(57)【要約】  本発明は、一側面において、後発酵茶ケトン分画物を有効成分として含む認知機能低下改善用組成物に関し、他の側面において、後発酵茶ケトン分画物から分離した３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボン（３−Ｏ−ｇａｌｌｏｙｌ−３，３’，５，５’，７−ｐｅｎｔａｈｙｄｒｏｘｙｆｌａｖａｎ）、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、そのプロドラッグ、その水和物、又はその溶媒和物を有効成分として含む認知機能低下改善用組成物に関し、本発明の一側面を用いてベータアミロイドの凝集を効果的に抑制することができ、ＢＤＮＦ発現及びＤＮＭＴ１発現を調節することができるので、本発明は、一側面において、認知機能低下に関連した多様な分野において活用され得る。【選択図】  図５
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の化学式１で表わされる３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボン（３−Ｏ−ｇａｌｌｏｙｌ−３，３’，５，５’，７−ｐｅｎｔａｈｙｄｒｏｘｙｆｌａｖａｎ）、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、そのプロドラッグ、その水和物、その溶媒和物、又はそれを含む後発酵茶ケトン分画物を有効成分として含む、認知機能低下改善用組成物。
【化１】
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【請求項２】
前記後発酵茶ケトン分画物は、後発酵茶の水不溶性抽出物に対するケトン分画物である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ケトンは、アセトンである、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボンは、下記の化学式２で表わされるＴｒａｎｓ−３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボン（Ｔｒａｎｓ−３−Ｏ−ｇａｌｌｏｙｌ−３，３’，５，５’，７−ｐｅｎｔａｈｙｄｒｏｘｙｆｌａｖａｎ）である、請求項１に記載の組成物。
【化２】
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【請求項５】
当該組成物中の３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボン、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、そのプロドラッグ、その水和物、又はその溶媒和物の含量は、当該組成物の総質量に対して０．０００００１質量％〜５質量％である、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
当該組成物中の後発酵茶ケトン分画物の含量は、当該組成物の総質量に対して０．０１質量％〜１００質量％である、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記分画物は、前記３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボン、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、そのプロドラッグ、その水和物、又はその溶媒和物が分画物の総質量を基準に０．０００１質量％〜５質量％含まれたものである、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
当該組成物の投与による３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボン（３−Ｏ−ｇａｌｌｏｙｌ−３，３’，５，５’，７−ｐｅｎｔａｈｙｄｒｏｘｙｆｌａｖａｎ）、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、そのプロドラッグ、その水和物、又はその溶媒和物の投与量は、０．０００１ｍｇ／ｋｇ／日〜１５ｍｇ／ｋｇ／日である、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記認知機能低下は、ベータアミロイド（β−ａｍｙｌｏｉｄ）の凝集（ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ）、脳由来神経栄養因子（ｂｒａｉｎ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｆａｃｔｏｒ、ＢＤＮＦ）発現低下、及びＤＮＭＴ１（ＤＮＡ（ｃｙｔｏｓｉｎｅ−５）−ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  １）発現増加からなる群より選ばれた一つ以上に起因する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記認知機能低下は、記憶力減退、認知減退、識別力減退、鬱病、及び健忘症からなる群より選ばれた一つ以上を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記改善は、ベータアミロイドの凝集抑制、凝集したベータアミロイドの分解、ＢＤＮＦ発現増進、及びＤＮＭＴ１発現減少からなる群より選ばれた一つ以上によってなされる、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
当該組成物は、神経退行性疾病を予防又は治療するための薬学組成物である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記神経退行性疾病は、ベータアミロイド（β−ａｍｙｌｏｉｄ）の凝集（ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ）、ＢＤＮＦ発現低下、及びＤＮＭＴ１発現増加からなる群より選ばれた一つ以上に起因する、薬学組成物である、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記神経退行性疾病はアルツハイマー病である、薬学組成物である、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１５】
当該組成物は食品組成物である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本明細書は、３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボン（３−Ｏ−ｇａｌｌｏｙｌ−３，３’，５，５’，７−ｐｅｎｔａｈｙｄｒｏｘｙｆｌａｖａｎ）を含む認知機能改善用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
生活水準の向上や医療産業の発達に伴い、癌をはじめとする難治性疾患の治療が可能になりヒトが長寿命化したが、それに伴う人口の老齢化は晩成退行性神経疾患の増加をもたらし、これは、むしろ生活の質を相対的に低下させている。神経細胞機能障害や損傷は凝集しやすいタンパク質によって誘発するとされており、多数の神経系疾患はかかる容態を特徴とする。このような神経系疾患は、アルツハイマー病といった疾患を含む。
【０００３】
アルツハイマー病とは、頭脳の神経細胞が損傷しながら認知能力減退、記憶力減退、不可逆的記憶損失、方向感覚喪失、識別力減退、鬱病、健忘症及び言語能力損傷障害などの症状を示す進行性神経退行性疾病である。アルツハイマー病は、脳血管疾患、癌に続く３番目に高い老化に関連した死亡原因であり、発生時、平均有病期間が１０年以上になるので、保護者の精神的、経済的負担とともに社会的負担が増加している。現在まで知られているアルツハイマー病の最も代表的な原因としては、ベータアミロイド（β−ａｍｙｌｏｉｄ、Ａβ、アミロイドベータともいう）の異常な凝集（ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ）が挙げられる。すなわち、脳内に正常に存在していたベータアミロイドが異常に凝集してアミロイドプラーク（Ａβ  ｐｌａｑｕｅ）を形成し、これにより神経細胞及び神経細胞連接が損傷して発病する。
【０００４】
老人人口の増加につれ、老化、退行性神経疾患及び脳疾患に係る治療及び防止に係る必要性が増加しつつあり、それに伴い、かかる老化や疾患の予防、治療、緩和、及び改善などに関する研究が続けられてきている。しかし、既存の物質は効果が不明であったり副作用を誘発したりするなどの問題があり、このような問題を解決する天然物由来の治療剤の開発が必要である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】米国特許第９０６１０２３号明細書
【特許文献２】米国公開特許第２００２−０１５１５０６号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】LIM, H. J. et al., “Green Tea Catechin Leads to Global Improvement among Alzheimer’s Disease-related Phenotypes in NSE/hAPP-C105 Tg Mice”, Journal of Nutritional Biochemistry, 2013, vol.24, no.7, pages 1302-1313
【非特許文献２】CHOI, Y. T. et al., “The Green Tea Polyphenol (-)-epigallocatechin Gallate Attenuates beta-amyloid-induced Neurotoxicity in Cultured Hippocampal Neurons”, Life Sciences, 2001, vol.70, pages 603-614
【非特許文献３】MPOFU, S. et al., “Interactive Efficacies of Elephantorrhiza Elephantina and Pentanisia Prunelloides Extracts and Isolated Compounds against Gastrointestinal Bacteria”, South African Journal of Botany, 2014, vol.94, pages 224-230
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、一側面において、天然物由来の認知機能低下改善用物質に関するものであって、後発酵茶分画物を含む認知機能低下改善用組成物を提供することを目的とする。
【０００８】
本発明は、他の側面において、後発酵茶分画物から分離した３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボン（３−Ｏ−ｇａｌｌｏｙｌ−３，３’，５，５’，７−ｐｅｎｔａｈｙｄｒｏｘｙｆｌａｖａｎ）を有効成分として含む認知機能低下改善用組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
前記課題を解決するために、本発明は、一側面において、３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボン（３−Ｏ−ｇａｌｌｏｙｌ−３，３’，５，５’，７−ｐｅｎｔａｈｙｄｒｏｘｙｆｌａｖａｎ）、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、そのプロドラッグ、その水和物、その溶媒和物、又はそれを含む後発酵茶ケトン分画物を有効成分として含む認知機能低下改善用組成物を提供する。
【００１０】
また、本発明は、一側面において、３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボン（３−Ｏ−ｇａｌｌｏｙｌ−３，３’，５，５’，７−ｐｅｎｔａｈｙｄｒｏｘｙｆｌａｖａｎ）、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、そのプロドラッグ、その水和物、その溶媒和物、又はそれを含む後発酵茶ケトン分画物の有効量を、これを必要とする個体に投与することを含む認知機能低下改善及び治療方法を提供する。
【００１１】
また、本発明は、他の側面において、３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボン（３−Ｏ−ｇａｌｌｏｙｌ−３，３’，５，５’，７−ｐｅｎｔａｈｙｄｒｏｘｙｆｌａｖａｎ）、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、そのプロドラッグ、その水和物、その溶媒和物、又はそれを含む後発酵茶ケトン分画物を認知機能低下改善及び治療用組成物の製造に用いる用途を提供する。
【００１２】
さらに、本発明は、他の側面において、認知機能低下改善及び治療のための３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボン（３−Ｏ−ｇａｌｌｏｙｌ−３，３’，５，５’，７−ｐｅｎｔａｈｙｄｒｏｘｙｆｌａｖａｎ）、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、そのプロドラッグ、その水和物、その溶媒和物、又はそれを含む後発酵茶ケトン分画物を提供する。
【発明の効果】
【００１３】
本発明は、一側面において、後発酵茶ケトン分画物を含む組成物及び特定の化合物を含む組成物を提供し、認知機能改善関連分野及び神経退行性疾病管理分野において広く活用され得る。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】後発酵茶抽出物を高速液体クロマトグラフィーにて分析した結果であって、アセトン分画を経た場合と経ていない場合とを示している。
【図２】カフェインが除去されたクロロホルム：メタノール１０：１（ｖ／ｖ）分画物を大容量高速向流クロマトグラフィー（ｈｉｇｈ−ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｃｏｕｎｔｅｒｃｕｒｒｅｎｔ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、ＨＰＣＣＣ）を利用して１０個の下位分画を分けたことを示したものである。
【図３】ＨＰＣＣＣを利用して分画した前記１０個の下位分画のうちの分画１〜５に対して示したものである。
【図４】ＨＰＣＣＣを利用して分画した前記１０個の下位分画のうちの分画６〜１０に対して示したものである。
【図５】ベータアミロイド凝集に対するＴｒａｎｓ−３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボンの抑制効果を示したものである。
【図６】Ｔｒａｎｓ−３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボンの核磁気共鳴（ＮＭＲ）グラフを示したものである。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
以下、本明細書について詳しく説明する。
【００１６】
本明細書において、「後発酵茶」は、茶の葉に存在する酵素ではない別途の微生物又は物質によって発酵させたものを含む。
【００１７】
本明細書において、「ケトン分画物」は、ケトン溶媒を用いて特定の物質や抽出物を分画したもの又は分画して残ったもの、そして、これらを特定の溶媒で再び抽出したものを含む。前記ケトンの種類は問わないがアセトンが好ましく、分画方法及び抽出方法は当業界の通常の技術者に周知の如何なる方法を用いてもよい。
【００１８】
本明細書において、「異性体」は、特に光学異性体（ｏｐｔｉｃａｌ  ｉｓｏｍｅｒｓ）（例えば、本質的に純粋なエナンチオマー（ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｐｕｒｅ  ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ）、本質的に純粋なジアステレオマー（ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｐｕｒｅ  ｄｉａｓｔｅｒｅｏｍｅｒｓ）、又はこれらの混合物）だけでなく、配座異性体（ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｉｓｏｍｅｒｓ）（すなわち、１つ以上の化学結合のその角度のみ異なる異性体）、位置異性体（ｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｉｓｏｍｅｒｓ）（特に、互変異性体（ｔａｕｔｏｍｅｒｓ））、又は幾何異性体（ｇｅｏｍｅｔｒｉｃ  ｉｓｏｍｅｒｓ）（例えば、シス−トランス異性体）を含む。
【００１９】
本明細書において、「本質的に純粋な（ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｐｕｒｅ）」とは、例えば、エナンチオマー又はジアステレオマーと関連して用いた場合、エナンチオマー又はジアステレオマーを例として挙げることのできる具体的な化合物が約９０％以上、好ましくは、約９５％以上、より好ましくは、に約９７％以上、又は約９８％以上、さらに好ましくは、約９９％以上、最も好ましくは、約９９．５％以上（ｗ／ｗ）存在することを意味する。
【００２０】
本明細書において、「薬学的に許容可能」とは、通常の医薬的服用量（ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  ｄｏｓａｇｅ）で利用する際に相当な毒性を避けることにより、動物、より具体的には、ヒトに使用することができるという政府又はこれに準ずる規制機構の承認を受けることができ、又は承認を受け、又は薬局方に列挙され、又はその他一般的な薬局方に記載されたものと認知されることを意味する。
【００２１】
本明細書において、「薬学的に許容可能な塩」とは、薬学的に許容可能であり、親化合物（ｐａｒｅｎｔ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）の好ましい薬理活性を有する本発明の一側面に係る塩を意味する。前記塩は、（１）塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などといった無機酸により形成されるか；又は、酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、シクロペンテンプロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、３−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１，２−エタン−ジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４−クロロベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、カンファースルホン酸、４−メチルビシクロ［２，２，２］−ｏｃｔ−２−エン−１−カルボン酸、グルコヘプトン酸、３−フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、ｔｅｒｔ−ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、ムコン酸といった有機酸により形成される酸付加塩（ａｃｉｄ  ａｄｄｉｔｉｏｎ  ｓａｌｔ）；又は（２）親化合物に存在する酸性プロトンが置換される際に形成される塩を含んでよい。
【００２２】
本明細書において、「プロドラッグ（ｐｒｏｄｒｕｇ）」とは、ある薬物を化学的に変化させて、物理的、化学的性質を調節した薬物を意味し、それ自体は生理活性を示さないが、投与後に体内において化学的、生理学的、あるいは酵素の作用によって元来の薬物に変わって薬効を発揮することができる。
【００２３】
本明細書において、「水和物（ｈｙｄｒａｔｅ）」とは、水が結合している化合物を意味し、水と化合物との間に化学的な結合力のない内包化合物を含む広範囲な概念である。
【００２４】
本明細書において、「溶媒和物」とは、溶質の分子やイオンと溶媒の分子やイオンとの間に生じた高次の化合物を意味する。
【００２５】
本発明は、一側面において、下記の化学式１で表わされる３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボン（３−Ｏ−ｇａｌｌｏｙｌ−３，３’，５，５’，７−ｐｅｎｔａｈｙｄｒｏｘｙｆｌａｖａｎ）、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、そのプロドラッグ、その水和物、その溶媒和物、又はそれを含む後発酵茶ケトン分画物を有効成分として含む認知機能低下改善用組成物を提供する。
【００２６】
【化１】
2019521076.tif 000003
【００２７】
一具現例によれば、前記後発酵茶ケトン分画物は、後発酵茶の水不溶性抽出物に対するケトン分画物であってよい。
【００２８】
他の具現例によれば、前記３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボンは、下記の化学式２で表わされるＴｒａｎｓ−３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボン（Ｔｒａｎｓ−３−Ｏ−ｇａｌｌｏｙｌ−３，３’，５，５’，７−ｐｅｎｔａｈｙｄｒｏｘｙｆｌａｖａｎ）であってよい。
【００２９】
【化２】
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【００３０】
他の具現例によれば、前記ケトン分画物は、ケトン分画物のアルコール抽出物であってよい。
【００３１】
他の具現例によれば、前記ケトンは、アセトン、カーボン（ｃａｒｖｏｎ）、プレゴン（ｐｕｌｅｇｏｎｅ）、イソロンギホレン（ｉｓｏｌｏｎｇｉｆｏｌａｎｏｎｅ）、２−ヘプタノン、２−ペンタノン、３−ヘキサノン、３−ヘプタノン、４−ヘプタノン、２−オクタノン、３−オクタノン、２−ノナノン、３−ノナノン、２−ウンデカノン、２−トリデカノン、メチルイソプロピルケトン、エチルイソアミルケトン、ブチリデンアセトン、メチルヘプテノン、ジメチルオクテノン、ゲラニルアセトン、ファルネシルアセトン、２，３−ペンタジオン、２，３−ヘキサジオン、３，４−ヘキサジオン、２，３−ヘプタジオン、アミルシクロペンタノン、アミルシクロペンテノン、２−シクロペンチルシクロペンタノン、ヘキシルシクロペンタノン、２−ｎ−ヘプチルシクロペンタノン、ｃｉｓ−ジャスモン、ジヒドロジャスモン、メチルコリロン、２−ｔｅｒｔ−ブチルシクロヘキサノン、ｐ−ｔｅｒｔ−ブチルシクロヘキサノン、２−ｓｅｃ−ブチルシクロヘキサノン、セロリケトン、クリプトン、ｐ−ｔｅｒｔ−ペンチルシクロヘキサノン、メチルシクロシトロン、ネロン、４−シクロヘキシル−４−メチル−２−ペンタノン、オキシドケトン、エモキシフロン、メチルナフチルケトン、α−メチルアニサルアセトン、アニシルアセトン、ｐ−メトキシフェニルアセトン、ベンジリデンアセトン、ｐ−メトキシアセトフェノン、ｐ−メチルアセトフェノン、プロピオフェノン、アセトフェノン、α−ダイナスコン（Ｄｙｎａｓｃｏｎｅ）、イリトーン（ｌｒｉｔｏｎｅ）、イオノン（ｉｏｎｏｎｅ）、プソイドイオノン（Ｐｓｅｕｄｏｉｏｎｏｎｅ）、メチルイオノン、メチルイリトーン、２，４−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルシクロヘキサノン、アリルイオノン、２−アセチル−３，３−ジ−メチルノルボルナン、ベルベノン、フェンコン（ｆｅｎｃｈｏｎ）、シクロペンタデカノン、シクロヘキサデセノンなどを含んでいてよく、当業界で一般に用いられ得る溶媒としてのケトン類及びこれらの混合物をいずれも含んでいてよく、好ましくは、アセトンであってよい。
【００３２】
また他の具現例によれば、前記アルコールは、当業界において一般に用いられていてよいアルコールの単独又は混合物であってよく、好ましくは、エタノールであってよい。
【００３３】
本発明は、他の側面において、３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボン（３−Ｏ−ｇａｌｌｏｙｌ−３，３’，５，５’，７−ｐｅｎｔａｈｙｄｒｏｘｙｆｌａｖａｎ）、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、そのプロドラッグ、その水和物、又はその溶媒和物を有効成分として含む認知機能低下改善用組成物を提供する。
【００３４】
一具現例によれば、前記３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボンは、前記化学式２で表されるＴｒａｎｓ−３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボン（Ｔｒａｎｓ−３−Ｏ−ｇａｌｌｏｙｌ−３，３’，５，５’，７−ｐｅｎｔａｈｙｄｒｏｘｙｆｌａｖａｎ）であってよい。
【００３５】
他の具現例によれば、前記組成物中の３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボン又はＴｒａｎｓ−３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボン、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、そのプロドラッグ、その水和物、又はその溶媒和物は、前記組成物の総質量を基準に０．０００００１質量％以上、０．０００００５質量％以上、０．００００１質量％以上、０．００００５質量％以上、０．０００１質量％以上、０．０００５質量％以上、０．００１質量％以上、０．００５質量％以上、０．０１質量％以上、０．０５質量％以上、０．１質量％以上、０．３質量％以上、０．５質量％以上、１質量％以上、１．５質量％以上、１．８質量％以上、２質量％以上、２．２質量％以上、２．５質量％以上、２．８質量％以上、３質量％以上、３．２質量％以上、３．５質量％以上、３．８質量％以上、４質量％以上、４．２質量％以上、４．５質量％以上、又は４．８質量％以上であるか、５質量％以下、４．８質量％以下、４．５質量％以下、４．２質量％以下、３．８質量％以下、３．５質量％以下、３．２質量％以下、３質量％以下、２．８質量％以下、２．５質量％以下、２．２質量％以下、２質量％以下、１．８質量％以下、１．５質量％以下、１．２質量％以下、１質量％以下、０．５質量％以下、０．３質量％以下、０．１質量％以下、０．０５質量％以下、０．０１質量％以下、０．００５質量％以下、０．００１質量％以下、０．０００５質量％以下、０．０００１質量％以下、０．００００５質量％以下、０．００００１質量％以下、又は０．０００００５質量％以下であってよい。好ましくは、０．０００００１〜５質量％以下であってよい。
【００３６】
他の具現例によれば、前記組成物中の後発酵茶ケトン分画物の含量は、前記組成物の総質量に対して０．０１質量％以上、０．１質量％以上、１質量％以上、５質量％以上、１０質量％以上、１５質量％以上、２０質量％以上、２５質量％以上、３０質量％以上、３５質量％以上、４０質量％以上、４５質量％以上、５０質量％以上、５５質量％以上、６０質量％以上、６５質量％以上、７０質量％以上、７５質量％以上、８０質量％以上、８５質量％以上、９０質量％以上、又は９５質量％以上であるか、１００質量％以下、９５質量％以下、９０質量％以下、８５質量％以下、８０質量％以下、７５質量％以下、７０質量％以下、６５質量％以下、６０質量％以下、５５質量％以下、５０質量％以下、４５質量％以下、４０質量％以下、３５質量％以下、３０質量％以下、２５質量％以下、２０質量％以下、１５質量％以下、１０質量％以下、５質量％以下、１質量％以下、０．１質量％以下、又は０．０５質量％以下であってよい。好ましくは、０．０１質量％〜１００質量％であってよい。
【００３７】
他の具現例によれば、前記分画物は、３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボン又はＴｒａｎｓ−３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボン、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、そのプロドラッグ、その水和物、又はその溶媒和物が、分画物の総質量を基準に０．０００１質量％以上、０．０００５質量％以上、０．００１質量％以上、０．００５質量％以上、０．０１質量％以上、０．０５質量％以上、０．１質量％以上、０．５質量％以上、１質量％以上、１．５質量％以上、２質量％以上、２．５質量％以上、３質量％以上、３．５質量％以上、４質量％以上、又は４．５質量％以上であるか、５質量％以下、４．５質量％以下、４質量％以下、３．５質量％以下、３質量％以下、２．５質量％以下、２質量％以下、１．５質量％以下、１質量％以下、０．５質量％以下、０．１質量％以下、０．０５質量％以下、０．０１質量％以下、０．００５質量％以下、０．００１質量％以下、又は０．０００５質量％以下であってよい。好ましくは、０．０００１質量％〜５質量％含まれていてよい。
【００３８】
他の具現例によれば、前記組成物の投与による３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボン又はＴｒａｎｓ−３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボン、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、そのプロドラッグ、その水和物、又はその溶媒和物の投与量は、０．０００１ｇ／ｋｇ／日以上、０．００１ｇ／ｋｇ／日以上、０．０１ｇ／ｋｇ／日以上、０．１ｇ／ｋｇ／日以上、１ｇ／ｋｇ／日以上、２ｇ／ｋｇ／日以上、３ｇ／ｋｇ／日以上、４ｇ／ｋｇ／日以上、５ｇ／ｋｇ／日以上、６ｇ／ｋｇ／日以上、７ｇ／ｋｇ／日以上、８ｇ／ｋｇ／日以上、９ｇ／ｋｇ／日以上、１０ｇ／ｋｇ／日以上、１１ｇ／ｋｇ／日以上、１２ｇ／ｋｇ／日以上、１３ｇ／ｋｇ／日以上、又は１４ｇ／ｋｇ／日以上であるか、１５ｇ／ｋｇ／日以下、１４ｇ／ｋｇ／日以下、１３ｇ／ｋｇ／日以下、１２ｇ／ｋｇ／日以下、１１ｇ／ｋｇ／日以下、１０ｇ／ｋｇ／日以下、９ｇ／ｋｇ／日以下、８ｇ／ｋｇ／日以下、７ｇ／ｋｇ／日以下、６ｇ／ｋｇ／日以下、５ｇ／ｋｇ／日以下、４ｇ／ｋｇ／日以下、３ｇ／ｋｇ／日以下、２ｇ／ｋｇ／日以下、１ｇ／ｋｇ／日以下、０．１ｇ／ｋｇ／日以下、０．０１ｇ／ｋｇ／日以下、０．００１ｇ／ｋｇ／日以下、又は０．０００５ｇ／ｋｇ／日以下であってよい。好ましくは、０．０００１ｇ／ｋｇ／日〜１５ｍｇ／ｋｇ／日であってよい。
【００３９】
他の具現例によれば、前記認知機能低下は、ベータアミロイド（β−ａｍｙｌｏｉｄ）の凝集（ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ）、ベータアミロイドプラーク（ｐｌａｑｕｅ）の形成、脳由来神経栄養因子（ｂｒａｉｎ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｆａｃｔｏｒ、ＢＤＮＦ）の発現低下及びＤＮＭＴ１（ＤＮＡ（ｃｙｔｏｓｉｎｅ−５）−ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ１）発現増加からなる群より選ばれたいずれか一つ以上に起因したものであってよい。
【００４０】
また他の具現例によれば、前記認知機能低下は、記憶力減退、認知減退、識別力減退、鬱病、及び健忘症からなる群より選ばれる一つ以上を含んでいてよい。
【００４１】
また他の具現例によれば、前記改善は、ベータアミロイドの凝集抑制、凝集したベータアミロイドの分解、ＢＤＮＦ発現増進、及びＤＮＭＴ１発現減少からなる群より選ばれた一つ以上によりなされるものであってよい。
【００４２】
本発明の一実施例に係る、前記Ｔｒａｎｓ−３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボンを用いてベータアミロイド凝集評価（ｂｅｔａ−Ａｍｙｌｏｉｄ  ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ  ａｓｓａｙ）を実施した結果、比較対象物質であるエピカテキン３−Ｏ−ガレート（Ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ  ３−Ｏ−ｇａｌｌａｔｅ、ＥＣＧ、１μｇ／ｍｌ）は化合物を処理していない対照群（ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｃｏｎｔｒｏｌ）に比べて１７％の凝集抑制効果を示し、Ｔｒａｎｓ−３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボンは対照群に比べて６４％の凝集抑制効果を示した。特に、Ｔｒａｎｓ−３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボンのベータアミロイドは、結果グラフ（図５参照）上、優れた凝集抑制剤として知られているフェノールレッド（ｐｈｅｎｏｌ  ｒｅｄ、５５％の凝集抑制効果）とモリン（ｍｏｒｉｎ、７８％の凝集抑制効果）との間に位置するほど優れた凝集抑制効果を示した。さらに、Ｔｒａｎｓ−３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボン処理群において、反応時間６０分後に凝集（ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ）が減少する様相を示すことから、Ｔｒａｎｓ−３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボンは凝集したベータアミロイドの分解（ｄｉｓａｓｓｅｍｂｌｅ）にも効果があることが分かる。したがって、本発明のＴｒａｎｓ−３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボンを用いてベータアミロイドに関係した認知機能低下を改善させることができることを確認した。また、ベータアミロイド凝集に起因する疾病（アルツハイマー病などの神経退行性疾病を含む）の予防及び治療にＴｒａｎｓ−３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボンを有効に用いることができることを確認した。
【００４３】
また、本願発明のＴｒａｎｓ−３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボンは、神経細胞においてＢＤＮＦ発現を増進させ、ＤＮＭＴ１の発現を低下させた。すなわち、ＢＤＮＦ発現減少又はＤＮＭＴ１発現増進に関係した認知機能低下、アルツハイマー病などの神経退行性疾患の予防及び治療に本願発明を有効に活用することができることを究明したのである。
【００４４】
本発明のまた他の側面において、前記組成物は、神経退行性疾病を予防又は治療するための薬学組成物であってよい。
【００４５】
一具現例によれば、前記神経退行性疾病は、ベータアミロイド（β−ａｍｙｌｏｉｄ）の凝集（ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ）、ベータアミロイドのプラーク（ｐｌａｑｕｅ）の形成、ＢＤＮＦ発現低下、及びＤＮＭＴ１発現増加からなる群より選ばれたいずれか一つ以上に起因したものであってよい。
【００４６】
他の具現例によれば、前記神経退行性疾病は、アルツハイマー病を含んでいてよく、前記認知機能低下を含む症状を伴うものであってよい。
【００４７】
本発明の一側面に係る前記薬学組成物は、経口、非経口、直腸、局所、経皮、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下などに投与されていてよい。経口投与のための剤形は錠剤、丸剤、軟質及び硬質カプセル剤、顆粒剤、散剤、細粒剤、液剤、乳濁剤又はペレット剤であってよいが、これらに制限されるものではない。非経口投与のための剤形は、溶液剤、懸濁剤、乳液剤、ゲル、点滴剤、坐剤、パッチ又は噴霧剤であってよいが、これらに制限されるものではない。前記剤形は、当該分野における通常の方法によって容易に製造されていてよく、界面活性剤、賦形剤、水和剤、乳化促進剤、懸濁剤、浸透圧調節のための塩又は緩衝剤、着色剤、香辛料、安定化剤、防腐剤、保存剤又はその他常用する補助剤を更に含んでいてよい。
【００４８】
本発明の一側面に係る前記薬学組成物の適用量又は投与量は、投与を受ける対象の年齢、性別、体重、病理状態及びその深刻度、投与経路又は処方者の判断によって変わり得る。このような因子に基づく適用量の決定は、当業者の水準内にあり、有効成分の１日投与用量は、例えば、０．００１μｇ／ｋｇ／日〜５０００ｍｇ／ｋｇ／日、より具体的には、０．０００１ｍｇ／ｋｇ／日〜１５ｍｇ／ｋｇ／日であってよいが、これに制限されるものではない。
【００４９】
また他の具現例によれば、前記組成物は、食品組成物であってよい。
【００５０】
前記食品組成物の剤形は、特に限定されないが、例えば、錠剤、顆粒剤、丸剤、粉末剤、ドリンク剤のような液剤、キャラメル、ゲル、バー、ティーバッグなどに剤形化されていてよい。各剤形の食品組成物は、有効成分の他、当該分野において通常に用いられる成分を剤形又は使用目的に応じて当業者が難なく適宜選定して配合していてよく、他の原料と同時に適用する場合に相乗効果を奏し得る。
【００５１】
前記組成物は、単純摂取、飲用、注射投与、スプレー投与又はスクイズ投与などの多様な方法にて投与されていてよい。
【００５２】
本発明の一側面に係る食品組成物において、前記有効成分の投与量の決定は当業者の水準内にあり、その１日投与用量は、例えば、０．０００１ｍｇ／ｋｇ／日〜１５ｍｇ／ｋｇ／日であってよいが、これに制限されず、投与したい対象の年齢、健康状態、合併症などの種々の要因によって変わり得る。
【００５３】
本発明の一側面に係る食品組成物は、例えば、チューインガム、キャラメル製品、キャンディー類、氷菓類、菓子類などの各種の食品類、清涼飲料、ミネラルウォーター、アルコール飲料などの飲料製品、ビタミンやミネラルなどを含む健康機能性食品類であってよい。
【００５４】
前記以外に、本発明の一側面に係る食品組成物は、種々の栄養剤、ビタミン、鉱物（電解質）、合成風味剤及び天然風味剤などの風味剤、着色剤及び増進剤（チーズ、チョコレートなど）、ペクチン酸及びその塩、アルギン酸及びその塩、有機酸、保護性コロイド増粘剤、ｐＨ調整剤、安定化剤、防腐剤、グリセリン、アルコール、炭酸飲料に用いられる炭酸化剤などを含んでいてよい。その他、本発明の一側面に係る食品組成物は、天然果実ジュース及び果実ジュース飲料、並びに野菜飲料の製造のための果肉を含んでいてよい。これらの成分は、独立して、又は組み合わせて用いていてよい。これらの添加剤の比率は、さして重要ではないが、本発明の一側面に係る組成物１００質量部当たり０〜約５０質量部の範囲で含まれるのが一般的である。
【００５５】
以下、実施例、実験例、及び剤形例を挙げて本明細書の構成及び効果をより具体的に説明する。なお、これらの例は本明細書に対する理解を助けるための目的から例示したものに過ぎす、本明細書の範疇及び範囲が下記例により制限されるものではない
【００５６】
＜実施例１＞後発酵茶試料の製造
緑茶（Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ.  Ｙａｂｕｋｉｔａ）の葉で作った緑茶に水を添加して水分含量を４０質量％に調整した。これにバチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｌｉｓ）５×１０６ｃｆｕ／ｇを接種し、５０℃で３日間醗酵させてから８０℃で４日間醗酵させた。発酵された茶を７０℃〜８０℃の熱風で水分含量４質量％〜６質量％まで乾燥させた後、１０℃で１００日間熟成した。
【００５７】
前記熟成された茶試料を１５秒間粉砕し、メッシュサイズ１ｍｍのステンレス篩いにかけた。次いで、粉砕された５０ｍｇを１．５ｍｌエッペンドルフチューブ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ  ｔｕｂｅ）に入れ、１ｍｌの脱イオン水を添加して、６０℃恒温水槽で３０分間一定速度で撹拌した後、２５℃、１３，０００ｒｐｍで１５分間遠心分離した。乾燥させた醗酵緑茶抽出物から水に溶けない部分のみを分離した。
【００５８】
＜実施例２＞分画物の収得及び化合物の分離
前記後発酵茶試料１５０ｇをアセトンで分画してカテキン誘導体及びカフェインをできるだけ除去し、フラボノイドが濃縮された可溶物を収得した。前記アセトン可溶物４０ｇに対し、一次的にシリカゲルカラムクロマトグラフィーを利用して、クロロホルム：メタノールの混合物を溶媒として、１０：１、５：１、１：１（ｖ／ｖ）の順に溶出して各分画を得た。
【００５９】
ここで、クロロホルム：メタノール１０：１（ｖ／ｖ）分画１２ｇを高速液体クロマトグラフィー（ｈｉｇｈ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、ＨＰＬＣ、Ｗａｔｅｒｓ  Ａｌｌｉａｎｃｅ  ２６９５  ｓｙｓｔｅｍ、Ｗａｔｅｒｓ、ＵＳＡ）で分析した結果、前記のようにアセトンで分画していない場合、依然としてカフェインが主化合物として存在しており、前記のようにアセトンを用いて分画した後はカフェインが除去されたことを確認した（図１）。
【００６０】
カフェインが除去されたクロロホルム：メタノール１０：１（ｖ／ｖ）分画物８．９ｇを大容量高速向流クロマトグラフィー（ｈｉｇｈ−ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｃｏｕｎｔｅｒｃｕｒｒｅｎｔ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、ＨＰＣＣＣ、Ｄｙｎａｍｉｃ  Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｓ  Ｌｔｄ、ＵＫ）を利用して分画した。この際に用いた溶媒はｎ−ｈｅｘａｎｅ−ＴＢＭＥ（Ｍｅｔｈｙｌ  ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌ  ｅｔｈｅｒ）−ＢｕＯＨ−ＭｅＣＮ−Ｗａｔｅｒ（０．２５：３：１：１：５、ｖ／ｖ）であり、流速は２５ｍｌ／ｍｉｎであった。前記条件を用いて総１０個の下位分画を分け（図２）、これらをＨＰＬＣで分析して、各分画に含有された化合物の大半がフラボノイド（ｆｌａｖｏｎｏｉｄ）系であることを確認した（図３、図４）。
【００６１】
前記分画物からＴｒａｎｓ−３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボン（Ｔｒａｎｓ−３−Ｏ−ｇａｌｌｏｙｌ−３，３’，５，５’，７−ｐｅｎｔａｈｙｄｒｏｘｙｆｌａｖａｎ、Ｃ２２Ｈ１８Ｏ１０、分子量４４２．０９００）を分離し、分離された化合物の構造は下記のとおりである。
【００６２】
【化３】
2019521076.tif 000005
【００６３】
１Ｈ核磁気共鳴（ｎｕｃｌｅａｒ  ｍａｇｎｅｔｉｃ  ｒｅｓｏｎａｎｃｅ、ＮＭＲ）の場合、溶媒（ｓｏｌｖｅｎｔ）としてｍｅｔｈａｎｏｌ−ｄ３を用い、機器はＢｒｕｋｅｒ  Ａｄｖａｎｃｅ  ＤＰＸ−５００（ＢＲＵＫＥＲ社、ＵＳＡ）を使用し、Ｔｒａｎｓ−３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボンのＮＭＲデータは下記のとおりであり、具体的なグラフは図６のとおりである。
【００６４】
１Ｈ ＮＭＲ ｄ（５００Ｈｚ） ７.０１（ｓ、２Ｈ）、６.８９（ｓ、１Ｈ）、６.７６（ｓ、２Ｈ）、６.０４（ｓ、１Ｈ）、５.９６（ｓ、１Ｈ）、５.３６（ｍ、１Ｈ）、５.１３（ｍ、１Ｈ）、２.８３（ｍ、１H）、２.７３（ｍ、１Ｈ）
【００６５】
＜実験例１＞ベータアミロイド凝集効果の確認
前記Ｔｒａｎｓ−３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボンのベータアミロイド凝集阻害効果を蛍光分析法（ＴｈｉｏｆｌａｖｉｎＴ  ａｓｓａｙ）にて確認した。
【００６６】
具体的に、ベータアミロイド（Ａβ１−４２、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｃｏ、ＵＳＡ）５μＭの濃度で用い、使用前に−８０℃で保管した。ＤＭＳＯにモリン（Ｍｏｒｉｎ、１００μＭ）、フェノールレッド（Ｐｈｅｎｏｌ  Ｒｅｄ、１００μＭ）、エピカテキン３−Ｏ−ガレート（Ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ  ３−Ｏ−ｇａｌｌａｔｅ、ＥＣＧ、１μｇ／ｍｌ）、Ｔｒａｎｓ−３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボン（１μｇ／ｍｌ）それぞれを希釈して前記濃度に調節した。Ａβ１−４２凝集抑制程度を特定するために、０．０１Ｍリン酸ナトリウム緩衝溶液９２．５μｌに前記濃度で用意したそれぞれの化合物を５μｌずつ加え、５μＭのＡβ１−４２を２．５μｌ加えてから、３７℃で２６時間反応させた後、５μＭチオフラビンＴ（ＴｈｉｏｆｌａｖｉｎＴ）２，０００μｌを加え、蛍光分光光度計（ＲＦ−５３００ＰＣ、ＳＨＩＭＡＤＺＵ  ＣＯＲＰＯＲＡＴＩＯＮ、Ｊａｐａｎ）で測定した。
【００６７】
その結果を図５に併せて示した。すなわち、ＥＣＧとＴｒａｎｓ−３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボンは、それぞれ陽性対照群（ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｃｏｎｔｒｏｌ、化合物を処理することなくベータアミルロイドだけを凝集させたもの）に比べて１７％、６４％の凝集抑制効果を示した。特に、Ｔｒａｎｓ−３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボンの抑制効果（６４％）は、陽性抑制剤（ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）として用いられたフェノールレッド（５５％）とモリン（７８％）との間に位置するほど優れた凝集抑制効果を示した。Ｔｒａｎｓ−３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボン処理群において、反応時間６０分後に凝集が減少する様相から、Ｔｒａｎｓ−３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボンは凝集したベータアミロイドの分解（ｄｉｓａｓｓｅｍｂｌｅ）にも効果があることが確認された。
【００６８】
＜実験例２＞細胞内のＢＤＮＦ（脳由来神経栄養因子、ｂｒａｉｎ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｆａｃｔｏｒ）及びＤＮＭＴ１（ＤＮＡ（ｃｙｔｏｓｉｎｅ−５）−ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  １）の発現量の確認
ＳＨ−ＳＹ５Ｙ（神経芽細胞腫、韓国細胞株銀行）細胞株を６ウェルプレート（ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅ、ＦＡＬＣＯＮ）にウェル当たり２×１０６ずつシーディングし（ｓｅｅｄｉｎｇ）、２４時間、３７℃、５％ＣＯ２インキュベータに培養後、ＧＣＧ  １０μＭ、ＥＧＣＧ  １０μＭ、既存の緑茶抽出物（ｇｒｅｅｎ  ｔｅａ  ｅｘｔｒａｃｔ、ＧＴＥ）１０μｇ／ｍｌ、Ｔｒａｎｓ−３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボン１０μｇ／ｍｌ、陽性対照群として５−Ａｚａ−２’ｄｅｏｘｙｃｙｔｉｄｉｎｅ（５−Ａｚａ、Ｓｉｇｍａ−ａｌｄｒｉｃｈ）１μＭで処理して２４時間更に培養した。次いで、培地を全て除去し、ＲＮＡ抽出キット（ＲＮｅａｓｙ  ｍｉｎｉ  ｋｉｔ、Ｑｕｉａｇｅｎ社）を利用してＲＮＡを抽出した。抽出したｍＲＮＡを紫外線検出器（ＴＥＣＡＮ社）を利用して定量後、１μｇのｍＲＮＡをキット（ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  ＶＩＬＯ  ｃＤＮＡ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｋｉｔ、Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ  ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を利用して相補的なＤＮＡに合成した。約１μｇの相補的なＤＮＡを取り、Ｔａｑｍａｎ  ｐｒｏｂｅ（Ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社）とＱｕａｎｔｉｔｅｃｔ  Ｐｒｏｂｅ  ＰＣＲ  Ｋｉｔ（Ｑｕｉａｇｅｎ社）を利用してリアルタイム定量連鎖重合反応を実施した。これにより、ＢＤＮＦ及びＤＮＭＴ１の発現量を確認した。このとき、補正基準ｍＲＮＡとしては、ハウスキーピング遺伝子（ｈｏｕｓｅｋｅｅｐｉｎｇ  ｇｅｎｅ）であるＧＡＰＤＨを用いた。
【００６９】
ＢＤＮＦ及びＤＮＭＴ１の発現量をそれぞれ表１及び表２に表した。
【００７０】
【表１】
2019521076.tif 000006
【００７１】
【表２】
2019521076.tif 000007
【００７２】
＜剤形例１＞軟質カプセル
本発明の実施例２に係る後発酵茶アセトン分画物１５０ｍｇ、ラクトース４４０ｍｇ、とうもろこし澱粉４３０ｍｇ及びステアリン酸マグネシウム２ｍｇを混合して軟質カプセル充填液を製造した。そして、該充填液とは別にゼラチン６６質量部、グリセリン２４質量部及びソルビトール液１０質量部の割合で軟質カプセルシートを製造し、前記充填液を充填して、軟質カプセルを製造した。
【００７３】
また、本発明の実施例に係るＴｒａｎｓ−３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボン３ｍｇ、ラクトース４４０ｍｇ、とうもろこし澱粉４５０ｍｇ及びステアリン酸マグネシウム２ｍｇを混合して軟質カプセル充填液を製造する。そして、前記のように軟質カプセルシートを製造し、前記充填液を充填して、軟質カプセルを製造した。
【００７４】
＜剤形例２＞錠剤
本発明の実施例２に係る後発酵茶アセトン分画物１５０ｍｇ、ビタミンＥ  １５ｍｇ、ビタミンＣ  １５ｍｇ、ガラクトオリゴ糖２５０ｍｇ、乳糖６０ｍｇ及び麦芽糖１４０ｍｇを混合し、流動層乾燥機を利用して造粒した後、糖エステル（ｓｕｇａｒ  ｅｓｔｅｒ）８ｍｇを添加した。この組成物を通常の方法にて打錠して錠剤を製造した。
【００７５】
また、実施例のＴｒａｎｓ−３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボン３ｍｇ、ビタミンＥ  １５ｍｇ、ビタミンＣ  １５ｍｇ、ガラクトオリゴ糖２５９ｍｇ、乳糖６０ｍｇ及び麦芽糖１４０ｍｇを混合し、流動層乾燥機を利用して造粒した後、糖エステル（ｓｕｇａｒ  ｅｓｔｅｒ）８ｍｇを添加した。この組成物を通常の方法にて打錠して錠剤を製造した。
【００７６】
＜剤形例３＞ドリンク剤
本発明の実施例２に係る後発酵茶アセトン分画物８０ｍｇ、ビタミンＥ  ９ｍｇ、ビタミンＣ  ９ｍｇ、ブドウ糖１０g、クエン酸０．６ｇ、及び液状オリゴ糖２５ｇを混合し、これに精製水４００ｍｌを加えて、ビンに充填した。ビンに充填した後、３０℃で４〜５秒間殺菌してドリンク剤を製造した。
【００７７】
また、実施例のＴｒａｎｓ−３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボン０．１ｍｇ、ビタミンＥ  ９ｍｇ、ビタミンＣ  ９ｍｇ、ブドウ糖１０ｇ、クエン酸０．６ｇ、及び液状オリゴ糖２５gを混合し、これに精製水４００ｍｌを加えて、各ビンに２００ｍｌずつ充填した。ビンに充填した後、３０℃で４〜５秒間殺菌してドリンク剤を製造した。
【００７８】
＜剤形例４＞顆粒剤
本発明の実施例２に係る後発酵茶アセトン分画物１５０ｍｇ、ビタミンＥ  ９ｍｇ、ビタミンＣ  ９ｍｇ、無水結晶ブドウ糖２５０ｍｇ及び澱粉５５０ｍｇを混合し、流動層顆粒機を使用して料粒に造粒した後、包みに充填して顆粒剤を製造した。
【００７９】
また、実施例のＴｒａｎｓ−３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボン３ｍｇ、ビタミンＥ  ９ｍｇ、ビタミンＣ  ９ｍｇ、無水結晶ブドウ糖２５０ｍｇ及び澱粉５５０ｍｇを混合し、流動層顆粒機を使用して顆粒に造粒した後、包みに充填して顆粒剤を製造した。
【００８０】
＜剤形例５＞注射剤
下記の表３に表わされた組成に従い、通常の方法にて注射剤を製造した。
【００８１】
【表３】
2019521076.tif 000008
【００８２】
また、前記後発酵茶アセトン分画物の代わりに、実施例のＴｒａｎｓ−３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボンを３ｍｇ用いて注射剤を製造した。
【００８３】
＜剤形例６＞健康食品
下記の表４に表わした組成に従い、通常の方法にて健康食品を製造した。
【００８４】
【表４】
2019521076.tif 000009
【００８５】
また、前記後発酵茶アセトン分画物の代わり、実施例のＴｒａｎｓ−３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボンを３ｍｇ用いて健康食品を製造した。
【００８６】
前記ビタミン及び無機質混合物の組成比は、比較的に健康食品に適合した成分を例にして混合組成したが、その配合比を任意に変形実施しても構わなく、通常の健康食品の製造方法にて前記の成分を混合した後、通常の方法にて健康食品の組成物の製造に用いてよい。
【００８７】
＜剤形例７＞健康飲料
【００８８】
【表５】
2019521076.tif 000010
【００８９】
前記表５のように総体積９００ｍｌとなるように残量の精製水を添加して、通常の健康飲料の製造方法に従い、前記成分を混合してから、約１時間、８５℃で撹拌加熱した後、作られた溶液をろ過し、滅菌された２リットルの容器に入れて、密封滅菌した後、冷蔵保管して、健康飲料を製造した。
【００９０】
また、前記後発酵茶アセトン分画物の代わりに、実施例のＴｒａｎｓ−３−Ｏ−ガロイル−３，３’，５，５’，７−ペンタヒドロキシフラボンを０．１ｍｇ用いて健康飲料を製造した。
【００９１】
以上、本明細書の特定の部分について詳細に記述したが、当業界の通常の知識を有する者にとってこうした具体的な記述は、単に好ましい具現例であるに過ぎず、これにより本明細書の範囲が制限されるものでない点は明白である。したがって、本明細書の実質的な範囲は、特許請求の範囲とそれらの等価物によって定義されると言える。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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