(57)【要約】  セントラルメモリーＴ−リンパ球（Ｔｃｍ）表現型を含む非移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）誘発細胞の単離された集合を生成する方法であって、前記細胞が、耐性誘発性細胞であり、および／または抗疾患活性を付与し、移植後にリンパ節にホーミングすることが可能である、方法が開示される。本方法は、（ａ）少なくとも７０％のメモリーＴ細胞の集合を与えることと、（ｂ）抗原反応性細胞を濃縮するように、前記メモリーＴ細胞の集合と、１種類の抗原または複数の抗原とを接触させることと、（ｃ）サイトカイン存在下、前記Ｔｃｍ表現型を含む細胞を増幅させるように、工程（ｂ）から得られた前記細胞を培養することとを含む。この方法によって作られる細胞、医薬組成物、および治療方法も開示される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
セントラルメモリーＴ−リンパ球（Ｔｃｍ）表現型を含む非移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）誘発細胞の単離された集合を生成する方法であって、前記細胞が、耐性誘発性細胞であり、および／または抗疾患活性を付与し、移植後にリンパ節にホーミングすることが可能であり、前記方法は、
（ａ）少なくとも７０％のメモリーＴ細胞の集合を与えることと、
（ｂ）抗原反応性細胞を濃縮するように、前記メモリーＴ細胞の集合と、１種類の抗原または複数の抗原とを接触させることと、
（ｃ）サイトカイン存在下、前記Ｔｃｍ表現型を含む細胞を増幅させるように、工程（ｂ）から得られた前記細胞を培養し、それによって、非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合を生成することと
を含む、方法。
【請求項２】
前記メモリーＴ細胞は、ＣＤ４５ＲＡ＋細胞が枯渇している、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記メモリーＴ細胞は、ＣＤ４＋細胞および／またはＣＤ５６＋細胞が枯渇している、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
ＩＬ−２１存在下、前記メモリーＴ細胞の集合と、１種類の抗原または複数の抗原とを接触させることが行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
サイトカイン存在下、工程（ｂ）から得られた細胞を培養することは、ＩＬ−２１、ＩＬ−１５および／またはＩＬ−７のいずれか存在下、前記細胞を培養することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
少なくとも７０％のメモリーＴ細胞の集合を与える前に、細胞ドナーを、１種類の抗原または複数の抗原で処理することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記少なくとも７０％のメモリーＴ細胞の集合が、前記１種類の抗原または複数の抗原に対して濃縮される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
セントラルメモリーＴ−リンパ球（Ｔｃｍ）表現型を含む非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合を生成する方法であって、前記細胞が、耐性誘発性細胞であり、および／または抗疾患活性を付与し、移植後にリンパ節にホーミングすることが可能であり、前記方法は、
（ａ）非接着性末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、ＣＤ４５ＲＡ−ＣＤ８＋表現型を含むメモリーＴ細胞の集合を与えるように、ＣＤ４＋、ＣＤ５６＋およびＣＤ４５ＲＡ＋細胞を枯渇させることが可能な薬剤で処理することと、
（ｂ）抗原反応性細胞を濃縮するように、ＩＬ−２１存在下、前記メモリーＴ細胞の集合と、１種類の抗原または複数の抗原とを接触させることと、
（ｃ）ＩＬ−２１、ＩＬ−１５および／またはＩＬ−７存在下、前記Ｔｃｍ表現型を含む細胞を増幅させるように、工程（ｂ）から得られた前記細胞を培養し、それによって、非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合を生成することと
を含む、方法。
【請求項９】
前記１種類の抗原または複数の抗原が、ウイルス性抗原、細菌性抗原、腫瘍抗原、自己免疫疾患に関連する抗原、タンパク質抽出物、精製されたタンパク質および合成ペプチドからなる群から選択される、請求項１または８に記載の方法。
【請求項１０】
前記１種類の抗原または複数の抗原が、自己抗原提示細胞、非自己抗原提示細胞、人工ビヒクルまたは人工抗原提示細胞によって提示される、請求項１、８または９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記１種類の抗原または複数の抗原が、前記メモリーＴ細胞と同じ由来の抗原提示細胞によって提示される、請求項１、８または９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
セントラルメモリーＴ−リンパ球（Ｔｃｍ）表現型を含む非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合を生成する方法であって、前記細胞が、耐性誘発性細胞であり、および／または抗疾患活性を付与し、移植後にリンパ節にホーミングすることが可能であり、前記方法は、
（ａ）非接着性末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、ＣＤ４５ＲＡ−ＣＤ８＋表現型を含むメモリーＴ細胞の集合を与えるように、ＣＤ４＋、ＣＤ５６＋およびＣＤ４５ＲＡ＋細胞を枯渇させることが可能な薬剤で処理することと、
（ｂ）抗原反応性細胞を濃縮するように、ＩＬ−２１存在下、前記メモリーＴ細胞の集合と、１種類のウイルス性抗原または複数のウイルス性抗原とを接触させることと、
（ｃ）ＩＬ−２１、ＩＬ−１５および／またはＩＬ−７存在下、前記Ｔｃｍ表現型を含む細胞を増幅させるように、工程（ｂ）から得られた前記細胞を培養し、それによって、非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合を生成することと
を含む、方法。
【請求項１３】
前記１種類のウイルス性抗原または複数のウイルス性抗原が、自己抗原提示細胞、非自己抗原提示細胞、人工ビヒクルまたは人工抗原提示細胞によって提示される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記１種類のウイルス性抗原または複数のウイルス性抗原が、前記ＰＢＭＣと同じ由来の抗原提示細胞によって提示される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記抗原提示細胞が樹状細胞である、請求項１０、１１、１３または１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記１種類のウイルス性抗原または複数のウイルス抗原が、２種類以上のウイルスペプチドを含む、請求項９、１２、１３または１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記１種類のウイルス性抗原または複数のウイルス性抗原が、ＥＢＶペプチド、ＣＭＶペプチドおよび／またはアデノウイルス（Ａｄｖ）ペプチドを含む、請求項９、１２〜１４または１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記１種類のウイルス性抗原または複数のウイルス性抗原が、３種類のＥＢＶペプチド、２種類のＣＭＶペプチドおよび２種類のアデノウイルス（Ａｄｖ）ペプチドを含む、請求項９、１２〜１４、１６または１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記１種類のウイルス性抗原または複数のウイルス性抗原が、ＥＢＶ−ＬＭＰ２、ＥＢＶ−ＢＺＬＦ１、ＥＢＶ−ＥＢＮＡ１、ＣＭＶ−ｐｐ６５、ＣＭＶ−ＩＥ−１、Ａｄｖ−ペントンおよびＡｄｖ−ヘキソンからなる群から選択される、請求項９、１２〜１４、１６、１７または１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記１種類のウイルス性抗原または複数のウイルス性抗原が、ＥＢＶ−ＬＭＰ２、ＥＢＶ−ＢＺＬＦ１、ＥＢＶ−ＥＢＮＡ１、ＣＭＶ−ｐｐ６５、ＣＭＶ−ＩＥ−１、Ａｄｖ−ペントンおよびＡｄｖ−ヘキソンのうち２種類以上を含む、請求項９、１２〜１４、１６、１７または１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記１種類のウイルス性抗原または複数のウイルス性抗原が、さらに、細菌性抗原を含む、請求項９、１２〜１４、１６〜１９または２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記ＩＬ−２１存在下、前記メモリーＴ細胞の集合と、１種類の抗原または複数の抗原とを接触させることが、１２時間〜５日間行われる、請求項４、８または１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記ＩＬ−２１存在下、前記メモリーＴ細胞の集合と、１種類の抗原または複数の抗原とを接触させることが、３日間行われる、請求項４、８、１２または２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
ＩＬ−２１、ＩＬ−１５および／またはＩＬ−７存在下、工程（ｂ）から得られた細胞を培養することが、１２時間〜１０日間行われる、請求項５〜８または１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
ＩＬ−２１、ＩＬ−１５およびＩＬ−７存在下、工程（ｂ）から得られた細胞を培養することが、４日間〜８日間行われる、請求項５〜８、１２または２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
ＩＬ−２１、ＩＬ−１５およびＩＬ−７存在下、工程（ｂ）から得られた細胞を培養することが、６日間行われる、請求項５〜８、１２、２４または２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記非ＧｖＨＤ誘発細胞を生成する時間の全長が１０日間である、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
工程（ｃ）の後にアロ反応性細胞を枯渇させることをさらに含む、請求項１、８または１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記アロ反応性細胞を枯渇させることが、前記Ｔｃｍ表現型を含む細胞と宿主抗原提示細胞（ＡＰＣ）とを接触させることによるＣＤ１３７＋および／またはＣＤ２５＋細胞の枯渇によって行われる、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記方法がｅｘ−ｖｉｖｏで行われる、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記ＰＢＭＣが、被験体に関して非同系である、請求項８、１２または１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記ＰＢＭＣが、被験体に関して同種異系である、請求項８、１２または１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記Ｔセントラルメモリー表現型を有する細胞は、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ４５ＲＡ−、ＣＤ４５ＲＯ＋シグネチャを含む、請求項１、８または１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
セントラルメモリーＴ−リンパ球（Ｔｃｍ）表現型を含む非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合であって、前記細胞が、耐性誘発性細胞であり、および／または抗疾患活性を付与し、移植後にリンパ節にホーミングすることが可能であり、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の方法によって生成する、単離された集合。
【請求項３５】
活性成分として請求項３４に記載の非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合と、医薬的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
【請求項３６】
疾患の治療が必要な被験体において、前記疾患を治療する方法であって、前記方法が、被験体に、治療に有効な量の請求項３４に記載の非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合を投与することを含み、それによって、前記被験体の疾患を治療する、方法。
【請求項３７】
疾患の治療が必要な被験体において、前記疾患を治療するために同定される医薬の製造のための、請求項３４に記載の非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合の使用。
【請求項３８】
疾患の治療が必要な被験体において疾患を治療する方法であって、前記方法が、
（ａ）前記疾患に関連する１種類の抗原または複数の抗原の存在について、被験体の生体サンプルを分析することと、
（ｂ）前記疾患に関連する１種類の抗原または複数の抗原に対し、抗原反応性細胞を濃縮するように、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の方法に従って、非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合を生成することと、
（ｃ）前記被験体に、治療に有効な量の（ｂ）の非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合を投与することによって、前記被験体の疾患を治療することと
を含む、方法。
【請求項３９】
前記生体サンプルが、血液、血漿、血清、髄液、リンパ液および組織生検からなる群から選択される、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記１種類の抗原または複数の抗原が、ウイルス性抗原、細菌性抗原、腫瘍抗原および自己免疫疾患に関連する抗原からなる群から選択される、請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】
細胞または組織の移植を前記被験体に移植することをさらに含む、請求項３６または３８〜４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
前記移植が、非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合の投与と同時に、非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合を投与する前に、または非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合の投与の後に行われる、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記医薬が、さらに、細胞または組織の移植を含む、請求項３７に記載の使用。
【請求項４４】
前記疾患が悪性疾患である、請求項３６または３８〜４２のいずれか一項に記載の方法、または請求項３７または４３に記載の使用。
【請求項４５】
前記疾患が非悪性疾患である、請求項３６または３８〜４２のいずれか一項に記載の方法、または請求項３７または４３に記載の使用。
【請求項４６】
細胞または組織の移植が必要な被験体を治療する方法であって、前記方法が、
（ａ）細胞または組織の移植を前記被験体に移植することと、
（ｂ）前記被験体に、治療に有効な量の請求項３４に記載の非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合を投与することと
を含み、それによって、細胞または組織の移植が必要な被験体を治療する、方法。
【請求項４７】
前記被験体が、組織または細胞の移植を必要としており、前記被験体への前記細胞または組織の移植のための補助薬物療法として同定される医薬の製造のための、請求項３４に記載の非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合の使用。
【請求項４８】
前記非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合が、細胞または組織の移植の前に、細胞または組織の移植と当時に、または細胞または組織の移植の後に投与されるためのものである、請求項４７に記載の使用。
【請求項４９】
（ｂ）が（ａ）の前に行われる、請求項４６に記載の方法。
【請求項５０】
（ａ）と（ｂ）が同時に行われる、請求項４６に記載の方法。
【請求項５１】
さらに、移植の前に、被験体を亜致死状態、致死状体または超致死状態に調整することを含む、請求項４１〜４２、４６、４９または５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
亜致死、致死または超致死に調整するプロトコルをさらに含む、請求項４３、４７または４８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５３】
前記亜致死、致死または超致死を調整することが、全身照射（ＴＢＩ）、部分的な身体照射、骨髄破壊による調整、骨髄を破壊しない調整、共刺激による遮断、化学療法剤および抗体免疫治療からなる群から選択される、請求項５１に記載の方法、または請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記細胞または組織の移植が、前記被験体と非同系である、請求項４１または４６、４９または５０のいずれか一項に記載の方法、または請求項４３または４７〜４８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５５】
前記細胞または組織の移植と、前記非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合が、同じドナーから得られる、請求項４１、４６、４９、５０または５４のいずれか一項に記載の方法、または請求項４３、４７、４８または５４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５６】
前記細胞または組織の移植が、ＨＬＡが同一の同種異系のドナー、ＨＬＡが非同一の同種異系のドナーおよび異種のドナーからなる群から選択されるドナーに由来する、請求項４１、４６、４９、５０または５４〜５５のいずれか一項に記載の方法、または請求項４３、４７、４８または５４〜５５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５７】
前記細胞または組織の移植が、未熟な造血細胞を含む、請求項４１、４６、４９、５０または５４〜５６のいずれか一項に記載の方法、または請求項４３、４７、４８または５４〜５６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５８】
前記細胞または組織の移植が、肝臓、膵臓、脾臓、腎臓、心臓、肺、皮膚、腸、脳、卵巣およびリンパ系／造血細胞または組織からなる群から選択される、請求項４１、４６、４９、５０または５４〜５６のいずれか一項に記載の方法、または請求項４３、４７、４８または５４〜５６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５９】
前記細胞または組織の移植が、いくつかの臓器の同時移植を含む、請求項４１、４６、４９、５０または５４〜５６のいずれか一項に記載の方法、または請求項４３、４７、４８または５４〜５６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６０】
前記同時移植が、未熟な造血細胞と固形臓器の移植を含む、請求項５９に記載の方法または使用。
【請求項６１】
前記未熟な造血細胞と前記固形臓器が同じドナーから得られる、請求項６０に記載の方法または使用。
【請求項６２】
前記未熟な造血細胞が、固形臓器の移植の前に、固形臓器の移植と同時に、または固形臓器の移植の後に移植される、請求項６０または６１に記載の方法または使用。
【請求項６３】
前記被験体が悪性疾患を有する、請求項４６に記載の方法または請求項４７に記載の使用。
【請求項６４】
前記悪性腫瘍が、固体腫瘍または腫瘍転移である、請求項４４または６３に記載の方法または使用。
【請求項６５】
前記悪性疾患が血液悪性腫瘍である、請求項４４または６３に記載の方法または使用。
【請求項６６】
前記悪性疾患が、白血病、リンパ腫、骨髄腫、メラノーマ、肉腫、神経芽細胞腫、結腸癌、結腸直腸癌、乳癌、卵巣癌、食道癌、滑膜細胞癌、肝臓癌および膵臓癌からなる群から選択される、請求項４４または６３〜６５のいずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項６７】
前記被験体が非悪性疾患を有する、請求項４６に記載の方法または請求項４７に記載の使用。
【請求項６８】
前記非悪性疾患が、臓器機能不全または臓器不全、血液疾患、移植片に関連する疾患、感染性疾患、自己免疫疾患、炎症、アレルギー、外傷および損傷からなる群から選択される、請求項４５または６７に記載の方法または使用。
【請求項６９】
前記感染性疾患がウイルス性疾患または細菌性疾患である、請求項６８に記載の方法または使用。
【請求項７０】
前記被験体がヒト被験体である、請求項３１〜３２、３６、３８〜４１、４６、５１、５４、６３または６７のいずれか一項に記載の方法、または請求項３７〜３８、４７、５４、６３または６７のいずれか一項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、そのいくつかの実施形態では、メモリーＴ細胞から作られるベト細胞に関し、排他的ではないが、より特定的には、その製造方法、移植および疾患の治療におけるこれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
証拠の蓄積から、ヒトにおいて、ＣＤ４５ＲＡが枯渇した末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、移植片対宿主（ＧｖＨ）反応性の低下を示す。この手法の前提は、抗原を経験したＴ細胞でのＣＤ４５ＲＡ発現のダウンレギュレーションに関し、したがって、ＣＤ４５ＲＡ＋細胞を枯渇させることによって、機能的な抗原を経験した細胞（メモリーＴ細胞を含む）を保持しつつ、ナイーブＴ細胞が除去される。その結果、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）のリスクは、顕著に減少し、生着、免疫再構成および移植片対白血病／リンパ腫（ＧｖＬ）は、Ｔ細胞が枯渇した幹細胞（ＴＣＤ）移植のみを用いた手法と比較して向上している。さらに、Ｔ制御細胞（Ｔｒｅｇ）も、ＣＤ４５ＲＡ−集合に属しており、おそらく、この細胞調製によって示される免疫寛容効果に寄与するだろう。この手法は、マウスＣＤ４メモリーＴ細胞およびエフェクターメモリーＣＤ８Ｔ細胞が、移植片対宿主（ＧｖＨ）反応性を欠いていることを示す前臨床試験に基づくものである［非特許文献１］。
【０００３】
しかし、Ｚｈｅｎｇら［非特許文献２］は、ＣＤ８＋セントラルメモリーＴ細胞（Ｔｃｍ）が、ナイーブＴ細胞と比較して、顕著に、ある程度の減少したＧｖＨＤを示すことを示した。この減少したＧｖＨＤが、メモリーＴ細胞の抗原を経験したプールにおいて、アロ反応性クローンの頻度が減少していることと関係があり得ることを考慮して、Ｊｕｃｈｅｍらは、さらに、レシピエントで偏在的に発現する抗体ペプチドに対して指向する同様のレベルのＴＣＲ導入遺伝子を発現するナイーブＴ細胞とメモリーＴ細胞の間のあり得る固有の差を調べた［非特許文献３］。この試験は、エフェクターメモリーＴ細胞（Ｔｅｍ）が、低いＧｖＨ反応性を示すことを示し、これは、おそらく、異なるホーミングパターンおよび／またはこれらの細胞がＩＮＦγを分泌する異なる能力に起因すると思われ、Ｔｃｍは、ナイーブＴ細胞に匹敵する高いＧｖＨ活性を示す［非特許文献３］。
【０００４】
近年、白血病患者へのＣＤ４５ＲＡ＋が枯渇した造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）を使用しようとする２つの主要な研究が企てられた［非特許文献４］が、ＧｖＨＤの発生は完全にはなくならなかった。このことは、多数の注入されたＣＤ４５ＲＡ＋Ｔ細胞と、ＴｃｍがＧｖＨＤの強力な誘発因子であることを明確に示した前臨床データには関係なく、ＣＤ４５ＲＡが枯渇したフラクションが、ＴｅｍとＴｃｍを両方とも含むという事実に起因するだろう。
【０００５】
抗サードパーティドナーに由来するセントラルメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞（ベトＴｃｍ）は、骨髄を破壊せずに減少させて調整しつつ、同種異系のＴ細胞が枯渇した骨髄移植（ＴＤＢＭＴ）の生着を助けることが既に示されており、ＧｖＨＤを引き起こすことなく、ドナー型の臓器移植片に対する耐性が生じる［非特許文献５］。さらに、ＧｖＨ反応性を欠く耐性誘発性細胞（例えば、ベト細胞）の生成、移植片の移植のための補助薬物療法としての使用のために種々の手法が想定されており、いくつかを上にまとめている。
【０００６】
特許文献１は、ドナー由来の移植片をレシピエントに移植する方法を開示し、この方法は、（ａ）前記移植片をレシピエントに移植する工程と、（ｂ）前記レシピエントに、非アロ反応性抗サードパーティ細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）を含む投薬量を投与し、非アロ反応性抗サードパーティＣＴＬが、サードパーティの１種類の抗原または複数の抗原に対してドナーのＴリンパ球が指向することによって作られ（外因性ＩＬ−２非存在下）、前記投薬量が、アロ反応性ＣＴＬに成長することが可能なＴリンパ球（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞および／またはＣＤ５６＋ナチュラルキラー細胞）が実質的に枯渇しており、それによって、レシピエントによる移植拒絶および移植片対宿主病を両方とも予防または軽減する工程を含む。
【０００７】
特許文献２は、被験体における非同系移植片の移植拒絶を減らすか、または予防するための免疫寛容性細胞の塩宇を開示している。開示されている免疫寛容性Ｔ制御細胞（例えば、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞）は、被験体および移植片の両方と非同系の任意のドナー（「サードパーティ」免疫寛容性細胞）から誘導されてもよい。移植片（例えば、骨髄）は、被験体と同種異系または異種の任意の移植ドナーから誘導されてもよい。
【０００８】
特許文献３は、セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を有する非ＧｖＨＤ誘発性抗サードパーティ細胞を含む細胞の単離された集合を開示し、この細胞は耐性誘発性細胞であり、移植後にリンパ節にホーミングすることが可能である。特許文献３によれば、細胞は、（ａ）非同系の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）とサードパーティの１種類の抗原または複数の抗原とを、ＧＶＨ反応性細胞を除去可能な条件で（例えば、サイトカインが枯渇した培養物）接触させ、（ｂ）工程（ａ）から得られた細胞を、ＩＬ−１５存在下、Ｔｃｍ表現型を含む細胞を増幅させる条件（例えば、ＩＬ−７および／またはＩＬ−２１存在下）で培養することによって作られる。
【０００９】
特許文献４は、（ａ）非同系細胞または組織移植片を被験体に移植することと、（ｂ）被験体に、セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を有する非移植片対宿主（ＧｖＨＤ）誘発性抗サードパーティ細胞を含む細胞の単離された集合を治療に有効な量投与することとを含み、この細胞が耐性誘発性細胞であり、移植後にリンパ節にホーミングすることが可能である、被験体において疾患を治療する方法を開示する。特許文献４によれば、細胞は、（ａ）ＰＢＭＣとサードパーティの１種類の抗原または複数の抗原とを、ＩＬ−２１存在下または非存在下で、ＧＶＨ反応性細胞を除去可能な条件で接触させ（例えば、１〜５日間培養する）、（ｂ）工程（ａ）から得られた細胞を、ＩＬ−１５存在下、Ｔｃｍ表現型を含む細胞を増幅させる条件（例えば、さらにＩＬ−７存在下）で、抗原を含まない環境で培養することによって作られる。
【００１０】
特許文献５は、セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を有する抗サードパーティ細胞を含む細胞の単離された集合を生成する新しい方法を開示し、この細胞は、耐性誘発性細胞であり、および／または抗疾患活性を付与し、移植後にリンパ節にホーミングすることが可能である。特許文献５によれば、細胞は、（ａ）ＩＬ−２１存在下、抗原反応性細胞を濃縮可能なように、ＰＢＭＣと、サードパーティの１種類の抗原または複数の抗原とを接触させ、（ｂ）工程（ａ）から得られた細胞を、ＩＬ−２１、ＩＬ−１５およびＩＬ−７存在下、Ｔｃｍ表現型を含む細胞を増幅させるように、抗原を含まない環境で培養することによって作られる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】ＷＯ２００１／４９２４３号
【特許文献２】ＷＯ２００７／０２３４９１号
【特許文献３】ＷＯ２０１０／０４９９３５号
【特許文献４】ＷＯ２０１２／０３２５２６号
【特許文献５】ＷＯ２０１３／０３５０９９号
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ＢＥら  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ（２００３）１１２（１）：１０１−８
【非特許文献２】Ｚｈｅｎｇ  Ｈ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００９）１８２（１０）：５９３８−４８
【非特許文献３】Ｊｕｃｈｅｍ  ＫＷら  Ｂｌｏｏｄ．（２０１１）１１８（２３）：６２０９−１９
【非特許文献４】Ｂｌｅａｋｌｅｙ  Ｍ．ら  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．（２０１５）１２５（７）：２６７７−８９；Ｔｒｉｐｌｅｔｔ、Ｂ．Ｍ．ら、Ｂｏｎｅ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．（２０１５）５０（７）：９６８−９７７
【非特許文献５】Ｏｐｈｉｒ、Ｅ．ら、Ｂｌｏｏｄ．（２０１３）１２１（７）：１２２０−１２２８
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、セントラルメモリーＴ−リンパ球（Ｔｃｍ）表現型を含む非移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）誘発細胞の単離された集合を生成する方法であって、前記細胞が、耐性誘発性細胞であり、および／または抗疾患活性を付与し、移植後にリンパ節にホーミングすることが可能であり、前記方法は、（ａ）少なくとも７０％のメモリーＴ細胞の集合を与えることと、（ｂ）抗原反応性細胞を濃縮するように、前記メモリーＴ細胞の集合と、１種類の抗原または複数の抗原とを接触させることと、（ｃ）サイトカイン存在下、前記Ｔｃｍ表現型を含む細胞を増幅させるように、工程（ｂ）から得られた前記細胞を培養し、それによって、非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合を生成することとを含む、方法が提供される。
【００１４】
本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、セントラルメモリーＴ−リンパ球（Ｔｃｍ）表現型を含む非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合を生成する方法であって、前記細胞が、耐性誘発性細胞であり、および／または抗疾患活性を付与し、移植後にリンパ節にホーミングすることが可能であり、前記方法は、（ａ）非接着性末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、ＣＤ４５ＲＡ−ＣＤ８＋表現型を含むメモリーＴ細胞の集合を与えるように、ＣＤ４＋、ＣＤ５６＋およびＣＤ４５ＲＡ＋細胞を枯渇させることが可能な薬剤で処理することと、（ｂ）抗原反応性細胞を濃縮するように、ＩＬ−２１存在下、前記メモリーＴ細胞の集合と、１種類の抗原または複数の抗原とを接触させることと、（ｃ）ＩＬ−２１、ＩＬ−１５および／またはＩＬ−７存在下、前記Ｔｃｍ表現型を含む細胞を増幅させるように、工程（ｂ）から得られた前記細胞を培養し、それによって、非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合を生成することとを含む、方法が提供される。
【００１５】
本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、セントラルメモリーＴ−リンパ球（Ｔｃｍ）表現型を含む非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合を生成する方法であって、前記細胞が、耐性誘発性細胞であり、および／または抗疾患活性を付与し、移植後にリンパ節にホーミングすることが可能であり、前記方法は、（ａ）非接着性末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、ＣＤ４５ＲＡ−ＣＤ８＋表現型を含むメモリーＴ細胞の集合を与えるように、ＣＤ４＋、ＣＤ５６＋およびＣＤ４５ＲＡ＋細胞を枯渇させることが可能な薬剤で処理することと、（ｂ）抗原反応性細胞を濃縮するように、ＩＬ−２１存在下、前記メモリーＴ細胞の集合と、１種類のウイルス性抗原または複数のウイルス性抗原とを接触させることと、（ｃ）ＩＬ−２１、ＩＬ−１５および／またはＩＬ−７存在下、前記Ｔｃｍ表現型を含む細胞を増幅させるように、工程（ｂ）から得られた前記細胞を培養し、それによって、非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合を生成することとを含む、方法が提供される。
【００１６】
本発明のいくつかの実施形態の態様によれば、セントラルメモリーＴ−リンパ球（Ｔｃｍ）表現型を含む非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合であって、前記細胞が、耐性誘発性細胞であり、および／または抗疾患活性を付与し、移植後にリンパ節にホーミングすることが可能であり、本発明のいくつかの実施形態の方法によって生成する、単離された集合が提供される。
【００１７】
本発明のいくつかの実施形態の態様によれば、活性成分として、本発明のいくつかの実施形態の非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合と、医薬的に許容される担体とを含む医薬組成物が提供される。
【００１８】
本発明のいくつかの実施形態の態様によれば、疾患の治療が必要な被験体において、前記疾患を治療する方法であって、前記方法が、被験体に、治療に有効な量の本発明のいくつかの実施形態の非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合を投与することを含み、それによって、前記被験体の疾患を治療する方法が提供される。
【００１９】
本発明のいくつかの実施形態の態様によれば、疾患の治療が必要な被験体において、前記疾患を治療するために同定される医薬の製造のための、本発明のいくつかの実施形態の非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合の使用が提供される。
【００２０】
本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、疾患の治療が必要な被験体において疾患を治療する方法であって、前記方法が、（ａ）前記疾患に関連する１種類の抗原または複数の抗原の存在について、被験体の生体サンプルを分析することと、（ｂ）前記疾患に関連する１種類の抗原または複数の抗原に対し、抗原反応性細胞を濃縮するように、本発明のいくつかの実施形態の方法に従って、非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合を生成することと、（ｃ）前記被験体に、治療に有効な量の（ｂ）の非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合を投与することによって、前記被験体の疾患を治療することとを含む、方法が提供される。
【００２１】
本発明のいくつかの実施形態の態様によれば、細胞または組織の移植が必要な被験体を治療する方法であって、前記方法が、（ａ）細胞または組織の移植を前記被験体に移植することと、（ｂ）前記被験体に、治療に有効な量の本発明のいくつかの実施形態の非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合を投与することとを含み、それによって、細胞または組織の移植が必要な被験体を治療する方法が提供される。
【００２２】
本発明のいくつかの実施形態の態様によれば、被験体が、組織または細胞の移植を必要としており、前記被験体への前記細胞または組織の移植のための補助薬物療法として同定される医薬の製造のための、本発明のいくつかの実施形態の非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合の使用が提供される。
【００２３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、メモリーＴ細胞は、ＣＤ４５ＲＡ＋細胞が枯渇している。
【００２４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、メモリーＴ細胞は、ＣＤ４＋細胞および／またはＣＤ５６＋細胞が枯渇している。
【００２５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ＩＬ−２１存在下、メモリーＴ細胞の集合と、１種類の抗原または複数の抗原とを接触させることが行われる。
【００２６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、サイトカイン存在下、工程（ｂ）から得られた細胞を培養することは、ＩＬ−２１、ＩＬ−１５および／またはＩＬ−７存在下、前記細胞を培養することを含む。
【００２７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、本方法は、さらに、少なくとも７０％のメモリーＴ細胞の集合を与える前に、細胞ドナーを、１種類の抗原または複数の抗原で処理することを含む。
【００２８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、少なくとも７０％のメモリーＴ細胞の集合は、上述の１種類の抗原または複数の抗原を豊富に含む。
【００２９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、１種類の抗原または複数の抗原は、ウイルス性抗原、細菌性抗原、腫瘍抗原、自己免疫疾患に関連する抗原、タンパク質抽出物、精製されたタンパク質および合成ペプチドからなる群から選択される。
【００３０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、１種類の抗原または複数の抗原は、自己抗原提示細胞、非自己抗原提示細胞、人工ビヒクルまたは人工抗原提示細胞によって提示される。
【００３１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、１種類の抗原または複数の抗原は、メモリーＴ細胞と同じ由来の抗原提示細胞によって提示される。
【００３２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、１種類のウイルス性抗原または複数のウイルス性抗原は、自己抗原提示細胞、非自己抗原提示細胞、人工ビヒクルまたは人工抗原提示細胞によって提示される。
【００３３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、１種類のウイルス性抗原または複数のウイルス性抗原は、ＰＢＭＣと同じ由来の抗原提示細胞によって提示される。
【００３４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、抗原提示細胞は、樹状細胞である。
【００３５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、１種類のウイルス性抗原または複数のウイルス性抗原は、２種類以上のウイルスペプチドを含む。
【００３６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、１種類のウイルス性抗原または複数のウイルス性抗原は、ＥＢＶペプチド、ＣＭＶペプチドおよび／またはアデノウイルス（Ａｄｖ）ペプチドを含む。
【００３７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、１種類のウイルス性抗原または複数のウイルス性抗原は、３種類のＥＢＶペプチド、２種類のＣＭＶペプチドおよび２種類のアデノウイルス（Ａｄｖ）ペプチドを含む。
【００３８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、１種類のウイルス性抗原または複数のウイルス性抗原は、ＥＢＶ−ＬＭＰ２、ＥＢＶ−ＢＺＬＦ１、ＥＢＶ−ＥＢＮＡ１、ＣＭＶ−ｐｐ６５、ＣＭＶ−ＩＥ−１、Ａｄｖ−ペントンおよびＡｄｖ−ヘキソンからなる群から選択される。
【００３９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、１種類のウイルス性抗原または複数のウイルス性抗原は、ＥＢＶ−ＬＭＰ２、ＥＢＶ−ＢＺＬＦ１、ＥＢＶ−ＥＢＮＡ１、ＣＭＶ−ｐｐ６５、ＣＭＶ−ＩＥ−１、Ａｄｖ−ペントンおよびＡｄｖ−ヘキソンのうち２種類以上を含む。
【００４０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、１種類のウイルス性抗原または複数のウイルス性抗原は、さらに、細菌性抗原を含む。
【００４１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ＩＬ−２１存在下、メモリーＴ細胞の集合と、１種類の抗原または複数の抗原とを接触させることは、１２時間〜５日間行われる。
【００４２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ＩＬ−２１存在下、メモリーＴ細胞の集合と、１種類の抗原または複数の抗原とを接触させることは、３日間行われる。
【００４３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ＩＬ−２１、ＩＬ−１５および／またはＩＬ−７存在下、工程（ｂ）から得られた細胞を培養することは、１２時間〜１０日間行われる。
【００４４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ＩＬ−２１、ＩＬ−１５およびＩＬ−７存在下、工程（ｂ）から得られた細胞を培養することは、４日間〜８日間行われる。
【００４５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ＩＬ−２１、ＩＬ−１５およびＩＬ−７存在下、工程（ｂ）から得られた細胞を培養することは、６日間行われる。
【００４６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、非ＧｖＨＤ誘発細胞を生成するための時間の全長は、１０日間である。
【００４７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、本方法は、さらに、工程（ｃ）の後にアロ反応性細胞を枯渇させることを含む。
【００４８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、アロ反応性細胞を枯渇させることが、前記Ｔｃｍ表現型を含む細胞と宿主抗原提示細胞（ＡＰＣ）とを接触させることによるＣＤ１３７＋および／またはＣＤ２５＋細胞の枯渇によって行われる。
【００４９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、本方法は、ｅｘ−ｖｉｖｏで行われる。
【００５０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ＰＢＭＣは、被験体に関して非同系である。
【００５１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ＰＢＭＣは、被験体に関して同種異系である。
【００５２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、セントラルメモリー表現型を有する細胞は、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ４５ＲＡ−、ＣＤ４５ＲＯ＋シグネチャを含む。
【００５３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、生体サンプルは、血液、血漿、血清、髄液、リンパ液および組織生検からなる群から選択される。
【００５４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、１種類の抗原または複数の抗原は、ウイルス性抗原、細菌性抗原、腫瘍抗原および自己免疫疾患に関連する抗原からなる群から選択される。
【００５５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、本方法は、さらに、細胞または組織の移植を被験体に移植することを含む。
【００５６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、医薬は、さらに、細胞または組織の移植を含む。
【００５７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、移植は、非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合の投与と同時に、非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合を投与する前に、または非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合の投与の後に行われる。
【００５８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、疾患は、悪性疾患である。
【００５９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、疾患は、非悪性疾患である。
【００６０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合は、細胞または組織の移植の前に、細胞または組織の移植と当時に、または細胞または組織の移植の後に投与されるためのものである。
【００６１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態の方法において、（ｂ）が（ａ）の前に行われる。
【００６２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態の方法において、（ａ）と（ｂ）は同時に行われる。
【００６３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、本方法は、さらに、移植の前に、被験体を亜致死状態、致死状体または超致死状態に調整することを含む。
【００６４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合の使用は、さらに、亜致死、致死または超致死に調整するプロトコルを含む。
【００６５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、亜致死、致死または超致死を調整することは、全身照射（ＴＢＩ）、部分的な身体照射、骨髄破壊による調整、骨髄を破壊しない調整、共刺激による遮断、化学療法剤および抗体免疫治療からなる群から選択される。
【００６６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、細胞または組織の移植は、被験体と非同系である。
【００６７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、細胞または組織の移植と、非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合は、同じドナーから得られる。
【００６８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、細胞または組織の移植は、ＨＬＡが同一の同種異系のドナー、ＨＬＡが非同一の同種異系のドナーおよび異種のドナーからなる群から選択されるドナーに由来する。
【００６９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、細胞または組織の移植は、未熟な造血細胞を含む。
【００７０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、細胞または組織の移植は、肝臓、膵臓、脾臓、腎臓、心臓、肺、皮膚、腸、脳、卵巣およびリンパ系／造血細胞または組織からなる群から選択される。
【００７１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、細胞または組織の移植は、数種類の臓器の同時移植を含む。
【００７２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、同時移植は、未熟な造血細胞と固形臓器の移植を含む。
【００７３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、未熟な造血細胞と固形臓器は、同じドナーから得られる。
【００７４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、未熟な造血細胞は、固形臓器の移植の前に、固形臓器の移植と同時に、または固形臓器の移植の後に移植される。
【００７５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、被験体は、悪性疾患を有する。
【００７６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、悪性疾患は、固形腫瘍または腫瘍転移である。
【００７７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、悪性疾患は、血液悪性腫瘍である。
【００７８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、悪性疾患は、白血病、リンパ腫、骨髄腫、メラノーマ、肉腫、神経芽細胞腫、結腸癌、結腸直腸癌、乳癌、卵巣癌、食道癌、滑膜細胞癌、肝臓癌および膵臓癌からなる群から選択される。
【００７９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、被験体は、非悪性疾患を有する。
【００８０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、非悪性疾患は、臓器機能不全または臓器不全、血液疾患、移植片に関連する疾患、感染性疾患、自己免疫疾患、炎症、アレルギー、外傷および損傷からなる群から選択される。
【００８１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、感染性疾患は、ウイルス性疾患または細菌性疾患である。
【００８２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、被験体は、ヒト被験体である。
【００８３】
他の意味であると定義されていない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および／または科学用語は、本発明が関連する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載したのと類似または等価な方法および材料が、本発明の実施形態を実施し、または試験する際に使用されてもよいが、例示的な方法および／または材料を以下に記載する。矛盾する場合には、定義を含め、本明細書が優先する。これに加え、材料、方法および例は、単なる具体例であり、必ずしも限定することを意図していない。
【図面の簡単な説明】
【００８４】
本発明のいくつかの実施形態は、単なる例として、添付の図面を参照しつつ、本明細書に記載される。ここで、図面を詳細に具体的に参照しつつ、示される特定のものは、例であり、本発明の実施形態を具体的に説明するためのものであることを強調しておく。この観点で、図面とともになされている説明は、本発明をどのように実施し得るかは、当業者には明らかであろう。
【図１】図１は、ＯＶＡ免疫付与したマウス由来のＣＤ４４＋ＣＤ８＋メモリーＴ細胞から誘導されるベトＴｃｍ細胞を用い、減少するように調整するＴ細胞が枯渇した骨髄移植（ＴＤＢＭＴ）モデルの模式図である。
【図２Ａ】図２Ａは、抗原を経験した細胞（ＣＤ８＋ＣＤ４４＋）の集合から調製されたベトＴｃｍ細胞が、オボアルブミンを用いたＯＴ１マウスの免疫付与後に、Ｔ細胞が枯渇した（ＴＣＤ）同種異系の幹細胞移植（ＳＣＴ）に対する耐性を誘発することを示すグラフである。亜致死状態になるように照射された（５．２５Ｇｙ）Ｂａｌｂ／ｃ（Ｈ−２ｄ）マウスに、５×１０６の同種異系のＣ５７ＢＬ／６ベトＴｃｍ細胞（Ｈ−２ｂ）またはＯＴ−１  ＯＶＡ免疫付与されたマウスから誘導される５×１０６のＣＤ８＋ＣＤ４４＋細胞と共に、またはこれらを用いずに、２０×１０６のＣ５７ＢＬ／６−ヌード（Ｈ−２ｂ）ＢＭ細胞を移植した。末梢血におけるドナー細胞の割合を、抗宿主（Ｈ−２Ｄｄ）抗ドナー（Ｈ−２Ｋｂ）抗体を用いるＦＡＣＳによって、移植から４５日間分析した。
【図２Ｂ】図２Ｂは、ＣＤ８＋ＣＤ４４＋Ｔｃｍ細胞が、ストリンジェントなマウスモデルにおいてＧｖＨＤを誘発しないことを示すグラフである。
【図２Ｃ】図２Ｃは、ＣＤ８＋ＣＤ４４＋Ｔｃｍ細胞が、ストリンジェントなマウスモデルにおいてＧｖＨＤを誘発しないことを示すグラフである。亜致死状態になるように照射された（５Ｇｙ）Ｂａｌｂ／ｃ（Ｈ−２ｄ）マウスに、５×１０６または１０×１０６の同種異系のＯＶＡ免疫付与した後Ｃ５７ＢＬ／６（Ｈ−２ｂ）から誘導されるＣＤ８＋ＣＤ４４＋Ｔｃｍ細胞または新鮮なＣＤ８＋ＣＤ４４＋細胞を移植した。ＣＤ８＋ＣＤ４４−ナイーブ細胞をＧｖＨＤのポジティブコントロールとして使用した。（図２Ｂ）細胞移植後６２日間の平均重量変化（図２Ｃ）生存プロットは、特定の群におけるマウスの生存時間線を示す。
【図２Ｄ】図２Ｄは、天然に存在するメモリー細胞（例えば、ＣＤ４４＋ＣＤ８＋抗ＯＶＡ）から誘導されるＴｃｍ細胞による耐性誘発を試験するための、強度を下げるように調整する（ＲＩＣ）モデルの模式図である。
【図２Ｅ】図２Ｅは、天然に存在するメモリー細胞（ＣＤ８＋ＣＤ４４＋）から調製されたベトＴｃｍ細胞が、ＴＣＤ  ａｌｌｏＳＣＴに対する耐性を誘発することを示すグラフである。亜致死状態になるように照射された（５Ｇｙ）Ｂａｌｂ／ｃ（Ｈ２ｄ）マウスに、５×１０６の同種異系のＣ５７ＢＬ／６ベトＴｃｍ細胞（Ｈ−２ｂ）またはＯＶＡ免疫付与されたマウスから誘導される５×１０６のＣＤ８＋ＣＤ４４＋細胞または５×１０６の同系異種Ｃ５７ＢＬ／６の新しく単離されたＣＤ８＋ＣＤ４４＋細胞と共に、またはこれらを用いずに、２０×１０６のＣ５７ＢＬ／６−ヌード（Ｈ−２ｂ）ＢＭ細胞を移植した。末梢血におけるドナー細胞の割合を、抗宿主（Ｈ−２Ｄｄ）抗ドナー（Ｈ−２Ｋｂ）抗体を用いるＦＡＣＳによって、移植から５５日間分析した。
【図３】図３Ａ〜Ｄは、ウイルスペプチドを用いた抗サードパーティＣＤ４−ＣＤ５６−ベトＴｃｍ細胞の生成を示すグラフである。０日目にドナーＰＢＭＣからＣＤ４＋細胞およびＣＤ５６＋細胞を枯渇させた後に確立されたヒトＣＤ４−ＣＤ５６−応答物を、ＥＢＶ、ＣＭＶおよびアデノウイルスのウイルスペプチドで刺激を受けた照射されたドナーに由来するＤＣに対して、＋３日目までＩＬ−２１と共に共培養し、＋３日目から＋９日目までＩＬ−２１、ＩＬ−１５およびＩＬ−７を加えて培養した。（図３Ａ〜Ｂ）０日目での応答性ＣＤ４−ＣＤ５６−細胞（図３Ａ）、培養９日目にこれらから生成した抗ウイルス性Ｔｃｍ細胞（図３Ｂ）のベトＴｃｍ表現型のＦＡＣＳ分析。（図３Ｃ〜Ｄ）＋９日目に、細胞を集め、照射された宿主ＰＢＭＣに対して５日間培養し（すなわち、バルク培養）、次いで、これを集め、エフェクター表現型を誘発するためにＩＬ−２存在下、限界希釈分析（ＬＤＡ）において、照射された宿主ＰＢＭＣに対して７日間、再び刺激を与えた。＋２１日目に、宿主由来のＣｏｎＡ−ブラストに対するＳ３５−メチオニンＬＤＡ死滅アッセイを行った。５時間の混合リンパ球反応（ＭＬＲ）の後、ウェルから上清を集め、βカウンタで放射性を計測した。（図３Ｃ）は、培養物あたりの細胞数に対して応答した培養物％のプロットを表す。（図３Ｄ）培養物あたり、細胞数に対する非応答性培養物の割合％の線形回帰プロットを表す。特定の培養物中の抗宿主クローンの頻度（ｆ）を、線形回帰の傾きから計算した。
【図４Ａ】図４Ａは、白血球除去療法によって誘導される抗ウイルス性ＣＤ４−ＣＤ５６−ＣＤ４５ＲＡ−ヒトベトＴｃｍ細胞を生成し、その抗宿主反応性を試験するためのプロトコルの模式図である。
【図４Ｂ】図４Ｂは、ウイルスペプチドをロードしたヒト成熟樹状細胞の生成の模式図である。
【図５Ａ】図５Ａは、サードパーティ刺激としてウイルスペプチドをロードした自家性ＤＣを用い、ＣＤ４−ＣＤ５６−ＣＤ４５ＲＡ−応答物から作られた抗ウイルス性ベトＴｃｍ細胞を示すグラフである。
【図５Ｂ】図５Ｂは、サードパーティ刺激としてウイルスペプチドをロードした自家性ＤＣを用い、ＣＤ４−ＣＤ５６−ＣＤ４５ＲＡ−応答物から作られた抗ウイルス性ベトＴｃｍ細胞を示すグラフである。（図５Ａ）０日目のＣＤ４−ＣＤ５６−応答物および＋９日目のＴｃｍ細胞の表現型（右側パネル）。（図５Ｂ）０日目のＣＤ４−ＣＤ５６−ＣＤ４５ＲＡ−応答物および＋９日目のＴｃｍ細胞の表現型（右側パネル）。
【図５Ｃ】図５Ｃは、ＣＤ４−ＣＤ５６−ＣＤ４５ＲＡ−細胞フラクションおよびＣＤ４−ＣＤ５６−細胞フラクションから作られる抗ウイルスＴｃｍ細胞において、新鮮なＣＤ４−ＣＤ５６−ＣＤ１９−Ｔ細胞と比較して、抗宿主ＣＴＬ前駆対の頻度の限界希釈分析（ＬＤＡ）を示すグラフである。＋９日目に、新鮮なＣＤ４−ＣＤ５６−ＣＤ１９−細胞のコントロール集合を、新鮮な解凍したドナー細胞からビーズ選別した。３種類全てのドナー細胞調製物（すなわち、抗ウイルス性ベトＴｃｍ  ＣＤ４−ＣＤ５６−、抗ウイルス性ベトＴｃｍ  ＣＤ４−ＣＤ５６−ＣＤ４５ＲＡ−および新鮮なＣＤ４−ＣＤ５６−ＣＤ１９−細胞）を、照射された宿主ＰＢＭＣに対し、＋９日目に５日間培養し（すなわち、バルク培養）、次いで、これを集め、エフェクター表現型を誘発するためにＩＬ−２存在下、ＬＤＡ中、照射された宿主ＰＢＭＣに対して７日間、再び刺激を与えた。＋２１日目に、宿主由来のＣｏｎＡ−ブラストに対するＳ３５−メチオニンＬＤＡ死滅アッセイを行った。５時間のＭＬＲの後、ウェルから上清を集め、βカウンタで放射性を計測した。培養物あたり、細胞数に対する非応答性培養物の割合％の線形回帰プロットを示している。特定の培養物中の抗宿主クローンの頻度（ｆ）を、線形回帰の傾きから計算した。
【図６】図６は、ウイルスペプチドに対して指向するベトＴｃｍ細胞の生成前と生成後の抗宿主Ｔ細胞の枯渇をまとめた表である（図４Ａおよび図５Ａ〜Ｃにおいて行われた通り）。注目すべきは、ＬＤＡアッセイに基づく、低い抗宿主ＣＴＬ−ｐ頻度と、総抗宿主ＣＴＬ−ｐレベルである（グラフ上に円で囲まれている）。
【図７】図７は、メモリーＴ細胞から誘導され、自己抗原提示細胞の観点で、ウイルス性抗原に対して培養したヒトベトＴｃｍ細胞を生成するためのプロトコルの一実施形態の模式図である。
【図８】図８は、図７に示されるプロトコルによって、ベトＴｃｍ細胞をメモリーＴ細胞から生成した１０回の実験をまとめた表である。注目すべきは、細胞の回収率と純度が、非常に再現性があることであった。
【図９】図９Ａ〜Ｈは、図７に示されるプロトコルによってメモリーＴ細胞から作られたベトＴｃｍ細胞の純度を示す１つの実験の典型的なＦＡＣＳ分析を示すグラフである。この図は、図８に示される各工程のＦＡＣＳ分析が以下の通りであることを示す。図９Ａ〜Ｂは、精製前の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）のＦＡＣＳ分析を示す。図９Ｃ〜Ｄは、ＣＤ４−ＣＤ５６−精製後のＦＡＣＳ分析を示す。図９Ｅ〜Ｆは、ＣＤ４−ＣＤ５６−ＣＤ４５ＲＡ−精製後のＦＡＣＳ分析を示す（すなわち、ＣＤ４−ＣＤ５６−ＣＤ４５ＲＯ＋細胞の濃縮）。図９Ｇ〜Ｈは、抗ウイルスＴｃｍ細胞のＦＡＣＳ分析を示す。
【発明を実施するための形態】
【００８５】
本発明は、そのいくつかの実施形態では、メモリーＴ細胞から作られるベト細胞に関し、排他的ではないが、より特定的には、その製造方法、移植および疾患の治療におけるこれらの使用に関する。
【００８６】
本発明の原理および操作は、図面および添付の記載を参照しつつ、よりよく理解されるだろう。
【００８７】
本発明の少なくとも１つの実施形態を詳細に説明する前に、本発明が、その用途において、以下の説明に示されるか、または実施例によって例示される詳細に必ずしも限定されないことが理解されるべきである。本発明は、他の実施形態も可能であり、または種々の様式で実施または実行することが可能である。また、本明細書で使用される句および用語は、説明のためのものであり、限定するものとみなすべきではないことが理解されるべきである。
【００８８】
骨髄（ＢＭ）移植は、血液悪性腫瘍および他の障害（例えば、血液疾患、臓器不全）を有する多くの患者のための治療的措置を与える。さらに、ＢＭは、キメラ現象の誘発によって移植の成功率を高めるために、種々の他の臓器（例えば、同じ臓器ドナーに由来する腎臓または肝臓の移植）と共に同時移植されてもよい。しかし、ＢＭ移植は、宿主抗原（Ａｇ）に応答し、複数系統の移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）を引き起こすドナーＴ細胞を含む。ＧｖＨＤの問題は、このような設定において、ほとんどが一様に致死となるが、Ｔ細胞が枯渇した骨髄（ＴＤＢＭＴ）の移植によって防ぐことができる。しかし、ＧｖＨＤ予防の利点は、顕著に高い移植拒絶率によって相殺され得る。
【００８９】
同種異系のＴＤＢＭＴの拒絶を克服するための手法の１つは、ＰＣＴ出願公開番号第ＷＯ２００１／４９２４３号、第ＷＯ２００７／０２３４９１号、第ＷＯ２０１０／０４９９３５号、第ＷＯ２０１２／０３２５２６号、第ＷＯ２０１３／０３５０９９号によって教示されるような、種々のベト細胞調製物を利用したものである。しかし、移植拒絶とＧｖＨＤは、養子細胞治療において、特に、同種異系の設定において、いまだ大きな関心事である。
【００９０】
実施のために本発明を縮小しつつ、本願発明者らは、移植片対宿主（ＧｖＨ）反応を誘発することなく、抗疾患活性（例えば、抗ウイルス活性）も含む、ベト細胞の改良された集合を明らかにした。これらの新規細胞は、抗原活性化によって、メモリーＴ細胞からアロ反応性クローンを枯渇させることによって作られる。
【００９１】
本明細書で以下に示され、以下の実施例の章に示されるように、本願発明者らは、メモリーＴ細胞から出発するＨＬＡが適合しない（例えば、同種異系の）用途のためにベト細胞を生成する新しい方法を提供する。具体的には、図１に示すように、本願発明者らは、天然に存在するメモリーＴ細胞由来のベトＴｃｍ細胞を生成するためにマウスモデルを利用した。メモリーＴ細胞から作られるＴｃｍ細胞は、下げるように調整したＴ細胞が枯渇した骨髄移植（ＴＤＢＭＴ）モデルにおいて、移植片対宿主反応性を有さずに、耐性を誘発し（図２Ａ）、強度を下げるように調整するプロトコルの後、キメラ現象の顕著な向上を示した（図２Ｅ）。しかし、新鮮なＣＤ８＋ＣＤ４４＋メモリー細胞（抗原活性化を受けなかった）は、ＧｖＨＤに起因する顕著な致死性と体重減少を誘発した（図２Ｂ〜Ｃ）。
【００９２】
次に、ウイルス性抗原を使用し、ＣＤ４−ＣＤ５６−細胞集合からヒトＴｃｍベト細胞を生成した。図３Ａ〜Ｂに示されるように、細胞をウイルス性抗原存在下で培養し、自己樹状細胞上に提示し、培養開始から９日目に、９３％のＴｃｍ表現型（ＣＤ６２＋ＣＤ４５ＲＯ＋細胞）を含んでいた。さらに、これらのＴｃｍ細胞は、新鮮なＣＤ４−ＣＤ５６−細胞と比較して、宿主アロ反応性クローンの２ｌｏｇでの枯渇を得た（以下の図３Ｃ〜Ｄと表２）。次いで、まず、ＣＤ４＋、ＣＤ５６＋およびＣＤ４５ＲＡ＋細胞の細胞ドナーから得られた末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を枯渇させることによって、ヒトメモリー細胞からベト細胞を生成した（図４Ａ）。したがって、この細胞の残りの集合は、ドナーのメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞を含んでいた。メモリーＣＤ８＋Ｔ細胞を、（同じ細胞ドナーの）樹状細胞と一緒に培養し、ここで、樹状細胞は、抗原（例えば、ＥＢＶ、ＣＭＶおよびアデノウイルスを含むウイルス性抗原カクテル）を発現するように操作されている。最初の３日間、細胞培養物にＩＬ−２１を追加し、次いで、３日目から９日目まで、ＩＬ−２１、ＩＬ−１５およびＩＬ−７を培養物に加えた。得られた細胞の集合は、Ｔｃｍ表現型を含んでいたが、抗宿主反応性を発揮しなかった（図５Ａ〜Ｃと図６に示す通り）。
【００９３】
合わせると、抗原活性化による（例えば、ウイルス性抗原、腫瘍抗原を用いる）、Ｔ細胞メモリープールにおけるアロ反応性クローンの枯渇は、メモリーＴ細胞プール中に残っている残留ＧｖＨＤの問題を解決し得る。さらに、これらの結果は、移植耐性の誘発、ＧｖＨＤ合併症がないことと、疾患の治療（例えば、抗ウイルス用途または抗癌用途）のために、メモリー細胞から作られるベト細胞の新規な調製を、細胞治療に使用可能であることを示唆している。
【００９４】
したがって、本発明の一態様によれば、セントラルメモリーＴ−リンパ球（Ｔｃｍ）表現型を含む非移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）誘発細胞の単離された集合を生成する方法であって、前記細胞が、耐性誘発性細胞であり、および／または抗疾患活性を付与し、移植後にリンパ節にホーミングすることが可能であり、前記方法は、（ａ）少なくとも７０％のメモリーＴ細胞の集合を与えることと、（ｂ）抗原反応性細胞を濃縮するように、前記メモリーＴ細胞の集合と、１種類の抗原または複数の抗原とを接触させることと、（ｃ）サイトカイン存在下、前記セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を含む細胞を増幅させるように、工程（ｂ）から得られた前記細胞を培養し、それによって、非ＧＶＨＤ誘発細胞の単離された集合を生成することとを含む、方法が提供される。
【００９５】
「細胞の単離された集合」との句は、本明細書で使用される場合、その天然環境（例えば、ヒトの身体）から単離された細胞を指す。
【００９６】
「非移植片対宿主病」または「非ＧｖＨＤ」との用語は、本明細書で使用される場合、移植片対宿主（ＧｖＨ）誘発反応性がかなり減っているか、またはないことを指す。したがって、本発明の細胞は、移植から３０〜１２０日後の移植された被験体の生存、体重および全体的な外観によって実証されるように、顕著な移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）を引き起こさないものとして作られる。ＧｖＨＤの減少について被験体を評価する方法は、当業者によく知られている。
【００９７】
一実施形態によれば、本発明の細胞は、本教示に従って作成されていない細胞と比較して、宿主に対する反応性が少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、またはさらに１００％減少している。
【００９８】
「セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型」との句は、本明細書で使用される場合、リンパ節に対してホーミングするＴ細胞傷害性細胞の部分集合を指す。Ｔｃｍ表現型を有する細胞は、典型的には、ＣＤ３＋／ＣＤ８＋／ＣＤ６２Ｌ＋／ＣＤ４５ＲＯ＋／ＣＤ４５ＲＡ−シグネチャを含む。Ｔｃｍ細胞は、１つの細胞で全てのシグネチャマーカーを発現してもよく、または１つの細胞で、シグネチャマーカーの一部のみを発現してもよいことが理解されるだろう。細胞表現型の決定は、当業者に知られている任意の方法によって、例えば、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）または捕捉ＥＬＩＳＡ標識によって行われてもよい。
【００９９】
一実施形態によれば、細胞の単離された集合の少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、またはさらに１００％が、Ｔｃｍ細胞シグネチャを有している。
【０１００】
特定の実施形態によれば、上述の細胞の単離された集合の約２０〜４０％、約３０〜５０％、約４０〜６０％、約５０〜７０％、約６０〜８０％、約７０〜９０％、約８０〜１００％、または約９０〜１００％は、Ｔｃｍ細胞シグネチャを有する。
【０１０１】
本発明の非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合は、本明細書では、「Ｔｃｍ細胞」とも呼ばれる。
【０１０２】
上述のように、Ｔｃｍ細胞は、典型的には、移植後に、リンパ節に対してホーミングする。いくつかの実施形態によれば、本発明の細胞の単離された集合は、移植後にリンパ節のいずれか（例えば、末梢リンパ節および腸間膜リンパ節）に対してホーミングしてもよい。これらの細胞のホーミング性によって、これらの細胞が、迅速かつ効率的な様式でベト活性を発揮する。
【０１０３】
本発明のＴｃｍ細胞の単離された集合は、耐性誘発性細胞である。
【０１０４】
「耐性誘発性細胞」との細胞は、本明細書で使用される場合、レシピエントの細胞と接触したときに、投与された耐性誘発性細胞が存在しないレシピエントの細胞の応答性と比較して、レシピエントの細胞（例えば、レシピエントのＴ細胞）の応答性が低下した細胞を指す。耐性誘発性細胞は、ＰＣＴ出願公開第ＷＯ２００１／０４９２４３号および第ＷＯ２００２／１０２９７１号に既に記載されているように、ベト細胞（すなわち、宿主Ｔ細胞と接触したときに、宿主Ｔ細胞のアポトーシスを引き起こすＴ細胞）を含む。
【０１０５】
「ベト活性」との用語は、ベト細胞を認識し、これに結合したときに、抗ドナーレシピエントＴ細胞を不活性化させる免疫細胞（例えば、ドナー由来のＴ細胞）に関する。一実施形態によれば、この不活性化によって、抗−ドナーレシピエントＴ細胞のアポトーシスが起こる。
【０１０６】
これに加えて、またはこれに代えて、本発明のＴｃｍ細胞の単離された集合は、抗疾患活性を含む。
【０１０７】
「抗疾患活性」との用語は、疾患細胞に対するＴｃｍ細胞の機能を指す。抗疾患活性は、疾患細胞に対して直接的なものであってもよく、例えば、疾患細胞の能力を殺してもよい。この活性は、ＬＦＡ１−Ｉ／ＣＡＭ１結合が介在するＴＣＲ依存性の死滅に起因するものであってもよい［Ａｒｄｉｔｔｉら、Ｂｌｏｏｄ（２００５）１０５（８）：３３６５−７１．Ｅｐｕｂ  ２００４年７月６日］。これに加えて、またはこれに代えて、抗疾患活性は、例えば、疾患細胞の死を引き起こすことによって（例えば、死滅、アポトーシスによって、または例えば、抗体、サイトカインなどの他の因子の分泌によって）、他の種類の細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球、マクロファージ、ＮＫ細胞）の活性化によって、間接的であってもよい。
【０１０８】
疾患細胞は、例えば、ウイルス感染した細胞、細菌感染した細胞、癌細胞［例えば、固形腫瘍細胞または白血病／リンパ腫細胞、Ｔｃｍ細胞の移植片対白血病（ＧＶＬ）活性とも呼ばれる］、自己免疫疾患に関連する細胞、アレルギー反応に関連する細胞、またはストレス、照射または年齢に起因して変化した細胞を含んでいてもよい。
【０１０９】
いくつかの実施形態によれば、本発明のＴｃｍ細胞は、遺伝的に改変されていない細胞または遺伝的に改変された細胞であってもよい（例えば、特定の遺伝子、マーカーまたはペプチドを発現するか、または発現しないように遺伝的に操作された細胞、または特定のサイトカインを分泌するか、または分泌しないように遺伝的に操作された細胞）。当該技術分野で知られている任意の方法を、例えば、関連する遺伝子／複数の遺伝子の不活性化によって、またはポリペプチドの発現を妨害するアンチセンスＲＮＡの挿入によって（例えば、本明細書で参考として組み込まれるＷＯ／２０００／０３９２９４号を参照）、細胞を遺伝子操作する際に実施してもよい。
【０１１０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、細胞の単離された集合を生成する方法であって、前記方法が、（ａ）メモリーＴ細胞の集合を与えることと、（ｂ）抗原反応性細胞を濃縮するように、前記メモリーＴ細胞の集合と、１種類の抗原または複数の抗原とを接触させることと、（ｃ）サイトカイン存在下、セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を含む細胞を増幅させるように、工程（ｂ）から得られた前記細胞を培養することとを含む方法が提供される。
【０１１１】
「メモリーＴ細胞」との用語は、本明細書で使用される場合、以前に抗原に遭遇し、応答したＴリンパ球の部分集合を指し、抗原を経験したＴ細胞とも呼ばれる。
【０１１２】
一実施形態によれば、メモリーＴ細胞は、細胞の集合の少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、またはさらに１００％含まれる。
【０１１３】
一実施形態によれば、メモリーＴ細胞は、ＣＤ８マーカーを発現する細胞傷害性Ｔ細胞（すなわち、ＣＤ８＋Ｔ細胞）を含む。
【０１１４】
別の実施形態によれば、メモリーＴ細胞は、ＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＯ＋表現型を含む。
【０１１５】
別の実施形態によれば、メモリーＴ細胞は、ＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＡ−表現型を含む。
【０１１６】
別の実施形態によれば、メモリーＴ細胞は、ＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＯ＋ＣＤ４５ＲＡ−表現型を含む。
【０１１７】
メモリーＣＤ８＋Ｔ細胞の選択は、ＣＤ８＋およびＣＤ４５ＲＡ−を一緒に発現する細胞および／またはＣＤ８＋およびＣＤ４５ＲＯ＋を一緒に発現する細胞の選択によって行われてもよく、当該技術分野で知られている任意の方法を用いて、例えば、アフィニティに基づく精製によって（例えば、ＭＡＣＳビーズ、ＦＡＣＳソーターおよび／または捕捉ＥＬＩＳＡ標識を用いることによって）行われてもよい。
【０１１８】
メモリーＣＤ８＋Ｔ細胞の選択は、エフェクターＴ細胞およびセントラルメモリーＴ細胞の選択によって、さらに行われてもよい。後者は、例えば、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２７および／またはＣＤ２８を発現する。
【０１１９】
一実施形態によれば、メモリーＴ細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から得られる。
【０１２０】
一実施形態によれば、メモリーＴ細胞は、リンパ系組織から、例えば、リンパ節または脾臓から得られる。
【０１２１】
高純度のメモリーＴ細胞（例えば、少なくとも約５０〜７０％のメモリーＴ細胞）を含む細胞の集合を得るために、またはメモリーＴ細胞の数を増やすために、ＰＢＭＣは、ナイーブ細胞（例えば、ＣＤ４５ＲＡ＋細胞）、付着性細胞（例えば、単球、マクロファージ）、ＣＤ４＋細胞（例えば、Ｔヘルパー細胞）、ＣＤ５６＋細胞（例えば、ＮＫ細胞）、またはメモリーＴ細胞表現型を含まない任意の他の細胞が枯渇していてもよい。
【０１２２】
ナイーブＴ細胞（例えば、ＣＤ４５ＲＡ＋細胞を発現する）、ＣＤ４＋および／またはＣＤ５６＋細胞の枯渇は、当該技術分野で知られている任意の方法を用いて、例えば、アフィニティに基づく精製によって（例えば、ＭＡＣＳビーズ、ＦＡＣＳソーターおよび／または捕捉ＥＬＩＳＡ標識を用いることによって）行われてもよい。
【０１２３】
付着性細胞の枯渇は、当該技術分野で知られている任意の方法を用いて、例えば、細胞培養皿でＰＢＭＣを培養し（例えば、２〜６時間）、非付着性細胞を集めることによって、行われてもよい。
【０１２４】
一実施形態によれば、メモリーＴ細胞は、ＣＤ４５ＲＡ＋細胞が枯渇している。
【０１２５】
一実施形態によれば、メモリーＴ細胞は、ＣＤ４＋細胞および／またはＣＤ５６＋細胞が枯渇している。
【０１２６】
メモリーＴ細胞プールからアロ反応性クローンを枯渇させるために、メモリーＴ細胞を、１種類の抗原または複数の抗原と接触させる。
【０１２７】
本明細書で使用される場合、「１種類の抗原または複数の抗原」との句は、免疫応答を誘発することができる可溶性または不溶性の（例えば、膜に会合する）分子を指す。
【０１２８】
例えば、１種類の抗原または複数の抗原は、全細胞（例えば、生きた細胞または死んだ細胞）、細胞フラクション（例えば、溶解した細胞）、細胞抗原（例えば、細胞表面抗原）、タンパク質抽出物、精製されたタンパク質または合成ペプチドであってもよい。例えば、本発明のいくつかの実施形態の１種類の抗原または複数の抗原は、悪性疾患に関連する抗原（例えば、腫瘍抗原）、自己免疫疾患に関連する抗原（すなわち、自己免疫抗原）、アレルギー反応に関連する抗原（すなわち、アレルギー抗原）、ウイルスの抗原（すなわち、ウイルス性抗原）、細菌の抗原（すなわち、細菌性抗原）または真菌の抗原（例えば、真菌抗原）を含む。
【０１２９】
ある実施形態によれば、１種類の抗原または複数の抗原は、典型的には免疫力が低下した被験体（例えば移植患者）に影響を与える感染性有機体（例えば、ウイルス、細菌、真菌といった有機体）の抗原である。免疫力が低下した患者に影響を与え得る例示的な感染性有機体としては、限定されないが、ウイルス、例えば、パルボウイルス（例えば、パルボウイルスＢ１９）、ロタウイルス、水痘・帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、ヘルペス単純ウイルス（ＨＳＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒウイルス（ＥＢＶ）、ポリオーマウイルス（例えば、ＢＫウイルス）；細菌、例えば、Ｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｐ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ、Ｌ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ｎｏｃａｒｄｉａ  ｓｐｅｃｉｅｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐｅｃｉｅｓ、Ｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｎｏｃａｒｄｉａ  ｓｐｅｃｉｅｓ、Ｐ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｓｐｅｃｉｅｓ、Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ、マイコバクテリウム（例えば、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ−ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ  ｃｏｍｐｌｅｘ）、封入された細菌、例えば、Ｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｈ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅおよびＮ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ；真菌、例えば、Ｐ  ｊｉｒｏｖｅｃｉ、ＣａｎｄｉｄａおよびＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ；および寄生生物、例えば、トキソプラズマ種、クリプトスポリジウム種、ストロンギロイデス種が挙げられる。
【０１３０】
一実施形態によれば、抗原は、ウイルス性抗原であり、例えば限定されないが、Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒウイルス（ＥＢＶ）、アデノウイルス（Ａｄｖ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、風邪ウイルス、流感ウイルス、Ａ型、Ｂ型およびＣ型肝炎ウイルス、ヘルペス単純、ＨＩＶ、インフルエンザ、日本脳炎、麻疹、ポリオ、狂犬病、呼吸器多核体、風疹、天然痘、水痘帯状疱疹、ロタウイルス、ウエストナイルウイルス、ポリオーマウイルス（例えば、ＢＫウイルス）またはジカウイルスの抗原である。
【０１３１】
ウイルス性抗原のさらに特定的な例として、アデノウイルス抗原としては、限定されないが、Ａｄｖ−ペントンまたはＡｄｖ−ヘキソンが挙げられ、ＣＭＶ抗原としては、限定されないが、エンベロープ糖タンパク質Ｂ、ＣＭＶ  ＩＥ−１およびＣＭＶ  ｐｐ６５が挙げられ、ＥＢＶ抗原としては、限定されないが、ＥＢＶ  ＬＭＰ２、ＥＢＶ  ＢＺＬＦ１、ＥＢＶ  ＥＢＮＡ１、ＥＢＶ  Ｐ１８およびＥＢＶ  Ｐ２３が挙げられ、肝炎抗原としては、限定されないが、Ｂ型肝炎ウイルスのＳ、ＭおよびＬタンパク質、Ｂ型肝炎ウイルスのｐｒｅ−Ｓ抗原、ＨＢＣＡＧ  ＤＥＬＴＡ、ＨＢＶ  ＨＢＥ、Ｃ型肝炎ウイルス性ＲＮＡ、ＨＣＶ  ＮＳ３およびＨＣＶ  ＮＳ４が挙げられ、ヘルペス単純ウイルス性抗原としては、限定されないが、最初期遺伝子タンパク質および糖タンパク質Ｄが挙げられ、ＨＩＶ抗原としては、限定されないが、ｇａｇ、ｐｏｌ、およびｅｎｖ遺伝子の遺伝子産物、例えば、ＨＩＶ  ｇｐ３２、ＨＩＶ  ｇｐ４１、ＨＩＶ  ｇｐ１２０、ＨＩＶ  ｇｐ１６０、ＨＩＶ  Ｐ１７／２４、ＨＩＶ  Ｐ２４、ＨＩＶ  Ｐ５５  ＧＡＧ、ＨＩＶ  Ｐ６６  ＰＯＬ、ＨＩＶ  ＴＡＴ、ＨＩＶ  ＧＰ３６、Ｎｅｆタンパク質および逆転写酵素が挙げられ、インフルエンザ抗原としては、限定されないが、ヘマグルチニンおよびノイラミニダーゼが挙げられ、日本脳炎ウイルス性抗原としては、限定されないが、タンパク質Ｅ、Ｍ−Ｅ、Ｍ−Ｅ−ＮＳ１、ＮＳ１、ＮＳ１−ＮＳ２Ａおよび８０％  Ｅが挙げられ、麻疹抗原としては、限定されないが、麻疹ウイルス融合タンパク質が挙げられ、狂犬病抗原としては、限定されないが、狂犬病糖タンパク質および狂犬病ヌクレオタンパク質が挙げられ、呼吸器多核体ウイルス性抗原としては、限定されないが、ＲＳＶ融合タンパク質およびＭ２タンパク質が挙げられ、ロラウイルス性抗原としては、限定されないが、ＶＰ７ｓｃが挙げられ、風疹抗原としては、限定されないが、タンパク質Ｅ１およびＥ２が挙げられ、水痘帯状疱疹ウイルス性抗原としては、限定されないが、ｇｐｌおよびｇｐｌｌが挙げられる。
【０１３２】
一実施形態によれば、抗原は、細菌性抗原であり、例えば限定されないが、炭疽病、グラム陰性菌、クラミジア、ジフテリア、インフルエンザ菌、ヘリコバクターピロリ、マラリア、ヒト結核菌、百日咳毒素、肺炎球菌、リケッチア、ブドウ球菌、連鎖球菌および破傷風の抗原が挙げられる。
【０１３３】
細菌性抗原のさらなる特定の例として、炭疽病抗原としては、限定されないが、炭疽病保護抗原が挙げられ、グラム陰性菌抗原としては、限定されないが、リポ多糖体が挙げられ、インフルエンザ菌抗原としては、限定されないが、莢膜多糖類が挙げられ、ジフテリア抗原としては、限定されないが、ジフテリア毒素が挙げられ、ヒト結核菌抗原としては、限定されないが、ミコール酸、ヒートショックタンパク質６５（ＨＳＰ６５）、３０ｋＤａの主要な分泌タンパクおよび抗原８５Ａが挙げられ、百日咳毒素抗原としては、限定されないが、血球凝集素、パータクチン、ＦＩＭ２、ＦＩＭ３およびアデニル酸シクラーゼが挙げられ、肺炎球菌抗原としては、限定されないが、ニューモリシンおよびニューモリシン莢膜多糖類が挙げられ、リケッチア抗原としては、限定されないが、ｒｏｍｐＡが挙げられ、連鎖球菌抗原としては、限定されないが、Ｍタンパク質が挙げられ、破傷風抗原としては、限定されないが、破傷風毒素が挙げられる。
【０１３４】
一実施形態によれば、抗原は、スーパー耐性菌抗原である（例えば、多剤耐性菌）。スーパー耐性菌の例としては、限定されないが、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａおよびＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｐ．を含む）が挙げられる。
【０１３５】
一実施形態によれば、抗原は、真菌性抗原である。真菌の例としては、限定されないが、カンジダ、コクシジオデス（ｃｏｃｃｉｄｉｏｄｅｓ）、クリプトコッカス、ヒストプラズマ、リーシュマニア、マラリア原虫、原生動物、寄生生物、住血吸虫、白癬、トキソプラズマおよびクルーズ・トリパノソーマが挙げられる。
【０１３６】
真菌性抗原のさらなる特定的な例として、コクシジオデス（ｃｏｃｃｉｄｉｏｄｅｓ）抗原としては、限定されないが、球状体抗原が挙げられ、クリプトコッカス抗原としては、限定されないが、莢膜多糖が挙げられ、ヒストプラズマ抗原としては、限定されないが、ヒートショックタンパク質６０（ＨＳＰ６０）が挙げられ、リーシュマニア抗原としては、限定されないが、ｇｐ６３およびリポホスホグリカンが挙げられ、マラリア原虫抗原としては、限定されないが、メロゾイト表面抗原、スポロゾイト表面抗原、スポロゾイト周囲抗原、生殖母体／ガメート表面抗原、１５５／ＲＥＳＡの血液ステージ抗原を含む原生動物および他の寄生生物性抗原が挙げられ、住血吸虫抗原としては、限定されないが、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼおよびパラミオシンが挙げられ、白癬真菌性抗原としては、限定されないが、トリコフィトンが挙げられ、トキソプラズマ抗原としては、限定されないが、ＳＡＧ−１およびｐ３０が挙げられ、クルーズ・トリパノソーマ抗原としては、限定されないが、７５〜７７ｋＤａ抗原および５６ｋＤａ抗原が挙げられる。
【０１３７】
一実施形態によれば、抗原は、望まない自己免疫状態またはアレルギー状態に関連する細胞によって発現される抗原である。例示的な自己免疫状態としては、限定されないが、急性壊死性出血性脳症、アレルギー喘息、円形脱毛症、貧血、アフター性潰瘍、関節炎（関節リウマチ、若年性関節リウマチ、変形性関節症、乾癬性関節炎を含む）、喘息、自己免疫甲状腺炎、結膜炎、クローン病、皮膚エリテマトーデス、皮膚炎（アトピー性皮膚炎および湿疹様皮膚炎を含む）、糖尿病（ｄｉａｂｅｔｅｓ）、糖尿病（ｄｉａｂｅｔｅｓ  ｍｅｌｌｉｔｕｓ）、癩性結節性紅斑、角結膜炎、多発性硬化症、重症筋無力症、乾癬、強皮症、シェーグレン症候群（シェーグレン症候群に対して二次的な乾性角結膜炎を含む）、スティーブンス・ジョンソン症候群、全身性エリテマトーデス、潰瘍性結腸炎、膣炎およびウェゲナー肉芽腫症が挙げられる。
【０１３８】
自己免疫抗原の例としては、限定されないが、グルタミン酸デカルボキシラーゼ６５（ＧＡＤ  ６５）、ネイティブＤＮＡ、ミエリン塩基性タンパク質、ミエリンプロテオリピドタンパク質、アセチルコリン受容体要素、サイログロブリン、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）受容体が挙げられる。
【０１３９】
アレルギー抗原の例としては、限定されないが、花粉抗原、例えば、スギ花粉抗原、ブタクサ花粉抗原、ドクムギ花粉抗原、動物由来の抗原（例えば、イエダニ抗原およびネコ抗原）、組織適合性抗原およびペニシリン、および他の治療薬が挙げられる。
【０１４０】
一実施形態によれば、抗原は、腫瘍細胞によって発現する抗原（またはその一部、例えば、抗原エピトープ）である。一実施形態によれば、抗原（またはその一部）は、造血組織で発現するタンパク質から誘導され（例えば、造血悪性腫瘍、例えば、白血病抗原）、または固形腫瘍（例えば、メラノーマ、膵臓癌、肝臓癌、胃腸癌など）で発現するタンパク質から誘導される。
【０１４１】
腫瘍抗原の例としては、限定されないが、Ａ３３、ＢＡＧＥ、Ｂｃｌ−２、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ＢＣＲ−ＡＢＬ、β−カテニン、癌精巣抗原（ＣＴＡ、例えば、ＭＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−Ａ２／Ａ３およびＮＹ−ＥＳＯ−１）、ＣＡ  ｌ２５、ＣＡ  １９−９、ＣＡ  ５０、ＣＡ  ２７．２９（ＢＲ  ２７．２９）、ＣＡ  １５−３、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ１２３、ＣＥＡ、ｃ−Ｍｅｔ、ＣＳ−１、サイクリンＢ１、ＤＡＧＥ、ＥＢＮＡ、ＥＧＦＲ、ＥＬＡ２、エフリンＢ２、エストロゲン受容体、ＦＡＰ、フェリチン、葉酸結合タンパク質、ＧＡＧＥ、Ｇ２５０／ＣＡ  ＩＸ、ＧＤ−２、ＧＭ２、ｇｐ７５、ｇｐ１００（Ｐｍｅｌ  １７）、ＨＡ−１、ＨＡ−２、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ、ＨＭ１．２４、ＨＰＶ  Ｅ６、ＨＰＶ  Ｅ７、ｈＴＥＲＴ、Ｋｉ−６７、ＬＲＰ、メソテリン、ムチン様癌関連抗原（ＭＣＡ）、ＭＵＣ１、ｐ５３、ＰＲ１、ＰＲＡＭＥ、ＰＲＴＮ３、ＲＨＡＭＭ（ＣＤ１６８）、ＷＴ−１が挙げられる。さらなる腫瘍抗原は、Ｍｏｌｌｄｒｅｍ  Ｊ．Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｂｌｏｏｄ  ａｎｄ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ（２００６）１２：１３−１８；Ａｌａｔｒａｓｈ  Ｇ．およびＭｏｌｌｄｒｅｍ  Ｊ．，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ  Ｈｅｍａｔｏｌ．（２０１１）４（１）：３７−５０；Ｒｅｎｋｖｉｓｔら、Ｃａｎｃｅｒ  ｌｍｍｕｎｏｌ  ｌｍｍｕｎｏｔｈｅｒ（２００１）５０：３−１５；ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｂｒｕｇｇｅｎ  Ｐ、Ｓｔｒｏｏｂａｎｔ  Ｖ、Ｖｉｇｎｅｒｏｎ  Ｎ、Ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｅｙｎｄｅ  Ｂ．Ｐｅｐｔｉｄｅ  ｄａｔａｂａｓｅ：Ｔ  ｃｅｌｌ−ｄｅｆｉｎｅｄ  ｔｕｍｏｒ  ａｎｔｉｇｅｎｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎ（２０１３）、ｗｗｗ（ｄｏｔ）ｃａｎｃｅｒｉｍｍｕｎｉｔｙ（ｄｏｔ）ｏｒｇ／ｐｅｐｔｉｄｅ／；Ｒｉｔｔｅｎｈｏｕｓｅ、ＭａｎｄｅｒｉｎｏおよびＨａｓｓ，Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（１９８５）１６（９）５５６−５６０に与えられ、これらは全て本明細書に参考として組み込まれる。
【０１４２】
以下は、本発明のいくつかの実施形態の教示に従って使用可能な腫瘍抗原のリストである。
【０１４３】
表１−腫瘍抗原のリスト
2019520823.tif 000002
2019520823.tif 000003
2019520823.tif 000004
2019520823.tif 000005
表１、続き
【０１４４】
一実施形態によれば、抗原は、１種類の抗原（例えば、ウイルス性抗原、細菌性抗原または腫瘍抗原）を含む。
【０１４５】
一実施形態によれば、１種類の抗原または複数の抗原は、２種類以上の抗原を含む（例えば、ある抗原群、例えば、ウイルス性抗原、腫瘍抗原などの抗原の混合物；または異なる抗原群からの抗原の混合物、例えば、ウイルス性抗原と細菌性抗原、ウイルス性抗原と腫瘍抗原、ウイルス性抗原と自己免疫抗原、腫瘍抗原と自己免疫抗原、または自己免疫抗原とアレルギー抗原）。
【０１４６】
一実施形態によれば、１種類の抗原または複数の抗原は、２種類、３種類、４種類、５種類またはより多くの抗原を含む（例えば、１つの製剤中に、またはいくつかの製剤中に）。
【０１４７】
一実施形態によれば、１種類の抗原または複数の抗原は、２種類、３種類、４種類、５種類またはより多くの腫瘍抗原を含む（例えば、１つの製剤中に、またはいくつかの製剤中に）。
【０１４８】
一実施形態によれば、１種類の抗原または複数の抗原は、２種類、３種類、４種類、５種類またはより多くのウイルス性抗原を含む（例えば、１つの製剤中に、またはいくつかの製剤中に）。
【０１４９】
特定の実施形態によれば、１種類の抗原または複数の抗原は、３種類のウイルス性抗原、例えば、ＥＢＶペプチド、ＣＭＶペプチドおよびＡｄｖペプチドを含む。
【０１５０】
特定の実施形態によれば、１種類の抗原または複数の抗原は、ＥＢＶ−ＬＭＰ２、ＥＢＶ−ＢＺＬＦ１、ＥＢＶ−ＥＢＮＡ１、ＣＭＶ−ｐｐ６５、ＣＭＶ−ＩＥ−１、Ａｄｖ−ペントンおよびＡｄｖ−ヘキソンのうち２種類以上（例えば、２種類、３種類、４種類、５種類、６種類、または７種類全ての抗原）を含む。
【０１５１】
特定の実施形態によれば、１種類の抗原または複数の抗原は、ＣＭＶ、ＥＢＶおよびＡｄｅｎｏの３種類のウイルスの全タンパク質配列におよぶ重複しているペプチドライブラリー（例えば、１１アミノ酸によって重複している１５マー）であるペプミックスの混合物を含む（このようなペプミックスは、例えば、ＪＰＴ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ベルリン、ドイツから市販的に購買できる）。
【０１５２】
別の特定の実施形態によれば、１種類の抗原または複数の抗原は、ＥＢＶ−ＬＭＰ２、ＥＢＶ−ＢＺＬＦ１、ＥＢＶ−ＥＢＮＡ１、ＣＭＶ−ｐｐ６５、ＣＭＶ−ＩＥ−１、Ａｄｖ−ペプトンおよびＡｄｖ−ヘキソンにわたる７種類のペプミックスの混合物を、例えば、この７種類のペプチドを１００ｎｇ／ペプチドまたは７００ｎｇ／混合物の濃度で含む。
【０１５３】
特定の実施形態によれば、ウイルス性抗原は、さらに、１種類の細菌性抗原または複数の細菌性抗原を含む。
【０１５４】
メモリーＴ細胞の免疫応答を刺激するために、例えば、限定されないが、オボアルブミン、ＤＮＰ（ジニトロフェニル）、ＫＬＨ（キーホール・リンペット・ヘモシアニン）などのさらなる刺激抗原を使用してもよい。
【０１５５】
一実施形態によれば、１種類の抗原または複数の抗原は、「サードパーティの１種類の抗原または複数の抗原」であり、すなわち、ドナーまたはレシピエントのいずれにも存在しない可溶性または不溶性の（例えば、膜に会合する）１種類の抗原または複数の抗原である。例えば、サードパーティ抗原は、サードパーティ細胞であってもよい。
【０１５６】
サードパーティ細胞は、ドナーおよびレシピエントに対して同種異系または異種のいずれかであってもよい（本明細書で以下にさらに詳細に説明する）。同種異系のサードパーティ細胞の場合、このような細胞は、ドナーのＨＬＡ抗原とは異なるが、レシピエントのＨＬＡ抗原と交差反応性ではないＨＬＡ抗原を有しており、その結果、このような細胞に対して作られる抗サードパーティ細胞は、移植またはレシピエント抗原に対して反応性ではない。
【０１５７】
本発明の一実施形態によれば、同種異系または異種のサードパーティ細胞は、末梢血リンパ球（ＰＢＬ）、脾臓またはリンパ節から精製される細胞、サイトカインが動員されるＰＢＬ、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで拡張される抗原提示細胞（ＡＰＣ）、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで拡張される樹状細胞（ＤＣ）および人工抗原提示細胞からなる群から選択される刺激細胞である。
【０１５８】
本発明の抗原は、細胞、ウイルス、真菌または細菌の表面に提示されてもよく、またはこれらから誘導されてもよく、および／またはこれらから精製されてもよい。さらに、ウイルス性、真菌性、細菌性の抗原は、感染した細胞上に提示されてもよく、または細胞抗原は、人工ビヒクル（例えば、リポソーム）または人工抗原提示細胞（例えば、１種類の抗原または複数の抗原でトランスフェクトされた細胞株）上に提示されてもよい。したがって、ウイルス性、細菌性または真菌性の抗原は、これらを用いて感染した細胞、または他の方法でウイルス／細菌／真菌ペプチドを発現するように作られた細胞によって提示されてもよい。同様に、腫瘍抗原、自己免疫抗原またはアレルギー抗原は、これらのタンパク質を発現するために作られる細胞によって提示されてもよい。
【０１５９】
細胞を利用すると、抗原としてのウイルス感染した細胞、細菌感染した細胞、ウイルスペプチドを提示する細胞、または細菌ペプチドを提示する細胞は、このような抗原は、多種多様な抗原決定因子を含み、それ自体が多様な集合のＴｃｍ細胞の生成を指令するため、特に有利であり、例えば、致死または亜致死状態の照射または化学療法手技の後に（以下に詳細に記載する通り）、または疾患と闘うために（以下に詳細に記載する通り）このような再構成が必要とされる場合には、さらに、Ｔ細胞の迅速な再構成に役立ち得る。
【０１６０】
したがって、抗原提示細胞（以下に記載するように、自家性または非自家性）、細胞株、人工ビヒクル（例えばリポソーム）または人工抗原提示細胞（例えば、１種類の抗原または複数の抗原でトランスフェクトされた白血病または線維芽細胞株）を使用し、これに融合またはロードされた短い合成ペプチドを提示するか、またはタンパク質抽出物または精製されたタンパク質を提示することができる。このような短いペプチド、タンパク質抽出物または精製されたタンパク質は、任意の他の抗原を表す１つ以上のペプチドに由来する、ウイルス性、細菌性、真菌性、腫瘍、自己免疫またはアレルギー抗原であってもよい。
【０１６１】
専用ソフトウェアを使用し、ウイルス性、細菌性、真菌性、腫瘍、自己免疫またはアレルギー抗原の配列を分析し、免疫原性の短いペプチド、すなわち、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩまたはＭＨＣクラスＩＩの観点で提示可能なペプチドを同定することができる。
【０１６２】
さらに、本発明の人工ビヒクルまたは人工ＡＰＣは、外因性ペプチドを用いて刺激されることなく、ＭＨＣを示すように操作されてもよい。したがって、一実施形態によれば、人工ＡＰＣは、ＭＨＣ決定因子でトランスフェクトされたＫ５６２腫瘍細胞（例えば、メモリーＴ細胞に関して自家性）と共刺激分子とを含む［例えば、Ｓｕｈｏｓｋｉ  ＭＭら、Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．（２００７）１５（５）：９８１−８に既に記載されている通り］、またはこれらでトランスフェクトされた線維芽細胞を含む。
【０１６３】
一実施形態によれば、１種類の抗原または複数の抗原は、ＭＨＣクラスＩまたはＭＨＣクラスＩＩの観点でメモリーＴ細胞の認識を可能にするために、メモリーＴ細胞に関して自家性の、例えば、（例えば同じドナーの）同じ由来の抗原提示細胞（例えば、ＤＣ）によって提示される。
【０１６４】
一実施形態によれば、１種類の抗原または複数の抗原は、メモリーＴ細胞によって認識可能なＭＨＣ抗原（ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）とも呼ばれる）を示す遺伝的に改変された抗原提示細胞または人工抗原提示細胞によって提示される。
【０１６５】
一実施形態によれば、抗原提示細胞は、ヒト細胞を含む。
【０１６６】
一実施形態によれば、抗原提示細胞は、樹状細胞（ＤＣ）を含む。
【０１６７】
一実施形態によれば、抗原提示細胞は、成熟した樹状細胞を含む。
【０１６８】
一実施形態によれば、抗原提示細胞は、照射された樹状細胞を含む。
【０１６９】
したがって、一実施形態によれば、ＤＣは、約５〜１０Ｇｙ、約１０〜２０Ｇｙ、約２０〜３０Ｇｙ、約２０〜４０Ｇｙ、約２０〜５０Ｇｙ、約１０〜５０Ｇｙ照射される。特定の実施形態によれば、ＤＣは、約１０〜５０Ｇｙ（例えば、３０Ｇｙ）照射される。
【０１７０】
樹状細胞をＡＰＣとして利用する方法は、当該技術分野で知られている。したがって、非限定例として、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、細胞ドナーから［例えば、メモリーＴ細胞と同じ細胞ドナーから］得られてもよい。ＰＢＭＣを培養プレートに播種し、ヒト血清（例えば、１％ヒト血清）およびペニシリン／ストレプトマイシン（例えば、１％ペニシリン／ストレプトマイシン）を追加したＤＣ細胞培地（例えば、Ｃｅｌｌｇｒｏ  ＤＣ培地）を用い、３７℃、５％  ＣＯ２／Ｏ２で１〜５時間（例えば３時間）インキュベートする。上清細胞（Ｔ細胞を含む）を捨て、残りの細胞（すなわち、付着性細胞）を、サイトカインＧＭ−ＣＳＦ（例えば、８００〜１６００ＩＵ／ｍｌ）およびＩＬ−４（例えば、７５０ＩＵ／ｍｌ）（例えば、Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、ハンブルグ、ドイツから入手可能）を加えつつ、同じ培養条件でさらに４８〜９６時間（例えば、７２時間）インキュベートする。２〜４日（例えば、３日）後、浮遊細胞を集め（すなわち、大部分が未熟な樹状細胞を含む）、ＤＣの成熟のために、例えば、ＧＭ−ＣＳＦ（例えば、８００ＩＵ／ｍｌ）、ＩＬ−４（例えば、７５０ＩＵ／ｍｌ）、ＬＰＳ（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｏ５５：Ｂ５から、例えば、４０ｎｇ／ｍｌで）およびＩＦＮ−γ（例えば、２００ＩＵ／ｍｌ）（例えば、Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、ハンブルグ、ドイツから入手可能）などのサイトカインと共に播種し、一晩インキュベートする。次の日に、付着していない細胞を捨ててもよく、付着した成熟ＤＣを、氷上で１０〜６０分間（例えば３０分間）インキュベートした後、例えば、２ｍＭ  ＥＤＴＡおよび１％  ＨＳを含む、例えば冷ＰＢＳを用い、穏やかに除去してもよく、それによって、成熟ＤＣからなる大きな細胞を得てもよい。
【０１７１】
ＡＰＣ（例えば、成熟ＤＣ）上に１種類の抗原または複数の抗原を提示するために、１種類の抗原または複数の抗原をＡＰＣ（例えば、ＤＣ）と共に、３７℃、５％  ＣＯ２／Ｏ２で、約３０分〜３時間（例えば、１時間）培養する。例えば、３７℃、５％  ＣＯ２／Ｏ２で約１時間インキュベートすることによって、ＤＣを、ペプミックス（ウイルスペプチド）のカクテルと共にロードしてもよい。次いで、抗原をロードしたＡＰＣ（例えば、ＤＣ）は、本発明のいくつかの実施形態に従ってメモリーＴ細胞の集合からＴｃｍ細胞を生成するために使用する準備ができた。
【０１７２】
本発明のＴｃｍ細胞は、典型的には、まず、メモリーＴ細胞の集合と、１種類の抗原または複数の抗原（例えば上述のもの）とを、ＩＬ−２１を追加した培養物中（例えば、それ以外のサイトカインを含まない培養物中、すなわち、さらなるサイトカインを添加しないで）接触させることによって作られる。この工程は、典型的には、約１２〜２４時間、約１２〜３６時間、約１２〜７２時間、１２〜９６時間、１２〜１２０時間、約２４〜３６時間、約２４〜４８時間、約２４〜７２時間、約３６〜４８時間、約３６〜７２時間、約４８〜７２時間、約４８〜９６時間、約４８〜１２０時間、０．５〜１日間、０．５〜２日間、０．５〜３日間、０．５〜５日間、１〜２日間、１〜３日間、１〜５日間、１〜７日間、１〜１０日間、２〜３日間、２〜４日間、２〜５日間、２〜６日間、２〜８日間、３〜４日間、３〜５日間、３〜７日間、４〜５日間、４〜８日間、５〜７日間、６〜８日間または８〜１０日間行われるか、または抗原反応性細胞の濃縮を可能にする時間行われる。
【０１７３】
特定の実施形態によれば、ＩＬ−２１を追加した培養物（その他のサイトカインを含まない培養物）中、メモリーＴ細胞の集合と、１種類の抗原または複数の抗原（例えば上述のもの）とを接触させることは、１〜５日間（例えば、３日間）行われる。
【０１７４】
ＩＬ−２１を追加した培養物中、メモリーＴ細胞の集合と、１種類の抗原または複数の抗原（例えば上述のもの）とを接触させることは、典型的には、約０．００１〜３０００ＩＵ／ｍｌ、０．０１〜３０００ＩＵ／ｍｌ、０．１〜３０００ＩＵ／ｍｌ、１〜３０００ＩＵ／ｍｌ、１０〜３０００ＩＵ／ｍｌ、１００〜３０００ＩＵ／ｍｌ、１０００〜３０００ＩＵ／ｍｌ、０．００１〜１０００ＩＵ／ｍｌ、０．０１〜１０００ＩＵ／ｍｌ、０．１〜１０００ＩＵ／ｍｌ、１〜１０００ＩＵ／ｍｌ、１０〜１０００ＩＵ／ｍｌ、１００〜１０００ＩＵ／ｍｌ、２５０〜１０００ＩＵ／ｍｌ、５００〜１０００ＩＵ／ｍｌ、７５０〜１０００ＩＵ／ｍｌ、１０〜５００ＩＵ／ｍｌ、５０〜５００ＩＵ／ｍｌ、１００〜５００ＩＵ／ｍｌ、２５０〜５００ＩＵ／ｍｌ、１００〜２５０ＩＵ／ｍｌ、０．１〜１００ＩＵ／ｍｌ、１〜１００ＩＵ／ｍｌ、１０〜１００ＩＵ／ｍｌ、３０〜１００ＩＵ／ｍｌ、５０〜１００ＩＵ／ｍｌ、１〜５０ＩＵ／ｍｌ、１０〜５０ＩＵ／ｍｌ、２０〜５０ＩＵ／ｍｌ、３０〜５０ＩＵ／ｍｌ、１〜３０ＩＵ／ｍｌ、１０〜３０ＩＵ／ｍｌ、２０〜３０ＩＵ／ｍｌ、１０〜２０ＩＵ／ｍｌ、０．１〜１０ＩＵ／ｍｌまたは１〜１０ＩＵ／ｍｌのＩＬ−２１存在下で行われる。特定の実施形態によれば、ＩＬ−２１の濃度は、５０〜５００ＩＵ／ｍｌ（例えば、１００ＩＵ／ｍｌ）である。
【０１７５】
特定の実施形態によれば、メモリーＴ細胞の集合と、１種類の抗原または複数の抗原とを接触させることは、サイトカインを含まない培養物（例えば、ＩＬ−２１のみが追加された）中で行われ、このような培養条件によって、これらの細胞が、生存を可能にする（これらの培養条件では、残りの細胞は全て死滅する）サイトカイン（例えば、ＩＬ−２）を分泌するため、１種類の抗原または複数の抗原によって刺激および活性化を受けた細胞（すなわち、抗原反応性細胞）の生存および濃縮が可能になる。
【０１７６】
１種類の抗原または複数の抗原（例えば、抗原によって刺激を与えられた樹状細胞などのＡＰＣ上に提示される）とメモリーＴ細胞との比率は、典型的には、約１：２〜約１：１０、例えば、約１：４、約１：５、約１：６、約１：８または約１：１０である。特定の実施形態によれば、１種類の抗原または複数の抗原（例えば、ＡＰＣ上に提示される）とメモリーＴ細胞との比率は、約１：２〜約１：８（例えば、１：５）である。
【０１７７】
次に、得られたメモリーＴ細胞（すなわち、ＩＬ−２１と共に培養した後）を、Ｔｃｍ表現型を含む細胞を増殖させるように、抗原を含まない（すなわち、１種類の抗原または複数の抗原を添加しない）環境で、ＩＬ−２１、ＩＬ−１５および／またはＩＬ−７存在下で培養する。この工程は、典型的には、約１２〜２４時間、約１２〜３６時間、約１２〜７２時間、約１２〜９６時間、約１２〜１２０時間、約１２〜２４０時間、２４〜３６時間、２４〜４８時間、約２４〜７２時間、２４〜９６時間、２４〜１２０時間、２４〜２４０時間、約４８〜７２時間、約４８〜１２０時間、約４８〜２４０時間、約９６〜２４０時間、約１２０〜１４４時間、約１２０〜２４０時間、約１４４〜２４０時間、０．５〜１日間、０．５〜２日間、０．５〜３日間、０．５〜５日間、０．５〜１０日間、１〜２日間、１〜３日間、１〜４日間、１〜６日間、１〜８日間、１〜１０日間、１〜１５日間、２〜３日間、２〜４日間、２〜５日間、２〜６日間、２〜８日間、２〜１０日間、４〜５日間、４〜６日間、４〜８日間、４〜１０日間、５〜６日間、５〜７日間、５〜８日間、５〜１０日間、５〜１５日間、６〜７日間、６〜８日間、６〜１０日間、７〜８日間、７〜９日間、７〜１０日間、７〜１３日間、７〜１５日間、８〜１０日間、１０〜１２日間、１０〜１４日間、１２〜１４日間、１４〜１６日間、１４〜１８日間、１６〜１８日間または１８〜２０日間行われる。特定の実施形態によれば、得られたメモリーＴ細胞（すなわち、ＩＬ−２１と共に培養した後）を、抗原を含まない環境で、ＩＬ−２１、ＩＬ−１５およびＩＬ−７存在下で約４〜８日間（例えば、６日間）培養する。
【０１７８】
この工程は、典型的には、約０．００１〜３０００ＩＵ／ｍｌ、０．０１〜３０００ＩＵ／ｍｌ、０．１〜３０００ＩＵ／ｍｌ、１〜３０００ＩＵ／ｍｌ、１０〜３０００ＩＵ／ｍｌ、１００〜３０００ＩＵ／ｍｌ、１０００〜３０００ＩＵ／ｍｌ、０．００１〜１０００ＩＵ／ｍｌ、０．０１〜１０００ＩＵ／ｍｌ、０．１〜１０００ＩＵ／ｍｌ、１〜１０００ＩＵ／ｍｌ、１０〜１０００ＩＵ／ｍｌ、１００〜１０００ＩＵ／ｍｌ、２５０〜１０００ＩＵ／ｍｌ、５００〜１０００ＩＵ／ｍｌ、７５０〜１０００ＩＵ／ｍｌ、１０〜５００ＩＵ／ｍｌ、５０〜５００ＩＵ／ｍｌ、１００〜５００ＩＵ／ｍｌ、２５０〜５００ＩＵ／ｍｌ、１００〜２５０ＩＵ／ｍｌ、０．１〜１００ＩＵ／ｍｌ、１〜１００ＩＵ／ｍｌ、１０〜１００ＩＵ／ｍｌ、３０〜１００ＩＵ／ｍｌ、５０〜１００ＩＵ／ｍｌ、１〜５０ＩＵ／ｍｌ、１０〜５０ＩＵ／ｍｌ、２０〜５０ＩＵ／ｍｌ、３０〜５０ＩＵ／ｍｌ、１〜３０ＩＵ／ｍｌ、１０〜３０ＩＵ／ｍｌ、２０〜３０ＩＵ／ｍｌ、１０〜２０ＩＵ／ｍｌ、０．１〜１０ＩＵ／ｍｌまたは１〜１０ＩＵ／ｍｌの濃度のＩＬ−２１存在下で行われる。特定の実施形態によれば、ＩＬ−２１の濃度は、５０〜５００ＩＵ／ｍｌ（例えば、１００ＩＵ／ｍｌ）である。
【０１７９】
この工程は、さらに、約０．００１〜３０００ＩＵ／ｍｌ、０．０１〜３０００ＩＵ／ｍｌ、０．１〜３０００ＩＵ／ｍｌ、１〜３０００ＩＵ／ｍｌ、１０〜３０００ＩＵ／ｍｌ、１００〜３０００ＩＵ／ｍｌ、１２５〜３０００ＩＵ／ｍｌ、１０００〜３０００ＩＵ／ｍｌ、０．００１〜１０００ＩＵ／ｍｌ、０．０１〜１０００ＩＵ／ｍｌ、０．１〜１０００ＩＵ／ｍｌ、１〜１０００ＩＵ／ｍｌ、１０〜１０００ＩＵ／ｍｌ、１００〜１０００ＩＵ／ｍｌ、１２５〜１０００ＩＵ／ｍｌ、２５０〜１０００ＩＵ／ｍｌ、５００〜１０００ＩＵ／ｍｌ、７５０〜１０００ＩＵ／ｍｌ、１０〜５００ＩＵ／ｍｌ、５０〜５００ＩＵ／ｍｌ、１００〜５００ＩＵ／ｍｌ、１２５〜５００ＩＵ／ｍｌ、２５０〜５００ＩＵ／ｍｌ、２５０〜５００ＩＵ／ｍｌ、１２５〜２５０ＩＵ／ｍｌ、１００〜２５０ＩＵ／ｍｌ、０．１〜１００ＩＵ／ｍｌ、１〜１００ＩＵ／ｍｌ、１０〜１００ＩＵ／ｍｌ、３０〜１００ＩＵ／ｍｌ、５０〜１００ＩＵ／ｍｌ、１〜５０ＩＵ／ｍｌ、１０〜５０ＩＵ／ｍｌ、２０〜５０ＩＵ／ｍｌ、３０〜５０ＩＵ／ｍｌ、１〜３０ＩＵ／ｍｌ、１０〜３０ＩＵ／ｍｌ、２０〜３０ＩＵ／ｍｌ、１０〜２０ＩＵ／ｍｌ、０．１〜１０ＩＵ／ｍｌまたは１〜１０ＩＵ／ｍｌの濃度のＩＬ−１５存在下で行われる。特定の実施形態によれば、ＩＬ−１５の濃度は、５０〜５００ＩＵ／ｍｌ（例えば、１２５ＩＵ／ｍｌ）である。
【０１８０】
この工程は、さらに、約０．００１〜３０００ＩＵ／ｍｌ、０．０１〜３０００ＩＵ／ｍｌ、０．１〜３０００ＩＵ／ｍｌ、１〜３０００ＩＵ／ｍｌ、１０〜３０００ＩＵ／ｍｌ、３０〜３０００ＩＵ／ｍｌ、１００〜３０００ＩＵ／ｍｌ、１０００〜３０００ＩＵ／ｍｌ、０．００１〜１０００ＩＵ／ｍｌ、０．０１〜１０００ＩＵ／ｍｌ、０．１〜１０００ＩＵ／ｍｌ、１〜１０００ＩＵ／ｍｌ、１０〜１０００ＩＵ／ｍｌ、３０〜１０００ＩＵ／ｍｌ、１００〜１０００ＩＵ／ｍｌ、２５０〜１０００ＩＵ／ｍｌ、５００〜１０００ＩＵ／ｍｌ、７５０〜１０００ＩＵ／ｍｌ、１０〜５００ＩＵ／ｍｌ、３０〜５００ＩＵ／ｍｌ、５０〜５００ＩＵ／ｍｌ、１００〜５００ＩＵ／ｍｌ、２５０〜５００ＩＵ／ｍｌ、１００〜２５０ＩＵ／ｍｌ、０．１〜１００ＩＵ／ｍｌ、１〜１００ＩＵ／ｍｌ、１０〜１００ＩＵ／ｍｌ、３０〜１００ＩＵ／ｍｌ、５０〜１００ＩＵ／ｍｌ、１〜５０ＩＵ／ｍｌ、１０〜５０ＩＵ／ｍｌ、２０〜５０ＩＵ／ｍｌ、３０〜５０ＩＵ／ｍｌ、１〜３０ＩＵ／ｍｌ、１０〜３０ＩＵ／ｍｌ、２０〜３０ＩＵ／ｍｌ、１０〜２０ＩＵ／ｍｌ、０．１〜１０ＩＵ／ｍｌまたは１〜１０ＩＵ／ｍｌの濃度のＩＬ−７存在下で行われる。特定の実施形態によれば、ＩＬ−７の濃度は、１〜１００ＩＵ／ｍｌ（３０ＩＵ／ｍｌ）である。
【０１８１】
ＩＬ−２１と共に培養した後（すなわち、例えば、ＩＬ−２１、ＩＬ−１５およびＩＬ−７の添加を含むＴｃｍ増幅工程において）、１種類の抗原または複数の抗原が、細胞培養物中に存在していてもよいことが理解されるだろう。したがって、抗原を含まない環境は、補助的な１種類の抗原または複数の抗原の添加を行わない細胞培養に関する。
【０１８２】
本教示に従って実施し得るさらなる工程は、ＩＬ−２１、ＩＬ−１５およびＩＬ−７存在下（すなわち、抗原を含まない環境を作り出す前）、得られたメモリーＴ細胞（すなわち、ＩＬ−２１と共に培養した後）と１種類の抗原または複数の抗原とを培養することを含む。この工程は、典型的には、約１２〜２４時間、約１２〜３６時間、約１２〜７２時間、２４〜４８時間、２４〜３６時間、約２４〜７２時間、約４８〜７２時間、１〜２日間、２〜３日間、１〜３日間、２〜４日間、１〜５日間または２〜５日間行われ、上に示すのと同じ用量のＩＬ−２１、ＩＬ−１５およびＩＬ−７で行われる。特定の実施形態によれば、ＩＬ−２１、ＩＬ−１５およびＩＬ−７存在下、メモリー細胞と、１種類の抗原または複数の抗原とを培養することは、約１２時間〜４日間（例えば、１〜２日間）行われる。一実施形態によれば、Ｔｃｍ細胞を生成する時間の全長は、約７、８、９、１０、１１または１２日間（例えば、９日間）である。
【０１８３】
本教示に従って行われ得るさらなる工程は、活性化された細胞の選択および除去を含む。このような選択工程は、潜在的な宿主反応性Ｔ細胞の除去に役立つ。
【０１８４】
活性化された細胞を単離することは、２段階の手法によって行われてもよい。第１の段階において、活性化された細胞は、ＩＬ−２１、ＩＬ−１５およびＩＬ−７の存在下で細胞を培養する前に選択される。この第１の段階は、典型的には、ＩＬ−２１存在下、メモリーＴ細胞と１種類の抗原または複数の抗原とを最初に接触させた後に行われる。この選択プロセスは、１種類の抗原または複数の抗原（例えば、以下に記載する発現活性化マーカー）によって活性化される細胞のみを選び、典型的には、メモリーＴ細胞と１種類の抗原または複数の抗原とを最初に接触させた後、約１２〜２４時間、約２４〜３６時間、約１２〜３６時間、約３６〜４８時間、約１２〜４８時間、約４８〜６０時間、約１２〜６０時間、約６０〜７２時間、約１２〜７２時間、約７２〜８４時間、約１２〜８４時間、約８４〜９６時間、約１２〜９６時間行われる。特定の実施形態によれば、選択プロセスは、メモリーＴ細胞と１種類の抗原または複数の抗原とを最初に接触させた後、約１２〜２４時間（例えば、１４時間）行われる。
【０１８５】
活性化された細胞を単離することは、アフィニティに基づく精製によって（例えば、ＭＡＣＳビーズ、ＦＡＣＳソーターおよび／または捕捉ＥＬＩＳＡ標識を用いることによって）行われてもよく、細胞表面マーカーを含む任意の活性化マーカー（例えば、限定されないが、ＣＤ６９、ＣＤ４４、ＣＤ２５、ＣＦＳＥ、ＣＤ１３７）または非細胞表面マーカー（例えば、限定されないが、ＩＦＮ−γおよびＩＬ−２）に対して行われてもよい。また、活性化された細胞を単離することは、当該技術分野で知られている任意の方法を用いて（例えば、ＦＡＣＳによって）、形態に基づく精製（例えば、大きな細胞を単離すること）によって行われてもよい。さらに、典型的には、活性化された細胞は、ＣＤ８＋細胞の発現について選択される。さらに、上述の方法の任意の組み合わせを利用し、活性化された細胞を効率的に単離してもよい。
【０１８６】
本発明のある実施形態によれば、活性化された細胞の選択は、ＣＤ１３７＋細胞および／またはＣＤ２５＋細胞の選択によって行われる。
【０１８７】
活性化された細胞の単離の第２の段階は、典型的には、培養終了時（すなわち、ＩＬ−２１、ＩＬ−１５およびＩＬ−７と共に、抗原を含まない環境で培養した後）に行われる。この段階は、セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）と、照射された宿主抗原提示細胞（ＡＰＣ、例えば、樹状細胞）とを接触させた後に活性化されたこれらの細胞の枯渇によって、アロ反応性細胞を枯渇させる。上述のように、活性化された細胞を単離することは、アフィニティに基づく精製によって（例えば、ＭＡＣＳビーズ、ＦＡＣＳソーターおよび／または捕捉ＥＬＩＳＡ標識を用いることによって）行われてもよく、細胞表面マーカーを含む任意の活性化マーカー（例えば、限定されないが、ＣＤ６９、ＣＤ４４、ＣＤ２５、ＣＦＳＥ、ＣＤ１３７）または非細胞表面マーカー（例えば、限定されないが、ＩＦＮ−γおよびＩＬ−２）に対して行われてもよい。
【０１８８】
本発明のある実施形態によれば、アロ反応性細胞を枯渇させることは、ＣＤ１３７＋細胞および／またはＣＤ２５＋細胞の枯渇によって行われる。
【０１８９】
本発明のある実施形態によれば、アロ反応性細胞を枯渇させることは、Ｔｃｍ細胞と、照射された宿主抗原提示細胞（ＡＰＣ、例えば、樹状細胞）とを、例えば、１２〜２４時間（例えば、１６時間）、培養開始（すなわち、メモリーＴ細胞と１種類の抗原または複数の抗原とを培養する最初の日が０日目）から約６〜９日間（例えば、８日目）培養することによって行われる。
【０１９０】
一実施形態によれば、活性化された細胞の単離は、上述の第１の段階の使用によってのみ行われる。
【０１９１】
別の実施形態によれば、活性化された細胞の単離は、上述の第２の段階の使用によってのみ行われる。
【０１９２】
一実施形態によれば、本発明のセントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を有する非ＧｖＨＤ誘発細胞は、天然には存在せず、天然産物ではない。これらの細胞は、典型的には、ｅｘ−ｖｉｖｏ操作によって作られる（すなわち、特定のサイトカイン存在下、１種類の抗原または複数の抗原にさらす）。
【０１９３】
本発明の一実施形態によれば、セントラルメモリーＴ−リンパ球（Ｔｃｍ）表現型を含む非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合を生成する方法であって、前記細胞が、ベト細胞であり、および／または抗疾患活性を付与し、移植後にリンパ節にホーミングすることが可能であり、前記方法は、（ａ）非接着性末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、ＣＤ４５ＲＡ−ＣＤ８＋表現型を含むメモリーＴ細胞の集合を与えるように、ＣＤ４＋、ＣＤ５６＋およびＣＤ４５ＲＡ＋細胞を枯渇させることが可能な薬剤で処理することと、（ｂ）抗原反応性細胞を濃縮するように、ＩＬ−２１存在下、前記メモリーＴ細胞の集合と、１種類の抗原または複数の抗原とを接触させることと、（ｃ）ＩＬ−２１、ＩＬ−１５および／またはＩＬ−７存在下、前記Ｔｃｍ表現型を含む細胞を増幅させるように、工程（ｂ）から得られた前記細胞を培養し、それによって、非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合を生成することとを含む、方法が提供される。
【０１９４】
本発明の一実施形態によれば、セントラルメモリーＴ−リンパ球（Ｔｃｍ）表現型を含む非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合を生成する方法であって、前記細胞が、ベト細胞であり、および／または抗疾患活性を付与し、移植後にリンパ節にホーミングすることが可能であり、前記方法は、（ａ）非接着性末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、ＣＤ４５ＲＡ−ＣＤ８＋表現型を含むメモリーＴ細胞の集合を与えるように、ＣＤ４＋、ＣＤ５６＋およびＣＤ４５ＲＡ＋細胞を枯渇させることが可能な薬剤で処理することと、（ｂ）抗原反応性細胞を濃縮するように、ＩＬ−２１存在下、前記メモリーＴ細胞の集合と、１種類のウイルス性抗原または複数のウイルス性抗原とを接触させることと、（ｃ）ＩＬ−２１、ＩＬ−１５および／またはＩＬ−７存在下、前記Ｔｃｍ表現型を含む細胞を増幅させるように、工程（ｂ）から得られた前記細胞を培養し、それによって、非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合を生成することとを含む、方法が提供される。
【０１９５】
一実施形態によれば、１種類の抗原または複数の抗原に特異的なメモリーＴ細胞を得るために、抗原／複数の抗原（例えば、腫瘍抗原、ウイルス性抗原）を、これらからメモリーＴ細胞を得る前に（例えば、少なくとも７０％のメモリーＴ細胞の集合を与える前に）メモリーＴ細胞ドナーに投与する。免疫原性の応答（例えば、メモリーＴ細胞の性正）を誘発するために、抗原に対して細胞ドナーを免疫付与する方法を使用してもよい。
【０１９６】
抗原は、そのまま投与されてもよく、またはアジュバント（例えば、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）または不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ））を含む組成物の一部として投与されてもよい。一実施形態によれば、抗原は、メモリーＴ細胞ドナーに１回投与される。一実施形態によれば、メモリーＴ細胞ドナーは、抗原の少なくとも１つのさらなる（例えば、ブースト）投与（例えば、２回、３回、４回、またはより多くの投与）を受ける。このようなさらなる投与は、抗原を最初に投与してから１、３、５、７、１０、１２、１４、２１、３０日後、またはより後に行われてもよい。
【０１９７】
本発明のいくつかの実施形態と共に使用可能な腫瘍抗原（例えば、細胞系ワクチン、例えば、ペプチド特異的なＤＣワクチン、特定されていないエピトープに対するＤＣワクチン、ワクチン化のために使用される白血病から誘導されるＤＣ、ＧＶＡＸ（登録商標）プラットフォーム）に対して被験体を免疫付与するさらなる方法は、Ａｌａｔｒａｓｈ  Ｇ．ａｎｄ  Ｍｏｌｌｄｒｅｍ  Ｊ．，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ  Ｈｅｍａｔｏｌ．（２０１１）４（１）：３７−５０に記載されており、本明細書に参考として組み込まれる。
【０１９８】
特定の抗原／複数の抗原に対してメモリーＴ細胞をさらに濃縮し、メモリーＴ細胞プールからアロ反応性クローンを枯渇させるために、本明細書で上に記載するように、メモリーＴ細胞を、さらに、同じ１種類の抗原または複数の抗原（例えば、細胞ドナーに投与されるのと同じ抗原）と接触させてもよい。
【０１９９】
上述のプロトコルは、典型的には、非同系用途に使用され、そのため、使用されるメモリーＴ細胞またはＰＢＭＣは、典型的には、被験体に対して同種異系である（例えば、同種異系のドナーに由来）。同様に、異種の用途が有益であり得る場合には、使用されるメモリーＴ細胞またはＰＢＭＣは、以下に記載するように、異種由来であってもよい。
【０２００】
しかし、同系用途が有利であり得る場合、使用されるメモリーＴ細胞またはＰＢＭＣは、被験体に対して自家性であってもよい（例えば、被験体由来）。このような決定は、特に、提供されている開示の観点で、十分に当業者の能力の範囲内である。
【０２０１】
したがって、上述のように、メモリーＴ細胞またはＰＢＭＣは、被験体に対して同系または非同系であってもよい。
【０２０２】
本明細書で使用される場合、「同系」細胞との用語は、被験体と本質的に遺伝的に同一であるか、または本質的に全てが被験体のリンパ球である細胞を指す。同系細胞の例としては、被験体に由来する細胞（当該技術分野では「自家性」とも呼ばれる）、被験体のクローンに由来する細胞、または被験体の一卵性双生児に由来する細胞が挙げられる。
【０２０３】
本明細書で使用される場合、「非同系」細胞との用語は、被験体と本質的に遺伝的に同一でないか、または本質的に全てが被験体のリンパ球ではない細胞（例えば、同種異系の細胞または異種細胞）を指す。
【０２０４】
本明細書で使用される場合、「同種異系」との用語は、被験体と同じ種であるドナーに由来するが、実質的に被験体のクローンではない細胞を指す。典型的には、同じ種の非近交系、非接合性の双子の哺乳動物は、互いに同種異系である。同種異系の細胞は、被験体とＨＬＡが同一であってもよく、ＨＬＡが部分的に同一であってもよく、またはＨＬＡが非同一であってもよい（すなわち、１つ以上の全く異なるＨＬＡ決定因子を示す）。
【０２０５】
一実施形態によれば、細胞ドナーは、ヒトである。
【０２０６】
本明細書で使用される場合、「異種」との用語は、被験体のリンパ球のうちかなりの割合の種に対して異なる種の抗原を実質的に発現する細胞を指す。典型的には、異なる種の非近交系の哺乳動物が、互いに異種である。
【０２０７】
本発明は、異種の細胞が、さまざまな種から誘導されることを想定している。したがって、一実施形態によれば、細胞は、哺乳動物から誘導されてもよい。細胞の由来となる適切な種は、主要な飼育動物または家畜動物および霊長類を含む。このような動物としては、限定されないが、ブタ類（例えば、ブタ）、ウシ類（例えば、ウシ）、ウマ類（例えば、ウマ）、ヒツジ類（例えば、ヤギ、ヒツジ）、ネコ類（例えば、Ｆｅｌｉｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃａ）、イヌ類（例えば、Ｃａｎｉｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃａ）、げっ歯類（例えば、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、アレチネズミ、ハムスター）および霊長類（例えば、チンパンジー、アカゲザル、カニクイザル、マーモセット）が挙げられる。
【０２０８】
異種由来の細胞（例えば、ブタ由来）は、好ましくは、動物原性感染症、例えば、ブタ内因性レトロウイルスを含まないことが知られている供給源から得られる。同様に、ヒト由来の細胞または組織は、好ましくは、実質的に病原体を有しない供給源から得られる。
【０２０９】
したがって、メモリーＴ細胞またはＰＢＭＣの供給源は、意図する細胞の使用に関して決定されるだろう（本明細書で以下にさらに詳細に記載）。これは、特に、本明細書に与えられる詳細な記載の観点で、十分に当業者の能力の範囲内である。
【０２１０】
ベト細胞の使用は、特に、移植拒絶をなくし、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）を克服することが必要な状況、例えば、同種異系または異種の細胞または組織の移植において有益である。
【０２１１】
上述のように、本発明のベト細胞は、さらに、抗疾患活性を与え、したがって、被験体（例えば、移植された被験体）が、移植前または移植後（例えば、免疫再構成が達成される前）に、ある疾患または状態（例えば、悪性、ウイルス性、細菌性、真菌性、自己免疫またはアレルギー疾患または状態）を有する状況において有益である。
【０２１２】
したがって、本発明の別の態様によれば、疾患の治療が必要な被験体において、前記疾患を治療する方法であって、前記方法が、被験体に、治療に有効な量の本発明のいくつかの実施形態の非ＧｖＨＤ誘発細胞（すなわち、Ｔｃｍ細胞）の単離された集合を投与することを含み、それによって、前記被験体の疾患を治療する方法が提供される。
【０２１３】
本発明の別の態様によれば、細胞または組織の移植が必要な被験体を治療する方法であって、前記方法が、（ａ）細胞または組織の移植を前記被験体に移植することと、（ｂ）前記被験体に、治療に有効な量の本発明のいくつかの実施形態の非ＧｖＨＤ誘発細胞（すなわち、Ｔｃｍ細胞）の単離された集合を投与することとを含み、それによって、細胞または組織の移植が必要な被験体を治療する方法が提供される。
【０２１４】
本明細書で使用される場合、「治療する」との用語は、ある状態の進行を無効にし、実質的に抑制し、遅らせるか、または逆行させること、ある状態の臨床的または美的な症状を実質的に緩和すること、またはある状態の臨床的または美的な症状の外観を実質的に予防することを含む。
【０２１５】
本明細書で使用される場合、「被験体」または「疾患の治療が必要な被験体」との用語は、哺乳動物、好ましくはヒトを指し、細胞または組織の移植が必要であるか、またはＴｃｍ細胞を用いて治療可能な疾患を患う任意の年齢の男性または女性を指す。典型的には、被験体は、障害または病的な状態または望ましくない状態、状況、または症候群、または細胞または組織の移植による治療で修正可能な物理的、形態的または生理学的な異常に起因して、細胞または組織の移植が必要である（本明細書ではレシピエントとも呼ばれる）。このような障害の例は、以下にさらに与えられる。
【０２１６】
本明細書で使用される場合、「治療に有効な量」との用語は、寛容化（すなわち、ベト効果）、抗疾患効果、抗腫瘍効果および／またはＧｖＨＤを誘発しない免疫再構築に効果的なＴｃｍ細胞の量である。本発明のＴｃｍ細胞は、移植後にリンパ節に対してホーミングするため、細胞の有益な効果／複数の効果（例えば、寛容化、抗疾患効果、抗腫瘍効果および／または免疫再構築）を達成するのに必要な細胞はより少ない量であり得る（既に使用されている細胞の用量と比較して、例えば、第ＷＯ２００１／０４９２４３号を参照）。本発明のＴｃｍ細胞と組み合わせて、必要な免疫抑制薬（以下に記載）の量は少なくてよいことが理解されるだろう（例えば、治療プロトコルからのラパマイシンの除外）。
【０２１７】
治療に有効な量の決定は、特に、本明細書に与えられる詳細な開示の観点で、十分に当業者の能力の範囲内である。
【０２１８】
本発明の方法で使用される任意の調製物の場合、治療に有効な量または投薬量は、最初に、ｉｎ  ｖｉｔｒｏの細胞培養アッセイから概算することができる。例えば、投薬量は、所望な濃度またはタイターを達成するために、動物モデルで配合されてもよい。このような情報を使用し、ヒトに有用な用量をさらに正確に決定することができる。
【０２１９】
例えば、細胞移植の場合には、レシピエントに注入されるＴｃｍ細胞の数は、１×１０４／体重（Ｋｇ）より多くなければならない。レシピエントに注入されるＴｃｍ細胞の数は、典型的には、１ｘ１０３／体重（Ｋｇ）〜１ｘ１０４／体重（Ｋｇ）の範囲、１ｘ１０４／体重（Ｋｇ）〜１ｘ１０５／体重（Ｋｇ）の範囲、１ｘ１０４／体重（Ｋｇ）〜１ｘ１０６／体重（Ｋｇ）の範囲、１ｘ１０４／体重（Ｋｇ）〜１０ｘ１０７／体重（Ｋｇ）の範囲、１ｘ１０４／体重（Ｋｇ）〜１ｘ１０８／体重（Ｋｇ）の範囲、１ｘ１０３／体重（Ｋｇ）〜１ｘ１０５／体重（Ｋｇ）の範囲、１ｘ１０４／体重（Ｋｇ）〜１ｘ１０６／体重（Ｋｇ）の範囲、１ｘ１０６／体重（Ｋｇ）〜１０ｘ１０７／体重（Ｋｇ）の範囲、１ｘ１０５／体重（Ｋｇ）〜１０ｘ１０７／体重（Ｋｇ）の範囲、１ｘ１０６／体重（Ｋｇ）〜１ｘ１０８／体重（Ｋｇ）の範囲でなければならない。特定の実施形態によれば、レシピエントに注入されるＴｃｍ細胞の数は、１ｘ１０５／体重（Ｋｇ）〜１０ｘ１０７／体重（Ｋｇ）の範囲でなければならない。
【０２２０】
したがって、本発明の方法は、限定されないが、悪性疾患、移植片の移植に関連する疾患（例えば、移植拒絶、移植片対宿主病）、感染性疾患（例えば、ウイルス性疾患、真菌性疾患または細菌性疾患）、炎症性疾患、自己免疫疾患および／またはアレルギー疾患または状態などの任意の疾患を治療するために適用されてもよい。
【０２２１】
一実施形態によれば、被験体は、悪性疾患を有する。
【０２２２】
本発明のいくつかの実施形態の方法によって治療可能な悪性疾患（癌とも呼ばれる）は、任意の固形腫瘍または非固形腫瘍および／または腫瘍転移であってもよい。
【０２２３】
癌の例としては、限定されないが、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫および白血病が挙げられる。このような癌のさらに特定的な例としては、扁平上皮細胞癌、軟組織肉腫、カポジ肉腫、メラノーマ、肺癌（小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、肺の扁平上皮癌腫）、腹膜の癌、肝細胞癌、腹部または胃の癌（胃腸癌を含む）、膵臓癌、膠芽細胞腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、ヘパトーマ、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、直腸癌、子宮内膜または子宮の癌腫、カルチノイド癌腫、唾液腺癌腫、腎臓癌または腎癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、肝臓癌腫、中皮腫、多発性骨髄腫、移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）、およびさまざまな種類の頭頸部癌（例えば、脳腫瘍）が挙げられる。本発明の治療のために修正可能な癌性状態としては、転移性癌が挙げられる。
【０２２４】
一実施形態によれば、悪性疾患は、血液悪性腫瘍である。例示的な血液悪性腫瘍としては、限定されないが、白血病［例えば、急性リンパ性、急性リンパ芽球性、急性リンパ芽球性プレＢ細胞、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、急性巨核芽球性、単球性、急性骨髄性（ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ）、急性骨髄性（ｍｙｅｌｏｉｄ）、好酸球増多を伴う急性骨髄性、Ｂ細胞、好塩基性、慢性骨髄性、慢性、Ｂ細胞、好酸球性、フレンド、顆粒球性または骨髄球性、ヘアリー細胞、リンパ球性、巨核芽球性、単球性、単球性−マクロファージ、骨髄芽球性、骨髄性、骨髄単核性、血漿細胞、プレＢ細胞、前骨髄球性、亜急性、Ｔ細胞、リンパ系新生物、骨髄性悪性腫瘍の傾向、急性非リンパ球性白血病、Ｔ細胞急性リンパ球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）およびＢ細胞慢性リンパ球性白血病（Ｂ−ＣＬＬ）］およびリンパ腫［例えば、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、バーキット、皮膚Ｔ細胞、組織球性、リンパ芽球性、Ｔ細胞、胸腺、Ｂ細胞、低グレード／濾胞性；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ；バルキー疾患ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；およびワルデンストレームマクログロブリン血症］が挙げられる。
【０２２５】
特定の実施形態によれば、悪性疾患は、白血病、リンパ腫、骨髄腫、メラノーマ、肉腫、神経芽細胞腫、結腸癌、結腸直腸癌、乳癌、卵巣癌、食道癌、滑膜細胞癌、肝臓癌および膵臓癌である。
【０２２６】
一実施形態によれば、被験体は、非悪性疾患を有する。
【０２２７】
一実施形態によれば、非悪性疾患は、臓器機能不全または臓器不全、血液疾患、移植片に関連する疾患、感染性疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患、アレルギー、外傷および損傷である。
【０２２８】
炎症性疾患としては、限定されないが、慢性炎症性疾患および急性炎症性疾患が挙げられる。
【０２２９】
過敏症を伴う炎症性疾患
過敏症の例としては、限定されないが、Ｉ型過敏症、ＩＩ型過敏症、ＩＩＩ型過敏症、ＩＶ型過敏症、即時過敏症、抗体媒介過敏症、免疫複合体が介在する過敏症、Ｔリンパ球が介在する過敏症およびＤＴＨが挙げられる。
【０２３０】
Ｉ型過敏症または即時過敏症、例えば喘息
【０２３１】
ＩＩ型過敏症としては、限定されないが、リウマチ様疾患、リウマチ様自己免疫疾患、関節リウマチ（Ｋｒｅｎｎ  Ｖ．ら、Ｈｉｓｔｏｌ  Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌ  ２０００  Ｊｕｌ；１５（３）：７９１）、脊椎炎、強直性脊椎炎（Ｊａｎ  Ｖｏｓｗｉｎｋｅｌら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ  ２００１；３（３）：１８９）、全身性疾患、全身性自己免疫疾患、全身性エリテマトーデス（Ｅｒｉｋｓｏｎ  Ｊ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ  １９９８；１７（１−２）：４９）、硬化症、全身性硬化症（Ｒｅｎａｕｄｉｎｅａｕ  Ｙ．ら、Ｃｌｉｎ  Ｄｉａｇｎ  Ｌａｂ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９９  Ｍａｒ；６（２）：１５６）；Ｃｈａｎ  ＯＴ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ  １９９９  Ｊｕｎ；１６９：１０７）、腺疾患、腺自己免疫疾患、膵臓自己免疫疾患、糖尿病、Ｉ型糖尿病（Ｚｉｍｍｅｔ  Ｐ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｒｅｓ  Ｃｌｉｎ  Ｐｒａｃｔ  １９９６  Ｏｃｔ；３４  Ｓｕｐｐｌ：Ｓ１２５）、甲状腺疾患、自己免疫甲状腺疾患、グレーブス病（Ｏｒｇｉａｚｚｉ  Ｊ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ  Ｃｌｉｎ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ  ２０００  Ｊｕｎ；２９（２）：３３９）、甲状腺炎、自然発生自己免疫甲状腺炎（Ｂｒａｌｅｙ−Ｍｕｌｌｅｎ  Ｈ．およびＹｕ  Ｓ、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０００  Ｄｅｃ  １５；１６５（１２）：７２６２）、橋本甲状腺炎（Ｔｏｙｏｄａ  Ｎ．ら、Ｎｉｐｐｏｎ  Ｒｉｎｓｈｏ  １９９９  Ａｕｇ；５７（８）：１８１０）、粘液水腫、特発性粘液水腫（Ｍｉｔｓｕｍａ  Ｔ．Ｎｉｐｐｏｎ  Ｒｉｎｓｈｏ．１９９９  Ａｕｇ；５７（８）：１７５９）；自己免疫生殖疾患、卵巣疾患、卵巣自己免疫（Ｇａｒｚａ  ＫＭ．ら、Ｊ  Ｒｅｐｒｏｄ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９８  Ｆｅｂ；３７（２）：８７）、自己免疫抗精子不妊症（Ｄｉｅｋｍａｎ  ＡＢ．ら、Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｐｒｏｄ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２０００  Ｍａｒ；４３（３）：１３４）、繰り返しの胎児消失（Ｔｉｎｃａｎｉ  Ａ．ら、Ｌｕｐｕｓ  １９９８；７  Ｓｕｐｐｌ  ２：Ｓ１０７−９）、神経変性疾患、神経学的疾患、神経学的自己免疫疾患、多発性硬化症（Ｃｒｏｓｓ  ＡＨ．ら、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ  ２００１  Ｊａｎ  １；１１２（１−２）：１）、アルツハイマー病（Ｏｒｏｎ  Ｌ．ら、Ｊ  Ｎｅｕｒａｌ  Ｔｒａｎｓｍ  Ｓｕｐｐｌ．１９９７；４９：７７）、重症筋無力症（Ｉｎｆａｎｔｅ  ＡＪ．Ａｎｄ  Ｋｒａｉｇ  Ｅ、Ｉｎｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９９；１８（１−２）：８３）、運動性ニューロパシー（Ｋｏｒｎｂｅｒｇ  ＡＪ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０００  Ｍａｙ；７（３）：１９１）、ギラン・バレー症候群、ニューロパシーおよび自己免疫ニューロパシー（Ｋｕｓｕｎｏｋｉ  Ｓ．Ａｍ  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｓｃｉ．２０００  Ａｐｒ；３１９（４）：２３４）、筋無力性疾患、ランバート・イートン筋無力症症候群（Ｔａｋａｍｏｒｉ  Ｍ．Ａｍ  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｓｃｉ．２０００  Ａｐｒ；３１９（４）：２０４）、神経学的腫瘍随伴疾患、小脳萎縮症、傍腫瘍性小脳萎縮、非傍腫瘍性スティフマン症候群、小脳萎縮症、進行性小脳萎縮症、脳炎、ラスムッセン脳炎、筋萎縮性側索硬化症、シデナム舞踏病、ジル・ドゥ・ラ・トゥレット症候群、多腺性内分泌障害、自己免疫多腺性内分泌障害（Ａｎｔｏｉｎｅ  ＪＣ．  ａｎｄ  Ｈｏｎｎｏｒａｔ  Ｊ．Ｒｅｖ  Ｎｅｕｒｏｌ（Ｐａｒｉｓ）２０００  Ｊａｎ；１５６（１）：２３）；ニューロパシー、免疫性ニューロパシー（Ｎｏｂｉｌｅ−Ｏｒａｚｉｏ  Ｅ．ら、Ｅｌｅｃｔｒｏｅｎｃｅｐｈａｌｏｇｒ  Ｃｌｉｎ  Ｎｅｕｒｏｐｈｙｓｉｏｌ  Ｓｕｐｐｌ  １９９９；５０：４１９）；ニューロミオトニア、後天性ニューロミオトニア、先天性多発性関節拘縮症（Ｖｉｎｃｅｎｔ  Ａ．ら、Ａｎｎ  Ｎ  Ｙ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．１９９８  Ｍａｙ  １３；８４１：４８２）、心血管疾患、心血管自己免疫疾患、アテローム性動脈硬化症（Ｍａｔｓｕｕｒａ  Ｅ．ら、Ｌｕｐｕｓ．１９９８；７  Ｓｕｐｐｌ  ２：Ｓ１３５）、心筋梗塞（Ｖａａｒａｌａ  Ｏ．Ｌｕｐｕｓ．１９９８；７  Ｓｕｐｐｌ  ２：Ｓ１３２）、血栓症（Ｔｉｎｃａｎｉ  Ａ．ら、Ｌｕｐｕｓ  １９９８；７  Ｓｕｐｐｌ  ２：Ｓ１０７−９）、肉芽腫症、ウェゲナー肉芽腫症、動脈炎、高安動脈炎および川崎症候群（Ｐｒａｐｒｏｔｎｉｋ  Ｓ．ら、Ｗｉｅｎ  Ｋｌｉｎ  Ｗｏｃｈｅｎｓｃｈｒ  ２０００  Ａｕｇ  ２５；１１２（１５−１６）：６６０）；抗ｆａｃｔｏｒ  ＶＩＩＩ自己免疫疾患（Ｌａｃｒｏｉｘ−Ｄｅｓｍａｚｅｓ  Ｓ．ら、Ｓｅｍｉｎ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｈｅｍｏｓｔ．２０００；２６（２）：１５７）；脈管炎、壊死性小血管脈管炎、顕微鏡的多発性血管炎、チャーグ・ストラウス症候群、糸球体腎炎、ｐａｕｃｉ−ｉｍｍｕｎｅ型病巣壊死性糸球体腎炎、半月体形成性糸球体腎炎（Ｎｏｅｌ  ＬＨ．Ａｎｎ  Ｍｅｄ  Ｉｎｔｅｒｎｅ（Ｐａｒｉｓ）．２０００  Ｍａｙ；１５１（３）：１７８）；抗リン脂質症候群（Ｆｌａｍｈｏｌｚ  Ｒ．ら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ａｐｈｅｒｅｓｉｓ  １９９９；１４（４）：１７１）；心不全、心不全におけるアゴニスト様β−アドレナリン受容体抗体（Ｗａｌｌｕｋａｔ  Ｇ．ら、Ａｍ  Ｊ  Ｃａｒｄｉｏｌ．１９９９  Ｊｕｎ  １７；８３（１２Ａ）：７５Ｈ）、血小板減少性紫斑病（Ｍｏｃｃｉａ  Ｆ．Ａｎｎ  Ｉｔａｌ  Ｍｅｄ  Ｉｎｔ．１９９９  Ａｐｒ−Ｊｕｎ；１４（２）：１１４）；溶血性貧血、自己免疫溶血性貧血（Ｅｆｒｅｍｏｖ  ＤＧ．ら、Ｌｅｕｋ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  １９９８  Ｊａｎ；２８（３−４）：２８５）、胃腸疾患、胃腸管の自己免疫疾患、腸疾患、慢性炎症性腸疾患（Ｇａｒｃｉａ  Ｈｅｒｏｌａ  Ａ．ら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  Ｈｅｐａｔｏｌ．２０００  Ｊａｎ；２３（１）：１６）、セリアック病（Ｌａｎｄａｕ  ＹＥ．  ａｎｄ  Ｓｈｏｅｎｆｅｌｄ  Ｙ．Ｈａｒｅｆｕａｈ  ２０００  Ｊａｎ  １６；１３８（２）：１２２）、筋肉組織の自己免疫疾患、筋炎、自己免疫筋炎、シェーグレン症候群（Ｆｅｉｓｔ  Ｅ．ら、Ｉｎｔ  Ａｒｃｈ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０００  Ｓｅｐ；１２３（１）：９２）；平滑筋自己免疫疾患（Ｚａｕｌｉ  Ｄ．ら、Ｂｉｏｍｅｄ  Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ  １９９９  Ｊｕｎ；５３（５−６）：２３４）、肝臓疾患、肝臓自己免疫疾患、自己免疫肝炎（Ｍａｎｎｓ  ＭＰ．  Ｊ  Ｈｅｐａｔｏｌ  ２０００  Ａｕｇ；３３（２）：３２６）および原発性胆汁性肝硬変（Ｓｔｒａｓｓｂｕｒｇ  ＣＰ．ら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  Ｈｅｐａｔｏｌ．１９９���  Ｊｕｎ；１１（６）：５９５）が挙げられる。
【０２３２】
ＩＶ型またはＴ細胞が介在する過敏症としては、限定されないが、リウマチ様疾患、関節リウマチ（Ｔｉｓｃｈ  Ｒ、ＭｃＤｅｖｉｔｔ  ＨＯ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  １９９４  Ｊａｎ  １８；９１（２）：４３７）、全身性疾患、全身性自己免疫疾患、全身性エリテマトーデス（Ｄａｔｔａ  ＳＫ．，Ｌｕｐｕｓ  １９９８；７（９）：５９１）、腺疾患、腺自己免疫疾患、膵臓疾患、膵臓自己免疫疾患、１型糖尿病（Ｃａｓｔａｎｏ  Ｌ．  ａｎｄ  Ｅｉｓｅｎｂａｒｔｈ  ＧＳ．Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８：６４７）；甲状腺疾患、自己免疫甲状腺疾患、グレーブス病（Ｓａｋａｔａ  Ｓ．ら、Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  １９９３  Ｍａｒ；９２（１）：７７）；卵巣疾患（Ｇａｒｚａ  ＫＭ．ら、Ｊ  Ｒｅｐｒｏｄ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９８  Ｆｅｂ；３７（２）：８７）、前立腺炎、自己免疫前立腺炎（Ａｌｅｘａｎｄｅｒ  ＲＢ．ら、Ｕｒｏｌｏｇｙ  １９９７  Ｄｅｃ；５０（６）：８９３）、多腺性症候群、多腺性自己免疫症候群、Ｉ型多腺性自己免疫症候群（Ｈａｒａ  Ｔ．ら、Ｂｌｏｏｄ．１９９１  Ｍａｒ  １；７７（５）：１１２７）、神経学的疾患、自己免疫神経学的疾患、多発性硬化症、神経炎、視神経炎（Ｓｏｄｅｒｓｔｒｏｍ  Ｍ．ら、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  １９９４  Ｍａｙ；５７（５）：５４４）、重症筋無力症（Ｏｓｈｉｍａ  Ｍ．ら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９０  Ｄｅｃ；２０（１２）：２５６３）、スティフマン症候群（Ｈｉｅｍｓｔｒａ  ＨＳ．ら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  ２００１  Ｍａｒ  ２７；９８（７）：３９８８）、心血管疾患、シャーガス病の心臓自己免疫（Ｃｕｎｈａ−Ｎｅｔｏ  Ｅ．ら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １９９６  Ｏｃｔ  １５；９８（８）：１７０９）、自己免疫血小板減少性紫斑病（Ｓｅｍｐｌｅ  ＪＷ．ら、Ｂｌｏｏｄ  １９９６  Ｍａｙ  １５；８７（１０）：４２４５）、抗ヘルパーＴリンパ球自己免疫（Ｃａｐｏｒｏｓｓｉ  ＡＰ．ら、Ｖｉｒａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９８；１１（１）：９）、溶血性貧血（Ｓａｌｌａｈ  Ｓ．ら、Ａｎｎ  Ｈｅｍａｔｏｌ  １９９７  Ｍａｒ；７４（３）：１３９）、肝臓疾患、肝臓自己免疫疾患、肝炎、慢性活動性肝炎（Ｆｒａｎｃｏ  Ａ．ら、Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ  １９９０  Ｍａｒ；５４（３）：３８２）、胆汁性肝硬変、原発性胆汁性肝硬変（Ｊｏｎｅｓ  ＤＥ．  Ｃｌｉｎ  Ｓｃｉ（Ｃｏｌｃｈ）１９９６  Ｎｏｖ；９１（５）：５５１）、腎臓疾患、腎臓自己免疫疾患、腎炎、腸腎炎（Ｋｅｌｌｙ  ＣＪ．Ｊ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｎｅｐｈｒｏｌ  １９９０  Ａｕｇ；１（２）：１４０）、結合組織疾患、耳疾患、自己免疫結合組織疾患、自己免疫耳疾患（Ｙｏｏ  ＴＪ．ら、Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９４  Ａｕｇ；１５７（１）：２４９）、内耳の疾患（Ｇｌｏｄｄｅｋ  Ｂ．ら、Ａｎｎ  Ｎ  Ｙ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  １９９７  Ｄｅｃ  ２９；８３０：２６６）、皮膚（ｓｋｉｎ）疾患、皮膚（ｃｕｔａｎｅｏｕｓ）疾患、真皮疾患、水疱性皮膚疾患、尋常性天疱瘡、水疱性類天疱瘡および落葉状天疱瘡が挙げられる。
【０２３３】
遅延型過敏症の例としては、限定されないが、接触皮膚炎および薬疹が挙げられる。
【０２３４】
Ｔリンパ球が介在する過敏症の例としては、限定されないが、ヘルパーＴリンパ球および細胞傷害性Ｔリンパ球が挙げられる。
【０２３５】
ヘルパーＴリンパ球が介在する過敏症の例としては、限定されないが、０ｈ１リンパ球が介在する過敏症および０ｈ２リンパ球が介在する過敏症が挙げられる。
自己免疫疾患
【０２３６】
限定されないが、心血管疾患、リウマチ様疾患、腺疾患、胃腸疾患、皮膚疾患、肝臓疾患、神経疾患、筋肉疾患、腎臓疾患、生殖に関連する疾患、結合組織疾患および全身性疾患が挙げられる。
【０２３７】
自己免疫心血管疾患の例としては、限定されないが、アテローム性動脈硬化症（Ｍａｔｓｕｕｒａ  Ｅ．ら、Ｌｕｐｕｓ．１９９８；７  Ｓｕｐｐｌ  ２：Ｓ１３５）、心筋梗塞（Ｖａａｒａｌａ  Ｏ．Ｌｕｐｕｓ．１９９８；７  Ｓｕｐｐｌ  ２：Ｓ１３２）、血栓症（Ｔｉｎｃａｎｉ  Ａ．ら、Ｌｕｐｕｓ  １９９８；７  Ｓｕｐｐｌ  ２：Ｓ１０７−９）、ウェゲナー肉芽腫症、高安動脈炎、川崎症候群（Ｐｒａｐｒｏｔｎｉｋ  Ｓ．ら、Ｗｉｅｎ  Ｋｌｉｎ  Ｗｏｃｈｅｎｓｃｈｒ  ２０００  Ａｕｇ  ２５；１１２（１５−１６）：６６０）、抗ｆａｃｔｏｒ  ＶＩＩＩ自己免疫疾患（Ｌａｃｒｏｉｘ−Ｄｅｓｍａｚｅｓ  Ｓ．ら、Ｓｅｍｉｎ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｈｅｍｏｓｔ．２０００；２６（２）：１５７）、壊死性小血管脈管炎、顕微鏡的多発性血管炎、チャーグ・ストラウス症候群、ｐａｕｃｉ−ｉｍｍｕｎｅ型病巣壊死性糸球体腎炎および半月体形成性糸球体腎炎（Ｎｏｅｌ  ＬＨ．Ａｎｎ  Ｍｅｄ  Ｉｎｔｅｒｎｅ（Ｐａｒｉｓ）．２０００  Ｍａｙ；１５１（３）：１７８）、抗リン脂質症候群（Ｆｌａｍｈｏｌｚ  Ｒ．ら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ａｐｈｅｒｅｓｉｓ  １９９９；１４（４）：１７１）、抗体誘発性心不全（Ｗａｌｌｕｋａｔ  Ｇ．ら、Ａｍ  Ｊ  Ｃａｒｄｉｏｌ．１９９９  Ｊｕｎ  １７；８３（１２Ａ）：７５Ｈ）、血小板減少性紫斑病（Ｍｏｃｃｉａ  Ｆ．Ａｎｎ  Ｉｔａｌ  Ｍｅｄ  Ｉｎｔ．１９９９  Ａｐｒ−Ｊｕｎ；１４（２）：１１４；Ｓｅｍｐｌｅ  ＪＷ．ら、Ｂｌｏｏｄ  １９９６  Ｍａｙ  １５；８７（１０）：４２４５）、自己免疫溶血性貧血（Ｅｆｒｅｍｏｖ  ＤＧ．ら、Ｌｅｕｋ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  １９９８  Ｊａｎ；２８（３−４）：２８５；Ｓａｌｌａｈ  Ｓ．ら、Ａｎｎ  Ｈｅｍａｔｏｌ  １９９７  Ｍａｒ；７４（３）：１３９）、シャーガス病の心臓自己免疫（Ｃｕｎｈａ−Ｎｅｔｏ  Ｅ．ら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １９９６  Ｏｃｔ  １５；９８（８）：１７０９）および抗ヘルパーＴリンパ球自己免疫（Ｃａｐｏｒｏｓｓｉ  ＡＰ．ら、Ｖｉｒａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９８；１１（１）：９）が挙げられる。
【０２３８】
自己免疫リウマチ様疾患の例としては、限定されないが、関節リウマチ（Ｋｒｅｎｎ  Ｖ．ら、Ｈｉｓｔｏｌ  Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌ  ２０００  Ｊｕｌ；１５（３）：７９１；Ｔｉｓｃｈ  Ｒ、ＭｃＤｅｖｉｔｔ  ＨＯ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ｕｎｉｔｓ  Ｓ  Ａ  １９９４  Ｊａｎ  １８；９１（２）：４３７）および強直性脊椎炎（Ｊａｎ  Ｖｏｓｗｉｎｋｅｌら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ  ２００１；３（３）：１８９）が挙げられる。
【０２３９】
自己免疫腺疾患としては、限定されないが、膵臓疾患、Ｉ型糖尿病、甲状腺疾患、グレーブス病、甲状腺炎、自然発生自己免疫甲状腺炎、橋本甲状腺炎、特発性粘液水腫、卵巣自己免疫、自己免疫抗精子不妊症、自己免疫前立腺炎およびＩ型多腺性自己免疫症候群が挙げられる。疾患としては、限定されないが、膵臓の自己免疫疾患、１型糖尿病（Ｃａｓｔａｎｏ  Ｌ．ａｎｄ  Ｅｉｓｅｎｂａｒｔｈ  ＧＳ．Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８：６４７；Ｚｉｍｍｅｔ  Ｐ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｒｅｓ  Ｃｌｉｎ  Ｐｒａｃｔ  １９９６  Ｏｃｔ；３４  Ｓｕｐｐｌ：Ｓ１２５）、自己免疫甲状腺疾患、グレーブス病（Ｏｒｇｉａｚｚｉ  Ｊ．  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ  Ｃｌｉｎ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ  ２０００  Ｊｕｎ；２９（２）：３３９；Ｓａｋａｔａ  Ｓ．ら、Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  １９９３  Ｍａｒ；９２（１）：７７）、自然発生自己免疫甲状腺炎（Ｂｒａｌｅｙ−Ｍｕｌｌｅｎ  Ｈ．  ａｎｄ  Ｙｕ  Ｓ、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０００  Ｄｅｃ  １５；１６５（１２）：７２６２）、橋本甲状腺炎（Ｔｏｙｏｄａ  Ｎ．ら、Ｎｉｐｐｏｎ  Ｒｉｎｓｈｏ  １９９９  Ａｕｇ；５７（８）：１８１０）、特発性粘液水腫（Ｍｉｔｓｕｍａ  Ｔ．Ｎｉｐｐｏｎ  Ｒｉｎｓｈｏ．１９９９  Ａｕｇ；５７（８）：１７５９）、卵巣自己免疫（Ｇａｒｚａ  ＫＭ．ら、Ｊ  Ｒｅｐｒｏｄ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９８  Ｆｅｂ；３７（２）：８７）、自己免疫抗精子不妊症（Ｄｉｅｋｍａｎ  ＡＢ．ら、Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｐｒｏｄ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０００  Ｍａｒ；４３（３）：１３４）、自己免疫前立腺炎（Ａｌｅｘａｎｄｅｒ  ＲＢ．ら、Ｕｒｏｌｏｇｙ  １９９７  Ｄｅｃ；５０（６）：８９３）およびＩ型多腺性自己免疫症候群（Ｈａｒａ  Ｔ．ら、Ｂｌｏｏｄ．１９９１  Ｍａｒ  １；７７（５）：１１２７）が挙げられる。
【０２４０】
自己免疫胃腸疾患の例としては、限定されないが、慢性炎症性腸疾患（Ｇａｒｃｉａ  Ｈｅｒｏｌａ  Ａ．ら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  Ｈｅｐａｔｏｌ．２０００  Ｊａｎ；２３（１）：１６）、セリアック病（Ｌａｎｄａｕ  ＹＥ．  ａｎｄ  Ｓｈｏｅｎｆｅｌｄ  Ｙ．Ｈａｒｅｆｕａｈ  ２０００  Ｊａｎ  １６；１３８（２）：１２２）、大腸炎、回腸炎およびクローン病が挙げられる。
【０２４１】
自己免疫皮膚疾患としては、限定されないが、自己免疫水疱性皮膚疾患、例えば、限定されないが、尋常性天疱瘡、水疱性類天疱瘡および落葉状天疱瘡が挙げられる。
【０２４２】
自己免疫肝臓疾患の例としては、限定されないが、肝炎、自己免疫慢性活動性肝炎（Ｆｒａｎｃｏ  Ａ．ら、Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ  １９９０  Ｍａｒ；５４（３）：３８２）、原発性胆汁性肝硬変（Ｊｏｎｅｓ  ＤＥ．Ｃｌｉｎ  Ｓｃｉ（Ｃｏｌｃｈ）１９９６  Ｎｏｖ；９１（５）：５５１；Ｓｔｒａｓｓｂｕｒｇ  ＣＰ．ら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  Ｈｅｐａｔｏｌ．１９９９  Ｊｕｎ；１１（６）：５９５）および自己免疫肝炎（Ｍａｎｎｓ  ＭＰ．Ｊ  Ｈｅｐａｔｏｌ  ２０００  Ａｕｇ；３３（２）：３２６）が挙げられる。
【０２４３】
自己免疫神経学的疾患の例としては、限定されないが、多発性硬化症Ｃｒｏｓｓ  ＡＨ．ら、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ  ２００１  Ｊａｎ  １；１１２（１−２）：１）、アルツハイマー病（Ｏｒｏｎ  Ｌ．ら、Ｊ  Ｎｅｕｒａｌ  Ｔｒａｎｓｍ  Ｓｕｐｐｌ．１９９７；４９：７７）、重症筋無力症（Ｉｎｆａｎｔｅ  ＡＪ．Ａｎｄ  Ｋｒａｉｇ  Ｅ、Ｉｎｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９９；１８（１−２）：８３；Ｏｓｈｉｍａ  Ｍ．ら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９０  Ｄｅｃ；２０（１２）：２５６３）、ニューロパシー、運動性ニューロパシー（Ｋｏｒｎｂｅｒｇ  ＡＪ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０００  Ｍａｙ；７（３）：１９１）；ギラン・バレー症候群および自己免疫ニューロパシー（Ｋｕｓｕｎｏｋｉ  Ｓ．Ａｍ  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｓｃｉ．２０００  Ａｐｒ；３１９（４）：２３４）、筋無力性疾患、ランバート・イートン筋無力症症候群（Ｔａｋａｍｏｒｉ  Ｍ．Ａｍ  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｓｃｉ．２０００  Ａｐｒ；３１９（４）：２０４）；神経学的腫瘍随伴疾患、小脳萎縮症、傍腫瘍性小脳萎縮、スティフマン症候群（Ｈｉｅｍｓｔｒａ  ＨＳ．ら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ｕｎｉｔｓ  Ｓ  Ａ  ２００１  Ｍａｒ  ２７；９８（７）：３９８８）；非傍腫瘍性スティフマン症候群、進行性小脳萎縮症、脳炎、ラスムッセン脳炎、筋萎縮性側索硬化症、シデナム舞踏病、ジル・ドゥ・ラ・トゥレット症候群および多腺性内分泌障害（Ａｎｔｏｉｎｅ  ＪＣ．  ａｎｄ  Ｈｏｎｎｏｒａｔ  Ｊ．Ｒｅｖ  Ｎｅｕｒｏｌ（Ｐａｒｉｓ）２０００  Ｊａｎ；１５６（１）：２３）；免疫性ニューロパシー（Ｎｏｂｉｌｅ−Ｏｒａｚｉｏ  Ｅ．ら、Ｅｌｅｃｔｒｏｅｎｃｅｐｈａｌｏｇｒ  Ｃｌｉｎ  Ｎｅｕｒｏｐｈｙｓｉｏｌ  Ｓｕｐｐｌ  １９９９；５０：４１９）；後天性ニューロミオトニア、先天性多発性関節拘縮症（Ｖｉｎｃｅｎｔ  Ａ．ら、Ａｎｎ  Ｎ  Ｙ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．１９９８  Ｍａｙ  １３；８４１：４８２）、神経炎、視神経炎（Ｓｏｄｅｒｓｔｒｏｍ  Ｍ．ら、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  １９９４  Ｍａｙ；５７（５）：５４４）および神経変性疾患が挙げられる。
【０２４４】
自己免疫筋肉疾患としては、限定されないが、筋炎、自己免疫筋炎および原発性シェーグレン症候群（Ｆｅｉｓｔ  Ｅ．ら、Ｉｎｔ  Ａｒｃｈ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０００  Ｓｅｐ；１２３（１）：９２）および平滑筋自己免疫疾患（Ｚａｕｌｉ  Ｄ．ら、Ｂｉｏｍｅｄ  Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ  １９９９  Ｊｕｎ；５３（５−６）：２３４）が挙げられる。
【０２４５】
自己免疫腎臓疾患としては、限定されないが、腎炎および自己免疫腸腎炎（Ｋｅｌｌｙ  ＣＪ．Ｊ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｎｅｐｈｒｏｌ  １９９０  Ａｕｇ；１（２）：１４０）が挙げられる。
【０２４６】
生殖に関連する自己免疫疾患の例としては、限定されないが、反復性胎児喪失が挙げられる（Ｔｉｎｃａｎｉ  Ａ．ら、Ｌｕｐｕｓ  １９９８；７  Ｓｕｐｐｌ  ２：Ｓ１０７−９）。
【０２４７】
自己免疫結合組織疾患の例としては、限定されないが、耳の疾患、自己免疫性の耳の疾患（Ｙｏｏ  ＴＪ．ら、Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９４  Ａｕｇ；１５７（１）：２４９）および内耳の自己免疫疾患（Ｇｌｏｄｄｅｋ  Ｂ．ら、Ａｎｎ  Ｎ  Ｙ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  １９９７  Ｄｅｃ  ２９；８３０：２６６）が挙げられる。
【０２４８】
自己免疫全身性疾患の例としては、限定されないが、全身性エリテマトーデス（Ｅｒｉｋｓｏｎ  Ｊ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ  １９９８；１７（１−２）：４９）および全身性硬化症（Ｒｅｎａｕｄｉｎｅａｕ  Ｙ．ら、Ｃｌｉｎ  Ｄｉａｇｎ  Ｌａｂ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９９  Ｍａｒ；６（２）：１５６）；Ｃｈａｎ  ＯＴ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ  １９９９  Ｊｕｎ；１６９：１０７）が挙げられる。
感染性疾患
【０２４９】
感染性疾患の例としては、限定されないが、慢性感染性疾患、亜急性感染性疾患、急性感染性疾患、ウイルス性疾患、細菌性疾患、原生動物性疾患、寄生生物性疾患、真菌性疾患、マイコプラズマ疾患およびプリオン疾患が挙げられる。
【０２５０】
本発明の教示に従って治療可能な感染性疾患を引き起こす具体的な種類のウイルス性病原体としては、限定されないが、レトロウイルス、サーコウイルス、パルボウイルス、パポーバウイルス、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、イリドウイルス、ポックスウイルス、ヘパドナウイルス、ピコルナウイルス、カリシウイルス、トガウイルス、フラビウイルス、レオウイルス、オルトミクソウイルス、パラミクソウイルス、ラブドウイルス、ブニヤウイルス、コロナウイルス、アレナウイルスおよびフィロウイルスが挙げられる。
【０２５１】
本発明の教示に従って治療可能なウイルス性感染の具体例としては、限定されないが、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）によって誘発される後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）によって引き起こされる感染、インフルエンザ、ライノウイルス感染、ウイルス性髄膜炎、Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒウイルス（ＥＢＶ）感染、Ａ型、Ｂ型またはＣ型の肝炎ウイルス感染、麻疹、パピローマウイルス感染／疣贅、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）感染、ヘルペス単純ウイルス感染、黄熱病、エボラウイルス感染、狂犬病、アデノウイルス（Ａｄｖ）、風邪ウイルス、流感ウイルス、日本脳炎、ポリオ、呼吸器合胞体ウイルス、風疹、天然痘、水痘帯状疱疹、ロタウイルス、ウエストナイルウイルスおよびジカウイルスが挙げられる。
【０２５２】
本発明の教示に従って治療可能な細菌性感染の具体例としては、限定されないが、炭疽病、グラム陰性菌、クラミジア、ジフテリア、インフルエンザ菌、ヘリコバクターピロリ、マラリア、ヒト結核菌、百日咳毒素、肺炎球菌、リケッチア、ブドウ球菌、連鎖球菌および破傷風によって引き起こされる感染が挙げられる。
【０２５３】
本発明の教示に従って治療可能なスーパー耐性菌感染の具体例（例えば、多剤耐性菌）としては、限定されないが、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａおよびＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｐ．を含む）によって引き起こされる感染が挙げられる。
【０２５４】
本発明の教示に従って治療可能な真菌感染の具体例としては、限定されないが、カンジダ、コクシジオデス（ｃｏｃｃｉｄｉｏｄｅｓ）、クリプトコッカス、ヒストプラズマ、リーシュマニア、マラリア原虫、原生動物、寄生生物、住血吸虫、白癬、トキソプラズマおよびクルーズ・トリパノソーマによって引き起こされる感染が挙げられる。
移植拒絶疾患
【０２５５】
他の実施形態によれば、疾患は、移植片の移植に関連する。移植片の移植に関連する疾患の例としては、限定されないが、移植拒絶、慢性移植拒絶、亜急性移植拒絶、超急性移植拒絶、急性移植拒絶、同種移植拒絶、異種移植拒絶および移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）が挙げられる。
アレルギー疾患
【０２５６】
アレルギー疾患の例としては、限定されないが、喘息、蕁麻疹、皮膚の掻痒、花粉アレルギー、イエダニアレルギー、毒アレルギー、化粧品アレルギー、ラテックスアレルギー、化学物質アレルギー、薬物アレルギー、虫刺されアレルギー、動物の鱗屑アレルギー、イラクサアレルギー、ツタウルシアレルギーおよび食物アレルギーが挙げられる。
非悪性血液疾患
【０２５７】
非悪性血液疾患の例としては、限定されないが、貧血、骨髄障害、深部静脈血栓症／肺塞栓、先天性赤芽球癆貧血、ヘモクロマトーシス、血友病、免疫血液障害、鉄代謝障害、鎌状細胞疾患、サラセミア、血小板減少症およびフォンウィルブランド病が挙げられる。
【０２５８】
Ｔｃｍ細胞の抗疾患活性を高めるために、治療すべき疾患に関連する１種類の抗原または複数の抗原を選択し、治療のために抗原特異的なＴｃｍ細胞を生成することが有益である。
【０２５９】
したがって、一実施形態によれば、本方法は、（ａ）前記疾患に関連する１種類の抗原または複数の抗原の存在について、被験体の生体サンプルを分析することと、（ｂ）前記疾患に関連する１種類の抗原または複数の抗原に対し、抗原反応性細胞を濃縮するように、本発明のいくつかの実施形態の方法に従って、非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合を生成することと、（ｃ）前記被験体に、治療に有効な量の（ｂ）の非ＧｖＨＤ誘発細胞の単離された集合を投与することによって、前記被験体の疾患を治療することとを含む。
【０２６０】
本明細書で使用される場合、「生体サンプル」は、被験体から誘導される流体サンプルまたは組織サンプルを指す。「生体サンプル」の例としては、限定されないが、全血、血清、血漿、脳脊髄液、尿、リンパ液、組織生検、および呼吸、腸および生殖器官の種々の外部分泌、涙、唾液、乳および白血球細胞、組織、細胞培養物、例えば、一次培養物が挙げられる。
【０２６１】
このような生体サンプルを得る方法は、当該技術分野で知られており、限定されないが、標準的な血液回収手順、尿の収集、腰椎穿孔が挙げられる。
【０２６２】
生体サンプルにおいて１種類の抗原または複数の抗原の存在を決定することは、当該技術分野で知られている任意の方法、例えば、血清学によって（病原体の存在について試験する）、細菌培養、細菌感受性試験、真菌、ウイルス、マイコバクテリウムおよび／または寄生生物の試験（ＡＦＢ試験）、電気泳動、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ウェスタンブロット分析および蛍光活性化セル選別（ＦＡＣＳ）によって行われてもよい。
【０２６３】
分析が行われると、１種類の抗原または複数の抗原が選択され、上述のように、疾患に特異的な１種類の抗原または複数の抗原（例えば、腫瘍抗原、ウイルス性抗原、細菌性抗原など）を用いてメモリーＴ細胞の集合からＴｃｍ細胞が作られ、これを、治療のために被験体に投与する。
【０２６４】
上述のように、本発明のＴｃｍ細胞は、ベト活性を付与する。したがって、本発明のＴｃｍ細胞を、細胞または組織の移植のための補助療法として使用してもよい。本発明のＴｃｍ細胞は抗疾患活性も付与するため、本発明の方法は、細胞または移植の生着を促進しつつ、同時に、被験体において疾患に対して有利に適用することができる。
【０２６５】
血漿、本明細書で使用される場合、「細胞または組織の移植」との句は、身体の細胞（例えば、１つの細胞または細胞群）、または組織（例えば、固形組織／臓器または軟組織、全体または一部が移植されてもよい）を指す。本教示に従って移植され得る例示的な組織または臓器としては、限定されないが、肝臓、膵臓、脾臓、腎臓、心臓、肺、皮膚、腸およびリンパ系／造血組織（例えば、リンパ節、パイエル板、胸腺または骨髄）が挙げられる。本教示に従って移植され得る例示的な細胞としては、限定されないが、未熟な造血細胞が挙げられ、これは、幹細胞、心筋細胞、肝臓細胞、膵臓細胞、脾臓細胞、肺細胞、脳細胞、腎臓細胞、腸／胃細胞、卵巣細胞、皮膚細胞（例えば、これらのいずれかの細胞の単離された集合）を含む。さらに、本発明は、臓器全体、例えば、腎臓、心臓、肝臓または皮膚などの移植も包含する。
【０２６６】
用途に応じて、本方法は、被験体と同系または非同系の細胞または組織を用いて行われてもよい。
【０２６７】
本発明のある実施形態によれば、被験体とドナーは、両方ともヒトである。
【０２６８】
用途および利用可能な供給源に応じて、本発明の細胞または組織は、出生前の生物、出生後の生物、成体ドナーまたは死体ドナーから得られてもよい。さらに、必要な用途に応じて、細胞または組織は、ナイーブであってもよく、または遺伝的に改変されていてもよい。このような決定因子は、十分に当業者の能力の範囲内である。
【０２６９】
当該技術分野で知られている任意の方法を使用し、（例えば移植のための）細胞または組織を得てもよい。
【０２７０】
細胞または組織を被験体に移植することは、例えば、細胞または組織の種類、レシピエントの疾患の種類、段階または重篤度（例えば、臓器不全）、被験体に固有の物理的または生理学的なパラメータ、および／または望ましい治療結果などの種々のパラメータに依存して、多くの様式で行われてもよい。
【０２７１】
本発明の細胞または組織の移植片の移植は、その用途に応じて、種々の解剖学的位置のいずれかへの細胞または組織の移植片の移植によって行われてもよい。細胞または組織の移植は、同所の解剖学的位置に移植されてもよく（移植のための通常の解剖学的位置）、または異所の解剖学的位置に移植されてもよい（移植のための異常な解剖学的位置）。用途に応じて、細胞または組織の移植は、有利には、腎被膜下、腎臓内、精巣の脂肪、皮下組織、大網、門脈、肝臓、脾臓、心腔、心臓、胸腔、肺、皮膚、膵臓、および／または腹腔内に移植されてもよい。
【０２７２】
例えば、本教示の肝臓組織は、肝臓、門脈、腎被膜、皮下組織、大網、脾臓、胃の中の空間に移植されてもよい。これらのような種々の解剖学的位置への肝臓の移植は、一般的に、当該技術分野では、肝臓移植による治療で修正可能な疾患（例えば、肝不全）を治療するために実施される。同様に、本発明の膵臓組織への移植は、有利には、組織を門脈、肝臓、膵臓、精巣の脂肪、皮下組織、大網、腸係蹄（小腸のＵ字型ループの漿膜下組織）および／または腹腔内に移植することによって行われてもよい。膵臓組織の移植を使用し、膵臓移植を介する治療によって修正可能な疾患（例えば糖尿病）を治療してもよい。同様に、例えば、腎臓、心臓、肺または皮膚組織などの組織の移植は、例えば、腎不全、心不全、肺不全または皮膚損傷（例えば、火傷）を患うレシピエントを治療する目的のために、上述の解剖学的位置に行われてもよい。単離された細胞が移植される場合、このような細胞は、例えば、静脈内経路、気管内経路、腹腔内経路または経鼻経路によって投与されてもよい。
【０２７３】
また、本発明の方法は、例えば、未熟な造血細胞の移植を必要とする疾患を患うレシピエントを治療するために使用されてもよい。
【０２７４】
後者の場合に、例えば、ドナーの骨髄、動員された末梢血（例えば、白血球除去療法による）、胎児肝臓、卵黄嚢および／または臍帯血に由来していてもよい未熟な自家性、同種異系または異種の造血細胞（幹細胞を含む）は、疾患を患うレシピエントに移植されてもよい。一実施形態によれば、未熟な造血細胞は、Ｔ細胞が枯渇したＣＤ３４＋未熟造血細胞である。このような疾患としては、限定されないが、白血病［例えば、急性リンパ性、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性リンパ芽球性プレＢ細胞、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、急性巨核芽球細胞性、単球性、急性骨髄性（ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ）、急性骨髄性（ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ）、好酸球増多を伴う急性骨髄性、Ｂ細胞、好塩基性、慢性骨髄性、慢性Ｂ細胞、好酸球性、フレンド、顆粒球性または骨髄球性、急性骨髄球性白血病（ＡＭＬ）または慢性骨髄球性白血病（ＣＭＬ）、ヘアリー細胞、リンパ球性、巨核芽球性、単球性、単球性−マクロファージ、骨髄芽球性、骨髄性、骨髄単核性、血漿細胞、プレＢ細胞、前骨髄球性、亜急性、Ｔ細胞、リンパ系新生物、骨髄性悪性腫瘍の傾向、急性非リンパ球性白血病、急性非リンパ芽球性白血病（ＡＮＬＬ）、Ｔ細胞急性リンパ球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）およびＢ細胞慢性リンパ球性白血病（Ｂ−ＣＬＬ）］、リンパ腫（例えば、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞、バーキット、皮膚Ｔ細胞、組織球性、リンパ芽球性、Ｔ細胞、胸腺）、重症複合免疫不全症候群（ＳＣＩＤ）（アデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）を含む）、大理石骨病、無形成性貧血、ゴーシェ病、サラセミアおよび他の先天性または遺伝的に決定される造血性異常が挙げられる。
【０２７５】
細胞移植のための当該技術分野で知られている任意の方法を用いて、例えば、限定されないが、細胞注入（例えば、静脈内）によって、または腹腔内経路によって、本発明の未熟な自家性、同種異系または異種の造血細胞をレシピエントに移植してもよいことが理解されるだろう。
【０２７６】
場合により、本発明の細胞または組織の移植片が、欠陥のある臓器を有する被験体に移植される場合、移植片の最適な成長、被験体の解剖学／生理学との一体化を可能にするために、まず、被験体から欠陥のある臓器を少なくとも部分的に除去することが有利な場合がある。
【０２７７】
一実施形態によれば、細胞または組織の移植は、同種異系のドナーに由来する。一実施形態によれば、細胞または組織の移植は、ＨＬＡが同一の同種異系のドナーから誘導されるか、またはＨＬＡが非同一の同種異系のドナーから誘導される。一実施形態によれば、細胞または組織の移植は、異種のドナーから誘導される。
【０２７８】
一実施形態によれば、細胞または組織の移植およびＴｃｍの単離された集合は、同じ（例えば、非同系の）ドナーから誘導される。
【０２７９】
一実施形態によれば、細胞または組織の移植およびＴｃｍの単離された集合は、異なる（例えば、非同系の）ドナーから誘導される。したがって、細胞または組織の移植は、Ｔｃｍ細胞と非同系であってもよい。
【０２８０】
一実施形態によれば、未熟な造血細胞とＴｃｍ細胞の単離された集合は、同じ（例えば、非同系の）ドナーから誘導される。
【０２８１】
一実施形態によれば、未熟な造血細胞とＴｃｍ細胞の単離された集合は、異なる（例えば、非同系の）ドナーから誘導される。したがって、未熟な造血細胞は、Ｔｃｍ細胞と非同系であってもよい。
【０２８２】
本発明の方法は、被験体がこのような同時移植の手技によって有利な影響を受け得る場合には、いくつかの臓器（心臓と肺組織）の同時移植も想定している。
【０２８３】
一実施形態によれば、同時移植は、未熟な造血細胞と固形組織／臓器または多くの固形臓器／組織の移植を含む。
【０２８４】
一実施形態によれば、未熟な造血細胞と固形臓器は、同じドナーから得られる。
【０２８５】
別の実施形態によれば、未熟な造血細胞と固形臓器／組織または臓器／組織は、異なる（例えば非同系の）ドナーから得られる。
【０２８６】
一実施形態によれば、未熟な造血細胞は、固形臓器の移植の前に、固形臓器の移植と同時に、または固形臓器の移植の後に移植される。
【０２８７】
ある実施形態によれば、まず、造血キメラ現象が、本発明のＴｃｍ細胞と組み合わせた未熟な造血細胞の移植によって、被験体に導入され、同じドナーから移植された他の組織／臓器の耐性を生じさせる。
【０２８８】
ある実施形態によれば、本発明のＴｃｍ細胞は、それ自体が、同じドナーから移植される、移植した組織／臓器の拒絶を減らすために使用される。
【０２８９】
本教示に従う被験体への細胞または組織の移植片の移植の後、標準的な医療の実施に従って、種々の標準的な技術のいずれか１つに従って臓器の成長機能と免疫適合性を監視するように助言が可能である。例えば、移植後に、標準的な膵臓機能試験（例えば、血中インスリンレベルの分析）によって、膵臓組織移植の機能を監視してもよい。同様に、肝臓組織の移植は、移植後に、標準的な肝臓機能試験（例えば、血清アルブミンレベル、総タンパク質、ＡＬＴ、ＡＳＴおよびビリルビンの分析、血液凝固時間の分析）によって監視されてもよい。細胞または組織の構造的な成長は、コンピュータ断層撮影または超音波撮像によって監視されてもよい。
【０２９０】
移植の内容に応じて、細胞または組織の移植片の生着を容易にするために、本方法は、さらに、有利には、移植の前に被験体を亜致死、致死または超致死の状態に調整することを含んでいてもよい。
【０２９１】
本明細書で使用される場合、「亜致死」、「致死」、「超致死」との用語は、本発明の被験体を調整することに関する場合、それぞれ、被験体の代表的な集合に適用される場合、典型的には、通常の無菌条件で、集合の本質的に全てが非致死状態、ある程度が致死だが、集合の全てではない状態、または集合の本質的に全てが致死状態になる、骨髄毒性および／またはリンパ細胞傷害性の治療を指す。
【０２９２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、亜致死、致死または超致死に調整することは、全身照射（ＴＢＩ）、全リンパ系照射（ＴＬＩ、すなわち、全てのリンパ節、胸腺および脾臓への曝露）、部分的な身体照射（例えば、肺、腎臓、脳などへの特定的な曝露）、骨髄破壊による調整および／または骨髄を破壊しない調整を含み、例えば、限定されないが、共刺激による遮断、化学療法剤および／または抗体免疫治療を含む異なる組み合わせを含む。本発明のいくつかの実施形態によれば、調整することは、上述の調整するプロトコルのいずれかの組み合わせを含む（例えば、化学療法剤とＴＢＩ、共刺激による遮断と化学療法剤、抗体免疫治療と化学療法剤など）。
【０２９３】
一実施形態によれば、ＴＢＩは、０．５〜１Ｇｙ、０．５〜１．５Ｇｙ、０．５〜２．５Ｇｙ、０．５〜５Ｇｙ、０．５〜７．５Ｇｙ、０．５〜１０Ｇｙ、０．５〜１５Ｇｙ、１〜１．５Ｇｙ、１〜２Ｇｙ、１〜２．５Ｇｙ、１〜３Ｇｙ、１〜３．５Ｇｙ、１〜４Ｇｙ、１〜４．５Ｇｙ、１〜１．５Ｇｙ、１〜７．５Ｇｙ、１〜１０Ｇｙ、２〜３Ｇｙ、２〜４Ｇｙ、２〜５Ｇｙ、２〜６Ｇｙ、２〜７Ｇｙ、２〜８Ｇｙ、２〜９Ｇｙ、２〜１０Ｇｙ、３〜４Ｇｙ、３〜５Ｇｙ、３〜６Ｇｙ、３〜７Ｇｙ、３〜８Ｇｙ、３〜９Ｇｙ、３〜１０Ｇｙ、４〜５Ｇｙ、４〜６Ｇｙ、４〜７Ｇｙ、４〜８Ｇｙ、４〜９Ｇｙ、４〜１０Ｇｙ、５〜６Ｇｙ、５〜７Ｇｙ、５〜８Ｇｙ、５〜９Ｇｙ、５〜１０Ｇｙ、６〜７Ｇｙ、６〜８Ｇｙ、６〜９Ｇｙ、６〜１０Ｇｙ、７〜８Ｇｙ、７〜９Ｇｙ、７〜１０Ｇｙ、８〜９Ｇｙ、８〜１０Ｇｙ、１０〜１２Ｇｙまたは１０〜１５Ｇｙの範囲内の１回の照射、またはフラクション化した照射を含む。
【０２９４】
特定の実施形態によれば、ＴＢＩは、１〜７．５Ｇｙの範囲内の１回の照射、またはフラクション化した照射を含む。
【０２９５】
一実施形態によれば、調整することは、被験体を超致死状態で（例えば骨髄破壊状態で）調整することによって行われる。
【０２９６】
または、調整することは、被験体を致死または亜致死の状態に調整することによって、例えば、被験体を骨髄を破壊する状態または骨髄を破壊しない状態に調整することによって、行われてもよい。
【０２９７】
一実施形態によれば、調整することは、骨髄を破壊する薬（例えば、ブスルファンまたはメルファラン）または骨髄を破壊しない薬（例えば、シクロホスファミドおよび／またはフルダラビン）を用いて被験体を調整することによって行われる。
【０２９８】
被験体を調整するために使用可能な、調整する薬剤の例としては、限定されないが、照射、薬理学的薬剤および耐性誘発性細胞（本明細書に記載するような）が挙げられる。
【０２９９】
薬理学的薬剤の例としては、骨髄毒性薬、リンパ細胞傷害性薬および免疫抑制薬が挙げられる（以下に詳細に記載）。
【０３００】
骨髄毒性薬の例としては、限定されないが、ブスルファン、ジメチルミレラン、メルファランおよびチオテパが挙げられる。
【０３０１】
これに加えて、またはこれに代えて、本方法は、さらに、細胞または組織の移植の前に、移植と同時に、または移植の後に、免疫抑制計画を用いて被験体を調整することをさらに含んでいてもよい。
【０３０２】
適切な種類の免疫抑制計画の例としては、免疫抑制薬、耐性誘発性細胞の集合（例えば、本明細書で上に詳細に記載したように、Ｔｃｍ細胞）の投与および／または免疫抑制照射を含む。
【０３０３】
移植のための適切な免疫抑制計画を選択し、投与するための十分なガイダンスは、当該技術分野のあ文献内に与えられている（例えば、Ｋｉｒｋｐａｔｒｉｃｋ  ＣＨ．およびＲｏｗｌａｎｄｓ  ＤＴ  Ｊｒ．，１９９２．ＪＡＭＡ．２６８、２９５２；Ｈｉｇｇｉｎｓ  ＲＭ．ら、１９９６．Ｌａｎｃｅｔ  ３４８、１２０８；Ｓｕｔｈａｎｔｈｉｒａｎ  Ｍ．およびＳｔｒｏｍ  ＴＢ．，１９９６．Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３１、３６５；Ｍｉｄｔｈｕｎ  ＤＥ．ら、１９９７．Ｍａｙｏ  Ｃｌｉｎ  Ｐｒｏｃ．７２、１７５；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ＶＡ．ら、１９９４．Ａｍ  Ｊ  Ｍｅｄ．９７、１４；Ｈａｎｔｏ  ＤＷ．，１９９５．Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｍｅｄ．４６、３８１；Ｓｅｎｄｅｒｏｗｉｃｚ  ＡＭ．ら、１９９７．Ａｎｎ  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ．１２６、８８２；Ｖｉｎｃｅｎｔｉ  Ｆ．ら、１９９８．Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３８、１６１；Ｄａｎｔａｌ  Ｊ．ら、１９９８．Ｌａｎｃｅｔ  ３５１、６２３を参照のこと）。
【０３０４】
好ましくは、免疫抑制計画は、少なくとも１つの免疫抑制剤を被験体に投与することからなる。
【０３０５】
免疫抑制剤の例としては、限定されないが、タクロリムス（ＦＫ−５０６またはフジマイシンとも呼ばれる、商品名Ｐｒｏｇｒａｆ、Ａｄｖａｇｒａｆ、Ｐｒｏｔｏｐｉｃ）、ミコフェノール酸モフェチル、ミコフェノール酸ナトリウム、プレドニゾン、メトトレキサート、シクロホスファミド、シクロスポリン、シクロスポリンＡ、クロロキン、ヒドロキシクロロキン、スルファサラジン（スルファサラゾピリン）、金塩、Ｄ−ペニシラミン、レフルノミド、アザチオプリン、アナキンラ、インフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ）、エタネルセプト、ＴＮＦαブロッカー、炎症性サイトカインを標的とする生物学的薬剤、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）が挙げられる。ＮＳＡＩＤの例としては、限定されないが、アセチルサリチル酸、サリチル酸コリンマグネシウム、ジフルニサル、サリチル酸マグネシウム、サラサレート、サリチル酸ナトリウム、ジクロフェナク、エトドラク、フェノプロフェン、フルルビプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、ケトロラク、メクロフェナメート、ナプロキセン、ナブメトン、フェニルブタゾン、ピロキシカム、スリンダク、トルメチン、アセトアミノフェン、イブプロフェン、Ｃｏｘ−２阻害剤、トラマドール、ラパマイシン（シロリムス）およびラパマイシン類似体（例えば、ＣＣＩ−７７９、ＲＡＤ００１、ＡＰ２３５７３）が挙げられる。これらの薬剤を個々に投与してもよく、または組み合わせて投与してもよい。
【０３０６】
移植の種類にかかわらず、移植拒絶および移植片対宿主病を避けるために、本発明の方法は、新規なＴｃｍ細胞を利用する（本明細書で上に詳細に記載した通り）。
【０３０７】
本発明の方法によれば、これらのＴｃｍ細胞は、細胞または組織の移植と同時に、この移植の前に、または移植の後に投与される。
【０３０８】
Ｔｃｍ細胞は、細胞移植のための技術分野で知られている任意の方法によって、例えば限定されないが、細胞注入（例えば、静脈内）によって、または腹腔内経路によって、投与されてもよい。
【０３０９】
本発明の実施形態のＴｃｍ細胞は、有機体にそのまま投与されてもよく、または適切な担体または賦形剤と混合した医薬組成物で投与されてもよい。
【０３１０】
本明細書で使用される場合、「医薬組成物」は、本明細書に記載の１つ以上の活性成分と他の化学成分（例えば、生理学的に適した担体および賦形剤）との調製物を指す。医薬組成物の目的は、有機体への化合物の投与を容易にすることである。
【０３１１】
ここで、「活性成分」との用語は、生物学的効果について責任を負うＴｃｍ細胞を指す。
【０３１２】
以下、「生理学的に許容される担体」および「医薬的に許容される担体」との句は、相互に置き換え可能に使用されてもよく、有機体に顕著な刺激を引き起こさず、投与される化合物の生体活性および特性を無効にしない担体または希釈剤を指す。アジュバントは、これらの句に含まれる。
【０３１３】
ここで、「賦形剤」との用語は、活性成分の投与をさらに容易にするために、医薬組成物に加えられる不活性物質を指す。賦形剤の例としては、限定されないが、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、種々の糖類およびさまざまなデンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油およびポリエチレングリコールが挙げられる。
【０３１４】
薬物を配合し、投与するための技術は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．（イーストン、ＰＡ）、最新版の中に見出すことができ、本明細書に参考として組み込まれる。
【０３１５】
適切な投与経路としては、例えば、経口、直腸、経粘膜、特に、経鼻、腸または非経口送達（筋肉内、皮下および髄内への注射、ならびにくも膜下、直接脳室内、心腔内、例えば、右または左の心室腔、共通の冠状動脈、静脈内、腹腔内、鼻内または眼球内への注射を挙げ得る。
【０３１６】
中枢神経系（ＣＮＳ）への薬物送達のための従来の方法としては、脳神経外科的戦略（例えば、大脳内注射または脳室内注入）；薬剤の分子操作（例えば、ＢＢＢの内因性輸送経路の１つを活用しようとする企てにおいて、それ自体はＢＢＢを通過することができない薬剤と組み合わせて内皮細胞表面分子への親和性を有する油相ペプチドを含むキメラ融合タンパク質の産生）；薬剤の脂質溶解度を高めるように設計された薬理学的戦略（例えば、水溶性薬剤を脂質またはコレステロール担体に接合）；高浸透圧破壊によって、ＢＢＢの一体性を一時的に破壊すること（マンニトール溶液を頸動脈に注入することから生じるか、またはアンギオテンシンペプチドなどの生体活性薬剤の使用によって生じる）が挙げられる。しかし、これらそれぞれの戦略には制限があり、例えば、侵襲性の外科手技に関連する固有のリスク、内因性輸送系に固有の制限によって生じる大きさの制限、ＣＮＳの外側で活性であり得る担体モチーフで構成されるキメラ分子の全身性投与に関連する、潜在的に望ましくない生体での副作用、ＢＢＢが破壊される脳の領域内の脳損傷のリスクの可能性があり、これらにより、最適な送達方法とはなっていない。
【０３１７】
または、医薬組成物を、全身様式ではなく、例えば、患者のある組織領域に医薬組成物を直接注射することによって、局所的に投与してもよい。
【０３１８】
本発明のいくつかの実施形態の医薬組成物は、当該技術分野でよく知られたプロセス、例えば、従来の混合、溶解、顆粒化、糖衣錠製造、粉末化、乳化、カプセル封入、封入または凍結乾燥プロセスによって製造されてもよい。
【０３１９】
したがって、本発明のいくつかの実施形態に従って使用するための医薬組成物は、活性成分から調製物への加工を容易にし、医薬的に使用することが可能な賦形剤および補助物質を含む１つ以上の生理学的に許容される担体を用い、従来の様式で配合されてもよい。適切な製剤は、選択する投与経路に依存して変わる。
【０３２０】
注射のために、医薬組成物の活性成分は、水溶液に、好ましくは、生理学的に適合性のバッファー、例えば、Ｈａｎｋ溶液、Ｒｉｎｇｅｒ溶液または生理学的塩緩衝液に配合されてもよい。経粘膜投与のために、浸透すべき障壁に適した浸透剤を製剤に使用する。このような浸透剤は、当該技術分野で一般的に知られている。
【０３２１】
経口投与のために、医薬組成物は、活性化合物と、当該技術分野でよく知られている医薬的に許容される担体とを合わせることによって、容易に配合することができる。このような担体によって、医薬組成物を、患者が経口摂取するための錠剤、丸薬、糖衣錠、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁物などに配合することができる。経口使用のための薬理学的調製物は、固体の賦形剤を用いて製造し、場合により、得られた混合物を粉砕し、所望な場合には適切な補助物質を加えた後に顆粒の混合物を処理し、錠剤または糖衣錠のコアを得ることができる。適切な賦形剤は、特に、フィラー、例えば、糖類（ラクトース、ショ糖、マンニトールまたはソルビトールを含む）、セルロース調製物、例えば、トウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、ガムトラガカント、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ナトリウムカルボメチルセルロース；および／または生理学的に許容されるポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）である。所望な場合、例えば、架橋したポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸またはその塩、例えば、アルギン酸ナトリウムなどの崩壊剤を加えてもよい。
【０３２２】
糖衣錠コアは、適切なコーティングを伴って与えられる。この目的のために、濃縮糖溶液を使用してもよく、この溶液は、場合により、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、二酸化チタン、ラッカー溶液および適切な有機溶媒、または溶媒混合物を含んでいてもよい。識別のために、または活性化合物の用量の異なる組み合わせを特徴付けるために、染料または顔料を錠剤または糖衣錠コーティングに添加してもよい。
【０３２３】
経口で使用可能な医薬組成物としては、ゼラチンから作られるプッシュフィットカプセル、ゼラチンと可塑剤（例えば、グリセロールまたはソルビトール）から作られる軟らかい密封したカプセルが挙げられる。プッシュフィットカプセルは、フィラー、例えば、ラクトース、バインダー、例えば、デンプン、滑沢剤、例えば、タルクまたはステアリン酸マグネシウムと、場合により安定剤を含む混合物の状態で活性成分を含有していてもよい。軟質カプセルにおいて、活性成分を、例えば、脂肪族油、液体パラフィンまたは液体ポリエチレングリコールなどの適切な液体に溶解または懸濁してもよい。これに加え、安定化剤を添加してもよい。経口投与のための全ての製剤は、選択した投与経路に適した投薬量でなければならない。
【０３２４】
口腔投与のために、組成物は、従来の様式で配合された錠剤またはトローチ剤の形態をしていてもよい。
【０３２５】
経鼻吸入による投与のために、本発明のいくつかの実施形態に従って使用するための活性成分は、簡便には、適切な噴射剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタンまたは二酸化炭素）を用い、加圧パックまたはネブライザーからエアロゾルスプレーの形態で送達される。加圧エアロゾルの場合、投薬単位は、計量した量を運ぶためのバルブを設けることによって決定されてもよい。カプセルおよびカートリッジ、例えば、ディスペンサに使用するためのゼラチンのカプセルおよびカートリッジは、化合物と、ラクトースまたはデンプンなどの適切な粉末基剤との粉末混合物を含むように配合されてもよい。
【０３２６】
本明細書に記載の医薬組成物は、例えば、ボーラス注射または連続静注による非経口投与のために配合されてもよい。注射のための製剤は、単位剤形で（例えば、アンプルで）、または場合により防腐剤を添加した複数回投薬容器で提示されてもよい。組成物は、油性または水性のビヒクルの懸濁物、溶液またはエマルションであってもよく、懸濁剤、安定化剤および／または分散剤などの配合薬剤を含んでいてもよい。
【０３２７】
非経口投与のための医薬組成物は、水溶性形態での活性調製物の水溶液を含む。さらに、活性成分の懸濁物は、適切な場合、油性または水性の注射用懸濁物として調製されてもよい。適切な親油性溶媒またはビヒクルとしては、脂肪族油、例えば、ゴマ油、または合成脂肪酸エステル、例えば、オレイン酸エチル、トリグリセリドまたはリポソームが挙げられる。水性注射懸濁物は、懸濁物の粘度を上げる物質、例えば、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ソルビトールまたはデキストランを含んでいてもよい。場合により、懸濁物は、高度に濃縮した溶液の調製を可能にするために、適切な安定化剤または活性成分の溶解度を上げる薬剤を含んでいてもよい。
【０３２８】
または、活性成分は、使用前の適切なビヒクルを用いた構成（例えば、滅菌のパイロジェンフリー水性溶液）のための粉末形態であってもよい。
【０３２９】
本発明のいくつかの実施形態の医薬組成物は、例えば、従来の坐剤基剤、例えば、ココアバターまたは他のグリセリドを用い、直腸組成物（例えば、坐剤または保持浣腸）で配合されてもよい。
【０３３０】
本発明のいくつかの実施形態で使用するのに適した医薬組成物としては、意図する目的を達成するのに有効な量で活性成分を含む組成物が挙げられる。さらに特定的には、治療に有効な量は、ある障害（例えば、悪性疾患または非悪性疾患）の症状を予防し、軽減し、または改善するか、または治療される被験体の生存を延ばすのに効果的な活性成分（Ｔｃｍ細胞）の量を意味する。
【０３３１】
治療に有効な量の決定は、特に、本明細書に与えられる詳細な開示の観点で、十分に当業者の能力の範囲内である。
【０３３２】
本発明の方法で使用される任意の調製物の場合、治療に有効な量または投薬量は、最初に、ｉｎ  ｖｉｔｒｏの細胞培養アッセイから概算することができる。例えば、投薬量は、所望な濃度またはタイターを達成するために、動物モデルで配合されてもよい。このような情報を使用し、ヒトに有用な用量をさらに正確に決定することができる。
【０３３３】
本明細書に記載される活性成分の毒性および治療効能は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、細胞培養物で、または実験動物で、標準的な医薬手順によって決定することができる。これらのｉｎ  ｖｉｔｒｏ、細胞培養アッセイ、動物実験から得られたデータを、ヒトに使用するある範囲の投薬量を配合する際に使用してもよい。投薬量は、使用される投薬形態および利用される投与経路に依存して変動してもよい。実際の製剤、投与経路、投薬量は、患者の状態という観点で、個々の医師が選択することができる。（例えば、Ｆｉｎｇｌら、１９７５、「Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ」、Ｃｈ．１  ｐ．１を参照。）
【０３３４】
投薬量および投薬間隔は、生物学的効果を誘発するか、または抑制するのに十分である豊富なレベルの活性成分を与えるように、個々に調節されてもよい（最小有効濃度、ＭＥＣ）。ＭＥＣは、それぞれの調製物についてさまざまであるが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのデータから概算することができる。ＭＥＣを達成するのに必要な投薬量は、個々の特徴および投与経路に依存して変わるだろう。検出アッセイを使用し、血漿濃度を決定してもよい。
【０３３５】
治療される状態の重篤度および応答性に応じて、投薬は、１回の投与または複数回の投与であってもよく、一連の治療は、数日間から数週間続くか、または治癒が起こるか、または疾患状態の縮小が達成されるまで続く。
【０３３６】
治療される状態の重篤度および応答性に応じて、投薬は、１回の投与または複数回の投与であってもよく、一連の治療は、数日間から数週間続くか、または治癒が起こるか、または疾患状態の縮小が達成されるまで続く。
【０３３７】
もちろん、投与される組成物の量は、治療される被験体、罹患の重篤度、投与様式、主治医の判断などに依存して変わるだろう。
【０３３８】
本発明のいくつかの実施形態の組成物は、所望な場合、パックまたはディスペンサデバイス（例えば、ＦＤＡが承認したキット）で提示されてもよく、活性成分を含有する１つ以上の単位剤形を含んでいてもよい。パックは、金属箔またはプラスチック箔（例えばブリスターパック）を含んでいてもよい。パックまたはディスペンサデバイスは、投与のための指示書を伴っていてもよい。パックまたはディスペンサは、医薬品の製造、使用または販売を規制する政府機関によって定められた形態で容器に付けられた注意書きを伴っていてもよく、注意書きは、組成物またはヒトまたは動物への投与の形態で機関によって承認されたものを反映している。このような注意書きは、例えば、処方薬のためのＵ．Ｓ．  Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎによって承認されたラベルであってもよく、または承認された製品添付書類であってもよい。また、上にさらに詳細に示したように、適合性の医薬担体に配合された本発明の調製物を含む組成物が調製され、適切な容器に入れられ、適応する状態の治療のためにラベルが付けられてもよい。
【０３３９】
本明細書で使用される場合、「約」との用語は、±１０％を指す。
【０３４０】
「〜を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「〜を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「〜を含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「〜を含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「〜を有する（ｈａｖｉｎｇ）」およびこれらの活用形は、「〜を含むが、それに限定されない」を意味する。
【０３４１】
「〜からなる」との用語は、「〜を含み、これに限定される」ことを意味する。
【０３４２】
「〜から本質的になる」との用語は、組成物、方法または構造が、さらなる成分、工程および／または部品が、請求されている組成物、方法または構造の基本的かつ新規な特徴を大きく変えない場合にかぎり、さらなる成分、工程および／または部品を含んでいてもよいことを意味する。
【０３４３】
本明細書で使用される場合、「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」といった単数形は、その内容が明確に他の意味であることを示していない限り、複数の対象物も含む。例えば、「１つの化合物（ａ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）」または「少なくとも１つの化合物」との用語は、その混合物を含め、複数の化合物を含んでいてもよい。
【０３４４】
本出願全体で、本発明の種々の実施形態を、ある範囲の形態で示している場合がある。範囲の形態での記載は、単に簡便に簡略化するためのものであり、本発明の範囲の柔軟性のない限定であると解釈すべきではないことを理解すべきである。したがって、ある範囲の記載は、全ての可能な部分範囲と、その範囲内の個々の数値を具体的に開示していると考えるべきである。例えば、ある範囲の記載（例えば、１〜６）は、例えば、１〜３、１〜４、１〜５、２〜４、２〜６、３〜６などの部分範囲と、その範囲内の個々の数字（例えば、１、２、３、４、５、６）を具体的に開示していると考えるべきである。このことは、その範囲の幅にかかわらず適用される。
【０３４５】
数値範囲が本明細書に示されている場合はいつでも、示されている範囲内の引用されている数字（分数または積分）を含むことを意味している。第１の示されている数字から第２の示されている数字「の範囲」という句、第１の示されている数字「から」第２の示されている範囲「までの範囲」という句は、本明細書で相互に置き換え可能に用いられ、第１の示されている数字と第２の示されている数字と、その間の分数および整数を含むことを意図している。
【０３４６】
本明細書で使用される場合、「方法」との用語は、限定されないが、化学、医薬学、生物学、生化学および医学分野の実施者によって既に知られているか、既知の様式、手段、技術および手順から容易に開発されるこれらの様式、手段、技術および手順を含め、所与の作業を達成するための様式、手段、技術および手順を指す。
【０３４７】
本発明の特定の特徴は、明確性のために、別個の実施形態の観点で記載されているが、１つの実施形態で組み合わせて与えられてもよいことが理解される。逆に、簡潔にするために、１つの実施形態の観点で記載されている本発明の種々の特徴も、別個に提供されてもよく、または任意の適切な部分的な組み合わせで、または本発明の任意の他の記載されている実施形態に適するものとして提供されてもよい。種々の実施形態の観点で記載されている特定の特徴は、これらの要素がないと実施形態が操作不可能になる場合を除き、これらの実施形態の必須の特徴であると考えるべきではない。
【０３４８】
上に記載され、以下の特許請求の範囲の章で請求される、本発明の種々の実施形態および態様は、以下の実施例に実験的な裏付けが見出される。
【実施例】
【０３４９】
ここで、上の記載と合わせて、本発明を非限定的な様式で示す以下の実施例を参照する。
【０３５０】
一般的に、本明細書で使用される命名法および本発明で利用される実験手順は、分子学、生化学、微生物学、組換えＤＮＡの技術を含む。このような技術は、文献で十分に説明されている。例えば、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ」、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）；「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」、Ｖｏｌｕｍｅｓ  Ｉ−ＩＩＩ  Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｒ．Ｍ．編集（１９９４）；Ａｕｓｕｂｅｌら、「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、Ｍａｒｙｌａｎｄ（１９８９）；Ｐｅｒｂａｌ、「Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ」、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８８）；Ｗａｔｓｏｎら、「Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＤＮＡ」、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｂｏｏｋｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｂｉｒｒｅｎら（編集）「Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  Ｓｅｒｉｅｓ」、Ｖｏｌ．１−４、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９８）；米国特許第４，６６６，８２８号；第４，６８３，２０２号；第４，８０１，５３１号；第５，１９２，６５９号、第５，２７２，０５７号に記載される方法論；「Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ」、Ｖｏｌｕｍｅ  Ｉ−ＩＩＩ  Ｃｅｌｌｉｓ，Ｊ．Ｅ．編集（１９９４）；「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」、Ｖｏｌｕｍｅ  Ｉ−ＩＩＩ  Ｃｏｌｉｇａｎ  Ｊ．Ｅ．編集（１９９４）；Ｓｔｉｔｅｓら（編集）、「Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」（第８版）、Ａｐｐｌｅｔｏｎ＆Ｌａｎｇｅ、Ｎｏｒｗａｌｋ、ＣＴ（１９９４）；Ｍｉｓｈｅｌｌ  ａｎｄ  Ｓｈｉｉｇｉ（編集）、「Ｓｅｌｅｃｔｅｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８０）を参照。利用可能な免疫アッセイは、特許および科学文献に広く記載されている。例えば、米国特許第３，７９１，９３２号；第３，８３９，１５３号；第３，８５０，７５２号；第３，８５０，５７８号；第３，８５３，９８７号；第３，８６７，５１７号；第３，８７９，２６２号；第３，９０１，６５４号；第３，９３５，０７４号；第３，９８４，５３３号；第３，９９６，３４５号；第４，０３４，０７４号；第４，０９８，８７６号；第４，８７９，２１９号；第５，０１１，７７１号、第５，２８１，５２１号；「Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、Ｇａｉｔ，Ｍ．Ｊ．編集（１９８４）；「Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ」、Ｈａｍｅｓ，  Ｂ．Ｄ．およびＨｉｇｇｉｎｓ  Ｓ．Ｊ．編集（１９８５）；「Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ」、Ｈａｍｅｓ，Ｂ．Ｄ．，およびＨｉｇｇｉｎｓ  Ｓ．Ｊ．編集（１９８４）；「Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌ��  Ｃｕｌｔｕｒｅ」、Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ｒ．Ｉ．編集（１９８６）；「Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  Ｅｎｚｙｍｅｓ」、ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ（１９８６）；「Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ」、Ｐｅｒｂａｌ，Ｂ．（１９８４）および「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ」、Ｖｏｌ．１−３１７、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；「ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ  Ｇｕｉｄｅ  Ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ（１９９０）；Ｍａｒｓｈａｋら、「Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ−Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｃｏｕｒｓｅ  Ｍａｎｕａｌ」、ＣＳＨＬ  Ｐｒｅｓｓ（１９９６）を参照。これらは全て、本明細書に完全に記載されているかのように参考として組み込まれる。他の一般的な参考文献は、本文書全体で与えられている。その手順は、当該技術分野でよく知られていると考えられ、読者が簡便なように与えられている。ここに含まれる全ての情報は、本明細書に参考として組み込まれる。
一般的な材料および実験手順
動物
【０３５１】
雌の６〜１２週齢のＢＡＬＢ／ｃ、ＦＶＢ、Ｃ５７ＢＬ／６およびＢＡＬＢ／ｃ−ＮＵＤＥマウスを、Ｈａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから得た。コンジェニックＢ６．ＳＪＬ、Ｃ５７ＢＬ／６−Ｔｇ（ＣＡＧ−ＯＶＡ）９１６Ｊｅｎ／Ｊマウス（ＯＶＡを発現するマウス）およびＯＴ１マウス（Ｈ２Ｋｂ  ＭＨＣ−Ｉの観点でオボアルブミン（ＯＶＡ）の残基２５７〜２６４を認識するように設計されたトランスジェニック（Ｔｇ）ＴＣＲを発現する）およびＯＴ１／Ｒａｇ−／ＣＤ４５．１を、Ｗｅｉｚｍａｎｎ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｎｔｅｒで飼育した。全てのマウスを小さなケージに入れ（殻ケージに５匹の動物）、滅菌餌と酸性水を与えた。Ｔｈｅ  Ｗｅｉｚｍａｎｎ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅは、これらの試験を承認した。
マウスメモリーＴ細胞からのベト細胞の生成
【０３５２】
Ｈ２Ｋｂ  ＭＨＣ−Ｉの観点でオボアルブミン（ＯＶＡ）の残基２５７〜２６４を認識するように設計されたトランスジェニック（Ｔｇ）ＴＣＲを発現するＯＴ１マウスを使用した。これらのマウスは、ベトＴｃｍ細胞のドナーとして役立った。これらのＯＴ１  ＣＤ８  Ｔ細胞を収集する前に、マウスに、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）と混合したＯＶＡ−ペプチドで免疫付与し、ＯＶＡ−ペプチド＋不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）を用いた初期のチャレンジから１４日間、免疫付与を促進した。免疫付与から７〜１４日後に、マウスを屠殺し、その脾臓およびリンパ節を取り出し、粉砕し、磁気ビーズ選別を利用し、一般的なＣＤ８＋細胞プールからメモリー細胞（ＣＤ８＋ＣＤ４４＋）を単離した。得られた集合に対し、サイトカイン枯渇状態で、ＯＶＡを発現するマウスの脾臓から作られた、照射された脾臓細胞と共に培養することによって、サードパーティの刺激を与えた。培養開始から６０時間後、野生型（ＷＴ）Ｔｃｍについて、細胞が以下に記載するようなＴｃｍ様表現型（すなわち、既に記載したベトＴｃｍ細胞）を発現するようにするため、ｈＩＬ−１５（１０ｎｇ／ｍｌ）を培養物に加え、これは既に実証されているように全脾臓細胞または末梢血単核細胞から調製される［Ｏｐｈｉｒ，Ｅ．（２０１３）、前出］）。
ウイルスペプチドをロードしたヒト樹状細胞の生成
【０３５３】
ウイルスペプチドをロードしたヒト樹状細胞（ＤＣ）を、図４Ｂに示すように調製した。簡単に言うと、ドナー末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を培養プレートに播種し、３７℃、５％のＣＯ２／Ｏ２で３時間インキュベートした。上清細胞（Ｔ細胞を含む）を捨て、付着した細胞を、サイトカインＩＬ−４およびＧＭ−ＣＳＦを添加し、（同じ培養条件で）さらに７２時間インキュベートした。３日後、浮遊細胞を集め（未熟な樹状細胞）、播種し、ＤＣを成熟させるために、ＩＮＦ−γ、ＩＬ−４、ＧＭ−ＣＳＦおよびＬＰＳといったサイトカインと共に、一晩インキュベートした。４日目に、付着した細胞（成熟ＤＣ、すなわち、ｍＤＣ）を剥がし、ウイルスペプチドのカクテルを加え、３７℃で１時間インキュベートした。ウイルスカクテルは、ＥＢＶ、ＣＭＶおよびアデノウイルス（Ａｄｖ）の７種類のペプミックスを含んでいる。ペプミックスは、ＪＰＴ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（ベルリン、ドイツ）から購入した、目的抗原の全タンパク質配列の１１アミノ酸が重複している１５マーである。ＥＢＶ（ＬＭＰ２、ＢＺＬＦ１、ＥＢＮＡ１）、Ａｄｖ−（ペントン、ヘキソン）およびＣＭＶ−（ｐｐ６５、ＩＥ−１）に及ぶペプミックスを使用した。次いで、ウイルスペプチドをロードしたヒトｍＤＣに３０Ｇｙを照射し、これを以下に記載したようにＴ細胞フラクションに加えた。
ウイルスペプチドを用いたヒト抗サードパーティＴｃｍ細胞の生成
【０３５４】
まず、ＣＤ４＋およびＣＤ５６＋細胞の細胞ドナーから得られた末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を枯渇させることによって、抗サードパーティヒトベト細胞を生成した（Ｍｉｌｔｅｎｉ  Ｂｉｏｔｅｃから得た磁気ビーズを用いた磁気セル選別を用いる）。
【０３５５】
細胞の残りの集合を、（同じ細胞ドナーの）照射した（３０Ｇｙ）樹状細胞と一緒に培養し、ここで、樹状細胞は、サードパーティ抗原（例えば、ＥＢＶ、ＣＭＶおよびアデノウイルスを含むウイルス性抗原カクテル）を発現するように刺激を受けていた。培養の最初の３日間、細胞にＩＬ−２１のみを追加し、次いで、＋３日目から＋９日目まで、ＩＬ−２１、ＩＬ−１５およびＩＬ−７を培養物に加えた。
ウイルスペプチドを用いた、メモリーＴ細胞からのヒトベトＴｃｍ細胞の生成
【０３５６】
まず、ＣＤ４＋、ＣＤ５６＋およびＣＤ４５ＲＡ＋細胞の細胞ドナーから得られた末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を枯渇させることによって、ヒトメモリー細胞からベト細胞を生成した（Ｍｉｌｔｅｎｉ  Ｂｉｏｔｅｃから得た磁気ビーズを用いた磁気セル選別を用いる）。この細胞の残りの集合は、ＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＯ＋メモリーＴ細胞を含んでいた。次に、メモリーＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞を、（同じ細胞ドナーの）照射した（３０Ｇｙ）樹状細胞と一緒に培養し、ここで、樹状細胞は、抗原（例えば、ＥＢＶ、ＣＭＶおよびアデノウイルスを含むウイルス性抗原カクテル）を発現するように刺激を受けていた。培養の最初の３日間、細胞にＩＬ−２１のみを追加し、次いで、＋３日目から＋９日目まで、ＩＬ−２１、ＩＬ−１５およびＩＬ−７を培養物に加えた。
腫瘍ペプチドを用いた、メモリーＴ細胞からのヒトベトＴｃｍ細胞の生成
【０３５７】
ベト細胞は、まず、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）を用い、細胞ドナーを腫瘍ペプチド（例えば、ＢＣＲ−ＡＢＬ、ＥＬＡ２、Ｇ２５０／炭酸脱水酵素ＩＸ、ＨＡ−１、ＨＡ−２、ｈＴＥＲＴ、ＭＡＧＥ−１、ＭＵＣ１、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＰＲ１、ＰＲＴＮ３、ＲＨＡＭＭおよびＷＴ−１、またはこれらの組み合わせ、Ｍｏｌｌｄｒｅｍ  Ｊ．Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｂｌｏｏｄ  ａｎｄ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ（２００６）１２：１３−１８；Ａｌａｔｒａｓｈ  Ｇ．およびＭｏｌｌｄｒｅｍ  Ｊ．，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ  Ｈｅｍａｔｏｌ．（２０１１）４（１）：３７−５０）に記載されている通り）で免疫付与し、腫瘍ペプチド＋不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）を用いた初期のチャレンジから１４日間かけて免疫付与することによって、ヒトメモリー細胞から作られる。次いで、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）が得られ、これは、ＣＤ４＋、ＣＤ５６＋およびＣＤ４５ＲＡ＋細胞が枯渇している（Ｍｉｌｔｅｎｉ  Ｂｉｏｔｅｃから得た磁気ビーズを用いた磁気セル選別を用いる）。この細胞の残りの集合は、ＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＯ＋メモリーＴ細胞を含んでいる。次に、メモリーＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞を、（同じ細胞ドナーの）照射した（３０Ｇｙ）樹状細胞と一緒に培養し、ここで、樹状細胞は、腫瘍抗原を発現するように刺激を受けている。培養の最初の３日間、細胞にＩＬ−２１のみを追加し、次いで、＋３日目から＋９日目まで、ＩＬ−２１、ＩＬ−１５およびＩＬ−７を培養物に加える。
フローサイトメトリー分析
【０３５８】
蛍光活性化セル選別（ＦＡＣＳ）分析は、Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ＦＡＣＳｃａｎｔｏ  ＩＩを用いて行われ、生成したＴｃｍ細胞の純度と表現型（すなわち、ＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＯ＋ＣＤ６２Ｌ＋およびＣＤ４−ＣＤ５６−ＣＤ４５ＲＡ−）のレベルを決定した。以下の標識された抗体を用い、細胞を２つのパネルで染色した。
【０３５９】
パネル１：ＣＤ８−フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、ＣＤ４５ＲＯ−フィコエリトリン（ＰＥ）、ＣＤ６２Ｌ−アロフィコシアニン（ＡＰＣ）、ＣＤ５６−ＡＰＣ−Ｃｙ７、ＣＤ３−Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  Ｖｉｏｌｅｔ  ７１１、ＣＤ１６−ＰＥ−Ｃｙ７および７ＡＡＤ−ＰｅｒＣｐ。
【０３６０】
パネル２：ＣＤ３−Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  Ｖｉｏｌｅｔ  ７１１、ＣＤ８−ＦＩＴＣ、ＣＤ４５ＲＡ−ＰＥ−Ｃｙ７、ＣＤ４５ＲＯ−ＡＰＣ−Ｃｙ７、ＣＤ２０−ＰＥおよび７ＡＡＤ−ＰｅｒＣｐ。
限界希釈分析（ＬＤＡ）および３５Ｓ−メチオニン死滅アッセイ
【０３６１】
異なる精製段階で、例えば、ＣＤ４−ＣＤ５６−（すなわち、濃縮されたＣＤ８＋細胞）またはＣＤ４−ＣＤ５６−ＣＤ４５ＲＡ−（すなわち、メモリー細胞）でＰＢＭＣから作られる抗サードパーティＴｃｍ培養物内に残留する抗宿主反応性細胞の頻度を評価するために、新鮮なＣＤ４−ＣＤ５６−ＣＤ１９−細胞（同種異系のポジティブコントロールとして働く）と比較して、制限希釈分析（ＬＤＡ）を行った。上述の３種類の試験した細胞調製物を、照射された宿主ＰＢＭＣに対し、ＭＬＲ培養物中で５日間培養し（すなわち、バルク培養）、抗宿主活性を誘発させた。５日後、エフェクター細胞をＭＬＲ培養物から集め、Ｆｉｃｏｌｌ上で分離した。エフェクター細胞を、９６ウェルの丸底プレート（入力数あたり１６個ずつ）に、異なる希釈率で播種した（範囲、ウェルあたり１〜４００００個の細胞）。バルクＭＬＲで使用する照射された（３０Ｇｙ）宿主刺激因子を各ウェルに加えた。限界希釈培養物を使用し、抗宿主シグナルの終点を滴定し、ＩＬ−２存在下、エフェクターシグナルを増幅させるために７日間維持した。
【０３６２】
７日後、３５Ｓ−メチオニン標識された細胞に対し、標準的な５時間アッセイで細胞傷害性活性を測定した。簡単に言うと、標的細胞として使用する宿主由来のコンカナバリンＡ調製ブラスト（Ｓｉｇｍａ、セントルイス、ＭＯ）を３５Ｓ−メチオニンで標識し、試験する誘発されたエフェクター細胞の種々の希釈物と共に播種した。５時間インキュベートした後、１６個ずつのサンプルの上清の平均放射活性を計算し、以下の式によって、特異的な溶解物の割合を計算した。１００ｘ（平均実験放出度−平均自然放出度）／（平均全放出度−平均自然放出度）。標的細胞によって放出される３５Ｓ−メチオニンのレベルは、抗宿主活性のレベルを表す死滅レベルを表す。
【０３６３】
制限希釈培養の読みから頻度を計算するために、以下の式を使用した。ｌｎｙ＝−ｆｘ＋ｌｎａ（ポアソン分布の０次項を表す）。ここで、ｙは、非応答培養物の割合であり、ｘは、培養物あたりの応答する細胞の数であり、ｆは、応答前駆体の頻度であり、ａは、理論的に１００％に等しいｙの切片である。標的細胞のみを含む１６ウェルの平均と３標準偏差の和は、バックグラウンド放射活性のカットオフ値として決定された。カットオフ値を超えている場合、実験ウェルを溶解について陽性であるとスコア付けした。応答する培養物の割合は、正の培養物の割合を計算することによって定義された。データの線形回帰分析を利用して描かれた線の勾配から、ＣＴＬ−ｐ頻度（ｆ）および標準誤差（ＳＥ）を決定した。
ＩＦＮ−γ−Ｅｌｉｓｐｏｔ分析
【０３６４】
酵素結合免疫スポット（ＥＬＩＳｐｏｔ）アッセイは、単細胞レベルでサイトカインを分泌する細胞の頻度を測定する高感度免疫アッセイであり、これを使用した。具体的には、ＩＦＮ−γは、活性化されたＴ細胞およびＮＫ細胞によって主に産生されるため、ＩＮＦ−γ（インターフェロン−ガンマ）ＥＬＩＳｐｏｔアッセイを使用し、抗サードパーティＴｃｍ培養物内に残留する抗宿主反応性細胞の頻度を評価した。
【０３６５】
簡単に言うと、９６ウェルＰＶＤＦ膜マイクロタイタープレートの膜表面を、アッセイするサイトカイン（ＩＦＮ−γ）の特異的なエピトープに結合する捕捉抗体（精製された抗ヒトＩＮＦ−γ）でコーティングした。１６時間のＭＬＲと刺激工程の間、試験する細胞の種々の希釈物（ウェルあたり、１〜４０，０００細胞の範囲）を、照射された抗宿主刺激因子と共にプレートのウェルに播種した。これらは、ウェルの膜表面上に単層を生成した。抗宿主特異的細胞が活性化すると、これらの細胞は、ＩＦＮ−γを放出し、固定された抗体によって膜表面に直接的に捕捉される。したがって、ＩＦＮ−γは、培地に拡散する機会が与えられる前に、またはプロテアーゼによって分解され、そばにある細胞の受容体に結合する前に、分泌する細胞の周囲の領域に直接的に「捕捉される」。その後の検出工程は、固定されたＩＦＮ−γをＩｍｍｕｎｏＳｐｏｔとして視覚化する。ウェルを洗浄して、細胞、屑片および培地成分を除去した後、ヒトＩＦＮ−γに特異的なビオチン化抗体をウェルに加えた。この抗体は、ＩＦＮ−γサイトカインの固有のエピトープと反応性であるため、これを使用し、捕捉されたサイトカインを検出する。結合していないビオチン化抗体を除去するために洗浄した後、セイヨウワサビペルオキシダーゼ酵素（ＨＲＰ）および沈殿基質（例えば、ＡＥＣ、ＢＣＩＰ／ＮＢＴ）に接合したストレプトアビジンを用い、検出されたサイトカインを視覚化した。着色した最終生成物（赤色のスポット（ＨＲＰの場合））は、典型的には、個々のＩＦＮーγを産生する細胞を表す。スポットを手動で計測した（例えば、実体顕微鏡を用いて）、または自動化されたリーダーを用い、マイクロウェルの画像を捕捉し、スポットの数と大きさを分析した。
【０３６６】
(実施例１)
同族抗原に対して拡張されたＴＣＲトランスジェニックＣＤ８メモリーＴ細胞は、完全に同種異系のＴ細胞が枯渇したＢＭの生着を顕著に向上させる。
【０３６７】
メモリーＴ細胞がＧｖＨＤのリスク減少に関連している可能性は、過去１０年間にわたって議論されてきた。原理的に、メモリープールは、抗ウイルス性クローンで濃縮されるため、含まれるアロ反応性Ｔ細胞のレベルが少なくなるだろう。しかし、きわめて最近、白血病患者へのＣＤ４５ＲＡ＋が枯渇したＨＳＣＴを使用しようとする２つの主要な研究で、移植後のＧｖＨＤ予防を用いた場合であっても顕著なレベルのＧｖＨＤが報告された［Ｂｌｅａｋｌｅｙ  Ｍ．ら  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．（２０１５）１２５（７）：２６７７−８９；Ｔｒｉｐｌｅｔｔ、Ｂ．Ｍ．ら  Ｂｏｎｅ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．（２０１５）５０（７）：９６８−９７７］。したがって、抗サードパーティＴ細胞の活性化および拡張によるＴ細胞メモリープールからのアロ反応性クローンの枯渇は、ＣＤ４５ＲＡ細胞の枯渇後に残ってしまう残留するＧｖＨＤの問題を解決し得る。さらに、一般的なウイルス性抗原ペプチドをサードパーティ刺激として使用すると、アロ活性を枯渇させ、抗ウイルス活性を付与するベトＴｃｍを潜在的に作成することができる。
【０３６８】
この目的のために、本願発明者らは、既存のメモリーＴ細胞プールのＴＣＲが指向される特異的なペプチドを用いた刺激を確立することによって、抗サードパーティベトＴｃｍ細胞の生成のための以前のプロトコルを改変した。したがって、Ｈ２Ｋｂ  ＭＨＣ−Ｉの観点でオボアルブミン（ＯＶＡ）の残基２５７〜２６４を認識するように設計されたトランスジェニック（Ｔｇ）ＴＣＲを発現するＯＴ１マウスを使用し、概念実験の証明をマウスモデルで行った。これらのマウスは、ベトＴｃｍ細胞のドナーとして役立った。これらのＯＴ１  ＣＤ８  Ｔ細胞を収集する前に、マウスに、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）と混合したＯＶＡ−ペプチドで免疫付与し、ＯＶＡ−ペプチド＋不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）を用いた初期のチャレンジから１４日間、免疫付与を促進した（図１の説明を参照）。免疫付与から７〜１４日後に、マウスを屠殺し、その脾臓およびリンパ節を取り出し、粉砕し、磁気ビーズ選別を利用し、一般的なＣＤ８＋細胞プールからメモリー細胞（ＣＤ８＋ＣＤ４４＋）を単離した。得られた集合に対し、サイトカイン枯渇状態で、ＯＶＡを発現するマウスの脾臓から作られた、照射された脾臓細胞と共に培養することによって、サードパーティの刺激を与えた。培養開始から６０時間後、細胞にＷＴ  Ｔｃｍ（すなわち、以下に記載するように、「一般的な」Ｔｃｍ細胞）について上に記載したようなＴｃｍ様表現型を発現させるために、ｈＩＬ−１５（１０ｎｇ／ｍｌ）を培養物に加えた。
【０３６９】
図２Ａに示されるように、メモリー細胞（ＣＤ８＋ＣＤ４４＋）の出発物質の集合から調製されたＯＴ−１  Ｔｃｍ細胞は、「一般的な」抗サードパーティＴｃｍ細胞（すなわち、既に実証されているような全脾臓または末梢血単核細胞から調製される、既に記載したベトＴｃｍ細胞）によって誘発されるキメラ現象と同様に、同種異系のＴ細胞が枯渇した骨髄移植の生着を高めることができた［Ｏｐｈｉｒ，Ｅ．（２０１３）、前出］）。まとめると、これらの結果は、同族ペプチドに対して拡張されたＣＤ８＋ＣＤ４４＋から誘導されるＴｃｍ細胞は、実際に、ＧｖＨＤを起こすことなく、耐性を誘発することができることを強く示している。
【０３７０】
(実施例２)
ＣＤ８メモリーＴ細胞から作られるＴｃｍベト細胞は、ＧＶＨＤのリスクを減らしつつ、顕著なベト活性を与える
【０３７１】
次に、本願発明者らは、ＯＶＡで免疫付与した後のＢ６−ＷＴ  メモリーＣＤ８  Ｔ細胞からＴｃｍ細胞を得ようと企てた。この目的のために、Ｃ５７ＢＬ／６マウスを免疫付与した後、ＣＤ８＋ＣＤ４４＋メモリーＴ細胞を磁気選別し、全てのＯＶＡ刺激因子を用いたＴｃｍ生成について同じプロトコルを行った。最初に、本願発明者らは、これらのＣＤ８＋ＣＤ４４＋Ｔｃｍ細胞がＧｖＨＤを誘発する能力を、クリニックで以前使用した出発物質であるＣＤ８＋ＣＤ４４＋の集合の能力と比較して試験したいと考えた。ＣＤ８＋ＣＤ４４＋Ｔｃｍ細胞は、関連するＴＣＲを保有するＴ細胞クローンのみを選択的に活性化するＯＶＡペプチドを用いた抗原刺激に起因して、アロ反応性クローンが枯渇していると予想された。
【０３７２】
実際に、ＣＤ８＋ＣＤ４４＋Ｔｃｍ細胞は、動物モデルにおいて顕著なＧｖＨＤ症状を誘発せず、一方、サードパーティ活性化を受けていなかったＣＤ８＋ＣＤ４４＋の新鮮なメモリー細胞は、ＧｖＨＤに起因して、顕著な致死および体重減少を誘発したことが示された（図２Ｂ〜Ｃ）。次に、本願発明者らは、これらの細胞が、強度を下げるように調整する（ＲＩＣ）モデルにおいて耐性を誘発することができるかどうかを評価したいと考えた（図２Ｄに示される）。図２Ｅからわかるように、ＣＤ８＋ＣＤ４４＋Ｔｃｍは、Ｃ５７ＢＬ−Ｎｕｄｅ−ＢＭを、５Ｇｙ  ＴＢＩで調整されたＢａｌｂ／ｃレシピエントに移植した後のキメラ現象の顕著な向上を示した。
【０３７３】
(実施例３)
ウイルス性抗原を用いた抗サードパーティヒトＴｃｍ細胞の生成
【０３７４】
本願発明者らは、アロ活性の枯渇のための２段階の磁気選別手法を用い、ＣＤ４−ＣＤ５６−細胞の出発物質の集合から、ＧｖＨＤのリスクを最小限にしつつ、ヒト由来の抗サードパーティベト細胞を生成するためのプロトコルを既に開発している。このプロトコルは、３種類の細胞ドナーを用いて開発され、サードパーティドナーは、ＧｖＨＤを予防するために、ＨＬＡクラスＩ対立遺伝子が、いずれも宿主のＨＬＡクラスＩ対立遺伝子と共通ではないように選択された。
【０３７５】
現在の実験では、マウス概念実証実験について上に記載したのと同様に、本願発明者らは、ベトＴｃｍ細胞を調製するために、天然に存在するメモリーＣＤ８細胞を出発物質として使用することを利用した。これらの細胞は、ナイーブ細胞と比較して、ＧｖＨＤ誘発の傾向が小さいことが報告されているからである。この選択肢は、近年、ナイーブＴ細胞の枯渇のためのＧＭＰグレードのＣＤ４５ＲＡ磁気ビーズのリリースにより、現実のものとなった。上述のように、上の「分野と背景技術」の章において、ＣＤ４５ＲＡ−細胞を注入する手法は、白血病患者の２つの臨床試験で試験されている［Ｂｌｅａｋｌｅｙ  Ｍ．ら（２０１５）、前出、Ｔｒｉｐｌｅｔｔ、Ｂ．Ｍ．ら（２０１５）、前出］しかし、ＧｖＨＤは、防がれておらず、何人かの患者は、移植後に免疫抑制治療がされていても、重篤な形態のＧｖＨＤを示している。これらのデータから、本願発明者らは、特定の抗原に対するＣＤ４５ＲＡが枯渇したＣＤ８  Ｔ細胞の刺激が、全てのＧｖＨ反応性を完全に失わせ得る可能性を評価した。このメモリープール中の大部分の細胞のＴＣＲは、一般的なウイルス性抗原および細菌性抗原に指向しているため、通常は宿主アロ反応性はほとんどないと思われるため、本願発明者らは、刺激因子としてドナーＤＣ（すなわち、Ｔｃｍ細胞と同じ細胞ドナー）にロードしたウイルス性抗原ペプチド（例えば、ＣＭＶ、ＥＢＶおよびアデノウイルス）を簡便に使用することができると予想した。この手法を用い、これらの細胞の可能な抗ウイルス活性の利点が、これらのベト活性に加えて得られると思われ、このことは、ウイルスの再活性化が一般的に有害な事象である移植設定にとって特に魅力的な属性である。
【０３７６】
この予想に取り組むために、予備実験を開始した。予備実験では、ベトＴｃｍ細胞の同じ培養条件を使用したが、但し、抗原に対する刺激は、サードパーティＤＣのためのサードＨＬＡを渇望するドナーの代わりに、３種類の著名なウイルス（ＥＢＶ、ＣＭＶおよびアデノウイルス）のウイルスペプチド混合物を用いて刺激を与えたドナーＤＣに対して行われた。注目すべきことに、この実験は、既に記載しているＣＤ４−ＣＤ５６−集合から開始した（すなわち、ＣＤ４５ＲＡ＋細胞は除去しなかった）。図３Ａ〜３Ｂからわかるように、ベトＴｃｍ細胞は、この抗ウイルス刺激に応答して十分に成長し、＋９日目に１０倍の拡張を示し、高い割合の細胞（９３．２％）がベトＴｃｍ表現型を示している。
【０３７７】
限界希釈分析（ＬＤＡ）によって分析される抗宿主反応性を図３Ｃ〜Ｄに示し、関連するパラメータを以下の表２にまとめている。結果は、この方法によって、渇望するＨＬＡドナーに対する「一般的な」サードパーティ活性化を用いた以前の結果と同様に、宿主アロ反応性クローンの２ｌｏｇの枯渇が得られたことを示していた。これらの結果を、さらに、ＩＦＮγ−Ｅｌｉｓｐｏｔ分析（バルク培養の後に行われた）によって補強し、宿主活性化が起こると、新鮮な細胞（ＣＤ４−ＣＤ５６−ＣＤ１９−）は、約２５，０００スポット／１０６  Ｔ細胞を生成し、ベトＴｃｍ細胞培養物ではスポットは検出することができなかった（データは示していない）。
【０３７８】
表２：ウイルスペプチドに対して指向するベトＴｃｍ細胞を生成する前および後の抗宿主Ｔ細胞の枯渇
2019520823.tif 000006
【０３７９】
(実施例４)
ウイルス性抗原を用いた、メモリーＴ細胞からのヒトベト細胞の生成
【０３８０】
次に、本願発明者らは、ドナー（すなわち、Ｔｃｍ細胞と同じ細胞ドナーの）ＤＣ上に提示されたウイルス性抗原に対して活性化された、ＣＤ４５ＲＡが枯渇した集合から成長したＴｃｍ細胞の反応性を試験した（図４Ａおよび図４Ｂに示される）。
【０３８１】
この出発物質（ＣＤ４−ＣＤ５６−ＣＤ４５ＲＡ−細胞）の集合から成長したベトＴｃｍ細胞の反応性を、ＬＤＡ死滅アッセイを用いて試験した。この結果からわかるように、メモリー細胞から作られるベト細胞は、抗宿主反応性を発揮しないことが明らかである（図５Ａ〜Ｃおよび図６）。
【０３８２】
合わせると、これらの結果は、刺激因子としての抗ウイルスペプチドの手法を、ＧｖＨＤ傾向が比較的低いことが知られているＣＤ４５ＲＡが枯渇した応答性細胞（例えば、ＣＤ４−ＣＤ５６−ＣＤ４５ＲＡ−細胞）の出発物質の集合に適用することができることを強く示唆している。示されているように、この細胞集合は、さらに、抗ウイルス性刺激を受けつつ、推定抗宿主クローンでさらに希釈されてもよく、きわめて安全で、ＧｖＨＤを含まない細胞調製物を得ることができた。
【０３８３】
(実施例５)
非ウイルス性抗原を用いた、メモリーＴ細胞からのヒトベト細胞の生成
【０３８４】
本願発明者らは、癌（例えば、固形腫瘍または造血悪性腫瘍）と共に同定されたペプチドを含む非ウイルスペプチドに対して刺激を受けたメモリー細胞の出発物質の集合（ＣＤ４５ＲＡ−細胞）からベト細胞を生成する。
【０３８５】
上述のように、ベト細胞は、ドナーから得たメモリーＴ細胞（すなわち、ＣＤ４５ＲＡが枯渇した集合）を、ドナーＤＣ上に提示された腫瘍抗原にさらすことによって生成する。
【０３８６】
または、ベト細胞は、まず、細胞ドナーを、腫瘍ペプチド（上の「一般的な材料および実験手順」の章に記載）を用い、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）を用いて免疫付与し、腫瘍ペプチド＋不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）を用いた初期のチャレンジの後１４日間、免疫付与を促進することによって作られる。次に、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を被験体から得て、ＣＤ４＋ＣＤ５６＋ＣＤ４５ＲＡ＋細胞が枯渇している。この細胞の残りの集合（すなわち、ＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＯ＋メモリーＴ細胞）を、ドナーＤＣ上に提示された腫瘍抗原と共に培養する。
【０３８７】
これらの細胞を、残った癌細胞を治療により除去するためにさらに使用してもよい。
【０３８８】
(実施例６)
抗ウイルス性セントラルメモリーＣＤ８ベトＴ細胞（Ｔｃｍ）の大規模生産のための適性製造基準（ＧＭＰ）プロトコル
【０３８９】
本願発明者らは、自己抗原提示細胞上に提示されたウイルス性抗原を用い、メモリーＴ細胞からヒトベト細胞を生成するためのプロトコルを１０回、首尾良く繰り返した（図７）。図８および図９Ａ〜Ｈからわかるように、新規プロトコルの細胞の回収率および純度は、非常に再現性があった。
【０３９０】
本発明を、具体的な実施形態と組み合わせて記載してきたが、多くの変更、改変および変形が当業者には明らかであることは明確である。したがって、添付の特許請求の範囲の趣旨および広い範囲に含まれるこのような全ての変更、改変および変形を包含することを意図している。
【０３９１】
本明細書で述べられる全ての刊行物、特許および特許明細書は、それぞれの個々の刊行物、特許および特許明細書が、具体的かつ個々に本明細書に参考として組み込まれるように示されているかのように同程度まで、その全体が本明細書に組み込まれる。加えて、本出願における任意の参考文献の引用または特定は、このような参考文献が本発明の従来技術として利用可能であることを認めたものであると解釈すべきではない。章の見出しが使用される程度まで、これらの見出しは、必ずしも限定するものであると解釈すべきではない。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図２Ｅ】
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【図３Ａ−Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ−Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９Ａ−Ｄ】
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【図９Ｅ−Ｈ】
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【国際調査報告】
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