(57)【要約】  心不全を処置または予防するための方法、組成物およびキットが開示される。哺乳動物における心不全を処置するための本発明の方法は、哺乳動物に有効量のチエノピリミジン化合物を投与することを含む。
2019521192.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物における心不全を処置する方法であって、哺乳動物に有効量の１以上の次の化合物：
【化１】
2019521192.tif 000019
【化２】
2019521192.tif 000020
またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法。
【請求項２】
哺乳動物における心不全を処置する方法であって、哺乳動物に有効量の１以上の：
２−(３，４−ジクロロベンジル)−５−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロチエノ[２，３−ｄ]ピリミジン−６−カルボン酸またはその薬学的に許容される塩；
２−(３−クロロベンジル)−５−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロチエノ[２，３−ｄ]ピリミジン−６−カルボン酸またはその薬学的に許容される塩；
５−メチル−４−オキソ−２−(３−トリフルオロメチルベンジル)−３，４−ジヒドロチエノ[２，３−ｄ]ピリミジン−６−カルボン酸またはその薬学的に許容される塩；
２−(３−クロロ−４−フルオロベンジル)−５−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロチエノ[２，３−ｄ]ピリミジン−６−カルボン酸またはその薬学的に許容される塩；
２−(５−クロロ−２−フルオロベンジル)−５−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロチエノ[２，３−ｄ]ピリミジン−６−カルボン酸またはその薬学的に許容される塩；
２−(シクロペント−１−エニルメチル)−５−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロチエノ[２，３−ｄ]ピリミジン−６−カルボン酸またはその薬学的に許容される塩；
４−オキソ−２−(チオフェン−２−イルメチル)−３，４−ジヒドロチエノ[２，３−ｄ]ピリミジン−６−カルボン酸またはその薬学的に許容される塩；
２−ベンジル−４−オキソ−３，４−ジヒドロチエノ[２，３−ｄ]ピリミジン−６−カルボン酸またはその薬学的に許容される塩；
２−(３−クロロベンジル)−４−オキソ−３，４−ジヒドロチエノ[２，３−ｄ]ピリミジン−６−カルボン酸またはその薬学的に許容される塩；および／または
４−オキソ−２−(３−トリフルオロメチルベンジル)−３，４−ジヒドロチエノ−[２，３−ｄ]ピリミジン−６−カルボン酸またはその薬学的に許容される塩
を投与することを含む、方法。
【請求項３】
哺乳動物に有効量のチエノピリミジン化合物を投与することを含む、哺乳動物における心不全を処置する方法。
【請求項４】
化合物が次の式(Ｉ)：
【化３】
2019521192.tif 000021
〔式中、
Ｒ１は水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシＣ１−６アルキルまたは１〜６個のハロゲン原子を含むＣ１−６ハロアルキルであり、
Ｒ２は水素、Ｃ１−６アルキル、フェニルＣ１−６アルキルまたはアミノであり、
Ｒ３はＣ２−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、カルバモイルＣ１−６アルキル、アミノＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルアミノＣ１−６アルキル、ジ(Ｃ１−６アルキル)アミノＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルチオまたはＹ−Ｘ基であるか、
Ｒ２およびＲ３は一体となってテトラメチレンを形成してよく、
Ｘは化学結合またはＣＨ２、ＣＨ(ＯＨ)、ＣＨ(Ｃ６Ｈ５)、ＣＯ、ＣＨ２ＣＨ２、ＣＨ２ＣＯ、ＣＯＣＨ２、Ｓ、ＯもしくはＮＨであり、
Ｙは芳香族炭素環式基、ベンジル、芳香族ヘテロ環式基、４〜７員シクロアルキル基、４〜７員シクロアルケニル基、１個または２個の窒素原子を含む５〜７員飽和ヘテロ環式基または５員または６員飽和環式基との縮合環を形成し、かつ１個または２個の窒素原子を含む５〜７員飽和ヘテロ環式基であり、これらの基は全て場合によりハロゲン原子、Ｃ１−６アルキル、１〜６個のハロゲン原子を含むＣ１−６ハロアルキル、１〜６個のハロゲン原子を含むＣ１−６ハロアルキルオキシ、１〜６個のハロゲン原子を含むＣ１−６ハロアルキルチオ、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルチオ、Ｃ１−４アルキレンジオキシ、カルボキシル、Ｃ１−６アルコキシカルボニル、オキソ、アミノ、ニトロおよびフェニルから選択される１〜３個の置換基を含んでよく、
ＺはＳまたはＯであり、そして
ｎは０または１〜４の整数である〕
およびその薬学的に許容される塩に対応するものである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
化合物が表Ｂの化合物である、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
化合物が表Ｃの化合物である、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
哺乳動物が心不全に罹患しているまたは罹患していた、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
心不全に罹患しているまたは罹患していた哺乳動物が心不全処置のために選択され、選択された哺乳動物に化合物が投与される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
哺乳動物が低心拍出量および／または低一回拍出量を有するうっ血性心不全障害を示すと特定される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
哺乳動物がうっ血性心不全に罹患していた、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
哺乳動物が心原性ショックに罹患していた、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
哺乳動物がヒトである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
化合物が１以上のアンギオテンシン−変換酵素(ＡＣＥ)阻害剤；アンギオテンシンＩＩ受容体ブロッカーまたは阻害剤；アンギオテンシン受容体ネプリライシン阻害剤(ＡＲＮＩ；ベータブロッカー；アルドステロンアンタゴニスト；利尿剤；抗凝血剤(血液希釈剤)；および／またはコレステロール低下剤と共投与される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
１)１以上の次の化合物
【化４】
2019521192.tif 000022
【化５】
2019521192.tif 000023
またはその薬学的に許容される塩および２)心不全を処置するための化合物の使用についての指示書を含む、キット。
【請求項１５】
１)１以上のチエノピリミジン化合物およびその薬学的に許容される塩ならびに２)心不全を処置するための化合物の使用についての指示書を含む、キット。
【請求項１６】
１)１以上の表Ｂの化合物およびその薬学的に許容される塩ならびに２)心不全を処置するための化合物の使用についての指示書を含む、キット。
【請求項１７】
１)１以上の表Ｃの化合物およびその薬学的に許容される塩ならびに２)心不全を処置するための化合物の使用についての指示書を含む、キット。
【請求項１８】
１)１以上の次の化合物
化合物が次の式(Ｉ)：
【化６】
2019521192.tif 000024
〔式中、
Ｒ１は水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシＣ１−６アルキルまたは１〜６個のハロゲン原子を含むＣ１−６ハロアルキルであり、
Ｒ２は水素、Ｃ１−６アルキル、フェニルＣ１−６アルキルまたはアミノであり、
Ｒ３はＣ２−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、カルバモイルＣ１−６アルキル、アミノＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルアミノＣ１−６アルキル、ジ(Ｃ１−６アルキル)アミノＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルチオまたはＹ−Ｘ基であるか、
Ｒ２およびＲ３は一体となってテトラメチレンを形成してよく、
Ｘは化学結合またはＣＨ２、ＣＨ(ＯＨ)、ＣＨ(Ｃ６Ｈ５)、ＣＯ、ＣＨ２ＣＨ２、ＣＨ２ＣＯ、ＣＯＣＨ２、Ｓ、ＯもしくはＮＨであり、
Ｙは芳香族炭素環式基、ベンジル、芳香族ヘテロ環式基、４〜７員シクロアルキル基、４〜７員シクロアルケニル基、１個または２個の窒素原子を含む５〜７員飽和ヘテロ環式基または５員または６員飽和環式基との縮合環を形成し、かつ１個または２個の窒素原子を含む５〜７員飽和ヘテロ環式基であり、これらの基は全て場合によりハロゲン原子、Ｃ１−６アルキル、１〜６個のハロゲン原子を含むＣ１−６ハロアルキル、１〜６個のハロゲン原子を含むＣ１−６ハロアルキルオキシ、１〜６個のハロゲン原子を含むＣ１−６ハロアルキルチオ、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルチオ、Ｃ１−４アルキレンジオキシ、カルボキシル、Ｃ１−６アルコキシカルボニル、オキソ、アミノ、ニトロおよびフェニルから選択される１〜３個の置換基を含んでよく、
ＺはＳまたはＯであり、そして
ｎは０または１〜４の整数である〕
およびその薬学的に許容される塩ならびに２)心不全を処置するための化合物の使用についての指示書を含む、キット。
【請求項１９】
１)１以上の次の化合物：
２−(３，４−ジクロロベンジル)−５−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロチエノ[２，３−ｄ]ピリミジン−６−カルボン酸；
２−(３−クロロベンジル)−５−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロチエノ[２，３−ｄ]ピリミジン−６−カルボン酸；
５−メチル−４−オキソ−２−(３−トリフルオロメチルベンジル)−３，４−ジヒドロチエノ[２，３−ｄ]ピリミジン−６−カルボン酸；
２−(３−クロロ−４−フルオロベンジル)−５−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロチエノ[２，３−ｄ]ピリミジン−６−カルボン酸；
２−(５−クロロ−２−フルオロベンジル)−５−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロチエノ[２，３−ｄ]ピリミジン−６−カルボン酸；
２−(シクロペント−１−エニルメチル)−５−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロチエノ[２，３−ｄ]ピリミジン−６−カルボン酸；
４−オキソ−２−(チオフェン−２−イルメチル)−３，４−ジヒドロチエノ[２，３−ｄ]ピリミジン−６−カルボン酸；
２−ベンジル−４−オキソ−３，４−ジヒドロチエノ[２，３−ｄ]ピリミジン−６−カルボン酸；
２−(３−クロロベンジル)−４−オキソ−３，４−ジヒドロチエノ[２，３−ｄ]ピリミジン−６−カルボン酸；および
４−オキソ−２−(３−トリフルオロメチルベンジル)−３，４−ジヒドロチエノ−[２，３−ｄ]ピリミジン−６−カルボン酸
またはその薬学的に許容される塩ならびに２)心不全を処置するための化合物の使用についての指示書を含む、キット。
【請求項２０】
指示書が添付文書または包装ラベルである、請求項１４〜１９のいずれか一項に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は２０１６年７月７日に出願された米国仮出願番号第６２／３５９，６９５の優先権の利益を主張するものであり、その全体を参照により本明細書に包含させる。
【０００２】
分野
本発明は心不全を処置または予防するための１以上のチエノピリミジン化合物の使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
心不全は世界中で３８００万人に影響を与える世界的規模の問題である。心不全は６５歳以上の入院患者における最も一般的な診断結果であり、米国で６００万人以上が罹患している。心不全の５年生存率は、多くの癌の５年生存率より低く、米国における心不全の年間経費は３００億米ドルを超えると推定されている(２０１５、Ｂｒａｕｎｗａｌｄ、Ｌａｎｃｅｔ；３８５：８１２−２４)。
【０００４】
米国において、年間約１００万の心不全の入院がある。米国における約５７０万人の成人が心不全を有し、心不全を発症する約半数の人々は診断から５年以内に死亡する(heart failure fact sheet, Center for Disease Control, http://www.cdc.gov/dhdsp/data_statistics/fact_sheets/fs_heart_failure.htm)。
【０００５】
収縮期ＨＦとしても知られている駆出率が低下した心不全(ＨＦｒＥＦ)において、心筋は十分に収縮することができず、従って、循環に酸素豊富な血液を少量しか押し出さない。この形態の疾患を有する患者は心エコー図において正常より低い左室駆出率を有する。保持された駆出率を有する心不全(ＨＦｐＥＦ)は現在何の治療法もない第２型の心不全であり、従って、特に問題である。ＨＦｐＥＦは全ての心不全症例の少なくとも半分を構成する。運動不耐性、肺うっ血および疲労が顕著なＨＦｐＥＦ症状であり、乏しいライフクオリティをもたらす。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
従って、両形態の心不全の処置のための新たな治療法を有することが望ましい。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
我々は、心不全の処置のための新たな治療法を提供する。
【０００８】
ある態様において、本発明の方法は哺乳動物、例えば心不全に罹患しているまたはそれに罹患しやすい哺乳動物にチエノピリミジン化合物を投与することを含む。
【０００９】
さらなる態様において、本発明の方法は哺乳動物に有効量の１以上のチエノピリミジン化合物、例えば１以上の次の式(Ｉ)：
【化１】
2019521192.tif 000003
〔式中、
Ｒ１は水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシＣ１−６アルキルまたは１〜６個のハロゲン原子を含むＣ１−６ハロアルキルであり、
Ｒ２は水素、Ｃ１−６アルキル、フェニルＣ１−６アルキルまたはアミノであり、
Ｒ３はＣ２−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、カルバモイルＣ１−６アルキル、アミノＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルアミノＣ１−６アルキル、ジ(Ｃ１−６アルキル)アミノＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルチオまたはＹ−Ｘ基であるか、または
Ｒ２およびＲ３は一体となってテトラメチレンを形成してよく、
Ｘは化学結合、またはＣＨ２、ＣＨ(ＯＨ)、ＣＨ(Ｃ６Ｈ５)、ＣＯ、ＣＨ２ＣＨ２、ＣＨ２ＣＯ、ＣＯＣＨ２、Ｓ、ＯまたはＮＨであり、そして
Ｙは芳香族炭素環式基、ベンジル、芳香族ヘテロ環式基、４〜７員シクロアルキル基、４〜７員シクロアルケニル基、１個または２個の窒素原子を含む５〜７員飽和ヘテロ環式基、または５員または６員飽和環式基と縮合環を形成し、１個または２個の窒素原子を含む５〜７員飽和ヘテロ環式基であり、これらの基は全て場合によりハロゲン原子、Ｃ１−６アルキル、１〜６個のハロゲン原子を含むＣ１−６ハロアルキル、１〜６個のハロゲン原子を含むＣ１−６ハロアルキルオキシ、１〜６個のハロゲン原子を含むＣ１−６ハロアルキルチオ、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルチオ、Ｃ１−４アルキレンジオキシ、カルボキシル、Ｃ１−６アルコキシカルボニル、オキソ、アミノ、ニトロおよびフェニルから選択される１〜３個の置換基を含んでよく、
ＺはＳまたはＯであり、
ｎは０または１〜４の整数である〕
の化合物およびその薬学的に許容される塩を投与することを含む。
【００１０】
特定の好ましい態様において、Ｚは酸素である。さらなる態様において、Ｚは好ましくはＳである。特定の態様において、Ｒ３はフルオロまたはクロロで置換されたベンジルおよびフェニルを含むハロゲン置換されたフェニルまたはベンジルを含む、フェニルまたはベンジルのような芳香族基を含む。数値ｎは好ましくは０または１である。Ｒ１は好ましくは水素またはメチルのようなＣ１−６アルキルである。
【００１１】
特定の態様において、投与される化合物またはキットの化合物は下表Ａに示される次の化合物の１以上またはこのような１以上の化合物の薬学的に許容される塩である。本明細書で言及される「表Ａの化合物」は、下表Ａに示されるいずれかの化合物をいう。
【表１−１】
2019521192.tif 000004
【表１−２】
2019521192.tif 000005
【００１２】
特定のさらなる態様において、投与される化合物またはキットの化合物は１以上の次の化合物、または１以上の次の化合物の薬学的に許容される塩である：
２−(３，４−ジクロロベンジル)−５−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロチエノ[２，３−ｄ]ピリミジン−６−カルボン酸；
２−(３−クロロベンジル)−５−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロチエノ[２，３−ｄ]ピリミジン−６−カルボン酸；
５−メチル−４−オキソ−２−(３−トリフルオロメチルベンジル)−３，４−ジヒドロチエノ[２，３−ｄ]ピリミジン−６−カルボン酸；
２−(３−クロロ−４−フルオロベンジル)−５−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロチエノ[２，３−ｄ]ピリミジン−６−カルボン酸；
２−(５−クロロ−２−フルオロベンジル)−５−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロチエノ[２，３−ｄ]ピリミジン−６−カルボン酸；
２−(シクロペント−１−エニルメチル)−５−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロチエノ[２，３−ｄ]ピリミジン−６−カルボン酸；
４−オキソ−２−(チオフェン−２−イルメチル)−３，４−ジヒドロチエノ[２，３−ｄ]ピリミジン−６−カルボン酸；
２−ベンジル−４−オキソ−３，４−ジヒドロチエノ[２，３−ｄ]ピリミジン−６−カルボン酸；
２−(３−クロロベンジル)−４−オキソ−３，４−ジヒドロチエノ[２，３−ｄ]ピリミジン−６−カルボン酸；および
４−オキソ−２−(３−トリフルオロメチルベンジル)−３，４−ジヒドロチエノ−[２，３−ｄ]ピリミジン−６−カルボン酸。
【００１３】
さらなる特定の態様において、投与される化合物またはキットの化合物は下の表Ｂに示される１以上の後記化合物またはこのような１以上の化合物の薬学的に許容される塩である。
【００１４】
さらなる特定の態様において、投与される化合物またはキットの化合物は下の表Ｃに示される１以上の後記化合物またはこのような１以上の化合物の薬学的に許容される塩である。
【００１５】
特定の態様において、処置される哺乳動物は心不全に罹患している、または心不全に罹患していた。哺乳動物はまた、うっ血性心不全に罹患している、またはうっ血性心不全に罹患していた。哺乳動物はまた、心原性ショックに罹患している、または心原性ショックに罹患していた。
【００１６】
特定の実施態様において、処置される哺乳動物は心肥大、保持された駆出率を有する心不全(ＨｆｐＥＦ)、駆出率が低下した心不全(ＨＦｒＥＦ)(低下した収縮機能)、低下した拡張機能、非適応性心肥大、収縮機能が保持された心不全、拡張期心不全、高血圧性心疾患、大動脈狭窄、肥大型心筋症および／または術後虚血性心臓リモデリングに罹患している、または罹患しやすい。
【００１７】
好ましい態様において、心不全に罹患しているまたは心不全に罹患していた哺乳動物を心不全処置のために選択し、本明細書に開示される化合物を選択した哺乳動物に投与する。哺乳動物は低心拍出量および／または低一回拍出量を有するうっ血性心不全障害を示すと特定され得る。
【００１８】
好ましい態様において、処置される哺乳動物はヒトである。
【００１９】
チエノピリミジン化合物は、心不全を処置するために異なる１以上の他の薬剤と併用して適切に投与され得る。
【００２０】
適切には心不全を処置するための本明細書に開示されるチエノピリミジン化合物およびチエノピリミジン化合物の使用についての指示書を含み得るキットもまた、提供される。指示書は一般的に、例えば添付文書または製品ラベルとして提示されるような書面形式である。
【００２１】
本明細書に開示されるチエノピリミジン化合物の使用は、対照(本明細書に開示されるチエノピリミジン化合物を用いた処置前の対象からの血液または尿サンプル)と比較した対象の血液または尿サンプルにおけるサイクリックＧＭＰ測定レベルの増加、例えば２０％、３０％、４０％、５０％、８０％または１００％またはそれ以上のサイクリックＧＭＰ測定値の増加を提供する。
【００２２】
本発明の他の態様は、以下に開示される。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】図１Ａはマウス実験群からの脛骨長に対して標準化されたＬＶ重量を示し；図１Ｂはマウス実験群からの脛骨長に対して標準化されたＨＷ重量を示し；図１Ｃはマウス実験群からの脛骨長に対して標準化されたＲＶ重量を示し；図１Ｄはマウス実験群からの脛骨長に対して標準化された心房重量を示し；そして図１Ｅはマウス実験群からの脛骨長に対して標準化された肺重量を示す。
【図２】図２Ａはマウス実験群からの後壁の厚さを示し、図２Ｂはマウス実験群からの前壁の厚さを示す。
【図３】図３Ａはマウス実験群から測定したＬＶ拡張終期径(ＥＤＤ)を示し；図３Ｂはマウス実験群から測定したＬＶ収縮終期径(ＥＳＤ)を示し；図３Ｃはマウス実験群について計算されたＬＶ内径短縮率(ＦＳ)を示し；そして図３Ｄはマウス実験群から測定したＬＶ駆出率を示す。
【図４】図４Ａはマウス実験群からの心エコー検査から計算されたＬＶ重量を示し；図４Ｂはマウス実験群からの心エコー検査から計算された生ＬＶ重量を示し；そして図４Ｃは計算されたＬＶ重量および未処理ＬＶ重量の比較を示す。
【図５】図５Ａは０〜１４日までのマウス実験群からの心エコー検査により計算されたＬＶ重量を示し、図５Ｂは０〜１４日までのマウス実験群から計算されたおよび未処理ＬＶ重量の間の相関を示す。
【図６】図６Ａは０〜１４日までのマウス実験群からの心エコー検査により測定した後壁の厚さを示し；そして図６Ｂは０〜１４日までのマウス実験群からの心エコー検査により測定した前壁の厚さを示す。
【図７】図７Ａは０〜１４日までのマウス実験群に由来するＬＶ拡張終期径を示し；そして図７Ｂは０〜１４日までのマウス実験群に由来するＬＶ収縮終期径を示す。
【図８】図８Ａは０〜１４日までのマウス実験群に由来するＬＶ内径短縮率を示し；そして図８Ｂは０〜１４日までのマウス実験群に由来するＬＶ駆出率を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
詳細な説明
好ましい本発明の化合物は、インビトロアッセイにより決定されるホスホジエステラーゼ９(ＰＤＥ９)の強力な阻害剤であり得る。
【００２５】
好ましいチエノピリミジンは、場合により置換されていてよいチエノ[２，３−ｄ]ピリミジン化合物を含む。
【００２６】
本願において、「Ｃ１−６」、「Ｃ１−４」および「Ｃ２−６」は、これらの表現が付された基の炭素数が、それぞれ示される数字の範囲内であることを示す。
【００２７】
「Ｃ１−６アルキル」は直鎖または分岐鎖であり得て、その例はメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチルおよびｎ−ヘキシルを含む。これらの中では、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピルおよびｎ−ブチルが好ましい。「Ｃ２−６アルキル」もまた、メチルを除く上で定義されるＣ１−６アルキルに関して定義されるそれらの基を包含し、それらの中ではエチル、ｎ−プロピル、イソプロピルおよびｎ−ブチルが好ましい。
【００２８】
「Ｃ２−６アルケニル」は、任意の位置に１つまたは複数の二重結合を有し得て、かつ直鎖または分岐鎖であり得て、具体的な例はビニル、アリル、イソプロペニル、１−ブテニル、２−ブテニル、３−ブテニル、１，３−ブタジエニル、２−メチルアリル、１−ペンテニルおよび１−ヘキセニルを含み、それらの中ではビニル、アリルおよびイソプロペニルが好ましい。
【００２９】
「Ｃ１−６アルコキシ」はＣ１−６アルキルで置換されたオキシ(Ｏ)基であり、具体的な例はメトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ｎ−ペンチルオキシおよびｎ−ヘキシルオキシを含む。それらの中では、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシおよびｎ−ブトキシが好ましい。
【００３０】
「Ｃ１−６アルキルチオ」はＣ１−６アルキルで置換されたチオ(Ｓ)基であり、具体的な例はメチルチオ、エチルチオ、ｎ−プロピルチオ、イソプロピルチオ、ｎ−ブチルチオ、イソブチルチオ、ｓｅｃ−ブチルチオ、ｔｅｒｔ−ブチルチオ、ｎ−ペンチルチオおよびｎ−ヘキシルチオを含む。それらの中では、メチルチオ、エチルチオ、ｎ−プロピルチオ、イソプロピルチオおよびｎ−ブチルチオが好ましい。
【００３１】
「Ｃ１−４アルキレンジオキシ」は例えば、メチレンジオキシ、エチレンジオキシ、プロピレンジオキシおよびテトラメチレンジオキシを含む。それらの中では、メチレンジオキシおよびエチレンジオキシが好ましい。
【００３２】
「４〜７員シクロアルキル」シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルおよびシクロヘプチルを含む。それらの中では、シクロペンチルおよびシクロヘキシルが好ましい。
【００３３】
「ハロゲン原子」はフッ素、塩素、臭素およびヨウ素を含み、フッ素、塩素および臭素が特に好ましい。
【００３４】
「１〜６個のハロゲン原子を含むＣ１−６ハロアルキル」は、同一または異なる１〜６個のハロゲン原子で置換された上記定義に従うＣ１−６アルキルを示し、具体的な例はフルオロメチル、トリフルオロメチル、１，２−ジクロロエチル、１−クロロ−２−ブロモエチル、ペンタフルオロエチル、１−クロロ−ｎ−プロピル、２−ブロモ−２−メチルエチル、３−クロロ−ｎ−ペンチルおよび２−ブロモ−３−クロロ−ｎ−ヘキシルを含む。それらの中では、同一または異なる１〜５個のハロゲン原子で置換されたＣ１−２アルキルが好ましい。
【００３５】
また、「１〜６個のハロゲン原子を含むＣ１−６ハロアルキルオキシ」は上の「１〜６個のハロゲン原子を含むＣ１−６ハロアルキル」で置換されたオキシ(Ｏ)基を示し、「１〜６個のハロゲン原子を含むＣ１−６ハロアルキルチオ」は、「１〜６個のハロゲン原子を含むＣ１−６ハロアルキル」で置換されたチオ(Ｓ)基を示す。
【００３６】
式(Ｉ)におけるＲ１の定義における「Ｃ１−６アルコキシＣ１−６アルキル」は、上記定義に従うＣ１−６アルコキシで置換されたＣ１−６アルキルを示し、具体的な例はメトキシメチル、メトキシエチル、メトキシ−ｎ−プロピル、メトキシ−ｎ−ブチル、メトキシ−ｎ−ヘキシル、エトキシメチル、イソプロポキシメチル、エトキシエチルおよびｎ−ブトキシ−ｎ−プロピルを含む。それらの中では、メトキシメチル、メトキシエチル、エトキシメチルおよびエトキシエチルが好ましい。
【００３７】
式(Ｉ)のＲ２の定義における「フェニルＣ１−６アルキル」は、フェニルで置換された上記定義に従うＣ１−６アルキルを示し；「カルバモイルＣ１−６アルキル」は、カルバモイル(−ＣＯＮＨ２)で置換された上記定義に従うＣ１−６アルキルを示し；「アミノＣ１−６アルキル」は、アミノ(−ＮＨ２)で置換された上記定義に従うＣ１−６アルキルを示す。
【００３８】
式(Ｉ)のＲ３の定義における「Ｃ１−６アルキルアミノＣ１−６アルキル」は、アミノ基が２つの上記定義に従うＣ１−６アルキル基でさらに置換された上のアミノＣ１−６アルキルを示し；「ジ(Ｃ１−６アルキル)アミノＣ１−６アルキル」は、アミノ基が２つの上記定義に従うＣ１−６アルキル基でさらに置換されることを除いて、上と同義である。ジ(Ｃ１−６アルキル)アミノＣ１−６アルキルにおいてアミノ基を置換する２つのＣ１−６アルキルは同一であっても異なってもよい。
【００３９】
式(Ｉ)のＲ３の定義における「Ｃ１−６アルキルチオ」は、上記定義に従うＣ１−６アルキル基で置換されたチオ(Ｓ)基を示し、式(Ｉ)のＹの定義における「Ｃ１−６アルコキシカルボニル」は、上記定義に従うＣ１−６アルコキシ基で置換されたカルボニル(ＣＯ)を示す。
【００４０】
Ｙの定義における「芳香族炭素環式基」はＣ６−２０芳香族炭素環式基を包含し、具体的な例はフェニル、１−インデニル、１−ナフチル、２−ナフチル、２−アントリルおよび１−アセナフテニルを含む。それらの中では、フェニルおよび１−ナフチルが好ましい。
【００４１】
Ｙの定義における「芳香族ヘテロ環式基」は、１つの環が５員または６員であるＮ、ＯおよびＳから選択される１個または２個のヘテロ原子を含む単環式または多環式芳香族ヘテロ環式化合物を含む。具体的な例はピロリル、フリル、チエニル、イミダゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、インドリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンズチアゾリル、キノリル、イソキノリルおよびキナゾリルを含む。それらの中では、単環式芳香族ヘテロ環式基が好ましい。
【００４２】
Ｙの定義における「４〜７員シクロアルケニル」として、例えば、１−シクロブテニル、１−シクロペンテニル、１−シクロヘキセニル、１−シクロヘプテニル、２−シクロブテニル、２−シクロペンテニルおよび３−シクロヘキセニルが指定され得る。それらの中では、１−シクロヘキセニルおよび２−シクロヘキセニルが好ましい。
【００４３】
Ｙの定義における「１個または２個の窒素原子を含む５〜７員飽和ヘテロ環式基」として、例えば、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニルおよびアゼピニルが指定され得る。それらの中では、ピペリジニルおよびピペラジニルが好ましい。
【００４４】
Ｙの定義における「５員または６員飽和環式基と縮合環を形成し、１個または２個の窒素原子を含む５〜７員飽和ヘテロ環式基」として、例えば、ヘキサヒドロシクロペンタ[ｂ]ピロリル、ヘキサヒドロシクロペンタ[ｃ]ピロリル、オクタヒドロシクロペンタ[ｂ]ピリジル、オクタヒドロシクロペンタ[ｂ]ピリジル、デカヒドロシクロペンタ[ｂ]アゼピニル、オクタヒドロインドリル、オクタヒドロイソインドリル、デカヒドロキノリル、デカヒドロイソキノリル、ドデカヒドロベンゾ[ｂ]アゼピニル、オクタヒドロピロロ[２，３−ｄ]ピリジル、オクタヒドロピロロ[１，２−ａ]ピラジル、オクタヒドロピリド[１，２−ａ]ピリミジニル、デカヒドロフタラジニル、デカヒドロナフチリジニルおよびデカヒドロキナゾリニルが好ましい。
【００４５】
具体的に、本発明の方法およびキットにおける使用について好ましい化合物は、下表Ｂに示される次の化合物およびこのような化合物の薬学的に許容される塩を含む。本明細書で言及される「表Ｂの化合物」は、下表Ｂに示されるいずれかの化合物をいう。
【表２−１】
2019521192.tif 000006
【００４６】
【表２−２】
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【００４７】
【表２−３】
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【００４８】
【表２−４】
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【００４９】
【表２−５】
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【００５０】
【表２−６】
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【００５１】
【表２−７】
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【００５２】
【表２−８】
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【００５３】
【表２−９】
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【００５４】
本発明の方法およびキットにおける使用のためのさらなる好ましい化合物は、次のものおよびこのような化合物の薬学的に供される塩である。次の化合物およびその薬学的に許容される塩は本明細書において表Ｃの化合物と称される。
【表３−１】
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【表３−２】
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【表３−３】
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【００５５】
本発明の方法およびキットにおける使用のためのチエノピリミジン化合物は、Gotandaらの米国特許第８，２９３，７５４号に開示される既知の方法により合成され得る。チエノピリミジンは、親チオフェン環におけるピリミジン核の環化または親ピリミジン環におけるチオフェン核の環化により合成され得る。Abdel-Megidら、J. Pharm. Appl Chem., 2, No. 3, 103-127 (2016)を参照。
【００５６】
本明細書に記載の１以上のチエノピリミジン化合物を投与される対象は、適切には哺乳動物または特にヒトである。いくつかの実施態様において、心不全を処置する方法は、急性心原性ショックのうっ血性心不全に罹患しているまたはそれに罹患しやすい対象を含む、心不全に罹患しているまたはそれに罹患しやすい対象をさらに含む。
【００５７】
さらなる実施態様において、心不全を処置する方法は、心肥大、保持された駆出率を有する心不全(ＨｆｐＥＦ)、駆出率が低下した心不全(ＨＦｒＥＦ)(低下した収縮機能)、低下した拡張機能、非適応性心肥大、収縮機能が保持された心不全、拡張期心不全、高血圧性心疾患、大動脈狭窄、肥大型心筋症、および／または術後虚血性心臓リモデリングに罹患している、または罹患しやすい対象を選択する段階をさらに含む。
【００５８】
いくつかの実施態様において、本明細書に開示される１以上のチエノピリミジン化合物は１以上のさらなる異なる心不全治療剤と組み合わせて投与され得る。共投与のための例は、カプトプリル(Ｃａｐｏｔｅｎ)、エナラプリル(Ｖａｓｏｔｅｃ)、フォシノプリル(Ｍｏｎｏｐｒｉｌ)、リシノプリル(Ｐｒｉｎｉｖｉｌ、Ｚｅｓｔｒｉｌ)、ペリンドプリル(Ａｃｅｏｎ)、キナプリル(Ａｃｃｕｐｒｉｌ)、ラミプリル(Ａｌｔａｃｅ)およびトランドラプリル(Ｍａｖｉｋ)のようなアンギオテンシン変換酵素(ＡＣＥ)阻害剤；カンデサルタン(Ａｔａｃａｎｄ)、ロサルタン(Ｃｏｚａａｒ)、およびバルサルタン(Ｄｉｏｖａｎ)のようなアンギオテンシンＩＩ受容体ブロッカー(または阻害剤)；ネプリライシン阻害剤単剤またはサクビトリル／バルサルタン(Ｅｎｔｒｅｓｔｏ)のようなアンギオテンシン受容体ネプリライシン阻害剤(ＡＲＮＩｓ)合剤、イバブラジン(Ｃｏｒｌａｎｏｒ)のようなＩｆチャネルブロッカー(または阻害剤)との組合せのような組み合わせ；ビソプロロール(Ｚｅｂｅｔａ)、メトプロロールスクシネート(Ｔｏｐｒｏｌ  ＸＬ)、カルベジロール(Ｃｏｒｅｇ)およびカルベジロールＣＲ(Ｃｏｒｅｇ  ＣＲ)Ｔｏｐｒｏｌ  ＸＬのようなベータブロッカー；スピロノラクトン(Ａｌｄａｃｔｏｎｅ)およびエプレレノン(Ｉｎｓｐｒａ)のようなアルドステロンアンタゴニスト；ヒドララジンおよび二硝酸イソソルビド；フロセミド(Ｌａｓｉｘ)、ブメタニド(Ｂｕｍｅｘ)、トルセミド(Ｄｅｍａｄｅｘ)、クロロチアジド(Ｄｉｕｒｉｌ)、アミロライド(Ｍｉｄａｍｏｒ)、クロルタリドン(Ｈｙｇｒｏｔｏｎ)、ヒドロクロロチアジド(Ｅｓｉｄｒｉｘ、Ｈｙｄｒｏｄｉｕｒｉｌ)、インダパミド(Ｌｏｚｏｌ)、メトラゾン(Ｚａｒｏｘｏｌｙｎ)およびトリアムテレン(Ｄｙｒｅｎｉｕｍ)のような利尿剤；抗凝血剤(血液希釈剤)；および／またはコレステロール低下剤(スタチン)を含む。
【００５９】
本明細書に開示されるチエノピリミジン化合物の治療有効用量は極めて広範に異なることがあり、十分なレベルの活性薬剤を提供するためにまたは所望の効果を維持するために調整または選択され得る。考慮される因子は、疾患状態の重篤度、対象の一般的な健康、対象の年齢、体重および性別、食事、投与の時間および回数、薬剤の組合せ、反応感度ならびに治療への耐容性／応答を含む。適切な有効量は１日あたり０.０１〜５または１０ｍｇ／ｋｇの範囲であり得るが、そのような範囲外の用量もまた、適宜使用され得る。
【００６０】
治療的有効用量の化合物は、多様な投与経路により対象に投与され得る。経口または局所投与が一般的に好ましいが、非経腸、舌下または埋め込み型リザーバーのような他の投与プロトコルもまた、使用され得る。いくつかの実施態様において、化合物は投与の目的のためにカプセル剤、錠剤、ゲル剤、粉剤、液剤、懸濁剤またはエマルジョン剤に製剤され得る。
【００６１】
上記のように、治療組成物はまた、場合により薬学的に許容される担体と共に１以上の本明細書に開示される化合物を含む。
【００６２】
本明細書で使用される用語「薬学的に許容される担体」は、本発明において有用な化合物が意図した機能を発揮できるように、それを対象の体内にまたは対象に運搬または輸送することに関与する薬学的に許容される物質、組成物または担体、例えば液体もしくは固形増量剤、安定剤、分散剤、懸濁化剤、希釈剤、賦形剤、濃化剤、溶媒または封入物質を意味する。一般的に、このような構築物はある臓器または身体の一部から別の臓器または身体の別の一部へ運搬または輸送される。各担体は、本発明において有用な化合物を含めて、製剤の他の成分と適合するという意味において「許容される」ものでなければならず、対象にとって有害なものであってはならない。薬学的に許容される担体の役割を果たし得る物質のいくつかの例は、ラクトース、グルコースおよびスクロースのような糖；コーンスターチおよびジャガイモデンプンのようなデンプン；セルロースおよびその誘導体、例えばナトリウムカルボキシメチルセルロース、エチルセルロースおよびセルロースアセテート；粉末トラガカント；麦芽；ゼラチン；タルク；カカオバターおよび坐剤用ワックスのような賦形剤；ピーナツ油、綿実油、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油およびダイズ油のような油；プロピレングリコールのようなグリコール；グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコールのようなポリオール；オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチルのようなエステル；寒天；水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムのような緩衝剤；界面活性剤；アルギン酸；発熱性物質除去水；等張食塩水；リンガー溶液；エチルアルコール；リン酸緩衝溶液；医薬製剤において使用される他の非毒性適合物質を含む。
【００６３】
ある好ましい態様において、化合物は投与の目的のためにカプセル剤、錠剤、ゲル剤、散剤、液剤、懸濁剤またはエマルジョン剤に製剤され得る；しかしながら、投与方法は特に限定されなくてもよい。
【００６４】
いくつかの実施態様において、治療有効用量の化合物は、経口、非経腸、口腔、舌下または埋め込み型リザーバー経由で投与され得る。
【００６５】
化合物は投与のための指示書が添付されたキット、容器、小包またはディスペンサーを含む。例えば、キットは心不全の予防を含む処置のための組成物の使用を開示する製品ラベルまたは添付文書を含み得る。
【００６６】
以下の非限定的な実施例は、本発明を説明する。
【００６７】
実施例１
本実施例は、ＰＤＥ９阻害剤(ＰＤＥ９ｉ)が心不全の標準的なマウス心血管モデルを使用して心不全の心血管症候群の前臨床モデルにおいて有益な効果を有するかどうかを示し得る。当該アプローチはマウス大動脈縮窄術(ＴＡＣ)モデルにおける予め確立された心筋肥大に対するＰＤＥ９ｉの効果を試験することを含む。試験された仮説は、心不全のモデルにおいてＰＤＥ９ｉは心不全および血行動態機能不全の発症および程度を予防および／または阻害するというものである。
【００６８】
本試験は、１)２０００ｍｇ／ｋｇ／日、または２２０〜２５０μＬの溶媒(１０ｍＬ／ｋｇ／用量を超えない体積と同量)に希釈できる最大用量の試験薬剤の経口胃管栄養投与の安全性を試験するために；および２)心臓、他の全身組織および所望ならばｃＧＭＰの測定を可能にする血液を保存または貯蔵するために実施される。
【００６９】
０日目に、マウスを試験薬剤またはビークルに対して無作為化する。マウスはそれぞれ、２０００ｍｇ／ｋｇ／日の投与を目標として、理想的には２４時間毎、あるいは１２時間毎に薬剤を投与される。正常な食餌摂取を確保するために、苦痛の徴候および１日の体重について、１日２回マウスをモニタリングする。身体状態スコアについてもまた、マウスをモニタリングする。７日目に、マウスを吸入性イソフルラン(３．５％)で麻酔する。血液(１ｍＬ)および心臓を採り、−８０℃で保存する。腎臓、肝臓、肺および脾臓を含む他の標的臓器もまた、摘出し、冷凍する。臓器の小部分を分離し、所望ならば組織の組織学的試験を将来的に可能にするために、１０％ホルマリン中で保存する。
【００７０】
試験群(マウス実験群)は次のとおりに処置される。
１)ビークル(１０ｍＬ／ｋｇ)；ｎ＝６
２)ＡＳＰ４９０１(１０ｍＬ／ｋｇの体積中２０００ｍｇ／ｋｇ)；ｎ＝６
【００７１】
実施例２
横行大動脈(大動脈縮窄術、ＴＡＣ)周囲に縫合糸を外科的に配置することにより、圧負荷をかける。これらのＰＤＥ９ｉ試験について、大きさ、年齢および性別が適合した(雄性)Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスを無作為化し、ビークルのみまたはＰＤＥ９ｉ(２０００ｍｇ／ｋｇ用量で開始)を与える。
【００７２】
これらの慢性的な薬剤処置試験について、定常状態レベルのＰＤＥ９ｉを確立するために、動物を無作為化し、−７日目に経口胃管栄養法によりビークルまたはＰＤＥ９ｉを毎日与える。
【００７３】
０日目に、マウスは２つの方法：擬似手術またはＴＡＣの１つを受け、表１に示すこれら４つの実験群をもたらす。
【表４】
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【００７４】
全１０匹の８〜１０週齢の雄性Ｃ５７／ＢＬ６マウス(体重２２〜２５ｇ)各擬似群において使用する。２８日目までの予測ＴＡＣマウス生存が１０〜１５匹に達するように、全２０匹の８〜１０週齢の雄性Ｃ５７／ＢＬ６マウス(体重２２〜２５ｇ)を各ＴＡＣ群において使用する。この長期試験において各群で生存する動物(上で説明のとおり)を、薬剤無作為化の日(−７日目)、手術日(０日目)および最終摘出日(２８日目)に心エコー検査し、続いて血行動態の侵襲的な検査を行い、試験の最後に屠殺する。
【００７５】
最終血行動態試験の後、組織分析のためにマウスを屠殺する。最終血行動態試験の後、組織学的試験を実施する。有効なシグナルが得られたならば、ＰＤＥ９ｉの遊離結晶濃度および潜在的なバイオマーカーを決定するために血漿アリコートを保存し、冷凍する。
【００７６】
全てのこれらの試験について、インビボ分析および解剖心筋分析を、実験群を盲検化した調査員により実施する。ＴＡＣマウスにおいて、分析は左心室(ＬＶ)圧における予測された増加を示すマウスに限定される(採取時に＞２０ｍｍＨｇ水銀ＴＡＣ勾配)。
【００７７】
エンドポイント：圧負荷誘発性心不全の後の死亡率および心機能に対する慢性的ＰＤＥ９ｉ処置の効果を、心臓血行動態機能および体圧の標準的なパネルを用いて全ての動物において評価する。ＰＤＥ９ｉ処置群、擬似手術群における測定は、ＴＡＣからの圧負荷の非存在下においてＰＤＥ９ｉが心血管機能に対して何らかの独立性(薬剤誘発性)効果を有するかを調査するために使用される。
【００７８】
動物ＴＡＣを以下の引用文献１およびその中の引用文献に記載のとおり実施する。全ての方法は、２．０％〜２．５％イソフルランを用いた一般的な麻酔下で実施する。擬似およびＴＡＣ手術については、マウスを麻酔し、挿管し、小動物呼吸器を用いて酸素を供給する(Harvard Rodent Ventilator, Model 683, Natick, MA)。左開胸術を実施する。２７ゲージの針に対して、７−０ポリプロピレン縫合糸を横行大動脈周囲で結紮することにより、ＴＡＣを誘発させる。
【００７９】
心エコー検査。体温を３７．０℃に維持しながら、ノーズコーンにより投与される１．５％イソフルランを用いて浅い鎮静下で経胸腔心エコー検査を実施する。心エコー画像の解析を盲検化した調査員により実施する。ＬＶ拡張終期径(ＥＤＤ)およびＬＶ収縮終期径(ＥＳＤ)を直接的に測定し、標準方程式ＦＳ＝(ＥＤＤ−ＥＳＤ)／ＥＤＤを用いてＬＶ内径短縮率(ＦＳ)を決定する。心室の大きさもまた、マイクロキャリパー(Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ)を用いて０．０１ｍｍで四捨五入する死後測定され得る脛骨長(ＴＬ)に対して指数化する。
【００８０】
末期血行動態評価。ノーズコーンにより投与される２．０％イソフルラン麻酔を用いて末期血行動態評価を実施する。左内頸動脈、右内頸動脈および左心室へ連続して圧力をかける。圧−容積ループ分析を実施する。
【００８１】
組織採取。屠殺時、０．３ｍＬの１Ｍ  ＫＣｌの静脈内注射により心臓を拡張期に停止させ；その後心臓を迅速に摘出し、右心室自由壁を注意深くＬＶから分離する。全ての組織を計量する。マイクロキャリパーを用いて０．０１ｍｍで四捨五入する測定されたＴＬに対して、ＬＶ重量を指数化する。屠殺時、ＬＶ基部の一部(１０〜２０ｍｇ)を採り、液体窒素中で急速凍結し、必要に応じて、将来のタンパク質およびＲＮＡ抽出のために−７０℃で保存する。乳頭筋のレベルで短軸に切断したＬＶの中央部分を１０％ホルマリンで一晩固定し、ＩＨＣ分析のためにパラフィンに包埋する。ＬＶの尖部をｃＧＭＰ濃度測定のために保存する。
【００８２】
組織学。心筋を１０％ホルムアルデヒドで固定し、パラフィンに包埋し、４ｍｍ薄片に切片化する。コラーゲンを可視化するためにマッソントリクローム染色を使用する。各心臓の４〜６つの領域において線維成分の定量化を実施する。筋細胞横断面積をＮＩＨ  Ｉｍａｇｅ  Ｊ  １.４７ｉソフトウェアを用いた自動アルゴリズムを用いて測定する。Ｚｅｉｓｓ  ＬＳＭ５１０−ＭＥＴＡレーザー走査型顕微鏡上で画像取得を実施する。
【００８３】
分子解析。Ｂｌａｎｔｏｎらおよびその中に記載の引用文献に記載のとおり、ＰＤＥ９発現およびｃＧＭＰ量を決定する。タキモトらおよびその中に記載の引用文献に記載のとおり、商業的に入手可能なＥＬＩＳＡキット(ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ)を用いてｃＧＭＰ濃度を決定する。
【００８４】
データ解析および統計。プライマリーエンドポイントは脛骨長に対して標準化されたＬＶ重量によりアッセイされるＬＶ肥大である。これは試験群間で比較される。セカンダリーエンドポイントは各群間で比較したａ)内径短縮率およびｂ)生存率である。二次解析はＬＶ機能の血流力学データおよび指数に関するものである。さらなる二次解析は、−７〜２８日目までの心エコーパラメータの群内における変化(例えば−７〜２８日目のＦＳ％における相対的変化)および２〜２８日目までの変化の比較を含む。全てのデータは平均±ＳＥＭとして報告される。対応のないスチューデントｔ検定を用いて群間の比較を実施する。ＴＡＣ試験について、変化の２通りの解析により比較を実施し、Ｐ値を計算してＴＡＣ刺激性応答に対する遺伝子型の効果を決定する。注記しない限り、スチューデント−ニューマン−コイルス法を用いて複数比較についての補正を実施する。Ｐ値＜０．０５は、統計的に有意であると考えられる。
【００８５】
試験のための実験室施設：試験は、３つの独立した完全に機能的なマウス「手術室」を備えた最先端のマウス生理学コア施設で、それぞれＺｅｉｓｓ社のカラーモニターを備えた３５ｍｍカメラアダプターおよびＶＨＳビデオ／オーディオタッピング機能を有するデュアルオペレーター外科用顕微鏡、Ｎｉｋｏｎ社のシングルオペレーター実体［立体］顕微鏡、ハーバード齧歯類呼吸器、齧歯類吸入(イソフルオラン)麻酔のための卓上ガス麻酔機(ＶｅｔＥｑｕｉｐ社、Ｐｌｅａｓａｎｔｏｎ  Ｃａｌｉｆ.)、ＭａｃＬａｂデータ取得分析ＥＣＧモニタリングを備えたＨｏｎｅｙｗｅｌｌ  ｓｉｍｕｌｔｒａｃｅ生理レコーダー、ラップトップコンピュータを備えたＶｉｓｉｔｅｃｈ社のマウステールカフ血圧分析システム、１時間あたりのマイクロリットル機能を備えたハーバード注射器注入ポンプ、超微細手術用具および備品／カミソリ、物差し、加熱した作業面、加熱ランプ、酸素、直腸温度モニタリング、ＮＩＨ画像解析ソフトウェアを備えたＰｏｗｅｒ  Ｍａｃｉｎｔｏｓｈコンピュータ７１００／６６ＡＶに接続したソニー社トリニトロンカラービデオモニターＰＶＭ  １３４３ＭＤを備えた日立カラービデオカメラＶＫ−Ｃ３７０を有するオリンパス社Ｂｍａｘ  Ｕ−ＳＰＴ顕微鏡を用いて実施する。
【００８６】
さらに、施設には、連続的な携帯型遠隔測定ＥＫＧモニタリング、血行動態モニタリング、および侵襲的電気生理学的試験を実施するために必要な機器が含まれる。特に、それはＭａｃＬａｂデータ取得およびＥＣＧモニタリング、ラップトップコンピュータを備えたＶｉｓｉｔｅｃｈマウス尾部血圧分析システム、１．４ｆ  Ｍｉｌｌａｒ圧力−容積変換器カテーテル(＃ＳＰＲ−６７１)、ＥＭＫＡ取得カードおよびソフトウェアに接続された制御ボックス（＃ＴＣ５１０）、ならびにＰＶループおよび他のインビボ血行動態測定のリアルタイム観察および分析を可能にするソフトウェアを含む血行動態およびＥＣＧモニタリングおよび取得装置の全装備を備えている。さらに、施設には２Ｆｒ．ＣｌＢｅｒマウスＥＰカテーテル、連続携帯式遠隔測定ＥＣＧ分析用のための埋め込み型ＥＣＧモニター(Ｄａｔａ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｉｎｃ.)および専用Ｄｅｌｌ  ＰＣと接続されたＤａｔａｑｕｅｓｔ  ＡＲＴデータ収集および分析システムを含む全電気生理学ツールが備えられている。ＭＣＲＩマウス生理学コア施設はまた、高処理能マウス心エコー検査試験を実施するための研究適用専用の最先端の超音波システム。Ｖｉｓｕａｌｓｏｎｉｃｓ装置は得られたＬＶ画像の画像処理および機能解析に必要な全ての解析ソフトウェアを含む。
【００８７】
実施例３
(１)器官重量測定
手術(擬似またはＴＡＣ)および／または処置(ビークルまたはＡＳＰ４９０１)後の実施例１のマウス実験群から器官を得て、評価した。ＬＶ(図１Ａ)、ＨＷ(図１Ｂ)、ＲＶ(図１Ｃ)、心房(図１Ｄ)および肺(図１Ｄ)からの器官重量を脛骨長に対して標準化し、結果を図１Ａ〜１Ｅに示す。ＴＡＣ手術およびＡＳＰを用いた処置を受けた群からの器官重量は、擬似手術を受けた群(対照)と同様の傾向を有する。
【００８８】
(２)１４日目心エコー検査測定
心エコー検査を用いた実施例１の実験群における右心室(ＲＶ)の後壁厚および前壁厚を測定し、結果を図２Ａ〜２Ｂに示す。前壁と後壁でわずかに異なる結果が示されるが、これらの壁厚はＬＶ重量計算に使用される。
【００８９】
実施例１の各マウス実験群において、ＬＶ拡張終期径(ＥＤＤ)およびＬＶ収縮終期径(ＥＳＤ)を測定し、結果を図３Ａ〜３Ｂに示す。従って、本明細書に記載のとおりＬＶ内径短縮率(ＦＳ)を決定し、結果を図３Ｃに記載する。各マウス群からＬＶ駆出率を計算し、結果を図３Ｄに示す。ＴＡＣ処置またはＡＳＰ未処置の後、減少した駆出率が各マウス実験群から観察された。
【００９０】
本試験において、経時的にＬＶ重量を確認することが可能な心エコー検査からＬＶ重量が計算され得る。１４日目に、生存したマウスからの未処理ＬＶ重量(図４Ｂ)および計算されたＬＶ重量(図４Ａ)を図４Ｃにおいて比較した。１４日目に心エコー検査から計算したＬＶ重量および採取時の直接的なＬＶ重量は、高いｒ２と良好に相関する。
【００９１】
(３)日ごとの心エコー検査パラメータ
実施例１におけるマウス実験群を手術前(０日)、ビークルまたはＡＳＰに対する無作為化前(７日)および採取時(１４日、ビークルまたはＡＳＰ投与の７日後)に心エコー検査パラメータにより評価した。各マウス実験群からのＬＶ重量もまた、０〜１４日までの各群における心エコー検査により計算する(図５Ａ)。計算したＬＶ重量を直接的に測定した(未処理)重量と比較し、それらの間の相関を確認するために回帰で示した(図５Ｂ)。後の後壁厚および前壁厚の測定は０〜１４日までの心エコー検査により得られ、結果を図６Ａ〜６Ｂに示す。さらに、０〜１４日までの各マウス実験群におけるＬＶ拡張終期径およびＬＶ収縮終期径を図７Ａ〜７Ｂに示し；そして１〜１４日までの各マウス実験群におけるＬＶ内径短縮率およびＬＶ駆出率を図８Ａ〜８Ｂに示す。
【００９２】
とりわけ、マウス実験群からの重量データ(例えば図５Ａ)は、テューキーポスト検定を伴うＯｎｅ  Ｗａｙ  ＡＮＯＶＡにより、１４日目において有意であった。上で提供される実験データは、薬物処置されたＴＡＣマウスがビークル処置と比較してＬＶ肥大の退行を有することを示し得る。さらに、心エコー検査を再検討すると、無作為化時に、双方のＴＡＣ群は同程度のＬＶ肥大および収縮機能不全を有したが、１４日目までに、薬物処置群においてＬＶＨは選択的に退行した。
【００９３】
引用文献
１．Protein kinase G Iα inhibits pressure overload-induced cardiac remodeling and is required for the cardioprotective effect of sildenafil in vivo. Blanton RM, Takimoto E, Lane AM, Aronovitz M, Piotrowski R, Karas RH, Kass DA, Mendelsohn ME. J Am Heart Assoc. 2012 Oct;1(5):e003731
２．Chronic inhibition of cyclic GMP phosphodiesterase 5A prevents and reverses cardiac hypertrophy. Takimoto E, Champion HC, Li M, Belardi D, Ren S, Rodriguez ER, Bedja D, Gabrielson KL, Wang Y, Kass DA. Nat Med. 2005 Feb;11(2):214-22.
【００９４】
本明細書において言及される全ての文献は、それらの全体を参照することにより本明細書に包含させる。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
2019521192.tif 000026
【図１Ｃ】
2019521192.tif 000027
【図１Ｄ】
2019521192.tif 000028
【図１Ｅ】
2019521192.tif 000029
【図２Ａ】
2019521192.tif 000030
【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
2019521192.tif 000035
【図４Ａ】
2019521192.tif 000036
【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【国際調査報告】
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