【手続補正書】
【提出日】令和3年12月3日(2021.12.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（a）CD4＋T細胞の組成物とCD8＋T細胞の組成物とを、2:1〜1:2のCD4＋T細胞：CD8＋T細胞比で組み合わせ、それにより、インプット組成物を生成する工程、ならびに
（b）刺激条件下でインプット組成物をインキュベートし、それにより、刺激された組成物を生成する工程であって、刺激条件が、TCR複合体の1つまたは複数の成分の1つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインおよび/あるいは1つまたは複数の共刺激分子の1つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを活性化することができる刺激試薬の存在を含む、工程
を含む、操作された細胞の組成物を製造する方法であって、
インプット組成物が、5×106細胞/mL未満の濃度で少なくとも100×106個の総CD4＋T細胞およびCD8＋T細胞を含む、
前記方法。
【請求項２】
刺激条件下でインプット組成物をインキュベートし、それにより、刺激された組成物を生成する工程を含む、操作された細胞の組成物を製造する方法であって、
インプット組成物が、2:1〜1:2のCD4＋T細胞：CD8＋T細胞比を有し、インプット組成物が、5×106細胞/mL未満の濃度で少なくとも100×106個の総CD4＋T細胞およびCD8＋T細胞を含み、
刺激条件が、TCR複合体の1つまたは複数の成分の1つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインおよび/あるいは1つまたは複数の共刺激分子の1つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを活性化することができる刺激試薬の存在を含む、
前記方法。
【請求項３】
インプット組成物が、CD4＋T細胞およびCD8＋T細胞である少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、または少なくとも95％の細胞を含む、請求項1または2記載の方法。
【請求項４】
インプット組成物が、100×106〜500×106個の総CD4＋T細胞およびCD8＋T細胞、ならびに/または300×106個または約300×106個の総CD4＋T細胞およびCD8＋T細胞を含み、任意で、総CD4＋T細胞およびCD8＋T細胞が生存細胞である、請求項1〜3のいずれか一項記載の方法。
【請求項５】
インプット組成物が、1×106細胞/mL〜5×106細胞/mLの濃度、任意で3×106細胞/mLまたは約3×106細胞/mLの濃度を有する、請求項1〜4のいずれか一項記載の方法。
【請求項６】
インプット組成物が、1.5:1〜1:1.5のCD4＋細胞：CD8＋細胞比または1.2:1〜0.8:1のCD4＋細胞：CD8＋細胞比、任意で1:1または約1:1のCD4＋細胞：CD8＋細胞比を含む、請求項1〜5のいずれか一項記載の方法。
【請求項７】
刺激された組成物からの細胞、任意で生存細胞に組換え受容体を導入し、それにより、操作された細胞組成物を生成する工程であって、導入が、刺激された組成物の細胞と、組換え受容体をコードするポリヌクレオチドを含む作用物質、任意でウイルスベクターとを接触させることを含む、工程
をさらに含む、請求項1〜6のいずれか一項記載の方法。
【請求項８】
（a）刺激条件下でインプット組成物をインキュベートし、それにより、刺激された組成物を生成する工程であって、
インプット組成物が、2:1〜1:2のCD4＋細胞：CD8＋細胞比を含み、5×106細胞/mL未満の濃度で少なくとも100×106個の生存CD4＋T細胞およびCD8＋T細胞を含み、かつ
刺激条件が、TCR複合体の1つまたは複数の成分の1つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインおよび/あるいは1つまたは複数の共刺激分子の1つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを活性化することができる刺激試薬の存在を含む、
工程；ならびに
(b)刺激された組成物の細胞に組換え受容体を導入し、それにより、操作された細胞組成物を生成する工程であって、組換え受容体が、刺激された組成物からの300×106個未満の生存細胞に導入され、導入が、刺激された組成物の細胞と、組換え受容体をコードするポリヌクレオチドを含むウイルスベクターとを接触させることを含む、工程
を含む、操作された細胞の組成物を製造する方法。
【請求項９】
刺激された組成物からの300×106個未満の細胞を作用物質と接触させるか；または
刺激された組成物からの50×106個の細胞〜500×106個の細胞、50×106個の細胞〜200×106個の細胞、もしくは100×106個の細胞〜200×106個の細胞、任意で刺激された組成物からの約100×106個の細胞を作用物質と接触させる、
請求項7または8記載の方法。
【請求項１０】
導入の間、刺激された組成物からの細胞が3×106細胞/mL未満の濃度で培養される；および/または
導入の間、刺激された組成物からの細胞が0.5×106細胞/mL〜2×106細胞/mLの濃度、任意で約1×106細胞/mLの濃度で培養される、
請求項7〜9のいずれか一項記載の方法。
【請求項１１】
操作された細胞の組成物を製造する方法であって、T細胞組成物の細胞に組換え受容体を導入する工程を含み、T細胞組成物が、1mL当たり少なくとも1×106個または少なくとも約1×106個の生存細胞の濃度を含み、T細胞組成物の細胞の少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％または少なくとも95％が、CD4＋T細胞またはCD8＋T細胞であり、
任意で、導入が、組換え受容体をコードするポリヌクレオチドを含むウイルスベクターを形質導入することによってT細胞に接触させることを含む、
前記方法。
【請求項１２】
刺激条件下でのインキュベーションの開始後2日以内、36時間以内、もしくは30時間以内かつ/またはインプット組成物のCD4＋T細胞およびCD8＋T細胞が組み合わされた後2日以内、36時間以内、もしくは30時間以内に、導入が開始される、請求項7〜10のいずれか一項記載の方法。
【請求項１３】
操作された細胞の増殖および/または拡大増殖を促進する条件下で、操作された組成物を培養し、それにより、操作されたT細胞を含むアウトプット組成物を製造する工程
をさらに含む、請求項7〜12のいずれか一項記載の方法。
【請求項１４】
インキュベーション、導入、および/または培養が無血清培地中で行われる、請求項1〜13のいずれか一項記載の方法。
【請求項１５】
インキュベーションおよび/または導入が、組換えIL-2、組換えIL-7、および組換えIL-15から選択される1つまたは複数のサイトカインの存在下で行われ、
任意で、1つまたは複数のサイトカインが、10〜200IU/mLの組換えIL-2、100IU/mL〜1,000IU/mLの組換えIL-7、および/または10〜200IU/mLの組換えIL-15を含む、請求項1〜14のいずれか一項記載の方法。
【請求項１６】
刺激試薬が、TCR複合体のメンバーに特異的に結合する主剤を含み、任意で、刺激試薬が、T細胞共刺激分子に特異的に結合する副剤をさらに含む、請求項1〜10および12〜15のいずれか一項記載の方法。
【請求項１７】
主剤が、抗CD3抗体またはその抗原結合断片であり、かつ副剤が、抗CD28抗体またはその抗原結合断片である、請求項16記載の方法。
【請求項１８】
主剤および/または副剤がビーズの表面上に存在する、請求項16または17記載の方法。
【請求項１９】
ビーズ：細胞の比が3:1未満である、および/または
ビーズ：細胞の比が2:1〜0.5:1もしくは約2:1〜約0.5:1、任意で1:1もしくは約1:1である、
請求項18記載の方法。
【請求項２０】
主剤および副剤が、複数のストレプトアビジン分子またはストレプトアビジンムテイン分子を含むオリゴマー粒子試薬の表面に可逆的に結合される、請求項16または17記載の方法。
【請求項２１】
インキュベーションおよび/もしくは導入が、48時間未満行われる、ならびに/または
インキュベーションおよび/もしくは導入が、12時間以上36時間以下もしくは18時間以上30時間以下、任意で24時間もしくは約24時間行われる、
請求項1〜20のいずれか一項記載の方法。
【請求項２２】
ウイルスベクターが、レトロウイルスベクター、任意でレンチウイルスベクターまたはガンマレトロウイルスベクターである、請求項7〜21のいずれか一項記載の方法。
【請求項２３】
導入が、形質導入アジュバントの非存在下で行われる、請求項7〜22のいずれか一項記載の方法。
【請求項２４】
培養の少なくとも一部が、混合および/または灌流を用いて行われる、請求項13〜23のいずれか一項記載の方法。
【請求項２５】
培養の少なくとも一部が、500mL/日、600mL/日、700mL/日、750mL/日、800mL/日、900mL/日、1,000mL/日、1,200mL/日、1,400mL/日、1,500mL/日、1,600mL/日、1,800mL/日および/または2,000mL/日、約500mL/日、約600mL/日、約700mL/日、約750mL/日、約800mL/日、約900mL/日、約1,000mL/日、約1,200mL/日、約1,400mL/日、約1,500mL/日、約1,600mL/日、約1,800mL/日および/または約2,000mL/日、あるいは少なくとも500mL/日、少なくとも600mL/日、少なくとも700mL/日、少なくとも750mL/日、少なくとも800mL/日、少なくとも900mL/日、少なくとも1,000mL/日、少なくとも1,200mL/日、少なくとも1,400mL/日、少なくとも1,500mL/日、少なくとも1,600mL/日、少なくとも1,800mL/日および/または少なくとも2,000mL/日の速度の灌流を用いて行われる、請求項24記載の方法。
【請求項２６】
培養の少なくとも第1の部分が、500mL/日、750mL/日もしくは1,000mL/日、約500mL/日、約750mL/日もしくは約1,000mL/日、または少なくとも500mL/日、少なくとも750mL/日もしくは少なくとも1,000mL/日の灌流速度により行われ、
培養の少なくとも第2の部分が、1,200mL/日、1,400mL/日もしくは1,500mL/日、約1,200mL/日、約1,400mL/日もしくは約1,500mL/日、または少なくとも1,200mL/日、少なくとも1,400mL/日もしくは少なくとも1,500mL/日の灌流速度により行われる、請求項24または25記載の方法。
【請求項２７】
細胞が第1の特定の密度に達すると、灌流が開始され、第1の特定の密度が、0.4×106個の細胞、0.5×106個の細胞、0.6×106個の細胞、0.8×106個の細胞、1.0×106個の細胞、1.2×106個の細胞、1.4×106個の細胞、1.6×106個の細胞、1.8×106個の細胞、2.0×106個の細胞、2.2×106個の細胞もしくは2.4×106個の細胞、約0.4×106個の細胞、約0.5×106個の細胞、約0.6×106個の細胞、約0.8×106個の細胞、約1.0×106個の細胞、約1.2×106個の細胞、約1.4×106個の細胞、約1.6×106個の細胞、約1.8×106個の細胞、約2.0×106個の細胞、約2.2×106個の細胞もしくは約2.4×106個の細胞、または少なくとも0.4×106個の細胞、少なくとも0.5×106個の細胞、少なくとも0.6×106個の細胞、少なくとも0.8×106個の細胞、少なくとも1.0×106個の細胞、少なくとも1.2×106個の細胞、少なくとも1.4×106個の細胞、少なくとも1.6×106個の細胞、少なくとも1.8×106個の細胞、少なくとも2.0×106個の細胞、少なくとも2.2×106個の細胞もしくは少なくとも2.4×106個の細胞であり、
任意で、細胞が第2の特定の密度に達すると、灌流が増加され、第2の特定の密度が、0.4×106個の細胞、0.5×106個の細胞、0.6×106個の細胞、0.8×106個の細胞、1.0×106個の細胞、1.2×106個の細胞、1.4×106個の細胞、1.6×106個の細胞、1.8×106個の細胞、2.0×106個の細胞、2.2×106個の細胞もしくは2.4×106個の細胞、約0.4×106個の細胞、約0.5×106個の細胞、約0.6×106個の細胞、約0.8×106個の細胞、約1.0×106個の細胞、約1.2×106個の細胞、約1.4×106個の細胞、約1.6×106個の細胞、約1.8×106個の細胞、約2.0×106個の細胞、約2.2×106個の細胞もしくは約2.4×106個の細胞、または少なくとも0.4×106個の細胞、少なくとも0.5×106個の細胞、少なくとも0.6×106個の細胞、少なくとも0.8×106個の細胞、少なくとも1.0×106個の細胞、少なくとも1.2×106個の細胞、少なくとも1.4×106個の細胞、少なくとも1.6×106個の細胞、少なくとも1.8×106個の細胞、少なくとも2.0×106個の細胞、少なくとも2.2×106個の細胞もしくは少なくとも2.4×106個の細胞である、
請求項24〜26のいずれか一項記載の方法。
【請求項２８】
細胞が0.6×106細胞/mLまたは約0.6×106細胞/mLの密度に達すると、灌流が750mL/日または約750mL/日の速度で開始され；かつ
細胞が2.0×106細胞/mLまたは約2.0×106細胞/mLの密度に達すると、灌流が1500mL/日もしくは約1500mL/日の速度に増加される、
請求項24〜27のいずれか一項記載の方法。
【請求項２９】
培養が、組換えIL-2、組換えIL-7、および組換えIL-15から選択される1つまたは複数のサイトカインの存在下で行われ、
任意で、1つまたは複数のサイトカインが、50〜400IU/mLの組換えIL-2、100IU/mL〜2,000IU/mLの組換えIL-7、および/または50〜400IU/mLの組換えIL-15を含む、
請求項13〜28のいずれか一項記載の方法。
【請求項３０】
刺激条件下でのインキュベーションの開始後3日以内、60時間以内、もしくは48時間以内かつ/またはインプット組成物のCD4＋T細胞およびCD8＋T細胞が組み合わせられた後3日以内、60時間以内、もしくは48時間以内に、培養が開始される、請求項13〜29のいずれか一項記載の方法。
【請求項３１】
少なくとも組成物が閾値数のT細胞、閾値数の生存T細胞、閾値濃度のT細胞、閾値濃度の生存T細胞を含むまで、培養が行われ、
(i)T細胞の閾値数または生存T細胞の閾値数が、900×106個、1200×106個もしくは3500×106個、約900×106個、約1200×106個もしくは約3500×106個、または少なくとも900×106個、少なくとも1200×106個もしくは少なくとも3500×106個の有核細胞総数である；
(ii)T細胞の閾値数または生存T細胞の閾値数が、2400×106個もしくは5500×106個、約2400×106個もしくは約5500×106個、または少なくとも2400×106個もしくは少なくとも5500×106個の有核細胞総数である；および/あるいは
(iii)T細胞の閾値数または生存T細胞の閾値数が、2000×106個または約2000×106個から、3000×106個または約3000×106個である、
請求項13〜30のいずれか一項記載の方法。
【請求項３２】
閾値数の細胞の生存率が、約75％もしくは少なくとも約75％または約85％もしくは少なくとも約85％である、請求項31記載の方法。
【請求項３３】
アウトプット組成物の細胞を収集する工程、ならびに/または凍結保存および/もしくは対象への投与のためにアウトプット組成物の細胞を製剤化する工程をさらに含む、請求項13〜32のいずれか一項記載の方法。
【請求項３４】
アウトプット組成物の細胞が、凍結保護物質、任意でDMSOの存在下でまたは薬学的に許容される賦形剤の存在下で製剤化される、請求項13〜33のいずれか一項記載の方法。
【請求項３５】
インキュベーション前に対象由来の生体試料からCD4＋T細胞およびCD8＋T細胞が別々に単離されており、任意で、生体試料が、全血試料、バフィーコート試料、末梢血単核細胞（PBMC）試料、未分画T細胞試料、リンパ球試料、白血球細胞試料、アフェレーシス産物、もしくは白血球アフェレーシス産物であるかまたはそれを含む、請求項1〜34のいずれか一項記載の方法。
【請求項３６】
疾患、障害または症状、任意で感染性疾患もしくは障害、自己免疫疾患、炎症性疾患、または腫瘍もしくはがんの細胞または組織に関連し、特異的であり、かつ/または発現する標的抗原、任意で腫瘍抗原に、組換え受容体が結合することができる、請求項1〜35のいずれか一項記載の方法。
【請求項３７】
組換え受容体が、TCRまたはその抗原結合断片であるかまたはそれを含む、あるいは
組換え受容体が、キメラ抗原受容体（CAR）、任意で抗BCMA CARである、
請求項1〜36のいずれか一項記載の方法。
【請求項３８】
閾値数以上の数の細胞を含むアウトプット組成物が、方法の85％超もしくは約85％超、90％超もしくは約90％超、または95％超もしくは約95％超の反復の間で製造される、
複数の異なる個々の対象間で前記方法が行われた複数のヒト生体試料の少なくとも約80％、約90％、約95％、約97％、約99％、約100％、または100％において、前記方法により、アウトプット組成物中のCARを発現する細胞の閾値数を示すアウトプット組成物が製造される、ならびに/あるいは
刺激条件の下でのインキュベーションの開始から、アウトプット細胞が回収され、配合され、および/または冷凍凍結される時点までの時間量が、方法が行われる複数の異なる個々の対象の85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、もしくは100%について、約85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、もしくは100%について、または少なくともおよそ85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、もしくは100%について、5〜8日である、
請求項31〜37のいずれか一項記載の方法。
【請求項３９】
複数の異なる個々の対象が、疾患または症状を有する対象を含み、任意で疾患または症状が、がん、任意で多発性骨髄腫である、請求項38記載の方法。
【請求項４０】
培養の少なくとも一部の間、細胞が、細胞生存率、濃度、密度、数またはそれらの組合せについてモニタリングされ、任意で、細胞がT細胞の閾値数、生存T細胞の閾値数、T細胞の閾値濃度、または生存T細胞の閾値濃度に達するまでモニタリングが行われる、請求項13〜39のいずれか一項記載の方法。
【請求項４１】
モニタリングが、光学的方法、任意で微分デジタルホログラフィー顕微鏡観察（DDHM）によって行われる、ならびに/または
モニタリングおよび培養が閉鎖系で行われる、
請求項40記載の方法。
【請求項４２】
(A)
アウトプット組成物中の細胞の少なくとも30％、少なくとも40％、少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、または95％超がメモリー表現型であり、
アウトプット組成物中の細胞の少なくとも30％、少なくとも40％、少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、または95％超がセントラルメモリー表現型であり、
アウトプット組成物中の細胞の少なくとも30％、少なくとも40％、少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、または95％超がCD27＋、CD28＋、CCR7＋、CD45RA-、CD45RO＋、CD62L＋、CD3＋、CD95＋、グランザイムB-および/またはCD127＋であり、かつ/あるいは
アウトプット組成物中の細胞の少なくとも30％、少なくとも40％、少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、または95％超がCCR7＋/CD45RA-またはCCR7＋/CD45RO＋である;および/または
(B)複数のアウトプット組成物を製造するための前記方法の複数の反復の間で、
(i)複数のアウトプット組成物中のメモリー表現型の細胞の平均割合が、約40％〜約65％、約40％〜約45％、約45％〜約50％、約50％〜約55％、約55％〜約60％、または約60％〜約65％であり、
(ii)複数のアウトプット組成物中のセントラルメモリー表現型の細胞の平均割合が、約40％〜約65％、約40％〜約45％、約45％〜約50％、約50％〜約55％、約55％〜約60％、または約60％〜約65％である、
(iii)複数のアウトプット組成物中のCD27＋、CD28＋、CCR7＋、CD45RA-、CD45RO＋、CD62L＋、CD3＋、CD95＋、グランザイムB-、および/またはCD127＋である細胞の平均割合が、約40％〜約65％、約40％〜約45％、約45％〜約50％、約50％〜約55％、約55％〜約60％、または約60％〜約65％である、
(iv)複数のアウトプット組成物中のCCR7＋/CD45RA-またはCCR7＋/CD45RO＋である細胞の平均割合が、約40％〜約65％、約40％〜約45％、約45％〜約50％、約50％〜約55％、約55％〜約60％、または約60％〜約65％である、
(v)複数のアウトプット組成物の操作されたCD4＋T細胞、任意でCAR＋CD4＋T細胞内のセントラルメモリーCD4＋T細胞の平均割合が、約40％〜約65％、約40％〜約45％、約45％〜約50％、約50％〜約55％、約55％〜約60％、または約60％〜約65％である、
(vi)複数のアウトプット組成物の操作されたCD8＋T細胞、任意でCAR＋CD8＋T細胞内のセントラルメモリーCD8＋T細胞の平均割合が、約40％〜約65％、約40％〜約45％、約45％〜約50％、約50％〜約55％、約55％〜約60％、または約60％〜約65％である、および/あるいは
(vii)複数のアウトプット組成物の操作されたT細胞、任意でCAR＋T細胞内のセントラルメモリーT細胞、任意でCD4＋セントラルメモリーT細胞およびCD8＋セントラルメモリーT細胞の平均割合が、約40％〜約65％、約40％〜約45％、約45％〜約50％、約50％〜約55％、約55％〜約60％、または約60％〜約65％である、
請求項13〜41のいずれか一項記載の方法。
【請求項４３】
請求項1〜42のいずれか一項記載の方法によって製造された操作された細胞を含む組成物。
【請求項４４】
請求項43記載の組成物と、対象にアウトプット組成物を投与するための指示書とを含む、製造物品であって、対象が、疾患または症状を有し、任意で組換え受容体が該疾患もしくは症状と関連する抗原または該疾患もしくは症状の細胞上に発現しているかもしくは存在する抗原を、特異的に認識するまたはそれに特異的に結合する、製造物品。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７１】
特定の態様では、本明細書において提供されるのは、本明細書において提供される任意の組成物と、対象にアウトプット組成物を投与するための指示書とを含む製造物品である。提供される製造物品のいずれかの特定の態様では、対象は、疾患または症状を有し、任意で、組換え受容体は、疾患もしくは症状に関連するまたは疾患もしくは症状の細胞上に発現するもしくは存在する抗原を特異的に認識するかまたはその抗原に特異的に結合する。
[本発明1001]
（a）CD4＋T細胞の組成物とCD8＋T細胞の組成物とを、2:1〜1:2のCD4＋T細胞：CD8＋T細胞比で組み合わせ、それにより、インプット組成物を生成する工程、
（b）刺激条件下でインプット組成物をインキュベートし、それにより、刺激された組成物を生成する工程であって、刺激条件が、TCR複合体の1つまたは複数の成分の1つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインおよび/あるいは1つまたは複数の共刺激分子の1つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを活性化することができる刺激試薬の存在を含む、工程
を含み、
インプット組成物が、5×106細胞/mL未満の濃度で少なくとも100×106個の総CD4＋T細胞およびCD8＋T細胞を含む、
操作された細胞の組成物を製造する方法。
[本発明1002]
インプット組成物中のCD4＋細胞およびCD8＋細胞が、対象から得られた初代試料から濃縮または選択され、任意で、インプット組成物中のCD4＋細胞およびCD8＋細胞が、対象から得られた初代試料から別々に濃縮または選択される、本発明1001の方法。
[本発明1003]
CD4＋T細胞の組成物が、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％または少なくとも95％のCD4＋T細胞を含む、本発明1001または本発明1002の方法。
[本発明1004]
CD8＋T細胞の組成物が、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％または少なくとも95％のCD8＋T細胞を含む、本発明1001〜1003のいずれかの方法。
[本発明1005]
刺激条件下でインプット組成物をインキュベートし、それにより、刺激された組成物を生成する工程
を含み、
インプット組成物が、2:1〜1:2のCD4＋T細胞：CD8＋T細胞比を有し、インプット組成物が、5×106細胞/mL未満の濃度で少なくとも100×106個の総CD4＋T細胞およびCD8＋T細胞を含み、
刺激条件が、TCR複合体の1つまたは複数の成分の1つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインおよび/あるいは1つまたは複数の共刺激分子の1つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを活性化することができる刺激試薬の存在を含む、
操作された細胞の組成物を製造する方法。
[本発明1006]
インキュベーションが無血清培地中で行われる、本発明1001〜1005のいずれかの方法。
[本発明1007]
インプット組成物が、CD4＋T細胞またはCD8＋T細胞である少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％または少なくとも95％の細胞を含む、本発明1001〜1006のいずれかの方法。
[本発明1008]
インプット組成物が、100×106〜500×106個の総CD4＋T細胞およびCD8＋T細胞を含む、本発明1001〜1007のいずれかの方法。
[本発明1009]
インプット組成物が、300×106個または約300×106個の総CD4＋T細胞およびCD8＋T細胞を含む、本発明1001〜1008のいずれかの方法。
[本発明1010]
総CD4＋T細胞およびCD8＋T細胞が生存細胞である、本発明1009の方法。
[本発明1011]
インプット組成物が、1×106細胞/mL〜5×106細胞/mLの濃度を有する、本発明1001〜1010のいずれかの方法。
[本発明1012]
インプット組成物が、3×106細胞/mLまたは約3×106細胞/mLの濃度を有する、本発明1001〜1011のいずれかの方法。
[本発明1013]
インプット組成物が、1.5:1〜1:1.5のCD4＋細胞：CD8＋細胞比を有する、本発明1001〜1012のいずれかの方法。
[本発明1014]
インプット組成物が、1.2:1〜0.8:1のCD4＋細胞：CD8＋細胞比を有する、本発明1001〜1013のいずれかの方法。
[本発明1015]
インプット組成物が、1:1または約1:1のCD4＋細胞：CD8＋細胞比を有する、本発明1001〜1014のいずれかの方法。
[本発明1016]
インプット組成物が、CD45RAおよびCCR7に対して表面陽性であるCD4＋およびCD8＋を含む、本発明1001〜1015のいずれかの方法。
[本発明1017]
CD45RAおよびCCR7に対して表面陽性のCD4＋細胞とCD45RAおよびCCR7に対して表面陽性のCD8＋細胞との比が、1.1:1または約1.1:1である、本発明1016の方法。
[本発明1018]
インプット組成物が、CD27およびCCR7に対して表面陽性であるCD4＋細胞およびCD8＋細胞を含む、本発明1001〜1017のいずれかの方法。
[本発明1019]
CD27およびCCR7に対して表面陽性であるCD4＋細胞とCD27およびCCR7に対して表面陽性のCD8＋細胞との比が、1.69:1または約1.69:1である、本発明1018の方法。
[本発明1020]
インプット組成物が、CCR7に対して表面陽性でありかつCD62Lに対して表面陰性であるCD4＋細胞およびCD8＋細胞を、任意で2.0:1〜1.5:1の比で含む、本発明1001〜1019のいずれかの方法。
[本発明1021]
刺激された組成物からの細胞に組換え受容体を導入し、それにより、操作された細胞組成物を生成する工程であって、導入が、刺激された組成物の細胞と、組換え受容体をコードするポリヌクレオチドを含む作用物質とを接触させることを含む、工程
をさらに含む、本発明1001〜1020のいずれかの方法。
[本発明1022]
接触が、ベクターを用いたトランスフェクションによる接触であり、ベクターが、トランスポゾン、任意でスリーピングビューティー（SB）トランスポゾンまたはピギーバックトランスポゾンであるか、
接触が、ウイルスベクターを用いた形質導入による接触である、
本発明1021の方法。
[本発明1023]
刺激された組成物からの細胞に組換え受容体を導入し、それにより、操作された細胞組成物を生成する工程であって、導入が、刺激された組成物の細胞に、組換え受容体をコードするポリヌクレオチドを含むウイルスベクターを形質導入することを含む、工程
をさらに含む、本発明1001〜1022のいずれかの方法。
[本発明1024]
導入が無血清培地中で行われる、本発明1021〜1023のいずれかの方法。
[本発明1025]
導入のために、刺激された組成物が300×106個未満の細胞を含む、本発明1021〜1024のいずれかの方法。
[本発明1026]
導入のために、刺激された組成物が50×106個の細胞〜200×106個の細胞、任意で約100×106個の細胞、例えば、約100×106個のCD4＋T細胞およびCD8＋T細胞を含む、本発明1021〜1025のいずれかの方法。
[本発明1027]
導入のために、刺激された組成物が少なくとも約100×106個の細胞かつ最大約200×106個の細胞、例えば、少なくとも約100×106個かつ最大約200×106個のCD4＋T細胞およびCD8＋T細胞を含む、本発明1021〜1025のいずれかの方法。
[本発明1028]
導入のために、刺激された組成物が3×106細胞/mL未満の濃度を有する、本発明1021〜1027のいずれかの方法。
[本発明1029]
導入のために、刺激された組成物が0.5×106細胞/mL〜2×106細胞/mLの濃度を有する、本発明1021〜1028のいずれかの方法。
[本発明1030]
導入のために、刺激された組成物が1×106細胞/mLまたは約1×106細胞/mLの濃度を有する、本発明1021〜1029のいずれかの方法。
[本発明1031]
刺激された組成物の細胞に組換え受容体を導入する前に、刺激条件下でインキュベートした後、刺激された組成物の組成を調整する工程を含む、本発明1021〜1030のいずれかの方法。
[本発明1032]
刺激された組成物の細胞が生存細胞である、本発明1021〜1031のいずれかの方法。
[本発明1033]
操作された細胞の組成物を製造する方法であって、T細胞組成物の細胞に組換え受容体を導入する工程を含み、T細胞組成物が、1mL当たり少なくとも1×106個または少なくとも約1×106個の生存細胞の濃度を有し、T細胞組成物の細胞の少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％または少なくとも95％が、CD4＋T細胞またはCD8＋T細胞である、前記方法。
[本発明1034]
T細胞組成物の濃度が、1mL当たり5×106個未満の生存細胞である、本発明1033の方法。
[本発明1035]
T細胞組成物が、少なくとも100×106個または少なくとも約100×106個または約100×106個の生存細胞を含むか、T細胞組成物が、少なくとも約100×106個の生存細胞かつ最大約200×106個の生存細胞を含む、本発明1033または1034のいずれかの方法。
[本発明1036]
T細胞組成物が、300×106個未満の生存細胞を含む、本発明1033〜1035のいずれかの方法。
[本発明1037]
導入が、組換え受容体をコードするポリヌクレオチドを含むウイルスベクターを形質導入することによってT細胞に接触させることを含む、本発明1033〜1036のいずれかの方法。
[本発明1038]
導入が無血清培地中で行われる、本発明1033〜1037のいずれかの方法。
[本発明1039]
T細胞組成物の1つまたは複数の細胞が、活性化され、かつ/またはLDL受容体の表面発現を含む、本発明1033〜1038のいずれかの方法。
[本発明1040]
前記細胞組成物の細胞の少なくとも10％、少なくとも20％、少なくとも30％、少なくとも40％、少なくとも50％または少なくとも60％が、
（i）HLA-DR、CD25、CD69、CD71、CD40Lおよび4-1BBからなる群より選択される表面マーカーを発現し、
（ii）IL-2、IFN-γ、TNF-αからなる群より選択されるサイトカインの細胞内発現を含み、
（iii）細胞周期のG1以降の段階にあり、かつ/または
（iv）増殖することができる、
本発明1033〜1039のいずれかの方法。
[本発明1041]
導入前に、前記組成物の細胞が、刺激条件下でCD4＋T細胞およびCD8＋T細胞を含むインプット組成物をインキュベートする工程を含むプロセスによって生成され、刺激条件が、TCR複合体の1つまたは複数の成分の1つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインおよび/あるいは1つまたは複数の共刺激分子の1つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを活性化することができる刺激試薬の存在を含む、本発明1033〜1040のいずれかの方法。
[本発明1042]
インキュベーションが無血清培地中で行われ、任意で、導入が、インキュベーション用の無血清培地と同じまたは異なる組成の無血清培地中で行われる、本発明1041の方法。
[本発明1043]
以下の工程を含む、操作された細胞の組成物を製造する方法：
（a）刺激条件下でインプット組成物をインキュベートし、それにより、刺激された組成物を生成する工程であって、
インプット組成物が、2:1〜1:2のCD4＋T細胞：CD8＋T細胞比を有し、5×106細胞/mL未満の濃度で少なくとも100×106個のCD4＋T細胞およびCD8＋T細胞を含み、
刺激条件が、TCR複合体の1つまたは複数の成分の1つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインおよび/あるいは1つまたは複数の共刺激分子の1つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを活性化することができる刺激試薬の存在を含む、
工程、ならびに
（b）刺激された組成物の300×106個未満の細胞に組換え受容体を導入し、それにより、操作された細胞組成物を生成する工程であって、導入が、刺激された組成物の細胞と、組換え受容体をコードするポリヌクレオチドを含むウイルスベクターとを接触させることを含む、工程。
[本発明1044]
インキュベーションおよび/または導入が無血清培地中で行われる、本発明1043のいずれかの方法。
[本発明1045]
CD4＋T細胞およびCD8＋T細胞が生存細胞である、本発明1043または1044のいずれかの方法。
[本発明1046]
刺激された組成物からの細胞が生存細胞である、本発明1044のいずれかの方法。
[本発明1047]
刺激条件下でのインキュベーションの開始後2日以内かつ/またはインプット組成物のCD4＋T細胞およびCD8＋T細胞が組み合わされた後2日以内に、導入が開始される、本発明1033〜1046のいずれかの方法。
[本発明1048]
刺激条件下でのインキュベーションの開始後36時間以内かつ/またはインプット組成物のCD4＋T細胞およびCD8＋T細胞が組み合わされた後36時間以内に、導入が開始される、本発明1033〜1047のいずれかの方法。
[本発明1049]
刺激条件下でのインキュベーションの開始後30時間以内かつ/またはインプット組成物のCD4＋T細胞およびCD8＋T細胞が組み合わされた後30時間以内に、導入が開始される、本発明1033〜1048のいずれかの方法。
[本発明1050]
操作された細胞の増殖および/または拡大増殖を促進する条件下で、操作された組成物を培養し、それにより、操作されたT細胞を含むアウトプット組成物を製造する工程
をさらに含む、本発明1033〜1049のいずれかの方法。
[本発明1051]
培養が無血清培地中で行われる、本発明1050の方法。
[本発明1052]
以下の工程を含む、操作された細胞の組成物を製造する方法：
（a）刺激条件下でインプット組成物をインキュベートする工程であって、それにより、刺激された組成物が生成され、インプット組成物が、2:1〜1:2のCD4＋T細胞：CD8＋T細胞比を有し、インプット組成物が、5×106細胞/mL未満の濃度で少なくとも100×106個の総CD4＋T細胞およびCD8＋T細胞を含み、刺激条件が、TCR複合体の1つまたは複数の成分の1つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインおよび/あるいは1つまたは複数の共刺激分子の1つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを活性化することができる刺激試薬の存在を含む、工程、
（b）刺激された組成物からの300×106個未満の細胞に組換え受容体を導入する工程であって、それにより、操作された細胞組成物が生成され、導入が、刺激された組成物の細胞に、組換え受容体をコードするポリヌクレオチドを含むウイルスベクターを形質導入することを含む、工程、ならびに
（c）操作された細胞の増殖および/または拡大増殖を促進する条件下で、操作された組成物を培養する工程であって、それにより、操作されたT細胞を含むアウトプット組成物が製造される、工程。
[本発明1053]
インキュベーション工程、導入工程および培養工程の1つ、2つまたは全部が、1つの無血清培地または複数の無血清培地中で行われ、任意で、複数の無血清培地が同じ組成または異なる組成を有する、本発明1052の方法。
[本発明1054]
インプット組成物が、1.5:1〜1:1.5のCD4＋細胞：CD8＋細胞比、1.2:1〜0.8:1のCD4＋細胞：CD8＋細胞比、任意で1:1または約1:1のCD4＋T細胞：CD8＋T細胞比を有する、本発明1041〜1053のいずれかの方法。
[本発明1055]
インプット組成物が、CD45RAおよびCCR7に対して表面陽性であるCD4＋およびCD8＋を含む、本発明1041〜1054のいずれかの方法。
[本発明1056]
CD45RAおよびCCR7に対して表面陽性のCD4＋細胞とCD45RAおよびCCR7に対して表面陽性のCD8＋細胞との比が、1.1:1または約1.1:1である、本発明1055の方法。
[本発明1057]
インプット組成物が、CD27およびCCR7に対して表面陽性であるCD4＋細胞およびCD8＋細胞を含む、本発明1041〜1056のいずれかの方法。
[本発明1058]
CD27およびCCR7に対して表面陽性であるCD4＋細胞とCD27およびCCR7に対して表面陽性のCD8＋細胞との比が、1.69:1または約1.69:1である、本発明1057の方法。
[本発明1059]
インプット組成物が、CCR7に対して表面陽性でありかつCD62Lに対して表面陰性であるCD4＋細胞およびCD8＋細胞を含む、本発明1041〜1058のいずれかの方法。
[本発明1060]
導入のために、刺激された組成物が300×106個未満の細胞、任意で50×106個の生存細胞〜200×106個の生存細胞、および任意で100×106個または約100×106個の生存細胞を含む、本発明1043〜1059のいずれかの方法。
[本発明1061]
導入のために、刺激された組成物が少なくとも約100×106個の生存細胞かつ最大約200×106個の生存細胞を含む、本発明1043〜1059のいずれかの方法。
[本発明1062]
導入のために、刺激された組成物が3×106細胞/mL未満の濃度を有する、本発明1043〜1061のいずれかの方法。
[本発明1063]
導入のために、刺激された組成物が0.5×106細胞/mL〜2×106細胞/mL、任意で1×106細胞/mLまたは約1×106細胞/mLの濃度を有する、本発明1043〜1062のいずれかの方法。
[本発明1064]
刺激された組成物の細胞に組換え受容体を導入する前に、刺激条件下でインキュベートした後、刺激された組成物の組成を調整する、本発明1043〜1063のいずれかの方法。
[本発明1065]
インキュベーションが、1つまたは複数のサイトカインの存在下で、任意で無血清培地中で行われる、本発明1001〜1064のいずれかの方法。
[本発明1066]
1つまたは複数のサイトカインが、組換えIL-2、組換えIL-7および/または組換えIL-15から選択される、本発明1065の方法。
[本発明1067]
1つまたは複数のサイトカインが、10〜200IU/mLの組換えIL-2、100IU/mL〜1,000IU/mLの組換えIL-7および/または10〜200IU/mLの組換えIL-15を含む、本発明1066の方法。
[本発明1068]
1つまたは複数のサイトカインが、10〜200IU/mLの組換えIL-2、100IU/mL〜1,000IU/mLの組換えIL-7および10〜200IU/mLの組換えIL-15を含む、本発明1066または1067の方法。
[本発明1069]
刺激された組成物の細胞の少なくとも10％、少なくとも20％、少なくとも30％、少なくとも40％、少なくとも50％または少なくとも60％が、
（i）HLA-DR、CD25、CD69、CD71、CD40Lおよび4-1BBからなる群より選択される表面マーカーを発現し、
（ii）IL-2、IFN-γ、TNF-αからなる群より選択されるサイトカインの細胞内発現を含み、
（iii）細胞周期のG1以降の段階にあり、かつ/または
（iv）増殖することができる、
本発明1001〜1068のいずれかの方法。
[本発明1070]
刺激試薬が、TCR複合体のメンバーに特異的に結合する主剤を含み、該主剤は任意でCD3に特異的に結合する、本発明1001〜1069のいずれかの方法。
[本発明1071]
刺激試薬が、T細胞共刺激分子に特異的に結合する副剤をさらに含み、任意で、該共刺激分子が、CD28、CD137（4-1-BB）、OX40またはICOSから選択される、本発明1070の方法。
[本発明1072]
主剤および/または副剤が抗体を含み、任意で、刺激試薬が、抗CD3抗体および抗CD28抗体またはその抗原結合断片とのインキュベーションを構成する、本発明1070または本発明1071の方法。
[本発明1073]
主剤および/または副剤が固体支持体の表面上に存在する、本発明1071〜1072のいずれかの方法。
[本発明1074]
固体支持体がビーズであるかビーズを含む、本発明1073の方法。
[本発明1075]
ビーズが、3.5μmを超えるか約3.5μmを超えるが約9μm以下または約8μm以下または約7μm以下または約6μm以下または約5μm以下の直径を有する、本発明1074の方法。
[本発明1076]
ビーズが、4.5μmまたは約4.5μmの直径を有する、本発明1074または本発明1075の方法。
[本発明1077]
ビーズが不活性である、本発明1074〜1076のいずれかの方法。
[本発明1078]
ビーズがポリスチレン表面であるかポリスチレン表面を含む、本発明1074〜1077のいずれかの方法。
[本発明1079]
ビーズが磁性または超常磁性である、本発明1074〜1078のいずれかの方法。
[本発明1080]
ビーズ：細胞の比が3:1未満である、本発明1074〜1079のいずれかの方法。
[本発明1081]
ビーズ：細胞の比が2:1〜0.5:1または約2:1〜約0.5:1であり、任意で、ビーズ：細胞の比が1:1または約1:1である、本発明1074〜1080のいずれかの方法。
[本発明1082]
主剤および副剤が、複数のストレプトアビジン分子またはストレプトアビジンムテイン分子を含むオリゴマー粒子試薬の表面に可逆的に結合される、本発明1071〜1072のいずれかの方法。
[本発明1083]
インプット組成物が、刺激条件下で48時間未満インキュベートされる、本発明1001〜1082のいずれかの方法。
[本発明1084]
インプット組成物が、刺激条件下で、12時間以上36時間以下インキュベートされる、本発明1001〜1083のいずれかの方法。
[本発明1085]
インプット組成物が、刺激条件下で、18時間以上30時間以下インキュベートされる、本発明1001〜1084のいずれかの方法。
[本発明1086]
インプット組成物が、刺激条件下で、24時間または約24時間インキュベートされる、本発明1001〜1085のいずれかの方法。
[本発明1087]
接触、任意で形質導入が、48時間未満行われる、本発明1023〜1086のいずれかの方法。
[本発明1088]
接触、任意で形質導入が、12時間以上36時間以下行われる、本発明1023〜1087のいずれかの方法。
[本発明1089]
接触、任意で形質導入が、18時間以上30時間以下行われる、本発明1023〜1088のいずれかの方法。
[本発明1090]
接触、任意で形質導入が、24時間または約24時間行われる、本発明1023〜1089のいずれかの方法。
[本発明1091]
ウイルスベクターがレトロウイルスベクターである、本発明1023〜1090のいずれかの方法。
[本発明1092]
ウイルスベクターが、レンチウイルスベクターまたはガンマレトロウイルスベクターである、本発明1023〜1091のいずれかの方法。
[本発明1093]
接触、任意で形質導入が、形質導入アジュバントの非存在下で行われる、本発明1023〜1092のいずれかの方法。
[本発明1094]
導入が、1つまたは複数のサイトカインの存在下で、任意で無血清培地中で行われる、本発明1023〜1093のいずれかの方法。
[本発明1095]
1つまたは複数のサイトカインが、組換えIL-2、組換えIL-7および/または組換えIL-15から選択される、本発明1094の方法。
[本発明1096]
1つまたは複数のサイトカインが、10〜200IU/mLの組換えIL-2、100IU/mL〜1,000IU/mLの組換えIL-7および/または10〜200IU/mLの組換えIL-15を含む、本発明1094または1095の方法。
[本発明1097]
1つまたは複数のサイトカインが、10〜200IU/mLの組換えIL-2、100IU/mL〜1,000IU/mLの組換えIL-7および10〜200IU/mLの組換えIL-15を含む、本発明1094〜1096のいずれかの方法。
[本発明1098]
培養の少なくとも一部が、混合および/または灌流を用いて行われる、本発明1050〜1097のいずれかの方法。
[本発明1099]
培養の少なくとも一部が、500mL/日、600mL/日、700mL/日、750mL/日、800mL/日、900mL/日、1,000mL/日、1,200mL/日、1,400mL/日、1,500mL/日、1,600mL/日、1,800mL/日および/または2,000mL/日、約500mL/日、約600mL/日、約700mL/日、約750mL/日、約800mL/日、約900mL/日、約1,000mL/日、約1,200mL/日、約1,400mL/日、約1,500mL/日、約1,600mL/日、約1,800mL/日および/または約2,000mL/日、あるいは少なくとも500mL/日、少なくとも600mL/日、少なくとも700mL/日、少なくとも750mL/日、少なくとも800mL/日、少なくとも900mL/日、少なくとも1,000mL/日、少なくとも1,200mL/日、少なくとも1,400mL/日、少なくとも1,500mL/日、少なくとも1,600mL/日、少なくとも1,800mL/日および/または少なくとも2,000mL/日の速度の灌流を用いて行われる、本発明1098の方法。
[本発明1100]
培養の少なくとも第1の部分が、500mL/日、750mL/日もしくは1,000mL/日、約500mL/日、約750mL/日もしくは約1,000mL/日、または少なくとも500mL/日、少なくとも750mL/日もしくは少なくとも1,000mL/日の灌流速度により行われ、培養の少なくとも第2の部分が、1,200mL/日、1,400mL/日もしくは1,500mL/日、約1,200mL/日、約1,400mL/日もしくは約1,500mL/日、または少なくとも1,200mL/日、少なくとも1,400mL/日もしくは少なくとも1,500mL/日の灌流速度により行われる、本発明1098または1099の方法。
[本発明1101]
細胞が特定の密度に達すると、灌流が開始されかつ/または増加される、本発明1098〜1100のいずれかの方法。
[本発明1102]
特定の密度が、0.4×106個の細胞、0.5×106個の細胞、0.6×106個の細胞、0.8×106個の細胞、1.0×106個の細胞、1.2×106個の細胞、1.4×106個の細胞、1.6×106個の細胞、1.8×106個の細胞、2.0×106個の細胞、2.2×106個の細胞もしくは2.4×106個の細胞、約0.4×106個の細胞、約0.5×106個の細胞、約0.6×106個の細胞、約0.8×106個の細胞、約1.0×106個の細胞、約1.2×106個の細胞、約1.4×106個の細胞、約1.6×106個の細胞、約1.8×106個の細胞、約2.0×106個の細胞、約2.2×106個の細胞もしくは約2.4×106個の細胞、または少なくとも0.4×106個の細胞、少なくとも0.5×106個の細胞、少なくとも0.6×106個の細胞、少なくとも0.8×106個の細胞、少なくとも1.0×106個の細胞、少なくとも1.2×106個の細胞、少なくとも1.4×106個の細胞、少なくとも1.6×106個の細胞、少なくとも1.8×106個の細胞、少なくとも2.0×106個の細胞、少なくとも2.2×106個の細胞もしくは少なくとも2.4×106個の細胞である、本発明1101の方法。
[本発明1103]
細胞が0.6×106細胞/mLまたは約0.6×106細胞/mLの密度に達すると、灌流が開始されかつ/または750mL/日または約750mL/日の速度に増加される、本発明1098〜1102のいずれかの方法。
[本発明1104]
細胞が2.0×106細胞/mLまたは約2.0×106細胞/mLの密度に達すると、灌流が開始されかつ/または1500mL/日もしくは約1500mL/日の速度に増加される、本発明1098の方法。
[本発明1105]
培養が、1つまたは複数のサイトカインの存在下で、任意で無血清培地中で行われる、本発明1050〜1104のいずれかの方法。
[本発明1106]
1つまたは複数のサイトカインが、組換えIL-2、組換えIL-7および/または組換えIL-15から選択される、本発明1105の方法。
[本発明1107]
1つまたは複数のサイトカインが、50〜400IU/mLの組換えIL-2、100IU/mL〜2,000IU/mLの組換えIL-7および/または50〜400IU/mLの組換えIL-15を含む、本発明1105または1106の方法。
[本発明1108]
1つまたは複数のサイトカインが、50〜400IU/mLの組換えIL-2、100IU/mL〜2,000IU/mLの組換えIL-7および50〜400IU/mLの組換えIL-15を含む、本発明1105〜1107のいずれかの方法。
[本発明1109]
刺激条件下でのインキュベーションの開始後3日以内かつ/またはインプット組成物のCD4＋T細胞およびCD8＋T細胞が組み合わせられた後3日以内に、培養が開始される、本発明1050〜1108のいずれかの方法。
[本発明1110]
刺激条件下でのインキュベーションの開始後60時間以内かつ/またはインプット組成物のCD4＋T細胞およびCD8＋T細胞が組み合わせられた後60時間以内に、培養が開始される、本発明1050〜1109のいずれかの方法。
[本発明1111]
刺激条件下でのインキュベーションの開始後48時間以内かつ/またはインプット組成物のCD4＋T細胞およびCD8＋T細胞が組み合わせられた後48時間以内に、培養が開始される、本発明1050〜1110のいずれかの方法。
[本発明1112]
少なくとも組成物が閾値数のT細胞、閾値数の生存T細胞、閾値濃度のT細胞、閾値濃度の生存T細胞を含むまで、培養が行われる、本発明1050〜1111のいずれかの方法。
[本発明1113]
T細胞の閾値数または生存T細胞の閾値数が、2400×106個もしくは5500×106個、約2400×106個もしくは約5500×106個、または少なくとも2400×106個もしくは少なくとも5500×106個の有核細胞総数であり、任意で、有核細胞総数の生存率が、約75％もしくは少なくとも約75％または約85％もしくは少なくとも約85％である、本発明1112の方法。
[本発明1114]
T細胞の閾値数、生存T細胞の閾値数、T細胞の閾値濃度、生存T細胞の閾値濃度に達した後、培養が少なくとも1日間継続され、任意で、T細胞の閾値数または生存T細胞の閾値数が、900×106個、1200×106個もしくは3500×106個、約900×106個、約1200×106個もしくは約3500×106個、または少なくとも900×106個、少なくとも1200×106個もしくは少なくとも3500×106個の有核細胞総数である、本発明1112の方法。
[本発明1115]
T細胞の閾値数が、約85％または少なくとも約85％の生存率を有する2400×106個または約2400×106個の有核細胞総数である、本発明1050〜1114のいずれかの方法。
[本発明1116]
T細胞の閾値数が、5500×106個または約5500×106個の有核細胞総数である、本発明1050〜1114のいずれかの方法。
[本発明1117]
培養後にアウトプット組成物の細胞を収集する工程を含む、本発明1050〜1116のいずれかの方法。
[本発明1118]
培養後にアウトプット組成物の細胞を収集する工程を含み、アウトプット組成物の細胞が、刺激条件下でのインキュベーションの開始後少なくとも9日の時点で収集される、本発明1050〜1117のいずれかの方法。
[本発明1119]
培養後にアウトプット組成物の細胞を収集する工程を含み、アウトプット組成物の細胞が、刺激条件下でのインキュベーションの開始後少なくとも10日の時点で収集される、本発明1050〜1118のいずれかの方法。
[本発明1120]
8日〜25日以内、任意で14日〜18日である、インキュベーションの開始とアウトプット組成物の細胞の収集との間の期間の95％信頼区間を含む、本発明1118または1119の方法。
[本発明1121]
9日〜21日以内である、インキュベーションの開始とアウトプット組成物の細胞の収集との間の期間の95％信頼区間を含む、本発明1118または1119の方法。
[本発明1122]
9日〜16日以内である、インキュベーションの開始とアウトプット組成物の細胞の収集との間の期間の95％信頼区間を含む、本発明1118または1119の方法。
[本発明1123]
任意で薬学的に許容される賦形剤の存在下で、凍結保存および/または対象への投与のためにアウトプット組成物の細胞を製剤化する工程をさらに含む、本発明1052〜1122のいずれかの方法。
[本発明1124]
アウトプット組成物の細胞が、凍結保護物質の存在下で製剤化される、本発明1123の方法。
[本発明1125]
凍結保護物質がDMSOを含む、本発明1124の方法。
[本発明1126]
アウトプット組成物の細胞が、容器、任意でバイアルまたはバッグ内で製剤化される、本発明1122〜1125のいずれかの方法。
[本発明1127]
インキュベーション前に生体試料からCD4＋T細胞および/またはCD8＋T細胞を単離する工程をさらに含む、本発明1001〜1126のいずれかの方法。
[本発明1128]
単離が、CD4および/またはCD8の表面発現に基づいて、任意で陽性選択または陰性選択により、細胞を選択することを含む、本発明1127の方法。
[本発明1129]
単離が、免疫親和性に基づく選択を行うことを含む、本発明1127または本発明1128の方法。
[本発明1130]
生体試料が、対象から得られた初代T細胞を含む、本発明1127〜1129のいずれかの方法。
[本発明1131]
対象がヒト対象である、本発明1130の方法。
[本発明1132]
生体試料が、全血試料、バフィーコート試料、末梢血単核細胞（PBMC）試料、未分画T細胞試料、リンパ球試料、白血球細胞試料、アフェレーシス産物または白血球アフェレーシス産物であるかまたはそれを含む、本発明1127〜1131のいずれかの方法。
[本発明1133]
疾患、障害または症状の細胞または組織に関連し、特異的であり、かつ/または発現する標的抗原に、組換え受容体が結合することができる、本発明1001〜1132のいずれかの方法。
[本発明1134]
疾患、障害または症状が、感染性疾患もしくは障害、自己免疫疾患、炎症性疾患または腫瘍もしくはがんである、本発明1133の方法。
[本発明1135]
標的抗原が腫瘍抗原である、本発明1133または1134の方法。
[本発明1136]
標的抗原が、5T4、8H9、avb6インテグリン、B7-H6、B細胞成熟抗原（BCMA）、CA9、がん-精巣抗原、炭酸脱水酵素9（CAIX）、CCL-1、CD19、CD20、CD22、CEA、B型肝炎表面抗原、CD23、CD24、CD30、CD33、CD38、CD44、CD44v6、CD44v7/8、CD123、CD133、CD138、CD171、コンドロイチン硫酸プロテオグリカン4（CSPG4）、がん胎児性抗原（CEA）、CE7、サイクリン、サイクリンA2、c-Met、二重抗原、EGFR、上皮糖タンパク質2（EPG-2）、上皮糖タンパク質40（EPG-40）、EPHa2、エフリンB2、erb-B2、erb-B3、erb-B4、erbB二量体、EGFR vIII、エストロゲン受容体、胎児AchR、葉酸受容体α、葉酸結合タンパク質（FBP）、FCRL5、FCRH5、胎児アセチルコリン受容体、G250/CAIX、GD2、GD3、gp100、グリピカン3（GPC3）、Gタンパク質共役型受容体クラスCグループ5メンバーD（GPRC5D）、Her2/neu（受容体チロシンキナーゼerbB2）、HMW-MAA、IL-22R-α、IL-13受容体α2（IL-13Rα2）、キナーゼ挿入ドメイン受容体（kdr）、カッパ軽鎖、ルイスY、L1-細胞接着分子（L1-CAM）、メラノーマ関連抗原（MAGE）-A1、MAGE-A3、MAGE-A6、MART-1、MAGE-A10、メソセリン（MSLN）、マウスCMV、ムチン1（MUC1）、MUC16、NCAM、NKG2D、NKG2Dリガンド、NY-ESO-1、O-アセチル化GD2（OGD2）、癌胎児性抗原、メラノーマ優先発現抗原（PRAME）、PSCA、プロゲステロン受容体、サバイビン、ROR1、TAG72、チロシナーゼ関連タンパク質1（TRP1;TYRP1またはgp75としても知られる）、チロシナーゼ関連タンパク質2（TRP2;ドパクロムトートメラーゼ、ドパクロムδイソメラーゼまたはDCTとしても知られる）、VEGF受容体、VEGF-R2、ウィルムス腫瘍1（WT-1）、病原体特異的抗原、およびユニバーサルタグに関連する抗原から選択される、本発明1133〜1135のいずれかの方法。
[本発明1137]
組換え受容体が、機能的非TCR抗原受容体もしくはTCRまたはその抗原結合断片であるかまたはそれを含む、本発明1001〜1136のいずれかの方法。
[本発明1138]
組換え受容体がキメラ抗原受容体（CAR）である、本発明1001〜1137のいずれかの方法。
[本発明1139]
組換え受容体が抗BCMA CARである、本発明1001〜1138のいずれかの方法。
[本発明1140]
キメラ抗原受容体が、抗原結合ドメインを含む細胞外ドメインを含む、本発明1138または1139の方法。
[本発明1141]
抗原結合ドメインが、抗体、または任意で一本鎖断片であるその抗体断片であるかまたはそれを含む、本発明1140の方法。
[本発明1142]
前記断片が、柔軟なリンカーによって結合された抗体可変領域を含む、本発明1141の方法。
[本発明1143]
前記断片がscFvを含む、本発明1141または本発明1142の方法。
[本発明1144]
キメラ抗原受容体が、スペーサーおよび/またはヒンジ領域をさらに含む、本発明1138〜1143のいずれかの方法。
[本発明1145]
キメラ抗原受容体が、細胞内シグナル伝達領域を含む、本発明1138〜1144のいずれかの方法。
[本発明1146]
細胞内シグナル伝達領域が、細胞内シグナル伝達ドメインを含む、本発明1145の方法。
[本発明1147]
細胞内シグナル伝達ドメインが、一次シグナル伝達ドメイン、T細胞内で一次活性化シグナルを誘導することができるシグナル伝達ドメイン、T細胞受容体（TCR）成分のシグナル伝達ドメイン、および/または免疫受容活性化チロシンモチーフ（ITAM）を含むシグナル伝達ドメインであるかまたはそれを含む、本発明1146の方法。
[本発明1148]
細胞内シグナル伝達ドメインが、CD3鎖、任意でCD3-ゼータ（CD3ζ）鎖の細胞内シグナル伝達ドメイン、またはそのシグナル伝達部分であるかまたはそれを含む、本発明1146または1147の方法。
[本発明1149]
キメラ抗原受容体が、細胞外ドメインと細胞内シグナル伝達領域との間に位置する膜貫通ドメインをさらに含む、本発明1145〜1148のいずれかの方法。
[本発明1150]
細胞内シグナル伝達領域が、共刺激シグナル伝達領域をさらに含む、本発明1145〜1149のいずれかの方法。
[本発明1151]
共刺激シグナル伝達領域が、T細胞共刺激分子の細胞内シグナル伝達ドメインまたはそのシグナル伝達部分を含む、本発明1150の方法。
[本発明1152]
共刺激シグナル伝達領域が、CD28、4-1BBもしくはICOSの細胞内シグナル伝達ドメインまたはそのシグナル伝達部分を含む、本発明1150または本発明1151の方法。
[本発明1153]
共刺激シグナル伝達領域が、膜貫通ドメインと細胞内シグナル伝達領域との間にある、本発明1150〜1152のいずれかの方法。
[本発明1154]
閾値数以上の数の細胞を含むアウトプット組成物が、方法の85％超もしくは約85％超、90％超もしくは約90％超または95％超もしくは約95％超の反復の間で製造される、本発明1113〜1153のいずれかの方法。
[本発明1155]
無血清培地が、
基本培地中の0.5mM〜5mMのL-グルタミンのジペプチド形態、
0.5mM〜5mMのL-グルタミン、および
少なくとも1つのタンパク質
を含み、該培地が血清を含まない、本発明1001〜1154のいずれかの方法。
[本発明1156]
L-グルタミンのジペプチド形態がL-アラニル-L-グルタミンである、本発明1155の方法。
[本発明1157]
無血清培地中のL-グルタミンのジペプチド形態の濃度が、2mMまたは約2mMである、本発明1155または本発明1156の方法。
[本発明1158]
無血清培地中のL-グルタミンの濃度が、2mMまたは約2mMである、本発明1155〜1157のいずれかの方法。
[本発明1159]
少なくとも1つのタンパク質が、アルブミン、インスリンまたはトランスフェリンのうちの1つまたは複数、任意でヒトもしくは組換えアルブミン、ヒトもしくは組換えインスリンまたはヒトもしくは組換えトランスフェリンのうちの1つまたは複数を含む、本発明1155〜1158のいずれかの方法。
[本発明1160]
本発明1001〜1159または1165〜1177のいずれかの方法により作製された操作された細胞を含む、組成物。
[本発明1161]
薬学的に許容される担体をさらに含む、本発明1160の組成物。
[本発明1162]
凍結保護物質、任意でDMSOを含む、本発明1160または本発明1161の組成物。
[本発明1163]
本発明1160〜1162のいずれかの組成物と、対象にアウトプット組成物を投与するための指示書とを含む、製造物品。
[本発明1164]
対象が、疾患または症状を有し、任意で、組換え受容体が、疾患もしくは症状に関連するまたは疾患もしくは症状の細胞上に発現するもしくは存在する抗原を特異的に認識するかまたはその抗原に特異的に結合する、本発明1163の製造物品。
[本発明1165]
培養の少なくとも一部の間、細胞が、細胞生存率、濃度、密度、数またはそれらの組合せについてモニタリングされる、本発明1055〜1159のいずれかの方法。
[本発明1166]
モニタリングが、光学的方法、任意で顕微鏡観察によって行われる、本発明1165の方法。
[本発明1167]
モニタリングが、明視野顕微鏡観察、蛍光顕微鏡観察、微分干渉顕微鏡観察、位相差顕微鏡観察、デジタルホログラフィー顕微鏡観察（DHM）、微分デジタルホログラフィー顕微鏡観察（DDHM）またはそれらの組合せによって行われる、本発明1165または本発明1166の方法。
[本発明1168]
モニタリングが、微分デジタルホログラフィー顕微鏡観察（DDHM）によって行われる、本発明1165〜1167のいずれかの方法。
[本発明1169]
モニタリングが、培養の少なくとも一部の間、断続的または連続的に行われ、任意で、培養中、少なくとも1時間ごと、少なくとも6時間ごと、少なくとも12時間ごと、少なくとも18時間ごと、少なくとも24時間ごとまたは少なくとも26時間ごとに行われる、本発明1165〜1168のいずれかの方法。
[本発明1170]
モニタリングが、細胞がT細胞の閾値数、生存T細胞の閾値数、T細胞の閾値濃度または生存T細胞の閾値濃度に達するまで行われる、本発明1165〜1169のいずれかの方法。
[本発明1171]
モニタリングおよび培養が閉鎖系で行われる、本発明1165〜1170のいずれかの方法。
[本発明1172]
アウトプット組成物中の細胞の少なくとも30％、少なくとも40％、少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％または95％超がメモリー表現型であり、
アウトプット組成物中の細胞の少なくとも30％、少なくとも40％、少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％または95％超がセントラルメモリー表現型であり、
アウトプット組成物中の細胞の少なくとも30％、少なくとも40％、少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％または95％超がCD27＋、CD28＋、CCR7＋、CD45RA-、CD45RO＋、CD62L＋、CD3＋、CD95＋、グランザイムB-および/またはCD127＋であり、かつ/あるいは
アウトプット組成物中の細胞の少なくとも30％、少なくとも40％、少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％または95％超がCCR7＋/CD45RA-またはCCR7＋/CD45RO＋である、
本発明1050〜1159および1165〜1171のいずれかの方法。
[本発明1173]
前記方法の反復により、任意でヒト生体試料から、複数のアウトプット組成物が製造され、前記方法が複数の異なる個々の対象間で行われ、
複数のアウトプット組成物中のメモリー表現型の細胞の平均割合が、約40％〜約65％、約40％〜約45％、約45％〜約50％、約50％〜約55％、約55％〜約60％または約60％〜約65％であり、
複数のアウトプット組成物中のセントラルメモリー表現型の細胞の平均割合が、約40％〜約65％、約40％〜約45％、約45％〜約50％、約50％〜約55％、約55％〜約60％または約60％〜約65％であり、
複数のアウトプット組成物中のCD27＋、CD28＋、CCR7＋、CD45RA-、CD45RO＋、CD62L＋、CD3＋、CD95＋、グランザイムB-および/またはCD127＋である細胞の平均割合が、約40％〜約65％、約40％〜約45％、約45％〜約50％、約50％〜約55％、約55％〜約60％または約60％〜約65％であり、
複数のアウトプット組成物中のCCR7＋/CD45RA-またはCCR7＋/CD45RO＋である細胞の平均割合が、約40％〜約65％、約40％〜約45％、約45％〜約50％、約50％〜約55％、約55％〜約60％または約60％〜約65％であり、
複数のアウトプット組成物の操作されたCD4＋T細胞、任意でCAR＋CD4＋T細胞内のセントラルメモリーCD4＋T細胞の平均割合が、約40％〜約65％、約40％〜約45％、約45％〜約50％、約50％〜約55％、約55％〜約60％または約60％〜約65％であり、
複数のアウトプット組成物の操作されたCD8＋T細胞、任意でCAR＋CD8＋T細胞内のセントラルメモリーCD8＋T細胞の平均割合が、約40％〜約65％、約40％〜約45％、約45％〜約50％、約50％〜約55％、約55％〜約60％または約60％〜約65％であり、かつ/あるいは
複数のアウトプット組成物の操作されたT細胞、任意でCAR＋T細胞内のセントラルメモリーT細胞、任意でCD4＋セントラルメモリーT細胞およびCD8＋セントラルメモリーT細胞の平均割合が、約40％〜約65％、約40％〜約45％、約45％〜約50％、約50％〜約55％、約55％〜約60％または約60％〜約65％である、
本発明1050〜1159および1165〜1172のいずれかの方法。
[本発明1174]
前記方法が、ヒト生体試料の少なくとも約80％、約90％、約95％、約97％、約99％、約100％または100％において、アウトプット組成物中でCARを発現する細胞の所定の特徴、任意で閾値数を示すアウトプット組成物を製造し、前記方法が、複数の異なる個々の対象間で行われる、本発明1001〜1159および1165〜1173のいずれかの方法。
[本発明1175]
複数の異なる個々の対象が、疾患または症状を有する対象を含む、本発明1174の方法。
[本発明1176]
疾患または症状ががんである、本発明1175の方法。
[本発明1177]
がんが、血液がんであり、任意で多発性骨髄腫である、本発明1176の方法。
[本発明1178]
組成物中の細胞の少なくとも30％、少なくとも40％、少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％または95％超がメモリー表現型であり、
組成物中の細胞の少なくとも30％、少なくとも40％、少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％または95％超がセントラルメモリー表現型であり、
組成物中の細胞の少なくとも30％、少なくとも40％、少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％または95％超がCD27＋、CD28＋、CCR7＋、CD45RA-、CD45RO＋、CD62L＋、CD3＋、グランザイムB-および/またはCD127＋であり、かつ/あるいは
アウトプット組成物中の細胞の少なくとも30％、少なくとも40％、少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％または95％超がCCR7＋/CD45RA-またはCCR7＋/CD45RO＋である、
本発明1160の組成物。