(57)【要約】  本発明は、特に、特定の新生物状態に対して有効な他の処置、特に有糸分裂の阻害剤（有糸分裂阻害剤）である治療薬による抗癌処置、と組み合わせた治療薬による静止癌細胞の標的化によって、新生物を処置する組成物および方法を提供する。
2019511553.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
新生物を有する被験者を処置する方法において、
前記被験者に、順次または同時に、ＤＹＲＫ１阻害剤を投与し、前記被験者に有糸分裂の阻害剤を投与することを含み、前記ＤＹＲＫ１阻害剤は、式Ｉ：
【化１】
2019511553.tif 000012
またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を有し、
式中、
Ｒ１は、置換もしくは非置換のＣ１〜８アルキル、置換もしくは非置換のフェニル、または置換もしくは非置換のベンジルであり、
Ｒ２は、オプションとしてハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルキル、ＯＨ、ＯＣ１〜４アルキルから独立して選択された最大で４つの基で置換された、フェニルであり、２つの隣接する基およびそれらの介在炭素原子は、Ｎ、Ｏ、またはＳから選択された１つ以上のヘテロ原子を含有する五〜六員環を形成し得る、方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法において、
前記被験者に有効量の放射線療法を施すことをさらに含む、方法。
【請求項３】
請求項１に記載の方法において、
処置される前記新生物は、胆道癌、脳癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、胃癌、腎癌、頭頸部癌、白血病、肝癌、肺癌、リンパ腫、卵巣癌、膵癌、前立腺癌、直腸癌、肉腫、皮膚癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、膀胱癌、乳癌、大腸癌、卵巣癌、および前立腺癌から選択される原発性または転移性の癌である、方法。
【請求項４】
請求項１に記載の方法において、
処置される前記新生物は、結腸癌、非小細胞肺癌、卵巣癌、前立腺癌、小細胞肺癌、および膵癌から選択される原発性または転移性の癌である、方法。
【請求項５】
請求項１に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤は、タキサン、ビンカアルカロイド、またはＰＬＫ１阻害剤である、方法。
【請求項６】
請求項１に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤は、ＢＭＳ−１８８７９６、ＢＭＳ−１８８７９７、カバジタキセル、ＤＥＰカバジタキセル、ドセタキセル、ラロタキセル（ＸＲＰ９８８１、ＲＰＲ１０９８８１）、パクリタキセル、タキソプレキシン（ＤＨＡ−パクリタキセル）、およびテセタキセル（ＤＪ−９２７）から選択される、方法。
【請求項７】
請求項１に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤は、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビンフルニン、およびビノレルビンから選択される、方法。
【請求項８】
請求項１に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤はビンタフォリドである、方法。
【請求項９】
請求項１に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤は、ＢＩ−２５３６、ＧＳＫ４６１３６４、ＧＷ８４３６８２Ｘ、ＨＭＮ−２１４およびＨＭＮ−１７６、ＭＬＮ−０９０５、ＮＭＳ−Ｐ９３７、リゴサチブ、Ｒｏ３２８０、ＳＢＥ  １３、ならびにボラセルチブから選択される、方法。
【請求項１０】
請求項１に記載の方法において、
前記ＤＹＲＫ１阻害剤は、Ｉ−１、Ｉ−２、Ｉ−３、Ｉ−４、Ｉ−５、Ｉ−６、およびＩ−７から選択される、方法。
【請求項１１】
請求項１０に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤は、タキサン、ビンカアルカロイド、またはＰＬＫ１阻害剤である、方法。
【請求項１２】
請求項１０に記載の方法において、
前記被験者に有効量の放射線療法を施すことをさらに含む、方法。
【請求項１３】
請求項１０に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤は、ＢＭＳ−１８８７９６、ＢＭＳ−１８８７９７、カバジタキセル、ＤＥＰカバジタキセル、ドセタキセル、ラロタキセル（ＸＲＰ９８８１、ＲＰＲ１０９８８１）、パクリタキセル、タキソプレキシン（ＤＨＡ−パクリタキセル）、およびテセタキセル（ＤＪ−９２７）から選択される、方法。
【請求項１４】
請求項１０に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤は、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビンフルニン、およびビノレルビンから選択される、方法。
【請求項１５】
請求項１０に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤はビンタフォリドである、方法。
【請求項１６】
請求項１０に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤は、ＢＩ−２５３６、ＧＳＫ４６１３６４、ＧＷ８４３６８２Ｘ、ＨＭＮ−２１４およびＨＭＮ−１７６、ＭＬＮ−０９０５、ＮＭＳ−Ｐ９３７、リゴサチブ、Ｒｏ３２８０、ＳＢＥ  １３、ならびにボラセルチブから選択される、方法。
【請求項１７】
請求項１０に記載の方法において、
処置される前記新生物は、胆道癌、脳癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、胃癌、腎癌、頭頸部癌、白血病、肝癌、肺癌、リンパ腫、卵巣癌、膵癌、前立腺癌、直腸癌、肉腫、皮膚癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、膀胱癌、乳癌、大腸癌、卵巣癌、および前立腺癌から選択される原発性または転移性の癌である、方法。
【請求項１８】
請求項１０に記載の方法において、
処置される前記新生物は、結腸癌、非小細胞肺癌、卵巣癌、前立腺癌、小細胞肺癌、および膵癌から選択される原発性または転移性の癌である、方法。
【請求項１９】
新生物を有する被験者を処置する方法において、
前記被験者に、順次または同時に、
（ａ）ＤＹＲＫ１阻害剤であって、生化学アッセイにおいて１００ｎＭ以下のＩＣ５０で、ＤＹＲＫ１ＡまたはＤＹＲＫ１Ｂキナーゼ活性を阻害し、このような阻害剤がない場合に見られるであろう静止癌細胞（ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏ）の割合を、少なくとも１０％だけ減少させる、ＤＹＲＫ１阻害剤と、
（ｂ）有糸分裂の阻害剤と、
を投与することを含む、方法。
【請求項２０】
請求項１９に記載の方法において、
前記ＤＹＲＫ１阻害剤は、式Ｉ：
【化２】
2019511553.tif 000013
またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を有し、
式中、
Ｒ１は、置換もしくは非置換のＣ１〜８アルキル、置換もしくは非置換のフェニル、または置換もしくは非置換のベンジルであり、
Ｒ２は、オプションとしてハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルキル、ＯＨ、ＯＣ１〜４アルキルから独立して選択された最大で４つの基で置換された、フェニルであり、２つの隣接する基およびそれらの介在炭素原子は、Ｎ、Ｏ、またはＳから選択された１つ以上のヘテロ原子を含有する五〜六員環を形成し得る、方法。
【請求項２１】
請求項１９に記載の方法において、
前記被験者に有効量の放射線療法を施すことをさらに含む、方法。
【請求項２２】
請求項１９に記載の方法において、
処置される前記新生物は、胆道癌、脳癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、胃癌、腎癌、頭頸部癌、白血病、肝癌、肺癌、リンパ腫、卵巣癌、膵癌、前立腺癌、直腸癌、肉腫、皮膚癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、膀胱癌、乳癌、大腸癌、卵巣癌、および前立腺癌から選択される原発性または転移性の癌である、方法。
【請求項２３】
請求項１９に記載の方法において、
処置される前記新生物は、原発性または転移性の結腸癌、非小細胞肺癌、卵巣癌、前立腺癌、小細胞肺癌、または膵癌である、方法。
【請求項２４】
請求項１９に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤は、タキサン、ビンカアルカロイド、またはＰＬＫ１阻害剤である、方法。
【請求項２５】
請求項１９に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤は、ＢＭＳ−１８８７９６、ＢＭＳ−１８８７９７、カバジタキセル、ＤＥＰカバジタキセル、ドセタキセル、ラロタキセル（ＸＲＰ９８８１、ＲＰＲ１０９８８１）、パクリタキセル、タキソプレキシン（ＤＨＡ−パクリタキセル）、およびテセタキセル（ＤＪ−９２７）から選択される、方法。
【請求項２６】
請求項１９に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤は、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビンフルニン、およびビノレルビンから選択される、方法。
【請求項２７】
請求項１９に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤はビンタフォリドである、方法。
【請求項２８】
請求項１９に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤は、ＢＩ−２５３６、ＧＳＫ４６１３６４、ＧＷ８４３６８２Ｘ、ＨＭＮ−２１４およびＨＭＮ−１７６、ＭＬＮ−０９０５、ＮＭＳ−Ｐ９３７、リゴサチブ、Ｒｏ３２８０、ＳＢＥ  １３、ならびにボラセルチブのリストから選択される、方法。
【請求項２９】
請求項１９に記載の方法において、
前記ＤＹＲＫ１阻害剤は、Ｉ−１、Ｉ−２、Ｉ−３、Ｉ−４、Ｉ−５、Ｉ−６、およびＩ−７から選択される、方法。
【請求項３０】
新生物を有する被験者を処置する方法において、
前記被験者に、順次または同時に、ＤＹＲＫ１阻害剤を投与し、前記被験者に有糸分裂の阻害剤を投与することを含み、
前記有糸分裂の阻害剤のＥＣ５０値は、細胞ベースのアッセイで決定される場合に、前記有糸分裂の阻害剤単独での同じ処置と比べて、組み合わせ処置では少なくとも２０％低い、方法。
【請求項３１】
請求項３０に記載の方法において、
前記ＤＹＲＫ１阻害剤は、式Ｉ：
【化３】
2019511553.tif 000014
またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を有し、
式中、
Ｒ１は、置換もしくは非置換のＣ１〜８アルキル、置換もしくは非置換のフェニル、または置換もしくは非置換のベンジルであり、
Ｒ２は、オプションとしてハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルキル、ＯＨ、ＯＣ１〜４アルキルから独立して選択された最大で４つの基で置換された、フェニルであり、２つの隣接する基およびそれらの介在炭素原子は、Ｎ、Ｏ、またはＳから選択された１つ以上のヘテロ原子を含有する五〜六員環を形成し得る、方法。
【請求項３２】
請求項３０に記載の方法において、
前記被験者に有効量の放射線療法を施すことをさらに含む、方法。
【請求項３３】
請求項３０に記載の方法において、
処置される前記新生物は、胆道癌、脳癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、胃癌、腎癌、頭頸部癌、白血病、肝癌、肺癌、リンパ腫、卵巣癌、膵癌、前立腺癌、直腸癌、肉腫、皮膚癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、膀胱癌、乳癌、大腸癌、卵巣癌、および前立腺癌から選択される原発性または転移性の癌である、方法。
【請求項３４】
請求項３０に記載の方法において、
処置される前記新生物は、原発性または転移性の結腸癌、非小細胞肺癌、卵巣癌、前立腺癌、小細胞肺癌、および膵癌である、方法。
【請求項３５】
請求項３０に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤は、タキサン、ビンカアルカロイド、またはＰＬＫ１阻害剤である、方法。
【請求項３６】
請求項３０に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤は、ＢＭＳ−１８８７９６、ＢＭＳ−１８８７９７、カバジタキセル、ＤＥＰカバジタキセル、ドセタキセル、ラロタキセル（ＸＲＰ９８８１、ＲＰＲ１０９８８１）、パクリタキセル、タキソプレキシン（ＤＨＡ−パクリタキセル）、およびテセタキセル（ＤＪ−９２７）から選択される、方法。
【請求項３７】
請求項３０に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤は、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビンフルニン、およびビノレルビンのリストから選択される、方法。
【請求項３８】
請求項３０に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤はビンタフォリドである、方法。
【請求項３９】
請求項３０に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤は、ＢＩ−２５３６、ＧＳＫ４６１３６４、ＧＷ８４３６８２Ｘ、ＨＭＮ−２１４およびＨＭＮ−１７６、ＭＬＮ−０９０５、ＮＭＳ−Ｐ９３７、リゴサチブ、Ｒｏ３２８０、ＳＢＥ  １３、ならびにボラセルチブから選択される、方法。
【請求項４０】
請求項３０に記載の方法において、
前記ＤＹＲＫ１阻害剤は、Ｉ−１、Ｉ−２、Ｉ−３、Ｉ−４、Ｉ−５、Ｉ−６、およびＩ−７から選択される、方法。
【請求項４１】
新生物を有する被験者を処置する方法において、
前記被験者に、順次または同時に、ＤＹＲＫ１阻害剤を投与し、前記被験者に有糸分裂の阻害剤を投与することを含み、この組み合わせ処置は、ＦＡＣＳアッセイによりサブ−Ｇ０細胞の割合によって決定される場合に、処置集団のアポトーシス細胞の割合を、いずれかの薬剤単独の場合と比較して少なくとも２倍だけ増やす、方法。
【請求項４２】
請求項４１に記載の方法において、
前記ＤＹＲＫ１阻害剤は、式Ｉ：
【化４】
2019511553.tif 000015
またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を有し、
式中、
Ｒ１は、置換もしくは非置換のＣ１〜８アルキル、置換もしくは非置換のフェニル、または置換もしくは非置換のベンジルであり、
Ｒ２は、オプションとしてハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルキル、ＯＨ、ＯＣ１〜４アルキルから独立して選択された最大で４つの基で置換された、フェニルであり、２つの隣接する基およびそれらの介在炭素原子は、Ｎ、Ｏ、またはＳから選択された１つ以上のヘテロ原子を含有する五〜六員環を形成し得る、方法。
【請求項４３】
請求項４１に記載の方法において、
前記被験者に有効量の放射線療法を施すことをさらに含む、方法。
【請求項４４】
請求項４１に記載の方法において、
処置される前記新生物は、胆道癌、脳癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、胃癌、腎癌、頭頸部癌、白血病、肝癌、肺癌、リンパ腫、卵巣癌、膵癌、前立腺癌、直腸癌、肉腫、皮膚癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、膀胱癌、乳癌、大腸癌、肺癌、卵巣癌、および前立腺癌から選択される原発性または転移性の癌である、方法。
【請求項４５】
請求項４１に記載の方法において、
処置される前記新生物は、原発性または転移性の結腸癌、非小細胞肺癌、卵巣癌、前立腺癌、小細胞肺癌、膵癌である、方法。
【請求項４６】
請求項４１に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤は、タキサン、ビンカアルカロイド、またはＰＬＫ１阻害剤である、方法。
【請求項４７】
請求項４１に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤は、ＢＭＳ−１８８７９６、ＢＭＳ−１８８７９７、カバジタキセル、ＤＥＰカバジタキセル、ドセタキセル、ラロタキセル（ＸＲＰ９８８１、ＲＰＲ１０９８８１）、パクリタキセル、タキソプレキシン（ＤＨＡ−パクリタキセル）、およびテセタキセル（ＤＪ−９２７）から選択される、方法。
【請求項４８】
請求項４１に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤は、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビンフルニン、およびビノレルビンのリストから選択される、方法。
【請求項４９】
請求項４１に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤はビンタフォリドである、方法。
【請求項５０】
請求項４１に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤は、ＢＩ−２５３６、ＧＳＫ４６１３６４、ＧＷ８４３６８２Ｘ、ＨＭＮ−２１４およびＨＭＮ−１７６、ＭＬＮ−０９０５、ＮＭＳ−Ｐ９３７、リゴサチブ、Ｒｏ３２８０、ＳＢＥ  １３、ならびにボラセルチブから選択される、方法。
【請求項５１】
請求項４１に記載の方法において、
前記ＤＹＲＫ１阻害剤は、Ｉ−１、Ｉ−２、Ｉ−３、Ｉ−４、Ｉ−５、Ｉ−６、およびＩ−７から選択される、方法。
【発明の詳細な説明】
【開示の内容】
【０００１】
〔発明の背景〕
癌細胞静止、事実上睡眠状態にある細胞は、処置に対する癌細胞の耐性の、また疾患再発の経路を与えるための、主要なメカニズムとして近年認識されている。この静止は、代わりに細胞休眠とも呼ばれるが、細胞周期のＧ０期での停止によるものである。典型的には、細胞は、図１に示すように、ギャップ期１（Ｇ１）から細胞周期に入る。合成期（Ｓ）および短い有糸分裂前インターバル（Ｇ２）の後、細胞は、有糸分裂（Ｍ）により分裂し、その後Ｇ１に戻る。しかしながら、Ｇ１の代わりに、細胞は、Ｇ０期として示される細胞休眠または静止に入る場合がある。癌細胞は、老化と呼ばれる、最終分化を受ける前の不可逆状態に入るか、または、可逆性で真に静止したＧ０状態に入ることができ、このＧ０状態から、細胞は、静止繊維芽細胞のように、循環を再開し得る（Ｃｏｌｌｅｒ  ＨＡ，  Ｓａｎｇ  Ｌ，  ａｎｄ  Ｒｏｂｅｒｔｓ  ＪＭ  （２００６）  Ａ  ｎｅｗ  ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｑｕｉｅｓｃｅｎｃｅ，  ＰＬｏＳ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ４，  ｅ８３）。
【０００２】
細胞集団は当然、いつでも静止状態にあってよく、また細胞分裂周期に入る信号を受け取るまでの予測できない期間にわたり静止したままであってよい。一例では、腫瘍内の集団において静止状態にある癌細胞の割合は、栄養素の欠乏、低酸素、高濃度の活性酸素種等といった、環境因子によって増大し得る。細胞はまた、薬理学的静止に見られるように、原薬の作用によって静止状態へと誘導され得る。
【０００３】
静止細胞のエネルギーおよび栄養素の必要性は、分裂細胞と比べて少ない。現在の癌療法は図２に示すように分裂細胞を標的としているので、癌細胞は、そのような処置が癌細胞に影響を及ぼすには細胞分裂周期になければならない。したがって、静止癌細胞は、露出したＤＮＡを損傷すること、ＤＮＡ複製もしくは修復を妨げること、有糸分裂を妨げること、または他のメカニズムによって１つ以上の（one of more）細胞増殖プロセスに影響を及ぼす処置に耐性を示す。
【０００４】
抗癌療法および放射線処置の両方が副作用を生じる。したがって、投与量および処置期間は、毒性により制限され、より低い有効投与量および／またはより短い処置期間が大いに望ましい。しかしながら、投与量を減少させるか、または処置を中止すると、生存静止癌細胞は、細胞周期に再び入った時に癌再発を引き起こす場合があり、そのタイミングは予測できない。さらに、血流中の転移性の癌細胞は、新たな微環境に順応する間、静止期間を経験し得る（Ｃｈａｆｆｅｒ  ＣＬ  ａｎｄ  Ｗｅｉｎｂｅｒｇ  ＲＡ  （２０１１）  Ａ  ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｏｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３３１，  １５５９−１５６４）。静止癌細胞はそれらのポリリボソームを分解し、よって、翻訳を阻止し、全ＲＮＡおよびタンパク質含量を低下させる。これらの収縮した癌細胞は、毛細血管の孔（約８μｍ直径）に入ることができ得るが、循環する癌細胞は、通常はるかに大きい（２０〜３０μｍ）。
【０００５】
したがって、新生物内における静止癌細胞集団の存在は、好結果で永続性のある処置に対する障害として認識されている（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＲＣ  （１９８９）  Ｔｈｅ  ｐｒｏｂｌｅｍ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｑｕｉｅｓｃｅｎｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ，  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ２９，  ２７−４６）。さまざまな癌型に由来する静止癌細胞の、さまざまな抗癌処置に対する耐性のエビデンスが報告されている。
【０００６】
しかし、癌細胞静止の重要性の評価の高まりにもかかわらず、この問題は、臨床的に取り組まれていない。したがって、本発明は、特定の新生細胞に対して有効であることが知られる処置と組み合わせた、小分子、特に静止癌細胞に対して有効な分子によって、静止癌細胞を標的化することを特徴とする、新生物を処置する方法および組み合わせを提供する。
【０００７】
〔発明の概要〕
本発明は、特に、特定の新生物状態（neoplastic conditions）に対して有効な他の処置、特に有糸分裂の阻害剤（有糸分裂阻害剤）である治療薬による抗癌処置、と組み合わせた治療薬による静止癌細胞の標的化によって、新生物を処置する組成物および方法を提供する。
【０００８】
概して、本発明は、新生物を処置する方法を特徴とし、この方法は、新生物の処置を必要とする被験者に、治療上有効量の、（ａ）静止癌細胞に対して有効な治療薬、および（ｂ）有糸分裂の阻害剤である第２の薬剤を投与することを含み、これら２つの薬剤は、順次または同時に投与され得る。いくつかの実施形態では、新生物は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏの癌または癌細胞集団である。いくつかの実施形態では、この処置を受ける被験者は、（例えば転移性または前転移性の）癌と診断されている。いくつかの実施形態では、被験者は、以前に、癌に対する第一選択治療で処置されている。いくつかの実施形態では、被験者は、順次または同時に２つ以上の有糸分裂の阻害剤で処置されるか、または処置されている。
【０００９】
いくつかの実施形態では、組み合わせ処置は、生存の増加、重症度の低下、再発の遅れもしくは排除、または一次処置（すなわち、有糸分裂の阻害剤）の副作用の減少など、転帰の改善を生じ得る。いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、組み合わせの一環として投与される場合には、その薬剤のみでの処置に比べて、より低い投与量で、および／またはより短い期間にわたり、投与される。例えば、いくつかの実施形態では、有糸分裂の阻害剤のＥＣ５０値は、例えば細胞ベースのアッセイで決定される場合に、有糸分裂の阻害剤単独での同じ処置と比べて、組み合わせ処置では少なくとも２０％低い。いくつかの実施形態では、組み合わせ処置は、例えばＦＡＣＳアッセイによるサブ−Ｇ０細胞の割合によって決定される場合に、処置集団のアポトーシス細胞の割合を、いずれかの薬剤単独の場合と比較して少なくとも２倍だけ増やす。
【００１０】
一実施形態では、静止癌細胞に対して有効な治療薬はＤＹＲＫ１阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＤＹＲＫ１阻害剤は、例えば生化学アッセイにおいて１００ｎＭ以下のＩＣ５０で、ＤＹＲＫ１キナーゼであるＤＹＲＫ１ＡまたはＤＹＲＫ１Ｂ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏ）いずれかの活性を阻害する化合物である。いくつかの実施形態では、ＤＹＲＫ１阻害剤は、このような阻害剤がない場合に見られるであろう静止癌細胞（ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏ）の割合を、例えば少なくとも１０％だけ減少させる。いくつかの実施形態では、ＤＹＲＫ１阻害剤は、ＤＹＲＫ１ＡおよびＤＹＲＫ１Ｂの両方を阻害する。いくつかの実施形態では、ＤＹＲＫ１阻害剤は、ＤＹＲＫ１ＡまたはＤＹＲＫ１Ｂに対して選択的である。
【００１１】
一実施形態では、静止癌細胞に対して有効な治療薬はＤＹＲＫ１阻害剤である。一実施形態では、ＤＹＲＫ１阻害剤は、式Ｉ：
【化１】
2019511553.tif 000003
の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物であり、
式中、
Ｒ１は、置換もしくは非置換のＣ１〜８アルキル、置換もしくは非置換のフェニル、または置換もしくは非置換のベンジルであり、
Ｒ２は、オプションとしてハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルキル、ＯＨ、ＯＣ１〜４アルキルから独立して選択された最大で４つの基で置換された、フェニルであり、２つの隣接する基およびそれらの介在炭素原子は、Ｎ、Ｏ、またはＳから選択された１つ以上のヘテロ原子を含有する五〜六員環を形成し得る。
【００１２】
一実施形態では、式Ｉの化合物は以下から選択される。
【化２】
2019511553.tif 000004
【００１３】
別の実施形態では、本発明の方法は、（ｃ）被験者に、別の癌療法、例えば放射線療法または他の癌処置を施すこと、をさらに提供する。
【００１４】
一実施形態では、本発明の方法は、必要とする被験者に、治療上有効量の（ａ）式Ｉの治療薬、（ｂ）有糸分裂の阻害剤、および（ｃ）放射線療法を投与することを含み、各療法は、順次または同時に施される。例えば、いくつかの実施形態では、被験者はまず、放射線療法で処置され、その際、被験者は、式Ｉの治療薬を単独で、または有糸分裂の阻害剤と組み合わせて、投与される。いくつかの実施形態では、被験者は、（ａ）静止癌細胞に対して有効な治療薬、（ｂ）有糸分裂の阻害剤、およびオプションとして（ｃ）放射線療法を同時投与される。いくつかの実施形態では、有糸分裂の阻害剤は、癌の処置に承認されたすべてのそのような化合物および哺乳動物の被験者（例えばマウス、ラット、イヌ、サル、ヒト）の癌の処置において別様に効力を示す化合物、ならびにｉｎ  ｖｉｔｒｏで新生細胞に対して効力を示す化合物を含むがこれらに限定されない、新生物を処置または予防するのに有効な有糸分裂の阻害剤である。多くのそのような化合物が既知である。
【００１５】
一実施形態では、有糸分裂の阻害剤はタキサンである。さらなる実施形態では、有糸分裂の阻害剤タキサンは、例えば、ＢＭＳ−１８８７９６、ＢＭＳ−１８８７９７、カバジタキセル、ＤＥＰカバジタキセル、ドセタキセル、ラロタキセル（ＸＲＰ９８８１、ＲＰＲ１０９８８１）、パクリタキセル、タキソプレキシン（taxoprexin）（ＤＨＡ−パクリタキセル）、およびテセタキセル（ＤＪ−９２７）である。
【００１６】
別の実施形態では、有糸分裂の阻害剤はビンカアルカロイドである。さらなる実施形態では、有糸分裂の阻害剤ビンカアルカロイドは、例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビンフルニン、およびビノレルビンである。別の実施形態では、有糸分裂の阻害剤ビンカアルカロイドは、ビンタフォリドである。
【００１７】
別の実施形態では、有糸分裂の阻害剤はＰＬＫ１阻害剤である。さらなる実施形態では、有糸分裂の阻害剤ＰＬＫ１は、例えば、ＢＩ−２５３６、ＧＳＫ４６１３６４、ＧＷ８４３６８２Ｘ、ＨＭＮ−２１４およびＨＭＮ−１７６、ＭＬＮ−０９０５、ＮＭＳ−Ｐ９３７、リゴサチブ、Ｒｏ３２８０、ＳＢＥ  １３、ならびにボラセルチブである。さらなる実施形態では、有糸分裂の阻害剤はＢＩ−２５３６またはＧＳＫ４６１３６４である。
【００１８】
別の実施形態では、処置される新生物は、癌、例えば、胆道癌、脳癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、胃癌、腎癌、頭頸部癌、白血病、肝癌、肺癌、リンパ腫、卵巣癌、膵癌、前立腺癌、直腸癌、肉腫、皮膚癌（例えば、黒色腫）、精巣癌、甲状腺癌、または子宮癌である。さらなる実施形態では、処置される新生物は、膀胱癌、乳癌、大腸癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、卵巣癌、および前立腺癌である。さらなる実施形態では、癌は原発性または転移性である。なおさらなる実施形態では、癌は、実施例に示す細胞株種（cell line types）で表される種類のものである。
【００１９】
実施形態は、追加の組み合わせ成分、特に、既存の処置の組み合わせの一部である治療薬および阻害剤、例えば、Ｔがドセタキセルであるタキソテール（登録商標）を表すＴＰＦ、またはＶが硫酸ビンクリスチンを表すＰＣＶなど、に関して制限することは意図していない。同様に、実施形態は、投与経路および順序に関して、または、患者のタイプ（以前に処置を受けていないか、もしくは以前に処置を受けている、共存症状態の有無、性別など）、または患者の疾患の病期、有糸分裂の阻害剤の種類などに関して制限することは意図していない。
【００２０】
〔発明の詳細な説明〕
用語集
本発明では、「アルキル」基は、別段の指示がない限り、１〜８個の炭素原子（Ｃ１〜８アルキル基）、特に１〜６個または１〜４個の炭素原子を含む、飽和、直鎖、または分枝炭化水素基である。１〜６個の炭素原子を有するアルキル基の例は、メチル、エチル、プロピル（例えばｎ−プロピル、イソ−プロピル）、ブチル（例えばｔｅｒｔ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｎ−ブチル）、ペンチル（例えばｎｅｏ−ペンチル）、ヘキシル（例えばｎ−ヘキシル）、２−メチルブチル、２−メチルペンチル、およびそれらの他の異性体型である。アルキル基は、非置換であるか、または、ハロゲン原子、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、アルコキシル、アルケニル、アルキニル、ＣＮ、ニトロ、およびアミノ基から選択された少なくとも１つの基で置換されていてよい。
【００２１】
本発明では、「アルケニル」基は、（別段の指示がない限り）２〜８個の炭素原子を含む、少なくとも１つの二重炭素−炭素結合を含む、直鎖または分枝炭化水素基である。２〜６個の炭素原子を含有するアルケニル基の例は、ビニル、アリル、１−プロペニル、２−プロペニル、１−ブテニル、２−ブテニル、３−ブテニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、３−ペンテニル、４−ペンテニル、１−ヘキセニル、２−ヘキセニル、３−ヘキセニル、４−ヘキセニル、５−ヘキセニル、およびそれらの異性体型である。アルケニル基は、非置換であるか、または、ハロゲン原子、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、アルコキシル、アルケニル、アルキニル、ＣＮ、ニトロ、およびアミノ基から選択される少なくとも１つの基によって置換されていてよい。
【００２２】
本発明では、「アルキニル」基は、２〜８個の炭素原子を含む、少なくとも１つの三重炭素−炭素結合を含む直鎖または分枝炭化水素基である。アルキニル基は、ハロゲン原子、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、アルコキシル、アルケニル、アルキニル、ＣＮ、ニトロ、およびアミノ基から選択される少なくとも１つの基によって置換されていてよい。
【００２３】
本発明では、「アリール」基は、５〜１４個の炭素原子を含む芳香族炭化水素環である。最も好適なアリール基は、単環式または二環式であり、６〜１４個の炭素原子を含み、例えばフェニル、α−ナフチル、３−ナフチル、アントラセニル（antracenyl）、好ましくはフェニルである。「アリール」基は、少なくとも別のアリール、ヘテロアリール、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル基に融合されたアリール環を含む、二環（bicycles）または三環（tricycles）、例えばベンゾジオキソラン（benzodioxolane）、ベンゾジオキサン、ジヒドロベンゾフラン（dihydrobenzofurane）、またはベンゾイミダゾールも含む。アリール基は、非置換であるか、または、ハロゲン原子、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、アルコキシル、アルケニル、アルキニル、ＣＮ、ニトロ、およびアミノ基から選択される少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、もしくは３つ）の基で置換されていてよい。さらに、アリール基は、付着する炭素原子と合わせると、Ｎ、Ｏ、およびＳから選択される１つ以上のヘテロ原子を含有し得る五〜六員環を形成し得る隣接する置換基によって、置換されていてよい。
【００２４】
本発明では、「ハロゲン原子」または「ハロ」は、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、またはＩ原子である。
【００２５】
本発明では、「アルコキシル」基は、式Ｏ−アルキルの、酸素原子を通じて分子の残りに結合されたアルキル基である。
【００２６】
本発明では、「アミノ」基は、ＮＨ２、ＮＨ−アルキル、またはＮ（アルキル）２基である。
【００２７】
本発明では、「ヘテロアリール」基は、環が少なくとも少なくとも１つのヘテロ原子、例えばＮ、Ｏ、またはＳ原子によって遮られたアリール基、例えばチオフェンまたはピリジンである。ヘテロアリール基は、非置換であるか、または、ハロゲン原子、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、アルコキシル、アルケニル、アルキニル、ＣＮ、ニトロ、およびアミノ基から選択される少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、もしくは３つ）の基で置換されていてよい。さらに、ヘテロアリール基は、付着する炭素原子と合わせると、Ｎ、Ｏ、およびＳから選択される１つ以上のヘテロ原子を含有し得る五〜六員環を形成し得る隣接する置換基によって、置換されていてよい。
【００２８】
本発明では、「シクロアルキル」は、好ましくは３〜１４個の炭素原子、さらに好ましくは３〜８個の炭素原子を有する１つの環を形成する飽和アルキル基、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、およびシクロオクチルを指す。シクロアルキル基は、非置換であるか、または、ハロゲン原子、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、アルコキシル、アルケニル、アルキニル、ＣＮ、ニトロ、およびアミノ基から選択される少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、もしくは３つ）の基によって置換されていてよい。さらに、シクロアルキル基は、付着する炭素原子と合わせると、Ｎ、Ｏ、およびＳから選択される１つ以上のヘテロ原子を含有し得る五〜六員環を形成し得る隣接する置換基によって、置換されていてよい。
【００２９】
本発明では、「ヘテロシクロアルキル」基は、少なくとも１つのヘテロ原子を含むシクロアルキル基、例えば、ピロリジン、テトラヒドロチオフェン、テトラヒドロフラン、ピペリジン、ピラン、ダイオキシン、モルフォリン、またはピペラジンである。ヘテロシクロアルキル基は、特に４〜１４個の炭素原子を含み得、例えば、モルホリニル、ピペリジニル、ピロリジニル、テトラヒドロピラニル、ジチオラニル（dithiolanyl）である。ヘテロシクロアルキル基は、非置換であるか、または、ハロゲン原子、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、アルコキシル、アルケニル、アルキニル、ＣＮ、ニトロ、およびアミノ基から選択される少なくとも１つの基によって置換されていてよい。さらに、ヘテロシクロアルキル基は、付着する炭素原子と合わせると、Ｎ、Ｏ、およびＳから選択される１つ以上のヘテロ原子を含有し得る五〜六員環を形成し得る隣接する置換基によって、置換されていてよい。
【００３０】
本明細書で使用される「新生物」は、新生組織形成によって生じる異常な組織塊を意味する。「新生組織形成」は、細胞の異常な増殖のプロセスを意味する。本発明のいくつかの実施形態では、新生物は、固形癌、または代わりに造血性癌である。新生組織形成は、良性、前悪性、または悪性であり得る。新生物という用語は、哺乳動物の癌、いくつかの実施形態ではヒト癌、および任意の組織の癌腫、肉腫、芽細胞腫（例えば腺癌、扁平上皮癌、骨肉腫など）、胚細胞性腫瘍、グリア細胞腫、リンパ腫、白血病を包含し、これらは、固形癌およびリンパ癌、腎癌、乳癌、肺癌、膀胱癌、結腸癌、卵巣癌、前立腺癌、直腸癌、膵癌、胃癌、脳癌、頭頸部癌、皮膚癌、子宮癌、子宮頸癌、精巣癌、食道癌、甲状腺癌、胆道癌、肝癌、ならびに骨および軟骨組織の癌を含み、これらは、非ホジキンリンパ腫（例えばバーキットリンパ腫、小細胞型リンパ腫、および大細胞型リンパ腫）およびホジキンリンパ腫、白血病、多発性骨髄腫、および骨髄異形成症候群を含む。
【００３１】
本明細書で使用される用語「処置する（treat）」、「処置すること（treating）」、または「処置（treatment）」は、医学的状態（例えば癌）を、その医学的状態が臨床的に許容可能な標準に従って改善される範囲で妨げることを意味する。癌の改善は、１）腫瘍増殖率の低下（腫瘍増殖阻害）、２）腫瘍縮小（退縮）、３）部分的かもしくは全体的かに関わらず、寛解、４）転移の減少、５）無増悪生存期間の延長、および６）再発の遅れもしくは排除を含み得る。本発明の特定の実施形態では、処置することは、以下の結果：癌の大きさ（mass）、もしくは体積、または悪性細胞数を部分的もしくは全体的に減らすこと；固形癌もしくは造血性癌に関連する臨床症状もしくは指標を向上もしくは改善すること；固形癌もしくは造血性癌の進行を遅らせるか、阻害するか、もしくは防止すること；または、固形癌もしくは造血性癌の発病もしくは発症を部分的もしくは全体的に遅らせるか、阻害するか、もしくは防止すること、のうちの１つ以上を部分的もしくは実質的に達成することを含む。また、「処置」は、処置なしで予測される生存と比べて、または標準的処置と比べて、長く生存することを意味し得る。
【００３２】
処置することは、予防的または防止的処置を含む。「予防的処置」は、対象の疾患の発症、重症度、または進行を防止、阻止、または低減するための、その疾患の臨床症状の出現または再発の前の処置を指す。
【００３３】
本明細書で使用される「有効量」は、対象の疾患の望ましい改善に作用するのに治療上または予防的に十分である治療薬、または治療薬の組み合わせの量を指す。有効量の例は、典型的には、１回の投薬につき体重１ｋｇ当たり約０．０００１ｍｇ〜体重１ｋｇ当たり約５００ｍｇの範囲であり、このような投薬は、１回、またはある期間にわたって施される。例としての範囲は、１回の投薬につき体重１ｋｇ当たり約０．０００１ｍｇ〜体重１ｋｇ当たり約５ｍｇである。他の実施例では、この範囲は、１回の投薬につき約０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇであってよい。さらに他の実施例では、有効量は、１回の投薬につき体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ〜体重１ｋｇ当たり５０ｍｇ、または１回の投薬につき体重１ｋｇ当たり０．０１ｍｇ〜体重１ｋｇ当たり０．１ｍｇ、体重１ｋｇ当たり０．５ｍｇ、体重１ｋｇ当たり１ｍｇ、体重１ｋｇ当たり２ｍｇ、体重１ｋｇ当たり３ｍｇ、体重１ｋｇ当たり４ｍｇ、体重１ｋｇ当たり５ｍｇ、体重１ｋｇ当たり６ｍｇ、体重１ｋｇ当たり１０ｍｇ、体重１ｋｇ当たり２０ｍｇ、体重１ｋｇ当たり２５ｍｇ、体重１ｋｇ当たり３０ｍｇ、または体重１ｋｇ当たり４０ｍｇの範囲である。既知の臨床用途の薬剤では、有効投与量の例は、適応症の処置のための規制機関により承認された量である。
【００３４】
本明細書で使用される用語「被験者」は、哺乳動物、例えばヒトを指すが、獣医学的処置を必要とする動物、例えば伴侶動物（例えばイヌ、ネコなど）、家畜（例えばウシ、ヒツジ、ブタ、ウマなど）、および実験動物（例えば、ラット、マウス、モルモットなど）も意味し得る。
【００３５】
本明細書で使用される用語「治療薬」は、作用機序に関係なく、小分子であるか、もしくはペプチドであるか、もしくは抗体であるか、もしくはオリゴヌクレオチドであるかに関わらず、細胞毒性剤、細胞増殖抑制剤、もしくは標的剤を含む、癌処置に使用されるか、癌処置での使用を企図されるか、または癌処置での使用について研究される、任意の化学分子を意味する。本明細書で使用される用語「治療用物質」または「治療薬」は、医薬品有効成分（ＡＰＩ）またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物（溶媒和物）、あるいは治療薬を含有するが調合された製剤を指し、ＡＰＩが非晶質であるか、または結晶質であるかを問わず、またいかなる多形体であるかを問わない。調合は、投与可能な剤形（製剤）を作るために賦形剤および／または送達ビヒクル（delivery vehicle）と組み合わせられた１つの医薬品有効成分（ＡＰＩ、原薬）または複数の医薬品有効成分（ＡＰＩｓ）の組み合わせを意味する。例えば、本明細書で使用されるように、パクリタキセルへの言及は、タキソール（登録商標）、アブラキサン（登録商標）、Ｌｉｐｕｓｕ（登録商標）、および有効成分としてパクリタキセルを含む任意の他の製剤を含む。
【００３６】
本発明の治療薬は、単独で投与され得るが、概して、（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇに記載されるような）標準的な薬務に関して、薬学的に許容されるキャリアと共に投与される。したがって、本発明のさらなる目的は、本明細書に定義される薬学的組成物、および薬学的に許容されるキャリアに関する。
【００３７】
本明細書で使用される用語「阻害剤」は、酵素活性を低下させる任意の組成物を意味する。阻害剤の例は化学分子である。阻害剤の効能の指標は、その「５０％阻害濃度」（ＩＣ５０）である。ＩＣ５０濃度またはＩＣ５０値は、酵素活性の５０％が阻害剤により阻害される、阻害剤の濃度である。例えばキナーゼ阻害剤の、ＩＣ５０値の決定方法は、当業者には既知であり、ＨｏｔＳｐｏｔ（商標）キナーゼアッセイテクノロジー（ペンシルバニア州マルバーンのＲｅａｃｔｉｏｎ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、ｗｗｗ．ｒｅａｃｔｉｏｎｂｉｏｌｏｇｙ．ｃｏｍ）などの直接および間接的な機能アッセイ、またはＫＩＮＯＭＥｓｃａｎ（登録商標）（カリフォルニア州フリーモントのＤｉｓｃｏｖｅｒＸ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、ｗｗｗ．ｄｉｓｃｏｖｅｒｘ．ｃｏｍ）などの競合結合アッセイを含む。
【００３８】
細胞株に対する治療薬の効能の指標は、その「５０％効果濃度」（ＥＣ５０）である。ＥＣ５０濃度またはＥＣ５０値は、例えば５０％の増殖阻害または５０％の細胞生存能力低下など、最大半量の反応を生じる、薬品濃度である。例えばキナーゼ阻害剤の、ＥＣ５０値の決定方法は、当業者には既知である。
【００３９】
本明細書で使用される用語「静止」または「静止状態」は、当技術分野の専門家が理解するように、細胞周期のＧ０状態を指す。
【００４０】
本明細書で使用される用語「静止癌細胞に対して有効な治療薬」は、細胞集団中の静止癌細胞の割合を減少させるか、または、別の状況では細胞集団中の静止癌細胞の割合の増加を生じるであろう条件下で、そのような増加を完全にもしくは実質的に防止する、分子を指す。
【００４１】
「静止新生細胞」は、代わりに（alternately）「静止癌細胞」と呼ばれるが、細胞周期の静止状態すなわちＧ０状態で存在する癌細胞を意味する。本明細書で使用される「静止新生細胞の割合」または「静止癌細胞の割合」は、細胞周期のＧ０状態で存在する癌細胞集団の部分を意味する。静止新生細胞の割合の決定は、細胞周期のステージ内のその構成細胞の分布によって、細胞集団を特徴づけることを含む。Ｇ０状態の細胞（すなわち、静止新生細胞）の割合は、細胞集団全体に対して定量化される。この割合は、細胞集団全体のパーセンテージ（すなわち（静止細胞の数を細胞集団中の全細胞で割ったもの）に１００を掛けたもの）として表すことができる。細胞周期のステージ内のその構成細胞の分布によって、細胞集団を特徴づけることは、当業者に既知の技術により達成され得、フローサイトメトリー法、例えば蛍光活性化細胞分類（ＦＡＣＳ）を用いたＤＮＡおよび／またはＲＮＡ含量による分析を含み得る。
【００４２】
〔詳細な説明〕
本発明は、特に、特定の新生物状態に対して有効な他の処置、特に有糸分裂の阻害剤である治療薬による抗癌処置、と組み合わせた治療薬による静止癌細胞の標的化によって、新生物を処置する組成物および方法を提供する。
【００４３】
概して、本発明は、新生物を処置する方法を特徴とし、この方法は、新生物の処置を必要とする被験者に、治療上有効量の、（ａ）静止癌細胞に対して有効な治療薬、および（ｂ）有糸分裂の阻害剤である第２の薬剤を投与することを含み、これら２つの薬剤は、順次または同時に投与され得る。いくつかの実施形態では、新生物は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏの癌または癌細胞集団である。いくつかの実施形態では、この処置を受ける被験者は、（例えば転移性または前転移性の）癌と診断されている。いくつかの実施形態では、被験者は、以前に、癌に対する第一選択治療で処置されている。いくつかの実施形態では、被験者は、以前に、第二選択治療および／または他の療法で処置されている。いくつかの実施形態では、被験者は、放射線療法で処置されるか、または処置されている。いくつかの実施形態では、被験者は、例えば腫瘍を切除または摘除するために、手術で処置されている。他の実施形態では、被験者の新生物は再発している。いくつかの実施形態では、被験者は、順次または同時に２つ以上の有糸分裂の阻害剤で処置されるか、または処置されている。
【００４４】
いくつかの実施形態では、組み合わせ処置は、生存の増加、重症度の低下、再発の遅れもしくは排除、または一次処置（すなわち、有糸分裂の阻害剤）の副作用の減少など、転帰の改善を生じ得る。いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、その薬剤のみでの処置に比べて、組み合わせの一環として投与される場合に、より低い投与量で、および／またはより短い期間にわたり、投与される。例えば、いくつかの実施形態では、有糸分裂の阻害剤のＥＣ５０値は、例えば細胞ベースのアッセイで決定される場合に、第１の薬剤での同じ処置と比べて、組み合わせ処置では少なくとも２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、１００％、３倍、５倍、１０倍低い。いくつかの実施形態では、組み合わせ処置は、例えばＦＡＣＳアッセイにおけるサブ−Ｇ０期細胞の割合によって決定される場合に、処置集団中のアポトーシス細胞の割合を、いずれかの薬剤単独の場合と比較して、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍だけ増やす。
【００４５】
一実施形態では、静止癌細胞に対して有効な治療薬はＤＹＲＫ１阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＤＹＲＫ１阻害剤は、例えば生化学アッセイにおいて＜１００ｎＭ、＜９０ｎＭ、＜８０ｎＭ、＜７０ｎＭ、＜６０ｎＭ、＜５０ｎＭ、＜４０ｎＭ、＜３０ｎＭ、＜２０ｎＭ、＜１０ｎＭ、＜５ｎＭであるか、またはそれより低いＩＣ５０値で、ＤＹＲＫ１ＡまたはＤＹＲＫ１Ｂ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏ）いずれかのＤＹＲＫ１キナーゼの活性を阻害する化合物である。いくつかの実施形態では、ＤＹＲＫ１阻害剤は、このような阻害剤がない場合に見られるであろう腫瘍または集団中の静止癌細胞（ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏ）の割合を、例えば少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％だけ、またはこれより多く減少させる。
【００４６】
いくつかの実施形態では、ＤＹＲＫ１阻害剤は、ＤＹＲＫ１ＡおよびＤＹＲＫ１Ｂの両方を阻害する。いくつかの実施形態では、ＤＹＲＫ１阻害剤は、ＤＹＲＫ１ＢのＩＣ５０とＤＹＲＫ１ＡのＩＣ５０との比率が１０００、１００、５０、２５、１０：１で、ＤＹＲＫ１Ａに対して選択的である。いくつかの実施形態では、ＤＹＲＫ１阻害剤は、ＤＹＲＫ１ＡのＩＣ５０とＤＹＲＫ１ＢのＩＣ５０との比率が１０００、１００、５０、２５、１０、または５：１で、ＤＹＲＫ１Ｂに対して選択的である。いくつかの実施形態では、ＤＹＲＫ１阻害剤は、ＩＣ５０値の比率によって決定される場合に、ＤＹＲＫ２および／またはＤＹＲＫ３および／またはＤＹＲＫ４と比べて、少なくとも４倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍だけＤＹＲＫ１に対して選択的である。いくつかの実施形態では、ＤＹＲＫ１阻害剤は、ＩＣ５０値の比率によって決定される場合に、例えばＣＤＫ２などのサイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）と比べて、少なくとも４倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、５００倍、１０００倍だけＤＹＲＫ１に対して選択的である。
【００４７】
既知のＤＹＲＫ１阻害剤の例は、ＡＺ１９１、ＤＹＲＫｉ、ハルミン、ＩＤ−８、ｌｅｕｃｅｔｔｉｎｅ  Ｌ４１、ＮＣＧＣ００１８５９８１、ＩＮＤＹ、ＰｒｏＩＮＤＹ、ＴＣ−Ｓ  ７００４、およびＴＧ００３を含む。少なくとも１つの既知のＤＹＲＫ１阻害剤であるＴＣ−Ｓ  ７００４（ＵＳ２０１２０１８４５６２）が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏの静止癌細胞に対して有効であることが報告されている（Ｅｗｔｏｎ  ＤＺ，  Ｈｕ  Ｊ，  Ｖｉｌｅｎｃｈｉｋ  Ｍ，  Ｄｅｎｇ  Ｘ，  Ｌｕｋ  ＫＣ，  Ｐｏｌｏｎｓｋａｉａ  Ａ，  Ｈｏｆｆｍａｎ  ＡＦ，  Ｚｉｐｆ  Ｋ，  Ｂｏｙｌａｎ  ＪＦ，  ａｎｄ  Ｆｒｉｅｄｍａｎ  ＥＡ．  （２０１１）  Ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＭＩＲＫ／ＤＹＲＫ１Ｂ  ｋｉｎａｓｅ  ｔａｒｇｅｔｓ  ｑｕｉｅｓｃｅｎｔ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ．  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  １０：  ２１０４−２１１４）。
【化３】
2019511553.tif 000005
【００４８】
一実施形態では、ＤＹＲＫ１阻害剤は、式Ｉ：
【化４】
2019511553.tif 000006
の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物であり、
式中、
Ｒ１は、置換もしくは非置換のＣ１〜８アルキル、置換もしくは非置換のフェニル、または置換もしくは非置換のベンジルであり、
Ｒ２は、オプションとしてハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルキル、ＯＨ、ＯＣ１〜４アルキルから独立して選択された最大で４つの基で置換された、フェニルであり、２つの隣接する基およびそれらの介在炭素原子は、Ｎ、Ｏ、またはＳから選択された１つ以上のヘテロ原子を含有する五〜六員環を形成し得る。
【００４９】
一実施形態では、式Ｉの化合物は以下から選択される。
【化５】
2019511553.tif 000007
【００５０】
別の実施形態では、本発明の方法は、（ｃ）被験者に、別の癌療法、例えば放射線療法または他の癌処置を施すこと、をさらに提供する。
【００５１】
一実施形態では、本発明の方法は、必要とする被験者に、治療上有効量の（ａ）式Ｉの治療薬、（ｂ）有糸分裂の阻害剤、および（ｃ）放射線療法を投与することを含み、各療法は、順次または同時に施される。例えば、いくつかの実施形態では、被験者はまず、放射線療法で処置され、その際、被験者は、式Ｉの治療薬を単独で、または有糸分裂の阻害剤と組み合わせて、投与される。いくつかの実施形態では、被験者は、（ａ）静止癌細胞に対して有効な治療薬、（ｂ）有糸分裂の阻害剤、およびオプションとして（ｃ）放射線療法を同時投与される。
【００５２】
いくつかの実施形態では、有糸分裂の阻害剤は、癌の処置に承認されたすべてのそのような化合物、癌の処置のための臨床試験における化合物、哺乳動物の被験者（例えばマウス、ラット、サル、ヒト）の癌の処置において別様に効力を示す化合物、およびｉｎ  ｖｉｔｒｏで新生細胞に対して効力を示す化合物を含むがこれらに限定されない、新生物を処置または予防するのに有効な有糸分裂の阻害剤である。多くのそのような化合物が既知である。
【００５３】
一実施形態では、有糸分裂の阻害剤はタキサンである。本発明の方法に有用なタキサンは、ＢＭＳ−１８８７９６、ＢＭＳ−１８８７９７、カバジタキセル、ＤＥＰカバジタキセル、ドセタキセル、ラロタキセル（ＸＲＰ９８８１、ＲＰＲ１０９８８１）、パクリタキセル、タキソプレキシン（ＤＨＡ−パクリタキセル）、およびテセタキセル（ＤＪ−９２７）を含む。
【００５４】
別の実施形態では、有糸分裂の阻害剤はビンカアルカロイドである。本発明の方法に有用なビンカアルカロイドは、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビンフルニン、およびビノレルビンを含む。別の実施形態では、有糸分裂の阻害剤ビンカアルカロイドは、ビンタフォリドである。
【００５５】
別の実施形態では、有糸分裂の阻害剤はＰＬＫ１阻害剤である。本発明の方法に有用なＰＬＫ１阻害剤は、ＢＩ−２５３６、ＧＳＫ４６１３６４、ＧＷ８４３６８２Ｘ、ＨＭＮ−２１４およびＨＭＮ−１７６、ＭＬＮ−０９０５、ＮＭＳ−Ｐ９３７、リゴサチブ、Ｒｏ３２８０、ＳＢＥ  １３、ならびにボラセルチブを含む。さらなる実施形態では、有糸分裂の阻害剤はＢＩ−２５３６またはＧＳＫ４６１３６４である。
【００５６】
別の実施形態では、新生物は、胆道癌、脳癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、胃癌、頭頸部癌、腎癌、白血病、肝癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、リンパ腫、卵巣癌、膵癌、前立腺癌、直腸癌、肉腫、皮膚癌（例えば、黒色腫）、精巣癌、甲状腺癌、または子宮癌である。さらなる実施形態では、新生物は、膀胱癌、乳癌、大腸癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、卵巣癌、および前立腺癌から選択される。さらなる実施形態では、癌は原発性または転移性である。なおさらなる実施形態では、癌は、実施例に示す細胞株種で表される種類のものである。
【００５７】
実施形態は、追加の組み合わせ成分、特に、既存の処置の組み合わせの一部である化合物、例えば、Ｔがドセタキセルであるタキソテール（登録商標）を表すＴＰＦ、またはＶが硫酸ビンクリスチンを表すＰＣＶなど、に関して制限することは意図していない。本明細書に記載する実施形態は例示的なものであり、投与経路および順序、患者のタイプ（以前に処置を受けていないか、もしくは以前に処置を受けている、共存症状態の有無、年齢、性別など）、または患者の疾患の病期、有糸分裂の阻害剤の種類などに関して制限することは意図していない。
【００５８】
有糸分裂の阻害剤は当技術分野で既知である（Ｄｏｍｉｎｇｕｅｚ−Ｂｒａｕｅｒ  Ｃ，  ｅｔ  ａｌ，  （２０１５）  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｍｉｔｏｓｉｓ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ：  ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｅｌｌ  ６０，  ５２４−５３６）。本明細書で使用される用語「有糸分裂の阻害剤」および「有糸分裂阻害剤」は等価であり、互換的に使用され得る。有糸分裂の阻害剤は、Ｍ期中、またはＭ期に入るチェックポイント（Ｇ２／Ｍチェックポイント）もしくはＭ期を出るチェックポイント（有糸分裂後チェックポイント）において、細胞周期を妨害する。Ｍ期において、染色体および細胞質は、２つの娘細胞へと分裂する（細胞質分裂）。有糸分裂は、５つの期間：前期、前中期、中期、後期、および終期で進み、有糸分裂の阻害剤は、これらの期間のいずれかを妨害し得る。例としての有糸分裂の阻害剤は、タキサン、ビンカアルカロイド、およびＰＬＫ１阻害剤を含む。
【００５９】
例えば、タキサンは、ＢＭＳ−１８８７９６、ＢＭＳ−１８８７９７、カバジタキセル、ＤＥＰカバジタキセル、ドセタキセル、ラロタキセル（ＸＲＰ９８８１、ＲＰＲ１０９８８１）、パクリタキセル、タキソプレキシン（ＤＨＡ−パクリタキセル）、およびテセタキセル（ＤＪ−９２７）を含み；ビンカアルカロイドは、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、ビンフルニン、およびビノレルビンを含み；ＰＬＫ１阻害剤は、ＢＩ−２５３６、ＧＳＫ４６１３６４、ＧＷ８４３６８２Ｘ、ＨＭＮ−２１４およびＨＭＮ−１７６、ＭＬＮ−０９０５、ＮＭＳ−Ｐ９３７、リゴサチブ、Ｒｏ３２８０、ＳＢＥ  １３、ならびにボラセルチブを含む。
【００６０】
Ｇ０状態は、遺伝子発現の特別なプログラムにより維持される。ＤＹＲＫ１ＡおよびＤＹＲＫ１ＢなどのＤＹＲＫ１キナーゼは、Ｇ０状態（静止状態）にある癌細胞の維持に重要となり得る。
【００６１】
ＤＹＲＫ１Ｂ／Ｍｉｒｋは、特定の正常組織において生存および分化を媒介するキナーゼのＭｉｎｉｂｒａｉｎ／ＤＹＲＫファミリーのメンバーである。（Ｋｅｎｔｒｕｐ  Ｈ，  Ｂｅｃｋｅｒ  Ｗ，  Ｈｅｕｋｅｌｂａｃｈ  Ｊ，  Ｗｉｌｍｅｓ  Ａ，  Ｓｃｈｕｒｍａｎｎ  Ａ，  Ｈｕｐｐｅｒｔｚ  Ｃ，  Ｋａｉｎｕｌａｉｎｅｎ  Ｈ，  ａｎｄ  Ｊｏｏｓｔ  ＨＧ  （１９９６）  Ｄｙｒｋ，  ａ  ｄｕａｌ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  ｗｉｔｈ  ｕｎｉｑｕｅ  ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｆｅａｔｕｒｅｓ  ｗｈｏｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｓ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｏｎ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｒｅｓｉｄｕｅｓ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｓｕｂｄｏｍａｉｎｓ  ＶＩＩ  ａｎｄ  ＶＩＩＩ，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２７１，  ３４８８−３４９５；Ｂｅｃｋｅｒ  Ｗ，  Ｗｅｂｅｒ  Ｙ，  Ｗｅｔｚｅｌ  Ｋ，  Ｅｉｒｍｂｔｅｒ  Ｋ，  Ｔｅｊｅｄｏｒ  ＦＪ，  ａｎｄ  Ｊｏｏｓｔ  ＨＧ  （１９９８）  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ，  ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ  ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ，  ａｎｄ  ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ＤＹＲＫ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｋｉｎａｓｅｓ，  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｆａｍｉｌｙ  ｏｆ  ｄｕａｌ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅｓ，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２７３，  ２５８９３−２５９０２）。ＤＹＲＫ１Ｂは、骨格筋細胞および精巣において検出可能なレベルで発現する。ＤＹＲＫ１Ｂのノックアウトは、マウスの発達中の筋肉においても明らかに異常な表現型を引き起こさず、これは、ＤＹＲＫ１Ｂが正常な発達にとって不可欠の遺伝子ではないことを示唆している。この解釈を裏付けるように、正常な繊維芽細胞は、ＤＹＲＫ１Ｂキナーゼレベルの２０倍枯渇後の生存に全く変化を示さなかった。よって、ＤＹＲＫ１Ｂは、正常細胞の生存に不可欠な遺伝子であるとは思われないが、ＤＹＲＫ１Ｂが癌細胞を静止状態に保持することにより生存を媒介すると考えられる特定の悪性癌細胞内でアップレギュレートされるというエビデンスがある。これらの異常な特徴は、ＤＹＲＫ１Ｂが治療的介入、特に静止癌細胞に直接対抗する抗癌療法にとって魅力的な標的となり得ることを示唆している。
【００６２】
開示される組み合わせおよび方法は、個々のそれぞれの成分または既存の単一および組み合わせ処置の使用に比べて、用語集で定義されるような改善のうちの１つ以上を提供し得る。また、開示される組み合わせおよび方法は、治療薬および放射線の投与量および／または投与回数の減少を可能にし、個々の成分または既存の単一および組み合わせ処置を用いて可能となるものに比べて、処置の結果として同じ改善を達成することができる。
【００６３】
開示される組み合わせは、有糸分裂の阻害剤での単一療法に比べて処置の有効性の著しい改善を生じるように、相乗的である必要はない。前述のとおり、静止癌細胞は、有糸分裂阻害剤を含む抗癌治療用物質に本質的に影響を受けにくく、処置後生存しているほんのわずかな静止細胞さえ、再発をもたらし得る。したがって、新生物中の耐性のある静止細胞集団を根絶することにより、ＥＣ５０値の相乗的な減少をもたらす場合ももたらさない場合もあるが、癌再発および転移性の新生物の出現において著しい改善をもたらし得る。
【００６４】
開示される組み合わせの投与レジメンおよび投与経路は、処置される新生物、新生物の進行の程度、選択される厳密な組み合わせ、被験者の年齢、性別および健康状態、ならびに他の要因に応じて大いに変化し得る。投与レジメンは、ある期間につき複数回の投与を含み得、処置は、同時に、または連続するなどして、施される。さらに、この組み合わせは、処置を受けたことがない（処置されていない）被験者、または処置を以前に受けたか、もしくは固形腫瘍の外科的切除もしくは摘除を受けている被験者、または、癌が再発した被験者に投与され得る。例えば、静止癌細胞に対して有効な治療薬が、有糸分裂の阻害剤の前に投与され得る。静止癌細胞に対して有効な治療薬は、有糸分裂の阻害剤より６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間前に投与され得る。静止癌細胞に対して有効な治療薬は、有糸分裂の阻害剤と同時に（付随して）投与され得る。静止癌細胞に対して有効な治療薬は、有糸分裂の阻害剤の６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間後に投与され得る。静止癌細胞に対して有効な治療薬および／または有糸分裂の阻害剤は、放射線または他の療法の前、後、またはそれに付随して投与され得る。
【００６５】
静止癌細胞に対して有効な治療薬は、毎日、２日毎、３日毎、４日毎、週１回、２週間に１回、１か月に１回、経口、静脈内（ＩＶ）、腹膜内（ＩＰ）、皮下（ＳＣ）、腫瘍内（ＩＴ）、髄腔内、または他の投与経路によって、投与され得る。
【００６６】
組み合わせは、処置を受けたことがない（処置されていない）被験者、または第一選択、第二選択、第三選択、もしくは他の療法、放射線処置による処置を以前に受けたか、もしくは固形腫瘍の外科的切除もしくは摘除を受けている被験者、または、癌が再発した被験者、または、癌が非転移性もしくは転移性である被験者に投与され得る。
【００６７】
〔実施例〕
以下の実施例は限定的とすることを意図しない。当業者は、本開示を鑑みて、多くの変更を特定の材料において行うことができ、それらは、開示され、本発明の趣旨および範囲から逸脱せずに依然として同じようなまたは類似の結果を得ることを、認識するであろう。
【００６８】
実施例１．  集団内の静止癌細胞の割合の決定
以下の細胞株をＡＴＣＣから入手し、ＡＴＣＣ推奨に従って培養した：ＤＭＳ２７３−小細胞肺癌細胞株；ＥＧＦＲ  ＴＫ中にＬ８５８ＲおよびＴ７９０Ｍ突然変異を含むＨ１９７５−非小細胞肺癌細胞株；野生型ＥＧＦＲを有するＡ５４９−非小細胞肺癌細胞株；ＬＮＣａｐ−前立腺癌細胞株；ＳＷ６２０−結腸癌細胞株；ＭｉａＰａＣａ２−膵癌細胞株；ＰＡＮＣ１−膵癌細胞株；ＯＶＣＡＲ３−卵巣癌細胞株；ＳＫ−ＯＶ−３−卵巣癌細胞株。
【００６９】
細胞培養物を、６ウェルプレートに、３×１０５〜６×１０５細胞／ウェルで播種した；培養された細胞数は、細胞の大きさおよび増殖速度次第であり、約５０％コンフルエンシーを目標とした。播種後、細胞は、３７℃で、湿気のある５％  ＣＯ２環境においてインキュベートされながら、２４時間付着させられ、その後、所望の長さの時間（通常２４時間）にわたり化合物で処置されて、同じ条件下でインキュベートされた。次に、細胞を、トリプシン処置で採取し、細胞を浮遊させて貯蔵し、ＰＢＳ中で洗浄し、氷のように冷たい７０％エタノールで一晩固定した。アクリジン・オレンジ（ＡＯ）染色では、固定細胞を、氷のように冷たいＰＢＳで一度洗浄し、１００μＬのＰＢＳ中に再懸濁させ、２００μＬの透過処置溶液（permeabilizing solution）と６００μＬのＡＯ染色溶液とを添加した。４８８ｎｍで励起するよう青色レーザーを用いてＧｕａｖａ  ｅａｓｙＣｙｔｅ  ＨＴフローサイトメーター（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）によって測定を行い、５２６ｎｍでのＡＯ−ＤＮＡ複合体および６５０ｎｍでのＡＯ−ＲＮＡ複合体の発光をモニタリングした。緩衝液の完全なプロトコルおよび組成が文献に記載されている（Ｄａｒｚｙｎｋｉｅｗｉｃｚ  Ｚ，  Ｊｕａｎ  Ｇ，  ａｎｄ  Ｓｒｏｕｒ  ＥＦ  （２００４）  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  Ｓｔａｉｎｉｎｇ  ｏｆ  ＤＮＡ  ａｎｄ  ＲＮＡ  （２００４）．  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，  Ｃｈａｐｔｅｒ  ７：Ｕｎｉｔ  ７．３）。
【００７０】
実施例２．  細胞生存率測定のための一般的な手順
生存率分析では、細胞を、９６ウェルプレートに２×１０３〜６×１０３細胞／ウェルで播種した；培養された細胞数は、細胞の大きさおよび増殖速度次第であり、約５０％コンフルエンシーを目標とした。播種後、細胞は、３７℃で、湿気のある５％  ＣＯ２環境においてインキュベートされて、２４時間付着させられた。
【００７１】
この処置は、細胞培地中のＤＭＳＯ濃度が＜１％となるよう、ＤＭＳＯ中で１：３連続希釈法において少なくとも６つの異なる濃度の化合物を用いて行った。細胞培養物は、３７℃で５％  ＣＯ２インキュベーターにおいてさらに９６時間インキュベートした。処置は３回行った。結果を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｇ７５７１）によって、Ｓｐｅｃｔｒａ  ＭＡＸ  Ｇｅｍｉｎｉ分光光度計（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いて製造業者の指示に従って、分析した。
【００７２】
実施例３．  静止癌細胞に対して有効な分子とパクリタキセルとの組み合わせ
ＳＷ６２０細胞を、実施例１および２で説明したように培養、処置、および分析した。このアッセイで使用したパクリタキセルの最高濃度は１００ｎＭであり、化合物Ｉ−５の濃度はこれに応じて２μＭおよび４μＭであった。パクリタキセルの観察されたＥＣ５０値は、化合物Ｉ−５が存在しなかった場合に８．１ｎＭ、化合物Ｉ−５が２μＭの濃度で存在した場合に２．３ｎＭ、化合物Ｉ−５が４μＭの濃度で存在した場合に０．２ｎＭであった。図３を参照のこと。
【００７３】
ＤＭＳ２７３細胞を、実施例１および２で説明したように培養、処置、および分析した。このアッセイで使用したパクリタキセルの最高濃度は１０ｎＭであり、化合物Ｉ−７の濃度は２μＭおよび４μＭであった。パクリタキセルの観察されたＥＣ５０値は、化合物Ｉ−７が存在しなかった場合に２．７ｎＭ、化合物Ｉ−７が２μＭの濃度で存在した場合に１．９ｎＭ、化合物Ｉ−７が４μＭの濃度で存在した場合に０．９ｎＭであった。図４を参照のこと。
【００７４】
ＬＮＣａｐ細胞を、実施例１および２で説明したように培養、処置、および分析した。このアッセイで使用したパクリタキセルの最高濃度は１０ｎＭであり、化合物Ｉ−５の濃度は２μＭおよび４μＭであった。パクリタキセルの観察されたＥＣ５０値は、化合物Ｉ−５が存在しなかった場合に３．２ｎＭ、化合物Ｉ−５が２μＭの濃度で存在した場合に２．１ｎＭ、化合物Ｉ−５が４μＭの濃度で存在した場合に０．９ｎＭであった。図５を参照のこと。
【００７５】
ＨＣＣ８２７細胞を、実施例１および２で説明したように培養、処置、および分析した。このアッセイで使用したパクリタキセルの最高濃度は１０ｎＭであり、化合物Ｉ−７の濃度は３μＭおよび６μＭであった。パクリタキセルの観察されたＥＣ５０値は、化合物Ｉ−７が存在しなかった場合に４．２ｎＭ、化合物Ｉ−７が３μＭの濃度で存在した場合に２．５ｎＭ、化合物Ｉ−７が６μＭの濃度で存在した場合に０．６ｎＭであった。図６を参照のこと。
【００７６】
Ａ５４９細胞を、実施例１および２で説明したように培養、処置、および分析した。このアッセイで使用したパクリタキセルの最高濃度は１０ｎＭであり、化合物Ｉ−７の濃度は３μＭおよび６μＭであった。パクリタキセルの観察されたＥＣ５０値は、化合物Ｉ−７が存在しなかった場合に４．８ｎＭ、化合物Ｉ−７が３μＭの濃度で存在した場合に２．５ｎＭ、化合物Ｉ−７が６μＭの濃度で存在した場合に０．７ｎＭであった。図７を参照のこと。
【００７７】
ＳＫ−ＯＶ−３細胞を、実施例１および２で説明したように培養、処置、および分析した。このアッセイで使用したパクリタキセルの最高濃度は１０ｎＭであり、化合物Ｉ−７の濃度は２μＭ、４μＭ、８μＭおよび１０μＭであった。パクリタキセルの観察されたＥＣ５０値は、化合物Ｉ−７が存在しなかった場合に９．７ｎＭ、化合物Ｉ−７が２μＭの濃度で存在した場合に９．４ｎＭ、化合物Ｉ−７が４μＭの濃度で存在した場合に４．８ｎＭ、化合物Ｉ−７が８μＭの濃度で存在した場合に４．７ｎＭ、化合物Ｉ−７が１０μＭの濃度で存在した場合に５．２ｎＭであった。図８を参照のこと。
【００７８】
ＯＶＣＡＲ３細胞を、実施例１および２で説明したように培養、処置、および分析した。このアッセイで使用したパクリタキセルの最高濃度は１０ｎＭであり、化合物Ｉ−７の濃度は２μＭおよび４μＭであった。パクリタキセルの観察されたＥＣ５０値は、化合物Ｉ−７が存在しなかった場合に３．３ｎＭ、化合物Ｉ−７が３μＭの濃度で存在した場合に２．８ｎＭ、化合物Ｉ−７が６μＭの濃度で存在した場合に１．７ｎＭであった。図９を参照のこと。
【００７９】
実施例４．  静止癌細胞に対して有効な分子とドセタキセルとの組み合わせ
ＳＷ６２０細胞を、実施例１および２で説明したように培養、処置、および分析した。このアッセイで使用したドセタキセルの最高濃度は１００ｎＭであり、化合物Ｉ−５の濃度は２μＭおよび４μＭであった。ドセタキセルの観察されたＥＣ５０値は、化合物Ｉ−５が存在しなかった場合に２．８５ｎＭ、化合物Ｉ−５が２μＭの濃度で存在した場合に０．６９ｎＭ、化合物Ｉ−５が４μＭの濃度で存在した場合に＜０．０１５ｎＭであった。図１０を参照のこと。
【００８０】
ＤＭＳ２７３細胞を、実施例１および２で説明したように培養、処置、および分析した。このアッセイで使用したドセタキセルの最高濃度は１０ｎＭであり、化合物Ｉ−７の濃度は２μＭおよび４μＭであった。ドセタキセルの観察されたＥＣ５０値は、化合物Ｉ−７が存在しなかった場合に０．６４ｎＭ、化合物Ｉ−７が２μＭの濃度で存在した場合に０．３８ｎＭ、化合物Ｉ−７が４μＭの濃度で存在した場合に０．１４ｎＭであった。図１１を参照のこと。
【００８１】
ＨＣＣ８２７細胞を、実施例１および２で説明したように培養、処置、および分析した。このアッセイで使用したドセタキセルの最高濃度は１０ｎＭであり、化合物Ｉ−７の濃度は３μＭおよび６μＭであった。ドセタキセルの観察されたＥＣ５０値は、化合物Ｉ−７が存在しなかった場合に１．８ｎＭ、化合物Ｉ−７が２μＭの濃度で存在した場合に０．６ｎＭ、化合物Ｉ−７が４μＭの濃度で存在した場合に０．０３ｎＭであった。図１２を参照のこと。
【００８２】
Ａ５４９細胞を、実施例１および２で説明したように培養、処置、および分析した。このアッセイで使用したドセタキセルの最高濃度は５ｎＭであり、化合物Ｉ−７の濃度は３μＭおよび６μＭであった。ドセタキセルの観察されたＥＣ５０値は、化合物Ｉ−７が存在しなかった場合に１．４ｎＭ、化合物Ｉ−７が２μＭの濃度で存在した場合に０．６ｎＭ、化合物Ｉ−７が４μＭの濃度で存在した場合に０．１ｎＭであった。図１３を参照のこと。
【００８３】
ＳＫ−ＯＶ−３細胞を、実施例１および２で説明したように培養、処置、および分析した。このアッセイで使用したドセタキセルの最高濃度は１０ｎＭであり、化合物Ｉ−７の濃度は４μＭおよび８μＭであった。ドセタキセルの観察されたＥＣ５０値は、化合物Ｉ−７が存在しなかった場合に２．５ｎＭ、化合物Ｉ−７が２μＭの濃度で存在した場合に１．５ｎＭ、化合物Ｉ−７が４μＭの濃度で存在した場合に０．３ｎＭであった。図１４を参照のこと。
【００８４】
ＯＶＣＡＲ３細胞を、実施例１および２で説明したように培養、処置、および分析した。このアッセイで使用したドセタキセルの最高濃度は１０ｎＭであり、化合物Ｉ−７の濃度は２μＭおよび４μＭであった。ドセタキセルの観察されたＥＣ５０値は、化合物Ｉ−７が存在しなかった場合に０．８５ｎＭ、化合物Ｉ−７が２μＭの濃度で存在した場合に０．５２ｎＭ、化合物Ｉ−７が４μＭの濃度で存在した場合に＜０．０４ｎＭであった。図１５を参照のこと。
【００８５】
実施例５．  静止癌細胞に対して有効な分子とビンクリスチンとの組み合わせ
ＤＭＳ２７３細胞を、実施例１および２で説明したように培養、処置、および分析した。このアッセイで使用したビンクリスチンの最高濃度は１０ｎＭであり、化合物Ｉ−５の濃度は２μＭおよび４μＭであった。ビンクリスチンの観察されたＥＣ５０値は、化合物Ｉ−５が存在しなかった場合に１．１ｎＭ、化合物Ｉ−５が２μＭの濃度で存在した場合に０．４ｎＭ、化合物Ｉ−５が４μＭの濃度で存在した場合に＜０．０４ｎＭであった。図１６を参照のこと。
【００８６】
Ｈ１９７５細胞を、実施例１および２で説明したように培養、処置、および分析した。このアッセイで使用したビンクリスチンの最高濃度は１０ｎＭであり、化合物Ｉ−５の濃度は２μＭおよび４μＭであった。ビンクリスチンの観察されたＥＣ５０値は、化合物Ｉ−５が存在しなかった場合に１．５ｎＭ、化合物Ｉ−５が２μＭの濃度で存在した場合に０．８５ｎＭ、化合物Ｉ−５が４μＭの濃度で存在した場合に０．３５ｎＭであった。図１７を参照のこと。
【００８７】
ＳＫ−ＯＶ−３細胞を、実施例１および２で説明したように培養、処置、および分析した。このアッセイで使用したビンクリスチンの最高濃度は２０ｎＭであり、化合物Ｉ−７の濃度は４μＭおよび８μＭであった。ビンクリスチンの観察されたＥＣ５０値は、化合物Ｉ−７が存在しなかった場合に８．７ｎＭ、化合物Ｉ−７が４μＭの濃度で存在した場合に２．１ｎＭ、化合物Ｉ−７が８μＭの濃度で存在した場合に１．０ｎＭであった。図１８を参照のこと。
【００８８】
ＯＶＣＡＲ３細胞を、実施例１および２で説明したように培養、処置、および分析した。このアッセイで使用したビンクリスチンの最高濃度は１ｎＭであり、化合物Ｉ−７の濃度は１μＭおよび３μＭであった。ビンクリスチンの観察されたＥＣ５０値は、化合物Ｉ−７が存在しなかった場合に１．２ｎＭ、化合物Ｉ−７が２μＭの濃度で存在した場合に０．８ｎＭ、化合物Ｉ−７が４μＭの濃度で存在した場合に０．１ｎＭであった。図１９を参照のこと。
【００８９】
実施例６．  静止癌細胞に対して有効な分子とビノレルビンとの組み合わせ
ＤＭＳ２７３細胞を、実施例１および２で説明したように培養、処置、および分析した。このアッセイで使用したビノレルビンの最高濃度は１０ｎＭであり、化合物Ｉ−５の濃度は２μＭおよび４μＭであった。ビノレルビンの観察されたＥＣ５０値は、化合物Ｉ−５が存在しなかった場合に１．１ｎＭ、化合物Ｉ−５が２μＭの濃度で存在した場合に０．４ｎＭ、化合物Ｉ−５が４μＭの濃度で存在した場合に＜０．０４ｎＭであった。図２０を参照のこと。
【００９０】
Ｈ１９７５細胞を、実施例１および２で説明したように培養、処置、および分析した。このアッセイで使用したビノレルビンの最高濃度は１０ｎＭであり、化合物Ｉ−５の濃度は２μＭおよび４μＭであった。ビノレルビンの観察されたＥＣ５０値は、化合物Ｉ−５が存在しなかった場合に９．５ｎＭ、化合物Ｉ−５が２μＭの濃度で存在した場合に５．２ｎＭ、化合物Ｉ−５が４μＭの濃度で存在した場合に２．１ｎＭであった。図２１を参照のこと。
【００９１】
ＯＶＣＡＲ３細胞を、実施例１および２で説明したように培養、処置、および分析した。このアッセイで使用したビノレルビンの最高濃度は１０ｎＭであり、化合物Ｉ−７の濃度は１μＭおよび３μＭであった。ビノレルビンの観察されたＥＣ５０値は、化合物Ｉ−７が存在しなかった場合に２．４ｎＭ、化合物Ｉ−７が１μＭの濃度で存在した場合に２．４ｎＭ、化合物Ｉ−７が３μＭの濃度で存在した場合に０．１ｎＭであった。図２２を参照のこと。
【００９２】
ＳＫ−ＯＶ−３細胞を、実施例１および２で説明したように培養、処置、および分析した。このアッセイで使用したビノレルビンの最高濃度は４０ｎＭであり、化合物Ｉ−７の濃度は２μＭおよび４μＭであった。ビノレルビンの観察されたＥＣ５０値は、化合物Ｉ−７が存在しなかった場合に１５．１ｎＭ、化合物Ｉ−７が２μＭの濃度で存在した場合に１０．１ｎＭ、化合物Ｉ−７が４μＭの濃度で存在した場合に４．７ｎＭであった。図２３を参照のこと。
【００９３】
Ａ５４９細胞を、実施例１および２で説明したように培養、処置、および分析した。このアッセイで使用したビノレルビンの最高濃度は５０ｎＭであり、化合物Ｉ−７の濃度は２μＭおよび４μＭであった。ビノレルビンの観察されたＥＣ５０値は、化合物Ｉ−７が存在しなかった場合に２７ｎＭ、化合物Ｉ−７が２μＭの濃度で存在した場合に１６ｎＭ、化合物Ｉ−７が４μＭの濃度で存在した場合に６ｎＭであった。図２４を参照のこと。
【００９４】
実施例７．  静止癌細胞に対して有効な分子とＢＩ２５３６との組み合わせ
Ｈ１９７５細胞を、実施例１および２で説明したように培養、処置、および分析した。このアッセイで使用したＢＩ２５３６の最高濃度は５０ｎＭであり、化合物Ｉ−７の濃度は２μＭおよび４μＭであった。ＢＩ２５３６の観察されたＥＣ５０値は、化合物Ｉ−７が存在しなかった場合に４６．３ｎＭ、化合物Ｉ−７が２μＭの濃度で存在した場合に１７．３ｎＭ、化合物Ｉ−７が４μＭの濃度で存在した場合に＜０．０４ｎＭであった。図２５を参照のこと。
【００９５】
ＰＡＮＣ１細胞を、実施例１および２で説明したように培養、処置、および分析した。このアッセイで使用したＢＩ２５３６の最高濃度は５０ｎＭであり、化合物Ｉ−７の濃度は２μＭおよび４μＭであった。ＢＩ２５３６の観察されたＥＣ５０値は、化合物Ｉ−７が存在しなかった場合に７．３ｎＭ、化合物Ｉ−７が２μＭの濃度で存在した場合に４．４ｎＭ、化合物Ｉ−７が４μＭの濃度で存在した場合に２．５ｎＭであった。図２６を参照のこと。
【００９６】
ＤＭＳ２７３細胞を、実施例１および２で説明したように培養、処置、および分析した。このアッセイで使用したＢＩ２５３６の最高濃度は５０ｎＭであり、化合物Ｉ−７の濃度は２μＭおよび４μＭであった。ＢＩ２５３６の観察されたＥＣ５０値は、化合物Ｉ−７が存在しなかった場合に６．２ｎＭ、化合物Ｉ−７が２μＭの濃度で存在した場合に４．１ｎＭ、化合物Ｉ−７が４μＭの濃度で存在した場合に１．７ｎＭであった。図２７を参照のこと。
【００９７】
Ａ５４９細胞を、実施例１および２で説明したように培養、処置、および分析した。このアッセイで使用したＢＩ２５３６の最高濃度は５０ｎＭであり、化合物Ｉ−７の濃度は３μＭおよび６μＭであった。ＢＩ２５３６の観察されたＥＣ５０値は、化合物Ｉ−７が存在しなかった場合に６．２ｎＭ、化合物Ｉ−７が３μＭの濃度で存在した場合に４．１ｎＭ、化合物Ｉ−７が６μＭの濃度で存在した場合に１．７ｎＭであった。図２８を参照のこと。
【００９８】
実施例８．  静止癌細胞に対して有効な分子とＧＳＫ４６１３６４との組み合わせ
Ｈ１９７５細胞を、実施例１および２で説明したように培養、処置、および分析した。このアッセイで使用したＧＳＫ４６１３６４の最高濃度は１０μＭであり、化合物Ｉ−７の濃度は２μＭおよび４μＭであった。ＧＳＫ４６１３６４の観察されたＥＣ５０値は、化合物Ｉ−７が存在しなかった場合に１．９μＭ、化合物Ｉ−７が２μＭの濃度で存在した場合に０．９７μＭ、化合物Ｉ−７が４μＭの濃度で存在した場合に０．５８μＭであった。図２９を参照のこと。
【００９９】
ＰＡＮＣ１細胞を、実施例１および２で説明したように培養、処置、および分析した。このアッセイで使用したＧＳＫ４６１３６４の最高濃度は１０μＭであり、化合物Ｉ−７の濃度は２μＭおよび４μＭであった。ＧＳＫ４６１３６４の観察されたＥＣ５０値は、化合物Ｉ−７が存在しなかった場合に０．５μＭ、化合物Ｉ−７が２μＭの濃度で存在した場合に０．３μＭ、化合物Ｉ−７が４μＭの濃度で存在した場合に０．２μＭであった。図３０を参照のこと。
【０１００】
ＤＭＳ２７３細胞を、実施例１および２で説明したように培養、処置、および分析した。このアッセイで使用したＧＳＫ４６１３６４の最高濃度は１０μＭであり、化合物Ｉ−７の濃度は２μＭおよび４μＭであった。ＧＳＫ４６１３６４の観察されたＥＣ５０値は、化合物Ｉ−７が存在しなかった場合に０．４３μＭ、化合物Ｉ−７が２μＭの濃度で存在した場合に０．２４μＭ、化合物Ｉ−７が４μＭの濃度で存在した場合に０．１２μＭであった。図３１を参照のこと。
【０１０１】
Ａ５４９細胞を、実施例１および２で説明したように培養、処置、および分析した。このアッセイで使用したＧＳＫ４６１３６４の最高濃度は１μＭであり、化合物Ｉ−７の濃度は３μＭおよび６μＭであった。ＧＳＫ４６１３６４の観察されたＥＣ５０値は、化合物Ｉ−７が存在しなかった場合に１．２μＭ、化合物Ｉ−７が３μＭの濃度で存在した場合に０．５μＭ、化合物Ｉ−７が６μＭの濃度で存在した場合に０．２μＭであった。図３２を参照のこと。
【０１０２】
実施例９．  パクリタキセル、および静止癌細胞に対して有効な分子とパクリタキセルとの組み合わせの細胞周期効果および細胞毒性
ＤＭＳ２７３細胞を、実施例１および２で説明したように培養、処置、および分析した。異なる濃度のパクリタキセル、化合物Ｉ−７、またはパクリタキセルおよび化合物Ｉ−７の両方が存在する場合の結果を図３３に示す。
【０１０３】
この実験では、ＤＭＳ２７３細胞をパクリタキセルに暴露しても、細胞周期のＧ０期にある細胞の割合がパクリタキセルの有無にかかわらず同様であるので、薬理学的静止をもたらさないことが証明された。化合物Ｉ−７をパクリタキセルと組み合わせると、ＤＭＳ２７３細胞の細胞周期分布に大きく影響し、Ｇ０にある細胞の割合を著しく減少させたことも証明された。さらに、この組み合わせの細胞毒性は、サブＧ０集団として観察されるアポトーシス細胞の割合の著しい増加によって明らかとなるように、パクリタキセル単独の場合よりも著しく高かった。
【０１０４】
標準的な成長培地（ＦＢＳ＋）でインキュベートされた、正常に増殖するＤＭＳ２７３細胞、および無血清培地（ＦＢＳ−）で予めインキュベートされたＤＭＳ２７３細胞の細胞周期分布を比較のため示す。
【０１０５】
ＳＷ６２０細胞を、実施例１および２で説明したように培養、処置、および分析した。異なる濃度のパクリタキセル、化合物Ｉ−７、またはパクリタキセルおよび化合物Ｉ−７の両方が存在する場合の結果を図３４に示す。
【０１０６】
この実験では、ＳＷ６２０細胞をパクリタキセルに暴露しても、細胞周期のＧ０期にある細胞の割合が、成長培地（ＦＢＳ＋）でインキュベートされた細胞中のパクリタキセルの有無にかかわらず同様であるので、薬理学的静止をもたらさないことが証明された。化合物Ｉ−７をパクリタキセルと組み合わせると、ＳＷ６２０細胞の細胞周期分布に大きく影響し、Ｇ０にある細胞の割合を著しく減少させたことも証明された。さらに、この組み合わせの細胞毒性は、サブＧ０集団として観察されるアポトーシス細胞の割合の著しい増加によって明らかとなるように、パクリタキセル単独の場合よりも著しく高かった。
【０１０７】
標準的な成長培地（ＦＢＳ＋）でインキュベートされた、正常に増殖するＳＷ６２０細胞、および無血清培地（ＦＢＳ−）で予めインキュベートされたＳＷ６２０細胞の細胞周期分布を比較のため示す。
【０１０８】
実施例１０．  ビンクリスチン、および静止癌細胞に対して有効な分子とビンクリスチンとの組み合わせの細胞周期効果および細胞毒性
ＤＭＳ２７３細胞を、実施例１および２で説明したように培養、処置、および分析した。異なる濃度のビンクリスチン、化合物Ｉ−７、またはビンクリスチンおよび化合物Ｉ−７の両方が存在する場合の結果を図３５に示す。
【０１０９】
この実験では、ＤＭＳ２７３細胞をビンクリスチンに暴露しても、細胞周期のＧ０期にある細胞の割合が、成長培地（ＦＢＳ＋）でインキュベートされた細胞中のビンクリスチンの有無にかかわらず同様であるので、薬理学的静止をもたらさないことが証明された。化合物Ｉ−７をビンクリスチンと組み合わせると、ＤＭＳ２７３細胞の細胞周期分布に大きく影響し、Ｇ０にある細胞の割合を著しく減少させたことも証明された。さらに、この組み合わせの細胞毒性は、サブＧ０集団として観察されるアポトーシス細胞の割合の著しい増加によって明らかとなるように、ビンクリスチン単独の場合よりも著しく高かった。
【０１１０】
標準的な成長培地（ＦＢＳ＋）でインキュベートされた、正常に増殖するＤＭＳ２７３細胞、および無血清培地（ＦＢＳ−）で予めインキュベートされたＤＭＳ２７３細胞の細胞周期分布を比較のため示す。
【０１１１】
実施例１１．  ビノレルビン、および静止癌細胞に対して有効な分子とビノレルビンとの組み合わせの細胞周期効果および細胞毒性
ＤＭＳ２７３細胞を、実施例１および２で説明したように培養、処置、および分析した。異なる濃度のビノレルビン、化合物Ｉ−７、またはビノレルビンおよび化合物Ｉ−７の両方が存在する場合の結果を図３６に示す。
【０１１２】
この実験では、ＤＭＳ２７３細胞をビノレルビンに暴露しても、薬理学的静止をもたらさないことが証明された。化合物Ｉ−７をビノレルビンと組み合わせると、ＤＭＳ２７３細胞の細胞周期分布に影響し、Ｇ０にある細胞の割合を著しく減少させたことも証明された。さらに、この組み合わせの細胞毒性は、サブＧ０集団として観察されるアポトーシス細胞の割合の著しい増加によって明らかとなるように、ビノレルビン単独の場合よりも著しく高かった。
【０１１３】
標準的な成長培地（ＦＢＳ＋）でインキュベートされた、正常に増殖するＤＭＳ２７３細胞、および無血清培地（ＦＢＳ−）で予めインキュベートされたＤＭＳ２７３細胞の細胞周期分布を比較のため示す。
【０１１４】
実施例１２．  ＡＺ１９１の細胞周期効果および化合物Ｉ−７との比較
ＳＷ６２０細胞を、実施例１に記載のとおりに培養し、処置した。ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）染色では、フローサイトメトリー用のＧｕａｖａ  Ｃｅｌｌ  Ｃｙｃｌｅ試薬（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）に付属の製造業者のプロトコルに従った。５３５ｎｍで励起するよう緑色レーザーを用いてＧｕａｖａ  ＰＣＡ−９６フローサイトメーター（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）によって測定を行い、６１７ｎｍでの発光をモニタリングした。
【０１１５】
異なる濃度のＡＺ１９１が存在した場合の結果を図３７に示す。データは、２つの複製物の平均である。
【０１１６】
ＳＷ６２０細胞を、実施例１で説明したように培養し、処置し、分析した。ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）染色では、フローサイトメトリー用のＧｕａｖａ  Ｃｅｌｌ  Ｃｙｃｌｅ試薬（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）に付属の製造業者のプロトコルに従った。５３５ｎｍで励起するよう緑色レーザーを用いてＧｕａｖａ  ＰＣＡ−９６フローサイトメーター（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）によって測定を行い、６１７ｎｍでの発光をモニタリングした。
【０１１７】
異なる濃度の化合物Ｉ−７が存在した場合の結果を図３８に示す。データは、２つの複製物の平均である。
【０１１８】
これらの実験では、ＳＷ６２０細胞を、異なる濃度のＡＺ１９１または化合物Ｉ−７を含有するＦＢＳ−培地で２４時間インキュベートした。これらの条件下で、ＡＺ１９１への曝露は、Ｇ０＋Ｇ１期の細胞の割合に変化が観察されなかったことに基づくと、静止状態（Ｇ０）にある細胞の割合を減少させなかった。同じ条件下で、同じかまたはより低い濃度の化合物Ｉ−７への曝露は、Ｇ０＋Ｇ１期の細胞の割合が著しく減少したことに基づくと、静止状態（Ｇ０）にある細胞の割合を著しく減少させた。
【０１１９】
ＡＺ１９１は、１７ｎＭでＤＹＲＫ１Ｂを阻害する（Ａｓｈｆｏｒｄ  ＡＬ，  Ｏｘｌｅｙ  Ｄ，  Ｋｅｔｔｌｅ  Ｊ，  Ｈｕｄｓｏｎ  Ｋ，  Ｇｕｉｃｈａｒｄ  Ｓ，  Ｃｏｏｋ  ＳＪ，  Ｌｏｃｈｈｅａｄ  ＰＡ  （２０１４）  Ａ  ｎｏｖｅｌ  ＤＹＲＫ１Ｂ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ＡＺ１９１  ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｓ  ｔｈａｔ  ＤＹＲＫ１Ｂ  ａｃｔｓ  ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙ  ｏｆ  ＧＳＫ３ｂｅｔａ  ｔｏ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅ  ｃｙｃｌｉｎ  Ｄ１  ａｔ  Ｔｈｒ（２８６），  ｎｏｔ  Ｔｈｒ（２８８）．  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ４５７，  ４３−５６）。
【０１２０】
この実験では、すべてのＤＹＲＫ１阻害剤が静止癌細胞に対して有効とは限らないことが証明された。
【０１２１】
本発明は、例としての実施形態を参照して具体的に図示および説明してきたが、形態および詳細のさまざまな変更が、特許請求の範囲により包含される本発明の範囲を逸脱せずに行われ得ることを、当業者は理解するであろう。
【０１２２】
〔実施の態様〕
（１）  新生物を有する被験者を処置する方法において、
前記被験者に、順次または同時に、ＤＹＲＫ１阻害剤を投与し、前記被験者に有糸分裂の阻害剤を投与することを含み、前記ＤＹＲＫ１阻害剤は、式Ｉ：
【化６】
2019511553.tif 000008
またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を有し、
式中、
Ｒ１は、置換もしくは非置換のＣ１〜８アルキル、置換もしくは非置換のフェニル、または置換もしくは非置換のベンジルであり、
Ｒ２は、オプションとしてハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルキル、ＯＨ、ＯＣ１〜４アルキルから独立して選択された最大で４つの基で置換された、フェニルであり、２つの隣接する基およびそれらの介在炭素原子は、Ｎ、Ｏ、またはＳから選択された１つ以上のヘテロ原子を含有する五〜六員環を形成し得る、方法。
（２）  実施態様１に記載の方法において、
前記被験者に有効量の放射線療法を施すことをさらに含む、方法。
（３）  実施態様１に記載の方法において、
処置される前記新生物は、胆道癌、脳癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、胃癌、腎癌、頭頸部癌、白血病、肝癌、肺癌、リンパ腫、卵巣癌、膵癌、前立腺癌、直腸癌、肉腫、皮膚癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、膀胱癌、乳癌、大腸癌、卵巣癌、および前立腺癌から選択される原発性または転移性の癌である、方法。
（４）  実施態様１に記載の方法において、
処置される前記新生物は、結腸癌、非小細胞肺癌、卵巣癌、前立腺癌、小細胞肺癌、および膵癌から選択される原発性または転移性の癌である、方法。
（５）  実施態様１に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤は、タキサン、ビンカアルカロイド、またはＰＬＫ１阻害剤である、方法。
【０１２３】
（６）  実施態様１に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤は、ＢＭＳ−１８８７９６、ＢＭＳ−１８８７９７、カバジタキセル、ＤＥＰカバジタキセル、ドセタキセル、ラロタキセル（ＸＲＰ９８８１、ＲＰＲ１０９８８１）、パクリタキセル、タキソプレキシン（ＤＨＡ−パクリタキセル）、およびテセタキセル（ＤＪ−９２７）から選択される、方法。
（７）  実施態様１に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤は、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビンフルニン、およびビノレルビンから選択される、方法。
（８）  実施態様１に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤はビンタフォリドである、方法。
（９）  実施態様１に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤は、ＢＩ−２５３６、ＧＳＫ４６１３６４、ＧＷ８４３６８２Ｘ、ＨＭＮ−２１４およびＨＭＮ−１７６、ＭＬＮ−０９０５、ＮＭＳ−Ｐ９３７、リゴサチブ、Ｒｏ３２８０、ＳＢＥ  １３、ならびにボラセルチブから選択される、方法。
（１０）  実施態様１に記載の方法において、
前記ＤＹＲＫ１阻害剤は、Ｉ−１、Ｉ−２、Ｉ−３、Ｉ−４、Ｉ−５、Ｉ−６、およびＩ−７から選択される、方法。
【０１２４】
（１１）  実施態様１０に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤は、タキサン、ビンカアルカロイド、またはＰＬＫ１阻害剤である、方法。
（１２）  実施態様１０に記載の方法において、
前記被験者に有効量の放射線療法を施すことをさらに含む、方法。
（１３）  実施態様１０に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤は、ＢＭＳ−１８８７９６、ＢＭＳ−１８８７９７、カバジタキセル、ＤＥＰカバジタキセル、ドセタキセル、ラロタキセル（ＸＲＰ９８８１、ＲＰＲ１０９８８１）、パクリタキセル、タキソプレキシン（ＤＨＡ−パクリタキセル）、およびテセタキセル（ＤＪ−９２７）から選択される、方法。
（１４）  実施態様１０に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤は、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビンフルニン、およびビノレルビンから選択される、方法。
（１５）  実施態様１０に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤はビンタフォリドである、方法。
【０１２５】
（１６）  実施態様１０に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤は、ＢＩ−２５３６、ＧＳＫ４６１３６４、ＧＷ８４３６８２Ｘ、ＨＭＮ−２１４およびＨＭＮ−１７６、ＭＬＮ−０９０５、ＮＭＳ−Ｐ９３７、リゴサチブ、Ｒｏ３２８０、ＳＢＥ  １３、ならびにボラセルチブから選択される、方法。
（１７）  実施態様１０に記載の方法において、
処置される前記新生物は、胆道癌、脳癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、胃癌、腎癌、頭頸部癌、白血病、肝癌、肺癌、リンパ腫、卵巣癌、膵癌、前立腺癌、直腸癌、肉腫、皮膚癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、膀胱癌、乳癌、大腸癌、卵巣癌、および前立腺癌から選択される原発性または転移性の癌である、方法。
（１８）  実施態様１０に記載の方法において、
処置される前記新生物は、結腸癌、非小細胞肺癌、卵巣癌、前立腺癌、小細胞肺癌、および膵癌から選択される原発性または転移性の癌である、方法。
（１９）  新生物を有する被験者を処置する方法において、
前記被験者に、順次または同時に、
（ａ）ＤＹＲＫ１阻害剤であって、生化学アッセイにおいて１００ｎＭ以下のＩＣ５０で、ＤＹＲＫ１ＡまたはＤＹＲＫ１Ｂキナーゼ活性を阻害し、このような阻害剤がない場合に見られるであろう静止癌細胞（ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏ）の割合を、少なくとも１０％だけ減少させる、ＤＹＲＫ１阻害剤と、
（ｂ）有糸分裂の阻害剤と、
を投与することを含む、方法。
（２０）  実施態様１９に記載の方法において、
前記ＤＹＲＫ１阻害剤は、式Ｉ：
【化７】
2019511553.tif 000009
またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を有し、
式中、
Ｒ１は、置換もしくは非置換のＣ１〜８アルキル、置換もしくは非置換のフェニル、または置換もしくは非置換のベンジルであり、
Ｒ２は、オプションとしてハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルキル、ＯＨ、ＯＣ１〜４アルキルから独立して選択された最大で４つの基で置換された、フェニルであり、２つの隣接する基およびそれらの介在炭素原子は、Ｎ、Ｏ、またはＳから選択された１つ以上のヘテロ原子を含有する五〜六員環を形成し得る、方法。
【０１２６】
（２１）  実施態様１９に記載の方法において、
前記被験者に有効量の放射線療法を施すことをさらに含む、方法。
（２２）  実施態様１９に記載の方法において、
処置される前記新生物は、胆道癌、脳癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、胃癌、腎癌、頭頸部癌、白血病、肝癌、肺癌、リンパ腫、卵巣癌、膵癌、前立腺癌、直腸癌、肉腫、皮膚癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、膀胱癌、乳癌、大腸癌、卵巣癌、および前立腺癌から選択される原発性または転移性の癌である、方法。
（２３）  実施態様１９に記載の方法において、
処置される前記新生物は、原発性または転移性の結腸癌、非小細胞肺癌、卵巣癌、前立腺癌、小細胞肺癌、または膵癌である、方法。
（２４）  実施態様１９に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤は、タキサン、ビンカアルカロイド、またはＰＬＫ１阻害剤である、方法。
（２５）  実施態様１９に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤は、ＢＭＳ−１８８７９６、ＢＭＳ−１８８７９７、カバジタキセル、ＤＥＰカバジタキセル、ドセタキセル、ラロタキセル（ＸＲＰ９８８１、ＲＰＲ１０９８８１）、パクリタキセル、タキソプレキシン（ＤＨＡ−パクリタキセル）、およびテセタキセル（ＤＪ−９２７）から選択される、方法。
【０１２７】
（２６）  実施態様１９に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤は、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビンフルニン、およびビノレルビンから選択される、方法。
（２７）  実施態様１９に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤はビンタフォリドである、方法。
（２８）  実施態様１９に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤は、ＢＩ−２５３６、ＧＳＫ４６１３６４、ＧＷ８４３６８２Ｘ、ＨＭＮ−２１４およびＨＭＮ−１７６、ＭＬＮ−０９０５、ＮＭＳ−Ｐ９３７、リゴサチブ、Ｒｏ３２８０、ＳＢＥ  １３、ならびにボラセルチブのリストから選択される、方法。
（２９）  実施態様１９に記載の方法において、
前記ＤＹＲＫ１阻害剤は、Ｉ−１、Ｉ−２、Ｉ−３、Ｉ−４、Ｉ−５、Ｉ−６、およびＩ−７から選択される、方法。
（３０）  新生物を有する被験者を処置する方法において、
前記被験者に、順次または同時に、ＤＹＲＫ１阻害剤を投与し、前記被験者に有糸分裂の阻害剤を投与することを含み、
前記有糸分裂の阻害剤のＥＣ５０値は、細胞ベースのアッセイで決定される場合に、前記有糸分裂の阻害剤単独での同じ処置と比べて、組み合わせ処置では少なくとも２０％低い、方法。
【０１２８】
（３１）  実施態様３０に記載の方法において、
前記ＤＹＲＫ１阻害剤は、式Ｉ：
【化８】
2019511553.tif 000010
またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を有し、
式中、
Ｒ１は、置換もしくは非置換のＣ１〜８アルキル、置換もしくは非置換のフェニル、または置換もしくは非置換のベンジルであり、
Ｒ２は、オプションとしてハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルキル、ＯＨ、ＯＣ１〜４アルキルから独立して選択された最大で４つの基で置換された、フェニルであり、２つの隣接する基およびそれらの介在炭素原子は、Ｎ、Ｏ、またはＳから選択された１つ以上のヘテロ原子を含有する五〜六員環を形成し得る、方法。
（３２）  実施態様３０に記載の方法において、
前記被験者に有効量の放射線療法を施すことをさらに含む、方法。
（３３）  実施態様３０に記載の方法において、
処置される前記新生物は、胆道癌、脳癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、胃癌、腎癌、頭頸部癌、白血病、肝癌、肺癌、リンパ腫、卵巣癌、膵癌、前立腺癌、直腸癌、肉腫、皮膚癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、膀胱癌、乳癌、大腸癌、卵巣癌、および前立腺癌から選択される原発性または転移性の癌である、方法。
（３４）  実施態様３０に記載の方法において、
処置される前記新生物は、原発性または転移性の結腸癌、非小細胞肺癌、卵巣癌、前立腺癌、小細胞肺癌、および膵癌である、方法。
（３５）  実施態様３０に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤は、タキサン、ビンカアルカロイド、またはＰＬＫ１阻害剤である、方法。
【０１２９】
（３６）  実施態様３０に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤は、ＢＭＳ−１８８７９６、ＢＭＳ−１８８７９７、カバジタキセル、ＤＥＰカバジタキセル、ドセタキセル、ラロタキセル（ＸＲＰ９８８１、ＲＰＲ１０９８８１）、パクリタキセル、タキソプレキシン（ＤＨＡ−パクリタキセル）、およびテセタキセル（ＤＪ−９２７）から選択される、方法。
（３７）  実施態様３０に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤は、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビンフルニン、およびビノレルビンのリストから選択される、方法。
（３８）  実施態様３０に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤はビンタフォリドである、方法。
（３９）  実施態様３０に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤は、ＢＩ−２５３６、ＧＳＫ４６１３６４、ＧＷ８４３６８２Ｘ、ＨＭＮ−２１４およびＨＭＮ−１７６、ＭＬＮ−０９０５、ＮＭＳ−Ｐ９３７、リゴサチブ、Ｒｏ３２８０、ＳＢＥ  １３、ならびにボラセルチブから選択される、方法。
（４０）  実施態様３０に記載の方法において、
前記ＤＹＲＫ１阻害剤は、Ｉ−１、Ｉ−２、Ｉ−３、Ｉ−４、Ｉ−５、Ｉ−６、およびＩ−７から選択される、方法。
【０１３０】
（４１）  新生物を有する被験者を処置する方法において、
前記被験者に、順次または同時に、ＤＹＲＫ１阻害剤を投与し、前記被験者に有糸分裂の阻害剤を投与することを含み、この組み合わせ処置は、ＦＡＣＳアッセイによりサブ−Ｇ０細胞の割合によって決定される場合に、処置集団のアポトーシス細胞の割合を、いずれかの薬剤単独の場合と比較して少なくとも２倍だけ増やす、方法。
（４２）  実施態様４１に記載の方法において、
前記ＤＹＲＫ１阻害剤は、式Ｉ：
【化９】
2019511553.tif 000011
またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を有し、
式中、
Ｒ１は、置換もしくは非置換のＣ１〜８アルキル、置換もしくは非置換のフェニル、または置換もしくは非置換のベンジルであり、
Ｒ２は、オプションとしてハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルキル、ＯＨ、ＯＣ１〜４アルキルから独立して選択された最大で４つの基で置換された、フェニルであり、２つの隣接する基およびそれらの介在炭素原子は、Ｎ、Ｏ、またはＳから選択された１つ以上のヘテロ原子を含有する五〜六員環を形成し得る、方法。
（４３）  実施態様４１に記載の方法において、
前記被験者に有効量の放射線療法を施すことをさらに含む、方法。
（４４）  実施態様４１に記載の方法において、
処置される前記新生物は、胆道癌、脳癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、胃癌、腎癌、頭頸部癌、白血病、肝癌、肺癌、リンパ腫、卵巣癌、膵癌、前立腺癌、直腸癌、肉腫、皮膚癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、膀胱癌、乳癌、大腸癌、肺癌、卵巣癌、および前立腺癌から選択される原発性または転移性の癌である、方法。
（４５）  実施態様４１に記載の方法において、
処置される前記新生物は、原発性または転移性の結腸癌、非小細胞肺癌、卵巣癌、前立腺癌、小細胞肺癌、膵癌である、方法。
【０１３１】
（４６）  実施態様４１に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤は、タキサン、ビンカアルカロイド、またはＰＬＫ１阻害剤である、方法。
（４７）  実施態様４１に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤は、ＢＭＳ−１８８７９６、ＢＭＳ−１８８７９７、カバジタキセル、ＤＥＰカバジタキセル、ドセタキセル、ラロタキセル（ＸＲＰ９８８１、ＲＰＲ１０９８８１）、パクリタキセル、タキソプレキシン（ＤＨＡ−パクリタキセル）、およびテセタキセル（ＤＪ−９２７）から選択される、方法。
（４８）  実施態様４１に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤は、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビンフルニン、およびビノレルビンのリストから選択される、方法。
（４９）  実施態様４１に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤はビンタフォリドである、方法。
（５０）  実施態様４１に記載の方法において、
前記有糸分裂の阻害剤は、ＢＩ−２５３６、ＧＳＫ４６１３６４、ＧＷ８４３６８２Ｘ、ＨＭＮ−２１４およびＨＭＮ−１７６、ＭＬＮ−０９０５、ＮＭＳ−Ｐ９３７、リゴサチブ、Ｒｏ３２８０、ＳＢＥ  １３、ならびにボラセルチブから選択される、方法。
【０１３２】
（５１）  実施態様４１に記載の方法において、
前記ＤＹＲＫ１阻害剤は、Ｉ−１、Ｉ−２、Ｉ−３、Ｉ−４、Ｉ−５、Ｉ−６、およびＩ−７から選択される、方法。
【図面の簡単な説明】
【０１３３】
【図１】真核細胞の有糸分裂周期の概略図を示す。
【図２】利用可能な抗癌治療薬のいくつかが作用すると考えられる細胞周期のステージを示すように注釈を付けられた、真核癌細胞の有糸分裂周期の概略図を示す。
【図３】ＳＷ６２０細胞の増殖に対する、パクリタキセルと化合物Ｉ−５（０、２、４μＭ）との組み合わせの効果を示す。
【図４】ＤＭＳ２７３細胞の増殖に対する、パクリタキセルと化合物Ｉ−７（０、２、４μＭ）との組み合わせの効果を示す。
【図５】ＬＮＣａｐ細胞の増殖に対する、パクリタキセルと化合物Ｉ−５（０、２、４μＭ）との組み合わせの効果を示す。
【図６】ＨＣＣ８２７細胞の増殖に対する、パクリタキセルと化合物Ｉ−７（０、３、６μＭ）との組み合わせの効果を示す。
【図７】Ａ５４９細胞の増殖に対する、パクリタキセルと化合物Ｉ−７（０、３、６μＭ）との組み合わせの効果を示す。
【図８】ＳＫ−ＯＶ−３細胞の増殖に対する、パクリタキセルと化合物Ｉ−７（０、２、４、８、１０μＭ）との組み合わせの効果を示す。
【図９】ＯＶＣＡＲ３細胞の増殖に対する、パクリタキセルと化合物Ｉ−７（０、２、４μＭ）との組み合わせの効果を示す。
【図１０】ＳＷ６２０細胞の増殖に対する、ドセタキセルと化合物Ｉ−５（０、２、４μＭ）との組み合わせの効果を示す。
【図１１】ＤＭＳ２７３細胞の増殖に対する、ドセタキセルと化合物Ｉ−７（０、２、４μＭ）との組み合わせの効果を示す。
【図１２】ＨＣＣ８２７細胞の増殖に対する、ドセタキセルと化合物Ｉ−７（０、３、６μＭ）との組み合わせの効果を示す。
【図１３】Ａ５４９細胞の増殖に対する、ドセタキセルと化合物Ｉ−７（０、３、６μＭ）との組み合わせの効果を示す。
【図１４】ＳＫ−ＯＶ−３細胞の増殖に対する、ドセタキセルと化合物Ｉ−７（０、４、８μＭ）との組み合わせの効果を示す。
【図１５】ＯＶＣＡＲ３細胞の増殖に対する、ドセタキセルと化合物Ｉ−７（０、２、４μＭ）との組み合わせの効果を示す。
【図１６】ＤＭＳ２７３細胞の増殖に対する、ビンクリスチンと化合物Ｉ−５（０、２、４μＭ）との組み合わせの効果を示す。
【図１７】Ｈ１９７５細胞の増殖に対する、ビンクリスチンと化合物Ｉ−５（０、２、４μＭ）との組み合わせの効果を示す。
【図１８】ＳＫ−ＯＶ−３細胞の増殖に対する、ビンクリスチンと化合物Ｉ−７（０、４、８μＭ）との組み合わせの効果を示す。
【図１９】ＯＶＣＡＲ３細胞の増殖に対する、ビンクリスチンと化合物Ｉ−７（０、１、３μＭ）との組み合わせの効果を示す。
【図２０】ＤＭＳ２７３細胞の増殖に対する、ビノレルビンと化合物Ｉ−５（０、２、４μＭ）との組み合わせの効果を示す。
【図２１】Ｈ１９７５細胞の増殖に対する、ビノレルビンと化合物Ｉ−５（０、２、４μＭ）との組み合わせの効果を示す。
【図２２】ＯＶＣＡＲ３細胞の増殖に対する、ビノレルビンと化合物Ｉ−７（０、１、３μＭ）との組み合わせの効果を示す。
【図２３】ＳＫ−ＯＶ−３細胞の増殖に対する、ビンクリスチンと化合物Ｉ−７（０、４、８μＭ）との組み合わせの効果を示す。
【図２４】Ａ５４９細胞の増殖に対する、ビンクリスチンと化合物Ｉ−７（０、３、６μＭ）との組み合わせの効果を示す。
【図２５】Ｈ１９７５細胞の増殖に対する、ＢＩ２５３６と化合物Ｉ−７（０、２、４μＭ）との組み合わせの効果を示す。
【図２６】ＰＡＮＣ１細胞の増殖に対する、ＢＩ２５３６と化合物Ｉ−７（０、２、４μＭ）との組み合わせの効果を示す。
【図２７】ＤＭＳ２７３細胞の増殖に対する、ＢＩ２５３６と化合物Ｉ−７（０、２、４μＭ）との組み合わせの効果を示す。
【図２８】Ａ５４９細胞の増殖に対する、ＢＩ２５３６と化合物Ｉ−７（０、２、４μＭ）との組み合わせの効果を示す。
【図２９】Ｈ１９７５細胞の増殖に対する、ＧＳＫ４６１３６４と化合物Ｉ−７（０、２、４μＭ）との組み合わせの効果を示す。
【図３０】ＰＡＮＣ１細胞の増殖に対する、ＧＳＫ４６１３６４と化合物Ｉ−７（０、２、４μＭ）との組み合わせの効果を示す。
【図３１】ＤＭＳ２７３細胞の増殖に対する、ＧＳＫ４６１３６４と化合物Ｉ−７（０、２、４μＭ）との組み合わせの効果を示す。
【図３２】Ａ５４９細胞の増殖に対する、ＧＳＫ４６１３６４と化合物Ｉ−７（０、３、６μＭ）との組み合わせの効果を示す。
【図３３】以下で２４時間インキュベートされたＤＭＳ２７３細胞の細胞周期分布のＦＡＣＳ分析を示す：パネルＡ：ＦＢＳ＋培地；パネルＢ：ＦＢＳ−培地；パネルＣ：４μＭの化合物Ｉ−７を含むＦＢＳ＋培地；パネルＤ：２．７ｎＭのパクリタキセルを含むＦＢＳ＋培地；パネルＥ：５μＭの化合物Ｉ−７および２ｎＭのパクリタキセルを含むＦＢＳ＋培地。
【図３４】以下で２４時間インキュベートされたＳＷ６２０細胞の細胞周期分布のＦＡＣＳ分析を示す：パネルＡ：ＦＢＳ＋培地；パネルＢ：ＦＢＳ−培地；パネルＣ：４μＭの化合物Ｉ−７を含むＦＢＳ＋培地；パネルＤ：２ｎＭのパクリタキセルを含むＦＢＳ＋培地；パネルＥ：４μＭの化合物Ｉ−７および２ｎＭのパクリタキセルを含むＦＢＳ＋培地。
【図３５】以下で２４時間インキュベートされたＤＭＳ２７３細胞の細胞周期分布のＦＡＣＳ分析を示す：パネルＡ：ＦＢＳ＋培地；パネルＢ：ＦＢＳ−培地；パネルＣ：４μＭの化合物Ｉ−７を含むＦＢＳ＋培地；パネルＤ：１．１ｎＭのビンクリスチンを含むＦＢＳ＋培地；パネルＥ：４μＭの化合物Ｉ−７および１．１ｎＭのビンクリスチンを含むＦＢＳ＋培地。
【図３６】以下で２４時間インキュベートされたＤＭＳ２７３細胞の細胞周期分布のＦＡＣＳ分析を示す：パネルＡ：ＦＢＳ＋培地；パネルＢ：ＦＢＳ−培地；パネルＣ：４μＭの化合物Ｉ−７を含むＦＢＳ＋培地；パネルＤ：８．１ｎＭのビノレルビンを含むＦＢＳ＋培地；パネルＥ：４μＭの化合物Ｉ−７および８．１ｎＭのビノレルビンを含むＦＢＳ＋培地。
【図３７】ＳＷ６２０細胞の細胞周期分布のＤＮＡ含量によるＦＡＣＳ分析を示す。細胞は以下でインキュベートされた：パネルＡ：２４時間ＦＢＳ−培地；パネルＢ：２４時間２．５μＭのＡＺ１９１を含むＦＢＳ−培地；パネルＣ：２４時間５μＭのＡＺ１９１を含むＦＢＳ−培地；パネルＤ：２４時間１０μＭのＡＺ１９１を含むＦＢＳ−培地。
【図３８】ＳＷ６２０細胞の細胞周期分布のＤＮＡ含量によるＦＡＣＳ分析を示す。細胞は以下でインキュベートされた：パネルＡ：２４時間ＤＭＳＯ対照を含むＦＢＳ−培地；パネルＢ：２４時間１．２５μＭの化合物Ｉ−７を含むＦＢＳ−培地；パネルＣ：２４時間２．５μＭの化合物Ｉ−７を含むＦＢＳ−培地；パネルＤ：２４時間５μＭの化合物Ｉ−７を含むＦＢＳ−培地。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【国際調査報告】
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