(57)【要約】この発明は、ｉｎｖ（１６）白血病の処置のための、特に、急性骨髄性白血病の処置の方法及び組成物に関する。ｉｎｖ（１６）白血病を処置する方法であって、これを必要とする対象に、ａ）式（１）の化合物と、ｂ）ピラルビシン、アクラルビシン、ミトキサントロン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、イダルビシン、エピルビシン、シタラビン、薬学的に許容可能な塩及びこれらの混合物からなる群から選択される化学療法剤との治療的に有効な組み合わせを投与することを含む、上記方法を開示する。治療的に有効な組み合わせは、ｉｎｖ（１６）白血病細胞の増殖を相乗的に阻害する。この発明はまた、式（１）の化合物と化学療法剤との治療的に有効な組み合わせ、及び薬学的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物にも関する。【選択図】図４
2019525924.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｉｎｖ（１６）白血病を処置する方法であって：
これを必要とする対象に、
ａ）式（１）の化合物
【化１】
2019525924.tif 000012
式中、Ｙは、Ｏ、ＮＨ、もしくはＮＲであり、ここで、Ｒがメチルもしくはエチルであり、
ｎが１〜１０の整数である；またはその薬学的に許容可能な塩；と
ｂ）ピラルビシン、アクラルビシン、ミトキサントロン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、イダルビシン、エピルビシン、シタラビン、薬学的に許容可能な塩及びこれらの混合物からなる群から選択される化学療法剤と
の治療的に有効な組み合わせを投与するステップ；
を含み、
前記式（１）の化合物と前記化学療法剤との前記治療的に有効な組み合わせが、ｉｎｖ（１６）白血病細胞の増殖を相乗的に阻害する、前記方法。
【請求項２】
ＹがＯである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＹがＮ−ＣＨ３である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
ｎが１〜５の整数である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記式（１）の化合物が：
【化２】
2019525924.tif 000013
から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記式（１）の化合物が：
【化３】
2019525924.tif 000014
である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記式（１）の化合物及び前記化学療法剤が、前記式（１）の化合物、前記化学療法剤、及び薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物において投与される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記化学療法剤が、ドキソルビシンまたはダウノルビシンである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記化学療法剤が、ドキソルビシンである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ｉｎｖ（１６）白血病が、急性骨髄性白血病である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記式（１）の化合物及び前記化学療法剤が、同時に投与され、または、まず前記式（１）の化合物を投与し、続いて前記化学療法剤を投与することによって逐次的に投与される、請求項１〜６及び８〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記式（１）の化合物及び前記化学療法剤が同時に投与される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記化学療法剤の投与後、１日以上の間、さらなる治療的に有効な量の前記式（１）の化合物を投与するステップをさらに含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記式（１）の化合物及び前記化学療法剤の同時投与後、１日以上の間、さらなる治療的に有効な量の前記式（１）の化合物を投与するステップをさらに含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
ｉｎｖ（１６）白血病を処置する方法であって：
これを必要とする対象に、
ａ）式（１ａ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩と
【化４】
2019525924.tif 000015
ｂ）ドキソルビシンまたはその薬学的に許容可能な塩と
の治療的に有効な組み合わせを投与するステップを含み、前記式（１ａ）の化合物と前記ドキソルビシンとの前記治療的に有効な組み合わせが、ｉｎｖ（１６）白血病細胞の増殖を相乗的に阻害する、前記方法。
【請求項１６】
医薬組成物であって：
薬学的に許容可能な担体、及び：
ａ）式（１）の化合物
【化５】
2019525924.tif 000016
式中、Ｙは、Ｏ、ＮＨ、またはＮＲであり、ここで、Ｒがメチルまたはエチルであり，
ｎが１〜１０の整数である；
またはその薬学的に許容可能な塩；と
ｂ）ピラルビシン、アクラルビシン、ミトキサントロン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、イダルビシン、エピルビシン、シタラビン、またはその薬学的に許容可能な塩からなる群から選択される化学療法剤；と
の治療的に有効な組み合わせ；及び
薬学的に許容可能な賦形剤；
を含み、
前記式（１）の化合物及び前記化学療法剤が、ｉｎｖ（１６）白血病細胞の増殖を阻害するのに相乗的に有効な組み合わせ量で存在する、前記医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
連邦政府による資金提供を受けた研究開発の記載
この発明は、アメリカ国立衛生研究所によって与えられた助成金番号ＣＡ１０８０５６及びＣＡ１４０３９８の下で政府支援によってなされた。政府は、当該発明においてある一定の権利を有する。
【０００２】
関連出願の相互参照
この出願は、参照によって本明細書に組み込まれる、２０１６年７月２７日に出願された米国出願第６２／３６７，２６３号の優先権を主張する。
【０００３】
本発明は、白血病を処置する組成物及び方法に概して関する。より詳細には、本発明は、化学療法剤と特定の転写因子阻害剤との相乗的組み合わせを使用する処置の組成物及び方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）は、成人の白血病の最も一般的な形態である。染色体逆位ｉｎｖ（１６）（ｐｌ３ｑ２２）によるＡＭＬにおいて発現される転写因子融合ＣＢＦβ−ＳＭＭＨＣ（コア結合因子β及び平滑筋ミオシン重鎖）は、転写因子ＲＵＮＸ１への結合に関して野生型ＣＢＦβを打ち負かし、造血におけるＲＵＮＸ１活性を規制解除し、ＡＭＬを誘発する。非選択的細胞毒性化学療法による現在のｉｎｖ（１６）ＡＭＬ処置は、良好な初期反応を結果として生じるが、長期の生存を制限していた。
【０００５】
ＣＢＦは、ＤＮＡ結合ＲＵＮＸサブユニット（３つの遺伝子：ＲＵＮＸ１、ＲＵＮＸ２、またはＲＵＮＸ３；のうちの１つによってコードされる）及び非ＤＮＡ結合ＣＢＦβサブユニットから構成されるヘテロ二量体転写因子であり、これは、ＤＮＡに対するＲＵＮＸタンパク質の親和性を増加させる。全３つのＲＵＮＸタンパク質ならびにＣＢＦβは、特定の発生経路の重要な調節因子であることが示されている。ＲＵＮＸ１及びＣＢＦβは、二次造血に必須であり、これらは、幹細胞及び前駆細胞の増殖、分化、及び生存に関連する遺伝子の発現を調節する。ＲＵＮＸ２は、骨の発達に重要な遺伝子の転写調節による正常な骨形成に必須である。ＲＵＮＸ１及びＲＵＮＸ３は、いずれも、神経発達において重要な役割を果たす。
【０００６】
正常な発達における重要な役割に基づいて、ＲＵＮＸタンパク質及びＣＢＦβは、多数のがんにおいて変化の標的である。ＲＵＮＸ１及びＣＢＦβは、いずれも、対応する融合タンパク質が疾患のドライバーであることが明らかに示されている急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）及び急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）患者のサブセットにおいて染色体転座を経験する。融合タンパク質ＡＭＬ１−ＥＴＯ及びＴＥＬ−ＡＭＬ１では、ＣＢＦβへの融合タンパク質の結合が、形質転換に必須であることが示されている。ＲＵＮＸ１は、ＡＭＬ及び骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）患者のサブセットにおいて変異する。
【０００７】
特に転写因子に関するタンパク質−タンパク質相互作用の小分子阻害剤は、このクラスの相互作用が「新薬の開発に繋がらない」、すなわち、かかる相互作用を標的とすることは成功の可能性が非常に低いという長年広く信じられている考えに部分的に起因して、依然として、比較的新生の分野である。転写因子を含めた、タンパク質−タンパク質相互作用に影響する小分子阻害剤の成功談の数が増加するにつれ、このパラダイムは、明らかに変わりつつある。また、エピジェネティックなシグナル伝達タンパク質の小分子阻害剤、例えば、ＢＲＤ４またはＥＺＨ２阻害剤の最近の開発は、転写の小分子調節が、特に、がん処置への潜在的に強力なアプローチであることを明らかに示している。
【０００８】
参照によって本明細書に組み込まれる米国特許第８，７４８，６１８号及び同第９，２２１，７６４号は、ＣＢＦβ−ＳＭＭＨＣと、ＣＢＦβ−ＳＭＭＨＣのＣＢＦβ部に結合するＲＵＮＸ１のＲｕｎｔドメインとの間のタンパク質−タンパク質相互作用の小分子阻害剤を報告している。米国特許第８，７４８，６１８号及び同第９，２２１，７６４号に開示されている二量体阻害剤は、ｉｎｖ（１６）細胞株に対する効能の増加及び非ｉｎｖ（１６）細胞株への最小限の影響を示している。
【０００９】
ｉｎｖ（１６）ＡＭＬを有する患者は、細胞毒性薬、例えば、Ａｒａ−Ｃ及びアントラサイクリンを含めた積極的な化学療法レジメンを通常は経験する。この処置は、若年患者により良好に耐容性であり、４５％〜６５％の５年全生存率を示している（Ｒａｖａｎｄｉ，ｅｔ  ａｌ．，２００７；Ｐｕｌｓｏｎｉ，ｅｔ  ａｌ．，２００８）。しかし、大部分の患者が高齢であり、６０歳を超える患者での５年全生存率は約２０％である（Ｆａｒａｇ，ｅｔ  ａｌ．，２００６）。これらのデータは、ｉｎｖ（１６）ＡＭＬ患者で治療応答を改善することができる標的療法が望ましいことを示している。
【００１０】
新興文献には、細胞毒性化学療法、キナーゼ阻害剤、またはモノクローナル抗体を含めた現在の療法によってがんを治癒できないことが、処置に耐性であって、静止していて、長期自己再生能を有していて、かつ、再発時に腫瘍表現型を完全に反復することができる、いわゆるがん幹細胞またはがん発症細胞の集団に起因し得ることが示唆されている。ｉｎｖ（１６）ＡＭＬは、この特徴の良好な例である。なぜなら、ｉｎｖ（１６）患者は、診断で検出される他の変異体（ＲＡＳ、ＦＬＴ３ＩＴＤもしくはＫＩＴ）は再発時に検出される場合もあり、されない場合もあるが、再発時にｉｎｖ（１６）再配列を常に示すからである（Ｎａｋａｎｏ，ｅｔ  ａｌ．，１９９９；Ｋｏｔｔａｒｉｄｉｓ，ｅｔ  ａｌ．，２００２；Ｓｈｉｈ，ｅｔ  ａｌ．，２００８）。
【００１１】
現在、標準の細胞毒性化学療法が、ｉｎｖ（１６）白血病の処置に使用されている。該療法は、若年患者によっては合理的に良好な耐容性が示されるが、この疾患に悩まされている主に高齢患者によっては良好な耐容性が示されない。より重要なことには、ｉｎｖ（１６）患者のおよそ６０％が再発しかつ５年以内に死亡することから、かなりの再発率を示している。これは、おそらく、標準の化学療法によって処置するときに白血病幹細胞集団を死滅させないという結果であり、当該疾患を再発させる。ＣＢＦβ−ＳＭＭＨＣは、細胞の遺伝子発現プロファイルを、より幹細胞様に変化させることが知られているため、ＣＢＦβ−ＳＭＭＨＣが、白血病幹細胞表現型のドライバーであることは明らかである。そのため、ＣＢＦβ−ＳＭＭＨＣの直接阻害が、この表現プロファイルを改変し得、そのため、単独でまたは細胞毒性化学療法と組み合わせて、より効果的な治療的アプローチであり得ることが大いに起こり得る。
【００１２】
特にｉｎｖ（１６）融合を含めた、急性骨髄性白血病を防止または処置するのに有用な組成物及び方法について、当該分野において長年感じられている必要性が存在する。本発明は、これらの必要性を満たすものである。
【発明の概要】
【００１３】
この発明は、ｉｎｖ（１６）白血病の処置のための方法及び組成物に概して関する。
【００１４】
この発明は、ｉｎｖ（１６）白血病を処置する方法であって：これを必要とする対象に、
ａ）式（１）の化合物
【化１】
2019525924.tif 000003
式中、Ｙは、Ｏ、ＮＨ、もしくはＮＲであり、ここで、Ｒがメチルもしくはエチルであり
ｎが１〜１０の整数である；
またはその薬学的に許容可能な塩と
ｂ）ピラルビシン、アクラルビシン、ミトキサントロン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、イダルビシン、エピルビシン、シタラビン、薬学的に許容可能な塩及びこれらの混合物からなる群から選択される化学療法剤と
の治療的に有効な組み合わせを投与するステップを含む、上記方法に関する。式（１）の化合物と化学療法剤との治療的に有効な組み合わせは、ｉｎｖ（１６）白血病細胞の増殖を相乗的に阻害する。
【００１５】
本発明による方法において、式（１）の化合物及び化学療法剤は、同時に投与され、または、まず式（１）の化合物を投与し、続いて化学療法剤を投与することによって逐次的に投与される。
【００１６】
この発明はまた、式（１）の化合物と化学療法剤との治療的に有効な組み合わせ、及び薬学的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物にも関する。式（１）の化合物と化学療法剤との治療的に有効な組み合わせは、ｉｎｖ（１６）白血病細胞の増殖を阻害するのに相乗的に有効な組み合わせ量である。
【００１７】
本発明の方法及び医薬組成物において、式（１）の化合物は、式（１ａ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩であり；
【化２】
2019525924.tif 000004
化学療法剤は、ドキソルビシンまたはその薬学的に許容可能な塩である。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】白血病が移植され、かつＤＭＳＯ（対照）、ドキソルビシン、ＡＩ−１０−４９、及びドキソルビシン＋ＡＩ−１０−４９で処置されたマウスからの白血球数の測定。
【図２】白血病が移植され、かつＤＭＳＯ（対照）、ドキソルビシン、ＡＩ−１０−４９、及びドキソルビシン＋ＡＩ−１０−４９で処置されたマウスからのｃ−Ｋｉｔ＋細胞集団の測定。
【図３】白血病が移植され、かつＤＭＳＯ（対照）、ドキソルビシン、ＡＩ−１０−４９、及びドキソルビシン＋ＡＩ−１０−４９で処置されたマウスからの脾臓重量及び細胞数の測定。
【図４】白血病が移植され、かつＤＭＳＯ（対照）、ドキソルビシン、ＡＩ−１０−４９、及びドキソルビシン＋ＡＩ−１０−４９で処置されたマウスからのＬｉｎ−Ｓｅａ１−Ｃ−Ｋｉｔ＋細胞集団の測定。
【図５】ＣＢＦβ−ＳＭＭＨＣ融合タンパク質を発現するＭＥ−１白血病細胞株に対するＡＩ−１０−４９及びドキソルビシンならびにこれらの組み合わせの効果の測定。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本発明は、ｉｎｖ（１６）白血病の処置の方法であって、これを必要とする対象に：
ａ）式（１）の化合物
【化３】
2019525924.tif 000005
式中、Ｙは、Ｏ、ＮＨ、またはＮＲであり、ここで、Ｒがメチルまたはエチルであり、
ｎが１〜１０の整数である；
またはその薬学的に許容可能な塩と
ｂ）ピラルビシン、アクラルビシン、ミトキサントロン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、イダルビシン、エピルビシン及びシタラビン、ならびにこれらの混合物、またはその薬学的に許容可能な塩からなる群から選択される化学療法剤と
の治療的に有効な組み合わせを投与することを含む、上記方法に関する。
【００２０】
式（１）の化合物と化学療法剤との治療的に有効な組み合わせは、ｉｎｖ（１６）白血病細胞の増殖を相乗的に阻害する。本発明の方法は、ｉｎｖ（１６）白血病の１タイプである急性骨髄性白血病の処置において特に有用である。「処置」または「処置すること」は、特定の障害もしくは状態の予防、あるいは、特定の障害もしくは状態の予防に関連する症状の寛解、及び／またはこれらの症状の防止もしくは排除を含む。
【００２１】
驚くべきことに、相乗効果は、ある一定の組み合わせ量の式（１）の化合物及び化学療法剤がｉｎｖ（１６）白血病細胞の増殖を阻害するのに使用されるときに見られる。本発明において使用される相乗的組み合わせは、式（１）の化合物の１日投与用量に対する化学療法剤の１日投与用量の重量対重量比が、約０．０００１：１〜約１０００：１の範囲である。当該比は、約０．００１：１〜約１００：１、例えば、約０．０１：１〜約１０：１、例えば約０．１：１〜約１：１であってよい。
【００２２】
発がん性ＣＢＦβ−ＳＭＭＨＣ融合タンパク質の直接阻害は、ｉｎｖ（１６）ＡＭＬについての潜在的に有効な治療アプローチとして示されている（Ｉｌｌｅｎｄｕｌａ，ｅｔ  ａｌ．，２０１５．）。５−メトキシ−２−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール、ＡＩ−４−５７は、ＣＢＦβ−ＳＭＭＨＣ融合タンパク質のＣＢＦβ部に結合して当該部のＲＵＮＸタンパク質のＲｕｎｔドメインへの結合を阻害する化合物として報告された（Ｉｌｌｅｎｄｕｌａ，ｅｔ  ａｌ．，２０１５．）。トリフルオロメトキシ（ＣＦ３Ｏ）誘導体である、２−（ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメトキシ）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール、Ａ−１０−４７は、メトキシ化合物と比較して向上した代謝安定性を示した（Ｉｌｌｅｎｄｕｌａ，ｅｔ  ａｌ．，２０１５．）。ポリエチレングリコール系リンカーは、５−、７−、１０−、及び１６−原子リンカー長を有する二価誘導体を作り出すのに使用された（Ｉｌｌｅｎｄｕｌａ，ｅｔ  ａｌ．，２０１５．）。５原子リンカー化合物は、より低い活性を有したが、より長いリンカー化合物は、強力な阻害を示す。７原子リンカーを有する化合物、ＡＩ−４−８３は、一価化合物よりも６３倍の向上を示す。また、ＡＩ−４−８３は、飽和濃度においてＣＢＦβ−ＳＭＭＨＣ及びＲＵＮＸ１Ｒｕｎｔドメインの＞１０倍解離を達成した（Ｉｌｌｅｎｄｕｌａ，ｅｔ  ａｌ．，２０１５．）。
【００２３】
７原子リンカーを有するトリフルオロメトキシ誘導体、ＡＩ−１０−４９はまた、本明細書において、化合物（１ａ）とも称され、
【化４】
2019525924.tif 000006
ｉｎｖ（１６）による白血病細胞株、ＭＥ−１細胞株における細胞死を誘発する強力なＣＢＦβ−ＳＭＭＨＣ特異的化合物であることが示された（Ｉｌｌｅｎｄｕｌａ，ｅｔ  ａｌ．，２０１５．）。ＣＢＦβ−ＳＭＭＨＣはオリゴマーである一方で、ＣＢＦβは、単量体である。ＡＩ−１０−４９は、ＣＢＦβ機能への影響が最小でありながら、ＣＢＦβ−ＳＭＭＨＣ活性を阻害する（Ｉｌｌｅｎｄｕｌａ，ｅｔ  ａｌ．，２０１５．）。
【００２４】
本発明による方法において、式（１）の化合物は、リンカー、−Ｏ−［ＣＨ２ＣＨ２Ｙ］ｎ−Ｏ−によって結合された２つの２−（ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメトキシ）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール基を含有する。式（１）の化合物において、リンカーは、ベンゾイミダゾール環を通して分子の２つの結合部を接続する。二量体または二価阻害剤は、ＣＢＦβ−ＳＭＭＨＣのオリゴマー性質を利用しており、多価の原則が適用されて（Ｍａｍｍｅｎ，ｅｔ  ａｌ．，１９９８；Ｋｉｅｓｓｌｉｎｇ，ｅｔ  ａｌ．，２００６）、所望の選択性を達成している。Ｃ末端先端を欠失するＣＢＦβ−ＳＭＭＨＣの切断型は、溶液中で二量体を形成することが示されている（Ｌｕｋａｓｉｋ，ｅｔ  ａｌ．，２００２．）。全長タンパク質では、これらの二量体が次いでオリゴマー化して高次オリゴマーを形成する（Ｓｈｉｇｅｓａｄａ，ｅｔ  ａｌ．２００４．）。対照的に、ＣＢＦβは、溶液中で単量体である。オリゴマー化におけるこの差は、ＣＢＦβ−ＳＭＭＨＣ対ＣＢＦβの選択的阻害を達成する手段を提供する。
【００２５】
本発明の方法によると、式（１）の化合物において、Ｙは、Ｏ、ＮＨ、またはＳである。本発明の方法において、Ｙは、Ｏである。本発明の別の方法において、Ｙは、Ｎ−ＣＨ３である。ｎが１を超えるとき、Ｙは、同じであっても異なっていてもよい。
【００２６】
本発明の方法によると、式（１）の化合物において、ｎは、１〜１０の整数である。本発明による方法及び組成物において、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。好ましくは、ｎは、１〜５である。式（１）の化合物において、リンカーは、式（１）の二価化合物が、ＣＢＦβ−ＳＭＭＨＣ−リガンド相互作用対一価ＣＢＦβ−リガンド相互作用によって結合の向上を達成することを可能にするように十分に長くあるべきである。米国特許第９，２２１，７６４号、図５を参照されたい。単量体ＣＢＦβに結合している一価化合物についての解離定数は、Ｋｄ（単量体）に等しい。この化合物のホモ二量体は、Ｋｄ（単量体）／２に等しい解離定数を有する単量体ＣＢＦβタンパク質を結合させる。しかし、この同ホモ二量体は、二量体ＣＢＦβ−ＳＭＭＨＣタンパク質における２つの部位と相互作用し、（Ｋｄ（単量体））２／Ｃｅｆｆ：ここで、Ｃｅｆｆは、ＣＢＦβ−ＳＭＭＨＣにおいて２つの結合部位が互いにつながることから生じる有効濃度である；に等しいＫｄ（二量体）を有する。（Ｍｕｌｄｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，２００４）
【００２７】
式（１）の範囲内の非限定的な例示的化合物として：
【化５】
2019525924.tif 000007
が挙げられる。
【００２８】
本発明による好ましい方法において、式（１）の化合物は、
【化６】
2019525924.tif 000008
である。
【００２９】
参照によって本明細書に組み込まれる米国特許第９，２２１，７６４号は、ポリエチレングリコール系リンカーを有する特定の二価阻害剤の構造及び合成経路を開示している。
【００３０】
本発明による方法において、式（１）の化合物は、
【化７】
2019525924.tif 000009
である。
【００３１】
ＡＩ−１４−１２４としても知られている化合物（１ｂ）の例示的な合成を以下に示す：
【化８】
2019525924.tif 000010
【００３２】
本発明の方法によると、化学療法剤は、ピラルビシン、アクラルビシン、ミトキサントロン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、イダルビシン、エピルビシン及びシタラビン、ならびにこれらの混合物、またはその薬学的に許容可能な塩からなる群から選択される。
【００３３】
言及されているように、本発明において使用される式（１）の化合物または化学療法剤は、「薬学的に許容可能な塩」の形態を取り得、これは、本発明の化合物の生物学的効果及び特性を保持し、かつ、生物学的にまたは他の点で望ましくないということがない塩を指す。多くの場合において、本発明の方法において投与される化合物は、アミノ及び／またはカルボキシル基もしくはこれと同様の基の存在によって酸及び／または塩基塩を形成することが可能である。薬学的に許容可能な酸付加塩は、無機及び有機酸から調製されてよい。無機酸に由来する塩として、限定されないが、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などが挙げられる。薬学的に許容可能な塩基付加塩は、無機及び有機塩基から調製されてよい。無機塩基に由来する塩として、ほんの一例として、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム及びマグネシウム塩が挙げられる。有機塩基に由来する塩として、限定されないが、第１級、第２級及び第３級アミンの塩が挙げられる。
【００３４】
ｉｎｖ（１６）ＡＭＬを有する患者は、細胞毒性薬、例えば、Ａｒａ−Ｃ（シタラビン）及びアントラサイクリンを含めた積極的な化学療法レジメンを通常は経験する。シタラビンは、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病及びリンパ腫の処置において主に使用され、シタラビンは、導入化学療法の重要要素である（Ｐｉｇｎｅｕｘ  ｅｔ  ａｌ．，２００７．）。シタラビンは、ＤＮＡの合成を妨げて、有糸分裂のためにＤＮＡ複製を必要とする迅速に分裂する細胞に影響する。４つの最も一般的なアントラサイクリンは、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン及びイダルビシンである（ＭｃＧｏｗａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１７．）。ドキソルビシン及びダウノルビシンは、臨床診療において使用されることが最初であった。エピルビシンは、ドキソルビシンの立体異性体であり、ドキソルビシンよりも増加した分布体積及び長い半減期を有する。イダルビシンは、ダウノルビシンの誘導体であり、ダウノルビシンよりも親油性でありかつより高い細胞取り込みを有する。さらにいくつかのアントラサイクリンのみが臨床承認を得ている；これらとして、ピラルビシン、アクラシノマイシンＡ（アクラルビシン）、及びミトキサントロン（置換されたアグリコン性アントラキノン）が挙げられる（Ｍｉｎｏｔｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００４．）。広範な臨床利用にもかかわらず、がん細胞におけるアントラサイクリンの作用のメカニズムは、依然として論争中のままである。影響力のある解説において、以下のメカニズムが考えられた：１）ＤＮＡへの挿入により、高分子の合成の阻害に至る；２）遊離ラジカルの発生により、ＤＮＡ損傷または脂質過酸化に至る；３）ＤＮＡ結合及びアルキル化；４）ＤＮＡ架橋；５）ＤＮＡ巻き戻しまたはＤＮＡ鎖分離及びヘリカーゼ活性の妨げ；６）直接的な膜効果；７）トポイソメラーゼＩＩの阻害を介したＤＮＡ損傷の開始；ならびに８）トポイソメラーゼＩＩ阻害に応答したアポトーシスの誘発（Ｇｅｗｉｒｔｚ  Ｄ．Ａ．，１９９９．）
【００３５】
本発明の方法によると、化学療法剤は、ドキソルビシンまたはダウノルビシンである。例えば、化学療法剤は、ドキソルビシンである。本発明による方法において、化学療法剤は、ドキソルビシン塩酸塩である。
【００３６】
本発明による方法において、ある量の式（１）の化合物、例えば、化合物（１ａ）、及び化学療法剤、例えば、ドキソルビシンの治療的に有効な組み合わせが投与されて、ｉｎｖ（１６）白血病細胞の増殖を相乗的に阻害する。「阻害する」という用語は、本発明の化合物が、記載されている機能、例えば、細胞増殖を低減または遅延させる能力を指す。好ましくは、阻害は、少なくとも１０％だけ、より好ましくは少なくとも２５％、なおより好ましくは少なくとも５０％だけであり、最も好ましくは、当該機能は、少なくとも７５％だけ阻害される。
【００３７】
本発明による方法において、本発明において使用される相乗的組み合わせは、式（１）の化合物の１日投与用量に対する化学療法剤の１日投与用量の重量対重量比が、約０．０００１：１〜１０００：１の範囲である。当該比は、約０．００１：１〜約１００：１、例えば、約０．０１：１〜約１０：１、例えば約０．１：１〜約１：１であってよい。連日投与は、同時、連続または非連続であってよい。
【００３８】
化学療法剤及び式（１）の化合物は、ｉｎｖ（１６）白血病細胞の増殖を阻害するときに効果的であることが別個に示されているが、組み合わされると、結果は、加法を超えるものであり、相乗的である。本発明による処置の方法における使用に必要とされる、式（１）の化合物及び化学療法剤またはその塩の相乗的組み合わせの量は、投与経路、処置される状態の性質、ならびに患者の年齢及び状態によって変動してよく、最終的には、主治医または臨床医の裁量によるであろう。急性骨髄性白血病患者を、体表面積の平方メートル当たり４５〜５０ｍｇの用量でダウノルビシンによって３日間処置し、加えて、平方メートル当たり１００〜２００ｍｇの用量でシタラビンによって７〜１０日間処置することが標準的技法である（Ｌｏｗｅｍｂｅｒｇ，２００９．）。本発明による処置の方法において、化学療法剤の１日投与用量は約１０ｍｇ／ｍ２〜約１０，０００ｍｇ／ｍ２である。例えば、１つの処置方法は、約２０〜約１０００ｍｇ／ｍ２の１日用量での化学療法剤の投与を含む。処置の方法は、約２５、３０、４５、５０，１００，１５０、２５０、４５０、７５０または９００ｍｇ／ｍ２の１日用量での化学療法剤の投与を含む。化学療法剤の投与は、静脈内注射、静注、ボーラス注射または皮下注射によってなされ得る。本発明による処置の方法において、式（１）の化合物の１日投与用量は、約１０ｍｇ／ｍ２〜約１０，０００ｍｇ／ｍ２である。例えば、１つの処置方法は、約２０〜約１０００ｍｇ／ｍ２の１日用量での式（１）の化合物の投与を含む。１つの処置方法は、約２５、３０、４５、５０、１００、１５０、２５０、４５０、７５０または９００ｍｇ／ｍ２の１日用量での式（１）の化合物の投与を含む。処置の方法において、化学療法剤の投与は、１、２及び３日目に１日１回であるが、式（１）の化合物の投与は、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、またはそれより多くの間、１日１回行う。式（１）の化合物の投与の継続期間は、当業者によって決定されてよく、必要に応じて継続されてよい。１つの処置方法において、化学療法剤の投与は、１及び２日目に１日１回であるが、式（１）の化合物の投与は、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、またはそれより多くの間、１日１回行う。１つの処置方法において、化学療法剤の投与は、１日目に１日１回であるが、式（１）の化合物の投与は、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、またはそれより多くの間、１日１回行う。
【００３９】
本発明による処置の方法において、式（１）の化合物及び化学療法剤は、同時に投与され、または、まず式（１）の化合物を投与し、続いて化学療法剤を投与することによって逐次的に投与される。本発明による処置の方法において、式（１）の化合物及び化学療法剤は、同時に投与されてもよい。本発明による代替の方法において、式（１）の化合物及び化学療法剤は、まず式（１）の化合物を投与し、続いて化学療法剤を投与することにより、逐次的に投与されてよい。本発明の処置の他の方法によると、さらなる治療的に有効な量の式（１）の化合物が、化学療法剤を投与した後、１日以上の間、連日投与されてもよい。例えば、本発明による処置の方法において、式（１）の化合物が投与され、続いて化学療法剤が投与され、続いて、１日以上の間、式（１）の化合物が連日投与される。本発明の処置の方法の別の例として、式（１）の化合物及び化学療法剤が同時に投与され、続いて、１日以上の間、式（１）の化合物が連日投与される。
【００４０】
所望の用量は、簡便に、単回用量で、または、適切な間隔で投与される分割用量として、例えば、１日当たり２、３、４、もしくはそれを超えるサブ用量として提示され得る。サブ用量自体は、例えば、多数の別個の大まかに間隔をあけた投与；例えば、複数回の注射；にさらに分割されてよい。
【００４１】
本発明による方法において、ｉｎｖ（１６）白血病に罹患している対象からの細胞の増殖の程度は、当業者に公知の技術を使用して測定される。ｉｎｖ（１６）白血病のマウスモデルを使用した、白血病を引き起こす細胞と称される特定の細胞集団は、適切な動物モデルとして同定及び受容されている（Ｋｕｏ，Ｙ．Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．，２００６．）。この細胞集団は、ｉｎｖ（１６）を保持しているが、疾患に関連する二次変異を保有していない。かかる二次変異の取得に際し、これらの細胞は、顕性白血病に進行し得る。これらの細胞はまた、常套的な細胞毒性化学療法に典型的にはより耐性でもあり、そのため、細胞のプールを提示し、これから再発が起こり得る。細胞は、血液、脾臓、骨髄、及び／または髄液から測定用に抽出されてよい。例えば、ｉｎｖ（１６）白血病を有する対象から抽出したＬｉｎ−Ｓｃａ−Ｋｉｔ＋細胞の集団は、フローサイトメトリーを使用して測定される。Ｌｉｎ−Ｓｅａ１−ｃ−Ｋｉｔ＋細胞集団は、白血病を引き起こす細胞（ＬＩＣ）及び白血病幹細胞（ＬＳＣ）集団に富んでいる。
【００４２】
本発明による処置の方法において、式（１）の化合物及び化学療法剤は、式（１）の化合物、化学療法剤、及び薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物において投与される。本発明による処置の他の方法においては、式（１）の化合物が、式（１）の化合物及び薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物において投与され、化学療法剤が、化学療法剤及び薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物において後に投与される。本発明による方法において、薬剤の投薬処方は、同じであっても異なっていてもよい。例えば、化学療法剤及び式（１）の化合物は、両方が、非経口送達用の液剤として処方される。代替的には、化学療法剤が、液剤として処方され、式（１）の化合物が、錠剤として処方される。
【００４３】
本発明の別個の実施形態は、薬学的に許容可能な担体、及び
ａ）式（１）の化合物
【化９】
2019525924.tif 000011
式中、Ｙは、Ｏ、ＮＨ、またはＮＲであり、ここで、Ｒがメチルまたはエチルであり、
ｎは１〜１０の整数である；
またはその薬学的に許容可能な塩；と
ｂ）ピラルビシン、アクラルビシン、ミトキサントロン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、イダルビシン、エピルビシン、シタラビン、またはその薬学的に許容可能な塩からなる群から選択される化学療法剤；と
の治療的に有効な組み合わせを含む医薬組成物であって、
式（１）の化合物において及び化学療法剤が、ｉｎｖ（１６）白血病細胞の成長を阻害するのに相乗的に有効な組み合わせ量で存在する、上記医薬組成物である。
【００４４】
本発明による医薬組成物は、式（１）の化合物と化学療法剤との相乗的組み合わせを含有するいずれの医薬品形態であってもよい。医薬組成物は、例えば、錠剤、カプセル、液体懸濁液、注射可能組成物、局所組成物、吸入可能組成物または経皮組成物であってよい。液体医薬組成物が調製されてもよい。医薬組成物は、例えば、約０．１％〜約９９．９重量％の組み合わせ量の式（１）の化合物及び化学療法剤、例えば、約０．５％〜約９９重量％の組み合わせ量の式（１）の化合物及び化学療法剤、例えば、９９．５％〜０．５重量％の少なくとも１つの好適な薬学的賦形剤を概して含有する。一実施形態において、上記組成物は、以下に議論するように、残りが、少なくとも１つの好適な薬学的賦形剤または少なくとも１つの他のアジュバントである、約５％〜約７５重量％の間の組み合わせ量の式（１）の化合物及び化学療法剤であってよい。
【００４５】
医薬組成物の種類に応じて、薬学的に許容可能な担体は、当該分野において公知の担体のいずれか１つまたは組み合わせから選択されてよい。薬学的に許容可能な担体の選択は、医薬品形態及び使用される所望の投与方法に依る。
【００４６】
好適な液体医薬組成物は、例えば、シクロデキストリンなどの薬物水溶性を改善する可溶化剤を含有する。シクロデキストリンの１つの非限定例は、β−シクロデキストリン（β−ＣＤ）の、ポリアニオン性の可変的に置換されたスルホブチルエーテルである（Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標））。
【００４７】
本発明の固体医薬組成物では、固体医薬組成物における担体は、式（１）の化合物または化学療法剤のいずれも実質的に改変すべきではない。当該担体は、例えば、任意の望ましくない生物学的効果を生じること、またはさもなければ医薬組成物の任意の他の成分（複数可）と有害に相互作用することによって、使用される式（１）の化合物または化学療法剤と非相溶性になってはならない。
【００４８】
本発明の医薬組成物は、医薬製剤分野において公知の方法によって調製されてよく、例えば、参照によって本明細書に組み込まれる、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  Ｅｄ．，（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９９０）を参照されたい。本発明の医薬組成物の好適な固体剤形には、少なくとも１つの薬学的に許容可能な賦形剤、例えば、クエン酸ナトリウムもしくはリン酸二カルシウムなど、あるいは、（ａ）充填剤もしくは増量剤、例えば、デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、及びケイ酸など、（ｂ）結合剤、例えば、セルロース誘導体、デンプン、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、及びアカシアガムなど、（ｃ）保湿剤、例えば、グリセロールなど、（ｄ）崩壊剤、例えば、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモまたはタピオカデンプン、アルギン酸、クロスカルメロースナトリウム、複合シリケート、及び炭酸ナトリウムなど、（ｅ）溶液遅延剤、例えば、パラフィンなど、（ｆ）吸収促進剤、例えば、第４級アンモニウム化合物など、（ｇ）湿潤剤、例えば、セチルアルコール、及びモノステアリン酸グリセロール、ステアリン酸マグネシウムなど、（ｈ）吸着剤、例えば、カオリン及びベントナイトなど、ならびに（ｉ）滑沢剤、例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、またはこれらの混合物が含まれる。カプセル、錠剤、及び丸薬の場合、上記剤形は、緩衝剤を含んでいてもよい。
【００４９】
医薬製剤分野において公知の薬学的に許容可能なアジュバントは、本発明の医薬組成物において使用されてもよい。これらとして、限定されないが、保存、湿潤、懸濁、甘味、香味、香料、乳化、及び分散剤が挙げられる。微生物の作用の防止は、種々の抗菌及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などの包含により保証されてよい。等張剤、例えば、糖、塩化ナトリウムなどを含むことが望ましい場合もある。所望により、本発明の医薬組成物はまた、少量の補助物質、例えば、湿潤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤、酸化剤など、例えば、クエン酸、モノステアリン酸ソルビタン、オレイン酸トリエタノールアミン、ブチル化ヒドロキシトルエンなどを含有していてもよい。
【００５０】
上記に記載されている固体剤形は、医薬分野において公知であるように、コーティング及びシェル、例えば、腸溶性コーティングなどを用いて調製されてよい。これら固体剤形は、緩和剤を含有していてよく、また、活性化合物または複数の活性化合物を、腸管のある一定の部分において、遅延して放出するような組成物を有することもできる。使用され得る埋め込み組成物の非限定例は、ポリマー物質及びワックスである。活性化合物はまた、適切な場合、上記の賦形剤のうち１つ以上を有する、マイクロカプセル化形態であってもよい。
【００５１】
好適な懸濁液は、懸濁剤、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール及びソルビタンエステル、微結晶性セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天及びトラガカント、またはこれらの物質の混合物などを含有していてよい。液体剤形は、水性であってよく、薬学的に許容可能な溶媒、ならびに、限定されないが、緩衝剤、風味剤、甘味剤、保存料、及び安定剤を含めた、当該分野において公知の慣例的な液体剤形賦形剤を含有していてよい。
【００５２】
カプセル、錠剤、丸薬、粉末、顆粒、及び懸濁液を含めた、経口投与用の剤形が使用されてよい。本発明による好適な医薬組成物は、液体または注射可能な医薬組成物として製剤化されてもよい。投与は、許容されている投与形態または同様の利用性を与える薬剤のいずれかを介して実施されてよい。そのため、投与は、例えば、経口、頬側、または非経口（静脈内、筋肉内、腹腔内、もしくは皮下）、固体、半固体、凍結乾燥粉末、または液体剤形の形態、例えば、錠剤、丸薬、軟質弾性及び硬質ゼラチンカプセル、粉末、液剤、懸濁液、またはエアロゾルなど、例えば、正確な投薬量の簡単な投与に好適な単位剤形であってよい。１つの投与経路は、処置される状態の重篤さの程度によって調整され得る簡便な１日投薬量レジメンを使用した、経口投与であってよい。
【００５３】
概して、本発明による医薬組成物において、液体組成物、例えば、注射可能な液剤中での、本発明の式（１）の化合物及び化学療法剤の組み合わせ濃度は、約０．１〜２５重量％、好ましくは約０．５〜１０重量％である。半固体または固体組成物、例えば、ゲルまたは粉末における濃度は、約０．１〜５重量％、好ましくは約０．５〜２．５重量％である。
【実施例】
【００５４】
実施例１：マウスにおける白血病移植研究
【００５５】
動物を用いた実験を、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによってレビュー及び承認されているプロトコルにしたがって実施した。ｉｎｖ（１６）ＡＭＬの有効なマウスモデルを使用した（Ｌ．Ｘｕｅ，ｅｔ  ａｌ．，２０１４．）。白血病細胞を持つＣｂｆｂ＋／ＭＹＨ１１及びＮｒａｓ＋／Ｇ１２Ｄ発がん性対立遺伝子を、先に記載されているように、ＣＤ４５．２  Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて発生させた（ｌｌｌｅｎｄｕｌａ，ｅｔ  ａｌ．，２０１５．）。簡潔には、２×１０３Ｃｂｆｂ＋／ＭＹＨ１１；Ｎｒａｓ＋／Ｇ１２Ｄ白血病細胞を、１６匹の亜致死的に照射された６〜８週齢のＣＤ４５．１  Ｃ５７ＢＬ／６雌性マウスの各々に移植した。移植後５日で、マウスを、各群において４匹のマウスを含む４群：ＤＭＳＯ（対照、５０μＬ）、Ｄｏｘ、ＡＩ−１０−４９、及びＤｏｘ＋ＡＩ−１０−４９；に分けた。両方のＤｏｘ群には、移植後５日間、単回用量のドキソルビシン（２ｍｇ／ｋｇ）を与えた。両方のＡＩ−１０−４９群には、ＤＭＳＯ中の１日用量のＡＩ−１０−４９（２００ｍｇ／ｋｇ）を、腹腔内注射により１０日間与えた。この１０日の期間の後、全てのマウスを犠牲にし、いくつかの尺度を介して白血病負荷について分析した。マウスを二人以上による観察下に置いて中央値の白血病潜伏期間を求め、運動及び身繕い行動の低減、背中の丸まり、青ざめた足（貧血）、ならびに低体温を含めた疾患の兆候が検出されたら安楽死させた。安楽死のとき、末梢血及び脾臓細胞を抽出し、先に記載されているように分析した（Ｙ．Ｈ．Ｋｕｏ，ｅｔ  ａｌ．，２００６．）。白血病負荷を、合計白血球数、ｃ−ｋｉｔ（＋）−ゲート化集団における細胞数、脾臓重量及び細胞数、ならびに脾臓Ｌｉｎ−Ｓｃａ１−ｃ−ｋｉｔ＋集団を測定することによって末梢血において分析した。Ｋｉｔ＋及びＬｉｎ−Ｓｃａ−Ｋｉｔ＋の結果については、フローサイトメトリーを使用して効果を測定した。
【００５６】
白血球数を図１に示すように測定した。白血球数は、ＡＩ−１０−４９及びＤｏｘの両方の群において低減した。Ｄｏｘ及びＡＩ−１０−４９の組み合わせは、ＷＢＣの低減において相加効果を示した。
【００５７】
ｃ−Ｋｉｔ＋細胞集団を図２に示すように評価した。ｃ−Ｋｉｔ＋細胞集団は、白血病細胞を含有する富化画分である。ここで、個々の薬剤は効果を及ぼし、組み合わせは、相加効果を示した。
【００５８】
脾臓重量及び細胞数を図３に示すように評価した。これらは、白血病患者において上昇する。脾臓細胞は、ＷＢＣ及びｃ−Ｋｉｔ＋細胞について見られるのと同様の相加効果を示し、脾臓重量は、単一の薬剤のいずれかと比較して組み合わせの相乗効果を示した。
【００５９】
最後に、Ｌｉｎ−Ｓｅａ１−ｃ−Ｋｉｔ＋細胞集団への効果を図４に示す。この細胞集団は、白血病を引き起こす細胞（ＬＩＣ）または白血病幹細胞（ＬＳＣ）が富化されている。ここで、これらの細胞数への明らかな相乗効果がＤｏｘ＋ＡＩ−１０−４９によって観察された一方で、ＡＩ−１０−４９単独では若干の効果が見られたのみであり、Ｄｏｘ単独では効果が見られなかった。
【００６０】
ドキソルビシンは、ｉｎｖ（１６）ＡＭＬ患者のための現在の標準治療の成分であるため、本発明者らは、標的化されたＣＢＦβ−ＳＭＭＨＣ阻害剤、ＡＩ−１０−４９と、ドキソルビシンとを組み合わせることによって効能の増大を示している。総合すれば、これらの結果は、転帰を改善するための、患者におけるＡＩ−１０−４９とドキソルビシンとの組み合わせの有用性を強く主張している。特に、最後の結果は、上記組み合わせが、再発を駆動する白血病細胞のリザーバーであるＬＩＣ集団を効果的に標的化し得ることを主張している。これは、上記組み合わせが、ｉｎｖ（１６）ＡＭＬ患者について転帰を改善し得ることを強く主張している。
【００６１】
実施例２：ｉｎｖ（１６）＋細胞株ＭＥ−１の増殖への効果
【００６２】
ＭＥ−１細胞（ｉｎｖ（１６）＋）（ＤＳＭＺ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を、２０％ウシ胎仔血清及び２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳを含むＲＰＭＩ１６４０中で培養した。５×１０５個のＭＥ−１細胞を、９６ウェルプレートを使用して、ＤＭＳＯ、または示したような異なる添加順序による異なる組み合わせにおいて、２４時間培養した。細胞を合計４日間インキュベートし、増殖を、ＭＴＴキット、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  ９６（登録商標）ＡＱｕｅｏｕｓ  Ｏｎｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｐｒｏｍｅｇａ，ＰＡ）を使用して測定した。化合物を、１日目のみ、２日目のみ、または１日目に両方を添加し、組み合わせのタイミングのあらゆる効果をアセスメントした。実験を少なくとも２回再現した。
【００６３】
図５に示すように、同時に添加したＡＩ−１０−４９＋ドキソルビシンの組み合わせ、ならびにＡＩ−１０−４９、続いて二日目にドキソルビシンを添加したときに関する相乗効果を観察した。一方で、ドキソルビシン、続いてのＡＩ−１０−４９の添加は、別個に添加した各成分と同等の阻害を示した。
【００６４】
実施例３：Ｎ−メチル−２−（（６−（５−（トリフルオロメトキシ）−１Ｈ−ベンゾ［ジ］イミダゾール−２−イル）ピリジン−３−イル）オキシ）−Ｎ−（２−（（６−（５−（トリフルオロメトキシ）−１Ｈ−ベンゾ［ジ］イミダゾール−２−イル）ピリジン−３−イル）オキシ）エチル）エタン−１−アミン（ＡＩ−１４−１２４）の合成
【００６５】
合成を、先に記載されている方法によって２ステップで達成した（Ｉｌｌｅｎｄｕｌａ，ｅｔ  ａｌ．，２０１５．）。ステップ１において、ジアルデヒド、５，５’−（（（メチルアザンジイル）ビス（エタン−２，１−ジイル））ビス（オキシ））ジピコリンアルデヒド（ＡＩ−１４−１１８）を、市販の中間体、５−ヒドロキシピコリンアルデヒド及び２−クロロ−Ｎ−（２−クロロエチル）−Ｎ−メチルエタン−１−アミンから合成した。こうして合成したアルデヒドを次のステップに運んだ。ステップ２において、ＡＩ−１４−１２４をニトロアニリン（０．２２ｇ、１ｍｍｏｌ）及びジアルデヒドＡＩ−１４−１１８（０．１６ｇ、０．５ｍｍｏｌ）から合成し、良好な収率であった（０．１３ｇ、４０％）。融点１３９−１４２℃；１Ｈ ＮＭＲ （８００ ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ−ｄ４）： δ ２．５４ （３Ｈ， ｓ）， ３．０３ − ３．０４ （２Ｈ， ｔ）， ４．３０ − ４．３１ （２Ｈ， ｔ）， ７．１１ （１Ｈ， ｓ）， ７．４０ − ７．６０ （３Ｈ， ｍ）， ８．１３ − ８．１４ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝８．６４ Ｈｚ）， ８．３６ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝３．３ Ｈｚ）；１３Ｃ ＮＭＲ （８００ ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ−ｄ４）： δ ４４．００， ５７．４０， ６８．０５， １０５．９１， １１２．１５， １１８．１１， １２１．６７， １２２．７５， １２３．７２， １３４．４８， １３５．７１， １３９．６４， １４１．５６， １４６．４９， １５４．６１， １５７．６７．ＨＲＭＳ： ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋，Ｃ３１Ｈ２５Ｆ６Ｎ７Ｏ４についての計算値；６７４．１９４５；実測値：６７４．１９４７
【００６６】
参考文献
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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