(57)【要約】  生体成長に影響する組成物は、第１の体積を有する溶液であって、デキストロースを含む低ｐＨ流体ベース及びアルブミンを有する溶液を含み、溶液中のアルブミンの濃度は約１０ｍｇ／ｍｌ〜約１５０ｍｇ／ｍｌの間である。【選択図】  図２６Ｃ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１の体積を有し、デキストロースを含む低ｐＨ流体ベースと、アルブミンと、を含む溶液を含み、前記溶液中のアルブミンの濃度が約１０ｍｇ／ｍｌ〜約１５０ｍｇ／ｍｌの間である、生体成長に影響する組成物。
【請求項２】
前記組成物のｐＨが５．０〜７．４の間である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記組成物のｐＨが４．１〜７．２の間である、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記組成物のｐＨが４．１〜６．２の間である、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記組成物のｐＨが５．０〜６．２の間である、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記組成物のｐＨを改変するように構成されるベースをさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
重炭酸ナトリウムをさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
重炭酸カルシウムをさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記アルブミンが、市販ヒト血清に由来する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
前記アルブミンが、ドナー由来血清に由来する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
前記アルブミンが、ヒト臍帯血に由来する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
前記溶液中のアルブミンの濃度が、約１０ｍｇ／ｍｌ〜約１２０ｍｇ／ｍｌの間である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記溶液中のアルブミンの濃度が、約５０ｍｇ／ｍｌ〜約１５０ｍｇ／ｍｌの間である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
前記溶液中のアルブミンの濃度が、約５０ｍｇ／ｍｌ〜約１２０ｍｇ／ｍｌの間である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１５】
前記溶液中のアルブミンの濃度が、約１０５ｍｇ／ｍｌ〜約１５０ｍｇ／ｍｌの間である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１６】
前記組成物が、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含有しない、請求項１に記載の組成物。
【請求項１７】
前記低ｐＨ流体ベースが、デキストランをさらに含む、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１８】
前記低ｐＨ流体ベースが、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）をさらに含む、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１９】
前記低ｐＨ流体ベースが、ＣｒｙｏＧｏｌｄ（商標）又はその同等物をさらに含む、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２０】
幹細胞をさらに含む、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２１】
幹細胞が、非増殖細胞集団からなる、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
幹細胞が、造血性幹細胞（ＨＳＣ）を含む、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２３】
幹細胞が、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）を含む、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２４】
生単核球をさらに含む、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２５】
前記組成物が、１ｍｌ当たり約１００，０００個〜約７５００万個の間の生単核球を含む、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
前記組成物が、１ｍｌ当たり約７５０，０００個〜約３０００万個の間の生単核球を含む、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２７】
前記組成物が、１ｍｌ当たり約１０００万個〜約３０００万個の間の生単核球を含む、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２８】
前記組成物が、１ｍｌ当たり約１０００万個〜約２０００万個の間の生単核球を含む、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２９】
前記組成物が、１ｍｌ当たり約２５０万個〜約１０２０万個の間の生単核球を含む、請求項２４に記載の組成物。
【請求項３０】
前記組成物が、１ｍｌ当たり約９８０万個〜約１０２０万個の間の生単核球を含む、請求項２４に記載の組成物。
【請求項３１】
前記単核球が、単一ドナーの臍帯血のみに由来する、請求項２４に記載の組成物。
【請求項３２】
１つ又は複数の生物活性剤をさらに含む、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３３】
１つ又は複数の生物活性剤が、１つ又は複数のサイトカインを含む、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３４】
１つ又は複数のサイトカインが、マクロファージ炎症タンパク質アルファ（ＭＩＰ−１α）、マクロファージ炎症タンパク質ベータ（ＭＩＰ−１β）、及びインターフェロンガンマ誘導性タンパク質１０（ＩＰ−１０）を含むケモカイン、インターロイキン１ベータ（ＩＬ−１β）、インターロイキン２（ＩＬ−２）、インターロイキン４（ＩＬ−４）、インターロイキン５（ＩＬ−５）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、インターロイキン７（ＩＬ−７）、インターロイキン８（ＩＬ−８）、インターロイキン１０（ＩＬ−１０）、インターロイキン１２（ＩＬ−１２）、及びインターロイキン１３（ＩＬ−１３）を含むインターロイキン、インターフェロンアルファ（ＩＮＦα）を含むインターフェロン、リンホカイン、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、幹細胞因子（ＫＬ）、及び腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）からなる群から選択される、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
１つ又は複数の生物活性剤が、１つ又は複数の増殖因子を含む、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３６】
１つ又は複数の増殖因子が、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、神経増殖因子、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、線維芽細胞増殖因子２（ＦＧＦ−２）を含む線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、ケラチノサイト増殖因子、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）、インスリン様増殖因子、ｄｅｓ（１−３）−ＩＧＦ−Ｉ（脳ＩＧＦ−Ｉ）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）及び脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）からなる群から選択される、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３７】
前記アルブミンが第１のドナーの臍帯血に由来し、１つ又は複数の生物活性剤が少なくとも第２のドナーに由来する、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３８】
１つ又は複数の生物活性剤が、市販ヒトアルブミン又は市販ヒトアルブミン血清から取得される又は由来する、請求項３７に記載の組成物。
【請求項３９】
前記アルブミン及び１つ又は複数の生物活性剤が、単一ドナーの臍帯血に由来する、請求項３２に記載の組成物。
【請求項４０】
１つ又は複数の生物活性剤が、マクロファージ炎症タンパク質アルファ（ＭＩＰ−１α）、マクロファージ炎症タンパク質ベータ（ＭＩＰ−１β）、インターフェロンガンマ誘導性タンパク質１０（ＩＰ−１０）、インターロイキン１ベータ（ＩＬ−１β）、インターロイキン２（ＩＬ−２）、インターロイキン４（ＩＬ−４）、インターロイキン５（ＩＬ−５）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、インターロイキン７（ＩＬ−７）、インターロイキン８（ＩＬ−８）、インターロイキン９（ＩＬ−９）、インターロイキン１０（ＩＬ−１０）、インターロイキン１２（ＩＬ−１２）、インターロイキン１３（ＩＬ−１３）、インターロイキン１５（ＩＬ−１５）、インターロイキン１７（ＩＬ−１７）、インターロイキン１８（ＩＬ−１８）、インターロイキン２１（ＩＬ−２１）、インターロイキン２２（ＩＬ−２２）、インターロイキン２３（ＩＬ−２３）、インターロイキン２７（ＩＬ−２７）、インターロイキン３１（ＩＬ−３１）、インターフェロンアルファ（ＩＮＦα）、リンホカイン、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、幹細胞因子（ＫＬ）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、神経増殖因子、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、線維芽細胞増殖因子２（ＦＧＦ−２）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、ケラチノサイト増殖因子、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）、インスリン様増殖因子、ｄｅｓ（１−３）−ＩＧＦ−Ｉ（脳ＩＧＦ−Ｉ）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、エオタキシン、ＣＸＣリガンド１（ＧＲＯα）、インターロイキン１受容体アンタゴニスト（ＩＬ−１ＲＡ）、インターロイキン１アルファ（ＩＬ−１α）、白血病抑制因子（ＬＩＦ）、胎盤増殖因子（ＰＬＧＦ）、ケモカインリガンド５（ＲＡＮＴＥＳ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、ストローマ細胞由来因子（ＳＤＦ１α）、及び腫瘍壊死因子（ＴＮＦβ）からなる群から選択される、請求項３２に記載の組成物。
【請求項４１】
対象において治療を実施するための方法であって、
第１の体積を有し、デキストロースを含む低ｐＨ流体ベースと、アルブミンと、を含む溶液を含む組成物であって、前記溶液中のアルブミンの濃度が約１０ｍｇ／ｍｌ〜約１５０ｍｇ／ｍｌの間である、組成物を用意するステップと、
対象の組織の内部、付近又は隣接部に有効量の前記組成物を移植するステップと、
を含む方法。
【請求項４２】
前記移植するステップが、固定される隣接する椎骨の間に前記組成物を移植するステップを含む、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記組成物が、耐力デバイスと組み合わせて移植される、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
耐力デバイスが、固定ケージを含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
耐力デバイスが、少なくとも２つの椎弓根スクリュー及び少なくとも１つのロッドを含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４６】
対象が、骨格が成熟している、請求項４２に記載の方法。
【請求項４７】
前記移植するステップが、固定される骨の隣接する部分の間に前記組成物を移植するステップを含む、請求項４１に記載の方法。
【請求項４８】
骨の前記隣接する部分が、骨の第１の部分及び骨の第２の部分を含む、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
骨の第１の部分が、対象の骨格系における、骨の第２の部分と異なる骨に由来する、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
骨の第１の部分が、対象の骨格系における、骨の第２の部分と同じ骨に由来する、請求項４８に記載の方法。
【請求項５１】
前記組成物が、耐力デバイスと組み合わせて移植される、請求項４７に記載の方法。
【請求項５２】
耐力デバイスが、プレート、ロッド、ネイル、スクリュー、フック、又はピンからなるリストから選択される、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
対象が、骨格が成熟している、請求項４７に記載の方法。
【請求項５４】
前記移植するステップが、軟部組織の内部、付近又は隣接部に前記組成物を移植するステップを含む、請求項４１に記載の方法。
【請求項５５】
前記移植するステップが、がん細胞の隣接部に前記組成物を移植するステップを含む、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
がん細胞が、リンパ腺がんに関連する、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記移植するステップが、がん細胞の元の部位で、その付近又は隣接部に前記組成物を移植するステップを含む、請求項５４に記載の方法。
【請求項５８】
がん細胞が、リンパ腺がんに関連していた、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記組成物のｐＨが、４．１〜７．４の間である、請求項４１に記載の方法。
【請求項６０】
前記組成物が、前記組成物のｐＨを改変するように構成されるベースをさらに含む、請求項４１に記載の方法。
【請求項６１】
前記低ｐＨ流体ベースが、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）をさらに含む、請求項４１〜６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６２】
前記低ｐＨ流体ベースが、ＣｒｙｏＧｏｌｄ（商標）又はその同等物をさらに含む、請求項４１〜６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６３】
前記低ｐＨ流体ベースが、デキストランをさらに含む、請求項４１〜６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６４】
前記組成物が、幹細胞をさらに含む、請求項４１〜６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６５】
前記組成物が、生単核球をさらに含む、請求項４１〜６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６６】
前記組成物が、１ｍｌ当たり約１００，０００個〜約７５００万個の間の生単核球を含む、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記組成物が、１つ又は複数の生物活性剤をさらに含む、請求項４１〜６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６８】
１つ又は複数の生物活性剤が、１つ又は複数のサイトカインを含む、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
１つ又は複数の生物活性剤が、１つ又は複数の増殖因子を含む、請求項６７に記載の方法。
【請求項７０】
１つ又は複数の生物活性剤が、マクロファージ炎症タンパク質アルファ（ＭＩＰ−１α）、マクロファージ炎症タンパク質ベータ（ＭＩＰ−１β）、インターフェロンガンマ誘導性タンパク質１０（ＩＰ−１０）、インターロイキン１ベータ（ＩＬ−１β）、インターロイキン２（ＩＬ−２）、インターロイキン４（ＩＬ−４）、インターロイキン５（ＩＬ−５）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、インターロイキン７（ＩＬ−７）、インターロイキン８（ＩＬ−８）、インターロイキン９（ＩＬ−９）、インターロイキン１０（ＩＬ−１０）、インターロイキン１２（ＩＬ−１２）、インターロイキン１３（ＩＬ−１３）、インターロイキン１５（ＩＬ−１５）、インターロイキン１７（ＩＬ−１７）、インターロイキン１８（ＩＬ−１８）、インターロイキン２１（ＩＬ−２１）、インターロイキン２２（ＩＬ−２２）、インターロイキン２３（ＩＬ−２３）、インターロイキン２７（ＩＬ−２７）、インターロイキン３１（ＩＬ−３１）、インターフェロンアルファ（ＩＮＦα）、リンホカイン、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、幹細胞因子（ＫＬ）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、神経増殖因子、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、線維芽細胞増殖因子２（ＦＧＦ−２）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、ケラチノサイト増殖因子、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）、インスリン様増殖因子、ｄｅｓ（１−３）−ＩＧＦ−Ｉ（脳ＩＧＦ−Ｉ）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、エオタキシン、ＣＸＣリガンド１（ＧＲＯα）、インターロイキン１受容体アンタゴニスト（ＩＬ−１ＲＡ）、インターロイキン１アルファ（ＩＬ−１α）、白血病抑制因子（ＬＩＦ）、胎盤増殖因子（ＰＬＧＦ）、ケモカインリガンド５（ＲＡＮＴＥＳ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、ストローマ細胞由来因子（ＳＤＦ１α）、及び腫瘍壊死因子（ＴＮＦβ）からなる群から選択される、請求項６７に記載の方法。
【請求項７１】
前記組成物が、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含有しない、請求項４１〜６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７２】
前記組成物のｐＨが、５．０〜７．４の間である、請求項４１に記載の方法。
【請求項７３】
前記組成物のｐＨが、４．１〜７．２の間である、請求項４１に記載の方法。
【請求項７４】
前記組成物のｐＨが、４．１〜６．２の間である、請求項４１に記載の方法。
【請求項７５】
前記組成物のｐＨが、５．０〜６．２の間である、請求項４１に記載の方法。
【請求項７６】
前記ベースが、重炭酸ナトリウムを含む、請求項６０に記載の方法。
【請求項７７】
前記ベースが、重炭酸カルシウムを含む、請求項６０に記載の方法。
【請求項７８】
前記アルブミンが、市販ヒト血清に由来する、請求項４１〜６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７９】
前記アルブミンが、ドナー由来血清に由来する、請求項４１〜６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８０】
前記アルブミンが、ヒト臍帯血に由来する、請求項４１〜６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８１】
前記溶液中のアルブミンの濃度が、約８０ｍｇ／ｍｌ〜約１２０ｍｇ／ｍｌの間である、請求項４１〜６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８２】
前記溶液中のアルブミンの濃度が、約１０５ｍｇ／ｍｌ〜約１５０ｍｇ／ｍｌの間である、請求項４１〜６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８３】
前記溶液中のアルブミンの濃度が、約１５ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌの間である、請求項４１〜６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８４】
前記溶液中のアルブミンの濃度が、約１８ｍｇ／ｍｌ〜約２５ｍｇ／ｍｌの間である、請求項４１〜６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８５】
幹細胞が、非増殖細胞集団からなる、請求項６４に記載の方法。
【請求項８６】
幹細胞が、造血性幹細胞（ＨＴＣ）を含む、請求項６４に記載の方法。
【請求項８７】
幹細胞が、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）を含む、請求項６４に記載の方法。
【請求項８８】
前記組成物が、１ｍｌ当たり約７５０，０００個〜約３０００万個の間の生単核球を含む、請求項６５に記載の方法。
【請求項８９】
前記組成物が、１ｍｌ当たり約１０００万個〜約３０００万個の間の生単核球を含む、請求項６５に記載の方法。
【請求項９０】
前記組成物が、１ｍｌ当たり約１０００万個〜約２０００万個の間の生単核球を含む、請求項６５に記載の方法。
【請求項９１】
前記組成物が、１ｍｌ当たり約２５０万個〜約１０２０万個の間の生単核球を含む、請求項６５に記載の方法。
【請求項９２】
前記組成物が、１ｍｌ当たり約９８０万個〜約１０２０万個の間の生単核球を含む、請求項６５に記載の方法。
【請求項９３】
前記単核球が、単一ドナーの臍帯血のみに由来する、請求項６５に記載の方法。
【請求項９４】
前記アルブミンが第１のドナーの臍帯血に由来し、１つ又は複数の生物活性剤が少なくとも第２のドナーに由来する、請求項６７に記載の方法。
【請求項９５】
１つ又は複数の生物活性剤が、市販ヒトアルブミン又は市販ヒトアルブミン血清から取得される又は由来する、請求項９４に記載の方法。
【請求項９６】
前記アルブミン及び１つ又は複数の生物活性剤が、単一ドナーの臍帯血に由来する、請求項６７に記載の方法。
【請求項９７】
第１の体積を有し、デキストロースを含む低ｐＨ流体ベースと、保護剤と、を含む溶液を含み、前記組成物のｐＨが４．１〜７．２の間である、生体成長に影響する組成物。
【請求項９８】
保護剤が、アルブミンを含む、請求項９７に記載の組成物。
【請求項９９】
保護剤が、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含む、請求項９７に記載の組成物。
【請求項１００】
保護剤が、デキストランを含む、請求項９７に記載の組成物。
【請求項１０１】
保護剤が、デキストラン及びアルブミンを含む、請求項９７に記載の組成物。
【請求項１０２】
保護剤が、ＣｒｙｏＧｏｌｄ（商標）又はその同等物を含む、請求項９７に記載の組成物。
【請求項１０３】
前記組成物が、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含有しない、請求項９７、９８、１００又は１０２に記載の組成物。
【請求項１０４】
保護剤が、凍結保護特性を有する、請求項９７〜１０３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０５】
保護剤が、タンパク質保護特性を有する、請求項９７〜１０３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０６】
保護剤及びデキストロースの組み合わせが、タンパク質保護特性を有する、請求項９７〜１０３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０７】
保護剤及びデキストロースの組み合わせが、凍結保護特性を有する、請求項１０６に記載の組成物。
【請求項１０８】
前記アルブミンが、市販ヒト血清に由来する、請求項９８又は１０１に記載の組成物。
【請求項１０９】
前記アルブミンが、ドナー由来血清又はヒト臍帯血に由来する、請求項９８又は１０１に記載の組成物。
【請求項１１０】
前記溶液中のアルブミンの濃度が、約１０ｍｇ／ｍｌ〜約１５０ｍｇ／ｍｌの間である、請求項９８、１０８又は１０９に記載の組成物。
【請求項１１１】
前記溶液中のアルブミンの濃度が、約８０ｍｇ／ｍｌ〜約１２０ｍｇ／ｍｌの間である、請求項１１０に記載の組成物。
【請求項１１２】
前記溶液中のアルブミンの濃度が、約１０５ｍｇ／ｍｌ〜約１５０ｍｇ／ｍｌの間である、請求項１１０に記載の組成物。
【請求項１１３】
前記溶液中のアルブミンの濃度が、約１５ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌの間である、請求項１１０に記載の組成物。
【請求項１１４】
前記組成物のｐＨが、４．１〜６．２の間である、請求項９７〜１１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１５】
前記組成物のｐＨが、５．０〜７．２の間である、請求項９７〜１１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１６】
幹細胞をさらに含む、請求項９７〜１１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１７】
幹細胞が、非増殖細胞集団からなる、請求項１１６に記載の組成物。
【請求項１１８】
幹細胞が、造血性幹細胞（ＨＳＣ）を含む、請求項１１６に記載の組成物。
【請求項１１９】
幹細胞が、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）を含む、請求項１１６に記載の組成物。
【請求項１２０】
前記組成物が、生単核球を含む、請求項９７〜１１９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２１】
前記組成物が、１ｍｌ当たり約２５０万個〜約１０２０万個の間の生単核球を含む、請求項１２０に記載の組成物。
【請求項１２２】
前記組成物が、１ｍｌ当たり約９８０万個〜約１０２０万個の間の生単核球を含む、請求項１２０に記載の組成物。
【請求項１２３】
１つ又は複数の生物活性剤をさらに含む、請求項９７〜１２２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２４】
１つ又は複数の生物活性剤が、１つ又は複数のサイトカインを含む、請求項１２３に記載の組成物。
【請求項１２５】
１つ又は複数のサイトカインが、マクロファージ炎症タンパク質アルファ（ＭＩＰ−１α）、マクロファージ炎症タンパク質ベータ（ＭＩＰ−１β）、及びインターフェロンガンマ誘導性タンパク質１０（ＩＰ−１０）を含むケモカイン、インターロイキン１ベータ（ＩＬ−１β）、インターロイキン２（ＩＬ−２）、インターロイキン４（ＩＬ−４）、インターロイキン５（ＩＬ−５）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、インターロイキン７（ＩＬ−７）、インターロイキン８（ＩＬ−８）、インターロイキン１０（ＩＬ−１０）、インターロイキン１２（ＩＬ−１２）、及びインターロイキン１３（ＩＬ−１３）を含むインターロイキン、インターフェロンアルファ（ＩＮＦα）を含むインターフェロン、リンホカイン、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、幹細胞因子（ＫＬ）、及び腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）からなる群から選択される、請求項１２４に記載の組成物。
【請求項１２６】
１つ又は複数の生物活性剤が、１つ又は複数の増殖因子を含む、請求項１２３に記載の組成物。
【請求項１２７】
１つ又は複数の増殖因子が、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、神経増殖因子、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、線維芽細胞増殖因子２（ＦＧＦ−２）を含む線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、ケラチノサイト増殖因子、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）、インスリン様増殖因子、ｄｅｓ（１−３）−ＩＧＦ−Ｉ（脳ＩＧＦ−Ｉ）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）及び脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）からなる群から選択される、請求項１２６に記載の組成物。
【請求項１２８】
前記アルブミンが第１のドナーの臍帯血に由来し、１つ又は複数の生物活性剤が少なくとも第２のドナーに由来する、請求項１２３〜１２７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２９】
１つ又は複数の生物活性剤が、市販ヒトアルブミン又は市販ヒトアルブミン血清から取得される又は由来する、請求項１２８に記載の組成物。
【請求項１３０】
前記アルブミン及び１つ又は複数の生物活性剤が、単一ドナーの臍帯血に由来する、請求項１２３〜１２７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３１】
前記単核球が、単一ドナーの臍帯血のみに由来する、請求項１２０〜１２２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３２】
前記低ｐＨ流体ベースが、ＬＭＤ（デキストラン４０）又はその同等化合物を含む、請求項９７〜１３１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３３】
前記低ｐＨ流体ベースが、ＬＭＤ（デキストラン４０）からなる、請求項９７〜１３１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３４】
幹細胞の中の生存細胞のパーセンテージが、７０％より多い、請求項１１６〜１１９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３５】
幹細胞の中の生存細胞のパーセンテージが、８５％より多い、請求項１１６〜１１９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３６】
幹細胞の中の生存細胞のパーセンテージが、９５％より多い、請求項１１６〜１１９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３７】
対象への移植のために構成される、生体成長に影響する組成物を作製する方法であって、
ヒト臍帯血を含み、第１の体積ＶＵＣを有する試料であって、ヒト臍帯血が赤血球、赤血球以外の細胞、及び非細胞物質を含む試料を得るステップと、
ヒト臍帯血を含む前記試料を、体積ＶＰＣを有する、ある量のＰｒｅｐａＣｙｔｅ−ＣＢ又はその同等物と組み合わせるステップであり、上清が形成されるように、ＶＵＣ／ＶＰＣ比が約０．６０〜約１．７５の間であるステップと、
容器内で、上清の少なくとも一部を、単核球を単離するために構成される試薬の層に積層するステップであり、前記上清の少なくとも一部が体積ＶＳを有し、前記試薬の前記層が体積ＶＲを有し、前記試薬の前記層の前記体積ＶＲが、前記上清の少なくとも一部の前記体積ＶＳの少なくとも６７％であるステップと、
前記容器の内容物に十分な遠心力をかけるステップであって、力ベクトルを前記容器の閉鎖端に向けて、単核球を実質的に含む少なくとも１つの新しい層を形成させるステップと、
単核球を実質的に含む前記層の少なくとも一部を、乳酸加リンゲル液又はその同等物と組み合わせて、単核球溶液を作り出すステップと、
前記単核球溶液の少なくとも一部中の生細胞の総数ＮＬを決定するステップであり、前記単核溶液の少なくとも一部が体積ＶＭを有するステップと、
組み合わせた組成物にアルブミンを添加するステップと、
を含む方法。
【請求項１３８】
デキストロース溶液中の体積ＶＤの低分子量デキストランを、前記単核球溶液の少なくとも一部に添加するステップであり、前記体積ＶＤが、生細胞の総数ＮＬに少なくとも部分的に基づいて、１ｍｌ当たり１００，０００個〜７５００万個の間の生単核球の濃度を有する調整組成物を作り出すステップをさらに含む、請求項１３７に記載の方法。
【請求項１３９】
デキストロース溶液中の体積ＶＤの低分子量デキストランを、前記単核球溶液の少なくとも一部に添加するステップであり、前記体積ＶＤが、生細胞の総数ＮＬに少なくとも部分的に基づいて、１ｍｌ当たり７５０，０００個〜３０００万個の間の生単核球の濃度を有する調整組成物を作り出すステップをさらに含む、請求項１３７に記載の方法。
【請求項１４０】
デキストロース溶液中の体積ＶＤの低分子量デキストランを、前記単核球溶液の少なくとも一部に添加するステップであり、前記体積ＶＤが、生細胞の総数ＮＬに少なくとも部分的に基づいて、１ｍｌ当たり１０００万個〜３０００万個の間の生単核球の濃度を有する調整組成物を作り出すステップをさらに含む、請求項１３７に記載の方法。
【請求項１４１】
デキストロース溶液中の体積ＶＤの低分子量デキストランを、前記単核球溶液の少なくとも一部に添加するステップであり、前記体積ＶＤが、生細胞の総数ＮＬに少なくとも部分的に基づいて、１ｍｌ当たり１０００万個〜２０００万個の間の生単核球の濃度を有する調整組成物を作り出すステップをさらに含む、請求項１３７に記載の方法。
【請求項１４２】
前記調整組成物のｐＨを決定するステップをさらに含む、請求項１３７〜１４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４３】
前記調整組成物のｐＨを、４．１〜８．５の間であるように調整するステップをさらに含む、請求項１４２に記載の方法。
【請求項１４４】
積層する前記ステップにおける前記試薬の前記層の前記体積ＶＲが、前記上清の少なくとも一部の前記体積ＶＳの少なくとも７５％である、請求項１３７〜１４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４５】
積層する前記ステップにおける前記試薬の前記層の前記体積ＶＲが、前記上清の少なくとも一部の前記体積ＶＳの少なくとも８５％である、請求項１３７〜１４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４６】
前記試料を組み合わせる前記ステップにおけるＶＵＣ／ＶＰＣ比が、約０．７５〜約１．２５の間である、請求項１３７〜１４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４７】
前記試料を組み合わせる前記ステップにおけるＶＵＣ／ＶＰＣ比が、約０．６０〜約１．１０の間である、請求項１３７〜１４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４８】
前記試料を組み合わせる前記ステップにおけるＶＵＣ／ＶＰＣ比が、約１．２５〜約１．７５の間である、請求項１３７〜１４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４９】
対象への移植のために構成される、生体成長に影響する組成物を作製する方法であって、
ヒト臍帯血を含み、第１の体積ＶＵＣを有する試料であって、ヒト臍帯血が赤血球、赤血球以外の細胞、及び非細胞物質を含む試料を得るステップと、
ヒト臍帯血を含む前記試料を、第１のフレキシブル容器において体積ＶＰＣを有する、ある量のＰｒｅｐａＣｙｔｅ−ＣＢ又はその同等物と混合するステップであり、ＶＵＣ／ＶＰＣ比が約０．６０〜約１．７５の間であるステップと、
混合物を前記第１のフレキシブル容器において、上清が形成されるまで少なくとも２０分間残存させるステップと、
上清の少なくとも一部を、前記第１のフレキシブル容器から第２のフレキシブル容器へと、前記第１のフレキシブル容器と前記第２のフレキシブル容器を連結するコンジットを介して進めるステップと、
前記第２のフレキシブル容器の内容物に十分な遠心力をかけるステップであって、単核球を実質的に含む少なくとも１つの新しい層を形成させるステップと、
単核球を実質的に含む前記層の少なくとも一部を、試薬と組み合わせて、単核球溶液を作り出すステップと、
前記単核球溶液の少なくとも一部中の生細胞の総数ＮＬを決定するステップであり、前記単核溶液の少なくとも一部が体積ＶＭを有するステップと、
組み合わせた組成物にアルブミンを添加するステップと、
を含む方法。
【請求項１５０】
デキストロース溶液中の体積ＶＤの低分子量デキストランを、前記単核球溶液の少なくとも一部に添加するステップであり、前記体積ＶＤが、生細胞の総数ＮＬに少なくとも部分的に基づいて、１ｍｌ当たり１００，０００個〜７５００万個の間の生単核球の濃度を有する調整組成物を作り出すステップをさらに含む、請求項１４９に記載の方法。
【請求項１５１】
デキストロース溶液中の体積ＶＤの低分子量デキストランを、前記単核球溶液の少なくとも一部に添加するステップであり、前記体積ＶＤが、生細胞の総数ＮＬに少なくとも部分的に基づいて、１ｍｌ当たり７５０，０００個〜３０００万個の間の生単核球の濃度を有する調整組成物を作り出すステップをさらに含む、請求項１４９に記載の方法。
【請求項１５２】
デキストロース溶液中の体積ＶＤの低分子量デキストランを、前記単核球溶液の少なくとも一部に添加するステップであり、前記体積ＶＤが、生細胞の総数ＮＬに少なくとも部分的に基づいて、１ｍｌ当たり１０００万個〜３０００万個の間の生単核球の濃度を有する調整組成物を作り出すステップをさらに含む、請求項１４９に記載の方法。
【請求項１５３】
デキストロース溶液中の体積ＶＤの低分子量デキストランを、前記単核球溶液の少なくとも一部に添加するステップであり、前記体積ＶＤが、生細胞の総数ＮＬに少なくとも部分的に基づいて、１ｍｌ当たり１０００万個〜２０００万個の間の生単核球の濃度を有する調整組成物を作り出すステップをさらに含む、請求項１４９に記載の方法。
【請求項１５４】
前記調整組成物のｐＨを決定するステップをさらに含む、請求項１４９〜１５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５５】
前記調整組成物のｐＨを、４．１〜８．５の間であるように調整するステップをさらに含む、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１５６】
前記ｐＨが、４．１〜７．２の間である、請求項１５５に記載の方法。
【請求項１５７】
前記ｐＨが、５．０〜６．２の間である、請求項１５６に記載の方法。
【請求項１５８】
前記試料を混合する前記ステップにおけるＶＵＣ／ＶＰＣ比が、約０．７５〜約１．２５の間である、請求項１４９〜１５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５９】
前記試料を混合する前記ステップにおけるＶＵＣ／ＶＰＣ比が、約０．６０〜約１．１０の間である、請求項１４９〜１５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６０】
前記試料を混合する前記ステップにおけるＶＵＣ／ＶＰＣ比が、約１．２５〜約１．７５の間である、請求項１４９〜１５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６１】
対象への移植のために構成される、生体成長に影響する組成物を作製する方法であって、
ヒト臍帯血を含み、第１の体積ＶＵＣを有する試料であって、ヒト臍帯血が赤血球、赤血球以外の細胞、及び非細胞物質を含む試料を得るステップと、
ヒト臍帯血を含む前記試料を、体積ＶＰＣを有する、ある量のＰｒｅｐａＣｙｔｅ−ＣＢ又はその同等物と組み合わせるステップであり、上清が形成されるように、ＶＵＣ／ＶＰＣ比が約０．７５〜約１．２５の間であるステップと、
容器内で、上清の少なくとも一部を、単核球を単離するために構成される試薬の層に積層するステップであり、前記上清の少なくとも一部がカラム高ＣＨＳを有し、前記試薬の前記層がカラム高ＣＨＲを有し、カラム高ＣＨＲが、前記上清の少なくとも一部のカラム高ＣＨＳの少なくとも７５％であるステップと、
前記容器の内容物に十分な遠心力をかけるステップであって、力ベクトルを前記容器の閉鎖端に向けて、単核球を実質的に含む少なくとも１つの新しい層を形成させるステップと、
単核球を実質的に含む前記層の少なくとも一部を、乳酸加リンゲル液又はその同等物と組み合わせて、単核球溶液を作り出すステップと、
前記単核球溶液の少なくとも一部中の生細胞の総数ＮＬを決定するステップであり、前記単核溶液の少なくとも一部が体積ＶＭを有するステップと、
組み合わせた組成物にアルブミンを添加するステップと、
を含む方法。
【請求項１６２】
デキストロース溶液中の体積ＶＤの低分子量デキストランを、前記単核球溶液の少なくとも一部に添加するステップであり、前記体積ＶＤが、生細胞の総数ＮＬに少なくとも部分的に基づいて、１ｍｌ当たり１００，０００個〜７５００万個の間の生単核球の濃度を有する調整組成物を作り出すステップをさらに含む、請求項１６１に記載の方法。
【請求項１６３】
デキストロース溶液中の体積ＶＤの低分子量デキストランを、前記単核球溶液の少なくとも一部に添加するステップであり、前記体積ＶＤが、生細胞の総数ＮＬに少なくとも部分的に基づいて、１ｍｌ当たり７５０，０００個〜３０００万個の間の生単核球の濃度を有する調整組成物を作り出すステップをさらに含む、請求項１６１に記載の方法。
【請求項１６４】
デキストロース溶液中の体積ＶＤの低分子量デキストランを、前記単核球溶液の少なくとも一部に添加するステップであり、前記体積ＶＤが、生細胞の総数ＮＬに少なくとも部分的に基づいて、１ｍｌ当たり１０００万個〜３０００万個の間の生単核球の濃度を有する調整組成物を作り出すステップをさらに含む、請求項１６１に記載の方法。
【請求項１６５】
デキストロース溶液中の体積ＶＤの低分子量デキストランを、前記単核球溶液の少なくとも一部に添加するステップであり、前記体積ＶＤが、生細胞の総数ＮＬに少なくとも部分的に基づいて、１ｍｌ当たり１０００万個〜２０００万個の間の生単核球の濃度を有する調整組成物を作り出すステップをさらに含む、請求項１６１に記載の方法。
【請求項１６６】
前記調整組成物のｐＨを決定するステップをさらに含む、請求項１６１〜１６５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６７】
前記調整組成物のｐＨを、４．１〜８．５の間であるように調整するステップをさらに含む、請求項１６６に記載の方法。
【請求項１６８】
対象への移植のために構成される、生体成長に影響する組成物を作製する方法であって、
ヒト臍帯血を含み、第１の体積ＶＵＣを有する試料であって、ヒト臍帯血が赤血球、赤血球以外の細胞、及び非細胞物質を含む試料を得るステップと、
ヒト臍帯血を含む前記試料を、体積ＶＰＣを有する、ある量のＰｒｅｐａＣｙｔｅ−ＣＢ又はその同等物と組み合わせるステップであり、上清が形成されるように、ＶＵＣ／ＶＰＣ比が約０．７５〜約１．２５の間であるステップと、
容器内で、上清の少なくとも一部を、単核球を単離するために構成される試薬の層に積層するステップであり、前記上清の少なくとも一部がカラム高ＣＨＳを有し、前記試薬の前記層がカラム高ＣＨＲを有し、カラム高ＣＨＲが、前記上清の少なくとも一部のカラム高ＣＨＳの少なくとも７５％であるステップと、
前記容器の内容物に十分な遠心力をかけるステップであって、力ベクトルを前記容器の閉鎖端に向けて、単核球を実質的に含む少なくとも１つの新しい層を形成させるステップと、
単核球を実質的に含む、前記層の少なくとも一部を、乳酸加リンゲル液又はその同等物と組み合わせて、単核球溶液を作り出すステップと、
前記単核球溶液の少なくとも一部中の生細胞の総数ＮＬを決定するステップであり、前記単核溶液の少なくとも一部が体積ＶＭを有するステップと、
を含む方法。
【請求項１６９】
デキストロース溶液中の体積ＶＤの低分子量デキストランを、前記単核球溶液の少なくとも一部に添加するステップであり、前記体積ＶＤが、生細胞の総数ＮＬに少なくとも部分的に基づいて、１ｍｌ当たり１００，０００個〜７５００万個の間の生単核球の濃度を有する調整組成物を作り出すステップをさらに含む、請求項１６８に記載の方法。
【請求項１７０】
デキストロース溶液中の体積ＶＤの低分子量デキストランを、前記単核球溶液の少なくとも一部に添加するステップであり、前記体積ＶＤが、生細胞の総数ＮＬに少なくとも部分的に基づいて、１ｍｌ当たり７５０，０００個〜３０００万個の間の生単核球の濃度を有する調整組成物を作り出すステップをさらに含む、請求項１６８に記載の方法。
【請求項１７１】
デキストロース溶液中の体積ＶＤの低分子量デキストランを、前記単核球溶液の少なくとも一部に添加するステップであり、前記体積ＶＤが、生細胞の総数ＮＬに少なくとも部分的に基づいて、１ｍｌ当たり１０００万個〜３０００万個の間の生単核球の濃度を有する調整組成物を作り出すステップをさらに含む、請求項１６８に記載の方法。
【請求項１７２】
デキストロース溶液中の体積ＶＤの低分子量デキストランを、前記単核球溶液の少なくとも一部に添加するステップであり、前記体積ＶＤが、生細胞の総数ＮＬに少なくとも部分的に基づいて、１ｍｌ当たり１０００万個〜２０００万個の間の生単核球の濃度を有する調整組成物を作り出すステップをさらに含む、請求項１６８に記載の方法。
【請求項１７３】
前記調整組成物のｐＨを決定するステップをさらに含む、請求項１６８〜１７２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７４】
前記調整組成物のｐＨを、４．１〜８．５の間であるように調整するステップをさらに含む、請求項１７３に記載の方法。
【請求項１７５】
組み合わせた組成物にアルブミンを添加するステップをさらに含む、請求項１６８〜１７４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７６】
対象への移植のために構成される、生体成長に影響する組成物を作製する方法であって、
ヒト臍帯血を含み、第１の体積Ｖ１を有する試料であって、ヒト臍帯血が赤血球、赤血球以外の細胞、及び非細胞物質を含む試料を得るステップと、
前記試料から赤血球の少なくとも約９５％を除去し、前記試料から生じるペレットが赤血球以外の細胞を実質的に含み、前記生じるペレットが第２の体積Ｖ２を有するように前記試料から非細胞物質の相当量を除去するステップと、
前記生じるペレットの少なくとも一部を乳酸加リンゲル液で希釈することにより、前記生じるペレットの前記少なくとも一部を復元するステップであり、前記少なくとも一部が初期体積Ｖｉを有し、得られる希釈された一部が希釈体積Ｖｄｉｌを有し、前記希釈体積と前記初期体積の間のＶｄｉｌ／Ｖｉ比が約０．９５×Ｖ１／Ｖ２〜約１．０５×Ｖ１／Ｖ２の間であるステップと、
容器内で、前記得られる希釈された一部の少なくとも一部を、単核球を単離するために構成される試薬の層に積層するステップであり、前記得られる希釈された一部の前記一部が体積Ｖ３を有し、前記試薬の前記層が体積Ｖ４を有し、前記試薬の前記層の前記体積Ｖ４が、前記得られる希釈された一部の前記一部の前記体積Ｖ３の約１５％〜約８５％の間であるステップと、
前記容器に十分な遠心力をかけるステップであって、力ベクトルを、試薬層を含む前記容器の閉鎖端に向けて、単核球を実質的に含む少なくとも１つの新しい層を形成させるステップと、
単核球の前記層の少なくとも一部を乳酸加リンゲル液と組み合わせて、単核球溶液を作り出すステップと、
前記単核球溶液の少なくとも一部分中の生細胞の数ＮＬを推定するステップであり、前記単核溶液の少なくとも一部分が体積Ｖ５を有するステップと、
デキストロース溶液中の体積Ｖ６の低分子量デキストランを、前記単核球溶液の少なくとも一部分に添加するステップであり、前記体積Ｖ６が、前記単核球溶液の少なくとも一部分中の生細胞の数ＮＬに少なくとも部分的に依存するステップと、
必要な場合、デキストロース溶液中の低分子量デキストラン及び単核球溶液の組み合わせた組成物のｐＨを、４．１〜８．５の間であるように調整するステップと、
組み合わせた組成物にアルブミンを添加するステップと、
を含む方法。
【請求項１７７】
前記単核球溶液が、幹細胞を含む、請求項１３７〜１７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７８】
幹細胞が、造血性幹細胞（ＨＳＣ）を含む、請求項１７７に記載の方法。
【請求項１７９】
幹細胞が、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）を含む、請求項１７７に記載の方法。
【請求項１８０】
前記アルブミンを添加するステップの後、組み合わせた組成物を低温貯蔵するステップをさらに含み、細胞カウントが、１ｍｌ当たり約２５０万個の生単核球から約１０２０万個の生単核球の間に減少される、請求項１３７、１４９、１６１、又は１７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８１】
細胞カウントが、１ｍｌ当たり約９８０万個の生単核球から約１０２０万個の生単核球の間に減少される、請求項１８０に記載の方法。
【請求項１８２】
デキストロース溶液中の前記低分子量デキストランが、ＬＭＤ（デキストラン４０）を含む、請求項１３８〜１４１、１５０〜１５３、１６２〜１６５、１６９〜１７２及び１７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８３】
前記ｐＨを調整するステップの後に、ｐＨが４．１〜７．２の間である、請求項１４３、１５５、１６７、１７４、又は１７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８４】
前記ｐＨを調整するステップの後に、ｐＨが４．１〜６．２の間である、請求項１８３に記載の方法。
【請求項１８５】
前記ｐＨを調整するステップが、重炭酸ナトリウム粉末を添加するステップを含む、請求項１４３、１５５、１６７、１７４、１７６、又は１８３〜１８４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８６】
前記アルブミンを添加するステップが、約１０ｍｇ〜約１５０ｍｇの間のアルブミンを、組み合わせた組成物の１ｍｌ当たり添加するステップを含む、請求項１３７、１４９、１６１、又は１７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８７】
前記アルブミンを添加するステップが、約１５ｍｇ〜約３０ｍｇの間のアルブミンを、組み合わせた組成物の１ｍｌ当たり添加するステップを含む、請求項１８６に記載の方法。
【請求項１８８】
前記アルブミンを添加するステップが、約８０ｍｇ〜約１５０ｍｇの間のアルブミンを、組み合わせた組成物の１ｍｌ当たり添加するステップを含む、請求項１８６に記載の方法。
【請求項１８９】
ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）が、前記組成物に添加されない、請求項１３７〜１８８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９０】
１つ又は複数の生物活性剤を添加するステップをさらに含む、請求項１３７〜１８９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９１】
１つ又は複数の生物活性剤が、１つ又は複数のサイトカインを含む、請求項１９０に記載の方法。
【請求項１９２】
１つ又は複数の生物活性剤が、１つ又は複数の増殖因子を含む、請求項１９０又は１９１に記載の方法。
【請求項１９３】
１つ又は複数の生物活性剤が、ヒト臍帯血を含む前記試料に由来する、請求項１９０〜１９２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９４】
１つ又は複数の生物活性剤が、ヒト臍帯血を含む前記試料からではないヒト臍帯血に由来する、請求項１９０〜１９２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９５】
１つ又は複数の生物活性剤が、市販ヒトアルブミン又は市販ヒトアルブミン血清から取得される又は由来する、請求項１９０〜１９２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９６】
前記除去するステップが、少なくとも約９８％の赤血球を、前記試料から除去するステップを含む、請求項１７６に記載の方法。
【請求項１９７】
前記除去するステップが、少なくとも約９９％の赤血球を、前記試料から除去するステップを含む、請求項１９６に記載の方法。
【請求項１９８】
前記除去するステップが、少なくとも約９５体積％の非細胞物質を前記試料から除去するステップを含む、請求項１７６、１９６又は１９７に記載の方法。
【請求項１９９】
かける前記ステップが、遠心分離で回転させるステップを含む、請求項１３７〜１９８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２００】
前記遠心力をかけるステップが、海面での重力加速度の少なくとも約３５０倍を前記内容物にかけるステップを含む、請求項１３７〜１９９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０１】
単核球を単離するために構成される試薬が、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ  ＰＲＥＭＩＵＭ  Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ  Ｍｅｄｉａを含む、請求項１３７〜１４８及び１６１〜１７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０２】
前記推定するステップが、ＣＤ３４＋カウントを実施するステップを含む、請求項１７６に記載の方法。
【請求項２０３】
前記推定するステップが、総有核細胞（ＴＮＣ）カウントを実施するステップを含む、請求項１７６に記載の方法。
【請求項２０４】
前記体積Ｖ６を添加するステップにおいて、１ｍｌあたりデキストロース溶液中の前記体積Ｖ６の低分子量デキストランが、式Ｖ６＝Ｋ×ＮＬ（式中、Ｋは、約７．３５×１０−８ｍｌ／細胞から約３．００×１０−７ｍｌ／細胞の間であり、ＮＬは、前記単核球溶液中の２０ｍｌ部分における生細胞の数である。）に対応する、請求項１７６に記載の方法。
【請求項２０５】
前記体積Ｖ６を添加するステップにおいて、１ｍｌあたりデキストロース溶液中の前記体積Ｖ６の低分子量デキストランが、式Ｖ６＝Ｋ×ＮＬ（式中、Ｋは、約７．３５×１０−８ｍｌ／細胞から約７．５０×１０−８ｍｌ／細胞の間であり、ＮＬは、前記単核球溶液中の２０ｍｌ部分における生細胞の数である。）に対応する、請求項２０４に記載の方法。
【請求項２０６】
前記除去するステップが、ヒト臍帯血をＰｒｅｐａＣｙｔｅ−ＣＢ溶液又はその同等物と組み合わせるステップを含む、請求項１７６に記載の方法。
【請求項２０７】
前記除去するステップが、ヒト臍帯血を遠心分離機内の容器に配置するステップ、及び前記遠心分離機を操作するステップを含む、請求項１７６又は２０６に記載の方法。
【請求項２０８】
前記組み合わせるステップが、単核球を乳酸加リンゲル液と混合するステップを含む、請求項１７６に記載の方法。
【請求項２０９】
前記単核球溶液が、非増殖細胞集団を実質的に含む、請求項１３７〜１７９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１０】
前記単核球溶液が、非プール細胞集団を実質的に含む、請求項１３７〜１７９及び２０９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１１】
前記試薬の前記層の前記体積Ｖ４が、前記得られる希釈された一部分の前記一部分の前記体積Ｖ３の約４５％〜約５５％の間である、請求項１７６に記載の方法。
【請求項２１２】
前記試薬の前記層の前記体積Ｖ４が、前記得られる希釈された一部分の前記一部分の前記体積Ｖ３の約７５％〜約８５％の間である、請求項１７６に記載の方法。
【請求項２１３】
前記試薬の前記層の前記体積Ｖ４が、前記得られる希釈された一部分の前記一部分の前記体積Ｖ３の約５０％である、請求項１７６に記載の方法。
【請求項２１４】
前記推定するステップの後に、実質的に全ての乳酸加リンゲル液を除去するステップをさらに含む、請求項１７６に記載の方法。
【請求項２１５】
前記組み合わせるステップの後に、前記単核球溶液中の単核球を洗浄するステップをさらに含む、請求項１７６に記載の方法。
【請求項２１６】
前記単核球を洗浄するステップが、単核球を少なくとも２回洗浄するステップを含む、請求項２１５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［発明の背景］
[0001]本発明の分野は、一般的に、骨再発生（ｂｏｎｅ  ｒｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）を含む、組織再建のための細胞同種移植に関する。細胞同種移植組成物の供給源としては歴史的に成人の骨髄が関与してきたが、最近は胎盤液が実験的な供給源となっている。
【０００２】
［発明の概要］
[0002]一実施形態では、生体成長に影響する組成物は、第１の体積を有する溶液であって、デキストロースを含む低ｐＨ流体ベース及びアルブミンを有する溶液を含み、前記溶液中のアルブミンの濃度は約１０ｍｇ／ｍｌ〜約１５０ｍｇ／ｍｌの間である。
【０００３】
[0003]別の実施形態では、対象において治療を実施するための方法は、第１の体積を有する溶液であって、デキストロースを含む低ｐＨ流体ベース及びアルブミンを含む溶液を含み、前記溶液中のアルブミンの濃度が約１０ｍｇ／ｍｌ〜約１５０ｍｇ／ｍｌの間である、組成物を用意するステップ、並びに対象の組織の内部、付近、又は隣接部に、有効量の組成物を移植するステップを含む。
【０００４】
[0004]更に別の実施形態では、生体成長に影響する組成物は、第１の体積を有する溶液であって、デキストロースを含む低ｐＨ流体ベース及び保護剤を含む溶液を含み、前記組成物のｐＨは４．１〜７．２の間である。
【０００５】
[0005]更に別の実施形態では、対象への移植のために構成される、生体成長に影響する組成物を作製する方法は、ヒト臍帯血を含み、第１の体積ＶＵＣを有する試料であって、ヒト臍帯血が赤血球、赤血球以外の細胞、及び非細胞物質を含む、試料を得るステップと、ヒト臍帯血を含む前記試料を、体積ＶＰＣを有する、ある量のＰｒｅｐａＣｙｔｅ−ＣＢ又はその同等物と組み合わせるステップであって、上清が形成されるように、ＶＵＣ／ＶＰＣ比が約０．６０〜約１．７５の間であるステップと、容器内で、上清の少なくとも一部分を、単核球を単離するために構成される試薬の層に積層するステップであって、前記上清の少なくとも一部分が体積ＶＳを有し、前記試薬の前記層が体積ＶＲを有し、前記試薬の前記層の前記体積ＶＲが、前記上清の少なくとも一部分の前記体積ＶＳの少なくとも６７％であるステップと、前記容器の内容物に十分な遠心力をかけて、力ベクトルを前記容器の閉鎖端に向けて、単核球を実質的に含む少なくとも１つの新しい層を形成させるステップと、単核球を実質的に含む前記層の少なくとも一部を、乳酸加リンゲル液又はその同等物と組み合わせて、単核球溶液を作り出すステップと、前記単核球溶液の少なくとも一部分中の生細胞の総数ＮＬを決定するステップであって、前記単核溶液の少なくとも一部分が体積ＶＭを有するステップと、組み合わせた組成物にアルブミンを添加するステップと、を含む。
【０００６】
[0006]更に別の実施形態では、対象への移植のために構成される、生体成長に影響する組成物を作製する方法は、ヒト臍帯血を含み、第１の体積ＶＵＣを有する試料であって、ヒト臍帯血が赤血球、赤血球以外の細胞、及び非細胞物質を含む試料を得るステップと、ヒト臍帯血を含む前記試料を、第１のフレキシブル容器において体積ＶＰＣを有する、ある量のＰｒｅｐａＣｙｔｅ−ＣＢ又はその同等物と混合するステップであって、ＶＵＣ／ＶＰＣ比が約０．６０〜約１．７５の間であるステップと、混合物を前記第１のフレキシブル容器において、上清が形成されるまで少なくとも２０分間残存させるステップと、上清の少なくとも一部分を、前記第１のフレキシブル容器から第２のフレキシブル容器へと、前記第１のフレキシブル容器と前記第２のフレキシブル容器を連結するコンジットを介して進めるステップと、前記第２のフレキシブル容器の内容物に十分な遠心力をかけて、単核球を実質的に含む、少なくとも１つの新しい層を形成させるステップと、単核球を実質的に含む前記層の少なくとも一部を、試薬と組み合わせて、単核球溶液を作り出すステップと、前記単核球溶液の少なくとも一部分中の生細胞の総数ＮＬを決定するステップであって、前記単核溶液の少なくとも一部分が体積ＶＭを有するステップと、組み合わせた組成物にアルブミンを添加するステップと、を含む。
【０００７】
[0007]更に別の実施形態では、対象への移植のために構成される、生体成長に影響する組成物を作製する方法は、ヒト臍帯血を含み、第１の体積ＶＵＣを有する試料であって、ヒト臍帯血が赤血球、赤血球以外の細胞、及び非細胞物質を含む試料を得るステップと、ヒト臍帯血を含む前記試料を、体積ＶＰＣを有する、ある量のＰｒｅｐａＣｙｔｅ−ＣＢ又はその同等物と組み合わせるステップであって、上清が形成されるように、ＶＵＣ／ＶＰＣ比が約０．７５〜約１．２５の間であるステップと、容器内で、上清の少なくとも一部を、単核球を単離するために構成される試薬の層に積層するステップであって、前記上清の少なくとも一部がカラム高ＣＨＳを有し、前記試薬の前記層がカラム高ＣＨＲを有し、カラム高ＣＨＲが前記上清の少なくとも一部のカラム高ＣＨＳの少なくとも７５％であるステップと、前記容器の内容物に十分な遠心力をかけて、力ベクトルを前記容器の閉鎖端に向けて、単核球を実質的に含む少なくとも１つの新しい層を形成させるステップと、単核球を実質的に含む前記層の少なくとも一部を、乳酸加リンゲル液又はその同等物と組み合わせて、単核球溶液を作り出すステップ、前記単核球溶液の少なくとも一部中の生細胞の総数ＮＬを決定するステップであって、前記単核溶液の少なくとも一部が体積ＶＭを有するステップと、組み合わせた組成物にアルブミンを添加するステップと、を含む。
【０００８】
[0008]更に別の実施形態では、対象への移植のために構成される、生体成長に影響する組成物を作製する方法は、ヒト臍帯血を含み、第１の体積ＶＵＣを有する試料であって、ヒト臍帯血が赤血球、赤血球以外の細胞、及び非細胞物質を含む試料を得るステップと、ヒト臍帯血を含む前記試料を、体積ＶＰＣを有する、ある量のＰｒｅｐａＣｙｔｅ−ＣＢ又はその同等物と組み合わせるステップであって、上清が形成されるようにＶＵＣ／ＶＰＣ比が約０．７５〜約１．２５の間であるステップと、容器内で、上清の少なくとも一部を、単核球を単離するために構成される試薬の層に積層するステップであって、前記上清の少なくとも一部がカラム高ＣＨＳを有し、前記試薬の前記層がカラム高ＣＨＲを有し、カラム高ＣＨＲが前記上清の少なくとも一部のカラム高ＣＨＳの少なくとも７５％であるステップと、前記容器の内容物に十分な遠心力をかけて、力ベクトルを前記容器の閉鎖端に向けて、単核球を実質的に含む少なくとも１つの新しい層を形成させるステップと、単核球を実質的に含む前記層の少なくとも一部を、乳酸加リンゲル液又はその同等物と組み合わせて、単核球溶液を作り出すステップと、前記単核球溶液の少なくとも一部中の生細胞の総数ＮＬを決定するステップであって、前記単核溶液の少なくとも一部が体積ＶＭを有するステップと、を含む。
【０００９】
[0009]更に別の実施形態では、対象への移植のために構成される、生体成長に影響する組成物を作製する方法は、ヒト臍帯血を含み、第１の体積Ｖ１を有する試料であって、ヒト臍帯血が赤血球、赤血球以外の細胞、及び非細胞物質を含む試料を得るステップと、前記試料から赤血球の少なくとも約９５％を除去し、前記試料から非細胞物質の相当量を除去することにより、前記試料から生じるペレットが赤血球以外の細胞を実質的に含み、前記生じるペレットが第２の体積Ｖ２を有するステップと、前記生じるペレットの少なくとも一部を乳酸加リンゲル液で希釈することにより、前記生じるペレットの少なくとも一部を復元するステップであって、前記少なくとも一部が初期体積Ｖｉを有し、得られる希釈された一部が希釈体積Ｖｄｉｌを有し、前記希釈体積と前記初期体積の間のＶｄｉｌ／Ｖｉ比が約０．９５×Ｖ１／Ｖ２〜約１．０５×Ｖ１／Ｖ２の間であるステップと、容器内で、前記得られる希釈された一部の少なくとも一部を、単核球を単離するために構成される試薬の層に積層するステップであって、前記得られる希釈された一部の前記一部が体積Ｖ３を有し、前記試薬の前記層が体積Ｖ４を有し、前記試薬の前記層の前記体積Ｖ４が、前記得られる希釈された一部の前記一部の前記体積Ｖ３の約１５％〜約８５％の間であるステップと、前記容器に十分な遠心力をかけて、力ベクトルを、試薬層を含む前記容器の端部に向けて、単核球を実質的に含む少なくとも１つの新しい層を形成させるステップと、単核球の前記層の少なくとも一部を乳酸加リンゲル液と組み合わせて、単核球溶液を作り出すステップと、前記単核球溶液の少なくとも一部中の生細胞の数ＮＬを推定するステップであって、前記単核溶液の少なくとも一部が体積Ｖ５を有するステップと、デキストロース溶液中の体積Ｖ６の低分子量デキストランを、前記単核球溶液の少なくとも一部に添加するステップであって、前記体積Ｖ６が、前記単核球溶液の少なくとも一部中の生細胞の数ＮＬに少なくとも部分的に依存するステップと、必要な場合、デキストロース溶液中の低分子量デキストラン及び単核球溶液の組み合わせた組成物のｐＨを、４．１〜８．５の間であるように調整するステップと、組み合わせた組成物にアルブミンを添加するステップと、を含む。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】第１の実施形態による、患者への移植のための組成物を形成させるためのプロセスを示す図である。
【図２】第１及び第２の層が内部に配置された容器を示す図である。
【図３】容器に遠心力を適用するための一般的な機構を示す図である。
【図４】遠心力の適用の後の図２の容器を示す図である。
【図５】ある特定の物質の除去後の図４の容器を示す図である。
【図６】第２の実施形態による、患者への移植のための組成物を形成させるためのプロセスを示す図である。
【図７】第１及び第２の層が内部に配置された容器を示す図である。
【図８】容器に遠心力を適用するための一般的な機構を示す図である。
【図９】遠心力の適用の後の図７の容器を示す図である。
【図１０】ある特定の物質の除去の後の図９の容器を示す図である。
【図１１】第３の実施形態による、患者への移植のための組成物を形成させるためのプロセスを示す図である。
【図１２】操作の間の第１及び第２のフレキシブル容器を示す図である。
【図１３】図１２の第２のフレキシブル容器に遠心力を適用するための一般的な機構を示す図である。
【図１４】別の操作の間の図１２の第１及び第２のフレキシブル容器を示す図である。
【図１５】遠心力の適用の後の第２のフレキシブル容器を示す図である。
【図１６】第４の実施形態による、患者への移植のための組成物を形成させるためのプロセスを示す図である。
【図１７】第１及び第２の層が内部に配置された容器を示す図である。
【図１８】容器に遠心力を適用するための一般的な機構を示す図である。
【図１９】遠心力の適用の後の図１７の容器を示す図である。
【図２０】ある特定の物質の除去の後の図１９の容器を示す図である。
【図２１】第５の実施形態による、患者への移植のための組成物を形成させるためのプロセスを示す図である。
【図２２】第１及び第２の層が内部に配置された容器を示す図である。
【図２３】容器に遠心力を適用するための一般的な機構を示す図である。
【図２４】遠心力の適用の後の図２２の容器を示す図である。
【図２５】ある特定の物質の除去の後の図２４の容器を示す図である。
【図２６Ａ】ある実施形態による、患者における脊椎固定手順の間の２つの椎骨を示す図である。
【図２６Ｂ】ある実施形態による、患者における脊椎固定手順の間の２つの椎骨を示す図である。
【図２６Ｃ】ある実施形態による、患者における脊椎固定手順の間の２つの椎骨を示す図である。
【図２７Ａ】ある実施形態による、患者における固定手順の間の２つの骨部を示す図である。
【図２７Ｂ】ある実施形態による、患者における固定手順の間の２つの骨部を示す図である。
【図２８Ａ】ある実施形態による、患者におけるある手順の間の軟部組織を示す図である。
【図２８Ｂ】ある実施形態による、患者におけるある手順の間の軟部組織を示す図である。
【００１１】
［示された実施形態の詳細な説明］
[0038]本発明は、臍帯血に少なくとも部分的に由来する細胞同種移植の組成物並びにその製造及び使用に関する。生物学的プロセスを加速する若しくは最適化する又は新しい生物学的プロセスを開始させるための組成物は、本明細書に記載の教示に従って生産され得る。細胞及び増殖因子は、臍帯血から有利に得られ又は由来し得、また臍帯血が万能ドナー適用を支持することができる生来（ｎａｔｉｖｅ）の細胞集団を含むとの利点から本質的に利益を受け得る。本質的に増加した細胞の健康は、細胞同種移植の利益も持続し得る。
【００１２】
[0039]組成物の一部の実施形態では、アルブミンが添加される。本明細書における「一部の実施形態では」の使用は、「記載された要素が添加される可能性又は潜在能力を有する、任意の実施形態又は任意の実施形態の組み合わせでは」を意味することが意図されることに注意すべきである。出願人によって実施される研究では、アルブミンは、そのような組成物のプロセシングの間で共通である、凍結及び解凍手順の間の血液の細胞成分の生存度を増加させることが示されている。アルブミンが、タンパク質安定化剤として作用すること、溶液中のタンパク質の凝集を防止すること、並びに不正確なタンパク質のフォールディングの量を減少させることによって、解凍後の細胞生存度を増強し得ると考えられている。タンパク質の正確なフォールディングにより、タンパク質が、例えば、それらの所望の三次元構造を達成することが可能になる。しかしながら、誤って折り畳まれたタンパク質は、改変された又は毒性の機能性を有する。アルブミンは、培養プロセスの間に用いられるフラスコ（培養フラスコ）に対する細胞の接着性に影響することも示されている。アルブミンは、臍帯血細胞、例えば、幹細胞の分化の割合を追加的に増強することができる。
【００１３】
[0040]ある特定の組成物では、低い、酸性のｐＨ、例えば、約４．０〜約５．０の間、又は約４．４のｐＨは、例えば、無細胞抽出物を含む創部ケアを意図する組成物に望ましいことがある。低ｐＨ組成物は、凍結又は解凍の間などの細胞の死及び破裂を促進する微小環境を有していてもよい。この細胞の死及び破裂又はその増加は、サイトカイン又は増殖因子が含まれるが、限定されない、可溶性細胞外タンパク質因子又は生物活性剤の増加もたらすことがある。これらの生物活性剤は、創傷治癒の動態に潜在的に役立つ成分であると考えられる。創傷治癒の動態又は時間的な側面は、患者の組織に添加される組成物の特定のメイクアップに依存して変動することがある。例えば、約７０％生存細胞まで含む細胞を含有する組成物は、約９５％生存細胞より多く含む細胞を含有する組成物よりも可溶性細胞外因子／生物活性剤の比較的より大きい体積又は量を含むことがある。したがって、約７０％生存細胞まで有する組成物は、約９５％生存細胞よりもより多く有する組成物よりもより急速な創傷治癒応答させることがある。したがって、記載されているとおり相対的に低いｐＨ組成物の使用は、１つ又は複数の慢性創傷を有する患者において利用することができる。
【００１４】
[0041]他方、他の組成物では、よりアルカリ性のｐＨ、例えば約７．０〜約８．０の間、又は約７．５のｐＨは、生存細胞、例えば幹細胞を使用する生物学的治癒プロセスを媒介することが意図される組成物などに望ましいことがある。アルブミンは、細胞におけるｐＨの効果の制御を助ける潜在能力があり、したがって、この目的のためのものなどの組成物に組み込むことができる。
【００１５】
[0042]出願人は、臍帯血細胞が、アルブミンの存在下で培養された場合に、様々な形態を有するいくつかの異なる細胞タイプに分化することも観察してきた。これらの特定の細胞の種を同定することにより、分化後、各々特定の群の細胞が、各ケースにおいて専門の組成物を作り出すことが増強され得る。例えば、骨治癒又は骨成長のために特別に製剤化された１つ又は複数の特定の組成物、神経治癒又は神経成長のために特別に製剤化された１つ又は複数の特定の組成物、或いは他のタイプの組織の治癒又は成長のための他の組成物。細胞タイプの同定後、幹細胞の分化を、その特定の細胞タイプに向けることができる。各細胞タイプでは、その細胞タイプに関連するある特定の生物活性剤（サイトカイン、増殖因子など）が単離され得る。これらの生物活性剤は、次に、特殊な目的のための特定の組成物に用いられてもよい。例として、オンコスタチンＭは、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）に付着又は結合するサイトカインであり、骨及び神経の両方に影響する増殖因子として同定されている。少なくともこの理由のため、オンコスタチンＭは、骨及び／又は神経同種移植組成物に組み込むことができる。別の例として、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）は、骨での使用のための同種移植組成物に組み込むことができる増殖因子又はサイトカインである。
【００１６】
[0043]組成物の第１の実施形態は、第１の体積を有し、デキストロース及びデキストランを含む低ｐＨ流体ベース並びにアルブミンも含む溶液を含む。一部の実施形態では、低ｐＨ流体ベースは、ＬＭＤ（デキストラン４０）又はその同等化合物を含み得る。一部の実施形態では、低ｐＨ流体ベースは、ＬＭＤ（デキストラン４０）からなる。デキストロース及びデキストラン及び特にデキストロース成分の低ｐＨ流体ベースは、タンパク質、例えばサイトカインの凝集を防止することによって、タンパク質保護剤として作用することができる。一部の実施形態では、溶液中のアルブミンは、約１０ｍｇ／ｍｌ（ミリグラム／ミリリットル）〜約１５０ｍｇ／ｍｌの間、又は約１０ｍｇ／ｍｌ（ミリグラム／ミリリットル）〜約１２０ｍｇ／ｍｌの間の濃度を有する。一部の実施形態では、溶液中のアルブミンは、約１５ｍｇ／ｍｌ（ミリグラム／ミリリットル）〜約３０ｍｇ／ｍｌの間の濃度を有する。一部の実施形態では、溶液中のアルブミンは、約１８ｍｇ／ｍｌ（ミリグラム／ミリリットル）〜約２５ｍｇ／ｍｌの間の濃度を有する。一部の実施形態では、溶液中のアルブミンは、約２０ｍｇ／ｍｌの濃度を有する。一部の実施形態では、溶液中のアルブミンは、約８０ｍｇ／ｍｌ〜約１５０ｍｇ／ｍｌの間、又は約５０ｍｇ／ｍｌ〜約１５０ｍｇ／ｍｌの間の濃度を有する。一部の実施形態では、溶液中のアルブミンは、約８０ｍｇ／ｍｌ〜約１２０ｍｇ／ｍｌの間、又は約５０ｍｇ／ｍｌ〜約１２０ｍｇ／ｍｌの間、又は約９０ｍｇ／ｍｌ〜約１１０ｍｇ／ｍｌの間の濃度を有する。一部の実施形態では、溶液中のアルブミンは、約１０５ｍｇ／ｍｌ〜約１５０ｍｇ／ｍｌの間、又は約１０５ｍｇ／ｍｌ〜約１２０ｍｇ／ｍｌの間の濃度を有する。一緒に、デキストロース及びデキストランの低ｐＨ流体ベース並びにアルブミンは、供給源（例えば、臍帯血）から得られるタンパク質の完全性を維持することによって貯蔵剤又は保護剤（保存剤、安定化剤）として一緒に作用する。デキストロース及びデキストランの低ｐＨ流体ベースの別の有益な使用は、相対的に低いｐＨを提供することであり、その理由は、そのベースラインｐＨが、生理的ｐＨよりも低く、したがって、使用において、シグナル伝達タンパク質における増加を介して創傷治癒を促進する細胞を動員する環境を提供するからである。アルブミンが、デキストロース及びデキストランの低ｐＨ流体ベースに対する粉末形態中に添加される実施形態では、例えば、デキストロース及びデキストランの低ｐＨ流体ベース及び血清中のアルブミンを組み合わせることと比較してコスト削減が提供される。
【００１７】
[0044]物質、例えば重炭酸ナトリウム粉末は、組成物の最終的なｐＨを制御するため、必要に応じて、溶液に添加されてもよい。或いは、重炭酸カルシウム液体を使用してもよい。例えば、一部の実施形態では、組成物のｐＨは４．１〜７．２の間であってもよい。一部の実施形態では、組成物のｐＨは４．１〜７．４の間、又は、場合によって７．４よりも高くてもよい。一部の実施形態では、組成物のｐＨは、４．１〜６．２の間であってもよい。一部の実施形態では、組成物のｐＨは、５．０〜７．４の間であってもよい。一部の実施形態では、組成物のｐＨは、５．０〜６．２の間であってもよい。列挙された範囲の１つの範囲内のｐＨは、追加のベース、例えば重炭酸ナトリウム又は重炭酸カルシウムを添加することのない場合は、デキストロース及びデキストランの低ｐＨ流体ベースの固有の特徴に基づき、達成され得る。場合によって、追加のベースは、列挙された範囲の１つの範囲内のｐＨを達成するため使用してもよい。場合によって、列挙された範囲の１つの範囲内のｐＨを達成するため追加のベースを使用することが必要であり得る。
【００１８】
[0045]一部の実施形態では、アルブミンは、市販ヒト血清から得られ又は由来し得る。他の実施形態では、アルブミンは、ドナー由来血清から得られ又は由来し得る。一部の実施形態では、アルブミンは、ヒト臍帯血から得られ又は由来し得る。
【００１９】
[0046]一部の実施形態では、組成物は、前駆細胞を含み得る。一部の実施形態では、組成物は、幹細胞を含み得る。一部の実施形態では、幹細胞は、例えば、ペトリ皿又は成長培地／マトリックスにおける成長によって増殖されない非増殖（ｎｏｎ−ｅｘｐａｎｄｅｄ）細胞集団からなる。臍帯血細胞集団及び他の因子の全体メイクアップは、より広範囲の利益を患者に提供し得る。幹細胞は、造血性幹細胞（ＨＳＣ）又は間葉系幹細胞（ＭＳＣ）が含まれるが、限定されない、幹細胞のうちの１つ又は複数のタイプを含み得る。一部の実施形態では、幹細胞は、生存細胞及び非生存細胞を含み得る。一部の実施形態では、幹細胞の中の生存細胞のパーセンテージは、７０％より多くてもよい。一部の実施形態では、幹細胞の中の生存細胞のパーセンテージは、８５％より多くてもよい。一部の実施形態では、幹細胞の中の生存細胞のパーセンテージは、９５％より多くてもよい。
【００２０】
[0047]一部の実施形態では、組成物は、幹細胞又は生物活性剤を含み得るが、限定されない、生単核球を含み得る。一部の実施形態では、組成物は、１ミリリットル（ｍｌ）当たり約２５０万個の生単核球から１ミリリットル（ｍｌ）当たり約１０２０万個の生単核球を含む。一部の実施形態では、組成物は、１ミリリットル（ｍｌ）当たり約９８０万個の生単核球から１ミリリットル（ｍｌ）当たり約１０２０万個の生単核球を含む。一部の実施形態では、単核球は、単一ドナーの臍帯血に由来し得る。
【００２１】
[0048]一部の実施形態では、組成物は、サイトカイン又は増殖因子が含まれるが、限定されない、１つ又は複数の生物活性剤を含み得る。生物活性剤は、マクロファージ炎症タンパク質アルファ（ＭＩＰ−１α）、マクロファージ炎症タンパク質ベータ（ＭＩＰ−１β）、及びインターフェロンガンマ誘導性タンパク質１０（ＩＰ−１０）を含むケモカイン、インターロイキン１ベータ（ＩＬ−１β）、インターロイキン２（ＩＬ−２）、インターロイキン４（ＩＬ−４）、インターロイキン５（ＩＬ−５）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、インターロイキン７（ＩＬ−７）、インターロイキン８（ＩＬ−８）、インターロイキン１０（ＩＬ−１０）、インターロイキン１２（ＩＬ−１２）、及びインターロイキン１３（ＩＬ−１３）を含むインターロイキン、インターフェロンアルファ（ＩＮＦα）を含むインターフェロン、リンホカイン、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、幹細胞因子（ＫＬ）、及び腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）のいずれかを含み得る。生物活性剤は、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、神経増殖因子、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、線維芽細胞増殖因子２（ＦＧＦ−２）を含む線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、ケラチノサイト増殖因子、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）、インスリン様増殖因子、ｄｅｓ（１−３）−ＩＧＦ−Ｉ（脳ＩＧＦ−Ｉ）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）及び脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のいずれかを含み得る。
【００２２】
[0049]組成物に組み込まれ得る他の生物活性剤は、トランスフォーミング増殖因子ベータ１（ＴＧＦ−β１）、トランスフォーミング増殖因子アルファ１（ＴＧＦ−α１）、インターロイキン１６（ＩＬ−１６）、血小板第４因子（ＰＦ４）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、インスリン増殖因子（ＩＧＦ−１）、ｆａｓリガンド（Ｆａｓ−Ｌ）、単球走化性タンパク質２（ＭＣＰ−２）、単球走化性タンパク質３（ＭＣＰ−３）、単球走化性タンパク質４（ＭＣＰ−４）、マクロファージ由来ケモカイン（ＭＤＣ）、血小板第４因子（ＰＦ−４）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、インスリン様増殖因子１（ＩＧＦ−１）、及びインスリン様増殖因子結合タンパク質−３（ＩＧＦＢＰ−３）のうちの１つ又は複数を含み得る。
【００２３】
[0050]組成物に組み込まれ得る他の生物活性剤は、インターロイキン１５（ＩＬ−１５）、インターロイキン１７（ＩＬ−１７）、インターロイキン１８（ＩＬ−１８）、インターロイキン２１（ＩＬ−２１）、インターロイキン２２（ＩＬ−２２）、インターロイキン２３（ＩＬ−２３）、インターロイキン２７（ＩＬ−２７）、インターロイキン３１（ＩＬ−３１）、エオタキシン、ＣＸＣリガンド１（ＧＲＯα）、インターロイキン１受容体アンタゴニスト（ＩＬ−１ＲＡ）、インターロイキン１アルファ（ＩＬ−１α）、白血病抑制因子（ＬＩＦ）、胎盤増殖因子（ＰＬＧＦ）、ケモカインリガンド５（ＲＡＮＴＥＳ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、ストローマ細胞由来因子（ＳＤＦ１α）、及び腫瘍壊死因子（ＴＮＦβ）のうちの１つ又は複数を含み得る。各インターロイキンカテゴリーは、カテゴリー又はファミリー内のうちの１つ又は複数メンバーを含み得る。例えば、インターロイキン１７（ＩＬ−１７）カテゴリー内では、いくつかの種のうちの１つは、例えば、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｂ、ＩＬ−１７Ｃ、ＩＬ−１７Ｄ、ＩＬ−１７Ｅ、又はその他から選択され得る。ＩＬ−１７が一般的に表示される場合、これらの異なる種のうちの任意の１つ又は複数を包含することが意図される。
【００２４】
[0051]一部の実施形態では、組成物は、アルブミン及び１つ又は複数の生物活性剤を含み得、アルブミンは、第１のドナーの臍帯血に由来し、１つ又は複数の生物活性剤は、少なくとも第２のドナーに由来する。１つ又は複数の生物活性剤は、市販ヒトアルブミン及び／又は市販ヒトアルブミン血清から取得又は由来し得る。一部の実施形態では、組成物は、アルブミン及び１つ又は複数の生物活性剤を含み得、アルブミン及び１つ又は複数の生物活性剤は、単一ドナーの臍帯血に由来する。
【００２５】
[0052]一部の実施形態では、組成物は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含まず、対象においてアレルギー性反応を誘導することなどの、ＤＭＳＯが有し得る任意の潜在的に有害な効果が回避されるように、生産され得る。しかしながら、一部の実施形態では、ＤＭＳＯは、例えば、凍結保護物質として、デキストランに関する代替品として、デキストランと組み合わせて、なおも使用し得る。デキストランに関して及び／又はＤＭＳＯに関して置き換えることができる代替的な凍結保護物質又は凍結保存剤は、Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ、ＣＡ、ＵＳＡのＳｙｓｔｅｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｉｎｃ．によって供給されるＣｒｙｏＧｏｌｄ（商標）である。グリセロールは、置き換えることができる別の代替的な凍結保護物質又は凍結保存剤である。
【００２６】
[0053]組成物（例えば本明細書に記載の実施形態）を生産する方法は、第１の実施形態に従って記載される。図１のステップ１０では、ヒト臍帯血を含み、第１の体積Ｖ１を有する試料が得られる。ヒト臍帯血は、典型的には赤血球、赤血球以外の細胞、及び非細胞物質を含む。ステップ１２では、試料から赤血球の少なくとも約９５％が除去され、試料から相当量の非細胞物質が除去される。ステップ１２は、赤血球以外の細胞を実質的に含むペレットを生成する。ペレットは、第２の体積Ｖ２を有する。一部の実施形態では、試料から赤血球の少なくとも約９８％が除去される。一部の実施形態では、試料から赤血球少なくとも約９９％が除去される。一部の実施形態では、試料から非細胞物質の少なくとも約９５％（体積％）が除去される。一部の実施形態では、赤血球及び／又は非細胞物質の除去は、ヒト臍帯血を、ＰｒｅｐａＣｙｔｅ（登録商標）−ＣＢ溶液（Ｂｉｏ−Ｅ、ＬＬＣ、Ｂｌｏｏｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＮ）又は同等な凝集剤若しくは沈殿剤と組み合わせるステップを含み得る。一部の実施形態では、赤血球及び／又は非細胞物質の除去は、ヒト臍帯血を遠心分離機内の容器に配置するステップと、前記遠心分離機を操作するステップと、を含み得る。これは、ヒト臍帯血を、ＰｒｅｐａＣｙｔｅ−ＣＢ溶液又は同等な凝集剤若しくは沈殿剤と組み合わせるステップの後に生じ得る。ステップ１４では、ペレットの少なくとも一部は、それを乳酸加リンゲル液で希釈するステップによって復元される。ペレットの少なくとも一部は初期体積Ｖｉを有し、得られる希釈された一部は希釈体積Ｖｄｉｌを有する。一部の実施形態では、希釈体積と初期体積の間のＶｄｉｌ／Ｖｉ比は、約０．９５×Ｖ１／Ｖ２〜約１．０５×Ｖ１／Ｖ２の間である。ステップ１６では、容器３０（図２）は、遠心分離機内での配置のために構成されるチューブを含み得、２つの層を充填される。図２に示されるとおり、第１の層３２は、単核球を単離するために構成される試薬を含む。一部の実施形態では、試薬は、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ（登録商標）Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ  Ｍｅｄｉａ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｂｉｏ−Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）又は同等な媒体を含む。一部の実施形態では、試薬は、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ（登録商標）ＰＬＵＳ  Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ  Ｍｅｄｉａを含む。一部の実施形態では、試薬は、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ（登録商標）ＰＲＥＭＩＵＭ  Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ  Ｍｅｄｉａを含む。一部の実施形態では、試薬は、約１．０グラム／ｍｌ〜約１．３グラム／ｍｌの間の密度を有する。一部の実施形態では、試薬は、約１．０７グラム／ｍｌ〜約１．０９グラム／ｍｌの間の密度を有する。一部の実施形態では、試薬は、約１．０７３グラム／ｍｌ〜約１．０８４グラム／ｍｌの間の密度を有する。第２の層３４は、第１の層３２上に配置される。第２の層３４は、ステップ１４から得られる希釈された一部の少なくとも一部を含む。第１の層３２及び第２の層３４は、容器３０において、第２の層３４の体積Ｖ３が第１の層３２の体積Ｖ４上に配置され、体積Ｖ４がＶ３の約１５％〜約８５％の間であるように、配置される���一部の実施形態では、体積Ｖ４は、Ｖ３の約４５％〜約５５％の間である。一部の実施形態では、体積Ｖ４は、Ｖ３の約７５％〜約８５％の間である。一部の実施形態では、体積Ｖ４は、Ｖ３の約５０％である。
【００２７】
[0054]ステップ１８では、容器３０（図３）及びその内容物（例えば、第１の層３２及び第２の層３４）に十分な遠心力成分４８がかけられ、遠心力成分４８が閉鎖容器端５０に向かい、図４に示されるとおり、層が形成される。図３は、中心点４２の周囲の環状経路４４における容器３０を回転させる遠心分離機４６の基本的な力学を示す。図４では、層３６は、顆粒球及び赤血球を含み、単核球を単離するために構成され、図２の第１の層３２から残存する、試薬を含有する層３２ａの下に移動されている。層３８は単核球を実質的に含み、層４０は血漿及び血小板を実質的に含む。一部の実施形態では、ステップ１８は、容器３０及びその内容物に少なくとも約３５０倍の重力加速度をかける遠心分離機を使用して実施されてもよい。一部の実施形態では、ステップ１８は、容器３０及びその内容物に少なくとも約４００倍の重力加速度をかける遠心分離機を使用して実施されてもよい。一部の実施形態では、ステップ１８は、容器３０及びその内容物に少なくとも約４５０倍の重力加速度をかける遠心分離機を使用して実施されてもよい。一部の実施形態では、遠心分離を約５分間〜約３０分間実施して所望の結果を達成してもよい。
【００２８】
[0055]内容物における遠心力の量及び／又は遠心分離機が操作される時間の量を制御することに加えて、利用者は、遠心分離機の速度増加（ｒａｍｐ  ｕｐ）及び速度減少（ｒａｍｐ  ｄｏｗｎ）；換言すれば、停止状態から選択された遠心力に達するまで必要とされる時間及び公称の選択された遠心力から停止状態に達するまで必要とされる時間の制御も選択し得る。従前の遠心分離では、これは、所望の定常操作速度に達するまでの回転スピード（例えば、ＲＰＭ）のスピードアップ及び停止状態への回転スピード（所望の定常操作速度から）のスローダウンに対応する。これらの２つの要素のうちの１つ又は両方の制御を使用して、遠心分離の有効性をさらに至適化することができる。実質的にゼロ遠心力から所望の遠心力に速度増加する時間は、約３０秒間〜約１５分間の間又は約１分間〜約５分間の間であってもよい。所望の遠心力から実質的にゼロ遠心力に速度減少する時間は、約３０秒間〜約２０分間の間又は約１分間〜約１０分間の間であってもよい。
【００２９】
[0056]ステップ２０では、単核球層３８からの単核球が、容器３０から除去され、乳酸加リンゲル液と組み合わされて、単核球溶液が作り出される。容器３０からの単核球の除去の前、層４０が最初に除去されてもよく（図５）、このようにして、層３８の除去が容易となる。例えば、無菌ピペットの使用によって層４０を除去する場合、層３８が乱されないように配慮してもよい。ステップ２２では、単核球が、乳酸加リンゲル液と積極的に（しかし、穏やかに）混合される。単核球はまた、乳酸加リンゲル液で１回、２回、又はそれ以上の回数で洗浄されてもよい。一部の実施形態では、単核球溶液は、非増殖（ｎｏｎ−ｅｘｐａｎｄｅｄ）細胞集団を実質的に含む。一部の実施形態では、単核球溶液は、非プール細胞集団を含む。血小板又は血漿タンパク質によるいかなる不要な混入も最小化するため、層３８を除去する前に、層４０が実質的に除去されることに注意すべきである。層３８を除去する場合、層３２ａが実質的に乱されず残されて、このようにして顆粒球によるいかなる不要な混入も最小化されることにも注意すべきである。
【００３０】
[0057]ステップ２２では、一部の単核球溶液又は実質的に全ての単核球溶液のいずれかの体積Ｖ５は、体積Ｖ５における生細胞の数ＮＬを推定するため使用される。一部の実施形態では、推定は、ＣＤ３４＋カウントを実施することによって行われる。一部の実施形態では、推定は、総有核細胞（ＴＮＣ）カウントを実施することによって行われる。一部の実施形態では、推定は、自動細胞カウンターで少なくとも部分的に行われる。代替的な方法は、トリパンブルー染色後の血球計数（ｈｅｍｔｏｃｙｔｏｍｅｔｅｒ）、ＡＴＰ試験、カルセインＡＭ、クローン原性アッセイ、エチジウムホモ二量体アッセイ、エバンスブルー、二酢酸フルオレセイン加水分解／ヨウ化プロピジウム染色（ＦＤＡ／ＰＩ染色）、フローサイトメトリー、ホルマザン−ベース−アッセイ（ＭＴＴ／ＸＴＴ）、緑色蛍光タンパク質、乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）、メチルバイオレット、ヨウ化プロピジウムＤＮＡ染色（壊死性、アポトーシス性、及び正常細胞を区別するため）、レサズリン、死細胞の細胞膜だけを横断するトリパンブルー、又はＴＵＮＥＬアッセイを含む細胞カウントを実施するため使用してもよい。ステップ２２の終わりに、実質的に全ての乳酸加リンゲル液は、体積Ｖ５から除去されてもよい。ステップ２４では、生細胞の推定数ＮＬに少なくとも部分的に基づいて、デキストロース溶液中の、計算され、推定され又は決定された体積Ｖ６の低分子量デキストランが、単核球溶液の少なくとも一部の体積Ｖ５に添加される。一部の実施形態では、体積Ｖ６の計算、推定又は決定は、単核球溶液の少なくとも一部中の細胞のおよそ７５％が、凍結及び解凍後に生存可能であるとの仮定に少なくとも部分的に基づいていてもよい。一部の実施形態では、体積Ｖ６の計算、推定又は決定は、１ミリリットル当たり約２５０万個の生細胞から約１０２０万個の生細胞の間の意図される生細胞濃度に少なくとも部分的に基づいていてもよい。一部の実施形態では、細胞は、低温で貯蔵され得る。一部の実施形態では、低温貯蔵は約−６０℃未満である。一部の実施形態では、低温貯蔵は約−８０℃未満である。一部の実施形態では、体積Ｖ６の計算、推定又は決定は、１ミリリットル当たり約２５０万個の生細胞から約１０２０万個の生細胞の間の意図される生細胞濃度に少なくとも部分的に基づいていてもよく、この生細胞濃度が、組み合わせた組成物にアルブミンを添加するステップ及び組み合わせた組成物を低温貯蔵するステップの後に生じることが仮定され得る。一部の実施形態では、体積Ｖ６の計算、推定又は決定は、１ミリリットル当たり約９８０万個の生細胞から約１０２０万個の生細胞の間の意図される生細胞濃度に少なくとも部分的に基づいていてもよい。一部の実施形態では、デキストロースにおける低分子量デキストランは、ＬＭＤ（デキストラン４０）を含み得る。一部の実施形態では、添加される体積Ｖ６は、以下の式
Ｖ６＝Ｋ×ＮＬ
に対応しており、
【００３１】
[0058]式中、Ｋは、約７．３５×１０−８ｍｌ／細胞から約３．００×１０−７ｍｌ／細胞の間であり、かつ
【００３２】
[0059]式中、ＮＬは、単核球溶液中の２０ｍｌ部分における生細胞の数である。
【００３３】
[0060]一部の実施形態では、添加される体積Ｖ６は、以下の式
Ｖ６＝Ｋ×ＮＬ
に対応しており、
【００３４】
[0061]式中、Ｋは、約７．３５×１０−８ｍｌ／細胞から約７．５０×１０−８ｍｌ／細胞の間であり、かつ
【００３５】
[0062]式中、ＮＬは、単核球溶液中の２０ｍｌ部分における生細胞の数である。
【００３６】
[0063]ステップ２６では、単核球溶液及びデキストロース溶液中の低分子量デキストランの組み合わせた組成物のｐＨは、必要な場合、所望の範囲内のｐＨを作り出すため、調整されてもよい。一部の実施形態では、ｐＨは、重炭酸ナトリウム、例えば、重炭酸ナトリウム粉末を添加することによって調整される。一部の実施形態では、ｐＨは、重炭酸カルシウム、例えば、重炭酸カルシウム液体を添加することによって調整される。一部の実施形態では、ｐＨは４．１〜８．５の間に調整又は維持される。一部の実施形態では、ｐＨは４．１〜７．２の間に調整又は維持される。一部の実施形態では、ｐＨは４．１〜６．２の間に調整又は維持される。一部の実施形態では、ｐＨは５．０〜７．４の間に調整又は維持される。一部の実施形態では、ｐＨは５．０〜７．２の間に調整又は維持される。一部の実施形態では、ｐＨは、５．０〜６．２の間に調整又は維持される。ステップ２８では、組み合わせた組成物にアルブミンが添加される。一部の実施形態では、組み合わせた組成物の１ミリリットル当たり約１０ｍｇ〜約１５０ｍｇの間のアルブミンが添加され得る。一部の実施形態では、組み合わせた組成物の１ミリリットル当たり約１５ｍｇ〜約３０ｍｇの間のアルブミンが添加され得る。一部の実施形態では、組み合わせた組成物の１ミリリットル当たり約１８ｍｇ〜約２５ｍｇの間のアルブミンが添加され得る。一部の実施形態では、組み合わせた組成物の１ミリリットル当たり約２０ｍｇのアルブミンが添加され得る。
【００３７】
[0064]一部の実施形態では、単核球溶液は、幹細胞を含む。一部の実施形態では、幹細胞は、造血性幹細胞（ＨＳＣ）を含む。一部の実施形態では、幹細胞は、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）を含む。
【００３８】
[0065]一部の実施形態では、１つ又は複数の生物活性剤が、組成物に添加され得る。１つ又は複数の生物活性剤は、サイトカイン又は増殖因子を含み得、ヒト臍帯血に由来し得る。一部の実施形態では、１つ又は複数の生物活性剤は、ステップ１０に記載されるヒト臍帯血を含む同じ試料から得られ又は由来し得る。一部の実施形態では、１つ又は複数の生物活性剤は、ステップ１０に記載されるヒト臍帯血を含む試料ではないヒト臍帯血から得られ又は由来し得る。一部の実施形態では、１つ又は複数の生物活性剤は、ステップ１０に記載されるヒト臍帯血を含む試料とは異なるドナーからのヒト臍帯血から得られ又は由来し得る。一部の実施形態では、１つ又は複数の生物活性剤は、市販ヒトアルブミン又は市販ヒトアルブミン血清から得る又は由来する。
【００３９】
[0066]一部の実施形態では、１つ又は複数の生物活性剤は、サイトカイン又は増殖因子を含み得るが、限定されない。生物活性剤は、マクロファージ炎症タンパク質アルファ（ＭＩＰ−１α）、マクロファージ炎症タンパク質ベータ（ＭＩＰ−１β）、及びインターフェロンガンマ誘導性タンパク質１０（ＩＰ−１０）を含むケモカイン、インターロイキン１ベータ（ＩＬ−１β）、インターロイキン２（ＩＬ−２）、インターロイキン４（ＩＬ−４）、インターロイキン５（ＩＬ−５）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、インターロイキン７（ＩＬ−７）、インターロイキン８（ＩＬ−８）、インターロイキン１０（ＩＬ−１０）、インターロイキン１２（ＩＬ−１２）、及びインターロイキン１３（ＩＬ−１３）を含むインターロイキン、インターフェロンアルファ（ＩＮＦα）を含むインターフェロン、リンホカイン、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、幹細胞因子（ＫＬ）、及び腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）のいずれかを含み得る。生物活性剤は、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、神経増殖因子、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、線維芽細胞増殖因子２（ＦＧＦ−２）を含む線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、ケラチノサイト増殖因子、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）、インスリン様増殖因子、ｄｅｓ（１−３）−ＩＧＦ−Ｉ（脳ＩＧＦ−Ｉ）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）及び脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のいずれかを含み得る。
【００４０】
[0067]一部の実施形態では、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）は、いかなるステップにおいても組成物に添加されることはなく、したがって、組成物を実質的に無ＤＭＳＯのままにし、ＤＭＳＯが有し得る、任意の潜在的に有害な効果が回避される。組み合わせた組成物は、次に、例えば、超低温フリーザー中の低温バイアルにおいて、低温学的に貯蔵され得る。低温貯蔵は、−６０℃未満又は−８０℃未満の温度で制御され得る。
【００４１】
[0068]組成物（例えば本明細書に記載の実施形態）を生産する方法は、第２の実施形態に従って記載される。図６のステップ１００では、ヒト臍帯血を含み、第１の体積ＶＵＣを有する試料が得られる。ヒト臍帯血は、典型的には赤血球、赤血球以外の細胞、及び非細胞物質を含む。ステップ１０２では、ヒト臍帯血を含む試料は、体積ＶＰＣのＰｒｅｐａＣｙｔｅ（登録商標）−ＣＢ溶液（Ｂｉｏ−Ｅ、ＬＬＣ、Ｂｌｏｏｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＮ）又は同等な凝集剤若しくは沈殿剤と組み合わされる。体積ＶＵＣ及びＶＰＣのうちの一方又は両方は、ＶＵＣ／ＶＰＣ比が約０．６０〜約１．７５の間であるように選択され得る。一部の実施形態では、ＶＵＣ／ＶＰＣ比は約０．７５〜約１．２５の間である。一部の実施形態では、ＶＵＣ／ＶＰＣ比は約０．６０〜約１．１０の間である。一部の実施形態では、ＶＵＣ／ＶＰＣ比は約１．２５〜約１．７５の間である。組み合わせた体積ＶＵＣ及びＶＰＣは、上清が形成されるまで又は少なくとも２つの明確な層が形成されるまで少なくとも約２０分間又は少なくとも約３０分間乱されることなく静置させられる。ステップ１０４では、遠心力にさらされるように構成される容器１６８（例えば、遠心チューブ）は、単核球を単離するために構成される試薬１７０で部分的に充填され、試薬１７０は体積ＶＲを有する（図７）。一部の実施形態では、試薬１７０は、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ（登録商標）Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ  Ｍｅｄｉａ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｂｉｏ−Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）又は同等な媒体を含む。一部の実施形態では、試薬１７０は、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ（登録商標）ＰＬＵＳ  Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ  Ｍｅｄｉａを含む。一部の実施形態では、試薬１７０は、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ（登録商標）ＰＲＥＭＩＵＭ  Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ  Ｍｅｄｉａを含む。一部の実施形態では、試薬１７０は、約１．０グラム／ｍｌ〜約１．３グラム／ｍｌの間の密度を有する。一部の実施形態では、試薬１７０は、約１．０７グラム／ｍｌ〜約１．０９グラム／ｍｌの間の密度を有する。一部の実施形態では、試薬１７０は、約１．０７３グラム／ｍｌ〜約１．０８４グラム／ｍｌの間の密度を有する。試薬１７０の体積ＶＲは、容器１６８中の第１の層１７２（例えば、底部層）を表す。さらに、ステップ１０４の一部として、ステップ１０２において生産される体積ＶＳの上清１７６を含む第２の層１７４は、図７に示されるとおり、容器１６８中の第１の層１７２に積層される。試薬１７０の層１７２の体積ＶＲは、上清１７６の層１７４の体積ＶＳの少なくとも６７％である。一部の実施形態では、試薬１７０の層１７２の体積ＶＲは、上清１７６の層１７４の体積ＶＳの少なくとも７５％である。一部の実施形態では、試薬１７０の層１７２の体積ＶＲは、上清１７６の層１７４の体積ＶＳの少なくとも８５％である。一部の実施形態では、試薬１７０の層１７２の体積ＶＲは、上清１７６の層１７４の体積ＶＳの約３０％〜約１３５％の間である。一部の実施形態では、試薬１７０の層１７２の体積ＶＲは、上清１７６の層１７４の体積ＶＳの約５０％〜約１００％の間である。一��の実施形態では、試薬１７０の層１７２の体積ＶＲは、上清１７６の層１７４の体積ＶＳの約７５％〜約１００％の間である。２つの層１７２、１７４の間の明確な界面が最初に所望される場合、第２の層１７４は、緩徐な又は少なくとも穏やかな又は非破裂的な様式（例えば、緩徐なスピードでのピペッティング）で、第１の層１７２上に添加されるべきである。
【００４２】
[0069]ステップ１０６では、容器１６８（図８）及びその内容物（例えば、第１の層１７２及び第２の層１７４）に十分な遠心力成分１７８がかけられ、遠心力成分１７８が閉鎖容器端１８０に向かい、図９に示されるとおり、層が形成される。図８は、中心点１８４の周囲の環状経路１８２における容器１６８を回転させる遠心分離機４６の基本的な力学を示す。容器１６８は、例えば、回転させるため適切な位置において遠心分離機４６内に慎重に配置され得る。図９では、層１８６は、顆粒球及び赤血球を含み、図７の第１の層１７２から残存する、試薬１７０を含有する層１７２ａの下に移動されている。層１８８は単核球を実質的に含み、層１９０は血漿及び血小板を実質的に含む。一部の実施形態では、ステップ１０６は、容器１６８及びその内容物に少なくとも約３５０倍の重力加速度をかける遠心分離機を使用して実施されてもよい。一部の実施形態では、ステップ１０６は、容器１６８及びその内容物に少なくとも約４００倍の重力加速度をかける遠心分離機を使用して実施されてもよい。一部の実施形態では、ステップ１０６は、容器１６８及びその内容物に少なくとも約４５０倍の重力加速度をかける遠心分離機を使用して実施されてもよい。一部の実施形態では、ステップ１０６は、容器１６８及びその内容物に少なくとも約６００倍の重力加速度をかける遠心分離機を使用して実施されてもよい。一部の実施形態では、ステップ１０６は、容器１６８及びその内容物に少なくとも約８００倍の重力加速度をかける遠心分離機を使用して実施されてもよい。一部の実施形態では、ステップ１０６は、容器１６８及びその内容物に少なくとも約１，４００倍の重力加速度をかける遠心分離機を使用して実施されてもよい。一部の実施形態では、遠心分離を約５分間〜約３０分間実施して所望の結果を達成してもよい。
【００４３】
[0070]内容物における遠心力の量及び／又は遠心分離機が操作される時間の量を制御することに加えて、利用者は、遠心分離機の速度増加及び速度減少；換言すれば、停止状態から選択された遠心力に達するまで必要とされる時間及び公称の選択された遠心力から停止状態に達するまで必要とされる時間の制御も選択し得る。従来の遠心分離では、これは、所望の定常操作速度に達するまでの回転スピード（例えば、ＲＰＭ）のスピードアップ及び停止状態への回転スピード（所望の定常操作速度から）のスローダウンに対応する。これらの２つの要素のうちの１つ又は両方の制御を使用して、遠心分離の有効性をさらに至適化することができる。実質的にゼロ遠心力から所望の遠心力に速度増加する時間は、約３０秒間〜約１５分間の間又は約１分間〜約５分間の間であってもよい。所望の遠心力から実質的にゼロ遠心力に速度減少する時間は、約３０秒間〜約２０分間の間又は約１分間〜約１０分間の間であってもよい。
【００４４】
[0071]ステップ１０８では、単核球層１８８からの単核球が、容器１６８から除去され、乳酸加リンゲル液と組み合わされて、単核球溶液が作り出される。容器１６８からの単核球の除去の前、層１９０が最初に除去されてもよく（図１０）、このようにして、層１８８の除去が容易となる。例えば、無菌ピペットの使用によって層１９０を除去する場合、層１８８が乱されないように配慮してもよい。ステップ１０８では、単核球層１８８からの単核球が、乳酸加リンゲル液と積極的に（しかし、穏やかに）混合される。単核球はまた、乳酸加リンゲル液で１回、２回、又はそれ以上の回数で洗浄されてもよい。一部の実施形態では、単核球溶液は、非増殖（ｎｏｎ−ｅｘｐａｎｄｅｄ）細胞集団を実質的に含む。一部の実施形態では、単核球溶液は、非プール細胞集団を含む。血小板又は血漿タンパク質によるいかなる不要な混入も最小化するため、層１８８からの単核球を除去する前に、層１９０が実質的に除去されることに注意すべきである。層１８８を除去する場合、層１７２ａが実質的に乱されず残されて、このようにして層１８６における顆粒球によるいかなる不要な混入も最小化されることにも注意すべきである。
【００４５】
[0072]ステップ１１０では、一部の単核球溶液又は実質的に全ての単核球溶液のいずれかの体積ＶＭは、体積ＶＭにおける生細胞の数ＮＬを推定するため使用される。一部の実施形態では、推定は、ＣＤ３４＋カウントを実施することによって行われる。一部の実施形態では、推定は、総有核細胞（ＴＮＣ）カウントを実施することによって行われる。一部の実施形態では、推定は、自動細胞カウンターで少なくとも部分的に行われる。代替的な方法は、トリパンブルー染色後の血球計数、ＡＴＰ試験、カルセインＡＭ、クローン原性アッセイ、エチジウムホモ二量体アッセイ、エバンスブルー、二酢酸フルオレセイン加水分解／ヨウ化プロピジウム染色（ＦＤＡ／ＰＩ染色）、フローサイトメトリー、ホルマザン−ベース−アッセイ（ＭＴＴ／ＸＴＴ）、緑色蛍光タンパク質、乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）、メチルバイオレット、ヨウ化プロピジウムＤＮＡ染色（壊死性、アポトーシス性、及び正常細胞を区別するため）、レサズリン、死細胞の細胞膜だけを横断するトリパンブルー、又はＴＵＮＥＬアッセイを含む細胞カウントを実施するため使用してもよい。ステップ１１０の終わりに、実質的に全ての乳酸加リンゲル液は、体積ＶＭから除去されてもよい。
【００４６】
[0073]ステップ１１２では、組み合わせた組成物にアルブミンが添加される。一部の実施形態では、組み合わせた組成物の１ミリリットル当たり約１０ｍｇ〜約１５０ｍｇの間のアルブミンが添加され得る。一部の実施形態では、組み合わせた組成物の１ミリリットル当たり約１０ｍｇ〜約１２０ｍｇの間のアルブミンが、添加され得る。一部の実施形態では、組み合わせた組成物の１ミリリットル当たり約５０ｍｇ〜約１５０ｍｇの間のアルブミンが添加され得る。一部の実施形態では、組み合わせた組成物の１ミリリットル当たり約５０ｍｇ〜約１２０ｍｇの間のアルブミンが添加され得る。一部の実施形態では、組み合わせた組成物の１ミリリットル当たり約８０ｍｇ〜約１５０ｍｇの間のアルブミンが添加され得る。一部の実施形態では、組み合わせた組成物の１ミリリットル当たり約８０ｍｇ〜約１２０ｍｇの間のアルブミンが添加され得る。一部の実施形態では、組み合わせた組成物の１ミリリットル当たり約１０５ｍｇ〜約１５０ｍｇの間のアルブミンが添加され得る。一部の実施形態では、組み合わせた組成物の１ミリリットル当たり約１０５ｍｇ〜約１２０ｍｇの間のアルブミンが添加され得る。一部の実施形態では、組み合わせた組成物の１ミリリットル当たり約１５ｍｇ〜約３０ｍｇの間のアルブミンが添加され得る。一部の実施形態では、組み合わせた組成物の１ミリリットル当たり約１８ｍｇ〜約２５ｍｇの間のアルブミンが添加され得る。一部の実施形態では、組み合わせた組成物の１ミリリットル当たり約２０ｍｇのアルブミンが添加され得る。
【００４７】
[0074]一部の実施形態では、デキストロース溶液中の低分子量デキストランは、アルブミンの添加の間又は前に、単核球溶液の少なくとも一部の体積ＶＭに添加される。一部の実施形態では、デキストロース溶液中の低分子量デキストランの量は、生細胞の推定数ＮＬに少なくとも部分的に基づいて、計算され、推定され又は決定される。一部の実施形態では、添加されるデキストロース溶液中の低分子量デキストランの体積ＶＤＤの計算、推定又は決定は、単核球溶液の少なくとも一部中の細胞のおよそ７５％が、凍結及び解凍後に生存可能であるとの仮定に少なくとも部分的に基づいていてもよい。一部の実施形態では、体積ＶＤＤの計算、推定又は決定は、１ミリリットル当たり約１００，０００個の生細胞から約７５００万個の生細胞の間の意図される生細胞濃度に少なくとも部分的に基づいていてもよい。一部の実施形態では、体積ＶＤＤの計算、推定又は決定は、１ミリリットル当たり約７５０，０００個の生細胞から約３０００万個の生細胞の間の意図される生細胞濃度に少なくとも部分的に基づいていてもよい。一部の実施形態では、細胞は、低温で貯蔵され得る。一部の実施形態では、体積ＶＤＤの計算、推定又は決定は、１ミリリットル当たり約１０００万個の生細胞から約３０００万個の生細胞の間の意図される生細胞濃度に少なくとも部分的に基づいていてもよい。一部の実施形態では、体積ＶＤＤの計算、推定又は決定は、１ミリリットル当たり約１０００万個の生細胞から約２０００万個の生細胞の間の意図される生細胞濃度に少なくとも部分的に基づいていてもよい。一部の実施形態では、低温貯蔵は、約−６０℃未満である。一部の実施形態では、低温貯蔵は、約−８０℃未満である。
【００４８】
[0075]一部の実施形態では、組み合わせた組成物のｐＨは、必要な場合、所望の範囲内のｐＨを作り出すため、調整されてもよい。一部の実施形態では、ｐＨは、重炭酸ナトリウム、例えば、重炭酸ナトリウム粉末を、添加することによって調整される。一部の実施形態では、ｐＨは、重炭酸カルシウム、例えば、重炭酸カルシウム溶液を添加することによって調整される。一部の実施形態では、ｐＨは４．１〜８．５の間に調整又は維持される。一部の実施形態では、ｐＨは４．１〜７．２の間に調整又は維持される。一部の実施形態では、ｐＨは４．１〜６．２の間に調整又は維持される。一部の実施形態では、ｐＨは５．０〜７．４の間に調整又は維持される。一部の実施形態では、ｐＨは５．０〜７．２の間に調整又は維持される。一部の実施形態では、ｐＨは５．０〜６．２の間に調整又は維持される。
【００４９】
[0076]一部の実施形態では、単核球溶液は、幹細胞を含む。一部の実施形態では、幹細胞は、造血性幹細胞（ＨＳＣ）を含む。一部の実施形態では、幹細胞は、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）を含む。
【００５０】
[0077]一部の実施形態では、１つ又は複数の生物活性剤が、組成物に添加され得る。１つ又は複数の生物活性剤は、サイトカイン又は増殖因子を含み得、ヒト臍帯血に由来し得る。一部の実施形態では、１つ又は複数の生物活性剤は、ステップ１００に記載されるヒト臍帯血を含む同じ試料から得られ又は由来し得る。一部の実施形態では、１つ又は複数の生物活性剤は、ステップ１００に記載されるヒト臍帯血を含む試料ではないヒト臍帯血から得られ又は由来し得る。一部の実施形態では、１つ又は複数の生物活性剤は、ステップ１００に記載されるヒト臍帯血を含む試料とは異なるドナーからのヒト臍帯血から得られ又は由来し得る。一部の実施形態では、１つ又は複数の生物活性剤は、市販ヒトアルブミン又は市販ヒトアルブミン血清から得る又は由来する。
【００５１】
[0078]一部の実施形態では、１つ又は複数の生物活性剤は、サイトカイン又は増殖因子を含み得るが、限定されない。生物活性剤は、マクロファージ炎症タンパク質アルファ（ＭＩＰ−１α）、マクロファージ炎症タンパク質ベータ（ＭＩＰ−１β）、インターフェロンガンマ誘導性タンパク質１０（ＩＰ−１０）を含むケモカイン、インターロイキン１ベータ（ＩＬ−１β）、インターロイキン２（ＩＬ−２）、インターロイキン４（ＩＬ−４）、インターロイキン５（ＩＬ−５）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、インターロイキン７（ＩＬ−７）、インターロイキン８（ＩＬ−８）、インターロイキン９（ＩＬ−９）、インターロイキン１０（ＩＬ−１０）、インターロイキン１２（ＩＬ−１２）、インターロイキン１３（ＩＬ−１３）、インターロイキン１５（ＩＬ−１５）、インターロイキン１７（ＩＬ−１７）、インターロイキン１８（ＩＬ−１８）、インターロイキン２１（ＩＬ−２１）、インターロイキン２２（ＩＬ−２２）、インターロイキン２３（ＩＬ−２３）、インターロイキン２７（ＩＬ−２７）、インターロイキン３１（ＩＬ−３１）を含むインターロイキン、インターフェロンアルファ（ＩＮＦα）を含むインターフェロン、リンホカイン、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、幹細胞因子（ＫＬ）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、神経増殖因子、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、線維芽細胞増殖因子２（ＦＧＦ−２）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、ケラチノサイト増殖因子、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）、インスリン様増殖因子、ｄｅｓ（１−３）−ＩＧＦ−Ｉ（脳ＩＧＦ−Ｉ）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、エオタキシン、ＣＸＣリガンド１（ＧＲＯα）、インターロイキン１受容体アンタゴニスト（ＩＬ−１ＲＡ）、インターロイキン１アルファ（ＩＬ−１α）、白血病抑制因子（ＬＩＦ）、胎盤増殖因子（ＰＬＧＦ）、ケモカインリガンド５（ＲＡＮＴＥＳ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、ストローマ細胞由来因子（ＳＤＦ１α）、及び腫瘍壊死因子（ＴＮＦβ）のいずれかを含み得る。
【００５２】
[0079]一部の実施形態では、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）は、いかなるステップにおいても組成物に添加されることはなく、したがって、組成物を実質的に無ＤＭＳＯのままにし、ＤＭＳＯが有し得る、任意の潜在的に有害な効果が回避される。組み合わせた組成物は、次に、例えば、超低温フリーザー中の低温バイアルにおいて、低温学的に貯蔵され得る。低温貯蔵は、−６０℃未満又は−８０℃未満の温度で制御され得る。
【００５３】
[0080]組成物（例えば本明細書に記載の実施形態）を生産する方法は、第３の実施形態に従って記載される。図１１のステップ２００では、ヒト臍帯血を含み、第１の体積ＶＵＣを有する試料が、得られる。ヒト臍帯血は、典型的には赤血球、赤血球以外の細胞、及び非細胞物質を含む。ステップ２０２では、ヒト臍帯血２７１を含む試料は、図１２に示されるとおり、第１のフレキシブル容器２６７内で、体積ＶＰＣのＰｒｅｐａＣｙｔｅ（登録商標）−ＣＢ溶液２７３（Ｂｉｏ−Ｅ、ＬＬＣ、Ｂｌｏｏｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＮ）又は同等な凝集剤若しくは沈殿剤と混合される。第１のフレキシブル容器２６７に接続されるスパイク２７７及び挿入チューブ２７９を利用して、ヒト臍帯血２７１を含む試料又はさらに体積ＶＰＣのＰｒｅｐａＣｙｔｅ（登録商標）−ＣＢ溶液２７３が挿入され得る。一部の実施形態では、体積ＶＰＣのＰｒｅｐａＣｙｔｅ（登録商標）−ＣＢ溶液２７３は、第１のフレキシブル容器２６７内に既に受け入れられている。体積ＶＵＣ及びＶＰＣのうちのいずれか又は両方は、ＶＵＣ／ＶＰＣ比が約０．６０〜約１．７５の間であるように、選択され得る。一部の実施形態では、ＶＵＣ／ＶＰＣ比は約０．７５〜約１．２５の間である。一部の実施形態では、ＶＵＣ／ＶＰＣ比は約０．６０〜約１．１０の間である。一部の実施形態では、ＶＵＣ／ＶＰＣ比は約１．２５〜約１．７５の間である。ステップ２０４では、混合される体積ＶＵＣ＋ＶＰＣは、少なくとも２０分間、上清２７５が形成されるまで、第１のフレキシブル容器に残存させる。一部の実施形態では、混合される体積ＶＵＣ＋ＶＰＣは、少なくとも３０分間、第１のフレキシブル容器２６７に残存させる。ステップ２０６では、図１４に示されるとおり、上清の少なくとも一部２７５を、第１のフレキシブル容器２６７から第２のフレキシブル容器２６８（矢印）へと、第１のフレキシブル容器２６７と第２のフレキシブル容器２６８を連結するコンジット２６９を介して進める。ステップ２０８では、第２のフレキシブル容器２６８は遠心分離機に配置され、遠心分離機が操作されて第２のフレキシブル容器２６８内で遠心力が上清に適用される。一部の実施形態では、第１のフレキシブル容器２６７は、第２のフレキシブル容器２６８から除去され、例えば、コンジット２６９を切断することによって廃棄されてもよい。第２のフレキシブル容器２６８から延長する切断されたコンジット２６９の一部は、切断後にはずしてもよい。第２のフレキシブル容器２６８（図１３）及びその内容物に十分な遠心力成分２７８がかけられ、遠心力成分２７８が閉鎖容器端２８０に向かい、図１５に示されるとおり、層が形成される。図１３は、中心点２８４の周囲の環状経路２８２における第２のフレキシブル容器２６８を回転させる遠心分離機４６の基本的な力学を示す。第２のフレキシブル容器２６８は、例えば、回転させるため適切な位置において遠心分離機４６内に慎重に配置され得る。図１５では、層２８６は顆粒球及び赤血球を含み、層２７２ａは残存するＰｒｅｐａＣｙｔｅ（登録商標）−ＣＢ溶液２７３を含有する。層２８８は単核球を実質的に含み、層２９０は血漿及び血小板を実質的に含む。一部の実施形態では、ステップ２０８は、第２のフレキシブル容器２６８及びその内容物に少なくとも約３５０倍の重力加速度をかける、遠心分離機を使用して実施されてもよい。一部の実施形態では、ステップ２０８は、第２のフレキシブル容器２６８及びその内容物に少なくとも約４００倍の重力加速度をかける、遠心分離機を使用して実施されてもよい。一部の実施形態では、ステップ２０８は、第２のフレキシブル容器２６８及びその内容物に少なくとも約４５０倍の重力加速度をかける、遠心分離機を使用して実施されてもよい。一部の実施形態では、ステップ２０８は、第２のフレキシブル容器２６８及びその内容物に少なくとも約６００倍の重力加速度をかける、遠心分離機を使用して実施されてもよい。一部の実施形態では、ステップ２０８は、第２のフレキシブル容器２６８及びその内容物に少なくとも約８００倍の重力加速度をかける、遠心分離機を使用して実施されてもよい。一部の実施形態では、ステップ２０８は、容器２６８及びその内容物に少なくとも約１，４００倍の重力加速度をかける、遠心分離機を使用して実施されてもよい。一部の実施形態では、遠心分離を約５分間〜約３０分間実施して所望の結果を達成してもよい。
【００５４】
[0081]内容物における遠心力の量及び／又は遠心分離機が操作される時間の量を制御することに加えて、利用者は、遠心分離機の速度増加及び速度減少；換言すれば、停止状態から選択された遠心力に達するまで必要とされる時間及び公称の選択された遠心力から停止状態に達するまで必要とされる時間の制御も選択し得る。従前の遠心分離では、これは、所望の定常操作速度に達するまでの回転スピード（例えば、ＲＰＭ）のスピードアップ及び停止状態への回転スピード（所望の定常操作速度から）のスローダウンに対応する。これらの２つの要素のうちの１つ又は両方の制御を使用して、遠心分離の有効性をさらに至適化することができる。実質的にゼロ遠心力から所望の遠心力に速度増加する時間は、約３０秒間〜約１５分間の間又は約１分間〜約５分間の間であってもよい。所望の遠心力から実質的にゼロ遠心力に速度減少する時間は、約３０秒間〜約２０分間の間又は約１分間〜約１０分間の間であってもよい。
【００５５】
[0082]ステップ２１０では、単核球層２８８からの単核球が、第２のフレキシブル容器２６８から除去され、試薬と組み合わされて、単核球溶液が作り出される。一部の実施形態では、試薬は、ヒト血清、例えば、５％ヒト血清アルブミンを含む。第２のフレキシブル容器２６８からの単核球の除去の前、層２９０が最初に除去されてもよく、このようにして、層２８８の除去が容易となる。例えば、無菌ピペットの使用によって層２９０を除去する場合、層２８８が乱されないように配慮してもよい。層２９０はまた、ポート又はバルブ２８３を有する追加アクセスチューブ２８１を通して（例えば、針での吸引によって）慎重に除去されてもよい。一部の実施形態では、単核球溶液は、非増殖（ｎｏｎ−ｅｘｐａｎｄｅｄ）細胞集団を実質的に含む。一部の実施形態では、単核球溶液は、非プール細胞集団を含む。血小板又は血漿タンパク質によるいかなる不要な混入も最小化するため、層２８８からの単核球を除去する前に、層２９０が実質的に除去されることに注意すべきである。層２８８を除去する場合、層２７２ａが実質的に乱されず残されて、このようにして層２８６における顆粒球によるいかなる不要な混入も最小化されることにも注意すべきである。
【００５６】
[0083]ステップ２１２では、一部の単核球溶液又は実質的に全ての単核球溶液のいずれかの体積ＶＭは、体積ＶＭにおける生細胞の数ＮＬを推定するため使用される。一部の実施形態では、推定は、ＣＤ３４＋カウントを実施することによって行われる。一部の実施形態では、推定は、総有核細胞（ＴＮＣ）カウントを実施することによって行われる。一部の実施形態では、推定は、自動細胞カウンターで少なくとも部分的に行われる。代替的な方法は、トリパンブルー染色後の血球計数、ＡＴＰ試験、カルセインＡＭ、クローン原性アッセイ、エチジウムホモ二量体アッセイ、エバンスブルー、二酢酸フルオレセイン加水分解／ヨウ化プロピジウム染色（ＦＤＡ／ＰＩ染色）、フローサイトメトリー、ホルマザン−ベース−アッセイ（ＭＴＴ／ＸＴＴ）、緑色蛍光タンパク質、乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）、メチルバイオレット、ヨウ化プロピジウムＤＮＡ染色（壊死性、アポトーシス性、及び正常細胞を区別するため）、レサズリン、死細胞の細胞膜だけを横断するトリパンブルー、又はＴＵＮＥＬアッセイを含む細胞カウントを実施するため使用してもよい。ステップ２１２の終わりに、実質的に全ての試薬は、体積ＶＭから除去されてもよい。
【００５７】
[0084]ステップ２１４では、組み合わせた組成物にアルブミンが添加される。一部の実施形態では、組み合わせた組成物の１ミリリットル当たり約１０ｍｇ〜約１５０ｍｇの間のアルブミンが添加され得る。一部の実施形態では、組み合わせた組成物の１ミリリットル当たり約１０ｍｇ〜約１２０ｍｇの間のアルブミンが添加され得る。一部の実施形態では、組み合わせた組成物の１ミリリットル当たり約５０ｍｇ〜約１５０ｍｇの間のアルブミンが添加され得る。一部の実施形態では、組み合わせた組成物の１ミリリットル当たり約５０ｍｇ〜約１２０ｍｇの間のアルブミンが添加され得る。一部の実施形態では、組み合わせた組成物の１ミリリットル当たり約８０ｍｇ〜約１５０ｍｇの間のアルブミンが添加され得る。一部の実施形態では、組み合わせた組成物の１ミリリットル当たり約８０ｍｇ〜約１２０ｍｇの間のアルブミンが添加され得る。一部の実施形態では、組み合わせた組成物の１ミリリットル当たり約１０５ｍｇ〜約１５０ｍｇの間のアルブミンが添加され得る。一部の実施形態では、組み合わせた組成物の１ミリリットル当たり約１０５ｍｇ〜約１２０ｍｇの間のアルブミンが添加され得る。一部の実施形態では、組み合わせた組成物の１ミリリットル当たり約１５ｍｇ〜約３０ｍｇの間のアルブミンが添加され得る。一部の実施形態では、組み合わせた組成物の１ミリリットル当たり約１８ｍｇ〜約２５ｍｇの間のアルブミンが添加され得る。一部の実施形態では、組み合わせた組成物の１ミリリットル当たり約２０ｍｇのアルブミンが添加され得る。
【００５８】
[0085]一部の実施形態では、デキストロース溶液中の低分子量デキストランは、アルブミンの添加の間又は前に、単核球溶液の少なくとも一部の体積ＶＭに添加される。一部の実施形態では、デキストロース溶液中の低分子量デキストランの量は、生細胞の推定数ＮＬに少なくとも部分的に基づいて、計算され、推定され又は決定される。一部の実施形態では、添加されるデキストロース溶液中の低分子量デキストランの体積ＶＤＤの計算、推定又は決定は、単核球溶液の少なくとも一部中の細胞のおよそ７５％が、凍結及び解凍後に生存可能であるとの仮定に少なくとも部分的に基づいていてもよい。一部の実施形態では、体積ＶＤＤの計算、推定又は決定は、１ミリリットル当たり約１００，０００個の生細胞から約７５００万個の生細胞の間の意図される生細胞濃度に少なくとも部分的に基づいていてもよい。一部の実施形態では、体積ＶＤＤの計算、推定又は決定は、１ミリリットル当たり約７５０，０００個の生細胞から約３０００万個の生細胞の間の意図される生細胞濃度に少なくとも部分的に基づいていてもよい。一部の実施形態では、細胞は、低温で貯蔵され得る。一部の実施形態では、体積ＶＤＤの計算、推定又は決定は、１ミリリットル当たり約１０００万個の生細胞から約３０００万個の生細胞の間の意図される生細胞濃度に少なくとも部分的に基づいていてもよい。一部の実施形態では、体積ＶＤＤの計算、推定又は決定は、１ミリリットル当たり約１０００万個の生細胞から約２０００万個の生細胞の間の意図される生細胞濃度に少なくとも部分的に基づいていてもよい。一部の実施形態では、低温貯蔵は、約−６０℃未満である。一部の実施形態では、低温貯蔵は、約−８０℃未満である。
【００５９】
[0086]一部の実施形態では、組み合わせた組成物のｐＨは、必要な場合、所望の範囲内のｐＨを作り出すため、調整されてもよい。一部の実施形態では、ｐＨは、重炭酸ナトリウム、例えば、重炭酸ナトリウム粉末を、添加することによって調整される。一部の実施形態では、ｐＨは、重炭酸カルシウム、例えば、重炭酸カルシウム溶液を添加することによって調整される。一部の実施形態では、ｐＨは４．１〜８．５の間に調整又は維持される。一部の実施形態では、ｐＨは４．１〜７．２の間に調整又は維持される。一部の実施形態では、ｐＨは４．１〜６．２の間に調整又は維持される。一部の実施形態では、ｐＨは５．０〜７．４の間に調整又は維持される。一部の実施形態では、ｐＨは５．０〜７．２の間に調整又は維持される。一部の実施形態では、ｐＨは５．０〜６．２の間に調整又は維持される。
【００６０】
[0087]一部の実施形態では、単核球溶液は、幹細胞を含む。一部の実施形態では、幹細胞は、造血性幹細胞（ＨＳＣ）を含む。一部の実施形態では、幹細胞は、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）を含む。
【００６１】
[0088]一部の実施形態では、１つ又は複数の生物活性剤が、組成物に添加され得る。１つ又は複数の生物活性剤は、サイトカイン又は増殖因子を含み得、ヒト臍帯血に由来し得る。一部の実施形態では、１つ又は複数の生物活性剤は、ステップ２００に記載されるヒト臍帯血を含む同じ試料から得られ又は由来し得る。一部の実施形態では、１つ又は複数の生物活性剤は、ステップ２００に記載されるヒト臍帯血を含む試料ではないヒト臍帯血から得られ又は由来し得る。一部の実施形態では、１つ又は複数の生物活性剤は、ステップ２００に記載されるヒト臍帯血を含む試料とは異なるドナーからのヒト臍帯血から得られ又は由来し得る。一部の実施形態では、１つ又は複数の生物活性剤は、市販ヒトアルブミン又は市販ヒトアルブミン血清から得る又は由来する。
【００６２】
[0089]一部の実施形態では、１つ又は複数の生物活性剤は、サイトカイン又は増殖因子を含み得るが、限定されない。生物活性剤は、マクロファージ炎症タンパク質アルファ（ＭＩＰ−１α）、マクロファージ炎症タンパク質ベータ（ＭＩＰ−１β）、インターフェロンガンマ誘導性タンパク質１０（ＩＰ−１０）を含むケモカイン、インターロイキン１ベータ（ＩＬ−１β）、インターロイキン２（ＩＬ−２）、インターロイキン４（ＩＬ−４）、インターロイキン５（ＩＬ−５）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、インターロイキン７（ＩＬ−７）、インターロイキン８（ＩＬ−８）、インターロイキン９（ＩＬ−９）、インターロイキン１０（ＩＬ−１０）、インターロイキン１２（ＩＬ−１２）、インターロイキン１３（ＩＬ−１３）、インターロイキン１５（ＩＬ−１５）、インターロイキン１７（ＩＬ−１７）、インターロイキン１８（ＩＬ−１８）、インターロイキン２１（ＩＬ−２１）、インターロイキン２２（ＩＬ−２２）、インターロイキン２３（ＩＬ−２３）、インターロイキン２７（ＩＬ−２７）、インターロイキン３１（ＩＬ−３１）を含むインターロイキン、インターフェロンアルファ（ＩＮＦα）を含むインターフェロン、リンホカイン、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、幹細胞因子（ＫＬ）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、神経増殖因子、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、線維芽細胞増殖因子２（ＦＧＦ−２）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、ケラチノサイト増殖因子、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）、インスリン様増殖因子、ｄｅｓ（１−３）−ＩＧＦ−Ｉ（脳ＩＧＦ−Ｉ）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、エオタキシン、ＣＸＣリガンド１（ＧＲＯα）、インターロイキン１受容体アンタゴニスト（ＩＬ−１ＲＡ）、インターロイキン１アルファ（ＩＬ−１α）、白血病抑制因子（ＬＩＦ）、胎盤増殖因子（ＰＬＧＦ）、ケモカインリガンド５（ＲＡＮＴＥＳ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、ストローマ細胞由来因子（ＳＤＦ１α）、及び腫瘍壊死因子（ＴＮＦβ）のいずれかを含み得る。
【００６３】
[0090]一部の実施形態では、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）は、いかなるステップにおいても組成物に添加されることはなく、したがって、組成物を実質的に無ＤＭＳＯのままにし、ＤＭＳＯが有し得る、任意の潜在的に有害な効果が回避される。組み合わせた組成物は、次に、例えば、超低温フリーザー中の低温バイアルにおいて、低温学的に貯蔵され得る。低温貯蔵は、−６０℃未満又は−８０℃未満の温度で制御され得る。
【００６４】
[0091]組成物（例えば本明細書に記載の実施形態）を生産する方法は、第４の実施形態に従って記載される。図１６のステップ３００では、ヒト臍帯血を含み、第１の体積ＶＵＣを有する試料が、得られる。ヒト臍帯血は、典型的には赤血球、赤血球以外の細胞、及び非細胞物質を含む。ステップ３０２では、ヒト臍帯血を含む試料は、体積ＶＰＣのＰｒｅｐａＣｙｔｅ（登録商標）−ＣＢ溶液（Ｂｉｏ−Ｅ、ＬＬＣ、Ｂｌｏｏｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＮ）又は同等な凝集剤若しくは沈殿剤と組み合わされる。体積ＶＵＣ及びＶＰＣのうちのいずれか又は両方は、ＶＵＣ／ＶＰＣ比が約０．６０〜約１．７５の間であるように、選択され得る。一部の実施形態では、ＶＵＣ／ＶＰＣ比は約０．７５〜約１．２５の間である。一部の実施形態では、ＶＵＣ／ＶＰＣ比は約０．６０〜約１．１０の間である。一部の実施形態では、ＶＵＣ／ＶＰＣ比は約１．２５〜約１．７５の間である。組み合わせた体積ＶＵＣ及びＶＰＣは、上清が形成されるまで又は少なくとも２つの明確な層が形成されるまで少なくとも約２０分間又は少なくとも約３０分間乱されることなく静置させられる。ステップ３０４では、遠心力にさらされるように構成される容器３６８（例えば、遠心チューブ）は、単核球を単離するために構成される試薬３７０で部分的に充填され、試薬３７０は体積ＶＲを有する（図１７）。一部の実施形態では、試薬３７０は、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ（登録商標）Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ  Ｍｅｄｉａ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｂｉｏ−Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）又は同等な媒体を含む。一部の実施形態では、試薬３７０は、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ（登録商標）ＰＬＵＳ  Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ  Ｍｅｄｉａを含む。一部の実施形態では、試薬３７０は、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ（登録商標）ＰＲＥＭＩＵＭ  Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ  Ｍｅｄｉａを含む。一部の実施形態では、試薬３７０は、約１．０グラム／ｍｌ〜約１．３グラム／ｍｌの間の密度を有する。一部の実施形態では、試薬３７０は、約１．０７グラム／ｍｌ〜約１．０９グラム／ｍｌの間の密度を有する。一部の実施形態では、試薬３７０は、約１．０７３グラム／ｍｌ〜約１．０８４グラム／ｍｌの間の密度を有する。試薬３７０の体積ＶＲは、容器３６８中の第１の層３７２（例えば、底部層）を表す。さらに、ステップ３０４の一部として、ステップ３０２において生産される体積ＶＳの上清３７６を含む第２の層３７４は、図１７に示されるとおり、容器３６８中の第１の層３７２に積層される。試薬３７０の層３７２は、ある高さ、又はその高さの少なくとも６７％であるカラム高ＣＨＲ、又は上清３７６の層３７４のカラム高ＣＨＳで積層される。一部の実施形態では、試薬３７０の層３７２のカラム高ＣＨＲは、上清３７６の層３７４のカラム高ＣＨＳの少なくとも７５％である。一部の実施形態では、試薬３７０の層３７２のカラム高ＣＨＲは、上清３７６の層３７４のカラム高ＣＨＳの少なくとも８５％である。一部の実施形態では、試薬３７０の層３７２のカラム高ＣＨＲは、上清３７６の層３７４のカラム高ＣＨＳの約３０％〜約１３５％の間である。一部の実施形態では、��薬３７０の層３７２のカラム高ＣＨＲは、上清３７６の層３７４のカラム高ＣＨＳの約５０％〜約１００％の間である。一部の実施形態では、試薬３７０の層３７２のカラム高ＣＨＲは、上清３７６の層３７４のカラム高ＣＨＳの約７５％〜約１００％の間である。２つの層３７２、３７４の間の明確な界面が最初に所望される場合、第２の層３７４は、緩徐な又は少なくとも穏やかな又は非破裂的な様式（例えば、緩徐なスピードでのピペッティング）で、第１の層３７２上に添加されるべきである。
【００６５】
[0092]ステップ３０６では、容器３６８（図１８）及びその内容物（例えば、第１の層３７２及び第２の層３７４）に十分な遠心力成分３７８がかけられ、遠心力成分３７８が閉鎖容器端３８０に向かい、図１９に示されるとおり、層が形成される。図１８は、中心点３８４の周囲の環状経路３８２における容器３６８を回転させる遠心分離機４６の基本的な力学を示す。容器３６８は、例えば、回転させるため適切な位置において遠心分離機４６内に慎重に配置され得る。図１９では、層３８６は、顆粒球及び赤血球を含み、図１７の第１の層３７２から残存する、試薬３７０を含有する層３７２ａの下に移動されている。層３８８は単核球を実質的に含み、層３９０は血漿及び血小板を実質的に含む。一部の実施形態では、ステップ３０６は、容器３６８及びその内容物に少なくとも約３５０倍の重力加速度をかける遠心分離機を使用して実施されてもよい。一部の実施形態では、ステップ３０６は、容器３６８及びその内容物に少なくとも約４００倍の重力加速度をかける遠心分離機を使用して実施されてもよい。一部の実施形態では、ステップ３０６は、容器３６８及びその内容物に少なくとも約４５０倍の重力加速度をかける遠心分離機を使用して実施されてもよい。一部の実施形態では、ステップ３０６は、容器３６８及びその内容物に少なくとも約６００倍の重力加速度をかける遠心分離機を使用して実施されてもよい。一部の実施形態では、ステップ３０６は、容器３６８及びその内容物に少なくとも約８００倍の重力加速度をかける遠心分離機を使用して実施されてもよい。一部の実施形態では、ステップ３０６は、容器３６８及びその内容物に少なくとも約１，４００倍の重力加速度をかける遠心分離機を使用して実施されてもよい。一部の実施形態では、遠心分離を約５分間〜約３０分間実施して所望の結果を達成してもよい。
【００６６】
[0093]内容物における遠心力の量及び／又は遠心分離機が操作される時間の量を制御することに加えて、利用者は、遠心分離機の速度増加及び速度減少；換言すれば、停止状態から選択された遠心力に達するまで必要とされる時間及び公称の選択された遠心力から停止状態に達するまで必要とされる時間の制御も選択し得る。従前の遠心分離では、これは、所望の定常操作速度に達するまでの回転スピード（例えば、ＲＰＭ）のスピードアップ及び停止状態への回転スピード（所望の定常操作速度から）のスローダウンに対応する。これらの２つの要素のうちの１つ又は両方の制御を使用して、遠心分離の有効性をさらに至適化することができる。実質的にゼロ遠心力から所望の遠心力に速度増加する時間は、約３０秒間〜約１５分間の間又は約１分間〜約５分間の間であってもよい。所望の遠心力から実質的にゼロ遠心力に速度減少する時間は、約３０秒間〜約２０分間の間又は約１分間〜約１０分間の間であってもよい。
【００６７】
[0094]ステップ３０８では、単核球層３８８からの単核球が、容器３６８から除去され、乳酸加リンゲル液と組み合わされて、単核球溶液が作り出される。容器３６８からの単核球の除去の前、層３９０が最初に除去されてもよく（図２０）、このようにして、層３８８の除去が容易となる。例えば、無菌ピペットの使用によって層３９０を除去する場合、層３８８が乱されないように配慮してもよい。ステップ３０８では、単核球層３８８からの単核球が、乳酸加リンゲル液と積極的に（しかし、穏やかに）混合される。単核球はまた、乳酸加リンゲル液で１回、２回、又はそれ以上の回数で洗浄されてもよい。一部の実施形態では、単核球溶液は、非増殖（ｎｏｎ−ｅｘｐａｎｄｅｄ）細胞集団を実質的に含む。一部の実施形態では、単核球溶液は、非プール細胞集団を含む。血小板又は血漿タンパク質によるいかなる不要な混入も最小化するため、層３８８からの単核球を除去する前に、層３９０が実質的に除去されることに注意すべきである。層３８８を除去する場合、層３７２ａが実質的に乱されず残されて、このようにして層３８６における顆粒球によるいかなる不要な混入も最小化されることにも注意すべきである。
【００６８】
[0095]ステップ３１０では、一部の単核球溶液又は実質的に全ての単核球溶液のいずれかの体積ＶＭは、体積ＶＭにおける生細胞の数ＮＬを推定するため使用される。一部の実施形態では、推定は、ＣＤ３４＋カウントを実施することによって行われる。一部の実施形態では、推定は、総有核細胞（ＴＮＣ）カウントを実施することによって行われる。一部の実施形態では、推定は、自動細胞カウンターで少なくとも部分的に行われる。代替的な方法は、トリパンブルー染色後の血球計数、ＡＴＰ試験、カルセインＡＭ、クローン原性アッセイ、エチジウムホモ二量体アッセイ、エバンスブルー、二酢酸フルオレセイン加水分解／ヨウ化プロピジウム染色（ＦＤＡ／ＰＩ染色）、フローサイトメトリー、ホルマザン−ベース−アッセイ（ＭＴＴ／ＸＴＴ）、緑色蛍光タンパク質、乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）、メチルバイオレット、ヨウ化プロピジウムＤＮＡ染色（壊死性、アポトーシス性、及び正常細胞を区別するため）、レサズリン、死細胞の細胞膜だけを横断するトリパンブルー、又はＴＵＮＥＬアッセイを含む細胞カウントを実施するため使用してもよい。ステップ３１０の終わりに、実質的に全ての乳酸加リンゲル液は、体積ＶＭから除去されてもよい。
【００６９】
[0096]ステップ３１２では、組み合わせた組成物にアルブミンが添加される。一部の実施形態では、組み合わせた組成物の１ミリリットル当たり約１０ｍｇ〜約１５０ｍｇの間のアルブミンが添加され得る。一部の実施形態では、組み合わせた組成物の１ミリリットル当たり約１０ｍｇ〜約１２０ｍｇの間のアルブミンが添加され得る。一部の実施形態では、組み合わせた組成物の１ミリリットル当たり約５０ｍｇ〜約１５０ｍｇの間のアルブミンが添加され得る。一部の実施形態では、組み合わせた組成物の１ミリリットル当たり約５０ｍｇ〜約１２０ｍｇの間のアルブミンが添加され得る。一部の実施形態では、組み合わせた組成物の１ミリリットル当たり約８０ｍｇ〜約１５０ｍｇの間のアルブミンが添加され得る。一部の実施形態では、組み合わせた組成物の１ミリリットル当たり約８０ｍｇ〜約１２０ｍｇの間のアルブミンが添加され得る。一部の実施形態では、組み合わせた組成物の１ミリリットル当たり約１０５ｍｇ〜約１５０ｍｇの間のアルブミンが添加され得る。一部の実施形態では、組み合わせた組成物の１ミリリットル当たり約１０５ｍｇ〜約１２０ｍｇの間のアルブミンが添加され得る。一部の実施形態では、組み合わせた組成物の１ミリリットル当たり約１５ｍｇ〜約３０ｍｇの間のアルブミンが添加され得る。一部の実施形態では、組み合わせた組成物の１ミリリットル当たり約１８ｍｇ〜約２５ｍｇの間のアルブミンが添加され得る。一部の実施形態では、組み合わせた組成物の１ミリリットル当たり約２０ｍｇのアルブミンが添加され得る。
【００７０】
[0097]一部の実施形態では、デキストロース溶液中の低分子量デキストランは、アルブミンの添加の間又は前に、単核球溶液の少なくとも一部の体積ＶＭに添加される。一部の実施形態では、デキストロース溶液中の低分子量デキストランの量は、生細胞の推定数ＮＬに少なくとも部分的に基づいて、計算され、推定され又は決定される。一部の実施形態では、添加されるデキストロース溶液中の低分子量デキストランの体積ＶＤＤの計算、推定又は決定は、単核球溶液の少なくとも一部中の細胞のおよそ７５％が、凍結及び解凍後に生存可能であるとの仮定に少なくとも部分的に基づいていてもよい。一部の実施形態では、体積ＶＤＤの計算、推定又は決定は、１ミリリットル当たり約１００，０００個の生細胞から約７５００万個の生細胞の間の意図される生細胞濃度に少なくとも部分的に基づいていてもよい。一部の実施形態では、体積ＶＤＤの計算、推定又は決定は、１ミリリットル当たり約７５０，０００個の生細胞から約３０００万個の生細胞の間の意図される生細胞濃度に少なくとも部分的に基づいていてもよい。一部の実施形態では、細胞は、低温で貯蔵され得る。一部の実施形態では、体積ＶＤＤの計算、推定又は決定は、１ミリリットル当たり約１０００万個の生細胞から約３０００万個の生細胞の間の意図される生細胞濃度に少なくとも部分的に基づいていてもよい。一部の実施形態では、体積ＶＤＤの計算、推定又は決定は、１ミリリットル当たり約１０００万個の生細胞から約２０００万個の生細胞の間の意図される生細胞濃度に少なくとも部分的に基づいていてもよい。一部の実施形態では、低温貯蔵は、約−６０℃未満である。一部の実施形態では、低温貯蔵は、約−８０℃未満である。
【００７１】
[0098]一部の実施形態では、組み合わせた組成物のｐＨは、必要な場合、所望の範囲内のｐＨを作り出すため、調整されてもよい。一部の実施形態では、ｐＨは、重炭酸ナトリウム、例えば、重炭酸ナトリウム粉末を、添加することによって調整される。一部の実施形態では、ｐＨは、重炭酸カルシウム、例えば、重炭酸カルシウム溶液を添加することによって調整される。一部の実施形態では、ｐＨは４．１〜８．５の間に調整又は維持される。一部の実施形態では、ｐＨは４．１〜７．２の間に調整又は維持される。一部の実施形態では、ｐＨは４．１〜６．２の間に調整又は維持される。一部の実施形態では、ｐＨは５．０〜７．４の間に調整又は維持される。一部の実施形態では、ｐＨは５．０〜７．２の間に調整又は維持される。一部の実施形態では、ｐＨは５．０〜６．２の間に調整又は維持される。
【００７２】
[0099]一部の実施形態では、単核球溶液は、幹細胞を含む。一部の実施形態では、幹細胞は、造血性幹細胞（ＨＳＣ）を含む。一部の実施形態では、幹細胞は、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）を含む。
【００７３】
[00100]一部の実施形態では、１つ又は複数の生物活性剤が、組成物に添加され得る。１つ又は複数の生物活性剤は、サイトカイン又は増殖因子を含み得、ヒト臍帯血に由来し得る。一部の実施形態では、１つ又は複数の生物活性剤は、ステップ３００に記載されるヒト臍帯血を含む同じ試料から得られ又は由来し得る。一部の実施形態では、１つ又は複数の生物活性剤は、ステップ３００に記載されるヒト臍帯血を含む試料ではないヒト臍帯血から得られ又は由来し得る。一部の実施形態では、１つ又は複数の生物活性剤は、ステップ３００に記載されるヒト臍帯血を含む試料とは異なるドナーからのヒト臍帯血から得られ又は由来し得る。一部の実施形態では、１つ又は複数の生物活性剤は、市販ヒトアルブミン又は市販ヒトアルブミン血清から得る又は由来する。
【００７４】
[00101]一部の実施形態では、１つ又は複数の生物活性剤は、サイトカイン又は増殖因子を含み得るが、限定されない。生物活性剤は、マクロファージ炎症タンパク質アルファ（ＭＩＰ−１α）、マクロファージ炎症タンパク質ベータ（ＭＩＰ−１β）、インターフェロンガンマ誘導性タンパク質１０（ＩＰ−１０）を含むケモカイン、インターロイキン１ベータ（ＩＬ−１β）、インターロイキン２（ＩＬ−２）、インターロイキン４（ＩＬ−４）、インターロイキン５（ＩＬ−５）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、インターロイキン７（ＩＬ−７）、インターロイキン８（ＩＬ−８）、インターロイキン９（ＩＬ−９）、インターロイキン１０（ＩＬ−１０）、インターロイキン１２（ＩＬ−１２）、インターロイキン１３（ＩＬ−１３）、インターロイキン１５（ＩＬ−１５）、インターロイキン１７（ＩＬ−１７）、インターロイキン１８（ＩＬ−１８）、インターロイキン２１（ＩＬ−２１）、インターロイキン２２（ＩＬ−２２）、インターロイキン２３（ＩＬ−２３）、インターロイキン２７（ＩＬ−２７）、インターロイキン３１（ＩＬ−３１）を含むインターロイキン、インターフェロンアルファ（ＩＮＦα）を含むインターフェロン、リンホカイン、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、幹細胞因子（ＫＬ）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、神経増殖因子、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、線維芽細胞増殖因子２（ＦＧＦ−２）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、ケラチノサイト増殖因子、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）、インスリン様増殖因子、ｄｅｓ（１−３）−ＩＧＦ−Ｉ（脳ＩＧＦ−Ｉ）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、エオタキシン、ＣＸＣリガンド１（ＧＲＯα）、インターロイキン１受容体アンタゴニスト（ＩＬ−１ＲＡ）、インターロイキン１アルファ（ＩＬ−１α）、白血病抑制因子（ＬＩＦ）、胎盤増殖因子（ＰＬＧＦ）、ケモカインリガンド５（ＲＡＮＴＥＳ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、ストローマ細胞由来因子（ＳＤＦ１α）、及び腫瘍壊死因子（ＴＮＦβ）のいずれかを含み得る。
【００７５】
[00102]一部の実施形態では、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）は、いかなるステップにおいても組成物に添加されることはなく、したがって、組成物を実質的に無ＤＭＳＯのままにし、ＤＭＳＯが有し得る、任意の潜在的に有害な効果が回避される。組み合わせた組成物は、次に、例えば、超低温フリーザー中の低温バイアルにおいて、低温学的に貯蔵され得る。低温貯蔵は、−６０℃未満又は−８０℃未満の温度で制御され得る。
【００７６】
[00103]組成物（例えば本明細書に記載の実施形態）を生産する方法は、第５の実施形態に従って記載される。図２１のステップ４００では、ヒト臍帯血を含み、第１の体積ＶＵＣを有する試料が、得られる。ヒト臍帯血は、典型的には赤血球、赤血球以外の細胞、及び非細胞物質を含む。ステップ４０２では、ヒト臍帯血を含む試料は、体積ＶＰＣのＰｒｅｐａＣｙｔｅ（登録商標）−ＣＢ溶液（Ｂｉｏ−Ｅ、ＬＬＣ、Ｂｌｏｏｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＮ）又は同等な凝集剤若しくは沈殿剤と組み合わされる。体積ＶＵＣ及びＶＰＣのうちのいずれか又は両方は、ＶＵＣ／ＶＰＣ比が約０．６０〜約１．７５の間であるように、選択され得る。一部の実施形態では、ＶＵＣ／ＶＰＣ比は約０．７５〜約１．２５の間である。一部の実施形態では、ＶＵＣ／ＶＰＣ比は約０．６０〜約１．１０の間である。組み合わせた体積ＶＵＣ及びＶＰＣは、上清が形成されるまで又は少なくとも２つの明確な層が形成されるまで少なくとも約２０分間又は少なくとも約３０分間乱されることなく静置させられる。ステップ４０４では、遠心力にさらされるように構成される容器４６８（例えば、遠心チューブ）は、単核球を単離するために構成される試薬４７０で部分的に充填され、試薬４７０は体積ＶＲを有する（図２２）。一部の実施形態では、試薬４７０は、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ（登録商標）Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ  Ｍｅｄｉａ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｂｉｏ−Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）又は同等な媒体を含む。一部の実施形態では、試薬４７０は、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ（登録商標）ＰＬＵＳ  Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ  Ｍｅｄｉａを含む。一部の実施形態では、試薬４７０は、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ（登録商標）ＰＲＥＭＩＵＭ  Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ  Ｍｅｄｉａを含む。一部の実施形態では、試薬４７０は、約１．０グラム／ｍｌ〜約１．３グラム／ｍｌの間の密度を有する。一部の実施形態では、試薬４７０は、約１．０７グラム／ｍｌ〜約１．０９グラム／ｍｌの間の密度を有する。一部の実施形態では、試薬４７０は、約１．０７３グラム／ｍｌ〜約１．０８４グラム／ｍｌの間の密度を有する。試薬４７０の体積ＶＲは、容器４６８中の第１の層４７２（例えば、底部層）を表す。さらに、ステップ４０４の一部として、ステップ４０２において生産される体積ＶＳの上清４７６を含む第２の層４７４は、図２２に示されるとおり、容器４６８中の第１の層４７２に積層される。試薬４７０の層４７２は、ある高さ、又はその高さの少なくとも６７％であるカラム高ＣＨＲ、又は上清４７６の層４７４のカラム高ＣＨＳで積層される。一部の実施形態では、試薬４７０の層４７２のカラム高ＣＨＲは、上清４７６の層４７４のカラム高ＣＨＳの少なくとも７５％である。一部の実施形態では、試薬４７０の層４７２のカラム高ＣＨＲは、上清４７６の層４７４のカラム高ＣＨＳの少なくとも８５％である。一部の実施形態では、試薬４７０の層４７２のカラム高ＣＨＲは、上清４７６の層４７４のカラム高ＣＨＳの約３０％〜約１３５％の間である。一部の実施形態では、試薬４７０の層４７２のカラム高ＣＨＲは、上清４７６の層４７４のカラム高Ｃ���Ｓの約５０％〜約１００％の間である。一部の実施形態では、試薬４７０の層４７２のカラム高ＣＨＲは、上清４７６の層４７４のカラム高ＣＨＳの約７５％〜約１００％の間である。２つの層４７２、４７４の間の明確な界面が最初に所望される場合、第２の層４７４は、緩徐な又は少なくとも穏やかな又は非破裂的な様式（例えば、緩徐なスピードでのピペッティング）で、第１の層４７２上に添加されるべきである。
【００７７】
[00104]ステップ４０６では、容器４６８（図２３）及びその内容物（例えば、第１の層４７２及び第２の層４７４）に十分な遠心力成分４７８がかけられ、遠心力成分４７８が閉鎖容器端４８０に向かい、図２４に示されるとおり、層が形成される。図２３は、中心点４８４の周囲の環状経路４８２における容器４６８を回転させる遠心分離機４６の基本的な力学を示す。容器４６８は、例えば、回転させるため適切な位置において遠心分離機４６内に慎重に配置され得る。図２４では、層４８６は、顆粒球及び赤血球を含み、図２２の第１の層４７２から残存する、試薬４７０を含有する層４７２ａの下に移動されている。層４８８は単核球を実質的に含み、層４９０は血漿及び血小板を実質的に含む。一部の実施形態では、ステップ４０６は、容器４６８及びその内容物に少なくとも約３５０倍の重力加速度をかける遠心分離機を使用して実施されてもよい。一部の実施形態では、ステップ４０６は、容器４６８及びその内容物に少なくとも約４００倍の重力加速度をかける遠心分離機を使用して実施されてもよい。一部の実施形態では、ステップ４０６は、容器４６８及びその内容物に少なくとも約４５０倍の重力加速度をかける遠心分離機を使用して実施されてもよい。一部の実施形態では、ステップ４０６は、容器４６８及びその内容物に少なくとも約６００倍の重力加速度をかける遠心分離機を使用して実施されてもよい。一部の実施形態では、ステップ４０６は、容器４６８及びその内容物に少なくとも約８００倍の重力加速度をかける、遠心分離機を使用して実施されてもよい。一部の実施形態では、ステップ４０６は、容器４６８及びその内容物に少なくとも約１，４００倍の重力加速度をかける遠心分離機を使用して実施されてもよい。一部の実施形態では、遠心分離を約５分間〜約３０分間実施して所望の結果を達成してもよい。
【００７８】
[00105]内容物における遠心力の量及び／又は遠心分離機が操作される時間の量を制御することに加えて、利用者は、遠心分離機の速度増加及び速度減少；換言すれば、停止状態から選択された遠心力に達するまで必要とされる時間及び公称の選択された遠心力から停止状態に達するまで必要とされる時間の制御も選択し得る。従前の遠心分離では、これは、所望の定常操作速度に達するまでの回転スピード（例えば、ＲＰＭ）のスピードアップ及び停止状態への回転スピード（所望の定常操作速度から）のスローダウンに対応する。これらの２つの要素のうちの１つ又は両方の制御を使用して、遠心分離の有効性をさらに至適化することができる。実質的にゼロ遠心力から所望の遠心力に速度増加する時間は、約３０秒間〜約１５分間の間又は約１分間〜約５分間の間であってもよい。所望の遠心力から実質的にゼロ遠心力に速度減少する時間は、約３０秒間〜約２０分間の間又は約１分間〜約１０分間の間であってもよい。
【００７９】
[00106]ステップ４０８では、単核球層４８８からの単核球が、容器４６８から除去され、乳酸加リンゲル液と組み合わされて、単核球溶液が作り出される。容器４６８からの単核球の除去の前、層４９０が最初に除去されてもよく（図２５）、このようにして、層４８８の除去が容易となる。例えば、無菌ピペットの使用によって層４９０を除去する場合、層４８８が乱されないように配慮してもよい。ステップ４０８では、単核球層４８８からの単核球が、乳酸加リンゲル液と積極的に（しかし、穏やかに）混合される。単核球はまた、乳酸加リンゲル液で１回、２回、又はそれ以上の回数で洗浄されてもよい。一部の実施形態では、単核球溶液は、非増殖（ｎｏｎ−ｅｘｐａｎｄｅｄ）細胞集団を実質的に含む。一部の実施形態では、単核球溶液は、非プール細胞集団を含む。血小板又は血漿タンパク質によるいかなる不要な混入も最小化するため、層４８８からの単核球を除去する前に、層４９０が実質的に除去されることに注意すべきである。層４８８を除去する場合、層４７２ａが実質的に乱されず残されて、このようにして層４８６における顆粒球によるいかなる不要な混入も最小化されることにも注意すべきである。
【００８０】
[00107]ステップ４１０では、一部の単核球溶液又は実質的に全ての単核球溶液のいずれかの体積ＶＭは、体積ＶＭにおける生細胞の数ＮＬを推定するため使用される。一部の実施形態では、推定は、ＣＤ３４＋カウントを実施することによって行われる。一部の実施形態では、推定は、総有核細胞（ＴＮＣ）カウントを実施することによって行われる。一部の実施形態では、推定は、自動細胞カウンターで少なくとも部分的に行われる。代替的な方法は、トリパンブルー染色後の血球計数、ＡＴＰ試験、カルセインＡＭ、クローン原性アッセイ、エチジウムホモ二量体アッセイ、エバンスブルー、二酢酸フルオレセイン加水分解／ヨウ化プロピジウム染色（ＦＤＡ／ＰＩ染色）、フローサイトメトリー、ホルマザンベース−アッセイ（ＭＴＴ／ＸＴＴ）、緑色蛍光タンパク質、乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）、メチルバイオレット、ヨウ化プロピジウムＤＮＡ染色（壊死性、アポトーシス性、及び正常細胞を区別するため）、レサズリン、死細胞の細胞膜だけを横断するトリパンブルー、又はＴＵＮＥＬアッセイを含む細胞カウントを実施するため使用してもよい。ステップ４１０の終わりに、実質的に全ての乳酸加リンゲル液は、体積ＶＭから除去されてもよい。
【００８１】
[00108]一部の実施形態では、デキストロース溶液中の低分子量デキストランは、単核球溶液の少なくとも一部の体積ＶＭに添加される。一部の実施形態では、デキストロース溶液中の低分子量デキストランの量は、生細胞の推定数ＮＬに少なくとも部分的に基づいて、計算され、推定され又は決定される。一部の実施形態では、添加されるデキストロース溶液中の低分子量デキストランの体積ＶＤＤの計算、推定又は決定は、単核球溶液の少なくとも一部中の細胞のおよそ７５％が、凍結及び解凍後に生存可能であるとの仮定に少なくとも部分的に基づいていてもよい。一部の実施形態では、体積ＶＤＤの計算、推定又は決定は、１ミリリットル当たり約１００，０００個の生細胞から約７５００万個の生細胞の間の意図される生細胞濃度に少なくとも部分的に基づいていてもよい。一部の実施形態では、体積ＶＤＤの計算、推定又は決定は、１ミリリットル当たり約７５０，０００個の生細胞から約３０００万個の生細胞の間の意図される生細胞濃度に少なくとも部分的に基づいていてもよい。一部の実施形態では、細胞は、低温で貯蔵され得る。一部の実施形態では、体積ＶＤＤの計算、推定又は決定は、１ミリリットル当たり約１０００万個の生細胞から約３０００万個の生細胞の間の意図される生細胞濃度に少なくとも部分的に基づいていてもよい。一部の実施形態では、体積ＶＤＤの計算、推定又は決定は、１ミリリットル当たり約１０００万個の生細胞から約２０００万個の生細胞の間の意図される生細胞濃度に少なくとも部分的に基づいていてもよい。一部の実施形態では、低温貯蔵は、約−６０℃未満である。一部の実施形態では、低温貯蔵は、約−８０℃未満である。
【００８２】
[00109]一部の実施形態では、組み合わせた組成物のｐＨは、必要な場合、所望の範囲内のｐＨを作り出すため、調整されてもよい。一部の実施形態では、ｐＨは、重炭酸ナトリウム、例えば、重炭酸ナトリウム粉末を、添加することによって調整される。一部の実施形態では、ｐＨは、重炭酸カルシウム、例えば、重炭酸カルシウム溶液を添加することによって調整される。一部の実施形態では、ｐＨは４．１〜８．５の間に調整又は維持される。一部の実施形態では、ｐＨは４．１〜７．２の間に調整又は維持される。一部の実施形態では、ｐＨは４．１〜６．２の間に調整又は維持される。一部の実施形態では、ｐＨは５．０〜７．４の間に調整又は維持される。一部の実施形態では、ｐＨは５．０〜７．２の間に調整又は維持される。一部の実施形態では、ｐＨは５．０〜６．２の間に調整又は維持される。
【００８３】
[00110]一部の実施形態では、単核球溶液は、幹細胞を含む。一部の実施形態では、幹細胞は、造血性幹細胞（ＨＳＣ）を含む。一部の実施形態では、幹細胞は、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）を含む。
【００８４】
[00111]一部の実施形態では、１つ又は複数の生物活性剤が、組成物に添加され得る。１つ又は複数の生物活性剤は、サイトカイン又は増殖因子を含み得、ヒト臍帯血に由来し得る。一部の実施形態では、１つ又は複数の生物活性剤は、ステップ４００に記載されるヒト臍帯血を含む同じ試料から得られ又は由来し得る。一部の実施形態では、１つ又は複数の生物活性剤は、ステップ４００に記載されるヒト臍帯血を含む試料ではないヒト臍帯血から得られ又は由来し得る。一部の実施形態では、１つ又は複数の生物活性剤は、ステップ４００に記載されるヒト臍帯血を含む試料とは異なるドナーからのヒト臍帯血から得られ又は由来し得る。一部の実施形態では、１つ又は複数の生物活性剤は、市販ヒトアルブミン又は市販ヒトアルブミン血清から得る又は由来する。
【００８５】
[00112]一部の実施形態では、１つ又は複数の生物活性剤は、サイトカイン又は増殖因子を含み得るが、限定されない。生物活性剤は、マクロファージ炎症タンパク質アルファ（ＭＩＰ−１α）、マクロファージ炎症タンパク質ベータ（ＭＩＰ−１β）、インターフェロンガンマ誘導性タンパク質１０（ＩＰ−１０）を含むケモカイン、インターロイキン１ベータ（ＩＬ−１β）、インターロイキン２（ＩＬ−２）、インターロイキン４（ＩＬ−４）、インターロイキン５（ＩＬ−５）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、インターロイキン７（ＩＬ−７）、インターロイキン８（ＩＬ−８）、インターロイキン９（ＩＬ−９）、インターロイキン１０（ＩＬ−１０）、インターロイキン１２（ＩＬ−１２）、インターロイキン１３（ＩＬ−１３）、インターロイキン１５（ＩＬ−１５）、インターロイキン１７（ＩＬ−１７）、インターロイキン１８（ＩＬ−１８）、インターロイキン２１（ＩＬ−２１）、インターロイキン２２（ＩＬ−２２）、インターロイキン２３（ＩＬ−２３）、インターロイキン２７（ＩＬ−２７）、インターロイキン３１（ＩＬ−３１）を含むインターロイキン、インターフェロンアルファ（ＩＮＦα）を含むインターフェロン、リンホカイン、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、幹細胞因子（ＫＬ）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、神経増殖因子、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、線維芽細胞増殖因子２（ＦＧＦ−２）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、ケラチノサイト増殖因子、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）、インスリン様増殖因子、ｄｅｓ（１−３）−ＩＧＦ−Ｉ（脳ＩＧＦ−Ｉ）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、エオタキシン、ＣＸＣリガンド１（ＧＲＯα）、インターロイキン１受容体アンタゴニスト（ＩＬ−１ＲＡ）、インターロイキン１アルファ（ＩＬ−１α）、白血病抑制因子（ＬＩＦ）、胎盤増殖因子（ＰＬＧＦ）、ケモカインリガンド５（ＲＡＮＴＥＳ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、ストローマ細胞由来因子（ＳＤＦ１α）、及び腫瘍壊死因子（ＴＮＦβ）のいずれかを含み得る。
【００８６】
[00113]一部の実施形態では、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）は、いかなるステップにおいても組成物に添加されることはなく、したがって、組成物を実質的に無ＤＭＳＯのままにし、ＤＭＳＯが有し得る、任意の潜在的に有害な効果が回避される。組み合わせた組成物は、次に、例えば、超低温フリーザー中の低温バイアルにおいて、低温学的に貯蔵され得る。低温貯蔵は、−６０℃未満又は−８０℃未満の温度で制御され得る。
【００８７】
[00114]図２６Ａ〜２８Ｂは、薬物処置方法における使用における本明細書に記載の実施形態を含む組成物を示す。図２６Ａ〜２６Ｃは、本明細書に記載の実施形態の組成物を使用する脊椎固定についての手順を示す。患者の脊椎５２は、固定される２つの隣接する椎骨５４、５６を含む。限定されないが、脊柱側弯症、脊椎すべり症、過後弯症、過前弯症（又は低前弯症／平背症候群（ｆｌａｔ−ｂａｃｋ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、低後弯症）、変性性椎間板疾患（ＤＤＤ）、脊髄狭窄、外傷（椎骨骨折を含む）、腫瘍、修正手術（ｒｅｖｉｓｉｏｎ  ｓｕｒｇｅｒｙ）、感染、偽関節、椎間板ヘルニア、脊椎分離症、機械的不安定性、小関節面症候群（ｆａｃｅｔ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、慢性背痛、及び放散性下肢痛を含む、いくつもの異なる病気を処置するために２つ以上の椎骨を固定することが所望され得る。図２６Ａでは、患者の椎骨５４、５６が少なくとも部分的に露出され、椎間板５８が除去される。場合によって、椎間板５８は、既に除去されていてもよく又は欠損若しくは損傷していてもよく、したがって、除去を必要としない。場合によって、少なくとも一部の椎間板は、定位置に故意に残されてもよい。場合によって、任意選択であるが、図２６Ｂでは、第１の椎骨５４と第２の椎骨５６の間に耐力デバイス６０が配置される。耐力デバイス６０は、固定ケージ又は椎体間デバイスを含み得る。図２６Ｃでは、本明細書に記載のものの任意の実施形態などの生体組成物６２は、椎骨５４、５６の間に、また適用可能な場合は、存在するのであれば椎体間デバイス中の任意のキャビティの内部を含め、耐力デバイス６０の周囲又は隣接部に配置される。生体組成物６２は、外側後溝（ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ−ｌａｔｅｒａｌ  ｇｕｔｔｅｒ）の付近に、又は外側後溝に配置されてもよい。手順には、後方腰椎椎体間固定（ＰＬＩＦ）、経椎間孔的腰椎椎体間固定（ＴＬＩＦ）、前方腰椎椎体間固定（ＡＬＩＦ）、正側方椎体間固定（ＸＬＩＦ）、直接側方椎体間固定（ＤＬＩＦ）、又は軸方向腰椎椎体間固定（ＡｌｉａＬＩＦ）が含まれ得る。適切な量の生体組成物６２は、２つの椎骨５４、５６の固定の補助に有効であるように配置される。場合によって、患者は、骨格が成熟していてもよい。場合によって、患者は、骨格が未成熟であってもよい。
【００８８】
[00115]場合によって、第１の椎骨５４と第２の椎骨５６の固定を促進、補助、又は加速する有効量の生体組成物６２は、充填される体積の約１％〜５０％の間（又は約３％〜２５％、又は約５％〜２０％、又は約１０％）を含み得る。充填される体積の残りは、骨移植物若しくは他の物質で充填され又は少なくとも部分的に充填されないまま残されてもよい。例えば、椎間板腔に約１０ｍｌ、約０．５ｍｌ〜２．０ｍｌの生体組成物６２を挿入してもよく又は椎間板腔に約５ｍｌ、約０．２５ｍｌ〜約１．０ｍｌの生体組成物６２を挿入してもよい。生体組成物６２は、充填される体積内で実質的に特定の位置に適用されてもよく或いは充填される体積内で拡散した位置に適用されてもよい。一部の実施形態では、他の物質は、合成の骨置換物、例えば、ベータリン酸三カルシウム又は細かくした骨を含む骨の実際の断片（ａｃｔｕａｌ  ｐｉｅｃｅｓ）を含む、生体組成物６２に添加され得る。
【００８９】
[00116]図２７Ａ〜２７Ｂは、本明細書に記載の実施形態の組成物を使用する固定についての手順を示す。患者の骨格系のセグメント７２は、固定される第１の骨部７４及び第２の骨部７６を含む。限定されないが、外傷（骨折を含む）、腫瘍、関節炎、強直症、変形、先天性欠陥、骨長不一致（ｂｏｎｅ  ｌｅｎｇｔｈ  ｄｉｓｃｒｅｐａｎｃｙ）、修正手術、感染、骨壊死、骨粗鬆症、偽関節、癒着不能、癒着遅延（ｄｅｌａｙｅｄ−ｕｎｉｏｎ）、及び疼痛を含む、いくつもの異なる病気を処置するために２つ以上の骨部を固定することが所望され得る。骨部７４、７６は、両方が脊椎（頚部、胸部、腰部、仙椎部）の特定の部位内であり得る又は２つの異なる部位（胸部から腰部、腰部から仙椎部、など）の部位内であり得る。図２７Ａでは、第１の骨部７４及び第２の骨部７６は、少なくとも部分的に露出される。第１及び第２の骨部７４、７６のうちの１つ又は各々における表面は、次に、例えば、切断すること（骨切り術）又は粗面処理することによって調製され得る。場合によって、耐力デバイス７５、例えば、プレート、ロッド、ネイル、スクリュー、フック、又はピンを使用して、第１の骨部７４及び第２の骨部７６を互いに対して保持し得る。図２７Ｂでは、生体組成物７８（例えば、本明細書に記載のものの任意の実施形態）は、第１及び第２の骨部７４、７６の間に、また適用可能な場合は、耐力デバイス７５の周囲又は隣接部に配置される。適切な量の生体組成物７８は、第１及び第２の骨部７４、７６の固定の補助に有効であるように配置される。骨格系の任意の骨は、生体組成物７８を利用している間に固定され得る。場合によって、患者は、骨格が成熟していてもよい。場合によって、患者は、骨格が未成熟であってもよい。
【００９０】
[00117]場合によって、第１の骨部７４と第２の骨部７６の固定を促進、補助、又は加速する有効量の生体組成物７８は、充填される体積の約１％〜５０％の間（又は約３％〜２５％、又は約５％〜２０％、又は約１０％）を含み得る。充填される体積の残りは、骨移植物若しくは他の物質で充填され又は少なくとも部分的に充填されないまま残されてもよい。生体組成物７８は、充填される体積内で実質的に特定の位置に適用されてもよく或いは充填される体積内で拡散した位置に適用されてもよい。一部の実施形態では、他の物質は、合成の骨置換物、例えば、ベータリン酸三カルシウム又は細かくした骨を含む骨の実際の断片を含む、生体組成物７８に添加され得る。
【００９１】
[00118]図２８Ａ〜２８Ｂは、患者の領域８２における軟部組織８４の治癒又は成長増大（ｇｒｏｗｔｈ  ａｕｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ）についての手順を示す。生体組成物８６（例えば、本明細書に記載のものの任意の実施形態）は、軟部組織８４の内部、付近、又は隣接部に配置される。代替的な手順では、部分的な又は完全な硬組織も又は代わりに生体組成物８６で処置され得る。場合によって、処置される患者は少なくともいくつかのがん性細胞を有し、生体組成物８６はがん性細胞の内部、付近又は隣接部に配置される。場合によって、処置される患者は除去された少なくともいくつかのがん性細胞を有し、且つ生体組成物８６はがん性細胞の以前の位置（元の部位）の内部、付近又は隣接部に配置される。がん患者又はポストがん患者（ｐｏｓｔ−ｃａｎｃｅｒ  ｐａｔｉｅｎｔ）において、がんは、限定されないが、リンパ管腫瘍を含むリンパ腺がん、軟部組織肉腫、脂肪組織腫瘍、筋肉組織腫瘍、末梢神経腫瘍、線維組織腫瘍、関節組織腫瘍、及び血管腫瘍を含み得る。場合によって、生体組成物は、脈管再構築（例えば、血管）のため使用され得る。処置される患者には、成人又は小児科患者が含まれ得る。場合によって、軟部組織８４の治癒又は成長増大を促進する有効量の生体組成物８６は、少なくとも約０．２５ｍｌ、又は約０．２５ｍｌ〜約５ｍｌの間、又は約０．２５ｍｌ〜約２ｍｌの間を含み得る。
【００９２】
[00119]臍帯血以外の他の供給源が、本明細書に記載の組成物に関して可能であり、羊水、末梢血、臍帯組織、骨髄、脂肪組織、及び中枢神経系（ＣＮＳ）液を含むが、限定されない。
【００９３】
[00120]以前に言及された手順に加えて、他の手順を実施して、本明細書に記載の実施形態の組成物及び製造の方法を組み込み得、それには、真性糖尿病及び／又はその関連する症状の処置のための手順、糖尿病性ニューロパチーの処置のための手順、糖尿病性潰瘍の処置のための手順、上皮性、真皮性、又は皮下性の糖尿病性潰瘍の処置のための手順、慢性痛を有する関節を含む、関節の疼痛処理のための手順、腱炎の処置のための手順、折れた軟骨の処置のための手順、腱弛緩、例えば、肩関節、足首関節、膝関節、臀部関節、及び肘関節が含まれるが、限定されない、関節における腱弛緩の処置のための手順、白血病の処置のための手順、リンパ腫の処置のための手順、ミエローマの処置のための手順、他のがんの処置のための手順、他の上皮性、真皮性、又は皮下性の障害又は疾患のための手順、或いはパーキンソン病及び脳腫瘍を含む、ニューロンに対するダメージに関連する手順が含まれるが、限定されない。手順を実施して、腫瘍サイズを減少させるため、本明細書に記載の実施形態の組成物及び製造の方法を組み込み得る。一部の実施形態では、組成物は、硬膜外適用、経包膜適用（ｔｒａｎｓｔｈｅｃａｌ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ）、静脈内（ＩＶ）適用、又は直接部位適用を含む、他の様式で添加され得る。
【００９４】
[00121]実施形態が示され及び記載されてきたが、様々な改変が、本明細書に開示された発明の概念の範囲から逸脱することなく、為され得る。
【００９５】
[00122]本明細書に開示された範囲には、任意の及び全ての重複する、部分的な範囲、及びその組み合わせも包含される。例えば、「まで（ｕｐ  ｔｏ）」、「少なくとも（ａｔ  ｌｅａｓｔ）」、「より多く（ｇｒｅａｔｅｒ  ｔｈａｎ）」、「未満（ｌｅｓｓ  ｔｈａｎ）」、「間（ｂｅｔｗｅｅｎ）」などの語には、列挙された数が含まれる。本明細書に使用される「およそ（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」、「約（ａｂｏｕｔ）」、及び「実質的（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ）」などの用語によって先行される数には、列挙された数（例えば、約１０％＝１０％）が含まれ、依然として所望の機能を実施する又は所望の結果を達成する指定されている量に近い量も表す。例えば、用語「およそ」、「約」及び「実質的」は、指定されている量の１０％未満内、５％未満内、１％未満内、０．１％未満内、及び、０．０１％未満内である量を指し得る。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６Ａ】
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【図２６Ｂ】
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【図２６Ｃ】
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【図２７Ａ】
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【図２７Ｂ】
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【図２８Ａ】
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【図２８Ｂ】
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【国際調査報告】
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