(57)【要約】  本発明の目的は、胃潰瘍の抑制効果が改善され、容易に製造できる天然由来の胃潰瘍の予防又は治療剤、経口投与薬、及び胃潰瘍の予防又は治療剤の製造方法を提供することである。  本発明に係る胃潰瘍の予防又は治療剤は、酵母を用いて得られる醸造酒における分子量１００００Ｄａ以上の画分の由来物を、胃潰瘍の予防又は治療有効量で含有する。醸造酒は、清酒であることが好ましい。また、本発明に係る胃潰瘍の予防又は治療剤は、経口投与されるものであることが好ましい。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
酵母を用いて得られる醸造酒における分子量１００００Ｄａ以上の画分の由来物を、胃潰瘍の予防又は治療有効量で含有する胃潰瘍の予防又は治療剤。
【請求項２】
前記醸造酒は、清酒である請求項１記載の胃潰瘍の予防又は治療剤。
【請求項３】
経口投与されるものである請求項１又は２記載の胃潰瘍の予防又は治療剤。
【請求項４】
インドメタシンを含有する経口投与薬であって、
酵母を用いて得られる醸造酒における分子量１００００Ｄａ以上の画分の由来物を、胃潰瘍の予防又は治療有効量で含有する経口投与薬。
【請求項５】
胃潰瘍の予防又は治療剤の製造方法であって、
酵母を用いて得られる醸造酒から分子量１００００Ｄａ以上の画分を回収し、回収物を濃縮する工程を有する方法。
【請求項６】
前記醸造酒は、清酒である請求項５記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、胃潰瘍の予防又は治療技術に関する。
【背景技術】
【０００２】
胃潰瘍は、消化器疾患の中でも羅患率が高く、医師及び患者の双方にとって厄介な疾患である。胃潰瘍は特に男性に多くみられ、社会的ストレスの多い人や性格的に神経質な人等が、自律神経を介して胃液分泌や胃血流に影響を及ぼし、潰瘍を作ると考えられている。しかも、一度潰瘍を作った人は繰り返し再発することが多いとされている。【０００３】
従来、胃潰瘍治療のために様々な治療薬が用いられてきたが、眠気の誘発、アナフィラキシーショックなどの副作用が懸念される。そこで、これらの副作用を軽減し、簡便に摂取し得る天然由来の胃潰瘍の治療薬の開発が期待されている。【０００４】
この点、特許文献１は、酵母等の微生物の破砕物から得られる粉末が、塩酸含有エタノールの経口投与により発生する胃潰瘍を抑制したことが記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】ＷＯ２００６／０２５４４８号パンフレット
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかし、特許文献１に示される技術を含む多くの天然由来の胃潰瘍治療薬は、その製造過程が煩雑である場合が多い。また、胃潰瘍の抑制効果の改善は、常に求められ続ける社会的要請である。【０００７】
本発明は、以上の実情に鑑みてなされたものであり、胃潰瘍の抑制効果が改善され、容易に製造できる天然由来の胃潰瘍の予防又は治療剤、及び胃潰瘍の予防又は治療剤の製造方法を提供することを目的とする。また、本発明は、胃潰瘍の予防効果に優れる経口投与薬を提供することも目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、酵母を用いて得られる醸造酒における分子量１００００Ｄａ以上の画分の由来物が、極めて胃潰瘍の抑制効果に優れることを見出し、本発明を完成するに至った。具体的に、本発明は以下のようなものを提供する。【０００９】
（１）  酵母を用いて得られる醸造酒における分子量１００００Ｄａ以上の画分の由来物を、胃潰瘍の予防又は治療有効量で含有する胃潰瘍の予防又は治療剤。【００１０】
（２）  前記醸造酒は、清酒である（１）記載の胃潰瘍の予防又は治療剤。【００１１】
（３）  経口投与されるものである（１）又は（２）記載の胃潰瘍の予防又は治療剤。【００１２】
（４）  インドメタシンを含有する経口投与薬であって、
酵母を用いて得られる醸造酒における分子量１００００Ｄａ以上の画分の由来物を、胃潰瘍の予防又は治療有効量で含有する経口投与薬。【００１３】
（５）  胃潰瘍の予防又は治療剤の製造方法であって、
酵母を用いて得られる醸造酒から分子量１００００Ｄａ以上の画分を回収し、回収物を濃縮する工程を有する方法。【００１４】
（６）  前記醸造酒は、清酒である（５）記載の方法。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、酵母を用いて得られる醸造酒における分子量１００００Ｄａ以上の画分の由来物を胃潰瘍の予防又は治療有効量で含有することで、胃潰瘍の抑制効果が改善され、容易に製造できる天然由来の胃潰瘍の予防又は治療剤、及び胃潰瘍の予防又は治療剤の製造方法を提供することができる。また、酵母を用いて得られる醸造酒における分子量１００００Ｄａ以上の画分の由来物を胃潰瘍の予防又は治療有効量で含有することで、胃潰瘍の予防効果に優れる経口投与薬を提供することもできる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】本発明の一実施例に係る胃潰瘍の予防剤による胃潰瘍の抑制効果を示す胃の写真である。
【図２】図１の胃における前庭部組織像を示す写真である。
【図３】図１の胃における胃潰瘍の程度を示すグラフである。
【図４】図１の胃における胃潰瘍の程度を示すグラフである。
【図５】図１の胃における胃潰瘍の程度を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
以下、本発明の実施形態を説明するが、これが本発明を限定するものではない。
【００１８】
胃潰瘍の予防又は治療剤は、酵母を用いて得られる醸造酒における分子量１００００Ｄａ以上の画分の由来物を、胃潰瘍の予防又は治療有効量で含有する。醸造酒には、酵母から分泌されたチオレドキシンが含まれており、分子量１００００Ｄａ以上の画分の由来物にも比較的多量のチオレドキシンが含まれる。このチオレドキシンが、由来物中に含まれる他の成分（食物繊維、糖質、灰分、タンパク質、水等）と相まって、胃潰瘍を十分に抑制するものと考えられる。
【００１９】
ここで、画分が由来する醸造酒は、アルコール発酵性酵母の発酵により得られるものである。チオレドキシンは生物種に広く認められるタンパク質であるため、チオレドキシン産生能が欠損されていない限りにおいて、任意の酵母が使用できる。また、本発明に使用される酵母は、遺伝子工学的手法等によりチオレドキシン産生能が高められ、もしくはヒト等の他の生物由来のチオレドキシンが導入されていてもよい。
【００２０】
本発明に使用される酵母として、具体的には、サッカロマイセス属（Saccharomyces）の酵母が挙げられ、清酒酵母、ワイン酵母、醤油酵母、ビール酵母等の食用酵母であることが好ましく、清酒酵母がより好ましい。これにより、より安全性に優れる胃潰瘍の予防又は治療剤が製造できる。また、酵母としては、アルコール耐性が低い酵母が好ましい。
【００２１】
本発明に使用される醸造酒は、清酒、ワイン、ビール、発泡酒等のいずれであってもよく、好ましくは清酒である。他方、焼酎等の蒸留酒は、蒸留処理により有効成分が除去されるため、本発明からは除外される。
【００２２】
醸造酒は、上槽前の酵母死滅率が５％以上となるように醪仕込みを行って得られたものであることが好ましい。このような醸造酒には、より多量のチオレドキシンが含まれている（特開２００９−１７８０８７号公報参照）一方、かかる醸造酒を用いた場合でも、画分中の前述した他成分の組成にはほぼ変化がない。これにより、胃潰瘍の抑制効果を更に向上することができる。なお、醸造酒は、上槽前の酵母死滅率が１０％以上となるように醪仕込みを行って得られたものであることがより好ましい。
【００２３】
また、醸造酒におけるアルコール濃度は、特に制限されないが、４〜３０体積％、好ましくは１５〜２５体積％であってよい。これによっても、より多量のチオレドキシンが含まれている（特開２００９−１７８０８７号公報参照）一方、かかる醸造酒を用いた場合でも、画分中の前述した他成分の組成にはほぼ変化がない。これにより、胃潰瘍の抑制効果を更に向上することができる。
【００２４】
分子量１００００Ｄａ以上の画分は、醸造酒を限外ろ過等の公知の方法で処理することにより回収できる。低分子の夾雑物を除去するために、限外ろ過を複数回（例えば、２〜１０回）行ってもよい。なお、醸造酒に固形物が含まれている場合には、必要に応じて、圧搾、ろ過、遠心分離等の固液分離を予め行ってもよい。
【００２５】
このようにして得られた画分は、更に、必要に応じて、ゲル濾過、塩析、アフィニティークロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー等の公知の精製処理に供して、チオレドキシンの純度を向上させてもよい。更に画分は乾燥処理に供して、乾燥物の状態で使用してもよい。
【００２６】
本発明の胃潰瘍の予防又は治療剤は、上記の画分に由来する物、典型的には乾燥粉末を含有する。本発明の予防又は治療剤は、胃潰瘍の抑制効果に優れる点で、経口投与されることが好ましく、そのために錠剤、丸剤、粉剤、カプセル剤、液剤、乳濁剤、懸濁剤、シロップ剤などの形態であってよい。
【００２７】
本発明の予防又は治療剤は、画分由来物の他に、薬理学的に許容できる担体を更に含有してもよい。かかる担体としては、例えば、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アカシアゴム、リン酸カルシウム、アルギン酸塩、珪酸カルシウム、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース誘導体、トラガカント、ゼラチン、シロップ、ヒドロキシ安息香酸メチル、タルク、ステアリン酸マグネシウム、水、鉱油などが挙げられる。
【００２８】
本発明の予防又は治療剤は、画分由来物を含む顆粒、錠菓、ゼリー、飴、飲料などの形態であってもよい。これらの形態で用いる原料は、当該分野で一般に使用されるものであってよく、例えばラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、リンゴファイバー、大豆ファイバー、肉エキス、黒酢エキス、ゼラチン、コーンスターチ、蜂蜜、動植物油脂類、多糖類などが挙げられる。
【００２９】
本発明の予防又は治療剤は、潤沢剤、乳化剤、懸濁化剤、酸化防止剤、防腐剤、甘味剤および／または香味剤などを更に含んでいてもよく、他の有効成分（水溶性ビタミン類および油溶性ビタミン類などを含む）を含んでもよい。
【００３０】
このように、本発明の予防又は治療剤は、医薬用組成物又は飲食品組成物のいずれとしても機能し、胃潰瘍の発症前又は発症後のいずれの時点においても有用に投与される。なお、特に胃潰瘍の予防という観点からは、インドメタシンを含有する経口投与薬とともに投与されることが好ましい。
【００３１】
本発明の予防又は治療剤は、幅広い用量範囲にわたって有効である。１日あたりの用量が、通常、体重１ｋｇに対して約０．０１〜１０００ｍｇ、好ましくは約０．１〜５００ｍｇ、さらに好ましくは約１〜３００ｍｇの範囲であってよく、このような量を１回または数回に分割して投与することが好ましい。ただし、実際の用量は、対象者の年齢、体重および症状の重篤度などを考慮して決定されるべきである。
【００３２】
本発明は、インドメタシンを含有する経口投与薬も提供する。インドメタシンには解熱作用、抗炎症作用等が知られているため、上記経口投与薬は総合感冒薬等として使用されるが、インドメタシンによる胃へのダメージが懸念されている。しかし、本発明の経口投与薬は、酵母を用いて得られる醸造酒における分子量１００００Ｄａ以上の画分の由来物を、胃潰瘍の予防又は治療有効量で含有するため、インドメタシンが胃に与えるダメージを軽減でき、胃潰瘍を抑制しつつ解熱作用、抗炎症作用等を享受することができる。なお、経口投与薬におけるインドメタシン及び上記画分以外の成分は、従来周知の通りであるため、省略する。
【実施例】
【００３３】
＜胃潰瘍の予防又は治療剤の製造＞
サッカロマイセス・セレビシエ（Saccharomyces  cerevisiae）に属する清酒酵母「ＫＺ０６」を用い、上槽前の酵母死滅率１００％となる条件（その他の条件は常法に従った）で醸造し、醸造アルコールを添加した清酒（普通酒、チオレドキシン濃度０．４ｍｇ／Ｌ）４ｋＬを、限外濾過膜（分画分子量１００００Ｄａ：旭化成ケミカルズ社「マイクローザ  ＳＬＰ−３０５３」）によって濃縮し、濾過膜非透過の画分４２Ｌを回収した。得られたチオレドキシン含有画分に等量の精製水を加え、これを再度、限外濾過膜（分画分子量１００００Ｄａ）によって濃縮して、濾過膜非透過の画分４２Ｌを回収した。この操作を合計８回繰り返して実施し、最終的に３４Ｌのチオレドキシン含有抽出物を得た。得られたチオレドキシン含有抽出物には、チオレドキシンが３９．０ｍｇ／Ｌの濃度で含まれており、チオレドキシンの収率は８２．９％であった。【００３４】
上記のチオレドキシン含有抽出物１００ｍＬを凍結乾燥し、粉末状の胃潰瘍の予防又は治療剤４．１ｇを得た。この粉末について、成分分析を行った結果を表１に示す。【００３５】
【表１】
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【００３６】
表１に示されるように、胃潰瘍の予防又は治療剤には、チオレドキシンの他に多様な成分が含まれることが確認された。また、この粉末は、香りをほとんど感じさせず、水への溶解性が良好であった。【００３７】
＜評価＞
生後８週齢（体重約２０ｇ）のＣ５７ＢＬ／６マウス（ｎ＝各１０）に対し、上記粉末０．３５〜０．４０ｇ／匹／日（チオレドキシンが３５０〜８００μｇ／匹／日）を１０％の割合で含む配合飼料を３日間に亘り摂取させた。その後、各マウスにインドメタシン溶液をインドメタシン８００μｇ／匹の量で腹腔内注射し、２４時間絶食させた。対照としては、上記粉末を含まない配合飼料を摂取させた系、インドメタシン溶液の代わりに生理食塩水を用いた系をそれぞれ行った。【００３８】
すると、上記粉末を含まない配合飼料を摂取させた系では、マウスが平均−２．７ｇ／匹の体重減少を示したのに対し、上記粉末を含む配合飼料を摂取させた系では、平均−１．５ｇ／匹の体重減少にとどまっていた。【００３９】
また、体重測定後に各マウスから胃を摘出し、大彎切開し写真を撮影した。その結果を図１に示す。図１において、（Ａ）は粉末を含まない配合飼料及び生理食塩水を用いた対照、（Ｂ）は粉末を含む配合飼料及び生理食塩水を用いた対照、（Ｃ）は粉末を含まない配合飼料及びインドメタシン溶液を用いた対照、（Ｄ）は粉末を含む配合飼料及びインドメタシン溶液を用いた実施例を示す。【００４０】
図１（Ａ）〜（Ｃ）の比較により、インドメタシン溶液を腹腔内注射することで、マウスの胃に浮腫及び前庭部のびらん及び出血が生じることが確認された。しかし、図１（Ｄ）に示されるように、粉末を含む配合飼料を摂取させた実施例では、インドメタシン溶液による胃の浮腫、前庭部のびらん及び出血が大幅に抑制されていた。【００４１】
図１においてびらん及び出血の差が顕著に見られた前庭部について、酸化的ＤＮＡ傷害マーカーである８−ヒドロキシデオキシグアノシン（８−ＯＨｄＧ）により、常法に従って免疫染色を行った。その結果を図２に示す。図２において、（Ａ）は粉末を含まない配合飼料及び生理食塩水を用いた対照、（Ｂ）は粉末を含む配合飼料及び生理食塩水を用いた対照、（Ｃ）は粉末を含まない配合飼料及びインドメタシン溶液を用いた対照、（Ｄ）は粉末を含む配合飼料及びインドメタシン溶液を用いた実施例を示す。【００４２】
図２（Ａ）〜（Ｃ）の比較により、インドメタシン溶液を腹腔内注射することで、マウスの胃前庭部が傷害を受けていることが確認された。しかし、図２（Ｄ）に示されるように、粉末を含む配合飼料を摂取させた実施例では、インドメタシン溶液による胃前庭部の傷害が大幅に抑制されていた。【００４３】
また、前庭部に対する壊死粘膜長の割合を算出した結果を図３に、粘膜下層の厚みを測定した結果を図４に各々示す。さらに、ヘマトキシリン・エオジン（ＨＥ）染色した標本について、顕微鏡下で炎症の程度を観察し、以下の基準で浸潤スコアを算出した結果を図５に示す。
浸潤スコア
０：  炎症細胞数の増加なし
１：  リンパ球及びプラズマ細胞による固有層のわずかな浸潤
２：  リンパ球及びプラズマ細胞による固有層の中程度の浸潤
３：  リンパ球及びプラズマ細胞による固有層の高度な浸潤【００４４】
図３〜５において、実施例は粉末を含む配合飼料及びインドメタシン溶液を用いた系、対照１は粉末を含まない配合飼料及びインドメタシン溶液を用いた系、対照２は粉末を含まない配合飼料及び生理食塩水を用いた系、対照３は粉末を含む配合飼料及び生理食塩水を用いた系を指す。【００４５】
図３〜５に示されるように、実施例では対照１に比べ、壊死粘膜の割合、粘膜下層の厚み、好中球スコアのいずれも有意に低下していた。【００４６】
以上より、酵母を用いて得られる醸造酒における分子量１００００Ｄａ以上の画分の由来物を、胃潰瘍の予防又は治療有効量で含有する剤は、優れた胃潰瘍の抑制効果を有することが分かった。
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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