊ．，Ｓａｙｅｇｈ，Ｍ．Ｈ．ａｎｄ  Ｓｈａｒｐｅ，Ａ．Ｈ．，Ｔｉｓｓｕｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＰＤ−Ｌ１  ｍｅｄｉａｔｅｓ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２００６．２０３：８８３−８９５．
９  Ｏｒｔｌｅｒ，Ｓ．，Ｌｅｄｅｒ，Ｃ．，Ｍｉｔｔｅｌｂｒｏｎｎ，Ｍ．，Ｚｏｚｕｌｙａ，Ａ．Ｌ．，Ｋｎｏｌｌｅ，Ｐ．Ａ．，Ｃｈｅｎ，Ｌ．，Ｋｒｏｎｅｒ，Ａ．ａｎｄ  Ｗｉｅｎｄｌ，Ｈ．，Ｂ７−Ｈ１  ｒｅｓｔｒｉｃｔｓ  ｎｅｕｒｏａｎｔｉｇｅｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ａｎｄ  ｃｏｎｆｉｎｅｓ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ＣＮＳ  ｄａｍａｇｅ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｌｅｓｉｏｎ  ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｏｆ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００８．３８：１７３４−１７４４．
１０  Ｚｈｕ，Ｇ．，Ａｕｇｕｓｔｉｎｅ，Ｍ．Ｍ．，Ａｚｕｍａ，Ｔ．，Ｌｕｏ，Ｌ．，Ｙａｏ，Ｓ．，Ａｎａｎｄ，Ｓ．，Ｒｉｅｔｚ，Ａ．Ｃ．，Ｈｕａｎｇ，Ｊ．，Ｘｕ，Ｈ．，Ｆｌｉｅｓ，Ａ．Ｓ．，Ｆｌｉｅｓ，Ｓ．Ｊ．，Ｔａｍａｄａ，Ｋ．，Ｃｏｌｏｎｎａ，Ｍ．，ｖａｎ  Ｄｅｕｒｓｅｎ，Ｊ．Ｍ．ａｎｄ  Ｃｈｅｎ，Ｌ．，Ｂ７−Ｈ４−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｍｉｃｅ  ｄｉｓｐｌａｙ  ａｕｇｍｅｎｔｅｄ  ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｉｎｎａｔｅ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ｂｌｏｏｄ  ２００９．１１３：１７５９−１７６７．
１１  Ｃｈｅｎ，Ｙ．，Ｗａｎｇ，Ｑ．，Ｓｈｉ，Ｂ．，Ｘｕ，Ｐ．，Ｈｕ，Ｚ．，Ｂａｉ，Ｌ．ａｎｄ  Ｚｈａｎｇ，Ｘ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ａ  ｓａｎｄｗｉｃｈ  ＥＬＩＳＡ  ｆｏｒ  ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ＰＤ−Ｌ１（ＣＤ２７４）  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｓｅｒａ  ｏｆ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ａｇｅｓ  ａｓ  ｗｅｌｌ  ａｓ  ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔｓ  ｏｆ  ＰＤ−Ｌ１（＋）  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ２０１１．
１２  Ｇｒｅｅｎｗａｌｄ，Ｒ．Ｊ．，Ｆｒｅｅｍａｎ，Ｇ．Ｊ．ａｎｄ  Ｓｈａｒｐｅ，Ａ．Ｈ．，Ｔｈｅ  Ｂ７  ｆａｍｉｌｙ  ｒｅｖｉｓｉｔｅｄ．Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００５．２３：５１５−５４８．
１３  Ｚｈｕ，Ｙ．，Ｙａｏ，Ｓ．，Ｉｌｉｏｐｏｕｌｏｕ，Ｂ．Ｐ．，Ｈａｎ，Ｘ．，Ａｕｇｕｓｔｉｎｅ，Ｍ．Ｍ．，Ｘｕ，Ｈ．，Ｐｈｅｎｎｉｃｉｅ，Ｒ．Ｔ．，Ｆｌｉｅｓ，Ｓ．Ｊ．，Ｂｒｏａｄｗａｔｅｒ，Ｍ．，Ｒｕｆｆ，Ｗ．，Ｔａｕｂｅ，Ｊ．Ｍ．，Ｚｈｅｎｇ，Ｌ．，Ｌｕｏ，Ｌ．，Ｚｈｕ，Ｇ．，Ｃｈｅｎ，Ｊ．ａｎｄ  Ｃｈｅｎ，Ｌ．，Ｂ７−Ｈ５  ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ  ｈｕｍａｎ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｖｉａ  ＣＤ２８Ｈ．Ｎａｔ  Ｃｏｍｍｕｎ  ２０１３．４：２０４３．
１４  Ｂｒａｎｄｔ，Ｃ．Ｓ．，Ｂａｒａｔｉｎ，Ｍ．，Ｙｉ，Ｅ．Ｃ．，Ｋｅｎｎｅｄｙ，Ｊ．，Ｇａｏ，Ｚ．，Ｆｏｘ，Ｂ．，Ｈａｌｄｅｍａｎ，Ｂ．，Ｏｓｔｒａｎｄｅｒ，Ｃ．Ｄ．，Ｋａｉｆｕ，Ｔ．，Ｃｈａｂａｎｎｏｎ，Ｃ．，Ｍｏｒｅｔｔａ，Ａ．，Ｗｅｓｔ，Ｒ．，Ｘｕ，Ｗ．，Ｖｉｖｉｅｒ，Ｅ．ａｎｄ  Ｌｅｖｉｎ，Ｓ．Ｄ．，Ｔｈｅ  Ｂ７  ｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  Ｂ７−Ｈ６  ｉｓ  ａ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌ  ｌｉｇａｎｄ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＮＫｐ３０  ｉｎ  ｈｕｍａｎｓ．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２００９．２０６：１４９５−１５０３．
１５  Ｗａｎｇ，Ｌ．，Ｒｕｂｉｎｓｔｅｉｎ，Ｒ．，Ｌｉｎｅｓ，Ｊ．Ｌ．，Ｗａｓｉｕｋ，Ａ．，Ａｈｏｎｅｎ，Ｃ．，Ｇｕｏ，Ｙ．，Ｌｕ，Ｌ．Ｆ．，Ｇｏｎｄｅｋ，Ｄ．，Ｗａｎｇ，Ｙ．，Ｆａｖａ，Ｒ．Ａ．，Ｆｉｓｅｒ，Ａ．，Ａｌｍｏ，Ｓ．ａｎｄ  Ｎｏｅｌｌｅ，Ｒ．Ｊ．，ＶＩＳＴＡ，ａ  ｎｏｖｅｌ  ｍｏｕｓｅ  Ｉｇ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ｌｉｇａｎｄ  ｔｈａｔ  ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２０１１．２０８：５７７−５９２．
１６  Ｌｉｎｅｓ，Ｊ．Ｌ．，Ｓｅｍｐｅｒｅ，Ｌ．Ｆ．，Ｗａｎｇ，Ｌ．，Ｐａｎｔｔａｚｉ，Ｅ．，Ｍａｋ，Ｊ．，Ｏ’Ｃｏｎｎｅｌｌ，Ｓ．，Ｃｅｅｒａｚ，Ｓ．，Ｓｕｒｉａｗｉｎａｔａ，Ａ．Ａ．，Ｙａｎ，Ｓ．，Ｅｒｎｓｔｏｆｆ，Ｍ．Ｓ．ａｎｄ  Ｎｏｅｌｌｅ，Ｒ．Ｊ．，ＶＩＳＴＡ  ｉｓ  ａｎ  ｉｍｍｕｎｅ  ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｆｏｒ  ｈｕｍａｎ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ．ｉｎ  ｒｅｖｉｓｉｏｎ（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）．
１７  ＬｅＭｅｒｃｉｅｒ，Ｉ．，Ｌｉｎｅｓ，Ｊ．Ｌ．，Ｓｅｒｇｅｎｔ，Ｐ．，Ｌｉ，Ｊ．，Ｎｏｅｌｌｅ，Ｒ．Ｊ．ａｎｄ  Ｗａｎｇ，Ｌ．，ＶＩＳＴＡ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ａｎｔｉ−ｔｕｍｏｒ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ．ｉｎ  ｒｅｖｉｓｉｏｎ（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）．
１８  Ｗｏｌｃｈｏｋ，Ｊ．Ｄ．，Ｋｌｕｇｅｒ，Ｈ．，Ｃａｌｌａｈａｎ，Ｍ．Ｋ．，Ｐｏｓｔｏｗ，Ｍ．Ａ．，Ｒｉｚｖｉ，Ｎ．Ａ．，Ｌｅｓｏｋｈｉｎ，Ａ．Ｍ．，Ｓｅｇａｌ，Ｎ．Ｈ．，Ａｒｉｙａｎ，Ｃ．Ｅ．，Ｇｏｒｄｏｎ，Ｒ．Ａ．，Ｒｅｅｄ，Ｋ．，Ｂｕｒｋｅ，Ｍ．Ｍ．，Ｃａｌｄｗｅｌｌ，Ａ．，Ｋｒｏｎｅｎｂｅｒｇ，Ｓ．Ａ．，Ａｇｕｎｗａｍｂａ，Ｂ．Ｕ．，Ｚｈａｎｇ，Ｘ．，Ｌｏｗｙ，Ｉ．，Ｉｎｚｕｎｚａ，Ｈ．Ｄ．，Ｆｅｅｌｙ，Ｗ．，Ｈｏｒａｋ，Ｃ．Ｅ．，Ｈｏｎｇ，Ｑ．，Ｋｏｒｍａｎ，Ａ．Ｊ．，Ｗｉｇｇｉｎｔｏｎ，Ｊ．Ｍ．，Ｇｕｐｔａ，Ａ．ａｎｄ  Ｓｚｎｏｌ，Ｍ．，Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ  ｐｌｕｓ  ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ  ｉｎ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｍｅｌａｎｏｍａ．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２０１３．３６９：１２２−１３３．
１９  Ｉｌｉｏｐｏｕｌｏｓ，Ｄ．，Ｋａｖｏｕｓａｎａｋｉ，Ｍ．，Ｉｏａｎｎｏｕ，Ｍ．，Ｂｏｕｍｐａｓ，Ｄ．ａｎｄ  Ｖｅｒｇｉｎｉｓ，Ｐ．，Ｔｈｅ  ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ＰＤ−１  ｍｏｄｕｌａｔｅｓ  ｔｈｅ  ｂａｌａｎｃｅ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ａｎｄ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ  ｖｉａ  ｍｉＲ−２１．Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０１１．４１：１７５４−１７６３．
２０  Ａｎｓａｒｉ，Ｍ．Ｊ．，Ｓａｌａｍａ，Ａ．Ｄ．，Ｃｈｉｔｎｉｓ，Ｔ．，Ｓｍｉｔｈ，Ｒ．Ｎ．，Ｙａｇｉｔａ，Ｈ．，Ａｋｉｂａ，Ｈ．，Ｙａｍａｚａｋｉ，Ｔ．，Ａｚｕｍａ，Ｍ．，Ｉｗａｉ，Ｈ．，Ｋｈｏｕｒｙ，Ｓ．Ｊ．，Ａｕｃｈｉｎｃｌｏｓｓ，Ｈ．，Ｊｒ．ａｎｄ  Ｓａｙｅｇｈ，Ｍ．Ｈ．，Ｔｈｅ  ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｄｅａｔｈ−１（ＰＤ−１）  ｐａｔｈｗａｙ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｄｉａｂｅｔｅｓ  ｉｎ  ｎｏｎｏｂｅｓｅ  ｄｉａｂｅｔｉｃ（ＮＯＤ）  ｍｉｃｅ．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２００３．１９８：６３−６９．
２１  Ｂｅｒｔｓｉａｓ，Ｇ．Ｋ．，Ｎａｋｏｕ，Ｍ．，Ｃｈｏｕｌａｋｉ，Ｃ．，Ｒａｐｔｏｐｏｕｌｏｕ，Ａ．，Ｐａｐａｄｉｍｉｔｒａｋｉ，Ｅ．，Ｇｏｕｌｉｅｌｍｏｓ，Ｇ．，Ｋｒｉｔｉｋｏｓ，Ｈ．，Ｓｉｄｉｒｏｐｏｕｌｏｓ，Ｐ．，Ｔｚａｒｄｉ，Ｍ．，Ｋａｒｄａｓｓｉｓ，Ｄ．，Ｍａｍａｌａｋｉ，Ｃ．ａｎｄ  Ｂｏｕｍｐａｓ，Ｄ．Ｔ．，Ｇｅｎｅｔｉｃ，ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ，ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｄｅａｔｈ  １／ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｄｅａｔｈ  ｌｉｇａｎｄ  １  ｐａｔｈｗａｙ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ  ２００９．６０：２０７−２１８．
２２  Ｐｒｏｋｕｎｉｎａ，Ｌ．，Ｃａｓｔｉｌｌｅｊｏ−Ｌｏｐｅｚ，Ｃ．，Ｏｂｅｒｇ，Ｆ．，Ｇｕｎｎａｒｓｓｏｎ，Ｉ．，Ｂｅｒｇ，Ｌ．，Ｍａｇｎｕｓｓｏｎ，Ｖ．，Ｂｒｏｏｋｅｓ，Ａ．Ｊ．，Ｔｅｎｔｌｅｒ，Ｄ．，Ｋｒｉｓｔｊａｎｓｄｏｔｔｉｒ，Ｈ．，Ｇｒｏｎｄａｌ，Ｇ．，Ｂｏｌｓｔａｄ，Ａ．Ｉ．，Ｓｖｅｎｕｎｇｓｓｏｎ，Ｅ．，Ｌｕｎｄｂｅｒｇ，Ｉ．，Ｓｔｕｒｆｅｌｔ，Ｇ．，Ｊｏｎｓｓｅｎ，Ａ．，Ｔｒｕｅｄｓｓｏｎ，Ｌ．，Ｌｉｍａ，Ｇ．，Ａｌｃｏｃｅｒ−Ｖａｒｅｌａ，Ｊ．，Ｊｏｎｓｓｏｎ，Ｒ．，Ｇｙｌｌｅｎｓｔｅｎ，Ｕ．Ｂ．，Ｈａｒｌｅｙ，Ｊ．Ｂ．，Ａｌａｒｃｏｎ−Ｓｅｇｏｖｉａ，Ｄ．，Ｓｔｅｉｎｓｓｏｎ，Ｋ．ａｎｄ  Ａｌａｒｃｏｎ−Ｒｉｑｕｅｌｍｅ，Ｍ．Ｅ．，Ａ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ  ｉｎ  ＰＤＣＤ１  ｉｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｔｏ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎｓ．Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ  ２００２．３２：６６６−６６９．
２３  Ｏｚｋａｙｎａｋ，Ｅ．，Ｗａｎｇ，Ｌ．，Ｇｏｏｄｅａｒｌ，Ａ．，ＭｃＤｏｎａｌｄ，Ｋ．，Ｑｉｎ，Ｓ．，Ｏ’Ｋｅｅｆｅ，Ｔ．，Ｄｕｏｎｇ，Ｔ．，Ｓｍｉｔｈ，Ｔ．，Ｇｕｔｉｅｒｒｅｚ−Ｒａｍｏｓ，Ｊ．Ｃ．，Ｒｏｔｔｍａｎ，Ｊ．Ｂ．，Ｃｏｙｌｅ，Ａ．Ｊ．ａｎｄ  Ｈａｎｃｏｃｋ，Ｗ．Ｗ．，Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｄｅａｔｈ−１  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｃａｎ  ｐｒｏｍｏｔｅ  ａｌｌｏｇｒａｆｔ  ｓｕｒｖｉｖａｌ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００２．１６９：６５４６−６５５３．
２４  Ｗａｔｓｏｎ，Ｍ．Ｐ．，Ｇｅｏｒｇｅ，Ａ．Ｊ．ａｎｄ  Ｌａｒｋｉｎ，Ｄ．Ｆ．，Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ｐａｔｈｗａｙ  ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｎ  ｃｏｒｎｅａｌ  ａｌｌｏｇｒａｆｔ  ｓｕｒｖｉｖａｌ．Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  ２００６．４７：３４１７−３４２２．
２５  Ｐｏｄｏｊｉｌ，Ｊ．Ｒ．，Ｌｉｕ，Ｌ．Ｎ．，Ｍａｒｓｈａｌｌ，Ｓ．Ａ．，Ｃｈｉａｎｇ，Ｍ．Ｙ．，Ｇｏｉｎｇｓ，Ｇ．Ｅ．，Ｃｈｅｎ，Ｌ．，Ｌａｎｇｅｒｍａｎｎ，Ｓ．ａｎｄ  Ｍｉｌｌｅｒ，Ｓ．Ｄ．，Ｂ７−Ｈ４Ｉｇ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｍｏｕｓｅ  ａｎｄ  ｈｕｍａｎ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｒｅａｔｓ  ＥＡＥ  ｖｉａ  ＩＬ−１０／Ｔｒｅｇ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ．Ｊ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ  ２０１３．４４：７１−８１．
２６  Ｓｉｃａ，Ｇ．Ｌ．，Ｃｈｏｉ，Ｉ．Ｈ．，Ｚｈｕ，Ｇ．，Ｔａｍａｄａ，Ｋ．，Ｗａｎｇ，Ｓ．Ｄ．，Ｔａｍｕｒａ，Ｈ．，Ｃｈａｐｏｖａｌ，Ａ．Ｉ．，Ｆｌｉｅｓ，Ｄ．Ｂ．，Ｂａｊｏｒａｔｈ，Ｊ．ａｎｄ  Ｃｈｅｎ，Ｌ．，Ｂ７−Ｈ４，ａ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｂ７  ｆａｍｉｌｙ，ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２００３．１８：８４９−８６１．
２７  Ｗａｎｇ，Ｘ．，Ｈａｏ，Ｊ．，Ｍｅｔｚｇｅｒ，Ｄ．Ｌ．，Ｍｕｉ，Ａ．，Ａｏ，Ｚ．，Ｖｅｒｃｈｅｒｅ，Ｃ．Ｂ．，Ｃｈｅｎ，Ｌ．，Ｏｕ，Ｄ．ａｎｄ  Ｗａｒｎｏｃｋ，Ｇ．Ｌ．，Ｂ７−Ｈ４  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｄｏｎｏｒ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ  ｉｎ  ｍｏｕｓｅ  ｉｓｌｅｔ  ａｌｌｏｇｒａｆｔｓ．Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  ２０１２．２１：９９−１１１．
２８  Ｙａｍａｕｒａ，Ｋ．，Ｗａｔａｎａｂｅ，Ｔ．，Ｂｏｅｎｉｓｃｈ，Ｏ．，Ｙｅｕｎｇ，Ｍ．，Ｙａｎｇ，Ｓ．，Ｍａｇｅｅ，Ｃ．Ｎ．，Ｐａｄｅｒａ，Ｒ．，Ｄａｔｔａ，Ｓ．，Ｓｃｈａｔｔｏｎ，Ｔ．，Ｋａｍｉｍｕｒａ，Ｙ．，Ａｚｕｍａ，Ｍ．ａｎｄ  Ｎａｊａｆｉａｎ，Ｎ．，Ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｂ７−Ｈ４  ｉｎ  ａｌｌｏｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ．Ａｍ  Ｊ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  ２０１０．１０：２３５５−２３６２．
２９  Ｙｉ，Ｋ．Ｈ．ａｎｄ  Ｃｈｅｎ，Ｌ．，Ｆｉｎｅ  ｔｕｎｉｎｇ  ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｈｒｏｕｇｈ  Ｂ７−Ｈ３  ａｎｄ  Ｂ７−Ｈ４．Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ  ２００９．２２９：１４５−１５１．
３０  Ｗａｎｇ，Ｘ．，Ｈａｏ，Ｊ．，Ｍｅｔｚｇｅｒ，Ｄ．Ｌ．，Ａｏ，Ｚ．，Ｃｈｅｎ，Ｌ．，Ｏｕ，Ｄ．，Ｖｅｒｃｈｅｒｅ，Ｃ．Ｂ．，Ｍｕｉ，Ａ．ａｎｄ  Ｗａｒｎｏｃｋ，Ｇ．Ｌ．，Ｂ７−Ｈ４  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ  Ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ＥＲＫ，ＪＮＫ，ｐ３８，ａｎｄ  ＡＫＴ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ２０１２．７：ｅ２８２３２．
３１  Ｔｅｒａｗａｋｉ，Ｓ．，Ｔａｎａｋａ，Ｙ．，Ｎａｇａｋｕｒａ，Ｔ．，Ｈａｙａｓｈｉ，Ｔ．，Ｓｈｉｂａｙａｍａ，Ｓ．，Ｍｕｒｏｉ，Ｋ．，Ｏｋａｚａｋｉ，Ｔ．，Ｍｉｋａｍｉ，Ｂ．，Ｇａｒｂｏｃｚｉ，Ｄ．Ｎ．，Ｈｏｎｊｏ，Ｔ．ａｎｄ  Ｍｉｎａｔｏ，Ｎ．，Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｄ  ｈｉｇｈ−ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｏｆ  ｔｅｔｒａｍｅｒｉｚｅｄ  ＰＤ−Ｌ１  ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｄｏｍａｉｎ  ｔｏ  ＰＤ−１−ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｃｅｌｌｓ：ｐｏｓｓｉｂｌｅ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｔｏ  ｅｎｈａｎｃｅ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００７．１９：８８１−８９０．
３２  Ｓｅｄｙ，Ｊ．Ｒ．，Ｇａｖｒｉｅｌｉ，Ｍ．，Ｐｏｔｔｅｒ，Ｋ．Ｇ．，Ｈｕｒｃｈｌａ，Ｍ．Ａ．，Ｌｉｎｄｓｌｅｙ，Ｒ．Ｃ．，Ｈｉｌｄｎｅｒ，Ｋ．，Ｓｃｈｅｕ，Ｓ．，Ｐｆｅｆｆｅｒ，Ｋ．，Ｗａｒｅ，Ｃ．Ｆ．，Ｍｕｒｐｈｙ，Ｔ．Ｌ．ａｎｄ  Ｍｕｒｐｈｙ，Ｋ．Ｍ．，Ｂ  ａｎｄ  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ａｔｔｅｎｕａｔｏｒ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ  ｅｎｔｒｙ  ｍｅｄｉａｔｏｒ．Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００５．６：９０−９８．
３３  Ｐａｒｉｓｉ，Ｓ．，Ｂａｔｔｉｓｔａ，Ｍ．，Ｍｕｓｔｏ，Ａ．，Ｎａｖａｒｒａ，Ａ．，Ｔａｒａｎｔｉｎｏ，Ｃ．ａｎｄ  Ｒｕｓｓｏ，Ｔ．，Ａ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｌｏｏｐ  ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ  Ｄｉｅｓ１  ａｎｄ  ｍｉＲ−１２５ａ  ｃｏｎｔｒｏｌｓ  ＢＭＰ４  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｉｎ  ｍｏｕｓｅ  ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ．ＦＡＳＥＢ  Ｊ  ２０１２．２６：３９５７−３９６８．
３４  Ｙｏｕｎｇｎａｋ，Ｐ．，Ｋｏｚｏｎｏ，Ｙ．，Ｋｏｚｏｎｏ，Ｈ．，Ｉｗａｉ，Ｈ．，Ｏｔｓｕｋｉ，Ｎ．，Ｊｉｎ，Ｈ．，Ｏｍｕｒａ，Ｋ．，Ｙａｇｉｔａ，Ｈ．，Ｐａｒｄｏｌｌ，Ｄ．Ｍ．，Ｃｈｅｎ，Ｌ．ａｎｄ  Ａｚｕｍａ，Ｍ．，Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  Ｂ７−Ｈ１  ａｎｄ  Ｂ７−ＤＣ  ｔｏ  ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｄｅａｔｈ−１．Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  ２００３．３０７：６７２−６７７．
３５  Ｂｕｔｔｅ，Ｍ．Ｊ．，Ｋｅｉｒ，Ｍ．Ｅ．，Ｐｈａｍｄｕｙ，Ｔ．Ｂ．，Ｓｈａｒｐｅ，Ａ．Ｈ．ａｎｄ  Ｆｒｅｅｍａｎ，Ｇ．Ｊ．，Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｄｅａｔｈ−１  ｌｉｇａｎｄ  １  ｉｎｔｅｒａｃｔｓ  ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ｂ７−１  ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｔｏ  ｉｎｈｉｂｉｔ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２００７．２７：１１１−１２２．
３６  Ｓｈａｒｐｅ，Ａ．Ｈ．ａｎｄ  Ｆｒｅｅｍａｎ，Ｇ．Ｊ．，Ｔｈｅ  Ｂ７−ＣＤ２８  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ．Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００２．２：１１６−１２６．
３７  Ｂａｒｔｅｌ  Ｐ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（１９９３）  Ｕｓｉｎｇ  ｔｈｅ  ｔｗｏ−ｈｙｂｒｉｄ  ｓｙｓｔｅｍ  ｔｏ  ｄｅｔｅｃｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ．Ｉｎ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｄ．Ａ．Ｈａｒｔｌｅｙ，Ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ；  ｐｐ  １５３−１７９．
３８  Ｂeｒａｎｇｅｒ  Ｆ．ｅｔ  ａｌ．（１９９７）  Ｇｅｔｔｉｎｇ  ｍｏｒｅ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｔｗｏ−ｈｙｂｒｉｄ  ｓｙｓｔｅｍ  ：Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｆｕｓｉｏｎｓ  ｔｏ  ＬｅｘＡ  ａｒｅ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  ａｎｄ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ｂａｉｔｓ  ｆｏｒ  ｔｗｏ−ｈｙｂｒｉｄ  ｓｔｕｄｉｅｓ．ＮＡＲ  ２５：２０３５−３６．
３９  Ｆｏｒｍｓｔｅｃｈｅｒ  Ｅ．ｅｔ  ａｌ．（２００５）  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｍａｐｐｉｎｇ：ａ  Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ｃａｓｅ  ｓｔｕｄｙ．Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．１５：３７６８４．
４０  Ｆｒｏｍｏｎｔ−Ｒａｃｉｎｅ  Ｍ．，Ｒａｉｎ  Ｊ．Ｃ．，ａｎｄ  Ｌｅｇｒａｉｎ  Ｐ．（１９９７）  Ｔｏｗａｒｄ  ａ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｙｅａｓｔ  ｇｅｎｏｍｅ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｅｘｈａｕｓｔｉｖｅ  ｔｗｏ−ｈｙｂｒｉｄ  ｓｃｒｅｅｎｓ．Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．１６：２７７−８２．
４１  Ｒａｉｎ  Ｊ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）  Ｔｈｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｍａｐ  ｏｆ  Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ．Ｎａｔｕｒｅ  ４０９：２１１−１５．
４２  Ｖｏｊｔｅｋ  Ａ．ａｎｄ  Ｈｏｌｌｅｎｂｅｒｇ  Ｓ．Ｍ．（１９９５）  Ｒａｓ−Ｒａｆ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ：ｔｗｏ−ｈｙｂｒｉｄ  ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．２５５：３３１４２．
４３  Ｗｏｊｃｉｋ  Ｊ．，Ｂｏｎｅｃａ  Ｉ．Ｇ．，ａｎｄ  Ｌｅｇｒａｉｎ  Ｐ．（２００２）  Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ，ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｍａｐｓ  ｉｎ  ｂａｃｔｅｒｉａ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３２３：７６３−７０．
４４．Ｆｒａｎｋｌｉｎ  ＥＣ，Ｋｕｎｋｅｌ  ＨＧ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ  Ｂｅｔｗｅｅｎ  ｔｈｅ  １９  Ｓ  ａｎｄ  ７  Ｓ  Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ  ｏｆ  Ｎｏｒｍａｌ  Ｈｕｍａｎ  γ−Ｇｌｏｂｕｌｉｎ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．１９５７；７８（１）：１１−８．
４５．Ｒｏｄａ  Ｇ，Ｊｈａｒａｐ  Ｂ，Ｎｅｅｒａｊ  Ｎ，Ｃｏｌｏｍｂｅｌ  Ｊ−Ｆ．Ｌｏｓｓ  ｏｆ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  Ａｎｔｉ−ＴＮＦｓ：Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ，Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ，ａｎｄ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ．Ｃｌｉｎ  Ｔｒａｎｓ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．２０１６；７：ｅ１３５．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｃｔｇ．２０１５．６３．
４６．Ｇｒｅｅｎｗａｌｄ  ＲＪ，Ｆｒｅｅｍａｎ  ＧＪ，Ｓｈａｒｐｅ  ＡＨ．Ｔｈｅ  Ｂ７  ｆａｍｉｌｙ  ｒｅｖｉｓｉｔｅｄ．Ａｎｎｕａｌ  ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２００５；２３：５１５−４８．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：１５７７１５８０．
４７．Ｌｉｎｅｓ  ＪＬ，Ｐａｎｔａｚｉ  Ｅ，Ｍａｋ  Ｊ，Ｓｅｍｐｅｒｅ  ＬＦ，Ｗａｎｇ  Ｌ，Ｏ’Ｃｏｎｎｅｌｌ  Ｓ，Ｃｅｅｒａｚ  Ｓ，Ｓｕｒｉａｗｉｎａｔａ  ＡＡ，Ｙａｎ  Ｓ，Ｅｒｎｓｔｏｆｆ  ＭＳ，Ｎｏｅｌｌｅ  Ｒ．ＶＩＳＴＡ  ｉｓ  ａｎ  ｉｍｍｕｎｅ  ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｆｏｒ  ｈｕｍａｎ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ．Ｃａｎｃｅｒ  ｒｅｓｅａｒｃｈ．２０１４；７４（７）：１９２４−３２．ｄｏｉ：１０．１１５８／０００８−５４７２．ＣＡＮ−１３−１５０４．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：２４６９１９９３；  ＰＭＣＩＤ：３９７９５２７．
４８．Ｌｅ  Ｍｅｒｃｉｅｒ  Ｉ，Ｃｈｅｎ  Ｗ，Ｌｉｎｅｓ  ＪＬ，Ｄａｙ  Ｍ，Ｌｉ  Ｊ，Ｓｅｒｇｅｎｔ  Ｐ，Ｎｏｅｌｌｅ  ＲＪ，Ｗａｎｇ  Ｌ．ＶＩＳＴＡ  Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｔｈｅ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ｃａｎｃｅｒ  ｒｅｓｅａｒｃｈ．２０１４；７４（７）：１９３３−４４．ｄｏｉ：１０．１１５８／０００８−５４７２．ＣＡＮ−１３−１５０６．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：２４６９１９９４；  ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ４１１６６８９．
４９．Ｆｌｉｅｓ  ＤＢ，Ｈａｎ  Ｘ，Ｈｉｇｕｃｈｉ  Ｔ，Ｚｈｅｎｇ  Ｌ，Ｓｕｎ  Ｊ，Ｙｅ  ＪＪ，Ｃｈｅｎ  Ｌ．Ｃｏｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＰＤ−１Ｈ  ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ  ＣＤ４（＋）  Ｔ  ｃｅｌｌ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ．２０１４；１２４（５）：１９６６−７５．ｄｏｉ：１０．１１７２／ＪＣＩ７４５８９．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：２４７４３１５０；  ＰＭＣＩＤ：４００１５５７．
５０．Ｌｉｎｅｓ  ＪＬ，Ｓｅｍｐｅｒｅ  ＬＦ，Ｂｒｏｕｇｈｔｏｎ  Ｔ，Ｗａｎｇ  Ｌ，Ｎｏｅｌｌｅ  Ｒ．ＶＩＳＴＡ  Ｉｓ  ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｂｒｏａｄ−Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｎｅｇａｔｉｖｅ  Ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｃａｎｃｅｒ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ｒｅｓｅａｒｃｈ．２０１４；２（６）：５１０−７．ｄｏｉ：１０．１１５８／２３２６−６０６６．ＣＩＲ−１４−００７２．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：２４８９４０８８．
５１．Ｗａｎｇ  Ｌ，Ｌｅ  Ｍｅｒｃｉｅｒ  Ｉ，Ｐｕｔｒａ  Ｊ，Ｃｈｅｎ  Ｗ，Ｌｉｕ  Ｊ，Ｓｃｈｅｎｋ  ＡＤ，Ｎｏｗａｋ  ＥＣ，Ｓｕｒｉａｗｉｎａｔａ  ＡＡ，Ｌｉ  Ｊ，Ｎｏｅｌｌｅ  ＲＪ．Ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｅ−ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  ＶＩＳＴＡ  ｇｅｎｅ  ｉｍｐａｒｔｓ  ａ  ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ  ｗｉｔｈ  ｐｒｅｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ．２０１４；１１１（４１）：１４８４６−５１．ｄｏｉ：１０．１０７３／ｐｎａｓ．１４０７４４７１１１．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：２５２６７６３１；  ＰＭＣＩＤ：４２０５６４２．
５２．Ｗａｎｇ  Ｌ，Ｒｕｂｉｎｓｔｅｉｎ  Ｒ，Ｌｉｎｅｓ  ＪＬ，Ｗａｓｉｕｋ  Ａ，Ａｈｏｎｅｎ  Ｃ，Ｇｕｏ  Ｙ，Ｌｕ  ＬＦ，Ｇｏｎｄｅｋ  Ｄ，Ｗａｎｇ  Ｙ，Ｆａｖａ  ＲＡ，Ｆｉｓｅｒ  Ａ，Ａｌｍｏ  Ｓ，Ｎｏｅｌｌｅ  ＲＪ．ＶＩＳＴＡ，ａ  ｎｏｖｅｌ  ｍｏｕｓｅ  Ｉｇ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ｌｉｇａｎｄ  ｔｈａｔ  ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ．２０１１；２０８（３）：５７７−９２．Ｅｐｕｂ  ２０１１／０３／０９．ｄｏｉ：ｊｅｍ．２０１００６１９  ［ｐｉｉ］  １０．１０８４／ｊｅｍ．２０１００６１９．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：２１３８３０５７；  ＰＭＣＩＤ：３０５８５７８．
５３．Ｆｌｉｅｓ  ＤＢ，Ｈａｎ  Ｘ，Ｈｉｇｕｃｈｉ  Ｔ，Ｚｈｅｎｇ  Ｌ，Ｓｕｎ  Ｊ，Ｙｅ  ＪＪ，Ｃｈｅｎ  Ｌ．Ｃｏｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＰＤ−１Ｈ  ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ  ＣＤ４（＋）  Ｔ  ｃｅｌｌ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ．２０１４；１２４（５）：１９６６−７５．ｄｏｉ：１０．１１７２／ＪＣＩ７４５８９．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：ＰＭＣ４００１５５７．
５４．Ｙｏｏｎ  ＫＷ，Ｂｙｕｎ  Ｓ，Ｋｗｏｎ  Ｅ，Ｈｗａｎｇ  ＳＹ，Ｃｈｕ  Ｋ，Ｈｉｒａｋｉ  Ｍ，Ｊｏ  ＳＨ，Ｗｅｉｎｓ  Ａ，Ｈａｋｒｏｕｓｈ  Ｓ，Ｃｅｂｕｌｌａ  Ａ，Ｓｙｋｅｓ  ＤＢ，Ｇｒｅｋａ  Ａ，Ｍｕｎｄｅｌ  Ｐ，Ｆｉｓｈｅｒ  ＤＥ，Ｍａｎｄｉｎｏｖａ  Ａ，Ｌｅｅ  ＳＷ．Ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｃｌｅａｒａｎｃｅ  ｏｆ  ａｐｏｐｔｏｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｔｕｍｏｒ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  ｐ５３．Ｓｃｉｅｎｃｅ．２０１５；３４９（６２４７）：１２６１６６９．ｄｏｉ：１０．１１２６／ｓｃｉｅｎｃｅ．１２６１６６９．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：２６２２８１５９．
５５．Ｂｅｔｔｅｌｌｉ  Ｅ，Ｐａｇａｎｙ  Ｍ，Ｗｅｉｎｅｒ  ＨＬ，Ｌｉｎｉｎｇｔｏｎ  Ｃ，Ｓｏｂｅｌ  ＲＡ，Ｋｕｃｈｒｏｏ  ＶＫ．Ｍｙｅｌｉｎ  Ｏｌｉｇｏｄｅｎｄｒｏｃｙｔｅ  Ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  Ｍｉｃｅ  Ｄｅｖｅｌｏｐ  Ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  Ｏｐｔｉｃ  Ｎｅｕｒｉｔｉｓ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ．２００３；１９７（９）：１０７３−８１．ｄｏｉ：１０．１０８４／ｊｅｍ．２００２１６０３．
５６．Ｃｅｅｒａｚ  Ｓ，Ｓｅｒｇｅｎｔ  Ｐ，Ｐｌｕｍｍｅｒ  Ｓ，Ｓｃｈｎｅｄ  Ａ，Ｐｅｃｈｅｎｉｃｋ  Ｄ，Ｂｕｒｎｓ  Ｃ，Ｎｏｅｌｌｅ  Ｒ．ＶＩＳＴＡ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｓ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｆａｔａｌ  ｍｕｒｉｎｅ  ｌｕｐｕｓ  ｎｅｐｈｒｉｔｉｓ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ．２０１６；ｓｕｂｍｉｔｔｅｄ．
５７．Ｌｉｕ  Ｊ，Ｙｕａｎ  Ｙ，Ｃｈｅｎ  Ｗ，Ｐｕｔｒａ  Ｊ，Ｓｕｒｉａｗｉｎａｔａ  ＡＡ，Ｓｃｈｅｎｋ  ＡＤ，Ｍｉｌｌｅｒ  ＨＥ，Ｇｕｌｅｒｉａ  Ｉ，Ｂａｒｔｈ  ＲＪ，Ｈｕａｎｇ  ＹＨ，Ｗａｎｇ  Ｌ．Ｉｍｍｕｎｅ−ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ＶＩＳＴＡ  ａｎｄ  ＰＤ−１  ｎｏｎｒｅｄｕｎｄａｎｔｌｙ  ｒｅｇｕｌａｔｅ  ｍｕｒｉｎｅ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ．２０１５；１１２（２１）：６６８２−７．ｄｏｉ：１０．１０７３／ｐｎａｓ．１４２０３７０１１２．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：２５９６４３３４；  ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ４４５０４３８．
５８．Ｆｌｉｅｓ  ＤＢ，Ｈｉｇｕｃｈｉ  Ｔ，Ｃｈｅｎ  Ｌ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  ＰＤ−１Ｈ  Ｃｏｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ  ｔｏ  Ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２０１５；１９４（１１）：５２９４−３０４．ｄｏｉ：１０．４０４９／ｊｉｍｍｕｎｏｌ．１４０２６４８．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：２５９１７１０１；  ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ４４３３８８０．
５９．ＤｉＬｉｌｌｏ  ＤＪ，Ｒａｖｅｔｃｈ  ＪＶ．Ｆｃ−Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  Ｒｅｇｕｌａｔｅ  Ｂｏｔｈ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｆｆｅｃｔｏｒ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ．Ｃａｎｃｅｒ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ｒｅｓｅａｒｃｈ．２０１５；３（７）：７０４−１３．ｄｏｉ：１０．１１５８／２３２６−６０６６．ｃｉｒ−１５−０１２０．
６０．Ｗｈｉｔｅ  ＡＬ，Ｃｈａｎ  ＨＴ，Ｆｒｅｎｃｈ  ＲＲ，Ｗｉｌｌｏｕｇｈｂｙ  Ｊ，Ｍｏｃｋｒｉｄｇｅ  ＣＩ，Ｒｏｇｈａｎｉａｎ  Ａ，Ｐｅｎｆｏｌｄ  ＣＡ，Ｂｏｏｔｈ  ＳＧ，Ｄｏｄｈｙ  Ａ，Ｐｏｌａｋ  ＭＥ，Ｐｏｔｔｅｒ  ＥＡ，Ａｒｄｅｒｎ−Ｊｏｎｅｓ  ＭＲ，Ｖｅｒｂｅｅｋ  ＪＳ，Ｊｏｈｎｓｏｎ  ＰＷ，Ａｌ−Ｓｈａｍｋｈａｎｉ  Ａ，Ｃｒａｇｇ  ＭＳ，Ｂｅｅｒｓ  ＳＡ，Ｇｌｅｎｎｉｅ  ＭＪ．Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｇ２  ｈｉｎｇｅ  ｉｍｐａｒｔｓ  ｓｕｐｅｒａｇｏｎｉｓｔｉｃ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｔｏ  ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ．２０１５；２７（１）：１３８−４８．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｃｅｌｌ．２０１４．１１．００１．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：２５５００１２２；  ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ４２９７２９０．
６１．Ｄｕｂｅｙ  ＡＫ，Ｈａｎｄｕ  ＳＳ，Ｄｕｂｅｙ  Ｓ，Ｓｈａｒｍａ  Ｐ，Ｓｈａｒｍａ  ＫＫ，Ａｈｍｅｄ  ＱＭ．Ｂｅｌｉｍｕｍａｂ：Ｆｉｒｓｔ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ．Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ．２０１１；２（４）：３１７−９．ｄｏｉ：１０．４１０３／０９７６−５００Ｘ．８５９３０．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：２２０２５８７２；  ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ３１９８５３９．
６２．Ｗａｌｌａｃｅ  ＤＪ，Ｈｏｂｂｓ  Ｋ，Ｃｌｏｗｓｅ  ＭＥ，Ｐｅｔｒｉ  Ｍ，Ｓｔｒａｎｄ  Ｖ，Ｐｉｋｅ  Ｍ，Ｍｅｒｒｉｌｌ  ＪＴ，Ｌｅｓｚｃｚｙｎｓｋｉ  Ｐ，Ｎｅｕｗｅｌｔ  ＣＭ，Ｊｅｋａ  Ｓ，Ｈｏｕｓｓｉａｕ  Ｆ，Ｋｅｉｓｅｒｍａｎ  Ｍ，Ｏｒｄｉ−Ｒｏｓ  Ｊ，Ｂｏｎｇａｒｄｔ  Ｓ，Ｋｉｌｇａｌｌｅｎ  Ｂ，Ｇａｌａｔｅａｎｕ  Ｃ，Ｋａｌｕｎｉａｎ  Ｋ，Ｆｕｒｉｅ  Ｒ，Ｇｏｒｄｏｎ  Ｃ．Ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｓａｆｅｔｙ  ａｎｄ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ｅｐｒａｔｕｚｕｍａｂ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍｏｄｅｒａｔｅ−ｔｏ−ｓｅｖｅｒｅ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ：ｒｅｓｕｌｔｓ  ｆｒｏｍ  ａｎ  ｏｐｅｎ−ｌａｂｅｌ  ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ  ｓｔｕｄｙ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｃａｒｅ  Ｒｅｓ（Ｈｏｂｏｋｅｎ）．２０１５．ｄｏｉ：１０．１００２／ａｃｒ．２２６９４．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：２６３１６３２５．
６３．Ｖａｎ  Ｗａｕｗｅ  ＪＰ，Ｄｅ  Ｍｅｙ  ＪＲ，Ｇｏｏｓｓｅｎｓ  ＪＧ．ＯＫＴ３：ａ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉ−ｈｕｍａｎ  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｗｉｔｈ  ｐｏｔｅｎｔ  ｍｉｔｏｇｅｎｉｃ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．１９８０；１２４（６）：２７０８−１３．
６４．Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ  ＪＭ，Ｊｅｎｓｅｎ  ＰＥ，Ｅｖａｖｏｌｄ  ＢＤ．ＤＯ１１．１０  ａｎｄ  ＯＴ−ＩＩ  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ  Ｒｅｃｏｇｎｉｚｅ  ａ  Ｃ−Ｔｅｒｍｉｎａｌ  Ｏｖａｌｂｕｍｉｎ  ３２３−３３９  Ｅｐｉｔｏｐｅ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２０００；１６４（９）：４７０６−１２．ｄｏｉ：１０．４０４９／ｊｉｍｍｕｎｏｌ．１６４．９．４７０６．
６５．Ｗａｎｇ  Ｈ−Ｘ，Ｌｉｕ  Ｍ，Ｗｅｎｇ  Ｓ−Ｙ，Ｌｉ  Ｊ−Ｊ，Ｘｉｅ  Ｃ，Ｈｅ  Ｈ−Ｌ，Ｇｕａｎ  Ｗ，Ｙｕａｎ  Ｙ−Ｓ，ＧａｏＪ．Ｉｍｍｕｎｅ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｃａｎａｖａｌｉｎ  Ａ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ．Ｗｏｒｌｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ：ＷＪＧ．２０１２；１８（２）：１１９−２５．ｄｏｉ：１０．３７４８／ｗｊｇ．ｖ１８．ｉ２．１１９．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：ＰＭＣ３２５７４３８．
６６．Ｗｅｉｎｅｒ  ＧＪ．Ｂｕｉｌｄｉｎｇ  ｂｅｔｔｅｒ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｂａｓｅｄ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ．２０１５；１５（６）：３６１−７０．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｒｃ３９３０．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：２５９９８７１５；  ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ４４９１４４３．
６７．Ｒａｖｅｔｃｈ  ＪＶ，Ｂｏｌｌａｎｄ  Ｓ．ＩｇＧ  Ｆｃ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．Ａｎｎｕａｌ  ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２００１；１９：２７５−９０．ｄｏｉ：１０．１１４６／ａｎｎｕｒｅｖ．ｉｍｍｕｎｏｌ．１９．１．２７５．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：１１２４４０３８．
６８．Ｌｉ  Ｆ，Ｓｍｉｔｈ  Ｐ，Ｒａｖｅｔｃｈ  ＪＶ．Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆｃγ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｉｓ  ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ  ｏｆ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ（）．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍｄ  ：１９５０）．２０１４；１９２（７）：３０２１−８．ｄｏｉ：１０．４０４９／ｊｉｍｍｕｎｏｌ．１３０２９３４．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：ＰＭＣ３９６７５０５．
６９．Ｈｉｎｔｏｎ  ＰＲ，Ｊｏｈｌｆｓ  ＭＧ，Ｘｉｏｎｇ  ＪＭ，Ｈａｎｅｓｔａｄ  Ｋ，Ｏｎｇ  ＫＣ，Ｂｕｌｌｏｃｋ  Ｃ，Ｋｅｌｌｅｒ  Ｓ，Ｔａｎｇ  ＭＴ，Ｔｓｏ  ＪＹ，Ｖａｓｑｕｅｚ  Ｍ，Ｔｓｕｒｕｓｈｉｔａ  Ｎ．Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｗｉｔｈ  ｌｏｎｇｅｒ  ｓｅｒｕｍ  ｈａｌｆ−ｌｉｖｅｓ  ｉｎ  ｐｒｉｍａｔｅｓ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．２００４；２７９（８）：６２１３−６．ｄｏｉ：１０．１０７４／ｊｂｃ．Ｃ３００４７０２００．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：１４６９９１４７．
７０．Ｖａｃｃａｒｏ  Ｃ，Ｚｈｏｕ  Ｊ，Ｏｂｅｒ  ＲＪ，Ｗａｒｄ  ＥＳ．Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｆｃ  ｒｅｇｉｏｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｇ  ｔｏ  ｍｏｄｕｌａｔｅ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｌｅｖｅｌｓ．Ｎａｔｕｒｅ  ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．２００５；２３（１０）：１２８３−８．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｂｔ１１４３．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：１６１８６８１１．
７１．Ｂｏｒｒｏｋ  ＭＪ，Ｗｕ  Ｙ，Ｂｅｙａｚ  Ｎ，Ｙｕ  Ｘ−Ｑ，Ｏｇａｎｅｓｙａｎ  Ｖ，Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ＷＦ，Ｔｓｕｉ  Ｐ．ｐＨ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｒｅｖｅａｌｓ  ａｎ  ＦｃＲｎ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ  Ｔｈａｔ  Ｇｏｖｅｒｎｓ  ＩｇＧ  Ｒｅｃｙｃｌｉｎｇ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．２０１５；２９０（７）：４２８２−９０．ｄｏｉ：１０．１０７４／ｊｂｃ．Ｍ１１４．６０３７１２．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：ＰＭＣ４３２６８３６．
７２．Ｏｙａｒｚｕｎ  Ｐ，Ｅｌｌｉｓ  ＪＪ，Ｇｏｎｚａｌｅｚ−Ｇａｌａｒｚａ  ＦＦ，Ｊｏｎｅｓ  ＡＲ，Ｍｉｄｄｌｅｔｏｎ  Ｄ，Ｂｏｄｅｎ  Ｍ，Ｋｏｂｅ  Ｂ．Ａ  ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ｔｏｏｌ  ｆｏｒ  ｅｐｉｔｏｐｅ−ｂａｓｅｄ  ｖａｃｃｉｎｅ  ｄｅｓｉｇｎ  ｔｈａｔ  ａｃｃｏｕｎｔｓ  ｆｏｒ  ｈｕｍａｎ  ｅｔｈｎｉｃ  ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ：Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｔｏ  ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｖａｃｃｉｎｅ．２０１５；３３（１０）：１２６７−７３．ｄｏｉ：ｈｔｔｐ：／／ｄｘ．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ｖａｃｃｉｎｅ．２０１５．０１．０４０．
７３．Ｈａｓｋｉｎｓ  Ｋ，Ｋｕｂｏ  Ｒ，Ｗｈｉｔｅ  Ｊ，Ｐｉｇｅｏｎ  Ｍ，Ｋａｐｐｌｅｒ  Ｊ，Ｍａｒｒａｃｋ  Ｐ．Ｔｈｅ  ｍａｊｏｒ  ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｃｏｍｐｌｅｘ−ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｏｎ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ．Ｉ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ａ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ．１９８３；１５７（４）：１１４９−６９．Ｅｐｕｂ  １９８３／０４／０１．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：６６０１１７５；  ＰＭＣＩＤ：Ｐｍｃ２１８６９８３．
７４．Ｍａｒｋｅｅｓ  ＴＧ，Ｐｈｉｌｌｉｐｓ  ＮＥ，Ｎｏｅｌｌｅ  ＲＪ，Ｓｈｕｌｔｚ  ＬＤ，Ｍｏｒｄｅｓ  ＪＰ，Ｇｒｅｉｎｅｒ  ＤＬ，Ｒｏｓｓｉｎｉ  ＡＡ．Ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｏｆ  ｍｏｕｓｅ  ｓｋｉｎ  ａｌｌｏｇｒａｆｔｓ  ｉｎ  ｒｅｃｉｐｉｅｎｔｓ  ｔｒｅａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｄｏｎｏｒ  ｓｐｌｅｎｏｃｙｔｅｓ  ａｎｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｏ  ＣＤ４０  ｌｉｇａｎｄ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．１９９７；６４（２）：３２９−３５．
７５．Ｅｈｓｔ  ＢＤ，Ｉｎｇｕｌｌｉ  Ｅ，Ｊｅｎｋｉｎｓ  ＭＫ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｍｏｕｓｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ＣＤ４  ａｎｄ  ＣＤ８  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｄｕｒｉｎｇ  ｇｒａｆｔ  ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ．Ａｍｅｒｉｃａｎ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ：ｏｆｆｉｃｉａｌ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｓｕｒｇｅｏｎｓ．２００３；３（１１）：１３５５−６２．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：１４５２５５９５．
７６．Ｗｕ  Ｓ，Ｊｉｎ  Ｌ，Ｖｅｎｃｅ  Ｌ，Ｒａｄｖａｎｙｉ  ＬＧ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ‘ｐｈｏｓｐｈｏｆｌｏｗ’  ａｓ  ａ  ｔｏｏｌ  ｆｏｒ  ｉｍｍｕｎｏｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ．Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ．２０１０；９（６）：６３１−４３．ｄｏｉ：１０．１５８６／ｅｒｖ．１０．５９．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：２０５１８７１８；  ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ２９３３８３９．
７７．Ｗｅｉｓｓｍｕｌｌｅｒ  Ｓ，Ｋｒｏｎｈａｒｔ  Ｓ，Ｋｒｅｕｚ  Ｄ，Ｓｃｈｎｉｅｒｌｅ  Ｂ，Ｋａｌｉｎｋｅ  Ｕ，Ｋｉｒｂｅｒｇ  Ｊ，Ｈａｎｓｃｈｍａｎｎ  ＫＭ，Ｗａｉｂｌｅｒ  Ｚ．ＴＧＮ１４１２  Ｉｎｄｕｃｅｓ  Ｌｙｍｐｈｏｐｅｎｉａ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ｉｎ  ａ  Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  Ｍｏｕｓｅ  Ｍｏｄｅｌ．ＰｌｏＳ  ｏｎｅ．２０１６；１１（３）：ｅ０１４９０９３．ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．０１４９０９３．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：２６９５９２２７；  ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ４７８４８９２．
７８．Ｐｉｃｃｏｔｔｉ  ＪＲ，Ａｌｖｅｙ  ＪＤ，Ｒｅｉｎｄｅｌ  ＪＦ，Ｇｕｚｍａｎ  ＲＥ．Ｔ−ｃｅｌｌ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ：ａｓｓａｙ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｉｎ  ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ  ｍｏｎｋｅｙｓ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｃｏｌ．２００５；２（４）：１９１−６．ｄｏｉ：１０．１０８０／１５４７６９１０５００３６２８３８．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：１８９５８６７３．
７９．Ｍｕｌｌｅｒ  ＰＹ，Ｂｒｅｎｎａｎ  ＦＲ．Ｓａｆｅｔｙ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｄｏｓｅ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｆｉｒｓｔ−ｉｎ−ｈｕｍａｎ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌｓ  ｗｉｔｈ  ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ．２００９；８５（３）：２４７−５８．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｃｌｐｔ．２００８．２７３．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：１９１７７０６５
配列表
配列番号１：Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓＶＩＳＴＡ（代替名：Ｂ７−Ｈ５；Ｂ７Ｈ５；ＤＤ１アルファ；ＧＩ２４；ＰＰ２１３５；ＳＩＳＰ１）アミノ酸配列
2019525943.tif 000012
配列番号２：Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ  ＶＩＳＴＡアミノ酸配列
2019525943.tif 000013
配列番号３：Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ  ＶＩＳＴＡアミノ酸配列
2019525943.tif 000014
配列番号４：Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓＶＩＳＴＡ（代替名：Ｂ７−Ｈ５；Ｂ７Ｈ５；ＤＤ１アルファ；ＧＩ２４；ＰＰ２１３５；ＳＩＳＰ１）核酸配列
2019525943.tif 000015
2019525943.tif 000016
2019525943.tif 000017
配列番号５：Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓＶＩＳＴＡ（代替名：Ｂ７−Ｈ５；Ｂ７Ｈ５；ＤＤ１アルファ；ＧＩ２４；ＰＰ２１３５；ＳＩＳＰ１）コード核酸配列
2019525943.tif 000018
2019525943.tif 000019
配列番号６：Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ  ＶＩＳＴＡコード核酸配列
2019525943.tif 000020
【図１】
2019525943.tif 000021
【図２】
2019525943.tif 000022
【図３】
2019525943.tif 000023
【図４−１】
2019525943.tif 000024
【図４−２】
2019525943.tif 000025
【図４−３】
2019525943.tif 000026
【図４−４】
2019525943.tif 000027
【図４−５】
2019525943.tif 000028
【図４−６】
2019525943.tif 000029
【図４−７】
2019525943.tif 000030
【図４−８】
2019525943.tif 000031
【図４−９】
2019525943.tif 000032
【図４−１０】
2019525943.tif 000033
【図４−１１】
2019525943.tif 000034
【図４−１２】
2019525943.tif 000035
【図４−１３】
2019525943.tif 000036
【図４−１４】
2019525943.tif 000037
【図４−１５】
2019525943.tif 000038
【図４−１６】
2019525943.tif 000039
【図４−１７】
2019525943.tif 000040
【図４−１８】
2019525943.tif 000041
【図４−１９】
2019525943.tif 000042
【図４−２０】
2019525943.tif 000043
【図４−２１】
2019525943.tif 000044
【図４−２２】
2019525943.tif 000045
【図４−２３】
2019525943.tif 000046
【図４−２４】
2019525943.tif 000047
【図４−２５】
2019525943.tif 000048
【図４−２６】
2019525943.tif 000049
【図４−２７】
2019525943.tif 000050
【図４−２８】
2019525943.tif 000051
【図４−２９】
2019525943.tif 000052
【図４−３０】
2019525943.tif 000053
【図４−３１】
2019525943.tif 000054
【図４−３２】
2019525943.tif 000055
【図４−３３】
2019525943.tif 000056
【図４−３４】
2019525943.tif 000057
【図４−３５】
2019525943.tif 000058
【図４−３６】
2019525943.tif 000059
【図４−３７】
2019525943.tif 000060
【図４−３８】
2019525943.tif 000061
【図４−３９】
2019525943.tif 000062
【図４−４０】
2019525943.tif 000063
【図４−４１】
2019525943.tif 000064
【図４−４２】
2019525943.tif 000065
【図４−４３】
2019525943.tif 000066
【図４−４４】
2019525943.tif 000067
【図４−４５】
2019525943.tif 000068
【図４−４６】
2019525943.tif 000069
【図４−４７】
2019525943.tif 000070
【図４−４８】
2019525943.tif 000071
【図４−４９】
2019525943.tif 000072
【図５】
2019525943.tif 000073
【図６】
2019525943.tif 000074
【図７】
2019525943.tif 000075
【図８】
2019525943.tif 000076
【図９】
2019525943.tif 000077
【図１０】
2019525943.tif 000078
【図１１】
2019525943.tif 000079
【図１２】
2019525943.tif 000080
【図１３】
2019525943.tif 000081
【図１４】
2019525943.tif 000082
【図１５】
2019525943.tif 000083
【図１６】
2019525943.tif 000084
【図１７】
2019525943.tif 000085
【図１８】
2019525943.tif 000086
【図１９】
2019525943.tif 000087
【配列表】
2019525943000001.app
【国際調査報告】
2019525943.tif 000088
2019525943.tif 000089
2019525943.tif 000090
2019525943.tif 000091
2019525943.tif 000092