(57)【要約】  式（Ｉ）の１，２，４−トリアゾロ−［３，４−ｂ］−１，３，４−チアジアゾールの誘導体、それらの製造方法、それらを含む医薬組成物、並びにがん治療におけるそれらの使用。2019521146.tif 000051
2019521146.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩：
【化１】
2019521146.tif 000044
式中、
Ｒ１およびＲ２は、同一または異なり、Ｃ１−Ｃ５アルキル、フェニル、メチルフェニルからなる群から選択され、
Ｒ３は、ＣＨ２Ｒ８、ＣＨ２ＣＨ２Ｒ８、ＣＨ＝ＣＨＲ８、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｒ８、ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＲ８、ＣＨ＝ＣＨＣＨ２Ｒ８、ＣＨ＝ＣＨ−ＯＲ８、ＣＨ２−ＯＲ８、ＣＨ２ＣＨ２−ＯＲ８、ＣＨ＝ＣＨ−ＮＨＲ８、ＣＨ２−ＮＨＲ８、ＣＨ２ＣＨ２−ＮＨＲ８、ＣＨ＝ＣＨ−ＳＲ８、ＣＨ２−ＳＲ８、ＣＨ２ＣＨ２−ＳＲ８、
【化２】
2019521146.tif 000045
置換または非置換のフェニル、ベンジル、ピリジル、ピリミジニル、トリアジニル、トリアジナニル、オキサジニル、オキサジナニル、シクロヘキサニル、シクロヘキセニル、シクロヘキサジエニル、ピラニル、オキサチアニル、ピペリジニル、シクロペンタニル、シクロペンテニル、シクロペンタジエニル、ピロリジニル、ピロリル、フラニル、オキサゾリジニル、ピラゾリジニル、チオフェニル、オキサチイニル、オキサチオリル、オキサチオラニルからなる群から選択され、一つまたは複数の置換基はメチル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＮＯ２、ＣＮ、ＮＨ２、ＯＣＨ２Ｘ、ＣＨ２Ｘ、ＣＸ３、ＣＨ２ＣＨ２Ｘ、ＯＨからなる群から選択され、ＸはＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉからなる群から選択され、
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７は、同一または異なり、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＮＯ２、ＣＮ、ＮＨ２、ＯＣＨ３、ＯＨ、ＮＨＣＨ２ＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２からなる群から選択され、
Ｒ８は
【化３】
2019521146.tif 000046
置換または非置換のフェニル、ベンジル、ピリジル、ピリミジニル、トリアジニル、トリアジナニル、オキサジニル、オキサジナニル、シクロヘキサニル、シクロヘキセニル、シクロヘキサジエニル、ピラニル、オキサチアニル、ピペリジニル、シクロペンタニル、シクロペンテニル、シクロペンタジエニル、ピロリジニル、ピロリル、フラニル、オキサゾリジニル、ピラゾリジニル、チオフェニル、オキサチイニル、オキサチオリル、オキサチオラニルからなる群から選択され、一つまたは複数の置換基はメチル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＮＯ２、ＣＮ、ＮＨ２、ＯＣＨ２Ｘ、ＣＨ２Ｘ、ＣＸ３、ＣＨ２ＣＨ２Ｘ、ＯＨ，からなる群から選択され、ＸはＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉからなる群から選択され、
Ｒ９は、ＮＨＲ１０、ＮＲ１１Ｒ１２からなる群から選択され、
Ｒ１０は、Ｃ１−Ｃ５アルキル、フェニルからなる群から選択され、
Ｒ１１およびＲ１２は、同一または異なり、Ｃ１−Ｃ５アルキルである。
【請求項２】
Ｒ１およびＲ２が同一または異なり、Ｃ１−Ｃ３アルキル、フェニル、メチルフェニルからなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１およびＲ２はメチルである、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ３はＣＨ２Ｒ８、ＣＨ２ＣＨ２Ｒ８、ＣＨ＝ＣＨＲ８、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｒ８、ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＲ８、ＣＨ＝ＣＨＣＨ２Ｒ８、
【化４】
2019521146.tif 000047
置換又は非置換のフェニル、ベンジル、ピリジルから選択され、一つまたは複数の置換基はメチル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＮＯ２、ＣＮ、ＮＨ２、ＯＣＨ２Ｘ、ＣＨ２Ｘ、ＣＸ３、ＣＨ２ＣＨ２Ｘ、ＯＨからなる群から選択され、ＸはＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉからなる群から選択される、請求項１乃至３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ３はＣＨ＝ＣＨＲ８、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｒ８、
【化５】
2019521146.tif 000048
置換又は非置換のフェニル、ピリジルからなる群から選択され、一つまたは複数の置換基はＦ、Ｃｌ、ＮＯ２からなる群から選択される、請求項１乃至４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７は同一または異なり、Ｈ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＮＨ２、ＯＣＨ３からなる群から選択される、請求項１乃至５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ４およびＲ７がＨであり、Ｒ５およびＲ６ＯＣＨ３である、請求項１乃至６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ８は
【化６】
2019521146.tif 000049
置換又は非置換のフェニル、ベンジル、ピリジルからなる群から選択され、一つまたは複数の置換基は、メチル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＮＯ２、ＣＮ、ＮＨ２、ＯＣＨ２Ｘ、ＣＨ２Ｘ、ＣＸ３、ＣＨ２ＣＨ２Ｘ、ＯＨからなる群から選択され、ＸはＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉからなる群から選択される、請求項１乃至７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ８は
【化７】
2019521146.tif 000050
置換又は非置換のフェニル、ピリジルからなる群から選択され、一つまたは複数の置換基はＦ、Ｃｌ、ＮＯ２からなる群から選択される、請求項１乃至８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ１０は、Ｃ１−Ｃ３アルキル、フェニルからなる群から選択される、請求項１乃至９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ１０はメチルである、請求項１乃至１０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ１１およびＲ１２は同一または異なり、Ｃ１−Ｃ３アルキルである、請求項１乃至１１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ１１およびＲ１２はメチルである、請求項１乃至１２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１４】
請求項１乃至１３のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩および医薬的に許容できる担体を含む医薬組成物。
【請求項１５】
がん治療用の請求項１乃至１３のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な１，２，４−トリアゾロ−［３，４−ｂ］−１，３，４−チアジアゾール誘導体、誘導体の製造方法、およびがん治療における使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
治療法は進化しているとしても、がんはまだ致命的な健康状の課題である。今日では、様々な種類のがんによる死の一定の増加が観察されており、２０３０年には死者が１２００万人に達すると推定される。通常、制がん療法は、それに伴う高い毒性のため解決困難な課題とされている。制ガン剤の主要な副作用は、悪心、嘔吐、下痢、脱毛症および感染症（通常白血球減少症によって生じる）である。従って、有毒がないかある場合も毒性の少ない新規の活性制ガン剤の開発はきわめて重要かつ必要なことである。
【０００３】
チアゾール系またはチアジアゾール系化学構造を含む複素環式化合物は次のような非常に重要な生物活性を示す：抗菌性[a) Holla, B.S., Shivananda, M.K., Akberali, P.M., Baliga, S., Safeer, S., Farmaco, 1996, 51, 785. b) Zhang, Z.Y., Sum, X.W., Chu, C.H., Zhao, L, J. Chim. Chem. Soc, 1997, 44, 535. c) Demirbas, N., Demirbas, A., Karaoglu, S.A., Celik, E., Arkivoc, 2005, 1, 75.], 抗がん性[a) Ibrahim, D.A., Eur. J. Med. Chem., 2009, 44, 2776 b) Al-Masoudi, N.A., Al-Soud, Y.A., Nucleos:Nucleot. Nucleic Acids, 2008, 27, 1034. c) Chowrasia, D., Karthikeyan, C, Choure, L, Sahabjada, Gupta, M., Arshad, Md., Trivedi, P., Arab. J. of Chem., 2013, doi:10.1016/j.arabjc.2013.08.026. d) Mango, K., Valentina, P., Eur. J. Chem., 2010, 1, 50.], 抗ウイルス性[a) Kritsanida, M., Mouroutsou, A., Marakos, P., Pouli, N., Papakonstantinou-Garoufalias, S., Pannecouque, C, Witvrouw, M., Declercq, E., Farmaco, 2002, 57, 253. b) Invidiata, F.P., Simoni, D., Skintu, F., Pinna, N., Farmaco., 1996, 51, 659. c) Srivastava, V., Sen, S., Shekar, R., Indian J. Chem., 1994, 33B, 344.], 抗炎症性[a) Chawla, G., Kumar, U., Bawa, S., Kumar, J., J. Enzyme Inhib. Med. Chem., 2012, 27, 658. b) Amir, M., Harish, K., Javed, S.A., Eur. J. Med. Chem., 2008, 43, 2056. c) Prasad, A.R., Ramlingam, T., Bhaskar Rao A., Diwan, P.B., Sattur., Indian J. Chem., 1986, 25B, 566.], 鎮痛性[a) Srivastava, V., Sen, S., Shekar, R., Indian J. Chem., 1994, 33B, 344. b) Chawla, G., Kumar, U., Bawa, S., Kumar, J., J. Enzyme Inhib. Med. Chem., 2012, 27, 658.], 抗真菌性[a) Karabasanagouda, T., Adhikari, A.V., Suchethasettey, N., Eur. J. Med. Chem., 2007, 42, 521. b) Tiwari, N., Chaturvedi, B., Nizamuddin., Agric. Biol. Chem., 1988, 52, 1229.]および駆虫性[a) El-Khawass, S.M., Khalil, M.A., Hazzaa, A.A., Bassiouny, H.A., Loutfy, N.F., Farmaco. 1989, 44, 703. 2. Imitiaz, M., Kumar, V., Indian J. Chem., 1992, 31 B, 673.]。これら以前の研究では、アミノチアジアゾール誘導体およびジイミノチアジアゾール誘導体の中に抗がん活性を持つものもあった[a) Hill, D.L. Cancer Chemother. Pharmacol. 1980, 4, 215. b) Nelson, J.A., Rose, L.M., Benette, L. Cancer Res. 1977, 37, 182. c) Tsukamoto, K., Suno, M., Igarashi, K., Kozai, Y., Sugino, Y., Cancer Res. 1975, 35, 2631]。
【発明の概要】
【０００４】
本発明は、新規の１，２，４−トリアゾロ−［３，４−ｂ］−１，３，４−チアジアゾール誘導体およびそれらの薬学的に許容される塩、製造方法、および生物活性を提供する。本発明の化合物は、低い急性毒性を伴う制がん活性を示し、制がん療法に応用することができる。
【発明を実施するための形態】
【０００５】
本発明は式（１）
【０００６】
【化１】
2019521146.tif 000003
【０００７】
の１，２，４−トリアゾロ−［３，４−ｂ］−１，３，４−チアジアゾールまたはその薬学的に許容される塩を提供する：
式中
Ｒ１およびＲ２は、同一または異なり、Ｃ１−Ｃ５アルキル、フェニル、メチルフェニルからなる群から選択される、
Ｒ３は、ＣＨ２Ｒ８、ＣＨ２ＣＨ２Ｒ８、ＣＨ＝ＣＨＲ８、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｒ８、ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＲ８、ＣＨ＝ＣＨＣＨ２Ｒ８、ＣＨ＝ＣＨ−ＯＲ８、ＣＨ２−ＯＲ８、ＣＨ２ＣＨ２−ＯＲ８、ＣＨ＝ＣＨ−ＮＨＲ８、ＣＨ２−ＮＨＲ８、ＣＨ２ＣＨ２−ＮＨＲ８、ＣＨ＝ＣＨ−ＳＲ８、ＣＨ２−ＳＲ８、ＣＨ２ＣＨ２−ＳＲ８、
【０００８】
【化２】
2019521146.tif 000004
【０００９】
置換または非置換のフェニル、ベンジル、ピリジル、ピリミジニル、トリアジニル、トリアジナニル、オキサジニル、オキサジナニル、シクロヘキサニル、シクロヘキセニル、シクロヘキサジエニル、ピラニル、オキサチアニル、ピペリジニル、シクロペンタニル、シクロペンテニル、シクロペンタジエニル、ピロリジニル、ピロリル、フラニル、オキサゾリジニル、ピラゾリジニル、チオフェニル、オキサチイニル、オキサチオリル、オキサチオラニル、からなる群から選択され、一つまたは複数の置換基はメチル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＮＯ２、ＣＮ、ＮＨ２、ＯＣＨ２Ｘ、ＣＨ２Ｘ、ＣＸ３、ＣＨ２ＣＨ２Ｘ、ＯＨからなる群から選択され、ＸはＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉからなる群から選択される、
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７は、同一または異なり、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＮＯ２、ＣＮ、ＮＨ２、ＯＣＨ３、ＯＨ、ＮＨＣＨ２ＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２からなる群から選択される、
Ｒ８は
【００１０】
【化３】
2019521146.tif 000005
【００１１】
置換または非置換のフェニル、ベンジル、ピリジル、ピリミジニル、トリアジニル、トリアジナニル、オキサジニル、オキサジナニル、シクロヘキサニル、シクロヘキセニル、シクロヘキサジエニル、ピラニル、オキサチアニル、ピペリジニル、シクロペンタニル、シクロペンテニル、シクロペンタジエニル、ピロリジニル、ピロリル、フラニル、オキサゾリジニル、ピラゾリジニル、チオフェニル、オキサチイニル、オキサチオリル、オキサチオラニル、からなる群から選択され、一つまたは複数の置換基はメチルＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＮＯ２、ＣＮ、ＮＨ２、ＯＣＨ２Ｘ、ＣＨ２Ｘ、ＣＸ３、ＣＨ２ＣＨ２Ｘ、ＯＨからなる群から選択され、ＸはＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉからなる群から選択される、
Ｒ９は、ＮＨＲ１０、ＮＲ１１Ｒ１２からなる群から選択される、
Ｒ１０は、Ｃ１−Ｃ５アルキル、フェニルからなる群から選択される、
Ｒ１１およびＲ１２は同一または異なり、それらはＣ１−Ｃ５アルキルである。
【００１２】
好ましくは、Ｒ１およびＲ２は、同一または異なり、Ｃ１−Ｃ３アルキル、フェニル、メチルフェニルからなる群から選択される。より好ましくは、Ｒ１およびＲ２は、メチルである。
【００１３】
好ましくは、Ｒ３はＣＨ２Ｒ８、ＣＨ２ＣＨ２Ｒ８、ＣＨ＝ＣＨＲ８、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｒ８、ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＲ８、ＣＨ＝ＣＨＣＨ２Ｒ８、
【００１４】
【化４】
2019521146.tif 000006
【００１５】
置換又は非置換のフェニル、ベンジル、ピリジルからなる群から選択され、一つまたは複数の置換基はメチル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＮＯ２、ＣＮ、ＮＨ２、ＯＣＨ２Ｘ、ＣＨ２Ｘ、ＣＸ３、ＣＨ２ＣＨ２Ｘ、ＯＨからなる群から選択され、ＸはＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉからなる群から選択される。より好ましくは、Ｒ３はＣＨ＝ＣＨＲ８、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｒ８、
【００１６】
【化５】
2019521146.tif 000007
【００１７】
置換又は非置換のフェニル、ピリジルからなる群から選択され、一つまたは複数の置換基はＦ、Ｃｌ、ＮＯ２からなる群から選択される。
好ましくは、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７は同一または異なり、Ｈ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＮＨ２、ＯＣＨ３からなる群から選択される。より好ましくは、Ｒ４およびＲ７はＨであり、Ｒ５およびＲ６はＯＣＨ３である。
【００１８】
好ましくは、Ｒ８は
【００１９】
【化６】
2019521146.tif 000008
【００２０】
置換又は非置換のフェニル、ベンジル、ピリジルからなる群から選択され、一つまたは複数の置換基はメチル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＮＯ２、ＣＮ、ＮＨ２、ＯＣＨ２Ｘ、ＣＨ２Ｘ、ＣＸ３、ＣＨ２ＣＨ２Ｘ、ＯＨからなる群から選択され、ＸはＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉからなる群から選択される。より好ましくは、Ｒ８は
【００２１】
【化７】
2019521146.tif 000009
【００２２】
置換又は非置換のフェニル、ピリジルからなる群から選択され、一つまたは複数の置換基はＦ、Ｃｌ、ＮＯ２からなる群から選択される。
好ましくは、Ｒ１０は、Ｃ１−Ｃ３アルキル、フェニルからなる群から選択される。より好ましくは、Ｒ１０はメチルである。
【００２３】
好ましくは、Ｒ１１およびＲ１２は同一または異なり、Ｃ１−Ｃ３アルキルである。より好ましくは、Ｒ１１およびＲ１２はメチルである。
式（Ｉ）の化合物は少なくとも１つの塩基性基を含み、従って、それらは適切な酸を用いる処理を経て薬学的に許容される塩を形成することができる。好適な酸には、薬理学的に許容される有機酸ならびに薬理学的に許容される無機酸が含まれる。薬学的に許容される塩には、塩化物、臭化物、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、酪酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、シュウ酸塩、コハク酸塩および安息香酸塩が含まれる。
【００２４】
式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を、異なる種類の悪性新生物（固形腫瘍、リンパ腫および白血病）の治療で使うことができる。好ましくは、それらは卵巣がん、乳がん、前立腺がん、肺がんおよびリンパ腫の治療で使われる。より好ましくは、それらは、卵巣線がんおよび小細胞および非小細胞肺がんの治療で使われる。
【００２５】
式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩は、強力な細胞増殖抑止作用および細胞障害作用および低い急性全身毒性を示す。
また、本発明は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む医薬品組成物を提供する。このような医薬組成物はそれが経口、鼻腔内、局所または非経口投与のような適切な方法で投与することができるように製剤される。例えば、このような医薬組成物は、錠剤、カプセル、粉剤、溶液、懸濁液、軟膏またはゲルに製剤される。このような組成物は、通常は式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩以外に、医薬的に許容できる担体を含む。このような担体は、当技術分野で周知の賦形剤、例えば希釈剤、結合剤、充填剤、崩壊剤、滑沢剤、溶媒、増粘剤、懸濁化剤、ゲル化剤、緩衝剤または防腐剤を含んでいてもよい。これらの組成物は、当技術分野で周知の方法に従って調製される。
【００２６】
本発明はさらに式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩の調製方法を提供する。
１，２，４−トリアゾロ−［３，４−ｂ］−１，３，４−チアジアゾール合成の一般的な手順は、以下にスキーム１に示される。
【００２７】
【化８】
2019521146.tif 000010
【００２８】
塩化スルホニル（Ｖ）は、芳香族のエステル（ＶＩ）とクロロスルホン酸の反応から合成することができる。スルホンアミド（ＩＶ）は、塩化スルホニル（Ｖ）とアミンの反応から合成することができる。ヒドラジド（ＩＩＩ）は、Camoutsisおよび彼の共同研究者達(Ezabadi IR、Camoutsis C、Zoumpoulakis P、Geronikaki A、Sokovic M、Glamocilija J、Ciric A. Bioorg MedChem. 2008, 16(3):1150-61)の方法に従って、スルホンアミド（ＩＶ）と水性ヒドラジンから調製することができる。工程４および５は、Mathewおよび共同研究者達（Mathew, V; Keshavayya, J; Vaidya, V.P. Giles, D. Eur. J. Med.Chem., 2007,42, 521)の方法に従って行うことができる。したがって、ヒドラジド（ＩＩＩ）は二硫化炭素およびヒドラジンと反応し、ジチオカルバミン酸カリウム塩中間体を経てアミノトリアゾール（ＩＩ）を生成する。最後に、アミノトリアゾール（ＩＩ）は、オキシ塩化リンの存在下で酸と反応して、３，６−二置換１，２，４−トリアゾロ［３，４−ｂ］−１，２，４−チアゾール（Ｉ）に転換される。
【００２９】
実施例１
酢酸２−（２−（クロロスルホニル）−４，５−ジメトキシフェニル）メチルの合成
【００３０】
【化９】
2019521146.tif 000011
【００３１】
酢酸２−（３，４−ジメトキシフェニル）メチル（３．７ｇ、１７．６５ｍｍｏｌ）を含むフラスコ中で、ＣＨＣｌ３（３５ｍｌ）を加え、次いで、クロロスルホン酸（５．２８ｍｌ、７９．４ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気の下で０℃で滴下する。溶液は黒紫色の色を呈し、室温で４時間撹拌される。０℃の水（３５ｍｌ）を徐々に追加して反応を止め、ＤＣＭを用いる抽出（３×３５ｍｌ）、Ｎａ２ＳＯ４で有機層を乾燥し、濃縮後ＰＳ／ＥＡ（２：１）の溶離溶媒を用いるカラムクロマトグラフィーを行う。生成物を８８％の収率の白色固形物として回収する。
【００３２】
２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル）−４，５−ジメトキシ−フェニルアセチルヒドラジドの合成
ＴＨＦ（１．８ｍｌ）に溶解した酢酸２−（２−（クロロスルホニル）−４，５−ジメトキシフェニル）メチル（４５０ｍｇ、１．４６ｍｍｏｌ）を含有するオートクレーブシステム中、ジメチルアミン（１．４７ｍｌ、２．９２ｍｍｏｌ）の２ＭのＴＨＦ溶液（０℃）を加えた。反応物を１時間室温で撹拌し、淡黄色の固形物を観察する。反応完了後、溶液を必要量のＤＣＭを含むフラスコに静かに移して、ロータリーエバポレーターで濃縮し、１００％の収率で淡黄色の固形物として回収する。
【００３３】
５−［２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル）−４，５−ジメトキシベンジル］−４−アミノ−３−メルカプト−１，２，４−トリアゾールの合成
２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル）−４，５−ジメトキシ−フェニルアセチルヒドラジド（０．０１モル）の無水エタノール（１５０ｍＬ）冷溶液中に、水酸化カリウム（０．０１５モル）および二硫化炭素（０．０１５モル）を加える。反応混合物を室温で２０時間撹拌する。反応中に、ジチオカルバミン酸カリウム塩中間体は沈殿する。その後、乾燥エーテル（１５０ｍＬ）を加えて、形成された塩の結晶化を完結させ、結晶は濾過・ならびに乾燥エーテルを用いて更に乾燥する。
【００３４】
この塩を８０％の水性ヒドラジン（０．０２モル）の懸濁液として２時間還流加熱しながら撹拌する。反応混合物を冷却し、冷水に溶解し、１０％の塩酸で中和する。沈殿物をろ過で集めて、冷水で洗浄し、乾燥後メタノールで再結晶する。
収率：56%、融点 222-223℃(CH3OH)、1H-NMR (500 MHz、DMSO-d6) δ 13.30 (s,1H), 7.15 (s,1H), 6.92 (s,1H), 5.46 (s,2H), 4.20 (s,2H), 3.71 (s,3H), 3.68 (s,3H), 3.22 (s,6H)、13C NMR (126 MHz、 DMSO-d6) δ 165.8, 151.8, 151.5, 147.1, 127.7, 126.3, 115.6, 112.7, 55.9, 36.8, 28.1。元素分析：C13H19N5O4S2(分子量：373)。計算値％：C:41.82, H:5.09,N:18.76。実測値 C:41.77, H:5.12, N:18.79。
【００３５】
３−［２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル）−４，５−ジメトキシベンジル］−６−フェニル−１，２，４−トリアゾロ［３，４−ｂ］−１，３，４−チアゾールの合成
５−［２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル）−４，５−ジメトキシベンジル］−４−アミノ−３−メルカプト−１，２，４−トリアゾール（０．０１モル）および安息香酸（０．０１モル）の混合物の乾燥オキシ塩化リン（３．７ｍＬ）に溶解したものを２時間還流加熱しながら撹拌する。反応混合物を室温に冷却して、氷の中に注ぐ。反応物のｐＨが８を越えるまで、乾燥炭酸カリウムおよび適切な量の水酸化カリウムによって過剰のオキシ塩化リンを中和する。固形物をろ別し、水でよく洗浄して乾燥する。
【００３６】
【化１０】
2019521146.tif 000012
【００３７】
収率：74%、融点212-214℃ (CH3OH)、1H-NMR (CDCl3) δ 7.95 (d、J＝6.9 Hz, 2H), 7.68 (m,1H), 7.63 (m, 2H), 7.30 (s, 1H), 7.21 (s, 1H), 4.78 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 2.63 (s、6H), I.R. v cm-1 1601 (C＝N), 1573, 1513, 1470, 1446 (C＝C), 1265 (N-N＝C), 1328 (S-O非対称), 1141 (S-O対称)。元素分析：C20H21N5O4S2(分子量：459)。
計算値%：C:52.28、H:4.57、N:15.25。測定値：C:52.25、H:4.53、N:15.27。
【００３８】
実施例２
例１の方法に従って、以下のチアゾール化合物の合成を完了した。
【００３９】
【化１１】
2019521146.tif 000013
【００４０】
３−［２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル）−４，５−ジメトキシベンジル］−６−（４−クロロフェニル）−１，２，４−トリアゾロ［３，４−ｂ］−１，３，４−チアゾール
収率：52%。融点：228-229℃ (CH3OH-CH2Cl2)、1H-NMR (CDCl3) δ 7.97 (d, J＝8.5 Hz, 2H), 7.71 (d, J＝8.6 Hz, 2H), 7.30 (s, 1H), 7.20 (s, 1H), 4.78 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 2.62(s, 6H), I.R. v cm-1 1600 (C＝N), 1573, 1519, 1470 (C＝C), 1272 (N-N＝C), 1339(S-O非対称), 1138 (S-O対称)。元素分析：C20H20N5O4S2Cl (分子量493.5)。計算値%:C:48.63、H:4.05、N:14.18。測定値：C:48.65、H:4.01、N:14.21。
【００４１】
３−［２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル）−４，５−ジメトキシベンジル］−６−（２−クロロ−４−ニトロフェニル）−１，２，４−トリアゾロ［３，４−ｂ］−１，３，４−チアゾール
【００４２】
【化１２】
2019521146.tif 000014
【００４３】
収率：65%。融点：216-217℃ (CH3OH)、1H-NMR (CDCl3) δ 8.57 (d, J＝2.3 Hz, 1H), 8.40 (dd, J＝8.7, 2.3 Hz, 1H), 8.27 (d, J＝8.7 Hz, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.20 (s, 1H), 4.80 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 2.61 (s, 6H), I.R. v cm-11603 (C＝N), 1573, 1518, 1476 (C＝C), 1269 (N-N＝C), 1331(S-O非対称), 1138(S-O対称)。元素分析：C20H19N6O6S2Cl (分子量538.5)。計算値%：C:44.56、H:3.52、N:15.60。測定値：C:44.53、H:3.55、N:15.63。
【００４４】
３−［２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル）−４，５−ジメトキシベンジル］−６−（３−メチル−４−ニトロフェニル）−１，２，４−トリアゾロ［３，４−ｂ］−１，３，４−チアゾール
【００４５】
【化１３】
2019521146.tif 000015
【００４６】
収率：46%。融点：142-144℃(CH3OH)、1H-NMR (CDCl3) δ 8.18 (d, J＝8.5 Hz, 1H), 8.08 (s, 1H), 8.02 (d, J＝8.5 Hz, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 4.80 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 2.62 (s, 6H), I.R. v cm-1 1600 (C＝N), 1573, 1510, 1476 (C＝C), 1271 (N-N＝C), 1344 (S-O非対称), 1133 (S-O対称）、元素分析：C21H22N6O6S2(分子量518)。計算値％：C:48.64、H:4.24、N:16.21。測定値：C:48.68、H:4.21、N:16.25。
【００４７】
３−［２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル）−４，５−ジメトキシベンジル］−６−（３，４，５−トリメトキシフェニル）−１，２，４−トリアゾロ［３，４−ｂ］−１，３，４−チアゾール
【００４８】
【化１４】
2019521146.tif 000016
【００４９】
収率：38%。融点：169-170℃(CH3OH)、1H-NMR (CDCl3) δ 7.30 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 7.14 (s, 2H), 4.78 (s, 2H), 3.89 (s, 6H), 3.84 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.76 (s, 3H), 2.62 (s, 6H), I.R. v cm-11630 (C＝N), 1586, 1459, 1414 (C＝C), 1267 (N-N＝C), 1333 (S-O非対称), 1127 (S-O対称)。 元素分析：C23H27N5O7S2(分子量549)。計算値%：C:50.27, H:4.92, N:12.75, 実測値：C:50.25, H:4.96, N:12.78。
【００５０】
３−［２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル）−４，５−ジメトキシベンジル］−６−（２−アミノフェニル）−１，２，４−トリアゾロ［３，４−ｂ］−１，３，４−チアゾール
【００５１】
【化１５】
2019521146.tif 000017
【００５２】
収率：36%。融点：219-220℃(C2H5OH)、1H-NMR (CDCl3) δ 7.30 (s, 1H), 7.23 (t, J＝7.8 Hz, 1H), 7.20 (s, 1H), 7.13 (m, 1H), 7.03 (d, J＝8.35 Hz, 1H), 6.82 (d, J＝8.2 Hz, 1H), 4.75 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 2.61 (s, 6H), I.R. v cm-1 2436, 3382, 3267 (N-H), 1608 (C＝N), 1555, 1514, 1474 (C＝C), 1265 (N-N＝C), 1328 (S-O非対称), 1141 (S-O対称), 元素分析：C20H22N6O4S2(分子量：474)。計算値%：C:50.63, H:4.64, N:17.72。測定値：C:50.60, H:4.61, N:17.75。
【００５３】
３−［２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル）−４，５−ジメトキシベンジル］−６−（３−アミノフェニル）−１，２，４−トリアゾロ［３，４−ｂ］−１，３，４−チアゾール
【００５４】
【化１６】
2019521146.tif 000018
【００５５】
収率：20%。融点：164-165℃(C2H5OH)、1H-NMR (CDCl3) δ 7.44 (dd, J＝8.0, 1.4 Hz, 1H), 7.29 (m, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.16 (s, 1H), 6.93 (d, J＝8.4 Hz, 1H), 6.71 (bs, 2H, NH2), 6.68 (t, J＝7.5 Hz, 1H), 4.81 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.78 (s, 3H), 2.63 (s, 6H), I.R. v cm-1, 3450, 3347 (N-H), 1626 (C＝N), 1579, 1512, 1473 (C＝C), 1272 (N-N＝C), 1322 (S-O非対称), 1129 (S-O対称), 元素分析：C20H26N6O4S2(分子量：474)。計算値%：C:50.63、H:4.64、N:17.72。測定値:C:50.65、H:4.67、N:17.69。
【００５６】
３−［２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル）−４，５−ジメトキシベンジル］−６−（４−アミノフェニル）−１，２，４−トリアゾロ［３，４−ｂ］−１，３，４−チアゾール
【００５７】
【化１７】
2019521146.tif 000019
【００５８】
収率：18%。融点：179-181℃(C2H5OH)、1H-NMR (CDCl3) δ 7.58 (dd, J＝8.6, 2.9 Hz, 2H), 7.29 (d, J＝3.0 Hz, 1H), 7.19 (d, J＝2.8 Hz, 1H), 6.68 (dd, J＝8.6, 2.9 Hz, 2H), 6.17 (s, 2H), 4.72 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.78 (s, 3H), 2.61 (s, 6H), I.R. v cm-1 3457, 3348, 3237 (N-H), 1603 (C＝N), 1577, 1518, 1461 (C＝C), 1265 (N-N＝C), 1331 (S-O非対称), 1138 (S-O対称), 元素分析：C20H26N6O4S2(分子量：474)。計算値%：C:50.63, H:4.64, N:17.72。測定値:C:50.60, H:4.59, N:17.70。
【００５９】
３−［２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル）−４，５−ジメトキシベンジル］−６−ベンジル−１，２，４−トリアゾロ［３，４−ｂ］−１，３，４−チアゾール
【００６０】
【化１８】
2019521146.tif 000020
【００６１】
収率：18%。融点：178-179℃(CH3OH)；1H-NMR (CDCl3) δ 7.42 - 7.36 (m, 4H), 7.36 - 7.30 (m, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.13 (s, 1H), 4.69 (s, 2H), 4.44 (s, 2H)3.84 (s, 3H), 3.76 (s, 3H), 2.57 (s, 6H), I.R. v ,cm-11601 (C＝N), 1565, 1517, 1475 (C＝C), 1267 (N-N＝C), 1339 (S-O非対称), 1140 (S-O対称)、元素分析：C21H23N5O4S2(分子量473)。計算値%:C:53.27、H:4.86、N:14.80。測定値:C:53.23、H:4.89、N:14.83。
【００６２】
３−［２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル）−４，５−ジメトキシベンジル］−６−（３−メトキシベンジル）−１，２，４−トリアゾロ［３，４−ｂ］−１，３，４−チアゾール
【００６３】
【化１９】
2019521146.tif 000021
【００６４】
収率：58%。融点：165-166℃(CH3OH)、1H-NMR (CDCl3) δ 7.30 (d, J＝8.0 Hz, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.13 (s, 1H), 6.97 (s, 1H), 6.94 (d, J＝7.7 Hz, 1H), 6.90 (dd, J＝8.3, 2.5 Hz, 1H), 4.70 (s, 2H), 4.41 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.77 (s, 3H), 3.75 (s, 3H), 2.57 (s, 6H), I.R. v cm-1 1607 (C＝N), 1581, 1515, 1491 (C＝C), 1266 (N-N＝C), 1334 (S-O非対称), 1139 (S-O対称), 元素分析：C22H25N5O5S2(分子量503)。計算値%：C:52.48, H:4.97, N:13.91。測定値:C:52.44, H:4.95, N:12.88。
【００６５】
３−［２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル）−４，５−ジメトキシベンジル］−６−（４−メトキシベンジル）−１，２，４−トリアゾロ［３，４−ｂ］−１，３，４−チアゾール
【００６６】
【化２０】
2019521146.tif 000022
【００６７】
収率：52%。融点：184-185℃(CH3OH)、1H-NMR  (CDCl3) δ 7.30 (d, J＝8.6 Hz, 2H), 7.29 (s, 1H), 7.13 (s, 1H), 6.94 (d, J＝8.6 Hz, 2H), 4.69 (s, 2H), 4.36 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.77 (s, 3H), 3.75 (s, 3H), 2.57 (s, 6H), I.R. v cm-11610 (C＝N), 1571, 1514, 1476 (C＝C), 1267 (N-N＝C), 1340 (S-O非対称), 1140 (S-O対称), 元素分析：C22H25N5O5S2(分子量503)。計算値%：C:52.48, H:4.97, N:13.91。測定値:C:52.45, H:4.99, N:13.94。
【００６８】
３−［２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル）−４，５−ジメトキシベンジル］−６−（３，４−ジメトキシベンジル）−１，２，４−トリアゾロ［３，４−ｂ］−１，３，４−チアゾール
【００６９】
【化２１】
2019521146.tif 000023
【００７０】
収率：50%。融点：139-140℃(CH3OH)、1H-NMR (CDCl3) δ 7.29 (s, 1H), 7.13 (s, 1H), 6.99 (s, 1H), 6.95 (d, J＝8.2 Hz, 1H), 6.90 (dd, J＝8.3, 2.0Hz, 1H), 4.70 (s, 2H), 4.35 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.77 (s, 3H), 3.75 (s, 3H), 3.73 (s, 3H), 2.58 (s, 6H), I.R. v cm-1, 1602 (C＝N), 1555, 1516, 1462 (C＝C), 1266 (N-N＝C), 1336 (S-O非対称), 1139 (S-O対称), 元素分析：C23H27N5O6S2(分子量533)。計算値%：C:51.78, H:5.06, N:13.13。
測定値%：C:51.81, H:5.10, N:13.15。
【００７１】
３−［２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル）−４，５−ジメトキシベンジル］−６−（３−フェニルプロピル）−１，２，４−トリアゾロ［３，４−ｂ］−１，３，４−チアゾール
【００７２】
【化２２】
2019521146.tif 000024
【００７３】
収率：14%。融点128-129℃(CH3OH)、1H-NMR (CDCl3) δ 7.30 - 7.26 (m, 3H), 7.23 - 7.17 (m, 3H), 7.12 (s, 1H), 4.69 (s, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.77 (s, 3H), 3.04 (t, J＝7.4Hz, 2H), 2.68 (t, J＝7.7Hz, 2H), 2.59 (s, 6H), 2.03 (p, J＝7.6Hz, 2H), I.R. v cm-1, 1600 (C＝N), 1574, 1516, 1478 (C＝C), 1267 (N-N＝C), 1334 (S-O非対称), 1139 (S-O対称), 元素分析：C23H27N5O4S2(分子量501)。計算値%：C:55.09, H:5.38, N:13.97。測定値%：C:55.11, H:5.41, N:14.01。
【００７４】
３−［２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル）−４，５−ジメトキシベンジル］−６−（２−ピリジニル）−１，２，４−トリアゾロ［３，４−ｂ］−１，３，４−チアゾール
【００７５】
【化２３】
2019521146.tif 000025
【００７６】
収率：32%。融点198-199℃(CH3OH)、1H-NMR (CDCl3) δ 8.76 (s、1H)8.23-8.00 (m、2H)、7.69 (s, 1H), 7.37 - 7.15 (m, 2H), 4.79 (s, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.78 (s, 3H), 2.62 (s, 6H), I.R. v cm-1, 1599 (C＝N), 1576, 1517, 1456 (C＝C), 1270 (N-N＝C), 1335 (S-O 非対称), 1137 (S-O 対称), 元素分析：C19H20N6O4S2(分子量460)。計算値%：C:49.56, H:4.34, N:18.26。測定値%：C:49.60, H:4.31, N:18.30。
【００７７】
３−［２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル）−４，５−ジメトキシベンジル］−６−（４−ピリジニル）−１，２，４−トリアゾロ［３，４−ｂ］−１，３，４−チアゾール
【００７８】
【化２４】
2019521146.tif 000026
【００７９】
収率：37%。融点：231-232℃(C2H5OH)、1H-NMR (CDCl3) δ 8.85 (d, J＝5.0 Hz, 2H), 7.91 (d, J＝5.0Hz, 2H), 7.30 (s, 1H), 7.21 (s, 1H), 4.80 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 2.63 (s, 6H), I.R. v cm-1, 1600 (C＝N), 1561, 1507, 1473, 1411 (C＝C), 1274 (N-N＝C), 1337 (S-O非対称), 1138 (S-O対称), 元素分析：C19H20N6O4S2(分子量460)。計算値%：C:49.56, H:4.34, N:18.26。測定値％：C:49.58, H:4.37, N:18.23。
【００８０】
３−［２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル）−４，５−ジメトキシベンジル］−６−（３−ブロモ−５−ピリジニル）−１，２，４−トリアゾロ［３，４−ｂ］−１、３，４−チアゾール
【００８１】
【化２５】
2019521146.tif 000027
【００８２】
収率：41%。融点：227-228℃(C2H5OH)、1H-NMR (CDCl3) δ 9.10 (d, J＝2.0 Hz, 1H), 8.98 (d, J＝2.2 Hz, 1H), 8.58 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 4.79 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 2.63 (s, 6H), I.R. v cm-1, 1600 (C＝N), 1573, 1516, 1481, 1440, 1412 (C＝C), 1270 (N-N＝C), 1338 (S-O非対称), 1140 (S-O対称)。元素分析：C19H19BrN6O4S2(分子量：539)。計算値%:C:42.30, H:3.52, N:15.58。測定値%:C:42.32, H:3.49, N:15.56。
【００８３】
３−［２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル）−４，５−ジメトキシベンジル］−６−シンナミル−１，２，４−トリアゾロ［３，４−ｂ］−１，３，４−チアゾール
【００８４】
【化２６】
2019521146.tif 000028
【００８５】
収率：44%。融点：191-193℃ (CH3OH-CH2Cl2)；1H-NMR (CDCl3) δ 7.81 (d, J＝7.1 Hz, 2H), 7.64 (d, J＝16.4 Hz, 1H), 7.60 (d, J＝16.3 Hz, 1H), 7.52 - 7.40 (m, 3H), 7.30 (s, 1H), 7.16 (s, 1H), 4.73 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 2.62 (s, 6H), I.R. v cm-1, 1630 (CH＝CH), 1600 (C＝N), 1575, 1576, 1475 (C＝C), 1267 (N-N＝C), 1332 (S-O非対称), 1138 (S-O対称), 元素分析：C22H23N5O4S2(分子量485)。計算値%:C:54.43, H:4.74, N:14.43。測定値%:C:54.45, H:4.71, N:14.39。
【００８６】
３−［２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル）−４，５−ジメトキシベンジル］−６−（Ｅ）−４−フルオロスチリル−１，２，４−トリアゾロ［３，４−ｂ］−１，３，４−チアゾール
【００８７】
【化２７】
2019521146.tif 000029
【００８８】
収率：73%。融点：210-212℃；1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7.89 (dd, J＝8.6, 5.6 Hz, 2H), 7.65 (d, J＝16.4 Hz, 1H), 7.58 (d, J＝16.4 Hz, 1H), 7.36 - 7.25 (m, 2H), 7.16 (s, 1H), 4.72 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 2.60 (s, 6H)。I.R. v cm-1, 2926, 2853, 1736, 1631, 1601, 1513, 1494, 1474, 1387, 1337, 1268, 1231, 1139, 1156, 1048。
【００８９】
３−［２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル）−４，５−ジメトキシベンジル］−６−（Ｅ）−４−クロロスチリル−１，２，４−トリアゾロ［３，４−ｂ］−１，３，４−チアゾール
【００９０】
【化２８】
2019521146.tif 000030
【００９１】
収率：72%。融点229-231℃; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7.84 (d, J＝8.6 Hz, 2H), 7.64 (s, 2H), 7.53 (d, J＝8.6 Hz, 2H), 7.30 (s, 1H), 7.15 (s, 1H), 4.72 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 2.61 (s, 6H)。13C NMR (126 MHz, DMSO-d6) δ 165.7, 151.9, 147.2, 146.3, 139.4, 134.8, 133.3, 129.8, 129.0, 127.9, 126.1, 119.0, 115.5, 112.7, 55.9, 36.8, 27.6。I.R. v cm-1, 2934, 2844, 1726, 1633, 1516, 1488, 1473, 1410, 1381, 1339, 1268, 1224, 1139, 1175, 1087。
【００９２】
３−［２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル）−４，５−ジメトキシベンジル］−６−（Ｅ）−３−フルオロスチリル−１，２，４−トリアゾロ［３，４−ｂ］−１，３，４−チアゾール
【００９３】
【化２９】
2019521146.tif 000031
【００９４】
収率：52%。融点212-215℃；1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 7.92-7.73 (m, 2H), 7.68 (td, J＝8.1, 5.8 Hz, 1H), 7.55 (td, J＝8.6, 2.4 Hz, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.21 (s, 1H), 4.78 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 2.63 (s, 6H)。I.R. v cm-1, 2929, 2844, 1589, 1516, 1474, 1387, 1338, 1270, 1228, 1174, 1155, 1140, 1042。
【００９５】
３−［２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル）−４，５−ジメトキシベンジル］−６−フェノキシメチル−１，２，４−トリアゾロ［３，４−ｂ］−１，３，４−チアゾール
【００９６】
【化３０】
2019521146.tif 000032
【００９７】
収率：41%。融点：178-179℃ (CH3OH-CH2Cl2); 1H-NMR (CDCl3) δ 7.37 - 7.31 (m, 2H), 7.29 (s, 1H), 7.13 (s, 1H), 7.09 (d, J＝7.7, 1.0 Hz, 2H), 7.06-7.01 (m, 1H), 5.55 (s, 2H), 4.72 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.78 (s, 3H), 2.58 (s, 6H), I.R. v cm-1, 1598 (C＝N), 1572, 1516, 1479 (C＝C), 1267 (N-N＝C), 1337 (S-O非対称), 1139 (S-O対称), 元素分析:C21H23N5O5S2(分子量489)。計算値%:C:51.53, H:4.70, N:14.31。測定値%:C:51.51, H:4.67, N:14.33。
【００９８】
３−［２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル）−４，５−ジメトキシベンジル］−６−［２−（２−メトキシフェニル）エチル］−１，２，４−トリアゾロ［３，４−ｂ］−１，３，４−チアゾール
【００９９】
【化３１】
2019521146.tif 000033
【０１００】
収率:37%。融点:154-155℃(CH3OH-CH2Cl2), 1H-NMR (CDCl3) 5 7.29 (s, 1H), 7.21 (m, 1H), 7.17 (d, J＝7.5 Hz, 1H), 7.10 (s, 1H), 6.95 (d, J＝8.2 Hz, 1H), 6.84 (t, J＝7.26 Hz, 1H), 4.67 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.77 (s, 3H), 3.75 (s, 3H), 3.29 (m, 2H), 3.01 (t, J＝7.5 Hz, 4H), 2,56 (s, 6H), I.R. v cm-1, 1601 (C＝N), 1569, 1519, 1477 (C＝C), 1267 (N-N＝C), 1336 (S-O非対称), 1139 (S-O対称), 元素分析:C23H27N5O5S2(分子量517)。計算値%:C:53.38, H:5.22, N:13.53。測定値%:C:53.41, H:5.19, N:13.56。
【０１０１】
３−［２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル）−４，５−ジメトキシベンジル］−６−［２−（４−メトキシフェニル）エチル］−１，２，４−トリアゾロ［３，４−ｂ］−１，３，４−チアゾール
【０１０２】
【化３２】
2019521146.tif 000034
【０１０３】
収率:41%。融点:151-152℃(CH3OH-CH2Cl2)、1H-NMR (CDCl3) δ 7.29 (s, 1H), 7.18 (d, J＝8.3 Hz, 2H), 7.11 (s, 1H), 6.83 (d, J＝8.1 Hz, 2H), 4.67 (s, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.77 (s, 3H), 3.71 (s, 3H), 2.99 (t, J＝7.6 Hz, 2H), 2.55 (s, 6H), I.R. v cm-1, 1601 (C＝N), 1569, 1519, 1477 (C＝C), 1267 (N-N＝C), 1336 (S-O非対称), 1139 (S-O対称), 元素分析:C23H27N5O5S2(517)。計算値%:C:53.38, H:5.22, N:13.53。測定値%:C:53.35, H:5.24, N:13.50。
【０１０４】
３−［２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル）−４，５−ジメトキシベンジル］−６−（３−クロロフェニル）−１，２，４−トリアゾロ［３，４−ｂ］−１，３，４−チアゾール
【０１０５】
【化３３】
2019521146.tif 000035
【０１０６】
収率:45%。融点:237-239℃, 1H NMR (500MHz, CDCl3) δ 7.86 (s, 1H), 7.74 (d, J＝7.7 Hz, 1H), 7.56 (d, J＝8.0 Hz, 1H), 7.53 - 7.39 (m, 2H), 6.99 (s, 1H), 4.90 (s, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.87 (s, 3H), 2.72 (s, 6H)。13C NMR (126 MHz, CDCl3) δ 164.9, 153.1, 152.5, 147.7, 146.8, 135.7, 132.7, 130.9, 130.8, 127.9, 127.03, 127.0 125.3, 114.4, 1 13.4, 56.4, 56.2, 36.9, 27.9。I.R. v cm-1 3088, 3056, 2955, 2927, 2852, 2616, 1598, 1573, 1518, 1482, 1470, 1439, 1405, 187, 1339, 1270, 1228, 1175, 1139, 1101, 1078, 1043。
【０１０７】
３−［２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル）−４，５−ジメトキシベンジル］−６−（４−ニトロフェニル）−１，２，４−トリアゾロ［３，４−ｂ］−１，３，４−チアゾール
【０１０８】
【化３４】
2019521146.tif 000036
【０１０９】
収率：53%。融点:223-225℃、1H NMR (500MHz, CDCl3)δ8.39 (d, J＝8.7 Hz, 2H), 8.08 (d, J＝8.7 Hz, 2H), 7.45 (s, 1H), 7.00 (s, 1H), 4.94 (s, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.88 (s, 3H), 2.73 (s, 6H), 13C NMR (126 MHz, CDCl3) δ 163.9, 153.1, 152.5, 150.1, 147.9, 147.1, 134.8, 128.2, 127.5, 126.9, 124.7, 1 14.5, 113.1, 113.1, 56.4, 37.1, 28.0, I.R. v cm-1 3108, 3004, 2931, 2837, 1600, 1534, 1571, 1518, 1471, 1351, 1337, 1270, 1227, 1138, 1049。
【０１１０】
３−［２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル）−４，５−ジメトキシベンジル］−６−（４−フルオロフェニル）−１，２，４−トリアゾロ［３，４−ｂ］−１，３，４−チアゾール
【０１１１】
【化３５】
2019521146.tif 000037
【０１１２】
収率:66%。融点:220-223℃、1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 8.02 (dd, J＝8.8, 5.2 Hz, 2H), 7.48 (t, J＝8.8 Hz, 2H), 7.30 (s, 1H), 7.20 (s, 1H), 4.78 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 2.62 (s, 6H), I.R. v cm-1 2933, 2842,1602, 1517, 1475, 187, 1337, 1268, 1241, 1225, 1139, 1042。
【０１１３】
３−［２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル）−４，５−ジメトキシベンジル］−６−（２，４−ジニトロフェニル）−１，２，４−トリアゾロ［３，４−ｂ］−１，３，４−チアゾール
【０１１４】
【化３６】
2019521146.tif 000038
【０１１５】
収率:29%。融点:162-164℃, 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 8.74 (s, 1H), 8.69 (d, J＝8.4 Hz, 1H), 8.50 (d, J＝8.6 Hz, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.13 (s, 1H), 4.74 (s, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 2.58 (s, 6H), 13C NMR (126 MHz, DMSO-d6) δ 161.2, 153.8, 151.9, 150.5, 149.3, 147.3, 146.3, 128.2, 127.7, 127.6, 126.9, 126.1, 124.3, 1 15.4, 1 12.8, 55.9, 55.8, 36.7, 27.6, I.R. v cm-1 2917, 2850, 1729, 1555, 1514, 1457, 1346, 1308, 1270, 1223, 1 137, 1042。
【０１１６】
実施例３
ヒトがんおよび白血病細胞株に対する細胞増殖抑制−細胞毒性活性の生体外研究
本実施例は、ヒト卵巣がん細胞株ＵＷＢ１．２８９（突然変異体ＢＲＣＡ１を有する）、ＵＷＢ１．２８９＋ＢＲＣＡ１、ＯＶＣＡＲ−３、ＳＣＯＶ−３、ヒト乳がん細胞株ＭＣＦ−７［エストロゲン受容体（インシュリン様成長因子結合タンパク質（ＩＧＦＢＰ）ＢＰ−２、ＢＰ−４、ＢＰ−５、腫瘍遺伝子ＷＮＴ７Ｂをを発現）］、Ｔ−４７Ｄ（すべてのステロイド受容体および腫瘍遺伝子ＷＮＴ７Ｂの発現に陽性）、ホルモン耐性前立腺がんＰＣ−３のヒトがん細胞株、ヒト急性Ｔ−白血病細胞株ＭＯＬＴ−４（突然変異体Ｐ５３腫瘍遺伝子の発現を示さない）およびＫＲＡＳ腫瘍遺伝子(p.G12S c.34G>A)の突然変異を生じるヒト肺がん細胞株Ａ５４９に対して本発明の以下の化合物の細胞増殖抑制−細胞毒性効果を説明する。
【０１１７】
【化３７】
2019521146.tif 000039
【０１１８】
研究された化合物のＲ３置換基は、表１に定義されている。
【０１１９】
【表１】
2019521146.tif 000040
【０１２０】
卵巣がん細胞株の具体的特徴
SKOV-3(SKOV-3) (ATCC HTB 77)およびOVCAR-3(ATCC（登録商標）; HTB-161TM)
ヒト卵巣腺がん細胞は上皮様の形態を有する単層培養で、容易に増殖する。ＳＫＯＶ−３は腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）および他の細胞毒（例えばシスプラチンおよびアドリアマイシン）に耐性があり、ＯＶＣＡＲ−３はアドリアマイシン、シスプラチンおよびメルファランに耐性がある。これらの細胞株は、アンドロゲン、エストロゲンおよびプロゲステロン受容体を発現する。ＳＫＯＶ−３またはＯＶＣＡＲ−３細胞をヌードマウス（ＳＣｌＤマウス）の皮下に埋め込むと、中分化腫瘍が発現し、その結果得られたモデルはヒトにおける原発性卵巣線がんに似ている。
【０１２１】
UWB1.289 (ATCC CRL-2945)
ヒト卵巣腺がん細胞（単層培養で容易に増殖する）は、上皮がん細胞の形態を持ち、エストロゲンおよびプロゲステロン受容体を発現しない。また、ＵＷＢ１．２８９細胞は、ｐ５３がん抑制遺伝子および陽ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ）発現を変異させて、官能性ＢＲＣＡ１遺伝子を持たず、サイトケラチン７（ＣＫ−７）、カルレチニンおよびウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ）の発現に陽性である。最後に、これらは電離放射線に感受性がある。
【０１２２】
UBWB1.289+BRCA1 (ATCC CRL-2946)
ヒト卵巣腺がん細胞はUBWB1.289から生じ、ＢＲＣＡ１遺伝子の存在が確認された。それらは培養で容易に増殖して単層を作りだし、上皮がん細胞の形態を持ち、エストロゲンおよびプロゲステロン受容体を発現しない。それらは、電離放射線および放射免疫化学薬品（例えば、アルキル化剤）に影響されにくい。また、ＵＷＢ1.289細胞は、ｐ５３がん抑制遺伝子を変異させ、サイトケラチン７（ＣＫ−７）、カルレチニンおよびウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ）の発現に陽性である。
【０１２３】
細胞培養
すべてのがん細胞株を、液体窒素タンク中、２．５ｍｌ中の冷凍バイアル瓶（Corning-Costar、マサチューセッツ州ケンブリッジ）に保存する。凍結防止剤として作用するＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）を加えて細胞を溶解させる可能性のある氷晶の形成を防止する。細胞をＴ−７５フラスコ（Corning-Costar、マサチューセッツ州ケンブリッジ）中で単層培養物として増殖させ、100%相対湿度の5%CO2インキュベータ中で３７℃に維持する。使用した培地は、10%ウシ胎仔血清（ＦＢＳ、ギブコ）および１％抗生物質（100IU/mlのペニシリン/100μg/mlのストレプトマイシン）を補充し、ろ過（Corning-Costarフィルタ、直径0.2μm）により滅菌したMcCoy 5a培地、RPMI-1640、及び10%ウシ胎仔血清（ＦＢＳ、ギブコ）および1%抗生物質（100 IU/mlのペニシリン/100μg/mlのストレプトマイシン）を補充した50%RPMI-1640(カタログ番号30-2001)プラス50%乳房上皮増殖培地(Mammary Epithelial Growth Medium ＝MEGM)である。継代は次のように３〜４日ごとに行う。細胞を無菌リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）：8 g/lのNaCl、0.2g/lのKCl、1.15g/lのNa2HPO4και、0.2g/lのKH2PO4. pH:7,4) で洗浄し、２〜３ｍｌの0.05%トリプシン（ギブコ１：２５０）および0.02%EDTAを加えて単層を被覆し、３７℃で５〜１０分間フラスコをインキュベートする。トリプシン−ＥＤＴＡは、主にフラスコから細胞を分離して、単一細胞懸濁液を調製するために用いられる。最後に、細胞数をヌーバウアー室を用いて直接計数で測定することができ、トリパン青で細胞を染色して細胞生存度を決定する。
【０１２４】
実験室(in vitro)研究
実証研究において、化合物型（Ｉ）の生体外効果を卵巣がん細胞株UWB1.289、UWB1.289+BRCA1 και SKOV-3に対して評価した。これらの細胞を９６穴プレート（ＭＴＰ）に、ウェル毎に１×１０４細胞数／ｍｌの濃度に置き、5%CO2培養器内に３７℃で７２時間保ち、単層として増殖させた。最初の細胞の数の選択は、細胞株（実験中に細胞が指数関数的（ロガリズム）増殖期にあるという状態の）の増殖速度に従って行われた。２４時間後に、細胞を１〜１００μmol／lの試験化合物で４８時間処理した。３つのウェルを使用して各実験を行った。培養細胞の生存率は、以前に記載されている臭化３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウム（ＭＴＴ）代謝検定（Finlay GJ, Wilson WRおよびBaguley BC：Comparison of in vitro activity of cytotoxic drugs towards human carcinoma and leukaemia cell lines（ヒトがんおよび白血病細胞株に対する細胞毒の生体外活性の比較）．Eur J Cancer Clin. Oncol 22:655-662、1986; Alley MC, Scudiero DA, Monks A, Hursey ML, Czerwinski MJ, Fine DL, et al. Feasibility of drug screening with panels of human tumor cell lines using a microculture tetrazolium assay（微細培養テトラゾリウム検定を用いる人腫瘍細胞株のパネリストによる医薬品選別の実現可能性研究）Cancer Res 1988; 48:589-601）により評価した。ＭＴＴ(Sigma、米国ミズーリ州セントルイス)を5mg/ml濃度のPBSに溶解し、濾過滅菌後４℃で保存した。ＭＴＴ(保存液50μl)を各培養物に加え、３７℃で３時間培養して代謝を促した。ホルマザン結晶をＤＭＳＯ(100μl) に溶解した。転換された染料の吸光度をELISA読み取り装置(BioTek、米国バーモント州ウィヌースキー)を用いて波長540nmで測定した。
【０１２５】
５０％または総（１００％）増殖阻害（それぞれ、GI50およびTGI）を生成した各化合物の平均濃度ならびに培養細胞の５０％に対して細胞毒性を生じた化合物濃度［（最大半量阻害濃度(IC50)］を線形回帰方法を用いて算出した。７つの吸光度測定［時間２４時間(Ct24)、対照増殖７２時間(Ct72)、および５つの濃度水準(Tt72x)の薬剤の存在下の試験増殖］を用いて、増殖率（パーセント）を各レベルの薬剤濃度で算出した。パーセント増殖阻害率を国立がん研究所(NCI)に従って算出した：
Tt72x>Ct24の濃度に対しては[(Tt72x)-(Ct24)/(Ct72)-(Ct24)]×100で、Tt72x<Ct24の濃度に対しては[(Tt72x)-(Ct24)/Ct24]×100
GI50：細胞増殖の50%の阻害（増殖阻害率50%）が起こる平均濃度。値の算出は、次式に基づく：
(Tt72x)-(Ct24)/(Ct72)-(Ct24)×100＝50
TGI：細胞増殖の１００％の阻害（全増殖阻害）が起こる平均濃度。値は、次式に従って算出される：
(Tt72x)-(Ct24)/(Ct72)-(Ct24)×100＝0
IC50：細胞の50%（阻害濃度50%）を殺す平均濃度。値は、式に従って算出される：
(Tt72x)-(Ct24)/(Ct24)×100＝50
結果
結果をスチューデントｔ検定で分析した。Ｐ＜０．０５は、統計的に有意であるとみなされた。
【０１２６】
生体外研究の結果を表２に示す。
【０１２７】
【表２−１】
2019521146.tif 000041
【０１２８】
【表２−２】
2019521146.tif 000042
【０１２９】
１，２，４−トリアゾロ−［３，４−ｂ］−１，３，４−チアジアゾールの１２の誘導体ＴＳ１６７、ＴＳ７０、ＴＳ６１、ＴＳ６０、ＴＳ５９、ＴＳ５８、ＴＳ５１、ＴＳ５６、ＴＳ５４、ＴＳ５５、ＴＳ５２、ＴＳ６５は９つすべてのヒトがん細胞株におけるIC50>100μΜで試験した濃度で細胞毒性制がん活性より強力な細胞増殖抑止(IG50<100μΜ)を示した。
【０１３０】
実施例４
６匹のＣ５７ＢＩマウスに対する毒性の生体内(in vivo)研究
生体内急性毒性
化合物の急性毒性を100 mg/kgで始まる異なる濃度の試験による死亡率から評価した。試験化合物の治療用量は、LD10（動物の10%に対する致死用量）と定義される。腹腔の（ｉ．ｐ．）治療のために試験化合物の貯蔵液を使用の直前に調製した。これらの化合物をまず１０％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解した後、望ましい濃度のトウモロコシ油に懸濁させた。毒性研究に、６匹のＣ５７ＢＩ雌雄マウスを用いた。水と食品を入れた無菌ケージ内でマウスを恒温恒湿の状態に保った。急性毒性研究の結果を表３に示す。
【０１３１】
【表３】
2019521146.tif 000043
【０１３２】
すべての化合物が６匹のＣ５７ＢＩマウスに関してかなり低い急性毒性を生じたことは注目すべきである。試験された１，２，４トリアゾロ−［３，４−ｂ］−１，３，４−チアジアゾール誘導体の腹腔内投与による１０％致死量はすべて３５０ｍｇ／ｋｇを超えており、どの場合も５０％致死量には達しなかった。誘導体ＴＳ５０、ＴＳ６６、ＴＳ１６７、ＴＳ７１、ＴＳ５７、ＴＳ１６７、ＴＳ７０、ＴＳ６１、ＴＳ６０、ＴＳ５９、ＴＳ５８、ＴＳ５１、ＴＳ５６、ＴＳ５４、ＴＳ５５、ＴＳ５２およびＴＳ６５に関しては、より高い腹腔内投与用量で急性毒性は発現せず、１０％および５０％致死量に達しなかった（＞５００ｍｇ／ｋｇ）。
【国際調査報告】
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