(57)【要約】  本発明は、ヒトおよび動物細胞において細胞内カルシウムホメオスタシスおよびＲｙＲ−カルスタビン結合機能を改善するまたは回復させるために有用な式の１，２，３−トリアゾールに関する。：2019520423.tif 000039本発明はまた、前記化合物を合成するための方法、それを含有する医薬組成物、ならびに骨格筋障害、心臓障害および神経系障害を予防または治療するためのその使用に関する。
2019520423.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な立体異性体、塩、溶媒和物もしくは複合体、またはその同位体標識誘導体もしくはプロドラッグ：
【化１】
2019520423.tif 000036
［式中、
Ｒ１は、Ｃ１−４アルキル、Ｃ６−１０アリール、Ｆ、Ｃｌ、ＣＮおよびＮＯ２からなる群から独立に選択される１以上の置換基で置換されていてもよいＣ１−４アルキレンビラジカルであり；
Ｒ２は、Ｃ１−６アルキレンビラジカルであり、ここで、１、２または３個の−ＣＨ２−基は、−Ｏ−および−Ｓ−から選択される基で場合により置き換えることができ；かつ、前記Ｃ１−Ｃ６アルキレンビラジカルは、Ｃ１−４アルキル、アリル、プロパルギル、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシエチル、２−ヒドロキシエチル、３−アミノプロピル、４−アミノブチル、３−グアニジルプロピル、３−インドリルメチル、Ｃ６−１０アリール、ベンジル、４−ヒドロキシベンジル、Ｃ６−１０ヘテロアリール、Ｆ、Ｃｌ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１−４アルキル）、ＣＮ、ＮＯ２、ＣＯ（Ｃ１−４アルキル）、ＣＯ２（Ｃ１−４アルキル）、−ＣＯＮＨ（Ｃ１−４アルキル）および−ＣＯＮ（Ｃ１−４アルキル）２からなる群から独立に選択される１以上の基で場合により置換することができ；
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ６−１０アリール、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒおよびＩからなる群から選択され；
ｍは、０、１、２、３、４から選択され；
ｎは、０、１および２から選択され；
Ｘは、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１−４アルキル）、Ｏ（Ｃ６−１０アリール）、ＯＣＦ３、Ｓ（Ｃ１−４アルキル）、Ｓ（Ｃ６−１０アリール）、Ｃ１−６アルキル、ＣＦ３、ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１−４アルキル）およびハロゲンからなる群から独立に選択されるか；または２個のＸ基がメチレンジオキシ、エチレンジオキシまたはプロピレンジオキシビラジカルを表すことができ；かつ
Ｙは、−ＯＨ、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２（Ｃ１−４アルキル）、−ＣＯ２（アリル）、−ＣＯ２（ベンジル）、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１−４アルキル）、−Ｎ（Ｃ１−４アルキル）２、Ｎ（Ｃ１−４アルキル）３および−Ｎ（ヘテロシクリルまたはヘテロアリール）からなる群から選択され、ここで、前記ヘテロシクリルまたはヘテロアリールは、Ｃ１−４アルキル基で置換されていてもよく、かつ、前記Ｎ原子はヘテロシクリルまたはヘテロアリールの一部である］。
【請求項２】
Ｒ１が−ＣＨ２−である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ２が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、アリル、プロパルギル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシエチル、２−ヒドロキシエチル、３−アミノプロピル、４−アミノブチル、３−グアニジルプロピル、３−インドリルメチル、フェニル、１−ナフチル、２−ナフチル、ベンジル、４−ヒドロキシベンジル、Ｃ６−１０ヘテロアリールからなる群から独立に選択される１または２個の置換基で置換されていてもよいＣ１−４アルキレンビラジカルである、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ２が、メチル、イソプロピル、イソブチルおよびベンジルからなる群から独立に選択される１または２個の置換基で置換されていてもよい−ＣＨ２−または−ＣＨ２−ＣＨ２−ビラジカルである、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ２が、２個のメチル置換基で、もしくはイソプロピル、イソブチルおよびベンジルからなる群から選択される１個の置換基で置換されていてもよい−ＣＨ２−ビラジカル、またはＲ２が−ＣＨ２−ＣＨ２−ビラジカルである、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ２が−ＣＨ２−または−ＣＨ２−ＣＨ２−ビラジカルである、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ３がＨである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
ｍが１である、請求項１〜７いずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
ｎが０である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
ＸがＯ（Ｃ１−４アルキル）またはハロゲンである、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｘがメタ位もしくはパラ位のメトキシ基または塩素である、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｙが、ＣＯ２Ｈ、ＣＯ２Ｍｅ、ＮＨ２、−ＮＨＭｅ、−ＮＭｅ２、−ＮＭｅ３、−ＮＨＥｔ、−ＮＥｔ２、−ＮＥｔ３、
【化２】
2019520423.tif 000037
または前記の基の薬学的に許容可能な塩からなる群から選択される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｙが、ＣＯ２Ｈ、ＣＯ２Ｍｅ、ＮＨ２、−ＮＨＭｅ、−ＮＭｅ２、−ＮＭｅ３、−ＮＨＥｔ、−ＮＥｔ２、−ＮＥｔ３、ピロリジン−１−イル、ピペリジン−１−イル、モルホリン−４−イル、４−ピペラジン−１−イル、４−メチル−ピペラジン−１−イルおよびピリジン−１−イルまたは前記の基の薬学的に許容可能な塩からなる群から選択される、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｙが、ＣＯ２Ｈおよび−ＮＭｅ２からなる群から選択される、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
１−カルボキシメチル−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール、
１−［２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）エチル］−４−［４−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール、
１−カルボキシメチル−４−［４−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール、
（Ｓ）−１−（１−カルボキシ−２−フェニルエチル）−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール、
（Ｒ）−１−（１−カルボキシ−２−フェニルエチル）−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール、
（Ｓ）−１−（１−カルボキシ−３−メチルブチル）−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール、
（Ｒ）−１−（１−カルボキシ−３−メチルブチル）−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール、
（Ｓ）−１−（１−カルボキシ−２−メチルプロピル）−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール、
（Ｒ）−１−（１−カルボキシ−２−メチルプロピル）−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール、
１−（１−カルボキシ−１−メチルエチル）−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール、
１−（２−ヒドロキシエチル）−４−［４−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール、
１−メトキシカルボニルメチル−４−（フェニルスルフィニルメチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール、および
１−カルボキシメチル−４−［３−（メトキシ）フェニルスルホニルメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール、
１−カルボキシメチル−４−［３−（クロロ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール
からなる群から選択される、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物またはその塩。
【請求項１６】
請求項１〜１５のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物と、１以上の薬学的に許容可能な賦形剤またはビヒクルとを含んでなる、医薬組成物。
【請求項１７】
経口投与または非経口投与のための、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
医薬品を製造するための、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項１９】
骨格筋障害および疾患、心臓障害および疾患ならびに神経障害および疾患の治療および／または予防を意図する医薬品を製造するための、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項２０】
前記骨格筋障害および疾患が、筋ジストロフィー、先天性ミオパチー、代謝ミオパチー、筋萎縮およびサルコペニアから選択される、請求項１９に記載の使用。
【請求項２１】
前記骨格筋障害または疾患がデュシェンヌ型筋ジストロフィーまたはベッカー型筋ジストロフィーである、請求項２０に記載の使用。
【請求項２２】
前記心臓障害および疾患が心不全、心虚血、心不整脈および心筋症から選択される、請求項１９に記載の使用。
【請求項２３】
前記神経障害および疾患が脳卒中、アルツハイマー病、前頭側頭骨型認知症および認知機能障害から選択される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２４】
請求項１〜１５のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物を合成するための方法であって、
ａ）場合により銅触媒の存在下、および場合により塩基の存在下で、式（ＩＩ）のアルキンを式（ＩＩＩ）のアジドと反応させて式（Ｉ）の化合物を得ること
【化３】
2019520423.tif 000038
［ここで、
式（ＩＩ）〜（ＩＩＩ）の化合物における基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、ｍ、ｎおよびＸは、請求項１〜１５のいずれか一項に定義される通りであり、かつ、
Ｙは、カルボキシル保護基、ヒドロキシル保護基またはアミノ保護基で保護されていてもよい請求項１〜１５のいずれか一項に定義される基である］；
ｂ）工程ａ）で得られた式（Ｉ）の化合物においてｎが０である場合には、場合により、前記式（Ｉ）の化合物を酸化剤で処理して、式（Ｉ）の化合物（式中、ｎが１または２であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、ｍおよびＸが請求項１〜１５のいずれか一項に記載の通りであり、かつ、Ｙが、カルボキシル保護基、ヒドロキシル保護基またはアミノ保護基で保護されていてもよい請求項１〜１５のいずれ一項に定義される基である）を得ること；および
ｃ）工程ａ）またはｂ）で得られた式（Ｉ）の化合物が保護基で保護されたＹ基を有する場合には、前記保護基を除去して、式（Ｉ）の化合物（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、ｍ、ｎ、ＸおよびＹが請求項１〜１５のいずれか一項に定義される通りである）を得ること
を含んでなる、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒトおよび動物細胞において細胞内カルシウムホメオスタシス機能を改善するまたは回復させるために有用な新規な置換１，２，３−トリアゾールに関する。本発明はまた、前記化合物を合成するための方法、それらを含有する医薬組成物、ならびに骨格筋、心臓および神経変性疾患を予防または治療するためのその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
筋ジストロフィーは、骨格筋の進行性の筋力低下および萎縮を特徴とする不均質な遺伝病である。Ｘ連鎖デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）は、男性３５００人に１人を侵す最も多い形態のものである。そのより良性の対立形質（ベッカー型筋ジストロフィー、ＢＭＤ）の場合と同様に、ＤＭＤおよびＢＭＤは両方とも４２７ｋＤａの細胞骨格タンパク質であるジストロフィンをコードする遺伝子の突然変異により引き起こされる。遺伝学的研究は散在性症例の罹患率が高いために疾患を根絶するには十分でなく、従って、新規の有効な療法の探索が差し迫って必要である。
【０００３】
肢帯型筋ジストロフィー（ＬＧＭＤ）は、主として骨盤および肩帯を含む進行性の近位筋力低下を特徴とする遺伝性筋ジストロフィーの大きなグループである。ＬＧＭＤの劣性型のうち、カルパイノパチーまたはＬＧＭＤ２Ａは最も一般的な形態であり、適正な筋肉機能および再生に必要な非リソソーム系システインプロテアーゼであるカルパイン３（ＣＡＰＮ３）をコードする遺伝子の突然変異により引き起こされる。
【０００４】
１型筋緊張性ジストロフィー（ＤＭ１）は、成人の筋ジストロフィーの最も一般的な形態であり、筋力低下、筋緊張および多臓器関与を特徴とする。ＤＭ１は、主として骨格筋で発現される、１９番染色体の長腕に位置するＤＭＰＫ遺伝子の３’非コード領域に位置するＣＴＧトリプレットリピートの不安定な拡大により引き起こされる優性常染色体遺伝病である。
【０００５】
細胞内カルシウムホメオスタシスの変化は、前述のならびに他の筋ジストロフィー（例えば、とりわけＤＭ２、劣性および優性ＬＧＭＤ、先天性または代謝ミオパチー）に共有されている。筋線維における細胞内Ｃａ２＋濃度の変化が共通の中枢的病原機構に相当するようであるという事実のため、細胞内Ｃａ２＋の変化を防ぐ治療介入の開発が極めて有価な治療標的となる(Vallejo-Illarramendi et al. Expert Rev. Molec. Med. 2014, 16, e16, doi: 10.1017/erm.2014.17 “Dysregulation of calcium homeostasis in muscular dystrophies”)。
【０００６】
高いベースライン細胞内Ｃａ２＋レベルは、カルパインの活性化、タンパク質の分解、ミトコンドリア膜透過性遷移孔（ｍＰＴＰ）の開放、および最終的には壊死による筋線維の死滅をもたらす。細胞内Ｃａ２＋レベルの上昇は、筋線維膜を介するＣａ２＋フラックス、筋小胞体（ＳＲ）からのカルシウム喪失およびＳＲ内の異常なＣａ２＋レベルを含む複雑なプロセスである。デュシェンヌ型筋ジストロフィーの動物モデルであるｍｄｘマウスでは、リアノジン受容体ＲｙＲ１およびＲｙＲ２のシステイン残基の異常なＳ−ニトロシル化がタンパク質複合体からのカルスタビンの解離をもたらし、安静時にカルシウムを喪失する不安定なチャネルを生じる。このニトロシル化は、ジストロフィーｍｄｘマウスの筋肉においてニトロソ化ストレスおよび酸化ストレスを生じる酸化窒素調節不全により引き起こされると思われる(Dudley et al., Am. J. Pathol. 2006, 168, 1276-1284; Bellinger et al., Nat Med. 2009, 15, 325-330; Fauconier et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2010, 107, 1559-1564)。さらに、誘導される、ジストロフィン依存性微小管におけるミクロジストロフィンの発現がイノシトール１，４，５−三リン酸受容体（ＩＰ３Ｒ）依存性カルシウム放出の増加を対照レベルにまで戻し、このことは、ＤＭＤにおけるＣａ２＋ホメオスタシスの変化におけるＩＰ３Ｒの関与を示唆する。
【０００７】
カルパイン３（ＣＡＰＮ３）は、免疫沈降アッセイによって、カルシウムホメオスタシスに関与するタンパク質であるカルセクエストリン（ＣＳＱ）と相互作用することが証明されている。ＣＡＰＮ３ノックアウトマウス（Ｃ３ＫＯ、Ｃａｐｎ３−／−）、ＲｙＲ１レベルの低下には、ＳＲからのＣａ２＋放出の低下が伴う。次に、Ｃａｐｎ３−／−マウスにおけるＳＲからのカルシウム放出後にＳＲへのＣａ２＋の再取り込みがよりゆっくり起こることが見出されているが、この所見の基礎はより深い研究を要する。しかしながら、Ｃａｐｎ３  ｃｓ／ｃｓマウスにおけるＣＡＰＮ３タンパク質分解活性の低下はカルシウムホメオスタシスに影響を及ぼさないことが認められており、このことは、ＣＡＰＮ３の構造的機能がＣａ２＋ホメオスタシスを維持するために重要であることを示す。
【０００８】
筋緊張性ジストロフィーは、興奮−収縮（Ｅ−Ｃ）連関に不可欠な電圧センサであるジヒドロピリジン受容体ＤＨＰＲのα１ＳサブユニットをコードするＣＡＣＮＡ１Ｓ遺伝子の選択的接続の調節不全に関連付けられている。ＤＭ１およびＤＭ２では、より大きなＣＡＣＮＡ１Ｓエキソン２９の脱落があり、これがチャネルコンダクタンスおよび電圧感受性を増大させる。
【０００９】
いくつかの障害および疾患が先天性または後天性ＲｙＲ１タンパク質改変に関連している(Kushmir et al. Recent Pat Biotechnol. 2012, 6, 157-166 “Ryanodine receptor patents”)。前記障害および疾患は、骨格筋、心臓および神経病態を含む。より具体的には、前記障害および疾患には、限定されるものではないが、先天性ミオパチー、筋ジストロフィー、サルコペニア、骨格筋疲労、後天性筋力低下または萎縮、悪性過熱症、運動誘発性心不整脈、鬱血性心不全、肥大型心筋症、アルツハイマー病および加齢性記憶喪失が含まれる。これらの総ての病態に関して、安静状態における細胞内Ｃａ２＋濃度（［Ｃａ２＋］ｉ）の上昇が細胞（筋線維、心筋細胞、ニューロンまたはグリア細胞）の毒性、その悪化およびＣａ２＋依存性プロテアーゼの同時的活性化に直接寄与することが示唆されている。
【００１０】
筋線維には、骨格筋に位置するＲｙＲ１と心筋に位置するＲｙＲ２の、２つのタイプのカルシウムチャネル関連リアノジン受容体が存在する。各カルシウムチャネルはＲｙＲタンパク質四量体により形成され、各ＲｙＲモノマーはカルスタビンタンパク質と相互作用することができる。ＲｙＲ１はＦＫＢＰ１２（カルスタビン１）に結合し、ＲｙＲ２はＦＫＢＰ１２．６（カルスタビン２）に結合する。心臓および骨格筋の両方で、進行性のＲｙＲチャネルのニトロシル化によるカルスタビンとＲｙＲチャネルの異常な解離が筋小胞体から細胞内の細胞質に向けたＣａ２＋放出の増加を招き、収縮中の筋肉性能を低下させ、かつ、長期間筋肉の機能不全を助長することが見出されている(Bellinger et al., Nat. Med. 2009, 15, 325-330; Fauconier et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2010, 107, 1559-1564)。
【００１１】
傷害を受けた筋肉組織において治療活性を示すいくつかの低分子量化合物は、当技術分野の現状において既知である。例えば、心筋壊死および心筋梗塞を予防するための４−［３−（４−ベンジルピペリジニル）−プロパノイル］−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−ベンゾチアゼピン（ＪＴＶ−５１９）の有用性が示されている。１０−６Ｍの濃度で、化合物ＪＴＶ−５１９は、ラット心臓の左室のｉｎ  ｖｉｔｒｏアドレナリンおよびカフェインにより誘発される心筋壊死を左室心拍数または血圧に影響を与えずに阻害する(Kaneko, N. et al. WO92/12148A1 “Preparation of 4-[(4-benzylpiperidinyl)-alkanoyl]-2,3,4,5-tetrahydro-1,4-benzothiazepine derivatives for inhibiting the kinetic cell death of cardiac muscles without inhibiting cardiac functions”)。化合物ＪＴＶ−５１９は、カルスタビン２関連ＲｙＲ２リアノジン受容体（ＦＫＢＰ１２．６）に作用して、ＰＫＡキナーゼによりリン酸化されたＲｙＲ２受容体に対するＦＫＢＰ１２．６の親和性を高め、そうでなければＦＫＢＰ１２．６との親和性が低いかまたはＦＫＢＰ１２．６と結合しない突然変異体ＲｙＲ２受容体に対する親和性も高める。ＪＴＶ−５１９のこの作用は、ＲｙＲ２におけるＣａ２＋イオンの漏出を固定する(Marks, A. R. et al. US2004/229781A1 “Compounds and methods for treating and preventing exercise-induced cardiac arrhythmias”)。
【化１】
2019520423.tif 000003
【００１２】
化合物Ｓ−１０７、または他の構造上関連のあるテトラヒドロベンゾチアゼピンを含有する薬学上活性な組成物もまた、心臓細胞においてカルシウムチャネル機能を調節するＲｙＲ２受容体に関連する障害または疾患を治療または予防するために有効であることが知られている(Marks, A. R. et al. US2006/194767A1 “Benzothiazepines as novel agents for preventing and treating disorders involving modulation of the RyR receptors and their preparation and pharmaceutical compositions”; Mei, Y. et al. PLoS One. 2013, 8: e54208 “Stabilization of the skeletal muscle ryanodine receptor ion channel-FKBP12 complex by the 1,4-benzothiazepine derivative S107”もまた参照)。化合物の同じファミリーはまた、筋肉疲労を軽減し(Marks, A. R. et al. WO2008/060332A2 “Methods using tetrahydrobenzothiazepine compounds for treating or reducing muscle fatigue”)、サルコペニアを治療するための(Marks, A. R. et al. WO2012/019071A1 “Methods and compositions comprising benzazepine derivatives for preventing and treating sarcopenia”)、ＲｙＲ１−カルスタビン１相互作用安定剤として活性があることも知られている。
【００１３】
いくつかのカルベジロール誘導体は、ＲｙＲ２受容体に対する作用を介して細胞内カルシウムホメオスタシスの正常化を助け、それにより心臓療法における有益な効果を提供することが記載されている(Chen, S. et al. US2007/025489A1 “Preparation of carbazoles as ryanodine receptor type 2 (RyR2) antagonists for treatment of cardiac conditions”)。
【００１４】
最後に、リアノジンＲｙＲ３受容体同形体は、脳またはその他の神経組織において細胞内カルシウムホメオスタシスを調節することが知られ、ベンゾチアゼピンを用いたその調整はいくつかのニューロン障害を治療するために特許請求されている(Marks, A. R. et al. WO2012/037105A1 “Methods and compositions comprising benzazepine derivatives for treating or preventing stress-induced neuronal disorders and diseases”)。さらに、ＲｙＲ１およびＲｙＲ２は両方とも脳で発現され、カルシウム調節およびニトロ酸化ストレスが種々の脳障害および神経細胞死に関与しているという証拠がある(Kakizawa et al., EMBO J. 2012, 31, 417-428; Liu X et al., Cell. 2012, 150, 1055-1067)。
【００１５】
これらの先行文献は総て、細胞内カルシウムレベルを調節することによりＲｙＲ受容体を調節または調整することを可能とする化合物の開発が、筋肉障害、ならびに心臓および神経変性疾患の治療に有用な選択肢を与えるであろうことを明らかに示す。
【００１６】
発明の簡単な説明
本発明の著者らは、動物またはヒト細胞においてカルシウム機能を調節するＲｙＲ受容体を調整するために好適な新規なトリアゾール由来化合物、特に、４−［（フェニルチオ）アルキル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾールを開発した。前記化合物は、本発明において「ＡＨＫ」と呼称される。
【００１７】
実験のパートで明確に示されるように、本発明による化合物は、ジストロフィー筋線維において細胞内カルシウムホメオスタシスを調整し、見られていた細胞内カルシウム増加を逆転させる能力を有する。さらに、前記化合物はＲｙＲに対する調整効果を有し、ニトロ酸化ストレスを受けた健常なヒト筋管に対するＲｙＲ１−カルスタビン相互作用を回復させるそれらの能力が示されている。
【００１８】
次に、ｉｎ  ｖｉｖｏアッセイは、前記化合物はさらにジストロフィーマウスにおいて握力を向上させるとともに過剰発現されたジストロフィー遺伝子を正常化し、ジストロフィー組織病理学的マーカーを低減することを可能とすることを明らかに示した。
【００１９】
この目的で、本発明の第１の側面は、式（Ｉ）の１，４−二置換１，２，３−トリアゾール化合物またはその薬学的に許容可能な立体異性体、塩、溶媒和物もしくは複合体、またはその同位体標識誘導体もしくはプロドラッグに関する：
【化２】
2019520423.tif 000004
【００２０】
［式中、
Ｒ１は、Ｃ１−４アルキル、Ｃ６−１０アリール、Ｆ、Ｃｌ、ＣＮおよびＮＯ２からなる群から独立に選択される１以上の置換基で置換されていてもよいＣ１−Ｃ４アルキレンビラジカルであり；
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキレンビラジカルであり、ここで、１、２または３個の−ＣＨ２−基は−Ｏ−および−Ｓ−から選択される基で場合により置き換えることができ；かつ、前記Ｃ１−Ｃ６アルキレンビラジカルは、Ｃ１−４アルキル、アリル、プロパルギル、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシエチル、２−ヒドロキシエチル、３−アミノプロピル、４−アミノブチル、３−グアニジルプロピル、３−インドリルメチル、Ｃ６−１０アリール、ベンジル、４−ヒドロキシベンジル、Ｃ６−１０ヘテロアリール、Ｆ、Ｃｌ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１−４アルキル）、ＣＮ、ＮＯ２、ＣＯ（Ｃ１−４アルキル）、ＣＯ２（Ｃ１−４アルキル）、−ＣＯＮＨ（Ｃ１−４アルキル）、−ＣＯＮ（Ｃ１−４アルキル）２から独立に選択される１以上の基で場合により置換することができ；
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ６−１０アリール、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉから独立に選択される基であり；
ｍは、０、１、２、３、４から選択され；
ｎは、０、１、２から選択され；
Ｘは、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１−４アルキル）、Ｏ（Ｃ６−１０アリール）、ＯＣＦ３、Ｓ（Ｃ１−４アルキル）、Ｓ（Ｃ６−１０アリール）、Ｃ１−６アルキル、ＣＦ３、ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１−４アルキル）およびハロゲンからなる群から独立に選択されるか；または２個のＸ基はメチレンジオキシ、エチレンジオキシまたはプロピレンジオキシビラジカルを表すことができ；かつ
Ｙは、−ＯＨ、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２（Ｃ１−４アルキル）、−ＣＯ２（アリル）、−ＣＯ２（ベンジル）、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１−４アルキル）、−Ｎ（Ｃ１−４アルキル）２、Ｎ（Ｃ１−４アルキル）３および−Ｎ（ヘテロシクリルまたはヘテロアリール）からなる群から選択され、ここで、前記ヘテロシクリルまたはヘテロアリールは、Ｃ１−４アルキル基で置換されていてもよく、かつ、前記Ｎ原子は前記ヘテロシクリルまたはヘテロアリールの一部である］。
【００２１】
本発明の別の側面は、式（Ｉ）の化合物を合成するための方法であって、
ａ）場合により銅触媒の存在下、および場合により塩基の存在下で、式（ＩＩ）のアルキンを式（ＩＩＩ）のアジドと反応させて式（Ｉ）の化合物を得ること
【化３】
2019520423.tif 000005
【００２２】
［ここで、
式（ＩＩ）〜（ＩＩＩ）の化合物における基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、ｍ、ｎおよびＸは、上記項に定義された通りであり、かつ、
Ｙは、場合によりカルボキシル保護基、ヒドロキシル保護基またはアミノ保護基で保護された上記に定義される基である］；
ｂ）工程ａ）で得られた式（Ｉ）の化合物においてｎが０である場合には、場合により、前記式（Ｉ）の化合物を酸化剤で処理して、式（Ｉ）の化合物（ｎが１または２であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、ｍおよびＸが上記に定義される通りであり、かつ、Ｙが、カルボキシル保護基、ヒドロキシル保護基またはアミノ保護基で保護された上記に記載されていてもよい上記に定義された基である）を得ること；および
ｃ）工程ａ）またはｂ）で得られた式（Ｉ）の化合物が保護基で保護されたＹ基を有する場合には、前記保護基を除去して、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、ｍ、ｎ、ＸおよびＹが上記に記載の通りである式（Ｉ）の化合物を得ること
を含んでなる方法を含んでなる。
【００２３】
本発明の別の側面は、上記で示すように定義される式（Ｉ）の化合物を１以上の薬学的に許容可能な賦形剤またはビヒクルとともに含有する医薬組成物に関する。
【００２４】
本発明のさらなる側面は、医薬品を製造するための上記で定義される式（Ｉ）の化合物の使用に関する。
【００２５】
本発明の最後の側面は、細胞内カルシウム濃度調節不全またはＲｙＲ受容体機能不全関連障害または疾患、特に、骨格筋障害または疾患、心臓障害または疾患および神経系障害または疾患の治療および／または予防のための医薬品の製造における上記で定義される式（Ｉ）の化合物の使用に関する。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】図１は、ＣｙｔｏＴｏｘ  ９６比色定量アッセイを用いた、２４時間のインキュベーション後のヒト筋管に対する化合物ＡＨＫ１、ＡＨＫ２およびＳ−１０７の毒性を示す毒性曲線を示す。
【図２】図２は、安静時のマウス筋線維における細胞内カルシウムレベルに対する化合物ＡＨＫ１およびＡＨＫ２のｉｎ  ｖｉｔｒｏ効果を示す。Ａ）特徴的な線条パターン(striation pattern)を示す短指屈筋から単離された線維の画像。Ｂ）細胞内カルシウムレベルを測定するために必要とされるバックグラウンド補正を行った後のｆｕｒａ−２ＡＭを負荷した線維［対照線維（ＣＴＲＬ）およびジストロフィー線維（ＭＤＸ）］の代表的画像。Ｃ）種々の線維群のベースライン細胞内カルシウムレベルを示すヒストグラム。分析した線維の数（ｎ）をヒストグラムに示す（クラスカル・ウォリスおよびＵマン・ホイットニー、＊ｐ＜０．０５）。
【図３】図３は、ペルオキシ亜硝酸ストレスに曝した健常なヒト筋管培養物におけるＲｙＲ１−カルスタビン１相互作用に対する化合物ＡＨＫ１およびＡＨＫ２のｉｎ  ｖｉｔｒｏ効果を示す。
【図４】図４は、化合物ＡＨＫ１およびＡＨＫ２で処置したジストロフィーｍｄｘマウスの握力に対する効果を示す。＊ｐ＜０．０５；ｎ＝１０対照マウス（ＣＴＲＬ）；ｎ＝１１未処置ｍｄｘマウス（ＭＤＸ）；ｎ＝１０  ＡＨＫ１で処置したｍｄｘマウス（ＭＤＸ＋ＡＨＫ１）；およびｎ＝６  ＡＨＫ２で処置したｍｄｘマウス（ＭＤＸ＋ＡＨＫ２）。
【図５】図５は、ジストロフィーｍｄｘマウスにおける筋肉変性／再生に対する化合物ＡＨＫ１およびＡＨＫ２のｉｎ  ｖｉｖｏ効果を示す。Ａ）対照およびジストロフィーマウス横隔膜の代表的クリオスタット切片、ここでは、蛍光抗体で標識したコラーゲンＩＶおよび４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）で標識した核が観察される。Ｂ）ＡＨＫ１（ＭＤＸ＋ＡＨＫ１）およびＡＨＫ２（ＭＤＸ＋ＡＨＫ２）で処置した対照マウス（ＣＴＲＬ）、ジストロフィーマウス（ＭＤＸ）およびジストロフィーマウスの切片で得られた中央核の数。＊ｐ＜０．０５；ｎ＝３  ＣＴＲＬ；ｎ＝７  ＭＤＸ  ＮＤ；ｎ＝７  ＭＤＸ＋ＡＨＫ１およびｎ＝４  ＭＤＸ＋ＡＨＫ２）。
【図６】図６は、ｍｄｘマウスの前脛骨筋の遺伝子発現パターンに対するＡＨＫ１処置の効果を示す。
【図７】図７は、ジストロフィーｍｄｘマウスにおける異常なＣＮＳ機能に対する化合物ＡＨＫ２のｉｎ  ｖｉｖｏ効果を示す。Ａ）１５秒短時間無動にした後、ＡＨＫ２（ｍｄｘ  ＡＨＫ２）で処置した対照マウス（Ｃｔｌ）、ｍｄｘマウス（ｍｄｘ）およびｍｄｘマウスの１分の軌跡；Ｂ）マウスが１分間すくみ反応を起こす時間の百分率として表される、急性ストレス後の再燃した防御応答。（グレーのバー）：９０％無動感度を有する少なくとも１秒の持続性無動；（黒いバー）：非無動動物におけるすくみ反応時間の割合。＊Ｐ＜０．０５（対応のないｔ検定）；＃ｐ＜０．０５（対応のあるｔ検定）；ｎｓ、有意でない；１群当たりｎ≧５マウス、誤差±ＳＥＭバー。
【図８】図８は、ｍｄｘマウスにおけるイソプロテレノール誘発性心筋症に対する化合物ＡＨＫ２のｉｎ  ｖｉｖｏ効果を示す。上のパネル：対照マウスＢＬ１０（Ｃｔｌ）、ｍｄｘマウス（ｍｄｘ）およびＡＨＫ２で処置したｍｄｘマウス（ｍｄｘ  ＡＨＫ２）の心臓切片の代表的画像。較正バー、１ｍｍ。エバンスブルー取り込みが蛍光顕微鏡の手段により見られる。下のグラフ：対照マウス（Ｃｔｌ）、ｍｄｘマウス（ｍｄｘ）およびＡＨＫ２で処置したｍｄｘマウス（ｍｄｘ  ＡＨＫ２）の心臓における損傷面積の百分率。１群当たりＮ＝２マウスを分析した；誤差±ＳＥＭバー。
【００２７】
発明の詳細な説明
本発明は、細胞内カルシウム調節不全またはＲｙＲ受容体機能不全に関連する障害または疾患を治療または予防することができる新規なトリアゾール化合物を提供する。
【００２８】
この意味で、前述のように、本発明の第１の側面は、式（Ｉ）の化合物：
【化４】
2019520423.tif 000006
【００２９】
［式中、
Ｒ１は、Ｃ１−４アルキル、Ｃ６−１０アリール、Ｆ、Ｃｌ、ＣＮおよびＮＯ２からなる群から独立に選択される１以上の置換基で置換されていてもよいＣ１−Ｃ４アルキレンビラジカルであり；
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキレンビラジカルであり、ここで、１、２または３個の−ＣＨ２−基は、−Ｏ−および−Ｓ−から選択される基で場合により置き換えることができ；かつ、前記Ｃ１−Ｃ６アルキレンビラジカルは、Ｃ１−４アルキル、アリル、プロパルギル、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシエチル、２−ヒドロキシエチル、３−アミノプロピル、４−アミノブチル、３−グアニジルプロピル、３−インドリルメチル、Ｃ６−１０アリール、ベンジル、４−ヒドロキシベンジル、Ｃ６−１０ヘテロアリール、Ｆ、Ｃｌ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１−４アルキル）、ＣＮ、ＮＯ２、ＣＯ（Ｃ１−４アルキル）、ＣＯ２（Ｃ１−４アルキル）、−ＣＯＮＨ（Ｃ１−４アルキル）、−ＣＯＮ（Ｃ１−４アルキル）２から独立に選択される１以上の基で場合により置換することができ；
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ６−１０アリール、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉから独立に選択される基であり；
ｍは、０、１、２、３、４から選択され；
ｎは、０、１、２から選択され；
Ｘは、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１−４アルキル）、Ｏ（Ｃ６−１０アリール）、ＯＣＦ３、Ｓ（Ｃ１−４アルキル）、Ｓ（Ｃ６−１０アリール）、Ｃ１−６アルキル、ＣＦ３、ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１−４アルキル）およびハロゲンからなる群から独立に選択されるか；または２個のＸ基はメチレンジオキシ、エチレンジオキシまたはプロピレンジオキシビラジカルを表すことができ；かつ
Ｙは、−ＯＨ、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２（Ｃ１−４アルキル）、−ＣＯ２（アリル）、−ＣＯ２（ベンジル）、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１−４アルキル）、−Ｎ（Ｃ１−４アルキル）２およびＮ（Ｃ１−４アルキル）３および−Ｎ（ヘテロシクリルまたはヘテロアリール）からなる群から選択され、ここで、前記ヘテロシクリルまたはヘテロアリールは、Ｃ１−４アルキル基で置換されていてもよく、かつ、Ｎ原子は前記ヘテロシクリルまたはヘテロアリールの一部である］
またはその薬学的に許容可能な立体異性体、塩、溶媒和物もしくは複合体、またはその同位体標識誘導体、またはそのプロドラッグに関する。
【００３０】
本発明に関して、式（Ｉ）の化合物において見られる次の用語は以下に示される意味を有する：
用語「アルキレンビラジカル」は、炭素および水素原子からなり、不飽和を持たず、その末端で分子の残りの部分と一重結合を介して結合した直鎖または分岐炭化水素鎖により形成されたビラジカル、例えば、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレンなどを指す。Ｃ１−Ｃ４アルキレンビラジカルという場合には、１〜４個の炭素原子を有する前記ビラジカルを指し、一方、Ｃ１−Ｃ６アルキレンビラジカルという場合には、１〜６個の炭素原子を有する前記ビラジカルを指す。アルキレンビラジカルは、式（Ｉ）の化合物においてＲ１およびＲ２置換基の定義で明示されるように置換することができる。
【００３１】
用語「アルキル」は、炭素および水素原子からなる直鎖または分岐炭化水素鎖により形成されるラジカル（radical）を指し、これは飽和を含まず、一重結合の手段により分子の残りの部分と結合しており、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチルなどである。Ｃ１−Ｃ４アルキルという場合には、１〜４個の炭素原子を有する前記ラジカルを指す。
【００３２】
用語「Ｃ６−Ｃ１０アリール」は、炭素および水素原子、好ましくは、フェニルラジカルからなる６〜１０員芳香環により形成されるラジカルを指す。
【００３３】
用語「Ｃ６−Ｃ１０ヘテロアリール」は、炭素および水素原子とＯ、ＮおよびＳから選択される１以上のヘテロ原子とからなる６〜１０員芳香環により形成されるラジカルを指す。
【００３４】
用語「−Ｎ（ヘテロシクリル）」は、炭素および水素原子とＯ、ＮおよびＳから選択される１以上のヘテロ原子とからなり、それらのうち少なくとも１つはＮであり、かつ、それらはＲ２ラジカルに直接結合している５〜７員環により形成されるラジカルを指す。
【００３５】
用語「−Ｎ（ヘテロアリール）」は、炭素および水素原子とＯ、ＮおよびＳから選択される１以上のヘテロ原子とからなり、それらのうち少なくとも１つがＮであり、かつ、それらはＲ２ラジカルに直接結合している６〜１０員芳香環により形成されるラジカルを指す。
【００３６】
用語「アリル」は、式−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２のラジカルを指す。
【００３７】
用語「ハロゲン」は、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩを指す。
【００３８】
語句「同位体標識誘導体」は、その原子の少なくとも１つが同位体的に富化されている式（Ｉ）の化合物を指す。例えば、水素が重水素またはトリチウムで置き換えられた、炭素が１３Ｃまたは１４Ｃ富化原子で置き換えられた、または窒素が１５Ｎ富化原子で置き換えられた式（Ｉ）の化合物が本発明の範囲内にある。
【００３９】
用語「薬学的に許容可能な塩または溶媒和物」は、レシピエントに投与された際に、本明細書に記載されるような式（Ｉ）の化合物を（調節的または間接的に）提供することができる、いずれの薬学的に許容可能な塩、エステル、溶媒和物、またはいずれの他の化合物も指す。塩は、当技術分野の現状において既知の方法の手段によって製造することができる。
【００４０】
例えば、本明細書に提供される化合物の薬学的に許容可能な塩は、従前に記載された塩基性または酸性単位含有化合物から従来の化学法の手段によって合成される。このような塩は一般に、例えば、水または有機溶媒または両方の混合物中で、これらの化合物の遊離酸または塩基形態を化学量論量の好適な塩基または酸と反応させることによって製造される。エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノールまたはアセトニトリルなどの非水性媒体が一般に好ましい。酸付加塩の例としては、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩などの無機酸付加塩、ならびに例えば、酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、クエン酸塩、シュウ酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、リンゴ酸塩、マンデル酸塩、メタンスルホン酸塩およびｐ−トルエンスルホン酸塩などの有機酸付加塩が含まれる。アルカリ付加塩の例としては、例えば、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、マグネシウム、アルミニウムおよびリチウムなどの無機塩、例えば、エチレンジアミン、エタノールアミン、Ｎ，Ｎ−ジアルキレンエタノールアミン、グルカミンおよび塩基性アミノ酸塩などの有機アルカリ塩が含まれる。
【００４１】
溶媒和物は、薬学上好適な溶媒の分子が結晶格子に組み込まれている式（Ｉ）の化合物の塩を指す。溶媒和法は一般に当技術分野の現状において既知である。薬学上好適な溶媒の例は、エタノール、水などである。特定の実施形態では、溶媒和物は水和物である。
【００４２】
式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物は、好ましくは、薬学的に許容可能な形態または実質的に純粋な形態である。薬学的に許容可能な形態は、とりわけ、希釈剤および賦形剤などの通常の製薬添加剤を除いて薬学的に許容可能なレベルの純度を有し、かつ、通常の用量レベルで有毒と考えられるいずれの材料も含まないものと理解される。薬物の純度レベルは、好ましくは５０％を上回り、より好ましくは７０％を上回り、いっそうより好ましくは９０％を上回る。好ましい実施形態では、それは式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物の９５％を上回る。
【００４３】
上記の式（Ｉ）により表される本発明の化合物は、鏡像異性体およびジアステレオ異性体を含め、キラル中心の存在に依存するいずれの立体異性体も含み得る。個々の異性体、鏡像異性体またはジアステレオマーおよびそれらの混合物は本発明の範囲内にある。
【００４４】
用語「プロドラッグ」は、その最も広い意味で用いられ、ｉｎ  ｖｉｖｏで本発明の化合物に変換される誘導体を含んでなる。このような誘導体には、分子中に存在する官能基に応じて、限定されるものではないが、エステル、アミノ酸エステル、リン酸エステル、金属塩スルホン酸エステル、カルバミン酸塩およびアミドが含まれる。所与の活性化合物のプロドラッグを生産するための方法の例は当業者に公知であり、例えば、Krogsgaard-Larsen et al. “Textbook of Drug Design and Discovery” Taylor & Francis (April 2002)に見出すことができる。
【００４５】
本発明の１つのバリアント（Ａ）において、Ｒ１ラジカルは−ＣＨ２−である。
【００４６】
前記バリアント（Ａ）の好ましい実施形態では、Ｒ２は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、アリル、プロパルギル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシエチル、２−ヒドロキシエチル、３−アミノプロピル、４−アミノブチル、３−グアニジルプロピル、３−インドリルメチル、フェニル、１−ナフチル、２−ナフチル、ベンジル、４−ヒドロキシベンジル、およびＣ６−１０ヘテロアリールからなる群から独立に選択される１または２個の置換基で置換されていてもよいＣ１−４アルキレンビラジカルである。
【００４７】
より好ましくは、Ｒ２は、メチル、イソプロピル、イソブチルおよびベンジルからなる群から独立に選択される１または２個の置換基で置換されていてもよい−ＣＨ２−または−ＣＨ２−ＣＨ２−ビラジカルである。さらにより好ましくは、Ｒ２は、２個のメチル置換基で、もしくはイソプロピル、イソブチルおよびベンジルからなる群から選択される１個の置換基で置換されていてもよい−ＣＨ２−ビラジカルであるか、またはＲ２は、−ＣＨ２−ＣＨ２−ビラジカルである。また好ましくは、Ｒ２は−ＣＨ２−または−ＣＨ２−ＣＨ２−ビラジカルである。
【００４８】
前記バリアント（Ａ）の別の好ましい実施形態では、Ｒ３はＨである。
【００４９】
前記バリアント（Ａ）の別の好ましい実施形態では、ｍは１である。
【００５０】
前記バリアント（Ａ）の別の好ましい実施形態では、ｎは０である。
【００５１】
前記バリアント（Ａ）の別の好ましい実施形態では、Ｘは、−Ｏ（Ｃ１−４アルキル）またはハロゲン、より好ましくは、メタもしくはパラ位のメトキシ基または塩素である。
【００５２】
前記バリアント（Ａ）の別の好ましい実施形態では、Ｙは、ＣＯ２Ｈ、ＣＯ２Ｍｅ、ＮＨ２、−ＮＨＭｅ、−ＮＭｅ２、−ＮＭｅ３、−ＮＨＥｔ、−ＮＥｔ２、−ＮＥｔ３、
【化５】
2019520423.tif 000007
または前記の基の薬学的に許容可能な塩からなる群から選択される。
【００５３】
より好ましくは、Ｙは、ＣＯ２Ｈ、ＣＯ２Ｍｅ、ＮＨ２、−ＮＨＭｅ、−ＮＭｅ２、−ＮＭｅ３、−ＮＨＥｔ、−ＮＥｔ２、−ＮＥｔ３、ピロリジン−１−イル、ピペリジン−１−イル、モルホリン−４−イル、４−ピペラジン−１−イル、４−メチル−ピペラジン−１−イル、ピリジン−１−イル、より好ましくはＣＯ２Ｈおよび−ＮＭｅ２からなる群から選択され、一層より好ましくは、Ｙは−ＣＯ２Ｈまたはその薬学的に許容可能な塩である。
【００５４】
バリアント（Ａ）内で、式（Ｉ）の化合物は、
１−カルボキシメチル−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール、
１−［２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）エチル］−４−［４−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール、
１−カルボキシメチル−４−［４−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール、
（Ｓ）−１−（１−カルボキシ−２−フェニルエチル）−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール、
（Ｒ）−１−（１−カルボキシ−２−フェニルエチル）−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール、
（Ｓ）−１−（１−カルボキシ−３−メチルブチル）−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール、
（Ｒ）−１−（１−カルボキシ−３−メチルブチル）−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール、
（Ｓ）−１−（１−カルボキシ−２−メチルプロピル）−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール、
（Ｒ）−１−（１−カルボキシ−２−メチルプロピル）−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール、
１−（１−カルボキシ−１−メチルエチル）−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール、
１−（２−ヒドロキシエチル）−４−［４−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール、
１−メトキシカルボニルメチル−４−（フェニルスルフィニルメチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール、および
１−カルボキシメチル−４−［３−（メトキシ）フェニルスルホニルメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール、
１−カルボキシメチル−４−［３−（クロロ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール、
またはそれらの塩からなる群から選択される。
【００５５】
本発明のバリアント（Ｂ）では、Ｒ１ラジカルは−ＣＨ２−である。
【００５６】
前記バリアント（Ｂ）の好ましい実施形態では、Ｒ２は、１または２個の−ＣＨ２−基が−Ｏ−で置き換えられたＣ１−４アルキレンビラジカルであり、ここで、前記Ｃ１−Ｃ４アルキレンビラジカルは、１または２個のＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよく、好ましくは、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチルおよびｔｅｒｔ−ブチルから選択される。
【００５７】
より好ましくは、Ｒ２は、メチル、イソプロピルおよびイソブチルからなる群から独立に選択される１または２個の置換基で置換されていてもよい−ＣＨ２−または−ＣＨ２−ＣＨ２−ビラジカルである。さらにより好ましくは、Ｒ２は、２個のメチル置換基で、もしくはイソプロピルおよびイソブチルからなる群から選択される１個の置換基で置換されていてもよい−ＣＨ２−ビラジカルであるか、またはＲ２は−ＣＨ２−ＣＨ２−ビラジカルである。
【００５８】
前記バリアント（Ｂ）の別の好ましい実施形態では、Ｒ３はＨである。
【００５９】
前記バリアント（Ｂ）の別の好ましい実施形態では、ｍは１である。
【００６０】
前記バリアント（Ｂ）の別の好ましい実施形態では、ｎは０である。
【００６１】
前記バリアント（Ｂ）の別の好ましい実施形態では、Ｘは、−Ｏ（Ｃ１−４アルキル）またはハロゲン、より好ましくはメタ位もしくはパラ位のメトキシ基または塩素である。
【００６２】
前記バリアント（Ｂ）の別の好ましい実施形態では、Ｙは、ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）、−Ｎ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）２、−Ｎ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）３、
【化６】
2019520423.tif 000008
からなる群から選択される。
【００６３】
より好ましくは、Ｙは、−ＮＨ２、−ＮＨＭｅ、−ＮＭｅ２、−ＮＭｅ３、−ＮＨＥｔ、−ＮＥｔ２、−ＮＥｔ３、ピロリジン−１−イル、ピペリジン−１−イル、モルホリン−４−イル、４−ピペラジン−１−イル、４−メチル−ピペラジン−１−イル、ピリジン−１−イルまたは前記の基の薬学的に許容可能な塩から選択される。より好ましくは、Ｙは、−ＮＭｅ２、またはその薬学的に許容可能な塩である。
【００６４】
本発明のバリアント（Ｃ）では、Ｒ１ラジカルは−ＣＨ２−である。
【００６５】
前記バリアント（Ｃ）の好ましい実施形態では、Ｒ２は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、アリル、プロパルギル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシエチル、２−ヒドロキシエチル、３−アミノプロピル、４−アミノブチル、３−グアニジルプロピル、３−インドリルメチル、フェニル、１−ナフチル、２−ナフチル、ベンジル、４−ヒドロキシベンジル、およびＣ６−１０ヘテロアリールからなる群から独立に選択される１または２個の置換基で置換されていてもよいＣ１−４アルキレンビラジカルである。
【００６６】
より好ましくは、Ｒ２は、メチル、イソプロピル、イソブチルおよびベンジルからなる群から独立に選択される１または２個の置換基で置換されていてもよい−ＣＨ２−または−ＣＨ２−ＣＨ２−ビラジカルである。一層より好ましくは、Ｒ２は、２個のメチル置換基で、もしくはイソプロピル、イソブチルおよびベンジルからなる群から選択される１個の置換基で置換されていてもよい−ＣＨ２−ビラジカルであるか、またはＲ２は−ＣＨ２−ＣＨ２−ビラジカルである。また好ましくは、Ｒ２は−ＣＨ２−または−ＣＨ２−ＣＨ２−ビラジカルである。
【００６７】
前記バリアント（Ｃ）の別の好ましい実施形態では、Ｒ３はＨである。
【００６８】
前記バリアント（Ｃ）の別の好ましい実施形態では、ｍは１である。
【００６９】
前記バリアント（Ｃ）の別の好ましい実施形態では、ｎは０である。
【００７０】
前記バリアント（Ｃ）の別の好ましい実施形態では、Ｘは、−Ｏ（Ｃ１−４アルキル）またはハロゲン、より好ましくはメタ位もしくはパラ位のメトキシ基または塩素である。
【００７１】
前記バリアント（Ｃ）の別の好ましい実施形態では、Ｙは、ＣＯ２Ｈ、ＣＯ２（Ｃ１−Ｃ４アルキル）、ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）、−Ｎ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）２、−Ｎ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）３、
【化７】
2019520423.tif 000009
または前記の基の薬学的に許容可能な塩からなる群から選択される。
【００７２】
より好ましくは、Ｙは、−ＮＨ２、−ＮＨＭｅ、−ＮＭｅ２、−ＮＭｅ３、−ＮＨＥｔ、−ＮＥｔ２、−ＮＥｔ３、ピロリジン−１−イル、ピペリジン−１−イル、モルホリン−４−イル、４−ピペラジン−１−イル、４−メチル−ピペラジン−１−イル、ピリジン−１−イルまたは前記の基の薬学的に許容可能な塩から選択される。
【００７３】
より好ましくは、Ｙは、ＣＯ２Ｈおよび−ＮＭｅ２またはその薬学的に許容可能な塩からなる群から選択される。
【００７４】
本発明の化合物を得るための方法
本発明の式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩ）のアルキンと式（ＩＩＩ）のアジド：
【化８】
2019520423.tif 000010
［ここで、式（ＩＩ）〜（ＩＩＩ）の化合物におけるＲ１、Ｒ２、Ｒ３、ｍ、ｎおよびＸは、式（Ｉ）の化合物に関して定義される通りであり、かつ、Ｙは、前記Ｙ基の性質に応じてカルボキシル保護基、ヒドロキシル保護基またはアミノ保護基で保護されていてもよい式（Ｉ）の化合物に関して定義される基である］
を反応させることを含んでなる方法の手段によって製造することができる。
【００７５】
この反応は、例えば、硫酸銅（ＩＩ）／アスコルビン酸ナトリウム、ヨウ化銅（Ｉ）または酢酸銅（Ｉ）などの銅触媒の存在下で行うことができる。
【００７６】
さらに、好ましい実施形態では、式（ＩＩ）の化合物と式（ＩＩＩ）の化合物との反応は、例えば、酢酸ナトリウム、ジイソプロピルアミンまたはトリエチルアミンなどの塩基の存在下で行われる。
【００７７】
特定の実施形態では、ｎが０である場合には、前記方法に従って得られた式（Ｉ）の化合物を酸化剤で処置して、ｎが１または２である式（Ｉ）の化合物を得ることができる。
【００７８】
酸化剤の例としては、例えば、３−クロロ過安息香酸またはｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシドが含まれる。
【００７９】
別の特定の実施形態では、前記方法に従って得られた式（Ｉ）の化合物が、保護基で保護されたＹ基を有する場合には、前記保護基を除去して、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、ｍ、ｎ、ＸおよびＹが式（Ｉ）の化合物に関して定義される通りである式（Ｉ）の化合物が得られる。保護基は、有機合成の熟練者に一般に知られている方法に従って除去することができる。
【００８０】
医薬組成物
本発明はさらに、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容可能な立体異性体、塩、溶媒和物もしくは複合体、またはその同位体標識誘導体、またはそのプロドラッグと、１以上の薬学的に許容可能な賦形剤またはビヒクルとを含んでなる医薬組成物を提供する。
【００８１】
薬学的に許容可能なビヒクルは、組成物の他の成分と適合し、かつ、その受容者に有害でないという意味で許容可能でなければならない。前記薬学的に許容可能なビヒクルは、医薬処方物において使用され、鎮痛剤、ｐＨ調節剤、配位子、崩壊剤、希釈剤、乳化剤、増量剤、流動促進剤、可溶化剤、安定剤、懸濁剤、等張化剤および増粘剤として組み込まれる有機および無機材料から選択することができる。酸化防止剤、芳香剤、色素、芳香増強剤、保存剤および甘味剤などの製薬添加剤をさらに添加することができる。
【００８２】
薬学的に許容可能なビヒクルの例としては、とりわけ、カルボキシメチルセルロース、結晶性セルロース、グリセリン、アラビアガム、ラクトース、ステアリン酸マグネシウム、メチルセルロース、生理食塩水、アルギン酸ナトリウム、スクロース、デンプン、タルクおよび水が含まれる。
【００８３】
本発明の医薬処方物は、薬学分野で周知の方法によって製造される。例えば、式（Ｉ）の化合物を、薬学的に許容可能な賦形剤またはビヒクルと、懸濁液または溶液として混合する。ビヒクルの選択は、化合物の溶解度および化学的性質、選択される投与経路および標準的な製薬実務によって決定される。
【００８４】
本発明の化合物または組成物は、限定されるものではないが、経口投与、舌下または口内投与、非経口投与、経皮吸収、鼻腔滴下または吸入、膣、直腸のおよび筋肉内投与を含むいずれかの既知の方法の手段によってヒトまたは動物対象に投与することができる。
【００８５】
特定の実施形態では、投与は、例えば、皮下注射、筋肉内注射、腹腔内注射、静脈内注射の手段によるなど、非経口的に行われる。非経口投与では、本発明の化合物は、対象の血液と等張な無菌水溶液と合わせる。この種の処方物は、塩化ナトリウム、グリシンなどの生理学的に適合する物質を含有し、かつ、生理学的条件に適合する緩衝ｐＨを有する水に固体有効成分を溶解することによって製造される。前記処方物は、密閉バイアルまたはアンプルなどの単用量または多用量容器で提供される。
【００８６】
別の特定の実施形態では、投与は経口適に行われる。この場合、本発明の化合物の処方物は、カプセル剤、錠剤、散剤、顆粒剤の形態で、または懸濁液もしくは溶液として提供される。前記処方物は、ラクトース、マンニトール、デンプンなどの従来の添加剤；結晶性セルロース、セルロース誘導体、アラビアガム、トウモロコシデンプンまたはゼラチンなどの結合剤；トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプンまたはカルボキシメチルセルロースナトリウムなどの崩壊剤；タルクまたはステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤を含むことができる。
【００８７】
適用
本発明の化合物は、動物またはヒト細胞においてカルシウム機能を調節するＲｙＲ受容体を調整するために好適であり、従って、本発明の化合物は、基本的にＲｙＲ受容体機能不全により引き起こされる細胞内カルシウム調節不全に関連する障害または疾患を治療または予防することができる。
【００８８】
「細胞内カルシウム調節不全」は、細胞におけるカルシウムレベルおよびカルシウムフラックスの異常な調節として理解されなければならない。
【００８９】
従って、安静条件下での細胞内カルシウム（Ｃａ２＋）濃度の上昇は、毒性筋細胞（筋線維）に対する損傷とそれと同時にカルパインなどのＣａ２＋依存性プロテアーゼの活性化をもたらす。カルパイン活性がｍｄｘマウスの壊死性筋線維で増すこと、およびカルパイン機能不全が肢帯筋ジストロフィーをもたらすことを考えれば、細胞内Ｃａ２＋増加を阻害することによってカルシウム依存性プロテアーゼの活性を妨げると、筋萎縮を予防し、従って、デュシェンヌ型筋ジストロフィーまたはベッカー型筋ジストロフィーなどの疾患を治療することができる。
【００９０】
本発明の化合物を用いて行われたｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイでは、筋線維においてそれらの化合物の、細胞内カルシウム増加を復帰させる能力が示されており、これらの化合物がＲｙＲチャネル調整を含む機構を介してこの復帰を行うことを示唆する。さらに、前記化合物はまた、ジストロフィーｍｄｘ筋肉において過剰発現された遺伝子の数を半分に減らす能力も示しており、前記遺伝子の１つは骨格筋の喪失または萎縮に関連している。
【００９１】
細胞内カルシウム機能を調節するＲｙＲ受容体としては、ＲｙＲ１、ＲｙＲ２およびＲｙＲ３、ならびにＲｙＲタンパク質またはＲｙＲ類似体が含まれる。ＲｙＲ類似体は、ＲｙＲタンパク質とアミノ酸配列において６０％以上の相同性を有する生物活性を持つＲｙＲタンパク質の機能的変異体を指す。
【００９２】
本発明に関して、「ＲｙＲ生物活性」は、本明細書に記載のアッセイ条件下で、それ自体と物理的に会合するか、またはＲｙＲ１およびＲｙＲ３の場合にはＦＫＢＰ１２（カルスタビン−１）と、またＲｙＲ２の場合にはＦＫＢＰ１２．６（カルスタビン−２）と結合する能力を示すタンパク質またはペプチドの活性として理解されなければならない。
【００９３】
本発明の化合物は、対象の細胞におけるＲｙＲと結合したＦＫＢＰ（カルスタビン）のレベルの低下を制限または防止するために使用することができる。前段に記載されていることに基づけば、ＲｙＲが結合したＦＫＢＰは、ＲｙＲ１が結合したＦＫＢＰ１２（カルスタビン−１）、ＲｙＲ２が結合したＦＫＢＰ１２．６（カルスタビン−２）およびＲｙＲ３が結合したＦＫＢＰ１２（カルスタビン−１）を指す。
【００９４】
対象の細胞におけるＲｙＲが結合したＦＫＢＰのレベルの低下は、対象の細胞におけるＲｙＲが結合したＦＫＢＰのレベルが、そうではなくそれが投与化合物の不在下にあった場合よりも大きいように、本発明の化合物を投与する手段によって、前記の低下が何らかの方法で停止、遮断、妨害、障害または低減される場合に制限または防止される。
【００９５】
対象におけるＲｙＲが結合したＦＫＢＰレベルは、本明細書の実験のパートに開示されているもののような免疫学的技術、ハイブリダイゼーション分析、免疫沈降、ウエスタンブロット解析、蛍光イメージングおよび／または放射線検出技術、ならびにその他のアッセイまたは技術などの、当業者に知られている標準的アッセイまたは技術を用いて検出される。
【００９６】
特定の実施形態では、ＲｙＲが結合したＦＫＢＰ（カルスタビン）のレベルの低下は、対象由来の細胞がニトロ酸化ストレスを受けた結果として生じる。実際に、本発明の化合物を用いて行った実験アッセイは、ＲｙＲ１−カルスタビン１相互作用親和性の増強を介して、健常なヒト筋管に対するニトロ酸化ストレスの変性作用の最小化を可能とすることを明らかに示した。
【００９７】
よって、本発明の化合物は、ＲｙＲ受容体調整または細胞内カルシウム増加を含む障害または病態を予防し、それによりそのレベルの調節を可能とすることが実証された。前記障害または病態の例としては、骨格筋障害および疾患（ＲｙＲ１調整に関連する）、心臓障害および疾患（ＲｙＲ２調整に関連する）および神経系障害および疾患（ＲｙＲ１、ＲｙＲ２またはＲｙＲ３調整に関連する）が含まれる。
【００９８】
従って、本発明のさらなる側面は、骨格筋障害および疾患、心臓障害および疾患および神経系障害および疾患の治療および／または予防を意図した医薬品の製造における、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容可能な立体異性体、塩、溶媒和物もしくは複合体、またはその同位体標識誘導体、またはそのプロドラッグの使用に関する。
【００９９】
特定の実施形態では、骨格筋障害および疾患は、筋ジストロフィー、先天性ミオパチー、代謝ミオパチーおよび筋萎縮から選択される。好ましくは、前記骨格筋障害または疾患は、デュシェンヌ型筋ジストロフィーまたはベッカー型筋ジストロフィーである。
【０１００】
別の特定の実施形態では、心臓障害および疾患は、心不全、心虚血、心不整脈および心筋症から選択される。
【０１０１】
別の特定の実施形態では、神経系障害および疾患は、脳卒中、アルツハイマー病、前頭側頭骨型認知症および認知機能障害から選択される。
【０１０２】
好ましい実施形態では、本発明のバリアント（Ａ）のよる化合物は、上記のものなどの骨格筋障害および疾患の治療ならびに心臓障害および疾患の治療を意図した医薬品の製造において使用されるものである。
【０１０３】
別の好ましい実施形態では、本発明のバリアント（Ｂ）による化合物は、上記のものなどの神経系障害および疾患の治療を意図した医薬品の製造において使用されるものである。
【０１０４】
本発明のさらなる側面は、骨格筋障害および疾患、心臓障害および疾患および神経系障害および疾患の治療および／または予防におけるその使用のための、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容可能な立体異性体、塩、溶媒和物もしくは複合体、またはその同位体標識誘導体、またはそのプロドラッグに関する。
【０１０５】
本発明の別の側面は、骨格筋障害および疾患、心臓障害および疾患および神経系障害および疾患の治療および／または予防のための方法に関し、その方法は、それを必要とする患者に治療上有効な量の式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容可能な立体異性体、塩、溶媒和物もしくは複合体、またはその同位体標識誘導体、またはそのプロドラッグを投与することを含んでなる。
【０１０６】
「治療上有効な」量は、有益なまたは所望の結果を達成するのに十分な量として理解されなければならず、応答は、予防的および／または治療的、望まない副作用の回避または実質的軽減である。
【０１０７】
特定の実施形態では、本発明の化合物は、異常な細胞内カルシウム濃度を調整するために有効な量で対象に投与される。この量は、当技術分野により、既知の方法を用いて容易に決定することができる。例えば、ＲｙＲチャネルを介した細胞内カルシウムの放出は、Ｆｌｕｏ−３またはＦｕｒａ−２などのカルシウム感受性蛍光色素を用い、光電子増倍管および好適なソフトウエアでカルシウム依存性蛍光シグナルをモニタリングして定量することができる(Brillantes, et al. Cell, 1994, 77, 513-523, “Stabilization of calcium release channel (ryanodine receptor) function by FK506-binding protein”; Gillo, et al. Blood, 1993, 81, 783-792)。
【０１０８】
ヒトまたは動物対象の血清中の本発明の化合物の濃度は、当技術分野で公知の方法に従って決定することができる(Thebis, M. et al. Drug Test. Analysis 2009, 1, 32-42 “Screening for the calstabin-ryanodine receptor complex stabilizers JTV-519 and S-107 in doping control analysis”)。異常な細胞内カルシウムレベルの制限または防止に有効な式（Ｉ）の化合物の投与量は、選択された化合物の相対的有効性、治療される障害の重篤度および罹患対象の体重によって異なる。しかしながら、これらの化合物は一般に１日１回以上、例えば、１日１、２、３または４回、約１ｍｇ／ｋｇ／日〜１００ｍｇ／ｋｇ／日、より好ましくは１０ｍｇ／ｋｇ／日〜４０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲の典型的な総一日用量、または約１ｎｇ／ｍｌ〜５００ｎｇ／ｍｌの血清レベルを達成するのに十分な量で投与されよう。
【０１０９】
式（Ｉ）の化合物は、単独で、互いに組み合わせて、または限定されるものではないが、ｍＲＮＡエキソンスプライシングエンハンサー、遺伝子転写モジュレーター、利尿薬、抗凝固薬、血小板薬、抗不整脈薬、変力薬、変時薬、αおよびβ遮断薬、アンギオテンシン阻害剤および血管拡張薬を含む、治療活性を有する他の薬物と組み合わせて使用することができる。
【０１１０】
前記薬物は同じ組成物の一部であってもよく、または同時もしくは異なる時点で投与するための別個の組成物として提供することもできる。
【０１１１】
本発明はまた、細胞内カルシウムレベルを調整するおよびＲｙＲタンパク質複合体からのカルスタビン解離を防ぐ化合物の能力を決定するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ法を含み、前記方法は、（ａ）ＲｙＲ受容体を含有する細胞培養物を取得または作製すること；（ｂ）前記細胞をアッセイする化合物と接触させること；（ｃ）細胞を、細胞内カルシウム調節を変更するか、またはＲｙＲ受容体において翻訳後修飾を生じる１以上の既知の条件に曝すこと；（ｄ）前記化合物が細胞内カルシウムレベルを調整するか否か決定すること；および（ｅ）前記化合物がＲｙＲタンパク質複合体からのカルスタビン解離を制限または防止するか否か決定することを含んでなる。
【０１１２】
特定の実施形態では、胞内カルシウム調節を変化させるまたはＲｙＲ受容体において翻訳後修飾を生じる条件は、酸化ストレスまたはニトロソ化ストレスである。
【０１１３】
本発明はまた、障害または疾患の診断のための方法も検討し、前記方法は、
対象からＲｙＲ受容体を含有する組織または細胞サンプルを取得すること；
工程ａ）で得られた組織または細胞サンプルを式（Ｉ）の化合物とともにインキュベートすること、および
（ａ）対照細胞または組織におけるＲｙＲ−カルスタビン相互作用に対してＲｙＲ−カルスタビン相互作用の増強があるか否か；または
（ｂ）対照細胞または組織における低下の不在に比べて細胞内カルシウムレベルの低下があるか否か
を決定することを含んでなり、
（ａ）におけるＲｙＲ−カルスタビン相互作用の増強または（ｂ）における細胞内カルシウムレベルの低下は、対象における障害または疾患の存在を示す。
【０１１４】
特定の実施形態では、診断方法で使用される式（Ｉ）の化合物は、本発明のバリアント（Ｃ）による化合物である。
【０１１５】
別の特定の実施形態では、組織サンプルは筋肉組織サンプルである。
【０１１６】
特定の実施形態では、ＲｙＲがＲｙＲ１である場合に、診断される障害または疾患は骨格筋障害または疾患である。
【０１１７】
特定の実施形態では、ＲｙＲがＲｙＲ２である場合に、診断される障害または疾患は心臓障害または疾患である。
【０１１８】
特定の実施形態では、ＲｙＲがＲｙＲ１、ＲｙＲ２またはＲｙＲ３である場合に、診断される障害または疾患は神経系障害または疾患である。
【０１１９】
ＲｙＲ−カルスタビン相互作用の増強および細胞内カルシウムレベルの低下は、免疫沈降、ｉｎ  ｓｉｔｕ近接ライゲーションアッセイ（ＰＬＡ）および蛍光プローブを用いたリアルタイムカルシウムイメージングなどの当業者に既知の技術の手段によって測定することができる。
【実施例】
【０１２０】
使用される化合物、試薬、溶媒または技術の頭字語(acronyms)は次のように定義される：
ＡＨＫ１：基：Ｒ１＝Ｒ２＝−ＣＨ２−；Ｒ３＝Ｈ；ｍ＝１；ｎ＝０；Ｘ＝３−ＭｅＯ；Ｙ＝ＣＯ２Ｈを含む式（Ｉ）による化合物、
ＡＨＫ２：基：Ｒ１＝−ＣＨ２−；Ｒ２＝−ＣＨ２ＣＨ２−；Ｒ３＝Ｈ；ｍ＝１；ｎ＝０；Ｘ＝４−ＭｅＯ；Ｙ＝ＮＭｅ２を含む式（Ｉ）による化合物、
Ｓ−１０７：実施した生物アッセイにおいて比較目的で使用した化合物、その構造は本明細書の背景の節に見出せる、
ｔＢｕＯＨ：ｔｅｒｔ−ブタノール、
ＤＡＰＩ：４’，６−ジアミノ−２−フェニルインドール、
ＥＳＩ：エレクトロスプレーイオン化法、
ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル、
ＨＲＭＳ：高分解能質量分析、
ＩＲ：赤外線分光法、
ｍｄｘ：Ｘ連鎖デュシェンヌ型筋ジストロフィーの動物モデル、
ＭＰ：融点、
ＮＭＲ：核磁気共鳴、
ＳＩＮ１：３−モルホリノ−シドノンイミン、ペルオキシ亜硝酸および酸化窒素発生剤、
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン、
ＴＢＴＡ：トリス［（１−ベンジル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル］アミン。
【０１２１】
以下の例は例示のために示されるものであり、本発明を限定しようとするものではない。
【０１２２】
例１：  １−メトキシカルボニルメチル−４−［４−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール
【化９】
2019520423.tif 000011
ＴＨＦ／ｔＢｕＯＨ（１：１、４ｍＬ）中、１−（４−メトキシフェニルチオ）−２−プロピン（２ｍｍｏｌ、３５６ｍｇ）、アジド酢酸メチル（２．００ｍｍｏｌ、２３０ｍｇ）およびＴＢＴＡ（触媒）の溶液を窒素雰囲気下で作製した。次に、Ｈ２Ｏ（１ｍＬ）中ＣｕＳＯ４（０．４ｍｍｏｌ、６３ｍｇ）とＨ２Ｏ（１ｍＬ）中アスコルビン酸ナトリウム（０．８ｍｍｏｌ、１５８ｍｇ）の２つの脱気した水溶液を加え、この混合物を室温で一晩撹拌した。反応が完了した際に、溶媒を蒸発させ、２８％アンモニウム水溶液（１０ｍＬ）を加え、生成物をＣＨ２Ｃｌ２（３×２０ｍＬ）で抽出した。プールした有機抽出液を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、溶媒を減圧下で蒸発させた。生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；１：３  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製した。収量：４７７ｍｇ（７８％）。帯黄色油状物。ＩＲ（ｃｍ−１）：２９５３、２８３７（Ｃ−Ｈ）、１７５０（Ｃ＝Ｏ）、１２１９、１１７４（トリアゾール）。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．３８（ｓ，１Ｈ），７．３０（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），６．８１（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），５．０９（ｓ，３Ｈ），４．１２（ｓ，２Ｈ），３．７８（ｓ，３Ｈ），３．７７（ｓ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１６６．７，１５９．４，１４５．８，１３４．０，１２５．４，１２３．５，１１４．７，５５．４，５３．１，５０．８，３０．９。Ｃ１３Ｈ１６Ｎ３Ｏ３Ｓ  のＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋，ｍ／ｚ），理論値：２９４．０９１２；検出値：２９４．０９１６。
【０１２３】
例２：  １−メトキシカルボニルメチル−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール
【化１０】
2019520423.tif 000012
１−（３−メトキシフェニルチオ）−２−プロピン（２．００ｍｍｏｌ、３５６ｍｇ）およびアジド酢酸メチル（２．００ｍｍｏｌ、２３０ｍｇ）から出発し、例１の方法に従った。収量：５３７ｍｇ（８８％）。帯黄色油状物。ＩＲ（ｃｍ−１）：２９５３、２８３７（Ｃ−Ｈ）、１７４９（Ｃ＝Ｏ）、１２２０、１１８０（トリアゾール）。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．５１（ｓ，１Ｈ），７．１８（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９２（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），６．９０−６．８７（ｍ，１Ｈ），６．７３（ｄｄ，Ｊ＝８．２，１．８Ｈｚ，１Ｈ）  ５．１１（ｓ，２Ｈ），４．２６（ｓ，２Ｈ），３．７８（ｓ，３Ｈ），３．７７（ｓ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１６６．７，１５９．９，１４５．７，１３６．８，１２９．９，１２３．６，１２１．５，１１４．６，１１２．５，５５．４，５３．１，５０．８，２８．７。Ｃ１３Ｈ１６Ｎ３Ｏ３ＳのＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋，ｍ／ｚ），理論値：２９４．０９１２；検出値：２９４．０９１７。
【０１２４】
例３：  （Ｓ）−１−（１−メトキシカルボニル−２−フェニルエチル）−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール
【化１１】
2019520423.tif 000013
１−（３−メトキシフェニルチオ）−２−プロピン（２．００ｍｍｏｌ、３８４ｍｇ）および（Ｓ）−２−アジド−３−フェニルプロパン酸メチルエステル（２．００ｍｍｏｌ、３５８ｍｇ）から出発し、例１の方法に従った。収量：６６８ｍｇ（８７％）。帯黄色油状物。［α］Ｄ２５＝−５６．１°（ｃ．１．０１ｇ／１００ｍＬ、ＣＨ２Ｃｌ２）。ＩＲ（ｃｍ−１）：２９５２、２８３６（Ｃ−Ｈ）、１７４４（Ｃ＝Ｏ）、１２２８、１１７２（トリアゾール）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．４７（ｓ，１Ｈ），７．２７−６．６２（ｍ，９Ｈ），５．５０（ｄｄ，Ｊ＝８．５，６．２Ｈｚ，１Ｈ），４．１２（ｑ，Ｊ＝１４．９Ｈｚ，２Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ），３．７３（ｓ，３Ｈ），３．４６（ｄｄ，Ｊ＝１４．０，５．８Ｈｚ，１Ｈ），３．３６（ｄｄ，Ｊ＝１３．９，９．２Ｈｚ，１Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１６８．６，１５９．９，１４５．１，１３６．８，１３４．７，１２９．９，１２８．９，１２７．６，１２２．４，１２１．５，１１４．５，１１２．５，６４．３，５５．４，５３．２，３８．９，２８．７。Ｃ２０Ｈ２２Ｎ３Ｏ３ＳのＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋，ｍ／ｚ），理論値：３８４．１３８２；検出値：３８４．１３９２。
【０１２５】
例４：  （Ｒ）−１−（１−メトキシカルボニル−２−フェニルエチル）−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール
【化１２】
2019520423.tif 000014
１−（３−メトキシフェニルチオ）−２−プロピン（２．００ｍｍｏｌ、３８４ｍｇ）および（Ｒ）−２−アジド−３−フェニルプロパン酸メチルエステル（２．００ｍｍｏｌ、３５８ｍｇ）から出発し、例１の方法に従った。収量：６５３ｍｇ（８５％）。帯黄色油状物。［α］Ｄ２５＝＋３９．４°（ｃ．２．７１ｇ／１００ｍＬ、ＣＨ２Ｃｌ２）。Ｃ２０Ｈ２２Ｎ３Ｏ３ＳのＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋，ｍ／ｚ）、理論値：３８４．１３８２；検出値：３８４．１３８２。ＮＭＲデータは例３のものと同一であった。
【０１２６】
例５：  （Ｓ）−１−（１−メトキシカルボニル−３−メチル−ブチル）−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール
【化１３】
2019520423.tif 000015
１−（３−メトキシフェニルチオ）−２−プロピン（２．００ｍｍｏｌ、３８４ｍｇ）および（Ｓ）−２−アジド−４−メチルペンタン酸メチルエステル（２．００ｍｍｏｌ、３４２ｍｇ）から出発し、例１の方法に従った。収量：６７７．９ｍｇ（９７％）。帯黄色油状物。［α］Ｄ２５＝＋１０．７°（ｃ．１．００ｇ／１００ｍＬ、ＣＨ２Ｃｌ２）。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．５１（ｓ，１Ｈ），７．１６（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），６．８７（ｓ，１Ｈ），６．７２（ｄｄ，Ｊ＝８．２，１．８Ｈｚ，１Ｈ），５．３８（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），４．２４（ｑ，Ｊ＝１４．８Ｈｚ，２Ｈ），３．７６（ｓ，３Ｈ），３．７３（ｓ，３Ｈ），１．９４（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），１．１９（ｄｔ，Ｊ＝１３．４，６．７Ｈｚ，１Ｈ），０．９０（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，３Ｈ），０．８４（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１６９．８，１５９．９，１４５．３，１３６．６，１２９．８，１２２．１，１１５．１，１１２．７，６１．１，５５．３，５３．１，４１．４，２９．１，２４．７，２２．７，２１．３。
【０１２７】
例６：  （Ｒ）−１−（１−メトキシカルボニル−３−メチル−ブチル）−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール
【化１４】
2019520423.tif 000016
１−（３−メトキシフェニルチオ）−２−プロピン（２．００ｍｍｏｌ、３８４ｍｇ）および（Ｒ）−２−アジド−４−メチルペンタン酸メチルエステル（２．００ｍｍｏｌ、３４２ｍｇ）から出発し、例１の方法に従った。収量：６５３ｍｇ（９３％）。帯黄色油状物。［α］Ｄ２５＝−１２．１°（ｃ．１．０３ｇ／１００ｍＬ、ＣＨ２Ｃｌ２）。ＮＭＲデータは例５のものと同一であった。
【０１２８】
例７：  （Ｓ）−１−（１−メトキシカルボニル−２−メチル−プロピル）−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール
【化１５】
2019520423.tif 000017
１−（３−メトキシフェニルチオ）−２−プロピン（２．００ｍｍｏｌ、３８４ｍｇ）および（Ｓ）−２−アジド−３−メチルブタン酸メチルエステル（２．００ｍｍｏｌ、３１４ｍｇ）から出発し、例１の方法に従った。収量：６１６ｍｇ（９２％）。帯黄色油状物。［α］Ｄ２５＝＋２１．５°（ｃ．１．０３ｇ／１００ｍＬ、ＣＨ２Ｃｌ２）。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．６３（ｓ，１Ｈ），７．１６（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），６．９２（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），６．８８（ｓ，１Ｈ），６．７２（ｄ，Ｊ＝６．８，１Ｈ），５．０６（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），４．２４（ｑ，Ｊ＝１４．７Ｈｚ，２Ｈ），３．７６（ｓ，６Ｈ），２．４４−２．３０（ｍ，１Ｈ），０．９６（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ），０．７３（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１６８．８，１５９．６，１４４．７，１３６．３，１２９．５，１２１．９，１１５．０，１１２．３，６８．５，５５．０，５２．５，３２．０，２８．８，１８．８，１８．１。
【０１２９】
例８：  （Ｒ）−１−（１−メトキシカルボニル−２−メチル−プロピル）−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール
【化１６】
2019520423.tif 000018
１−（３−メトキシフェニルチオ）−２−プロピン（２．００ｍｍｏｌ、３８４ｍｇ）および（Ｒ）−２−アジド−３−メチルブタン酸メチルエステル（２．００ｍｍｏｌ、３１４ｍｇ）から出発し、例１の方法に従った。収量：６２６ｍｇ（９３％）。帯黄色油状物。［α］Ｄ２５＝−１９．５°（ｃ．１．０６ｇ／１００ｍＬ、ＣＨ２Ｃｌ２）。ＮＭＲデータは例７のものと同一であった。
【０１３０】
例９：  ４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１−（１−メチル−１−メトキシカルボニルエチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール
【化１７】
2019520423.tif 000019
１−（３−メトキシフェニルチオ）−２−プロピン（２．００ｍｍｏｌ、３８４ｍｇ）および２−アジドイソ酪酸メチル（２．００ｍｍｏｌ、３８６ｍｇ）から出発し、例１の方法に従った。収量：２５８ｍｇ（４０％）。帯黄色油状物。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．４４（ｓ，１Ｈ），７．１１（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），６．８２（ｓ，１Ｈ），６．６７（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），４．１７（ｓ，２Ｈ），３．６９（ｓ，３Ｈ），３．６２（ｓ，３Ｈ），１．８２（ｓ，６Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１７１．６，１５９．７，１４４．３，１３６．７，１２９．６，１２１．６，１２１．０，１１４．８，１１２．３，６４．３，５５．１，５３．１，２８．８，２５．５。
【０１３１】
例１０：  １−（２−ヒドロキシエチル）−４−［４−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール
【化１８】
2019520423.tif 000020
１−（４−メトキシフェニルチオ）−２−プロピン（２．００ｍｍｏｌ、３８４ｍｇ）および２−アジドエタノール（２．００ｍｍｏｌ、１７４ｍｇ）から出発し、例１の方法に従った。収量：５２０ｍｇ（９８％）。帯黄色油状物。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．４０（ｓ，１Ｈ），７．２９（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），６．８０（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），４．４０（ｓ，２Ｈ），４．０９（ｓ，２Ｈ），３．９９（ｓ，２Ｈ），３．７７（ｓ，３Ｈ），３．１８（ｓ，１Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１５９．５，１４４．９，１３３．９，１２５．４，１２３．５，１１４．８，６１．１，５５．５，５２．９，３０．９。Ｃ１２Ｈ１５Ｎ３Ｏ２ＳのＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋，ｍ／ｚ），理論値：２６６．０９６３；検出値：２６６．０９６５。
【０１３２】
例１１：  １−カルボキシメチル−４−［４−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール
【化１９】
2019520423.tif 000021
ＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（１：１、８ｍＬ）中、１−メトキシカルボニルメチル−４−［４−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール（１．００ｍｍｏｌ、３０５ｍｇ、例１）の溶液に、水酸化リチウム一水和物（２．００ｍｍｏｌ、８４ｍｇ）を加え、得られた混合物を室温で１時間撹拌した。有機溶媒を蒸発させ、得られた水性混合物を１Ｍ  ＨＣｌで酸性化し、この溶液をＥｔＯＡｃ（２×１０ｍＬ）で抽出した。プールした有機相を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、溶媒を減圧下で蒸発させた。収量：１５８ｍｇ（５４％）。白色固体。ＭＰ：１６３−１７０℃。ＩＲ（ｃｍ−１）：２９２３、２８４８（Ｃ−Ｈ）、１７３０（Ｃ＝Ｏ）、１２２３、１１８８（トリアゾール）。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：７．６６（ｓ，１Ｈ），７．２８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），６．８４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），５．１９（ｓ，２Ｈ），４．０７（ｓ，２Ｈ），３．７６（ｓ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ１６９．７，１６１．１，１４６．３，１３５．６，１２６．３，１１５．７，５５．８，５１．６，３１．５。Ｃ１２Ｈ１４Ｎ３Ｏ３ＳのＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋，ｍ／ｚ），理論値：２８０．０７５６；検出値：２８０．０７６０。
【０１３３】
例１２：  １−カルボキシメチル−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール
【化２０】
2019520423.tif 000022
１−メトキシカルボニルメチル−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール（１．００ｍｍｏｌ、３０５ｍｇ、例２）から出発し、例１１の方法に従った。収量：２７４ｍｇ（９４％）。白色固体。ＭＰ：１１５−１１９℃。ＩＲ（ｃｍ−１）：２９９９、２９７１（Ｃ−Ｈ）、１７０７（Ｃ＝Ｏ）、１２２９（トリアゾール）。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．８０（ｓ，１Ｈ），７．１８（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９６−６．８６（ｍ，２Ｈ），６．７６（ｄｄ，Ｊ＝８．３，１．８Ｈｚ，１Ｈ），５．１９（ｓ，２Ｈ），４．２３（ｓ，２Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ１６９．７，１６１．４，１４６．１，１３８．０，１３０．９，１２５．９，１２３．１，１１６．１，１１３．６，５５．７，５１．７，２９．３。Ｃ１２Ｈ１４Ｎ３Ｏ３ＳのＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋，ｍ／ｚ），理論値：２８０．０７５６；検出値：２８０．０７５３。
【０１３４】
例１３：  （Ｓ）−１−（１−カルボキシ−２−フェニルエチル）−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール
【化２１】
2019520423.tif 000023
（Ｓ）−１−（１−メトキシカルボニル−２−フェニルエチル）−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール（１．００ｍｍｏｌ、３８３ｍｇ、例３）から出発し、例１１の方法に従った。収量：３１８ｍｇ（８６％）．  白色固体。ＭＰ：７９−８３℃。［α］Ｄ２４＝−２３．３°（ｃ．１．１２ｇ／１００ｍＬ、ＣＨ２Ｃｌ２）。ＩＲ（ｃｍ−１）：２９３１（Ｃ−Ｈ）、１７２７（Ｃ＝Ｏ）、１２４６、１２２９（トリアゾール）。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．７７（ｓ，１Ｈ），７．２０−６．７１（ｍ，９Ｈ），５．５６（ｄｄ，Ｊ＝１０．８，４．６Ｈｚ，１Ｈ），４．１５（ｓ，２Ｈ），３．７３（ｓ，３Ｈ），３．５６（ｄｄ，Ｊ＝１４．３，４．５Ｈｚ，１Ｈ），３．４０（ｄｄ，Ｊ＝１４．３，１０．９Ｈｚ，１Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ１７１．１，１６１，４，１４５．９，１３７．９，１３７．２，１３０．８，１２９．９，１２８．１，１２４．８，１２２．９，１１５．９，１１３．５，６５．８，５５．７，３８．９，２９．０。Ｃ２０Ｈ２２Ｎ３Ｏ３ＳのＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋，ｍ／ｚ），理論値：３８４．１３８２；検出値：３８４．１３９２。
【０１３５】
例１４：  （Ｒ）−１−（１−カルボキシ−２−フェニルエチル）−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール
【化２２】
2019520423.tif 000024
（Ｒ）−１−（１−メトキシカルボニル−２−フェニルエチル）−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール（１．００ｍｍｏｌ、３８３ｍｇ、例４）から出発し、例１１の方法に従った。収量：２８０ｍｇ（７６％）。白色固体。ＭＰ：７８−８６℃。Ｃ２０Ｈ２２Ｎ３Ｏ３ＳのＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋，ｍ／ｚ）、理論値：３８４．１３８２；検出値：３８４．１３８２。［α］Ｄ２４＝＋１６．５°（ｃ．０．９８ｇ／１００ｍＬ、ＣＨ２Ｃｌ２）。ＮＭＲデータは例１３のものと同一であった。
【０１３６】
例１５：  （Ｓ）−１−（１−カルボキシ−３−メチルブチル）−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール
【化２３】
2019520423.tif 000025
（Ｓ）−１−（１−メトキシカルボニル−３−メチル−ブチル）−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール（１．００ｍｍｏｌ、３４９ｍｇ、例５）から出発し、例１１の方法に従った。収量：２６５ｍｇ（７６％）。白色固体。ＭＰ：９６−１０５℃。［α］Ｄ２５．６＝＋９．３°（ｃ．１．１１ｇ／１００ｍＬ、ＣＨ２Ｃｌ２）。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１１．８８（ｓ，１Ｈ），７．５４（ｓ，１Ｈ），７．１２（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），６．９２−６．７７（ｍ，２Ｈ），６．７０（ｄｄ，Ｊ＝８．１，１．７Ｈｚ，１Ｈ），５．３８（ｄｄ，Ｊ＝１０．７，５．０Ｈｚ，１Ｈ），４．２３（ｄｄ，Ｊ＝４０．８，１４．９Ｈｚ，２Ｈ），３．７０（ｓ，３Ｈ），２．０３−１．８６（ｍ，２Ｈ），１．１７（ｄｔ，Ｊ＝１９．８，６．５Ｈｚ，１Ｈ），０．８８（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，３Ｈ），０．８２（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１７１．２，１５９．８，１４４．７，１３５．９，１２９．８，１２２．６，１２２．４，１１５．６，１１２．９，６１．８，５５．３，４１，２，２８．５，２４．７，２２．６，２１．１。
【０１３７】
例１６：  （Ｒ）−１−（１−カルボキシ−３−メチルブチル）−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール
【化２４】
2019520423.tif 000026
（Ｒ）−１−（１−メトキシカルボニル−３−メチル−ブチル）−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール（１．００ｍｍｏｌ、３４９ｍｇ、例６）から出発し、例１１の方法に従った。収量：３０１ｍｇ（８６％）。白色固体。ＭＰ：９７−１０４℃。［α］Ｄ２５．４＝−１２．１°（ｃ．０．９５ｇ／１００ｍＬ、ＣＨ２Ｃｌ２）。ＮＭＲデータは例１５のものと同一であった。
【０１３８】
例１７：  （Ｓ）−１−（１−カルボキシ−２−メチルプロピル）−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール
【化２５】
2019520423.tif 000027
（Ｓ）−１−（１−メトキシカルボニル−２−メチル−プロピル）−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール（１．００ｍｍｏｌ、３３５ｍｇ、例７）から出発し、例１１の方法に従った。収量：２７９ｍｇ（８７％）。白色固体。ＭＰ：１１５−１２１℃。［α］Ｄ２５．６＝＋４．５°（ｃ．１．０６ｇ／１００ｍＬ、ＣＨ２Ｃｌ２）。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１１．５３（ｓ，１Ｈ），７．６８（ｓ，１Ｈ），７．１２（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），６．８７（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），６．８４（ｓ，１Ｈ），６．７０（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），５．１３（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），４．２３（ｄｄ，Ｊ＝４３．５，１４．５Ｈｚ，２Ｈ），３．７１（ｓ，３Ｈ），２．４４（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），０．９６（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ），０．７５（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１７０．７，１５９．９，１４４．６，１３６．１，１２９．９，１２２．９，１２２．８，１１５．８，１１３．０，６９．３，５５．４，３２．２，２８．７，１９．２，１８．３。
【０１３９】
例１８：  （Ｒ）−１−（１−カルボキシ−２−メチルプロピル）−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール
【化２６】
2019520423.tif 000028
（Ｒ）−１−（１−メトキシカルボニル−２−メチル−プロピル）−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール（１．００ｍｍｏｌ、３３５ｍｇ、例８）から出発し、例１１の方法に従った。収量：２９０ｍｇ（９０％）。白色固体。ＭＰ：１１４−１２３℃。［α］Ｄ２５．６＝−６．７°（ｃ．１．０１ｇ／１００ｍＬ、ＣＨ２Ｃｌ２）。ＮＭＲデータは例１７のものと同一であった。
【０１４０】
例１９：  １−（１−カルボキシ−１−メチルエチル）−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール
【化２７】
2019520423.tif 000029
４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１−（１−メチル−１−メトキシカルボニルエチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール（０．８ｍｍｏｌ、２５８ｍｇ、例９）から出発し、例１１の方法に従った。収量：２４６ｍｇ（１００％）。帯黄色固体。ＭＰ：１０９−１２１℃  １Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．７７（ｓ，１Ｈ），７．０９（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．７９（ｓ，１Ｈ），６．６７（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），４．１２（ｓ，２Ｈ），３．６５（ｓ，３Ｈ），１．７８（ｓ，６Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  １７４．２，１６１．３，１４５．３，１３７．９，１３０．８，１２３．４，１１６．５，１１３．７，６５．９，５５．７，２９．５，２５．９。
【０１４１】
例２０：  １−［２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）エチル］−４−［４−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール
【化２８】
2019520423.tif 000030
窒素雰囲気下、０℃に冷却した無水ＴＨＦ（１６ｍＬ）中、１−（２−ヒドロキシエチル）−４−［４−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール（２．９２ｍｍｏｌ、７７６ｍｇ、例１０）の溶液に、トリエチルアミン（８．８０ｍｍｏｌ、１．２２ｍＬ）および塩化メシル（４．３９ｍｍｏｌ、０．３４ｍＬ）を順次加えた。この反応混合物を室温で一晩撹拌した。次に、塩酸ジメチルアミン（８．００ｍｍｏｌ、６５２ｍｇ）、トリエチルアミン（８．８０ｍｍｏｌ、１，２２ｍＬ）、ＮａＩ（０．１３ｍｍｏｌ、２０ｍｇ）および追加量の無水ＴＨＦ（８ｍＬ）を加え、この混合物を５０℃で一晩撹拌した。反応が完了した際に、溶媒を減圧下で蒸発させ、得られた残渣をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（３０ｍＬ）およびブライン（１０ｍＬ）で順次洗浄した。有機層を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、真空蒸発乾固した。収量：５７２ｍｇ（８４％）。白色固体。ＭＰ：３５−４０℃。ＩＲ（ｃｍ−１）：２９４３（Ｎ−Ｈ）、２８６０、２７７１（Ｃ−Ｈ）、１２４２（トリアゾール）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．４１（ｓ，１Ｈ），７．３０（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），６．８１（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ），４．３７（ｓ，２Ｈ），４．１１（ｓ，２Ｈ），３．７７（ｓ，３Ｈ），２．７１（ｓ，２Ｈ），２．２５（ｓ，６Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：１５９．２，１４４．８，１３３．７，１２５．５，１２２．６，１１４．５，５８．６，５５．３，４８．０，４５．３，３０．９。Ｃ１４Ｈ２１Ｎ４ＯＳのＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋，ｍ／ｚ），理論値：２９３．１４３６；検出値：２９３．１４４０。
【０１４２】
例２１：  １−メトキシカルボニルメチル−４−（フェニルスルフィニルメチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール
【化２９】
2019520423.tif 000031
フェニルチオ−２−プロピン（２．００ｍｍｏｌ、２６８ｍｇ）およびアジド酢酸メチル（２．００ｍｍｏｌ、２３０ｍｇ）から出発し、例１の方法に従った。収量：３４２ｍｇ（６５％）。白色固体。ＭＰ：７０−７４℃。ＩＲ（ｃｍ−１）：２９５３、２８３７（Ｃ−Ｈ）、１７４９（Ｃ＝Ｏ）、１２２０、１１８０（トリアゾール）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．４９（ｓ，１Ｈ），７．３４（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），７．３１−７．２２（ｍ，２Ｈ），７．２０（ｍ，１Ｈ），５．１１（ｓ，２Ｈ），４．２７（ｓ，２Ｈ），３．７８（ｓ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１６６．５，１４４．６，１３５．１，１２９．１，１２８．６，１２６．１，１２３．５，５２．６，５０．３，２８．３。０℃で、無水クロロホルム（３０ｍＬ）中、１−（メトキシカルボニルメチル）−４−（フェニルチオメチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール（１．００ｍｍｏｌ、２６３ｍｇ）の得られた溶液に、ｍ−クロロ過安息香酸（１．００ｍｍｏｌ、１７２ｍｇ）を加え、この混合物を３０分間同じ温度で撹拌した。この混合物を蒸発させ、残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；５：９５  ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）により精製した。無色の油状物。収量：１６１ｍｇ（５８％）。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．７２（ｓ，１Ｈ），７．４９（ｓ，５Ｈ），５．２４−５．１０（ｄｄ，Ｊ＝５．１３Ｈｚ，２Ｈ），４．２９−４．１５（ｄｄ，Ｊ＝４．２８Ｈｚ，２Ｈ），３．８２（ｓ，３Ｈ）。
【０１４３】
例２２：  １−カルボキシメチル−４−［３−（メトキシ）フェニルスルホニルメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール
【化３０】
2019520423.tif 000032
０℃で、クロロホルム／アセトニトリル（３ｍＬ）の１：１  無水混合物中、１−（カルボキシメチル）−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール（１．００ｍｍｏｌ、２７９ｍｇ、例１２）の溶液に、ｍ−クロロ過安息香酸（２．５０ｍｍｏｌ、４３７ｍｇ）を加え、この混合物を室温で一晩撹拌した。この混合物を蒸発させ、残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；５：９５  ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）により精製した。収量：２０３ｍｇ（６５％）。白色固体。ＭＰ：１０６−１１５℃。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：７．９１（ｓ，１Ｈ），７．５０−７．２９（Ａｒ，４Ｈ），４．９９（ｓ，２Ｈ），４．７１（ｓ，２Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ）。Ｃ１２Ｈ１４Ｎ３Ｏ５ＳのＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋，ｍ／ｚ），理論値：３１２．０６５４；検出値：３１２．０６６２。
【０１４４】
例２３：  １−カルボキシメチル−４−［３−（クロロ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール
【化３１】
2019520423.tif 000033
水（４ｍＬ）中、ブロモ酢酸（１０ｍｍｏｌ、１．３８ｇ）およびアジ化ナトリウム（４０ｍｍｏｌ、２．６０ｇ）の溶液を室温で一晩撹拌した。次に、この溶液を３Ｍ  ＮａＯＨおよびアセトニトリル（１５ｍＬ）で中和し、１−（３−クロロフェニルチオ）−２−プロピン（８ｍｍｏｌ、１．４５ｇ）、酢酸ナトリウム（３０ｍｍｏｌ、２．４６ｇ）および酢酸銅（Ｉ）（２ｍｍｏｌ、２４２ｍｇ）を順次加えた。得られた混合物を４５℃で６時間撹拌し、溶媒を蒸発させ、１Ｍ  ＨＣｌで酸性化し、ＥｔＯＡｃ（３×２０ｍＬ）で抽出した。プールした有機相を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、溶媒を減圧下で蒸発させた。収量：１．４９ｇ（６６％）。白色固体。ＭＰ：１４６−１４８℃。ＩＲ（ｃｍ−１）：２９２８、２８５０（Ｃ−Ｈ）、１７３１（Ｃ＝Ｏ）、１２２４、１１８４（トリアゾール）。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：７．８６（ｓ，１Ｈ），７．３９（ｓ，１Ｈ），７．２８−７．２１（ｍ，３Ｈ），５．２２（ｓ，２Ｈ），４．２９（ｓ，２Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ１６８．５，１４４．１，１３７．９，１３４．４，１３０．０，１２８．８，１２７．６，１２６．３，１２４．６，５０．４，２７．７。Ｃ１１Ｈ１０ＣｌＮ３Ｏ２ＳのＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋，ｍ／ｚ），理論値：２８３．０１８２；検出値：２８３．０１９０。
【０１４５】
例２４：  ヒト細胞におけるｉｎ  ｖｉｔｒｏ毒性生物アッセイ
これらのアッセイは、分化培地中１４日後のヒト対照筋管ＬＨＣＮ−Ｍ２で行った。種々の分析化合物、特に本発明によるＡＨＫ１およびＡＨＫ２の毒性を決定するために、これらの化合物を種々の濃度（０〜２ｍＭ）で３７℃にて２４時間培養培地に加えた。比較目的で、同じアッセイを、対照化合物Ｓ−１０７を添加することにより行った。細胞生存率は、マニュアルの説明に従ってＣｙｔｏｔｏｘ  ９６（Ｐｒｏｍｅｇａ）比色定量アッセイの手段により決定した。
【０１４６】
結果を図１に示し、この図では、本発明による化合物、ヒト筋管に対して１０ｎＭ〜２ｍＭの濃度ではｉｎ  ｖｉｔｒｏ急性毒性を示さないことが見て取れる。２４時間のインキュベーション後の化合物ＡＨＫ１およびＡＨＫ２の挙動は、同じ条件下、１ｍＭの濃度の対照化合物Ｓ−１０７で見られた１００％細胞毒性とは対照的である。この結果は、本発明による化合物がＳ−１０７よりも低い毒性を有することを示し、ＡＨＫ化合物がヒトにおける異常なカルシウムホメオスタシスを含む障害の治療的処置のためのより良い候補となり得ることを示唆する。
【０１４７】
例２５．  マウス筋線維において細胞内カルシウムレベルを決定するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ
マウス短指屈筋から単離した線維を１５０ｎＭの濃度の化合物ＡＨＫ１およびＡＨＫ２の存在下または不在下で一晩培養した。ベースライン細胞内カルシウムレベルを、これらの線維を培養培地中、３７℃で３０分間、Ｆｕｒａ２−ＡＭレシオメトリック蛍光色素（４μＭ）およびプルロニック酸（０．０２％）とともにインキュベートする手段によって評価した。これらの線維を高解像度デジタルカメラで観察し、細胞内［Ｃａ２＋］を３４０ｎｍ／３８０ｎｍ励起比の手段によって見積もった。
【０１４８】
図２は、記載のマウス筋線維における安静時細胞内カルシウムレベルに対する化合物ＡＨＫ１およびＡＨＫ２のｉｎ  ｖｉｔｒｏ効果を示す。未処理ジストロフィー線維（ＭＤＸ）が対照線維（ＣＴＲＬ）と比べてどれほどカルシウムレベルの有意な上昇を示したかが分かる。ＭＤＸ線維をＡＨＫ１およびＡＨＫ２で一晩処理すると、細胞内カルシウムレベルは対照レベルに戻り、これは筋線維で見られた細胞内カルシウムの上昇を復帰させる能力を実証する。これらの結果を鑑みれば、本発明による化合物はＲｙＲチャネル調整を含む機構を介してこの復帰を行うことが仮定される。
【０１４９】
例２６．  ＲｙＲ１−カルスタビン１相互作用に関するｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ
このアッセイは、分化培地で９日後のヒト対照筋管ＬＨＣＮ−Ｍ２で行った。前記筋管を１５０ｎＭの濃度の化合物ＡＨＫ１およびＡＨＫ２で１２時間前処理した。処理後、これらの筋管に、ＳＩＮ１（５ｍＭ）を３０分間添加する手段により、ペルオキシ亜硝酸誘導性のニトロ酸化ストレスをかけた。
【０１５０】
ＲｙＲ１−カルスタビンの共局在はｉｎ  ｓｉｔｕ近接ライゲーション技術（ｉｎ  ｓｉｔｕ  ＰＬＡ）の手段により分析し、そのためにＳｉｇｍａのデュオリンクＩＩネットワーク蛍光キットおよびＲｙＲ１およびカルスタビン１特異的抗体を使用した。この技術は、互いに４０ｎｍ未満の距離で配置した２つの抗原の正確な位置の検出を可能とする。ＲｙＲ１−カルスタビン−１の共局在を判定するために、Ｉｍａｇｅ  Ｊコンピューターソフトウエア(http://rsb.info.nih.gov/ij/download.html)を用い、各条件につき１視野当たり約９筋管で３枚の写真を数量化した。各画像の共局在面積をミオシン発現面積に対して正規化し、これはフルオレセインコンジュゲート特異的抗体を用いた免疫蛍光の手段によって決定した。
【０１５１】
図３に示されるように、本発明による化合物ＡＨＫ１およびＡＨＫ２は、ニトロ酸化ストレスに曝した後の健常なヒト筋管培養物においてＲｙＲ１−カルスタビン１相互作用の低下からの部分的回復能を有する。ＰＬＡ技術の手段によるＲｙＲ１−Ｃａｌｓｔ１相互作用の分析は、ＳＩＮ１の存在下でＲｙＲ１−Ｃａｌｓｔ１複合体の解離が起こること、および前記の解離は化合物ＡＨＫ１およびＡＨＫ２による前処理の手段によって部分的に防げることを実証した。図３の上のパネルは、Ｉｍａｇｅ  ＪによるＰＬＡ画像の数量化を示し、下のパネルは、各条件のＰＬＡの代表的画像を示し、ここで、点はＲｙＲ１−Ｃａｌｓｔ１相互作用（５０μｍ較正バー）を表す。従って、アッセイした本発明による化合物は、デュシェンヌ型またはベッカー型ジストロフィーの筋管の機能を改善するたけでなく、ＲｙＲ１−カルスタビン１相互作用の親和性の増強を介して健常なヒト筋管に対するニトロ酸化ストレスの変性作用も最小化する。
【０１５２】
これらの結果によれば、本発明の化合物は、ニトロ酸化ストレス条件下でＲｙＲ１−カルスタビン１親和性の低下により引き起こされる疾患に対する治療薬として有用であり得る。
【０１５３】
例２７．  マウスにおけるｉｎ  ｖｉｖｏ生物アッセイ
Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ(https://www.jax.org/strain/001801)により供給された１か月齢の雄ジストロフィーｍｄｘマウスを使用した。筋機能に対するＡｈｕｌｋｅｎ（ＡＨＫ）化合物の効果を測定するための生物アッセイは１か月齢のマウスで行い、心臓およびＣＮＳに対する効果を決定するためのｉｎ  ｖｉｖｏアッセイは４か月齢のマウスで行った。１か月齢のマウスを化合物ＡＨＫ１または化合物ＡＨＫ２で５週間処置し、ここで、前記化合物は０．２５ｍｇ／ｍＬの濃度の飲水で投与した。前肢の筋力を、握力計を用いて毎週測定し、得られた値を動物の体重によって正規化した。この目的で、ＴＲＥＡＴ−ＮＭＤ  Ｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌａｒ  Ｎｅｔｗｏｒｋプロトコール(http://www.treat-nmd.eu/downloads/file/sops/dmd/MDX/DMD_M.2.2.001.pdf)に記載されている指示に従った。ジストロフィーマウスは、有意な握力低下を示した。しかしながら、２週間の処置の後、未処置同腹子に比べてＡＨＫ１またはＡＨＫ２で処置したｍｄｘマウスでは筋力が有意に増加した。５週間の処置の後、筋力は有意に２０％増加した（図４）。
【０１５４】
このデータは、本発明による化合物は筋機能を改善するまたは筋力低下を防ぐ手段によって筋ジストロフィー患者を治療するために有効であり得ることを示唆する。
【０１５５】
５週間の処置を行った後、前脛骨筋を取得し、続いての筋損傷の程度を決定するための生化学的および免疫組織学的分析向けに処理した。細胞死により誘導される再生は、筋凍結切片において、コラーゲンＩＶおよび細胞核を検出するための標準的な免疫蛍光技術を用いて中央核の百分率を数量化する手段によって決定した。図５は、コラーゲンＩＶを観察するために標識し、核を観察するためにＤＡＰＩで染色した対照およびジストロフィーマウス横隔膜の代表的なクリオスタット切片を示す。ｍｄｘマウスのＡＨＫ１およびＡＨＫ２による５週間の処置は、中央核の百分率を有意に低下させ、これは５週間の処置の後の筋ジストロフィーの組織病理学的マーカーを減らす前記化合物の能力を明らかに示す。これらの結果は、本発明による化合物がｉｎ  ｖｉｖｏにおいて有効であり、骨格筋に到達することを示唆する。
【０１５６】
次に、前脛骨筋の生化学的分析を、ＲＮＡ抽出ならびに対照マウス、ｍｄｘマウスおよび種々の処置を受けたマウスにおける発現パターン分析の手段によって行った。この目的で、各群少なくとも３個体のマウスのｃＤＮＡ混合物を用いるヒト骨格筋、筋形成および筋障害ＲＴ  Ｐｒｏｆｉｌｅｒ  ＰＣＲアレイ（ＰＡＨＳ−０９９Ｚ、ＱＩＡＧＥＮ）を使用した。従って、骨格筋の生理病理学的機構に関与する８４の遺伝子の発現プロフィールを分析した。これらの実験は７３００リアルタイムＰＣＲ装置（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）で行い、得られた結果を、ＱＩＡＧＥＮオンラインソフトウエア(http://www.sabiosciences.com/dataanalysis.php)を用いて分析した。
【０１５７】
５週間、化合物ＡＨＫ１でｍｄｘマウスを処置すると、図５でＷＴマウスとｍｄｘマウスの遺伝子発現を比較する手段によって示されるように、ｍｄｘマウスの遺伝子発現パターンが回復される。対照に比べてｍｄｘマウスで発現が増強された４０の遺伝子があり、この数はＡＨＫ１で処置したマウス（ＭＤＸ＋ＡＨＫ１）では２０に減少した。遺伝子は、その発現が対照の少なくとも１．７５倍増強された場合に過剰発現されたと見なした。表１は、発現がｍｄｘマウスで増強され、かつ、対照値まで低下した遺伝子の一覧を示し、これはＡＨＫ１処置で部分的に低下するかまたは変化しない。
【０１５８】
【表１】
2019520423.tif 000034
2019520423.tif 000035
【０１５９】
具体的には、これらの結果は、本発明による化合物はジストロフィーｍｄｘ筋において過剰発現される遺伝子の数を半分に減らす能力を示すことを明らかに示す。ＡＨＫ化合物の手段によって調整可能な遺伝子としては、限定されるものではないが、Ａｋｔ１、Ｂｃｌ２、Ｃａｓｐ３、Ｃａｓｔ、Ｃａｖ３、Ｃｒｙａｂ、Ｃｔｎｎｂ１、Ｄａｇ１、Ｄｅｓ、Ｄｙｓｆ、Ｆｏｘｏ３、Ｉｇｆｂｐ３、Ｉｇｆｂｐ５、Ｉｋｂｋｂ、Ｍａｐｋ３、Ｍｙｏｄ１、Ｎｆｋｂ１、Ｐｐａｒｇｃ１ｂ、Ｐｒｋａａ１、Ｒｐｓ６ｋｂ１、Ｕｔｒ、Ｃａｓｐ３、Ｉｇｆ２、Ｉｌ１ｂ、Ｉｌ６、Ｌｍｎａ、Ｍｍｐ９、Ｍｙｏｇ、Ｔｇｆｂ１、Ｔｎｎｃ１およびＴｎｎｔ１が含まれる。この一覧の中で、Ａｋｔ１、Ｉｌ１ｂ、Ｍａｐｋ３、Ｍｍｐ９およびＵｔｒは、骨格筋喪失または萎縮に関連する遺伝子である。
【０１６０】
心臓およびＣＮＳに対する本発明による化合物の効果を決定するために、４か月齢のマウスを５週間、０．２５ｍｇ／ｍＬ濃度の飲水中、化合物ＡＨＫ２で処置した。４か月齢のｍｄｘマウスは、運動、心臓および呼吸器系の欠損に依存しない急性ストレスの値に防御応答の再燃を示し、中枢機構により制御される（図７）。急性ストレスは、腹腔内注射を行うために慣用される姿勢で１５秒間、手で無動化する手段によって行った。急性ストレス後、マウスを１分間モニタリングし、すくみ反応時間または９０％無動感度を有する少なくとも１秒の持続性無動の％を計算する。ストレスを受けなかったマウスのすくみ反応には違いは見られず、これはｍｄｘマウスによって示された防御応答の再燃が運動の欠損に依存しないことを示す。５週間のＡＨＫ２処置は、ｍｄｘマウスの防御応答の再燃に関するＣＮＳ表現型を有意に改善する。これらの結果は、本発明による化合物が脳機能の変化を治療するためにｉｎ  ｖｉｖｏで有効であり、それらがＣＮＳに到達することを示唆する。
【０１６１】
４か月齢のジストロフィーｍｄｘマウスの心筋層は機械的ストレスに感受性が高く、化合物イソプロテレノールはこれらのマウスで心筋症を誘発する（図８）。心筋細胞筋線維膜の完全性は、膜損傷を有する心筋細胞に蓄積するエバンスブルー色素の取り込みを測定する手段によって決定した。エバンスブルーは、心臓を摘出する２４時間前に腹腔内注射（１０μｌ／ｇ体重）の手段によって１０ｍｇ／ｍｌの濃度で投与した。イソプロテレノールによる損傷は、筋損傷の程度を決定するためにエバンスブルーを投与した１８、２０および２２時間後に、β−イソプロテレノール（３５０ｎｇ／ｇ体重）の３連続の腹腔内注射の手段によって行った。細胞死により誘導される再生は、筋凍結切片において、コラーゲンＩＶおよび細胞核を検出するための標準的な免疫蛍光技術を用いて、中央核の百分率を数量化する手段によって決定した。図８は、イソプロテレノールにより引き起こされた心臓損傷を観察するためにエバンスブルーを注射した対照マウスおよびジストロフィーマウスの心臓の代表的なクリオスタット切片を示す。ｍｄｘマウスのＡＨＫ２による５週間の処置は、ｍｄｘマウスの心筋細胞筋線維膜の完全性を増し、イソプロテレノールにより誘導される損傷から心筋層を保護し、これは前記化合物が心筋に到達し、２型リアノジン受容体（ＲｙＲ２）を調整することができ、心筋症を予防するためにｉｎ  ｖｉｖｏで有効であることを示す。
【図１】
2019520423.tif 000040
【図２】
2019520423.tif 000041
【図３】
2019520423.tif 000042
【図４】
2019520423.tif 000043
【図５】
2019520423.tif 000044
【図６】
2019520423.tif 000045
【図７】
2019520423.tif 000046
【図８】
2019520423.tif 000047
【手続補正書】
【提出日】平成31年1月30日(2019.1.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な立体異性体、塩、溶媒和物もしくは複合体、またはその同位体標識誘導体もしくはプロドラッグ：
【化１】
2019520423.tif 000048
［式中、
Ｒ１は、Ｃ１−４アルキル、Ｃ６−１０アリール、Ｆ、Ｃｌ、ＣＮおよびＮＯ２からなる群から独立に選択される１以上の置換基で置換されていてもよいＣ１−４アルキレンビラジカルであり；
Ｒ２は、Ｃ１−４アルキレンビラジカルであり、ここで、該Ｃ１−４アルキレンビラジカルは、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、アリル、プロパルギル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシエチル、２−ヒドロキシエチル、３−アミノプロピル、４−アミノブチル、３−グアニジルプロピル、３−インドリルメチル、フェニル、１−ナフチル、２−ナフチル、ベンジル、４−ヒドロキシベンジル、およびＣ６−１０ヘテロアリールからなる群から独立に選択される１または２個の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ３は、Ｈであり；
ｍは、０、１、２、および４から選択され；
ｎは、０、１および２から選択され；
Ｘは、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１−４アルキル）、Ｏ（Ｃ６−１０アリール）、ＯＣＦ３、Ｓ（Ｃ１−４アルキル）、Ｓ（Ｃ６−１０アリール）、Ｃ１−６アルキル、ＣＦ３、ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１−４アルキル）およびハロゲンからなる群から独立に選択されるか；または２個のＸ基がメチレンジオキシ、エチレンジオキシまたはプロピレンジオキシビラジカルを表すことができ；かつ
Ｙは、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２（Ｃ１−４アルキル）、および−Ｎ（Ｃ１−４アルキル）２からなる群から選択される］。
【請求項２】
Ｒ１が−ＣＨ２−である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ２が、メチル、イソプロピル、イソブチルおよびベンジルからなる群から独立に選択される１または２個の置換基で置換されていてもよい−ＣＨ２−または−ＣＨ２−ＣＨ２−ビラジカルである、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ２が、２個のメチル置換基で、もしくはイソプロピル、イソブチルおよびベンジルからなる群から選択される１個の置換基で置換されていてもよい−ＣＨ２−ビラジカル、またはＲ２が−ＣＨ２−ＣＨ２−ビラジカルである、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ２が−ＣＨ２−または−ＣＨ２−ＣＨ２−ビラジカルである、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
ｍが１である、請求項１〜５いずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
ｎが０である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
ＸがＯ（Ｃ１−４アルキル）またはハロゲンである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
Ｘがメタ位もしくはパラ位のメトキシ基または塩素である、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｙが、ＣＯ２Ｈ、ＣＯ２Ｍｅ、−ＮＭｅ２、および−ＮＥｔ２または前記の基の薬学的に許容可能な塩からなる群から選択される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｙが、ＣＯ２Ｈおよび−ＮＭｅ２からなる群から選択される、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
１−カルボキシメチル−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール、
１−［２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）エチル］−４−［４−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール、
１−カルボキシメチル−４−［４−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール、
（Ｓ）−１−（１−カルボキシ−２−フェニルエチル）−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール、
（Ｒ）−１−（１−カルボキシ−２−フェニルエチル）−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール、
（Ｓ）−１−（１−カルボキシ−３−メチルブチル）−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール、
（Ｒ）−１−（１−カルボキシ−３−メチルブチル）−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール、
（Ｓ）−１−（１−カルボキシ−２−メチルプロピル）−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール、
（Ｒ）−１−（１−カルボキシ−２−メチルプロピル）−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール、
１−（１−カルボキシ−１−メチルエチル）−４−［３−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール、
１−（２−ヒドロキシエチル）−４−［４−（メトキシ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール、
１−メトキシカルボニルメチル−４−（フェニルスルフィニルメチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール、および
１−カルボキシメチル−４−［３−（メトキシ）フェニルスルホニルメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール、
１−カルボキシメチル−４−［３−（クロロ）フェニルチオメチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール
からなる群から選択される、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物またはその塩。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物と、１以上の薬学的に許容可能な賦形剤またはビヒクルとを含んでなる、医薬組成物。
【請求項１４】
経口投与または非経口投与のための、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
医薬品を製造するための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項１６】
骨格筋障害および疾患、心臓障害および疾患ならびに神経障害および疾患の治療および／または予防のための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物を含む、医薬組成物。
【請求項１７】
前記骨格筋障害および疾患が、筋ジストロフィー、先天性ミオパチー、代謝ミオパチー、筋萎縮およびサルコペニアから選択される、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記骨格筋障害または疾患がデュシェンヌ型筋ジストロフィーまたはベッカー型筋ジストロフィーである、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
前記心臓障害および疾患が心不全、心虚血、心不整脈および心筋症から選択される、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
前記神経障害および疾患が脳卒中、アルツハイマー病、前頭側頭骨型認知症および認知機能障害から選択される、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物を合成するための方法であって、
ａ）場合により銅触媒の存在下、および場合により塩基の存在下で、式（ＩＩ）のアルキンを式（ＩＩＩ）のアジドと反応させて式（Ｉ）の化合物を得ること
【化２】
2019520423.tif 000049
［ここで、
式（ＩＩ）〜（ＩＩＩ）の化合物における基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、ｍ、ｎおよびＸは、請求項１〜１２のいずれか一項に定義される通りであり、かつ、
Ｙは、カルボキシル保護基、ヒドロキシル保護基またはアミノ保護基で保護されていてもよい請求項１〜１２のいずれか一項に定義される基である］；
ｂ）工程ａ）で得られた式（Ｉ）の化合物においてｎが０である場合には、場合により、前記式（Ｉ）の化合物を酸化剤で処理して、式（Ｉ）の化合物（式中、ｎが１または２であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、ｍおよびＸが請求項１〜１２のいずれか一項に記載の通りであり、かつ、Ｙが、カルボキシル保護基、ヒドロキシル保護基またはアミノ保護基で保護されていてもよい請求項１〜１２のいずれ一項に定義される基である）を得ること；および
ｃ）工程ａ）またはｂ）で得られた式（Ｉ）の化合物が保護基で保護されたＹ基を有する場合には、前記保護基を除去して、式（Ｉ）の化合物（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、ｍ、ｎ、ＸおよびＹが請求項１〜１２のいずれか一項に定義される通りである）を得ること
を含んでなる、方法。
【国際調査報告】
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