(57)【要約】  本発明は、抗体を介する治療のための組成物および方法に関する。詳細には、本明細書で提供されるのは変化された半減期を有する改変された免疫グロブリンである。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＦｃＲｎに対する変化された結合親和性を有する治療性免疫グロブリンを含む組成物であって、前記免疫グロブリンが、前記免疫グロブリンのＦｃ領域に少なくとも１つの突然変異を含む、組成物。
【請求項２】
前記免疫グロブリンが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４サブクラスである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記免疫グロブリンが、３１１、４３４、４２８、４３８、および４３５からなる群から選択される位置の１つまたは複数で突然変異を有する、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記突然変異が、ＩｇＧ１−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ、ＩｇＧ１−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ、ＩｇＧ１−Ｑ３１１Ｒ、ＩｇＧ１−Ｎ４３４Ｗ、ＩｇＧ３（ｂ）−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ、ＩｇＧ３（ｂ）−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４３８Ｅ／Ｒ４３５Ｈ、ＩｇＧ１−Ｍ２５２Ｓ／Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ、ＩｇＧ１−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｐ／Ｍ４２８Ｅ、ＩｇＧ１−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｄ、ＩｇＧ１−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ／Ｈ４３３Ｋ、ＩｇＧ１−Ｌ３０９Ｋ／Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ、ＩｇＧ１−Ｌ３０９Ｒ／Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ、ＩｇＧ１−Ｌ３０９Ｓ／Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ、およびＩｇＧ３（ｂ）−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ／Ｒ４３５Ｈからなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
前記免疫グロブリンの定常領域が、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２、３、４、５、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、および１５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記突然変異が、前記突然変異をレーシングする（ｌａｃｉｎｇ）免疫グロブリンに比較して免疫グロブリンの血清半減期を延長する、請求項１〜５のいずれかに記載の組成物。
【請求項７】
免疫グロブリンのＦｃ領域に少なくとも１つの突然変異を含む前記免疫グロブリンを含む組成物であって、前記免疫グロブリンが、ＦｃＲｎへの変化された結合を有し、前記突然変異が、ＩｇＧ１−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ、ＩｇＧ１−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ、ＩｇＧ１−Ｑ３１１Ｒ、ＩｇＧ１−Ｎ４３４Ｗ、ＩｇＧ３（ｂ）−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ、ＩｇＧ３（ｂ）−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４３８Ｅ／Ｒ４３５Ｈ、ＩｇＧ１−Ｍ２５２Ｓ／Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ、ＩｇＧ１−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｐ／Ｍ４２８Ｅ、ＩｇＧ１−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｄ、ＩｇＧ１−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ／Ｈ４３３Ｋ、ＩｇＧ１−Ｌ３０９Ｋ／Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ、ＩｇＧ１−Ｌ３０９Ｒ／Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ、ＩｇＧ１−Ｌ３０９Ｓ／Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ、およびＩｇＧ３（ｂ）−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ／Ｒ４３５Ｈからなる群から選択される、組成物。
【請求項８】
前記突然変異が、前記突然変異をレーシングする免疫グロブリンに比較して免疫グロブリンの血清半減期を延長する、請求項６に記載の組成物。
【請求項９】
前記免疫グロブリンの定常領域が、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２、３、４、５、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、および１６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項７または８に記載の組成物。
【請求項１０】
ＦｃＲｎへの変化された結合を有するＩｇＧ１免疫グロブリンを含む組成物であって、前記免疫グロブリンが、Ｑ３１１Ｒ、Ｎ４３４Ｗ、およびＭ４２８Ｅ突然変異を有する、組成物。
【請求項１１】
前記突然変異が、前記突然変異をレーシングする免疫グロブリンに比較して免疫グロブリンの血清半減期を延長する、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記抗体が、癌マーカー、サイトカイン、感染性疾患マーカー、および成長因子からなる群から選択される標的に結合する、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１３】
それを必要とする対象において疾患を処置または予防するための請求項１〜１２のいずれか１項に記載の免疫グロブリンの使用。
【請求項１４】
前記疾患が、癌、自己免疫疾患、炎症性疾患、移植片拒絶、および感染性疾患からなる群から選択される、請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
前記抗体が、癌マーカー、サイトカイン、感染性疾患マーカー、および成長因子からなる群から選択される標的に結合する、請求項１３または１４に記載の使用。
【請求項１６】
それを必要とする対象に請求項１〜１２のいずれか１項に記載の免疫グロブリンを提供すること、
を含む、対象において疾患を処置するまたは予防する方法。
【請求項１７】
前記疾患が、癌、自己免疫疾患、炎症性疾患、移植片拒絶、および感染性疾患からなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記抗体が、癌マーカー、サイトカイン、感染性疾患マーカー、および成長因子からなる群から選択される標的に結合する、請求項１６または１７に記載の方法。
【請求項１９】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の免疫グロブリンのＦｃ融合体。
【請求項２０】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の免疫グロブリンまたは免疫原に融合された請求項１９に記載のＦｃ融合体を含む融合タンパク質。
【請求項２１】
請求項２０に記載の融合タンパク質を含むワクチン組成物。
【請求項２２】
対象において免疫応答を生じるための請求項２１に記載のワクチン組成物の使用。
【請求項２３】
対象が前記免疫原に対して免疫応答を生じるような条件下で前記対象に請求項２１に記載のワクチン組成物を投与すること、
を含む、対象において免疫応答を生成する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、抗体を介した治療のための組成物および方法に関する。詳細には本明細書で提供されるのは、変化された半減期を有する改変された免疫グロブリンである。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
抗体は、特異的抗原を結合する免疫タンパク質である。ヒトおよびマウスをはじめとするほとんどの哺乳動物において、抗体は、対合した重鎖および軽鎖ポリペプチド鎖から構築される。各鎖は、個々の免疫グロブリン（Ｉｇ）ドメインで構成され、このため一般的用語の免疫グロブリンは、そのようなタンパク質に用いられる。各鎖は、可変領域および定常領域と称される２つの別個の領域で構成される。軽鎖および重鎖可変領域は、抗体間で顕著な配列多様性を示し、標的抗原の結合を担う。定常領域は、より低い配列多様性を示し、重要な生化学的事象を誘起する複数の天然タンパク質の結合を担う。ヒトには、ＩｇＡ（サブクラスＩｇＡ１およびＩｇＡ２を含む)、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ（サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を含む）、およびＩｇＭを含む５つの異なるクラスの抗体がある。Ｖ領域には微妙な差異が存在し得るが、これらの抗体クラス間を識別する特色は、それらの定常領域である。図１は、免疫グロブリンの一般的構造特徴を記載するために、本明細書で用いられるＩｇＧ１抗体を示している。ＩｇＧ抗体は、２つの重鎖および２つの軽鎖から構成される四量体タンパク質である。ＩｇＧ重鎖は、それぞれ重鎖可変ドメイン、重鎖定常ドメイン１、重鎖定常ドメイン２、および重鎖定常ドメイン３を指す、ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３の順でＮ末端からＣ末端へと連結される４つの免疫グロブリンドメイン（それぞれ重鎖可変ドメイン、定常ガンマ１ドメイン、定常ガンマ２ドメイン、および定常ガンマ３ドメインを指す、ＶＨ−Ｃγ１−Ｃγ２−Ｃγ３とも称される) から構成される。ＩｇＧ軽鎖は、それぞれ軽鎖可変ドメインおよび軽鎖定常ドメインを指す、ＶＬ−ＣＬの順でＮ末端からＣ末端へと連結される２つの免疫グロブリンドメインから構成される。
【０００３】
抗体の可変領域は、分子の抗原結合決定基を含有し、こうしてその標的抗原に対する抗体の特異性を決定する。可変領域は、同じクラス内の他の抗体と配列が最も異なるために、このように呼ばれる。配列可変性の大部分は、相補性決定領域（ＣＤＲ）において生じる。重鎖および軽鎖に３つずつ、合計６つのＣＤＲがあり、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３と呼ばれる。ＣＤＲの外側の可変領域は、フレームワーク（ＦＲ）領域と称される。ＣＤＲほど多様ではないが、配列可変性が、異なる抗体間でＦＲ領域に生じる。全体として、抗体のこの特徴的構造様式が安定な足場（ＦＲ領域）を提供し、その上で実質的な抗原結合多様性（ＣＤＲ）が免疫系により模索されて、幅広い抗原群に対する特異性が獲得され得る。多数の高解像度構造が異なる生物体由来の種々の可変領域フラグメントについて入手可能であり、いくつかは未結合でありいくつかは抗原と複合体形成している。抗体可変領域の配列および構造的特徴は、十分に特徴づけられており（全体として参照により組み入れられる、Ｍｏｒｅａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｃｈｅｍ  ６８：９−１６；Ｍｏｒｅａ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０：２６７−２７９）、抗体の保存された特色が、豊富な抗体改変技法の開発を可能にした（全体として参照により組み入れられる、Ｍａｙｎａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ｅｎｇ  ２：３３９−３７６）。例えば、１つの抗体、例えばネズミ抗体由来のＣＤＲを別の抗体、例えばヒト抗体のフレームワーク領域に移植することが可能である。当該技術分野で「ヒト化」と称されるこのプロセスは、非ヒト抗体からの免疫原性の低い抗体治療薬の作製を可能にする。可変領域を含むフラグメントが抗体の他の領域の非存在下で存在してよく、例えばＶＨ−Ｃγ１およびＶＨ−ＣＬを含む抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）、ＶＨおよびＶＬを含む可変フラグメント（Ｆｖ）、同じ鎖内で互いに連結されたＶＨおよびＶＬを含む一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、ならびに種々の他の可変領域フラグメントを含む（全体として参照により組み入れられる、Ｌｉｔｔｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｏｄａｙ  ２１：３６４−３７０）。
【０００４】
抗体のＦｃ領域は、複数のＦｃ受容体およびリガンドと相互作用し、エフェクター機能と称される数々の重要な機能的能力を付与する。
【０００５】
ＩｇＧでは、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインの両方からのアミノ酸を含むＦｃ上の部位が、エンドサイトーシスされた抗体をエンドソームから血流へ再循環させる受容体である胎児性Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）との相互作用を媒介する（全体として参照により組み入れられる、Ｒａｇｈａｖａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｃｅｌｌ  Ｄｅｖ  Ｂｉｏｌ  １２：１８１−２２０；Ｇｈｅｔｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １８：７３９−７６６）。このプロセスは、完全長分子のサイズが大きいために腎臓ろ過の除外を伴い、１〜３週間の範囲の好適な抗体血清半減期をもたらす。ＦｃのＦｃＲｎへの結合もまた、細胞内および細胞間の抗体輸送において中心的役割を果たす。Ｆｃ上のＦｃＲｎへの結合部位は、細菌のプロテインＡおよびＧが結合する部位でもある。これらのタンパク質による緊密な結合は典型的には、タンパク質精製時にプロテインＡまたはタンパク質Ｇアフィニティークロマトグラフィーを用いることによる、抗体精製の手段として活用される。こうしてＦｃ上のこの領域の忠実度は、抗体の臨床的特性およびそれらの精製の両方にとって重要である。
【０００６】
ＦｃＲｎは、それがＩｇＧの母子間移行を媒介し、ＩｇＧおよびアルブミンの血清存続性を調節し、かつ異なる細胞コンパートメント間で両方のリガンドを輸送するため、複数の免疫および非免疫プロセスにおける重要な担い手である。加えてＦｃＲｎは、抗原提示および交差提示を増強する。サイトゾル内で見出されるＴＲＩＭ２１とは対照的に、ＦｃＲｎは、酸性化されたエンドソーム内に主に存在し分極化された細胞層をまたいでリサイクル経路または経細胞輸送経路のいずれかを介してリガンドを輸送する、膜貫通受容体である。しかしＦｃＲｎは、免疫複合体のプロセシングとそれに続くＴ細胞への抗原性ペプチドの提示を増強することもできる。ＦｃＲｎ−ＩｇＧ相互作用の特徴は、ＦｃＲｎが厳密にｐＨ依存性の方式でＩｇＧ  Ｆｃを結合し、酸性ｐＨでは結合するが中性ｐＨでは結合しないか遊離し、このことは細胞の中および外でのＦｃＲｎ介在性輸送に不可欠である。ＦｃＲｎ−ＩｇＧ  Ｆｃ相互作用の改変は、より短いもしくはより長い血清半減期を有する抗体、または細胞層をまたいで輸送されるための変化された能力を有する抗体を生じた。ＦｃＲｎは、広く発現され、そのため造血細胞または非造血細胞の両方において異なる細胞内の位置で見出される。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
ＦｃＲｎへのｐＨ依存性結合の増強を示す改善された治療性ＩｇＧが、必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
発明の概要
本発明は、抗体を介した治療のための組成物および方法に関する。詳細には本明細書で提供されるのは、変化された半減期を有する改変された免疫グロブリンである。
【０００９】
例えば幾つかの実施形態において、本発明は、ＦｃＲｎへの変化された結合親和性を有する治療性免疫グロブリンを含む組成物であって、免疫グロブリンが、その免疫グロブリンのＦｃ領域に少なくとも１つの突然変異を含む、組成物を提供する。幾つかの実施形態において、免疫グロブリンは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４サブクラスである。幾つかの実施形態において、免疫グロブリンは、本明細書に記載される免疫グロブリン変異体の１つのＦｃ融合体である。幾つかの実施形態において、免疫グロブリンは、例えば、３１１、４３４、４２８、４３８、または４３５から選択される位置の１つまたは複数で突然変異を有する。幾つかの実施形態において、突然変異は、例えば、ＩｇＧ１−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ、ＩｇＧ１−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ、ＩｇＧ１−Ｑ３１１Ｒ、ＩｇＧ１−Ｎ４３４Ｗ、ＩｇＧ３（ｂ）−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ、ＩｇＧ３（ｂ）−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４３８Ｅ／Ｒ４３５Ｈ、ＩｇＧ１−Ｍ２５２Ｓ／Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ、ＩｇＧ１−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｐ／Ｍ４２８Ｅ、ＩｇＧ１−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｄ、ＩｇＧ１−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ／Ｈ４３３Ｋ、ＩｇＧ１−Ｌ３０９Ｋ／Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ、ＩｇＧ１−Ｌ３０９Ｒ／Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ、ＩｇＧ１−Ｌ３０９Ｓ／Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ、またはＩｇＧ３（ｂ）−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ／Ｒ４３５Ｈである（例えば、免疫グロブリンの定常領域は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２、３、４、５、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、もしくは１６から選択されるアミノ酸配列 、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２、３、４、５、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、もしくは１６と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一の配列を有する）。
【００１０】
さらなる実施形態は、Ｆｃ領域に少なくとも１つの突然変異を含む免疫グロブリンを含む組成物であって、免疫グロブリンがＦｃＲｎへの変化された結合を有し、突然変異が、例えばＩｇＧ１−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ、ＩｇＧ１−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ、ＩｇＧ１−Ｑ３１１Ｒ、ＩｇＧ１−Ｎ４３４Ｗ、ＩｇＧ３（ｂ）−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ、ＩｇＧ３（ｂ）−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４３８Ｅ／Ｒ４３５Ｈ、ＩｇＧ１−Ｍ２５２Ｓ／Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ、ＩｇＧ１−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｐ／Ｍ４２８Ｅ、ＩｇＧ１−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｄ、ＩｇＧ１−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ／Ｈ４３３Ｋ、ＩｇＧ１−Ｌ３０９Ｋ／Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ、ＩｇＧ１−Ｌ３０９Ｒ／Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ、ＩｇＧ１−Ｌ３０９Ｓ／Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ、またはＩｇＧ３（ｂ）−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ／Ｒ４３５Ｈから選択される、組成物を提供する。
【００１１】
さらに別の実施形態は、ＦｃＲｎへの変化された結合を有し、Ｑ３１１Ｒ、Ｎ４３４Ｗ、およびＭ４２８Ｅ突然変異を有する、ＩｇＧ１免疫グロブリンを提供する。
【００１２】
幾つかの実施形態において、抗体は、例えば、癌マーカー、サイトカイン、感染性疾患マーカー、または成長因子から選択される標的に結合する。
【００１３】
さらに別の実施形態は、それを必要とする対象における疾患を処置または予防するための本明細書に記載された免疫グロブリンの使用を提供する。幾つかの実施形態において、疾患は、例えば、癌、自己免疫疾患、炎症性疾患、移植片拒絶、または感染性疾患であるが、他の疾患が特別に企図される。幾つかの実施形態において、抗体は、例えば、癌マーカー、サイトカイン、感染性疾患マーカー、または成長因子から選択される標的に結合するが、他の標的が特別に企図される。
【００１４】
さらなる実施形態は、それを必要とする対象に本明細書に記載された免疫グロブリンを提供することを含む、対象における疾患を処置するまたは予防する方法を提供する。
【００１５】
さらなる実施形態は、本明細書に記載された免疫グロブリン変異体またはそのＦｃ融合体（例えば、免疫原に融合された）を含むワクチン組成物、および対象において免疫応答を生成するためのその使用を提供する。
【００１６】
追加の実施形態が、本明細書に記載される。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】ｐＨ６．０（上図）および７．４（下図）でのヒトＦｃＲｎへの一群のＦｃを改変されたｈ９Ｃ１２  ＩｇＧ１変異体の結合を示すＥＬＩＳＡ。
【図２】ｐＨ６．０（７．８〜４０００．０ｎＭ）および７．４（４０００．０ｎＭ）でのヒトＦｃＲｎへの一群のＦｃを改変されたｈ９Ｃ１２  ＩｇＧ１変異体の結合を示すＳＰＲセンサーグラム。ＩｇＧ１−Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅを対照として含んだ。
【図３】ＩｇＧ１変異体のアミノ酸配列を示すアライメントを示す。Ｆｃを改変されたＩｇＧ１変異体の定常ドメインのアミノ酸配列。
【図４】図３からの配列を示す。
【図５】ｐＨ６．０および７．４でのヒトＦｃＲｎへの一群のＦｃを改変されたｈ９Ｃ１２  ＩｇＧ１およびＩｇＧ３変異体の結合を示すＥＬＩＳＡを示す。
【図６】ｐＨ６．０（１０００〜１５．６ｎＭ）（Ａ〜Ｄ）およびｐＨ７．４（１０００ｎＭ）（Ｅ〜Ｆ）でのヒトＦｃＲｎへの一群のＦｃを改変されたｈ９Ｃ１２  ＩｇＧ１変異体の結合を示すＳＰＲセンサーグラムを示す。
【図７】ヒトＦｃＲｎ  Ｔｇ３２−Ａｌｂ−／−トランスジェニックマウスにおける（Ａ）ｈ９Ｃ１２および（ｂ）ＮＩＰ  ＩｇＧ１変異体のインビボ半減期（残留率％）を示す。ＮＩＰ＝４−ヒドロキシ−３−ヨード−５−ニトロフェニル酢酸。
【図８】ＩｇＧ変異体の配列を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
定義
本明細書で用いられる用語「抗体」は、最も広い意味で用いられ、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば二重特異性抗体）、および所望の抗原結合活性を示す抗体フラグメントを非限定的に含む、様々な抗体構造を包含する。また包含されるのは、Ｆｃ領域を有する抗体断片、および免疫グロブリンのＦｃ領域と同等の領域を含む融合タンパク質である。
【００１９】
「抗体フラグメント」は、インタクト抗体が結合する抗原を結合するインタクトな抗体の一部を含む、インタクトな抗体以外の分子を指す。抗体フラグメントの例としては、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、一本鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）、ダイアボディ、および抗体フラグメントから形成される多重特異性抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２０】
本明細書内の用語「Ｆｃ領域」は、定常領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖のＣ−末端領域を定義するために用いられる。この用語は、ネイティブ配列のＦｃ領域および変異体のＦｃ領域を包含する。一実施形態において、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６から、またはＰｒｏ２３０から重鎖のカルボキシル末端へと延在する。しかし、Ｆｃ領域のＣ−末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、存在してもしなくてもよい。本明細書で他に断りがなければ、Ｆｃ領域または定常領域中のアミノ酸残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９９１に記載される通り、ＥＵインデックスとも呼ばれる、ＥＵナンバリングシステムに従う。
【００２１】
「エフェクター機能」は本明細書では、抗体のアイソタイプにより変わる、抗体のＦｃ領域に起因し得るそれらの生物活性を指すために用いられる。抗体のエフェクター機能の例としては、Ｃｌｑ結合および補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞介在性細胞障害（ＡＤＣＣ）；貪食；サイトカイン分泌；抗原提示細胞による免疫複合体介在性抗原取り込み；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御；およびＢ細胞活性化が挙げられる。タンパク質を参照して用いられる場合の用語「野生型」は、合成タンパク質を生成するように操作されるもの以外の細胞、組織、または生物体のゲノムにコードされるタンパク質を指す。
【００２２】
用語「抗原結合ドメイン」は、抗原の一部または全てに特異的に結合しかつそれらに相補的であるエリアを含む、抗原結合分子の一部を指す。抗原が大きい場合、抗原結合分子は、抗原の特定部分のみに結合でき、その部分はエピロープと称される。抗原結合ドメインは、例えば、１つまたは複数の抗体可変ドメイン（抗体可変領域とも呼ばれる）により提供され得る。好ましくは抗原結合ドメインは、抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）および抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。
【００２３】
用語「キメラ抗体」は、重鎖および／または軽鎖の一部が特定の供給源または種に由来し、重鎖および／または軽鎖の残り部分が異なる供給源または種に由来する抗体を指す。キメラ抗体の場合、例えば非抗原結合成分は、チンパンジーおよびヒトなどの霊長類を含む、非常に多様な種に由来し得る。ヒト化抗体は、キメラ抗体の特に好ましい形態である。
【００２４】
抗体の「クラス」は、重鎖に保有される定常ドメインまたは定常領域のタイプを指す。抗体には５つの主なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭがあり、これらの複数は、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２にさらに分別され得る。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、α、β、δ、ε、γ、およびμと呼ばれる。
【００２５】
「免疫グロブリンのＦｃ領域と同等の領域」は、免疫グロブリンのＦｃ領域の天然由来の対立遺伝子変異体に加え、置換、付加、または欠失を生じるが、エフェクター機能（抗体依存性細胞障害など）を媒介する免疫グロブリンの能力を実質的に低下させない変化を有する変異体を包含するものとする。例えば１つまたは複数のアミノ酸は、生物学的機能の実質的な損失なしに免疫グロブリンのＦｃ領域のＮ−末端またはＣ−末端から欠失され得る。そのような変異体は、活性への最小の影響を有するように当該技術分野で公知の一般的規則に従って選択され得る（例えば、Ｂｏｗｉｅ，Ｊ．Ｕ．ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４７：１３０６−１０（１９９０））。
【００２６】
「フレームワーク」または「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）（またはＣＤＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは一般に、４つのＦＲドメイン：ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４からなる。したがってＨＶＲおよびＦＲ配列は一般に、ＶＨ（またはＶＬ）において以下の順序で出現する：ＦＲ１−Ｈ１（Ｌ１）−ＦＲ２−Ｈ２（Ｌ２）−ＦＲ３−Ｈ３（Ｌ３）−ＦＲ４。
【００２７】
用語「完全長抗体」、「インタクト抗体」および「全抗体」は、本明細書で互換的に用いられ、ネイティブ抗体構造と実質的に類似の構造を有する抗体、または本明細書で定義されるＦｃ領域を含む重鎖を有する抗体を指す。
【００２８】
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択の際に最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからである。一般に、配列のサブグループは、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ９１−３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａ  Ｍｄ．（１９９１），ｖｏｌｓ．１−３でのようなサブグループである。一実施形態において、ＶＬの場合、サブグループは、上掲のＫａｂａｔらでのようなサブグループカッパＩである。一実施形態において、ＶＨの場合、サブグループは、上掲のＫａｂａｔらでのようなサブグループＩＩＩである。
【００２９】
「ヒト化」抗体は、非ヒトＨＶＲ由来のアミノ酸残基と、ヒトＦＲ由来のアミノ酸残基と、を含むキメラ抗体を指す。特定の実施形態において、ヒト化抗体は、少なくとも１種、典型的には２種の可変ドメインの実質的に全てを含み、ＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）の全てまたは実質的に全ては、非ヒト抗体のものに対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全ては、ヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は場合により、ヒト抗体由来の抗体定常領域の少なくとも一部を含み得る。抗体、例えば非ヒト抗体の「ヒト化形態」は、ヒト化を受けた抗体を指す。
【００３０】
本明細書で用いられる用語「超可変領域」または「ＨＶＲ」は、配列中で超可変性であり、そして／または構造的に定義されたループ（「超可変ループ」）を形成する、抗体可変ドメインの領域のそれぞれを指す。一般にネイティブの４本鎖抗体は、ＶＨに３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、およびＶＬに３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）の、６つのＨＶＲを含む。ＨＶＲは一般に、超可変ループからのおよび／または「相補性決定領域（ＣＤＲ）」からのアミノ酸残基を含み、後者は最も配列可変性高くかつ／または抗原認識に関与する。ＶＨ内のＣＤＲ１を除き、ＣＤＲは一般に、超可変ループを形成するアミノ酸残基を含む。超可変領域（ＨＶＲ）は相補性決定領域（ＣＤＲ）とも称され、これらの用語は、本明細書では抗原結合領域を形成する可変領域の部分を参照して互換的に用いられる。この特定の領域は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，”Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”（１９８３）、およびＣｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７）に記載されており、それらの定義は、互いに比較される場合アミノ酸残基のオーバーラップまたはサブセットを含む。しかし、抗体またはその変異体のＣＤＲを指すためのいずれかの定義の適用は、本明細書で定義および使用される用語の範囲内のものとする。先に引用された参考資料のそれぞれに定義されるＣＤＲを包含する適切なアミノ酸残基を、比較として以下の表１に示す。特定のＣＤＲを包含する厳密な残基番号は、ＣＤＲの配列およびサイズに応じて変動するであろう。当業者は、どの残基が抗体の可変領域アミノ酸配列で表される特定のＣＤＲを含むかを、日常的に決定できる。
【００３１】
ポリペプチドを参照して用いられる場合の用語「変異体」および「突然変異体」は、１種または複数のアミノ酸が他の、通常は関連するポリペプチドと異なるアミノ酸配列を指す。変異体は、「保存的」変化を有し得、そこで置換されたアミノ酸は、類似の構造または化学的特性を有する。保存的アミノ酸置換の１つのタイプは、類似の側鎖を有する残基の互換性を指す。例えば、脂肪族側鎖を有するアミノ酸の群は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、およびイソロイシンであり；脂肪族ヒドロキシル側鎖を有するアミノ酸の群は、セリンおよびトレオニンであり；アミド含有側鎖を有するアミノ酸の群は、アスパラギンおよびグルタミンであり；芳香族側鎖を有するアミノ酸の群は、フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファンであり；ｐ−アミノフェニルアラニンのような非天然アミノ酸、塩基性側鎖を有するアミノ酸の群は、リジン、アルギニン、およびヒスチジンであり；硫黄含有側鎖を有するアミノ酸の群は、システインおよびメチオニンである。好ましい保存的アミノ酸置換の群は、バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リジン−アルギニン、アラニン−バリン、およびアスパラギン−グルタミンである。より希少なものとして、変異体は、「非保存的」変化を有し得る（例えば、グリシンとトリプトファンの交換）。類似の微小な変異はまた、アミノ酸欠失もしくは挿入（即ち、付加）、またはその両方も包含し得る。どのアミノ酸残基が、および幾つのアミノ酸残基が、生物活性を減じることなく置換、挿入または欠失され得るかを決定する手引きは、当該技術分野で周知のコンピュータプログラム、例えば、ＤＮＡＳｔａｒソフトウエアを用いて見出され得る。変異体を、機能的アッセイでテストできる。好ましい変異体は、１０％未満の、好ましくは５％未満の、より好ましくは２％未満の変化（置換、欠失などのいずれか）を有する。アミノ酸置換については、以下の命名法を使用する：元のアミノ酸、位置、置換アミノ酸。したがって、位置５７３におけるリジンのアラニンによる置換は「Ｋ５７３Ａ」と表され、位置５７３におけるリジンのプロリンによる置換は「Ｋ５７３Ｐ」と表される。多重突然変異については、例えば加算記号（「＋」）または「／」により区切って表記され、例えば、「Ｇｌｙ２０５Ａｒｇ＋Ｓｅｒ４１１Ｐｈｅ」または「Ｇ２０５Ｒ／Ｓ４１１Ｆ」は、それぞれ、位置２０５および４１１での、グリシン（Ｇ）をアルギニン（Ｒ）に置換し、セリン（Ｓ）をフェニルアラニン（Ｆ）に置換する突然変異を表す。
【００３２】
２つのアミノ酸配列間、または２つのヌクレオチド配列間の関連性は、「同一性」というパラメータによって記載される。本発明の目的においては、２つのアミノ酸配列間の同一性の度合いは、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ−Ｗｕｎｓｃｈ アルゴリズム（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ，１９７０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３−４５３）を、ＥＭＢＯＳＳパッケージ（ＥＭＢＯＳＳ：Ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｏｐｅｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｓｕｉｔｅ，Ｒｉｃｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １６：２７６−２７７）のＮｅｅｄｌｅプログラム（好ましくはバージョン３.０.０以降）で実行されるように用いて決定される。用いられる任意パラメータ１１６４４．０００−ＥＰ７は、ギャップ・オープン・ペナルティーが１０、ギャップ・エクステンション・ペナルティーが０.５、およびＥＢＬＯＳＵＭ６２（ＢＬＯＳＵＭ６２のＥＭＢＯＳＳバージョン）置換マトリックスである。「最長同一性」と表示されるＮｅｅｄｌｅの出力値（−ｎｏｂｒｉｅｆオプションを用いて得られるもの）を％同一性として使用し、以下の式に従って計算する：
（同一残基数×１００）／（アラインメント長−アラインメント中のギャップ総数）。
【００３３】
参照配列中のある位置「に対応するアミノ酸位置」という表現、および類似の表現は、一次構造または空間的構造において参照配列中の特定の位置に対応するアミノ酸残基を同定するためのものである。熟練者は、これが、所与の配列を参照配列とアライメントすること、および参照配列の特定の位置で一致するアミノ酸残基を同定することにより実施され得ることを、認識するであろう。
【００３４】
Ｘｎｎｎという表現は、ＨＳＡ中の位置ｎｎｎに対応する位置に存在するアミノ酸残基Ｘを意味すると意図され、ＸｎｎｎＹという表現は、ＨＳＡ中の位置ｎｎｎに対応する位置に存在する任意のアミノ酸Ｘの、アミノ酸残基Ｙでの置換を意味すると意図される。
【００３５】
本明細書で用いられる用語「親和性」は、結合対の２つのメンバーの間、例えば、免疫グロブリンとＦｃＲｎの間の結合強度の尺度を指す。Ｋｄは、解離定数であり、モル濃度の単位を有する。親和性定数は、解離定数の逆数である。親和性定数は、この化学的物体を記載するための一般的用語として用いられる場合もある。それは、結合エネルギーの直接の尺度である。Ｋの自然対数は、式：ΔＧ０＝−ＲＴＬＮ（Ｋ）（式中、Ｒは気体定数であり、温度はケルビン度である）による結合のギブズ自由エネルギーに一次的に関連する。親和性は、実験的に、例えば市販のＢｉａｃｏｒｅ  ＳＰＲ装置（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いる表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により、決定され得る。
【００３６】
本明細書で用いられる用語「上記対象が免疫応答を生じるような条件下で」は、免疫応答（例えば、自然なまたは獲得された）の任意の定性的または定量的な誘導、発生、および／または刺激を指す。
【００３７】
本明細書で用いられる用語「免疫応答」は、対象の免疫系による応答を指す。例えば、免疫応答としては、Ｔｏｌｌ受容体活性化、リンホカイン（例えば、サイトカイン（例えば、Ｔｈ１またはＴｈ２型サイトカイン）またはケモカイン）発現および／もしくは分泌、マクロファージ活性化、樹状細胞活性化、Ｔ細胞活性化（例えば、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞）、ＮＫ細胞活性化、ならびに／またはＢ細胞活性化（例えば、抗体生成および／または分泌）における検出可能な変化（例えば、増加）が挙げられるが、これらに限定されない。免疫応答の追加的例としては、ＭＨＣ分子への免疫原（例えば、抗原（例えば、免疫原性ポリペプチド））の結合ならびに細胞障害性Ｔリンパ球（「ＣＴＬ」）の応答を誘導すること、免疫原性ポリペプチドが得られる抗原に対するＢ細胞の応答（例えば、抗体産生）、および／またはＴ−ヘルパーリンパ球の応答、および／または遅延型過敏性（ＤＴＨ）応答の誘導、免疫系の細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞（例えば、任意の発生段階の（例えば形質細胞）の拡張（例えば、細胞集団の成長）、ならびに抗原提示細胞による抗原のプロセシングおよび提示の増加が挙げられる。免疫応答は、対象の免疫系が異物として認識する免疫原（例えば、微生物（例えば、病原）由来の非自己抗原、または異物として認識される自己抗原）に対するものであり得る。したがって、本明細書で用いられる「免疫応答」が非限定的に、自然免疫応答（例えば、Ｔｏｌｌ受容体シグナルカスケードの活性化）、細胞性免疫応答（例えば、Ｔ細胞（例えば、抗原特異性Ｔ細胞）および免疫系の非特異性細胞を介する応答）、および液性免疫応答（例えば、Ｂ細胞を介する応答（例えば、血漿、リンパおよび／または組織液への抗体の産生および分泌を介する））を含む任意のタイプの免疫応答を指すことが、理解されなければならない。用語「免疫応答」は、抗原および／または免疫原に応答する対象の免疫系の能力の全ての態様を包含することを意味する（例えば、免疫原（例えば、病原）への初期の応答、および適応免疫の結果である獲得された（例えば、記憶）応答の両方）。
【００３８】
本明細書で用いられる用語「免疫」は、疾患を引き起こす可能性がある微生物（例えば、病原）への暴露の際の疾患からの防御（例えば、疾患の兆候、症状または状態の予防または減弱化（例えば、抑制））を指す。免疫は、自然なもの（例えば、抗原への過去の暴露の非存在下で存在する非適応な（例えば、非獲得）免疫応答）および／または獲得されたもの（例えば、抗原への過去の暴露に続くＢおよびＴ細胞が介する（例えば、抗原への増加された特異性および反応性を示す）免疫応答）であり得る。
【００３９】
本明細書で用いられる用語「免疫原」は、対象において免疫応答を誘発できる物質（例えば、微生物（例えば、細菌、ウイルスまたは真菌）および／またはその一部もしくは成分（例えば、タンパク質抗原））を指す。幾つかの実施形態において、免疫原は、この免疫原（例えば、微生物（例えば、病原または病原産物））に対する免疫を誘起する。
【００４０】
用語「被験化合物」は、疾患、疾病、病気、もしくは身体機能の障害を処置もしくは予防するために、またはそれ以外で試料の生理学的状態もしくは細胞状態を変化させるために用いられ得る任意の化学的物体、医薬、薬物などを指す。被験化合物は、既知のおよび潜在的な治療化合物の両方を含む。被験化合物は、本発明のスクリーニング方法を用いてスクリーニングすることにより治療性であと決定され得る。「既知の治療化合物」は、そのような処置または予防に効果的であると示された（例えば、動物試験またはヒトへの投与による過去の経験により）治療化合物を指す。
【００４１】
本明細書で用いられる用語「試料」は、その最も広い意味で用いられる。本明細書で用いられる用語「試料」は、その最も広い意味で用いられる。１つの意味ではそれは、組織試料を指し得る。別の意味ではそれは、任意の供給源から得られる標本または培養物、および生体試料を包含することを意味する。生体試料は、動物（ヒトを含む）から得ることができ、液体、固体、組織、および気体を包含する。生体試料としては、血漿、血清などの血液生成物が挙げられるが、これらに限定されない。これらの例は、本発明に適用可能な試料のタイプを限定するものと解釈されてはならない。ヒト染色体またはヒト染色体に関連する配列の含有が疑われる試料は、細胞、細胞から単離された染色体（例えば、分裂中期染色体のスプレッド）、ゲノムＤＮＡ（溶液中の、またはサザンブロット分析用などの固体担体に結合された）、ＲＮＡ（溶液中の、またはノーザンブロット分析用などの固体担体に結合された）、ｃＤＮＡ（溶液中の、または固体担体に結合された）などを含み得る。タンパク質の含有が疑われる試料は、細胞、組織の一部、１種または複数のタンパク質を含有する抽出物などを含み得る。
【００４２】
本明細書で用いられる用語「親和性」は、結合対の１つのメンバーの間の、例えば免疫グロブリンとＦｃＲｎの間の結合強度の尺度を指す。Ｋｄは、解離定数であり、モル濃度の単位を有する。親和性定数は、解離定数の逆数である。親和性定数は、この化学的物体を記載するための一般的用語として用いられる場合もある。それは、結合エネルギーの直接の尺度である。Ｋの自然対数は、式：ΔＧ０＝−ＲＴＬＮ（Ｋ）（式中、Ｒは気体定数であり、温度はケルビン度である）による結合のギブズ自由エネルギーに一次的に関連する。親和性は、実験的に、例えば市販のＢｉａｃｏｒｅ  ＳＰＲ装置（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いる表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により、決定され得る。
【００４３】
本明細書で用いられる用語「上記対象が免疫応答を生じるような条件下で」は、免疫応答（例えば、自然なまたは獲得された）の任意の定性的または定量的な誘導、発生、および／または刺激を指す。
【００４４】
本明細書で用いられる用語「免疫応答」は、対象の免疫系による応答を指す。例えば、免疫応答としては、Ｔｏｌｌ受容体活性化、リンホカイン（例えば、サイトカイン（例えば、Ｔｈ１またはＴｈ２型サイトカイン）またはケモカイン）発現および／もしくは分泌、マクロファージ活性化、樹状細胞活性化、Ｔ細胞活性化（例えば、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞）、ＮＫ細胞活性化、ならびに／またはＢ細胞活性化（例えば、抗体生成および／または分泌）における検出可能な変化（例えば、増加）が挙げられるが、これらに限定されない。免疫応答の追加的例としては、ＭＨＣ分子への免疫原（例えば、抗原（例えば、免疫原性ポリペプチド））の結合、ならびに細胞障害性Ｔリンパ球（「ＣＴＬ」）の応答を誘導すること、免疫原性ポリペプチドが得られる抗原に対するＢ細胞の応答（例えば、抗体産生）、および／またはＴ−ヘルパーリンパ球の応答、および／または遅延型過敏性（ＤＴＨ）応答の誘導、免疫系の細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞（例えば、任意の発生段階の（例えば、形質細胞）の拡張（例えば、細胞集団の成長）、ならびに抗原提示細胞による抗原のプロセシングおよび提示の増加が挙げられる。免疫応答は、対象の免疫系が異物として認識する免疫原（例えば、微生物（例えば、病原）由来の非自己抗原、または異物として認識される自己抗原）に対するものであり得る。したがって、本明細書で用いられる「免疫応答」が非限定的に自然免疫応答（例えば、Ｔｏｌｌ受容体シグナルカスケードの活性化）、細胞性免疫応答（例えば、Ｔ細胞（例えば、抗原特異性Ｔ細胞）および免疫系の非特異性細胞を介する応答）、および液性免疫応答（例えば、Ｂ細胞を介する応答（例えば、血漿、リンパおよび／または組織液への抗体の産生および分泌を介する））を含む任意のタイプの免疫応答を指すことが、理解されなければならない。用語「免疫応答」は、抗原および／または免疫原に応答する対象の免疫系の能力の全ての態様を包含することを意味する（例えば、免疫原（例えば、病原）への初期の応答、および適応免疫の結果である獲得された（例えば、記憶）免疫応答の両方）。
【００４５】
本明細書で用いられる用語「免疫」は、疾患を引き起こす可能性がある微生物（例えば、病原）への暴露の際の疾患からの防御（例えば、疾患の兆候、症状または状態の予防または減弱化（例えば、抑制））を指す。免疫は、自然なもの（例えば、抗原への過去の暴露の非存在下で存在する非適応な（例えば、非獲得）免疫応答）および／または獲得されたもの（例えば、抗原への過去の暴露に続くＢおよびＴ細胞が介する（例えば、抗原への増加された特異性および反応性を示す）免疫応答）であり得る。
【００４６】
本明細書で用いられる用語「免疫原」は、対象において免疫応答を誘発できる物質（例えば、微生物（例えば、細菌、ウイルスまたは真菌）および／またはその一部もしくは成分（例えば、タンパク質抗原））を指す。幾つかの実施形態において、免疫原は、この免疫原（例えば、微生物（例えば、病原または病原産物））に対する免疫を誘起する。
【００４７】
本発明の詳細な記載
本発明は、抗体を介した治療のための組成物および方法に関する。詳細には、本明細書で提供されるのは、変化された半減期を有する改変された免疫グロブリンである。
【００４８】
免疫グロブリン分子は、鎖間ジスルフィド結合により共につながれる、２つの同一重鎖および２つの同一軽鎖ポリペプチド鎖で構成される。個々の軽鎖および重鎖は、約１１０のアミノ酸の領域に折り重なり、保存された三次元コンホメーションを取る。軽鎖は、１つの可変領域（ＶＬと称される）および１つの定常領域（ＣＬ）を含むみ、一方で重鎖は、１つの可変領域（ＶＨ）および３つの定常領域（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）を含む。領域の対が会合して、不連続の構造を形成する。詳細には軽鎖および重鎖の可変領域であるＶＬおよびＶＨが会合して、抗原結合部位を含む「ＦＶ」エリアを形成する。
【００４９】
重鎖および軽鎖の両方の可変領域は、抗体分子により構造および軽鎖アミノ酸組成において大きな可変性を示すが、定常領域は、可変性をほとんど示さない。各抗体は、重鎖および軽鎖の可変領域をＦｖエリアへと会合させることにより画定される結合部位を通して抗原を認識し結合する。特定の抗体分子の軽鎖可変領域ＶＬおよび重鎖可変領域ＶＨは、その特定の抗体により認識される抗原エピトープに結合するコンホメーションを抗原結合部位が取れるようにする特異的アミノ酸配列を有する。
【００５０】
可変領域内には、アミノ酸配列が抗体により極めて可変性である領域が見出される。３つのこれらのいわゆる「超可変」領域または「相補性決定領域」（ＣＤＲ）が、軽鎖および重鎖それぞれに見出される。軽鎖由来の３つのＣＤＲおよび対応する重鎖由来の３つのＣＤＲが、抗原結合部位を形成する。
【００５１】
多くの免疫グロブリン重鎖および軽鎖のアミノ酸配列が決定されており、抗体分子の２つの重要な特徴を明らかにする。第一に、各鎖は、類似しているが同一でない一連の配列からなり、それぞれが約１１０アミノ酸長である。これらのリピートのそれぞれは、タンパク質ドメインとして知られるタンパク質構造の不連続でコンパクトに折り畳まれた領域に対応する。軽鎖はそのような２つの免疫グロブリンドメインで構成され、一方でＩｇＧ抗体の重鎖は４つ含む。
【００５２】
アミノ酸配列の比較により明らかにされた第二の重要な特徴は、重鎖および軽鎖の両方のアミノ末端配列が異なる抗体間で大きく変動することである。配列中の可変性は、第一のドメインに対応する最初の１１０アミノ酸にほぼ限定され、一方で残りのドメインは、同じアイソタイプの免疫グロブリン鎖の間で一定である。重鎖および軽鎖のアミノ末端可変またはＶドメイン（それぞれＶＨおよびＶＬ）は一緒に抗体のＶ領域を構成し、特異的抗原に結合する能力をそこに付与し、一方で重鎖および軽鎖の定常ドメイン（Ｃドメイン）（それぞれ、ＣＨおよびＣＬ）はＣ領域を構成する。複数の重鎖Ｃドメインは、アミノ末端からカルボキシ末端へと、例えばＣＨ１、ＣＨ２などとナンバリングされる。
【００５３】
先に記載されたタンパク質ドメインは、会合してより大きな球状ドメインを形成する。したがって、完全に折り畳まれ組織化されると、抗体分子は、ヒンジ領域として知られるポリペプチド鎖のフレキシブルなストレッチにより接合される３つの等しいサイズの球状部分を含む。このＹ形構造の各アームは、軽鎖と重鎖のアミノ末端半分との会合により形成され、Ｙの本体は、２つの重鎖のカルボキシ末端半分の対合により形成される。重鎖と軽鎖の会合は、ＣＨ１ドメインとＣＬドメインのように、ＶＨドメインとＶＬドメインが対合するようになっている。ＣＨ３ドメインは互いに対合するが、ＣＨ２ドメインは相互作用せず、ＣＨ２ドメインに付着した炭水化物側鎖は２つの重鎖の間に存在する。２つの抗原結合部位は、Ｙの２つのアームの末端で対合したＶＨおよびＶＬドメインによって形成される。
【００５４】
ポリペプチド配列を切断するタンパク質分解酵素（プロテアーゼ）が、抗体分子の構造を解体するため、および分子のどの部分がその様々な機能を担うかを決定するために用いられている。プロテアーゼであるパパインによる限定的な消化は、抗体分子を３つのフラグメントに切断する。２つのフラグメントは、同一であり、抗原結合活性を含む。これらは、Ｆｒａｇｍｅｎｔ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｂｉｎｄｉｎｇ（フラグメント抗原結合）として、Ｆａｂフラグメントと称される。Ｆａｂフラグメントは抗体分子の２つの同一アームに対応し、重鎖のＶＨおよびＣＨ１ドメインと対合される完全な軽鎖を含む。他のフラグメントは、抗原結合活性を含まず、本来は即座に結晶化することが観察されており、この理由のためＦｒａｇｍｅｎｔ  ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｂｌｅ（結晶化可能なフラグメント）として、Ｆｃフラグメントと命名された。このフラグメントは、対合したＣＨ２およびＣＨ３ドメインに対応し、エフェクター分子および細胞と相互作用する抗体分子の一部である。重鎖アイソタイプの間の機能的差異は、主にＦｃフラグメントに存在する。抗体分子のＦｃ部分とＦａｂ部分を連結するヒンジ領域は、剛性のヒンジというよりむしろ、実際には柔軟なロープであり、２つのＦａｂアームの独立した運動を可能にする。本発明は、ウイルスターゲットに対する抗体を介した免疫のための組成物および方法に関する。詳細には本明細書で提供されるのは、抗ウイルス活性を有する改変された免疫グロブリンである。
【００５５】
本発明は、好ましくは免疫グロブリンのＦｃ領域またはヒンジ領域に、１つまたは複数の突然変異を含む突然変異体免疫グロブリンを提供する。好ましい実施形態において、突然変異は、所望の方法で免疫グロブリンの機能を変化させる。例えば、幾つかの実施形態において、本発明は、抗体のインビボ半減期を増加させるために、ＦｃＲＮ結合を調整するＦｃ領域での少なくとも１つの突然変異を含む、変異体免疫グロブリンの使用を提供する。増加された半減期は、治療的抗体に有利である。
【００５６】
幾つかの実施形態において、免疫グロブリンは、突然変異を含まない免疫グロブリンに比較してＦｃＲＮへの変化された結合（上昇または低下した結合親和性）を示す。幾つかの実施形態において、免疫グロブリンは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４サブクラスである。幾つかの実施形態において、免疫グロブリンは、例えばＫａｂａｔシステムによるナンバリングの３１１、４２８、４３４、４３５、または４３８から選択される１つまたは複数の位置で突然変異を有する。本開示全体を通して、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９８７）および（１９９１）のナンバリングシステムが参照される。これらの概論において、Ｋａｂａｔは、各サブクラスでの抗体について多くのアミノ酸配列を列挙し、そのサブクラスでの各残基位置について最も一般的に発生するアミノ酸を列挙している。Ｋａｂａｔは、列挙された配列中の各アミノ酸に残基番号を割り付けるための方法を利用し、残基番号を割り付けるためのこの方法は、この分野での基準になった。この明細書ではＫａｂａｔナンバリング計画に従う。本発明の目的では、Ｋａｂａｔの概論に含まれない候補抗体のアミノ酸配列に残基番号を割り付けるために、以下のステップに従う。一般に候補配列は、Ｋａｂａｔで任意の免疫グロブリン配列または任意のコンセンサス配列とアラインされる。アライメントは、手作業で、または一般的に許容されたコンピュータプログラムを用いてコンピュータにより実施され得、そのようなプログラムの例はＡｌｉｇｎ２プログラムである。アライメントは、ほとんどのＦａｂ配列に共通する幾つかのアミノ酸残基を用いることにより容易になり得る。例えば、軽鎖および重鎖はそれぞれ、同じ残基番号を有する２つのシステインを典型的に有し；ＶＬドメインでは２つのシステインは典型的には残基番号２３および８８にあり、ＶＨドメインでは２つのシステイン残基は典型的には２２および９２とナンバリングされる。フレームワーク残基は必ずではないが一般に、ほぼ同じ番号の残基を有するが、ＣＤＲは、サイズが変動するであろう。例えば、アライメントされるＫａｂａｔでの配列中のＣＤＲよりも長い候補配列からのＣＤＲの場合、さらなる残基の挿入を示すために、典型的には副指数が残基番号に付加される。例えば残基３４および３６についてはＫａｂａｔ配列と並ぶが、残基３５と並ぶ残基をそれらの間に有さない候補配列では、番号３５は単に残基に割り付けられない。
【００５７】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載されるのは、定常鎖（ｃｏｎｓｔａｎｔ  ｃｈａｉｎ）（例えば、Ｆｃの）変異体である。本明細書に記載される免疫グロブリンは、特定のＣＤＲまたは可変領域配列に限定されず、所望される任意の抗原またはエピトープを認識するように作製されまたは改変され得る。したがって幾つかの実施形態において、突然変異は、例えば、ＩｇＧ１−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ、ＩｇＧ１−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ、ＩｇＧ１−Ｑ３１１Ｒ、ＩｇＧ１−Ｎ４３４Ｗ、ＩｇＧ３（ｂ）−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ、ＩｇＧ３（ｂ）−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４３８Ｅ／Ｒ４３５Ｈ、ＩｇＧ１−Ｍ２５２Ｓ／Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ、ＩｇＧ１−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｐ／Ｍ４２８Ｅ、ＩｇＧ１−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｄ、ＩｇＧ１−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ／Ｈ４３３Ｋ、ＩｇＧ１−Ｌ３０９Ｋ／Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ、ＩｇＧ１−Ｌ３０９Ｒ／Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ、ＩｇＧ１−Ｌ３０９Ｓ／Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ、またはＩｇＧ３（ｂ）−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ／Ｒ４３５Ｈから選択される（例えば、免疫グロブリンの定常領域は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２、３、４、５、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、もしくは１６から選択されるアミノ酸配列 、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２、３、４、５、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、もしくは１６と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一の配列を有する）。幾つかの特別な実施形態において、免疫グロブリンは、Ｑ３１１Ｒ、Ｎ４３４Ｗ、およびＭ４２８Ｅ突然変異を有する。
【００５８】
先に記載された突然変異は、任意の適切な免疫グロブリン分子中に導入され得る。幾つかの実施形態において、免疫グロブリンは、モノクローナル抗体であり、好ましくは組換え技術により生成される。
【００５９】
標的抗原（例えば、受容体などの細胞表面タンパク質）に対するモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）の体細胞ハイブリダイゼーション技術などの従来のモノクローナル抗体方法論を含む種々の技術により生成される。幾つかの実施形態において、体細胞ハイブリダイゼーション手順が好ましいが、モノクローナル抗体を生成するための他の技術も、企図される（例えば、Ｂリンパ球のウイルス性または発癌性形質転換）。ハイブリドーマを調製するための好ましい動物系は、ネズミ系である。
【００６０】
マウスにおけるハイブリドーマ生成は、確立された手順である。融合用の免疫脾細胞の単離のための免疫化プロトコルおよび技術は、当該技術分野で公知である。融合パートナー（例えば、ネズミ骨髄腫細胞）および融合手順もまた、公知である。ヒトタンパク質に対するヒトモノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、マウス系よりむしろ完全なヒト免疫系を含むトランスジェニックマウスを用いて作製され得る。トランスジェニックマウスからの脾細胞が、目的の抗原で免疫化され、それを用いて、ヒトタンパク質由来のエピトープに対し特異的親和性を有するヒトｍＡｂを分泌するハイブリドーマを生成する。（例えば、Ｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．，ＷＯ９１／００９０６，Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，ＷＯ９１／１０７４１；Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，ＷＯ９２／０３９１８；Ｋａｙ  ｅｔ  ａｌ．，ＷＯ９２／０３９１７［それぞれが、全体として参照により本明細書に組み入れられる］；Ｎ．Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３６８：８５６−８５９［１９９４］；Ｌ．Ｌ．Ｇｒｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ．，７：１３−２１［１９９４］；Ｓ．Ｌ．Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５［１９９４］；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．，７：３３−４０［１９９３］；Ｔｕａｉｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：３７２０−３７２４［１９９３］；およびＢｒｕｇｇｅｒｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２１：３２３−１３２６［１９９１］参照）。
【００６１】
モノクローナル抗体は、組換えＤＮＡ技術の当業者に公知の他の方法により作製することもできる。「コンビナトリアル抗体ディスプレイ」と称される他の方法が、特定の抗原特異性を有する抗体フラグメントを同定および単離するために開発されており、モノクローナル抗体を生成するために用いることができる。（例えば、Ｓａｓｔｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８６：５７２８［１９８９］；Ｈｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４６：１２７５［１９８９］；およびＯｒｌａｎｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８６：３８３３［１９８９］参照）。上記の通り動物を免疫原で免疫化した後、得られたＢ細胞プールの抗体レパトアがクローニングされる。オリゴプライマーの混合物およびＰＣＲを利用することにより免疫グロブリン分子の多様な集団の可変領域のＤＮＡ配列を得る方法が、一般に公知である。例えば、５’リーダー（シグナルペプチド）配列および／またはフレームワーク１（ＦＲ１）配列に対応する混合オリゴヌクレオチドプライマー、ならびに保存された３’定常領域プライマーに対するプライマーを、複数のネズミ抗体からの重鎖および軽鎖可変領域のＰＣＲ増幅に用いることができる。（例えば、Ｌａｒｒｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１１：１５２−１５６［１９９１］参照）。類似の方策も、ヒト抗体からのヒト重鎖および軽鎖可変領域を増幅するのに用いられてきた（例えば、Ｌａｒｒｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｃｏｍｐａｎｉｏｎ  ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２：１０６−１１０［１９９１］参照）。
【００６２】
キメラマウス−ヒトモノクローナル抗体は、当該技術分野で公知の組換えＤＮＡ技術を利用して生成され得る。例えば、ネズミ（または他の種の）モノクローナル抗体分子のＦｃ定常領域をコードする遺伝子は、制限酵素で消化されてネズミＦｃをコードする領域を除去し、ヒトＦｃ定常領域をコードする遺伝子の同等部分が置換される（例えば、Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９；欧州特許出願第１８４，１８７号；欧州特許出願第１７１，４９６号；欧州特許出願第１７３，４９４号；ＷＯ８６／０１５３３；ＵＳ４，８１６，５６７；欧州特許出願第１２５，０２３号［それぞれが、全体として参照により本明細書に組み入れられる］；Ｂｅｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４０：１０４１−１０４３［１９８８］；Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８４：３４３９−３４４３［１９８７］；Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３９：３５２１−３５２６［１９８７］；Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８４：２１４−２１８［１９８７］；Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃ．Ｒｅｓ．，４７：９９９−１００５［１９８７］；Ｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３１４：４４６−４４９［１９８５］；およびＳｈａｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．，８０：１５５３−１５５９［１９８８］参照）。キメラ抗体は、抗原結合に直接関与しないＦｖ可変領域の配列をヒトＦｖ可変領域由来の同等の配列に置き換えることにより、さらにヒト化され得る。ヒト化キメラ抗体の一般的論評は、Ｓ．Ｌ．Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：１２０２−１２０７（１９８５）およびＯｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ．Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，４：２１４（１９８６）に提供されている。それらの方法は、重鎖または軽鎖の少なくとも一方からの免疫グロブリンＦｖ可変領域の全てまたは一部をコードする核酸配列を単離する、操作する、および発現することを含む。そのような核酸の供給源は当業者に周知であり、例えば、ハイブリドーマを産生する抗ＧＰＩＩｂＩＩＩａ抗体である７Ｅ３から得ることができる。キメラ抗体またはそのフラグメントをコードする組換えＤＮＡはその後、適当な発現ベクター中にクローニングされ得る。
【００６３】
適切なヒト化抗体はあるいは、ＣＤＲ置換により生成され得る（例えば、ＵＳ５，２２５，５３９［全体として参照により本明細書に組み入れられる］；Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５５２−５２５［１９８６］；Ｖｅｒｈｏｅｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４［１９８８］；およびＢｅｉｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４１：４０５３［１９８８］）。特定のヒト抗体のＣＤＲの全てが、非ヒトＣＤＲの少なくとも一部と置き換えられ得るか、またはＣＤＲの幾つかのみが、非ヒトＣＤＲで置き換えられ得る。Ｆｃ受容体へのヒト化抗体の結合に必要とされる複数のＣＤＲを置き換えることだけが、必要である。
【００６４】
抗体は、ヒト抗体のＣＤＲの少なくとも一部を非ヒト抗体由来のＣＤＲで置き換えることが可能な任意の方法によりヒト化され得る。ヒト化ＣＤＲは、オリゴヌクレオチド部位特異的突然変異誘発を用いて、非ヒトＣＤＲで置き換えることができる。
【００６５】
特異的アミノ酸が置換、欠失または付加されているキメラおよびヒト化抗体もまた、本発明の範囲内である。詳細には、好ましいヒト化抗体は、抗原への結合を改善するためなどの、フレームワーク領域にアミノ酸置換を有する。例えば、マウスＣＤＲを有するヒト化抗体において、ヒトフレームワーク領域に位置するアミノ酸は、マウス抗体内の対応する位置にあるアミノ酸で置換され得る。そのような置換は、幾つかの例において抗原へのヒト化抗体の結合を改善することが知られる。幾つかの実施形態において、モノクローナル抗体は、ネズミ抗体またはそのフラグメントである。他の好ましい実施形態において、モノクローナル抗体は、ウシ抗体またはそのフラグメントである。例えば、ネズミ抗体は、不死化細胞に融合された重鎖トランスジーンおよび軽鎖トランスジーンを含むゲノムを有するトランスジェニックマウスから得られたＢ細胞を含むハイブリドーマにより生成され得る。抗体は、非限定的にＩｇＧ（例えば、IｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ２ｃ、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）；ＩｇＭ；ＩｇＡ１；ＩｇＡ２；ＩｇＡｓｅｃ；ＩｇＤ；およびＩｇＥを含む様々なアイソタイプのものであり得る。幾つかの好ましい実施形態において、抗体は、ＩｇＧアイソタイプである。他の好ましい実施形態において、抗体は、ＩｇＭアイソタイプである。抗体は、完全長（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４抗体）であり得るか、または抗原結合部分（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖまたは一本鎖Ｆｖフラグメント）のみを含み得る。
【００６６】
好ましい実施形態において、免疫グロブリンは、組換え抗体（例えば、キメラまたはヒト化抗体）、そのサブユニット、または抗原結合フラグメントである（例えば、可変領域、または少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を有する）。幾つかの実施形態において、免疫グロブリンは、一価である（例えば、１対の重鎖および軽鎖、またはその抗原結合部分を含む）。別の実施形態において、免疫グロブリンは、二価である（例えば、２対の重鎖および軽鎖、またはその抗原結合部分を含む）。
【００６７】
幾つかの実施形態において、本発明は、変異体免疫グロブリンまたはそのＦｃ融合体と、免疫原と、を含むワクチン組成物を提供する。本発明は、ワクチン組成物の特定の配合剤により限定されない。実際に、本発明のワクチン組成物は、融合タンパク質に加えて、１種または複数の異なる薬剤を含み得る。これらの薬剤または補因子としては、アジュバント、界面活性剤、添加剤、緩衝剤、可溶化剤、キレート化剤、油、塩、治療剤、薬物、生物活性剤、抗菌剤、および抗微生物剤（例えば、抗生物質、抗ウイルス薬など）が挙げられるが、これらに限定されない。幾つかの実施形態において、融合タンパク質を含むワクチン組成物は、免疫応答を誘導する免疫原の能力を増強する薬剤および／または補因子（例えば、アジュバント）を含む。幾つかの好ましい実施形態において、１種または複数の補因子または薬剤の存在は、免疫応答（例えば、防御的免疫応答（例えば、防御的免疫化））の誘導に必要とされる免疫原の量を減少させる。幾つかの実施形態において、１種または複数の補因子または薬剤の存在は、免疫応答を細胞性の（例えば、Ｔ細胞を介する）または液性の（例えば、抗体を介する）免疫応答へとスキューイングするのに用いることができる。本発明は、本発明の治療薬中で用いられる補因子または薬剤のタイプにより限定されない。
【００６８】
アジュバントは、Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｄｅｓｉｇｎ−−ｔｈｅ  Ｓｕｂｕｎｉｔ  ａｎｄ  Ａｄｊｕｖａｎｔ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｐｏｗｅｌｌ  ａｎｄ  Ｎｅｗｍａｎによる編集，Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９５に概ね記載されている。本発明は、用いられるアジュバントのタイプ（例えば、組成物（例えば、医薬組成物）中での使用のための）により限定されない。例えば、幾つかの実施形態において、適切なアジュバントとしては、水酸化アルミニウムゲル（ミョウバン）またはリン酸アルミニウムなどのアルミニウム塩が挙げられる。幾つかの実施形態において、アジュバントは、カルシウム、鉄もしくは亜鉛の塩であり得るか、あるいはアシル化チロシン、アシル化糖、カチオンもしくはアニオンで誘導体化された多糖、またはポリホスファゼンの不溶性懸濁液であり得る。
【００６９】
一般に免疫応答は、抗原と免疫系細胞との相互作用を通して抗原に対して生じる。免疫応答は、広範には２つのカテゴリー、つまり液性免疫応答および細胞を介した免疫応答（例えば、従来はそれぞれ、抗体および細胞エフェクターの防御機構により特徴づけられる）に分類され得る。これらの応答カテゴリーは、Ｔｈ１型応答（細胞を介する応答）、およびＴｈ２型免疫応答（液性免疫）と呼ばれてきた。
【００７０】
免疫応答の刺激は、ある介入に対する免疫系の細胞または成分の直接的または間接的な応答（例えば、免疫原への暴露）から生じ得る。免疫応答は、免疫系細胞（例えば、Ｂ細胞、Ｔ細胞、樹状細胞、ＡＰＣ、マクロファージ、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞など）の活性化、増殖または分化；マーカーおよびサイトカインの上方または下方制御された発現；ＩｇＡ、ＩｇＭまたはＩｇＧ力価の刺激；脾腫大（脾臓細胞充実度の増加を含む）；様々な臓器での過形成および細胞浸潤の混合、を含む多くの方法で測定できる。免疫刺激に関して評定され得る免疫系の他の応答、細胞、および成分は、当該技術分野で公知である。
【００７１】
メカニズムの理解は本発明を実践するのに必須ではなく、本発明は任意の特定の作用機序に限定されないが、幾つかの実施形態において、本発明の組成物および方法は、サイトカインの発現および分泌（例えば、マクロファージ、樹状細胞、およびＣＤ４＋Ｔ細胞による）を誘導する。特定のサイトカインの発現の調整は、局所でまたは全身で起こり得る。サイトカインプロファイルが免疫応答におけるＴ細胞調節機能およびエフェクター機能を決定し得ることは、公知である。幾つかの実施形態において、Ｔｈ１型サイトカインが誘導され得、それにより本発明の免疫刺激組成物が、細胞障害性Ｔ細胞を含むＴｈ１型抗原特異性免疫応答を促進し得る（例えば、それにより望まないＴｈ２型免疫応答（例えば、疾患の重症度を高めること（例えば、粘液形成のＩＬ−１３誘導）に関与するＴｈ２型サイトカイン（例えば、ＩＬ−１３）の生成）を回避する）。
【００７２】
サイトカインは、Ｔ細胞応答を指揮することにおいて役割を担う。ヘルパー（ＣＤ４＋）Ｔ細胞は、Ｂおよび他のＴ細胞を含む他の免疫系細胞に作用する可溶性因子の産生を通して哺乳動物の免疫応答を統合する。ほとんどの成熟ＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞は、２つのサイトカインプロファイル：Ｔｈ１またはＴｈ２の一方を発現する。Ｔｈ１型ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＦＮ−γ、ＧＭ−ＣＳＦおよび高レベルのＴＮＦ−αを分泌する。Ｔｈ２細胞は、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＧＭ−ＣＳＦおよび低レベルのＴＮＦ−αを発現する。Ｔｈ１型サイトカインは、細胞を介する免疫、ならびにマウスでのＩｇＧ２ａおよびヒトでのＩｇＧ１への免疫グロブリンのクラススイッチングを特徴とする液性免疫の両方を促進する。Ｔｈ１応答はまた、遅延型過敏症および自己免疫疾患と関連し得る。Ｔｈ２型サイトカインは、主として液性免疫を誘導し、ＩｇＧ１およびＩｇＥへのクラススイッチングを誘導する。Ｔｈ１応答と関連する抗体アイソタイプは一般的に、中和能およびオプソニン化能を有し、Ｔｈ２応答と関連する抗体は、アレルギー性応答とより関連する。
【００７３】
複数の因子が、Ｔｈ１型またはＴｈ２型応答のいずれかへの免疫応答のスキューイングに影響を及ぼすことが示されている。最もよく特徴づけられた調節因子は、サイトカインである。ＩＬ−１２およびＩＦＮ−γは、陽性のＴｈ１調節因子であり陰性のＴｈ２調節因子である。ＩＬ−１２は、ＩＦＮ−γ産生を促進し、ＩＦＮ−γは、ＩＬ−１２に正のフィードバックをもたらす。ＩＬ−４およびＩＬ１０は、Ｔｈ２サイトカインプロファイルの確立、およびＴｈ１サイトカインの産生の下方制御に重要であると考えられる。
【００７４】
したがって、好ましい実施形態において、本発明は、免疫原を含む組成物を対象に投与することを含む、対象におけるＴｈ１型免疫応答を刺激する方法を提供する。しかし他の実施形態において、本発明は、免疫原を含む組成物を対象に投与することを含む、対象におけるＴｈ２型の免疫応答を刺激する方法（例えば、Ｔ細胞を介する応答の均衡が望ましい場合）を提供する。さらに好ましい実施形態において、アジュバントを用いて（例えば本発明の組成物と共投与されて）、Ｔｈ１型またはＴｈ２型免疫応答のいずれかへと免疫応答をスキューイングし得る。例えば、Ｔｈ２応答を誘導する、またはＴｈ１応答を弱めるアジュバントとしては、ミョウバン、サポニン、およびＳＢ−Ａｓ４が挙げられるが、これらに限定されない。Ｔｈ１応答を誘導するアジュバントとしては、ＭＰＬ、ＭＤＰ、ＩＳＣＯＭＳ、ＩＬ−１２、ＩＦＮ−γ、およびＳＢ−ＡＳ２が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７５】
Ｔｈ１型免疫原の複数の他のタイプが、本発明の組成物および方法において使用され得る（例えばアジュバントとして）。これらとしては、以下のものが挙げられるが、これらに限定されない。幾つかの実施形態において、モノホスホリルリピドＡ（例えば、特に３−ｄｅ−Ｏ−アシル化モノホスホリルリピドＡ（３Ｄ−ＭＰＬ））が使用される。３Ｄ−ＭＰＬは、モンタナ州のＲｉｂｉ  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍによって製造される周知のアジュバントである。化学的にはそれは多くの場合、４、５または６位のいずれかのアシル化鎖を有する３−ｄｅ−Ｏ−アシル化モノホスホリルリピドＡの混合物として供給される。幾つかの実施形態において、ジホスホリルリピドＡ、およびその３−Ｏ−脱アシル化変異体が使用される。これらの免疫原のそれぞれは、全体として参照により本明細書に組み入れられるＧＢ２１２２２０４Ｂに記載の方法によって精製および調製され得る。他の精製および合成リポ多糖が、記載されている（例えば、それぞれ全体として参照により本明細書に組み入れられる、米国特許第６，００５，０９９号およびＥＰ０７２９４７３；Ｈｉｌｇｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Iｎｔ．Ａｒｃｈ．Ａｌｌｅｒｇｙ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，７９（４）：３９２−６；Ｈｉｌｇｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６０（１）：１４１−６；ならびにＥＰ０５４９０７４参照）。幾つかの実施形態において、３Ｄ−ＭＰＬは、微粒子配合剤の形態で使用される（例えば、全体として参照により本明細書に組み入れられるＥＰ０６８９４５４に記載される、直径０．２μｍ未満の小さな粒径を有して）。
【００７６】
幾つかの実施形態において、サポニンが、本発明の組成物における免疫原（例えばＴｈ１型アジュバント）として使用される。サポニンは、周知のアジュバントである（例えば、Ｌａｃａｉｌｌｅ−Ｄｕｂｏｉｓ  ａｎｄ  Ｗａｇｎｅｒ（１９９６）Ｐｈｙｔｏｍｅｄｉｃｉｎｅ  ｖｏｌ  ２  ｐｐ３６３−３８６参照）。サポニンの例としては、Ｑｕｉｌ  Ａ（南アメリカの樹木Ｑｕｉｌｌａｊａ  Ｓａｐｏｎａｒｉａ  Ｍｏｌｉｎａの樹皮に由来）、およびこれらの画分が挙げられる（例えば、それぞれ全体として参照により本明細書に組み入れられる、米国特許第５，０５７，５４０号；Ｋｅｎｓｉｌ，Ｃｒｉｔ  Ｒｅｖ  Ｔｈｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔ，１９９６，１２（１−２）：１−５５；およびＥＰ０３６２２７９参照）。また本発明において有用であると企図されるのは、溶血性のサポニンＱＳ７、ＱＳ１７、およびＱＳ２１（Ｑｕｉｌ  ＡのＨＰＬＣ精製画分；例えば、それぞれ全体として参照により本明細書に組み入れられる、Ｋｅｎｓｉｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １４６，４３１−４３７、米国特許第５，０５７，５４０号、ＷＯ９６／３３７３９、ＷＯ９６／１１７１１およびＥＰ０３６２２７９参照）である。また有用であると企図されるのは、ＱＳ２１とポリソルベートまたはシクロデキストリンとの組合せである（例えば、全体として参照により本明細書に組み入れられる国際公開第９９／１０００８号参照）。
【００７７】
幾つかの実施形態において、非メチル化ＣｐＧジヌクレオチド（「ＣｐＧ」）を含む免疫原性オリゴヌクレオチドが、アジュバントとして使用される。ＣｐＧは、ＤＮＡ中に存在するシトシン−グアノシンジヌクレオチドモチーフの略語である。ＣｐＧは、全身および粘膜の両経路によって投与される場合のアジュバントとして当該分野で公知である（例えば、全体として参照により本明細書に組み入れられる、ＷＯ９６／０２５５５、ＥＰ４６８５２０、Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１９９８，１６０（２）：８７０−８７６、ＭｃＣｌｕｓｋｉｅ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｓ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９８，１６１（９）：４４６３−６、および米国特許出願公開第２００５０２３８６６０号参照）。例えば、幾つかの実施形態において、免疫刺激性の配列は、プリン−プリン−Ｃ−Ｇ−ピリミジン−ピリミンジンであり、ここでＣＧモチーフはメチル化されていない。
【００７８】
メカニズムの理解は本発明を実践するのに必須ではなく、本発明は任意の特定の作用機序に限定されないが、幾つかの実施形態において、１つまたは複数のＣｐＧオリゴヌクレオチドの存在は、ナチュラルキラー細胞（ＩＦＮ−γを産生）およびマクロファージを含む様々な免疫サブセットを活性化する。幾つかの実施形態において、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、免疫応答を誘導するために本発明の組成物中に配合される。幾つかの実施形態において、ＣｐＧの遊離溶液が、抗原（例えば、溶液中に存在する（例えば、参照により本明細書に組み入れられるＷＯ９６／０２５５５参照））と共投与される。幾つかの実施形態において、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、抗原に共有結合でコンジュゲートされる（例えば、参照により本明細書に組み入れられるＷＯ９８／１６２４７参照）か、または水酸化アルミニウムなどの担体と共に配合される（例えば、Ｂｒａｚｏｌｏｔ−Ｍｉｌｌａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．ＡｃａｄＳｃｉ．，ＵＳＡ，１９９８，９５（２６），１５５５３−８参照）。
【００７９】
幾つかの実施形態において、フロイント完全アジュバントおよびフロイント不完全アジュバント、サイトカイン（例えば、インターロイキン（例えば、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−４など）、マクロファージコロニー刺激因子、腫瘍壊死因子など）、細菌のＡＤＰ−リボシル化毒素、例えばコレラ毒素（ＣＴ）、百日咳毒素（ＰＴ）、または大腸菌の熱不安定性毒素（ＬＴ）、特にＬＴ−Ｋ６３（６３位にある野生型アミノ酸がリジンに置換されている）、ＬＴ−Ｒ７２（７２位にある野生型アミノ酸がアルギニンに置換されている）、ＣＴ−Ｓ１０９（１０９位にある野生型アミノ酸がセリンに置換されている）、およびＰＴ−Ｋ９／Ｇ１２９（９位にある野生型アミノ酸がリジンに置換され、１２９位にある野生型アミノ酸がグリシンに置換されている）（例えば、それぞれ参照により本明細書に組み入れられるＷＯ９３／１３２０２およびＷＯ９２／１９２６５参照））の無毒化突然変異体、および他の免疫原性物質（例えば、本発明の組成物の有効性を高める）などのアジュバントが、本発明の免疫原を含む組成物と共に使用される。
【００８０】
本発明における用途が見出されるアジュバントのさらなる例としては、ポリ（ジ（カルボキシラトフェノキシ）ホスファゼン（ＰＣＰＰポリマー；Ｖｉｒｕｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、米国所在）；モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ；Ｒｉｂｉ  ＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｉｎｃ．，モンタナ州ハミルトン所在）、ムラミルジペプチド（ＭＤＰ；Ｒｉｂｉ）およびトレオニル−ムラミルジペプチド（ｔ−ＭＤＰ；Ｒｉｂｉ）などのリポ多糖の誘導体；ＯＭ−１７４（リピドＡと関連するグルコサミン二糖；ＯＭ  Ｐｈａｒｍａ  ＳＡ、スイス  メイラン所在）；およびリーシュマニアの伸長因子（精製されたリーシュマニアタンパク質；Ｃｏｒｉｘａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、ワシントン州シアトル所在）が挙げられる。
【００８１】
アジュバントを、免疫原を含む組成物に添加でき、またはアジュバントを、組成物と組み合わせるまたは共投与する前に、担体、例えばリポソーム、または金属塩（例えば、アルミニウム塩（例えば、水酸化アルミニウム））と共に配合できる。
【００８２】
幾つかの実施形態において、免疫原を含む組成物は、単一のアジュバントを含む。他の実施形態において、組成物は、２種以上のアジュバントを含む（例えば、それぞれが全体として参照により本明細書に組み入れられる、ＷＯ９４／００１５３、ＷＯ９５／１７２１０、ＷＯ９６／３３７３９、ＷＯ９８／５６４１４、ＷＯ９９／１２５６５、ＷＯ９９／１１２４１およびＷＯ９４／００１５３参照）。
【００８３】
幾つかの実施形態において、免疫原を含む組成物は、１種または複数の粘膜接着剤を含む（例えば、全体として参照により本明細書に組み入れられる、米国特許出願公開第２００５０２８１８４３号参照）。本発明は、使用される粘膜接着剤のタイプにより限定されない。実際に、非限定的にポリ（アクリル酸）（例えば、Ｃａｒｂｏｐｏｌおよびポリカルボフィル）、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、多糖（例えばアルギナートおよびキトサン）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、レクチン、線毛タンパク質、およびカルボキシメチルセルロース、の架橋誘導体を含む種々の粘膜接着剤が、本発明において有用であると企図される。メカニズムの理解は本発明を実践するのに必須ではなく、本発明は任意の特定の作用機序に限定されないが、幾つかの実施形態において、粘膜接着剤が使用されない場合の免疫原への暴露の期間および／または量に比較して、粘膜接着剤が使用される場合に対象が受ける免疫原への暴露の期間および／または量の増加により、粘膜接着剤の使用（例えば、免疫原を含む組成物中で）は、対象（例えば、本発明の組成物を投与された）における免疫応答の誘導を増強する。
【００８４】
幾つかの実施形態において、免疫グロブリンおよび／またはワクチン組成物は、適当な塩および緩衝剤と一緒に用いられて組成物を対象に送達させる。緩衝剤は、組成物が患者に導入される際にも用いられる。水性組成物は、医薬的に許容し得る担体または水性媒体中に分散された組成物の有効量を含む。そのような組成物は、接種物とも称される。
【００８５】
語句「医薬的または薬理学的に許容し得る」とは、動物またはヒトに投与された場合に有害反応、アレルギー性反応、または他の望まない反応を生じない分子物質および組成物を指す。本明細書で用いられる「医薬的に許容し得る担体」は、あらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを包含する。いずれかの従来の媒体または薬剤が、本発明のベクターまたは細胞と不適合である場合を除き、治療組成物中でのその使用が、企図される。補助的有効成分も、組成物中に組み入れられ得る。
【００８６】
本発明の幾つかの実施形態において、活性組成物は、古典的な医薬調製物を包含する。本発明によるこれらの組成物の投与は、標的組織がその経路を介して利用できる限り、任意の一般的経路を介する。これは経口、鼻孔、口腔、直腸、膣または局所を包含する。あるいは投与は、同所性、皮内、皮下、筋肉内、腹腔内または静脈内注射によるものであり得る。
【００８７】
組成物はまた、非経口または腹腔内投与され得る。遊離塩基または薬理学的に許容し得る塩として活性化合物の溶液が、ヒドロキシプロピルセルロースなどの界面活性剤と適宜混合された水中で調製される。分散液は、グリセロール、液体ポリエチレンングリコールおよびそれらの混合物、ならびに油の中で調製され得る。貯蔵および使用の通常の条件下で、これらの調製物は、微生物の増殖を予防する防腐剤を含有する。
【００８８】
注射可能な使用に適した医薬形態は、滅菌水性溶液または分散液および滅菌注射可能な溶液または分散液の即時調製用の滅菌粉末を含む。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、適切なそれらの混合物、および植物油を含有する溶媒または分散媒であり得る。適当な流動性が、例えば、レシチンなどのコーティングの使用により、分散の場合には必要な粒径の維持により、および界面活性剤の使用により、維持され得る。微生物の作用の予防は、様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどにより行うことができる。多くの場合、等張剤、例えば、糖または塩化ナトリウムを含むことが好ましいであろう。注射可能な組成物の長期吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンの組成物中での使用によって行うことができる。
【００８９】
滅菌注射溶液は、先に列記された様々な他の成分と共に、必要な量で活性化合物を適当な溶媒中に組み入れ、必要に応じて次に濾過滅菌することにより、調製される。一般に分散液は、基本的な分散媒および先に列記されたものからの必要な他の成分を含有する滅菌ビヒクル中に様々な滅菌有効成分を組み入れることにより調製される。滅菌注射可能溶液の調製のための滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、予め滅菌濾過されたその溶液から有効成分＋任意の所望の追加的成分の粉末を生じる、真空乾燥および凍結乾燥技術である。
【００９０】
配合の後、組成物は、投与配合剤と適合可能な手法で、かつ治療的に有効である量で投与される。配合剤は、注射可能な溶液、薬物放出カプセルなどの種々の投与剤形で容易に投与される。水性溶液中での非経口投与の場合、例えば、必要に応じて溶液を適宜緩衝し、液体希釈剤をまず十分な生理食塩水またはグルコースで等張にする。これらの特定の水性溶液は、静脈内、筋肉内、皮下および腹腔内投与に特に適する。例えば、１つの投与量を、１ｍｌの等張ＮａＣｌ溶液中に溶解し、１０００ｍｌの皮下注入流体に添加するか、または提案された輸液部位に注射し得る（例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」１５ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ、ｐ１０３５−１０３８および１５７０−１５８０参照）。本発明の幾つかの実施形態において、活性粒子または活性剤は、用量あたり約０．０００１〜１．０ミリグラム、または約０．００１〜０．１ミリグラム、または約０．１〜１．０またはさらに約１０ミリグラムを含むように治療混合物中に配合される。複数の用量が、投与され得る。
【００９１】
他の投与様式に適したさらなる配合剤としては、膣坐薬およびペッサリーが挙げられる。直腸ペッサリーまたは坐薬を用いることもできる。坐薬は、様々な重量および形状の固体投与剤形であり、通常は直腸、膣または尿道への挿入用に製剤化される。挿入後、坐薬は、体腔液で軟化、融解または溶解する。一般に、坐薬の場合、伝統的な結合剤および担体は、例えばポリアルキレングリコールまたはトリグリセリドを含んでよく；そのような坐薬は、０．５％〜１０％の、好ましくは１％〜２％の範囲で有効成分を含有する混合物から形成され得る。膣坐薬またはペッサリーは通常、球形または卵形であり、それぞれ約５ｇの重量である。膣用薬剤は、坐薬の古典的概念から離れて、種々の物理的形態で、例えばクリーム、ゲルまたは液体で利用可能である。
【００９２】
本発明の状況における「処置すること」は、障害もしくは疾患に関連する症状の全てもしくは一部の軽減、またはそれらの症状のさらなる進行もしくは増悪の緩徐化、阻害もしくは停止、または疾患もしくは障害を発症するリスクのある対象における疾患もしくは障害の予防もしくは防止を意味する。したがって、例えば、ウイルス感染を処置することは、対象におけるウイルスの複製を阻害もしくは予防すること、または対象におけるウイルス感染の症状を低減することを包含し得る。本明細書で用いられる、本発明の化合物の「治療有効量」は、障害もしくは疾患に関連する症状の全てもしくは一部を軽減する、またはそれらの症状のさらなる進行もしくは増悪を緩徐化、阻害もしくは停止する、または疾患もしくは障害を発症するリスクのある対象における疾患もしくは障害を予防するあるいはそれらの防止を提供する、化合物の量を指す。
【００９３】
対象は、本明細書に記載される化合物の投与により利益を享受する任意の動物である。幾つかの実施形態において、対象は、例えばヒト、霊長類、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、げっ歯類、例えばラットまたはマウスである。典型的には対象は、ヒトである。
【００９４】
本発明で用いられる本明細書に記載される化合物の治療有効量は、投与経路および投与剤形に応じて変動し得る。本発明の化合物の有効量は典型的には、約０．００１〜１００ｍｇ／ｋｇ／日、より典型的には約０．０５〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲に含まれる。典型的には、本発明で用いられる化合物または複数の化合物は、高い治療指数を示す配合剤を提供するように選択される。治療指数は、ＬＤ５０とＥＤ５０の間の比率として表され得る毒性作用と治療効果の間の比率である。ＬＤ５０は、集団の５０％に致死的な用量であり、ＥＤ５０は、集団の５０％において治療的に有効な用量である。ＬＤ５０およびＥＤ５０は、動物細胞培養または実験動物での標準的な医薬手順により決定される。本発明は、本明細書に記載された１種または複数の化合物、その医薬的に許容し得る塩、その立体異性体、その互変異性体、またはその溶媒和物を、医薬的に許容し得る担体、賦形剤、結合剤などと混和することにより調製されて、原発性および／または転移性前立腺癌を阻害または処置し得る医薬的組成物および薬剤も提供する。そのような組成物は、例えば顆粒、粉末、錠剤、カプセル、シロップ、坐薬、注射、エマルジョン、エリキシル、懸濁液または溶液の形態であり得る。本発明の組成物は、例えば、経口、非経口、局所、直腸、鼻腔による、または移植されたリザーバーを介する、様々な投与の経路のために配合され得る。非経口または全身投与としては、皮下、静脈内、腹腔内、および筋肉内注射が挙げられるが、これらに限定されない。以下の投与剤形は、例として示されており、本発明を限定するものと解釈されてはならない。
【００９５】
経口、口腔および舌下投与の場合、粉末、懸濁液、顆粒、錠剤、丸薬、カプセル、ゲルカップ、およびカプレットが固体投与剤形として許容できる。これらは、例えば、本発明の１種もしくは複数の化合物またはその医薬的に許容し得る塩もしくは互変異性体を、デンプンまたは他の添加剤などの少なくとも１種の添加剤と混合することにより、調製され得る。適切な添加剤は、スクロース、ラクトース、セルロース糖（ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ  ｓｕｇａｒ）、マンニトール、マルチトール、デキストラン、デンプン、寒天、アルギナート、キチン、キトサン、ペクチン、トラガカントガム、アラビアガム、ゼラチン、コラーゲン、カゼイン、アルブミン、合成もしくは半合成ポリマーまたはグリセリドである。場合により経口投与剤形は、不活性希釈剤などの投与を補助する他の成分、またはステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤、またはパラベンもしくはソルビン酸などの防腐剤、またはアスコルビン酸、トコフェロールもしくはシステインなどの抗酸化剤、崩壊剤、結合剤、増粘剤、緩衝剤、甘味剤、香味剤または芳香剤を含有し得る。錠剤および丸薬は、当該技術分野で公知の適切なコーティング材料でさらに処置され得る。
【００９６】
経口投与用の液体投与剤形は、医薬的に許容し得るエマルジョン、シロップ、エリキシル、懸濁液、および溶液の形態であってよく、それは水などの不活性希釈剤を含有し得る。医薬配合剤および薬剤は、非限定的に油、水、アルコール、およびこれらの組み合わせなどの滅菌液を用いて、液体懸濁物または溶液として調製され得る。医薬的に適した界面活性剤、懸濁剤、乳化剤が、経口または非経口投与のために添加され得る。上記の通り、懸濁液は、油を含み得る。そのような油としては、ピーナッツ油、ゴマ油、綿実油、コムオイル（ｃｏｍ  ｏｉｌ）およびオリーブ油が挙げられるが、これらに限定されない。懸濁調製物は、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、脂肪酸グリセリドおよびアセチル化脂肪酸グリセリドなどの脂肪酸のエステルも含有し得る。懸濁配合剤は、非限定的にエタノール、イソプロピルアルコール、ヘキサデシルアルコール、グリセロールおよびプロピレングリコールなどのアルコールを含み得る。非限定的にポリ（エチレングリコール）、鉱物油およびワセリンなどの石油系炭化水素などのエーテル；ならびに水が、懸濁配合剤中で用いられ得る。注射可能な投与剤形は一般に、適切な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を用いて調製され得る水性懸濁液または油性懸濁液を含む。注射可能な形態は、溶液相または、溶媒あるいは希釈剤を用いて調製される懸濁液の形態であり得る。許容し得る溶媒またはビヒクルとしては、滅菌水、リンゲル液、または等張水性生理食塩液が挙げられる。あるいは滅菌オイルが、溶媒または懸濁剤として用いられ得る。典型的には、油または脂肪酸は、非揮発性であり、天然または合成の油、脂肪酸、モノ−、ジ−もしくはトリ−グリセリドを含む。
【００９７】
注射の場合、医薬配合剤および／または薬剤は、先に記載された適当な溶液での再構成に適した粉末であり得る。これらの例としては、凍結乾燥、回転式乾燥、または噴霧乾燥された粉末、非晶質粉末、顆粒、沈殿、または微粒子が挙げられるが、これらに限定されない。注射の場合、配合剤は、安定化剤、ｐＨ調整剤、界面活性剤、生物学的利用度調整剤（ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ  ｍｏｄｉｆｉｅｒｓ）およびこれらの組み合わせを含有し得る。
【００９８】
直腸投与の場合、医薬配合剤および薬剤は、腸、Ｓ字結腸曲、および／または直腸中での化合物の放出のための坐薬、軟膏、浣腸、錠剤またはクリームの形態であり得る。直腸坐薬は、本発明の１種もしくは複数の化合物または化合物の医薬的に許容し得る塩もしくは互変異性体を、許容し得るビヒクル、例えば、通常の貯蔵温度では固相で存在し、直腸などの体内で薬物を放出するのに適したそれらの温度では液相で存在する、カカオバターまたはポリエチレングリコールと、混合することにより調製される。油もまた、軟ゼラチン型および坐薬の配合剤の調製に用いられ得る。水、生理食塩水、水性デキストロースおよび関連の糖溶液、ならびにグリセロールが、ペクチン、カルボマー、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースまたはカルボキシメチルセルロースなどの懸濁剤、ならびに緩衝液および防腐剤を含有し得る懸濁配合剤の調製に用いられ得る。本発明の化合物は、鼻または口を介する吸入により肺に投与され得る。吸入に適した医薬配合剤としては、任意の適当な溶媒および場合により他の化合物、例えば非限定的に、安定化剤、抗菌剤、抗酸化剤、ｐＨ調整剤、界面活性剤、生物学的利用度調整剤およびこれらの組み合わせを含有する溶液、スプレー、乾燥粉末、またはエアロゾルが挙げられる。吸入投与用の配合剤は、賦形剤として、例えば、ラクトース、ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル、グリココーラートおよびデオキシコーラートを含有する。水性および非水性エアロゾルが典型的に、吸入による本発明の化合物の送達に用いられる。
【００９９】
通常、水性エアロゾルは、化合物の水性溶液または懸濁液を従来の医薬的に許容し得る担体および安定化剤と共に配合することにより作製される。担体および安定化剤は、特定の化合物の要件に応じて異なるが、典型的には非イオン性界面活性剤（ＴＷＥＥＮ、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ類、またはポリエチレングリコール）、血清アルブミンのような接種タンパク質、ソルビタンエステル、オレイン酸、レシチン、グリシンなどのアミノ酸、緩衝剤、塩、糖または糖アルコールが挙げられる。エアロゾルは一般に、等張性溶液から調製される。非水性懸濁液（例えば、フルオロカーボン噴射剤で）を用いて、本発明の化合物を送達することもできる。
【０１００】
本発明による使用のための化合物を含有するエアロゾルは、吸入器、噴霧器、加圧パックまたはネブライザーおよび適切な噴射剤、例えば非限定的に、加圧されたジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、窒素、空気、または二酸化炭素を用いて従来通り送達される。加圧エアロゾルの場合、投与単位は、計量された量を送達する弁を提供することにより制御され得る。吸入器または注入器中での使用のための例えばゼラチンの、カプセルおよびカートリッジが、化合物とラクトースまたはデンプンなどの適切な粉末基剤とのパウダーミックスを含有して配合され得る。
【０１０１】
ネブライザーは、化合物の分解をもたらし得るせん断（ｓｈｅａｒ）への薬剤の暴露を最小限にするため、音波ネブライザーを用いる本発明のエアロゾルの送達は有利である。
【０１０２】
鼻腔投与の場合、医薬配合剤および薬剤は、適当な溶媒（複数可）および場合により他の化合物、例えば非限定的に、安定化剤、抗微生物剤、抗酸化剤、ｐＨ調整剤、界面活性剤、生物学的利用度調整剤およびこれらの組み合わせを含有するスプレー、点鼻薬、またはエアロゾルであり得る。点鼻薬の形態での投与の場合、化合物は、油性溶液中で、またはゲルとして配合され得る。鼻腔エアロゾルの投与の場合、圧縮空気、窒素、二酸化炭素、または炭化水素系低沸点溶媒を含む任意の適切な噴射剤が、用いられ得る。本発明の化合物の局所（口腔および舌下）または経皮投与のための投与剤形としては、粉末、スプレー、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、溶液、およびパッチが挙げられる。活性成分は、医薬的に許容し得る担体または賦形剤と、および必要とされ得る、任意の防腐剤または緩衝剤と、滅菌条件下で混合され得る。粉末およびスプレーは、例えば、ラクトース、タルク、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウムおよびポリアミド粉末、またはこれらの物質の混合物などの賦形剤と共に調製され得る。軟膏、ペースト、クリームおよびゲルはまた、動物および植物性脂肪、油、ワックス、パラフィン、デンプン、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸、タルクおよび酸化亜鉛、またはそれらの混合物などの賦形剤を含有し得る。
【０１０３】
経皮パッチは、身体への本発明の化合物の制御送達を提供する付加的利点を有する。そのような投与剤形は、薬剤を適当な培地中に溶解するまたは分散することにより作製され得る。吸収増強剤を用いて、皮膚を介する本発明の化合物の流動を増加させることもできる。そのような流動の速度は、速度制御膜を提供すること、または化合物をポリマーマトリックスもしくはゲル中に分散すること、のいずれかにより制御され得る。
【０１０４】
先に記載されたそれらの代表的投与剤形の他に、医薬的に許容し得る賦形剤および担体が、当業者に概ね公知であり、したがって本発明に含まれる。そのような賦形剤および担体は、例えば、参照により本明細書に組み入れられる”Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ”  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂ．Ｃｏ．，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ（１９９１）に記載される。
【０１０５】
本発明の配合剤は、以下に記載される通り短期作用性、急速放出性、長期作用性、および持続放出性であるように設計され得る。したがって、医薬配合剤はまた、制御放出用にまたは緩徐な放出用に配合され得る。本発明はまた、例えば、ミセルもしくはリポソーム、または幾つかの他の封入形態も含み得、あるいは長期貯蔵および／または送達効果を提供するように長期放出形態で投与され得る。それゆえ、医薬配合剤および薬剤は、ペレットまたは円筒形へと圧縮され得、およびデポ注射またはステントなどのインプラントとして筋肉内または皮下に埋入され得る。そのようなインプラントは、シリコーンおよび生分解性ポリマーなどの公知の不活性材料を用い得る。
【０１０６】
特定の投与量が、疾患の状態、対象の年齢、体重、一般的健康状態、性別、および食事、投与間隔、投与経路、排出率、ならびに薬物の併用に応じて調整され得る。有効量を含有する上記投与剤形のいずれも、日常的実験の限度内に十分含まれ、それゆえ本発明の範囲内に十分含まれる。
【０１０７】
本発明の幾つかの実施形態において、任意の数の障害の処置および予防のための方法および組成物が、提供される。治療抗体は、例えば、癌、自己免疫疾患、感染（例えば、ウイルス感染）などの処置に用途を見出す。
【０１０８】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載される免疫グロブリンは、別の治療剤（例えば、抗癌剤、免疫抑制剤、または抗ウイルス薬）との組み合わせで投与される。幾つかの実施形態において、本明細書に記載される免疫グロブリンでの処置は、数分〜数週間の範囲の間隔で他の薬剤に先立つ、または他の薬剤に続く。他の薬剤および免疫グロブリンが細胞に別々に適用される実施形態において、各送達時間の間で大幅に長い期間が過ぎないことを一般に確実にして、複数の治療薬が細胞に対し有利に組み合わされた効果を発揮できるようにする。そのような例では、細胞が互いの１２〜２４時間以内に、より好ましくは互いの約６〜１２時間以内に両方の様式と接触されることが企図され、約１２時間のみの遅延時間が最も好ましい。しかし幾つかの状況において、各投与の間に数日（２〜７）〜数週間（１〜８）が経過するように、処置期間を顕著に延長することが望ましい場合がある。
【０１０９】
幾つかの実施形態において、本発明の免疫療法組成物または他の薬剤の１回を超える投与が、利用される。以下に例示される通り、免疫グロブリンが「Ａ」であり他の薬剤が「Ｂ」であるる、様々な組み合わせが用いられ得る：Ａ／Ｂ／Ａ、Ｂ／Ａ／Ｂ、Ｂ／Ｂ／Ａ、Ａ／Ａ／Ｂ、Ｂ／Ａ／Ａ、Ａ／Ｂ／Ｂ、Ｂ／Ｂ／Ｂ／Ａ、Ｂ／Ｂ／Ａ／Ｂ、Ａ／Ａ／Ｂ／Ｂ、Ａ／Ｂ／Ａ／Ｂ、Ａ／Ｂ／Ｂ／Ａ、Ｂ／Ｂ／Ａ／Ａ、Ｂ／Ａ／Ｂ／Ａ、Ｂ／Ａ／Ａ／Ｂ、Ｂ／Ｂ／Ｂ／Ａ、Ａ／Ａ／Ａ／Ｂ、Ｂ／Ａ／Ａ／Ａ、Ａ／Ｂ／Ａ／Ａ、Ａ／Ａ／Ｂ／Ａ、Ａ／Ｂ／Ｂ／Ｂ、Ｂ／Ａ／Ｂ／Ｂ、Ｂ／Ｂ／Ａ／Ｂ。他の組み合わせが、企図される。
【０１１０】
本発明の幾つかの実施形態において、本発明の１種または複数の化合物および追加の活性剤が、対象に、より典型的にはヒトに、連続で一定間隔内に投与され、化合物は他の薬剤と一緒に作用して、他の方法で投与された場合に得られる利益よりも高い利益を提供できる。例えば、追加の薬剤は共配合剤（ｃｏ−ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）により共投与され得るか、同時に投与され得るか、または異なる時点で任意の順序で連続して投与され得るが、同時に投与されない場合、それらは所望の治療または防止効果を提供するように十分に近い時間に投与されなければならない。幾つかの実施形態において、化合物および追加の活性剤は、重複する時間において効果を発揮する。各追加の活性剤は、別個に、任意の適当な形態でかつ任意の適切な経路で投与され得る。他の実施形態において、化合物は追加の活性剤の投与の前、その投与と同時にまたはその投与の後に投与される。様々な例において、化合物および追加の活性剤は、約１時間未満離して、約１時間離して、約１時間〜約２時間離して、約２時間〜約３時間離して、約３時間〜約４時間離して、約４時間〜約５時間離して、約５時間〜約６時間離して、約６時間〜約７時間離して、約７時間〜約８時間離して、約８時間〜約９時間離して、約９時間〜約１０時間離して、約１０時間〜約１１時間離して、約１１時間〜約１２時間離して、２４時間以下または４８時間以下離して、投与される。他の例において、化合物および追加の活性剤は、同時に投与される。さらに別の例において、化合物および追加の活性剤は、共配合剤により同時に投与される。
【０１１１】
他の例において、化合物および追加の活性剤は、約２〜４日離して、約４〜６日離して、約１週間離して、約１〜２週間離して、または２週間より長く離して、投与される。
【０１１２】
特定の例において、本発明の化合物および場合により追加の活性剤は、周期的に対象に投与される。周期的治療は、一定期間の第一の薬剤の投与、それに続く一定期間の第二の薬剤および／または第３の薬剤の投与およびこの連続投与の繰り返しを含む。周期的治療は、種々の利益を提供でき、例えば、治療の１つもしくは複数への耐性の発生を低減し、治療の１つもしくは複数の副作用を回避もしくは低減し、および／または処置の有効性を改善できる。
【０１１３】
他の例において、本発明の幾つかの実施形態の１種または複数の化合物、ならびに場合により追加の活性剤は、約３週間未満の、約２週間ごとに１回の、約１０日ごとに１回のまたは約１週間ごとに１回の周期で投与される。１つの周期は、１周期ごとに約９０分にわたる、１周期ごとに約１時間にわたる、１周期ごとに約４５分にわたる、１周期ごとに約３０分にわたるまたは１周期ごとに約１５分にわたる、輸液による本発明の化合物および場合により第二の活性剤の投与を含み得る。各サイクルは、少なくとも１週間の休薬、少なくとも２週間の休薬、少なくとも３週間の休薬を含み得る。投与される周期の数は、約１〜約１２周期、より典型的には約２〜約１０周期、より典型的には約２〜約８周期である。数クールの処置薬が対象に同時に投与されてよく、即ち追加の活性剤の個々の用量が別個にしかし一定間隔のうちに投与され、本発明の化合物が追加の活性剤と一緒に作用し得る。例えば、ある成分は、２週間ごとに１回または３週間ごとに１回投与され得る他の成分と併せて１週間に１回投与され得る。換言すると、治療薬が同時にまたは同日に投与されなくとも、投与レジメンは同時に実施される。
【０１１４】
追加の活性剤が、本発明の化合物（複数可）と相加的に、またはより典型的には相乗的に作用し得る。一例において、１種または複数の本発明の化合物は、同じ医薬組成物中で１種または複数の活性剤と同時に投与される。別の例において、１種または複数の本発明の化合物は、別の医薬組成物中で１種または複数の第二の活性剤と同時に投与される。さらに別の実施形態において、１種または複数の本発明の化合物は、第二の活性剤の投与の前にまたは後に投与される。本発明は、同一または異なる投与経路、例えば経口および非経口による、本発明の化合物および第二の活性剤の投与を企図する。特定の実施形態において、本発明の化合物が、非限定的に毒性を含む有害な副作用を潜在的に生じる第二の活性剤と同時に投与される場合、第二の活性剤は、有害副作用が誘発される閾値未満に収まる用量で有利に投与され得る。
【０１１５】
サイトカインなどの可溶性因子および膜貫通受容体を含む膜結合因子の両方を含む、標的抗原の以下の列挙に属するタンパク質、サブユニット、ドメイン、モチーフ、および／またはエピトープを含むが限定されない事実上任意の抗原が、ＩｇＧ変異体により標的にされ得る：１７−ＩＡ、４−１ＢＢ、４Ｄｃ、６−ケト−ＰＧＦ１ａ、８−イソ−ＰＧＦ２ａ、８−オキソ−ｄＧ、Ａ１アデノシン受容体、Ａ３３、ＡＣＥ、ＡＣＥ−２、アクチビン、アクチビンＡ、アクチビンＡＢ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＲＩＡ、アクチビンＲＩＡ  ＡＬＫ−２、アクチビンＲＩＢ  ＡＬＫ−４、アクチビンＲＩＩＡ、アクチビンＲＩＩＢ、ＡＤＡＭ、ＡＤＡＭ１０、ＡＤＡＭ１２、ＡＤＡＭ１５、ＡＤＡＭ１７／ＴＡＣＥ、ＡＤＡＭ８、ＡＤＡＭ９、ＡＤＡＭＴＳ、ＡＤＡＭＴＳ４、ＡＤＡＭＴＳ５、アドレッシン、ａＦＧＦ、ＡＬＣＡＭ、ＡＬＫ、ＡＬＫ−１、ＡＬＫ−７、アルファ−１−アンチトリプシン、アルファ−Ｖ／ベータ−１アンタゴニスト、ＡＮＧ、Ａｎｇ、ＡＰＡＦ−１、ＡＰＥ、ＡＰＪ、ＡＰＰ、ＡＰＲＩＬ、ＡＲ、ＡＲＣ、ＡＲＴ、アルテミン、抗Ｉｄ、ＡＳＰＡＲＴＩＣ、心房性ナトリウム利用因子、ａｖ／ｂ３インテグリン、Ａｘｌ、ｂ２Ｍ、Ｂ７−１、Ｂ７−２、Ｂ７−Ｈ、Ｂ−リンパ球刺激因子（ＢｌｙＳ）、ＢＡＣＥ、ＢＡＣＥ−１、Ｂａｄ、ＢＡＦＦ、ＢＡＦＦ−Ｒ、Ｂａｇ−１、ＢＡＫ、Ｂａｘ、ＢＣＡ−１、ＢＣＡＭ、Ｂｃｌ、ＢＣＭＡ、ＢＤＮＦ、ｂ−ＥＣＧＦ、ｂＦＧＦ、ＢＩＤ、Ｂｉｋ、ＢＩＭ、ＢＬＣ、ＢＬ−ＣＡＭ、ＢＬＫ、ＢＭＰ、ＢＭＰ−２  ＢＭＰ−２ａ、ＢＭＰ−３オステオゲニン、ＢＭＰ−４、ＢＭＰ−２ｂ、ＢＭＰ−５、ＢＭＰ−６  Ｖｇｒ−１、ＢＭＰ−７（ＯＰ−１）、ＢＭＰ−８（ＢＭＰ−８ａ、ＯＰ−２）、ＢＭＰＲ、ＢＭＰＲ−ＩＡ（ＡＬＫ−３）、ＢＭＰＲ−ＩＢ（ＡＬＫ−６）、ＢＲＫ−２、ＲＰＫ−１、ＢＭＰＲ−ＩＩ（ＢＲＫ−３）、ＢＭＰ、ｂ−ＮＧＦ、ＢＯＫ、ボンベシン、骨由来神経栄養因子、ＢＰＤＥ、ＢＰＤＥ−ＤＮＡ、ＢＴＣ、補体因子３（Ｃ３）、Ｃ３ａ、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ５ａ、Ｃ１０、ＣＡ１２５、ＣＡＤ−８、カルシトニン、ｃＡＭＰ、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、癌関連抗原、カテプシンＡ、カテプシンＢ、カテプシンＣ／ＤＰＰＩ、カテプシンＤ、カテプシンＥ、カテプシンＨ、カテプシンＬ、カテプシンＯ、カテプシンＳ、カテプシンＶ、カテプシンＸ／Ｚ／Ｐ、ＣＢＬ、ＣＣＩ、ＣＣＫ２、ＣＣＬ、ＣＣＬ１、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１２、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ６、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ９／１０、ＣＣＲ、ＣＣＲ１、ＣＣＲ１０、ＣＣＲ１０、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＤ１、ＣＤ２、ＣＤ３、Ｃｄ３Ｅ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ１０、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１３、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ���３、ＣＤ２５、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ３２、ＣＤ３３（ｐ６７タンパク質）、ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ４６、ＣＤ４９ａ、ＣＤ５２、ＣＤ５４、Ｃｄ５５、ＣＤ５６、ＣＤ６１、ＣＤ６４、ＣＤ６６ｅ、ＣＤ７４、ＣＤ８０（Ｂ７−１）、ＣＤ８９、ＣＤ９５、ＣＤ１２３、ＣＤ１３７、ＣＤ１３８、ＣＤ１４０ａ、ＣＤ１４６、ＣＤ１４７、ＣＤ１４８、ＣＤ１５２、ＣＤ１６４、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＦＴＲ、ｃＧＭＰ、ＣＩＮＣ、ボツリヌス菌毒素、ウェルシュ菌毒素、ＣＫｂ８−１、ＣＬＣ、ＣＭＶ、ＣＭＶ  ＵＬ、ＣＮＴＦ、ＣＮＴＮ−１、ＣＯＸ、Ｃ−Ｒｅｔ、ＣＲＧ−２、ＣＴ−１、ＣＴＡＣＫ、ＣＴＧＦ、ＣＴＬＡ−４、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸＣＬ、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＲ、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、サイトケラチン腫瘍関連抗原、ＤＡＮ、ＤＣＣ、ＤｃＲ３、ＤＣ−ＳＩＧＮ、崩壊促進因子、ｄｅｓ（１−３）−ＩＧＦ−Ｉ（脳ＩＧＦ−１）、Ｄｈｈ、ジゴキシン、ＤＮＡＭ−１、Ｄａｓｅ、Ｄｐｐ、ＤＰＰＩＶ／ＣＤ２６、Ｄｔｋ、ＥＣＡＤ、ＥＤＡ、ＥＤＡ−Ａ１、ＥＤＡ−Ａ２、ＥＤＡＲ、ＥＧＦ、ＥＧＦＲ（ＥｒｂＢ−１）、ＥＭＡ、ＥＭＭＰＲＩＮ、ＥＮＡ、エンドセリン受容体、エンケファリナーゼ、ｅＮＯＳ、Ｅｏｔ、エオタキシン１、ＥｐＣＡＭ、エフリンＢ２／ＥｐｈＢ４、ＥＰＯ、ＥＲＣＣ、Ｅ−セレクチン、ＥＴ−１、第ＩＩａ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩｃ因子、第ＩＸ因子、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、Ｆａｓ、ＦｃＲ１、ＦＥＮ−１、フェリチン、ＦＧＦ、ＦＧＦ−１９、ＦＧＦ−２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ−８、ＦＧＦＲ、ＦＧＦＲ−３、フィブリン、ＦＬ、ＦＬＩＰ、Ｆｌｔ−３、Ｆｌｔ−４、卵胞刺激ホルモン、フラクタルカイン、ＦＺＤ１、ＦＺＤ２、ＦＺＤ３、ＦＺＤ４、ＦＺＤ５、ＦＺＤ６、ＦＺＤ７、ＦＺＤ８、ＦＺＤ９、ＦＺＤ１０、Ｇ２５０、Ｇａｓ６、ＧＣＰ−２、ＧＣＳＦ、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧＤＦ、ＧＤＦ−１、ＧＤＦ−３（Ｖｇｒ−２）、ＧＤＦ−５（ＢＭＰ−１４、ＣＤＭＰ−１）、ＧＤＦ−６（ＢＭＰ−１３、ＣＤＭＰ−２）、ＧＤＦ−７（ＢＭＰ−１２、ＣＤＭＰ−３）、ＧＤＦ−８（ミオスタチン）、ＧＤＦ−９、ＧＤＦ−１５（ＭＩＣ−１）、ＧＤＮＦ、ＧＤＮＦ、ＧＦＡＰ、ＧＦＲａ−１、ＧＦＲ−アルファ１、ＧＦＲ−アルファ２、ＧＦＲ−アルファ３、ＧＩＴＲ、グルカゴン、Ｇｌｕｔ４、糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ（ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ）、ＧＭ−ＣＳＦ、ｇｐ１３０、ｇｐ７２、ＧＲＯ、成長ホルモン放出因子、ハプテン（ＮＰ−ｃａｐまたはＮＩＰ−ｃａｐ）、ＨＢ−ＥＧＦ、ＨＣＣ、ＨＣＭＶ  ｇＢエンベロープ糖タンパク質、ＨＣＭＶ）  ｇＨエンベロープ糖タンパク質、ＨＣＭＶ  ＵＬ、造血成長因子（ＨＧＦ）、Ｈｅｐ  Ｂ  ｇｐ１２０、ヘパラナーゼ、Ｈｅｒ２、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ−２）、Ｈｅｒ３（ＥｒｂＢ−３）、���ｅｒ４（ＥｒｂＢ−４）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）  ｇＢ糖タンパク質、ＨＳＶ  ｇＤ糖タンパク質、ＨＧＦＡ、高分子量メラノーマ関連抗原（ＨＭＷ−ＭＡＡ）、ＨＩＶ  ｇｐ１２０、ＨＩＶ  ＩＩＩＢ  ｇｐ１２０  Ｖ３ループ、ＨＬＡ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＭ１．２４、ＨＭＦＧ  ＰＥＭ、ＨＲＧ、Ｈｒｋ、ヒト心臓ミオシン、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）、ヒト成長ホルモン（ＨＧＨ）、ＨＶＥＭ、Ｉ−３０９、ＩＡＰ、ＩＣＡＭ、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−３、ＩＣＥ、ＩＣＯＳ、ＩＦＮｇ、Ｉｇ、ＩｇＡ受容体、ＩｇＥ、ＩＧＦ、ＩＧＦ結合タンパク質、ＩＧＦ−１Ｒ、ＩＧＦＢＰ、ＩＧＦ−Ｉ、ＩＧＦ−ＩＩ、ＩＬ、ＩＬ−１、ＩＬ−１Ｒ、ＩＬ−２、ＩＬ−２Ｒ、ＩＬ−４、ＩＬ−４Ｒ、ＩＬ−５、ＩＬ−５Ｒ、ＩＬ−６、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−２３、インターフェロン （ＩＮＦ）−アルファ、ＩＮＦ−ベータ、ＩＮＦ−ガンマ、インヒビン、ｉＮＯＳ、インスリンＡ鎖、インスリンＢ鎖、インスリン様成長因子１、インテグリンアルファ２、インテグリンアルファ３、インテグリンアルファ４、インテグリンアルファ４／ベータ７、インテグリンアルファ４／ベータ７、インテグリンアルファ５（アルファＶ）、インテグリンアルファ５／ベータ１、インテグリンアルファ５／ベータ３、インテグリンアルファ６、インテグリンベータ１、インテグリンベータ２、インターフェロンガンマ、ＩＰ−１０、Ｉ−ＴＡＣ、ＪＥ、カリクレイン２、カリクレイン５、カリクレイン６、カリクレイン１１、カリクレイン１２、カリクレイン１４、カリクレイン１５、カリクレインＬ１、カリクレインＬ２、カリクレインＬ３、カリクレインＬ４、ＫＣ、ＫＤＲ、ケラチノサイト成長因子（ＫＧＦ）、ラミニン５、ＬＡＭＰ、ＬＡＰ、ＬＡＰ（ＴＧＦ−１）、潜在型ＴＧＦ−１、潜在型ＴＧＦ−１  ｂｐ１、ＬＢＰ、ＬＤＧＦ、ＬＥＣＴ２、レェフティー、ルイスＹ抗原、ルイスＹ関連抗原、ＬＦＡ−１、ＬＦＡ−３、Ｌｆo、ＬＩＦ、ＬＩＧＨＴ、リポタンパク質、ＬＩＸ、ＬＫＮ、Ｌｐｔｎ、Ｌ−セレクチン、ＬＴ−ａ、ＬＴ−ｂ、ＬＴＢ４、ＬＴＢＰ−１、肺表面活性物質、黄体形成ホルモン、リンフォトキシンベータ受容体、Ｍａｃ−１、ＭＡｄＣＡＭ、ＭＡＧ、ＭＡＰ２、ＭＡＲＣ、ＭＣＡＭ、ＭＣＡＭ、ＭＣＫ−２、ＭＣＰ、Ｍ−ＣＳＦ、ＭＤＣ、Ｍｅｒ、メタロプロテアーゼ、ＭＧＤＦ受容体、ＭＧＭＴ、ＭＨＣ（ＨＬＡ−ＤＲ）、ＭＩＦ、ＭＩＧ、ＭＩＰ、ＭＩＰ−１−アルファ、ＭＫ、ＭＭＡＣ１、ＭＭＰ、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＰＩＦ、Ｍｐｏ、ＭＳＫ、ＭＳＰ、ムチン（Ｍｕｃ１）、ＭＵＣ１８、ミュラー管阻害物質、Ｍｕｇ、ＭｕＳＫ、ＮＡＩＰ、ＮＡＰ、ＮＣＡＤ、Ｎ−カドヘリン、
ＮＣＡ９０、ＮＣＡＭ、ＮＣＡＭ、ネプリリシン、ニューロトロフィン−３、−４、または−６、ニュールツリン、神経成長因子（ＮＧＦ）、ＮＧＦＲ、ＮＧＦ−ベータ、ｎＮＯＳ、ＮＯ、ＮＯＳ、Ｎｐｎ、ＮＲＧ−３、ＮＴ、ＮＴＮ、ＯＢ、ＯＧＧ１、ＯＰＧ、ＯＰＮ、ＯＳＭ、ＯＸ４０Ｌ、ＯＸ４０Ｒ、ｐ１５０、ｐ９５、ＰＡＤＰｒ、副甲状腺ホルモン、ＰＡＲＣ、ＰＡＲＰ、ＰＢＲ、ＰＢＳＦ、ＰＣＡＤ、Ｐ−カドヘリン、ＰＣＮＡ、ＰＤＧＦ、ＰＤＧＦ、ＰＤＫ−１、ＰＥＣＡＭ、ＰＥＭ、ＰＦ４、ＰＧＥ、ＰＧＦ、ＰＧＩ２、ＰＧＪ２、ＰＩＮ、ＰＬＡ２、胎盤性アルカリホスファターゼ（ＰＬＡＰ）、ＰＩＧＦ、ＰＬＰ、ＰＰ１４、プロインスリン、プロレラキシン、プロテインＣ、ＰＳ、ＰＳＡ、ＰＳＣＡ、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＰＴＥＮ、ＰＴＨｒｐ、Ｐｔｋ、ＰＴＮ、Ｒ５１、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬ、ＲＡＮＴＥＳ、ＲＡＮＴＥＳ、レラキシンＡ鎖、レラキシンＢ鎖、レニン、呼吸器多核体ウイルス（ＲＳＶ）Ｆ、ＲＳＶ  Ｆｇｐ、Ｒｅｔ、リウマトイド因子、ＲＬＩＰ７６、ＲＰＡ２、ＲＳＫ、Ｓ１００、ＳＣＦ／ＫＬ、ＳＤＦ−１、セリン、血清アルブミン、ｓＦＲＰ−３、Ｓｈｈ、ＳＩＧＩＲＲ、ＳＫ−１、ＳＬＡＭ、ＳＬＰＩ、ＳＭＡＣ、ＳＭＤＦ、ＳＭＯＨ、ＳＯＤ、ＳＰＡＲＣ、Ｓｔａｔ、ＳＴＥＡＰ、ＳＴＥＡＰ−ＩＩ、ＴＡＣＥ、ＴＡＣＩ、ＴＡＧ−７２（腫瘍関連糖タンパク質７２）、ＴＡＲＣ、ＴＣＡ−３、Ｔ細胞受容体（例えば、Ｔ細胞受容体アルファ／ベータ）、ＴｄＴ、ＴＥＣＫ、ＴＥＭ１、ＴＥＭ５、ＴＥＭ７、ＴＥＭ８、ＴＥＲＴ、睾丸ＰＬＡＰ様アルカリホスファターゼ、ＴｆＲ、ＴＧＦ、ＴＧＦ−アルファ、ＴＧＦ−ベータ、ＴＧＦ−ベータ（Ｐａｎ特異性）、ＴＧＦ−ベータ  Ｒ１（ＡＬＫ−５）、ＴＧＦ−ベータ  ＲＩＩ、ＴＧＦ−ベータ  ＲＩＩｂ、ＴＧＦ−ベータＲＩＩＩ、ＴＧＦ−ベータ１、ＴＧＦ−ベータ２、ＴＧＦ−ベータ３、ＴＧＦ−ベータ４、ＴＧＦ−ベータ５、トロンビン、胸腺Ｃｋ−１、甲状腺刺激ホルモン、Ｔｉｅ、ＴＩＭＰ、ＴＩＱ、組織因子、ＴＭＥＦＦ２、Ｔｍｐｏ、ＴＭＰＲＳＳ２、ＴＮＦ、ＴＮＦ−アルファ、ＴＮＦ−アルファベータ、ＴＮＦ−ベータ２、ＴＮＦｃ、ＴＮＦ−ＲＩ、ＴＮＦ−ＲＩＩ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ（ＴＲＡＩＬ  Ｒ３Ａｐｏ−２、ＤＲ４）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ（ＴＲＡＩＬ  Ｒ２ＤＲ５、ＫＩＬＬＥＲ、ＴＲＩＣＫ−２Ａ、ＴＲＩＣＫ−Ｂ）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ（ＴＲＡＩＬ  Ｒ３ＤｃＲ１、ＬＩＴ、ＴＲＩＤ）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ（ＴＲＡＩＬ  Ｒ４ＤｃＲ２、ＴＲＵＮＤＤ）、ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ（ＲＡＮＫ  ＯＤＦ  Ｒ、ＴＲＡＮＣＥ  Ｒ）、ＴＮＦＲＳＦ１１Ｂ（ＯＰＧ  ＯＣＩＦ、ＴＲ１）、ＴＮＦＲＳＦ１２（ＴＷＥＡＫ  Ｒ  ＦＮ１４）、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ（ＴＡＣＩ）、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ（ＢＡＦＦ  Ｒ）、ＴＮＦＲＳＦ１４（ＨＶＥＭ  ＡＴＡＲ、ＨｖｅＡ、ＬＩＧＨＴ  Ｒ、ＴＲ２）、ＴＮＦＲＳＦ１６（ＮＧＦＲ  ｐ７５ＮＴＲ）、ＴＮＦＲＳＦ１７（ＢＣＭＡ）、ＴＮＦＲＳＦ１８（ＧＩＴＲ  ＡＩＴＲ）、ＴＮＦＲＳＦ１９（ＴＲＯＹ  ＴＡＪ、ＴＲＡＤＥ）、ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ（ＲＥＬＴ）、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ（ＴＮＦ  Ｒ１ＣＤ１２０ａ、ｐ５５−６０）、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ（ＴＮＦ  ＲＩＩ  ＣＤ１２０ｂ、ｐ７５−８０）、ＴＮＦＲＳＦ２６（ＴＮＦＲＨ３）、ＴＮＦＲＳＦ３（ＬＴｂＲ  ＴＮＦ  ＲＩＩＩ、ＴＮＦＣ  Ｒ）、ＴＮＦＲＳＦ４（ＯＸ４０  ＡＣＴ３５、ＴＸＧＰ１  Ｒ）、ＴＮＦＲＳＦ５（ＣＤ４０  ｐ５０）、ＴＮＦＲＳＦ６（Ｆａｓ  Ａｐｏ−１、ＡＰＴ１、ＣＤ９５）、ＴＮＦＲＳＦ６Ｂ（ＤｃＲ３Ｍ６８、ＴＲ６）、ＴＮＦＲＳＦ７（ＣＤ２７）、ＴＮＦＲＳＦ８（ＣＤ３０）、ＴＮＦＲＳＦ９（４−１  ＢＢ  ＣＤ１３７、ＩＬＡ）、ＴＮＦＲＳＦ２１（ＤＲ６）、ＴＮＦＲＳＦ２２（ＤｃＴＲＡＩＬ  Ｒ２ＴＮＦＲＨ２）、ＴＮＦＲＳＴ２３（ＤｃＴＲＡＩＬ  Ｒ１  ＴＮＦＲＨ１）、ＴＮＦＲＳＦ２５（ＤＲ３Ａｐｏ−３、ＬＡＲＤ、ＴＲ−３、ＴＲＡＭＰ、ＷＳＬ−１）、ＴＮＦＳＦ１０（ＴＲＡＩＬ  Ａｐｏ−２リガンド、ＴＬ２）、ＴＮＦＳＦ１１（ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫリガンドＯＤＦ、ＯＰＧリガンド）、ＴＮＦＳＦ１２（ＴＷＥＡＫ  Ａｐｏ−３リガンド、ＤＲ３リガンド）、ＴＮＦＳＦ１３（ＡＰＲＩＬ  ＴＡＬＬ２）、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ（ＢＡＦＦ  ＢＬＹＳ、ＴＡＬＬ１、ＴＨＡＮＫ、ＴＮＦＳＦ２０）、ＴＮＦＳＦ１４（ＬＩＧＨＴ  ＨＶＥＭリガンド、ＬＴｇ）、ＴＮＦＳＦ１５（ＴＬ１Ａ／ＶＥＧＩ）、ＴＮＦＳＦ１８（ＧＩＴＲリガンドＡＩＴＲリガンド、ＴＬ６）、ＴＮＦＳＦ１Ａ（ＴＮＦ−ａコネクチン、ＤＩＦ、ＴＮＦＳＦ２）、ＴＮＦＳＦ１Ｂ（ＴＮＦ−ｂ  ＬＴａ、ＴＮＦＳＦ１）、ＴＮＦＳＦ３（ＬＴｂ  ＴＮＦＣ、ｐ３３）、ＴＮＦＳＦ４（ＯＸ４０リガンドｇｐ３４、ＴＸＧＰ１）、ＴＮＦＳＦ５（ＣＤ４０リガンドＣＤ１５４、ｇｐ３９、ＨＩＧＭ１、ＩＭＤ３、ＴＲＡＰ）、ＴＮＦＳＦ６（ＦａｓリガンドＡｐｏ−１リガンド、ＡＰＴ１リガンド）、ＴＮＦＳＦ７（ＣＤ２７リガンドＣＤ７０）、ＴＮＦＳＦ８（ＣＤ３０リガンドＣｄ１５３）、ＴＮＦＳＦ９（４−１ＢＢリガンドＣＤ１３７リガンド）、ＴＰ−１、ｔ−ＰＡ、Ｔｐｏ、ＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＩＬ  Ｒ、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、ＴＲＡＮＣＥ、トランスフェリン受容体（ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎｇ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）、ＴＲＦ、Ｔｒｋ、ＴＲＯＰ−２、ＴＳＧ、ＴＳＬＰ、腫瘍関連抗原ＣＡ１２５、腫瘍関連抗原発現ルイスＹ関連炭水化物、ＴＷＥＡＫ、ＴＸＢ２、Ｕｎｇ、ｕＰＡＲ、ｕＰＡＲ−１、ウロキナーゼ、ＶＣＡＭ、ＶＣＡＭ−１、ＶＥＣＡＤ、ＶＥ−カドヘリン、ＶＥ−カドヘリン−２、ＶＥＦＧＲ−１（ｆｉｔ−１）、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ−３（ｆｌｔ−４）、ＶＥＧＩ、ＶＩＭ、ウイルス抗原、ＶＬＡ、ＶＬＡ−１、ＶＬＡ−４、ＶＮＲインテグリン、フォン・ヴィレブランド因子、ＷＩＦ−１、ＷＮＴ１、ＷＮＴ２、ＷＮＴ２Ｂ／１３、ＷＮＴ３、ＷＮＴ３Ａ、ＷＮＴ４、ＷＮＴ５Ａ、ＷＮＴ５Ｂ、ＷＮＴ６、ＷＮＴ７Ａ、ＷＮＴ７Ｂ、ＷＮＴ８Ａ、ＷＮＴ８Ｂ、ＷＮＴ９Ａ、ＷＮＴ９Ａ、ＷＮＴ９Ｂ、ＷＮＴ１０Ａ、ＷＮＴ１０Ｂ、ＷＮＴ１１、ＷＮＴ１６、ＸＣＬ１、ＸＣＬ２、ＸＣＲ１、ＸＣＲ１、ＸＥＤＡＲ、ＸＩＡＰ、ＸＰＤ、ならびにホルモンおよび成長因子の受容体。
【０１１６】
当業者は、前述の標的の列挙が、特異的タンパク質および生体分子のみならず、それを含む生化学的経路および複数の経路を参照していることを認識するであろう。例えば、標的抗原としてのＣＴＬＡ−４の参照は、ＣＴＬＡ−４、Ｂ７−１、Ｂ７−２、ＣＤ２８、およびこれらのタンパク質を結合する任意の他の未発見のリガンドまたは受容体を含むＴ細胞共刺激経路を構成するリガンドおよび受容体もまた標的であることを示唆する。したがって、本明細書で用いられる標的は、特異的生体分子のみならず、前記標的と相互作用する一連のタンパク質および、前記標的が属する生化学的経路のメンバーも参照する。当業者は、前述の標的抗原、それらを結合するリガンドもしくは受容体、またはそれらの対応する生化学的経路の他のメンバーのいずれかが、Ｆｃ融合体を作製するために本発明のＦｃ変異体に動作可能に連結され得ることを、さらに認識するであろう。したがって例えば、ＥＧＦＲを標的とするＦｃ融合体は、ＥＧＦ、ＴＧＦ−ｂ、またはＥＧＦＲを結合する発見された、もしくは未発見の任意の他のリガンドへＦｃ変異体を動作可能に連結させることにより構築され得る。したがって本発明のＦｃ変異体は、ＥＧＦ、ＴＧＦ−ｂ、またはＥＧＦＲを結合する発見された、もしくは未発見の任意の他のリガンドを結合するＦｃ融合体を作製するために、ＥＧＦＲに動作可能に連結され得る。したがって、非限定的に前述の標的およびそれらの対応する生化学的経路を構成するタンパク質を含む、リガンド、受容体、または幾つかの他のタンパク質もしくはタンパク質ドメインのいずれに関わらず、事実上任意のポリペプチドが、本発明のＦｃ変異体に動作可能に連結されて、Ｆｃ融合体を開発できる。
【０１１７】
適切な抗原の選択は、所望の適用に依存する。抗癌処置の場合、その発現が癌性細胞に制限される標的を有することが望ましい。抗体療法に特に適応し易いことが立証されているいくつかの標的は、シグナル伝達機能を有するものである。他の治療抗体は、受容体とその同族リガンドの間の結合を阻害することによる受容体のシグナル伝達を遮断することにより、その効果を発揮する。治療抗体の他の作用機序は、受容体の下方制御を引き起こすことである。他の抗体は、標的抗原を介するシグナル伝達により働くわけではない。幾つかの例では、感染性疾患薬に対する抗体が、用いられる。
【０１１８】
一実施形態において、本発明のＦｃ変異体は、サイトカインに対する抗体中に組み込まれる。あるいはＦｃ変異体は、サイトカインに融合またはコンジュゲートされる。本明細書で用いられる「サイトカイン」は、細胞内媒介物質として別の細胞に作用する１つの細胞集団により放出されるタンパク質の一般的用語を意味する。例えば、参照により明白に組み入れられるＰｅｎｉｃｈｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４８：９１−１０１に記載される通り、サイトカインは抗体に融合されて、数々の所望の特性を提供できる。そのようなサイトカインの例は、リンホカイン、モノカイン、および伝統的なポリペプチドホルモンである。サイトカインに含まれるのは、ヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニルヒト成長ホルモン、およびウシ成長ホルモンなどの成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；レラキシン；プロレラキシン；卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）および黄体形成ホルモン（ＬＨ）などの糖タンパク質ホルモン；肝臓成長因子；線維芽細胞成長因子；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン；腫瘍壊死因子−アルファおよび−ベータ；ミュラー管阻害物質；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮成長因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；ＮＧＦ−ベータなどの神経成長因子；血小板成長因子；ＴＧＦ−アルファおよびＴＧＦ−ベータなどのトランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ）；インスリン様成長因子−Ｉおよび−ＩＩ；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子；インターフェロン−アルファ、−ベータおよび−ガンマなどのインターフェロン；マクロファージ−ＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）などのコロニー刺激因子（ＣＳＦ）；顆粒球−マクロファージ−ＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）；および顆粒球−ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）；ＩＬ−１、ＩＬ−１アルファ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５などのインターロイキン（ＩＬ）；ＴＮＦ−アルファまたはＴＮＦ−ベータなどの腫瘍壊死因子；Ｃ５ａ；ならびにＬＩＦおよびｋｉｔリガンド（ＫＬ）を含む他のポリペプチド因子である。本明細書で用いられるサイトカインという用語は、天然供給源または組換え細胞培養物からのタンパク質、および天然配列のサイトカインの生物的に活性な均等物を包含する。
【０１１９】
ＴＮＦスーパーファミリーメンバーなどの、サイトカインおよび可溶性の標的は、本発明の変異体との使用のための好ましい標的である。例えば、抗ＶＥＧＦ、抗ＣＴＬＡ−４および抗ＴＮＦ抗体、またはそれらのフラグメントは、ＦｃＲｎ結合を増加させるＦｃ変異体の使用にとって特に良好な抗体である。これらの標的への治療薬は多くの場合、自己免疫疾患の処置に関与し、長期間にわたり複数回の注射を必要とする。それゆえ、本発明の変異体から得られる、より長い血清半減期およびより少ない処置回数が、特に好ましい。
【０１２０】
臨床試験または開発での使用が認可された複数の抗体およびＦｃ融合体は、本発明のＦｃ変異体から利益を享受し得る。これらの抗体およびＦｃ融合体は、本明細書では「臨床製品および候補」と称される。したがって好ましい実施形態において、本発明のＦｃポリペプチドは、様々な臨床製品および候補において用途を見出し得る。例えば、ＣＤ２０を標的とする多数の抗体は、本発明のＦｃポリペプチドから利益を享受し得る。例えば本発明のＦｃポリペプチドは、非ホジキンリンパ腫の処置で認可されたキメラ抗ＣＤ２０であるリツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）、ＩＤＥＣ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）（例えば、米国特許第５，７３６，１３７号参照）；Ｇｅｎｍａｂにより現在開発されている抗ＣＤ２０抗体であり、米国特許第５，５００，３６２号に記載されている抗ＣＤ２０抗体であるＨｕＭａｘ−ＣＤ２０、ＡＭＥ−１３３（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ）、ｈＡ２０（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ，Ｉｎｃ．）、ＨｕｍａＬＹＭ（Ｉｎｔｒａｃｅｌ）、およびＰＲＯ７０７６９（ＰＣＴ／ＵＳ２００３／０４０４２６、表題「Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｖａｒｉａｎｔｓ  ａｎｄ  Ｕｓｅｓ  Ｔｈｅｒｅｏｆ」）と実質的に類似の抗体において用途を見出し得る。ＥＧＦＲ（ＥｒｂＢ−１）、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ−２）、Ｈｅｒ３（ＥｒｂＢ−３）、Ｈｅｒ４（ＥｒｂＢ−４）を含む、上皮成長因子受容体のファミリーのメンバーを標的とする多数の抗体が、本発明のＦｃポリペプチドから利益を享受し得る。例えば、本発明のＦｃポリペプチドは、乳癌を処置するために認可されたヒト化抗Ｈｅｒ２／ｎｅｕ抗体であるトラツヅマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）（例えば、米国特許第５，６７７，１７１参照）；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈにより現在開発されているペルツズマブ（ｒｈｕＭａｂ−２Ｃ４、Ｏｍｎｉｔａｒｇ（商標）；米国特許第４，７５３，８９４号に記載された抗Ｈｅｒ２抗体；種々の癌についての臨床試験でのキメラ抗ＥＧＦＲ抗体であるセツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標）、Ｉｍｃｌｏｎｅ）（米国特許第４，９４３，５３３号；ＰＣＴ  ＷＯ９６／４０２１０）；Ａｂｇｅｎｉｘ−Ｉｍｍｕｎｅｘ−Ａｍｇｅｎにより現在開発されているＡＢＸ−ＥＧＦ（米国特許第６，２３５，８８３号）；Ｇｅｎｍａｂにより現在開発されているＨｕＭａｘ−ＥＧＦｒ（米国特許出願第１０／１７２，３１７号）；４２５、ＥＭＤ５５９００、ＥＭＤ６２０００、およびＥＭＤ７２０００（Ｍｅｒｃｋ  ＫＧａＡ）（米国特許第５，５５８，８６４号；Ｍｕｒｔｈｙ  ｅｔ  ａｌ．１９８７，Ａｒｃｈ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ．２５２（２）：５４９−６０；Ｒｏｄｅｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．３５（４）：３１５−２０；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．４（７）：７７３−８３）；ＩＣＲ６２（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）（ＰＣＴ  ＷＯ９５／２００４５；Ｍｏｄｊｔａｈｅｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｐｈｙｓ．１９９３，２２（１−３）：１２９��４６；Ｍｏｄｊｔａｈｅｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｂｒ  Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ．１９９３，６７（２）：２４７−５３；Ｍｏｄｊｔａｈｅｄｉ  ｅｔ  ａｌ，１９９６，Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ，７３（２）：２２８−３５；Ｍｏｄｊｔａｈｅｄｉ  ｅｔ  ａｌ，２００３，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ，１０５（２）：２７３−８０）；ＴｈｅｒａＣＩＭ  ｈＲ３（カナダのＹＭ  ＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓおよびキューバのＣｅｎｔｒｏ  ｄｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉａ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ）（米国特許第５，８９１，９９６号；米国特許第６，５０６，８８３号；Ｍａｔｅｏ  ｅｔ  ａｌ，１９９７，Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，３（１）：７１−８１）;ｍＡｂ−８０６（Ｌｕｄｗｉｇ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｓｌｏａｎ−Ｋｅｔｔｅｒｉｎｇ）（Ｊｕｎｇｂｌｕｔｈ  ｅｔ  ａｌ．２００３，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．１００（２）：６３９−４４）；ＫＳＢ−１０２（ＫＳ  Ｂｉｏｍｅｄｉｘ）；ＭＲ１−１（ＩＶＡＸ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）（ＰＣＴ  ＷＯ０１６２９３１Ａ２）；およびＳＣ１００（Ｓｃａｎｃｅｌｌ）（ＰＣＴ  ＷＯ０１／８８１３８）と実質的に類似の抗体において用途を見出し得る。別の好ましい実施形態において、本発明のＦｃポリペプチドは、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病の処置について現在認可されているヒト化モノクローナル抗体アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標）、Ｍｉｌｌｅｎｉｕｍ）において用途を見出し得る。本発明のＦｃポリペプチドは、Ｏｒｔｈｏ  Ｂｉｏｔｅｃｈ／Ｊｏｈｎｓｏｎ  ＆  Ｊｏｈｎｓｏｎにより開発された抗ＣＤ３抗体であるムロモナブ−ＣＤ３（Ｏｒｔｈｏｃｌｏｎｅ  ＯＫＴ３（登録商標）)、ＩＤＥＣ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  ＡＧにより開発された抗ＣＤ２０抗体であるイブリツモマブ・チウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標）)、Ｃｅｌｌｔｅｃｈ／Ｗｙｅｔｈにより開発された抗ＣＤ３３（ｐ６７タンパク質）抗体であるゲムツズマブ・オゾガマイシン（Ｍｙｌｏｔａｒｇ（登録商標）)、Ｂｉｏｇｅｎにより開発された抗ＬＦＡ−３Ｆｃ融合体であるアレファセプト（Ａｍｅｖｉｖｅ（登録商標）)、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ／Ｌｉｌｌｙにより開発されたアブシキシマブ（ＲｅｏＰｒｏ（登録商標）)、Ｎｏｖａｒｔｉｓにより開発されたバシリキシマブ（Ｓｉｍｕｌｅｃｔ（登録商標）)、Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅにより開発されたパリビズマブ（Ｓｙｎａｇｉｓ（登録商標）)、Ｃｅｎｔｏｃｏｒにより開発された抗ＴＮＦアルファ抗体であるインフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標）)、Ａｂｂｏｔｔにより開発された抗ＴＮＦアルファ抗体であるアダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標）)、Ｃｅｌｌｔｅｃｈにより開発された抗ＴＮＦアルファ抗体であるＨｕｍｉｃａｄｅ（商標）、Ｉｍｍｕｎｅｘ／Ａｍｇｅｎにより開発された抗ＴＮＦアルファＦｃ融合体であるエタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標）)、Ａｂｇｅｎｉｘにより開発された抗ＣＤ１４７抗体であるＡＢＸ−ＣＢＬ、Ａｂｇｅｎｉｘにより開発された抗ＩＬ８抗体であるＡＢＸ−ＩＬ８、Ａｂｇｅｎｉｘにより開発された抗ＭＵＣ１８抗体であるＡＢＸ−ＭＡ１、Ａｎｔｉｓｏｍａにより開発された抗ＭＵＣ１であるペムツモマブ（Ｒ１５４９、９０Ｙ−ｍｕＨＭＦＧ１）、Ａｎｔｉｓｏｍａにより開発された抗ＭＵＣ１抗体であるＴｈｅｒｅｘ（Ｒ１５５０）、Ａｎｔｉｓｏｍａにより開発されたＡｎｇｉｏＭａｂ（ＡＳ１４０５）、Ａｎｔｉｓｏｍａにより開発されたＨｕＢＣ−１、Ａｎｔｉｓｏｍａにより開発されたＴｈｉｏｐｌａｔｉｎ（ＡＳ１４０７）、Ｂｉｏｇｅｎにより開発された抗アルファ−４−ベータ−１（ＶＬＡ−４）およびアルファ−４−ベータ−７抗体であるＡｎｔｅｇｒｅｎ（登録商標）（ナタリズマブ）、Ｂｉｏｇｅｎにより開発された抗ＶＬＡ−１インテグリン抗体であるＶＬＡ−１  ｍＡｂ、Ｂｉｏｇｅｎにより開発された抗リンフォトキシンベータ受容体（ＬＴＢＲ）抗体であるＬＴＢＲ  ｍＡｂ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙにより開発された抗ＴＧＦ−β２抗体であるＣＡＴ−１５２、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙおよびＡｂｂｏｔｔにより開発された抗ＩＬ−１２抗体であるＪ６９５、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙおよびＧｅｎｚｙｍｅにより開発された抗ＴＧＦβ１抗体であるＣＡＴ−１９２、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙにより開発された抗エオタキシン１抗体であるＣＡＴ−２１３、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙおよびＨｕｍａｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ．により開発された抗Ｂｌｙｓ抗体であるＬｙｍｐｈｏＳｔａｔ−Ｂ（商標）、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙおよびＨｕｍａｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ．により開発された抗ＴＲＡＩＬ−Ｒ１抗体であるＴＲＡＩＬ−Ｒ１  ｍＡｂ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈにより開発された抗ＶＥＧＦ抗体であるＡｖａｓｔｉｎ（商標）(ベバシズマブ、ｒｈｕＭＡｂ−ＶＥＧＦ）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈにより開発された抗ＨＥＲ受容体ファミリー抗体、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈにより開発された抗組織因子抗体であるＡｎｔｉ−Ｔｉｓｓｕｅ  ｆａｃｔｏｒ（ＡＴＦ） 、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈにより開発された抗ＩｇＥ抗体であるＸｏｌａｉｒ（商標）（オマリズマブ）、ＧｅｎｅｎｔｅｃｈおよびＸｏｍａにより開発された抗ＣＤ１１ａ抗体であるＲａｐｔｉｖａ（商標）（エファリズマブ）、ＧｅｎｅｎｔｅｃｈおよびＭｉｌｌｅｎｉｕｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓにより開発されたＭＬＮ−０２抗体（旧名称ＬＤＰ−０２）、Ｇｅｎｍａｂにより開発された抗ＣＤ４抗体であるＨｕＭａｘ  ＣＤ４、ＧｅｎｍａｂおよびＡｍｇｅｎにより開発された抗ＩＬ−１５抗体であるＨｕＭａｘ−ＩＬ１５、ＧｅｎｍａｂおよびＭｅｄａｒｅｘにより開発されたＨｕＭａｘ−Ｉｎｆｌａｍ、ＧｅｎｍａｂおよびＭｅｄａｒｅｘおよびＯｘｆｏｒｄ  ＧｃｏＳｃｉｅｎｃｅｓにより開発された抗ＨｅｐａｒａｎａｓｅＩ抗体であるＨｕＭａｘ−Ｃａｎｃｅｒ、 ＧｅｎｍａｂおよびＡｍｇｅｎにより開発されたＨｕＭａｘ−Ｌｙｍｐｈｏｍａ、Ｇｅｎｍａｂにより開発されたＨｕＭａｘ−ＴＡＣ、ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓにより開発されたＩＤＥＣ−１���１および抗ＣＤ４０Ｌ抗体、ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓにより開発された抗ＣＤ４抗体であるＩＤＥＣ−１５１（クレノリキシマブ）、ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓにより開発された抗ＣＤ８０抗体であるＩＤＥＣ−１１４、ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓにより開発された抗ＣＤ２３であるＩＤＥＣ−１５２、ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓにより開発された抗マクロファージ遊走阻止因子（ａｎｔｉ−ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ）（ＭＩＦ）抗体、Ｉｍｃｌｏｎｅにより開発された抗イディオタイプ抗体であるＢＥＣ２、Ｉｍｃｌｏｎｅにより開発された抗ＫＤＲ抗体であるＩＭＣ−１Ｃ１１、Ｉｍｃｌｏｎｅにより開発された抗ｆｌｋ−１抗体であるＤＣ１０１、
Ｉｍｃｌｏｎｅにより開発された抗ＶＥカドヘリン抗体、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓにより開発された抗癌胎児性抗原（ＣＥＡ）抗体であるＣＥＡ−Ｃｉｄｅ（商標）（タベツズマブ）、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓにより開発された抗ＣＤ２２抗体であるＬｙｍｐｈｏＣｉｄｅ（商標）（エプラツズマブ）、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓにより開発されたＡＦＰ−Ｃｉｄｅ、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓにより開発されたＭｙｅｌｏｍａＣｉｄｅ、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓにより開発されたＬｋｏＣｉｄｅ、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓにより開発されたＰｒｏｓｔａＣｉｄｅ、Ｍｅｄａｒｅｘにより開発された抗ＣＴＬＡ４抗体であるＭＤＸ−０１０、Ｍｅｄａｒｅｘにより開発された抗ＣＤ３０抗体であるＭＤＸ−０６０、Ｍｅｄａｒｅｘにより開発されたＭＤＸ−０７０、Ｍｅｄａｒｅｘにより開発されたＭＤＸ−０１８、ＭｅｄａｒｅｘおよびＩｍｍｕｎｏ−Ｄｅｓｉｇｎｅｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓにより開発されたＯｓｉｄｅｍ（商標）（ＩＤＭ−１）および抗Ｈｅｒ２抗体、ＭｅｄａｒｅｘおよびＧｅｎｍａｂにより開発された抗ＣＤ４抗体であるＨｕＭａｘ（商標）−ＣＤ４、ＭｅｄａｒｅｘおよびＧｅｎｍａｂにより開発された抗ＩＬ１５抗体であるＨｕＭａｘ−ＩＬ１５、ＭｅｄａｒｅｘおよびＣｅｎｔｏｃｏｒ／Ｊ＆Ｊにより開発された抗ＴＮＦα抗体であるＣＮＴＯ  １４８、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ／Ｊ＆Ｊにより開発された抗サイトカイン抗体であるＣＮＴＯ１２７５、ＭｏｒｐｈｏＳｙｓにより開発された抗細胞間接着分子−１（ＩＣＡＭ−１）（ＣＤ５４）抗体であるＭＯＲ１０１およびＭＯＲ１０２、ＭｏｒｐｈｏＳｙｓにより開発された抗線維芽細胞増殖因子受容体３（ＦＧＦＲ−３）抗体である ＭＯＲ２０１、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂｓにより開発された抗ＣＤ３抗体であるＮｕｖｉｏｎ（登録商標）（ビシリズマブ）、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂｓにより開発された抗ガンマインターフェロン抗体であるＨｕＺＡＦ（商標）、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂｓにより開発された抗α５β１インテグリン、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂｓにより開発された抗ＩＬ１２、Ｘｏｍａにより開発された抗Ｅｐ−ＣＡＭ抗体であるＩＮＧ−１、ならびにＸｏｍａにより開発された抗ベータ２インテグリン抗体であるＭＬＮ０１を含むが限定されない、他の臨床製品および候補と実質的に類似の種々の抗体またはＦｃ融合体において用途を見出し得、この段落で上に引用された参考資料の全てが、参照により本明細書に明白に組み入れられる。
【０１２１】
本発明のＦｃポリペプチドは、前述の臨床候補および製品中に、またはそれらと実質的に類似の抗体およびＦｃ融合体中に組み込まれ得る。本発明のＦｃポリペプチドは、ヒト化された、親和性成熟された、改変された、または幾つかの他の方法で修飾された前述の臨床候補および製品のバージョン中に組み込まれ得る。
【０１２２】
一実施形態において、本発明のＦｃポリペプチドは、自己免疫、炎症、または移植片の適応症の処置に用いられる。そのような疾患の関連する標的抗原ならびに臨床製品および候補としては、ＬＤＰ−０２などの抗α４β７インテグリン抗体、ＬＤＰ−０１などの抗β２インテグリン抗体、５Ｇ１．１などの抗補体（Ｃ５）抗体、ＢＴＩ−３２２およびＭＥＤＩ−５０７などの抗ＣＤ２抗体、ＯＫＴ３およびＳＭＡＲＴ抗ＣＤ３抗体などの抗ＣＤ３抗体、ＩＤＥＣ−１５１、ＭＤＸ−ＣＤ４およびＯＫＴ４Ａなどの抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ１１ａ抗体、ＩＣ１４などの抗ＣＤ１４抗体、抗ＣＤ１８抗体、ＩＤＥＣ１５２などの抗ＣＤ２３抗体、Ｚｅｎａｐａｘなどの抗ＣＤ２５抗体、５ｃ８、ＡｎｔｏｖａおよびＩＤＥＣ−１３１などの抗ＣＤ４０Ｌ抗体、ＭＤＸ−３３などの抗ＣＤ６４抗体、ＩＤＥＣ−１１４などの抗ＣＤ８０抗体、ＡＢＸ−ＣＢＬなどの抗ＣＤ１４７抗体、ＣＤＰ８５０などの抗Ｅセレクチン抗体、ＲｅｏＰｒｏ／アブシキシマブ（Ａｂｃｉｘｉｍａ）などの抗ｇｐＩＩｂ／ＩＩＩａ抗体、ＩＣＭ３などの抗ＩＣＡＭ−３抗体、ＶＸ−７４０などの抗ＩＣＥ抗体、ＭＤＸ−３３などの抗ＦｃＲ１抗体、ｒｈｕＭａｂ−Ｅ２５などの抗ＩｇＥ抗体、ＳＢ−２４０６８３などの抗ＩＬ−４抗体、ＳＢ−２４０５６３およびＳＣＨ５５７００などの抗ＩＬ−５抗体、ＡＢＸ−ＩＬ８などの抗ＩＬ−８抗体、抗インターフェロンガンマ抗体、ＣＤＰ５７１、ＣＤＰ８７０、Ｄ２Ｅ７、インフリキシマブ、ＭＡＫ−１９５Ｆなどの抗ＴＮＦ（ＴＮＦ、ＴＮＦａ、ＴＮＦａ、ＴＮＦ−アルファ）抗体、ならびにＡｎｔｅｇｒｅｎなどの抗ＶＬＡ−４抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２３】
ＦｃＲｎへの増加された結合を有するものなどの本発明のＦｃ変異体は、ＴＮＦ阻害剤分子中で用いられて、増強された特性を提供し得る。有用なＴＮＦ阻害剤分子としては、哺乳動物においてＴＮＦ−アルファの作用を阻害する任意の分子が挙げられる。適切な例としては、Ｆｃ融合体Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標）（エタネルセプト）、ならびに抗体Ｈｕｍｉｒａ（登録商標）（アダリムマブ）およびＲｅｍｉｃａｄｅ（登録商標）（インフリキシマブ）が挙げられる。ＦｃＦｎ結合を増加させるように本発明のＦｃ変異体を用いて改変されたモノクローナル抗体（ＲｅｍｉｃａｄｅおよびＨｕｍｉｒａなど）は、半減期の増加を通してより良好な有効性に転換し得る。
【０１２４】
幾つかの実施形態において、感染性疾患に対する抗体が、用いられる。真核細胞に対する抗体としては、非限定的にサッカロマイセス・セレビシエ、ハンゼヌラ・ポリモルファ、クルイベロマイセス・フラギリス、Ｋ．ラクティス、ピキア・グイレリモンジイ、Ｐ．パストリス、シゾサッカロミケス・ポンベ、プラスモジウム・ファルシパリウム、およびヤロウィア・リポリティカを含む酵母細胞を標的とする抗体が挙げられる。
【０１２５】
さらなる真菌細胞に対する抗体もまた有用であり、とりわけカンジダ・グラブラータ、カンジダ・アルビカンス、Ｃ．クルーセイ、Ｃ．ルシタニエおよびＣ．マルトーサを含むカンジダ菌株、ならびにアスペルギルス、クリプトコッカス、ヒストプラズマ、コクシジオイデス、ブラストマイセス、およびペニシリウムの種に関連する標的抗原を含む。
【０１２６】
原虫に関連する標的抗原に対する抗体としては、トリパノソーマ、レイシュマニア・ドノバニイを含むレイシュマニア種、プラスモジウムｓｐｐ．、ニューモシスティス・カリニ、クリプトスポリジウム・パルバム、ギアルジア・ランブリア、エンタモエバ・ヒストリティカ、およびシクロスポラ・カエタネンシスに関連する抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２７】
原核生物性抗原に対する抗体もまた有用であり、バチルス・アントラシスを含む炭疽菌；ビブリオ属、例えばＶ．コレラ；エシェリキア属、例えば腸管毒素原性大腸菌、赤痢菌、例えばＳ・ディゼンテリエ；サルモネラ菌、例えばＳ．チフィ；マイコバクテリウム属、例えばＭ．ツベルクローシス、Ｍ．レプラエ；クロストリジウム属、例えばボツリヌス菌、Ｃ．テタニ、Ｃ．ディフィシレ、ウェルシュ菌；コリネバクテリウム属、例えばＣ．ジフテリア；ストレプトコッカス属、Ｓ．ピオゲネス、Ｓ．ニューモニエ；スタフィロコッカス属、例えば黄色ブドウ球菌；ヘモフィルス属、例えばＨ．インフルエンザ；ナイセリア属、例えばＮ．メニンギティディス、Ｎ．ゴノルホエア；エルシニア属、例えばＹ．ランブリア、Ｙ．ペスティス；シュードモナス属、例えばＰ．アエルギノーサ、Ｐ．プチダ；クラミジア属、例えばＣ．トラコマティス；ボルデテラ属、例えばＢ．ペルツスシス；トレポネーマ属、例えばＴ．パラジウム；Ｂ．アントラシス、Ｙ．ペスティス、ブルセラｓｐｐ．、Ｆ．ツラレンシス、Ｂ．マレイ、Ｂ．シュードマレイ、Ｂ．マレイ、Ｂ．シュードマレイ、ボツリヌス菌、サルモネラｓｐｐ．、ＳＥＢ  Ｖ．コレラ毒素Ｂ、大腸菌Ｏ１５７：Ｈ７、リステリアｓｐｐ．、トリコスポロン・ベイゲリ、ロドトルラ種、ハンセヌラ・アノマーラ、エンテロバクターｓｐ．、クレブシエラｓｐ．、リステリアｓｐ．、マイコプラズマｓｐ．などを含むが限定されない病原性および非病原性原核生物などの適切な細菌に対する抗体を含む。
【０１２８】
幾つかの態様において、抗体は、ウイルス感染に対するものであり、これらのウイルスとしては、オルトミクソウイルス（例えばインフルエンザウイルス）、パラミクソウイルス（例えば呼吸器合胞体ウイルス、ムンプスウイルス、麻疹ウイルス）、アデノウイルス、ライノウイルス、コロナウイルス、レオウイルス、トガウイルス（例えば風疹ウイルス）、パルボウイルス、ポックスウイルス（例えば天然痘ウイルス、ワクシニアウイルス）、エンテロウイルス（例えばポリオウイルス、コクサッキーウイルス）、肝炎ウイルス（Ａ、Ｂ、およびＣを含む）、ヘルペスウイルス（例えば単純ヘルペスウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、サイトメガロウイルス、エスプタイン・バーウイルス）、ロタウイルス、ノーウォークウイルス、ハンタウイルス、アレナウイルス、ラブドウイルス（例えば狂犬病ウイルス）、レトロウイルス（ＨＩＶ、ＨＴＬＶ−Ｉおよび−ＩＩを含む）、パポバウイルス（例えばパピローマウイルス）、ポリオーマウイルス、およびピコルナウイルスなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２９】
実験
実施例１
改善されたＦｃＲｎ結合のためのＦｃ改変
胎児性Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）は、ヒトにおいてＩｇＧの３週間のＩｇＧ半減期を調節する。ＦｃＲｎへの改善されたｐＨ依存性結合のためのＩｇＧ抗体の改変は、延長された半減期／変化された薬物動態および細胞輸送特性を有する抗体の例をもたらした。
【０１３０】
材料と方法
細胞培養．  細胞株ＨＥＫ２９３Ｅを、加湿された５％ＣＯ２、９５％空気のインキュベータ中で３７℃にて１０％ＦＢＳ、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇストレプトマイシンを補充したＤＭＥＭ中に保持した。
【０１３１】
可溶性組換えヒトＦｃＲｎの産生．  日本住血吸虫由来のグルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）をコードするｃＤＮＡにＣ−末端融合された３つの細胞外ドメイン（α１〜α３）をコードするｃＤＮＡを含有する、野生型ヒトＦｃＲｎの組換えトランケート型をコードする真核生物ｐｃＤＮＡ３ベクターの構築が、記載されている（Ｂｅｒｎｔｚｅｎ，Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ，２００５．２９８（１−２）：ｐ．９３−１０４；Ａｎｄｅｒｓｅｎ，Ｊ．Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．，ＦＥＢＳ  Ｊ，２００８．２７５（１６）：ｐ．４０９７−１１０）。ベクターは、ヒトβ２−ミクログロブリンをコードするｃＤＮＡおよびエプスタイン・バーウイルスの複製起点配列も含有する。ＧＳＴタグ付きｈＦｃＲｎを、Ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｉｍｉｎｅ  Ｍａｘ（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いてヒト胚腎２９３Ｅ（ＨＥＫ２９３Ｅ）細胞の一過性トランスフェクションにより産生し、受容体を、記載された通り（Ｂｅｒｎｔｚｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，上掲；Ａｎｄｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，上掲）ＧＳＴｒａｐ  ＦＦカラムを用いて回収された上清から精製した。
【０１３２】
モノマーのＨｉｓタグ付きヒトＦｃＲｎを、バキュロウイルス発現ベクター系を用いて産生した（Ｋｉｍ，Ｊ．Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．，ＦｃＲｎ．Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，１９９９．２９（９）：ｐ．２８１９−２５）。Ｈｉｓタグ付きヒトＦｃＲｎをコードするウイルスストックは、Ｄｒ．Ｓａｌｌｙ  Ｗａｒｄ氏（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｔｅｘａｓ、Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ、テキサス州ダラス所在）からの贈与であった。手短に述べると、ヒトＦｃＲｎを、Ｎｉ２＋イオンを供給されるＨｉｓＴｒａｐ  ＨＰカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて精製した。カラムを、０．０５％アジ化ナトリウム含有１×ＰＢＳで前もって平衡化し、上清のｐＨを０．０５％アジ化ナトリウム含有１×ＰＢＳ（ｐＨ１０．９）で調整した後、流速５ｍｌ／分をＨｉｓＴｒａｐ  ＨＰカラムにアプライした。カラムを２００ｍＬの１×ＰＢＳ  と、その後５０ｍｌの２５ｍｍイミダゾール、１×ＰＢＳ（ｐＨ７．３）を用いて洗浄し、ヒトＦｃＲｎを２５０ｍｍイミダゾール、１×ＰＢＳ（ｐＨ７．４）で溶出した。採取されたタンパク質をＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１０  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて１×ＰＢＳにバッファー交換し、続いてモノマー画分を単離した。ＨｉＬｏａｄ  ２６／６００  Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００  ｐｒｅｐ  ｇｒａｄｅカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いてモノマー画分を単離した後、タンパク質を、Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａカラム（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて濃縮し、４℃で貯蔵した。
【０１３３】
Ｆｃ改変されたＩｇＧ１変異体の構築および産生．  ヒト化９Ｃ１２  ＩｇＧ１変異体をコードするベクターは、ｐＬＮＯＨ２／ｐＬＮＯｋ発現系に基づいた（Ｎｏｒｄｅｒｈａｕｇ，Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ，１９９７．２０４（１）：ｐ．７７−８７）。具体的には、ハイブリドーマ細胞株ＴＣ３１−９Ｃ１２．Ｃ９（Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  Ｓｔｕｄｉｅｓ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  Ｂａｎｋ,Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｉｏｗａ）（Ｖａｒｇｈｅｓｅ，Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｖｉｒｏｌ，２００４．７８（２２）：ｐ．１２３２０−３２）に由来する重（Ｈ）鎖および軽（Ｌ）鎖可変（Ｖ）遺伝子を、エンドヌクレアーゼＢｓｍＩ／ＢｓｉＷＩにより認識される制限部位が隣接するクローニングカセットとして合成した。遺伝子フラグメントをその後、ｐＬＮＯＨ２−ＮＩＰｈＩｇＧ１−ＷＴ−ｏｒｉＰおよびＮＩＰｐＬＮＯｋ−ｏｒｉＰにサブクローニングし、それぞれキメラヒトＨ鎖およびＬ鎖をコードするｐＬＮＯＨ２−ＨｅｘｏｎｈＩｇＧ１−ＷＴ−ｏｒｉＰおよびＨｅｘｏｎＬＮＯｋ−ｏｒｉＰを得た。ベクターｐＬＮＯＨ２−ＨｅｘｏｎｈＩｇＧ１−ＷＴ−ｏｒｉＰをコードするＨ鎖を、ＣＨ２およびＣＨ３遺伝子フラグメントを所望の突然変異を含むフラグメントと交換することにより、ｈ９Ｃ１２変異体の作製にさらに用いた。ＣＨ２フラグメントを、エンドヌクレアーゼＡｇｅＩおよびＳｆｉＩにより認識される特有の制限部位を用いて交換し、ＣＨ３を、ＳｆｉＩおよびＢａｍＨＩを用いて交換した（全てＮｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ製）。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ２０００（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いるＨＥＫ２９３Ｅ細胞中へのＨ鎖およびＬ鎖の両ベクターのコトランスフェクションに続いて、ｈ９Ｃ１２  ＩｇＧ１変異体を、ＣＨ１特異性ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔカラム（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて採取された上清から精製した。モノマー画分を、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ２００カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いるＳＥＣクロマトグラフィーにより単離した。タンパク質の完全性を、非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）により検証した。
【０１３４】
ＥＬＩＳＡ．  組換えＡｄＶ５ヘキソン（Ａｂｄ  Ｓｅｒｏｔｅｃｈ）（ＰＢＳで１μｇ／ｍｌに希釈）を９６ウェルプレート（Ｎｕｎｃ）にコーティングして、４℃で一晩インキュベートした。残りの表面積を、ＰＢＳ／４％脱脂乳（Ｓ）（Ａｃｕｍｅｄｉａ）を用いてブロックした後、ＰＢＳ／０．００５％Ｔｗｅｅｎ２０（Ｔ）で４回洗浄した。ＰＢＳ／Ｔ／Ｓで希釈された滴定量のｈ９Ｃ１２変異体をウェルに添加して、室温で１時間インキュベートした。上記の通り洗浄した後、ＰＢＳ／Ｓ／Ｔで希釈された可溶性ＧＳＴタグ付きヒトＦｃＲｎをウェルに添加して、室温で１時間インキュベートした。上記の通り洗浄した後、ＨＲＰコンジュゲート化抗ＧＳＴ抗体（１：８０００）を、添加されたＰＢＳ／Ｓ／Ｔ（Ｒｏｃｋｌａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ、米国所在）中で希釈した後、室温で１時間インキュベートした。上記の通り洗浄した後、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）溶液（ＣａｌＢｉｏｃｈｅｍ）を添加することにより、結合したヒトＦｃＲｎを視覚化した。反応を、１００μｌの１Ｍ  ＨＣｌの添加により停止させて、４５０ｎｍでの吸収を、ＳＵＮＲＩＳＥプレートリーダー（ＴＥＣＡＮ）を用いて記録した。ＥＬＩＳＡを、ｐＨ６．０またはｐＨ７．４のＰＢＳを用いて実施した。
【０１３５】
ＳＰＲ．  Ｂｉａｃｏｒｅ  ３０００装置（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を、全ての反応速度測定に用いた。ヒト化９Ｃ１２  ＩｇＧ１変異体を、製造業者の使用説明書に従い、ＣＭ５センサーチップ上にアミンカップリングにより固定した。カップリングを、１０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ４．５（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）中に溶解された１〜２．５μｇ／ｍｌのＩｇＧ１変異体を注入することにより実施した。ＨＢＳ−Ｐ緩衝液（０．０１Ｍ  ＨＥＰＥＳ、０．１５ＮａＣｌ、０．００５％界面活性剤Ｐ２０、ｐＨ７．４）を、ランニング用緩衝液および希釈用緩衝液として用いた。次に、可溶性モノマーヒトＦｃＲｎの濃度系列を注入した。反応速度分析を、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅを用いて実施し、結合データを単純な一次（１：１）Ｌａｎｇｍｕｉｒ生体分子相互作用モデルにフィットさせた。
【０１３６】
結果
本明細書に記載されるのは、以下の通りヒトＦｃＲｎへの変化された結合を有するＦｃが改変されたＩｇＧ抗体である。三重突然変異体Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅは、発表された実施例を超える改善されたｐＨ依存性結合を示す。
【表１】
2019518712.tif 000002
【表２】
2019518712.tif 000003
【０１３７】
実施例２
この実施例は、ヒトＦｃＲｎへの変化された結合を有するさらなるＩｇＧ１およびＩｇＧ３変異体を記載する。
【０１３８】
材料と方法
インビボ試験  −  Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ遺伝子バックグランドのＴｇ３２−Ａｌｂ−／−マウスは、ＦｃＲｎ  ＨＣ（Ｆｃｇｒｔｔｍ１Ｄｃｒ）およびアルブミン（Ａｌｂｅｍ１２Ｍｖｗ）のヌル対立遺伝子を含み、ネイティブｈＦｃＲｎプロモーターの制御下でｈＦｃＲｎ  ＨＣ（ＦＣＧＲＴ）のゲノムトランスジーンを発現する。Ｔｇ３２−Ａｌｂ−／−マウス（性別：雌、週齢：７〜９週齢、体重１７〜２７ｇ、５匹／群）は、腹腔内注射により５ｍｇ／ｋｇ  ＩｇＧ１変異体を受けた。血液試料（２５μｌ）を、注射後１、３、５、７、１０、１２、１６、１９、２３、３０および３７日目に後眼窩静脈叢から採取した。試料採取後、血液を直ちに１％Ｋ３−ＥＤＴＡ  １μｌと混合して凝固を防ぎ、その後４℃にて１７０００×ｇで５分間遠心分離した。血漿を単離し、５０％グリセロール／ＰＢＳ溶液中で１：１０に希釈し、その後ＥＬＩＳＡによる分析まで−２０℃で貯蔵した。インビボ試験は、Ｔｈｅ  Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（メイン州バーハーバー所在）で実施した。
【０１３９】
表面プラズモン共鳴  −  Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００装置（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を、全ての反応速度測定に用いた。９Ｃ１２変異体を、製造業者の使用説明書に従い、ＣＭ５センサーチップ上にアミンカップリングにより固定した。全ての実験で、ｐＨ６．０のリン酸緩衝液（６７ｍＭリン酸塩、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、０．００５％Ｔｗｅｅｎ２０）またはｐＨ７．４のＨＢＳ−Ｐ緩衝液（０．１Ｍ  ＨＥＰＥＳ、０．１５ＮａＣｌ、０．００５％界面活性剤Ｐ２０）を、それぞれランニング用緩衝液および再生用緩衝液として用いた。組換えヒトＦｃＲｎの濃度系列（１０００．０〜１５．６）ｎＭを、２５℃にて流速５０μｌ／分で注入した。反応速度分析を、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅを用いて実施し、結合データを単純な一次（１：１）Ｌａｎｇｍｕｉｒ生体分子相互作用モデルにフィットさせた。
【０１４０】
ＥＬＩＳＡ  −  実施例１に記載された通り実施した。
【表３】
2019518712.tif 000004
【０１４１】
結果
結果を、図５〜７および表３〜５に示す。
【表４】
2019518712.tif 000005
【表５】
2019518712.tif 000006
【表６】
2019518712.tif 000007
【０１４２】
先の詳述に列挙された全ての発行物および特許は、参照により本明細書に組み入れられる。本発明に記載された方法およびシステムの様々な修正および変更は、本発明の範囲および主旨から逸脱することなく当業者に明白となろう。本発明を特定の好ましい実施形態と関連づけて記載したが、特許請求された本発明がそのような特定の実施形態に不当に限定されるべきでないことが、理解されなければならない。事実、関連分野の当業者に明白な本発明を実施するための記載された様式の様々な修正は、以下の特許請求の範囲に含まれるものとする。
【図１】
2019518712.tif 000008
【図２】
2019518712.tif 000009
【図３】
2019518712.tif 000010
【図４】
2019518712.tif 000011
【図５】
2019518712.tif 000012
【図６】
2019518712.tif 000013
【図７】
2019518712.tif 000014
【図８−１】
2019518712.tif 000015
【図８−２】
2019518712.tif 000016
【図８−３】
2019518712.tif 000017
【配列表】
2019518712000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成30年9月19日(2018.9.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
免疫グロブリンのＦｃ領域に少なくとも１つの突然変異を含む前記免疫グロブリンを含む組成物であって、前記免疫グロブリンが、ＦｃＲｎへの変化された結合を有し、前記免疫グロブリンが、
ＩｇＧ１−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ、
ＩｇＧ１−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ、
ＩｇＧ３（ｂ）−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ、
ＩｇＧ１−Ｍ２５２Ｓ／Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ、
ＩｇＧ１−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｐ／Ｍ４２８Ｅ、
ＩｇＧ１−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｄ、
ＩｇＧ１−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ／Ｈ４３３Ｋ、
ＩｇＧ１−Ｌ３０９Ｋ／Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ、
ＩｇＧ１−Ｌ３０９Ｒ／Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ、
ＩｇＧ１−Ｌ３０９Ｓ／Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ、および
ＩｇＧ３（ｂ）−Ｑ３１１Ｒ／Ｎ４３４Ｗ／Ｍ４２８Ｅ／Ｒ４３５Ｈからなる群から選択される、組成物。
【請求項２】
前記突然変異が、前記突然変異を欠如する免疫グロブリンに比較して免疫グロブリンの血清半減期を延長する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記免疫グロブリンの定常領域が、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２、３、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、および１６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
ＦｃＲｎへの変化された結合を有するＩｇＧ１免疫グロブリンを含む組成物であって、前記免疫グロブリンが、Ｑ３１１Ｒ、Ｎ４３４Ｗ、およびＭ４２８Ｅ突然変異を含む、組成物。
【請求項５】
前記突然変異が、前記突然変異を欠如する免疫グロブリンに比較して免疫グロブリンの血清半減期を延長する、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記免疫グロブリンが、癌マーカー、サイトカイン、感染性疾患マーカー、および成長因子からなる群から選択される標的に結合する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
それを必要とする対象における疾患の処置または予防での使用のための請求項１〜６のいずれか１項に記載の免疫グロブリン。
【請求項８】
前記疾患が、癌、自己免疫疾患、炎症性疾患、移植片拒絶、および感染性疾患からなる群から選択される、請求項７に記載の免疫グロブリン。
【請求項９】
前記免疫グロブリンが、癌マーカー、サイトカイン、感染性疾患マーカー、および成長因子からなる群から選択される標的に結合する、請求項７または８に記載の免疫グロブリン。
【請求項１０】
それを必要とする対象に請求項１〜６のいずれか１項に記載の免疫グロブリンを提供することを含む、対象において疾患を処置するまたは予防する方法。
【請求項１１】
前記疾患が、癌、自己免疫疾患、炎症性疾患、移植片拒絶、および感染性疾患からなる群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記免疫グロブリンが、癌マーカー、サイトカイン、感染性疾患マーカー、および成長因子からなる群から選択される標的に結合する、請求項１０または１１に記載の方法。
【請求項１３】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の免疫グロブリン由来のＦｃ変異体を含むＦｃ融合体。
【請求項１４】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の免疫グロブリンまたは免疫原に融合された請求項１〜６のいずれか１項に記載の免疫グロブリンのＦｃ領域を含む融合タンパク質。
【請求項１５】
請求項１４に記載の融合タンパク質を含むワクチン組成物。
【請求項１６】
対象において免疫応答を生じることにおける使用のための請求項１５に記載のワクチン組成物。
【請求項１７】
対象が前記免疫原に対して免疫応答を生じるような条件下で前記対象に請求項１５に記載のワクチン組成物を投与することを含む、
対象において免疫応答を生成する方法。
【国際調査報告】
2019518712.tif 000018
2019518712.tif 000019
2019518712.tif 000020
2019518712.tif 000021
2019518712.tif 000022