【手続補正書】
【提出日】令和3年11月29日(2021.11.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｇタンパク質共役型受容体（ＧＰＲ）１２４／ＲＥＣＫ／Ｆｒｉｚｚｌｅｄ／リポタンパク質受容体関連タンパク質（ＬＲＰ）媒介性Ｗｎｔシグナル伝達を活性化することができる剤であって、ＲＥＣＫおよび／またはＧＰＲ１２４の非存在下でのＦｒｉｚｚｌｅｄ／ＬＲＰ媒介性Ｗｎｔシグナル伝達は活性化しない、剤。
【請求項２】
ＲＥＣＫおよびＧＰＲ１２４の存在下では細胞膜におけるＦｒｉｚｚｌｅｄポリペプチドとＬＲＰポリペプチドのヘテロマー形成（ｈｅｔｅｒｏｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ）を誘導することができるが、ＲＥＣＫおよび／またはＧＰＲ１２４の非存在下での当該ヘテロマー形成を誘導することができない、請求項１に記載の剤。
【請求項３】
ＲＥＣＫおよびＧＰＲ１２４の存在下では細胞膜においてＦｒｉｚｚｌｅｄポリペプチドとＬＲＰポリペプチドに同時に結合することができるが、ＲＥＣＫおよび／またはＧＰＲ１２４の非存在下ではＦｒｉｚｚｌｅｄポリペプチドとＬＲＰポリペプチドに同時に結合することができない、請求項２に記載の剤。
【請求項４】
ＧＰＲ１２４および／またはＲＥＣＫポリペプチドに結合することができる、請求項１から３のいずれか一項に記載の剤。
【請求項５】
ＲＥＣＫポリペプチドに結合することができる、請求項１から４のいずれか一項に記載の剤。
【請求項６】
ＲＥＣＫポリペプチドのシステインノット４（ＣＫ４）領域、ＣＫ５領域、またはＣＫ４領域およびＣＫ５領域に結合することができる、請求項５に記載の剤。
【請求項７】
Ｆｒｉｚｚｌｅｄポリペプチドのシステインリッチドメイン（ＣＲＤ）に結合することができる、請求項１から６のいずれか一項に記載の剤。
【請求項８】
ＬＲＰポリペプチドのＤＫＫ結合性部位および／またはＷｎｔ結合性部位に結合することができる、請求項１から７のいずれか一項に記載の剤。
【請求項９】
化学物質、抗体、抗体断片、抗体様タンパク質足場、タンパク質またはポリペプチド、ペプチド、ペプチド模倣体、アプタマー、光アプタマー、シュピーゲルマーおよび核酸からなる群を含むかまたはそれから選択され、好ましくはタンパク質またはポリペプチドを含むかまたはそれである、請求項１から８のいずれか一項に記載の剤。
【請求項１０】
前記剤が、ＲＥＣＫ結合性ドメイン、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ結合性ドメインおよびＬＲＰ結合性ドメインを含み、前記ＲＥＣＫ結合性ドメイン、前記Ｆｒｉｚｚｌｅｄ結合性ドメイン、および前記ＬＲＰ結合性ドメインが、Ｗｎｔ７ａポリペプチドまたはＷｎｔ７ｂポリペプチドなどのＷｎｔ７ポリペプチドに由来する、請求項１から９のいずれか一項に記載の剤。
【請求項１１】
前記ＲＥＣＫ結合性ドメインが、
−アミノ酸配列ＨＶＥＰＶＲＡＳＲＮＫＲＰＴＦＬＫＩＫＫＰＬＳＹＲＫＰＭＤＴＤＬＶＹＩＥＫＳＰＮＹＣ（配列番号１７）に対して少なくとも２５％の配列同一性を有するアミノ酸配列；または
−アミノ酸配列ＶＥＰＶＲＡＳＲＮＫＲＰＴＦＬＫＩＫＫＰＬＳＹＲＫＰＭＤＴ（配列番号１８）に対して少なくとも２５％の配列同一性を有するアミノ酸配列；または
−アミノ酸配列ＶＥＶＶＲＡＳＲＬＲＱＰＴＦＬＲＩＫＱＬＲＳＹＱＫＰＭＥＴ（配列番号１９）に対して少なくとも２５％の配列同一性を有するアミノ酸配列；または
−アミノ酸配列ＸＸＸＶＸＡＸＲＸＸＸＸＸＦＬＸＩＸＸＸＸＸＹＸＫＸＸＸＸ（配列番号２０）、ＶＸＡＸＲＸＸＸＸＸＦＬＸＩＸＸＸＸＸＹＸＫ（配列番号２１）、ＸＸＸＶＸＡＸＲＸＸＸＸＸＦＬＸＸＸＸＸＸＸＸＸＫＸＸＸＸ（配列番号２２）もしくはＶＸＡＸＲＸＸＸＸＸＦＬＸＸＸＸＸＸＸＸＸＫ（配列番号２３）であって、Ｘが任意のアミノ酸であり、好ましくはアミノ酸配列が配列番号１８または配列番号１９のいずれか１つに対して少なくとも５０％の配列同一性を示す、アミノ酸配列
を含む、請求項１０に記載の剤。
【請求項１２】
Ｗｎｔ７ａポリペプチドまたはＷｎｔ７ｂポリペプチドの断片などの、Ｗｎｔ７ポリペプチドの断片であるかまたはそれから本質的になる、請求項１から１１のいずれか一項に記載の剤。
【請求項１３】
前記断片が、Ｗｎｔ７ポリペプチドのＮ末端ドメイン（ＮＴＤ）であるかまたはそれから本質的になる、請求項１２に記載の剤。
【請求項１４】
Ｗｎｔ７ａポリペプチドまたはＷｎｔ７ｂポリペプチドの変異体などの、Ｗｎｔ７ポリペプチドの変異体である、請求項１から１３のいずれか一項に記載の剤。
【請求項１５】
−  配列番号２４または配列番号５１の１７位に対応する位置のグルタミン（Ｑ）残基が、グルタミン（Ｑ）以外の１つまたは複数のアミノ酸残基によって、好ましくはアラニン（Ａ）残基によって置換されており；
−  配列番号２４または配列番号５１の２０位に対応する位置のイソロイシン（Ｉ）残基が、イソロイシン（Ｉ）以外の１つまたは複数のアミノ酸残基によって、好ましくはアラニン（Ａ）残基によって置換されており；
−  配列番号２４または配列番号５１の２５位に対応する位置のプロリン（Ｐ）残基が、プロリン（Ｐ）以外の１つまたは複数のアミノ酸残基によって、好ましくはアラニン（Ａ）残基によって置換されており；
−  配列番号２４または配列番号５１の２７位に対応する位置のアラニン（Ａ）残基が、アラニン（Ａ）以外の１つまたは複数のアミノ酸残基、好ましくはアルギニン（Ｒ）残基によって置換されており；
−  配列番号２４または配列番号５１の２８位に対応する位置のイソロイシン（Ｉ）残基が、イソロイシン（Ｉ）以外の１つまたは複数のアミノ酸残基によって、好ましくはアラニン（Ａ）残基によって置換されており；
−  配列番号２４または配列番号５１の３３位に対応する位置のグルタミン酸（Ｅ）残基が、グルタミン酸（Ｅ）以外の１つまたは複数のアミノ酸残基によって、好ましくはアラニン（Ａ）残基によって置換されており；
−  配列番号２４または配列番号５１の３７位に対応する位置のメチオニン（Ｍ）残基が、メチオニン（Ｍ）以外の１つまたは複数のアミノ酸残基によって、好ましくはアラニン（Ａ）残基によって置換されており；
−  配列番号２４または配列番号５１の３９位に対応する位置のロイシン（Ｌ）残基が、ロイシン（Ｌ）以外の１つまたは複数のアミノ酸残基によって、好ましくはアラニン（Ａ）残基によって置換されており；
−  配列番号２４または配列番号５１の４１位に対応する位置のグルタミン酸（Ｅ）残基が、グルタミン酸（Ｅ）以外の１つまたは複数のアミノ酸残基によって、好ましくはアラニン（Ａ）残基によって置換されており；
−  配列番号２４または配列番号５１の４４位に対応する位置のフェニルアラニン（Ｆ）残基が、フェニルアラニン（Ｆ）以外の１つまたは複数のアミノ酸残基によって、好ましくはアラニン（Ａ）残基によって置換されており；
−  配列番号２４または配列番号５１の５０位に対応する位置のアルギニン（Ｒ）残基が、アルギニン（Ｒ）以外の１つまたは複数のアミノ酸残基によって、好ましくはアラニン（Ａ）残基によって置換されており；
−  配列番号２４または配列番号５１の５２位に対応する位置のアスパラギン（Ｎ）残基が、アスパラギン（Ｎ）以外の１つまたは複数のアミノ酸残基によって、好ましくはグルタミン（Ｑ）残基によって置換されており；
−  配列番号２４または配列番号５１の６８位に対応する位置のバリン（Ｖ）残基が、バリン（Ｖ）以外の１つまたは複数のアミノ酸残基によって、好ましくはアラニン（Ａ）残基によって置換されており；
−  配列番号２４または配列番号５１の１２９位に対応する位置のイソロイシン（Ｉ）残基が、イソロイシン（Ｉ）以外の１つまたは複数のアミノ酸残基によって、好ましくはアラニン（Ａ）残基によって置換されており；
−  配列番号２４または配列番号５１の１３１位に対応する位置のフェニルアラニン（Ｆ）残基が、フェニルアラニン（Ｆ）以外の１つまたは複数のアミノ酸残基によって、好ましくはアラニン（Ａ）残基によって置換されており；
−  配列番号２４または配列番号５１の１３３位に対応する位置のリシン（Ｋ）残基が、リシン（Ｋ）以外の１つまたは複数のアミノ酸残基によって、好ましくはアラニン（Ａ）残基によって置換されており；
−  配列番号２４または配列番号５１の１３５位に対応する位置のフェニルアラニン（Ｆ）残基が、フェニルアラニン（Ｆ）以外の１つまたは複数のアミノ酸残基によって、好ましくはアラニン（Ａ）残基によって置換されており；
−  配列番号２４または配列番号５１の１４１位に対応する位置のイソロイシン（Ｉ）残基が、イソロイシン（Ｉ）以外の１つまたは複数のアミノ酸残基によって、好ましくはアラニン（Ａ）残基によって置換されており；
−  配列番号２４または配列番号５１の１４６位に対応する位置のアルギニン（Ｒ）残基が、アルギニン（Ｒ）以外の１つまたは複数のアミノ酸残基によって、好ましくはアラニン（Ａ）残基によって置換されており；
−  配列番号２４または配列番号５１の１５８位に対応する位置のアルギニン（Ｒ）残基が、アルギニン（Ｒ）以外の１つまたは複数のアミノ酸残基によって、好ましくはアラニン（Ａ）残基によって置換されており；
−  配列番号２４または配列番号５１の１５９位に対応する位置のリシン（Ｋ）残基が、リシン（Ｋ）以外の１つまたは複数のアミノ酸残基によって、好ましくはアラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）またはロイシン（Ｌ）残基によって置換されており；
−  配列番号２４または配列番号５１の１８１位に対応する位置のリシン（Ｋ）残基が、リシン（Ｋ）以外の１つまたは複数のアミノ酸残基によって、好ましくはアラニン（Ａ）残基によって置換されており；
−  配列番号２４または配列番号５１の１９１位に対応する位置のアルギニン（Ｒ）残基が、アルギニン（Ｒ）以外の１つまたは複数のアミノ酸残基によって、好ましくはアラニン（Ａ）残基によって置換されており；
−  配列番号２４または配列番号５１の１９８位に対応する位置のリシン（Ｋ）残基が、リシン（Ｋ）以外の１つまたは複数のアミノ酸残基によって、好ましくはアラニン（Ａ）残基によって置換されており；
−  配列番号２４または配列番号５１の２００位に対応する位置のリシン（Ｋ）残基が、リシン（Ｋ）以外の１つまたは複数のアミノ酸残基によって、好ましくはアラニン（Ａ）残基によって置換されており；
−  配列番号２４または配列番号５１の２０５位に対応する位置のバリン（Ｖ）残基が、バリン（Ｖ）以外の１つまたは複数のアミノ酸残基によって、好ましくはアラニン（Ａ）残基によって置換されており；
−  配列番号２４または配列番号５１の２０８位に対応する位置のグルタミン酸（Ｅ）残基が、グルタミン酸（Ｅ）以外の１つまたは複数のアミノ酸残基によって、好ましくはアラニン（Ａ）残基によって置換されており；
−  配列番号２４または配列番号５１の２１４位に対応する位置のアルギニン（Ｒ）残基が、アルギニン（Ｒ）以外の１つまたは複数のアミノ酸残基によって、好ましくはアラニン（Ａ）残基によって置換されており；
−  配列番号２４または配列番号５１の２１６位に対応する位置のリシン（Ｋ）残基が、リシン（Ｋ）以外の１つまたは複数のアミノ酸残基によって、好ましくはアラニン（Ａ）残基によって置換されており；
−  配列番号２４または配列番号５１の２１８位に対応する位置のプロリン（Ｐ）残基が、プロリン（Ｐ）以外の１つまたは複数のアミノ酸残基によって、好ましくはアラニン（Ａ）残基によって置換されており；
−  配列番号２４または配列番号５１の２２２位に対応する位置のリシン（Ｋ）残基が、リシン（Ｋ）以外の１つまたは複数のアミノ酸残基によって、好ましくはアラニン（Ａ）残基によって置換されており；
−  配列番号２４または配列番号５１の２２３位に対応する位置のイソロイシン（Ｉ）残基が、イソロイシン（Ｉ）以外の１つまたは複数のアミノ酸残基によって、好ましくはアラニン（Ａ）残基によって置換されており；
−  配列番号２４または配列番号５１の２２９位に対応する位置のチロシン（Ｙ）残基が、チロシン（Ｙ）以外の１つまたは複数のアミノ酸残基によって、好ましくはアラニン（Ａ）残基によって置換されており；
−  配列番号２４または配列番号５１の２３２位に対応する位置のプロリン（Ｐ）残基が、プロリン（Ｐ）以外の１つまたは複数のアミノ酸残基によって、好ましくはアラニン（Ａ）残基によって置換されており；
−  配列番号２４または配列番号５１の２３５位に対応する位置のトレオニン（Ｔ）残基が、トレオニン（Ｔ）以外の１つまたは複数のアミノ酸残基によって、好ましくはアラニン（Ａ）残基によって置換されており；
−  配列番号２４または配列番号５１の２４８位に対応する位置のグルタミン酸（Ｅ）残基が、グルタミン酸（Ｅ）以外の１つまたは複数のアミノ酸残基によって、好ましくはアラニン（Ａ）残基によって置換されており；
−  配列番号２４または配列番号５１の２８９位に対応する位置のアルギニン（Ｒ）残基が、アルギニン（Ｒ）以外の１つまたは複数のアミノ酸残基によって、好ましくはアラニン（Ａ）残基によって置換されており；
−  配列番号２４または配列番号５１の２９１位に対応する位置のトリプトファン（Ｗ）残基が、トリプトファン（Ｗ）以外の１つまたは複数のアミノ酸残基によって、好ましくはアラニン（Ａ）残基によって置換されており；
−  配列番号２４または配列番号５１の３０７位に対応する位置のトレオニン（Ｔ）残基が、トレオニン（Ｔ）以外の１つまたは複数のアミノ酸残基によって、好ましくはアラニン（Ａ）残基によって置換されており、かつ／または
−  配列番号２４または配列番号５１の３１８位に対応する位置のリシン（Ｋ）残基が、リシン（Ｋ）以外の１つまたは複数のアミノ酸残基によって、好ましくはアラニン（Ａ）残基によって置換されている、
請求項１４に記載の剤。
【請求項１６】
請求項１から１５のいずれか一項に記載の剤をコードする核酸であって、前記剤が、タンパク質、ポリペプチドまたはペプチドである、核酸。
【請求項１７】
プロモーターならびに／または転写調節シグナルおよび翻訳調節シグナルに作動可能に連結した、請求項１６に記載の核酸を含む核酸発現カセット。
【請求項１８】
ウイルスベクターなどの、請求項１６に記載の核酸または請求項１７に記載の核酸発現カセットを含むベクター。
【請求項１９】
請求項１から１５のいずれか一項に記載の剤、請求項１６に記載の核酸、請求項１７に記載の核酸発現カセットまたは請求項１８に記載のベクター、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項２０】
医薬として使用するための、請求項１から１５のいずれか一項に記載の剤、請求項１６に記載の核酸、請求項１７に記載の核酸発現カセット、請求項１８に記載のベクターまたは請求項１９に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
神経血管機能不全を含む神経血管障害または中枢神経系（ＣＮＳ）障害の予防または治療における使用のための、請求項１から１５のいずれか一項に記載の剤、請求項１６に記載の核酸、請求項１７に記載の核酸発現カセット、請求項１８に記載のベクターまたは請求項１９に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
前記神経血管障害が、虚血性脳卒中、出血性卒中、虚血／再灌流傷害、脳動脈瘤、動静脈奇形（ＡＶＭ）、海綿状血管奇形、血管炎、脳出血、くも膜下出血、脊髄血管奇形、頸動脈狭窄、もやもや病および頭蓋内アテローム性動脈硬化症、およびこれらの組合せからなる群から選択されるか、または、前記ＣＮＳ障害が、多発性硬化症、虚血性脳卒中、脳がん、てんかん、認知症、血管性認知症、ＨＩＶ−１関連認知症、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、感染性脳疾患、外傷性脳損傷、片頭痛および慢性外傷性脳障害、およびこれらの組合せからなる群から選択される、請求項２１に記載の使用のための、請求項１から１５のいずれか一項に記載の剤、請求項１６に記載の核酸、請求項１７に記載の核酸発現カセット、請求項１８に記載のベクターまたは請求項１９に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
例えば神経血管機能不全を含む神経血管障害またはＣＮＳ障害の予防または治療に有用なものなどの、治療薬として有用な剤を同定するためのインビトロにおける方法であって、試験剤が、ＧＰＲ１２４／ＲＥＣＫ／Ｆｒｉｚｚｌｅｄ／ＬＲＰ媒介性Ｗｎｔシグナル伝達を活性化するが、ＲＥＣＫおよび／またはＧＰＲ１２４の非存在下でのＦｒｉｚｚｌｅｄ／ＬＲＰ媒介性Ｗｎｔシグナル伝達は活性化しないものであるかどうかを決定することを含む方法。
【請求項２４】
−  試験剤を、ＧＰＲ１２４／ＲＥＣＫ／Ｆｒｉｚｚｌｅｄ／ＬＲＰ媒介性Ｗｎｔシグナル伝達を行うことができる細胞と接触させ、前記Ｗｎｔシグナル伝達を測定すること、および
−  試験剤を、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ／ＬＲＰ媒介性Ｗｎｔシグナル伝達を行うことはできるがＧＰＲ１２４／ＲＥＣＫ／Ｆｒｉｚｚｌｅｄ／ＬＲＰ媒介性Ｗｎｔシグナル伝達を行うことができない細胞と接触させ、前記Ｗｎｔシグナル伝達を測定すること
を含む、請求項２３に記載のインビトロにおける方法。
【請求項２５】
試験剤がＲＥＣＫポリペプチドに結合することができるかどうかを決定することをさらに含む、請求項２３または２４に記載のインビトロにおける方法。