(57)【要約】  本発明は、Ｂｃｌ−ｘＬを阻害する抗上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）、当該ＡＤＣを使用した組成物及び方法などに関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
リンカーによって抗ｈＥＧＦＲ抗体に連結されている薬物を含む、抗ヒト上皮成長因子受容体（ｈＥＧＦＲ）抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）であって、薬物が、構造式（ＩＩａ）に従うＢｃｌ−ｘＬ阻害剤：
【化１】
2019521114.tif 000221
（式中、
Ａｒは、
【化２】
2019521114.tif 000222
から選択され、ハロ、シアノ、メチル及びハロメチルから独立して選択される１つ以上の置換基で置換されていてもよく、
Ｚ１は、Ｎ、ＣＨ及びＣ−ＣＮから選択され、
Ｚ２は、ＮＨ、ＣＨ２、Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）及びＳ（Ｏ）２から選択され、
Ｒ１は、メチル、クロロ及びシアノから選択され、
Ｒ２は、水素、メチル、クロロ及びシアノから選択され、
Ｒ４は、水素、Ｃ１〜４アルカニル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル又はＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、Ｒ４Ｃ１〜４アルカニル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル及びＣ１〜４ヒドロキシアルキルは、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３及びＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣＨ３から独立して選択される１つ以上の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ１０ａ、Ｒ１０ｂ及びＲ１０ｃはそれぞれ、互いに独立して、水素、ハロ、Ｃ１〜６アルカニル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル及びＣ１〜６ハロアルキルから選択され、
Ｒ１１ａ及びＲ１１ｂはそれぞれ、互いに独立して、水素、メチル、エチル、ハロメチル、ヒドロキシル、メトキシ、ハロ、ＣＮ及びＳＣＨ３から選択され、
ｎは、０、１、２又は３であり、
＃は、リンカーに対する結合点を表す。）
であり、
抗ｈＥＧＦＲ抗体が、次の特徴：
アミノ酸配列ＣＧＡＤＳＹＥＭＥＥＤＧＶＲＫＣ（配列番号４５）内のエピトープに結合する、又は競合的結合アッセイにおいて上皮成長因子受容体バリアントＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）（配列番号３３）への結合について２次抗ｈＥＧＦＲ抗体と競合し、２次抗ＥＧＦＲ抗体は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含むこと、
表面プラズモン共鳴によって決定される約１×１０−６Ｍ以下の解離定数（Ｋｄ）でＥＧＦＲ（１〜５２５）（配列番号４７）に結合すること
を有する、ＡＤＣ。
【請求項２】
構造式（Ｉ）に従う化合物：
【化３】
2019521114.tif 000223
（式中、
Ｄは、式（ＩＩａ）のＢｃｌ−ｘＬ阻害薬であり、
Ｌは、リンカーであり、
Ａｂは、抗ｈＥＧＦＲ抗体であり、
ＬＫは、リンカー（Ｌ）を抗ｈＥＧＦＲ抗体（Ａｂ）と連結している共有結合を表し、
ｍは、１〜２０の範囲の整数である。）
である、請求項１に記載のＡＤＣ。
【請求項３】
Ａｒが置換されていない．請求項１又は２に記載のＡＤＣ。
【請求項４】
Ａｒが、
【化４】
2019521114.tif 000224
である、請求項３に記載のＡＤＣ。
【請求項５】
Ｒ１０ａ、Ｒ１０ｂ及びＲ１０ｃがそれぞれ、水素である、請求項１又は２に記載のＡＤＣ。
【請求項６】
Ｒ１０ａ、Ｒ１０ｂ及びＲ１０ｃのうちの１つがハロであり、その他が水素である、請求項１又は２に記載のＡＤＣ。
【請求項７】
Ｚ１が、Ｎである、請求項１又は２に記載のＡＤＣ。
【請求項８】
Ｒ１が、メチル又はクロロである、請求項１又は２に記載のＡＤＣ。
【請求項９】
Ｒ２が、水素又はメチルである、請求項１又は２に記載のＡＤＣ。
【請求項１０】
Ｒ２が、水素である、請求項９に記載のＡＤＣ。
【請求項１１】
Ｒ４が、水素又はＣ１〜４アルカニルであり、Ｃ１〜４アルカニルが、−ＯＣＨ３で置換されていてもよい、請求項１又は２に記載のＡＤＣ。
【請求項１２】
Ｚ１が、Ｎであり、Ｒ１が、メチルであり、Ｒ２が、水素であり、Ｒ４が、水素又はＣ１〜４アルカニルであり、Ｃ１〜４アルカニルが、−ＯＣＨ３で置換されていてもよく、Ｒ１０ａ、Ｒ１０ｂ及びＲ１０ｃのうちの１つが水素又はハロであり、その他が水素であり、Ｒ１１ａ及びＲ１１ｂはそれぞれ、メチルであり、Ａｒは、
【化５】
2019521114.tif 000225
である、請求項１又は２に記載のＡＤＣ。
【請求項１３】
Ｚ２が、ＣＨ２又はＯである、請求項１又は２に記載のＡＤＣ。
【請求項１４】
ｎが、０、１又は２である、請求項１又は２に記載のＡＤＣ。
【請求項１５】
基
【化６】
2019521114.tif 000226
が、
【化７】
2019521114.tif 000227
である、請求項１又は２に記載のＡＤＣ。
【請求項１６】
基
【化８】
2019521114.tif 000228
が、
【化９】
2019521114.tif 000229
である、請求項１又は２に記載のＡＤＣ。
【請求項１７】
Ｚ２が、酸素であり、Ｒ４が、水素であり、又はＯＣＨ３で置換されていてもよいＣ１〜４アルカニルであり、ｎが、０、１又は２である、請求項１又は２に記載のＡＤＣ。
【請求項１８】
Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤が、構造式（ＩＩａ）の＃の位置に対応する水素が存在せず一価基を形成しているという点で変更されている、以下の化合物：
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−［１−（｛３，５−ジメチル−７−［２−（メチルアミノ）エトキシ］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−（１−｛［（１ｒ，３Ｒ，５Ｓ，７ｓ）−３，５−ジメチル−７−（２−｛２−［２−（メチルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−カルボン酸；
３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
３−［１−（｛３−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３−｛２−［（２−メトキシエチル）アミノ］エトキシ｝−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸；
３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−５−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−６−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸；及び
３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−７−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸
からなる群から選択される、請求項１又は２に記載のＡＤＣ。
【請求項１９】
リンカーが、リソソーム酵素によって切断可能である、請求項１〜１８のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
【請求項２０】
リソソーム酵素がカテプシンＢである、請求項１９に記載のＡＤＣ。
【請求項２１】
リンカーが、構造式（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）、（ＩＶｃ）又は（ＩＶｄ）に従うセグメント：
【化１０】
2019521114.tif 000230
（式中、
ペプチドは、リソソーム酵素によって切断可能なペプチドを表し（Ｎ→Ｃで図示されており、ペプチドはアミノ及びカルボキシ「末端」を含む）、
Ｔは、１個以上のエチレングリコール単位若しくはアルキレン鎖又はこれらの組合せを含むポリマーを表し、
Ｒａは、水素、Ｃ１〜６アルキル、ＳＯ３Ｈ及びＣＨ２ＳＯ３Ｈから選択され、
Ｒｙは、水素又はＣ１〜４アルキル−（Ｏ）ｒ−（Ｃ１〜４アルキレン）ｓ−Ｇ１若しくはＣ１〜４アルキル−（Ｎ）−［（Ｃ１〜４アルキレン）−Ｇ１］２であり、
Ｒｚは、Ｃ１〜４アルキル−（Ｏ）ｒ−（Ｃ１〜４アルキレン）ｓ−Ｇ２であり、
Ｇ１は、ＳＯ３Ｈ、ＣＯ２Ｈ、ＰＥＧ４−３２又は糖部分であり、
Ｇ２は、ＳＯ３Ｈ、ＣＯ２Ｈ又はＰＥＧ４−３２部分であり、
ｒは、０又は１であり、
ｓは、０又は１であり、
ｐは、０〜５の範囲の整数であり、
ｑは、０又は１であり、
ｘは、０又は１であり、
ｙは、０又は１であり、
【化１１】
2019521114.tif 000231
は、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤に対するリンカーの結合点を表し、
＊は、リンカーの残部に対する結合点を表す。）
を含む、請求項１〜１８のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
【請求項２２】
ペプチドが、Ｖａｌ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ｖａｌ；Ａｌａ−Ａｌａ；Ａｌａ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ａｌａ；Ａｓｎ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ａｓｎ；Ｃｉｔ−Ｃｉｔ；Ｖａｌ−Ｇｌｕ；Ｇｌｕ−Ｖａｌ；Ｓｅｒ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ｓｅｒ；Ｌｙｓ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ｌｙｓ；Ａｓｐ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ａｓｐ；Ａｌａ−Ｖａｌ；Ｖａｌ−Ａｌａ；Ｐｈｅ−Ｌｙｓ；Ｌｙｓ−Ｐｈｅ；Ｖａｌ−Ｌｙｓ；Ｌｙｓ−Ｖａｌ；Ａｌａ−Ｌｙｓ；Ｌｙｓ−Ａｌａ；Ｐｈｅ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ｐｈｅ；Ｌｅｕ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ｌｅｕ；Ｉｌｅ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ｉｌｅ；Ｐｈｅ−Ａｒｇ；Ａｒｇ−Ｐｈｅ；Ｃｉｔ−Ｔｒｐ；及びＴｒｐ−Ｃｉｔからなる群から選択される、請求項２１に記載のＡＤＣ。
【請求項２３】
リソソーム酵素が、β−グルクロニダーゼ又はβ−ガラクトシダーゼである、請求項１９に記載のＡＤＣ。
【請求項２４】
リンカーが、構造式（Ｖａ）、（Ｖｂ）、（Ｖｃ）、（Ｖｄ）又は（Ｖｅ）に従うセグメント：
【化１２】
2019521114.tif 000232
2019521114.tif 000233
（式中、
ｑは、０又は１であり、
ｒは、０又は１であり、
Ｘ１は、ＣＨ２、Ｏ又はＮＨであり、
【化１３】
2019521114.tif 000234
は、薬物に対するリンカーの結合点を表し、
＊は、リンカーの残部に対する結合点を表す。）
を含む、請求項１〜１８のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
【請求項２５】
リンカーが、構造式（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）又は（ＶＩＩＩｃ）に従うセグメント：
【化１４】
2019521114.tif 000235
又はこれらの加水分解された誘導体（式中、
Ｒｑは、Ｈ又は−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１１−ＣＨ３であり、
ｘは、０又は１であり、
ｙは、０又は１であり、
Ｇ３は、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＳＯ３Ｈ又は−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１１−ＣＨ３であり、
Ｒｗは、−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２ＳＯ３Ｈ又は−ＮＨ（ＣＯ）−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１２−ＣＨ３であり、
＊は、リンカーの残部に対する結合点を表し、
【化１５】
2019521114.tif 000236
は、抗体に対するリンカーの結合点を表す。）
を含む、請求項１〜１８のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
【請求項２６】
リンカーが、１〜６個のエチレングリコール単位を有するポリエチレングリコールセグメントを含む、請求項１〜１８のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
【請求項２７】
ｍが、２、３又は４である、請求項２〜１８のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
【請求項２８】
リンカーＬが、ＩＶａ又はＩＶｂから選択される、請求項１〜１８のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
【請求項２９】
リンカーＬが、閉鎖型又は開放型のいずれかのＩＶａ．１〜ＩＶａ．８、ＩＶｂ．１〜ＩＶｂ．１９、ＩＶｃ．１〜ＩＶｃ．７、ＩＶｄ．１〜ＩＶｄ．４、Ｖａ．１〜Ｖａ．１２、Ｖｂ．１〜Ｖｂ．１０、Ｖｃ．１〜Ｖｃ．１１、Ｖｄ．１〜Ｖｄ．６、Ｖｅ．１〜Ｖｅ．２、ＶＩａ．１、ＶＩｃ．１〜Ｖ１ｃ．２、ＶＩｄ．１〜ＶＩｄ．４、ＶＩＩａ．１〜ＶＩＩａ．４、ＶＩＩｂ．１〜ＶＩＩｂ．８、ＶＩＩｃ．１〜ＶＩＩｃ．６からなる群から選択される、請求項１〜１８のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
【請求項３０】
リンカーＬが、ＩＶｂ．２、ＩＶｃ．５、ＩＶｃ．６、ＩＶｃ．７、ＩＶｄ．４、Ｖｂ．９、ＶＩＩａ．１、ＶＩＩａ．３、ＶＩＩｃ．１、ＶＩＩｃ．３、ＶＩＩｃ．４及びＶＩＩｃ．５からなる群から選択され、各リンカーのマレイミドが、抗体Ａｂと反応して、スクシンイミド（閉鎖型）又はスクシンアミド（開放型）のいずれかとして共有結合を形成している、請求項１〜１８のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
【請求項３１】
リンカーＬが、ＩＶｃ．５、ＩＶｃ．６、ＩＶｄ．４、ＶＩＩａ．１、ＶＩＩａ．３、ＶＩＩｃ．１、ＶＩＩｃ．３、ＶＩＩｃ．４及びＶＩＩｃ．５からなる群から選択され、各リンカーのマレイミドが、抗体Ａｂと反応して、スクシンイミド（閉鎖型）又はスクシンアミド（開放型）のいずれかとして共有結合を形成している、請求項１〜１８のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
【請求項３２】
リンカーＬが、ＶＩＩａ．３、ＩＶｃ．６、ＶＩＩｃ．１及びＶＩＩｃ．５からなる群から選択され、式中
【化１６】
2019521114.tif 000237
は、薬物Ｄに対する結合点であり、＠は、ＬＫに対する結合点であり、リンカーが、下記に示すような開放型である場合、＠はこの隣にあるカルボン酸のα位又はβ位のいずれかであり得る：
【化１７】
2019521114.tif 000238
2019521114.tif 000239
2019521114.tif 000240
請求項１〜１８のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
【請求項３３】
ＬＫが、抗ｈＥＧＦＲ抗体Ａｂ上のアミノ基と形成された連結である、請求項２〜１８のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
【請求項３４】
ＬＫが、アミド又はチオ尿素である、請求項３２に記載のＡＤＣ。
【請求項３５】
ＬＫが、抗ｈＥＧＦＲ抗体Ａｂ上のスルフヒドリル基と形成された連結である、請求項２〜１８のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
【請求項３６】
ＬＫがチオエーテルである、請求項３５に記載のＡＤＣ。
【請求項３７】
ＬＫが、アミド、チオ尿素及びチオエーテルからなる群から選択され、
ｍが、１〜８の範囲の整数である、請求項２〜１８のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
【請求項３８】
Ｄが、構造式（ＩＩａ）の＃の位置に対応する水素が存在せず一価基を形成しているという点で変更されている、以下の化合物：
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−［１−（｛３，５−ジメチル−７−［２−（メチルアミノ）エトキシ］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−（１−｛［（１ｒ，３Ｒ，５Ｓ，７ｓ）−３，５−ジメチル−７−（２−｛２−［２−（メチルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−カルボン酸；
３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
３−［１−（｛３−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３−｛２−［（２−メトキシエチル）アミノ］エトキシ｝−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸；
３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−５−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−６−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸；及び
３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−７−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
からなる群から選択されるＢｃｌ−ｘＬ阻害剤であり、
Ｌが、リンカーＩＶａ．１〜ＩＶａ．８、ＩＶｂ．１〜ＩＶｂ．１９、ＩＶｃ．１〜ＩＶｃ．７、ＩＶｄ．１〜ＩＶｄ．４、Ｖａ．１〜Ｖａ．１２、Ｖｂ．１〜Ｖｂ．１０、Ｖｃ．１〜Ｖｃ．１１、Ｖｄ．１〜Ｖｄ．６、Ｖｅ．１〜Ｖｅ．２、ＶＩａ．１、ＶＩｃ．１〜Ｖ１ｃ．２、ＶＩｄ．１〜ＶＩｄ．４、ＶＩＩａ．１〜ＶＩＩａ．４、ＶＩＩｂ．１〜ＶＩＩｂ．８、ＶＩＩｃ．１〜ＶＩＩｃ．６からなる群から選択され、各リンカーが、抗ｈＥＧＦＲ抗体Ａｂと反応して、共有結合を形成しており、
ＬＫが、チオエーテルであり、
ｍが、１〜８の範囲の整数である、請求項２に記載のＡＤＣ。
【請求項３９】
Ｄが、構造式（ＩＩａ）の＃の位置に対応する水素が存在せず一価基を形成しているという点で変更されている、以下の化合物：
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−［１−（｛３，５−ジメチル−７−［２−（メチルアミノ）エトキシ］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］ピリジン−２−カルボン酸；及び
３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−５−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
からなる群から選択されるＢｃｌ−ｘＬ阻害剤であり、
Ｌが、閉鎖型又は開放型のいずれかのリンカーＶｃ．５、ＩＶｃ．６、ＩＶｄ．４、ＶＩＩａ．１、ＶＩＩｃ．１、ＶＩＩｃ．３、ＶＩＩｃ．４及びＶＩＩｃ．５からなる群から選択され、
ＬＫが、チオエーテルであり、
ｍが、２〜４の範囲の整数である、請求項２に記載のＡＤＣ。
【請求項４０】
ＡｂＡ−ＷＤ、ＡｂＡ−ＬＢ、ＡｂＡ−ＶＤ、ＡｂＢ−ＷＤ、ＡｂＢ−ＬＢ、ＡｂＢ−ＶＤ、ＡｂＧ−ＷＤ、ＡｂＧ−ＬＢ、ＡｂＧ−ＶＤ、ＡｂＫ−ＷＤ、ＡｂＫ−ＬＢ及びＡｂＫ−ＶＤからなる群から選択され、ＷＤ、ＬＢ及びＶＤが、表５に開示されているシントンであり、シントンは、開放型又は閉鎖型のいずれかである、請求項２に記載のＡＤＣ。
【請求項４１】
式ｉ〜ｖｉ：
【化１８】
2019521114.tif 000241
2019521114.tif 000242
2019521114.tif 000243
（式中、ｍは、１〜６の整数である。）
からなる群から選択される、請求項２に記載のＡＤＣ。
【請求項４２】
ｍが、２〜６の整数である．請求項４１に記載のＡＤＣ。
【請求項４３】
抗体が、表面プラズモン共鳴によって決定される約１×１０−６Ｍ〜約１×１０−１０ＭのＫｄでＥＧＦＲ（１〜５２５）（配列番号４７）に結合する、請求項１〜４２のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
【請求項４４】
抗体が、表面プラズモン共鳴によって決定される約１×１０−６Ｍ〜約１×１０−７ＭのＫｄでＥＧＦＲ（１〜５２５）（配列番号４７）に結合する、請求項１〜４２のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
【請求項４５】
抗体が、表面プラズモン共鳴によって決定される約８．２×１０−９Ｍ以下のＫｄでＥＧＦＲｖＩＩＩ（配列番号３３）に結合する、請求項１〜４２のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
【請求項４６】
抗体が、表面プラズモン共鳴によって決定される約８．２×１０−９Ｍ〜約６．３×１０−１０ＭのＫｄでＥＧＦＲｖＩＩＩ（配列番号３３）に結合する、請求項１〜４２のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
【請求項４７】
抗体が、表面プラズモン共鳴によって決定される約８．２×１０−９Ｍ〜約２．０×１０−９ＭのＫｄでＥＧＦＲｖＩＩＩ（配列番号３３）に結合する、請求項１〜４２のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
【請求項４８】
抗ｈＥＧＦＲ抗体が、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１ドメイン；配列番号８に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１ドメインを含む、請求項１〜４２のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
【請求項４９】
抗体が、配列番号９に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１〜４２のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
【請求項５０】
抗体が、配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１〜４２のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
【請求項５１】
抗体が、配列番号４０に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号３９に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号３８に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１ドメイン；並びに配列番号３７に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号３６に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号３５に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１ドメインを含む、請求項１〜４２のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
【請求項５２】
抗体が、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６及び７８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；並びに５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７及び７９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１〜４２のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
【請求項５３】
抗体が、配列番号１０、１１及び１２；配列番号１６、１７及び１８；配列番号１０、１１及び１９；配列番号２０、１１及び１２；配列番号２１、３及び２２；配列番号１６、１７及び１９；配列番号２、３及び４；配列番号１０、３及び１２；配列番号８０、１１及び１８；配列番号８０、３及び１８；配列番号２０、３及び１２；配列番号８０、１１及び１２；並びに配列番号８１、１１及び２２からなる群から選択される重鎖ＣＤＲセット（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）；並びに
配列番号６、７及び８；配列番号２３、２４及び２５；配列番号２６、２７及び２８；配列番号２９、３０及び３１；配列番号６、７及び８４；配列番号８２、８３及び３１；並びに配列番号８２、２７及び８５からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲセット（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含み、
抗体が、配列番号２、３及び４の重鎖ＣＤＲセットと配列番号６、７及び８の軽鎖ＣＤＲセットを共に含まない、請求項１〜４２のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
【請求項５４】
抗体が、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１ドメイン；並びに配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１ドメインを含む、請求項１〜４２のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
【請求項５５】
抗体が、配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１ドメイン；並びに配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１ドメインを含む、請求項１〜４２のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
【請求項５６】
抗体が、配列番号２８に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１ドメイン；並びに配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１ドメインを含む、請求項１〜４２のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
【請求項５７】
抗体が、配列番号６４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号６５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１〜４２のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
【請求項５８】
抗体が、配列番号７２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号７３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１〜４２のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
【請求項５９】
抗体が、配列番号７４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号７５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１〜４２のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
【請求項６０】
リンカーによって抗ｈＥＧＦＲ抗体に連結されている薬物を含む、抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣであって、薬物が、構造式（ＩＩａ）に従うＢｃｌ−ｘＬ阻害剤：
【化１９】
2019521114.tif 000244
（式中、
Ａｒは、
【化２０】
2019521114.tif 000245
から選択され、ハロ、シアノ、メチル及びハロメチルから独立して選択される１つ以上の置換基で置換されていてもよく、
Ｚ１は、Ｎ、ＣＨ及びＣ−ＣＮから選択され、
Ｚ２は、ＮＨ、ＣＨ２、Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）及びＳ（Ｏ）２から選択され、
Ｒ１は、メチル、クロロ及びシアノから選択され、
Ｒ２は、水素、メチル、クロロ及びシアノから選択され、
Ｒ４は、水素、Ｃ１〜４アルカニル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル又はＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、Ｒ４Ｃ１〜４アルカニル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル及びＣ１〜４ヒドロキシアルキルは、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３及びＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣＨ３から独立して選択される１つ以上の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ１０ａ、Ｒ１０ｂ及びＲ１０ｃはそれぞれ、互いに独立して、水素、ハロ、Ｃ１〜６アルカニル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル及びＣ１〜６ハロアルキルから選択され、
Ｒ１１ａ及びＲ１１ｂはそれぞれ、互いに独立して、水素、メチル、エチル、ハロメチル、ヒドロキシル、メトキシ、ハロ、ＣＮ及びＳＣＨ３から選択され、
ｎは、０、１、２又は３であり、
＃は、リンカーに対する結合点を表す。）
であり、
抗ｈＥＧＦＲ抗体が、モノクローナルＩｇＧ抗体であり、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１ドメイン；配列番号８に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１ドメインを含む、ＡＤＣ。
【請求項６１】
抗体が、配列番号９に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項６０に記載のＡＤＣ。
【請求項６２】
リンカーによって抗ｈＥＧＦＲ抗体に連結されている薬物を含む、抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣであって、薬物が、構造式（ＩＩａ）に従うＢｃｌ−ｘＬ阻害剤：
【化２１】
2019521114.tif 000246
（式中、
Ａｒは、
【化２２】
2019521114.tif 000247
から選択され、ハロ、シアノ、メチル及びハロメチルから独立して選択される１つ以上の置換基で置換されていてもよく、
Ｚ１は、Ｎ、ＣＨ及びＣ−ＣＮから選択され、
Ｚ２は、ＮＨ、ＣＨ２、Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）及びＳ（Ｏ）２から選択され、
Ｒ１は、メチル、クロロ及びシアノから選択され、
Ｒ２は、水素、メチル、クロロ及びシアノから選択され、
Ｒ４は、水素、Ｃ１〜４アルカニル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル又はＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、Ｒ４Ｃ１〜４アルカニル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル及びＣ１〜４ヒドロキシアルキルは、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３及びＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣＨ３から独立して選択される１つ以上の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ１０ａ、Ｒ１０ｂ及びＲ１０ｃはそれぞれ、互いに独立して、水素、ハロ、Ｃ１〜６アルカニル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル及びＣ１〜６ハロアルキルから選択され、
Ｒ１１ａ及びＲ１１ｂはそれぞれ、互いに独立して、水素、メチル、エチル、ハロメチル、ヒドロキシル、メトキシ、ハロ、ＣＮ及びＳＣＨ３から選択され、
ｎは、０、１、２又は３であり、
＃は、リンカーに対する結合点を表す。）
であり、
抗体が、モノクローナルＩｇＧ抗体であり、配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１ドメイン；並びに配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１ドメインを含む、ＡＤＣ。
【請求項６３】
抗体が、配列番号７２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号７３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項６２に記載のＡＤＣ。
【請求項６４】
リンカーによって抗ｈＥＧＦＲ抗体に連結されている薬物を含む、抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣであって、薬物が、構造式（ＩＩａ）に従うＢｃｌ−ｘＬ阻害剤：
【化２３】
2019521114.tif 000248
（式中、
Ａｒは、
【化２４】
2019521114.tif 000249
から選択され、ハロ、シアノ、メチル及びハロメチルから独立して選択される１つ以上の置換基で置換されていてもよく、
Ｚ１は、Ｎ、ＣＨ及びＣ−ＣＮから選択され、
Ｚ２は、ＮＨ、ＣＨ２、Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）及びＳ（Ｏ）２から選択され、
Ｒ１は、メチル、クロロ及びシアノから選択され、
Ｒ２は、水素、メチル、クロロ及びシアノから選択され、
Ｒ４は、水素、Ｃ１〜４アルカニル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル又はＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、Ｒ４Ｃ１〜４アルカニル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル及びＣ１〜４ヒドロキシアルキルは、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３及びＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣＨ３から独立して選択される１つ以上の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ１０ａ、Ｒ１０ｂ及びＲ１０ｃはそれぞれ、互いに独立して、水素、ハロ、Ｃ１〜６アルカニル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル及びＣ１〜６ハロアルキルから選択され、
Ｒ１１ａ及びＲ１１ｂはそれぞれ、互いに独立して、水素、メチル、エチル、ハロメチル、ヒドロキシル、メトキシ、ハロ、ＣＮ及びＳＣＨ３から選択され、
ｎは、０、１、２又は３であり、
＃は、リンカーに対する結合点を表す。）
であり、
抗体が、モノクローナルＩｇＧ抗体であり、配列番号２８に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１ドメイン；並びに配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１ドメインを含む、ＡＤＣ。
【請求項６５】
抗体が、配列番号７４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号７５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項６４に記載のＡＤＣ。
【請求項６６】
構造式（Ｉ）に従う化合物：
【化２５】
2019521114.tif 000250
（式中、
Ｄは、式（ＩＩａ）のＢｃｌ−ｘＬ阻害薬であり、
Ｌは、リンカーであり、
Ａｂは、抗ｈＥＧＦＲ抗体であり、
ＬＫは、リンカー（Ｌ）を抗ｈＥＧＦＲ抗体（Ａｂ）と連結している共有結合を表し、
ｍは、１〜２０の範囲の整数である。）
である、請求項６０〜６５のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
【請求項６７】
構造式（ｉ）
【化２６】
2019521114.tif 000251
（式中、ｍは、１〜６の整数である。）
に従う化合物である、請求項６６に記載のＡＤＣ。
【請求項６８】
構造式（ｉｉ）
【化２７】
2019521114.tif 000252
（式中、ｍは、１〜６の整数である。）
に従う化合物である、請求項６６に記載のＡＤＣ。
【請求項６９】
構造式（ｉｉｉ）
【化２８】
2019521114.tif 000253
（式中、ｍは、１〜６の整数である。）
に従う化合物である、請求項６６に記載のＡＤＣ。
【請求項７０】
構造式（ｉｖ）
【化２９】
2019521114.tif 000254
（式中、ｍは、１〜６の整数である。）
に従う化合物である、請求項６６に記載のＡＤＣ。
【請求項７１】
有効量の請求項１〜７０又は１０３のいずれか一項に記載のＡＤＣ、及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
【請求項７２】
複数の請求項１〜７０又は１０３のいずれか一項に記載のＡＤＣを含むＡＤＣ混合物、及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
【請求項７３】
ＡＤＣ混合物が、２〜４の平均薬物抗体比（ＤＡＲ）を有する、請求項７２に記載の医薬組成物。
【請求項７４】
ＡＤＣ混合物が、２〜８のＤＡＲをそれぞれ有するＡＤＣを含む、請求項７２に記載の医薬組成物。
【請求項７５】
がんを処置する方法であって、治療有効量の請求項１〜７０又は１０３のいずれか一項に記載のＡＤＣをそれを必要とする対象に投与することを含む、方法。
【請求項７６】
がんが、乳がん、肺がん、膠芽腫、前立腺がん、膵臓がん、結腸がん、頭頸部がん及び腎臓がんからなる群から選択される、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
がんが、扁平上皮癌である、請求項７５に記載の方法。
【請求項７８】
扁平上皮癌が、扁平上皮肺がん又は扁平上皮頭頸部がんである、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
がんが、トリプルネガティブ乳がんである、請求項７５に記載の方法。
【請求項８０】
がんが、非小細胞肺がんである、請求項７５に記載の方法。
【請求項８１】
がんが、ＥＧＦＲ過剰発現を有すると特徴付けられる、請求項７６〜８０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８２】
がんが、活性型ＥＧＦＲ変異を有すると特徴付けられる、請求項７６〜８０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８３】
活性型ＥＧＦＲ変異が、エクソン１９欠失変異、エクソン２１における単一点置換変異Ｌ８５８Ｒ、Ｔ７９０Ｍ点変異及びこれらの組合せからなる群から選択される、請求項８２に記載の方法。
【請求項８４】
固形腫瘍を有する対象において固形腫瘍成長を阻害する又は減少させる方法であって、固形腫瘍成長が、阻害される又は減少するように、請求項１〜７０又は１０３のいずれか一項に記載のＡＤＣを固形腫瘍を有する対象に投与することを含む、方法。
【請求項８５】
固形腫瘍が、非小細胞肺癌又は膠芽腫である、請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
固形腫瘍が、扁平上皮癌である、請求項８４に記載の方法。
【請求項８７】
固形腫瘍が、ＥＧＦＲｖＩＩＩ陽性固形腫瘍である又はＥＧＦＲ発現固形腫瘍である、請求項８４〜８６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８８】
固形腫瘍が、ＥＧＦＲを過剰発現する、請求項８４〜８６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８９】
ＡＤＣが、さらなる薬剤又はさらなる療法と組み合わせて投与される、請求項７５〜８８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９０】
さらなる薬剤が、抗ＰＤ１抗体（例えばペムブロリズマブ）、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（アテゾリズマブ）、抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えばイピリムマブ）、ＭＥＫ阻害剤（例えばトラメチニブ）、ＥＲＫ阻害剤、ＢＲＡＦ阻害剤（例えばタブラフェニブ）、オシメルチニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、ソラフェニブ、ＣＤＫ９阻害剤（例えばディナシクリブ）、ＭＣＬ−１阻害剤、テモゾロミド、Ｂｃｌ−２阻害剤（例えばベネトクラクス）、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤、イブルチニブ、ｍＴＯＲ阻害剤（例えばエベロリムス）、ＰＩ３Ｋ阻害剤（例えばブパルリシブ）、デュベリシブ、イデラリシブ、ＡＫＴ阻害剤、ＨＥＲ２阻害剤（例えばラパチニブ）、タキサン（例えばドセタキセル、パクリタキセル、ナブパクリタキセル）、アウリスタチンを含むＡＤＣ、ＰＢＤを含むＡＤＣ（例えばロバルピツズマブテシリン）、メイタンシノイドを含むＡＤＣ（例えばＴＤＭ１）、ＴＲＡＩＬアゴニスト、プロテアソーム阻害剤（例えばボルテゾミブ）及びニコチンアミドホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＮＡＭＰＴ）阻害剤からなる群から選択される、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
さらなる療法が、放射線である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９２】
さらなる薬剤が、化学療法剤である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９３】
構造式（Ｉ）に従うＡＤＣ：
【化３０】
2019521114.tif 000255
（式中、
Ｄは、式（ＩＩａ）のＢｃｌ−ｘＬ阻害薬であり、
Ｌは、リンカーであり、
Ａｂは、抗ｈＥＧＦＲ抗体であり、抗ｈＥＧＦＲ抗体は、ＡｂＡ、ＡｂＢ、ＡｂＧ及びＡｂＫの重鎖及び軽鎖ＣＤＲを含み、
ＬＫは、リンカーＬを抗体Ａｂと連結している共有結合を表し、
ｍは、１〜２０の範囲の整数である。）
の調製方法であって、
水溶液中の抗体を有効量のジスルフィド還元剤で、３０〜４０℃で少なくとも１５分間処理し、次いで、抗体溶液を２０〜２７℃に冷却すること、
還元された抗体溶液に、２．１〜２．６３（表５）の群から選択されるシントンを含む水／ジメチルスルホキシドの溶液を添加すること、
溶液のｐＨを、７．５〜８．５のｐＨに調整すること、
反応を４８〜８０時間にわたって進ませて、ＡＤＣを形成すること
を含み、エレクトロスプレー質量分析によって測定すると、スクシンイミドからスクシンアミドへの加水分解ごとに質量が１８±２ａｍｕずつ変わり、
ＡＤＣが、疎水性相互作用クロマトグラフィーによって任意選択的に精製される、方法。
【請求項９４】
ｍが、２である、請求項９３に記載の方法。
【請求項９５】
ＡＤＣが、ｈＥＧＦＲ細胞表面受容体又は腫瘍細胞上で発現された腫瘍関連抗原に結合する抗体を薬物リンカーシントンと、シントンが、抗体に式（ＩＩｄ）及び（ＩＩｅ）
【化３１】
2019521114.tif 000256
（式中、Ｄは、式（ＩＩａ）のＢｃｌ−ｘＬ阻害薬であり、Ｌ１は、抗体へのシントンの結合の際にマレイミドから形成されていないリンカーの部分である。）
において示されるマレイミド部分を介して共有結合する条件下で接触させることにより形成され、薬物−リンカーシントンが、以下のリスト：
Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド；
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド；
Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−アラニル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド；
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−アラニル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド；
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［１２−（｛（１ｓ，３ｓ）−３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）−４−メチル−３−オキソ−２，７，１０−トリオキサ−４−アザドデカ−１−イル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド；
Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［１２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）−４−メチル−３−オキソ−２，７，１０−トリオキサ−４−アザドデカ−１−イル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド；
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［１２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）−４−メチル−３−オキソ−２，７，１０−トリオキサ−４−アザドデカ−１−イル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド；
Ｎ−（｛２−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ］エトキシ｝アセチル）−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［１２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）−４−メチル−３−オキソ−２，７，１０−トリオキサ−４−アザドデカ−１−イル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド；
Ｎ−［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド；
Ｎ−［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］−Ｌ−アラニル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド；
Ｎ−［（２Ｒ）−４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２−スルホブタノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド；
Ｎ−［（２Ｓ）−４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２−スルホブタノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド；
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４−｛（１Ｅ）−３−［（｛２−［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エトキシ］エチル｝カルバモイル）オキシ］プロパ−１−エン−１−イル｝−２−（｛Ｎ−［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］−β−アラニル｝アミノ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
４−｛（１Ｅ）−３−［（｛２−［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エトキシ］エチル｝カルバモイル）オキシ］プロパ−１−エン−１−イル｝−２−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−β−アラニル｝アミノ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
４−［（１Ｅ）−１４−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）−６−メチル−５−オキソ−４，９，１２−トリオキサ−６−アザテトラデカ−１−エン−１−イル］−２−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−β−アラニル｝アミノ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−［２−（２−｛［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−［２−（２−｛［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
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２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−［２−（２−｛［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−（３−｛［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］アミノ｝プロポキシ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
１−Ｏ−（｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−２−［２−（２−｛［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニル｝カルバモイル）−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸；
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−（１−｛［３−（２−｛［（｛３−［（Ｎ−｛［２−（｛Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−３−スルホ−Ｄ−アラニル｝アミノ）エトキシ］アセチル｝−β−アラニル）アミノ］−４−（β−Ｄ−ガラクトピラノシルオキシ）ベンジル｝オキシ）カルボニル］（メチル）アミノ｝エトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−カルボン酸；
４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−［３−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−３−スルホ−Ｌ−アラニル｝アミノ）プロポキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
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４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−５−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−［２−（２−｛［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−｛２−［２−（｛Ｎ−［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］−３−スルホ−Ｌ−アラニル｝アミノ）エトキシ］エトキシ｝フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−｛２−［２−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−３−スルホ−Ｌ−アラニル｝アミノ）エトキシ］エトキシ｝フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３−｛［２２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３−メチル−４，２０−ジオキソ−７，１０，１３，１６−テトラオキサ−３，１９−ジアザドコサ−１−イル］オキシ｝−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸；
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３−｛［２８−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−９−メチル−１０，２６−ジオキソ−３，６，１３，１６，１９，２２−ヘキサオキサ−９，２５−ジアザオクタコサ−１−イル］オキシ｝−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸；
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３−｛２−［２−（２−｛［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］（メチル）アミノ｝エトキシ）エトキシ］エトキシ｝−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸；
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−（１−｛［３−（２−｛［４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２−スルホブタノイル］（メチル）アミノ｝エトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−カルボン酸；
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３−｛［３４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３−メチル−４，３２−ジオキソ−７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８−オクタオキサ−３，３１−ジアザテトラトリアコンタ−１−イル］オキシ｝−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸；
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３−｛［２８−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３−メチル−４，２６−ジオキソ−７，１０，１３，１６，１９，２２−ヘキサオキサ−３，２５−ジアザオクタコサ−１−イル］オキシ｝−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸；
２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−｛２−［２−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−３−スルホ−Ｌ−アラニル｝アミノ）エトキシ］エトキシ｝フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
Ｎ２−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｎ６−（３７−オキソ−２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５−ドデカオキサヘプタトリアコンタン−３７−イル）−Ｌ−リシル−Ｌ−アラニル−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド；
２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−［２−（２−｛［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−［３−（｛Ｎ−［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］−３−スルホ−Ｌ−アラニル｝アミノ）プロポキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−［３−（３−スルホプロポキシ）プロパ−１−イン−１−イル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド；
（６Ｓ）−２，６−アンヒドロ−６−（｛２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル｝アミノ）フェニル｝エチニル）−Ｌ−グロン酸；
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−［３−（３−スルホプロポキシ）プロピル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド；
２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−（５−｛［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝ペンチル）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−［１６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１４−オキソ−４，７，１０−トリオキサ−１３−アザヘキサデカ−１−イル］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
（６Ｓ）−２，６−アンヒドロ−６−（２−｛２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル｝アミノ）フェニル｝エチル）−Ｌ−グロン酸；
２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−（３−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝プロピル）フェニルＤ−グルコピラノシドウロン酸；
２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−｛４−［（｛（３Ｓ，５Ｓ）−３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２−オキソ−５−［（２−スルホエトキシ）メチル］ピロリジン−１−イル｝アセチル）アミノ］ブチル｝フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
３−｛（３−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−（β−Ｄ−グルコピラヌロノシルオキシ）フェニル｝プロピル）［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルプロパン−１−アミニウム；及び
（６Ｓ）−２，６−アンヒドロ−６−［２−（２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−｛［Ｎ−（｛（３Ｓ，５Ｓ）−３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２−オキソ−５−［（２−スルホエトキシ）メチル］ピロリジン−１−イル｝アセチル）−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル］アミノ｝フェニル）エチル］−Ｌ−グロン酸
から選択される、請求項１〜７０又は１０３のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
【請求項９６】
接触させるステップが、ＡＤＣが、２、３又は４のＤＡＲを有するような条件下で行われる、請求項９５に記載のＡＤＣ。
【請求項９７】
構造式Ｄ−Ｌ２−Ｒｘ
【化３２】
2019521114.tif 000257
（式中、
Ｄは、構造式（ＩＩａ）に従うＢｃｌ−ｘＬ阻害薬であり、
Ｌ２は、ＩＶａ．８、ＩＶｂ．１６〜ＩＶｂ．１９、ＩＶｃ．３〜ＩＶｃ．６、ＩＶｄ．１〜ＩＶｄ．４、Ｖｂ．５〜Ｖｂ．１０、Ｖｃ．１１、Ｖｄ．３〜Ｖｄ．６、ＶＩｄ．４、ＶＩＩａ．１〜ＶＩＩａ．４、ＶＩＩｂ．１〜ＶＩＩｂ．８及びＶＩＩｃ．１〜ＶＩＩｃ．６からなる群から選択されるリンカーであり、
Ｒｘは、シントンを抗体に共有結合する能力がある官能基を含む部分であり、
Ａｒは、
【化３３】
2019521114.tif 000258
から選択され、ハロ、シアノ、メチル及びハロメチルから独立して選択される１つ以上の置換基で置換されていてもよく、
Ｚ１は、Ｎ、ＣＨ及びＣ−ＣＮから選択され、
Ｚ２は、ＮＨ、ＣＨ２、Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）及びＳ（Ｏ）２から選択され、
Ｒ１は、メチル、クロロ及びシアノから選択され、
Ｒ２は、水素、メチル、クロロ及びシアノから選択され、
Ｒ４は、水素、Ｃ１〜４アルカニル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル又はＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、Ｒ４Ｃ１〜４アルカニル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル及びＣ１〜４ヒドロキシアルキルは、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３及びＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣＨ３から独立して選択される１つ以上の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ１０ａ、Ｒ１０ｂ及びＲ１０ｃはそれぞれ、互いに独立して、水素、ハロ、Ｃ１〜６アルカニル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル及びＣ１〜６ハロアルキルから選択され、
Ｒ１１ａ及びＲ１１ｂはそれぞれ、互いに独立して、水素、メチル、エチル、ハロメチル、ヒドロキシル、メトキシ、ハロ、ＣＮ及びＳＣＨ３から選択され、
ｎは、０、１、２又は３であり、
＃は、リンカーＬ２に対する結合点を表す。）
に従う、シントン。
【請求項９８】
Ｒｘが、マレイミド、ハロゲン化アセチル又はビニルスルホンを含む、請求項９７に記載のシントン。
【請求項９９】
Ｄが、構造式（ＩＩａ）の＃の位置に対応する水素が存在せず一価基を形成しているという点で変更されている、以下の化合物：
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−［１−（｛３，５−ジメチル−７−［２−（メチルアミノ）エトキシ］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−（１−｛［（１ｒ，３Ｒ，５Ｓ，７ｓ）−３，５−ジメチル−７−（２−｛２−［２−（メチルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−カルボン酸；
３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
３−［１−（｛３−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３−｛２−［（２−メトキシエチル）アミノ］エトキシ｝−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸；
３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−５−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−６−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸；及び
３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−７−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸
からなる群から選択されるＢｃｌ−ｘＬ阻害剤である、請求項９７に記載のシントン。
【請求項１００】
リンカーＬ２が、
【化３４】
2019521114.tif 000259
2019521114.tif 000260
2019521114.tif 000261
からなる群から選択され、式中
【化３５】
2019521114.tif 000262
は、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤に対するリンカーＬ２の結合点を表す、請求項９７に記載のシントン。
【請求項１０１】
シントン例２．４１（ＬＢ）、２．５４（ＬＸ）、２．５５（ＭＪ）、２．５６（ＮＨ）、２．５７（ＯＶ）、２．５８（ＱＳ）、２．５９（ＳＧ）、２．６０（ＵＦ）、２．６１（ＶＤ）、２．６２（ＶＸ）、２．６３（ＷＤ）からなる群から選択される、請求項９７に記載のシントン。
【請求項１０２】
シントン例２．４２（ＬＢ）、２．６１（ＶＤ）及び２．６３（ＷＤ）からなる群から選択される、請求項９７に記載のシントン
【化３６】
2019521114.tif 000263
2019521114.tif 000264
。
【請求項１０３】
抗体が、２つの重鎖及び２つの軽鎖である、４つのポリペプチド鎖を有するＩｇＧ１抗体である、請求項１〜７０のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
【請求項１０４】
請求項９３又は９４に記載の方法によって調製されるＡＤＣ。
【請求項１０５】
構造式（ｖ）
【化３７】
2019521114.tif 000265
（式中、ｍは、１〜６の整数である。）
に従う化合物である、請求項６６に記載のＡＤＣ。
【請求項１０６】
構造式（ｖｉ）
【化３８】
2019521114.tif 000266
（式中、ｍは、１〜６の整数である。）
に従う化合物である、請求項６６に記載のＡＤＣ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１６年６月８日に出願した米国仮出願第６２／３４７，３３３号の優先権を主張し、その全内容を、参照により本明細書に明示的に組み込む。
【０００２】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットにおいて電子的に提出し、その全体として参照により本明細書に組み込む配列表を含む。２０１７年６月２日付で作成した前記ＡＳＣＩＩのコピーは、１１７８１３−１２４２０＿ＳＬ．ｔｘｔと命名し、サイズ１４２，５３５バイトである。
【背景技術】
【０００３】
ヒト上皮成長因子受容体（ＨＥＲ−１又はＥｒｂ−Ｂ１としても知られ、本明細書において「ＥＧＦＲ」と称される）は、ｃ−ｅｒｂＢ癌原遺伝子によりコードされる１７０ｋＤａの膜貫通型受容体であり、固有のチロシンキナーゼ活性を示す（Ｍｏｄｊｔａｈｅｄｉら、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、７３：２２８〜２３５頁（１９９６年）；Ｈｅｒｂｓｔ及びＳｈｉｎ、Ｃａｎｃｅｒ、９４：１５９３〜１６１１頁、（２００２年））。ＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベースエントリーＰ００５３３は、ヒトＥＧＦＲの配列を提供する。ＥＧＦＲは、細胞増殖、分化、細胞生存、アポトーシス、血管新生、有糸分裂誘発及び転移を調節するシグナル伝達経路の活性化を含むが、これらに限定されない、チロシンキナーゼによって媒介されるシグナル伝達経路を介した多数の細胞プロセスを制御する（Ａｔａｌａｙら、Ａｎｎ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、１４：１３４６〜１３６３頁、（２００３年）；Ｔｓａｏ及びＨｅｒｂｓｔ、Ｓｉｇｎａｌ、４：４〜９頁、（２００３年）；Ｈｅｒｂｓｔ及びＳｈｉｎ、Ｃａｎｃｅｒ、９４：１５９３〜１６１１頁、（２００２年）；Ｍｏｄｊｔａｈｅｄｉら、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、７３：２２８〜２３５頁、（１９９６年））。
【０００４】
ＥＧＦＲの公知のリガンドは、ＥＧＦ、ＴＧＦＡ／ＴＧＦ−α、アンフィレギュリン、エピジェン／ＥＰＧＮ、ＢＴＣ／ベータセルリン、エピレギュリン／ＥＲＥＧ及びＨＢＥＧＦ／ヘパリン結合ＥＧＦを含む。ＥＧＦＲへのリガンド結合は、受容体のホモ及び／又はヘテロ二量体化並びに鍵となる細胞質残基の自己リン酸化の引き金となる。リン酸化されたＥＧＦＲは、ＧＲＢ２のようなアダプタータンパク質を動員し、次いでこのタンパク質が、少なくとも以下の主要な下流シグナル伝達カスケード：ＲＡＳ−ＲＡＦ−ＭＥＫ−ＥＲＫ、ＰＩ３キナーゼ−ＡＫＴ、ＰＬＣγ−ＰＫＣ及びＳＴＡＴモジュールを含む、複雑な下流シグナル伝達カスケードを活性化する。この自己リン酸化はまた、アダプタータンパク質自体のホスホチロシン結合ＳＨ２ドメインを介して、リン酸化されたチロシンと関連するいくつかの他のタンパク質による下流活性化及びシグナル伝達を誘発する。これらの下流シグナル伝達タンパク質は、いくつかのシグナル伝達カスケード、主に、ＭＡＰＫ、Ａｋｔ及びＪＮＫ経路を開始して、細胞増殖を引き起こす。ＥＧＦＲへのリガンド結合はまた、ＮＦ−κ−Ｂシグナル伝達カスケードを活性化し得る。リガンド結合はまた、ＲＧＳ１６のような他のタンパク質を直接リン酸化し、これにより、そのＧＴＰａｓｅ活性が活性化され、ＥＧＦ受容体シグナル伝達をＧタンパク質共役受容体シグナル伝達に潜在的に結び付ける。リガンド結合はまた、ＭＵＣ１をリン酸化し、ＳＲＣ及びＣＴＮＮＢ１／β−カテニンとのその相互作用を増大させる。
【０００５】
ＥＧＦＲの過剰発現は、膀胱がん、脳腫瘍、頭頸部がん、膵臓がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、結腸がん、前立腺がん及び腎臓がんを含む、多数のヒトの悪性状態において報告されている。（Ａｔａｌａｙら、Ａｎｎ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、１４：１３４６〜１３６３頁、（２００３年）；Ｈｅｒｂｓｔ及びＳｈｉｎ、Ｃａｎｃｅｒ、９４：１５９３〜１６１１頁、（２００２年）；及びＭｏｄｊｔａｈｅｄｉら、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、７３：２２８〜２３５頁、（１９９６年））。これらの状態の多くにおいて、ＥＧＦＲの過剰発現は、患者の予後不良と相関し、又は関連付けられる。（Ｈｅｒｂｓｔ及びＳｈｉｎ、Ｃａｎｃｅｒ、９４：１５９３〜１６１１頁、（２００２年）；及びＭｏｄｊｔａｈｅｄｉら、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、７３：２２８〜２３５頁、（１９９６年））。ＥＧＦＲはまた、悪性細胞よりも低いレベルであるが、正常組織、特に、皮膚、肝臓及び胃腸管の上皮組織の細胞においても発現される（Ｈｅｒｂｓｔ及びＳｈｉｎ、Ｃａｎｃｅｒ、９４：１５９３〜１６１１頁、（２００２年））。
【０００６】
相当な割合の、ＥＧＦＲ遺伝子の増幅を含有する腫瘍が、ｄｅ２−７  ＥＧＦＲ、ΔＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ又はΔ２−７（本明細書において互換的に使用される用語）として知られる、受容体の切断型（Ｗｉｋｓｔｒａｎｄら、（１９９８年）、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｖｉｒｏｌ．、４、１４８〜１５８頁）をも共発現する（Ｏｌａｐａｄｅ−Ｏｌａｏｐａら、（２０００年）、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ．、８２、１８６〜９４頁）。ｄｅ２−７ＥＧＦＲにおいて見られる再編成は、エクソン２〜７にまたがる８０１個のヌクレオチドを欠くインフレームの成熟ｍＲＮＡが生成される（Ｗｏｎｇら、（１９９２年）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、８９、２９６５〜９頁；Ｙａｍａｚａｋｉら、（１９９０年）、Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、８１、７７３〜９頁；Ｙａｍａｚａｋｉら、（１９８８年）、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．、８、１８１６〜２０頁；及びＳｕｇａｗａら、（１９９０年）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、８７、８６０２〜６頁）。対応するＥＧＦＲタンパク質は、細胞外ドメインの残基６〜２７３からなる２６７個のアミノ酸欠失、及び融合接合部における新規グリシン残基を有する（Ｓｕｇａｗａら、１９９０年）。この欠失は、グリシン残基の挿入と一緒に、欠失接合部において固有の接合部ペプチドを生じる（Ｓｕｇａｗａら、１９９０）。
【０００７】
ＥＧＦＲｖＩＩＩは、グリオーマ、乳がん、肺がん、卵巣がん及び前立腺がんを含むいくつもの腫瘍種で報告されている（Ｗｉｋｓｔｒａｎｄら、（１９９７年）、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、５７、４１３０〜４０頁；Ｏｌａｐａｄｅ−Ｏｌａｏｐａら、（２０００年）、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ．、８２、１８６〜９４頁；Ｗｉｋｓｔｒａｎｄら、（１９９５年）、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、５５、３１４０〜８頁；Ｇａｒｃｉａ  ｄｅ  Ｐａｌａｚｚｏら、（１９９３年）、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、５３、３２１７〜２０頁）。この切断受容体は、リガンドと結合しないが、ヌードマウスにおいて腫瘍異種移植片として増殖させたグリオーマ細胞に対して、低い恒常的活性を有し、顕著な増殖効果を付与し（Ｎｉｓｈｉｋａｗａら、（１９９４年）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、９１、７７２７〜３１頁）、ＮＩＨ３Ｔ３細胞（Ｂａｔｒａら、（１９９５年）、Ｃｅｌｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｄｉｆｆｅｒ．、６、１２５１〜９頁）及びＭＣＦ−７細胞を形質転換することができる。グリオーマ細胞においてｄｅ２−７  ＥＧＦＲにより利用される細胞機序は、完全には解明されていないが、アポトーシスの低減（Ｎａｇａｎｅら、（１９９６年）、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、５６、５０７９〜８６頁）及び増殖のわずかな増強を含むことが報告されている（Ｎａｇａｎｅら、１９９６年）。この切断受容体の発現は、腫瘍細胞に限定されているので、この受容体は、抗体療法の高度に特異的な標的となる。
【０００８】
抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、化学的リンカーを介して細胞傷害性の薬物にコンジュゲートされた抗体を含む新規のクラスの治療薬となる。ＡＤＣの治療概念は、抗体の結合能を薬物と合わせることであり、抗体は、標的表面抗原に結合することにより、腫瘍細胞に薬物を送達するために使用される。  がんにおけるＥＧＦＲの役割を考慮すると、当技術分野において、がんの処置のために使用され得る抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣが依然として必要である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｍｏｄｊｔａｈｅｄｉら、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、７３：２２８〜２３５頁（１９９６年）
【非特許文献２】Ｈｅｒｂｓｔ及びＳｈｉｎ、Ｃａｎｃｅｒ、９４：１５９３〜１６１１頁、（２００２年）
【非特許文献３】ＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベースエントリーＰ００５３３
【非特許文献４】Ａｔａｌａｙら、Ａｎｎ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、１４：１３４６〜１３６３頁、（２００３年）
【非特許文献５】Ｔｓａｏ及びＨｅｒｂｓｔ、Ｓｉｇｎａｌ、４：４〜９頁、（２００３年）
【非特許文献６】Ｗｉｋｓｔｒａｎｄら、（１９９８年）、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｖｉｒｏｌ．、４、１４８〜１５８頁
【非特許文献７】Ｏｌａｐａｄｅ−Ｏｌａｏｐａら、（２０００年）、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ．、８２、１８６〜９４頁
【非特許文献８】Ｗｏｎｇら、（１９９２年）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、８９、２９６５〜９頁
【非特許文献９】Ｙａｍａｚａｋｉら、（１９９０年）、Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、８１、７７３〜９頁
【非特許文献１０】Ｙａｍａｚａｋｉら、（１９８８年）、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．、８、１８１６〜２０頁
【非特許文献１１】Ｓｕｇａｗａら、（１９９０年）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、８７、８６０２〜６頁
【非特許文献１２】Ｗｉｋｓｔｒａｎｄら、（１９９７年）、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、５７、４１３０〜４０頁
【非特許文献１３】Ｗｉｋｓｔｒａｎｄら、（１９９５年）、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、５５、３１４０〜８頁
【非特許文献１４】Ｇａｒｃｉａ  ｄｅ  Ｐａｌａｚｚｏら、（１９９３年）、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、５３、３２１７〜２０頁
【非特許文献１５】Ｎｉｓｈｉｋａｗａら、（１９９４年）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、９１、７７２７〜３１頁
【非特許文献１６】Ｂａｔｒａら、（１９９５年）、Ｃｅｌｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｄｉｆｆｅｒ．、６、１２５１〜９頁
【非特許文献１７】Ｎａｇａｎｅら、（１９９６年）、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、５６、５０７９〜８６頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
（発明の要旨）
Ｂｃｌ−ｘＬの小分子阻害剤は、Ｂｃｌ−ｘＬを阻害し結果的にアポトーシスを誘導することが有益であろう細胞、例えば、ＥＧＦＲを発現する細胞の表面上で発現された抗原に結合する抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の形態で投与されると、効果的であることが発見された。この発見により、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害治療薬を、ＥＧＦＲを発現する特異的な細胞及び／又は組織にターゲティングすることができ、それによりＢｃｌ−ｘＬ阻害剤が、ＥＧＦＲを発現する形質転換されたがん細胞に内部送達される。本発明の１つの利点は、所望の治療有益性を達成するのに必要な血清レベルを低減し、並びに／又は小分子Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤自体の全身投与に伴う副作用の可能性を回避及び／若しくは改善する可能性があることである。
【００１１】
ＡＤＣは、１つ以上の薬物部分を腫瘍関連抗原などの標的組織、例えば、ＥＧＦＲ発現腫瘍に選択的に送達することができるため、疾患、例えばがんを処置における抗体の治療有効性を増大し得る。したがって、ある特定の実施形態において、本発明は、治療的使用、例えば、がんの処置のための抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣを提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
一態様において、本発明は、１つ以上のＢｃｌ−ｘＬ阻害剤に連結されている抗ヒト上皮成長因子受容体（ｈＥＧＦＲ）抗体、すなわち、ヒトＥＧＦＲに特異的に結合する抗体を含む、抗ヒト上皮成長因子受容体（ｈＥＧＦＲ）抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を特徴とする。
【００１３】
別の態様において、本発明は、リンカーによって抗ヒト上皮成長因子受容体（ｈＥＧＦＲ）抗体に連結されている薬物を含む、抗ヒト上皮成長因子受容体（ｈＥＧＦＲ）抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）であって、薬物が、構造式（ＩＩａ）に従うＢｃｌ−ｘＬ阻害剤：
【００１４】
【化１】
2019521114.tif 000002
（式中、
Ａｒは、
【００１５】
【化２】
2019521114.tif 000003
から選択され、ハロ、シアノ、メチル及びハロメチルから独立して選択される１つ以上の置換基で置換されていてもよく、
Ｚ１は、Ｎ、ＣＨ及びＣ−ＣＮから選択され、
Ｚ２は、ＮＨ、ＣＨ２、Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）及びＳ（Ｏ）２から選択され、
Ｒ１は、メチル、クロロ及びシアノから選択され、
Ｒ２は、水素、メチル、クロロ及びシアノから選択され、
Ｒ４は、水素、Ｃ１〜４アルカニル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル又はＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、Ｒ４Ｃ１〜４アルカニル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル及びＣ１〜４ヒドロキシアルキルは、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３及びＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣＨ３から独立して選択される１つ以上の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ１０ａ、Ｒ１０ｂ及びＲ１０ｃはそれぞれ、互いに独立して、水素、ハロ、Ｃ１〜６アルカニル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル及びＣ１〜６ハロアルキルから選択され、
Ｒ１１ａ及びＲ１１ｂはそれぞれ、互いに独立して、水素、メチル、エチル、ハロメチル、ヒドロキシル、メトキシ、ハロ、ＣＮ及びＳＣＨ３から選択され、
ｎは、０、１、２又は３であり、
＃は、リンカーに対する結合点を表す。）
であり、
抗ｈＥＧＦＲ抗体が、次の特徴：
アミノ酸配列ＣＧＡＤＳＹＥＭＥＥＤＧＶＲＫＣ（配列番号４５）内のエピトープに結合する、又は競合的結合アッセイにおいて上皮成長因子受容体バリアントＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）（配列番号３３）への結合について第二の抗ｈＥＧＦＲ抗体と競合し、第二の抗ＥＧＦＲ抗体は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含むこと、
表面プラズモン共鳴によって決定される約１×１０−６Ｍ以下の解離定数（Ｋｄ）でＥＧＦＲ（１〜５２５）（配列番号４７）に結合すること
を有する、ＡＤＣを特徴とする。
【００１６】
一実施形態において、ＡＤＣは、構造式（Ｉ）に従う化合物：
【００１７】
【化３】
2019521114.tif 000004
（式中、
Ｄは、式（ＩＩａ）のＢｃｌ−ｘＬ阻害薬であり、
Ｌはリンカーであり、
Ａｂは、抗ｈＥＧＦＲ抗体であり、
ＬＫは、リンカー（Ｌ）を抗ｈＥＧＦＲ抗体（Ａｂ）と連結している共有結合を表し、
ｍは、１〜２０の範囲の整数である。）
である。
【００１８】
別の実施形態において、Ａｒは、置換されていない。
【００１９】
さらなる実施形態において、Ａｒは、
【００２０】
【化４】
2019521114.tif 000005
である。
【００２１】
一実施形態において、Ｒ１０ａ、Ｒ１０ｂ及びＲ１０ｃは、それぞれ、水素である。別の実施形態において、Ｒ１０ａ、Ｒ１０ｂ及びＲ１０ｃの１つはハロであり、他は、水素である。別の実施形態において、Ｚ１は、Ｎである。別の実施形態において、Ｒ１は、メチル又はクロロである。別の実施形態において、Ｒ２は、水素又はメチルである。別の実施形態において、Ｒ２は、水素である。別の実施形態において、Ｒ４は、水素又はＣ１〜４アルカニルであり、Ｃ１〜４アルカニルは、−ＯＣＨ３で置換されていてもよい。別の実施形態において、Ｚ１はＮであり、Ｒ１はメチルであり、Ｒ２は水素であり、Ｒ４は、水素又はＣ１〜４アルカニルであり、Ｃ１〜４アルカニルは、−ＯＣＨ３で置換されていてもよく、Ｒ１０ａ、Ｒ１０ｂ及びＲ１０ｃの１つは、水素又はハロであり、他は水素であり、Ｒ１１ａ及びＲ１１ｂはそれぞれメチルであり、Ａｒは、
【００２２】
【化５】
2019521114.tif 000006
である。
【００２３】
別の実施形態において、Ｚ２は、ＣＨ２又はＯである。
【００２４】
別の実施形態において、ｎは、０、１又は２である。
【００２５】
別の実施形態において、基
【００２６】
【化６】
2019521114.tif 000007
は、
【００２７】
【化７】
2019521114.tif 000008
である。
【００２８】
別の実施形態において、基
【００２９】
【化８】
2019521114.tif 000009
は、
【００３０】
【化９】
2019521114.tif 000010
である。
【００３１】
別の実施形態において、Ｚ２は、酸素であり、Ｒ４は、水素であり、又はＯＣＨ３で置換されていてもよいＣ１〜４アルカニルであり、ｎは、０、１又は２である。
【００３２】
一実施形態において、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤は、構造式（ＩＩａ）の＃の位置に対応する水素が存在せず一価基を形成しているという点で変更されている、以下の化合物：
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−［１−（｛３，５−ジメチル−７−［２−（メチルアミノ）エトキシ］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−（１−｛［（１ｒ，３Ｒ，５Ｓ，７ｓ）−３，５−ジメチル−７−（２−｛２−［２−（メチルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−カルボン酸；
３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
３−［１−（｛３−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３−｛２−［（２−メトキシエチル）アミノ］エトキシ｝−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸；
３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−５−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−６−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸；及び
３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−７−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸
からなる群から選択される。
【００３３】
本明細書における態様及び実施形態のいずれか１つの一実施形態において、リンカーは、リソソーム酵素によって切断可能である。さらなる実施形態において、リソソーム酵素は、カテプシンＢである。
【００３４】
本明細書における態様及び実施形態のいずれか１つの一実施形態において、リンカーは、構造式（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）、（ＩＶｃ）又は（ＩＶｄ）に従うセグメント：
【００３５】
【化１０】
2019521114.tif 000011
（式中、
ペプチドは、リソソーム酵素によって切断可能なペプチドを表し（Ｎ→Ｃで図示されており、ペプチドはアミノ及びカルボキシ「末端」を含む）、
Ｔは、１個以上のエチレングリコール単位若しくはアルキレン鎖、又はこれらの組合せを含むポリマーを表し、
Ｒａは、水素、Ｃ１〜６アルキル、ＳＯ３Ｈ及びＣＨ２ＳＯ３Ｈから選択され、
Ｒｙは、水素又はＣ１〜４アルキル−（Ｏ）ｒ−（Ｃ１〜４アルキレン）ｓ−Ｇ１若しくはＣ１〜４アルキル−（Ｎ）−［（Ｃ１〜４アルキレン）−Ｇ１］２であり、
Ｒｚは、Ｃ１〜４アルキル−（Ｏ）ｒ−（Ｃ１〜４アルキレン）ｓ−Ｇ２であり、
Ｇ１は、ＳＯ３Ｈ、ＣＯ２Ｈ、ＰＥＧ４−３２、又は糖部分であり、
Ｇ２は、ＳＯ３Ｈ、ＣＯ２Ｈ又はＰＥＧ４−３２部分であり、
ｒは、０又は１であり、
ｓは、０又は１であり、
ｐは、０〜５の範囲の整数であり、
ｑは、０又は１であり、
ｘは、０又は１であり、
ｙは、０又は１であり、
【００３６】
【化１１】
2019521114.tif 000012
は、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤に対するリンカーの結合点を表し、
＊は、リンカーの残部に対する結合点を表す。）
を含む。
【００３７】
さらなる実施形態において、ペプチドは、Ｖａｌ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ｖａｌ；Ａｌａ−Ａｌａ；Ａｌａ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ａｌａ；Ａｓｎ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ａｓｎ；Ｃｉｔ−Ｃｉｔ；Ｖａｌ−Ｇｌｕ；Ｇｌｕ−Ｖａｌ；Ｓｅｒ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ｓｅｒ；Ｌｙｓ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ｌｙｓ；Ａｓｐ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ａｓｐ；Ａｌａ−Ｖａｌ；Ｖａｌ−Ａｌａ；Ｐｈｅ−Ｌｙｓ；Ｌｙｓ−Ｐｈｅ；Ｖａｌ−Ｌｙｓ；Ｌｙｓ−Ｖａｌ；Ａｌａ−Ｌｙｓ；Ｌｙｓ−Ａｌａ；Ｐｈｅ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ｐｈｅ；Ｌｅｕ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ｌｅｕ；Ｉｌｅ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ｉｌｅ；Ｐｈｅ−Ａｒｇ；Ａｒｇ−Ｐｈｅ；Ｃｉｔ−Ｔｒｐ；及びＴｒｐ−Ｃｉｔからなる群から選択される。
【００３８】
一実施形態において、リソソーム酵素は、β−グルクロニダーゼ又はβ−ガラクトシダーゼである。
【００３９】
本明細書における態様及び実施形態のいずれか１つの一実施形態において、リンカーは、構造式（Ｖａ）、（Ｖｂ）、（Ｖｃ）、（Ｖｄ）又は（Ｖｅ）に従うセグメント：
【００４０】
【化１２】
2019521114.tif 000013
2019521114.tif 000014
（式中、
ｑは、０又は１であり、
ｒは、０又は１であり、
Ｘ１は、ＣＨ２、Ｏ又はＮＨであり、
【００４１】
【化１３】
2019521114.tif 000015
は、薬物に対するリンカーの結合点を表し、
＊は、リンカーの残部に対する結合点を表す。）
を含む。
【００４２】
本明細書における態様及び実施形態のいずれか１つの一実施形態において、リンカーは、構造式（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）又は（ＶＩＩＩｃ）に従うセグメント：
【００４３】
【化１４】
2019521114.tif 000016
又はこれらの加水分解された誘導体（式中、
Ｒｑは、Ｈ又は−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１１−ＣＨ３であり、
ｘは、０又は１であり、
ｙは、０又は１であり、
Ｇ３は、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＳＯ３Ｈ又は−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１１−ＣＨ３であり、
Ｒｗは、−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２ＳＯ３Ｈ又は−ＮＨ（ＣＯ）−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１２−ＣＨ３であり、
＊は、リンカーの残部に対する結合点を表し、
【００４４】
【化１５】
2019521114.tif 000017
は、抗体に対するリンカーの結合点を表す。）
を含む。
【００４５】
本明細書における態様及び実施形態のいずれか１つの一実施形態において、リンカーは、１〜６個のエチレングリコール単位を有するポリエチレングリコールセグメントを含む。
【００４６】
本明細書における態様及び実施形態のいずれか１つの一実施形態において、ｍは、２、３又は４である。
【００４７】
本明細書における態様及び実施形態のいずれか１つの一実施形態において、リンカーＬは、ＩＶａ又はＩＶｂから選択される。
【００４８】
本明細書における態様及び実施形態のいずれか１つの一実施形態において、リンカーＬは、閉鎖型又は開放型のいずれかの、ＩＶａ．１〜ＩＶａ．８、ＩＶｂ．１〜ＩＶｂ．１９、ＩＶｃ．１〜ＩＶｃ．７、ＩＶｄ．１〜ＩＶｄ．４、Ｖａ．１〜Ｖａ．１２、Ｖｂ．１〜Ｖｂ．１０、Ｖｃ．１〜Ｖｃ．１１、Ｖｄ．１〜Ｖｄ．６、Ｖｅ．１〜Ｖｅ．２、ＶＩａ．１、ＶＩｃ．１〜Ｖ１ｃ．２、ＶＩｄ．１〜ＶＩｄ．４、ＶＩＩａ．１〜ＶＩＩａ．４、ＶＩＩｂ．１〜ＶＩＩｂ．８、ＶＩＩｃ．１〜ＶＩＩｃ．６からなる群から選択される。
【００４９】
本明細書における態様及び実施形態のいずれか１つの一実施形態において、リンカーＬは、ＩＶｂ．２、ＩＶｃ．５、ＩＶｃ．６、ＩＶｃ．７、ＩＶｄ．４、Ｖｂ．９、ＶＩＩａ．１、ＶＩＩａ．３、ＶＩＩｃ．１、ＶＩＩｃ．３、ＶＩＩｃ．４及びＶＩＩｃ．５からなる群から選択され、各リンカーのマレイミドが、抗体Ａｂと反応して、スクシンイミド（閉鎖型）又はスクシンアミド（開放型）のいずれかとして共有結合を形成している。
【００５０】
本明細書における態様及び実施形態のいずれか１つの一実施形態において、リンカーＬは、ＩＶｃ．５、ＩＶｃ．６、ＩＶｄ．４、ＶＩＩａ．１、ＶＩＩａ．３、ＶＩＩｃ．１、ＶＩＩｃ．３、ＶＩＩｃ．４及びＶＩＩｃ．５からなる群から選択され、各リンカーのマレイミドが、抗体Ａｂと反応して、スクシンイミド（閉鎖型）又はスクシンアミド（開放型）のいずれかとして共有結合を形成している。
【００５１】
本明細書における態様及び実施形態のいずれか１つの一実施形態において、リンカーＬは、ＶＩＩａ．３、ＩＶｃ．６、ＶＩＩｃ．１及びＶＩＩｃ．５からなる群から選択され、式中
【００５２】
【化１６】
2019521114.tif 000018
は、薬物Ｄに対する結合点であり、＠は、ＬＫに対する結合点であり、リンカーが下記に示すような開放型である場合、＠はこの隣にあるカルボン酸のα位又はβ位のいずれかであり得る：
【００５３】
【化１７】
2019521114.tif 000019
2019521114.tif 000020
2019521114.tif 000021
【００５４】
本明細書における態様及び実施形態のいずれか１つの一実施形態において、ＬＫは、抗ｈＥＧＦＲ抗体Ａｂ上のアミノ基と形成された連結である。さらなる実施形態において、ＬＫは、アミド又はチオ尿素である。
【００５５】
本明細書における態様及び実施形態のいずれか１つの一実施形態において、ＬＫは、抗ｈＥＧＦＲ抗体Ａｂ上のスルフヒドリル基と形成された連結である。さらなる実施形態において、ＬＫは、チオエーテルである。
【００５６】
本明細書における態様及び実施形態のいずれか１つの一実施形態において、ＬＫは、アミド、チオ尿素及びチオエーテルからなる群から選択され、ｍは、１〜８の範囲の整数である。
【００５７】
一実施形態において、Ｄは、構造式（ＩＩａ）の＃の位置に対応する水素が存在せず一価基を形成しているという点で変更されている、以下の化合物：
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−［１−（｛３，５−ジメチル−７−［２−（メチルアミノ）エトキシ］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−（１−｛［（１ｒ，３Ｒ，５Ｓ，７ｓ）−３，５−ジメチル−７−（２−｛２−［２−（メチルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−カルボン酸；
３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
３−［１−（｛３−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３−｛２−［（２−メトキシエチル）アミノ］エトキシ｝−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸；
３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−５−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−６−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸；及び
３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−７−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
からなる群から選択されるＢｃｌ−ｘＬ阻害剤であり、
Ｌは、リンカーＩＶａ．１〜ＩＶａ．８、ＩＶｂ．１〜ＩＶｂ．１９、ＩＶｃ．１〜ＩＶｃ．７、ＩＶｄ．１〜ＩＶｄ．４、Ｖａ．１〜Ｖａ．１２、Ｖｂ．１〜Ｖｂ．１０、Ｖｃ．１〜Ｖｃ．１１、Ｖｄ．１〜Ｖｄ．６、Ｖｅ．１〜Ｖｅ．２、ＶＩａ．１、ＶＩｃ．１〜Ｖ１ｃ．２、ＶＩｄ．１〜ＶＩｄ．４、ＶＩＩａ．１〜ＶＩＩａ．４、ＶＩＩｂ．１〜ＶＩＩｂ．８、ＶＩＩｃ．１〜ＶＩＩｃ．６からなる群から選択され、各リンカーは、抗ｈＥＧＦＲ抗体Ａｂと反応して、共有結合を形成し、
ＬＫはチオエーテルであり、
ｍは、１〜８の範囲の整数である。
【００５８】
一実施形態において、Ｄは、構造式（ＩＩａ）の＃の位置に対応する水素が存在せず一価基を形成しているという点で変更されている、以下の化合物：
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−［１−（｛３，５−ジメチル−７−［２−（メチルアミノ）エトキシ］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］ピリジン−２−カルボン酸；及び
３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−５−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸
からなる群から選択されるＢｃｌ−ｘＬ阻害剤であり、
Ｌは、閉鎖型又は開放型のいずれかの、リンカーＶｃ．５、ＩＶｃ．６、ＩＶｄ．４、ＶＩＩａ．１、ＶＩＩｃ．１、ＶＩＩｃ．３、ＶＩＩｃ．４及びＶＩＩｃ．５からなる群から選択され、
ＬＫは、チオエーテルであり、
ｍは、２〜４の範囲の整数である。
【００５９】
一実施形態において、ＡＤＣは、ＡｂＡ−ＷＤ、ＡｂＡ−ＬＢ、ＡｂＡ−ＶＤ、ＡｂＢ−ＷＤ、ＡｂＢ−ＬＢ、ＡｂＢ−ＶＤ、ＡｂＧ−ＷＤ、ＡｂＧ−ＬＢ、ＡｂＧ−ＶＤ、ＡｂＫ−ＷＤ、ＡｂＫ−ＬＢ及びＡｂＫ−ＶＤからなる群から選択され、ＷＤ、ＬＢ及びＶＤが、表５に開示されているシントンであり、シントンは、開放型又は閉鎖型のいずれかである。
【００６０】
一実施形態において、ＡＤＣは、式ｉ〜ｖｉ：
【００６１】
【化１８】
2019521114.tif 000022
2019521114.tif 000023
2019521114.tif 000024
（式中、ｍは、１〜６の整数である。）
からなる群から選択される。ある特定の実施形態において、ｍは２である。ある特定の実施形態において、Ａｂは、抗ｈＥＧＦＲ抗体であり、抗ｈＥＧＦＲ抗体は、ＡｂＡの重鎖及び軽鎖ＣＤＲを含む。別の特定の実施形態において、Ａｂは抗ｈＥＧＦＲ抗体であり、抗ｈＥＧＦＲ抗体は、ＡｂＧの重鎖及び軽鎖ＣＤＲを含む。
【００６２】
さらなる実施形態において、ｍは、２〜６の整数である。
【００６３】
本明細書における態様及び実施形態のいずれか１つの一実施形態において、抗体は、表面プラズモン共鳴によって決定される約１×１０−６Ｍ〜約１×１０−１０ＭのＫｄでＥＧＦＲ（１〜５２５）（配列番号４７）に結合する。
【００６４】
本明細書における態様及び実施形態のいずれか１つの一実施形態において、抗体は、表面プラズモン共鳴によって決定される約１×１０−６Ｍ〜約１×１０−７ＭのＫｄでＥＧＦＲ（１〜５２５）（配列番号４７）に結合する。
【００６５】
本明細書における態様及び実施形態のいずれか１つの一実施形態において、抗体は、表面プラズモン共鳴によって決定される約８．２×１０−９Ｍ以下のＫｄでＥＧＦＲｖＩＩＩ（配列番号３３）に結合する。
【００６６】
本明細書における態様及び実施形態のいずれか１つの一実施形態において、抗体は、表面プラズモン共鳴によって決定される約８．２×１０−９Ｍ〜約６．３×１０−１０ＭのＫｄでＥＧＦＲｖＩＩＩ（配列番号３３）に結合する。
【００６７】
本明細書における態様及び実施形態のいずれか１つの一実施形態において、抗体は、表面プラズモン共鳴によって決定される約８．２×１０−９Ｍ〜約２．０×１０−９ＭのＫｄでＥＧＦＲｖＩＩＩ（配列番号３３）に結合する。
【００６８】
本明細書における態様及び実施形態のいずれか１つの一実施形態において、抗ｈＥＧＦＲ抗体は、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１ドメイン、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１ドメインを含む。
【００６９】
本明細書における態様及び実施形態のいずれか１つの一実施形態において、抗体は、配列番号９に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【００７０】
本明細書における態様及び実施形態のいずれか１つの一実施形態において、抗体は、配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００７１】
本明細書における態様及び実施形態のいずれか１つの一実施形態において、抗体は、配列番号４０に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号３９に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号３８に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１ドメイン、並びに配列番号３７に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号３６に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号３５に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１ドメインを含む。
【００７２】
本明細書における態様及び実施形態のいずれか１つの一実施形態において、抗体は、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６及び７８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、並びに５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７及び７９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【００７３】
本明細書における態様及び実施形態のいずれか１つの一実施形態において、抗体は、配列番号１０、１１及び１２；配列番号１６、１７及び１８；配列番号１０、１１及び１９；配列番号２０、１１及び１２；配列番号２１、３及び２２；配列番号１６、１７及び１９；配列番号２、３及び４；配列番号１０、３及び１２；配列番号８０、１１及び１８；配列番号８０、３及び１８；配列番号２０、３及び１２；配列番号８０、１１及び１２；並びに配列番号８１、１１及び２２からなる群から選択される重鎖ＣＤＲセット（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）；並びに配列番号６、７及び８；配列番号２３、２４及び２５；配列番号２６、２７及び２８；配列番号２９、３０及び３１；配列番号６、７及び８４；配列番号８２、８３及び３１；並びに配列番号８２、２７及び８５からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲセット（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含み、抗体が、配列番号２、３及び４の重鎖ＣＤＲセットと配列番号６、７及び８の軽鎖ＣＤＲセットを共に含まない。
【００７４】
本明細書における態様及び実施形態のいずれか１つの一実施形態において、抗体は、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１ドメイン、並びに配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１ドメインを含む。
【００７５】
本明細書における態様及び実施形態のいずれか１つの一実施形態において、抗体は、配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１ドメイン、並びに配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１ドメインを含む。
【００７６】
本明細書における態様及び実施形態のいずれか１つの一実施形態において、抗体は、配列番号２８に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１ドメイン、並びに配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１ドメインを含む。
【００７７】
本明細書における態様及び実施形態のいずれか１つの一実施形態において、抗体は、配列番号６４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号６５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【００７８】
本明細書における態様及び実施形態のいずれか１つの一実施形態において、抗体は、配列番号７２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号７３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【００７９】
本明細書における態様及び実施形態のいずれか１つの一実施形態において、抗体は、配列番号７４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号７５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【００８０】
一実施形態において、抗体は、４つのポリペプチド鎖、２つの重鎖及び２つの軽鎖を有するＩｇＧ１抗体である。
【００８１】
一実施形態において、抗体は、κ軽鎖を含む。一実施形態において、抗体は、λ軽鎖を含む。
【００８２】
一態様において、本発明は、リンカーによって抗ｈＥＧＦＲ抗体に連結されている薬物を含む抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣであって、薬物が、構造式（ＩＩａ）に従うＢｃｌ−ｘＬ阻害剤：
【００８３】
【化１９】
2019521114.tif 000025
（式中、
Ａｒは、
【００８４】
【化２０】
2019521114.tif 000026
から選択され、ハロ、シアノ、メチル及びハロメチルから独立して選択される１つ以上の置換基で置換されていてもよく、
Ｚ１は、Ｎ、ＣＨ及びＣ−ＣＮから選択され、
Ｚ２は、ＮＨ、ＣＨ２、Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）及びＳ（Ｏ）２から選択され、
Ｒ１は、メチル、クロロ及びシアノから選択され、
Ｒ２は、水素、メチル、クロロ及びシアノから選択され、
Ｒ４は、水素、Ｃ１〜４アルカニル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル又はＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、Ｒ４Ｃ１〜４アルカニル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル及びＣ１〜４ヒドロキシアルキルは、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３及びＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣＨ３から独立して選択される１つ以上の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ１０ａ、Ｒ１０ｂ及びＲ１０ｃはそれぞれ、互いに独立して、水素、ハロ、Ｃ１〜６アルカニル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル及びＣ１〜６ハロアルキルから選択され、
Ｒ１１ａ及びＲ１１ｂはそれぞれ、互いに独立して、水素、メチル、エチル、ハロメチル、ヒドロキシル、メトキシ、ハロ、ＣＮ及びＳＣＨ３から選択され、
ｎは、０、１、２又は３であり、
＃は、リンカーに対する結合点を表す。）
であり、
抗ｈＥＧＦＲ抗体が、モノクローナルＩｇＧ抗体であり、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１ドメイン；配列番号８に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１ドメインを含む、ＡＤＣを特徴とする。
【００８５】
一実施形態において、抗体は、配列番号９に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【００８６】
別の態様において、本発明は、リンカーによって抗ｈＥＧＦＲ抗体に連結されている薬物を含む抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣであって、薬物が、構造式（ＩＩａ）に従うＢｃｌ−ｘＬ阻害剤：
【００８７】
【化２１】
2019521114.tif 000027
（式中、
Ａｒは、
【００８８】
【化２２】
2019521114.tif 000028
から選択され、ハロ、シアノ、メチル及びハロメチルから独立して選択される１つ以上の置換基で置換されていてもよく、
Ｚ１は、Ｎ、ＣＨ及びＣ−ＣＮから選択され、
Ｚ２は、ＮＨ、ＣＨ２、Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）及びＳ（Ｏ）２から選択され、
Ｒ１は、メチル、クロロ及びシアノから選択され、
Ｒ２は、水素、メチル、クロロ及びシアノから選択され、
Ｒ４は、水素、Ｃ１〜４アルカニル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル又はＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、Ｒ４Ｃ１〜４アルカニル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル及びＣ１〜４ヒドロキシアルキルは、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３及びＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣＨ３から独立して選択される１つ以上の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ１０ａ、Ｒ１０ｂ及びＲ１０ｃはそれぞれ、互いに独立して、水素、ハロ、Ｃ１〜６アルカニル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル及びＣ１〜６ハロアルキルから選択され、
Ｒ１１ａ及びＲ１１ｂはそれぞれ、互いに独立して、水素、メチル、エチル、ハロメチル、ヒドロキシル、メトキシ、ハロ、ＣＮ及びＳＣＨ３から選択され、
ｎは、０、１、２又は３であり、
＃は、リンカーに対する結合点を表す。）
であり、
抗体が、モノクローナルＩｇＧ抗体であり、配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１ドメイン；並びに配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１ドメインを含む、ＡＤＣを特徴とする。
【００８９】
一実施形態において、抗体は、配列番号７２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号７３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【００９０】
別の態様において、本発明は、リンカーによって抗ｈＥＧＦＲ抗体に連結されている薬物を含む抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣであって、薬物が、構造式（ＩＩａ）に従うＢｃｌ−ｘＬ阻害剤：
【００９１】
【化２３】
2019521114.tif 000029
（式中、
Ａｒは、
【００９２】
【化２４】
2019521114.tif 000030
から選択され、ハロ、シアノ、メチル及びハロメチルから独立して選択される１つ以上の置換基で置換されていてもよく、
Ｚ１は、Ｎ、ＣＨ及びＣ−ＣＮから選択され、
Ｚ２は、ＮＨ、ＣＨ２、Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）及びＳ（Ｏ）２から選択され、
Ｒ１は、メチル、クロロ及びシアノから選択され、
Ｒ２は、水素、メチル、クロロ及びシアノから選択され、
Ｒ４は、水素、Ｃ１〜４アルカニル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル又はＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、Ｒ４Ｃ１〜４アルカニル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル及びＣ１〜４ヒドロキシアルキルは、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３及びＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣＨ３から独立して選択される１つ以上の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ１０ａ、Ｒ１０ｂ及びＲ１０ｃはそれぞれ、互いに独立して、水素、ハロ、Ｃ１〜６アルカニル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル及びＣ１〜６ハロアルキルから選択され、
Ｒ１１ａ及びＲ１１ｂはそれぞれ、互いに独立して、水素、メチル、エチル、ハロメチル、ヒドロキシル、メトキシ、ハロ、ＣＮ及びＳＣＨ３から選択され、
ｎは、０、１、２又は３であり、
＃は、リンカーに対する結合点を表す。）
であり、
抗体が、モノクローナルＩｇＧ抗体であり、配列番号２８に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１ドメイン；並びに配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１ドメインを含む、ＡＤＣを特徴とする。
【００９３】
一実施形態において、抗体は、配列番号７４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号７５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【００９４】
本明細書における態様及び実施形態のいずれか１つの一実施形態において、ＡＤＣは、構造式（Ｉ）に従う化合物：
【００９５】
【化２５】
2019521114.tif 000031
（式中、
Ｄは、式（ＩＩａ）のＢｃｌ−ｘＬ阻害薬であり、
Ｌは、リンカーであり、
Ａｂは、抗ｈＥＧＦＲ抗体であり、
ＬＫは、リンカー（Ｌ）を抗ｈＥＧＦＲ抗体（Ａｂ）と連結している共有結合を表し、
ｍは、１〜２０の範囲の整数である。）
である。
【００９６】
一実施形態において、ＡＤＣは、構造式（ｉ）：
【００９７】
【化２６】
2019521114.tif 000032
（式中、ｍは、１〜６の整数である。）
に従う化合物である。ある特定の実施形態において、ｍは２である。ある特定の実施形態において、Ａｂは、抗ｈＥＧＦＲ抗体であり、抗ｈＥＧＦＲ抗体が、ＡｂＡの重鎖及び軽鎖ＣＤＲを含む。他の実施形態において、抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣは、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１ドメイン；並びに配列番号８に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１ドメインを含む抗体を含む。さらに別の実施形態において、抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣは、配列番号９に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体を含む。他の実施形態において、抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣは、配列番号４１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域及び／又は配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む抗体を含む。さらなる実施形態において、抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣは、配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を含む。さらなる実施形態において、抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣは、配列番号１０２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を含む。別の特定の実施形態において、Ａｂは抗ｈＥＧＦＲ抗体であり、抗ｈＥＧＦＲ抗体は、ＡｂＧの重鎖及び軽鎖ＣＤＲを含む。他の実施形態において、抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣは、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１ドメイン；並びに配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１ドメインを含む抗体を含む。さらに別の実施形態において、抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣは、配列番号７２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号７３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体を含む。他の実施形態において、抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣは、配列番号４１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域及び／又は配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む抗体を含む。さらなる実施形態において、抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣは、配列番号９３に記載のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号９５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を含む。さらなる実施形態において、抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣは、配列番号９４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号９５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を含む。
【００９８】
一実施形態において、ＡＤＣは、構造式（ｉｉ）：
【００９９】
【化２７】
2019521114.tif 000033
（式中、ｍは、１〜６の整数である。）
に従う化合物である。ある特定の実施形態において、ｍは２である。ある特定の実施形態において、Ａｂは、抗ｈＥＧＦＲ抗体であり、抗ｈＥＧＦＲ抗体が、ＡｂＡの重鎖及び軽鎖ＣＤＲを含む。他の実施形態において、抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣは、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１ドメイン；並びに配列番号８に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１ドメインを含む抗体を含む。さらに別の実施形態において、抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣは、配列番号９に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体を含む。他の実施形態において、抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣは、配列番号４１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域及び／又は配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む抗体を含む。さらなる実施形態において、抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣは、配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を含む。さらなる実施形態において、抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣは、配列番号１０２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を含む。別の特定の実施形態において、Ａｂは抗ｈＥＧＦＲ抗体であり、抗ｈＥＧＦＲ抗体は、ＡｂＧの重鎖及び軽鎖ＣＤＲを含む。他の実施形態において、抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣは、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１ドメイン；並びに配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１ドメインを含む抗体を含む。さらに別の実施形態において、抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣは、配列番号７２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号７３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体を含む。他の実施形態において、抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣは、配列番号４１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域及び／又は配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む抗体を含む。さらなる実施形態において、抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣは、配列番号９３に記載のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号９５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を含む。さらなる実施形態において、抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣは、配列番号９４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号９５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を含む。
【０１００】
一実施形態において、ＡＤＣは、構造式（ｉｉｉ）：
【０１０１】
【化２８】
2019521114.tif 000034
（式中、ｍは、１〜６の整数である。）
に従う化合物である。ある特定の実施形態において、ｍは２である。ある特定の実施形態において、Ａｂは、抗ｈＥＧＦＲ抗体であり、抗ｈＥＧＦＲ抗体が、ＡｂＡの重鎖及び軽鎖ＣＤＲを含む。他の実施形態において、抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣは、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１ドメイン；並びに配列番号８に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１ドメインを含む抗体を含む。さらに別の実施形態において、抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣは、配列番号９に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体を含む。他の実施形態において、抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣは、配列番号４１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域及び／又は配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む抗体を含む。さらなる実施形態において、抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣは、配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を含む。さらなる実施形態において、抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣは、配列番号１０２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を含む。別の特定の実施形態において、Ａｂは抗ｈＥＧＦＲ抗体であり、抗ｈＥＧＦＲ抗体は、ＡｂＧの重鎖及び軽鎖ＣＤＲを含む。他の実施形態において、抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣは、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１ドメイン；並びに配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１ドメインを含む抗体を含む。さらに別の実施形態において、抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣは、配列番号７２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号７３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体を含む。他の実施形態において、抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣは、配列番号４１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域及び／又は配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む抗体を含む。さらなる実施形態において、抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣは、配列番号９３に記載のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号９５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を含む。さらなる実施形態において、抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣは、配列番号９４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号９５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を含む。
【０１０２】
一実施形態において、ＡＤＣは、構造式（ｉｖ）：
【０１０３】
【化２９】
2019521114.tif 000035
（式中、ｍは、１〜６の整数である。）
に従う化合物である。ある特定の実施形態において、ｍは２である。ある特定の実施形態において、Ａｂは、抗ｈＥＧＦＲ抗体であり、抗ｈＥＧＦＲ抗体が、ＡｂＡの重鎖及び軽鎖ＣＤＲを含む。他の実施形態において、抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣは、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１ドメイン；並びに配列番号８に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１ドメインを含む抗体を含む。さらに別の実施形態において、抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣは、配列番号９に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体を含む。他の実施形態において、抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣは、配列番号４１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域及び／又は配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む抗体を含む。さらなる実施形態において、抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣは、配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を含む。さらなる実施形態において、抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣは、配列番号１０２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を含む。別の特定の実施形態において、Ａｂは抗ｈＥＧＦＲ抗体であり、抗ｈＥＧＦＲ抗体は、ＡｂＧの重鎖及び軽鎖ＣＤＲを含む。他の実施形態において、抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣは、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１ドメイン；並びに配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１ドメインを含む抗体を含む。さらに別の実施形態において、抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣは、配列番号７２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号７３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体を含む。他の実施形態において、抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣは、配列番号４１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域及び／又は配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む抗体を含む。さらなる実施形態において、抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣは、配列番号９３に記載のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号９５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を含む。さらなる実施形態において、抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣは、配列番号９４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号９５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を含む。
【０１０４】
別の態様において、本発明は、有効量の、本明細書における態様及び実施形態のいずれか１つのＡＤＣ、並びに薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物を特徴とする。
【０１０５】
別の態様において、本発明は、本明細書における態様又は実施形態のいずれか１つの複数のＡＤＣを含むＡＤＣ混合物及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を特徴とする。
【０１０６】
一実施形態において、ＡＤＣ混合物は、２〜４の平均薬物抗体比（ＤＡＲ）を有する。  一実施形態において、ＡＤＣ混合物は、２〜８のＤＡＲをそれぞれ有するＡＤＣを含む。
【０１０７】
一実施形態において、ＡＤＣ混合物は、１．５〜４のＤＡＲをそれぞれ有するＡＤＣを含む。
【０１０８】
一実施形態において、ＡＤＣ混合物は、１．５〜８のＤＡＲをそれぞれ有するＡＤＣを含む。
【０１０９】
別の態様において、本発明は、がんを処置する方法であって、治療有効量の、本明細書における実施形態又は態様のいずれか１つのＡＤＣを、それを必要とする対象に投与することを含む、方法を特徴とする。
【０１１０】
一実施形態において、がんは、乳がん、肺がん、膠芽腫、前立腺がん、膵臓がん、結腸がん、頭頸部がん及び腎臓がんからなる群から選択される。
【０１１１】
別の実施形態において、がんは扁平上皮癌である。さらなる実施形態において、扁平上皮癌は、扁平上皮肺がん又は扁平上皮頭頸部がんである。
【０１１２】
一実施形態において、がんはトリプルネガティブ乳がんである。
【０１１３】
一実施形態において、がんは非小細胞肺がんである。
【０１１４】
本明細書における態様及び実施形態のいずれか１つの一実施形態において、がんは、ＥＧＦＲ過剰発現を有すると特徴付けられる。
【０１１５】
本明細書における態様及び実施形態のいずれか１つの一実施形態において、がんは、活性型ＥＧＦＲ変異を有すると特徴付けられる。さらなる実施形態において、活性型ＥＧＦＲ変異は、エクソン１９欠失変異、エクソン２１における単一点置換変異Ｌ８５８Ｒ、Ｔ７９０Ｍ点変異及びこれらの組合せからなる群から選択される。
【０１１６】
別の態様において、本発明は、固形腫瘍を有する対象において固形腫瘍成長を阻害する又は減少させる方法であって、固形腫瘍成長が、阻害される又は減少するように、本明細書における実施形態又は態様のいずれか１つのＡＤＣを、固形腫瘍を有する対象に投与することを含む方法を特徴とする。
【０１１７】
一実施形態において、固形腫瘍は、非小細胞肺癌又は膠芽腫である。
【０１１８】
一実施形態において、固形腫瘍は、扁平上皮癌である。
【０１１９】
本明細書における態様及び実施形態のいずれか１つの一実施形態において、固形腫瘍は、ＥＧＦＲｖＩＩＩ陽性固形腫瘍である又はＥＧＦＲ発現固形腫瘍である。
【０１２０】
本明細書における態様及び実施形態のいずれか１つの一実施形態において、固形腫瘍は、ＥＧＦＲを過剰発現する。
【０１２１】
本明細書における態様及び実施形態のいずれか１つの一実施形態において、ＡＤＣは、さらなる薬剤又はさらなる療法と組み合わせて投与される。
【０１２２】
別の実施形態において、さらなる薬剤は、抗ＰＤ１抗体（例えばペムブロリズマブ）、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（例えばアテゾリズマブ）、抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えばイピリムマブ）、ＭＥＫ阻害剤（例えばトラメチニブ）、ＥＲＫ阻害剤、ＢＲＡＦ阻害剤（例えばタブラフェニブ）、オシメルチニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、ソラフェニブ、ＣＤＫ９阻害剤（例えばディナシクリブ）、ＭＣＬ−１阻害剤、テモゾロミド、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤（例えばベネトクラクス）、イブルチニブ、ｍＴＯＲ阻害剤（例えばエベロリムス）、ＰＩ３Ｋ阻害剤（例えばブパルリシブ）、デュベリシブ、イデラリシブ、ＡＫＴ阻害剤、ＨＥＲ２阻害剤（例えばラパチニブ）、タキサン（例えばドセタキセル、パクリタキセル、ナブパクリタキセル）、アウリスタチンを含むＡＤＣ、ＰＢＤを含むＡＤＣ（例えばロバルピツズマブテシリン）、メイタンシノイドを含むＡＤＣ（例えばＴＤＭ１）、ＴＲＡＩＬアゴニスト、プロテアソーム阻害剤（例えばボルテゾミブ）及びニコチンアミドホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＮＡＭＰＴ）阻害剤からなる群から選択される。
【０１２３】
一実施形態において、さらなる療法は、放射線である。
【０１２４】
一実施形態において、さらなる薬剤は、化学療法剤である。
【０１２５】
別の態様において、本発明は、構造式（Ｉ）に従うＡＤＣ：
【０１２６】
【化３０】
2019521114.tif 000036
（式中、
Ｄは、式（ＩＩａ）のＢｃｌ−ｘＬ阻害薬であり、
Ｌは、リンカーであり、
Ａｂは抗ｈＥＧＦＲ抗体であり、抗ｈＥＧＦＲ抗体は、ＡｂＡ、ＡｂＢ、ＡｂＧ及びＡｂＫの重鎖及び軽鎖ＣＤＲを含み、
ＬＫは、リンカーＬを抗体Ａｂと連結している共有結合を表し、
ｍは、１〜２０の範囲の整数である。）
の調製方法であって、
水溶液中の抗体を有効量のジスルフィド還元剤で、３０〜４０℃で少なくとも１５分間処理し、次いで、抗体溶液を２０〜２７℃に冷却すること、
還元された抗体溶液に、２．１〜２．３１及び２．３４〜２．６３の群から選択されるシントンを含む水／ジメチルスルホキシドの溶液を添加すること、
溶液のｐＨを７．５〜８．５のｐＨに調整すること、
反応を４８〜８０時間にわたって進ませること
を含み、
エレクトロスプレー質量分析によって測定すると、スクシンイミドからスクシンアミドへの加水分解ごとに質量が１８±２ａｍｕずつ変わる、方法を特徴とする。
【０１２７】
別の実施形態において、本発明は、本明細書における態様及び実施形態に記載された方法によって調製されるＡＤＣを特徴とする。
【０１２８】
本明細書における態様及び実施形態のいずれか１つの一実施形態において、ＡＤＣは、ｈＥＧＦＲ細胞表面受容体又は腫瘍細胞上で発現された腫瘍関連抗原に結合する抗体を薬物−リンカーシントンと、シントンが、抗体に式（ＩＩｄ）及び（ＩＩｅ）
【０１２９】
【化３１】
2019521114.tif 000037
（式中、Ｄは、式（ＩＩａ）のＢｃｌ-ｘＬ阻害薬であり、Ｌ１は、抗体へのシントンの結合の際にマレイミドから形成されないリンカーの部分である）
において示されるマレイミド部分を介して共有結合する条件下で接触させることにより形成され、薬物−リンカーシントンは、以下のリスト：
Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド；
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド；
Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−アラニル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド；
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−アラニル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド；
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［１２−（｛（１ｓ，３ｓ）−３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）−４−メチル−３−オキソ−２，７，１０−トリオキサ−４−アザドデカ−１−イル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド；
Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［１２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）−４−メチル−３−オキソ−２，７，１０−トリオキサ−４−アザドデカ−１−イル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド；
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［１２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）−４−メチル−３−オキソ−２，７，１０−トリオキサ−４−アザドデカ−１−イル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド；
Ｎ−（｛２−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ］エトキシ｝アセチル）−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［１２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）−４−メチル−３−オキソ−２，７，１０−トリオキサ−４−アザドデカ−１−イル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド；
Ｎ−［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド；
Ｎ−［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］−Ｌ−アラニル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド；
Ｎ−［（２Ｒ）−４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２−スルホブタノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド；
Ｎ−［（２Ｓ）−４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２−スルホブタノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド；
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−３−スルホ−Ｌ−アラニル−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド；
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４−｛（１Ｅ）−３−［（｛２−［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エトキシ］エチル｝カルバモイル）オキシ］プロパ−１−エン−１−イル｝−２−（｛Ｎ−［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］−β−アラニル｝アミノ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
４−｛（１Ｅ）−３−［（｛２−［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エトキシ］エチル｝カルバモイル）オキシ］プロパ−１−エン−１−イル｝−２−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−β−アラニル｝アミノ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
４−［（１Ｅ）−１４−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）−６−メチル−５−オキソ−４，９，１２−トリオキサ−６−アザテトラデカ−１−エン−１−イル］−２−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−β−アラニル｝アミノ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
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２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−［２−（２−｛［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−（３−｛［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］アミノ｝プロポキシ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
１−Ｏ−（｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−２−［２−（２−｛［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニル｝カルバモイル）−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸；
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４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−２−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−β−アラニル｝アミノ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
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４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−２−（｛Ｎ−［４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ブタノイル］−β−アラニル｝アミノ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
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４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−５−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−［２−（２−｛［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
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４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−｛２−［２−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−３−スルホ−Ｌ−アラニル｝アミノ）エトキシ］エトキシ｝フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３−｛［２２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３−メチル−４，２０−ジオキソ−７，１０，１３，１６−テトラオキサ−３，１９−ジアザドコサ−１−イル］オキシ｝−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸；
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６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−（１−｛［３−（２−｛［４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２−スルホブタノイル］（メチル）アミノ｝エトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−カルボン酸；
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３−｛［３４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３−メチル−４，３２−ジオキソ−７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８−オクタオキサ−３，３１−ジアザテトラトリアコンタ−１−イル］オキシ｝−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸；
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３−｛［２８−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３−メチル−４，２６−ジオキソ−７，１０，１３，１６，１９，２２−ヘキサオキサ−３，２５−ジアザオクタコサ−１−イル］オキシ｝−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸；
２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−｛２−［２−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−３−スルホ−Ｌ−アラニル｝アミノ）エトキシ］エトキシ｝フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
Ｎ２−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｎ６−（３７−オキソ−２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５−ドデカオキサヘプタトリアコンタン−３７−イル）−Ｌ−リシル−Ｌ−アラニル−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド；
２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−［２−（２−｛［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−［３−（｛Ｎ−［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］−３−スルホ−Ｌ−アラニル｝アミノ）プロポキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−［３−（３−スルホプロポキシ）プロパ−１−イン−１−イル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド；
（６Ｓ）−２，６−アンヒドロ−６−（｛２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル｝アミノ）フェニル｝エチニル）−Ｌ−グロン酸；
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−［３−（３−スルホプロポキシ）プロピル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド；
２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−（５−｛［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝ペンチル）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−［１６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１４−オキソ−４，７，１０−トリオキサ−１３−アザヘキサデカ−１−イル］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
（６Ｓ）−２，６−アンヒドロ−６−（２−｛２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル｝アミノ）フェニル｝エチル）−Ｌ−グロン酸；
２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−（３−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝プロピル）フェニルＤ−グルコピラノシドウロン酸；
２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−｛４−［（｛（３Ｓ，５Ｓ）−３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２−オキソ−５−［（２−スルホエトキシ）メチル］ピロリジン−１−イル｝アセチル）アミノ］ブチル｝フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
３−｛（３−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−（β−Ｄ−グルコピラヌロノシルオキシ）フェニル｝プロピル）［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルプロパン−１−アミニウム；及び
（６Ｓ）−２，６−アンヒドロ−６−［２−（２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−｛［Ｎ−（｛（３Ｓ，５Ｓ）−３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２−オキソ−５−［（２−スルホエトキシ）メチル］ピロリジン−１−イル｝アセチル）−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル］アミノ｝フェニル）エチル］−Ｌ−グロン酸
から選択される。
【０１３０】
一実施形態において、接触させるステップが、ＡＤＣが、２、３又は４のＤＡＲを有するような条件下で行われる。
【０１３１】
別の態様において、本発明は、構造式Ｄ−Ｌ２−Ｒｘ
【０１３２】
【化３２】
2019521114.tif 000038
（式中、
Ｄは、構造式（ＩＩａ）に従うＢｃｌ−ｘＬ阻害薬であり、
Ｌ２は、ＩＶａ．８、ＩＶｂ．１６〜ＩＶｂ．１９、ＩＶｃ．３〜ＩＶｃ．６、ＩＶｄ．１〜ＩＶｄ．４、Ｖｂ．５〜Ｖｂ．１０、Ｖｃ．１１、Ｖｄ．３〜Ｖｄ．６、ＶＩｄ．４、ＶＩＩａ．１〜ＶＩＩａ．４、ＶＩＩｂ．１〜ＶＩＩｂ．８及びＶＩＩｃ．１〜ＶＩＩｃ．６からなる群から選択されるリンカーであり、
Ｒｘは、シントンを抗体に共有結合させる能力がある官能基を含む部分であり、
Ａｒは、
【０１３３】
【化３３】
2019521114.tif 000039
から選択され、ハロ、シアノ、メチル及びハロメチルから独立して選択される１つ以上の置換基で置換されていてもよく、
Ｚ１は、Ｎ、ＣＨ及びＣ−ＣＮから選択され、
Ｚ２は、ＮＨ、ＣＨ２、Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）及びＳ（Ｏ）２から選択され、
Ｒ１は、メチル、クロロ及びシアノから選択され、
Ｒ２は、水素、メチル、クロロ及びシアノから選択され、
Ｒ４は、水素、Ｃ１〜４アルカニル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル又はＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、Ｒ４Ｃ１〜４アルカニル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル及びＣ１〜４ヒドロキシアルキルは、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３及びＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣＨ３から独立して選択される１つ以上の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ１０ａ、Ｒ１０ｂ及びＲ１０ｃはそれぞれ、互いに独立して、水素、ハロ、Ｃ１〜６アルカニル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル及びＣ１〜６ハロアルキルから選択され、
Ｒ１１ａ及びＲ１１ｂはそれぞれ、互いに独立して、水素、メチル、エチル、ハロメチル、ヒドロキシル、メトキシ、ハロ、ＣＮ及びＳＣＨ３から選択され、
ｎは、０、１、２又は３であり、
＃は、リンカーＬ２に対する結合点を表す。）。
に従うシントンを特徴とする。
【０１３４】
一実施形態において、Ｒｘは、マレイミド、ハロゲン化アセチル又はビニルスルホンを含む。
【０１３５】
一実施形態において、Ｄは、構造式（ＩＩａ）の＃の位置に対応する水素が存在せず一価基を形成しているという点で変更されている、以下の化合物：
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−［１−（｛３，５−ジメチル−７−［２−（メチルアミノ）エトキシ］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−（１−｛［（１ｒ，３Ｒ，５Ｓ，７ｓ）−３，５−ジメチル−７−（２−｛２−［２−（メチルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−カルボン酸；
３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
３−［１−（｛３−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３−｛２−［（２−メトキシエチル）アミノ］エトキシ｝−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸；
３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−５−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−６−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸；及び
３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−７−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸
からなる群から選択されるＢｃｌ−ｘＬ阻害剤である。
【０１３６】
一実施形態において、リンカーＬ２は、
【０１３７】
【化３４】
2019521114.tif 000040
2019521114.tif 000041
2019521114.tif 000042
からなる群から選択され、式中
【０１３８】
【化３５】
2019521114.tif 000043
は、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤に対するリンカーＬ２の結合点を表す。
【０１３９】
一実施形態において、シントンは、シントン例２．４２（ＬＢ）、２．５４（ＬＸ）、２．５５（ＭＪ）、２．５６（ＮＨ）、２．５７（ＯＶ）、２．５８（ＱＳ）、２．５９（ＳＧ）、２．６０（ＵＦ）、２．６１（ＶＤ）、２．６２（ＶＸ）、２．６３（ＷＤ）からなる群から選択される。
【０１４０】
一実施形態において、シントンは、シントン例２．４１（ＬＢ）、２．６１（ＶＤ）及び２．６３（ＷＤ）からなる群から選択される
【０１４１】
【化３６】
2019521114.tif 000044
2019521114.tif 000045
。
【０１４２】
別の態様において、本発明は、構造式（Ｉ）に従うＡＤＣ：
【０１４３】
【化３７】
2019521114.tif 000046
（式中、
Ｄは、本明細書において開示される式（ＩＩａ）のＢｃｌ−ｘＬ阻害薬であり、
Ｌは、本明細書において開示されるリンカーであり、
Ａｂは抗ｈＥＧＦＲ抗体であり、抗ｈＥＧＦＲ抗体は、ＡｂＡ、ＡｂＢ、ＡｂＧ又はＡｂＫの重鎖及び軽鎖ＣＤＲを含み、
ＬＫは、リンカーＬを抗体Ａｂと連結している共有結合を表し、
ｍは、１〜２０の範囲の整数である。）
の調製方法であって、
水溶液中の抗体を有効量のジスルフィド還元剤で、３０〜４０℃で少なくとも１５分間処理し、次いで、抗体溶液を２０〜２７℃に冷却すること、
還元された抗体溶液に、２．１〜２．６３（表５）の群から選択されるシントンを含む水／ジメチルスルホキシドの溶液を添加すること、
溶液のｐＨを７．５〜８．５のｐＨに調整すること、
反応を４８〜８０時間にわたり進ませて、ＡＤＣを形成させること
を含み、エレクトロスプレー質量分析によって測定すると、スクシンイミドからスクシンアミドへの加水分解ごとに質量が１８±２ａｍｕずつ変わり、
ＡＤＣが、疎水性相互作用クロマトグラフィーによって任意選択的に精製される、方法を特徴とする。
【０１４４】
一実施形態において、ｍは２である。
【０１４５】
別の態様において、本発明は、上で記載されたプロセスによって調製されるＡＤＣを特徴とする。
【図面の簡単な説明】
【０１４６】
【図１】ＥＧＦＲ並びにＡｂ１及びＡｂ２により結合した領域の略図を示す図である。
【図２】Ａｂ１（配列番号：１及び５）並びにＡｂＡ（配列番号：９及び５）の重鎖可変（ＶＨ）及び軽鎖可変（ＶＬ）領域アミノ酸配列を示す図である。ＶＨ及びＶＬ領域内のＣＤＲ配列を線で囲み、Ａｂ１  ＶＨ配列とＡｂＡ  ＶＨ配列との差異を影にしている。
【図３】Ａｂ１（配列番号：１３及び１４）並びにＡｂＡ（配列番号：１３及び１５）に関する全長軽鎖及び重鎖を示す図である。重鎖中のＡｂ１配列とＡｂＡ配列との間の差異をハイライトしている。
【図４】抗体還元、チオスクシンイミド中間体を得るマレイミド誘導体での変性、引き続くチオスクシンイミド部分の加水分解を説明する図である。
【図５】例示的な抗体の軽鎖及び重鎖の１）コンジュゲーション前、２）チオスクシンイミド中間体を得るマレイミド誘導体へのコンジュゲーション後及び３）チオスクシンイミド環のｐＨ８媒介加水分解後の質量分析（ＭＳ）特徴付けを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【０１４７】
多数のＢｃｌ−ｘＬ阻害剤が、調節されないアポトーシス経路を含む疾患（例えば、がん）の処置のため開発された。しかしながら、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤は、標的細胞（例えばがん細胞）以外の細胞において作用し得る。例えば、前臨床研究により、Ｂｃｌ−ｘＬの薬理不活性化が、血小板の半減期を低減し、血小板減少症を引き起こすことが示された（Ｍａｓｏｎら、２００７年、Ｃｅｌｌ、１２８：１１７３〜１１８６頁を参照）。
【０１４８】
アポトーシスの調節においてＢｃｌ−ｘＬの重要性を仮定すると、アポトーシスが、Ｂｃｌ−ｘＬのような抗アポトーシスＢｃｌ−２ファミリータンパク質の発現又は過剰発現を介して調節されない、疾患の処置に対するアプローチとして選択的又は非選択的のいずれかでＢｃｌ−ｘＬ活性を阻害する薬剤が、当該技術分野において依然として必要である。したがって、毒性を制限する低減された用量を有する新規のＢｃｌ−ｘＬ阻害剤が必要とされる。
【０１４９】
Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤については探索していない細胞に薬物を送達する１つの可能性のある手段は、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の使用を介した送達である。抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、化学リンカーを介して細胞傷害性の薬物にコンジュゲートされた抗体を含む新規の治療薬のクラスを表す。ＡＤＣの治療概念は、抗体の結合能を薬物と組み合わせることであり、抗体が、標的表面抗原に結合することにより、腫瘍細胞に薬物を送達するために使用される。
【０１５０】
したがって、標的がん細胞、例えば、ＥＧＦＲｖＩＩＩ発現細胞にＢｃｌ−ｘＬを選択的に送達し得る新規ＡＤＣの開発が、有意な発見である。
【０１５１】
本発明の様々な態様は、新規の抗ＥＧＦＲ抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ；免疫コンジュゲートとも呼ばれる）及びこれらの医薬組成物に関する。特に、本開示は、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤を含む新規の抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣ、ＡＤＣを合成するのに有用なシントン、ＡＤＣを含む組成物、ＡＤＣを作製する方法及びＡＤＣを使用する様々な方法に関する。
【０１５２】
当業者により理解される通り、本明細書において開示されるＡＤＣは、性質が「モジュラー」である。本開示を通じて、ＡＤＣ並びにＡＤＣを合成するのに有用なシントンを含む様々な「モジュール」の特定の様々な実施形態が記載されている。特定の非限定的な例として、ＡＤＣ及びシントンを含み得る抗体、リンカー及びＢｃｌ−ｘＬ阻害剤の特定の実施形態が記載されている。記載された特定の実施形態の全てが、それぞれの特定の組合せが、明確に個々に記載されたかのように、組み合わされ得ることが意図される。
【０１５３】
本明細書に記載された様々なＢｃｌ−ｘＬ阻害剤、ＡＤＣ及び／又はＡＤＣシントンが、塩の形態であってもよく、ある特定の実施形態において、特に、薬学的に許容される塩であってもよいことはまた、当業者に理解される。十分な酸性、十分な塩基性又は両方の官能基を有する本開示の化合物は、多数の無機塩基、並びに無機酸及び有機酸のいずれかと反応して、塩を形成することができる。あるいは、４級窒素を有するもののような、本質的に荷電されている化合物は、適当な対イオン、例えば、臭化物、塩化物、又はフッ化物のようなハロゲン化物と塩を形成することができる。
【０１５４】
酸付加塩を形成するために一般に利用される酸は、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、リン酸などのような無機酸、及びｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、ｐ−ブロモフェニル−スルホン酸、炭酸、コハク酸、クエン酸などのような有機酸である。塩基付加塩は、水酸化、炭酸化、重炭酸化アンモニウム及びアルカリ又はアルカリ土類金属などのような無機塩基に由来するものを含む。
【０１５５】
以下の開示において、構造図と命名法の両方が含まれ、命名法が構造図と矛盾するなら、構造図が支配する。
Ｉ．定義
本発明がより容易に理解され得るために、ある特定の用語がまず定義される。加えて、パラメーターの値又は値の範囲が列挙されるときはいつでも、列挙される値の間にある値及び範囲も、本発明の一部であることが意図されることが意図されることは、注意されるできである。さらに、本明細書において特に定義されない限り、本開示と関連して使用される科学用語及び技術用語は、当業者により一般に理解される意味を有する。
【０１５６】
様々な化学置換基が、以下で定義される。ある場合では、置換基（例えば、アルキル、アルカニル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、複素環、ヘテロアリール及びアリール）中の炭素原子の数は、接頭語「Ｃｘ〜Ｃｙ」又は「Ｃｘ〜ｙ」（式中、ｘは、炭素原子の最小数であり、ｙは、炭素原子の最大数である。）により示される。したがって、例えば、「Ｃ１〜Ｃ６アルキル」は、１〜６個の炭素原子を含有するアルキルを指す。さらに説明すると、「Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル」は、３〜８個の炭素環原子を含有する飽和炭化水素環を意味する。置換基が、「置換されている」として記載された場合、炭素又は窒素上の水素原子は、非水素基で置き換えられる。例えば置換されたアルキル置換基は、アルキル上の少なくとも１つの水素原子が非水素基で置き換えられているアルキル置換基である。説明するために、モノフルオロアルキルは、フルオロ基で置換されたアルキルであり、ジフルオロアルキルは、２つのフルオロ基で置換されたアルキルである。置換基上に１つより多くの置換が存在する場合、各置換は、同一であり又は異なり（別段述べられない限り）ことは、認識されるべきである。置換基が、「置換されていてもよい」と記載された場合、置換基は、（１）置換されていない又は（２）置換されている、のいずれであってもよい。可能性のある置換基は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル、オキソ、−ＣＮ、ＮＯ２、−ＯＲｘａ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒｚ、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒｘａ）２、−ＳＲｘａ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒｘａ、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒｘａ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒｘａ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲｘａ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｘａ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｘａ）Ｓ（Ｏ）２Ｒｚ、−Ｎ（Ｒｘａ）２、−Ｎ（Ｒｘａ）Ｃ（Ｏ）Ｒｚ、−Ｎ（Ｒｘａ）Ｓ（Ｏ）２Ｒｚ、−Ｎ（Ｒｘａ）Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｒｚ）、−Ｎ（Ｒｘａ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｘａ）２、−Ｎ（Ｒｘａ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒｘａ）２、−（Ｃ１〜Ｃ６アルキレニル）−ＣＮ、−（Ｃ１〜Ｃ６アルキレニル）−ＯＲｘａ、−（Ｃ１〜Ｃ６アルキレニル）−ＯＣ（Ｏ）Ｒｚ、−（Ｃ１〜Ｃ６アルキレニル）−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒｘａ）２、−（Ｃ１〜Ｃ６アルキレニル）−ＳＲｘａ、−（Ｃ１〜Ｃ６アルキレニル）−Ｓ（Ｏ）２Ｒｘａ、−（Ｃ１〜Ｃ６アルキレニル）−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒｘａ）２、−（Ｃ１〜Ｃ６アルキレニル）−Ｃ（Ｏ）Ｒｘａ、−（Ｃ１〜Ｃ６アルキレニル）−Ｃ（Ｏ）ＯＲｘａ、−（Ｃ１〜Ｃ６アルキレニル）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｘａ）２、−（Ｃ１〜Ｃ６アルキレニル）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｘａ）Ｓ（Ｏ）２Ｒｚ、−（Ｃ１〜Ｃ６アルキレニル）−Ｎ（Ｒｘａ）２、−（Ｃ１〜Ｃ６アルキレニル）−Ｎ（Ｒｘａ）Ｃ（Ｏ）Ｒｚ、−（Ｃ１〜Ｃ６アルキレニル）−Ｎ（Ｒｘａ）Ｓ（Ｏ）２Ｒｚ、−（Ｃ１〜Ｃ６アルキレニル）−Ｎ（Ｒｘａ）Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｒｚ）、−（Ｃ１〜Ｃ６アルキレニル）−Ｎ（Ｒｘａ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｘａ）２、又は−（Ｃ１〜Ｃ６アルキレニル）−Ｎ（Ｒｘａ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒｘａ）２；（式中、Ｒｘａは、出現ごとに、独立して水素、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、Ｃ１〜Ｃ６アルキル又はＣ１〜Ｃ６ハロアルキルであり、Ｒｚは、出現ごとに、独立してアリール、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、Ｃ１〜Ｃ６アルキル又はＣ１〜Ｃ６ハロアルキルである。）を含むが、これらに限定されない。
【０１５７】
ＡＤＣ及び／又はシントンを含む様々なＡＤＣ、シントン及びＢｃｌ−ｘＬ阻害剤が、一部の実施形態において、置換基、例えば、置換基Ａｒ、Ｚ１、Ｚ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ１０ａ、Ｒ１０ｂ、Ｒ１０ｃ、Ｒ１１ａ、Ｒ１１ｂ、Ｌ、Ｒｘ、Ｆｘ、ＬＫ、Ａｂ、ｎ及び／又はｍを含む構造式を参照して本明細書に記載されている。原子価及び安定性が許容するなら、置換基を含む様々な基が組み合わされ得ることは、理解されるべきである。本開示により想定される置換基及び変数の組合せは、安定な化合物の形成をもたらすもののみである。本明細書において使用される場合、用語「安定な」は、製造を可能にするのに十分な安定性を有し、本明細書において詳しく述べられた目的に有用であるのに十分な期間化合物の完全性を維持する化合物を指す。
【０１５８】
本明細書において使用される場合、以下の用語は、以下の意味を有することが意図される。
【０１５９】
用語「アルコキシ」は、式−ＯＲｘａ（式中、Ｒｘａはアルキル基である。）の基を指す。代表的なアルコキシ基は、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシなどを含む。
【０１６０】
用語「アルコキシアルキル」は、アルコキシ基で置換されたアルキル基を指し、一般式−ＲｂＯＲｘａ（式中、Ｒｂはアルキレン基であり、Ｒｘａはアルキル基である。）により表され得る。
【０１６１】
用語「アルキル」は、それ自体又は別の置換基の一部として、親アルカン、アルケン又はアルキンの単一の炭素原子からの１つの水素原子の除去により誘導される飽和又は不飽和の分岐、直鎖又は環状の一価の炭化水素ラジカルを指す。典型的なアルキル基は、メチル；エタニル、エテニル、エチニルのようなエチル；プロパン−１−イル、プロパン−２−イル、シクロプロパン−１−イル、プロパ−１−エン−１−イル、プロパ−１−エン−２−イル、プロパ−２−エン−１−イル、シクロプロパ−１−エン−１−イルのようなプロピル；シクロプロパ−２−エン−１−イル、プロパ−１−イン−１−イル、プロパ−２−イン−１−イルなど；ブタン−１−イル、ブタン−２−イル、２−メチル−プロパン−１−イル、２−メチル−プロパン−２−イル、シクロブタン−１−イル、ブタ−１−エン−１−イル、ブタ−１−エン−２−イル、２−メチル−プロパ−１−エン−１−イル、ブタ−２−エン−１−イル、ブタ−２−エン−２−イル、ブタ−１，３−ジエン−１−イル、ブタ−１，３−ジエン−２−イル、シクロブタ−１−エン−１−イル、シクロブタ−１−エン−３−イル、シクロブタ−１，３−ジエン−１−イル、ブタ−１−イン−１−イル、ブタ−１−イン−３−イル、ブタ−３−イン−１−イルなどのようなブチルなどを含むが、これらに限定されない。特定のレベルの飽和が意図される場合、命名法「アルカニル」、「アルケニル」及び／又は「アルキニル」が、以下で定義される通り、使用される。用語「低級アルキル」は、１〜６個の炭素を有するアルキル基を指す。
【０１６２】
用語「アルカニル」は、それ自体又は別の置換基の一部として、親アルカンの単一の炭素原子からの１つの水素原子の除去により誘導される飽和の分岐、直鎖又は環状のアルキルを指す。典型的なアルカニル基は、メチル；エタニル；プロパン−１−イル、プロパン−２−イル（イソプロピル）、シクロプロパン−１−イルなどのようなプロパニル；ブタン−１−イル、ブタン−２−イル（ｓｅｃ−ブチル）、２−メチル−プロパン−１−イル（イソブチル）、２−メチル−プロパン−２−イル（ｔ−ブチル）、シクロブタン−１−イルなどのようなブタニルなどを含むが、これらに限定されない。
【０１６３】
用語「アルケニル」は、それ自体又は別の置換基の一部として、親アルケンの単一の炭素原子からの１つの水素原子の除去により誘導される少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する不飽和の分岐、直鎖又は環状のアルキルを指す。典型的なアルケニル基は、エテニル；プロパ−１−エン−１−イル、プロパ−１−エン−２−イル、プロパ−２−エン−１−イル、プロパ−２−エン−２−イル、シクロプロパ−１−エン−１−イル、シクロプロパ−２−エン−１−イルのようなプロペニル；ブタ−１−エン−１−イル、ブタ−１−エン−２−イル、２−メチル−プロパ−１−エン−１−イル、ブタ−２−エン−１−イル、ブタ−２−エン−２−イル、ブタ−１，３−ジエン−１−イル、ブタ−１，３−ジエン−２−イル、シクロブタ−１−エン−１−イル、シクロブタ−１−エン−３−イル、シクロブタ−１，３−ジエン−１−イルなどのようなブテニルなどを含むが、これらに限定されない。
【０１６４】
用語「アルキニル」は、それ自体又は別の置換基の一部として、親アルキンの単一の炭素原子からの１つの水素原子の除去により誘導される少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を有する不飽和の分岐、直鎖又は環状のアルキルを指す。典型的なアルキニル基は、エチニル；プロパ−１−イン−１−イル、プロパ−２−イン−１−イルなどのようなプロピニル；ブタ−１−イン−１−イル、ブタ−１−イン−３−イル、ブタ−３−イン−１−イルなどのようなブチニルなどを含むが、これらに限定されない。
【０１６５】
用語「アルキルアミン」は、式−ＮＨＲｘａの基を指し、「ジアルキルアミン」は、式−ＮＲｘａＲｘａ（式中、各Ｒｘａは、他とは独立して、アルキル基である。）の基を指す。
【０１６６】
用語「アルキレン」は、２つの末端炭素原子のそれぞれからの１つの水素原子の除去により誘導される２つの末端の一価のラジカル中心を有するアルカン、アルケン又はアルキン基を指す。典型的なアルキレン基は、メチレン；及び飽和又は不飽和エチレン；プロピレン；ブチレンなどを含むが、これらに限定されない。用語「低級アルキレン」は、１〜６個の炭素を有するアルキレン基を指す。
【０１６７】
用語「アリール」は、６〜１４個の炭素環原子を含有する芳香族カルボシクリルを意味する。アリールは、単環式又は多環式であってもよい（すなわち、１つより多くの環を含有してもよい）。多環式芳香環の場合、多環系の１つのみの環が芳香族であることが必要であり、一方、残りの環は、飽和、部分的に飽和又は不飽和であってもよい。アリールの例は、フェニル、ナフタレニル、インデニル、インダニル及びテトラヒドロナフチルを含む。
【０１６８】
接頭語「ハロ」は、接頭語を含む置換基が、１つ以上の独立して選択されたハロゲン基で置換されていることを示す。例えばハロアルキルは、少なくとも１つの水素基がハロゲン基で置き換えられているアルキル置換基を意味する。典型的なハロゲン基は、クロロ、フルオロ、ブロモ及びヨードを含む。ハロアルキルの例は、クロロメチル、１−ブロモエチル、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル及び１，１，１−トリフルオロエチルを含む。置換基が１つより多くのハロゲン基により置換されている場合、これらのハロゲン基は、同一であってもよく又は異なっていてもよい（別段述べられていない限り）ことは、認識されるべきである。
【０１６９】
用語「ハロアルコキシ」は、式−ＯＲｃ（式中、Ｒｃはハロアルキルである。）の基を指す。
【０１７０】
用語「ヘテロアルキル」、「ヘテロアルカニル」、「ヘテロアルケニル」、「ヘテロアルキニル」及び「ヘテロアルキレン」は、炭素原子の１個以上、例えば１、２又は３個の炭素原子が、同じ又は異なるヘテロ原子又はヘテロ原子基でそれぞれ独立して置き換えられている、それぞれ、アルキル、アルカニル、アルケニル、アルキニル及びアルキレン基を指す。炭素原子を置き換え得る典型的なヘテロ原子及び／又はヘテロ原子基は、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＮＲｃ、ＰＨ、Ｓ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）ＮＲｃ、Ｓ（Ｏ）２ＮＲｃなど（これらの組合せを含む）を含むが、これらに限定されず、式中、各Ｒｃは、独立して、水素又はＣ１〜Ｃ６アルキルである。
【０１７１】
用語「シクロアルキル」及び「ヘテロシクリル」は、それぞれ、「アルキル」及び「ヘテロアルキル」基の環状バージョンを指す。ヘテロシクリル基について、ヘテロ原子は、分子の残部に結合している位置を占め得る。シクロアルキル又はヘテロシクリル環は、単一の環（単環式）であってもよい又は２つ以上の環を有してもよい（二環式又は多環式）。
【０１７２】
単環式シクロアルキル及びヘテロシクリル基は、典型的には３〜７個の環原子、より典型的には３〜６個の環原子、なおより典型的には５〜６個の環原子を含有する。シクロアルキル基の例は、シクロプロピル；シクロブタニル及びシクロブテニルのようなシクロブチル；シクロペンタニル及びシクロペンテニルのようなシクロペンチル；シクロヘキサニル及びシクロヘキセニルのようなシクロヘキシルなどを含むが、これらに限定されない。単環式ヘテロシクリルの例は、オキセタン、フラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、チオフェニル（チオフラニル）、ジヒドロチオフェニル、テトラヒドロチオフェニル、ピロリル、ピロリニル、ピロリジニル、イミダゾリル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピラゾリル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、トリアゾリル、テトラゾリル、オキサゾリル、オキサゾリジニル、イソオキサゾリジニル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、チアゾリニル、イソチアゾリニル、チアゾリジニル、イソチアゾリジニル、チオジアゾリル、オキサジアゾリル（１，２，３−オキサジアゾリル、１，２，４−オキサジアゾリル、１，２，５−オキサジアゾリル（フラザニル）又は１，３，４−オキサジアゾリルを含む）、オキサトリアゾリル（１，２，３，４−オキサトリアゾリル又は１，２，３，５−オキサトリアゾリルを含む）、ジオキサゾリル（１，２，３−ジオキサゾリル、１，２，４−ジオキサゾリル、１，３，２−ジオキサゾリル又は１，３，４−ジオキサゾリルを含む）、１，４−ジオキサニル、ジオキソチオモルホリニル、オキサチアゾリル、オキサチオリル、オキサチオラニル、ピラニル、ジヒドロピラニル、チオピラニル、テトラヒドロチオピラニル、ピリジニル（アジニル）、ピペリジニル、ジアジニル（ピリダジニル（１，２−ジアジニル）、ピリミジニル（１，３−ジアジニル）又はピラジニル（１，４−ジアジニル）を含む）、ピペラジニル、トリアジニル（１，３，５−トリアジニル、１，２，４−トリアジニル及び１，２，３−トリアジニル）を含む）、オキサジニル（１，２−オキサジニル、１，３−オキサジニル又は１，４−オキサジニル）を含む）、オキサチアジニル（１，２，３−オキサチアジニル、１，２，４−オキサチアジニル、１，２，５−オキサチアジニル又は１，２，６−オキサチアジニル）を含む）、オキサジアジニル（１，２，３−オキサジアジニル、１，２，４−オキサジアジニル、１，４，２−オキサジアジニル又は１，３，５−オキサジアジニル）を含む）、モルホリニル、アゼピニル、オキセピニル、チエピニル、ジアゼピニル、ピリドニル（ピリド−２（１Ｈ）−オンイル及びピリド−４（１Ｈ）−オンイルを含む）、フラン−２（５Ｈ）−オンイル、ピリミドニル（ピラミド−２（１Ｈ）−オンイル及びピラミド−４（３Ｈ）−オンイルを含む）、オキサゾール−２（３Ｈ）−オンイル、１Ｈ−イミダゾール−２（３Ｈ）−オンイル、ピリダジン−３（２Ｈ）−オンイル並びにピラジン−２（１Ｈ）−オンイルを含むが、これらに限定されない。
【０１７３】
多環式シクロアルキル及びヘテロシクリル基は、１つより多くの環を含有し、二環式シクロアルキル及びヘテロシクリル基は、２つの環を含有する。環は、架橋された状態であってもよい、縮合された状態であってもよい又はスピロ配向の状態であってもよい。多環式シクロアルキル及びヘテロシクリル基は、架橋された環、縮合された環及び／又はスピロ環の組合せを含んでもよい。スピロ環状のシクロアルキル又はヘテロシクリルにおいて、１個の原子が、２個の異なる環に共通する。スピロシクロアルキルの例は、スピロ［４．５］デカンであり、スピロヘテロシクリルの例は、スピロピラゾリンである。
【０１７４】
架橋されたシクロアルキル又はヘテロシクリルにおいて、環は、少なくとも２個の共通の非隣接原子を共有する。架橋されたシクロアルキルの例は、アダマンチル及びノルボルナニル環を含むが、これらに限定されない。架橋されたヘテロシクリルの例は、２−オキサトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカニルを含むが、これに限定されない。
【０１７５】
縮合環シクロアルキル又はヘテロシクリルにおいて、２個以上の環は、２個の環が１個の共通の結合を共有するように、一緒に縮合される。縮合環シクロアルキルの例は、デカリン、ナフチレン、テトラリン及びアントラセンを含む。２個又は３個の環を含有する縮合環ヘテロシクリルの例は、イミダゾピラジニル（イミダゾ［１，２−ａ］ピラジニルを含む）、イミダゾピリジニル（イミダゾ［１，２−ａ］ピリジニルを含む）、イミダゾピリダジニル（イミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジニルを含む）、チアゾロピリジニル（チアゾロ［５，４−ｃ］ピリジニル、チアゾロ［５，４−ｂ］ピリジニル、チアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニル及びチアゾロ［４，５−ｃ］ピリジニルを含む）、インドリジニル、ピラノピロリル、４Ｈ−キノリジニル、プリニル、ナフチリジニル、ピリドピリジニル（ピリド［３，４−ｂ］−ピリジニル、ピリド［３，２−ｂ］−ピリジニル又はピリド［４，３−ｂ］−ピリジニルを含む）並びにプテリジニルを含む。縮合環ヘテロシクリルの他の例は、ジヒドロクロメニル、テトラヒドロイソキノリニル、インドリル、イソインドリル（イソベンザゾリル、プソイドイソインドリル）、インドレニニル（プソイドインドリル）、イソインダゾリル（ベンゾピラゾリル）、ベンザジニル（キノリニル（１−ベンザジニル）又はイソキノリニル（２−ベンザジニル）を含む）、フタラジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、ベンゾジアジニル（シンノリニル（１，２−ベンゾジアジニル）又はキナゾリニル（１，３−ベンゾジアジニル）を含む）、ベンゾピラニル（クロマニル又はイソクロマニルを含む）、ベンゾオキサジニル（１，３，２−ベンゾオキサジニル、１，４，２−ベンゾオキサジニル、２，３，１−ベンゾオキサジニル又は３，１，４−ベンゾオキサジニルを含む）、ベンゾ［ｄ］チアゾリル及びベンゾイソオキサジニル（１，２−ベンゾイソオキサジニル又は１，４−ベンゾイソオキサジニルを含む）のようなベンゾ縮合ヘテロシクリルを含む。
【０１７６】
用語「シクロアルキレン」は、２個の環炭素のそれぞれからの１個の水素原子の除去により誘導される２個の一価のラジカル中心を有するシクロアルキル基を指す。例示的なシクロアルキレン基は、
【０１７７】
【化３８】
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を含む。
【０１７８】
用語「ヘテロアリール」は、５〜１４個の環原子を含有する芳香族ヘテロシクリルを指す。ヘテロアリールは、単一の環又は２若しくは３個の縮合環であってもよい。ヘテロアリールの例は、ピリジル、ピラジル、ピリミジニル、ピリダジニル及び１，３，５−、１，２，４−又は１，２，３−トリアジニルのような６員環；トリアゾリル、ピロリル、イミダジル、フラニル、チオフェニル、ピラゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、１，２，３−、１，２，４−、１，２，５−又は１，３，４−オキサジアゾリル及びイソチアゾリルのような５員環置換基；イミダゾピラジニル（イミダゾ［１，２−ａ］ピラジニルを含む）、イミダゾピリジニル（イミダゾ［１，２−ａ］ピリジニルを含む）、イミダゾピリダジニル（イミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジニルを含む）、チアゾロピリジニル（チアゾロ［５，４−ｃ］ピリジニル、チアゾロ［５，４−ｂ］ピリジニル、チアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニル及びチアゾロ［４，５−ｃ］ピリジニルを含む）、ベンゾ［ｄ］チアゾリル、ベンゾチオフラニル、ベンゾイソオキサゾリル、ベンゾオキサゾリル、プリニル及びアントラニリルのような６／５員の縮合環置換基；並びにベンゾピラニル、キノリニル、イソキノリニル、シンノリニル、キナゾリニル及びベンゾオキサジニルのような６／６員の縮合環を含む。ヘテロアリールはまた、ピリドニル（ピリド−２（１Ｈ）−オンイル及びピリド−４（１Ｈ）−オンイルを含む）、ピリミドニル（ピラミド−２（１Ｈ）−オンイル及びピラミド−４（３Ｈ）−オンイルを含む）、ピリダジン−３（２Ｈ）−オンイル並びにピラジン−２（１Ｈ）−オンイルのような芳香族（４Ｎ＋２ｐｉ電子）共鳴寄与体を有する複素環であってもよい。
【０１７９】
本明細書において使用される用語「スルホネート」は、スルホン酸の塩又はエステルを意味する。
【０１８０】
本明細書において使用される用語「メチルスルホネート」は、スルホン酸基のメチルエステルを意味する。
【０１８１】
本明細書において使用される用語「カルボキシレート」は、カルボン酸の塩又はエステルを意味する。
【０１８２】
リンカーの文脈で本明細書において使用される用語「糖」は、単糖類のＯ−グリコシド又はＮ−グリコシド炭水化物誘導体を意味し、天然に生じる供給源に由来してもよい又は起源が合成であってもよい。例えば、「糖」は、これらに限定されないが、β−グルクロン酸及びβ−ガラクトースから誘導されるもののような誘導体を含む。適当な糖置換は、ヒドロキシル、アミン、カルボン酸、エステル及びエーテルを含むが、これらに限定されない。
【０１８３】
用語「ＮＨＳエステル」は、カルボン酸のＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル誘導体を意味する。
【０１８４】
用語塩は、「又はその塩」の文脈で使用されるとき、アルカリ金属塩を形成するために、及び遊離酸又は遊離塩基の付加塩を形成するために一般的に使用される塩を含む。一般に、これらの塩は、典型的には、例えば適当な酸又は塩基を本発明の化合物と反応させることにより、従来の手段によって調製され得る。
【０１８５】
塩が、患者に投与されること（例えばインビトロの状況において使用することと反対）が意図される場合、塩は、好ましくは、薬学的に許容される及び／又は生理的に適合可能である。用語「薬学的に許容される」は、修飾された名詞が、医薬製品として又は医薬製品の一部としての使用に適当であることを意味するように、本特許出願において形容詞的に使用される。用語「薬学的に許容される塩」は、アルカリ金属塩を形成するために及び遊離酸又は遊離塩基の付加塩を形成するために一般に使用される塩を含む。一般に、これらの塩は、典型的には、例えば適当な酸又は塩基を本発明の化合物と反応させることにより、従来の手段によって調製され得る。
【０１８６】
本明細書において使用される用語「抗上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）抗体」は、ＥＧＦＲに特異的に結合する抗体を指す。目的の抗原、すなわち、ＥＧＦＲに「結合する」抗体は、抗体が抗原を発現する細胞を標的にするのに有用であるように、十分な親和性でその抗原と結合する能力があるものである。好ましい実施形態において、抗体は、ヒトＥＧＦＲ（ｈＥＧＦＲ）に特異的に結合する。抗ＥＧＦＲ抗体の例は、以下で開示される。別段示されない限り、用語「抗ＥＧＦＲ抗体」は、野生型ＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩのようなＥＧＦＲの任意のバリアントに結合する抗体を指すことを意味する。
【０１８７】
野生型ヒトＥＧＦＲのアミノ酸配列を配列番号３２として以下に示し、シグナルペプチド（アミノ酸残基１〜２４）に下線を引き、細胞外ドメインのアミノ酸残基（ＥＣＤ、アミノ酸残基２５〜６４５）が太字で強調される。ＥＧＦＲの切断された野生型ＥＣＤ（本明細書においてＥＧＦＲ（１〜５２５）とも称される）は、配列番号４７に対応し、配列番号３２のアミノ酸１〜５２５と等しい。野生型ＥＧＦＲの成熟型は、シグナルペプチドを含まないタンパク質、すなわち、配列番号３２のアミノ酸残基２５〜１２１０に対応する。
【０１８８】
【化３９】
2019521114.tif 000048
2019521114.tif 000049
ヒトＥＧＦＲのＥＣＤのアミノ酸配列を配列番号３４として以下に示し、シグナル配列（下線）を含む。
【０１８９】
【化４０】
2019521114.tif 000050
【０１９０】
ＥＧＦＲの全体構造は、図１に記載されている。ＥＧＦＲのＥＣＤは、４つのドメインを有する（Ｃｏｃｈｒａｎら、（２００４年）、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、２８７、１４７〜１５８頁）。ドメインＩ及びＩＩＩは、リガンドに対する高い親和性結合部位の形成に関与することが示唆されている。ドメインＩＩ及びＩＶは、タンパク質フォールディングを安定化し、可能性のあるＥＧＦＲ二量体化界面を含有するシステインリッチなラミニン様領域である。
【０１９１】
ＥＧＦＲバリアントは、ＥＧＦＲ遺伝子増幅により達成される遺伝子再編成に起因し得る。
【０１９２】
ＥＧＦＲｖＩＩＩは、ヒトがんにおいてＥＧＦＲの最も一般に生じるバリアントである（Ｋｕａｎら、Ｅｎｄｏｃｒ  Ｒｅｌａｔ  Ｃａｎｃｅｒ．、８（２）：８３〜９６頁、（２００１年））。遺伝子増幅のプロセス中、２６７個のアミノ酸欠失は、融合結合において挿入されたグリシン残基を有するＥＧＦＲの細胞外ドメインにおいて生じる。したがって、ＥＧＦＲｖＩＩＩは、野生型ＥＧＦＲの細胞外ドメインのアミノ酸６〜２７３を欠き、結合においてグリシン残基挿入を含む。ＥＧＦＲのＥＧＦＲｖＩＩＩバリアントは、グリシンが欠失結合において挿入される、細胞外ドメインにおいて２６７個のアミノ酸残基の欠失を含有する。ＥＧＦＲｖＩＩＩアミノ酸配列を配列番号３３として以下に示す（ＥＣＤが太字で強調され、配列番号４６に対応し、シグナル配列に下線を引く）。
【０１９３】
【化４１】
2019521114.tif 000051
【０１９４】
ＥＧＦＲｖＩＩＩは、恒常的シグナル伝達を介して、リガンドに依存しない方法で腫瘍進行に関与する。ＥＧＦＲｖＩＩＩは、正常組織において発現されることは知られていないが（Ｗｉｋｓｔｒａｎｄら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、５５（１４）：３１４０〜３１４８頁、（１９９５年）；Ｏｌａｐａｄｅ−Ｏｌａｏｐａら、Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ．、８２（１）：１８６〜９４頁、（２０００年））、乳がん、グリオーマ、ＮＳＣＬがん、卵巣がん及び前立腺がんを含む腫瘍細胞において有意な発現を示す（Ｗｉｋｓｔｒａｎｄら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、５５（１４）：３１４０〜３１４８頁、（１９９５年）；Ｇｅら、Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ．、９８（３）：３５７〜６１頁、（２００２年）；Ｗｉｋｓｔｒａｎｄら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、５５（１４）：３１４０〜３１４８頁、（１９９５）；Ｍｏｓｃａｔｅｌｌｏら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、５５（２３）：５５３６〜９、（１９９５年）；Ｇａｒｃｉａ  ｄｅ  Ｐａｌａｚｚｏら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、５３（１４）：３２１７〜２０頁、（１９９３年）；Ｍｏｓｃａｔｅｌｌｏら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、５５（２３）：５５３６〜９頁、（１９９５年）；及びＯｌａｐａｄｅ−Ｏｌａｏｐａら、２（１）：１８６〜９４頁、（２０００年））ことを示している。
【０１９５】
本明細書において使用される「ＥＧＦＲの生物学的活性」は、上皮成長因子（ＥＧＦ）への結合、腫瘍成長因子α（ＴＧＦα）への結合、ホモ二量体化、ＪＡＫ２キナーゼ活性の活性化、ＭＡＰＫキナーゼ活性の活性化及び膜貫通型受容体タンパク質チロシンキナーゼ活性の活性化を含むが、これらに限定されないＥＧＦＲの全ての本来の生物学的特性を指す。
【０１９６】
本明細書において使用される用語「遺伝子増幅」は、ＤＮＡの任意の特定の断片の複数の複製の産生により特徴付けられる細胞プロセスを指す。例えば腫瘍細胞は、細胞シグナル及びときに環境事象の結果として染色体部分を増幅する又は複製し得る。遺伝子増幅のプロセスは、遺伝子のさらなる複製の産生に至る。一実施形態において、遺伝子は、ＥＧＦＲ、すなわち、「ＥＧＦＲ増幅」である。一実施形態において、本明細書において開示される組成物及び方法は、ＥＧＦＲが増幅したがんを有する対象を処置するために使用される。
【０１９７】
抗体又はＡＤＣの第２の化学種との相互作用に関して本明細書において使用される用語「特異的な結合」又は「特異的に結合すること」は、相互作用が、化学種上の特定の構造（例えば抗原決定基又はエピトープ）の存在に依存すること；例えば抗体が、一般にタンパク質よりむしろ特定のタンパク質構造を認識し、結合することを意味する。抗体又はＡＤＣが、エピトープ「Ａ」に特異的である場合、標識された「Ａ」及び抗体を含有する反応におけるエピトープＡ（又はフリー、標識されていないＡ）を含有する分子の存在が、抗体又はＡＤＣに結合した標識されたＡの量を減少させる。
【０１９８】
本明細書において使用される語句「ｈＥＧＦＲに特異的に結合する」又は「ｈＥＧＦＲへの特異的結合」は、少なくとも約１×１０−６Ｍ、１×１０−７Ｍ、１×１０−８Ｍ、１×１０−９Ｍ、１×１０−１０Ｍ、１×１０−１１Ｍ、１×１０−１２Ｍ以上のＫＤでｈＥＧＦＲに結合する、及び／又は非特異的抗原に対するこの親和性より少なくとも２倍高い親和性で抗原に結合する抗ＥＧＦＲ抗体又はＡＤＣの能力を指す。しかしながら、抗体又はＡＤＣが、配列において関連する２つ以上の抗原に特異的に結合する能力があり得ることは理解される。例えば一実施形態において、抗体は、ＥＧＦＲのヒトと非ヒト（例えばマウス又は非ヒト霊長類）オルソログの両方に特異的に結合することができる。一実施形態において、抗原は、ＥＧＦＲ（１〜５２５）である。
【０１９９】
用語「抗体」は、抗原に特異的に結合し、重（Ｈ）鎖及び軽（Ｌ）鎖を含む免疫グロブリン分子を指す。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書においてＨＣＶＲ又はＶＨと略される）及び重鎖定常領域からなる。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３からなる。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書においてＬＣＶＲ又はＶＬと略される）及び軽鎖定常領域からなる。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、ＣＬからなる。ＶＨ及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる、より保存されている領域が分散された相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる、超可変性の領域にさらに分けることができる。各ＶＨ及びＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で配置された３つのＣＤＲ及び４つのＦＲからなる。抗体は、任意の種類（例えばＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＹ）並びにクラス（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）又はサブクラスのものであり得る。用語「抗体」は、抗体（以下で定義される）の抗原結合部分を含むことを意図されていない一方、ある特定の実施形態において、重鎖のカルボキシ末端から少数のアミノ酸欠失を有する抗体を含むことが意図される。一実施形態において、抗体は、重鎖のカルボキシ末端の１〜５個のアミノ酸欠失を有する重鎖を含む。一実施形態において、抗体は、ｈＥＧＦＲに結合することができる４つのポリペプチド鎖、２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ鎖）を有するＩｇＧであるモノクローナル抗体である。一実施形態において、抗体は、λ又はκ軽鎖を含むモノクローナルＩｇＧ抗体である。
【０２００】
本明細書において使用される、抗体の用語「抗原結合部分」（又は単に「抗体部分」）は、抗原（例えばｈＥＧＦＲ）に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ以上のフラグメントを指す。抗体の抗原結合機能は、全長抗体の断片により果たされ得ることが示されている。かかる抗体の実施形態はまた、二重特異性、二重に特異性又は多特異性フォーマットであってもよく、２つ以上の異なる抗原に特異的に結合する。抗体の用語「抗原結合部分」内に包含される結合断片の例は、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなる一価の断片であるＦａｂ断片；（ｉｉ）ヒンジ領域においてジスルフィド架橋により連結された２つのＦａｂ断片を含む二価の断片である、Ｆ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の１本のアームのＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）単一の可変ドメインを含むｄＡｂ断片（参照により本明細書に組み込む、Ｗａｒｄら、（１９８９年）、Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４〜５４６頁、Ｗｉｎｔｅｒら、ＰＣＴ公開ＷＯ９０／０５１４４Ａ１）；並びに（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメイン、ＶＬ及びＶＨは、別々の遺伝子によりコードされるが、これらは、ＶＬ及びＶＨ領域が対を成して一価の分子（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られている；例えばＢｉｒｄら、（１９８８年）、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３〜４２６頁；及びＨｕｓｔｏｎら（１９８８年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８５：５８７９〜５８８３頁を参照）を形成する単一タンパク質鎖としてこれらが作製されるのを可能にする合成リンカーによって組換え方法を使用して一体にされ得る。かかる単鎖抗体はまた、抗体の用語「抗原結合部分」内に包含されることが意図される。本発明のある特定の実施形態において、ｓｃＦｖ分子は、融合タンパク質に組み込まれてもよい。ダイアボディのような他の形態の単鎖抗体もまた包含される。ダイアボディは、ＶＨ及びＶＬドメインが単一ポリペプチド鎖上で発現され、同じ鎖上の２つのドメイン間での対形成を可能にするにはあまりに短いリンカーを使用するが、これにより、ドメインを別の鎖の相補ドメインと対形成させ、２つの抗原結合部位を生じる、二価の二重特異性抗体である（例えばＨｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．ら（１９９３年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：６４４４〜６４４８頁；Ｐｏｌｊａｋ，Ｒ．Ｊ．ら（１９９４年）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、２：１１２１〜１１２３頁を参照）。かかる抗体結合部分は、当技術分野において公知である（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｄｕｂｅｌ編、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（２００１年）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、７９０頁（ＩＳＢＮ３−５４０−４１３５４−５））。
【０２０１】
ＩｇＧは、Ｙの形で配置された２つの重鎖及び２つの軽鎖を含む抗体のクラスである。例示的なヒトＩｇＧ重鎖及び軽鎖定常ドメインアミノ酸配列は、当該技術分野において公知であり、表１において以下に表される。
【０２０２】
【表１】
2019521114.tif 000052
2019521114.tif 000053
【０２０３】
なおさらに、抗体又はこの抗原結合部分は、抗体又は抗体部分の１つ以上の他のタンパク質又はペプチドとの共有又は非共有結合により形成されたより大きな免疫結合分子の一部であってもよい。かかる免疫結合分子の例は、４量体ｓｃＦｖ分子を作製するためのストレプトアビジンコア領域の使用（Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ，Ｓ．Ｍ．ら、（１９９５年）、Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ、６：９３〜１０１頁）及びシステイン残基の使用、２価のビオチン化ｓｃＦｖ分子を作製するためのマーカーペプチド及びＣ末端ポリヒスチジンタグ（Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ，Ｓ．Ｍ．ら、（１９９４年）、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、３１：１０４７〜１０５８頁）を含む。Ｆａｂ及びＦ（ａｂ’）２フラグメントのような抗体部分は、抗体全体のそれぞれ、パパイン又はペプシン消化のような従来技術を使用して抗体全体から調製することができる。さらに、抗体、抗体部分及び免疫結合分子は、本明細書に記載された標準的な組換えＤＮＡ技術を使用して得ることができる。
【０２０４】
本明細書において使用される「単離された抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指すことが意図される（例えば、ＥＧＦＲに特異的に結合する単離された抗体は、ＥＧＦＲ以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない。）。しかしながら、ＥＧＦＲに特異的に結合する単離された抗体は、他の種由来のＥＧＦＲ分子のような他の抗原に対する交差反応性を有してもよい。さらに、単離された抗体は、他の細胞物質及び／又は化学物質を実質的に含み得ない。
【０２０５】
用語「ヒト化抗体」は、非ヒト種（例えばマウス）由来の重鎖及び軽鎖可変領域配列を含むが、ＶＨ及び／又はＶＬ配列の少なくとも一部が、より「ヒト様」、すなわち、ヒト生殖系列可変配列により類似するように変更された抗体を指す。特に、用語「ヒト化抗体」は、目的の抗原に免疫特異的に結合し、ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有するフレームワーク（ＦＲ）領域及び非ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有する相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、抗体又はそのバリアント、誘導体、類似体若しくは断片である。本明細書において使用される場合、ＣＤＲの文脈における用語「実質的に」は、非ヒト抗体ＣＤＲのアミノ酸配列に少なくとも８０％、好ましくは、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲを指す。ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域の全て又は実質的に全てが、非ヒト免疫グロブリン（すなわち、ドナー抗体）のものに対応し、フレームワーク領域の全て又は実質的に全てが、ヒト免疫グロブリン共通配列のものである、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメイン（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＦａｂＣ、Ｆｖ）の実質的に全てを含む。好ましくは、ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも部分、典型的には、ヒト免疫グロブリンのものを含む。一部の実施形態において、ヒト化抗体は、軽鎖並びに重鎖の少なくとも可変ドメインの両方を含有する。抗体はまた、重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３及びＣＨ４領域を含んでもよい。一部の実施形態において、ヒト化抗体のみが、ヒト化軽鎖を含有する。他の実施形態において、ヒト化抗体のみが、ヒト化重鎖を含有する。特定の実施形態において、ヒト化抗体のみが、軽鎖のヒト化可変ドメイン及び／又はヒト化重鎖を含有する。
【０２０６】
ヒト化抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＥを含む免疫グロブリンの任意のクラス、並びに限定することなくＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４を含む任意のアイソタイプから選択され得る。ヒト化抗体は、１つより多くのクラス又はアイソタイプ由来の配列を含んでもよく、特定の定常ドメインは、当技術分野において周知の技術を使用して所望のエフェクター機能が最適化するように選択されてもよい。
【０２０７】
用語「Ｋａｂａｔ番号付け」、「Ｋａｂａｔ定義」及び「Ｋａｂａｔラベリング」は、本明細書において互換的に使用される。これらの用語は、当技術分野において認識されており、抗体又はその抗原結合部分の重鎖及び軽鎖可変領域における他のアミノ酸残基より可変（すなわち、超可変性）であるアミノ酸残基に番号を付けるシステムを指す（Ｋａｂａｔら（１９７１年）Ａｎｎ．ＮＹ  Ａｃａｄ，Ｓｃｉ．１９０：３８２〜３９１頁及びＫａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら（１９９１年）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ公開番号第９１〜３２４２）。重鎖可変領域について、超可変領域は、ＣＤＲ１についてアミノ酸位３１〜３５の範囲であり、ＣＤＲ２についてアミノ酸位５０〜６５の範囲であり、ＣＤＲ３についてアミノ酸位９５〜１０２の範囲である。軽鎖可変領域について、超可変領域範囲は、ＣＤＲ１についてアミノ酸位２４〜３４の範囲であり、ＣＤＲ２についてアミノ酸位５０〜５６の範囲であり、ＣＤＲ３についてアミノ酸位８９〜９７の範囲である。
【０２０８】
本明細書において使用される場合、用語「ＣＤＲ」は、抗体可変配列内の相補性決定領域を指す。重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）の可変領域のそれぞれにおいて３つのＣＤＲが存在し、３つのＣＤＲが、可変領域のそれぞれについてＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３（又は具体的には、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、ＨＣ  ＣＤＲ３、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２、及びＬＣ  ＣＤＲ３）と命名される。本明細書において使用される用語「ＣＤＲセット」は、抗原を結合する能力がある単一の可変領域において生じる３つのＣＤＲの群を指す。これらのＣＤＲの正確な境界は、異なるシステムに従い異なって定義されてきた。Ｋａｂａｔにより記載されたシステム（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９８７年）及び（１９９１年））は、抗体の任意の可変領域に適用可能な明白な残基番号付けシステムを提供するだけでなく、３つのＣＤＲを定義する正確な残基境界を提供する。これらのＣＤＲは、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲと称され得る。Ｃｈｏｔｈｉａ及び共同研究者ら（Ｃｈｏｔｈｉａ  ＆  Ｌｅｓｋ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１９６：９０１〜９１７頁、（１９８７年）及びＣｈｏｔｈｉａら、Ｎａｔｕｒｅ、３４２：８７７〜８８３頁（１９８９年））は、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ内のある特定の下位部分が、アミノ酸配列のレベルで大きな多様性を有するにも関わらず、ほぼ同一のペプチド骨格立体構造をとることを見出した。これらの下位部分は、「Ｌ」及び「Ｈ」が、それぞれ軽鎖及び重鎖領域を命名する、Ｌ１、Ｌ２及びＬ３又はＨ１、Ｈ２及びＨ３と命名される。これらの領域は、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲと称され得、これらの領域は、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲと重複する境界を有する。Ｋａｂａｔ  ＣＤＲと重複するＣＤＲを定義する他の境界は、Ｐａｄｌａｎ（ＦＡＳＥＢ  Ｊ、９：１３３〜１３９頁（１９９５年））及びＭａｃＣａｌｌｕｍ（Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ、２６２（５）：７３２〜４５頁（１９９６年））により記載されている。これらは、特定の残基又は残基の群又はＣＤＲの全体でさえ、抗原結合に有意に影響を与えないという予測又は実験的知見に照らして、短くされ得る又は長くされ得るにもかかわらず、なお他のＣＤＲ境界の定義は、上記のシステムの１つに厳密に従わなくてもよいが、それにも関わらずＫａｂａｔ  ＣＤＲと重複する。好ましい実施形態は、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａにより定義されたＣＤＲを使用するが、本明細書において使用される方法は、これらのシステムのいずれかに従い定義されるＣＤＲを利用してもよい。
【０２０９】
本明細書において使用される場合、用語「フレームワーク」又は「フレームワーク配列」は、ＣＤＲを引いた可変領域の残りの配列を指す。ＣＤＲ配列の正確な定義は、異なるシステムにより定義することができるので、フレームワーク配列の意味は、対応する異なる解釈の対象である。６つのＣＤＲ（軽鎖のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２及びＣＤＲ−Ｌ３並びに重鎖のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２及びＣＤＲ−Ｈ３）はまた、ＣＤＲ１が、ＦＲ１とＦＲ２の間に位置し、ＣＤＲ２が、ＦＲ２とＦＲ３の間に位置し、ＣＤＲ３が、ＦＲ３とＦＲ４の間に位置する、軽鎖及び重鎖上のフレームワーク領域を各鎖上の４つの下位領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４）に分ける。特定の下位領域をＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３又はＦＲ４と特定することなく、他のものにより言及されるフレームワーク領域は、単一の天然に存在する免疫グロブリン鎖の可変領域内の組み合わされたＦＲのものを表す。本明細書において使用される場合、ＦＲは、４つのうち１つの下位領域を表し、ＦＲは、フレームワーク領域を構成する４つのうち２つ以上の下位領域を表す。
【０２１０】
ヒト化抗体のフレームワーク及びＣＤＲ領域は、親配列に正確に対応する必要はなく、例えばドナー抗体ＣＤＲ又は共通フレームワークは、この部位のＣＤＲ又はフレームワーク残基が、ドナー抗体又は共通フレームワークのいずれかに対応しないように、少なくとも１つのアミノ酸残基の置換、挿入及び／又は欠失により変異誘発されてもよい。しかしながら、好ましい実施形態において、かかる変異は広範ではない。通常、ヒト化抗体残基の少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％が、親ＦＲ及びＣＤＲ配列のものに対応する。本明細書において使用される場合、用語「共通フレームワーク」は、共通免疫グロブリン配列中のフレームワーク領域を指す。本明細書において使用される場合、用語「共通免疫グロブリン配列」は、関連する免疫グロブリン配列のファミリーにおいて最も頻繁に生じるアミノ酸（又はヌクレオチド）から形成された配列を指す（例えばＷｉｎｎａｋｅｒ、Ｆｒｏｍ  Ｇｅｎｅｓ  ｔｏ  Ｃｌｏｎｅｓ（Ｖｅｒｌａｇｓｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ、Ｗｅｉｎｈｅｉｍ、ドイツ、１９８７年を参照）。免疫グロブリンのファミリーにおいて、共通配列におけるそれぞれの位置は、ファミリーにおけるこの位置で最も頻繁に生じるアミノ酸により占められる。２つのアミノ酸が、等しい頻度で生じる場合、いずれかが、共通配列に含まれ得る。
【０２１１】
ペプチド又はポリペプチド配列に関する「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」は、配列同一性の一部として保存的置換を考慮することなく、最大のパーセント配列同一性を達成するために、配列を整列させ、必要に応じてギャップを導入した後に、特定のペプチド又はポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基の割合と定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的のためのアラインメントは、当技術分野における技術の範囲内である様々な方法、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアのような公的に入手可能なコンピューターソフトウェアを使用して達成することができる。当業者は、比較される配列の全長にわたり最大のアラインメントを達成するのに必要とされる任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメーターを決定することができる。一実施形態において、本発明は、配列番号１〜３１、３５〜４０又は５０〜８５のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２１２】
用語「多価抗体」は、２つ以上の抗原結合部位を含む抗体を表示するために本明細書において使用される。ある特定の実施形態において、多価抗体は、３つ以上の抗原結合部位を有するように操作されてもよく、一般に、天然に存在する抗体ではない。
【０２１３】
用語「多重特異性抗体」は、２つ以上の無関連の抗原と結合する能力がある抗体を指す。一実施形態において、多重特異性抗体は、２つの無関連の抗原に結合する能力がある二重特異性抗体、例えば、ＥＧＦＲ（例えばＥＧＦＲｖＩＩＩ）及びＣＤ３に結合する二重特異性抗体又はその抗原結合部分である。
【０２１４】
用語「活性」は、抗原に対する抗体若しくはＡＤＣ、例えば、ｈＥＧＦＲ抗原に結合する抗ｈＥＧＦＲ抗体の結合特異性／親和性、及び／又は抗体、例えば、ｈＥＧＦＲへの結合がｈＥＧＦＲの生物学的活性を阻害する抗ｈＥＧＦＲ抗体の中和効力、例えば、ＥＧＦＲ発現細胞株、例えば、ヒト肺癌細胞株Ｈ２９２におけるＥＧＦＲのリン酸化の阻害、又はＥＧＦＲ発現細胞株、例えば、ヒトＨ２９２肺癌細胞、ヒトＨ１７０３肺癌細胞若しくはヒトＥＢＣ１肺癌細胞の増殖の阻害のような活性を含む。
【０２１５】
本明細書において使用される用語「非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）異種移植アッセイ」は、抗ＥＧＦＲ抗体若しくはＡＤＣが、腫瘍成長（例えば、さらなる成長）を阻害し得る及び／又は免疫不全マウスへのＮＳＣＬＣ細胞の移植から生じる腫瘍成長を減少させ得るかどうかを決定するために使用されるインビボアッセイを指す。ＮＳＣＬＣ異種移植アッセイは、腫瘍が所望されるサイズ、例えば２００〜２５０ｍｍ３まで成長し、その際抗体又はＡＤＣが、抗体又はＡＤＣが腫瘍成長を阻害し得る及び／又は減少させ得るかどうかを決定するためにマウスに投与されるように、免疫不全マウスへのＮＳＣＬＣ細胞の移植を含む。ある特定の実施形態において、抗体又はＡＤＣの活性は、対照抗体、例えば腫瘍細胞に特異的に結合しない、例えばがんと関連しない抗原に指向される又は非がん性である供給源（例えば正常ヒト血清）から得られるヒトＩｇＧ抗体（又はその集合物）と比較してパーセント腫瘍成長阻害（％ＴＧＩ）に従い決定される。かかる実施形態において、抗体（又はＡＤＣ）及び対照抗体は、同じ用量、同じ頻度及び同じ経路を介してマウスに投与される。一実施形態において、ＮＳＣＬＣ異種移植アッセイにおいて使用されるマウスは、重度の合併免疫不全（ＳＣＩＤ）マウス及び／又は胸腺欠損ＣＤ−１ヌードマウスである。ＮＳＣＬＣ異種移植アッセイにおいて使用され得るＮＳＣＬＣ細胞の例は、Ｈ２９２細胞（例えば、ＮＣＩＨ２９２［Ｈ２９２］（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ１８４８）を含むが、これらに限定されない。
【０２１６】
用語「エピトープ」は、抗体又はＡＤＣにより結合される抗原の領域を指す。ある特定の実施形態において、エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル又はスルホニルのような分子の化学的に活性な表面分類を含み、ある特定の実施形態において、特定の３次元構造特徴及び／又は特定の荷電特徴を有してもよい。ある特定の実施形態において、抗体は、それが、タンパク質及び／又は高分子の複合混合物においてその標的抗原を優先的に認識するとき、抗原に特異的に結合すると述べられる。一実施形態において、本発明の抗体は、（ｈＥＧＦＲの成熟型のアミノ酸残基２８７〜３０２に対応する）アミノ酸配列ＣＧＡＤＳＹＥＭＥＥＤＧＶＲＫＣ（配列番号４５）により定義されるエピトープに結合する。
【０２１７】
本明細書において使用される、用語「表面プラズモン共鳴」は、例えばＢＩＡｃｏｒｅシステム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ  ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、スウェーデン及びＰｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を使用したバイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度における変化の検出により、リアルタイム生体特異的相互作用の解析を可能にする光学的現象を指す。さらなる記載については、Ｊｏｎｓｓｏｎ，Ｕ．ら（１９９３年）Ａｎｎ．Ｂｉｏｌ．Ｃｌｉｎ．５１：１９〜２６頁；Ｊｏｎｓｓｏｎ，Ｕ．ら（１９９１年）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、１１：６２０〜６２７頁；Ｊｏｈｎｓｓｏｎ，Ｂ．ら（１９９５年）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．、８：１２５〜１３１頁；及びＪｏｈｎｎｓｏｎ，Ｂ．ら（１９９１年）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９８：２６８〜２７７を参照。一実施形態において、表面プラズモン共鳴は、実施例２において記載される方法に従い決定される。
【０２１８】
本明細書において使用される用語「ｋｏｎ」又は「ｋａ」は、抗体／抗原複合体を形成するための抗原への抗体の結合についての結合速度定数を指すことが意図される。
【０２１９】
本明細書において使用される用語「ｋｏｆｆ」又は「ｋｄ」は、抗体／抗原複合体からの抗体の解離についての解離速度定数を指すことが意図される。
【０２２０】
本明細書において使用される、用語「ＫＤ」は、特定の抗体−抗原相互作用（例えばＡｂＡ抗体及びＥＧＦＲ）の平衡解離定数を指すことが意図される。ＫＤは、ｋａ／ｋｄにより計算される。
【０２２１】
本明細書において使用される用語「競合的結合」は、第１の抗体が、第３の分子、例えば抗原上の結合部位について第２の抗体と競合する状況を指す。一実施形態において、２つの抗体の間での競合的結合は、ＦＡＣＳ解析を使用して決定される。
【０２２２】
用語「競合的結合アッセイ」は、２つ以上の抗体が同じエピトープに結合するかどうかを決定するために使用されるアッセイである。一実施形態において、競合的結合アッセイは、標識された抗体の蛍光シグナルが、同じエピトープに対する競合が蛍光のレベルを下げる標識されていない抗体の導入に起因して低減されるかどうかを決定することにより、２つ以上の抗体が同じエピトープに結合するかどうかを決定するために使用される競合蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）アッセイである。競合結合ＦＡＣＳアッセイの例は、実施例３において提供され、Ｕ８７ＭＧ細胞（ＥＧＦＲｖＩＩＩを発現する）を使用する競合ＦＡＣＳアッセイが記載されている。
【０２２３】
用語「抗体−薬物−コンジュゲート」又は「ＡＤＣ」は、任意選択的に治療又は細胞傷害性薬剤であってもよい１つ以上の化学薬物（本明細書において薬剤、ウォーヘッド又はペイロードとも称される）に化学的に連結された抗体又はこの抗原結合フラグメントのような結合タンパク質を指す。好ましい実施形態において、ＡＤＣは、抗体、細胞傷害性又は治療用薬物及び抗体への薬物の結合又はコンジュゲートを可能にするリンカーを含む。ＡＤＣは、典型的には、２、４、６又は８個の薬物負荷種を含む１〜８個の範囲の抗体にコンジュゲートされた薬物を有する。好ましい実施形態において、本発明のＡＤＣは、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤にリンカーを介してコンジュゲートされた抗ＥＧＦＲ抗体を含む。
【０２２４】
本明細書において互換的に使用される用語「抗上皮成長因子抗体薬物コンジュゲート」「抗ＥＧＦＲ抗体薬物コンジュゲート」又は「抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣ」は、抗体が１つ以上の化学薬剤にコンジュゲートされる、ＥＧＦＲに特異的に結合する抗体を含むＡＤＣを指す。一実施形態において、抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣは、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤にコンジュゲートされた抗体ＡｂＡを含む。一実施形態において、抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣは、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤にコンジュゲートされた抗体ＡｂＢを含む。一実施形態において、抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣは、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤にコンジュゲートされた抗体ＡｂＫを含む。一実施形態において、抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣは、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤にコンジュゲートされた抗体ＡｂＧを含む。
【０２２５】
用語「薬物抗体比」又は「ＤＡＲ」は、ＡＤＣの抗体に結合された薬物、例えばＢｃｌ−ｘＬ阻害剤の数を指す。より高い負荷、例えば１０がまた、抗体上の連結部位の数に依存して可能であるが、ＡＤＣのＤＡＲは、１〜８の範囲であり得る。用語ＤＡＲは、個々の抗体上に負荷された薬物の数に関して使用されてもよい又はあるいは、ＡＤＣの群の平均若しくは中間のＤＡＲに関して使用されてもよい。
【０２２６】
本明細書において使用される用語「所望されないＡＤＣ種」は、異なる薬物負荷を有するＡＤＣ種から分離されるべきである任意の薬物負荷種を指す。一実施形態において、用語所望されないＡＤＣ種は、６以上の薬物負荷種、すなわち、ＤＡＲ６、ＤＡＲ７、ＤＡＲ８及び８より大きいＤＡＲ（すなわち、６、７、８又は８より大きい薬物負荷種）を含む、６以上のＤＡＲを有するＡＤＣを指すことができる。別の実施形態において、用語所望されないＡＤＣ種は、８以上の薬物負荷種、すなわち、ＤＡＲ８及び８より大きいＤＡＲ（すなわち、８又は８より大きい薬物負荷種）を含む、８以上のＤＡＲを有するＡＤＣを指してもよい。
【０２２７】
本明細書において使用される用語「ＡＤＣ混合物」は、ＡＤＣの不均一なＤＡＲ分布を含有する組成物を指す。一実施形態において、ＡＤＣ混合物は、１〜８、例えば２、４、６及び８のＤＡＲ（すなわち、２、４、６及び８の薬物負荷種）の分布を有するＡＤＣを含有する。特に、分解産物は、１、３、５及び７のＤＡＲがまた、混合物に含まれ得るように生じてもよい。さらに、混合物内のＡＤＣはまた、８より大きいＤＡＲを有してもよい。ＡＤＣ混合物は、鎖間ジスルフィド還元、続いてコンジュゲートから生じる。一実施形態において、ＡＤＣ混合物は、４以下のＤＡＲを有するＡＤＣ（すなわち、４以下の薬物負荷種）と６以上のＤＡＲを有するＡＤＣ（すなわち、６以上の薬物負荷種）の両方を含む。
【０２２８】
用語「がん」は、調節されていない細胞成長により典型的に特徴付けられる哺乳動物における生理的状態を指す又は記載することを意味する。がんの例は、癌、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病又はリンパ系腫瘍を含むが、これらに限定されない。かかるがんのより具体的な例は、膠芽腫、非小細胞肺がん、肺がん、結腸がん、結腸直腸がん、頭頸部がん、乳がん（例えば、トリプルネガティブ乳がん）、膵臓がん、扁平上皮腫瘍、扁平上皮癌（例えば、扁平上皮肺がん又は扁平上皮頭頸部がん）、肛門がん、皮膚がん及び外陰がんを含む。一実施形態において、本発明のＡＤＣは、腫瘍が、ＥＧＦＲの切断されたバージョン、ＥＧＦＲｖＩＩＩを発現する、ＥＧＦＲ遺伝子の増幅を含有する腫瘍を有する患者に投与される。一実施形態において、本発明のＡＤＣは、ＥＧＦＲを過剰発現しそうである固形腫瘍を有する患者に投与される。一実施形態において、本発明のＡＤＣは、扁平上皮非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）を有する患者に投与される。一実施形態において、本発明のＡＤＣは、進行した固形腫瘍を含む固形腫瘍を有する患者に投与される。
【０２２９】
本明細書において使用される用語「ＥＧＦＲ発現腫瘍」は、ＥＧＦＲタンパク質を発現する腫瘍を指す。一実施形態において、腫瘍におけるＥＧＦＲ発現は、腫瘍試料におけるバックグラウンドレベルより上の任意の免疫組織化学染色が、腫瘍がＥＧＦＲ発現腫瘍であることを示す、腫瘍細胞膜の免疫組織化学染色を使用して決定される。腫瘍においてＥＧＦＲの発現を検出する方法は、当該技術分野において公知であり、例えば、ＥＧＦＲ  ｐｈａｒｍＤｘ（商標）キット（Ｄａｋｏ）である。対照的に、「ＥＧＦＲ陰性腫瘍」は、免疫組織化学技術により決定して腫瘍試料においてバックグラウンドより上のＥＧＦＲ膜染色の存在が存在しない腫瘍として定義される。
【０２３０】
本明細書において使用される用語「ＥＧＦＲｖＩＩＩ陽性腫瘍」は、ＥＧＦＲｖＩＩＩタンパク質を発現する腫瘍を指す。一実施形態において、腫瘍におけるＥＧＦＲｖＩＩＩ発現は、腫瘍試料におけるバックグラウンドレベルより上の任意の免疫組織化学染色が、腫瘍がＥＧＦＲｖＩＩＩ発現腫瘍であることを示す、腫瘍細胞膜の免疫組織化学染色を使用して決定される。腫瘍においてＥＧＦＲの発現を検出する方法が、当該技術分野において公知であり、免疫組織化学アッセイを含む。対照的に、「ＥＧＦＲｖＩＩＩ陰性腫瘍」は、免疫組織化学技術により決定して腫瘍試料においてバックグラウンドより上のＥＧＦＲｖＩＩＩ膜染色が存在しない腫瘍として定義される。
【０２３１】
用語「過剰発現する」、「過剰発現」又は「過剰発現された」は、互換的に、正常細胞と比較して、通常がん細胞において検出可能なより高いレベルで転写される又は翻訳される遺伝子を指す。したがって、過剰発現は、タンパク質及びＲＮＡの過剰発現（増大した転写、転写後プロセシング、翻訳、翻訳後プロセシング、変化した安定性及び変化したタンパク質分解に起因する）、並びに変化したタンパク質出入パターン（増大した核局在化）及び増強された機能活性、例えば基質の増大した酵素加水分解などに起因する局所過剰発現の両方を指す。したがって、過剰発現は、タンパク質又はＲＮＡレベルのいずれかを指す。過剰発現はまた、正常細胞又は比較細胞と比較して５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又はそれ以上であり得る。ある特定の実施形態において、本発明の抗ＥＧＦＲＡＤＣは、ＥＧＦＲを過剰発現しそうである固形腫瘍を処置するために使用される。
【０２３２】
本明細書において使用される、用語「投与すること」は、治療目的（例えばＥＧＦＲ関連障害の処置）を達成するための物質（例えば抗ＥＧＦＲＡＤＣ）の送達を指すことを意味する。投与様式は、非経口、経腸及び局所であってもよい。非経口投与は、通常、注射によるものであり、限定せずに、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、脊髄内及び胸骨内注射及び注入を含む。
【０２３３】
本明細書において使用される用語「併用療法」は、２つ以上の治療物質、例えば抗ＥＧＦＲＡＤＣ及びさらなる治療剤の投与を指す。さらなる治療剤は、抗ＥＧＦＲＡＤＣの投与と同時、投与の前又は投与の後に投与されてもよい。
【０２３４】
本明細書において使用される場合、用語「有効量」又は「治療有効量」は、障害、例えばがん若しくはその１つ以上の症状の重症度及び／若しくは期間を低減する若しくは改善する、障害の進行を防止する、障害の退縮を引き起こす、障害に伴う１つ以上の症状の再発、発生、発症若しくは進行を防止する、障害を検出する又は別の療法（例えば予防若しくは治療剤）の予防若しくは治療効果を増強する若しくは改善するのに十分である薬物、例えば抗体又はＡＤＣの量を指す。有効量の抗体又はＡＤＣは、例えば腫瘍成長を阻害する（例えば腫瘍体積の増大を阻害する）、腫瘍成長を減少させる（例えば腫瘍体積を減少させる）、がん細胞の数を低減する及び／又はある程度までがんに伴う症状の１つ以上を軽減してもよい。有効量は、例えば無病生存期間（ＤＦＳ）を改善する、全生存期間（ＯＳ）を改善する又は再発の尤度を減少させてもよい。
【０２３５】
本発明の様々な態様が、以下のサブセクションにおいてさらに詳細に記載される。
【０２３６】
２．抗ＥＧＦＲ抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）：抗ＥＧＦＲ抗体
本発明の一態様は、薬物がＢｃｌ−ｘＬ阻害剤である、リンカーを介して薬物にコンジュゲートされた抗ｈＥＧＦＲ抗体を含む抗ヒト上皮成長因子受容体（抗ｈＥＧＦＲ）抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を特徴とする。本明細書に記載のＡＤＣにおいて使用され得る例示的な抗ＥＧＦＲ抗体（及びこれらの配列）が、以下、並びにＵＳ２０１５−０３３７０４２において記載され、全体を参照により本明細書に組み込む。
【０２３７】
本明細書に記載された抗ＥＧＦＲ抗体は、抗体に結合された細胞傷害性Ｂｃｌ−ｘＬ薬物が、ＥＧＦＲ発現細胞に送達され得るように、本発明のＡＤＣにＥＧＦＲに結合する能力をもたらす。
【０２３８】
用語「抗体」が全体にわたって使用されるが、抗体フラグメント（すなわち、抗ＥＧＦＲ抗体の抗原結合部分）も、本発明に記載されたＢｃｌ−ｘＬ阻害剤にコンジュゲートされ得ることに留意されたい。したがって、ある特定の実施形態において、本明細書に記載された抗ＥＧＦＲ抗体の抗体フラグメントが、リンカーを介してＢｃｌ−ｘＬ阻害剤にコンジュゲートされることは、本発明の範囲内である。ある特定の実施形態において、抗ＥＧＦＲ抗体結合部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、ｓｃＦｖ、シングルドメイン抗体又は二重特異性抗体である。
【０２３９】
本発明のＡＤＣにおいて使用され得る抗ＥＧＦＲ抗体は、これらをＡＤＣにおける使用に有利にする特徴を有する。一実施形態において、抗ＥＧＦＲ抗体は、ＥＧＦＲｖＩＩＩを発現する腫瘍細胞への結合、ＥＧＦＲを発現する腫瘍細胞上の野生型ＥＧＦＲへの結合、ＥＧＦＲ上のエピトープＣＧＡＤＳＹＥＭＥＥＤＧＶＲＫＣ（配列番号４５）の認識、正常ヒト上皮ケラチノサイト上のＥＧＦＲへの結合及びマウスモデルにおける異種移植片腫瘍成長の減少又は阻害を含むが、これらに限定されない特徴を有する。一実施形態において、本発明のＡＤＣにおいて使用され得る抗ＥＧＦＲ抗体は、配列番号４５により定義されるヒトＥＧＦＲのエピトープに結合する能力がある、及び／又はヒトＥＧＦＲへの結合について本明細書において開示される任意の抗体（例えば、Ａｂ１、ＡｂＡ、ＡｂＢ、ＡｂＣ、ＡｂＤ、ＡｂＥ、ＡｂＦ、ＡｂＧ、ＡｂＨ、ＡｂＪ、ＡｂＫ）と競合することができる。ＥＧＦＲへの抗体の結合は、例えば、全体を参照により本明細書に組み込む、ＵＳ２０１５−０３３７０４２Ａ１において記載された競合アッセイ解析に従いアッセイされてもよい。本発明の一実施形態において、本発明のＡＤＣにおいて使用され得る抗ＥＧＦＲ抗体は、ＥＧＦＲ（配列番号４７）の１〜５２５に対して、表面プラズモン共鳴によって決定される約１×１０−６Ｍ〜約１×１０−１０Ｍの解離定数（Ｋｄ）を有する。前述の態様の他の実施形態において、本発明のＡＤＣは、ＥＧＦＲｖＩＩＩに結合し、ＥＧＦＲを過剰発現する細胞上のＥＧＦＲに結合し、ＥＧＦＲ上のエピトープＣＧＡＤＳＹＥＭＥＥＤＧＶＲＫＣ（配列番号４５）を認識する抗ＥＧＦＲ抗体を含む。さらなる実施形態において、抗ＥＧＦＲ抗体は、ＥＧＦＲｖＩＩＩ接合部ペプチドから離れているエピトープにおいてＥＧＦＲｖＩＩＩに結合する。前述の態様のさらなる実施形態において、本発明のＡＤＣにおいて使用される抗ＥＧＦＲ抗体は、ヒトＥＧＦＲへの結合についてセツキシマブと競合しない。
【０２４０】
一実施形態において、本発明のＡＤＣは、表面プラズモン共鳴によって決定される約１×１０−６Ｍ以下の解離定数（Ｋｄ）でＥＧＦＲ（１〜５２５）（配列番号４７）に結合する抗ＥＧＦＲ抗体を含む。あるいは、抗ＥＧＦＲ抗体は、表面プラズモン共鳴によって決定される約１×１０−６Ｍ〜約１×１０−１０ＭのＫｄでＥＧＦＲ（１〜５２５）（配列番号４７）に結合され得る。さらなる代替において、抗ＥＧＦＲ抗体は、表面プラズモン共鳴によって決定される約１×１０−６Ｍ〜約１×１０−７ＭのＫｄでＥＧＦＲ（１〜５２５）（配列番号４７）に結合する。あるいは、本発明において使用される抗体は、表面プラズモン共鳴によって決定される約１×１０−６Ｍ〜約５×１０−１０ＭのＫｄ；約１×１０−６Ｍ〜約１×１０−９ＭのＫｄ；約１×１０−６Ｍ〜約５×１０−９ＭのＫｄ；約１×１０−６Ｍ〜約１×１０−８ＭのＫｄ；約１×１０−６Ｍ〜約５×１０−８ＭのＫｄ；約５．９×１０−７Ｍ〜約１．７×１０−９ＭのＫｄ；約５．９×１０−７Ｍ〜約２．２×１０−７ＭのＫｄでＥＧＦＲ（１〜５２５）（配列番号４７）に結合され得る。ある特定の実施形態において、本発明のＡＤＣにおいて使用される抗ｈＥＧＦＲ抗体の解離定数（Ｋｄ）は、抗ＥＧＦＲ抗体セツキシマブ（すなわち、Ａｂ１よりきつくＥＧＦＲに結合するが、セツキシマブよりきつくは結合しない抗体）の解離定数より高いＡｂ１に対する解離定数より低い。
【０２４１】
本明細書に記載された抗ＥＧＦＲ抗体の１つの利点は、抗体が、ＥＧＦＲｖＩＩＩを発現する腫瘍細胞に結合し、これにより、悪性細胞に特異的な本発明のＡＤＣを作製する能力があることである。ＥＧＦＲｖＩＩＩは、ある特定のタイプのがんに付随し、当該技術分野において公知の多くの抗ＥＧＦＲ抗体、例えば、セツキシマブは、ＥＧＦＲｖＩＩＩ発現腫瘍における腫瘍成長を阻害する又は減少させる際に有効ではない。したがって、一実施形態において、本発明のＡＤＣにおいて使用される抗体は、表面プラズモン共鳴によって決定される約８．２×１０−９Ｍ以下のＫｄでＥＧＦＲｖＩＩＩ（配列番号３３）に結合する。あるいは、本発明のＡＤＣにおいて使用される抗体は、表面プラズモン共鳴によって決定される約８．２×１０−９Ｍ〜約６．３×１０−１０ＭのＫｄ；約８．２×１０−９Ｍ〜約２．０×１０−９ＭのＫｄ；約２．３×１０−９Ｍ〜約１．５×１０−１０ＭのＫｄでＥＧＦＲｖＩＩＩ（配列番号３３）に結合する。
【０２４２】
本明細書において使用される、用語「異種移植アッセイ」は、ヒト腫瘍細胞が、ヒト細胞を拒絶しない免疫不全マウスに、皮下又は腫瘍の起源である臓器型のいずれかに移植される、ヒト腫瘍異種移植アッセイを指す。
【０２４３】
上述の特徴の組合せを有する抗ＥＧＦＲ抗体も本発明の実施形態であるとみなされることに留意されたい。例えば、抗ＥＧＦＲ抗体は、表面プラズモン共鳴によって決される約１×１０−６Ｍ以下の解離定数（Ｋｄ）でＥＧＦＲ（１〜５２５）（配列番号４７）に結合し、アミノ酸配列ＣＧＡＤＳＹＥＭＥＥＤＧＶＲＫＣ（配列番号４５）内のエピトープに結合され得、競合的結合アッセイにおいてＥＧＦＲｖＩＩＩ（配列番号３３）への結合についてＡｂ１（又は配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む抗ＥＧＦＲ抗体）と競合し得る。ある特定の実施形態において、本発明の抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣは、アミノ酸配列ＣＧＡＤＳＹＥＭＥＥＤＧＶＲＫＣ（配列番号４５）内のエピトープに結合し、競合的結合アッセイにおいてＥＧＦＲｖＩＩＩ（配列番号３３）への結合についてＡｂ１（又は配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む抗ＥＧＦＲ抗体）と競合し、表面プラズモン共鳴によって決定される約８．２×１０−９Ｍ以下のＫｄでＥＧＦＲｖＩＩＩ（配列番号３３）に結合する、抗ＥＧＦＲ抗体を含む。
【０２４４】
一実施形態において、本発明のＡＤＣにおいて使用される抗ＥＧＦＲ抗体は、例えば、当該技術分野において公知のいくつかのインビトロ及びインビボアッセイのいずれか１つにより評価されるＥＧＦＲ活性を低減する又は中和する高い能力を示す。例えば、ＥＧＦＲ発現細胞株、例えば、ｈ２９２細胞株におけるＥＧＦＲのリン酸化の阻害が、測定され得る。ある特定の実施形態において、抗ＥＧＦＲ抗体は、ヒトＥＧＦＲに結合し、抗体は、ヒトＥＧＦＲ（ＥＧＦＲ１〜５２５）から、表面プラズモン共鳴によって決定される約５．９×１０−７Ｍ以下のＫＤ速度定数で解離する。さらなる実施形態において、抗体は、ヒトＥＧＦＲ（１〜５２５）から、表面プラズモン共鳴によって決定される約４．２×１０−７ＭのＫＤ速度定数で解離してもよい。あるいは、抗体は、ヒトＥＧＦＲ（１〜５２５）から、表面プラズモン共鳴によって決定される約２．５×１０−７Ｍの約ＫＤ速度定数のｋｏｆｆ速度定数で解離してもよい。ある特定の実施形態において、本発明の抗ＥＧＦＲ抗体は、５．９×１０−７Ｍ〜５×１０−９ＭのＫＤ速度定数を有する。あるいは、抗体は、表面プラズモン共鳴によって決定される約６．１×１０−９Ｍ以下のＫＤ速度定数でヒトＥＧＦＲｖＩＩＩから解離してもよい。あるいは、抗体は、表面プラズモン共鳴によって決定される約３．９×１０−９Ｍ以下のＫＤ速度定数でヒトＥＧＦＲｖＩＩＩから解離してもよい。あるいは、抗体は、表面プラズモン共鳴によって決定して約２．３×１０−９Ｍ以下のＫＤ速度定数でヒトＥＧＦＲｖＩＩＩから解離してもよい。
【０２４５】
本明細書に記載されたＡＤＣにおいて使用され得る例示的な抗ＥＧＦＲ抗体は、抗体１（Ａｂ１）、抗体Ａ（ＡｂＡ）、抗体Ｂ（ＡｂＢ）、抗体Ｃ（ＡｂＣ）、抗体Ｄ（ＡｂＤ）、抗体Ｅ（ＡｂＥ）、抗体Ｆ（ＡｂＦ）、抗体Ｇ（ＡｂＧ）、抗体Ｈ（ＡｂＨ）、抗体Ｊ（ＡｂＪ）、抗体Ｋ（ＡｂＫ）、抗体Ｌ（ＡｂＬ）、抗体Ｍ（ＡｂＭ）、抗体Ｎ（ＡｂＮ）、抗体Ｏ（ＡｂＯ）、抗体Ｐ（ＡｂＰ）及び抗体Ｑ（ＡｂＱ）を含むが、これらに限定されない。
【０２４６】
一実施形態において、本発明は、リンカーを介してＢｃｌ−ｘＬ阻害剤にコンジュゲートされたＡｂ１を含む抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣを特徴とする。Ａｂ１は、ヒト化抗ＥＧＦＲ抗体である。Ａｂ１の軽鎖及び重鎖配列は、それぞれ、配列番号１３及び配列番号１４に記載されている（参照により本明細書に組み込む、米国特許出願公開第２０１２０１８３４７１号も参照）。Ａｂ１の軽鎖可変領域は、配列番号５に記載され、配列番号６に記載のＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７に記載のＣＤＲ２アミノ酸配列及び配列番号８に記載のＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。Ａｂ１の重鎖可変領域は、配列番号１に記載され、配列番号２に記載のＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号３に記載のＣＤＲ２アミノ酸配列及び配列番号４に記載のＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。一実施形態において、本発明のＡＤＣは、配列番号４５に記載のアミノ酸配列内のエピトープに結合し、競合的結合アッセイにおいてＥＧＦＲｖＩＩＩに対する結合について、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む抗ＥＧＦＲ抗体と競合する、抗ＥＧＦＲ抗体を含む。
【０２４７】
一実施形態において、本発明は、リンカーを介してＢｃｌ−ｘＬ阻害剤にコンジュゲートされた抗体ＡｂＡである抗ｈＥＧＦＲ抗体を含む抗ｈＥＧＦＲ  ＡＤＣを特徴とする。用語「ＡｂＡ」は、ＡｂＡの少なくとも６つのＣＤＲを有するＩｇＧ抗体を含むことを意味する。ＡｂＡ抗体は、Ａｂ１のものと同一の軽鎖を有するが、親抗体Ａｂ１に対して６個のアミノ酸配列変更を含有する重鎖を有する（重鎖の可変領域における４個のアミノ酸変更及び重鎖の定常領域における２個のアミノ酸変更）。ＡｂＡ抗体は、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域、並びに配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む。ＡｂＡの重鎖可変領域は、配列番号９に記載のアミノ酸配列及び配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域により定義される。抗体ＡｂＡの全長重鎖は、配列番号１５に記載されたアミノ酸配列に記載され、一方、抗体ＡｂＡの全長軽鎖は、配列番号１３に記載されたアミノ酸配列に記載されている（図３を参照）。ＡｂＡの重鎖の核酸配列を以下に示す。
【０２４８】
【化４２】
2019521114.tif 000054
【０２４９】
ＡｂＡの軽鎖の核酸配列を以下に示す。
【０２５０】
【化４３】
2019521114.tif 000055
【０２５１】
ＡｂＡの重鎖のアミノ酸配列を以下に示す。
【０２５２】
【化４４】
2019521114.tif 000056
【０２５３】
別の実施形態において、ＡｂＡの重鎖のアミノ酸配列を以下に示す。
【０２５４】
【化４５】
2019521114.tif 000057
【０２５５】
ＡｂＡの軽鎖のアミノ酸配列を以下に示す。
【０２５６】
【化４６】
2019521114.tif 000058
【０２５７】
図２及び３は、ＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列のアライメント（図２）、Ａｂ１及びＡｂＡの完全な重鎖及び軽鎖（図３）を提供する。Ａｂ１及びＡｂＡの軽鎖アミノ酸配列は同一である（配列番号１３）。しかしながら、Ａｂ１及びＡｂＡの重鎖アミノ酸配列は、２つの配列間で６個のアミノ酸相違を有し、これらの３つは、ＣＤＲ中にある。Ａｂ１  ＶＨアミノ酸配列とＡｂＡ  ＶＨアミノ酸配列間の相違は、図２において陰影を付けられ、ＶＨ  ＣＤＲのそれぞれにおいて見出される。ＡｂＡの可変重鎖のＣＤＲ１ドメインは、セリン（Ａｂ１）からアルギニンへのアミノ酸変更を含んでいた。可変重鎖のＣＤＲ２ドメインは、Ａｂ１におけるセリンからＡｂＡにおけるアスパラギンへのアミノ酸変更を含んでいた。最終的に、可変重鎖のＣＤＲ３ドメインは、Ａｂ１におけるグリシンからＡｂＡにおけるセリンへのアミノ酸変更を含んでいた。ＡｂＡ内のアミノ酸変更のうち２つのアミノ酸変更が、重鎖の定常領域（Ｄ３５４Ｅ及びＬ３５６Ｍ）内である。ＡｂＡにおけるＦｃ領域アミノ酸変異は、ｚ非アロタイプに対するアロタイプである、ｚからのヒトＩｇＧアロタイプ変更を表す。他の変更に加えて、第１のアミノ酸が、例えば、図３において記載された通り、グルタミン（Ｑ）からグルタミン酸（Ｅ）に変更された。
【０２５８】
したがって、一実施形態において、本発明は、リンカーを介してＢｃｌ−ｘＬにコンジュゲートされた抗ｈＥＧＦＲ抗体を含むＡＤＣであって、抗体が、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域、並びに配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む、ＡＤＣを特徴とする。一実施形態において、本発明は、リンカーを介してＢｃｌ−ｘＬ阻害剤にコンジュゲートされた抗ｈＥＧＦＲ抗体を含むＡＤＣであって、抗体が、配列番号９に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、ＡＤＣを特徴とする。
【０２５９】
一実施形態において、本発明は、リンカーを介してＢｃｌ−ｘＬ阻害剤にコンジュゲートされた抗体ＡｂＢを含む抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣを特徴とする。ＡｂＢ抗体は、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域、並びに配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む。さらなる実施形態において、本発明は、配列番号６４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号６５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する抗体を提供する。したがって、一実施形態において、本発明のＡＤＣは、ＡｂＢのＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ｈＥＧＦＲ抗体を含む。別の実施形態において、本発明のＡＤＣは、ＡｂＢのアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域を有する抗ｈＥＧＦＲ抗体を含む。
【０２６０】
一実施形態において、本発明は、リンカーを介してＢｃｌ−ｘＬ阻害剤にコンジュゲートされた抗体ＡｂＣを含む抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣを特徴とする。ＡｂＣ抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン及び配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域、並びに配列番号８４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む。さらなる実施形態において、本発明は、配列番号６６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号６７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する抗体を提供する。したがって、一実施形態において、本発明のＡＤＣは、ＡｂＣのＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ｈＥＧＦＲ抗体を含む。別の実施形態において、本発明のＡＤＣは、ＡｂＣのアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域を有する抗ｈＥＧＦＲ抗体を含む。
【０２６１】
一実施形態において、本発明は、リンカーを介してＢｃｌ−ｘＬ阻害剤にコンジュゲートされた抗体ＡｂＤを含む抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣを特徴とする。ＡｂＤ抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン及び配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域、並びに配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン及び配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む。さらなる実施形態において、本発明は、配列番号６８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号６９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する抗体を提供する。したがって、一実施形態において、本発明のＡＤＣは、ＡｂＤのＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ｈＥＧＦＲ抗体を含む。別の実施形態において、本発明のＡＤＣは、ＡｂＤのアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域を有する抗ｈＥＧＦＲ抗体を含む。
【０２６２】
一実施形態において、本発明は、リンカーを介してＢｃｌ−ｘＬ阻害剤にコンジュゲートされた抗体ＡｂＥを含む抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣを特徴とする。ＡｂＥ抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン及び配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域、並びに配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン及び配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む。さらなる実施形態において、本発明は、配列番号５０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する抗体を提供する。したがって、一実施形態において、本発明のＡＤＣは、ＡｂＥのＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ｈＥＧＦＲ抗体を含む。別の実施形態において、本発明のＡＤＣは、ＡｂＥのアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域を有する抗ｈＥＧＦＲ抗体を含む。
【０２６３】
一実施形態において、本発明は、リンカーを介してＢｃｌ−ｘＬ阻害剤にコンジュゲートされた抗体ＡｂＦを含む抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣを特徴とする。ＡｂＦ抗体は、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域、並びに配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む。さらなる実施形態において、本発明は、配列番号５２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する抗体を提供する。したがって、一実施形態において、本発明のＡＤＣは、ＡｂＦのＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ｈＥＧＦＲ抗体を含む。別の実施形態において、本発明のＡＤＣは、ＡｂＦのアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域を有する抗ｈＥＧＦＲ抗体を含む。
【０２６４】
一実施形態において、本発明は、リンカーを介してＢｃｌ−ｘＬ阻害剤にコンジュゲートされた抗体ＡｂＧを含む抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣを特徴とする。ＡｂＧ抗体は、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域、並びに配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン及び配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む。さらなる実施形態において、本発明は、配列番号７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号７３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する抗体を提供する。したがって、一実施形態において、本発明のＡＤＣは、ＡｂＧのＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ｈＥＧＦＲ抗体を含む。別の実施形態において、本発明のＡＤＣは、ＡｂＧのアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域を有する抗ｈＥＧＦＲ抗体を含む。
【０２６５】
一実施形態において、本発明は、リンカーを介してＢｃｌ−ｘＬ阻害剤にコンジュゲートされた抗体ＡｂＨを含む抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣを特徴とする。ＡｂＨ抗体は、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン及び配列番号８０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域、並びに配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン及び配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む。さらなる実施形態において、本発明は、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する抗体を提供する。したがって、一実施形態において、本発明のＡＤＣは、ＡｂＨのＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ｈＥＧＦＲ抗体を含む。別の実施形態において、本発明のＡＤＣは、ＡｂＨのアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域を有する抗ｈＥＧＦＲ抗体を含む。
【０２６６】
一実施形態において、本発明は、リンカーを介してＢｃｌ−ｘＬ阻害剤にコンジュゲートされた抗体ＡｂＪを含む抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣを特徴とする。ＡｂＪ抗体は、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン及び配列番号８０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域、並びに配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン及び配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む。さらなる実施形態において、本発明は、配列番号５６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する抗体を提供する。したがって、一実施形態において、本発明のＡＤＣは、ＡｂＪのＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ｈＥＧＦＲ抗体を含む。別の実施形態において、本発明のＡＤＣは、ＡｂＪのアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域を有する抗ｈＥＧＦＲ抗体を含む。
【０２６７】
一実施形態において、本発明は、リンカーを介してＢｃｌ−ｘＬ阻害剤にコンジュゲートされた抗体ＡｂＫを含む抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣを特徴とする。ＡｂＫ抗体は、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域、並びに配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン及び配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む。さらなる実施形態において、本発明は、配列番号７４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号７５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する抗体を提供する。したがって、一実施形態において、本発明のＡＤＣは、ＡｂＫのＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ｈＥＧＦＲ抗体を含む。別の実施形態において、本発明のＡＤＣは、ＡｂＫのアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域を有する抗ｈＥＧＦＲ抗体を含む。
【０２６８】
一実施形態において、本発明は、リンカーを介してＢｃｌ−ｘＬ阻害剤にコンジュゲートされた抗体ＡｂＬを含む抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣを特徴とする。ＡｂＬ抗体は、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン及び配列番号８０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域、並びに配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン及び配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む。さらなる実施形態において、本発明は、配列番号５８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する抗体を提供する。したがって、一実施形態において、本発明のＡＤＣは、ＡｂＬのＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ｈＥＧＦＲ抗体を含む。別の実施形態において、本発明のＡＤＣは、ＡｂＬのアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域を有する抗ｈＥＧＦＲ抗体を含む。
【０２６９】
一実施形態において、本発明は、リンカーを介してＢｃｌ−ｘＬ阻害剤にコンジュゲートされた抗体ＡｂＭを含む抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣを特徴とする。ＡｂＭ抗体は、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン及び配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域、並びに配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン及び配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む。さらなる実施形態において、本発明は、配列番号７６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する抗体を提供する。したがって、一実施形態において、本発明のＡＤＣは、ＡｂＭのＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ｈＥＧＦＲ抗体を含む。別の実施形態において、本発明のＡＤＣは、ＡｂＭのアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域を有する抗ｈＥＧＦＲ抗体を含む。
【０２７０】
一実施形態において、本発明は、リンカーを介してＢｃｌ−ｘＬ阻害剤にコンジュゲートされた抗体ＡｂＮを含む抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣを特徴とする。ＡｂＮ抗体は、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン及び配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域、並びに配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン及び配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む。さらなる実施形態において、本発明は、配列番号６０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号６１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する抗体を提供する。したがって、一実施形態において、本発明のＡＤＣは、ＡｂＮのＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ｈＥＧＦＲ抗体を含む。別の実施形態において、本発明のＡＤＣは、ＡｂＮのアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域を有する抗ｈＥＧＦＲ抗体を含む。
【０２７１】
一実施形態において、本発明は、リンカーを介してＢｃｌ−ｘＬ阻害剤にコンジュゲートされた抗体ＡｂＯを含む抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣを特徴とする。ＡｂＯ抗体は、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン及び配列番号８０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域、並びに配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン及び配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む。さらなる実施形態において、本発明は、配列番号６２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号６３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する抗体を提供する。したがって、一実施形態において、本発明のＡＤＣは、ＡｂＯのＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ｈＥＧＦＲ抗体を含む。別の実施形態において、本発明のＡＤＣは、ＡｂＯのアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域を有する抗ｈＥＧＦＲ抗体を含む。
【０２７２】
一実施形態において、本発明は、リンカーを介してＢｃｌ−ｘＬ阻害剤にコンジュゲートされた抗体ＡｂＰを含む抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣを特徴とする。ＡｂＰ抗体は、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン及び配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域、並びに配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン及び配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む。さらなる実施形態において、本発明は、配列番号７８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号７９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する抗体を提供する。したがって、一実施形態において、本発明のＡＤＣは、ＡｂＰのＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ｈＥＧＦＲ抗体を含む。別の実施形態において、本発明のＡＤＣは、ＡｂＰのアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域を有する抗ｈＥＧＦＲ抗体を含む。
【０２７３】
一実施形態において、本発明は、リンカーを介してＢｃｌ−ｘＬ阻害剤にコンジュゲートされた抗体ＡｂＱを含む抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣを特徴とする。ＡｂＱ抗体は、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン及び配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域、並びに配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン及び配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む。さらなる実施形態において、本発明は、配列番号７０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号７１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する抗体を提供する。したがって、一実施形態において、本発明のＡＤＣは、ＡｂＱのＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ｈＥＧＦＲ抗体を含む。別の実施形態において、本発明のＡＤＣは、ＡｂＱのアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域を有する抗ｈＥＧＦＲ抗体を含む。
【０２７４】
以下に示される表２に記載された通り、本明細書において開示される抗体配列は、Ａｂ１  ＥＧＦＲエピトープへの改善された結合をもたらすＣＤＲドメインを表すアミノ酸共通配列を提供する。したがって、一実施形態において、本発明は、配列番号４０として記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号３９として記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン及び配列番号３８として記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域；並びに配列番号３７として記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号３６として記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン及び配列番号３５として記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域を含む抗ＥＧＦＲ抗体を特徴とする。さらなる実施形態において、本発明の抗ＥＧＦＲ抗体は、配列番号１２、１８、１９及び２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン；配列番号１１又は１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン；及び配列番号１０、１６、２０又は２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域；並びに配列番号８、２５、２８及び３１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン；配列番号７、２４、２７及び３０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン；及び配列番号６、２３、２６及び２９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む。
【０２７５】
【表２】
2019521114.tif 000059
【０２７６】
一実施形態において、本発明のＡＤＣは、５０、５２、５３、５６、５８、６０、６２、６４、６６及び６８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；並びに５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７及び６９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗ｈＥＧＦＲ抗体を含む。
【０２７７】
前述の抗ＥＧＦＲ抗体ＣＤＲ配列は、本発明に従い単離された、表２〜４に挙げられるＣＤＲ配列を含むポリペプチドを含む、ＥＧＦＲ結合タンパク質の新規ファミリーを確立する。
【０２７８】
上記表２は、Ａｂ１と比較したＡｂ１バリアント抗体ＡｂＡ、ＡｂＧ、ＡｂＫ、ＡｂＭ及びＡｂＰについての重鎖及び軽鎖ＣＤＲのアミノ酸配列のアライメントを提供する。
【０２７９】
以下の表３において記載された通り、Ａｂ１バリアント抗体ＡｂＡ、ＡｂＧ、ＡｂＫ、ＡｂＭ、ＡｂＰはそれぞれ、グリシンの代わりに、ＣＤＲ３の可変重鎖においてセリン残基を有する（表３において太字／下線で示される）。
【０２８０】
【表３】
2019521114.tif 000060
【０２８１】
抗体ＡｂＢ、ＡｂＣ、ＡｂＤ、ＡｂＥ、ＡｂＦ、ＡｂＨ、ＡｂＪ、ＡｂＬ、ＡｂＮ、ＡｂＯ及びＡｂＱに対するＡｂ１のＶＨ及びＶＬ  ＣＤＲ配列の比較が、表４に示される。以下の表４に記載されたＣＤＲ変更に加えて、ＡｂＧは、ＶＨのフレームワーク２領域内にアミノ酸残基変更を有する。
【０２８２】
一実施形態において、本発明は、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６及び７８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、並びに５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７及び７９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗ｈＥＧＦＲ抗体を含む。
【０２８３】
一実施形態において、本発明は、配列番号１０、１１及び１２；配列番号１６、１７及び１８；配列番号１０、１１及び１９；配列番号２０、１１及び１２；配列番号２１、３及び２２；配列番号１６、１７及び１９；配列番号２、３及び４；配列番号１０、３及び１２；配列番号８０、１１及び１８；配列番号８０、３及び１８；配列番号２０、３及び１２；配列番号８０、１１及び１２；並びに配列番号８１、１１及び２２からなる群から選択されるＨＣ  ＣＤＲセット（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）；並びに配列番号６、７及び８；配列番号２３、２４及び２５；配列番号２６、２７及び２８；配列番号２９、３０及び３１；配列番号６、７及び８４；配列番号８２、８３及び３１；並びに配列番号８２、２７及び８５からなる群から選択されるＬＣ軽鎖ＣＤＲセット（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む抗ｈＥＧＦＲ抗体を含み、抗体又はこの抗原結合部分が、配列番号２、３及び４のＨＣ  ＣＤＲセットと配列番号６、７及び８のＬＣ  ＣＤＲセットを共に含まない。一実施形態において、本発明は、配列番号４０に記載のアミノ酸配列を含むＬＣ  ＣＤＲ３ドメイン、配列番号３９に記載のアミノ酸配列を含むＬＣ  ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号３８に記載のアミノ酸配列を含むＬＣ  ＣＤＲ１ドメイン；並びに配列番号３７に記載のアミノ酸配列を含むＨＣ  ＣＤＲ３ドメイン、配列番号３６に記載のアミノ酸配列を含むＨＣ  ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号３５に記載のアミノ酸配列を含むＨＣ  ＣＤＲ１ドメインを含む抗ｈＥＧＦＲ抗体を含む。
【０２８４】
【表４】
2019521114.tif 000061
2019521114.tif 000062
【０２８５】
ＡｂＢの全長重鎖及び軽鎖配列を以下に示す。
【０２８６】
ＡｂＢ
重鎖
【０２８７】
【化４７】
2019521114.tif 000063
【０２８８】
一実施形態において、上記のＡｂＢ重鎖配列は、２つの太字のロイシンで示した位置に２つのアラニン置換を含有する（配列番号９１も参照）。
【０２８９】
ＡｂＢ軽鎖
【０２９０】
【化４８】
2019521114.tif 000064
【０２９１】
ＡｂＧの全長重鎖及び軽鎖配列を以下に示す。
【０２９２】
ＡｂＧ
重鎖
【０２９３】
【化４９】
2019521114.tif 000065
【０２９４】
一実施形態において、上記のＡｂＧ重鎖配列は、２つの太字のロイシンで示した位置に２つのアラニン置換を含有する（配列番号９４も参照）。
【０２９５】
軽鎖
【０２９６】
【化５０】
2019521114.tif 000066
【０２９７】
ＡｂＫの全長重鎖及び軽鎖配列を以下に示す。
【０２９８】
ＡｂＫ
重鎖
【０２９９】
【化５１】
2019521114.tif 000067
【０３００】
一実施形態において、上記のＡｂＫ重鎖配列は、２つの太字のロイシンで示した位置に２つのアラニン置換を含有する（配列番号９７も参照）。
【０３０１】
軽鎖
【０３０２】
【化５２】
2019521114.tif 000068
【０３０３】
ｈＥＧＦＲに関して好ましいＥＧＦＲ結合及び／又は中和活性を有するＣＤＲを生成し、選択するために、本明細書において具体的に記載されるものを含むが、これらに限定されない、抗体又はその抗原結合部分を生成する、並びにこれらの抗体又はその抗原結合部分のＥＧＦＲ結合及び／又は中和特徴を評価する当技術分野において公知の標準的な方法が使用されてもよい。
【０３０４】
ある特定の実施形態において、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ又はＩｇＤ定常領域のような、重鎖定常領域を含む。ある特定の実施形態において、抗ＥＧＦＲ抗体は、ヒトＩｇＧ定常ドメイン、ヒトＩｇＭ定常ドメイン、ヒトＩｇＥ定常ドメイン及びヒトＩｇＡ定常ドメインからなる群から選択される重鎖免疫グロブリン定常ドメインを含む。さらなる実施形態において、抗体又はその抗原結合部分は、ＩｇＧ１重鎖定常領域、ＩｇＧ２重鎖定常領域、ＩｇＧ３定常領域又はＩｇＧ４重鎖定常領域を有する。好ましくは、重鎖定常領域は、ＩｇＧ１重鎖定常領域又はＩｇＧ４重鎖定常領域である。さらに、抗体は、軽鎖定常領域、κ軽鎖定常領域又はλ軽鎖定常領域のいずれかを含むことができる。一実施形態において、抗体は、κ軽鎖定常領域を含む。
【０３０５】
ある特定の実施形態において、抗ＥＧＦＲ抗体は、多特異性抗体、例えば、二重特異性抗体である。
【０３０６】
ある特定の実施形態において、抗ＥＧＦＲ抗体は、配列番号４１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域、及び／又は配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む。
【０３０７】
抗体エフェクター機能を変化させるためのＦｃ部分におけるアミノ酸残基の置き換えが、記載されている（参照により本明細書に組み込むＷｉｎｔｅｒら、米国特許第５，６４８，２６０号及び第５，６２４，８２１号）。抗体のＦｃ部分は、いくつかの重要なエフェクター機能、例えば抗体及び抗原−抗体複合体のサイトカイン誘導、ＡＤＣＣ、食作用、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）及び半減期／クリアランス速度を媒介する。一部の場合では、これらのエフェクター機能は、治療用抗体にとって望ましいが、他の場合では、治療目的に依存して、不必要であり得る又は有害である場合すらある。ある特定のヒトＩｇＧアイソタイプ、特に、ＩｇＧ１及びＩｇＧ３は、それぞれ、ＦｃγＲ及び補体Ｃ１ｑへの結合を介してＡＤＣＣ及びＣＤＣを媒介する。新生児のＦｃ受容体（ＦｃＲｎ）は、抗体の循環半減期を決定する重要な構成要素である。さらに別の実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸残基が、抗体のエフェクター機能が変化するように、抗体の定常領域、例えば抗体のＦｃ領域において置き換えられる。
【０３０８】
本発明の一実施形態は、抗体が、誘導体化される又は以下で記載されたＢｃｌ−ｘＬ阻害剤に加えて１つ以上の機能分子（例えば、別のペプチド又はタンパク質）に連結される、標識された抗ＥＧＦＲ抗体を含む。例えば標識された抗体は、別の抗体（例えば二重特異性抗体若しくはダイアボディ）、検出可能な薬剤、医薬剤、別の分子との抗体若しくは抗体部分の結合を媒介することができるタンパク質若しくはペプチド（ストレプトアビジンコア領域若しくはポリヒスチジンタグ）及び／又は有糸分裂阻害剤、抗腫瘍抗生物質、免疫調節剤、遺伝子治療用のベクター、アルキル化剤、抗血管新生剤、代謝拮抗物質、ホウ素含有剤、化学保護剤、ホルモン、抗体ホルモン剤、コルチコステロイド、光活性治療剤、オリゴヌクレオチド、放射性核種剤、トポイソメラーゼ阻害剤、キナーゼ阻害剤、放射線増感剤及びこれらの組合せからなる群から選択される細胞傷害性若しくは治療用薬剤のような１つ以上の他の分子実体に本発明の抗体又は抗体部分を（化学カップリング、遺伝子融合、非共有結合などにより）機能的に連結させることにより、誘導することができる。
【０３０９】
抗体若しくはその抗体部分を誘導体化し得る有用な検出可能な薬剤は、蛍光化合物を含む。例示的な蛍光の検出可能な薬剤は、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、５−ジメチルアミン−１−ナフタレンスルホニルクロライド、フィコエリトリン等を含む。抗体はまた、アルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、グルコース酸化酵素などのような検出可能な酵素で誘導体化されてもよい。抗体が、検出可能な酵素で誘導体化されるとき、これは、酵素が検出可能な反応産物を産生するのに使用するさらなる試薬を添加することにより検出される。例えば検出可能な薬剤である西洋ワサビペルオキシダーゼが存在するとき、過酸化水素及びジアミノベンジジンの添加が、検出可能である着色した反応産物をもたらす。抗体はまた、ビオチンで誘導体化され、アビジン又はストレプトアビジン結合の間接的な測定を介して検出されてもよい。
【０３１０】
一実施形態において、本発明の抗体は、イメージング剤にコンジュゲートされている。本明細書に記載される組成物及び方法において使用され得るイメージング剤の例は、放射標識（例えばインジウム）、酵素、蛍光標識、発光標識、生物発光標識、磁気標識及びビオチンを含むが、これらに限定されない。
【０３１１】
一実施形態において、抗体は、これに限定されないが、インジウム（１１１Ｉｎ）のような放射標識に連結される。１１１インジウムは、ＥＧＦＲ陽性腫瘍の同定において使用するための本明細書に記載される抗体及びＡＤＣを標識するために使用されてもよい。ある特定の実施形態において、本明細書に記載される抗ＥＧＦＲ抗体（又はＡＤＣ）は、二官能性シクロヘキシルジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）キレート剤である二官能性キレート剤を介して１１１Ｉで標識される（米国特許第５，１２４，４７１号；第５，４３４，２８７号；及び第５，２８６，８５０号を参照、これらのそれぞれを、参照により本明細書に組み込む）。
【０３１２】
本発明の別の実施形態は、抗ＥＧＦＲ抗体が、１個以上の炭水化物残基を含む、グリコシル化結合タンパク質を提供する。新生のインビボタンパク質生成は、翻訳後修飾として知られているさらなるプロセシングを受けてもよい。特に、糖（グリコシル）残基が酵素的に加えられてもよく、これはグリコシル化として知られているプロセスである。共有結合されたオリゴ糖側鎖を有する、得られたタンパク質は、グリコシル化タンパク質又は糖タンパク質として知られている。抗体は、Ｆｃドメイン及び可変ドメインにおいて１個以上の炭水化物残基を有する糖タンパク質である。Ｆｃドメイン中の炭水化物残基は、抗体の抗原結合又は半減期に対する最小の効果と共に、Ｆｃドメインのエフェクター機能に対する重要な効果を有する（Ｒ．Ｊｅｆｆｅｒｉｓ、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．、２１（２００５年）、１１〜１６頁）。対照的に、可変ドメインのグリコシル化は、抗体の抗原結合活性に対する効果を有し得る。可変ドメインにおけるグリコシル化は、おそらく立体障害に起因して抗体結合親和性に対して負の効果を有し得る（Ｃｏ，Ｍ．Ｓ．ら、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９３年）３０：１３６１〜１３６７頁）、又は抗原に対して増大した親和性をもたらし得る（Ｗａｌｌｉｃｋ，Ｓ．Ｃ．ら、Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．（１９８８年）１６８：１０９９〜１１０９頁；Ｗｒｉｇｈｔ，Ａ．ら、ＥＭＢＯ  Ｊ．（１９９１年）１０：２７１７〜２７２３頁）。
【０３１３】
本発明の一態様は、結合タンパク質のＯ−又はＮ−結合型グリコシル化部位が変異されているグリコシル化部位変異体を生成することを対象とする。当業者は、標準的な周知のテクノロジーを使用してかかる変異体を生成することができる。生物学的活性を保持するが、増大又は低下した結合活性を有するグリコシル化部位変異体は、本発明の別の目的である。
【０３１４】
なお別の実施形態において、抗ＥＧＦＲ抗体のグリコシル化が修飾される。例えばアグリコシル化抗体を作製することができる（すなわち、抗体がグリコシル化を欠く。）。グリコシル化は、例えば抗原に対する抗体の親和性を増大させるために変更され得る。かかる炭水化物修飾は、例えば抗体配列内のグリコシル化の１つ以上の部位を変更することにより達成することができる。例えば１つ以上の可変領域グリコシル化部位の除去をもたらし、これにより、この部位でのグリコシル化を除去する、１つ以上のアミノ酸置換がなされ得る。かかるアグリコシル化は、抗原に対する抗体の親和性を増大し得る。かかるアプローチは、ＰＣＴ公開ＷＯ２００３０１６４６６Ａ２並びに米国特許第５，７１４，３５０号及び第６，３５０，８６１号においてさらに詳細に記載され、これらのそれぞれを、その全体として参照により本明細書に組み込む。
【０３１５】
さらに又はあるいは、低減した量のフコシル残基を有するハイポフコシル化抗体又は増大した二分するＧｌｃＮＡｃ構造を有する抗体のような、変更された種類のグリコシル化を有する修飾された抗ＥＧＦＲ抗体を作製することができる。かかる変更されたグリコシル化パターンは、抗体のＡＤＣＣ能を増大することが示されている。かかる炭水化物修飾は、例えば変更されたグリコシル化機構を有する宿主細胞において抗体を発現させることにより達成することができる。変更されたグリコシル化機構を有する細胞は、当技術分野において記載されており、本発明の組換え抗体を発現させ、これにより、変更されたグリコシル化を有する抗体を産生するための宿主細胞として使用することができる。例えばＳｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ら（２００２年）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７７：２６７３３〜２６７４０頁；Ｕｍａｎａら（１９９９年）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．、１７：１７６〜１頁、並びに欧州特許第ＥＰ１，１７６，１９５号；ＰＣＴ公開ＷＯ０３／０３５８３５；ＷＯ９９／５４３４２８０を参照し、これらのそれぞれを、その全体として参照により本明細書に組み込む。
【０３１６】
タンパク質グリコシル化は、目的のタンパク質のアミノ酸配列、及びタンパク質が発現される宿主細胞に依存する。異なる生物は、異なるグリコシル化酵素（例えば糖転移酵素及びグリコシダーゼ）を産生し、利用可能な異なる基質（ヌクレオチド糖）を有し得る。かかる因子に起因して、タンパク質グリコシル化パターン及びグリコシル残基の組成は、特定のタンパク質が発現される宿主系に依存して異なってもよい。本発明において有用なグリコシル残基は、グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、ｎ−アセチルグルコサミン及びシアル酸を含み得るが、これらに限定されない。好ましくは、グリコシル化された結合タンパク質は、グリコシル化パターンがヒトであるように、グリコシル残基を含む。
【０３１７】
異なるタンパク質グリコシル化は、異なるタンパク質特徴をもたらし得る。例えば、酵母のような微生物宿主において産生され、酵母内在経路を利用してグリコシル化された治療用タンパク質の有効性は、ＣＨＯ細胞株のような哺乳動物細胞において発現された同じタンパク質のものと比較して低減されていてもよい。かかる糖タンパク質はまた、ヒトにおいて免疫原性であり、投与後の低減したインビボ半減期を示してもよい。ヒト及び他の動物における特定の受容体は、特定のグリコシル残基を認識し、血流からのタンパク質の迅速なクリアランスを促進し得る。他の副作用は、タンパク質フォールディング、溶解度、タンパク質分解酵素に対する感受性、移動、輸送、区画化、分泌、他のタンパク質若しくは因子による認識、抗原性又はアレルゲン性における変化を含み得る。したがって、実施者は、グリコシル化の特定の組成及びパターンを有する治療用タンパク質、例えばヒト細胞において又は意図される対象動物の種特異的な細胞において産生されるものと同一、又は少なくとも類似のグリコシル化組成及びパターンを好んでもよい。
【０３１８】
宿主細胞のものと異なるグリコシル化タンパク質の発現は、宿主細胞を遺伝子的に修飾して、異種性グリコシル化酵素を発現させることにより、達成されてもよい。組換え技術を使用して、実施者は、ヒトタンパク質グリコシル化を示す抗体又はその抗原結合部分を生成してもよい。例えば、これらの酵母株において産生されるグリコシル化タンパク質（糖タンパク質）が、動物細胞、特にヒト細胞のものと同一のタンパク質グリコシル化を示すように、酵母株が、天然に存在しないグリコシル化酵素を発現するよう遺伝子的に修飾されている（米国特許公開第２００４００１８５９０号及び第２００２０１３７１３４号並びにＰＣＴ公開ＷＯ２００５１００５８４Ａ２）。
【０３１９】
抗体は、いくつかの技術のいずれかにより産生され得る。例えば重鎖及び軽鎖をコードする発現ベクターが、標準的な技術により宿主細胞にトランスフェクトされる、宿主細胞からの発現。用語「トランスフェクション」の様々な形態は、原核又は真核宿主細胞への外来ＤＮＡの導入のため一般に使用される多種多様な技術、例えばエレクトロポレーション、カルシウム−リン酸塩沈殿、ＤＥＡＥ−デキストラントランスフェクションなどを包含することが意図される。原核又は真核宿主細胞のいずれかにおいて抗体を発現させることが可能であるが、真核細胞における抗体の発現が好ましく、哺乳動物宿主細胞における抗体の発現が最も好ましく、これは、かかる真核細胞（特に哺乳動物細胞）が、原核細胞より、正しくフォールディングされ、免疫学的に活性な抗体を組み立て、分泌する可能性が高いからである。
【０３２０】
本発明の組換え抗体の発現に好ましい哺乳動物宿主細胞は、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細胞）（例えばＲ．Ｊ．Ｋａｕｆｍａｎ及びＰ．Ａ．Ｓｈａｒｐ（１９８２年）Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１５９：６０１〜６２１頁において記載される、ＤＨＦＲ選択可能なマーカーと共に使用される、Ｕｒｌａｕｂ及びＣｈａｓｉｎ（１９８０年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、ＵＳＡ、７７：４２１６〜４２２０頁において記載されるｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞を含む）、ＮＳ０ミエローマ細胞、ＣＯＳ細胞及びＳＰ２細胞を含む。抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターが、哺乳動物宿主細胞に導入されるとき、抗体は、宿主細胞において抗体の発現を可能にするのに十分な期間宿主細胞を培養し、又はより好ましくは、宿主細胞が成長する培養培地に抗体を分泌させることにより、産生される。抗体は、標準的なタンパク質精製方法を使用して培養培地から回収することができる。
【０３２１】
宿主細胞をまた、Ｆａｂ断片又はｓｃＦｖ分子のような機能的抗体断片を産生するために使用することができる。上記の手順についてのバリエーションが本発明の範囲内であることは、理解される。例えば、宿主細胞に本発明の抗体の軽鎖及び／又は重鎖のいずれかの機能的断片をコードするＤＮＡをトランスフェクトすることが望ましくてもよい。組換えＤＮＡテクノロジーはまた、目的の抗原への結合に必要ではない軽鎖及び重鎖のいずれか又は両方をコードするＤＮＡの一部又は全てを取り除くために使用されてもよい。かかる切断されたＤＮＡ分子から発現された分子もまた、本発明の抗体によって包含される。加えて、標準的な化学架橋方法により本発明の抗体を第２の抗体に架橋することにより、１つの重鎖及び１つの軽鎖が本発明の抗体であり、他の重鎖及び軽鎖が目的の抗原以外の抗原に特異的である、二機能性抗体が産生されてもよい。
【０３２２】
抗体の組換え発現に好ましいシステムにおいて、抗体重鎖と抗体軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターが、リン酸カルシウムにより媒介されるトランスフェクションにより、ｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞に導入される。組換え発現ベクター内で、抗体重鎖及び軽鎖遺伝子はそれぞれ、ＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節エレメントに作動可能に連結して、高レベルの遺伝子転写を駆動する。組換え発現ベクターはまた、ＤＨＦＲ遺伝子を有し、ＤＨＦＲ遺伝子が、メトトレキサートセレクション／増幅を使用して、ベクターでトランスフェクトされたＣＨＯ細胞のセレクションを可能にする。選択された形質転換体宿主細胞を培養して、抗体重鎖及び軽鎖の発現を可能にし、インタクトな抗体が、培養培地から回収される。標準的な分子生物学技術が、組換え発現ベクターを調製するために、宿主細胞にトランスフェクトするために、形質転換体について選択するために、宿主細胞を培養するために及び培養培地から抗体を回収するために使用される。なおさらに、本発明は、組換え抗体が合成されるまで、適当な培養培地において宿主細胞を培養することにより、本発明の組換え抗体を合成する方法を提供する。本発明の組換え抗体は、本明細書において開示されるアミノ酸配列に対応する核酸分子を使用して、産生されてもよい。一実施形態において、配列番号８６及び／又は８７に記載の核酸分子が、組換え抗体の産生において使用される。方法は、培養培地から組換え抗体を単離することをさらに含み得る。
【０３２３】
本明細書において列挙される抗体及び抗体の配列はまた、米国特許第９，４９３，５６８号（ＡｂｂＶｉｅ  Ｉｎｃ．）においても記載され、米国特許第９，４９３，５６８号を参照により本明細書に組み込む。
【０３２４】
３．抗ＥＧＦＲ抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）：Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤及びリンカー
無調節なアポトーシス経路はまた、がんの病理に関連している。下方制御されたアポトーシス（及びより具体的には、タンパク質のＢｃｌ−２ファミリー）が、がん性悪性腫瘍の発症に関与するという推測により、このなお定義が難しい疾患を標的にする新規の方法が明らかになった。研究により、例えば抗アポトーシスタンパク質、Ｂｃｌ２及びＢｃｌ−ｘＬが、多くのがん細胞型において過剰発現されることが示された。Ｚｈａｎｇ、２００２年、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ／Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  １：１０１；Ｋｉｒｋｉｎら、２００４年、Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ、１６４４：２２９〜２４９頁；及びＡｍｕｎｄｓｏｎら、２０００年、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、６０：６１０１〜６１１０頁を参照。この脱調節の効果は、変更をうけていなければ正常状態においてアポトーシスを受けるであろう、変更された細胞の生存である。調節されていない増殖と関連するこれらの欠損の繰り返しが、がん発生の開始点であると考えられている。
【０３２５】
本開示の態様は、リンカーを介して薬物にコンジュゲートされた抗ｈＥＧＦＲ抗体を含む抗ｈＥＧＦＲＡＤＣであって、薬物がＢｃｌ−ｘＬ阻害剤である、抗ｈＥＧＦＲＡＤＣに関する。特定の実施形態において、ＡＤＣは、以下の構造式（Ｉ）に従う化合物又はその薬学的に許容される塩であり、式中、Ａｂは、抗ｈＥＧＦＲ抗体を表し、Ｄは、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害薬（すなわち、以下に示される式ＩＩａの化合物）を表し、Ｌは、リンカーを表し、ＬＫは、リンカー（Ｌ）を抗ｈＥＧＦＲ抗体（Ａｂ）に連結している共有結合を表し、ｍは、１〜２０の範囲の整数である抗体に連結されたＤ−Ｌ−ＬＫ単位の数を表す。ある特定の実施形態において、ｍは、２、３又は４である。一部の実施形態において、ｍは、１〜８、１〜７、１〜６、２〜６、１〜５、１〜４又は２〜４の範囲である。
【０３２６】
一部の実施形態において、ＡＤＣは、以下の式（式Ｉ）：
【０３２７】
【化５３】
2019521114.tif 000069
（式中、Ａｂは、抗体、例えば、抗ＥＧＦＲ抗体ＡｂＡ、ＡｂＢ、ＡｂＧ又はＡｂＫであり、（Ｄ−Ｌ−ＬＫ）は、薬物−リンカー−共有結合である。）を有する。薬物−リンカー部分は、リンカーであるＬ−、及び例えば、標的細胞、例えば、ＥＧＦＲを発現する細胞に対する、細胞増殖抑制性、細胞傷害性、又はそうでなければ、治療活性を有する薬物部分である−Ｄから作製され；ｍは、１〜２０の整数である。一部の実施形態において、ｍは、１〜８、１〜７、１〜６、２〜６、１〜５、１〜４、１〜３、１〜２、１．５〜８、１．５〜７、１．５〜６、１．５〜５、１．５〜４、２〜６、１〜５、１〜４、１〜３、１〜２又は２〜４の範囲である。ＡＤＣのＤＡＲは、式Ｉにおいて言及される「ｍ」と等しい。一実施形態において、ＡＤＣは、Ａｂ−（ＬＫ−Ｌ−Ｄ）ｍ（式中、Ａｂは、抗ＥＧＦＲ抗体、例えば、ＡｂＡ、ＡｂＢ、ＡｂＧ又はＡｂＫであり、Ｌはリンカーであり、Ｄは、薬物、例えば、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤であり、ＬＫは、共有結合リンカー、例えば、−Ｓ−であり、ｍは、１〜８（例えば、２〜４のＤＡＲ、１．５〜４のＤＡＲ、１．５〜８のＤＡＲ）である。）の式を有する。本発明のＡＤＣ並びに代替のＡＤＣ構造において使用され得る薬物（式ＩのＤ）及びリンカー（式ＩのＬ）に関するさらなる詳細が、以下で記載される。
【０３２８】
本明細書に記載されるＡＤＣを含み得る様々なＢｃｌ−ｘＬ阻害剤（Ｄ）、リンカー（Ｌ）及び抗ＥＧＦＲ抗体（Ａｂ）の特定の実施形態、並びにＡＤＣに連結されたＢｃｌ−ｘＬ阻害剤の数が、以下でより詳細に記載される。
【０３２９】
本発明の抗ＥＧＦＲＡＤＣにおいて使用され得るＢｃｌ−ｘＬ阻害剤の例が、以下で提供され、抗体及び１つ以上のＢｃｌ−ｘＬ阻害剤をコンジュゲートするために使用され得るリンカーである。用語「連結された」及び「コンジュゲートされた」も本明細書において互換的に使用され、抗体及び部分が共有結合されていることを示す。
【０３３０】
本明細書に記載されたＡＤＣにおいて使用され得るＢｃｌ−ｘＬ阻害剤及びリンカー、並びにこれを作製する方法は、ＷＯ２０１６／０９４５０５（ＡｂｂＶｉｅ  Ｉｎｃ．）において記載され、ＷＯ２０１６／０９４５０５を参照により本明細書に組み込む。
【０３３１】
３．１．Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤
ＡＤＣは、１つ以上のＢｃｌ−ｘＬ阻害剤を含み、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤、同一であってもよい又は異なっていてもよいが、典型的には同一である。一部の実施形態において、ＡＤＣを含むＢｃｌ−ｘＬ阻害剤、及びある特定の実施形態において、上記の構造式（Ｉ）のＤは、構造式（ＩＩａ）に従う化合物である。本発明において、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤が、ＡＤＣの一部として含まれるとき、以下の構造式（ＩＩａ）において示される＃は、リンカーに対する結合点を表し、＃は、これらが一価基形態又はその薬学的に許容される塩で表されることを示す。
【０３３２】
【化５４】
2019521114.tif 000070
（式中：
Ａｒは、
【０３３３】
【化５５】
2019521114.tif 000071
から選択され、ハロ、シアノ、メチル及びハロメチルから独立して選択される１つ以上の置換基で置換されていてもよく、
Ｚ１は、Ｎ、ＣＨ及びＣ−ＣＮから選択され、
Ｚ２は、ＮＨ、ＣＨ２、Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）及びＳ（Ｏ）２から選択され、
Ｒ１は、メチル、クロロ及びシアノから選択され、
Ｒ２は、水素、メチル、クロロ及びシアノから選択され、
Ｒ４は、水素、Ｃ１〜４アルカニル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル又はＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、Ｒ４Ｃ１〜４アルカニル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ１〜４ハロアルキル及びＣ１〜４ヒドロキシアルキルは、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３及びＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣＨ３から独立して選択される１つ以上の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ１０ａ、Ｒ１０ｂ及びＲ１０ｃはそれぞれ、互いに独立して、水素、ハロ、Ｃ１〜６アルカニル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル及びＣ１〜６ハロアルキルから選択され、
Ｒ１１ａ及びＲ１１ｂはそれぞれ、互いに独立して、水素、メチル、エチル、ハロメチル、ヒドロキシル、メトキシ、ハロ、ＣＮ及びＳＣＨ３から選択され、
ｎは、０、１、２又は３であり、
＃は、リンカーに対する結合点を表す。）。
【０３３４】
ある特定の実施形態において、式（ＩＩａ）のＡｒは、置換されていない。
【０３３５】
ある特定の実施形態において、式（ＩＩａ）のＡｒは、
【０３３６】
【化５６】
2019521114.tif 000072
から選択され、ハロ、シアノ、メチル、及びハロメチルから独立して選択される１つ以上の置換基で置換されていてもよい。特定の実施形態において、Ａｒは、
【０３３７】
【化５７】
2019521114.tif 000073
である。
【０３３８】
ある特定の実施形態において、式（ＩＩａ）のＺ１は、Ｎである。
【０３３９】
ある特定の実施形態において、式（ＩＩａ）のＺ１は、ＣＨである。
【０３４０】
ある特定の実施形態において、式（ＩＩａ）のＺ２は、ＣＨ２又はＯである。
【０３４１】
ある特定の実施形態において、式（ＩＩａ）のＺ２は、Ｏである。
【０３４２】
ある特定の実施形態において、式（ＩＩａ）のＲ１は、メチル及びクロロから選択される。
【０３４３】
ある特定の実施形態において、式（ＩＩａ）のＲ２は、水素及びメチルから選択される。ある特定の実施形態において、Ｒ２は水素である。
【０３４４】
ある特定の実施形態において、式（ＩＩａ）中のＲ１はメチルであり、Ｒ２は水素であり、Ｚ１はＮである。
【０３４５】
ある特定の実施形態において、Ｒ４は、水素又はＣ１〜４アルカニルであり、Ｃ１〜４アルカニルは、ＯＣＨ３で置換されていてもよい。
【０３４６】
ある特定の実施形態において、式（ＩＩａ）中のＲ１０ａはハロであり、Ｒ１０ｂ及びＲ１０ｃはそれぞれ水素である。特定の実施形態において、Ｒ１０ａは、フルオロである。
【０３４７】
ある特定の実施形態において、式（ＩＩａ）中のＲ１０ｂはハロであり、Ｒ１０ａ及びＲ１０ｃはそれぞれ、水素である。特定の実施形態において、Ｒ１０ｂはフルオロである。
【０３４８】
ある特定の実施形態において、式（ＩＩａ）中のＲ１０ｃはハロであり、Ｒ１０ａ及びＲ１０ｂはそれぞれ水素である。特定の実施形態において、Ｒ１０ｃはフルオロである。
【０３４９】
ある特定の実施形態において、式（ＩＩａ）中のＲ１０ａＲ１０ｂ及びＲ１０ｃはそれぞれ、水素である。
【０３５０】
ある特定の実施形態において、式（ＩＩａ）中のＲ１１ａ及びＲ１１ｂは、同一である。特定実施形態において、Ｒ１１ａ及びＲ１１ｂは、それぞれメチルである。
【０３５１】
ある特定の実施形態において、Ｚ１はＮであり、Ｒ１はメチルであり、Ｒ２は水素であり、Ｒ４は、水素又はＣ１〜４アルカニルであり、Ｃ１〜４アルカニルは、ＯＣＨ３で置換されていてもよく、Ｒ１０ａ、Ｒ１０ｂ及びＲ１０ｃの１つは、水素又はハロであり、他は水素であり、Ｒ１１ａ及びＲ１１ｂはそれぞれメチルであり、Ａｒは、
【０３５２】
【化５８】
2019521114.tif 000074
である。
【０３５３】
ある特定の実施形態において、Ｚ２は、酸素であり、Ｒ４は水素又はＯＣＨ３で置換されていてもよいＣ１〜４アルカニルであり、ｎは、０、１又は２である。
【０３５４】
ある特定の実施形態において、式（ＩＩａ）のｎは、０、１又は２である。特定の実施形態において、式（ＩＩａ）のｎは、０又は１である。
【０３５５】
ある特定の実施形態において、基
【０３５６】
【化５９】
2019521114.tif 000075
は、
【０３５７】
【化６０】
2019521114.tif 000076
である。
【０３５８】
ある特定の実施形態において、基
【０３５９】
【化６１】
2019521114.tif 000077
は、
【０３６０】
【化６２】
2019521114.tif 000078
である。
【０３６１】
コンジュゲートされていない形態の本明細書に記載された方法において使用され得る及び／若しくは本明細書に記載されたＡＤＣに含まれる例示的なＢｃｌ−ｘＬ阻害剤並びに／又はそれらの塩は、それぞれ、実施例１．１〜１．８に記載された化合物Ｗ１．０１〜Ｗ１．０８を含む。
【０３６２】
特に、本出願のＢｃｌ−ｘＬ阻害剤が、コンジュゲートされた形態であるとき、構造式（ＩＩａ）の＃の位置に対応する水素は存在せず、一価基を形成する。例えば、化合物Ｗ１．０１（実施例１．１）は、６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−［１−（｛３，５−ジメチル−７−［２−（メチルアミノ）エトキシ］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］ピリジン−２−カルボン酸である。
【０３６３】
これがコンジュゲートされていない形態である場合、これは、以下の構造：
【０３６４】
【化６３】
2019521114.tif 000079
を有する。
【０３６５】
同じ化合物が、構造式（ＩＩａ）又は（ＩＩｂ）において示されるＡＤＣに含まれるとき、＃の位置に対応する水素は存在せず、一価基を形成する。
【０３６６】
【化６４】
2019521114.tif 000080
【０３６７】
ある特定の実施形態において、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤は、構造式（ＩＩａ）に従い、＃は、以下の化合物を形成するように水素で置き換えられる：
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−［１−（｛３，５−ジメチル−７−［２−（メチルアミノ）エトキシ］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−（１−｛［（１ｒ，３Ｒ，５Ｓ，７ｓ）−３，５−ジメチル−７−（２−｛２−［２−（メチルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−カルボン酸；
３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
３−［１−（｛３−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３−｛２−［（２−メトキシエチル）アミノ］エトキシ｝−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸；
３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−５−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−６−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−７−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３，５−ジメチル−７−｛２−［（２−スルホエチル）アミノ］エトキシ｝トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸；
及びその薬学的に許容される塩。
【０３６８】
ＡＤＣに含まれないとき、ＡＤＣを含むＢｃｌ−ｘＬ阻害剤は、アポトーシスを誘導する抗アポトーシスＢｃｌ−ｘＬタンパク質に結合し、阻害する。ＡＤＣ（すなわち、構造式（ＩＩａ）に従う化合物又は塩で、式中、＃は、水素原子を表す。）に含まれないとき、構造式（ＩＩａ）に従う特定のＢｃｌ−ｘＬ阻害剤の、結合し、Ｂｃｌ−ｘＬ活性を阻害する能力は、例えば、Ｔａｏら、２０１４年、ＡＣＳＭｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、５：１０８８〜１０９３頁に記載されたＴＲ−ＦＲＥＴ  Ｂｃｌ−ｘＬ結合アッセイを含む、標準的な結合及び活性アッセイにおいて確かめられてもよい。Ｂｃｌ−ｘＬ結合を確かめるために使用することができる特定のＴＲ−ＦＲＥＴ  Ｂｃｌ−ｘＬ結合アッセイが、以下の実施例４において提供される。典型的には、本明細書に記載されたＡＤＣにおいて有用なＢｃｌ−ｘＬ阻害剤は、実施例４の結合アッセイにおける約１０ｎＭ未満のＫｉを示すが、有意により小さいＫｉ、例えば、約１未満、０．１未満、又は０．０１ｎＭ未満でさえあるＫｉを示してもよい。
【０３６９】
ＢｃｌｘＬ阻害活性はまた、Ｔａｏら、２０１４年、ＡＣＳ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、５：１０８８〜１０９３頁において記載されたＦＬ５．１２細胞及びＭｏｌｔ−４細胞傷害性アッセイのような、標準的な細胞ベースの細胞傷害性アッセイにおいて確かめられてもよい。特定のＢｃｌ−ｘＬ阻害剤のＢｃｌ−ｘＬ阻害活性を確かめるために使用され得る特定のＭｏｌｔ−４細胞傷害性アッセイが、以下の実施例５において提供される。典型的には、本明細書に記載されたＡＤＣにおいて有用なＢｃｌ−ｘＬ阻害剤は、実施例５のＭｏｌｔ−４細胞傷害性アッセイにおいて約５００ｎＭ未満のＥＣ５０を示すが、有意により低いＥＣ５０、例えば、約２５０未満、１００未満、５０未満、２０未満、１０未満又は５ｎＭ未満でさえあるＥＣ５０を示してもよい。
【０３７０】
構造式（ＩＩａ）により定義されるＢｃｌ−ｘＬ阻害剤は細胞透過性であり、ＡＤＣに含まれないとき細胞を透過する、と予想されるが、細胞膜を自由に移動しない化合物のＢｃｌ−ｘＬ阻害活性が、透過した細胞を用いた細胞アッセイにおいて確かめられてもよい。背景技術のセクションにおいて考察された通り、ミトコンドリア外膜透過（ＭＯＭＰ）のプロセスが、Ｂｃｌ−２ファミリータンパク質により調節される。具体的には、ＭＯＭＰは、活性化の際、外側のミトコンドリア膜上でオリゴマー形成し、孔を形成し、これが、チトクロムｃ（ｃｙｔ  ｃ）の放出を導く、アポトーシス促進性Ｂｃｌ−２ファミリータンパク質Ｂａｘ及びＢａｋにより促進される。ｃｙｔ  ｃの放出は、アポトソームの形成を作動させ、アポトソームは次に、カスパーゼ活性化及び細胞にプログラム細胞死を受けさせる他の事象をもたらす（Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎら、２００５年、Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  ａｎｄ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ、１２：４５３〜４６２頁を参照）。Ｂａｘ及びＢａｋのオリゴマー形成作用は、Ｂｃｌ−２及びＢｃｌ−ｘＬを含む、抗アポトーシスＢｃｌ−２ファミリーのメンバーにより拮抗される。生存についてＢｃｌ−ｘＬに依存する細胞におけるＢｃｌ−ｘＬ阻害剤は、Ｂａｘ及び／又はＢａｋの活性化、ＭＯＭＰ、ｃｙｔ  ｃの放出、並びにアポトーシスを導く下流の事象を引き起こすことができる。ｃｙｔ  ｃ放出のプロセスは、細胞においてチトクロムｃのミトコンドリアと細胞質画分の両方のウエスタンブロットを介して評価することができ、細胞におけるアポトーシスの代理測定として使用することができる。
【０３７１】
Ｂｃｌ−ｘＬ阻害活性及び結果として低い細胞透過性を有する分子についてのｃｙｔ  ｃの放出を検出する手段として、細胞は、細胞膜における選択的孔形成を引き起こすが、ミトコンドリアの膜では引き起こさない薬剤で処理され得る。具体的には、コレステロール／リン脂質比は、ミトコンドリア膜より形質膜においてずっと高い。結果として、低い濃度のコレステロール指向性界面活性剤ジギトニンとの短時間のインキュベーションは、ミトコンドリア膜に有意に影響することなく、形質膜を選択的に透過する。この薬剤は、コレステロールと不溶性の複合体を形成し、これが、その正常なリン脂質結合部位からのコレステロールの分離を導く。この作用は、次に、脂質二重層において幅約４０〜５０Åの孔の形成を導く。形質膜を透過処理すると、ジギトニンにより形成された孔を通過することができる細胞質成分は、アポトーシス細胞においてミトコンドリアから細胞質に放出されたチトクロムＣを含み、洗い流すことができる（Ｃａｍｐｏｓ、２００６年、Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  Ａ、６９（６）：５１５〜５２３頁）。
【０３７２】
化合物は、例えば、約５未満、１未満又は０．５ｎＭ未満でさえある有意に低いＥＣ５０を表し得るが、典型的には、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤は、実施例５のＭｏｌｔ−４細胞透過ｃｙｔ  ｃアッセイにおいて約１０ｎＭ未満のＥＣ５０を生じる。
【０３７３】
構造式（ＩＩａ）のＢｃｌ−ｘＬ阻害剤の多くが、他の抗アポトーシスＢｃｌ−２ファミリータンパク質にわたりＢｃｌ−ｘＬを選択的又は特異的に阻害するが、Ｂｃｌ−ｘＬの選択的及び／又は特異的な阻害は必須ではない。ＡＤＣを含むＢｃｌ−ｘＬ阻害剤はまた、Ｂｃｌ−ｘＬを阻害することに加えて、例えば、Ｂｃｌ−２のような、１つ以上の他の抗アポトーシスＢｃｌ−２ファミリーのタンパク質を阻害し得る。一部の実施形態において、ＡＤＣを含むＢｃｌ−ｘＬ阻害剤は、Ｂｃｌ−ｘＬに選択的である及び／又は特異的である。特異的又は選択的とは、特定のＢｃｌ−ｘＬ阻害剤が、等しいアッセイ条件下でＢｃｌ−２より高い程度まで、Ｂｃｌ−ｘＬに結合する又は阻害することを意味する。特定の実施形態において、ＡＤＣを含むＢｃｌ−ｘＬ阻害剤は、Ｂｃｌ−ｘＬ結合アッセイにおいてＢｃｌ−２よりＢｃｌ−ｘＬについて１０倍、１００倍又はより高い特異性の範囲でさえ示す。
【０３７４】
３．２．リンカー
本明細書に記載されるＡＤＣにおいて、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤は、リンカーを経由して、抗体に連結される。Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤をＡＤＣの抗体に連結するリンカーは、短く、長く、疎水性、親水性、可動性若しくは強固であってもよく、又はリンカーが、異なる特性を有するセグメントを含み得るように、それぞれ独立して、上記の特性の１つ以上を有するセグメントから構成されてもよい。リンカーは、これらが、１つより多くのＢｃｌ−ｘＬ阻害剤を抗体上の単一部位に共有結合するように、多価であってもよく、又はこれらが、単一のＢｃｌ−ｘＬ阻害剤を抗体上の単一部位に共有結合するように一価であってもよい。
【０３７５】
当業者により理解される通り、１つの位置においてＢｃｌ−ｘＬ阻害剤に共有結合、及び別の位置において抗体に共有結合を形成することにより、リンカーはＢｃｌ−ｘＬ阻害剤を抗体に連結する。リンカー上の官能基と阻害剤及び抗体上の官能基との反応により、共有結合が形成される。本明細書において使用される場合、表現「リンカー」は、（ｉ）リンカーをＢｃｌ−ｘＬ阻害剤に共有結合する能力がある官能基、及びリンカーを抗体に共有結合する能力がある官能基を含む、コンジュゲートされていない形態のリンカー；（ｉｉ）リンカーを抗体に共有結合する能力がある官能基を含み、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤に共有結合された、又はその逆である、部分的にコンジュゲートされた形態のリンカー；並びに（ｉｉｉ）Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤と抗体の両方に共有結合される、完全にコンジュゲートされた形態のリンカーを含むことが意図される。本明細書に記載される中間のシントン及びＡＤＣの一部の特定の実施形態において、リンカー上の官能基を含む部分、及びリンカーと抗体の間で形成された共有結合が、それぞれ、Ｒｘ及びＬＫとして具体的に説明される。一実施形態は、細胞表面受容体に結合する抗体又は腫瘍細胞上で発現された腫瘍関連抗原を本明細書に記載されたシントンと、シントンが抗体に共有結合する条件下で接触させることにより形成されるＡＤＣに関する。一実施形態は、本明細書に記載されたシントンを、シントンが抗体に共有結合する条件下で接触させることにより形成されるＡＤＣを作製する方法に関する。一実施形態は、細胞を、細胞に結合する能力がある本明細書に記載されたＡＤＣと、ＡＤＣが細胞に結合する条件下で接触させることを含む、Ｂｃｌ−ｘＬを発現する細胞においてＢｃｌ−ｘＬ活性を阻害する方法に関する。
【０３７６】
リンカーは、細胞の外側の条件に化学的に安定であることが好ましいが、そうである必要はなく、細胞の内部で切断し、犠牲にされ、及び／又は他の方法で特異的に分解するよう設計されていてもよい。あるいは、細胞の内部で特異的に切断し、又は分解するよう設計されていないリンカーが使用されてもよい。ＡＤＣの状況において薬物を抗体に連結するのに有用な多種多様なリンカーが、当技術分野において公知である。これらのリンカーのいずれか及び他のリンカーを使用して、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤を本明細書に記載されるＡＤＣの抗体に連結してもよい。多くのＢｃｌ−ｘＬ阻害剤を抗体に連結するのに使用され得る例示的な多価のリンカーは、例えば米国特許第８，３９９，５１２号；米国公開出願第２０１０／０１５２７２５号；米国特許第８，５２４，２１４号；米国特許第８，３４９，３０８号；米国公開出願第２０１３／１８９２１８号；米国公開出願第２０１４／０１７２６５号；ＷＯ２０１４／０９３３７９；ＷＯ２０１４／０９３３９４；ＷＯ２０１４／０９３６４０において記載されており、これらの内容を、それらの全体として参照により本明細書に組み込む。例えばＭｅｒｓａｎａらにより開発されたＦｌｅｘｉｍｅｒ（登録商標）リンカーテクノロジーは、良好な物理化学特性を有する高ＤＡＲ  ＡＤＣを可能にする可能性を有する。以下で示される通り、Ｆｌｅｘｉｍｅｒ（登録商標）リンカーテクノロジーは、エステル結合の配列を介して薬物分子を可溶化ポリ−アセタール骨格に取り込むことに基づく。方法論は、良好な物理化学特性を維持しながら、高度に負荷されたＡＤＣ（ＤＡＲ最大２０）をもたらす。この方法論は、以下のスキームにおいて示される通り、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤と共に利用することができる。
【０３７７】
【化６５】
2019521114.tif 000081
【０３７８】
上のスキームにおいて描かれるＦｌｅｘｉｍｅｒ（登録商標）リンカーテクノロジーを利用するために、脂肪族アルコールが、存在又はＢｃｌ−ｘＬ阻害剤に導入されるべきである。次いで、アルコール部分は、アラニン部分にコンジュゲートされ、次いで、これが、Ｆｌｅｘｉｍｅｒ（登録商標）リンカーに合成で取り込まれる。インビトロでのＡＤＣのリポソーム処理により、親アルコール含有薬物が放出される。
【０３７９】
樹状タイプのリンカーのさらなる例を、ＵＳ２００６／１１６４２２；ＵＳ２００５／２７１６１５；ｄｅ  Ｇｒｏｏｔら、（２００３年）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．編、４２：４４９０〜４４９４頁；Ａｍｉｒら、（２００３年）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．編、４２：４４９４〜４４９９頁；Ｓｈａｍｉｓら、（２００４年）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、１２６：１７２６〜１７３１頁；Ｓｕｎら、（２００２年）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、１２：２２１３〜２２１５頁；Ｓｕｎら、（２００３年）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１１：１７６１〜１７６８頁；及びＫｉｎｇら、（２００２年）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、４３：１９８７〜１９９０頁において見出すことができる。
【０３８０】
使用され得る例示的な一価のリンカーが、例えばＮｏｌｔｉｎｇ、２０１３年、Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｄｒｕｇ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、１０４５：７１〜１００頁；Ｋｉｔｓｏｎら、２０１３年、ＣＲＯｓ／ＣＭＯｓ−Ｃｈｅｍｉｃａ  Ｏｇｇｉ−Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｔｏｄａｙ、３１（４）：３０〜３６頁；Ｄｕｃｒｙら、２０１０年、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．、２１：５〜１３頁；Ｚｈａｏら、２０１１年、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、５４：３６０６〜３６２３頁；米国特許第７，２２３，８３７号；米国特許第８，５６８，７２８号；米国特許第８，５３５，６７８号；及びＷＯ２００４０１０９５７において記載され、これらのそれぞれの内容を、それらの全体として参照により本明細書に組み込む。
【０３８１】
例として、限定ではなく、本明細書に記載されるＡＤＣに含まれ得る、いくつかの切断可能なリンカー及び切断不可能なリンカーが、以下に記載される。
【０３８２】
３．２．１  切断可能なリンカー
ある特定の実施形態において、選択されたリンカーは、インビトロ及びインビボで切断可能である。切断可能なリンカーは、化学的又は酵素的に不安定な又は分解可能な結合を含んでもよい。切断可能なリンカーは、一般に、細胞質における還元、リソソームにおける酸性条件への曝露又は細胞内での特定のタンパク質分解酵素若しくは他の酵素による切断のような細胞内部でのプロセスを利用して薬物を遊離させる。切断可能なリンカーは、一般に、化学的又は酵素的のいずれかで切断可能である１つ以上の化学結合を取り込み、一方、リンカーの残部は、切断不可能である。
【０３８３】
ある特定の実施形態において、リンカーは、ヒドラゾン及び／又はジスルフィド基のような化学的に不安定な基を含む。化学的に不安定な基を含むリンカーは、原形質といくつかの細胞質区画の間の異なる特性を活用する。ヒドラゾンを含有するリンカーのための薬物放出を促進する細胞内条件は、エンドソーム及びリソソームの酸性環境であり、一方、ジスルフィドを含有するリンカーは、高いチオール濃度、例えばグルタチオンを含む細胞質において還元される。ある特定の実施形態において、化学的に不安定な基を含むリンカーの原形質安定性は、化学的に不安定な基の近くの置換基を使用して、立体障害を導入することにより、増大されてもよい。
【０３８４】
ヒドラゾンのような、酸不安定な基は、血液の中性ｐＨ環境（ｐＨ７．３〜７．５）において全身循環中インタクトなままであり、ＡＤＣが、細胞の弱酸性エンドソーム（ｐＨ５．０〜６．５）及びリソソーム（ｐＨ４．５〜５．０）区画に内部移行されると、加水分解を受け、薬物を放出する。このｐＨ依存性放出機序は、薬物の非特異的な放出と関連している。リンカーのヒドラゾン基の安定性を増大させるために、リンカーは、化学修飾、例えば置換により変化し得、これにより、循環中の最小化した喪失で、リソソームにおけるより効率的な放出を達成するのに合わせることが可能になる。
【０３８５】
ヒドラゾン含有リンカーは、さらなる酸不安定な切断部位及び／又は酵素的に不安定な切断部位のような、さらなる切断部位を含有してもよい。例示的なヒドラゾン含有リンカーを含むＡＤＣは、以下の構造：
【０３８６】
【化６６】
2019521114.tif 000082
（式中、Ｄ及びＡｂは、それぞれ、薬物及びＡｂを表し、ｎは、抗体に連結した薬物−リンカーの数を表す。）を含む。リンカー（Ｉｄ）のようなある特定のリンカーにおいて、リンカーは、２つの切断可能な基−ジスルフィド及びヒドラゾン部分を含む。かかるリンカーについて、修飾されていない遊離薬物の有効な放出は、酸性ｐＨ又はジスルフィド還元及び酸性ｐＨを必要とする。単一のヒドラゾン切断部位を有する（Ｉｅ）及び（Ｉｆ）のようなリンカーが、有効であることが示された。
【０３８７】
リンカーに含まれ得る他の酸不安定な基は、ｃｉｓ−アコニチル含有リンカーを含む。ｃｉｓ−アコニチル化学は、アミド結合に並置したカルボン酸を使用して、酸性条件下でアミド加水分解を促進する。
【０３８８】
切断可能なリンカーはまた、ジスルフィド基を含んでもよい。ジスルフィドは、生理的ｐＨにおいて熱力学的に安定であり、細胞内部での内部移行の際に薬物を放出するよう設計され、ここで、細胞質は、細胞外環境と比較して、有意により還元的な環境をもたらす。ジスルフィド含有リンカーが、循環中合理的に安定であり、これにより、細胞質において薬物を選択的に放出するように、ジスルフィド結合の切断は、一般に、（還元型）グルタチオン（ＧＳＨ）のような、細胞質チオールコファクターの存在を必要とする。細胞内酵素タンパク質ジスルフィドイソメラーゼ又はジスルフィド結合を切断することが可能な同様の酵素はまた、細胞内部でのジスルフィド結合の優先切断に寄与してもよい。ＧＳＨは、有意により低い濃度のＧＳＨ又はシステイン、約５μＭの循環中、最も大量な低分子量チオールと比較して、０．５〜１０ｍＭの濃度範囲で細胞に存在することが報告されている。不規則な血流が低酸素状態を導く、腫瘍細胞は、還元酵素の増強された活性をもたらし、したがって、さらに高いグルタチオン濃度をもたらす。ある特定の実施形態において、ジスルフィド含有リンカーのインビボ安定性は、リンカーの化学的修飾、例えばジスルフィド結合に隣接した立体障害の使用により、増強されてもよい。
【０３８９】
例示的なジスルフィド含有リンカーを含むＡＤＣは、以下の構造：
【０３９０】
【化６７】
2019521114.tif 000083
（式中、Ｄ及びＡｂは、それぞれ、薬物及び抗体を表し、ｎは、抗体に連結された薬物−リンカーの数を表し、Ｒは、出現ごとに、例えば、水素又はアルキルから独立して選択される。）を含む。ある特定の実施形態において、ジスルフィド結合に隣接する立体障害の増大が、リンカーの安定性を増大させる。（Ｉｇ）及び（Ｉｉ）のような構造は、１つ以上のＲ基が、メチルのような低級アルキルから選択されるとき、増大したインビボ安定性を示す。
【０３９１】
使用され得る別の種類のリンカーは、酵素により特異的に切断されるリンカーである。一実施形態において、リンカーは、リソソーム酵素によって切断可能である。かかるリンカーは、典型的には、ペプチドベースであり、又は酵素の基質として作用するペプチド性領域を含む。ペプチドベースのリンカーは、化学的に不安定なリンカーより、原形質及び細胞外環境においてより安定である傾向がある。リソソームタンパク質分解酵素は、リソソームと比較して、内在性の阻害剤及び血液の好ましくない高いｐＨ値に起因して血液において非常に低い活性を有するので、ペプチド結合は、一般に、良好な血清安定性を有する。抗体からの薬物の放出は、リソソームタンパク質分解酵素、例えばカテプシン及びプラスミンの作用に起因して特異的に生じる。これらのタンパク質分解酵素は、ある特定の腫瘍組織において上昇したレベルで存在してもよい。一実施形態において、リンカーは、リソソーム酵素によって切断可能であり、リソソーム酵素はカテプシンＢである。ある特定の実施形態において、リンカーは、リソソーム酵素によって切断可能であり、リソソーム酵素は、β−グルクロニダーゼ又はβ−ガラクトシダーゼである。ある特定の実施形態において、リンカーは、リソソーム酵素によって切断可能であり、リソソーム酵素はβ−グルクロニダーゼである。ある特定の実施形態において、リンカーは、リソソーム酵素によって切断可能であり、リソソーム酵素はβ−ガラクトシダーゼである。
【０３９２】
例示的な実施形態において、切断可能なペプチドは、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕのようなテトラペプチド又はＶａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ａｌａ及びＰｈｅ−Ｌｙｓのようなジペプチドから選択される。ある特定の実施形態において、ジペプチドは、より長いペプチドの疎水性に起因して、より長いポリペプチドより好ましい。
【０３９３】
ドキソルビシン、マイトマイシン、カンプトテシン、タリソマイシン及びアウリスタチン／アウリスタチンファミリーメンバーのような薬物を抗体に連結させるのに有用な様々なジペプチドベースの切断可能なリンカーが記載されている（Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋら、１９９８年、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、６７：１８６６〜１８７２頁；Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋら、１９９８年、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、８：３３４１〜３３４６頁；Ｗａｌｋｅｒら、２００２年、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、１２：２１７〜２１９頁；Ｗａｌｋｅｒら、２００４年、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、１４：４３２３〜４３２７頁；及びＦｒａｎｃｉｓｃｏら、２００３年、Ｂｌｏｏｄ、１０２：１４５８〜１４６５頁を参照、これらのそれぞれの内容を、参照により本明細書に組み込む）。これらのジペプチドリンカー又はこれらのジペプチドリンカーの修飾されたバージョンの全てが、本明細書に記載されるＡＤＣにおいて使用され得る。使用され得る他のジペプチドリンカーは、Ｓｅａｔｔｌｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ’  Ｂｒｅｎｔｕｘｉｍａｂ  Ｖｅｎｄｏｔｉｎ  ＳＧＮ−３５（Ａｄｃｅｔｒｉｓ（商標））、Ｓｅａｔｔｌｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ＳＧＮ−７５（抗ＣＤ−７０、ＭＣ−モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、Ｃｅｌｌｄｅｘ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ｇｌｅｍｂａｔｕｍｕｍａｂ（ＣＤＸ−０１１）（抗ＮＭＢ、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）及びＣｙｔｏｇｅｎ  ＰＳＭＡ−ＡＤＣ（ＰＳＭＡ−ＡＤＣ−１３０１）（抗ＰＳＭＡ、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＭＭＡＥ）のようなＡＤＣにおいて見出されるものを含む。
【０３９４】
酵素的に切断可能なリンカーは、薬物を酵素切断の部位から空間的に分けるための自壊性スペーサーを含んでもよい。ペプチドリンカーへの薬物の直接結合は、薬物のアミノ酸付加物のタンパク質分解性放出をもたらし、これにより、その活性を損ない得る。自壊性スペーサーの使用により、アミド結合加水分解の際に、完全に活性な化学的に修飾されていない薬物の除去が可能となる。
【０３９５】
１つの自壊性スペーサーは、二官能性パラ−アミノベンジルアルコール基であり、これは、アミノ基を介してペプチドに連結され、アミド結合を形成しており、一方、アミン含有薬物は、（ｐ−アミドベンジルカルバメート、ＰＡＢＣを付与するために）カルバメート官能性を介してリンカーのベンジリックヒドロキシル基に結合されてもよい。得られたプロドラッグは、タンパク質分解酵素により媒介される切断の際に活性化され、修飾されていない薬物、二酸化炭素及びリンカー基のレムナントを放出する１，６−脱離反応を導く。以下のスキームは、ｐ−アミドベンジルカルバメートの断片化及び薬物の放出を描く：
【０３９６】
【化６８】
2019521114.tif 000084
（式中、Ｘ−Ｄは、修飾されていない薬物を表す。）。この自壊性基のヘテロ環状の変異体も記載されている。米国特許第７，９８９，４３４号を参照。
【０３９７】
ある特定の実施形態において、酵素的に切断可能なリンカーは、β−グルクロン酸ベースのリンカーである。薬物の容易な放出は、リソソーム酵素β−グルクロニダーゼによるβ−グルクロニドグリコシド結合の切断を介して実現され得る。この酵素は、リソソーム内に大量に存在し、一部の腫瘍型において過剰発現され、一方細胞の外側の酵素活性は低い。β−グルクロン酸ベースのリンカーを使用して、β−グルクロニドの親水性に起因して凝集を経験するＡＤＣの傾向を回避し得る。ある特定の実施形態において、β−グルクロン酸ベースのリンカーは、疎水性薬物に連結されたＡＤＣのためのリンカーとして好ましい。以下のスキームは、ＡＤＣからの薬物の放出、及びβ−グルクロン酸ベースのリンカーを含有するＡＤＣを描く：
【０３９８】
【化６９】
2019521114.tif 000085
【０３９９】
アウリスタチン、カンプトテシン及びドキソルビシン類似体、ＣＢＩ小溝結合剤並びにプシムベリンのような薬物を抗体に連結させるのに有用な様々な切断可能なβ−グルクロン酸ベースのリンカーが記載されている（Ｊｅｆｆｒｅｙら、２００６年、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．、１７：８３１〜８４０頁；Ｊｅｆｆｒｅｙら、２００７年、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、１７：２２７８〜２２８０頁；及びＪｉａｎｇら、２００５年、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１２７：１１２５４〜１１２５５頁を参照、これらのそれぞれの内容を、参照により本明細書に組み込む）。これらのβ−グルクロン酸ベースのリンカーの全てが、本明細書に記載されるＡＤＣにおいて使用され得る。ある特定の実施形態において、酵素的に切断可能なリンカーは、β−ガラクトシドベースのリンカーである。β−ガラクトシドは、リソソーム内に大量に存在し、一方、細胞の外側の酵素活性は低い。
【０４００】
加えて、フェノール基を含有するＢｃｌ−ｘＬ阻害剤は、フェノール類酸素を介してリンカーに共有結合することができる。米国公開出願第２００９／０３１８６６８号において記載される、１つのかかるリンカーは、ジアミノ−エタン「ＳｐａｃｅＬｉｎｋ」を、伝統的な「ＰＡＢＯ」ベースの自壊性基と共に使用して、フェノールを送達する、方法論を利用する。リンカーの切断が、本開示のＢｃｌ−ｘＬ阻害剤を使用して、以下で模式的に描かれる。
【０４０１】
【化７０】
2019521114.tif 000086
【０４０２】
切断可能なリンカーは、切断不可能な部分若しくはセグメントを含んでもよく、及び／又は切断可能なセグメント若しくは部分は、そうでなければ、それを切断可能にする切断不可能なリンカーに含まれてもよい。単なる例として、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）及び関連するポリマーは、ポリマー骨格において切断可能な基を含んでもよい。例えば、ポリエチレングリコール又はポリマーリンカーは、ジスルフィド、ヒドラゾン又はジペプチドのような１つ以上の切断可能な基を含んでもよい。
【０４０３】
リンカーに含まれ得る他の分解可能な結合は、ＰＥＧカルボン酸又は活性化されたＰＥＧカルボン酸の生物学的に活性な薬剤上のアルコール基との反応により形成されるエステル結合を含み、かかるエステル基は、一般に、生理学的条件下で加水分解して、生物学的に活性な薬剤を放出する。加水分解で分解可能な結合は、カーボネート結合；アミンとアルデヒドの反応から生じるイミン結合；アルコールをリン酸基と反応させることにより形成されるリン酸エステル結合；アルデヒド及びアルコールの反応産物であるアセタール結合；ギ酸塩及びアルコールの反応産物であるオルソエステル結合；並びにポリマーの末端にあるものを含むがこれらに限定されないホスホラミダイト基及びオリゴヌクレオチドの５’ヒドロキシル基により形成されるオリゴヌクレオチド結合を含むが、これらに限定されない。
【０４０４】
ある特定の実施形態において、リンカーは、酵素的に切断可能なペプチド部分、例えば構造式（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）、（ＩＶｃ）又は（ＩＶｄ）：
【０４０５】
【化７１】
2019521114.tif 000087
（式中、
ペプチドは、リソソーム酵素によって切断可能なペプチド（Ｎ→Ｃで図示され、ペプチドは、アミノ及びカルボキシ「末端」を含む）を表し、
Ｔは、１つ以上のエチレングリコール単位若しくはアルキレン鎖又はこれらの組合せを含むポリマーを表し、
Ｒａは、水素、Ｃ１〜６アルキル、ＳＯ３Ｈ及びＣＨ２ＳＯ３Ｈから選択され、
Ｒｙは、水素又はＣ１〜４アルキル−（Ｏ）ｒ−（Ｃ１〜４アルキレン）ｓ−Ｇ１若しくはＣ１〜４アルキル−（Ｎ）−［（Ｃ１〜４アルキレン）−Ｇ１］２であり、
Ｒｚは、Ｃ１〜４アルキル−（Ｏ）ｒ−（Ｃ１〜４アルキレン）ｓ−Ｇ２であり、
Ｇ１は、ＳＯ３Ｈ、ＣＯ２Ｈ、ＰＥＧ４−３２又は糖部分であり、
Ｇ２は、ＳＯ３Ｈ、ＣＯ２Ｈ又はＰＥＧ４−３２部分であり、
ｒは、０又は１であり、
ｓは、０又は１であり、
ｐは、０〜５の範囲の整数であり、
ｑは、０又は１であり、
ｘは、０又は１であり、
ｙは、０又は１であり、
【０４０６】
【化７２】
2019521114.tif 000088
は、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤に対するリンカーの結合点を表し、
＊は、リンカーの残部への結合点を表す。）
又はその薬学的に許容される塩を含むリンカーを含む。
【０４０７】
ある特定の実施形態において、リンカーは、酵素的に切断可能なペプチド部分、例えば、構造式（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）、（ＩＶｃ）若しくは（ＩＶｄ）を含むリンカー又はそれらの塩を含む。
【０４０８】
ある特定の実施形態において、リンカーＬは、構造式ＩＶａ若しくはＩＶｂに従うセグメント又はその薬学的に許容される塩を含む。
【０４０９】
ある特定の実施形態において、ペプチドは、トリペプチド又はジペプチドから選択される。特定の実施形態において、ジペプチドは、Ｖａｌ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ｖａｌ；Ａｌａ−Ａｌａ；Ａｌａ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ａｌａ；Ａｓｎ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ａｓｎ；Ｃｉｔ−Ｃｉｔ；Ｖａｌ−Ｇｌｕ；Ｇｌｕ−Ｖａｌ；Ｓｅｒ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ｓｅｒ；Ｌｙｓ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ｌｙｓ；Ａｓｐ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ａｓｐ；Ａｌａ−Ｖａｌ；Ｖａｌ−Ａｌａ；Ｐｈｅ−Ｌｙｓ；Ｌｙｓ−Ｐｈｅ；Ｖａｌ−Ｌｙｓ；Ｌｙｓ−Ｖａｌ；Ａｌａ−Ｌｙｓ；Ｌｙｓ−Ａｌａ；Ｐｈｅ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ｐｈｅ；Ｌｅｕ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ｌｅｕ；Ｉｌｅ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ｉｌｅ；Ｐｈｅ−Ａｒｇ；Ａｒｇ−Ｐｈｅ；Ｃｉｔ−Ｔｒｐ；及びＴｒｐ−Ｃｉｔ；又はその薬学的に許容される塩から選択される。
【０４１０】
本明細書に記載されるＡＤＣに含まれ得る構造式（ＩＶａ）に従うリンカーの例示的な実施形態は、以下で説明されるリンカーを含む（説明される通り、リンカーは、リンカーを抗体に共有結合させるのに適した基を含む。）：
【０４１１】
【化７３】
2019521114.tif 000089
2019521114.tif 000090
2019521114.tif 000091
【０４１２】
本明細書に記載されるＡＤＣに含まれ得る構造式（ＩＶｂ）、（ＩＶｃ）又は（ＩＶｄ）に従うリンカーの例示的な実施形態は、以下で説明されるリンカーを含む（説明される通り、リンカーは、リンカーを抗体に共有結合させるのに適した基を含む。）：
【０４１３】
【化７４】
2019521114.tif 000092
2019521114.tif 000093
2019521114.tif 000094
2019521114.tif 000095
2019521114.tif 000096
2019521114.tif 000097
2019521114.tif 000098
【０４１４】
ある特定の実施形態において、リンカーは、酵素的に切断可能な糖部分、例えば、構造式（Ｖａ）、（Ｖｂ）、（Ｖｃ）、（Ｖｄ）又は（Ｖｅ）：
【０４１５】
【化７５】
2019521114.tif 000099
2019521114.tif 000100
（式中、
ｑは、０又は１であり、
ｒは、０又は１であり、
Ｘ１は、ＣＨ２、Ｏ又はＮＨであり、
【０４１６】
【化７６】
2019521114.tif 000101
は、薬物へのリンカーの結合点を表し、
＊は、リンカーの残部への結合点を表す。）
又はその薬学的に許容される塩を含むリンカーを含む。
【０４１７】
本明細書に記載されるＡＤＣに含まれ得る構造式（Ｖａ）に従うリンカーの例示的な実施形態は、以下で説明されるリンカーを含む（説明される通り、リンカーは、リンカーを抗体に共有結合させるのに適した基を含む。）：
【０４１８】
【化７７】
2019521114.tif 000102
2019521114.tif 000103
2019521114.tif 000104
2019521114.tif 000105
2019521114.tif 000106
【０４１９】
本明細書に記載されるＡＤＣに含まれ得る構造式（Ｖｂ）に従うリンカーの例示的な実施形態は、以下で説明されるリンカーを含む（説明される通り、リンカーは、リンカーを抗体に共有結合させるのに適した基を含む。）：
【０４２０】
【化７８】
2019521114.tif 000107
2019521114.tif 000108
2019521114.tif 000109
【０４２１】
本明細書に記載されるＡＤＣに含まれ得る構造式（Ｖｃ）に従うリンカーの例示的な実施形態は、以下で説明されるリンカーを含む（説明される通り、リンカーは、リンカーを抗体に共有結合させるのに適した基を含む。）：
【０４２２】
【化７９】
2019521114.tif 000110
2019521114.tif 000111
2019521114.tif 000112
【０４２３】
本明細書に記載されるＡＤＣに含まれ得る構造式（Ｖｄ）に従うリンカーの例示的な実施形態は、以下で説明されるリンカーを含む（説明される通り、リンカーは、リンカーを抗体に共有結合させるのに適した基を含む。）：
【０４２４】
【化８０】
2019521114.tif 000113
2019521114.tif 000114
【０４２５】
本明細書に記載されるＡＤＣに含まれ得る構造式（Ｖｅ）に従うリンカーの例示的な実施形態は、以下で説明されるリンカーを含む（説明される通り、リンカーは、リンカーを抗体に共有結合させるのに適した基を含む。）：
【０４２６】
【化８１】
2019521114.tif 000115
【０４２７】
３．２．２  切断不可能なリンカー
切断可能なリンカーは、ある特定の利点をもたらし得るが、本明細書に記載されるＡＤＣを含むリンカーは、切断可能である必要はない。切断不可能なリンカーについて、薬物放出は、原形質と一部の細胞質区画の間の異なる特性に依存しない。薬物の放出は、抗原により媒介されるエンドサイトーシスを介したＡＤＣの内部移行及びリソソーム区画への送達後に生じることが仮定され、抗体は、細胞内タンパク質分解性分解を介してアミノ酸のレベルまで分解される。このプロセスは、薬物、リンカー及びリンカーが共有結合していたアミノ酸残基により形成される薬物誘導体を放出する。切断不可能なリンカーを有するコンジュゲートからのアミノ酸薬物代謝産物は、より親水性であり、一般に、より少なく膜透過性であり、これが、切断可能なリンカーを有するコンジュゲートと比較して、より少ないバイスタンダー効果及びより少ない非特異的毒性を導く。一般に、切断不可能なリンカーを有するＡＤＣは、切断可能なリンカーを有するＡＤＣより循環中より高い安定性を有する。切断不可能なリンカーは、アルキレン鎖であってもよく、又は例えばポリアルキレングリコールポリマー、アミドポリマーに基づくような、事実上ポリマーであってもよく、又はアルキレン鎖、ポリアルキレングリコール及び／若しくはアミドポリマーのセグメントを含んでもよい。ある特定の実施形態において、リンカーは、１〜６個のエチレングリコール単位を有するポリエチレングリコールセグメントを含む。
【０４２８】
薬物を抗体に連結するために使用される様々な切断不可能なリンカーが記載されている。（Ｊｅｆｆｒｅｙら、２００６年、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．１７；８３１〜８４０頁；Ｊｅｆｆｒｅｙら、２００７年、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、１７：２２７８〜２２８０頁；及びＪｉａｎｇら、２００５年、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、１２７：１１２５４〜１１２５５頁を参照、これらの内容を、参照により本明細書に組み込む）。これらのリンカーの全てが、本明細書に記載されるＡＤＣに含まれてもよい。
【０４２９】
ある特定の実施形態において、リンカーは、インビボで切断不可能であり、例えば構造式（ＶＩａ）、（ＶＩｂ）、（ＶＩｃ）若しくは（ＶＩｄ）：
【０４３０】
【化８２】
2019521114.tif 000116
2019521114.tif 000117
（式中、
Ｒａは、水素、アルキル、スルホネート及びメチルスルホネートから選択され、
Ｒｘは、リンカーを抗体に共有結合させる能力がある官能基を含む部分であり、
【０４３１】
【化８３】
2019521114.tif 000118
は、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤に対するリンカーの結合点を表す。）
又はその薬学的に許容される塩によるリンカーである（説明される通り、リンカーは、リンカーを抗体に共有結合させるのに適当な基を含む。）。
【０４３２】
本明細書に記載されるＡＤＣに含まれ得る構造式（ＶＩａ）〜（ＶＩｄ）に従うリンカーの例示的な実施形態は、以下で説明されるリンカーを含む（説明される通り、リンカーは、リンカーを抗体に共有結合させるのに適した基を含み、
【０４３３】
【化８４】
2019521114.tif 000119
は、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤に対する結合点を表す。）。
【０４３４】
【化８５】
2019521114.tif 000120
【０４３５】
３．２．３  リンカーを抗ＥＧＦＲ抗体に結合するために使用される基
結合基は、事実上求電子性であり、マレイミド基、活性化したジスルフィド、ＮＨＳエステル及びＨＯＢｔエステルのような活性エステル、ハロギ酸塩、酸ハロゲン化物、アルキル並びにハロアセトアミドのようなベンジルハロゲン化物を含み得る。以下で論じられる通り、本開示に従い使用することができる「自己安定化」マレイミド及び「架橋ジスルフィド」に関連する新たに発生したテクノロジーも存在する。
【０４３６】
ＡＤＣからの薬物−リンカーの喪失は、アルブミン、システイン又はグルタチオンとのマレイミド交換プロセスの結果として観察されている（Ａｌｌｅｙら、２００８年、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．、１９：７５９〜７６９頁）。これは、コンジュゲーションの高度に溶媒にアクセス可能な部位から特に行き渡り、一方、部分的にアクセス可能であり、正に荷電した環境を有する部位は、マレイミド環加水分解を促進する（Ｊｕｎｕｔｕｌａら、２００８年、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、２６：９２５〜９３２頁）。認められている解決策は、コンジュゲーションから形成されたスクシンイミドを加水分解することであり、これは抗体からの脱コンジュゲーションに抵抗性であり、これにより、ＡＤＣを血清中で安定にする。スクシンイミド環が、アルカリ条件下で加水分解を受けることは、既に報告されている（Ｋａｌｉａら、２００７年、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、１７：６２８６〜６２８９頁）。ＡＤＣ種に改善された安定性を与えるために抗体コンジュゲーション条件下で自発的に加水分解する「自己安定化」マレイミド基の１つの例が、以下のスキームにおいて描かれる。米国公開出願第２０１３／０３０９２５６号、国際出願公開第ＷＯ２０１３／１７３３３７号、Ｔｕｍｅｙら、２０１４年、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．、２５：１８７１〜１８８０頁及びＬｙｏｎら、２０１４年、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、３２：１０５９〜１０６２頁を参照。したがって、マレイミド結合基が、抗体のスルフヒドリルと反応して、中間のスクシンイミド環が得られる。加水分解型の結合基は、原形質タンパク質の存在下で脱コンジュゲーションに抵抗性である。
【０４３７】
【化８６】
2019521114.tif 000121
【０４３８】
上で示される通り、リンカーのマレイミド環は、抗体Ａｂと反応し、スクシンイミド（閉鎖型）又はスクシンアミド（開放型）のいずれかとして共有結合を形成する。Ｐｏｌｙｔｈｅｒｉｃｓは、天然のヒンジジスルフィド結合の還元から誘導されるスルフヒドリル基の対を架橋する方法を開示した。Ｂａｄｅｓｃｕら、２０１４年、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．、２５：１１２４〜１１３６頁を参照。反応が、以下の概略図において描かれる。この方法論の利点は、ＩｇＧの完全な還元（４対のスルフヒドリルを得る）、続いて、４当量のアルキル化剤との反応により、同種のＤＡＲ４  ＡＤＣを合成する能力である。「架橋されたジスルフィド」を含有するＡＤＣはまた、増大した安定性を有することが主張される。
【０４３９】
【化８７】
2019521114.tif 000122
【０４４０】
同様に、以下で描かれる通り、１対のスルフヒドリル基を架橋する能力があるマレイミド誘導体が開発された。米国公開出願第２０１３／０２２４２２８号を参照。
【０４４１】
【化８８】
2019521114.tif 000123
【０４４２】
ある特定の実施形態において、結合部分は、構造式（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩｂ）若しくは（ＶＩＩｃ）：
【０４４３】
【化８９】
2019521114.tif 000124
（式中、
Ｒｑは、Ｈ又は−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１１−ＣＨ３であり、
ｘは、０又は１であり、
ｙは、０又は１であり、
Ｇ３は、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＳＯ３Ｈ又は−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１１−ＣＨ３であり；
Ｒｗは、−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２ＳＯ３Ｈ又は−ＮＨ（ＣＯ）−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１２−ＣＨ３であり、
＊は、リンカーの残部に対する結合点を表す。）
又はその塩を含む。
【０４４４】
ある特定の実施形態において、リンカーは、構造式（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）若しくは（ＶＩＩＩｃ）：
【０４４５】
【化９０】
2019521114.tif 000125
（式中、
Ｒｑは、Ｈ又は−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１１−ＣＨ３であり、
ｘは、０又は１であり、
ｙは、０又は１であり、
Ｇ３は、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＳＯ３Ｈ又は−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１１−ＣＨ３であり、
Ｒｗは、−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２ＳＯ３Ｈ又は−ＮＨ（ＣＯ）−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１２−ＣＨ３であり、
＊は、リンカーの残部に対する結合点を表し、
【０４４６】
【化９１】
2019521114.tif 000126
は、抗体に対するリンカーの結合点を表す。）
に従うセグメント、又はその加水分解された誘導体若しくは薬学的に許容される塩を含む。
【０４４７】
本明細書に記載されるＡＤＣに含まれ得る構造式（ＶＩＩａ）及び（ＶＩＩｂ）に従うリンカーの例示的な実施形態は、以下で説明されるリンカーを含む（説明される通り、リンカーは、リンカーを抗体に共有結合させるのに適した基を含む。）：
【０４４８】
【化９２】
2019521114.tif 000127
2019521114.tif 000128
2019521114.tif 000129
2019521114.tif 000130
2019521114.tif 000131
2019521114.tif 000132
2019521114.tif 000133
【０４４９】
本明細書に記載されるＡＤＣに含まれ得る構造式（ＶＩＩｃ）に従うリンカーの例示的な実施形態は、以下で説明されるリンカーを含む（説明される通り、リンカーは、リンカーを抗体に共有結合させるのに適した基を含む。）：
【０４５０】
【化９３】
2019521114.tif 000134
2019521114.tif 000135
【０４５１】
ある特定の実施形態において、Ｌは、閉鎖型又は開放型のＩＶａ．１〜ＩＶａ．８、ＩＶｂ．１〜ＩＶｂ．１９、ＩＶｃ．１〜ＩＶｃ．７、ＩＶｄ．１〜ＩＶｄ．４、Ｖａ．１〜Ｖａ．１２、Ｖｂ．１〜Ｖｂ．１０、Ｖｃ．１〜Ｖｃ．１１、Ｖｄ．１〜Ｖｄ．６、Ｖｅ．１〜Ｖｅ．２、ＶＩａ．１、ＶＩｃ．１〜Ｖ１ｃ．２、ＶＩｄ．１〜ＶＩｄ．４、ＶＩＩａ．１〜ＶＩＩａ．４、ＶＩＩｂ．１〜ＶＩＩｂ．８、ＶＩＩｃ．１〜ＶＩＩｃ．６、及びその薬学的に許容される塩からなる群から選択される。ある特定の実施形態において、Ｌは、ＩＶｂ．２、ＩＶｃ．５、ＩＶｃ．６、ＩＶｃ．７、ＩＶｄ．４、Ｖｂ．９、ＶＩＩａ．１、ＶＩＩａ．３、ＶＩＩｃ．１、ＶＩＩｃ．３、ＶＩＩｃ．４及びＶＩＩｃ．５からなる群から選択され、各リンカーのマレイミドは、抗体Ａｂと反応して、スクシンイミド（閉鎖型）又はスクシンアミド（開放型）のいずれかとして共有結合を形成している。
【０４５２】
ある特定の実施形態において、Ｌは、ＩＶｃ．５、ＩＶｃ．６、ＩＶｄ．４、ＶＩＩａ．１、ＶＩＩａ．３、ＶＩＩｃ．１、ＶＩＩｃ．３、ＶＩＩｃ．４及びＶＩＩｃ．５からなる群から選択され、各リンカーのマレイミドは、抗体Ａｂと反応し、スクシンイミド（閉鎖型）又はスクシンアミド（開放型）のいずれかとして共有結合を形成する。
【０４５３】
ある特定の実施形態において、Ｌは、ＶＩＩａ．３、ＩＶｃ．６、ＶＩＩｃ．５、及びＶＩＩｃ．１からなる群から選択され、式中
【０４５４】
【化９４】
2019521114.tif 000136
は、薬物Ｄに対する結合点であり、＠は、ＬＫに対する結合点であり、リンカーが、下記に示すような開放型である場合、＠はこの隣にあるカルボン酸のα−位又はβ−位のいずれかであり得る：
【０４５５】
【化９５】
2019521114.tif 000137
2019521114.tif 000138
。
【０４５６】
３．２．３  リンカー選択の考慮事項
当業者により知られている通り、特定のＡＤＣのため選択されたリンカーは、抗体への結合の部位（例えばｌｙｓ、ｃｙｓ又は他のアミノ酸残基）、薬物ファルマコフォアの構造上の制約及び薬物の親油性を含むが、これらに限定されない、様々な要因により影響され得る。ＡＤＣのために選択される特定のリンカーは、特定の抗体／薬物の組合せについてこれらの異なる要因のバランスをとろうとするべきである。ＡＤＣにおけるリンカーの選択により影響される要因の概要については、Ｎｏｌｔｉｎｇ、５章、「Ｌｉｎｋｅｒ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｉｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｄｒｕｇ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ」、Ｉｎ：Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｄｒｕｇ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、１０４５巻、７１〜１００頁、Ｌａｕｒｅｎｔ  Ｄｕｃｒｙ（編）、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｍｅｄｉｃａ、ＬＬＣ、２０１３年を参照。
【０４５７】
例えば、ＡＤＣは、抗原陽性腫瘍細胞の近傍に存在するバイスタンダー抗原陰性細胞の死滅をもたらすことが観察されている。ＡＤＣによるバイスタンダー細胞死滅の機序は、ＡＤＣの細胞内プロセッシング中に形成された代謝産物が、役割を果たし得ることを示した。抗原陽性細胞におけるＡＤＣの代謝により生成される中性の細胞傷害性代謝産物は、バイスタンダー細胞死滅において役割を果たすように思われ、一方、荷電した代謝産物は、膜を渡り培地に拡散することが防止され、したがって、バイスタンダー死滅に影響を与えることができない。ある特定の実施形態において、リンカーを選択して、ＡＤＣの細胞代謝産物により引き起こされるバイスタンダー死滅効果を減弱する。ある特定の実施形態において、リンカーを選択して、バイスタンダー死滅効果を増大させる。
【０４５８】
リンカーの特性はまた、使用及び／又は保存の条件下でＡＤＣの凝集に影響を及ぼし得る。典型的には、文献において報告されているＡＤＣは、１つの抗体分子当たり３〜４個以下の薬物分子を含有する（例えばＣｈａｒｉ、２００８年、Ａｃｃ  Ｃｈｅｍ  Ｒｅｓ、４１：９８〜１０７頁を参照）。特に、薬物とリンカーの両方が疎水性である場合、ＡＤＣの凝集に起因して、より高い薬物抗体比（「ＤＡＲ」）を得るための試みはしばしば失敗した（Ｋｉｎｇら、２００２年、Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ、４５：４３３６〜４３４３頁；Ｈｏｌｌａｎｄｅｒら、２００８年、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ  １９：３５８〜３６１頁；Ｂｕｒｋｅら、２００９年、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ、２０：１２４２〜１２５０頁）。多くの場合において、３〜４より高いＤＡＲは、効力を増大する手段として有益であり得る。Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤が事実上疎水性である場合において、特に、３〜４より多いＤＡＲが望まれる場合において、ＡＤＣ凝集を低減する手段として相対的に親水性であるリンカーを選択することが望ましいことがある。したがって、ある特定の実施形態において、リンカーは、保存及び／又は使用中に、ＡＤＣの凝集を低減する化学部分を取り込む。リンカーは、荷電した基又は生理的ｐＨ下で荷電されて、ＡＤＣの凝集を低減する基のような極性又は親水性基を取り込んでもよい。例えば、リンカーは、生理的ｐＨで、例えばカルボキシレートを脱プロトン化する、又は例えばアミンをプロトン化する塩又は基のような荷電した基を取り込んでもよい。
【０４５９】
多くのＢｃｌ−ｘＬ阻害剤を抗体に連結するのに使用され得る２０もの高いＤＡＲを生じることが報告されている例示的な多価のリンカーは、米国特許第８，３９９，５１２号；米国公開出願第２０１０／０１５２７２５号；米国特許第８，５２４，２１４号；米国特許第８，３４９，３０８号；米国公開出願第２０１３／１８９２１８号；米国公開出願第２０１４／０１７２６５号；ＷＯ２０１４／０９３３７９；ＷＯ２０１４／０９３３９４；ＷＯ２０１４／０９３６４０において記載されており、これらの内容を、それらの全体として、参照により本明細書に組み込む。
【０４６０】
特定の実施形態において、保存又は使用中のＡＤＣの凝集は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって決定される約４０％未満である。特定の実施形態において、保存又は使用中のＡＤＣの凝集は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって決定される、約３０％未満のような、約２５％未満のような、約２０％未満のような、約１５％未満のような、約１０％未満のような、約５％未満のような、約４％未満のような、又はさらに低い３５％未満である。
【０４６１】
一実施形態は、リンカーＬが、リンカーＩＶａ．１〜ＩＶａ．８、ＩＶｂ．１〜ＩＶｂ．１９、ＩＶｃ．１〜ＩＶｃ．７、ＩＶｄ．１〜ＩＶｄ．４、Ｖａ．１〜Ｖａ．１２、Ｖｂ．１〜Ｖｂ．１０、Ｖｃ．１〜Ｖｃ．１１、Ｖｄ．１〜Ｖｄ．６、ＶＩａ．１、Ｖｅ．１〜Ｖｅ．２、ＶＩａ．１、Ｖ１ｃ．１〜Ｖ１ｃ．２、Ｖ１ｄ．１〜Ｖ１ｄ．４、ＶＩＩａ．１〜ＶＩＩａ．４、ＶＩＩｂ．１〜ＶＩＩｂ．８、ＶＩＩｃ．１〜ＶＩＩｃ．６及びそれらの塩からなる群から選択されるＡＤＣ又はシントンに関する。
【０４６２】
４．ＡＤＣシントン
抗体−薬物コンジュゲートシントンは、ＡＤＣを形成するために使用される合成中間体である。シントンは、一般に、構造式（ＩＩＩ）：
（ＩＩＩ）Ｄ−Ｌ−Ｒｘ
（式中、Ｄは、既に記載されたＢｃｌ−ｘＬ阻害剤であり、Ｌは、既に記載されたリンカーであり、Ｒｘは、シントンを抗体に共有結合するのに適当な官能基を含む部分である。）に従う化合物又はそれらの塩である。特定の実施形態において、シントンは、構造式（ＩＩＩａ）：
【０４６３】
【化９６】
2019521114.tif 000139
（式中、Ａｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ１０ａ、Ｒ１０ｂ、Ｒ１０ｃ、Ｒ１１ａ、Ｒ１１ｂ、Ｚ１、Ｚ２及びｎは、構造式（ＩＩａ）について既に定義された通りであり、Ｌ及びＲｘは、構造式（ＩＩＩ）について定義された通りである。）に従う化合物又はそれらの塩である。
【０４６４】
ＡＤＣを合成するために、構造式（ＩＩＩ）に従う中間体シントン又はその塩を、官能基Ｒｘが、抗体、Ｆｘ上で「相補的な」官能基と反応して、共有結合を形成する条件下で、目的の抗体と接触させる。
【０４６５】
【化９７】
2019521114.tif 000140
【０４６６】
基Ｒｘ及びＦｘの同一性は、シントンを抗体に連結するために使用される化学に依存する。一般に、使用される化学は、抗体の完全性、例えばその標的に結合するこの能力を変えるべきではない。好ましくは、コンジュゲートされた抗体の結合特性は、コンジュゲートされていない抗体のものと密接に類似する。分子を、抗体のような生体分子にコンジュゲートするための様々な化学及び技術は、当技術分野において公知であり、特に抗体について周知である。例えばＡｍｏｎら、「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ」、ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｒｅｉｓｆｅｌｄら編、Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．、１９８５年；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」、ｉｎ：Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、Ｒｏｂｉｎｓｏｎら編、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、第２編、１９８７年；Ｔｈｏｒｐｅ、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  Ｏｆ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ」、ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｐｉｎｃｈｅｒａら編、１９８５年；「Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，ａｎｄ  Ｆｕｔｕｒｅ  Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ」、ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｂａｌｄｗｉｎら編、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、１９８５年；及びＴｈｏｒｐｅら、１９８２年、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６２：１１９〜５８頁；ＷＯ８９／１２６２４を参照。これらの化学のいずれかを使用して、シントンを抗体に連結してもよい。
【０４６７】
一実施形態において、Ｒｘは、シントンを抗体上のアミノ基に連結する能力がある官能基を含む。別の実施形態において、Ｒｘは、ＮＨＳ−エステル又はイソチオシアネートを含む。別の実施形態において、Ｒｘは、シントンを抗体上のスルフヒドリル基に連結する能力がある官能基を含む。別の実施形態において、Ｒｘは、ハロアセチル又はマレイミドを含む。
【０４６８】
典型的には、シントンは、例えば、アクセス可能なリジン残基の１級アミノ基又はアクセス可能なシステイン残基のスルフヒドリル基を含む、抗体のアミノ酸残基の側鎖に連結される。遊離スルフヒドリル基は、鎖間ジスルフィド結合を還元することにより、得られてもよい。
【０４６９】
一実施形態において、ＬＫは、抗ｈＥＧＦＲ抗体Ａｂ（ＡｂＡ、ＡｂＢ、ＡｂＧ又はＡｂＫ）上のアミノ基と形成された結合である。別の実施形態において、ＬＫは、アミド又はチオ尿素である。別の実施形態において、ＬＫは、抗ｈＥＧＦＲ抗体Ａｂ上のスルフヒドリル基と形成された連結である。別の実施形態において、ＬＫはチオエーテルである。
【０４７０】
一実施形態において、Ｄは、構造式（ＩＩａ）の＃の位置に対応する水素が存在せず一価基を形成しているという点で変更されている、以下の化合物：
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−［１−（｛３，５−ジメチル−７−［２−（メチルアミノ）エトキシ］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−（１−｛［（１ｒ，３Ｒ，５Ｓ，７ｓ）−３，５−ジメチル−７−（２−｛２−［２−（メチルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−カルボン酸；
３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
３−［１−（｛３−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３−｛２−［（２−メトキシエチル）アミノ］エトキシ｝−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸；
３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−５−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−６−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−７−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
及びその薬学的に許容される塩からなる群から選択されるＢｃｌ−ｘＬ阻害剤であり、
Ｌは、リンカーＩＶａ．１〜ＩＶａ．８、ＩＶｂ．１〜ＩＶｂ．１９、ＩＶｃ．１〜ＩＶｃ．７、ＩＶｄ．１〜ＩＶｄ．４，Ｖａ．１〜Ｖａ．１２、Ｖｂ．１〜Ｖｂ．１０、Ｖｃ．１〜Ｖｃ．１１、Ｖｄ．１〜Ｖｄ．６、ＶＩａ．１、Ｖｅ．１〜Ｖｅ．２、ＶＩａ．１、Ｖ１ｃ．１〜Ｖ１ｃ．２、Ｖ１ｄ．１〜Ｖ１ｄ．４、ＶＩＩａ．１〜ＶＩＩａ．４、ＶＩＩｂ．１〜ＶＩＩｂ．８、ＶＩＩｃ．１〜ＶＩＩｃ．６からなる群から選択され、各リンカーが、抗ｈＥＧＦＲ抗体Ａｂと反応して、共有結合を形成し、ＬＫが、チオエーテルであり、ｍが、１〜８の範囲の整数である。
【０４７１】
一実施形態において、Ｄは、構造式（ＩＩａ）の＃の位置に対応する水素が存在せず一価基を形成しているという点で変更されている、以下の化合物：
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−［１−（｛３，５−ジメチル−７−［２−（メチルアミノ）エトキシ］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−５−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
及びその薬学的に許容される塩からなる群から選択されるＢｃｌ−ｘＬ阻害剤であり、
Ｌは、閉鎖型又は開放型のいずれかのリンカーＶｃ．５、ＩＶｃ．６、ＩＶｄ．４、ＶＩＩａ．１、ＶＩＩｃ．１、ＶＩＩｃ．３、ＶＩＩｃ．４及びＶＩＩｃ．５、並びにその薬学的に許容される塩からなる群から選択され、
ＬＫは、チオエーテルであり、
ｍは、２〜４の範囲の整数である。
【０４７２】
ＡＤＣを形成するために、シントン（例えば、表５において挙げられるシントン）のマレイミド環は、抗体Ａｂと反応して、スクシンイミド（閉鎖型）又はスクシンアミド（開放型）のいずれかとして共有結合を形成してもよい。
【０４７３】
ある特定の実施形態において、ＡＤＣ又はこの薬学的に許容される塩は、ＡｂＡ−ＷＤ、ＡｂＡ−ＬＢ、ＡｂＡ−ＶＤ、ＡｂＢ−ＷＤ、ＡｂＢ−ＬＢ、ＡｂＢ−ＶＤ、ＡｂＧ−ＷＤ、ＡｂＧ−ＬＢ、ＡｂＧ−ＶＤ、ＡｂＫ−ＷＤ、ＡｂＫ−ＬＢ及びＡｂＫ−ＶＤからなる群から選択され、ＷＤ、ＬＢ及びＶＤは、表５に開示されるシントンであり、シントンは、開放型又は閉鎖型のいずれかである。
【０４７４】
ある特定の実施形態において、ＡＤＣ又はこの薬学的に許容される塩は、式ｉ〜ｖｉ：
【０４７５】
【化９８】
2019521114.tif 000141
2019521114.tif 000142
2019521114.tif 000143
（式中、ｍは、１〜６の整数である。）
からなる群から選択される。ある特定の実施形態において、ｍは、１〜４の整数である。
【０４７６】
シントンをアクセス可能なリジン残基に連結するのに有用ないくつかの官能基Ｒｘ及び化学は公知であり、例として、限定ではなく、ＮＨＳ−エステル及びイソチオシアネートを含む。
【０４７７】
シントンをシステイン残基のアクセス可能な遊離スルフヒドリル基に連結するのに有用ないくつかの官能基Ｒｘ及び化学は公知であり、例として、限定ではなく、ハロアセチル及びマレイミドを含む。
【０４７８】
一実施形態において、Ｄは、Ｗ１．０１、Ｗ１．０２、Ｗ１．０３、Ｗ１．０４、Ｗ１．０５、Ｗ１．０６、Ｗ１．０７及びＷ１．０８並びにそれらの塩からなる群から選択され、Ｌは、リンカーＩＶａ．１〜ＩＶａ．８、ＩＶｂ．１〜ＩＶｂ．１９、ＩＶｃ．１〜ＩＶｃ．７、ＩＶｄ．１〜ＩＶｄ．４、Ｖａ．１〜Ｖａ．１２、Ｖｂ．１〜Ｖｂ．１０、Ｖｃ．１〜Ｖｃ．１１、Ｖｄ．１〜Ｖｄ．６、ＶＩａ．１、Ｖｅ．１〜Ｖｅ．２、ＶＩａ．１、Ｖ１ｃ．１〜Ｖ１ｃ．２、Ｖ１ｄ．１〜Ｖ１ｄ．４、ＶＩＩａ．１〜ＶＩＩａ．４、ＶＩＩｂ．１〜ＶＩＩｂ．８、ＶＩＩｃ．１〜ＶＩＩｃ．６及びそれらの塩からなる群から選択され、Ｒｘは、ＮＨＳ−エステル、イソチオシアネート、ハロアセチル及びマレイミドからなる群から選択される官能基を含む。
【０４７９】
しかしながら、コンジュゲート化学は、利用可能な側鎖基に制限されない。アミンのような側鎖は、適当な小分子をアミンに連結することにより、ヒドロキシルのような他の有用な基に変換されてもよい。このストラテジーは、多機能小分子を抗体のアクセス可能なアミノ酸残基の側鎖にコンジュゲートすることにより、抗体における利用可能な結合部位の数を増大させるために使用することができる。
【０４８０】
コンジュゲーションのためのアミノ酸残基を含むように抗体を操作してもよい。ＡＤＣの文脈において薬物をコンジュゲートするのに有用な、非遺伝子的にコードされたアミノ酸残基を含むために、抗体を操作するためのアプローチは、Ａｘｕｐら、２００３年、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ、１０９：１６１０１〜１６１０６頁及びＴｉａｎら、２０１４年、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ、１１１：１７７６〜１７７１頁において記載され、シントンをコードされていないアミノ酸に連結するのに有用な化学及び官能基である。
【０４８１】
本明細書に記載されたＡＤＣを作製するのに有用な例示的なシントンは、以下のシントンを含むが、これらに限定されない：
【０４８２】
【表５】
2019521114.tif 000144
2019521114.tif 000145
2019521114.tif 000146
2019521114.tif 000147
2019521114.tif 000148
2019521114.tif 000149
2019521114.tif 000150
2019521114.tif 000151
2019521114.tif 000152
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【０４８３】
ある特定の実施形態において、シントンは、シントン例２．１、２．２、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．１０、２．１２、２．１７、２．１８、２．２１、２．２２、２．２３、２．２４、２．２５、２．２６、２．２７、２．２８、２．２９、２．３０、２．３１、２．３２、２．３３、２．３４、２．３５、２．３６、２．３７、２．３８、２．３９、２．４０、２．４１、２．４２、２．４３、２．４４、２．４５、２．４６、２．４７、２．４８、２．４９、２．５０、２．５１、２．５２、２．５３、２．５４、２．５５、２．５６、２．５７、２．５８、２．５９、２．６０、２．６１、２．６２及び２．６３又はその薬学的に許容される塩からなる群から選択される。これらのシントンの化合物名を以下に示す：
Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド；
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド；
Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−アラニル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド；
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−アラニル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド；
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［１２−（｛（１ｓ，３ｓ）−３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）−４−メチル−３−オキソ−２，７，１０−トリオキサ−４−アザドデカ−１−イル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド；
Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［１２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）−４−メチル−３−オキソ−２，７，１０−トリオキサ−４−アザドデカ−１−イル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド；
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［１２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）−４−メチル−３−オキソ−２，７，１０−トリオキサ−４−アザドデカ−１−イル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド；
Ｎ−（｛２−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ］エトキシ｝アセチル）−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［１２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）−４−メチル−３−オキソ−２，７，１０−トリオキサ−４−アザドデカ−１−イル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド；
Ｎ−［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド；
Ｎ−［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］−Ｌ−アラニル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド；
Ｎ−［（２Ｒ）−４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２−スルホブタノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド；
Ｎ−［（２Ｓ）−４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２−スルホブタノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド；
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−３−スルホ−Ｌ−アラニル−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド；
４−［（１Ｅ）−３−（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）プロパ−１−エン−１−イル］−２−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−β−アラニル｝アミノ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
４−｛（１Ｅ）−３−［（｛２−［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エトキシ］エチル｝カルバモイル）オキシ］プロパ−１−エン−１−イル｝−２−（｛Ｎ−［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］−β−アラニル｝アミノ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
４−｛（１Ｅ）−３−［（｛２−［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エトキシ］エチル｝カルバモイル）オキシ］プロパ−１−エン−１−イル｝−２−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−β−アラニル｝アミノ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
４−［（１Ｅ）−１４−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）−６−メチル−５−オキソ−４，９，１２−トリオキサ−６−アザテトラデカ−１−エン−１−イル］−２−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−β−アラニル｝アミノ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−［２−（２−｛［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−［２−（２−｛［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３−｛２−［（｛［３−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−β−アラニル｝アミノ）−４−（β−Ｄ−ガラクトピラノシルオキシ）ベンジル］オキシ｝カルボニル）（メチル）アミノ］エトキシ｝−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸；
２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−［２−（２−｛［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−［２−（２−｛［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−（３−｛［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］アミノ｝プロポキシ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
１−Ｏ−（｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−２−［２−（２−｛［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニル｝カルバモイル）−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸；
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−（１−｛［３−（２−｛［（｛３−［（Ｎ−｛［２−（｛Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−３−スルホ−Ｄ−アラニル｝アミノ）エトキシ］アセチル｝−β−アラニル）アミノ］−４−（β−Ｄ−ガラクトピラノシルオキシ）ベンジル｝オキシ）カルボニル］（メチル）アミノ｝エトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−カルボン酸；
４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−［３−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−３−スルホ−Ｌ−アラニル｝アミノ）プロポキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−２−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−β−アラニル｝アミノ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−２−（｛Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−β−アラニル｝アミノ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−２−（｛Ｎ−［４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ブタノイル］−β−アラニル｝アミノ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
４−［１２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）−４−メチル−３−オキソ−２，７，１０−トリオキサ−４−アザドデカ−１−イル］−２−｛［Ｎ−（｛２−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ］エトキシ｝アセチル）−β−アラニル］アミノ｝フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−２−［（Ｎ−｛６−［（エテニルスルホニル）アミノ］ヘキサノイル｝−β−アラニル）アミノ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−２−（｛Ｎ−［６−（エテニルスルホニル）ヘキサノイル］−β−アラニル｝アミノ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−５−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−［２−（２−｛［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−｛２−［２−（｛Ｎ−［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］−３−スルホ−Ｌ−アラニル｝アミノ）エトキシ］エトキシ｝フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−｛２−［２−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−３−スルホ−Ｌ−アラニル｝アミノ）エトキシ］エトキシ｝フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３−｛［２２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３−メチル−４，２０−ジオキソ−７，１０，１３，１６−テトラオキサ−３，１９−ジアザドコサ−１−イル］オキシ｝−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸；
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３−｛［２８−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−９−メチル−１０，２６−ジオキソ−３，６，１３，１６，１９，２２−ヘキサオキサ−９，２５−ジアザオクタコサ−１−イル］オキシ｝−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸；
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３−｛２−［２−（２−｛［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］（メチル）アミノ｝エトキシ）エトキシ］エトキシ｝−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸；
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−（１−｛［３−（２−｛［４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２−スルホブタノイル］（メチル）アミノ｝エトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−カルボン酸；
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３−｛［３４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３−メチル−４，３２−ジオキソ−７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８−オクタオキサ−３，３１−ジアザテトラトリアコンタ−１−イル］オキシ｝−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸；
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３−｛［２８−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３−メチル−４，２６−ジオキソ−７，１０，１３，１６，１９，２２−ヘキサオキサ−３，２５−ジアザオクタコサ−１−イル］オキシ｝−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸；
２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−｛２−［２−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−３−スルホ−Ｌ−アラニル｝アミノ）エトキシ］エトキシ｝フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
Ｎ２−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｎ６−（３７−オキソ−２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５−ドデカオキサヘプタトリアコンタン−３７−イル）−Ｌ−リシル−Ｌ−アラニル−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド；
２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−［２−（２−｛［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−［３−（｛Ｎ−［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］−３−スルホ−Ｌ−アラニル｝アミノ）プロポキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−［３−（３−スルホプロポキシ）プロパ−１−イン−１−イル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド；
（６Ｓ）−２，６−アンヒドロ−６−（｛２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル｝アミノ）フェニル｝エチニル）−Ｌ−グロン酸；
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−［３−（３−スルホプロポキシ）プロピル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド；
２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−（５−｛［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝ペンチル）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−［１６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１４−オキソ−４，７，１０−トリオキサ−１３−アザヘキサデカ−１−イル］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
（６Ｓ）−２，６−アンヒドロ−６−（２−｛２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル｝アミノ）フェニル｝エチル）−Ｌ−グロン酸；
２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−（３−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝プロピル）フェニルＤ−グルコピラノシドウロン酸；
２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−｛４−［（｛（３Ｓ，５Ｓ）−３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２−オキソ−５−［（２−スルホエトキシ）メチル］ピロリジン−１−イル｝アセチル）アミノ］ブチル｝フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸；
３−｛（３−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−（β−Ｄ−グルコピラヌロノシルオキシ）フェニル｝プロピル）［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルプロパン−１−アミニウム；及び
（６Ｓ）−２，６−アンヒドロ−６−［２−（２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−｛［Ｎ−（｛（３Ｓ，５Ｓ）−３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２−オキソ−５−［（２−スルホエトキシ）メチル］ピロリジン−１−イル｝アセチル）−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル］アミノ｝フェニル）エチル］−Ｌ−グロン酸。
【０４８４】
一実施形態において、本発明は、構造式Ｄ−Ｌ２−Ｒｘ：
（式中、
Ｄは、構造式（ＩＩａ）に従うＢｃｌ−ｘＬ阻害薬であり、
Ｌ２は、ＩＶａ．８、ＩＶｂ．１６〜ＩＶｂ．１９、ＩＶｃ．３〜ＩＶｃ．６、ＩＶｄ．１〜ＩＶｄ．４、Ｖｂ．５〜Ｖｂ．１０、Ｖｃ．１１、Ｖｄ．３〜Ｖｄ．６、ＶＩｄ．４、ＶＩＩａ．１〜ＶＩＩａ．４、ＶＩＩｂ．１〜ＶＩＩｂ．８及びＶＩＩｃ．１〜ＶＩＩｃ．６からなる群から選択されるリンカーであり、
Ｒｘは、シントンを抗体に共有結合する能力がある官能基を含む部分であり、
Ａｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ１０ａ、Ｒ１０ｂ、Ｒ１０ｃ、Ｒ１１ａ、Ｒ１１ｂ、Ｚ１、Ｚ２及びｎは、構造式（ＩＩａ）：
【０４８５】
【化９９】
2019521114.tif 000179
又はその薬学的に許容される塩について既に定義された通りである。）
に従うシントン又はその薬学的に許容される塩を対象とする。
【０４８６】
ある特定の実施形態において、Ｒｘは、マレイミド、ハロゲン化アセチル又はビニルスルホンを含む。
【０４８７】
ある特定の実施形態において、Ｄは、構造式（ＩＩａ）の＃の位置に対応する水素が存在せず一価基を形成しているという点で変更されている、以下の化合物：
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−［１−（｛３，５−ジメチル−７−［２−（メチルアミノ）エトキシ］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−（１−｛［（１ｒ，３Ｒ，５Ｓ，７ｓ）−３，５−ジメチル−７−（２−｛２−［２−（メチルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−カルボン酸；
３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
３−［１−（｛３−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３−｛２−［（２−メトキシエチル）アミノ］エトキシ｝−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸；
３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−５−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−６−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−７−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸；
及びその薬学的に許容される塩からなる群から選択されるＢｃｌ−ｘＬ阻害剤である。
【０４８８】
ある特定の実施形態において、リンカーＬ２は、上で記載された構造式ＩＶｃ．５、ＩＶｃ．６、ＩＶｄ．３、ＩＶｄ．４、Ｖｂ．９、ＶＩＩａ．１、ＶＩＩａ．２、ＶＩＩｃ．１、ＶＩＩｃ．４、ＶＩＩｃ．５に従うセグメントを含み、
【０４８９】
【化１００】
2019521114.tif 000180
は、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤に対するリンカーの結合点を表す。
【０４９０】
ある特定の実施形態において、本発明のシントンは、シントン例２．５４（ＬＸ）、２．５５（ＭＪ）、２．５６（ＮＨ）、２．５７（ＯＶ）、２．５８（ＱＳ）、２．５９（ＳＧ）、２．６０（ＵＦ）、２．６１（ＶＤ）、２．６２（ＶＸ）、２．６３（ＷＤ）及びその薬学的に許容される塩からなる群から選択される。より特定の実施形態において、本発明のシントンは、シントン例２．６１（ＶＤ）及び２．６３（ＷＤ）及びその薬学的に許容される塩からなる群から選択される。
【０４９１】
一実施形態において、ＡＤＣ又はこの薬学的に許容される塩は、
【０４９２】
【化１０１】
2019521114.tif 000181
（式中、ｍは２であり、Ａｂは抗ｈＥＧＦＲ抗体であり、抗ｈＥＧＦＲ抗体は、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１ドメイン；並びに配列番号８に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１ドメインを含み、任意選択的に、抗ｈＥＧＦＲ抗体は、配列番号９に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択的に、抗ｈＥＧＦＲ抗体は、配列番号４１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域及び／又は配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含み、任意選択的に、抗ｈＥＧＦＲ抗体は、配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、任意選択的に、抗ｈＥＧＦＲ抗体は、配列番号１０２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。）
である。
【０４９３】
一実施形態において、ＡＤＣ又はこの薬学的に許容される塩は、
【０４９４】
【化１０２】
2019521114.tif 000182
（式中、ｍは２であり、Ａｂは抗ｈＥＧＦＲ抗体であり、抗ｈＥＧＦＲ抗体は、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１ドメイン；並びに配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１ドメインを含み、任意選択的に、抗ｈＥＧＦＲ抗体は、配列番号７２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号７３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択的に、抗ｈＥＧＦＲ抗体は、配列番号４１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域及び／又は配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含み、任意選択的に、抗ｈＥＧＦＲ抗体は、配列番号９３に記載のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号９５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、任意選択的に、抗ｈＥＧＦＲ抗体は、配列番号９４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号９５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。）
である。
【０４９５】
一実施形態において、ＡＤＣ又はこの薬学的に許容される塩は、
【０４９６】
【化１０３】
2019521114.tif 000183
（式中、ｍは２であり、Ａｂは抗ｈＥＧＦＲ抗体であり、抗ｈＥＧＦＲ抗体は、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１ドメイン；並びに配列番号８に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１ドメインを含み、任意選択的に、抗ｈＥＧＦＲ抗体は、配列番号９に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択的に、抗ｈＥＧＦＲ抗体は、配列番号４１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域及び／又は配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含み、任意選択的に、抗ｈＥＧＦＲ抗体は、配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、任意選択的に、抗ｈＥＧＦＲ抗体は、配列番号１０２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。）
である。
【０４９７】
一実施形態において、ＡＤＣ又はこの薬学的に許容される塩は、
【０４９８】
【化１０４】
2019521114.tif 000184
（式中、ｍは２であり、Ａｂは抗ｈＥＧＦＲ抗体であり、抗ｈＥＧＦＲ抗体は、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１ドメイン；並びに配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３ドメイン、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２ドメイン及び配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１ドメインを含み、任意選択的に、抗ｈＥＧＦＲ抗体は、配列番号７２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号７３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、任意選択的に、抗ｈＥＧＦＲ抗体は、配列番号４１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域及び／又は配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含み、任意選択的に、抗ｈＥＧＦＲ抗体は、配列番号９３に記載のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号９５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、任意選択的に、抗ｈＥＧＦＲ抗体は、配列番号９４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号９５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。）
である。
【０４９９】
ウォーヘッド及びシントンを含むＢｃｌ−ｘＬ阻害剤、及びこれを作製する方法は、ＷＯ２０１６／０９４５０５（ＡｂｂＶｉｅ  Ｉｎｃ．）に記載され、ＷＯ２０１６／０９４５０５を参照により本明細書に組み込む。
【０５００】
５．  ＡＤＣの合成方法
本明細書に記載されるＢｃｌ−ｘＬ阻害剤及びシントンは、有機化学の標準的な公知の技術を使用して合成されてもよい。完全な範囲の、本明細書に記載されるＢｃｌ−ｘＬ阻害剤及びシントンを合成するためにそのまま使用され得る又は修飾され得るＢｃｌ−ｘＬ阻害剤及びシントンを合成する一般的なスキームが、以下で提供される。ガイダンスに有用であり得る例示的なＢｃｌ−ｘＬ阻害剤及びシントンを合成する特定の方法は、実施例セクションにおいて提供される。
【０５０１】
ＡＤＣは、同様に、Ｈａｍｂｌｅｔｔら、２００４年、「Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ｌｏａｄｉｎｇ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ａ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｄｒｕｇ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ」、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、１０：７０６３〜７０７０頁；Ｄｏｒｏｎｉｎａら、２００３年、「Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｄ  ｈｉｇｈｌｙ  ｅｆｆｉｃａｃｉｏｕｓ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅｒａｐｙ」、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、２１（７）：７７８〜７８４頁；及びＦｒａｎｃｉｓｃｏら、２００３年、「ｃＡＣｌＯ−ｖｃＭＭＡＥ，ａｎ  ａｎｔｉ−ＣＤ３０−ｍｏｎｏｍｅｔｈｙｌａｕｒｉｓｔａｔｉｎ  Ｅ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ｗｉｔｈ  ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ」、Ｂｌｏｏｄ、１０２：１４５８〜１４６５頁において記載されたものに類似する方法のような標準的な方法により調製されてもよい。例えば１つの抗体当たり４つの薬物を有するＡＤＣは、３７℃において３０分間の過剰量のＤＴＴ又はＴＣＥＰのような還元試薬での抗体の部分的還元、次いで、ＤＰＢＳ中の１ｍＭ  ＤＴＰＡでのＳＥＰＨＡＤＥＸ（登録商標）Ｇ−２５樹脂を介した溶出によりバッファー交換により、調製されてもよい。溶出液を、さらなるＤＰＢＳで希釈し、抗体のチオール濃度は、５，５’−ジチオビス（２−ニトロ安息香酸）［エルマン試薬］を使用して測定されてもよい。過剰、例えば５倍のリンカー−薬物シントンは、４℃において１時間添加され、コンジュゲーション反応は、実質的に過剰、例えば２０倍のシステインの添加によりクエンチされてもよい。得られたＡＤＣ混合物は、ＰＢＳにおいて平衡化されたＳＥＰＨＡＤＥＸ  Ｇ−２５上で精製されて、未反応のシントンが取り除かれ、所望されるなら脱塩され、サイズ排除クロマトグラフィーにより精製されてもよい。次いで、得られたＡＤＣが、例えば０．２μｍのフィルターを通して、無菌濾過され、保存のために、所望されるなら凍結乾燥されてもよい。ある特定の実施形態において、鎖間システインジスルフィド結合の全てが、リンカー−薬物コンジュゲートにより置き換えられる。一実施形態は、シントンが抗体に共有結合する条件下で本明細書に記載されるシントンを抗体と接触させることを含む、ＡＤＣを作製する方法に関する。
【０５０２】
完全な範囲の、本明細書に記載されるＡＤＣを合成するために使用され得る例示的なＡＤＣを合成する特定の方法は、実施例のセクションにおいて提供される。
【０５０３】
５．１  Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤を合成する一般的な方法
【０５０４】
５．１．１  化合物（９）の合成
スキーム１
【０５０５】
【化１０５】
2019521114.tif 000185
【０５０６】
ピラゾール中間体、式（９）の合成が、スキーム１において記載されている。３−ブロモ−５，７−ジメチルアダマンタンカルボン酸（１）をＢＨ３−ＴＨＦで処理して、３−ブロモ−５，７−ジメチルアダマンタンメタノール（２）をもたらすことができる。反応は、典型的には、周囲温度で、これに限定されないがテトラヒドロフランのような溶媒中で行われる。１−（（３−ブロモ−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル）−１Ｈ−ピラゾール（３）は、３−ブロモ−５，７−ジメチルアダマンタンメタノール（２）を１Ｈ−ピラゾールとシアノメチレントリブチルホスホランの存在下で処理することにより、調製することができる。反応は、典型的には、高温において、これらに限定されないがトルエンのような溶媒中で行われる。１−（（３−ブロモ−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル）−１Ｈ−ピラゾール（３）を、これに限定されないがトリエチルアミンのような塩基の存在下でエタン−１，２−ジオールで処理して、２−｛［３，５−ジメチル−７−（１Ｈ−ピラゾール−１−イルメチル）トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］オキシ｝エタノール（４）をもたらすことができる。反応は、典型的には、高温で行われ、反応は、マイクロ波条件下で行われてもよい。２−｛［３，５−ジメチル−７−（１Ｈ−ピラゾール−１−イルメチル）トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］オキシ｝エタノール（４）は、これに限定されないがｎ−ブチルリチウムのような強塩基で処理し、続いて、ヨードメタンを添加して、２−（｛３，５−ジメチル−７−［（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エタノール（５）をもたらすことができる。添加及び反応は、典型的には、これに限定されないがテトラヒドロフランのような溶媒中で低温で行われ、その後、後処理のために周囲温度まで温められる。２−（｛３，５−ジメチル−７−［（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エタノール（５）を、Ｎ−ヨードスクシンイミドで処理して、１−（｛３，５−ジメチル−７−［２−（ヒドロキシ）エトキシ］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝メチル）−４−ヨード−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール（６）をもたらすことができる。反応は、典型的には、周囲温度で、これに限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような溶媒中で行われる。式（７）の化合物は、１−（｛３，５−ジメチル−７−［２−（ヒドロキシ）エトキシ］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝メチル）−４−ヨード−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール（６）を塩化メタンスルホニルと、これに限定されないがトリエチルアミンのような塩基の存在下で反応させて、続いて、アミンＨ２ＮＲ４を添加することにより、調製することができる。塩化メタンスルホニルとの反応は、典型的には、低温で行われ、その後、アミンとの反応のため温度を上げ、反応は、典型的には、これに限定されないがテトラヒドロフランのような溶媒中で行われる。式（７）の化合物を、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボネートと、４−ジメチルアミノピリジンの存在下で反応させて、式（８）の化合物をもたらすことができる。反応は、典型的には、周囲温度で、これに限定されないがテトラヒドロフランのような溶媒中で行われる。式（８）の化合物のホウ素化が、本明細書に記載された、文献において容易に入手可能な条件下で行われて、式（９）の化合物をもたらすことができる。
【０５０７】
５．１．２  化合物（１４）の合成
スキーム２
【０５０８】
【化１０６】
2019521114.tif 000186
【０５０９】
中間体、式（１４）の合成が、スキーム２において記載されている。式（１２）の化合物は、式（１０）の化合物をｔｅｒｔ−ブチル３−ブロモ−６−フルオロピコリネート（１１）と、これらに限定されないがＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、又はトリメチルアミンのような塩基の存在下で反応させることにより、調製することができる。反応は、典型的には、不活性雰囲気下で、高温で、これに限定されないがジメチルスルホキシドのような溶媒中で行われる。式（１２）の化合物を４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（１３）と、本明細書又は文献において記載されるホウ素化条件下で反応させて、式（１４）の化合物をもたらすことができる。
【０５１０】
５．１．３．  化合物（２４）の合成
スキーム３
【０５１１】
【化１０７】
2019521114.tif 000187
【０５１２】
スキーム３は、アダマンタインに繋ぎ止められた−Ｎｕ（求核剤）及びｔ−ブチルエステルで保護されたピコリン酸塩を含有する中間体を作製する方法を記載する。メチル２−（６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボキシレート（１４）を、１−（｛３，５−ジメチル−７−［２−（ヒドロキシ）エトキシ］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝メチル）−４−ヨード−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール（６）と、本明細書又は文献に記載されたスズキカップリング条件下で反応させて、メチル２−（６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−（１−（（３−（２−ヒドロキシエトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボキシレート（１７）をもたらすことができる。メチル２−（６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−（１−（（３−（２−ヒドロキシエトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボキシレート（１７）を、これに限定されないがトリエチルアミンのような塩基で処理し、続いて、塩化メタンスルホニルで処理して、メチル２−（６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−（１−（（３，５−ジメチル−７−（２−（（メチルスルホニル）オキシ）エトキシ）アダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボキシレート（１８）をもたらすことができる。添加は、典型的には、これに限定されないが、ジクロロメタンのような溶媒中で低温で行われ、その後、周囲温度まで温められる。メチル２−（６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−（１−（（３，５−ジメチル−７−（２−（（メチルスルホニル）オキシ）エトキシ）アダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボキシレート（１８）を、式（１９）の求核剤（Ｎｕ）と反応させて、式（２０）の化合物をもたらすことができる。求核剤の例は、アジ化ナトリウム、メチルアミン、アンモニア及びジ−ｔｅｒｔ−ブチルイミノジカルボネートを含むが、これらに限定されない。式（２０）の化合物を、水酸化リチウムと反応させて、式（２１）の化合物をもたらすことができる。反応は、典型的には、周囲温度で、これらに限定されないがテトラヒドロフラン、メタノール、水又はこれらの混合物のような溶媒中で行われる。式（２１）の化合物を、式（２２）（式中、Ａｒは、本明細書に記載された通りである。）の化合物と本明細書に記載された又は文献における容易に入手可能なアミド化条件下で反応させて、式（２３）の化合物をもたらすことができる。式（２３）の化合物を、トリフルオロ酢酸又はＨＣｌのような酸で、これらに限定されないがジクロロメタン又はジオキサンのような溶媒中で処理して、式（２４）の化合物をもたらすことができる。
【０５１３】
５．１．４  化合物（３４）の合成
スキーム４
【０５１４】
【化１０８】
2019521114.tif 000188
【０５１５】
化合物（３４）の合成が、スキーム４において記載されている。式（２５）の化合物を、式（２６）（式中、Ａｒは、本明細書に記載された通りである。）の化合物と本明細書に記載された又は文献における容易に入手可能なアミド化条件下で反応させて、式（２７）の化合物をもたらすことができる。式（２７）の化合物を、ｔｅｒｔ−ブチル３−ブロモ−６−フルオロピコリネート（１１）と、これに限定されないが、炭酸セシウムのような塩基の存在下で反応させて、式（２８）の化合物をもたらすことができる。反応は、典型的には、高温において、これに限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミドのような溶媒中で行われる。式（３０）の化合物を、式（２８）の化合物を式（２９）のボロン酸エステル（又は均等なボロン酸）と、本明細書又は文献に記載されたスズキカップリング条件下で反応させることにより、調製することができる。式（３１）の化合物は、式（３０）の化合物をトリフルオロ酢酸で処理することにより、調製することができる。反応は、典型的には、周囲温度で、これに限定されないがジクロロメタンのような溶媒中で行われる。式（３１）の化合物を、２−メトキシアセトアルデヒド（３２）と反応させて、続いて、これらに限定されないが水素化ホウ素ナトリウムのような還元剤と反応させて、式（３３）の化合物をもたらすことができる。反応は、典型的には、周囲温度で、これらに限定されないがジクロロメタン、メタノール又はこれらの混合物のような溶媒中で行われる。式（３３）の化合物を、トリフルオロ酢酸又はＨＣｌのような酸で、これらに限定されないがジクロロメタン又はジオキサンのような溶媒中で処理して、式（３４）の化合物をもたらすことができる。
【０５１６】
５．２  シントンを合成する一般的な方法
以下のスキームにおいて、可変Ａｒ２は、式（ＩＩａ）の化合物中の
【０５１７】
【化１０９】
2019521114.tif 000189
を表し、可変Ａｒ１は、式（ｉｉａ）の化合物中の
【０５１８】
【化１１０】
2019521114.tif 000190
を表す。
【０５１９】
５．２．１  化合物（８９）の合成
スキーム５
【０５２０】
【化１１１】
2019521114.tif 000191
【０５２１】
スキーム５において示される通り、式（７７）（式中、ＰＧは、適当な塩基不安定な保護基であり、ＡＡ（２）は、Ｃｉｔ、Ａｌａ又はＬｙｓである。）の化合物を４−（アミノフェニル）メタノール（７８）と、本明細書において記載される又は文献において容易に入手可能なアミド化条件下で反応させて、化合物（７９）をもたらすことができる。化合物（８０）は、化合物（７９）を、これに限定されないがジエチルアミンのような塩基と反応させることにより、調製することができる。反応は、典型的には、周囲温度で、これに限定されないがＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような溶媒中で行われる。化合物（８１）（式中、ＰＧは、適当な塩基又は酸不安定な保護基であり、ＡＡ（１）は、Ｖａｌ又はＰｈｅである。）は、化合物（８０）と、本明細書において記載される又は文献において容易に入手可能なアミド化条件下で反応させて、化合物（８２）をもたらすことができる。化合物（８３）は、化合物（８２）を、必要に応じてジエチルアミン又はトリフルオロ酢酸で処理することにより、調製することができる。反応は、典型的には、周囲温度で、これに限定されないがジクロロメタンのような溶媒中で行われる。化合物（８４）（式中、Ｓｐはスペーサーである。）を化合物（８３）と反応させて、化合物（８５）をもたらすことができる。反応は、典型的には、周囲温度で、これに限定されないがＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような溶媒中で行われる。化合物（８５）をビス（４−ニトロフェニル）カルボネート（８６）と、これに限定されないがＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンのような塩基の存在下で反応させて、化合物（８７）をもたらすことができる。反応は、典型的には、周囲温度で、これに限定されないがＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような溶媒中で行われる。化合物（８７）を化合物（８８）と、これに限定されないがＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンのような塩基の存在下で反応させて、化合物（８９）をもたらすことができる。反応は、典型的には、周囲温度で、これに限定されないがＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような溶媒中で行われる。
【０５２２】
５．２．２  化合物（９４）及び（９６）の合成
スキーム６
【０５２３】
【化１１２】
2019521114.tif 000192
【０５２４】
スキーム６は、１回分の、ジペプチドシントンへの代わりのｍＡｂ−リンカー結合を記載する。化合物（８８）を化合物（９０）と、これに限定されないがＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンのような塩基の存在下で反応させて、化合物（９１）をもたらすことができる。反応は、典型的には、周囲温度で、これに限定されないがＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような溶媒中で行われる。化合物（９２）は、化合物（９１）をジエチルアミンと反応させることにより、調製することができる。反応は、典型的には、周囲温度で、これに限定されないがＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような溶媒中で行われる。化合物（９３）（式中、Ｘ１は、Ｃｌ、Ｂｒ、又はＩである。）を化合物（９２）と本明細書に記載される又は文献において容易に入手可能なアミド化条件下で反応させて、化合物（９４）をもたらすことができる。化合物（９２）を式（９５）の化合物と本明細書に記載される又は文献において容易に入手可能なアミド化条件下で反応させて、化合物（９６）をもたらすことができる。
【０５２５】
５．２．３  化合物（１０６）の合成
スキーム７
【０５２６】
【化１１３】
2019521114.tif 000193
【０５２７】
スキーム７は、ビニルグルクロニドリンカー中間体及びシントンの合成を記載する。（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−ブロモ−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（９７）を、酸化銀、続いて、４−ブロモ−２−ニトロフェノール（９８）で処理して、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（４−ブロモ−２−ニトロフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（９９）をもたらすことができる。反応は、典型的には、周囲温度で、これに限定されないがアセトニトリルのような溶媒中で行われる。（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（４−ブロモ−２−ニトロフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（９９）を（Ｅ）−ｔｅｒｔ−ブチルジメチル（（３−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）アリル）オキシ）シラン（１００）と、これに限定されないが炭酸ナトリウムのような塩基及びこれに限定されないがトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（Ｐｄ２（ｄｂａ）３）のような触媒の存在下で反応させて、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（４−（（Ｅ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）プロパ−１−エン−１−イル）−２−ニトロフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１０１）をもたらすことができる。反応は、典型的には、高温で、これに限定されないがテトラヒドロフランのような溶媒中で行われる。（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（２−アミノ−４−（（Ｅ）−３−ヒドロキシプロパ−１−エン−１−イル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１０２）は、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（４−（（Ｅ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）プロパ−１−エン−１−イル）−２−ニトロフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１０１）を亜鉛と、これに限定されないが塩酸のような酸の存在下で反応させることにより、調製することができる。添加は、典型的には、これらに限定されないがテトラヒドロフラン、水又はこれらの混合物のような溶媒中で、低温で行われ、その後、周囲温度まで温められる。（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（２−アミノ−４−（（Ｅ）−３−ヒドロキシプロパ−１−エン−１−イル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１０２）は、（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（３−クロロ−３−オキソプロピル）カルバメート（１０３）と、これに限定されないがＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンのような塩基の存在下で反応させて、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（２−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）−４−（（Ｅ）−３−ヒドロキシプロパ−１−エン−１−イル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１０４）をもたらすことができる。添加は、典型的には、これに限定されないがジクロロメタンのような溶媒中で低温で行われ、その後、周囲温度まで温められる。化合物（８８）は、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（２−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）−４−（（Ｅ）−３−ヒドロキシプロパ−１−エン−１−イル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１０４）と、これに限定されないがＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンのような塩基の存在下で反応させ、続いて、後処理し、式（１０５）の化合物と、これに限定されないがＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンのような塩基の存在下で反応させて、化合物（１０６）をもたらすことができる。反応は、典型的には、周囲温度で、これに限定されないがＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような溶媒中で行われる。
【０５２８】
５．２．４  化合物（１１５）の合成
スキーム８
【０５２９】
【化１１４】
2019521114.tif 000194
【０５３０】
スキーム８は、代表的な２−エーテルグルクロニドリンカー中間体及びシントンの合成を記載する。（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−ブロモ−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（９７）を２，４−ジヒドロキシベンズアルデヒド（１０７）と、炭酸銀の存在下で反応させて、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（４−ホルミル−３−ヒドロキシフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１０８）をもたらすことができる。反応は、典型的には、高温で、これに限定されないがアセトニトリルのような溶媒中で行われる。（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（４−ホルミル−３−ヒドロキシフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１０８）を水素化ホウ素ナトリウムで処理して、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（３−ヒドロキシ−４−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１０９）をもたらすことができる。添加は、典型的には、これらに限定されないがテトラヒドロフラン、メタノール又はこれらの混合物のような溶媒中で低温で行われ、その後、周囲温度まで温められる。（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−３−ヒドロキシフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１１０）は、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（３−ヒドロキシ−４−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１０９）をｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロライドとイミダゾールの存在下で反応させることにより、調製することができる。反応は、典型的には、低温で、これに限定されないがジクロロメタンのような溶媒中で行われる。（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（３−（２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１１１）は、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−３−ヒドロキシフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１１０）を（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エチル）カルバメートと、トリフェニルホスフィン及びこれに限定されないがジ−ｔｅｒｔ−ブチルジアゼン−１，２−ジカルボキシレートのようなアゾジカルボキシレートの存在下で反応させることにより、調製することができる。反応は、典型的には、周囲温度で、これに限定されないがトルエンのような溶媒中で行われる。（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（３−（２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１１１）を酢酸で処理して、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（３−（２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−４−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１１２）をもたらすことができる。反応は、典型的には、周囲温度で、これらに限定されないが水、テトラヒドロフラン又はこれらの混合物のような溶媒中で行われる。（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（３−（２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−４−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１１３）は、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（３−（２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−４−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１１２）をビス（４−ニトロフェニル）カルボネートと、これに限定されないがＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンのような塩基の存在下で反応させることにより、調製することができる。反応は、典型的には、周囲温度で、これに限定されないがＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような溶媒中で行われる。（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（３−（２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−４−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１１３）を化合物（８８）で、これに限定されないがＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンのような塩基の存在下で処理し、続いて、水酸化リチウムで処理して、化合物（１１４）をもたらすことができる。反応は、典型的には、周囲温度で、これらに限定されないがＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、メタノール又はこれらの混合物のような溶媒中で行われる。化合物（１１５）は、化合物（１１４）を化合物（８４）と、これに限定されないがＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンのような塩基の存在下で反応させることにより、調製することができる。反応は、典型的には、周囲温度で、これに限定されないがＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような溶媒中で行われる。
【０５３１】
５．２．５  化合物（１１９）の合成
スキーム９
【０５３２】
【化１１５】
2019521114.tif 000195
【０５３３】
スキーム９は、糖リンカーへの第２の可溶化基の導入を記載する。化合物（１１６）を（Ｒ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−３−スルホプロパン酸（１１７）と、本明細書に記載される又は文献において容易に入手可能なアミド化条件下で反応させ、続いて、これに限定されないがジエチルアミンのような塩基で処理して、化合物（１１８）をもたらすことができる。化合物（１１８）を化合物（８４）（式中、Ｓｐはスペーサーである。）と、本明細書に記載される又は文献において容易に入手可能なアミド化条件下で反応させて、化合物（１１９）をもたらすことができる。
【０５３４】
５．２．６  化合物（１２９）の合成
スキーム１０
【０５３５】
【化１１６】
2019521114.tif 000196
【０５３６】
スキーム１０は、４−エーテルグルクロニドリンカー中間体及びシントンの合成を記載する。４−（２−（２−ブロモエトキシ）エトキシ）−２−ヒドロキシベンズアルデヒド（１２２）は、２，４−ジヒドロキシベンズアルデヒド（１２０）を１−ブロモ−２−（２−ブロモエトキシ）エタン（１２１）と、これに限定されないが炭酸カリウムのような塩基の存在下で反応させることにより、調製することができる。反応は、典型的には、高温で、これに限定されないがアセトニトリルのような溶媒中で行われる。４−（２−（２−ブロモエトキシ）エトキシ）−２−ヒドロキシベンズアルデヒド（１２２）をアジ化ナトリウムで処理して、４−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）−２−ヒドロキシベンズアルデヒド（１２３）をもたらすことができる。反応は、典型的には、周囲温度で、これに限定されないがＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような溶媒中で行われる。（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（５−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）−２−ホルミルフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１２５）は、４−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）−２−ヒドロキシベンズアルデヒド（１２３）を（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−ブロモ−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１２４）と、酸化銀の存在下で反応させることにより、調製することができる。反応は、典型的には、周囲温度で、これに限定されないがアセトニトリルのような溶媒中で行われる。Ｐｄ／Ｃの存在下での（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（５−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）−２−ホルミルフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１２５）の水素化により、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（５−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）−２−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１２６）がもたらされる。反応は、典型的には、周囲温度で、これに限定されないがテトラヒドロフランのような溶媒中で行われる。（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（５−（２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−２−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１２７）は、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（５−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）−２−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１２６）を（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルカルボノクロリデートで、これに限定されないがＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンのような塩基の存在下で処理することにより、調製することができる。反応は、典型的には、低温で、これに限定されないがジクロロメタンのような溶媒中で行われる。化合物（８８）を（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（５−（２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−２−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１２７）と、これに限定されないがＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンのような塩基の存在下で反応させ、続いて、水酸化リチウムで処理して、化合物（１２８）をもたらすことができる。反応は、典型的には、低温で、これに限定されないがＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような溶媒中で行われる。化合物（１２９）は、化合物（１２８）を化合物（８４）と、これに限定されないがＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンのような塩基の存在下で反応させることにより、調製することができる。反応は、典型的には、周囲温度で、これに限定されないがＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような溶媒中で行われる。
【０５３７】
５．２．７  化合物（１３９）の合成
スキーム１１
【０５３８】
【化１１７】
2019521114.tif 000197
【０５３９】
スキーム１１は、カルバメートグルクロニド中間体及びシントンの合成を記載する。２−アミノ−５−（ヒドロキシメチル）フェノール（１３０）を水素化ナトリウムで処理して、次いで、２−（２−アジドエトキシ）エチル４−メチルベンゼンスルホン酸塩（１３１）と反応させて、（４−アミノ−３−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）フェニル）メタノール（１３２）をもたらすことができる。反応は、典型的には、高温で、これに限定されないがＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような溶媒中で行われる。２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）−４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）アニリン（１３３）は、（４−アミノ−３−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）フェニル）メタノール（１３２）をｔｅｒｔ−ブチルジメチルクロロシランと、イミダゾールの存在下で反応させることにより、調製することができる。反応は、典型的には、周囲温度で、これに限定されないがテトラヒドロフランのような溶媒中で行われる。２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）−４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）アニリン（１３３）をホスゲンで、これに限定されないがトリメチルアミンのような塩基の存在下で処理して、続いて、（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−ヒドロキシ−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１３４）と、これに限定されないがトリメチルアミンのような塩基の存在下で反応させて２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（（（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）−４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）フェニル）カルバモイル）オキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１３５）をもたらすことができる。反応は、典型的には、これに限定されないがトルエンのような溶媒中で行われ、添加は、典型的には、低温で行われ、その後、ホスゲン添加の後に、周囲温度まで温められ、（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−ヒドロキシ−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１３４）添加の後に、高温で加熱される。（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（（（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）−４−（ヒドロキシメチル）フェニル）カルバモイル）オキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１３６）は、２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（（（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）−４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）フェニル）カルバモイル）オキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１３５）をｐ−トルエンスルホン酸一水和物と反応させることにより、調製することができる。反応は、典型的には、周囲温度で、これに限定されないがメタノールのような溶媒中で行われる。（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（（（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）−４−（ヒドロキシメチル）フェニル）カルバモイル）オキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１３６）をビス（４−ニトロフェニル）カルボネートと、これに限定されないがＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンのような塩基の存在下で反応させて、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（（（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）−４−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェニル）カルバモイル）オキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１３７）をもたらすことができる。反応は、典型的には、周囲温度で、これに限定されないがＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような溶媒中で行われる。（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（（（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）−４−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェニル）カルバモイル）オキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１３７）を化合物と、これに限定されないがＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンのような塩基の存在下で反応させ、続いて、水酸化リチウム水溶液で処理して、化合物（１３８）をもたらすことができる。第１のステップは、典型的には、周囲温度で、これに限定されないがＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような溶媒中で行われ、第２のステップは、典型的には、低温で、これに限定されないがメタノールのような溶媒中で行われる。化合物（１３８）をトリス（２−カルボキシエチル））ホスフィンヒドロクロライドで処理して、続いて、化合物（８４）とこれに限定されないがＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンのような塩基の存在下で反応させて、化合物（１３９）をもたらすことができる。トリス（２−カルボキシエチル））ホスフィンヒドロクロライドとの反応は、典型的には、周囲温度で、これらに限定されないがテトラヒドロフラン、水又はこれらの混合物のような溶媒中で行われ、Ｎ−スクシンイミジル６−マレイミドヘキサノエートとの反応は、典型的には、周囲温度で、これに限定されないがＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような溶媒中で行われる。
【０５４０】
５．２．８  化合物（１４９）の合成
スキーム１２
【０５４１】
【化１１８】
2019521114.tif 000198
【０５４２】
スキーム１２は、ガラクトシドリンカー中間体及びシントンの合成を記載する。（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−（アセトキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２，３，４，５−テトライルテトラアセテート（１４０）を、酢酸中のＨＢｒで処理して、（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−（アセトオキシメチル）−６−ブロモテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１４１）をもたらすことができる。反応は、典型的には、周囲温度で、窒素雰囲気下で行われる。（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−６−（４−ホルミル−２−ニトロフェノキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１４３）は、（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−６−ブロモテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１４１）を酸化銀（Ｉ）で、４−ヒドロキシ−３−ニトロベンズアルデヒド（１４２）の存在下で処理することにより、調製することができる。反応は、典型的には、周囲温度で、これに限定されないがアセトニトリルのような溶媒中で行われる。（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−６−（４−ホルミル−２−ニトロフェノキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１４３）を水素化ホウ素ナトリウムで処理して、（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−６−（４−（ヒドロキシメチル）−２−ニトロフェノキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１４４）をもたらすことができる。反応は、典型的には、低温で、これらに限定されないがテトラヒドロフラン、メタノール又はこれらの混合物のような溶媒中で行われる。（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−６−（２−アミノ−４−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１４５）は、（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−６−（４−（ヒドロキシメチル）−２−ニトロフェノキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１４４）を亜鉛で、塩酸の存在下で処理することにより、調製することができる。反応は、典型的には、低温で、窒素雰囲気下で、これに限定されないがテトラヒドロフランのような溶媒中で行われる。（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−２−（２−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）−４−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（アセトキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１４６）は、（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−６−（２−アミノ−４−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１４５）を（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（３−クロロ−３−オキソプロピル）カルバメート（１０３）と、これに限定されないがＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンのような塩基の存在下で反応させることにより、調製することができる。反応は、典型的には、低温で、これに限定されないがジクロロメタンのような溶媒中で行われる。（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−２−（２−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）−４−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（アセトキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１４６）をビス（４−ニトロフェニル）カルボネートと、これに限定されないがＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンのような塩基の存在下で反応させて、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−２−（２−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）−４−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（アセトキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１４７）をもたらすことができる。反応は、典型的には、低温で、これに限定されないがＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような溶媒中で行われる。（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−２−（２−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）−４−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（アセトキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１４７）を化合物（８８）と、これに限定されないがＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンのような塩基の存在下で反応させ、続いて、水酸化リチウムで処理して、化合物（１４８）をもたらすことができる。第１のステップは、典型的には、低温で、これに限定されないがＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような溶媒中で行われ、第２のステップは、典型的には、周囲温度で、これに限定されないがメタノールのような溶媒中で行われる。化合物（１４８）を化合物（８４）（式中、Ｓｐはスペーサーである。）で、これに限定されないがＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンのような塩基の存在下で処理して、化合物（１４９）をもたらすことができる。反応は、典型的には、周囲温度で、これに限定されないがＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような溶媒中で行われる。
【０５４３】
５．３  抗ＥＧＦＲＡＤＣを合成する一般的な方法
本発明はまた、構造式（Ｉ）：
【０５４４】
【化１１９】
2019521114.tif 000199
（式中、Ｄ、Ｌ、ＬＫ、Ａｂ及びｍは、詳細な説明のセクションにおいて定義された通りである。）に従う抗ＥＧＦＲＡＤＣを調製するプロセスを開示する。プロセスは、
水溶液中の抗体を有効量のジスルフィド還元剤で、３０〜４０℃で少なくとも１５分間処理し、次いで、抗体溶液を２０〜２７℃まで冷却すること、
還元された抗体溶液に、２．１〜２．６３（表５）の群から選択されるシントンを含む水／ジメチルスルホキシドの溶液を添加すること、
溶液のｐＨを７．５〜８．５のｐＨに調整すること、
反応を４８〜８０時間にわたって進ませて、ＡＤＣを形成すること
を含み、エレクトロスプレー質量分析によって測定すると、スクシンイミドからスクシンアミドへの加水分解ごとに質量が１８±２ａｍｕずつ変わり、
ＡＤＣが、疎水性相互作用クロマトグラフィーによって任意選択的に精製される。
【０５４５】
ある特定の実施形態において、Ａｂは、ＡｂＡ、ＡｂＢ、ＡｂＧ及びＡｂＫを含む、本明細書において開示される抗ｈＥＧＦＲ抗体の重鎖及び軽鎖ＣＤＲを含む抗ｈＥＧＦＲ抗体である。
【０５４６】
本発明はまた、上で記載された方法により調製される抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣを対象とする。
【０５４７】
ある特定の実施形態において、本出願において開示される抗ＥＧＦＲＡＤＣは、ｈＥＧＦＲ細胞表面受容体又は腫瘍細胞上で発現される腫瘍関連抗原に結合する抗体を薬物−リンカーシントンと、薬物−リンカーシントンが抗体に、式（ＩＩｄ）及び（ＩＩｅ）において示されるマレイミド部分を介して共有結合する条件下で接触させることにより、形成される。
【０５４８】
【化１２０】
2019521114.tif 000200
（式中、Ｄは、上で記載された構造式（ＩＩａ）に従うＢｃｌ−ｘＬ阻害薬であり、Ｌ１は、抗体へのシントンの結合の際に、マレイミドから形成されないリンカーの部分であり；薬物−リンカーシントンは、シントン例２．１〜２．６３（表５）又はその薬学的に許容される塩からなる群から選択される。）
ある特定の実施形態において、接触させるステップは、抗ＥＧＦＲＡＤＣが、２、３又は４のＤＡＲを有するような条件下で実行される。
【０５４９】
６．抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣの精製
ＡＤＣの精製は、ある特定のＤＡＲを有するＡＤＣを回収するような方法で達成されてもよい。例えばＨＩＣ樹脂を使用して、最適な薬物抗体比（ＤＡＲ）、例えば４以下のＤＡＲを有するＡＤＣから高い薬物負荷ＡＤＣを分離してもよい。一実施形態において、疎水性樹脂は、所望されないＡＤＣ、すなわち、より高い薬物負荷ＡＤＣが、樹脂に結合し、混合物から選択的に除去され得るように、ＡＤＣ混合物に添加される。ある特定の実施形態において、ＡＤＣの分離は、ＡＤＣ混合物（例えば、４以下のＡＤＣの薬物負荷種及び６以上のＡＤＣの薬物負荷種を含む混合物）を疎水性樹脂と接触させることにより達成されてもよく、樹脂の量は、ＡＤＣ混合物から取り除かれる薬物負荷種の結合を可能にするのに十分である。樹脂とＡＤＣ混合物は、取り除かれるＡＤＣ種（例えば６以上の薬物負荷種）が、樹脂に結合し、ＡＤＣ混合物中の他のＡＤＣ種から分離することができるように、一緒に混合される。方法において使用される樹脂の量は、取り除かれるべき種と樹脂の間の重量比に基づき、使用される樹脂の量は、所望される薬物負荷種の十分な結合を可能にしない。したがって、方法を使用して、平均ＤＡＲを４未満まで低減してもよい。さらに、本明細書に記載される精製方法を使用して、薬物負荷種、例えば、４以下の薬物負荷種、３以下の薬物負荷種、２以下の薬物負荷種、１以下の薬物負荷種の任意の所望される範囲を有するＡＤＣを単離してもよい。
【０５５０】
ある特定の種の分子は、種と疎水性樹脂の間の疎水性相互作用に基づき、表面に結合する。一実施形態において、本発明の方法は、疎水性樹脂とＡＤＣの混合物の相互混合を利用する精製プロセスを指し、混合物に添加される樹脂の量が、どの種（例えば６以上のＤＡＲを有するＡＤＣ）が結合するかを決定する。発現系（例えば哺乳動物発現系）からの抗体の生産及び精製後、抗体は還元され、コンジュゲーション反応を介して薬物にカップリングされる。得られたＡＤＣ混合物は、しばしば、ＤＡＲの範囲、例えば１〜８を有するＡＤＣを含有する。一実施形態において、ＡＤＣ混合物は、４以下の薬物負荷種及び６以上の薬物負荷種を含む。本発明の方法により、４以下の薬物負荷種を有するＡＤＣが選択され、より高い薬物負荷を有するＡＤＣ（例えば６以上の薬物負荷種を有するＡＤＣ）から分離されるように、ＡＤＣ混合物は、これに限定されないがバッチプロセスのようなプロセスを使用して精製されてもよい。特に、本明細書に記載される精製方法を使用して、任意の所望される範囲のＤＡＲ、例えば４以下のＤＡＲ、３以下のＤＡＲ又は２以下のＤＡＲを有するＡＤＣを単離してもよい。
【０５５１】
したがって、一実施形態において、４以下の薬物負荷種及び６以上の薬物負荷種を含むＡＤＣ混合物を疎水性樹脂と接触させて、樹脂混合物を形成することができ、ＡＤＣ混合物と接触させる疎水性樹脂の量は、樹脂への６以上の薬物負荷種の結合を可能にするのに十分であるが、４以下の薬物負荷種の有意な結合を可能にせず；ＡＤＣを含む組成物が得られるように、疎水性樹脂をＡＤＣ混合物から取り除き、ここで組成物は、１５％未満の６以上の薬物負荷種を含み、ＡＤＣは、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤にコンジュゲートされた抗体を含む。別の実施形態において、本発明の方法は、４以下の薬物負荷種及び６以上の薬物負荷種を含むＡＤＣ混合物を、疎水性樹脂と接触させて、樹脂混合物を形成するステップであって、ＡＤＣ混合物と接触させる疎水性樹脂の量が、樹脂への６以上の薬物負荷種の結合を可能にするのに十分であるが、４以下の薬物負荷種の有意な結合を可能にしない、ステップ；及びＡＤＣを含む組成物が得られるように、ＡＤＣ混合物から疎水性樹脂を取り除くステップであって、組成物が、１５％未満の６以上の薬物負荷種を含み、ＡＤＣが、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤にコンジュゲートされた抗体を含み、疎水性樹脂重量が、ＡＤＣ混合物における６以上の薬物負荷種の重量の３〜１２倍である、ステップを含む。
【０５５２】
本明細書に記載されるＡＤＣ分離方法は、バッチ精製方法を使用して行われてもよい。バッチ精製プロセスは、一般に、容器内でＡＤＣ混合物を疎水性樹脂に添加すること、混合すること、及び続いて、上清から樹脂を分離することを含む。例えば、バッチ精製の文脈において、疎水性樹脂は、所望される平衡バッファーにおいて調製されてもよく又は平衡化されてもよい。これにより、疎水性樹脂のスラリーが得られ得る。次いで、ＡＤＣ混合物をスラリーと接触させ、疎水性樹脂により分離されるべきＡＤＣの特定の種が吸着され得る。次いで、疎水性樹脂材料に結合しない所望されるＡＤＣを含む溶液は、例えば、濾過により、又はスラリーを沈殿させ、上清を取り除くことにより、スラリーから分離され得る。得られたスラリーは、１回以上の洗浄ステップに供され得る。結合したＡＤＣを溶出するために、塩濃度を下げることができる。一実施形態において、本発明において使用されるプロセスは、５０ｇ以下の疎水性樹脂を含む。
【０５５３】
したがって、バッチ方法を使用して、４以下の薬物負荷種及び６以上の薬物負荷種を含むＡＤＣ混合物を疎水性樹脂と接触させて、樹脂混合物を形成することができ、ＡＤＣ混合物と接触させる疎水性樹脂の量は、樹脂への６以上の薬物負荷種の結合を可能にするのに十分であるが、４以下の薬物負荷種の有意な結合を可能にせず；ＡＤＣを含む組成物が得られるように、疎水性樹脂をＡＤＣ混合物から取り除き、ここで組成物は、１５％未満の６以上の薬物負荷種を含み、ＡＤＣは、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤にコンジュゲートされた抗体を含む。別の実施形態において、バッチ方法を使用して、４以下の薬物負荷種及び６以上の薬物負荷種を含むＡＤＣ混合物を、疎水性樹脂と接触させて、樹脂混合物を形成し、ＡＤＣ混合物と接触させる疎水性樹脂の量は、樹脂への６以上の薬物負荷種の結合を可能にするのに十分であるが、４以下の薬物負荷種の有意な結合を可能にせず；ＡＤＣを含む組成物が得られるように、ＡＤＣ混合物から疎水性樹脂を取り除き、ここで組成物は、１５％未満の６以上の薬物負荷種を含み、ＡＤＣは、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤にコンジュゲートされた抗体を含み、疎水性樹脂重量は、ＡＤＣ混合物における６以上の薬物負荷種の重量の３〜１２倍である。
【０５５４】
あるいは、別の実施形態において、精製は、循環プロセスを使用して行われてもよく、これにより、樹脂が容器に充填され、分離されるべき特定の種のＡＤＣが除去されるまで、ＡＤＣ混合物は、疎水性樹脂ベッドを通過する。次いで、上清（所望されるＡＤＣ種を含有する）が、容器から汲み上げられ、樹脂ベッドが、洗浄ステップに供されてもよい。
【０５５５】
循環プロセスを使用して、４以下の薬物負荷種及び６以上の薬物負荷種を含むＡＤＣ混合物を疎水性樹脂と接触させて、樹脂混合物を形成することができ、ここで、ＡＤＣ混合物と接触させる疎水性樹脂の量は、樹脂への６以上の薬物負荷種の結合を可能にするのに十分であるが、４以下の薬物負荷種の有意な結合を可能にせず；ＡＤＣを含む組成物が得られるように、疎水性樹脂をＡＤＣ混合物から取り除き、ここで組成物は、１５％未満の６以上の薬物負荷種を含み、ＡＤＣは、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤にコンジュゲートされた抗体を含む。別の実施形態において、循環プロセスを使用して、４以下の薬物負荷種及び６以上の薬物負荷種を含むＡＤＣ混合物を、疎水性樹脂と接触させて、樹脂混合物を形成し、ＡＤＣ混合物と接触させる疎水性樹脂の量は、樹脂への６以上の薬物負荷種の結合を可能にするのに十分であるが、４以下の薬物負荷種の有意な結合を可能にせず；ＡＤＣを含む組成物が得られるように、ＡＤＣ混合物から疎水性樹脂を取り除き、ここで組成物は、１５％未満の６以上の薬物負荷種を含み、ＡＤＣは、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤にコンジュゲートされた抗体を含み、疎水性樹脂重量は、ＡＤＣ混合物における６以上の薬物負荷種の重量の３〜１２倍である。
【０５５６】
あるいは、フロースループロセスを使用して、ＡＤＣ混合物を精製し、ある特定の所望されるＤＡＲを有するＡＤＣの大部分を含む組成物に達し得る。フロースループロセスにおいて、樹脂は、容器、例えばカラムに充填され、所望されるＡＤＣ種が、樹脂に実質的に結合せず、樹脂中を流れ、所望されないＡＤＣ種が樹脂に結合するように、ＡＤＣ混合物は、充填された樹脂を通過する。フロースループロセスは、単一通過様式（ここで、目的のＡＤＣ種は、容器の樹脂の単一の通過の結果として得られる。）において、又は複数通過様式（ここで、目的のＡＤＣ種は、容器の樹脂の複数の通過の結果として得られる。）において行われてもよい。選択された樹脂の重量が、所望されないＡＤＣ集団に結合し、所望されるＡＤＣ（例えばＤＡＲ２〜４）が樹脂を越えて流れ、１回又は複数回の通過後、フロースルーにおいて集められるように、フロースループロセスは行われる。
【０５５７】
フロースループロセスを使用して、４以下の薬物負荷種及び６以上の薬物負荷種を含むＡＤＣ混合物を疎水性樹脂と接触させてもよく、ＡＤＣ混合物と接触させる疎水性樹脂の量は、樹脂への６以上の薬物負荷種の結合を可能にするのに十分であるが、４以下の薬物負荷種の有意な結合を可能にせず、所望されるＡＤＣ（例えばＤＡＲ２〜４）を含む組成物が得られるように、４以下の薬物負荷種が樹脂を通過し、続いて、１回又は複数回の通過後に集められ、ここで、組成物は、１５％未満の６以上の薬物負荷種を含み、ＡＤＣは、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤にコンジュゲートされた抗体を含む。別の実施形態において、フロースループロセスを使用して、ＡＤＣ混合物を樹脂に通過させることにより、４以下の薬物負荷種及び６以上の薬物負荷種を含むＡＤＣ混合物を疎水性樹脂と接触させ、ＡＤＣ混合物と接触させた疎水性樹脂の量は、樹脂への６以上の薬物負荷種の結合を可能にするのに十分であるが、４以下の薬物負荷種の有意な結合を可能にせず、４以下の薬物負荷種は、樹脂を通過し、続いて、ＡＤＣを含む組成物が得られるように集められ、組成物は、１５％未満の６以上の薬物負荷種を含み、ＡＤＣは、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤にコンジュゲートされた抗体を含み、疎水性樹脂重量の量は、ＡＤＣ混合物における６以上の薬物負荷種の重量の３〜１２倍である。
【０５５８】
フロースループロセス後、樹脂は、１回以上の洗浄で洗浄され、その後、所望されるＤＡＲ範囲を有するＡＤＣ（洗浄濾液において見られる）をさらに回収してもよい。例えば、低下している伝導性を有する複数の洗浄を使用して、目的のＤＡＲを有するＡＤＣをさらに回収してもよい。樹脂の洗浄から得られた溶出物質は、続いて、目的のＤＡＲを有するＡＤＣの改善された回収のため、フロースループロセスから得られた濾液と合わせてもよい。
【０５５９】
前述のバッチ、循環及びフロースループロセス精製方法は、ＡＤＣの高薬物負荷種対低薬物負荷種を分離するための疎水性樹脂の使用に基づく。疎水性樹脂は、ＡＤＣの疎水性と相互作用する疎水性基を含む。ＡＤＣ上の疎水性基は、疎水性樹脂内の疎水性基と相互作用する。より疎水性のタンパク質であるほど、疎水性樹脂とより強く相互作用する。
【０５６０】
疎水性樹脂は、通常、疎水性リガンド（例えば、アルキル又はアリール基）がカップリングされる塩基マトリックス（例えば、架橋結合したアガロース又は合成コポリマー物質）を含む。多くの疎水性樹脂が市販されている。例は、低置換又は高置換のＰｈｅｎｙｌ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（商標）６高速（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ＬＫＢ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＡＢ、Ｓｗｅｄｅｎ）；Ｐｈｅｎｙｌ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（商標）高性能（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ＬＫＢ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＡＢ、Ｓｗｅｄｅｎ）；Ｏｃｔｙｌ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（商標）高性能（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ＬＫＢ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＡＢ、Ｓｗｅｄｅｎ）；Ｆｒａｃｔｏｇｅｌ（商標）ＥＭＤプロピル又はＦｒａｃｔｏｇｅｌ（商標）ＥＭＤフェニルカラム（Ｅ．Ｍｅｒｃｋ、Ｇｅｒｍａｎｙ）；Ｍａｃｒｏ−Ｐｒｅｐ（商標）メチル又はＭａｃｒｏ−Ｐｒｅｐ（商標）；ｔ−ブチルサポート（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）；ＷＰ  ＨＩ−プロピル（Ｃ３）（商標）（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ）；及びＴｏｙｏｐｅａｒｌ（商標）エーテル、ヘキシル、フェニル又はブチル（ＴｏｓｏＨａａｓ、ＰＡ）を含むが、これらに限定されない。一実施形態において、疎水性樹脂は、ブチル疎水性樹脂である。別の実施形態において、疎水性樹脂は、フェニル疎水性樹脂である。別の実施形態において、疎水性樹脂は、ヘキシル疎水性樹脂、オクチル疎水性樹脂又はデシル疎水性樹脂である。一実施形態において、疎水性樹脂は、ｎ−ブチルリガンドを有するメタクリル系ポリマー（例えばＴＯＹＯＰＥＡＲＬブチル−６００Ｍ）である。
【０５６１】
所望されるＤＡＲを有する組成物を得るためにＡＤＣ混合物を精製するさらなる方法は、その全体を参照により組み込む米国出願第１４／２１０，６０２号（米国特許出願公開第ＵＳ２０１４／０２８６９６８号）において記載される。
【０５６２】
本発明のある特定の実施形態において、ＤＡＲ２を有する本明細書に記載されるＡＤＣは、より高い又はより低いＤＡＲを有するＡＤＣから精製される。かかる精製されたＤＡＲ２  ＡＤＣは、本明細書において「Ｅ２」と称される。Ｅ２  抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣを有する組成物を得る精製方法。一実施形態において、本発明は、ＡＤＣ混合物を含む組成物を提供し、ＡＤＣの少なくとも７５％は、ＤＡＲ２を有する抗ＥＧＦＲＡＤＣ（本明細書に記載されるもののような）である。別の実施形態において、本発明は、ＡＤＣ混合物を含む組成物を提供し、ＡＤＣの少なくとも８０％は、ＤＡＲ２を有する抗ＥＧＦＲＡＤＣ（本明細書に記載されるもののような）である。別の実施形態において、本発明は、ＡＤＣ混合物を含む組成物を提供し、ＡＤＣの少なくとも８５％は、ＤＡＲ２を有する抗ＥＧＦＲＡＤＣ（本明細書に記載されるもののような）である。別の実施形態において、本発明は、ＡＤＣ混合物を含む組成物を提供し、ＡＤＣの少なくとも９０％は、ＤＡＲ２を有する抗ＥＧＦＲＡＤＣ（本明細書に記載されるもののような）である。
７．抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣの使用
ＡＤＣに含まれるＢｃｌ−ｘＬ阻害剤、並びにＡＤＣにより送達されるシントンは、Ｂｃｌ−ｘＬ活性を阻害し、Ｂｃｌ−ｘＬを発現する細胞においてアポトーシスを誘導する。したがって、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤及び／又はＡＤＣは、Ｂｃｌ−ｘＬ活性を阻害し、及び／又は細胞においてアポトーシスを誘導する方法において使用されてもよい。
【０５６３】
Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤について、方法は、一般に、生存が少なくとも一部Ｂｃｌ−ｘＬ発現に依存する細胞を、Ｂｃｌ−ｘＬ活性を阻害し、及び／又はアポトーシスを誘導するのに十分な量のＢｃｌ−ｘＬ阻害剤と接触させることを含む。ＡＤＣについて、方法は、一般に、生存が少なくとも一部Ｂｃｌ−ｘＬ発現に依存し、ＡＤＣの抗体についての細胞表面抗原、すなわち、ＥＧＦＲを発現する細胞を、ＡＤＣとＡＤＣが抗原に結合する条件下で接触させることを含む。
Ｂｃｌ−ｘＬ阻害性シントンが送達される細胞へのＡＤＣのＡＢＶ１２２内部移行。方法は、Ｂｃｌ−ｘＬ活性を阻害する、及び／若しくはアポトーシスを阻害する細胞アッセイにおいてインビトロで、又はアポトーシスの阻害及び／若しくはアポトーシスの誘導が望ましい疾患の処置に向けた治療アプローチとしてインビボで行われてもよい。
【０５６４】
無調節なアポトーシスは、例えば、自己免疫障害（例えば、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、移植片対宿主病、重症筋無力症又はシェーグレン症候群）、慢性炎症性状態（例えば、乾癬、喘息又はクローン病）、過剰増殖障害（例えば、乳がん、肺がん）、ウイルス感染症（例えば、ヘルペス、パピローマ又はＨＩＶ）並びに骨関節炎及びアテローム性動脈硬化症のような他の状態を含む、様々な疾患において関連付けられている。本明細書に記載されたＢｃｌ−ｘＬ阻害剤又はＡＤＣは、これらの疾患のいずれかを処置する又は改善するために使用されてもよい。かかる処置は、一般に、疾患に罹患している対象に、治療恩恵をもたらすのに十分な本明細書に記載された量のＢｃｌ−ｘＬ阻害剤又はＡＤＣを投与することを含む。ＡＤＣについて、投与されるＡＤＣの抗体の同一性は、処置される疾患に依存し、抗体は、Ｂｃｌ−ｘＬ活性の阻害が有益である細胞タイプにおいて発現される細胞表面抗原に結合すべきである。達成される治療恩恵はまた、処置される特定の疾患に依存する。ある特定の場合では、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤又はＡＤＣは、単独療法として投与されるとき、疾患自体若しくは疾患の症状を処置する又は改善してもよい。他の場合では、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤又はＡＤＣは、阻害剤又はＡＤＣと一緒になって、処置される疾患若しくは疾患の症状を処置する又は改善する他の薬剤を含む全体的な処置治療計画の一部であってもよい。本明細書に記載されたＢｃｌ−ｘＬ阻害剤及び／若しくはＡＤＣに補助的に又は共に投与され得る特定の疾患を処置する又は改善するのに有用な薬剤は、当業者に明らかである。
【０５６５】
絶対的な治癒が、常に、任意の治療計画において望ましいが、治癒の達成が、治療恩恵をもたらすのに必要とされない。治療恩恵は、疾患の進行を停止すること又は遅延させること、治癒することなく疾患を退行させること、及び／又は疾患の症状の進行を改善すること若しくは遅延させることを含んでもよい。統計平均と比較して延長された生存及び／又は改善されたクオリティ・オブ・ライフはまた、考え抜かれた治療恩恵であり得る。
【０５６６】
無調節なアポトーシスに関与し、有意な世界的な健康負担である１つの特定の種類の疾患は、がんである。特定の実施形態において、本明細書に記載されたＢｃｌ−ｘＬ阻害剤及び／又はＡＤＣは、がんを処置するために使用されてもよい。がんは、例えば、固形腫瘍又は血液系の腫瘍であってもよい。本明細書に記載されたＡＤＣで処置され得るがんは、これらに限定されないが、膀胱がん、脳のがん、乳がん、骨髄がん、頸部がん、慢性リンパ性白血病、結腸直腸がん、食道がん、肝細胞がん、リンパ芽球性白血病、濾胞性リンパ腫、Ｔ細胞若しくはＢ細胞起源のリンパ系腫瘍、メラノーマ、骨髄性白血病、ミエローマ、経口がん、卵巣がん、非小細胞肺がん、慢性リンパ性白血病、ミエローマ、前立腺がん又は脾臓がんを含むが、これらに限定されない。抗体は、具体的には腫瘍細胞にＢｃｌ−ｘＬ阻害性シントンを標的化させ、これにより、コンジュゲートされていない阻害剤の全身投与に伴い得る望ましくない副作用及び／又は毒性を潜在的に回避する又は改善するために使用することができるので、ＡＤＣは、がんの処置において特に有益であり得る。一実施形態は、無調節なアポトーシスを含む疾患を有する対象に、治療恩恵をもたらすのに有効な量の本明細書に記載されたＡＤＣを投与することを含む、無調節な固有のアポトーシスを含む疾患を処置する方法であって、ＡＤＣの抗体が、固有のアポトーシスが調節されない細胞上の細胞表面受容体に結合する、方法に関する。一実施形態は、がんを有する対象に、細胞表面受容体又はがん細胞の表面上で発現された腫瘍関連抗原に結合する能力がある本明細書に記載されたＡＤＣを、治療恩恵をもたらすのに有効な量で投与することを含む、がんを処置する方法に関する。
【０５６７】
ある特定の実施形態において、がんは、ＥＧＦＲ過剰発現を有すると特徴付けられ得る。
【０５６８】
他の実施形態において、がんは、活性化しているＥＧＦＲ変異、例えば、ＥＧＦＲシグナル伝達経路を活性化する変異、及び／又はＥＧＦＲタンパク質の過剰発現を導く変異を有すると特徴付けられる。特定の例示的な実施形態において、活性化しているＥＧＦＲ変異は、ＥＧＦＲ遺伝子における変異であってもよい。特定の実施形態において、活性化しているＥＧＦＲ変異は、エクソン１９欠失変異、エクソン２１における単一点置換変異Ｌ８５８Ｒ、Ｔ７９０Ｍ点変異、及び／又はそれらの組合せである。
【０５６９】
腫瘍化がんの文脈において、上で考察された効果を含むことに加えて、治療恩恵はまた、具体的には、処置されるがんの種類及びステージについての統計平均と比較して、腫瘍成長の進行を停止すること若しくは遅延させること、腫瘍成長を退行させること、１つ以上の腫瘍を根絶すること及び／又は患者生存を増大させることを含み得る。一実施形態において、処置されるがんは、腫瘍化がんである。
【０５７０】
本発明のＡＤＣは、インビボとインビトロの両方でヒトＥＧＦＲ活性を中和する能力がある。したがって、本発明のかかるＡＤＣを使用して、本発明の抗体が架橋反応するＥＧＦＲを有するヒト対象において、又は他の哺乳動物対象において、例えばｈＥＧＦＲを含有する細胞培養物においてｈＥＧＦＲ活性を阻害することができる。一実施形態において、本発明は、ｈＥＧＦＲ活性が阻害されるように、ｈＥＧＦＲを本発明の抗体又は抗体部分を接触させることを含む、ｈＥＧＦＲ活性を阻害する方法を提供する。例えば、ｈＥＧＦＲを含有する細胞培養物、又は含有することが疑われる細胞培養物において、本発明の抗体又は抗体部分を培養培地に加えて、培養液においてｈＥＧＦＲ活性を阻害することができる。
【０５７１】
別の実施形態において、本発明は、対象において、有利には、ＥＧＦＲ活性が有害である疾患又は障害に罹患している対象から、ｈＥＧＦＲ活性を低減する方法を特徴としている。本発明は、かかる疾患又は障害に罹患している対象においてＥＧＦＲ活性を低減する方法であって、対象におけるＥＧＦＲ活性が低減されるように、対象に本発明のＡＤＣを投与することを含む方法を提供する。好ましくは、ＥＧＦＲはヒトＥＧＦＲであり、対象はヒト対象である。あるいは、対象は、本発明のＡＤＣが結合することができるＥＧＦＲを発現する哺乳動物であり得る。なおさらに、対象は、ＥＧＦＲが導入された（例えば、ＥＧＦＲの投与により又はＥＧＦＲ導入遺伝子の発現により）哺乳動物であり得る。本発明のＡＤＣは、治療目的でヒト対象に投与することができる。さらに、本発明のＡＤＣは、獣医学の目的のため、又はヒト疾患の動物モデルとして、抗体が結合することができるＥＧＦＲを発現する非ヒト哺乳動物に投与することができる。後者に関して、かかる動物モデルは、本発明の抗体の治療有効性（例えば、投薬量の試験及び投与の時間経過）を評価するのに有用であり得る。
【０５７２】
本明細書において使用される場合、用語「ＥＧＦＲ活性が有害である障害」は、障害に罹患している対象におけるＥＧＦＲの存在が、障害の病態生理に関与する又は障害の悪化に寄与する因子のいずれかであると示されている又は疑われる、疾患又は他の障害を含むことが意図される。したがって、ＥＧＦＲ活性が有害である障害は、ＥＧＦＲ活性の低減が、障害の症状及び／又は進行を緩和することが予想される障害である。かかる障害は、例えば、上で記載された抗ＥＧＦＲ抗体を使用して、検出することができる、例えば、障害に罹患している対象の生体液におけるＥＧＦＲ濃度の増大（例えば、対象の腫瘍、血清、血漿、滑液など中のＥＧＦＲの濃度の増大）により、証明され得る。本発明のＡＤＣ、例えば、ＡｂＡを含むＡＤＣで処置することができる障害の非限定的な例は、以下で考察されるものを含む。例えば、適当な障害は、乳がん、肺がん、グリオーマ、前立腺がん、膵臓がん、結腸がん、頭頸部がん及び腎臓がんを含むが、これらに限定されない、様々ながんを含むが、これらに限定されない。本明細書において開示される組成物及び方法を使用して処置され得るがんの他の例は、扁平上皮癌（例えば扁平上皮肺がん又は扁平上皮頭頸部がん）、トリプルネガティブ乳がん、非小細胞肺がん、結腸直腸がん及び中皮腫を含む。一実施形態において、本明細書において開示されるＡＤＣを使用して、固形腫瘍を処置する、例えば、ＥＧＦＲを過剰発現する又はＥＧＦＲ陽性である、固形腫瘍の成長を阻害し、又はサイズを低減する。一実施形態において、本発明は、ＥＧＦＲが増幅した扁平上皮肺がんの処置を対象とする。一実施形態において、本明細書において開示されるＡＤＣを使用して、ＥＧＦＲが増幅した扁平上皮頭頸部がんを処置する。別の実施形態において、本明細書において開示されるＡＤＣを使用して、トリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）を処置する。本明細書に記載される疾患及び障害は、本発明の抗ＥＧＦＲＡＤＣ、及びかかる抗ＥＧＦＲＡＤＣを含む医薬組成物により処置されてもよい。
【０５７３】
ある特定の実施形態において、本明細書において開示されるＡＤＣは、それを必要とする対象に、上昇したレベルの上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）を示すようである進行した固形腫瘍タイプを処置するために投与される。かかる腫瘍の例は、頭頸部扁平上皮癌、非小細胞肺がん、トリプルネガティブ乳がん、結腸直腸癌及び多形膠芽腫を含むが、これらに限定されない。
【０５７４】
ある特定の実施形態において、本発明は、固形腫瘍を有する対象において固形腫瘍成長を阻害する又は減少させる方法であって、固形腫瘍成長が、阻害される又は減少するように、本明細書に記載される抗ＥＧＦＲＡＤＣを固形腫瘍を有する対象に投与することを含む方法を含む。ある特定の実施形態において、固形腫瘍は、非小細胞肺癌又は膠芽腫である。さらなる実施形態において、固形腫瘍は、ＥＧＦＲｖＩＩＩ陽性腫瘍又はＥＧＦＲ発現固形腫瘍である。さらなる実施形態において、固形腫瘍は、ＥＧＦＲが増幅した固形腫瘍又はＥＧＦＲ過剰発現固形腫瘍である。ある特定の実施形態において、本明細書に記載される抗ＥＧＦＲＡＤＣは、多形膠芽腫を有する対象に、単独又はさらなる薬剤、例えば放射線及び／若しくはテモゾロミドと組み合わせて投与される。
【０５７５】
ある特定の実施形態において、本発明は、ＥＧＦＲ発現腫瘍又はＥＧＦＲ過剰発現腫瘍（又はＥＧＦＲｖＩＩＩ発現腫瘍）として同定された固形腫瘍を有する対象において固形腫瘍成長を阻害する又は減少させる方法であって、固形腫瘍成長が、阻害される又は減少するように、本明細書に記載された抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣを、固形腫瘍を有する対象に投与することを含む方法を含む。ＥＧＦＲ発現腫瘍（例えばＥＧＦＲ過剰発現腫瘍）を同定する方法は、当技術分野において公知であり、ＦＤＡにより承認された試験及び検証アッセイを含む。例えば、ＥＧＦＲ  ｐｈａｒｍＤｘ（商標）アッセイ（Ｄａｋｏ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａ，Ｉｎｃ．）は、組織学的評価のため日常的に固定される正常及び腫瘍性組織においてＥＧＦＲ発現を同定するために使用される定量的免疫組織化学（ＩＨＣ）キットシステムである。ＥＧＦＲ  ｐｈａｒｍＤｘは、ＥＧＦＲ発現細胞においてＥＧＦＲ（ＨＥＲ１）タンパク質を特異的に検出する。加えて、ＰＣＲベースのアッセイはまた、ＥＧＦＲ過剰発現腫瘍を同定するために使用されてもよい。例えば、これらのアッセイは、バリアントＥＧＦＲ遺伝子（例えば、配列番号３３）及び／又はｃＤＮＡに特異的であり、ＥＧＦＲ遺伝子／ｃＤＮＡ又はそれらの部分の増幅をもたらすプライマーを使用してもよい。増幅されたＰＣＲ産物は、続いて、例えば、ＰＣＲ産物のサイズを決定するための当技術分野において公知の標準的方法を使用したゲル電気泳動により、解析されてもよい。かかる試験を使用して、本明細書に記載される方法及び組成物で処置され得る腫瘍を同定してもよい。
【０５７６】
当技術分野において利用可能な遺伝子治療の方法のいずれかは、本発明により使用することができる。遺伝子治療の方法の一般的な総説について、Ｇｏｌｄｓｐｉｅｌら、１９９３年、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、１２：４８８〜５０５頁；Ｗｕ及びＷｕ、１９９１年、Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ、３：８７〜９５頁；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ、１９９３年、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．、３２：５７３〜５９６頁；Ｍｕｌｌｉｇａｎ、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２６０：９２６〜９３２頁（１９９３年）；並びにＭｏｒｇａｎ及びＡｎｄｅｒｓｏｎ、１９９３年、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ、６２：１９１〜２１７頁；Ｍａｙ、１９９３年、ＴＩＢＴＥＣＨ、１１（５）：１５５〜２１５頁を参照。使用することができる組換えＤＮＡテクノロジーの当技術分野において一般的に公知の方法は、Ａｕｓｕｂｅｌら（編）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、ＮＹ（１９９３年）；及びＫｒｉｅｇｌｅｒ、Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ、Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ（１９９０年）において記載される。遺伝子治療の様々な方法の詳細な説明は、参照により本明細書に組み込むＵＳ２００５００４２６６４Ａ１において提供される。
【０５７７】
別の態様において、この適用は、対象におけるＥＧＦＲと関連する障害の処置（例えば、治癒、抑制、改善、発症の遅延又は予防、又は再発若しくは再燃の予防）方法、又は予防方法を特徴とする。方法は、対象にＥＧＦＲ結合剤（具体的には、アンタゴニスト）、例えば、本明細書に記載された抗ＥＧＦＲ抗体又はそれらのフラグメントを、ＥＧＦＲと関連する障害を処置する又は予防するのに十分な量で投与することを含む。ＥＧＦＲアンタゴニスト、例えば、抗ＥＧＦＲ抗体又はそれらのフラグメントは、対象に、単独、又は本明細書に記載された他の治療モダリティと組み合わせて投与され得る。
【０５７８】
本発明のＡＤＣ又はその抗原結合部分を単独で又は組み合わせて使用して、かかる疾患を処置することができる。本発明のＡＤＣを、単独で又はさらなる薬剤、例えば治療剤と組み合わせて使用することができ、前記さらなる薬剤は、その意図される目的について当業者により選択されることは、理解されるべきである。例えば、さらなる薬剤は、本発明のＡＤＣにより処置されている疾患又は状態を処置するのに有用であると当技術分野において認められる治療剤であり得る。さらなる薬剤はまた、治療用組成物、例えば、組成物の粘度に影響する薬剤に有益な特性を与える薬剤であり得る。
【０５７９】
本発明に含まれるべきである組合せが、これらの意図される目的について有用なこれらの組合せであることは、さらに理解されるべきである。以下で説明される薬剤は、説明を目的とし、限定されることは意図されない。本発明の一部である組合せは、本発明の抗体、及び以下のリストから選択される少なくとも１つのさらなる薬剤であり得る。組合せが、形成された組成物が、その意図される機能を果たし得るようなものであれば、組合せはまた、１つより多くのさらなる薬剤、例えば２つ又は３つのさらなる薬剤を含み得る。
【０５８０】
併用療法は、１つ以上のさらなる治療剤、例えば、さらに本明細書に記載された、１つ以上のサイトカイン及び成長因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症剤（例えば、全身性抗炎症剤）、抗線維化剤、代謝阻害剤、酵素阻害剤、及び／又は細胞傷害性若しくは細胞分裂阻害剤、有糸分裂阻害剤、抗腫瘍抗生物質、免疫調節剤、遺伝子治療用のベクター、アルキル化剤、抗血管新生薬、代謝拮抗物質、ホウ素含有剤、化学保護剤、ホルモン、抗ホルモン剤、コルチコステロイド、光活動性治療剤、オリゴヌクレオチド、放射性核種剤、トポイソメラーゼ阻害剤、キナーゼ阻害剤、又は放射線増感剤と共に製剤された、及び／又は同時投与される本発明の抗ＥＧＦＲアンタゴニストＡＤＣを含み得る。
【０５８１】
特定の実施形態において、本明細書に記載された抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣは、抗がん剤又は抗腫瘍薬剤と組み合わせて使用される。用語「抗がん剤」及び「抗新生物剤」は、がん性成長のような悪性腫瘍を処置するために使用される薬物を指す。薬物治療は、単独で、又は外科手術若しくは放射線療法のような他の処置と組み合わせて使用されてもよい。いくつかのクラスの薬物は、関与する臓器の性質に依存してがん処置において使用され得る。例えば、乳がんは、一般にエストロゲンにより刺激され、性ホルモンを不活性化する薬物で処置され得る。同様に、前立腺がんは、男性ホルモンであるアンドロゲンを不活性化する薬物で処置され得る。本発明の抗ＥＧＦＲＡＤＣと併せて使用され得る抗がん剤は、特に、以下の薬剤を含む。
【０５８２】
【表６】
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【０５８３】
上記の抗がん剤に加えて、本明細書に記載された抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣが、セクションＩＩに記載された薬剤と組み合わせて投与されてもよい。さらに、前述の抗がん剤はまた、本発明のＡＤＣにおいて使用されてもよい。
【０５８４】
特定の実施形態において、本発明のＡＤＣは、単独、又はＥＧＦＲ活性に伴う疾患を処置するための抗体と併用して、若しくは相乗的に作用する別の抗がん剤と共に投与することができる。かかる抗がん剤は、例えば当技術分野において周知の薬剤（例えば、細胞毒、化学療法剤、小分子及び放射線）を含む。抗がん剤の例は、パノレックス（Ｇｌａｘｏ−Ｗｅｌｃｏｍｅ）、リツキサン（ＩＤＥＣ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｈｏｆｆｍａｎ  ｌａ  Ｒｏｃｈｅ）、マイロターグ（Ｗｙｅｔｈ）、キャンパス（Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ）、ゼヴァリン（ＩＤＥＣ  ａｎｄ  Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  ＡＧ）、ベキサール（Ｃｏｒｉｘａ／ＧＳＫ）、アービタックス（Ｉｍｃｌｏｎｅ／ＢＭＳ）、アバスチン（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）及びハーセプチン（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｈｏｆｆｍａｎ  ｌａ  Ｒｏｃｈｅ）を含むが、これらに限定されない。他の抗がん剤は、米国特許第７，５９８，０２８号及び国際公開第ＷＯ２００８／１００６２４号に記載されるものを含むが、これらに限定されず、これらの内容を、参照により本明細書に組み込む。１つ以上の抗がん剤は、本発明の抗体又はその抗原結合部分の投与と同時、又はその前若しくは後に投与されてもよい。
【０５８５】
本発明の特定の実施形態において、本明細書に記載されたＡＤＣは、それを必要とする対象を処置するためのＮＡＭＰＴの阻害剤（参照により本明細書に組み込む、ＵＳ２０１３／０３０３５０９；ＡｂｂＶｉｅ，  Ｉｎｃ．における阻害剤の例を参照）との併用療法において使用することができる。ＮＡＭＰＴ（前Ｂ細胞コロニー増強因子（ＰＢＥＦ）及びビスファチンとしても公知である）は、ニコチンアミドのホスホリボシル化を触媒する酵素であり、ＮＡＤを救援する２つのうち１つの経路における律速酵素である。本発明の一実施形態において、本明細書に記載される抗ＥＧＦＲ抗体及びＡＤＣは、対象において、がんの処置のためのＮＡＭＰＴ阻害剤と組み合わせて投与される。
【０５８６】
本発明の特定の実施形態において、本明細書に記載されるＡＤＣは、トポイソメラーゼ阻害剤イリノテカンの活性な代謝産物であるＳＮ−３８との併用療法において使用することができる。
【０５８７】
本発明の他の実施形態において、本明細書に記載されるＡＤＣを、ＰＡＲＰ（ポリＡＤＰリボースポリメラーゼ）阻害剤、例えばベリパリブとの併用療法において使用して、乳がん、卵巣がん及び非小細胞肺がんを含むがんを処置することができる。
【０５８８】
本明細書に記載される抗ＥＧＦＲＡＤＣと同時投与され得る及び／又は製剤化され得るさらなる治療剤のさらなる例は、吸入ステロイド；ベータ−アゴニスト、例えば短時間作用又は長時間作用ベータ−アゴニスト；ロイコトリエン又はロイコトリエン受容体のアンタゴニスト；ＡＤＶＡＩＲのような併用薬；ＩｇＥ阻害剤、例えば抗ＩｇＥ抗体（例えばＸＯＬＡＩＲ、オマリズマブ）；ホスホジエステラーゼ阻害剤（例えばＰＤＥ４阻害剤）；キサンチン；抗コリン薬；クロモリンのようなマスト細胞安定化剤；ＩＬ−４阻害剤；ＩＬ−５阻害剤；エオタキシン／ＣＣＲ３阻害剤；Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３及びＨ４を含む、ヒスタミン又はその受容体のアンタゴニスト、並びにプロスタグランジンＤ又はその受容体（ＤＰ１及びＣＲＴＨ２）のアンタゴニストの１つ以上を含むが、これらに限定されない。かかる組合せを使用して、例えば喘息及び他の呼吸障害を処置することができる。本明細書に記載される抗ＥＧＦＲＡＤＣと同時投与され得る及び／又は製剤化され得るさらなる治療剤の他の例は、テモゾロミド、イブルチニブ、デュベリシブ及びイデラリシブの１つ以上を含むが、これらに限定されない。１つ以上の抗ＥＧＦＲ抗体又はその断片と同時投与され得る及び／又は製剤化され得る治療剤のさらなる例は、特に、ＴＮＦアンタゴニスト（例えばＴＮＦ受容体の溶解性断片、例えばｐ５５若しくはｐ７５ヒトＴＮＦ受容体又はその誘導体、例えば７５ｋＤ  ＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤ  ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、ＥＮＢＲＥＬ））；ＴＮＦ酵素アンタゴニスト、例えばＴＮＦ変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤；ムスカリン性受容体アンタゴニスト；ＴＧＦ−ベータアンタゴニスト；インターフェロンガンマ；ペルフェニドン；化学療法剤、例えばメトトレキサート、レフルノミド若しくはシロリムス（ラパマイシン）又はその類似体、例えばＣＣＩ−７７９；ＣＯＸ２及びｃＰＬＡ２阻害剤；ＮＳＡＩＤ；免疫調節物質；ｐ３８阻害剤、ＴＰＬ−２、ＭＫ−２及びＮＦｋＢ阻害剤の１つ以上を含む。
【０５８９】
他の好ましい組合せは、サイトカイン抑制性抗炎症薬（ＣＳＡＩＤ）；他のヒトサイトカイン又は成長因子、例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、ＩＬ−３１、インターフェロン、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ、ＥＧＦ、ＰＤＧＦ及びエドセリン−１に対する抗体又はこれらのアンタゴニスト、並びにこれらのサイトカイン及び成長因子の受容体である。本発明の抗体又はその抗原結合部分は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０（Ｂ７．１）、ＣＤ８６（Ｂ７．２）、ＣＤ９０、ＣＴＬＡ、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１又はＣＤ１５４を含むこれらのリガンド（ｇｐ３９若しくはＣＤ４０Ｌ）のような、細胞表面分子に対する抗体と組み合わせることができる。
【０５９０】
治療剤の好ましい組合せは、炎症カスケードにおける異なるポイントにおいて干渉してもよく；好ましい例は、キメラ、ヒト化又はヒトＴＮＦ抗体のようなＴＮＦアンタゴニスト、アダリムマブ、（ＨＵＭＩＲＡ；Ｄ２Ｅ７；参照により本明細書に組み込むＰＣＴ公開第ＷＯ９７／２９１３１号及び米国特許第６，０９０，３８２号）、ＣＡ２（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標））、ＣＤＰ５７１及び溶解性ｐ５５又はｐ７５ＴＮＦ受容体、その誘導体（ｐ７５ＴＮＦＲ１ｇＧ（Ｅｎｂｒｅｓｌ（登録商標））又はｐ５５ＴＮＦＲ１ｇＧ（レネルセプト）を含み、また、ＴＮＦ変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤；同様に、ＩＬ−１阻害剤（インターロイキン−１変換酵素阻害剤、ＩＬ−１ＲＡなど）が、同じ理由のため有効であり得る。他の好ましい組合せは、インターロイキン４を含む。
【０５９１】
本発明の医薬組成物は、「治療有効量」又は「予防有効量」の本発明の抗体又は抗体部分を含んでもよい。「治療有効量」は、所望される治療結果を達成するために必要な投薬量における及び期間の有効な量を指す。治療有効量の抗体又は抗体部分は、当業者により決定されてもよく、個体の疾患状態、年齢、性別及び体重、並びに個体において所望される応答を誘発するための抗体又は抗体部分の能力のような要因により変動してもよい。治療有効量はまた、治療上有益な効果が抗体又は抗体部分の任意の毒性又は有害な作用より勝るものである。「予防有効量」は、所望される予防結果を達成するために必要な投薬量における及び期間の有効な量を指す。典型的には、予防用量は、疾患の前又は早期ステージで対象において使用されるので、予防有効量は、治療有効量未満である。
【０５９２】
投与されるＡＤＣの量は、処置される特定の疾患、投与様式、所望される治療恩恵、疾患のステージ又は重症度、患者の年齢、体重及び他の特徴などを含むが、これらに限定されない、様々な要因に依存する。有効投薬量の決定は、当業者の能力の範囲内である。
【０５９３】
投与レジメンは、最適な所望される応答（例えば治療又は予防応答）をもたらすよう調整され得る。例えば、単一ボーラスが投与されてもよく、いくつかの分割用量が、時間をかけて投与されてもよく、又は用量が、治療状況の急迫した事情により示される通り、比例的に低減されてもよく若しくは増大されてもよい。投与の容易さ及び投薬量の均一さのため、投薬単位形態の非経口組成物を製剤化することが特に有利である。本明細書において使用される投薬単位形態は、処置されるべき哺乳動物対象のための単位投薬量として合わせた物理的に別個の単位を指し、各単位は、必要とされる医薬担体と共に、予め決められた量の、所望される治療効果をもたらすように計算された活性化合物を含有する。本発明の投薬単位形態についての規格は、（ａ）活性化合物の固有の特徴及び達成されるべき治療又は予防効果、並びに（ｂ）個体における感受性の処置のためのかかる活性化合物の配合の分野における固有の制限により、及びこれらに直接的に依存して指示される。
【０５９４】
治療又は予防有効量のＡＤＣの例示的な非限定的な範囲は、０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは１〜１０ｍｇ／ｋｇである。一実施形態において、本明細書に記載されるＡＤＣの用量は、ここで列挙される個々の用量、例えば、１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ及び６ｍｇ／ｋｇを含む、１〜６ｍｇ／ｋｇである。別の実施形態において、本明細書に記載されるＡＤＣの用量は、ここで列挙される個々の用量、例えば、１μｇ／ｋｇ、２μｇ／ｋｇ、３μｇ／ｋｇ、４μｇ／ｋｇ、５μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ、２０μｇ／ｋｇ、３０μｇ／ｋｇ、４０μｇ／ｋｇ、５０μｇ／ｋｇ、６０μｇ／ｋｇ、８０μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ、１２０μｇ／ｋｇ、１４０μｇ／ｋｇ、１６０μｇ／ｋｇ、１８０μｇ／ｋｇ及び２００μｇ／ｋｇを含む、１〜２００μｇ／ｋｇである。投薬量の値は、緩和されるべき状態の種類及び重症度で変動し得ることは注意されるべきである。任意の特定の対象について、特定の投与レジメンが、個々の要求、及び組成物を投与する又は組成物の投与を監督する人の専門的判断により経時的に調整されるべきであること、並びに本明細書に記載の投薬量範囲が、例示的にすぎず、請求される組成物の範囲又は実施を限定することは意図されないことは、さらに理解されるべきである。
【０５９５】
一実施形態において、本明細書に記載された抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣは、例えば、ＡｂＡを含むＡＤＣは、それを必要とする対象、例えば、がんを有する対象に、０．１〜３０ｍｇ／ｋｇの用量のＡＤＣとして投与される。別の実施形態において、抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣ、例えば、ＡｂＡを含むＡＤＣは、それを必要とする対象、例えば、がんを有する対象に、１〜１５ｍｇ／ｋｇの用量のＡＤＣとして投与される。別の実施形態において、抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣ、例えば、ＡｂＡを含むＡＤＣは、それを必要とする対象、例えば、がんを有する対象に、１〜１０ｍｇ／ｋｇの用量のＡＤＣとして投与される。別の実施形態において、抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣ、例えば、ＡｂＡを含むＡＤＣは、それを必要とする対象、例えば、がんを有する対象に、２〜３ｍｇ／ｋｇの用量のＡＤＣとして投与される。別の実施形態において、抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣ、例えば、ＡｂＡを含むＡＤＣは、それを必要とする対象、例えば、がんを有する対象に、１〜４ｍｇ／ｋｇの用量のＡＤＣとして投与される。
【０５９６】
一実施形態において、本明細書に記載された抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣ、例えば、ＡｂＡを含むＡＤＣは、それを必要とする対象、例えば、がんを有する対象に、１〜２００μｇ／ｋｇの用量のＡＤＣとして投与される。別の実施形態において、抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣ、例えば、ＡｂＡを含むＡＤＣは、それを必要とする対象、例えば、がんを有する対象に、５〜１５０μｇ／ｋｇの用量のＡＤＣとして投与される。別の実施形態において、抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣ、例えば、ＡｂＡを含むＡＤＣは、それを必要とする対象、例えば、がんを有する対象に、５〜１００μｇ／ｋｇの用量のＡＤＣとして投与される。別の実施形態において、抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣ、例えば、ＡｂＡを含むＡＤＣは、それを必要とする対象、例えば、がんを有する対象に、５〜９０μｇ／ｋｇの用量のＡＤＣとして投与される。別の実施形態において、抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣ、例えば、ＡｂＡを含むＡＤＣは、それを必要とする対象、例えば、がんを有する対象に、５〜８０μｇ／ｋｇの用量のＡＤＣとして投与される。別の実施形態において、抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣ、例えば、ＡｂＡを含むＡＤＣは、それを必要とする対象、例えば、がんを有する対象に、５〜７０μｇ／ｋｇの用量のＡＤＣとして投与される。別の実施形態において、抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣ、例えば、ＡｂＡを含むＡＤＣは、それを必要とする対象、例えば、がんを有する対象に、５〜６０μｇ／ｋｇの用量のＡＤＣとして投与される。別の実施形態において、抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣ、例えば、ＡｂＡを含むＡＤＣは、それを必要とする対象、例えば、がんを有する対象に、１０〜８０μｇ／ｋｇの用量のＡＤＣとして投与される。
【０５９７】
一実施形態において、本明細書に記載された抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣは、それを必要とする対象、例えば、がんを有する対象に、１〜６ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。別の実施形態において、本明細書に記載された抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣは、それを必要とする対象、例えば、がんを有する対象に、０．５〜４ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。別の実施形態において、本明細書に記載された抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣは、それを必要とする対象、例えば、がんを有する対象に、１．８〜２．４ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。別の実施形態において、本明細書に記載された抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣは、それを必要とする対象、例えば、がんを有する対象に、１〜４ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。別の実施形態において、本明細書に記載された抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣは、それを必要とする対象、例えば、がんを有する対象に、約１ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。別の実施形態において、本明細書に記載された抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣは、それを必要とする対象、例えば、がんを有する対象に、３〜６ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。別の実施形態において、本明細書に記載された抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣは、それを必要とする対象、例えば、がんを有する対象に、３ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。別の実施形態において、本明細書に記載された抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣは、それを必要とする対象、例えば、がんを有する対象に、２〜３ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。別の実施形態において、本明細書に記載された抗ＥＧＦＲ  ＡＤＣは、それを必要とする対象、例えば、がんを有する対象に、６ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
【０５９８】
別の実施形態において、本明細書に記載される抗ＥＧＦＲＡＤＣは、それを必要とする対象、例えばがんを有する対象に、１〜２００μｇ／ｋｇの用量で投与される。別の実施形態において、本明細書に記載される抗ＥＧＦＲＡＤＣは、それを必要とする対象、例えばがんを有する対象に、５〜１００μｇ／ｋｇの用量で投与される。別の実施形態において、本明細書に記載される抗ＥＧＦＲＡＤＣは、それを必要とする対象、例えばがんを有する対象に、５〜９０μｇ／ｋｇの用量で投与される。別の実施形態において、本明細書に記載される抗ＥＧＦＲＡＤＣは、それを必要とする対象、例えばがんを有する対象に、５〜８０μｇ／ｋｇの用量で投与される。別の実施形態において、本明細書に記載される抗ＥＧＦＲＡＤＣは、それを必要とする対象、例えばがんを有する対象に、５〜７０μｇ／ｋｇの用量で投与される。別の実施形態において、本明細書に記載される抗ＥＧＦＲＡＤＣは、それを必要とする対象、例えばがんを有する対象に、５〜６０μｇ／ｋｇの用量で投与される。
【０５９９】
別の態様において、本出願は、インビトロでの試料（例えば血清、血漿、組織、及び生検のような生物学的試料）におけるＥＧＦＲの存在を検出する方法を提供する。本方法を使用して、障害、例えばがんを診断することができる。方法は、（ｉ）試料又は対照試料を、本明細書に記載される抗ＥＧＦＲＡＤＣと接触させること；及び（ｉｉ）抗ＥＧＦＲＡＤＣと試料又は対照試料の間での複合体の形成を検出することを含み、ここで、対照試料に対して、試料における複合体の形成における統計的に有意な変化が、試料におけるＥＧＦＲの存在を示す。
【０６００】
ヒトＥＧＦＲに結合するこれらの能力を考慮すると、本発明の抗ヒトＥＧＦＲＡＤＣを使用して、酵素結合免疫吸着測定（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）又は組織免疫組織化学のような従来のイムノアッセイを使用して、（例えば血清又は血漿のような、生物学的試料において）ヒトＥＧＦＲを検出することができる。一態様において、本発明は、生物学的試料を、本発明の抗体又はその抗体部分と接触させること、及びヒトＥＧＦＲに結合した抗体（若しくは抗体部分）又は結合していない抗体（若しくは抗体部分）を検出し、これにより、生物学的試料におけるヒトＥＧＦＲを検出することを含む、生物学的試料においてヒトＥＧＦＲを検出する方法を提供する。抗体は、結合した又は結合していない抗体の検出を促進するための検出可能な物質で直接的又は間接的に標識される。適当な検出可能な物質は、様々な酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質及び放射性物質を含む。適当な酵素の例は、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ又はアセチルコリンエステラーゼを含み、適当な補欠分子族複合体の例は、ストレプトアビジン／ビオチン及びアビジン／ビオチンを含み；適当な蛍光物質の例は、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロライド又はフィコエリトリンを含み；発光物質の例は、ルミノールを含み；適当な放射性物質の例は、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏ又は１５３Ｓｍを含む。
【０６０１】
抗体を標識する代わりに、ヒトＥＧＦＲは、生体液において、検出可能な物質で標識されたｒｈＥＧＦＲ標準及び標識されていない抗ヒトＥＧＦＲＡＣＤを使用して、競合イムノアッセイによりアッセイすることができる。このアッセイにおいて、生物学的試料、標識されたｒｈＥＧＦＲ標準及び抗ヒトＥＧＦＲ抗体が組み合わされ、標識されていない抗体に結合した標識されたｒｈＥＧＦＲ標準の量が決定される。生物学的試料におけるヒトＥＧＦＲの量は、抗ＥＧＦＲ抗体に結合した標識されたｒｈＥＧＦＲ標準の量に反比例する。同様に、ヒトＥＧＦＲはまた、生体液において、検出可能な物質で標識されたｒｈＥＧＦＲ標準及び標識されていない抗ヒトＥＧＦＲＡＤＣを使用して、競合イムノアッセイによりアッセイすることができる。
【０６０２】
８．医薬組成物
本明細書に記載されたＢｃｌ−ｘＬ阻害剤及び／又はＡＤＣは、阻害剤又はＡＤＣ並びに１つ以上の担体、賦形剤及び／又は希釈剤を含む組成物の形態であってもよい。組成物は、獣医での使用又はヒトにおける医薬上の使用のためのような、特定の使用のため製剤化されてもよい。組成物の形態（例えば、乾燥粉剤、液体製剤など）並びに使用される賦形剤、希釈剤及び／又は担体は、阻害剤及び／又はＡＤＣの意図される使用、並びに治療上の使用のため、投与の様式に依存する。
【０６０３】
治療上の使用のため、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤及び／又はＡＤＣ組成物は、薬学的に許容される担体を含む無菌の医薬組成物の一部として供給されてもよい。この組成物は、（これを患者に投与する所望される方法に依存して）任意の適当な形態であり得る。医薬組成物は、経口、経皮、皮下、鼻腔内、静脈内、筋肉内、くも膜下腔内、外用又は局所のような様々な経路により、患者に投与することができる。任意の所定のケースにおいて投与に最も適した経路は、特定のＢｃｌ−ｘＬ阻害剤又はＡＤＣ、対象、並びに疾患の性質及び重症度、並びに対象の身体的状態に依存する。典型的には、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤は、経口又は非経口投与され、ＡＤＣ医薬組成物は、静脈内又は皮下投与される。
【０６０４】
医薬組成物は、１用量当たり予め決められた量の本明細書に記載されたＢｃｌ−ｘＬ阻害剤又はＡＤＣを含有する単位投薬形態で便宜的に提示することができる。単位用量に含まれる阻害剤又はＡＤＣの量は、処置される疾患、並びに当該技術分野で周知である他の要因に依存する。Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤について、かかる単位投薬量は、１回投与に適当な量のＢｃｌ−ｘＬ阻害剤を含有する錠剤、カプセル剤、ロゼンジなどの形態であってもよい。ＡＤＣについて、かかる単位投薬量は、１回投与に適当な量のＡＤＣを含有する乾燥凍結された乾燥粉剤の形態、又は液体の形態であってもよい。乾燥粉剤単位投薬形態は、シリンジ、適量の希釈剤及び／又は投与に有用な他の成分を含むキットに密封されてもよい。液体形態の単位投薬量は、１回投与に適当な量のＡＤＣで予め密封されたシリンジの形態で便宜的に供給されてもよい。
【０６０５】
医薬組成物はまた、複数回投与に適当な量のＡＤＣを含有するバルク形態で供給されてもよい。
【０６０６】
ＡＤＣの医薬組成物は、保存のため、所望される純度を有するＡＤＣを、当該技術分野において典型的に利用される任意選択的な薬学的に許容される担体、賦形剤又は安定剤（これらの全てが、本明細書において「担体」と称される。）、すなわち、緩衝剤、安定化剤、保存剤、等張化剤、非イオン性洗浄剤、酸化防止剤及び他の種々雑多な添加剤を混合することにより、凍結乾燥された製剤又は水溶液として調製されてもよい。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１６編（Ｏｓｏｌ編、１９８０年）を参照。かかる添加剤は、利用される投薬量及び濃度で受取人にとって非毒性であるべきである。
【０６０７】
緩衝剤は、生理学的条件に近づける範囲のｐＨを維持するのを助ける。これらは、約２ｍＭ〜約５０ｍＭの範囲の濃度で存在してもよい。本開示と共に使用するための適当な緩衝剤は、クエン酸緩衝液（例えば、クエン酸一ナトリウムとクエン酸二ナトリウムの混合物、クエン酸とクエン酸三ナトリウムの混合物、クエン酸とクエン酸一ナトリウムの混合物など）、コハク酸塩緩衝液（例えば、コハク酸とコハク酸一ナトリウムの混合物、コハク酸と水酸化ナトリウムの混合物、コハク酸とコハク酸二ナトリウムの混合物など）、酒石酸塩緩衝液（例えば、酒石酸と酒石酸ナトリウムの混合物、酒石酸と酒石酸カリウムの混合物、酒石酸と水酸化ナトリウムの混合物など）、フマル酸緩衝液（例えば、フマル酸とフマル酸一ナトリウムの混合物、フマル酸とフマル酸二ナトリウムの混合物、フマル酸一ナトリウムとフマル酸二ナトリウムの混合物など）、グルコン酸塩緩衝液（例えば、グルコン酸とグルコン酸ナトリウムの混合物、グルコン酸と水酸化ナトリウムの混合物、グルコン酸とグルコン酸カリウムの混合物など）、シュウ酸塩緩衝液（例えば、シュウ酸とシュウ酸ナトリウムの混合物、シュウ酸と水酸化ナトリウムの混合物、シュウ酸とシュウ酸カリウムの混合物など）、乳酸塩緩衝液（例えば、乳酸と乳酸ナトリウムの混合物、乳酸と水酸化ナトリウムの混合物、乳酸と乳酸カリウムの混合物など）、及び酢酸塩緩衝液（例えば、酢酸と酢酸ナトリウムの混合物、酢酸と水酸化ナトリウムの混合物など）のような、有機酸と無機酸の両方並びにこれらの塩を含む。加えて、リン酸塩緩衝液、ヒスチジン緩衝液及びＴｒｉｓのようなトリメチルアミン塩を使用することができる。
【０６０８】
保存剤は、微生物の成長を遅延させるために添加されてもよく、約０．２％〜１％（ｗ／ｖ）の範囲の量で添加することができる。本開示との使用に適当な保存剤は、フェノール、ベンジルアルコール、メタクレゾール、メチルパラベン、プロピルパラベン、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、ハロゲン化（例えば、塩化、臭化及びヨウ化）ベンザルコニウム、ヘキサメトリウムクロリド、及びメチル又はプロピルパラベンのようなアルキルパラベン、カテコール、レゾルシン、シクロヘキサノール並びに３−ペンタノールを含む。ときに「安定剤」としても知られている等張化剤は、本開示の液体組成物の等張性を確かにするために添加することができ、多価の糖アルコール、例えば、グリセリン、エリトリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール及びマンニトールのような三水素化又は高級糖アルコールを含む。安定剤は、充填剤から、治療剤を可溶化する又は変性若しくは容器の壁への付着を予防するのを助ける添加剤までの機能の範囲であり得る、広いカテゴリーの賦形剤を指す。典型的な安定剤は、多価の糖アルコール（上で列挙された）；アルギニン、リジン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アラニン、オルニチン、Ｌ−ロイシン、２−フェニルアラニン、グルタミン酸、スレオニンなどのようなアミノ酸、ラクトース、トレハロース、スタキオース、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、リビトール、ミオイニシトール、ガラクチトール、グリセロールなどのような有機糖又は糖アルコール、イノシトールのようなシクリトールを含み；ポリエチレングリコール；アミノ酸ポリマー；尿素、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリセロール、α−モノチオグリセロール及びチオ硫酸ナトリウムのような硫黄含有還元剤；低分子量ポリペプチド（例えば、１０残基以下のペプチド）；ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリンのようなタンパク質；キシロース、マンノース、フルクトース、グルコースのようなポリビニルピロリドン単糖のような親水性ポリマー；ラクトース、マルトース、スクロースのような二糖及びラフィノースのような三糖；並びにデキストランのような多糖であり得る。
【０６０９】
非イオン性界面活性剤又は洗浄剤（「湿潤剤」としても知られている）は、糖タンパク質を可溶化する、並びに撹拌により誘導される凝集に対して糖タンパク質を保護するために添加されてもよく、非イオン性界面活性剤又は洗浄剤はまた、製剤が、タンパク質の変性を引き起こすことなく、圧力を加えられた表面を剪断するために曝露されることを可能にする。適当な非イオン性界面活性剤は、ポリソルベート（２０、８０など）、ポリオキサマー（１８４、１８８など）、プルロニックポリオール、ポリオキシエチレンソルビタンモノエーテル（ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）−８０など）を含む。非イオン性界面活性剤は、約０．０５ｍｇ／ｍｌ〜約１．０ｍｇ／ｍｌ、例えば、約０．０７ｍｇ／ｍｌ〜約０．２ｍｇ／ｍｌの範囲で存在してもよい。
【０６１０】
追加の種々雑多な賦形剤は、充填剤（例えば、スターチ）、キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）、酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸、メチオニン、ビタミンＥ）及び共溶媒を含む。
【０６１１】
本明細書に記載される本発明の方法の他の適当な修飾及び適合が、明らかであり、本発明又は本明細書において開示される実施形態の範囲から逸脱することなく適当な均等物を使用してなされ得ることは、当業者に容易に明らかである。ここで、本発明を詳細に記載し、これは、説明の目的のためだけに含まれ、限定することは意図されない、以下の実施例を参照してよりはっきりと理解される。
【実施例】
【０６１２】
［実施例１］
例示的Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤の合成
この実施例は、例示的Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤化合物Ｗ１．０１〜Ｗ１．０８のための合成方法を提供する。Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤（Ｗ１．０１〜Ｗ１．０８）及びシントン（実施例２．１〜２．６３）を、ＡＣＤ／Ｎａｍｅ  ２０１２年リリース（Ｂｕｉｌｄ５６０８４、２０１２年４月５日、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ社、トロント、オンタリオ州）、ＡＣＤ／Ｎａｍｅ  ２０１４年リリース（Ｂｕｉｌｄ６６６８７、２０１３年１０月２５日、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ社、トロント、オンタリオ州）、ＣｈｅｍＤｒａｗ（登録商標）バージョン９．０．７（ＣａｍｂｒｉｄｇｅＳｏｆｔ、ケンブリッジ、マサチューセッツ州）、ＣｈｅｍＤｒａｗ（登録商標）Ｕｌｔｒａバージョン１２．０（ＣａｍｂｒｉｄｇｅＳｏｆｔ、ケンブリッジ、マサチューセッツ州）又はＣｈｅｍＤｒａｗ（登録商標）Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌバージョン１５．０．０．１０６を使用して命名した。Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤及びシントン中間体を、ＡＣＤ／Ｎａｍｅ  ２０１２年リリース（Ｂｕｉｌｄ５６０８４、２０１２年４月５日、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ社、トロント、オンタリオ州）、ＡＣＤ／Ｎａｍｅ  ２０１４年リリース（Ｂｕｉｌｄ６６６８７、２０１３年１０月２５日、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ社、トロント、オンタリオ州）、ＣｈｅｍＤｒａｗ（登録商標）バージョン９．０．７（ＣａｍｂｒｉｄｇｅＳｏｆｔ、ケンブリッジ、マサチューセッツ州）、ＣｈｅｍＤｒａｗ（登録商標）Ｕｌｔｒａバージョン１２．０（ＣａｍｂｒｉｄｇｅＳｏｆｔ、ケンブリッジ、マサチューセッツ州）又はＣｈｅｍＤｒａｗ（登録商標）Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌバージョン１５．０．０．１０６を用いて命名した（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．）。
【０６１３】
１．１．  ６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−［１−（｛３，５−ジメチル−７−［２−（メチルアミノ）エトキシ］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］ピリジン−２−カルボン酸（化合物Ｗ１．０１）の合成
【０６１４】
１．１．１．  ３−ブロモ−５，７−ジメチルアダマンタンカルボン酸
５０ｍＬの丸底フラスコ中、０℃で臭素（１６ｍＬ）を加えた。次いで鉄粉（７ｇ）を加え、反応物を０℃で３０分間撹拌した。次いで３，５−ジメチルアダマンタン−１−カルボン酸（１２ｇ）を加えた。混合物を室温に加温し、３日間撹拌した。氷及び濃ＨＣｌの混合物を反応混合物中に注ぎ入れた。得られた懸濁液をＮａ２ＳＯ３（水２００ｍＬ中５０ｇ）で２回処理して臭素を分解し、ジクロロメタンで３回抽出した。合わせた有機物を１Ｎ  ＨＣｌ水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、粗製の標題化合物を得た。
【０６１５】
１．１．２．  ３−ブロモ−５，７−ジメチルアダマンタンメタノール
実施例１．１．１（１５．４ｇ）のテトラヒドロフラン（２００ｍＬ）中溶液に、ＢＨ３（テトラヒドロフラン中１Ｍ、１５０ｍＬ）を加えた。混合物を室温で終夜撹拌した。次いで反応混合物をメタノールを滴下添加することにより注意深くクエンチした。次いで混合物を真空下で濃縮し、残渣を酢酸エチル（５００ｍＬ）と２Ｎ  ＨＣｌ水溶液（１００ｍＬ）との間で平衡させた。水性層を酢酸エチルでさらに２回抽出し、合わせた有機抽出物を水及びブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過した。溶媒を蒸発させて、標題化合物を得た。
【０６１６】
１．１．３．  １−（（３−ブロモ−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル）−１Ｈ−ピラゾール
実施例１．１．２（８．０ｇ）のトルエン（６０ｍＬ）中溶液に、１Ｈ−ピラゾール（１．５５ｇ）及びシアノメチレントリブチルホスホラン（２．０ｇ）を加えた。混合物を９０℃で終夜撹拌した。次いで反応混合物を濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１０：１ヘプタン：酢酸エチル）により精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ３２４．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６１７】
１．１．４．  ２−｛［３，５−ジメチル−７−（１Ｈ−ピラゾール−１−イルメチル）トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］オキシ｝エタノール
実施例１．１．３（４．０ｇ）のエタン−１，２−ジオール（１２ｍＬ）中溶液に、トリエチルアミン（３ｍＬ）を加えた。混合物をマイクロ波条件（Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｉｎｉｔｉａｔｏｒ）下１５０℃で４５分間撹拌した。混合物を水（１００ｍＬ）中に注ぎ入れ、酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機抽出物を水及びブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過した。溶媒を蒸発させて粗生成物を得、これをヘプタン中２０％酢酸エチル、続いてジクロロメタン中５％メタノールで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ３０５．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６１８】
１．１．５．  ２−（｛３，５−ジメチル−７−［（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エタノール
実施例１．１．４（６．０５ｇ）のテトラヒドロフラン（１００ｍＬ）中冷却（−７８℃）溶液に、ｎ−ＢｕＬｉ（４０ｍＬ、ヘキサン中２．５Ｍ）を加えた。混合物を−７８℃で１．５時間撹拌した。ヨードメタン（１０ｍＬ）を注射器を通して加え、混合物を−７８℃で３時間撹拌した。次いで反応混合物をＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチし、酢酸エチルで２回抽出し、合わせた有機抽出物を水及びブラインで洗浄した。Ｎａ２ＳＯ４で脱水した後、溶液を濾過し、濃縮し、残渣をジクロロメタン中５％メタノールで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ  ３１９．５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６１９】
１．１．６．  １−（｛３，５−ジメチル−７−［２−（ヒドロキシ）エトキシ］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝メチル）−４−ヨード−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール
実施例１．１．５（３．５ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）中溶液に、Ｎ−ヨードスクシンイミド（３．２ｇ）を加えた。混合物を室温で１．５時間撹拌した。次いで反応混合物を酢酸エチル（６００ｍＬ）で希釈し、ＮａＨＳＯ３水溶液、水及びブラインで洗浄した。Ｎａ２ＳＯ４で脱水した後、溶液を濾過し、濃縮し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン中２０％酢酸エチル）により精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ４４５．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６２０】
１．１．７．  ２−（｛３−［（４−ヨード−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチルメタンスルホネート
実施例１．１．６（６．１６ｇ）のジクロロメタン（１００ｍＬ）中冷却溶液に、トリエチルアミン（４．２１ｇ）続いてメタンスルホニルクロリド（１．６ｇ）を加えた。混合物を室温で１．５時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチル（６００ｍＬ）で希釈し、水及びブラインで洗浄した。Ｎａ２ＳＯ４で脱水した後、溶液を濾過し、濃縮し、残渣をさらには精製せずに次の反応に使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ５２３．４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６２１】
１．１．８．  １−（｛３，５−ジメチル−７−［２−（メチルアミノ）エトキシ］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝メチル）−４−ヨード−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール
実施例１．１．７（２．５ｇ）のメタノール中２Ｍメチルアミン（１５ｍＬ）中溶液を、マイクロ波条件（Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｉｎｉｔｉａｔｏｒ）下１００℃で２０分間撹拌した。反応混合物を真空下で濃縮した。残渣を次いで酢酸エチル（４００ｍＬ）で希釈し、ＮａＨＣＯ３水溶液、水及びブラインで洗浄した。Ｎａ２ＳＯ４で脱水した後、溶液を濾過し、濃縮し、残渣をさらには精製せずに次の反応に使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ  ４５８．４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６２２】
１．１．９．  ｔｅｒｔ−ブチル［２−（｛３−［（４−ヨード−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］メチルカルバメート
実施例１．１．８（２．２ｇ）のテトラヒドロフラン（３０ｍＬ）中溶液に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボネート（１．２６ｇ）及び触媒量の４−ジメチルアミノピリジンを加えた。混合物を室温で１．５時間撹拌し、酢酸エチル（３００ｍＬ）で希釈した。溶液を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、水（６０ｍＬ）及びブライン（６０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残渣をジクロロメタン中２０％酢酸エチルで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ  ５５８．５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６２３】
１．１．１０．  ６−フルオロ−３−ブロモピコリン酸
６−アミノ−３−ブロモピコリン酸（２５ｇ）の１：１ジクロロメタン／クロロホルム４００ｍＬ中スラリー液を、５℃で１時間かけてジクロロメタン（１００ｍＬ）中のニトロソニウムテトラフルオロボレート（１８．２ｇ）に加え、得られた混合物をさらに３０分間撹拌し、次いで３５℃に加温し、終夜撹拌した。反応物を室温に冷却し、次いでＮａＨ２ＰＯ４水溶液でｐＨを４に調整した。得られた溶液をジクロロメタンで３回抽出し、合わせた抽出物をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、濃縮して、標題化合物を得た。
【０６２４】
１．１．１１．  ｔｅｒｔ−ブチル３−ブロモ−６−フルオロピコリネート
パラ−トルエンスルホニルクロリド（２７．６ｇ）を、０℃で実施例１．１．１０（１４．５ｇ）及びピリジン（２６．７ｍＬ）のジクロロメタン（１００ｍＬ）及びｔｅｒｔ−ブタノール（８０ｍＬ）中溶液に加えた。反応物を１５分間撹拌し、室温に加温し、終夜撹拌した。溶液を濃縮し、酢酸エチルとＮａ２ＣＯ３水溶液との間で分配した。層を分離し、水性層を酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせ、Ｎａ２ＣＯ３水溶液及びブラインですすぎ、硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、濃縮して、標題化合物を得た。
【０６２５】
１．１．１２．  メチル２−（５−ブロモ−６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボキシレート
メチル１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボキシレート塩酸塩（１２．３７ｇ）及び実施例１．１．１１（１５ｇ）のジメチルスルホキシド（１００ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１２ｍＬ）を加えた。混合物を５０℃で２４時間撹拌した。次いで混合物を酢酸エチル（５００ｍＬ）で希釈し、水及びブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。濾過し、溶媒を蒸発させて残渣を得、これをヘプタン中２０％酢酸エチルで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ４４８．４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６２６】
１．１．１３．  メチル２−（６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボキシレート
実施例１．１．１２（２．２５ｇ）及び［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）（２０５ｍｇ）のアセトニトリル（３０ｍＬ）中溶液に、トリエチルアミン（３ｍＬ）及びピナコールボラン（２ｍＬ）を加えた。混合物を還流状態で３時間撹拌した。混合物を酢酸エチル（２００ｍＬ）で希釈し、水及びブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。濾過し、溶媒を蒸発させ、シリカゲルクロマトグラフィー（ヘプタン中２０％酢酸エチルで溶出）にかけて、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ４９５．４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６２７】
１．１．１４．  メチル２−（６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−（１−（（３−（２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボキシレート
実施例１．１．１３（４．９４ｇ）のテトラヒドロフラン（６０ｍＬ）及び水（２０ｍＬ）中溶液に、実施例１．１．９（５．５７ｇ）、１，３，５，７−テトラメチル−８−テトラデシル−２，４，６−トリオキサ−８−ホスファアダマンタン（４１２ｍｇ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（４５７ｍｇ）及びＫ３ＰＯ４（１１ｇ）を加えた。混合物を還流状態で２４時間撹拌した。反応混合物を冷却し、酢酸エチル（５００ｍＬ）で希釈し、水及びブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。濾過し、溶媒を蒸発させて残渣を得、これをヘプタン中２０％酢酸エチルで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ７９９．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６２８】
１．１．１５．  ２−（６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−（１−（（３−（２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボン酸
実施例１．１．１４（１０ｇ）のテトラヒドロフラン（６０ｍＬ）、メタノール（３０ｍＬ）及び水（３０ｍＬ）中溶液に、水酸化リチウム一水和物（１．２ｇ）を加えた。混合物を室温で２４時間撹拌した。反応混合物を２％ＨＣｌ水溶液で中和し、真空下で濃縮した。残渣を酢酸エチル（８００ｍＬ）で希釈し、水及びブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。濾過し、溶媒を蒸発させて、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ７８５．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６２９】
１．１．１６．  ｔｅｒｔ−ブチル６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３−｛２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ］エトキシ｝−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボキシレート
実施例１．１．１５（１０ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）中溶液に、ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−アミン（３．２４ｇ）、フルオロ−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルホルムアミジニウムヘキサフルオロホスフェート（５．６９ｇ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（５．５７ｇ）を加えた。混合物を６０℃で３時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチル（８００ｍＬ）で希釈し、水及びブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。濾過し、溶媒を蒸発させて残渣を得、これをジクロロメタン中２０％酢酸エチルで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ９１５．５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６３０】
１．１．１７．  ６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−［１−（｛３，５−ジメチル−７−［２−（メチルアミノ）エトキシ］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］ピリジン−２−カルボン酸
実施例１．１．１６（５ｇ）のジクロロメタン（２０ｍＬ）中溶液に、トリフルオロ酢酸（１０ｍＬ）を加えた。混合物を終夜撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させ、残渣をジメチルスルホキシド／メタノール（１：１、１０ｍＬ）に溶解し、水中１０〜８５％アセトニトリル及び０．１％トリフルオロ酢酸で溶出するＡｎａｌｏｇｉｘシステム及びＣ１８カートリッジ（３００ｇ）を使用する逆相によるクロマトグラフィーにかけて、標題化合物をＴＦＡ塩として得た。1H  NMR  (300  MHz,  ジメチルスルホキシド  d6)  δ  ppm  12.85  (s,  1H),  8.13-8.30  (m,  2H),  8.03  (d,  1H),  7.79  (d,  1H),  7.62  (d,  1H),  7.32-7.54  (m,  3H),  7.28  (d,  1H),  6.96  (d,  1H),  4.96  (dd,  1H),  3.80-3.92  (m,  4H),  3.48-3.59  (m,  1H),  2.91-3.11  (m,  2H),  2.51-2.59  (m,  4H),  2.03-2.16  (m,  2H),  1.21-1.49  (m,  6H),  0.97-1.20  (m,  4H),  0.87  (s,  6H).ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ７６０．４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６３１】
１．２．  ６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−（１−｛［（１ｒ，３Ｒ，５Ｓ，７ｓ）−３，５−ジメチル−７−（２−｛２−［２−（メチルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−カルボン酸（化合物Ｗ１．０２）の合成
【０６３２】
１．２．１．  ２−（２−（２−（（（３−（（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エタノール
実施例１．１．３（２．６５ｇ）の２，２’−（エタン−１，２−ジイルビス（オキシ））ジエタノール（１５ｇ）中溶液に、トリエチルアミン（３ｍＬ）を加えた。混合物をマイクロ波条件（Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｉｎｉｔｉａｔｏｒ）下１８０℃で１２０分間撹拌した。混合物を水及びアセトニトリル（１：１、４０ｍＬ）で希釈した。粗製物を逆相カラム（Ｃ１８、ＳＦ６５−８００ｇ）に加え、０．１％トリフルオロ酢酸を含む水中１０〜１００％アセトニトリルで溶出して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ３９３．０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６３３】
１．２．２．  ２−（２−（２−（（３，５−ジメチル−７−（（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル）アダマンタン−１−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エタノール
実施例１．２．１（２．６９ｇ）のテトラヒドロフラン（２０ｍＬ）中冷却（０℃）溶液に、ｎ−ＢｕＬｉ（１０ｍＬ、ヘキサン中２．５Ｍ）を加えた。混合物を０℃で１．５時間撹拌した。ヨードメタン（１ｍＬ）を注射器に通して加え、混合物を０℃で１．５時間撹拌した。反応混合物をトリフルオロ酢酸（１ｍＬ）でクエンチした。溶媒を蒸発させた後、残渣を次のステップに直接使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ４０７．５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６３４】
１．２．３．  ２−（２−（２−（（３−（（４−ヨード−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エタノール
実施例１．２．２（２．７８ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）中冷却（０℃）溶液に、Ｎ−ヨードスクシンイミド（１．６５ｇ）を加えた。混合物を室温で２時間撹拌した。粗生成物を逆相カラム（Ｃ−１８、ＳＦ６５−８００ｇ）に加え、０．１％トリフルオロ酢酸を含む水中１０〜１００％アセトニトリルで溶出して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ５３３．０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６３５】
１．２．４．  ２−（２−（２−（（３−（（４−ヨード−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）−Ｎ−メチルエタンアミン
実施例１．２．３（２．４５ｇ）のテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）中冷却（０℃）溶液に、トリエチルアミン（１ｍＬ）を、続いてメタンスルホニルクロリド（０．５８８ｇ）を加えた。混合物を室温で２時間撹拌した。メタンアミン（１０ｍＬ、メタノール中２Ｍ）を反応混合物に加え、２０ｍＬのマイクロ波管に移した。混合物をマイクロ波条件（Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｉｎｉｔｉａｔｏｒ）下１００℃で６０分間加熱した。室温に冷却した後、溶媒を真空下で除去した。残渣を逆相カラム（Ｃ１８、ＳＦ４０−３００ｇ）に加え、０．１％トリフルオロ酢酸を含む水中４０〜１００％アセトニトリルで溶出して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ５４６．０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６３６】
１．２．５．  ｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−（（３−（（４−ヨード−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）（メチル）カルバメート
実施例１．２．４（１．４１ｇ）のテトラヒドロフラン（２０ｍＬ）中溶液に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボネート（１ｇ）及び４−ジメチルアミノピリジン（０．６ｇ）を加えた。混合物を室温で３時間撹拌し、溶媒を真空により除去した。残渣をヘキサン中１０〜１００％酢酸エチルで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ６４５．８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６３７】
１．２．６．  ｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−（（３，５−ジメチル−７−（（５−メチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル）アダマンタン−１−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）（メチル）カルバメート
実施例１．２．５（１．２５ｇ）、ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，６’−ジメトキシビフェニル（０．０９ｇ）、ピナコールボラン（１．５ｍＬ）及びトリエチルアミン（１．５ｍＬ）のジオキサン（２０ｍＬ）中溶液に、ビス（ベンゾニトリル）パラジウム（ＩＩ）クロリド（０．０４２ｇ）を加えた。脱気した後、混合物を９０℃で終夜撹拌した。溶媒を蒸発させ、シリカゲルカラム精製（ヘキサン中２０〜１００％酢酸エチルで溶出）して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ６４６．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６３８】
１．２．７．  ｔｅｒｔ−ブチル８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−カルボキシレート
２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボン酸（６．８ｇ）及びベンゾ［ｄ］チアゾール−２−アミン（５．５２ｇ）のジクロロメタン（８０ｍＬ）中溶液に、１−エチル−３−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−カルボジイミド塩酸塩（９．４ｇ）及び４−ジメチルアミノピリジン（６ｇ）を加えた。混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物をジクロロメタン（４００ｍＬ）で希釈し、５％ＨＣｌ水溶液、水及びブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、標題化合物を得た。
【０６３９】
１．２．８．  Ｎ−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボキサミド二塩酸塩
実施例１．２．７（８．５ｇ）のジクロロメタン（８０ｍＬ）中溶液に、ジエチルエーテル中２Ｎ  ＨＣｌ（８０ｍＬ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌し、減圧下で濃縮して、標題化合物を得た。
【０６４０】
１．２．９．  ｔｅｒｔ−ブチル６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）−３−ブロモピコリネート
実施例１．１．１１（０．７３６ｇ）、実施例１．２．８（１．６２ｇ）及びＣｓ２ＣＯ３（４．１ｇ）を、無水Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド１２ｍＬ中１２０℃で１２時間撹拌した。次いで冷却した反応混合物を酢酸エチル及び１０％クエン酸で希釈した。有機相をクエン酸で３回、水及びブラインで１回洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。濾過し、濃縮して粗製物を得、これをヘキサン中０〜４０％酢酸エチルを使用するシリカゲル上でのクロマトグラフィーにかけて、標題化合物を得た。
【０６４１】
１．２．１０．  ｔｅｒｔ−ブチル６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）−３−（１−（（（１ｓ，７ｓ）−３，５−ジメチル−７−（（２，２，５−トリメチル−４−オキソ−３，８，１１−トリオキサ−５−アザトリデカン−１３−イル）オキシ）アダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピコリネート
実施例１．２．６（０．１３５ｇ）のテトラヒドロフラン（１ｍＬ）及び水（１ｍＬ）中溶液に、実施例１．２．９（０．１２ｇ）、１，３，５，７−テトラメチル−８−テトラデシル−２，４，６−トリオキサ−８−ホスファアダマンタン（０．０２３ｇ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（０．０１５ｇ）及びＫ３ＰＯ４（０．２ｇ）を加えた。混合物をマイクロ波条件（Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｉｎｉｔｉａｔｏｒ）下１４０℃で５分間撹拌した。反応混合物をトルエン（５ｍＬ）で希釈し、濾過した。溶媒を蒸発させ、シリカゲル精製（ヘプタン中２０〜１００％酢酸エチル）して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １００４．８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６４２】
１．２．１１．  ６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−（１−｛［３，５−ジメチル−７−（２−｛２−［２−（メチルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−カルボン酸
ジクロロメタン（１０ｍＬ）中の実施例１．２．１０（１．４２ｇ）をトリフルオロ酢酸（６ｍＬ）で処理し、反応物を室温で２４時間撹拌した。揮発物を減圧下で除去した。残渣を０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含む水中３０〜１００％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステム（Ｃ１８、ＳＦ４０−３００ｇ）を使用する逆相クロマトグラフィーにより精製した。所望のフラクションを合わせ、凍結乾固して、標題化合物をＴＦＡ塩として得た。1H  NMR  (300  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.85  (br.s,  1H),  8.33  (br.s,  2H),  8.03  (d,  1H),  7.79  (d,  1H),  7.62  (d,  1H),  7.41-7.54  (m,  3H),  7.32-7.40  (m,  2H),  7.28  (s,  1H),  6.95  (d,  1H),  4.95  (s,  2H),  3.85-3.93  (m,  2H),  3.81  (s,  2H),  3.60-3.66  (m,  2H),  3.52-3.58  (m,  4H),  3.45  (s,  3H),  2.97-3.12  (m,  4H),  2.56  (t,  2H),  2.10  (s,  3H),  1.34-1.41  (m,  2H),  1.18-1.31  (m,  4H),  0.95-1.18  (m,  6H),  0.85  (s,  6H).ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ８４８．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６４３】
１．３．  ３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸（化合物Ｗ１．０３）の合成
【０６４４】
１．３．１．  メチル２−（６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−（１−（（３−（２−ヒドロキシエトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボキシレート
実施例１．１．１３（２．２５ｇ）のテトラヒドロフラン（３０ｍＬ）及び水（１０ｍＬ）中溶液に、実施例１．１．６（２．０ｇ）、１，３，５，７−テトラメチル−６−フェニル−２，４，８−トリオキサ−６−ホスファアドマント（３２９ｍｇ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（２０６ｍｇ）及びリン酸カリウム三塩基酸（４．７８ｇ）を加えた。混合物を終夜還流し、冷却し、酢酸エチル（５００ｍＬ）で希釈した。得られた混合物を水及びブラインで洗浄し、有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残渣をヘプタン中２０％酢酸エチルで、次いでジクロロメタン中５％メタノールで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。
【０６４５】
１．３．２．  メチル２−（６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−（１−（（３，５−ジメチル−７−（２−（（メチルスルホニル）オキシ）エトキシ）アダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボキシレート
実施例１．３．１（３．３２ｇ）のジクロロメタン（１００ｍＬ）中冷却溶液に、氷浴中トリエチルアミン（３ｍＬ）及びメタンスルホニルクロリド（１．１ｇ）を順次加えた。反応混合物を室温で１．５時間撹拌し、酢酸エチルで希釈し、水及びブラインで洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、標題化合物を得た。
【０６４６】
１．３．３．  メチル２−（５−（１−（（３−（２−アジドエトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボキシレート
実施例１．３．２（１６．５ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１２０ｍＬ）中溶液に、アジ化ナトリウム（４．２２ｇ）を加えた。混合物を８０℃で３時間加熱し、冷却し、酢酸エチルで希釈し、水及びブラインで洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残渣をヘプタン中２０％酢酸エチルで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。
【０６４７】
１．３．４．  ２−（５−（１−（（３−（２−アジドエトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボン酸
実施例１．３．３（１０ｇ）のテトラヒドロフラン（６０ｍＬ）、メタノール（３０ｍＬ）及び水（３０ｍＬ）の混合物中溶液に、水酸化リチウム一水和物（１．２ｇ）を加えた。混合物を室温で終夜撹拌し、２％ＨＣｌ水溶液で中和した。得られた混合物を濃縮し、残渣を酢酸エチル（８００ｍＬ）に溶解し、水及びブラインで洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、標題化合物を得た。
【０６４８】
１．３．５．  ｔｅｒｔ−ブチル３−（１−（（３−（２−アジドエトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリネート
実施例１．１．１５を実施例１．３．４に置き換えて、１．１．１６に記載した手順に従うことにより標題化合物を調製した。
【０６４９】
１．３．６．  ｔｅｒｔ−ブチル３−（１−（（３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリネート
実施例１．３．５（２．０ｇ）のテトラヒドロフラン（３０ｍＬ）中溶液に、Ｐｄ／Ｃ（１０％、２００ｍｇ）を加えた。混合物を水素雰囲気下終夜撹拌した。反応物を濾過し、濾液を濃縮して、標題化合物を得た。
【０６５０】
１．３．７．  ３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸
ジクロロメタン（３ｍＬ）中の実施例１．３．６（３００ｍｇ）を、トリフルオロ酢酸（３ｍＬ）で終夜処理した。反応混合物を濃縮し、残渣を０．１％トリフルオロ酢酸水溶液中１０〜７０％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステム（３００ｇのＣ１８カラム）を使用する逆相クロマトグラフィーにより精製して、標題化合物をトリフルオロ酢酸塩として得た。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.85  (s,  1H)  8.03  (d,  1H)  7.79  (d,  1H)  7.59-7.73  (m,  4H)  7.41-7.53  (m,  3H)  7.32-7.40  (m,  2H)  7.29  (s,  1H)  6.96  (d,  1H)  4.96  (s,  2H)  3.89  (t,  2H)  3.83  (s,  2H)  3.50  (t,  2H)  3.02  (t,  2H)  2.84-2.94  (m,  2H)  2.11  (s,  3H)  1.41  (s,  2H)  1.21-1.36  (m,  4H)  1.08-1.19  (m,  4H)  0.96-1.09  (m,  2H)  0.87  (s,  6H).ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ７４４．３（Ｍ−Ｈ）−。
【０６５１】
１．４．  ３−［１−（｛３−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸（化合物Ｗ１．０４）の合成
【０６５２】
１．４．１．  ２−（２−（（３−（（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）オキシ）エトキシ）エタノール
エタン−１，２−ジオールの代わりに２，２’−オキシジエタノールを用いることにより、実施例１．１．４において記載した通りに標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ３４９．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６５３】
１．４．２．  ２−（２−（（３，５−ジメチル−７−（（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル）アダマンタン−１−イル）オキシ）エトキシ）エタノール
実施例１．１．４の代わりに実施例１．４．１を用いることにより、実施例１．１．５において記載した通りに標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ３６３．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６５４】
１．４．３．  ２−（２−（（３−（（４−ヨード−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）オキシ）エトキシ）エタノール
実施例１．１．５の代わりに実施例１．４．２を用いることにより、実施例１．１．６において記載した通りに標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ４８９．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６５５】
１．４．４．  ２−（２−（（３−（（４−ヨード−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）オキシ）エトキシ）エチルメタンスルホネート
実施例１．１．６の代わりに実施例１．４．３を用いることにより、実施例１．１．７において記載した通りに標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ５６７．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６５６】
１．４．５．  ２−（２−（（３−（（４−ヨード−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）オキシ）エトキシ）エタンアミン
実施例１．１．７の代わりに実施例１．４．４を、メタノール中２Ｎメチルアミンの代わりにメタノール中７Ｎアンモニアを用いることにより、実施例１．１．８において記載した通りに標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ４８８．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６５７】
１．４．６．  ｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（（３−（（４−ヨード−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）オキシ）エトキシ）エチル）カルバメート
実施例１．１．８の代わりに実施例１．４．５を用いることにより、実施例１．１．９において記載した通りに標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ５８８．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６５８】
１．４．７．  メチル２−（６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−（１−（（３−（２−（２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボキシレート
実施例１．１．９の代わりに実施例１．４．６を用いることにより、実施例１．１．１４において記載した通りに標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ８２８．５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６５９】
１．４．８．  ２−（６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−（１−（（３−（２−（２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボン酸
実施例１．１．１４の代わりに実施例１．４．７を用いることにより、実施例１．１．１５において記載した通りに標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ８１４．５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６６０】
１．４．９．  ｔｅｒｔ−ブチル６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）−３−（１−（（３−（２−（２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピコリネート
実施例１．１．１５の代わりに実施例１．４．８を用いることにより、実施例１．１．１６において記載した通りに標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ９４６．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６６１】
１．４．１０．  ３−［１−（｛３−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸
実施例１．１．１６の代わりに実施例１．４．９を用いることにより、実施例１．１．１７において記載した通りに標題化合物を調製した。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.85  (s,  1H),  7.99-8.08  (m,  1H),  7.60-7.82  (m,  4H),  7.20-7.52  (m,  5H),  6.93-6.99  (m,  1H),  4.96  (s,  2H),  3.45-3.60  (m,  6H),  2.09-2.14  (m,  4H),  0.95-1.47  (m,  19H),  0.81-0.91  (m,  6H).ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ７９０．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
１．５．  ６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３−｛２−［（２−メトキシエチル）アミノ］エトキシ｝−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸（化合物Ｗ１．０５）の合成
【０６６２】
１．５．１．  ｔｅｒｔ−ブチル６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）−３−（１−（（（１ｒ，３ｒ）−３−（２−（（２−メトキシエチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピコリネート
実施例１．３．６（０．０５０ｇ）及び２−メトキシアセトアルデヒド（６．９３ｍｇ）の溶液を、ジクロロメタン（０．５ｍＬ）中室温で１時間共に撹拌した。反応物に水素化ホウ素ナトリウム（２ｍｇ）のメタノール（０．２ｍＬ）中懸濁液を加えた。３０分間撹拌した後、反応物をジクロロメタン（２ｍＬ）で希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（１ｍＬ）でクエンチした。有機層を分離し、硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＬＳＤ）  ｍ／ｅ  ８６０．５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６６３】
１．５．２．  ６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３−｛２−［（２−メトキシエチル）アミノ］エトキシ｝−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸
実施例１．５．１のジクロロメタン（１ｍＬ）中溶液を、トリフルオロ酢酸（０．５ｍＬ）で処理した。終夜撹拌した後、反応物を濃縮し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．５ｍＬ）及び水（０．５ｍＬ）に溶解し、０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含む水中１０〜８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムを使用して分取ＨＰＬＣにより精製した。所望のフラクションを合わせ、凍結乾固して、標題化合物をＴＦＡ塩として得た。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.85  (s,  2H),  8.39  (s,  2H),  8.03  (d,  1H),  7.79  (d,  1H),  7.62  (d,  1H),  7.53-7.42  (m,  3H),  7.40-7.33  (m,  2H),  7.29  (s,  1H),  6.96  (d,  1H),  4.96  (s,  2H),  3.89  (t,  2H),  3.83  (s,  2H),  3.61-3.53  (m,  10H),  3.29  (s,  3H),  3.17-3.09  (m,  2H),  3.09-2.97  (m,  4H),  2.10  (s,  3H),  1.41  (s,  2H),  1.35-1.23  (m,  4H),  1.20-1.10  (m,  4H),  1.10-0.98  (m,  2H).ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ８０４．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６６４】
１．６．  ３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−５−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸（化合物Ｗ１．０６）の合成
【０６６５】
１．６．１．  ３−シアノメチル−４−フルオロ安息香酸メチルエステル
トリメチルシランカルボニトリル（１．４９ｍＬ）のテトラヒドロフラン（２．５ｍＬ）中溶液に、１Ｍテトラブチルアンモニウムフルオリド（１１．１３ｍＬ）を２０分かけて滴下添加した。次いで溶液を室温で３０分間撹拌した。メチル４−フルオロ−３−（ブロモメチル）ベンゾエート（２．５０ｇ）をアセトニトリル（１２ｍＬ）に溶解し、最初の溶液に１０分かけて滴下添加した。次いで溶液を８０℃に６０分間加熱し、冷却した。溶液を減圧下で濃縮し、ヘプタン中２０〜３０％酢酸エチルで溶出するシリカゲル上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。溶媒を減圧下で蒸発させて、標題化合物を得た。
【０６６６】
１．６．２．  ３−（２−アミノエチル）−４−フルオロ安息香酸メチルエステル
実施例１．６．１（１．８４ｇ）をテトラヒドロフラン（５０ｍＬ）に溶解し、１Ｍボラン（テトラヒドロフラン中、１１．９ｍＬ）を加えた。溶液を室温で１６時間撹拌し、メタノールでゆっくりクエンチした。４Ｍ塩酸水溶液（３５ｍＬ）を加え、溶液を室温で１６時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮し、固体の炭酸カリウムを使用してｐＨを１１〜１２の間に調整した。次いで溶液をジクロロメタン（３×１００ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を合わせ、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶液を濾過し、減圧下で濃縮し、物質をジクロロメタン中１０〜２０％メタノールで溶出するシリカゲル上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。溶媒を減圧下で蒸発させて、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １９８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６６７】
１．６．３．  ４−フルオロ−３−［２−（２，２，２−トリフルオロアセチルアミノ）エチル］安息香酸メチルエステル
実施例１．６．２（１．２０７ｇ）をジクロロメタン（４０ｍＬ）に溶解し、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１．３ｍＬ）を加えた。次いでトリフルオロ酢酸無水物（１．０ｍＬ）を滴下添加した。溶液を１５分間撹拌した。水（４０ｍＬ）を加え、溶液を酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈した。１Ｍ塩酸水溶液（５０ｍＬ）を加え、有機層を分離し、１Ｍ塩酸水溶液で洗浄し、次いでブラインで洗浄した。溶液を無水硫酸ナトリウムで脱水した。濾過後、溶媒を減圧下で蒸発させて、標題化合物を得た。
【０６６８】
１．６．４．  ５−フルオロ−２−（２，２，２−トリフルオロアセチル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボン酸メチルエステル
実施例１．６．３（１．７９５ｇ）及びパラホルムアルデヒド（０．９１９ｇ）をフラスコ中に置き、濃硫酸（１５ｍＬ）を加えた。溶液を室温で１時間撹拌した。冷水（６０ｍＬ）を加え、溶液を酢酸エチル（２×１００ｍＬ）で抽出した。抽出物を合わせ、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）及び水（１００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶液を濾過し、減圧下で濃縮し、物質をヘプタン中１０〜２０％酢酸エチルで溶出するシリカゲル上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。溶媒を減圧下で蒸発させて、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ３２３（Ｍ＋ＮＨ４）＋。
【０６６９】
１．６．５．  ５−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボン酸メチルエステル
実施例１．６．４（６８５ｍｇ）をメタノール（６ｍＬ）及びテトラヒドロフラン（６ｍＬ）に溶解した。水（３ｍＬ）を、続いて炭酸カリウム（３７２ｍｇ）を加えた。反応物を室温で３時間撹拌し、次いで酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈した。溶液を飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を濾過し、減圧下で蒸発させて、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ２１０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６７０】
１．６．６．  ２−（５−ブロモ−６−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルピリジン−２−イル）−５−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボン酸メチルエステル
１．１．１２において実施例１．６．５をメチル１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボキシレート塩酸塩の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ４６５、４６７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６７１】
１．６．７．  ２−［６−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−５−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−ピリジン−２−イル］−５−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−８−カルボン酸メチルエステル
実施例１．１．１３において実施例１．６．６を実施例１．１．１２の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ５１３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６７２】
１．６．８．  ２−（（３−（（４−ヨード−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）オキシ）エタンアミン
実施例１．１．７（４．５ｇ）のメタノール中７Ｎアンモニウム（１５ｍＬ）中溶液を、マイクロ波条件（Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｉｎｉｔｉａｔｏｒ）下１００℃で２０分間撹拌した。反応混合物を真空下で濃縮し、残渣を酢酸エチル（４００ｍＬ）で希釈し、ＮａＨＣＯ３水溶液、水（６０ｍＬ）及びブライン（６０ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残渣をさらには精製せずに次の反応に使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ４４４．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６７３】
１．６．９．  ｔｅｒｔ−ブチル（２−（（３−（（４−ヨード−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）オキシ）エチル）カルバメート
実施例１．６．８（４．４ｇ）のテトラヒドロフラン（１００ｍＬ）中溶液に、ジ−ｔ−ブチルジカルボネート（２．６ｇ）及びＮ，Ｎ−ジエチル−４−アミノピリジン（１００ｍｇ）を加えた。混合物を１．５時間撹拌した。次いで反応混合物を酢酸エチル（３００ｍＬ）で希釈し、ＮａＨＣＯ３水溶液、水（６０ｍＬ）及びブライン（６０ｍＬ）で洗浄した。脱水（無水Ｎａ２ＳＯ４）した後、溶液を濾過し、濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン中２０％酢酸エチル）により精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ５４４．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６７４】
１．６．１０．  ２−（６−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−５−｛１−［５−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エトキシ）−３，７−ジメチル−アダマンタン−１−イルメチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−ピリジン−２−イル）−５−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−８−カルボン酸メチルエステル
実施例１．１．１４において実施例１．６．７を実施例１．１．１３の代わりに、実施例１．６．９を実施例１．１．９の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ８０２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６７５】
１．６．１１．  ２−（６−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−５−｛１−［５−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エトキシ）−３，７−ジメチル−アダマンタン−１−イルメチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−ピリジン−２−イル）−５−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−８−カルボン酸
実施例１．１．１５において実施例１．６．１０を実施例１．１．１４の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ７８８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６７６】
１．６．１２．  ６−［８−（ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−５−フルオロ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル］−３−｛１−［５−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エトキシ）−３，７−ジメチル−アダマンタン−１−イルメチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−ピリジン−２−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
実施例１．１．１６において実施例１．６．１１を実施例１．１．１５の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ９２０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６７７】
１．６．１３．  ３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−５−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸
実施例１．１．１７において実施例１．６．１２を実施例１．１．１６の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。1H  NMR  (400MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.88  (bs,  1H),  8.03  (d,  1H),  7.79  (d,  1H),  7.73  (m,  1H),  7.63  (m,  2H),  7.52  (d,  1H),  7.48  (t,  1H),  7.36  (t,  1H),  7.28  (dd,  2H),  7.04  (d,  1H),  5.02  (s,  2H),  3.95  (t,  2H),  3.83  (s,  2H),  3.49  (t,  2H),  2.90  (m,  4H),  2.11  (s,  3H),  1.41  (s,  2H),  1.35-1.23  (m,  4H),  1.19-0.99  (m,  6H),  0.87  (bs,  6H).ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ７６４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６７８】
１．７  ３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−６−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸（Ｗ１．０７）の合成
【０６７９】
１．７．１  （３−ブロモ−５−フルオロ−フェニル）−アセトニトリル
実施例１．６．１において１−ブロモ−３−（ブロモメチル）−５−フルオロベンゼンをメチル４−フルオロ−３−（ブロモメチル）ベンゾエートの代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。
【０６８０】
１．７．２  ２−（３−ブロモ−５−フルオロ−フェニル）−エチルアミン
実施例１．６．２において実施例１．７．１を実施例１．６．１の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。
【０６８１】
１．７．３  ［２−（３−ブロモ−５−フルオロ−フェニル）−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
実施例１．７．２（１．４０ｇ）及びＮ，Ｎ−ジメチルピリジン−４−アミン（０．０７８ｇ）を、アセトニトリル（５０ｍＬ）に溶解した。ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボネート（１．５４ｇ）を加えた。溶液を室温で３０分間撹拌した。溶液をジエチルエーテル（１５０ｍＬ）で希釈し、０．１Ｍ  ＨＣｌ水溶液（２５ｍＬ）で２回洗浄し、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶液を濾過し、減圧下で濃縮し、粗製物をヘプタン中５〜１０％酢酸エチルで溶出するシリカゲル上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。溶媒を減圧下で蒸発させて、標題化合物を得た。
【０６８２】
１．７．４  ３−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エチル）−５−フルオロ−安息香酸メチルエステル
実施例１．７．３（７７５ｍｇ）及びジクロロ［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）（３６ｍｇ）を、５０ｍＬの圧力ボトルに加えた。メタノール（１０ｍＬ）及びトリメチルアミン（４９３ｍｇ）を加えた。溶液を３回脱気しアルゴンでフラッシュし、続いて脱気し一酸化炭素でフラッシュした。反応物を６０ｐｓｉの一酸化炭素下１００℃に１６時間加熱した。追加のジクロロ［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）（３６ｍｇ）を加え、脱気及びフラッシュ手順を繰り返した。反応物を６０ｐｓｉの一酸化炭素下１００℃に追加の１６時間加熱した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をヘプタン中２０〜３０％酢酸エチルで溶出するシリカゲル上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。溶媒を減圧下で蒸発させて、標題化合物を得た。
【０６８３】
１．７．５  ３−（２−アミノ−エチル）−５−フルオロ−安息香酸メチルエステル
実施例１．７．４（２９２ｍｇ）をジクロロメタン（３ｍＬ）に溶解した。２，２，２−トリフルオロ酢酸（１６８０ｍｇ）を加え、溶液を室温で２時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去して標題化合物を得、これをさらには精製せずに次のステップに使用した。
【０６８４】
１．７．６  ３−フルオロ−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−アセチルアミノ）−エチル］−安息香酸メチルエステル
実施例１．６．３において実施例１．７．５を実施例１．６．２の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。
【０６８５】
１．７．７  ６−フルオロ−２−（２，２，２−トリフルオロ−アセチル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−８−カルボン酸メチルエステル
実施例１．６．４において実施例１．７．６を実施例１．６．３の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。
【０６８６】
１．７．８  ６−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−８−カルボン酸メチルエステル
実施例１．６．５において実施例１．７．７を実施例１．６．４の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。
【０６８７】
１．７．９  ２−（５−ブロモ−６−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−ピリジン−２−イル）−６−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−８−カルボン酸メチルエステル
実施例１．１．１２において実施例１．７．８をメチル１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボキシレート塩酸塩の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ４６４、４６６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６８８】
１．７．１０  ２−［６−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−５−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−ピリジン−２−イル］−６−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−８−カルボン酸メチルエステル
実施例１．１．１３において実施例１．７．９を実施例１．１．１２の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ５１３（Ｍ＋Ｈ）＋、５４３（Ｍ＋ＭｅＯＨ−Ｈ）−。
【０６８９】
１．７．１１  ｛２−［５−（４−ヨード−５−メチル−ピラゾール−１−イルメチル）−３，７−ジメチル−アダマンタン−１−イルオキシ］−エチル｝−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルイミノジカルボキシレート
実施例１．１．６（５．０００ｇ）をジクロロメタン（５０ｍＬ）に溶解した。トリエチルアミン（１．５４３ｇ）を加え、溶液を氷浴上で冷却した。メタンスルホニルクロリド（１．６９１ｇ）を滴下添加した。溶液を室温に加温し、３０分間撹拌した。飽和重炭酸ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）を加えた。層を分離し、有機層をブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。次いで水溶液部分を合わせ、ジクロロメタン（５０ｍＬ）で逆抽出した。有機部分を合わせ、無水硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、濃縮した。残渣をアセトニトリル（５０ｍＬ）に溶解した。ジ−ｔｅｒｔ−ブチルイミノジカルボキシレート（２．６８９ｇ）及び炭酸セシウム（７．３３２ｇ）を加え、溶液を１６時間還流した。溶液を冷却し、ジエチルエーテル（１００ｍＬ）及び水（１００ｍＬ）に加えた。層を分離した。有機部分をブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。次いで水溶液部分を合わせ、ジエチルエーテル（１００ｍＬ）で逆抽出した。有機部分を合わせ、無水硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。物質をヘプタン中２０％酢酸エチルで溶出するシリカゲル上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。溶媒を減圧下で蒸発させて、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ６６６（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０６９０】
１．７．１２  メチル２−（６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−（１−（（３−（２−（ジ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−イル）−６−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボキシレート
実施例１．１．１４において実施例１．７．１０を実施例１．１．１３及び実施例１．７．１１を実施例１．１．９の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ９０２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６９１】
１．７．１３  ２−（６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−（１−（（３−（２−（ジ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−イル）−６−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボン酸
実施例１．１．１５において実施例１．７．１２を実施例１．１．１４の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ８８８（Ｍ＋Ｈ）＋、８８６（Ｍ−Ｈ）−。
【０６９２】
１．７．１４  ｔｅｒｔ−ブチル６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−６−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）−３−（１−（（３−（２−（ジ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピコリネート
実施例１．１．１６において実施例１．７．１３を実施例１．１．１５の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。
【０６９３】
１．７．１５  ３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−６−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸
実施例１．１．１７において実施例１．７．１４を実施例１．１．１６の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  8.04  (d,  1H),  7.79  (d,  1H),  7.65  (bs,  3H),  7.50  (m,  2H),  7.40-7.29  (m,  3H),  6.98  (d,  1H),  4.91  (d,  2H),  3.88  (t,  2H),  3.83  (s,  2H),  3.02  (t,  2H),  2.89  (t,  4H),  2.10  (s,  3H),  1.44-1.20  (m,  6H),  1.19-1.00  (m,  6H),  0.86  (bs,  6  H).ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ７６４（Ｍ＋Ｈ）＋、７６２（Ｍ−Ｈ）−。
【０６９４】
１．８  ３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−７−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸（Ｗ１．０８）の合成
【０６９５】
１．８．１  ［２−（３−ブロモ−４−フルオロ−フェニル）−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
実施例１．７．３において２−（３−ブロモ−４−フルオロフェニル）エタンアミン塩酸塩を実施例１．７．２の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。
【０６９６】
１．８．２  ５−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エチル）−２−フルオロ−安息香酸メチルエステル
実施例１．７．４において実施例１．８．１を実施例１．７．３の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ３１５（Ｍ＋ＮＨ４）＋。
【０６９７】
１．８．３  ５−（２−アミノ−エチル）−２−フルオロ−安息香酸メチルエステル
実施例１．７．５において実施例１．８．２を実施例１．７．４の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。
【０６９８】
１．８．４  ２−フルオロ−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−アセチルアミノ）−エチル］−安息香酸メチルエステル
実施例１．６．３において実施例１．８．３を実施例１．６．２の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。
【０６９９】
１．８．５  ７−フルオロ−２−（２，２，２−トリフルオロ−アセチル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−８−カルボン酸メチルエステル
実施例１．６．４において実施例１．８．４を実施例１．６．３の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ３２３（Ｍ＋ＮＨ４）＋。
【０７００】
１．８．６  ７−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−８−カルボン酸メチルエステル
実施例１．６．５において実施例１．８．５を実施例１．６．４の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ２１０（Ｍ＋Ｈ）＋、２０８（Ｍ−Ｈ）−。
【０７０１】
１．８．７  ２−（５−ブロモ−６−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−ピリジン−２−イル）−７−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−８−カルボン酸メチルエステル
実施例１．１．１２において実施例１．８．６をメチル１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボキシレート塩酸塩の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ４６５，４６７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７０２】
１．８．８  ２−［６−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−５−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−ピリジン−２−イル］−７−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−８−カルボン酸メチルエステル
実施例１．１．１３において実施例１．８．７を実施例１．１．１２の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ５１３（Ｍ＋Ｈ）＋、５４３（Ｍ＋ＭｅＯＨ−Ｈ）−。
【０７０３】
１．８．９  メチル２−（６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−（１−（（３−（２−（ジ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−イル）−７−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボキシレート
実施例１．１．１４において実施例１．８．８を実施例１．１．１３及び実施例１．７．１１を実施例１．１．９の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ９０２（Ｍ＋Ｈ）＋、９００（Ｍ−Ｈ）−。
【０７０４】
１．８．１０  ２−（６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−（１−（（３−（２−（ジ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−イル）−７−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボン酸
実施例１．１．１５において実施例１．８．９を実施例１．１．１４の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ７８８（Ｍ＋Ｈ）＋、７８６（Ｍ−Ｈ）−。
【０７０５】
１．８．１１  ｔｅｒｔ−ブチル６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−７−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）−３−（１−（（３−（２−（ジ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピコリネート
実施例１．１．１６において実施例１．８．１０を実施例１．１．１５の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。
【０７０６】
１．８．１２  ３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−７−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸
実施例１．１．１７において実施例１．８．１１を実施例１．１．１６の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  13.08  (bs,  1H),  11.41  (bs,  1H),  8.05  (d,  1H),  7.81  (d,  1H),  7.63  (m,  4H),  7.55-7.22  (m,  6H),  6.95  (d,  1H),  4.78  (s,  2H),  3.86  (m,  4H),  3.50  (m,  2H),  2.97  (m,  2H),  2.90  (m,  2H),  2.09  (s,  3H),  1.48-1.40  (m,  2H),  1.38-1.23  (m,  4H),  1.20-1.01  (m,  6H),  0.88  (bs,  6H).ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ７６４（Ｍ＋Ｈ）＋、７６２（Ｍ−Ｈ）−。
【０７０７】
１．９  ６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３，５−ジメチル−７−｛２−［（２−スルホエチル）アミノ］エトキシ｝トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸（Ｗ１．０９）の合成
【０７０８】
１．９．１  ｔｅｒｔ−ブチル６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−［１−（｛３，５−ジメチル−７−［（２，２，７，７−テトラメチル−１０，１０−ジオキシド−３，３−ジフェニル−４，９−ジオキサ−１０λ６−チア−１３−アザ−３−シラペンタデカン−１５−イル）オキシ］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］ピリジン−２−カルボキシレート
実施例１．３．６（５００ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（８ｍＬ）中溶液に、４−（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）−２，２−ジメチルブチルエテンスルホネート（３３４ｍｇ）を加えた。反応物を室温で終夜撹拌し、メチルアミン（０．３ｍＬ）を加えて、反応物をクエンチした。得られた混合物を２０分間撹拌し、０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含む水中５０〜１００％アセトニトリルで溶出するＡｎａｌｏｇｉｘシステム（Ｃ１８カラム）を使用する逆相クロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。
【０７０９】
１．９．２  ６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３，５−ジメチル−７−｛２−［（２−スルホエチル）アミノ］エトキシ｝トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸
ジクロロメタン（５ｍＬ）中の実施例１．９．１（２００ｍｇ）をトリフルオロ酢酸（２．５ｍＬ）で終夜処理した。反応混合物を濃縮し、０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含む水中２０〜６０％アセトニトリルで溶出する逆相クロマトグラフィー（Ｃ１８カラム）により精製して、標題化合物を得た。1H  NMR  (500  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.86  (s,  1H),  8.32  (s,  2H),  8.02  (d,  1H),  7.78  (d,  1H),  7.60  (d,  1H),  7.51  (d,  1H),  7.40-7.49  (m,  2H),  7.31-7.39  (m,  2H),  7.27  (s,  1H),  6.95  (d,  1H),  4.94  (s,  2H),  3.87  (t,  2H),  3.81  (s,  2H),  3.15-3.25  (m,  2H),  3.03-3.13  (m,  2H),  3.00  (t,  2H),  2.79  (t,  2H),  2.09  (s,  3H),  1.39  (s,  2H),  1.22-1.34  (m,  4H),  0.94-1.18  (m,  6H),  0.85  (s,  6H).ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ８５４．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７１０】
［実施例２］
例示的シントンの合成
この実施例は、ＡＤＣを作製するために使用される例示的シントンの合成方法を提供する。
【０７１１】
２．１．  Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（シントンＥ）の合成
【０７１２】
２．１．１．  （Ｓ）−（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（１−（（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５−ウレイドペンタン−２−イル）カルバメート
（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−５−ウレイドペンタン酸（４０ｇ）をジクロロメタン（１．３Ｌ）に溶解した。（４−アミノフェニル）メタノール（１３．０１ｇ）、２−（３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−３−イル）−１，１，３，３−テトラメチルイソウロニウムヘキサフルオロリン酸塩（Ｖ）（４２．１ｇ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０３５Ｌ）を溶液に加え、得られた混合物を室温で１６時間撹拌した。生成物を濾取し、ジクロロメタンですすいだ。合わせた固体を真空乾固して標題化合物を得、これをさらには精製せずに次のステップに使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ  ５０３．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７１３】
２．１．２．  （Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）−５−ウレイドペンタンアミド
実施例２．１．１（４４ｇ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３００ｍＬ）に溶解した。溶液をジエチルアミン（３７．２ｍＬ）で処理し、室温で１時間撹拌した。反応混合物を濾過し、溶媒を減圧下で濃縮した。粗生成物を酢酸エチル中０〜３０％メタノールの濃度勾配で溶出する塩基性アルミナクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ  ２８１．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７１４】
２．１．３．  ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５−ウレイドペンタン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート
（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−メチルブタン酸（９．６９ｇ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２００ｍＬ）に溶解した。溶液に２−（３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−３−イル）−１，１，３，３−テトラメチルイソウロニウムヘキサフルオロホスフェート（Ｖ）（１８．６５ｇ）を加え、反応物を室温で１時間撹拌した。実施例２．１．２（１２．５ｇ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１５．５８ｍＬ）を加え、反応混合物を室温で１６時間撹拌した。溶媒を減圧下で濃縮し、残渣をジクロロメタン中１０％メタノールで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ  ４８０．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７１５】
２．１．４．  （Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタンアミド）−Ｎ−（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）−５−ウレイドペンタンアミド
実施例２．１．４（３１．８ｇ）をジクロロメタン（６５０ｍＬ）に溶解し、溶液にトリフルオロ酢酸（４．８５ｍＬ）を加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌した。溶媒を減圧下で濃縮して、粗製の標題化合物及び４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル２，２，２−トリフルオロアセテートの混合物を得た。粗製物を１：１ジオキサン／水溶液（３００ｍＬ）に溶解し、溶液に水酸化ナトリウム（５．５５ｇ）を加えた。混合物を室温で３時間撹拌した。溶媒を真空下で濃縮し、粗生成物を、０．０５容量／容量％水酸化アンモニウムを含む水中５〜６０％アセトニトリルの濃度勾配で溶出するＣｏｍｂｉＦｌａｓｈシステムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ  ３８０．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７１６】
２．１．５．  １−（３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５−ウレイドペンタン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカン−１５−アミド
実施例２．１．４（１．５ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）中溶液に、２，５−ジオキソピロリジン−１−イル１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３−オキソ−７，１０，１３，１６−テトラオキサ−４−アザノナデカン−１９−オエート（２．０３ｇ）を加えた。混合物を室温で３日間撹拌した。粗製物を逆相カラム（Ｃ１８、ＳＦ６５−８００ｇ）に加え、０．１％トリフルオロ酢酸を含む水中２０〜１００％アセトニトリルで溶出して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ７７８．３（Ｍ＋１）＋。
【０７１７】
２．１．６．  ４−（（２Ｓ，５Ｓ）−２５−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−５−イソプロピル−４，７，２３−トリオキソ−２−（３−ウレイドプロピル）−１０，１３，１６，１９−テトラオキサ−３，６，２２−トリアザペンタコサンアミド）ベンジル（４−ニトロフェニル）カルボネート
実施例２．１．５（２．６０５ｇ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（１．８ｍＬ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）中溶液に、ビス（４−ニトロフェニル）カルボネート（１．２３ｇ）を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した。粗製物を逆相カラム（Ｃ１８、ＳＦ６５−８００ｇ）に加え、０．１％トリフルオロ酢酸を含む水中２０〜１００％アセトニトリルで溶出して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ９４３．２（Ｍ＋１）＋。
【０７１８】
２．１．７．  Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド
実施例２．１．６（４９．６ｍｇ）及び実施例１．１．１７（３０ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）中混合物に、０℃でＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０１８ｍＬ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌し、ジメチルスルホキシドで希釈し、０．１％トリフルオロ酢酸水溶液中２０〜７０％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムを使用するＲＰ−ＨＰＬＣにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １５６３．４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７１９】
２．２．  Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（シントンＤ）の合成
４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル４−ニトロフェニルカルボネート（Ｓｙｎｃｈｅｍから購入、５７ｍｇ）及び実施例１．１．１７（５７ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（６ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．５ｍＬ）を加えた。混合物を終夜撹拌し、次いで真空下で濃縮した。残渣をメタノール（３ｍＬ）及び酢酸（０．３ｍＬ）で希釈し、０．１％トリフルオロ酢酸を含む水中３０〜７０％アセトニトリルで溶出するＲＰ−ＨＰＬＣ（Ｇｉｌｓｏｎシステム、Ｃ１８カラム）により精製した。生成物フラクションを凍結乾燥して、標題化合物を得た。1H  NMR  (300  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.86  (d,  1H),  9.98  (s,  1H),  7.96-8.10  (m,  2H),  7.74-7.83  (m,  2H),  7.54-7.64  (m,  3H),  7.31-7.52  (m,  6H),  7.24-7.29  (m,  3H),  6.99  (s,  2H),  6.94  (d,  1H),  4.96  (d,  4H),  4.33-4.43  (m,  2H),  4.12-4.24  (m,  2H),  3.22-3.42  (m,  7H),  2.77-3.07  (m,  7H),  1.86-2.32  (m,  7H),  0.92-1.70  (m,  22H),  0.72-0.89  (m,  13H).ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １３５８．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７２０】
２．３．  Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−アラニル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド（シントンＪ）の合成
【０７２１】
２．３．１．  （Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）プロパン酸
（Ｓ）−２，５−ジオキソピロリジン−１−イル２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパノエート（５ｇ）のジメトキシエタン４０ｍＬ中溶液を、Ｌ−アラニン（１．１４５ｇ）及び重炭酸ナトリウム（１．０８ｇ）の水（４０ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。クエン酸水溶液（１５容量／容量％、７５ｍＬ）を反応物に加えた。沈殿物を濾過し、水（２×２５０ｍＬ）で洗浄し、真空乾固した。固体をジエチルエーテル（１００ｍＬ）でさらに摩砕し、濾過し、硫酸ナトリウムで脱水して生成物を得、これをさらには精製せずに次のステップに使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ３８３．０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７２２】
２．３．２．  （９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）カルバメート
Ｎ−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン（ＥＥＤＱ）（６．２１ｇ）を、実施例２．３．１（３．２ｇ）及び４−アミノベンジルアルコール（１．５４６ｇ）の２：１ジクロロメタン：メタノール５０ｍＬ中溶液に加えた。反応物を室温で２日間撹拌した。溶媒を真空下で濃縮した。残渣を酢酸エチル７５ｍＬで摩砕し、固体を濾取し、真空乾固して標題化合物を得、これをさらには精製せずに次のステップに使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ４８８．０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７２３】
２．３．３．  （Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）プロパンアミド
ジエチルアミン（１１．７５ｍＬ）を、実施例２．３．２（１．５８ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）中溶液に加え、反応物を室温で１６時間静置した。溶媒を真空下で蒸発させた。残渣を酢酸エチル（１００ｍＬ）で摩砕し、生成物を濾取し、真空乾固して標題化合物を得、これをさらには精製せずに次のステップに使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ２６６．０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７２４】
２．３．４．  １−（３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカン−１５−アミド
実施例２．３．３（１．０３３ｇ）を、１％Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを含むＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１９．５ｍＬ）中の２，５−ジオキソピロリジン−１−イル１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３−オキソ−７，１０，１３，１６−テトラオキサ−４−アザノナデカン−１９−オエート（２ｇ）と１６時間混合した。粗製の反応物を０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含む水中５〜８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステム及びＣ１８  ２５×１００ｍｍカラムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物フラクションを凍結乾燥して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ６６４．０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７２５】
２．３．５．  ４−（（２Ｓ，５Ｓ）−２５−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，５−ジメチル−４，７，２３−トリオキソ−１０，１３，１６，１９−テトラオキサ−３，６，２２−トリアザペンタコサンアミド）ベンジル（４−ニトロフェニル）カルボネート
実施例２．３．４（１．５ｇ）を、１％Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを含むＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１１．３ｍＬ）中のビス（４−ニトロフェニル）カルボネート（１．３８ｇ）と混合した。反応物を室温で１６時間撹拌した。粗製の反応物を０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含む水中５〜８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステム及びＣ１８  ２５×１００ｍｍカラムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物フラクションを凍結乾燥して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ８２９．０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７２６】
２．３．６．  Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−アラニル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド
実施例１．１．１７のトリフルオロ酢酸塩（１５ｍｇ）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）中の実施例２．３．５（２１．３ｍｇ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．００６ｍＬ）と混合した。反応混合物を室温で１時間撹拌した。粗製の反応物を０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含む水中５〜８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステム及びＣ１８  ２５×１００ｍｍカラムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物フラクションを凍結乾燥して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １４５０．７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７２７】
２．４．  Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−アラニル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド（シントンＫ）の合成
【０７２８】
２．４．１．  ６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）ヘキサンアミド
実施例２．３．４においてＮ−スクシンイミジル６−マレイミドヘキサノエートを２，５−ジオキソピロリジン−１−イル１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３−オキソ−７，１０，１３，１６−テトラオキサ−４−アザノナデカン−１９−オエートの代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ６４０．８（Ｍ＋ＮＨ４）＋。
【０７２９】
２．４．２．  ４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）プロパンアミド）プロパンアミド）ベンジル（４−ニトロフェニル）カルボネート
実施例２．３．５において実施例２．４．１を実施例２．３．４の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。
【０７３０】
２．４．３．  Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−アラニル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド
実施例２．３．６において実施例２．４．２を実施例２．３．５の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  9.56  (s,  1H),  7.98  (d,  1H),  7.76  (d,  1H),  7.71-7.52  (m,  3H),  7.51-7.21  (m,  4H),  6.97-6.84  (m,  1H),  4.98  (d,  2H),  4.42  (p,  1H),  4.27  (p,  1H),  3.89  (t,  1H),  3.80  (s,  2H),  3.43  (d,  19H),  3.03  (t,  7H),  2.87  (s,  2H),  2.32  (s,  1H),  2.11  (d,  3H),  1.52  (h,  2H),  1.41-0.94  (m,  12H),  0.84  (s,  3H).ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １２４４．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７３１】
２．５．  Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［１２−（｛（１ｓ，３ｓ）−３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）−４−メチル−３−オキソ−２，７，１０−トリオキサ−４−アザドデカ−１−イル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（シントンＬ）の合成
【０７３２】
２．５．１．  （３−ブロモアダマンタン−１−イル）メタノール
実施例１．１．２において３−ブロモアダマンタン−１−カルボン酸を実施例１．１．１の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。
【０７３３】
２．５．２．  １−（（３−ブロモアダマンタン−１−イル）メチル）−１Ｈ−ピラゾール
実施例１．１．３において実施例２．５．１を実施例１．１．２の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ２９５．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７３４】
２．５．３．  ２−（２−（２−（（３−（（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル）アダマンタン−１−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エタノール
実施例１．２．１において実施例２．５．２を実施例１．１．３の代わりに、硫酸銀をトリエチルアミンの代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ３６５．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７３５】
２．５．４．  ２−（２−（２−（（３−（（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル）アダマンタン−１−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エタノール
実施例１．２．２において実施例２．５．３を実施例１．２．１の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ３７９．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７３６】
２．５．５．  ２−（２−（２−（（３−（（４−ヨード−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル）アダマンタン−１−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エタノール
実施例１．２．３において実施例２．５．４を実施例１．２．２の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ５０４．９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７３７】
２．５．６．  ２−（２−（２−（（３−（（４−ヨード−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル）アダマンタン−１−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）−Ｎ−メチルエタンアミン
実施例１．２．４において実施例２．５．５を実施例１．２．３の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ５１８．４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７３８】
２．５．７．  ｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−（（３−（（４−ヨード−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル）アダマンタン−１−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）（メチル）カルバメート
実施例１．２．５において実施例２．５．６を実施例１．２．４の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ６１７．９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７３９】
２．５．８．  ｔｅｒｔ−ブチルメチル（２−（２−（２−（（３−（（５−メチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル）アダマンタン−１−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート
実施例１．２．６において実施例２．５．７を実施例１．２．５の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ６１８．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７４０】
２．５．９．  ｔｅｒｔ−ブチル６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）−３−（５−メチル−１−（（３−（（２，２，５−トリメチル−４−オキソ−３，８，１１−トリオキサ−５−アザトリデカン−１３−イル）オキシ）アダマンタン−１−イル）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピコリネート
実施例１．２．１０において実施例２．５．８を実施例１．２．６の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ９７６．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７４１】
２．５．１０．  ６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）−３−（５−メチル−１−（（（１ｓ，３ｓ）−３−（２−（２−（２−（メチルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）アダマンタン−１−イル）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピコリン酸
実施例１．２．１１において実施例２．５．９を実施例１．２．１０の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ８２０．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７４２】
２．５．１１．  Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［１２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）−４−メチル−３−オキソ−２，７，１０−トリオキサ−４−アザドデカ−１−イル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド
実施例２．２において実施例２．５．１０を実施例１．１．１７の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  9.96  (br.s,  1H),  7.96-8.12  (m,  2H),  7.73-7.83  (m,  2H),  7.29-7.66  (m,  9H),  7.17-7.30  (m,  3H),  6.89-7.01  (m,  2H),  4.86-5.01  (m,  4H),  4.28-4.45  (m,  1H),  4.12-4.21  (m,  1H),  3.69-3.92  (m,  3H),  3.27-3.62  (m,  9H),  2.78-3.06  (m,  7H),  2.01-2.23  (m,  7H),  1.87-2.01  (m,  1H),  1.54-1.72  (m,  4H),  1.01-1.54  (m,  22H),  0.72-0.89  (m,  6H).ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １４１８．４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７４３】
２．６．  Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［１２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）−４−メチル−３−オキソ−２，７，１０−トリオキサ−４−アザドデカ−１−イル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（シントンＭ）の合成
実施例２．１．７において実施例２．５．１０を実施例１．１．１７の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。1H  NMR  (500  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  9.97  (s,  1H),  8.07-8.13  (m,  1H),  7.97-8.05  (m,  2H),  7.86  (d,  1H),  7.78  (d,  1H),  7.55-7.63  (m,  3H),  7.40-7.51  (m,  3H),  7.32-7.38  (m,  2H),  7.25-7.30  (m,  2H),  6.98  (s,  1H),  6.93  (d,  1H),  4.91-5.01  (m,  4H),  4.31-4.41  (m,  1H),  4.17-4.24  (m,  1H),  3.83-3.91  (m,  2H),  3.76  (s,  2H),  3.30-3.62  (m,  21H),  3.10-3.17  (m,  1H),  2.89-3.05  (m,  4H),  2.81-2.88  (m,  3H),  2.42-2.47  (m,  1H),  2.27-2.40  (m,  3H),  2.04-2.15  (m,  5H),  1.91-2.00  (m,  1H),  1.30-1.72  (m,  16H),  0.76-0.88  (m,  6H).ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １６２３．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７４４】
２．７．  Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［１２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）−４−メチル−３−オキソ−２，７，１０−トリオキサ−４−アザドデカ−１−イル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（シントンＶ）の合成
実施例２．２において実施例１．２．１１を実施例１．１．１７の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。1H  NMR  (500  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  9.61  (s,  1H),  7.97  (d,  1H),  7.76  (d,  1H),  7.67  (d,  1H),  7.61  (d,  1H),  7.51-7.57  (m,  2H),  7.38-7.48  (m,  4H),  7.29-7.36  (m,  2H),  7.23-7.28  (m,  3H),  6.86-6.94  (m,  2H),  4.97  (d,  4H),  4.38-4.45  (m,  1H),  4.12-4.19  (m,  1H),  3.89  (t,  2H),  3.80  (s,  2H),  3.47-3.54  (m,  5H),  3.44  (s,  3H),  3.33-3.41  (m,  6H),  2.93-3.06  (m,  6H),  2.87  (s,  2H),  2.11-2.22  (m,  2H),  2.08  (s,  3H),  1.97-2.05  (m,  1H),  1.70-1.81  (m,  2H),  1.33-1.68  (m,  10H),  0.95-1.32  (m,  14H),  0.80-0.91  (m,  13H).ＭＳ（＋ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １４４６．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７４５】
２．８．  Ｎ−（｛２−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ］エトキシ｝アセチル）−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［１２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）−４−メチル−３−オキソ−２，７，１０−トリオキサ−４−アザドデカ−１−イル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（シントンＤＳ）の合成
【０７４６】
２．８．１．  （Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（２−（２−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ）エトキシ）アセトアミド）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ−（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）−５−ウレイドペンタンアミド
実施例２．１．５において２，５−ジオキソピロリジン−１−イル２−（２−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ）エトキシ）アセテートを２，５−ジオキソピロリジン−１−イル１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３−オキソ−７，１０，１３，１６−テトラオキサ−４−アザノナデカン−１９−オエートの代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。
【０７４７】
２．８．２．  ４−（（２Ｓ，５Ｓ）−１４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−５−イソプロピル−４，７−ジオキソ−２−（３−ウレイドプロピル）−９，１２−ジオキサ−３，６−ジアザテトラデカンアミド）ベンジル（４−ニトロフェニル）カルボネート
実施例２．３．５において実施例２．８．１を実施例２．３．４の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。
【０７４８】
２．８．３．  Ｎ−（｛２−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ］エトキシ｝アセチル）−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［１２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）−４−メチル−３−オキソ−２，７，１０−トリオキサ−４−アザドデカ−１−イル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド
実施例２．２において実施例１．２．１１を実施例１．１．１７及び実施例２．８．２を４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル４−ニトロフェニルカルボネートの代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。1H  NMR  (500  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  9.64  (s,  1H),  7.97  (d,  1H),  7.92  (d,  1H),  7.75  (d,  1H),  7.60  (d,  1H),  7.54  (d,  2H),  7.45  (d,  2H),  7.38-7.43  (m,  1H),  7.29-7.36  (m,  2H),  7.22-7.28  (m,  4H),  6.88-6.93  (m,  2H),  4.98  (d,  4H),  4.39-4.46  (m,  1H),  4.24-4.31  (m,  1H),  3.86-3.93  (m,  4H),  3.80  (s,  2H),  3.46-3.61  (m,  15H),  3.43-3.45  (m,  5H),  3.33-3.38  (m,  4H),  2.87  (s,  3H),  1.99-2.11  (m,  4H),  1.56-1.80  (m,  2H),  1.34-1.50  (m,  4H),  0.94-1.32  (m,  11H),  0.80-0.91  (m,  13H).ＭＳ（＋ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １４７８．３（Ｍ＋Ｈ）。
【０７４９】
２．９．  この段落は意図的に空欄にされている。
【０７５０】
２．１０．  Ｎ−［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（シントンＢＧ）の合成
【０７５１】
２．１０．１．  （Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ−（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）−５−ウレイドペンタンアミド
実施例２．１．４（３ｇ）及び２，５−ジオキソピロリジン−１−イル３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノエート（１．７８９ｇ）をメタノール（３０ｍＬ）に溶解し、室温で３時間撹拌した。溶媒を減圧下で濃縮し、残渣をジクロロメタン中５〜３０％メタノールの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ５３１．０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７５２】
２．１０．２．  ４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル（４−ニトロフェニル）カルボネート
ビス（４−ニトロフェニル）カルボネート（２．２９３ｇ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１．３１７ｍＬ）及び実施例２．１０．１（２ｇ）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）に溶解し、室温で１６時間撹拌した。溶媒を減圧下で濃縮し、残渣をジクロロメタン中０〜１０％メタノールの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ６９６．９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７５３】
２．１０．３．  Ｎ−［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド
実施例２．９．５において実施例２．１０．２を実施例２．９．４の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.86  (bs,  1H),  9.95  (s,  1H),  8.10  (d,  1H),  8.01  (dd,  2H),  7.79  (d,  1H),  7.65-7.56  (m,  3H),  7.55-7.40  (m,  3H),  7.40-7.33  (m,  2H),  7.35-7.24  (m,  3H),  6.99  (s,  2H),  6.95  (d,  1H),  4.42-4.28  (m,  1H),  4.15  (dd,  1H),  3.92-3.85  (m,  2H),  3.83-3.77  (m,  2H),  3.77-3.52  (m,  2H),  3.45-3.38  (m,  2H),  3.30-3.23  (m,  2H),  3.08-2.90  (m,  4H),  2.90-2.81  (m,  3H),  2.09  (s,  3H),  2.02-1.86  (m,  1H),  1.79-1.52  (m,  2H),  1.52-0.92  (m,  15H),  0.91-0.75  (m,  13H).ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １３１６．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７５４】
２．１１．  この段落は意図的に空欄にされている。
【０７５５】
２．１２．  Ｎ−［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］−Ｌ−アラニル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド（シントンＢＩ）の合成
【０７５６】
２．１２．１．  ３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）プロパンアミド
実施例２．３．３（９ｇ）及び２，５−ジオキソピロリジン−１−イル３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノエート（９．０３ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）中混合物を、室温で１６時間撹拌した。反応混合物を水で希釈した。水性層を塩化メチレン（３×１００ｍＬ）で逆抽出した。有機溶媒を真空下で濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲル上に吸着させ、５０：１ジクロロメタン／メタノールで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ４３９．１（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０７５７】
２．１２．２．  ４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド）プロパンアミド）プロパンアミド）ベンジル（４−ニトロフェニル）カルボネート
実施例２．１０．２において実施例２．１２．１を実施例２．１０．１の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。生成物を２５％テトラヒドロフラン／ジクロロメタンで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーシリカにより精製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ６０４．０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７５８】
２．１２．３．  Ｎ−［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］−Ｌ−アラニル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド
実施例２．９．５において実施例２．１２．２を実施例２．９．４の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  9.51  (s,  1H),  7.97  (dd,  1H),  7.90-7.83  (m,  1H),  7.76  (d,  1H),  7.72-7.66  (m,  1H),  7.64-7.57  (m,  1H),  7.60-7.55  (m,  1H),  7.55  (s,  1H),  7.48-7.37  (m,  3H),  7.37-7.29  (m,  2H),  7.29-7.22  (m,  3H),  6.91  (d,  1H),  6.88  (s,  1H),  4.98  (s,  2H),  4.96  (bs,  2H),  4.40  (p,  1H),  4.24  (p,  1H),  3.89  (t,  2H),  3.79  (s,  2H),  3.64  (t,  2H),  3.44  (t,  2H),  3.29-3.14  (m,  2H),  3.02  (t,  2H),  2.86  (s,  3H),  2.08  (s,  3H),  1.36  (bs,  2H),  1.31  (d,  3H),  1.29-0.94  (m,  14H),  0.83  (s,  6H).ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １２０２．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７５９】
２．１３．  この段落は意図的に空欄にされている。
【０７６０】
２．１４．  この段落は意図的に空欄にされている。
【０７６１】
２．１５．  この段落は意図的に空欄にされている。
【０７６２】
２．１６．  この段落は意図的に空欄にされている。
【０７６３】
２．１７．  Ｎ−［（２Ｒ）−４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２−スルホブタノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（シントンＢＯ）の合成
【０７６４】
２．１７．１．  ３−（１−（（３−（２−（（（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例２．３．６において（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（（Ｓ）−３−メチル−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５−ウレイドペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソブタン−２−イル）カルバメートを実施例２．３．５の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １３８７．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７６５】
２．１７．２．  ３−（１−（（３−（２−（（（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例２．１７．１（１５ｍｇ）を、３０％ジエチルアミンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）中溶液と混合し、反応混合物を室温で終夜撹拌した。粗製の反応混合物をＣ１８カラム及び０．１％トリフルオロ酢酸を含む水中１０〜１００％アセトニトリルの濃度勾配を使用する逆相ＨＰＬＣにより直接精製した。生成物を含むフラクションを凍結乾燥して、標題化合物をトリフルオロ酢酸塩として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １１６５．５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７６６】
２．１７．３．  ４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１−（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ）−１−オキソブタン−２−スルホネート
窒素でスパージした１００ｍＬのフラスコ中、１−カルボキシ−３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパン−１−スルホネートをジメチルアセトアミド（２０ｍＬ）に溶解した。この溶液に、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（４４０ｍｇ）及び１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（１０００ｍｇ）を加え、反応物を窒素雰囲気下室温で１６時間撹拌した。溶媒を減圧下で濃縮し、残渣を０．１容量／容量％酢酸を含むジクロロメタン中１〜２％メタノールの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を約８０％活性化エステル及び２０％酸の混合物として得、これをさらには精製せずに次のステップに使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ３６０．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７６７】
２．１７．４．  Ｎ−［（２Ｒ）−４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２−スルホブタノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド
実施例２．１７．２のトリフルオロ酢酸塩（６ｍｇ）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５００ｍＬ）中の実施例２．１７．３（１６．８５ｍｇ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０２５ｍＬ）と混合し、反応混合物を室温で終夜撹拌した。粗製の反応混合物を０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含む水中５〜８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステム及びＣ１８  ２５×１００ｍｍカラムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物フラクションを凍結乾燥して、ラセミ体の実施例２．１７．３から誘導される新たに加えられた位置にて立体化学が異なる２種のジアステレオマーを得た。２種の生成物のその中心での立体化学をランダムに割り当てた。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １４０８．５（Ｍ−Ｈ）−。
【０７６８】
２．１８．  Ｎ−［（２Ｓ）−４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２−スルホブタノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（シントンＢＰ）の合成
標題化合物は、実施例２．１７．４に記載した通りに、実施例２．１７．４の調製の間で単離された２番目のジアステレオマーである。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １４０８．４（Ｍ−Ｈ）−。
【０７６９】
２．１９．  この段落は意図的に空欄にされている。
【０７７０】
２．２０．  この段落は意図的に空欄にされている。
【０７７１】
２．２１．  Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−３−スルホ−Ｌ−アラニル−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド（シントンＩＱ）の合成
【０７７２】
２．２１．１．  （Ｓ）−（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（１−（（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ−１−オキソプロパン−２−イル）カルバメート
（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパン酸（５０ｇ）のメタノール（４００ｍＬ）及びジクロロメタン（４００ｍＬ）中溶液に、（４−アミノフェニル）メタノール（２３．７３ｇ）及びエチル２−エトキシキノリン−１（２Ｈ）−カルボキシレート（７９ｇ）を加え、反応物を室温で終夜撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣をジクロロメタンにより洗浄して、標題化合物を得た。
【０７７３】
２．２１．２．  （Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）プロパンアミド
実施例２．２１．１（１０ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１００ｍＬ）中溶液に、ピペリジン（４０ｍＬ）を加え、反応物を２時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣をメタノールに溶解した。固体を濾別し、濾液を濃縮して、粗生成物を得た。
【０７７４】
２．２１．３．  （９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート
実施例２．２１．２（５ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１００ｍＬ）中溶液に、（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−３−メチルブタン酸（１０．４８ｇ）及び２−（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルイソウロニウムヘキサフルオロホスフェート（Ｖ）（１４．６４ｇ）を加え、反応物を終夜撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣をジクロロメタンで洗浄し、固体を濾過して、粗生成物を得た。
【０７７５】
２．２１．４．  （９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（（Ｓ）−３−メチル−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート
実施例２．１０．２において実施例２．２１．３を実施例２．１０．１の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。
【０７７６】
２．２１．５．  ３−（１−（（３−（２−（（（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）オキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例１．３．７（０．１０２ｇ）、実施例２．２１．４（０．０８９ｇ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．１０４ｍＬ）の溶液を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）中室温で共に撹拌した。終夜撹拌した後、ジエチルアミン（０．０６２ｍＬ）を加え、反応物を追加の２時間撹拌した。反応物を水（１ｍＬ）で希釈し、トリフルオロ酢酸でクエンチし、０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含む水中１０〜８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムを使用して分取ＨＰＬＣにより精製した。所望のフラクションを合わせ、凍結乾固して、標題化合物を得た。
【０７７７】
２．２１．６．  ３−（１−（（３−（２−（（（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｒ）−２−アミノ−３−スルホプロパンアミド）−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）オキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
（Ｒ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−３−スルホプロパン酸（０．０２８ｇ）及び２−（３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−３−イル）−１，１，３，３−テトラメチルイソウロニウムヘキサフルオロリン酸塩（Ｖ）（０．０２７ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０４２ｍＬ）を加え、反応物を５分間撹拌した。混合物を実施例２．２１．５（０．０５０ｇ）に加え、混合物を１時間撹拌した。次いでジエチルアミン（０．０４９ｍＬ）を反応物に加え、追加の１時間撹拌を続けた。反応物をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）及び水（０．５ｍＬ）で希釈し、トリフルオロ酢酸でクエンチし、０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含む水中１０〜８８％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望のフラクションを合わせ、凍結乾固して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １２１４．４（Ｍ−Ｈ）−。
【０７７８】
２．２１．７．  Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−３−スルホ−Ｌ−アラニル−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド
実施例２．２１．６（０．０３０ｇ）及び２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノエート（８．３４ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０２０ｍＬ）を加え、反応物を１時間撹拌した。反応物をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）及び水（０．５ｍＬ）で希釈し、０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含む水中１０〜８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムを使用して分取ＨＰＬＣにより精製した。所望のフラクションを合わせ、凍結乾固して、標題化合物を得た。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.84  (s,  1H),  9.41  (s,  1H),  8.26  (d,  1H),  8.11-7.95  (m,  3H),  7.79  (d,  1H),  7.68  (d,  2H),  7.61  (d,  1H),  7.57-7.27  (m,  6H),  7.24  (d,  2H),  7.12  (t,  1H),  7.02-6.90  (m,  3H),  4.94  (d,  4H),  4.67  (td,  2H),  4.34-4.22  (m,  2H),  4.04-3.94  (m,  2H),  3.88  (t,  2H),  3.82  (s,  2H),  3.42-3.27  (m,  4H),  3.11-2.96  (m,  5H),  2.84  (dd,  1H),  2.30-1.98  (m,  6H),  1.56-1.41  (m,  4H),  1.41-0.79  (m,  28H).ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １４０９．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７７９】
２．２２．  ４−［（１Ｅ）−３−（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）プロパ−１−エン−１−イル］−２−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−β−アラニル｝アミノ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（シントンＤＢ）の合成
【０７８０】
２．２２．１．  （Ｅ）−ｔｅｒｔ−ブチルジメチル（（３−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）アリル）オキシ）シラン
ｔｅｒｔ−ブチルジメチル（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）シラン（５ｇ）及びジクロロメタン（１４．７ｍＬ）を入れたフラスコに、窒素雰囲気下４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（３．９４ｇ）を滴下添加した。混合物を室温で１分間撹拌し、次いで窒素でスパージしたＣｐ２ＺｒＣｌＨ（クロリドビス（η５−シクロペンタジエニル）ヒドリドジルコニウム、Ｓｃｈｗａｒｔｚ試薬）（３７９ｍｇ）を含むフラスコにカヌーレにより移した。得られた反応混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物を水（１５ｍＬ）で注意深くクエンチし、次いでジエチルエーテル（３×３０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を水（１５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮し、ヘプタン中０〜８％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ３１６．０（Ｍ＋ＮＨ４）＋。
【０７８１】
２．２２．２．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（４−ブロモ−２−ニトロフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−ブロモ−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（５ｇ）をアセトニトリル（１００ｍＬ）に溶解した。Ａｇ２Ｏ（２．９２ｇ）を溶液に加え、反応物を室温で５分間撹拌した。４−ブロモ−２−ニトロフェノール（２．７４ｇ）を加え、反応混合物を室温で４時間撹拌した。銀塩残渣を珪藻土に通して濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。残渣をヘプタン中１０〜７０％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ５５０．９（Ｍ＋ＮＨ４）＋。
【０７８２】
２．２２．３．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（４−（（Ｅ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）プロパ−１−エン−１−イル）−２−ニトロフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．２２．２（１ｇ）、炭酸ナトリウム（０．５９５ｇ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０．０８６ｇ）及び１，３，５，７−テトラメチル−６−フェニル−２，４，８−トリオキサ−６−ホスファアダマンタン（０．０５５ｇ）を、還流冷却器を装着した５０ｍＬの３ツ口丸底フラスコ中で合わせ、システムを窒素で脱気した。別途、実施例２．２２．１（０．７２６ｇ）のテトラヒドロフラン（１５ｍＬ）中溶液を、窒素で３０分間脱気した。後者の溶液を、固体試薬を含むフラスコ中にカヌーレにより移し、続いて脱気した水（３ｍＬ）を注射器により加えた。反応物を６０℃に２時間加熱した。反応混合物を酢酸エチル（３×３０ｍＬ）と水（３０ｍＬ）との間で分配した。合わせた有機相を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、濃縮した。残渣をヘプタン中０〜３５％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ６４３．１（Ｍ＋ＮＨ４）＋。
【０７８３】
２．２２．４．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（２−アミノ−４−（（Ｅ）−３−ヒドロキシプロパ−１−エン−１−イル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
均圧滴下漏斗を装備した５００−ｍＬの３ツ口フラスコを窒素でフラッシュし、これに亜鉛末（８．７７ｇ）を入れた。実施例２．２２．３（８．３９ｇ）のテトラヒドロフラン（６７ｍＬ）中脱気溶液を、カヌーレにより加えた。得られた懸濁液を氷浴中で冷却し、反応物の内温が３５℃を超えない速度で、６Ｎ  ＨＣｌ（２２．３ｍＬ）を添加漏斗により滴下添加した。添加完了後、反応物を室温で２時間撹拌し、珪藻土のパッドに通して濾過し、水及び酢酸エチルですすいだ。水性層が酸性で無くなるまで、濾液を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で処理し、混合物を濾過して、得られた固体を除去した。濾液を分液漏斗に移し、層を分離した。水性層を酢酸エチル（３×７５ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層を水（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残渣をジエチルエーテルで摩砕し、固体を濾取して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ４８２．０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７８４】
２．２２．５．  （９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（３−クロロ−３−オキソプロピル）カルバメート
３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパン酸（５．０ｇ）のジクロロメタン（５３．５ｍＬ）中溶液に、亜硫酸ジクロリド（０．７０３ｍＬ）を加えた。混合物を６０℃で１時間撹拌した。混合物を冷却し、濃縮して標題化合物を得、これをさらには精製せずに次のステップに使用した。
【０７８５】
２．２２．６．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（２−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）−４−（（Ｅ）−３−ヒドロキシプロパ−１−エン−１−イル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．２２．４（６．７８ｇ）をジクロロメタン（５０ｍＬ）に溶解し、溶液を氷浴中で０℃に冷却した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３．６４ｇ）を加え、続いて実施例２．２２．５（４．８８ｇ）のジクロロメタン（５０ｍＬ）中溶液を滴下添加した。氷浴を室温にしながら、反応物を１６時間撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１００ｍＬ）を加え、層を分離した。水性層をジクロロメタン（２×５０ｍＬ）でさらに抽出した。抽出物をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮し、５〜９５％酢酸エチル／ヘプタンの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、出発物のアニリンと所望の生成物との分離できない混合物を得た。混合物を１Ｎ  ＨＣｌ水溶液（４０ｍＬ）とジエチルエーテル及び酢酸エチルの１：１混合物（４０ｍＬ）との間で分配し、次いで水性相を酢酸エチル（２×２５ｍＬ）でさらに抽出した。有機相を合わせ、水（２×２５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ７７４．９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７８６】
２．２２．７．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（２−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）−４−（（Ｅ）−３−（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）プロパ−１−エン−１−イル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．２２．６（３．５７ｇ）をジクロロメタン（４５ｍＬ）に溶解し、ビス（４−ニトロフェニル）カルボネート（２．８０ｇ）を加え、続いてＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．８９６ｇ）を滴下添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した。シリカゲル（２０ｇ）を反応溶液に加え、浴温を２５℃又はそれ未満で維持しながら混合物を減圧下で濃縮乾固した。シリカ残渣をカラムに装填し、生成物を０〜１００％酢酸エチル−ヘプタンの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、部分的に精製された生成物を得、これはニトロフェノールを不純物として含んでいた。物質をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２５０ｍＬ）で摩砕し、得られたスラリー液を１時間置いた。生成物を濾取した。連続する３つのクロップを同様の方法で集めて、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  ９３９．８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７８７】
２．２２．８．  ３−（１−（（３−（２−（（（（（Ｅ）−３−（３−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）−４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）フェニル）アリル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例１．１．１７のトリフルオロ酢酸塩（７７ｍｇ）及び実施例２．２２．７（８３ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３．５ｍＬ）中冷却（０℃）溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０７４ｍＬ）を加えた。反応物を室温にゆっくり加温し、１６時間撹拌した。反応物を水及び酢酸エチルを加えることによりクエンチした。層を分離し、水溶液を追加の酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機物を無水硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して標題化合物を得、これをさらには精製せずに引き続くステップに使用した。
【０７８８】
２．２２．９．  ３−（１−（（３−（２−（（（（（Ｅ）−３−（３−（３−アミノプロパンアミド）−４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−６−カルボキシ−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）フェニル）アリル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例２．２２．８（１３７ｍｇ）のメタノール（３ｍＬ）中周囲温度溶液に、２Ｍ水酸化リチウム溶液（０．６６ｍＬ）を加えた。反応混合物を３５℃で２時間撹拌し、酢酸（０．１８ｍＬ）を加えることによりクエンチした。反応物を濃縮乾固し、残渣をメタノールで希釈した。粗生成物を０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含む水中２０〜７５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステム及びＣ１８  ２５×１００ｍｍカラムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物フラクションを凍結乾燥して、標題化合物をトリフルオロ酢酸塩として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １２２０．３（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０７８９】
２．２２．１０．  ４−［（１Ｅ）−３−（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）プロパ−１−エン−１−イル］−２−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−β−アラニル｝アミノ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸
実施例２．２２．９のトリフルオロ酢酸塩（４１．９ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）中溶液に、Ｎ−スクシンイミジル６−マレイミドヘキサノエート（９．８４ｍｇ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０１０ｍＬ）を加え、反応物を室温で１６時間撹拌した。粗製の反応物を０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含む水中５〜８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステム及びＣ１８  ２５×１００ｍｍカラムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物フラクションを凍結乾燥して、標題化合物を得た。1H  NMR  (500  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.86  (bs,  2H),  9.03  (s,  1H),  8.25  (bs,  1H),  8.03  (d,  1H),  7.97-7.85  (m,  1H),  7.79  (d,  1H),  7.64-7.59  (m,  1H),  7.56-7.39  (m,  3H),  7.40-7.32  (m,  2H),  7.28  (s,  1H),  7.14-7.06  (m,  1H),  7.04  (d,  1H),  6.98  (s,  2H),  6.95  (d,  1H),  6.60-6.52  (m,  1H),  6.22-6.12  (m,  1H),  4.95  (bs,  2H),  4.90-4.75  (m,  1H),  4.63  (d,  2H),  4.24-4.05  (m,  1H),  4.08-3.62  (m,  8H),  3.50-3.24  (m,  10H),  3.04-2.97  (m,  2H),  2.92-2.82  (m,  3H),  2.11-2.06  (m,  3H),  2.03  (t,  J  =  7.4  Hz,  2H),  1.53-1.39  (m,  4H),  1.41-0.73  (m,  23H).ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １４１３．３（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０７９０】
２．２３．  ４−｛（１Ｅ）−３−［（｛２−［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エトキシ］エチル｝カルバモイル）オキシ］プロパ−１−エン−１−イル｝−２−（｛Ｎ−［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］−β−アラニル｝アミノ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（シントンＤＭ）の合成
【０７９１】
２．２３．１．  ３−（１−（（３−（２−（２−（（（（（Ｅ）−３−（３−（３−アミノプロパンアミド）−４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−６−カルボキシ−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）フェニル）アリル）オキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例２．２２．７（９４ｍｇ）及び実施例１．４．１０（９０ｍｇ）の冷却（０℃）溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（０．０５４ｍＬ）を加えた。反応物を室温にゆっくり加温し、終夜撹拌した。反応物を水及び酢酸エチルを加えることによりクエンチした。層を分離し、水性層を追加の酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機物を無水硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。粗製物をテトラヒドロフラン／メタノール／Ｈ２Ｏ（２：１：１、８ｍＬ）に溶解して、これに水酸化リチウム一水和物（４０ｍｇ）を加えた。反応混合物を終夜撹拌した。混合物を真空下で濃縮し、トリフルオロ酢酸で酸性化し、ジメチルスルホキシド／メタノールに溶解した。溶液を０．１％トリフルオロ酢酸を含む水中１０〜８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステム及びＣ１８カラムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １２２８．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７９２】
２．２３．２．  ４−｛（１Ｅ）−３−［（｛２−［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エトキシ］エチル｝カルバモイル）オキシ］プロパ−１−エン−１−イル｝−２−（｛Ｎ−［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］−β−アラニル｝アミノ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸
実施例２．２３．１（２０ｍｇ）及び２，５−ジオキソピロリジン−１−イル３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノエート（５．５ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０５４ｍＬ）を加えた。反応物を終夜撹拌した。反応混合物をメタノール（２ｍＬ）で希釈し、トリフルオロ酢酸で酸性化した。溶液を０．１％トリフルオロ酢酸を含む水中１０〜８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステム及びＣ１８カラムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製して、標題化合物を得た。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.85  (s,  1H),  9.03  (s,  1H),  8.24  (s,  1H),  7.95-8.11  (m,  2H),  7.79  (d,  1H),  7.61  (d,  1H),  7.32-7.52  (m,  5H),  7.28  (s,  1H),  7.02-7.23  (m,  3H),  6.91-6.96  (m,  3H),  6.57  (d,  1H),  6.05-6.24  (m,  1H),  4.95  (s,  2H),  4.87  (d,  1H),  4.59  (d,  2H),  3.78-3.95  (m,  4H),  3.13  (q,  2H),  3.01  (t,  2H),  2.51-2.57  (m,  2H),  2.27-2.39  (m,  3H),  2.11  (s,  3H),  0.92-1.43  (m,  16H),  0.83  (s,  6H).ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １３７９．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７９３】
２．２４．  ４−｛（１Ｅ）−３−［（｛２−［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エトキシ］エチル｝カルバモイル）オキシ］プロパ−１−エン−１−イル｝−２−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−β−アラニル｝アミノ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（シントンＤＬ）の合成
実施例２．２３．１（２０ｍｇ）及び２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノエート（６．５ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０５４ｍＬ）を加えた。反応混合物を終夜撹拌した。反応混合物をメタノール（２ｍＬ）で希釈し、トリフルオロ酢酸で酸性化した。混合物を０．１％トリフルオロ酢酸を含む水中１０〜８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステム及びＣ１８カラムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製して、標題化合物を得た。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.85  (s,  1H),  9.03  (s,  1H),  8.24  (s,  1H),  8.03  (d,  1H),  7.87  (t,  1H),  7.78  (s,  1H),  7.61  (d,  1H),  7.32-7.55  (m,  5H),  6.90-7.19  (m,  5H),  6.56  (d,  1H),  6.08-6.24  (m,  1H),  4.91-4.93  (m,  1H),  4.86  (s,  1H),  4.59  (d,  2H),  3.27-3.46  (m,  14H),  3.13  (q,  3H),  2.96-3.02  (m,  2H),  2.50-2.59  (m,  3H),  2.09  (s,  3H),  2.00-2.05  (m,  3H),  0.94-1.54  (m,  20H),  0.83  (s,  6H).ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １４２１．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７９４】
２．２５．  ４−［（１Ｅ）−１４−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）−６−メチル−５−オキソ−４，９，１２−トリオキサ−６−アザテトラデカ−１−エン−１−イル］−２−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−β−アラニル｝アミノ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（シントンＤＲ）の合成
【０７９５】
２．２５．１．  ３−（１−（（３−（（（Ｅ）−１４−（３−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）−４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）フェニル）−９−メチル−１０−オキソ−３，６，１１−トリオキサ−９−アザテトラデカ−１３−エン−１−イル）オキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例２．２２．７（９０ｍｇ）及び実施例１．２．１１（９２ｍｇ）の冷却（０℃）溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（０．０５０ｍＬ）を加えた。氷浴を除去し、反応物を終夜撹拌した。反応物を水及び酢酸エチルを加えることによりクエンチした。層を分離し、水溶液を追加の酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機物を無水硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して標題化合物を得、これをさらには精製せずに引き続くステップに使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １６４８．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７９６】
２．２５．２．  ３−（１−（（３−（（（Ｅ）−１４−（３−（３−アミノプロパンアミド）−４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−６−カルボキシ−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）フェニル）−９−メチル−１０−オキソ−３，６，１１−トリオキサ−９−アザテトラデカ−１３−エン−１−イル）オキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例２．２５．１（１５８ｍｇ）のメタノール（２．０ｍＬ）中冷却（０℃）溶液に、２Ｍ水酸化リチウム水溶液（０．７８３ｍＬ）を加えた。反応物を４時間撹拌し、酢酸（０．１ｍＬ）を加えることによりクエンチした。反応物を濃縮乾固し、残渣を０．１％トリフルオロ酢酸を含む水中１０〜８５％アセトニトリルで溶出するＢｉｏｔａｇｅ  Ｉｓｏｌｅｒａ  Ｏｎｅシステム及び逆相Ｃ１８  ４０ｇカラムを使用するクロマトグラフィーにかけた。生成物を含むフラクションを凍結乾燥して、標題化合物を固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １２８６．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７９７】
２．２５．３．  ４−［（１Ｅ）−１４−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）−６−メチル−５−オキソ−４，９，１２−トリオキサ−６−アザテトラデカ−１−エン−１−イル］−２−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−β−アラニル｝アミノ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸
実施例２．２５．２（９．０３ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．０ｍＬ）中周囲温度溶液に、２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノエート（４ｍｇ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（０．０２０ｍＬ）を加え、反応物を終夜撹拌した。反応物をジメチルスルホキシド及びメタノールで希釈し、０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含む水中１０〜７５％アセトニトリルの濃度勾配で溶出するＢｉｏｔａｇｅ  Ｉｓｏｌｅｒａクロマトグラフィーユニット（Ｃ１８カラム４０ｇ）上でのＲＰ−ＨＰＬＣにより精製した。生成物を含むフラクションを凍結乾固により濃縮して、標題化合物を固体として得た。1H  NMR  (400MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.85  (s,  1H),  8.04  (d,  1H),  7.99  (t,  1H),  7.79  (d,  1H),  7.60  (d,  1H),  7.53-7.41  (m,  3H),  7.40-7.32  (m,  2H),  7.28  (s,  1H),  6.99  (s,  2H),  6.98-6.92  (m,  1H),  4.95  (bs,  2H),  3.92-3.85  (m,  1H),  3.81  (s,  2H),  3.63-3.55  (m,  4H),  3.55-3.31  (m,  28H),  3.18-3.10  (m,  2H),  3.05-2.98  (m,  2H),  2.97  (s,  2H),  2.80  (s,  2H),  2.59-2.50  (m,  1H),  2.32  (t,  2H),  2.10  (s,  3H),  1.39-1.34  (m,  2H),  1.31-1.18  (m,  4H),  1.20-0.92  (m,  6H),  0.84  (s,  6H).ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １４７９．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０７９８】
２．２６．  ４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−［２−（２−｛［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（シントンＤＺ）の合成
【０７９９】
２．２６．１．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（４−ホルミル−３−ヒドロキシフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
２，４−ジヒドロキシベンズアルデヒド（１５ｇ）及び（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−ブロモ−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１０ｇ）のアセトニトリル中溶液に、炭酸銀（１０ｇ）を加え、反応物を４０℃に加熱した。４時間撹拌した後、反応物を冷却し、濾過し、濃縮した。粗生成物をジクロロメタンに懸濁し、珪藻土に通して濾過し、濃縮した。残渣をヘプタン中１０〜１００％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。
【０８００】
２．２６．２．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（３−ヒドロキシ−４−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．２６．１（１６．１２ｇ）のテトラヒドロフラン（２００ｍＬ）及びメタノール（２００ｍＬ）中溶液を０℃に冷却し、水素化ホウ素ナトリウム（１．４７６ｇ）を少しずつ加えた。反応物を２０分間撹拌し、次いで水：飽和重炭酸ナトリウム溶液の１：１混合物（４００ｍＬ）でクエンチした。得られた固体を濾別し、酢酸エチルですすいだ。相を分離し、水性層を酢酸エチルで４回抽出した。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮した。粗生成物をヘプタン中１０〜１００％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ４７３．９（Ｍ＋ＮＨ４）＋。
【０８０１】
２．２６．３．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−３−ヒドロキシフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
ジクロロメタン（１６８ｍＬ）中の実施例２．２６．２（７．６６ｇ）及びｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（２．７８ｇ）に、−５℃でイミダゾール（２．６３ｇ）を加え、反応混合物を終夜撹拌して、反応物の内温を１２℃に加温した。反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液中に注ぎ入れ、ジクロロメタンで４回抽出した。合わせた有機物をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮した。粗生成物をヘプタン中１０〜１００％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ５９３．０（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０８０２】
２．２６．４．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（３−（２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
トルエン（８８ｍＬ）中の実施例２．２６．３（５．０３ｇ）及びトリフェニルホスフィン（４．６２ｇ）に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−アゾジカルボキシレート（４．０６ｇ）を加え、反応混合物を３０分間撹拌した。（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エチル）カルバメートを加え、反応物を追加の１．５時間撹拌した。反応物をヘプタン中１０〜１００％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲル上に直接装填して、標題化合物を得た。
【０８０３】
２．２６．５．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（３−（２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−４−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．２６．４（４．２９ｇ）を、酢酸：水：テトラヒドロフランの３：１：１溶液（１００ｍＬ）中で終夜撹拌した。反応混合物を飽和重炭酸ナトリウム水溶液中に注ぎ入れ、酢酸エチルで抽出した。有機層を硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮した。粗生成物をヘプタン中１０〜１００％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。
【０８０４】
２．２６．６．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（３−（２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−４−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．２６．５（０．５９５ｇ）及びビス（４−ニトロフェニル）カルボネート（０．４９２ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（０．２１２ｍＬ）を加えた。１．５時間後、反応物を高真空下で濃縮した。残渣をヘプタン中１０〜１００％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ９２２．９（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０８０５】
２．２６．７．  ３−（１−（（３−（２−（（（（２−（２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例１．１．１７（０．１０６ｇ）及び実施例２．２６．６（０．１３０ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．５ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（０．０４９ｍＬ）を加えた。６時間後、追加のＮ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（０．０２５ｍＬ）を加え、反応物を終夜撹拌した。反応物を酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈し、水（１０ｍＬ）で、続いてブライン（１５ｍＬ）で４回洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮して標題化合物を得、これをさらには精製せずに次のステップに使用した。
【０８０６】
２．２６．８．  ３−（１−（（３−（２−（（（（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）−４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−６−カルボキシ−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例２．２６．７（０．２１５ｇ）のメタノール（２ｍＬ）中懸濁液を、２．０Ｍ水酸化リチウム水溶液（１ｍＬ）で処理した。１時間撹拌した後、反応物を酢酸（０．１１９ｍＬ）を加えることによりクエンチした。得られた懸濁液をジメチルスルホキシド（１ｍＬ）で希釈し、０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含む水中１０〜８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムを使用して分取ＨＰＬＣにより精製した。所望のフラクションを合わせ、凍結乾固して、標題化合物を得た。
【０８０７】
２．２６．９．  ４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−［２−（２−｛［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸
実施例２．２６．８（０．０５０ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（０．０３７ｍＬ）を、続いて２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノエート（０．０１７ｇ）を加え、反応物を室温で撹拌した。１時間撹拌した後、反応物を水で希釈し、０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含む水中１０〜８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望のフラクションを合わせ、凍結乾固して、標題化合物を得た。1H  NMR  (500  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.86  (s,  1H),  8.03  (d,  1H),  7.82-7.77  (m,  2H),  7.62  (d,  1H),  7.53-7.41  (m,  3H),  7.40-7.33  (m,  2H),  7.28  (s,  1H),  7.19  (d,  1H),  6.98  (s,  2H),  6.95  (d,  1H),  6.66  (s,  1H),  6.60  (d,  1H),  5.06  (t,  1H),  5.00-4.93  (m,  4H),  4.18-4.04  (m,  2H),  3.95-3.85  (m,  2H),  3.85-3.77  (m,  2H),  3.71  (t,  2H),  3.41-3.30  (m,  4H),  3.30-3.23  (m,  4H),  3.19  (q,  2H),  3.01  (t,  2H),  2.85  (d,  3H),  2.09  (s,  3H),  2.02  (t,  2H),  1.53-1.40  (m,  4H),  1.40-0.78  (m,  24H).ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １３８０．５（Ｍ−Ｈ）−。
【０８０８】
２．２７．  ４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−［２−（２−｛［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（シントンＥＡ）の合成
実施例２．２６．８（０．０３１ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（０．０２３ｍＬ）を、続いて２，５−ジオキソピロリジン−１−イル３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノエート（９ｍｇ）を加え、反応物を室温で撹拌した。１時間撹拌した後、反応物を水で希釈し、０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含む水中１０〜８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムを使用して分取ＨＰＬＣにより精製した。所望のフラクションを合わせ、凍結乾固して、標題化合物を得た。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.84  (s,  1H),  8.03  (d,  1H),  8.00  (t,  1H),  7.79  (d,  1H),  7.61  (d,  1H),  7.54-7.41  (m,  3H),  7.40-7.32  (m,  2H),  7.28  (s,  1H),  7.19  (d,  1H),  6.97  (s,  2H),  6.95  (d,  1H),  6.66  (s,  1H),  6.60  (d,  1H),  5.11-5.02  (m,  1H),  4.96  (s,  4H),  4.18-4.02  (m,  2H),  3.96-3.84  (m,  2H),  3.80  (s,  2H),  3.71  (t,  2H),  3.43-3.22  (m,  12H),  3.17  (q,  2H),  3.01  (t,  2H),  2.85  (d,  3H),  2.33  (t,  2H),  2.09  (s,  3H),  1.44-0.76  (m,  18H).ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １３３８．５（Ｍ−Ｈ）−。
【０８０９】
２．２８．  ６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３−｛２−［（｛［３−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−β−アラニル｝アミノ）−４−（β−Ｄ−ガラクトピラノシルオキシ）ベンジル］オキシ｝カルボニル）（メチル）アミノ］エトキシ｝−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸（シントンＥＯ）の合成
【０８１０】
２．２８．１．  （２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−６−ブロモテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
乾燥した１００ｍＬの丸底フラスコを窒素でスパージし、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−（アセトキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２，３，４，５−テトライルテトラアセテート（５ｇ）を入れ、窒素雰囲気下ゴム製セプタムで密栓した。氷酢酸中臭化水素溶液（３３重量％、１１．０６ｍＬ）を加え、反応物を室温で２時間撹拌した。反応混合物をジクロロメタン（７５ｍＬ）で希釈し、氷冷水２５０ｍＬ中に注ぎ入れた。層を分離し、有機層を氷冷水（３×１００ｍＬ）及び飽和重炭酸ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）でさらに洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残った酢酸をトルエン（３×５０ｍＬ）からこれを共沸させることにより除去した。溶媒を減圧下で濃縮して標題化合物を得、これをさらには精製せずに次のステップに使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ４２９．８（Ｍ＋ＮＨ４）＋。
【０８１１】
２．２８．２．  （２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−６−（４−ホルミル−２−ニトロフェノキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．２８．１（５．１３ｇ）をアセトニトリル（１００ｍＬ）に溶解した。酸化銀（Ｉ）（２．８９ｇ）を加え、反応物を２０分間撹拌した。４−ヒドロキシ−３−ニトロベンズアルデヒド（２．０８５ｇ）を加え、反応混合物を室温で４時間撹拌し、次いでＭｉｌｌｉｐｏｒｅ０．２２μｍフィルターに通して真空濾過して、銀塩を除去した。溶媒を減圧下で濃縮して標題化合物を得、これをさらには精製せずに次のステップに使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ５１４．９（Ｍ＋ＮＨ４）＋。
【０８１２】
２．２８．３．  （２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−６−（４−（ヒドロキシメチル）−２−ニトロフェノキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
乾燥し窒素でスパージした１Ｌの丸底フラスコに、実施例２．２８．２（５．０ｇ）の微粉を入れ、窒素雰囲気下で保持した。テトラヒドロフラン（７０ｍＬ）を加え、溶液を２分間超音波処理して、懸濁液を得た。メタノール（１４０ｍＬ）を加え、懸濁液をさらに３分間超音波処理した。懸濁液を氷浴上に設置し、窒素雰囲気下２０分間撹拌して、平衡に達した（０℃）。水素化ホウ素ナトリウム（０．３８０ｇ）を２０分かけて少しずつ加え、冷却（０℃）反応物を３０分間撹拌した。酢酸エチル（２００ｍＬ）を反応混合物に加え、その間反応物を氷浴上飽和塩化アンモニウム溶液３００ｍＬを、続いて水２００ｍＬを加えてクエンチした。反応混合物を酢酸エチル（３×３００ｍＬ）で抽出し、ブライン（３００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒を減圧下で濃縮して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ５１６．９（Ｍ＋ＮＨ４）＋。
【０８１３】
２．２８．４．  （２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−６−（２−アミノ−４−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．２２．３において実施例２．２８．３を実施例２．２２．２の代わりに用い、摩砕ステップを省略することにより、標題化合物を調製した。生成物をさらには精製せずに次のステップに使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ４６９．９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０８１４】
２．２８．５．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−２−（２−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）−４−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（アセトキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．２２．５において実施例２．２８．４を実施例２．２２．３の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。反応物をジクロロメタンと水との間で分配することによりクエンチした。層を分離し、水溶液を酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機層を１Ｎ塩酸水溶液及びブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。生成物をヘプタン中１０〜１００％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ７６２．９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０８１５】
２．２８．６．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−２−（２−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）−４−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（アセトキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．２８．５（３．２ｇ）及びビス（４−ニトロフェニル）カルボネート（１．９１４ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）中周囲温度溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１．１０ｍＬ）を滴下添加した。反応物を室温で１．５時間撹拌した。溶媒を減圧下で濃縮した。粗生成物をヘプタン中１０〜１００％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ９２７．８（Ｍ＋Ｈ）、９５０．１（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０８１６】
２．２８．７．  ３−（１−（（３−（２−（（（（３−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）−４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−（アセトキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例２．２２．８において実施例２．２８．６を実施例２．２２．７の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １５４８．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０８１７】
２．２８．８．  ３−（１−（（３−（２−（（（（３−（３−アミノプロパンアミド）−４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリヒドロキシ−６−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例２．２２．８において実施例２．２８．７を実施例２．２２．７の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １１５８．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０８１８】
２．２８．９．  ６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３−｛２−［（｛［３−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−β−アラニル｝アミノ）−４−（β−Ｄ−ガラクトピラノシルオキシ）ベンジル］オキシ｝カルボニル）（メチル）アミノ］エトキシ｝−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸
実施例２．２２．９において実施例２．２８．８を実施例２．２２．８の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.85  (bs,  1H),  9.13  (bs,  1H),  8.19  (bs,  1H),  8.03  (d,  1H),  7.88  (d,  1H),  7.79  (d,  1H),  7.62  (d,  1H),  7.55-7.39  (m,  3H),  7.41-7.30  (m,  2H),  7.28  (s,  1H),  7.14  (d,  1H),  7.05-6.88  (m,  4H),  4.96  (bs,  4H),  3.57-3.48  (m,  1H),  3.49-3.09  (m,  11H),  3.08-2.57  (m,  7H),  2.33  (d,  1H),  2.14-1.97  (m,  6H),  1.55-0.90  (m,  20H),  0.86-0.79  (m,  6H).ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １３５１．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０８１９】
２．２９．  ２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−［２−（２−｛［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（シントンＦＢ）の合成
【０８２０】
２．２９．１．  ４−（２−（２−ブロモエトキシ）エトキシ）−２−ヒドロキシベンズアルデヒド
２，４−ジヒドロキシベンズアルデヒド（１．０ｇ）、１−ブロモ−２−（２−ブロモエトキシ）エタン（３．４ｇ）及び炭酸カリウム（１．０ｇ）のアセトニトリル（３０ｍＬ）中溶液を７５℃に２日間加熱した。反応物を冷却し、酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈し、水（５０ｍＬ）及びブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮した。ヘプタン中５〜３０％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより残渣を精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＬＳＤ）ｍ／ｅ  ２９０．４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０８２１】
２．２９．２  ４−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）−２−ヒドロキシベンズアルデヒド
実施例２．２９．１（１．２６ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）中溶液に、アジ化ナトリウム（０．４３ｇ）を加え、反応物を室温で終夜撹拌した。反応物をジエチルエーテル（１００ｍＬ）で希釈し、水（５０ｍＬ）及びブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮した。ヘプタン中５〜３０％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより残渣を精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＬＳＤ）ｍ／ｅ  ２５１．４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０８２２】
２．２９．３  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（５−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）−２−ホルミルフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．２９．２（０．８４ｇ）、（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−ブロモ−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１．９９ｇ）及び酸化銀（Ｉ）（１．１６ｇ）の溶液をアセトニトリル（１５ｍＬ）中で共に撹拌した。終夜撹拌した後、反応物をジクロロメタン（２０ｍＬ）で希釈した。珪藻土を加え、反応物を濾過し、濃縮した。ヘプタン中５〜７５％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより残渣を精製して、標題化合物を得た。
【０８２３】
２．２９．４  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（５−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）−２−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．９．３（０．６９５ｇ）のメタノール（５ｍＬ）及びテトラヒドロフラン（２ｍＬ）中溶液を０℃に冷却した。水素化ホウ素ナトリウム（０．０２３ｇ）を加え、反応物を室温に加温した。合計１時間撹拌した後、反応物を酢酸エチル（７５ｍＬ）及び水（２５ｍＬ）の混合物中に注ぎ入れ、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）を加えた。有機層を分離し、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮した。ヘプタン中５〜８５％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより残渣を精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＬＳＤ）ｍ／ｅ  ５５１．８（Ｍ−Ｈ２Ｏ）−。
【０８２４】
２．２９．５．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（５−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）−２−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
テトラヒドロフラン（２０ｍＬ）中の実施例２．２９．４（０．４６５ｇ）に、５０ｍＬの圧力ボトル中５％Ｐｄ／Ｃ（０．１ｇ）を加え、混合物を３０ｐｓｉの水素下１６時間振盪した。反応物を濾過し、濃縮して標題化合物を得、これをさらには精製せずに使用した。ＭＳ（ＥＬＳＤ）ｍ／ｅ  ５４４．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０８２５】
２．２９．６．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（５−（２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−２−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．２９．５（０．４４３ｇ）のジクロロメタン（８ｍＬ）中溶液を０℃に冷却し、次いでＮ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（０．２１４ｍＬ）及び（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルカルボノクロリデート（０．１９０ｇ）を加えた。１時間後、反応物を濃縮した。ヘプタン中５〜９５％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより残渣を精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＬＳＤ）ｍ／ｅ  ７４８．１５（Ｍ−ＯＨ）−。
【０８２６】
２．２９．７．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（５−（２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−２−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．２９．６（０．４４４ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（０．１５２ｍＬ）及びビス（４−ニトロフェニル）カルボネート（０．３５３ｇ）を加え、反応物を室温で撹拌した。５時間後、反応物を濃縮した。ヘプタン中５〜９０％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより残渣を精製して、標題化合物を得た。
【０８２７】
２．２９．８．  ３−（１−（（３−（２−（（（（４−（２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−２−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例１．１．１７（０．１１７ｇ）及び実施例２．２９．７（０．１４３ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．５ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（０．１３４ｍＬ）を加え、反応物を終夜撹拌した。反応物を酢酸エチル（７５ｍＬ）で希釈し、次いで水（２０ｍＬ）で、続いてブライン（４×２０ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮して標題化合物を得、これをさらには精製せずに使用した。
【０８２８】
２．２９．９．  ３−（１−（（３−（２−（（（（４−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）−２−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−６−カルボキシ−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例２．２９．８（０．２０５ｇ）のメタノール（２ｍＬ）中懸濁液を、水酸化リチウム水和物（０．０８３ｇ）の水（１ｍＬ）中溶液で処理した。１時間撹拌した後、反応物を酢酸（０．１１３ｍＬ）を加えることによりクエンチし、ジメチルスルホキシドで希釈し、０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含む水中１０〜８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムを使用して分取ＨＰＬＣにより精製した。所望のフラクションを合わせ、凍結乾固して、標題化合物を得た。
【０８２９】
２．２９．１０．  ２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−［２−（２−｛［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸
実施例２．２９．９（０．０８０ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（０．０５４ｍＬ）を、続いて２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノエート（０．０２５ｇ）を加え、反応物を室温で撹拌した。１時間撹拌した後、反応物を水（０．５ｍＬ）で希釈し、０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含む水中１０〜８５％アセトニトリルで溶出する分取ＨＰＬＣ（Ｇｉｌｓｏｎシステム）により精製した。所望のフラクションを合わせ、凍結乾固して、標題化合物を得た。1H  NMR  (500  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.86  (s,  1H),  8.03  (d,  1H),  7.86-7.81  (m,  1H),  7.79  (d,  1H),  7.62  (d,  1H),  7.52-7.41  (m,  3H),  7.39-7.32  (m,  2H),  7.28  (s,  1H),  7.19  (d,  1H),  6.99  (s,  2H),  6.95  (d,  1H),  6.68  (d,  1H),  6.59  (d,  1H),  5.09-4.99  (m,  3H),  4.96  (s,  2H),  4.05  (s,  2H),  3.94  (d,  1H),  3.88  (t,  2H),  3.81  (d,  2H),  3.47-3.24  (m,  15H),  3.19  (q,  2H),  3.01  (t,  2H),  2.86  (d,  3H),  2.09  (s,  3H),  2.03  (t,  2H),  1.51-1.41  (m,  4H),  1.41-0.78  (m,  18H),ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １３８２．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０８３０】
２．３０．  ２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−［２−（２−｛［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（シントンＫＸ）の合成
【０８３１】
２．３０．１．  ３−（１−（（３−（２−（（（（４−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）−２−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−６−カルボキシ−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）ベンジル）オキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例１．３．７（０．０７１ｇ）及び実施例２．２９．７（０．０７７ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（０．０７２ｍＬ）を加え、反応物を３時間撹拌した。反応物を濃縮し、得られた油状物をテトラヒドロフラン（０．５ｍＬ）及びメタノール（０．５ｍＬ）に溶解し、水（０．５ｍＬ）中の水酸化リチウム一水和物（０．０５２ｇ）溶液で処理した。１時間撹拌した後、反応物をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ｌｍＬ）で希釈し、０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含む水中１０〜７５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムを使用して分取ＨＰＬＣにより精製した。所望のフラクションを合わせ、凍結乾固して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １１７５．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０８３２】
２．３０．２．  ２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−［２−（２−｛［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸
実施例２．３０．１（０．０５５ｇ）及び２，５−ジオキソピロリジン−１−イル３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノエート（０．０１２ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（０．０２２ｍＬ）を加え、反応物を室温で撹拌した。１時間撹拌した後、反応物をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド及び水の１：１溶液（２ｍＬ）で希釈し、０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含む水中１０〜８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムを使用して分取ＨＰＬＣにより精製した。所望のフラクションを合わせ、凍結乾固して、標題化合物を得た。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.85  (s,  1H),  8.07  -  8.00  (m,  2H),  7.79  (d,  1H),  7.62  (d,  1H),  7.55  -  7.41  (m,  3H),  7.40  -  7.32  (m,  2H),  7.28  (s,  1H),  7.20  (d,  1H),  7.11  (t,  1H),  6.98  (s,  2H),  6.95  (d,  1H),  6.66  (s,  1H),  6.60  (dd,  1H),  5.04  (d,  1H),  5.00  (s,  2H),  4.96  (s,  2H),  4.10  -  4.03  (m,  2H),  3.95  (d,  2H),  3.88  (t,  2H),  3.70  (t,  2H),  3.59  (t,  2H),  3.46  -  3.38  (m,  4H),  3.36  -  3.25  (m,  4H),  3.17  (q,  2H),  3.08  -  2.98  (m,  4H),  2.33  (t,  2H),  2.10  (s,  3H),  1.37  (s,  2H),  1.25  (q,  4H),  1.18  -  0.93  (m,  6H),  0.84  (s,  6H),ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １３２５．９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０８３３】
２．３１．  ４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−（３−｛［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］アミノ｝プロポキシ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（シントンＦＦ）の合成
【０８３４】
２．３１．１．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（３−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロポキシ）−４−ホルミルフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（３−ヒドロキシプロピル）カルバメート（０．２４５ｇ）及びトリフェニルホスフィン（０．２１６ｇ）のテトラヒドロフラン（２ｍＬ）中溶液に、０℃でジイソプロピルアゾジカルボキシレート（０．１６０ｍＬ）を滴下添加した。１５分間撹拌した後、実施例２．２６．１（０．２５０ｇ）を加え、氷浴を除去し、反応物を室温に加温した。２時間後、反応物を濃縮した。ヘプタン中５〜７０％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより残渣を精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＡＰＣＩ）  ｍ／ｅ  ５１２．０（Ｍ−ＦＭＯＣ）−。
【０８３５】
２．３１．２．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（３−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロポキシ）−４−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．３１．１（０．２３３ｇ）のメタノール（３ｍＬ）及びテトラヒドロフラン（１ｍＬ）中懸濁液に、水素化ホウ素ナトリウム（６ｍｇ）を加えた。３０分後、反応物を酢酸エチル（５０ｍＬ）及び水（２５ｍＬ）中に注ぎ入れ、続いて飽和重炭酸ナトリウム水溶液（５ｍＬ）を加えた。有機層を分離し、ブライン（２５ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮した。ヘプタン中５〜８０％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより残渣を精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＡＰＣＩ）  ｍ／ｅ  ７１８．１（Ｍ−ＯＨ）−。
【０８３６】
２．３１．３．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（３−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロポキシ）−４−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．３１．２（０．１４０ｇ）及びビス（４−ニトロフェニル）カルボネート（０．１１６ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（０．０５０ｍＬ）を加えた。１．５時間後、反応物を高真空下で濃縮した。ヘプタン中１０〜７０％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより残渣を精製して、標題化合物を得た。
【０８３７】
２．３１．４．  ３−（１−（（３−（２−（（（（２−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロポキシ）−４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例１．１．１７（０．０６５ｇ）及び実施例２．３１．３（０．０６７ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．７５ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（０．０６５ｍＬ）を加えた。６時間後、追加のＮ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（０．０２５ｍＬ）を加え、反応混合物を終夜撹拌した。反応物を酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈し、水（２０ｍＬ）で、続いてブライン（２０ｍＬ）で洗浄した。酢酸エチル層を硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮して標題化合物を得、これをさらには精製せずに次のステップに使用した。
【０８３８】
２．３１．５．  ３−（１−（（３−（２−（（（（２−（３−アミノプロポキシ）−４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−６−カルボキシ−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例２．３１．４（０．０６４ｇ）をメタノール（０．７５ｍＬ）に溶解し、水酸化リチウム一水和物（０．０３１ｇ）で水（０．７５ｍＬ）中溶液として処理した。２時間撹拌した後、反応物をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）で希釈し、トリフルオロ酢酸（０．０５７ｍＬ）でクエンチした。溶液を０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含む水中１０〜８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムを使用して分取ＨＰＬＣにより精製した。所望のフラクションを合わせ、凍結乾固して、標題化合物を得た。
【０８３９】
２．３１．６．  ４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−（３−｛［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］アミノ｝プロポキシ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸
実施例２．３１．５（０．０２０ｇ）及び２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノエート（５．８ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（０．０１４ｍＬ）を加えた。２時間撹拌した後、反応物をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．５ｍＬ）及び水（０．５ｍＬ）で希釈した。溶液を０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含む水中１０〜７５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムを使用して分取ＨＰＬＣにより精製した。所望のフラクションを合わせ、凍結乾固して、標題化合物を得た。1H  NMR  (500  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.83  (s,  1H),  8.03  (d,  1H),  7.83  (t,  1H),  7.79  (d,  1H),  7.62  (d,  1H),  7.54-7.42  (m,  3H),  7.37  (d,  1H),  7.34  (d,  1H),  7.28  (s,  1H),  7.19  (d,  1H),  6.98  (s,  2H),  6.95  (d,  1H),  6.64  (d,  1H),  6.59  (d,  1H),  5.05  (t,  1H),  4.96  (d,  4H),  4.02-3.94  (m,  2H),  3.88  (t,  2H),  3.46-3.22  (m,  14H),  3.18  (q,  2H),  3.01  (t,  2H),  2.85  (d,  3H),  2.09  (s,  3H),  2.02  (t,  2H),  1.81  (p,  2H),  1.54-1.41  (m,  4H),  1.41-0.78  (m,  18H).ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １３５０．５（Ｍ−Ｈ）−。
【０８４０】
２．３２．  １−Ｏ−（｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−２−［２−（２−｛［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニル｝カルバモイル）−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸（シントンＦＵ）の合成
【０８４１】
２．３２．１．  ２−アミノ−５−（ヒドロキシメチル）フェノール
水素化ジイソブチルアルミニウム（ジクロロメタン中１Ｍ、１２０ｍＬ）を、−７８℃でジクロロメタン５０ｍＬ中のメチル４−アミノ−３−ヒドロキシベンゾエート（１０ｇ）に５分かけて加え、溶液を０℃に加温した。反応混合物を２時間撹拌した。さらに水素化ジイソブチルアルミニウム（ジクロロメタン中１Ｍ）６０ｍＬを加え、反応物を０℃でさらに１時間撹拌した。メタノール（４０ｍＬ）を注意深く加えた。飽和酒石酸カリウムナトリウム溶液（１００ｍＬ）を加え、混合物を終夜撹拌した。混合物を酢酸エチルで２回抽出し、合わせた抽出物を濃縮して、およそ１００ｍＬの容量にし、混合物を濾過した。固体を集め、溶液を濃縮して極少容量にし、濾過した。合わせた固体を乾燥して、標題化合物を得た。
【０８４２】
２．３２．２．  ２−（２−アジドエトキシ）エチル４−メチルベンゼンスルホネート
２−（２−アジドエトキシ）エタノール（４．８５ｇ）、トリエチルアミン（５．１６ｍＬ）及びＮ，Ｎ−ジメチルピリジン−４−アミン（０．２２６ｇ）のジクロロメタン（１２３ｍＬ）中周囲温度溶液に、４−メチルベンゼン−１−スルホニルクロリド（７．０５ｇ）を加えた。反応物を終夜撹拌し、ジクロロメタン及び飽和塩化アンモニウム水溶液を加えることによりクエンチした。層を分離し、有機層をブラインで２回洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して標題化合物を得、これをさらには精製せずに引き続く反応に使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ３０２．９（Ｍ＋ＮＨ４）＋。
【０８４３】
２．３２．３．  （４−アミノ−３−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）フェニル）メタノール
実施例２．３２．１（０．４８８ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１１．６８ｍＬ）中周囲温度溶液に、水素化ナトリウム（０．１４０ｇ）を加えた。混合物を０．５時間撹拌し、実施例２．３２．２（１．０ｇ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２．０ｍＬ）中溶液として加えた。反応物を５０℃に終夜加熱した。反応混合物を水及び酢酸エチルを加えることによりクエンチした。層を分離し、水性層を酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機物を無水硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を２５〜１００％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ２５３．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０８４４】
２．３２．４．  ２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）−４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）アニリン
実施例２．３２．３（４４０ｍｇ）及びイミダゾール（１７８ｍｇ）のテトラヒドロフラン（１０．６ｍＬ）中周囲温度溶液に、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルクロロシラン（２８９ｍｇ）を加えた。反応混合物を１６時間撹拌し、酢酸エチル（３０ｍＬ）及び飽和重炭酸ナトリウム水溶液（２０ｍＬ）を加えることによりクエンチした。層を分離し、水溶液を酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機物を無水硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をヘプタン中０〜５０％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ３６６．９（Ｍ＋Ｈ）。
【０８４５】
２．３２．５．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（（（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）−４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）フェニル）カルバモイル）オキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．３２．４（４１０ｍｇ）を、乾燥した５０ｍＬの丸底フラスコ中高真空下で終夜乾燥した。実施例２．３２．４（４１０ｍｇ）及びトリエチルアミン（０．２３４ｍＬ）のトルエン（１８ｍＬ）中冷却（浴温０℃）溶液に、ホスゲン（０．７９８ｍＬ、ジクロロメタン中１Ｍ）を加えた。反応物を室温にゆっくり加温し、１時間撹拌した。反応物を冷却（浴温０℃）し、（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−ヒドロキシ−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（４１１ｍｇ）及びトリエチルアミン（０．３５ｍＬ）のトルエン（５ｍＬ）中溶液を加えた。反応物を室温に加温し、５０℃に２時間加熱した。反応物を飽和重炭酸塩水溶液及び酢酸エチルを加えることによりクエンチした。層を分離し、水性層を酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をヘプタン中０〜４０％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ７４３．９（Ｍ＋ＮＨ４）＋。
【０８４６】
２．３２．６．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（（（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）−４−（ヒドロキシメチル）フェニル）カルバモイル）オキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．３２．５（７００ｍｇ）のメタノール（５ｍＬ）中溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（１８．３２ｍｇ）のメタノール（２ｍＬ）中溶液を加えた。反応物を室温で１時間撹拌した。反応物を飽和重炭酸ナトリウム水溶液及びジクロロメタンを加えることによりクエンチした。層を分離し、水性層を追加のジクロロメタンで抽出した。合わせた有機物をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒を減圧下で蒸発させて標題化合物を得、これをさらには精製せずに引き続くステップに使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ６２９．８（Ｍ＋ＮＨ４）＋。
【０８４７】
２．３２．７．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（（（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）−４−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェニル）カルバモイル）オキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．２２７ｍＬ）を、実施例２．３２．６（５３０ｍｇ）及びビス（４−ニトロフェニル）カルボネート（３９５ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４．３ｍＬ）中周囲温度溶液に滴下添加した。反応混合物を周囲温度で１．５時間撹拌した。溶媒を減圧下で濃縮した。残渣をヘプタン中０〜５０％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ７９４．９（Ｍ＋ＮＨ４）＋。
【０８４８】
２．３２．８．  ３−（１−（（３−（２−（（（（３−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）−４−（（（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）カルボニル）アミノ）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例１．１．１７のトリフルオロ酢酸塩（１１１ｍｇ）及び実施例２．３２．７（９８．５ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３．５ｍＬ）中冷却（０℃）溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０６６ｍＬ）を加えた。反応物を室温にゆっくり加温し、１６時間撹拌した。反応物を水及び酢酸エチルを加えることによりクエンチした。層を分離し、水性層を酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機物を無水硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して標題化合物を得、これをさらには精製せずに引き続くステップに使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １３９８．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０８４９】
２．３２．９．  ３−（１−（（３−（２−（（（（３−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）−４−（（（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−６−カルボキシ−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）カルボニル）アミノ）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例２．３２．８（１５０ｍｇ）のメタノール（３．０ｍＬ）中冷却（０℃）溶液に、２Ｍ水酸化リチウム溶液（０．８０４ｍＬ）を加えた。反応物を１時間撹拌し、０℃で維持しながら酢酸（０．１２３ｍＬ）を加えることによりクエンチした。粗製の反応溶液を、０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含む水中１０〜１００％アセトニトリルの濃度勾配で溶出するＣ１８カラムを有するＧｉｌｓｏｎシステムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物を含むフラクションを凍結乾燥して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １２５８．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０８５０】
２．３２．１０．  ３−（１−（（３−（２−（（（（３−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）−４−（（（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−６−カルボキシ−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）カルボニル）アミノ）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
２：１テトラヒドロフラン：水（０．３ｍＬ）に溶解した実施例２．３２．９（４５ｍｇ）の溶液に、トリス（２−カルボキシエチル））ホスフィン塩酸塩の溶液（水０．２ｍＬ中５１．３ｍｇ）を加えた。反応物を室温で１６時間撹拌した。溶媒を減圧下で部分的に濃縮して、ほとんどのテトラヒドロフランを除去した。粗製の反応物を０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含む水中５〜８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステム及びＣ１８  ２５×１００ｍｍカラムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物フラクションを凍結乾燥して、標題化合物をトリフルオロ酢酸塩として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １２３２．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０８５１】
２．３２．１１．  １−Ｏ−（｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−２−［２−（２−｛［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニル｝カルバモイル）−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸
実施例２．３２．１０のトリフルオロ酢酸塩（１５ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド１ｍＬ中溶液に、２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノエート（４．１２ｍｇ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０１０ｍＬ）を加え、反応物を室温で１６時間撹拌した。粗製の反応混合物を０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含む水中５〜８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステム及びＣ１８  ２５×１００ｍｍカラムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物フラクションを凍結乾燥して、標題化合物を得た。1H  NMR  (500  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.84  (s,  1H),8.58  (d,  1H),  8.03  (d,  1H),  7.79  (t,  2H),7.68  (s,  1H),  7.61  (d,  1H),  7.40-7.54  (m,  3H),  7.36  (q,  2H),7.27  (s,  1H),  7.05  (s,  1H),  6.97  (s,  2H),  6.93  (t,  2H),  5.41(d,  Hz,  1H),  5.38  (d,  1H),  5.27  (d,  1H),4.85-5.07  (m,  4H),  4.11  (t,  2H),  3.87  (t,  2H),  3.80(s,  2H),  3.71-3.77  (m,  3H),  3.46  (s,  3H),  3.22  (d,  2H),  3.00(t,  2H),  2.86  (d,  3H),  2.08  (s,  3H),  2.01  (t,  2H),  1.44  (dd,  4H),  1.34  (d,  2H),  0.89-1.29(m,  16H),  0.82  (d,  7H),  3.51-3.66  (m,  3H).ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １４４７．２（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０８５２】
２．３３．  ６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−（１−｛［３−（２−｛［（｛３−［（Ｎ−｛［２−（｛Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−３−スルホ−Ｄ−アラニル｝アミノ）エトキシ］アセチル｝−β−アラニル）アミノ］−４−（β−Ｄ−ガラクトピラノシルオキシ）ベンジル｝オキシ）カルボニル］（メチル）アミノ｝エトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−カルボン酸（シントンＧＨ）の合成
【０８５３】
２．３３．１．  （Ｒ）−２８−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−７，１０，２６−トリオキソ−８−（スルホメチル）−３，１３，１６，１９，２２−ペンタオキサ−６，９，２５−トリアザオクタコサン−１−酸
本明細書に記載した通りの固相ペプチド合成を使用して、標題化合物を合成した。２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）酢酸（１５４３ｍｇ）をジオキサン１０ｍＬに溶解し、溶媒を減圧下で濃縮した。（手順を２回繰り返した）。物質を終夜凍結乾燥した。ジオキサン乾燥したアミノ酸を、シーブ乾燥したジクロロメタン２０ｍＬに溶解し、これにＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（４．０７ｍＬ）を加えた。シーブ乾燥したジクロロメタンで予め（２回）洗浄した２−クロロトリチル固体担持樹脂（８０００ｍｇ）に溶液を加えた。樹脂及びアミノ酸の混合物を、周囲温度で４時間振盪し、排出し、１７：２：１ジクロロメタン：メタノール：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンで洗浄し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドで３回洗浄した。次いで混合物を、シーブ乾燥したジクロロメタンとメタノールとを交互に繰り返してさらに３回洗浄した。装填した樹脂を真空乾燥機中４０℃で乾燥した。樹脂装填を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中２０％ピペリジンでの処理により公知量の樹脂を脱保護化することによって得られた溶液の３０１ｎｍでの吸光度を測定する定量的Ｆｍｏｃ−装填試験により決定した。全てのＦｍｏｃ脱保護化ステップを、樹脂をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジンで２０分間処理し、続いてＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドで洗浄することにより行った。アミノ酸（Ｒ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−３−スルホプロパン酸の、引き続き１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３−オキソ−７，１０，１３，１６−テトラオキサ−４−アザノナデカン−１９−酸のカップリングを、４当量のアミノ酸をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中の４当量の（（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−１−イル）オキシ）トリ（ピロリジン−１−イル）ホスホニウムヘキサフルオロリン酸塩（Ｖ）及び８当量のＮ，Ｎ−ジヨードプロピルエチルアミンを用いて１分間活性化し、続いて樹脂で１時間インキュベートすることにより行った。標題化合物を、ジクロロメタン中５％トリフルオロ酢酸で３０分間処理することにより樹脂から解離させた。樹脂を濾過し、濾液を減圧下で濃縮して標題化合物を得、これをさらには精製せずに次のステップに使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ６６９．０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０８５４】
２．３３．２．  ６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−（１−｛［３−（２−｛［（｛３−［（Ｎ−｛［２−（｛Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−３−スルホ−Ｄ−アラニル｝アミノ）エトキシ］アセチル｝−β−アラニル）アミノ］−４−（β−Ｄ−ガラクトピラノシルオキシ）ベンジル｝オキシ）カルボニル］（メチル）アミノ｝エトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−カルボン酸
実施例２．３３．１（５．０９ｍｇ）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド１ｍＬ中の２−（３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−３−イル）−１，１，３，３−テトラメチルイソウロニウムヘキサフルオロリン酸塩（Ｖ）（２．６３ｍｇ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．００４ｍＬ）と混合し、２分間撹拌した。実施例２．２８．８（８．８ｍｇ）を加え、反応混合物を室温で１．５時間撹拌した。粗製の反応混合物を０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含む水中５〜８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステム及びＣ１８  ２５×１００ｍｍカラムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物フラクションを凍結乾燥して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １８０６．５（Ｍ−Ｈ）−。
【０８５５】
２．３４．  ４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−［３−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−３−スルホ−Ｌ−アラニル｝アミノ）プロポキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（シントンＦＸ）の合成
【０８５６】
２．３４．１．  ３−（１−（（３−（２−（（（（２−（３−（（Ｒ）−２−アミノ−３−スルホプロパンアミド）プロポキシ）−４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−６−カルボキシ−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
（Ｒ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−３−スルホプロパン酸（０．０１９ｇ）及び２−（３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−３−イル）−１，１，３，３−テトラメチルイソウロニウムヘキサフルオロリン酸塩（Ｖ）（０．０１９ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（７．８２μＬ）を加えた。２分間撹拌した後、反応物を室温で実施例２．３１．５（０．０５７ｇ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（０．０３１ｍＬ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）中溶液に加え、３時間撹拌した。ジエチルアミン（０．０２３ｍＬ）を反応物に加え、追加の２時間撹拌を続けた。反応物を水（１ｍＬ）で希釈し、トリフルオロ酢酸（０．０３４ｍＬ）でクエンチし、溶液を０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含む水中１０〜８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムを使用して分取ＨＰＬＣにより精製した。所望のフラクションを合わせ、凍結乾固して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １３１０．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０８５７】
２．３４．２．  ４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−［３−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−３−スルホ−Ｌ−アラニル｝アミノ）プロポキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸
実施例２．３４．１（０．０２７７ｇ）及び２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノエート（７．８２ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（０．０１８ｍＬ）を加え、反応物を室温で撹拌した。反応物を０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含む水中１０〜８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムを使用して分取ＨＰＬＣにより精製した。所望のフラクションを合わせ、凍結乾固して、標題化合物を得た。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.81  (s,  1H),  8.02  (d,  1H),  7.89-7.81  (m,  2H),  7.78  (d,  1H),  7.60  (d,  1H),  7.53-7.40  (m,  3H),  7.39-7.31  (m,  2H),  7.29  (s,  1H),  7.16  (d,  1H),  6.98-6.92  (m,  3H),  6.63  (s,  1H),  6.56  (d,  1H),  5.08-4.99  (m,  1H),  4.95  (s,  4H),  4.28  (q,  2H),  3.90-3.85  (m,  4H),  3.48-3.06  (m,  12H),  3.00  (t,  2H),  2.88-2.64  (m,  8H),  2.08  (s,  3H),  2.04  (t,  2H),  1.80  (p,  2H),  1.51-1.39  (m,  4H),  1.39-0.75  (m,  18H).ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １５０１．４（Ｍ−Ｈ）−。
【０８５８】
２．３５．  ４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−２−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−β−アラニル｝アミノ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（シントンＨ）の合成
【０８５９】
２．３５．１．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（４−ホルミル−２−ニトロフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−ブロモ−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（４ｇ）のアセトニトリル（１００ｍＬ）中溶液に、酸化銀（Ｉ）（１０．０４ｇ）及び４−ヒドロキシ−３−ニトロベンズアルデヒド（１．６８３ｇ）を加えた。反応混合物を室温で４時間撹拌し、濾過した。濾液を濃縮し、残渣をヘプタン中５〜５０％酢酸エチルで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ（Ｍ＋１８）＋。
【０８６０】
２．３５．２．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（４−（ヒドロキシメチル）−２−ニトロフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．３５．１（６ｇ）のクロロホルム（７５ｍＬ）及びイソプロパノール（１８．７５ｍＬ）の混合物中溶液に、シリカゲル０．８７ｇを加えた。得られた混合物を０℃に冷却し、ＮａＢＨ４（０．４７０ｇ）を加え、得られた懸濁液を０℃で４５分間撹拌した。反応混合物をジクロロメタン（１００ｍＬ）で希釈し、珪藻土に通して濾過した。濾液を水及びブラインで洗浄し、濃縮して粗生成物を得、これをさらには精製せずに使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ（Ｍ＋ＮＨ４）＋：
【０８６１】
２．３５．３．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（２−アミノ−４−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．３５．２（７ｇ）の酢酸エチル（８１ｍＬ）中撹拌溶液を、２０℃で１気圧のＨ２下触媒として１０％Ｐｄ／Ｃ（１．５３５ｇ）を使用し１２時間水素化した。反応混合物を珪藻土に通して濾過し、溶媒を減圧下で蒸発させた。残渣を９５／５ジクロロメタン／メタノールで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。
【０８６２】
２．３５．４．  ３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパン酸
３−アミノプロパン酸（４．９９ｇ）を５００ｍＬのフラスコ中で１０％Ｎａ２ＣＯ３水溶液（１２０ｍＬ）に溶解し、氷浴で冷却した。得られた溶液に、１，４−ジオキサン（１００ｍＬ）中の（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルカルボノクロリデート（１４．５ｇ）を徐々に加えた。反応混合物を室温で４時間撹拌し、次いで水（８００ｍＬ）を加えた。水性層を反応混合物から分離し、ジエチルエーテル（３×７５０ｍＬ）で洗浄した。水性層を２Ｎ  ＨＣｌ水溶液でｐＨ値を２に酸性化し、酢酸エチル（３×７５０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、濃縮して、粗生成物を得た。粗生成物を酢酸エチル：ヘキサン１：２の混合溶媒（３００ｍＬ）中で再結晶して、標題化合物を得た。
【０８６３】
２．３５．５．  （９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（３−クロロ−３−オキソプロピル）カルバメート
実施例２．３５．４のジクロロメタン（１６０ｍＬ）中溶液に、亜硫酸ジクロリド（５０ｍＬ）を加えた。混合物を６０℃で１時間撹拌した。混合物を冷却し、濃縮して、標題化合物を得た。
【０８６４】
２．３５．６．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（２−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）−４−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．３５．３（６ｇ）のジクロロメタン（４８０ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（４．６０ｍＬ）を加えた。実施例２．３５．５（５．３４ｇ）を加え、混合物を室温で３０分間撹拌した。混合物を飽和重炭酸ナトリウム水溶液中に注ぎ入れ、酢酸エチルで抽出した。合わせた抽出物を水及びブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水した。濾過し、濃縮して残渣を得、これを移動相として石油エーテル中０〜１００％酢酸エチルを使用するラジアルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。
【０８６５】
２．３５．７．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（２−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）−４−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．３５．６（５．１ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２００ｍＬ）中混合物に、ビス（４−ニトロフェニル）カルボネート（４．１４ｇ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１．７８４ｍＬ）を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌し、減圧下で濃縮した。粗製物をジクロロメタンに溶解し、１ｍｍラジアルクロマトトロンプレート上に直接吸引し、ヘキサン中５０〜１００％酢酸エチルで溶出して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０８６６】
２．３５．８．  ３−（１−（（３−（２−（（（（３−（３−アミノプロパンアミド）−４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−６−カルボキシ−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例１．１．７（３２５ｍｇ）及び実施例２．３５．７（３８２ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（９ｍＬ）中溶液に、０℃でＮ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（４９．１ｍｇ）を加えた。反応混合物を０℃で５時間撹拌し、酢酸（２２．８ｍｇ）を加えた。得られた混合物を酢酸エチルで希釈し、水及びブラインで洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残渣をテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）及びメタノール（５ｍＬ）の混合物に溶解した。この溶液に０℃で１Ｍ水酸化リチウム水溶液（３．８ｍＬ）を加えた。得られた混合物を０℃で１時間撹拌し、酢酸で酸性化し、濃縮した。濃縮物を凍結乾燥して、粉体を得た。粉体をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）に溶解し、氷浴中で冷却し、０℃でピペリジン（１ｍＬ）を加えた。混合物を０℃で１５分間撹拌し、酢酸１．５ｍＬを加えた。溶液を０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含む水中３０〜８０％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムを用いる逆相ＨＰＬＣにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ  １１７２．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０８６７】
２．３５．９  ４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−２−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−β−アラニル｝アミノ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）中の実施例２．３５．８（２００ｍｇ）に、０℃で２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノエート（１０５ｍｇ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．１２ｍＬ）を加えた。混合物を０℃で１５分間撹拌し、室温に加温し、０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含む水中３０〜８０％アセトニトリルで溶出する１００ｇＣ１８カラムを使用するＧｉｌｓｏｎシステム上での逆相ＨＰＬＣにより精製して、標題化合物を得た。1H  NMR  (500  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.85  (s,  2H)  9.07  (s,  1H)  8.18  (s,  1H)  8.03  (d,  1H)  7.87  (t,  1H)  7.79  (d,  1H)  7.61  (d,  1H)  7.41-7.53  (m,  3H)  7.36  (q,  2H)  7.28  (s,  1H)  7.03-7.09  (m,  1H)  6.96-7.03  (m,  3H)  6.94  (d,  1H)  4.95  (s,  4H)  4.82  (t,  1H)  3.88  (t,  3H)  3.80  (d,  2H)  3.01  (t,  2H)  2.86  (d,  3H)  2.54  (t,  2H)  2.08  (s,  3H)  2.03  (t,  2H)  1.40-1.53  (m,  4H)  1.34  (d,  2H)  0.90-1.28  (m,  12H)  0.82  (d,  6H).ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ  １３６５．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０８６８】
２．３６．  ４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−２−（｛Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−β−アラニル｝アミノ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（シントンＩ）の合成
２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノエートを２，５−ジオキソピロリジン−１−イル１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３−オキソ−７，１０，１３，１６−テトラオキサ−４−アザノナデカン−１９−オエートで置き換え、実施例２．３５．９における手順を用いて標題化合物を調製した。1H  NMR  (500  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  8.95  (s,  1H)  8.16  (s,  1H)  7.99  (d,  1H)  7.57-7.81  (m,  4H)  7.38-7.50  (m,  3H)  7.34  (q,  2H)  7.27  (s,  1H)  7.10  (d,  1H)  7.00  (d,  1H)  6.88-6.95  (m,  2H)  4.97  (d,  4H)  4.76  (d,  2H)  3.89  (t,  2H)  3.84  (d,  2H)  3.80  (s,  2H)  3.57-3.63  (m,  4H)  3.44-3.50  (m,  4H)  3.32-3.43  (m,  6H)  3.29  (t,  2H)  3.16  (q,  2H)  3.02  (t,  2H)  2.87  (s,  3H)  2.52-2.60  (m,  2H)  2.29-2.39  (m,  3H)  2.09  (s,  3H)  1.37  (s,  2H)  1.20-1.29  (m,  4H)  1.06-1.18  (m,  4H)  0.92-1.05  (m,  2H)  0.83  (s,  6H).ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ  １５６８．６（Ｍ−Ｈ）−。
【０８６９】
２．３７．  ４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−２−（｛Ｎ−［４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ブタノイル］−β−アラニル｝アミノ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（シントンＫＱ）の合成
２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノエートを２，５−ジオキソピロリジン−１−イル４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ブタノエートに置き換えて、実施例２．３５．９における手順を使用して標題化合物を調製した。1H  NMR  (500  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.86  (s,  3H)  9.08  (s,  2H)  8.17  (s,  1H)  8.03  (d,  1H)  7.89  (t,  1H)  7.79  (d,  1H)  7.61  (d,  1H)  7.46-7.53  (m,  1H)  7.41-7.46  (m,  1H)  7.31-7.40  (m,  1H)  7.28  (s,  1H)  7.03-7.10  (m,  1H)  6.91-7.03  (m,  2H)  4.69-5.08  (m,  4H)  3.83-3.95  (m,  2H)  3.74-3.83  (m,  2H)  3.21-3.47  (m,  12H)  2.95-3.08  (m,  1H)  2.86  (d,  2H)  1.98-2.12  (m,  3H)  1.62-1.79  (m,  2H)  0.90-1.43  (m,  8H)  0.82  (d,  3H).ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １３３７．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０８７０】
２．３８．  ４−［１２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）−４−メチル−３−オキソ−２，７，１０−トリオキサ−４−アザドデカ−１−イル］−２−｛［Ｎ−（｛２−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ］エトキシ｝アセチル）−β−アラニル］アミノ｝フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（シントンＫＰ）の合成
【０８７１】
２．３８．１．  ３−（１−（（−（（１−（３−（３−アミノプロパンアミド）−４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−６−カルボキシ−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）フェニル）−４−メチル−３−オキソ−２，７，１０−トリオキサ−４−アザドデカン−１２−イル）オキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例２．３５．８において実施例１．２．１１を実施例１．１．１７の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。
【０８７２】
２．３８．２．  ４−［１２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）−４−メチル−３−オキソ−２，７，１０−トリオキサ−４−アザドデカ−１−イル］−２−｛［Ｎ−（｛２−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ］エトキシ｝アセチル）−β−アラニル］アミノ｝フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸
実施例２．３５．９において実施例２．３８．１を実施例２．３５．８及び２，５−ジオキソピロリジン−１−イル２−（２−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ）エトキシ）アセテートを２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノエートの代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。1H  NMR  (500  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  8.92  (s,  1H),  8.12-8.15  (m,  1H),  7.97  (d,  1H),  7.76  (d,  1H),  7.61  (d,  1H),  7.28-7.49  (m,  6H),  7.25  (s,  1H),  7.09  (d,  1H),  6.97-7.02  (m,  1H),  6.88-6.94  (m,  2H),  4.97  (d,  4H),  4.75  (d,  1H),  3.76-3.93  (m,  9H),  3.47-3.60  (m,  16H),  3.32-3.47  (m,  15H),  2.88  (s,  3H),  2.59  (t,  2H),  2.08  (s,  3H),  1.38  (s,  2H),  0.93-1.32  (m,  11H),  0.84  (s,  6H).ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １４８５．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０８７３】
２．３９．  ４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−２−［（Ｎ−｛６−［（エテニルスルホニル）アミノ］ヘキサノイル｝−β−アラニル）アミノ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（シントンＨＡ）の合成
【０８７４】
２．３９．１．  メチル６−（ビニルスルホンアミド）ヘキサノエート
６−メトキシ−６−オキソヘキサン−１−アミニウムクロリド（０．３ｇ）及びトリエチルアミン（１．１５ｍＬ）のジクロロメタン中溶液に、０℃でエテンスルホニルクロリド（０．２０９ｇ）を滴下添加した。反応混合物を室温に加温し、１時間撹拌した。混合物をジクロロメタンで希釈し、ブラインで洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、濃縮して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ４７１．０（２Ｍ＋Ｈ）＋。
【０８７５】
２．３９．２．  ６−（ビニルスルホンアミド）ヘキサン酸
実施例２．３９．１（８０ｍｇ）及び水酸化リチウム一水和物（８１ｍｇ）のテトラヒドロフラン（１ｍＬ）及び水（１ｍＬ）の混合物中溶液を２時間撹拌し、次いで水（２０ｍＬ）で希釈し、ジエチルエーテル（１０ｍＬ）で洗浄した。水性層を１Ｎ  ＨＣｌ水溶液でｐＨ４に酸性化し、ジクロロメタン（３×１０ｍＬ）で抽出した。有機層をブライン（５ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、濃縮して、標題化合物を得た。
【０８７６】
２．３９．３．  ２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（ビニルスルホンアミド）ヘキサノエート
実施例２．３９．２（２５ｍｇ）、１−エチル−３−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−カルボジイミド塩酸塩（４３．３ｍｇ）及び１−ヒドロキシピロリジン−２，５−ジオン（１５．６ｍｇ）のジクロロメタン（８ｍＬ）中混合物を終夜撹拌し、飽和塩化アンモニウム水溶液及びブラインで洗浄し、濃縮して、標題化合物を得た。
２．３９．４．  ４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−２−［（Ｎ−｛６−［（エテニルスルホニル）アミノ］ヘキサノイル｝−β−アラニル）アミノ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸
２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノエートを実施例２．３９．３に置き換えて、実施例２．３５．９における手順を使用して標題化合物を調製した。1H  NMR  (500  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.85  (s,  2H)  9.07  (s,  1H)  8.18  (s,  1H)  8.03  (d,  1H)  7.87  (t,  1H)  7.79  (d,  1H)  7.61  (d,  1H)  7.41-7.53  (m,  3H)  7.33-7.39  (m,  2H)  7.28  (s,  1H)  7.17  (t,  1H)  7.04-7.08  (m,  1H)  6.98-7.03  (m,  1H)  6.95  (d,  1H)  6.65  (dd,  1H)  5.91-6.04  (m,  2H)  4.96  (s,  4H)  4.82  (s,  1H)  3.22-3.48  (m,  11H)  3.01  (t,  2H)  2.86  (d,  3H)  2.73-2.80  (m,  2H)  2.51-2.57  (m,  2H)  1.99-2.12  (m,  5H)  1.29-1.52  (m,  6H)  0.90-1.29  (m,  12H)  0.82  (d,  6H).ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １３７５．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０８７７】
２．４０．  ４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−２−（｛Ｎ−［６−（エテニルスルホニル）ヘキサノイル］−β−アラニル｝アミノ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（シントンＨＢ）の合成
【０８７８】
２．４０．１．  エチル６−（（２−ヒドロキシエチル）チオ）ヘキサノエート
エチル６−ブロモヘキサノエート（３ｇ）、２−メルカプトエタノール（０．９４７ｍＬ）及びＫ２ＣＯ３（１２ｇ）のエタノール（１００ｍＬ）中混合物を終夜撹拌し、濾過した。濾液を濃縮した。残渣をジクロロメタン（１００ｍＬ）に溶解し、水及びブラインで洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、標題化合物を得た。
【０８７９】
２．４０．２．  ６−（（２−ヒドロキシエチル）チオ）ヘキサン酸
実施例２．３９．２を実施例２．４０．１に置き換えて、実施例２．３９．２における手順を使用して標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １７５．１（Ｍ−Ｈ２Ｏ）−。
【０８８０】
２．４０．３．  ６−（（２−ヒドロキシエチル）スルホニル）ヘキサン酸
実施例２．４０．２（４ｇ）の水（４０ｍＬ）及び１，４−ジオキサン（１６０ｍＬ）の混合物中撹拌溶液に、Ｏｘｏｎｅ（登録商標）（３８．４ｇ）を加えた。混合物を終夜撹拌した。混合物を濾過し、濾液を濃縮した。残った水性層をジクロロメタンで抽出した。抽出物を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、標題化合物を得た。
【０８８１】
２．４０．４．  ６−（ビニルスルホニル）ヘキサン酸
実施例２．４０．３（１ｇ）のジクロロメタン（１０ｍＬ）中撹拌溶液に、アルゴン下トリエチルアミン（２．８ｍＬ）を加え、続いて０℃でメタンスルホニルクロリド（１．１ｍＬ）を加えた。混合物を終夜撹拌し、水及びブラインで洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、濃縮して、標題化合物を得た。
【０８８２】
２．４０．５．  ２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（ビニルスルホニル）ヘキサノエート
実施例２．４０．４（０．８８ｇ）のジクロロメタン（１０ｍＬ）中撹拌溶液に、１−ヒドロキシピロリジン−２，５−ジオン（０．５４ｇ）及びＮ，Ｎ’−メタンジイリデンジシクロヘキサンアミン（０．９２ｇ）を加えた。混合物を終夜撹拌し、濾過した。濾液を濃縮し、石油中１０〜２５％酢酸エチルで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ３０４．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０８８３】
２．４０．６．  ４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−２−（｛Ｎ−［６−（エテニルスルホニル）ヘキサノイル］−β−アラニル｝アミノ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸
２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノエートを実施例２．４０．５に置き換えて、実施例２．３５．９における手順を使用して標題化合物を調製した。1H  NMR  (500  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.84  (s,  2H)  9.07  (s,  1H)  8.18  (s,  1H)  8.03  (d,  1H)  7.89  (t,  1H)  7.79  (d,  1H)  7.61  (d,  1H)  7.41-7.53  (m,  3H)  7.32-7.40  (m,  2H)  7.28  (s,  1H)  7.04-7.11  (m,  1H)  6.98-7.03  (m,  1H)  6.88-6.97  (m,  2H)  6.17-6.26  (m,  2H)  4.95  (s,  4H)  4.82  (s,  1H)  3.74-3.99  (m,  8H)  3.41-3.46  (m,  8H)  3.24-3.41  (m,  8H)  2.97-3.08  (m,  4H)  2.86  (d,  3H)  2.54  (t,  2H)  2.00-2.13  (m,  5H)  1.43-1.64  (m,  4H)  0.89-1.40  (m,  15H)  0.82  (d,  6H).ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １３６０．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０８８４】
２．４１．  ４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−５−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−［２−（２−｛［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（シントンＬＢ）の合成
【０８８５】
２．４１．１．  ３−（１−（（３−（２−（（（（２−（２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）ベンジル）オキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−５−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例２．２６．７において実施例１．６．１３を実施例１．１．１７の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。
【０８８６】
２．４１．２．  ３−（１−（（３−（２−（（（（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）−４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−６−カルボキシ−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）ベンジル）オキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−５−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例２．２６．８において実施例２．４１．１を実施例２．２６．７の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １１９３（Ｍ＋Ｈ）＋、１１９１（Ｍ−Ｈ）−。
【０８８７】
２．４１．３．  ４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−５−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−［２−（２−｛［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸
実施例２．２７において実施例２．４１．２を実施例２．２６．８の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。1H  NMR  (400MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.88  (bs,  1H),  8.03  (d,  1H),  8.02  (t,  1H),  7.78  (d,  1H),  7.73  (1H),  7.53  (d,  1H),  7.47  (td,  1H),  7.35  (td,  1H),  7.29  (s,  1H),  7.26  (t,  1H),  7.26  (t,  1H),  7.19  (d,  1H),  7.02  (d,  1H),  6.98  (s,  1H),  6.65  (d,  1H),  6.59  (dd,  1H),  5.07  (d,  1H),  5.01  (s,  1H),  4.92  (1H),  4.08  (m,  2H),  3.94  (t,  2H),  3.90  (d,  2H),  3.87  (s,  2H),  3.70  (m,  6H),  3.60  (m,  6H),  3.44  (t,  2H),  3.39  (t,  2H),  3.32  (t,  1H),  3.28  (dd,  1H),  3.17  (q,  2H),  3.03  (q,  2H),  2.92  (t,  2H),  2.33  (t,  2H),  2.10  (s,  3H),  1.37  (s,  2H),  1.25  (q,  4H),  1.11  (q,  4H),  1.00  (dd,  2H),  0.83  (s,  6H).ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １３６６（Ｍ＋Ｎａ）＋、１３４２（Ｍ−Ｈ）−。
【０８８８】
２．４２．  ４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−｛２−［２−（｛Ｎ−［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］−３−スルホ−Ｌ−アラニル｝アミノ）エトキシ］エトキシ｝フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（シントンＮＦ）の合成
【０８８９】
２．４２．１．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（４−ホルミル−３−ヒドロキシフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
２，４−ジヒドロキシベンズアルデヒド（１５ｇ）及び（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−ブロモ−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１０ｇ）をアセトニトリルに溶解し、続いて炭酸銀（１０ｇ）を加え、反応物を４９℃に加熱した。４時間撹拌した後、反応物を冷却し、濾過し、濃縮した。粗製の標題化合物をジクロロメタンに懸濁し、珪藻土に通して濾過し、濃縮した。残渣を１〜１００％酢酸エチル／ヘプタンで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。
【０８９０】
２．４２．２．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（３−ヒドロキシ−４−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．４２．１（１６．１２ｇ）のテトラヒドロフラン（２００ｍＬ）及びメタノール（２００ｍＬ）中溶液を０℃に冷却し、水素化ホウ素ナトリウム（１．４７６ｇ）を少しずつ加えた。反応物を２０分間撹拌し、水：飽和重炭酸ナトリウム水溶液の１：１混合物（４００ｍＬ）でクエンチした。得られた固体を濾別し、酢酸エチルですすいだ。相を分離し、水性層を酢酸エチルで４回抽出した。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮した。粗製の標題化合物を１〜１００％酢酸エチル／ヘプタンで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ  ４７３．９（Ｍ＋ＮＨ４）＋。
【０８９１】
２．４２．３．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−３−ヒドロキシフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
ジクロロメタン（１６８ｍＬ）中の実施例２．４２．２（７．６６ｇ）及びｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（２．７８ｇ）に、−５℃でイミダゾール（２．６３ｇ）を加え、反応物を終夜撹拌して、反応の内温を１２℃に加温した。反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液中に注ぎ入れ、ジクロロメタンで４回抽出した。合わせた有機物をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮した。粗製の標題化合物を１〜５０％酢酸エチル／ヘプタンで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ  ５９３．０（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０８９２】
２．４２．４．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（３−（２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
トルエン（８８ｍＬ）中の実施例２．４２．３（５．０３ｇ）及びトリフェニルホスフィン（４．６２ｇ）に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−アゾジカルボキシレート（４．０６ｇ）を加え、反応物を３０分間撹拌した。（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エチル）カルバメートを加え、反応物をさらに１．５時間撹拌した。反応物をシリカゲル上に直接装填し、１〜５０％酢酸エチル／ヘプタンで溶出して、標題化合物を得た。
【０８９３】
２．４２．５．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（３−（２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−４−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．４２．４（４．２９ｇ）を、酢酸：水：テトラヒドロフランの３：１：１溶液（１００ｍＬ）中で終夜撹拌した。反応物を飽和重炭酸ナトリウム水溶液中に注ぎ入れ、酢酸エチルで抽出した。有機層を硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮した。粗製の標題化合物を１〜５０％酢酸エチル／ヘプタンで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。
【０８９４】
２．４２．６．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（３−（２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−４−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．４２．５（０．５９５ｇ）及びビス（４−ニトロフェニル）カルボネート（０．４９２ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４ｍＬ）中溶液に、Ｎ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン（０．２１２ｍＬ）を加えた。１．５時間後、反応物を高真空下で濃縮した。反応物をシリカゲル上に直接装填し、１〜５０％酢酸エチル／ヘプタンを使用して溶出して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ  ９２２．９（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０８９５】
２．４２．７．  ３−（１−（（３−（２−（（（（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）−４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−６−カルボキシ−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例１．１．１７（９２ｍｇ）をジメチルホルムアミド（０．６ｍＬ）に溶解した。実施例２．４２．６（１２９ｍｇ）及びＮ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン（０．１８ｍＬ）を加えた。反応物を室温で１時間撹拌した。次いで反応物を濃縮し、残渣をテトラヒドロフラン（０．６ｍＬ）及びメタノール（０．６ｍＬ）に溶解した。ＬｉＯＨ水溶液（１．９４Ｎ、０．５５ｍＬ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。０．１％ＴＦＡ水中１０〜９０％アセトニトリルで溶出する逆相クロマトグラフィー（Ｃ１８カラム）により精製して、標題化合物をトリフルオロ酢酸塩として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １１８７．４（Ｍ−Ｈ）−。
【０８９６】
２．４２．８．  ３−（１−（（３−（２−（（（（２−（２−（２−（（Ｒ）−２−アミノ−３−スルホプロパンアミド）エトキシ）エトキシ）−４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−６−カルボキシ−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例２．３４．１において実施例２．２６．８を実施例２．３１．５の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １３３８．４（Ｍ−Ｈ）−。
【０８９７】
２．４２．９．  ６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）−３−（１−（（３−（２−（（（（４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−６−カルボキシ−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−２−（２−（２−（（Ｒ）−２−（３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド）−３−スルホプロパンアミド）エトキシ）エトキシ）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピコリン酸
実施例２．３４．２において実施例２．４２．２を実施例２．３４．１及び２，５−ジオキソピロリジン−１−イル３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノエートを２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノエートの代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  8.06  (d,  1H),  8.02  (d,  1H),  7.80  (m,  2H),  7.61  (d,1H),  7.52  (d,  1H),  7.45  (m,  2H),  7.36  (m,  2H),  7.30  (s,  1H),  7.18  (d,  1H),  6.97  (s,  2H),  6.96  (m,2H),  6.66  (d,  1H),  6.58  (dd,  1H),  5.06  (br  m,  1H),  4.96  (s,  4H),  4.31  (m,  1H),  4.09  (m,  2H),  3.88  (m,  3H),  3.80  (m,  2H),  3.71  (m,  2H),  3.59  (t,  2H),  3.44  (m,  6H),  3.28  (m,  4H),  3.19  (m,  2H),  3.01  (m,  2H),  2.82  (br  m,  3H),  2.72  (m,  1H),  2.33  (m,  2H),  2.09  (s,  3H),  1.33  (br  m,  2H),  1.28-0.90  (m,  10H),  0.84,  0.81  (共にs,  計6H).ＭＳ（ＥＳＩ−）  ｍ／ｅ  １４８９．５（Ｍ−１）。
【０８９８】
２．４３．  ４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−｛２−［２−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−３−スルホ−Ｌ−アラニル｝アミノ）エトキシ］エトキシ｝フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（シントンＮＧ）の合成
実施例２．３４．２において実施例２．４２．１を実施例２．３４．１の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  8.02  (d,  1H),  7.87  (d,  1H),  7.80  (m,  2H),  7.61  (d,1H),  7.52  (d,  1H),  7.45  (m,  2H),  7.36  (m,  2H),  7.30  (s,  1H),  7.18  (d,  1H),  6.97  (s,  2H),  6.96  (m,2H),  6.66  (d,  1H),  6.58  (dd,  1H),  5.06  (br  m,  1H),  4.96  (s,  4H),  4.31  (m,  1H),  4.09  (m,  2H),  3.88  (m,  3H),  3.80  (m,  2H),  3.71  (m,  2H),  3.59  (t,  2H),  3.44  (m,  6H),  3.28  (m,  4H),  3.19  (m,  2H),  3.01  (m,  2H),  2.82  (br  m,  3H),  2.72  (m,  1H),  2.09  (s,  3H),  2.05  (t,  2H),  1.46  (br  m,  4H),  1.33  (br  m,  2H),  1.28-0.90  (m,  12H),  0.84,  0.81  (共にs,  計6H).ＭＳ（ＥＳＩ−）  ｍ／ｅ  １５３１．５（Ｍ−１）。
【０８９９】
２．４４．  ６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３−｛［２２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３−メチル−４，２０−ジオキソ−７，１０，１３，１６−テトラオキサ−３，１９−ジアザドコサ−１−イル］オキシ｝−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸（シントンＡＳ）の合成
実施例１．１．１７（５６．９ｍｇ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０６５ｍＬ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．０ｍＬ）中溶液に、２，５−ジオキソピロリジン−１−イル１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３−オキソ−７，１０，１３，１６−テトラオキサ−４−アザノナデカン−１９−オエート（５０ｍｇ）を加えた。反応物を終夜撹拌し、溶液を０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含む水中２０〜８０％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望のフラクションを合わせ、凍結乾固して、標題化合物を得た。1H  NMR  (400  MHz  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.85  (s,  1H),  8.08-7.95  (m,  1H),  7.79  (d,  1H),  7.62  (d,  1H),  7.55-7.40  (m,  3H),  7.40-7.32  (m,  2H),  7.28  (s,  1H),  7.01-6.89  (m,  3H),  4.95  (s,  2H),  3.89  (s,  2H),  3.81  (s,  2H),  3.55-3.25  (m,  23H),  3.14  (d,  2H),  2.97  (t,  4H),  2.76  (d,  2H),  2.57  (s,  1H),  2.31  (d,  1H),  2.09  (s,  3H),  1.35  (s,  2H),  1.30-0.93  (m,  12H),  0.85  (d,  6H).ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １１８０．３（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０９００】
２．４５．  ６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３−｛［２８−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−９−メチル−１０，２６−ジオキソ−３，６，１３，１６，１９，２２−ヘキサオキサ−９，２５−ジアザオクタコサ−１−イル］オキシ｝−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸（シントンＡＴ）の合成
実施例１．２．１１（５０ｍｇ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０５１ｍＬ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．０ｍＬ）中溶液に、２，５−ジオキソピロリジン−１−イル１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３−オキソ−７，１０，１３，１６−テトラオキサ−４−アザノナデカン−１９−オエート（３９ｍｇ）を加えた。反応物を終夜撹拌し、０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含む水中２０〜８０％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望のフラクションを合わせ、凍結乾固して、標題化合物を得た。1H  NMR  (400  MHz  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.85  (s,  1H),  8.04  (d,  1H),  7.99  (t,  1H),  7.79  (d,  1H),  7.60  (d,  1H),  7.53-7.41  (m,  3H),  7.40-7.32  (m,  2H),  7.28  (s,  1H),  6.99  (s,  2H),  6.98-6.92  (m,  1H),  4.95  (bs,  2H),  3.92-3.85  (m,  1H),  3.81  (s,  2H),  3.63-3.55  (m,  4H),  3.55-3.31  (m,  28H),  3.18-3.10  (m,  2H),  3.05-2.98  (m,  2H),  2.97  (s,  2H),  2.80  (s,  2H),  2.59-2.50  (m,  1H),  2.32  (t,  2H),  2.10  (s,  3H),  1.39-1.34  (m,  2H),  1.31-1.18  (m,  4H),  1.20-0.92  (m,  6H),  0.84  (s,  6H).ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １２６８．４（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０９０１】
２．４６．  ６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３−｛２−［２−（２−｛［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］（メチル）アミノ｝エトキシ）エトキシ］エトキシ｝−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸（シントンＡＵ）の合成
実施例１．２．１１（５０ｍｇ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０５１ｍＬ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．０ｍＬ）中溶液に、２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノエート（１８ｍｇ）を加えた。反応物を終夜撹拌し、０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含む水中２０〜８０％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望のフラクションを合わせ、凍結乾固して、標題化合物を得た。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.92-12.82  (m,  1H),  8.03  (d,  1H),  7.79  (d,  1H),  7.62  (d,  1H),  7.53-7.41  (m,  3H),  7.40-7.32  (m,  2H),  7.28  (s,  1H),  7.01-6.97  (m,  2H),  6.98-6.92  (m,  1H),  4.95  (bs,  2H),  4.04-3.84  (m,  3H),  3.86-3.75  (m,  3H),  3.49-3.32  (m,  10H),  3.01  (s,  2H),  2.95  (s,  2H),  2.79  (s,  2H),  2.31-2.19  (m,  2H),  2.10  (s,  3H),  1.52-1.40  (m,  4H),  1.36  (s,  2H),  1.31-0.94  (m,  14H),  0.84  (s,  6H).ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １０４１．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０９０２】
２．４７．  ６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−（１−｛［３−（２−｛［４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２−スルホブタノイル］（メチル）アミノ｝エトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−カルボン酸（シントンＢＫ）の合成
【０９０３】
２．４７．１．  ４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１−（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ）−１−オキソブタン−２−スルホネート
窒素でスパージした１００ｍＬのフラスコ中、１−カルボキシ−３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパン−１−スルホネートをジメチルアセトアミド（２０ｍＬ）に溶解した。この溶液に、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（４４０ｍｇ）及び１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（１０００ｍｇ）を加え、反応物を窒素雰囲気下室温で１６時間撹拌した。溶媒を減圧下で濃縮し、残渣を溶媒に含まれた０．１容量／容量％酢酸を含むジクロロメタン中１〜２％メタノールの濃度勾配で操作するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を約８０％活性化エステル及び２０％酸の混合物として得、これをさらには精製せずに次のステップに使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ３６０．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０９０４】
２．４７．２．  ６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−（１−｛［３−（２−｛［４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２−スルホブタノイル］（メチル）アミノ｝エトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−カルボン酸
実施例１．１．１７（５ｍｇ）及び実施例２．４７．１（２０．５５ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．２５ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．００２ｍＬ）を加え、反応物を室温で１６時間撹拌した。粗製の反応混合物を０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含む水中５〜８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステム及びＣ１８  ２５×１００ｍｍカラムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物フラクションを凍結乾燥して、標題化合物を得た。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  8.01-7.95  (m,  1H),  7.76  (d,  1H),  7.60  (dd,  1H),  7.49-7.37  (m,  3H),  7.37-7.29  (m,  2H),  7.28-7.22  (m,  1H),  6.92  (d,  1H),  6.85  (s,  1H),  4.96  (bs,  2H),  3.89  (t,  2H),  3.80  (s,  2H),  3.35  (bs,  5H),  3.08-2.96  (m,  3H),  2.97-2.74  (m,  2H),  2.21  (bs,  1H),  2.08  (s,  4H),  1.42-1.38  (m,  2H),  1.31-1.23  (m,  4H),  1.23-1.01  (m,  6H),  0.97  (d,  1H),  0.89-0.79  (m,  6H).ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １００５．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０９０５】
２．４８．  ６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３−｛［３４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３−メチル−４，３２−ジオキソ−７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８−オクタオキサ−３，３１−ジアザテトラトリアコンタ−１−イル］オキシ｝−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸（シントンＢＱ）の合成
２，５−ジオキソピロリジン−１−イル１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３−オキソ−７，１０，１３，１６−テトラオキサ−４−アザノナデカン−１９−オエートを２，５−ジオキソピロリジン−１−イル１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３−オキソ−７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８−オクタオキサ−４−アザヘントリアコンタン−３１−オエート（ＭＡＬ−ｄＰＥＧ８−ＮＨＳ−エステル）に置き換えて、実施例２．４４において記載した通りに標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １３３４．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０９０６】
２．４９．  ６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３−｛［２８−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３−メチル−４，２６−ジオキソ−７，１０，１３，１６，１９，２２−ヘキサオキサ−３，２５−ジアザオクタコサ−１−イル］オキシ｝−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸（シントンＢＲ）の合成
２，５−ジオキソピロリジン−１−イル１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３−オキソ−７，１０，１３，１６−テトラオキサ−４−アザノナデカン−１９−オエートを２，５−ジオキソピロリジン−１−イル１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３−オキソ−７，１０，１３，１６，１９，２２−ヘキサオキサ−４−アザペンタコサン−２５−オエート（ＭＡＬ−ｄＰＥＧ６−ＮＨＳ−エステル）に置き換えて、実施例２．４４において記載した通りに標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １２４６．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０９０７】
２．５０  ２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−｛２−［２−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−３−スルホ−Ｌ−アラニル｝アミノ）エトキシ］エトキシ｝フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（シントンＯＩ）の合成
【０９０８】
２．５０．１  ３−（１−（（３−（２−（（（（４−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）−２−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−６−カルボキシ−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例２．３０．１において実施例１．１．１７を実施例１．３．７の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １１８９．５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０９０９】
２．５０．２  ３−（１−（（３−（２−（（（（４−（２−（２−（（Ｒ）−２−アミノ−３−スルホプロパンアミド）エトキシ）エトキシ）−２−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−６−カルボキシ−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例２．３４．１において実施例２．５０．１を実施例２．３１．５の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １３３９．５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０９１０】
２．５０．３  ２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−｛２−［２−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−３−スルホ−Ｌ−アラニル｝アミノ）エトキシ］エトキシ｝フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸
実施例２．３４．２において実施例２．５０．２を実施例２．３４．１の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。1H  NMR  (500  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.83  (s,  2H);  8.01  (dd,  1H),  7.86  (d,  1H),  7.80  -  7.71  (m,  2H),  7.60  (dd,  1H),  7.52  -  7.26  (m,  7H),  7.16  (d,  1H),  6.94  (d,  3H),  6.69  (d,  1H),  6.61  -  6.53  (m,  1H),  5.09  -  4.91  (m,  5H),  3.46  -  3.08  (m,  14H),  2.99  (t,  2H),  2.88  -  2.63  (m,  5H),  2.13  -  1.94  (m,  5H),  1.52  -  0.73  (m,  27H).ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １５３１．４（Ｍ−Ｈ）−。
【０９１１】
２．５１  Ｎ２−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｎ６−（３７−オキソ−２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５−ドデカオキサヘプタトリアコンタン−３７−イル）−Ｌ−リシル−Ｌ−アラニル−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド（シントンＮＸ）の合成
【０９１２】
２．５１．１  （Ｓ）−６−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキサン酸
（Ｓ）−６−アミノ−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキサン酸（８．５ｇ）の５％ＮａＨＣＯ３水溶液（３００ｍＬ）及び１，４−ジオキサン（４０ｍＬ）の混合物中冷却（氷浴）溶液に、（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルピロリジン−１−イルカルボネート（１１．７ｇ）の１，４−ジオキサン（４０ｍＬ）中溶液を滴下添加した。反応混合物を室温に加温し、２４時間撹拌した。追加の３つのバイアルを上記した通りにセットアップした。反応が完了した後、４つの反応混合物を合わせ、有機溶媒を真空下で除去した。水性層を塩酸水溶液（１Ｎ）でｐＨ３に酸性化し、次いで酢酸エチル（３×５００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、真空下で濃縮して粗製の化合物を得、これをメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルから再結晶して、標題化合物を得た。1H  NMR  (400MHz,  クロロホルム-d)  δ  11.05  (br.  s.,  1H),  7.76  (d,  2H),  7.59  (d,  2H),  7.45  -  7.27  (m,  4H),  6.52  -  6.17  (m,  1H),  5.16  -  4.87  (m,  1H),  4.54  -  4.17  (m,  4H),  3.26  -  2.98  (m,  2H),  1.76  -  1.64  (m,  1H),  1.62  -  1.31  (m,  14H).
【０９１３】
２．５１．２  ｔｅｒｔ−ブチル１７−ヒドロキシ−３，６，９，１２，１５−ペンタオキサヘプタデカン−１−オエート
３，６，９，１２−テトラオキサテトラデカン−１，１４−ジオール（４０ｇ）のトルエン（８００ｍＬ）中溶液に、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（２０．７ｇ）を少しずつ加えた。混合物を室温で３０分間撹拌した。ｔｅｒｔ−ブチル２−ブロモアセテート（３６ｇ）を混合物に滴下添加した。反応物を室温で１６時間撹拌した。追加の２つのバイアルを上記した通りにセットアップした。反応が完了した後、３つの反応混合物を合わせた。水（５００ｍＬ）を合わせた混合物に加え、容量を１リットルに濃縮した。混合物をジクロロメタンで抽出し、１Ｎカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド水溶液（１Ｌ）で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をジクロロメタン：メタノール５０：１で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。1H  NMR  (400MHz,  クロロホルム-d)  δ  4.01  (s,  2H),  3.75  -  3.58  (m,  21H),  1.46  (s,  9H).
【０９１４】
２．５１．３  ｔｅｒｔ−ブチル１７−（トシルオキシ）−３，６，９，１２，１５−ペンタオキサヘプタデカン−１−オエート
実施例２．５１．２（３０ｇ）のジクロロメタン（５００ｍＬ）中溶液に、窒素雰囲気下０℃で４−メチルベンゼン−１−スルホニルクロリド（１９．５ｇ）及びトリエチルアミン（１０．３ｇ）のジクロロメタン（５００ｍＬ）中溶液を滴下添加した。混合物を室温で１８時間撹拌し、水（１００ｍＬ）中に注ぎ入れた。溶液をジクロロメタン（３×１５０ｍＬ）で抽出し、有機層を塩酸（６Ｎ、１５ｍＬ）次いでＮａＨＣＯ３（５％水溶液、１５ｍＬ）続いて水（２０ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、濃縮して残渣を得、これを石油エーテル：酢酸エチル１０：１からジクロロメタン：メタノール５：１で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。1H  NMR  (400  MHz,  クロロホルム-d)  δ  7.79  (d,  2H),  7.34  (d,  2H),  4.18  -  4.13  (m,  2H),  4.01  (s,  2H),  3.72  -  3.56  (m,  18H),  2.44  (s,  3H),  1.47  (s,  9H).
【０９１５】
２．５１．４  ２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５−ドデカオキサヘプタトリアコンタン−３７−酸
実施例２．５１．３（１６ｇ）のテトラヒドロフラン（３００ｍＬ）中溶液に、０℃で水素化ナトリウム（１．６ｇ）を加えた。混合物を室温で４時間撹拌した。２，５，８，１１，１４，１７−ヘキサオキサノナデカン−１９−オール（３２．８ｇ）のテトラヒドロフラン（３００ｍＬ）中溶液を、室温で反応混合物に滴下添加した。得られた反応混合物を室温で１６時間撹拌し、水（２０ｍＬ）を加えた。混合物を室温でさらに３時間撹拌して、ｔｅｒｔ−ブチルエステルの加水分解を完了させた。最終の反応混合物を減圧下で濃縮して、有機溶媒を除去した。水性残渣をジクロロメタン（２×１５０ｍＬ）で抽出した。水性層をｐＨ３に酸性化し、次いで酢酸エチル（２×１５０ｍＬ）で抽出した。最後に、水性層を濃縮して粗生成物を得、これを石油エーテル：酢酸エチル１：１からジクロロメタン：メタノール５：１の濃度勾配で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。1H  NMR  (400MHz,  クロロホルム-d)  δ  4.19  (s,  2H),  3.80  -  3.75  (m,  2H),  3.73  -  3.62  (m,  40H),  3.57  (dd,  2H),  3.40  (s,  3H)  
【０９１６】
２．５１．５  （４３Ｓ，４６Ｓ）−４３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−４６−メチル−３７，４４−ジオキソ−２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５−ドデカオキサ−３８，４５−ジアザヘプタテトラコンタン−４７−酸
標準のＦｍｏｃ固相ペプチド合成手順及び２−クロロトリチル樹脂を使用して、実施例２．５１．５を合成した。特に、無水のシーブ乾燥したジクロロメタン（１００ｍＬ）中の２−クロロトリチル樹脂（１２ｇ）、（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパン酸（１０ｇ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（４４．９ｍＬ）を１４℃で２４時間振盪した。混合物を濾過し、ケーキをジクロロメタン（３×５００ｍＬ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２×２５０ｍＬ）及びメタノール（２×２５０ｍＬ）（各ステップ５分）で洗浄した。上記樹脂に２０％ピペリジン／Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１００ｍＬ）を加えて、Ｆｍｏｃ基を除去した。混合物に窒素ガスを１５分間吹き込み、濾過した。樹脂を２０％ピペリジン／Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１００ｍＬ）でさらに５回（各洗浄ステップ５分）洗浄し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５×１００ｍＬ）で洗浄して、脱保護化したＬ−Ａｌａ装填樹脂を得た。
【０９１７】
実施例２．５１．１（９．０ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）中溶液に、ヒドロキシベンゾトリアゾール（３．５ｇ）、２−（６−クロロ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルアミニウムヘキサフルオロホスフェート（９．３ｇ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（８．４ｍＬ）を加えた。混合物を２０℃で３０分間撹拌した。上記混合物をＬ−Ａｌａ装填樹脂に加え、室温で９０分間窒素ガスを吹き込むことにより混合した。混合物を濾過し、樹脂をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（各ステップ５分）で洗浄した。上記樹脂におよそ２０％ピペリジン／Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１００ｍＬ）を加えて、Ｆｍｏｃ基を除去した。混合物に１５分間窒素ガスを吹き込み、濾過した。樹脂を２０％ピペリジン／Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１００ｍＬ×５）及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１００ｍＬ×５）（各洗浄ステップ５分）で洗浄した。
【０９１８】
実施例２．５１．４（１１．０ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）中溶液に、ヒドロキシベンゾトリアゾール（３．５ｇ）、２−（６−クロロ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルアミニウムヘキサフルオロホスフェート（９．３ｇ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（８．４ｍＬ）を加え、混合物を樹脂に加え、室温で３時間窒素ガスを吹き込むことにより混合した。混合物を濾過し、残渣をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５×１００ｍＬ）、ジクロロメタン（８×１００ｍＬ）（各ステップ５分）で洗浄した。
【０９１９】
最終の樹脂に、１％トリフルオロ酢酸／ジクロロメタン（１００ｍＬ）を加え、５分間窒素ガスを吹き込むことにより混合した。混合物を濾過し、濾液を集めた。解離操作を４回繰り返した。合わせた濾液をＮａＨＣＯ３でｐＨ７にし、水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、濃縮して、標題化合物を得た。1H  NMR  (400MHz,  メタノール-d4)  δ  4.44  -  4.33  (m,  1H),  4.08  -  4.00  (m,  1H),  3.98  (s,  2H),  3.77  -  3.57  (m,  42H),  3.57  -  3.51  (m,  2H),  3.36  (s,  3H),  3.25  (t,  2H),  1.77  (br.  s.,  1H),  1.70  -  1.51  (m,  4H),  1.44  (s,  9H),  1.42  -  1.39  (m,  3H).
【０９２０】
２．５１．６  ３−（１−（（３−（２−（（（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）オキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例１．３．７のトリフルオロ酢酸塩（０．１０２ｇ）、実施例２．２１．４（０．０８９ｇ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．１０４ｍＬ）の溶液を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）中室温で１６時間撹拌した。ジエチルアミン（０．０６２ｍＬ）を加え、反応物を室温で２時間撹拌した。反応物を水（１ｍＬ）で希釈し、トリフルオロ酢酸（０．０５０ｍＬ）でクエンチし、０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含む水中５〜８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステム及びＣ１８カラムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物フラクションを凍結乾燥して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＬＣ−ＭＳ）  ｍ／ｅ  １０６６．５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０９２１】
２．５１．７  ６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）−３−（１−（（３−（２−（（（（４−（（４３Ｓ，４６Ｓ，４９Ｓ，５２Ｓ）−４３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−４９−イソプロピル−４６，５２−ジメチル−３７，４４，４７，５０−テトラオキソ−２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５−ドデカオキサ−３８，４５，４８，５１−テトラアザトリペンタコンタンアミド）ベンジル）オキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピコリン酸
実施例２．５１．５（１６．６８ｍｇ）を、Ｎ−メチルピロリドン（１ｍＬ）中の１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム３−オキシドヘキサフルオロホスフェート（７．２５ｍｇ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０１５ｍＬ）と１０分間混合し、実施例２．５１．６（２５ｍｇ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０１５ｍＬ）のＮ−メチルピロリジノン（１．５ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含む水中５〜８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステム及びＣ１８カラムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物フラクションを凍結乾燥して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ９６１．３３（２Ｍ＋Ｈ）２＋。
【０９２２】
２．５１．８  ３−（１−（（３−（２−（（（（４−（（４３Ｓ，４６Ｓ，４９Ｓ，５２Ｓ）−４３−アミノ−４９−イソプロピル−４６，５２−ジメチル−３７，４４，４７，５０−テトラオキソ−２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５−ドデカオキサ−３８，４５，４８，５１−テトラアザトリペンタコンタンアミド）ベンジル）オキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例２．５１．７（２５ｍｇ）をトリフルオロ酢酸１ｍＬで５分間処理した。窒素を穏やかに流すことにより溶媒を除去した。残渣を１：１アセトニトリル：水から凍結乾燥して標題化合物を得、これをさらには精製せずに次のステップに使用した。ＭＳ（ＬＣ−ＭＳ）  ｍ／ｅ  １８２２．０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０９２３】
２．５１．９  Ｎ２−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｎ６−（３７−オキソ−２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５−ドデカオキサヘプタトリアコンタン−３７−イル）−Ｌ−リシル−Ｌ−アラニル−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド
実施例２．５１．８（２３ｍｇ）、Ｎ−スクシンイミジル６−マレイミドヘキサノエート（４．４０ｍｇ）及びヒドロキシベンゾトリアゾール（０．３２１ｍｇ）のＮ−メチルピロリドン（１．５ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（８．２８μＬ）を加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物を０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含む水中５〜８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステム及びＣ１８カラムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物フラクションを凍結乾燥して、標題化合物を得た。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  7.76  (dq,  3H),  7.64  -  7.51  (m,  5H),  7.45  (dd,  4H),  7.35  (td,  Hz,  3H),  4.97  (d,  5H),  3.95  -  3.79  (m,  8H),  3.57  (d,  46H),  3.50  -  3.30  (m,  14H),  1.58  -  0.82  (m,  59H).ＭＳ（ＬＣ−ＭＳ）  ｍ／ｅ  １００７．８（２Ｍ＋Ｈ）２＋。
【０９２４】
２．５２  ２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−［２−（２−｛［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（シントンＯＪ）の合成
実施例２．３０．２において実施例２．５０．１を実施例２．３０．１の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。1H  NMR  (500  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.87  (s,  2H);  8.06  -  7.98  (m,  1H),  7.78  (d,  1H),  7.61  (dd,  1H),  7.52  -  7.41  (m,  2H),  7.39  -  7.26  (m,  2H),  7.18  (d,  1H),  7.01  -  6.91  (m,  2H),  6.68  (d,  1H),  6.59  (d,  1H),  5.08  -  4.98  (m,  2H),  4.95  (s,  1H),  3.59  (t,  1H),  3.46  -  3.36  (m,  3H),  3.34  -  3.22  (m,  2H),  3.16  (q,  1H),  3.01  (t,  1H),  2.85  (d,  2H),  2.32  (t,  1H),  2.09  (s,  2H),  1.44  -  0.71  (m,  10H).ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １３３８．４（Ｍ−Ｈ）−。
【０９２５】
２．５３  ４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−［３−（｛Ｎ−［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］−３−スルホ−Ｌ−アラニル｝アミノ）プロポキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（シントンＸＹ）の合成
２，５−ジオキソピロリジン−１−イル３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノエートを２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノエートの代わりに及びＮ−メチル−２−ピロリドンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドの代わりに用いることにより、実施例２．３４．２において記載した通りに標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １４５８．０（Ｍ−Ｈ）−。
【０９２６】
２．５４  Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−［３−（３−スルホプロポキシ）プロパ−１−イン−１−イル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド（シントンＬＸ）の合成
【０９２７】
２．５４．１  メチル４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２−ヨードベンゾエート
３−ヨード−４−（メトキシカルボニル）安息香酸（９ｇ）のｔｅｒｔ−ブタノール（１００ｍＬ）中溶液に、ジフェニルホスホルアジデート（７．６ｍＬ）及びトリエチルアミン（４．９ｍＬ）を加えた。混合物を８３℃（内温）に終夜加熱した。混合物を減圧下で濃縮乾固し、０％〜２０％酢酸エチル／ヘプタンの濃度勾配で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ３７７．９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０９２８】
２．５４．２  メチル４−アミノ−２−ヨードベンゾエート
実施例２．５４．１（３ｇ）をジクロロメタン（３０ｍＬ）及びトリフルオロ酢酸（１０ｍＬ）に溶解し、室温で１．５時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮乾固し、水（塩酸でｐＨ１に調整）とエーテルとの間で分配した。層を分離し、有機層を重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、減圧下で濃縮乾固した。得られた固体をトルエンで摩砕して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ２７８．０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０９２９】
２．５４．３  メチル４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）−２−ヨードベンゾエート
フラスコに、実施例２．５４．２（３３７ｍｇ）及びＦｍｏｃ−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＯＨ（５００ｍｇ）を入れた。酢酸エチル（１８ｍＬ）を、続いてピリジン（０．２９６ｍＬ）を加えた。得られた懸濁液を氷浴中で冷却し、Ｔ３Ｐ（酢酸エチル中５０％溶液、１．４ｍＬ）を滴下添加した。０℃で４５分間撹拌を続け、反応物を−２０℃の冷凍庫中で終夜置いた。反応物を室温に加温し、次いで水でクエンチした。層を分離し、水溶液を酢酸エチルでさらに２回抽出した。合わせた有機物を無水硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をジクロロメタンに溶解し、次いでジエチルエーテルで処理して標題化合物が沈殿し、これを濾取した。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ６６９．７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０９３０】
２．５４．４  （９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（ヒドロキシメチル）−３−ヨードフェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート
実施例２．５４．３（１ｇ）をテトラヒドロフラン（１５ｍＬ）に溶解し、溶液を氷−アセトン浴中で−１５℃に冷却した。次いで温度を−１０℃未満に維持しながら、水素化アルミニウムリチウム（テトラヒドロフラン中１Ｎ、３ｍＬ）を滴下添加した。反応物を１時間撹拌し、次いで１０％クエン酸（２５ｍＬ）で注意深くクエンチした。反応物を水と酢酸エチルとの間で分配した。層を分離し、有機物を酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機層を水及びブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を５％〜６％メタノール／ジクロロメタンの濃度勾配で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ６６４．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０９３１】
２．５４．５  ４−（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）−２，２−ジメチルブチル３−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）プロパン−１−スルホネート
４−（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）−２，２−ジメチルブタン−１−オール（１．８ｇ）及び３−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）プロパン−１−スルホニルクロリド（２．１ｇ）をジクロロメタン（５０．０ｍＬ）中で合わせた。混合物を氷浴中で冷却し、トリエチルアミン（３．５ｍＬ）を滴下添加した。反応物を室温で３時間撹拌し、水を加えることによりクエンチした。層を分離し、水溶液をジクロロメタンで３回抽出した。合わせた有機物を硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を０％〜２５％酢酸エチル／ヘプタンの濃度勾配で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ５３４．０（Ｍ＋ＮＨ４）＋。
【０９３２】
２．５４．６  ４−（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）−２，２−ジメチルブチル３−（（３−（５−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）プロパ−２−イン−１−イル）オキシ）プロパン−１−スルホネート
実施例２．５４．４（１．５ｇ）、ヨウ化銅（Ｉ）（０．０４５ｇ）及びビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）ジクロリド（０．１６４ｇ）をフラスコ中で合わせ、システムをＮ２で４５分間脱気した。別途、実施例２．５４．５（２．３８ｇ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１２ｍＬ）に溶解し、溶液を窒素で４５分間脱気した。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液を注射器により乾燥試薬に移した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１．２ｍＬ）を加え、反応物を終夜撹拌した。反応混合物を水（４００ｍＬ）で希釈し、ジクロロメタン（４×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた抽出物を無水硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を０％〜５％メタノール／ジクロロメタンの濃度勾配で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １０１２．１（Ｍ−Ｈ２Ｏ）＋。
【０９３３】
２．５４．７  ４−（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）−２，２−ジメチルブチル３−（（３−（５−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）−２−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェニル）プロパ−２−イン−１−イル）オキシ）プロパン−１−スルホネート
実施例２．５４．６（７００ｍｇ）及びビス（４−ニトロフェニル）カルボネート（２０７ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．１２９ｍＬ）を加えた。反応物を室温で２時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮した。残渣を０％〜６０％酢酸エチル／ヘプタンの濃度勾配で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １２１１．９（Ｍ＋ＮＨ４）＋。
【０９３４】
２．５４．８  ３−（１−（（（１ｒ，３ｒ）−３−（２−（（（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）−２−（３−（３−スルホプロポキシ）プロパ−１−イン−１−イル）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例１．１．１７（０．０２６ｇ）及び実施例２．５４．７（０．０３３ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．４ｍＬ）中溶液を、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０２４ｍＬ）を加え、反応物を５時間撹拌した。反応物を減圧下で濃縮して、油状物を得た。油状物をテトラヒドロフラン（０．２ｍＬ）に溶解し、テトラブチルアンモニウムフルオリド（テトラヒドロフラン中１．０Ｍ、０．２７ｍＬ）で処理し、反応物を終夜撹拌した。反応物をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．３ｍＬ）、水（０．７ｍＬ）で希釈し、３５分かけて１０％〜８５％アセトニトリル水の濃度勾配を使用するＧｉｌｓｏｎシステム（Ｌｕｎａカラム、２５０×５０、流量６０ｍＬ／分）上での分取逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物を含むフラクションを凍結乾燥して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １２５５．８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０９３５】
２．５４．９  Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−［３−（３−スルホプロポキシ）プロパ−１−イン−１−イル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド
実施例２．５４．８（０．０２２ｇ）及び２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノエート（７．０２ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０１５ｍＬ）を加え、反応物を室温で３時間撹拌した。反応物をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．３ｍＬ）、水（０．７ｍＬ）で希釈し、３５分かけて１０％〜８５％アセトニトリル水の濃度勾配を使用するＧｉｌｓｏｎシステム（Ｌｕｎａカラム、２５０×５０、流量６０ｍＬ／分）上での分取逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物を含むフラクションを凍結乾燥して、標題化合物を得た。1H  NMR  (400  MHz,  DMSO-d6)  δ  8.14  (d,  1H),  8.02  (d,  1H),  7.77  (d,  3H),  7.59  (t,  2H),  7.51  -  7.39  (m,  3H),  7.34  (td,  3H),  7.26  (s,  1H),  6.97  (s,  2H),  6.93  (d,  1H),  5.05  (s,  2H),  4.94  (s,  2H),  4.34  (s,  3H),  4.21  -  4.10  (m,  2H),  3.87  (t,  2H),  3.78  (d,  2H),  3.53  (t,  4H),  3.24  (s,  4H),  2.99  (t,  2H),  2.84  (d,  4H),  2.46  -  2.38  (m,  2H),  2.25  -  2.02  (m,  5H),  1.92  (dt,  2H),  1.87  -  1.75  (m,  2H),  1.45  (dt,  4H),  1.38  -  0.87  (m,  18H),  0.87  -  0.71  (m,  10H).．ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １４４８．８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０９３６】
２．５５  （６Ｓ）−２，６−アンヒドロ−６−（｛２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル｝アミノ）フェニル｝エチニル）−Ｌ−グロン酸（シントンＭＪ）の合成
【０９３７】
２．５５．１  （３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリス（ベンジルオキシ）−６−（ベンジルオキシメチル）−テトラヒドロピラン−２−オン
（３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリス（ベンジルオキシ）−６−（（ベンジルオキシ）メチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−オール（７５ｇ）のジメチルスルホキシド（４００ｍＬ）中溶液に、０℃でＡｃ２Ｏ（２２５ｍＬ）を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した後、０℃に冷却した。大量の水を加え、反応混合物が３時間落ち着くように撹拌を停止した（粗製のラクトンがフラスコの底に溜まっている）。上清を除去し、粗製の混合物を酢酸エチルで希釈し、水で３回洗浄し、ＮａＨＣＯ３の飽和水溶液で中和し、水で再度２回洗浄した。次いで有機層を硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ５６１（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０９３８】
２．５５．２  （３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリス（ベンジルオキシ）−６−（ベンジルオキシメチル）−２−エチニル−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−オール
窒素下ドライアイス／アセトン浴（内温−６５℃）中で冷却した、エチニルトリメチルシラン（１８．２３ｇ）のテトラヒドロフラン（４００ｍＬ）中溶液に、温度を−６０℃未満に保持しながら、ヘキサン中２．５Ｍ  ＢｕＬｉ（５５．７ｍＬ）を滴下添加した。混合物を冷浴中で４０分間、続いて氷水浴（内温を０．４℃に上げた）により４０分間撹拌し、最後−７５℃に再度冷却した。内温を−７０℃未満に保持しながら、実施例２．５５．１（５０ｇ）のテトラヒドロフラン（５０ｍＬ）中溶液を滴下添加した。混合物をドライアイス／アセトン浴中で追加の３時間撹拌した。反応物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２５０ｍＬ）でクエンチした。混合物を室温に加温し、酢酸エチル（３×３００ｍＬ）で抽出し、ＭｇＳＯ４で脱水し、真空で濃縮して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ６５９（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０９３９】
２．５５．３  トリメチル（（（３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリス（ベンジルオキシ）−６−（ベンジルオキシメチル）−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）エチニル）シラン
実施例２．５５．２（６０ｇ）のアセトニトリル（４５０ｍＬ）及びジクロロメタン（１５０ｍＬ）中混合溶液に、氷塩浴中−１５℃でトリエチルシラン（８１ｍＬ）を滴下添加し、続いて内温が−１０℃を超えないような速度で、ＢＦ３．ＯＥｔ２（４０．６ｍＬ）を加えた。次いで混合物を−１５℃〜−１０℃で２時間撹拌した。反応物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２７５ｍＬ）でクエンチし、室温で１時間撹拌した。次いで混合物を酢酸エチル（３×５５０ｍＬ）で抽出した。抽出物をＭｇＳＯ４で脱水し、濃縮した。残渣を０％〜７％酢酸エチル／石油エーテルの濃度勾配で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ６４３（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０９４０】
２．５５．４  （２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ）−３，４，５−トリス（ベンジルオキシ）−２−（ベンジルオキシメチル）−６−エチニル−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン
実施例２．５５．３（８０ｇ）のジクロロメタン（２００ｍＬ）及びメタノール（１０００ｍＬ）中混合溶液に、１Ｎ  ＮａＯＨ水溶液（２５８ｍＬ）を加えた。混合物を室温で２時間撹拌した。溶媒を除去した。次いで残渣を水とジクロロメタンとの間で分配した。抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ５７１（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０９４１】
２．５５．５  （２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−６−エチニル−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
氷／水浴により冷却した実施例２．５５．４（６６ｇ）の無水酢酸（５００ｍＬ）中溶液に、ＢＦ３・ＯＥｔ２（１５２ｍＬ）を滴下添加した。混合物を室温で１６時間撹拌し、氷／水浴中で冷却し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で中和した。混合物を酢酸エチル（３×５００ｍＬ）で抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、真空で濃縮した。残渣を０％〜３０％酢酸エチル／石油エーテルの濃度勾配で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ３５７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０９４２】
２．５５．６  （３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）−２−エチニル−６−（ヒドロキシメチル）−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリオール
実施例２．５５．５（２５ｇ）のメタノール（４４０ｍＬ）中溶液に、ナトリウムメタノレート（２．１ｇ）を加えた。混合物を室温で２時間撹拌し、次いでジオキサン中４Ｍ  ＨＣｌで中和した。溶媒を除去し、残渣をシリカゲル上に吸着させ、シリカゲルカラム上に装填した。カラムを０〜１００％酢酸エチル／石油エーテル、次いで０％〜１２％メタノール／酢酸エチルの濃度勾配で溶出して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ２１１（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０９４３】
２．５５．７  （２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−６−エチニル−３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸
３ツ口ＲＢＦに実施例２．５５．６（６．００ｇ）、ＫＢｒ（０．３０ｇ）、テトラブチルアンモニウムブロミド（０．４１ｇ）及び飽和ＮａＨＣＯ３水溶液６０ｍＬを入れた。ジクロロメタン６０ｍＬ中のＴＥＭＰＯ（０．１５ｇ）を加えた。混合物を激しく撹拌し、氷塩浴中で内温−２℃に冷却した。内温を２℃未満に維持するように、ブライン（１２ｍＬ）、ＮａＨＣＯ３水溶液（２４ｍＬ）及びＮａＯＣｌ（１５４ｍＬ）の溶液を滴下添加した。固体のＮａ２ＣＯ３を加えて、反応混合物のｐＨを８．２〜８．４の範囲に維持した。合計６時間後、反応物を内温３℃に冷却し、ＥｔＯＨ（約２０ｍＬ）を滴下添加し、約３０分間撹拌した。混合物を分液漏斗に移し、ジクロロメタン層を廃棄した。水性層のｐＨを、１Ｍ  ＨＣｌを使用して２〜３に調整した。次いで水性層を濃縮乾固して、灰白色固体を得た。メタノール（１００ｍＬ）を乾燥固体に加え、スラリー液を約３０分間撹拌した。混合物をセライトのパッド上で濾過し、漏斗中の残渣をメタノール約１００ｍＬで洗浄した。濾液を減圧下で濃縮して、標題化合物を得た。
【０９４４】
２．５５．８  （２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−メチル６−エチニル−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボキシレート
５００ｍＬの３ツ口ＲＢＦに実施例２．５５．７（６．４５ｇ）のメタノール（９６ｍＬ）中懸濁液を入れ、氷塩浴中にて内温−１℃で冷却した。チオニルクロリド（２．７９ｍＬ）を無溶媒で注意深く加えた。内温は添加の間上昇し続けたが、１０℃は超えなかった。反応物を１５〜２０℃に２．５時間かけてゆっくり加温した。２．５時間後、反応物を濃縮して、標題化合物を得た。
【０９４５】
２．５５．９．  （３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−２−エチニル−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（７５ｍＬ）溶液として実施例２．５５．８（６．９ｇ）に、ＤＭＡＰ（０．１７ｇ）及び無水酢酸（３６．１ｍＬ）を加えた。懸濁液を氷浴中で冷却し、ピリジン（１８．０４ｍＬ）を注射器により１５分かけて加えた。反応物を室温に終夜加温した。さらに無水酢酸（１２ｍＬ）及びピリジン（６ｍＬ）を加え、撹拌をさらに６時間続けた。反応物を氷浴中で冷却し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液２５０ｍＬを加え、１時間撹拌した。水（１００ｍＬ）を加え、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機抽出物を飽和ＣｕＳＯ４溶液で２回洗浄し、乾燥し、濃縮した。残渣を５０％酢酸エチル／石油エーテルで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。1H  NMR  (500  MHz,  メタノール-d4)  δ  ppm  5.29  (t,  1H),  5.08  (td,  2H),  4.48  (dd,  1H),  4.23  (d,  1H),  3.71  (s,  3H),  3.04  (d,  1H),  2.03  (s,  3H),  1.99  (s,  3H),  1.98  (s,  4H).
【０９４６】
２．５５．１０  （２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（（５−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）エチニル）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．５５．９（３２．０ｍｇ）、実施例２．５４．４（５０ｍｇ）、ヨウ化銅（Ｉ）（１．５ｍｇ）及びビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）ジクロリド（５．５ｍｇ）を、セプタムで密栓したバイアル中で合わせ、スパージした。別途、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２７．０μＬ）及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３９０μＬ）を合わせ、１時間スパージし、乾燥試薬中にカヌーレで移した。反応物を室温で終夜撹拌した。反応物を酢酸エチルと水との間で分配した。合わせた有機物を硫酸ナトリウムで脱水し、減圧下で濃縮した。残渣を０％〜２０％メタノール／ジクロロメタンの濃度勾配で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ８３８．１（Ｍ−Ｈ２Ｏ）＋。
【０９４７】
２．５５．１１  （２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（（５−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）−２−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェニル）エチニル）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．５５．１０（５１ｍｇ）及びビス（４−ニトロフェニル）カルボネート（３６．３ｍｇ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２９８μＬ）中で合わせ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１１．５５ｍｇ）を加えた。反応物を室温で２時間撹拌し、次いで窒素の気流下で濃縮した。残渣を０％〜７０％酢酸エチル／ヘプタンの濃度勾配で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １０３７．９（Ｍ＋ＮＨ４）＋。
【０９４８】
２．５５．１２  ３−（１−（（（１ｒ，３ｒ）−３−（２−（（（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）−２−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−カルボキシ−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）エチニル）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸、トリフルオロ酢酸塩
実施例１．１．１７（０．０４４ｇ）及び実施例２．５５．１１（０．０４７ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０４０ｍＬ）を加え、反応物を４時間撹拌した。反応物を減圧下で濃縮した。残渣をメタノール（０．５ｍＬ）及びテトラヒドロフラン（０．５ｍＬ）に溶解し、水酸化リチウム水和物（０．０２９ｇ）で水（０．５ｍＬ）中溶液として処理した。反応物を１．５時間撹拌し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）で希釈し、３５分かけて１０％〜８５％アセトニトリル水の濃度勾配を使用するＧｉｌｓｏｎシステム上での分取逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物を含むフラクションを凍結乾燥して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １２７９．９（Ｍ＋Ｈ）＋
【０９４９】
２．５５．１３  （６Ｓ）−２，６−アンヒドロ−６−（｛２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル｝アミノ）フェニル｝エチニル）−Ｌ−グロン酸
実施例２．５５．１２（０．０２５ｇ）及び２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノエート（７．１９ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０１６ｍＬ）を加え、反応物を３時間撹拌した。反応物をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．３ｍＬ）及び水（０．７ｍＬ）の１：１混合物で希釈し、３５分かけて１０％〜８５％アセトニトリル水の濃度勾配を使用するＧｉｌｓｏｎシステム上での分取逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物を含むフラクションを凍結乾燥して、標題化合物を得た。1H  NMR  (400  MHz,  DMSO-d6)  δ  12.85  (s,  2H),  10.03  (s,  1H),  8.17  (d,  1H),  8.03  (d,  1H),  7.78  (q,  3H),  7.62  (d,  1H),  7.55  (d,  1H),  7.54  -  7.40  (m,  3H),  7.36  (td,  3H),  7.28  (s,  1H),  6.99  (s,  2H),  6.95  (d,  1H),  5.11  (s,  2H),  4.96  (s,  2H),  4.36  (q,  1H),  4.25  -  4.13  (m,  2H),  3.88  (t,  2H),  3.80  (d,  2H),  3.69  (d,  2H),  3.44  (s,  2H),  3.36  (td,  2H),  3.32  -  3.16  (m,  4H),  3.01  (t,  2H),  2.90  (s,  2H),  2.84  (s,  2H),  2.16  (td,  2H),  2.09  (s,  4H),  1.95  (q,  1H),  1.47  (p,  4H),  1.29  (d,  6H),  1.24  (s,  1H),  1.16  (q,  4H),  1.08  (d,  3H),  0.83  (dt,  12H).ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １４７２．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０９５０】
２．５６  Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−［３−（３−スルホプロポキシ）プロピル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド（シントンＮＨ）の合成
【０９５１】
２．５６．１  ４−（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）−２，２−ジメチルブチル３−（３−（５−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）プロポキシ）プロパン−１−スルホネート
実施例２．５４．６．（９００ｍｇ）のテトラヒドロフラン（２０ｍＬ）及びメタノール（１０ｍＬ）中溶液に、５０ｍＬの圧力容器中１０％Ｐｄ／Ｃ（２００ｍｇ、乾燥品）を加え、３０ｐｓｉのＨ２下室温で１６時間振盪した。反応物を濾過し、減圧下で濃縮して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １０１６．１（Ｍ−Ｈ２Ｏ）＋。
【０９５２】
２．５６．２  ４−（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）−２，２−ジメチルブチル３−（３−（５−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）−２−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェニル）プロポキシ）プロパン−１−スルホネート
実施例２．５６．１（８４６ｍｇ）及びビス（４−ニトロフェニル）カルボネート（２４９ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１１６ｍｇ）を加えた。反応物を室温で２時間撹拌し、減圧下で濃縮した。残渣を０％〜６０％酢酸エチル／ヘプタンの濃度勾配で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １２１６．０（Ｍ＋ＮＨ４）＋。
【０９５３】
２．５６．３  ３−（１−（（（１ｒ，３ｒ）−３−（２−（（（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）−２−（３−（３−スルホプロポキシ）プロピル）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例１．１．１７（０．０１８ｇ）及び実施例２．５６．２（０．０２２ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．４ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０１６ｍＬ）を加え、反応物を５時間撹拌した。反応物を減圧下で濃縮し、テトラヒドロフラン（０．２ｍＬ）に溶解し、テトラブチルアンモニウムフルオリド（テトラヒドロフラン中１．０Ｍ、０．３６７ｍＬ）で終夜処理した。反応物をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド：水２：１の混合物（２ｍＬ）で希釈し、３５分かけて１０％〜８５％アセトニトリル／水の濃度勾配を使用するＧｉｌｓｏｎシステム上での分取逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物を含むフラクションを凍結乾燥して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １２５５．８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０９５４】
２．５６．４  Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−［３−（３−スルホプロポキシ）プロピル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド
実施例２．５６．３（０．０１６ｇ）及び２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノエート（５．４ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．４ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１０．１７μＬ）を加え、反応物を５時間撹拌した。反応物をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．３ｍＬ）及び水（０．７ｍＬ）の１：１混合物で希釈し、３５分かけて１０％〜８５％アセトニトリル水の濃度勾配を使用するＧｉｌｓｏｎシステム上での分取逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物を含むフラクションを凍結乾燥して、標題化合物を得た。1H  NMR  (400  MHz,  DMSO-d6)  δ  12.82  (s,  2H),  9.87  (s,  1H),  8.07  (d,  1H),  7.76  (dd,  2H),  7.61  -  7.50  (m,  2H),  7.50  -  7.37  (m,  3H),  7.36  -  7.28  (m,  3H),  7.24  (s,  1H),  7.18  (d,  1H),  6.95  (s,  1H),  6.91  (d,  1H),  4.97  (s,  2H),  4.92  (s,  2H),  4.35  (p,  2H),  4.13  (dd,  2H),  3.85  (t,  2H),  3.76  (d,  2H),  3.41  -  3.25  (m,  8H),  3.21  (d,  2H),  2.97  (t,  2H),  2.80  (s,  3H),  2.60  (t,  2H),  2.23  -  2.01  (m,  5H),  1.93  (dq,  2H),  1.73  (dp,  4H),  1.44  (h,  4H),  1.37  -  0.86  (m,  18H),  0.80  (dd,  12H).ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １４５２．４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０９５５】
２．５７  ２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−（５−｛［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝ペンチル）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（シントンＯＶ）の合成
【０９５６】
２．５７．１  ４−（５−クロロペンタ−１−イン−１−イル）−２−ヒドロキシベンズアルデヒド
４−ブロモ−２−ヒドロキシベンズアルデヒド（２．０００ｇ）、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）ジクロリド（０．３４９ｇ）及びヨウ化銅（Ｉ）（０．０９５ｇ）を、１００ｍＬのＲＢＦ中に秤量し、バイアルを窒素の気流でフラッシュした。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３．４８ｍＬ）、５−クロロペンタ−１−イン（２．０４１ｇ）及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４０ｍＬ）を加え、反応物を５０℃に終夜加熱した。反応物を冷却し、酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈し、１Ｎ塩酸（７５ｍＬ）及びブライン（７５ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで脱水し、減圧下で濃縮した。残渣を１％〜５％酢酸エチル／ヘプタンの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。+H  NMR  (400  MHz,  クロロホルム-d)  δ  9.87  (s,  1H),  7.48  (d,  1H),  7.04  -  7.00  (m,  2H),  3.72  (t,  2H),  2.66  (t,  2H),  2.16  -  2.03  (m,  2H).
【０９５７】
２．５７．２  ４−（５−アジドペンタ−１−イン−１−イル）−２−ヒドロキシベンズアルデヒド
実施例２．５７．１（２．１５ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４０ｍＬ）中溶液に、アジ化ナトリウム（０．９４２ｇ）を加え、反応物を７５℃に１時間加熱した。反応物を冷却し、ジエチルエーテル（１００ｍＬ）で希釈し、水（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、減圧下で濃縮した。残渣を１％〜７％酢酸エチル／ヘプタンの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、所望の生成物を得た。1H  NMR  (400  MHz,  クロロホルム-d)  δ  11.04  (s,  1H),  9.89  (s,  1H),  7.50  (d,  1H),  7.07  -  7.01  (m,  2H),  3.50  (t,  2H),  2.60  (t,  2H),  1.92  (p,  2H).
【０９５８】
２．５７．３  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（５−（５−アジドペンタ−１−イン−１−イル）−２−ホルミルフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．５７．２（１．２８ｇ）、（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−ブロモ−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（３．３３ｇ）及び酸化銀（１．９４ｇ）をアセトニトリル（２５ｍＬ）中で撹拌した。終夜撹拌した後、反応物をジクロロメタン（５０ｍＬ）で希釈し、セライトのプラグに通して濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を５％〜４０％酢酸エチル／ヘプタンの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。
【０９５９】
２．５７．４  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（５−（５−アジドペンタ−１−イン−１−イル）−２−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．５７．３（１．８２ｇ）のテトラヒドロフラン（６ｍＬ）及びメタノール（６ｍＬ）中溶液を０℃に冷却し、水素化ホウ素ナトリウム（０．０６３ｇ）を一度に加えた。３０分間撹拌した後、反応物をジエチルエーテル（１００ｍＬ）で希釈し、重炭酸ナトリウム溶液（１００ｍＬ）及びブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで脱水し、減圧下で濃縮した。残渣を４０分かけて１０％〜５５％酢酸エチル／ヘプタンの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。1H  NMR  (501  MHz,  クロロホルム-d)  δ  7.31  (d,  1H),  7.18  (dd,  1H),  7.05  (d,  1H),  5.43  -  5.29  (m,  3H),  5.17  (d,  1H),  4.76  (dd,  1H),  4.48  (dd,  1H),  4.17  (d,  1H),  3.74  (s,  3H),  3.51  (t,  2H),  2.72  (dd,  1H),  2.57  (t,  2H),  2.13  (s,  3H),  2.09  (s,  3H),  2.08  (s,  3H),  1.91  (p,  2H).
【０９６０】
２．５７．５  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（５−（５−アミノペンチル）−２−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．５７．４（１．３３ｇ）及びテトラヒドロフラン（２０ｍＬ）を、５０ｍＬの圧力ボトル中１０％パラジウム／Ｃ（０．１４ｇ）に加え、３０ｐｓｉのＨ２下室温で６時間撹拌した。１６時間後、反応物を濾過し、減圧下で濃縮して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ５２６．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０９６１】
２．５７．６  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（５−（５−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）ペンチル）−２−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．５７．５（１．２７７ｇ）のジクロロメタン（１０ｍＬ）中溶液を０℃に冷却した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．６３７ｍＬ）及び（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルカルボノクロリデート（０．５６６ｇ）を加え、反応物を１時間撹拌した。反応物を１０％〜７５％酢酸エチル／ヘプタンの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ７４８．４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０９６２】
２．５７．７  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（５−（５−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）ペンチル）−２−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．５７．６（０．２００ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０７０ｍＬ）及びビス（４−ニトロフェニル）カルボネート（０．１６３ｇ）を加え、反応物を室温で４時間撹拌した。反応物を減圧下で濃縮し、１０％〜６５％ヘプタン／酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ９１３．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０９６３】
２．５７．８  ３−（１−（（（１Ｓ，３ｒ）−３−（２−（（（（４−（５−アミノペンチル）−２−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−６−カルボキシ−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸、トリフルオロ酢酸
実施例１．１．１７（０．０７５ｇ）及び実施例２．５７．７（０．０７８ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０７５ｍＬ）を加え、反応物を３時間撹拌した。反応物を減圧下で濃縮し、テトラヒドロフラン（０．５ｍＬ）、メタノール（０．５ｍＬ）に溶解し、水酸化リチウム水和物（０．０５４ｇ）で水（１ｍＬ）中溶液として処理した。１時間後、反応物を２，２，２−トリフルオロ酢酸（０．０９９ｍＬ）でクエンチし、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）で希釈し、３５分かけて１０％〜８５％アセトニトリル水の濃度勾配を使用するＧｉｌｓｏｎシステム上での分取逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物を含むフラクションを凍結乾燥して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １１７１．６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０９６４】
２．５７．９  ２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−（５−｛［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝ペンチル）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸の合成
実施例２．５７．８（０．０４０ｇ）及び２，５−ジオキソピロリジン−１−イル３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノエート（１０．７７ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０２７ｍＬ）を加え、反応物を３時間撹拌した。反応物をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド：水の１：１混合物（２ｍＬ）で希釈し、３５分かけて１０％〜８５％アセトニトリル水の濃度勾配を使用するＧｉｌｓｏｎシステム上での分取逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物を含むフラクションを凍結乾燥して、標題化合物を得た。1H  NMR  (400  MHz,  DMSO-d6)  δ  12.81  (s,  2H),  8.00  (dd,  1H),  7.84  (t,  1H),  7.76  (d,  1H),  7.58  (dd,  1H),  7.50  -  7.35  (m,  4H),  7.38  -  7.25  (m,  2H),  7.25  (s,  1H),  7.13  (t,  1H),  6.97  -  6.87  (m,  4H),  6.80  (d,  1H),  5.05  (s,  2H),  4.97  (d,  1H),  4.92  (s,  2H),  3.89  -  3.81  (m,  6H),  3.77  (s,  2H),  3.55  (t,  2H),  3.45  -  3.34  (m,  2H),  3.33  -  3.20  (m,  4H),  3.02  -  2.79  (m,  8H),  2.27  (t,  2H),  2.06  (s,  3H),  1.49  (h,  2H),  1.32  (t,  4H),  1.26  -  1.19  (m,  2H),  1.19  (s,  4H),  1.12  -  0.94  (m,  4H),  0.93  (s,  1H),  0.79  (d,  6H).ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １３４４．４（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０９６５】
２．５８  ２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−［１６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１４−オキソ−４，７，１０−トリオキサ−１３−アザヘキサデカ−１−イル］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（シントンＱＳ）の合成
【０９６６】
２．５８．１  ｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート
ｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（０．８５４ｇ）のジクロロメタン（２０ｍＬ）中撹拌溶液に、水酸化ナトリウム（０．５ｇ）及び３−ブロモプロパ−１−イン（０．７ｍＬ）を加えた。混合物を５０℃で終夜撹拌し、セライトに通して濾過し、減圧下で濃縮して、標題化合物を得た。
【０９６７】
２．５８．２  （９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（２−（２−（２−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート
実施例２．５８．１（０．９８６ｇ）のジクロロメタン（２０ｍＬ）中撹拌溶液に、塩酸（２０ｍＬ、エーテル中２Ｍ）を加えた。混合物を室温で２時間撹拌し、減圧下で濃縮した。残渣をジクロロメタン（２０ｍＬ）に懸濁した。トリエチルアミン（３ｍＬ）及び９−フルオレニルメチルクロロホルメート（１．５ｇ）を加え、反応物を室温で２時間撹拌した。反応物を減圧下で濃縮した。酢酸エチルを加え、懸濁液を濾過した。溶出液を減圧下で濃縮し、５％〜４０％ヘプタン／酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ４１０．０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０９６８】
２．５８．３  （３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（２−ホルミル−５−ヨードフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−ブロモ−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１．０ｇ）のアセトニトリル（１２ｍＬ）中撹拌溶液に、２−ヒドロキシ−４−ヨードベンズアルデヒド（０．９９９ｇ）、Ｉ２（０．１９２ｇ）及び酸化銀（２．００１ｇ）を加えた。混合物をアルミニウム箔で覆い、室温で４時間撹拌した。反応物をセライトに通して濾過し、酢酸エチルで洗浄した。溶媒を除去した。残渣を１０％〜２５％石油エーテル／酢酸エチルで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。1H-NMR  (CDCl3,  400  MHz):2.07  (s,  9H),  3.76  (s,  3H),  4.26-4.28  (m,  1H),  5.25-5.27  (m,  1H),  5.34-5.40  (m,  3H),  7.51-7.59  (m,  3H),  10.28  (s,  1H).ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５８７（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０９６９】
２．５８．４  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（５−（１−（９Ｈ−フルオレン−９−イル）−３−オキソ−２，７，１０，１３−テトラオキサ−４−アザヘキサデカ−１５−イン−１６−イル）−２−ホルミルフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．５８．３（０．２８０ｇ）、実施例２．５８．２（０．２６４ｇ）、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）ジクロリド（０．０３５ｇ）及びヨウ化銅（Ｉ）（９．４５ｍｇ）をフラスコ中に秤量し、窒素の気流でフラッシュした。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．１７３ｍＬ）及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３ｍＬ）を加え、反応物を室温で４時間撹拌した。反応物をジエチルエーテル（１００ｍＬ）で希釈し、水（５０ｍＬ）及びブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで脱水し、減圧下で濃縮した。残渣を１０％〜７５％酢酸エチル／ヘプタンの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ８４６．４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０９７０】
２．５８．５  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（５−（１−（９Ｈ−フルオレン−９−イル）−３−オキソ−２，７，１０，１３−テトラオキサ−４−アザヘキサデカン−１６−イル）−２−ホルミルフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．５８．４（０．２２５ｇ）及びテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）を、５０ｍＬの圧力容器中１０％Ｐｄ／Ｃ（４５ｍｇ、乾燥品）に加え、３０ｐｓｉのＨ２下室温で１時間振盪した。反応物を濾過し、減圧下で濃縮して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ８５０．４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０９７１】
２．５８．６  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（５−（１−（９Ｈ−フルオレン−９−イル）−３−オキソ−２，７，１０，１３−テトラオキサ−４−アザヘキサデカン−１６−イル）−２−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．５８．５（０．２００ｇ）のテトラヒドロフラン（０．７５ｍＬ）及びメタノール（０．７５ｍＬ）中溶液を０℃に冷却し、水素化ホウ素ナトリウム（４．４５ｍｇ）を加えた。３０分後、反応物を酢酸エチル（５０ｍＬ）及び飽和重炭酸ナトリウム水溶液（２０ｍＬ）の混合物中に注ぎ入れた。有機層を分離し、ブライン（２５ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、減圧下で濃縮した。残渣を３０分かけて２０％〜８５％酢酸エチル／ヘキサンの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  ８５２．４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０９７２】
２．５８．７  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（５−（１−（９Ｈ−フルオレン−９−イル）−３−オキソ−２，７，１０，１３−テトラオキサ−４−アザヘキサデカン−１６−イル）−２−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．５８．６（０．１５８ｇ）、ビス（４−ニトロフェニル）カルボネート（０．１１３ｇ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０４９ｍＬ）の溶液を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．０ｍＬ）中室温で４時間撹拌した。反応物を減圧下で濃縮し、残渣を２０％〜８０％酢酸エチル／ヘキサンの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １０１７．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０９７３】
２．５８．８  ３−（１−（（（１Ｓ，３ｒ）−３−（２−（（（（４−（３−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エトキシ）プロピル）−２−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−６−カルボキシ−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸、トリフルオロ酢酸
実施例１．１．１７（０．０３０ｇ）及び実施例２．５８．７のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０３０ｍＬ）を加え、反応物を３時間撹拌した。反応物を減圧下で濃縮し、テトラヒドロフラン（０．５ｍＬ）、メタノール（０．５ｍＬ）に溶解し、水酸化リチウム水和物（０．０２２ｇ）で水（１ｍＬ）中溶液として処理した。１時間後、反応物をトリフルオロ酢酸（０．１３２ｍＬ）でクエンチし、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド：水（１：１）（１ｍＬ）で希釈し、３０分かけて５％〜７５％アセトニトリル水の濃度勾配を使用するＧｉｌｓｏｎ  ＰＬＣ２０２０システム上での分取逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物を含むフラクションを合わせ、凍結乾燥して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １２７５．７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０９７４】
２．５８．９  ２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−［１６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１４−オキソ−４，７，１０−トリオキサ−１３−アザヘキサデカ−１−イル］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸
実施例２．５８．８（０．０２３ｇ）及び２，５−ジオキソピロリジン−１−イル３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノエート（５．７３ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．４ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０１４ｍＬ）を加え、反応物を室温で１時間撹拌した。反応物を水（１．５ｍＬ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）及びトリフルオロ酢酸（０．０６４ｍＬ）の混合物でクエンチし、３０分かけて５％〜７５％アセトニトリル／水の濃度勾配を使用するＧｉｌｓｏｎ  ＰＬＣ２０２０システム上での分取逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物を含むフラクションを合わせ、凍結乾燥して、標題化合物を得た。1H  NMR  (501  MHz,  DMSO-d6)  δ  8.01  (dd,  1H),  7.97  (t,  1H),  7.60  (d,  1H),  7.51  -  7.39  (m,  3H),  7.39  -  7.31  (m,  2H),  7.26  (s,  1H),  6.96  (s,  2H),  6.95  -  6.90  (m,  2H),  6.82  (d,  1H),  5.15  -  4.96  (m,  4H),  4.94  (s,  2H),  3.94  -  3.83  (m,  4H),  3.79  (d,  2H),  3.57  (dd,  12H),  3.41  -  3.23  (m,  10H),  3.12  (q,  2H),  2.99  (t,  2H),  2.86  (d,  4H),  2.55  (t,  2H),  2.33  -  2.26  (m,  2H),  2.07  (s,  3H),  1.74  (p,  2H),  1.45  -  0.87  (m,  12H),  0.81  (d,  6H).ＭＳ（ＥＳＩ）  ｍ／ｅ  １４４８．４（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０９７５】
２．５９  （６Ｓ）−２，６−アンヒドロ−６−（２−｛２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル｝アミノ）フェニル｝エチル）−Ｌ−グロン酸（シントンＳＧ）の合成
【０９７６】
２．５９．１  ２−ヨード−４−ニトロ安息香酸
機械撹拌機、温度プローブ及び添加漏斗を装備した３Ｌの完全に被覆されたフラスコに、窒素雰囲気下２−アミノ−４−ニトロ安息香酸（６９．１ｇ、Ｃｏｍｂｉ−Ｂｌｏｃｋｓ）及び硫酸、１．５Ｍ水溶液（６９６ｍＬ）を入れた。得られたオレンジ色懸濁液を内温０℃に冷却し、温度を１℃未満に維持しながら亜硝酸ナトリウム（２８．８ｇ）の水（２５０ｍＬ）中溶液を４３分かけて滴下添加した。反応物を約０℃で１時間撹拌した。内温を１℃未満に維持しながらヨウ化カリウム（１０７ｇ）の水（２５０ｍＬ）中溶液を４４分かけて滴下添加した。（最初の添加は発熱であり、ガス発生する）。反応物を０℃で１時間撹拌した。温度を２０℃に上げ、次いで周囲温度で終夜撹拌した。反応混合物はオレンジ色懸濁液になった。反応混合物を濾過し、集めたオレンジ色固体を水で洗浄した。含水のオレンジ色固体（約１０８ｇ）を１０％亜硫酸ナトリウム（３５０ｍｌ、固体中洗浄するために使用した水約２００ｍＬで）中で３０分間撹拌した。オレンジ色懸濁液を濃塩酸（３５ｍＬ）で酸性化し、固体を濾取し、水で洗浄した。固体を水（１Ｌ）中でスラリー化し、再度濾過し、固体を漏斗中終夜乾燥した。次いで固体を真空乾燥機中６０℃で２時間乾燥した。得られた鮮オレンジ色固体をジクロロメタン（５００ｍＬ）で摩砕し、懸濁液を濾過し、追加のジクロロメタンで洗浄した。固体を空気乾燥して、標題生成物を得た。
【０９７７】
２．５９．２．  （２−ヨード−４−ニトロフェニル）メタノール
フレーム乾燥した３Ｌの３ツ口フラスコに実施例２．５９．１（５１．９ｇ）及びテトラヒドロフラン（７００ｍＬ）を入れた。溶液を氷浴中で０．５℃に冷却し、ボラン−テトラヒドロフラン錯体（４４３ｍＬ、ＴＨＦ中１Ｍ）を５０分かけて滴下添加すると（ガス発生）、最終温度は１．３℃になった。反応混合物を１５分間撹拌し、氷浴を除去した。反応物を３０分かけて周囲温度にした。加熱マントルを取り付け、反応物を内温６５．５℃に３時間加熱し、次いで終夜撹拌しながら室温に冷却した。反応混合物を氷浴中で０℃に冷却し、メタノール（４００ｍＬ）を滴下添加することによりクエンチした。短時間インキュベーションした後、温度はガス発生しながら素早く上昇した。最初１００ｍＬを約３０分かけて加えた後、反応は最早発熱せず、ガス発生は止んだ。氷浴を除去し、混合物を窒素下周囲温度で終夜撹拌した。混合物を濃縮して固体にし、ジクロロメタン／メタノールに溶解し、シリカゲル（約１５０ｇ）上に吸着させた。残渣をシリカゲル（３０００ｍＬ）のプラグ上に装填し、ジクロロメタンで溶出して、標題生成物を得た。
【０９７８】
２．５９．３．  （４−アミノ−２−ヨードフェニル）メタノール
機械撹拌機、ＪＫＥＭ温度プローブにより制御される加熱マントル及び冷却器を装着した５Ｌのフラスコに、実施例２．５９．２（９８．８３ｇ）及びエタノール（２Ｌ）を入れた。反応物を素早く撹拌し、鉄（９９ｇ）を、続いて塩化アンモニウム（２０．８４ｇ）の水溶液（５００ｍＬ）を加えた。反応物を内温８０．３℃に２０分かけて加熱し、この時点で激しく還流が始まった。還流が穏やかになるまでマントルを下した。その後、混合物を８０℃に１．５時間加熱した。反応物をメンブランフィルターに通して加熱濾過し、鉄残渣を熱５０％酢酸エチル／メタノール（８００ｍＬ）で洗浄した。溶出液をセライトパッドに通し、透明黄色濾液を濃縮した。残渣を５０％ブライン（１５００ｍＬ）と酢酸エチル（１５００ｍＬ）との間で分配した。層を分離し、水性層を酢酸エチル（４００ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、濃縮して標題生成物を得、これをさらには精製せずに使用した。
【０９７９】
２．５９．４．  ４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−３−ヨードアニリン
機械撹拌機を有する５Ｌのフラスコに実施例２．５９．３（８８ｇ）及びジクロロメタン（２Ｌ）を入れた。懸濁液を氷浴中で内温２．５℃に冷跥鞁胣钽뷯銽뷯銈菣膃菣꾂菣궃苣ꆃ菣ꮃ苣ꦃ菣袼볯鎼볯鎼뷯覼苣颼裥讁臣ꚁ냥鞁臣ꒁ諥袁臣芀볯邼裥貾胣醼볯銈苣龃菣뺂菣ꮃ볯鎼볯躼볯螽볯銂蛥뒍迥鲿觧ꮁ냥鞁臣ꒁ諥袁臣芀蛥ꦸ苣醼볯莄臣誸臣ꪁ臣覂迥鲿觧銂볯邼裥릒详鞁臣芀迥鲿럦袐觧銂냦袼볯겼볯誏臣뢂苣궃菣ꆃ苣뎃볯醼볯覼臣貸蟩鞁臣芀뇥銂裥ꊛ臣膀鳦龩뇥銂ꇧ뢅菣袃菣Ꚃ菣ꞁ蓨뒰臣膀뿦꺸臣ꚁ胣릲諧ꦉ臣鞁臣芀껦ꎸ苣颃菣뾂菣궸볯鲀볯閼볯ꊅ藩ꢂ菣ꮃ臣莿뫥뺋藩ꞁ뫦몇臣讂苣ꪃ苣늂菣꾂菣麃菣낂菣閃苣벃볯랂菣ꮂ苣ꮃ볯隼볯邼뷯覼臣袂苣뺲ꏨ鞁臣膀꣦財铧邈觧銂닦뚊觧ꢁ臣ꚁ뻥龁胣ં䐼噉邀볯馼볯邼胣㲑䐯噉ਾ볯躼볯馼볯閼볯₎袼볯覼裢銼裢袼볯뎼볯銈볯銈볯袼볯袼볯ꢼ裢閃菣ꪂ菣뎃裢馼裢ꒂ菣覼菣袃苣랂볯ꮂ菣鲃菣ꮃ볯ꊂ菣躃볯銈볯銈菣膃菣隃苣뎃苣龃菣覼菣궃菣뎃藩㲸牢ਾ†볯뎼볯銈볯銈볯袼볯袼볯ꢼ裢閃菣ꪂ菣뎃裢馼裢ꒂ菣覼菣袃苣랂볯ꮂ菣鲃菣ꮃ볯ꊂ菣躃볯銈볯銈菣膃菣隃苣뎃藩袼볯躼볯螽볯꺁볯궼볯袼볯邼뷯겼볯뚺뛦ꮁ胣뒰볯钼볯趽볯覼룤꺁볯뎼볯銈볯銈苣龃菣鞃菣醃菣뢅볯醼볯鎼볯鎼뷯覼迥뎁蟩궂藩誃菣ꪃ苣ꂃ볯醼볯鎼볯钼뷯覼苣ꂊ臣龁胣蚃菣ꦃ菣覃菣閃菣뎃볯銼볯趽볯覼苣ꂊ臣ꚁ뫦ꎧ臣鮁臣芀뻥覂苣龁럦袐觧銂껥ꦸ臣醼볯芙雩릒详鞁臣芀苣ꢂ菣뢅냦뚺뛦袼볯閼볯膀볯閼뷯겼볯銂諥袁胣랷郥ꦉ苣ꊅ藩ꢂ菣ꮃ룤醼볯薼볯銈菣궃菣躃菣ꮃ볯銼韃볯邼볯趽볯覼臣붊蟥鞁臣芀닦뾮觧貁鳦龩뇥ꮁ铧邈臣龁胣袐苣鮁臣覜ꧦ꒱苣뒰볯銼韃볯閼볯趽볯覼臣鞴뗦鞁臣芀鳦龩뇥銂룦Ꞝ룤ꞁ뿦꺸臣膀곦蒁臣뢂苣膃菣ꢂ菣蚃菣袼볯邼뷯겼볯ꞁ釦閠臣龁胣궟駦鎖뛨뎟돦ꚇ郧鞁臣貾胣馨ꇩ隌郥ꦉ苣붙觨몛뷤ꢁ臣ꚁ뿦随臣龁胣궼볯袼볯뎼볯覼뷯込뷯₅钼볯醼볯궼볯ꢼ볯㲉畳⁰浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯㲋猯灵芀㰊䥄㹖胣邼볯颼볯醀⼼䥄㹖銼볯閼볯躼볯躼†볯馼볯銈菣ꮃ苣것菣銈볯銈苣ꮃ볯ꆃ菣ꮃ볯袼볯覼裢醼裢袼볯袼볯覼裢醼裢袼볯钼裢袼볯袼뷯薽뷯钽裢隃菣ꮃ苣ꆃ菣ꮃ苣ꪃ菣覼苣궂苣覼菣膃菣覼裢鎼裢ꢃ菣覃菣Ꞃ菣ꮃ볯ꊂ菣躃볯銈볯銈苣궂苣鞃菣醃菣銈볯銈苣ꮃ볯ꊂ菣躃볯銈볯銈菣膃菣銈볯銈苣궂苣隃苣뎃裢銼裢ꒂ菣覼苣ꮃ菣ꆃ菣袃戼㹲 龮雦设볯躼볯馼볯钼볯閼볯钼볯螽볯誏臣龮雦设볯躼볯馼볯閼볯隼볯醼볯螽볯꺁苣꾂菣궃菣뾂菣袼볯邼뷯겼볯誏臣ꆃ苣躃菣ꮃ볯鎼볯躼볯趽볯覼臣랷郥ꦉ룤뚺뛦銂胣ꢂ菣ꮃ볯銈苣袃苣랂苣躃菣뎃裢醼볯銼볯覼裢ꮂ菣鲃苣랂菣벃菣袼볯躼볯颼뷯覼苣ꂊ臣膀迥鲿觧銂뗧鲤鋦貋臣龁胣趏뿥ꦉ苣莿룧鞁胣랂菣ꮂ苣ꮃ룤ꮁꏨꮡ臣膀藩뢅苣膃菣궸볯邼볯鲀볯閼볯颃菣뾂菣꺁뿦ꚺ该超胣骶臣ꚁ苣꾂菣궃菣뾂菣궸볯薼菣뾂菣벃菣ꞁ뫦몇臣龁胣龔裦ꦉ郥覜菣ꦃ苣랂菣뎃苣莿룧鞁胣뢂苣궃菣ꆃ苣뎃룤邼볯銼볯ꆃ苣躃菣ꮃ볯閼볯趽볯覼臣뚺꟨鞁胣랂菣ꮂ苣ꮃ룤ꮁꏨꮡ臣膀苣꾂菣궃菣뾂菣궸볯躼볯薼胣銼볯ꆃ苣躃菣ꮃ臣莿뫥뺋藩ꞁ뫦몇臣龁胣龔裦ꦉ苣ꮐ苣閃菣꾂苣ꞃ菣銂鯩膂臣膀꣦財賥袐觧銂뻥龁胣궼볯袼볯뎼볯覼뷯込뷯₅鞼볯隼볯邼볯궼볯ꢼ볯㲉畳⁰浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯㲋猯灵芀㰊䥄㹖胣邼볯颼볯醀⼼䥄㹖銼볯閼볯躼볯躼†볯銼볯貼볯뎼볯钼볯貼볯뎼볯隼볯覼裢銼裢袼볯閼裢袼볯뎼볯銈볯銈볯袼볯覼裢銼裢袼볯袼볯馼볯銈菣ꮃ苣것菣銈볯銈苣ꮃ볯ꆃ菣궂苣覼苣ꮃ菣讃菣覼苣龃菣覼裢鎼裢ꆃ菣ꮃ菣뾂菣ꊂ菣覃볯鞃菣醃菣ꊂ菣覃볯銈볯銈볯袼볯钽뷯銽뷯銈菣膃菣뢂菣膃菣랂菣ꮃ볯ꪂ苣랂볯ꆃ菣ꮃ볯閃苣讃菣覼苣膃菣ꮃ볯銈볯銈볯ꆃ菣궂苣ꮂ菣鲃菣ꮃ볯蚃菣ꦃ菣覃菣銈볯ꢼ裢钃菣뎃裢鎼볯钼볯閼裢袃菣ꒂ菣袃菣ꊂ苣蚃菣袃戼㹲 龮雦设볯躼볯閼볯馼볯钼볯閼볯邼뷯覼胣龮雦设볯躼볯馼볯隼볯隼볯隼볯螽볯膀菣Ꚃ賥薊볯ꦼ볯袼볯躼볯颼볯螽볯誏臣낼뷯ꎼ뷯㲌畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯㲒猯扵袼볯낼뷯㲈畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯㲓猯扵覼猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銼⼼畳㹢볯邼볯鎼볯颼뷯覼臣뚺뛦銂菣ꒂ苣ꮃ룤ꞁ郥辂臣膀蓨鞰臣龁胣꺼볯꺼裢뢂菣膃菣鮃菣ꂃ苣龃菣袼볯閼뷯겼볯誏臣꺼裢ꢂ菣ꮃ裢꺼裢ꒂ苣鞃菣钃菣鞃菣醃菣銈볯銈苣龃菣袼볯躼볯閼뷯겼볯銂諥袁胣趏뿥릮駥銂ꫧꂴ臣閃菣莃苣ꖃ臣膀껥ꦸ臣芵ꓥ릒详鞁臣芀迥鲿觧銂냦袼볯邼볯趽볯覼臣ꊅ藩ꢂ菣ꮃ볯銼볯邼뷯겼볯ꢁ臣鎖臣蚈藩鞁臣芀뇥銂裥ꊛ臣膀鳦龩뇥銂ꇧ뢅菣낂菣랂苣ꂃ臣놄냦鞁胣莿룧鞁臣芀껦ꎸ苣颃菣뾂菣궸볯薼胣馼볯薼藩뢅苣膃菣꺁뿦ꚺ该超臣뚺蟥馁苣랂菣ꮂ苣ꮃ苣궃菣袃苣ꦃ菣ꎂ菣ꮁ苣誂닧붣臣龁胣龔裦ꦉ苣ꮐ苣閃菣꾂苣ꞃ菣銂鯩膂胣莿룧鞁胣뢂苣궃菣ꆃ苣뎃룤邼볯銼볯薼胣銼볯閼볯ꆃ苣躃菣ꮃ臣莿뫥뺋藩ꞁ뫦몇臣讂苣ꪃ苣늂菣꾂菣麃菣낂菣閃苣벃臣袂苣뺲ꏨ鞁臣膀꣦財賥袐觧銂뻥龁胣궼볯袼볯뎼볯覼뷯込뷯₅馼볯邼볯钼볯궼볯ꢼ볯㲉畳⁰浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯㲋猯灵芀㰊䥄㹖胣邼볯颼볯醀⼼䥄㹖銼볯閼볯躼볯躼†볯銼볯貼볯뎼볯钼볯貼볯뎼볯隼볯覼裢銼裢袼볯銈볯袼볯覼裢銼裢袼볯뎼볯銈볯銈볯袼볯袼볯ꢼ裢閃菣ꪂ菣뎃裢馼裢ꒂ菣覼菣袃苣랂볯ꮂ菣鲃菣ꮃ볯ꊂ菣躃볯銈볯銈菣膃菣隃苣뎃苣龃菣覼菣궃菣뎃苣龃菣覼裢銼裢袼볯袼뷯薽뷯钽裢隃菣ꮃ苣ꆃ菣ꮃ苣ꪃ菣覼苣궂苣覼菣膃菣覼菣Ꞃ菣膃菣覼裢隼裢袼菣袃苣랂苣ꮃ菣讃菣覼菣袃菣銃菣궃裢銼볯銈菣ꦃ菣銈볯貼볯貼볯銈菣ꪃ苣ꮃ菣ꪃ苣뮂菣벃菣㲈牢ਾ†껥붖뻤銼볯閼볯躼볯袼볯躼볯螽볯誏臣蚃菣ꦃ菣覃菣閃菣뎃볯馼볯趽볯覼苣膀볯邼뷯겼臣Ꞝ諥鲃菣ꮃ룤閼볯낼뷯込볯袼볯躼볯銼뷯膀郥뒰볯ꮁ諥袁胣꒮룦ꞁ볯邼뷯鎽뷯꺁냦ꂴ룤馼볯蚈雩꾌鯧鞁臣芀迥鲿觧銂뿦躁臣膀뿦꺸臣ꚁ胣馨ꇩ隌郥ꦉ苣鞾臣芀볯뎼볯ꖼ볯ꦼ볯₉趽볯薽†볯鞼볯躼볯袼볯讼볯覼猼灵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰讼⼼畳㹰胣ં䐼噉邀볯馼볯钼胣㲑䐯噉ਾ볯躼볯馼볯馼볯₎袼볯뎼볯鎼볯貼볯늼볯閼볯貼볯뎼볯銈볯銈볯閼裢袼볯뎼볯銈볯銈볯袼볯覼裢銼裢袼볯袼볯馼볯銈菣ꮃ苣것菣銈볯銈苣ꮃ볯ꆃ菣궂苣覼苣ꮃ菣讃菣覼苣龃菣覼裢鎼裢ꆃ菣ꮃ菣뾂菣ꊂ菣覃볯鞃菣醃菣ꊂ菣覃볯銈볯銈볯銃菣궃苣랂菣膃菣覼菣Ꞃ菣膃菣覼裢隼裢袼菣袃苣랂苣ꮃ菣讃菣覼菣袃菣銃菣궃裢銼볯銈菣ꦃ菣銈볯貼볯貼볯銈菣ꪃ苣ꮃ菣ꪃ苣뮂菣벃菣㲈牢ਾ†껥붖뻤銼볯閼볯躼볯袼볯躼볯螽볯꺁菣袃菣銃菣궃菣ꦃ菣袼볯趽볯覼胣뒰볯鞼뷯겼볯誏臣랰藩뢅볯銼볯趽볯覼룤뚺뛦銂껥ꦸ臣芵ꓥ릒详鞁臣芀迥鲿觧銂藩뢅苣膃菣袼볯邼볯趽볯覼臣貸蟩鞁胣뒰볯醼볯邼뷯겼볯膀ꏩ貒볯膽볯ꎼ볯㲯畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯㲓猯扵뒰뫦늶볯醼볯邼뷯겼볯膀菣ꦃ苣뎃볯醼볯邼뷯겼볯ꞁ듦蒵臣膀ꇧ뢅菣낂菣랂苣ꂃ臣놄냦鞁胣莿룧鞁臣芀껦ꎸ苣뢂苣궃菣ꆃ苣뎃룤邼볯閼볯鲀볯薼菣뾂菣벃菣꺁뿦ꚺ该超臣뚺蟥馁苣랂菣ꮂ苣ꮃ苣궃菣袃苣ꦃ菣ꎂ菣ꮁ苣誂닧붣臣ꚁ胣馨ꇩ隌郥ꦉ苣鞾臣芀볯뎼볯ꖼ볯ꦼ볯趽볯薽†볯隼볯躼볯袼볯讼볯覼猼灵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰讼⼼畳㹰胣ં䐼噉邀볯馼볯閼胣㲑䐯噉ਾ볯躼볯馼볯醼볯躼†볯銼볯貼볯뎼볯钼볯貼볯뎼볯隼볯覼裢銼裢袼볯銈볯袼볯覼裢銼裢袼볯뎼볯銈볯銈볯袼볯袼볯ꢼ裢閃菣ꪂ菣뎃裢馼裢ꒂ菣覼菣袃苣랂볯ꮂ菣鲃菣ꮃ볯ꊂ菣躃볯銈볯銈菣膃菣隃苣뎃苣龃菣覼菣궃菣뎃苣龃菣覼裢銼裢袼볯袼볯钼裢讃菣궃菣Ꞃ菣궂苣覼苣ꮃ菣讃菣覼苣궂苣覼菣膃菣覼菣Ꞃ菣膃菣覼裢隼裢袼菣袃苣랂苣ꮃ菣讃菣覼菣袃菣銃菣궃裢銼볯銈菣ꦃ菣銈볯貼볯貼볯銈菣ꪃ苣ꮃ菣ꪃ苣뮂菣벃菣㲈牢ਾ†껥붖뻤銼볯閼볯躼볯袼볯躼볯邼뷯覼迥뎁菣릂볯钼裢讃菣궃菣Ꞃ菣ꮃ볯ꮂ菣鲃菣벃菣袼볯躼볯鎼뷯覼臣ꊂ苣袃菣袃菣ꮃ볯颼볯趽볯覼룤뚺뛦ꮁ胣꒮룦ꞁ볯銈苣膃菣銈볯銈苣붂菣궃菣ꮃ菣궃菣뎃裢銼裢ꊂ菣뎃볯醼볯銼볯趽볯覼苣ꂊ臣龁胣芵ꓥ릒详鞁臣貾胣趏뿥ꦉ苣莿룧鞁胣뢂苣궃菣ꆃ苣뎃볯銼볯邼뷯겼볯ꮁ뫦ꎧ臣膀ꏩ貒볯膽볯ꎼ볯㲯畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯㲓猯扵뒰뫦늶볯钼韃볯閼볯趽볯覼臣鞴뗦鞁臣芀鳦龩뇥銂ꇧ뢅菣낂菣랂苣ꂃ臣놄냦鞁胣莿룧鞁臣芀뻥覂苣龁돦뚊觧銂菣궂苣뎃룤閼볯鲀볯閼볯ꊅ藩ꢂ菣ꮃ臣莿뫥뺋藩ꞁ뫦몇臣讂苣ꪃ苣늂菣꾂菣麃菣낂菣閃苣벃臣袂苣뺲ꏨ鞁臣膀꣦財賥袐觧銂뻥龁胣궼볯袼볯뎼볯覼뷯込뷯₅醼볯銼볯躼볯袼볯讼볯覼猼灵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰讼⼼畳㹰胣ં䐼噉邀볯馼볯隼胣㲑䐯噉ਾ볯躼볯馼볯醼볯躼†볯銈볯醼裢袼볯袼볯銽볯鎼뷯覼裢鎼裢袼볯銈볯袼볯袼볯銈볯袼볯覼裢銼裢袼볯뎼볯銈볯銈苣龃菣銈볯銈菣膃菣隃苣뎃苣龃菣覼菣궃菣뎃苣龃菣覼裢銼裢袼볯銈볯袼볯뎼볯鎼볯貼볯늼볯閼볯貼볯뎼볯銈볯銈苣ꮃ菣궂苣銈볯貼볯貼볯銈菣ꪃ菣覃菣궂苣蚃菣ꦃ菣覃菣銈볯ꢼ裢钃菣뎃裢銼裢ꒂ菣覼苣膃菣覼菣뎃苣ꮃ볯ꪂ苣랂볯ꮂ菣鲃菣ꮃ볯袼菣膃菣覼苣龃菣覼苣袃苣랂볯銈볯貼볯銈苣ꆃ菣ꮃ苣肃菣뎃苣뎃裢醼裢ꒂ菣覼菣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