(57)【要約】本発明の実施形態は、アレナウイルスの糖タンパク質によって偽型化された複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスに関連する組成物及び方法、並びに抗癌治療としての、特に補体阻害剤と組み合わせたそれらの使用に関する。【選択図】  図８
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療及び／又は防止を必要とする哺乳動物において癌又は転移を治療及び／又は防止するための方法であって、（ａ）アレナウイルスの糖タンパク質によって偽型化された複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスと、（ｂ）１つ又は複数の補体阻害剤とを含む組合せの有効量を前記哺乳動物に対して投与するステップを含む、方法。
【請求項２】
前記偽型複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスが、野生型又は遺伝子改変型のベシクロウイルスのバックボーンを有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記偽型複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスが、野生型又は遺伝子改変型のＶＳＶ又はマラバウイルスのバックボーンを有する、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記偽型複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスが、野生型又は遺伝子改変型のマラバウイルスのバックボーンを有する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記補体阻害剤が、古典的補体経路の阻害剤である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記補体阻害剤が、Ｃ１を標的とし、Ｃ１エステラーゼ阻害剤（シンライズ又はベリナート）、及びＴＮＴ００９又はＴＮＴ０１０等の抗Ｃ１ｓ抗体から任意選択で選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記補体阻害剤が、副補体経路の阻害剤である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記補体阻害剤が、補体因子Ｂ（ＣＦＢ）及び／又は補体因子Ｄ（ＣＦＤ）を標的とし、ＴＡ１０６、ＦＣＦＤ４５１４Ｓ、及びランパリズマブ等の抗体又は抗体フラグメント、抗ＣＦＢｓｉＲＮＡ、抗ＣＦＤｓｉＲＮＡ、並びにアプタマーから任意選択で選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記補体阻害剤が、古典的経路及び副経路の阻害剤である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記補体阻害剤がＣ３を標的とし、ＴＴ３０（ＣＲ２／ＣＦＨ）、ＭｉｎｉＣＦＨ、ｓＣＲ１（ＣＤＸ−１１３５）、ミクロセプト（ＡＰＴ０７０）、ＴＴ３２（ＣＲ２／ＣＲ１）、Ｈ１７等の抗体、コンプスタチン又は類似体、ペプチド模倣薬、又は４（１ＭｅＷ）／ＰＯＴ−４、４（１ＭｅＷ）／ＡＰＬ−１／２、Ｃｐ４０／ＡＭＹ−１０１、及びＰＥＧ−Ｃｐ４０等のそれらの誘導体から任意選択で選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記補体阻害剤がＣ５を標的とし、エクリズマブ、ＬＦＧ３１６、ムボディナ、ＣａＣＰ２９及びパキセリズマブ等の抗体又はそれらの抗原結合フラグメント、コバーシン（ＯｍＣｌ）等の組換えタンパク質、ＡＲＣ１００５及びＡＲＣ１９０５等のアプタマー、ＡＬＮ−ＣＣ５等の抗Ｃ５ｓｉＲＮＡ、並びにＮＧＤ  ２０００−１、ＣＣＸ１６８、ＰＭＸ５３及びＡｃＰｈｅ［Ｏｒｎ−Ｐｒｏ−Ｄ−シクロヘキシルアラニン−Ｔｒｐ−Ａｒｇ］（ＡｃＦ−［ＯｐｄＣｈａＷＲ］等のＣ５ａ受容体アンタゴニストから任意選択で選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記偽型複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスが、好ましくは古典補体経路の阻害剤及び副補体経路の阻害剤及び／又は終末経路の阻害剤を含む、少なくとも２種の補体阻害剤と組み合わせて哺乳動物に投与される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記偽型複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルス及び前記補体阻害剤が同時に投与される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記偽型複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルス及び前記補体阻害剤が逐次投与され、偽型腫瘍溶解性ラブドウイルスの初回投与が、補体阻害剤の初回投与の前に起こり、好ましくは、補体阻害剤の初回投与の３０日以内に起こる、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記偽型複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスが少なくとも８日間の期間にわたって複数回投与され、補体阻害剤の初回投与が、偽型複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスの第２又は後に続く投与の前に起こる、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記偽型複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルス及び前記補体阻害剤が逐次投与され、補体阻害剤の初回投与が、偽型複製可能腫瘍溶解性ウイルスの初回投与の前に起こり、好ましくは、偽型複製可能腫瘍溶解性ウイルスの初回投与の３０日以内に起こる、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記偽型複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスが複数回投与される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記偽型腫瘍溶解性ラブドウイルスが腫瘍抗原を発現する、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記腫瘍抗原が、ＭＡＧＥＡ３、ヒトパピローマウイルスＥ６／Ｅ７融合タンパク質、ヒト前立腺６回膜貫通型上皮抗原タンパク質、癌精巣抗原１、及びそれらのバリアントからなる群から選択される腫瘍関連抗原である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記哺乳動物が、前記腫瘍関連抗原に対する既存の免疫を有している、請求項１８又は１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記哺乳動物における前記既存の免疫が、前記偽型複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスを投与する前に、前記腫瘍関連抗原を前記哺乳動物に対して投与することによって確立されている、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスが、旧世界アレナウイルスの糖タンパク質によって偽型化されている、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記旧世界アレナウイルスの糖タンパク質が、ＬＣＭＶ、ラッサウイルス、モペイアウイルス、モバラウイルス、イッピイウイルス、マリエンタルウイルス、メリノウォークウイルス、メネクレウイルス、ガイロウイルス、バグローブウイルス、モロゴロウイルス、コドコウイルス、ランクウイルス、オカハンジャウイルス、ルーヨウイルス、レミニスコミスウイルス、コビトハツカネズミウイルス、ウンシュウウイルス、及びルナウイルスの糖タンパク質からなる群から選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記旧世界アレナウイルスの糖タンパク質がＬＣＭＶ又はラッサウイルスの糖タンパク質である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスが、新世界アレナウイルスの糖タンパク質によって偽型化されている、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記新世界アレナウイルスの糖タンパク質が、フニンウイルス、タカリベウイルス、マチュポウイルス、キュピキシウイルス、アマパリウイルス、パラナウイルス、パタワウイルス、タミアミウイルス、ピチンデウイルス、ラチノウイルス、フレキサルウイルス、グアナリトウイルス、サビアウイルス、オリベロスウイルス、ホワイトウォーターアロヨウイルス、ピリタルウイルス、パンパウイルス、ベアキャニオンウイルス、オコソコアウトラデエスピノサウイルス、アルパフアヨウイルス、トントクリークウイルス、ビッグブラッシータンクウイルス、レアルデカトルセウイルス、カタリナウイルス、スキンナータンクウイルス、及びチャパレウイルスの糖タンパク質から選択される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記新世界アレナウイルスの糖タンパク質がフニンウイルスの糖タンパク質である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記偽型複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスが、１０６〜１０１４ｐｆｕ、１０６〜１０１２ｐｆｕ、１０８〜１０１４ｐｆｕ、又は１０８〜１０１２ｐｆｕののうちの１つ又は複数の用量で投与される、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記偽型複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスが、少なくとも８日間の期間にわたって、１０６〜１０１４ｐｆｕ、１０６〜１０１２ｐｆｕ、１０８〜１０１４ｐｆｕ、又は１０８〜１０１２ｐｆｕの用量で複数回投与される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記偽型複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスが血管内及び／又は腫瘍内投与される、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記癌が、結腸直腸癌、肺癌、食道癌、黒色腫、膵癌、卵巣癌、腎細胞癌、子宮頸癌、肝癌、乳癌、頭頚部癌、前立腺癌、脳癌、膀胱癌、及び軟部組織肉腫である、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記補体阻害剤が抗体又は抗体フラグメントであり、０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇ、０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ、１〜１０ｍｇ／ｋｇ、２〜８ｍｇ／ｋｇ、３〜７ｍｇ／ｋｇ、４〜５ｍｇ／ｋｇ、又は少なくとも１０ｍｇ／ｋｇのうちの１つ又は複数の用量で投与される、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記補体阻害剤が、週当たり少なくとも３回、週当たり少なくとも４回、週当たり少なくとも５回、毎週、隔週、２週間ごとに、又は３週間ごとに投与される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記哺乳動物がヒトである、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
前記ヒトが、１つ又は複数の以前の治療レジメンに不応性である癌を有する、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
（ａ）アレナウイルスの糖タンパク質によって偽型化された複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスと（ｂ）１つ又は複数の補体阻害剤とを含む、医薬組成物。
【請求項３７】
薬学的に許容可能なアジュバント、希釈剤、又は担体と共に、（ａ）アレナウイルスの糖タンパク質によって偽型化された複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスと（ｂ）１つ又は複数の補体阻害剤とを含む、組合せ製剤。
【請求項３８】
以下の構成要素：（ａ）薬学的に許容可能なアジュバント、希釈剤、又は担体と共の、アレナウイルスの糖タンパク質によって偽型化された複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルス、及び（ｂ）薬学的に許容可能なアジュバント、希釈剤、又は担体と共の、１つ又は複数の補体阻害剤を含むパーツのキットであって、前記構成要素が、逐次、個別、及び／又は同時の投与に好適な形態で提供される、キット。
【請求項３９】
前記偽型複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスが哺乳動物において癌を治療するのに有効な量で存在し、前記補体阻害剤が哺乳動物において補体の活性を阻害するのに有効な量で存在する、請求項３８に記載のキット。
【請求項４０】
複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルス、好ましくはアレナウイルスの糖タンパク質をコードする遺伝子を含む野生型又は弱毒化されたＶＳＶ又はマラバウイルスであって、前記アレナウイルスの糖タンパク質がＬＣＭＶの糖タンパク質以外であり、マラバウイルス又はＶＳＶのＧタンパク質をコードする機能的遺伝子を欠如している、複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルス。
【請求項４１】
前記ラブドウイルスが、フニン若しくはラッサウイルスの糖タンパク質によって偽型化された野生型若しくは弱毒化されたＶＳＶであるか、又はフニン若しくはラッサウイルスの糖タンパク質によって偽型化された野生型若しくは弱毒化されたマラバウイルスである、請求項４０に記載の複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルス。
【請求項４２】
請求項４０又は請求項４１に記載の偽型複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスの有効量と、薬学的に許容可能なアジュバント、希釈剤、又は担体とを含む、医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［ＩＩＩ．  技術分野］
本発明は、一般的にはウイルス学及び医学に関する。ある態様において、本発明は腫瘍溶解性ウイルス、特にキメラ腫瘍溶解性ラブドウイルス、及び、癌の治療のための補体阻害剤と組み合わせたそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
［ＩＶ．  背景技術］
腫瘍溶解性ウイルスは、正常組織には影響を与えないままとしつつ、悪性細胞に特異的に感染し、悪性細胞の中で複製し、悪性細胞を殺傷する。いくらかの腫瘍溶解性ウイルスは、様々な新生物の治療のための臨床評価の進んだステージに到達してきている。
【０００３】
水疱性口炎ウイルス（ＶＳＶ）、マラバウイルス（ＭＲＢ）を含むラブドウイルスは、広範に前臨床的に研究されてきている、腫瘍溶解性ラブドウイルスの２つの例である。ラブドウイルスは、ウイルスが遺伝子再結合、宿主ゲノムへの組込み、又は悪性の形質転換の可能性を全く示さないので、有望な臨床候補である。このウイルスは、広範囲の腫瘍細胞にわたって溶解性であり、Ｉ型インターフェロンに対して、非常に感受性であり、治療指数を極めて大きいものとしている。さらに、ヒトの感染はまれであり、通常は無症候であり、ヒトにおいて既存の免疫が実質的に存在しない。腫瘍溶解性ＶＳＶ及びＭＲＢは、現在、フェーズＩヒト臨床治験において、臨床的に評価されている。
【０００４】
いくつかの研究はマウスモデルを使用し、腫瘍溶解性ラブドウイルスによる初回インビボ治療の後、強い中和抗体応答が起こり、その後のウイルスの投与の有効性を大幅に低減することを実証してきている。当該技術分野における重要な進歩は、循環する腫瘍溶解性ラブドウイルスの抗体中和を克服する治療方法から生じるであろう。
【発明の概要】
【０００５】
いくつかの実施形態において、ラブドウイルスの糖タンパクの代わりのアレナウイルスエンベロープ糖タンパク質を含む偽型複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルス、及び、アレナウイルスの糖タンパク質を含む偽型複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスと薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物が提供される。いくつかの実施形態において、偽型複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスは、野生型又は組換え型ベシクロウイルスであり、特に水疱性口炎ウイルス（ＶＳＶ）又はマラバウイルス（ＭＲＢ）の糖タンパク質を置き換えるアレナウイルスの糖タンパク質を有する、野生型又は組換え型水疱性口炎ウイルス（ＶＳＶ）又はマラバウイルス（ＭＲＢ）である。いくつかの実施形態において、偽型腫瘍溶解性ラブドウイルスは、ウイルスの腫瘍選択性及び／又は腫瘍溶解性効果を向上する１つ又は複数の遺伝的改変を含むＶＳＶ又はＭＲＢである。他の好ましい実施形態において、アレナウイルスの糖タンパク質は、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）の糖タンパク質、ラッサウイルスの糖タンパク質、フニンウイルスの糖タンパク質、又はそれらのバリアントである。特に好ましい実施形態において、ＶＳＶ又はマラバウイルスの糖タンパク質を置き換える、ラッサ又はフニンの糖タンパク質を有する、偽型腫瘍溶解性ＶＳＶ又はマラバウイルスが提供される。いくつかの実施形態において、偽型複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスは、同一の遺伝的背景を有する非偽型複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスと比べて、低減された向神経性を示す。他の実施形態において、偽型複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスは、その内容がいずれも参照により本明細書に組み込まれる、ＷＩＰＯ公開番号国際公開第２０１４／１２７４７８号の段落［００７１］〜［００８２］及び米国特許出願公開第２０１２／００１４９９０号の段落［００４２］において述べられているもののような１つ又は複数の腫瘍抗原をコードする異種核酸配列、及び／又は１つ又は複数のサイトカインをコードする異種核酸配列、及び／又は１つ又は複数の免疫チェックポイント阻害剤をコードする異種核酸配列を含む。
【０００６】
他の実施形態において、癌を治療及び／又は防止する方法、及び／又は転移を治療及び／又は防止する方法であって、アレナウイルスの糖タンパク質を含む偽型複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスの有効量を、治療及び／又は防止を必要とする哺乳動物に投与することを含む、方法が提供される。好ましい実施形態において、腫瘍溶解性ラブドウイルスは、ラッサウイルス又はフリンウイルスの糖タンパク質によって偽型化されたＶＳＶ又はマラバウイルスであり、哺乳動物はヒトである。哺乳動物が、全身（例えば血管内）及び／又は腫瘍内経路の投与によって、偽型複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスの複数回投与（２、３、４、５、６、又はそれ以上の投与）を投与されることが好ましい。他の好ましい実施形態において、治療及び／又は防止されるべき癌は、肝癌、脳癌（例えば神経膠腫）、黒色腫、前立腺癌、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、肺癌、腎癌、膵癌、食道癌、及び膀胱癌から選択される。
【０００７】
関連する実施形態において、（ｉ）アレナウイルスの糖タンパク質を含む偽型複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスと、（ｉｉ）補体阻害剤とを含む、医薬的組合せが提供される。好ましい実施形態において、癌を治療及び／又は防止する方法、及び／又は転移を治療及び／又は防止する方法であって、癌と診断された、又は癌若しくは転移を起こす危険性を有する哺乳動物に対して、（ｉ）癌及び／又は転移を治療及び／又は防止する有効量のアレナウイルスの糖タンパク質を含む偽型複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスと、（ｉｉ）補体活性を阻害する有効量の補体阻害剤とを共投与することを含む、方法が提供される。組合せの偽型複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスが、腫瘍内、全身、特に血管内（静脈内及び／又は動脈内）、又は頭蓋内投与されること、並びに複数回投与されることが好ましい。いくつかの実施形態において、偽型複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスの治療濃度は、哺乳動物内において、単独で（すなわち、補体阻害剤の非存在において）投与されるときの同一の偽型複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスと比べて、増加した時間、維持される。
【０００８】
関連する実施形態において、哺乳動物におけるアレナウイルスの糖タンパク質を含む偽型複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスに対する抗体の中和効果を防ぐか又は低減する方法であって、偽型複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスと共に１つ又は複数の補体阻害剤を哺乳動物に対して共投与することを含む、方法が提供される。哺乳動物がヒトであることが好ましい。
【０００９】
他の関連する実施形態において、上記ウイルスの上記哺乳動物に対する単回又は複数回投与に続くアレナウイルスの糖タンパク質によって偽型化された偽型複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスの持続を向上させる方法であって、偽型複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスと共に１つ又は複数の補体阻害剤を哺乳動物に対して共投与することを含む、方法が提供される。哺乳動物がヒトであることが好ましい。
【００１０】
組合せの補体阻害剤は、Ｃ３ａ若しくはＣ３ａ受容体を介するシグナル伝達、又はＣ５ａ若しくはＣ５ａ受容体を介するシグナル伝達を生じる補体活性化経路の活性化及び／又は伝播を阻害、防止又は低減する。組合せにおいて有用な補体阻害剤は、古典経路、副経路、又はレクチン経路に作用するものを含む。いくつかの実施形態において、組合せの補体阻害剤は、古典経路を阻害する。他の実施形態において、組合せの補体阻害剤は、副経路を阻害する。さらに他の実施形態において、組合せの補体阻害剤は、古典経路及び副経路を阻害し、この場合、補体阻害剤は、Ｃ３又はＣ５等の終末経路の補体を標的とすることが好ましい。
【００１１】
組合せのラブドウイルスは、野生型又は遺伝子改変型の、アラジャス（Ａｒａｊａｓ）ウイルス、チャンディプラウイルス、球菌ウイルス、イスファハン（Ｉｓｆａｈａｎ）ウイルス、マラバウイルス、ピリウイルス、水疱性口内炎アラゴウイルス、ＢｅＡｎ１５７５７５ウイルス、ボテクウイルス、カルチャキ（Ｃａｌｃｈａｑｕｉ）ウイルス、アメリカウナギのラブドウイルス、グレーロッジ（Ｇｒａｙ  Ｌｏｄｇｅ）ウイルス、ユロナ（Ｊｕｒｏｎａ）ウイルス、クラマス（Ｋｌａｍａｔｈ）ウイルス、クワッタ（Ｋｗａｔｔａ）ウイルス、ラホヤ（Ｌａ  Ｊｏｙａ）ウイルス、マルペススプリング（Ｍａｌｐａｉｓ  Ｓｐｒｉｎｇ）ウイルス、マウントエルゴンコウモリウイルス、ペリネ（Ｐｅｒｉｎｅｔ）ウイルス、ツパイ（Ｔｕｐａｉａ）ウイルス、ファーミントン（Ｆａｒｍｉｎｇｔｏｎ）、バイアグランデ（Ｂａｈｉａ  Ｇｒａｎｄｅ）ウイルス、ミュアスプリングス（Ｍｕｉｒ  Ｓｐｒｉｎｇｓ）ウイルス、リードランチ（Ｒｅｅｄ  Ｒａｎｃｈ）ウイルス、ハートパークウイルス、フランダーズウイルス、カメセ（Ｋａｍｅｓｅ）ウイルス、モスケイロ（Ｍｏｓｑｕｅｉｒｏ）ウイルス、モスリル（Ｍｏｓｓｕｒｉｌ）ウイルス、バルールウイルス、フクオカ（Ｆｕｋｕｏｋａ）ウイルス、ケルンキャニオンウイルス、コルビッソン（Ｎｋｏｌｂｉｓｓｏｎ）ウイルス、ルダンテック（Ｌｅ  Ｄａｎｔｅｃ）ウイルス、キューラリバ（Ｋｅｕｒａｌｉｂａ）ウイルス、コネチカット（Ｃｏｎｎｅｃｔｉｃｕｔ）ウイルス、ニューミント（Ｎｅｗ  Ｍｉｎｔｏ）ウイルス、ソーグラス（Ｓａｗｇｒａｓｓ）ウイルス、チャコウイルス、セナ・マドレイラ（Ｓｅｎａ  Ｍａｄｕｒｅｉｒａ）ウイルス、ティンボ（Ｔｉｍｂｏ）ウイルス、アルンピバーウイルス、アルアクウイルス、バンゴランウイルス、ビンボウイルス、ビベンスアーム（Ｂｉｖｅｎｓ  Ａｒｍ）ウイルス、ブルークラブ（Ｂｌｕｅ  ｃｒａｂ）ウイルス、シャルルヴィル（Ｃｈａｒｌｅｖｉｌｌｅ）ウイルス、コースタルプレインズ（Ｃｏａｓｔａｌ  Ｐｌａｉｎｓ）ウイルス、ＤａｋＡｒＫ７２９２ウイルス、エントアメーバ（Ｅｎｔａｍｏｅｂａ）ウイルス、ガルバ（Ｇａｒｂａ）ウイルス、ゴサス（Ｇｏｓｓａｓ）ウイルス、ハンプティドゥー（Ｈｕｍｐｔｙ  Ｄｏｏ）ウイルス、ジョインジャカカ（Ｊｏｉｎｊａｋａｋａ）ウイルス、カンナマンガラム（Ｋａｎｎａｍａｎｇａｌａｍ）ウイルス、コロンゴ（Ｋｏｌｏｎｇｏ）ウイルス、コールピンヤ（Ｋｏｏｌｐｉｎｙａｈ）ウイルス、コトンコン（Ｋｏｔｏｎｋｏｎ）ウイルス、ランジャ（Ｌａｎｄｊｉａ）ウイルス、マニトバ（Ｍａｎｉｔｏｂａ）ウイルス、マルコ（Ｍａｒｃｏ）ウイルス、ナソウル（Ｎａｓｏｕｌｅ）ウイルス、ナバロ（Ｎａｖａｒｒｏ）ウイルス、ガインガン（Ｎｇａｉｎｇａｎ）ウイルス、オークベール（Ｏａｋ−Ｖａｌｅ）ウイルス、オボジャング（Ｏｂｏｄｈｉａｎｇ）ウイルス、オイタ（Ｏｉｔａ）ウイルス、オウァンゴ（Ｏｕａｎｇｏ）ウイルス、パリークリーク（Ｐａｒｒｙ  Ｃｒｅｅｋ）ウイルス、リオグランデシクリッドウイルス（Ｒｉｏ  Ｇｒａｎｄｅ  ｃｉｃｈｌｉｄ）ウイルス、サンジンバ（Ｓａｎｄｊｉｍｂａ）ウイルス、シグマウイルス、スリ���ル（Ｓｒｉｐｕｒ）ウイルス、スイートウォーターブランチ（Ｓｗｅｅｔｗａｔｅｒ  Ｂｒａｎｃｈ）ウイルス、チブロガルガン（Ｔｉｂｒｏｇａｒｇａｎ）ウイルス、キシブレマ（Ｘｉｂｕｒｅｍａ）ウイルス、ヤタ（Ｙａｔａ）ウイルス、ロードアイランド、アデレードリバー（Ａｄｅｌａｉｄｅ  Ｒｉｖｅｒ）ウイルス、ベリマー（Ｂｅｒｒｉｍａｈ）ウイルス、キンバリー（Ｋｉｍｂｅｒｌｅｙ）ウイルス、又はウシ流行熱ウイルスを非限定的に含む。いくつかの好ましい実施形態において、偽型腫瘍溶解性ラブドウイルスは、偽型の野生型又は組換え型のベシクロウイルスである。他の好ましい実施形態において、組合せの腫瘍溶解性ラブドウイルスは、野生型又は組換え型の、ＶＳＶ、ファーミントン、マラバ、カラジャス、ミュアスプリングス、又はバイアグランデのウイルス、それらのバリアントを含むウイルスのバックグラウンド系統に基づく。特に好ましい実施形態において、組合せの偽型腫瘍溶解性ラブドウイルスは、ＶＳＶ又はマラバラブドウイルスのバックグラウンド系統に基づく。他の特に好ましい実施形態において、腫瘍溶解性ラブドウイルスは、腫瘍選択性及び／又はウイルスの腫瘍溶解性効果を向上する１つ又は複数の遺伝的改変を含むＶＳＶ又はマラバラブドウイルスである。
【００１２】
関連する実施形態において、併用療法による偽型腫瘍溶解性ラブドウイルスは、ＷＩＰＯ公開番号国際公開第２０１４／１２７４７８号の段落［００７１］〜［００８２］及び米国特許出願公開第２０１２／００１４９９０号の段落［００４２］において述べられているもののような１つ又は複数の腫瘍抗原を発現するよう遺伝子操作を受けている。好ましい実施形態において、偽型腫瘍溶解性ラブドウイルス（例えばＶＳＶ又はマラバ系統）は、ＭＡＧＥＡ３、ヒトパピローマウイルスＥ６／Ｅ７融合タンパク質、ヒト前立腺６回膜貫通型上皮抗原タンパク質、若しくは癌精巣抗原１、又はそれらのバリアントを発現する。特に好ましい実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、ＭＡＧＥＡ３、ヒトパピローマウイルスＥ６／Ｅ７融合タンパク質、ヒト前立腺６回膜貫通型上皮抗原タンパク質、若しくは癌精巣抗原１、又はそれらのバリアントを発現する、マラバ及びＶＳＶｄｅｌｔａ５１から選択される腫瘍溶解性ラブドウイルスである。
【００１３】
他の実施形態において、併用療法による偽型腫瘍溶解性ラブドウイルスは、１つ又は複数のサイトカインを発現するよう遺伝子操作を受けている。
【００１４】
他の実施形態において、１つ又は複数の免疫チェックポイント阻害剤は、好ましくは治療及び／又は防止を必要とするヒト対象において、癌又は転移を治療及び／又は防止するための補体阻害剤と偽型腫瘍溶解性ラブドウイルスとの医薬的組合せと共投与される。
【００１５】
組合せの偽型腫瘍溶解性ラブドウイルスは、１０、１００、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１０１０、１０１１、１０１２、１０１３、１０１４、又はそれ以上のウイルス粒子（ｖｐ）又はプラーク形成単位（ｐｆｕ）ののうちの１つ又は複数の用量で投与され得る。好ましい実施形態において、偽型腫瘍溶解性ラブドウイルスは、野生型又は遺伝子改変型の、ＶＳＶ又はマラバの糖タンパク質を置き換えるラッサ又はフニンの糖タンパク質を有するＶＳＶ又はマラバであり、任意選択で、１つ又は複数の腫瘍抗原及び／又はサイトカインを発現し、癌を有するヒトに対して、１０６〜１０１４ｐｆｕ、１０６〜１０１２ｐｆｕ、１０８〜１０１４ｐｆｕ、又は１０８〜１０１２ｐｆｕののうちの１つ又は複数の用量で投与される。投与は、腫瘍内、腹腔内、静脈内、動脈内、筋肉内、皮膚内、皮内、頭蓋内、皮下、又は鼻腔内によるものであり得る。好ましい実施形態において、偽型腫瘍溶解性ラブドウイルスは、注入、灌流等を含む、全身、特に血管内（静脈内及び／又は動脈内）投与によって投与される。
【００１６】
偽型腫瘍溶解性ラブドウイルスと補体阻害剤は、投与を必要とする哺乳動物に対して、同時又は逐次に投与され、同一の製剤の一部として、又は異なる製剤中で投与され得る。いくつかの実施形態において、補体阻害剤の初回投与は、偽型腫瘍溶解性ラブドウイルスの初回投与の後であるが、続く（例えば２回目の）投与より前に投与される。他の実施形態において、偽型腫瘍溶解性ラブドウイルスの初回投与よりも、補体阻害剤の投与が先行し、任意選択で、偽型腫瘍溶解性ラブドウイルスの各々の続く投与よりも、補体阻害剤の投与が先行する。したがって、いくつかの実施形態において、補体阻害剤の初回投与は、偽型腫瘍溶解性ラブドウイルスの初回投与より前に投与され、補体阻害剤の２回目投与は、偽型腫瘍溶解性ラブドウイルスの２回目の投与等より前に投与される。
【００１７】
本明細書において記載される組合せによって治療されるべき癌は、白血病、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、骨髄芽球前骨髄球、骨髄単球性単球性赤白血病、慢性白血病、慢性骨髄性（顆粒球）白血病、慢性リンパ球性白血病、マントル細胞リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、バーキットリンパ腫及び辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、真性赤血球増加リンパ腫、ホジキン病、非ホジキン病、多発性骨髄腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、Ｈ鎖病、固形腫瘍、肉腫、及び癌腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫（ｃｈｒｏｎｄｒｏｓａｒｃｏｍａ）、骨原性肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、リンパ管肉腫、リンパ管内皮細胞肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸肉腫、結腸直腸癌、膵癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性肺癌、腎細胞癌、肝細胞腫、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎児性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、子宮癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫瘍、希突起神経膠腫、髄膜腫（ｍｅｎａｎｇｉｏｍａ）、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、鼻咽腔癌、食道癌、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳及び中枢神経系（ＣＮＳ）の癌、子宮頸癌、絨毛癌、結腸直腸癌、結合組織癌、消化器系癌、子宮内膜癌、食道癌、眼癌、頭頚部癌、胃癌、上皮内新生物、腎癌、喉頭癌、肝癌、肺癌（小細胞肺癌、扁平上皮非小細胞肺癌、及び非扁平上皮非小細胞肺癌を含む）、黒色腫（転移性黒色腫を含む）、神経芽細胞腫、口腔癌（例えば、口唇、舌、口腔、及び咽頭を含む）、卵巣癌、膵癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、直腸癌、呼吸器系の癌、肉腫、皮膚癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、並びに泌尿器系の癌を非限定的に含む。いくつかの好ましい実施形態において、治療すべき癌は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、乳癌（例えば、ホルモン不応性転移性乳癌）、頭頚部癌（例えば、頭頚部扁平上皮細胞癌）、転移性結腸直腸癌、ホルモン感受性又はホルモン不応性前立腺癌、結腸直腸癌、卵巣癌、肝細胞癌、腎細胞癌、軟部組織肉腫、及び小細胞肺癌から選択される。
【００１８】
一態様において、組合せによって治療されるべき対象は、１つ又は複数の化学療法薬による治療に対して不応性及び／又は１つ又は複数の抗体による治療に対して不応性である、癌を有するヒトである。
【００１９】
さらなる態様において、方法は、併用療法の前に、併用療法と同時に、又は併用療法の後に、対象に対する、化学療法薬の投与、標的治療、照射、化学療法、又は温熱療法をさらに含む。
【００２０】
本発明の関連する実施形態は、哺乳動物において、癌の治療において使用するための、又は癌を治療する医薬の製造において使用するための医薬的組合せを提供し、ここで、組合せは、偽型腫瘍溶解性ラブドウイルス、好ましくは、ＬＣＭＶ、ラッサ、又はフニンの糖タンパク質によって偽型化された野生型又は弱毒化されたＶＳＶ又はマラバウイルスと、補体阻害剤とを含む。いくつかの実施形態において、医薬的組合せは、Ｃ３阻害剤及び／又はＣ５阻害剤と、ＬＣＭＶ、ラッサ、又はフニンの糖タンパク質によって偽型化されたＶＳＶｄｅｌｔａ５１又はマラバウイルスとを含む。
【００２１】
さらなる態様において、哺乳動物において癌を治療するのに使用するキットであって、偽型腫瘍溶解性ラブドウイルス、好ましくは、偽型の野生型又は弱毒化されたマラバ又はＶＳＶと、補体阻害剤とを含む、キットが提供される。いくつかの実施形態において、キットは、ＭＡＧＥＡ３、ヒトパピローマウイルスＥ６／Ｅ７融合タンパク質、ヒト前立腺６回膜貫通型上皮抗原タンパク質、癌精巣抗原１、又はそれらのバリアントを発現するＶＳＶｄｅｌｔａ５１又はマラバ系統のラブドウイルスと、補体阻害剤とを含む。キットは、癌を治療するための組合せの使用のための説明書をさらに含み得る。
【００２２】
本発明の方法及び組成物は、腫瘍溶解性又は複製の欠損したウイルス等の第２の治療用ウイルスを含み得る。腫瘍溶解性は、典型的には、癌細胞を殺傷すること、溶解すること、又は停止させることのできる因子を指す。腫瘍溶解性ウイルスに関して、用語は、癌細胞においていくらか複製でき、癌細胞の死、溶解、増殖の停止を引き起こし、典型的には非癌細胞に対して最小限の毒作用を有する、ウイルスを指す。第２のウイルスは、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、ニューカッスル病ウイルス、アルファウイルス、パルボウイルス、ヘルペスウイルス、ラブドウイルス、非ＶＳＶラブドウイルス等を含むが、これらに限定されない。他の態様において、組成物は、薬学的に許容可能な組成物である。組成物はまた、化学療法薬、放射線治療薬、又は免疫治療薬等の第２の抗癌剤を含み得る。
【００２３】
本発明の他の実施形態は、本願全体にわたって論じられている。本発明の１つの態様に関して論じられている全ての実施形態は、本発明の他の態様に対して同様に適用され、その逆もまた同様である。発明を実施するための形態及び実施例のセクションにおける実施形態は、本発明の全ての態様に適用可能な本発明の非限定的な実施形態であると理解されるべきである。
【００２４】
用語「阻害する」、「低減する」、若しくは「防止する」、又はこれらの用語の任意の変形は、特許請求の範囲及び／又は明細書において使用されるとき、所望の結果を達成するための、任意の測定可能な低減又は完全な阻害を含む。所望の結果は、癌性又は過剰増殖性の状態の好転、低減、緩徐化、又は撲滅、及び、改善された生活の質又は寿命の延長を含むが、これらに限定されない。
【００２５】
「補体阻害剤」は、３つの活性化経路又は終末経路のいずれかの活性化を防止又は低減する任意の薬剤である。これは、最終的には、Ｃ３又はＣ５の切断、及び、後に続く細胞又は病原体の膜表面への会合した分子の沈着と重要なシグナル伝達分子の放出とを防止することができる。補体阻害剤は、１つ又は複数の補体経路、すなわち、古典経路、副経路、又はレクチン経路に作用することができる。「Ｃ３阻害剤」は、Ｃ３のＣ３ａとＣ３ｂへの切断を防止又は低減する分子又は物質である。「Ｃ５ａ阻害剤」は、Ｃ５ａの活性を防止又は低減する分子又は物質である。「Ｃ５ａＲ阻害剤」は、Ｃ５ａのＣ５ａ受容体に対する結合を防止又は低減する分子又は物質である。「Ｃ３ａＲ阻害剤」は、Ｃ３ａのＣ３ａ受容体に対する結合を防止又は低減する分子又は物質である。「Ｄ因子阻害剤」は、Ｄ因子の活性を防止又は低減する分子又は物質である。「Ｂ因子阻害剤」は、Ｂ因子の活性を防止又は低減する分子又は物質である。「Ｃ４阻害剤」は、Ｃ４のＣ４ｂとＣ４ａへの切断を防止又は低減する分子又は物質である。「Ｃ１ｑ阻害剤」は、抗体抗原複合体、ビリオン、感染細胞、又はＣ１ｑが結合して補体活性化を開始する他の分子へのＣ１ｑの結合を防止又は低減する分子又は物質である。本明細書において記載されている補体阻害剤の任意のものは、当業者によって理解されるような、抗体又は抗体フラグメントを含み得る。
【００２６】
単語「ａ」又は「ａ」の使用は、特許請求の範囲及び／又は明細書において、用語「含む」と組み合わせて使用されるとき、「１」を意味し得るが、それはまた、「１つ又は複数」、「少なくとも１つ」、及び「１つ又は１つ又は複数」の意味と矛盾しない。
【００２７】
本出願全体にわたって、用語「約」は、値が、値を決定するために使用される装置又は方法についての誤差の標準偏差を含むことを示すのに使用される。
【００２８】
特許請求の範囲における用語「又は」の使用は、本開示が選択肢のみ、及び「及び／又は」を指す定義を裏付けるとしても、選択肢のみを指すと明示的に示されない限り、又は選択肢が互いに排他的である場合を除いて、「及び／又は」を意味するのに使用される。
【００２９】
本明細書及び特許請求の範囲の請求項（複数可）において使用されるとき、用語「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」（並びに、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」及び「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」等の含むことの任意の形態）、「有すること（ｈａｖｉｎｇ）」（並びに、「有する（ｈａｖｅ）」及び「有する（ｈａｓ）」等の有することの任意の形態）、又は「含むこと（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」（並びに、「含む（ｃｏｎｔａｉｎｓ）」及び「含む（ｃｏｎｔａｉｎ）」等の含むことの任意の形態）は、両立的又はオープンエンドであり、追加の、言及されていない要素又は方法のステップを排除しない。
【００３０】
「併用療法」は、組合せの成分の同時、逐次、又は個別の投与を想定することは理解されよう。本発明の一態様において、「併用療法」は、偽型腫瘍溶解性ラブドウイルスと補体阻害剤との同時投与を想定する。本発明のさらなる態様において、「併用療法」は、偽型腫瘍溶解性ラブドウイルスと補体阻害剤との逐次投与を想定する。本発明の別の態様において、「併用療法」は、偽型腫瘍溶解性ラブドウイルスと補体阻害剤との個別の投与を想定する。偽型腫瘍溶解性ラブドウイルスと補体阻害剤の投与が逐次又は個別である場合、偽型腫瘍溶解性ラブドウイルスと補体阻害剤は、治療薬が共同的、例えば相乗効果を示すことを可能にする時間間隔内に投与される。好ましい実施形態において、偽型腫瘍溶解性ラブドウイルスと補体阻害剤は、互いに、１、２、３、６、１２、２４、４８、７２時間以内、又は４、５、６、若しくは７日間以内、又は８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、若しくは３１日間以内に投与される。
【００３１】
本発明の他の目的、特徴及び利点は、以下の詳細な説明により明確となるであろう。しかしながら、本発明の精神及び範囲内での様々な変更及び修正は、この詳細な説明から当業者に明らかになるであろうから、詳細な説明及び具体的な実施例は、本発明の具体的な実施形態を示しているが、単に例示として与えられているにすぎないことは理解されるはずである。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
以下の図面は本明細書の一部を形成し、本発明の特定の態様をさらに示すために含まれる。本発明は、本明細書に提示される特定の実施形態の詳細な説明と組み合わせてこれらの図面の１つ又は複数を参照することにより、よりよく理解できる。
【図１Ａ】ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇ抗体は、補体の存在下においてのみ、ウイルス中和を誘導するが、ＭＧ１抗体は誘導しない。図１Ａ：インビボ及びインビトロの処理スケジュール。ラットは、０日目に、１０７プラーク形成単位（ｐｆｕ）のＭＧ１（Ｇタンパク質Ｑ２４２Ｒ及びＭタンパク質Ｌ１２３Ｗ点変異を含むマラバ）又はＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇ（ＬＣＭＶの糖タンパク質によって偽型化されたマラバウイルス）を静脈内（ＩＶ）にワクチン接種した。１５日目に、各々の群から半分のラットを、補体を枯渇させるために３５Ｕのコブラ毒因子（ＣＶＦ）で処理した。１６日目に、ラットから血液を採取した。図１Ｂ〜Ｃ：ラットの血液、血漿、又は熱不活化血漿による、ＭＧ１（図１Ｂ）又はＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇ（図１Ｃ）のエクスビボ中和。補体枯渇を伴うか、又は伴わない、ワクチン接種されていない（ナイーブ）マウスからのラットの血液、血漿、又は熱不活化血漿によるＭＧ１又はＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇの中和を比較のために示す。免疫／補体の状態当たり１匹のラットを使用し、データを、テクニカルレプリケート（ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  ｒｅｐｌｉｃａｔｅｓ）±ＳＤとして表す。
【図１Ｂ】ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇ抗体は、補体の存在下においてのみ、ウイルス中和を誘導するが、ＭＧ１抗体は誘導しない。図１Ａ：インビボ及びインビトロの処理スケジュール。ラットは、０日目に、１０７プラーク形成単位（ｐｆｕ）のＭＧ１（Ｇタンパク質Ｑ２４２Ｒ及びＭタンパク質Ｌ１２３Ｗ点変異を含むマラバ）又はＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇ（ＬＣＭＶの糖タンパク質によって偽型化されたマラバウイルス）を静脈内（ＩＶ）にワクチン接種した。１５日目に、各々の群から半分のラットを、補体を枯渇させるために３５Ｕのコブラ毒因子（ＣＶＦ）で処理した。１６日目に、ラットから採取した。図１Ｂ〜Ｃ：ラットの血液、血漿、又は熱不活化血漿による、ＭＧ１（図１Ｂ）又はＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇ（図１Ｃ）のエクスビボ中和。補体枯渇を伴うか、又は伴わない、ワクチン接種されていない（ナイーブ）マウスからのラットの血液、血漿、又は熱不活化血漿によるＭＧ１又はＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇの中和を比較のために示す。免疫／補体の状態当たり１匹のラットを使用し、データを、テクニカルレプリケート（ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  ｒｅｐｌｉｃａｔｅｓ）±ＳＤとして表す。
【図１Ｃ】ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇ抗体は、補体の存在下においてのみ、ウイルス中和を誘導するが、ＭＧ１抗体は誘導しない。図１Ａ：インビボ及びインビトロの処理スケジュール。ラットは、０日目に、１０７プラーク形成単位（ｐｆｕ）のＭＧ１（Ｇタンパク質Ｑ２４２Ｒ及びＭタンパク質Ｌ１２３Ｗ点変異を含むマラバ）又はＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇ（ＬＣＭＶの糖タンパク質によって偽型化されたマラバウイルス）を静脈内（ＩＶ）にワクチン接種した。１５日目に、各々の群から半分のラットを、補体を枯渇させるために３５Ｕのコブラ毒因子（ＣＶＦ）で処理した。１６日目に、ラットから採取した。図１Ｂ〜Ｃ：ラットの血液、血漿、又は熱不活化血漿による、ＭＧ１（図１Ｂ）又はＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇ（図１Ｃ）のエクスビボ中和。補体枯渇を伴うか、又は伴わない、ワクチン接種されていない（ナイーブ）マウスからのラットの血液、血漿、又は熱不活化血漿によるＭＧ１又はＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇの中和を比較のために示す。免疫／補体の状態当たり１匹のラットを使用し、データを、テクニカルレプリケート（ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  ｒｅｐｌｉｃａｔｅｓ）±ＳＤとして表す。
【図２Ａ】ＬＣＭＶの糖タンパク質に起因するウイルスの補体依存性抗体中和はラブドウイルスのバックボーンとは独立している。図２Ａ：ラットは、１０８ｐｆｕのＭＧ１若しくはＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇ又は１０７ｐｆｕの野生型マラバ（マラバｗｔ）、ＶＳＤｄ５１、若しくはＶＳＶ  ＬＣＭＶ  Ｇ（ＬＣＭＶの糖タンパク質によって偽型化されたＶＳＶ）をワクチン接種した。ワクチン接種後１４日目に血清を採取した。ウイルス中和は、ナイーブラット血清（補体の源）、又は、Ｃ３を枯渇させるためにコブラ毒因子（ＣＶＦ）によって予め処理したナイーブラット血清を含む、デキストロースゼラチンベロナール緩衝液（ＧＶＢ対照緩衝液）と混合した熱不活化免疫血清との約５×１０５ｐｆｕの対応するウイルスのインキュベーション（１時間３７℃）に続くエクスビボプラークアッセイによって評価した。図１Ｂ：各々の群について、投入したウイルスの相対的な回復を示す。Ｎ＝２ラット／群；データは、群平均±ＳＤとして表す。
【図２Ｂ】ＬＣＭＶの糖タンパク質に起因するウイルスの補体依存性抗体中和はラブドウイルスのバックボーンとは独立している。図２Ａ：ラットは、１０８ｐｆｕのＭＧ１若しくはＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇ又は１０７ｐｆｕの野生型マラバ（マラバｗｔ）、ＶＳＤｄ５１、若しくはＶＳＶ  ＬＣＭＶ  Ｇ（ＬＣＭＶの糖タンパク質によって偽型化されたＶＳＶ）をワクチン接種した。ワクチン接種後１４日目に血清を採取した。ウイルス中和は、ナイーブラット血清（補体の源）、又は、Ｃ３を枯渇させるためにコブラ毒因子（ＣＶＦ）によって予め処理したナイーブラット血清を含む、デキストロースゼラチンベロナール緩衝液（ＧＶＢ対照緩衝液）と混合した熱不活化免疫血清との約５×１０５ｐｆｕの対応するウイルスのインキュベーション（１時間３７℃）に続くエクスビボプラークアッセイによって評価した。図１Ｂ：各々の群について、投入したウイルスの相対的な回復を示す。Ｎ＝２ラット／群；データは、群平均±ＳＤとして表す。
【図３Ａ】ＬＣＭＶ  Ｇ偽型ラブドウイルス抗体中和の、補体依存性の性質は、げっ歯類特異的な現象ではない。図３Ａ：２匹のカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ  ｍａｃａｑｕｅｓ）に、１０１０ｐｆｕを静脈内（動物１）に、又は１０９ｐｆｕを頭蓋内（動物２）に投与した。中和は、カニクイザル血清（補体の源）、又は、ＣＰ４０によって処理したカニクイザル血清（阻害された補体）を含む、対照緩衝液を含む熱不活化免疫血清のエクスビボインキュベーション（１時間３７℃）に続いて評価した。図３Ｂ：ワクチン接種後の様々な時点における動物１の免疫血清からのＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇウイルスの相対的な回復を示す。図３Ｃ：ワクチン接種後の様々な時点における動物２の免疫血清からのＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇウイルスの相対的な回復を示す。データを、テクニカルレプリケート±ＳＤとして表す。
【図３Ｂ】ＬＣＭＶ  Ｇ偽型ラブドウイルス抗体中和の、補体依存性の性質は、げっ歯類特異的な現象ではない。図３Ａ：２匹のカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ  ｍａｃａｑｕｅｓ）に、１０１０ｐｆｕを静脈内（動物１）に、又は１０９ｐｆｕを頭蓋内（動物２）に投与した。中和は、カニクイザル血清（補体の源）、又は、ＣＰ４０によって処理したカニクイザル血清（阻害された補体）を含む、対照緩衝液を含む熱不活化免疫血清のエクスビボインキュベーション（１時間３７℃）に続いて評価した。図３Ｂ：ワクチン接種後の様々な時点における動物１の免疫血清からのＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇウイルスの相対的な回復を示す。図３Ｃ：ワクチン接種後の様々な時点における動物２の免疫血清からのＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇウイルスの相対的な回復を示す。データを、テクニカルレプリケート±ＳＤとして表す。
【図３Ｃ】ＬＣＭＶ  Ｇ偽型ラブドウイルス抗体中和の、補体依存性の性質は、げっ歯類特異的な現象ではない。図３Ａ：２匹のカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ  ｍａｃａｑｕｅｓ）に、１０１０ｐｆｕを静脈内（動物１）に、又は１０９ｐｆｕを頭蓋内（動物２）に投与した。中和は、カニクイザル血清（補体の源）、又は、ＣＰ４０によって処理したカニクイザル血清（阻害された補体）を含む、対照緩衝液を含む熱不活化免疫血清のエクスビボインキュベーション（１時間３７℃）に続いて評価した。図３Ｂ：ワクチン接種後の様々な時点における動物１の免疫血清からのＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇウイルスの相対的な回復を示す。図３Ｃ：ワクチン接種後の様々な時点における動物２の免疫血清からのＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇウイルスの相対的な回復を示す。データを、テクニカルレプリケート±ＳＤとして表す。
【図４Ａ】補体依存性ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇウイルス中和の無効化は、古典経路又は終末経路のいずれかを介して達成できる。図４Ａ：免疫ラット血清は、ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇワクチン接種後１８日目又は２１日目に採取された。Ｃ３試験において使用された免疫血清は、採取する前の日に３５ＵのＣＶＦによって処理された動物から採取された。免疫ラット血清（抗体の源）は、対照緩衝液ＤＶＢ、正常ヒト血清（ＮＨＳ）、Ｃ１ｑ免疫枯渇ＮＨＳ、Ｃ３免疫枯渇ＮＨＳ、又はＣ５免疫枯渇ＮＨＳ（補体の源）と混合した。示される場合、Ｃ１ｑ又はＣ５は、それぞれ７０又は７５ｕｇ／ｍＬの濃度で添加して戻した。さらに、ヒトＣ３を阻害するために２５μＭの濃度のＣＰ４０を添加したか、又はＣ５を阻害するために１００μｇ／ｍＬの濃度でＣ５モノクローナル抗体、エクリズマブを使用した。ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇは、これらの抗体及び補体の源、並びにプラークアッセイで定量された感染性ウイルスと共に３７℃で１時間インキュベートした。図４Ｂ：Ｃ１ｑ枯渇血清からのＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇウイルスの相対的な回復。Ｃ１ｑ枯渇血清（図４Ｂ）、Ｃ３枯渇血清（図４Ｃ）、及びＣ５枯渇血清（図４Ｄ）からのＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇウイルスの相対的な回復を示す。
【図４Ｂ】補体依存性ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇウイルス中和の無効化は、古典経路又は終末経路のいずれかを介して達成できる。図４Ａ：免疫ラット血清は、ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇワクチン接種後１８日目又は２１日目に採取された。Ｃ３試験において使用された免疫血清は、採取する前の日に３５ＵのＣＶＦによって処理された動物から採取された。免疫ラット血清（抗体の源）は、対照緩衝液ＤＶＢ、正常ヒト血清（ＮＨＳ）、Ｃ１ｑ免疫枯渇ＮＨＳ、Ｃ３免疫枯渇ＮＨＳ、又はＣ５免疫枯渇ＮＨＳ（補体の源）と混合した。示される場合、Ｃ１ｑ又はＣ５は、それぞれ７０又は７５ｕｇ／ｍＬの濃度で添加して戻した。さらに、ヒトＣ３を阻害するために２５μＭの濃度のＣＰ４０を添加したか、又はＣ５を阻害するために１００μｇ／ｍＬの濃度でＣ５モノクローナル抗体、エクリズマブを使用した。ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇは、これらの抗体及び補体の源、並びにプラークアッセイで定量された感染性ウイルスと共に３７℃で１時間インキュベートした。図４Ｂ：Ｃ１ｑ枯渇血清からのＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇウイルスの相対的な回復。Ｃ１ｑ枯渇血清（図４Ｂ）、Ｃ３枯渇血清（図４Ｃ）、及びＣ５枯渇血清（図４Ｄ）からのＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇウイルスの相対的な回復を示す。
【図４Ｃ】補体依存性ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇウイルス中和の無効化は、古典経路又は終末経路のいずれかを介して達成できる。図４Ａ：免疫ラット血清は、ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇワクチン接種後１８日目又は２１日目に採取された。Ｃ３試験において使用された免疫血清は、採取する前の日に３５ＵのＣＶＦによって処理された動物から採取された。免疫ラット血清（抗体の源）は、対照緩衝液ＤＶＢ、正常ヒト血清（ＮＨＳ）、Ｃ１ｑ免疫枯渇ＮＨＳ、Ｃ３免疫枯渇ＮＨＳ、又はＣ５免疫枯渇ＮＨＳ（補体の源）と混合した。示される場合、Ｃ１ｑ又はＣ５は、それぞれ７０又は７５ｕｇ／ｍＬの濃度で添加して戻した。さらに、ヒトＣ３を阻害するために２５μＭの濃度のＣＰ４０を添加したか、又はＣ５を阻害するために１００μｇ／ｍＬの濃度でＣ５モノクローナル抗体、エクリズマブを使用した。ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇは、これらの抗体及び補体の源、並びにプラークアッセイで定量された感染性ウイルスと共に３７℃で１時間インキュベートした。図４Ｂ：Ｃ１ｑ枯渇血清からのＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇウイルスの相対的な回復。Ｃ１ｑ枯渇血清（図４Ｂ）、Ｃ３枯渇血清（図４Ｃ）、及びＣ５枯渇血清（図４Ｄ）からのＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇウイルスの相対的な回復を示す。
【図４Ｄ】補体依存性ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇウイルス中和の無効化は、古典経路又は終末経路のいずれかを介して達成できる。図４Ａ：免疫ラット血清は、ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇワクチン接種後１８日目又は２１日目に採取された。Ｃ３試験において使用された免疫血清は、採取する前の日に３５ＵのＣＶＦによって処理された動物から採取された。免疫ラット血清（抗体の源）は、対照緩衝液ＤＶＢ、正常ヒト血清（ＮＨＳ）、Ｃ１ｑ免疫枯渇ＮＨＳ、Ｃ３免疫枯渇ＮＨＳ、又はＣ５免疫枯渇ＮＨＳ（補体の源）と混合した。示される場合、Ｃ１ｑ又はＣ５は、それぞれ７０又は７５ｕｇ／ｍＬの濃度で添加して戻した。さらに、ヒトＣ３を阻害するために２５μＭの濃度のＣＰ４０を添加したか、又はＣ５を阻害するために１００μｇ／ｍＬの濃度でＣ５モノクローナル抗体、エクリズマブを使用した。ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇは、これらの抗体及び補体の源、並びにプラークアッセイで定量された感染性ウイルスと共に３７℃で１時間インキュベートした。図４Ｂ：Ｃ１ｑ枯渇血清からのＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇウイルスの相対的な回復。Ｃ１ｑ枯渇血清（図４Ｂ）、Ｃ３枯渇血清（図４Ｃ）、及びＣ５枯渇血清（図４Ｄ）からのＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇウイルスの相対的な回復を示す。
【図５Ａ】表面糖タンパク質に対して生成された抗体の補体依存性は、汎アレナウイルスの現象である。図５Ａ：ラットは、１０７プラーク形成単位（ｐｆｕ）のＭＲＢラッサＧ（ラッサの糖タンパク質によって偽型化されたマラバウイルス）、又はＭＲＢフニンＧ（フニンの糖タンパク質によって偽型化されたマラバウイルス）を静脈内にワクチン接種され、ワクチン接種後１４日目に血清を採取した。中和は、ラット血清（補体の源）、又は、Ｃ３を枯渇させるためにＣＶＦによって予め処理したラット血清（補体枯渇）を含む、デキストロースゼラチンベロナール緩衝液（ＧＶＢ＋＋）と混合した熱不活化免疫血清との約５×１０５ｐｆｕの対応するウイルスのエクスビボインキュベーション（１時間３７℃）に続いて評価した。ウイルスの回復をプラークアッセイによって評価した。図５Ｂ：ＭＲＢフニンＧウイルス相対的な回復。図５Ｃ：ＭＲＢラッサＧウイルスの相対的な回復。Ｎ＝３ラット／群；データは、群平均±ＳＤとして表す。
【図５Ｂ】表面糖タンパク質に対して生成された抗体の補体依存性は、汎アレナウイルスの現象である。図５Ａ：ラットは、１０７プラーク形成単位（ｐｆｕ）のＭＲＢラッサＧ（ラッサの糖タンパク質によって偽型化されたマラバウイルス）、又はＭＲＢフニンＧ（フニンの糖タンパク質によって偽型化されたマラバウイルス）を静脈内にワクチン接種され、ワクチン接種後１４日目に血清を採取した。中和は、ラット血清（補体の源）、又は、Ｃ３を枯渇させるためにＣＶＦによって予め処理したラット血清（補体枯渇）を含む、デキストロースゼラチンベロナール緩衝液（ＧＶＢ＋＋）と混合した熱不活化免疫血清との約５×１０５ｐｆｕの対応するウイルスのエクスビボインキュベーション（１時間３７℃）に続いて評価した。ウイルスの回復をプラークアッセイによって評価した。図５Ｂ：ＭＲＢフニンＧウイルス相対的な回復。図５Ｃ：ＭＲＢラッサＧウイルスの相対的な回復。Ｎ＝３ラット／群；データは、群平均±ＳＤとして表す。
【図５Ｃ】表面糖タンパク質に対して生成された抗体の補体依存性は、汎アレナウイルスの現象である。図５Ａ：ラットは、１０７プラーク形成単位（ｐｆｕ）のＭＲＢラッサＧ（ラッサの糖タンパク質によって偽型化されたマラバウイルス）、又はＭＲＢフニンＧ（フニンの糖タンパク質によって偽型化されたマラバウイルス）を静脈内にワクチン接種され、ワクチン接種後１４日目に血清を採取した。中和は、ラット血清（補体の源）、又は、Ｃ３を枯渇させるためにＣＶＦによって予め処理したラット血清（補体枯渇）を含む、デキストロースゼラチンベロナール緩衝液（ＧＶＢ＋＋）と混合した熱不活化免疫血清との約５×１０５ｐｆｕの対応するウイルスのエクスビボインキュベーション（１時間３７℃）に続いて評価した。ウイルスの回復をプラークアッセイによって評価した。図５Ｂ：ＭＲＢフニンＧウイルス相対的な回復。図５Ｃ：ＭＲＢラッサＧウイルスの相対的な回復。Ｎ＝３ラット／群；データは、群平均±ＳＤとして表す。
【図６Ａ】補体枯渇は、免疫された動物において、ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇの安定性及び送達を向上するが、ＭＧ１に関しては向上しない。図６Ａ：Ｆｉｓｈｅｒラットに、ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇ又はＭＧ１を静脈内でワクチン接種するか、又はウイルスに対してナイーブのまま残した。ワクチン接種後６日目に、ラットに両側の１３７６２ＭＡＴＢＩＩＩ腫瘍を移植した。実験１４日目に、動物の半分において、３５ＵのＣＶＦによって補体を枯渇させた。実験２０日目に、ラットに、同一の用量で同種のウイルスを静脈内投与した。ウイルス処理の１０分後にラットを屠殺し、血液及び腫瘍からの感染性ウイルスをプラークアッセイによって定量した。図６Ｂ：ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇ処理した動物について、血液及び腫瘍内の感染性ウイルスを定量した。図６Ｃ：ＭＧ１処理した動物について、血液及び腫瘍内の感染性ウイルスを定量した。群当たりＮ＝３のラット。データは群平均±ＳＤとして表され、各々のドットがラットを表す。ＮＤ＝検出されない。一元配置ＡＮＯＶＡ（＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊ｐ＜０．０１、＊ｐ＜０．０５、ｎｓｐ＞０．０５）。
【図６Ｂ】補体枯渇は、免疫された動物において、ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇの安定性及び送達を向上するが、ＭＧ１に関しては向上しない。図６Ａ：Ｆｉｓｈｅｒラットに、ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇ又はＭＧ１を静脈内でワクチン接種するか、又はウイルスに対してナイーブのまま残した。ワクチン接種後６日目に、ラットに両側の１３７６２ＭＡＴＢＩＩＩ腫瘍を移植した。実験１４日目に、動物の半分において、３５ＵのＣＶＦによって補体を枯渇させた。実験２０日目に、ラットに、同一の用量で同種のウイルスを静脈内投与した。ウイルス処理の１０分後にラットを屠殺し、血液及び腫瘍からの感染性ウイルスをプラークアッセイによって定量した。図６Ｂ：ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇ処理した動物について、血液及び腫瘍内の感染性ウイルスを定量した。図６Ｃ：ＭＧ１処理した動物について、血液及び腫瘍内の感染性ウイルスを定量した。群当たりＮ＝３のラット。データは群平均±ＳＤとして表され、各々のドットがラットを表す。ＮＤ＝検出されない。一元配置ＡＮＯＶＡ（＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊ｐ＜０．０１、＊ｐ＜０．０５、ｎｓｐ＞０．０５）。
【図６Ｃ】補体枯渇は、免疫された動物において、ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇの安定性及び送達を向上するが、ＭＧ１に関しては向上しない。図６Ａ：Ｆｉｓｈｅｒラットに、ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇ又はＭＧ１を静脈内でワクチン接種するか、又はウイルスに対してナイーブのまま残した。ワクチン接種後６日目に、ラットに両側の１３７６２ＭＡＴＢＩＩＩ腫瘍を移植した。実験１４日目に、動物の半分において、３５ＵのＣＶＦによって補体を枯渇させた。実験２０日目に、ラットに、同一の用量で同種のウイルスを静脈内投与した。ウイルス処理の１０分後にラットを屠殺し、血液及び腫瘍からの感染性ウイルスをプラークアッセイによって定量した。図６Ｂ：ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇ処理した動物について、血液及び腫瘍内の感染性ウイルスを定量した。図６Ｃ：ＭＧ１処理した動物について、血液及び腫瘍内の感染性ウイルスを定量した。群当たりＮ＝３のラット。データは群平均±ＳＤとして表され、各々のドットがラットを表す。ＮＤ＝検出されない。一元配置ＡＮＯＶＡ（＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊ｐ＜０．０１、＊ｐ＜０．０５、ｎｓｐ＞０．０５）。
【図７Ａ】補体枯渇が、免疫ラットにおいて、ＭＲＧＢ  ＬＣＭＶ  Ｇの局所投与に続いて、腫瘍の感染を向上したが、ＭＧ１では向上しなかった。図７Ａ：Ｆｉｓｈｅｒラットに、ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇ（図７Ｂ）又はＭＧ１（図７Ｃ）を静脈内でワクチン接種するか、又はウイルスに対してナイーブのまま残した。ワクチン接種後９日目に、ラットに両側の１３７６２  ＭＡＴＢＩＩＩ腫瘍を移植した。実験１９日目に、動物の半分において、３５ＵのＣＶＦによって補体を枯渇させた。実験２０日目に、ラットに、示された用量で同種のウイルスを腫瘍内注入した。ウイルス処理の２４時間後にラットを屠殺し、腫瘍からの感染性ウイルスをプラークアッセイによって定量した。皮下腫瘍の力価を示す（群当たりｎ＝４）。データは群平均±ＳＤとして表す。各々のドットがラットを表す。ＮＤ＝検出されない。一元配置ＡＮＯＶＡ（＊ｐ＜０．０５、ｎｓｐ＞０．０５）。
【図７Ｂ】補体枯渇が、免疫ラットにおいて、ＭＲＧＢ  ＬＣＭＶ  Ｇの局所投与に続いて、腫瘍の感染を向上したが、ＭＧ１では向上しなかった。図７Ａ：Ｆｉｓｈｅｒラットに、ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇ（図７Ｂ）又はＭＧ１（図７Ｃ）を静脈内でワクチン接種するか、又はウイルスに対してナイーブのまま残した。ワクチン接種後９日目に、ラットに両側の１３７６２  ＭＡＴＢＩＩＩ腫瘍を移植した。実験１９日目に、動物の半分において、３５ＵのＣＶＦによって補体を枯渇させた。実験２０日目に、ラットに、示された用量で同種のウイルスを腫瘍内注入した。ウイルス処理の２４時間後にラットを屠殺し、腫瘍からの感染性ウイルスをプラークアッセイによって定量した。皮下腫瘍の力価を示す（群当たりｎ＝４）。データは群平均±ＳＤとして表す。各々のドットがラットを表す。ＮＤ＝検出されない。一元配置ＡＮＯＶＡ（＊ｐ＜０．０５、ｎｓｐ＞０．０５）。
【図７Ｃ】補体枯渇が、免疫ラットにおいて、ＭＲＧＢ  ＬＣＭＶ  Ｇの局所投与に続いて、腫瘍の感染を向上したが、ＭＧ１では向上しなかった。図７Ａ：Ｆｉｓｈｅｒラットに、ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇ（図７Ｂ）又はＭＧ１（図７Ｃ）を静脈内でワクチン接種するか、又はウイルスに対してナイーブのまま残した。ワクチン接種後９日目に、ラットに両側の１３７６２  ＭＡＴＢＩＩＩ腫瘍を移植した。実験１９日目に、動物の半分において、３５ＵのＣＶＦによって補体を枯渇させた。実験２０日目に、ラットに、示された用量で同種のウイルスを腫瘍内注入した。ウイルス処理の２４時間後にラットを屠殺し、腫瘍からの感染性ウイルスをプラークアッセイによって定量した。皮下腫瘍の力価を示す（群当たりｎ＝４）。データは群平均±ＳＤとして表す。各々のドットがラットを表す。ＮＤ＝検出されない。一元配置ＡＮＯＶＡ（＊ｐ＜０．０５、ｎｓｐ＞０．０５）。
【図８】野生型マラバ（マラバＷＴ）、ＬＣＭＶの糖タンパク質によって偽型化されたマラバウイルス（ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇ）、フニンの糖タンパク質によって偽型化されたマラバウイルス（ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇ）、及びラッサの糖タンパク質によって偽型化されたマラバウイルス（ＭＲＢ  Ｌａｓｓａ  Ｇ）のゲノムマップ。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
アレナウイルスの糖タンパク質によって偽型化された複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスが、ウイルス粒子を中和するのに補体を必要とする抗体応答を誘発することが発見された。さらに、この中和は、補体阻害剤を使用すること又は補体を枯渇することによって防止することができ、これは、血液中の感染性ウイルスの増加した存在をもたらす。
【００３４】
本出願は、補体阻害が、血液中の偽型複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスの安定性を大幅に増加させ、ウイルスの局所及び全身投与に続いて、ウイルスの腫瘍に対する送達を大幅に増加させることを実証する。アレナウイルスの糖タンパク質によって偽型化された複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルス、並びに哺乳動物における癌の治療及び／又は防止、及び／又は転移の治療及び／又は防止におけるそれらの使用が、哺乳動物における癌の治療及び／又は防止、及び／又は転移の治療及び／又は防止の使用のための、（ｉ）有効な量の、アレナウイルスの糖タンパクによって偽型化された複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスの有効量と、（ｉｉ）哺乳動物における補体活性を阻害するのに有効な量の補体阻害剤とを含む、医薬的組合せと同様に提供される。
【００３５】
本発明の実施形態は、偽型ラブドウイルス及びそれらの抗癌治療薬としてのそれらの使用に関連する組成物及び方法を含む。特に、ラブドウイルスバックグラウンド系統（又はバックボーン）に基づく偽型ラブドウイルスが提供され、ここで糖タンパク質遺伝子は、異種のアレナウイルスの糖タンパク質と置き換えられている。
【００３６】
Ｉ．  ラブドウイルス科（ラブドウイルス）
任意の複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルス系統が、天然のラブドウイルスの糖タンパク質を異種のアレナウイルスの糖タンパク質と置き換えるよう改変され得る。
【００３７】
典型的なラブドウイルスは、このウイルス科の最も研究されたものである、狂犬病ウイルス及び水疱性口炎ウイルス（ＶＳＶ）である。ラブドウイルスは、非セグメント化（−）センスＲＮＡゲノムを有する弾丸状のウイルスの科である。ラブドウイルス科は、以下を含むが、これらに限定されない：アラジャスウイルス、チャンディプラウイルス（ＡＦ１２８８６８／ｇｉ：４５８３４３６、ＡＪ８１００８３／ｇｉ：５７８３３８９１、ＡＹ８７１８００／ｇｉ：６２８６１４７０、ＡＹ８７１７９９／ｇｉ：６２８６１４６８、ＡＹ８７１７９８／ｇｉ：６２８６１４６６、ＡＹ８７１７９７／ｇｉ：６２８６１４６４、ＡＹ８７１７９６／ｇｉ：６２８６１４６２、ＡＹ８７１７９５／ｇｉ：６２８６１４６０、ＡＹ８７１７９４／ｇｉ：６２８６１４５９、ＡＹ８７１７９３／ｇｉ：６２８６１４５７、ＡＹ８７１７９２／ｇｉ：６２８６１４５５、ＡＹ８７１７９１／ｇｉ：６２８６１４５３）、球菌ウイルス（ＡＦ０４５５５６／ｇｉ：２８６５６５８）、イスファハンウイルス（ＡＪ８１００８４／ｇｉ：５７８３４０３８）、マラバウイルス（参照により本明細書に組み込まれる米国特許第８，４８１，０２３号の配列番号１〜６、ＨＱ６６００７６．１）、カラジャスウイルス（参照により本明細書に組み込まれる米国特許第８，４８１，０２３号の配列番号７〜１２、ＡＹ３３５１８５／ｇｉ：３３５７８０３７）、ピリウイルス（Ｄ２６１７５／ｇｉ：４４２４８０、Ｚ１５０９３／ｇｉ：６１４０５）、水胞性口内炎アラゴウイルス、ＢｅＡｎ１５７５７５ウイルス、ボテクウイルス、カルチャキウイルス、アメリカウナギのラブドウイルス、グレーロッジウイルス、ユロナウイルス、クラマスウイルス、クワッタウイルス、ラホヤウイルス、マルペススプリングウイルス、マウントエルゴンコウモリウイルス（ＤＱ４５７１０３／ｇｉ｜９１９８４８０５）、ペリネウイルス（ＡＹ８５４６５２／ｇｉ：７１８４２３８１）、ツパイウイルス（ＮＣ＿００７０２０／ｇｉ：６６５０８４２７）、ファーミントンバイアグランデウイルス（参照により本明細書に組み込まれる米国特許第８，４８１，０２３号の配列番号１３〜１８、ＫＭ２０５０１８．１）、ミュアスプリングスウイルス（ＫＭ２０４９９０．１）、リードランチウイルス、ハートパークウイルス、フランダーズウイルス（ＡＦ５２３１９９／ｇｉ：２５１４０６３５、ＡＦ５２３１９７／ｇｉ：２５１４０６３４、ＡＦ５２３１９６／ｇｉ：２５１４０６３３、ＡＦ５２３１９５／ｇｉ：２５１４０６３２、ＡＦ５２３１９４／ｇｉ：２５１４０６３１、ＡＨ０１２１７９／ｇｉ：２５１４０６３０）、カメセウイルス、モスケイロウイルス、モスリルウイルス、バルールウイルス、フクオカウイルス（ＡＹ８５４６５１／ｇｉ：７１８４２３７９）、ケルンキャニオンウイルス、コルビッソンウイルス、ルダンテックウイルス（ＡＹ８５４６５０／ｇｉ：７１８４２３７７）、キューラリバウイルス、コネチカットウイルス、ニューミントウイルス、ソーグラスウイルス、チャコウイルス、セナ・マドレイラウイルス、ティンボウイルス、アルンピバーウイルス（ＡＹ８５４６４５／ｇｉ：７１８４２３６７）、アルアクウイルス、バンゴランウイルス、ビンボウイルス、ビベンスアームウイルス、ブルークラブウイルス、シャルルヴィルウイルス、コースタルプレインズウイルス、ＤａｋＡｒＫ７２９２  ウイルス、エントアメーバウイルス、ガルバウイルス、ゴサスウイルス、ハンプティドゥーウイルス（ＡＹ８５４６４３／ｇｉ：７１８４２３６３）、ジョインジャカカウイルス、カンナマンガラムウイルス、コロンゴウイルス（ＤＱ４５７１００／ｇｉ｜９１９８４７９９核タンパク質（Ｎ）ｍＲＮＡ、部分的なコード領域）；コールピンヤウイルス、コトンコンウイルス（ＤＱ４５７０９９／ｇｉ｜９１９８４７９７、ＡＹ８５４６３８／ｇｉ：７１８４２３５４）；ランジャウイルス、マニトバウイルス、マルコウイルス、ナソウルウイルス、ナバロウイルス、ガインガンウイルス（ＡＹ８５４６４９／ｇｉ：７１８４２３７５）、オークベールウイルス（ＡＹ８５４６７０／ｇｉ：７１８４２４１７）、オボジャングウイルス（ＤＱ４５７０９８／ｇｉ｜９１９８４７９５）、オイタウイルス（ＡＢ１１６３８６／ｇｉ：４６０２００２７）、オウァンゴウイルス、パリークリークウイルス（ＡＹ８５４６４７／ｇｉ：７１８４２３７１）、リオグランデシクリッドウイルス、サンジンバウイルス（ＤＱ４５７１０２／ｇｉ｜９１９８４８０３）、シグマウイルス（ＡＨ００４２０９／ｇｉ：１６８０５４５、ＡＨ００４２０８／ｇｉ：１６８０５４４、ＡＨ００４２０６／ｇｉ：１６８０５４２）、スリプルウイルス、スイートウォーターブランチウイルス、チブロガルガンウイルス（ＡＹ８５４６４６／ｇｉ：７１８４２３６９）、キシブレマウイルス、ヤタウイルス、ロードアイランド、アデレードリバーウイルス（Ｕ１０３６３／ｇｉ：６００１５１、ＡＦ２３４９９８／ｇｉ：１０４４３７４７、ＡＦ２３４５３４／ｇｉ：９９７１７８５、ＡＹ８５４６３５／ｇｉ：７１８４２３４８）、ベリマーウイルス（ＡＹ８５４６３６／ｇｉ：７１８４２３５０］）、キンバリーウイルス（ＡＹ８５４６３７／ｇｉ：７１８４２３５２）又はウシ流行熱ウイルス（ＮＣ＿００２５２６／ｇｉ：１００８６５６１）。
【００３８】
好ましい実施形態において、例えば腫瘍選択性を向上させるために任意選択で遺伝的に改変されている野生型マラバ系統のラブドウイルス又はそれらのバリアントは、偽型腫瘍溶解性ラブドウイルスのバックグラウンド系統としての役割を果たす。好ましい実施形態において、偽型腫瘍溶解性ラブドウイルスは、アレナウイルスの糖タンパク質、好ましくはＬＣＭＶ、フニン、又はラッサ系統の糖タンパク質を含む、マラバ系統（例えばＭＧ１）である。
【００３９】
別の好ましい実施形態において、例えば腫瘍選択性を向上させるために任意選択で遺伝的に改変されている、ＶＳＶ系統（例えば、ＶＳＶインディアナ株、ＶＳＶニュージャージー株）、又はそれらのバリアントは、偽型腫瘍溶解性ラブドウイルスのバックグラウンド系統としての役割を果たす。特に好ましい実施形態において、偽型複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスは、参照によりその内容が本明細書に組み込まれる、Ｓｔｏｊｄｌ他、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ．、４（４）：２６３−７５  （２００３）に記載されているように、Ｍタンパク質の５１位のメチオニンの欠失を含むＶＳＶ（ＶＳＶｄ５１）である。ＶＳＶ系統は、参照によりその内容が本明細書に組み込まれる、米国特許第８，２８２，９１７号に記載されるように、Ｍタンパク質からの１つ又は複数のアミノ酸の変異及び／又は欠失によってさらに弱毒化されているか、又は、代替的に弱毒化される。いくつかの好ましい実施形態において、偽型腫瘍溶解性ラブドウイルスは、ＬＣＭＶ、フニン、又はラッサ系統の糖タンパク質を有する、ＶＳＶバックボーン（例えばＶＳＶｄ５１）を含む。
【００４０】
他の実施形態において、偽型反復可能腫瘍溶解性ラブドウイルスは、２つ以上の系統又は血清型由来の遺伝子を含む。例えば、バックグラウンド系統は、１つの系統又は血清型由来のＮ、Ｐ、Ｍ、及び／又はＬ遺伝子と、異なる系統又は血清型由来の残りの遺伝子とを含む。
【００４１】
アレナウイルスの糖タンパク質
例えば、Ｂｏｗｅｎ他、」Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、６９９２−７００４（２０００）に記載されるような、任意のもののような、アレナウイルスの任意の系統由来の（異種の）糖タンパク質は、複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスバックグラウンド中で置き換えられて、偽型複製可能腫瘍溶解性ウイルスを産生する。アレナウイルスは、アレナウイルス科のメンバーであるウイルスであり、そのメンバーは、２つの一本鎖のアンビセンスＲＮＡからなるゲノムを有するエンベロープ型ウイルスである。２つのＲＮＡセグメントは、Ｓｍａｌｌ（Ｓ）及びＬａｒｇｅ（Ｌ）と名付けられ、各々のセグメントが、反対方向で、２つの（非重複の）ウイルスタンパク質をコードする。Ｌセグメントは、約３．５ｋｂであり、ヌクレオカプシドタンパク質（ＮＰ）及び糖タンパク質前駆体（ＧＰＣ）をコードする。Ｌセグメントは約７．２ｋｂであり、ウイルスＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（Ｌ）及び小ＲＩＮＧドメイン含有タンパク質（Ｚ）をコードする。アレナウイルスの糖タンパク質（ＧＰ）は、ビリオン表面にスタッドを打ち込むよう非共有的に相互作用する、平行するエンベロープ糖タンパク質ＧＰ１及びＧＰ２、並びに安定なシグナルペプチド（ＳＳＰ）へのＧＰＣの翻訳後切断によって形成される、三量体の複合体である。
【００４２】
アレナウイルスは、遺伝的に異なる２つの血清学的グループに、地理的分布、すなわち新世界アレナウイルス（東半球に見出される）と旧世界アレナウイルス（西半球に見出された）によって分けられている。旧世界アレナウイルスは、ＬＣＭＶ、ラッサウイルス、モペイアウイルス、モバラウイルス、イッピイ（Ｉｐｐｙ）ウイルス、マリエンタル（Ｍａｒｉｅｎｔａｌ）ウイルス、メリノウォーク（Ｍｅｒｉｎｏ  Ｗａｌｋ）ウイルス、メネクレ（Ｍｅｎｅｋｒｅ）ウイルス、ガイロ（Ｇａｉｒｏ）ウイルス、バグローブ（Ｇｂａｇｒｏｕｂｅ）ウイルス、モロゴロ（Ｍｏｒｏｇｏｒｏ）ウイルス、コドコ（Ｋｏｄｏｋｏ）ウイルス、ランク（Ｌｕｎｋ）ウイルス、オカハンジャ（Ｏｋａｈａｎｄｊａ）ウイルス、ルーヨ（Ｌｕｊｏ）ウイルス、レミニスコミス（Ｌｅｍｎｉｓｃｏｍｙｓ）ウイルス、コビトハツカネズミウイルス、ウンシュウ（Ｗｅｎｚｈｏｕ）ウイルス、及びルナ（Ｌｕｎａ）ウイルスを含む。新世界アレナウイルスは、タカリベウイルス、フニンウイルス、マチュポウイルス、キュピキシ（Ｃｕｐｉｘｉ）ウイルス、アマパリウイルス、パラナウイルス、パタワ（Ｐａｔａｗａ）ウイルス、タミアミウイルス、ピチンデウイルス、ラチノウイルス、フレキサル（Ｆｌｅｘａｌ）ウイルス、グアナリトウイルス、サビアウイルス、オリベロス（Ｏｌｉｖｅｒｏｓ）ウイルス、ホワイトウォーターアロヨ（Ｗｈｉｔｅｗａｔｅｒ  Ａｒｒｏｙｏ）ウイルス、ピリタル（Ｐｉｒｉｔａｌ）ウイルス、パンパ（Ｐａｍｐａ）ウイルス、ベアキャニオン（Ｂｅａｒ  Ｃａｎｙｏｎｅ）ウイルス、オコソコアウトラデエスピノサ（Ｏｃｏｚｏｃｏａｕｔｌａ  ｄｅ  Ｅｓｐｉｎｏｓａ）ウイルス、アルパフアヨ（Ａｌｌｐａｈｕａｙｏ）ウイルス、トントクリーク（Ｔｏｎｔｏ  Ｃｒｅｅｋ）ウイルス、ビッグブラッシータンク（Ｂｉｇ  Ｂｒｕｓｈｙ  Ｔａｎｋ）ウイルス、レアルデカトルセ（Ｒｅａｌ  ｄｅ  Ｃａｔｏｒｃｅ）ウイルス、カタリナ（Ｃａｔａｒｉｎａ）ウイルス、スキンナータンク（Ｓｋｉｎｎｅｒ  Ｔａｎｋ）ウイルス、及びチャパレ（Ｃｈａｐａｒｅ）ウイルスを含む。いくつかの実施形態において、複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスは、旧世界複合アレナウイルス由来のアレナウイルスの糖タンパク質によって偽型化されている。他の実施形態において、複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスは、新世界アレナウイルス由来のアレナウイルスの糖タンパク質によって偽型化されている。
【００４３】
いくつかの好ましい実施形態において、複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスは、ＬＣＭＶの糖タンパク質によって偽型化されている。ＬＣＭＶ  ＷＥ系統の糖タンパク質の配列は、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＪ２９７４８４において見出すことができ、例示的なｐＨＣＭＶ発現ベクターの配列は、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＪ３１８５１２（ｐＨＣＭＶ−ＬＣＭＶ−ＧＰ（ＷＥ））及びＡＪ３１８５１３（ｐＨＣＭＶ−ＬＣＭＶ−ＧＰ（ＷＥ−ＨＰＩ））において見出すことができる。ＬＣＭＶアームストロング系統の糖タンパク質の配列は、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号Ｍ２０８６９において見出すことができる。他の好ましい実施形態において、複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスは、ラッサの糖タンパク質によって偽型化されている。ラッサ系統の糖タンパク質の配列は、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＡＴ４９０１４、ＡＡＴ４９０１２、ＡＡＴ４９０１０において見出すことができる。ラッサの糖タンパク質をコードするＤＮＡ配列の例は、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＨＱ６８８６７３（ヨシアセグメントＳ、完全長配列）、ＡＹ１７９１７３（位置３６〜１５１１）、ＡＦ２４６１２１（位置５４〜１５２９）、ＡＦ３３３９６９（位置５２〜１５２４）、ＡＦ１８１８５４（位置５２〜１５２４）、及びＡＦ１８１８５３（位置５２〜１５２４）で開示されている。他の好ましい実施形態において、複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスは、フニンの糖タンパク質によって偽型化されている。例示的なフニン系統の糖タンパク質の配列は、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＣ＿００５０８１において見出すことができる。いくつかの実施形態において、複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスは、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＪ２９７４８４、ＡＡＴ４９０１４、ＡＡＴ４９０１２、ＡＡＴ４９０１０、ＨＱ６８８６７３、ＡＹ１７９１７３、ＡＦ２４６１２１、ＡＦ３３３９６９、ＡＦ１８１８５４、ＡＦ１８１８５３、又はＮＣ＿００５０８１．１で開示されるアレナウイルスの糖タンパク質の配列に対し、少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一であるアレナウイルスの糖タンパク質によって偽型化されている。いくつかの実施形態において、複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスは、ＬＣＭＶ系統由来の糖タンパク質ではないアレナウイルスの糖タンパク質によって偽型化されている。他の実施形態において、複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスは、ラッサ系統由来の糖タンパク質ではないアレナウイルスの糖タンパク質によって偽型化されている。他の実施形態において、複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスは、ラッサ系統由来でもＬＣＭＶ系統由来の糖タンパク質でもないアレナウイルスの糖タンパク質によって偽型化されている。イッピイウイルス系統の糖タンパク質の配列は、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号Ｕ８０００３に見出すことができ、モペイアウイルス系統の糖タンパク質の配列は、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号Ｕ８０００５（系統ＡＮ２０４１０）及びＭ３３８７９  （系統ＡＮ２１３６６）に見出すことができる。モバラウイルス系統の糖タンパク質の配列はＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＦ０１２５３０（系統３０７６）に見��すことができる。
【００４４】
いくつかの好ましい実施形態において、偽型腫瘍溶解性ラブドウイルスのゲノムは、フニン系統の糖タンパク質、それらのオープンリーディングフレーム、又はフラグメント、又はそれらのオープンリーディングフレームに対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するそれらのバリアントをコードする以下のコドン最適化核酸配列を含む：
GGTACCCAGTTATATTTGTTACAACAATGGGACAATTCATCTCCTTCATGCAGGAGATACCTACTTTCCTCCAAGAGGCTCTCAATATCGCTCTGGTGGCGGTTTCACTGATCGCTATCATAAAGGGCATTGTGAACTTGTACAAATCAGGCCTGTTCCAATTCTTTGTGTTCCTGGCTCTTGCAGGGAGATCTTGTACAGAAGAGGCTTTTAAAATCGGCCTCCACACTGAGTTTCAGACCGTGAGTTTCTCAATGGTCGGCCTGTTTTCAAATAATCCCCATGACCTGCCCCTGTTGTGTACCCTGAACAAGAGTCACCTGTACATCAAGGGCGGAAACGCATCATTCATGATCTCCTTTGACGATATTGAAGTGCTGCTGCCTCAATACGATGTGATAATACAGCACCCAGCCGACATGTCCTGGTGCAGCAAGTCCGATGACCAAATTTGGTTGTCCCAGTGGTTTATGAATGCAGTCGGACATGATTGGCACTTGGACCCACCCTTCCTTTGCCGCAATAGAACTAAGACCGAGGGTTTCATTTTTCAGGTCAACACAAGCAAGACTGGGGTCAACGAAAACTATGCAAAAAAGTTCAAGACAGGTATGCATCACCTCTACCGGGAGTACCCTGATTCTTGCCTGAACGGGAAGTTGTGCCTGATGAAGGCCCAGCCAACGTCCTGGCCTCTGCAGTGCCCTTTGGACCATGTGAACACTTTGCACTTTCTCACTAGAGGCAAAAACATCCAGCTCCCTAGGCGATCCCTTAAGGCGTTCTTTTCTTGGAGTCTGACGGATTCTTCCGGAAAGGACACCCCTGGGGGCTACTGTCTCGAAGAATGGATGCTGGTAGCTGCAAAGATGAAATGTTTTGGGAACACTGCCGTCGCGAAATGCAACCTGAACCATGATTCTGAATTTTGCGATATGCTCCGACTTTTCGACTATAATAAGAATGCTATCAAGACACTGAACGATGAAACTAAGAAACAGGTGAATCTCATGGGACAGACCATTAATGCTCTGATCAGTGACAATCTGCTGATGAAGAATAAAATCCGAGAGCTGATGTCAGTGCCCTATTGTAATTATACAAAATTTTGGTACGTGAATCACACACTGTCCGGCCAGCACTCTCTGCCGAGGTGCTGGCTGATTAAGAATAATAGCTACTTGAACATCAGCGACTTCAGAAACGACTGGATTCTCGAGTCCGATTTTCTGATCAGCGAAATGCTCAGTAAAGAGTATTCAGACAGACAGGGCAAGACACCCCTTACTCTCGTTGATATTTGTTTTTGGAGTACAGTTTTTTTTACGGCCTCCCTGTTCCTCCATCTGGTCGGTATTCCTACCCACCGACATATCCGCGGCGAGGCATGTCCACTGCCTCATCGCCTCAATTCACTGGGAGGCTGTCGATGTGGAAAGTATCCGAATCTCAAAAAACCTACCGTCTGGCGCAGAAGACATTAGGCGGCCGC（配列番号１）
【００４５】
関連する実施形態において、偽型腫瘍溶解性ラブドウイルスのゲノムは、以下のフニンの糖タンパク質、又は機能的フラグメント、又はそれらに対し、少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するそれらのバリアントをコードする核酸配列を含む：
MGQFISFMQEIPTFLQEALNIALVAVSLIAIIKGIVNLYKSGLFQFFVFLALAGRSCTEEAFKIGLHTEFQTVSFSMVGLFSNNPHDLPLLCTLNKSHLYIKGGNASFMISFDDIEVLLPQYDVIIQHPADMSWCSKSDDQIWLSQWFMNAVGHDWHLDPPFLCRNRTKTEGFIFQVNTSKTGVNENYAKKFKTGMHHLYREYPDSCLNGKLCLMKAQPTSWPLQCPLDHVNTLHFLTRGKNIQLPRRSLKAFFSWSLTDSSGKDTPGGYCLEEWMLVAAKMKCFGNTAVAKCNLNHDSEFCDMLRLFDYNKNAIKTLNDETKKQVNLMGQTINALISDNLLMKNKIRELMSVPYCNYTKFWYVNHTLSGQHSLPRCWLIKNNSYLNISDFRNDWILESDFLISEMLSKEYSDRQGKTPLTLVDICFWSTVFFTASLFLHLVGIPTHRHIRGEACPLPHRLNSLGGCRCGKYPNLKKPTVWRRRH（配列番号２）
【００４６】
いくつかの好ましい実施形態において、偽型腫瘍溶解性ラブドウイルスのゲノムは、ラッサ系統の糖タンパク質、それらのオープンリーディングフレーム、又はフラグメント、又はそれらのオープンリーディングフレームに対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するそれらのバリアントをコードする以下のコドン最適化核酸配列を含む：
GGTACCCAGTTATATTTGTTACAACAATGGGACAAATCATCACGTTTTTCCAGGAAGTGCCCCACGTCATAGAGGAGGTAATGAATATAGTGCTCATTGCCCTCAGTTTGCTGGCGATCCTGAAAGGGATCTACAACGTGGCGACTTGTGGTCTGTTTGGCTTGGTGTCTTTCCTGCTGTTGTGCGGTCGAAGCTGCAGTACCACCTATAAGGGAGTCTACGAGCTGCAGACACTGGAACTGGACATGGCTAGCTTGAACATGACTATGCCTCTCTCCTGCACAAAGAATAACAGTCACCATTACATAATGGTGGGGAATGAAACTGGTTTGGAACTCACACTTACCAACACATCCATCATAAATCACAAGTTTTGTAACCTCAGTGACGCCCACAAAAAAAACTTGTATGATCACGCTCTCATGTCCATAATCAGCACTTTTCACCTGTCTATCCCTAACTTCAATCAGTACGAGGCTATGTCTTGCGACTTTAACGGGGGCAAAATCAGCGTGCAATACAATCTGAGCCACGCATATGCCGTCGACGCCGCCAACCACTGCGGAACTATCGCTAACGGCGTCCTGCAGACATTCATGCGGATGGCTTGGGGCGGCTCCTATATCGCTCTGGATAGCGGAAAGGGCAGTTGGGACTGTATTATGACCTCATACCAGTACCTTATTATCCAGAACACCACCTGGGAGGATCACTGTCAATTTTCCCGGCCGTCCCCAATCGGCTATCTGGGCCTCCTGAGCCAAAGAACTCGGGACATTTACATATCTCGGCGACTCCTCGGGACATTCACATGGACCCTGTCCGACTCTGAAGGGAATGAAACGCCAGGCGGGTATTGCCTGACCCGATGGATGCTGATCGAAGCCGAGCTCAAGTGCTTTGGAAATACCGCAGTCGCCAAGTGTAATGAAAAGCATGATGAAGAATTTTGCGATATGCTGCGGCTGTTCGATTTCAATAAACAGGCCATTCGACGGCTGAAAACCGAGGCCCAAATGAGTATCCAGCTGATTAACAAGGCCGTTAATGCCCTGATTAATGACCAGCTCATTATGAAAAATCACCTGCGGGATATCATGGGCATTCCTTACTGTAACTATTCCAAGTATTGGTATCTGAACCACACCGTGACTGGCAAAACGTCACTGCCAAGGTGCTGGCTGGTCTCCAATGGAAGCTACCTGAACGAGACCCATTTTTCCGATGATATCGAGCAGCAGGCCGATAATATGATTACCGAACTGTTGCAGAAAGAATACATGGACCGCCAGGGCAAAACTCCACTTGGGTTGGTCGACCTGTTTGTGTTCTCTACCAGCTTCTACTTGATTAGCATTTTCCTGCACCTGGTGCGCATCCCCACGCACAGACATGTCATCGGTAAGCCATGCCCTAAGCCGCATAGACTCAACCATATGGGGATTTGCTCCTGTGGTCTCTATAAACACCCCGGCGTGCCTGTCAAATGGAAGAGGTGAGCGGCCGC（配列番号３）
【００４７】
関連する実施形態において、偽型腫瘍溶解性ラブドウイルスのゲノムは、以下のラッサの糖タンパク質、又は機能的フラグメント、又はそれらに対し、少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するそれらのバリアントをコードする核酸配列を含む：
MGQIITFFQEVPHVIEEVMNIVLIALSLLAILKGIYNVATCGLFGLVSFLLLCGRSCSTTYKGVYELQTLELDMASLNMTMPLSCTKNNSHHYIMVGNETGLELTLTNTSIINHKFCNLSDAHKKNLYDHALMSIISTFHLSIPNFNQYEAMSCDFNGGKISVQYNLSHAYAVDAANHCGTIANGVLQTFMRMAWGGSYIALDSGKGSWDCIMTSYQYLIIQNTTWEDHCQFSRPSPIGYLGLLSQRTRDIYISRRLLGTFTWTLSDSEGNETPGGYCLTRWMLIEAELKCFGNTAVAKCNEKHDEEFCDMLRLFDFNKQAIRRLKTEAQMSIQLINKAVNALINDQLIMKNHLRDIMGIPYCNYSKYWYLNHTVTGKTSLPRCWLVSNGSYLNETHFSDDIEQQADNMITELLQKEYMDRQGKTPLGLVDLFVFSTSFYLISIFLHLVRIPTHRHVIGKPCPKPHRLNHMGICSCGLYKHPGVPVKWKR（配列番号４）
【００４８】
偽型ウイルスのゲノムをコードする偽型ウイルスのゲノム又はプラスミドが完全なアレナウイルスの糖タンパク質前駆体をコードして、ＧＰ１とＧＰ２の両方が、発現され、偽型ウイルスのエンベロープの形成に寄与するようになっていることが好ましい。他の実施形態において、偽型ウイルスのゲノムをコードする偽型ウイルスのゲノム又はプラスミドは、完全なアレナウイルスの糖タンパク質前駆体に満たないものをコードする。例えば、実施形態において、組換え型ウイルスゲノムをコードする偽型ウイルスのゲノム又はプラスミドは、短縮型ＧＰＣ又はＧＰ１のみ若しくはＧＰ２のみをコードする。
【００４９】
さらなる異種核酸配列
他の好ましい実施形態において、偽型腫瘍溶解性ラブドウイルスは、α−フェトプロテイン及び癌胎児性抗原等の癌胎児性抗原、ＣＡ１２５等の表面糖タンパク質、Ｈｅｒ２等の腫瘍遺伝子、ドパクロムトートメラーゼ（ＤＣＴ）、ＧＰ１００、及びＭＡＲＴ１等の黒色腫関連抗原、ＭＡＧＥタンパク質及びＮＹ−ＥＳＯ１等の癌精巣抗原、ＨＰＶ  Ｅ６及びＥ７等のウイルスの癌遺伝子、並びに、通常は胚組織若しくは胚体外組織に制限されているが、腫瘍において異所性に発現する、ＰＬＡＣ等のタンパク質等の１つ又は複数の腫瘍抗原、又は腫瘍関連抗原のバリアントを発現する。腫瘍関連抗原の「バリアント」は、（ａ）腫瘍関連抗原性タンパク質由来の少なくとも１つの腫瘍関連抗原のエピトープを含み、（ｂ）腫瘍関連抗原性タンパク質に対し、少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、又は少なくとも９５％同一である、タンパク質を指す。広く受け入れられている抗原性エピトープを要約するデータベースは、Ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｂｒｕｇｇｅｎ  Ｐ、Ｓｔｒｏｏｂａｎｔ  Ｖ、Ｖｉｇｎｅｒｏｎ  Ｎ、Ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｅｙｎｄｅ  Ｂによって「Ｄａｔａｂａｓｅ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌ−ｄｅｆｉｎｅｄ  ｈｕｍａｎ  ｔｕｍｏｒ  ａｎｔｉｇｅｎｓ：  ｔｈｅ  ２０１３  ｕｐｄａｔｅ」、Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎ  ２０１３  １３：１５及びｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒｉｍｍｕｎｉｔｙ．ｏｒｇ／ｐｅｐｔｉｄｅにおいて提供される。特に好ましい実施形態において、偽型腫瘍溶解性ラブドウイルスは、ＭＡＧＥＡ３、ヒトパピローマウイルスＥ６／Ｅ７融合タンパク質、ヒト前立腺６回膜貫通型上皮抗原タンパク質、又は癌精巣抗原１を発現する。関連する態様において、腫瘍抗原を発現する偽型腫瘍溶解性ラブドウイルスは、癌を治療するために癌を有する哺乳動物に対し補体阻害剤と共に共投与される。哺乳動物は、腫瘍抗原を発現する偽型腫瘍溶解性ラブドウイルスを投与する前に、自然に存在するか、又は哺乳動物に対し腫瘍抗原を投与することによって確立されている、腫瘍抗原に対する既存の免疫を有し得る。
【００５０】
腫瘍特異的抗原をコードするＭＡＧＥファミリーの遺伝子は、Ｄｅ  Ｐｌａｅｎ他、Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ４０：３６０−３６９（１９９４）において論じられている。ＭＡＧＥＡ３は、黒色腫、非小細胞肺癌、頭頚部癌、結腸直腸癌、及び膀胱癌を含む多種多様な腫瘍において発現している。腫瘍関連抗原のエピトープはＭＡＧＥＡ３についてすでに同定されており、それらのエピトープのいずれも偽型腫瘍溶解性ラブドウイルスによって発現され得る。
【００５１】
ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）の腫瘍性タンパク質Ｅ６／Ｅ７は、子宮頸癌において構成的に発現している（Ｚｕｒ  Ｈａｕｓｅｎ、Ｈ（１９９６）Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ１２８８：Ｆ５５−Ｆ７８）。さらに、ＨＰＶの１６型及び１８型は、７５％の子宮頸癌の原因である（Ｗａｌｂｏｏｍｅｒｓ  ＪＭ（１９９９）Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ１８９：１２−１９）。
【００５２】
前立腺６回膜貫通型上皮抗原（ｈｕＳＴＥＡＰ）は、最近同定されたタンパク質であり、前立腺癌において過剰発現していること、並びに、膵臓、結腸、乳房、精巣、頸部、膀胱、卵巣、急性リンパ球性白血病（ｌｙｐｈｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）、及びユーイング肉腫を含む複数の癌細胞株において上方制御されていることが示されている（Ｈｕｂｅｒｔ  ＲＳ他、１９９９）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ９６：１４５２３−１４５２８）。ＳＴＥＡＰ遺伝子は、親水性のアミノ及びカルボキシ末端ドメインに隣接された６回の起こりうる膜貫通の領域をコードする。
【００５３】
癌精巣抗原１（ＮＹＥＳ０１）は、精巣及び卵巣等の正常成人組織、並びに様々な癌において発現する癌／精巣抗原である（Ｎｉｃｈｏｌａｏｕ  Ｔ他、（２００６）Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ８４：３０３−３１７）。癌精巣抗原は、独特なファミリーの抗原であり、正常成人において、精巣胚細胞に限定された発現を有するが、軟部肉腫、黒色腫、及び上皮癌を含む、様々な固形腫瘍において異常発現する。
【００５４】
他の実施形態において、偽型腫瘍溶解性ラブドウイルスは、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）、腫瘍壊死因子β（ＴＮＦβ）、インターロイキン１（ＩＬ−１）、インターロイキン２（ＩＬ−２）、インターロイキン４（ＩＬ−４）、インターロイキン５（ＩＬ−５）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、インターロイキン１０（ＩＬ−１０）、インターロイキン１２（ＩＬ−１２）、インターロイキン１５（ＩＬ−１５）、インターロイキン２１（ＩＬ−２１）、インターフェロンα（ＩＦＮα）、インターフェロンβ（ＩＦＮβ）、インターフェロンγ（ＩＦＮγ）等の１つ又は複数のサイトカイン、並びにそれらのバリアント及びフラグメントを発現する。関連する態様において、サイトカインを発現する偽型腫瘍溶解性ラブドウイルスは、癌を治療するために癌を有する哺乳動物に対し補体阻害剤と共に共投与される。他の実施形態において、偽型腫瘍溶解性ラブドウイルスは、細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ４）、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）、並びにそのリガンドＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ）、Ｔ細胞膜タンパク質３（ＴＩＭ３）、ガレクチン９（ＧＡＬ９）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３）、Ｔ細胞活性化のＶドメイン免疫グロブリン（Ｉｇ）含有抑制因子（ＶＩＳＴＡ）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、Ｂ及びＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）、又はそれらの組合せ等の免疫チェックポイントタンパク質に結合し、その活性をアンタゴナイズする１つ又は複数の免疫チェックポイント阻害剤を発現する。好ましい実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ１、若しくは抗ＣＬＴＡ４抗体、又はそれらの抗原結合フラグメント若しくは融合タンパク質である。いくつかの実施形態において、偽型腫瘍溶解性ラブドウイルスは、イピリムマブ（ヤーボイ（Ｙｅｒｖｏｙ）（登録商標）、ＢＭＳ）若しくはトレメリムマブ（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ／ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）等のＣＴＬＡ４に対するモノクローナル抗体、及び／又はニボルマブ（オプジーボ（Ｏｐｄｉｖｏ）（登録商標）Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ；コードネーム  ＢＭＳ−９３６５５８）、ペンブロリズマブ（キイトルーダ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ）（登録商標））、若しくはピディリズマブ等のＰＤ−１に対するモノクローナル抗体を発現する。
【００５５】
本明細書において記載される方法による偽型腫瘍溶解性ラブドウイルスの投与経路は、病変の位置及び性質によって当然に変動し、例えば、皮内、経皮、非経口、血管内（静脈内又は動脈内）、筋肉内、鼻腔内、皮下、局所、経皮、気管内、腹腔内、膀胱内、腫瘍内、吸入、灌流、洗浄、直接注入、食物性及び経口投与、並びに製剤を含む。好ましい実施形態において、組合せの腫瘍溶解性ラブドウイルスと、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物は、腫瘍内注入及び／又は血管内で、癌を有する哺乳動物に投与されるが、代替的に、医薬組成物は、米国特許第５，５４３，１５８号、米国特許第５，６４１，５１５号、及び米国特許第５，３９９，３６３号（各々は参照によりその全てが本明細書に具体的に組み込まれる）に記載されるように、腫瘍内、非経口、静脈内、動脈内、皮内、筋肉内、経皮、頭蓋内、又は腹腔内投与され得る。本明細書において使用されるとき、「担体」は、任意及び全ての、溶媒、分散媒、ビヒクル、コーティング、希釈剤、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤、緩衝液、担体、溶液、懸濁液、コロイド等を含む。薬学的に活性な物質のためのそのような媒体及び剤の使用は、当該技術分野において周知である。任意の従来の媒体又は剤が活性成分と不適合である場合を除き、治療用の組成物におけるその使用が意図されている。補助的な活性剤もまた、組成物中に組み入れることができる。
【００５６】
ある実施形態において、治療される腫瘍は、少なくとも最初は、切除可能ではないことがある。治療用ウイルスコンストラクトによる治療は、縁部における縮小により、又はある特定の浸潤部分の排除によって、腫瘍の切除可能性を向上し得る。治療に続いて、切除が可能になり得る。切除に続くさらなる治療は、腫瘍部位における顕微鏡的に残存する疾患の排除に寄与するであろう。
【００５７】
原発性腫瘍又は切除後の腫瘍床の典型的な治療経路は、複数回の投与を含むであろう。典型的な原発性腫瘍の治療は、１、２、３、４、５、６週間の期間又はそれ以上にわたる、１、２、３、４、５、６又はそれ以上の回数の投与を含む。２週間のレジメンは、１、２、３、４、５、６、又はそれ以上の回数繰り返され得る。治療経路の間、計画された投与の完了について、再評価され得る。いくつかの実施形態において、補体阻害剤と共投与されるとき、偽型腫瘍溶解性ラブドウイルスの第２、第３、第４、第５、第６、又はそれ以上の続く投与は、以前の投与された用量と比べて、効果の実質的な減少及び／又は用量の実質的な増加なしに起こる。
【００５８】
治療は様々な「単位用量」を含み得る。単位用量は、所定の量の治療用組成物を含むと定義される。投与されるべき量、及び特定の経路及び製剤は、臨床の技術分野における当業者の技能の範囲内である。単位用量は、単回注入として投与する必要がないが、所定の期間にわたる連続注入を含んでもよい。本発明の単位用量は、便宜的に、プラーク形成単位（ｐｆｕ）又はウイルスコンストラクトのウイルス粒子を単位として記載してもよい。単位用量は、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１０１０、１０１１、１０１２、１０１３ｐｆｕ又はｖｐ、及びそれ以上の範囲である。代替的に、ウイルスの種類及び取得可能な力価に応じて、１〜１００、１０〜５０、１００〜１０００、又は約１×１０４、１×１０５、１×１０６、１×１０７、１×１０８、１×１０９、１×１０１０、１×１０１１、１×１０１２、１×１０１３、１×１０１４、若しくは１×１０１５若しくはそれ以上までの感染性ウイルス粒子（ｖｐ）を患者又は患者の細胞に送達する。
【００５９】
語句「薬学的に許容可能」又は「薬理学的に許容可能」は、ヒトに投与されるとき、アレルギー反応又は同様の有害反応をもたらさない分子実体及び組成物を指す。タンパク質を活性成分として含む水性組成物の調製は、当該技術分野において十分に理解されている。そのような組成物が溶液又は懸濁液のいずれかの注入可能なものとして調整されること、注入前に液体又は懸濁液とするために好適な固体形態もまた調製され得ることが典型的である。
【００６０】
ＩＩ．補体阻害剤
様々な態様において、治療及び／又は防止を必要とする哺乳動物に対して、（ｉ）アレナウイルスの糖タンパク質によって偽型化された複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスと（ｉｉ）１つ又は複数の補体阻害剤とを、癌を治療及び／又は防止するのに有効な量で混合して共投与することを含む、癌を治療及び／又は防止、及び／又は転移を治療及び／又は防止するための併用療法が提供される。
【００６１】
補体系は、自然免疫における重要な構成要素である。補体系は、３つの別個の経路、古典経路、副経路、及びレクチン経路のいずれか１つによって活性化でき、それらの全ては、それらの認識の様式について異なるが、中心的な構成要素Ｃ３をＣ３ａ及びＣ３ｂへと切断するＣ３転換酵素の生成において収束する。続いて、Ｃ３転換酵素は、別のＣ３ｂ分子をＣ３転換酵素へと含ませることによって、Ｃ５転換酵素に変化する。このＣ５転換酵素は、Ｃ５を切断して、Ｃ５ａの放出とＣ５ｂ−９複合体の形成とをもたらす。補体阻害剤は、Ｃ３ａ若しくはＣ３ａ受容体を介するシグナル伝達、又はＣ５ａ若しくはＣ５ａ受容体を介するシグナル伝達を生じる補体活性化経路の活性化及び／又は伝播を防止又は低減する。組合せにおいて有用な補体阻害剤は、古典経路、副経路、若しくはレクチン経路、又は共有された終末経路に作用するものを含む。
【００６２】
Ｃ３を標的とする阻害剤は、補体活性化プロセスにおけるＣ３の中心的な位置のために、全ての３つ（古典、副、及びレクチン）の経路を阻害できる。いくつかの実施形態において、組合せの補体阻害剤は、Ｃ３を阻害する。Ｃ３を阻害する補体阻害剤は、ヒト化モノクローナル抗体Ｈ１７（ＥｌｕＳｙｓ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、環状ペプチドコンプスタチン及び類似体、ペプチド模倣薬、及び４（１ＭｅＷ）／ＰＯＴ−４（Ｐｏｔｅｎｔｉａ）、４（１ＭｅＷ）／ＡＰＬ−１、ＡＰＬ−２（Ａｐｅｌｌｉｓ）、Ｃｐ４０／ＡＭＹ−１０１、ＰＥＧ−Ｃｐ４０（Ａｍｙｎｄａｓ）等のそれらの誘導体、並びに参照により各々の内容が本明細書に組み込まれる米国特許第６，３１９，８９７号及び米国特許第７，８８８，３２３号及び国際公開第２０１３／０３６７７８号Ａ２に記載されるもの、ＴＴ３０（ＣＲ２／ＣＦＨ；Ａｌｅｘｉｏｎ）、ＭｉｎｉＣＦＨ（Ａｍｙｎｄａｓ）等のＣＦＨに基づくタンパク質、ｓＣＲ１（ＣＤＸ−１１３５；Ｃｅｌｌｄｅｘ／Ａｖａｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ミクロセプト（Ｍｉｃｒｏｃｅｐｔ）、（ＡＰＴ０７０）及びＴＴ３２（ＣＲ２／ＣＲ１；Ａｌｅｘｉｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）等のＣＲ１に基づくタンパク質を非限定的に含む。好ましい実施形態において、補体阻害剤は、コンプスタチン若しくは類似体、ペプチド模倣薬、又はそれらの誘導体である。
【００６３】
Ｃ５を標的とする阻害剤はまた、３つ全ての経路を阻害できる。したがって、他の実施形態において、組合せの補体阻害剤は、補体成分５（Ｃ５）を阻害する。Ｃ５を標的とする補体阻害剤は、（Ｓｏｌｉｒｉｓ；Ａｌｅｘｉｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）及びＬＦＧ３１６（Ｎｏｖａｒｔｉｓ／Ｍｏｒｐｈｏｓｙｓ）等のモノクローナル抗体、ムボディナ（Ｍｕｂｏｄｉｎａ）（Ａｄｉｅｎｎｅ）等のヒトミニボディ、パキセリズマブ（Ａｌｅｘｉｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）等のヒト化単鎖可変フラグメント（ｓｃＦＶ）、コバーシン（Ｃｏｖｅｒｓｉｎ）（ＯｍＣｌ；Ｖｏｌｕｔｉｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ−Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）等の組換えタンパク質、ＡＲＣ１００５（ＮｏｖｏＮｏｒｄｉｓｋ）、ＡＲＣ１９０５（Ｏｐｈｔｈｏｔｅｃｈ）、及びＳＯＭＡｍｅｒｓ（ＳｏｍａＬｏｇｉｃ）等のアプタマー、ＳＯＢ１００２（アルブミン結合ドメインと融合されている；Ｓｗｅｄｉｓｈ  Ｏｒｐａｈｎ  Ｂｉｏｖｉｔｒｕｍ）等のアフィボディ、抗Ｃ５ｓｉＲＮＡ（Ａｌｎｙｌａｍ）等のｓｉＲＮＡを非限定的に含む。好ましい実施形態において、補体阻害剤は、Ｃ５に結合して、そのＣ５ａ及びＣ５ｂへの切断を阻害するヒト化モノクローナル抗体である、エクリズマブである。
【００６４】
古典経路は、抗原抗体複合体の形成によって活性化される。Ｃ１は、Ｃ１ｑ、２つのＣ１ｒ分子、及び２つのＣ１ｓ分子からなるカスケードの第１の酵素複合体である。この複合体は、Ｃ１ｑドメインを介して抗原抗体複合体に結合し、カスケードを開始する。一度活性化すると、Ｃ１ｓは、Ｃ４を切断して、最終的にＣ２に結合するＣ４ｂをもたらす。Ｃ２は、Ｃ１ｎｉよって切断されて、活性化形態となり、Ｃ２ａがＣ４ｂと結合し（Ｃ４ｂ２ａ）、古典経路のＣ３転換酵素を形成する。続いて、Ｃ４ｂ２ａは、さらなるＣ３ｂ分子の結合によって、Ｃ５転換酵素へと転換する。古典経路は、例えば、Ｃ２ａ及び／又はＣ２のＣ２ａ部分を標的とすることによって特異的に阻害できる。一態様において、古典経路の阻害剤は、Ｃ２とＣ４との間の相互作用と干渉するモノクローナル抗Ｃ２ａ抗体である。古典経路は、例えば、Ｃ２ａ及び／又はＣ２のＣ２ａ部分を標的とすることによって特異的に阻害できる。一態様において、古典経路の阻害剤は、Ｃ２とＣ４との間の相互作用と干渉するモノクローナル抗Ｃ２ａ抗体である。他の実施形態において、補体阻害剤はＣ１を阻害する。Ｃ１（例えばＣ１ｓ）を阻害する補体阻害剤は、精製又は組換え型のＣ１エステラーゼ阻害剤（例えば、シンライズ（Ｃｉｎｒｙｚｅ）（ＶｉｒｏＰｈａｒｍａ／Ｂａｘｔｅｒ））、並びにＴＮＴ００３、ＴＮＴ００９、及びＴＮＴ０１０（Ｔｒｕｅ  Ｎｏｒｔｈ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）等のモノクローナル抗体を非限定的に含む。好ましい実施形態において、補体阻害剤は、シンライズ、ＴＮＴ００９、又はＴＮＴ０１０である。因子Ｉはまた、古典のＣ３転換酵素を阻害することによって古典経路を阻害する。
【００６５】
副経路（ＡＰ）は、特異的な認識分子を欠いている。この経路において、Ｃ３転換酵素の会合は、Ｃ３ｂの活性剤表面への共有結合によって開始される。次のステップにおいて、補体因子Ｂ（ＣＦＢ）は、表面に結合したＣ３ｂへと結合し、続いて、補体因子Ｄ（ＣＦＤ）によって切断され、Ｃ３ｂＢｂを生成する。続いて、Ｃ３ｂＢｂは、さらなるＣ３ｂ分子の結合によって、Ｃ５転換酵素へと転換する。いくつかの実施形態において、補体阻害剤はＣＦＢ及び／又はＣＦＤを阻害する。ＣＦＢを阻害する補体阻害剤は、ＴＡ１０６（Ａｌｅｘｉｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）等のモノクローナル抗体、及び抗ＦＢ  ｓｉＲＮＡ（Ａｌｎｙｌａｍ）等のｓｉＲＮＡを含む。ＣＦＤを阻害する補体阻害剤は、ＦＣＦＤ４５１４Ｓ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）等のモノクローナル抗体、及びランパリズマブ（Ｇｅｎｅｔｅｃｈ）等の抗原結合抗体フラグメントを含む。ＣＦＤ及びＣＦＢを阻害する補体阻害剤は、ＳＯＭＡｍｅｒｓ（ＳｏｍａＬｏｇｉｃ）等のアプタマー、及びＮｏｖａｒｔｉｓより入手可能なもの等の小分子阻害剤を含む。可溶性糖タンパクである因子Ｈ（不活性Ｃ３ｂ）もまた、Ｃ３ｂへの結合について因子Ｂと競合することによってＣ３転換酵素の形成を阻害することによって、副経路を阻害する。
【００６６】
補体の生物活性を阻害する剤の他の例は、以下を含むが、これらには限定されない：Ｃ５ａ受容体アンタゴニスト、例えば、ＮＧＤ２０００−１（Ｎｅｕｒｏｇｅｎ，Ｃｏｒｐ．、Ｂｒａｎｆｏｒｄ、Ｃｏｎｎ．）、ＣＣＸ１６８（ＣｈｅｍｏＣｅｎｔｒｙｘ）、ＰＭＸ５３（Ｐｒｏｍｉｃｓ／Ｃｅｐｈａｌｏｎ）、及びＡｃＰｈｅ［Ｏｒｎ−Ｐｒｏ−Ｄ−シクロヘキシルアラニン−Ｔｒｐ−Ａｒｇ］（ＡｃＦ−［ＯＰｄＣｈａＷＲ］；例えばＳｔｒａｃｈａｎ，Ａ．Ｊ．他、Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１３４（８）：１７７８−１７８６（２００１）を参照）；因子Ｉ（不活性Ｃ４ｂ）；可溶性第１型補体受容体（ｓＣＲ１；例えば米国特許第５，８５６，２９７号を参照）及びｓＣＲ１−ｓＬｅ（Ｘ）（例えば米国特許第５，８５６，３００号を参照）；細胞膜補因子タンパク質（ＭＣＰ）、崩壊促進因子（ＤＡＦ）、及びＣＤ５９、並びにそれらの可溶性組換え型（Ａｓｈｇａｒ，Ｓ．Ｓ．他、Ｆｒｏｎｔ  Ｂｉｏｓｃｉ．５：Ｅ６３−Ｅ８１（２０００）、及びＳｏｈｎ，Ｊ．Ｈ．他、Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｔｈａｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．４１（１３）：４１９５−４２０２（２０００））；少なくとも２つの補体阻害性ドメインを有するキメラ補体阻害剤タンパク質（例えば米国特許第５，６７９，５４６号、米国特許第５，８５１，５２８号、及び米国特許第５，６２７，２６４号を参照）；並びに小分子アンタゴニスト（例えばＰＣＴ国際公開第０２／４９９９３号、米国特許第５，６５６，６５９号、米国特許第５，６５２，２３７号、米国特許第４，５１０，１５８号、米国特許第４，５９９，２０３号、及び米国特許第４，２３１，９５８号を参照）。他の公知の補体阻害剤は当該技術分野において知られ、本明細書において記載される方法に包含される。さらに、（例えば、補体活性を阻害する剤を同定するために）補体活性を測定する方法もまた当該技術分野において公知である。そのような方法は、例えば、５０％溶血性補体（ＣＨ５０）アッセイを用いること（例えば、Ｋａｂａｔ他、Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第２版（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｃ．Ｔｈｏｍａｓ，Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ、Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄ、Ｉｌｌ．）、ｐ．１３３−２３９（１９６１）を参照）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）を用いること、リポソーム免疫測定法（ＬＩＡ）を用いること、（例えば、Ｊａｓｋｏｗｓｋｉ他、Ｃｌｉｎ．Ｄｉａｇｎ．Ｌａｂ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６（１）：１３７−１３９（１９９９）を参照）を含む。
【００６７】
組合せによる補体阻害剤は、血管内（静脈内及び／又は動脈内）、筋肉内、皮下、硝子体内、並びに経口を含む、任意の好適な投与経路によって、癌を有する哺乳動物に投与することができる。
【００６８】
組合せによる補体阻害剤は、哺乳動物において癌を治療及び／又は防止するのに有効な混合量で、偽型複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスと共に、哺乳動物に共投与される。補体阻害剤は、哺乳動物において、補体活性を阻害するのに有効な量で投与されることが典型的である。適切な用量は、当該技術分野において公知であり、投与される阻害剤に依存する。抗体に関して、適切な用量は、一般的に０．１ｍｇ／患者の体重のｋｇ〜２０ｍｇ／患者の体重のｋｇ、好ましくは、１ｍｇ／患者の体重のｋｇ〜１０ｍｇ／患者の体重のｋｇの範囲である。例えば、エクリズマブは、１、２、３、４、又はそれ以上の週間、７日目ごとに、６００又は９００ｍｇの用量で静脈内注入によって投与され得、その後、用量を、１回投与される（７日後）９００又は１２００ｍｇへと増加でき、続いて、その後に２週間ごとに９００又は１２００ｍｇとすることができる。パキセリズマブは、単回の２．０ｍｇ／ｋｇのボーラスによって投与でき、任意選択で、２０〜２４時間の０．０５ｍｇ／ｋｇ／時間の注入が後に続く。シンライズは、３又は４日ごとに、静脈内に１０００Ｕで投与できる。ペプチドコンプスタチン及びその類似体（例えばＣＰ４０）は、例えば約０．５ｍｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇの用量で、１回（例えば単回のボーラス）又はそれ以上投与できる。例えば、コンプスタチン又はそれらの類似体は、２〜１０ｍｇ／ｋｇの単回ボーラスとして投与でき、任意選択で、連続注入が後に続く。
【００６９】
いくつかの実施形態において、癌を治療及び／又は防止するために、単一の補体阻害剤が、偽型複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスと共に共投与される。他の実施形態において、癌を治療及び／又は防止するために、２つ以上の補体阻害剤の組合せが、偽型複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスと共に共投与される。例えば、哺乳動物において癌を治療及び／又は防止するために、古典経路の阻害剤と副経路の阻害剤の組合せが、偽型複製可能腫瘍溶解性ラブドウイルスと共に哺乳動物に共投与される。
【００７０】
さらなる治療法
本発明の化合物及び方法は、癌と関連して使用できる。本明細書において記載される治療方法の有効性を高めるために、本明細書において記載される組成物を、癌の防止／治療に有効な他の薬剤と組み合わせることが望ましくあり得る。例えば、癌の治療は、本発明の治療用化合物と、抗癌剤又は手術等の他の抗癌治療とで実施され得る。
【００７１】
「抗癌」剤は、対象において、例えば、癌細胞におけるアポトーシスを含む癌細胞の殺傷、癌細胞の増殖率の低減、転移の発生若しくは数の低減、腫瘍サイズの低減、腫瘍増殖の阻害、腫瘍若しくは癌細胞に対する血液供給の低減、癌細胞若しくは腫瘍に対する免疫応答の促進、癌の増殖の防止若しくは阻害、又は癌を有する対象の寿命の増加によって、癌にとって悪い影響を及ぼす場合がある。抗癌剤は、生物学的製剤（生物学的療法）、化学療法剤、及び放射線療法剤を含む。より一般的には、これらの他の組成物は、細胞の殺傷又は細胞の増殖を阻害するのに有効な量で混合されて提供される。このプロセスは、ウイルス又はウイルスコンストラクトと剤（複数可）又は複数の因子（複数可）とを同時に細胞と接触させることを含む。これは、両方の剤を含む単一の組成物若しくは医薬製剤を細胞と接触させることによって、又は、１つの組成物がウイルスを含み、他が第２の剤（複数可）を含む２つの異なる組成物若しくは製剤と細胞と同時に接触させることによって、達成され得る。
【００７２】
化学療法剤及び放射線療法剤に対する腫瘍細胞の耐性は、臨床腫瘍学における主要な問題を表す。現在の癌研究の１つの終点は、遺伝子療法と組み合わせることによって化学療法及び放射線療法の有効性を向上させる方法を見出だすことである。例えば、レトロウイルスベクター系によって脳腫瘍へと送達されるとき、単純ヘルペスチミジンキナーゼ（ＨＳ−ｔＫ）遺伝子は、抗ウイルス剤ガンシクロビルに対する感受性を成功裏に導入する（Ｃｕｌｖｅｒ他、１９９２）。本発明に関連して、ポックスウイルス療法が、他のアポトーシス促進剤又は細胞周期制御剤に加えて、化学療法、放射線療法、免疫療法、又は他の生物学的介入と組み合わせて同様に使用され得る。
【００７３】
代替的に、ウイルス療法は、分から週の範囲の間隔によって他の治療に先行又は後続し得る。他の剤及びウイルスが、個別に細胞に適用される実施形態において、各々の送達の間にかなりの期間が過ぎないようにして、剤及びウイルスが、細胞に対する併用効果を有益に発揮することがまだできるようにすることが、一般的に確保されている。そのような状況において、細胞を両方の治療法と、互いに約１２〜２４時間以内、より好ましくは、互いに６〜１２時間以内に接触し得る。いくつかの状況において、治療のための期間を十分に延長することが望ましいが、それぞれの投与の間に、数日（２、３、４、５、６、又は７日）から数週間（１、２、３、４、５、６、７、又は８週間）経過する。
【００７４】
癌療法はまた、化学と放射線の両方に基づく治療との様々な併用療法を含む。併用化学療法は、例えば、シスプラチン（ＣＤＤＰ）、カルボプラチン、プロカルバジン、メクロレタミン、シクロホスファミド、カンプトテシン、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、ニトロスウレア（ｎｉｔｒｏｓｕｒｅａ）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、プリコマイシン（ｐｌｉｃｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシン、エトポシド（ＶＰ１６）、タモキシフェン、ラロキシフェン、エストロゲン受容体結合剤、タキソール、ゲムシタビン、ナベルビン、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、トランス白金（ｔｒａｎｓｐｌａｔｉｎｕｍ）、５−フルオロウラシル、ビンクリスチン及びメトトレキサート、テマゾロミド（Ｔｅｍａｚｏｌｏｍｉｄｅ）、又は、先行するものの任意の類似体若しくは誘導バリアントを含む。化学療法の生物学的療法との組合せは、生物化学療法として知られている。
【００７５】
ＤＮＡに損傷を引き起こし、広範に使用されている他の因子は、γ線、Ｘ線、プロトンビーム、及び／又は放射性同位体の腫瘍細胞への直接的な送達として知られているものを含む。マイクロ波及びＵＶ照射等のＤＮＡ損傷因子の他の形態もまた、企図されている。これらの因子の全ては、ＤＮＡ、ＤＮＡの前駆体、ＤＮＡの複製及び修復、並びに、染色体の会合と維持に対し広範囲の損傷を与える可能性が最も高い。Ｘ線の線量範囲は、長期間（３〜４週間）に対して５０〜２００レントゲンの１日用量から２０００〜６０００レントゲンの単回用量までの範囲までである。放射性同位体の線量範囲は、広範囲に変動し、同位体の半減期、放出された放射線の強さと型、新生物細胞による取り込みに依存する。
【００７６】
細胞に適用されるとき、用語「接触した」及び「曝露された」は、本明細書において、治療用コンストラクト及び化学療法剤又は放射線療法剤が標的細胞に送達されるか、又は標的細胞との直接的に並置されるプロセスを記載するのに使用される。細胞の殺傷又は停止を達成するために、両方の剤が、細胞を殺傷するか、又は細胞の分裂を防止するのに有効な混合量で、細胞に送達される。
【００７７】
細胞増殖を誘導するタンパク質は、機能に応じて様々なカテゴリーに分類される。これらのタンパク質の全ての共有する特徴は、細胞増殖を制御するそれらの能力である。例えば、シス腫瘍遺伝子であるＰＤＧＦの形態は、分泌された増殖因子である。腫瘍遺伝子は、増殖因子をコードする遺伝子から生じることがまれであり、現在では、シス腫瘍遺伝子は、唯一の知られている天然に存在する腫瘍遺伝子の増殖因子である。本発明の一実施形態において、細胞増殖の特定の誘導因子に対するアンチセンスｍＲＮＡが、細胞増殖の誘導因子の発現を防止するのに使用されることが企図されている。
【００７８】
腫瘍抑制腫瘍遺伝子は、過剰な細胞増殖を阻害するよう機能する。これらの遺伝子の不活化は、それらの阻害活性を破壊し、制御されない増殖をもたらす。腫瘍抑制因子は、ｐ５３、ｐ１６、及びＣ−ＣＡＭを含む。本発明によって使用され得る他の遺伝子は、Ｒｂ、ＡＰＣ、ＤＣＣ、ＮＦ−１、ＮＦ−２、ＷＴ−１、ＭＥＮ−Ｉ、ＭＥＮ−ＩＩ、ｚａｃ１、ｐ７３、ＶＨＬ、ＭＭＡＣ１／ＰＴＥＮ、ＤＢＣＣＲ−１、ＦＣＣ、ｒｓｋ−３、ｐ２７、ｐ２７／ｐ１６融合、ｐ２１／ｐ２７融合、抗血栓遺伝子（例えば、ＣＯＸ−１、ＴＦＰＩ）、ＰＧＳ、Ｄｐ、Ｅ２Ｆ、ｒａｓ、ｍｙｃ、ｎｅｕ、ｒａｆ、ｅｒｂ、ｆｍｓ、ｔｒｋ、ｒｅｔ、ｇｓｐ、ｈｓｔ、ａｂｌ、Ｅ１Ａ、ｐ３００、血管新生に関与する遺伝子（例えば、ＶＥＧＦ、ＦＧＦ、トロンボスポンジン、ＢＡＩ−１、ＧＤＡＩＦ、又はそれらの受容体）、及びＭＣＣを含む。
【００７９】
アポトーシス、又はプログラム細胞死は、正常な胚発生において重要なプロセスであり、成人組織におけるホメオスタシスを維持し、発癌を抑制する（Ｋｅｒｒ他、１９７２）。Ｂｃｌ−２ファミリーのタンパク質及びＩＣＥ様プロテアーゼは、他の系においてアポトーシスの重要な制御因子及びエフェクターであると実証されてきている。Ｂｃｌ  ２タンパク質は、濾胞性リンパ腫と関連して発見され、アポトーシスを制御すること、及び多様なアポトーシス刺激に応答して細胞の生存を増強することにおいて、顕著な役割を果たす（Ｂａｋｈｓｈｉ他、１９８５；Ｃｌｅａｒｙ  ａｎｄ  Ｓｋｌａｒ、１９８５；Ｃｌｅａｒｙ他、１９８６；Ｔｓｕｊｉｍｏｔｏ他、１９８５；Ｔｓｕｊｉｍｏｔｏ  ａｎｄ  Ｃｒｏｃｅ、１９８６）。進化的に保存されたＢｃｌ−２タンパク質は、現在、関連するタンパク質のファミリーのメンバーであるとして認識され、死のアゴニスト又は死のアンタゴニストとして分類できる。
【００８０】
その発見に続いて、Ｂｃｌ２は、様々な刺激によって引き起こされる細胞死を抑制するよう作用する。同様に、共通の構造的配列的相同性を共有するＢｃｌ−２細胞死制御タンパク質のファミリーが存在することが現在明らかである。これらの異なるファミリーのメンバーは、Ｂｃｌ２と同様の機能を有する（例えば、ＢｃｌＸＬ、ＢｃｌＷ、ＢｃｌＳ、Ｍｃｌ−１、Ａ１、Ｂｆｌ−１）か、又はＢｃｌ２機能と反対に作用して細胞死を促進する（例えば、Ｂａｘ、Ｂａｋ、Ｂｉｋ、Ｂｉｍ、Ｂｉｄ、Ｂａｄ、Ｈａｒａｋｉｒｉ）かのいずれかであると示されてきている。
【００８１】
癌を有する個人の約６０％は、防止、診断、又は病期分類、治癒的及び緩和的な手術を含むいくつかの型の手術を経験する。治癒的手術は、本発明の治療、化学療法、放射線療法、ホルモン療法、遺伝子療法、免疫療法、及び／又は代替治療等の他の治療と組み合わせて使用し得る癌治療である。
【００８２】
治癒的手術は、癌組織の全部又は一部を物理的に除去、切除及び／又は破壊する切除を含む。腫瘍切除は、腫瘍の少なくとも一部の物理的な除去を指す。腫瘍切除に加えて、手術による治療は、レーザー手術、凍結手術、電気手術、及び顕微鏡的に制御された手術（モース手術）を含む。本発明が、表在性癌、前癌、又は付随する量の正常組織の除去と組み合わせて使用し得ることもさらに企図される。
【００８３】
癌性細胞、組織、又は腫瘍の全体の一部の切除の際、生体内に空洞を形成することができる。治療は、灌流、直接注入、又はさらなる抗癌治療の領域への局所適用によって達成し得る。そのような治療は、例えば、１、２、３、４、５、６、若しくは７日ごと、又は１、２、３、４、及び５週間ごと、又は１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、若しくは１２ヶ月ごとに繰り返し得る。同様に、これらの治療は変動する用量であり得る。
【００８４】
治療の治療有効性を向上するために、他の剤が本明細書において記載される組成物及び方法と組み合わせて使用され得るということが企図される。これらのさらなる剤は、上述の免疫チェックポイント阻害剤などの免疫調節薬、細胞表面受容体及びギャップジャンクションの情報制御に影響を及ぼす剤、細胞分裂停止剤及び分化剤、細胞接着の阻害剤、過剰増殖細胞のアポトーシス誘導因子に対する感受性を増加する剤、又は他の生物学的製剤を含む。免疫調節薬は、腫瘍壊死因子、インターフェロンα、β、及びγ、ＩＬ−２及び他のサイトカイン、Ｆ４２Ｋ及び他のサイトカイン類似体、又はＭＩＰ−１、ＭＩＰ−１β、ＭＣＰ−１、ＲＡＮＴＥＳ、並びに他のケモカインを含む。Ｆａｓ／Ｆａｓリガンド、ＤＲ４又はＤＲ５／ＴＲＡＩＬ（Ａｐｏ−２リガンド）等の細胞表面受容体又はそれらのリガンドの上方制御が、過剰増殖細胞に対するオートクライン又はパラクライン効果を確立することによって、本発明のアポトーシス誘導能力を強化することもさらに企図される。ギャップジャンクションの数を上昇させることによって細胞内シグナル伝達を増加することは、隣接する過剰増殖細胞集団に対する抗過剰増殖効果を増大させる。他の実施形態において、細胞分裂停止剤及び分化剤は、治療の抗過剰増殖効果を向上するために、本発明と組み合わせて使用できる。細胞接着の阻害剤は、本発明の有効性を向上するために企図される。細胞接着の阻害剤の例は、接着斑キナーゼ（ＦＡＫ）阻害剤及びロバスタチンである。抗体ｃ２２５等の過剰増殖細胞のアポトーシスに対する感受性を向上する他の剤を、治療の有効性を向上するために、本発明と組み合わせて使用できることもさらに企図される。
【００８５】
細胞傷害性化学療法薬の導入に続いて、癌の治療において多くの利点が存在していた。しかしながら、化学療法の結果の１つは、薬剤耐性の表現型の発生／獲得、及び多重薬剤耐性の発生である。薬剤耐性の発生は、そのような腫瘍の治療における主要な障害として残り、したがって、ウイルス療法などの代替的なアプローチへの明らかな必要性が存在する。
【００８６】
化学療法、放射線療法、又は生物学的療法と組み合わせた使用のための治療の別の形態は、患者の組織が高温（華氏１０６°まで）に曝露される手順である、温熱療法を含む。外部又は内部の加熱装置は、局所、局所、局部又は全身の温熱療法の適用に含まれ得る。局所温熱療法は、腫瘍などの小さな領域に対する熱の適用を含む。熱は、生体外の装置からの、腫瘍を標的とした高周波によって外部的に生成し得る。内部の熱は、薄い、加熱されたワイヤ又は温水で満たされた中空チューブ、埋め込まれたマイクロ波アンテナ、又は無線周波数電極を含む滅菌プローブを含み得る。
【００８７】
患者の器官又は四肢は、磁石等の高エネルギーを生成するデバイスを使用して達成される局部治療のために加熱される。代替的に、患者の血液のいくらかは、取り出され、内部的に加熱されるであろう領域中に灌流される前に加熱される。全身加熱はまた、癌が生体内全体にわたって広がったような場合において企図される。温水ブランケット、ホットワックス、誘導コイル、及び熱チャンバをこの目的のために使用することができる。
【００８８】
ホルモン療法はまた、本発明と組み合わせて、又は以前に記載した任意の他の癌治療と組み合わせて使用することもできる。ホルモンの使用は、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、又は子宮頸癌などの特定の癌の治療に用いられて、テストステロン又はエストロゲンなどの特定のホルモンのレベルを低下させたり、その効果を遮断するために使用され得る。この治療はしばしば、治療としての少なくとも１つの他の癌治療と組み合わせて使用される。
【実施例】
【００８９】
ＩＩＩ．実施例
以下の実施例は、本発明の様々な実施形態を例示する目的のために提供され、いずれかのやり方でも本発明の限定することを意味するものではない。当業者は、本発明は、課題を実施するよう、並びに述べられた目的及び利点、並びに本明細書において固有のそれらの課題、目的、及び利点を得るよう構成されていることを容易に理解するであろう。本明細書において記載される方法による本実施例は、好ましい実施形態の現在受け入れられている代表例であり、例示であり、本発明の範囲の限定としては意図されていない。特許請求の範囲によって規定される本発明の精神に包含される、それらにおける変更及び他の使用は、当業者が想到するであろう。
【００９０】
実施例１
方法
ウイルス及び細胞．  ベロ、１３７６２  ＭＡＴ  Ｂ  ＩＩＩ及び９Ｌ／ＬａｃＺ細胞は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）から購入した。１３７６２  ＭＡＴ  Ｂ  ＩＩＩ細胞は、１０％のウシ胎仔血清（ＨｙＣｌｏｎｅ、Ｌｏｇａｎ、ＵＴ）を補充したマッコイ５Ａ培地（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）中で維持した。９Ｌ／ＬａｃＺ及びベロ細胞は、１０％のウシ胎仔血清（ＨｙＣｌｏｎｅ、Ｌｏｇａｎ、ＵＴ）を補充したダルベッコ改変イーグル培地（ＨｙＣｌｏｎｅ、Ｌｏｇａｎ、ＵＴ）中で維持した。マラバＭＧ１（Ｇタンパク質のＱ２４２Ｒ及びＭタンパク質のＬ１２３Ｗの点変異を含むマラバ）、並びに、マラバ野生型を、これまでに記載されているように使用した。ＶＳＶｄ５１（Ｍタンパク質の５１位のメチオニンの欠失を含むＶＳＶ）及びＶＳＶ  ＬＣＭＶ  Ｇ（ＬＣＭＶの糖タンパク質（Ｇ）をコードする遺伝子を含み、ＶＳＶのエンベロープのタンパク質Ｇの機能性遺伝子を欠く、ＶＳＶ）を、これまでに記載されているように使用した。ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇ（又はＭＶ−ＬＣＭＶｇ）は、マラバのＧタンパク質をＬＣＭＶの糖タンパク質（Ｇ）をコードする遺伝子で置き換えることによって生成した。ＭＲＢラッサＧ（又はＭＶ−Ｌｇ）は、マラバのＧタンパク質をラッサウイルスの糖タンパク質（Ｇ）をコードする遺伝子で置き換えることによって生成した。ＭＲＢフニンＧ（又はＭＶ−Ｊｇ）は、マラバのＧタンパク質をフニンウイルスの糖タンパク質（Ｇ）をコードする遺伝子で置き換えることによって生成した。図８を参照。偽型ウイルスの各々において、天然のＶＳＶ又はマラバのＧタンパク質が欠失され、ＶＳＶ又はマラバのＧタンパク質遺伝子が欠失されたのと同一の位置において、ＬＣＭＶ、フニン、又はラッサウイルスの糖タンパク質をコードするコドン最適化遺伝子に置き換えられた。手短に、フニンの糖タンパク質及びラッサの糖タンパク質をコードするコドン最適化遺伝子が合成され、上流のＫｐｎＩ制限部位及び下流のＮｏｔＩ制限部位を有するよう遺伝子操作を受けた。ＫｐｎＩ／ＮｏｔＩのフニンの糖タンパク質とラッサの糖タンパク質のフラグメントを、ＮｏｔＩ−糖タンパク質マラバウイルスベクター（糖タンパク質をコードする配列の下流のＮｏｔＩ制限部位を有するよう遺伝子操作を受けた改変マラバウイルスベクター）へとクローニングして天然のマラバ糖タンパク質を置き換えた。
【００９１】
全血によるインビトロ中和  末端採取の２週間前に、ラットに、１×１０７ｐｆｕのウイルスを静脈内にワクチン接種した。採取の１日前に、ラットの半分において、３５ＵのＣＶＦによって補体を枯渇させた。血清採取バキュテナーチューブ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ）を用いて、ラットから血液を採取し、抗凝固薬レフルダン（Ｒｅｆｌｕｄａｎ）（５０μｇ／ｍＬ）によってすぐに処理した。血液を８００×ｇ、１０分間遠心して血漿を得た。血漿のアリコートを５０℃で３０分間インキュベートして補体を不活化した。２００μＬの血液又はそれらの分画を、２×１０６ｐｆｕのＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇ又はＭＧ１と共に、３７℃で１時間インキュベートした。残った感染性ウイルスを、ベロ細胞におけるプラークアッセイによって定量した。
【００９２】
血清によるインビトロ中和  メスのＦ３４４Ｆｉｓｃｈｅｒラットに、１×１０８ｐｆｕのＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇ又はＭＧ１を１×１０７ｐｆｕの野生型（ｗｔ）マラバ、ＶＳＶｄ５１、ＶＳＶ  ＬＣＭＶ  Ｇ、ＭＲＢラッサＧ、又はＭＲＢフニンＧと共に、静脈内にワクチン接種した。ワクチン接種後１４日のラットから、心臓穿刺によって血清を採取した。血清（２５μＬ）を熱不活化（５６℃で３０分間）し、抗体の源として使用した。補体を、等量（２５μＬ）のラット血清（ＣｏｍｐＴｅｃｈ、Ｔｙｌｅｒ、ＴＸ）で補充した。代替的に、２５μＬのデキストロースゼラチンベロナール緩衝液（ＧＶＢ＋＋；Ｌｏｎｚａ、Ａｌｌｅｎｄａｌｅ、ＮＪ）を使用した。血清を、ＧＶＢ＋＋に希釈し、反応当たり５×１０５ｐｆｕの濃度のウイルスとの３７℃１時間のインキュベーションに続いて中和を評価した。残存する感染性ウイルスを、ベロ細胞におけるプラークアッセイによって定量した。中和はまた、１０Ｕ／ｍＬのコブラ毒因子（ＣＶＦ；Ｑｕｉｄｅｌ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）によって、３７℃１位時間予め処理したラット血清（ＣｏｍｐＴｅｃｈ、Ｔｙｌｅｒ、ＴＸ）を用いて評価した。
【００９３】
Ａｎｉｍａｌ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ  Ｃｅｎｔｒｅ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｎｅｔｗｏｒｋ、Ｔｏｒｏｎｔｏ、ＯＮ、Ｃａｎａｄａによって承認された手順に従って、カニクイザルを、１×１０１０ｐｆｕを静脈内（動物１）又は１×１０９ｐｆｕを頭蓋内（動物２）のいずれかによって処理した。様々な時点（投与前、投与後８日目、１４日目、又は３６日目）で血清を採取した。ラット及びマウスの免疫血清において記載されたように、中和は、ＧＶＢ＋＋又はカニクイザル血清（Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｎｏｖｉ、ＭＩ）との、熱不活化免疫血清（１時間３７℃）のインキュベーションに続いて評価された。データを、テクニカルレプリケート±標準偏差として表す。
【００９４】
ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇの中和は、ヒト血清（ＮＨＳ）又は主要な補体成分を免疫枯渇させた血清によって補充したラット免疫血清によって評価された。Ｃ１ｑ枯渇、Ｃ３枯渇、及びＣ５枯渇の血清、並びにＮＨＳ（ＣｏｍＴｅｃｈ、Ｔｙｌｅｒ  ＴＸ）、又はコンプスタチン類似体ＣＰ４０（２５μＭ）若しくはエクリズマブ（１００μｇ／ｍＬ）によって予めインキュベートされた（３７℃１５分間）ＮＨＳを、２５μＬの熱不活化ラット免疫血清及び５×１０５ｐｆｕで３７℃１時間混合した。ヒトＣ３免疫枯渇血清と混合した免疫ラット血清は、採取の２日前にＣＶＦによって処理された動物に由来する。
【００９５】
インビボ動物試験  体重１００〜１５０ｇのメスのＦ３４４  Ｆｉｓｃｈｅｒラットを、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ）から購入した。全ての動物は、病原体フリーの環境に収容し、実施された全ての試験は、Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ  Ｓｅｒｖｉｃｅ  ｆａｃｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｏｔｔａｗａのガイドラインに従っていた。腫瘍は、片側又は左側と右側の両側に、１×１０６の１３７６２  ＭＡＴＢＩＩＩ細胞を皮下注入することによって確立した。それらのウイルス処理の２週間前に、動物に、１×１０７ｐｆｕのＭＧ１又はＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇを静脈内でワクチン接種した。補体の枯渇のために、ウイルスの２４時間前に、３５Ｕのコブラ毒因子（ＣＦＶ）（Ｑｕｉｄｅｌ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を腹腔内投与した。投与後早期のウイルスの安定性を試験するために、動物を、１×１０８ｐｆｕＭＧ１又はＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇによって静脈内で処理し、処理後１０分間で動物を屠殺した。血液を心臓穿刺によってＥＤＴＡバキュテナーチューブ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｍｉｓｓｉｓｓａｕｇａ  ＯＮ）中に採取し、腫瘍を切除した。残存するウイルスを定量するために、血液をベロ細胞上で力価決定し、腫瘍を急速冷凍し、ホモジナイズし、感染性ウイルスを定量するために、ベロ細胞上で力価決定した。
【００９６】
ウイルスナイーブ又はワクチン接種ラットはまた、１×１０７ｐｆｕのＭＧ１又はＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇによって腫瘍内で処理した。ウイルス処理の後２４時間で腫瘍を採取し、直ぐに凍結した。感染性ウイルスを、ベロ細胞におけるプラークアッセイによって定量した。
【００９７】
結果
ＭＧ１（非偽型）及びＬＣＭＶの糖タンパク質によって認可マラバウイルス（ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇ）に対する抗体及び補体の影響を調べるために、ウイルスに対してナイーブであったか、又は採取の２週間前にワクチン接種されていたラットの血液中で、ウイルス中和をエクスビボで評価した（図１Ａ〜Ｃ）。採取の１日前に、動物の半分において、コブラ毒因子（ＣＶＦ）を用いて補体を枯渇させた。血液を動物から単離し、レフルダンによって抗凝固処理し、全血、血漿、及び熱不活化血漿（補体破壊）中においてウイルス中和をインビトロで評価した。ＭＧ１群の動物から採取した血液について、感染性ＭＧ１は、各々の血液分画に対してインビトロで添加された。ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇ群の動物から採取した血液について、感染性ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇは、各々の血液分画に対してインビトロで添加された。血液−ウイルス混合物を３７℃で１時間インキュベートし、その時点の後、試料中に残存する感染性ウイルスをウイルスプラークアッセイによって評価した。
【００９８】
ＭＧ１ナイーブ血液及び血漿において、ＭＧ１は、補体媒介中和に感受性であった。しかしながら、補体が熱不活化によって破壊されたとき、ＭＧ１の中和は観察されなかった（図１Ｂ）。ＭＧ１ワクチン接種動物から採取した血液において、５ログ近いウイルスが抗ＭＧ１抗体によって失われた。補体が完全なものと枯渇したものとを比較することによって観察されるように、全血、及び血漿中の補体の存在は、ウイルス力価におけるさらなる減少の主な原因であったが、この差異は非常に小さかった。同一の小さな差異が熱不活化血漿と血漿試料とで回収したウイルスを比較するときに観察された。したがって、天然のマラバＧに対する抗体は、補体によって控えめにのみ増強された。補体の阻害が、感染性ウイルスの力価を控えめにのみ増加させセルので、天然のマラバの糖タンパク質に対して生成した抗体は、補体に独立した様式でウイルスを主に中和するということをデータは実証する。
【００９９】
ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇはまた、ナイーブの血液において、補体中和に対して中程度に感受性であった（図１Ｃ）。しかしながら、ＭＧ１と対照的に、ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇによって処理されたラットから採取した血液は、補体の存在する場合においてのみ中和する抗体を生じた。補体の存在下（血液及び血漿の試料）において、４ログ近いＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇウイルスが中和された。この効果は、血漿が熱不活化された場合、又はラットが補体阻害剤によって予め処理されていた場合、無効化された。ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇに対して生成した抗体が補体の存在下においてのみＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇを中和できることを、データは実証する。
【０１００】
ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇ  ｖｉｒｕｓによって生じる抗体の補体依存性の表現型が、実際にラブドウイルスのバックボーンと独立していたことを確証するために、エクスビボラット試験を実施した。抗体の源を生成するために、ラットに、野生型マラバウイルス（マラバｗｔ）、ＭＧ１、ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇ、並びに弱毒化ＶＳＶ（ＶＳＶｄ５１）、及びＬＣＭＶの糖タンパク質にＶＳＶよって偽型化された（ＶＳＶ  ＬＣＭＶ  Ｇ）をワクチン接種した。ワクチン接種の２週間後に、ラットから血液を採取し、ウイルス特異的抗体を回収した血清を熱不活化することによって調製した。血清（抗体の源）を、補体の活性源（ナイーブラット血清）又は補体の不活化源（ＣＶＦ）によって処理したナイーブラット血清）、又は対照緩衝液と混合した。抗体：補体混合物に対し、同種のウイルスを添加し、３７℃での１時間のインキュベーションに続いてプラークアッセイによって中和を評価した。図２Ａを参照。
【０１０１】
天然の糖タンパク質を有するウイルス（マラバｗｔ、ＭＧ１、ＶＳＶｄ５１）に関して、ワクチン接種動物から回収した抗体は、ウイルス力価における大幅な低減をもたらし、天然のラブドウイルスの糖タンパク質が、少なくとも９９％の投入ウイルスを中和することが可能であった抗体を生じたことを確証した。ウイルス中和は、補体（ラット血清）の存在下で控えめにのみ増加し、抗体の大部分が、非補体依存性の様式によって中和することを示す。対照的に、ＬＣＭＶ  Ｇで偽型化されたラブドウイルス（ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇ及びＶＳＶ  ＬＣＭＶ  Ｇ）に関して、ワクチン接種動物の血液から回収された抗体は、補体（ラット血清）の存在下においてウイルス力価における低減をもたらすのみであった。これらのデータは、図２Ｂに示され、ＬＣＭＶの糖タンパク質を標的とする抗体が補体なしで非中和であるが、補体の存在下において９９％を超える中和を媒介することができることを実証する。さらに、データは、この現象が、ラブドウイルスのバックボーンと独立していることを示す。
【０１０２】
抗体中和の補体依存性の性質が、げっ歯類特異的な現象ではないことを確証するために、カニクイザルモデルが使用された。２匹の動物が、ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇによって、静脈内又は頭蓋内のいずれかで処理された。処理後の様々な時点でそれらの血清を回収した。補体を除去するために血清を熱不活化し、２つの源の補体：ナイーブカニクイザル血清（活性補体）、補体阻害剤ＣＰ４０で処理したナイーブカニクイザル血清（不活性補体）、又は対照緩衝液と混合した。各々の抗体に対し、補体混合物、等量のＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇを添加し、中和を３７℃での１時間のインキュベーションに続くプラークアッセイによって評価した。図３Ａを参照。
【０１０３】
両方のカニクイザルにおいて、ワクチン接種前に、ナイーブサル血清が、補体に起因する、回収可能なウイルスにおける小さな減少をもたらした。ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇによるワクチン接種後８日という早期において、抗体媒介性、補体依存性中和が観察され、投入ウイルスの９９％を超える喪失をもたらした。両方の動物において、ＣＰ４０による補体の阻害が、抗体の効果を大幅に減弱することができた。１匹の動物において、この減弱が、処理後３０日の期間にわたって持続した。これらのデータは図３Ｂ及び３Ｃに示され、ＬＣＭＶ  Ｇ偽型の抗体中和の補体依存性の性質がげっ歯類特異的な現象ではないことを実証する。
【０１０４】
ヒト／ラットエクスビボ系を用いて、ヒト補体阻害剤が、補体依存性ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇウイルス中和の無効化におけるそれらの有効性を確証するために評価された。ラットにおいて使用できる試薬の選択がＣＶＦに限定されている一方で、ヒト補体阻害剤は、特にヒトエクスビボ系を用いて評価された。血清は、ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇワクチン接種マウスから回収された。補体を除去するために血清を熱不活化し、対照緩衝液（デキストロースゼラチンベロナール緩衝液（ＧＶＢ））、活性補体の源としての正常ヒト血清（ＮＨＳ）、様々な補体阻害剤によって処理されたＮＨＳ、又は主要な補体成分（Ｃ１ｑ、Ｃ３、若しくはＣ５）を枯渇したＮＨＳと混合した。後者の混合物に対し、Ｃ１ｑ及びＣ５に関して、観察したことが逆転されることを確認するために、枯渇されたＮＨＳに対し３つの成分が添加されたさらなるアドバック（ａｄｄ−ｂａｃｋ）対照が含まれた。抗体：補体混合物に対し、ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇを添加し、３７℃での１時間のインキュベーションに続いて中和を評価した。図４Ａを参照。
【０１０５】
ラット血清から単離されたＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇウイルスに対する抗体は、対照緩衝液ＧＶＢと混合したとき、ウイルスの中和をもたらさなかった。しかしながら、ＮＨＳ（補体の源として）と混合したとき、回収可能なウイルスの量は、投入の約１％にまで低減した。重要な古典経路の分子Ｃ１ｑがＮＨＳから免疫枯渇された場合、抗体及び補体媒介性のウイルスの中和は無効化された。生理学的な濃度までのＣ１ｑの添加の際、中和効果が回復した。これらのデータは図４Ｂに示され、ウイルス中和が、Ｃ１ｑ（古典経路の一部）を介する補体媒介性であることを実証する。同様に、Ｃ３ＮＨＳを枯渇したＮＨＳと混合するとき、ラット血清から単離したＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇ抗体は、ウイルス中和をもたらさなかった。この効果は、Ｃ３結合タンパク質のＮＨＳ（ＣＰ４０）への添加によって忠実に映し出された。これらのデータは図４Ｃに示され、ウイルス中和が、Ｃ３を介する補体媒介性であることを実証する。
【０１０６】
終末補体経路もまた補体依存性ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇの媒介に関与しているかどうかを評価するために、Ｃ５免疫枯渇血清及びＣ５阻害モノクローナル抗体、エクリズマブを使用した。Ｃ５の枯渇と阻害の両方は、ウイルス中和を防止することができた。しかしながら、この効果は、Ｃ５枯渇血清に関して、生理学的レベルのＣ５の添加によって逆転された。これらのデータは図４Ｄに示され、ウイルス中和が、Ｃ５（終末経路の一部）を介する補体媒介性であることを実証する。したがって、抗ＬＣＭＶ  Ｇ抗体の機能的活性は、古典補体経路、終末補体経路のハブ分子Ｃ３を阻害することによって無効化できる。
【０１０７】
ＬＣＭＶ  Ｇによって偽型化されたラブドウイルスについて観察された補体依存性中和が、ＬＣＭＶの糖タンパク質に特異的であるか、又はその代わりに、汎アレナウイルスの現象であるかを確かめるために、２つの新規の偽型マラバウイルスを構築した：ラッサウイルスの糖タンパク質によって偽型化されたマラバ（ＭＲＢラッサＧ）、及びフニンウイルスの糖タンパクによって偽型化されたマラバ（ＭＲＢフニンＧ）。ラッサ及びフニンの糖タンパク質は、ＬＣＭＶの糖タンパク質に対して、それぞれ７５％及び５１％の相同性を共有する。ＭＲＢフニンＧ及びＭＲＢラッサＧの中和は、エクスビボにおいて、これらのウイルスをワクチン接種されたラットからの熱不活化免疫血清の存在下で評価された。血清（抗体の源）を、２つの補体の源：ナイーブラット血清（活性補体）、インビトロでＣＶＦによって処理したナイーブラット血清（不活性補体）のうちの１つ、又は対照緩衝液と混合した。抗体：補体混合物に対し、同種のウイルスを添加し、３７℃での１時間のインキュベーションに続いてプラークアッセイによって中和を評価した。これらの結果を図５Ａに示す。
【０１０８】
熱不活化ナイーブ血清とインキュベートしたＭＲＢフニンＧは、対照緩衝液（補体なし）又はラット血清（補体活性）のいずれかと混合したとき、中和されなかった。ＭＲＢフニンＧワクチン接種ラットから回収した抗体含有免疫血清は、対照緩衝液において中和をもたらさなかったが、ナイーブラット血清（活性補体源）と混合したとき、４ログ近いウイルスの中和をもたらした（相対的な回収が投入ウイルスの０．０００１であり、０．０１％に対応する）。中和は、抗ＭＲＢフニンＧ抗体をＣＶＦによって補体を枯渇した血清と混合した場合、無効化された。これらのデータは図５Ｂに示され、フニンの糖タンパク質が、ウイルスを中和するのに補体活性を必要とする抗体を生じることを実証する。
【０１０９】
ＭＲＢラッサＧナイーブ血清において、対照緩衝液（補体なし）と比較して、ラット血清（補体活性）を含む試料から回収されたウイルスにおける少しの減少が存在した。ＭＲＢラッサＧワクチン接種ラットから回収した血清（抗体の源）は、対照緩衝液において中和をもたらさなかったが、ナイーブラット血清（活性補体源）と混合したとき、３ログを超えるウイルスが中和された（相対的な回収が投入ウイルスの０．００１であり、０．１％に対応する）。この効果は、ラット血清を補体阻害剤、ＣＶＦによって予め処理した場合、無効かされた。これらのデータは図５Ｃに示され、ラッサの糖タンパク質がまた、ウイルスを中和するのに補体活性を必要とする抗体を生じることを実証する。
【０１１０】
コブラ毒因子（ＣＶＦ）は、Ｃ３ｂ模倣薬として作用し、Ｃ３分子を活性化して枯渇させるＣ３転換酵素を生成するよう結合する。この枯渇は、ＣＰ４０等の化合物によるＣ３分子の標的化に類似する。乳腺腺癌細胞株１３７６２  ＭＡＴ  Ｂ  ＩＩＩが同系であるＦｉｓｃｈｅｒラットモデルを用いて、血液におけるＭＧ１及び  ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇウイルスの安定性の増加並びに腫瘍に対する送達の向上の補体枯渇の能力を評価した。手短に、ウイルス接種又はナイーブラットに、両側の乳腺腺癌腫瘍（１３７６２  ＭＡＴ  Ｂ  ＩＩＩ）を移植した。動物の亜集団において補体を枯渇するためにＣＶＦを使用し、続いてウイルスを静脈内送達した（尾静脈注入）。プラークアッセイによって血液中、及び腫瘍におけるウイルスを定量するために、ウイルス投与の１０分後に動物を屠殺した。図６Ａを参照。
【０１１１】
ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇナイーブラットにおいて、補体の完全なラットと比べて、補体枯渇ラットの血液から回収した感染性ウイルスの大幅な増加が存在した。ナイーブ動物と比較して、大幅に少ない感染性ウイルスが、ワクチン接種した動物の血液から回収された。対照的に、静脈内ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇの前に、ＣＶＦ補体阻害剤によって処理された場合、ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇ免疫動物の血液からの感染性ウイルス回収の大幅な増加（平均して９７倍の増加）が観察された。これらの発見は、ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇ免疫動物の皮下腫瘍から回収された感染性ウイルスの対応する大幅な増加、及び補体枯渇と関連したナイーブ動物の腫瘍における増加した回収への傾向を説明した。これらのデータは図６Ｂに示され、インビボの補体阻害が血液におけるＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇウイルスの増大した安定性をもたらし、腫瘍から回収された増加したウイルスと関連することを実証する。
【０１１２】
ＬＣＭＶの糖タンパク質によって偽型化されたマラバウイルスと対照的に、ＭＧ１について、ナイーブ又は免疫動物のいずれにおいても、血液における安定性又は腫瘍への送達に対する補体枯渇からの利益が全く観察されなかった。ＭＧ１ラットについて、ＭＧ１ナイーブラットから単離した血液から回収されたウイルスを、ＭＧ１ワクチン接種ラットと比較すると、回収されたウイルスの劇的な低下が存在した。ＭＧ１ワクチン接種ラットから単離した血液において、血液において回収可能なウイルスが全く存在せず、ＣＶＦによる処理（補体枯渇）が、この効果を無効化しなかったので、この抗体中和は補体に媒介されていることが見出せなかった。同様の観察が腫瘍において観察された。これらのデータは図６Ｃに示され、ＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇによって観察された補体依存性抗体中和が糖タンパク質特異的であることを実証する。
【０１１３】
補体枯渇の効果はまた、ウイルスの局所投与に関連して評価された。ナイーブ及びワクチン接種ラットは、ＣＶＦ又はシャムによって処理され、続いて、図７におけるスケジュールによってＭＧ１又はＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇウイルスの腫瘍内投与が与えられた。補体枯渇は、ウイルス投与の２４時間後に、免疫ラットからの腫瘍から回収されたＭＲＢ  ＬＣＭＶ  Ｇの力価を増加させたが（平均して１３５倍の増加）、ウイルスの腫瘍内投与に続いて、ナイーブラットにおいて増加させなかった。血液中のウイルス安定性に関する試験と一致して、ＭＧ１に対する抗体は、補体と独立してウイルスを中和し、腫瘍の感染を防止した。補体枯渇はまた、ナイーブ動物において、皮下腫瘍のＭＧ１の感染を助けなかった。したがって、血流と腫瘍微小環境の療法において、補体は、アレナウイルスの糖タンパク質によって偽型化されたラブドウイルスの感染を制限するための重要な役割を果たす。補体阻害と偽型の組合せ戦略は、抗ウイルス抗体の存在にもかかわらず、感染性ウイルスの腫瘍に対する局所及び全身送達を可能にする。
【０１１４】
考察
ＶＳＶ及びマラバウイルス等のラブドウイルスの投与後の最初の週間に、これらのウイルスに対する中和抗体が生成され、複数ラウンドの投与を制限する。対照的に、ＬＣＭＶ等のアレナウイルスは、早期の中和抗体を生成しない能力が知られている。この性質は、偽型化することによってラブドウイルスに与えられ、マウスで調べると、ＬＣＭＶの糖タンパク質によって偽型化されたＶＳＶウイルスは、強力な中和抗体を生じず、複数回の治療的投与後、腫瘍に対する増強された送達を実証した。しかしながら、この戦略は他の動物モデルに移転されていない。アレナウイルスの糖タンパク質によって偽型化されたラブドウイルスをラット及び霊長類モデルにおいて用いて、本出願は、驚くべきことに、３つの異なる種において、アレナウイルスの糖タンパク質に対する早期の抗体が生成され、抗体はそれら自体に対して非中和である一方で、堅牢な補体依存性ウイルス中和を媒介し、これらのウイルスの治療の可能性を制限することを最初に実証した。特に、アレナウイルスの糖タンパク質によって偽型化されたウイルスに結合する抗体は、Ｃ１ｑ結合及び膜侵襲複合体を介した中和を媒介する。本出願は、補体阻害がそのような偽型ラブドウイルスの安定性及び腫瘍に対する送達を向上し、腫瘍内注入によって局所的に、又は静脈内注入によって全身に投与される場合に、ナイーブと免疫動物の両方において、腫瘍溶解性感染の持続的な増加をもたらすことを実証する。本出願は、免疫動物又はヒトにおいてウイルス中和を回避するための補体阻害剤の使用が、単回投与として投与されるときに向上した治療効果をもたらし、複数ラウンドの治療用偽型ウイルスが有効に投与されることを可能にすることを裏付ける。
【０１１５】
［Ｉ．  関連出願への相互参照］
本願は、参照により本明細書に組み込まれる、２０１６年５月１９日に出願された米国特許仮出願第６２／３３８，９４０号の権益を主張する。
【０１１６】
［ＩＩ．  テキストファイルとして提供される配列表の参照による組込み］
本明細書において、２０１７年５月１５日作成の、１２．６ＫＢのサイズを有するテキストファイル「ＰＡＴ  １０４０４４Ｗ−９０  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ」として配列表が提供される。テキストファイルの内容は、参照により本明細書にその全てが組み込まれる。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図８】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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