【手続補正書】
【提出日】令和3年12月6日(2021.12.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗体産生細胞における内因性抗体産生を変更するための方法であって、前記抗体産生細胞を含む細胞懸濁物に狭窄を通過させるステップを含み、前記狭窄が前記細胞を変形させ、それによって、抗体産生を変更する化合物が前記抗体産生細胞に進入するような前記細胞の乱れを引き起こし、前記抗体産生細胞における内因性抗体産生が変更される、方法。
【請求項２】
前記内因性抗体産生が増強される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
（ａ）前記狭窄が、マイクロ流体チャネル内に含まれるか、または、前記狭窄が、孔であるか、もしくは孔内に含まれる、および／または
（ｂ）前記狭窄のサイズが、前記細胞の直径の関数である、
請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記狭窄のサイズが、前記細胞の直径の約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％または約９９％である、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
（ａ）前記細胞懸濁物が、混合された細胞集団を含む、および／または
（ｂ）前記細胞懸濁物が、哺乳動物細胞を含む、および／または
（ｃ）前記細胞懸濁物が、ヒト細胞を含む、
請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
（ａ）前記細胞懸濁物が全血である、および／または
（ｂ）前記細胞懸濁物が、末梢血単核細胞を含む、および／または
（ｃ）前記抗体産生細胞が免疫細胞である、
請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記抗体産生細胞が、Ｂ細胞またはＢ細胞先駆体である、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記抗体産生細胞が、骨髄由来Ｂ細胞先駆体、ナイーブＢ細胞、活性化されたＢ細胞、メモリーＢ細胞、形質細胞、Ｂ−１細胞、辺縁帯Ｂ細胞、濾胞Ｂ細胞、調節性Ｂ細胞またはＢ細胞リンパ腫細胞である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記化合物が、
（ａ）核酸、
（ｂ）ペプチド核酸、
（ｃ）タンパク質−核酸複合体、
（ｄ）タンパク質もしくはポリペプチド、
（ｅ）Ｂ細胞活性化因子、
（ｆ）増殖誘導性リガンド、
（ｇ）Ｂ細胞受容体シグナル伝達分子、
（ｈ）ＡＴＰ、
（ｉ）細胞活性化因子、
（ｊ）細胞分化因子、
（ｋ）小分子、
（ｌ）ナノ粒子、または
（ｍ）リポソーム
を含む、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
（ａ）前記化合物が核酸を含み、
（ｉ）前記核酸が、ｓｉＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｌｎｃＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｓａＲＮＡもしくはｓｈＲＮＡをコードするか、または
（ｉｉ）前記核酸がプラスミドであるか、または
（ｉｉｉ）前記核酸がＣａｓ９タンパク質およびガイドＲＮＡをコードするか、
（ｉｖ）前記化合物が、ウイルス、ウイルス粒子、もしくはウイルスカプシドを含むビヒクル中にあるか、または
（ｂ）前記化合物がタンパク質−核酸複合体を含み、前記タンパク質−核酸複合体がＣａｓ９タンパク質およびガイドＲＮＡを含むか、または
（ｃ）前記化合物が、タンパク質もしくはポリペプチドを含み、前記タンパク質が
（ｉ）ＴＡＬＥＮタンパク質、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、メガヌクレアーゼもしくはＣＲＥリコンビナーゼ、
（ｉｉ）転写因子
（ｉｉｉ）トランスポザーゼもしくはインテグラーゼ酵素、または
（ｉｖ）抗アポトーシスタンパク質
である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
（ａ）前記化合物がタンパク質−核酸複合体を含み、前記タンパク質−核酸複合体がＣａｓ９タンパク質およびガイドＲＮＡを含み、前記化合物がドナーＤＮＡをさらに含むか、または
（ｂ）前記化合物が核酸を含み、前記核酸がＣａｓ９タンパク質およびガイドＲＮＡをコードし、前記化合物がドナーＤＮＡをさらに含むか、または
（ｃ）前記化合物が核酸を含み、前記化合物がウイルス、ウイルス粒子、もしくはウイルスカプシドを含むビヒクル中にあり、前記ウイルスがアデノ随伴ウイルスである、
請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
（ａ）前記抗体が、ヒトまたはヒト化抗体である、および／または
（ｂ）前記抗体が抗原結合性抗体バリアントである、および/または
（ｃ）前記抗体のクラスが、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥもしくはＩｇＤである、
請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
（ａ）前記抗体が抗原結合性抗体断片であるか、
（ｂ）前記抗体が全長抗体であるか、
（ｃ）前記抗体が、単一ドメイン抗体、ナノボディ、ＶＨＨもしくはＶＮＡＲ抗体断片であるか、
（ｄ）前記抗体が単鎖抗体であるか、
（ｅ）前記抗体が多特異性抗体であるか、または
（ｆ）前記抗体が抗体融合タンパク質である、
請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
（ａ）前記細胞懸濁物が、前記狭窄を通過させるステップの前に、それと同時に、またはその後に、前記化合物と接触される、および／または
（ｂ）前記チャネルが、約１０μｍから３０μｍの狭窄長さおよび約４μｍの狭窄幅を含む、および／または
（ｃ）約−５℃と約４５℃との間で実施される、
請求項１から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記内因性抗体産生が、少なくとも約２５％、約５０％、約７５％、約１００％、約１５０％、約２００％、または約２００％よりも大きく変更される、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
患者の処置において使用するための、改変された抗体産生細胞を含む組成物であって、前記使用は請求項１から１５のいずれか一項に従って改変された前記抗体産生免疫細胞を前記患者に導入することを含む、組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２６０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２６０】
脾臓を、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌性マウスから収集し、７０μｍセルストレーナーを介してすり潰す。赤血球を溶解させ、Ｂ細胞を、使用説明書に従ってＢ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して、細胞懸濁物からさらに単離する。Ｂ細胞を、Ｂ細胞抗体産生を増強するための化合物と共に、１ｍＬ当たり１〜１０×１０６細胞の濃度でＰＢＳ中に懸濁する。対照として、Ｂ細胞を、化合物なしで処理する。細胞懸濁物に、９０ｐｓｉの圧力において１０−４チップまたは３０−４チップのいずれかを通過させる処理を行う。処理後、細胞を、その間の遠心分離を伴ってＲ１０中で３回洗浄し、最終的にＲ１０中に再懸濁し、９６ウェルのｕ底中に、１ｕｇ／ｍｌのＲ８４８＋１００単位／ｍｌのＩＬ−２と共に１０〜５０，０００細胞／ウェルでプレートする。細胞を３日間培養し、その後、上清を回収し、ＥＬＩＳＡによって総抗体含量についてアッセイする。化合物が送達されたＢ細胞によって産生された総抗体含量を、その化合物を受けていないＢ細胞によって産生された総抗体と比較する。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
(項目１)
抗体産生細胞における内因性抗体産生を変更するための方法であって、前記抗体産生細胞を含む細胞懸濁物に狭窄を通過させるステップを含み、前記狭窄が前記細胞を変形させ、それによって、抗体産生を変更する化合物が前記抗体産生細胞に進入するような前記細胞の乱れを引き起こし、前記抗体産生細胞における内因性抗体産生が変更される、方法。
(項目２)
前記内因性抗体産生が増強される、項目１に記載の方法。
(項目３)
前記内因性抗体産生が減少される、項目１に記載の方法。
(項目４)
前記狭窄が、マイクロ流体チャネル内に含まれる、項目１から３のいずれか一項に記載の方法。
(項目５)
前記狭窄が、孔であるか、または孔内に含まれる、項目１から３のいずれか一項に記載の方法。
(項目６)
前記孔が、表面中に含まれる、項目５に記載の方法。
(項目７)
前記表面がフィルターである、項目６に記載の方法。
(項目８)
前記表面がメンブレンである、項目６に記載の方法。
(項目９)
前記狭窄のサイズが、前記細胞の直径の関数である、項目１から８のいずれか一項に記載の方法。
(項目１０)
前記狭窄のサイズが、前記細胞の直径の約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％または約９９％である、項目１から９のいずれか一項に記載の方法。
(項目１１)
前記細胞懸濁物が、混合された細胞集団を含む、項目１から１０のいずれか一項に記載の方法。
(項目１２)
前記細胞懸濁物が全血である、項目１から１１のいずれか一項に記載の方法。
(項目１３)
前記細胞懸濁物が、精製された細胞集団を含む、項目１から１０のいずれか一項に記載の方法。
(項目１４)
前記細胞懸濁物が、哺乳動物細胞を含む、項目１から１３のいずれか一項に記載の方法。
(項目１５)
前記細胞懸濁物が、サル、マウス、イヌ、ネコ、ウマ、ラット、ヒツジ、ヤギまたはウサギの細胞を含む、項目１から１４のいずれか一項に記載の方法。
(項目１６)
前記細胞懸濁物が、ヒト細胞を含む、項目１から１４のいずれか一項に記載の方法。
(項目１７)
前記細胞懸濁物が、非哺乳動物細胞を含む、項目１から１３のいずれか一項に記載の方法。
(項目１８)
前記細胞懸濁物が、細菌、酵母、ニワトリ、カエル、昆虫または線形動物の細胞を含む、項目１から１３または１７のいずれか一項に記載の方法。
(項目１９)
前記細胞懸濁物が、末梢血単核細胞を含む、項目１から１７のいずれか一項に記載の方法。
(項目２０)
前記抗体産生細胞が免疫細胞である、項目１から１９のいずれか一項に記載の方法。
(項目２１)
前記抗体産生細胞が、Ｂ細胞またはＢ細胞先駆体である、項目１から２０のいずれか一項に記載の方法。
(項目２２)
前記抗体産生細胞が、Ｂ細胞先駆体、ナイーブＢ細胞、活性化されたＢ細胞、メモリーＢ細胞、形質細胞、Ｂ−１細胞、辺縁帯Ｂ細胞、濾胞Ｂ細胞、調節性Ｂ細胞またはＢ細胞リンパ腫細胞である、項目２１に記載の方法。
(項目２３)
前記抗体産生細胞が骨髄由来Ｂ細胞先駆体である、項目２１または２２に記載の方法。
(項目２４)
前記化合物が、核酸を含む、項目１から２３のいずれか一項に記載の方法。
(項目２５)
前記核酸が、ｓｉＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｌｎｃＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｓａＲＮＡまたはｓｈＲＮＡをコードする、項目２４に記載の方法。
(項目２６)
前記核酸がプラスミドである、項目２４に記載の方法。
(項目２７)
前記化合物が、ペプチド核酸を含む、項目１から２３のいずれか一項に記載の方法。
(項目２８)
前記化合物が、タンパク質−核酸複合体を含む、項目１から２３のいずれか一項に記載の方法。
(項目２９)
前記タンパク質−核酸複合体が、Ｃａｓ９タンパク質およびガイドＲＮＡを含む、項目２８に記載の方法。
(項目３０)
ドナーＤＮＡをさらに含む、項目２９に記載の方法。
(項目３１)
前記核酸が、Ｃａｓ９タンパク質およびガイドＲＮＡをコードする、項目２４に記載の方法。
(項目３２)
ドナーＤＮＡをさらに含む、項目３１に記載の方法。
(項目３３)
前記化合物が、タンパク質またはポリペプチドを含む、項目１から２３のいずれか一項に記載の方法。
(項目３４)
前記タンパク質が、ＴＡＬＥＮタンパク質、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、メガヌクレアーゼまたはＣＲＥリコンビナーゼである、項目３３に記載の方法。
(項目３５)
前記タンパク質が転写因子である、項目３３に記載の方法。
(項目３６)
前記タンパク質が、トランスポザーゼまたはインテグラーゼ酵素である、項目３３に記載の方法。
(項目３７)
前記タンパク質が抗アポトーシスタンパク質である、項目３３に記載の方法。
(項目３８)
前記化合物がＢ細胞活性化因子である、項目１から２３のいずれか一項に記載の方法。
(項目３９)
前記化合物が増殖誘導性リガンドである、項目１から２３のいずれか一項に記載の方法。
(項目４０)
前記化合物が、Ｂ細胞受容体シグナル伝達分子のアクチベーターである、項目１から２３のいずれか一項に記載の方法。
(項目４１)
前記化合物がＡＴＰである、項目１から２３のいずれか一項に記載の方法。
(項目４２)
前記化合物が細胞活性化因子である、項目１から２３のいずれか一項に記載の方法。
(項目４３)
前記化合物が細胞分化因子である、項目１から２３のいずれか一項に記載の方法。
(項目４４)
前記化合物が小分子である、項目１から２３のいずれか一項に記載の方法。
(項目４５)
前記化合物がナノ粒子中にある、項目１から２３のいずれか一項に記載の方法。
(項目４６)
前記化合物がリポソーム中にある、項目１から２３のいずれか一項に記載の方法。
(項目４７)
前記化合物が、ウイルス、ウイルス粒子、またはウイルスカプシドを含むビヒクル中にある、項目２４に記載の方法。
(項目４８)
前記化合物が、アデノ随伴ウイルス、アデノ随伴ウイルス粒子、またはアデノ随伴ウイルスカプシドを含むビヒクル中にある、項目２４に記載の方法。
(項目４９)
前記抗体が、ヒトまたはヒト化抗体である、項目１から４８のいずれか一項に記載の方法。
(項目５０)
前記抗体が抗原結合性抗体バリアントである、項目１から４９のいずれか一項に記載の方法。
(項目５１)
前記抗体のクラスが、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥまたはＩｇＤである、項目１から５０のいずれか一項に記載の方法。
(項目５２)
前記抗体が抗原結合性抗体断片である、項目１から５０のいずれか一項に記載の方法。
(項目５３)
前記抗体が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆａｂ２、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂまたはｄｓＦｖ断片である、項目５２に記載の方法。
(項目５４)
前記抗体が全長抗体である、項目１から５１のいずれか一項に記載の方法。
(項目５５)
前記抗体が、単一ドメイン抗体、ナノボディ、ＶＨＨまたはＶＮＡＲ抗体断片である、項目１から５０のいずれか一項に記載の方法。
(項目５６)
前記抗体が単鎖抗体である、項目１から５０のいずれか一項に記載の方法。
(項目５７)
前記抗体が多特異性抗体である、項目１から５１のいずれか一項に記載の方法。
(項目５８)
前記抗体が抗体融合タンパク質である、項目１から５１のいずれか一項に記載の方法。
(項目５９)
前記細胞懸濁物が、前記狭窄を通過させるステップの前に、それと同時に、またはその後に、前記化合物と接触される、項目１から５８のいずれか一項に記載の方法。
(項目６０)
前記チャネルが、約３０μｍの狭窄長さおよび約４μｍの狭窄幅を含む、項目１から２のいずれか一項に記載の方法。
(項目６１)
前記チャネルが、約１０μｍの狭窄長さおよび約４μｍの狭窄幅を含む、項目１から４のいずれか一項に記載の方法。
(項目６２)
前記孔のサイズが、約０．４μｍ、約４μｍ、約５μｍ、約８μｍ、約１０μｍ、約１２μｍまたは約１４μｍである、項目１から３または５のいずれか一項に記載の方法。
(項目６３)
約−５℃と約４５℃との間で実施される、項目１から６２のいずれか一項に記載の方法。
(項目６４)
前記内因性抗体産生が、少なくとも約２５％、約５０％、約７５％、約１００％、約１５０％、約２００％、または約２００％よりも大きく変更される、項目１から６３のいずれか一項に記載の方法。
(項目６５)
前記内因性抗体産生が、前記狭窄を通過しなかった細胞による抗体産生よりも、約２５％、約５０％、約７５％、約１００％、約１５０％、約２００％長く、または約２００％を超えて長く持続される、項目１から６３のいずれか一項に記載の方法。
(項目６６)
項目１から１６または１９から６５のいずれか一項に従って改変された前記抗体産生免疫細胞を患者に導入することによって、前記患者を処置する方法。
(項目６７)
前記細胞が、患者から単離され、項目１から１６または１９から６５のいずれか一項に記載の方法に従って改変され、前記患者中に戻し導入される、項目６６に記載の方法。
(項目６８)
前記細胞が、異なる個体から単離され、項目１から１６または１９から６５のいずれか一項に記載の方法に従って改変され、患者中に導入される、項目６６に記載の方法。
(項目６９)
項目１から１６または１９から６５のいずれか一項に従って改変された前記抗体産生免疫細胞を個体に導入することによって、前記個体における抗体産生を増強する方法。
(項目７０)
前記細胞が、個体から単離され、項目１から１６または１９から６５のいずれか一項に記載の方法に従って改変され、前記個体中に戻し導入される、項目６９に記載の方法。
(項目７１)
前記細胞が、個体から単離され、項目１から１６または１９から６５のいずれか一項に記載の方法に従って改変され、異なる個体中に導入される、項目６９に記載の方法。
(項目７２)
前記細胞を、少なくとも１つの電極によって生成された電場と接触させるステップをさらに含む、項目１から７１のいずれか一項に記載の方法。
(項目７３)
項目１から７２のいずれか一項に記載の方法における使用のための、前記狭窄、細胞懸濁物および化合物を含むシステム。
(項目７４)
電場を生成するための少なくとも１つの電極をさらに含む、項目７３に記載のシステム。
(項目７５)
細胞におけるｄｅ  ｎｏｖｏ抗体産生を誘導するための方法であって、細胞懸濁物に狭窄を通過させるステップを含み、前記狭窄が前記細胞を変形させ、それによって、抗体産生を開始させる化合物が前記細胞に進入するような前記細胞の乱れを引き起こし、前記細胞におけるｄｅ  ｎｏｖｏ抗体産生が誘導される、方法。
(項目７６)
前記狭窄が、マイクロ流体チャネル内に含まれる、項目７５に記載の方法。
(項目７７)
前記狭窄が、孔であるか、または孔内に含まれる、項目７５に記載の方法。
(項目７８)
前記孔が、表面中に含まれる、項目７７に記載の方法。
(項目７９)
前記表面がフィルターである、項目７８に記載の方法。
(項目８０)
前記表面がメンブレンである、項目７８に記載の方法。
(項目８１)
前記狭窄のサイズが、前記細胞の直径の関数である、項目７５から８０のいずれか一項に記載の方法。
(項目８２)
前記狭窄のサイズが、前記細胞の直径の約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％または約９９％である、項目７５から８１のいずれか一項に記載の方法。
(項目８３)
前記細胞懸濁物が、混合された細胞集団を含む、項目７５から８２のいずれか一項に記載の方法。
(項目８４)
前記細胞懸濁物が全血である、項目７５から８３のいずれか一項に記載の方法。
(項目８５)
前記細胞懸濁物が、精製された細胞集団を含む、項目７５から８４のいずれか一項に記載の方法。
(項目８６)
前記細胞懸濁物が、哺乳動物細胞を含む、項目７５から８５のいずれか一項に記載の方法。
(項目８７)
前記細胞懸濁物が、サル、マウス、イヌ、ネコ、ウマ、ラット、ヒツジ、ヤギまたはウサギの細胞を含む、項目７５から８６のいずれか一項に記載の方法。
(項目８８)
前記細胞懸濁物が、ヒト細胞を含む、項目７５から８６のいずれか一項に記載の方法。
(項目８９)
前記細胞懸濁物が、非哺乳動物細胞を含む、項目７５から８５のいずれか一項に記載の方法。
(項目９０)
前記細胞懸濁物が、細菌、酵母、ニワトリ、カエル、昆虫または線形動物の細胞を含む、項目７５から８５または８９のいずれか一項に記載の方法。
(項目９１)
前記細胞懸濁物が、末梢血単核細胞を含む、項目７５から８９のいずれか一項に記載の方法。
(項目９２)
前記細胞が、免疫細胞、幹細胞、骨髄由来前駆細胞、赤血球先駆体、線維芽細胞、心臓細胞または細胞株細胞である、項目７５から９１のいずれか一項に記載の方法。
(項目９３)
前記細胞が、Ｂ細胞、Ｔ細胞、単球、マクロファージ、好中球、好酸球、樹状細胞、好塩基球、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、マスト細胞または幹細胞である、項目７５から９２のいずれか一項に記載の方法。
(項目９４)
前記細胞が、Ｂ細胞またはＢ細胞先駆体である、項目７５から９３のいずれか一項に記載の方法。
(項目９５)
前記細胞が、Ｂ細胞先駆体、ナイーブＢ細胞、活性化されたＢ細胞、メモリーＢ細胞、形質細胞、Ｂ−１細胞、辺縁帯Ｂ細胞、濾胞Ｂ細胞、調節性Ｂ細胞またはＢ細胞リンパ腫細胞である、項目９４に記載の方法。
(項目９６)
前記細胞が骨髄由来Ｂ細胞先駆体である、項目９４または９５に記載の方法。
(項目９７)
前記化合物が、核酸を含む、項目７５から９６のいずれか一項に記載の方法。
(項目９８)
前記核酸が、免疫グロブリンをコードする、項目９７に記載の方法。
(項目９９)
前記核酸が、前記細胞のゲノム中に組み込まれる、項目９８に記載の方法。
(項目１００)
前記核酸が、前記細胞のゲノム中に組み込まれない、項目９８に記載の方法。
(項目１０１)
前記核酸が、ｓｉＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｌｎｃＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｓａＲＮＡまたはｓｈＲＮＡをコードする、項目９７に記載の方法。
(項目１０２)
前記核酸がプラスミドである、項目９７に記載の方法。
(項目１０３)
前記化合物が、ペプチド核酸を含む、項目７５から９６のいずれか一項に記載の方法。
(項目１０４)
前記化合物が、タンパク質−核酸複合体を含む、項目７５から９６のいずれか一項に記載の方法。
(項目１０５)
前記タンパク質−核酸複合体が、Ｃａｓ９タンパク質およびガイドＲＮＡを含む、項目１０４に記載の方法。
(項目１０６)
ドナーＤＮＡをさらに含む、項目１０５に記載の方法。
(項目１０７)
前記核酸が、Ｃａｓ９タンパク質およびガイドＲＮＡをコードする、項目９７に記載の方法。
(項目１０８)
ドナーＤＮＡをさらに含む、項目１０７に記載の方法。
(項目１０９)
前記化合物が、タンパク質またはポリペプチドを含む、項目７５から９６のいずれか一項に記載の方法。
(項目１１０)
前記タンパク質が、ＴＡＬＥＮタンパク質、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、メガヌクレアーゼまたはＣＲＥリコンビナーゼである、項目１０９に記載の方法。
(項目１１１)
前記タンパク質が転写因子である、項目１０９に記載の方法。
(項目１１２)
前記タンパク質が、トランスポザーゼまたはインテグラーゼ酵素である、項目１０９に記載の方法。
(項目１１３)
前記化合物がＢ細胞活性化因子である、項目７５から９６のいずれか一項に記載の方法。
(項目１１４)
前記化合物が増殖誘導性リガンドである、項目７５から９６のいずれか一項に記載の方法。
(項目１１５)
前記化合物が、Ｂ細胞受容体シグナル伝達分子のアクチベーターである、項目７５から９６のいずれか一項に記載の方法。
(項目１１６)
前記化合物が細胞活性化因子である、項目７５から９６のいずれか一項に記載の方法。
(項目１１７)
前記化合物が細胞分化因子である、項目７５から９６のいずれか一項に記載の方法。
(項目１１８)
前記化合物が小分子である、項目７５から９６のいずれか一項に記載の方法。
(項目１１９)
前記化合物がナノ粒子中にある、項目７５から９６のいずれか一項に記載の方法。
(項目１２０)
前記化合物がリポソーム中にある、項目７５から９６のいずれか一項に記載の方法。
(項目１２１)
前記化合物が、ウイルス、ウイルス粒子、またはウイルスカプシドを含むビヒクル中にある、項目９７に記載の方法。
(項目１２２)
前記化合物が、アデノ随伴ウイルス、アデノ随伴ウイルス粒子、またはアデノ随伴ウイルスカプシドを含むビヒクル中にある、項目９７に記載の方法。
(項目１２３)
前記抗体が、ヒトまたはヒト化抗体である、項目７５から１２２のいずれか一項に記載の方法。
(項目１２４)
前記抗体が抗原結合性抗体バリアントである、項目７５から１２３のいずれか一項に記載の方法。
(項目１２５)
前記抗体のクラスが、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥまたはＩｇＤである、項目７５から１２４のいずれか一項に記載の方法。
(項目１２６)
前記抗体が抗原結合性抗体断片である、項目７５から１２４のいずれか一項に記載の方法。
(項目１２７)
前記抗体が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆａｂ２、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂまたはｄｓＦｖ断片である、項目１２６に記載の方法。
(項目１２８)
前記抗体が全長抗体である、項目７５から１２５のいずれか一項に記載の方法。
(項目１２９)
前記抗体が、単一ドメイン抗体、ナノボディ、ＶＨＨまたはＶＮＡＲ抗体断片である、項目７５から１２４のいずれか一項に記載の方法。
(項目１３０)
前記抗体が単鎖抗体である、項目７５から１２４のいずれか一項に記載の方法。
(項目１３１)
前記抗体が多特異性抗体である、項目７５から１２５のいずれか一項に記載の方法。
(項目１３２)
前記抗体が抗体融合タンパク質である、項目７５から１２５のいずれか一項に記載の方法。
(項目１３３)
前記細胞懸濁物が、前記狭窄を通過させるステップの前に、それと同時に、またはその後に、前記化合物と接触される、項目７５から１３２のいずれか一項に記載の方法。
(項目１３４)
前記チャネルが、約３０μｍの狭窄長さおよび約４μｍの狭窄幅を含む、項目７５から７６のいずれか一項に記載の方法。
(項目１３５)
前記チャネルが、約１０μｍの狭窄長さおよび約４μｍの狭窄幅を含む、項目７５から７６のいずれか一項に記載の方法。
(項目１３６)
前記孔のサイズが、約０．４μｍ、約４μｍ、約５μｍ、約８μｍ、約１０μｍ、約１２μｍまたは約１４μｍである、項目７５または７７のいずれか一項に記載の方法。
(項目１３７)
約−５℃と約４５℃との間で実施される、項目７５から１３６のいずれか一項に記載の方法。
(項目１３８)
項目７５から８８または９１から１３７のいずれか一項に従って改変された前記細胞を患者に導入することによって、前記患者を処置する方法。
(項目１３９)
前記細胞が、患者から単離され、項目７５から８８または９１から１３７のいずれか一項に記載の方法に従って改変され、前記患者中に戻し導入される、項目１３８に記載の方法。
(項目１４０)
前記細胞が、異なる個体から単離され、項目７５から８８または９１から１３７のいずれか一項に記載の方法に従って改変され、患者中に導入される、項目１３８に記載の方法。
(項目１４１)
項目７５から８８または９１から１３７のいずれか一項に従って改変された前記細胞を個体に導入することによって、前記個体におけるｄｅ  ｎｏｖｏ抗体産生を誘導する方法。
(項目１４２)
前記細胞が、個体から単離され、項目７５から８８または９１から１３７のいずれか一項に記載の方法に従って改変され、前記個体中に戻し導入される、項目１４１に記載の方法。
(項目１４３)
前記細胞が、個体から単離され、項目７５から８８または９１から１３７のいずれか一項に記載の方法に従って改変され、異なる個体中に導入される、項目１４１に記載の方法。
(項目１４４)
前記細胞を、少なくとも１つの電極によって生成された電場と接触させるステップをさらに含む、項目７５から１４３のいずれか一項に記載の方法。
(項目１４５)
項目７５から１４４のいずれか一項に記載の方法における使用のための、前記狭窄、細胞懸濁物および化合物を含むシステム。
(項目１４６)
電場を生成するための少なくとも１つの電極をさらに含む、項目１４５に記載のシステム。