【手続補正書】
【提出日】令和3年9月28日(2021.9.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
いくつかの実施形態では、ＲＢＣ抗体はペプチドエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、ＲＢＣ抗体は、ＲｈＤタンパク質、ＧＰＡ、ＴＥＲ−１１９抗原（Ｌｙ７６）のヒト相同分子種、およびＢａｎｄ３から選択されるＲＢＣ分子に結合する。いくつかの実施形態では、ＲＢＣ抗体は、ＲＢＣあたり１０２〜１０５コピーの密度で見出されるＲＢＣ分子に結合する。抗体は任意の経路、例えば非経口または非−非経口（ｎｏｎ−ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ）によって投与される。好ましい非経口経路としては、静脈内、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、関節内、関節滑液嚢内、髄腔内、局所投与または吸入が挙げられる。典型的には、ＲＢＣに対する抗体は、静脈内または皮下投与によって投与される。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２５】
【図１】抗体クローニング戦略を示す図である。ベクターおよび断片は、示した酵素を使用して消化され、Ｔ４  ＤＮＡライゲースによってクローニングされた。組換えクローンは、ＩｎＴａｇアダプターに位置するクロラムフェニコール耐性マーカー（ＣｍＲ）を使用して選択された。ｐＣＭＶ：ＣＭＶプロモーター、ｐＡ：ＢＧＨポリＡ、Ｓ：ＥＲシグナル配列。
【図２−１】マウスＩＴＰの改善が、検出可能な貧血症の前に生じ得ることを示す図である。Ｃ５７Ｂ１／６マウスは、ラットＩｇＧ  ４５μｇの（Ａ、Ｂ）またはＴＥＲ−１１９抗体４５μｇ（Ｃ、Ｄ）によって前処置され、血小板ならびに赤血球は、Ｘ軸に示した期間に数えられた。ＩＴＰは、Ｘ軸に示した時点で抗血小板抗体（ＭＷＲｅｇ３０）２μｇによって誘導された。血小板は、ＭＷＲｅｇ３０注射の１時間後に数えられた。左のｙ軸は血小板数を表し（白い四角）、右のｙ軸はＲＢＣ数を表す（黒い三角）。データは、５回の別々の実験、全部で９０匹のマウスの平均±ＳＥＭとして表される。血小板減少症では、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊Ｐ＜０．０００１。
【図２−２】図２−１の続き。
【図３】モノクローナルＲＢＣ特異的抗体ＴＥＲ−１１９が炎症性関節炎および輸血関連急性肺障害を阻害することを示す図である。０日目、Ｃ５７Ｂ１／６マウスは基底の関節炎測定のためにアセスメントされた（Ａ、Ｂ）。マウスの１つの群はＴＥＲ−１１９抗体４５μｇを受け（白い丸）、他の群は何も受けなかった（白い四角）。２時間後、全てのマウスはＫ／Ｂ×Ｎ血清の注射を受けた。足首測定（Ａ）および臨床スコア（Ｂ）は、Ｍｏｔｔ  ＰＪら、ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．２０１３；８（６）：ｅ６５８０５にしたがって１０日間毎日とられた。データは５回の別々の実験の平均±Ｓ．Ｅ．Ｍとして表される。ｎ＝１６（Ｋ／Ｂ×Ｎ血清のみ）；ｎ＝１３（ＴＥＲ−１１９）。＊Ｐ＜０．００５；＊＊Ｐ＜０．０００１。  独立した実験では、マウスは、前処置無しでＫ／Ｂ×Ｎ血清の注射を受ける。５日目に、関節炎のマウスは、処置（矢印）無し（白い丸）、３０Ｆ１抗体５０μｇ（白い三角）またはＴＥＲ−１１９抗体４５μｇ（白い丸）によって処置された。足首測定（Ｃ）および臨床スコア（Ｄ）は、Ｍｏｔｔ  ＰＪら、ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．２０１３；８（６）：ｅ６５８０５にしたがって０、１、２および５〜９日目に測定された。データは４回の別々の実験の平均±Ｓ．Ｅ．Ｍとして表される。ｎ＝５（Ｋ／Ｂ×Ｎ血清のみ）；ｎ＝６（ＴＥＲ−１１９）；ｎ＝７（３０−Ｆ１）。＊Ｐ＜０．０１；＊＊Ｐ＜０．０００１。  ＴＲＡＬＩ実験のため、ＳＣＩＤマウスは、２４時間、ＴＥＲ−１１９抗体４０μｇを注射される（白い丸、白い三角）、または未処置のままであった（白い四角）。マウスは、次いで３４−１−２ｓ  ５０μｇを注射される（白い三角、白い四角）、または何も注射されなかった（白い丸）。直腸温度は、２時間の間３０分毎に測定された（Ｅ）。マウスは続いて２時間で犠牲にされ、肺浮腫がアセスメントされた（Ｆ）。データは４回の別々の実験の平均±Ｓ．Ｅ．Ｍとして表される。ｎ＝４（ＴＥＲ−１１９）；ｎ＝５（３４−１−２Ｓ）；ｎ＝１４（ＴＥＲ−１１９＋３４−１−２Ｓ）。＊Ｐ＝０．００６；＊＊Ｐ＝０．００１。
【図４−１】コラーゲンＡｂ誘導関節炎（ＣＡｂＩＡ）へのＴＥＲ−１１９の治療効果を示す図である。（Ａ）ＣＡｂＩＡが確立されたマウスは、ＴＥＲ−１１９  ２ｍｇ／ｋｇまたはアイソタイプ対照ｍＡｂ（ラットＩｇＧ２ｂ）の単回ｉ．ｖ．注射によって５日目に処置された。臨床スコアは、Ｃａｍｐｂｅｌｌ  ＩＫら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１４；１９２：５０３１〜５０３８頁にしたがってアセスメントされた。データは平均±ＳＥＭ（ｎ＝９）である。（Ｂ）実験の１２日目のマウスの全組織学的スコア。点は、個々のマウスを表す；バーは平均±ＳＥＭを示す。＊＊＊Ｐ＜０．００１、アイソタイプ対照と比較、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ検定（両側）。（Ｃ）および（Ｄ）は、コラーゲンＡｂ誘導関節炎（ＣＡｂＩＡ）における臨床スコアへの異なる用量のＴＥＲ−１１９の効果を示す。（Ｅ）関節での浸潤細胞の数をアセスメントするため、各マウスからの膝蓋骨が回収され、消化され、視覚的に数えられた浸潤する白血球を示す。（Ｆ）１ｍｇ／ｋｇ用量でのＴＥＲ−１１９は、１．５および２ｍｇ／ｋｇ用量と比較してＲＢＣの表面での著しく低い結合抗体を生じ、これは臨床スコアと相関する。（Ｇ）全ての用量のＴＥＲ−１１９抗体は、関節炎マウスの関節でＣ１ｑ、Ｃ３およびＣ５ａレベルを低減する。補体成分Ｃ１ｑ（Ａ）、Ｃ３（Ｂ）およびＣ５ａ（Ｃ）は、ＥＬＩＳＡによって滑液からアセスメントれた。データは、対照群に対するｏｎｅ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ検定とＨｏｌｍ−Ｓｉｄａｋ多重比較検定によって分析された。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１；＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１。（Ｈ）ＣＡｂＩＡが確立されたマウスは、ＴＥＲ−１１９、アイソタイプ対照ｍＡｂ、脱グリコシル化ＴＥＲ−１１９またはＭ１／６９によって６日目に処置された。臨床スコアおよび足幅がアセスメントされた。統計的な比較は、Ｔｗｏ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡとＤｕｎｎｅｔｔ多重比較検定を使用して算出された（アイソタイプ対照に対する全ての群）。（Ｉ）フローサイトメトリーによってアセスメントされた、Ｃ５７ＢＬ／６マウス由来の赤血球と抗体（一次抗体０〜５１２ｎｇ）の結合を示す。
【図４−２】図４−１の続き。
【図４−３】図４−２の続き。
【図４−４】図４−３の続き。
【図４−５】図４−４の続き。
【図４−６】図４−５の続き。
【図５】ＴＥＲ−１１９オプソニン化ＲＢＣの用量依存的食作用係数を示す図である。赤血球はＣ５７Ｂ／６マウスから得られ、様々な濃度のＴＥＲ−１１９によって非オプソニン化（対照）またはオプソニン化され、次いで３０分間ＲＡＷ２６４．７マクロファージとインキュベートされた。食作用係数は、摂取されたＲＢＣの総数を計数し、これをフィールド内のマクロファージの総数によって割り、１００倍することによって算出された（群あたりｎ＝５）。＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１。
【図６】ＴＥＲ−１１９オプソニン化赤血球とインキュベートした血小板の食作用係数を示す図である。ＲＡＷ２６４．７細胞は終夜培養され、次いでＣＭＦＤＡによって標識され、Ｍｗｒｅｇ３０によってオプソニン化された血小板は、３７℃で３０分間、ＴＥＲ−１１９オプソニン化ＲＢＣ有りまたは無しのいずれかでＲＡＷ細胞に添加された。血小板食作用係数が算出された。＊＊＊Ｐ＜０．０５。（群あたりｎ＝５）。
【図７】抗赤血球抗体コートしたＲＢＣの、血小板食作用を阻害する能力を示す図である。赤血球は、非オプソニン化または１時間、抗体ＴＥＲ−１１９、脱グリコシル化ＴＥＲ−１１９、３４−３Ｃ（５または４０μｇ）およびＭ１／６９によってオプソニン化され、次いで、３０分間ＲＡＷ２６４．７細胞およびＭＷＲｅｇ３０オプソニン化ＣＦＭＤＡ標識された血小板とインキュベートされた。細胞は、共焦点顕微鏡によって可視化され、内部移行した血小板はＩｍａｒｉｓ  ｓｏｆｔｗａｒｅ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ８．０．２によって数えられた。（Ｐ＜０．０５）。（群あたりｎ＝４〜６）。
【図８】マウスＩｇＧスイッチバリアントとして発現された６つのＴＥＲ−１１９が、受動抗体伝達非依存的にコラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）の慢性モデルを処置し得ることを示す図である。ＩＩ型コラーゲンに対して免疫されたＤＢＡ−１マウスは、関節炎を発症させられ、次いでＰＢＳ（四角、ｎ＝７マウス）、マウスＩｇＧ１サブタイプとして発現された（三角、ｎ＝６マウス）、またはマウスＩｇＧ２ａサブタイプとして発現された（下向き三角、ｎ＝６マウス）ＴＥＲ−１１９  ２ｍｇ／ｋｇによって処置され（矢印によって示したタイミング）、関節炎の臨床スコアは実験の経過にわたって評価された。
【図９】コラーゲンＡｂ誘導関節炎（ＣＡｂＩＡ）への３４−３Ｃ（抗Ｂａｎｄ３抗体）の治療効果を示す図である。（Ａ）ＣＡｂＩＡが確立されたマウスは、抗Ｂａｎｄ  ３ｍＡｂ（クローン３４−３Ｃ、マウスＩｇＧ２ａ）２ｍｇ／ｋｇまたはＰＢＳの単回ｉ．ｖ．注射によって５日目に処置された。臨床スコアは、Ｃａｍｐｂｅｌｌ  ＩＫら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１４；１９２：５０３１〜５０３８頁にしたがってアセスメントされた。データは平均±ＳＥＭ（ｎ＝４／５）である。（Ｂ）実験の６日目と１２日目の間のマウスの臨床スコアの平均を示す図である。点は、個々のマウスを表す；バーは平均±ＳＥＭを示す。データは、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ検定（両側）によって分析された。＊Ｐ＜０．０５。
【手続補正３】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
炎症状態を防止または処置する方法での使用のための、赤血球（ＲＢＣ）に対する抗体を含む医薬組成物であって、該炎症状態は、ＩＴＰではない自己免疫状態である前記医薬組成物。
【請求項２】
炎症状態は、神経学的自己免疫状態である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
炎症状態は、健康な対象と比較してＩｌ−１０が上昇した自己免疫状態である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
抗体は、１つまたはそれ以上の他の血液細胞および／または血管系に関連する細胞よりもＲＢＣ上に高密度で見出されるＲＢＣ分子に結合する、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
抗体は、モノクローナルおよびヒトまたはヒト化抗体である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
抗体は、ＩｇＧ型、好ましくはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４型のものである、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
抗体は、Ｆｃ領域を含み、好ましくはＦｃ受容体、例えば、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）、ＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ）のようなＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）に結合する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
自己免疫状態は、自己抗体媒介自己免疫状態である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
状態は、
（ｉ）慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー（ＣＩＤＰ）、重症筋無力症（ＭＧ）、多発性硬化症（ＭＳ）および視神経脊髄炎（ＮＭＯ）から選択される、
（ｉｉ）関節リウマチおよびＴＲＡＬＩから選択される、
請求項１〜８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
ＲＢＣ抗体は、ペプチドエピトープに結合する、請求項１〜８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
ＲＢＣ抗体は、ＲｈＤタンパク質、グリコホリンＡ（ＧＰＡ）タンパク質、ＴＥＲ−１１９抗原（Ｌｙ７６）のヒト相同分子種、およびＢａｎｄ３から選択されるＲＢＣ分子に結合する、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
ＲＢＣ抗体は、細胞あたり１０２〜１０５コピーの密度で見出されるＲＢＣ分子に結合する、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
抗体は、静脈内、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、脳内、皮下、関節内、関節滑液嚢内、髄腔内、肺内、鼻腔内、皮内局所投与によって、または吸入によって、好ましくは静脈内または皮下投与によって投与される、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
抗体は、１つまたはそれ以上の他の治療剤、好ましくは少なくとも１つの他の抗炎症剤、または炎症状態を処置するため、またはそれらの症状を軽減するために使用される薬剤と組み合わせて投与され、場合により該１つまたはそれ以上の他の治療剤が抗炎症剤、免疫抑制剤、および／または鎮痛剤から選択される、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
ａ．抗体の投与は、抗原のもしくは抗原に対する寛容をもたらさず、場合により該抗原は、自己免疫状態に関与するまたは自己免疫状態を起こす抗体と投与されるタンパク質またはペプチドである、および／または
ｂ．該抗体は、任意の非免疫グロブリン配列を含有せず、好ましくはここで該抗体は、免疫グロブリン配列からなり、さらなる（例えばＮまたはＣ末端に融合した）配列が存在しない、および／または
ｃ．該抗体は、任意のさらなるタンパク質またはペプチドを有する融合タンパク質ではない、
請求項１〜１４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
抗体は、組成物として対象に投与され、場合により該組成物が任意の細胞を含まないおよび／または細胞が該組成物と共投与されない、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の医薬組成物。