(57)【要約】  この出願は、国際調査報告が作成されていないため、国際公開公報に要約書が記載されておりません。【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗ＴＮＦ抗体を含む医薬組成物であって、抗ＴＮＦ抗体が配列番号１に示すアミノ酸配列を含む軽鎖および配列番号２に示すアミノ酸配列を含む重鎖を含み、
抗ＴＮＦ抗体が少なくとも８０％ＮＧＮＡ末端シアル酸のグリコシル化パターンおよびＧａｌ−α(１,３)−Ｇａｌのグリコシル化パターンを有する、
医薬組成物。
【請求項２】
抗体のｚ−ａｖｇが１５〜２０nmである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
シアル酸グリコシル化がＮ−グリコシル化部位で少なくとも８０％ＮＡＮＡグリコシル化末端シアル酸である、請求項１に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
技術分野
本発明は、少なくとも８０％ＮＡＮＡグリコシル化末端シアル酸およびＧａｌ−α(２,３／６)−Ｇａｌのグリコシル化パターンを有する、キメラインフリキシマブ様モノクローナル抗体を提供する。キメラインフリキシマブ様モノクローナル抗体は、腫瘍壊死因子アルファ(ＴＮＦ)標的に結合する。開示されるインフリキシマブ様モノクローナル抗体は、インフリキシマブ(レミケード(登録商標))と同一のアミノ酸配列(配列番号１／配列番号２の軽鎖／重鎖)を有するキメラ抗体である。しかしながら、本発明の改善は、その少なくとも８０％ＮＧＮＡ末端シアル酸を有するグリコシル化およびＧａｌ−α(１,３)−Ｇａｌのグリコシル化パターンである。
【背景技術】
【０００２】
背景
グリコシル化は、翻訳後修飾である。タンパク質分子表面糖鎖は、該タンパク質分子の構造および機能に影響を有し得る。モノクローナル抗体のグリコシル化およびグリカン構造は、ＩｇＧ分子の抗体依存性細胞傷害(ＡＤＣＣ)、補体依存性細胞傷害(ＣＤＣ)および半減期を制御するように、ＩｇＧ分子のＦｃＲｓ、ＣｌｑおよびＦｅＲｎへの結合に影響することにより、その機能との相関性を有する。グリコシル化はまたｍＡｂ、特に非ヒトグリカンの安全性特性にも影響し、免疫原性の可能性がある。Ｆａｂ機能的領域に位置するグリカンは、これらの薬物の安全性および有効性特性の両者にも影響し得る。
【０００３】
グリコシル化は、細胞発現系およびサブクローン選択、細胞培養因子、例えば培地成分および培養条件に依存する。さらに、グリコシル化は、治療タンパク質の生物学的活性、有効性、免疫原性および薬物動態に影響する。
【０００４】
ＣＨＯ細胞およびマウス骨髄腫細胞(ＮＳ０、ＳＰ２／０)発現系は、治療抗体およびＦｃ融合タンパク質のために使用されている。現在、今まで承認されている治療モノクローナル抗体の４８％がＣＨＯ細胞で発現され、一方４５％がマウス細胞(２１％ＮＳ０細胞、１４％ＳＰ２／０細胞、１０％ハイブリドーマ細胞)で発現される。
【０００５】
ＴＮＦは、炎症誘発性作用を有し、血管内皮細胞での凝血原活性誘発(Pober et al., J. Immunol. 136:1680 (1986))、好中球およびリンパ球粘着性増加(Pober et al., J. Immunol. 138:3319 (1987))およびマクロファージ、好中球および血管内皮細胞からの血小板活性化因子遊離刺激(Camussi et al., J. Exp. Med. 166:1390 (1987))など組織傷害をもたらす。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
薬物特異的ＩｇＥ抗体は過敏症反応を有する大部分の患者の血清で見られており、特にα−Ｇａｌに対して反応する。インフリキシマブは、哺乳動物細胞(マウス骨髄腫細胞ＳＰ２／０)で発現され、調製される。このマウス細胞株は、付加的α１,３−ガラクトシダーゼトランスフェラーゼを含み、これは主にα配置のＵＤＰ−Ｇａｌからのガラクトース残基の末端ガラクトース残基への移動に介在し、それによりα−Ｇａｌを産生する。α−Ｇａｌは、ｍＡｂ、特にマウス細胞株で発現されたｍＡｂ上のあるグリカンに見られる有害な非ヒト二糖である。高レベルの抗α−Ｇａｌ  ＩｇＥ抗体が、インフリキシマブで処置した一部患者で見られた。さらに、ヒトとマウス細胞ＩｇＧグリコシル化の差異は、マウス細胞がα−Ｇａｌエピトープを作る生合成機構を有するだけでなく、Ｎ−アセチルフェノールノイラミニダーゼ(ＮＡＮＡ)ではなくてＮ−ヒドロキシエチルノイラミニダーゼ(ＮＧＮＡ)も産生することである。ＮＧＮＡに付加的酸素原子がある。糖タンパク質は、ＮＧＮＡ残基を含むならば、ヒトにおける免疫原性と密接に関係すると考えられる。いくつかの市販治療糖タンパク質は、ＮＧＮＡ残基を含むため、患者における重度有害反応を引き起こす。それ故に、当分野において、免疫原性低減により、インフリキシマブ投与の安全性を改善する必要がある。本発明は、薬物安全性を改善するために行った。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
概要
本発明は、Ｎ−グリコシル化部位に少なくとも８０％ＮＡＮＡグリコシル化末端シアル酸およびＧａｌ−α(２,３／６)−Ｇａｌのグリコシル化パターンを有するキメラインフリキシマブ様モノクローナル抗体を提供する。開示されるインフリキシマブ様モノクローナル抗体は、少なくとも８０％ＮＧＮＡ末端シアル酸およびＧａｌ−α(１,３)−Ｇａｌのグリコシル化パターンを有する、インフリキシマブ(レミケード(登録商標))と同一のアミノ酸配列(配列番号１／配列番号２の軽鎖／重鎖)を有するキメラ抗体である。
【０００８】
健常ボランティアでのフェーズ１臨床治験で、ＳＴＩ００２は、インフリキシマブの過去のデータと比較して、免疫原性反応の減少を示した。この観察は、メトトレキサートと組み合わせたＲＡ(リウマチ性関節炎)患者における複数回投与治験でも確認された。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】インフリキシマブ(レミケード(登録商標))と類似する結合反応速度を有する、開示されるインフリキシマブ様抗体(別名ＳＴＩ００２)の開示される抗体の比較を示す。
【００１０】
【図２】インフリキシマブ(レミケード(登録商標))と類似する有効性を有する、開示されるインフリキシマブ様抗体(別名ＳＴＩ００２)のＴＮＦ中和および有効性またはＥＣ５０決定の比較を示す。
【００１１】
【図３】インフリキシマブ(レミケード(登録商標))と類似する有効性を有する、開示されるインフリキシマブ様抗体(別名ＳＴＩ００２)のＴＮＦ中和および有効性またはＥＣ５０決定の比較を示す。
【００１２】
【図４】開示されるインフリキシマブ様抗体(別名ＳＴＩ００２)とインフリキシマブ(レミケード(登録商標))の抗体温度安定性の比較を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
詳細な記載
本発明は、少なくとも一部、チャイニーズハムスター卵巣(ＣＨＯ)細胞における抗ＴＮＦ抗体の産生の治療利益に基づく。ＳＴＩ００２は、ＣＨＯ細胞で産生され、インフリキシマブのアミノ酸配列を有する抗ＴＮＦ抗体である。構造的に、インフリキシマブは、配列番号１に示すアミノ酸配列を含む軽鎖および配列番号２に示すアミノ酸配列を含む重鎖を有する。インフリキシマブ軽鎖および重鎖のアミノ酸配列は、下に記載する。
【化１】
2019504065.tif 000002
【化２】
2019504065.tif 000003
【００１４】
それ故に、インフリキシマブ様抗体は、配列番号１に示すアミノ酸配列を含む軽鎖および配列番号２に示すアミノ酸配列を含む重鎖を含む。さらに、インフリキシマブ様抗体は、Ｎ−グリコリルノイラミン酸(ＮＧＮＡ)グリカンまたはＧａｌ−α(１,３)−Ｇａｌグリカンを含まない。インフリキシマブ様抗体は、例えば、Ｇａｌ−α(２,３／６)−Ｇａｌグリカンを含む、ＣＨＯ細胞発現と関連するグリカンを含む。
【００１５】
ＣＨＯ細胞におけるグリコシル化機構は、ヒトにおけるＩｇＧグリコシル化機構と類似する。本発明は、インフリキシマブと異なるグリカン構造を有する、遺伝子改変抗ＴＮＦ抗体を提供する。構造解析により、インフリキシマブグリカンは主にα−Ｇａｌおよび末端シアル酸として大部分ＮＧＮＡを含むことが決定された。ＮＧＮＡは、極めて高い免疫原性を有する。免疫原性の大きな減少と同時に、開示されるインフリキシマブ様モノクローナル抗体インビボクリアランスの特徴付けは、キメラ抗体のインビボ代謝に一致し、薬物動態パラメータはインフリキシマブに一致する。
【００１６】
インフリキシマブモノクローナル抗体と比較して、開示されるモノクローナル抗体は、同じアミノ酸一次構造を有するが、α−Ｇａｌを含まない。さらに、末端シアル酸は主にＮ−アセチルノイラミン酸(ＮＡＮＡ)である。これらのグリコシル化変化は、良好な患者耐容性を伴う顕著な改善を提供する。開示される抗体の臨床治験は、市販インフリキシマブで公開されている過去のデータと比較したとき、良好な患者耐容性および免疫原性減少を示した。開示されるモノクローナル抗体はまた、インフリキシマブの市販品開示データと類似の薬物動態インビボクリアランスおよびインビボ代謝も示した。
【００１７】
本発明は、Ｎ−グリコシル化部位に少なくとも８０％ＮＡＮＡグリコシル化末端シアル酸およびＧａｌ−α(２,３／６)−Ｇａｌのグリコシル化パターンを有するキメラモノクローナル抗体を提供する。
【００１８】
有効性をインビトロでも測定し、比較した。図１は、インフリキシマブ(レミケード(登録商標))と類似する結合反応速度を有する開示されるインフリキシマブ様抗体(別名ＳＴＩ００２)の比較を示す。図２は、インフリキシマブ(レミケード(登録商標))と類似する有効性を有する、開示されるインフリキシマブ様抗体(別名ＳＴＩ００２)のＴＮＦ中和および有効性またはＥＣ５０決定の比較を示す。図３は、インフリキシマブ(レミケード(登録商標))と類似する有効性を有する開示されるインフリキシマブ様抗体(別名ＳＴＩ００２)のＴＮＦ中和および有効性またはＥＣ５０決定の比較を示す。両抗体は、類似の有効性を示した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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