(57)【要約】  本発明は、等張溶液に難溶性である水溶性ペプチドを含む組成物であって、向上されたバイオアベイラビリティを呈し、注射部位反応を含む有害効果が低減された、組成物を提供する。また、限定されるものではないが、がん、２型糖尿病、先端巨大症、代謝障害、内分泌障害、外分泌腫瘍、及びホルモン関連腫瘍を含む疾患を治療するためにそのような組成物を使用するための方法も開示される。また、有害な注射部位反応を低減し、バイオアベイラビリティを改善する方法も開示される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ベルドレオチド又はその薬学的に許容される塩、
薬学的に許容される担体又は希釈剤、及び
環状多糖若しくはデキストロース、又はそれらの組み合わせである、賦形剤
を含む、医薬組成物。
【請求項２】
薬学的に許容される塩が、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、クエン酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、サリチル酸塩、ｐ−アミノサリチル酸塩、リンゴ酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、アスコルビン酸塩、マレイン酸塩、スルホン酸塩、ホスホン酸塩、過塩素酸塩、硝酸塩、ギ酸塩、プロピオン酸塩、グルコン酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、パモ酸塩、ヒドロキシマレイン酸塩、ピルビン酸塩、フェニル酢酸塩、安息香酸塩、ｐ−アミノ安息香酸塩、ｐ−ヒドロキシ安息香酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、亜硝酸塩、ヒドロキシエタンスルホン酸塩、エチレンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、ナフチルスルホン酸塩、スルファニル酸塩、カンファースルホン酸塩、マンデル酸塩、ｏ−メチルマンデル酸塩、水素−ベンゼンスルホン酸塩、ピクリン酸塩、アジピン酸塩、Ｄ−ｏ−トリル酒石酸塩、タルトロン酸塩、α−トルイル酸塩、（ｏ，ｍ，ｐ）−トルイル酸塩、ナフチルアミンスルホン酸塩、オクタン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、脂肪酸塩、他の鉱酸塩、及びカルボン酸からなる群から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
薬学的に許容される塩が、酢酸塩である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
薬学的に許容される担体又は希釈剤が、等張酢酸緩衝液、水中０．９％のＮａＣｌ又は水中０．４５％のＮａＣｌの通常生理食塩水、注射用水、等張乳酸、及びリン酸緩衝生理食塩水からなる群から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
薬学的に許容される担体が、水中０．９％のＮａＣｌ又は水中０．４５％のＮａＣｌの生理食塩水である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
薬学的に許容される担体又は希釈剤が、通常生理食塩水（水中０．９％のＮａＣｌ）である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項７】
ベルドレオチドの薬学的に許容される塩を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
ベルドレオチドの薬学的に許容される塩が、ベルドレオチド酢酸塩である、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
賦形剤が、環状多糖である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
環状多糖が、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンである、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンの、ベルドレオチド又はその薬学的に許容される塩に対する質量比が、１：１〜２０：１である、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンの、ベルドレオチド又はその薬学的に許容される塩に対する質量比が、１：１である、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンの、ベルドレオチド又は薬学的に許容される塩に対する質量比が、２０：１である、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
賦形剤が、デキストロースである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
デキストロースの、ベルドレオチド又はその薬学的に許容される塩に対する質量比が、１：１〜約５：１である、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
デキストロースの、ベルドレオチド又はその薬学的に許容される塩に対する質量比が、５：１である、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
ベルドレオチド酢酸塩を含み、薬学的に許容される担体又は希釈剤が、水中０．９％のＮａＣｌ及び水中０．４５％のＮａＣｌの生理食塩水、注射用水、及びリン酸緩衝生理食塩水からなる群から選択され、賦形剤が、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（ＨＰＢＣＤ）である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンの、ベルドレオチド酢酸塩に対する質量比が、１：１〜２０：１である、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンの、ベルドレオチド酢酸塩に対する質量比が、１０：１である、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンの、ベルドレオチド酢酸塩に対する質量比が、１５：１である、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
ベルドレオチド酢酸塩を含み、薬学的に許容される担体又は希釈剤が、等張酢酸緩衝液、注射用水、水中０．９％のＮａＣｌ又は水中０．４５％のＮａＣｌの注射用生理食塩水、等張乳酸、及びリン酸緩衝生理食塩水からなる群から選択され、デキストロースを含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
デキストロースの、ベルドレオチド酢酸塩に対する質量比が、１：１〜約５：１である、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
デキストロースの、ベルドレオチド酢酸塩に対する質量比が、５：１である、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
ベルドレオチド又はその薬学的に許容される塩、
ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（ＨＰＢＣＤ）又はデキストロースから選択される、賦形剤、及び
高分子ミクロスフェア
を含み、ベルドレオチド又は前記その薬学的に許容される塩及び前記賦形剤が、前記高分子ミクロスフェア内にカプセル封入されている、医薬組成物。
【請求項２５】
高分子ミクロスフェアが、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）を含む、請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
賦形剤が、デキストロースである、請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
デキストロースの量が、高分子ミクロスフェアの総重量に対して、約０．１重量％〜約１．０重量％である、請求項２６に記載の医薬組成物。
【請求項２８】
賦形剤が、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（ＨＰＢＣＤ）である、請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
ＨＰＢＣＤの量が、高分子ミクロスフェアの総重量に対して、約２．０重量％〜約１０重量％である、請求項２８に記載の医薬組成物。
【請求項３０】
高分子ミクロスフェアが、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）を含む、請求項２６〜２９のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項３１】
高分子ミクロスフェアの直径が、約１０ミクロン〜約１００ミクロンである、請求項３０に記載の医薬組成物。
【請求項３２】
高分子ミクロスフェアの直径が、約１０ミクロン〜約２０ミクロンである、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項３３】
高分子ミクロスフェアの表面積が、約７ｍ２／ｇ〜約１２ｍ２／ｇである、請求項２１〜２９のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項３４】
表面積が、ブルナウアー・エメット・テラー（ＢＥＴ）法によって決定される、請求項３３に記載の医薬組成物。
【請求項３５】
高分子ミクロスフェアを製造するための方法であって、
（ｉ）環状多糖若しくはデキストロース、又はそれらの組み合わせを含む、賦形剤と、ベルドレオチド又はその薬学的に許容される塩とを水中で混合して、第１の水性混合物を形成するステップ、
（ii）ポリマーを、ジクロロメタンなどの有機溶媒中に混合して、ポリマー溶液を形成するステップ、
（iii）前記第１の水性混合物を、前記ポリマー溶液中に混合して、一次エマルションを含む第１の分散体混合物を形成するステップ、
（iv）ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）を、リン酸緩衝生理食塩水又は生理食塩水中に混合して、第２の水性混合物を形成するステップ、
（ｖ）前記一次エマルションを、前記ＰＶＡの第２の水性混合物中に混合して、二重エマルションを形成し、それによって二次分散体混合物を提供するステップ、及び
（vi）前記二次分散体混合物中の前記有機溶媒を蒸発させて、ベルドレオチド又はその薬学的に許容される塩を含む、固体高分子ミクロスフェアを形成するステップ
を含む、前記方法。
【請求項３６】
賦形剤が、環状多糖であり、前記環状多糖が、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（ＨＰＢＣＤ）である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
ＨＰＢＣＤの、ペプチド又はその薬学的に許容される塩に対する質量比が、約１：１〜約１：１０である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
ＨＰＢＣＤの、ペプチド又はその薬学的に許容される塩に対する質量比が、約１：２〜約１：４である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３９】
賦形剤が、デキストロースであり、デキストロースの、ペプチド又はその薬学的に許容される塩に対する質量比が、１：４〜１：１６である、請求項３５に記載の方法。
【請求項４０】
賦形剤が、デキストロースであり、デキストロースの、ペプチド又はその薬学的に許容される塩に対する質量比が、１：６〜１：１０である、請求項３５に記載の方法。
【請求項４１】
賦形剤が、デキストロースであり、デキストロースの、ペプチド又はその薬学的に許容される塩に対する質量比が、１：８である、請求項３５に記載の方法。
【請求項４２】
ベルドレオチドの薬学的に許容される塩が、ベルドレオチド酢酸塩である、請求項３５〜４１のいずれかに記載の方法。
【請求項４３】
ポリマー溶液が、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）を含む、請求項３５〜４１のいずれかに記載の方法。
【請求項４４】
請求項４２又は４３に記載の方法によって生成される、持続放出性医薬組成物。
【請求項４５】
高分子ミクロスフェアを製造するための組成物であって、ベルドレオチド又はその薬学的に許容される塩；環状多糖若しくはデキストロース、又はそれらの組み合わせを含む、賦形剤；及びポリマーを含む、前記組成物。
【請求項４６】
賦形剤が、環状多糖であり、前記環状多糖が、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（ＨＰＢＣＤ）である、請求項４５に記載の組成物。
【請求項４７】
ＨＰＢＣＤの、ベルドレオチド又はその薬学的に許容される塩に対する質量比が、約１：１〜約１：２０、又は約１：２〜約１：４、又は約１：４である、請求項４６に記載の組成物。
【請求項４８】
賦形剤が、デキストロースである、請求項４５に記載の組成物。
【請求項４９】
デキストロースの、ベルドレオチド又はその薬学的に許容される塩に対する質量比が、１：４〜１：１６、又は１：６〜１：１０、又は１：８である、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５０】
ポリマーが、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）を含む、請求項４５〜４９のいずれかに記載の組成物。
【請求項５１】
複数の高分子ミクロスフェアを含む医薬組成物であって、
前記複数の高分子ミクロスフェアが、ベルドレオチド又はその薬学的に許容される塩を含み、前記複数の高分子ミクロスフェアが、ＢＥＴによって決定した場合、約７．００ｍ２／ｇ〜約１２．００ｍ２／ｇの表面積を有する、前記医薬組成物。
【請求項５２】
複数の高分子ミクロスフェアが、デキストロースをさらに含む、請求項５１に記載の医薬組成物。
【請求項５３】
デキストロースが、複数のミクロスフェアの総重量の約０．１重量％〜約１．０重量％を含む、請求項５２に記載の医薬組成物。
【請求項５４】
複数の高分子ミクロスフェアが、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（ＨＰＢＣＤ）をさらに含む、請求項５１に記載の医薬組成物。
【請求項５５】
ＨＰＢＣＤが、複数のミクロスフェアの総重量の約１重量％〜約１０重量％である、請求項５４に記載の医薬組成物。
【請求項５６】
ＨＰＢＣＤが、複数のミクロスフェアの総重量の約２重量％〜約５重量％である、請求項５４に記載の医薬組成物。
【請求項５７】
複数の高分子ミクロスフェアが、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）を含む、請求項５１〜５６のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項５８】
先端巨大症、先端巨大症がん、ＳＳＴ−Ｒ５発現腫瘍、２型糖尿病、高血糖症、及びホルモン関連腫瘍からなる群から選択される疾患又は状態を有する対象を治療するための方法であって、請求項１、２４、及び５１のいずれかに記載の医薬組成物を前記対象に投与するステップを含む、前記方法。
【請求項５９】
医薬組成物が、注射によって投与される、請求項５６に記載の方法。
【請求項６０】
医薬組成物が、皮下注射によって投与される、請求項５６に記載の方法。
【請求項６１】
医薬組成物が、筋肉内注射によって投与される、請求項５６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、ペプチド又はそれらの薬学的に許容される塩を含む医薬組成物であって、ペプチドは水溶性であるが、生理学的条件において低い溶解性を有する、医薬組成物、及びそのような医薬組成物を使用するための方法を対象とする。
【背景技術】
【０００２】
直鎖ペプチドの薬物としての使用を妨げる主要な問題は、そのようなペプチドが、多数のコンフォメーション間において急速平衡で存在する一方で、これらのコンフォメーションのうちごくわずかしか生体活性ではないという事実に関連する。この柔軟性が、不良な選択性、急速なタンパク質消化、及び低いバイオアベイラビリティにつながる。この問題を克服する最良の方法の１つは、ペプチドに対してコンフォメーションの拘束を導入する、環化によるものである。
【０００３】
天然に存在する環状ペプチドにおいては、環化は、ペプチド内の特定の側鎖及び／又は末端基を一緒に連結する。環化の典型的形式と呼ばれるこれらの形式の環化は、環化に供されるアミノ酸側鎖及びペプチド末端の数が少ないことに起因して、高度に制限される。したがって、可能性のある、所与の配列の拘束された「典型的」環状類似体の多様性は小さい。
【０００４】
主鎖環化は、これらの制限を克服する（Afargan et al., Novel Long-Acting Somatostain Analog with Endocrine Selectivity: Potent Suppression of Growth Hormone But Not of Insulin, Endocrinology, 142:1 (2001) 477-486）。この技術を適用することで、ペプチド主鎖中の１又は２以上のα−窒素の、互いに対する、又はアミノ若しくはカルボキシ末端に対する、又は側鎖に対する共有結合性の相互接続によって環化が起こる。
【０００５】
ソマトスタチンは、中枢神経系及び末梢組織の両方において見られる環状テトラデカペプチドである。ソマトスタチンは元来、哺乳動物の視床下部から単離され、脳下垂体前葉からの成長ホルモン分泌の重要な阻害因子として同定された。その多数の生物学的活性には、膵臓からのグルカゴン及びインスリンの分泌の阻害、大部分の消化管ホルモンの調節、並びに中枢神経系全体にわたる、運動活性及び認知過程に関与する他の神経伝達物質の放出の調節が含まれる（Lamberts, Endocrine Rev., 9:427, 1988を参照されたい）。加えて、ソマトスタチン及びその類似体は、様々な種類の腫瘍の治療にとって潜在的に有用である、抗増殖剤である。
【０００６】
その天然型において、ソマトスタチンは、２つの望ましくない性質：不良なバイオアベイラビリティ及び短い作用持続期間を呈するため、治療剤としての用途が制限されている。この理由から、成長ホルモン、インスリン、又はグルカゴンの放出の阻害に関して、効力、生体内安定性、作用持続期間、又は選択性のいずれかにおいて優位性を有するソマトスタチン類似体を発見するための多大な努力が、過去２０年間なされてきた。
【０００７】
ソマトスタチン類似体（米国特許第４，３１０，５１８号明細書及び同第４，２３５，８８６号明細書）の群には、臨床的に利用可能な、初めて認可されたソマトスタチン類似体である、オクトレオチド（octreotide）が含まれる。
【０００８】
別のソマトスタチン類似体は、コンフォメーション的に拘束された主鎖環状合成ペプチドである、ベルドレオチド（veldoreotide）である（以前にはＰＴＲ３１７３又はＤＧ３１７３として公知であった）。ベルドレオチドは、図１に描写されており、以下の通りである。
−γ−Ａｂｕ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｎ−カルバモイルメチル
式中、Ａｂｕは、アミノブチリルである。
【０００９】
ベルドレオチド酢酸塩は、より一般には、シクロ（−γ−アミノブチリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−トリプトファニル−Ｄ−トリプトファニル−Ｌ−リジル−Ｌ−スレオニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｎ−カルバモイルメチル−γ−アミノブチリル）、酢酸塩又はシクロ（−γ−Ａｂｕ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｎ−カルバモイルメチル−γ−Ａｂｕ）、酢酸塩として記載される。
【００１０】
オクトレオチド及びベルドレオチドは、注射用蒸留水に対して同様の溶解性を有するが、生理学的条件下においては非常に異なった溶解性を有する。かつてベルドレオチド酢酸塩の人体研究が進行していた頃、ベルドレオチド酢酸塩は、ＧＨ阻害に関してオクトレオチドと同様の受容体親和性を有するものの、両方とも乳酸緩衝液で注射された場合、同様の薬理学的効果のためには用量の増加が必要とされることが分かった。この問題の原因を調査したところ、ベルドレオチド酢酸塩が生理学的条件において難溶性であり、「急変する」薬物動態（“flip-flop” pharmacokinetics）につながることが発見された。ベルドレオチド酢酸塩に関する以前の研究では、ベルドレオチド酢酸塩の溶液の注射は、等張溶液に対するその溶解性が比較的低いことに起因して、有害な注射部位反応及び制限されたバイオアベイラビリティを結果としてもたらすことが分かった。したがって、生理学的（等張）溶液に対するベルドレオチド酢酸塩の溶解性を向上させるための方法が必要とされる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】米国特許第４，３１０，５１８号明細書
【特許文献２】米国特許第４，２３５，８８６号明細書
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Afargan et al., Novel Long-Acting Somatostain Analog with Endocrine Selectivity: Potent Suppression of Growth Hormone But Not of Insulin, Endocrinology, 142:1 (2001) 477-486
【非特許文献２】Lamberts, Endocrine Rev., 9:427, 1988
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本開示は、注射可能なペプチド又はその薬学的に許容される塩の溶解性及び分散を向上させ、バイオアベイラビリティ及び分布を改善し、注射部位における有害反応を低減する製剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本開示において本明細書内で考察される理論及び機序に関わらず、本発明の趣旨は、実際の機序とは関係なく、本明細書に記載される組成物の、改善された生理化学的性質及び薬物動態学的性質、並びにその使用を包括する。
【００１５】
一実施形態（実施形態１）においては、医薬組成物は、脱イオン水における溶解性が１００〜３５０ｍｇ／ｍｌであり、脱イオン水に溶けやすいが、生理学的条件下において、又は別様に塩化物イオンを有する溶液において溶解性が２〜３ｍｇ／ｍｌであり、溶けにくい、ペプチド又はその薬学的に許容される塩であって、ペプチド又は薬学的に許容される塩が、３ｍｇ／ｍｌ超の濃度で塩析することによって沈殿する、ペプチド又はその薬学的に許容される塩、薬学的に許容される担体又は希釈剤、及び環状多糖若しくはデキストロース、又はそれらの組み合わせである、賦形剤を含む。
【００１６】
ある特定の実施形態においては、ベルドレオチドの独特な表面活性の性質が活用される。例えば、ベルドレオチドは、水の表面張力を３０％を超えて低減させ、その独特な両親媒性の性質は、界面活性剤としてのその用途と一貫している。この表面張力における低減は、デキストロース又は環状多糖の添加によって部分的に軽減される。
【００１７】
したがって、ベルドレオチド、及び担体又は希釈剤中のデキストロース又は環状多糖のいずれかを含む組成物が提供され、組成物の表面張力は、担体単独の約６０％〜約８０％である。他の実施形態においては、組成物の表面張力は、５℃の温度で測定した場合、約４０ダイン／ｃｍ〜約６０ダイン／ｃｍである。
【００１８】
本発明はまた、高分子ミクロスフェアを製造するための方法であって、
（ｉ）環状多糖若しくはデキストロース、又はそれらの組み合わせを含む、賦形剤と、ペプチド又はその薬学的に許容される塩とを水中で混合して、第１の水性混合物を形成するステップであって、ペプチド又はその薬学的に許容される塩が、脱イオン水における溶解性が１００〜３５０ｍｇ／ｍｌであり、脱イオン水に溶けやすいが、生理学的条件下において、又は別様に塩化物イオンを有する溶液において溶解性が２〜３ｍｇ／ｍｌであり、溶けにくく、ペプチド又は薬学的に許容される塩が、３ｍｇ／ｍｌ超の濃度で塩析することによって沈殿する、ステップ、
（ii）ポリマーを、ジクロロメタンなどの有機溶媒中に混合して、ポリマー溶液を形成するステップ、
（iii）第１の水性混合物を、ポリマー有機溶液中に混合して、油中水型一次エマルションを含む第１の分散体混合物を形成するステップ、
（iv）ポリビニルアルコール（ＰＶＡ，polyvinyl alcohol）を、リン酸緩衝生理食塩水又は生理食塩水中に、０．１〜３重量％の量で混合して、第２の水性混合物を形成するステップ、
（ｖ）一次エマルションを、ＰＶＡの第２の水性混合物中に混合して、水中油中水型の二重エマルションを形成して、二次分散体混合物を提供するステップ、
（vi）二次分散体混合物中の有機溶媒を蒸発させて、固体高分子ミクロスフェアを形成するステップであって、ペプチド又はその薬学的に許容される塩が、高分子ミクロスフェア内にカプセル封入されている、ステップ、
（vii）高分子ミクロスフェアを洗浄及び単離するステップ、並びに
（viii）乾燥過程中に、界面活性剤及びマンニトールの混合物を添加して、又は添加せずに、制御条件下でミクロスフェアを乾燥させるステップ
を含む、前記方法も提供する。
【００１９】
本発明はまた、上の方法によって生成される、持続放出性医薬組成物も提供する。この実施形態においては、ベルドレオチドを含む複数の高分子ミクロスフェアであって、例えば、ブルナウアー・エメット・テラー（Brunauer-Emmett-Teller；ＢＥＴ）法によって測定した場合、約７ｍ２／ｇ〜約１２ｍ２／ｇの表面積を有する、高分子ミクロスフェアが提供される。ある特定の実施形態においては、複数の高分子ミクロスフェアは、約１０μｍ〜約１００μｍの、より好ましくは約１０μｍ〜約３０μｍの範囲の平均直径を有する。ある特定の実施形態においては、高分子ミクロスフェアは、非常に少量、例えば高分子ミクロスフェアの総重量に対して、約０．１重量％〜約１重量％のデキストロースを含んでもよい。他の実施形態においては、高分子ミクロスフェアは、高分子ミクロスフェアの総重量の約１重量％〜約１０重量％、より好ましくは約２．５重量％〜約５重量％の環状多糖を含んでもよい。ある特定の実施形態においては、ベルドレオチドは、高分子ミクロスフェアの総重量の約１０重量％〜約３０重量％、より好ましくは約１５重量％〜約２０重量％を構成する。
【００２０】
本発明はまた、高分子ミクロスフェアを製造するための組成物であって、ベルドレオチド又はその薬学的に許容される塩、環状多糖若しくはデキストロース、又はそれらの組み合わせを含む、賦形剤、及びポリマーを含む、組成物も提供する。
【００２１】
本発明はまた、先端巨大症、先端巨大症がん、ＳＳＴ−Ｒ５発現腫瘍、２型糖尿病、高血糖症、カルチノイド腫瘍、クッシング症候群、及びホルモン関連腫瘍からなる群から選択される疾患又は状態を治療するための方法であって、請求項１〜３７のいずれかに記載の医薬組成物を、前記疾患又は状態を有する患者に投与するステップを含む、方法も提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
前述の態様及び本発明に付随する利点の多くについては、これらを、添付の図面と併せて以下の発明を実施するための形態を参照することによってより良好に理解することで、より容易に認識されるであろう。
【図１】ベルドレオチドの化学構造である。
【図２】ベルドレオチド酢酸塩及びオクトレオチド酢酸塩の両方の三次元構造である。
【図３】８０：２０の綿実油：注射用水（ＷＦＩ，water for injection）中の、ベルドレオチド酢酸塩、オクトレオチド酢酸塩、及びゴセレリンの油中水型（ｗ／ｏ，water-in-oil）エマルション製剤の写真である。
【図４】賦形剤を伴う又は伴わない、ベルドレオチド酢酸塩の様々な製剤を注射されたラットにおける、ベルドレオチド酢酸塩の血漿濃度のグラフである。
【図５】０．３ｍｇ／ｋｇ、ＤＥＸ：ＰＥＰの比率が５：１のデキストロース／生理食塩水ＩＲ製剤の、ラットにおけるＣＯＲ００５  ＰＫプロファイルに対する効果を例証するグラフである。
【図６】デキストロース／生理食塩水ＩＲ製剤、ＨＰＢ／生理食塩水（ＨＰＢ：ＰＥＰ、１５：１）の、ラットにおけるＣＯＲ００５  ＰＫプロファイルに対する効果を例証するグラフである。
【図７】０．４ｍｇ／ｋｇでのミニブタにおける、ＨＰＢ及びＤＥＸ  ＳＣ製剤を比較するグラフである。
【図８】０．４ｍｇ／ｋｇでのミニブタにおける、ＨＰＢ製剤を乳酸に対して比較するグラフである。
【図９】ミニブタにおける、ＣＯＲ００５酢酸塩ＩＲ製剤、ＳＣ、０．４ｍｇ／ＫｇのＰＫプロファイルに対するＤＥＸの効果を示すグラフである。
【図１０】ミニブタにおける、ＣＯＲ００５酢酸塩ＩＲ製剤、ＳＣ、０．１ｍｇ／ＫｇのＰＫプロファイルに対するＤＥＸの効果を示すグラフである。
【図１１】ＳＣ治療群Ｂ９〜１３のＣＯＲ００５血漿濃度のプロットを示す図である。
【図１２】単回ＳＣ用量に関する、ＳＣ治療群Ｂ９〜１３の「バースト」薬物動態のグラフである。
【図１３】ＣＯＲ００５  ＰＬＧＡ  ＭＳのバースト放出に対するＨＰＢの効果を示す図である。
【図１４】ＣＯＲ００５  ＰＬＧＡ  ＭＳのバースト放出に対するＤＥＸの効果を示す図である。
【図１５】ミニブタにおける、ＰＳＩ１３のミクロスフェア（Ｂ１２、ＤＸＥ：ＰＥＰ  １：８）のＰＫプロファイルに関する、ＤＥＸ：ＰＥＰ  １：８の効果を示す図である。
【図１６】ミニブタにおける、バースト放出ミクロスフェア製剤Ｂ１３のＰＫプロファイルに関する、ＨＰＢ：ＰＥＰ  １：２の効果を示す図である。
【図１７】ミニブタにおける、組成物Ｂ１４のミクロスフェアからのバースト放出のＰＫプロファイルに関する、ＨＰＢ：ＰＥＰ  １：４の効果を示す図である。
【図１８】ミクロスフェア製剤Ｂ９〜１３からのＣＯＲ００５の比較用ＩＶＲプロファイルを示す図である。
【図１９】基礎的ミクロスフェア製剤Ｂ１０の外部形態のＳＥＭ顕微鏡写真である。
【図２０】基礎的ミクロスフェア製剤Ｂ１０の内部形態の顕微鏡写真である。
【図２１】製剤Ｂ１２の外部形態のＳＥＭ画像である。
【図２２】製剤Ｂ１２の内部形態のＳＥＭ画像である。
【図２３】製剤Ｂ１３の外部形態のＳＥＭ画像である。
【図２４】製剤Ｂ１３の内部形態のＳＥＭ画像である。
【図２５】ＨＰＢを有するがペプチドを有しない、プラセボＭＳの外部形態及び内部形態を示す図である。
【図２６】ＤＥＸを有するがペプチドを有しない、プラセボＭＳの外部形態及び内部形態を示す図である。
【図２７】様々な比率のＨＰＢ：ＰＥＰを有するＭＳ製剤の内部マトリックスの形態のＳＥＭ画像である。
【図２８】ベルドレオチド酢酸塩を用いて製剤化されたリポソームのＳＥＭ顕微鏡写真である。
【図２９】ベルドレオチド酢酸塩リポソームを注射されたラット対乳酸ビヒクル中のベルドレオチド酢酸塩を注射されたラットにおける、経時的（時間、横軸）なベルドレオチドの血漿濃度（ｎｇ／ｍＬ、縦軸）を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本明細書において引用されるすべての特許及び刊行物は、それらにおいて引用されたあらゆる参考文献を含めて、それら全体が参照により援用される。
【００２４】
本明細書において使用される場合、「ポリマー」とは、例えばホモポリマー、コポリマー、ブロックコポリマー、ランダムコポリマー、及び同類のものを含む、任意の種類のポリマーを指す。否定されない限り、本明細書に記載される種は、すべての可能な個別の異性体、例えば各エナンチオマー及びジアステレオマー、並びに異性体の混合物、例えばラセミ混合物又はスカレミック混合物などを含む。エナンチオマー種は、異なる異性体型又はエナンチオマー型で存在してもよい。別途特定されない限り、本明細書において考察される、それらの異性体型に対する言及を伴わないエナンチオマー種は、すべての様々な異性体型だけでなく、異性体型のラセミ混合物も含むものとする。例えば、乳酸に対する言及は、本明細書においては、Ｌ−乳酸、Ｄ−乳酸、乳酸のＬ−異性体及びＤ−異性体のラセミ混合物を含むものとし、ラクチドに対する言及は、本明細書においては、Ｌ−ラクチド、Ｄ−ラクチド、及びＤＬ−ラクチド（ＤＬ−ラクチドは、ラクチドのＬ−異性体及びＤ−異性体のラセミ混合物を指す）を含むものとし、同様に、ポリ（ラクチド）に対する言及は、本明細書においては、ポリ（Ｌ−ラクチド）、ポリ（Ｄ−ラクチド）、及びポリ（ＤＬ−ラクチド）を含むものとし、同様に、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）に対する言及は、本明細書においては、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）、ポリ（Ｄ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）、及びポリ（ＤＬ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）を含むものとする。
【００２５】
本明細書において使用される場合、「生理学的条件」という用語は、哺乳動物（例えば、マウス、ラット、又はヒト）の身体において通常存在する条件、例えば、溶質（例えば、塩化物イオンを含む塩）を哺乳動物の体液において見られる濃度と同等の濃度で含有する溶液などを指す。本明細書において使用される場合、「等張」という用語は、何らかの他の溶液、特に細胞又は体液における浸透圧と同じ浸透圧を有する流体、溶液を指す。一部の事例においては、等張溶液、例えば等張生理食塩水溶液などは、血液と同じ溶質濃度を有する。
【００２６】
本明細書において使用される場合、「ベルドレオチド」という用語は、シクロ（−γ−アミノブチリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−トリプトファニル−Ｄ−トリプトファニル−Ｌ−リジル−Ｌ−スレオニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｎ−カルバモイルメチル−γ−アミノブチリル）としても公知である環状ポリマーである。ベルドレオチドは、「ＣＯＲ−００５」、「ＣＯＲ００５」としても公知であり、本明細書においては互換的に使用される。ベルドレオチドは、以前には、ＰＴＲ３１７３又はＤＧ３１７３として公知であった。本明細書においては互換的に使用される、「ベルドレオチド酢酸塩」、「ＣＯＲ−００５酢酸塩」、「ＣＯＲ００５酢酸塩」という用語は、ベルドレオチドのモノ酢酸塩を指す。
【００２７】
本発明は、コンフォメーション的に拘束された主鎖環状合成ペプチド類似体を、等張溶液における溶解性を増加させるため、及びそのようなペプチドが注射によって送達される場合の吸収率及びバイオアベイラビリティを増加させるために、賦形剤と組み合わせる。本発明はまた、改善された薬物動態及び低減された注射部位反応を実証する、賦形剤を伴う又は伴わない、コンフォメーション的に拘束された主鎖環状合成ペプチド類似体の製剤についても開示する。
【００２８】
本発明の組成物は、限定されるものではないが、がん、２型糖尿病、先端巨大症、及びホルモン関連腫瘍を含む様々な疾患を治療するための本発明の方法において使用することができる。
【００２９】
本医薬組成物は、水溶性であるが、等張条件において低い溶解性を有するペプチド又はその薬学的に許容される塩と、ポリマーと、任意に、疎水性捕捉剤、糖、又はアミノ酸である賦形剤とを含んでもよい。
【００３０】
本医薬組成物は、水溶性であるが、等張条件において低い溶解性を有するペプチド又はその薬学的に許容される塩と、ポリマー形成性ミクロスフェアと、任意に、疎水性捕捉剤、糖、又はアミノ酸である賦形剤とを含んでもよい。
【００３１】
本医薬組成物は、水溶性であるが、等張条件において低い溶解性を有するペプチド又はその薬学的に許容される塩と、ポリマーがＰＬＧＡである、ポリマー形成性ミクロスフェアと、任意に、疎水性捕捉剤、糖、又はアミノ酸である賦形剤とを含んでもよい。
【００３２】
本医薬組成物は、水溶性であるが、等張条件において低い溶解性を有するペプチド又はその薬学的に許容される塩と、ポリマーと、賦形剤とを含んでもよく、医薬組成物はゲルを形成する。
【００３３】
本医薬組成物は、水溶性であるが、等張条件において低い溶解性を有するペプチド又はその薬学的に許容される塩と、油相と、水性相と、任意に、疎水性捕捉剤、糖、又はアミノ酸である賦形剤とを含むエマルションを形成してもよく、医薬組成物はエマルションである。
【００３４】
本医薬組成物は、水溶性であるが、等張条件において低い溶解性を有するペプチド又はその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体又は希釈剤と、リポソームを形成するリポソーム製剤と、任意に、疎水性捕捉剤、糖、又はアミノ酸である賦形剤とを含んでもよい。
【００３５】
実施形態のうちのいずれかにおけるペプチド又はその薬学的に許容される塩は、環状ペプチド、ペプチド両親媒性物質、イオン性水溶性界面活性剤、ソマトスタチン類似体、環状ソマトスタチン類似体、コンフォメーション的に拘束された主鎖環状ペプチド、コンフォメーション的に拘束された主鎖環状ソマトスタチン類似体、コンフォメーション的に拘束された主鎖環状単一アミンソマトスタチン類似体、ベルドレオチド及びその薬学的に許容される塩、例えばベルドレオチド酢酸塩であってもよい。ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、油中水型乳化剤として作用することができ、３〜８の間の親水性親油性バランスを有する。
【００３６】
薬学的に許容される塩は、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、クエン酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、サリチル酸塩、ｐ−アミノサリチル酸塩、リンゴ酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、アスコルビン酸塩、マレイン酸塩、スルホン酸塩、ホスホン酸塩、過塩素酸塩、硝酸塩、ギ酸塩、プロピオン酸塩、グルコン酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、パモ酸塩、ヒドロキシマレイン酸塩、ピルビン酸塩、フェニル酢酸塩、安息香酸塩、ｐ−アミノ安息香酸塩、ｐ−ヒドロキシ安息香酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、亜硝酸塩、ヒドロキシエタンスルホン酸塩、エチレンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、ナフチルスルホン酸塩、スルファニル酸塩、カンファースルホン酸塩、マンデル酸塩、ｏ−メチルマンデル酸塩、水素−ベンゼンスルホン酸塩、ピクリン酸塩、アジピン酸塩、Ｄ−ｏ−トリル酒石酸塩、タルトロン酸塩、α−トルイル酸塩、（ｏ，ｍ，ｐ）−トルイル酸塩、ナフチルアミンスルホン酸塩、オクタン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、脂肪酸塩、他の鉱酸塩、及びカルボン酸であってもよい。
【００３７】
糖は、単糖、二糖、多糖、環状多糖、シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、又はデキストロースであってもよい。デキストロースは、組成物の約２．５重量％で存在してもよい。アミノ酸は、リジン若しくはアルギニンを含む任意のアミノ酸、又はその塩酸塩などの薬学的に許容される塩、例えばＬ−リジン塩酸塩若しくはＬ−アルギニン塩酸塩であってもよい。疎水性捕捉剤は、少なくとも１つの遊離アミン基を有してもよい。
【００３８】
薬学的に許容される担体又は希釈剤としては、等張酢酸緩衝液、乳酸、生理食塩水、及びリン酸緩衝生理食塩水を挙げることができる。薬学的に許容される担体は、組成物の約０．４５重量％の濃度、例えば０．４５％生理食塩水で存在してもよい。
【００３９】
ポリマーとしては、マトリックスを形成するポリマー、粒子を形成するポリマー、ミクロスフェアを形成するポリマー、ゲルを形成するポリマー、及び生体適合性であるポリマーを挙げることができる。ポリマーとしては、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）又はカルボキシメチルセルロースを挙げることができる。ミクロスフェアを形成するポリマーとしては、ＰＬＧＡを挙げることができる。ＰＬＧＡは、５０：５０の比率の乳酸対グリコール酸を含み得る。ゲルを形成するポリマーとしては、セルロースガム及びそれらの誘導体、例えばカルボキシメチルセルロースなどを挙げることができる。ゲルを形成するために使用されるポリマーは、粘度調整剤、増粘剤、及びゲル化剤として特徴付けられ得る。そのような薬剤は、それらが添加される流体の粘度を増加させ、ゲルを形成することができる。そのようなポリマーは、１％水溶液において、１５００〜３０００ｃｐｓの平均粘度を有し得る。また、そのようなポリマーは、ペプチド又はその薬学的に許容される塩及びシクロデキストリンと相互作用して、ゲルを形成し得る。
【００４０】
リポソームを形成するリポソーム製剤としては、ホスファチジルコリン及びその誘導体を含む、任意の薬学的に許容されるリポソーム製剤、例えば、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、ＨＳＰＣ、コレステロール、ＤＳＰＧ、ＤＯＰＣ、ＤＰＰＧ、ＬＩＰＯＶＡ−Ｅ１２０、ＬＥＣＩＶＡ−Ｓ７０、ＬＥＣＩＶＡ−Ｓ９０、卵ＰＧ、ＭＰＥＧ−ＤＳＰＥ、ダイズ油、ポリソルベート−８０、卵スフィンゴミエリン、及びホスファチジルコリンなどを挙げることができる。
【００４１】
ポリマーがミクロスフェアを形成する、本明細書に記載される医薬組成物は、賦形剤を伴わないミクロスフェアと比較して、増加した多孔性、増加した表面積、増加したペプチド放出、患者に対して医薬組成物を注射した後最初の２４時間の間における増加したペプチドの放出を有し得る。また、ポリマーがミクロスフェアを形成する医薬組成物は、患者に対して医薬組成物を注射した後、少なくとも１週間、２週間、又は４週間の間、持続放出性プロファイルを呈し得る。加えて、ポリマーは、賦形剤、ペプチド若しくはその薬学的に許容される塩、又は賦形剤とペプチド若しくはその薬学的に許容される塩との両方をカプセル封入してもよく、ペプチド又はその薬学的に許容される塩と賦形剤とは、ポリマー内に共存してもよい。また、前述の実施形態のポリマーは、約７〜約１７キロダルトン又は３８〜５４キロダルトンの平均分子量を有してもよい。
【００４２】
医薬組成物は、２７Ｇほど小さい小ゲージ針によって注射可能であり得る。
【００４３】
油相としては、綿実若しくは油、又は任意の薬学的に許容される油を挙げることができる。前述の実施形態の水性相としては、水又は任意の薬学的に許容される水性ビヒクルを挙げることができる。医薬組成物は、油中水型エマルションであるエマルションを形成してもよい。油相の水性相に対する比率は、５０．１：４９．９〜９９．９：０．０１であり得る。油相の水性相に対する比率は、８０：２０であってもよい。エマルションを形成する医薬組成物においては、ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、約１重量／体積％の濃度で、乳化剤として作用し得る。
【００４４】
リポソーム製剤を含む医薬製剤は、少なくとも４８時間、ペプチド又はその薬学的に許容される塩の徐放性プロファイルを呈し得る。この徐放性プロファイルには、少なくとも４８時間の、治療有効血漿濃度のペプチド又はその薬学的に許容される塩が含まれ得る。
【００４５】
本明細書の実施形態は、開示される構成要素の任意の潜在的組み合わせを採用し得ることを理解されたい。例えば、医薬組成物は、ペプチド又はその薬学的に許容される塩、薬学的に許容される担体又は希釈剤、及び賦形剤の任意の可能な組み合わせを含み得る。
【００４６】
ある特定の態様においては、賦形剤を伴った注射と比較して、患者における注射部位副作用を低減するための方法は、本明細書の実施形態の医薬組成物を賦形剤とともに製剤化することと、医薬組成物を前記患者に対して注射によって投与することとを含む。一部の実施形態においては、ペプチド又はその薬学的に許容される塩のバイオアベイラビリティを増加させるための方法は、前述の実施形態の医薬組成物を賦形剤とともに製剤化することと、医薬組成物を前記患者に対して注射によって投与することとを含む。そのような実施形態においては、ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、治療有効用量で投与され得る。
【００４７】
一部の態様においては、ゲルを形成するポリマーを含む、本明細書の実施形態の医薬組成物を製剤化するための方法は、ペプチド又はその薬学的に許容される塩、及び賦形剤を混合することと、ポリマーを緩徐に添加することとを含む。
【００４８】
ある特定の態様においては、疾患を治療するための方法は、本明細書の実施形態の医薬組成物を、それを必要とする患者に投与することを含む。この疾患は、がん、２型糖尿病、先端巨大症、代謝障害、内分泌障害、外分泌障害、又はホルモン関連腫瘍であり得る。本医薬組成物は、注射、例えば皮下注射又は静脈内注射などによって投与され得る。加えて、ペプチド又はその薬学的に許容される塩は、治療有効用量で投与され得る。
【００４９】
注目すべきペプチドは、ベルドレオチドであり、その薬学的に許容される塩は、ベルドレオチド酢酸塩である。本発明は、ベルドレオチド及び／又はベルドレオチド酢酸塩に関する特定の実施形態及び実施例として記載されるものの、本開示に記載される組成物、プロセス、及び方法は、他のソマトスタチン類似体を含む、他のペプチド又はペプチド塩に対しても応用可能である。
【００５０】
ベルドレオチド酢酸塩は、改善された結合選択性、及びＳＳＴ受容体サブタイプであるＳＳＴ−Ｒ２、ＳＳＴ−Ｒ４、及びＳＳＴ−Ｒ５に対する独特な結合プロファイルを有し、カルチノイド腫瘍、先端巨大症、及び糖尿病関連合併症を治療するための、明確な治療的可能性を有する薬物候補を提供し、独特なソマトスタチン受容体サブタイプ２−、４−、５−選択的類似体は、オクトレオチド非応答性腫瘍であっても、ヒトＧＨ分泌下垂体腺腫におけるＧＨ分泌を効果的に低減する。ベルドレオチド酢酸塩は、インスリン又はグルカゴンに対する非選択的効果を有しない、成長ホルモン阻害において利用可能であるソマトスタチン類似体と等効力であるという点において、現在入手可能であるオクトレオチドを含む任意の他のソマトスタチン類似体を上回る、有意な利点を有する。したがって、ベルドレオチド酢酸塩は、成長ホルモン及びＩＧＦ−１の過剰分泌と関連する内分泌異常に対する薬物療法の利用可能性を、より良好な選択性及びこれらの患者のより良好な血糖コントロールによって、改善することができる。
【００５１】
本発明によれば、コンフォメーション的に拘束された主鎖環状合成ペプチド類似体は、患者に対して投与するための医薬組成物を形成するために、賦形剤と組み合わせてもよい。例えば、ベルドレオチド酢酸塩は水溶性分子であるものの、ある特定の賦形剤は、予想外なことに、等張条件におけるベルドレオチド酢酸塩の溶解性を改善する。
【００５２】
ペプチド又はその薬学的に許容される塩と、賦形剤とを含む本医薬組成物は、患者に対して投与するための組成物を製剤化するために、薬学的に許容される担体又は希釈剤と組み合わせてもよい。
【００５３】
環状ペプチドであるベルドレオチドは、アミノ酸残基の特定の組み合わせで構成されており、これらのアミノ酸残基が、ベルドレオチドの生物学的作用機序に加え、その独特な物理化学的性質にも寄与している。荷電アミンのＬｙｓ９の２つの親水性頭部基、及びＴｈｒ１０の極性ヒドロキシル頭部基に相対する、所定の位置の疎水性アミノ酸の組み合わせ、Ｐｈｅ６、Ｔｒｐ７、Ｄ−Ｔｒｐ８、Ｐｈｅ１１が、２つの特徴的な親水性ドメイン対疎水性ドメインを形成している。その特徴的な疎水性ドメイン及び親水性ドメイン、三次元ベータターン、並びに単一の酢酸対イオンの特定の塩形態の結果として、ベルドレオチド酢酸塩は、両親媒性の特性を有し、したがって、ペプチド両親媒性物質と考えられ、界面活性剤の性質も有する。図２は、ベルドレオチド酢酸塩及びオクトレオチド酢酸塩の三次元構造の比較を示しており、ベルドレオチド酢酸塩が、リジン残基において、単一の酢酸対イオンを伴う単一の遊離アミンを有しているのに対し、オクトレオチドは、リジン残基に１つ及び末端アミンに１つという、２つの酢酸対イオンを有していることを示している。
【００５４】
ソマトスタチン類似体、具体的には、乳化剤及びゲル形成剤、並びに油中水型界面活性剤として増加した両親媒性の性質を有する主鎖環状ソマトスタチン類似体であるベルドレオチド酢酸塩の薬学的有用性を考慮すると、そのような組成物は、限定されるものではないが、がん、２型糖尿病、先端巨大症、代謝障害、内分泌及び外分泌障害、並びにホルモン関連腫瘍を含む、様々な疾患及び障害を、より少ない有害効果及び延長された薬物作用によって特徴付けられる、改善された薬物療法によって治療するために使用することができる。
【００５５】
本医薬組成物の別の利点は、本開示の賦形剤を伴うベルドレオチド酢酸塩の組成物が、バイオアベイラビリティを改善し、驚くべきことに、有害な注射部位反応を低減するという点である。
【００５６】
ベルドレオチド酢酸塩及び他の主鎖環状ソマトスタチン類似体は、酵素による分解に対して相当な生体内代謝安定性を保有することが分かっている。
【００５７】
ベルドレオチド酢酸塩は、延長された作用持続期間で、成長ホルモン−ＩＧＦ−１軸に対して、薬物オクトレオチドと同様の規模の有意な阻害を及ぼすが、インスリン分泌の阻害などのオクトレオチドの不利益は有しない。また、ベルドレオチド酢酸塩は、グルカゴンの放出に対する影響がオクトレオチドよりも相当に低いため、高血糖症を引き起こさないという利点を有し、このことが、ベルドレオチド酢酸塩を、先端巨大症の患者の血糖コントロールの改善及び２型糖尿病の治療にとって非常に魅力的な化合物としている。
【００５８】
ベルドレオチド酢酸塩は、ＣＨＯ細胞発現クローン化ヒトＳＳＴ−Ｒ５の有意な成長阻害を示しており、ＳＳＴ−Ｒ５発現腫瘍（例えば、カルチノイド、下垂体腫瘍）の治療における潜在的役割を示している。ベルドレオチド酢酸塩は、ヒトカルチノイド細胞株からのクロモグラニンＡの放出を阻害しており、抗腫瘍効果が示される。
【００５９】
動物において評定した場合のベルドレオチド酢酸塩の独特な薬物動態学的プロファイルは、様々な酵素及び組織ホモジネートに対してインビトロで評定した場合のその代謝安定性と一貫している。長時間作用薬であるオクトレオチドの循環半減期は４０分でしかないが、ラットに対して皮下投与した後、ベルドレオチド酢酸塩は、オクトレオチドを有意に上回る、約３時間の循環半減期を有した。この延長された半減期は、ベルドレオチド酢酸塩の注射部位からの徐放性の結果である、その独特な「急変する」動態に起因するものである。
【００６０】
ベルドレオチド酢酸塩は、ソマトスタチン受容体に対して選択的であり、他のヒトクローン化Ｇタンパク質共役受容体に対する結合は、オクトレオチドよりも有意に少ない。非ソマトスタチン受容体に対する結合は、ヒトにおいて潜在的な有害効果を引き起こし得るため、この特性は有利である。
【００６１】
また、ベルドレオチド酢酸塩は、ヒト末梢血リンパ球増殖アッセイにおいて、ヒトリンパ球に対して分裂促進的ではないことも分かっている。
【００６２】
ベルドレオチド酢酸塩は、水、５％デキストロース、アセトン、並びにエタノール、グリセロール及びプロピレングリコールを含む様々なアルコールに対して、比較的高い溶解性を有することが分かっている。また、ベルドレオチド酢酸塩は、乳酸、酢酸、及びトリフルオロ酢酸などの酸性水溶液に対しても比較的高い溶解性を有することが分かっている。予想外なことに、塩酸に対するベルドレオチド酢酸塩の溶解性は、濃度依存的であることが分かっている（塩化物濃度の増加は、ペプチド沈殿／塩析に起因して、溶解性の低下をもたらした）。この塩化物との不適合性は、ｐＨ依存性ではない、生理学的条件（すなわち、０．９％の塩化ナトリウム、ｐＨ４．５及びリン酸緩衝生理食塩水、ｐＨ７．２）におけるベルドレオチド酢酸塩の比較的低い溶解性の発見につながった。
【００６３】
生理学的条件におけるベルドレオチド酢酸塩のこの制限された溶解性は、このペプチドにとって非常に特異的な性質であり、以前には知られていなかった。水に対する比較的高い溶解性を考慮すれば、ベルドレオチド酢酸塩は水溶性の薬物であると考えられる。水溶性の薬物であるベルドレオチド酢酸塩が、生理学的条件下において低い溶解性を有することが分かったのは、驚くべきことであり、予想外であった。
【００６４】
ベルドレオチド酢酸塩の三次元構造は、ソマトスタチン類似体の大部分において一般的なコンフォメーションである、特定のII型βターンを含む。このコンフォメーションの結果として、このペプチドの三次元柔軟性は拘束され、水性環境に面する、ペプチド環の外側に曝露された疎水性（芳香族）残基の重ね合わせをもたらす。
【００６５】
他の環状ソマトスタチン類似体、すなわちオクトレオチド、ランレオチド、バプレオチド、及びパシレオチドは、２つの遊離アミン基（正に荷電した頭部基）を含み、一方はリジン残基のアミンであり、他方はこれらのペプチドのアミノ末端にあるアミンである。ベルドレオチド酢酸塩は、極性頭部基としての遊離アミンを１つしか有しない。そのアミノ末端は、アミドである。
【００６６】
加えて、１〜２つのフェニルアラニン及び１つのトリプトファンというアミノ酸を有する大部分のソマトスタチン類似体とは異なり、ベルドレオチド酢酸塩は、その配列中に２つのフェニルアラニン及び２つのトリプトファンというアミノ酸を有する。
【００６７】
ベルドレオチドは、環状分子である。環化の主な役割は、分子の立体配座空間又は三次元（３Ｄ）形状を低減又は拘束することである。したがって、このように、ベルドレオチドは、コンフォメーション的に拘束された分子である。しかしながら、このペプチドは、その環状構造によって拘束されているものの、様々な水性媒体中におけるその３Ｄ構造又はコンフォメーションは、Ｈ−Ｈ結合の分子間及び分子内相互作用に依存する場合がある。Ｈ−Ｈ結合は、ペプチド及びポリペプチドの３Ｄ構造の支配的要因である。
【００６８】
ベルドレオチド酢酸塩は、一連のＨ供与体及び受容体：１２個の水素供与体及び１０個の水素受容体を有する。他の環状ソマトスタチン類似体は、同様の比率の水素供与体対水素受容体を有する。例えば、オクトレオチド酢酸塩は、１３個の水素供与体及び１０個の水素受容体を有する。
【００６９】
ベルドレオチドは、２倍の数の疎水性アミノ酸−２個のＴｒｐ及び２個のＰｈｅを有し、カチオン／アミンを１個しか有しないため、疎水性基対親水性基の比率は５：２である。注目すべきことに、ベルドレオチド酢酸塩中には、親水性基よりも多くの疎水性基が存在する。オクトレオチド酢酸塩は、１個のＴｒｐ及び２個のＰｈｅしか有しないが、さらに重要なことには、２個のカチオン／アミンと、さらなる末端ＯＨとを有し、疎水性基対親水性基の比率は３：５である。このことが、オクトレオチド酢酸塩を、ベルドレオチド酢酸塩よりも水溶性にし、その表面活性をより小さくしている。
【００７０】
ベルドレオチドペプチドは、疎水性アミノ酸がペプチドの親水性部分を圧するという、独特な組成を有する。この組成により、比較的高い度合いの両親媒性がもたらされる。この両親媒性の性質は、水性媒体中でのペプチド分配に影響を及ぼす。ベルドレオチドは、疎水性残基を空気に対して曝露して、熱力学的安定性をもたらすために、媒体の表面に集中する傾向がある。ベルドレオチドが水の表面に集中する場合、それは溶液の表面張力を低減する。
【００７１】
表面張力は、流体／空気の境界面において、流体の分子が、空気の分子よりも、互いに対して強力に結合するという性質であり、流体に、その表面が伸展された弾性膜によって覆われているかのように挙動させる。多くの場合、溶質は、純粋な溶媒の表面張力と比較した場合、表面張力を低減させることになる。水及び様々な等張溶液は、２５℃において約６５〜７２ダイン／ｃｍの範囲の表面張力を有する。表面活性を有するペプチドは、表面張力を低下させることになる。溶質の表面活性が高ければ高いほど、表面張力はより低くなり、分子又は物体がより自由に境界面を通過できるようになる。ベルドレオチド酢酸塩は、再蒸留水（ｐＨ＝５．０）の表面張力を、約４５ダイン／ｃｍまで低減する（表３を参照されたい）。
【００７２】
ペプチドが水溶液に溶解された場合、疎水性アミノ酸が通常、保護された疎水性領域を形成する一方で、親水性アミノ酸は、溶媒和の分子と相互作用し、ペプチドに、周りの水分子との水素結合を形成させる。ペプチド表面が十分に親水性である場合、ペプチドは水に溶解することができる。例えば、０．９％のＮａＣｌ又はＰＢＳなどの、生理学的媒体中における塩濃度が増加した場合、水分子の一部は塩イオンによって引き付けられ、これにより、ペプチドの荷電部分と水素結合によって相互作用することができる水分子の数が低下する。溶媒分子に対する需要が増加した結果として、ペプチド−ペプチド相互作用の方が溶媒−溶質相互作用よりも強くなり、ペプチドの脱溶媒和がもたらされる。ペプチド分子は、互いと疎水性相互作用を形成することによって凝析する。この過程は、塩析として公知である。
【００７３】
ベルドレオチド酢酸塩は、その両親媒性の性質に基づき、エマルション配合を用いて評定された。しかしながら、ベルドレオチド酢酸塩は、水中油型ｏ／ｗ乳化剤としては作用しないことが分かった。驚くべきことに、ベルドレオチド酢酸塩は、油中水型（ｗ／ｏ）乳化剤であることが分かった。油中水型のベルドレオチド酢酸塩によって得られる乳化は、安定なｗ／ｏエマルションをもたらした。したがって、ベルドレオチド酢酸塩は、６の親水性親油性バランス（ＨＬＢ，hydrophilic lipophilic balance）を有する、ｗ／ｏイオン性界面活性剤又はヒドロトロープと考えられ得る。
【００７４】
ベルドレオチド酢酸塩は、疎水性基対極性頭部基の比率が高い（４：１）ことに起因して、表３のデータによって実証されるように、より両親媒性であり、界面活性剤としての挙動が向上されている。
【００７５】
様々な賦形剤を伴うベルドレオチドの製剤化
賦形剤は、Ｖベルドレオチド酢酸塩などの注射用ペプチドの溶解性、分散、及びバイオアベイラビリティを改善することができる。そのような賦形剤としては、疎水性捕捉剤、糖、及びアミノ酸、例えばヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、Ｌ−リジンＨＣｌ、及びデキストロースなどを挙げることができる。
【００７６】
ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン
β−シクロデキストリン、例えばヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（ＨＰ−β−ＣＤ又はＨＰＢＣＤ，hydroxypropyl-β-cyclodextrin）などは、本発明において使用するための、例示的部類の賦形剤である。ＨＰＢＣＤは、１−４結合を通じて接合された７個のデキストロース単位で構成される環状オリゴ糖であり、比較的親油性の内側と比較的親水性の外側を保有し、包接複合体を形成する傾向がある（Chang、米国特許第７，２５９，１５３号明細書）。
【００７７】
いかなる特定の仮説にも束縛されるものではないが、ＨＰＢＣＤは、ベルドレオチドの疎水性部分と包接複合体を形成し、それによってベルドレオチドの有効な疎水性を低下させることができる。１：２又はそれ以上（例えば１０：１）というＨＰＢＣＤ：ＰＥＰの比率は、生理学的条件におけるこのペプチドの溶解性を改善する。しかしながら、所望される薬物動態プロファイル及びバイオアベイラビリティを達成するために使用される比率（１ＨＰＢＣＤ：４ＰＥＰ）は、生理学的媒体（生理食塩水又はリン酸緩衝生理食塩水）中の高濃度のベルドレオチドの溶解性を改善せず、表面張力によって裏付けられるように、このペプチドの物理的性質を調節することが示されている。ベルドレオチド酢酸塩とのＨＰＢＣＤの複合体は、複合体を形成していないベルドレオチド酢酸塩の場合の４５ダイン／ｃｍと比較して、５０ダイン／ｃｍを上回る表面張力をもたらした（表３を参照されたい）。このことは、ＨＰＢＣＤ：ベルドレオチド酢酸塩複合体は、表面における作用がより少なく、バルク溶液中における作用がより大きいことを示している。溶解性を改善させる、シクロデキストリンとの複合体形成は、観察された比率とは真逆の、シクロデキストリン対ペプチドの比率が１：１〜１０：１において起こる。ＨＰＢＣＤを伴うベルドレオチド酢酸塩の改善された溶媒和は、ＨＰＢＣＤを伴わないベルドレオチド酢酸塩と比較して、表面張力におけるより小さな変化をもたらす。
【００７８】
本発明は、環状ソマトスタチン類似体を、等張溶液における溶解性を増加させるため、及びそのようなペプチドが注射によって送達される場合の吸収率及びバイオアベイラビリティを増加させるために、ＨＰ−β−ＣＤと組み合わせる。加えて、驚くべきことに、注射部位における有害副作用の低減が見出される。
【００７９】
Ｌ−リジンＨＣｌ
ベルドレオチド酢酸塩の溶解性は、塩化物イオンを含有する溶液において低減されることが観察されている。例えば、ベルドレオチド酢酸塩は、０．１ＮのＨＣｌに対しては溶けるが、０．９ＮのＨＣｌに対しては溶けない。同様に、ベルドレオチド酢酸塩は、０．９％生理食塩水及びリン酸緩衝生理食塩水を含む、塩化物を含有する等張溶液に対しては、制限された溶解性を有する。
【００８０】
予想外なことに、ベルドレオチド酢酸塩は、２０ｍＭのトリス−ＨＣｌに対しては、この緩衝溶液の塩化物含有量にもかかわらず、高度に溶解性であることが発見された。しかしながら、塩化物濃度が増加するにつれて、ベルドレオチド酢酸塩の溶解性は大幅に低減される。例えば、ベルドレオチド酢酸塩の溶解性は、トリス−ＨＣｌの濃度が１３７ｍＭに増加された場合、又は１１７ｍＭのＮａＣｌが添加された場合、有意に低減される。
【００８１】
トリスの構造から明白であるように、TRIZMA／トリス緩衝液部分は、遊離アミンで構成されている。したがって、TRIZMAアミンが、ベルドレオチド酢酸塩のリジン残基の遊離アミンと、溶液中の塩化物に関して競合しているという仮説が立てられる。塩化物濃度が増加した場合でも、この効果は、ペプチドが、遊離アミン基の周囲の塩化物がより少ないことによって溶解できるため、ペプチドの溶解性の増加をもたらす。このことは、塩化物濃度を増加させるにつれて、トリス−ＨＣｌに対するベルドレオチド酢酸塩の溶解性が低下することによって確認される。
【００８２】
トリス−ＨＣｌに対するベルドレオチド酢酸塩の溶解性の観点から、ベルドレオチド酢酸塩の溶解性を、Ｌ−リジン及びＬ−リジンＨＣｌを含有する溶液中で試験した。
【００８３】
予想外なことに、Ｌ−リジンは、ベルドレオチド酢酸塩のアミンと塩化物に関して競合する遊離アミンを有するにもかかわらず、ベルドレオチド酢酸塩の溶解性を実質的に改善することはなかった。しかしながら、より驚くべきことに、Ｌ−リジンＨＣｌの添加が、等張媒体に対するベルドレオチド酢酸塩の溶解性を実質的に改善し、このペプチドの沈殿を制限することが発見された。
【００８４】
デキストロース
また、予想外なことに、等張溶液及び生理学的溶液中のベルドレオチド酢酸塩のバイオアベイラビリティが、賦形剤としてデキストロースを添加することによって改善されることも発見された。ベルドレオチド酢酸塩は、５％デキストロース（ＵＳＰ（米国薬局方））に対して約４００ｍｇ／ｍｌの溶解性を有し、溶けやすいことが分かっている。驚くべきことに、５％デキストロースは、生理学的媒体（生理食塩水又はリン酸緩衝生理食塩水）中の高濃度のベルドレオチドの溶解性を改善しない。これは、５％デキストロース水溶液に対するベルドレオチドの非常に高い溶解性とは反対である。ＬＡＲの薬物動態学的プロファイル及びバイオアベイラビリティの改善は、使用されたデキストロース：ペプチドの比率が低いにもかかわらず（１：８）達成される。そのような低い比率が、生理学的媒体に対するペプチドの溶解性を改善することは予想されていないが、ここでは、表面張力の挙動によって裏付けられるように、このペプチドの物理的性質を調節することが示されている。
【００８５】
いかなる特定の仮説にも束縛されるものではないが、デキストロースは、ペプチド極性基の周囲の水の溶媒和を改善させる。デキストロースを伴うベルドレオチド酢酸塩の改善された溶媒和は、デキストロースを伴わないベルドレオチド酢酸塩と比較して、表面張力におけるより小さな変化をもたらす。ベルドレオチド酢酸塩とのデキストロースの複合体は、複合体を形成していないベルドレオチド酢酸塩の場合の４５ダイン／ｃｍと比較して、５０ダイン／ｃｍを上回る表面張力をもたらした（表３を参照されたい）。このことは、デキストロース：ベルドレオチド酢酸塩複合体は、表面における作用がより少なく、バルク溶液中における作用がより大きいことを示している。この相互作用が、ベルドレオチドの親水性を増加させるため、より多くのペプチドが、表面ではなくバルク溶液中に集中することになる。このことによって、ベルドレオチドのバイオアベイラビリティが改善される。
【００８６】
本発明は、環状ソマトスタチン類似体を、等張溶液における溶解性を増加させるため、及びそのようなペプチドが注射によって送達される場合の吸収率及びバイオアベイラビリティを増加させるために、デキストロースと組み合わせる。加えて、驚くべきことに、注射部位における有害副作用の低減が見出される。
【００８７】
ニコチンアミドが、本組成物において有用な別の賦形剤である（米国特許第６，３３１，５２０号明細書を参照されたい）。
【００８８】
持続放出性（Sustained Release;ＳＲ）製剤
ミクロスフェア製剤
環状ソマトスタチン類似体の薬物動態を考慮すると、多くの場合、インビボでの持続放出用の製剤を提供することが望ましい。持続放出を実現するために、例えばＰＬＧＡミクロスフェア及びヒドロゲルの使用などの、様々なポリマー系製剤の使用を含む、いくつかの方法を使用することができる。また、エマルション及びリポローム製剤も有用であり得る。エマルション、ゲル、ミクロスフェア、及びリポソームを含む持続放出性製剤が、注射部位反応を減少させ、バイオアベイラビリティを改善し、持続放出性プロファイルを提供することができる一方で、即時放出性製剤用の賦形剤に関する所見に基づき、そのような賦形剤の持続放出性製剤における使用について調査すると、驚くべきことに、そのような賦形剤の使用は、インビボでの環状ソマトスタチン類似体の薬物動態を改善し、注射部位反応を低減させることが分かった。
【００８９】
環状ソマトスタチン類似体は、実施例７に開示されている技法などの、当業者に周知の従来の技法を使用して、ＰＬＧＡミクロスフェア中において調製されてもよい。また、環状ソマトスタチン類似体は、それらの特定の性質に基づき、エマルション及びゲルへと製剤化されてもよい。
【００９０】
いかなる特定の仮説にも束縛されるものではないが、ミクロスフェア間における差異は、その表面活性に関連し得るベルドレオチドの３Ｄ構造と、賦形剤がどのように相互作用するかに起因し得る。表３に示されるように、デキストロース−ベルドレオチド酢酸塩溶液の表面張力は、ＨＰＢＣＤ−ベルドレオチド酢酸塩溶液の表面張力と同様であり、それぞれ５４及び５１ダイン／ｃｍである。しかし、ＨＰＢＣＤで調製されたミクロスフェアの微視的構造は、デキストロースで調製されたミクロスフェアの微視的構造とは異なっている。
【００９１】
ＨＰＢＣＤは、ペプチドの分子量（molecular weight；ＭＷ）と概ね同じ範囲の、デキストロースよりも遥かに高いＭＷを有する。ＨＰＢＣＤは、ペプチドの疎水性残基などの疎水性部分と相互作用することができる疎水性コアを有し、ペプチドの疎水性部分と１又は２以上の包接複合体を形成する。包接複合体中に封入されたペプチドの部分は、疎水性ポリマーが導入された場合、このポリマーへのアクセスに関してより少ない可動性及びより少ない利用可能性を付与し得る。ＨＤＰＣＤを伴う複合体は、ペプチドの疎水性における効果的な減少をもたらす。結果として、ペプチドとポリマー溶液との間の表面相互作用は支持されにくく、ＨＰＢＣＤとペプチドとの複合体は水を引き付ける。このことから、ポリマー溶液に対するＨＰＢＣＤのより少ない希釈／分散がもたらされることになり、それにより、大きい液滴という内部構造が生まれ、結果として、デキストロースを含むミクロスフェアと比較して、より少ないものの、より大きい直径及びより小さい表面積を有する細孔が形成される。
【００９２】
デキストロースを含むミクロスフェアにおいては、より多数の小径細孔が観察された。小分子として、デキストロースは、ＨＰＢＣＤと比較して遥かに多く、ペプチド溶液に対して分散／希釈される。この希釈されたデキストロースは、ペプチドのより良好な可動性を可能とする。より良好な可動性は、ポリマー溶液内におけるペプチドのより良好な分布につながることになる。このペプチドのより良好な分布／分散は、その疎水性の性質に起因する。疎水性ポリマーが添加された場合、ペプチドの疎水性部分は、疎水性ポリマーに対して引き付けられる傾向がある。要約すると、デキストロースは、Ｈ−Ｈ結合を介してペプチドの３Ｄ構造に影響を及ぼし、その溶媒和を改善し、そのＭＷが小さいことに起因して、デキストロースは疎水性ポリマー溶液内のペプチドの分布及び分散を改善させる。結果は、ミクロスフェア内のより高密度の細孔である。ミクロスフェアの内部構造における変化は、ＢＥＴなどの好適な方法によって測定した場合、高分子ミクロスフェアの表面積に反映されている。ミクロスフェアを形成するために使用される一次乳化に、デキストロース又はＨＰＢＣＤがある特定の比率、例えば１：８（デキストロース対ベルドレオチド）及び１：２又は１：４（ＨＰＢＣＤ対ベルドレオチド）などで添加される場合、結果として得られるミクロスフェアは、約７ｍ２／ｇ〜約１２ｍ２／ｇの表面積を有する。ミクロスフェアの形成におけるデキストロースの効果が、概ね、ベルドレオチドの表面活性を修正するデキストロースの能力の関数となり得るように、最終的なミクロスフェア生成物中に残存するデキストロースは痕跡量のみであり得ることが理解されるべきである。この効果については、下で明示される実施例において、より詳細に考察する。しかしながら、ＨＰＢＣＤがミクロスフェアを形成するための一次エマルションにおいて使用される場合、ＨＰＢＣＤの多くは、最終的なミクロスフェア生成物中に保持されるようである。
【００９３】
したがって、ある特定の実施形態においては、ミクロスフェアを形成するための一次エマルションにおける、デキストロース対ベルドレオチドの質量比は、約１：１〜約１：１６であり、より好ましくは約１：４〜約１：８である。したがって、一部の実施形態においては、この質量比は、約１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１１、１：１２、１：１３、１：１４、１：１５、又は１：１６であり得る。
【００９４】
ある特定の他の実施形態においては、ミクロスフェアを形成するための一次エマルションにおける、ＨＰＢＣＤ対ベルドレオチドの質量比は、約１：１〜約１：８であり、より好ましくは約１：２〜約１：４である。したがって、一部の実施形態においては、この質量比は、約１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、又は１：８であり得る。
【００９５】
さらなる実施形態においては、ミクロスフェアを形成するための一次エマルションは、上に明示されるようなベルドレオチドに対する様々な質量比で、デキストロース及びＨＰＢＣＤの両方を含んでもよい。
【００９６】
リポソーム製剤
また、ベルドレオチド酢酸塩は、ベルドレオチド酢酸塩の血漿濃度が治療有効レベルにある、持続放出性プロファイルを少なくとも４８時間呈するリポソームへと製剤化できることも分かった。
【００９７】
リポソームは、同心円状の二重層ベシクルであり、その中には、水性の塊が、天然又は合成リン脂質で主に構成されている脂質二重層によって完全に囲い込まれている。リポソームは、脂質の薄膜又は脂質ケーキが水和され、多量の脂質結晶性二重層が流体となり、膨潤した際に形成される。撹拌中、水和された脂質シートは脱離し、自己会合してベシクルを形成し、これにより、水と、二重層の炭化水素コアとの縁部における相互作用は防止される。そのようなリポソームとしては、単一のリン脂質で構成される多重膜ベシクル（ＭＬＶ，multilamellar vesicle）が挙げられ、このリン脂質は、ホスファチジルコリンであり、より好ましくは１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）である。
【００９８】
エマルション及びヒドロゲル製剤
先述されたように、ベルドレオチド酢酸塩は、界面活性剤として作用し、水を油中に乳化できることが分かった。加えて、その両親媒性の性質を考慮すると、ベルドレオチド酢酸塩は、ヒドロゲルへと製剤化することもできる。ビヒクルは両方とも、持続放出性製剤を提供することができる。
【００９９】
驚くべきことに、油中水型エマルション製剤としてのベルドレオチド酢酸塩の注射は、注射部位反応の発症を低減及び遅延させ、２７Ｇほど小さい針を使用して注射することができることが分かった。
【０１００】
加えて、ベルドレオチド酢酸塩は、安定なヒドロゲルを形成することで、注射部位反応の誘発を遅延させることができ、同様に２７Ｇほど小さい針を使用して注射可能であることが分かった。
【０１０１】
したがって、ベルドレオチド酢酸塩のエマルション及びヒドロゲル製剤は、ベルドレオチド酢酸塩の持続放出性製剤を提供しながら、注射がより容易であり、もたらす注射部位反応はより少ないことが分かった。
［実施例］
【０１０２】
本発明は、以下の実施例において実証されるが、これらの実施例は例証のみを目的とするものであり、本発明はそれらに限定されることを意図するものではないことを理解されたい。
【０１０３】
材料
ＣＯＲ００５酢酸塩（Lonza社, DADR-APJ-001-5AN1R）
ヒドロキシプロピルβシクロデキストリン−ＨＰＢ（Merck KGaA社, Darmstadt, Germany （医薬品グレード） Cyclodextrin HPB Ph.Eur., NF 1.4220.0050）
デキストロース５％−ＵＳＰ−ＤＥＸ（Teva Medical社 Dextrose 5% AWB0064 pH 4.0 252mOsmol/L pH 4.0 252mOsmol/L）
無菌注射用水−ＷＦＩ（Norbrook laboratories社 Northern Ireland. B.W. 4364-90）
マンニトール−Ｍ２００（Merck KGaA社, Darmstadt, Germany （医薬品グレード） Parteck M200 Emprove exp Ph Eur, BP, JP, USP, E 421）
乳酸溶液（９０％）−（Sigma Aldrich社 USP spec. L6661 Batch #MKBR6268V）
通常生理食塩水、０．９％ＮａＣｌ、ｐＨ５．０（Teva Medical社 AWB1324 lot XP5E035 pH 5.0, 308mOsmol/L）
カルシウム及びマグネシウムを伴わないＰＢＳ、１０ｍＭ、ｐＨ７．４（Dulbecco's Phosphate Buffered Saline Biological Industries REF02023-1A）
【０１０４】
略語
ＮＳ−通常生理食塩水（０．９％  ＮａＣｌ）、ＩＲ−即時放出性、Ｆ−ＩＲビヒクルのＩＶのＡＵＣに対して計算された絶対的バイオアベイラビリティ（ラット又はミニブタ）、ＭＳ−ミクロスフェア、ＳＣ−皮下、ＢＡ−絶対的バイオアベイラビリティ、Ｃｍａｘ−最大血漿濃度、ＭＡＮ−マンニトール、ＨＰＢ−ヒドロキシプロピルβシクロデキストリン、ＤＥＸ−デキストロース、ＰＥＰ-ペプチド−ＣＯＲ００５酢酸塩、Ｌｙｓ-ＨＣｌ−リジン塩酸塩、Ｅｓｔ．−ＵＶ-Ｖｉｓ．によって推定、ＮＴ−試験されず、ＮＥ−変動性により該当なし
【実施例１】
【０１０５】
水性媒体に対するベルドレオチド酢酸塩の溶解性を、以下の方法によってスクリーニングした。固定量の１０ミリグラムのペプチドを秤量し、周囲温度で、完全な溶解、すなわち澄んだ／透明な溶液及びあらゆる沈殿物の不在が観察されるまで、増加する（増加的な）体積の試験媒体によって溶解させた（溶解のエンドポイントの値は、ＵＳＰガイダンスに従って画定された）。スクリーニング研究の結果に従って、いくつかの媒体を、ＨＰＬＣによるペプチド濃度（最大の溶解性）の定量的評価に基づく検証研究用に選択した。スクリーニング研究の結果は、表１に描写されており、一方で検証研究の結果は、表２に含まれている。データから認識することができるように、ベルドレオチド酢酸塩は、水及び他の水性媒体に対する高い溶解性を実証しているが、等張媒体に対しては制限された溶解性に悩まされている。
【０１０６】
【表１】
2019504897.tif 000002
【０１０７】
【表２】
2019504897.tif 000003
【０１０８】
表３は、様々な水性媒体に対するＣＯＲ００５酢酸塩の溶解性の値、生理食塩水及び生理学的条件におけるペプチドの溶解性に対するＤＥＸ及びＨＰＢなどの添加剤の効果、並びに対照としての添加剤を伴わないＣＯＲ００５と比較した、これらの添加剤を伴って調製されたＩＲ及びＭＳ製剤のＰＫプロファイルについて要約している。
【０１０９】
水性媒体に対するＣＯＲ００５酢酸塩の溶解性
水及び等張５％デキストロースに対するＣＯＲ００５酢酸塩の溶解性（下を参照されたい）は、比較的高い（少なくとも３００ｍｇ／ｍｌ）。一方で、水に対するその高い溶解性と比較すると、ＣＯＲ００５酢酸塩の溶解性は、等張ＰＢＳ  ｐＨ７．４及び生理食塩水において観察されるように、生理学的（水性）条件においては有意に低い（１〜２ｍｇ／ｍｌの範囲内）。両方の媒体（ＰＢＳ又は生理食塩水）は生理学的濃度の塩化物を含んでおり、このことは、塩化物イオンの存在下におけるペプチドの不適合性及び塩析を示していることに留意されたい。
【０１１０】
添加剤の効果
デキストロース：５００ｍｇ／ｍｌ超という、（水中）５％デキストロースに対するＣＯＲ００５酢酸塩の比較的高い溶解性は、デキストロースを伴う水に対するペプチドの改善された溶解性を示している。等張生理食塩水に対するデキストロースの添加は、２．５％のデキストロース及び０．４５％の生理食塩水（ＮａＣｌ）という最終濃度を有する、通常生理食塩水中に希釈された５％デキストロースに対して、２ｍｇ／ｍｌから約６〜７ｍｇ／ｍｌというペプチドの溶解性における増加をもたらす。なお、生理食塩水中に１：１で希釈されたこのデキストロースを、ラット及びミニブタにおけるＣＯＲ００５酢酸塩のＩＲ研究のビヒクルとして使用した（ＤＥＸ：ＰＥＰの比率は５：１であった）。
【０１１１】
【表３】
2019504897.tif 000004
【０１１２】
ラット及びミニブタに皮下注射されたＩＲ製剤に関するＰＫデータは、デキストロースビヒクルが、他のＩＲ製剤を上回って、ＣＯＲ００５酢酸塩のＣｍａｘ及び絶対的バイオアベイラビリティの値を増加させることを示している（ラット−デキストロースにおけるＣＯＲ００５のＣｍａｘ−５４４ｎｇ／ｍｌに対して、対照としての乳酸緩衝液におけるＣＯＲ００５のＣｍａｘ、３４５ｎｇ／ｍｌ。ミニブタ−デキストロースにおけるＣＯＲ００５  ０．４ｍｇ／ＫｇのＣｍａｘ−２３８ｎｇ／ｍｌ及びＢＡ８８．４に対して、対照としての乳酸緩衝液におけるＣＯＲ００５  ０．４ｍｇ／ＫｇのＣｍａｘ、１０８ｎｇ／ｍｌ及びＢＡ６９％、ＣＯＲ００５  ０．１ｍｇ／ＫｇのＢＡは、それぞれ、９１％対４５％であった）。このＰＫデータは、２つの主な理由：１）デキストロースは、ＭＳからペプチドが放出された後の、その溶解性及びＢＡを増加させることができること、及び２）デキストロースは、多孔性薬剤として公知であり、ＭＳの透過性を向上させ、それによってＭＳマトリックスからのペプチドの放出を改善できることのために、デキストロースをＭＳ製剤に添加する、可能な理論的根拠をもたらした。
【０１１３】
予想外なことに、ＰＢＳに対するデキストロースの溶解性の結果は、生理食塩水に対するペプチドの溶解性に対するデキストロースの効果とは有意に異なった。表３に示されているように、デキストロースは、等張ＰＢＳ  ｐＨ７．４において観察されるように、ＤＥＸ：ＰＥＰの比率が５：１及び１：８で、生理学的条件におけるペプチドの溶解性を改善せず、ここでの溶解性はそれぞれ、１．６ｍｇ／ｍｌ及び２ｍｇ／ｍｌでしかない。ＰＢＳ中のデキストロースでペプチドの溶解性が不良（不変）であることの可能な理由は、生理食塩水と比較して、増加されたＰＢＳのイオン強度である。ＰＢＳが、０．０２％  ＫＣｌ、０．０２％  ＫＨ２ＰＯ４、０．１１５％  Ｎａ２ＨＰＯ４、及び０．８％  ＮａＣｌを含む一方で、生理食塩水は、０．９％  ＮａＣｌしか含まない。
【０１１４】
ＤＥＸ：ＰＥＰの比率、１：８は、ＭＳ製剤Ｂ１２又はＰＳＩ１３に使用された比率であった。これは、基礎的ＭＳ製剤Ｂ１０（ＤＥＸなし）よりも高いＣｍａｘ及び絶対的ＢＡを呈した、これらのＤＥＸ製剤におけるＣＯＲ００５酢酸塩の観察されたＰＫプロファイルが、ＤＥＸが添加されたＰＢＳに対するＣＯＲ００５酢酸塩の溶解性は１〜２ｍｇ／ｍｌでしかないことから、生理学的条件におけるペプチドの溶解性の改善に起因するものではないことを示し得る。したがって、生理学的条件において溶解性を増加させる効果を超える、ＭＳ製剤におけるペプチドに対するＤＥＸの効果が存在するようである。
【０１１５】
デキストロースがＭＳからのＣＯＲ００５の放出及びＢＡを向上させる機序については、下の表面張力対ＳＥＭ要約データにおいて、詳細に考察する。
【０１１６】
ＨＰＢ：表３に示されているように、添加剤ＨＰＢは、濃度依存的様式で、生理食塩水及びＰＢＳの両方に対するＣＯＲ００５酢酸塩の溶解性を向上させる。ＨＰＢ：ＰＥＰの比率が１：２である場合（ＭＳ製剤Ｂ１３、下を参照されたい）、ＨＰＢを伴わない場合よりも、溶解性におけるわずかな増加が観察された（２．２から２．５ｍｇ／ｍｌへの増加）。ＨＰＢ：ＰＥＰの比率が、１：１、１０：１及び１５：１、並びにそれ以上に増加された場合、ＨＰＢは溶解性をさらに改善させ、最終的に１０ｍｇ／ｍｌの溶解性に到達する。なお、ＨＰＢ：ＰＥＰの比率が１：４である場合（ＭＳ製剤Ｂ１４、下を参照されたい）のＣＯＲ００５の溶解性は、ＰＢＳ単独に対するペプチドの不良な溶解性と同じ範囲内であった。
【０１１７】
ＩＲ製剤におけるＣＯＲ００５酢酸塩への添加剤としてのＨＰＢのＰＫデータは、ラットにおけるＣｍａｘ及びＢＡの増加、並びにミニブタにおける有意な増加を示している（両方の場合において、これは、２番目に高いＣｍａｘ及びＢＡを有するＩＲ製剤であった）。ラット−ＨＰＢにおけるＣＯＲ００５のＣｍａｘ−４５１ｎｇ／ｍｌに対して、対照としての乳酸緩衝液におけるＣＯＲ００５のＣｍａｘ、３４５ｎｇ／ｍｌ。ミニブタ−ＨＰＢにおけるＣＯＲ００５のＣｍａｘ−２５５ｎｇ／ｍｌ及びＢＡ８５．３％に対して、対照としての乳酸緩衝液におけるＣＯＲ００５のＣｍａｘ、１０８ｎｇ／ｍｌ及びＢＡ６９％）。
【０１１８】
これらのＰＫ結果は、デキストロースと同じ効果を達成するためにＭＳ製剤においてＨＰＢを使用する、同様の理論的根拠をもたらした。デキストロース及びＨＰＢは両方とも多孔性薬剤であり、ＭＳにおけるそれらの組成が、ＭＳの透過性の向上及びペプチド放出の増加につながり得る。また、ＨＰＢの場合においては、予測される多孔性の効果に加えて、（特に、溶解性データに描写されているように、ＨＰＢ：ＰＥＰの比率が１：２の場合に）ＨＰＢが生理学的条件におけるペプチドの溶解性をわずかに改善させ得るという仮説を立てた。
【０１１９】
しかしながら、予想外なことに、添加剤としてのＨＰＢを伴うＭＳの齧歯動物におけるＰＫデータは、ＭＳ製剤Ｂ１３及びＢ１４における、バースト（burst）及びＢＡに対するＨＰＢの２つの明瞭な効果を示している。ＨＰＢ：ＰＥＰの比率が１：２（この比率は、生理学的条件においてペプチド溶解性のわずかな増加をもたらす）で調製されたＭＳ製剤である、ラットにおいて試験した２つのうちの１つでしかなかったＢ１３の場合においては、ラットにおけるＰＫは、基礎的製剤Ｂ１０と比較して、バースト放出及び最初の２４時間の間の絶対的ＢＡ（ＢＡ０〜２４時間）の有意な増加を示している。ＣＯＲ００５−Ｂ１３のＣｍａｘ、２１１ｎｇ／ｍｌ及びＢＡ（０〜２４時間）１１％に対して、ＣＯＲ００５−Ｂ１０のＣｍａｘ、３０ｎｇ／ｍｌ及びＢＡ（０〜２４時間）２％。
【０１２０】
この傾向は、ミニブタＰＫ研究においても観察及び検証された。１：４の低減されたＨＰＢ：ＰＥＰ比率を有するＢ１４の場合においては、予想された結果は、生理学的条件（表に描写されているように）におけるペプチドの溶解性がより低く、ミクロスフェアの多孔性が低減されれば、結果的に、経時的なペプチド放出及び血漿濃度が低減されるであろうというものであった。
【０１２１】
驚くべきことにかつ予想外なことに、ミニブタにおけるＢ１４に関するＰＫデータは、正反対の効果を示している。ＨＰＢ：ＰＥＰの低減された比率は、ペプチド放出の有意な増加をもたらし、Ｃｍａｘ、ＢＡ、及び血漿ペプチドレベルは、Ｂ１３、Ｂ１２、及び基礎的ＭＳ製剤Ｂ１０に関して観察された値よりも有意に高い。
【０１２２】
なお、Ｂ１４（ＨＰＢ：ＰＥＰ  １：４）、並びにＢ１２及びＰＳＩ１３（各々、ＤＥＸ：ＰＥＰ  １：８を有する）はすべて、ＰＥＰに対して比較的低い比率のＨＰＢを有する。これらの低い比率は、生理学的条件におけるペプチドの溶解性の改善を示さなかった。この低い溶解性にもかかわらず、Ｂ１２及びＰＳＩ１３の値と比較した場合、インビボにおけるＣＯＲ００５酢酸塩の高いＢＡ及び延長された経時的な血漿濃度によって実証されるように、Ｂ１４  ＭＳからのペプチドの放出において有意な増加が存在した。したがって、生理学的条件において溶解性を増加させる効果を超える、ＭＳ製剤におけるペプチドに対するＨＰＢの効果が存在するようである。
【０１２３】
ＨＰＢがＭＳからのＣＯＲ００５の放出及びＢＡを向上させる機序については、下の表面張力対ＳＥＭ要約データにおいて、詳細に考察する。
【実施例２】
【０１２４】
水の密度、ｐＨ、及び表面張力に対するベルドレオチド酢酸塩の効果を、表４に示されているように分析した。ベルドレオチド酢酸塩は、ペプチド両親媒性物質として挙動し、水の表面張力を低減させることが分かった。しかしながら、水の表面張力の低減は、用量依存的様式で減少したわけではなく、ベルドレオチド酢酸塩が、界面活性剤ではなくヒドロトロープとして挙動することを示唆している。
【０１２５】
ツイーン８０を、比較用の対照界面活性剤として使用した。密度は、１ｍＬの固定体積試料で測定した。すべての試験を、２５℃において３連で行った。再蒸留水（ＤＤＷ，double distilled water）のｐＨに対するベルドレオチド酢酸塩の効果は、すべてのベルドレオチド酢酸塩濃度において同じであった。ＤＤＷのｐＨ５．０は、ｐＨ４．５に低減された。ＤＤＷの密度（ＤＤＷの出発密度は１．００３ｇ／ｍｌであった）に対するベルドレオチド酢酸塩の効果は、１．４ｍｇ／ｍｌから２１．５ｍｇ／ｍｌの濃度依存的であり、密度はそれぞれ、０．９８６〜０．９９８ｇ／ｍｌの範囲であった。しかしながら、４５及び１０２ｍｇ／ｍｌのベルドレオチド酢酸塩濃度においては、密度は、ＤＤＷの出発密度を上回って増加した。これらの結果から、４５ｍｇ／ｍｌ超のペプチドのＤＤＷ溶液は飽和していることが示された。ＤＤＷの表面張力（出発表面張力は６４．９ダイン／ｃｍであった）に対するベルドレオチド酢酸塩の効果は、ペプチド両親媒性物質（界面活性剤）として挙動するベルドレオチド酢酸塩と一貫していた。ＤＤＷの表面張力は、ベルドレオチド酢酸塩によって、最大で６４．９から４５ダイン／ｃｍまで低減された。この効果の意味を解明するために、ツイーン８０を基準界面活性剤として使用した。他の界面活性剤としては、ポロキサマー１８８が挙げられる。ツイーン８０によって誘発された表面張力の低減は、ベルドレオチド酢酸塩の３０％（６４．９ダイン／ｃｍから約４５ダイン／ｃｍ）と比較して、４０％の範囲であった（６４．９ダイン／ｃｍから約３９ダイン／ｃｍ）。なお、これらの実験条件の下で、ツイーン８０の効果は、濃度−効果の相関を示した。一方で、表面張力の低減に対するベルドレオチド酢酸塩の効果は、試験したすべての濃度に関して同じ範囲であった。
【０１２６】
【表４】
2019504897.tif 000005
【０１２７】
表５は、注射用水（ＷＦＩ）中における、オクトレオチド（ソマトスタチン類似体）及びゴセレリン（ＬＨＲＨ類似体）と比較した、ベルドレオチド酢酸塩の比較用表面張力を示している。
【０１２８】
【表５】
2019504897.tif 000006
【０１２９】
ミクロスフェア製剤におけるＣＯＲ００５酢酸塩の表面活性
表４のデータは、ＷＦＩ中の、添加剤を伴う又は伴わない、高度に濃縮されたＣＯＲ００５酢酸塩（２００ｍｇ／ｍｌ）の表面活性を示しており、これは、ミクロスフェアの一次エマルションの調製条件を模している。試験１及び２の結果（表４）は、水の表面張力に対するＣＯＲ００５酢酸塩の効果を示している。ＣＯＲ００５酢酸塩が水に溶解された場合、表面張力は、水単独の場合の６８．５ダイン／ｃｍから、２００ｍｇ／ｍｌのＣＯＲ００５酢酸塩を伴う水溶液の場合の４４ダイン／ｃｍまで、約３６％低減される。
【０１３０】
表５及び図３のデータは、両親媒性ペプチド対照としてここでは提供されているオクトレオチド及びゴセレリンに対する、ＣＯＲ００５の比較用の乳化性質を示している。このデータは、対照ペプチドと比較して独特なＣＯＲ００５の表面活性を示している。ＣＯＲ−００５は、オクトレオチドよりも高い表面活性を有し、ゴセレリン（オクトレオチドよりも疎水性のペプチドである）と同様の表面活性を有する。
【０１３１】
図３は、１６．６重量％の綿実油（ＣＳＯ，cottonseed oil）、７４．２重量％の注射用水ＷＦＩ、及び９．２重量％のペプチドを有する、オクトレオチド及びゴセレリンに対するＣＯＲ００５の乳化試料の写真を示している。これらの試料は、２５Ｇシリンジを使用して混合し、室温でボルテックス混合した。乳化結果は、エマルションの形成を可能にする、油／水境界面に対するＣＯＲ００５の有意な親和性を示している。オクトレオチドは、不十分な乳化効率を示し、ゴセレリンは、エマルション形成にとって最も低い潜在性を示している。これらの結果は、ＣＯＲ００５の、界面活性剤としての独特な両親媒性の性質を確認するものである。
【０１３２】
いかなる特定の仮説にも束縛されるものではないが、水性媒体中において、ＣＯＲ００５は、図２に示されるようなその疎水性アミノ酸（２個のトリプトファン、２個のフェニルアラニン、及び１個しかないアミン型のカチオン）に起因して、空気と水との間の境界面に対して好ましい親和性を有するようである。結果的に、ペプチドの疎水性に起因して、失われることになる水のエントロピーはより少なくなる。水の熱力学は、最大のエントロピー、水分子の無秩序、及びそれらの動的水素結合によって特徴付けられる。疎水性部分が水と混合されると、疎水性部分は水分子の自然な無秩序を妨害し、水のエントロピーを低減させる「氷の檻」を形成し、結果として水分子は、エントロピーの喪失を最小化するために、疎水性部分を表面に追い払う。
【０１３３】
水及び油、又は水性媒体及びＰＬＧＡなどの疎水性ポリマーなどの分散系においては、ＣＯＲ００５は、その両親媒性の性質に起因して、親油性／疎水性の境界面に対して高い親和性を有することになる。ＭＳの一次エマルションに対して予測される効果は、一次エマルションにおけるより小さな液滴サイズ、ペプチドによって低減された系の表面張力に起因するエマルションの安定性の増加、並びに境界面で疎水性「面」を形成するＰＬＧＡポリマー中における、ペプチドのより良好な相互作用、配向及び分散が形成されるであろうというものであった。
【０１３４】
観察された基礎的Ｂ１０  ＭＳ製剤からのＣＯＲ００５のインビトロ放出プロファイルは、最も低い放出速度を示した。加えて、ＳＥＭ画像（下を参照されたい）は、ペプチドの放出プロファイルと相関する、基礎的製剤Ｂ１０のＭＳの中実かつ密なマトリックスを示した。また、ミニブタにおけるＰＫデータは、Ｂ１０製剤に関して、ＣＯＲ００５の不良な経時的血漿濃度を実証している（表３）。
【０１３５】
ＣＯＲ００５酢酸塩の表面活性に対するＨＰＢの効果、ＨＰＢ：ＰＥＰ  １：２
ＨＰＢ：ＰＥＰの比率１：２でのＨＰＢの添加は、ペプチドの表面活性の低減をもたらす。観察された、添加物を伴わない水中におけるペプチドの表面活性（４４ダイン／ｃｍ）は、ＨＰＢが１：２の比率で添加されると、水（６８ダイン／ｃｍ）へと増加する方向に戻される（５２ダイン／ｃｍ）。この結果は、ＨＰＢが、水に対するペプチドの溶解性を増加させることによって、界面活性剤として作用するペプチドの潜在性を低減していることを示している。低減されたペプチドの表面活性及びより高い水溶性の結果は、境界面に存在するペプチドがより少なくなることである。
【０１３６】
ＭＳの一次エマルションに対するこの効果は、（ＨＰＢを伴わないペプチドの基礎的製剤と比較して）一次エマルションの比較的高めの表面張力、及びポリマー溶液に対して、水の境界面におけるペプチドの比較的低めの濃度となるであろう。加えて、ＨＰＢに対する水の高い親和性に起因して、ＭＳの沈殿中に、ＰＬＧＡマトリックス内に比較的多めの水が保持されることになる。
【０１３７】
観察された、Ｂ１３（ＨＰＢ：ＰＥＰが１：２の比率）からのＣＯＲ００５のインビトロ及びインビボバースト放出（Ｃｍａｘ）は、基礎的Ｂ１０、並びにＤＥＸ−Ｂ１２及びＰＳＩ１３  ＭＳ組成物の中で最高であった。また、ラットにおけるＢ１３のＰＫデータは、ペプチドの大部分が最初の２４時間の間に放出され、総ＡＵＣ（０〜２８日目）の約２０％が「ダンピング」された後、残りの２７日間の間は有意に低めの血漿レベルが続いたことを示している。
【０１３８】
ＣＯＲ００５酢酸塩の表面活性に対するＨＰＢの効果、ＨＰＢ：ＰＥＰ  １：４
試験４の結果（表４）は、ＨＰＢ：ＰＥＰの比率を１：２（製剤Ｂ１３）から１：４（製剤Ｂ１４）に低減したことの効果を示している。表面張力の結果は、ＨＰＢ：ＰＥＰ  １：４の低減された濃度（４５ダイン／ｃｍ）が、水中におけるＣＲ００５酢酸塩と同じ表面活性（４４ダイン／ｃｍ）を有することを示しており、この低めの比率においては、ペプチドの界面活性剤の性質に対するＨＰＢの効果はないことを示している。
【０１３９】
この場合、ペプチドは、ＨＰＢ：ＰＥＰ  １：２の場合よりも、境界面において高い濃度を有することが予想されるであろう。低減されたＨＰＢ：ＰＥＰの比率１：４の予測される効果は、製剤Ｂ１３のＩＶＲ及びＰＫプロファイルと比較して、低減されたインビトロ放出及びＢＡ、並びにＰＫプロファイルとなるであろう。基礎的な仮定は、ＨＰＢ：ＰＥＰ  １：４由来のＭＳ製剤における低減されたＨＰＢ濃度は、ＨＰＢ：ＰＥＰ  １：２由来のものと比較して、ペプチド／ＨＰＢ複合体に引き付けられる水がより少なくなるであろうことから、より密集したコアを有するミクロスフェアが形成されるであろうというものであった。また、ＭＳ表面の透過性も低減されるであろうことが予想される（より少ないＨＰＢ＝より少ない細孔）。ＨＰＢ：ＰＥＰの比率１：４を有するＭＳのこれらの可能な効果のすべては、製剤Ｂ１３（ＨＰＢ：ＰＥＰ  １：２）のＰＫプロファイルと比較して、ＭＳからのＣＯＲ００５の低減されたバースト放出と、その後の経時的により緩徐な放出をもたらすであろう。換言すれば、製剤Ｂ１３で観察されたような、最初の数日間の間のＭＳからのペプチドの急速放出を有する代わりに、Ｂ１４製剤は、より長い期間をかけて、同じ量のペプチドを放出するはずである。
【０１４０】
予想外なことに、このＨＰＢ：ＰＥＰの比率１：４のＩＶＲ及びＰＫ研究は、正反対の効果を示した。低減されたＨＰＢ：ＰＥＰの比率は、増加されたＩＶＲをもたらす（ＰＳＩシリーズのＩＶＲを参照されたい）。同じ傾向は、ＰＫ研究においても観察された。Ｂ１４のＰＫプロファイルは、製剤Ｂ１３を上回る、より高いバースト（Ｃｍａｘ）をもたらしている。加えて、製剤Ｂ１４から放出されたＣＯＲ００５の経時的血漿レベルは、製剤Ｂ１３よりも有意に高く、製剤Ｂ１０及びＢ１２をも上回った。
【０１４１】
ＣＯＲ００５酢酸塩の表面活性に対するＤＥＸの効果、ＤＥＸ：ＰＥＰ  １：８
試験５の結果（表４）は、ＤＥＸ：ＰＥＰの比率が１：８でＭＳ製剤に添加された場合のＤＥＸ：ＰＥＰの効果を示している。表面張力の結果は、ＤＥＸ：ＰＥＰ  １：８の溶液の見かけの表面張力（５４ダイン／ｃｍ）が、試験３のＨＰＢ：ＰＥＰ  １：２の場合（５１ダイン／ｃｍ）に匹敵することを示している。この効果は、より多くのペプチドが、境界面ではなくバルク溶液中に集中することを示唆している。実際、ペプチドに対するこれらのＤＥＸ及びＨＰＢの比率の下でのペプチドの表面活性は、ペプチド単独の場合（４４ダイン／ｃｍ）と比較して、低減される。水中に集中する添加剤は、一次エマルションの間、ペプチドの周囲に引き付けられる水の増加につながり得る。このことは、Ｂ１３製剤で起こることが予想されたような、内部マトリックスにおける比較的高めの含水量に起因する、ミクロスフェアの多孔性の増加につながり得る。
【０１４２】
しかしながら、製剤Ｂ１２（ＤＥＸ：ＰＥＰ）及びＢ１３（ＨＰＢ：ＰＥＰ）の比較用ＰＫデータは、これらの仮定を支持していない。製剤Ｂ１３のペプチド放出及び血漿レベルが、高いバースト放出及び低い経時的血漿濃度を示した一方で、製剤Ｂ１２からのバースト放出は低減され、経時的な血漿レベルは、製剤Ｂ１３のものを上回って、有意に増加されている。これらの予想外な結果は、一次エマルションの表面張力及び最終的ＭＳの外部多孔性が、観察されるペプチドのＰＫプロファイルに影響を及ぼす唯一の因子ではないことを示している。
【０１４３】
したがって、ＭＳの外部多孔性及びペプチドの表面張力を結び付けて、ＩＶＲ及びＰＫ研究において観察された添加剤の予想外な効果を（経験的に）支持する別の因子を探索した。様々なＭＳ製剤の内部（外部ではなく）形態に対する、様々な条件の効果を評定する試みの後に、この因子が特定された。加えて、下で考察されるＳＥＭ画像は、表面張力の測定値が、添加剤ＨＰＢ及びＤＥＸの濃度を変化させることによって影響を及ぼされる、変動するペプチドの境界面濃度の条件を特定するという仮説を支持した。実際に、ミクロスフェアの内部組織を曝露するためにミクロスフェアを切断することによってＳＥＭ画像撮影を繰り返すことによって初めて、ＣＯＲ００５  ＭＳ製剤の表面活性データとＩＶＲ及びＰＫデータとの間の結び付きが観察された（下を参照されたい）。
【０１４４】
表６は、生理学的条件下（３７℃）におけるＣＯＲ００５酢酸塩の表面活性プロファイルに対する添加剤の効果について要約しており、この条件は、注射部位でのＣＯＲ００５の放出を模している。
【０１４５】
【表６】
2019504897.tif 000007
【０１４６】
表６に描写されるデータは、ＣＯＲ００５酢酸塩に対する両方の添加剤ＤＥＸ又はＨＰＢの比率が、生理学的条件におけるＣＯＲ００５酢酸塩の溶解性を改善しないことを示している（表３及び４において、ＤＥＸはＰＢＳに対するペプチドの溶解性を改善せず、ＨＰＢはＰＢＳに対するペプチドの溶解性を、濃度依存的様式で改善することが示されていた）。ＭＳ製剤に関して使用される濃度で添加剤を伴うペプチドの溶解性は、溶解性に起因する、観察されたペプチドの放出及びＢＡの増加を支持しない。ＨＰＢ：ＰＥＰが１０：１という高い比率でＨＰＢを伴うＣＯＲ００５の表面張力（５０ダイン／ｃｍ）は、この仮定及び観察されるペプチド表面活性に対するＨＰＢの効果を確認するものである。ＨＰＢの増加は、より多くのペプチドが境界面ではなくバルク溶液中に存在することになるため、ペプチドの溶解性を増加させ、ペプチドの表面活性を低減させることになる。１：２から１：４へとＨＰＢ：ＰＥＰが低減される場合、溶液の表面張力も低減される。系内のより少ないＨＰＢは、より大きなペプチドの表面活性をもたらし、より多くのペプチドが境界面において利用可能となる。これらの結果は、製剤Ｂ１４に対する、製剤Ｂ１３の観察されたＩＶＲ及びＰＫデータを支持している。ＭＳにＨＰＢが添加された場合、多孔性が増加され、ペプチド放出は、ＭＳの内部空間の微小環境における、ペプチドとＨＰＢとの間の相互作用の程度（包接複合体）によって影響を及ぼされる。ＨＰＢ：ＰＥＰが比較的高い製剤Ｂ１３の場合、より多くの細孔がＭＳ内に生成され、より多くのペプチドが、ポリマーマトリックス内ではなく細孔の内部表面に存在する。より多くの水が（外部シェルにおけるより多くの細孔に起因して）内部マトリックスにとって利用可能となり、内部マトリックスへの急速な水の拡散が起こる。内部マトリックスでは、ペプチドの大部分が、ＨＰＢの効果に起因して、ポリマーから放出され得る。これは、最初の数日間の間のバースト及び急速放出の増加と、その後のより低い経時的血漿濃度を示した、製剤Ｂ１３のＩＶＲ及びＰＫにおいて観察されるような、比較的急速なペプチドの放出をもたらす。
【０１４７】
同じ傾向は、１：４の低減されたＨＰＢ：ＰＥＰの比率（製剤Ｂ１４）の効果によって支持される。表４は、この（低いＨＰＢの）条件におけるペプチドの表面活性が、添加剤を伴わないペプチドの表面活性と同様であり、それぞれ３４対３９ダイン／ｃｍであることを示している。この場合、ＭＳの多孔性は、（より多くのＨＰＢを伴う）製剤Ｂ１３と比較して低減されており、ペプチドの表面活性は保持され、より多くのペプチドが細孔の境界面に配向されることにつながる。水がＢ１４  ＭＳ内に拡散されると、ペプチドの放出は、内部高分子マトリックス及び細孔の内部空間からの放出によって影響を及ぼされる。
【０１４８】
これらの観察及び結果は、ＨＰＢのＭＳ製剤中のＨＰＢ残留濃度の分析によって支持される。実際、分析データ（下を参照されたい）によって、ＨＰＢの最終的ＭＳにおいて同じ比率のＨＰＢ：ＰＥＰが維持されていることが確認され、したがって、表６の条件及びデータが検証される。
【０１４９】
ＤＥＸの結果に関しては、最終ＭＳ中の残留ＤＥＸの分析データは、有意に低めのＤＥＸ：ＰＥＰの比率を示しており、これは、初期ＤＥＸ含有量の大部分が、調製過程の間にＭＳから洗い流されたことを示している。したがって、ＨＰＢの場合とは異なり、注射部位におけるＣＯＲ００５の表面活性に対するＤＥＸの効果は、無視できるほどであると思われる。ＤＥＸの効果については、下のＳＥＭ分析セクションにおいて扱う。
【実施例３】
【０１５０】
ベルドレオチド酢酸塩即時放出性製剤（グループ１Ｍ〜６Ｍ）を、下の表８に示されているように、HSD:SPRAGUE DAWLEY（登録商標）SD（登録商標）ラットへの注射用に調製した。下の表７に示されているように、製剤において使用するための乳酸ビヒクルを、以下の通りに調製した。
【０１５１】
【表７】
2019504897.tif 000008
【０１５２】
ラットへの注射用の製剤を、表８に要約されているように調製した。
【０１５３】
対象ラット（対象当たり約３７０グラムの平均体重）に、処置当たりラット５匹のグループで、上の投薬スケジュールに従って注射した。投薬の２日前に、ラットから、ベースラインとなる尾部血液試料を抜き取った。グループ１Ｍの場合、血液試料を、投薬の５分後、１０分後、３０分後、１時間後、２時間後、４時間後、６時間後、８時間後、及び２４時間後に抜き取った。グループ２Ｍ〜６Ｍの場合、尾部血液試料を、投薬の３０分後、１時間後、２時間後、３時間後、６時間後、８時間後、１２時間後、及び２４時間後にラットから抜き取った。血液試料は、およそ３００μＬの全血であり、市販のＫ３  ＥＤＴＡコーティングチューブに収集した。また、対象ラットは、投薬後最大５〜７日間、注射部位反応についても観察した。
【０１５４】
すべての皮下注射が、注射部位反応を誘発した。注射部位反応の評点を、表９に示す。
【０１５５】
【表８】
2019504897.tif 000009
2019504897.tif 000010
【０１５６】
【表９】
2019504897.tif 000011
【０１５７】
乳酸ビヒクルで製剤化されたベルドレオチド酢酸塩の注射液で、重度の注射部位反応が観察された。しかしながら、Ｌ−リジンＨＣｌ又は生理食塩水中のデキストロースで製剤化されたベルドレオチド酢酸塩を注射されたラット（それぞれ、グループ４Ｍ及び６Ｍ）は、比較的軽度の注射部位反応を呈した。
【０１５８】
血液試料は、収集後、遠心分離の時間まで氷上に保持した。血液試料は、採血から６０分以内に処理した。試料は、冷却遠心機（５℃）において、３０００Ｇで１５分間遠心分離させた。遠心分離後、血漿をチューブから取り出し、適切にラベル付けされた新しいチューブに入れ、移送するまで−６５℃〜−８０℃で保管した。
【０１５９】
血漿試料を、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって分析して、グループ１Ｍ〜６Ｍに関して、ベルドレオチド酢酸塩の血漿濃度を決定した。ベルドレオチド酢酸塩標準は、メタノール：水（１：９）で段階希釈し、ラットのブランク血漿に添加して、較正標準及びＱＣ試料を生成した。較正試料は、−７０℃で保管した。その後、凍結試料を室温まで解凍した。ブランク血漿及び試薬ブランク（水）も調製した。各々１００μＬのアリコートの試料、較正物質又はＱＣ試料に対して、２５μＬ（約１００ｎｇ／ｍＬ）の、メタノール：水（１：９）中の内部標準（オクトレオチド酢酸塩）、及び６００μＬのアセトニトリル：ギ酸（９９：１）を添加し、試料を３０秒間ボルテックス混合した。試料は、内部標準及びアセトニトリル：ギ酸溶液を添加する前に、２０μＬの血漿試料と１８０μＬのブランク血漿とを混合することによって希釈し、１００μＬのアリコートにした。
【０１６０】
その後、試料は、８℃で１０分間、１４，０００ｒｐｍにおいて遠心分離させた。次いで、４５０μＬの上（有機）層を蒸発管に移し、窒素下約５０℃で蒸発させた。次いで、２００μＬの再構成溶液（７０：３０：０．２の水：アセトニトリル：ギ酸）中で、試料を再構成した。試料は、８℃で１０分間、４０００ｒｐｍにおいて遠心分離させた。１６０μＬの各試料を取り出し、円錐形のガラスインサートを備えるオートサンプラーに入れ、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって分析した。
【０１６１】
その後、ベルドレオチド酢酸塩の血漿濃度を、標準的な薬物動態学的技法を使用してプロット及び分析した。グループ１Ｍ〜６Ｍに関して得られた薬物動態学的パラメーターを、表１０に示す。グループ２Ｍ〜６Ｍに関する、時間に対する血漿濃度のグラフ（片対数）を、図４に示す。
【０１６２】
【表１０】
2019504897.tif 000012
【０１６３】
ＣＯＲ００５酢酸塩のＩＶに対するＳＣの比較用片対数ＰＫプロファイルは、ＣＯＲ００５酢酸塩が、急変する動態を呈することを示している。ＳＣ曲線の傾斜率は、ＩＶの排出曲線と比較して、右にシフトしている。したがって、ＳＣ注射部位からのペプチドの見かけの吸収速度は、有意により緩徐であり、排出速度を上回って延長される。したがって、すべてのＳＣ製剤の見かけの半減期の値は、実際には、薬物動態学的プロファイルの排出段階の効果を支配する、吸収の半減期である。
【０１６４】
図５は、０．３ｍｇ／ｋｇ、ＤＥＸ：ＰＥＰの比率が５：１のデキストロース／生理食塩水ＩＲ製剤（６ｍ）の、ラットにおけるＣＯＲ００５  ＰＫプロファイル（profile）に対する効果を、対照として使用された乳酸緩衝液ｐＨ４中のＣＯＲ００５（３ｍ）と比較して例証するグラフである。図６は、デキストロース／生理食塩水ＩＲ製剤、ＨＰＢ／生理食塩水（ＨＰＢ：ＰＥＰ、１５：１）（５ｍ）の、ラットにおけるＣＯＲ００５  ＰＫプロファイルに対する効果を、対照として使用された乳酸緩衝液ｐＨ４中のＣＯＲ００５（３ｍ）と比較して例証するグラフである。図７は、対照として使用された乳酸緩衝液ｐＨ４中のＣＯＲ００５（３ｍ）と比較して、０．４ｍｇ／ｋｇでのミニブタにおける、ＨＰＢ及びＤＥＸ  ｓｃ製剤を比較するグラフである。図８は、対照として使用された乳酸緩衝液ｐＨ４中のＣＯＲ００５（３ｍ）と比較して、０．４ｍｇ／ｋｇでのミニブタにおけるＨＰＢ製剤を比較するグラフである。図９は、対照として使用された乳酸緩衝液ｐＨ４と比較して、ミニブタにおける、ＣＯＲ００５酢酸塩ＩＲ製剤、ＳＣ、０．４ｍｇ／ＫｇのＰＫプロファイルに対するＤＥＸの効果を示すグラフである。図１０は、対照として使用された乳酸緩衝液ｐＨ４と比較して、ミニブタにおける、ＣＯＲ００５酢酸塩ＩＲ製剤、ＳＣ、０．１ｍｇ／ＫｇのＰＫプロファイルに対するＤＥＸの効果を示すグラフである。
【０１６５】
これらの比較用ＰＫプロファイルは、デキストロース又はＨＰＢのいずれもが、他のビヒクルを上回って、ＣＯＲ００５の血漿Ｃｍａｘ及びその絶対的バイオアベイラビリティを向上させたことを示している。
【０１６６】
表１１は、ミニブタにおけるＣＯＲ００５酢酸塩ＩＲ製剤（用量、０．４ｍｇ／Ｋｇ）の薬物動態学的パラメーターを要約しており、ＣＯＲ００５のＣｍａｘ及び絶対的ＢＡに対するＨＰＢ及びＤＥＸの効果が示され、乳酸緩衝液ｐＨ４が対照として使用されている。表１２は、ミニブタにおけるＣＯＲ００５酢酸塩ＩＲ製剤（用量、０．１ｍｇ／Ｋｇ）の薬物動態学的パラメーターを要約しており、ＣＯＲ００５のＣｍａｘ及び絶対的ＢＡに対するＤＥＸの効果が示され、乳酸緩衝液ｐＨ４が対照として使用されている。
【０１６７】
【表１１】
2019504897.tif 000013
【０１６８】
【表１２】
2019504897.tif 000014
【０１６９】
ＨＰＢは、乳酸ビヒクル（Ｍ３）及びデキストロース（Ｍ６）と比較して、ＣＯＲ００５吸収の半減期を増加させている（Ｍ２及びＭ５）。これは、ＨＰＢビヒクルからのＣＯＲ００５のより緩徐な放出及び延長された吸収を示している。
【０１７０】
グループ２Ｍ〜６Ｍに関する２４時間でのトラフ濃度もまた分析しており、表１３に示している。
【０１７１】
【表１３】
2019504897.tif 000015
【０１７２】
留意され得るように、ベルドレオチド酢酸塩の静脈内注射は、入手可能な文献に基づいて予想された、１３ｍｌ／ｍｉｎ／ｋｇのＣＬを確認するものである（Afargan et al., Novel Long-Acting Somatostain Analog with Endocrine Selectivity: Potent Suppression of Growth Hormone But Not of Insulin, Endocrinology, 142:1 (2001) 477-486を参照されたい）。加えて、賦形剤の添加は、ベルドレオチド酢酸塩の薬物動態学的性能を改善させる。例えば、生理食塩水中のデキストロースの添加（グループ６Ｍ）は、ＡＵＣを改善させ、１００％超のＦ値をもたらす。図５〜１１において見られるように、賦形剤の添加は、ベルドレオチド酢酸塩のバイオアベイラビリティの改善をもたらす。加えて、表１３に示されているように、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（グループ２Ｍ及び５Ｍ）及びデキストロース（グループ６Ｍ）などの賦形剤の添加は、２４時間後に、ベルドレオチド酢酸塩の測定可能なトラフ濃度をもたらす。したがって、賦形剤の添加は、ラットモデルにおいて、注射部位反応を低減させるだけでなく、即時放出性ベルドレオチドの薬物動態を改善させることが実証された。
【実施例４】
【０１７３】
ベルドレオチド酢酸塩を、表１４の製剤に従って、ＰＬＧＡ（ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸））ミクロスフェアへと製剤化した。
【０１７４】
【表１４】
2019504897.tif 000016
【０１７５】
表１４の製剤を、製剤Ｂ９及びＢ１０の場合は２３Ｇ針を使用して、製剤Ｂ１１〜Ｂ１３の場合は１９Ｇ針を使用して、注射によってラットに投与した。各動物に対して、厳密に０．５ｍＬの体積の製剤を投与した。尾部血液試料を２８日間にわたって様々な時間点で抜き取り、ベルドレオチド酢酸塩製剤の薬物動態を決定し、注射部位反応をモニタリングした。採用した方法論は、実施例３において開示されたものと同様である。
【０１７６】
ラット血漿におけるＰＬＧＡ−ＭＳ−ＣＯＲ００５酢酸塩製剤の薬物動態学的分析
ＣＯＲ００５の薬物動態の分析を、PK Solutions 2.0ソフトウェア（Summit Research Services, CO.社 USA）を使用して行った。このソフトウェアは、いかなる特定のコンパートメントモデルも推定することなく、非コンパートメント（面積）及びコンパートメント（指数項）の方法を使用して、結果を計算する。複数回用量及び定常状態パラメーターは、単回用量の結果から自動的に算出される。ＰＫパラメーターの計算は、２つの標準的分析方法：（１）血液レベル曲線を説明する指数項を導出するための曲線回帰（又は残差法）、及び（２）曲線化面積の計算に基づいた。PK Solutions 2.0は、該当する場合、両方の方法を適用し、結果を並べて比較する。
【０１７７】
ＰＫデータ分析は、各グループの各動物のＰＫプロファイリングによって行った。様々な治療の比較用ＰＫパラメーターは、各グループの平均±ＳＴＤＥＶによって表した。
【０１７８】
図１１は、ＣＯＲ００５酢酸塩のＳＣ治療群Ｂ９〜１３の、ＰＬＧＡ−ＭＳ製剤の平均±ＳＴＤＥＶの時間曲線としての、ＣＯＲ００５血漿濃度の標準的プロットを示している（時間、０〜２８日目）。
【０１７９】
図１２は、単回ＳＣ用量、ラット（ｎ＝１６）に関する、ＳＣ治療群Ｂ９〜１３の、ＰＬＧＡ−ＭＳ−ＣＯＲ００５酢酸塩の平均±ＳＴＤＥＶのＣＯＲ００５血漿濃度時間曲線（時間、０〜２４時間）の標準的プロットとしての、「バースト」薬物動態のグラフを示している。
【０１８０】
図１３は、基礎的ＭＳ製剤と比較して、ＣＯＲ００５  ＰＬＧＡ  ＭＳのバースト放出（時間、０〜２４時間）に対するＨＰＢの効果を示している。
【０１８１】
表１５は、ラットにおけるＭＳ製剤からのＣＯＲ００５酢酸塩のバースト放出の、薬物動態学的パラメーターを要約しており、ＣＯＲ００５のＣｍａｘ及び絶対的ＢＡに対するＨＰＢの効果が示されている。
【０１８２】
【表１５】
2019504897.tif 000017
【０１８３】
図１４は、基礎的ＭＳ製剤と比較して、ＣＯＲ００５  ＰＬＧＡ  ＭＳのバースト放出（時間、０〜２４時間）に対するＤＥＸの効果を示しているグラフである。
【０１８４】
表１６は、ラットにおけるＭＳ製剤からのＣＯＲ００５酢酸塩のバースト放出の、薬物動態学的パラメーターを要約しており、ＣＯＲ００５のＣｍａｘ及び絶対的ＢＡに対するＤＥＸの効果が示されている。
【０１８５】
【表１６】
2019504897.tif 000018
【０１８６】
表１７は、ラットにおける全ＰＫプロファイル−ＣＯＲ００５  ＭＳ−ＰＬＧＡ  ７〜１７ｋＤａ−製剤Ｂ１３の絶対的及び相対的バイオアベイラビリティの値を要約している（時間、０〜２８日目）。
【０１８７】
【表１７】
2019504897.tif 000019
【０１８８】
表１８は、ミニブタにおける、ＣＯＲ００５酢酸塩ＰＬＧＡ−ＭＳ製剤の添加剤、ＨＰＢ及びＤＥＸの効果を要約している。
【０１８９】
【表１８】
2019504897.tif 000020
【０１９０】
図１５は、対照としてのＢ１０（基礎的ＭＳ製剤）と比較した、ミニブタにおける、ＰＳＩ１３のミクロスフェア（Ｂ１２、ＤＸＥ：ＰＥＰ  １：８）の比較用ＰＫプロファイルに関する、ＤＥＸ：ＰＥＰ  １：８の効果を示している。図１６は、対照としてのＢ１０（基礎的ＭＳ製剤）と比較した、ミニブタにおける、バースト放出ミクロスフェア製剤Ｂ１３の比較用ＰＫプロファイルのグラフで、ＨＰＢ：ＰＥＰ  １：２の効果を示している。図１７は、対照としてのＢ１０（基礎的ＭＳ製剤）と比較した、ミニブタにおける、組成物Ｂ１４のミクロスフェアからのバースト放出の比較用ＰＫプロファイルのグラフで、ＨＰＢ：ＰＥＰ  １：４の効果を示している。
【０１９１】
表１９及び２０は、ＨＰＬＣによって測定した、ミクロスフェアのバルク試料のペプチド含有量及びカプセル封入効率（ＥＥ，encapsulation efficiency）について要約している。
【０１９２】
【表１９】
2019504897.tif 000021
【０１９３】
【表２０】
2019504897.tif 000022
【０１９４】
ＰＬＧＡミクロスフェアからのベルドレオチド酢酸塩のインビトロ放出（ＩＶＲ，In vitro release）を測定した。５０ｍｇの各ミクロスフェアのバッチ（Ｂ９〜Ｂ１３）を、２０ｍＬのガラスバイアルにおいて、１０ｍＬのリン酸緩衝液（１０ｍＭ、ｐＨ＝７．４、カルシウム、マグネシウム、又は塩化物を伴わない）に添加した。これらのバイアルを、１５０ｒｐｍの温度制御振盪機上で、３７℃に維持した。試料を様々な時間点で回収し、NANOVUE（登録商標）UV-Vis分光光度計によって２８０ｎｍで標準的較正曲線に対して分析した。表２１に結果を要約する。図１８は、ミクロスフェア製剤Ｂ９〜１３からのＣＯＲ００５の比較用ＩＶＲプロファイルを示している。
【０１９５】
【表２１】
2019504897.tif 000023
【０１９６】
ミクロスフェア製剤Ｂ９〜Ｂ１３からのＣＯＲ００５の比較用ＩＶＲプロファイルは、図１８及び上の表２１に描写されている。データは、ミクロスフェアの調製に使用した、２つの特定の種類のＰＬＧＡ  ５０：５０の間で、有意な差を示している。放出されたペプチドの累積量及び放出速度は、両方とも、より高い分子量の３８〜５４ｋＤａで調製されたミクロスフェア（３８〜５４ＫＤ）と比較して、低い分子量のポリマー７〜１７ｋＤａで調製されたミクロスフェア（７〜１７ＫＤ）から有意に増加した。基礎的製剤Ｂ１０（添加剤を伴わない）と比較した、ＨＰＢ又はＤＥＸ（それぞれ、Ｂ１３及びＢ１２）との間の比較用インビトロ放出プロファイルは、添加剤ＨＰＢ又はＤＥＸが、基礎的製剤を上回って、放出速度及びミクロスフェアから放出された全累積ペプチドを増加させたことを示している。添加剤ＨＰＢを伴って調製されたＢ１３からのＣＯＲ００５のインビトロ放出プロファイルは、約４０％という最も高いバースト放出を示している。このバースト放出の後、次の１４日間の間は非常に低い放出速度が続き、１４日目に約４５％の総放出で終了した。なお、Ｂ１３のＩＶＲプロファイルは、ラット及びミニブタにおけるＰＫデータにおいて示されているように、そのＰＫプロファイルと相関している。添加剤デキストロースを伴って調製されたＢ１２からのＣＯＲ００５のインビトロ放出プロファイルは、約２０％という、Ｂ１３と比較して低減されたバースト放出を示している。Ｂ１２からのバースト放出の後、１４日間の時間経過を経て放出速度は連続的に増加し、１４日目に約４０％の総放出で終了した。Ｂ１３及びＢ１０に対する、Ｂ１２の比較用バースト放出のこのインビトロ放出プロファイルは、ラット及びミニブタにおけるＢ１２のＰＫプロファイルと相関している。添加剤を伴わずに調製された基礎的製剤、Ｂ１０からのＣＯＲ００５のインビトロ放出プロファイルは、約５％という有意に低いバーストを示している。Ｂ１０からのバースト放出の後、１４日間の時間経過を経て放出は連続的に増加し、１４日目に約２０％の総放出で終了した。観察されたＢ１０からの放出速度、及びこれらのミクロスフェアから放出された全累積ペプチドは、Ｂ１２及びＢ１３と比較すると有意に低かった。観察されたＢ１０からのインビトロバースト放出は、そのＰＫプロファイルと相関している。Ｂ１０は、ラット及びミニブタにおいて、Ｂ１２及びＢ１３と比較して、より低いインビボでのバースト放出を呈する。
【０１９７】
製剤の「バースト」動態（０〜２４時間）及び２８日間にわたる注射部位反応の結果を、それぞれ、表２２及び２３に示す。異なる製剤に関する薬物動態学的プロファイルについては、図１１〜１８に示している。
【０１９８】
【表２２】
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【０１９９】
【表２３】
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【０２００】
【表２４】
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【０２０１】
表２３に示されているように、ラットにおいては、耐容性は注射部位においては０．５ｍｇ以下であり、約１ｍｇで注射部位反応が誘発されるようである。
【０２０２】
また、この実施例で調製した各バッチに由来するＰＬＧＡミクロスフェアを、電子顕微鏡（ＳＥＭ）に供した。結果として得られた画像を、図１９〜２７に示す。
【０２０３】
図１２及び１３から観察することができるように、製剤Ｂ１３（ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンを伴う低分子量ＰＬＧＡミクロスフェア中のベルドレオチド酢酸塩）は、最初の２４時間の間に、他のベルドレオチド酢酸塩の製剤と比較して増加された「バースト」放出を呈した後、画定されたＣｍｉｎで２８日間の持続性放出が続いた。製剤Ｂ１０及びＢ１２（それぞれデキストロースを伴わない又は伴う、低分子量ＰＬＧＡミクロスフェア中のベルドレオチド酢酸塩）は、より小さな「バースト」を呈した後、約２週目から４週目にかけて、改善された耐容性を有する持続性放出を示す、注射部位反応の増加を伴わない放出の増加が続いた。Ｂ１２は特に、Ｂ１３に関して外挿されたＡＵＣよりも有意に高いバイオアベイラビリティ（ＡＵＣ）を実証した。しかしながら、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン又はデキストロースのいずれかを伴って調製されたベルドレオチド酢酸塩を含むＰＬＧＡミクロスフェアは、「バースト」段階において、賦形剤を伴わないＰＬＧＡミクロスフェアよりも向上された放出を呈した。理論に制限されるものではないが、これらの賦形剤が、ミクロスフェアの多孔性及び表面積の増加をもたらすものと思われる。全体として、Ｂ１０が最も耐容性を示した製剤であり、「バースト」段階の間に、約３０ｎｇ／ｍＬの血漿レベル（Ｃｍａｘ）をもたらした。また、ＩＶＲは、注射部位反応と逆相関するものであり、製剤に関する注射部位反応の潜在性を予測するために使用することができることも注目すべきである。
【０２０４】
添加剤の効果を示す、ＣＯＲ００５酢酸塩ＰＬＧＡ−ＭＳ製剤の比較用ＳＥＭ画像撮影
ＳＥＭ画像撮影の第１の目的は、様々なＭＳ製剤の外部形態を評定及び比較し、液滴サイズ及び表面張力に対する添加剤ＨＰＢ及びＤＥＸの効果を検証することであった。第２の目的は、様々なＭＳマトリックスの内部構造を評定及び比較することであった。より具体的には、ＣＯＲ００５、添加剤（ＤＥＸ及びＨＰＢ）、及び疎水性ＰＬＧＡポリマーの間の、示唆される独特な相互作用（一次エマルションの間、及び最終的ＭＳから注射部位においてペプチドが放出される間）、並びに（添加剤を伴う又は伴わない）ＣＯＲ００５の観察されるＩＶＲ及びＰＫプロファイルに対する、これらの相互作用の効果と相関する、様々な内部マトリックス間における可能な差異を特定することであった。
【０２０５】
図１９は、添加剤を伴わないＣＯＲ００５酢酸塩の基礎的ミクロスフェア製剤Ｂ１０の外部形態のＳＥＭ顕微鏡写真を示している。図２０は、添加剤を伴わないＣＯＲ００５酢酸塩の基礎的ミクロスフェア製剤Ｂ１０の内部形態の顕微鏡写真を示している。図２０において、矢印は、内部形態を示すために切り開かれたミクロスフェアを示している。
【０２０６】
図１９及び２０は、基礎的製剤Ｂ１０の外部形態及び内部形態を描写している。このＭＳ製剤の一次エマルションは、ペプチド水溶液を、塩化メチレン中のポリマーと、いかなる他の添加剤も伴わずに混合することに基づいた。なお、これらの調製条件の下では、ＣＯＲ００５は、（表２、３及び４に描写されているように）その最大表面活性を保有する。図１９は、製剤Ｂ１０  ＭＳの対称形の形状と、小さな細孔を数個だけ有する、ＭＳの比較的滑らかな外面とを描写している。したがって、これらの外部細孔の帰結を、ＭＳの内部形態とともに評定するために、別のＳＥＭシリーズを、ＭＳ試料を切断した後に行った。図２０のＳＥＭ画像は、低温切断の結果として曝露された、ＭＳの内部構造を示している。観察された内部マトリックスは、細孔を数個しか有しない中実性のテクスチャーを有し、これはこの基礎的Ｂ１０製剤の外部表面の観察と相関している。これらのＳＥＭ観察に基づき、製剤Ｂ１０は、比較的低い透過性を有するミクロスフェアと説明するのが最良である。これらの結果は、ＣＯＲ００５とポリマーとの間の親和性が高いという仮定を支持しており、比較的滑らかな外部表面と、中実かつ密な内部マトリックスをもたらす。この形態は、油中水型の、比較的疎水性の界面活性剤としてのＣＯＲ００５の独特な表面活性、及びポリマーの塩化メチレン溶液との境界面における疎水性表面としてのその配向に起因する（図２０、並びに表３、４及び５）。このペプチド：ポリマーの（化学的ではなく）物理的な相互作用の帰結として、製剤Ｂ１０からのペプチドの予想される放出は、比較的緩徐であるはずである。実際、ＩＶＲデータは、製剤Ｂ１０からのＣＯＲ００５の放出速度は、ＨＰＢ及びＤＥＸ  ＭＳ製剤と比較して、最も緩徐であることを示している。この緩徐な放出速度は、製剤Ｂ１２、Ｂ１３、及びＢ１４と比較して、ラット及びミニブタにおいて観察されたように、最も低いバースト放出（Ｃｍａｘ）を有し、ミニブタにおいて観察された、最も低い血漿レベルを有する、Ｂ１０のインビボＰＫプロファイルと相関していた（表３）。なお、ラットにおけるＰＫは、製剤Ｂ１２及びＢ１３を上回る、Ｂ１０  ＭＳ製剤からのＣＯＲ００５の血漿レベルの増加を示していたが、Ｂ１０動物群と関連する有意な変動性に起因して、これらの結果は不確定であったことに留意されたい。製剤Ｂ１０からの徐放性ＣＯＲ００５と、不良な血漿レベル及び低いＢＡとの間の決定的な相関関係は、表３に描写されているように、ミニブタにおけるＰＫ研究において裏付けられた。基礎的Ｂ１０製剤からのＣＯＲ００５の放出速度は、ミニブタにおけるＣＯＲ００５のクリアランス速度を克服するには緩徐であり過ぎ、結果として、不良な血漿レベルが経時的に得られた。
【０２０７】
ＤＥＸを伴うＢ１２製剤の外部形態及び内部形態
図２１及び２２は、それぞれ、製剤Ｂ１２（ＰＬＧＡ−ＭＳ−ＤＥＸ）の外部形態及び内部形態のＳＥＭ画像を描写している。図２１に描写されている画像は、基礎的Ｂ１０製剤において観察された非常に少ない細孔と比較して、表面に見える多くの細孔の結果としての外部表面の有意に高い多孔性を有する、製剤Ｂ１２の代表的ＭＳを示している。図２２においては、ＭＳの低温切断後の、製剤Ｂ１２の内部マトリックスが曝露されている。この画像は、比較的薄い組織内の高分子境界によって分離された有意に多数の空隙を示しており、これらの境界が、内部マトリックス内の高密度の小さな空隙と、したがって空隙容積の増加とをもたらす。この増加された空隙容積による、第１の予想される影響は、内部マトリックスにおけるポリマー密度の低減である。所定の体積のＭＳに関して、ＭＳ内部の空隙がより多いことは、空隙の内部空間に起因して、ポリマーがより少なくなることに等しい。この高い空隙容積による、第２の予想される結果は、ＭＳにおけるペプチド含有量の低減である。マトリックス内のポリマーがより少ないことは、ＭＳ内部におけるペプチドのカプセル封入がより少なくなることにつながり得る。この高い空隙容積による、第３の予想される影響は、製剤Ｂ１０の基礎的ＭＳの中実かつより密集したマトリックスと比較して、放出持続期間が短くなり、製剤Ｂ１２  ＭＳからのカプセル封入されたペプチドの放出が急速になることである。
【０２０８】
しかしながら、予想外なことに、予測された３つの結果のすべてが、ＣＯＲ００５のＩＶＲ及びＰＫデータにおいて観察されなかった。ＩＶＲデータ（下を参照されたい）は、製剤Ｂ１０よりも延長されかつ一定である、製剤Ｂ１２からのＣＯＲ００５の放出を示しており、ＰＫは、製剤Ｂ１０を上回る、製剤Ｂ１２の経時的に増加された血漿レベル及びより高い絶対的ＢＡを示している。
【０２０９】
これらの結果は、ＤＥＸを伴うＣＯＲ００５の一次エマルションの場合、ペプチドは、ＰＬＧＡマトリックス内に集中するのではなく、内部空隙のポリマーの表面に集中するという事実を指し示している。ＣＯＲ００５は、疎水性ＰＬＧＡポリマーに対するこのペプチドの高い親和性をもたらす、独特な表面活性を有するため、ＣＯＲ００５は、ポリマーと、一次エマルションの内部水相との境界面に集中する。この帰結として、添加剤を伴わないＭＳの固化段階の間、ＣＯＲ００５の大部分は、ＰＬＧＡ高分子鎖の間に集中することになる。
【０２１０】
しかしながら、ＤＥＸが添加されると、マトリックス内部に形成された多くの空隙が、多くの小空間を提供し、これらがＭＳ内部の表面積の向上をもたらす。この場合、ＭＳの総表面積は、比較的中実性のマトリックスを有する製剤Ｂ１０  ＭＳの場合を上回る、有意な様式で増加する。このことが、Ｂ１２からのＣＯＲ００５の有意に延長された放出と、それに続く、より長い期間にわたって増加された血漿レベルとをもたらし、これらは、ＣＯＲ００５が中実性の高分子構造からではなく、空隙の内部表面から放出されていることから説明できる。ペプチドが表面から放出されている場合にようやく、この放出の動態は、ＰＫと相関する。
【０２１１】
ＰＬＧＡ  ＭＳにおけるＤＥＸの予想外な別の影響は、ＭＳの一次エマルション及び固化の間の、ＣＯＲ００５の分散及び分布に対するその効果である。デキストロースは、水に対するＣＯＲ００５の溶解性を改善することが示されている（表３は、５００ｍｇ／ｍｌ超という、５％デキストロース溶液に対する高い溶解性を示している）。この効果は、ペプチドのコンフォメーションを、分子の外側に曝露される疎水性部分がより少なくなった、より親水性のコンフォメーションへと変化させる、デキストロースとＣＯＲ００５との間における潜在的な水素結合に起因し得る。換言すれば、高い水素結合能力及びデキストロースに対する水の親和性が、ペプチドの可溶化に役立ち得る。この効果は、ＭＳ内におけるペプチドの分散及び分布容積の改善につながる。一次エマルションが水性ＰＶＡ相である二次エマルションに添加されると、デキストロースの大部分は、未発達なＭＳから連続相へと漏出する。ペプチドは再度、ＰＬＧＡに対する高い親和性を有する、その元来の疎水性コンフォメーションを取ることになり、それによって、空隙の境界面及びポリマーマトリックス内部に集中する。これは、理論的積載量である４％のうち、最終的ＭＳではデキストロースが約０．５％しか検出されないという、最終的ＭＳにおける非常に低いデキストロースの回収率によって支持される（下の表２５）。
【０２１２】
【表２５】
2019504897.tif 000027
【０２１３】
ＨＰＢを伴うＢ１３製剤の外部形態及び内部形態
図２３及び２４は、製剤Ｂ１３  ＭＳの外部形態及び内部形態のＳＥＭ画像を描写している。図２５は、製剤Ｂ１３において使用されたものと同量のＨＰＢを伴う、対照として調製されたプラセボＭＳ（ＣＯＲ００５酢酸塩を添加しなかった）の外部形態及び内部形態を描写している。図２３に描写されているように、製剤Ｂ１３の外部形態は、ＰＬＧＡ−ＭＳにおける多孔性薬剤としてのＨＰＢの予想された効果を支持している。幅広い範囲の細孔径を有する多くの細孔が、表面に存在している。しかしながら、図２４は、低温切断によって切断された後の、製剤Ｂ１３  ＭＳの内部構造を示しており、これは、製剤Ｂ１３の内部形態と製剤Ｂ１２との間の有意な差異を指摘している。製剤Ｂ１３の内部構造は、製剤Ｂ１２における空隙のサイズと比較して、空隙サイズにおける有意な増加を呈している（図２２）。また、製剤Ｂ１３における内部のより大きい空隙の数は、製剤Ｂ１２において見られた高密度の多くの小さな空隙と比較して、低減されている。これらの結果は、製剤Ｂ１３の場合、内部空隙の形成に起因する総表面積の増加は、製剤Ｂ１２の場合よりも少ないことを示している。
【０２１４】
したがって、製剤Ｂ１３におけるＣＯＲ００５のカプセル封入効率は、内部表面積に起因して、製剤Ｂ１０及びＢ１２と比較すると低減されるであろうことが予想される。しかしながら、ＣＯＲ００５のカプセル封入効率は、これらの３つのＭＳ製剤に関して同様であった。これは、ＣＯＲ００５が、ＭＳの外部シェル周辺に比較的高濃度で集中しており、これがバースト放出の増加をもたらし得ることを意味している。また、包接複合体としてのＨＰＢとＣＯＲ００５との間の相互作用は、ＨＰＢとペプチドとの親水性複合体の濃度の増加をもたらすことになる。ＨＰＢとＣＯＲ００５との間のこの相互作用に起因して、親水性複合体がより多くの水を引き付けることになり、ＰＬＧＡの固化効率を制限することになり、これによって、図２３及び２４に示されているように、比較的大きな穴を有する内部マトリックスがもたらされることになる。
【０２１５】
ＨＰＢの分子量は、ＤＥＸと比較して有意に高いため（ＣＯＲ００５のレベルとほぼ同じ）、ＤＥＸのより高い分布容積と比較すると、ＭＳの内部空間におけるＨＰＢの可動性及び分散も制限されることになる。製剤Ｂ１３において見られるような、明白な内部空隙のより大きいサイズ、及びこの内部表面積と関連する、結果として生じるペプチドの表面活性の効果は、製剤Ｂ１３の独特なＩＶＲ及びＰＫプロファイルと相関している。製剤Ｂ１３  ＭＳの内部空間に水がアクセスすると、ペプチド周辺にＨＰＢが多く存在していることに起因して、ペプチドの即時放出が起こる。ＨＰＢの大部分は、表２５に示されているように、最終的ＭＳ内に残存し、これによって、ＨＰＢ：ＰＥＰの理論的比率１：２と同じ、ＨＰＢ：ＰＥＰの比率がもたらされる。加えて、これらの条件下では、表６に描写されているように、注射部位におけるペプチドの表面活性は低減される。これらの２つの効果の結果は、ペプチドの大部分は、ＭＳの大きな空隙の内部空間の表面に、ＨＰＢとの親水性複合体として集中することになるというものである。
【０２１６】
このデータは、水の浸透（注射後）の初期段階の間に、ペプチド積載量の大部分が即時放出され、その後、カプセル封入されていたペプチドの残りの非常に不良な放出が続くであろうことをさらに支持している。また、ＣＯＲ００５：ＨＰＢの相互作用、及びカプセル封入されたペプチドの表面活性に対するこの独特な相互作用の影響をさらに確認するために、Ｂ１３の「プラセボ」ＭＳ製剤を調製した。これは、製剤Ｂ１３と同様に、ＨＰＢとＰＬＧＡとの組み合わせに基づいたが、ペプチドＣＯＲ００５を伴わなかった。図２５は、ＣＯＲ００５酢酸塩を伴わないＢ１３製剤の「ＭＳ」形態のＳＥＭ画像を示している。この画像は、ＣＯＲ００５を伴わないＨＰＢのカプセル封入が、中実性のミクロスフェアではなく、中空のマイクロカプセルをもたらすことを明確に示している。より具体的には、ＭＳが固化している際にＨＰＢは水を保持し、潜在的には、未発達なＭＳにおけるＰＬＧＡの固化を緩徐にしている。この効果は、プラセボに関して観察されたように、製剤Ｂ１３のものよりも遥かに大きい、ＰＬＧＡマトリックスにおける有意に大きい穴／細孔につながり得る。この裏付けは、ＰＬＧＡ−ＭＳ製剤における独特かつ予想外な内部表面をもたらす、ＨＰＢとＣＯＲ００５との間の相互作用をさらに支持するものである。
【０２１７】
図２６は、ＤＥＸ及び賦形剤を使用するがペプチドＣＯＲ００５を伴わない、製剤Ｂ１２の同様の「プラセボ」ミクロスフェア製剤のＳＥＭ顕微鏡写真を示している。これらの図は、ペプチド含有製剤と同じ入力量の添加剤のみ（ＣＯＲ００５なし）で調製されたミクロスフェアの外部構造及び内部構造を示している。これらのプラセボミクロスフェアの外部形態は、非常に少ない表面細孔を示している。内部には、限られた数の大きな内部空隙が存在する。これらのミクロスフェアは、中空のコアを有する、ポリマーの「シェル」でしかない。これらは、マイクロカプセルと呼ばれることがある。いかなる特定の仮説にも束縛されるものではないが、油中水型の一次エマルションがいったん形成されると、ＷＦＩ及び添加剤のみの表面張力は、より小さな液滴を合体させる。ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）は、未発達なミクロスフェア（一次エマルション）を、分離した液滴として保持する。溶媒蒸発過程は比較的緩徐であり、一次エマルションに、２つの相：添加剤を含有する内側の水相と、ポリマー及び塩化メチレンで構成される外側のポリマー溶液相とを形成させる。ＭＳの表面は、有機ポリマー相内に微細分散された水滴によって形成された、わずかな細孔しか有しない。
【０２１８】
図２３及び２４において、ＣＯＲ００５をＨＰＢと併せて添加することの効果が見られる。内側水性相における表面張力の変化は、ペプチド及びＨＰＢのより小さな液滴を、溶媒蒸発過程全体を通じて残存させ、描写されているような内部構造及び表面構造が固まる。同様に、デキストロース及びＣＯＲ００５の組み合わせも、多数の小さな内部空隙を有するミクロスフェアをもたらす（図２２）。
【０２１９】
Ｂ１４（ＰＳＩ１２）パラダイム、並びにＨＰＢを伴うＣＯＲ００５の改善された放出プロファイル及びＰＫ
カプセル封入されたペプチド含有量の大部分が即時放出された後、有意に低い血漿レベルが経時的に続くことを示している、製剤Ｂ１３  ＩＶＲ及びそのＰＫプロファイルの予想外なデータは、低減された比率のＨＰＢ：ＰＥＰを有するＭＳ製剤の設計に関する基礎をもたらした。反直観的なＩＶＲ及びＰＫの結果は、１：２から１：４、さらには１：８へとＨＰＢ：ＰＥＰの比率を低減させることで、ＭＳからのペプチド放出における予想外な増加がもたらされることを示している。これらのＩＶＲ及びＰＫの結果と、ＣＯＲ００５の独特な表面活性との間の結び付きを調査するために、低減されたＨＰＢ：ＰＥＰの比率を有するＭＳの詳細なＳＥＭ分析を、それらの内部形態を評定することを目的として始めた。図２７は、様々な比率のＨＰＢ：ＰＥＰを有するＣＯＲ００５  ＭＳ製剤の内部マトリックスの形態を比較するＳＥＭ画像を示している。
【０２２０】
図２７の比較用ＳＥＭ画像から確認できるように、ＨＰＢ：ＰＥＰの比率の１：２（製剤Ｂ１３）から１：４（製剤Ｂ１４）への低減、並びに１：８及び１：１０へのさらなる低減は、これらのミクロスフェアの内部マトリックスにおける空隙の数の予想外な増加をもたらす。また、１：２から１：４へと低減された比率は、Ｂ１３と比較した場合のＢ１４のＨＰＢ：ＰＥＰ  １：４の例において確認できるように、ＭＳの外部表面における細孔の分布の増加という、別の反直観的な結果につながる。低減されたＨＰＢ：ＰＥＰの比率の逆／予想外な効果は、１：１０という最小のＨＰＢ：ＰＥＰの比率の場合に、この比率のＳＥＭ画像において描写されているように、さらに強化される。このＳＥＭ画像は、有意により密集した分布のより小さな空隙を有する内部マトリックスを示している。
【０２２１】
結論として、ＨＰＢ：ＰＥＰの比率が低減されるにつれて、より多くのＣＯＲ００５が、ＭＳの内部表面に配向される。この独特な表面活性は、増加及び延長されたペプチドの放出をもたらし、これは主に、増加した空隙を充填する内部表面積からのペプチドの放出に起因する。結果として、ペプチド放出は、製剤Ｂ１４の場合のＩＶＲ及びＰＫ研究において観察されたように、向上及び経時的に延長されることになる。なお、ＳＥＭ分析によって観察されたＨＰＢ：ＰＥＰ比率の間の逆の関係は、これらの様々なＨＰＢ：ＰＥＰ比率の比較用ＩＶＲ研究とも相関している。
【０２２２】
表面積
ミクロスフェアの表面積は、Micromeritics ASAP 2020計器において、窒素ガス吸着を使用して測定した。１５〜２５ｍｇのミクロスフェアを、この機械の分析管に添加し、特殊なシールフリットを用いて管の内部に密封する。分析を、２段階：脱ガス及び窒素吸着測定で始めた。脱ガスは、熱及び真空を適用して、ミクロスフェアの内側に湿分及び他の閉じ込められたガスを除去する過程である。ミクロスフェアは、真空（１００μｍＨｇ）下で脱ガスし、３５℃で１５０分間加熱した。その後、試料管を、計器の分析バルブに移した。試料管を、液体窒素のデュワ内に下ろして、試料を７７°Ｋに冷却する。窒素ガスを制御された様式で添加し、吸着等温線を生成するために、管の圧力をモニタリングする。等温線から、単位質量当たりの表面積を計算するために、ブルナウアー・エメット・テラー（ＢＥＴ）理論を適用する。分析時間はおよそ４時間であり、試料当たりの総実行時間は６．５時間である。
【０２２３】
細孔構造に影響を及ぼす表面張力の概念を、表面積測定によって再度確認する。上に記載されたように、賦形剤を伴わずに（ＰＳＩ−７）、及びＤＥＸ又はＨＰＢのいずれかを伴って（ＰＳＩ−６及びＰＳＩ−１２）調製された、いくつかの異なるミクロスフェアに対するこの試験の結果は、表２６に要約されている。
【０２２４】
【表２６】
2019504897.tif 000028
【０２２５】
より高いレベルの表面積は、ミクロスフェアの内部空隙の数がより大きいことを示している。
【０２２６】
ベルドレオチド酢酸塩、及び賦形剤としてのデキストロース又はＨＰＢのいずれかを含むミクロスフェアは、約７ｍ２／ｇ〜約１２ｍ２／ｇ、例えば約７ｍ２／ｇ〜約１０ｍ２／ｇなどの、複数の高分子ミクロスフェアの表面積を有する。
【０２２７】
比較として、０、０．２％、又は１％のグルコースを伴う、ＰＬＧＡ及びオクトレオチド酢酸塩で調製されたミクロスフェアは、それぞれ、４．４、４．７、又は４．９ｍ２／ｇの表面積を有した（Biomaterials, 2004, 25, 1919-1927）。
【実施例５】
【０２２８】
８０％（重量％）の綿実油、２０％（重量％）の注射用水（ＷＦＩ）、及び１％（重量％）のベルドレオチド酢酸塩を使用して、ベルドレオチドを油中水型エマルションとして製剤化した。具体的には、５ｍＬのガラスバイアルにおいて、１０ｍｇのベルドレオチド酢酸塩を２００μＬのＷＦＩに溶解させ、８００ｍｇの綿実油を添加し、結果として得られた混合物を、１０００ｒｐｍの磁気撹拌下、室温で１５分間撹拌した。次いで、このエマルションを光学顕微鏡で検分し、冷蔵下で保管した。結果として得られたエマルションは安定であり、２７Ｇ針によって注射可能であることが分かった。
【０２２９】
また、０．７％（ｗ／ｖ）のカルボキシメチルセルロースナトリウム塩（SIGMA C5013）高粘度、３７．５％（ｗ／ｖ）のヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、及び０．５％（ｗ／ｖ）のベルドレオチド酢酸塩を使用して、ベルドレオチド酢酸塩をヒドロゲルとして製剤化した。具体的には、１０ｍｇのベルドレオチド酢酸塩を、２ｍＬのＷＦＩ中の７５ｍｇのヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンと混合し、５ｍＬのガラスバイアルにおいて透き通るまで混合した。１４ｍｇのカルボキシメチルセルロースナトリウム塩を、室温で磁気撹拌しながら混合物に注ぎ入れることによって緩徐に添加した後、冷蔵下で保管した。結果として得られたヒドロゲルも、２７Ｇ針によって注射可能であることが分かった。驚くべきことに、製剤化の順序が、ゲルの安定性にとって重要であることが分かった。ベルドレオチド酢酸塩をヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンと組み合わせた後に、カルボキシメチルセルロースを添加すると、最初にカルボキシメチルセルロースをベルドレオチド酢酸塩に添加した場合又はこれらの構成要素を同時に組み合わせた場合よりも、強固なヒドロゲルがもたらされた。興味深いことに、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンと、カルボキシメチルセルロース単独との組み合わせは、ゲル形成をもたらさなかった。したがって、理論に束縛されるものではないが、ポリマーは、その独特な性質に起因して、シクロデキストリン及びペプチドと相互作用して、安定なゲルの形成をもたらすと考えられる。
【０２３０】
エマルション製剤及びヒドロゲルの両方を、ラットの各側に１つの製剤となるように、２７Ｇ針を使用して、注射部位当たり１ｍｇの用量でラットに注射した。投薬後４８時間まで、どちらの製剤でも、注射部位において腫脹は観察されなかった。投薬後４８時間で、ヒドロゲルのみに関して、注射部位において腫脹が観察されたが、エマルションでは観察されなかった。投薬後７２時間で、ゲル製剤に関して、腫脹及び小さな傷が観察された。エマルション製剤の注射部位は、いかなる有意な注射部位反応も呈せず、腫脹も脱毛も観察されなかった。
【０２３１】
ラットを屠殺し、死体解剖を行って、真皮下の注射部位反応を評価した。ヒドロゲルの注射部位において、７２時間で、浮腫、及び皮下組織の肥大を含む局所炎症の徴候が見られた。エマルションの注射部位においては、４８時間で、真皮下組織は、腫脹、浮腫、炎症、又は皮下組織の肥大の徴候も観察されず、良性であった。
【実施例６】
【０２３２】
ベルドレオチド酢酸塩及び１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）を１：１０の比率で組み合わせることによって、５ｍＬのガラスバイアルにおいて、１ｍＬのＷＦＩ中で、７ｍｇのベルドレオチド酢酸塩及び７０ｍｇのＤＭＰＣ（Avantiによる、14:0 PC (DMPC) 1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphocholine 850345、７重量％）を組み合わせることによって、ベルドレオチド酢酸塩をリポソーム（多重膜ベシクル）へと製剤化した。混合物を、磁気撹拌を使用して、室温で３０分間１０００ｒｐｍで撹拌した。この製剤を、図２８に示されているように、ＳＥＭ画像撮影を使用して分析した。リポソームを、冷蔵下で保管した。
【０２３３】
２匹のラットに、実施例３の乳酸ビヒクル中のベルドレオチド酢酸塩を注射した。３匹のSD（登録商標）ラットに、ベルドレオチド酢酸塩のリポソームを注射した。注射は、約４．５ｍｇ／ｋｇのベルドレオチド酢酸塩で行われ、投与された。血漿試料を、１時間、４時間、８時間、１２時間、２４時間、及び４８時間で抜き取り、先に考察したように分析して、ｎｇ／ｍＬ単位で、ベルドレオチド酢酸塩の血漿濃度を決定した。このデータについては、図２９にグラフ形状で示している。
【０２３４】
リポソームは、少なくとも４８時間の、治療濃度（１〜５ｎｇ／ｍＬ超）でのベルドレオチド酢酸塩の持続性放出にとって好適な送達ビヒクルであることを実証した。これは、ヒトの場合、１週間に１回の剤形と相関し得る。リポソームは、当業者に公知の任意の方法によって形成されてもよく、ベルドレオチド酢酸塩対リポソーム製剤の比率は、少なくとも１：５〜１：２０の範囲であり得ることが理解され得る。加えて、任意の薬学的に許容される担体又は希釈剤が使用されてもよい。
【実施例７】
【０２３５】
ベルドレオチド酢酸塩を含有するＰＬＧＡミクロスフェアを調製した。５００ｍｇのＰＬＧＡ  ５０：５０（７〜１７ｋＤａ）を、５ｍＬのジクロロメタン中に溶解させた（油相）。１ｍｌのＤＤＷ中に５０ｍｇのベルドレオチド酢酸塩を含有する水溶液を、別個に調製した（内側水性相）。第１の水性相を、高速ホモジナイザー（Polytron社）を使用して、２〜８℃で、異なる速度及び持続期間を用いて油相（ＰＬＧＡを含有する）中に乳化させて、油中水型一次エマルションを形成した。ＰＢＳ中１％のＰＶＡ溶液を含有する、１００ｍｌの外部水性相に、一次エマルションを（滴下）添加して、二次エマルションを形成した。ＰＶＡをＰＢＳ中に溶解させる理論的根拠は、水から外相へのベルドレオチド酢酸塩の漏出を最小限に低減するためである。次いで、湿潤したミクロスフェアを氷中において１０００ｒｐｍで２時間撹拌して、ＤＣＭを蒸発させ、ミクロスフェアを固化させた。ＰＢＳ中での３回の洗浄過程の後、湿潤したミクロスフェアを遠心分離によって回収し、次いで６ｍｌの２％マンニトール中に懸濁させ、凍結乾燥した。乾燥したミクロスフェアの試料を、ＤＤＷ：アセトン  １：１中に溶解させ、ペプチドの抽出量を、naoVue分光光度計によって推定した。ミクロスフェアにおけるベルドレオチド酢酸塩の最終薬物積載量は、６重量％であり、カプセル封入効率（ＥＥ）％は、７７％であった。
【０２３６】
本医薬組成物の実施形態としては、以下が挙げられる。
【０２３７】
水溶性であるが、等張条件において低い溶解性を有するペプチド又はその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体又は希釈剤と、疎水性捕捉剤、糖、又はアミノ酸である賦形剤とを含む、医薬組成物。
【０２３８】
水溶性であるが、等張条件において低い溶解性を有するペプチド又はその薬学的に許容される塩であって、前記薬学的に許容される塩が、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、クエン酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、サリチル酸塩、ｐ−アミノサリチル酸塩、リンゴ酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、アスコルビン酸塩、マレイン酸塩、スルホン酸塩、ホスホン酸塩、過塩素酸塩、硝酸塩、ギ酸塩、プロピオン酸塩、グルコン酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、パモ酸塩、ヒドロキシマレイン酸塩、ピルビン酸塩、フェニル酢酸塩、安息香酸塩、ｐ−アミノ安息香酸塩、ｐ−ヒドロキシ安息香酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、亜硝酸塩、ヒドロキシエタンスルホン酸塩、エチレンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、ナフチルスルホン酸塩、スルファニル酸塩、カンファースルホン酸塩、マンデル酸塩、ｏ−メチルマンデル酸塩、水素−ベンゼンスルホン酸塩、ピクリン酸塩、アジピン酸塩、Ｄ−ｏ−トリル酒石酸塩、タルトロン酸塩、α−トルイル酸塩、（ｏ，ｍ，ｐ）−トルイル酸塩、ナフチルアミンスルホン酸塩、オクタン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、脂肪酸塩、他の鉱酸塩、及びカルボン酸からなる群から選択される、ペプチド又はその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体又は希釈剤と、疎水性捕捉剤、糖、又はアミノ酸である賦形剤とを含む、医薬組成物。
【０２３９】
水溶性であるが、等張条件において低い溶解性を有するペプチド又はその薬学的に許容される塩と、ポリマーと、任意に、疎水性捕捉剤、糖、又はアミノ酸である賦形剤とを含む、医薬組成物。
【０２４０】
水溶性であるが、等張条件において低い溶解性を有するペプチド又はその薬学的に許容される塩と、ポリマー形成性ミクロスフェアと、任意に、疎水性捕捉剤、糖、又はアミノ酸である賦形剤とを含む、医薬組成物。
【０２４１】
水溶性であるが、等張条件において低い溶解性を有するペプチド又はその薬学的に許容される塩と、ポリマー形成性ミクロスフェアと、任意に、疎水性捕捉剤、糖、又はアミノ酸である賦形剤とを含む、医薬組成物。
【０２４２】
水溶性であるが、等張条件において低い溶解性を有するペプチド又はその薬学的に許容される塩と、ポリマーがＰＬＧＡである、ポリマー形成性ミクロスフェアと、任意に、疎水性捕捉剤、糖、又はアミノ酸である賦形剤とを含む、医薬組成物。
【０２４３】
ベルドレオチド又はその薬学的に許容される塩である、ペプチド又はその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体又は希釈剤と、疎水性捕捉剤、糖、又はアミノ酸である賦形剤とを含む、医薬組成物。
【０２４４】
ベルドレオチド又はその薬学的に許容される塩である、ペプチド又はその薬学的に許容される塩であって、前記薬学的に許容される塩が、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、クエン酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、サリチル酸塩、ｐ−アミノサリチル酸塩、リンゴ酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、アスコルビン酸塩、マレイン酸塩、スルホン酸塩、ホスホン酸塩、過塩素酸塩、硝酸塩、ギ酸塩、プロピオン酸塩、グルコン酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、パモ酸塩、ヒドロキシマレイン酸塩、ピルビン酸塩、フェニル酢酸塩、安息香酸塩、ｐ−アミノ安息香酸塩、ｐ−ヒドロキシ安息香酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、亜硝酸塩、ヒドロキシエタンスルホン酸塩、エチレンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、ナフチルスルホン酸塩、スルファニル酸塩、カンファースルホン酸塩、マンデル酸塩、ｏ−メチルマンデル酸塩、水素−ベンゼンスルホン酸塩、ピクリン酸塩、アジピン酸塩、Ｄ−ｏ−トリル酒石酸塩、タルトロン酸塩、α−トルイル酸塩、（ｏ，ｍ，ｐ）−トルイル酸塩、ナフチルアミンスルホン酸塩、オクタン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、脂肪酸塩、他の鉱酸塩、及びカルボン酸からなる群から選択される、ペプチド又はその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体又は希釈剤と、疎水性捕捉剤、糖、又はアミノ酸である賦形剤とを含む、医薬組成物。
【０２４５】
ベルドレオチド又はその薬学的に許容される塩である、ペプチド又はその薬学的に許容される塩と、ポリマーと、任意に、疎水性捕捉剤、糖、又はアミノ酸である賦形剤とを含む、医薬組成物。
【０２４６】
ベルドレオチド又はその薬学的に許容される塩である、ペプチド又はその薬学的に許容される塩と、ポリマー形成性ミクロスフェアと、任意に、疎水性捕捉剤、糖、又はアミノ酸である賦形剤とを含む、医薬組成物。
【０２４７】
ベルドレオチド又はその薬学的に許容される塩であって、前記ペプチドが、水溶性であるが、等張条件において低い溶解性を有する、ベルドレオチド又はその薬学的に許容される塩と、ポリマーがＰＬＧＡである、ポリマー形成性ミクロスフェアと、任意に、疎水性捕捉剤、糖、又はアミノ酸である賦形剤とを含む、医薬組成物。
【０２４８】
水溶性であるが、等張条件において低い溶解性を有するペプチド又はその薬学的に許容される塩と、ポリマーと、賦形剤とを含む医薬組成物であって、ゲルである、医薬組成物。
【０２４９】
水溶性であるが、等張条件において低い溶解性を有するペプチド又はその薬学的に許容される塩と、油相と、水性相と、任意に、疎水性捕捉剤、糖、又はアミノ酸である賦形剤とを含む医薬組成物であって、前記ペプチド又はその薬学的に許容される塩が、乳化剤として作用し、前記医薬組成物が、エマルションを形成する、医薬組成物。
【０２５０】
水溶性であるが、等張条件において低い溶解性を有するペプチド又はその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体又は希釈剤と、リポソームを形成するリポソーム製剤と、任意に、疎水性捕捉剤、糖、又はアミノ酸である賦形剤とを含む、医薬組成物。
【０２５１】
前述の医薬組成物のいずれかの実施形態としては、以下が挙げられる。
【０２５２】
ペプチド又はその薬学的に許容される塩が、環状ペプチド、又はペプチド両親媒性物質、又はソマトスタチン類似体、又は環状ソマトスタチン類似体、又はコンフォメーション的に拘束された主鎖環状ペプチド、又はコンフォメーション的に拘束された主鎖環状ソマトスタチン類似体、又はコンフォメーション的に拘束された主鎖環状単一アミンソマトスタチン類似体、又はイオン性水溶性界面活性剤である、医薬組成物。
【０２５３】
薬学的に許容される塩が、酢酸塩であるか、又は塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、クエン酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、サリチル酸塩、ｐ−アミノサリチル酸塩、リンゴ酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、アスコルビン酸塩、マレイン酸塩、スルホン酸塩、ホスホン酸塩、過塩素酸塩、硝酸塩、ギ酸塩、プロピオン酸塩、グルコン酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、パモ酸塩、ヒドロキシマレイン酸塩、ピルビン酸塩、フェニル酢酸塩、安息香酸塩、ｐ−アミノ安息香酸塩、ｐ−ヒドロキシ安息香酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、亜硝酸塩、ヒドロキシエタンスルホン酸塩、エチレンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、ナフチルスルホン酸塩、スルファニル酸塩、カンファースルホン酸塩、マンデル酸塩、ｏ−メチルマンデル酸塩、水素−ベンゼンスルホン酸塩、ピクリン酸塩、アジピン酸塩、Ｄ−ｏ−トリル酒石酸塩、タルトロン酸塩、α−トルイル酸塩、（ｏ，ｍ，ｐ）−トルイル酸塩、ナフチルアミンスルホン酸塩、オクタン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、脂肪酸塩、他の鉱酸塩、及びカルボン酸からなる群から選択される、医薬組成物。
【０２５４】
賦形剤が、糖であり、前記糖が、サッカライドであるか、又は単糖、二糖、及び多糖からなる群から選択されるか、又は環状多糖であるか、又はシクロデキストリンであるか、又はβ−シクロデキストリンであるか、又はヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンであるか、又は単糖であるか、又はデキストロースであるか、又は組成物の総重量に対して約２．５重量％〜約５．０重量％の濃度である、医薬組成物。
【０２５５】
賦形剤が、アミノ酸であり、天然アミノ酸であり、前記アミノ酸が、リジン又はアルギニン、又はアミノ酸の塩酸塩、又はＬ−リジン塩酸塩若しくはＬ−アルギニン塩酸塩である、医薬組成物。
【０２５６】
賦形剤が、疎水性捕捉剤であり、前記疎水性捕捉剤が、少なくとも１つの遊離アミン基を有する、医薬組成物。
【０２５７】
薬学的に許容される担体又は希釈剤が、等張酢酸緩衝液、乳酸、生理食塩水、及びリン酸緩衝生理食塩水からなる群から選択されるか、又は生理食塩水であるか、又は組成物の約０．４５重量％の濃度である、医薬組成物。
【０２５８】
ポリマーが、生体適合性であるか、又はマトリックスを形成するか、又は粒子を形成するか、又はミクロスフェアを形成する、医薬組成物。
【０２５９】
ミクロスフェアが、賦形剤を伴わずに製剤化されたミクロスフェアと比較して増加した多孔性を有するか、又は賦形剤を伴わずに製剤化されたミクロスフェアと比較して増加した表面積を有するか、又は賦形剤を伴わずに製剤化されたミクロスフェアと比較して増加したペプチド放出を有するか、又は賦形剤を伴わずに製剤化されたミクロスフェアと比較して、患者に対して医薬組成物を注射した後の最初の２４時間の間における増加したペプチドの放出を有するか、又は患者に対して医薬組成物を注射した後、少なくとも１週間の間、持続放出性プロファイルを呈するか、又は患者に対して医薬組成物を注射した後、少なくとも２週間の間、持続放出性プロファイルを呈するか、又は患者に対して医薬組成物を注射した後、少なくとも４週間の間、持続放出性プロファイルを呈する、医薬組成物。
【０２６０】
ポリマーが、ポリ乳酸−ｃｏ−グリコール酸（ＰＬＧＡ）であるか、又は前記ポリ乳酸−ｃｏ−グリコール酸（ＰＬＧＡ）が、５０：５０の比率の乳酸対グリコール酸を含む、医薬組成物。
【０２６１】
ポリマーが、ペプチド若しくはその薬学的に許容される塩、又は賦形剤、又はペプチド若しくはその薬学的に許容される塩と賦形剤との両方をカプセル封入する、医薬組成物。
【０２６２】
ポリマーが、約７〜約１７キロダルトンの平均分子量を有するか、又は約３８〜約５４キロダルトンの分子量を有する、医薬組成物。
【０２６３】
ペプチド及び賦形剤が、ポリマー内に共存する、医薬組成物。
【０２６４】
薬学的に許容される塩が、ベルドレオチド酢酸塩である、医薬組成物。
【０２６５】
ポリマーが、ベルドレオチド若しくはその薬学的に許容される塩、又は賦形剤、又はペプチド若しくはその薬学的に許容される塩と賦形剤との両方、又はベルドレオチド若しくはその薬学的に許容される塩と賦形剤との両方をカプセル封入する、医薬組成物。
【０２６６】
ベルドレオチド及び賦形剤が、ポリマー内に共存する、医薬組成物。
【０２６７】
ミクロスフェアが、ベルドレオチド若しくはその薬学的に許容される塩、又は賦形剤、又はベルドレオチド若しくはその薬学的に許容される塩と賦形剤との両方をカプセル封入する、医薬組成物。
【０２６８】
ポリマーが、粘度調整剤であるか、又は増粘剤であるか、又はゲル化剤であるか、又は１％水溶液において、１５００〜３０００ｃｐｓの平均粘度を有するか、又はセルロースガム若しくはその誘導体であるか、又はカルボキシメチルセルロースであるか、又はペプチド若しくはその薬学的に許容される塩と相互作用するか、又はペプチド及びシクロデキストリンと相互作用して、ゲルを形成する、医薬組成物。
【０２６９】
２７Ｇほど小さい小ゲージ針によって注射可能である、医薬組成物。
【０２７０】
エマルションであり、油相が、薬学的に許容される油若しくは綿実油を含むか、又は水性相が水を含むか、又は前記エマルションが、油中水型エマルションであるか、又は油相の水性相に対する比率が、約６０：４０〜９９．９：０．１であるか、若しくは約７０：３０〜９９．９：０．１であるか、若しくは約８０：２０〜９９．９：０．１であるか、若しくは約９０：１０〜９９．９：０．１であるか、若しくは約９５：５〜９９．９：０．１であるか、若しくは約５０．１：４９．９〜９０：１０であるか、若しくは約５０．１：４９．９〜８０：２０であるか、若しくは約５０．１：４９．９〜７０：３０であるか、若しくは約５０．１：４９．９〜６０：４０であるか、若しくは約６０：４０〜９０：１０であるか、若しくは約７０：３０〜８０：２０であるか、若しくは約８０：２０である、医薬組成物。
【０２７１】
リポソーム製剤が、ホスファチジルコリン若しくはその誘導体、又はＤＭＰＣである、医薬組成物。
【０２７２】
他の実施形態としては、以下が挙げられる。
【０２７３】
賦形剤を伴わない注射と比較して、患者における注射部位副作用を低減するための方法であって、（ａ）上の任意の実施形態の医薬組成物を賦形剤とともに製剤化するステップと、（ｂ）医薬組成物を前記患者に対して注射によって投与するステップとを含む、方法。
【０２７４】
賦形剤を伴わない注射と比較して、ペプチド又はその薬学的に許容される塩のバイオアベイラビリティを増加させるための方法であって、（ａ）上の任意の実施形態の医薬組成物を賦形剤とともに製剤化するステップと、（ｂ）医薬組成物を前記患者に対して注射によって投与するステップとを含む、方法。
【０２７５】
ペプチド又はその薬学的に許容される塩が、治療有効用量で投与される、方法。
【０２７６】
上の実施形態のうちいずれか１つの医薬組成物を製剤化するための方法であって、（ａ）ペプチド又はその薬学的に許容される塩、及び賦形剤を混合するステップと、（ｂ）ポリマーを緩徐に添加するステップとを含む、方法。
【０２７７】
疾患を治療するための方法であって、上の実施形態のうちいずれか１つの医薬組成物を、それを必要とする患者に投与するステップを含む、方法。
【０２７８】
疾患が、がん、２型糖尿病、先端巨大症、代謝障害、内分泌障害、外分泌障害、及びホルモン関連腫瘍からなる群から選択される、方法。
【０２７９】
医薬組成物が、注射、又は皮下注射、又は静脈内注射によって投与される、方法。
【０２８０】
実施形態１の医薬組成物の具体的な実施形態としては、以下が挙げられる。
【０２８１】
２．薬学的に許容される塩が、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、クエン酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、サリチル酸塩、ｐ−アミノサリチル酸塩、リンゴ酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、アスコルビン酸塩、マレイン酸塩、スルホン酸塩、ホスホン酸塩、過塩素酸塩、硝酸塩、ギ酸塩、プロピオン酸塩、グルコン酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、パモ酸塩、ヒドロキシマレイン酸塩、ピルビン酸塩、フェニル酢酸塩、安息香酸塩、ｐ−アミノ安息香酸塩、ｐ−ヒドロキシ安息香酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、亜硝酸塩、ヒドロキシエタンスルホン酸塩、エチレンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、ナフチルスルホン酸塩、スルファニル酸塩、カンファースルホン酸塩、マンデル酸塩、ｏ−メチルマンデル酸塩、水素−ベンゼンスルホン酸塩、ピクリン酸塩、アジピン酸塩、Ｄ−ｏ−トリル酒石酸塩、タルトロン酸塩、α−トルイル酸塩、（ｏ，ｍ，ｐ）−トルイル酸塩、ナフチルアミンスルホン酸塩、オクタン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、脂肪酸塩、他の鉱酸塩、及びカルボン酸からなる群から選択される、医薬組成物。
【０２８２】
３．薬学的に許容される塩が、ペプチドの酢酸塩である、実施形態１又は２に記載の医薬組成物。
【０２８３】
４．薬学的に許容される担体又は希釈剤が、等張酢酸緩衝液、水中０．９％のＮａＣｌ又は水中０．４５％のＮａＣｌの通常生理食塩水、注射用水、等張５％又は２．５％デキストロース、等張乳酸、及びリン酸緩衝生理食塩水からなる群から選択される、実施形態１〜３のいずれかに記載の医薬組成物。
【０２８４】
５．薬学的に許容される担体が、水中０．９％のＮａＣｌ又は水中０．４５％のＮａＣｌの生理食塩水である、実施形態１〜４のいずれかに記載の医薬組成物。
【０２８５】
６．薬学的に許容される担体又は希釈剤が、通常生理食塩水（水中０．９％のＮａＣｌ）である、実施形態１〜５のいずれかに記載の医薬組成物。
【０２８６】
７．ペプチド又はその薬学的に許容される塩が、それぞれ、ベルドレオチド又はベルドレオチド酢酸塩である、実施形態１〜６のいずれかに記載の組成物。
【０２８７】
８．ペプチドが、ベルドレオチドである、実施形態１〜７のいずれかに記載の医薬組成物。
【０２８８】
９．ペプチドの薬学的に許容される塩が、ベルドレオチド酢酸塩である、実施形態１〜８のいずれかに記載の組成物。
【０２８９】
１０．賦形剤が、環状多糖である、実施形態１〜９のいずれかに記載の医薬組成物。
【０２９０】
１１．環状多糖が、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンである、実施形態１０に記載の医薬組成物。
【０２９１】
１２．ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンの、ペプチド又はその薬学的に許容される塩に対する質量比が、１：１〜２０：１である、実施形態１１に記載の医薬組成物。
【０２９２】
１３．ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンの、ペプチド又はその薬学的に許容される塩に対する質量比が、１：１である、実施形態１２に記載の医薬組成物。
【０２９３】
１４．ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンの、ペプチド又は薬学的に許容される塩に対する質量比が、２０：１である、実施形態１２に記載の医薬組成物。
【０２９４】
１５．賦形剤が、デキストロースである、実施形態１〜９のいずれかに記載の医薬組成物。
【０２９５】
１６．デキストロースの、ペプチド又はその薬学的に許容される塩に対する質量比が、１：１〜約５：１、好ましくは５：１である、実施形態１５に記載の医薬組成物。
【０２９６】
１７．デキストロースの、ペプチド又はその薬学的に許容される塩に対する質量比が、５：１である、実施形態１６に記載の医薬組成物。
【０２９７】
１８．ベルドレオチド酢酸塩と、等張酢酸緩衝液、等張乳酸、水、水中０．９％のＮａＣｌ又は水中０．４５％のＮａＣｌの生理食塩水、注射用水、等張デキストロース５％又は２．５％、及びリン酸緩衝生理食塩水からなる群から選択される、薬学的に許容される担体又は希釈剤と、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（ＨＰＢＣＤ）とを含む、実施形態１〜１０のいずれかに記載の医薬組成物。
【０２９８】
１９．ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンの、ベルドレオチド酢酸塩に対する質量比が、１：１〜２５：１である、実施形態１８に記載の医薬組成物。
【０２９９】
２０．ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンの、ベルドレオチド酢酸塩に対する質量比が、１：１である、実施形態１９に記載の医薬組成物。
【０３００】
２１．ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンの、ベルドレオチド酢酸塩に対する質量比が、２５：１である、実施形態１９に記載の医薬組成物。
【０３０１】
２２．薬学的に許容される担体又は希釈剤が、水中０．９％のＮａＣｌ又は水中０．４５％のＮａＣｌの注射用生理食塩水である、実施形態１８〜２１のいずれかに記載の医薬組成物。
【０３０２】
２３．ベルドレオチド酢酸塩と、等張酢酸緩衝液、注射用水、水中０．９％のＮａＣｌ又は水中０．４５％のＮａＣｌの注射用生理食塩水、等張乳酸、等張デキストロース５％又は２．５％、及びリン酸緩衝生理食塩水からなる群から選択される、薬学的に許容される担体又は希釈剤と、デキストロースとを含む、実施形態１、２、３、４、５、６、７、８、及び１５のいずれかに記載の医薬組成物。
【０３０３】
２４．デキストロースの、ベルドレオチド酢酸塩に対する質量比が、１：１〜約５：１である、実施形態２３に記載の医薬組成物。
【０３０４】
２５．デキストロースの、ベルドレオチド酢酸塩に対する質量比が、５：１である、実施形態２３又は２４に記載の医薬組成物。
【０３０５】
２６．薬学的に許容される担体又は希釈剤が、水中０．９％のＮａＣｌ又は水中０．４５％のＮａＣｌの注射用生理食塩水である、実施形態２３〜２５のいずれかに記載の医薬組成物。
【０３０６】
２７．水に溶けやすいが、生理学的条件において溶けにくい、ペプチド又はその薬学的に許容される塩、環状多糖若しくはデキストロース、又はそれらの組み合わせである賦形剤、及び
高分子ミクロスフェアを含み、前記ペプチド又は前記その薬学的に許容される塩及び前記賦形剤が、前記高分子ミクロスフェア内にカプセル封入されている、実施形態１〜２６のいずれかに記載の医薬組成物。
【０３０７】
２８．高分子ミクロスフェアが、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）を含む、実施形態２７に記載の医薬組成物。
【０３０８】
２９．賦形剤が、デキストロースである、実施形態２７又は２８に記載の医薬組成物。
【０３０９】
３０．デキストロースの量が、高分子ミクロスフェアの総重量に対して、約０．１重量％〜約１．０重量％である、実施形態２７〜２９のいずれかに記載の医薬組成物。
【０３１０】
３１．ベルドレオチド酢酸塩、デキストロース、及び高分子ミクロスフェアを含み、前記高分子ミクロスフェアが、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）を含み、前記ベルドレオチド及び前記デキストロースが、前記高分子ミクロスフェア内にカプセル封入されている、実施形態２７〜３０のいずれかに記載の医薬組成物。
【０３１１】
３２．賦形剤が、環状多糖である、実施形態２７又は２８に記載の医薬組成物。
【０３１２】
３３．環状多糖が、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（ＨＰＢＣＤ）である、実施形態２７、２８、及び３２のいずれかに記載の医薬組成物。
【０３１３】
３４．ＨＰＢＣＤの量が、組成物の総ポリマー（ＰＬＧＡ）重量に対して、約２重量％〜約２０重量％である、実施形態２７、２８、３２、及び３３のいずれかに記載の医薬組成物。
【０３１４】
３５．ベルドレオチド酢酸塩、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（ＨＰＢＣＤ）、及び高分子ミクロスフェアを含み、前記高分子ミクロスフェアが、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）を含み、前記ベルドレオチド酢酸塩及び前記ＨＰＢＣＤが、前記高分子ミクロスフェア内にカプセル封入されている、実施形態２７、２８、３２、３３、及び３４のいずれかに記載の医薬組成物。
【０３１５】
３６．ベルドレオチド酢酸塩、デキストロース及びＨＰＢＣＤ、並びに高分子ミクロスフェアを含み、前記高分子ミクロスフェアが、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）を含み、前記ベルドレオチド、デキストロース及びＨＰＢＣＤが、前記高分子ミクロスフェア内にカプセル封入されている、実施形態２７又は２８に記載の医薬組成物。
【０３１６】
３７．高分子ミクロスフェアの直径が、約１０ミクロン〜約１００ミクロン、より好ましくは約１０ミクロン〜約３０ミクロンである、請求項２７〜３６のいずれかに記載の医薬組成物。
【０３１７】
実施形態３８．高分子ミクロスフェアを製造するための方法であって、
（ｉ）環状多糖若しくはデキストロース、又はそれらの組み合わせを含む、賦形剤と、ペプチド又はその薬学的に許容される塩とを水中で混合して、第１の水性混合物を形成するステップであって、前記ペプチド又は前記その薬学的に許容される塩が、脱イオン水における溶解性が１００〜３５０ｍｇ／ｍｌであり、脱イオン水に溶けやすいが、生理学的条件下において溶解性が２〜３ｍｇ／ｍｌであり、溶けにくく、前記ペプチド又は前記薬学的に許容される塩が、３ｍｇ／ｍｌ超の濃度で塩析することによって沈殿する、ステップ、
（ii）ポリマーを、ジクロロメタンなどの有機溶媒中に混合して、ポリマー溶液を形成するステップ、
（iii）前記第１の水性混合物を、前記ポリマー有機溶液中に混合して、油中水型一次エマルションを含む第１の分散体混合物を形成するステップ、
（iv）ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）を、リン酸緩衝生理食塩水又は生理食塩水中に、０．１〜３重量％の量で混合して、第２の水性混合物を形成するステップ、
（ｖ）前記一次エマルションを、前記ＰＶＡの第２の水性混合物中で混合して、水中油中水型の二重エマルションを形成して、二次分散体混合物を提供するステップ、
（vi）前記二次分散体混合物中の前記有機溶媒を蒸発させて、固体高分子ミクロスフェアを形成するステップであって、前記ペプチド又はその薬学的に許容される塩が、前記高分子ミクロスフェア内にカプセル封入されている、ステップ、
（vii）前記高分子ミクロスフェアを洗浄及び単離するステップ、並びに
（viii）乾燥過程中に、界面活性剤及びマンニトールの混合物を添加して、又は添加せずに、制御条件下で前記ミクロスフェアを乾燥させるステップ
を含む、前記方法。
【０３１８】
３９．賦形剤が、環状多糖であり、前記環状多糖の、ペプチド又はその薬学的に許容される塩に対する質量比が、約１：２〜約１：２０である、実施形態３８に記載の方法。
【０３１９】
４０．環状多糖が、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（ＨＰＢＣＤ）である、実施形態３９に記載の方法。
【０３２０】
４１．ＨＰＢＣＤの、ペプチド又はその薬学的に許容される塩に対する質量比が、約１：２〜約１：４である、実施形態３９に記載の方法。
【０３２１】
４２．賦形剤が、デキストロースであり、デキストロースの、ペプチド又はその薬学的に許容される塩に対する質量比が、１：４〜１：１６である、実施形態３８に記載の方法。
【０３２２】
４３．デキストロースの、ペプチド又はその薬学的に許容される塩に対する質量比が、１：６〜１：１０である、実施形態４２に記載の方法。
【０３２３】
４４．デキストロースの、ペプチド又はその薬学的に許容される塩に対する質量比が、１：８である、実施形態４２又は４３に記載の方法。
【０３２４】
４５．ペプチド又はその薬学的に許容される塩が、それぞれ、ベルドレオチド又はベルドレオチド酢酸塩である、実施形態３８〜４４のいずれかに記載の方法。
【０３２５】
４６．ポリマー溶液が、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）を含む、実施形態３８〜４５のいずれかに記載の方法。
【０３２６】
実施形態４７．実施形態３８〜４６のいずれかに記載の方法によって生成される、持続放出性医薬組成物。
【０３２７】
実施形態４８．高分子ミクロスフェアを製造するための組成物であって、ベルドレオチド又はその薬学的に許容される塩；環状多糖若しくはデキストロース、又はそれらの組み合わせを含む、賦形剤；及びポリマー溶液を含む、前記組成物。
【０３２８】
４９．賦形剤が、環状多糖、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（ＨＰＢＣＤ）である、実施形態４８に記載の組成物。
【０３２９】
５０．ＨＰＢＣＤの、ベルドレオチド又はその薬学的に許容される塩に対する質量比が、約１：１〜約１：２０、又は約１：２〜約１：４、又は約１：４である、実施形態４９に記載の組成物。
【０３３０】
５１．賦形剤が、デキストロースである、実施形態４８に記載の組成物。
【０３３１】
５２．デキストロースの、ベルドレオチド又はその薬学的に許容される塩に対する質量比が、１：４〜１：１６、又は１：６〜１：１０、又は１：８である、実施形態５１に記載の組成物。
【０３３２】
５３．ポリマー溶液がポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）を含む、実施形態４８〜５２のいずれかに記載の組成物。
【０３３３】
実施形態５４．先端巨大症、先端巨大症がん、カルチノイドがん、クッシング症候群、ＳＳＴ−Ｒ５発現腫瘍、２型糖尿病、高血糖症、及びホルモン関連腫瘍からなる群から選択される疾患又は状態を治療するための方法であって、実施形態１〜３７のいずれかに記載の医薬組成物を、前記疾患又は状態を有する患者に投与するステップを含む、方法。
【０３３４】
５５．医薬組成物が、注射によって投与される、実施形態５４に記載の方法。
【０３３５】
５６．医薬組成物が、皮下注射によって投与される、実施形態５４に記載の方法。
【０３３６】
５７．医薬組成物が、筋肉内注射によって投与される、実施形態５４に記載の方法。
【０３３７】
５８．医薬組成物が、注射準備済み等張溶液中の界面活性剤及びマンニトールで構成される、薬学的に許容される希釈剤中に分散される、実施形態５４〜５７のいずれかに記載の方法。
【０３３８】
本発明は、特定の実施形態に関して説明されてきたが、本発明の範囲から逸脱することなく、変更及び修正を行うことができ、本発明の範囲は、特許請求の範囲によってのみ画定されることが意図される。
【図１】
2019504897.tif 000029
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
2019504897.tif 000038
【図１１】
2019504897.tif 000039
【図１２】
2019504897.tif 000040
【図１３】
2019504897.tif 000041
【図１４】
2019504897.tif 000042
【図１５】
2019504897.tif 000043
【図１６】
2019504897.tif 000044
【図１７】
2019504897.tif 000045
【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
2019504897.tif 000048
【図２１】
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【図２２】
2019504897.tif 000050
【図２３】
2019504897.tif 000051
【図２４】
2019504897.tif 000052
【図２５】
2019504897.tif 000053
【図２６】
2019504897.tif 000054
【図２７】
2019504897.tif 000055
【図２８】
2019504897.tif 000056
【図２９】
2019504897.tif 000057
【国際調査報告】
2019504897.tif 000058
2019504897.tif 000059
2019504897.tif 000060