【手続補正書】
【提出日】令和3年11月22日(2021.11.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
霊長類の網膜色素上皮の細胞中で外生遺伝子を発現させるための医薬組成物であって、配列番号１の核酸配列を含む、若しくはそれから成る、又は配列番号１の前記核酸配列と少なくとも８０％の全体的な同一性を有する少なくとも１５００塩基対の核酸配列を含む単離核酸分子を含み、前記単離核酸分子は、前記外生遺伝子をコードする核酸配列が前記単離核酸分子に作動可能に結合している場合、前記霊長類の網膜色素上皮の細胞中での前記外生遺伝子の発現を駆動するのに有効である、医薬組成物。
【請求項２】
前記単離核酸分子は、配列番号１の前記核酸配列と少なくとも９５％の全体的な同一性を有する少なくとも１５００塩基対の核酸配列を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記単離核酸分子は、配列番号１の前記核酸配列を含む、請求項１又は２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記単離核酸分子は、前記外生遺伝子をコードする前記核酸配列に作動可能に結合している、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記単離核酸分子は、最小プロモーターを更に含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記最小プロモーターは、配列番号２の核酸配列を含む、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記単離核酸分子は、発現カセットの一部である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記発現カセットは、ベクターの一部である、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記ベクターは、ウイルスベクターである、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記ベクターは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである、請求項８又は９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記外生遺伝子をコードする前記核酸配列は、チャネルロドプシン又はハロロドプシンをコードする、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記霊長類は、ヒトである、請求項１〜１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記霊長類は、非ヒト霊長類である、請求項１〜１１に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
網膜色素上皮に関連する疾患を治療する際に使用するための、配列番号１の核酸配列を含み、若しくはそれから成る、又は配列番号１の前記核酸配列と少なくとも８０％の全体的な同一性を有する少なくとも１５００塩基対の核酸配列を含む単離核酸分子であって、前記単離核酸分子は、外生遺伝子をコードする核酸配列が前記単離核酸分子に作動可能に結合している場合、霊長類の網膜色素上皮の細胞中での前記外生遺伝子の発現を駆動するのに有効である、単離核酸分子。
【請求項１５】
網膜色素上皮に関連する前記疾患は、加齢性黄斑変性症、網膜色素変性症、糖尿病性網膜症及び網膜色素上皮肥大症から成る群から選択される、請求項１４に記載の使用のための単離核酸分子。
【請求項１６】
前記疾患は、加齢性黄斑変性症である、請求項１５に記載の使用のための単離核酸分子。
【請求項１７】
前記単離核酸分子は、配列番号１の前記核酸配列と少なくとも９５％の全体的な同一性を有する少なくとも１５００塩基対の核酸配列を含む、請求項１４〜１６のいずれか一項に記載の使用のための単離核酸分子。
【請求項１８】
前記単離核酸分子は、配列番号１の前記核酸配列を含む、請求項１４〜１６のいずれか一項に記載の使用のための単離核酸分子。
【請求項１９】
前記単離核酸分子は、前記外生遺伝子をコードする前記核酸配列に作動可能に結合している、請求項１４〜１８のいずれか一項に記載の使用のための単離核酸分子。
【請求項２０】
前記単離核酸分子は、最小プロモーターを更に含む、請求項１４〜１９のいずれか一項に記載の使用のための単離核酸分子。
【請求項２１】
前記最小プロモーターは、配列番号２の核酸配列を含む、請求項２０に記載の使用のための単離核酸分子。
【請求項２２】
前記単離核酸分子は、発現カセットの一部である、請求項１４〜２１のいずれか一項に記載の使用のための単離核酸分子。
【請求項２３】
前記発現カセットは、ベクターの一部である、請求項２２に記載の使用のための単離核酸分子。
【請求項２４】
前記ベクターは、ウイルスベクターである、請求項２３に記載の使用のための単離核酸分子。
【請求項２５】
前記ベクターは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである、請求項２３又は２４に記載の使用のための単離核酸分子。
【請求項２６】
前記外生遺伝子をコードする前記核酸配列は、チャネルロドプシン又はハロロドプシンをコードする、請求項１４〜２５のいずれか一項に記載の使用のための単離核酸分子。
【請求項２７】
前記霊長類は、ヒトである、請求項１４〜２６のいずれか一項に記載の使用のための単離核酸分子。
【請求項２８】
前記霊長類は、非ヒト霊長類である、請求項１４〜２６のいずれか一項に記載の使用のための単離核酸分子。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９６】
ウイルス形質移入及び組織製剤
ＡＡＶ投与は、Ｋｕｎｍｉｎｇ，Ｃｈｉｎａにおいて眼科医及び外部委託先と連携して実施した。アカゲザルは、ケタミン及びフェノバルビタールナトリウムにより麻酔した。２本の穿刺トンネルは、それぞれ鼻腔及び側頭胸膜領域に配置された２５ゲージの穿刺針を使用して作成した。１本のトンネルを通して照明用ファイバーを硝子体腔内に注入し、５０μＬのＡＡＶは、第２トンネルを通してハミルトンシリンジ上に取り付けた３０ゲージ針を使用して網膜下に注射した。３カ月後、単離網膜を３０分間に渡りＰＢＳ中の４％のＰＦＡ中で固定し、次いでＰＢＳ中で４℃において洗浄ステップを行った。全網膜は、室温で１時間に渡り１０％の標準ロバ血清（ＮＤＳ）、１％のＢＳＡ、ＰＢＳ中の０．５％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００により処理した。ＰＢＳ中３％のＮＤＳ、１％のＢＳＡ、０．５％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００中のモノクローナルラット抗ＧＦＰ  Ａｂ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ  Ｉｎｃ．；１：５００）による処理を室温で５日間実施した。二次ロバ抗ラットＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ−４８８Ａｂ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ  Ｉｎｃ．；１：２００）による処理を２時間に渡り実施した。切片を洗浄し、スライドガラス上にＰｒｏＬｏｎｇ  Ｇｏｌｄ褪色防止用試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ  Ｉｎｃ．）と共に載せ、Ｚｅｉｓｓ  ＬＳＭ  ７００  Ａｘｉｏ  Ｉｍａｇｅｒ  Ｚ２レーザー走査型共焦点顕微鏡（Ｃａｒｌ  Ｚｅｉｓｓ  Ｉｎｃ．）を使用してイメージングした。
本発明は、以下の態様を含み得る。
［１］
霊長類の網膜色素上皮の細胞中で外生遺伝子を特異的に発現させるための方法であって、配列番号１の核酸配列を含む、若しくはそれから成る、又は配列番号１の前記配列と、前記霊長類の前記網膜色素上皮の細胞と少なくとも８０％の全体的な同一性を有する少なくとも１５００ｂｐの核酸配列から成る単離核酸分子を送達するステップを含み、前記単離核酸分子は、外生遺伝子をコードする核酸配列が前記単離核酸分子に作動可能に結合している場合、霊長類の前記網膜色素上皮の細胞中での前記外生遺伝子の発現を特異的にもたらす方法。
［２］
前記単離核酸分子は、最小プロモーター、例えば、配列番号２の前記最小プロモーターを更に含む、［１］に記載の方法。
［３］
前記単離核酸分子は、発現カセットの一部である、［１］又は［２］に記載の方法。
［４］
前記発現カセットは、ベクターの一部である、［３］に記載の方法。
［５］
前記ベクターは、ウイルスベクターである、［４］に記載の方法。
［６］
配列番号１の核酸配列を含み、若しくはそれから成り、又は配列番号１の前記配列と少なくとも８０％の全体的な同一性を有する少なくとも１５００ｂｐの核酸配列から成る単離核酸分子の使用であって、前記単離核酸分子は、霊長類の前記網膜色素上皮の細胞中で外生遺伝子を特異的に発現させるために、前記外生遺伝子をコードする核酸配列が前記単離核酸分子に作動可能に結合している場合、霊長類の前記網膜色素上皮の細胞中での前記外生遺伝子の発現を特異的にもたらす使用。
［７］
前記単離核酸分子は、最小プロモーター、例えば、配列番号２の前記最小プロモーターを更に含む、［６］に記載の使用。
［８］
前記単離核酸分子は、発現カセットの一部である、［６］又は［７］に記載の使用。
［９］
前記発現カセットは、ベクターの一部である、［８］に記載の使用。
［１０］
前記ベクターは、ウイルスベクターである、［９］に記載の使用。
［１１］
網膜色素上皮に関連する疾患を治療する際に使用するための、配列番号１の核酸配列を含み、若しくはそれから成る、又は配列番号１の前記配列と少なくとも８０％の全体的な同一性を有する少なくとも１５００ｂｐの核酸配列から成る単離核酸分子であって、前記単離核酸分子は、外生遺伝子をコードする核酸配列が前記単離核酸分子に作動可能に結合している場合、霊長類の前記網膜色素上皮の細胞中での前記外生遺伝子の発現を特異的にもたらす単離核酸分子。
［１２］
網膜色素上皮に関連する前記疾患は、加齢性黄斑変性症、網膜色素変性症、糖尿病性網膜症及び網膜色素上皮肥大症から成る群から選択される、［１１］に記載の単離核酸分子の使用。