(57)【要約】  本開示は、がんの治療を必要とする対象におけるがんの治療のためのＨＤＡＣ６選択的阻害剤及びＢＥＴ阻害剤を含む薬学的組み合わせに関する。がんの治療を必要とする対象におけるがんを治療するための方法も、本明細書に提供され、本方法は、対象に、有効量のＨＤＡＣ６選択的阻害剤及びＢＥＴ阻害剤を投与することを含む。
2019521108.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
がんの治療を必要とする対象におけるがんを治療するための方法であって、前記対象に、治療有効量のヒストンデアセチラーゼ６（ＨＤＡＣ６）選択的阻害剤、ならびに治療有効量のブロモドメイン及びエキストラ末端（ＢＥＴ）阻害剤を投与することを含む、前記方法。
【請求項２】
前記ＨＤＡＣ６選択的阻害剤は、式Ｉの化合物、
【化１】
2019521108.tif 000026
またはその薬学的に許容可能な塩であり、
式中、
環Ｂは、アリールまたはヘテロアリールであり、
Ｒ１は、アリールまたはヘテロアリールであり、これらのそれぞれは、ＯＨ、ハロ、またはＣ１−６−アルキルによって任意に置換され得、
Ｒは、ＨまたはＣ１−６−アルキルである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
Ｒ１は、アリールまたはヘテロアリールである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記式Ｉの化合物は、
【化２】
2019521108.tif 000027
またはその薬学的に許容可能な塩である、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
Ｒ１は、アリールまたはヘテロアリールであり、これらのそれぞれは、ハロによって置換される、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
前記式Ｉの化合物は、
【化３】
2019521108.tif 000028
またはその薬学的に許容可能な塩である、請求項２に記載の方法。
【請求項７】
前記ＨＤＡＣ６選択的阻害剤は、式ＩＩの化合物、
【化４】
2019521108.tif 000029
またはその薬学的に許容可能な塩であり、
式中、
Ｒｘ及びＲｙは、それぞれが結合する炭素と一緒に、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、またはシクロオクチルを形成し、
各ＲＡは独立して、Ｃ１−６−アルキル、Ｃ１−６−アルコキシ、ハロ、ＯＨ、−ＮＯ２、−ＣＮ、または−ＮＨ２であり、
ｍは、０、１、または２である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記式ＩＩの化合物は、
【化５】
2019521108.tif 000030
またはその薬学的に許容可能な塩である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記式ＩＩの化合物は、
【化６】
2019521108.tif 000031
またはその薬学的に許容可能な塩である、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＨＤＡＣ６選択的阻害剤は、ツバスタチンＡまたはその薬学的に許容可能な塩である、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＢＥＴ阻害剤は、ＡＢＢＶ−０７５、ＢＡＹ１２３８０９７、ＢＭＳ９８６１５８、ブロモスポリン、ＣＢＰ３０、ＣＰＩ−２０３、ＣＰＩ−０６１０、ＦＴ−１１０１、ＧＳＫ２８２０１５１、Ｉ−ＢＥＴ１５１、Ｉ−ＢＥＴ７２６、Ｉ−ＢＥＴ−７６２、ＩＮＣＢ０５４３２９、ＩＮＣＢ０５７６４３、ＩＳＯＸ  ＤＵＡＬ、ＪＱ１、ＬＹ２９４００２、ＬＹ３０３５１１、ＭＳ４３６、ＭＫ８６２８、ＯＦ−１、ＯＸＦ  ＢＤ  ０２、ＰＦＩ−１、ＰＦＩ−３、ＰＦ−６４０５７６１、ＲＶＸ−２０８、ＴＥＮ−０１０、ＸＤ  １４、及びＺＥＮ００３６９４、またはその薬学的に許容可能な塩からなる群から選択される、先行請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
前記ＢＥＴ阻害剤は、ＪＱ１、
【化７】
2019521108.tif 000032
またはその薬学的に許容可能な塩である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＨＤＡＣ６選択的阻害剤または前記ＢＥＴ阻害剤は、サブ治療用量で投与される、先行請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
前記ＨＤＡＣ６選択的阻害剤は、がん細胞のアポトーシスを誘導する、先行請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
治療有効量のＨＤＡＣ６選択的阻害剤またはその薬学的に許容可能な塩と、治療有効量のＢＥＴ阻害剤またはその薬学的に許容可能な塩と、を含む、薬学的組み合わせ。
【請求項１６】
前記ＨＤＡＣ６選択的阻害剤は、式Ｉの化合物、
【化８】
2019521108.tif 000033
またはその薬学的に許容可能な塩であり、
式中、
環Ｂは、アリールまたはヘテロアリールであり、
Ｒ１は、アリールまたはヘテロアリールであり、これらのそれぞれは、ＯＨ、ハロ、またはＣ１−６−アルキルによって任意に置換され得、
Ｒは、ＨまたはＣ１−６−アルキルである、請求項１５に記載の薬学的組み合わせ。
【請求項１７】
前記式Ｉの化合物は、
【化９】
2019521108.tif 000034
またはその薬学的に許容可能な塩である、請求項１６に記載の薬学的組み合わせ。
【請求項１８】
前記式Ｉの化合物は、
【化１０】
2019521108.tif 000035
またはその薬学的に許容可能な塩である、請求項１６に記載の薬学的組み合わせ。
【請求項１９】
前記ＨＤＡＣ６選択的阻害剤は、式ＩＩの化合物、
【化１１】
2019521108.tif 000036
またはその薬学的に許容可能な塩であり、
式中、
Ｒｘ及びＲｙは、それぞれが結合する炭素と一緒に、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、またはシクロオクチルを形成し、
各ＲＡは独立して、Ｃ１−６−アルキル、Ｃ１−６−アルコキシ、ハロ、ＯＨ、−ＮＯ２、−ＣＮ、または−ＮＨ２であり、
ｍは、０、１、または２である、請求項１５に記載の薬学的組み合わせ。
【請求項２０】
前記式ＩＩの化合物は、
【化１２】
2019521108.tif 000037
またはその薬学的に許容可能な塩である、請求項１９に記載の薬学的組み合わせ。
【請求項２１】
前記式ＩＩの化合物は、
【化１３】
2019521108.tif 000038
またはその薬学的に許容可能な塩である、請求項１９に記載の薬学的組み合わせ。
【請求項２２】
前記ＨＤＡＣ６選択的阻害剤は、ツバスタチンＡまたはその薬学的に許容可能な塩である、請求項１５に記載の薬学的組み合わせ。
【請求項２３】
前記ＢＥＴ阻害剤は、ＡＢＢＶ−０７５、ＢＡＹ１２３８０９７、ＢＭＳ９８６１５８、ブロモスポリン、ＣＢＰ３０、ＣＰＩ−２０３、ＣＰＩ−０６１０、ＦＴ−１１０１、ＧＳＫ２８２０１５１、Ｉ−ＢＥＴ１５１、Ｉ−ＢＥＴ７２６、Ｉ−ＢＥＴ−７６２、ＩＮＣＢ０５４３２９、ＩＮＣＢ０５７６４３、ＩＳＯＸ  ＤＵＡＬ、ＪＱ１、ＬＹ２９４００２、ＬＹ３０３５１１、ＭＳ４３６、ＭＫ８６２８、ＯＦ−１、ＯＸＦ  ＢＤ  ０２、ＰＦＩ−１、ＰＦＩ−３、ＰＦ−６４０５７６１、ＲＶＸ−２０８、ＴＥＮ−０１０、ＸＤ  １４、及びＺＥＮ００３６９４、またはその薬学的に許容可能な塩からなる群から選択される、請求項１５に記載の薬学的組み合わせ。
【請求項２４】
前記ＢＥＴ阻害剤は、ＪＱ１、
【化１４】
2019521108.tif 000039
またはその薬学的に許容可能な塩である、請求項２３に記載の薬学的組み合わせ。
【請求項２５】
前記組み合わせは、薬学的に許容可能な担体をさらに含む、請求項１５〜２４のいずれかに記載の薬学的組み合わせ。
【請求項２６】
がんの治療のための薬学的調製物または医薬の製造のための請求項１５〜２４のいずれかに記載の薬学的組み合わせの使用。
【請求項２７】
前記がんは、肺癌である、請求項２６に記載の使用。
【請求項２８】
前記ＨＤＡＣ６選択的阻害剤及び前記ＢＥＴ阻害剤は、単一の製剤として一緒に製剤化される、請求項１５〜２４のいずれかに記載の薬学的組み合わせ。
【請求項２９】
前記ＨＤＡＣ６選択的阻害剤及び前記ＢＥＴ阻害剤は、それぞれ、別々の製剤として製剤化される、請求項１５〜２４のいずれかに記載の薬学的組み合わせ。
【請求項３０】
請求項１５〜２４のいずれかに記載の薬学的組み合わせをがんに罹患している対象に投与することによって、前記対象におけるがん細胞の細胞生存率を減少させるための方法。
【請求項３１】
前記がんは、肺癌である、請求項１〜１４及び３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
前記肺癌は、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、または肺カルチノイド腫瘍である、請求項１〜１４及び３０〜３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
前記肺癌は、非小細胞肺癌である、請求項１〜１４及び３０〜３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
前記ＨＤＡＣ６選択的阻害剤及び前記ＢＥＴ阻害剤は、単一の製剤として一緒に製剤化される、請求項１〜１４及び３０〜３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
前記ＨＤＡＣ６選択的阻害剤及び前記ＢＥＴ阻害剤はそれぞれ、別々の製剤として製剤化される、請求項１〜１４及び３０〜３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
前記ＨＤＡＣ６選択的阻害剤及び前記ＢＥＴ阻害剤は、実質的に同時に投与される、請求項１〜１４及び３０〜３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
前記ＨＤＡＣ６選択的阻害剤及び前記ＢＥＴ阻害剤は、異なる時間に投与される、請求項１〜１４及び３０〜３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
前記がんは、耐性または難治性がんである、請求項１〜１４及び３０〜３７のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１６年６月９日に出願された米国仮特許出願第６２／３４８，０５４号への優先権を主張するものであり、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害は、がん細胞増殖停止を引き起こし得る。しかしながら、汎ＨＤＡＣ阻害は、有意な副作用をもたらし、代替のＨＤＡＣ阻害プロファイルは、特に他の治療剤と組み合わせて望ましい。
【０００３】
ＨＤＡＣ６は、クラスＩＩｂ  ＨＤＡＣであり、α−チューブリン及びＨＳＰ９０を含む、多くの細胞タンパク質からアセチル基を除去することが知られている。ＨＳＰ９０過アセチル化は、ＥＲ及びＥＧＦＲを含む、その標的タンパク質を脱安定化することが報告されている。ＨＤＡＣ６の阻害剤は、様々ながん型において抗癌増殖活性を実証した。ＨＤＡＣ６活性の遮断は、様々な機構によるがん細胞増殖阻害を引き起こすことが示されている。
ＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、及びＢＲＤＴを含む、ブロモドメイン及び余剰の末端モチーフ（ＢＥＴ）タンパク質は、例えば、ヒストンのＮ末端尾部にあるアセチル化リジン残基を認識するブロモドメインを含有する。ＢＥＴ阻害剤は、ＢＥＴタンパク質のブロモドメインに結合し、細胞エピジェネティック及び転写プログラムを変化させる。ＢＥＴタンパク質の阻害剤は、様々ながん型における治療効果を示している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０２１９８２号
【特許文献２】国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０５９２３８号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
現行の汎選択的ＨＤＡＣ阻害剤の用量制限毒性により、がんの治療のための改善された方法が継続的に必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
代替の有効かつ毒性の少ないがん治療を提供するために、がんの治療のための方法、ならびにＨＤＡＣ阻害剤及びＢＥＴ阻害剤を含む薬学的組み合わせが、本明細書に提供される。本明細書に開示される薬学的組み合わせ及び方法は、良好な耐性を示し、前療法の用量制限毒性を呈しない。
【０００７】
一態様では、がんの治療を必要とする対象におけるがんを治療するための方法が、本明細書に提供され、本方法は、対象に、治療有効量のＨＤＡＣ６選択的阻害剤及び治療有効量のＢＥＴ阻害剤を投与することを含む。いくつかの実施形態において、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤は、式Ｉの化合物、
【化１】
2019521108.tif 000003
またはその薬学的に許容可能な塩であり、
式中、
環Ｂは、アリールまたはヘテロアリールであり、
Ｒ１は、アリールまたはヘテロアリールであり、これらのそれぞれは、ＯＨ、ハロ、またはＣ１−６−アルキルによって任意に置換され得、
Ｒは、ＨまたはＣ１−６−アルキルである。
【０００８】
他の実施形態において、Ｒ１は、アリールまたはヘテロアリールである。別の実施形態において、式Ｉの化合物は、
【化２】
2019521108.tif 000004
またはその薬学的に許容可能な塩である。
【０００９】
さらなる実施形態において、Ｒ１は、アリールまたはヘテロアリールであり、これらのそれぞれは、ハロによって置換される。なお別の実施形態において、式Ｉの化合物は、
【化３】
2019521108.tif 000005
またはその薬学的に許容可能な塩である。
【００１０】
いくつかの実施形態において、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤は、式ＩＩの化合物、
【化４】
2019521108.tif 000006
またはその薬学的に許容可能な塩であり、
式中、
Ｒｘ及びＲｙは、それぞれが結合する炭素と一緒に、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、またはシクロオクチルを形成し、
各ＲＡは独立して、Ｃ１−６−アルキル、Ｃ１−６−アルコキシ、ハロ、ＯＨ、−ＮＯ２、−ＣＮ、または−ＮＨ２であり、
ｍは、０、１、または２である。
別の実施形態において、式ＩＩの化合物は、
【化５】
2019521108.tif 000007
またはその薬学的に許容可能な塩である。さらに別の実施形態において、式ＩＩの化合物は、
【化６】
2019521108.tif 000008
またはその薬学的に許容可能な塩である。なお別の実施形態において、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤は、ツバスタチンＡまたはその薬学的に許容可能な塩である。
【００１１】
他の実施形態において、ＢＥＴ阻害剤は、ＡＢＢＶ−０７５、ＢＡＹ１２３８０９７、ＢＭＳ９８６１５８、ブロモスポリン、ＣＢＰ３０、ＣＰＩ−２０３、ＣＰＩ−０６１０、ＦＴ−１１０１、ＧＳＫ２８２０１５１、Ｉ−ＢＥＴ１５１、Ｉ−ＢＥＴ７２６、Ｉ−ＢＥＴ−７６２（ＧＳＫ５２５７６２）、ＩＮＣＢ０５４３２９、ＩＮＣＢ０５７６４３、ＩＳＯＸ  ＤＵＡＬ、ＪＱ１、ＬＹ２９４００２、ＬＹ３０３５１１、ＭＳ４３６、ＭＫ８６２８（ＯＴＸ−０１５）、ＯＦ−１、ＯＸＦ  ＢＤ  ０２、ＰＦＩ−１、ＰＦＩ−３、ＰＦ−６４０５７６１、ＲＶＸ−２０８、ＴＥＮ−０１０、ＸＤ  １４、及びＺＥＮ００３６９４またはその薬学的に許容可能な塩からなる群から選択される。別の実施形態において、ＢＥＴ阻害剤は、ＪＱ１である。
【００１２】
なお別の実施形態において、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤またはＢＥＴ阻害剤は、サブ治療用量で投与される。さらに別の実施形態において、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤は、がん細胞のアポトーシスを誘導する。
【００１３】
別の態様では、治療有効量のＨＤＡＣ６選択的阻害剤またはその薬学的に許容可能な塩と、治療有効量のＢＥＴ阻害剤またはその薬学的に許容可能な塩と、を含む、薬学的組み合わせが、本明細書に提供される。一実施形態において、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤は式Ｉの化合物である。別の実施形態において、式Ｉの化合物は、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩である。なお別の実施形態において、式Ｉの化合物は、化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩である。他の実施形態において、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤は、式ＩＩの化合物である。さらなる実施形態において、式ＩＩの化合物は、化合物Ｃまたはその薬学的に許容可能な塩である。さらに別の実施形態において、式ＩＩの化合物は、化合物Ｄまたはその薬学的に許容可能な塩である。なお別の実施形態において、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤は、ツバスタチンＡまたはその薬学的に許容可能な塩である。
【００１４】
いくつかの実施形態において、ＢＥＴ阻害剤は、ＡＢＢＶ−０７５、ＢＡＹ１２３８０９７、ＢＭＳ９８６１５８、ＣＰＩ−２０３、ＣＰＩ−０６１０、ＦＴ−１１０１、ＧＳＫ２８２０１５１、ＧＳＫ５２５７６２、Ｉ−ＢＥＴ１５１、Ｉ−ＢＥＴ７２６、Ｉ−ＢＥＴ−７６２、ＩＮＣＢ０５４３２９、ＩＮＣＢ０５７６４３、ＪＱ１、ＭＳ４３６、ＯＦ−１、ＭＫ８６２８、ＰＦＩ−３、ＰＦ−６４０５７６１、ＲＶＸ−２０８、ＴＥＮ−０１０、及びＺＥＮ００３６９４またはその薬学的に許容可能な塩からなる群から選択される。別の実施形態において、ＢＥＴ阻害剤は、ＪＱ１またはその薬学的に許容可能な塩である。ある特定の実施形態において、薬学的組み合わせは、薬学的に許容可能な担体をさらに含む。
【００１５】
別の態様では、治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩と、治療有効量のＪＱ１またはその薬学的に許容可能な塩と、を含む、薬学的組み合わせが、本明細書に提供される。
【００１６】
別の態様では、治療有効量の化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩と、治療有効量のＪＱ１またはその薬学的に許容可能な塩と、を含む、薬学的組み合わせが、本明細書に提供される。
【００１７】
別の態様では、治療有効量の化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩と、治療有効量のＪＱ１またはその薬学的に許容可能な塩と、を含む、薬学的組み合わせが、本明細書に提供される。
【００１８】
別の態様では、治療有効量の式ＩＩの化合物またはその薬学的に許容可能な塩と、治療有効量のＪＱ１またはその薬学的に許容可能な塩と、を含む、薬学的組み合わせが、本明細書に提供される。
【００１９】
別の態様では、治療有効量の化合物Ｃまたはその薬学的に許容可能な塩と、治療有効量のＪＱ１またはその薬学的に許容可能な塩と、を含む、薬学的組み合わせが、本明細書に提供される。
【００２０】
別の態様では、治療有効量の化合物Ｄまたはその薬学的に許容可能な塩と、治療有効量のＪＱ１またはその薬学的に許容可能な塩と、を含む、薬学的組み合わせが、本明細書に提供される。
【００２１】
他の実施形態において、がんの治療のための薬学的調製物または医薬の製造のために本明細書に開示される薬学的組み合わせの使用が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態において、がんは、肺癌である。
【００２２】
別の実施形態において、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤及びＢＥＴ阻害剤は、単一の製剤として一緒に製剤化される、薬学的組み合わせが、本明細書に提供される。なお別の実施形態において、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤及びＢＥＴ阻害剤はそれぞれ、別々の製剤として製剤化される、薬学的組み合わせが、本明細書に提供される。
【００２３】
他の実施形態において、本明細書に開示される薬学的組み合わせを投与することによって、がんに罹患している対象におけるがん細胞の細胞生存率を減少させるための方法が、本明細書に提供される。別の実施形態において、がんに罹患している対象に、本明細書に開示される薬学的組み合わせを投与することによって、対象におけるがん細胞のアポトーシスを相乗的に増加させるための方法が、本明細書に提供される。さらに別の実施形態において、がんに罹患している対象に、治療有効量のＨＤＡＣ６選択的阻害剤、治療有効量のＢＥＴ阻害剤、または治療有効量の本明細書に開示される薬学的組み合わせを投与することによって、対象における循環制御性Ｔリンパ球（Ｔｒｅｇ）を減少させるための方法が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態において、Ｔｒｅｇは、ＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋Ｔｒｅｇである。なお別の実施形態において、がんに罹患している対象に、治療有効量のＨＤＡＣ６選択的阻害剤または治療有効量の本明細書に開示される薬学的組み合わせを投与することによって、対象における抗原提示複合体の発現を変化させるための方法が、本明細書に提供される。さらなる実施形態において、対象に、治療有効量のＨＤＡＣ６選択的阻害剤または治療有効量の本明細書に開示される薬学的組み合わせを投与することによって、対象における抗原提示細胞の共刺激機能を増加させることによってがんを治療するための方法が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態において、提示タンパク質は、ＣＤ８６であり、発現が増加する。別の実施形態において、提示タンパク質は、ＭＨＣ  ＩＩであり、発現が増加する。さらなる実施形態において、対象に、治療有効量のＨＤＡＣ６選択的阻害剤または治療有効量の本明細書に開示される薬学的組み合わせを投与することによって、対象におけるＴ細胞を活性化することによってがんを治療するための方法が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態において、ＣＤ６９の発現が増加する。別の実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＤ６９陽性ＣＤ４＋Ｔ細胞である。別の実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＤ６９陽性ＣＤ８＋Ｔ細胞である。
【００２４】
別の態様では、がんに罹患している対象に、治療有効量の本明細書に開示される薬学的組み合わせを投与することによって、対象におけるがん細胞の細胞増殖を減少させるための方法が、本明細書に提供される。さらに別の態様では、本開示は、リンパ球の機能活性を上方調節するための方法に関し、本方法は、対象に、治療有効量のＨＤＡＣ６選択的阻害剤または治療有効量の本明細書に開示される薬学的組み合わせを投与することを含む。いくつかの実施形態において、リンパ球は、Ｔ細胞である。別の実施形態において、機能活性は、一時的ＴＣＲ非依存性活性化である。
【００２５】
上述の方法のある特定の実施形態において、がんは、肺癌である。上述の方法の別の実施形態において、肺癌は、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、または肺カルチノイド腫瘍である。上述の方法のさらなる実施形態において、がんは、非小細胞肺癌である。
【００２６】
前述の方法の他の実施形態において、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤及びＢＥＴ阻害剤は、単一の製剤として一緒に製剤化される。前述の方法の別の実施形態において、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤及びＢＥＴ阻害剤はそれぞれ、別々の製剤として製剤化される。前述の方法のさらに別の実施形態において、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤及びＢＥＴ阻害剤は、実質的に同時に投与される。前述の方法のなお別の実施形態において、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤及びＢＥＴ阻害剤は、異なる時間に投与される。
【００２７】
上述の方法のいくつかの実施形態において、がんは、耐性または難治性がんである。
【００２８】
別の態様では、がんに罹患している対象におけるがん細胞の細胞増殖を増加させるための方法が、本明細書に提供され、本方法は、対象に、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩と、ＪＱ１またはその薬学的に許容可能な塩と、を含む、治療有効量の薬学的組み合わせを投与することを含む。
【００２９】
別の態様では、がんに罹患している対象におけるがん細胞の細胞増殖を減少させるための方法が、本明細書に提供され、本方法は、対象に、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩と、ＪＱ１またはその薬学的に許容可能な塩と、を含む、治療有効量の薬学的組み合わせを投与することを含む。
【００３０】
別の態様では、がんに罹患している対象におけるがん細胞の細胞増殖を減少させるための方法が、本明細書に提供され、本方法は、対象に、化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩と、ＪＱ１またはその薬学的に許容可能な塩と、を含む、治療有効量の薬学的組み合わせを投与することを含む。
【００３１】
別の態様では、がんに罹患している対象におけるがん細胞の細胞増殖を減少させるための方法が、本明細書に提供され、本方法は、対象に、式ＩＩの化合物またはその薬学的に許容可能な塩と、ＪＱ１またはその薬学的に許容可能な塩と、を含む、治療有効量の薬学的組み合わせを投与することを含む。
【００３２】
別の態様では、がんに罹患している対象におけるがん細胞の細胞増殖を減少させるための方法が、本明細書に提供され、本方法は、対象に、化合物Ｃまたはその薬学的に許容可能な塩と、ＪＱ１またはその薬学的に許容可能な塩と、を含む、治療有効量の薬学的組み合わせを投与することを含む。
【００３３】
別の態様では、がんに罹患している対象におけるがん細胞の細胞増殖を減少させるための方法が、本明細書に提供され、本方法は、対象に、化合物Ｄまたはその薬学的に許容可能な塩と、ＪＱ１またはその薬学的に許容可能な塩と、を含む、治療有効量の薬学的組み合わせを投与することを含む。
【００３４】
他の目的、特徴、及び利点は、以下の詳細な説明から明らかになるであろう。詳細な説明及び具体例は、例示としてのみ行われ、そのため、この詳細な説明から本開示の精神及び範囲内の様々な変更及び改変が当業者にとって明らかとなろう。さらに、実施例は、本開示の原理を示す。
【図面の簡単な説明】
【００３５】
【図１Ａ】は、ＨＤＡＣ阻害剤を用いて２４時間健常ドナーからの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を培養した後に、生存／死生存性色素に陰性であった総細胞の分画によって決定される生細胞の割合を示す。
【図１Ｂ】は、指示されたＨＤＡＣ阻害剤による培養後に、全生存ＰＢＭＣ中のＣＤ４＋ＦＯＸＰ３−Ｔ細胞（左）、ＣＤ８＋Ｔ細胞（中央）、またはＣＤ３−ＣＤ１４＋単球（右）の割合を示す。
【図１Ｃ】は、指示された薬物による健常ドナー患者ＰＢＭＣの培養から２４時間後のＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇ細胞の割合の要約を示す。データは、４〜８人に対象から分析された試料の平均±標準誤差を表す。＊は、ｐ値＜０．０５を示し、＊＊は、ｐ値＜０．００１を示し、＊＊＊は、ｐ値＜０．０００１を示す。
【図２Ａ】は、化合物Ａまたはエンチノスタットで２４時間培養したＮＳＣＬＣ患者からのＰＢＭＣ中のＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋Ｔｒｅｇ細胞の割合を示す。データは、４人の患者から分析された試料の平均±標準誤差を表す。＊は、ｐ値＜０．０５を示す。
【図２Ｂ】は、化合物Ａで７２時間培養したＮＳＣＬＣ患者の腫瘍中のＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋Ｔｒｅｇ細胞の割合を示す。データは、４人の患者から分析された試料の平均±標準誤差を表す。＊は、ｐ値＜０．０５を示す。
【図３Ａ】は、化合物Ａまたはエンチノスタットで培養したＮＳＣＬＣ患者からのＰＢＭＣ内のゲート化ＣＤ８＋Ｔ細胞上のＣＤ６９の発現レベルの要約（左）及び代表的なヒストグラム（右）を示す。データは、４人のＮＳＣＬＣ患者から分析された試料の平均±標準誤差を表す。＊＊＊は、ｐ値＜０．０００１を示す。
【図３Ｂ】は、化合物Ａまたはエンチノスタットで培養したＮＳＣＬＣ患者からのＰＢＭＣ内のゲート化ＣＤ４＋Ｔ細胞上のＣＤ６９の発現レベルの要約（左）及び代表的なヒストグラム（右）を示す。データは、４人のＮＳＣＬＣ患者から分析された試料の平均±標準誤差を表す。＊は、ｐ値＜０．０５を示す。
【図３Ｃ】は、化合物Ａまたはエンチノスタットで２４時間培養した健常ドナーＰＢＭＣ内のゲート化ＣＤ８＋Ｔ細胞上のＣＤ６９の発現レベルの要約（左）及び代表的なヒストグラム（右）を示す。データは、８人の健常ドナーから分析された試料の平均±標準誤差を表す。＊＊は、ｐ値＜０．００１を示す。
【図３Ｄ】は、化合物Ａまたはエンチノスタットで２４時間培養した健常ドナーＰＢＭＣ内のゲート化ＣＤ４＋Ｔ細胞上のＣＤ６９の発現レベルの要約（左）及び代表的なヒストグラム（右）を示す。データは、８人の健常ドナーから分析された試料の平均±標準誤差を表す。＊は、ｐ値＜０．０５を示す。
【図３Ｅ】は、化合物Ａまたはエンチノスタットで培養し、ｃｙｔｏｆｆ分析によってさらに評価されたＰＢＭＣの表現型を示す。３人の健常ドナーから分析された３つの独立した実験の全ＣＤ３＋Ｔ細胞上のホスホ−ＳＴＡＴ３（上）またはＣＤ６９（下）の発現に対する代表的なプロファイルが示される。
【図４Ａ】は、指示されたＨＤＡＣ阻害剤で２４時間培養した後にＮＳＣＬＣ患者からのＰＢＭＣからのＭＨＣクラスＩＩ（左）及び共刺激分子ＣＤ８６（右）の発現レベルの代表的なヒストグラムを示す。データは、４人の患者の平均±標準誤差を表す。
【図４Ｂ】は、指示されたＨＤＡＣ阻害剤で２４時間培養した後に減量腫瘍中のＣＤ４５＋ＣＤ６８＋ＣＤ１１ｂ＋腫瘍関連マクロファージ上のＭＨＣクラスＩＩ（左）及び共刺激分子ＣＤ８６（右）の発現レベルの代表的なヒストグラムを示す。データは、４人の患者の平均±標準誤差を表す。
【図４Ｃ】は、指示されたＨＤＡＣ阻害剤で２４時間培養した後に健常ドナーからのＰＢＭＣ内のゲート化ＣＤ３−ＣＤ１４＋単球上のＭＨＣクラスＩＩ（左）及び共刺激分子ＣＤ８６（右）の発現レベルの代表的なヒストグラムを示す。
【図４Ｄ】は、ＣＤ１４＋細胞による刺激に応じてＣＴＶ希釈によって決定される応答者Ｔ細胞による増殖の割合を示す。データは、２つの独立した実験を表す。＊は、ｐ値＜０．０５を示す。
【図５Ａ】は、ＫＰマウスの腫瘍内に示されたリンパ細胞サブセットの割合を示す。
【図５Ｂ】は、ＴＬマウスの腫瘍内に示されたリンパ細胞サブセットの割合を示す。
【図５Ｃ】は、ＫＰ及びＴＬマウスの腫瘍内のＣＤ８＋Ｔ細胞対ＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇ細胞の比率を示す。
【図５Ｄ】は、指示されるように、ビヒクルまたは化合物Ａで処置したマウスにおける腫瘍湿潤ＣＤ３＋ＣＤ８＋Ｔ細胞上のＰＤ−１（左）、ＣＴＬＡ−４（中央）、及びＴＩＭ３（右）の発現レベルを示す。データは、群当たり５〜９匹のマウスの平均±標準誤差である。
【図５Ｅ】は、指示されるように、ビヒクルまたは化合物Ａで処置したマウスにおける腫瘍湿潤ＣＤ３＋ＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３−Ｔ細胞上のＰＤ−１（左）、ＣＴＬＡ−４（中央）、及びＴＩＭ３（右）の発現レベルを示す。データは、群当たり５〜９匹のマウスの平均±標準誤差である。
【図５Ｆ】は、指示されるように、ビヒクルまたは化合物Ａで処置したマウスにおける腫瘍湿潤ＣＤ３＋ＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔ細胞上のＰＤ−１（左）、ＣＴＬＡ−４（中央）、及びＴＩＭ３（右）の発現レベルを示す。データは、群当たり５〜９匹のマウスの平均±標準誤差である。
【図５Ｇ】は、化合物Ａまたは対照としてビヒクルで処置したＫＰ（左）またはＴＬ（右）マウスの腫瘍内にＫｉ６７を発現する指示されたＴ細胞サブセットの割合を示す。データは、群当たり５〜９匹のマウスの平均±標準誤差である。
【図５Ｈ】は、エクスビボ刺激後のＣＤ６９活性化マーカーを発現する腫瘍浸潤ＣＤ８＋Ｔ細胞の割合を示す。＊は、ｐ値＜０．０５を示す。
【図５Ｉ】は、化合物Ｂまたはビヒクルで処置したＫＰマウスの腫瘍内の、ＣＤ８対ＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇ細胞の比率（左）、ＣＤ６９活性化マーカーを発現するＣＤ８＋Ｔ細胞の割合（中央）、及びマクロファージ上のＭＨＣクラスＩＩの発現レベル（右）を示す。
【図５Ｊ】は、ＭＨＣクラスＩＩ発現に対して対応するヒストグラムプロットでＧＥＭマウスにおけるＣＤ１１ｂｌｏＣＤ１１ｃ＋腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）に対するゲート戦略を示す。
【図５Ｋ】は、示されるように処置されたＫＰマウスのＴＡＭ中のＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ８０、及びＣＤ８６の発現レベルに対する代表的なヒストグラムプロットを示す。
【図５Ｌ】は、ビヒクル及び化合物Ａで処置したＫＰ及びＴＬマウスにおける腫瘍関連ＣＤ１１ｃ＋ＣＤ１１ｂｌｏマクロファージ上のＭＨＣ  ＩＩ分子の発現レベルを示す。
【図５Ｍ】は、ビヒクル及び化合物Ａで処置したＫＰ及びＴＬマウスにおける腫瘍関連ＣＤ１１ｃ＋ＣＤ１１ｂｌｏマクロファージ上のＣＤ８６共刺激分子の発現レベルを示す。
【図５Ｎ】は、ビヒクル及び化合物Ａで処置したマウスの腫瘍から分類されたＣＤ３＋Ｔ細胞の遺伝子発現プロファイルを示す。
【図６】は、指示された薬物及び抗体で２週間処置した後の腫瘍成長速度を示す。データは、群当たり４〜８匹のマウスの平均±標準誤差である。＊は、ｐ値＜０．０５を示す。
【図７Ａ】は、Ｔ細胞上のＰＤ−１（左）及びＣＤ６９（右）の発現における代表的なヒストグラムを示す。データは、２つの独立した実験を表す。
【図７Ｂ】は、Ｔｒｅｇ上の発現ＰＤ−１（左）、ＣＤ６９（中央）、及びＦｏｘｐ３（右）における代表的なヒストグラムを示す。
【図７Ｃ】は、ＣＳＦＥ希釈に基づいて増殖する細胞の割合を示す代表的なヒストグラムプロットを示す。
【図８Ａ】は、指示された薬物及び抗体で２週間処置した後の腫瘍サイズの変化を示す。
【図８Ｂ】は、選択された腫瘍領域からのＫｉ６７陽性細胞の平均を示し、各スライドの腫瘍領域内の全ての切断されたカスパーゼ３がプロットされた。２匹のマウスを分析した。
【図８Ｃ】は、各処置条件下でマウスの無増悪生存率を示し、疾患進行は、腫瘍体積の３０％超の増加に分類された。データは、群当たり４〜８匹のマウスの平均±標準誤差である。＊は、ｐ値＜０．０５を示し、＊＊は、ｐ値＜０．００１を示し、＊＊＊は、ｐ値＜０．０００１を示す。
【図８Ｄ】は、ＴＬマウスにおける腫瘍成長速度を示す。データは、群当たり５匹のマウスの平均±標準誤差である。
【図８Ｅ】は、Ｂ６マウスにおける腫瘍成長速度を示す。データは、群当たり５匹のマウスの平均±標準誤差である。
【図９Ａ】は、図８Ａにあるように処置したＫＰマウスにおけるＣＤ８：Ｔｒｅｇの比の要約を示す。データは、群当たり４〜８匹のマウスの平均±標準誤差である。
【図９Ｂ】は、ＪＱ１及び／または化合物Ａで処置したＫＰマウスの腫瘍内のＣＤ４＋、ＣＤ８＋、及びＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋（Ｔｒｅｇ）細胞集団の要約を示す。データは、群当たり４〜８匹のマウスの平均±標準誤差である。
【図９Ｃ】は、腫瘍湿潤白血球内のＣＤ６９を発現したＣＤ８＋Ｔ細胞の割合を示す。データは、群当たり４〜８匹のマウスの平均±標準誤差である。
【図９Ｄ】は、エクスビボ刺激後の平均蛍光強度に基づいてＩＦＮ−γを分泌した腫瘍湿潤白血球内のＣＤ８＋Ｔ細胞の割合を示す。データは、群当たり４〜８匹のマウスの平均±標準誤差である。
【図９Ｅ】は、エクスビボ刺激後の平均蛍光強度に基づいて発現したＣＤ１０７αの割合を示す。データは、群当たり４〜８匹のマウスの平均±標準誤差である。
【図９Ｆ】は、生存／死滅の識別染料に対して陽性を染色した集団によって決定される、死滅ＥｐＣａｍ＋腫瘍細胞の割合を示す。
【図９Ｇ】は、処置したマウスの腫瘍内のＴＡＭ上のＭＨＣクラスＩＩの発現レベルの要約を示す。対照マウスは、ビヒクルを単独で受容した。データは、群当たり４〜８匹のマウスの平均±標準誤差である。
【図９Ｈ】は、処置したマウスの腫瘍内のＴＡＭ上のＣＤ８６の発現レベルの要約を示す。対照マウスは、ビヒクルを単独で受容した。データは、群当たり４〜８匹のマウスの平均±標準誤差である。
【図１０】は、ＦＡＣＳ分析のためのゲート化戦略を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３６】
腫瘍微小環境は、造血起源のものを含む様々な間質／支持細胞を含有する。Ｔリンパ球、天然キラー（ＮＫ）細胞などの具体的な細胞型は、がん細胞に対する免疫応答の成形において多様な役割を果たす多くの研究モデルにおいて実証されている（Ａｄａｍ，Ｊ．Ｋ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ，２００３．９９（１）：ｐ．１１３−３２、Ｄｏｍａｇａｌａ−Ｋｕｌａｗｉｋ，Ｊ．，Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｓｙｓｔｅｍ  ｉｎ  ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ  ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ａｎｄ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｆｏｒ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ．Ｔｒａｎｓｌ  Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，２０１５．４（２）：ｐ．１７７−９０、Ｑｕａｉｌ，Ｄ．Ｆ．ａｎｄ  Ｊ．Ａ．Ｊｏｙｃｅ，Ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ．Ｎａｔ  Ｍｅｄ，２０１３．１９（１１）：ｐ．１４２３−３７）。腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を処理し、Ｔ細胞プライミングをもたらすプロセスにおいて潜在的な腫瘍反応性Ｔ細胞にそれらを提示する、抗原提示細胞（ＡＰＣ）が特に重要である。抗腫瘍反応を生成するためのそれらの潜在性にもかかわらず、Ｔ細胞抗原特異的反応は、多くの場合、骨髄性由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）及びＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞などの免疫抑制細胞によって阻害される（Ｆａｃｃｉａｂｅｎｅ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｔ−ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｃｅｌｌｓ：ｋｅｙ  ｐｌａｙｅｒｓ  ｉｎ  ｔｕｍｏｒ  ｉｍｍｕｎｅ  ｅｓｃａｐｅ  ａｎｄ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，２０１２．７２（９）：ｐ．２１６２−７１）。腫瘍微小環境において作動する阻害性細胞機構に加えて、がん細胞は、それらの細胞表面上にＭＨＣクラスＩの下方調節によって免疫認識を回避することができるか、またはＴ細胞への阻害シグナルを形質導入するＰＤ−Ｌ１などの分子を上方調節することによってＴ細胞エフェクター機能を抑制することができる。これにより、免疫細胞における陽性免疫表現型及び機能的変化を促進する薬剤が、増強した抗腫瘍反応を好むより許容される腫瘍微小環境を生成し得るという最前線の概念に至る。
【００３７】
ＨＤＡＣは、ヒストン及び非ヒストンタンパク質からアセチル基を除去することによって遺伝子またはそれらの生成物の発現を調節する酵素のファミリーである。そうすることによって、それらは、多くの細胞プロセスを調節し、これらのいくつかは、悪性細胞の分化及び細胞周期進行、ならびにアポトーシスなどの腫瘍発生及び挙動の態様に関与してきた（Ｈａｂｅｒｌａｎｄ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  ｍａｎｙ  ｒｏｌｅｓ  ｏｆ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅｓ  ｉｎ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｙ．Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｇｅｎｅｔ，２００９．１０（１）：ｐ．３２−４２、Ｌｉｃｃｉａｒｄｉ，Ｐ．Ｖ．ａｎｄ  Ｔ．Ｃ．Ｋａｒａｇｉａｎｎｉｓ，Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｂｙ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．ＩＳＲＮ  Ｈｅｍａｔｏｌ，２０１２．２０１２：ｐ．６９０９０１、Ｒｏｐｅｒｏ，Ｓ．ａｎｄ  Ｍ．Ｅｓｔｅｌｌｅｒ，Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅｓ（ＨＤＡＣｓ）  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｃａｎｃｅｒ．Ｍｏｌ  Ｏｎｃｏｌ，２００７．１（１）：ｐ．１９−２）。いくつかの研究は、がん療法に対する汎−及びイソ酵素選択的ＨＤＡＣ阻害剤の両方の相対的有用性を評価するために実施されている（Ｋｒｏｅｓｅｎ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，ＨＤＡＣ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ；ａ  ｄｏｕｂｌｅ  ｅｄｇｅｄ  ｓｗｏｒｄ？  Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ，２０１４．５（１６）：ｐ．６５５８−７２、Ｗｅｓｔ，Ａ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ＨＤＡＣ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｒｅｑｕｉｒｅ  ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｓｙｓｔｅｍ．Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２０１４．３（１）：ｐ．ｅ２７４１４）。有望な治療結果は、特に、化学療法剤と組み合わせられたときに、汎−ＨＤＡＣ阻害剤を用いて示されているが、これらの薬剤の使用は、患者における有害作用及び用量制限毒性と関連付けられる。ＨＤＡＣ阻害剤の治療有効性を検出する多くの翻訳研究が悪性細胞におけるそれらの効果に焦点を当てられているが、多くの研究は、単独でまたは他の免疫療法剤と組み合わせて使用されるとき、ＨＤＡＣ阻害剤の免疫調節活性を強調した（Ｃｈｉｎｎａｉｙａｎ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｂｙ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ．Ｉｎｔ  Ｊ  Ｒａｄｉａｔ  Ｏｎｃｏｌ  Ｂｉｏｌ  Ｐｈｙｓ，２００５．６２（１）：ｐ．２２３−９、Ｄｉ  Ｆａｚｉｏ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  ｐａｎ−ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｐａｎｏｂｉｎｏｓｔａｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｇｒｏｗｔｈ  ｏｆ  ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｍｏｄｅｌｓ  ｂｙ  ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  ｐａｔｈｗａｙｓ  ｏｆ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．Ｃｅｌｌ  Ｏｎｃｏｌ，２０１０．３２（４）：ｐ．２８５−３００、Ｋｒｏｅｓｅｎ，２０１４、Ｌｉｃｃｉａｒｄｉ，２０１２、Ｒｏｐｅｒｏ，２���０７、Ｗｅｓｔ，２０１４）。汎ＨＤＡＣ阻害剤は、特に、標準治療薬物と組み合わせて、低い耐性を含む制限を有する。例えば、汎ＨＤＡＣ阻害剤パノビノスタットは、腫瘍細胞株におけるアポトーシスの誘導を介して直接細胞傷害性効果を引き起こす（Ｄｉ  Ｆａｚｉｏ，２０１０）。直接がん細胞−自律殺傷を超えて、上皮腫瘍のマウスモデルは、クラス特異的または汎ＨＤＡＣ阻害剤がＮＫＧ２Ｄリガンドの発現を変化させ、それ故に、がん細胞に対してＮＫ細胞の溶解機能に影響を及ぼし得ることが示されている。腫瘍免疫微環境の細胞構成要素におけるＨＤＡＣ阻害剤の効果は、不十分な理解を残す。
【００３８】
ブロモドメイン阻害剤は、転写機構によってアセチル化リジン残基の認識を調節することによって細胞エピジェネティック及び転写プログラムを変化させる第２のクラスの分子である。ＪＱ１は、ブロモドメイン含有タンパク質のＢＥＴファミリーのよく特徴付けられた阻害剤であり、ヒストンアセチル転移酵素（ＨＡＴ）及びＨＤＡＣと転写因子及び遺伝子発現に含まれるタンパク質との相互作用を調節することによって後成的足跡を直接調節し得る。腫瘍関連免疫細胞上のＢＥＴ阻害剤（例えばＪＱ１）の効果は、依然として不明である。
【００３９】
免疫チェックポイントを標的とする抗体、すなわち、ＰＤ−（Ｌ）１及びＣＴＬＡ４で生成された近年の前臨床及び臨床データは、抗腫瘍免疫が、Ｔ細胞、ＡＰＣ、及び腫瘍細胞集団間で阻害の相互作用を標的化することによって複数の腫瘍型において駆動され得ることを実証する。しかしながら、これらの薬剤の使用ががんの治療において大きな進歩を表すが、少数の患者のみがほとんどの腫瘍型に応答する。加えて、応答への障害は多様であり、特徴はあまりない。抗腫瘍免疫の耐久性は、免疫細胞寄与に際してヒンジに対してますます認識されている。本明細書に開示されるように、非選択的及び選択的ＨＤＡＣ阻害剤及びＢＥＴ阻害剤を含む小分子後成的調節剤のある特定の免疫調節効果が、特定された。末梢組織、ならびにＨＤＡＣ６選択的阻害剤（例えば化合物Ａ）によって引き起こされる腫瘍微環境において、Ｔ細胞及び単球／マクロファージの表現型及び機能に関して注目すべき動的変化が、本明細書に記載されている。ＢＥＴ阻害剤のＴｒｅｇ特異的効果も、記載されている。ＨＤＡＣ６選択的阻害剤（例えば化合物Ａ）及びＢＥＴ阻害剤（例えばＪＱ１）を含む薬学的組み合わせは、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）の免疫応答性遺伝子操作マウスモデルにおける持続性抗腫瘍応答を促進した。化合物Ａが血液学的癌の現行の臨床治験において好ましい安全性プロファイルを示し、ブロモドメイン阻害との組み合わせでの有用性は、免疫チェックポイント以外の機構を標的化することによって抗腫瘍免疫応答を増大させるために翻訳開発における合理的統合を表す。
【００４０】
本開示は、がんの治療を必要とする対象におけるがんを治療するための方法に関し、本方法は、対象に、治療有効量のＨＤＡＣ６選択的阻害剤及び治療有効量のＢＥＴ阻害剤を投与することを含む。ＨＤＡＣ６選択的阻害剤（例えば、式Ｉまたは式ＩＩの化合物）及びＢＥＴ阻害剤を含む、組み合わせ製品及び薬学的組み合わせも、本明細書に提供される。
【００４１】
定義
本開示内で用いられる様々な用語の定義が、以下に列挙される。これらの定義は、特に具体例で制限されない限り、個別にまたはより大きな集団の一部として本明細書及び特許請求の範囲を通して使用される用語に適用する。
【００４２】
本明細書及び添付の特許請求の範囲に使用される、「含んでいる」という用語は、「からなる」及び「から本質的になる」実施形態を含み得る。「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「有する（ｈａｓ）」、「できる（ｍａｙ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎ）」、及びそれらの変形は、本明細書で使用される場合、指名された材料／ステップの存在を必要とし、他の材料／ステップの存在を許容する、開放式の移行句、用語、または語句であることが意図される。しかしながら、このような説明は、任意の薬学的に許容可能な担体ともに、指定された化合物のみの存在を可能し、他の化合物を含まない、列挙された化合物「からなる」及び「から本質的になる」という組成物またはプロセスを説明するものと解釈されるべきである。
【００４３】
「約」という用語は、一般に、値の１０％以下、５％、または１％の可能な変化を示す。例えば、「約２５ｍｇ／ｋｇ」は、一般に、最も広い意味で２２．５〜２７．５ｍｇ／ｋｇ、すなわち、２５±２．５ｍｇ／ｋｇの値を示すであろう。
【００４４】
「アルキル」という用語は、ある特定の実施形態において、１〜６個または１〜８個の炭素原子を含有する飽和、直鎖、または分岐鎖炭化水素部分を指す。Ｃ１−６−アルキル部分の例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル部分が挙げられるが、これらに限定されず、Ｃ１−８−アルキル部分の例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル、ヘプチル、及びオクチル部分が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４５】
アルキル置換基の炭素原子数は、接頭語「Ｃｘ−ｙ」で示され得、式中、ｘは置換基の炭素の最小数であり、ｙは、その最大数である。同様に、Ｃｘ鎖は、ｘの炭素原子を含有するアルキル鎖を意味する。
【００４６】
「アリール」という用語は、フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダニル、イデニルなどが含まれるが、これらに限定されない、１つ以上の飽和鎖、縮合または非縮合を有する単環式または多環式炭素環式環系を指す。
【００４７】
「ヘテロアリール」という用語は、１つの環原子がＳ、Ｏ、及びＮから選択され、０個、１個、または２個の環原子が、Ｓ、Ｏ、及びＮから独立して選択されるさらなるヘテロ原子であり、残りの環原子が、炭素である、少なくとも１つの芳香環を有し、５〜１０個の環原子を有する、単環式または多環式（例えば、２環または３環もしくはそれ以上）縮合もしくは非縮合部分または環系を指す。ヘテロアリールとしては、ピリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、チオフェニル、フラニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、キノキサリニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４８】
「ハロ」という用語は、フッ素、塩素、臭素、及びヨウ素などのハロゲンを指す。
【００４９】
「ＨＤＡＣ」という用語は、コアヒストン中のリジン残基からアセチル基を除去し、そのため、縮合及び転写が抑制されているクロマチンの形成をもたらす酵素であるヒストンデアセチラーゼを指す。４つの群に分類される、現在１８個の既知のヒストンデアセチラーゼが存在する。ＨＤＡＣ１、ＨＤＡＣ２、ＨＤＡＣ３、及びＨＤＡＣ８を含むクラスＩ  ＨＤＡＣは、酵母ＲＰＤ３遺伝子に関連する。ＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣ５、ＨＤＡＣ６、ＨＤＡＣ７、ＨＤＡＣ９、及びＨＤＡＣ１０を含むクラスＩＩ  ＨＤＡＣは、酵母Ｈｄａ１遺伝子に関連する。サーチュインとしても知られているクラスＩＩＩ  ＨＤＡＣは、Ｓｉｒ２遺伝子に関連し、ＳＩＲＴ１−７を含む。ＨＤＡＣ１１のみを含有するクラスＩＶ  ＨＤＡＣは、クラスＩ及びＩＩ  ＨＤＡＣの両方の特性を有する。「ＨＤＡＣ」という用語は、特に指定されない限り、１８個の既知のヒストンデアセチラーゼのうちの任意の１つ以上を指す。
【００５０】
「ＨＤＡＣ６選択的」という用語は、化合物が、ＨＤＡＣ１またはＨＤＡＣ２などの任意の他の種類のＨＤＡＣ酵素よりも実質的に大きな規模、例えば、５倍、１０倍、１５倍、２０倍またはそれ以上でＨＤＡＣ６に結合することを意味する。すなわち、化合物は、任意の他の種類のＨＤＡＣ酵素以上にＨＤＡＣ６に選択的である。例えば、ＨＤＡＣ６に結合して、ＩＣ５０が１０ｎＭであり、ＨＤＡＣ１に結合して、ＩＣ５０が５０ｎＭである化合物は、ＨＤＡＣ６に選択的である。一方、ＨＤＡＣ６に結合して、ＩＣ５０が５０ｎＭであり、ＨＤＡＣ１に結合して、ＩＣ５０が６０ｎＭである化合物は、ＨＤＡＣ６に選択的ではない。
【００５１】
「阻害剤」という用語は、アンタゴニストという用語と同義である。
【００５２】
「ＢＥＴ阻害剤」は、ＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、及びＢＲＤＴを含む、ブロモドメイン及び余剰の末端モチーフ（ＢＥＴ）タンパク質を標的とする。ＢＥＴタンパク質は、アセチル化リジン残基を認識するブロモドメインを含有する。ＢＥＴ阻害剤は、ＢＥＴタンパク質のブロモドメインに結合し、細胞エピジェネティック及び転写プログラムを変化させる。例えば、ＢＥＴ阻害剤としては、ＡＢＢＶ−０７５、ＢＡＹ１２３８０９７、ＢＭＳ９８６１５８、ブロモスポリン、ＣＢＰ３０、ＣＰＩ−２０３、ＣＰＩ−０６１０、ＦＴ−１１０１、ＧＳＫ２８２０１５１、Ｉ−ＢＥＴ１５１、Ｉ−ＢＥＴ７２６、Ｉ−ＢＥＴ−７６２（ＧＳＫ５２５７６２）、ＩＮＣＢ０５４３２９、ＩＮＣＢ０５７６４３、ＩＳＯＸ  ＤＵＡＬ、ＪＱ１、ＬＹ２９４００２、ＬＹ３０３５１１、ＭＳ４３６、ＭＫ８６２８（ＯＴＸ−０１５）、ＯＦ−１、ＯＸＦ  ＢＤ  ０２、ＰＦＩ−１、ＰＦＩ−３、ＰＦ−６４０５７６１、ＲＶＸ−２０８、ＴＥＮ−０１０、ＸＤ  １４、及びＺＥＮ００３６９４が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５３】
本明細書で使用されるとき、「治療」または「治療する」という用語は、方法が少なくともがんを軽減していることを示す。治療のための方法は、対象に、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤及びＢＥＴ阻害剤を含む薬学的組み合わせを適用するまたは投与することを含む。治療のための方法は、がんを有する対象からの単離した組織または細胞株に（例えば、診断またはエクスビボ適用のために）、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤及びＢＥＴ阻害剤を含む薬学的組み合わせを適用するまたは投与することを含む。薬学的組み合わせの適用または投与の目的は、がんを軽減、治癒、軽減、緩和、変化、改善、緩和、改善、またはがんに影響を与えることである。そのような治療は、薬理ゲノムの分野から得られた知識に基づいて、具体的に調整または修正され得る。本開示の方法は、少なくとも異常な細胞増殖を軽減し得る。例えば、本方法は、患者におけるがん増殖速度を低減し得るか、またはがんの継続した増殖または蔓延を防止し得るか、またはがんの全体的な到達を低減し得る。
【００５４】
本明細書で使用されるとき、「患者」、「個体」、または「対象」という用語は、ヒトまたは非ヒト哺乳動物を指す。非ヒト哺乳動物は、例えば、ヒツジ、ウシ、ブタ、イヌ、ネコ、及びマウス哺乳動物等の家畜及びペットを含む。好ましくは、患者、対象、または個体は、ヒトである。
【００５５】
本明細書で使用されるとき、「薬学的に許容可能な」という用語は、化合物の生物学的活性または特性を抑止せず、かつ比較的非毒性である担体または希釈剤等の材料を指し、すなわち、材料は、望ましくない生物学的効果を引き起こすことも、それが含有される組成物の構成成分のいずれとも有害な様態で相互作用することもなく、個体に投与され得る。
【００５６】
本明細書で使用されるとき、「薬学的に許容可能な塩」という用語は、本開示の化合物の誘導体を指し、親化合物は、既存の酸または塩基部分の塩形態への変換によって修飾される。薬学的に許容可能な塩の例としては、アミンなどの塩基性残基の無機塩または有機酸塩、カルボン酸などの酸性残基のアルカリ塩または有機塩などが挙げられるが、これらに限定されない。本開示の薬学的に許容可能な塩には、例えば、無毒性の無機酸または有機酸から形成される親化合物の従来型無毒性塩が含まれる。本開示の薬学的に許容可能な塩は、従来の化学的方法によって塩基または酸性部分を含む親化合物から合成することができる。一般に、そのような塩は、これらの化合物の遊離の酸または塩基形態を、水または有機溶媒または水及び有機溶媒の混合物中で化学量論量の適切な塩基または酸と反応させることによって調製してもよく、一般に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、またはアセトニトリルのような非水系媒体が好ましい。好適な塩の一覧は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７ｔｈ  ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９８５，ｐ．１４１８及びＪｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６，２（１９７７）に見出され、それぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【００５７】
本明細書で使用されるとき、「組成物」または「薬学的組成物」という用語は、本発明内で有用な少なくとも１つの化合物と、薬学的に許容可能な担体との混合物を指す。薬学的組成物は、化合物の、患者または対象への投与を容易にする。静脈内、経口、エアロゾル、非経口、眼内、肺、及び局所投与を含むが、これらに限定されない、化合物を投与する複数の技法が当該技術分野で存在する。
【００５８】
本明細書で使用されるとき、「薬学的に許容可能な担体」という用語は、本発明内で有用な化合物を、それがその意図される機能を行い得るように、患者内でまたは患者へと担持するまたは輸送することに関与する、液体または固体充填剤、安定剤、分散化剤、懸濁化剤、希釈剤、賦形剤、増粘剤、溶媒、またはカプセル封入物質などの、薬学的に許容可能な材料、組成物、または担体を意味する。典型的には、そのような構築物は、身体のある器官または部分から身体の別の器官または部分に担持または輸送される。各担体は、本発明内で有用な化合物を含む製剤の他の成分と適合性であり、かつ患者に有害でないという意味で、「許容可能で」なければならない。「組み合わせ」、「治療用組み合わせ」、「薬学的組み合わせ」、または「組み合わせ生成物」という用語は、１つの投薬単位形態で固定した組み合わせ、または固定されていない組み合わせ、または２つ以上の治療剤が独立して、時間間隔内で、特に、これらの時間間隔が、組み合わせパートナーが協同効果、例えば、相乗効果を示すことを可能にする、同時にまたは別々に投与され得る、組み合わされた投与のための部分のキットを指す。
【００５９】
「組み合わせ療法」という用語は、本開示に記載される治療状態または障害を治療するための２つ以上の治療剤の投与を指す。そのような投与は、活性成分の固定比率を有する単一の製剤または各活性成分のための別々の製剤（例えば、カプセル及び／または静脈内投与製剤）中のような、実質的に同時様式でこれらの治療剤の同時投与を包含する。加えて、そのような投与はまた、ほぼ同時にまたは異なる時間に、順次的なまたは別々の様式で各タイプの治療剤の使用も包含する。そのような投与はまた、異なる時間で投与され得る別々の製剤として製剤化される各成分も包含する。例えば、式ＩのＨＤＡＣ６選択的阻害剤は、毎日投与され得る。任意の場合でも、治療レジメンは、本明細書に記載される病態または障害を治療する際に薬物組み合わせの有益な効果を提供するであろう。
【００６０】
「サブ治療有効量」または「サブ治療用量」という用語は、単独で患者に投与されたときに、意図した標的の生物学的活性を経時で完全に阻害しない活性成分（例えば、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤またはＢＥＴ阻害剤）の量または用量を指す。
【００６１】
「相乗効果」という用語は、単独で投与したそれぞれの薬剤の効果の単純な相加より大きい効果、例えば、がんまたはその症状の症状進行を遅延する効果を産み出す、例えば、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤及びＢＥＴ阻害剤などの２つの薬剤の作用を指す。
【００６２】
本明細書で使用される、がん患者に言及されるとき、治療剤に対して「耐性がある」または「難治性がある（ｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ）」という用語は、がんが、治療剤との接触の結果として治療剤の効果に対する耐性が固有であるまたは達成していることを意味する。別の言い方をすれば、がん患者は、特定の治療剤と関連する通常の標準治療に対して耐性である。
【００６３】
本明細書で使用される、「治療未経験」とは、がんに対して治験または認可された薬物、特に、ＢＥＴ阻害剤による治療をこれまでに受けたことがない患者を指す。
【００６４】
あるいは、本開示の方法に従って治療された患者は、「治療経験がある」患者であり得る。本明細書で使用される、「治療経験がある」とは、がん療法の少なくとも１つの過程、特に、ＢＥＴ阻害剤を有したことがある患者を指す。いくつかの実施形態において、この前述の過程における最後の用量は、本明細書に従って方法を実施する少なくとも３カ月前に行われた。
【００６５】
ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤
ＨＤＡＣ阻害剤及びＢＥＴ阻害剤を投与することを含む、がんの治療を必要とする対象におけるがんを治療するための方法が、本明細書に提供される。ＨＤＡＣ阻害剤及びＢＥＴ阻害剤を含む薬学的組み合わせも、本明細書に提供される。
【００６６】
本明細書に開示される薬学的組み合わせ及び方法は、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤を含む。ＨＤＡＣ阻害剤は、任意のＨＤＡＣ阻害剤であり得る。それ故に、ＨＤＡＣ阻害剤は、特定の種類のヒストンデアセチラーゼ酵素に対して選択的であっても、非選択的であってもよい。好ましくは、ＨＤＡＣ阻害剤は、選択的ＨＤＡＣ阻害剤である。より具体的には、ＨＤＡＣ阻害剤は、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤である。
【００６７】
いくつかの実施形態において、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤は、式Ｉの化合物、
【化７】
2019521108.tif 000009
またはその薬学的に許容可能な塩であり、
式中、
環Ｂは、アリールまたはヘテロアリールであり、
Ｒ１は、アリールまたはヘテロアリールであり、これらのそれぞれは、ＯＨ、ハロ、またはＣ１−６−アルキルによって任意に置換され得、
Ｒは、ＨまたはＣ１−６−アルキルである。
代表的な式Ｉの化合物としては、
【表１】
2019521108.tif 000010
またはその薬学的に許容可能な塩が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤は、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩である。化合物Ａはまた、リコリノスタットとも称される。他の実施形態において、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤は、化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩である。
【００６８】
式Ｉに従う選択的ＨＤＡＣ６阻害剤の調製及び特性は、国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０２１９８２号及び同第ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０５９２３８号において提供され、これらの全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【００６９】
他の実施形態において、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤は、式ＩＩの化合物、
【化８】
2019521108.tif 000011
またはその薬学的に許容可能な塩であり、
式中、
Ｒｘ及びＲｙは、それぞれが結合する炭素と一緒に、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、またはシクロオクチルを形成し、
各ＲＡは独立して、Ｃ１−６−アルキル、Ｃ１−６−アルコキシ、ハロ、ＯＨ、−ＮＯ２、−ＣＮ、または−ＮＨ２であり、
ｍは、０、１、または２である。
【００７０】
代表的な式Ｉの化合物としては、
【表２】
2019521108.tif 000012
またはその薬学的に許容可能な塩が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤は、化合物Ｃまたはその薬学的に許容可能な塩である。他の実施形態において、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤は、化合物Ｄまたはその薬学的に許容可能な塩である。
【００７１】
式ＩＩに従う選択的ＨＤＡＣ６阻害剤の調製及び特性は、国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０６０７９１号において提供され、この全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【００７２】
別の実施形態において、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤は、ツバスタチンＡまたはその薬学的に許容可能な塩である。
【００７３】
ブロモドメイン及び余剰のＲｅｒｍｉｎａｌモチーフタンパク質（ＢＥＴ）阻害剤
本明細書に開示される薬学的組み合わせ及び方法のいくつかの実施形態は、ＢＥＴ阻害剤を含む。ＢＥＴ阻害剤は、任意のＢＥＴ阻害剤であり得る。ある特定の実施形態において、ＢＥＴ阻害剤は、ＡＢＢＶ−０７５、ＢＡＹ１２３８０９７、ＢＭＳ９８６１５８、ブロモスポリン、ＣＢＰ３０、ＣＰＩ−２０３、ＣＰＩ−０６１０、ＦＴ−１１０１、ＧＳＫ２８２０１５１、Ｉ−ＢＥＴ１５１、Ｉ−ＢＥＴ７２６、Ｉ−ＢＥＴ−７６２（ＧＳＫ５２５７６２）、ＩＮＣＢ０５４３２９、ＩＮＣＢ０５７６４３、ＩＳＯＸ  ＤＵＡＬ、ＪＱ１、ＬＹ２９４００２、ＬＹ３０３５１１、ＭＳ４３６、ＭＫ８６２８（ＯＴＸ−０１５）、ＯＦ−１、ＯＸＦ  ＢＤ  ０２、ＰＦＩ−１、ＰＦＩ−３、ＰＦ−６４０５７６１、ＲＶＸ−２０８、ＴＥＮ−０１０、ＸＤ  １４、及びＺＥＮ００３６９４またはその薬学的に許容可能な塩からなる群から選択される。
【００７４】
別の実施形態において、ＢＥＴ阻害剤は、ＪＱ１もしくは（＋）−ＪＱ１またはその薬学的に許容可能な塩である。別の実施形態において、ＢＥＴ阻害剤は、ＪＱ１、
【化９】
2019521108.tif 000013
またはその薬学的に許容可能な塩である。なお別の実施形態において、ＢＥＴ阻害剤は、（＋）−ＪＱ１である。さらに別の実施形態において、ＢＥＴ阻害剤（＋）−ＪＱ１は、ＪＱ１と称される。ＪＱ１は、公知のＢＥＴ阻害剤である（Ｆｉｌｉｐｐａｋｏｐｏｕｌｏｓ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ＢＥＴ  Ｂｒｏｍｏｄｏｍａｉｎｓ．Ｎａｔｕｒｅ，２０１０．４６８：ｐ．１０６７−７３、Ｂｅｌｋｉｎａ，Ａ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，ＢＥＴ  ｄｏｍａｉｎ  ｃｏ−ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ  ｉｎ  ｏｂｅｓｉｔｙ，ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃａｎｃｅｒ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ，２０１２．１２（７）：ｐ．４６５−７７、これらの両方が参照によりそれら全体が本明細書に組み込まれる）。
【００７５】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される化合物は、非溶媒和である。他の実施形態において、化合物のうちの１つ以上は、溶媒和形態である。当該技術分野で既知であるように、溶媒和物は、水、エタノールなどの薬学的に許容可能な溶媒のうちのいずれかであり得る。
【００７６】
式Ｉ及びＩＩの化合物は、それらの中性形態で表されるが、いくつかの実施形態において、これらの化合物は、薬学的に許容可能な塩形態で使用される。
【００７７】
薬学的組み合わせ及び組成物
したがって、別の態様では、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤及びＢＥＴ阻害剤を含む薬学的組み合わせが、本明細書に提供される。
【００７８】
薬学的組み合わせのいくつかの実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤は、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤である。特定の実施形態において、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤は、式Ｉの化合物、
【化１０】
2019521108.tif 000014
またはその薬学的に許容可能な塩であり、
式中、
環Ｂは、アリールまたはヘテロアリールであり、
Ｒ１は、アリールまたはヘテロアリールであり、これらのそれぞれは、ＯＨ、ハロ、またはＣ１−６−アルキルによって任意に置換され得、
Ｒは、ＨまたはＣ１−６−アルキルである。
【００７９】
いくつかの実施形態において、式Ｉの化合物は、化合物Ａ、
【化１１】
2019521108.tif 000015
またはその薬学的に許容可能な塩である。
さらに他の実施形態において、式Ｉの化合物は、化合物Ｂ、
【化１２】
2019521108.tif 000016
またはその薬学的に許容可能な塩である。
【００８０】
なお別の実施形態において、薬学的組み合わせは、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤の化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩と、ＢＥＴ阻害剤のＪＱ１またはその薬学的に許容可能な塩と、を含む。
【００８１】
さらに別の実施形態において、薬学的組み合わせは、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤の化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩と、ＢＥＴ阻害剤のＪＱ１またはその薬学的に許容可能な塩と、を含む。
【００８２】
他の実施形態において、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤は、式ＩＩの化合物、
【化１３】
2019521108.tif 000017
またはその薬学的に許容可能な塩であり、
式中、
Ｒｘ及びＲｙは、それぞれが結合する炭素と一緒に、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、またはシクロオクチルを形成し、
各ＲＡは独立して、Ｃ１−６−アルキル、Ｃ１−６−アルコキシ、ハロ、ＯＨ、−ＮＯ２、−ＣＮ、または−ＮＨ２であり、
ｍは、０、１、または２である。
【００８３】
別の実施形態において、薬学的組み合わせは、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤の化合物Ｃまたはその薬学的に許容可能な塩と、ＢＥＴ阻害剤のＪＱ１またはその薬学的に許容可能な塩と、を含む。
【００８４】
なお別の実施形態において、薬学的組み合わせは、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤の化合物Ｄまたはその薬学的に許容可能な塩と、ＢＥＴ阻害剤のＪＱ１またはその薬学的に許容可能な塩と、を含む。
【００８５】
一実施形態において、薬学的組み合わせは、対象におけるがんの治療で用いる。ある特定の実施形態において、がんは、耐性または難治性癌である。
【００８６】
一実施形態において、薬学的組み合わせは、対象におけるがんの治療で用い、この対象は、治療未経験である。
【００８７】
上述の薬学的組み合わせ及び組成物の他の実施形態において、薬学的組み合わせまたは組成物は、１つ以上の薬学的に許容可能な担体をさらに含む。
【００８８】
がんを治療するための方法
一態様では、本開示は、がんの治療を必要とする対象におけるがんを治療するための方法を提供し、本方法は、対象に、治療有効量のＨＤＡＣ阻害剤及びＢＥＴ阻害剤を含む薬学的組み合わせを投与することを含む。
【００８９】
本明細書に見なされる対象は、典型的には、ヒトである。しかしながら、対象は、治療が所望される任意の哺乳動物であり得る。それ故に、本明細書に記載される方法は、ヒト及び獣医学的用途の両方に適用可能である。
【００９０】
したがって、一実施形態において、がんの治療を必要とする対象におけるがんを治療するための方法が、本明細書に提供され、本方法は、対象に、治療有効量のＨＤＡＣ６選択的阻害剤及び治療有効量のＢＥＴ阻害剤を投与することを含む。いくつかの実施形態において、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤またはＢＥＴ阻害剤は、サブ治療用量で投与される。
【００９１】
別の実施形態において、がんの治療を必要とする対象におけるがんを治療するための方法が、本明細書に提供され、本方法は、対象に、治療有効量の式ＩのＨＤＡＣ６選択的阻害剤及び治療有効量のＢＥＴ阻害剤を投与することを含む。
【００９２】
なお別の実施形態において、がんの治療を必要とする対象におけるがんを治療するための方法が、本明細書に提供され、本方法は、対象に、治療有効量の式ＩＩのＨＤＡＣ６選択的阻害剤及び治療有効量のＢＥＴ阻害剤を投与することを含む。
【００９３】
なお別の実施形態において、がんの治療を必要とする対象におけるがんを治療するための方法が、本明細書に提供され、本方法は、対象に、治療有効量の化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩及び治療有効量のＪＱ１またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む。
【００９４】
さらに別の実施形態において、がんの治療を必要とする対象におけるがんを治療するための方法が、本明細書に提供され、本方法は、対象に、治療有効量の化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩及び治療有効量のＪＱ１またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む。
【００９５】
なお別の実施形態において、がんの治療を必要とする対象におけるがんを治療するための方法が、本明細書に提供され、本方法は、対象に、治療有効量の化合物Ｃまたはその薬学的に許容可能な塩及び治療有効量のＪＱ１またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む。
【００９６】
なお別の実施形態において、がんの治療を必要とする対象におけるがんを治療するための方法が、本明細書に提供され、本方法は、対象に、治療有効量の化合物Ｄまたはその薬学的に許容可能な塩及び治療有効量のＪＱ１またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む。
【００９７】
本明細書に開示される方法のいくつかの実施形態において、細胞は、がん細胞である。別の実施形態において、細胞は、肺癌細胞である。さらに別の実施形態において、細胞は、非小細胞肺癌細胞である。
【００９８】
なお別の実施形態において、肺癌の治療を必要とする対象における肺癌を治療するための方法が、本明細書に提供され、本方法は、対象に、治療有効量の化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩及び治療有効量のＪＱ１またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む。
【００９９】
さらに別の実施形態において、肺癌の治療を必要とする対象における肺癌を治療するための方法が、本明細書に提供され、本方法は、対象に、治療有効量の化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩及び治療有効量のＪＱ１またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む。
【０１００】
なお別の実施形態において、肺癌の治療を必要とする対象における肺癌を治療するための方法が、本明細書に提供され、本方法は、対象に、治療有効量の化合物Ｃまたはその薬学的に許容可能な塩及び治療有効量のＪＱ１またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む。
【０１０１】
なお別の実施形態において、肺癌の治療を必要とする対象における肺癌を治療するための方法が、本明細書に提供され、本方法は、対象に、治療有効量の化合物Ｄまたはその薬学的に許容可能な塩及び治療有効量のＪＱ１またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む。
【０１０２】
なお別の実施形態において、非小細胞肺癌の治療を必要とする対象における非小細胞肺癌を治療するための方法が、本明細書に提供され、本方法は、対象に、治療有効量の化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩及び治療有効量のＪＱ１またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む。
【０１０３】
さらに別の実施形態において、非小細胞肺癌の治療を必要とする対象における非小細胞肺癌を治療するための方法が、本明細書に提供され、本方法は、対象に、治療有効量の化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩及び治療有効量のＪＱ１またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む。
【０１０４】
なお別の実施形態において、非小細胞肺癌の治療を必要とする対象における非小細胞肺癌を治療するための方法が、本明細書に提供され、本方法は、対象に、治療有効量の化合物Ｃまたはその薬学的に許容可能な塩及び治療有効量のＪＱ１またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む。
【０１０５】
なお別の実施形態において、非小細胞肺癌の治療を必要とする対象における非小細胞肺癌を治療するための方法が、本明細書に提供され、本方法は、対象に、治療有効量の化合物Ｄまたはその薬学的に許容可能な塩及び治療有効量のＪＱ１またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む。
【０１０６】
上述の方法のいくつかの実施形態において、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤は、がん細胞のアポトーシスを誘導する。
【０１０７】
他の実施形態において、本明細書に開示される薬学的組み合わせを投与することによって、がんに罹患している対象におけるがん細胞の細胞生存率を減少させるための方法が、提供される。
【０１０８】
別の実施形態において、がんに罹患している対象に、本明細書に開示される薬学的組み合わせを投与することによって、対象におけるがん細胞のアポトーシスを相乗的に増加させるための方法が、提供される。
【０１０９】
さらに別の実施形態において、がんに罹患している対象に、治療有効量のＨＤＡＣ６選択的阻害剤、治療有効量のＢＥＴ阻害剤、または治療有効量の本明細書に開示される薬学的組み合わせを投与することによって、対象における循環制御性Ｔリンパ球（Ｔｒｅｇ）を減少させるための方法が、提供される。いくつかの実施形態において、Ｔｒｅｇは、ＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋Ｔｒｅｇである。
【０１１０】
なお別の実施形態において、がんに罹患している対象に、治療有効量のＨＤＡＣ６選択的阻害剤または治療有効量の本明細書に開示される薬学的組み合わせを投与することによって、対象における抗原提示複合体の発現を変化させるための方法が、提供される。
【０１１１】
さらなる実施形態において、対象に、治療有効量のＨＤＡＣ６選択的阻害剤または治療有効量の本明細書に開示される薬学的組み合わせを投与することによって、対象における抗原提示細胞の共刺激機能を増加させることによってがんを治療するための方法が、提供される。いくつかの実施形態において、提示タンパク質は、ＣＤ８６であり、発現が増加する。別の実施形態において、提示タンパク質は、ＭＨＣ  ＩＩであり、発現が増加する。
【０１１２】
さらなる実施形態において、対象に、治療有効量のＨＤＡＣ６選択的阻害剤または治療有効量の本明細書に開示される薬学的組み合わせを投与することによって、対象におけるＴ細胞を活性化することによってがんを治療するための方法が、提供される。いくつかの実施形態において、ＣＤ６９の発現が増加する。別の実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＤ６９陽性ＣＤ４＋Ｔ細胞である。別の実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＤ６９陽性ＣＤ８＋Ｔ細胞である。
【０１１３】
別の態様では、がんに罹患している対象に、治療有効量の本明細書に開示される薬学的組み合わせを投与することによって、対象におけるがん細胞の細胞増殖を減少させるための方法が、本明細書に提供される。
【０１１４】
さらに別の態様では、本開示は、リンパ球の機能活性の上方調節を必要とする対象におけるその活性を上方調節するための方法に関する。具体的には、本開示は、リンパ球の機能活性の上方調節を必要とする対象におけるその活性を上方調節するための方法に関し、本方法は、対象に、治療有効量のＨＤＡＣ６選択的阻害剤または治療有効量の本明細書に開示される薬学的組み合わせを投与することを含む。いくつかの実施形態において、リンパ球は、Ｔ細胞である。別の実施形態において、機能活性は、一時的ＴＣＲ非依存性活性化である。
【０１１５】
上述の方法のある特定の実施形態において、がんは、肺癌である。上述の方法の別の実施形態において、肺癌は、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、または肺カルチノイド腫瘍である。上述の方法のさらなる実施形態において、がんは、非小細胞肺癌である。
【０１１６】
上述の方法のいくつかの実施形態において、がんは、耐性または難治性がんである。
【０１１７】
上述の方法のある特定の実施形態において、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤は、化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物Ｃ、化合物Ｄ、ツバスタチンＡ、またはその薬学的に許容可能な塩からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、ＢＥＴ阻害剤は、ＪＱ１またはその薬学的に許容可能な塩である。
【０１１８】
投与／用量
いくつかの実施形態において、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤（式Ｉまたは式ＩＩの化合物）は、ＢＥＴ阻害剤と同時に投与される。同時投与は、一般的には、両方の化合物が正確に同じ時間に患者に入ることを意味する。しかしながら、同時投与はまた、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤及びＢＥＴ阻害剤が異なる時間に患者に入る可能性も含み、その時間差は、十分に小さく、初回に投与する化合物は、２回目に投与する化合物が入る前に患者に効果があるまでの時間提供されない。このような遅延時間は、典型的には、１分未満、より典型的には、３０秒未満である。化合物が溶液状態にある一例では、同時投与は、化合物の薬学的組み合わせを含有する溶液を投与することによって達成され得る。別の例では、１つの溶液はＨＤＡＣ６選択的阻害剤を含み、他の溶液はＢＥＴ阻害剤を含む別々の溶液の同時投与を用いることができる。化合物が固形状態にある一例では、同時投与は、化合物の薬学的組み合わせを含有する組成物を投与することによって達成され得る。あるいは、同時投与は、１つの組成物がＨＤＡＣ６選択的阻害剤を含み、他の組成物がＢＥＴ阻害剤を含む２つの別々の組成物を投与することによって達成され得る。別の実施形態において、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤及びＢＥＴ阻害剤は、実質的に同じ時間に投与される。
【０１１９】
いくつかの実施形態において、化合物の薬学的組み合わせは、がんの治療に、相乗効果（すなわち、相加効果よりも大きい）を示す。「相乗効果」という用語は、単独で投与したそれぞれの薬剤の効果の単純な相加より大きい効果、例えば、がんまたはその症状の症状進行を遅延する効果を産み出す、例えば、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤及びＢＥＴ阻害剤などの２つの薬剤の作用を指す。相乗効果は、例えば、Ｓｉｇｍｏｉｄ−Ｅｍａｘ式（Ｈｏｌｆｏｒｄ，Ｎ．Ｈ．Ｇ．ａｎｄ  Ｓｃｈｅｉｎｅｒ，Ｌ．Ｂ．，Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ．６：４２９−４５３（１９８１））、Ｌｏｅｗｅ付加の式（Ｌｏｅｗｅ，Ｓ．ａｎｄ  Ｍｕｉｓｃｈｎｅｋ，Ｈ．，Ａｒｃｈ．Ｅｘｐ．Ｐａｔｈｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１１４：３１３−３２６（１９２６））、及び中位−効果式（Ｃｈｏｕ，Ｔ．Ｃ．ａｎｄ  Ｔａｌａｌａｙ，Ｐ．，Ａｄｖ．Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｇｕｌ．２２：２７−５５（１９８４））などの好適な方法を用いて計算することができる。上に参照される各式を実験データに適用して、薬物併用の効果を評価することを補助するための対応するグラフを生成することができる。上に参照される式に関連する対応するグラフは、それぞれ、濃度−効果曲線、アイソボログラム曲線、及び併用指数曲線である。
【０１２０】
他の実施形態において、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤及びＢＥＴ阻害剤は、同時に投与されないが、２つの薬剤は相乗効果を示す。いくつかの実施形態において、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤は、ＢＥＴ阻害剤の前に投与される。他の実施形態において、ＢＥＴ阻害剤は、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤の前に投与される。非同時投与の時間差は、１分、５分、１０分、１５分、３０分、４５分、６０分、２時間、３時間、６時間、９時間、１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、３日、４日、５日、６日、または７日より大きくてもよい。他の実施形態において、初回に投与する化合物は、２回目に投与する化合物が投与される前に患者に効果があるまでの時間提供される。一般に、時間差は、初回に投与する化合物が、患者においてその効果が完了する時間を超えて、または、初回に投与する化合物が、患者において完全または実質的に除去または不活性化される時間を超えて拡大しない。別の実施形態において、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤及びＢＥＴ阻害剤は、異なる時間に投与される。
【０１２１】
いくつかの実施形態において、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤及びＢＥＴ阻害剤は、単一の製剤として一緒に製剤化される。
【０１２２】
他の実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤及びＢＥＴ阻害剤は、それぞれ、別々の製剤として製剤化される。
【０１２３】
いくつかの実施形態において、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤及びＢＥＴ阻害剤のうちの一方または両方は、治療有効量または投薬量で投与される。「治療有効量」は、単独で患者に投与されたときに、がんを効果的に治療するＨＤＡＣ６選択的阻害剤（式Ｉまたは式ＩＩの化合物）またはＢＥＴ阻害剤の量である。所与の事例で、特定の対象に対して「治療有効量」であることが判明する量は、例えそのような投薬量が医師によって「治療有効量」であると見なされているとしても、考慮下にある疾患または病態に対して同様に治療された患者に１００％有効でない場合がある。治療有効量に対応する化合物の量は、がんの種類、がんの病期、治療される患者の年齢、及び他の因子に強く依存する。一般に、これらの化合物の治療有効量は、上述の支持している参考文献に提供されているように、当該技術分野において周知である。
【０１２４】
他の実施形態において、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤及びＢＥＴ阻害剤のうちの一方または両方は、サブ治療有効量または投薬量で投与される。サブ治療有効量は、単独で患者に投与されたときに、意図した標的の生物学的活性を経時で完全に阻害しないＨＤＡＣ６選択的阻害剤（式Ｉまたは式ＩＩの化合物）またはＢＥＴ阻害剤の量である。
【０１２５】
治療量またはサブ治療量で投与されるかどうかにかかわらず、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤及びＢＥＴ阻害剤の薬学的組み合わせは、がんを治療するのに有効でなければならない。例えば、ＢＥＴ阻害剤の化合物のサブ治療量は、式ＩまたはＩＩの化合物（ＨＤＡＣ６選択的阻害剤）と組み合わされたときに、薬学的組み合わせががんの治療に有効である場合、有効量であり得る。
【０１２６】
本開示のある特定の実施形態において、薬学的組み合わせ及び方法は、式ＩのＨＤＡＣ６選択的阻害剤及びＢＥＴ阻害剤を含む。それ故に、一実施形態において、薬学的組み合わせ及び方法は、化合物Ａ及びＢＥＴ阻害剤を含む。別の実施形態において、薬学的組み合わせ及び方法は、化合物Ｂ及びＢＥＴ阻害剤を含む。別の実施形態において、薬学的組み合わせ及び方法は、化合物Ｃ及びＢＥＴ阻害剤を含む。なお別の実施形態において、薬学的組み合わせ及び方法は、化合物Ｄ及びＢＥＴ阻害剤を含む。これらの実施形態は、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤またはＢＥＴ阻害剤のサブ治療量が使用され得るように相乗効果を示す。本開示のある特定の実施形態において、薬学的組み合わせ及び方法は、式ＩＩのＨＤＡＣ６選択的阻害剤及びＢＥＴ阻害剤を含む。
【０１２７】
異なる実施形態において、使用される薬学的組み合わせ及び有効量に応じて、化合物の薬学的組み合わせは、がん増殖を阻害し、がん停止を達成することができるか、または実質的にまたは完全ながんの退縮を達成することができる。
【０１２８】
ＨＤＡＣ６選択的阻害剤及びＢＥＴ阻害剤の量は、がんの有効な治療を生じるべきであるが、組み合わせられるときの量は、好ましくは、患者に対して過度に毒性でない（すなわち、量は、治療指針によって確立された毒性限界内である）。いくつかの実施形態において、過剰な毒性を防止するため、及び／またはがんのより有効な治療を提供するために、投与される合計の投薬量に関する制限が提供される。一般的に、本明細書において考慮される量は、１日当たりであるが、半日及び２日または３日のサイクルも本明細書において考慮される。
【０１２９】
異なる投薬レジメンは、がんを治療するために使用され得る。いくつかの実施形態において、上述の例示的な投薬量のうちのいずれかなどの１日投薬量は、１日１回、２回、３回、または４回３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、または１０日間投与される。がんの病期及び重症度に応じて、より短い治療期間（例えば５日まで）が高投薬量と共に使用され得、またはより長い治療期間（例えば１０日間またはそれ以上、または数週間、または１ヶ月間、またはそれ以上）が低投薬量と共に使用され得る。いくつかの実施形態において、１日１回または２回の投薬量が、１日おきに投与される。いくつかの実施形態において、各投薬量は、単一の投薬量として送達されるＨＤＡＣ６選択的阻害剤及びＢＥＴ阻害剤の両方を含むが、他の実施形態において、各投薬量は、別々の投薬量として送達されるＨＤＡＣ６選択的阻害剤及びＢＥＴ阻害剤のいずれかを含む。
【０１３０】
純粋な形態または適切な薬学的組成物中のＨＤＡＣ６選択的阻害剤、ＢＥＴ阻害剤、またはそれらの薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物形態が、当該技術分野で既知の許容される投与モードまたは薬剤のうちのいずれを介して投与され得る。これらの化合物は、例えば、経口、経鼻、非経口（静脈内、筋内、または皮下）、局所、経皮、膣内、膀胱内、嚢内、または直腸投与され得る。投薬形態は、例えば、固形、半固形、凍結乾燥散剤、または液状投薬形態、例えば、錠剤、丸剤、軟弾性または硬ゼラチンカプセル剤、散剤、液剤、懸濁剤、坐剤、エアロゾルなどであり得、好ましくは正確な投薬量の単一の投与に適した単位剤形であり得る。特定の投与経路は、経口、特に、都合のよい１日投薬投与量レジメンが治療される疾患の重症度に従って調整され得るものである。
【０１３１】
上に論じられるように、薬学的組み合わせのＨＤＡＣ６選択的阻害剤及びＢＥＴ阻害剤は、単一の単位用量または別々の剤形で投与され得る。したがって、「薬学的組み合わせ」という語句は、単一の剤形または別々の剤形のいずれかで、すなわち、本出願を通して記載される薬学的に許容可能な担体及び賦形剤は、単一の単位用量においてＨＤＡＣ６選択的阻害剤及びＢＥＴ阻害剤と組み合わせられ得、ならびにこれらの化合物が別々に投与されるときに、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤及びＢＥＴ阻害剤と個別に組み合わせられ得る、２つの薬物の組み合わせを含む。
【０１３２】
補助剤及びアジュバント剤は、例えば、保存剤、湿潤剤、懸濁化剤、甘味料、矯味矯臭剤、香料、乳化剤、及び分配剤（ｄｉｓｐｅｎｓｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）を含み得る。微生物の作用の予防は、一般的には、様々な抗菌剤及び抗真菌剤によって提供される。等張剤もまた、含まれ得る。注射可能な薬学的形態の持続的吸収は、吸収を遅らせる薬剤の使用により起こり得る。補助剤はまた、湿潤剤、乳化剤、ｐＨ緩衝化剤、及び抗酸化剤も含み得る。
【０１３３】
固形剤形は、当該技術分野において既知の腸溶コーティング及び他のコーティングなどのコーティング及び殻を用いて調製され得る。それらは、鎮静剤（ｐａｃｉｆｙｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）を含有し得、遅延した様式で腸管の特定の部分で活性化合物（複数可）を放出するような組成物であり得る。使用され得る包埋（ｅｍｂｅｄｄｅｄ）組成物の例は、ポリマー物質及びロウである。活性化合物はまた、適切な場合に上述の賦形剤のうちの１つ以上を用いた、ミクロカプセル封入形態であり得る。
【０１３４】
経口投与のための液体剤形としては、薬学的に許容可能な乳剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤、及びエリキシル剤が挙げられる。このような剤形は、例えば、本明細書に記載されるＨＤＡＣ６選択的阻害剤またはＢＥＴ阻害剤またはその薬学的に許容可能な塩、及び任意に薬学的アジュバントを、担体の中に溶解、分散などし、それにより溶液または懸濁液を形成することによって調製される。
【０１３５】
一般に、意図される投与様式に応じて、薬学的に許容可能な組成物は、約１重量％〜約９９重量％の本明細書に記載される化合物またはその薬学的に許容可能な塩と、９９重量％〜１重量％の薬学的に許容可能な賦形剤と、を含むであろう。一例では、組成物は、約５重量％〜約７５重量％の本明細書に記載される化合物またはその薬学的に許容可能な塩であり、残りは、好適な薬学的賦形剤である。
【０１３６】
このような剤形を調製する実際の方法は、当業者には既知であるかまたは明らかとなるであろう。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  Ｅｄが参照される（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９９０）。
【０１３７】
キット
他の実施形態において、キットが提供される。本開示に従うキットは、本開示の化合物または組成物を含むパッケージ（複数可）を含む。いくつかの実施形態において、キットは、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤またはその薬学的に許容可能な塩及びＢＥＴ阻害剤またはその薬学的に許容可能な塩を含む。
【０１３８】
「パッケージ」という語句は、本明細書に提示される化合物または組成物を含有する任意の容器を意味する。いくつかの実施形態において、パッケージは、箱またはラッピングであり得る。薬学的製品の包装で使用するための包装材料は、当業者に周知である。薬学的包装材料の例としては、ボトル、チューブ、吸入器、ポンプ、袋、バイアル、容器、シリンジ、ボトル、ならびに選択された製剤ならびに意図する投与様式及び治療に好適な任意の包装材料が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１３９】
キットはまた、そのパッケージ内に収容されていないが、そのパッケージの外側に添付されている物品、例えばピペットを含み得る。
【０１４０】
キットは、患者に本開示の化合物または組成物を投与するための指示書を含み得る。キットはまた、米国食品医薬品局のような監督官庁により認可された本明細書における化合物の使用についての指示書を含み得る。キットはまた、化合物についてのラベルまたは添付文書を含み得る。パッケージ（複数可）及び／またはいずれかの添付文書（複数可）は、それ自体監督官庁により認可され得る。キットは、化合物をパッケージ中の固相または液相（例えば提供される緩衝液）中に含み得る。キットはまた、方法を実行するための液剤を調製するための緩衝液、及び１つの容器から別の容器へ液体を移すためのピペットを含み得る。
【実施例】
【０１４１】
実施例は、説明の目的のため、かつある特定の実施形態を記載するために以下に記載されている。しかしながら、特許請求の範囲は、本明細書に記載される実施例によって決して限定されるものではない。開示される実施形態への様々な変更及び修正は、当業者には明らかであり、本開示の化学構造、置換基、誘導体、製剤、及び／または方法に関連するものを含むが、これらに限定されない、そのような変更及び修正は、本開示の精神及び添付の特許請求の範囲を逸脱することなく行うことができる。本明細書におけるスキームの構造の変数の定義は、本明細書に提示される式中の対応する位置の変数と相当する。
【０１４２】
式Ｉの化合物の合成は、国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０２１９８２号（化合物Ｂ）及び同第ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０５９２３８号（化合物Ａ及びＢ）において提供され、これらは、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。式ＩＩの化合物（化合物Ｃ及びＤ）の合成は、ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０６０７９１において提供され、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１４３】
実施例１：２−（ジフェニルアミノ）−Ｎ−（７−（ヒドロキシアミノ）−７−オキソヘプチル）
ピリミジン−５−カルボキサミド（化合物Ａ）の合成
【化１４】
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反応スキーム
【化１５】
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中間体２の合成：ＤＭＦ（１００ｍｌ）中のアニリン（３．７ｇ、４０ｍｍｏｌ）、化合物１（７．５ｇ、４０ｍｍｏｌ）、及びＫ２ＣＯ３（１１ｇ、８０ｍｍｏｌ）の混合物を、脱気し、１２０℃で、Ｎ２下で一晩撹拌した。反応混合物を室温まで冷却し、ＥｔＯＡｃ（２００ｍｌ）で稀釈し、次いで、飽和ブライン（２００ｍｌ×３）で洗浄した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、乾燥するまで蒸発させ、シリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝１０／１）によって精製して、白色固体として所望の生成物（６．２ｇ、６４％）を得た。
【０１４４】
中間体３の合成：ＴＥＯＳ（２００ｍｌ）中の化合物２（６．２ｇ、２５ｍｍｏｌ）、ヨードベンゼン（６．１２ｇ、３０ｍｍｏｌ）、ＣｕＩ（９５５ｍｇ、５．０ｍｍｏｌ）、Ｃｓ２ＣＯ３（１６．３ｇ、５０ｍｍｏｌ）の混合物を、脱気し、窒素でパージした。得られた混合物を、１４０℃で１４時間撹拌した。室温まで冷却した後、残渣をＥｔＯＡｃ（２００ｍｌ）で希釈した。シリカゲル上の９５％ＥｔＯＨ（２００ｍｌ）及びＮＨ４Ｆ−Ｈ２Ｏ［５０ｇ、シリカゲル（５００ｇ、１００〜２００メッシュ）に水（１５００ｍｌ）中のＮＨ４Ｆ（１００ｇ）の添加によって予め調製された］を添加し、得られた混合物を、室温で２時間保持した。固化された材料を濾過し、ＥｔＯＡｃで洗浄した。濾液を、乾燥するまで蒸発させ、残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝１０／１）によって精製して、黄色固体（３ｇ、３８％）を得た。
【０１４５】
中間体４の合成：２Ｎ  ＮａＯＨ（２００ｍｌ）を、ＥｔＯＨ（２００ｍｌ）中の化合物３（３．０ｇ、９．４ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。混合物を、６０℃で３０分間撹拌した。溶媒の蒸発後、溶液を２Ｎ  ＨＣｌで中和して、白色沈殿物を得た。懸濁液を、ＥｔＯＡｃ（２×２００ｍｌ）で抽出し、有機層を分離し、水（２×１００ｍｌ）、ブライン（２×１００ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒の除去により、茶色固体（２．５ｇ、９２％）を得た。
【０１４６】
中間体６の合成：化合物４（２．５ｇ、８．５８ｍｍｏｌ）、化合物５（２．５２ｇ、１２．８７ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（３．９１ｇ、１０．３０ｍｍｏｌ）、及びＤＩＰＥＡ（４．４３ｇ、３４．３２ｍｍｏｌ）の混合物を、室温で一晩撹拌した。反応混合物を濾過した後、濾液を乾燥するまで蒸発させ、残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝２／１）によって精製して、茶色固体（２ｇ、５４％）を得た。
【０１４７】
２−（ジフェニルアミノ）−Ｎ−（７−（ヒドロキシアミノ）−７−オキソヘプチル）ピリミジン−５−カルボキサミド（化合物Ａ）の合成：ＭｅＯＨ（５０ｍｌ）及びＤＣＭ（２５ｍｌ）中の化合物６（２．０ｇ、４．６ｍｍｏｌ）、水酸化ナトリウム（２Ｎ、２０ｍＬ）の混合物を、０℃で１０分間撹拌した。ヒドロキシルアミン（５０％）（１０ｍｌ）を、０℃まで冷却し、混合物に添加した。得られた混合物を、室温で２０分間撹拌した。溶媒の蒸発後、混合物を１Ｍ  ＨＣｌで中和して、白色沈殿物を得た。粗生成物を濾過し、分取ＨＰＬＣによって精製して、白色固体（９５０ｍｇ、４８％）を得た。
【０１４８】
実施例２：２−（（２−クロロフェニル）（フェニル）アミノ）−Ｎ−（７−（ヒドロキシアミノ）−７−オキソヘプチル）ピリミジン−５−カルボキサミド（化合物Ｂ）の合成
【化１６】
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反応スキーム：
【化１７】
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中間体２の合成：実施例１中の中間体２の合成を参照されたい。
【０１４９】
中間体３の合成：ＤＭＳＯ（６９０ｍｌ）中の化合物２（６９．２ｇ、１当量）、１−クロロ−２−ヨードベンゼン（１３５．７ｇ、２当量）、Ｌｉ２ＣＯ３（４２．０４ｇ、２当量）、Ｋ２ＣＯ３（３９．３２ｇ、１当量）、Ｃｕ（１当量４５μｍ）の混合物を、脱気し、窒素でパージした。得られた混合物を、１４０℃で撹拌した。反応物の調製により、収率９３％で化合物３を得た。
【０１５０】
中間体４の合成：実施例１中の中間体４の合成を参照されたい。
【０１５１】
中間体６の合成：実施例１中の中間体６の合成を参照されたい。
【０１５２】
２−（（２−クロロフェニル）（フェニル）アミノ）−Ｎ−（７−（ヒドロキシアミノ）−７−オキソヘプチル）ピリミジン−５−カルボキサミド（化合物Ｂ）の合成：実施例１中の化合物Ａの合成を参照されたい。
実施例３：２−（（１−（３−フルオロフェニル）シクロヘキシル）アミノ）−Ｎ−ヒドロキシピリミジン−５−カルボキサミド（化合物Ｃ）の合成
【化１８】
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中間体２の合成：乾燥ＤＭＦ（１０００ｍｌ）中の化合物１（１００ｇ、０．７４ｍｏｌ）の溶液に、１，５−ジブロモペンタン（１７０ｇ、０．７４ｍｏｌ）を添加した。ＮａＨ（６５ｇ、２．２当量）を滴加したが、反応物を、氷浴中で冷却した。得られた混合物を、５０℃で一晩激しく撹拌した。懸濁液を、氷水で慎重に反応停止処理し、酢酸エチル（３×５００ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層を、濃縮して、粗生成物を得、これをフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、淡い固体として化合物２（１００ｇ、６７％）を得た。
【０１５３】
中間体３の合成：ＰＰＡ（５００ｍｌ）中の化合物２（１００ｇ、０．４９ｍｏｌ）の溶液を、１１０℃で約５〜６時間加熱した。完了後、得られた混合物を、飽和ＮａＨＣＯ３溶液で約８〜９のｐＨになるまで慎重に調節した。得られた沈殿物を、収集し、水（１０００ｍｌ）で洗浄して、白色固体として化合物３（９５ｇ、８７％）を得た。
【０１５４】
中間体４の合成：ｎ−ＢｕＯＨ（８００ｍｌ）中の化合物３（９５ｇ、０．４３ｍｏｌ）の溶液に、ＮａＣｌＯ（２６０ｍｌ、１．４当量）を添加した。次いで、３Ｎ  ＮａＯＨ（４００ｍｌ、２．８当量）を０℃で添加し、反応物を室温で一晩撹拌した。得られた混合物を、ＥＡ（２×５００ｍｌ）で抽出し、合わせた有機層をブラインで洗浄した。溶媒を真空で除去して、ＨＣｌ塩での処置によってさらに精製して、白色粉末として化合物４（７２ｇ、７３％）を得た。
【０１５５】
中間体６の合成：ジオキサン（５０ｍｌ）中の化合物４（２．２９ｇ  １０ｍｍｏｌ）の溶液に、化合物５（１．８７ｇ、１．０当量）及びＤＩＰＥＡ（２．５８ｇ、２．０当量）を添加した。混合物を、１１０〜１２０℃で一晩加熱した。得られた混合物を、シリカゲルカラム上で直接精製して、白色固体として結合生成物である化合物６（１．３７ｇ、４０％）を得た。
【０１５６】
２−（（１−（３−フルオロフェニル）シクロヘキシル）アミノ）−Ｎ−ヒドロキシピリミジン−５−カルボキサミド（化合物Ｃ）の合成：
ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（１０ｍｌ、１：１）中の化合物６（１００ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）の溶液に、水（２ｍｌ、過剰）中の５０％ＮＨ２ＯＨに添加した。次いで、ＭｅＯＨ（２ｍｌ、過剰）中の飽和ＮａＯＨを、０℃で添加し、反応物を３〜４時間撹拌した。完了後、得られた混合物を濃縮し、ｐＨが４〜５になるように２Ｎ  ＨＣｌで酸性化した。沈殿物を収集し、水（１０ｍｌ）で洗浄して、過剰なＮＨ２ＯＨを除去した。沈殿物を乾燥させて、白色粉末として２−（（１−（３−フルオロフェニル）シクロヘキシル）アミノ）−Ｎ−ヒドロキシピリミジン−５−カルボキサミド（７０ｍｇ、７３％）を得た。
【０１５７】
実施例４：Ｎ−ヒドロキシ−２−（（１−フェニルシクロプロピル）アミノ）ピリミジン−５−カルボキサミド（化合物Ｄ）の合成
【化１９】
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反応スキーム
【化２０】
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中間体２の合成：ＭＴＢＥ（３７５０ｍｌ）中の化合物１、ベンゾニトリル（２５０ｇ、１．０当量）、及びＴｉ（ＯｉＰｒ）４（１３３０ｍｌ、１．５当量）の溶液を、窒素雰囲気下で、約−１０〜−５℃まで冷却した。ＥｔＭｇＢｒ（１６１０ｍｌ、３．０Ｍ、２．３当量）を６０分かけて滴加し、その間に、反応物の内部温度を５℃未満に維持した。反応混合物を１５〜２０℃まで１時間加温した。内部温度を１５℃未満に維持しながら、ＢＦ３−エーテル（１３００ｍｌ、２．０当量）を６０分以上滴加した。反応混合物を１５〜２０℃で１〜２時間撹拌し、低濃度のベンゾニトリルが残った時点で停止した。内部温度を３０℃未満に維持しながら、１Ｎ  ＨＣｌ（２５００ｍｌ）を滴加した。さらに温度を３０℃未満に維持しながら、ＮａＯＨ（２０％、３０００ｍｌ）を滴加して、ｐＨが約９．０になるようにした。反応混合物を、ＭＴＢＥ（３Ｌ×２）及びＥｔＯＡｃ（３Ｌ×２）で抽出し、合わせた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下（４５℃未満）で濃縮して、赤色油を得た。ＭＴＢＥ（２５００ｍｌ）をこの油に添加して、透明な溶液を得、乾燥ＨＣｌガスでバブリングすると、固体が沈殿した。この固体を濾過して、真空下で乾燥させて、１４３ｇの化合物２を得た。
【０１５８】
中間体４の合成：化合物２（６２０ｇ、１．０当量）及びＤＩＰＥＡ（１０８０ｇ、２．２当量をＮＭＰ（３１００ｍｌ）に溶解し、２０分間撹拌した。化合物３（６８０ｇ、１．０２当量）を添加し、反応混合物を約８５〜９５℃まで４時間加熱した。この溶液を室温までゆっくりと冷却した。この溶液をＨ２Ｏ（２０Ｌ）に注ぎ入れ、強撹拌に伴って溶液から多量の固体が析出した。混合物を濾過し、ケーキを、減圧下、５０℃で２４時間乾燥させ、８９６ｇの化合物４（固体、８６．８％）を得た。
【０１５９】
Ｎ−ヒドロキシ−２−（（１−フェニルシクロプロピル）アミノ）ピリミジン−５−カルボキサミド（化合物Ｄ）の合成：ＭｅＯＨ（１０００ｍｌ）の溶液を、撹拌しながら、約０〜５℃まで冷却した。ＮＨ２ＯＨ  ＨＣｌ（１１０７ｇ、１０当量）を添加し、続いて、ＮａＯＣＨ３（１０００ｇ、１２．０当量）を慎重に添加した。得られた混合物を、０〜５℃で１時間撹拌し、濾過して、固体を除去した。化合物４（４５０ｇ、１．０当量）を一度に反応混合物に添加し、化合物４が消費されるまで、１０℃で２時間撹拌した。反応混合物を、ＨＣｌ（６Ｎ）の添加によりｐＨを約８．５〜９に調整して、沈殿を生じさせた。混合物を減圧下で濃縮した。水（３０００ｍｌ）を、激しく撹拌しながら残渣に添加し、沈殿物を濾過によって収集した。生成物を、４５℃で、オーブンで一晩乾燥させた（３４０ｇ、収率７９％）。
【０１６０】
実施例５：ＨＤＡＣ酵素アッセイ
試験のための化合物を、ＤＭＳＯで最終濃度の５０倍に希釈し、１０．３倍の希釈系列を作った。化合物を、アッセイ緩衝液（５０ｍＭ  ＨＯＰＥＳ、ｐＨ７．４、１００ｍＭ  Ｋｉｌｌ、０．００１％Ｔｗｅｅｎ−２０、０．０５％ＢＡＳＥ、２０μＭ  ＴＥＣ）で最終濃度の６倍に希釈した。ＨＤＡＣ酵素（ＢＰＳ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから購入）を、アッセイ緩衝液で最終濃度の１．５倍に希釈した。０．０５μＭの最終濃度でジペプチド基質及びトリプシンを、アッセイ緩衝液で最終濃度の６倍に希釈した。これらのアッセイで使用した最終酵素濃度は、３．３ｎｇ／ｍｌ（ＨＤＡＣ１）、０．２ｎｇ／ｍｌ（ＨＤＡＣ２）、０．０８ｎｇ／ｍｌ（ＨＤＡＣ３）、及び２ｎｇ／ｍｌ（ＨＤＡＣ６）であった。使用した最終基質濃度は、１６μＭ（ＨＤＡＣ１）、１０μＭ（ＨＤＡＣ２）、１７μＭ（ＨＤＡＣ３）、及び１４μＭ（ＨＤＡＣ６）であった。５μｌの化合物及び２０μｌの酵素を、黒色の不透明な３８４ウェルプレートのウェルに二重に添加した。酵素及び化合物を共に、室温で１０分間インキュベートした。５μｌの基質を、各ウェルに添加し、プレートを６０秒間振とうし、Ｖｉｃｔｏｒ  ２μｌのプレートリーダー内に置いた。蛍光の発生を６０分間モニタリングし、線形反応速度を計算した。ＩＣ５０は、４つのパラメータ曲線フィットによるＧｒａｐｈ  Ｐａｄ  Ｐｒｉｓｍを使って決定した。
【０１６１】
実施例６：ＰＢＭＣ細胞及びＮＳＣＬＣ細胞中のＨＤＡＣ阻害剤及びＴリンパ球の活性化
以下の実施例の目的は、非小細胞肺癌細胞株において、単独でＨＤＡＣ６阻害剤化合物Ａの前臨床活性、及び化合物ＡとＪＱ１（ＢＥＴ阻害剤）との組み合わせの可能性を評価することである。これらの実験では、（＋）−ＪＱ１（実施例においてＪＱ１と称される）が用いられた。
【０１６２】
Ｉ．健常ドナーからの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）におけるＨＤＡＣ阻害剤の効果
ＨＤＡＣ阻害は、免疫適合性動物モデルにおいて腫瘍増殖停止をもたらす。白血球におけるクラスＩ及びクラスＩＩ  ＨＤＡＣ阻害を、健常ドナーから得られた末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を使用して調査した。ＰＢＭＣを、化合物Ａで培養し、これらの結果を、ＨＤＡＣ６に対して様々な選択性を有するＨＤＡＣ阻害剤のパネルと比較した。このパネルには、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤である化合物Ｂ、化合物Ｃ、化合物Ｄ、及びツバスタチンＡ、ならびにＨＤＡＣ１／２／３（クラスＩ  ＨＤＡＣ）選択的阻害剤エンチノスタット（ＭＳ−２７５）が含まれた（表１）。
表１．ＨＤＡＣ阻害剤は、健常ドナーＰＢＭＣ及びＨＤＡＣ生化学的アッセイデータで試験した。
【表３】
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【０１６３】
ＰＢＭＣを、ＨＤＡＣ阻害剤で２４時間培養し、その後、Ｔ細胞サブセットの頻度を、ＦＡＣＳによって評価した。ＤＭＳＯを、対照として使用した。特に、これらのＨＤＡＣ阻害剤で２４時間培養した細胞の生存率は、ほぼ同じであった（図１Ａ）。細胞サブタイプに関して、ＣＤ４＋ＦＯＸＰ３−及びＣＤ８＋従来のＴ細胞の頻度は、これらの薬物によって著しく影響を受けなかった（図１Ｂ）。ＰＢＭＣ内のＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋Ｔｒｅｇの割合は、化合物Ａまたは化合物Ｂで培養したときに、最も著しく減少したが、この効果は、依然として化合物Ｄまたはエンチノスタットで提示した。（図１Ｃ）。興味深いことに、高度選択的なＨＤＡＣ６阻害剤である化合物Ｃ及びツバスタチンＡは、Ｔｒｅｇ頻度を著しく影響を与えなかったが、化合物Ａ、化合物Ｂ、及びエンチノスタットなどの化合物によるクラスＩ  ＨＤＡＣ阻害が、Ｔｒｅｇ頻度の観察された低下に起因することを示唆した。
【０１６４】
ＩＩ．非小細胞肺癌細胞における化合物Ａまたはエンチノスタットの効果
次に、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）患者から得られたＰＢＭＣまたは解離された新たに切除された腫瘍から収集されたバルク単一細胞懸濁液を、２．５μｍの化合物Ａまたは２．５μｍのエンチノスタットで２４時間培養し、その後、ＣＤ３−ＣＤ１４＋単球またはＣＤ４５＋ＣＤ６８＋ＣＤ１１ｂ＋腫瘍マクロファージの表現型を、それぞれ、ＦＡＣＳによって評価した。ＤＭＳＯを、対照として使用した。細胞培養内の白血球サブセットのフローサイトメトリー分析は、化合物Ａが、健常ドナーＰＢＭＣにおいて観察されたものと同様に（図１Ｃ）、患者ＰＢＭＣ（図２Ａ、ｐ＝０．０４）及び患者腫瘍細胞（図２Ｂ、ｐ＝０．０５）におけるＤＭＳＯによる治療と比較して、Ｔｒｅｇ割合を実質的に低減したことを示した。化合物Ａによる治療もまた、患者ＰＢＭＣにおけるエンチノスタットでの治療と比較してＴｒｅｇ割合を低減した（図２Ａ）。
【０１６５】
ＩＩＩ．化合物Ａまたはエンチノスタットの追加効果
これらの観察と並行して、ＣＤ６９活性化マーカーの発現は、化合物Ａの存在下であるがエンチノスタットの不在下で、患者（図３Ａ、ｐ＝０．００３；図３Ｂ、ｐ＝０．０１）及び健常ドナーＰＢＭＣ培養（図３Ｃ、＊＊はｐ値＜０．００１を示し、図３Ｄ、＊は、ｐ値＜０．０５を示す）の両方における従来のＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞上で実質的に上方調節され、増加した活性化プロファイルが化合物Ａによって促進されたことを示唆した（図３Ｅ）。
【０１６６】
ＨＤＡＣ６選択的阻害剤（化合物Ａ）は、ＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋Ｔｒｅｇの頻度を低減し、末梢及び腫瘍関連Ｔリンパ球の一時的活性化を促進した。
【０１６７】
実施例７：ＨＤＡＣ６選択的阻害剤及びＡＰＣの機能的変化
ＨＤＡＣ６阻害は、炎症性サイトカイン産生の調節を必要とする機構におけるＡＰＣの機能的変化をもたらし得る。表現型及び機能に関するＡＰＣのＨＤＡＣ６選択的阻害剤化合物Ａの効果を調査した。具体的には、健常な対象及びＮＳＣＬＣ患者の末梢血中のＣＤ１４＋ＣＤ１１ｂ＋単球の表現型、または細分類されたＮＳＣＬＣ腫瘍内のＣＤ１４−ＣＤ６８＋ＣＤ１１ｂ＋マクロファージの表現型を調査した。化合物Ａで２４時間培養すると、ＣＤ１４＋単球画分は、ＭＨＣクラスＩＩ分子の発現、ならびにＣＤ８６を上方調節したが、ＣＤ８０は上方調節せず、ＡＰＣの増加したプライミング能力に関連する表現型を変化した。対照的には、ＤＭＳＯまたはエンチノスタットの添加も、これらのタンパク質の発現を上方調節しなかった（図４Ａ；ｐ＝０．０４）。ＭＨＣクラスＩＩ及びＣＤ８６の増加した発現の同様のパターンを、２−Ｄ腫瘍細胞培養内のＣＤ１４−ＣＤ６８＋ＣＤ１１ｂ＋マクロファージ（図４Ｂ）、及び化合物Ａでインキュベートしたときに、健常ドナーから得られたＰＢＭＣ（図４Ｃ）に見出された。この所見は、ヒト単球細胞及び腫瘍関連マクロファージにおける化合物Ａの固有の調節効果を示し、増強した抗原提示及び共刺激能力を支援し得る表現型変化を促進することを示唆する。この概念を支援して、化合物Ａを曝露したＣＤ１４＋単球を、混合したリンパ球反応における同種Ｔ細胞増殖性応答を誘導することにおいて優れたものであった（図４Ｄ）。化合物Ａまたはエンチノスタットで２４時間培養した患者ＰＢＭＣ内の精製ＣＤ１４＋細胞を、２０ＩＵ／ｍＬの組換えヒトＩＬ−２の存在下で、同種ドナーＰＢＭＣからの細胞トレースバイオレット（ＣＴＶ）で標識された精製Ｔ細胞で６日間インキュベートした。
【０１６８】
ＨＤＡＣ６選択的阻害剤（化合物Ａ）は、ヒト単球及び腫瘍関連マクロファージ上でＭＨＣ及び共刺激分子の発現を増加させ、より大きなＴ細胞増殖を刺激するそれらの機能を増加させた。
【０１６９】
実施例８：ＨＤＡＣ６選択的阻害剤及び腫瘍関連免疫細胞
腫瘍関連免疫細胞は、腫瘍進行の経過及び抗腫瘍免疫の成形に重要である。特に、腫瘍抗原の文脈において、表現型及び機能的変化におけるＨＤＡＣ６選択的阻害剤の効果を調査した。具体的には、ＫｒａｓＧ１２Ｄ変異の活性化及び同時ｐ５３損失（ＫＰとして表される）を含む完全免疫応答性遺伝子操作されたマウス、またはＴ７９０Ｍ／Ｌ８５８Ｒ  ＥＧＦＲ変異（ＴＬと称される）を有するものにおける自発的に発達する肺腺癌を浸潤するＨＤＡＣ６選択的阻害剤の効果を研究した。アデノウイルス−ｃｒｅリコンビナーゼの経鼻送達時に、ＬＳＬ−ＫｒａｓＧ１２Ｄ／ｐ５３ｆ／ｆ（ＫＰ）またはＬＳＬ−ＥＧＦＲ（ＴＬ）トランス遺伝子を含むマウスにおいて自発的に発達した肺腫瘍（ＭＲＩによって確認される）を、化合物Ａまたはビヒクルで７日間処置した後に切除した。肺腫瘍小結節の単一細胞懸濁液を生成し、ＦＡＣＳ分析に供して、ＫＰ及びＴＬマウスの両方から単離された腫瘍のＣＤ４５＋免疫細胞サブセットの割合、表現型、及び機能を評価した。
【０１７０】
既存の腺癌を有するマウスを、包括的なマルチパラメータフローサイトメトリによる解離した腫瘍の評価前に化合物Ａで１日１回７日間処置した。この短期治療において、処置した腫瘍におけるＣＤ８：Ｔｒｅｇの比の著しい上昇をもたらす、リンパ系細胞の中で腫瘍浸潤ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度の軽度増加及びＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇ細胞の大きな減少が観察された（図５Ａ〜５Ｃ）。ＣＤ８：Ｔｒｅｇ比のこのような増加は、しばしば、増強した抗腫瘍応答と関連付けられる。阻害性受容体分子の発現に関する実質的な表現型変化がなかったが（図５Ｄ〜５Ｇ）、化合物Ａで処置したマウスにおける腫瘍湿潤ＣＤ８＋Ｔ細胞は、ＣＤ６９活性化マーカーの発現レベルの増加を示し、ビヒクル対照群において同等の細胞と比較したときに、エクスビボ刺激後に、エフェクターサイトカインＩＦＮ−γならびにＴＮＦ−αを分泌する能力を実証した（図５Ｈ）。
【０１７１】
加えて、化合物Ａと同様に、化合物Ｂは、腫瘍においてＣＤ８：Ｔｒｅｇ比を増加させ、ＣＤ８  Ｔ細胞の活性化を増加させ（ＣＤ６９活性化マーカーの増加によって）、腫瘍関連マクロファージ上のＭＨＣＩＩの発現を増加させた（図５Ｉ）。化合物Ｂまたはビヒクルで７日間処置したＫＰマウスの肺腫瘍小結節の単一の細胞懸濁液を染色し、次いで、ＦＡＣＳ分析に供して、ＣＤ４５＋免疫細胞サブセットの割合、表現型、及び機能を評価した。化合物Ａに対する所見と一致して、単一の細胞ＲＮＡ−Ｓｅｑは、Ｃｄ６９、Ｓｅｌｌ（Ｃｄ６２Ｌ）、Ｃｄ４４、及びＰｒｆ１（パーフォリン）を含む、Ｔ細胞活性化及びエフェクター機能と関連付けられるいくつかの遺伝子が、ビヒクル群の腫瘍に由来する同等の細胞と比較したときに、化合物Ａで処置したＫＰマウスからの腫瘍浸潤Ｔ細胞に上方調節した（図５Ｎ）。化合物Ａまたはビヒクルで７日間処置したＫＰ及びＴＬマウスの肺腫瘍小結節の単一の細胞懸濁液を染色し、次いで、ＦＡＣＳ分析に供して、ＣＤ４５＋免疫細胞サブセットの割合、表現型、及び機能を評価した。骨髄性細胞集団の中で、ＣＤ１１ｃ＋ＣＤ１１ｂｌｏ腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ；図５Ｊ）は、ＭＨＣクラスＩＩ及び共刺激分子ＣＤ８６の著しく上昇した発現レベルを示した（図５Ｋ〜５Ｍ）。この表現型を支援して、単一の細胞ＲＮＡ配列決定によって分析された化合物Ａを曝露したＴＡＭＳは、対照マウスにおけるそれらの対応物と比較して、Ｃｄ７４及びＨ２−Ａａを含むＭＨＣクラスＩＩの発現と関連した主な遺伝子のより高い発現を示した（図５Ｎ）。
【０１７２】
それ故に、インビトロ観察と一致して、これらの所見は、化合物Ａでの治療時に、腫瘍浸潤マクロファージが、より成熟状態にあり、周辺のＴ細胞がより活性化された／エフェクタープロファイルを示すというＡＰＣと類似した変化を受けたことを示した。化合物Ａは、免疫細胞サブセットにおける陽性免疫動的及び表現型の変化を媒介した。単一薬剤として投与したとき、化合物Ａのみが肺腺癌を有する免疫適合性遺伝子操作マウスにおける腫瘍増殖の限界遅延をもたらし、同時にＫｒａｓ変異及びｐ５３欠損または変異ＥＧＦＲをもたらした（図６、データ示さず）。約２００ｍｍ３の腫瘍量を有するＫＰマウスに、化合物Ａ単独、ＪＱ１単独、または２つの薬物の組み合わせで１日１回腹腔内注射した。腫瘍増殖は、ＭＲＩによって毎週モニタリングされた。
【０１７３】
ＨＤＡＣ６選択的阻害剤（化合物Ａ）は、ＮＳＣＬＣモデルにおいて腫瘍浸潤Ｔ細胞プライミングを促進した表現型の変化を促した。
【０１７４】
実施例９：非小細胞肺癌細胞におけるＪＱ１と組み合わせられた化合物Ａ
ＨＤＡＣ６選択的阻害剤及び補助免疫調節剤による併用療法は、これらのＮＳＣＬＣモデルにおける腫瘍増殖の免疫系対照のより高いレベルを達成することができる。ＪＱ１は、ＭＹＣの下方調節及び腫瘍細胞におけるアポトーシスの誘導に起因して、部分的にＫＰマウスにおける抗腫瘍効果を有することがこれまでに示された。免疫細胞の観点から、従来のＣＤ８＋Ｔ細胞とは異なり、ＪＱ１に曝露されたＴｒｅｇは、ＰＤ−１及びＦｏｘｐ３の発現レベルの低下を示し、それらの曝露されていない対応物ほど抑制しなかった（図７Ａ〜７Ｃ）。これらのＪＱ１効果は、化合物Ａの免疫調節効果と組み合わされたときに、腫瘍浸潤Ｔ細胞のより強力な刺激及び増強された抗腫瘍応答を好む腫瘍微小環境を育て得る。Ｔ細胞を、野生型マウスの脾臓から単離し、ＣＤ３＋ＣＤ２５−（Ｔ細胞）またはＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉ（Ｔｒｅｇ）サブセットに分類し、続いて、ＪＱ１（１μＭ）の存在または不在下で培養した。培養物に、１００ＩＵ／ｍＬの組換えＩＬ−２を補充した。細胞を、培養の２日後に洗浄し、それらの表現型を、ＦＡＣＳによって評価した。図７Ｃに示されるＣＳＦＥ希釈の場合、ナイーブマウスの脾臓から得られた２×１０５ＣＦＳＥ標識精製Ｔ細胞を、１．０×１０５マイトマイシンＣで処置された、ＡＰＣとして機能したＴ枯渇細胞と共培養した。次いで、０．５μｇの可溶性抗ＣＤ３を、段階的な数のＴｒｅｇ（Ｔｒｅｇ：Ｔ細胞比によって示される）と共に各ウェルに添加した。
【０１７５】
肺腺癌を担持するマウスを、長期有効性研究において化合物Ａ及び／またはＪＱ１で処置した。腫瘍を担持する免疫コンピテントマウスに、化合物Ａ及び／またはＪＱ１の慢性投薬で投与し、腫瘍増殖速度を、処置群とビヒクル処置対照との間で評価した。具体的には、約２００ｍｍ３の腫瘍量を有するＫＰマウスに、ＣＤ４またはＣＤ８に対する抗体を枯渇させる、または枯渇させることなく、化合物Ａ単独、ＪＱ１単独、または２つの薬物の組み合わせで１日１回腹腔内注射した。腫瘍増殖は、ＭＲＩによって毎週モニタリングされた。ＫＰマウスにおいて、化合物ＡまたはＪＱ１の単剤療法は、それぞれ、腫瘍増殖の限界または中等度の遅延をもたらしたが、両方の薬剤による併用療法は、腫瘍増殖の有意な停止をもたらした（図６及び図８Ａ）。これらの効果は、治療レジメンにおけるＣＤ８またはＣＤ４枯渇抗体の組み込みの際に廃止された両方の薬剤の組み合わせの下で認められるように、腫瘍増殖停止としてＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞に大きく依存した（図８Ａ）。さらに、腫瘍細胞において減少したｋｉ６７及び増加したカスケープ３発現は、単一薬剤処置と比較したときに、化合物Ａ及びＪＱ−１処置の薬学的組み合わせで生じた。具体的には、ＫＰマウスを、ビヒクル、化合物Ａ、ＪＱ１、または化合物Ａ及びＪＱ１の組み合わせで１週間処置し、肺の小切片を、１０％ホルマリン中で固定した。これにより、２つの薬剤の組み合わせで腫瘍細胞の増殖の低減及びアポトーシスの増加がもたらされた（図８Ｂ）。さらに、併用療法により、いずれかの薬剤単独と比較して、より長い無増悪生存をもたらし（図８Ｃ）、ＪＱ１が化合物Ａと相乗作用して、Ｔ細胞媒介性抗腫瘍応答を駆動することを示唆した。ＫＰマウスと同様に、組み合わせはまた、これらのモデルの各々における腫瘍増殖の著しい阻害によって証明された、変異ＥＧＦＲ（ＴＬ）肺腫瘍ならびにＬｅｗｉｓ肺癌腫を担持するマウスにおいても有効であった（図８Ｄ及び図８Ｅ）。約２００ｍｍ３の腫瘍量を有するＴＬマウスに、化合物Ａ及びＪＱ１の組み合わせで１日１回腹腔内注射し、腫瘍体積をＭＲＩによって測定した（図８Ｄ）。Ｌｅｗｉｓ肺癌腫（ＬＬＣ）細胞（５００ｋ細胞／移植）を、１個の移植／マウスでＣ５７ＢＬ／６（Ｂ６）マウスに移植した。移植から３日後、マウスを、図８Ｅに示されるように、ビヒクル、ＪＱ１、及び／または化合物Ａでの処置のために１群当たり５匹にランダムに群分けした。腫瘍を週２回測定し、腫瘍体積を０．５＊Ｌ＊Ｗ＊Ｗで計算した。これらのデータは、この組み合わせアプローチの治療的有効性が自発的発達及び黒色腫によって特徴付けられるものに対してＧＥＭＭのドライバ変異の異所性発現によって推進された肺腺癌を越えて拡大することを示唆する。
【０１７６】
腫瘍小結節の免疫プロファイリングは、単一薬剤治療と比較して、２つの薬剤の組み合わせで処置したＫＰマウスのリンパ細胞浸潤腫瘍が、高度に減少したＴｒｅｇ比の結果として推定されるように、有意に高いＣＤ８：Ｔｒｅｇ比を示すことをさらに明らかにした（図９Ａ及び９Ｂ）。免疫プロファイリングのために、マウスのコホートを処置から４〜６週間後に殺処分し、腫瘍細胞懸濁液を、ＦＡＣＳ分析に供した。ＣＤ８＋Ｔ細胞は、ＣＤ６９の増加した発現によって証明されるように、より活性化した（図９Ｃ）。さらに、指示された薬物で処置したマウスの腫瘍から単離された免疫細胞を、ゴルジプラグの存在下で、６時間エクスビボで刺激した。これらの腫瘍浸潤ＣＤ８＋Ｔ細胞は、ＣＤ１０７ａ染色によって示されるように、エフェクターサイトカインＩＦＮ−γを分泌する増強された能力及び脱顆粒の増加を示した（図９Ｄ及び９Ｅ）。細胞懸濁液は、３つの集団：ＣＤ２５−ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ４５−Ｅｐｃａｍ＋腫瘍細胞、及びＣＤ１１ｂｌｏＣＤ１１ｃ＋ＴＡＭに分類した、ＪＱ１及び／または化合物Ａで処置したマウスから切除した腫瘍小結節から生成した。これらの集団の同等数の各々を、腫瘍細胞溶解物の存在下で２日間共培養した。化合物Ａ及び／またはＪＱ１で処置したマウスの腫瘍小結節から分類した、同等数のＴ細胞、ＴＡＭ、及びＥｐＣａｍ＋腫瘍細胞を、腫瘍細胞溶解物と共に共培養したときに、より高い割合の腫瘍細胞死が、二重薬剤で処置したマウスの腫瘍から単離されたＴ細胞の存在下で観察された（図９Ｆ）。これは、併用療法が腫瘍浸潤Ｔ細胞のより高い腫瘍を死滅させる可能性をもたらすことを示した。ＴＡＭに関して、単独でまたはＪＱ１と組み合わせた化合物Ａでの処置は、ＭＨＣクラスＩＩ分子及びＣＤ８６の上方調節を著しく促進した（図９Ｇ及び９Ｈ）。総合すると、これらの所見は、ブロモドメイン阻害剤ＪＱ１と組み合わせたＨＤＡＣ６選択的阻害剤である化合物Ａが、強固な免疫媒介性抗腫瘍応答を増強するように相乗的に作用する免疫調節効果を有したことを示した。つまり、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤（化合物Ａ）を伴うＢＥＴブロモドメイン阻害剤（ＪＱ１）は、腫瘍増殖の免疫依存性抑制を増強した。
【０１７７】
実施例１０：他の方法
マウス
Ｋｒａｓ＋／ＬＳＬ−Ｇ１２ＤＴｒｐ５３Ｌ／Ｌ（ＫＰ）またはＥＧＦＲＬＳＬ−Ｔ７９０Ｍ／Ｌ８５８Ｒ（ＴＬ）を持つ遺伝子操作マウスは、これまでに説明されている（ＤｕＰａｇｅ，Ｍ．，Ａ．Ｌ．Ｄｏｏｌｅｙ，ａｎｄ  Ｔ．Ｊａｃｋｓ，Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ  ｍｏｕｓｅ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ｍｏｄｅｌｓ  ｕｓｉｎｇ  ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ  ｏｒ  ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  Ｃｒｅ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｓｅ．Ｎａｔ  Ｐｒｏｔｏｃ，２００９．４（７）：ｐ．１０６４−７２）。肺腫瘍誘導のために、マウスは、１×１０６  ｃｆｕ  ｃｒｅをコードするアデノウイルスを５〜６週齢で鼻腔内に受容した。腫瘍形成（一般には、接種から６〜８週間後）及び体積を、ＭＲＩによって確認し、３Ｄスライサーソフトウェアを用いて定量化した。Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、Ｔａｃｏｎｉｃ  Ｆａｒｍｓ（Ｂｅｊｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ）から購入した。全てのマウスを、特定の病原体フリー環境で維持した。
【０１７８】
薬物、抗体、及び試薬
化合物Ａ（リコリノスタット）は、Ａｃｅｔｙｌｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）によって提供された。化合物Ａは、１０％のＤＭＳＯ及び９０％の５％デキストロース中で製剤化し、マウスに、５０ｍｇ／ｋｇで毎日腹腔内に投与した。ツバスタチンは、ＡＰＥｘＢＩＯ（Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）から入手した。ツバスタチンは、１０％のＤＭＳＯ及び９０％の０．９％生理食塩水中で製剤化し、マウスに、２５ｍｇ／ｋｇで毎日腹腔内に投与した。ＪＱ１は、Ｊａｍｅｓ  Ｂｒａｄｎｅｒ（Ｄａｎａ  Ｆａｒｂｅｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）によって提供された。ＪＱ１は、１０％のＤＭＳＯ及び９０％の１０％２−ヒドロキシルプロピルβ−シクロデキストリン（Ｓｉｇｍａ）中で製剤化し、マウスに、２５ｍｇ／ｋｇで毎日腹腔内に投与した。ビヒクル対照は、ＤＭＳＯを関連薬物ビヒクルに希釈することによって調製された。抗ＣＤ４（ＧＫ１．５）、抗ＣＤ８（５３−６．７２）、及びＲａｔ  ＩｇＧ（ＬＴＦ−２）は、ＢｉｏＸｃｅｌｌから購入した。まず、マウスに、化合物Ａ及びＪＱ１の組み合わせによる処置前に、２日連続で抗体を投与し、次いで、抗体と共に、４００ｕｇ／マウス／回で週２回腹腔内投与した。関連細胞型の枯渇は、尾静脈から得られた末梢血を用いて第２の用量から１日後にフローサイトメトリーによって確認された。フローサイトメトリー分析のための研究で使用されるマウス及びヒト抗体は、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ，Ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ及びＢＤ  ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎから購入した。組換えヒトサイトカインＩＬ−２、ＩＬ−４、及びＧＭ−ＣＳＦは全て、ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ（ＮＪ）から購入した。
【０１７９】
腫瘍プロファイリング及びフローサイトメトリー
細胞懸濁液を生成するために、腫瘍小結節を、ＫＰ及びＴＬマウスの肺から切除し、小さな破片に切断し、続いて、１００Ｕ／ｍｌのコラゲナーゼＩＶ型（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）及び５０ｕｇ／ｍｌのＤＮＡｓｅ  Ｉ（Ｒｏｃｈｅ）を含むＲＰＭＩ−１６４０／５％ＦＢＳ緩衝液中でさらに３７℃で４５分間解離した。インキュベーション後、細胞を、赤血球溶解緩衝液で処理し、７０μｍの細胞濾過器を通して濾過した。遠心分離後、細胞ペレットを、１ＸＰＢＳ／２％ＦＢＳで再懸濁した。細胞を計数し、約０．５〜１×１０６個の細胞を、ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ中で表面マーカーについて４℃で１５分間染色した。細胞内染色を、製造業者の取扱説明書に従ってＦｏｘｐ３染色緩衝液を用いて、Ｆｏｘｐ３、Ｋｉ６７、ＣＴＬＡ−４、及びＢｃｌ−２に対して行ったが、ｃｙｔｏｆｉｘ／ｃｙｔｏｐｅｒｍキット（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）は、細胞内サイトカイン染色のために使用した。簡潔には、細胞を、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ３を含む表面マーカーに対して染色し、続いて、透過化及び固化後に、ＰＥコンジュゲート抗ＩＦＮ−γ、ＢＶ４２１コンジュゲート抗ＴＮＦ−α、ＡＰＣコンジュゲートＩＬ−２、ＦＩＴＣコンジュゲートＰｅｒｆｏｒｉｎ、及びＣＤ１０７ａ（示された場合）、またはアイソタイプ適合したｍＡｂにより細胞内染色した。全ての染色された試料において、死滅細胞を、Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄ  Ｆｉｘａｂｌｅ死滅細胞染色キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して除外した。細胞を、ＬＳＲ  Ｆｏｒｔｅｓｓａ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）上に獲得し、ｆｌｏｗｊｏソフトウェア（Ｔｒｅｅｓｔａｒ）で分析した。ＦＡＣＳ分析のためのゲート戦略を図１０に示す。
【０１８０】
細胞精製及びインビトロ研究
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、健常ドナー及びＩＲＢ認可された施設プロトコルの下で同意した患者から得られた新鮮なまたは凍結血液試料からＦｉｃｏｌｌ勾配によって単離した。凍結したときに、ＰＢＭＣを解凍し、１０％完全培地（１０％プールしたヒト血清、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、１００Ｕ／ｍＬのストレプトマイシン、及び２ｍＭのＬ−グルタミンを補充したＲＰＭＩ  １６４０）中で３７℃で６時間静置し、この後、細胞（０．５×１０６）を、化合物Ａ（２．５μｍ）、エンチノスタット（２．５μｍ）、またはＪＱ１（１μｍ）で２４または７２時間培養した。次いで、細胞を洗浄し、ＦＡＣＳによる表現型分析に供した。いくつかの実験では、これらの培養物を、全ＰＢＭＣからの精製後に、精製されたＣＤ１４＋単球またはＣＤ３＋Ｔ細胞で行った。
【０１８１】
Ｔ細胞増殖アッセイのために、Ｔ細胞を、製造業者の取扱説明書に従ってＴ細胞濃縮キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）を用いて陽性選択によってＰＢＭＣから単離した。細胞は、一般に、約９０％の純度であった。次いで、精製されたＴ細胞を、２．５μＭ  ＣＦＳＥまたは細胞トレースバイオレット（ＣＴＶ）で３７℃で７分間標識した。細胞を、ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳで３回洗浄し、計数し、レスポンダー細胞として使用した。ＣＤ１４マイクロビーズを用いて陽性選択によって患者ＰＢＭＣから単離された精製されたＣＤ１４＋細胞を、化合物Ａまたはエンチノスタットで２４時間培養し、この後、混合したリンパ球反応において同種Ｔ細胞と共培養する前に、細胞を、３回洗浄した。
【０１８２】
細胞内サイトカイン検出アッセイのために、処置マウスまたは対照マウスの腫瘍からの免疫細胞を、上述のようにｆｉｃｏｌｌ勾配分離後に得られた。１×１０６個の細胞を、ＰＭＡ（５０ｎｇ）及びイオノマイシン（５００ｎｇ）で、３７℃で６時間培養し、ゴルジプラグ（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を最後５時間培養した。ヒトＰＢＭＣを用いる等価アッセイのために、０．５×１０６個の細胞を、分析前に同様に刺激した。
【０１８３】
腫瘍浸潤ＴＡＭ及びＴ細胞の単一細胞ＲＮＡ配列決定
腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ；ＣＤ４５＋ＣＤ１１ｃ＋ＣＤ１１ｂｌｏ）及びＣＤ４５＋ＣＤ３＋ＣＤ２５ｌｏ／−Ｔ細胞を、ＦＡＣＳ分類によって腫瘍組織から単離された組換えリボヌクレアーゼ阻害剤（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を含む５０μｌの１×ＰＢＳを含む９６ウェルプレートに分類した。簡潔には、腫瘍細胞懸濁液を、ＦｃγＲブロッキング後に生存／死滅固定可能な色素と共にインキュベートし、続いて、ＣＤ４５、ＣＤ３、ＣＤ８、ＣＤ１１ｂ、及びＣＤ１１ｃに対して抗体で染色した。Ｓｍａｒｔ−Ｓｅｑ２ライブラリーを、Ｂｒｏａｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｌａｂｓによって調製し、Ｂｒｏａｄ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  Ｐｌａｔｆｏｒｍによって配列決定した。
【０１８４】
統計学的分析
ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いた、２群間の比較にはスチューデントのｔ検定、または多群比較には一元Ａｎｏｖａによって統計的有意性を評価した。Ｐ＜０．０５値は、統計学的に有意であると見なされ（＊）、Ｐ＜０．０１値は、非常に有意であると見なされ（＊＊）、Ｐ＜０．００１値は、高度に有意であると見なされた（＊＊＊）。
【０１８５】
上記の実施例の要約
上記の実験は、エンチノスタット、クラス１  ＨＤＡＣ選択的薬剤のみが、化合物Ａ（ＨＤＡＣ１／２／３に対して弱い活性を有するＨＤＡＣ６選択的）の効果の一部を部分的に再生したことを示す。それ故に、化合物Ａの観察された免疫調節効果は、恐らく、ＨＤＡＣ６及びクラス１  ＨＤＡＣの相対的阻害活性の固有及び予想外の特徴であった。
【０１８６】
化合物Ａは、抗原提示に関連する免疫学的事象の微細調整の可能性を有する。病理学的または疾患設定において、未成熟プロフェッショナル抗原提示細胞（ＡＰＣ）は、プロセスを「選択」し、より成熟状態の表現型変化を経ている間、関連抗原を提示しなければならない。そのような状態に存在するとき、それらは、ＭＨＣクラスＩＩ及び共刺激分子のそれらの発現の増加により、増強した抗原提示及びＴ細胞プライミング能力を有する。それ故に、肺腫瘍を担持するマウスにおける化合物Ａでの処置時に、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）に観察されるように、ＭＨＣクラスＩＩならびに共刺激分子ＣＤ８６の発現の増加は、化合物Ａが、共刺激シグナル及び抗原の提示の改善された送達を好んだ表現型の変化を促進する固有の調節剤として役立つという考えと一致した。この点の支援において、患者ＰＢＭＣからの化合物Ａが曝露されたＣＤ１４＋単球がアロ反応性Ｔ細胞増殖を駆動することでより良好であるという所見であった。これは、主に、外来ＭＨＣ分子のＴ細胞係合及びＡＰＣに存在する共刺激に由来する刺激の程度の関数である。さらに、化合物Ａが曝露されたＴ細胞上のリンＳＴＡＴ３及びＣＤ６９の発現の観察された増加はまた、ＳＴＡＴ３活性化に依存する様式でＴ細胞における直接プライミング効果を有し得ることが示唆された。実際には、ＳＴＡＴ３の活性化は、ＣＤ６９発現を誘導し、ひいてはアロ反応性Ｔ細胞モデルにおけるＴ細胞の活性化を誘導することが知られている。そのような活性化効果は、特に、腫瘍関連抗原の文脈において、ＴＣＲを誘導した抗原駆動性Ｔ細胞プライミングの増幅に有益であり得る。
【０１８７】
化合物Ａの投与は、がん患者における改善されたＴ細胞プライミングを促進し得る。この考えは、化合物Ａで処置した腫瘍を担持するマウスに観察された活性化の増加及び腫瘍浸潤ＣＤ８＋Ｔ細胞の増強されたエフェクター機能によって支持された。それ自体はＮＳＣＬＣのＧＥＭモデルにおける腫瘍増殖を抑制するのに強固ではなかったが、化合物Ａは、ＪＱ１と結合したときに、優れたＴ細胞媒介性抗腫瘍有効性をもたらした。
【０１８８】
ＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋Ｔ制御性細胞が多くの固形がんに蓄積されるため、これらの細胞を標的とする可能性がある薬剤は、治療的有効性を提供し得る。開示されるように、ＨＤＡＣ６選択的阻害剤（化合物Ａ）及びＢＥＴ阻害剤（ＪＱ１）処置の組み合わせは、処置したマウスにおける腫瘍微小環境内のＴｒｅｇ細胞の分画を低減したが、従来のＴ細胞の分画は低減しなかった。このことは、Ｔｒｅｇ細胞がそれらの従来のＴ細胞対応物よりもエピジェネティック修飾に対してより感受性であり得ることを示唆した。Ｆｏｘｐ３のレベルがインビトロで化合物Ａによって免れたＴｒｅｇ細胞上で減少したが、この効果は唯一インビボで中程度であった。一方、ＪＱ１は、ＪＱ１処置マウスの腫瘍におけるＴｒｅｇ比のより実質的な低減に加えて、Ｆｏｘｐ３発現レベル及びインビトロでのＴｒｅｇ細胞の機能の低下によって証明されるさらに高度な効果を示した。化合物Ａ及びＪＱ１は、ＦＯＸＰ３遺伝子発現、またはタンパク質の安定性、ひいてはこれらの細胞の全生存及び活性を優先的に調節することができる。これらの効果は、ＨＡＴ／ＨＤＡＣによるヒストンのアセチル化状態が、ＦＯＸＰ３遺伝子発現及び安定性に影響を及ぼすことが知られているため、ある特定のＨＤＡＣ阻害剤がＴｒｅｇ生物学に影響を及ぼすことを示す既存の報告によって支持されている。異なるＨＤＡＣによって標的とされた遺伝子座またはタンパク質領域の変形は、異なるＨＤＡＣ阻害剤に応答してＴｒｅｇ活性に影響を及ぼし得る。加えて、異なる疾患状態と関連する炎症性状況は、ある特定のＨＤＡＣ阻害剤がそれらの活性にいかに影響を及ぼすかを決定付けることができる。
【０１８９】
いかなる理論にも拘束されることを意図しないが、化合物Ａは、免疫細胞において多面的役割を果たし得、Ｔｒｅｇ細胞数を低減し、Ｔ細胞の一時的ＴＣＲ非依存性活性化を増加させ、ＡＰＣ機能を促進することによって機能し得る。一方、ＪＱ１は、免疫媒介性抗腫瘍応答を妨げる主な機構であると考えられる、Ｔｒｅｇ抑制活性をさらに中断させる。ＪＱ１は、化合物Ａと相乗作用し、Ｔｒｅｇ比をさらに低減し、腫瘍床に存在する残りのＴｒｅｇの抑制機能を中断させる。正味効果は、抗原送達を最適化し、共刺激シグナルを増加させるが、阻害細胞機構を低下させるために、白血病オーケストレーション抗腫瘍応答の促進である。Ｔ細胞枯渇時に化合物Ａ及びＪＱ１療法で見られる腫瘍増殖停止の軽減は、このモデルにおける組み合わせ治療の有効性において重要な役割を果たすことを示した。
【０１９０】
化合物Ａ及びＪＱ１の組み合わせは、異なる変異遺伝子型によって駆動される肺腫瘍における強固な免疫媒介性抗腫瘍効果をもたらし、これにより、腫瘍を担持するマウスの生存を延長した。これらの２つの薬剤のこれまでに記載されていない免疫調節効果は、がん、特に、肺腺癌における治療介入のためのＨＤＡＣ６選択的阻害剤及びＢＥＴ阻害剤を含む合理的な薬学的組み合わせを支持する。さらに、本明細書で使用される投薬量は、現在の臨床用途と一致する。毒性の兆候は、観察されなかった。化合物Ａ及びＪＱ１は、それらの直接抗腫瘍効果だけでなく、強力な抗癌効果を促進するために集結する、免疫細胞動力学及び機能の末梢の再成形を介して間接的効果を利用する「ハイブリッド」療法として利用することができる。
【０１９１】
参照による組み込み
本出願全体で引用される全ての引用参考文献の内容（参考文献、発行済特許、公開済特許出願、及び同時係属特許出願を含む）は、参照によりそれらの全体が本明細書に明示的に組み込まれる。別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、当業者によって一般的に知られているものと同じ意味と一致している。
【０１９２】
等価物
当業者は、通例の実験方法に過ぎないものを使用して、本明細書に記載される特定の実施形態の多くの等価物を認識する、または確認することができるであろう。このような等価物は、次の特許請求の範囲によって包含されることが意図される。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図３Ｅ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図５Ｅ】
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【図５Ｆ】
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【図５Ｇ】
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【図５Ｈ】
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【図５Ｉ】
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【図５Ｊ】
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【図５Ｋ】
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【図５Ｌ】
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【図５Ｍ】
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【図５Ｎ】
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【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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【図８Ｅ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図９Ｄ】
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【図９Ｅ】
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【図９Ｆ】
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【図９Ｇ】
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【図９Ｈ】
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【図１０】
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【国際調査報告】
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