【手続補正書】
【提出日】令和3年12月6日(2021.12.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
インプット核酸からの５’および３’末端上にユニバーサルプライマーサイトを含有する核酸のライブラリーを生産するための方法であって、
（ａ）インプット核酸を、各キャプチャーオリゴヌクレオチドが５’ユニバーサルプライマーサイトと、インプット核酸中のヌクレオチド配列に相補的な３’標的結合部位とを含有するキャプチャーオリゴヌクレオチドのプールと接触させること、
（ｂ）ＤＮＡポリメラーゼを添加し、それにより、インプット核酸にハイブリダイズしたキャプチャーオリゴヌクレオチドを伸長させて、それぞれが前記５’ユニバーサルプライマーサイトと、前記インプット核酸のうちの１つに相補的な配列とを含む第１鎖核酸を形成すること、
（ｃ）前記第１鎖核酸を、それぞれが５’ユニバーサルプライマーサイトと、前記第１鎖核酸中のヌクレオチド配列に相補的な３’標的結合部位とを含む第２鎖プライミングオリゴヌクレオチドのプールと接触させることであって、前記第２鎖プライミングオリゴヌクレオチドの各３’標的結合部位がランダム配列を含む、接触させること、ならびに
（ｄ）ＤＮＡポリメラーゼを添加し、それにより、前記第２鎖プライミングオリゴヌクレオチドを伸長させて、前記インプット核酸に存在するヌクレオチド配列に隣接する５’および３’ユニバーサルプライマーサイトを含む第２鎖核酸を形成すること
を含む、方法。
【請求項２】
各キャプチャーオリゴヌクレオチドが、前記５’ユニバーサルプライマーサイトと前記３’標的結合部位との間に存在するバーコードを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記キャプチャーオリゴヌクレオチドが、ビーズの表面に付着している、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記インプット核酸が単一細胞に由来する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記第２鎖プライミングオリゴヌクレオチドの前記プール中の前記標的結合部位が、非ランダム配列をさらに含み、前記非ランダム配列が、（ａ）前記第１鎖核酸中の特異的配列に相補的な配列、および（ｂ）自己ハイブリダイゼーションを防止する配列のうちの１つである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
工程（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および／または（ｄ）において、クラウディング試薬を添加する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記第２鎖プライミングオリゴヌクレオチドの前記プール中の前記標的結合部位が、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５ヌクレオチド長のランダム標的結合配列を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
単一細胞から複数の同一に５’および３’標識されたｃＤＮＡ分子を生産するための方法であって、
（ａ）単一細胞ＲＮＡライブラリーから第１鎖ｃＤＮＡライブラリーを合成すること、ここで、前記ライブラリーからの第１鎖ｃＤＮＡ分子がそれぞれ、同一の５’ユニバーサルプライマーサイトと、必要に応じて同一のバーコードとを含む；
（ｂ）５’ユニバーサルプライマーサイトを有する第１鎖ｃＤＮＡ分子を、標的結合配列の上流に５’ユニバーサルプライマーサイトを有するオリゴヌクレオチドと接触させること；ならびに
（ｃ）前記オリゴヌクレオチドを伸長させて、５’ユニバーサルプライマーサイトおよび３’ユニバーサルプライマーサイトで同一に標識された複数の第２鎖ｃＤＮＡ分子を生産すること
を含む、方法。
【請求項９】
前記５’ユニバーサルプライマーサイトと、（ａ）ランダム、セミランダムおよび／または標的化キャプチャー配列、または（ｂ）ポリ（ｄＴ）キャプチャー配列とを含むキャプチャーオリゴヌクレオチドへの単一ＲＮＡ分子のハイブリダイゼーションにより、前記第１鎖ｃＤＮＡライブラリーを合成する、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
（ａ）前記キャプチャーオリゴヌクレオチドがビーズに付着している、（ｂ）複数の同一のキャプチャーオリゴヌクレオチドが前記ビーズに付着している、かつ／または（ｃ）前記キャプチャーオリゴヌクレオチドが、５’ユニバーサルプライマー配列、バーコードおよび３’キャプチャー配列を含む、請求項８または請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
（ｉ）単一細胞由来のＲＮＡライブラリーを取得または提供することをさらに含む、かつ／または（ｉｉ）工程（ｂ）において、第１鎖ｃＤＮＡ分子を、５’ユニバーサルプライマーサイトを欠くデコイオリゴヌクレオチドと接触させることをさらに含む、請求項８〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
複数の核酸分子を生産するための方法であって、
（ａ）複数の親核酸から、それぞれが前記複数の親核酸に相補的な第１鎖核酸を合成すること、ここで、第１鎖核酸がそれぞれ、同一の５’ユニバーサルプライマーサイトを含み；
（ｂ）５’ユニバーサルプライマーサイトを有する第１鎖核酸を、標的結合配列の上流に５’ユニバーサルプライマーサイトを含む第２鎖プライミングオリゴヌクレオチドと接触させること；ならびに
（ｃ）前記第２鎖プライミングオリゴヌクレオチドを伸長させて、５’ユニバーサルプライマーサイトおよび３’ユニバーサルプライマーサイトで同一に標識された複数の第２鎖核酸を生産すること
を含む、方法。
【請求項１３】
親核酸を、ランダム、セミランダムまたは標的化配列を有するキャプチャーオリゴヌクレオチドにハイブリダイズさせることにより、各前記第１鎖核酸を合成し、必要に応じて、前記キャプチャーオリゴヌクレオチドがビーズに付着しており、さらに必要に応じて、複数の同一のキャプチャーオリゴヌクレオチドが前記ビーズに付着しており、さらに必要に応じて、前記キャプチャーオリゴヌクレオチドが、５’ユニバーサルプライマー配列、バーコード配列および３’キャプチャー配列を含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
単一細胞またはウイルスから前記複数の親核酸を取得することをさらに含み、必要に応じて、前記単一細胞が病原体である、または必要に応じて、前記標的結合配列が、ランダム配列、セミランダム配列および／または非ランダム／標的化配列を含む、請求項１２または請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
（ａ）第１鎖ｃＤＮＡ分子または前記第１鎖核酸がそれぞれ、同一のバーコードを含む、（ｂ）前記第１鎖ｃＤＮＡ分子または前記第１鎖核酸がビーズに付着している、または（ｃ）工程（ａ）、（ｂ）および／または（ｃ）において、クラウディング試薬を添加することをさらに含む、請求項８〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９６】
本開示のこれらのおよび他の態様および実施形態は、本明細書により詳細に記載される。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
インプット核酸からの５’および３’末端上にユニバーサルプライマーサイトを含有する核酸のライブラリーを生産するための方法であって、
（ａ）インプット核酸を、各キャプチャーオリゴヌクレオチドが５’ユニバーサルプライマーサイトと、インプット核酸中のヌクレオチド配列に相補的な３’標的結合部位と、必要に応じて、前記５’ユニバーサルプライマーサイトと前記３’標的結合部位との間に必要に応じて存在するバーコードとを含有するキャプチャーオリゴヌクレオチドのプールと接触させること、
（ｂ）ＤＮＡポリメラーゼを添加し、それにより、インプット核酸にハイブリダイズしたキャプチャーオリゴヌクレオチドを伸長させて、それぞれが前記５’ユニバーサルプライマーサイトと、インプット核酸に相補的な配列とを含む第１鎖核酸を形成すること、
（ｃ）前記第１鎖核酸を、それぞれが５’ユニバーサルプライマーサイトと、前記第１鎖核酸中のヌクレオチド配列に相補的な３’標的結合部位とを含む第２鎖プライミングオリゴヌクレオチドのプールと接触させること、ならびに
（ｄ）ＤＮＡポリメラーゼを添加し、それにより、前記第２鎖プライミングオリゴヌクレオチドを伸長させて、前記インプット核酸に存在するヌクレオチド配列に隣接する５’および３’ユニバーサルプライマーサイトを含む第２鎖核酸を形成すること
を含む、方法。
（項目２）
前記キャプチャーオリゴヌクレオチドが、ポリ（ｄＴ）配列を含む標的結合配列を含む、項目１に記載の方法。
（項目３）
キャプチャーオリゴヌクレオチドの前記プール中の前記標的結合配列が、ポリ（ｄＴ）配列、または前記インプット核酸中の特定の配列をターゲティングする配列を含む、項目１に記載の方法。
（項目４）
キャプチャーオリゴヌクレオチドの前記プール中の前記標的結合配列が、前記インプット核酸中の特定の配列をターゲティングする配列を含む、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記キャプチャーオリゴヌクレオチドが、表面、必要に応じてビーズの表面に付着している、項目１〜４のいずれか一項に記載の方法。
（項目６）
前記インプット核酸が、インプット核酸の複合混合物として提供される、項目１〜５のいずれか一項に記載の方法。
（項目７）
前記インプット核酸がＲＮＡを含む、項目１〜６のいずれか一項に記載の方法。
（項目８）
前記インプット核酸が一本鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）とＲＮＡとの混合物を含む、項目１〜７のいずれか一項に記載の方法。
（項目９）
前記インプット核酸が、（ａ）ウイルスもしくは細菌に由来するか、（ｂ）酵母もしくは昆虫もしくは哺乳動物細胞に由来するか、（ｃ）単離された核であるか、または（ｄ）エキソソームである、項目１〜８のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０）
前記インプット核酸が、酵母または昆虫または哺乳動物ＲＮＡおよび細菌またはウイルスＤＮＡを含む感染細胞に由来する、項目１〜９のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１）
前記インプット核酸が単一細胞に由来する、項目１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
（項目１２）
前記インプット核酸が２〜１０００個の細胞に由来する、項目１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３）
第２鎖プライミングオリゴヌクレオチドの前記プール中の前記標的結合配列が、ランダムヌクレオチド配列を含む、項目１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
（項目１４）
第２鎖プライミングオリゴヌクレオチドの前記プール中の前記標的結合配列が、セミランダムヌクレオチド配列を含む、項目１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５）
第２鎖プライミングオリゴヌクレオチドの前記プール中の前記標的結合配列が、ランダム配列と、前記第１鎖核酸中の特定の配列に相補的な配列とを含む、項目１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
（項目１６）
第２鎖プライミングオリゴヌクレオチドの前記プール中の前記標的結合配列が、前記第１鎖核酸中の配列に相補的な配列を含む、項目１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
（項目１７）
第２鎖プライミングオリゴヌクレオチドの前記プールが、前記第１鎖核酸中の配列に相補的な標的結合配列を含むが前記ユニバーサルプライマーサイトを欠くデコイオリゴヌクレオチドをさらに含む、項目１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
（項目１８）
前記第２鎖プライミングオリゴヌクレオチドが、表面、必要に応じてビーズの表面に付着している、項目１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
（項目１９）
工程（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および／または（ｄ）において、クラウディング試薬を添加する、項目１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
（項目２０）
工程（ｂ）において、クラウディング試薬を添加する、項目１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
（項目２１）
工程（ｄ）において、クラウディング試薬を添加する、項目１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
（項目２２）
前記キャプチャーオリゴヌクレオチドが、ユニークな分子同定のためのランダムヌクレオチド配列をさらに含む、項目１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
（項目２３）
単一細胞から複数の同一に５’および３’標識されたｃＤＮＡ分子を生産するための方法であって、
（ａ）単一細胞ＲＮＡライブラリーから第１鎖ｃＤＮＡライブラリーを合成すること、ここで、前記ライブラリーからの第１鎖ｃＤＮＡ分子がそれぞれ、同一の５’ユニバーサルプライマーサイトと、必要に応じて同一のバーコードとを含む；
（ｂ）５’ユニバーサルプライマーサイトを有する第１鎖ｃＤＮＡ分子を、標的結合配列の上流に５’ユニバーサルプライマーサイトを有するオリゴヌクレオチドと接触させること；ならびに
（ｃ）前記オリゴヌクレオチドを伸長させて、５’ユニバーサルプライマーサイトおよび３’ユニバーサルプライマーサイトで同一に標識された複数の第２鎖ｃＤＮＡ分子を生産すること
を含む、方法。
（項目２４）
前記５’ユニバーサルプライマーサイトと、ランダム、セミランダムおよび／または標的化キャプチャー配列とを含むキャプチャーオリゴヌクレオチドへの単一ＲＮＡ分子のハイブリダイゼーションにより、前記第１鎖ｃＤＮＡライブラリーを合成する、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
前記５’ユニバーサルプライマーサイトと、ポリ（ｄＴ）キャプチャー配列とを含むキャプチャーオリゴヌクレオチドへの単一ＲＮＡ分子のハイブリダイゼーションにより、前記第１鎖ｃＤＮＡライブラリーを合成する、項目２３に記載の方法。
（項目２６）
前記キャプチャーオリゴヌクレオチドがビーズに付着している、項目２３〜２５のいずれか一項に記載の方法。
（項目２７）
複数の同一のキャプチャーオリゴヌクレオチドが前記ビーズに付着している、項目２３〜２６のいずれか一項に記載の方法。
（項目２８）
前記キャプチャーオリゴヌクレオチドが、５’ユニバーサルプライマー配列、バーコードおよび３’キャプチャー配列を含む、項目２３〜２７のいずれか一項に記載の方法。
（項目２９）
単一細胞由来のＲＮＡライブラリーを取得または提供することをさらに含む、項目２３〜２８のいずれか一項に記載の方法。
（項目３０）
工程（ｂ）が、第１鎖ｃＤＮＡ分子を、５’ユニバーサルプライマーサイトを欠くデコイオリゴヌクレオチドと接触させることをさらに含む、項目２３〜２９のいずれか一項に記載の方法。
（項目３１）
複数の核酸分子を生産するための方法であって、
（ａ）複数の親核酸から、それぞれが前記複数の親核酸に相補的な第１鎖核酸を合成すること、ここで、第１鎖核酸がそれぞれ、同一の５’ユニバーサルプライマーサイトを含み；
（ｂ）５’ユニバーサルプライマーサイトを有する第１鎖核酸を、標的結合配列の上流に５’ユニバーサルプライマーサイトを含む第２鎖プライミングオリゴヌクレオチドと接触させること；ならびに
（ｃ）前記第２鎖プライミングオリゴヌクレオチドを伸長させて、５’ユニバーサルプライマーサイトおよび３’ユニバーサルプライマーサイトで同一に標識された複数の第２鎖核酸を生産すること
を含む、方法。
（項目３２）
親核酸を、ランダム、セミランダムまたは標的化配列を有するキャプチャーオリゴヌクレオチドにハイブリダイズさせることにより、各前記第１鎖核酸を合成する、項目３１に記載の方法。
（項目３３）
前記キャプチャーオリゴヌクレオチドがビーズに付着している、項目３２に記載の方法。
（項目３４）
複数の同一のキャプチャーオリゴヌクレオチドがビーズに付着している、項目３３に記載の方法。
（項目３５）
前記キャプチャーオリゴヌクレオチドが、５’ユニバーサルプライマー配列、バーコード配列および３’キャプチャー配列を含む、項目３２〜３４のいずれか一項に記載の方法。
（項目３６）
単一細胞またはウイルスから前記複数の親核酸を取得することをさらに含む、項目３１〜３５のいずれか一項に記載の方法。
（項目３７）
前記単一細胞が病原体である、項目３６に記載の方法。
（項目３８）
前記標的結合配列が、ランダム配列、セミランダム配列および／または非ランダム／標的化配列を含む、項目３１〜３７のいずれか一項に記載の方法。
（項目３９）
第１鎖ｃＤＮＡ分子または前記第１鎖核酸がそれぞれ、同一のバーコードを含む、項目２３〜３８のいずれか一項に記載の方法。
（項目４０）
前記第１鎖ｃＤＮＡ分子または前記第１鎖核酸がビーズに付着している、項目２３〜３８のいずれか一項に記載の方法。
（項目４１）
工程（ａ）、（ｂ）および／または（ｃ）において、クラウディング試薬を添加することをさらに含む、項目２３〜３８のいずれか一項に記載の方法。
（項目４２）
前記５’ユニバーサルプライマーサイトと、キャプチャー配列と、必要に応じてそれらの間のバーコード配列とを含む前記キャプチャーオリゴヌクレオチドを提供すること；
前記キャプチャーオリゴヌクレオチドを、単一細胞由来の複数のＲＮＡ分子と接触させること；
前記複数のＲＮＡ分子がそれらの各キャプチャー配列にアニーリングすることを可能にすること；および
ＤＮＡポリメラーゼを添加し、それにより、前記キャプチャーオリゴヌクレオチドを伸長させて、前記第１鎖ｃＤＮＡ分子を生成すること、ここで、前記第１鎖ｃＤＮＡ分子が前記複数のＲＮＡ分子に相補的である、
を含む第１鎖ｃＤＮＡ分子の生成をさらに含む、項目２３〜３０のいずれか一項に記載の方法。
（項目４３）
前記５’ユニバーサルプライマーサイトと、キャプチャー配列と、必要に応じてそれらの間のバーコード配列とを含む前記キャプチャーオリゴヌクレオチドを提供すること；
前記キャプチャーオリゴヌクレオチドを、単一細胞またはウイルス由来の複数の親核酸と接触させること；
前記複数の親核酸が前記キャプチャー配列にアニーリングすることを可能にすること；および
ＤＮＡポリメラーゼを添加し、それにより、前記キャプチャーオリゴヌクレオチドを伸長させて、前記第１鎖核酸を生成すること、ここで、前記第１鎖核酸がそれぞれ親核酸に相補的である、
を含む第１鎖核酸の生成をさらに含む、項目３１〜３８のいずれか一項に記載の方法。
（項目４４）
テンプレートスイッチング反応の収量を増加させる方法であって、クラウディング試薬をテンプレートスイッチング反応に添加することを含む、方法。
（項目４５）
ピコウェルアレイへの膜のシーリングを増強する方法であって、前記ピコウェルアレイおよび膜をクラウディング試薬と接触させることを含む、方法。
（項目４６）
ピコウェルアレイがＳｅｑ−ｗｅｌｌアッセイで使用される、項目４５に記載の方法。
（項目４７）
ピコウェルアレイであって、
各ピコウェルが、１つまたはそれを超える核酸バーコードを含む機能化表面を含む複数のピコウェルを含む、ピコウェルアレイ。
（項目４８）
各核酸バーコードが、前記アレイ中のすべての他の核酸バーコードと比べて、または前記アレイ中の一部の他の核酸バーコードと比べてユニークである、項目４７に記載のピコウェルアレイ。
（項目４９）
前記複数のピコウェルがそれぞれ、核酸バーコードのユニークな組み合わせを含む、項目４７に記載のピコウェルアレイ。
（項目５０）
１つまたはそれを超える核酸バーコードが、複数のピコウェル間で共有される、項目４７に記載のピコウェルアレイ。
（項目５１）
前記アレイ中の各核酸バーコードの位置が既知である、項目４７〜５０のいずれか一項に記載のピコウェルアレイ。
（項目５２）
ユニークな刺激が、ユニークな核酸バーコードを有する各ピコウェルに適用される、項目４７〜５１のいずれか一項に記載のピコウェルアレイ。
（項目５３）
前記機能化表面が、前記ピコウェルの底内面である、項目４７〜５２のいずれか一項に記載のピコウェルアレイ。
（項目５４）
前記ピコウェルアレイの底内面がＤＮＡマイクロアレイを含む、項目４７〜５３のいずれか一項に記載のピコウェルアレイ。
（項目５５）
複数のピコウェルがそれぞれ、スペクトル符号化ビーズを含む、項目４７〜５４のいずれか一項に記載のピコウェルアレイ。
（項目５６）
複数のピコウェルがそれぞれ、複数のスペクトル符号化ビーズを含む、項目４７〜５５のいずれか一項に記載のピコウェルアレイ。
（項目５７）
前記スペクトル符号化ビーズが、前記ピコウェルの機能化表面に付着している、項目５５または５６に記載のピコウェルアレイ。
（項目５８）
ピコウェルアレイであって、
それぞれが、ユニークな空間バーコードを有する１つまたはそれを超える核酸分子を含む機能化表面を含む複数のピコウェルを含み、各ユニークな空間バーコードが、ピコウェルの１つまたはクラスタにユニークであり、必要に応じて、前記ピコウェルアレイ中の各空間バーコードの位置が既知である、ピコウェルアレイ。
（項目５９）
前記機能化表面が前記ピコウェルの内底面に存在する、項目５８に記載のピコウェルアレイ。
（項目６０）
前記ピコウェルアレイの底部がＤＮＡマイクロアレイを含む、項目５９に記載のピコウェルアレイ。
（項目６１）
前記機能化表面がスペクトル符号化ビーズを含む、項目５９に記載のピコウェルアレイ。
（項目６２）
ピコウェルアレイ中の転写産物を空間的に位置決定するための方法であって、
（ａ）ピコウェルアレイを提供すること、ここで：
（ｉ）１つまたはそれを超えるピコウェルが、ユニークな空間バーコードを有する核酸分子をそれぞれが含む１つまたはそれを超える機能化表面を含み；
（ｉｉ）１つまたはそれを超えるピコウェルが、空間バーコードのユニークな組み合わせを含み；
（ｉｉｉ）各ピコウェルに配置された空間バーコードのアイデンティティが既知であり；および
（ｉｖ）１つまたはそれを超えるピコウェルが、バーコード化転写産物キャプチャービーズをロードされている、
（ｂ）前記ピコウェルアレイを、各細胞が１つまたはそれを超える転写産物を含有する細胞の集団と接触させること；
（ｃ）前記細胞を溶解させ、前記同じウェルに存在する前記ビーズ上の細胞由来のＲＮＡをキャプチャーすること；
（ｄ）前記ビーズバーコードの配列がｃＤＮＡに組み込まれるように、前記キャプチャーした転写産物からｃＤＮＡを生成すること；
（ｅ）転写産物キャプチャービーズに結合した空間バーコードのプライマー伸長により、ビーズバーコード：空間バーコードハイブリッド分子を生成すること；
（ｆ）前記ｃＤＮＡおよびビーズバーコード：空間バーコードハイブリッド分子をシークエンシングすること；
（ｇ）各ビーズバーコードに関連するすべての前記空間バーコードを決定すること；
（ｈ）ビーズバーコードに関連する空間バーコードの組み合わせを、空間バーコードの同じ組み合わせを有する既知のピコウェルとマッチングすることにより、各ビーズバーコードの起源のウェルを決定すること；ならびに
（ｉ）前記ｃＤＮＡ中の前記ビーズバーコードを、そのビーズバーコードの供給源として同定されたピコウェルとマッチングすることにより、前記ピコウェルアレイ上の前記転写産物を位置決定すること
を含む、方法。
（項目６３）
前記機能化表面が、前記ピコウェルの底内面を含む、項目６２に記載の方法。
（項目６４）
前記ピコウェルアレイの底部がＤＮＡマイクロアレイを含む、項目６２または６３に記載の方法。
（項目６５）
前記機能化表面がスペクトル符号化ビーズを含む、項目６２〜６４のいずれか一項に記載の方法。
（項目６６）
ガラススライドに結合した薄組織切片として細胞の前記集団を前記アレイに送達する、項目６２〜６５のいずれか一項に記載の方法。
（項目６７）
ピコウェルアレイを使用して、刺激のセットに対する転写応答を決定するための方法であって、
（ａ）ピコウェルアレイを提供すること、ここで、ピコウェルの大部分がそれぞれ、（１）ユニークな空間バーコードを有する核酸分子と、（２）ユニークな刺激とを含む１つまたはそれを超える機能化表面を含む；
（ｂ）前記ピコウェルアレイを、１つまたはそれを超える転写産物を含有する細胞の集団と接触させること；
（ｃ）前記機能化表面から前記刺激を放出させること；
（ｄ）前記細胞を培養して、前記放出刺激に対する転写応答を可能にすること；
（ｅ）バーコード化転写産物キャプチャービーズをウェルの大部分にロードすること；
（ｆ）前記細胞を溶解させ、前記細胞と同じウェルに存在する前記ビーズ上の細胞由来のＲＮＡをキャプチャーすること；
（ｇ）前記ビーズバーコードの配列がｃＤＮＡに組み込まれるように、前記キャプチャーしたＲＮＡからｃＤＮＡを生成すること；
（ｈ）転写産物キャプチャービーズに結合した空間バーコードのプライマー伸長により、ビーズバーコード：空間バーコードハイブリッド分子を生成すること；
（ｉ）前記ｃＤＮＡおよびビーズバーコード：空間バーコードハイブリッド分子をシークエンシングすること；
（ｊ）各ビーズバーコードに関連する空間バーコードの組み合わせを決定すること；ならびに
（ｋ）空間バーコードの組み合わせをウェルに存在する刺激の組み合わせに変換することにより、所定のビーズバーコードに関連するｃＤＮＡの供給源であった細胞の刺激曝露を決定すること
を含む、方法。
（項目６８）
前記機能化表面が前記ピコウェルの底部を含む、項目６７に記載の方法。
（項目６９）
前記ピコウェルアレイの前記底部がＤＮＡマイクロアレイを含む、項目６７に記載の方法。
（項目７０）
前記機能化表面がスペクトル符号化ビーズを含む、項目６７に記載の方法。
（項目７１）
ピコウェルアレイ上の転写産物を空間的に位置決定するための方法であって、
ピコウェルアレイを提供すること、ここで、
（ｉ）各ピコウェルが、ユニークな空間バーコードを有する１つまたはそれを超える核酸分子を含む機能化表面を含み；
（ｉｉ）各ユニークな空間バーコードが、ピコウェルの１つまたはクラスタにユニークであり；
（ｉｉｉ）前記ピコウェルアレイ上の各ユニークな空間バーコードの位置が既知であり；
（ｉｖ）各ピコウェルが、バーコード化転写産物キャプチャービーズをロードされている、
前記ピコウェルアレイを、１つまたはそれを超える転写産物を含有する細胞の集団と接触させること；
前記ビーズバーコードの配列がｃＤＮＡに組み込まれるように、前記転写産物からｃＤＮＡを生成すること；
転写産物キャプチャービーズに結合した空間バーコードのプライマー伸長により、ビーズバーコード：空間バーコードハイブリッド分子を同時生成すること；ならびに
前記ｃＤＮＡ中の前記ビーズバーコードをビーズバーコード：空間バーコードハイブリッド分子とマッチングすることにより、前記ピコウェルアレイ上の前記転写産物を位置決定すること
を含む、方法。
（項目７２）
機能化表面が前記ピコウェルの底部を含む、項目７１に記載のピコウェルアレイ。
（項目７３）
前記ピコウェルアレイの前記底部がマイクロアレイを含む、項目７２に記載のピコウェルアレイ。
（項目７４）
前記機能化表面がスペクトル符号化ビーズを含む、項目７１に記載のピコウェルアレイ。
（項目７５）
各ピコウェルが刺激をさらに含む、項目７１〜７４のいずれか一項に記載の方法。
（項目７６）
組織切片中の転写産物を空間的に位置決定するための方法であって、
ピコウェルアレイを提供すること、ここで、
（ｉ）各ピコウェルが、ユニークな空間バーコードを有する１つまたはそれを超える核酸分子を含む機能化表面を含み；
（ｉｉ）各ユニークな空間バーコードが、ピコウェルの１つまたはクラスタにユニークであり；
（ｉｉｉ）前記ピコウェルアレイ上の各ユニークな空間バーコードの位置が既知であり；
（ｉｖ）各ピコウェルが、バーコード化転写産物キャプチャービーズをロードされている、
前記ピコウェルアレイを、ガラススライドに結合した薄組織切片と接触させること；
前記ビーズバーコードの配列がｃＤＮＡに組み込まれるように、前記転写産物からｃＤＮＡを生成すること；
転写産物キャプチャービーズに結合した空間バーコードのプライマー伸長により、ビーズバーコード：空間バーコードハイブリッド分子を生成すること；ならびに
前記ｃＤＮＡ中の前記ビーズバーコードをビーズバーコード：空間バーコードハイブリッド分子とマッチングすることにより、前記ピコウェルアレイ上の前記転写産物を位置決定すること
を含む、方法。
（項目７７）
機能化表面が前記ピコウェルの底部を含む、項目７６に記載のピコウェルアレイ。
（項目７８）
前記ピコウェルアレイの前記底部がマイクロアレイを含む、項目７７に記載のピコウェルアレイ。
（項目７９）
前記機能化表面がスペクトルビーズを含む、項目７６に記載のピコウェルアレイ。
（項目８０）
各ピコウェルが刺激をさらに含む、項目７６〜７９のいずれか一項に記載の方法。
（項目８１）
膜をピコウェルアレイに適用するためのメンブレンアプリケーターであって、
半多孔質膜；および
剛性支持体
を含み、
前記膜が、可逆的化学により前記剛性支持体に付着している、メンブレンアプリケーター。
（項目８２）
前記可逆的化学が親水性薄膜である、項目８１に記載のメンブレンアプリケーター。
（項目８３）
前記親水性薄膜が塩橋または親水性ポリマーである、項目８２に記載のメンブレンアプリケーター。
（項目８４）
前記剛性支持体がガラスまたはアクリルプラスチックである、項目８１〜８３のいずれか一項に記載のメンブレンアプリケーター。
（項目８５）
前記ピコウェルアレイがＳｅｑ−ｗｅｌｌアレイである、項目８１〜８４のいずれか一項に記載のメンブレンアプリケーター。
（項目８６）
複数のピコウェルを含むアレイに半多孔質膜をシーリングするための方法であって、
ピコウェルアレイを剛性支持体上の半多孔質膜と接触させること；および
加熱面を前記剛性支持体に適用すること、ここで、前記半多孔質膜は、前記剛性支持体と前記アレイとの間に挟まれている、
それにより、前記膜を前記ピコウェルアレイにシーリングすることを含む、方法。
（項目８７）
前記加熱面を前記膜に１０分間未満適用する、項目８６に記載の方法。
（項目８８）
前記加熱面が３５℃〜５０℃である、項目８６または８７に記載の方法。
（項目８９）
デバイスであって、１つまたはそれを超えるピコウェルアレイを剛性支持体上の半多孔質膜と接触させ、加熱面を前記剛性支持体に適用し、それにより、前記半多孔質膜を前記ピコウェルにシーリングするように構成された、デバイス。
（項目９０）
剛性支持体と、所望の温度に加熱されることができる表面とを含む、項目８９に記載のデバイス。
（項目９１）
刺激を細胞に送達するための方法であって、
（ａ）ピコウェルアレイを提供すること、ここで、各ピコウェルが、刺激に付着した１つまたはそれを超えるビーズと、前記刺激にユニークに関連するユニークな刺激バーコードを含む核酸とを含む；
（ｂ）前記ピコウェルアレイを、１つまたはそれを超える転写産物を含有する細胞の集団と接触させること；
（ｃ）細胞を前記刺激と共に培養すること；
（ｄ）バーコード化転写産物キャプチャービーズを各ウェルにロードすること；
（ｅ）前記ビーズから、前記ユニークな刺激バーコードを含む前記核酸を放出させること；
（ｆ）前記ビーズバーコードの配列がｃＤＮＡに組み込まれるように、前記転写産物から前記ｃＤＮＡを生成すること；
（ｇ）転写産物キャプチャービーズに結合した空間バーコードのプライマー伸長により、ビーズバーコード：刺激バーコードハイブリッド分子を生成すること；ならびに
（ｈ）前記ｃＤＮＡ中の前記ビーズバーコードをビーズバーコード：刺激バーコードハイブリッド分子とマッチングすることにより、各ｃＤＮＡの起源の前記細胞の刺激を同定すること
を含む、方法。
（項目９２）
前記ビーズから前記刺激を放出させることをさらに含む、項目９１に記載の方法。
（項目９３）
前記ビーズバーコード：刺激バーコードハイブリッド分子をシークエンシングすることをさらに含む、項目９１または９２に記載の方法。
（項目９４）
膜をピコウェルアレイに固定するためのクランプであって、
三ネジ設計
を含み、
アレイホルダーおよびトップピースを包含する矩形であり、下側においてのみ前記アレイホルダーと接触し、それにより、前記アレイに対して上向きの力を引き起こす、クランプ。
（項目９５）
前記クランプがプラスチックである、項目９４に記載の方法。
（項目９６）
バーコード化ビーズとして使用するための多孔質樹脂を磁化するための方法であって、
前記樹脂を収縮させ、それにより、前記樹脂の細孔を拡大すること；
前記樹脂を磁性ナノ粒子と接触させること；および
前記樹脂を膨張させること
を含む、方法。
（項目９７）
前記樹脂を、温度を低下させることにより収縮させ、温度を上昇させることにより膨張させる、項目９６に記載の方法。
（項目９８）
溶媒の組成を変化させることにより、前記樹脂を収縮および膨張させる、項目９６に記載の方法。
（項目９９）
ピコウェルアレイであって、
複数のピコウェル
を含み、各ピコウェルが、
（１）膜付着および単一細胞転写産物キャプチャーを可能にするように表面機能化されており；ならびに
（２）前記ピコウェルの１つまたはそれを超える内壁に沈殿および／または固定化した単一細胞の内容物を含む、ピコウェルアレイ。
（項目１００）
バーコード化転写産物キャプチャービーズが複数のピコウェルにロードされている、項目９９に記載のピコウェルアレイ。
（項目１０１）
単一細胞分析のために細胞を貯蔵する方法であって、
（ａ）ピコウェルアレイを提供すること、ここで、ピコウェルの大部分が、バーコード化転写産物キャプチャービーズをロードされており、
（ｂ）前記アレイの表面を単一細胞懸濁液と接触させること、
（ｃ）重力により細胞がピコウェルにロードすることを可能にすること、
（ｄ）前記アレイを固定液に浸漬すること、および
（ｅ）前記アレイを１日間またはそれを超えて貯蔵すること
を含む、方法。
（項目１０２）
前記ピコウェルアレイが、転写産物キャプチャーのために膜の付着を可能にするように機能化されている、項目１０１に記載の方法。
（項目１０３）
固定後に前記アレイを乾燥させる、項目１０２に記載の方法。
（項目１０４）
ウェルアレイであって、
０．１〜１００ｍＬ／分／ｃｍ２のフラックス速度および／または５０ｎｍ〜３ミクロンの孔径を有する第１の多孔質膜；ならびに
第１の複数のスルーホールを有するドライフィルムフォトレジストを含む第１のボトムレスマイクロウェルアレイ
を含み、
前記第１の多孔質膜が、前記第１のボトムレスマイクロウェルアレイの底面において前記第１のボトムレスマイクロウェルアレイと接触し；
前記アレイの各ウェルが、前記第１の複数のスルーホールの１つと、前記第１の多孔質膜を含む底面とを含む、ウェルアレイ。
（項目１０５）
ドライフィルムフォトレジストであって、１５〜１００ミクロンの範囲の最大横寸法を有し、０．１〜１００ｍＬ／分／ｃｍ２のフラックス速度および／または５０ｎｍ〜３ミクロンの孔径を有する多孔質底部を有するウェルアレイを含む、ドライフィルムフォトレジスト。
（項目１０６）
マイクロ流体デバイスであって、（ａ）１〜５００ミクロンの範囲の最大横寸法を有する第２のボトムレスマイクロウェルアレイと、（ｂ）第１の多孔質膜とに結合した、１〜５００ミクロンの範囲の最大横寸法を有する第１のボトムレスマイクロウェルアレイを含むマイクロ流体デバイス。
（項目１０７）
複数のスルーホールを含むフリースタンディングフォトレジストフィルムを作製する方法であって、
第１のドライフィルムフォトレジストをフォトマスクとアライメントすること；
前記フォトマスクを介して、前記第１のドライフィルムフォトレジストの少なくとも一部を紫外線（ＵＶ）光に曝露して、前記第１のドライフィルムフォトレジストに複数の第１スルーホールを形成し、それにより、複数のスルーホールを含む第１のフリースタンディングフォトレジストフィルムを生産すること
を含む、方法。
（項目１０８）
（ｉ）項目１０４に記載のウェルアレイ；
（ｉｉ）項目１０５に記載のドライフィルムフォトレジスト；または
（ｉｉｉ）項目１０６に記載のマイクロ流体デバイス
を介して、複数の細胞および／または複数のビーズを含む第１の流体を流し、
それにより、細胞ロードおよび／またはビーズロードマイクロウェルアレイを形成すること
を含む、方法。
（項目１０９）
１５〜１００ミクロンの平均ウェル直径を有し、８０〜１０００ナノメートルの平均孔径を有する第１の多孔質膜に結合した第１のボトムレスマイクロウェルアレイを含むマイクロ流体デバイスを提供すること；
前記マイクロ流体デバイスを介して、複数のビーズを含む第１の流体を流すこと；
前記第１の多孔質膜に結合した第１のボトムレスマイクロウェルアレイを、１〜１０ミクロンの平均ウェル直径を有する第２のボトムレスマイクロウェルアレイに結合した８０〜１０００ナノメートルの平均孔径を有する第２の多孔質膜に結合させること；および
前記マイクロ流体デバイスを介して、複数の細胞を含む第２の流体を流すこと
を含み、
前記第１のボトムレスマイクロウェルアレイのウェルの８０％が単一のビーズにより占有されている、方法。
（項目１１０）
１〜１０ミクロンの平均ウェル直径を有し、（ａ）１５〜１００ミクロンの平均ウェル直径を有する第２のボトムレスマイクロウェルアレイと、（ｂ）８０〜１０００ナノメートルの平均孔径を有する多孔質膜とに結合した第１のボトムレスマイクロウェルアレイを含むマイクロ流体デバイスを提供すること；
前記マイクロ流体デバイスを介して、複数の細胞を含む第１の流体を流すこと；および
前記マイクロ流体デバイスを、ビーズを含む第２の流体に曝露すること
を含む、方法。
（項目１１１）
生物学的サンプルを処理するためのキットであって、
その中に形成された複数のレセプタクルを有する表面を含むベースプレートであって、各レセプタクルが、マイクロウェルアレイを収容するサイズおよび形状であるベースプレート；
前記ベースプレートの表面に付着して、１つまたはそれを超える膜が前記複数のレセプタクルをカバーするようにアセンブリを形成するように構成された１つまたはそれを超える膜；ならびに
ハイブリダイゼーションプレートと前記ベースプレートとの間に配置された前記１つまたはそれを超える膜を有する前記アセンブリに付着されるように構成されたハイブリダイゼーションプレートであって、ハイブリダイゼーションプレートの内面と前記１つまたはそれを超える膜との間に形成された別個のボリュームを有するハイブリダイゼーションプレート
を含み、各ボリュームが、前記複数のレセプタクルの別個の１つに流体連結している、キット。
（項目１１２）
複数の凹部を含むコレクションプレートをさらに含み、前記コレクションプレートが、前記ベースプレートおよび関連マイクロウェルアレイを収容するように構築されており、前記コレクションプレートにより前記ベースプレートおよび関連マイクロウェルアレイが収容されると、各凹部が、単一のマイクロウェルアレイに流体連結する、項目１１１に記載のキット。
（項目１１３）
前記コレクションプレートの複数の凹部をシーリングするサイズおよび形状のカバーをさらに含む、項目１１１または１１２に記載のキット。
（項目１１４）
ハイブリダイゼーションバッファーをさらに含む、項目１１１〜１１３のいずれか一項に記載のキット。
（項目１１５）
溶解バッファーをさらに含む、項目１１１〜１１４のいずれか一項に記載のキット。
（項目１１６）
前記複数のレセプタクルがそれぞれ底面を含む、項目１１１〜１１５のいずれか一項に記載のキット。
（項目１１７）
前記複数のレセプタクルが、前記ベースプレートに形成されたスルーホールを含む、項目１１１〜１１６のいずれか一項に記載のキット。
（項目１１８）
前記ハイブリダイゼーションプレートが複数の開口部を含み、前記複数の開口部の１つがそれぞれ、前記ボリュームの別個の１つと流体連通するように配置されている、項目１１１〜１１７のいずれか一項に記載のキット。
（項目１１９）
前記キットを使用して生物学的サンプルを処理するための取扱説明書をさらに含む、項目１１１〜１１８のいずれか一項に記載のキット。
（項目１２０）
マイクロウェルデバイスであって、
（ａ）上面と、底面と、前記上面から前記底面への複数のスルーホールとを含むフォトレジストフィルムであって、各ホールが、前記上面上の上開口部と、前記底面上の底開口部とを有するフォトレジストフィルム、および
（ｂ）前記フォトレジストフィルムの前記底面と接触した多孔質底部膜であって、１０ポンド／平方インチ（ｐｓｉ）の水の初期フラックス速度により測定した場合に、少なくとも０．１ｍＬ／分／ｃｍ２のフラックス速度を有する多孔質底部膜
を含む、マイクロウェルデバイス。
（項目１２１）
前記多孔質底部膜が、少なくとも０．５、１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０または９０ｍＬ／分／ｃｍ２のフラックス速度を有する乾燥膜である、項目１２０に記載のデバイス。
（項目１２２）
無基板二層ラミネートであって、
（ａ）フォトレジストフィルムであって、（ｉ）上面と、底面と、（ｉｉ）強化部および未強化部とを含み、
溶解剤と接触すると、
前記未強化部が溶解して、前記上面から前記底面への複数のスルーホールを形成し、各ホールが、前記上面上の上開口部と、前記底面上の底開口部とを有し、前記上面、前記底面または両面の少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％または７５％が前記スルーホールによりカバーされ、
前記強化部が前記溶解剤に対して実質的に耐性であるフォトレジストフィルム；ならびに（ｂ）フォトマスクであって、
前記フォトマスクの最大特徴距離が２、１．９、１．８、１．７、１．６、１．５、１．４、１．３、１．２、１．１、１、０．９、０．８、０．７、０．６または０．５ｍｍ以下であり、
前記フォトレジストフィルムの上面と接触し、その少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または全体をカバーするフォトマスク
を含む、無基板二層ラミネート。
（項目１２３）
複数のスルーホールを含むフリースタンディングフォトレジストフィルムを製造する方法であって、
（ａ）フォトマスクでフォトレジストフィルムをラミネートすること、ここで、前記フォトマスクが、複数の特徴と、２、１．９、１．８、１．７、１．６、１．５、１．４、１．３、１．２、１．１、１、０．９、０．８、０．７、０．６または０．５ｍｍ以下の最大特徴距離とを有し、
前記フォトマスクが、フォトレジストフィルムの少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または全体をカバーし、
（ｂ）前記フォトマスクを介して、前記フォトレジストフィルムを光源に、前記フォトレジストの強化部を作るために十分な時間にわたって曝露すること、
（ｃ）前記フォトレジストフィルムを現像すること、および
（ｄ）前記フォトマスクから前記フォトレジストフィルムを分離し、それにより、前記複数のスルーホールを含む前記フリースタンディングフォトレジストフィルムを製造すること
を含む、方法。
（項目１２４）
前記フォトレジストの前記強化部が、表面積で前記フォトレジストの多くとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％または７５％である、項目１２３に記載の方法。
（項目１２５）
前記フォトレジストフィルムを同時に現像および分離する、項目１２３または１２４に記載の方法。
（項目１２６）
前記フォトレジストを曝露する前または後に、前記フォトレジストフィルムから剥離ライナーを除去することをさらに含む、項目１２３〜１２５のいずれか一項に記載の方法。
（項目１２７）
細胞ローディングの方法であって、
（ａ）（ｉ）上面と、底面と、前記上面から前記底面への複数のスルーホールとを含むボトムレスマイクロウェルアレイであって、各ホールが、前記上面上の上開口部と、前記底面上の底開口部とを有するボトムレスマイクロウェルアレイと、（ｉｉ）前記マイクロウェルアレイの前記底面と接触した多孔質底部膜であって、１０ポンド／平方インチ（ｐｓｉ）の水の初期フラックス速度により測定した場合に、少なくとも０．１ｍＬ／分／ｃｍ２のフラックス速度を有する多孔質底部膜とを含むマイクロアレイデバイスを介して、複数の細胞を含む流体サンプルを流すこと、
（ｂ）前記複数のスルーホールの少なくとも１つの前記上開口部から前記底開口部に圧力勾配を適用し、それにより、単一細胞を前記少なくとも１つのスルーホールにロードすること、
（ｃ）前記圧力勾配を適用することにより、前記細胞を前記少なくとも１つのスルーホールの底部に保持すること、
（ｄ）前記細胞を保持している間に、前記マイクロウェルアレイを反転させること、
（ｅ）前記反転マイクロウェルアレイを逆転させ、それにより、細胞を前記マイクロアレイの前記スルーホールにロードすること
を含む、方法。
（項目１２８）
前記保持細胞により、前記少なくとも１つのスルーホール内の圧力勾配が、第２の細胞のローディングを誘導するために不十分なレベルに減少される、項目１２７に記載の方法。
（項目１２９）
前記マイクロウェルアレイを反転させる際に、前記細胞または前記マイクロウェルアレイを洗浄することをさらに含む、項目１２７または１２８に記載の方法。
（項目１３０）
単離された細胞を培養または貯蔵する方法であって、
（ａ）（ｉ）上面と、底面と、前記上面から前記底面への複数のスルーホールとを含むボトムレスマイクロウェルアレイであって、各ホールが、前記上面上の上開口部と、前記底面上の底開口部とを有するボトムレスマイクロウェルアレイと、（ｉｉ）前記マイクロウェルアレイの前記底面と接触した多孔質底部膜であって、１０ポンド／平方インチ（ｐｓｉ）の水の初期フラックス速度により測定した場合に、少なくとも０．１ｍＬ／分／ｃｍ２のフラックス速度を有する多孔質底部膜とを含むマイクロアレイデバイスを介して、複数の細胞を含む流体サンプルを流すこと、
（ｂ）重力により、または圧力勾配の適用により、前記複数の細胞の少なくとも１つの細胞を前記スルーホールにロードすること、
（ｃ）前記マイクロウェルアレイの前記上面の上に多孔質上部膜を適用し、それにより、前記細胞を前記スルーホールに保持すること、および
（ｄ）前記複数のスルーホールの少なくとも一部が、前記上部、前記底部または両開口部を介して培地と流体接続されるように、前記マイクロウェルアレイを前記培地に浸漬すること
を含む、方法。
（項目１３１）
複数のビーズが前記マイクロウェルアレイにプレロードされている、項目１２７〜１３０のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３２）
複数のビーズを含む流体サンプルを流すことをさらに含む、項目１２７〜１３０のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３３）
組織切片を分析する方法であって、
（ａ）前記組織切片を、マイクロアレイデバイスであって、（ｉ）上面と、底面と、前記上面から前記底面への複数のスルーホールとを含むボトムレスマイクロウェルアレイであって、各ホールが、前記上面上の上開口部と、前記底面上の底開口部とを有し、
前記複数のスルーホールの少なくとも一部がバーコード化転写産物キャプチャービーズおよび機能表面を含むボトムレスマイクロウェルアレイと、（ｉｉ）前記マイクロウェルアレイの前記底面と接触した多孔質底部膜とを含むマイクロアレイデバイスと接触させること、ならびに
（ｂ）前記ビーズバーコードの配列がｃＤＮＡに組み込まれるように、前記転写産物からｃＤＮＡ配列を生成し、それにより、前記組織切片を分析すること
を含む、方法。
（項目１３４）
単一細胞分析キットであって、
（ａ）上面と、底面と、前記上面から前記底面への複数のスルーホールとを含むフォトレジストフィルムであって、各ホールが、前記上面上の上開口部と、前記底面上の底開口部とを有するフォトレジストフィルムをそれぞれが含む１つまたはそれを超えるマイクロアレイ、および
（ｂ）１０ポンド／平方インチ（ｐｓｉ）の水の初期フラックス速度により測定した場合に、少なくとも０．１ｍＬ／分／ｃｍ２のフラックス速度を有する少なくとも１つの多孔質乾燥膜
を含む、単一細胞分析キット。