(57)【要約】  本発明は、ベバシズマブの緩衝された水性製剤を提供する。本製剤は、トレハロース又はショ糖、及びポリソルベート２０を含有するリン酸クエン酸塩緩衝液を含有する。本製剤は、約５．８〜約６．０の酸性ｐＨを有し、且つベバシズマブ分子の立体構造安定性及びコロイド安定性を増強する。リン酸クエン酸塩緩衝液中の可逆的凝集体及び共有的ダイマーの効能−低下するレベルは低く、且つこの緩衝液は、更に強力なストレスに対する防御をもたらすが、抗体の重要な生物物理学的説明事項は修飾も変更もしなかった。【選択図】図２Ｂ（ｖ）
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号：１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号：２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体、約１０ｍＭ〜約１００ｍＭのリン酸クエン酸塩、約１００ｍＭ〜約２００ｍＭのトレハロース、並びに約０．０１％（ｖ／ｖ）〜約０．１％（ｖ／ｖ）のポリソルベート２０を含有する緩衝液を含む、緩衝された抗体製剤であって、ここで抗体製剤が、ｐＨ約５．７〜約６．１を有し、且つここで抗体製剤が、５℃の冷蔵条件下で貯蔵された場合に、少なくとも１８ヶ月安定している、緩衝された抗体製剤。
【請求項２】
前記製剤が、抗体約１０ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌを含有する、請求項１記載の製剤。
【請求項３】
前記製剤が、抗体約１５ｍｇ／ｍｌ〜約３５ｍｇ／ｍｌを含有する、請求項１記載の製剤。
【請求項４】
前記製剤が、抗体約２４ｍｇ／ｍｌ〜約２７ｍｇ／ｍｌを含有する、請求項１記載の製剤。
【請求項５】
前記製剤が、抗体約２５ｍｇ／ｍｌ〜約２６ｍｇ／ｍｌを含有する、請求項１記載の製剤。
【請求項６】
前記製剤が、抗体約２５．５ｍｇ／ｍｌを含有する、請求項１記載の製剤。
【請求項７】
前記製剤が、抗体約２５ｍｇ／ｍｌを含有する、請求項１記載の製剤。
【請求項８】
前記緩衝液が、リン酸クエン酸塩約３０ｍＭ〜約７０ｍＭを含有する、請求項１記載の製剤。
【請求項９】
前記緩衝液が、リン酸クエン酸塩約４０ｍＭ〜約６０ｍＭを含有する、請求項１記載の製剤。
【請求項１０】
前記緩衝液が、リン酸クエン酸塩約４８ｍＭ〜約５２ｍＭを含有する、請求項１記載の製剤。
【請求項１１】
前記緩衝液が、リン酸クエン酸塩約４９ｍＭ〜約５１ｍＭを含有する、請求項１記載の製剤。
【請求項１２】
前記緩衝液が、リン酸クエン酸塩約５０ｍＭ〜約５１ｍＭを含有する、請求項１記載の製剤。
【請求項１３】
前記緩衝液が、リン酸クエン酸塩約５０ｍＭを含有する、請求項１記載の製剤。
【請求項１４】
前記緩衝液が、リン酸クエン酸塩約５１ｍＭを含有する、請求項１記載の製剤。
【請求項１５】
前記製剤が、トレハロース約１２０ｍＭ〜約１８０ｍＭを含有する、請求項１記載の製剤。
【請求項１６】
前記製剤が、トレハロース約１４０ｍＭ〜約１８０ｍＭを含有する、請求項１記載の製剤。
【請求項１７】
前記製剤が、トレハロース約１５０ｍＭ〜約１７０ｍＭを含有する、請求項１記載の製剤。
【請求項１８】
前記製剤が、トレハロース約１５７ｍＭ〜約１６１ｍＭを含有する、請求項１記載の製剤。
【請求項１９】
前記製剤が、トレハロース約１５８ｍＭ〜約１６０ｍＭを含有する、請求項１記載の製剤。
【請求項２０】
前記製剤が、トレハロース約１５９ｍＭを含有する、請求項１記載の製剤。
【請求項２１】
前記製剤が、トレハロース約１６０ｍＭを含有する、請求項１記載の製剤。
【請求項２２】
前記製剤が、ポリソルベート２０約０．０２％（ｖ／ｖ）〜約０．０６％（ｖ／ｖ）を含有する、請求項１記載の製剤。
【請求項２３】
前記製剤が、ポリソルベート２０約０．０３％（ｖ／ｖ）〜約０．０５％（ｖ／ｖ）を含有する、請求項１記載の製剤。
【請求項２４】
前記製剤が、ポリソルベート２０約０．０４％（ｖ／ｖ）を含有する、請求項１記載の製剤。
【請求項２５】
前記製剤が、ｐＨ約５．８を有する、請求項１記載の製剤。
【請求項２６】
前記製剤が、ｐＨ約６を有する、請求項１記載の製剤。
【請求項２７】
配列番号：１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号：２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を約１５ｍｇ／ｍｌ〜約３５ｍｇ／ｍｌ、約５ｍＭ〜約２５ｍＭの酢酸ナトリウム、約１５０ｍＭ〜約２０１ｍＭのショ糖、並びに約０．０３％（ｖ／ｖ）〜約０．０５％（ｖ／ｖ）のポリソルベート２０を含有する緩衝液を含む、緩衝された抗体製剤であって、ここで抗体製剤が、約５．６〜約５．８を有し、ここで抗体製剤が、５℃の冷蔵条件下で貯蔵された場合に、少なくとも１８ヶ月安定している、緩衝された抗体製剤。
【請求項２８】
前記製剤が、抗体約２０ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌを含有する、請求項２７記載の製剤。
【請求項２９】
前記製剤が、抗体約２３ｍｇ／ｍｌ〜約２７ｍｇ／ｍｌを含有する、請求項２７記載の製剤。
【請求項３０】
前記製剤が、抗体約２４ｍｇ／ｍｌ〜約２７ｍｇ／ｍｌを含有する、請求項２７記載の製剤。
【請求項３１】
前記製剤が、抗体約２４ｍｇ／ｍｌ〜約２６ｍｇ／ｍｌを含有する、請求項２７記載の製剤。
【請求項３２】
前記製剤が、抗体約２５ｍｇ／ｍｌ〜約２６ｍｇ／ｍｌを含有する、請求項２７記載の製剤。
【請求項３３】
前記製剤が、抗体約２５．５ｍｇ／ｍｌを含有する、請求項２７記載の製剤。
【請求項３４】
前記製剤が、抗体約２５ｍｇ／ｍｌを含有する、請求項２７記載の製剤。
【請求項３５】
前記緩衝液が、酢酸ナトリウム約１１ｍＭ〜約１９ｍＭを含有する、請求項２７記載の製剤。
【請求項３６】
前記緩衝液が、酢酸ナトリウム約１３ｍＭ〜約１７ｍＭを含有する、請求項２７記載の製剤。
【請求項３７】
前記緩衝液が、酢酸ナトリウム約１３ｍＭ〜約１６ｍＭを含有する、請求項２７記載の製剤。
【請求項３８】
前記緩衝液が、酢酸ナトリウム約１５ｍＭを含有する、請求項２７記載の製剤。
【請求項３９】
前記製剤が、ショ糖約１６５ｍＭ〜約１８５ｍＭを含有する、請求項２７記載の製剤。
【請求項４０】
前記製剤が、ショ糖約１７０ｍＭ〜約１８０ｍＭを含有する、請求項２７記載の製剤。
【請求項４１】
前記製剤が、ショ糖約１７４ｍＭ〜約１７６ｍＭを含有する、請求項２７記載の製剤。
【請求項４２】
前記製剤が、ショ糖約１７５ｍＭを含有する、請求項２７記載の製剤。
【請求項４３】
前記製剤が、ポリソルベート２０約０．０３％（ｖ／ｖ）〜約０．０５％（ｖ／ｖ）を含有する、請求項２７記載の製剤。
【請求項４４】
前記製剤が、ポリソルベート２０約０．０４％（ｖ／ｖ）を含有する、請求項２７記載の製剤。
【請求項４５】
前記製剤が、ｐＨ約５．８を有する、請求項２７記載の製剤。
【請求項４６】
前記製剤が、ｐＨ約５．６を有する、請求項２７記載の製剤。
【請求項４７】
治療を必要とする対象において癌を治療する方法であって、該方法が、請求項１〜４６のいずれか一項記載の緩衝された抗体製剤の該癌の治療に有効な量を、対象へ投与することを含む、方法。
【請求項４８】
前記癌が、白金−抵抗性再発性上皮卵巣癌、卵管癌、原発性腹膜癌、難治性子宮頸癌、再発性子宮頸癌、転移性子宮頸癌、転移性結腸直腸癌、転移性ＨＥＲ２陰性乳癌、転移性腎細胞癌、膠芽細胞腫、及び非小細胞肺癌からなる群から選択される、請求項４７記載の方法。
【請求項４９】
前記対象が、ヒトである、請求項４７記載の方法。
【請求項５０】
前記投与工程が、抗体製剤を静脈内に注射することを含む、請求項４７記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、２０１５年１２月２９日に出願された米国特許仮出願第６２／２７２，１１６号の恩恵を及び優先権を主張するものであり、この出願の内容は、その全体が引用により本明細書中に組込まれている。
【０００２】
配列表の組込み
テキストファイル名「ＯＮＢＩ００５００１ＷＯＳｅｑＬｉｓｔ．ｔｘｔ，」は、２０１６年１２月２７日に作製され、サイズは８．４ＫＢであり、その内容はそれらの全体が引用により本明細書中に組込まれている。
【０００３】
発明の分野
本発明は、一般に抗体製剤化学の分野に関する。より特定すると、本発明は、血管内皮増殖因子に対する抗体の緩衝された製剤に関し、この製剤は、この抗体の熱安定性及びコロイド安定性を増大し、このことにより、抗体の長期貯蔵を増強する。
【背景技術】
【０００４】
発明の背景
生物製剤価格競争及び改革法（ＢＰＣＩＡ）の一部として、生物学的薬品（生体において生成されるか又は生体から誘導される）は、データがとりわけ、その製品が既に承認された生物学的製品に「高度に類似している」ことを示す場合、「バイオ後続品（ｂｉｏｓｉｍｉｌａｒ）」であることが明らかにされている。このバイオ後続品は、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）が承認した生物学的製品の少なくとも生物学的機能及び治療有効性を保持しなければならない。しかしバイオ後続品は、承認された生物学的製品とは異なるように製剤化され得る。この製剤は、生物学的医薬品の安定性及び貯蔵寿命を向上することができ、また特定の疾患又は状態の治療における有効性を向上することもできる。本製剤はまた、患者が承認された生物学的製品の投与時に経験することがある、患者の不快感又は他の厄介な作用の軽減を含む、他の投与の態様を向上することもできる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
抗体分子は、生物学的薬物として使用することができ、且つ多くのかかる抗体は、ヒトにおける使用が承認されている。抗体分子は、バイオ後続品として製造されることができ、且つ適切に再製剤化される。当該技術分野において高品質の抗体バイオ後続品の必要性が依然存在している。
【０００６】
商標アバスチン（登録商標）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社、サンフランシスコ、ＣＡ）として市販されているベバシズマブ抗体は、貯蔵条件下で、以下の２つの形で凝集することがわかっている−非共有的、可逆的凝集体、及び共有的不可逆的凝集体。後者（共有的凝集体）は、抗原−結合ドメインにおいて起こり、結果的に血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）との結合に利用可能な結合部位の数を減少すると、考えられている。結果的に、この抗体の効能は減弱される。かかる凝集体の減少は、一般に、及び特にベバシズマブなどの抗体にとって、望ましいものである。本開示は、当該技術分野におけるこれらの必要性に対処している。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
発明の概要
本発明は、ベバシズマブの貯蔵のための緩衝された製剤を特徴としている。ベバシズマブは、配列番号：１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号：２のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は配列番号：３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号：４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含んでよい。この緩衝された製剤において、ベバシズマブは、濃度約１０ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌ、又はより好ましくは約１５ｍｇ／ｍｌ〜約３５ｍｇ／ｍｌ、又はより好ましくは約２４ｍｇ／ｍｌ〜約２７ｍｇ／ｍｌ、又はより好ましくは約２５ｍｇ／ｍｌもしくは約２５．５ｍｇ／ｍｌで存在してよい。本製剤は水性であり、且つその緩衝液は、リン酸クエン酸塩又は酢酸ナトリウムを含有してよく、並びに本製剤はまた、トレハロースもしくはショ糖などの糖を含む安定化剤、並びにポリソルベート２０などの穏やかな界面活性剤も含有してよい。本製剤は好ましくは、酸性ｐＨ約５．６〜約６．１を有し、且つ一部の態様において、ｐＨは、約５．６、又は約５．８、又は約６である。
【０００８】
一部の態様において、本製剤は、約１０ｍＭ〜約１００ｍＭのリン酸クエン酸塩、約１００ｍＭ〜約２００ｍＭのトレハロース、及び約０．０１％（ｖ／ｖ）〜約０．１％（ｖ／ｖ）のポリソルベート２０を含有する緩衝液を含み、且つｐＨ約５．７〜約６．１を有する。リン酸クエン酸塩は、濃度範囲約３０ｍＭ〜約７０ｍＭ、約４０ｍＭ〜約６０ｍＭ、約４８ｍＭ〜約５２ｍＭ、約４９ｍＭ〜約５１ｍＭ、又は約５０ｍＭ〜約５１ｍＭであってよいか、あるいは濃度約５０ｍＭ又は約５１ｍＭであってよい。トレハロースは、濃度範囲約１２０ｍＭ〜約１８０ｍＭ、約１５０ｍＭ〜約１７０ｍＭ、約１５７ｍＭ〜約１６１ｍＭ、約１４０ｍＭ〜約１８０ｍＭ、又は約１５８ｍＭ〜約１６０ｍＭであってよいか、あるいは濃度約１５９ｍＭ又は約１６０ｍＭであってよい。ポリソルベートは、濃度範囲約０．０２％（ｖ／ｖ）〜約０．０６％（ｖ／ｖ）、又は約０．０３％（ｖ／ｖ）〜約０．０５％（ｖ／ｖ）であってよいか、あるいは濃度約０．０４％（ｖ／ｖ）であってよい。本製剤のｐＨは、約５．８であってよいか、又は約６であってよい。
【０００９】
一部の態様において、本製剤は、約５ｍＭ〜約２５ｍＭの酢酸ナトリウム三水和物、約１５０ｍＭ〜約２０１ｍＭのショ糖、及び約０．０３％（ｖ／ｖ）〜約０．０５％（ｖ／ｖ）のポリソルベート２０を含有する緩衝液を含み、且つｐＨ約５．５〜約５．９を有する。酢酸ナトリウム三水和物は、濃度範囲約１１ｍＭ〜約１９ｍＭ、約１３ｍＭ〜約１７ｍＭ、又は約１３ｍＭ〜約１６ｍＭであってよいか、あるいは濃度約１５ｍＭであってよい。ショ糖は、濃度範囲約１６５ｍＭ〜約１８５ｍＭ、約１７０ｍＭ〜約１８０ｍＭ、又は約１７４ｍＭ〜約１７６ｍＭであってよいか、あるいは濃度約１７５ｍＭであってよい。
【００１０】
本開示は、配列番号：１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号：２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体、約１０ｍＭ〜約１００ｍＭのリン酸クエン酸塩、約１００ｍＭ〜約２００ｍＭのトレハロース、及び約０．０１％（ｖ／ｖ）〜約０．１％（ｖ／ｖ）のポリソルベート２０を含有する緩衝液を含む、緩衝された抗体製剤を提供し、ここでこの抗体製剤は、ｐＨ約５．７〜約６．１を有する。好ましくは、この抗体製剤は、５℃の冷蔵条件下で貯蔵された場合に、少なくとも１８ヶ月安定している。
【００１１】
本開示はまた、約１５ｍｇ／ｍｌ〜約３５ｍｇ／ｍｌの配列番号：１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号：２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体、約４０ｍＭ〜約６０ｍＭのリン酸クエン酸塩、約１４０ｍＭ〜約１８０ｍＭのトレハロース、及び約０．０２％（ｖ／ｖ）〜約０．０６％（ｖ／ｖ）のポリソルベート２０を含有する緩衝液を含む、緩衝された抗体製剤も提供し、ここでこの抗体製剤は、ｐＨ約５．７〜約６．１を有する。好ましくは、本抗体製剤は、５℃の冷蔵条件下で貯蔵された場合に、少なくとも１８ヶ月安定している。
【００１２】
本開示は、約２４ｍｇ／ｍｌ〜約２７ｍｇ／ｍｌの配列番号：１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号：２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体、約４８ｍＭ〜約５２ｍＭのリン酸クエン酸塩、約１５７ｍＭ〜約１６１ｍＭのトレハロース、及び約０．０３％（ｖ／ｖ）〜約０．０５％（ｖ／ｖ）のポリソルベート２０を含有する緩衝液を含む、緩衝された抗体製剤を提供し、ここでこの抗体製剤は、ｐＨ約５．８〜約６．０を有する。好ましくは、本抗体製剤は、５℃の冷蔵条件下で貯蔵した場合、少なくとも１８ヶ月間安定している。
【００１３】
本開示は、配列番号：１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号：２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体、約５０ｍＭのリン酸クエン酸塩、約１５９ｍＭのトレハロース、及び約０．０４％（ｖ／ｖ）のポリソルベート２０を含有する緩衝液を含む、緩衝された抗体製剤を提供し、ここでこの抗体製剤は、ｐＨ約５．８又は約６を有する。好ましくは、本抗体製剤は、５℃の冷蔵条件下で貯蔵した場合、少なくとも１８ヶ月間安定している。
【００１４】
本開示は、約２０ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌの配列番号：１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号：２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体、約５ｍＭ〜約２５ｍＭの酢酸ナトリウム、約１５０ｍＭ〜約２０１ｍＭのショ糖、及び約０．０３％（ｖ／ｖ）〜約０．０５％（ｖ／ｖ）のポリソルベート２０を含有する緩衝液を含む、緩衝された抗体製剤を提供し、ここでこの抗体製剤は、ｐＨ約５．６〜約５．８を有する。好ましくは、本抗体製剤は、５℃の冷蔵条件下で貯蔵した場合、少なくとも１８ヶ月間安定している。
【００１５】
本開示はまた、約２４ｍｇ／ｍｌ〜約２６ｍｇ／ｍｌの配列番号：１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号：２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体、約１３ｍＭ〜約１７ｍＭの酢酸ナトリウム、約１７０ｍＭ〜約１８０ｍＭのショ糖、及び約０．０３％（ｖ／ｖ）〜約０．０５％（ｖ／ｖ）のポリソルベート２０を含有する緩衝液を含む、緩衝された抗体製剤を提供し、ここでこの抗体製剤は、ｐＨ約５．６〜約５．８を有する。好ましくは、本抗体製剤は、５℃の冷蔵条件下で貯蔵した場合、少なくとも１８ヶ月間安定している。
【００１６】
本開示はまた、配列番号：１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号：２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体、約１５ｍＭの酢酸ナトリウム、約１７５ｍＭのショ糖、及び約０．０４％（ｖ／ｖ）のポリソルベート２０を含有する緩衝液を含む、緩衝された抗体製剤を提供し、ここでこの抗体製剤は、ｐＨ約５．６〜約５．８を有する。好ましくは、本抗体製剤は、５℃の冷蔵条件下で貯蔵した場合、少なくとも１８ヶ月間安定している。
【００１７】
本開示はまた、配列番号：１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号：２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体、約１５ｍＭの酢酸ナトリウム、約１７５ｍＭのショ糖、及び約０．０４％（ｖ／ｖ）のポリソルベート２０を含有する緩衝液を含む、緩衝された抗体製剤を提供し、ここでこの抗体製剤は、ｐＨ約５．６〜約５．８を有する。好ましくは、本抗体製剤は、５℃の冷蔵条件下で貯蔵した場合、少なくとも１８ヶ月間安定している。
【００１８】
本開示はまた、本明細書に明らかにされた配列番号：１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号：２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を含有する緩衝された抗体製剤を含む、キットを提供する。このキットは、この抗体製剤を対象へ注射するための装置を更に備えることができる。本装置は、注射器、針、カテーテル、又はそれらの組合せを備えることができる。キットは更に、１種又は複数の本明細書に開示された癌の治療に対する説明書を更に含むことができる。
【００１９】
本開示はまた、治療を必要とする対象において癌を治療する方法を提供し、この方法は、本明細書に開示された配列番号：１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号：２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を含有する緩衝された任意の抗体製剤を、該癌を治療するための有効量で、対象に投与することを含み得る。
【００２０】
本開示は、癌の治療のための医薬品の製造において使用するための、本明細書に開示された配列番号：１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号：２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を含有する、任意の緩衝された抗体製剤も提供する。
【００２１】
任意の抗体製剤は、１又は複数の白金−抵抗性再発性上皮卵巣、卵管、もしくは原発性腹膜の癌を治療する方法において使用することができる。概して本方法は、ベバシズマブ抗体を含む製剤を、１又は複数の白金−抵抗性再発性上皮卵巣、卵管、もしくは原発性腹膜の癌の治療に有効な量で、それを必要とする対象へ、投与することを含む。この対象は好ましくは、ヒトであり、且つ該製剤は好ましくは、静脈内注入又は注射を介して投与される。任意の抗体製剤は、１又は複数の白金−抵抗性再発性上皮卵巣、卵管、もしくは原発性腹膜の癌、難治性、再発性、転移性の子宮頸癌、転移性結腸直腸癌、転移性ＨＥＲ２（ヒト上皮細胞増殖因子受容体２）陰性乳癌、転移性腎細胞癌、膠芽細胞腫、及び非小細胞肺癌などの癌の治療のための医薬品の製造に同様に使用されてよい。
【００２２】
別に規定しない限り、本明細書において使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の業者により通常理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に引用された全ての特許及び刊行物は、それらの全体が引用により及び全ての目的のために本明細書中に組み込まれている。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】図１は、５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液中のベバシズマブ熱安定性に対する様々な安定化剤の作用を示す、ＤＳＣプロットを示す。表１からのコンディション１、２、９、及び１０を、このプロットに示している。
【００２４】
【図２Ａ】図２Ａは、期間１８ヶ月間にわたり５℃で貯蔵した場合の、コンディション１（ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））合致）、コンディション２（ベバシズマブリン酸クエン酸塩、ｐＨ５．８）、コンディション３（ベバシズマブリン酸クエン酸塩、ｐＨ６．０）、コンディション４（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．６）、及びコンディション５（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．８）におけるベバシズマブ凝集体の割合を示している。
【００２５】
【図２Ａ（ｉ）】図２Ａ（ｉ）は、生成物を期間１８ヶ月間にわたり５℃で貯蔵した場合の、コンディション１（ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））合致）、コンディション２（ベバシズマブリン酸クエン酸塩、ｐＨ５．８）及びコンディション３（ベバシズマブリン酸クエン酸塩、ｐＨ６．０）に関する、クロマトグラフィーのオーバーレイ（無希釈注入条件を用いるサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により測定し、総凝集体を定量する）を示す。
【００２６】
【図２Ａ（ｉｉ）】図２Ａ（ｉｉ）は、生成物を期間１８ヶ月間にわたり５℃で貯蔵した場合の、コンディション１（ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））合致）、コンディション４（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．６）、及びコンディション５（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．８）に関する、クロマトグラフィーのオーバーレイ（無希釈注入条件を用いるサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により測定し、総凝集体を定量する）を示す。
【００２７】
【図２Ｂ】図２Ｂは、期間１８ヶ月間にわたり５℃で貯蔵した場合の、コンディション１（ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））合致）、コンディション２（ベバシズマブリン酸クエン酸塩、ｐＨ５．８）、コンディション３（ベバシズマブリン酸クエン酸塩、ｐＨ６．０）、コンディション４（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．６）、及びコンディション５（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．８）における、ベバシズマブ共有的ダイマーの割合を示している。
【００２８】
【図２Ｂ（ｉ）】図２Ｂ（ｉ）は、生成物を期間１８ヶ月間にわたり５℃で貯蔵した場合の、コンディション１（ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））合致）、コンディション２（ベバシズマブリン酸クエン酸塩、ｐＨ５．８）、及びコンディション３（ベバシズマブリン酸クエン酸塩、ｐＨ６．０）のクロマトグラフィーのオーバーレイ（希釈注入条件を用いるサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により測定し、ベバシズマブ共有的ダイマーを定量する）を示す。
【００２９】
【図２Ｂ（ｉｉ）】図２Ｂ（ｉｉ）は、生成物を期間１８ヶ月間にわたり５℃で貯蔵した場合の、コンディション１（ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））合致）、コンディション４（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．６）、及びコンディション５（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．８）のクロマトグラフィーのオーバーレイ（希釈注入条件を用いるサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により測定し、ベバシズマブ共有的ダイマーを定量する）を示す。
【００３０】
【図２Ｂ（ｉｉｉ）】図２Ｂ（ｉｉｉ）は、期間１８ヶ月間にわたり５℃で貯蔵した場合の、コンディション１（ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））合致）、コンディション２（ベバシズマブリン酸クエン酸塩、ｐＨ５．８）、コンディション３（ベバシズマブリン酸クエン酸塩、ｐＨ６．０）、コンディション４（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．６）、及びコンディション５（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．８）における、陽イオン交換クロマトグラフィー（ＣＥＸ）により測定したベバシズマブ酸性種の割合の変化を示す。
【００３１】
【図２Ｂ（ｉｖ）】図２Ｂ（ｉｖ）は、生成物を期間１８ヶ月間にわたり５℃で貯蔵した場合の、コンディション１（ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））合致）、コンディション２（ベバシズマブリン酸クエン酸塩、ｐＨ５．８）、及びコンディション３（ベバシズマブリン酸クエン酸塩、ｐＨ６．０）のクロマトグラフィーのオーバーレイ（陽イオン交換クロマトグラフィー（ＣＥＸ）により測定し、％酸性種、％塩基性種及び％主要種を定量する）を示す。
【００３２】
【図２Ｂ（ｖ）】図２Ｂ（ｖ）は、生成物を期間１８ヶ月間にわたり５℃で貯蔵した場合の、コンディション１（ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））合致）、コンディション４（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．６）、及びコンディション５（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．８）のクロマトグラフィーのオーバーレイ（陽イオン交換クロマトグラフィー（ＣＥＸ）により測定し、％酸性種、％塩基性種及び％主要種を定量する）を示す。
【００３３】
【図２Ｃ】図２Ｃは、３０℃で貯蔵した場合の、コンディション１（ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））合致）、コンディション２（ベバシズマブリン酸クエン酸塩、ｐＨ５．８）、コンディション３（ベバシズマブリン酸クエン酸塩、ｐＨ６．０）、コンディション４（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．６）、及びコンディション５（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．８）における、ベバシズマブ凝集体の割合を示す。
【００３４】
【図２Ｄ】図２Ｄは、３０℃で貯蔵した場合の、コンディション１（ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））合致）、コンディション２（ベバシズマブリン酸クエン酸塩、ｐＨ５．８）、コンディション３（ベバシズマブリン酸クエン酸塩、ｐＨ６．０）、コンディション４（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．６）、及びコンディション５（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．８）における、ベバシズマブ共有的ダイマーの割合を示す。
【００３５】
【図２Ｅ】図２Ｅは、３７℃で貯蔵した場合の、コンディション１（ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））合致）、コンディション２（ベバシズマブリン酸クエン酸塩、ｐＨ５．８）、コンディション３（ベバシズマブリン酸クエン酸塩、ｐＨ６．０）、コンディション４（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．６）、及びコンディション５（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．８）における、ベバシズマブ凝集体の割合を示す。
【００３６】
【図２Ｆ】図２Ｆは、３７℃で貯蔵した場合の、コンディション１（ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））合致）、コンディション２（ベバシズマブリン酸クエン酸塩、ｐＨ５．８）、コンディション３（ベバシズマブリン酸クエン酸塩、ｐＨ６．０）、コンディション４（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．６）、及びコンディション５（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．８）における、ベバシズマブ共有的ダイマーの割合を示す。
【００３７】
【図２Ｇ】図２Ｇは、振盪ストレスに供した場合の、コンディション１（ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））合致）、コンディション２（ベバシズマブリン酸クエン酸塩、ｐＨ５．８）、コンディション３（ベバシズマブリン酸クエン酸塩、ｐＨ６．０）、コンディション４（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．６）、及びコンディション５（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．８）における、ベバシズマブ凝集体の割合を示す。
【００３８】
【図２Ｈ】図２Ｈは、振盪ストレスに供した場合の、コンディション１（ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））合致）、コンディション２（ベバシズマブリン酸クエン酸塩、ｐＨ５．８）、コンディション３（ベバシズマブリン酸クエン酸塩、ｐＨ６．０）、コンディション４（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．６）、及びコンディション５（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．８）における、ベバシズマブ共有的ダイマーの割合を示す。
【００３９】
【図２Ｉ】図２Ｉは、凍結／解凍ストレスに供した場合の、コンディション１（ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））合致）、コンディション２（ベバシズマブリン酸クエン酸塩、ｐＨ５．８）、コンディション３（ベバシズマブリン酸クエン酸塩、ｐＨ６．０）、コンディション４（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．６）、及びコンディション５（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．８）における、ベバシズマブ凝集体の割合を示す。
【００４０】
【図２Ｊ】図２Ｊは、凍結／解凍ストレスに供した場合の、コンディション１（ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））合致）、コンディション２（ベバシズマブリン酸クエン酸塩、ｐＨ５．８）、コンディション３（ベバシズマブリン酸クエン酸塩、ｐＨ６．０）、コンディション４（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．６）、及びコンディション５（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．８）における、ベバシズマブ共有的ダイマーの割合を示す。
【００４１】
【図３】図３は、濃度変化による、ベバシズマブの流体力学的サイズを示す。
【００４２】
【図４】図４は、加速された安定性のＴ＝０での内部蛍光発光走査トリプトファンプロットを示す。
【発明を実施するための形態】
【００４３】
発明の詳細な説明
本発明の態様に関する様々な用語が、本明細書及び請求項を通じて使用される。かかる用語には、別に指摘されない限りは、当該技術分野におけるそれらの通常の意味が与えられている。他の具体的に定義された用語は、本明細書に提供される定義と一致した様式で構成されるべきである。
【００４４】
本明細書において使用される単数形「ある（ａ）、（ａｎ）及び（ｔｈｅ）」は、別に明白に言及しない限りは、複数の意味を含む。
【００４５】
本明細書において使用される用語「含有する」、「有する」及び「含む」は、より限定する用語「から本質的になる」及び「からなる」を包含している。
【００４６】
用語対象及び患者は、互換的に使用され、且つ任意の動物を含む。対象は、ペット及び家畜の哺乳動物、並びにマウス、ウサギ、及びラット、並びに他の齧歯類を含む齧歯類を含む、哺乳動物を含む。非ヒト霊長類は、好ましい対象である。ヒトは、高度に好ましい対象である。
【００４７】
用語組成物及び製剤は、互換的に使用される。従って、本開示の製剤は、本開示の組成物であってよく、且つ本開示の組成物は、本開示の製剤であってよい。
【００４８】
本発明に従い、血管内皮増殖因子に特異的に結合するベバシズマブバイオ後続品の抗体製剤は、トレハロースもしくはショ糖と共に、リン酸クエン酸塩により緩衝されるか、又はショ糖と共に、酢酸塩（リン酸クエン酸塩の代わりに）により緩衝されることができ、これらの緩衝液は、抗体の熱安定性及びコロイド安定性を増強し、臨床使用が現在承認されたベバシズマブの製剤（商標アバスチン（登録商標）で販売）よりも安定性をさらに増強することが認められる。特に本発明の製剤は、有意に低い抗体の凝集を明らかにしている。これらの緩衝液は、この抗体分子の貯蔵寿命を延長する。従って本開示は、酸性ｐＨで、リン酸クエン酸塩、並びにトレハロースもしくはショ糖を含有する緩衝液を含む水性担体、又は酸性ｐＨで、酢酸塩、並びにショ糖を含有する緩衝液を含む水性担体を含む、ベバシズマブバイオ後続品の抗体の緩衝された製剤を特徴としている。
【００４９】
本抗体は、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）のエピトープへ特異的に結合し、このエピトープは、線状又は立体構造（ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ）であってよい。一部の好ましい態様において、本抗体は、配列番号：１のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。一部の好ましい態様において、本抗体は、配列番号：２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。好ましくは、本抗体は、重鎖定常ドメイン及び／又は軽鎖定常ドメインを含む。高度に好ましい態様において、本抗体は、配列番号：１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号：２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一部の態様において、本抗体は、配列番号：３のアミノ酸配列の重鎖可変領域及び配列番号：４のアミノ酸配列の軽鎖可変領域を含む。
【表１】
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【００５０】
好ましくは、本抗体は、可変領域及び定常領域の両方を含む完全長抗体であるが、一部の態様において、本抗体は、完全長抗体分子の抗原−結合特異性を保持し、同じく好ましくはその親和性のほとんどもしくは全てを保持している、完全長抗体の誘導体又は断片又は一部を含んでよい。本抗体は、抗体活性又は安定性に影響を及ぼし得る、翻訳後修飾（ＰＴＭ）又は部分を含んでよい。本抗体は、メチル化、アセチル化、グリコシル化、硫酸化、リン酸化、カルボキシル化、及び／又はアミド化されてよく、並びに当該技術分野において周知である他の部分を含んでよい。
【００５１】
本製剤は好ましくは、本抗体の治療的有効量を含有する。治療的有効量は、抗体の投与時に治療される疾患又は病態に応じて、並びに／又は抗体が投与される対象の特徴、例えば年齢、性別、身長、体重、疾患もしくは病態の進行状態もしくは病期、先行する投与の回数及び有効性、その対象へ投与された他の治療薬、並びに実践者に公知であるか又は好適な投薬を決定する際に別に考慮した他の特徴などに応じて、変動してよい。好ましくは、治療的有効量は、非扁平上皮非小細胞肺癌、膠芽細胞腫、腎細胞癌、子宮頸癌、又は上皮卵巣、卵管、もしくは原発性腹膜の癌などの癌を治療するのに有効である量である。
【００５２】
本製剤は、本抗体を約１０ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌ含有してよい。一部の態様において、本製剤は、本抗体を約１０ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌ含有する。一部の態様において、本製剤は、本抗体を約１０ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌ含有する。一部の態様において、本製剤は、本抗体を約２０ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌ含有する。一部の態様において、本製剤は、本抗体を約２０ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌ含有する。一部の態様において、本製剤は、本抗体を約２０ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌ含有する。一部の態様において、本製剤は、本抗体を約１５ｍｇ／ｍｌ〜約４５ｍｇ／ｍｌ含有する。一部の態様において、本製剤は、本抗体を約１５ｍｇ／ｍｌ〜約３５ｍｇ／ｍｌ含有する。一部の態様において、本製剤は、本抗体を約１５ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌ含有する。一部の態様において、本製剤は、本抗体を約２１ｍｇ／ｍｌ〜約２９ｍｇ／ｍｌ含有する。一部の態様において、本製剤は、本抗体を約２２ｍｇ／ｍｌ〜約２８ｍｇ／ｍｌ含有する。一部の態様において、本製剤は、本抗体を約２３ｍｇ／ｍｌ〜約２７ｍｇ／ｍｌ含有する。一部の態様において、本製剤は、本抗体を約２４ｍｇ／ｍｌ〜約２５ｍｇ／ｍｌ含有する。一部の態様において、本製剤は、本抗体を約２５ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌ含有する。一部の態様において、本製剤は、本抗体を約２５ｍｇ／ｍｌ〜約２６ｍｇ／ｍｌ含有する。一部の態様において、本製剤は、本抗体を約２５ｍｇ／ｍｌ〜約２７ｍｇ／ｍｌ含有する。一部の態様において、本製剤は、本抗体を約２５ｍｇ／ｍｌ〜約２８ｍｇ／ｍｌ含有する。一部の態様において、本製剤は、本抗体を約２５ｍｇ／ｍｌ〜約２９ｍｇ／ｍｌ含有する。一部の態様において、本製剤は、本抗体を約２５ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌ含有する。一部の態様において、本製剤は、本抗体を約２４ｍｇ／ｍｌ〜約２７ｍｇ／ｍｌ含有する。一部の態様において、本製剤は、本抗体を約２４ｍｇ／ｍｌ〜約２８ｍｇ／ｍｌ含有する。一部の態様において、本製剤は、本抗体を約２４ｍｇ／ｍｌ〜約２９ｍｇ／ｍｌ含有する。一部の態様において、本製剤は、本抗体を約２４ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌ含有する。一部の態様において、本製剤は、本抗体を約２５．５ｍｇ／ｍｌ〜約２６ｍｇ／ｍｌ含有する。一部の態様において、本製剤は、本抗体を約２５．４ｍｇ／ｍｌ〜約２５．９ｍｇ／ｍｌ含有する。一部の態様において、本製剤は、本抗体を約２５．６ｍｇ／ｍｌ〜約２５．９ｍｇ／ｍｌ含有する。一部の態様において、本製剤は、本抗体を約２５．５ｍｇ／ｍｌ〜約２５．８ｍｇ／ｍｌ含有する。一部の態様において、本製剤は、本抗体を約２５．５ｍｇ／ｍｌ〜約２５．７ｍｇ／ｍｌ含有する。これらの範囲は、その範囲を規定する下限量と上限量を含む。一部の態様において、本製剤は、本抗体を約２５ｍｇ／ｍｌ含有する。一部の態様において、本製剤は、本抗体を約２５．５ｍｇ／ｍｌ含有する。一部の態様において、本製剤は、本抗体を約２５．６ｍｇ／ｍｌ含有する。一部の態様において、本製剤は、本抗体を約２５．７ｍｇ／ｍｌ含有する。一部の態様において、本製剤は、本抗体を約２５．８ｍｇ／ｍｌ含有する。
【００５３】
本抗体は、例えば、本明細書に説明された又は例証された濃度で、好ましくは緩衝された水性担体と共に製剤化され、且つこの担体は好ましくは水を含有する。この緩衝された抗体製剤は、好ましくは液体形状であり、より好ましくは静脈内投与に適した液体形状である。従って、緩衝された製剤中の水の量は、注入の所望の容積に応じて変動してよい。一部の好ましい態様において、本緩衝液は、リン酸クエン酸塩、トレハロース、及びポリソルベート２０などの穏やかな界面活性剤を含み、且つ抗体製剤を約５．８〜約６．０の酸性ｐＨに維持する。一部の代りの好ましい態様において、本緩衝液は、酢酸塩、ショ糖、及びポリソルベート２０などの穏やかな界面活性剤を含み、且つ抗体製剤を、約５．６〜約５．８の酸性ｐＨに維持する。緩衝された製剤中に貯蔵される場合、本抗体は、通常の貯蔵条件下で、貯蔵が安定している。
【００５４】
リン酸クエン酸塩は、約０．２Ｍリン酸水素二ナトリウム及び約０．１Ｍクエン酸を含有する予備混合溶液中に、リン酸水素二ナトリウム十二水和物及びクエン酸一水和物の水性組合せを含む。
【００５５】
本緩衝液は、約１０ｍＭ〜約１００ｍＭのリン酸クエン酸塩を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約２０ｍＭ〜約９０ｍＭのリン酸クエン酸塩を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約３０ｍＭ〜約７０ｍＭのリン酸クエン酸塩を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約３０ｍＭ〜約８０ｍＭのリン酸クエン酸塩を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約４０ｍＭ〜約７０ｍＭのリン酸クエン酸塩を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約４０ｍＭ〜約６０ｍＭのリン酸クエン酸塩を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約４５ｍＭ〜約５５ｍＭのリン酸クエン酸塩を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約４６ｍＭ〜約５４ｍＭのリン酸クエン酸塩レートを含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約４７ｍＭ〜約５３ｍＭのリン酸クエン酸塩を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約４８ｍＭ〜約５２ｍＭのリン酸クエン酸塩を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約４９ｍＭ〜約５１ｍＭのリン酸クエン酸塩を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約４０ｍＭ〜約５０ｍＭのリン酸クエン酸塩を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約５０ｍＭ〜約７５ｍＭのリン酸クエン酸塩を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約３０ｍＭ〜約５５ｍＭのリン酸クエン酸塩を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約４０ｍＭ〜約５５ｍＭのリン酸クエン酸塩を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約４２ｍＭ〜約５２ｍＭのリン酸クエン酸塩を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約４６ｍＭ〜約５２ｍＭのリン酸クエン酸塩を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約４３ｍＭ〜約５３ｍＭのリン酸クエン酸塩を含有してよい。これらの範囲は、その範囲を規定する下限量と上限量を含む。一部の態様において、本緩衝液は、約５０ｍＭのリン酸クエン酸塩を含有する。
【００５６】
このリン酸クエン酸塩緩衝液は、約１００ｍＭ〜約２００ｍＭのトレハロースを含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１１０ｍＭ〜約１９０ｍＭのトレハロースを含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１２０ｍＭ〜約１８０ｍＭのトレハロースを含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１３０ｍＭ〜約１７０ｍＭのトレハロースを含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１４０ｍＭ〜約１７０ｍＭのトレハロースを含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１５０ｍＭ〜約１７０ｍＭのトレハロースを含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１５５ｍＭ〜約１６５ｍＭのトレハロースを含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１５０ｍＭ〜約１６０ｍＭのトレハロースを含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１５３ｍＭ〜約１６４ｍＭのトレハロースを含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１５２ｍＭ〜約１６７ｍＭのトレハロースを含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１５４ｍＭ〜約１６４ｍＭのトレハロースを含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１５５ｍＭ〜約１６３ｍＭのトレハロースを含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１５６ｍＭ〜約１６２ｍＭのトレハロースを含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１５７ｍＭ〜約１６１ｍＭのトレハロースを含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１５８ｍＭ〜約１６０ｍＭのトレハロースを含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１５８．５ｍＭ〜約１５８．９ｍＭのトレハロースを含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１５８．６ｍＭ〜約１５８．８ｍＭのトレハロースを含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１５８ｍＭ〜約１６１ｍＭのトレハロースを含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１５９ｍＭ〜約１６１ｍＭのトレハロースを含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１５７ｍＭ〜約１６０ｍＭのトレハロースを含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１５７ｍＭ〜約１５９ｍＭのトレハロースを含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１５０ｍＭ〜約１５９ｍＭのトレハロースを含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１５９ｍＭ〜約１６０ｍＭのトレハロースを含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１５９ｍＭ〜約１６５ｍＭのトレハロースを含有してよい。これらの範囲は、その範囲を規定する下限量と上限量を含む。一部の態様において、本緩衝液は、約１５９ｍＭのトレハロースを含有する。一部の態様において、本緩衝液は、約１５８．７ｍＭのトレハロースを含有する。一部の態様において、ショ糖を、トレハロースの代わりにこれらの任意の濃度で使用してよい。従って、例えば、本リン酸クエン酸塩緩衝液は、トレハロースの代わりの安定化剤としてショ糖を含有してよい。
【００５７】
この酢酸塩−ショ糖緩衝液は、約１ｍＭ〜約３０ｍＭの酢酸塩を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約５ｍＭ〜約２５ｍＭの酢酸塩を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１０ｍＭ〜約２０ｍＭの酢酸塩を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１１ｍＭ〜約１９ｍＭの酢酸塩を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１２ｍＭ〜約１８ｍＭの酢酸塩を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１３ｍＭ〜約１５ｍＭの酢酸塩を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１０ｍＭ〜約１５ｍＭの酢酸塩を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１２ｍＭ〜約１６ｍＭの酢酸塩を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１２ｍＭ〜約１５ｍＭの酢酸塩を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１３ｍＭ〜約１６ｍＭの酢酸塩を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１３ｍＭ〜約１７ｍＭの酢酸塩を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１４ｍＭ〜約１８ｍＭの酢酸塩を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１４ｍＭ〜約１６ｍＭの酢酸塩を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１５ｍＭ〜約２０ｍＭの酢酸塩を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約５ｍＭ〜約１５ｍＭの酢酸塩を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１１ｍＭ〜約１７ｍＭの酢酸塩を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１５ｍＭ〜約１６ｍＭの酢酸塩を含有してよい。これらの範囲は、その範囲を規定する下限量と上限量を含む。一部の態様において、本緩衝液は、約１５ｍＭの酢酸塩を含有する。好ましくは、本酢酸塩は、酢酸ナトリウム三水和物である。
【００５８】
この酢酸塩−ショ糖又はリン酸クエン酸塩−ショ糖の緩衝液は、約１００ｍＭ〜約２５０ｍＭのショ糖を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１２５ｍＭ〜約２２５ｍＭのショ糖を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１５０ｍＭ〜約２００ｍＭのショ糖を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１５５ｍＭ〜約１９５ｍＭのショ糖を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１６０ｍＭ〜約１９０ｍＭのショ糖を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１６５ｍＭ〜約１８５ｍＭのショ糖を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１６６ｍＭ〜約１８４ｍＭのショ糖を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１６７ｍＭ〜約１８３ｍＭのショ糖を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１６８ｍＭ〜約１８２ｍＭのショ糖を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１６９ｍＭ〜約１８１ｍＭのショ糖を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１７０ｍＭ〜約１８０ｍＭのショ糖を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１７１ｍＭ〜約１７９ｍＭのショ糖を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１７２ｍＭ〜約１７８ｍＭのショ糖を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１７４ｍＭ〜約１７７ｍＭのショ糖を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１７４ｍＭ〜約１７６ｍＭのショ糖を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１７５ｍＭ〜約１７５．５ｍＭのショ糖を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１７５．２ｍＭ〜約１７５．４ｍＭのショ糖を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１７５ｍＭ〜約１８５ｍＭのショ糖を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１６５ｍＭ〜約１７５ｍＭのショ糖を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１７０ｍＭ〜約１９０ｍＭのショ糖を含有してよい。一部の態様において、本緩衝液は、約１５０ｍＭ〜約１７５ｍＭのショ糖を含有してよい。これらの範囲は、その範囲を規定する下限量と上限量を含む。一部の態様において、本緩衝液は、約１７５ｍＭのショ糖を含有する。一部の態様において、本緩衝液は、約１７５．３ｍＭのショ糖を含有する。
【００５９】
本抗体製剤（例えば、リン酸クエン酸塩−トレハロース又は酢酸塩ショ糖緩衝液を伴う）は、好ましくは、非イオン性界面活性剤を含有する。より好ましくは、この非イオン性界面活性剤は、ポリソルベート２０を含む（Ｃｒｏｄａ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｐｌｃ社（ヨークシャー、英国）の商標Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０のポリソルベートを含んでよい）。この抗体及び水性緩衝液を含有する本抗体製剤は、好ましくは、約０．０１％〜約０．１％（容量で）のポリソルベート２０を含有する。一部の態様において、本抗体製剤は、約０．０２％〜約０．０９％（容量で）のポリソルベート２０を含有する。一部の態様において、本抗体製剤は、約０．０３％〜約０．０８％（容量で）のポリソルベート２０を含有する。一部の態様において、本抗体製剤は、約０．０１％〜約０．０７％（容量で）のポリソルベート２０を含有する。一部の態様において、本抗体製剤は、約０．０２％〜約０．０６％（容量で）のポリソルベート２０を含有する。一部の態様において、本抗体製剤は、約０．０３％〜約０．０５％（容量で）のポリソルベート２０を含有する。一部の態様において、本抗体製剤は、約０．０４％〜約０．０６％（容量で）のポリソルベート２０を含有する。一部の態様において、本抗体製剤は、約０．０２％〜約０．０５％（容量で）のポリソルベート２０を含有する。一部の態様において、本抗体製剤は、約０．０２％〜約０．０４％（容量で）のポリソルベート２０を含有する。一部の態様において、本抗体製剤は、約０．０３％〜約０．０６％（容量で）のポリソルベート２０を含有する。一部の態様において、本抗体製剤は、約０．０１％〜約０．０５％（容量で）のポリソルベート２０を含有する。一部の態様において、本抗体製剤は、約０．０３％〜約０．０４％（容量で）のポリソルベート２０を含有する。一部の態様において、本抗体製剤は、約０．０４％〜約０．０５％（容量で）のポリソルベート２０を含有する。一部の態様において、本抗体製剤は、約０．０３５％〜約０．０４５％（容量で）のポリソルベート２０を含有する。これらの範囲は、その範囲を規定する下限量と上限量を含む。一部の態様において、本抗体製剤は、約０．０４％（容量で）のポリソルベート２０を含有する。
【００６０】
本抗体製剤（例えば、リン酸クエン酸塩−トレハロース／ショ糖又は酢酸塩ショ糖緩衝液を伴う）は、好ましくは、酸性ｐＨに緩衝される。本製剤は好ましくは、ｐＨ約５．３〜約６．５を有する。一部の態様において、本製剤は、ｐＨ約５．４〜約６．４を有する。一部の好ましい態様において、本製剤は、ｐＨ約５．４〜約５．９を有する。一部の好ましい態様において、本製剤は、ｐＨ約５．５〜約５．８を有する。一部の好ましい態様において、本製剤は、ｐＨ約５．６〜約５．８を有する。一部の好ましい態様において、本製剤は、ｐＨ約５．６〜約５．９を有する。一部の態様において、本製剤は、ｐＨ約５．５〜約５．３を有する。一部の好ましい態様において、本製剤は、ｐＨ約５．６〜約６．２を有する。一部の態様において、本製剤は、ｐＨ約５．７〜約６．１を有する。一部の態様において、本製剤は、ｐＨ約５．８〜約６．０を有する。一部の好ましい態様において、本製剤は、ｐＨ約５．４〜約５．９を有する。一部の態様において、本製剤は、ｐＨ約５．６〜約５．９を有する。一部の好ましい態様において、本製剤は、ｐＨ約５．７〜約５．９を有する。一部の好ましい態様において、本製剤は、ｐＨ約５．９〜約６．１を有する。一部の態様において、本製剤は、ｐＨ約６．０〜約６．２を有する。一部の態様において、本製剤は、ｐＨ約５．７〜約６．０を有する。一部の好ましい態様において、本製剤は、ｐＨ約５．８〜約６．１を有する。これらの範囲は、その範囲を規定する下限量と上限量を含む。一部の態様において、本製剤は、ｐＨ約５．８を有する。一部の態様において、本製剤は、ｐＨ約５．９を有する。一部の態様において、本製剤は、ｐＨ約６．０を有する。
【００６１】
一部の好ましい態様において、本抗体製剤は、ＶＥＧＦへ特異的に結合し、且つ配列番号：１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号：２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を約２０ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌ、並びに、約３０ｍＭ〜約７０ｍＭのリン酸クエン酸塩、約１５０ｍＭ〜約１７０ｍＭのトレハロース、及び約０．０１％〜約０．０７％（容量で）のポリソルベート２０を含有する緩衝液を含み、且つｐＨ約５．６〜約６．０を有する。一部の態様において、本抗体製剤は、ＶＥＧＦへ特異的に結合し、且つ配列番号：１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号：２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を約２０ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌ、並びに約３０ｍＭ〜約７０ｍＭのリン酸クエン酸塩、約１５０ｍＭ〜約１７０ｍＭのトレハロース、及び約０．０１％〜約０．０７％（容量で）のポリソルベート２０を含有する緩衝液から本質的になり、且つｐＨ約５．６〜約６．０を有する。一部の態様において、本抗体製剤は、ＶＥＧＦへ特異的に結合し、且つ配列番号：１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号：２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を約２０ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌ、並びに約３０ｍＭ〜約７０ｍＭのリン酸クエン酸塩、約１５０ｍＭ〜約１７０ｍＭのトレハロース、及び約０．０１％〜約０．０７％（容量で）のポリソルベート２０を含有する緩衝液からなり、且つｐＨ約５．６〜約６．０を有する。いずれかのかかる実施態様において、本抗体は、この製剤中に、約２１ｍｇ／ｍｌ〜約２９ｍｇ／ｍｌ、又は約２２ｍｇ／ｍｌ〜約２８ｍｇ／ｍｌ、又は約２３ｍｇ／ｍｌ〜約２７ｍｇ／ｍｌ、又は約２４ｍｇ／ｍｌ〜約２６ｍｇ／ｍｌ、又は約２４．５ｍｇ／ｍｌ〜約２６．５ｍｇ／ｍｌ、約２５ｍｇ／ｍｌ、約２６ｍｇ／ｍｌ、約２５．５ｍｇ／ｍｌ、約２５．６ｍｇ／ｍｌ、約２５．７ｍｇ／ｍｌ又は約２５．８ｍｇ／ｍｌで存在してよい。
【００６２】
一部の好ましい態様において、本抗体製剤は、ＶＥＧＦへ特異的に結合し、且つ配列番号：１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号：２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を約２０ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌ、並びに約４０ｍＭ〜約６０ｍＭのリン酸クエン酸塩、約１５４ｍＭ〜約１６４ｍＭのトレハロース、及び約０．０２％〜約０．０６％（容量で）のポリソルベート２０を含有する緩衝液を含み、且つｐＨ約５．６〜約６．０、又はｐＨ５．８、又はｐＨ約６．０を有する。一部の態様において、本抗体製剤は、ＶＥＧＦへ特異的に結合し、且つ配列番号：１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号：２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を約２０ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌ、並びに約４０ｍＭ〜約６０ｍＭのリン酸クエン酸塩、約１５４ｍＭ〜約１６４ｍＭのトレハロース、及び約０．０２％〜約０．０６％（容量で）のポリソルベート２０を含有する緩衝液から本質的になり、且つｐＨ約５．６〜約６．０、又はｐＨ約５．８、又はｐＨ約６．０を有する。一部の態様において、本抗体製剤は、ＶＥＧＦへ特異的に結合し、且つ配列番号：１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号：２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を約２０ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌ、並びに約４０ｍＭ〜約６０ｍＭのリン酸クエン酸塩、約１５４ｍＭ〜約１６４ｍＭのトレハロース、及び約０．０２％〜約０．０６％（容量で）のポリソルベート２０を含有する緩衝液からなり、且つｐＨ約５．６〜約６．０、又はｐＨ約５．８、又はｐＨ約６．０を有する。いずれかのかかる実施態様において、本抗体は、この製剤中に、約２１ｍｇ／ｍｌ〜約２９ｍｇ／ｍｌ、又は約２２ｍｇ／ｍｌ〜約２８ｍｇ／ｍｌ、又は約２３ｍｇ／ｍｌ〜約２７ｍｇ／ｍｌ、又は約２４ｍｇ／ｍｌ〜約２６ｍｇ／ｍｌ、又は約２４．５ｍｇ／ｍｌ〜約２６．５ｍｇ／ｍｌ、約２５ｍｇ／ｍｌ、約２６ｍｇ／ｍｌ、約２５．５ｍｇ／ｍｌ、約２５．６ｍｇ／ｍｌ、約２５．７ｍｇ／ｍｌ又は約２５．８ｍｇ／ｍｌで存在してよい。
【００６３】
一部の好ましい態様において、本抗体製剤は、ＶＥＧＦへ特異的に結合し、且つ配列番号：１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号：２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を約２５ｍｇ／ｍｌ〜約２６．５ｍｇ／ｍｌ、並びに約４５ｍＭ〜約５５ｍＭのリン酸クエン酸塩、約１５７ｍＭ〜約１６１ｍＭのトレハロース、及び約０．０３％〜約０．０５％（容量で）のポリソルベート２０を含有する緩衝液を含み、且つ約５．６〜約６．０、又はｐＨ約５．８、又はｐＨ約６．０を有する。一部の態様において、本抗体製剤は、ＶＥＧＦへ特異的に結合し、且つ配列番号：１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号：２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を約２５ｍｇ／ｍｌ〜約２６．５ｍｇ／ｍｌ、並びに約４５ｍＭ〜約５５ｍＭのリン酸クエン酸塩、約１５７ｍＭ〜約１６１ｍＭのトレハロース、及び約０．０３％〜約０．０５％（容量で）のポリソルベート２０を含有する緩衝液から本質的になり、且つ約５．６〜約６．０、又はｐＨ約５．８、又はｐＨ約６．０を有する。一部の態様において、本抗体製剤は、ＶＥＧＦへ特異的に結合し、且つ配列番号：１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号：２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を約２５ｍｇ／ｍｌ〜約２６．５ｍｇ／ｍｌ、並びに約４５ｍＭ〜約５５ｍＭのリン酸クエン酸塩、約１５７ｍＭ〜約１６１ｍＭのトレハロース、及び約０．０３％〜約０．０５％（容量で）のポリソルベート２０を含有する緩衝液からなり、且つ約５．６〜約６．０、又はｐＨ約５．８、又はｐＨ約６．０を有する。いずれかのかかる実施態様において、本抗体は、この製剤中に、約２５ｍｇ／ｍｌ〜約２６ｍｇ／ｍｌ、又は約２５．５ｍｇ／ｍｌ〜約２６ｍｇ／ｍｌ、約２５ｍｇ／ｍｌ、約２６ｍｇ／ｍｌ、約２５．５ｍｇ／ｍｌ、約２５．６ｍｇ／ｍｌ、約２５．７ｍｇ／ｍｌ又は約２５．８ｍｇ／ｍｌで存在してよい。
【００６４】
一部の好ましい態様において、本抗体製剤は、ＶＥＧＦへ特異的に結合し、且つ配列番号：１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号：２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を約２５．５ｍｇ／ｍｌ〜約２６．１ｍｇ／ｍｌ、並びに約５０ｍＭのリン酸クエン酸塩、約１５９ｍＭのトレハロース、及び約０．０４％（容量で）のポリソルベート２０を含有する緩衝液を含み、且つｐＨ約５．８又は約６．０を有する。一部の態様において、本抗体製剤は、ＶＥＧＦへ特異的に結合し、且つ配列番号：１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号：２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を約２５．５ｍｇ／ｍｌ〜約２６．１ｍｇ／ｍｌ、並びに約５０ｍＭのリン酸クエン酸塩、約１５９ｍＭのトレハロース、及び約０．０４％（容量で）のポリソルベート２０を含有する緩衝液から本質的になり、且つｐＨ約５．８又は約６．０を有する。一部の態様において、本抗体製剤は、ＶＥＧＦへ特異的に結合し、且つ配列番号：１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号：２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を約２５．５ｍｇ／ｍｌ〜約２６．１ｍｇ／ｍｌ、並びに約５０ｍＭのリン酸クエン酸塩、約１５９ｍＭのトレハロース、及び約０．０４％（容量で）のポリソルベート２０を含有する緩衝液からなり、且つｐＨ約５．８又は約６．０を有する。いずれかのかかる実施態様において、本抗体は、この製剤中に、約２６ｍｇ／ｍｌ、約２５．５ｍｇ／ｍｌ、約２５．６ｍｇ／ｍｌ、約２５．７ｍｇ／ｍｌ又は約２５．８ｍｇ／ｍｌで存在してよい。
【００６５】
本製剤は、特に数ヶ月間から数年にわたる期間の、棚貯蔵を改善するために、抗体を安定化する。本製剤が貯蔵される場合、本抗体は、貯蔵期間中、熱安定性及びコロイド安定性を維持する。例えば、本製剤が貯蔵される場合、本抗体は、安定しており、且つ最小の凝集、綿状沈殿（ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｏｎ）、断片化、及び変性を示し、並びに本抗体は、そのＶＥＧＦ結合活性を保持する。
【００６６】
本抗体製剤は、冷蔵条件下で、及び好ましくは約２℃〜約６℃で、約２℃、約３℃、約４℃、約５℃、約６℃、約７℃、約８℃を含む温度で貯蔵されることが、好ましい。本抗体製剤は、かかる温度で少なくとも約３ヶ月間貯蔵されてよい。一部の態様において、本抗体製剤は、かかる温度で少なくとも約６ヶ月間貯蔵されてよい。一部の態様において、本抗体製剤は、かかる温度で少なくとも約９ヶ月間貯蔵されてよい。一部の態様において、本抗体製剤は、かかる温度で少なくとも約１２ヶ月間貯蔵されてよい。一部の態様において、本抗体製剤は、かかる温度で少なくとも約１５ヶ月間貯蔵されてよい。一部の態様において、本抗体製剤は、かかる温度で少なくとも約１８ヶ月間貯蔵されてよい。一部の態様において、本抗体製剤は、かかる温度で少なくとも約２１ヶ月間貯蔵されてよい。一部の態様において、本抗体製剤は、かかる温度で少なくとも約２４ヶ月間貯蔵されてよい。この貯蔵期間中、本抗体は、安定しており、且つ最小の凝集、綿状沈殿、断片化、及び変性を示し、並びに本抗体は、そのＶＥＧＦ結合活性を保持し、その結果この抗体製剤は、貯蔵から取りだし、患者へ投与し、及び本製剤が投与される病態に対する治療的有効性を依然示す。
【００６７】
本製剤は、好ましくは抗体約２０ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌを、より好ましくは抗体約２５ｍｇ／ｍｌ又は約２５．５ｍｇ／ｍｌ、又は約２６ｍｇ／ｍｌを含有する。とりわけこの抗体タンパク質の量は、活性がある未変性の形状の抗体モノマーの割合、及び低下したＶＥＧＦ結合活性を有するかもしくは結合活性を有さない抗体凝集体の割合である。本製剤は、機能性抗体モノマーの最大量、並びに抗体凝集体の最小量、並びに低下した結合活性及び／又は治療的有効性（変更されないモノマーに対して）を伴う抗体の構造的に変更された形状の最小量を含むことは、高度に好ましい。例えば本抗体製剤は、好ましくは、抗体モノマーを少なくとも約８５重量％、及び約２℃〜約６℃で少なくとも約６ヶ月間貯蔵された場合に、低下したＶＥＧＦ結合活性及び／又は治療的有効性を伴う抗体凝集体を約１５重量％未満含む。
【００６８】
一部の態様において、本抗体製剤は、抗体モノマーを少なくとも約９０重量％、及び約２℃〜約８℃で少なくとも約６ヶ月間貯蔵された場合に、低下したＶＥＧＦ結合活性及び／又は治療的有効性を伴う抗体凝集体を約１０重量％未満含む。一部の態様において、本抗体製剤は、抗体モノマーを少なくとも約９３重量％、及び約２℃〜約８℃で少なくとも約６ヶ月間貯蔵された場合に、低下したＶＥＧＦ結合活性及び／又は治療的有効性を伴う抗体凝集体を約７重量％未満含む。一部の態様において、本抗体製剤は、抗体モノマーを少なくとも約９５重量％、及び約２℃〜約８℃で少なくとも約６ヶ月間貯蔵された場合に、低下したＶＥＧＦ結合活性及び／又は治療的有効性を伴う抗体凝集体を約５重量％未満含む。一部の態様において、本抗体製剤は、約２℃〜約８℃で少なくとも約６ヶ月間貯蔵された場合に、低下したＶＥＧＦ結合活性及び／又は治療的有効性を伴う抗体凝集体を少なくとも約９６重量％含む。一部の態様において、本抗体製剤は、抗体モノマーを少なくとも約９７重量％、及び約２℃〜約８℃で少なくとも約６ヶ月間貯蔵された場合に、低下したＶＥＧＦ結合活性及び／又は治療的有効性を伴う抗体凝集体を約３重量％未満含む。一部の態様において、本抗体製剤は、抗体モノマーを少なくとも約９８重量％、及び約２℃〜約８℃で少なくとも約６ヶ月間貯蔵された場合に、低下したＶＥＧＦ結合活性及び／又は治療的有効性を伴う抗体凝集体を約２重量％未満含む。一部の態様において、本抗体製剤は、抗体モノマーを少なくとも約９９重量％、及び約２℃〜約８℃で少なくとも約６ヶ月間貯蔵された場合に、低下したＶＥＧＦ結合活性及び／又は治療的有効性を伴う抗体凝集体を約１重量％未満含む。抗体モノマー及び／又は抗体凝集体の量は、本明細書において説明又は例示されたものを含む、当該技術分野において適した任意の技術に従い決定されてよく、これは示差（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ）光散乱（ＤＬＳ）、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥ−ＨＰＬＣ）、非還元条件及び還元条件キャピラリー電気泳動ＳＤＳ（ＮＲ  ＣＥ−ＳＤＳ及びＲ  ＣＥ−ＳＤＳ）、並びに粒子カウント（ＰＣ）のいずれか一つもしくは組合せを含む。
【００６９】
一部の態様において、本抗体製剤は、抗体モノマーを少なくとも約９０重量％、及び約２℃〜約８℃で少なくとも約１２ヶ月間貯蔵された場合に、低下したＶＥＧＦ結合活性及び／又は治療的有効性を伴う抗体凝集体を約１０重量％未満含む。一部の態様において、本抗体製剤は、抗体モノマーを少なくとも約９３重量％、及び約２℃〜約８℃で少なくとも約１２ヶ月間貯蔵された場合に、低下したＶＥＧＦ結合活性及び／又は治療的有効性を伴う抗体凝集体を約７重量％未満含む。一部の態様において、本抗体製剤は、抗体モノマーを少なくとも約９５重量％、及び約２℃〜約８℃で少なくとも約１２ヶ月間貯蔵された場合に、低下したＶＥＧＦ結合活性及び／又は治療的有効性を伴う抗体凝集体を約５重量％未満含む。一部の態様において、本抗体製剤は、約２℃〜約８℃で少なくとも約１２ヶ月間貯蔵された場合に、低下したＶＥＧＦ結合活性及び／又は治療的有効性を伴う抗体凝集体を少なくとも約９６重量％含む。一部の態様において、本抗体製剤は、抗体モノマーを少なくとも約９７重量％、及び約２℃〜約８℃で少なくとも約１２ヶ月間貯蔵された場合に、低下したＶＥＧＦ結合活性及び／又は治療的有効性を伴う抗体凝集体を約３重量％未満含む。一部の態様において、本抗体製剤は、抗体モノマーを少なくとも約９８重量％、及び約２℃〜約８℃で少なくとも約１２ヶ月間貯蔵された場合に、低下したＶＥＧＦ結合活性及び／又は治療的有効性を伴う抗体凝集体を約２重量％未満含む。一部の態様において、本抗体製剤は、抗体モノマーを少なくとも約９９重量％、及び約２℃〜約８℃で少なくとも約１２ヶ月間貯蔵された場合に、低下したＶＥＧＦ結合活性及び／又は治療的有効性を伴う抗体凝集体を約１重量％未満含む。抗体モノマー及び／又は抗体凝集体の量は、本明細書において説明又は例示されたものを含む、当該技術分野において適した任意の技術に従い決定されてよく、これは示差光散乱（ＤＬＳ）、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥ−ＨＰＬＣ）、非還元条件及び還元条件キャピラリー電気泳動ＳＤＳ（ＮＲ  ＣＥ−ＳＤＳ及びＲ  ＣＥ−ＳＤＳ）、並びに粒子カウント（ＰＣ）のいずれか一つもしくは組合せを含む。
【００７０】
一部の態様において、本抗体製剤は、抗体モノマーを少なくとも約９０重量％、及び約２℃〜約８℃で少なくとも約１８ヶ月間貯蔵された場合に、低下したＶＥＧＦ結合活性及び／又は治療的有効性を伴う抗体凝集体を約１０重量％未満含む。一部の態様において、本抗体製剤は、抗体モノマーを少なくとも約９３重量％、及び約２℃〜約８℃で少なくとも約１８ヶ月間貯蔵された場合に、低下したＶＥＧＦ結合活性及び／又は治療的有効性を伴う抗体凝集体を約７重量％未満含む。一部の態様において、本抗体製剤は、抗体モノマーを少なくとも約９５重量％、及び約２℃〜約８℃で少なくとも約１８ヶ月間貯蔵された場合に、低下したＶＥＧＦ結合活性及び／又は治療的有効性を伴う抗体凝集体を約５重量％未満含む。一部の態様において、本抗体製剤は、約２℃〜約８℃で少なくとも約１８ヶ月間貯蔵された場合に、低下したＶＥＧＦ結合活性及び／又は治療的有効性を伴う抗体凝集体を少なくとも約９６重量％含む。一部の態様において、本抗体製剤は、抗体モノマーを少なくとも約９７重量％、及び約２℃〜約８℃で少なくとも約１８ヶ月間貯蔵された場合に、低下したＶＥＧＦ結合活性及び／又は治療的有効性を伴う抗体凝集体を約３重量％未満含む。一部の態様において、本抗体製剤は、抗体モノマーを少なくとも約９８重量％、及び約２℃〜約８℃で少なくとも約１８ヶ月間貯蔵された場合に、低下したＶＥＧＦ結合活性及び／又は治療的有効性を伴う抗体凝集体を約２重量％未満含む。一部の態様において、本抗体製剤は、抗体モノマーを少なくとも約９９重量％、及び約２℃〜約８℃で少なくとも約１８ヶ月間貯蔵された場合に、低下したＶＥＧＦ結合活性及び／又は治療的有効性を伴う抗体凝集体を約１重量％未満含む。抗体モノマー及び／又は抗体凝集体の量は、本明細書において説明又は例示されたものを含む、当該技術分野において適した任意の技術に従い決定されてよく、これは示差光散乱（ＤＬＳ）、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥ−ＨＰＬＣ）、非還元条件及び還元条件キャピラリー電気泳動ＳＤＳ（ＮＲ  ＣＥ−ＳＤＳ及びＲ  ＣＥ−ＳＤＳ）、並びに粒子カウント（ＰＣ）のいずれか一つもしくは組合せを含む。
【００７１】
一部の態様において、本抗体製剤は、抗体モノマーを少なくとも約９０重量％、及び約２℃〜約８℃で少なくとも約２４ヶ月間貯蔵された場合に、低下したＶＥＧＦ結合活性及び／又は治療的有効性を伴う抗体凝集体を約１０重量％未満含む。一部の態様において、本抗体製剤は、抗体モノマーを少なくとも約９３重量％、及び約２℃〜約８℃で少なくとも約２４ヶ月間貯蔵された場合に、低下したＶＥＧＦ結合活性及び／又は治療的有効性を伴う抗体凝集体を約７重量％未満含む。一部の態様において、本抗体製剤は、抗体モノマーを少なくとも約９５重量％、及び約２℃〜約８℃で少なくとも約２４ヶ月間貯蔵された場合に、低下したＶＥＧＦ結合活性及び／又は治療的有効性を伴う抗体凝集体を約５重量％未満含む。一部の態様において、本抗体製剤は、約２℃〜約８℃で少なくとも約２４ヶ月間貯蔵された場合に、低下したＶＥＧＦ結合活性及び／又は治療的有効性を伴う抗体凝集体を少なくとも約９６重量％含む。一部の態様において、本抗体製剤は、抗体モノマーを少なくとも約９７重量％、及び約２℃〜約８℃で少なくとも約２４ヶ月間貯蔵された場合に、低下したＶＥＧＦ結合活性及び／又は治療的有効性を伴う抗体凝集体を約３重量％未満含む。一部の態様において、本抗体製剤は、抗体モノマーを少なくとも約９８重量％、及び約２℃〜約８℃で少なくとも約２４ヶ月間貯蔵された場合に、低下したＶＥＧＦ結合活性及び／又は治療的有効性を伴う抗体凝集体を約２重量％未満含む。一部の態様において、本抗体製剤は、抗体モノマーを少なくとも約９９重量％、及び約２℃〜約８℃で少なくとも約２４ヶ月間貯蔵された場合に、低下したＶＥＧＦ結合活性及び／又は治療的有効性を伴う抗体凝集体を約１重量％未満含む。抗体モノマー及び／又は抗体凝集体の量は、本明細書において説明又は例示されたものを含む、当該技術分野において適した任意の技術に従い決定されてよく、これは示差光散乱（ＤＬＳ）、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥ−ＨＰＬＣ）、非還元条件及び還元条件キャピラリー電気泳動ＳＤＳ（ＮＲ  ＣＥ−ＳＤＳ及びＲ  ＣＥ−ＳＤＳ）、並びに粒子カウント（ＰＣ）のいずれか一つもしくは組合せを含む。
【００７２】
本発明はまた、本明細書に説明又は例示された抗体製剤のいずれかの治療的有効量を投与することにより、治療を必要とする対象において腫瘍を治療する方法も特徴としている。好ましくは、本抗体製剤は、白金−抵抗性再発性上皮卵巣、卵管、原発性腹膜の癌、難治性、再発性、もしくは転移性の子宮頸癌、転移性結腸直腸癌、転移性ＨＥＲ２陰性乳癌、転移性腎細胞癌、膠芽細胞腫、又は非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）などの癌を治療する方法において使用される。治療的有効性は、例えば、投与される製剤中に存在するベバシズマブ抗体により達成される。本抗体製剤の投与は、任意の好適な経路に従い、好ましくは注射により、より好ましくは静脈内注射によることができる。投与は、医学的実践者の指示又は監視の下で実行されてよい。
【００７３】
本明細書において説明及び例示された抗体製剤は、医薬品として使用されてよい。本明細書において説明及び例示された抗体製剤は、白金−抵抗性再発性上皮卵巣、卵管、もしくは原発性腹膜の癌、難治性、再発性、もしくは転移性の子宮頸癌、転移性結腸直腸癌、転移性ＨＥＲ２陰性乳癌、転移性腎細胞癌、膠芽細胞腫、又は非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）などの癌の１又は複数の治療のための医薬品の製造における使用のためであってよい。本製剤は、白金−抵抗性再発性上皮卵巣、卵管、又は原発性腹膜の癌の治療における使用のためであってよい。本製剤は、難治性、再発性、又は転移性の子宮頸癌の治療における使用のためであってよい。本製剤は、転移性結腸直腸癌の治療における使用のためであってよい。本製剤は、転移性ＨＥＲ２陰性乳癌の治療における使用のためであってよい。本製剤は、転移性腎細胞癌の治療における使用のためであってよい。本製剤は、膠芽細胞腫の治療における使用のためであってよい。本製剤は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）の治療における使用のためであってよい。
【００７４】
本発明はまた、キットも特徴としている。これらのキットは、例えば、本明細書において説明又は例示された方法のいずれかを実践するために、使用されてよい。一部の態様において、キットは、本明細書において説明又は例示された任意の抗体製剤、並びに本明細書において説明又は例示された方法のいずれかにおける抗体製剤の使用に関する説明書を含む。このキットは、非限定的に、注射器及び針、又はカテーテルを含む、抗体製剤を対象へ注射するための装置を含む。
【００７５】
キットに含まれる説明書は、治療を必要とする白金−抵抗性再発性上皮卵巣、卵管、又は原発性腹膜の癌の患者へ、本抗体製剤を注射することに関する説明書を含む、白金−抵抗性再発性上皮卵巣、卵管、又は原発性腹膜の癌を治療する方法における、本抗体製剤の投与に関する説明書を含んでよい。一部の態様において、キットに含まれる説明書は、治療を必要とする難治性、再発性、又は転移性の子宮頸癌の患者へ、本抗体製剤を注射することに関する説明書を含む、難治性、再発性、又は転移性の子宮頸癌を治療する方法における、本抗体製剤の投与に関する説明書を含んでよい。一部の態様において、キットに含まれる説明書は、治療を必要とする転移性結腸直腸癌の患者へ、本抗体製剤を注射することに関する説明書を含む、転移性結腸直腸癌を治療する方法における、本抗体製剤の投与に関する説明書を含んでよい。一部の態様において、キットに含まれる説明書は、治療を必要とする転移性ＨＥＲ２陰性乳癌の患者へ、本抗体製剤を注射することに関する説明書を含む、転移性ＨＥＲ２陰性乳癌を治療する方法における、本抗体製剤の投与に関する説明書を含んでよい。一部の態様において、キットに含まれる説明書は、治療を必要とする転移性腎細胞癌の患者へ、本抗体製剤を注射することに関する説明書を含む、転移性腎細胞癌を治療する方法における、本抗体製剤の投与に関する説明書を含んでよい。一部の態様において、キットに含まれる説明書は、治療を必要とする膠芽細胞腫の患者へ、本抗体製剤を注射することに関する説明書を含む、膠芽細胞腫を治療する方法における、本抗体製剤の投与に関する説明書を含んでよい。一部の態様において、キットに含まれる説明書は、治療を必要とする非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）の患者へ、本抗体製剤を注射することに関する説明書を含む、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を治療する方法における、本抗体製剤の投与に関する説明書を含んでよい。
【００７６】
下記実施例は、より詳細に本発明を説明するために提供される。これらは、本発明を例証することを意図するが、限定することは意図していない。
【実施例】
【００７７】
実施例１−材料及び方法
導入。抗体ＯＮＳ−１０４５は、ベバシズマブのバイオ後続品を表し、且つこれは増強された貯蔵安定性のために再製剤化されている。この緩衝された製剤は、少なく見積もっても、長期間貯蔵時に抗体の凝集を減少することが、想定されている。緩衝された製剤は、ベバシズマブ分子の非共有的及び共有的の両方のダイマー化を減少し得ることが想定されている。アバスチン（登録商標）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社）として市販されているベバシズマブは、安定化剤としてトレハロースを含有し、且つ穏やかな界面活性剤を含有し、酸性ｐＨ６．２である、リン酸ナトリウム緩衝液中に、製剤化されている。以下に記載した実験的アプローチは、コロイド安定性を増強するためにベバシズマブを再製剤化するための開発作業が含まれた。安定性の有意な増強、及び特に凝集の減少に関するものは、緩衝液及びｐＨを変更することにより達成された。
【００７８】
動的光散乱（ＤＬＳ）。ＤＬＳ試験法は、Ｗｙａｔｔ  ＤｙｎａＰｒｏ（商標）プレートリーダーを使用し、溶液中のタンパク質のサイズ分布及び全般的コロイド安定性に関する情報を提供した。流体力学半径は、凝集の存在に関する情報及び溶液中の分子の構造の確認を提供した。ＤＬＳ試験は、非変性条件下での溶液中のサイズ分布の直交測定を提供した。
【００７９】
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）。示差走査熱量測定は、タンパク質の融解転移を測定し、結果的に溶液中のタンパク質の熱安定性に関する情報を提供した。熱量測定は、ＧＥ  ＶＰキャピラリーＤＳＣシステムを用いて行った。タンパク質を、最適走査速度で２５℃から９５℃まで加熱し、タンパク質がアンフォールディングする一方で、融解転移（Ｔｍ）を生じさせた。緩衝液対照を、試料と並行して加熱し、融解温度及び転移を計算するために使用した。ＤＳＣプロファイルは、抗体の特色を示し、且つタンパク質が、異なるドメインへフォールディングされたことを明らかにした。
【００８０】
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥ−ＨＰＬＣ）。ＳＥ−ＨＰＬＣを使用し、抗体サイズの相違の分布をモニタリングした。ＳＥ−ＨＰＬＣ試験法は、サイズを基にタンパク質を分ける。モノマーピークの前に溶出する種は、凝集体（ＨＭＷＳ）であり、且つモノマーピークの後に溶出するピークは、分解物（ＬＭＷＳ）であった。
【００８１】
種は、ＴＳＫ３０００ＳＷｘｌ  ７．８ｍｍ×３００ｍｍカラム（Ｔｏｓｏｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社、カタログ番号０８５４１）を用い、流量０．５ｍＬ／分及び試行時間３０分間；カラムは外界温度で、分離した。移動相は、０．２Ｍリン酸カリウム及び０．２５Ｍ塩化カリウムで構成され、ｐＨ６．２であった。試料注入の２つの型が存在する−無希釈注入１０ｕＬ＠２５ｍｇ／ｍＬ及び希釈注入１００ｕＬ＠０．５ｍｇ／ｍＬ（無希釈注入は、可逆性凝集体を含む総凝集体を測定し、希釈注入は、主に共有的性質のダイマーを測定する）。希釈試料は、移動相Ａ（０．２Ｍリン酸カリウム、０．２５Ｍ塩化カリウム、ｐＨ６．２）により、０．５ｍｇ／ｍＬに希釈した。
【００８２】
試料は、分析の前に、３０℃で、２４時間インキュベーションした。自動サンプラーの温度は、試行の全期間にわたり、３０℃で維持した。データは、２８０ｎｍで分析した。
【００８３】
陽イオン交換クロマトグラフィー（ＣＥＸ）。ベバシズマブ試料を、移動相Ａ中に希釈し、カルボキシペプチダーゼＢにより消化した。種を、陽イオン交換ＨＰＬＣカラムを用いて分離した。勾配は、移動相Ａ及び移動相Ｂにより、流量０．５ｍＬ／分を用いて行った。カラム温度は、４０℃で維持し、試料は、２〜８℃で維持した。データは、２８０ｎｍで分析した。
【００８４】
粒子含量（ｃｏｎｔｅｎｔ）（流体画像化）。流体画像化（ＦＩ）システムは、移動する流体中の粒子の迅速な分析のための統合されたシステムである。このシステムは、試料又は連続流れの中の粒子又は細胞を、自動的にカウントし、画像化し、且つ分析する。ＦＩシステムにおいて、試料は、ポンプによりフローチャンバーへ引き込まれる。ＡｕｔｏＩｍａｇｅモードでレーザーを使用し、ＦＩシステムは、通過する粒子の光散乱をモニタリングした。カメラは、使用者が指定した間隔で、同期的に画像を捕獲するように設定した。次に散乱検出値を、ＶｉｓｕａｌＳｐｒｅａｄｓｈｅｅｔ（全ての他の粒子特性及び画像に加えて）により保存した。コンピュータ及び信号処理装置は一緒に、視野の画像を開始し、検索し且つ処理するように作業する。
【００８５】
オスモル濃度。浸透圧計を使用し、凝固点測定により、緩衝液及びタンパク質溶液のオスモル濃度を測定した。これは、試料温度を感知し、過冷却及び凍結誘導の程度を制御し、並びに試料の凝固点を測定するために、高精度サーミスタを利用した。必要とされる試料は、１回の測定につき２０μＬであった。
【００８６】
内部蛍光。内部蛍光分光法は、タンパク質の三次構造に関する情報を提供する、非侵襲的生物物理学的特徴決定法である。この方法は、タンパク質構造のアンフォールディングの程度を測定した。タンパク質試料（例えば、トリプトファン発光）の強度及び最大波長を、蛍光光度計上で測定した。１回の反復につき０．１ｍｇ／ｍＬのタンパク質溶液６００μＬを試験した。発光走査：２９５ｎｍで励起、３１０ｎｍで開始し４５０ｎｍで終了。
【００８７】
ＨＵＶＥＣ細胞ベースのＶＥＧＦ中和アッセイ。抗−血管新生モノクローナル抗体ベバシズマブの作用の主な機構は、ＶＥＧＦに結合し、そのコグネート受容体への結合を防止することである。この方法で、ベバシズマブは、ＶＥＧＦの内皮細胞増殖を誘導する能力を中和し；結果的に、抗−ＶＥＧＦ抗体の効能は、ＶＥＧＦ−誘導した細胞の増殖を阻害するその能力により定量化することができる。ＨＵＶＥＣ細胞−ベースの効能アッセイにおいて、固定された濃度のＶＥＧＦを、連続希釈した薬物と共にインキュベーションした。ベバシズマブは、用量依存的様式で、ＶＥＧＦへ結合し、他の結合相互作用に利用できないＶＥＧＦを作製する。この薬物−ＶＥＧＦカクテルを、次に、マルチ−ウェルプレートに播種したＨＵＶＥＣ細胞へ添加し、更に継続された増殖のためにインキュベーションした。インキュベーション期間中に、ＨＵＶＥＣ細胞は、ＶＥＧＦ濃度−依存的様式で増殖する。低い薬物濃度で、より多くのＶＥＧＦが利用可能であり、従って増殖は高度であり、その逆もまた当てはまる。ＨＵＶＥＣ細胞増殖の抗体投与量−依存的阻害は、インキュベーション終了時の生存細胞数を定量化することにより、評価される。ＶＥＧＦ中和アッセイは、試料の効能が、参照標準に対して相対的に測定される、相対アッセイである。このアッセイは、３つの独立したアッセイプレートからなる。各プレートにおいて、標準及び試料の細胞生存度データを、４Ｐロジスティックモデルへフィットさせ、統計ソフトウェアを用い、独立した曲線パラメータを持つＳ字曲線を作製し；標準及び試料曲線のパラメータを比較し、曲線平行度を評価し、且つ平行であると見なされる場合は、被験物質の相対効能を計算する。最終的に報告された値は、許容し得る変動内にある３つの独立した値の平均である。
【００８８】
ＶＥＧＦ結合免疫学的検定。抗−血管新生モノクローナル抗体ベバシズマブの作用の主な機構は、ＶＥＧＦに結合し、そのコグネート受容体への結合を防止し、これにより、血管内皮細胞に対するＶＥＧＦ媒介した分裂促進性作用を阻害する。このベバシズマブによるＶＥＧＦの中和は、血管新生プロセスを阻害し、このことは次に腫瘍の生存及び進行を抑制する。従って、抗−ＶＥＧＦ抗体の効能は、ＥＬＩＳＡにおいて、それらのＶＥＧＦへの結合を測定することにより、定量化することができる。このアッセイにおいて、固定された濃度のＶＥＧＦを、マルチ−ウェルプレート上に最初にコーティングした。非−特異的結合部位をブロックした後、固定されたＶＥＧＦを、連続希釈した参照標準及び被験試料と反応させた。未結合の抗体は洗浄除去し、ウェルを、ＶＥＧＦ−抗体複合体に結合する、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）にコンジュゲートした抗−κ軽鎖抗体と共にインキュベーションした。次に、未結合の二次抗体を洗浄除去し、ウェルを、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）ＨＲＰ基質と共にインキュベーションし、呈色した生成物を生成した。発色を、リン酸の添加によりクエンチさせ、吸光度値を測定した。得られた光学密度（Ｏ．Ｄ．）値は、ＶＥＧＦに結合した試料の量に正比例した。ＶＥＧＦ結合アッセイは、試料の効能が、参照標準に対して相対的に測定される、相対アッセイである。このアッセイは、２つの独立したアッセイプレートからなる。各プレートにおいて、標準及び試料のＯ．Ｄ．データを、４Ｐロジスティックモデルへフィットさせ、統計ソフトウェアを用い、独立した曲線パラメータを持つＳ字曲線を作製し；標準及び試料曲線のパラメータを比較し、曲線平行度を評価し、且つ平行であると見なされる場合は、被験物質の相対効能を計算する。最終的に報告された値は、許容し得る変動内にある２つの独立した値の平均である。
【００８９】
実施例２−ベバシズマブの立体構造安定性及びコロイド安定性に対する緩衝液、安定化剤、及びｐＨの作用
最初の実験は、ベバシズマブの立体構造安定性及びコロイド安定性について、緩衝液成分を評価した。クエン酸塩、リン酸塩、及び酢酸塩緩衝液は、ベバシズマブの安定性にとって理想的であることが、決定された。更に、個別にこれらの緩衝液は、熱及び振盪に関連したストレスにより誘導されるベバシズマブの凝集に対し防御的作用を示した。更なる実験は、これらの緩衝液（クエン酸塩、リン酸塩及び酢酸塩）の組合せは、優れた安定化作用を示すかどうかを、評価した。ベバシズマブ合致組成物（市販のアバスチン（登録商標）製剤の処方に合致した）において、リン酸クエン酸塩緩衝液は、リン酸ナトリウム緩衝液に比べ、有意により少ない凝集体（共有型ダイマーを含む）及びより少ない帯電種を生じた。
【００９０】
５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液中のトレハロース安定化剤の作用を、ショ糖、ソルビトール、マンニトール、及びグリシンを含む、代替安定化剤と比較した。次に異なる安定化された緩衝液組成物中のこの抗体の立体構造安定性を、ＤＳＣにより評価した（図１）。これらのデータは、表１に提示し、且つ試験した安定化剤は全て、トレハロースと同等であるかもしくはより優れていたことを示している。
【００９１】
表１．  リン酸ナトリウム緩衝液中の代替立体構造安定化剤
【表２】
2019504049.tif 000004
【００９２】
これらの代替安定化剤（ショ糖、ソルビトール、マンニトール、及びグリシン）を次に、リン酸クエン酸塩緩衝液と共に使用し、ベバシズマブ抗体の立体構造安定性を、ＤＳＣにより評価した。このデータは、表２に提示し、且つリン酸クエン酸塩緩衝液中の代替安定化剤は、ベバシズマブ合致製剤と同等であるかもしくはより優れていることを示している。
【００９３】
表２．  リン酸クエン酸塩（Ｃ／Ｐ）緩衝液中の代替立体構造安定化剤
【表３】
2019504049.tif 000005
【００９４】
安定化剤としてのトレハロース（Ｔｒｅｈ）を含むリン酸クエン酸塩（Ｃｉｔ）緩衝液を使用し、抗体（ベバシズマブ）の立体構造安定性に対するｐＨの作用を、評価した。ＤＳＣを用い、抗体の安定性を測定した。表３に示したデータは、各製剤組成物中で測定したベバシズマブのアンフォールディング温度は、ベバシズマブ合致組成物について観察されたものと同等であるが、ｐＨは５．６より大きい（５．６、５．８、６．０、６．２）もののみ同等であることを示している。より低いｐＨ（特に５．０）では、早期のアンフォールディング事象が、約６５℃の比較的低い温度で生じ、従ってそのような比較的低いｐＨ（５．６未満）は、ベバシズマブの製剤化には適していない。
【００９５】
表３．  ５０ｍＭクエン酸塩又は５０ｍＭリン酸クエン酸塩緩衝液中のベバシズマブの熱／立体構造安定性に対するｐＨの作用
【表４】
2019504049.tif 000006
【００９６】
並行実験は、緩衝剤としての酢酸塩を評価した。酢酸塩は、濃度５ｍＭ、１５ｍＭ、及び２５ｍＭで、可変ｐＨで評価した（表４及び５）。これらの実験は、安定化剤としてショ糖（Ｓｕｃ）（６０ｍｇ／ｍｌ）とトレハロース（６０ｍｇ／ｍｌ）を比較した。次に各組成物中のベバシズマブ分子の安定性を、ＤＳＣにより評価した。データは、表４及び５に示している。酢酸塩のモル濃度が増加するとＴｍは低下し、並びにｐＨが増加しても同じくＴｍは低下したことが、認められた（表４及び５）。増強した立体構造安定性は、ｐＨ５．６及び５．８で認められた（表５）。
【００９７】
表４．  酢酸塩トレハロース緩衝された製剤中のベバシズマブの立体構造安定性
【表５】
2019504049.tif 000007
【００９８】
表５．  酢酸塩ショ糖緩衝された製剤中のベバシズマブの立体構造安定性
【表６】
2019504049.tif 000008
【００９９】
実施例３−リン酸クエン酸塩緩衝されたトレハロース製剤及び酢酸塩ショ糖製剤中の貯蔵安定性
４種の緩衝された製剤を選択し、１８ヶ月間にわたるベバシズマブ分子の長期貯蔵安定性を評価した。これらの製剤は、ベバシズマブ合致／参照製剤（コンディション１）と並行して試行した。貯蔵条件は、以下である：抗体は、〜２５ｍｇ／ｍｌ（無希釈）であるか又は希釈し；貯蔵は、５℃、３０℃、又は３７℃で；振盪は、室温で１５０ＲＰＭで；及び、凍結／解凍（２０℃から室温までを、３サイクル）した。試験した製剤を、以下に列挙している：
コンディション１：ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））合致
５０ｍＭ  リン酸ナトリウム
１５９ｍＭ  トレハロース
０．０４％  ポリソルベート２０
ｐＨ  ６．２０
注射用滅菌水で適量（Ｑ．Ｓ．）
コンディション２：ベバシズマブリン酸クエン酸塩、ｐＨ５．８
５０ｍＭ  リン酸クエン酸塩
１５９ｍＭ  トレハロース
０．０４％  ポリソルベート２０
ｐＨ  ５．８０
注射用滅菌水で適量
コンディション３：ベバシズマブリン酸クエン酸塩、ｐＨ６．０
５０ｍＭ  リン酸クエン酸塩
１５９ｍＭ  トレハロース
０．０４％  ポリソルベート２０
ｐＨ  ６．０
注射用滅菌水で適量
コンディション４：ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．６
１５ｍＭ  酢酸塩
１７５ｍＭ  ショ糖
０．０４％  ポリソルベート２０
ｐＨ  ５．６０
注射用滅菌水で適量
コンディション５：ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．８
１５ｍＭ  酢酸塩
１７５ｍＭ  ショ糖
０．０４％  ポリソルベート２０
ｐＨ  ５．８０
注射用滅菌水で適量。
【０１００】
各貯蔵条件下の抗体の安定性は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、陽イオン交換クロマトグラフィー（ＣＥＸ）、ＣＥ−ＳＤＳ、ＨＵＶＥＣ細胞ベースのＶＥＧＦ中和アッセイ、ＶＥＧＦ結合免疫学的検定及び粒子カウント（ＰＣ）を含むが、これらに限定されるものではない、一連の慣習的分析アッセイ及び拡大された特徴決定アッセイにより試験した。サイズ排除クロマトグラフィーを使用し、抗体モノマーの割合、総凝集体（共有的及び非共有的）の割合、及び分解物の割合を評価した。両方の製剤型の比較安定性は、ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））参照／合致組成物と共に評価した。長期貯蔵安定性に関する試料は、５℃±３℃で１８ヶ月間にわたり貯蔵し、これは、リン酸クエン酸塩ベースの組成物（コンディション２及び３）並びに酢酸塩緩衝液ベースの組成物（コンディション４及び５）は両方共、アバスチン（登録商標）合致組成物よりもより安定していることを示している（図２Ａ；図２Ａ（ｉ）；図２Ａ（ｉｉ）；表６）。図２Ｂ、図２Ｂ（ｉ）、図２Ｂ（ｉｉ）及び表７は、測定した共有的ダイマーは、５種のベバシズマブバイオ後続組成物の全てにおいて存在するが、コンディション２、３、４及び５は、ベバシズマブ合致組成物（コンディション１）中に存在するものよりも、より少ない共有的ダイマーを有することを示している（表７）。
【０１０１】
表６．  ＳＥ−ＨＰＬＣ（無希釈注入）により測定したベバシズマブバイオ後続製剤中の総凝集体（５℃での長期安定性）
【表７】
2019504049.tif 000009
【０１０２】
表７．  ＳＥ−ＨＰＬＣ（希釈注入）により測定したベバシズマブバイオ後続製剤中の共有的ダイマー（長期安定性）
【表８】
2019504049.tif 000010
【０１０３】
陽イオン交換クロマトグラフィー（ＣＥＸ）により測定した酸性に帯電した種も同じく、１８ヶ月間の長期貯蔵安定性試験時に、全ての試料について試験した（表７（ｉ）；図２Ｂ（ｉｉｉ）；図２Ｂ（ｉｖ）及び図２Ｂ（ｖ））。５種全ての組成物について、帯電した種、特に酸性に帯電した種は、５℃での１８ヶ月間にわたる貯蔵で、有意に変動しなかった。
【０１０４】
表７（ｉ）  ＣＥＸ−ＨＰＬＣにより測定したベバシズマブバイオ後続製剤における％酸性種（長期安定性）
【表９】
2019504049.tif 000011
【０１０５】
ＨＵＶＥＣ細胞ベースのＶＥＧＦ中和アッセイにより測定したアダリムマブバイオ後続製剤に関する相対効能は、全てのコンディション（コンディション２−５）について、コンディション１と比べ、９０〜１１０％以内であることがわかった（表７（ｉｉ））。この知見はまた、これらの製剤（コンディション２−５）の効能は、製剤組成の変更に起因した影響を受けず、且つ２〜８℃での１８ヶ月間にわたる貯蔵で、アバスチン組成物の製剤と同等であることを確認している。
【０１０６】
表７（ｉｉ）  ２〜８℃で１８ヶ月間貯蔵した後のＨＵＶＥＣ細胞ベースのＶＥＧＦ中和アッセイにより測定したベバシズマブバイオ後続製剤（コンディション１−５）の相対効能
【表１０】
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【０１０７】
ＶＥＧＦ結合免疫学的検定により測定したアダリムマブバイオ後続製剤に関する相対効能は、全てのコンディション（コンディション２−５）について、コンディション１と比べ、９０〜１１０％以内であることがわかった（表７（ｉｉｉ））。この知見はまた、これらの製剤（コンディション２−５）の効能は、製剤組成の変更に起因した影響を受けず、且つ２〜８℃での１８ヶ月間にわたる貯蔵で、アバスチン組成物の製剤と同等であることを確認している。
【０１０８】
表７（ｉｉｉ）  ２〜８℃で１８ヶ月間貯蔵した後のＶＥＧＦ結合免疫学的検定により測定したベバシズマブバイオ後続製剤（コンディション１−５）の相対効能
【表１１】
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【０１０９】
加速貯蔵安定性（３０℃）における試料は、リン酸クエン酸塩ベースの組成物及び酢酸塩緩衝液ベースの組成物の両方は、ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））合致組成物よりもより安定していることを示している（図２Ｃ及び図２Ｄ；表８及び９）。図２Ｄ及び表９は、測定可能な共有的ダイマーは、５種全てのベバシズマブバイオ後続組成物中に存在することを指摘している。全てのバイオ後続製剤コンディション（２−５）は、ベバシズマブ合致組成物中に存在するものよりも、より少ない共有的ダイマーを有することがわかった。
【０１１０】
表８．  ＳＥ−ＨＰＬＣ（無希釈注入）により測定したベバシズマブバイオ後続製剤中の総凝集体（３０℃での加速安定性）
【表１２】
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【０１１１】
表９．  ＳＥ−ＨＰＬＣ（希釈注入）により測定したベバシズマブバイオ後続製剤中の共有的ダイマー（３０℃での加速安定性）
【表１３】
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【０１１２】
加速貯蔵安定性（３７℃）における試料は、リン酸クエン酸塩ベースの組成物及び酢酸塩緩衝液ベースの組成物の両方は、ベバシズマブ合致組成物よりもより安定していることを示している（図２Ｅ及び図２Ｆ；表１０及び１１）。図２Ｆ及び表１１は、測定可能な共有的ダイマーは、５種全てのベバシズマブバイオ後続組成物中に存在することを指摘している。しかし、全てのコンディション（２−５）は、ベバシズマブ合致組成物中に存在するものよりも、より少ない共有的ダイマーを有する。
【０１１３】
表１０．  ＳＥ−ＨＰＬＣ（無希釈注入）により測定したベバシズマブバイオ後続製剤中の総凝集体（３７℃での加速安定性）
【表１４】
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【０１１４】
表１１．  ＳＥ−ＨＰＬＣ（希釈注入）により測定したベバシズマブバイオ後続製剤中の共有的ダイマー（３７℃での加速安定性）
【表１５】
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【０１１５】
ストレス試験（室温で１５０ｒｐｍの振盪）における試料は、リン酸クエン酸塩ベースの組成物及び酢酸塩緩衝液ベースの組成物の両方は、ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））合致組成物よりもより安定していることを示している（図２Ｇ及び図２Ｈ；表１２及び１３）。酢酸塩−ショ糖組成物（コンディション５）は、わずかに高い凝集体の割合を有し、このことはｐＨ５．６は、ｐＨ５．８を超えるベバシズマブの製剤安定性にとって好ましいことを指摘している。図２Ｈ及び表１３は、５種のベバシズマブバイオ後続組成物全てにおいて測定された共有的ダイマーを示している。全てのコンディション（２−５）は、ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））合致組成物中に存在するものよりも、より低い共有的ダイマーを有することが認められた。
【０１１６】
表１２  ＳＥ−ＨＰＬＣ（無希釈注入）により測定したベバシズマブバイオ後続製剤中の総凝集体（１５０ｒｐｍでの振盪）
【表１６】
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【０１１７】
表１３．  ＳＥ−ＨＰＬＣ（希釈注入）により測定したベバシズマブバイオ後続製剤中の共有的ダイマー（１５０ｒｐｍで振盪）
【表１７】
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【０１１８】
ストレス試験（凍結／解凍試験）における試料は、リン酸クエン酸塩ベースの組成物及び酢酸塩緩衝液ベースの組成物の両方は、凍結／解凍ストレスに対する防御の付与に関して、ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））合致組成物と同等であることを指摘している（図２Ｉ及び図２Ｊ；表１４及び１５）。酢酸塩−ショ糖組成物（コンディション５）は、わずかに高い凝集体の割合を有し、このことはｐＨ５．６は、ｐＨ５．８を超えるベバシズマブの製剤安定性にとって好ましいことを指摘している。図２Ｊ及び表１５は、５種のベバシズマブバイオ後続組成物全てにおいて測定可能な共有的ダイマーを示している。全てのコンディション（２−５）は、ベバシズマブ合致組成物中に存在するものよりも、より低い共有的ダイマーを有した。
【０１１９】
表１４．  ＳＥ−ＨＰＬＣ（無希釈注入）により測定したベバシズマブバイオ後続製剤中の総凝集体（１５０ｒｐｍで振盪）
【表１８】
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【０１２０】
表１５．  ＳＥ−ＨＰＬＣ（希釈注入）により測定したベバシズマブバイオ後続製剤中の共有的ダイマー（凍結／解凍ストレス）
【表１９】
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【０１２１】
実施例４−リン酸クエン酸塩緩衝されたトレハロース製剤及び酢酸塩ショ糖製剤中のベバシズマブバイオ後続品の生物物理特性
４種の緩衝されたバイオ後続被験製剤の生物物理特性を、ベバシズマブ合致参照製剤と並行して評価した。示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、動的光散乱（ＤＬＳ）、蛍光分光法（Ｉｎｔ．Ｆｌ．）により試験されたものを含むが、これらに限定されるものではない生物物理特性を、評価した。バイオ後続品の類似性は、いくつかの直交ツールにより評価し、これらの生物物理学的方法は、バイオ類似性（ｂｉｏｓｉｍｉｌａｌｉｔｙ）を評価するための直交解析法内のそのようなアプローチの１つである。直交ツールは、ベバシズマブバイオ後続品の４種の緩衝された製剤（コンディション２−５）の生物物理特性は、ベバシズマブ合致組成物（コンディション１）のそれに類似しているかもしくはより優れていることを指摘している。
【０１２２】
全ての製剤におけるベバシズマブの融解温度、従って熱によるアンフォールディングパターンは、Ｔｍ１約７３℃及びＴｍ２約８３℃と類似している（表１６）。これは、開発された製剤コンディションは全て、ベバシズマブに類似した立体構造安定性をもたらすことを指摘している。究極的に、これは、実施例３に記載されたような長期安定性試験（５℃で１８ヶ月間貯蔵）であり、これは最終的にベバシズマブがより安定し且つ凝集する傾向が少ないコンディション２−５を製剤（すなわち組成物）として同定している。
【０１２３】
表１６  ＤＳＣにより測定されたベバシズマブバイオ後続製剤組成物の立体構造安定性
【表２０】
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【０１２４】
４種全ての製剤コンディションにおけるベバシズマブバイオ後続品の流体力学的特性の動的光散乱（ＤＬＳ）ベースの評価を、ベバシズマブ合致組成物（コンディション１）と比較し、評価した。ベバシズマブバイオ後続品の流体力学的半径は、コンディション１−３において、約６ｎｍから７ｎｍまで増加する（濃度１５ｍｇ／ｍｌで）（表１７、図３）。酢酸塩コンディション４及び５は、ベバシズマブ合致組成物（コンディション１）と比べ、注目すべき異なるサイズの傾向を示し、これは、より優れたコロイド安定性を指摘している。リン酸クエン酸塩コンディション２及び３における流体力学的サイズでは、その傾向は、ベバシズマブ合致コンディション（コンディション１）と類似しているが、可逆的凝集体及び共有的ダイマー形成の傾向（実施例３に説明されたような、１８ヶ月間の期間にわたる長期間貯蔵及び加速された温度貯蔵安定性）は、これは凝集に対しより優れた防御をもたらすことを指摘している。
【０１２５】
表１７．  ＤＬＳにより異なる製剤コンディションについて測定された流体力学的サイズ（平均）及び拡散係数（平均）
【表２１】
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注記：太字で示されたＲｈは、マルチモーダル測定である。
【０１２６】
内部蛍光分光法は、全ての製剤コンディションは、合致組成物（コンディション１）としてのベバシズマブに類似した立体構造安定性をもたらすことを指摘している（表１８及び図４）。本試験の重要な生物物理学的説明事項（ｄｅｓｃｒｉｐｔｏｒ）（最大吸光及び最大波長）は、全ての製剤コンディションに関して類似している。
【０１２７】
表１８  最大の平均ピーク及び吸光度を示す全ての製剤コンディションに関する内部蛍光スペクトル
【表２２】
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【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ａ（ｉ）】
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【図２Ａ（ｉｉ）】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｂ（ｉ）】
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【図２Ｂ（ｉｉ）】
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【図２Ｂ（ｉｉｉ）】
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【図２Ｂ（ｉｖ）】
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【図２Ｂ（ｖ）】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図２Ｅ】
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【図２Ｆ】
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【図２Ｇ】
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【図２Ｈ】
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【図２Ｉ】
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【図２Ｊ】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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