(57)【要約】  本発明は、抗ヒトＶＥＧＦＲ２抗体、好ましくはラムシルマブと、メレスチニブ、又はその薬学的に許容され得る塩との組み合わせ、並びにこの組み合わせを使用して、進行性若しくは転移性の結腸直腸癌及び／又は局所結腸直腸癌を含む結腸直腸癌等の所定の疾患を処置する方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者における結腸直腸癌の処置方法であって、そのような処置を必要とする患者に、配列番号１の軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列及び配列番号２の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）アミノ酸配列を含み、ＶＥＧＦＲ２に結合する有効量の抗体と、メレスチニブである化合物、又はその薬学的に許容され得る塩とを投与することを含む、方法。
【請求項２】
前記抗体が、配列番号３の軽鎖アミノ酸配列及び配列番号４の重鎖アミノ酸配列を含み、ＶＥＧＦＲ２に結合する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記抗体がラムシルマブである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記化合物又はその塩が、２８日周期において、約４０ｍｇ〜１２０ｍｇの用量で１日１回、毎日投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
ラムシルマブが、約４ｍｇ／ｋｇ〜約１２ｍｇ／ｋｇの用量で、２８日周期の１日目及び１５日目に投与される、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記化合物又はその塩が、２８日周期において、約８０ｍｇの用量で１日１回、毎日投与される、請求項１〜５に記載の方法。
【請求項７】
前記抗体がラムシルマブであり、ラムシルマブが、約８ｍｇ／ｋｇの用量で、２８日周期の１日目及び１５日目に投与される、請求項１〜６に記載の方法。
【請求項８】
結腸直腸癌の処置における同時の、別々の又は逐次の使用のための、配列番号１の軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列及び配列番号２の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）アミノ酸配列を含み、ＶＥＧＦＲ２に結合する抗体と、メレスチニブである化合物、又はその薬学的に許容され得る塩とを含むキット。
【請求項９】
前記抗体が、配列番号３の軽鎖アミノ酸配列及び配列番号４の重鎖アミノ酸配列を含み、ＶＥＧＦＲ２に結合する、請求項８に記載のキット。
【請求項１０】
前記抗体がラムシルマブである、請求項９に記載のキット。
【請求項１１】
結腸直腸癌の処置における同時の、別々の又は逐次の使用のための、１種以上の薬学的に許容され得る担体、希釈剤又は賦形剤を有するラムシルマブと、１種以上の薬学的に許容され得る担体、希釈剤又は賦形剤を有するメレスチニブである化合物、又はその薬学的に許容され得る塩とを含むキット。
【請求項１２】
前記化合物又はその塩が、錠剤の形態で提供される、請求項１１に記載のキット。
【請求項１３】
前記錠剤が、噴霧乾燥分散により調製される、請求項１２に記載のキット。
【請求項１４】
結腸直腸癌の処置における同時の、別々の又は逐次の使用のための、抗ＶＥＧＦＲ２抗体及びメレスチニブである化合物、又はその薬学的に許容され得る塩を含む組み合わせ。
【請求項１５】
前記化合物又はその塩が、２８日周期において、約４０ｍｇ〜１２０ｍｇの用量で１日１回、毎日投与される、請求項１４に記載の組み合わせ。
【請求項１６】
前記抗ＶＥＧＦ抗体が、配列番号１の軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列及び配列番号２の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）アミノ酸配列を含み、約４ｍｇ／ｋｇ〜約１２ｍｇ／ｋｇの用量で、２８日周期の１日目及び１５日目に投与される、請求項１４に記載の組み合わせ。
【請求項１７】
前記抗ＶＥＧＦ抗体が、配列番号３の軽鎖アミノ酸配列及び配列番号４の重鎖アミノ酸配列を含む、請求項１６に記載の組み合わせ。
【請求項１８】
前記抗ＶＥＧＦ抗体がラムシルマブである、請求項１７に記載の組み合わせ。
【請求項１９】
前記化合物又はその塩が、２８日周期において、約８０ｍｇの用量で１日１回、毎日投与される、請求項１４〜１８に記載の組み合わせ。
【請求項２０】
前記抗ＶＥＧＦ抗体が、約８ｍｇ／ｋｇの用量で、２８日周期の１日目及び１５日目に投与される、請求項１６〜１９に記載の組み合わせ。
【請求項２１】
結腸直腸癌の処置における、メレスチニブである化合物、又はその薬学的に許容され得る塩と組み合わせた、同時の、別々の又は逐次の使用のための抗ＶＥＧＦＲ２抗体。
【請求項２２】
前記抗ＶＥＧＦ抗体が、配列番号１の軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列及び配列番号２の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）アミノ酸配列を含む、請求項２１に記載の抗ＶＥＧＦ抗体。
【請求項２３】
前記抗ＶＥＧＦ抗体が、配列番号３の軽鎖アミノ酸配列及び配列番号４の重鎖アミノ酸配列を含む、請求項２２に記載の抗ＶＥＧＦ抗体。
【請求項２４】
前記抗ＶＥＧＦＲ２抗体がラムシルマブである、請求項２３に記載の抗ＶＥＧＦ抗体。
【請求項２５】
結腸直腸癌の処置における、抗ＶＥＧＦＲ２抗体と組み合わせた、同時の、別々の又は逐次の使用のための、メレスチニブである化合物、又はその薬学的に許容され得る塩。
【請求項２６】
前記抗ＶＥＧＦ抗体が、配列番号１の軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列及び配列番号２の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）アミノ酸配列を含む、請求項２５に記載の化合物。
【請求項２７】
前記抗ＶＥＧＦ抗体が、配列番号３の軽鎖アミノ酸配列及び配列番号４の重鎖アミノ酸配列を含む、請求項２６に記載の化合物。
【請求項２８】
前記抗ＶＥＧＦＲ２抗体がラムシルマブである。請求項２７に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗ヒトＶＥＧＦＲ２抗体、好ましくはラムシルマブと、Ｎ−（３−フルオロ−４−（１−メチル−６−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−イルオキシ）フェニル）−１−（４−フルオロフェニル）−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミド（メレスチニブ）、又はその薬学的に許容され得る塩との組み合わせ、並びに、該組み合わせを使用して、進行性又は転移性結腸直腸癌及び／又は局所結腸直腸癌を含む結腸直腸癌等の所定の疾患を処置する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＭＥＴシグナル伝達経路の調節不全は、最も一般的な上皮癌、例えば結腸直腸癌等を含む様々なヒト癌に生じる（Ｐｅｔｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ，Ｖｏｌ．９、２０１２）。結腸癌等の原発腫瘍におけるＲＯＮの過剰発現は、患者生存を予測し、臨床及び病理パラメーターと相関する（Ｙａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ，Ｖｏｌ．１３，２０１３）。原発性結腸直腸癌及びそれらのその後の肝転移は、遺伝的に異なることが見出されており、例えば、ＫＲＡＳ、ＢＲＡＦ、ＫＤＲ、及びＰＩ３ＫＣＡ等の遺伝子に、またＥＧＦＲ／ＰＩ３Ｋ／ＶＥＧＦ経路の上流／下流遺伝子に変異が見出されている。従って、原発腫瘍の遺伝的特性ではなく転移の遺伝的特性が、処置選択肢の基礎を提供する筈である（Ｖｅｒｍａｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，１８（３）、２０１２）。また、ＭＫＮＫ１／２活性及びその基質ＥＩＦ４Ｅは、結腸直腸癌の悪性化に関与することが見出されている（Ｆａｎ  ｅｔ．ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ  Ｔｈｅｒ，Ｖｏｌ．８，２００９；Ｈｏｕ  ｅｔ．ａｌ．，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ，Ｖｏｌ．３，２０１２；Ｄｅ  Ｂｅｎｅｄｅｔｔｉ  ｅｔ．ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，Ｖｏｌ．２３，２００４）。
【０００３】
ＬＹ２８０１６５３又はメレスチニブとも称される
Ｎ−（３−フルオロ−４−（１−メチル−６−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−イルオキシ）フェニル）−１−（４−フルオロフェニル）−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミド、
【０００４】
【化１】
2019511541.tif 000002
【０００５】
又はその薬学的に許容され得る塩は、例えば、ＭＥＴ及びＲＯＮ、並びにＭＫＮＫ１／２に対して活性である（Ｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔ  Ｎｅｗ  Ｄｒｕｇｓ，Ｖｏｌ．３１，２０１３）。メレスチニブ、又はその薬学的に許容され得る塩、及びこの化合物の製造方法、及び癌の処置、より詳細には結腸直腸癌の処置のためを含むこの化合物の使用が国際公開第２０１０／０１１５３８号に開示されている。更に、メレスチニブは、現在、米国において進行癌に関する第Ｉ相臨床試験で検討されている（Ａ  Ｐｈａｓｅ  １  Ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ＬＹ２８０１６５３  ｉｎ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  Ｗｉｔｈ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｃａｎｃｅｒ，ＮＣＴ０１２８５０３７）。この研究の１つの目的は、ラムシルマブと共に摂取した場合の、胃癌を有する参加者に安全に与えることができるメレスチニブの推奨される第２相用量を決定することである。
【０００６】
ラムシルマブ（CYRAMZA（登録商標））は、血管内皮増殖因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）に指向される完全ヒトモノクローナル抗体である。ラムシルマブ、及びこの化合物の製造方法、並びに固形及び非固形腫瘍等の新生物疾病の処置のためを含むこの化合物の使用が、国際公開第２００３／０７５８４０号に開示されている。ラムシルマブは、単剤として、又は、フルオロピリミジン−又は白金含有化学療法による又は該療法後の疾病進行を有する、進行性又は転移性胃癌又は食道胃（ＧＥ）接合部腺癌を有する患者の処置のために、パクリタキセルとの組み合わせで；白金ベースの化学療法による又は該療法後の疾病進行を有する、転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する患者の処置のために、ドセタキセルとの組み合わせで；並びに、ベバシズマブ、オキサリプラチン及びフルオロピリミジンによる以前の治療による又は該治療後の疾病進行を有する、転移性結腸直腸癌（ｍＣＲＣ）を有する患者の処置のために、ＦＯＬＦＩＲＩ（イリノテカン、フォリン酸及び５−フルオロウラシル）化学療法との組み合わせで、Ｕ．Ｓ．Ｆ．Ｄ．Ａ．によって承認されている。
【０００７】
癌、特に、進行性若しくは転移性結腸直腸癌及び／又は局所結腸直腸癌を含む結腸直腸癌のための広く適用可能な治療法は、依然として分かりにくく、従って、進行性若しくは転移性結腸直腸癌及び／又は局所結腸直腸癌の処置に有効であることが証明され得る、より多くの及び異なる治療法が必要とされている。
【０００８】
胃癌の処置のためのＬＹ２８０１６５３及びラミシルマブ（ｒａｍｉｃｉｒｕｍａｂ）の組み合わせを検討する臨床試験が開示されている（ＮＣＴ０１２８５０３７）。しかしながら、本発明は、メレスチニブ、又はその薬学的に許容され得る塩とラムシルマブとの組み合わされた活性から、いずれかの薬剤単独により提供される治療的効果と比較して向上された及び／又は予測外の有益な治療的効果を提供する、患者における進行性若しくは転移性結腸直腸癌及び／又は局所結腸直腸癌を含む結腸直腸癌の処置のための方法を本明細書に開示する。更に、本発明は、メレスチニブ、又はその薬学的に許容され得る塩とラムシルマブとの組み合わされた活性から、いずれかの薬剤単独により提供される治療的効果と比較して向上された及び／又は予測外の有益な治療的効果を提供する、特定の処置レジメンの一部としての、患者における進行性若しくは転移性結腸直腸癌及び／又は局所結腸直腸癌を含む結腸直腸癌を処置するための方法を開示する。より詳細には、この組み合わせの使用により、ＫＲＡＳ陽性及びＫＲＡＳ陰性患者の両方に対する向上された及び／又は予測外の有益な治療的効果が提供され得る。
【０００９】
従って、本発明は、患者における結腸直腸癌の処置方法を提供し、該方法は、そのような処置を必要とする患者に、配列番号１の軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列及び配列番号２の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）アミノ酸配列を含み、ＶＥＧＦＲ２に結合する有効量の抗体と、メレスチニブである化合物、又はその薬学的に許容され得る塩とを投与することを含む。本発明の好ましい態様では、抗体は、配列番号３の軽鎖アミノ酸配列及び配列番号４の重鎖アミノ酸配列を含み、ＶＥＧＦＲ２に結合する。本発明の別の好ましい態様では、抗体はラムシルマブである。本発明の更なる好ましい態様では、化合物又はその塩は、２８日周期において、約８０ｍｇの用量で１日１回、毎日投与され、ラムシルマブは、約８ｍｇ／ｋｇの用量で、２８日周期の１日目及び１５日目に投与される。
【００１０】
本発明は、結腸直腸癌の処置における同時の、別々の又は逐次の使用のための、配列番号１の軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列及び配列番号２の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）アミノ酸配列を含み、ＶＥＧＦＲ２に結合する抗体と、メレスチニブである化合物、又はその薬学的に許容され得る塩とを含むキットも提供する。本発明の好ましい態様では、抗体は、配列番号３の軽鎖アミノ酸配列及び配列番号４の重鎖アミノ酸配列を含み、ＶＥＧＦＲ２に結合する。本発明の別の好ましい態様では、抗体はラムシルマブである。
【００１１】
本発明は更に、結腸直腸癌の処置における同時の、別々の又は逐次の使用のための、１種以上の薬学的に許容され得る担体、希釈剤又は賦形剤を有するラムシルマブと、１種以上の薬学的に許容され得る担体、希釈剤又は賦形剤を有するメレスチニブである化合物、又はその薬学的に許容され得る塩とを含むキットを提供する。本発明の好ましい態様では、化合物又はその塩は、錠剤の形態で提供される。本発明の別の好ましい態様では、錠剤は、噴霧乾燥分散により調製される。
【００１２】
本発明は更に、結腸直腸癌の処置における同時の、別々の又は逐次の使用のための、抗ＶＥＧＦＲ２抗体とメレスチニブである化合物、又はその薬学的に許容され得る塩とを含む組み合わせを提供する。本発明の好ましい態様では、抗ＶＥＧＦ抗体は、配列番号１の軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列及び配列番号２の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）アミノ酸配列を含む。本発明の別の好ましい態様では、抗ＶＥＧＦ抗体は、配列番号３の軽鎖アミノ酸配列及び配列番号４の重鎖アミノ酸配列を含む。本発明の更に別の好ましい態様では、抗ＶＥＧＦ抗体は、ラムシルマブである。本発明の更なる好ましい態様では、化合物又はその塩は、２８日周期において、約８０ｍｇの用量で１日１回、毎日投与され、ラムシルマブは、約８ｍｇ／ｋｇの用量で、２８日周期の１日目及び１５日目に投与される。
【００１３】
本発明は、結腸直腸癌の処置における、メレスチニブである化合物、又はその薬学的に許容され得る塩と組み合わせた同時の、別々の又は逐次の使用のための抗ＶＥＧＦＲ２抗体も提供する。本発明の好ましい態様では、抗ＶＥＧＦ抗体は、配列番号１の軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列及び配列番号２の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）アミノ酸配列を含む。本発明の別の好ましい態様では、抗ＶＥＧＦ抗体は、配列番号３の軽鎖アミノ酸配列及び配列番号４の重鎖アミノ酸配列を含む。本発明の更に別の好ましい態様では、抗ＶＥＧＦ抗体は、ラムシルマブである。
【００１４】
本発明は、結腸直腸癌の処置における、抗ＶＥＧＦＲ２抗体と組み合わせた同時の、別々の又は逐次の使用のためのメレスチニブである化合物、又はその薬学的に許容され得る塩も提供する。本発明の好ましい態様では、抗ＶＥＧＦ抗体は、配列番号１の軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列及び配列番号２の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）アミノ酸配列を含む。本発明の別の好ましい態様では、抗ＶＥＧＦ抗体は、配列番号３の軽鎖アミノ酸配列及び配列番号４の重鎖アミノ酸配列を含む。本発明の更に別の好ましい態様では、抗ＶＥＧＦ抗体は、ラムシルマブである。
【００１５】
本発明は、結腸直腸癌の処置のための医薬の製造における、配列番号１の軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列及び配列番号２の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）アミノ酸配列を含み、ＶＥＧＦＲ２に結合する抗体の使用も提供し、該医薬は、結腸直腸癌の処置における同時の、別々の又は逐次の使用のための医薬の製造のためのメレスチニブ、又はその薬学的に許容され得る塩と同時に、別々に又は連続して投与されるべきものである。本発明の好ましい態様では、化合物はメレスチニブである。本発明の別の好ましい態様では、抗体は、配列番号３の軽鎖アミノ酸配列及び配列番号４の重鎖アミノ酸配列を含み、ＶＥＧＦＲ２に結合する。本発明の更に別の好ましい態様では、抗体はラムシルマブである。
【００１６】
加えて、本発明は、結腸直腸癌の処置のための医薬の製造におけるメレスチニブ、又はその薬学的に許容され得る塩の使用を提供し、該医薬は、配列番号１の軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列及び配列番号２の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）アミノ酸配列を含み、ＶＥＧＦＲ２に結合する抗体と同時に、別々に又は連続して投与されるべきものである。本発明の好ましい態様では、化合物はメレスチニブである。本発明の別の好ましい態様では、抗体は、配列番号３の軽鎖アミノ酸配列及び配列番号４の重鎖アミノ酸配列を含み、ＶＥＧＦＲ２に結合する。本発明の更に別の好ましい態様では、抗体はラムシルマブである。
【００１７】
メレスチニブの代謝産物は：
【００１８】
【化２】
2019511541.tif 000003
１−（４−フルオロフェニル）−Ｎ−［３−フルオロ−４−［［６−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−イル］オキシ］フェニル］−６−メチル−２−オキソ−ピリジン−３−カルボキサミド、及び、
【００１９】
【化３】
2019511541.tif 000004
Ｎ−［３−フルオロ−４−［１−メチル−６−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）インダゾール−５−イル］オキシ−フェニル］−１−（４−フルオロフェニル）−６−（ヒドロキシメチル）−２−オキソ−ピリジン−３−カルボキサミドを含む。
【００２０】
本明細書で使用するとき、用語「ＶＥＧＦＲ２」は、当技術分野にて既知の血管内皮増殖因子受容体２を指す。ＶＥＧＦＲ２は、ＫＤＲとしても既知である。
【００２１】
本明細書で使用するとき、用語「抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂ」は：そのアミノ酸配列が配列番号１に示される軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、そのアミノ酸配列が配列番号２に示される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）とを含む抗体を指し、抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂは、十分な親和性及び特異性でＶＥＧＦＲ２に結合する。いくつかの実施形態において、抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂは：そのアミノ酸配列が配列番号３に示される軽鎖と、そのアミノ酸配列が配列番号４に示される重鎖とを含む抗体であり、十分な親和性及び特異性でＶＥＧＦＲ２に結合する。本発明の別の実施形態では、抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂは、ラムシルマブである。選択された抗体は、ＶＥＧＦＲ２に対する十分強力な結合親和性を有するであろう。例えば、抗体は、一般に、約１００ｎＭ〜約１ｐＭのＫｄ値でＶＥＧＦＲ２に結合するであろう。抗体親和性は、例えば、表面プラズモン共鳴ベースのアッセイ（ＰＣＴ出願公開第２００５／０１２３５９号に記載されているＢＩＡｃｏｒｅアッセイ等）；酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）；及び競合アッセイ（例えば、放射線標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ））により決定することができる。一実施形態において、Ｋｄは、抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂ、好ましくはラムシルマブを用いたＲＩＡにより測定される。
【００２２】
本明細書で使用するとき、用語「ラムシルマブ」は、CYRAMZA（登録商標）、ＩＭＣ−１１２１ｂ、ＣＡＳ登録番号９４７６８７−１３−０としても既知であり：そのアミノ酸配列の各々が配列番号３に示されるものである２つの軽鎖と、そのアミノ酸配列の各々が配列番号４に示されるものである２つの重鎖とを含む、抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂを指す。
【００２３】
特に示さない限り、用語「抗体」又は「Ａｂ」は、ジスルフィド結合により相互接続された２つの重鎖（ＨＣ）及び２つの軽鎖（ＬＣ）を含む免疫グロブリン分子を指す。各鎖のアミノ末端部分は、主として、該末端部分に含まれる相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を介して抗原認識に関与する、約１００〜約１１０アミノ酸の可変領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、主として、エフェクター機能に関与する定常領域を画定する。
【００２４】
本明細書で使用するとき、用語「軽鎖可変領域」又は「ＬＣＶＲ」は、ＣＤＲｓ及びＦＲｓのアミノ酸配列を含む抗体分子の軽鎖の部分を指す。
【００２５】
本明細書で使用するとき、用語「重鎖可変領域」「ＨＣＶＲ」は、ＣＤＲｓ及びＦＲｓのアミノ酸配列を含む抗体分子の重鎖の部分を指す。
【００２６】
本明細書で使用するとき、用語「キット」は、少なくとも２つの別々の容器を含むパッケージであって、第１の容器はメレスチニブ、又はその薬学的に許容され得る塩を収容し、第２の容器は抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂ、好ましくはラムシルマブを収容する、パッケージを指す。「キット」は、これらの第１及び第２の容器の内容物の全部又は一部を結腸直腸癌患者に投与するための説明書も含み得る。
【００２７】
本明細書で使用するとき、用語「処置している」、「処置する」又は「処置」は、安定疾病を抑制し、遅延させ、停止し、低減し、縮小し、維持し、又は、存在する症状、疾患、状態、若しくは疾病の進行若しくは重篤さを逆転させることを指す。
【００２８】
本明細書で使用するとき、用語「患者」は、哺乳動物、好ましくはヒトを指す。
【００２９】
本明細書で使用するとき、用語「癌」及び「癌性」は、典型的には未制御の細胞増殖により特徴付けられる、患者における生理学的状態を指す又は説明する。この定義には、良性及び悪性癌が含まれる。本発明で提供される癌の例は、進行性若しくは転移性結腸直腸癌及び／又は局所結腸直腸癌等の特定のタイプの結腸直腸癌を含むがこれに限定されない結腸直腸癌を含む。
【００３０】
本明細書で使用するとき、用語「有効量」は、診断又は処置を受けている患者に有効な応答を提供する、メレスチニブ、又はその薬学的に許容され得る塩の量又は用量、及び抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂ、好ましくはラムシルマブの量又は用量を指す。
【００３１】
本明細書で使用するとき、薬剤の組み合わせを用いた処置に対する患者の「有効な応答」又は患者の「応答性」という用語は、メレスチニブ、又はその薬学的に許容され得る塩、及び抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂ、好ましくはラムシルマブの投与により患者に付与される臨床的又は治療的利益を指す。
【００３２】
本明細書で使用するとき、表現「と組み合わせた」は、メレスチニブ、又はその薬学的に許容され得る塩、及び抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂ、好ましくはラムシルマブを同時に又は任意の順序で連続して投与することを指し、該連続投与は、例えば、処置の標準過程等の間、単一の周期又は２つ以上の周期の間に、間隔を置いて繰り返して行われ、従って１つの薬剤が他の薬剤の投与の前に、又は他の薬剤の投与と同時に、又は他の薬剤の投与の後に、又はこれらの任意の組み合わせで、投与され得る。
【００３３】
本発明の組み合わせ処置の主な利点は、有意な毒性又は有害事象を生じることなく、患者において顕著な抗癌効果を生じる能力であり、従って患者は全体的に見て組み合わせ処置方法から利益を得る。本発明の組み合わせ処置の有効性は、癌処置の評価に通常使用されている様々なエンドポイントにより測定することができ、該エンドポイントには、腫瘍退縮、腫瘍重量又はサイズの縮小、進行までの時間、全生存、進行なし生存、奏効率、応答の持続時間、及び生活の質が含まれるが、これらに限定されない。本発明で使用される治療薬は、原発腫瘍が縮小することなく転移性伝播の阻害をもたらすことができ、又は原発腫瘍の縮小を誘導することができ、又は単純に腫瘍静止（ｔｕｍｏｒｉｓｔａｔｉｃ）効果を発揮することができる。本発明は、独特の抗腫瘍薬剤の組み合わせの使用に関するため、場合により、本発明の任意の特定の組み合わせ療法の有効性を決定するための新規な手法が使用されてもよく、該手法には、例えば、血管新生及び／又は細胞周期活動の血漿又は尿マーカー、血管新生及び／又は細胞周期活動に関する組織ベースのバイオマーカーの測定、並びに放射線学的画像検査による応答の測定が含まれる。
【００３４】
抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂとの組み合わせで付与される場合、メレスチニブ、又はその薬学的に許容され得る塩は、例えば２８日周期に亘って、約４０ｍｇ〜１２０ｍｇの用量で１日１回、毎日経口投与され、抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂ、好ましくは、ラムシルマブは、約４ｍｇ／ｋｇ〜１２ｍｇ／ｋｇの用量で、１日目及び１５日目に投与される。好ましくは、ラムシルマブは、２８日周期の１日目及び１５日目に、約４ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇの用量、より好ましくは約６ｍｇ／ｋｇの用量、最も好ましくは約８ｍｇ／ｋｇの用量で、静脈内注入により投与される。好ましくは、メレスチニブ、又はその薬学的に許容され得る塩は、２８日周期において、約４０ｍｇ〜１２０ｍｇの用量、より好ましくは約４０ｍｇの用量、最も好ましくは約８０ｍｇの用量で、１日１回、毎日経口投与される。ラムシルマブとメレスチニブ、又はその薬学的に許容され得る塩との組み合わせは、好ましくは同時に、別々に又は連続して投与される。
【００３５】
メレスチニブ、Ｎ−（３−フルオロ−４−（１−メチル−６−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−イルオキシ）フェニル）−１−（４−フルオロフェニル）−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミドの遊離塩基が好ましい。しかしながら、当技術分野の読者は、Ｎ−（３−フルオロ−４−（１−メチル−６−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−イルオキシ）フェニル）−１−（４−フルオロフェニル）−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミドは、数種の無機酸及び有機酸と反応して、薬学的に許容され得る酸付加塩を形成できることを理解するであろう。それらの薬学的に許容され得る酸付加塩、及びそれらを調製するための一般的な方法論は、当技術分野にて周知である。例えば、Ｐ．Ｓｔａｈｌ，ｅｔ  ａｌ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｕｓｅ（ＶＣＨＡ／Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，２００２）；Ｌ．Ｄ．Ｂｉｇｈｌｅｙ，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，４５３−４９９（１９９５）；Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，６６，１，（１９７７）を参照されたい。
【００３６】
投与経路は、任意に変動し得るが、薬物の物理的性質並びに患者及び介護者の都合により制限される。抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂ、好ましくはラムシルマブは、好ましくは非経口投与、例えば静脈内又は皮下投与用に調製される。メレスチニブ、又はその薬学的に許容され得る塩は、好ましくは経口投与用に調製されるが、静脈内又は皮下投与を含む非経口投与を使用することができる。そのような医薬組成物及び該医薬組成物の調製方法は、当技術分野にて周知である。（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｌ．Ｖ．Ａｌｌｅｎ，Ｅｄｉｔｏｒ，２２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ，２０１２を参照されたい）。
【００３７】
例えば、メレスチニブは錠剤に調製されてもよい。そのような錠剤は、２０％メレスチニブ：ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートアクシネート（ａｕｃｃｉｎａｔｅ）（ＨＰＭＣＡＳ）培地グレード（Ｍ）（ＨＰＭＣＡＳ−Ｍ）噴霧乾燥分散物（ＳＤＤ）の組成物から作製することができる。２０％メレスチニブ：ＨＰＭＣＡＳ−Ｍ  ＳＤＤは、メレスチニブ（１％）、ＨＰＭＣＡＳ−Ｍ（４％）及びアセトン（８５．５％）及び精製水（９．５％）を含む噴霧溶液組成物（重量％）から作製される。ポリマーの添加前に、メレスチニブがアセトン／水溶液中に完全に可溶化されていることを確実にする。ＳＤＤ組成物を作製する噴霧乾燥を開始する前に、ポリマーが溶解していることを目視確認する。得られたＳＤＤ組成物は、メレスチニブ（２００ｍｇ／ｇ）及びＨＰＭＣＡＳ−Ｍ（８００ｍｇ／ｇ）を有する２０％メレスチニブ：ＨＰＭＣＡＳ−Ｍ  ＳＤＤ（ｍｇ／ｇ）である。必要であれば、原薬の量は、原薬のアッセイを考慮に入れて調整してもよい。物質収支の維持を必要とする場合、ＨＰＭＣＡＳ−Ｍの重量は、原薬のアッセイにおける僅かな変化に従って調整され得る。アセトン及び精製水は、残留レベルへの処理中に除去される。製剤組成物は、例えば、ＳＤＤメレスチニブ、及び、希釈剤（例えば、微結晶セルロース及びマンニトール）、錠剤崩壊剤（例えば、クロスカルメロースナトリウム）、界面活性剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）、流動促進剤（例えば、ｓｙｌｏｉｄ二酸化ケイ素）及び／又は滑沢剤（例えば、ステアリルフマル酸ナトリウム）等の他の賦形剤を含むことができる。錠剤の作製は、メレスチニブのＳＤＤを生成するための噴霧乾燥と、その後のローラー圧縮及び打錠を含む。次いで、錠剤は、ＨＰＭＣベースの着色混合物でフィルムコートされる。
【００３８】
４０ｍｇ用量強度のメレスチニブＳＤＤフィルムコート錠剤の単位配合物の例示的錠剤を表１に記載する。
【表１】
2019511541.tif 000005
【００３９】
ラムシルマブ及びＮ−（３−フルオロ−４−（１−メチル−６−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−イルオキシ）フェニル）−１−（４−フルオロフェニル）−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミドの組み合わせ処置は、内皮細胞発芽を低下させる
インビトロ細胞ベースのアッセイにより、インビトロでの内皮細胞発芽の低下を測定する。内皮細胞発芽に対するＮ−（３−フルオロ−４−（１−メチル−６−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−イルオキシ）フェニル）−１−（４−フルオロフェニル）−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミド及びラムシルマブの効果を測定するアッセイを用いる。
【００４０】
ＨＵＶＥＣｓ（Ｌｏｎｚａ  ＃Ｃ２５１９Ａ）を培養フラスコ（Ｃｏｒｎｉｎｇ  ＃３５６４８６）上で、SINGLEQUOTS（商標）キット（Ｌｏｎｚａ  ＃ＣＣ−４１４７）で補充し、更にウシ胎児血清（ＦＢＳ）補充物で最終１０％  ＦＢＳに補充したＥＢＭ−２培地（内皮増殖基本培地、Ｌｏｎｚａ  ＃ＣＣ−３１５６）中で、５％  ＣＯ２中、３７℃で培養し、継代２〜５で使用する。ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣｓ）を培養フラスコから回収し、これをHYCLONE（商標）ダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ、Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ＃ＳＨ３０２６４０２）、次いでＴｒｙｐＬＥ  Ｅｘｐｒｅｓｓ（GIBCO（商標）＃１２６０５−０１０）で濯ぎ、５ｍＬの暖かい培地中に懸濁する。Vi-CELL（商標）細胞カウンター（Ｂｅｃｋｍａｎ）を使用して生細胞数を決定する。
【００４１】
培養した肺癌関連の線維芽細胞（ＣＡＦｓ、Ａｓｔｒａｎｄ、６００９３Ａ、Ｌｉｌｌｙ用に特別に調製）をＣｏｒｎｉｎｇ培養フラスコ上で、SINGLEQUOTS（商標）キット（Ｌｏｎｚａ  ＃ＣＣ−４１２６）で補充し、更にＦＢＳ（HYCLONE（商標）＃ＳＨ３０６１１０２）補充物で最終１０％  ＦＢＳに補充した線維芽細胞増殖培地（ＦＢＭ、Ｌｏｎｚａ  ＃ＣＣ−３１３１）中で、５％  ＣＯ２中、３７℃で培養し、継代３〜７で使用する。ＣＡＦｓを培養フラスコから回収し、これをHYCLONE（商標）ＤＰＢＳ（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ＃ＳＨ３０２６４０２）、次いでＴｒｙｐＬＥ  Ｅｘｐｒｅｓｓ（GIBCO（商標）＃１２６０５−０１０）で濯ぎ、５ｍｌの暖かい培地で再懸濁する。Vi-CELL（商標）細胞カウンター（Ｂｅｃｋｍａｎ）を使用して生細胞数を決定する。
【００４２】
０．５ｇの乾燥CYTODEX（登録商標）ビーズ（Sigma-Aldrich（登録商標）＃Ｃ３２７５）を５０ｍＬ  HYCLONE（商標）ＤＰＢＳ  ｐＨ  ７．４（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ＃ＳＨ３０２６４０２）中で、室温で少なくとも３時間水和させる。ビーズを含むチューブ（Ｆａｌｃｏｎ  ＃３５２０９８）を０．５時間毎に反転して、穏やかに混合する。上清を廃棄する。ビーズを新鮮なＰＢＳで３回洗浄し、５０ｍＬ  ＰＢＳ中に再懸濁して〜２０，０００ビーズ／ｍＬを与える。ビーズ縣濁液を１１５℃で１５分間オートクレーブし、使用まで４℃で貯蔵する。
【００４３】
ビーズを穏やかに混合し、０．５ｍＬ（約１０，０００ビーズ）縣濁液を５０ｍＬチューブ（Ｆａｌｃｏｎ  ＃３５２０９８）内に移動する。ビーズを１０ｍＬの暖かいＥＢＭ−２培地（Ｌｏｎｚａ  ＃ＣＣ−３１５６）及びSINGLEQUOTS（商標）（Ｌｏｎｚａ  ＃ＣＣ−４１４７）中で２回洗浄する。最終的な洗浄後、培地を注意深く除去する。洗浄したビーズを８００万のＨＵＶＥＣ細胞と混合し、総容積２０ｍＬとする。ビーズ及びＨＵＶＥＣ細胞を含むチューブを、５％  ＣＯ２を有する３７℃のインキュベーター内に４時間配置し、チューブを数回反転することにより２０分毎に穏やかに混合する。インキュベーション後、ＨＵＶＥＣ細胞を有するビーズをＴ２５フラスコ（NUNC（商標）ｃａｔ  ＃１５６４９９）内に移動し、５％  ＣＯ２と共に３７℃で一晩インキュベートする。
【００４４】
フィブリノーゲン（Ｓｉｇｍａ  ＃Ｆ４８８３）をHYCLONE（商標）ＤＰＢＳに溶解して２ｍｇ／ｍＬとする。アプロチニン（Ｓｉｇｍａ  ＃Ａ３４２８）をフィブリノーゲン溶液に加えて濃度０．１５単位／ｍＬとし、穏やかに混合する。溶液を０．２２μフィルター（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  ＃ＳＣＧＰ００５２５）に通してろ過することにより滅菌し、直ちに使用する。
【００４５】
Ｔ２５フラスコ内のＨＵＶＥＣ被覆ビーズを５０ｍＬチューブに移動し、１０ｍＬの暖かいＥＢＭ−２培地及びSINGLEQUOTS（商標）（Ｌｏｎｚａ  ＃ＣＣ−４１４７）を使用して２回洗浄する。培地を穏やかに除去する。ＨＵＶＥＣ被覆ビーズ（約１０，０００）を、２００万のＣＡＦｓを有する５０ｍＬの滅菌フィブリノーゲン溶液中に再懸濁する。トロンビン（Ｓｉｇｍａ  ＃Ｔ４３９３）を滅菌水で５０単位／ｍｌに再構成する。０．６単位（１２μｌ）のトロンビン溶液を２４ウェルプレート（Ｃｅｌｌｖｉｓ  ＃Ｐ２４−１．５Ｈ−Ｎ）のウェル毎に加えた後、５００μｌ／ウェルのフィブリノーゲン／ビーズ／ＣＡＦ溶液を加える。溶液から、室温で１５分間、フィブリンゲルを形成させた後、３７℃で５％  ＣＯ２と共に１時間インキュベートする。０．５ｍＬの暖かいＥＢＭ−２培地及びSINGLEQUOTS（商標）（Ｌｏｎｚａ  ＃ＣＣ−４１４７）を各ウェル内のフィブリンゲルの上に加え、実験の終了まで３〜４日毎に置き換える。
【００４６】
新モードの発芽アッセイの場合、示された濃度に希釈された試験化合物を、各ウェルに加える。プレートを３７℃で５％  ＣＯ２と共にインキュベートし、試験化合物を有する培地を、アッセイが完了するまで３〜４日毎に交換する。
【００４７】
確立モードの発芽アッセイの場合、方法は新モードの発芽アッセイに関して上述したものと同じであるが、フィブリンゲル中のＨＵＶＥＣ被覆ビーズが試験化合物の添加前に３〜７日間培養される点が異なる。試験化合物の処理は、７日間行う。試験化合物を有する培地を、アッセイが完了するまで３〜４日毎に交換する。
【００４８】
アッセイの終了後、プレートを０．５ｍＬの４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ、Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＃１５７１０）中で４℃で一晩固定し、ＰＢＳ中で１回洗浄し、０．５ｍＬの０．５％  TRITON（商標）X-100（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  ＃Ｔ９２８４）／ＰＢＳで４℃で１０分間透過処理した後、１００  ｍＭグリシン（BIO-RAD（登録商標）＃１６１−０７１８）／ＰＢＳ中、室温で３回洗浄する。プレートを１ｍｌ／ウェル免疫蛍光（ＩＦ）緩衝液でブロックし、該緩衝液は、ＰＢＳ中の０．１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ、GIBCO（商標）＃１５２６０−０３７）、０．２％  TRITON（商標）X-100、０．０５％  Tween（登録商標）-20（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ＃２８３２０）、及び１０％ヤギ血清（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＃１６２１０）を含む。内皮細胞を、ＩＦ緩衝液及び１０％ヤギ血清中に１：１００の５００ｍＬ  ＰＢＳで再構成したヒツジ抗ヒトＣＤ３１抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ＃ＢＡＦ８０６）で染色する。α平滑筋アクチン陽性細胞を、ＩＦ緩衝液及び１０％ヤギ血清中、１：２００の抗α平滑筋アクチン抗体、Ｃｙ３抗体（Ｓｉｇｍａ、＃Ｃ６１９８）で染色する。染色溶液を各ウェルに５００μＬ／ウェルで加える。プレートを４℃で一晩保持する。翌日、染色溶液を除去し、プレートを０．５ｍＬ  ＩＦ緩衝液を使用して３回洗浄する。ＩＦ緩衝液及び１０％ヤギ血清中、１：２００希釈の２次抗体ALEXA FLUOR（登録商標）488ロバ抗ヒツジＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ  ＃Ａ−１１０１５）を加え、室温で１時間インキュベートする。プレートをＩＦ緩衝液を使用して３回洗浄して、任意の未結合２次抗体を除去する。５ｍｇ／ｍＬのＤＡＰＩ（４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドールジヒドロクロリデンＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＃Ｄ１３０６）をＰＢＳ中で１：１００００に希釈し、０．５ｍＬを各ウェルに加え、室温で１時間インキュベートする。プレートをＰＢＳで２回洗浄し、ＣＤ３１陽性内皮芽及びＳＭＡ陽性細胞の全長を、２Ｘ対物レンズを使用して、ＣｅｌｌＩｎｓｉｇｈｔ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）機器上でプレートを走査することにより画像化する。画像データはＣｅｌｌＩｎｓｉｇｈｔ（ＣＤ３１、緑；ＳＭＡ、赤）に直接由来し、数値データをJMP（登録商標）（ＳＡＳ統計解析ソフトウエア）で解析する。
【００４９】
Ｎ−（３−フルオロ−４−（１−メチル−６−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−イルオキシ）フェニル）−１−（４−フルオロフェニル）−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミド処理は、ＶＥＧＦ−Ａ依存性及びＶＥＧＦ−Ａ非依存性内皮発芽を統計的に有意性に低下させた。
【００５０】
Ｍａｂｒｙ，Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．，ＭＡｂｓ．２０１０  Ｊａｎ−Ｆｅｂ；２（１）：２０−３４及びＮａｋａｔｓｕ，ＭＮ，Ｍｅｔｈ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．２００８；４４３：６５−８２）に記載されている、ＨＵＶＥＣｓ及びＣＡＦ細胞を使用する改変されたインビトロ共培養血管新生アッセイを用いて、内皮細胞発芽に対するＮ−（３−フルオロ−４−（１−メチル−６−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−イルオキシ）フェニル）−１−（４−フルオロフェニル）−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミドの効果を評価する。ＣＡＦｓ、及びＨＵＶＥＣｓで被覆したｃｙｔｏｄｅｘビーズを、フィブリンゲルに包埋して平滑筋アクチン（ＳＭＡ）陽性周皮細胞で覆われた内皮芽を形成する。１週間の間、内皮細胞は一連の表現型変化を受け、該変化は、ＳＭＡ陽性細胞で覆われた内皮芽の安定な相互接続ネットワークをもたらす。内皮発芽は、７〜１０日までは培地中のＣＡＦ由来ＶＥＧＦ−Ａに依存するが、その後は、芽の伸長及び安定性はＶＥＧＦ−Ａに比較的依存しない。
【００５１】
アッセイの開始時（新モード、０〜７日）のラムシルマブ（１０μｇ／ｍｌ）によるＶＥＧＦ−Ａシグナル伝達の阻害は、内皮発芽の有意な阻害をもたらした（４倍低下）。血管新生の治療的阻害を模倣するために、ラムシルマブによる処置は、内皮芽及び周皮細胞被覆形成後の７日目に開始する（確立モード）。ラムシルマブ（１０μｇ／ｍｌ）による予め形成された芽の処置は、比較的効果的ではなく、内皮発芽を１．４倍のみ低下させた。ＶＥＧＦＲ２阻害と同様、アッセイの開始時（新モード、０〜７日）のＮ−（３−フルオロ−４−（１−メチル−６−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−イルオキシ）フェニル）−１−（４−フルオロフェニル）−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミドの添加は、用量依存的に、内皮発芽を強力に阻害した。試験した最高濃度、３００ｎＭにおいて、Ｎ−（３−フルオロ−４−（１−メチル−６−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−イルオキシ）フェニル）−１−（４−フルオロフェニル）−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミドは、内皮発芽を７．５倍低下させた。ＶＥＧＦＲ２阻害に対して感受性が有意に低い、予め形成された芽（確立モード）の、Ｎ−（３−フルオロ−４−（１−メチル−６−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−イルオキシ）フェニル）−１−（４−フルオロフェニル）−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミドによる処置は、内皮発芽の有意な低下をもたらした（２．７倍）。これらの結果は、Ｎ−（３−フルオロ−４−（１−メチル−６−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−イルオキシ）フェニル）−１−（４−フルオロフェニル）−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミドがＶＥＧＦ−Ａ依存性及びＶＥＧＦ−Ａ非依存性内皮発芽を強力に阻害することを示す。ＭＥＴ特異的阻害剤ＰＦ０４２１７９０３（ＬＳＮ２９００２９６）は、発芽がＶＥＧＦ−Ａ依存性であるアッセイ（新モード）の開始時（０〜７日目）に添加された際、及び芽伸長及び安定性に関してＶＥＧＦ−Ａに対する依存性が比較的低い予め形成された芽（確立モード）（７〜１４日）に添加された際、内皮発芽の阻害において比較的活性が低い。ＰＦ０４２１７９０３は、内皮発芽の阻害において不活性である。これらのデータは、Ｎ−（３−フルオロ−４−（１−メチル−６−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−イルオキシ）フェニル）−１−（４−フルオロフェニル）−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミドの抗血管新生活性が、ＭＥＴ依存性ではないことを示唆する。
【００５２】
Ｎ−（３−フルオロ−４−（１−メチル−６−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−イルオキシ）フェニル）−１−（４−フルオロフェニル）−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミドは、発芽を１４日間阻害したが、ラムシルマブは、発芽を７日目までのみ阻害した。対照（ＰＦ４２１７９０４）は、効果を有さなかった。
【００５３】
ラムシルマブは、特異的ＶＥＧＦＲ２阻害剤であり、このアッセイでは発芽がＶＥＧＦ−Ａ依存性である最初の７日間、内皮発芽の低下を示した。ＭＥＴ特異的阻害剤ＰＦ４２１７９０３は、このアッセイでは、アッセイの１４日間に亘って殆ど又は全く効果を示さず、ＭＥＴはこの血管モデルに役割を有さず、またＭＥＴはＮ−（３−フルオロ−４−（１−メチル−６−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−イルオキシ）フェニル）−１−（４−フルオロフェニル）−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミドのオンコキナーゼ標的の１つであることを示す。このアッセイのデータは、Ｔｉｅ２（ＴＥＫとしても既知）、ＡＸＬ、ＰＤＧＦＲＡ及びＭＥＲＴＫ等の、Ｎ−（３−フルオロ−４−（１−メチル−６−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−イルオキシ）フェニル）−１−（４−フルオロフェニル）−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミドの他の標的の１つ以上が、この血管新生アッセイの１４日間に亘って内皮発芽の阻害をもたらし得ることを示唆する。従って、Ｎ−（３−フルオロ−４−（１−メチル−６−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−イルオキシ）フェニル）−１−（４−フルオロフェニル）−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミドの抗血管新生活性は、ラムシルマブとは異なり、これらの２つの薬剤の組み合わせが、癌処置において、更なる処置利益を提供することを支持する。
【００５４】
Ｎ−（３−フルオロ−４−（１−メチル−６−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−イルオキシ）フェニル）−１−（４−フルオロフェニル）−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミドは、新モード及び確立モードにおいて、コード形成を阻害する
ＶＥＧＦ−Ａ誘導コード形成アッセイをＦａｌｃｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｈｅｍａｔｏｌ  Ｏｎｃｏｌ．２０１３；６：３１に従って、マイクロタイタープレート内で行う。このアッセイは、新モード（新血管形成脂肪由来幹細胞（ＡＤＳＣ）及びヒト内皮コロニー形成細胞（ＥＣＦＣ）共培養コード形成アッセイ）及び確立モード（確立ＡＤＳＣ及びＥＣＦＣ共培養コード形成アッセイ）として行う。
【００５５】
新モードのアッセイの場合、ＡＤＳＣ及びＥＣＦＣを、ANGIOKIT（商標）最適化培地（Ｃｅｌｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）を用いて共培養する。ＡＤＳＣを９６ウェルプレート内に、１００μＬでウェル当たり４０〜５０Ｋ細胞で蒔き、３７℃、５％  ＣＯ２で一晩インキュベートする。翌日、培地を除去し、５０〜１００μＬの培地中、ウェル当たり４〜５ＫのＥＣＦＣをＡＤＳＣ単層上に蒔き、３７℃、５％  ＣＯ２で３〜６時間インキュベートした後、２０ｎｇ／ｍＬ  ＶＥＧＦ−Ａ及び試験化合物を加える。共培養物を７日間増殖させ、その時点で細胞を固定し、染色し、スキャン装置で画像化する。コード領域を定量化する。
【００５６】
確立モードアッセイの場合、ＡＤＳＣ及びＥＣＦＣ共培養物を新モードのアッセイに関して上述したように蒔く。ＥＣＦＣを付着させた後、２０ｎｇ／ｍＬ  ＶＥＧＦ−Ａを使用して刺激し、コードネットワークを確立する。４日目に、培地を、示された濃度の試験化合物の存在下又は非存在下で、新鮮なＶＥＧＦ−Ａを含むように交換する。試験化合物の添加後、培養物を更に３〜４日間増殖させ、その後、細胞を固定し、染色し、上述したように画像化して、ネットワーク破壊又はコード退縮を調べる。
【００５７】
ラムシルマブは、このアッセイの新モードにおいて効果的であることが示された（ＩＣ５０＝０．４８μｇ／ｍＬ（Ｓ．Ｄ．０．３０、ｎ＝３）［０．４８μｇ／ｍＬ＝３．２ｎＭ］が、確立モードでは示されなかった（ＩＣ５０＞１０μｇ／ｍＬ）。Ｆａｌｃｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｈｅｍａｔｏｌ  Ｏｎｃｏｌ．２０１３；６：３１を参照されたい。スニチニブ、抗ＶＥＧＦＲ２活性を有する小分子多キナーゼ阻害剤は、このアッセイの新モードにおいて効果的であることが示された（ＩＣ５０＝０．０３８μＭ；Ｓ．Ｄ．０．０１３、ｎ＝３）が、確立モードでは示されなかった。Ｆａｌｃｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｈｅｍａｔｏｌ  Ｏｎｃｏｌ．２０１３；６：３１を参照されたい。
【００５８】
Ｎ−（３−フルオロ−４−（１−メチル−６−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−イルオキシ）フェニル）−１−（４−フルオロフェニル）−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミドは、新モード（ＩＣ５０＝０．０１３μＭ；Ｓ．Ｄ．０．００７、ｎ＝５）及び確立モード（ＩＣ５０＝０．０１６μＭ  ０．０１１、ｎ＝４）の両方で強力な活性を示した。
【００５９】
このアッセイでは、対照ＭＥＴ特異的阻害剤を評価する。対照ＭＥＴ特異的阻害剤は、新モードにおいて僅かな活性のみ示し（ＩＣ５０＝５．６１μＭ；Ｓ．Ｄ．１．８０、ｎ＝２）、確立モードにおいて活性を示さなかった（ＩＣ５０＞１０μＭ；ｎ＝２）。このことは、Ｎ−（３−フルオロ−４−（１−メチル−６−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−イルオキシ）フェニル）−１−（４−フルオロフェニル）−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミドの抗血管新生活性が、ＭＥＴに関するその活性に起因しないことを示唆する。
【００６０】
ラムシルマブは特異的ＶＥＧＦＲ２阻害剤であり、コード形成がＶＥＧＦ−Ａ依存性である場合、このコード形成アッセイの新モードで低下を示した。ＭＥＴ特異的阻害剤ＰＦ４２１７９０３は、この新モード又は確立モードの両方のアッセイにおいて効果を殆ど又は全く示さず、ＭＥＴはこの血管モデルに役割を有さず、またＭＥＴはＮ−（３−フルオロ−４−（１−メチル−６−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−イルオキシ）フェニル）−１−（４−フルオロフェニル）−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミドのオンコキナーゼ標的の１つであることを示す。このアッセイのデータは、Ｔｉｅ２（ＴＥＫとしても既知）、ＡＸＬ、ＰＤＧＦＲＡ及びＭＥＲＴＫ等の、Ｎ−（３−フルオロ−４−（１−メチル−６−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−イルオキシ）フェニル）−１−（４−フルオロフェニル）−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミドの他の標的の１つ以上が、新モード及び確立モードの両方で、コード形成の阻害に関与することを示唆する。従って、Ｎ−（３−フルオロ−４−（１−メチル−６−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−イルオキシ）フェニル）−１−（４−フルオロフェニル）−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミドの抗血管新生活性は、ラムシルマブとは異なり、これらの２つの薬剤の組み合わせが、癌処置において、更なる処置利益を提供することを支持する。
【００６１】
ＶＥＧＦ−Ａにより誘導されたマウス耳血管モデルにおけるＮ−（３−フルオロ−４−（１−メチル−６−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−イルオキシ）フェニル）−１−（４−フルオロフェニル）−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミド及びＤＣ１０１の組み合わせ
抗血管新生化合物を評価するためのマウス耳血管モデルをＮａｇｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．２００８；４４４：４３−６４に従って構成する。ハツカネズミＶＥＧＦ−Ａのコード配列を保有するアデノウイルスベクターのマウス耳内への注射を介して、ＶＥＧＦ−Ａ（血管内皮増殖因子Ａ）によりマウス耳内に血管を誘導する。
【００６２】
ＤＣ１０１を腹腔内注射を介して４０ｍｇ／ｋｇで週に２回投与する。Ｎ−（３−フルオロ−４−（１−メチル−６−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−イルオキシ）フェニル）−１−（４−フルオロフェニル）−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミドを１日１回、経口により１２ｍｇ／ｋｇで投与する。５日目の結果に関しては、化合物又はビヒクル対照を１日１回、１〜５日に投与する。２０日目の結果に関しては、化合物又はビヒクル対照を１日１回、１０〜２０日に投与する。６０日目の結果に関しては、化合物又はビヒクルを１日１回、５０〜６０日に投与する。Ｎ−（３−フルオロ−４−（１−メチル−６−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−イルオキシ）フェニル）−１−（４−フルオロフェニル）−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミドは、Ｈ２Ｏ中２０％  CAPTISOL（登録商標）の９０％中の１０％ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）４００の溶液として調製し、投与の各週に新たに調製する。ＤＣ１０１を投与の各週にＰＢＳ中に希釈する。ビヒクル対照は、Ｈ２Ｏ中２０％  CAPTISOL（登録商標）の９０％中の１０％  ＰＥＧ  ４００であり、１日１回、経口投与される。
【００６３】
組み合わせ処置、ビヒクル対照又は各々の単独薬剤の効果を評価し、QUANTIGENE（登録商標）Plex 2.0アッセイキットを使用して製造業者のプロトコル（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ  ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）に従って、５０の異なる血管マーカーの発現により評価及び定量化する。
【００６４】
組み合わせが対照と有意に異なり、影響の規模が大きく（組み合わせ−対照及び組み合わせ−予測される相加応答＞１．０又は＜−１．０）、相乗作用に関するｐ値が有意である（＜０．０５）場合、相乗作用を決定する。Ｐ値をビヒクル対照と比較し、ボンフェローニ調整を行う。
【００６５】
組み合わせ処置により相乗的に影響を受けたマーカーは後期（６０日目）のもので、周皮細胞よりも内皮により多いマーカーである（表１）。周皮細胞のマーカーは、Ａｃｔａ２、Ｃｓｐｇ４（ＮＧ２）、Ｎｏｔｃｈ  １及びＮｏｔｃｈ  ３並びにそれらのリガンド（ＤＬＬ１、ＤＬＬ３、Ｊａｇ２）、並びにＰＤＧＦＢである。これは、この組み合わせが早期血管形成の低下、早期及び後期血管リモデリング、並びに正常な血管の安定化に効果を示す点で一致している。
【表２】
2019511541.tif 000006
【００６６】
組み合わせが対照と有意に異なり、影響の規模が大きく（組み合わせ−対照及び組み合わせ−予測される相加応答＞１．０又は＜−１．０）、単独薬剤の１つが対照と有意に異ならず、ｐ値が、組み合わせに関して、予測される相加応答と比較して有意でない場合、相加性を決定する。Ｐ値をビヒクル対照と比較し、ボンフェローニ調整を行う。
【００６７】
組み合わせにより相乗的に影響を受けず、相加的に影響を受けたマーカーは早期（５日目）と後期（６０日目）との間に均等に分布している（表２）。これらのマーカーはまた、内皮マーカー（例えば、ＣＤ３４、ＰＥＣＡＭ１、ｖｗｆ、ＰＤＧＦＲＢ、ＰＤＧＦＲＡ、ＶＥＧＲ２及びそのリガンドＶＥＧＦＡ）及び周皮細胞マーカー（例えば、Ａｃｔａ２、Ｃｓｐｇ４（ＮＧ２）、Ｎｏｔｃｈ  １及びＮｏｔｃｈ  ３並びにそれらのリガンド（ＤＬＬ１、ＤＬＬ３、Ｊａｇ２））の均一混合物である。これらは、５〜６０日間の全研究期間を通した組み合わせ効果と一致している。
【００６８】
ラムシルマブ及びＮ−（３−フルオロ−４−（１−メチル−６−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−イルオキシ）フェニル）−１−（４−フルオロフェニル）−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミドの組み合わせは、マウス耳ＶＥＧＦ誘導血管新生モデルにおいてインビボで相乗的な抗血管新生活性をもたらす。
【表３】
2019511541.tif 000007
2019511541.tif 000008
【００６９】
進行癌における他の標的薬剤と組み合わせたラムシルマブの非盲検、第１ａ／１ｂ相研究：研究アーム１：結腸直腸癌におけるラムシルマブ＋メレスチニブ
研究設計
この研究は、進行性又は転移性結腸直腸癌の処置のための、メレスチニブと組み合わせたラムシルマブの安全性及び有効性を評価する多施設非無作為化非盲検第１ａ／１ｂ相研究である。第１ａ相は、用量制限毒性（ＤＬＴ）観察期間からなる。第１ｂ相は、拡大期間からなる。この研究は、メレスチニブと組み合わせたラムシルマブを検討するよう設計され、メレスチニブは、他の標的薬剤との以前の臨床経験により科学的論拠、及び、様々なタイプ及びステージの癌を有する患者を処置するためにラムシルマブを用いた経験に基づいて選択された。１次解析は、以下の時点の早い方で行われる：
１．研究の最終患者が第１ｂ相において該患者の研究処置の第１の用量を受容した約１年後；又は
２．研究の全患者が全研究処置を中止した後
【００７０】
研究の目的及びエンドポイント
この研究の１次目的は、特定の癌の徴候、詳細には進行性又は転移性結腸直腸癌におけるラムシルマブ＋メレスチニブの安全性及び忍容性を評価することである。
【００７１】
この研究の２次目的は、１）共投与された際のラムシルマブ及びメレスチニブの薬物動態を評価すること、並びに２）メレスチニブと組み合わせたラムシルマブで観察される予備的抗腫瘍活性を記述すること、例えば、
・完全寛解（ＣＲ）又は部分寛解（ＰＲ）を示す患者の割合［全寛解率（ＯＲＲ）］
・進行なし生存（ＰＦＳ）。
【００７２】
この研究の探索的目的は、処置、処置の作用機序、癌、及び臨床転帰に対する免疫応答に関連したバイオマーカー（ＶＥＧＦ及びｃＭＥＴ経路のバイオマーカーを含むがこれに限定されない）間の関係を評価することである。
【００７３】
この研究の１次エンドポイントは、１）用量制限毒性（ＤＬＴ）又はＤＬＴ相当毒性を特定すること、並びに２）臨床的及び研究的に有意な事象を含む、ラムシルマブ＋メレスチニブの組み合わせの安全性を監視することである。
【００７４】
この研究の２次エンドポイントは、１）ラムシルマブ＋メレスチニブの最小血清／血漿濃度を測定すること、及び２）固形腫瘍に関するＲＥＣＩＳＴ  １．１（Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ  ｅｔ．ａｌ．，２００９）によりＯＲＲを決定することである。
【００７５】
処置計画
この研究に登録される全患者は、第１ａ相（ＤＬＴ観察期間）及び第１ｂ相（拡大期間）中、経口投与されるメレスチニブと組み合わせた静脈内投与されるラムシルマブを受容する。第１ａ相は、１つの処置周期（２８日間）の間、継続する。ＤＬＴを有さずに第１ａ相を完了した患者は、中止の基準を満たすまで処置を継続する。
【００７６】
ラムシルマブ（２８日毎に、１日目及び１５日目に８ｍｇ／ｋｇをＩＶ投与）及びメレスチニブ（１日１回、８０ｍｇを経口投与）を、研究の第１ａ相（ＤＬＴ観察期間）中、２８日の処置周期の間投与する。ラムシルマブ及び／又はメレスチニブの投与は、有害事象の状況及び重症度等級の割り当てにＣＴＣＡＥ  Ｖｅｒｓｉｏｎ  ４．０（ＮＣＩ  ２００９）を使用して、患者が下記に記載する有害事象又はＤＬＴ相当毒性（ＤＬＴ観察期間後に生じるＤＬＴと定義）を経験した場合、遅延させ、省略し又は低減し得る。２８日間の１つの処置周期、及び安全性の中間解析の完了後、中止の基準を満たすまで、上記の用量のラムシルマブ及びメレスチニブの継続を、第１ｂ相（拡大期間）において再開し得る。
【００７７】
以下の基準は、研究用に登録された集団に関する管理を維持するために適用されるが、この特許出願の下で意図される潜在的な集団を限定するよう解釈されるべきではない。
【００７８】
当初、３人の患者が第１ａ相に登録される。追加の患者は、以下の基準に基づいて登録され得る。
【００７９】
・所定の用量レベルで処置された初期の３人の患者のいずれも、ＤＬＴを発生しない場合、第１ｂ相を開始する。
・所定の用量レベルで処置された初期の３人の患者のうちの１人がＤＬＴを発生した場合、３人の追加の患者がその用量レベルで登録される。
・所定の用量レベルで処置された６人の患者の≦１人がＤＬＴを発生した場合、第１ｂ相を開始する。
・所定の用量レベルで処置された≧２人の患者がＤＬＴを発生した場合、研究における登録を停止し、代替用量レベルを考慮し得る。
【００８０】
第１ｂ相では、１５人の追加の患者が登録される。
【００８１】
組み入れ基準
患者は、以下の基準の全部を満たす場合、この研究に包含されるのに適格である：
１）以下に記載する癌のタイプの診断を有し、以下の必要条件を満たす：
ａ）病理組織学的に確認された進行性又は転移性結腸直腸癌；
虫垂起源の原発腫瘍を除く
ｂ）放射線学的画像検査により評価可能な少なくとも１つの測定可能な病変を有する。以前照射された領域に位置する腫瘍病変内に進行が示された場合、そのような病変は測定可能と考慮される；
ｃ）以前にオキサリプラチン及び／又はイリノテカンを用いた第２次（ｓｅｃｏｎｄ−ｌｉｎｅ）処置を受け、他の認可された／標準治療の治療法が入手できない。参加者がＲＡＳ野生型結腸直腸癌を有する場合、該患者はまた、上皮増殖因子受容体モノクローナル抗体を用いた以前の治療を受けていた筈である；
ｄ）プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）／ＰＤ−１リガンド（ＰＤＬ  １）又はＰＤ−１／ＰＤＬ−２シグナル伝達経路を標的とする全身治療法（治験薬を含む）を以前に受けていない。抗ＣＤ１３７抗体又は抗細胞傷害性Ｔ−リンパ球関連抗原−４抗体を含むがこれらに限定されない他の免疫チェックポイント阻害剤を用いた以前の治療法は許容されない；
２）十分な器官機能を有する
３）入手可能な標準的治療が臨床的利益を提供できなかった後、研究者の判断により、実験的治療の適切な候補である；
４）癌の以前の全処置を中止し、グレード２以下の神経障害又は重篤ではない及び致死的ではない毒性、例えば脱毛、味覚異常及び爪の変化等以外の、治療法の急性効果から回復した；
５）米国東海岸癌臨床試験グループ（Ｅａｓｔｅｒｎ  Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｇｒｏｕｐ）スケールで０又は１の全身状態を有する；
６）スクリーニングの時点で少なくとも１８歳である；
７）男性及び女性は、研究中、及び研究薬物投与の最終用量から少なくとも３か月間、効果的な避妊方法の使用に同意する必要がある。妊娠の可能性がある女性は、スクリーニング時及び各処置周期中の各々において、血清及び尿妊娠検査が陰性である必要がある；
８）任意の研究特異的手順の前の、書面によるインフォームドコンセント；
９）３カ月以上の平均余命を有する；並びに
１０）嚥下錠剤及び／又はカプセル剤を嚥下可能である。
【００８２】
除外基準
患者は、以下の基準のいずれかを満たす場合、研究から除外される：
１）以下を含むがそれらに限定されない重い病気又は医学的状態を有する：活性な又は制御されない臨床的に重篤な感染症；未解決の胆管閉塞のエビデンスを有する不十分な胆道ドレナージ；
２）最短５年間治療を受けていない完全な寛解状態にあるものを除いて、血液系、原発性脳腫瘍、肉腫、及び他の固形腫瘍を含む以前の又は同時発生的な悪性腫瘍を有する（十分処置された非黒色腫皮膚癌及び生体内原位置で処置により治癒した頸部癌腫、又は他の非侵襲性癌腫若しくはインサイチュー新生物を除く）；
３）炎症性腸疾患、吸収障害症候群、又は頻繁なグレード２以上の下痢により特徴付けられる活動性胃腸（ＧＩ）疾病を有する；
４）妊娠又は授乳している；
５）以前記述された脳転移、軟髄膜疾病、又は制御されない脊髄圧迫を有する；
６）以下のいずれかを経験している：大手術、かなりの外傷、治癒していない創傷、消化性潰瘍、又は登録の２８日間以下前の骨折、又は研究処置の第１の用量の７日間以下前の皮下静脈アクセス装置の配置（該手順が研究者の判断により、出血の危険性が低くなければ）；
７）試験の過程中、待機又は計画大手術を有する；
８）任意の処置構成要素に対する既知のアレルギー又は過敏症を有する；
９）制御されない高血圧を有する；
１０）登録の６カ月前までに任意の動脈血栓塞栓症を経験した；
１１）登録の６カ月前までに、研究者により致命的と考えられる、又は症候性であり抗凝血療法により十分処置されていない、任意のグレード３又は４静脈血栓塞栓症を経験した；
１２）登録の６カ月前までに、ＧＩ穿孔及び／又は瘻孔の病歴を有する
１３）登録の３か月前までに、輸血又は内視鏡若しくは手術的介入が必要な、致命的と考えられる任意の出血症状の発現、又は、任意のグレード３若しくは４  ＧＩ／静脈瘤出血症状の発現を経験した；又は
１４）ニューヨーク心臓協会クラス（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｈｅａｒｔ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  Ｃｌａｓｓ）ＩＩ−ＩＶ心臓疾病による、鬱血性心不全又は制御が不十分な心臓性不整脈を有する。
【００８３】
組み合わせによる処置は、１年（１２周期）まで継続し得る。臨床的利益を受容する患者は、継続的なアクセス期間中、処置を継続し得る。ラムシルマブ及び／メレスチニブの投与は、患者が有害事象又はＤＬＴ相当毒性を経験した場合、遅延させ、省略し又は低減してもよい。一方の又は他方の研究薬物に対する関連性を指定することが困難な場合、両方の研究薬物の投与を遅延させ、省略し又は低減してもよい。ラムシルマブ投与は２８日間まで遅延させてもよく、メレスチニブ投与は１４日間まで省略してもよい。いずれか又は両方の薬物の処置は、有害事象又はＤＬＴ相当毒性以前の用量で再開してもよく、又は低減された用量で継続してもよい。
【００８４】
用量制限毒性
毒性は、いずれか又は両方の研究薬物に関連して少なくとも可能性があると見なされる場合、用量制限であると考えられる。患者は、該患者が（１）経口薬物の用量の少なくとも７０％を受容し、ＤＬＴ観察期間を完了する、又は（２）ＤＬＴのために中止する場合、ＤＬＴに関して評価可能であると見なされる。用量制限毒性（ＤＬＴｓ）は、以下の有害事象のいずれかとして定義される：グレード４血小板減少症（２４時間以内に回復せず、また出血が存在しない場合）、又はグレード≧２の出血と合併したグレード３血小板減少症、＞５日間持続するグレード４血液毒性、グレード≧３発熱性好中球減少症、最大限の支持的医療管理にも関わらず生じるグレード３非血液毒性、及び、例えばグレード２発作又は激しい振戦等の、用量制限であると見なされる任意の他の臨床的に有意な毒性。適切に管理でき、処置により＞７２時間持続しない脱毛、悪心、嘔吐、拒食症、下痢又は便秘、経口補充療法を用いて又は＜２４時間の入院を必要とする静脈内注入により処置することができる無症候性電解質障害、及び、既存の肝転移の状況における他の肝傷害のエビデンスを有さない肝トランスアミラーゼＡＬＴ及び／又はＡＳＴの一過性（≦５日間）グレード３上昇：を除外し得る。
【００８５】
ラムシルマブ投与
ラムシルマブの各注入に先立って、全患者に経口又は静脈内ヒスタミンＨ１拮抗薬、例えばジフェンヒドラミン塩酸塩を前投与する。研究者の思慮により追加の前投与を提供してもよい。ラムシルマブ注入は、約６０分間送達する必要がある。注入速度は、２５ｍｇ／分を超えてはならない。＞６０分間の注入は、以下の状況において許可される：
１）注入速度≦２５ｍｇ／分を維持するために必要な場合、又は
２）患者がラムシルマブＩＲＲを以前に経験している場合。
【００８６】
投与するべきラムシルマブの実際の用量は、患者の体重（単位キログラム）を各周期の開始時に測定することにより決定されるであろう。患者の体重が、以前の用量の計算に使用した体重から±１０％を超えて増減する場合、用量は再計算される必要がある。<１０％の体重増減に対するラムシルマブ用量の再計算は、可能であるが必須ではない。
【００８７】
メレスチニブ投与
メレスチニブは経口投与用の４０ｍｇ錠剤として供給され、少なくとも１００カロリーからなる食事と共に又は該食事の１時間以内に、少なくとも８オンス（２４０ｍＬ）の流体と共に、毎日ほぼ同じ時間に摂取する必要がある。しかしながら、患者がメレスチニブ及びラムシルマブの両方を受容する日に関しては、メレスチニブは、ラムシルマブ注入開始の約１０分前に摂取する必要がある。
【００８８】
研究処置の中止
患者は、以下に列挙する状況においては、全研究処置（第１ａ相及び第１ｂ相）を中止する。中止の理由及び中止の日を、全患者に関して収集する。
・患者が、この研究と科学的又は医学的に適合しないと判断された、治験薬又は任意の他のタイプの医学研究に関与する任意の他の臨床試験に登録される；
・患者が、進行性疾病を有する；
・患者が、研究中に妊娠する；
・患者が、研究手順及び／又は処置に有意に不従順である；
・患者が、何らかの理由で、研究徴候の処置に効果的であると示された他の一治療薬による処置を必要とする；研究処置の中止は、新しい薬剤の導入前に行う；
・研究者が、患者の研究処置を中止する必要があると決定する；
・患者が、研究処置の中止を要求する；
・患者の被指名人（例えば、親、法定後見人、又は介護者）が、患者の研究処置の中止を要求する。
【００８９】
研究評価
予備的な有効性シグナルを特徴付けるために、Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  Ｉｎ  Ｓｏｌｉｄ  Ｔｕｍｏｒｓ，Ｖｅｒｓｉｏｎ  １．１に関する、触知できる又は可視の病変の放射線学的画像検査及び測定により、各患者について腫瘍応答率／評価を行う（Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ  ｅｔ．ａｌ．，２００９）。固形腫瘍を有する患者の場合、スパイラルＣＴを含むコンピューター断層撮影（ＣＴ）スキャンが好ましい測定方法である（ＣＴスキャン厚さは、≦５ｍｍが推奨される）。治験実施施設（ｓｉｔｅ）が、ＣＴが診断ＣＴと全く同じ診断の質のものであると証明できるならば、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）−ＣＴスキャンのＣＴ部分を反応評価の方法として使用することができる。固形腫瘍の場合、追加の解析のために、ＰＥＴスキャンを単独で、又はＰＥＴ−ＣＴの一部として、行うことができるが、応答の評価には使用され得ない。以前照射された領域内に位置する腫瘍病変は、そのような病変内に進行が示された場合、測定可能であると考慮される。ベースライン画像化及び測定は、ＲＥＣＩＳＴ  ｖ１．１により規定されている。その後の、触知できる又は可視の病変の放射線学的画像検査及び測定は、登録後の最初の６カ月は６週間（±７日間）毎に、その後は９週間（±７日間）毎に、その後は、Ｘ線撮影による疾病進行、死亡又は研究完了のうちの最初に起こったものまで、ＲＥＣＩＳＴ  ｖ１．１に従って行う。
【００９０】
１次解析は、以下の早い方の時点で行う：
１．その研究の最終患者が、第１ｂ相において研究処置の該患者の第１の用量を受容してから約１年後；及び
２．その研究アームの全患者が全研究処置を中止した後。
【００９１】
腫瘍評価は、患者の臨床状態に起因して実行できないと思われる場合を除いて、研究処置が遅延又は省略された場合であっても行う。研究処置を中止した患者の場合、腫瘍評価及び画像化は、標準治療に応じて、ＲＥＣＩＳＴ  １．１に従って、ベースラインで使用したものと同じ方法で９〜１２週間毎に行ってもよい。
【００９２】
研究の終了
研究の終了は、最終患者に関する最終訪問又は予定された最終手順の日である。
【００９３】
配列リスト
配列番号１
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＩＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＤＮＷＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤ
ＡＳＮＬＤＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＹＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＦＡＶＹＦＣＱＱＡＫＡＦＰＰＴＦＧＧ
ＧＴＫＶＤＩＫ
【００９４】
配列番号２
ＥＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＳＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳ
ＩＳＳＳＳＳＹＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＶＴ
ＤＡＦＤＩＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ
【００９５】
配列番号３
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＩＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＤＮＷＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤ
ＡＳＮＬＤＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＹＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＦＡＶＹＦＣＱＱＡＫＡＦＰＰＴＦＧＧ
ＧＴＫＶＤＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶ
ＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧ
ＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
【００９６】
配列番号４
ＥＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＳＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳ
ＩＳＳＳＳＳＹＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＶＴ
ＤＡＦＤＩＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＬＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰ
ＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮ
ＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬ
ＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲ
ＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬ
ＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤ
ＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
【配列表】
2019511541000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成30年10月12日(2018.10.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者における結腸直腸癌の処置方法であって、そのような処置を必要とする患者に、配列番号１の軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列及び配列番号２の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）アミノ酸配列を含み、ＶＥＧＦＲ２に結合する有効量の抗体と、メレスチニブである化合物、又はその薬学的に許容され得る塩とを投与することを含む、方法。
【請求項２】
前記抗体がラムシルマブである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記化合物又はその塩が、２８日周期において、４０ｍｇ〜１２０ｍｇの用量で１日１回、毎日投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
ラムシルマブが、４ｍｇ／ｋｇ〜１２ｍｇ／ｋｇの用量で、２８日周期の１日目及び１５日目に投与される、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記化合物又はその塩が、２８日周期において、８０ｍｇの用量で１日１回、毎日投与される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記抗体がラムシルマブであり、ラムシルマブが、８ｍｇ／ｋｇの用量で、２８日周期の１日目及び１５日目に投与される、請求項１または５に記載の方法。
【請求項７】
結腸直腸癌の処置における同時の、別々の又は逐次の使用のための、抗ＶＥＧＦＲ２抗体及びメレスチニブである化合物、又はその薬学的に許容され得る塩を含む組み合わせ。
【請求項８】
前記化合物又はその塩が、２８日周期において、４０ｍｇ〜１２０ｍｇの用量で１日１回、投与される、請求項７に記載の組み合わせ。
【請求項９】
前記抗ＶＥＧＦ抗体が、配列番号１の軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列及び配列番号２の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）アミノ酸配列を含み、４ｍｇ／ｋｇ〜１２ｍｇ／ｋｇの用量で、２８日周期の１日目及び１５日目に投与される、請求項７に記載の組み合わせ。
【請求項１０】
前記抗ＶＥＧＦ抗体がラムシルマブである、請求項９に記載の組み合わせ。
【請求項１１】
前記化合物又はその塩が、２８日周期において、８０ｍｇの用量で１日１回、毎日投与される、請求項７〜１０のいずれか1項に記載の組み合わせ。
【請求項１２】
前記抗ＶＥＧＦ抗体が、８ｍｇ／ｋｇの用量で、２８日周期の１日目及び１５日目に投与される、請求項７〜１１のいずか1項に記載の組み合わせ。
【国際調査報告】
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2019511541.tif 000010