(57)【要約】  ＢＮＣＴ等に利用できる、新たなホウ素含有化合物およびその製造方法を提供することを目的とする。一般式（Ｉ）：【化１】2012018015.tif 000052（式中、ｌは、１から６までの整数を表し、ｍは、０、１、または２であり、ｎは、０、１、または２である）で表される、シクロ環含有アミノ酸骨格結合ホウ素化合物、またはその薬学的に許容できる塩を製造する。
2012018015.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）：
【化１】
2012018015.tif 000046
（式中、ｌは、１から６までの整数を表し、ｍは、０、１、または２であり、ｎは、０、１、または２である）で表される、シクロ環含有アミノ酸骨格結合ホウ素化合物、またはその薬学的に許容できる塩。
【請求項２】
ｌが１、ｍが０または１、ｎが０または１である、請求項1記載のシクロ環含有アミノ酸骨格結合ホウ素化合物、またはその薬学的に許容できる塩。
【請求項３】
一般式（ＩＩ）：
【化２】
2012018015.tif 000047
（式中、ｌは、１から６までの整数を表す）で表される、請求項1記載のシクロ環含有アミノ酸骨格結合ホウ素化合物、またはその薬学的に許容できる塩。
【請求項４】
一般式（ＩＩＩ）：
【化３】
2012018015.tif 000048
（式中、ｌは、１から６までの整数を表す）で表される、請求項1記載のシクロ環含有アミノ酸骨格結合ホウ素化合物、またはその薬学的に許容できる塩。
【請求項５】
一般式（１）：
【化４】
2012018015.tif 000049
で表される、シアノエチルＢＳＨ（１）を、アルカリの存在下において、
一般式（２）：
【化５】
2012018015.tif 000050
（式中、Ｘは、ハロゲンであり、ｌは、１から６までの整数を表し、ｍは、０、１、または２であり、ｎは、０、１、または２である）で表される化合物（２）と反応させる工程を含む、シクロ環含有アミノ酸骨格結合ホウ素化合物の製造方法。
【請求項６】
本発明はまた、一般式（１）で表される、シアノエチルＢＳＨ（１）を、アルカリの存在下において、
一般式（３）：
【化６】
2012018015.tif 000051
（式中、Ｘは、ハロゲンであり、ｌは、１から６までの整数を表し、ｍは、０、１、または２であり、ｎは、０、１、または２である）で表される化合物（３）と反応させる工程を含む、シクロ環含有アミノ酸骨格結合ホウ素化合物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、シクロ環含有アミノ酸骨格結合ホウ素化合物およびその製造方法に関する。本発明のシクロ環含有アミノ酸骨格結合ホウ素化合物は、各種用途への適用が考えられる。例えば、ホウ素中性子捕捉療法（ＢＮＣＴ）に用いられる中性子捕捉療法剤として有用である。
【背景技術】
【０００２】
近年、放射性アイソトープを利用した新しい癌の治療方法として、ホウ素中性子捕捉療法（ＢＮＣＴ）が注目を集めている。ホウ素中性子捕捉療法は、ホウ素１０同位体（１０Ｂ）を含むホウ素化合物をガン細胞に取り込ませ、低エネルギーの中性子線（例えば熱中性子）を照射して、細胞内で起こる核反応により局所的にガン細胞を破壊する治療方法である。この治療方法では、１０Ｂを含むホウ素化合物をガン組織の細胞に選択的に蓄積させることが、治療効果を高める上で重要であるため、ガン細胞に選択的に取り込まれるホウ素化合物の開発がなされている。【０００３】
これまでに、ＢＮＣＴに用いる薬剤として基本骨格にホウ素原子またはホウ素原子団を導入したホウ素含有化合物がいくつかは合成されている。実際の臨床で用いられている薬剤としては、ｐ−ボロノフェニルアラニン（ＢＰＡ）やメルカプトウンデカハイドロドデカボレート（ＢＳＨ；ボロカプテイト）がある。このうち、ＢＳＨは、ホウ素ケイジ（クラスター）化合物であり、最も低毒性であり、ナトリウム塩の形で主に脳腫瘍の治療に用いられ、その有用性が確認されている（例えば、非特許文献１〜８参照）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｉ．Ｍ．Ｗｙｚｌｉｃら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．，１９９２，３３，７４８９−７４９０，
【非特許文献２】Ｗ．Ｔｊａｒｋ，Ｊ．Ｏｒｇａｎｏｍｅｔ．Ｃｈｅｍ．，２０００，６１４−６１５，３７−４７，
【非特許文献３】Ｋ．Ｉｍａｍｕｒａら、Ｂｕｌｌ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｊｐｎ．，１９９７，７０．３１０３−３１１０．
【非特許文献４】Ａ．Ｓ．Ａｌ−Ｍａｄｈｏｒｎら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２００２，４５，４０１８−４０２８，
【非特許文献５】Ｆ．Ｃｏｍｐｏｓｔｅｌｌａら、Ｒｅｓ．Ｄｅｖｅｌｏｐ．Ｎｅｕｔｒｏｎ  Ｃａｐｔｕｒｅ  Ｔｈｅｒ．，２００２，８１−８４，
【非特許文献６】Ｓ．Ｂ  Ｋａｈｌら、Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  Ｎｅｕｔｒｏｎ  Ｃａｐｔｕｒｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ，Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  １９９２，２２３，
【非特許文献７】Ｊ．Ｃａｉら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９９７，４０，３８８７−３８９６，
【非特許文献８】Ｈ．Ｌｉｍら、Ｒｅｓ．Ｄｅｖｅｌｏｐ．Ｎｅｕｔｒｏｎ  Ｃａｐｔｕｒｅ  Ｔｈｅｒ．，２００２，３７−４２
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
上記の通り、ＢＮＣＴに利用できるガン細胞に選択的に取り込まれる、新たなホウ素含有化合物を開発することが望まれている。【０００６】
本発明の目的は、ＢＮＣＴ等に利用できる、新たなホウ素含有化合物およびその製造方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、鋭意研究を重ねた結果、以下に示す、シクロ環含有アミノ酸骨格結合ホウ素化合物およびその製造方法により上記目的を達成できることを見出し、本発明を完成するに到った。【０００８】
即ち、本発明は、一般式（Ｉ）：
【化１】
2012018015.tif 000003
（式中、ｌは、１から６までの整数を表し、ｍは、０、１、または２であり、ｎは、０、１、または２である）で表される、シクロ環含有アミノ酸骨格結合ホウ素化合物、または薬学的に許容できる塩に関する。【０００９】
本明細書において、ホウ素化合物は、以下のように定義される。
【化２】
2012018015.tif 000004
【００１０】
上記シクロ環含有アミノ酸骨格結合ホウ素化合物において、ｌは１、ｍは０または１、ｎは０または１であり得る。【００１１】
本発明は、また、下記一般式（ＩＩ）：
【化３】
2012018015.tif 000005
（式中、ｌは、１から６までの整数を表す）で表される、シクロ環含有アミノ酸骨格結合ホウ素化合物、および薬学的に許容できる塩に関する。【００１２】
本発明は、また、一般式（ＩＩＩ）：
【化４】
2012018015.tif 000006
（式中、ｌは、１から６までの整数を表す）で表される、シクロ環含有アミノ酸骨格結合ホウ素化合物、に関する。【００１３】
本発明はまた、一般式（１）：
【化５】
2012018015.tif 000007
で表される、シアノエチルＢＳＨ（１）を、アルカリの存在下において、
一般式（２）：
【化６】
2012018015.tif 000008
（式中、Ｘは、ハロゲンであり、ｌは、１から６までの整数を表し、ｍは、０、１、または２であり、ｎは、０、１、または２である）で表される化合物（２）とを反応させる工程を含む、シクロ環含有アミノ酸骨格結合ホウ素化合物の製造方法、に関する。【００１４】
本発明はまた、一般式（１）で表される、シアノエチルＢＳＨ（１）を、アルカリの存在下において、
一般式（３）：
【化７】
2012018015.tif 000009
（式中、Ｘは、ハロゲンであり、ｌは、１から６までの整数を表し、ｍは、０、１、または２であり、ｎは、０、１、または２である）で表される化合物（３）とを反応させる工程を含む、シクロ環含有アミノ酸骨格結合ホウ素化合物の製造方法、に関する。【００１５】
当該製造方法によれば、一般式（Ｉ）で表されるシクロ環含有アミノ酸骨格結合ホウ素化合物を得ることができる。
【発明の効果】
【００１６】
本発明のシクロ環含有アミノ酸骨格結合ホウ素化合物（Ｉ）は、疎水性部位とアミノ酸骨格を併せ持ち、癌特異的必須アミノ酸トランスポーター(LAT1)によるがん細胞への取り込みに都合よく使用することができる新規物質である。そのため、本発明のシクロ環含有アミノ酸骨格結合ホウ素化合物は、特に、ガン細胞をターゲットとするＢＮＣＴに有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】本発明のシクロ環含有アミノ酸骨格結合ホウ素化合物について、腫瘍細胞への取り込み試験を行った結果を示す図である。
【図２】本発明のシクロ環含有アミノ酸骨格結合ホウ素化合物について、中性子照射による腫瘍細胞に対する殺細胞効果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
以下、本発明の下記一般式（Ｉ）で表されるシクロ環含有アミノ酸骨格結合ホウ素化合物、またはその薬学的に許容できる塩について説明する。
【００１９】
一般式（Ｉ）において：
【化８】
2012018015.tif 000010
【００２０】
式中、上記ｌは、１から６までの整数を表し、ｍは、０、１、または２であり、ｎは、０、１、または２である。
【００２１】
上記シクロ環含有アミノ酸骨格結合ホウ素化合物において、ｌは１、ｍは０または１、ｎは０または１であるような化合物、またはその薬学的に許容できる塩が、好ましい。
【００２２】
このうち特に、一般式（ＩＩ）：
【化９】
2012018015.tif 000011
（式中、ｌは、１から６までの整数を表す）で表される、シクロ環含有アミノ酸骨格結合ホウ素化合物、または薬学的に許容できる塩であることが好ましい。
【００２３】
あるいはまた、一般式（ＩＩＩ）：
【化１０】
2012018015.tif 000012
で表される、シクロ環含有アミノ酸骨格結合ホウ素化合物、であることが好ましい。
【００２４】
さらに好ましくは、本発明の化合物は、
【化１１】
2012018015.tif 000013
で表されるシクロ環含有アミノ酸骨格結合ホウ素化合物、または
【化１２】
2012018015.tif 000014
で表されるシクロ環含有アミノ酸骨格結合ホウ素化合物であることが最も好ましい。
【００２５】
以下では、前記一般式（Ｉ）で表されるシクロ環含有アミノ酸骨格結合ホウ素化合物の製造方法について説明する。
【００２６】
本発明のシクロ環含有アミノ酸骨格結合ホウ素化合物（Ｉ）の製造方法では、原料として、一般式（１）：
【化１３】
2012018015.tif 000015
で表されるシアノエチルＢＳＨを用いる。このようなＢＳＨ化合物は、限定はされないが、文献既知の方法（例えば、Ｇａｂｅｌ，Ｄ．；Ｍｏｌｌｅｒ，Ｄ．；Ｈａｒｆｓｔ，Ｓ．；Ｒｏｓｌｅｒ，Ｊ．；Ｋｅｔｚ，Ｈ．Ｉｎｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９３，３２，２２７６−２２７８．）に従い、合成することができる。すなわち、この方法では、ＢＳＨとβ-ブロモプロピオニトリルとを、アセトニトリル中で反応させ、次にテトラメチルアンモニウムヒドロキシドなどと処理して、目的のシアノエチルＢＳＨ化合物を得る。
【００２７】
ここで、前記ＢＳＨは、ホウ素、水素およびイオウ原子から成る２０面体のホウ素クラスター構造をとる化合物である。ＢＳＨは無機低分子化合物であるにもかかわらず、体積はベンゼン環より大きく、３つのホウ素原子が２つの電子を共有するいわゆるスリーセンターボンド構造をとり、電子が局在化した特異な構造をしている。
【００２８】
このようなシアノエチルＢＳＨ（１）を、アルカリの存在下において、
一般式（２）：
【化１４】
2012018015.tif 000016
（式中、Ｘは、ハロゲンであり、ｌは、１から６までの整数を表し、ｍは、０、１、または２であり、ｎは、０、１、または２である）で表される化合物と反応させることで、本発明のシクロ環含有アミノ酸骨格結合ホウ素化合物を製造することができる。
【００２９】
本発明のシクロ環含有アミノ酸骨格結合ホウ素化合物はまた、一般式（１）で表される、シアノエチルＢＳＨ（１）を、アルカリの存在下において、
一般式（３）：
【化１５】
2012018015.tif 000017
（式中、Ｘは、ハロゲンであり、ｌは、１から６までの整数を表し、ｍは、０、１、または２であり、ｎは、０、１、または２である）で表される化合物（３）と反応させ、さらに、アルカリ存在下還流することで、得られる。
【００３０】
ここで、上記化学式（２）または（３）の製造方法は、限定はされないが、一例として、シクロブタン環を有する化合物を例にとって、その合成経路を示す。
【００３１】
【化１６】
2012018015.tif 000018
【００３２】
ここで、Ｂｎは、ベンジル基である。まず、酢酸銅(II)一水和物を酢酸に溶解させ、この溶液に亜鉛粉末を加え、dryジエチルエーテルに溶解させたアリルベンジルエーテルを加える。この溶液に、トリクロロアセチルクロリドと、三塩化ホスホリルを溶解させたdryジエチルエーテルを滴下させる。この反応液を還流し、撹拌して、室温にした後、ろ過を行う。ろ液を洗浄し、脱水を行った後、濃縮し、この残渣に、酢酸と亜鉛粉末を加え、還流下撹拌する。この反応液をろ過し、ろ液を濃縮した後、この残渣を酢酸エチルに溶解させ、中和して析出する亜鉛粉末をろ別する。このろ液を分液によりsat NaHCO3 とBrineによる洗浄を行い、この有機層を脱水し、濃縮して、未反応のアリルベンジルエーテルを減圧留去した後、３−（ベンジルオキシメチル）シクロブタノンを得ることができる。
【００３３】
次に、このようにして得られた３−（ベンジルオキシメチル）シクロブタノンを用いて、ベンジルオキシメチルシクロブタンを含むシスおよびトランスヒダントインを製造することができる。
【００３４】
【化１７】
2012018015.tif 000019
【００３５】
このようにして得られるベンジルオキシメチルシクロブタンを含むシスまたはトランスヒダントインを、アルカリ溶液と反応させ、さらに濃ハロゲン化水素溶液を加えて、還流することで、例えば、シスまたはトランス−１−アミノ−３−（ブロモメチル）シクロブタンカルボン酸臭化水素酸を得ることができる。
【００３６】
次に、ベンジルオキシメチルシクロブタンを含むシスまたはトランスヒダントインを、ハロゲン化ヒダントインに変換することができる。
【化１８】
2012018015.tif 000020
【化１９】
2012018015.tif 000021
さらに、上記化学式（２）または（３）の製造方法の別の方法として、シクロブタン環もしくはシクロヘキサン環、あるいはその他のシクロ環を有する化合物を製造し得る例について、その合成経路を示す。
【化２０】
2012018015.tif 000022
【００３７】
４−シクロヘキサノカルボン酸エチル, エチレングリコールさらに パラ-トルエンスルホン酸1水和物をトルエンに溶解させ、その後、Dean-Stark を用いて還流させる。反応終了後、減圧濃縮した後、５％炭酸水素ナトリウム水溶液を加える。さらに、この混合溶液をエーテルにて抽出し、抽出したエーテル層を硫酸ナトリウムにて乾燥させた後、減圧濃縮する。その後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製することにより、ジオキソラン中間体を得ることができる。
【００３８】
LiAlH4を無水THFに懸濁させた後、得られたジオキソラン中間体を滴下していく。さらに還流させた後、室温下にて、ゆっくりと、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を滴下していく。混合溶液をセライト濾過した後、得られた炉液を減圧濃縮する。残渣を酢酸エチルにて溶解させた後、酢酸エチル層を、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、さらにBrineにて洗浄し、硫酸ナトリウムにて乾燥後、減圧濃縮させると、目的のアルコール中間体を得ることができる。
【００３９】
THFに溶解させた上記アルコール中間体に, 0℃にて、60% NaHを添加する。撹拌の後、ベンジルブロマイドを加え、室温にて１８時間撹拌させる。その後、1N 塩酸水溶液にて、中和後、減圧濃縮する。そして、残った残渣をエーテルにて溶解し、水、Brineで洗浄した後、溶媒を減濃縮させる。そして、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製することにより、目的のエーテル中間体を得ることができる。
【００４０】
上記エーテル中間体を１N 塩酸水溶液に溶解させ、室温にて、１時間撹拌させ、反応溶液をクロロフォルムで洗浄した後、炭酸ナトリウムにて中和する。酢酸エチルにて抽出した後、有機層を硫酸ナトリウムにて乾燥後、減圧濃縮し、目的のケトン中間体を得ることができる。
【００４１】
次に、ベンジルオキシケトン中間体を、ハロゲン化する。
【００４２】
各工程では、適宜に、中和工程、精製工程を施した後に、次工程が施される。上記各工程における各生成物は、単離精製されても、そのまま次の工程に供してもよい。単離精製手段は、洗浄、抽出、再結晶法、各種クロマトグラフィーなどが包含される。各工程における各生成物は、これらの単離精製手段を単独で、あるいは適宜２種以上を組み合わせて使用して行うこともできる。
【００４３】
このような化合物は、そのまま、あるいは薬学的に許容できる塩の形態で、あるいはそれらと薬学的に許容できるキャリアーと混合して当業者に公知の製剤の形で、あるいはＢＳＨ封入ウイルスエンベロープベクターなどの形で、ホウ素中性子捕捉療法（ＢＮＣＴ）に好都合に用いられうる。薬学的に許容できる塩には、無機塩基との塩、有機塩基との塩、無機酸との塩、有機酸との塩、塩基性または酸性アミノ酸との塩などが挙げられる。無機塩基との塩の好適な例としては、例えばナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩;カルシウム塩、マグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩;ならびにアルミニウム塩、アンモニウム塩などが挙げられる。有機塩基との塩の好適な例としては、例えばトリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、ピコリン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ,Ｎ'−ジベンジルエチレンジアミンなどとの塩が挙げられる。無機酸との塩の好適な例としては、例えば塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸などとの塩が挙げられる。有機酸との塩の好適な例としては、例えばギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、フマール酸、シュウ酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、コハク酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、p−トルエンスルホン酸などとの塩が挙げられる。塩基性アミノ酸との塩の好適な例としては、例えばアルギニン、リジン、オルニチンなどとの塩が挙げられ、酸性アミノ酸との塩の好適な例としては、例えばアスパラギン酸、グルタミン酸などとの塩が挙げられる。
【００４４】
治療は、任意の適当な投与経路で、化合物が標的部位に蓄積するような方法で、本発明の化合物を含む薬剤を投与することによって行われる。本発明の化合物は、腫瘍に濃縮することが好ましい。化合物を含む製剤は一度に投与することもできるし、順次投与することもできる。製剤の投与を必要に応じて繰り返すことができる。所望であれば、腫瘍を外科的に可能な程度に除去した後、残りの腫瘍を本発明の製剤を使って破壊することも可能である。
【００４５】
本発明のＢＳＨ誘導体製剤を用いる治療は、任意の適当な投与経路で、ＢＳＨ誘導体が標的腫瘍中に蓄積するような方法で、投与することによって行われる。ＢＳＨ誘導体は放射線照射前に腫瘍に濃縮することが好ましく、放射線照射前の腫瘍：血液比が約2:1 または少なくとも1.5 ：1であると有利である。ＢＳＨ誘導体は一度に投与することもできるし、順次投与することもできる。腫瘍内に化合物が望ましく蓄積した後、その部位に有効量の低エネルギー中性子を照射する。皮膚を通してその部位を照射することができるし、あるいはその部位を照射前に完全にあるいは部分的に暴露することもできる。ＢＳＨ誘導体の投与とそれに続く放射線照射を必要に応じて繰り返すことができる。所望であれば、腫瘍を外科的に可能な程度に除去した後、残りの腫瘍を本発明のＢＳＨ誘導体を使って破壊する。もう1 つの態様として、患者に適当量のＢＳＨ誘導体を投与し、天然に存在する中性子放射物質である252カリフォルニウムの有効量で照射する。これは腫瘍中に挿入し、適当な時間に取り出すことが好ましい。
【００４６】
本発明のＢＳＨ誘導体投与の為に、適切な賦形剤、アジュバント、および／または薬学的に受容可能なキャリアーと混合して、単独で、あるいは他の薬剤と組み合わせて患者に投与され得る。特に好ましく用いられ得るキャリアーには、限定はされないが、生理食塩水、緩衝化生理食塩水、デキストロース、および水等が含まれる。本発明の一実施形態において、薬学的に受容可能なキャリアーは薬学的に不活性である。
【００４７】
本発明のＢＳＨ誘導体の投与は、経口および非経口でなされ得る。非経口投与の場合、動脈内（例えば、頚動脈を介する）、筋肉内、皮下、髄内、クモ膜下腔内、脳室内、静脈内、腹腔内、または鼻孔内へなされうる。
【００４８】
製剤は、散剤 、顆粒剤 、細粒剤 、ドライシロップ剤 、錠剤 、カプセル剤 、注射剤 、液剤などのいずれの形態にもなり得る。また、その剤型に応じ、製剤学的に公知の手法により、適切な賦形剤 ；崩壊剤；結合剤；滑沢剤；希釈剤；リン酸、クエン酸、コハク酸、酢酸、および他の有機酸またはそれらの塩のような緩衝剤緩衝剤；等張化剤；防腐剤；湿潤剤；乳化剤；分散剤；安定化剤；溶解補助剤；アスコルビン酸のような抗酸化剤；低分子量（約１０残基未満の）ポリペプチド（例えば、ポリアルギニンまたはトリペプチド）；タンパク質（例えば、血清アルブミン、ゼラチン、またはイムノグロブリン）；親水性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン）；アミノ酸（例えば、グリシン、グルタミン酸、アスパラギン酸、またはアルギニン）；単糖、二糖および他の炭水化物（セルロースまたはその誘導体、グルコース、マンノース、またはデキストリンを含む）；キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）；糖アルコール（例えば、マンニトールまたはソルビトール）；対イオン（例えば、ナトリウム）；および／または非イオン性界面活性剤（例えば、ポリソルベート、ポロキサマー）、などの医薬品添加物と適宜混合または希釈・溶解することにより調剤することができる。等張性および化学的安定性を増強するこのような物質は、使用された投薬量および濃度においてレシピエントに対して非毒性である。
【００４９】
処方および投与のための技術は、例えば、日本薬局方の最新版および最新追補、「ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ」（Ｍａａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）の最終版に記載されている。
【００５０】
本発明のＢＳＨ誘導体の製剤は、目的の薬剤が意図する目的を達成するのに有効な量で含有される薬剤であり、「治療的有効量」または「薬理学的有効量」は当業者に十分に認識され、薬理学的結果を生じるために有効な薬剤の量をいう。治療的有効用量の決定は十分に当業者に知られている。
【００５１】
治療的有効量とは、投与により疾患の状態を軽減する薬剤の量をいう。このような化合物の治療効果および毒性は、細胞培養または実験動物における標準的な薬学的手順によって決定され得る。用量は、好ましくは、毒性をほとんどまたは全くともなわないＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内にある。この用量は、使用される投与形態、患者の感受性、および投与経路に依存してこの範囲内で変化する。一例として、複合体の投与量は、年齢その他の患者の条件、疾患の種類、使用する複合体の種類等により適宜選択される。好ましい日用量は、処置すべき哺乳動物の体重１Kg当たり式(I)の化合物0.01〜1,000mgである。ヒトでは、好ましい日用量の範囲は、体重１Kgに対して式(I)の化合物0.01〜800mg、尚より好ましくは１〜600mgである。
【００５２】
以下に、本発明のシクロ環含有アミノ酸骨格結合ホウ素化合物の製造の具体例を実施例の態様で示すが、本発明はこれに限定されない。
【実施例】
【００５３】
下記実施例において、化合物の分析および分離精製は、以下の機種や試薬を用いて行った。
・ＮＭＲスペクトル：日本電子  ＪＭＴＣ−４００／５４／ＳＳ  ４００  ＭＨｚ（日本電子社製）。特に明記しない限り、内部標準としてＴＭＳを用いた。また、下記ケミカルシフトはδ値で示した。
・カラムクロマトグラフィー用シリカゲル：ＢＷ−２００（富士シリシア社製）。
・融点：BUCHI Melting point B-545を用いて測定した。
・ＩＲ：JASCO FT/IR-460 plusを用いて測定した。【００５４】
（実施例１）
３−(ベンジルオキシメチル)シクロブタノンの製造
【化２１】
2012018015.tif 000023
【００５５】
200 mlの四ツ口フラスコに酢酸銅(II)一水和物を0.16 g加えて、酢酸5 mlに溶解させた。この溶液に亜鉛粉末 2.8 gを加えて、90秒間撹拌した後デカントレーションを行った。この残渣に酢酸1 mlを加えてデカントレーションをさらに５回繰り返した。この残渣にdry ジエチルエーテル6 mlを加えてデカントレーションを3回繰り返した。アスピレーターにつないだ三方コックを操作して反応装置内をアルゴンガスで完全に置換した。この反応装置内にdryジエチルエーテル60 mlに溶解させたアリルベンジルエーテル6.3 g(6.3 ml, 40.5 mmol)を加えた。トリクロロアセチルクロリド5.0 ml(45 mmol)と、三塩化ホスホリル4.1 ml(45 mmol)を溶解させたdryジエチルエーテル40 mlを、この溶液に一時間かけて滴下した。この反応液を還流し、21時間撹拌した。この反応液を室温にした後、ろ過を行った。ろ液を水を加えてクエンチを行った後、水とBrineによる洗浄を行った。この有機層を芒硝による脱水を行った後、濃縮した。この残渣を酢酸33 mlと亜鉛粉末13.3 gを加え、還流下4時間撹拌した。この反応液をろ過し、ろ液を濃縮した。この残渣を酢酸エチルを溶解させ、sat NaHCO3で中和する事で析出した亜鉛粉末をセライトでろ別した。このろ液を分液によりsat NaHCO3 とBrineによる洗浄を行った。この有機層を芒硝で脱水を行った後、濃縮した。ガラスチューブオーブンで未反応のアリルベンジルエーテルを減圧留去した。残った残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（トルエン：酢酸エチル＝＝96：4）で精製し、透明なオイル状の3-(ベンジルオキシメチル)シクロブタノン(2.41 g, 29 ％)を得た。透明な油状物、b.p. 115 ℃/1.0 mmHg
（TLC; Rf= 0.20(G):(M)）
（1H-NMR(CD3Cl); 2.68(1H, m,BnOCH2CH-), 2.86(2H, m,-CHaHbCOCHaHb-), 3.11(2H, m,-CHaHbCOCHaHb-),3.57(2H,d,J=6.3 Hz, BnOCH2-),4.53(2H,s,PhCH2-),7.32(5H, m,C6H5-)）
（13C-NMR(CDCl3);23.6, 49.9, 72.8, 73.1, 127.6, 128.4, 138.0, 207.4 ）【００５６】
３−（ベンジルオキシメチル）シクロブタノンのヒダントインの製造
【化２２】
2012018015.tif 000024
3-(ベンジルオキシメチル)シクロブタノン4.0 g(21 mmol)、シアン化ナトリウム2.1 g(42 mmol)と炭酸アンモニウム10.1g(105 mmol)を100 mlナスフラスコに加えて、水/エタノール50 % を50 mlで溶解させた。このナスフラスコを密閉し、60 ℃で終夜撹拌した。このナスフラスコをドラフト内で注意して開けた後、減圧濃縮した。この残渣を酢酸エチルで溶解し、不溶物の無機塩を濾去した。この濾液を減圧濃縮し、残った残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝50：50）で精製した。これにより白色結晶の３−（ベンジルオキシメチル）シクロブタノンのヒダントイン (cis体, 2.8g, 11 mmol,50 % ： trans体, 1.1 g, 4.3 mmol, 21 %)を得た。【００５７】
cis体：白色結晶
（TLC; Rf= 0.28(D):(N)）
（1H-NMR(CD3Cl); 2.23(2H, dd, J = 6.3 Hz, 13Hz, -CHaHbC(NHCONHCO)CHaHb-), 2.58(1H, m,BnOCH2CH-), 2.77(2H, dd, J = 9.1 Hz, 13Hz, -CHaHbC(NHCONHCO)CHaHb-),3.48(2H,d,J=3.7 Hz, BnOCH2-), 4.58(2H,s,PhCH2-), 6.06(1H, b, -CH2NHCO-),7.35(5H, m,C6H5-), 7.74(1H, b, -CONHCO-)）【００５８】
trans体：白色結晶
（TLC; Rf= 0.28(D):(N)）
（1H-NMR(CD3Cl); 2.41(2H, m, -CHaHbCOCHaHb-), 2.52(2H, m, -CHaHbCOCHaHb-), 2.67(1H, m,BnOCH2CH-), 3.66(2H,d,J=7.3 Hz, BnOCH2-), 4.54(2H,s,PhCH2-), 6.17(1H, b, -CH2NHCO-),7.33(5H, m,C6H5-), 7.88(1H, b, -CONHCO-)）【００５９】
シス−1−アミノ−３−（ブロモメチル）シクロブタンカルボン酸臭化水素酸の製造
【化２３】
2012018015.tif 000025
50 mlのナスフラスコに、3-(ベンジルオキシメチル)シクロブタノンのシス−ヒダントイン 500 mg(1.92 mmol) と0.5 N NaOH 20 mlを加えて、60 ℃で24時間撹拌した。この反応液を濃縮し、濃縮 HBr水溶液15 mlを加えて還流下6時間撹拌した。この反応液を減圧濃縮した。この残渣を水で溶解し、不溶物を濾去した。濾液を減圧濃縮し得た残渣をアセトニトリルに溶解し、不溶物を濾去した。この濾液を減圧濃縮し得た残渣を逆相シリカゲルクロマトグラフィーで精製し、白色結晶のシス−1−アミノ−3−(ブロモメチル)シクロブタンカルボン酸臭化水素酸(64.5 mg, 0.22 mmol, 12 %)を得た。【００６０】
白色結晶
（TLC; Rf= 0.52(C):(N)）
（1H-NMR(DwO); 2.11(2H, m,  -CHaHbC｛ (NH2・HBr)(CO2H) ｝CHaHb-), 2.62(2H, m, -CHaHbC｛ (NH2・HBr)(CO2H) ｝CHaHb-), 2.86(1H, m, BrCH2CH-),3.43(2H, m, BrCH2-)）【００６１】
シス−１−アミノ−３−（ドデカボラニルチオメチル）シクロブタンカルボン酸臭化水素酸ジテトラメチルアンモニウムの製造
【化２４】
2012018015.tif 000026
シス−１−アミノ−３−（ブロモメチル）シクロブタンカルボン酸臭化水素酸 (63 mg, 0.22 mmol)とドデカボラニル-(β-シアノ)エチル}スルフィドテトラメチルアンモニウム塩(0.20 mg,0.20 mmol) をdryアセトニトリル5 mlを25 mlの三口フラスコに加え、不活性ガス中還流で終夜撹拌した。この溶液を減圧濃縮した後、アセトンを加えた。アセトンに不溶な固形物をろ別し、ろ液を減圧濃縮した。この残渣にアセトン(20 ml)と40 % メチルアミンメタノール溶液(0.52 ml)を入れ、氷冷化で撹拌した。その後、10% テトラメチルアンモニウムヒドロキシドメタノール溶液(0.23 ml,0.21 mmol)を加え、30分間撹拌した後、減圧濃縮をした。この残渣にアセトンを加え、アセトンに不溶な固形物をろ取した。このろ過物を純水に溶解させ、陽イオン交換樹脂アンバーライトIR 120 （H＋型） (Rohm and Hass社)を充填したガラスカラム管に通し、この水溶液を減圧濃縮した。この残渣を少量の純水で溶解させ、10% テトラメチルアンモニウムヒドロキシドメタノール溶液(0.45 ml,0.41 mmol)を加えた後、減圧濃縮をした。この残渣を逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、白色結晶の化合物 (51 mg, 0.099 mmol, 49 ％)を得た。【００６２】
白色結晶
（TLC; Rf= 0.31 (C):(N,I)）
（1H-NMR(D2O);0.75-1.80(11H, m, -B12H11), 2.10(2H, m,  -CHaHbC｛ (NH2・HBr)(CO2H) ｝CHaHb-), 2.66(5H, m, B12H11SCH2-, -CHaHbC｛ (NH2・HBr)(CO2H) ｝CHaHb-), 3.22(24H, s, -N(CH3)4)）
（IR(KBr);3570, 3411, 3210, 3023, 2491, 2032, 1878, 1618, 1486, 1400, 1268, 1071, 993）
（MS(ESI):m/z 514.6[M+3NMe4]1+, 440.5[M+2NMe4+H]1+, 366.2[M+NMe4]1- 132.2[B12H11]1-）【００６３】
（実施例２）
３−（ヒドロキシメチル）シクロブタノンのシス−ヒダントインの製造
【化２５】
2012018015.tif 000027
３−（ベンジルオキシメチル）シクロブタノンのシス−ヒダントイン1.2 g(4.6 mmol) をメタノール30 mlに溶解させた。この溶液に氷冷下で、20 % Pd(OH2) 240 mgを加えた。この反応液を室温で5.5気圧の水素雰囲気下で終夜撹拌した。TLCにて反応の進行を確認した後、濾紙とセライトで20 % Pd(OH)2を濾別した。この濾液を濃縮し、白色固形の３−（ヒドロキシメチル）シクロブタノンのシス−ヒダントイン(770 mg,4.5 mmol, 98 %)で得た。【００６４】
白色結晶
（TLC; Rf= 0.18(H):(N)）
（1H-NMR(CD3OD);2.13(2H, m, -CHaHbC(NHCONHCO)CHaHb-), 2.51(3H, m, BnO CHCHaHbC(NHCONHCO)CHaHb-), 3.37(1H, b, HOCH2-), 3.51(2H, d, J = 5.1 Hz)）【００６５】
３−（インドメチル）シクロブタノンのシス−ヒダントインの製造
【化２６】
2012018015.tif 000028
ヨウ素1.15 g(9.06 mmol)とイミダゾール617 mg(9.06 mmol) をdryジクロロメタン10 mlに溶解させた。この溶液に、氷冷下でトリフェニルホスフィン2.38 g(9.06 mmol)を加えて30分間撹拌した。その後一時間かけて室温に昇温した。この反応液に３−（ヒドロキシメチル）シクロブタノンのシス−ヒダントイン770 mg (4.5 mmol)とdryジクロロメタン10 mlを加えて、室温で5時間撹拌した。反応終了後、析出した白色固形物を濾取し、クロロホルムで洗浄した。この濾取物を酢酸エチルに溶解させ、1 N HClとBrineで洗浄後した。この有機層を芒硝で脱水し濾別した後、濾液を減圧濃縮し粗生成物の白色固形の３−（インドメチル）シクロブタノンのシス−ヒダントイン(506 mg, 1.80 mmol, 40 %)を得た。【００６６】
白色結晶
（TLC; Rf= 0.60(G):(N)）
（1H-NMR(CD3OD);1.98(2H, m, -CHaHbC(NHCONHCO)CHaHb-), 2.56(2H, m, -CHaHbC(NHCONHCO)CHaHb-), 2.68(1H, m, I CH2CH-),3.38(1H, m, ICH2-)）【００６７】
3−（ドデカボラニルチオメチル）シクロブタノンジテトラメチルアンモニウム塩の製造
【化２７】
2012018015.tif 000029
ドデカボラニル−{(2-シアノ）エチル｝スルフィドジテトラメチルアンモニウム塩543ｍｇ（1.49mmol）と、３−（インドメチル）シクロブタノンのシス−ヒダントイン500 mg (1.79 mmol)と dryアセトニトリルの計20 mlを、50 mlの二口フラスコに加える。この反応液を還流下で終夜撹拌した。TLCで反応終了を確認した後、減圧濃縮した。この残渣をアセトンを加えて、不溶物を濾去した。この残渣に室温で最少量のアセトンを加え溶解させた。これに水酸化テトラメチルアンモニウムの10 ％メタノール溶液を1.7 ml(1.56 mmol)をゆっくりと加え30分間撹拌した。この反応液を減圧濃縮した。この残渣にアセトンを加えて、不溶物を濾取した。この濾取物を純水に溶解させ、酢酸エチルで洗浄した。この水層をHP20に通し、減圧濃縮した。この残渣を純水で再結晶を行い、白色結晶の3−（ドデカボラニルチオメチル）シクロブタノンジテトラメチルアンモニウム塩(414 mg)を得た。また濾液を減圧濃縮した。この残渣を逆相シリカゲルクロマトグラフフィーによる精製を行い、白色結晶の3−（ドデカボラニルチオメチル）シクロブタノンジテトラメチルアンモニウム塩 149 mg (合計563 mg, 1.21 mmol, 81%)を得た。【００６８】
（TLC; Rf= 0.47(C):(N,I)）
（1H-NMR(D2O); 0.75-1.60(11H, m, -B12H11), 1.94(2H, t, J = 10.7 Hz, -CHaHbC(NHCONHCO)CHaHb-), 2.34(1H, m, B12H11SCH2CH-), 2.46(4H, m, B12H11SCH2-,-CHaHbC(NHCONHCO)CHaHb-), 3.00(24H, s, -N(CH3)4)）
（IR(KBr);3586, 3363, 3183, 3077, 3031, 2975, 2932, 2842, 2766, 2494, 2028, 1766,   1719, 1485, 1402, 1311, 1143, 1070）【００６９】
シス−１−アミノ−３−（ドデカボラニルチオメチル）シクロブタンカルボン酸三ナトリウム塩の製造
【化２８】
2012018015.tif 000030
3−（ドデカボラニルチオメチル）シクロブタノンジテトラメチルアンモニウム塩 40 mg(0.086 mmol)と0.5 N NaOH 3.4 mlを10 ml容ナス型フラスコに加えて、還流下で終夜撹拌した。TLCで反応の進行を確認した後、陽イオン交換樹脂アンバーライトIR 120B H＋型に通し、減圧濃縮した。この残渣を水に溶解させ、PTFEのメンブレンフィルターに通した。この濾液を陽イオン交換樹脂アンバーライトIR 120B Na＋型に通し、減圧濃縮し、白色固形物シス−１−アミノ−３−（ドデカボラニルチオメチル）シクロブタンカルボン酸三ナトリウム塩(31 mg, quant.)を得た。【００７０】
（TLC; Rf= 0.31 (C):(N,I)）
（1H-NMR(D2O);0.75-1.90(11H, m, -B12H11), 2.06(2H, m,  -CHaHbC｛ (NH2・HBr)(CO2H) ｝CHaHb-), 2.62(5H, m, B12H11SCH2-, -CHaHbC｛ (NH2・HBr)(CO2H) ｝CHaHb-), 3.22(24H, s, -N(CH3)4)）【００７１】
（実施例３）
３−（ヒドロキシメチル）シクロブタノンのトランスヒダントインの製造
【化２９】
2012018015.tif 000031
3-（ベンジルオキシメチル）シクロブタノンのトランス−ヒダントイン1.2 g(4.6 mmol) にメタノール30 mlに溶解させた。この溶液に氷冷下で、20 % Pd(OH2) 240 mgを加えた。この反応液を室温で5.5気圧の水素雰囲気下で終夜撹拌した。TLCにて反応の進行を確認した後、濾紙とセライトで20 % Pd(OH2)を濾別した。この濾液を濃縮し、白色固形の３−（ヒドロキシメチル）シクロブタノンのトランス−ヒダントイン(770 mg,4.5 mmol, 98 %)で得た。【００７２】
白色結晶
（TLC; Rf= 0.20(H):(N)）
（1H-NMR(CD3OD);2.36(4H, m, -CH2C(NHCONHCO)CH2-), 2.55(1H, m, HOCH2CH -), 3.70(1H, d, HOCH2-)）【００７３】
３−（インドメチル）シクロブタノンのトランス−ヒダントインの製造
【化３０】
2012018015.tif 000032
ヨウ素744 mg(5.86mmol)とイミダゾール399 mg(5.86mmol) をdryジクロロメタン5 mlさせた。この溶液に、氷冷下でトリフェニルホスフィン1.54 g(5.86 mmol)を加えて30分間撹拌した。その後一時間かけて室温に昇温した。この反応液に３−（ヒドロキシメチル）シクロブタノンのトランスヒダントイン498 mg (2.93 mmol)とdryジクロロメタン5 mlを加えて、室温で5時間撹拌した。反応液を濃縮し、ヘキサンで洗浄した。この残渣を酢酸エチルに溶解し、濾過を行った。この濾液を1 N HClとBrineで洗浄した。この有機層を芒硝で脱水し濾別した後、濾液を減圧濃縮した。残った残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝40：60）で精製した。
粗生成物の白色固形の３−（インドメチル）シクロブタノンのトランスヒダントイン(406 mg, 1.45 mmol, 49 %)を得た。【００７４】
（TLC; Rf=0.59(G):(N)）【００７５】
３−（ドデカボラニルチオメチル）シクロブタノンジテトラメチルアンモニウム塩のトランスヒダントインの製造
【化３１】
2012018015.tif 000033
ドデカボラニル-｛（2-シアノ）エチル｝スルフィドジテトラメチルアンモニウム塩  430 mg(1.18 mmol)、３−（インドメチル）シクロブタノンのトランスヒダントイン 494 mg (1.77 mmol)とdryアセトニトリル10 mlを、30mlの二口フラスコに加える。この反応液を還流下で終夜撹拌した。TLCで反応終了を確認した後、減圧濃縮した。この残渣をアセトンを加えて、不溶物を濾去した。この残渣に室温で最少量のアセトンを加え溶解させた。これに水酸化テトラメチルアンモニウムの10 ％メタノール溶液を1.34 ml(1.25 mmol)をゆっくりと加え30分間撹拌した。この反応液を減圧濃縮した。この残渣にアセトンを加えて、不溶物を濾取した。濾取物を水に溶解させ、HP20、IR120（H＋型）とIR120（Na＋型）に通し、減圧濃縮を行った。この残渣を逆相シリカゲルクロマトグラフフィーによる精製を行い、透明な油状物の３−（ドデカボラニルチオメチル）シクロブタノンジテトラメチルアンモニウム塩のトランスヒダントイン (合計150 mg,0.32 mmol, 37%)を得た。【００７６】
（TLC; Rf= 0.44 (C):(N,I)）
（1H-NMR(D2O); 0.75-1.60(11H, m, -B12H11), 2.11(2H, m, -CHaHbC(NHCONHCO)CHaHb-), 2.22(2H, m, -CHaHbC(NHCONHCO)CHaHb-), 2.59(3H, m, B12H11SCH2CH-)）【００７７】
トランス-１-アミノ−3−（ドデカボラニルチオメチル）シクロブタンカルボン酸三ナトリウム塩の製造
【化３２】
2012018015.tif 000034
3-（ドデカボラニルチオメチル）シクロブタノンニナトリウム塩のトランス-ヒダントイン  54.3 mg(0.157 mmol)と0.5 N NaOH 6.0 mlを20 ml容ナス型フラスコに加えて、還流下で終夜撹拌した。TLCで反応の進行を確認した後、陽イオン交換樹脂アンバーライトIR 120B H＋型に通し、減圧濃縮した。この残渣を水に溶解させ、PTFEのメンブレンフィルターに通した。この濾液を陽イオン交換樹脂アンバーライトIR 120B Na＋型に通し、減圧濃縮した。この残渣を逆相シリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、白色固形物のトランス-１-アミノ−3−（ドデカボラニルチオメチル）シクロブタンカルボン酸三ナトリウム塩 (47.7 mg, 84 %)を得た。【００７８】
（TLC; Rf= 0.31 (C):(N,I)）
（1H-NMR(D2O);0.80-1.90(11H, m, -B12H11), 2.32(4H, m,  -CH2C｛(NH2)(CO2Na) ｝CH2-), 2.64(2H, m, B12H11SCH2-), 2.76(1H, m, B12H11SCH2-)）
（MS(ESI):m/z 365.2[M+NMe4]1-, 314.1[M+Na]1-, 145.6[M]2-, 131.2[B12H11]1-）【００７９】
（実施例４）
エチル 1,4-ジオキサスピロ[4,5]デカン-8-カルボキシレートの製造
【化３３】
2012018015.tif 000035
４−シクロヘキサノカルボン酸エチル8.5 g (54.4 mmol), エチレングリコール3.8 ml(68.0 mmol) さらに パラ-トルエンスルホン酸1水和物1.1 g (5.8 mmol)をトルエン250 ml に溶解させ、その後、Dean-Stark を用いて18時間還流させた。 反応終了後、減圧濃縮した後、5％炭酸水素ナトリウム水溶液200 mlを加えた。さらに、この混合溶液をエーテル300mlにて3回抽出し、抽出したエーテル層を硫酸ナトリウムにて乾燥させた後、減圧濃縮した。その後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製することにより、淡黄色の油状物として、エチル 1,4-ジオキサスピロ[4,5]デカン-8-カルボキシレート（9.8g. 90%）を得た。
１H NMR (CDCl3): 1.20ppm (t, 3H, CH3CH2O-), 1.47-1.54ppm (m, 2H, 2-CHeq, 6-CHeq), 1.71-1.80 (m, 4H, 3-CH2, 5-CH2), 1.87-1.91 (m, 2H, 2-CHax, 6-CHax), 2.23-2.31ppm (m, 1H, 4-CH), 3.90ppm (s, 4H, -OCH2CH2O-), 4.08ppm (q, 2H, CH3CH2O-).【００８０】
1,4-ジオキサスピロ[4,5]デカン-8-イルメタノールの製造
【化３４】
2012018015.tif 000036
LiAlH4 2.4 g (63.2 mmol)を無水THF 100mlにてけん濁させた後、得られたエチル 1,4-ジオキサスピロ[4,5]デカン-8-カルボキシレート6.7g（31.6mmol）を滴下した。さらに6時間還流させた後、室温下にて、ゆっくりと飽和炭酸水素ナトリウム水溶液100mlを滴下した。混合溶液をセライト濾過した後、得られたろ液を減圧濃縮した。残渣を酢酸エチル200mlにて溶解させた後、酢酸エチル層を、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液100mlにて2回、さらにbrine 100mlにて洗浄し、硫酸ナトリウムにて乾燥後、減圧濃縮させることにより、無色透明の油状物、1,4-ジオキサスピロ[4,5]デカン-8-イルメタノール（3.8g, 70%）を得た。
１H NMR (CDCl3): 1.18-1.22ppm (m, 2H, 3-CHax, 5-CHax), 1.44-1.52 (m, 3H, 3-CHeq, 4-CH, 5-CHeq), 1.70-1.72 (m, 4H, 2-CH2, 6-CH2), 3.40-3.44ppm (m, 2H, HOCH2-), 3.88ppm (s, 4H, -OCH2CH2O-).【００８１】
8-(ベンジロキシメチル)-1,4-ジオキサスピロ[4,5]デカンの製造
【化３５】
2012018015.tif 000037
THF 75 mlに溶解させた1,4-ジオキサスピロ[4,5]デカン-8-イルメタノール5.2g (30 mmol)に, 0℃にて、60% NaH 1.32 g (33 mmol) を添加した。10分間の撹拌の後、ベンジルブロマイド（50mmol）を加え、その後室温にて18時間撹拌させた。その後、1N 塩酸水溶液にて、中和後、減圧濃縮した。残った残渣をエーテルにて溶解し、水で2回、brineで1回洗浄した後、溶媒を減圧濃縮させた。その後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製することにより無色透明の油状物として、8-(ベンジロキシメチル)-1,4-ジオキサスピロ[4,5]デカン(6.0g、77%)を得た。
１H NMR (CDCl3): 1.22-1.30ppm (m, 2H, 3-CHax, 5-CHax), 1.48-1.56 (m, 2H, 3-CHeq, 5-CHeq), 1.61-1.82 (m, 5H, 2-CH2, 4-CH, 6-CH2), 3.29ppm (d, 2H, -4CHCH2-) 3.92ppm (s, 4H, -OCH2CH2O-), 4.48ppm (s, 2H, PhCH2-), 7.24-7.34ppm (m, 5H, Ar)【００８２】
4-(ベンジロキシメチル)シクロヘキサノンの製造
【化３６】
2012018015.tif 000038
8-(ベンジロキシメチル)-1,4-ジオキサスピロ[4,5]デカン5.0g（19.1mmol）を1N 塩酸水溶液150mlにて溶解させ、室温にて、1時間撹拌させた。反応溶液をクロロホルム100mlで２回洗浄した後、炭酸ナトリウムにて中和した。酢酸エチル100mlにて2回抽出した後、有機層を硫酸ナトリウムにて乾燥後、減圧濃縮し、淡黄色の油状物、4-(ベンジロキシメチル)シクロヘキサノン（3.7g, 89%）を得た。
１H NMR (CDCl3): 1.42-1.46ppm (m, 2H, 3-CHax, 5-CHax), 2.07-2.14 (m, 3H, 3-CHeq, 4-CH, 5-CHeq), 2.31-2.34 (m, 4H, 2-CH2, 6-CH2), 3.37ppm (d, 2H, -4CHCH2-), 4.51ppm (s, 2H, PhCH2-), 7.27-7.34ppm (m, 5H, Ar). 【００８３】
8-ベンジルオキシメチル-1,3-ジアザ-スピロ[4,5]デカン-2,4-ジノンの製造
【化３７】
2012018015.tif 000039
4-ベンジルオキシメチルシクロヘキサノン1.90g（8.70mmol）、シアン化ナトリウム853mg（17.4mmol）、炭酸アンモニウム4.18g（43.5mmol）を50%エタノール20mlに溶解し、反応溶液を密栓した後に60℃で12時間攪拌した。反応溶液を室温に戻した後に、ドラフト内で、反応容器の密栓を十分に注意しながら空け、水100mlを加えた。生じた沈殿物をろ取し、水100mlで洗浄した後に、酢酸エチルから再結晶した。これにより無色結晶の8-ベンジルオキシメチル-1,3-ジアザ-スピロ[4,5]デカン-2,4-ジノン（2.26g, 90%）を得た。
1H NMR(DMSO-d6); 1.15-1.79 (9H, m, 2-CH2, 3-CH2, 4-CH, 5-CH2, 6-CH2), 3.22 (2H, d, J = 6.4 Hz, -4CHCH2-), 4,44 (2H, s, PhCH2-), 7.25-7.36 (5H, m, Ar), 8.41(1H, s,NH), 10.55 (1H, s,  NH)【００８４】
8-ヒドロキシメチル-1,3-ジアザ-スピロ[4,5]デカン-2,4-ジノンの製造
【化３８】
2012018015.tif 000040
8-ベンジルオキシメチル-1,3-ジアザ-スピロ[4,5]デカン-2,4-ジノン1.50g（5.20mmol）をメタノール50mlに溶解し、10%Pd-C 150mgを加えた。この反応溶液を室温下、5.5気圧の水素雰囲気下で１昼夜撹拌した。反応終了後、ろ過によってパラジウムを除去し、ろ液を濃縮して得られた無色固体をメタノールから再結晶した。これにより無色結晶の8-ヒドロキシメチル-1,3-ジアザ-スピロ[4,5]デカン-2,4-ジノン（906mg, 88%）を得た。
1H NMR(DMSO-d6); 1.07-1.68 (9H, m, 2-CH2, 3-CH2, 4-CH, 5-CH2, 6-CH2), 3.19 (2H, dd, J = 5.2 Hz, HOCH2-), 4,42 (1H, t, J = 5.2 Hz, OH), 8.40(1H, s, NH), 10.55 (1H, s, NH)【００８５】
8-(p-トルエンスルオニルオキシメチル)-1,3-ジアザ-スピロ[4,5]デカン-2,4-ジノンの製造
【化３９】
2012018015.tif 000041
8-ヒドロキシメチル-1,3-ジアザ-スピロ[4,5]デカン-2,4-ジノン500mg（2.52mmol）とトシルクロリド720mg（3.79mmol）を窒素雰囲気下で、ピリジン10mlに溶解し、室温で24時間攪拌した。反応溶液に、水100mlを加え、生じた白色沈殿物をろ取し、水50mlとジエチルエーテル50mlで洗浄して、目的とする無色固体の8-(p-トルエンスルオニルオキシメチル)-1,3-ジアザ-スピロ[4,5]デカン-2,4-ジノンを（780mg, 88%）得た。
1H NMR(DMSO-d6); 1.07-1.18 (2H, m, 3-CHax, 5-CHax), 1.47-1.58 (7H, m, 2-CH2, 3-CHeq, 4-CH, 5-CHeq, 6-CH2), 2.42 (3H, s, CH3), 3.77 (2H, d, J= 6.4 Hz, -4CHCH2-), 7.48 (2H, d, J = 8.0 Hz, m-Ar), 7.78 (2H, d, J = 8.0 Hz, o-Ar), 8.36(1H, s, NH), 10.58 (1H, s, NH)【００８６】
8-ヨードメチル-1,3-ジアザ-スピロ[4,5]デカン-2,4-ジノンの製造
【化４０】
2012018015.tif 000042
8-(p-トルエンスルオニルオキシメチル)-1,3-ジアザ-スピロ[4,5]デカン-2,4-ジノン500mg（1.42mmol）をアセトンに溶解し、NaI 1.06g（7.09mmol）を加え12時間加熱還流を行った。反応溶液をろ過し、得られた白色沈殿物を水50mlとアセトン50mlで洗浄し、目的とする無色固体の8-ヨードメチル-1,3-ジアザ-スピロ[4,5]デカン-2,4-ジノン（362mg, 83%）を得た。
1H NMR(DMSO-d6); 1.15-1.24 (2H, m, 3-CHax, 5-CHax), 1.51-1.83 (7H, m, 2-CH2, 3-CHeq, 4-CH, 5-CHeq, 6-CH2), 3.10 (2H, d, J = 6.4 Hz, -4CHCH2-), 8.41(1H, s, NH), 10.60 (1H, s, NH)【００８７】
8-ウンデカヒドロドデカボランチオメチル-1,3-ジアザ-スピロ[4,5]デカン-2,4-ジノン  ビステトラメチルアンモニウム塩の製造
【化４１】
2012018015.tif 000043
8-ヨードメチル-1,3-ジアザ-スピロ[4,5]デカン-2,4-ジノン250mg（0.811mmol）と2-ドデカボラニルチオプロパンニトリルテトラメチルアンモニウム塩254mg（0.676mmol）をアセトニトリル10mlに溶解し、12時間加熱還流を行った。反応溶液をろ過し、ろ液を濃縮後、残渣をアセトン20mlに溶解し、25w%テトラメチルアンモニウムヒドロキシド246mg（0.676mmol）を加えた。生じた白色沈殿物をろ取し、アセトン10mlで洗浄後、得られた無色固体を水、アセトニトリルから再結晶し、無色結晶の8-ウンデカヒドロドデカボランチオメチル-1,3-ジアザ-スピロ[4,5]デカン-2,4-ジノンビステトラメチルアンモニウム塩（323mg, 97%）を得た。
1H NMR(DMSO-d6); 0.55-1.76 (20H, m, B12H11, 2-CH2, 3-CH2, 4-CH, 5-CH2, 6-CH2), , 2.13 (2H, d, J = 6.4 Hz, SCH2-), 3.09 (24H, s, NMe4), 8.33(1H, s, NH), 10.52 (1H, br, NH)【００８８】
1-アミノ-4-[(ウンデカヒドロドデカボラニルチオ)メチル]シクロヘキサノン-1-カルボン酸  2ナトリウム塩の製造
【化４２】
2012018015.tif 000044
8-ウンデカヒドロドデカボランチオメチル-1,3-ジアザ-スピロ[4,5]デカン-2,4-ジノン  ビステトラメチルアンモニウム塩300mg（0.609mmol）を0.5N NaOH 36mlに溶解し、5時間加熱還流を行った。反応溶液を室温に戻し、アンバーライトIR-124(H+)カラムに通した後に、アンバーライトIR-124(Na+)カラムに通した。目的物を含むフラクションを濃縮することで、目的とする淡黄色結晶の1-アミノ-4-[(ウンデカヒドロドデカボラニルチオ)メチル]シクロヘキサノン-1-カルボン酸  ２ナトリウム塩（220mg, 99%）を得た。
1H NMR(D2O); 0.75-1.65 (15H, m, B12H11, 2-CHax, 3-CHax, 5-CHax, 6-CHax), 1.71-1.87 (5H, m,2-CHeq, 3-CHeq, 4-CH, 5-CHeq, 6-CHeq), 2.32 (2H, d, J = 6.4 Hz, -4CHCH2-)【００８９】
（生物学的評価）
実施例１から４で得た化合物（ホウ素薬剤）について、下記のように生物学的アッセイを行い、細胞毒性、がん細胞への取込みおよび中性子照射による殺細胞効果について、評価する。【００９０】
細胞毒性試験（WST-8）
９６ウェルのマイクロプレートを用い、1ウェルあたりに1.5X104cell/mlの濃度のラットグリーマ細胞（C6）を播取し、室温（37℃、5%CO2）で16時間培養を行なった。培養液を吸引除去し、実施例で得たホウ素薬剤を種々の濃度で含む培養液を100mLずつそれぞれのウェルに加えた。室温（37℃、5%CO2）で48時間培養後、培養液を吸引除去し、100mLのWST-8溶液をそれぞれ加え、さらに4時間室温（37℃、5%CO2）で培養を行なった。マイクロプレートリーダーを用いて450nm（リファレンス波長：655nm）の波長を測定し、細胞を含まないウェルの吸光度をバックグランドコントロールとした。これにより各IC50値を決定した。【００９１】
実施例２で得たシス−１−アミノ−３−（ドデカボラニルチオメチル）シクロブタンカルボン酸三ナトリウム塩（cis-ACBC-BSH）、実施例３で得たトランス-１-アミノ−3−（ドデカボラニルチオメチル）シクロブタンカルボン酸三ナトリウム塩（trans-ACBC-BSH）および実施例４で得た1-アミノ-4-[(ウンデカヒドロドデカボラニルチオ)メチル]シクロヘキサノン-1-カルボン酸  2ナトリウム塩（cis-ACHC-BSH）のIC50値を以下に示す。【００９２】
また比較対照にはBNCTの臨床研究に使用されている4−ボロノ−L−フェニルアラニン（L-BPA）を設定した。
【表１】
2012018015.tif 000045
【００９３】
この結果、実施例で得られた化合物は、少なくとも、4−ボロノ−L−フェニルアラニン（L-BPA）と同程度以上の細胞毒性を示すことがわかった。【００９４】
腫瘍細胞へのホウ素薬剤の取り込み試験
1.5X107cellのラットグリーマ細胞（C6）を播取し、24時間室温（37℃、5%CO2）で培養を行なった。培養液を吸引除去し、各ホウ素薬剤を2.0mM含む培養液を加え、さらに24時間室温（37℃、5%CO2）で培養を行なった。培養液を吸引除去後、PBSを用いて細胞を3回洗浄した後に、トリプシン処理を行い、細胞を回収した。回収した細胞数をカウントし、HClO4（60%, 0.3ml）とH2O2（31%, 0.6ml）を1時間、75℃に加熱して灰化溶液を作成した。メンブランフィルターを用いて灰化溶液をろ過し、ICP-AESを用いて溶液中のホウ素濃度を測定することによって、細胞内のホウ素濃度を決定した。【００９５】
実施例２で得たシス−１−アミノ−３−（ドデカボラニルチオメチル）シクロブタンカルボン酸三ナトリウム塩（cis-ACBC-BSH）、および実施例３で得たトランス-１-アミノ−3−（ドデカボラニルチオメチル）シクロブタンカルボン酸三ナトリウム塩（trans-ACBC-BSH）の取り込み試験の結果を図１に示す。ここで、比較対照にはBNCTの臨床研究に使用されている4−ボロノ−L−フェニルアラニン（L-BPA）を設定した。【００９６】
その結果、細胞に取り込まれる割合は、本発明の化合物の方が、4−ボロノ−L−フェニルアラニン（L-BPA）より高かった。【００９７】
中性子照射による腫瘍細胞に対する殺細胞効果
5.0X106cellの細胞を播取し、24時間室温（37℃、5%CO2）で培養を行なった。培養液を吸引除去し、各ホウ素薬剤を2.0mM含む培養液を加え、さらに6時間室温（37℃、5%CO2）で培養を行なった。培養液を吸引除去後、PBSを用いて細胞を3回洗浄した後に、トリプシン処理を行い、細胞を回収した。回収した細胞を培養液に懸濁させ、5.0X103cell/mlの濃度に調製し、この懸濁液1mlをテフロン（登録商標）チューブに移した。細胞溶液を入れたテフロン（登録商標）チューブに対して、熱中性子線を0〜4.3×1012cm-2照射し、その細胞を300cellずつ培養液6ml中に播取した。9日間室温（37℃、5%CO2）で培養を行なった後、エタノールを用いてコロニーを固定し、0.1%クリスタルバイオレットで染色してからコロニー数を数えて、殺細胞効果を比較した。【００９８】
実施例２で得たシス−１−アミノ−３−（ドデカボラニルチオメチル）シクロブタンカルボン酸三ナトリウム塩（cis-ACBC-BSH）の殺細胞効果を図２に示す。比較対照にはBNCTの臨床研究に使用されている4−ボロノ−L−フェニルアラニン（L-BPA）を設定した。【００９９】
その結果、殺細胞効果は、4−ボロノ−L−フェニルアラニン（L-BPA）に比較して、本発明の化合物の方が高いことがわかった。
【図１】
2012018015.tif 000053
【図２】
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【国際調査報告】
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