(57)【要約】  本発明は、ＲＳＶ感染症を処置または改善するための、ＲＳＶ阻害化合物Ａ、すなわち３−（｛５−クロロ−１−［３−（メチルスルホニル）プロピル］−１Ｈ−インドール−２−イル｝メチル）−１−（２，２，２−トリフルオロエチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−２−オンと、リバビリン、ＧＳ−５８０６、ＭＤＴ−６３７、ＢＴＡ−９８８１、ＢＭＳ−４３３７７１、ＹＭ−５４３４０３、Ａ−６０４４４、ＴＭＣ−３５３１２１、ＲＦＩ−６４１、ＣＬ−３８７６２６、ＭＢＸ−３００、ＡＺ−２７、ＭＥＤＩ８８９７、ＣＲ９５０１、パリビズマブ、３−（｛５−クロロ−１−［３−（メチルスルホニル）プロピル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝メチル）−１−シクロプロピル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−２−オン、３−［［７−クロロ−３−（２−エチルスルホニルエチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−２−イル］メチル］−１−シクロプロピル−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−２−オン、Ｎ−（２−フルオロ−６−メチルフェニル）−６−（４−（５−メチル−２−（７−オキサ−２−アザスピロ［３．５］ノナン−２イル）ニコチンアミド）ベンゾイル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ベンゾ［ｂ］チエノ［２，３−ｄ］アゼピン−２−カルボキサミド、および４−アミノ−８−［３−［［２−（３，４−ジメトキシフェニル）エチル］アミノ］プロピル］−６，６−ジメチル−２−（４−メチル−３−ニトロフェニル）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｈ］イソキノリン−７，９（６Ｈ，８Ｈ）−ジオンから選択される１種または複数種のＲＳＶ阻害化合物Ｂとの組合せを対象とする。本発明は、さらに、化合物Ａと１種または複数種の化合物Ｂとの組合せ製品、化合物Ａと１種または複数種の化合物Ｂとを含む医薬製品、化合物Ａと、化合物Ｂのうち１種または複数種との組合せ−または化合物Ａと１種または複数種の化合物Ｂとを含む医薬製品−のＲＳＶ感染症の処置のための使用、およびＲＳＶ感染症を処置または改善する方法を必要とする対象におけるＲＳＶ感染症を処置または改善する方法であって、化合物Ａと１種または複数種の化合物Ｂとの組合せを有効量で前記対象に投与するステップを含む方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＲＳＶ感染症の処置または改善に使用するための、
化合物Ａとして、３−（｛５−クロロ−１−［３−（メチルスルホニル）プロピル］−１Ｈ−インドール−２−イル｝メチル）−１−（２，２，２−トリフルオロエチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−２−オンまたはその薬学的に許容される塩と、
リバビリン、ＧＳ−５８０６、ＭＤＴ−６３７、ＢＴＡ−９８８１、ＢＭＳ−４３３７７１、ＹＭ−５４３４０３、Ａ−６０４４４、ＴＭＣ−３５３１２１、ＲＦＩ−６４１、ＣＬ−３８７６２６、ＭＢＸ−３００、ＡＺ−２７、ＭＥＤＩ８８９７、ＣＲ９５０１、パリビズマブ、３−（｛５−クロロ−１−［３−（メチルスルホニル）−プロピル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝メチル）−１−シクロプロピル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−２−オン、３−［［７−クロロ−３−（２−エチルスルホニル−エチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−２−イル］メチル］−１−シクロプロピル−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−２−オン、Ｎ−（２−フルオロ−６−メチルフェニル）−６−（４−（５−メチル−２−（７−オキサ−２−アザスピロ［３．５］ノナン−２−イル）ニコチンアミド）ベンゾイル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ベンゾ［ｂ］チエノ［２，３−ｄ］アゼピン−２−カルボキサミド、および４−アミノ−８−［３−［［２−（３，４−ジメトキシフェニル）エチル］アミノ］プロピル］−６，６−ジメチル−２−（４−メチル−３−ニトロフェニル）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｈ］イソキノリン−７，９（６Ｈ，８Ｈ）−ジオン、またはその薬学的に許容される塩から選択される１種または複数種の化合物Ｂと
を含む組合せ。
【請求項２】
化合物Ｂが、リバビリン、ＧＳ−５８０６、ＭＤＴ−６３７、Ａ−６０４４４、ＡＺ−２７、ＣＲ９５０１、パリビズマブ、Ｎ−（２−フルオロ−６−メチルフェニル）−６−（４−（５−メチル−２−（７−オキサ−２−アザスピロ［３．５］ノナン−２−イル）ニコチンアミド）−ベンゾイル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ベンゾ［ｂ］チエノ［２，３−ｄ］アゼピン−２−カルボキサミド、および４−アミノ−８−［３−［［２−（３，４−ジメトキシフェニル）エチル］アミノ］プロピル］−６，６−ジメチル−２−（４−メチル−３−ニトロフェニル）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｈ］イソキノリン−７，９（６Ｈ，８Ｈ）−ジオンから選択される、請求項１に記載の使用のための組合せ。
【請求項３】
化合物Ｂがリバビリンである、請求項１に記載の使用のための組合せ。
【請求項４】
化合物ＢがＧＳ−５８０６である、請求項１に記載の使用のための組合せ。
【請求項５】
化合物ＢがＭＤＴ−６３７である、請求項１に記載の使用のための組合せ。
【請求項６】
化合物ＢがＹＭ−５４３４０３である、請求項１に記載の使用のための組合せ。
【請求項７】
化合物ＢがＡ−６０４４４である、請求項１に記載の使用のための組合せ。
【請求項８】
化合物ＢがＭＥＤＩ８８９７、ＣＲ９５０１およびパリビズマブから選択されるモノクローナル抗体である、請求項１に記載の使用のための組合せ。
【請求項９】
化合物ＢがＮ−（２−フルオロ−６−メチルフェニル）−６−（４−（５−メチル−２−（７−オキサ−２−アザスピロ［３．５］ノナン−２−イル）ニコチンアミド）ベンゾイル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ベンゾ［ｂ］チエノ［２，３−ｄ］アゼピン−２−カルボキサミドである、請求項１に記載の使用のための組合せ。
【請求項１０】
化合物Ｂが４−アミノ−８−［３−［［２−（３，４−ジメトキシフェニル）エチル］アミノ］プロピル］−６，６−ジメチル−２−（４−メチル−３−ニトロフェニル）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｈ］イソキノリン−７，９（６Ｈ，８Ｈ）−ジオンである、請求項１に記載の使用のための組合せ。
【請求項１１】
化合物Ａの量および化合物Ｂの量が、ＲＳＶに対する相乗的な抗ウイルス効果が得られるような量である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の使用のための組合せ。
【請求項１２】
化合物Ａの量が１０ｍｇ〜２５００ｍｇの範囲であり、化合物Ｂの量が１０ｍｇ〜２５００ｍｇの範囲である、請求項１０に記載の使用のための組合せ。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の組合せと、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
【請求項１４】
ＲＳＶ感染症を処置または改善する方法を必要とする対象におけるＲＳＶ感染症を処置または改善する方法であって、化合物Ａとして、３−（｛５−クロロ−１−［３−（メチルスルホニル）プロピル］−１Ｈ−インドール−２−イル｝メチル）−１−（２，２，２−トリフルオロエチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−２−オンまたはその薬学的に許容される塩と、リバビリン、ＧＳ−５８０６、ＭＤＴ−６３７、ＢＴＡ−９８８１、ＢＭＳ−４３３７７１、ＹＭ−５４３４０３、Ａ−６０４４４、ＴＭＣ−３５３１２１、ＲＦＩ−６４１、ＣＬ−３８７６２６、ＭＢＸ−３００、ＡＺ−２７、ＭＥＤＩ８８９７、ＣＲ９５０１、パリビズマブ、３−（｛５−クロロ−１−［３−（メチルスルホニル）プロピル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝メチル）−１−シクロプロピル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−２−オン、３−［［７−クロロ−３−（２−エチルスルホニルエチル）−イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−２−イル］メチル］−１−シクロプロピル−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−２−オン、Ｎ−（２−フルオロ−６−メチルフェニル）−６−（４−（５−メチル−２−（７−オキサ−２−アザスピロ［３．５］ノナン−２−イル）ニコチンアミド）ベンゾイル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ベンゾ［ｂ］チエノ［２，３−ｄ］アゼピン−２−カルボキサミド、および４−アミノ−８−［３−［［２−（３，４−ジメトキシフェニル）エチル］アミノ］プロピル］−６，６−ジメチル−２−（４−メチル−３−ニトロフェニル）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｈ］イソキノリン−７，９（６Ｈ，８Ｈ）−ジオン、またはこれらのいずかの薬学的に許容される塩から選択される１種または複数種の化合物Ｂとを含む組合せを、治療有効量で前記対象に投与するステップを含む方法。
【請求項１５】
化合物Ａと１種または複数種の化合物Ｂとの前記組合せが、単一の医薬組成物に製剤化される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
化合物Ａと１種または複数種の化合物Ｂとの前記組合せが、化合物Ａを含む別個の医薬組成物、および１種または複数種の化合物Ｂを含む別個の医薬組成物として製剤化され、それにより、前記医薬組成物が同時にまたは逐次的に投与される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
ＲＳＶ感染症の処置または改善に使用するための医薬品を製造するための請求項１〜１２のいずれか一項に記載の組合せの使用。
【請求項１８】
ＲＳＶ感染症の処置または改善に使用するための医薬品を製造するための請求項１３に記載の医薬組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＲＳＶ感染症を処置または改善するための、ＲＳＶ阻害化合物Ａ、すなわち３−（｛５−クロロ−１−［３−（メチルスルホニル）プロピル］−１Ｈ−インドール−２−イル｝メチル）−１−（２，２，２−トリフルオロエチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−２−オンと、リバビリン、ＧＳ−５８０６、ＭＤＴ−６３７、ＢＴＡ−９８８１、ＢＭＳ−４３３７７１、ＹＭ−５４３４０３、Ａ−６０４４４、ＴＭＣ−３５３１２１、ＲＦＩ−６４１、ＣＬ−３８７６２６、ＭＢＸ−３００、ＡＺ−２７、ＭＥＤＩ８８９７、ＣＲ９５０１、パリビズマブ、３−（｛５−クロロ−１−［３−（メチルスルホニル）プロピル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝メチル）−１−シクロプロピル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−２−オン、３−［［７−クロロ−３−（２−エチルスルホニルエチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−２−イル］メチル］−１−シクロプロピル−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−２−オン、Ｎ−（２−フルオロ−６−メチルフェニル）−６−（４−（５−メチル−２−（７−オキサ−２−アザスピロ［３．５］ノナン−２−イル）ニコチンアミド）ベンゾイル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ベンゾ［ｂ］チエノ［２，３−ｄ］アゼピン−２−カルボキサミド、および４−アミノ−８−［３−［［２−（３，４−ジメトキシフェニル）エチル］アミノ］プロピル］−６，６−ジメチル−２−（４−メチル−３−ニトロフェニル）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｈ］イソキノリン−７，９（６Ｈ，８Ｈ）−ジオンから選択される１種または複数種のＲＳＶ阻害化合物Ｂとの組合せを対象とする。本発明は、さらに、化合物Ａと１種または複数種の化合物Ｂとの組合せ製品、化合物Ａと１種または複数種の化合物Ｂとを含む医薬製品、化合物Ａと、化合物Ｂのうち１種または複数種との組合せ−または化合物Ａと１種または複数種の化合物Ｂとを含む医薬製品−のＲＳＶ感染症の処置のための使用、およびＲＳＶ感染症を処置または改善する方法を必要とする対象におけるＲＳＶ感染症を処置または改善する方法であって、化合物Ａと１種または複数種の化合物Ｂとの組合せを有効量で前記対象に投与するステップを含む方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒトＲＳＶまたは呼吸器合胞体ウイルスは、ウシＲＳＶウイルスとともにニューモウイルス（Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅ）科、オルソニューモウイルス（Ｏｒｔｈｏｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓ）属に属する大型のＲＮＡウイルスである。ヒトＲＳＶは、世界中の全年齢の人々において、様々な気道疾患の原因となる。ヒトＲＳＶは、乳幼児期および小児期の下気道疾病の主因である。全乳幼児のうち半数を超える乳幼児が、生後１年以内にＲＳＶに遭遇し、ほぼすべての乳幼児が生後２年以内にＲＳＶに遭遇する。若年小児の感染は、長年続く肺障害を引き起こす可能性があり、その後の人生における慢性肺疾患（慢性喘鳴、喘息）の原因となる恐れがある。年長小児および成人は、ＲＳＶ感染すると（悪性の）感冒に罹患することが多い。高齢者では易罹患性が再び増加し、ＲＳＶは高齢者の肺炎発生に関連することが多く、これにより死亡率が著しく高くなる。
【０００３】
現在、ＲＳＶ感染症に対する使用に承認されているのは３種の薬物のみである。第１の薬物はリバビリンであり、これは入院小児の重篤なＲＳＶ感染症にエアゾール処置がされるヌクレオシド類似体である。他の２種の薬物、ＲｅｓｐｉＧａｍ（登録商標）（ＲＳＶ−ＩＧ）およびＳｙｎａｇｉｓ（登録商標）（パリビズマブ）、ポリクローナルおよびモノクローナル抗体免疫賦活薬は、予防的に使用するように意図されている。両薬物ともきわめて高価であり、非経口投与を必要とする。ＲＳＶ感染症の処置用に臨床開発中の化合物がいくつかある。それらの化合物のうちの１つが、国際公開第２０１２／０８０４４７号パンフレットに化合物Ｐ５５として開示されている、３−（｛５−クロロ−１−［３−（メチルスルホニル）−プロピル］−１Ｈ−インドール−２−イル｝メチル）−１−（２，２，２−トリフルオロエチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−２−オンである。
【発明の概要】
【０００４】
今般、３−（｛５−クロロ−１−［３−（メチルスルホニル）−プロピル］−１Ｈ−インドール−２−イル｝メチル）−１−（２，２，２−トリフルオロエチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−２−オン（以下、化合物Ａと呼ぶ）と、ＲＳＶ複製を阻害する特性を有する１種または複数種の化合物Ｂとの組合せが、ＲＳＶ感染症の処置において改善型の治療を提供することが発見された。
【０００５】
本明細書に開示している一部の実施形態は、化合物Ａと１種または複数種の化合物Ｂとの組合せ、およびＲＳＶ感染症を処置または改善するためのこの組合せの使用を必要とする対象における、ＲＳＶ感染症を処置または改善するためのこの組合せの使用に関する。
【０００６】
他の実施形態は、化合物Ａと１種または複数種の化合物Ｂとの組合せを含む医薬製品、およびＲＳＶ感染症を処置または改善するための前記医薬製品の使用に関する。
【０００７】
さらに他の実施形態は、ＲＳＶ感染症を処置または改善する方法を必要とする対象におけるＲＳＶ感染症を処置または改善する方法であって、化合物Ａと１種または複数種の化合物Ｂとの組合せを有効量で前記対象に投与するステップを含む方法に関する。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
化合物Ａは、３−（｛５−クロロ−１−［３−（メチルスルホニル）プロピル］−１Ｈ−インドール−２−イル｝メチル）−１−（２，２，２−トリフルオロエチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−２−オンであり、国際公開第２０１２／０８０４４７号パンフレットに、以下の構造：
【化１】
2019504102.tif 000002
を有する化合物Ｐ５５として開示されている。
【０００９】
１種または複数種のＲＳＶ阻害化合物Ｂは、リバビリン、ＧＳ−５８０６、ＭＤＴ−６３７、ＢＴＡ−９８８１、ＢＭＳ−４３３７７１、ＹＭ−５４３４０３、Ａ−６０４４４、ＴＭＣ−３５３１２１、ＲＦＩ−６４１、ＣＬ−３８７６２６、ＭＢＸ−３００、ＡＺ−２７、ＭＥＤＩ８８９７、ＣＲ９５０１、パリビズマブ、３−（｛５−クロロ−１−［３−（メチルスルホニル）プロピル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝メチル）−１−シクロプロピル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−２−オン、３−［［７−クロロ−３−（２−エチルスルホニルエチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−２−イル］メチル］−１−シクロプロピル−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−２−オン、Ｎ−（２−フルオロ−６−メチルフェニル）−６−（４−（５−メチル−２−（７−オキサ−２−アザスピロ［３．５］ノナン−２−イル）ニコチンアミド）ベンゾイル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ベンゾ［ｂ］チエノ［２，３−ｄ］アゼピン−２−カルボキサミド、および４−アミノ−８−［３−［［２−（３，４−ジメトキシフェニル）エチル］アミノ］プロピル］−６，６−ジメチル−２−（４−メチル−３−ニトロフェニル）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｈ］イソキノリン−７，９（６Ｈ，８Ｈ）−ジオンから個別に選択される。
【００１０】
【表１】
2019504102.tif 000003
【００１１】
【表２】
2019504102.tif 000004
【００１２】
【表３】
2019504102.tif 000005
【００１３】
【表４】
2019504102.tif 000006
【００１４】
以下で使用する場合は常に、化合物Ａ、化合物Ｂ、１種または複数種の化合物Ｂ、複数種の化合物Ｂという用語、または類似の用語は、化合物Ａおよび／または化合物Ｂの、その遊離塩基形態およびその薬学的に許容される塩形態の両方を含むものとする。
【００１５】
化合物Ａまたは化合物Ｂは、薬学的に許容される塩形態または遊離（すなわち非塩）形態で使用することができる。塩形態は、遊離形態を酸または塩基で処理することにより得ることができる。目的とするのは、薬学的に許容される酸付加塩および塩基付加塩であり、化合物が形成し得る治療活性のある無毒の酸付加塩および塩基付加塩の形態を含むものとする。化合物Ａまたは化合物Ｂの薬学的に許容される酸付加塩は、遊離形態を次のような適切な酸で処理することにより簡便に得ることができる。適切な酸には、例えば無機酸、例えば臭化水素酸もしくは特に塩酸などのハロゲン化水素酸、もしくは硫酸、硝酸およびリン酸などの酸；または有機酸、例えば、酢酸、プロパン酸、ヒドロキシ酢酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸（すなわちヒドロキシブタン二酸）、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、シクラミン酸、サリチル酸、ｐ−アミノサリチル酸、およびパモ酸などの酸が含まれる。化合物Ａまたは化合物Ｂは、適切な有機塩基または無機塩基で処理することにより、薬学的に許容される金属塩またはアミン付加塩の形態に変換することもできる。適切な塩基塩の形態には、例えば、アンモニウム塩、アルカリ金属塩およびアルカリ土類金属塩、例えば、リチウム塩、ナトリウム塩もしくはカリウム塩；またはマグネシウム塩もしくはカルシウム塩；有機塩基との塩、例えば、ベンザチン塩、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン塩、ヒドラバミン塩、ならびにアミノ酸との塩、例えば、アルギニンおよびリシンなどとの塩が含まれる。付加塩形態という用語は、化合物Ａまたは化合物Ｂが形成し得る、その塩に加えて、任意の溶媒和物も含むものとする。このような溶媒和物としては、例えば、水和物、およびアルコール付加物、例えばエタノール付加物などがある。
【００１６】
化合物Ｂの第１の群は、化合物Ｂが、リバビリン、ＧＳ−５８０６、ＭＤＴ−６３７、Ａ−６０４４４、ＡＺ−２７、ＣＲ９５０１、パリビズマブ、Ｎ−（２−フルオロ−６−メチルフェニル）−６−（４−（５−メチル−２−（７−オキサ−２−アザスピロ［３．５］ノナン−２−イル）ニコチンアミド）ベンゾイル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ベンゾ［ｂ］チエノ［２，３−ｄ］アゼピン−２−カルボキサミド、および４−アミノ−８−［３−［［２−（３，４−ジメトキシフェニル）エチル］アミノ］プロピル］−６，６−ジメチル−２−（４−メチル−３−ニトロフェニル）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｈ］イソキノリン−７，９（６Ｈ，８Ｈ）−ジオンから選択される群である。
【００１７】
化合物Ｂの第２の群は、化合物Ｂが、モノクローナル抗体の、ＭＥＤＩ８８９７、ＣＲ９５０１、およびパリビズマブから選択され、特に、化合物Ｂがパリビズマブである群である。
【００１８】
化合物Ｂの第３の群は、化合物Ｂが、リバビリン、ＧＳ−５８０６、ＭＤＴ−６３７、Ａ−６０４４４およびＡＺ−２７から選択される群である。
【００１９】
化合物Ｂの第４の群は、化合物Ｂが、Ｎ−（２−フルオロ−６−メチルフェニル）−６−（４−（５−メチル−２−（７−オキサ−２−アザスピロ［３．５］ノナン−２−イル）ニコチンアミド）−ベンゾイル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ベンゾ［ｂ］チエノ［２，３−ｄ］アゼピン−２−カルボキサミド、および４−アミノ−８−［３−［［２−（３，４−ジメトキシフェニル）エチル］アミノ］プロピル］−６，６−ジメチル−２−（４−メチル−３−ニトロフェニル）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｈ］イソキノリン−７，９（６Ｈ，８Ｈ）−ジオンから選択される群である。
【００２０】
ある実施形態では、本発明による組合せ中の化合物Ａの量および化合物Ｂの量は、ＲＳＶに対する相乗的な抗ウイルス効果が得られるような量である。
【００２１】
毎日投与される本発明の組合せ中の化合物Ａの量は、約１０ｍｇ〜約２５００ｍｇ、約５０ｍｇ〜約１０００ｍｇ、または約５０ｍｇ〜約５００ｍｇと変動し得る。
【００２２】
毎日投与される本発明の組合せ中の１種または複数種の化合物Ｂの量は、１種または複数種の化合物Ｂの総量について、約１０ｍｇ〜約２５００ｍｇ、約５０ｍｇ〜約１０００ｍｇ、または約５０ｍｇ〜約５００ｍｇと変動し得る。
【００２３】
本段落および以下の段落に記載する量はすべて、遊離形態（すなわち非塩形態）についてのものである。上記の値は、遊離形態相当値、すなわち遊離形態を投与すると仮定した場合の量を示す。塩を投与する場合、その量は、塩と遊離形態との分子量比に応じて算出する必要がある。
【００２４】
上記の１日量は、平均体重約７０ｋｇに対して算出されたものであり、小児用の場合、または体重がそれとかなり異なる患者に使用する場合には、計算し直さなければならない。
【００２５】
投与量は、１日を通して適切な間隔を空けて投与される、１回分、２回分、３回分または４回分以上の部分用量として提供することができる。使用される投与量は、好ましくは、化合物Ａおよび上記の１種または複数種の化合物Ｂの１日量、またはその部分用量、例えば、その１／２、１／３または１／４などに相当する。剤形は、化合物Ａおよび１種または複数種の化合物Ｂを、上記の段落に記載した範囲または量に等しい量で、別個の製剤中または組合せ製剤中に含有することができる。このような組合せ製剤が好ましい。
【００２６】
化合物Ａおよび１種または複数種の化合物Ｂが１日１回投与されるべき場合、これは、化合物Ａと１種または複数種の化合物Ｂとを含有する組合せの、組合せ固定用量を投与することにより、実現することができる。投与することができる剤形は以下に記載されるが、経口剤形、特に経口溶液が好ましい。
【００２７】
活性成分は、別個に、または組合せ医薬組成物として、医薬組成物に製剤化することができる。後者の場合、化合物Ａまたはその薬学的に許容される塩と、１種または複数種の化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩との治療有効量、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物が提供される。この場合の治療有効量とは、ＲＳＶ感染症を、感染した対象において、安定化させ、または低減するのに十分な量である。治療有効量は、特に、毎日投与される上記の量または毎日複数回投与することが容易なその部分用量に相当するものとすることができる。
【００２８】
さらなる態様において、本発明は、薬学的に許容される担体を、治療有効量の化合物Ａまたはその薬学的に許容される塩、および有効量の１種または複数種の化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩と、均質に混合するステップを含む、本明細書に記載の医薬組成物を調製する方法に関する。
【００２９】
本明細書で提供する組合せは、ＲＳＶ治療に同時にまたは逐次的に使用するための組合せ製剤として製剤化することもできる。このような場合、化合物Ａは、薬学的に許容される他の添加剤を含有する医薬組成物に製剤化され、１種または複数種の化合物Ｂは、それとは別に、薬学的に許容される他の添加剤を含有する医薬組成物に製剤化される。好都合には、これらの別個の医薬組成物は、同時にまたは逐次的に使用するためのキットの一部とすることができる。
【００３０】
本発明の組み合わせの個々の成分は、同時に、もしくは治療中の異なる時間に別々に、または分割した形態でもしくは単一の組合せ形態で同時に投与することができる。
【００３１】
したがって、化合物Ａおよび１種または複数種の化合物Ｂは、個々にまたは組み合わされて、投与目的に適した様々な医薬組成物に製剤化することができる。これらにおいて、特定の化合物ＡおよびＢの各々の治療有効量は、薬学的に許容される担体と組み合わされるが、担体は、投与に望ましい製剤の形態に応じて多種多様な形態をとり得る。医薬組成物は、経口、非経口（皮下、筋肉内および静脈内を含む）、経直腸、バッカルまたは経鼻で投与される医薬品として調製することができる。経口投与に好適な組成物としては、散剤、顆粒剤、凝集体剤、錠剤、圧縮丸剤または被覆丸剤、糖衣錠剤、サシェ剤、硬カプセル剤またはゼラチンカプセル剤、シロップ剤および懸濁剤が挙げられる。非経口投与に好適な組成物としては、水性または非水性の溶液剤または乳剤が挙げられ、経直腸投与について投与に好適な組成物としては、親水性または疎水性の賦形剤を有する坐剤が挙げられる。経鼻送達については、好適なエアゾール送達システムを使用することができる。
【００３２】
例えば、経口投与用の組成物を調製する際に、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤、乳剤および溶液剤などの経口液体組成物の場合には、例えば、水、グリコール類、油およびアルコールなどの通常の医薬媒体のいずれかを使用することができ、または固体組成物の場合には、デンプン、糖、カオリン、滑沢剤、結合剤および崩壊剤などの固体担体を使用することができる。非経口組成物では、担体は、通常、滅菌水を少なくとも大部分含むが、溶解補助剤、乳化剤または他の補助剤などの他の成分をそれに添加することができる。注射液剤を調製することができ、その担体は、生理食塩水溶液、グルコース溶液またはこの両方の混合物を含む。注射懸濁液を調製することもでき、その場合、適切な液体担体および懸濁化剤などを使用してもよい。また、再構成される散剤などの、使用直前に液体形態製剤に変換することが意図された固体形態製剤も含まれる。
【００３３】
医薬組成物は、投与が容易で投与量が均一になるように、単位剤形で提供することが好都合であり得る。例としては、錠剤（割線入り錠剤または被覆錠剤を含む）、カプセル剤、丸剤、坐剤、散剤分包、カシェ剤および注射用溶液剤または懸濁剤など、ならびにそれらを複数に分割したものが挙げられる。
【００３４】
本明細書に記載の化合物Ａと１種または複数種の化合物Ｂとの組合せは、ＲＳＶに感染した温血動物、特にヒトの処置において有用である。
【００３５】
本発明はまた、ＲＳＶ感染症を処置または改善する方法を必要とする対象におけるＲＳＶ感染症を処置または改善する方法であって、化合物Ａと１種または複数種の化合物Ｂとの、またはこれらのいずれかの薬学的に許容される塩の組合せを、治療有効量で、前記対象に投与するステップを含む方法にも関する。化合物Ａの量は５ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの範囲とすることができ、化合物Ｂの量は５ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの範囲とすることができる。
【００３６】
ある実施形態では、本発明は、さらに、ＲＳＶ感染症を処置または改善する方法を必要とする対象におけるＲＳＶ感染症を処置または改善する方法であって、化合物Ａと１種または複数種の化合物Ｂとの、またはこれらのいずれかの薬学的に許容される塩の組合せを投与するステップを含み、化合物Ａの量および化合物の量が、ＲＳＶに対する相乗的な抗ウイルス効果が得られるような量である、方法に関する。
【００３７】
他の実施形態は、ＲＳＶウイルスに感染した細胞に、化合物Ａと１種または複数種の化合物Ｂとの、またはこれらのいずれかの薬学的に許容される塩の組合せの有効量を接触させるステップを含む、ＲＳＶ感染症を処置または改善する方法に関する。
【００３８】
本明細書で使用する場合、「処置する」「処置すること」「処置」「治療の」および「治療」という用語は、必ずしも疾患または状態の完全治癒または消去を意味するものではない。いずれかの程度までの、ウイルス量の任意の低減、または疾患もしくは状態の任意の好ましくない徴候もしくは症状の軽減のことを、処置および／または治療と考えることができる。
【００３９】
「治療有効量」および「有効量」という用語は、指定された生物学的応答または薬物応答を引き出す活性化合物または医薬剤の量を示すために使用される。例えば、化合物の治療有効量は、疾患の症状を予防、軽減または改善するため、ウイルス量を低減するため、または治療を受ける対象の生存期間を延長するために必要な量とすることができる。この応答は、組織、系、動物またはヒトにおいて生じ得るものであり、ウイルス量の低減、治療を受ける疾患の徴候または症状の軽減を含む。有効量の決定は、本明細書に記載の本開示に照らすと、十分に当業者の能力の範囲内にある。用量として必要とされる、本明細書に開示している化合物の治療有効量は、投与経路、処置を受ける動物の種類（ヒトを含む）、および想定している特定の動物の身体特性に依存することになる。用量は、所望の効果を実現するために合わせて調整することができるが、体重、食事、併用投薬、および医療技術の当業者が認識し得る他の要因などの要因に依存することになる。
【００４０】
呼吸器シンクチカル（ｓｙｎｃｙｔｉｃａｌ）ウイルス（ＲＳＶ）感染症を処置する方法の有効性を判定するための種々の指標が当業者に公知である。好適な指標の例として、以下に限定されるものではないが、ウイルス量の低減、ウイルス複製の低減、セロコンバーション（患者血清中にウイルス検出不能）までの時間の短縮、臨床成績における罹患率もしくは死亡率の低減、および／または疾患応答の他の指標が挙げられる。
【００４１】
一部の実施形態では、化合物Ａと１種または複数種の化合物Ｂとの、またはこれらの薬学的な許容される塩の組合せは、ウイルス力価を検出不能レベルまで、例えば、１．７ｌｏｇ１０プラーク形成単位当量（ＰＦＵｅ）／ｍＬ未満、または０．３ｌｏｇ１０プラーク形成単位当量（ＰＦＵｅ）／ｍＬ未満まで低減することができる。一部の実施形態では、本明細書に記載の化合物の組合せは、ウイルス量を、本組合せの投与前のウイルス量と比較して（例えば、本組合せの初期投与を受けてから６０時間後）低減することができる。一部の実施形態では、本明細書に記載の化合物の組合せは、ウイルス量を、１．７ｌｏｇ１０（ＰＦＵｅ）／ｍＬより低く、または０．３ｌｏｇ１０（ＰＦＵｅ）／ｍＬより低くまで低減することができる。一部の実施形態では、本明細書に記載の化合物の組合せは、対象の血清中のウイルス力価の低減を、本組合せの投与前のウイルス量と比較して、約１．５−ｌｏｇ〜約２．５−ｌｏｇの低減、約３−ｌｏｇ〜約４−ｌｏｇの低減、または約５−ｌｏｇの低減よりも大きい範囲で実現することができる。例えば、ウイルス量は、本組合せの投与前、および本組合せの初期投与を受けてから数時間後（例えば、本組合せの初期投与を受けてから６０時間後）に測定される。
【００４２】
一部の実施形態では、化合物Ａと、化合物Ｂのうち１種または複数種との、またはこれらの薬学的な許容される塩の組合せは、対象の処置前のレベルを基準にしたＲＳＶの複製を、本組合せの初期投与を受けてから数時間後（例えば、本組合せの初期投与を受けてから６０時間後）に測定した場合、少なくとも１／１、１／２、１／３、１／４、１／５、１／１０、１／１５、１／２０、１／２５、１／５０、１／７５、１／１００またはそれ以上に低減することができる。一部の実施形態では、本明細書に記載の組合せは、処置前のレベルを基準にしたＲＳＶの複製を、約１／２〜約１／５、約１／１０〜約１／２０、約１／１５〜約１／４０、または約１／５０〜約１／１００の範囲に低減することができる。一部の実施形態では、本明細書に記載の組合せは、ＲＳＶ複製を、単剤治療として投与される１種の抗ＲＳＶ剤の使用によって実現されるＲＳＶの低減の低減と比較して、１〜１．５ｌｏｇ、１．５ｌｏｇ〜２ｌｏｇ、２ｌｏｇ〜２．５ｌｏｇ、２．５〜３ｌｏｇ、３ｌｏｇ〜３．５ｌｏｇまたは３．５〜４ｌｏｇ以上のＲＳＶ複製の低減の範囲で低減することができ、または同等の低減をより短時間で実現することができる。
【００４３】
経時で、感染因子は１種または複数種の治療剤に対して耐性を生じさせる可能性がある。「耐性」という用語は、本明細書で使用する場合、ウイルス株の治療剤に対する応答が遅延、低下および／またはなくなることを指す。例えば、抗ウイルス剤での処置後に、耐性ウイルスに感染した対象のウイルス量は、非耐性株に感染した対象が示すウイルス量の低減量と比較して、ごくわずかな程度までしか低減しない場合がある。一部の実施形態では、化合物Ａと、化合物Ｂのうち１種または複数種との、またはこれらの薬学的な許容される塩の組合せは、１種または複数種の異なる抗ＲＳＶ剤（例えばリバビリン）に耐性であるＲＳＶに感染した対象に投与することができる。一部の実施形態では、耐性ＲＳＶ株の発生は、対象が本明細書に記載の化合物の組合せで処置される場合、単剤治療として投与される他の抗ＲＳＶ剤に対するＲＳＶ株耐性の発生と比較して、遅らせることが可能である。
【００４４】
一部の実施形態では、化合物Ａと、化合物Ｂのうち１種または複数種との、またはこれらの薬学的な許容される塩の組合せは、ＲＳＶウイルス感染症から合併症になる対象のパーセンテージを、１種の抗ＲＳＶ剤で処置されて合併症になる対象のパーセンテージと比較して減少させることができる。例えば、本明細書に記載の化合物の組合せで処置されて合併症になる対象のパーセンテージは、単剤治療として投与される１種の抗ＲＳＶ剤のみで処置される対象と比較して、５％、１０％、２５％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％および９０％少なくすることができる。
【００４５】
化合物Ａと、化合物Ｂのうち１種または複数種との、またはこれらの薬学的な許容される塩の組合せを利用することの潜在的な利点は、化合物Ａもしくはその薬学的に許容される塩、および／または化合物Ｂのうち１種もしくは複数種、もしくはその薬学的に許容される塩の、ＲＳＶ感染症の処置において有効な必要量を、１種もしくは複数種の化合物（Ｂ）もしくはその薬学的に許容される塩、および／または化合物Ａもしくはその薬学的に許容される塩の場合に同等の治療結果を実現するための必要量と比較して、低減するということであり得る。例えば、化合物Ａもしくはその薬学的に許容される塩、および／または化合物Ｂのうち１種もしくは複数種、もしくはその薬学的に許容される塩の量は、単剤治療として投与された場合に同等のウイルス量の低減を実現するために必要な前述の化合物の量と比較して、少なくすることができる。本明細書に記載の組合せを利用することの別の潜在的な利点は、作用機序の異なる２種以上の化合物を使用すると、耐性ウイルス株の発生に対するバリアを、化合物が単剤治療として投与された場合のバリアと比較して、高くすることができるということである。本明細書に記載の組合せを利用することのさらなる利点には、組合せの化合物間に交差耐性が皆無かそれに近いこと、組合せの化合物の排泄経路が異なること、組合せの化合物間に重複する毒性が皆無かそれに近いこと、シトクロムＰ４５０に対する大幅な影響が皆無かそれに近いこと、および／または組合せの化合物間に薬物動態学的な相互作用が皆無かそれに近いことが含まれ得る。
【実施例】
【００４６】
以下の実施例は、本発明を例示するためのものであり、本発明を以下の実施例に限定するものではない。
【００４７】
実施例１：ＲＳＶアッセイ
底部が透明の黒色３８４ウェルのマイクロタイタープレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）にエコー・リキッドハンドラー（Ｌａｂｃｙｔｅ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を使用して音響液滴吐出により充填した。２００ｎＬの化合物原液（１００％のＤＭＳＯ）をアッセイプレートに移した。化合物（Ａ）またはその薬学的に許容される塩を、３８４ウェルプレートの「水平方向に」段階希釈（１：３）して１２の異なる濃度にし、化合物（Ｂ）またはその薬学的に許容される塩を、３８４ウェルプレートの「垂直方向に」段階希釈（１：３）して１２の異なる濃度にした。空所も、参照対照として使用するための化合物の各々単独の力価測定用に割り当てた。各ウェルに１０μＬの培養培地（フェノールレッド不含のＲＰＭＩ培地、１０％ＦＢＳ−熱不活性化、０．０４％ゲンタマイシン（５０ｍｇ／ｍＬ）を添加することによりアッセイを開始した。すべての添加工程は、マルチドロップ・ディスペンサー（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｅｒｅｍｂｏｄｅｇｅｍ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）を使用して行われる。次に、培養培地で希釈したｒｇＲＳＶ２２４ウイルス（ＭＯＩ＝１）をプレートに添加した。ｒｇＲＳＶ２２４ウイルスは付加ＧＦＰ遺伝子を含む遺伝子組換えウイルスであり（Ｈａｌｌａｋ  ＬＫ，Ｓｐｉｌｌｍａｎｎ  Ｄ，Ｃｏｌｌｉｎｓ  ＰＬ，Ｐｅｅｐｌｅｓ  ＭＥ．Ｇｌｙｃｏｓａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎ  ｓｕｌｆａｔｉｏｎ  ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  ｓｙｎｃｙｔｉａｌ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ；Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｖｉｒｏｌｏｇｙ（２０００），７４（２２），１０５０８−１３）、ＮＩＨ（Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，ＵＳＡ）からライセンスを受けて導入された。最後に、２０μＬのＨｅＬａ細胞懸濁液（３，０００細胞／ウェル）をプレーティングした。培地、ウイルス感染および偽感染の対照を、各試験に含めた。ウェルは体積当たり０．０５％のＤＭＳＯを含有する。細胞を５％ＣＯ２雰囲気下にて３７℃でインキュベートした。自社開発のＭＳＭレーザ顕微鏡（Ｔｉｂｏｔｅｃ，Ｂｅｅｒｓｅ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）で細胞中のＧＦＰ発現を測定することにより、ウイルス曝露３日後のウイルスの複製を定量した。ＥＣ５０を、ＧＦＰ発現に対する５０％阻害濃度と定義した。
【００４８】
細胞生存率アッセイ
並行して、化合物を、一連の白色３８４ウェルのマイクロタイタープレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）中で３日間インキュベートし、ＨｅＬａ細胞中の化合物の細胞毒性を、ＡＴＰｌｉｔｅキット（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ，Ｚａｖｅｎｔｅｍ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）を製造者の使用説明書に従って使用して細胞のＡＴＰ含量を測定することによって判定した。ＣＣ５０を、細胞毒性に対する５０％濃度と定義した。
【００４９】
データ解析
抗ＲＳＶ活性および細胞生存率の両方について、各実験をＮ＝３で行った。３つの実験のレプリコンの平均パーセント阻害値を生成し、抗ＲＳＶ活性については、組合せ指数（Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  Ｉｎｄｅｘ：ＣＩ）を、ＢｉｏｓｏｆｔソフトウェアのプログラムＣａｌＣｕＳｙｎ（Ｂｉｏｓｏｆｔ，ＵＫ）：ＣＩ＝［（Ｄ）１／（Ｄｘ）１］＋［（Ｄ）２／（Ｄｘ）２］により算出する。組合せは、ＣＩ＜１：相乗作用、ＣＩ＞１：拮抗作用、ＣＩ＝１：相加作用と定義される。ＣＩのより詳細な範囲を以下の表に示す。
【００５０】
【表５】
2019504102.tif 000007
【００５１】
実施例２：組合せ試験−ウミシイタケレポーターを有するＲＳＶ
ウミシイタケルシフェラーゼを発現するＲＳＶ（Ａ２−ＲＬ−株１９Ｆ）を、Ｅｍｏｒｙ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ａｔｌａｎｔａ，ＧＡ，ＵＳＡのＤｒ．Ｍａｒｔｉｎ  Ｍｏｏｒｅが作製した。Ａ２−ＲＬ−株１９Ｆのｉｎ  ｖｉｔｒｏでのウイルスの動態は、野生型ＲＳＶの動態と類似している。宿主細胞ＨＥｐ−２をＡＴＣＣから購入し（カタログ番号ＣＣＬ−２３）、この細胞を、Ｌ−グルタミンおよび１５ｍＭ  ＨＥＰＥＳを含有するＤＭＥＭ／ＨａｍのＦ−１２  ５０／５０ｌｘ（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ、カタログ番号１０−０９２−ＣＭ）中で培養した。培地にさらに５％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ、カタログ番号３５−０１０−ＣＶ）および１％（ｖ／ｖ）ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ、カタログ番号３０−００２−ＣＩ）を添加した。ＨＥｐ−２細胞を、加湿した５％ＣＯ２雰囲気下にて３７℃で維持した。
【００５２】
薬物処置およびウイルス投与
化合物の組合せの有効性を判定するために、以下の手順を続けた。初日、９６ウェルプレートに、ウェル当たり２０，０００のＨＥｐ−２細胞をプレーティングした。翌日、試験物を１００％ＤＭＳＯに溶解して、２００×の望ましい最終試験濃度にした。続いて、化合物（Ａ）またはその薬学的に許容される塩を、９６ウェルプレートの「水平方向に」段階希釈（１：３）して９つの異なる濃度にし、化合物（Ｂ）またはその薬学的に許容される塩を、９６ウェルプレートの「垂直方向に」段階希釈（１：３）して７つの異なる濃度にした。次いで、段階希釈した２００×試験物を、細胞培養培地中に１：１０に希釈して２０×試験物を生成した。２０×試験物から５μＬを分取し、９０μＬで存在する培地を伴う細胞に、チェッカーボード状に添加した。空所も、参照対照として使用するための化合物の各々単独の力価測定用に割り当てた。試験物を１２時間プレインキュベートしてから、ＭＯｌが０．５のＡ２−ＲＬ−株１９Ｆをプレートに添加し、さらに５％ＣＯ２下にて３７℃で２日間インキュベートした。
【００５３】
抗ＲＳＶ活性の判定
Ｒｅｎｉｌｌａ  Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  Ａｓｓａｙ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｅ２８２０）を使用して、抗ＲＳＶレプリコン活性を測定した。アッセイプレートを上記のように準備した。発光を、Ｐｅｒｋｉｎ  ＥｌｍｅｒマルチラベルカウンターＶｉｃｔｏｒ３Ｖを使用して記録した。
【００５４】
細胞生存率アッセイ
Ｐｒｏｍｅｇａ  ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙ、カタログ番号Ｇ７５７２）を使用して細胞生存率を測定した。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙは、培養中の生細胞の数を、代謝的に活性な細胞の存在を示す、存在するアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）の定量に基づいて決定するホモジニアス法である。細胞生存率アッセイにはウイルスを添加しなかったこと以外は抗ＲＳＶアッセイと同じ形式で、アッセイプレートを準備した。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ試薬から１００μＬを分取して各ウェルに添加し、室温で８分間インキュベートした。発光を、Ｐｅｒｋｉｎ  ＥｌｍｅｒマルチラベルカウンターＶｉｃｔｏｒ３Ｖを使用して記録した。
【００５５】
データ解析
抗ＲＳＶ活性および細胞生存率の両方について、各実験をＮ＝５で行った。５つの実験のレプリコンの平均パーセント阻害値を生成し、抗ＲＳＶ活性については、２つの薬物相互作用解析モデル、アイソボログラム解析および／またはＰｒｉｃｈａｒｄのモデルを使用して解析した。
【００５６】
アイソボログラム解析
薬物−薬物の組合せの有効性を、Ｌｏｅｗｅ相加性モデルにより評価し、実験データを、ＣｈｏｕおよびＴａｌａｌａｙ法に基づくコンピュータープログラムであるＣａｌｃｕＳｙｎ（Ｂｉｏｓｏｆｔ，Ｆｅｒｇｕｓｏｎ，ＭＯ）を使用して解析した。実験の組合せの各々について組合せ指数（ＣＩ）値およびアイソボログラムを算出した。ＣＩ値＜１、１および＞１は、それぞれ、相乗作用、相加作用および拮抗作用を示す。相乗作用の範囲内では、ＣＩ＜０．１はきわめて強力な相乗作用、ＣＩ０．１〜０．３は強力な相乗作用、ＣＩ０．３〜０．７は相乗作用、およびＣＩ０．７〜０．８５は穏やかな相乗作用と考えられる。薬物の相加作用、相乗作用および拮抗作用を図式表示するアイソボログラム解析も使用して、抗ウイルス活性の相互作用をモデル化した。この表示法では、１種の薬物の有効濃度（ＥＣ）値が１つの軸にプロットされ、対応する第２の薬物のＥＣ値が第２の軸にプロットされ、これらの２種の点を結ぶ線は、その効果が相加作用であると仮定した場合の、ＥＣ値に等しい量に到達するのに必要な、組合せ中の各薬物の量を表す。
【００５７】
Ｐｒｉｃｈａｒｄのモデル（Ｍａｃ  Ｓｙｎｅｒｇｙ  ＩＩ）
Ｄｒ．Ｍ．Ｐｒｉｃｈａｒｄ（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｍｉｃｈｉｇａｎ）の好意によりＭａｃＳｙｎｅｒｇｙ  ＩＩソフトウェアの提供を受けた。このプログラムは、Ｂｌｉｓｓ−Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅモデルを用いて、２種の阻害剤のチェッカーボード式の組合せから生成されるすべてのデータ点の薬物相互作用の三次元検証を可能にする。信頼限界はレプリケートのデータから決定される。９５％信頼限界（ＣＬ）が理論上の相加作用面に重ならない場合、２種の薬物間の相互作用は相加作用とは大いに異なる。相乗作用または拮抗作用の大きさを判定し、三次元で図式表示することができ、２種の薬物濃度の変化量当たりの相乗作用または拮抗作用の相対量が表示される。相乗作用および拮抗作用の大きさは、両化合物が異なる標的に独立に作用することを仮定しているＢｌｉｓｓ  ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅモデルに基づいている。Ｂｌｉｓｓ  ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅモデルにおける一連の予測される部分的応答ｆａＡＢを、ｆａＡＢ＝ｆａＡ＋ｆａＢ−ｆａＡ・ｆａＢとして算出するが、ｆａＡおよびｆａＢは、考えられる応答の部分、例えば、量がそれぞれｄＡおよびｄＢの化合物ＡおよびＢの％阻害を表し、量が（ｄＡ＋ｄＢ）での化合物ＡとＢとの組合せの％阻害を表す。ｆａＡＢ＞ｆａＡ＋ｆａＢ−ｆａＡ・ｆａＢの場合はＢｌｉｓｓ相乗作用があり、ｆａＡＢ＜ｆａＡ＋ｆａＢ−ｆａＡ・ｆａＢの場合はＢｌｉｓｓ拮抗作用がある。９５％相乗作用／拮抗作用の大きさとは、観察された阻害間の差の総和であり、Ｂｌｉｓｓ  ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅモデルにおけるｆａＡＢの予測の９５％信頼限界である。表１は、Ｂｌｉｓｓ  Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ解析の結果について、大きさおよび対応する大きさの説明を示す。Ｍａｃ  Ｓｙｎｅｒｇｙ  ＩＩをデータ解析に使用した。
【００５８】
【表６】
2019504102.tif 000008
【００５９】
実施例３：ＲＳＶアッセイ組合せ実験
組合せのＲＳＶに対する抗ウイルス効果を評価するために、ＪＮＪ−５３７１８６７８（「化合物Ａ」）と、作用機序の異なる種々の化合物（「化合物Ｂ」）とを用いてｉｎ  ｖｉｔｒｏ組合せ試験を行った。手短に言えば、９種の濃度の化合物Ａを、６種または７種の濃度のある特定の化合物Ｂと組み合わせた。種々の濃度の化合物Ａと化合物Ｂとを個々にまたは組み合わせて存在させて、ＨｅＬａ細胞を、ｅＧＦＰをコードする遺伝子組換えＲＳＶ株であるｒｇＲＳＶ２２４に感染させた（Ｈａｌｌａｋ  ＬＫ，Ｓｐｉｌｌｍａｎｎ  Ｄ，Ｃｏｌｌｉｎｓ  ＰＬ，Ｐｅｅｐｌｅｓ  ＭＥ．Ｇｌｙｃｏｓａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎ  ｓｕｌｆａｔｉｏｎ  ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  ｓｙｎｃｙｔｉａｌ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ；Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（２０００），７４（２２），１０５０８−１３）。
【００６０】
化合物原液は１００％ＤＭＳＯ中５ｍＭとし、以下を例外とした：リバビリン、２０ｍＭ；Ａ６０４４４、１０ｍＭ；ＣＲ９５０１、ＰＢＳ中１４１μＭ；パリビズマブ、ＰＢＳ中１５６μＭ；ＭＤＴ６３７、メタノール中１００μＭ。最初に、化合物をＤＭＳＯに段階希釈して３倍希釈系列にし、ＣＲ９５０１およびパリビズマブは細胞培養培地に段階希釈し、ＭＤＴ６３７はメタノールに段階希釈した。この濃度系列を細胞培養培地に１００倍希釈して組合せマトリックスを得た。これらの化合物溶液１０μＬを、底部が透明の黒色３８４ウェルの組織培養処理したプレートに移した。次に、ｍＬ当たり１５００００細胞のＨｅＬａ細胞懸濁液１０μＬを添加して、ウェル当たり３０００細胞にした。最後に、希釈ウイルスストック１０μＬを添加してＭＯＩを１にした。すべてのウェルの最終ＤＭＳＯ濃度を０．５％ＤＭＳＯとし、例外としてＭＤＴ６３７実験では０．２５％ＤＭＳＯ＋０．２５％メタノールとした。化合物濃度の各組合せを３つの別々のプレートに４レプリケートで試験し、これにより全部で１２レプリケートとした。プレートを、加湿した５％ＣＯ２雰囲気下にて３７℃で３日間インキュベートした。ＧＦＰシグナルをＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  ＥｎＶｉｓｉｏｎ装置で４０５ｎｍフィルターを使用して測定した。
【００６１】
統計解析については、観察されたＧＦＰシグナルを、対応するプレートのウイルス対照（ＶＣ）および細胞対照（ＣＣ）を使用して正規化した：応答＝（ＧＦＰ−ＣＣ）／（ＶＣ−ＣＣ）であり、ＣＣをすべてのブランクウェル（ウイルスなし）の中央値ＧＦＰとして計算し、ＶＣをすべての対照ウェル（化合物なし）の中央値ＧＦＰとして計算した。
【００６２】
Ｈａｒｂｒｏｎの方法（Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０１０，ＤＯＩ：１０．１００２／ｓｉｍ３９１６）を使用して相乗作用を評価した。Ｌｏｅｗｅの定義を使用して、２種の化合物を：
【数１】
2019504102.tif 000009
によって、相加、相乗または拮抗と特徴づける。
【００６３】
式中、ｄ１およびｄ２は、組み合わされて有効性ｙを生じさせる２種の化合物の用量を表し、Ｄｙ，１およびＤｙ，２は、単剤治療として投与された場合に同等の有効性ｙを生じさせる２種の化合物の用量を表す。３ＰＬモデル（３−パラメーター対数ロジスティックモデル）を単剤治療の用量−応答データについて使用し、ベースライン応答を１に固定した。
【００６４】
Ｈａｒｂｒｏｎの方法に従って、以下のモデルをデータにフィットさせた。
「相加的」：２種の化合物間に相互作用はないと仮定
「一様性」：すべての用量の組合せにおいて一定の相互作用指数τを仮定
「線形のＡ」：相互作用指数は化合物Ａのｌｏｇ１０用量に線形に従属すると仮定：τ＝τ１＋τ２ｌｏｇ１０（ｄＡ）
「個別のＡ」：相互作用指数τは化合物Ａの各用量について個別の値をとると仮定
後の２つのモデルは化合物Ｂについても考慮される：
「線形のＢ」：相互作用指数は化合物Ｂのｌｏｇ１０用量に線形にτ従属すると仮定：τ＝τ１＋τ２ｌｏｇ１０（ｄＢ）
「個別のＢ」：相互作用指数τは化合物Ｂの各用量について個別の値をとると仮定
【００６５】
「個別のＡ」モデルを、赤池情報量規準（ＡＩＣ）に基づき、試験したすべての組合せについて選択した。化合物Ａと種々の化合物Ｂとの組合せの試験結果を以下に報告する。
【００６６】
組合せ：化合物Ａ、および化合物Ｂとしてプルモサイド（ｐｕｌｍｏｃｉｄｅ）化合物（Ｎ−（２−フルオロ−６−メチルフェニル）−６−（４−（５−メチル−２−（７−オキサ−２−アザスピロ［３．５］ノナン−２−イル）ニコチンアミド）ベンゾイル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ベンゾ［ｂ］チエノ［２，３−ｄ］アゼピン−２−カルボキサミド）
【００６７】
【表７】
2019504102.tif 000010
【００６８】
表３は、「個別のＡ」モデルの９５％信頼区間（ＣＩ）での相互作用指数（τ）推定値を示す。相乗作用の程度は化合物Ａの用量によって変動することが可能であり、０．５７ｎＭ以上の用量でかなりの程度の相乗作用が現れる。概して、相乗作用の程度は用量レベルの増加に伴って高くなり、５．１〜１３９ｎＭあたりでプラトーになる。
【００６９】
【表８】
2019504102.tif 000011
【００７０】
組合せ：化合物Ａ、および化合物Ｂとしてパリビズマブ
【００７１】
【表９】
2019504102.tif 000012
【００７２】
表５は、「個別のＡ」モデルの９５％信頼区間（ＣＩ）での相互作用指数（τ）推定値を示す。このモデルは、化合物Ｂの３ＰＬモデルの勾配を、単剤治療のフィットから得られた推定値に固定することにより、フィットさせたことに留意されたい。相乗作用の程度は化合物Ａの用量によって変動することが可能であり、考慮した用量レベルのすべてにおいてかなりの程度の相乗作用が現れる。概して、相乗作用の程度は用量レベルの増加に伴って高くなり、５．１〜１３９ｎＭあたりでプラトーになる。
【００７３】
【表１０】
2019504102.tif 000013
【００７４】
組合せ：化合物Ａ、および化合物ＢとしてＡＺ−２７
【００７５】
【表１１】
2019504102.tif 000014
【００７６】
表７は、「個別のＡ」モデルの９５％ＣＩでの相互作用指数（τ）推定値を示す。相乗作用の程度は化合物Ａの用量によって変動することが可能であり、考慮した用量レベルのすべてにおいてかなりの程度の相乗作用が現れる。概して、相乗作用の程度は用量レベルの増加に伴って高くなり、５．１〜１３９ｎＭあたりでプラトーになる。
【００７７】
【表１２】
2019504102.tif 000015
【００７８】
組合せ：化合物Ａ、および化合物ＢとしてＧＳ−５８０６
【００７９】
【表１３】
2019504102.tif 000016
【００８０】
表９は、「個別のＡ」モデルの９５％信頼区間（ＣＩ）での相互作用指数（τ）推定値を示す。相乗作用の程度は化合物Ａの用量によって変動することが可能であり、０．５７〜１５ｎＭの用量においてかなりの程度の相乗作用が現れる。最高濃度での相互作用指数は評価不可であったことに留意されたい。
【００８１】
【表１４】
2019504102.tif 000017
【００８２】
組合せ：化合物Ａ、および化合物ＢとしてＭＤＴ−６３７
【００８３】
【表１５】
2019504102.tif 000018
【００８４】
個別のＡモデルについて、２種の最高濃度での相互作用指数は評価不可であった（τ８およびτ９）が、結果は局所最適に基づいていることに留意されたい。表１１は、「個別のＡ」モデルの９５％信頼区間（ＣＩ）での相互作用指数（τ）推定値を示す。相乗作用の程度は化合物Ａの用量によって変動することが可能であり、０．１９〜１５ｎＭの用量においてかなりの程度の相乗作用が現れる。
【００８５】
【表１６】
2019504102.tif 000019
【００８６】
組合せ：化合物Ａ、および化合物Ｂとして４−アミノ−８−［３−［［２−（３，４−ジメトキシフェニル）−エチル］アミノ］プロピル］−６，６−ジメチル−２−（４−メチル−３−ニトロフェニル）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｈ］イソキノリン−７，９（６Ｈ，８Ｈ）−ジオン
【００８７】
【表１７】
2019504102.tif 000020
【００８８】
化合物Ｂの単剤治療データに相当する第３のプレートのカラム１に製造誤差があり、これらのデータは解析では無視した（１２ではなく１０レプリケートになった）ことに留意されたい。表１３は、「個別のＡ」モデルの９５％信頼区間（ＣＩ）での相互作用指数（τ）推定値を示す。相乗作用の程度は化合物Ａの用量によって変動することが可能であり、０．５７〜４６ｎＭの濃度においてかなりの程度の相乗作用が現れる。
【００８９】
【表１８】
2019504102.tif 000021
【００９０】
組合せ：化合物Ａ、および化合物Ｂとしてモノクローナル抗体ＣＲ９５０１
【００９１】
【表１９】
2019504102.tif 000022
【００９２】
表１５は、「個別のＡ」モデルの９５％信頼区間（ＣＩ）での相互作用指数（τ）推定値を示す。相乗作用の程度は化合物Ａの用量によって変動することが可能であり、すべての濃度においてかなりの程度の相乗作用が現れる。
【００９３】
【表２０】
2019504102.tif 000023
【００９４】
組合せ：化合物Ａ、および化合物Ｂとしてリバビリン
【００９５】
【表２１】
2019504102.tif 000024
【００９６】
表１７は、「個別のＡ」モデルの９５％信頼区間（ＣＩ）での相互作用指数（τ）推定値を示す。下限をゼロに固定した２ＰＬモデルを化合物Ｂの単剤治療データにフィットさせたことに留意されたい。相乗作用の程度は化合物Ａの用量によって変動することが可能であり、０．１９〜１３９ｎＭの濃度においてかなりの程度の相乗作用が現れる。
【００９７】
【表２２】
2019504102.tif 000025
【００９８】
組合せ：化合物Ａ、および化合物ＢとしてＡ−６０４４４
【００９９】
【表２３】
2019504102.tif 000026
【０１００】
表１９は、「個別のＡ」モデルの９５％信頼区間（ＣＩ）での相互作用指数（τ）推定値を示す。下限をゼロに固定した２ＰＬモデルを化合物Ｂの単剤治療データにフィットさせたことに留意されたい。相乗作用の程度は化合物Ａの用量によって変動することが可能であり、０．５７〜１３９ｎＭの濃度においてかなりの程度の相乗作用が現れる。
【０１０１】
【表２４】
2019504102.tif 000027
【国際調査報告】
2019504102.tif 000028
2019504102.tif 000029
2019504102.tif 000030
2019504102.tif 000031
2019504102.tif 000032
2019504102.tif 000033
2019504102.tif 000034
2019504102.tif 000035
2019504102.tif 000036
2019504102.tif 000037