【誤訳訂正書】
【提出日】令和3年12月1日(2021.12.1)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１のオルガノイドを含有する第１のチャンバー、
第２のオルガノイドを含有する第２のチャンバー、
前記第１のチャンバーと第２のチャンバーとを接続する主要流体管路、および
前記第１のチャンバー、第２のチャンバーおよび主要流体管路内に存在する、単一の共通する水性増殖培地
を含む、多組織生体機能チップ装置であって、
前記第１および第２のチャンバーが前記主要流体管路により直列に接続されて、互いに流体連絡しており、
装置の動作中、前記培地が再循環型灌流により前記第１のチャンバー、第２のチャンバーおよび主要流体管路を通じて流動し、
前記第１および第２のオルガノイドが互いに異なり、
前記装置の容量が１００μＬ未満であり、
前記第１のチャンバーおよび第２のチャンバーのそれぞれが２μＬ〜１０μＬの容量を有しており、かつ、
前記装置が高度に生理学的な流体対組織体積比をもたらす、装置。
【請求項２】
前記第１および第２のオルガノイドの少なくとも一方がハイドロゲル内に存在する、請求項１に記載の装置。
【請求項３】
前記ハイドロゲルがチオール化ヒアルロン酸および／またはチオール化コラーゲンを含む、請求項２に記載の装置。
【請求項４】
前記ハイドロゲルがポリエチレングリコール（ＰＥＧ）架橋剤をさらに含む、請求項２に記載の装置。
【請求項５】
前記ＰＥＧ架橋剤がアルキンを含む、請求項４に記載の装置。
【請求項６】
前記第１および第２のオルガノイドが少なくとも２週間にわたり生存する、請求項１に記載の装置。
【請求項７】
前記培地が血清を含む、請求項１に記載の装置。
【請求項８】
血清が約０．１体積％〜約１０体積％の範囲の濃度で培地中に存在する、請求項１に記載の装置。
【請求項９】
前記培地が、無血清内皮細胞用培地および／または精巣細胞用培地を含む、請求項１に記載の装置。
【請求項１０】
前記培地が、約５μＬ／分〜約５０μＬ／分の範囲の流速で前記第１のチャンバー、第２のチャンバーおよび主要流体管路を通じて流動する、請求項１に記載の装置。
【請求項１１】
前記第１および第２のオルガノイドの少なくとも一方が初代細胞および／または幹細胞を含む、請求項１に記載の装置。
【請求項１２】
前記第１および第２のオルガノイドの少なくとも一方が不死化細胞株に由来する細胞を含まない、請求項１に記載の装置。
【請求項１３】
前記第１および第２のオルガノイドの少なくとも一方が肝臓オルガノイドである、請求項１に記載の装置。
【請求項１４】
前記第１のオルガノイドが肝臓オルガノイドであり、前記第２のオルガノイドが心臓オルガノイドである、請求項１に記載の装置。
【請求項１５】
第３のオルガノイドを含有する第３のチャンバーをさらに含み、ここで、前記第３のオルガノイドは前記第１および第２のオルガノイドとは異なるものであり、
前記第１、第２および第３のチャンバーが互いに流体連絡し、前記主要流体管路により接続されており、
装置の動作中、前記培地が再循環型灌流により前記第１のチャンバー、第２のチャンバー、第３のチャンバーおよび主要流体管路を通じて流動し、
前記第３のオルガノイドががん細胞を含む、請求項１に記載の装置。
【請求項１６】
前記第１のオルガノイドが肝臓オルガノイドであり、前記第２のオルガノイドが心臓オルガノイドであり、前記第３のオルガノイドが肺細胞、血管内皮細胞、骨格筋細胞、腎臓細胞、神経細胞、脳細胞、腸組織細胞、精巣細胞、卵巣細胞またはそれらの組み合わせを含む、請求項１５に記載の装置。
【請求項１７】
前記第３のオルガノイドが肺オルガノイドであり、前記装置が、精巣オルガノイドまたは卵巣オルガノイドを含有する第４のチャンバー、脳オルガノイドを含有する第５のチャンバー、および腸オルガノイドを含有する第６のチャンバーをさらに含む、請求項１５に記載の装置。
【請求項１８】
前記装置が接着性フィルムおよび／または両面テープを含む、請求項１に記載の装置。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】発明の名称
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【発明の名称】共通の培地を活用する、多臓器「生体機能チップ」装置
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００７】
本発明の一態様は、多組織生体機能チップ装置を対象とする。一部の実施形態では、装置は、互いと流体連絡した、少なくとも第１、第２、および第３のチャンバー；前記第１のチャンバー内の肝臓組織；前記第２のチャンバー内の心筋組織；前記第３のチャンバー内の肺組織；ならびに前記第１、第２、および第３のチャンバー内の、共通の水性増殖培地を含む。一部の実施形態では、装置は、互いと流体連絡した、少なくとも第１、第２、第３、第４、第５、および第６のチャンバー；前記第１のチャンバー内の肝臓組織、前記第２のチャンバー内の組織、前記第３のチャンバー内の肺組織、前記第４のチャンバー内の脳組織、前記第５のチャンバー内の結腸組織、前記第６のチャンバー内の精巣または卵巣組織；ならびに前記第１、第２、第３、第４、第５、および第６のチャンバー内の、共通の水性増殖培地を含む。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００８】
本発明のさらなる態様は、本発明の装置を使用する方法を対象とする。一部の実施形態では、方法は、（ａ）本発明の装置を用意するステップと；（ｂ）共通の水性増殖培地を、装置のチャンバーの全てを通して、少なくとも１、４、８、または１１日間にわたり循環させるステップとを含む。一部の実施形態では、方法は、試験化合物を、共通の水性増殖培地に添加するステップと；次いで、装置内に存在する、少なくとも１つの組織、または複数の組織における、試験化合物に対する薬理学的応答または毒性学的応答を検出するステップとを含む。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１１】
【図１Ａ】様々なバイオファブリケーション手法を使用する、典型的な６組織生体機能チップシステムのための、全体的デザインおよび実現戦略を示す図である。６組織モデルを維持するために構築された、モジュラー生体機能チップのハードウェアシステムについての例示および写真である。個々のマイクロ流体式マイクロリアクターユニットは、各オルガノイドまたは各組織モデルを格納し、中央流体ルーティングブレッドボードを介して接続されており、簡単な「プラグアンドプレイ」システムによる調製の初期設定を可能とする。
【図１Ｂ】様々なバイオファブリケーション法を使用する、典型的な６組織生体機能チップシステムのための、全体的デザインおよび実現戦略を示す図である。６組織モデルを維持するために構築された、モジュラー生体機能チップハードウェアシステムについての例示および写真である。個々のマイクロ流体式マイクロリアクターユニットは、各オルガノイドまたは各組織モデルを格納し、中央流体ルーティングブレッドボードを介して接続されており、簡単な「プラグアンドプレイ」システムによる調製の初期設定を可能とする。
【図１Ｃ】様々なバイオファブリケーション法を使用する、典型的な６組織生体機能チップシステムのための、全体的デザインおよび実現戦略を示す図である。システムのために、各組織型を、どのようにして調製するのかについての全般的な概観を示す図である。肝臓モジュール、心臓モジュール、および精巣モジュールを、特製のバイオインク中で、球形のオルガノイドをバイオプリンティングすることにより創出する結果として、マイクロリアクターデバイス内に設置された、３Ｄハイドロゲル構築物がもたらされることを示す図である。
【図１Ｄ】様々なバイオファブリケーション法を使用する、典型的な６組織生体機能チップシステムのための、全体的デザインおよび実現戦略を示す図である。システムのために、各組織型を、どのようにして調製するのかについての全般的な概観を示す図である。血管モジュールおよび肺モジュールが、細胞の層を、マイクロ流体デバイス内の多孔性膜上に創出することにより形成されることを示す図である。ＴＥＥＲ（経内皮［または上皮］電気抵抗）センサーの導入は、経時的に、組織障壁機能の完全性をモニタリングすることを可能とする。
【図１Ｅ】様々なバイオファブリケーション法を使用する、典型的な６組織生体機能チップシステムのための、全体的デザインおよび実現戦略を示す図である。システムのために、各組織型を、どのようにして調製するのかについての全般的な概観を示す図である。Ｉ型コラーゲン内の、結腸の平滑筋細胞および結腸の上皮細胞を、ポリマー鋳型内に封入することにより、結腸モジュールを創出することを示す図である。平滑筋細胞は、コラーゲンとアライメントし、オルガノイドを収縮させ、その後、オルガノイドは、ドーナツ様の形状を呈する。次いで、個々のオルガノイドを、マイクロ流体デバイス内に固定化するために、ヒアルロン酸ハイドロゲル内に封入する。
【図２Ａ】生体機能チップシステム内の、共通の培地条件下における、６つのオルガノイドの維持を示す図である。統合型システム内の、肝臓、心臓、結腸、肺、血管、および精巣の組織モデルについての、７日間の生存率を示す図である。緑は、カルセインＡＭで染色された生細胞であり、赤は、エチジウムホモ二量体で染色された死細胞である。
【図２Ｂ】生体機能チップシステム内の、共通の培地条件下における、６つのオルガノイドの維持を示す図である。統合型システム内の、肝臓、心臓、結腸、肺、血管、および精巣の組織モデルについての、１４日間の生存率を示す図である。緑は、カルセインＡＭで染色された生細胞であり、赤は、エチジウムホモ二量体で染色された死細胞である。
【図２Ｃ】生体機能チップシステム内の、共通の培地条件下における、６つのオルガノイドの維持を示す図である。溶液中のバイオマーカーが、システムが見かけ上の平衡状態に達していることを示す図である。アルブミンおよび尿素の定量化が、培地中のアルブミンおよび尿素の分泌は、経時的に比較的一貫しており、培地対照よりも有意に高度であることを示す図である。
【図２Ｄ】生体機能チップシステム内の、共通の培地条件下における、６つのオルガノイドの維持を示す図である。溶液中のバイオマーカーが、システムが見かけ上の平衡状態に達していることを示す図である。アルブミンおよび尿素の定量化が、培地中のアルブミンおよび尿素の分泌は、経時的に比較的一貫しており、培地対照よりも有意に高度であることを示す図である。
【図２Ｅ】生体機能チップシステム内の、共通の培地条件下における、６つのオルガノイドの維持を示す図である。溶液中のバイオマーカーが、システムが見かけ上の平衡状態に達していることを示す図である。細胞の溶解および毒性についての一般的マーカーであるＬＤＨが、培地対照のレベルに近いレベルを維持することから、細胞死が比較的少ないことを示す図である。
【図２Ｆ】生体機能チップシステム内の、共通の培地条件下における、６つのオルガノイドの維持を示す図である。溶液中のバイオマーカーが、システムが見かけ上の平衡状態に達していることを示す図である。細胞が死ぬと、溶解した心筋細胞により放出されるバイオマーカーであるクレアチンキナーゼが、比較的少ないままである（８日目の定量化におけるスパイク（その後、培地対照レベルに近い低濃度に復帰した）を除く）を示す図である。
【図２Ｇ】生体機能チップシステム内の、共通の培地条件下における、６つのオルガノイドの維持を示す図である。溶液中のバイオマーカーが、システムが見かけ上の平衡状態に達していることを示す図である。それぞれ、肺上皮および血管内皮から放出されるタンパク質である、ＩＬ−８およびプロスタサイクリンが、当初増大するが、経時的に、ベースラインレベルへと減少することから、肺構築物および血管構築物が、システム始動時には、ストレスを受けたが、経時的に、定常状態へと平衡化したことを示唆する図である。
【図２Ｈ】生体機能チップシステム内の、共通の培地条件下における、６つのオルガノイドの維持を示す図である。溶液中のバイオマーカーが、システムが見かけ上の平衡状態に達していることを示す図である。それぞれ、肺上皮および血管内皮から放出されるタンパク質である、ＩＬ−８およびプロスタサイクリンが、当初増大するが、経時的に、ベースラインレベルへと減少することから、肺構築物および血管構築物が、システム始動時には、ストレスを受けたが、経時的に、定常状態へと平衡化したことを示唆する図である。
【図３ａ】チップ上の血管系を示し、内皮マーカー発現、経内皮電気抵抗（ＴＥＥＲ）の測定に対する応答、および物質移動の変化を示す図である。内皮マーカー、ＣＤ３１についての免疫染色を示す図である。
【図３ｂ】チップ上の血管系を示し、内皮マーカー発現、経内皮電気抵抗（ＴＥＥＲ）の測定に対する応答、および物質移動の変化を示す図である。内皮マーカー、ｖＷＦについての免疫染色を示す図である。ヒスタミンの投与に対する、内皮の機能的な応答を示す図である。ヒスタミンは、内皮の破壊を引き起こす結果として、膜を隔てた抵抗の顕著な低下をもたらす。未使用の培地による洗浄は、抵抗の復帰を結果としてもたらす。
【図３ｃ】チップ上の血管系を示し、内皮マーカー発現、経内皮電気抵抗（ＴＥＥＲ）の測定に対する応答、および物質移動の変化を示す図である。内皮マーカー、ＶＥカドヘリンについての免疫染色を示す図である。
【図３ｄ】チップ上の血管系を示し、内皮マーカー発現、経内皮電気抵抗（ＴＥＥＲ）の測定に対する応答、および物質移動の変化を示す図である。血管モジュールの内皮についての、Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄ生存／細胞傷害作用染色を示す図である。緑は、カルセインＡＭで染色された生細胞であり、赤は、エチジウムホモ二量体で染色された死細胞である。
【図３ｅ】チップ上の血管系を示し、内皮マーカー発現、経内皮電気抵抗（ＴＥＥＲ）の測定に対する応答、および物質移動の変化を示す図である。ＴＥＥＲ測定システムの回路図である。
【図３ｆ】チップ上の血管系を示し、内皮マーカー発現、経内皮電気抵抗（ＴＥＥＲ）の測定に対する応答、および物質移動の変化を示す図である。ベースライン条件下では、内皮が、完全性を維持する結果として、単層を隔てて、比較的大きな抵抗をもたらすことを示す図である。損傷または何らかの刺激の下では、内皮は、不連続となる結果として、単層を隔てた抵抗の降下をもたらす。挿入画像は、ＴＥＥＲセンサーを伴う血管モジュールのものである。
【図３ｇ】チップ上の血管系を示し、内皮マーカー発現、経内皮電気抵抗（ＴＥＥＲ）の測定に対する応答、および物質移動の変化を示す図である。細胞を、半多孔性膜に播種した後、毎日のＴＥＥＲの測定が、培養中の経時的な、単層内の細胞充実度の増大を示す図である。統計学的有意性は、＊ｐ＜０．０５である。
【図３ｈ】チップ上の血管系を示し、内皮マーカー発現、経内皮電気抵抗（ＴＥＥＲ）の測定に対する応答、および物質移動の変化を示す図である。統計学的有意性は、＊ｐ＜０．０５である。
【図３ｉ】チップ上の血管系を示し、内皮マーカー発現、経内皮電気抵抗（ＴＥＥＲ）の測定に対する応答、および物質移動の変化を示す図である。肝臓オルガノイドが、内皮の下方の肝臓バイオインク中に位置する一方で、内皮層上の流動が保存される、チップ上の血管デバイスについての描示を示す図である。統計学的有意性を示す＊および＊＊は、それぞれ、表示の時点における、コンフルエント条件と、非コンフルエント条件との間の、ｐ＜０．０５およびｐ＜０．０１を描示する。＃は、コンフルエント実験群内では、時点３５、４０、および４５分における蛍光強度が、時点１０、１５、および２０より有意に大きい（ｐ＜０．０５）ことから、ヒスタミン投与の２０分後における、肯定的な色素移動の存在が示されることを表す。
【図３ｊ】チップ上の血管系を示し、内皮マーカー発現、経内皮電気抵抗（ＴＥＥＲ）の測定に対する応答、および物質移動の変化を示す図である。内皮（主に、青に見える）と、肝臓オルガノイド細胞（主に、赤に見える）との緊密な相互作用を示す、２つのマクロ共焦点３Ｄ再構築画像を示す図である。
【図３ｋ】チップ上の血管系を示し、内皮マーカー発現、経内皮電気抵抗（ＴＥＥＲ）の測定に対する応答、および物質移動の変化を示す図である。ヒスタミン投与の影響としての、内皮開通性ベースの、色素の除去および移動を示す図である。通常の培地条件下では、１５ｋＤａの、蛍光可溶性ゼラチン色素は、循環から離れ、下側チャンバー内に保持される。ヒスタミンを投与すると、色素は、内皮を通して、循環へと透過しうる。
【図３ｌ】チップ上の血管系を示し、内皮マーカー発現、経内皮電気抵抗（ＴＥＥＲ）の測定に対する応答、および物質移動の変化を示す図である。ヒスタミン投与の前および後に、モジュールから採取されたアリコートについての、蛍光強度の読み取りを示す図である。蛍光は、励起波長５８４ｎｍおよび発光波長６１２ｎｍを使用して読み取った。
【図４ａ】ＦＤＡによりリコールされた薬物に対するスクリーンに応答する、３Ｄの肝臓オルガノイドおよび心臓オルガノイドについてのＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ染色を示す図である。肝臓における、トログリタゾンおよびミベフラジルを示す図である。緑は、カルセインＡＭで染色された生細胞であり、赤は、エチジウムホモ二量体で染色された死細胞である。
【図４ｂ】ＦＤＡによりリコールされた薬物に対するスクリーンに応答する、３Ｄの肝臓オルガノイドおよび心臓オルガノイドについてのＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ染色を示す図である。心臓における、アステミゾール、ペルゴグリド、およびテロジリンを示す図である。緑は、カルセインＡＭで染色された生細胞であり、赤は、エチジウムホモ二量体で染色された死細胞である。
【図５ａ】ＦＤＡによりリコールされた薬物についてのスクリーンに応答するＡＴＰ活性についての、３Ｄの肝臓オルガノイドおよび心臓オルガノイド、２Ｄの肝細胞培養物および心筋細胞培養物、ならびに２ＤのＨｅｐＧ２細胞株培養物およびＣ２Ｃ１２細胞株培養物の間の比較を示す図である。トログリタゾンに応答する、肝臓オルガノイド培養物、２Ｄの初代ヒト肝細胞培養物、および２ＤのｈｅｐＧ２細胞株培養物のＡＴＰ活性を示す図である。群間の比較は、薬物を伴わない、ベースラインのＡＴＰ活性レベルに対して正規化した。統計学的有意性は：＊は、両方の２Ｄ培養物と対比した、３Ｄオルガノイドのｐ＜０．０５であり；＃は、３Ｄオルガノイドおよび２Ｄ細胞株の両方と対比した、２Ｄの肝細胞／心筋細胞のｐ＜０．０５であり；＄は、３Ｄオルガノイドおよび２Ｄの肝細胞／心筋細胞の両方と対比した、２Ｄ細胞株のｐ＜０．０５である。
【図５ｂ】ＦＤＡによりリコールされた薬物についてのスクリーンに応答するＡＴＰ活性についての、３Ｄの肝臓オルガノイドおよび心臓オルガノイド、２Ｄの肝細胞培養物および心筋細胞培養物、ならびに２ＤのＨｅｐＧ２細胞株培養物およびＣ２Ｃ１２細胞株培養物の間の比較を示す図である。ミベフラジルに応答する、肝臓オルガノイド培養物、２Ｄの初代ヒト肝細胞培養物、および２ＤのｈｅｐＧ２細胞株培養物のＡＴＰ活性を示す図である。群間の比較は、薬物を伴わない、ベースラインのＡＴＰ活性レベルに対して正規化した。統計学的有意性は：＊は、両方の２Ｄ培養物と対比した、３Ｄオルガノイドのｐ＜０．０５であり；＃は、３Ｄオルガノイドおよび２Ｄ細胞株の両方と対比した、２Ｄの肝細胞／心筋細胞のｐ＜０．０５であり；＄は、３Ｄオルガノイドおよび２Ｄの肝細胞／心筋細胞の両方と対比した、２Ｄ細胞株のｐ＜０．０５である。
【図５ｃ】ＦＤＡによりリコールされた薬物についてのスクリーンに応答するＡＴＰ活性についての、３Ｄの肝臓オルガノイドおよび心臓オルガノイド、２Ｄの肝細胞培養物および心筋細胞培養物、ならびに２ＤのＨｅｐＧ２細胞株培養物およびＣ２Ｃ１２細胞株培養物の間の比較を示す図である。ブロムフェナクに応答する、肝臓オルガノイド培養物、２Ｄの初代ヒト肝細胞培養物、および２ＤのｈｅｐＧ２細胞株培養物のＡＴＰ活性を示す図である。群間の比較は、薬物を伴わない、ベースラインのＡＴＰ活性レベルに対して正規化した。統計学的有意性は：＊は、両方の２Ｄ培養物と対比した、３Ｄオルガノイドのｐ＜０．０５であり；＃は、３Ｄオルガノイドおよび２Ｄ細胞株の両方と対比した、２Ｄの肝細胞／心筋細胞のｐ＜０．０５であり；＄は、３Ｄオルガノイドおよび２Ｄの肝細胞／心筋細胞の両方と対比した、２Ｄ細胞株のｐ＜０．０５である。
【図５ｄ】ＦＤＡによりリコールされた薬物についてのスクリーンに応答するＡＴＰ活性についての、３Ｄの肝臓オルガノイドおよび心臓オルガノイド、２Ｄの肝細胞培養物および心筋細胞培養物、ならびに２ＤのＨｅｐＧ２細胞株培養物およびＣ２Ｃ１２細胞株培養物の間の比較を示す図である。チエニル酸に応答する、肝臓オルガノイド培養物、２Ｄの初代ヒト肝細胞培養物、および２ＤのｈｅｐＧ２細胞株培養物のＡＴＰ活性を示す図である。群間の比較は、薬物を伴わない、ベースラインのＡＴＰ活性レベルに対して正規化した。統計学的有意性は：＊は、両方の２Ｄ培養物と対比した、３Ｄオルガノイドのｐ＜０．０５であり；＃は、３Ｄオルガノイドおよび２Ｄ細胞株の両方と対比した、２Ｄの肝細胞／心筋細胞のｐ＜０．０５であり；＄は、３Ｄオルガノイドおよび２Ｄの肝細胞／心筋細胞の両方と対比した、２Ｄ細胞株のｐ＜０．０５である。
【図５ｅ】ＦＤＡによりリコールされた薬物についてのスクリーンに応答するＡＴＰ活性についての、３Ｄの肝臓オルガノイドおよび心臓オルガノイド、２Ｄの肝細胞培養物および心筋細胞培養物、ならびに２ＤのＨｅｐＧ２細胞株培養物およびＣ２Ｃ１２細胞株培養物の間の比較を示す図である。アステミゾールに応答する、心臓オルガノイド培養物、２ＤのｉＰＳ由来心筋細胞培養物、および２ＤのＣ２Ｃ１２細胞株培養物のＡＴＰ活性を示す図である。群間の比較は、薬物を伴わない、ベースラインのＡＴＰ活性レベルに対して正規化した。統計学的有意性は：＊は、両方の２Ｄ培養物と対比した、３Ｄオルガノイドのｐ＜０．０５であり；＃は、３Ｄオルガノイドおよび２Ｄ細胞株の両方と対比した、２Ｄの肝細胞／心筋細胞のｐ＜０．０５であり；＄は、３Ｄオルガノイドおよび２Ｄの肝細胞／心筋細胞の両方と対比した、２Ｄ細胞株のｐ＜０．０５である。
【図５ｆ】ＦＤＡによりリコールされた薬物についてのスクリーンに応答するＡＴＰ活性についての、３Ｄの肝臓オルガノイドおよび心臓オルガノイド、２Ｄの肝細胞培養物および心筋細胞培養物、ならびに２ＤのＨｅｐＧ２細胞株培養物およびＣ２Ｃ１２細胞株培養物の間の比較を示す図である。ペルゴグリドに応答する、心臓オルガノイド培養物、２ＤのｉＰＳ由来心筋細胞培養物、および２ＤのＣ２Ｃ１２細胞株培養物のＡＴＰ活性を示す図である。群間の比較は、薬物を伴わない、ベースラインのＡＴＰ活性レベルに対して正規化した。統計学的有意性は：＊は、両方の２Ｄ培養物と対比した、３Ｄオルガノイドのｐ＜０．０５であり；＃は、３Ｄオルガノイドおよび２Ｄ細胞株の両方と対比した、２Ｄの肝細胞／心筋細胞のｐ＜０．０５であり；＄は、３Ｄオルガノイドおよび２Ｄの肝細胞／心筋細胞の両方と対比した、２Ｄ細胞株のｐ＜０．０５である。
【図５ｇ】ＦＤＡによりリコールされた薬物についてのスクリーンに応答するＡＴＰ活性についての、３Ｄの肝臓オルガノイドおよび心臓オルガノイド、２Ｄの肝細胞培養物および心筋細胞培養物、ならびに２ＤのＨｅｐＧ２細胞株培養物およびＣ２Ｃ１２細胞株培養物の間の比較を示す図である。テロジリンに応答する、心臓オルガノイド培養物、２ＤのｉＰＳ由来心筋細胞培養物、および２ＤのＣ２Ｃ１２細胞株培養物のＡＴＰ活性を示す図である。群間の比較は、薬物を伴わない、ベースラインのＡＴＰ活性レベルに対して正規化した。統計学的有意性は：＊は、両方の２Ｄ培養物と対比した、３Ｄオルガノイドのｐ＜０．０５であり；＃は、３Ｄオルガノイドおよび２Ｄ細胞株の両方と対比した、２Ｄの肝細胞／心筋細胞のｐ＜０．０５であり；＄は、３Ｄオルガノイドおよび２Ｄの肝細胞／心筋細胞の両方と対比した、２Ｄ細胞株のｐ＜０．０５である。
【図５ｈ】ＦＤＡによりリコールされた薬物についてのスクリーンに応答するＡＴＰ活性についての、３Ｄの肝臓オルガノイドおよび心臓オルガノイド、２Ｄの肝細胞培養物および心筋細胞培養物、ならびに２ＤのＨｅｐＧ２細胞株培養物およびＣ２Ｃ１２細胞株培養物の間の比較を示す図である。ロフェコキシブに応答する、心臓オルガノイド培養物、２ＤのｉＰＳ由来心筋細胞培養物、および２ＤのＣ２Ｃ１２細胞株培養物のＡＴＰ活性を示す図である。群間の比較は、薬物を伴わない、ベースラインのＡＴＰ活性レベルに対して正規化した。統計学的有意性は：＊は、両方の２Ｄ培養物と対比した、３Ｄオルガノイドのｐ＜０．０５であり；＃は、３Ｄオルガノイドおよび２Ｄ細胞株の両方と対比した、２Ｄの肝細胞／心筋細胞のｐ＜０．０５であり；＄は、３Ｄオルガノイドおよび２Ｄの肝細胞／心筋細胞の両方と対比した、２Ｄ細胞株のｐ＜０．０５である。
【図５ｉ】ＦＤＡによりリコールされた薬物についてのスクリーンに応答するＡＴＰ活性についての、３Ｄの肝臓オルガノイドおよび心臓オルガノイド、２Ｄの肝細胞培養物および心筋細胞培養物、ならびに２ＤのＨｅｐＧ２細胞株培養物およびＣ２Ｃ１２細胞株培養物の間の比較を示す図である。バルデコキシブに応答する、心臓オルガノイド培養物、２ＤのｉＰＳ由来心筋細胞培養物、および２ＤのＣ２Ｃ１２細胞株培養物のＡＴＰ活性を示す図である。群間の比較は、薬物を伴わない、ベースラインのＡＴＰ活性レベルに対して正規化した。統計学的有意性は：＊は、両方の２Ｄ培養物と対比した、３Ｄオルガノイドのｐ＜０．０５であり；＃は、３Ｄオルガノイドおよび２Ｄ細胞株の両方と対比した、２Ｄの肝細胞／心筋細胞のｐ＜０．０５であり；＄は、３Ｄオルガノイドおよび２Ｄの肝細胞／心筋細胞の両方と対比した、２Ｄ細胞株のｐ＜０．０５である。
【図６ａ】マルチオルガノイドの相互作用を示し、肝臓モジュールと心臓モジュールとを組み合わせる結果として、薬物に対して、統合された応答が可能な生物学的システムがもたらされることを示す図である。ＥＣＨＯプラットフォーム内の培養時における、心臓オルガノイドについてのリアルタイムの拍動データを捕捉するのに使用された、オンチップのカメラシステムについての描示である。
【図６ｂ】マルチオルガノイドの相互作用を示し、肝臓モジュールと心臓モジュールとを組み合わせる結果として、薬物に対して、統合された応答が可能な生物学的システムがもたらされることを示す図である。マイクロ流体システム内の心臓オルガノイドの拍動についてのビデオによるスクリーン捕捉を示す図である。
【図６ｃ】マルチオルガノイドの相互作用を示し、肝臓モジュールと心臓モジュールとを組み合わせる結果として、薬物に対して、統合された応答が可能な生物学的システムがもたらされることを示す図である。閾値を超えたピクセルの動きのスクリーン捕捉による、心臓オルガノイドの拍動の転換（カスタムで書かれたＭａｔＬａｂコードにより生成された）が、拍動数の定量化を可能とすることを示す図である。
【図６ｄ】マルチオルガノイドの相互作用を示し、肝臓モジュールと心臓モジュールとを組み合わせる結果として、薬物に対して、統合された応答が可能な生物学的システムがもたらされることを示す図である。肝臓オルガノイドの組込みが、０．１μＭのプロプラノロールおよび０．５μＭのエピネフリンの両方に対する、心臓オルガノイドの応答の変更を結果としてもたらすことを示す図である。
【図６ｅ】マルチオルガノイドの相互作用を示し、肝臓モジュールと心臓モジュールとを組み合わせる結果として、薬物に対して、統合された応答が可能な生物学的システムがもたらされることを示す図である。肝臓の代謝活性の、下流の心拍数に対する影響を示す図である。０．５μＭのエピネフリンにより、ＢＰＭ値は、ベースラインから増大するが、エピネフリンによる増大は、０．１μＭのプロプラノロールにより遮断される。肝臓オルガノイドが存在し、０．１μＭのプロプラノロールを、代謝的に不活化させることが可能な場合、０．１μＭのエピネフリンで、ＢＰＭ値の増大を誘導することが可能である。興味深いことに、２Ｄで培養された肝細胞で、肝臓オルガノイドを代用すると、この影響は、観察されないことから、２Ｄ培養物中では、肝細胞による薬物代謝が、大幅に低減されることが指し示される。統計学的有意性は、＊ｐ＜０．０５である。
【図６ｆ】マルチオルガノイドの相互作用を示し、肝臓モジュールと心臓モジュールとを組み合わせる結果として、薬物に対して、統合された応答が可能な生物学的システムがもたらされることを示す図である。パネルｅ）で提示された値に対応する、心臓オルガノイドの拍動ピークについてのプロットを示す図である。
【図６ｇ】マルチオルガノイドの相互作用を示し、肝臓モジュールと心臓モジュールとを組み合わせる結果として、薬物に対して、統合された応答が可能な生物学的システムがもたらされることを示す図である。パネルｅ）で提示された値に対応する、心臓オルガノイドの拍動ピークについてのプロットを示す図である。
【図６ｈ】マルチオルガノイドの相互作用を示し、肝臓モジュールと心臓モジュールとを組み合わせる結果として、薬物に対して、統合された応答が可能な生物学的システムがもたらされることを示す図である。パネルｅ）で提示された値に対応する、心臓オルガノイドの拍動ピークについてのプロットを示す図である。
【図６ｉ】マルチオルガノイドの相互作用を示し、肝臓モジュールと心臓モジュールとを組み合わせる結果として、薬物に対して、統合された応答が可能な生物学的システムがもたらされることを示す図である。パネルｅ）で提示された値に対応する、心臓オルガノイドの拍動ピークについてのプロットを示す図である。
【図７ａ】流体システム上における、ハイドロゲルバイオインク戦略によるバイオプリンティング、流体システムの概観、およびさらなる表現型評価を示す図である。肝臓バイオインクの形成および実現を示す図である。アクリレートベースの架橋剤（架橋剤１）、アルキンベースの架橋剤（架橋剤２）、チオール化ＨＡ、チオール化ゼラチン、ならびに非修飾ヒアルロン酸（ＨＡ）およびゼラチンから構成される、プリンティング可能なバイオインクの調合戦略を示す図である。
【図７ｂ】流体システム上における、ハイドロゲルバイオインク戦略によるバイオプリンティング、流体システムの概観、およびさらなる表現型評価を示す図である。肝臓バイオインクの形成および実現を示す図である。バイオプリンティング可能なハイドロゲルバイオインクの実現を示す図である。バイオインク調合物は、調製されると、チオール−アクリレート結合を介して、自発的に架橋する結果として、軟質で、射出可能な材料をもたらす。バイオプリンティングを実施する。最後に、バイオプリンティングされた構造を融合させ、安定化させ、目標の硬さとする。
【図７ｃ】流体システム上における、ハイドロゲルバイオインク戦略によるバイオプリンティング、流体システムの概観、およびさらなる表現型評価を示す図である。心臓バイオインクの形成および実現を示す図である。
【図７ｄ】流体システム上における、ハイドロゲルバイオインク戦略によるバイオプリンティング、流体システムの概観、およびさらなる表現型評価を示す図である。作動的な３つのチップ上のオルガノイドによる流体システムを示す図である。３つの流体回路が、並列回路用マイクロ流体ポンプ、培地リザーバー、およびバブルトラップ（図示しない）である、３つのオルガノイドデバイスを支援する。
【図８ａ】肝臓オルガノイドが、肝臓特異的マーカーを呈示し、長期にわたり、安定および生存を維持することを示す図である。平均オルガノイド直径が、２８日間にわたり、一定を維持することを示す図である。
【図８ｂ】肝臓オルガノイドが、肝臓特異的マーカーを呈示し、長期にわたり、安定および生存を維持することを示す図である。ＡＴＰアーゼの発光読み取りにより決定される通り、肝臓オルガノイドが、２８日間にわたり、代謝的な活性を維持することを示す図である。
【図８ｃ】肝臓オルガノイドが、肝臓特異的マーカーを呈示し、長期にわたり、安定および生存を維持することを示す図である。ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ染色（１４日の時点で示される）が、オルガノイド内の高細胞生存率を示す図である。緑は、カルセインＡＭで染色された生細胞であり、赤は、エチジウムホモ二量体で染色された死細胞であり、直径は、２６１μｍである。
【図８ｄ】肝臓オルガノイドが、肝臓特異的マーカーを呈示し、長期にわたり、安定および生存を維持することを示す図である。組織学的染色および免疫組織化学的染色が、オルガノイドの構造および構成を描示する図である。Ｈ＆Ｅ染色が、全オルガノイド形状を示す図である。
【図８ｅ】肝臓オルガノイドが、肝臓特異的マーカーを呈示し、長期にわたり、安定および生存を維持することを示す図である。組織学的染色および免疫組織化学的染色が、オルガノイドの構造および構成を描示する図である。初代ヒト肝細胞が、アルブミンの発現により同定されることを示す図である。
【図８ｆ】肝臓オルガノイドが、肝臓特異的マーカーを呈示し、長期にわたり、安定および生存を維持することを示す図である。組織学的染色および免疫組織化学的染色が、オルガノイドの構造および構成を描示する図である。初代ヒト肝細胞が、細胞膜周囲のＥカドヘリンの発現により示される、上皮構成を呈示することを示す図である。
【図８ｇ】肝臓オルガノイドが、肝臓特異的マーカーを呈示し、長期にわたり、安定および生存を維持することを示す図である。組織学的染色および免疫組織化学的染色が、オルガノイドの構造および構成を描示する図である。初代ヒト肝細胞がまた、コネキシン３２も発現させることを示す図である。
【図８ｈ】肝臓オルガノイドが、肝臓特異的マーカーを呈示し、長期にわたり、安定および生存を維持することを示す図である。組織学的染色および免疫組織化学的染色が、オルガノイドの構造および構成を描示する図である。初代ヒト肝細胞がまた、チトクロームＰ４５０レダクターゼも発現させることを示す図である。
【図８ｉ】肝臓オルガノイドが、肝臓特異的マーカーを呈示し、長期にわたり、安定および生存を維持することを示す図である。組織学的染色および免疫組織化学的染色が、オルガノイドの構造および構成を描示する図である。肝星細胞およびクッパー細胞が、ＧＦＡＰにより同定されることを示す図である。紫は、ヘマトキシリンで染色された核であり、ピンクは、細胞質であり、茶は、表示の染料であり、スケールバーは、１００μｍである。
【図８ｊ】肝臓オルガノイドが、肝臓特異的マーカーを呈示し、長期にわたり、安定および生存を維持することを示す図である。組織学的染色および免疫組織化学的染色が、オルガノイドの構造および構成を描示する図である。肝星細胞およびクッパー細胞が、ＣＤ６８により同定されることを示す図である。紫は、ヘマトキシリンで染色された核であり、ピンクは、細胞質であり、茶は、表示の染料であり、スケールバーは、１００μｍである。
【図９ａ】２Ｄ肝細胞培養物と比較して、肝臓オルガノイドが、ベースラインの肝機能および代謝を劇的に増大させて保持することを示す図である。正規化された尿素の、培地への分泌であって、ＥＬＩＳＡおよび比色アッセイにより解析された分泌が、２Ｄ肝細胞サンドイッチ培養物と比較して、３Ｄオルガノイドフォーマットにおける、機能的産生の劇的な増大を示す図である。
【図９ｂ】２Ｄ肝細胞培養物と比較して、肝臓オルガノイドが、ベースラインの肝機能および代謝を劇的に増大させて保持することを示す図である。正規化されたアルブミンの、培地への分泌であって、ＥＬＩＳＡおよび比色アッセイにより解析された分泌が、２Ｄ肝細胞サンドイッチ培養物と比較して、３Ｄオルガノイドフォーマットにおける、機能的産生の劇的な増大を示す図である。
【図９ｃ】主に、ＣＹＰ２Ｃ１９およびＣＹＰ３Ａ４によるジアゼパム代謝物である、テマゼパムの定量化を示す図である。統計学的有意性は、各時点における、３Ｄと２Ｄとの比較について、＊ｐ＜０．０５である。
【図９ｄ】主に、ＣＹＰ２Ｃ１９およびＣＹＰ３Ａ４によるジアゼパム代謝物である、ノルダゼパムの定量化を示す図である。統計学的有意性は、各時点における、３Ｄと２Ｄとの間の比較について、＊ｐ＜０．０５である。
【図９ｅ】主に、ＣＹＰ２Ｃ１９およびＣＹＰ３Ａ４によるジアゼパム代謝物である、オキサゼパムの定量化を示す図である。統計学的有意性は、各時点における、３Ｄと２Ｄとの比較について、＊ｐ＜０．０５である。
【図１０】肝臓オルガノイドにおける、チトクロームｐ４５０アイソフォームによる、ジアゼパムの、テマゼパム、ノルジアゼパム、およびオキサゼパムへの代謝を示す図である。
【図１１ａ−ｈ】心臓オルガノイドが、心臓特異的マーカーを呈示し、経時的に、安定および生存を維持することを示す図である。心臓オルガノイドを、パネルａ）ＶＥＧＦ、パネルｂ）アクチニン、パネルｃ）低レベルのミオシン制御軽鎖７（ＭＹＬ７）（赤は、表示の染料であり、青は、ＤＡＰＩである）、パネルｄ）心臓トロポニン−Ｔ（茶）について、ヘマトキシリン対比染色で、パネルｅ）Ｈ＆Ｅで、パネルｆ〜ｈ）Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄ生存／細胞傷害作用染料で、培養のパネルｆ）１日目、パネルｇ）２８日目、パネルｈ）３５日目において染色した。緑は、カルセインＡＭで染色された生細胞であり、赤は、エチジウムホモ二量体で染色された死細胞核である。スケールバーは、１５０μｍである。
【図１２ａ】免疫組織化学による、オンチップ肝臓オルガノイドの生存率および表現型についての解析を示す図である。流体システム上で初代培養された肝臓オルガノイドが、最長で２８日間にわたり、生存を維持することを示す図である。青染色は、ＤＡＰＩで染色された核を指し示す。
【図１２ｂ】免疫組織化学による、オンチップ肝臓オルガノイドの生存率および表現型についての解析を示す図である。流体システム上で初代培養された肝臓オルガノイドが、最長で２８日間にわたり、生存を維持することを示す図である。青染色は、ＤＡＰＩで染色された核を指し示す。
【図１２ｃ】免疫組織化学による、オンチップ肝臓オルガノイドの生存率および表現型についての解析を示す図である。流体システム上で初代培養された肝臓オルガノイドが、最長で２８日間にわたり、生存を維持することを示す図である。青染色は、ＤＡＰＩで染色された核を指し示す。
【図１２ｄ】免疫組織化学による、オンチップ肝臓オルガノイドの生存率および表現型についての解析を示す図である。流体システム上で初代培養された肝臓オルガノイドが、ＣＹＰ３Ａ７（緑）を発現させることを示す図である。青染色は、ＤＡＰＩで染色された核を指し示す。
【図１２ｅ】免疫組織化学による、オンチップ肝臓オルガノイドの生存率および表現型についての解析を示す図である。流体システム上で初代培養された肝臓オルガノイドが、アルブミン（緑）を発現させることを示す図である。青染色は、ＤＡＰＩで染色された核を指し示す。
【図１２ｆ】免疫組織化学による、オンチップ肝臓オルガノイドの生存率および表現型についての解析を示す図である。流体システム上で初代培養された肝臓オルガノイドが、Ｅ−カドヘリン（赤）およびＤＰＰ−４（緑）を発現させることを示す図である。青染色は、ＤＡＰＩで染色された核を指し示す。
【図１２ｇ】免疫組織化学による、オンチップ肝臓オルガノイドの生存率および表現型についての解析を示す図である。流体システム上で初代培養された肝臓オルガノイドが、ＺＯ−１（緑）を発現させることを示す図である。青染色は、ＤＡＰＩで染色された核を指し示す。
【図１２ｈ】免疫組織化学による、オンチップ肝臓オルガノイドの生存率および表現型についての解析を示す図である。流体システム上で初代培養された肝臓オルガノイドが、Ｏｓｔ−α（緑）を発現させることを示す図である。青染色は、ＤＡＰＩで染色された核を指し示す。
【図１２ｉ】免疫組織化学による、オンチップ肝臓オルガノイドの生存率および表現型についての解析を示す図である。流体システム上で初代培養された肝臓オルガノイドが、β−カテニン（緑）を発現させることを示す図である。青染色は、ＤＡＰＩで染色された核を指し示す。
【図１３ａ】チップ上の肝臓を示し、アセトアミノフェン、および対抗措置であるＮ−アセチル−Ｌ−システインに対するオンチップ応答を示す図である。肝臓オルガノイドが、アセトアミノフェン毒性に応答し、ＮＡＣによりレスキューされることを示す図である。１４日目に、ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ染色により決定された生存である。オルガノイドを、０ｍＭのＡＰＡＰ対照に曝露した。緑は、カルセインＡＭで染色された生細胞であり、赤は、エチジウムホモ二量体で染色された死細胞である。
【図１３ｂ】チップ上の肝臓を示し、アセトアミノフェン、および対抗措置であるＮ−アセチル−Ｌ−システインに対するオンチップ応答を示す図である。肝臓オルガノイドが、アセトアミノフェン毒性に応答し、ＮＡＣによりレスキューされることを示す図である。１４日目に、ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ染色により決定された生存である。オルガノイドを、１ｍＭのＡＰＡＰに曝露した。緑は、カルセインＡＭで染色された生細胞であり、赤は、エチジウムホモ二量体で染色された死細胞である。
【図１３ｃ】チップ上の肝臓を示し、アセトアミノフェン、および対抗措置であるＮ−アセチル−Ｌ−システインに対するオンチップ応答を示す図である。肝臓オルガノイドが、アセトアミノフェン毒性に応答し、ＮＡＣによりレスキューされることを示す図である。１４日目に、ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ染色により決定された生存である。オルガノイドを、１０ｍＭのＡＰＡＰに曝露した。緑は、カルセインＡＭで染色された生細胞であり、赤は、エチジウムホモ二量体で染色された死細胞である。
【図１３ｄ】チップ上の肝臓を示し、アセトアミノフェン、および対抗措置であるＮ−アセチル−Ｌ−システインに対するオンチップ応答を示す図である。肝臓オルガノイドが、アセトアミノフェン毒性に応答し、ＮＡＣによりレスキューされることを示す図である。１４日目に、ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ染色により決定された生存である。オルガノイドを、２０ｍＭのＮ−アセチル−Ｌ−システインを伴う、１０ｍＭのＡＰＡＰに曝露した。緑は、カルセインＡＭで染色された生細胞であり、赤は、エチジウムホモ二量体で染色された死細胞である。
【図１３ｅ】チップ上の肝臓を示し、アセトアミノフェン、および対抗措置であるＮ−アセチル−Ｌ−システインに対するオンチップ応答を示す図である。培地アリコートについての解析は、ＡＰＡＰが、機能の喪失および細胞死を誘導するのに対し、ＮＡＣは、これらの負の影響を緩和する能力を有することを指し示す図である。ヒトアルブミンの定量化を示す図である。アルブミンおよび尿素の産生量が、ＡＰＡＰ処理による負の影響を受けるのに対し、ＮＡＣは、この分泌量の低減を減少させる。統計学的有意性は：＊は、対照とＡＰＡＰとの間でｐ＜０．０５であり；＃は、ＡＰＡＰ＋ＮＡＣとＡＰＡＰとの間でｐ＜０．０５である。
【図１３ｆ】チップ上の肝臓を示し、アセトアミノフェン、および対抗措置であるＮ−アセチル−Ｌ−システインに対するオンチップ応答を示す図である。培地アリコートについての解析は、ＡＰＡＰが、機能の喪失および細胞死を誘導するのに対し、ＮＡＣは、これらの負の影響を緩和する能力を有することを指し示す図である。尿素の定量化を示す図である。アルブミンおよび尿素の産生量が、ＡＰＡＰ処理による負の影響を受けるのに対し、ＮＡＣは、この分泌量の低減を減少させる。統計学的有意性は：＊は、対照とＡＰＡＰとの間でｐ＜０．０５であり；＃は、ＡＰＡＰ＋ＮＡＣとＡＰＡＰとの間でｐ＜０．０５である。
【図１３ｇ】チップ上の肝臓を示し、アセトアミノフェン、および対抗措置であるＮ−アセチル−Ｌ−システインに対するオンチップ応答を示す図である。培地アリコートについての解析は、ＡＰＡＰが、機能の喪失および細胞死を誘導するのに対し、ＮＡＣは、これらの負の影響を緩和する能力を有することを指し示す図である。乳酸デヒドロゲナーゼの定量化を示す図である。対照群およびＡＰＡＰ＋ＮＡＣ群では、ＬＤＨおよびアルファ−ＧＳＴが、低いことから、細胞が機能的であることが裏付けられるのに対し、ＡＰＡＰは、レベルの上昇を誘導することから、アポトーシス、ならびにＬＤＨおよびアルファ−ＧＳＴの、培地への放出が指し示される。統計学的有意性は：＊は、対照とＡＰＡＰとの間でｐ＜０．０５であり；＃は、ＡＰＡＰ＋ＮＡＣとＡＰＡＰとの間でｐ＜０．０５である。
【図１３ｈ】チップ上の肝臓を示し、アセトアミノフェン、および対抗措置であるＮ−アセチル−Ｌ−システインに対するオンチップ応答を示す図である。培地アリコートについての解析は、ＡＰＡＰが、機能の喪失および細胞死を誘導するのに対し、ＮＡＣは、これらの負の影響を緩和する能力を有することを指し示す図である。アルファ−ＧＳＴの定量化を示す図である。対照群およびＡＰＡＰ＋ＮＡＣ群では、ＬＤＨおよびアルファ−ＧＳＴが、低いことから、細胞が機能的であることが裏付けられるのに対し、ＡＰＡＰは、レベルの上昇を誘導することから、アポトーシス、ならびにＬＤＨおよびアルファ−ＧＳＴの、培地への放出が指し示される。統計学的有意性は：＊は、対照とＡＰＡＰとの間でｐ＜０．０５であり；＃は、ＡＰＡＰ＋ＮＡＣとＡＰＡＰとの間でｐ＜０．０５である。
【図１４ａ】心臓オルガノイドが、薬物処置への応答として、拍動数をモジュレートすることを示す図である。ベースライン条件下の拍出量であって、拍動数を決定する拍出量を示す図である。
【図１４ｂ】心臓オルガノイドが、薬物処置への応答として、拍動数をモジュレートすることを示す図である。イソプレテレノールへの曝露から生じる、心臓オルガノイドの拍動数の変化を示す図である。
【図１４ｃ】心臓オルガノイドが、薬物処置への応答として、拍動数をモジュレートすることを示す図である。キニジンへの曝露から生じる、心臓オルガノイドの拍動数の変化を示す図である。
【図１４ｄ】心臓オルガノイドが、薬物処置への応答として、拍動数をモジュレートすることを示す図である。エピネフリンおよびプロプラノロールに対する、心臓オルガノイドの応答を示す図である。心臓オルガノイドは、エピネフリン濃度の増大と共に、１〜２倍の範囲で、拍動数の用量依存的増大をもたらした後、５μＭおよびこれを超えるエピネフリンにより、プラトーに達する。プロプラノロール濃度を、０〜２０μＭの範囲とする、初期のインキュベーションは、５μＭのエピネフリンの投与後に、拍動数の用量依存的減少を結果としてもたらす。
【図１４ｅ】心臓オルガノイドが、薬物処置への応答として、拍動数をモジュレートすることを示す図である。エピネフリンおよびプロプラノロールに対する、心臓オルガノイドの応答を示す図である。心臓オルガノイドは、エピネフリン濃度の増大と共に、１〜２倍の範囲で、拍動数の用量依存的増大をもたらした後、５μＭおよびこれを超えるエピネフリンにより、プラトーに達する。プロプラノロール濃度を、０〜２０μＭの範囲とする、初期のインキュベーションは、５μＭのエピネフリンの投与後に、拍動数の用量依存的減少を結果としてもたらす。
【図１５Ａ】疾患モデル化、薬物開発、および試験のための、３Ｄ肺オルガノイドの作出を示す図である。３Ｄ肺オルガノイドが、気道上皮細胞、気道間質細胞、および肺微小血管内皮細胞から構成されることを示す図である。層状化された３Ｄオルガノイドは、天然の気道組織内で見られる細胞構成と同様の細胞構成であって、気液界面に曝露されて、極性化された上皮表面と、組織構造をもたらす間質成分と、液体培地に曝露されて、薄層の血管障壁を形成する内皮とを伴う細胞構成を迅速にもたらす。層状化されたオルガノイドは、経上皮抵抗および細胞生存率を維持しながら、培養物中で、４週間を超えて維持することができる。オルガノイド形成の層状化法の利点は、通常の気道構造を表す、組織化された組織を、迅速に確立する能力である。
【図１５Ｂ】疾患モデル化、薬物開発、および試験のための、３Ｄ肺オルガノイドの作出を示す図である。経上皮電気抵抗のモニタリングを示す図である。
【図１５Ｃ】疾患モデル化、薬物開発、および試験のための、３Ｄ肺オルガノイドの作出を示す図である。３Ｄ肺オルガノイドが、ＣＦＴＲ活性化医薬またはＣＦＴＲ阻害性医薬に対する生理学的応答を裏付けることを示す図である。
【図１５Ｄ】疾患モデル化、薬物開発、および試験のための、３Ｄ肺オルガノイドの作出を示す図である。３Ｄ肺オルガノイドが、ＣＦＴＲ活性化医薬またはＣＦＴＲ阻害性医薬に対する生理学的応答を裏付けることを示す図である。
【図１５Ｅ】疾患モデル化、薬物開発、および試験のための、３Ｄ肺オルガノイドの作出を示す図である。短絡電流（Ｉｓｃ）およびＴＥＥＲを介して、ＣＦＴＲイオンチャネル活性について評価することにより裏付けられるヒスタミンを示す図である。
【図１６Ａ】３Ｄ精巣オルガノイドの作出および薬物毒性試験を示す図である。Ｐｅｒｆｅｃｔａ３Ｄ（登録商標）９６−Ｗｅｌｌ  Ｈａｎｇｉｎｇ  Ｄｒｏｐ  Ｐｌａｔｅを示す図である。これらの培養物プレートは、３Ｄ培養物の形成、およびその後の細胞構築物の評価のための、多用途のハイスループットシステムをもたらす。
【図１６Ｂ】３Ｄ精巣オルガノイドの作出および薬物毒性試験を示す図である。９６ウェル超低接着培養プレートのウェル内の精巣オルガノイドの視覚化を示す図である。挿入写真は、懸滴培養物中で、４８時間後に、完全に形成された精巣オルガノイドの位相差画像を表す。
【図１６Ｃ】３Ｄ精巣オルガノイドの作出および薬物毒性試験を示す図である。内部形状の特徴付けのために、ヘマトキシリンおよびエオシンで染色された、ヒト精巣オルガノイドを示す図である。
【図１６Ｄ】３Ｄ精巣オルガノイドの作出および薬物毒性試験を示す図である。ヒト精巣細胞に対する薬物の影響を示す図である。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙアッセイを介して、ＡＴＰ含量を決定する前に、４８時間にわたり、薬物に曝露された細胞（上パネルにおける２Ｄ培養物対下パネルにおける３Ｄオルガノイド）を示す図である。用量応答曲線を作成した（ｎ＝３）。平均値±ＳＤとして提示されたデータである。
【図１６Ｅ】３Ｄ精巣オルガノイドの作出および薬物毒性試験を示す図である。急性薬物処理後の、精巣オルガノイド遺伝子の発現変化を示す図である。精原（ＰＬＺＦ（ＺＴＢＴ１６））、ライディッヒ（ＣＹＰ１１Ａ１、ＳＴＡＲ）、およびセルトリ（ＳＯＸ９）の細胞マーカーの倍数変化（ＲｅｌＱ、２−ΔΔＣＴ）を測定して、３Ｄで培養された精巣オルガノイドを、対応する、２Ｄの精巣細胞培養物対照と、４つの、臨床的に関連性がある化学療法薬である、Ａ．ブスルファン、Ｂ．シスプラチン、Ｃ．ドキソルビシン、Ｄ．エトポシドについて比較した（ｎ＝３）。平均値±ＳＤとして提示されたデータである。有意性は、＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１である。
【図１７Ａ−Ｆ】結腸構築物の形状、コラーゲン線維のアライメント、および上皮腺房の形成を示す図である。パネルＡ）結腸構築物の断面形状であって、平滑筋細胞が、一方の側に凝集し、内側への収縮を引き起こす、断面形状を示す図である。パネルＢ）結腸構築物についてのピクロシリウスレッド染色であって、オレンジ／赤シグナルが、高度に束状化した線維を指し示し、緑シグナルが、網状線維を指し示す、ピクロシリウスレッド染色を示す図である。パネルＣ）コラーゲン線維束の拡大画像を示す図である。パネルＤ）結腸構築物内の上皮腺房の形成を描示し、発生した腺房が、平滑筋リモデリング（図示しない）を伴わずには形成されないことを描示する図である。パネルＥおよびＦ）腺房の上皮特異的染色が、結腸上皮内で典型的に見出される、腺房細胞の間の細胞間相互作用を裏付けることを示す図である。
【図１８】ロフェコキシブおよびバルデコキシブによる薬物スクリーンに応答する心臓オルガノイドについての生存率評価を示す図である。緑は、カルセインＡＭで染色された生細胞であり、赤は、エチジウムホモ二量体で染色された死細胞である。
【図１９ａ】アステミゾールに応答する、心臓オルガノイドの拍動動態についての評価を示す図である。
【図１９ｂ】ペルゴグリドに応答する、心臓オルガノイドの拍動動態についての評価を示す図である。
【図１９ｃ】テロジリンに応答する、心臓オルガノイドの拍動動態についての評価を示す図である。
【図２０Ａ】マイクロ流体デバイスの作製およびオルガノイドの形成を示す図である。パターン形成された接着性フィルムを、ガラス製スライド（下）と、流体の流入口および流出口をドリル加工したポリスチレン製スライド（上）との間で層状化させて、マイクロ流体チャネルを、迅速かつ容易に形成することを示す図である。
【図２０Ｂ】マイクロ流体デバイスの作製およびオルガノイドの形成を示す図である。インサイチューにおける３Ｄ細胞培養物の微小構築物形成のワークフローを示す図である。全ての流体チャネル（ｉ）を、光硬化型ハイドロゲル前駆体、標的細胞、およびさらなる構成要素の混合物で満たす（明るい赤、ｉｉ）。プリントされた透明フォトマスク、またはパターン形成されたフォイル（グレー）を利用して、構築物の形状を規定する（ｉｉｉ）。ＵＶへの曝露後、チャネル内では、架橋されたハイドロゲル（破線）が形成され（ｉｖ）、残りの溶液を、清明な緩衝液で置きかえる（ｖ）。落射蛍光イメージング（ｖｉ）は、構築物の形成を裏付ける。
【図２０Ｃ】マイクロ流体デバイスの作製およびオルガノイドの形成を示す図である。肝臓組織、肺組織、心臓組織、脳組織、血管組織、および精巣組織を支援する、小型６組織チップを示す図である。
【図２０Ｄ】マイクロ流体デバイスの作製およびオルガノイドの形成を示す図である。搭載された６組織の高生存率を示す図である。緑は、生細胞であり、赤は、死細胞である。
【図２１Ａ】肝臓オルガノイドの、タリウム、鉛、グリホサート、および水銀に対する応答を示す予備結果を示す図である。ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ染色（緑は、生細胞であり、赤は、死細胞である）を示す図である。
【図２１Ｂ】肝臓オルガノイドの、タリウム、鉛、グリホサート、および水銀に対する応答を示す予備結果を示す図である。ＡＴＰ活性を示す図である。
【図２２】タリウム、鉛、グリホサート、および水銀への曝露後における、心臓オルガノイドの、ＡＴＰ活性の減少を示す予備結果を示す図である。
【図２３Ａ】肝臓オルガノイドによる、予備的環境毒素スクリーンを示す図である。正規化されたＡＴＰ活性およびＩＣ５０値の推定を示す図である。＊は、各毒素スクリーンについて、薬物を伴わない状態と比較したｐ＜０．０５である。
【図２３Ｂ】肝臓オルガノイドによる、予備的環境毒素スクリーンを示す図である。正規化されたＡＴＰ活性およびＩＣ５０値の推定を示す図である。＊は、各毒素スクリーンについて、薬物を伴わない状態と比較したｐ＜０．０５である。
【図２３Ｃ】肝臓オルガノイドによる、予備的環境毒素スクリーンを示す図である。正規化されたＡＴＰ活性およびＩＣ５０値の推定を示す図である。＊は、各毒素スクリーンについて、薬物を伴わない状態と比較したｐ＜０．０５である。
【図２３Ｄ】肝臓オルガノイドによる、予備的環境毒素スクリーンを示す図である。正規化されたＡＴＰ活性およびＩＣ５０値の推定を示す図である。＊は、各毒素スクリーンについて、薬物を伴わない状態と比較したｐ＜０．０５である。
【図２３Ｅ】肝臓オルガノイドによる、予備的環境毒素スクリーンを示す図である。グリホサート、鉛、タリウム、および水銀で処理された肝臓オルガノイドについての、ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ染色およびマクロ共焦点イメージングを示す図である。緑は、生細胞であり、赤は、死細胞である。
【図２４】肝臓オルガノイドが、カペシタビンを、心臓オルガノイドおよび肺オルガノイドにおける細胞死の増大を誘導する、薬物の活性５−ＦＵ形態へと代謝するように要請されることを示す、ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ結果の画像を示す図である。
【図２５】小型システムにおける、ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ結果の画像を示し、肝臓が存在すると、カペシタビンは、毒性の薬物である５−ＦＵへと代謝され、心毒性および肺毒性を引き起こすことを示す図である。肝臓を伴わなければ、この代謝は、生じず、心臓オルガノイドおよび肺オルガノイドの生存率は、低下しない。
【図２６】標準的サイズシステムおよび小型システムにおける、初期バイオマーカー解析についてのグラフを示す図である。赤および青のデータ点は、標準的サイズシステムによるのに対し、黄色の「マイクロ」データ点は、小型システムによる。
【図２７】フルイディクス用テープおよび接着性フィルム、ならびに／または両面テープ（ＤＳＴ）、ポリ（メタクリル酸メチル）（ＰＭＭＡ）、およびポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）構成要素を組み込む、ハイブリッド型のマイクロリアクター作製戦略についての例示を示す図である。
【図２８Ａ】肝臓オルガノイドによる環境毒素スクリーンからの結果を示し、正規化されたＡＴＰ活性およびＩＣ５０値の推定を示す図である。＊は、各毒素スクリーンについて、薬物を伴わない状態と比較したｐ＜０．０５である。
【図２８Ｂ】肝臓オルガノイドによる環境毒素スクリーンからの結果を示し、正規化されたＡＴＰ活性およびＩＣ５０値の推定を示す図である。＊は、各毒素スクリーンについて、薬物を伴わない状態と比較したｐ＜０．０５である。
【図２８Ｃ】肝臓オルガノイドによる環境毒素スクリーンからの結果を示し、正規化されたＡＴＰ活性およびＩＣ５０値の推定を示す図である。＊は、各毒素スクリーンについて、薬物を伴わない状態と比較したｐ＜０．０５である。
【図２８Ｄ】肝臓オルガノイドによる環境毒素スクリーンからの結果を示し、正規化されたＡＴＰ活性およびＩＣ５０値の推定を示す図である。＊は、各毒素スクリーンについて、薬物を伴わない状態と比較したｐ＜０．０５である。
【図２８Ｅ】肝臓オルガノイドによる環境毒素スクリーンからの結果を示し、グリホサート、鉛、タリウム、および水銀で処理された肝臓オルガノイドについての、ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ染色およびマクロ共焦点イメージングを示す図である。
【図２９Ａ】心臓オルガノイドによる環境毒素スクリーンからの結果を示し、正規化されたＡＴＰ活性およびＩＣ５０値の推定を示す図である。＊は、各毒素スクリーンについて、薬物を伴わない状態と比較したｐ＜０．０５である。
【図２９Ｂ】心臓オルガノイドによる環境毒素スクリーンからの結果を示し、正規化されたＡＴＰ活性およびＩＣ５０値の推定を示す図である。＊は、各毒素スクリーンについて、薬物を伴わない状態と比較したｐ＜０．０５である。
【図２９Ｃ】心臓オルガノイドによる環境毒素スクリーンからの結果を示し、正規化されたＡＴＰ活性およびＩＣ５０値の推定を示す図である。＊は、各毒素スクリーンについて、薬物を伴わない状態と比較したｐ＜０．０５である。
【図２９Ｄ】心臓オルガノイドによる環境毒素スクリーンからの結果を示し、正規化されたＡＴＰ活性およびＩＣ５０値の推定を示す図である。＊は、各毒素スクリーンについて、薬物を伴わない状態と比較したｐ＜０．０５である。
【図２９Ｅ】心臓オルガノイドによる環境毒素スクリーンからの結果を示し、グリホサート、鉛、タリウム、および水銀で処理された肝臓オルガノイドについての、ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ染色およびマクロ共焦点イメージングを示す図である。
【図３０】環境毒素への曝露の影響としての、心臓オルガノイド拍動数の変化を示す図である。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５１】
一部の実施形態では、共通の水性増殖培地は、装置のチャンバーのうちの１つまたは複数（例えば、少なくとも３つまたは全て）に存在しうる。共通の水性増殖培地は、無血清内皮細胞用培地および／または精巣細胞用培地を含みうる。共通の水性増殖培地は、任意の方式で、少なくとも３つのチャンバーに導入することができる。例えば、一部の実施形態では、共通の水性増殖培地を、まず、精巣組織を含むチャンバーに導入し、次いで、心臓組織を含むチャンバーなどに導入することができる。共通の水性増殖培地は、灌流を循環させることにより、１つまたは複数のチャンバーの各々を通して、循環および／または流動させることができる。装置は、共通の水性増殖培地を、リザーバーから、約５μＬ／分〜約５０μＬ／分の範囲、もしくは任意の範囲、および／またはこれらの中の個々の値の速度で汲み出し、１つまたは複数のチャンバーを通して、培地を循環させる。一部の実施形態では、装置は、共通の水性増殖培地を、リザーバーから、約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、もしくは５０μＬ／分、または任意の範囲、および／あるいはこれらの中の個々の値の速度で汲み出す。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５２】
共通の水性増殖培地は、グルタミン、グルコース、ヒドロコルチゾン、アスコルビン酸、ヘパリン、抗菌剤、抗微生物剤、血清、インターロイキン、ニューロトロフィン、骨形成タンパク質、アンジオポエチン、エリスロポエチン、幹細胞因子、および／または、例えば、上皮増殖因子、血管内皮増殖因子、線維芽細胞増殖因子ベータ、肝細胞増殖因子、血小板由来の増殖因子、神経膠細胞株由来の神経栄養因子、角化細胞増殖因子、胎盤増殖因子、および／もしくはインスリン様増殖因子１など、１つもしくは複数の増殖因子（特に、例えば、ヒトなど、哺乳動物の増殖因子）を含むがこれらに限定されない、１つまたは複数のさらなる成分を含みうる。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５３】
一部の実施形態では、共通の水性増殖培地は、グルタミンを含むことが可能であり、任意選択的に、グルタミンを、約０．１ｍＭ〜約５ｍＭの範囲の濃度で含みうる。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５４】
共通の水性増殖培地は、グルコースを含むことが可能であり、任意選択的に、グルコースを、約５ｍＭ〜約６０ｍＭの範囲の濃度で含みうる。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５５】
共通の水性増殖培地は、（哺乳動物、特に、ヒトの）上皮増殖因子を含むことが可能であり、任意選択的に、上皮増殖因子を、約０．１ｎｇ／ｍＬ〜約２０ｎｇ／ｍＬの範囲の濃度で含みうる。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５６】
共通の水性増殖培地は、ヒドロコルチゾンを含むことが可能であり、任意選択的に、ヒドロコルチゾンを、約０．１μｇ／ｍＬ〜約２μｇ／ｍＬの範囲の濃度で含みうる。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５７】
共通の水性増殖培地は、アスコルビン酸を含むことが可能であり、任意選択的に、アスコルビン酸を、約０．１μｇ／ｍＬ〜約５０μｇ／ｍＬの範囲の濃度で含みうる。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５８】
共通の水性増殖培地は、（哺乳動物、特に、ヒトの）血管内皮増殖因子を含むことが可能であり、任意選択的に、血管内皮増殖因子を、約０．１ｎｇ／ｍＬ〜約１０ｎｇ／ｍＬの範囲の濃度で含みうる。
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５９】
共通の水性増殖培地は、（哺乳動物、特に、ヒトの）線維芽細胞増殖因子ベータを含むことが可能であり、任意選択的に、線維芽細胞増殖因子ベータを、約０．１〜約１０ｎｇ／ｍＬの範囲の濃度で含みうる。
【誤訳訂正１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６０】
共通の水性増殖培地は、インスリン様増殖因子１を含むことが可能であり、任意選択的に、インスリン様増殖因子１を、約０．１ｎｇ／ｍＬ〜約１５ｎｇ／ｍＬの範囲の濃度で含みうる。
【誤訳訂正１６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６１】
一部の実施形態では、共通の水性増殖培地は、ヘパリンを含むことが可能であり、任意選択的に、ヘパリンを、１ｍＬ当たり約０．１単位〜１ｍＬ当たり約５単位の範囲の濃度で含みうる。
【誤訳訂正１７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６２】
共通の水性増殖培地は、抗菌剤および／または抗微生物剤（例えば、ペニシリン、ストレプトマイシン、ゲンタマイシン、アンフォテリシンＢ）を含むことが可能であり、任意選択的に、抗菌剤および／または抗微生物剤を、約０．１体積％〜約１体積％の範囲の濃度で含みうる。
【誤訳訂正１８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６３】
一部の実施形態では、共通の水性増殖培地は、血清（例えば、ウシ胎仔血清、ウシ血清など）を含み、任意選択で、血清を、体積で約０．１％〜約１０％の範囲の濃度で含む。
【誤訳訂正１９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６４】
一部の実施形態では、共通の水性増殖培地は、例えば、金属（例えば、重金属）、薬物、および／または殺虫剤などの試験化合物を含む。
【誤訳訂正２０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６５】
本発明の装置は、共通の水性増殖培地と作動的に関連したセンサーを含みうる。センサーは、（ｉ）ＩＬ−８；（ｉｉ）プロスタサイクリン；（ｉｉｉ）アルブミン；（ｉｖ）尿素；（ｖ）ＬＤＨ；（ｖｉ）クレアチンキナーゼ；（ｖｉｉ）アルファ−グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ；（ｖｉｉｉ）カルセインＡＭで染色された生細胞；（ｉｘ）ヨウ化プロピジウムもしくはエチジウムホモ二量体で染色された死細胞；（ｘ）ＡＴＰ活性；および／または（ｘｉ）ミトコンドリア代謝のうちの１または複数の、存在、低減および／または増大を報告することにより、応答することなどにより、薬物、薬物候補物質、化合物、生物学的薬剤、化学的薬剤などに対する毒性応答を感知するように構成することができる。センサーは、ＥＬＩＳＡセンサー；比色アッセイセンサー、リアルタイムの抗体センサーもしくはアプタマーセンサー、ウェスタンブロットセンサー、経内皮電気抵抗センサー、経上皮電気抵抗センサー、組織の形状を示すように構成された光学ビデオ捕捉装置、および／または心臓組織内の拍動の動態もしくは拍動挙動の変化を示すように構成された光学ビデオ捕捉装置を含みうる。
【誤訳訂正２１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６７】
本発明の装置および／または方法は、各々が、少なくとも１、２、３、４週間、またはこれを超える期間にわたり生存する、１つまたは複数の（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、またはこれを超える）異なる組織および／またはオルガノイド（例えば、３Ｄオルガノイド）を含むことが可能であり、かつ／またはこれらを提供しうる。一部の実施形態では、本発明の装置および／または方法は、互いにかつ共通の水性増殖培地と流体連絡し、各々が、少なくとも１、２、３、４週間、またはこれを超える期間にわたり生存する、１つまたは複数の（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、またはこれを超える）異なる３Ｄ組織構築物を含み、かつ／または提供する。したがって、一部の実施形態では、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、またはこれを異なる３Ｄ組織構築物は、互いにかつ共通の水性増殖培地と流体連絡し、各々が、少なくとも１、２、３、４週間、またはこれを超える期間にわたり生存する。一部の実施形態では、３Ｄ組織構築物のうちの１つまたは複数は、生存することが可能であり、１、２、３、４週間後、またはこれを超える期間後に、構築物中に存在する細胞の平均数に基づき、少なくとも約７５％またはこれを超える（例えば、約８０％、８５％、９０％、９５％またはこれを超える）生存細胞を含みうる。組織および／またはオルガノイドは、一般的な細胞試料（例えば、対象から回収された皮膚試料などの試料）からの分化により作出することができる。組織構築物のうちの１つまたは複数は、対応する天然（例えば、ヒト）組織内に存在する細胞の比率と同様の比率で、細胞を含みうる。一部の実施形態では、組織構築物のうちの少なくとも１つは、転移性細胞および／または悪性細胞を含む。一部の実施形態では、組織および／またはオルガノイドの機能および／または特性を、決定および／または測定し、対応する天然組織の機能および／または特性と比較することができる（例えば、肝臓オルガノイドの特性を測定し、対象における肝臓組織の同じ特性と比較することができる）。一部の実施形態では、組織および／またはオルガノイドの機能および／または特性は、対応する天然組織の機能および／または特性と同様でありうる。
【誤訳訂正２２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６９】
本発明の装置は、装置のチャンバーのうちの１つまたは複数と作動的に関連したポンプを含みうる。一部の実施形態では、ポンプは、装置のチャンバーの全てと関連しうる。ポンプは、共通の水性増殖培地を、装置のチャンバーのうちの１つまたは複数（または全て）を通して循環させうる。
【誤訳訂正２３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７９】
本発明の装置は、インビトロにおける、薬物スクリーニング、毒性学スクリーニング、および／または疾患モデル化の方法において使用することができる。方法は、本発明の装置を用意するステップと；装置内に存在する、少なくとも１つまたは複数の組織における、薬理学的応答または毒性学的応答を検出するステップとを含みうる。一部の実施形態では、本発明の装置は、
（ａ）本発明の装置を用意するステップと；
（ｂ）任意選択的に、増殖培地（例えば、共通の水性増殖培地）を、第１のチャンバーから、第２のチャンバーに循環させるステップと；
（ｃ）少なくとも１つの試験化合物を、装置内の組織構築物に投与するステップ（例えば、試験化合物を、増殖培地に添加することにより）ステップと；ならびに
（ｄ）少なくとも１つの試験化合物に対する薬理学的応答および／または毒性学的応答を検出する（例えば、心臓構築物などの拍動頻度の変化を、例えば、心臓モニターにより決定する）ステップと
により、少なくとも１つの試験化合物を、生理学的活性および／または毒性についてスクリーニングするために使用することができる。一部の実施形態では、薬理学的応答および／または毒性学的応答を検出することは、応答を、試験化合物を投与しない場合に観察される応答（または応答の欠如）と比較することを含みうる。
【誤訳訂正２４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８９】
一部の実施形態では、方法は、増殖培地を、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、またはこれを超える日数など、１または複数の日数にわたり、装置内のチャンバーの全てを通して循環させるステップを含む。一部の実施形態では、循環させるステップは、例えば、ストレスについてのバイオマーカーなどのバイオマーカーが、およそ無細胞培地による対照レベルを達成することを可能とするのに、少なくとも十分な時間にわたり実行することができる。循環させるステップは、少なくとも（ｉ）前記共通の水性増殖培地中の、ＩＬ−８および／もしくはプロスタサイクリンの炎症性マーカー濃度が低下するのに十分な時間；（ｉｉ）前記培地中のアルブミンおよび／もしくは尿素の濃度が、実質的に安定を維持する時間；（ｉｉｉ）前記培地中のＬＤＨおよび／もしくはクレアチンキナーゼのレベルが、対照条件下の同じ培地と、実質的に同じレベルを維持する時間；ならびに／または（ｉｖ）前記培地中のアルファ−グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼレベルが、対照条件下の同じ培地と、実質的に同じレベルを維持する時間にわたり、実行することができる。一部の実施形態では、循環させるステップを、無細胞培地による対照レベルを達成し、かつ／または上記の通りの（ｉ）〜（ｉｖ）を達成するのに十分な時間にわたり実行した後で、少なくとも１つの試験化合物を投与することができる。
【誤訳訂正２５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９８】
＜６組織のベースラインにおける特徴付け＞
最終的に、生体機能チップデバイスは、毒性をほとんど伴わずに、ベースライン条件下の、共通の培地条件下で、多種多様な組織型を支援するものとする。上記のプラットフォームを組み立て、マイクロペリスタルティックポンプにより、５ｍＬのリザーバーから、培地を汲み出す、１０μＬ／分の循環灌流下で始動した。共通の培地は、無血清内皮細胞用培地と精巣細胞用培地との１：１の混合物を含有した。生存率は、ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ染色およびマクロ共焦点顕微鏡法によるイメージングを介して視覚化される通り、７および１４日目のいずれにおいても、比較的大きいことが示された（図２、パネルＡ〜Ｂ）。興味深いことに、分泌されたバイオマーカーについてのパネル（図２、パネルＣ〜Ｈ）は、炎症性マーカーが、当初増大してから減弱したものの、他の毒性マーカーは、研究を通して、低量を維持し、一部の機能的なマーカーが存在し、一定であることを指し示す。とりわけ、肝臓のベースライン機能（アルブミンおよび尿素）は、研究期間にわたり、比較的一貫し、培地対照より有意に高いレベルを維持したことから、良好な生存率および機能が指し示される（図２、パネルＣ〜Ｄ）。同様に、細胞から、培地に放出される場合に、様々な組織型についての毒性の一般的マーカーであるＬＤＨ、および心筋細胞内の毒性のマーカーであるＣＫも、培地対照と同様のレベルである、比較的低値を維持したことから、低毒性が指し示される（図２、パネルＥ〜Ｆ）。興味深いことに、それぞれ、肺上皮および血管内皮から放出されるタンパク質である、ＩＬ−８およびプロスタサイクリンが、当初スパイクするが、経時的に、ベースラインレベルに減少することから、肺構築物および血管構築物が、システム始動時には、ストレスを受けたが、経時的に、改善されたことが示唆される（図２、パネルＧ〜Ｈ）。これらのデータは、マルチオルガノイドシステムが、おそらく、人体が機能する方式と同様に、自らを自己調節し、経時的に、培地を馴化し、各組織型を良好に支援することを示唆する。
【誤訳訂正２６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１１３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１１３】
ここで提示される研究において、本発明者らは、生存率が高く毒性をほとんど指し示さない共通の培地下にある単一の再循環型灌流システム内で、肝臓、心臓、血管、肺、精巣および結腸の、最大で６つの顕著に異なる生体工学処理された組織モデルを支援するプラットフォーム（図２）について記載する。次いで、本発明者らは、プラットフォームの構成要素および構成要素の組合せの適用について記載して、このような生体機能チッププラットフォームが有しうる潜在的可能性を開示する。これらの例は、応答性で、モジュラーな、血管内皮モジュール（図３）、ＦＤＡによりリコールされた薬物を使用する、一連の薬物スクリーン（図４、５、および１９）、２つのオルガノイドによる、相互依存性の二重薬物応答（図６）、および個々の様々なオルガノイド／組織モデルの特徴付け（図７〜１７）であって、実質的な組織学的アッセイおよび機能的なアッセイのほか、アセトアミノフェン毒性およびＮ−アセチル−Ｌ−システインによる拮抗作用の実証（図１３）を含む特徴付けを含む。
【誤訳訂正２７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１１４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１１４】
重要なことは、６つの組織型構築物を、単一の灌流プラットフォーム内に統合したところ、本発明者らは、６つのモジュール全てにおいて、比較的高生存率を２週間にわたり維持することが可能であったことである。他の研究グループも、現在までのところ、多組織モデルシステムの生存率を、最大４週間という、より長期にわたり維持する能力を裏付けているが、これらの例は、最大で４つの組織型に限定されている２０、２１。さらに、これらのシステムにおける、オルガノイドまたは組織モデルの大部分は、２Ｄ培養物または３Ｄ細胞株の形態であった。本発明者らは、当初、十分なレベルの細胞生存率を維持するために、生体機能チッププラットフォームに添加される各組織型に応じて、それだけ、培地を複雑としなければならないと仮定していた。驚くべきことに、本発明者らは、これが当てはまらないと考えられることを見出した。本発明者らの６組織プラットフォームを実証するに当たり、本発明者らは、共通の培地に、より感受性の大きな細胞集団になると本発明者らが考えたもの、とりわけ、平面状に構成される内皮細胞オルガノイドおよび精巣オルガノイドに向けてバイアスをかけた。注目すべきことに、本発明者らは、システム内の、他の４つの組織型の性能も良好であることを観察した。生存率アッセイは、少数の死細胞を示した。可溶性バイオマーカー解析は、当初、ＩＬ−８、プロスタサイクリン、および、一部のシステムにおける、それぞれ、肺、血管、および心臓構築物が受けたストレスを表す、ＣＫのスパイクを明らかにした。しかし、システム作動の時間経過にわたり、これらのバイオマーカーは、無細胞の培地対照に近いレベルに戻った。この興味深い結果は、おそらく、多数の組織型が存在する結果として、培地を、天然由来のユニバーサルな支持培地のようなものへと馴化することを示唆する。加えて、本発明者らは、細胞は、生理学的に関連性がある３Ｄアーキテクチャー内に置かれると、より頑健となり、したがって、培地処方の変化の影響を受けにくくなりうると考える。これらの理論は、３Ｄ組織モデルから構成されたマルチオルガノイドプラットフォームは、現在市販されている、より高価で、組織特異的な培地処方から離れ、より廉価かつ単純な、一般的培地に向かうことが可能でありうることを示唆するために、注目に値する。
【誤訳訂正２８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１６２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１６２】
＜成果、起こりうる難題、および提起される解決策（ＳＡ１）＞
本発明者らのチームが、６オルガノイドプラットフォームの維持に成功した、上記の、本発明者らの研究に基づき、この３Ｄオルガノイドプラットフォームが、経時的に、共通の培地を馴化することから、含めたオルガノイド内の、特異的細胞型の全てに適した環境を創出することが期待される。使用されるシステム容量が極めて少ない（＜５０ｕｌ）場合、流体対組織体積比は、高度に生理学的である。公表されている、重金属の生体内分布は、臓器が、生物内のこれらの金属に曝露される順序に基づく可能性がある。これは、なぜ、消化管および肝臓の問題に、筋肉の問題よりも高頻度で遭遇するのかを説明しうる。ＭＰＳ内の流体対組織体積比が大きいために、この考えについて試験することは困難でありうる。オルガノイドの順序を切り替えて、この順序が生体内分布に影響を及ぼすのかどうかを決定することはできる。加えて、単一のオルガノイドシステムに由来するデータを作成して、臓器の順序が、重金属の生体内蓄積に影響を及ぼすのかどうかを決定することができる。