(57)【要約】  本発明は、ベンジルフェニルエーテル誘導体、その調製方法、並びにその医薬組成物及び使用を開示する。詳細には、本発明は、式（Ｉ）によって表されるベンジルフェニルエーテル誘導体、医薬的に許容されるその塩、その立体異性体、その調製方法、１つ又は複数の当該化合物を含有する医薬組成物、並びに、例えば癌、感染性疾患及び自己免疫疾患などのＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１シグナルチャネルに関連する疾患の処置における当該化合物の使用に関する。
2019518076.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2019518076.tif 000053
［式中：
Ｒ１は、
【化２】
2019518076.tif 000054
から選択され；
Ｒ２は、水素、シアノ、メチルスルホニル、アセチルアミノ、カルバモイル、ジメチルアミノホルミル（−ＣＯＮ（ＣＨ３）２）、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、トリフルオロメチル、Ｃ１〜Ｃ５アルキル及びＣ１〜Ｃ５アルコキシから選択され；
Ｒ３は、置換されたＣ１〜Ｃ８飽和アルキルアミノ、置換されたＣ２〜Ｃ６不飽和アルキルアミノ、置換されたＮ−含有Ｃ２〜Ｃ６ヘテロサイクル−１−イルから選択され、それぞれは、水素、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、Ｃ１〜Ｃ５アルコキシ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルアミノ、アセチルアミノ、シアノ、ウレイド（−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２）、グアニジノ（−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２）、ウレイドアミノ（−ＮＨ−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２）、グアニジノアミノ（−ＮＨ−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２）、スルホニルアミノ（−ＮＨＳＯ３Ｈ）、スルファモイル（−ＳＯ２ＮＨ２）、メタンスルホニルアミノ（−ＮＨ−ＳＯ２ＣＨ３）、ヒドロキシホルミル（−ＣＯＯＨ）、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシルカルボニル、スルフィドリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、テトラゾリル、
【化３】
2019518076.tif 000055
から選択される置換基（複数可）で一置換、二置換、三置換、又は四置換されており；
Ｘは、水素、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、エテニル、トリフルオロメチル、メトキシから選択される］
のベンジルフェニルエーテル誘導体、又はその立体異性体又は医薬的に許容されるその塩。
【請求項２】
式（ＩＡ）；
【化４】
2019518076.tif 000056
［式中：
Ｒ１は、
【化５】
2019518076.tif 000057
から選択され；
Ｒ２は、水素、シアノ、メチルスルホニル、アセチルアミノ、カルバモイル、ジメチルアミノホルミル（−ＣＯＮ（ＣＨ３）２）、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、トリフルオロメチル、Ｃ１〜Ｃ５アルキル及びＣ１〜Ｃ５アルコキシから選択され；
Ｒ３は、置換されたＣ１〜Ｃ８飽和アルキルアミノ、置換されたＣ２〜Ｃ６不飽和アルキルアミノ、置換されたＮ−含有Ｃ２〜Ｃ６ヘテロサイクル−１−イルから選択され、それぞれは、水素、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、Ｃ１〜Ｃ５アルコキシ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルアミノ、アセチルアミノ、シアノ、ウレイド（−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２）、グアニジノ（−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２）、ウレイドアミノ（−ＮＨ−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２）、グアニジノアミノ（−ＮＨ−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２）、スルホニルアミノ（−ＮＨＳＯ３Ｈ）、スルファモイル（−ＳＯ２ＮＨ２）、メタンスルホニルアミノ（−ＮＨ−ＳＯ２ＣＨ３）、ヒドロキシホルミル（−ＣＯＯＨ）、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシルカルボニル、スルフィドリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、テトラゾリル、
【化６】
2019518076.tif 000058
から選択される置換基（複数可）で一置換、二置換、三置換、又は四置換されており；
Ｘは、水素、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、エテニル、トリフルオロメチル、及びメトキシから選択される］
によって表される、請求項１に記載のベンジルフェニルエーテル誘導体、又は医薬的に許容されるその塩又はその立体異性体。
【請求項３】
式（ＩＡ−１）；
【化７】
2019518076.tif 000059
［式中：
Ｒ２は、水素、シアノ、メチルスルホニル、アセチルアミノ、カルバモイル、ジメチルアミノホルミル（−ＣＯＮ（ＣＨ３）２）、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、トリフルオロメチル、Ｃ１〜Ｃ５アルキル及びＣ１〜Ｃ５アルコキシから選択され；
Ｒ３は、置換されたＣ１〜Ｃ８飽和アルキルアミノ、置換されたＣ２〜Ｃ６不飽和アルキルアミノ、置換されたＮ−含有Ｃ２〜Ｃ６ヘテロサイクル−１−イルから選択され、それぞれは、水素、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、Ｃ１〜Ｃ５アルコキシ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルアミノ、アセチルアミノ、シアノ、ウレイド（−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２）、グアニジノ（−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２）、ウレイドアミノ（−ＮＨ−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２）、グアニジノアミノ（−ＮＨ−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２）、スルホニルアミノ（−ＮＨＳＯ３Ｈ）、スルファモイル（−ＳＯ２ＮＨ２）、メタンスルホニルアミノ（−ＮＨ−ＳＯ２ＣＨ３）、ヒドロキシホルミル（−ＣＯＯＨ）、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシルカルボニル、スルフィドリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、テトラゾリル、
【化８】
2019518076.tif 000060
から選択される置換基（複数可）で一置換、二置換、三置換、又は四置換されており；
Ｘは、水素、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、エテニル、トリフルオロメチル、及びメトキシから選択される］
によって表される、請求項２に記載のベンジルフェニルエーテル誘導体、又は医薬的に許容されるその塩又はその立体異性体。
【請求項４】
式（ＩＡ−１ａ）：
【化９】
2019518076.tif 000061
［式中：
Ｒ３は、置換されたＣ１〜Ｃ８飽和アルキルアミノ、置換されたＣ２〜Ｃ６不飽和アルキルアミノ、置換されたＮ−含有Ｃ２〜Ｃ６ヘテロサイクル−１−イルから選択され、それぞれは、水素、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、Ｃ１〜Ｃ５アルコキシ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルアミノ、アセチルアミノ、シアノ、ウレイド（−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２）、グアニジノ（−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２）、ウレイドアミノ（−ＮＨ−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２）、グアニジノアミノ（−ＮＨ−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２）、スルホニルアミノ（−ＮＨＳＯ３Ｈ）、スルファモイル（−ＳＯ２ＮＨ２）、メタンスルホニルアミノ（−ＮＨ−ＳＯ２ＣＨ３）、ヒドロキシホルミル（−ＣＯＯＨ）、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシルカルボニル、スルフィドリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、テトラゾリル、
【化１０】
2019518076.tif 000062
から選択される置換基（複数可）で一置換、二置換、三置換、又は四置換されており；
Ｘは、水素、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、エテニル、トリフルオロメチル、及びメトキシから選択される］
によって表される、請求項３に記載のベンジルフェニルエーテル誘導体、又は医薬的に許容されるその塩又はその立体異性体。
【請求項５】
式Ａ（ＩＡ−１ｂ）：
【化１１】
2019518076.tif 000063
［式中：
Ｒ３は、置換されたＣ１〜Ｃ８飽和アルキルアミノ、置換されたＣ２〜Ｃ６不飽和アルキルアミノ、置換されたＮ−含有Ｃ２〜Ｃ６ヘテロサイクル−１−イルから選択され、それぞれは、水素、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、Ｃ１〜Ｃ５アルコキシ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルアミノ、アセチルアミノ、シアノ、ウレイド（−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２）、グアニジノ（−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２）、ウレイドアミノ（−ＮＨ−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２）、グアニジノアミノ（−ＮＨ−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２）、スルホニルアミノ（−ＮＨＳＯ３Ｈ）、スルファモイル（−ＳＯ２ＮＨ２）、メタンスルホニルアミノ（−ＮＨ−ＳＯ２ＣＨ３）、ヒドロキシホルミル（−ＣＯＯＨ）、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシルカルボニル、スルフィドリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、テトラゾリル、
【化１２】
2019518076.tif 000064
から選択される置換基（複数可）で一置換−、二置換−、三置換−、又は四−置換されており；
Ｘは、水素、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、エテニル、トリフルオロメチル、及びメトキシから選択される］
によって表される、請求項３に記載のベンジルフェニルエーテル誘導体、又は医薬的に許容されるその塩又はその立体異性体。
【請求項６】
式（ＩＡ−２）：
【化１３】
2019518076.tif 000065
［式中：
Ｒ２は、水素、シアノ、メチルスルホニル、アセチルアミノ、カルバモイル、ジメチルアミノホルミル（−ＣＯＮ（ＣＨ３）２）、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、トリフルオロメチル、Ｃ１〜Ｃ５アルキル及びＣ１〜Ｃ５アルコキシから選択され；
Ｒ３は、置換されたＣ１〜Ｃ８飽和アルキルアミノ、置換されたＣ２〜Ｃ６不飽和アルキルアミノ、置換されたＮ−含有Ｃ２〜Ｃ６ヘテロサイクル−１−イルから選択され、それぞれは、水素、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、Ｃ１〜Ｃ５アルコキシ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルアミノ、アセチルアミノ、シアノ、ウレイド（−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２）、グアニジノ（−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２）、ウレイドアミノ（−ＮＨ−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２）、グアニジノアミノ（−ＮＨ−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２）、スルホニルアミノ（−ＮＨＳＯ３Ｈ）、スルファモイル（−ＳＯ２ＮＨ２）、メタンスルホニルアミノ（−ＮＨ−ＳＯ２ＣＨ３）、ヒドロキシホルミル（−ＣＯＯＨ）、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシルカルボニル、スルフィドリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、テトラゾリル、
【化１４】
2019518076.tif 000066
から選択される置換基（複数可）で一置換−、二置換−、三置換−、又は四−置換されており；
Ｘは、水素、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、エテニル、トリフルオロメチル、及びメトキシから選択される］
によって表される、請求項２に記載のベンジルフェニルエーテル誘導体、又は医薬的に許容されるその塩又はその立体異性体。
【請求項７】
式（ＩＡ−２ａ）：
【化１５】
2019518076.tif 000067
［式中：
Ｒ３は、置換されたＣ１〜Ｃ８飽和アルキルアミノ、置換されたＣ２〜Ｃ６不飽和アルキルアミノ、置換されたＮ−含有Ｃ２〜Ｃ６ヘテロサイクル−１−イルから選択され、それぞれは、水素、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、Ｃ１〜Ｃ５アルコキシ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルアミノ、アセチルアミノ、シアノ、ウレイド（−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２）、グアニジノ（−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２）、ウレイドアミノ（−ＮＨ−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２）、グアニジノアミノ（−ＮＨ−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２）、スルホニルアミノ（−ＮＨＳＯ３Ｈ）、スルファモイル（−ＳＯ２ＮＨ２）、メタンスルホニルアミノ（−ＮＨ−ＳＯ２ＣＨ３）、ヒドロキシホルミル（−ＣＯＯＨ）、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシルカルボニル、スルフィドリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、テトラゾリル、
【化１６】
2019518076.tif 000068
から選択される置換基（複数可）で一置換−、二置換−、三置換−、又は四−置換されており；
Ｘは、水素、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、エテニル、トリフルオロメチル、及びメトキシから選択される］
によって表される、請求項６に記載のベンジルフェニルエーテル誘導体、又は医薬的に許容されるその塩又はその立体異性体。
【請求項８】
式（ＩＡ−２ｂ）：
【化１７】
2019518076.tif 000069
［式中：
Ｒ３は、置換されたＣ１〜Ｃ８飽和アルキルアミノ、置換されたＣ２〜Ｃ６不飽和アルキルアミノ、置換されたＮ−含有Ｃ２〜Ｃ６ヘテロサイクル−１−イルから選択され、それぞれは、水素、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、Ｃ１〜Ｃ５アルコキシ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルアミノ、アセチルアミノ、シアノ、ウレイド（−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２）、グアニジノ（−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２）、ウレイドアミノ（−ＮＨ−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２）、グアニジノアミノ（−ＮＨ−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２）、スルホニルアミノ（−ＮＨＳＯ３Ｈ）、スルファモイル（−ＳＯ２ＮＨ２）、メタンスルホニルアミノ（−ＮＨ−ＳＯ２ＣＨ３）、ヒドロキシホルミル（−ＣＯＯＨ）、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシルカルボニル、スルフィドリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、テトラゾリル、
【化１８】
2019518076.tif 000070
から選択される置換基（複数可）で一置換−、二置換−、三置換−、又は四−置換されており；
Ｘは、水素、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、エテニル、トリフルオロメチル、及びメトキシから選択される］
によって表される、請求項６に記載のベンジルフェニルエーテル誘導体、又は医薬的に許容されるその塩又はその立体異性体。
【請求項９】
Ｒ３が：
【化１９】
2019518076.tif 000071
［式中、Ｒは、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチルから選択され；
Ｘは、水素、フッ素、塩素、臭素、メチル、エテニル、及びトリフルオロメチルから選択される］
から選択される、請求項１〜８のいずれか１項に記載のベンジルフェニルエーテル誘導体、又は医薬的に許容されるその塩又はその立体異性体。
【請求項１０】
化合物が、
Ｎ−アセチルアミノエチル−４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジルアミン
【化２０】
2019518076.tif 000072
Ｎ−（４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジル）セリン
【化２１】
2019518076.tif 000073
Ｎ−エチル−Ｎ−ヒドロキシルエチル−４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジルアミン
【化２２】
2019518076.tif 000074
Ｎ−（４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジル）プロリン
【化２３】
2019518076.tif 000075
Ｎ−ヒドロキシルエチル−４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジルアミン
【化２４】
2019518076.tif 000076
Ｎ−（４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジル）アラニン
【化２５】
2019518076.tif 000077
Ｎ−（４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジル）メチオニン
【化２６】
2019518076.tif 000078
Ｎ−（４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジル）スレオニン
【化２７】
2019518076.tif 000079
Ｎ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）−４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジルアミン
【化２８】
2019518076.tif 000080
Ｎ−［４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジル］モルホリンヒドロクロリド
【化２９】
2019518076.tif 000081
Ｎ−（４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−５−クロロ−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジル）セリン
【化３０】
2019518076.tif 000082
Ｎ−ヒドロキシルエチル−４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−５−クロロ−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジルアミン
【化３１】
2019518076.tif 000083
Ｎ−アセチルアミノエチル−４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−５−クロロ−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジルアミン
【化３２】
2019518076.tif 000084
Ｎ−（２−メタンスルホニルアミノエチル）−４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジルアミンヒドロクロリド
【化３３】
2019518076.tif 000085
（Ｓ）−Ｎ−（４−（２−ブロモ−３−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン−６−イル）ベンジルオキシ）−５−クロロ−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジル）ピペコリン酸
【化３４】
2019518076.tif 000086
Ｎ−（４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−５−クロロ−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジル）アラニン
【化３５】
2019518076.tif 000087
Ｎ−（４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−５−クロロ−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジル）スレオニン
【化３６】
2019518076.tif 000088
Ｎ−（４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−５−クロロ−２−（３−メタンスルホニルベンジルオキシ）ベンジル）セリン
【化３７】
2019518076.tif 000089
Ｎ−（４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−５−クロロ−２−（３−メタンスルホニルベンジルオキシ）ベンジル）ピペコリン酸
【化３８】
2019518076.tif 000090
から選択される、請求項１に記載のベンジルフェニルエーテル誘導体、又は医薬的に許容されるその塩又はその立体異性体。
【請求項１１】
前記医薬的に許容される塩が、無機酸で形成される塩、有機酸で形成される塩、アルカリ金属イオンの塩、アルカリ土類金属イオンの塩、又は生理学的に許容されるカチオンを提供する有機塩基で形成される塩及びアンモニウム塩を含む、請求項１に記載のベンジルフェニルエーテル誘導体、又はその立体異性体又は医薬的に許容されるその塩。
【請求項１２】
前記無機酸が、塩酸、臭化水素酸、リン酸又は硫酸から選択され；前記有機酸が、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、クエン酸、マレイン酸、酒石酸、フマル酸、クエン酸又は乳酸から選択され；前記アルカリ金属イオンが、リチウムイオン、ナトリウムイオン、カリウムイオンから選択され；前記アルカリ土類金属イオンが、カルシウムイオン及びマグネシウムイオンから選択され；生理学的に許容されるカチオンを提供する前記有機塩基が、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、ピペリジン、モルホリン又はトリス（２−ヒドロキシエチル）アミンから選択される、請求項１１に記載のベンジルフェニルエーテル誘導体、又はその立体異性体又は医薬的に許容されるその塩。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載のベンジルフェニルエーテル誘導体、及びその立体異性体、及び医薬的に許容されるその塩を調製する方法であって：
【化３９】
2019518076.tif 000091
式（Ｉ）の化合物の調製について、その構造に基づき、調製方法は２ステップに分けられ：
（ａ）２−ヒドロキシ−４−（２−ブロモ−３−Ｒ１ベンジルオキシ）−Ｘ−置換されたベンズアルデヒド１を出発物質として、塩基性条件下で３位にＲ２置換されたハロゲン化ベンジルと反応させて、アルデヒド−含有中間化合物２を得る；
（ｂ）前記アルデヒド−含有中間化合物２を出発物質として、アミノ基−又はイミノ基−含有のＨＲ３と縮合させ、得られた生成物を還元して、標的化合物Ｉを得る；
ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＸは、それぞれ請求項１〜１２のいずれか１項に定義されている、方法。
【請求項１４】
有効成分としての、請求項１〜１２のいずれか１項に記載のベンジルフェニルエーテル誘導体、又はその立体異性体又は医薬的に許容されるその塩、及び１つ又は複数の医薬的に許容される担体又は賦形剤を含むことを特徴とする、医薬組成物。
【請求項１５】
ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１シグナル伝達経路に関連する疾患の予防及び／又は処置のための医薬の製造における、請求項１〜１２のいずれか１項に記載のベンジルフェニルエーテル誘導体、又はその立体異性体、又は医薬的に許容されるその塩の使用。
【請求項１６】
ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１シグナル伝達経路に関連する前記疾患が、癌、感染性疾患、及び自己免疫疾患から選択される、請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
前記癌が、皮膚癌、肺癌、泌尿器腫瘍、血液腫瘍、乳癌、神経膠腫、消化器系腫瘍、生殖器系腫瘍、リンパ腫、神経系腫瘍、脳腫瘍、頭頚部癌から選択され；前記感染性疾患が、細菌感染症及びウイルス感染症から選択され；前記自己免疫疾患が、臓器特異的自己免疫疾患及び全身性自己免疫疾患から選択され；前記自己免疫疾患が、臓器特異的自己免疫疾患、全身性自己免疫疾患から選択され、前記臓器特異的自己免疫疾患として、慢性リンパ球性甲状腺炎、甲状腺機能亢進症、インスリン依存性糖尿病、重症筋無力症、潰瘍性大腸炎、慢性萎縮性胃炎に伴う悪性貧血、肺出血性腎炎症候群、原発性胆汁性肝硬変、多発性脳脊髄硬化症、及び急性特発性多発神経炎が挙げられ、前記全身性自己免疫疾患として、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、全身性血管炎、強皮症、天疱瘡、皮膚筋炎、混合性結合組織病、及び自己免疫性溶血性貧血が挙げられる、請求項１６に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
技術分野
本発明は、ベンジルフェニルエーテル誘導体、その調製方法、並びにその医薬組成物及び使用を開示する。詳細には、本発明は、式（Ｉ）によって表されるベンジルフェニルエーテル誘導体、医薬的に許容されるその塩、その立体異性体、その調製方法、１つ又は複数の当該化合物を含有する医薬組成物、並びに、例えば癌、感染性疾患及び自己免疫疾患などのＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１シグナルチャネルに関連する疾患の処置における当該化合物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
背景技術
癌免疫学に関する研究を掘り下げていくと、腫瘍微小環境は、腫瘍細胞を、ヒト免疫系により認識され且つ死滅させられることから守り得ることが見出された。腫瘍細胞の免疫回避は、腫瘍の発生及び成長において非常に重要な役割を果たす。２０１３年に、サイエンス誌は、腫瘍免疫療法を飛躍的な発明の上位１０中の１位として位置付けし、また免疫療法を癌処置の分野における「中心」とした。免疫細胞の活性化又は阻害は、正及び負のシグナルにより制御され、プログラム細胞死１（ＰＤ−１）／ＰＤ−１リガンド（ＰＤ−Ｌ１）は、腫瘍特異性ＣＤ８＋Ｔ細胞の免疫活性を阻害し且つ免疫回避を仲介する負の免疫制御シグナルである。
【０００３】
腫瘍細胞は、その表面上に産生されたプログラム細胞死リガンド（ＰＤ−Ｌ１）を、Ｔ細胞のＰＤ−１タンパク質に結合することにより免疫系から逃れる。腫瘍微小環境は、浸潤Ｔ細胞におけるＰＤ−１分子の高発現を誘起し、腫瘍細胞はＰＤ−１リガンドＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２を高度に発現し、腫瘍微小環境におけるＰＤ−１経路の持続的活性化をもたらす。阻害されたＴ細胞は、腫瘍を見つけ出すことができず、その結果、免疫系に、腫瘍細胞を攻撃して死滅させるというシグナルを送ることができない。ＰＤ−１又はＰＤ−Ｌ１に対するＰＤ−１抗体は、この２つのタンパク質が結合することを妨げることによりこの経路を遮断し、Ｔ細胞の機能を部分的に修復して、Ｔ細胞が腫瘍細胞を死滅させることを可能にする。
【０００４】
ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１−をベースとする免疫療法は、新世代の注目を浴びる免疫療法であり、身体に属する免疫系を使用して腫瘍と戦うことを目標としている。該免疫療法は、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１シグナル伝達経路を遮断してアポトーシスを誘起することにより、複数の種類の腫瘍を処置する可能性を有する。最近では、一連の驚くべき研究により、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害抗体が多用な腫瘍に対する強い抗腫瘍活性を有することが確認され、これは特に関心を集めている。２０１４年９月４日に、Ｍｅｒｃｋ社、ＵＳＡからのキイトルーダ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ）（登録商標）（ペンブロリズマブ）は、他の薬物療法に不応答であった、進行性又は切除不能な黒色腫患者の処置用の、最初のＦＤＡ承認されたＰＤ−１モノクローナル抗体となった。現在、ＭＳＤは、様々な種類の血液癌、肺癌、乳癌、膀胱癌、胃癌、及び頭頚部癌を含めて３０を超える異なる種類の癌において、キイトルーダの可能性を調査している。２０１４年１２月２２日に、巨大医薬品企業のＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ社は、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）からの迅速承認の獲得において先頭に立った。その抗癌免疫療法薬ニボルマブは、商標名オプジーボ（Ｏｐｄｉｖｏ）で、他の薬物に応答しない切除不能な又は転移性の黒色腫患者の処置用に収載され、これはＭＳＤのキイトルーダに続く、第２のＵＳ収載のＰＤ−１阻害剤である。２０１５年３月４日に、ＦＤＡは、ニボルマブを、白金系の化学療法中に又は化学療法後に進行した転移性の扁平上皮非小細胞肺癌の処置用に承認した。ＭＳＤ出版の、キイトルーダ（ペンブロリズマブ）による固形腫瘍の処置の第Ｉｂ相ＫＥＹＮＯＴＥ−０２８研究によると、キイトルーダ処置により、胸膜中皮腫（ＰＭ）を有する２５人の患者において、２８％の奏効率（ＯＲＲ）を達成した。並びに４８％の患者は、疾患が安定しており、疾患制御率は７６％に達した。承認薬のいずれにも処置応答を示さなかった進行性ホジキンリンパ腫（ＨＬ）を有する患者は、ＭＳＤのキイトルーダ及びＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓのオプジーボ（Ｏｐｄｖｉｏ）で処置を受けた後、完全寛解に到達することができた。２０１５年米国癌学会年会（ＡＡＣＲ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ）において、Ｊｏｈｎｓ  Ｈｏｐｋｉｎｓ  Ｋｉｍｍｅｌ  Ｃａｎｃｅｒ  ＣｅｎｔｅｒのＬｅｉｓｈａ  Ａ．Ｅｍｅｎｓ、ＭＤ、ＰｈＤ、腫瘍学準教授は、Ｒｏｃｈｅ社のＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体ＭＰＤＬ３２８０Ａが、進行性三種陰性乳癌において持続的効果を有することを報告した。
【０００５】
腫瘍免疫療法は、腫瘍標的療法の次の、癌処置における革命と考えられている。しかしながら、モノクローナル抗体治療薬は、それ自体の欠点を有し：プロテアーゼにより容易に分解され、そのため身体内で不安定であり、経口的に摂取できず；免疫交差反応が容易に起こり；生成物の質を制御することが容易ではなく、生産技術が高度であり；大量の調製及び精製が困難であり、費用が高く；使用が不便であり、注射又は点滴のみが可能である。したがって、腫瘍免疫療法にとって、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用の小分子阻害剤がより良い選択である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の内容
本発明によって解決されるべき技術的問題は、構造式（Ｉ）を有しＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１の相互作用を阻害するベンジルフェニルエーテル誘導体、及びその立体異性体及び医薬的に許容されるその塩、並びにその調製方法、及びその医薬組成物、及びＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１シグナル伝達経路に関連する疾患の予防又は処置におけるその使用を提供することである。
【０００７】
【化１】
2019518076.tif 000003
【課題を解決するための手段】
【０００８】
以下の技術的解決策は、上記の技術的問題を解決するために本発明により提供される。
技術的解決策の第１の態様は、式（Ｉ）：
【０００９】
【化２】
2019518076.tif 000004
【００１０】
［式中：
Ｒ１は、
【００１１】
【化３】
2019518076.tif 000005
【００１２】
から選択され；
Ｒ２は、水素、シアノ、メチルスルホニル、アセチルアミノ、カルバモイル、ジメチルアミノホルミル（−ＣＯＮ（ＣＨ３）２）、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、トリフルオロメチル、Ｃ１〜Ｃ５アルキル及びＣ１〜Ｃ５アルコキシから選択され；
Ｒ３は、置換されたＣ１〜Ｃ８飽和アルキルアミノ、置換されたＣ２〜Ｃ６不飽和アルキルアミノ、置換されたＮ−含有Ｃ２〜Ｃ６ヘテロサイクル−１−イルから選択され、それぞれは、水素、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、Ｃ１〜Ｃ５アルコキシ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルアミノ、アセチルアミノ、シアノ、ウレイド（−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２）、グアニジノ（−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２）、ウレイドアミノ（−ＮＨ−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２）、グアニジノアミノ（−ＮＨ−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２）、スルホニルアミノ（−ＮＨＳＯ３Ｈ）、スルファモイル（−ＳＯ２ＮＨ２）、メタンスルホニルアミノ（−ＮＨ−ＳＯ２ＣＨ３）、ヒドロキシホルミル（−ＣＯＯＨ）、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシルカルボニル、スルフィドリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、テトラゾリル、
【００１３】
【化４】
2019518076.tif 000006
【００１４】
から選択される置換基（複数可）で一置換、二置換、三置換、又は四置換されており；
Ｘは、水素、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、エテニル、トリフルオロメチル、メトキシから選択される］
によって表されるベンジルフェニルエーテル誘導体、その立体異性体及び医薬的に許容されるその塩を提供することである。
【００１５】
好ましいのは、化合物が、式（ＩＡ）：
【００１６】
【化５】
2019518076.tif 000007
【００１７】
［式中：
Ｒ１は、
【００１８】
【化６】
2019518076.tif 000008
【００１９】
から選択され；
Ｒ２は、水素、シアノ、メチルスルホニル、アセチルアミノ、カルバモイル、ジメチルアミノホルミル（−ＣＯＮ（ＣＨ３）２）、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、トリフルオロメチル、Ｃ１〜Ｃ５アルキル及びＣ１〜Ｃ５アルコキシから選択され；
Ｒ３は、置換されたＣ１〜Ｃ８飽和アルキルアミノ、置換されたＣ２〜Ｃ６不飽和アルキルアミノ、置換されたＮ−含有Ｃ２〜Ｃ６ヘテロサイクル−１−イルから選択され、それぞれは、水素、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、Ｃ１〜Ｃ５アルコキシ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルアミノ、アセチルアミノ、シアノ、ウレイド（−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２）、グアニジノ（−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２）、ウレイドアミノ（−ＮＨ−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２）、グアニジノアミノ（−ＮＨ−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２）、スルホニルアミノ（−ＮＨＳＯ３Ｈ）、スルファモイル（−ＳＯ２ＮＨ２）、メタンスルホニルアミノ（−ＮＨ−ＳＯ２ＣＨ３）、ヒドロキシホルミル（−ＣＯＯＨ）、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシルカルボニル、スルフィドリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、テトラゾリル、
【００２０】
【化７】
2019518076.tif 000009
【００２１】
から選択される置換基（複数可）で一置換、二置換、三置換、又は四置換されており；
Ｘは、水素、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、エテニル、トリフルオロメチル、及びメトキシから選択される］
によって表される、ベンジルフェニルエーテル誘導体、その立体異性体及び医薬的に許容されるその塩である。
【００２２】
好ましいのは、化合物が、式（ＩＡ−１）：
【００２３】
【化８】
2019518076.tif 000010
【００２４】
［式中：
Ｒ２は、水素、シアノ、メチルスルホニル、アセチルアミノ、カルバモイル、ジメチルアミノホルミル（−ＣＯＮ（ＣＨ３）２）、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、トリフルオロメチル、Ｃ１〜Ｃ５アルキル及びＣ１〜Ｃ５アルコキシから選択され；
Ｒ３は、置換されたＣ１〜Ｃ８飽和アルキルアミノ、置換されたＣ２〜Ｃ６不飽和アルキルアミノ、置換されたＮ−含有Ｃ２〜Ｃ６ヘテロサイクル−１−イルから選択され、それぞれは、水素、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、Ｃ１〜Ｃ５アルコキシ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルアミノ、アセチルアミノ、シアノ、ウレイド（−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２）、グアニジノ（−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２）、ウレイドアミノ（−ＮＨ−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２）、グアニジノアミノ（−ＮＨ−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２）、スルホニルアミノ（−ＮＨＳＯ３Ｈ）、スルファモイル（−ＳＯ２ＮＨ２）、メタンスルホニルアミノ（−ＮＨ−ＳＯ２ＣＨ３）、ヒドロキシホルミル（−ＣＯＯＨ）、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシルカルボニル、スルフィドリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、テトラゾリル、
【００２５】
【化９】
2019518076.tif 000011
【００２６】
から選択される置換基（複数可）で一置換、二置換、三置換、又は四置換されており；
Ｘは、水素、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、エテニル、トリフルオロメチル、及びメトキシから選択される］
によって表される、ベンジルフェニルエーテル誘導体、その立体異性体及び医薬的に許容されるその塩である。
【００２７】
好ましいのは、化合物が、式（ＩＡ−１ａ）：
【００２８】
【化１０】
2019518076.tif 000012
【００２９】
［式中：
Ｒ３は、置換されたＣ１〜Ｃ８飽和アルキルアミノ、置換されたＣ２〜Ｃ６不飽和アルキルアミノ、置換されたＮ−含有Ｃ２〜Ｃ６ヘテロサイクル−１−イルから選択され、それぞれは、水素、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、Ｃ１〜Ｃ５アルコキシ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルアミノ、アセチルアミノ、シアノ、ウレイド（−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２）、グアニジノ（−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２）、ウレイドアミノ（−ＮＨ−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２）、グアニジノアミノ（−ＮＨ−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２）、スルホニルアミノ（−ＮＨＳＯ３Ｈ）、スルファモイル（−ＳＯ２ＮＨ２）、メタンスルホニルアミノ（−ＮＨ−ＳＯ２ＣＨ３）、ヒドロキシホルミル（−ＣＯＯＨ）、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシルカルボニル、スルフィドリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、テトラゾリル、
【００３０】
【化１１】
2019518076.tif 000013
【００３１】
から選択される置換基（複数可）で一置換−、二置換−、三置換−、又は四−置換されており；
Ｘは、水素、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、エテニル、トリフルオロメチル、及びメトキシから選択される］
によって表されるベンジルフェニルエーテル誘導体、その立体異性体及び医薬的に許容されるその塩である。
【００３２】
好ましいのは、化合物が、式（ＩＡ−１ｂ）：
【００３３】
【化１２】
2019518076.tif 000014
【００３４】
［式中：
Ｒ３は、置換されたＣ１〜Ｃ８飽和アルキルアミノ、置換されたＣ２〜Ｃ６不飽和アルキルアミノ、置換されたＮ−含有Ｃ２〜Ｃ６ヘテロサイクル−１−イルから選択され、それぞれは、水素、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、Ｃ１〜Ｃ５アルコキシ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルアミノ、アセチルアミノ、シアノ、ウレイド（−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２）、グアニジノ（−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２）、ウレイドアミノ（−ＮＨ−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２）、グアニジノアミノ（−ＮＨ−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２）、スルホニルアミノ（−ＮＨＳＯ３Ｈ）、スルファモイル（−ＳＯ２ＮＨ２）、メタンスルホニルアミノ（−ＮＨ−ＳＯ２ＣＨ３）、ヒドロキシホルミル（−ＣＯＯＨ）、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシルカルボニル、スルフィドリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、テトラゾリル、
【００３５】
【化１３】
2019518076.tif 000015
【００３６】
から選択される置換基（複数可）で一置換−、二置換−、三置換−、又は四−置換されており；
Ｘは、水素、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、エテニル、トリフルオロメチル、及びメトキシから選択される］
によって表されるベンジルフェニルエーテル誘導体、その立体異性体及び医薬的に許容されるその塩である。
【００３７】
好ましいのは、化合物が、式（ＩＡ−２）：
【００３８】
【化１４】
2019518076.tif 000016
【００３９】
［式中：
Ｒ２は、水素、シアノ、メチルスルホニル、アセチルアミノ、カルバモイル、ジメチルアミノホルミル（−ＣＯＮ（ＣＨ３）２）、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、トリフルオロメチル、Ｃ１〜Ｃ５アルキル及びＣ１〜Ｃ５アルコキシから選択され；
Ｒ３は、置換されたＣ１〜Ｃ８飽和アルキルアミノ、置換されたＣ２〜Ｃ６不飽和アルキルアミノ、置換されたＮ−含有Ｃ２〜Ｃ６ヘテロサイクル−１−イルから選択され、それぞれは、水素、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、Ｃ１〜Ｃ５アルコキシ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルアミノ、アセチルアミノ、シアノ、ウレイド（−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２）、グアニジノ（−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２）、ウレイドアミノ（−ＮＨ−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２）、グアニジノアミノ（−ＮＨ−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２）、スルホニルアミノ（−ＮＨＳＯ３Ｈ）、スルファモイル（−ＳＯ２ＮＨ２）、メタンスルホニルアミノ（−ＮＨ−ＳＯ２ＣＨ３）、ヒドロキシホルミル（−ＣＯＯＨ）、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシルカルボニル、スルフィドリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、テトラゾリル、
【００４０】
【化１５】
2019518076.tif 000017
【００４１】
から選択される置換基（複数可）で一置換−、二置換−、三置換−、又は四−置換されており；Ｘは、水素、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、エテニル、トリフルオロメチル、及びメトキシから選択される］
によって表されるベンジルフェニルエーテル誘導体、その立体異性体及び医薬的に許容されるその塩である。
【００４２】
好ましいのは、化合物が、式（ＩＡ−２ａ）：
【００４３】
【化１６】
2019518076.tif 000018
【００４４】
［式中：
Ｒ３は、置換されたＣ１〜Ｃ８飽和アルキルアミノ、置換されたＣ２〜Ｃ６不飽和アルキルアミノ、置換されたＮ−含有Ｃ２〜Ｃ６ヘテロサイクル−１−イルから選択され、それぞれは、水素、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、Ｃ１〜Ｃ５アルコキシ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルアミノ、アセチルアミノ、シアノ、ウレイド（−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２）、グアニジノ（−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２）、ウレイドアミノ（−ＮＨ−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２）、グアニジノアミノ（−ＮＨ−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２）、スルホニルアミノ（−ＮＨＳＯ３Ｈ）、スルファモイル（−ＳＯ２ＮＨ２）、メタンスルホニルアミノ（−ＮＨ−ＳＯ２ＣＨ３）、ヒドロキシホルミル（−ＣＯＯＨ）、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシルカルボニル、スルフィドリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、テトラゾリル、
【００４５】
【化１７】
2019518076.tif 000019
【００４６】
から選択される置換基（複数可）で一置換−、二置換−、三置換−、又は四−置換されており；
Ｘは、水素、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、エテニル、トリフルオロメチル、及びメトキシから選択される］
によって表されるベンジルフェニルエーテル誘導体、その立体異性体及び医薬的に許容されるその塩である。
【００４７】
好ましいのは、化合物が、式（ＩＡ−２ｂ）：
【００４８】
【化１８】
2019518076.tif 000020
【００４９】
［式中：
Ｒ３は、置換されたＣ１〜Ｃ８飽和アルキルアミノ、置換されたＣ２〜Ｃ６不飽和アルキルアミノ、置換されたＮ−含有Ｃ２〜Ｃ６ヘテロサイクル−１−イルから選択され、それぞれは、水素、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、Ｃ１〜Ｃ５アルコキシ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルアミノ、アセチルアミノ、シアノ、ウレイド（−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２）、グアニジノ（−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２）、ウレイドアミノ（−ＮＨ−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２）、グアニジノアミノ（−ＮＨ−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２）、スルホニルアミノ（−ＮＨＳＯ３Ｈ）、スルファモイル（−ＳＯ２ＮＨ２）、メタンスルホニルアミノ（−ＮＨ−ＳＯ２ＣＨ３）、ヒドロキシホルミル（−ＣＯＯＨ）、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシルカルボニル、スルフィドリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、テトラゾリル、
【００５０】
【化１９】
2019518076.tif 000021
【００５１】
から選択される置換基（複数可）で一置換、二置換、三置換、又は四置換されており；
Ｘは、水素、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、エテニル、トリフルオロメチル、及びメトキシから選択される］
によって表される、ベンジルフェニルエーテル誘導体、その立体異性体及び医薬的に許容されるその塩である。
【００５２】
好ましいのは、化合物が、上記式において表され、式中、Ｒ３は：
【００５３】
【化２０】
2019518076.tif 000022
【００５４】
から選択され、
ここで、Ｒは、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチルから選択され；
Ｘは、水素、フッ素、塩素、臭素、メチル、エテニル、及びトリフルオロメチルから選択される、ベンジルフェニルエーテル誘導体、その立体異性体及び医薬的に許容されるその塩である。
【００５５】
上記式のベンジルフェニルエーテル誘導体、その立体異性体及び医薬的に許容されるその塩は、医薬的に許容される塩が、無機酸で形成される塩、有機酸で形成される塩、アルカリ金属イオンの塩、アルカリ土類金属イオンの塩、又は生理学的に許容されるカチオンを提供する有機塩基で形成される塩及びアンモニウム塩を含むことを特徴とする。
【００５６】
更に、前記無機酸は、塩酸、臭化水素酸、リン酸又は硫酸から選択され；前記有機酸は、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、クエン酸、マレイン酸、酒石酸、フマル酸、クエン酸又は乳酸から選択され；前記アルカリ金属イオンは、リチウムイオン、ナトリウムイオン、カリウムイオンから選択され；前記アルカリ土類金属イオンは、カルシウムイオン、マグネシウムイオンから選択され；生理学的に許容されるカチオンを提供する前記有機塩基は、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、ピペリジン、モルホリン又はトリス（２−ヒドロキシエチル）アミンから選択される。
【００５７】
本発明の第２の態様は、第１の態様の化合物を調製する方法を提供する。
式（Ｉ）の化合物の調製について、その構造に基づき、調製方法は５ステップに分けられる。
【００５８】
【化２１】
2019518076.tif 000023
【００５９】
（ａ）２−ブロモ−３−ヨードトルエン１及びベンゼンボロン酸又は置換されたベンゼンボロン酸又はベンゼンのホウ酸エステル又は置換されたベンゼンを出発物質として、スズキカップリング反応により反応させて中間化合物２を得る；
（ｂ）中間体２を出発物質として、ブロム化試薬によりメチル基のブロム化を施して、ブロモ中間体３を得る；
（ｃ）中間体３を出発物質として、塩基性条件下で２，４−ジヒドロキシ−Ｘ−置換されたベンズアルデヒドと反応させて、ベンジルアリールエーテル中間体４を得る；
（ｄ）中間体４を出発物質として、塩基性条件下で、ハロゲン化ベンジル、又は置換されたハロゲン化ベンジルと反応させて、中間化合物５を得る；
（ｅ）アルデヒド基−含有中間化合物５を出発物質として、アミノ基−又はイミノ基−含有のＨＲ３と縮合させ、得られた生成物を還元して、標的化合物Ｉを得る。
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＸは、それぞれ第１の態様に記載されるように定義される。
【００６０】
加えて、上記反応の出発物質及び中間体は容易に得られ、且つ各ステップ反応は、既報告の文献に基づくか、又は有機合成における従来の方法によって当業者により容易に実施することができる。式Ｉの化合物は、溶媒和形態又は非溶媒和形態で存在し得て、異なる溶媒からの結晶化により異なる溶媒和物がもたらされ得る。式（Ｉ）の医薬的に許容される塩として、以下の無機酸又は有機酸：塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、クエン酸、マレイン酸、酒石酸、フマル酸、クエン酸、乳酸の酸付加塩などの種々の酸付加塩が挙げられる。式Ｉの薬学的に許容される塩としてはまた、リチウム、ナトリウム、カリウムの塩などの様々なアルカリ金属塩；カルシウム、マグネシウムの塩などの様々なアルカリ土類金属塩及びアンモニウム塩；並びにメチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、ピペリジン、モルホリンの塩及びトリス（２−ヒドロキシエチル）アミン塩などの、生理学的に許容されるカチオンを提供する様々な有機塩基塩も挙げられる。本発明の範囲内におけるこれらの塩の全ては、従来の方法により調製することができる。式（Ｉ）の化合物及びその溶媒和物又は塩の調製中に、多結晶又は共晶が、異なる結晶化条件下で起こり得る。
【００６１】
本発明の第３の態様は、有効成分として本発明の第１の態様のベンジルフェニルエーテル誘導体及びその立体異性体、及び医薬的に許容される塩を含み、並びに医薬的に許容される担体又は賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
【００６２】
本発明は、更に、有効成分として本発明の化合物を含む医薬組成物に関する。当該医薬組成物は、当技術分野で周知の方法に基づいて調製することができる。ヒト又は動物の使用に好適な任意の剤形は、本発明の化合物と、１つ又は複数の医薬的に許容される賦形剤及び／又は固体若しくは液体のアジュバントとを組み合わせることにより調製することができる。その医薬組成物中の本発明の化合物の含有量は、通例、０．１〜９５重量％である。
【００６３】
本発明の化合物又は本発明の化合物を含む医薬組成物は、単位剤形で、経口、静脈内、筋肉内、皮下、経鼻、口腔粘膜、眼、肺及び気道、皮膚、膣、直腸などの経腸的又は非経口的な経路を介して投与することができる。
【００６４】
剤形は、液体剤形、固体剤形又は半固体剤形であり得る。液体剤形は、溶液（真溶液及びコロイド溶液を含める）、エマルジョン（ｏ／ｗ型、ｗ／ｏ型及び二重のエマルジョンを含める）、懸濁液、注射剤（水注射剤、粉末注射剤及び輸液を含める）、点眼剤、点鼻薬、ローション剤、リニメント剤などであってもよく；固体剤形は、錠剤（通常の錠剤、腸溶錠剤、トローチ剤、分散性錠剤、チュアブル錠、発泡錠、口腔内崩壊錠を含める）、カプセル剤（ハードカプセル剤、ソフトカプセル剤、腸溶カプセル剤を含める）、顆粒、散剤、ペレット、滴下剤、坐剤、フィルム、パッチ、ガス（粉末）スプレー剤、スプレー剤などであってもよく；半固体剤形は、軟膏剤、ゲル剤、ペースト剤などであってもよい。
【００６５】
本発明の化合物は、一般的調製物、同様に持続放出性調製物、制御放出性調製物、標的調製物、及び様々な微粒子送達系に製剤することができる。
【００６６】
本発明の化合物を錠剤に成形するために、希釈剤、結合剤、湿潤剤、崩壊作用剤、滑沢剤、及び流動促進剤を含めて当技術分野で公知の様々な賦形剤を広く使用することができる。希釈剤は、デンプン、デキストリン、スクロース、グルコース、ラクトース、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、微結晶性セルロース、硫酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、炭酸カルシウムなどであってもよく；湿潤剤は、水、エタノール、又はイソプロパノールなどであってもよく；結合剤は、水飴、デキストリン、シロップ、ハチミツ、グルコース溶液、微結晶性セルロース、アラビアゴム粘液、ゼラチン、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、エチルセルロース、アクリル樹脂、カルボマ、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコールなどであってもよく；崩壊剤は、乾燥デンプン、微結晶性セルロース、低置換されたヒドロキシプロピルセルロース、架橋したポリビニルピロリドン、クロスカルメロースナトリウム、ナトリウムカルボキシメチルデンプン、炭酸水素ナトリウム及びクエン酸、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、スルホン酸ドデシルナトリウムなどであってもよく；滑沢剤及び流動促進剤は、タルク、シリカ、ステアレート、酒石酸、液体パラフィン、ポリエチレングリコールなどであってもよい。
【００６７】
錠剤はまた、更に、糖コーティング錠、フィルムコーティング錠、腸溶コーティング錠、又は２層錠及び多層錠などのコーティング錠に製剤してもよい。
【００６８】
カプセル剤としての用量単位を調製するために、本発明の有効成分化合物は、希釈剤、流動促進剤と混合されてもよく、この混合物は、ハードカプセル又はソフトカプセル内に直接入れてもよい。当該有効成分はまた、希釈剤、結合剤、崩壊剤と共に顆粒又はペレットに製剤され、次にハードカプセル又はソフトカプセル内に入れることができる。本発明の化合物の錠剤を調製するための様々な希釈剤、結合剤、湿潤剤、崩壊作用剤及び流動促進剤はまた、本発明の化合物のカプセル剤を調製するためにも使用することができる。
【００６９】
注射剤として本発明の化合物を調製するために、水、エタノール、イソプロパノール、プロピレングリコール又はその混合物を溶媒として使用してもよい。加えて、当技術分野で一般的に使用される、適切な量の可溶化剤、共溶媒、ｐＨ調節剤、及び浸透圧調節剤を添加することができる。可溶化剤又は共溶媒は、ポロクサマー、レシチン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンなどであってもよく；ｐＨ調節剤は、ホスフェート、アセテート、塩酸、水酸化ナトリウムなどであってもよく；浸透圧調整剤は、塩化ナトリウム、マンニトール、グルコース、ホスフェート、アセテート、などであってもよい。凍結乾燥した粉末注射剤を調製するために、マンニトール、グルコースなどもまたプロッパントとして添加してもよい。
【００７０】
加えて、着色剤、防腐剤、芳香剤、着香剤又は他の添加剤もまた、必要に応じて、医薬調製物に添加してもよい。
【００７１】
本発明の化合物又は医薬組成物は、投与及び治療効果の向上という目的のために、任意の公知の投与方法により投与することができる。
【００７２】
本発明の化合物又は医薬組成物の投薬量は、予防されるか又は処置される疾患の性質及び重症度、患者又は動物の個々の状態、投与経路及び剤形などに応じて広範囲に投与することができる。一般に、本発明の化合物の好適な１日用量は、０．００１〜１５０ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である。上記投薬量は、医師の臨床経験及び他の治療手段の使用を含めた投薬レジメンに応じて、単回投薬単位又は分割投与単位で投与してもよい。
【００７３】
本発明の化合物又は組成物は、単独で又は他の治療的若しくは対症的な薬剤と組み合わせて投与してもよい。本発明の化合物を他の治療的薬剤と協同して使用する時、その投薬量は、実状に基づいて調節しなければならない。
【００７４】
本発明の第４の態様は、ベンジルフェニルエーテル誘導体、又はその立体異性体、又は医薬的に許容されるその塩を提供し、これらは、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１シグナル伝達経路に関連する疾患の予防及び／又は処置に有用な医薬の調製に使用される。
【００７５】
ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１シグナル伝達経路に関連する疾患は、癌、感染性疾患、及び自己免疫疾患から選択される。癌は、皮膚癌、肺癌、泌尿器腫瘍、血液腫瘍、乳癌、神経膠腫、消化器系腫瘍、生殖器系腫瘍、リンパ腫、神経系腫瘍、脳腫瘍、頭頚部癌から選択される。感染性疾患は、細菌感染症及びウイルス感染症から選択される。自己免疫疾患は、臓器特異的自己免疫疾患、全身性自己免疫疾患から選択され、臓器特異的自己免疫疾患として、慢性リンパ球性甲状腺炎、甲状腺機能亢進症、インスリン依存性糖尿病、重症筋無力症、潰瘍性大腸炎、慢性萎縮性胃炎に伴う悪性貧血、肺出血性腎炎症候群、原発性胆汁性肝硬変、多発性脳脊髄硬化症、及び急性特発性多発神経炎が挙げられる。並びに全身性自己免疫疾患として、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、全身性血管炎、強皮症、天疱瘡、皮膚筋炎、混合性結合組織病、自己免疫性溶血性貧血が挙げられる。
【発明の効果】
【００７６】
有益な技術的効果：
本発明の化合物は、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用に関して、既報告の化合物よりかなり高い高阻害活性を有する。当該化合物は、ＰＤ−Ｌ１タンパク質と結合する強い能力を有し、既報告のＰＤ−Ｌ１抗体よりはるかに強い。これらの化合物はまた、ＰＤ−Ｌ１によるＩＦＮ−γの阻害を軽減する能力も有する。ｉｎ  ｖｉｖｏの薬力学的研究により、当該化合物は、腫瘍容積及び腫瘍重量の両方において皮下腫瘍の成長を著しく阻害し得ることが示されている。マウスの血液中及び脾臓中のリンパ球数は、明らかに増加し得る。
【発明を実施するための形態】
【００７７】
実施例
本発明は、以下の実施例により更に説明されるが；しかしながら、本発明は、本明細書中以下に示される説明的な実施例により制限されることはない。
【００７８】
測定機器：核磁気共鳴分光分析法を、Ｖａａｒｉａａｎ  Ｍｅｒｃｕｒｙ  ３００核磁気共鳴装置を使用することにより実行した。質量分析を、ＺＡＤ−２Ｆ質量分析計及びＶＧ３００質量分析計を使用することにより実施した。
【実施例１】
【００７９】
実施例１：
Ｎ−アセチルアミノエチル−４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジルアミン
【００８０】
【化２２】
2019518076.tif 000024
【００８１】
（１）２−ブロモ−３−メチル−１，１’−ビフェニル：
５０ｍｌフラスコに、２−ブロモ−３−ヨードトルエン（３５０ｍｇ）及びジオキサン／水を撹拌しながら入れた。この溶液に、アルゴンを１０分間吹き込み、溶存酸素を除去した。次に、フェニルボロン酸（１７２．６５ｍｇ）、炭酸セシウム（９６１．２ｍｇ）、及びトリフェニルホスフィンパラジウム（４０．９１ｍｇ）を順次加えた。この混合物を、８０〜１００℃においてアルゴン保護下で１２時間撹拌した。反応を停止した。室温まで冷却した後、この混合物を、珪藻土を用いて濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、水及び酢酸エチルで３回抽出した。有機相を合わせて、飽和ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。有機層を濾過し、真空中で濃縮した。残渣にシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル）を施し、無色油状物（２２１ｍｇ）を得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6), δ 7.49 - 7.29 (m, 7H, Ar-H), 7.14 (d, 1H, Ar-H), 2.42 (s, 3H, Ar-CH3).
【００８２】
（２）２−ブロモ−３−（ブロモメチル）−１，１’−ビフェニル：
２−ブロモ−３−メチル−１，１’−ビフェニル（２３４ｍｇ）を出発物質として取り、１００ｍｌフラスコ中で２０ｍｌのＣＣｌ４に溶解した。この溶液に、撹拌しながらＮＢＳ（１７８ｍｇ）を添加した。この混合物を、８０℃まで加温し還流した。次に、過酸化ベンゾイル（４ｍｇ）を添加し、２時間後に過酸化ベンゾイル（４ｍｇ）を再度添加し、この混合物を更に２時間撹拌した。反応を停止した。室温まで冷却した後、この混合物を水でクエンチし、ジクロロメタン及び水で抽出した。有機相を飽和ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。有機層を濾過し、真空中で濃縮し、黄色油状物（１９２ｍｇ）を得て、これを更に精製することなく次のステップで使用した。
【００８３】
（３）４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−２−ヒドロキシベンズアルデヒド：
２，４−ジヒドロキシベンズアルデヒド（７３．９４ｍｇ）を取り、５０ｍｌフラスコ中で６ｍｌの無水アセトニトリルに溶解し、次に炭酸水素ナトリウム（９８．８８ｍｇ）を添加した。室温で４０分間撹拌した後、２−ブロモ−３−（ブロモメチル）−１，１’−ビフェニル（１９２ｍｇ、８ｍｌのＤＭＦに溶解）を、定圧滴下漏斗を介して反応混合物にゆっくりと添加し、反応が完了するまで加熱還流した。室温まで冷却した後、この混合物を水及び酢酸エチルで抽出した。有機相を飽和ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、次に濾過し、真空中で濃縮した。粗製の残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、白色固体（１５２ｍｇ）を得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.99 (s, 1H, -OH), 10.03 (s, 1H, -CHO), 7.64 (d, 1H, Ar-H), 7.57 (d, 1H, Ar-H), 7.45 (m, 4H, Ar-H), 7.37 (d, 3H, Ar-H), 6.67 (d, 1H, Ar-H), 6.59 (s, 1H, Ar-H), 5.25 (s, 2H, -CH2-)
【００８４】
（４）４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンズアルデヒド：
４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−２−ヒドロキシベンズアルデヒド（１００ｍｇ）を、５０ｍｌフラスコ中で６ｍｌのＤＭＦに溶解し、次に炭酸セシウム（１２７．５３ｍｇ）を添加した。室温で１５分間撹拌した後、ＤＭＦ（４ｍｌ）中の３−シアノベンジルブロミド（７６．６５ｍｇ）の溶液を滴下添加した。この混合物を８０℃で２時間撹拌した後、反応を停止した。室温まで冷却した後、この混合物を水及び酢酸エチルで抽出した。有機相を飽和ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、次に濾過し、真空中で濃縮した。粗製の残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、白色固体（７０ｍｇ）を得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.26 (s, 1H, -CHO), 8.00 (s, 1H, Ar-H), 7.83 (dd, 2H, Ar-H), 7.72 (d, 1H, Ar-H), 7.61 (t, 2H, Ar-H), 7.55 - 7.23 (m, 7H, Ar-H), 6.95 (s, 1H, Ar-H), 6.81 (d, 1H, Ar-H), 5.35 (s, 2H, -CH2-), 5.30 (s, 2H, -CH2-).
【００８５】
（５）Ｎ−アセチルアミノエチル−４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジルアミン
４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（５０．８ｍｇ）を５ｍｌのＤＭＦに溶解し、次に２−アセトアミドエチルアミン（３１．２５ｍｇ）及び氷酢酸（３６．７５ｍｇ）を添加した。室温で２０分間撹拌した後、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（１９．２３ｍｇ）を添加し、この混合物を２５℃で１４時間撹拌した。反応を停止した。この混合物を水及び酢酸エチルで抽出した。有機相を飽和ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、次に濾過し、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、白色固体（３５ｍｇ）を得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.01 (s, 1H, -CONH-), 7.96 (s, 1H, Ar-H), 7.82 (dd, 2H, Ar-H), 7.59 (dd, 2H, Ar-H), 7.43 (dd, 4H, Ar-H), 7.35 (t, 4H, Ar-H), 6.81 (s, 1H, Ar-H), 6.68 (d, 1H, Ar-H), 5.23 (s, 2H, -CH2-), 5.18 (s, 2H, -CH2-), 3.96 (s, 2H, -CH2-), 3.28 - 3.21 (m, 2H, -CH2-), 2.80 (t, 2H, -CH2-), 1.89 (s, 1H, -NH-), 1.78 (s, 3H, -CH3). MS (FAB): 585 (M+1).
【実施例２】
【００８６】
実施例２
Ｎ−（４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジル）セリン
【００８７】
【化２３】
2019518076.tif 000025
【００８８】
手順は、２−アセトアミドエチルアミンの代わりにＬ−セリンを使用したことを除いて実施例１と同じであり、白色固体を得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.00 (s, 1H, Ar-H), 7.89 (d, 1H, Ar-H), 7.79 (d, 1H, Ar-H), 7.58 (dd, 2H, Ar-H), 7.53 - 7.29 (m, 8H, Ar-H), 6.81 (s, 1H, Ar-H), 6.67 (d, 1H, Ar-H), 5.23 (s, 2H, -CH2-), 5.18 (s, 2H, -CH2-), 4.14 - 3.97 (m, 2H, -CH2-), 3.74 (dd, 1H, -CH2-), 3.62 (dd, 1H, -CH2-), 3.17 (t, 1H, -CH-). MS (FAB): 588 (M+1). [α]D20=-16 (C=0.18, CH2Cl2).
【実施例３】
【００８９】
実施例３
Ｎ−エチル−Ｎ−ヒドロキシルエチル−４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジルアミン
【００９０】
【化２４】
2019518076.tif 000026
【００９１】
手順は、２−アセトアミドエチルアミンの代わりに２−（エチルアミノ）エタノールを使用したことを除いて実施例１と同じであり、淡黄色固体粉末を得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.33 (s, 1H, -OH), 8.01 (s, 1H, -ArH), 7.84 (dd, 2H, -ArH), 7.61 (dd, 2H, -ArH), 7.55 - 7.28 (m, 8H, -ArH), 6.88 (s, 1H, -ArH), 6.74 (d, 1H, -ArH), 5.24 (s, 2H, -CH2- ), 5.21 (s, 2H, -CH2- ), 4.25 (s, 2H, -CH2-), 3.69 (s, 2H, -CH2-), 3.06 (s, 4H, -CH2-), 1.18 (m, 3H, -CH3). MS (FAB): 572 (M+1).
【実施例４】
【００９２】
実施例４：
Ｎ−（４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジル）プロリン
【００９３】
【化２５】
2019518076.tif 000027
【００９４】
手順は、２−アセトアミドエチルアミンの代わりにプロリンを使用したことを除いて実施例１と同じであり、淡黄色固体粉末を得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.00 (s, 1H, -ArH), 7.89 (d, 1H, -ArH), 7.80 (d, 1H, -ArH), 7.60 (dd, 2H, -ArH), 7.40 (m, 8H, -ArH), 6.82 (s, 1H, -ArH), 6.68 (d, 1H, -ArH), 5.31 - 5.22 (m, 2H, -CH2-), 5.19 (s, 2H, -CH2-), 4.19 - 4.01 (m, 2H, -CH2-), 3.53 (m, 1H, -CH-), 3.23 (m, 1H, -CH2-), 2.83 (m, 1H, -CH2-), 2.09 (t, 1H, -CH2-), 1.95 (t, 1H, -CH2-), 1.83 (s, 1H, -CH2-), 1.66 (m, -CH2-). MS (FAB): 598 (M+1).
【実施例５】
【００９５】
実施例５：
Ｎ−ヒドロキシルエチル−４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジルアミン
【００９６】
【化２６】
2019518076.tif 000028
【００９７】
手順は、２−アセトアミドエチルアミンの代わりに２−アミノエタノールを使用したことを除いて実施例１と同じであり、淡黄色固体粉末を得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.91 (s, 1H, -OH), 7.99 (s, 1H, -ArH), 7.84 (dd, 2H, -ArH), 7.60 (dd, 2H, -ArH), 7.54-7.28 (m, 8H, -ArH), 6.84 (d, 1H, -ArH), 6.71 (dd, 1H, -ArH), 5.24 (s, 2H, -CH2-), 5.20 (s, 2H, -CH2-), 4.09 (s, 2H, -CH2-), 3.65 (d, 2H, -CH2-), 2.91 (t, 2H, -CH2-). MS (FAB): 544 (M+1).
【実施例６】
【００９８】
実施例６
Ｎ−（４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジル）アラニン
【００９９】
【化２７】
2019518076.tif 000029
【０１００】
手順は、２−アセトアミドエチルアミンの代わりにアラニンを使用したことを除いて実施例１と同じであり、淡黄色固体粉末を得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.99 (s, 1H, -ArH), 7.84 (dd, 2H, -ArH), 7.59 (dd, 2H, -ArH), 7.40 (dq, 8H, -ArH), 6.90-6.56 (m, 2H, -ArH), 5.22 (s, 2H, -CH2-), 5.18 (s, 2H, -CH2-), 3.99 (d, 2H, -CH2-), 1.86 (s, 1H, -CH-), 1.26 (s, 3H, -CH3). MS (FAB): 572(M+1).
【実施例７】
【０１０１】
実施例７
Ｎ−（４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジル）メチオニン
【０１０２】
【化２８】
2019518076.tif 000030
【０１０３】
手順は、２−アセトアミドエチルアミンの代わりにメチオニンを使用したことを除いて実施例１と同じであり、淡黄色固体粉末を得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.99 (s, 1H, -ArH), 7.88 (d, 1H, -ArH), 7.80 (d, 1H, -ArH), 7.60 (dd, 2H, -ArH), 7.47 (d, 3H, -ArH), 7.43 (d, 1H, -ArH), 7.36 (m, 4H, -ArH), 6.80 (s, 1H, -ArH), 6.67 (d, 1H, -ArH), 5.23 (s, 2H, -CH2-), 5.19 (s, 2H, -CH2-), 3.90 (q, 2H, -CH2-), 3.21 (d, 1H, -CH-), 2.56 (d, 1H, -CH2-), 2.03 (s, 1H, -CH2-), 1.98 (s, 3H, -CH3), 1.94 - 1.87 (m, 1H, -CH2-), 1.87 - 1.80 (m, 1H, -CH2-). MS (FAB): 632(M+1).
【実施例８】
【０１０４】
実施例８
Ｎ−（４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジル）スレオニン
【０１０５】
【化２９】
2019518076.tif 000031
【０１０６】
手順は、２−アセトアミドエチルアミンの代わりにスレオニンを使用したことを除いて実施例１と同じであり、白色固体粉末を得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.01 (s, 1H, -ArH), 7.90-7.86 (t, 1H, -ArH), 7.84-7.81 (t, 1H, -ArH), 7.75-7.73(d, 1H, -ArH), 7.63-7.58 (m, 2H, -ArH), 7.50-7.46(m, 3H, -ArH), 7.43-7.42 (d, 1H, -ArH), 7.39-7.35 (m, 3H, -ArH), 5.36-5.32 (d, 2H, -CH2-), 5.24-5.23 (m, 2H, -CH2-), 3.98-3.96 (m, 1H, -CH-), 3.88-3.86 (m, 1H, -CH-), 1.13 (d, 3H, -CH3). MS (FAB): 602(M+1).
【実施例９】
【０１０７】
実施例９：
Ｎ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）−４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジルアミン
【０１０８】
【化３０】
2019518076.tif 000032
【０１０９】
手順は、２−アセトアミドエチルアミンの代わりにテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−アミンを使用したことを除いて実施例１と同じであり、淡黄色固体粉末を得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.12 (d, 1H, -ArH), 7.95 (m, 3H, -ArH), 7.73 (m, 2H, -ArH), 7.65-7.41 (m, 7H, -ArH), 6.96 (d, 1H, -ArH), 6.83 (d, 1H, -ArH), 5.33 (s, 4H, -CH2-), 4.13 (d, 2H, -CH2-), 3.94 (d, 2H, -CH2-), 3.37 (d, 2H, -CH2-), 3.23 (s, 1H, -CH-), 2.02 (d, 2H, -CH2-), 1.61 (d, 2H, -CH2-). MS (FAB): 584(M+1).
【実施例１０】
【０１１０】
実施例１０
Ｎ−［４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジル］モルホリンヒドロクロリド
【０１１１】
【化３１】
2019518076.tif 000033
【０１１２】
手順は、２−アセトアミドエチルアミンの代わりにモルホリンを使用したことを除いて実施例１と同じであり、淡黄色固体粉末を得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.20 (s, 1H, H-Cl), 8.03 (d, 1H, -ArH), 7.94 - 7.86 (m, 1H, -ArH), 7.81 (t, 2H, -ArH), 7.61 (m, 3H, -ArH), 7.54 - 7.44 (m, 2H, -ArH), 7.42 (d, 1H, -ArH), 7.38 (d, 2H, -ArH), 7.23 (s, 1H, -ArH), 6.89 (d, 1H, -ArH), 6.75 (t, 1H, -ArH), 5.27 (d, 2H, -CH2-), 5.23(d, 2H, -CH2-), 4.25 (t, 2H, -CH2-) , 3.58 (t, 2H, -CH2-), 3.04 (s, 2H, -CH2-), 2.98 - 2.82 (m, 2H, -CH2-) , 2.59 (m, 2H, -CH2-). MS (FAB): 606(M+1).
【実施例１１】
【０１１３】
実施例１１：
Ｎ−ヒドロキシルエチル−４−（２−ブロモ−３−（３，４−ジメトキシフェニル）ベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジルアミン
【０１１４】
【化３２】
2019518076.tif 000034
【０１１５】
（１）２−ブロモ−３−（３，４−ジメトキシフェニル）トルエン：
手順は、フェニルボロン酸の代わりに２−（３，４−ジメトキシフェニル）−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロランを使用し、トリフェニルホスフィンパラジウムの代わりに［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）を使用し、炭酸セシウムの代わりに炭酸カリウムを使用したことを除いて実施例１と同じであり、２−ブロモ−３−（３，４−ジメトキシフェニル）トルエンを得た。1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ 7.22 (d, 2H, -ArH), 7.15 (q, 1H, -ArH), 6.93 (s, 3H, -ArH), 3.91 (d, 6H, -OCH3), 2.49 (s, 3H, -CH3).
【０１１６】
（２）４−（２−ブロモ−３−（３，４−ジメトキシフェニル）ベンジルオキシ）−２−ヒドロキシベンズアルデヒド：
手順は、ブロム化に効果を与えるために、２−ブロモ−３−メチル−１，１’−ビフェニルの代わりに２−ブロモ−３−（３，４−ジメトキシフェニル）トルエンを使用したことを除いて実施例１と同じであり；ブロム化物は、更に精製することなく、２，４−ジヒドロキシベンズアルデヒドと直接反応させて、白色固体を得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.99 (s, 1H, -OH), 10.03 (s, 1H, -CHO), 7.64 (d, 1H, -ArH), 7.53 (d, 1H, -ArH), 7.46 (t, 1H, -ArH), 7.37 (d, 1H, -ArH), 7.02 (d, 1H, -ArH), 6.94 (s, 1H, -ArH), 6.92-6.85 (m, 1H, -ArH), 6.67 (d, 1H, -ArH), 6.59 (s, 1H, -ArH), 5.24 (s, 2H, -CH2-), 3.77 (s, 6H, -OCH3).
【０１１７】
（３）４−（２−ブロモ−３−（３，４−ジメトキシフェニル）ベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンズアルデヒド：
手順は、４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−２−ヒドロキシベンズアルデヒドの代わりに４−（２−ブロモ−３−（３，４−ジメトキシフェニル）ベンジルオキシ）−２−ヒドロキシベンズアルデヒドを使用したことを除いて実施例１と同じであり、白色固体を得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.28 (s, 1H, -CHO), 8.02 (s, 1H, -ArH), 7.87 (d, 1H, -ArH), 7.83 (d, 1H, -ArH), 7.74 (d, 1H, -ArH), 7.64 (t, 1H, -ArH), 7.58 (d, 1H, -ArH), 7.48 (t, 1H, -ArH), 7.40 (d, 1H, -ArH), 7.04 (d, 1H, -ArH), 6.96 (s, 2H, -ArH), 6.91 (d, 1H, -ArH), 6.82 (d, 1H, -ArH), 5.37 (s, 2H, -CH2-), 5.32 (s, 2H, -CH2-), 3.81 (s, 3H, -OCH3), 3.78 (s, 3H, -OCH3).
【０１１８】
（４）Ｎ−ヒドロキシルエチル−４−（２−ブロモ−３−（３，４−ジメトキシフェニル）ベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジルアミン：
手順は、４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンズアルデヒドの代わりに４−（２−ブロモ−３−（３，４−ジメトキシフェニル）ベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンズアルデヒドを使用し、２−アセトアミドエチルアミンの代わりに２−アミノエタノールを使用したことを除いて実施例１と同じであり、白色固体粉末を得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.52 (s, 1H, -OH), 7.98 (s, 1H, -ArH), 7.83 (dd, 2H, -ArH), 7.61 (t, 1H, -ArH), 7.54 (d, 1H, -ArH), 7.45 (m, 1H, -ArH), 7.37 (dd, 2H, -ArH), 7.02 (d, 1H, -ArH), 6.93 (d, 1H, -ArH), 6.91 - 6.81 (m, 2H, -ArH), 6.72 (dd, 1H, -ArH), 5.24 (s, 2H, -CH2-), 5.20 (s, 2H, -CH2-), 4.10 (s, 2H, -CH2-), 3.79 (s, 3H, -OCH3), 3.76 (s, 3H, -OCH3), 3.63 (q, 2H, -CH2-), 2.92 (t, 2H, -CH2-). MS (FAB): 604(M+1).
【実施例１２】
【０１１９】
実施例１２：
メチルＮ−（４−（２−ブロモ−３−（３，４−ジメトキシフェニル）ベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジル）セリネート
【０１２０】
【化３３】
2019518076.tif 000035
【０１２１】
手順は、２−アミノエタノールの代わりにメチルセリネートを使用したことを除いて実施例１１と同じであり、淡黄色固体粉末を得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.93 (s, 1H, -ArH), 7.79 (s, 2H, -ArH), 7.60 (t, 1H, -ArH), 7.53 (d, 1H, -ArH), 7.44 (t, 1H, -ArH), 7.34 (d, 1H, -ArH), 7.22 (d, 1H, -ArH), 7.02 (d, 1H, -ArH), 6.94 (s, 1H, -ArH), 6.89 (d, 1H, -ArH), 6.75 (s, 1H, -ArH), 6.61 (d, 1H, -ArH), 5.19 (s, 2H, -CH2-), 5.15 (s, 2H, -CH2-), 4.88 (s, 1H, -NH-), 3.79 (s, 3H, -OCH3), 3.76 (s, 3H, -OCH3), 3.65 (d, 1H, -CH2-), 3.57 (d, 2H, -CH2-), 3.55 (s, 3H, -OCH3)., 3.35 (m, 1H, -CH2-). MS (FAB): 662(M+1).
【実施例１３】
【０１２２】
実施例１３：
Ｎ−（４−（２−ブロモ−３−（３，４−ジメトキシフェニル）ベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジル）セリン
【０１２３】
【化３４】
2019518076.tif 000036
【０１２４】
メチル  Ｎ−（４−（２−ブロモ−３−（３，４−ジメトキシフェニル）ベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジル）セリネート（５０ｍｇ）を、メタノール／Ｈ２Ｏ（１０ｍｌ／１ｍｌ）に溶解し、次に水酸化リチウム一水和物（９０ｍｇ）を添加した。２時間還流した後、反応物を室温まで冷却した。反応を停止した。数滴の酢酸を氷浴中の混合物に添加し、ｐＨを５〜６に調節した。この混合物を水及び酢酸エチルにより抽出した。有機相を合わせて、飽和ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。次に有機層を濾過し、真空中で濃縮した。残渣をジエチルエーテルにより洗浄して、灰色がかった白色の固体粉末（２５ｍｇ）を得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.00 (s, 1H, -ArH), 7.90 (d, 1H, -ArH), 7.81 (d, 1H, -ArH), 7.61 (t, 1H, -ArH), 7.55 (d, 1H, -ArH), 7.45 (t, 1H, -ArH), 7.37 (d, 2H, -ArH), 7.04 (d, 1H, -ArH), 6.95 (s, 1H, -ArH), 6.90 (d, 1H, -ArH), 6.82 (s, 1H, -ArH), 6.74 - 6.61 (m, 1H, -ArH), 5.25 (s, 2H, -CH2-), 5.19 (s, 2H, -CH2-), 4.09 (s, 2H, -CH2-), 3.85 (s, 1H, -CH-), 3.81 (s, 3H, -OCH3), 3.73 (s, 3H, -OCH3), 3.72 - 3.62 (m, 1H, -CH2-), 3.38 (q, 1H, -CH2-). MS (FAB): 648(M+1).
【実施例１４】
【０１２５】
実施例１４：
Ｎ−アセチルアミノエチル−４−（２−ブロモ−３−（３，４−ジメトキシフェニル）ベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジルアミン
【０１２６】
【化３５】
2019518076.tif 000037
【０１２７】
手順は、２−アミノエタノールの代わりに２−アセトアミドエチルアミンを使用したことを除いて実施例１１と同じであり、灰色がかった白色の固体粉末を得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.67 (s, 1H, -NH-), 8.11 (t, 1H, -NHCO-), 7.99 (s, 1H, -ArH), 7.83 (dd, 2H, -ArH), 7.61 (t, 1H, -ArH), 7.53 (d, 1H, -ArH), 7.44 (t, 1H, -ArH), 7.37 (dd, 2H, -ArH), 7.02 (d, 1H, -ArH), 6.93 (s, 1H, -ArH), 6.89 (d, 1H, -ArH), 6.84 (s, 1H, -ArH), 6.72 (d, 1H, -ArH), 5.25 (s, 2H, -CH2-), 5.19 (s, 2H, -CH2-), 4.10 (s, 2H, -CH2-), 3.79 (s, 3H, -OCH3), 3.76 (s, 3H, -OCH3), 3.30( m, 2H, -CH2-), 2.92 (t, 2H, -CH2-), 1.80 (s, 3H, -COCH3). MS (FAB): 645(M+1).
【実施例１５】
【０１２８】
実施例１５：
Ｎ−（４−（２−ブロモ−３−（３，４−ジメトキシフェニル）ベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジル）プロリン
【０１２９】
【化３６】
2019518076.tif 000038
【０１３０】
手順は、２−アミノエタノールの代わりにプロリンを使用したことを除いて実施例１１と同じであり、灰色がかった白色の固体粉末を得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.02 (s, 1H, -ArH), 7.90 (d, 1H, -ArH), 7.82 (d, 1H, -ArH), 7.62 (t, 1H, -ArH), 7.56 (d, 1H, -ArH), 7.46 (t, 1H, -ArH), 7.37 (d, 2H, -ArH), 7.04 (d, 1H, -ArH), 6.96 (s, 1H, -ArH), 6.91 (d, 1H, -ArH), 6.83 (s, 1H, -ArH), 6.69 (d, 1H, -ArH), 5.27 (m, 2H, -CH2-), 5.19 (s, 2H, -CH2-), 4.20-4.02 (m, 2H, -CH2-), 3.81 (s, 3H, -OCH3), 3.78 (s, 3H, -OCH3), 3.55-3.49 (m, 1H, -CH-), 3.28-3.20(m, 1H, -CH2-), 2.85 (q, 1H, -CH2-), 2.18 - 2.05 (m, 1H, -CH2-), 2.02-1.94 (m, 1H, -CH2-), 1.91-1.79 (m, 1H, -CH2-), 1.77 -1.61 (m, 1H, -CH2-). MS (FAB): 658(M+1).
【実施例１６】
【０１３１】
実施例１６：
Ｎ−アセチルアミノエチル−４−（２−ブロモ−３−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン−６−イル）ベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジルアミン
【０１３２】
【化３７】
2019518076.tif 000039
【０１３３】
（１）２−ブロモ−３−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン−６−イル）トルエン：
手順は、フェニルボロン酸の代わりに２−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン−６−イル）−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロランを使用し、トリフェニルホスフィンパラジウムの代わりに［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）を使用し、炭酸セシウムの代わりに炭酸カリウムを使用したことを除いて実施例１と同じであり、２−ブロモ−３−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン−６−イル）トルエンを淡黄色油状物として得た。1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ 7.21 (d, 2H, -ArH), 7.11 (m, 1H, -ArH), 6.90 (d, 2H, -ArH), 6.86 (d, 1H, -ArH), 4.30 (m, 4H, -OCH2CH2O-), 2.48 (s, 3H, -CH3).
【０１３４】
（２）４−（２−ブロモ−３−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン−６−イル）ベンジルオキシ）−２−ヒドロキシベンズアルデヒド：
手順は、ブロム化に効果を与えるために、２−ブロモ−３−メチル−１，１’−ビフェニルの代わりに２−ブロモ−３−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン−６−イル）トルエンを使用したことを除いて実施例１と同じであり；ブロム化物は、更に精製することなく、２，４−ジヒドロキシベンズアルデヒドと直接反応させて、白色固体を得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.91 (s, 1H, -OH), 9.95 (s, 1H, -CHO), 7.57 (d, 1H, -ArH), 7.45 (d, 1H, -ArH), 7.37 (t, 1H, -ArH), 7.25 (d, 1H, -ArH), 6.84 (d, 1H, -ArH), 6.78 (s, 1H, -ArH), 6.74 (d, 1H, -ArH), 6.59 (d, 1H, -ArH), 6.51 (s, 1H, -ArH), 5.16 (s, 2H, -CH2-), 4.20 (m, 4H, -OCH2CH2O-).
【０１３５】
（３）４−（２−ブロモ−３−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン−６−イル）ベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンズアルデヒド：
手順は、４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−２−ヒドロキシベンズアルデヒドの代わりに４−（２−ブロモ−３−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン−６−イル）ベンジルオキシ）−２−ヒドロキシベンズアルデヒドを使用したことを除いて実施例１と同じであり、白色固体を得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.28 (s, 1H, -CHO), 8.01 (s, 1H, -ArH), 7.85 (dd, 2H, -ArH), 7.74 (d, 1H, -ArH), 7.63 (t, 1H, -ArH), 7.58 (d, 1H, -ArH), 7.46 (t, 1H, -ArH), 7.35 (d, 1H, -ArH), 6.94 (d, 2H, -ArH), 6.87 (s, 1H, -ArH), 6.82 (d, 2H, -ArH), 5.36 (s, 2H, -CH2-), 5.30 (s, 2H, -CH2-), 4.29 (m, 4H, -OCH2CH2O-).
【０１３６】
（４）Ｎ−ヒドロキシエチル−４−（２−ブロモ−３−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン−６−イル）ベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジルアミン：
手順は、４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンズアルデヒドの代わりに４−（２−ブロモ−３−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン−６−イル）ベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンズアルデヒドを使用したことを除いて実施例１と同じであり、灰色がかった白色の固体粉末を得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.74 (s, 1H, -NH-), 8.14 (m, 1H, -CONH-), 8.00 (s, 1H, -ArH), 7.85 (dd, 2H, -ArH), 7.63 (t, 1H, -ArH), 7.54 (d, 1H, -ArH), 7.50 - 7.37 (m, 2H, -ArH), 7.33 (d, 1H, -ArH), 6.94 (d, 1H, -ArH), 6.86 (s, 2H, -ArH), 6.82 (d, 1H, -ArH), 6.74 (d, 1H, -ArH), 5.27 (s, 2H, -CH2-), 5.20 (s, 2H, -CH2-), 4.29 (m, 4H, -OCH2CH2O-), 4.13 (s, 2H, -CH2-), 3.34-3.39 (m, 2H, -CH2-), 2.96 (m, 2H, -CH2-), 1.82 (s, 3H, -COCH3). MS (FAB): 643(M+1).
【実施例１７】
【０１３７】
実施例１７：
Ｎ−（４−（２−ブロモ−３−（３，４−ジメトキシフェニル）ベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジル）アラニン
【０１３８】
【化３８】
2019518076.tif 000040
【０１３９】
手順は、２−アミノエタノールの代わりにアラニンを使用したことを除いて実施例１１と同じであり、白色固体を得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.99 (s, 1H, -ArH), 7.89 (dd, 1H, -ArH), 7.80 (d, 1H, -ArH), 7.60 (t, 1H, -ArH), 7.53 (d, 1H, -ArH), 7.44 (t, 1H, -ArH), 7.35 (d, 2H, -ArH), 7.02 (d, 1H, -ArH), 6.94 (s, 1H, -ArH), 6.89 (d, 1H, -ArH), 6.81 (d, 1H, -ArH), 6.67 (d, 1H, -ArH), 5.23 (s, 2H, -CH2-), 5.17 (s, 2H, -CH2-), 3.94 (s, 1H, -CH2-), 3.84 (s, 1H, -CH2-), 3.79 (s, 3H, -OCH3), 3.76 (s, 3H, -OCH3), 3.35-3.38 (m, 1H, -CH-), 1.22 (s, 3H, -CH3). MS (FAB): 632(M+1).
【実施例１８】
【０１４０】
実施例１８：
Ｎ−（４−（２−ブロモ−３−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン−６−イル）ベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジル）セリン
【０１４１】
【化３９】
2019518076.tif 000041
【０１４２】
手順は、２−アセトアミドエチルアミンの代わりにセリンを使用したことを除いて実施例１６と同じであり、灰色がかった白色の固体粉末を得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.01 (s, 1H, -ArH), 7.90 (d, 1H, -ArH), 7.82 (d, 1H, -ArH), 7.61 (t, 1H, -ArH), 7.54 (d, 1H, -ArH), 7.44 (t, 1H, -ArH), 7.33 (t, 2H, -ArH), 6.93 (d, 1H, -ArH), 6.86 (s, 1H, -ArH), 6.82 (s, 2H, -ArH), 6.68 (d, 1H, -ArH), 5.24 (s, 2H, -CH2-), 5.18 (s, 2H, -CH2-), 4.29 (s, 4H, -OCH2CH2O-), 4.04 (s, 2H, -NCH2-), 3.73 (s, 1H, -NH-), 3.70 - 3.58 (m, 1H, -NCH-), 3.17 (s, 2H , -CH2-). MS (FAB): 646(M+1).
【実施例１９】
【０１４３】
実施例１９：
Ｎ−（４−（２−ブロモ−３−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン−６−イル）ベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジル）スレオニン
【０１４４】
【化４０】
2019518076.tif 000042
【０１４５】
手順は、２−アセトアミドエチルアミンの代わりにスレオニンを使用したことを除いて実施例１６と同じであり、白色固体を得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.96 (s, 1H, -ArH), 7.91 - 7.77 (m, 2H, -ArH), 7.62 (t, 1H, -ArH), 7.54 (d, 1H, -ArH), 7.44 (t, 1H, -ArH), 7.32 (d, 1H, -ArH), 7.24 (s, 1H, -ArH), 6.93 (d, 1H, -ArH), 6.82 (m, 3H, -ArH), 6.64 (d, 1H, -ArH), 5.22 (s, 2H, -CH2-), 5.16 (s, 2H, -CH2-), 4.29 (s, 4H, -OCH2CH2O-), 3.82 (s, 2H, -CH2-), 3.35-3.38 (m, 1H, -CH-), 1.87 (s, 3H, -CH3). MS (FAB): 660(M+1).
【実施例２０】
【０１４６】
実施例２０：
Ｎ−（４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−５−クロロ−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジル）セリン
【０１４７】
【化４１】
2019518076.tif 000043
【０１４８】
（１）４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−５−クロロ−２−ヒドロキシベンズアルデヒド：
手順は、２，４−ジヒドロキシベンズアルデヒドの代わりに２，４−ジヒドロキシ−５−クロロ−ベンズアルデヒドを使用したことを除いて実施例１と同じであり、白色固体を得た。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11.18 (s, 1H, -OH), 10.09 (s, 1H, -CHO), 7.74 (s, 1H, -ArH), 7.66 (d, 1H, -ArH), 7.57 (t, 1H, -ArH), 7.51 (m, 2H, -ArH), 7.46 (d, 1H, -ArH), 7.42 (d, 3H, -ArH), 6.85 (s, 1H, -ArH), 5.37 (s, 2H, -CH2-).
【０１４９】
（２）４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−５−クロロ−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンズアルデヒド：
手順は、４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−２−ヒドロキシベンズアルデヒドの代わりに４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−５−クロロ−２−ヒドロキシベンズアルデヒドを使用したことを除いて実施例１と同じであり、白色固体を得た。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.27 (s, 1H, -CHO), 8.07 (s, 1H, -ArH), 7.91 (d, 1H, -ArH), 7.87 (d, 1H, -ArH), 7.77 (s, 1H, -ArH), 7.73 - 7.64 (m, 2H, -ArH), 7.56 (m, 1H, -ArH), 7.51 (m, 2H, -ArH), 7.46 (d, 1H, -ArH), 7.43 (m, 3H, -ArH), 7.25 (s, 1H, -ArH), 5.48 (s, 2H, -CH2-), 5.46 (s, 2H, -CH2-).
【０１５０】
（３）Ｎ−（４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−５−クロロ−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジル）セリン
手順は、４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンズアルデヒドの代わりに４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−５−クロロ−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンズアルデヒドを使用し、２−アセトアミドエチルアミンの代わりにセリンを使用したことを除いて実施例１と同じであり、灰色がかった白色の固体を得た。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.02 (s, 1H, -ArH), 7.92 (d, 1H, -ArH), 7.84 (d, 1H, -ArH), 7.65 (m, 2H, -ArH), 7.55 (d, 2H, -ArH), 7.52 - 7.47 (m, 2H, -ArH), 7.46 (d, 1H, -ArH), 7.41 (m, 3H, -ArH), 7.07 (s, 1H, -ArH), 5.33 (s, 2H, -CH2-), 5.31 (s, 2H, -CH2-), 4.03 (s, 2H, -CH2- ), 3.83 - 3.63 (m, 2H, -CH2-), 3.38-3.43 (m, 1H, , -CH- ). MS (FAB): 622(M+1).
【実施例２１】
【０１５１】
実施例２１：
Ｎ−ヒドロキシルエチル−４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−５−クロロ−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジルアミン
【０１５２】
【化４２】
2019518076.tif 000044
【０１５３】
手順は、４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンズアルデヒドの代わりに４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−５−クロロ−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンズアルデヒドを使用し、２−アセトアミドエチルアミンの代わりに２−アミノエタノールを使用したことを除いて実施例１と同じであり、淡黄色固体を得た。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.00 (s, 1H, -ArH), 7.86 (d, 1H, -ArH), 7.82 (d, 1H, -ArH), 7.63 (q, 2H, -ArH), 7.56 (s, 1H, -ArH), 7.54 - 7.49 (m, 1H, -ArH), 7.47 (d, 2H, -ArH), 7.43 (d, 1H, -ArH), 7.38 (d, 3H, -ArH), 7.07 (s, 1H, -ArH), 5.32 (s, 2H, -CH2-), 5.30 (s, 2H, -CH2-), 3.97 (s, 2H, -CH2-), 3.59 (t, 2H, -CH2-), 2.81 (t, 2H, -CH2-). MS (FAB): 679(M+1).
【実施例２２】
【０１５４】
実施例２２：
Ｎ−アセチルアミノエチル−４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−５−クロロ−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジルアミン
【０１５５】
【化４３】
2019518076.tif 000045
【０１５６】
手順は、４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンズアルデヒドの代わりに４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−５−クロロ−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンズアルデヒドを使用したことを除いて実施例１と同じであり、灰色がかった白色の固体を得た。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.00 (s, 1H, -ArH), 7.86 (dd, 2H, -ArH), 7.69 - 7.62 (m, 2H, -ArH), 7.53 (d, 2H, -ArH), 7.50 (d, 2H, -ArH), 7.46 (d, 1H, -ArH), 7.41 (t, 3H, -ArH), 7.07 (s, 1H, -ArH), 5.33 (s, 2H, -CH2-), 5.32 (s, 2H, -CH2-), 3.89 (s, 2H, -CH2-), 3.25 (m, 2H, -CH2-), 2.74 (t, 2H, -CH2-), 1.83 (s, 3H, -COCH3). MS (FAB): 620(M+1).
【実施例２３】
【０１５７】
実施例２３：
Ｎ−（２−メタンスルホニルアミノエチル）−４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジルアミンヒドロクロリド
【０１５８】
【化４４】
2019518076.tif 000046
【０１５９】
Ｎ−（２−アミノエチル）メタンスルホンアミド−Ｆ３ＣＣＯＯＨ（７６ｍｇ）を５ｍｌのＤＭＦに溶解し、トリエチルアミン（３０ｍｇ）を添加した。２０分間の撹拌後、４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（５０ｍｇ）及び酢酸（５４ｍｇ）を添加した。３０分間の撹拌後、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（１５．７ｍｇ）を添加し、この混合物を室温で１２時間撹拌した。反応を停止した。この混合物を水及び酢酸エチルで３回抽出した。有機相を飽和ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、次に真空中で濃縮した。粗製の残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、粘稠性生成物を得た。１０ｍＬの飽和ＨＣｌメタノール溶液を添加し、終夜撹拌した。この混合物を真空中で濃縮し、エーテルで洗浄し、淡黄色固体粉末を得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.06 (s, 2H, -NH-), 8.01 (s, 1H, -ArH), 7.89 (d, 1H, -ArH), 7.83 (d, 1H, -ArH), 7.68 - 7.57 (m, 2H, -ArH), 7.50 (d, 1H, -ArH), 7.48 (d, 2H, -ArH), 7.45 (s, 1H, -ArH), 7.42 (s, 1H, -ArH), 7.39 (m, 3H, -ArH), 6.86 (d, 1H, -ArH), 6.75 (d, 1H, -ArH), 5.28 (s, 2H, -CH2-), 5.22 (s, 2H, -CH2-), 4.14 (t, 2H, -CH2-), 3.30 (m, 2H, -CH2-), 3.02 (m, 2H, -CH2-), 2.94 (s, 3H, -CH3). MS (FAB): 658(M+1).
【実施例２４】
【０１６０】
実施例２４：
（Ｓ）−Ｎ−（４−（２−ブロモ−３−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン−６−イル）ベンジルオキシ）−５−クロロ−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジル）ピペコリン酸
【０１６１】
【化４５】
2019518076.tif 000047
【０１６２】
手順は、２，４−ジヒドロキシベンズアルデヒドの代わりに２，４−ジヒドロキシ−５−クロロ−ベンズアルデヒドを使用し、２−アセトアミドエチルアミンの代わりにピペコリン酸を使用したことを除いて実施例１６と同じであり、灰色がかった白色の固体粉末を得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.94 (s, 1H, ArH), 7.81 (m, 2H, ArH), 7.61 (t, J = 8.0 Hz, 2H, ArH), 7.46 (m, 2H, ArH), 7.34 (d, J = 7.6 Hz, 1H, ArH), 7.01 (s, 1H, ArH), 6.94 (d, J = 8.4 Hz, 1H, ArH), 6.89- 6.79 (m, 2H, ArH), 5.28 (s, 2H, -CH2-), 5.25 (s, 2H, -CH2-), 4.29 (s, 4H, -CH2-), 3.70 (dd, J1 = 13.6 Hz, J2 = 52.4 Hz, 2H, -CH2-), 3.22-3.12 (m, 1H, -CH-), 2.91 (m, 1H, -CH2-), 2.31 (m, 1H, -CH2-), 1.76 (m, 2H, -CH2-), 1.49 (br s, 3H, -CH2-), 1.38 (br s, 1H, -CH2-). MS (FAB): 705(M+1).
【実施例２５】
【０１６３】
実施例２５：
Ｎ−（４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−５−クロロ−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジル）アラニン
【０１６４】
【化４６】
2019518076.tif 000048
【０１６５】
手順は、４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンズアルデヒドの代わりに４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−５−クロロ−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンズアルデヒドを使用し、２−アセトアミドエチルアミンの代わりにアラニンを使用したことを除いて実施例１と同じであり、Ｎ−（４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−５−クロロ−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジル）アラニンを白色固体として得た。MS (FAB): 606(M).
【実施例２６】
【０１６６】
実施例２６：
Ｎ−（４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−５−クロロ−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジル）スレオニン
【０１６７】
【化４７】
2019518076.tif 000049
【０１６８】
手順は、４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンズアルデヒドの代わりに４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−５−クロロ−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンズアルデヒドを使用し、２−アセトアミドエチルアミンの代わりにスレオニンを使用したことを除いて実施例１と同じであり、Ｎ−（４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−５−クロロ−２−（３−シアノベンジルオキシ）ベンジル）スレオニンを白色固体として得た。MS (FAB): 636(M).
【実施例２７】
【０１６９】
実施例２７：
Ｎ−（４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−５−クロロ−２−（３−メタンスルホニルベンジルオキシ）ベンジル）セリン
【０１７０】
【化４８】
2019518076.tif 000050
【０１７１】
手順は、４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−２−ヒドロキシベンズアルデヒドの代わりに４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−５−クロロ−２−ヒドロキシベンズアルデヒドを使用し、３−シアノベンジルブロミドの代わりに３−メタンスルホニルベンジルブロミドを使用し、２−アセトアミドエチルアミンの代わりにセリンを使用したことを除いて実施例１と同じであり、Ｎ−（４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−５−クロロ−２−（３−メタンスルホニルベンジルオキシ）ベンジル）セリンを固体粉末として得た。MS (FAB): 675(M).
【実施例２８】
【０１７２】
実施例２８
Ｎ−（４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−５−クロロ−２−（３−メタンスルホニルベンジルオキシ）ベンジル）ピペコリン酸
【０１７３】
【化４９】
2019518076.tif 000051
【０１７４】
手順は、４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−２−ヒドロキシベンズアルデヒドの代わりに４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−５−クロロ−２−ヒドロキシベンズアルデヒドを使用し、３−シアノベンジルブロミドの代わりに３−メタンスルホニルベンジルブロミドを使用し、２−アセトアミドエチルアミンの代わりにピペコリン酸を使用したことを除いて実施例１と同じであり、Ｎ−（４−（２−ブロモ−３−フェニルベンジルオキシ）−５−クロロ−２−（３−メタンスルホニルベンジルオキシ）ベンジル）ピペコリン酸を固体粉末として得た。MS (FAB): 699(M).
【０１７５】
薬理学的実験
１．Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性評価：  Ｃｉｓｂｉｏ  ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１結合アッセイキットを、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ酵素学的レベルの検出方法に適用した。
ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１小分子阻害剤のスクリーニングの原理及び方法
【０１７６】
１）原理：ＰＤ−１タンパク質はＨＩＳタグを伴い、ＰＤ−１リガンドＰＤ−Ｌ１はｈＦｃタグを伴う。Ｅｕ標識抗ｈＦｃ抗体及びＸＬ６６５標識抗ＨＩＳ抗体を、それぞれ、上記２種の標識タンパク質に結合する。レーザー励起後、エネルギーはドナーＥｕからレセプターＸＬ６６５へ移動し得て、ＸＬ６６５が蛍光を発することを可能にする。阻害剤（化合物又は抗体）を添加後、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との結合を遮断することにより、ＥｕとＸＬ６６５との距離が遠くなり、エネルギーは移動することができず、ＸＬ６６５は蛍光を発しない。
【０１７７】
２）実験方法：この特定の方法は、ＣｉｓｂｉｏのＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１  Ｋｉｔ（品目６４ＣＵＳ０００Ｃ−２）と称され得る。試薬を、以下の順序で分注しなければならない。３８４−ウェル白色ＥＬＩＳＡプレートに、２μｌの希釈剤又は希釈剤で希釈した標的化合物を各ウェルに入れ、次に１ウェル当たり４μｌのＰＤ−１タンパク質及び４μｌのＰＤ−Ｌ１タンパク質を入れて、１５分間室温でインキュベートして；１ウェル当たり１０μｌの抗Ｔａｇ１−Ｅｕ３＋及び抗Ｔａｇ２−ＸＬ６６５の混合物を入れて、１時間〜４時間室温でインキュベートして、Ｅｎｖｉｓｏｎ機器を用いて蛍光シグナルを６６５ｎｍ及び６２０ｎｍにおいて測定した。ＨＴＲＦ率＝（６６５ｎｍ／６２０ｎｍ）＊１０４。各化合物について８〜１０濃度を検出し、ＩＣ５０をＧｒａｐｈｐａｄソフトウェアにより算出した。
【０１７８】
３）スクリーニングの結果を表１に示した。
【０１７９】
【表１】
2019518076.tif 000052
【０１８０】
２．リガンドＰＤ−Ｌ１によるＩＦＮγの阻害を軽減する実施例化合物の能力：
ＩＦＮγの発現レベルは、Ｔリンパ球の増殖活性を反映し得る。抽出したヒトＰＢＭＣ（末梢血単核細胞）を使用して、Ｔリンパ球は抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８抗体により活性化され得ることに基づいて、リガンドＰＤ−Ｌ１を阻害Ｔリンパ球に添加して、ＰＤ−Ｌ１による阻害を軽減する実施例化合物の能力を調査した。
【０１８１】
詳細な手順は、以下の通りである。ＤＡＫＥＷＥヒトリンパ球分離溶液（ＤＫＷ−ＫＬＳＨ−０１００）を使用して、ヒト全血からＰＢＭＣを抽出し、ＰＢＭＣを９６ウェルプレートに１ウェル当たり３×１０５細胞で接種した。ヒトＰＤ−Ｌ１タンパク質（最終濃度５μｇ／ｍｌ）、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８タンパク質（最終濃度１μｇ／ｍｌ）及び実施例化合物の比例的希釈物を、それぞれ添加した。７２時間後、上澄み液中のＩＦＮγの発現レベルを、ＣｉｓｂｉｏＩＦＮγ試験キットにより検出した。実験結果により、ＩＦＮγの発現レベルに対するＰＤ−Ｌ１の阻害は、実施例化合物により１０ｎＭにおいて部分的に軽減され得ることが示された。
【０１８２】
３．ｉｎ  ｖｉｖｏにおける実施例化合物の有効性
薬力学的方法は、以下の通りであった：
皮下異種移植腫瘍における方法は、以下の通りであった。培養した特定の腫瘍細胞を温浸し、遠心分離により収集し、無菌生理食塩水で２回洗浄し、次に計数した。細胞濃度を生理食塩水により５×１０６／ｍｌに調節し、０．２ｍｌの細胞懸濁液を、Ｃ５７ＢＬ／６又はＢａｂｌｃのマウスの右腋窩に接種した。接種後、翌日、該マウスを無作為に２群に分けた。各群は６〜７匹のマウスを有した。秤量後、該マウスには１日１回投与し、腫瘍の大きさをモニターした。腫瘍の大きさがある特定の大きさに達すると、該マウスを秤量し、血液をマウスの眼窩から収集し、次に該マウスを、首を切除することにより屠殺した。腫瘍組織、胸腺組織及び脾臓組織を収集し、それぞれ秤量した。最終的に腫瘍成長阻害率を算出し、その腫瘍成長阻害率を使用して、抗腫瘍効果のレベルを評価した。
【０１８３】
Ｂ１６Ｆ１０肺転移モデルにおける方法は、以下の通りであった。培養したＢ１６Ｆ１０腫瘍細胞を温浸し、遠心分離にかけ、無菌生理食塩水で２回洗浄し、次に計数した。細胞濃度を、生理食塩水により２．５×１０６／ｍｌに調節した。０．２ｍｌの細胞を、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに尾静脈を通して注射し、マウスの肺中で腫瘍細胞を集める。接種後、翌日、該マウスを無作為に２群に分けた。各群は６〜７匹のマウスを有した。秤量後、該マウスには１日１回投与した。３週間後、該マウスを秤量して屠殺し、肺組織を収集して秤量し、ブアン固定液で固定した後、肺腫瘍の数を計数した。最終的に腫瘍成長阻害率を算出し、その腫瘍成長阻害率を使用して、抗腫瘍効果のレベルを評価した。
【０１８４】
ルイス肺癌水胸症モデルにおける方法は、以下の通りであった：ルイス肺癌の皮下異種移植腫瘍を均質とし、無菌生理食塩水で２回洗浄し、細胞濃度を生理食塩水により２．５×１０５／ｍｌに調節した。０．２ｍｌの細胞を、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの胸腔に注射した。接種後、翌日、該マウスを無作為に２群に分けた。各群は６〜７匹のマウスを有した。秤量後、該マウスには１日１回投与した。対照群のマウスの体重が突然減少した時、マウスを屠殺した。胸腔中の液体をシリンジで抜き取り、液体の体積を記録した。
【０１８５】
上記モデルの機構の研究において、様々な種類のＴ細胞の総細胞比率の測定にフローサイトメトリー法を採用した。詳細なステップは、以下の通りであった。最初に試料を処理した。血液組織について、眼窩血液を採取した。赤血球可溶化液を使用して赤血球を除去し、次にＰＢ緩衝液を洗浄に使用した。洗浄後、細胞を収集した。腫瘍及び脾臓について、組織をホモジナイザーですり潰し、次にＰＢＳ緩衝液で希釈し、次に３００メッシュのスクリーンにより濾過した。各試料について細胞数を計数した後、１×１０６の細胞をＥＰ管中に加え、フロー抗体用に染色した。氷上で１時間インキュベーションした後、各試料をＰＢＳ緩衝液で２回洗浄した。細胞集団を、ＢＤ社のＶＥＲＳＥフロー機器により分析した。腫瘍組織中の細胞総数は１×１０５であり、血液及び脾臓組織中の細胞総数は１×１０４であった。Ｔ細胞の、細胞総数に対する比をフローサイトメトリー後に分析した。
【０１８６】
（１）高転移性黒色腫Ｂ１６Ｆ１０の皮下異種移植モデル
高転移性黒色腫Ｂ１６Ｆ１０について、実施例化合物は、腫瘍の容積又は重量に関して皮下腫瘍の成長を著しく阻害し得る。
機構の分析から、実施例化合物は、腫瘍−浸潤リンパ球の比率及び脾臓中のリンパ球の比率を増加させ得る。
【０１８７】
（２）高転移性黒色腫Ｂ１６Ｆ１０の肺転移モデル
高転移性黒色腫Ｂ１６Ｆ１０を有する転移性肺癌モデルについて、実施例化合物は、肺転移数を著しく阻害し得る。
機構の分析から、実施例化合物は、マウス血液中のリンパ球の百分率を増加させ得る。
【０１８８】
（３）マウス乳癌ＥＭＴ６の皮下異種移植モデル
マウス乳癌ＥＭＴ６の皮下異種移植モデルについて、実施例化合物は、マウス乳癌ＥＭＴ６に関していくらかの阻害効果を有し、実施例化合物とＣＴＸとの組み合わせにより、ＣＴＸの腫瘍成長阻害率を著しく増加させ得る。
【０１８９】
（４）マウスのルイス肺癌水胸症モデル
実施例化合物は、マウスのルイス肺水胸症モデルに関して著しい阻害効果を有し、水胸症発症率を低減することができる。
【０１９０】
（５）マウス結腸癌ＭＣ３８の皮下異種移植モデル
マウス結腸癌ＭＣ３８の皮下異種移植モデルについて、実施例化合物は、マウス結腸癌ＭＣ３８に関して著しい阻害効果を有し、ＣＴＸと組み合わせてこの癌に関して相乗的抗腫瘍効果を有する。
【０１９１】
４．実施例化合物／ＰＤ−Ｌ１抗体とＰＤ−Ｌ１タンパク質との相互作用を、Ｂｉａｃｏｒｅにより試験した
（１）実験原理
表面プラズモンは、金属の表面上の一種の電磁波であり、自由振動における光子と電子との相互作用により生じる。表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）は、２種類の媒質の表面で起きる光学的現象であり、光子又は電子により誘起され得る。光濃密な媒質から光散乱媒質への光の全反射という現象は、光散乱媒質中にエバネッセント光を形成する。全反射したエバネッセント光が、金属表面上でプラズマ波と交わると、共鳴が起こり得て、反射光のエネルギーが減少し、反射光エネルギースペクトル上に共鳴ピークが現れる。この共鳴は、表面プラズモン共鳴と呼ばれる。表面プラズモン共鳴の入射角は、ＳＰＲ角度と呼ばれる。ＳＰＲバイオセンサーは、分子の相互作用をモニタリングするための、高感度の、リアルタイムの、非標識の検出技術を提供する。該センサーはＳＰＲ角度の変化を検出し、ＳＰＲはまた金属表面の屈折率にも関連する。分析種がチップ表面に結合している時、分析種によりチップ表面の屈折率の変化が引き起こされ、これによりＳＰＲ角度の変化へと至る。これが、ＳＰＲバイオセンサーによる分子間相互作用のリアルタイム検出の基本原理である。相互作用分析において、ＳＰＲ角度の変化は、リアルタイムでセンサーマップ上に記録される。
【０１９２】
（２）実験方法
ＰＤ−Ｌ１タンパク質を、捕獲法により、ＮＴＡチップのＦｃ４チャネル上で捕獲し、緩衝剤系はＰＢＳ−Ｐ＋、ｐＨ７．４、０．０１％ＤＭＳＯであった。一連の濃度の化合物及びＰＤ−Ｌ１抗体を調製し、相互作用を決定するために、チップの表面をフロースルーさせた。
【０１９３】
（３）実験結果
実施例化合物の結合タンパク質はＰＤ−Ｌ１であることを予め決定した。更なるＢｉａｃｏｒｅ実験により、実施例化合物が、ＰＤ−Ｌ１と結合する強い能力を有することが確認された。
【国際調査報告】
2019518076.tif 000092
2019518076.tif 000093
2019518076.tif 000094
2019518076.tif 000095