(57)【要約】【課題】本発明は、グルカゴン様ペプチド−１受容体とグルカゴン受容体のデュアルアゴニストペプチドの用途に関する。【解決手段】本発明のペプチドは、酵素分解に対する高安定性に加え、優れた生物活性を有し、更に不良反応がない等といった特徴があり、糖尿病に起因し又は高脂膳食誘発性の血中総コレステロール及びトリグリセリドレベルの異常上昇を抑制し、肝臓酵素値を低下させて肝臓損傷と線維化を改善することができ、並びに非アルコール性脂肪性肝疾患、高脂血症、動脈硬化等の疾患の予防又は治療に用いることができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記アミノ酸配列で表される親配列を含み、
Ｈｉｓ−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｘａａ１０−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｘａａ１３−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｘａａ１６−Ｘａａ１７−Ｘａａ１８−Ａｌａ−Ｘａａ２０−Ｘａａ２１−Ｐｈｅ−Ｘａａ２３−Ｘａａ２４−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｘａａ２７−Ｘａａ２８−Ｘａａ２９−Ｘａａ３０−Ｘａａ３１−Ｘａａ３２−Ｘａａ３３−Ｘａａ３４−Ｘａａ３５−Ｘａａ３６−Ｘａａ３７−Ｘａａ３８−Ｘａａ３９−Ｘａａ４０−ＣＯＲ１、そのうち、
Ｒ１＝−ＮＨ２又は−ＯＨ、
Ｘａａ２＝Ａｉｂ、Ｓｅｒ又はＤ−Ｓｅｒ、
Ｘａａ１０＝Ｌｙｓ又はＴｙｒ、
Ｘａａ１３＝Ｌｙｓ又はＴｙｒ、
Ｘａａ１６＝Ｓｅｒ、Ａｉｂ、Ｌｙｓ又はＧｌｕ、
Ｘａａ１７＝Ｌｙｓ又はＡｒｇ、
Ｘａａ１８＝Ａｒｇ又はＡｌａ、
Ｘａａ２０＝Ｈｉｓ、Ｇｌｎ又はＬｙｓ、
Ｘａａ２１＝Ａｓｐ又はＧｌｕ、
Ｘａａ２３＝Ｉｌｅ、Ｌｅｕ又はＶａｌ、
Ｘａａ２４＝Ｇｌｕ又はＧｌｎ、
Ｘａａ２７＝Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｎｌｅ又は非存在、
Ｘａａ２８＝Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ａｒｇ又は非存在、
Ｘａａ２９＝Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ又は非存在、
Ｘａａ３０＝Ｇｌｙ又は非存在、
Ｘａａ３１＝Ｇｌｙ又は非存在、
Ｘａａ３２＝Ｐｒｏ又は非存在、
Ｘａａ３３＝Ｓｅｒ又は非存在、
Ｘａａ３４＝Ｓｅｒ又は非存在、
Ｘａａ３５＝Ｇｌｙ又は非存在、
Ｘａａ３６＝Ａｌａ又は非存在、
Ｘａａ３７＝Ｐｒｏ又は非存在、
Ｘａａ３８＝Ｐｒｏ又は非存在、
Ｘａａ３９＝Ｐｒｏ又は非存在、
Ｘａａ４０＝Ｓｅｒ又は非存在であり、
そのうち、Ｘａａ１０，Ｘａａ１６，Ｘａａ１７又はＸａａ２０のうち少なくとも１つがＬｙｓであり、前記少なくとも１つのＬｙｓ又は前記配列の第１２位Ｌｙｓの側鎖が親油基に結合し、結合方式としては前記親油基のカルボキシル基が１つの架橋単位のアミノ基とアミド結合を形成し、架橋単位のアミノ酸残基におけるカルボキシル基が親配列におけるＬｙｓのＮ−末端残基と１つのアミド結合を形成して親配列に連結され、
前記架橋単位は、Ｇｌｕ、Ａｓｐ及び／又は（ＰＥＧ）ｍであり、ｍは２〜１０の整数であり、前記親油基は、ＣＨ３（ＣＨ２）ｎＣＯ−又はＨＯＯＣ（ＣＨ２）ｎＣＯ−から選ばれるアシル基であり、ｎは１０〜２４の整数であることを特徴とする、
ＧＬＰ−１Ｒ／ＧＣＧＲデュアルアゴニストペプチドの、非アルコール性脂肪性肝疾患、高脂血症及び動脈硬化を予防又は治療のための薬物の製造における用途。
【請求項２】
前記架橋単位は、Ｇｌｕ−（ＰＥＧ）ｍ、Ａｓｐ−（ＰＥＧ）ｍ又は（ＰＥＧ）ｍである、請求項１に記載の用途。
【請求項３】
前記架橋単位は、残基ペア１２と１６、残基ペア１６と２０、残基ペア１７と２１、残基ペア２０と２４の側鎖の間で形成される分子内架橋である、請求項１に記載の用途。
【請求項４】
前記親油基に結合するＬｙｓは、ＨｏｍｏＬｙｓ、Ｏｒｎ、Ｄａｐ又はＤａｂによって置き換える、請求項１に記載の用途。
【請求項５】
前記ＧＬＰ−１Ｒ／ＧＣＧＲデュアルアゴニストペプチドは、下記アミノ酸配列で表される親配列を含み、
Ｈｉｓ−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｘａａ１０−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｘａａ１３−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｘａａ１６−Ｘａａ１７−Ｘａａ１８−Ａｌａ−Ｘａａ２０−Ｘａａ２１−Ｐｈｅ−Ｘａａ２３−Ｘａａ２４−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｘａａ２７−Ｘａａ２８−Ｘａａ２９−Ｘａａ３０−Ｘａａ３１−Ｘａａ３２−Ｘａａ３３−Ｘａａ３４−Ｘａａ３５−Ｘａａ３６−Ｘａａ３７−Ｘａａ３８−Ｘａａ３９−Ｘａａ４０−ＣＯＲ１、そのうち、
Ｒ１＝−ＮＨ２、
Ｘａａ２＝Ａｉｂ又はＤ−Ｓｅｒ、
Ｘａａ１０＝Ｌｙｓ又はＴｙｒ、
Ｘａａ１３＝Ｌｙｓ又はＴｙｒ、
Ｘａａ１６＝Ｓｅｒ、Ａｉｂ、Ｇｌｕ又はＬｙｓ、
Ｘａａ１７＝Ｌｙｓ又はＡｒｇ、
Ｘａａ１８＝Ａｒｇ又はＡｌａ、
Ｘａａ２０＝Ｈｉｓ、Ｇｌｎ又はＬｙｓ、
Ｘａａ２１＝Ａｓｐ又はＧｌｕ、
Ｘａａ２３＝Ｉｌｅ、Ｖａｌ、
Ｘａａ２４＝Ｇｌｕ又はＧｌｎ、
Ｘａａ２７＝Ｍｅｔ、Ｌｅｕ又はＮｌｅ、
Ｘａａ２８＝Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ａｒｇ又は非存在、
Ｘａａ２９＝Ｇｌｙ、Ｔｈｒ又は非存在、
Ｘａａ３０＝Ｇｌｙ又は非存在、
Ｘａａ３１＝Ｇｌｙ又は非存在、
Ｘａａ３２＝Ｐｒｏ又は非存在、
Ｘａａ３３＝Ｓｅｒ又は非存在、
Ｘａａ３４＝Ｓｅｒ又は非存在、
Ｘａａ３５＝Ｇｌｙ又は非存在、
Ｘａａ３６＝Ａｌａ又は非存在、
Ｘａａ３７＝Ｐｒｏ又は非存在、
Ｘａａ３８＝Ｐｒｏ又は非存在、
Ｘａａ３９＝Ｐｒｏ又は非存在、
Ｘａａ４０＝Ｓｅｒ又は非存在である、請求項１に記載の用途。
【請求項６】
前記アミノ酸配列において第１０位、第１２位、第１６位、第１７位又は第２０位がＬｙｓであるとき、前記Ｌｙｓ側鎖に結合する親油基は、下記構造から選ばれる任意の１つである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の用途。
【化１】
2019520314.tif 000022
【化２】
2019520314.tif 000023
【化３】
2019520314.tif 000024
【化４】
2019520314.tif 000025
【化５】
2019520314.tif 000026
【化６】
2019520314.tif 000027
【化７】
2019520314.tif 000028
【化８】
2019520314.tif 000029
【請求項７】
前記親配列は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７和配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６及び配列番号３７からなる群より選ばれる任意の１つである、請求項１に記載の用途。
【請求項８】
前記非アルコール性脂肪性肝疾患は、非アルコール性脂肪変性、非アルコール性脂肪肝炎、肝線維症、又は肝線維症に伴う肝硬変である、請求項１に記載の用途。
【請求項９】
前記動脈硬化症は、アテローム性動脈硬化又は冠動脈疾患である、請求項１に記載の用途。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は生化学の技術分野に属し、具体的には、ＧＬＰ−１Ｒ／ＧＣＧＲをダブルターゲットとしたデュアルアゴニストペプチドに関する。本発明は、更に、非アルコール性脂肪性肝疾患、高脂血症、動脈硬化等の疾患の予防及び／又は治療における上記デュアルアゴニストペプチドの用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
非アルコール性脂肪性肝疾患（Ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｆａｔｔｙ  ｌｉｖｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ，ＮＡＦＬＤ）は、アルコールの過度摂取に起因しない進行性で複雑な肝臓疾患であり、脂肪変性から非アルコール性脂肪性肝炎（ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ，ＮＡＳＨ）、肝線維症（Ｆｉｂｒｏｓｉｓ）、肝硬変（Ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ）を介して最終的には肝細胞癌や肝不全に至ることがある。全世界でＮＡＦＬＤの罹患率が過去３０年間で倍に増え、そのうち中国でＮＡＦＬＤの罹患者は２．７億人の規模に達している。純粋な脂肪変性は一時的な発症率又は死亡率の増加と相関性を示さないが、ＮＡＳＨ患者が最終的に肝硬変、肝不全及び肝細胞癌までに進展するリスクは確実に増え続ける。ＮＡＳＨによる肝硬変は肝臓移植の主因であり、一方、ＮＡＳＨ患者のうち肝臓疾患に起因する心血管疾患の発症率と死亡率は健常人と比較して顕著に高いことが知られている。したがって、現在限られた医療資源にとって日増しに増えるＮＡＦＬＤの発症率は、緊急の課題であり、医療現場には緊迫感が増している。
【０００３】
ＮＡＳＨは、例えば、２型糖尿病、インスリン抵抗、中心性肥満、高脂血症及び高血圧等のメタボリックシンドロームの肝臓症状として広く認識されている。糖脂質代謝の異常は糖尿病、ＮＡＳＨ及びアテローム性動脈硬化等の疾患を引き起こし、また、ＮＡＳＨの形成により糖尿病及びアテローム性動脈硬化に関連して発症する血管合併症等の病状が更に重篤化し、その結果として臓器の線維化と機能不全に陥る。
【０００４】
ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨを対象とする有効な治療薬が依然として不足である中、新たな開発対象としてＰＰＡＲ−γ類インスリン感受性改善薬、オベチコール酸等のファルネソイドＸ受容体（Ｆａｒｎｅｓｏｉｄ  Ｘ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＦＸＲ）作動薬は、その長期間使用での安全性及び治療有効性は何れも更に検証する必要がある（Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ  ＭＪ，Ｇａｕｎｔ  Ｐ，Ａｉｔｈａｌ  ＧＰ，ｅｔ  ａｌ．  Ｌａｎｃｅｔ，２０１５．ｄｏｉ：１０．１０１６／Ｓ０１４０−６７３６（１５）００８０３−Ｘ．）。ペプチド薬品は、以下の利点がある。つまり、１）その多くが内因性ペプチド又は天然ペプチドであるため、構造と作用機序が明確であり、２）一般の低分子薬品に比べてより高い活性を示すと共に、投与量及び副作用が低く、加えて代謝産物が副作用のないアミノ酸であり、３）外因性タンパク質に比べて免疫原性が抑えられ、しかも化学合成できるため製品純度が高く、品質制御も可能となり、４）消化管で消化されることが少なく、タンパク質分子が消化酵素によって分解されて経口投与が困難であるといった欠点を解消することができる。
【０００５】
グルカゴン様ペプチド−１（Ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅ  ｐｅｐｔｉｄｅ−１，ＧＬＰ−１）は、１種のブドウ糖依存性のインクレチン（Ｉｎｃｒｅｔｉｎ）である。ヒトＧＬＰ−１はプログルカゴン（Ｐｒｏｇｌｕｃａｇｏｎ）に由来し、プログルカゴンは１５８個のアミノ酸からなり且つ異なる部位で異なるペプチド断片に切断される。ＧＬＰ−１は膵β細胞のＧＬＰ−１受容体（ＧＬＰ−１Ｒ）に結合して、細胞膜にある環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）と分裂促進因子活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）の経路を活性化させ、ブドウ糖と協同してインスリンの生合成と分泌を促進する。それ以外でも、ＧＬＰ−１は膵β細胞の増殖を維持、加速化することによってインスリン感受性を高め、グルカゴン分泌を抑制すると同時に、胃内容の排出を抑えて満腹感を増加させ、食欲を抑えて体重調整を行うという薬理作用を示している。天然由来のヒトＧＬＰ−１は半減期が特に短く、言わばドラッガビリティがないため、天然ＧＬＰ−１の構造を最適化又は修飾して生体内における半減期を長くする必要がある。こうして得られるＧＬＰ−１誘導体は構造や機能からしてＧＬＰ−１に似ており、ＧＬＰ−１Ｒに結合して活性化することができるため、ＧＬＰ−１類似体又はＧＬＰ−１Ｒ作動薬とも称される。ＮＡＳＨのげっ歯類モデルにおいて、ＧＬＰ−１類似体は肝酵素値と酸化ストレスを低下させ、肝臓の脂質代謝障害を改善して脂質酸化を抑制し、並びに肝臓の組織損傷を改善することができる（Ｔｒｅｖａｓｋｉｓ  ＪＬ，Ｇｒｉｆｆｉｎ  ＰＳ，Ｃａｒｒｉｅ  Ｗ，ｅｔ  ａｌ．  Ａｊｐ  Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ＆  Ｌｉｖｅｒ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２０１２，３０２（８）：Ｇ７６２−７２．）。リラグルチド（Ｌｉｒａｇｌｕｔｉｄｅ）は長時間作用型のＧＬＰ−１類似体であり、ＮＡＦＬＤ及びＮＡＳＨ患者の臨床症状を著しく軽減することができ、同時に肥満患者の体重を著しく低下させ、血糖異常を改善することができる。（Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ  ＭＪ，Ｇａｕｎｔ  Ｐ，Ａｉｔｈａｌ  ＧＰ，ｅｔ  ａｌ．  Ｌａｎｃｅｔ，２０１５．ｄｏｉ：１０．１０１６／Ｓ０１４０−６７３６（１５）００８０３−Ｘ．）。
【０００６】
ところで、ＧＬＰ−１類似体の薬物動態学及び安全性が未だに完全に掌握できていないため、導入された外因性化学物質がどのような経路を介して分解・排出し、人体にどのような影響をもたらすかが何れも不明であり、なおさら検証する必要がある。グルカゴン（Ｇｌｕｃａｇｏｎ）は膵臓α細胞から分泌されるホルモンであり、長さ２９個のアミノ酸からなる単鎖ポリペプチドである。グルカゴンは、肝臓及び腎臓の標的細胞表面に位置するグルカゴン受容体（ＧＣＧＲ）に特異的に結合し、細胞内のアデニル酸シクラーゼ（Ａｄｅｎｙｌａｔｅ  ｃｙｃｌａｓｅ）を活性化させて細胞内のｃＡＭＰレベルを高めることによりその生理機能を発揮する。また、グルカゴンは異化作用を兼ね備えるホルモンであり、グルカゴンを短期間で注射することによってグリコーゲン分解と糖新生を促進させ、血糖値を高めることができる。グルカゴンはインスリンと逆の働きをするホルモンであり、インスリンとペアを組んでグルコース恒常性の維持においてネガティブフィードバックループを形成する。特に、動物と人体試験においてグルカゴンを注射することにより長期間に亘ってＧＣＧＲを刺激すると、食欲が低下し、脂肪酸分解が加速化し、脂肪組織のエネルギー消費が大幅に増加することが実証されている（Ｃａｍｐｂｅｌｌ  ＪＥ，Ｄｒｕｃｋｅｒ  ＤＪ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，２０１５，１１（６）：３２９−３３８．）。
【０００７】
体内におけるポリペプチドの半減期を延ばし、ポリペプチドの投与頻度を低減するのに最も頻繁に使われる手段は、モノメトキシポリエチレングリコール（ｍｅｔｈｏｘｙｐｏｌｙ  ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ，ｍＰＥＧ）を用いて化学修飾することであり、よって、ポリペプチド分子の排除体積を増やし、薬物分子の腎臓除去率を低減させ、ｍＰＥＧ修飾後の薬物の血漿半減期を伸ばして投与頻度を低減することができる。しかしながら、このような方法では殆どのタンパク質の生物活性がある程度までに低下し、更に、ｍＰＥＧが人体によって代謝できない分子であるため、ｍＰＥＧ修飾のポリペプチド・タンパク質系薬物によって腎臓の液胞化を引き起こす恐れがある（Ｂｅｎｄｅｌｅ  Ａ，Ｓｅｅｌｙ  Ｊ，Ｒｉｃｈｅｙ  Ｃ，ｅｔ  ａｌ．  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９９８，４２（２）：１５２−１５７．）。一方、ｍＰＥＧの毒性が臨床現場で無視されている側面もある。そこで、安全でありながら優れた治療効果を示すペプチド薬品の開発は、アルコール性脂肪性肝疾患の患者が長期間に亘って薬物を投与せざるを得ない局面を改善することができ、臨床治療において極めて重要である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明者が提出した中国特許出願第２０１５１０２３７０２７．７号では、オキシントモジュリン（Ｏｘｙｎｔｏｍｕｄｕｌｉｎ，ＯＸＭ）の分子構造を改良することでオキシントモジュリン類似体としてＧＬＰ−１Ｒ／ＧＣＧＲデュアルアゴニストを取得し、該ＧＬＰ−１Ｒ／ＧＣＧＲデュアルアゴニストは、より長い半減期を有し、インスリン分泌促進活性を示すと同時に不良反応がなく、糖尿病等の疾患の治療に有用であることが開示されている。そして、本発明者が引続き検証を行い、上記ＧＬＰ−１Ｒ／ＧＣＧＲデュアルアゴニストペプチドの新しい生物活性及びその治療効能・用途を発見した。
【０００９】
そこで、本発明の目的は、上記ＧＬＰ−１Ｒ／ＧＣＧＲデュアルアゴニストペプチドの非アルコール性脂肪肝炎及び肝硬変などの肝線維症を抑制及び改善するための生物活性及び治療用途を提供する。本発明者は、鋭意検討を重ねた結果、上記ＧＬＰ−１Ｒ／ＧＣＧＲデュアルアゴニストペプチドが体外でヒト肝星細胞ＬＸ−２の活性化を抑制し、活性化されたポリペプチドが体外で肝線維症に対して優れた改善効果を示すと同時に、該ポリペプチドがＣＣｌ４誘発性のマウス肝線維症に対しても優れた改善効果を示すことを見出した。なお、該ポリペプチドが高脂肪食誘発性のマウス脂肪肝、並びにｄｂ／ｄｂ糖尿病マウスモデルの肝臓脂肪変性と非アルコール性脂肪炎症を著しく改善することができることも実証した。
【００１０】
本発明のもう１つの目的は、上記ＧＬＰ−１Ｒ／ＧＣＧＲデュアルアゴニストペプチドの脂肪肝に伴う肝線維症を抑制及び改善するための生物活性及び治療用途を提供する。本発明者は、鋭意検討を重ねた結果、上記ＧＬＰ−１Ｒ／ＧＣＧＲデュアルアゴニストペプチドが高脂肪食誘発性のマウス肝臓脂質とコラーゲンの沈着を著しく抑制することができ、該ポリペプチドが脂肪肝に伴う肝線維症を抑制することのできることを見出した。
【００１１】
本発明のもう１つの目的は、上記ＧＬＰ−１Ｒ／ＧＣＧＲデュアルアゴニストペプチドの糖脂質代謝調節、脂質降下における生物活性及び治療用途を提供する。本発明者は、鋭意検討を重ねた結果、上記ＧＬＰ−１Ｒ／ＧＣＧＲデュアルアゴニストペプチドがｄｂ／ｄｂ糖尿病マウスの血清トリグリセリド（ＴＧ）及び総コレステロール（ＴＣ）レベルを著しく低下させることのできることを見出した。
【００１２】
本発明のもう１つの目的は、上記ＧＬＰ−１Ｒ／ＧＣＧＲデュアルアゴニストペプチドの新しい適応症における治療用途を提供する。
【００１３】
上記ＧＬＰ−１Ｒ／ＧＣＧＲデュアルアゴニストペプチドは、高脂血症、動脈硬化、非アルコール性脂肪性肝疾患（例えば、非アルコール性脂肪変性、非アルコール性脂肪肝炎、肝線維症、及び肝線維症に伴う肝硬変など）等疾患を対象とする次世代の予防薬又は治療薬として有望である。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明は、下記アミノ酸配列で表される親配列を含むＧＬＰ−１Ｒ／ＧＣＧＲデュアルアゴニストペプチドを提供する。
【００１５】
Ｈｉｓ−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｘａａ１０−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｘａａ１３−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｘａａ１６−Ｘａａ１７−Ｘａａ１８−Ａｌａ−Ｘａａ２０−Ｘａａ２１−Ｐｈｅ−Ｘａａ２３−Ｘａａ２４−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｘａａ２７−Ｘａａ２８−Ｘａａ２９−Ｘａａ３０−Ｘａａ３１−Ｘａａ３２−Ｘａａ３３−Ｘａａ３４−Ｘａａ３５−Ｘａａ３６−Ｘａａ３７−Ｘａａ３８−Ｘａａ３９−Ｘａａ４０−ＣＯＲ１、そのうち、
Ｒ１＝−ＮＨ２又は−ＯＨ、
Ｘａａ２＝Ａｉｂ、Ｓｅｒ又はＤ−Ｓｅｒ、
Ｘａａ１０＝Ｌｙｓ又はＴｙｒ、
Ｘａａ１３＝Ｌｙｓ又はＴｙｒ、
Ｘａａ１６＝Ｓｅｒ、Ａｉｂ、Ｌｙｓ又はＧｌｕ、
Ｘａａ１７＝Ｌｙｓ又はＡｒｇ、
Ｘａａ１８＝Ａｒｇ又はＡｌａ、
Ｘａａ２０＝Ｈｉｓ、Ｇｌｎ又はＬｙｓ、
Ｘａａ２１＝Ａｓｐ又はＧｌｕ、
Ｘａａ２３＝Ｉｌｅ、Ｌｅｕ又はＶａｌ、
Ｘａａ２４＝Ｇｌｕ又はＧｌｎ、
Ｘａａ２７＝Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｎｌｅ又は非存在、
Ｘａａ２８＝Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ａｒｇ又は非存在、
Ｘａａ２９＝Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ又は非存在、
Ｘａａ３０＝Ｇｌｙ又は非存在、
Ｘａａ３１＝Ｇｌｙ又は非存在、
Ｘａａ３２＝Ｐｒｏ又は非存在、
Ｘａａ３３＝Ｓｅｒ又は非存在、
Ｘａａ３４＝Ｓｅｒ又は非存在、
Ｘａａ３５＝Ｇｌｙ又は非存在、
Ｘａａ３６＝Ａｌａ又は非存在、
Ｘａａ３７＝Ｐｒｏ又は非存在、
Ｘａａ３８＝Ｐｒｏ又は非存在、
Ｘａａ３９＝Ｐｒｏ又は非存在、
Ｘａａ４０＝Ｓｅｒ又は非存在である。
【００１６】
前記アミノ酸配列において、Ｘａａ１０、Ｘａａ１６、Ｘａａ１７又はＸａａ２０のうち少なくとも１つがＬｙｓであり、前記少なくとも１つのＬｙｓ又は前記配列の第１２位Ｌｙｓの側鎖が親油基に結合し、結合方式としては前記親油基のカルボキシル基が１つの架橋単位のアミノ基とアミド結合を形成し、架橋単位のアミノ酸残基におけるカルボキシル基が親配列におけるＬｙｓのＮ−末端残基と１つのアミド結合を形成して親配列に連結され、
前記架橋単位は、Ｇｌｕ、Ａｓｐ及び／又は（ＰＥＧ）ｍであり、そのうち、ｍは２〜１０の整数であり、前記親油基は、ＣＨ３（ＣＨ２）ｎＣＯ−又はＨＯＯＣ（ＣＨ２）ｎＣＯ−から選ばれるアシル基であり、そのうち、ｎは１０〜２４の整数である。好ましくは、前記架橋単位は、下記式に示す結合方式で形成されるＧｌｕ−（ＰＥＧ）ｍ又はＡｓｐ−（ＰＥＧ）ｍ又は（ＰＥＧ）ｍである。
【００１７】
【化１】
2019520314.tif 000002
【００１８】
本発明に係る化合物は、下記アミノ酸配列で表される親配列を含むことが好ましい。
Ｈｉｓ−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｘａａ１０−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｘａａ１３−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｘａａ１６−Ｘａａ１７−Ｘａａ１８−Ａｌａ−Ｘａａ２０−Ｘａａ２１−Ｐｈｅ−Ｘａａ２３−Ｘａａ２４−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｘａａ２７−Ｘａａ２８−Ｘａａ２９−Ｘａａ３０−Ｘａａ３１−Ｘａａ３２−Ｘａａ３３−Ｘａａ３４−Ｘａａ３５−Ｘａａ３６−Ｘａａ３７−Ｘａａ３８−Ｘａａ３９−Ｘａａ４０−ＣＯＲ１、そのうち、
Ｒ１＝−ＮＨ２、
Ｘａａ２＝Ａｉｂ又はＤ−Ｓｅｒ、
Ｘａａ１０＝Ｌｙｓ又はＴｙｒ、
Ｘａａ１３＝Ｌｙｓ又はＴｙｒ、
Ｘａａ１６＝Ｓｅｒ、Ａｉｂ、Ｇｌｕ又はＬｙｓ、
Ｘａａ１７＝Ｌｙｓ又はＡｒｇ、
Ｘａａ１８＝Ａｒｇ又はＡｌａ、
Ｘａａ２０＝Ｈｉｓ、Ｇｌｎ又はＬｙｓ、
Ｘａａ２１＝Ａｓｐ又はＧｌｕ、
Ｘａａ２３＝Ｉｌｅ、Ｖａｌ、
Ｘａａ２４＝Ｇｌｕ又はＧｌｎ、
Ｘａａ２７＝Ｍｅｔ、Ｌｅｕ又はＮｌｅ、
Ｘａａ２８＝Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ａｒｇ又は非存在、
Ｘａａ２９＝Ｇｌｙ、Ｔｈｒ又は非存在、
Ｘａａ３０＝Ｇｌｙ又は非存在、
Ｘａａ３１＝Ｇｌｙ又は非存在、
Ｘａａ３２＝Ｐｒｏ又は非存在、
Ｘａａ３３＝Ｓｅｒ又は非存在、
Ｘａａ３４＝Ｓｅｒ又は非存在、
Ｘａａ３５＝Ｇｌｙ又は非存在、
Ｘａａ３６＝Ａｌａ又は非存在、
Ｘａａ３７＝Ｐｒｏ又は非存在、
Ｘａａ３８＝Ｐｒｏ又は非存在、
Ｘａａ３９＝Ｐｒｏ又は非存在、
Ｘａａ４０＝Ｓｅｒ又は非存在である。
【００１９】
本発明に係る化合物は、理論上分子内架橋によって安定な螺旋構造を形成し、ＧＬＰ−１Ｒ又はＧＣＧＲ受容体に対して高い親和性及び／又は特異性を示す。本発明に係る化合物は、その配列構成において１個又は数個の分子内架橋を含む。このような架橋は２つのアミノ酸残基の側鎖の間で形成され、前記２つのアミノ酸残基は、通常、直線状配列において３つのアミノ酸によって隔てられる。前記分子内架橋は、例えば、残基ペア１２と１６、１６と２０、１７と２１、残基ペア２０と２４の側鎖の間で形成され、これらの２つの側鎖はイオン性相互作用又は共有結合を介して互いに連結される。したがって、これらの残基ペアは反対電荷を帯びる側鎖を含んでもよく、イオン性相互作用によって塩橋を形成することができる。例えば、片方の残基がＧｌｕ又はＡｓｐである場合、他方の残基がＬｙｓ又はＡｒｇであり、ＬｙｓとＧｌｕ、ＬｙｓとＡｓｐがそれぞれペアを形成し、ペア同士が結合してラクタム環を形成することができる。
【００２０】
本発明は、更に、本発明のＧＬＰ−１Ｒ／ＧＣＧＲデュアルアゴニストペプチドを含む薬物組成物を提供し、本発明に係る薬物組成物は、前記ＧＬＰ−１Ｒ／ＧＣＧＲデュアルアゴニストペプチドを活性成分とし、更に薬学的に許容可能な担体及び／又は添加剤を含んでなるものである。
【００２１】
本発明のＧＬＰ−１Ｒ／ＧＣＧＲデュアルアゴニストペプチドは、糖脂質代謝調節、脂質降下（例えば、トリグリセリド及び総コレステロールに対して優れた抑制効果を示す）の効果を示し、高脂血症を予防又は治療するための薬物として有望である。
【００２２】
本発明のＧＬＰ−１Ｒ／ＧＣＧＲデュアルアゴニストペプチドは、肝臓脂肪変性と非アルコール性脂肪性肝疾患に対して優れた抑制及び改善効果を示し、肝臓脂肪変性と非アルコール性脂肪肝炎を治療するための薬物として有望である。
【００２３】
本発明のＧＬＰ−１Ｒ／ＧＣＧＲデュアルアゴニストペプチドは、更に、脂肪肝に伴う肝線維症と肝硬変を著しく抑制、改善することができ、肝線維症、肝硬変等の疾患を治療するための薬物として有望である。
【００２４】
本発明のＧＬＰ−１Ｒ／ＧＣＧＲデュアルアゴニストペプチドは、動脈硬化、アテローム性動脈硬化及び冠動脈疾患を治療するための薬物として有望である。
【００２５】
本発明に係るポリペプチドは、肝臓脂肪変性、非アルコール性脂肪肝炎、脂肪肝に伴う肝線維症、肝硬変等の非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）に対して優れた改善及び治療効果を示す。本発明に係るポリペプチドは、非アルコール性脂肪性肝疾患に起因し、又はそれを特徴とする疾患の治療に直接又は間接的に適用することができる。本発明に係るポリペプチドは、肝線維症及び肝硬変に対して優れた改善及び治療効果を示す。本発明に係るポリペプチドは、肝線維症及び肝硬変に起因し、又はそれを特徴とする疾患の治療に適用することができる。本発明に係るポリペプチドは、循環コレステロールレベル、トリグリセリドに対して有益な調節作用を示す。したがって、本発明に係るポリペプチドは、高脂血症に起因し、又はそれを特徴とする関連血管疾患の治療に直接又は間接的に適用することができ、例えば、アテローム性動脈硬化、動脈硬化、冠動脈疾患の治療及び予防に適用することができる。
【００２６】
これら疾患に対する本発明に係るポリペプチドの治療効果は、肝臓、腎臓、血液循環系に対するポリペプチドの作用によるものであり、又はそれと関連していると考えられ、或いは肝臓、腎臓、血液循環系とは別に他の作用機構によるものと考えられる。
【００２７】
当業者からすれば、本発明に係る薬物組成物の投与形態に特に制限がないとよく理解でき、例えば、治療目的に応じて経口投与、経皮投与、静脈内投与、筋肉内投与、局所投与、鼻腔内投与等の投与形態を適宜選択することができる。また、投与形態にもよるが、本発明に係るペプチド薬物組成物を、治療及び／又は予防効果を示す有効量で少なくとも１種の本発明のペプチドと、少なくとも１種の薬学的に許容可能な担体とを含んでなる適切な製剤に調製することができる。
【００２８】
具体的な製剤としては、例えば、錠剤、カプセル、糖衣錠剤、粒剤、経口液剤又はシロップ剤が挙げられ、経皮投与では油脂性軟膏や貼付剤に調製することができ、更に、エアゾール剤、鼻腔用スプレー、注射用無菌液剤に調製することができる。
【００２９】
なお、非経口ルートで投与する場合、本発明のポリペプチドを含む薬物組成物を溶液又は凍結乾燥粉末に調製した後、使用に先立って適切な溶媒又は薬用担体を加えて緩衝液、等張液又は水溶液にすることができる。
【００３０】
本発明の薬物組成物に含まれるポリペプチド量は、当業者が疾患の種類、病状の深刻さ、患者体重、製剤形態、投与ルート等の客観要素を考慮した上で適宜調整することができる。
【００３１】
具体的には、本発明に係るＧＬＰ−１Ｒ／ＧＣＧＲデュアルアゴニストペプチドは、下記配列を含む。
化合物１（配列番号１）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１４ＣＨ３）−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｉｂ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
Ｈ−（ｄ−Ｓ）−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳ−Ｋ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１４ＣＨ３）−ＫＬＤ−Ａｉｂ−ＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＭＮＴＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２
化合物２（配列番号２）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｉｂ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
Ｈ−（ｄ−Ｓ）−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳ−Ｋ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−ＫＬＤ−Ａｉｂ−ＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＭＮＴＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２
化合物３（配列番号３）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＨ３）−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｉｂ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
Ｈ−（ｄ−Ｓ）−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳ−Ｋ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＨ３）−ＫＬＤ−Ａｉｂ−ＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＭＮＴＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２
化合物４（配列番号４）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１４ＣＨ３）−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｉｂ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
Ｈ−（ｄ−Ｓ）−ＱＧＴＦＴＳＤ−Ｋ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１４ＣＨ３）−ＳＫＹＬＤ−Ａｉｂ−ＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＭＮＴＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ
化合物５（配列番号５）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｉｂ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
Ｈ−（ｄ−Ｓ）−ＱＧＴＦＴＳＤ−Ｋ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−ＳＫＹＬＤ−Ａｉｂ−ＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＭＮＴＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２
化合物６（配列番号６）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１４ＣＨ３）−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
Ｈ−（ｄ−Ｓ）−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ−Ｋ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１４ＣＨ３）−ＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＭＮＴＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２
化合物７（配列番号７）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
Ｈ−（ｄ−Ｓ）−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ−Ａｉｂ−Ｋ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−ＲＡＱＤＦＶＱＷＬＭＮＴＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２
化合物８（配列番号８）：Ｈｉｓ−Ａｉｂ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１４ＣＨ３）−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｉｂ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤ−Ｋ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１４ＣＨ３）−ＳＫＹＬＤ−Ａｉｂ−ＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＬＤＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２
化合物９（配列番号９）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−ＣＯ（ＣＨ２）１４ＣＨ３）−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｉｂ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
Ｈ−（ｄ−Ｓ）−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳ−Ｋ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−ＣＯ（ＣＨ２）１４ＣＨ３）−ＫＬＤ−Ａｉｂ−ＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＭＮＴＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２
化合物１０（配列番号１０）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
Ｈ−（ｄ−Ｓ）−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ−Ａｉｂ−Ｋ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−ＲＡＱＤＦＶＱＷＬＭＮＴＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２
化合物１１（配列番号１１）：Ｈｉｓ−Ａｉｂ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１４ＣＯ２Ｈ）−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｉｂ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤ−Ｋ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１４ＣＯ２Ｈ）−ＳＫＹＬＤ−Ａｉｂ−ＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＬＤＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２
化合物１２（配列番号１２）：Ｈｉｓ−Ａｉｂ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＨ３）−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｉｂ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤ−Ｋ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＨ３）−ＳＫＹＬＤ−Ａｉｂ−ＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＬＤＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２
化合物１３（配列番号１３）：Ｈｉｓ−Ａｉｂ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１４ＣＯ２Ｈ）−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤ−Ｋ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１４ＣＯ２Ｈ）−ＳＫＹＬＤＥＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＬＤＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２
化合物１４（配列番号１４）：Ｈｉｓ−Ａｉｂ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＨ３）−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤ−Ｋ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＨ３）−ＳＫＹＬＤＥＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＬＤＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２
化合物１５（配列番号１５）：Ｈｉｓ−Ａｉｂ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤ−Ｋ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−ＳＫＹＬＤＥＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＬＤＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２
化合物１６（配列番号１６）：Ｈｉｓ−Ａｉｂ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１４ＣＨ３）−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤ−Ｋ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１４ＣＨ３）−ＳＫＹＬＤＥＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＬＤＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２
化合物１７（配列番号１７）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａ−ＮＨ２
Ｈ−（ｄ−Ｓ）−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳ−Ｋ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＲＡ−ＮＨ２
化合物１８（配列番号１８）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａ−ＮＨ２
Ｈ−（ｄ−Ｓ）−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＡＡ−Ｋ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−ＥＦＩＥＷＬＬＲＡ−ＮＨ２
化合物１９（配列番号１９）：Ｈｉｓ−Ａｉｂ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｉｂ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤ−Ｋ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−ＳＫＹＬＤ−Ａｉｂ−ＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＬＤＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２
化合物２０（配列番号２０）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｉｂ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
Ｈ−（ｄ−Ｓ）−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳ−Ｋ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−ＫＬＤ−Ａｉｂ−ＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＭＮＴＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２
化合物２１（配列番号２１）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
Ｈ−（ｄ−Ｓ）−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳ−Ｋ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２
化合物２２（配列番号２２）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＨ３）−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
Ｈ−（ｄ−Ｓ）−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳ−Ｋ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＨ３）−ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２
化合物２３（配列番号２３）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１４ＣＨ３）−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａ−ＮＨ２
Ｈ−（ｄ−Ｓ）−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＡＡ−Ｋ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１４ＣＨ３）−ＥＦＩＥＷＬＬＲＡ−ＮＨ２
化合物２４（配列番号２４）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＨ３）−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａ−ＮＨ２
Ｈ−（ｄ−Ｓ）−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＡＡ−Ｋ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＨ３）−ＥＦＩＥＷＬＬＲＡ−ＮＨ２
化合物２５（配列番号２５）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＨ３）−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａ−ＮＨ２
Ｈ−（ｄ−Ｓ）−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳ−Ｋ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＨ３）−ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＲＡ−ＮＨ２
化合物２６（配列番号２６）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
Ｈ−（ｄ−Ｓ）−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＡＡ−Ｋ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−ＥＦＩＥＷＬＬＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２
化合物２７（配列番号２７）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１４ＣＯ２Ｈ）−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
Ｈ−（ｄ−Ｓ）−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＡＡ−Ｋ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１４ＣＯ２Ｈ）−ＥＦＩＥＷＬＬＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２
化合物２８（配列番号２８）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＨ３）−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
Ｈ−（ｄ−Ｓ）−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＡＡ−Ｋ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＨ３）−ＥＦＩＥＷＬＬＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２
化合物２９（配列番号２９）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１４ＣＨ３）−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
Ｈ−（ｄ−Ｓ）−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＡＡ−Ｋ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１４ＣＨ３）−ＥＦＩＥＷＬＬＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２
化合物３０（配列番号３０）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｉｂ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
Ｈ−（ｄ−Ｓ）−ＱＧＴＦＴＳＤ−Ｋ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−ＳＫＹＬＤ−Ａｉｂ−ＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＭＮＴＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２
化合物３１（配列番号３１）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−ＣＯ（ＣＨ２）１４ＣＨ３）−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｉｂ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
Ｈ−（ｄ−Ｓ）−ＱＧＴＦＴＳＤ−Ｋ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−ＣＯ（ＣＨ２）１４ＣＨ３）−ＳＫＹＬＤ−Ａｉｂ−ＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＭＮＴＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２
化合物３２（配列番号３２）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＨ３）−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｉｂ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
Ｈ−（ｄ−Ｓ）−ＱＧＴＦＴＳＤ−Ｋ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＨ３）−ＳＫＹＬＤ−Ａｉｂ−ＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＭＮＴＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２
化合物３３（配列番号３３）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１４ＣＨ３）−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
Ｈ−（ｄ−Ｓ）−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ−Ａｉｂ−Ｋ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１４ＣＨ３）−ＲＡＱＤＦＶＱＷＬＭＮＴＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２
化合物３４（配列番号３４）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
Ｈ−（ｄ−Ｓ）−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ−Ｋ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−ＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＭＮＴＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２
化合物３５（配列番号３５）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
Ｈ−（ｄ−Ｓ）−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ−Ｋ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−ＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＭＮＴＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２
化合物３６（配列番号３６）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＨ３）−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
Ｈ−（ｄ−Ｓ）−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ−Ｋ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＨ３）−ＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＭＮＴＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２
化合物３７（配列番号３７）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１４ＣＨ３）−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
Ｈ−（ｄ−Ｓ）−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ−Ｋ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１４ＣＨ３）−ＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬ−Ｎｌｅ−ＮＴＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ２
【００３２】
上記配列において、Ｌｙｓ残基に対して、例えば、以下に示す通り修飾することができる。
【００３３】
【化２】
2019520314.tif 000003
【化３】
2019520314.tif 000004
【化４】
2019520314.tif 000005
【化５】
2019520314.tif 000006
【化６】
2019520314.tif 000007
【化７】
2019520314.tif 000008
【化８】
2019520314.tif 000009
【化９】
2019520314.tif 000010
【００３４】
また、上記修飾構造におけるＬｙｓ残基を、下記官能基に置き換えることができる。
【化１０】
2019520314.tif 000011
【００３５】
また、本明細書で使われる略語は、具体的には以下のものを指す。すなわち、
Ｂｏｃ  ｔ−ブトキシカルボニル基、Ｆｍｏｃ  フルオレニルメトキシカルボニル基、ｔ−Ｂｕ  ｔ−ブチル基、ｉｖＤＤｅ  １−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）−３−メチルブチルの脱保護と親油基、ｒｅｓｉｎ  樹脂、ＴＦＡ  トリフルオロ酢酸、ＥＤＴ  １，２−エタンジチオール、ｐｈｅｎｏｌ  フェノール、ＦＢＳ  ウシ胎児血清、ＢＳＡ  ウシ血清アルブミン、ＨＰＬＣ  高速液体クロマトグラフィー、ＧＬＰ−１Ｒ  グルカゴン様ペプチド−１受容体、ＧＣＧＲ  グルカゴン受容体、ＧＬＰ−１  グルカゴン様ペプチド−１、ｍＰＥＧ  モノメトキシポリエチレングリコール、ＯＸＭ  オキシントモジュリン、Ｈｉｓ  ヒスチジン、Ｓｅｒ  セリン、Ｄ−Ｓｅｒ  Ｄ−型セリン、Ｇｌｎ  グルタミン、Ｇｌｙ  グリシン、Ｇｌｕ  グルタミン酸、Ａｌａ  アラニン、Ｔｈｒ  トレオニン、Ｌｙｓ  リシン、Ａｒｇ  アルギニン、Ｔｙｒ  チロシン、Ａｓｐ  アスパラギン酸、Ｔｒｐ  トリプトファン、Ｐｈｅ  フェニルアラニン、Ｉｌｅ  イソロイシン、Ｌｅｕ  ロイシン、Ｃｙｓ  システイン、Ｐｒｏ  プロリン、Ｖａｌ  バリン、Ｍｅｔ  メチオニン、Ａｓｎ  アスパラギン、ＨｏｍｏＬｙｓ  ホモリシン、Ｏｒｎ  オルニチン、Ｄａｐ  ジアミノピメリン酸、Ｄａｂ  ２，４−ジアミノ酪酸、Ｎｌｅ  ノルロイシン、Ａｉｂ  ２−アミノイソ酪酸。
【発明の効果】
【００３６】
本発明に係るポリペプチドは、ＧＬＰ−１類似体に比してより優れた生体活性を示し、同時に薬物動態学の実験ではより長い半減期と安定性を示し、安定性が高く、安価でもあり、大量製造が可能である。また、低分子化合物に比べて毒性が低く、安全性が高く、用量が少ない。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】化合物２、６及び２２をＣＣｌ４誘発性の肝線維症マウスに投与したときの、肝組織切片の免疫組織化学染色の結果を示す図である。
【図２】化合物２、６及び２２をＣＣｌ４誘発性の肝線維症マウスに投与したときの、肝線維化の進行度をシリウスレッド染色された部分の面積で表する図である（＃＃＃：オリーブ油の注射群に比べて著しく上昇（９９．９％信頼区間、ｐ＜０．００１）、＊＊＊：ＣＣｌ４注射群に比べて著しく低下（９９．９％信頼区間、ｐ＜０．００１）、＊：ＣＣｌ４注射群に比べて著しく低下（９５％信頼区間、ｐ＜０．０５））。
【図３】化合物２、６及び２２をＣＣｌ４誘発性の肝線維症マウスに投与したときの、血清ＡＬＴの変化を示す図である（＃＃＃：オリーブ油の注射群に比べてＣＣｌ４を注射すると著しく上昇（９９．９％信頼区間、ｐ＜０．００１）、＊＊：ＣＣｌ４注射群に比べて著しく低下（９９％信頼区間、ｐ＜０．０１）、＊：ＣＣｌ４注射群に比べて著しく低下（９５％信頼区間、ｐ＜０．０５））。
【図４】化合物２、化合物６及びリラグルチド（Ｌｉｒａｇｌｕｔｉｄｅ）を高脂肪食誘発性の高脂血症マウスに投与したときの体重変化を示す図である（＃＃＃：普通食群に比べて著しく上昇（９９．９％信頼区間、ｐ＜０．００１）；＃＃：普通食群に比べて著しく上昇（９９％信頼区間、ｐ＜０．０１）、＊＊＊：高脂肪食群に比べて著しく低下（９９．９％信頼区間、ｐ＜０．００１）、＊＊：高脂肪食群に比べて著しく低下（９９％信頼区間、ｐ＜０．０１）、＊：高脂肪食群に比べて著しく低下（９５％信頼区間、ｐ＜０．０５））。
【図５】化合物２、化合物６及びリラグルチド（Ｌｉｒａｇｌｕｔｉｄｅ）を高脂肪食誘発性の高脂血症マウスに投与したときの、肝組織切片の免疫組織化学染色の結果を示す図である。
【図６】化合物２、化合物６及びリラグルチド（Ｌｉｒａｇｌｕｔｉｄｅ）を高脂肪食誘発性の高脂血症マウスに投与したときの、シリウスレッド染色で線維性結節の面積変化を示す図である（＃＃＃：普通食群に比べて著しく上昇（９９．９％信頼区間、ｐ＜０．００１）、＊＊＊：高脂肪食群に比べて著しく低下（９９．９％信頼区間、ｐ＜０．００１）、＊：高脂肪食群に比べて著しく低下（９５％信頼区間、ｐ＜０．０５））。
【図７】化合物２、化合物６及びリラグルチド（Ｌｉｒａｇｌｕｔｉｄｅ）を高脂肪食誘発性の高脂血症マウスに投与したときの、オイルレッドＯ（Ｏｉｌ  Ｒｅｄ  Ｏ）染色で肝脂質沈着の面積変化を示す図である（＃＃＃：普通食群に比べて著しく上昇（９９．９％信頼区間、ｐ＜０．００１）、＊＊＊：高脂肪食群に比べて著しく低下（９９．９％信頼区間、ｐ＜０．００１）、＊＊：高脂肪食群に比べて著しく低下（９９％信頼区間、ｐ＜０．０１）、＊：高脂肪食群に比べて著しく低下（９５％信頼区間、ｐ＜０．０５））。
【図８】化合物２、化合物６及びリラグルチド（Ｌｉｒａｇｌｕｔｉｄｅ）を高脂肪食誘発性の高脂血症マウスに投与したときの、肝臓トリグリセリドＴＧの変化を示す図である（＃＃＃：普通食群に比べて著しく上昇（９９．９％信頼区間、ｐ＜０．００１）、＊＊＊：高脂肪食群に比べて著しく低下（９９．９％信頼区間、ｐ＜０．００１）、＊＊：高脂肪食群に比べて著しく低下（９９％信頼区間、ｐ＜０．０１）、＊：高脂肪食群に比べて著しく低下（９５％信頼区間、ｐ＜０．０５））。
【図９】化合物２、６をｄｂ／ｄｂマウスに投与したときの、血清中における糖化ヘモグロビン（ＨｂＡ１ｃ）の変化を示す図である（＊＊：対照群に比べて著しく低下（９９％信頼区間、ｐ＜０．０１））。
【図１０】化合物２、６をｄｂ／ｄｂマウスに投与したときの、血清中におけるインスリン（ＩＮＳ）の変化を示す図である（＊＊：対照群に比べて著しく上昇（９９％信頼区間、ｐ＜０．０１）、＊：対照群に比べて著しく上昇（９５％信頼区間、ｐ＜０．０５））。
【図１１】化合物２、６をｄｂ／ｄｂマウスに投与したときの、血清中におけるトリグリセリド（ＴＧ）の変化を示す図である（＊＊＊：対照群に比べて著しく低下（９９．９％信頼区間、ｐ＜０．００１））。
【図１２】化合物２、６をｄｂ／ｄｂマウスに投与したときの、血清中における総コレステロール（ＴＣ）レベルの変化を示す図である（＊＊＊：対照群に比べて著しく低下（９９．９％信頼区間、ｐ＜０．００１））。
【図１３】肝組織切片の免疫組織化学染色図であり、化合物２、６をｄｂ／ｄｂマウスに投与したときの肝組織の脂肪空胞変性と脂肪炎症変化を示す図である。
【図１４】膵臓組織切片の免疫組織化学染色図であり、化合物２、６をｄｂ／ｄｂマウスに投与したときの、膵臓組織の膵島変化を示す図である。
【図１５】心臓、肺臓及び脾臓組織切片の免疫組織化学染色図であり、化合物２、６をｄｂ／ｄｂマウスに投与しても心臓、肺臓及び脾臓で組織学変化が起こらなかったことを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００３８】
以下、実施例を挙げて本発明を詳述するが、当業者であれば以下の実施例が本発明の一例に過ぎず、本発明の範囲がこれらによって制限されないことが理解できる。また、特に説明がない限り、以下の実施例は何れも通常の条件下又はメーカー推薦の条件下で行われ、試薬と測定装置も市販ルートで購入可能なものである。
【００３９】
実施例１：  ポリペプチドの合成
材料：アミノ酸は、全てＮｏｖａＢｉｏｃｈｅｍ社から購入した。特に説明がない限り、試薬は何れも分析用クラスであり、Ｓｉｇｍａ社から購入した。ペプチド合成装置としてＰｒｏｔｅｉｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社のＰＲＥＬＵＤＥ６チャンネルペプチド合成装置を用い、ポリペプチド精製にはＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８分収カラム（カラム規格：４６ｍｍ×２５０ｍｍ）を用いた。高速液体クロマトグラフは、Ｗａｔｅｒｓ社製である。マススペクトル解析は、Ａｇｉｌｅｎｔ質量分析計を用いて行った。
【００４０】
以下、ポリペプチド６を例として本発明に係るポリペプチド化合物の合成方法を説明する。
配列構造：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１４ＣＨ３）−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
【００４１】
ａ）主鎖の合成：Ｆｍｏｃ／ｔ−Ｂｕ法に従って、ＣＳ３３６Ｘペプチド合成装置（米国ＣＳ  Ｂｉｏ社製）を用いて０．２５ｍｍｏｌスケールの下記ペプチドを合成した。
Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）−Ｄ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｎ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｌｙｓ（ｉｖＤｄｅ）−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ａｌａ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−リンクアミド樹脂
【００４２】
ステップ１：リンクアミドＭＢＨＡ−ＬＬ樹脂０．７５ｇ（Ｎｏｖａ  ｂｉｏｃｈｅｍ社製、許容容量：０．３４ｍｍｏｌ／ｇ）をジクロロメタン（ＤＣＭ）中で１時間膨張させ、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で樹脂を３回かけて十分に洗浄した。
【００４３】
ステップ２：リンクアミド樹脂を担体とし、６−クロロベンゾトリアゾール−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＣＴＵ）と、有機塩基であるＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＰＡ）とが物質量で１：１の混合物をカップリング剤とし、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）を溶媒としてマニュアル通りに反応を行い、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ（３ｘ）、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ（２ｘ）、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ（２ｘ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ（２ｘ）、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（ｉｖＤｄｅ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨを縮合反応によって順に結合させて、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）−Ｄ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｎ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｌｙｓ（ｉｖＤｄｅ）−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ａｌａ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−リンクアミド樹脂を得た。そして、順にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、メタノール、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）を用いて樹脂をそれぞれ３回洗浄した。
【００４４】
上記反応において、１）1番目のアミノ酸Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨの用量と樹脂用量とが物質量で１：１〜６：１の範囲であり、２）続いての各縮合反応ではＦｍｏｃ保護のアミノ酸、６−クロロベンゾトリアゾール−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＣＴＵ）、有機塩基であるＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＰＡ）の用量が何れも過量で２〜８倍の範囲にあり、反応時間が１〜５時間であった。
【００４５】
ｂ）１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）−３−メチル−ブチル（ｉｖＤｄｅ）の除去と親油基の導入：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）とジクロロメタン（ＤＣＭ）とが体積比で１：１の混合溶液で樹脂を２回洗浄し、新たに調製したヒドラジン水和物を３．０％含むＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液を加え、該反応混合物を室温下で１０〜３０分間振蕩してヒドラジン処理を施した後、濾過した。ヒドラジン処理を５回繰り返してＢｏｃ−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）−Ｄ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｎ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｌｙｓ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ａｌａ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−リンクアミド樹脂を得た。そして、順にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、メタノール、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）を用いて樹脂をそれぞれ３回洗浄した。
【００４６】
そして、ＦｍｏｃＮＨ−ＰＥＧ２−ＯＨ（Ｑｕａｎｔａ  ＢｉｏＤｅｓｉｇｎ社製）、２−（７−アゾベンゾトリアゾール）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＡＴＵ）、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＰＡ）を含むＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのカップリング溶液（何れも５倍過量である。）を加え、２時間振蕩してから濾過した。そして、順にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、メタノール、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で樹脂をそれぞれ３回洗浄してＢｏｃ−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）−Ｄ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｎ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ−ＰＥＧ２）−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ａｌａ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−リンクアミド樹脂を得た。そして、順にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、メタノール、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で樹脂をそれぞれ３回洗浄した。
【００４７】
２０％のピペリジン／Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液を用いてＦｍｏｃ基を除去し（３０分間、除去操作を２回繰り返す）、Ｆｍｏｃ−ＰＥＧ２−ＯＨ、２−（７−アゾベンゾトリアゾール）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＡＴＵ）、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＰＡ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのカップリング溶液（何れも５倍過量である）を加え、カップリング反応を行うことによりＢｏｃ−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）−Ｄ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｎ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ−ＰＥＧ２−ＰＥＧ２）−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ａｌａ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−リンクアミド樹脂を得た。そして、順にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、メタノール、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で樹脂をそれぞれ３回洗浄した。
【００４８】
２０％のピペリジン／Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液を用いてＦｍｏｃ基を除去し（３０分間、除去操作を２回繰り返す。）、その後、通常の条件下で順にＦｍｏｃ−γＧｌｕ−ＯｔＢｕをカップリングさせ、ヘキサデシル酸（パルミチン酸）を導入することによりＢｏｃ−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）−Ｄ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｎ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−Ｃ１６）−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ａｌａ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−リンクアミド樹脂を得た。そして、順にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、メタノール、ジクロロメタン（ＤＣＭ）で樹脂をそれぞれ３回洗浄した後、真空濾過した。
【００４９】
ｃ）ペプチド保護基の除去：Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）−Ｄ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｎ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−Ｃ１６）−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ａｌａ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−リンクアミド樹脂に、ＴＦＡ／フェノール／チオアニソール／ＥＤＴ／Ｈ２Ｏが体積比で８２．５：５：５：２．５：５の分解液を加え、少し加熱することにより分解液の温度を２５℃に保持しつつ２．５時間反応させた。濾過し、濾過ケーキを少量の分解液で３回洗浄し、濾液を集めて回収した。そして、濾液をゆっくりと攪拌状態下で冷たいエチルエーテルに注ぎ、２時間以上静置して完全に沈降させ、遠心して沈降物を得た。冷たいエチルエーテルで沈降物を３回洗い流し、粗品としてＨｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−γＧｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１４ＣＨ３）−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２を得た。
【００５０】
ｄ）ポリペプチドの精製：得られた粗品をアセトニトリルとＨ２Ｏとが体積比で１：２の溶液に溶かし、５．０ｍｍ逆相Ｃ１８を仕込んだカラム（カラム規格：４６ｍｍ×２５０ｍｍ）で精製を行った。具体的には、３０％のアセトニトリル（トリフルオロ酢酸を０．０５％含む）／Ｈ２Ｏ（トリフルオロ酢酸を０．０５％含む）を開始溶液とし、１．３３％／分間の変化速度でアセトニトリルの比例を徐々に増やしながら流速１５ｍＬ／分間で該カラムを３０分間洗い流した。ペプチドを含む画分を回収し、凍結乾燥してＨＰＬＣ純度が９５％を越える純品を得た。精製済みの産物を液体クロマトグラフィー・質量分析法（ＬＣ−ＭＳ）で分析した。
【００５１】
上述のステップに従い、下記表１に示す本発明のポリペプチドを合成した。
【００５２】
【表１−ａ】
2019520314.tif 000012
【表１−ｂ】
2019520314.tif 000013
【表１−ｃ】
2019520314.tif 000014
【表１−ｄ】
2019520314.tif 000015
【表１−ｅ】
2019520314.tif 000016
【表１−ｆ】
2019520314.tif 000017
【表１−ｇ】
2019520314.tif 000018
【表１−ｈ】
2019520314.tif 000019
【００５３】
実施例２：  肝線維症に対するＧＬＰ−１Ｒ／ＧＣＧＲデュアルアゴニストペプチドの体外阻害効果
本実施例ではヒト肝星細胞株ＬＸ−２を用い、測定試料を異なる濃度で投与したときの、ＬＸ−２細胞の活性化マーカーであるα−ＳＭＡの発現量に対する影響を検討した。具体的には、ヒト肝星細胞ＬＸ−２を３５ｍｍの培養ディッシュに蒔き、ＤＭＥＭ（高糖分）＋１０％のＦＢＳ＋１％のダブルレジスタント培地（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ社製）を用いて３７℃、５％ＣＯ２の条件下で培養し、細胞が７０％コンフルエントの状態になると、血清フリーの培地に変えて一晩過ごした。翌朝、ＰＢＳに溶かした上記化合物１〜３７で処理し、４８時間後に細胞からタンパク質成分を分離してウェスタンブロッティングによる解析を行った。β−ａｃｔｉｎをコントロールし、ＩｍａｇｅＪ  １．５０ｉのグレー値解析ツールを利用してα−ＳＭＡとβ−ａｃｔｉｎの発現量を確定した。陰性対照として、実験組と同量のＰＢＳのみを加えた。
【００５４】
化合物２、５、１６及び１９をそれぞれ０．１μＭ、１μＭ、５μＭの濃度で処理を行ったところ、何れもα−ＳＭＡの発現を抑制することができ、且つある程度の用量反応関係を示した。一方、陰性対照物では、α−ＳＭＡの発現に対して影響を示さなかった（表２を参照）。
【００５５】
１μＭ濃度の化合物１〜３７を投与したときの、肝線維症に対する体外阻害実験の結果を下記表２に示す。ここで、陰性対照群のα−ＳＭＡ／β−ａｃｔｉｎの輝度合計値を１００％とし、測定試料の肝線維症に対する体外阻害活性を分析した。
【００５６】
【表２−ａ】
2019520314.tif 000020
【表２−ｂ】
2019520314.tif 000021
【００５７】
表２に示すように、本発明のデュアルアゴニストペプチド１〜３７は、体外でＬＸ−２細胞の活性化マーカーであるα−ＳＭＡの発現に対して何れも優れた阻害活性を示し、そのうち、化合物２、５、６、１６、１９、２０、３５及び３６がα−ＳＭＡの発現に対して最も顕著な降下効果を示した。
【００５８】
実施例３：  ＣＣｌ４誘発性のマウス肝線維症に対するＧＬＰ−１Ｒ／ＧＣＧＲデュアルアゴニストペプチドの改善と治療効果
６〜８週齢、体重２０〜２５ｇ、ＳＰＦ級の健康なＣ５７マウスは広東省実験動物センターより提供され、広東省薬学院実験動物センターのＳＰＦ級実験室で実験を行った。Ｃ５７マウスを対照群、肝線維症モデル群及び治療群に分け、各組ごとにそれぞれ８匹ずつであった。マウス腹腔に２０％のＣＣｌ４を注射し（２ｍＬ／ｋｇ体重、オリーブ油で１：４に希釈したもの）、週に２回の頻度で６週間連続して２０％のＣＣｌ４を注射することにより安定な肝線維症動物モデルを作製した。治療群には同時に化合物２、６及び２２をそれぞれ５００μｇ／ｋｇ体重の投与量で皮下注射し、２日1回の頻度で６週間連続して投与を行った。対照群には同じ用量、頻度でオリーブ油を６週間連続して投与し、実験終了するまで投与を続けた。実験終了後、マウスを麻酔して血清と肝臓標本を採取した。肝臓は、１０％のホルマリンを用いて固定してパラフィンで包埋した。
【００５９】
マウスにＣＣｌ４を６週間投与した後、ＨＥ染色によって肝臓の細胞損傷及び炎症性浸潤が特に顕著であることが確認でき、シリウスレッド（Ｓｉｒｉｕｓ  Ｒｅｄ）染色では肝臓に明らかな線維性結節と偽小葉が形成されたことが確認できた（図１を参照）。化合物２、６及び２２は、ＣＣｌ４誘発性のマウス肝臓損傷と線維化を著しく改善し（図１及び図２を参照）、更に肝線維症マウスの血清ＡＬＴレベルを著しく低下させた（図３を参照）。
【００６０】
以上のことから、本発明の化合物が何れもＣＣｌ４誘発性のマウス肝臓損傷と線維化を著しく改善し、同時に肝線維症マウスの血清ＡＬＴレベルを著しく低下させることのできることが分かる。
【００６１】
実施例４：  高脂肪食誘発性の非アルコール性脂肪肝と高脂血症に対するＧＬＰ−１Ｒ／ＧＣＧＲデュアルアゴニストペプチドの改善効果
６〜８週齢、体重２０〜２５ｇ、ＳＰＦ級の健康なＣ５７マウスは広東省実験動物センターより提供され、広東省薬学院実験動物センターのＳＰＦ級実験室で実験を行った。Ｃ５７マウスを対照群、肝線維症モデル群と治療群に分け、各組ごとにそれぞれ８匹ずつであった。高脂肪食（ＨＦＤ）でマウスを１２週間飼育し、治療群には同時に５００μｇ／ｋｇ体重の投与量で化合物２及び６を皮下注射し、２日に１回の頻度で１２週間連続して投与した。対照群には同じ用量、頻度でＰＢＳを投与した。実験終了後、マウスを麻酔して血清と肝臓標本を採取した。
【００６２】
化合物６及び２は、何れも高脂肪食ＨＦＤによって誘発されるマウスの体重増加を効果的に抑制し、化合物６による体重制御効果が特に顕著であった。また、化合物２及びリラグルチドによる体重制御効果がほぼ同じであった（図４を参照）。肝組織切片の染色結果から、化合物６及び２が肝臓脂肪変性と非アルコール性脂肪肝炎を抑制すると同時に、脂肪肝に伴う肝線維症を効果的に抑制できることが分かる（図５及び図６を参照）。また、化合物６及び２は、マウス肝臓の脂質沈着と肝臓トリグリセリドＴＧの量を効果的に低下させることができ（図７及び図８を参照）、且つ両者が何れもリラグルチドを遥かに上回る治療効果を示すため、化合物６及び２が非アルコール性脂肪肝炎に伴う線維化、高脂血症に対して比較的良い体内活性を有すると認められる。
【００６３】
以上のことから、ＧＬＰ−１Ｒ／ＧＣＧＲデュアルアゴニストとして、化合物６及び２は、高脂肪食誘発性のマウス非アルコール性脂肪性肝疾患に伴う肝線維症に対して顕著な予防及び治療效果があることが分かる。
【００６４】
実施例５：  糖尿病マウスの糖脂質代謝に対するＧＬＰ−１Ｒ／ＧＣＧＲデュアルアゴニストペプチドの影響
１２週齢のｄｂ／ｄｂ糖尿病肥満マウスを血糖値に基づいてランダムに３つの組に分け（組分けに先立って１２時間禁食した）、各組ごとにそれぞれ６匹であった。各組のマウスについては何れも１０μｇ／匹、皮下注射の方式で投与を行い，そのうち対照群には皮下注射方式で同じ量のＰＢＳ溶液を投与し、各組の投与量は何れも０．２５ｍｌ／匹であり、２日に１回の頻度（４８時間の間隔）で１８日間連続して投与した。実験が終了すると、マウス眼窩静脈叢から採血し、マウス血清中の糖化ヘモグロビン（ＨｂＡ１ｃ）、インスリン（ＩＮＳ）、トリグリセリド（ＴＧ）及び総コレステロール（ＴＣ）レベルを測定した。同時に、マウスの肝臓、膵臓、心臓、肺、脾臓等の組織について病理解析に備えてＨＥ染色を行った。統計学解析は、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ｖｅｒｓｉｏｎ６ソフトを利用して行った。
【００６５】
対照群に比べて、化合物２及び６はｄｂ／ｄｂ糖尿病マウスの糖化ヘモグロビンレベルを著しく低下させ、同時にインスリンレベルを高めることができ、化合物２及び６が膵島のインスリン分泌を促進することで血糖降下作用を示すと認められる。また、化合物２及び６は、ｄｂ／ｄｂ糖尿病マウスのトリグリセリド（ＴＧ）と総コレステロール（ＴＣ）レベルを著しく抑制し、顕著な脂質降下効果を示した。また、化合物６による糖脂質代謝の改善效果が特に顕著であった（図８〜１２を参照）。
【００６６】
組織切片の染色結果から、対照群の糖尿病マウス肝臓に明らかな脂肪空胞変性と脂肪炎症が現れ、化合物２及び６は何れも糖尿病マウスの肝臓脂肪変性と脂肪炎症を著しく抑制し、化合物６の抑制効果が特に顕著であった（図１３を参照）。
【００６７】
また、対照群の糖尿病マウスの膵臓組織において膵島が著しく萎縮することに比べ、化合物２及び６は何れも糖尿病マウスの膵島萎縮病変を著しく改善することができた（図１４を参照）。図１５に示すように、対象群と投与群の糖尿病マウスの心臓、肺、脾臓には何れも明らかな病理変化が見られず、治療有効量の範囲で化合物２と６を皮下注射することが確実に安全であることが確認できた。
【００６８】
以上は本発明を例示したに過ぎず、本発明の範囲を制限するものではない。特に説明がなくても、当業者からすれば本発明に係る全てのポリペプチドによって本発明の効果が得られ、また、本発明の趣旨から逸脱しない限り、本発明に対して種々の変形と変更を施すことが可能であり、これらの変形及び変更も本発明の範囲に含まれるとよく理解できる。
【図１】
2019520314.tif 000030
【図２】
2019520314.tif 000031
【図３】
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【図４】
2019520314.tif 000033
【図５】
2019520314.tif 000034
【図６】
2019520314.tif 000035
【図７】
2019520314.tif 000036
【図８】
2019520314.tif 000037
【図９】
2019520314.tif 000038
【図１０】
2019520314.tif 000039
【図１１】
2019520314.tif 000040
【図１２】
2019520314.tif 000041
【図１３】
2019520314.tif 000042
【図１４】
2019520314.tif 000043
【図１５】
2019520314.tif 000044
【配列表】
2019520314000001.xml
【国際調査報告】
2019520314.tif 000057
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