(57)【要約】本開示は、細胞外サイトカイン結合ドメインおよび１もしくはこれより多くのＩＬ−２Ｒ鎖の細胞内シグナル伝達ドメインまたはそのシグナル伝達部分（複数可）を含む融合タンパク質であって、ここで上記サイトカイン結合ドメインが、ＩＬ−２結合ドメインではない融合タンパク質に関する。本開示はまた、ある種の疾患（例えば、がんまたは感染性疾患）を処置するための、このような融合タンパク質を発現する免疫細胞の使用に関する。
2019515672.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
融合タンパク質および抗原結合タンパク質を含む宿主細胞であって、
ここで該融合タンパク質は、サイトカイン結合ドメインまたはその一部を含む細胞外構成要素と、ＩＬ−２Ｒ細胞内部分、細胞内シグナル伝達ドメインまたはその一部を含む細胞内構成要素との間に配置された膜貫通ドメインを含み；そして
ここで該抗原結合タンパク質は、Ｔ細胞レセプター（ＴＣＲ）；キメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）；または必要に応じて複数の抗原結合タンパク質、例えば、ＴＣＲおよびＣＡＲである、
宿主細胞。
【請求項２】
第１の融合タンパク質、第２の融合タンパク質および必要に応じて抗原結合タンパク質を含む宿主細胞であって、
ここで該第１の融合タンパク質は、サイトカイン結合ドメインまたはその一部を含む細胞外構成要素と、ＩＬ−２Ｒγ、必要に応じてヒトＩＬ−２Ｒγ、細胞内部分または細胞内シグナル伝達ドメインもしくはその一部から構成されるか、これと少なくとも９０％同一性を有するか、あるいは必要に応じて配列番号１０と少なくとも９０％同一性を有する細胞内構成要素との間に配置された膜貫通ドメインを含み；
ここで該第２の融合タンパク質は、サイトカイン結合ドメインまたはその一部を含む細胞外構成要素と、ＩＬ−２Ｒβ、必要に応じてヒトＩＬ−２Ｒβ、細胞内シグナル伝達ドメインもしくはその一部および／またはＩＬ−４Ｒ、ＩＬ−７Ｒ、ＩＬ−９Ｒ、ＩＬ−１５ＲもしくはＩＬ−２１Ｒ鎖のシグナルドメインもしくはその一部から構成されるか、またはこれと少なくとも９０％同一性を有するか、あるいは必要に応じて、配列番号１２と少なくとも９０％同一性を有する細胞内構成要素との間に配置された膜貫通ドメインを含み；そして
ここで必要に応じた該抗原結合タンパク質は、Ｔ細胞レセプター（ＴＣＲ）；キメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）を含み；そして必要に応じて複数の抗原結合タンパク質、例えば、ＴＣＲおよびＣＡＲを含む、
宿主細胞。
【請求項３】
前記第１および／または第２の融合タンパク質の前記細胞外構成要素および／または前記細胞外構成要素は、ＣＳＦ２Ｒ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＳＦ３Ｒ、ＣＸＣＲ２、またはＣＣＲ８の、必要に応じてヒトＣＳＦ２Ｒ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＳＦ３Ｒ、ＣＸＣＲ２、またはＣＣＲ８の細胞外部分を含む、請求項１または２に記載の宿主細胞。
【請求項４】
前記融合タンパク質の前記サイトカイン結合ドメインは、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、もしくはＣＣＬ１の結合部位の少なくとも一部に特異的に結合するか、またはこれを含み、そして必要に応じてヒト配列を含むかまたはこれからなる、先行する請求項のいずれか１項に記載の宿主細胞。
【請求項５】
前記サイトカイン結合ドメインは、ＧＭ−ＣＳＦ結合ドメインであり、そして／または、必要に応じてヒトＣＳＦ２ＲであるＣＳＦ２Ｒの細胞外部分に由来するか、または該細胞外部分と少なくとも９０％同一性を有するか、あるいは必要に応じて配列番号９または配列番号１１に示される配列の細胞外部分と少なくとも９０％同一性を有する、先行する請求項のいずれか１項に記載の宿主細胞。
【請求項６】
前記融合タンパク質のならびに／または前記第１および／もしくは第２の融合タンパク質の前記膜貫通ドメインは、ＩＬ−２ＲＧ、ＩＬ−２ＲＢ、ＩＬ−２ＲＡ、ＩＬ−４Ｒ、ＩＬ−７Ｒ、ＩＬ−９Ｒ、ＩＬ−１５ＲまたはＩＬ−２１Ｒの、必要に応じてヒト起源のものの膜貫通ドメインを含む、先行する請求項のいずれか１項に記載の宿主細胞。
【請求項７】
前記融合タンパク質の前記膜貫通ドメインは、ＣＳＦ２ＲＡ、ＣＳＦ２ＲＢ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＳＦ３Ｒ、ＣＸＣＲ２、もしくはＣＣＲ８の、必要に応じてヒト起源のものの膜貫通ドメインを含むか、または必要に応じて、配列番号２２または２３と少なくとも９０％アミノ酸配列同一性を有する、先行する請求項のいずれか１項に記載の宿主細胞。
【請求項８】
前記膜貫通ドメインは、ＣＤ２、ＣＤ３ε、ＣＤ３δ、ＣＤ３ζ、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ９５（Ｆａｓ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４）、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２７２（ＢＴＬＡ）、ＣＤ２７３（ＰＤ−Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ−Ｌ１）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＣＤ２７９（ＰＤ−１）、ＣＤ３００、ＣＤ３５７（ＧＩＴＲ）、Ａ２ａＲ、ＤＡＰ１０、ＦｃＲα、ＦｃＲβ、ＦｃＲγ、Ｆｙｎ、ＧＡＬ９、ＫＩＲ、Ｌｃｋ、ＬＡＴ、ＬＲＰ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＯＴＣＨ１、ＮＯＴＣＨ２、ＮＯＴＣＨ３、ＮＯＴＣＨ４、ＰＴＣＨ２、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、Ｒｙｋ、Ｓｌｐ７６、ＳＩＲＰα、ｐＴα、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＩＭ３、ＴＲＩＭ、ＬＰＡ５、またはＺａｐ７０の、必要に応じてヒト起源のものの膜貫通ドメインを含む、先行する請求項のいずれか１項に記載の宿主細胞。
【請求項９】
前記宿主細胞は、該宿主細胞表面上でヘテロマルチマーを形成するように会合できる少なくとも２種の融合タンパク質を含む、先行する請求項のいずれか１項に記載の宿主細胞。
【請求項１０】
前記融合タンパク質は各々、異なる細胞外構成要素を含み、ここで該異なる細胞外構成要素は、機能的サイトカイン結合ドメインを形成するように互いと会合できる、請求項９に記載の宿主細胞。
【請求項１１】
前記異なる細胞外構成要素のうちの一方は、ＣＳＦ２Ｒα、必要に応じてヒトＣＳＦ２Ｒα、細胞外部分、細胞外サイトカイン結合ドメインもしくはその一部から構成されるか、またはこれと少なくとも９０％同一性を有するか、あるいは必要に応じて配列番号９と少なくとも９０％同一性を有し、他方の異なる細胞外構成要素は、ＣＳＦ２Ｒβ、必要に応じてヒトＣＳＦ２Ｒβ、細胞外部分、細胞外サイトカイン結合ドメインもしくはその一部から構成されるか、またはこれと少なくとも９０％同一性を有するか、あるいは必要に応じて配列番号１１と少なくとも９０％同一性を有する、請求項１０に記載の宿主細胞。
【請求項１２】
前記融合タンパク質は各々、異なる細胞内構成要素を含み、ここで該異なる細胞内構成要素は、機能的細胞内シグナル伝達ドメインを形成するように互いと会合できる、請求項９〜１１のいずれか１項に記載の宿主細胞。
【請求項１３】
前記異なる細胞内構成要素のうちの少なくとも一方は、ＩＬ−２Ｒγ細胞内部分、細胞内シグナル伝達ドメインもしくはその一部から構成されるか、またはこれと少なくとも９０％同一性を有するか、あるいは必要に応じて配列番号１０と少なくとも９０％同一性を有する、請求項１２に記載の宿主細胞。
【請求項１４】
前記異なる細胞内構成要素のうちの少なくとも一方は、ＩＬ−２Ｒβ、ＩＬ−４ＲＡ、ＩＬ−７Ｒ、ＩＬ−１５ＲＡ、またはＩＬ−２１Ｒ細胞内部分、細胞内シグナル伝達ドメインもしくはその一部から構成されるか、またはこれと少なくとも９０％同一性を有し、いずれの場合にも、個々に、必要に応じてヒト由来であるか、あるいは必要に応じて配列番号１２と少なくとも９０％同一性を有する、請求項１２または１３に記載の宿主細胞。
【請求項１５】
前記宿主細胞表面上の前記ヘテロマルチマーは、ヘテロダイマーまたはヘテロトリマーである、請求項９〜１４のいずれか１項に記載の宿主細胞。
【請求項１６】
前記一方の融合タンパク質は、配列番号１からなるか、配列番号１を含むか、または配列番号１と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有し、前記他方の融合タンパク質は、配列番号２からなるか、配列番号２を含むか、または配列番号２と少なくとも９０％％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有する、請求項１５に記載の宿主細胞。
【請求項１７】
前記抗原結合タンパク質は、Ｔ細胞レセプター（ＴＣＲ）であるか、または必要に応じて抗原特異的ＴＣＲである、先行する請求項のいずれか１項に記載の宿主細胞。
【請求項１８】
前記抗原特異的ＴＣＲは、前記宿主細胞および／または該宿主細胞が投与される宿主に対して外因性である、先行する請求項のいずれか１項に記載の宿主細胞。
【請求項１９】
前記ＴＣＲは、抗原：：ＨＬＡ複合体に高親和性で結合する、請求項１７または１８に記載の宿主細胞。
【請求項２０】
前記高親和性結合は、１０７  Ｍ−１に等しいかまたはこれより大きなＫａを有する、請求項１９に記載の宿主細胞。
【請求項２１】
前記ＴＣＲは、ＨＬＡクラスＩ拘束性抗原に対して特異的である、請求項１７〜２０のいずれか１項に記載の宿主細胞。
【請求項２２】
前記抗原は、がん特異的抗原である、先行する請求項のいずれか１項に記載の宿主細胞。
【請求項２３】
前記がん特異的抗原は、ＷＴ−１、メソテリン、ＲＯＲ１またはサイクリン−Ａ１を含む、請求項２２に記載の宿主細胞。
【請求項２４】
前記ＴＣＲは、Ｃ４と称されるＷＴ−１特異的ＴＣＲである、先行する請求項のいずれか１項に記載の宿主細胞。
【請求項２５】
前記抗原結合タンパク質は、ＣＡＲである、先行する請求項のいずれか１項に記載の宿主細胞。
【請求項２６】
前記キメラ抗原レセプターは、細胞外抗原結合ドメインおよびＴ細胞に一次シグナルを送達できる細胞内シグナル伝達ドメイン、ならびに必要に応じて共刺激ドメインを含む、請求項２５に記載の宿主細胞。
【請求項２７】
前記細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激分子の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、請求項２６に記載の宿主細胞。
【請求項２８】
前記共刺激分子は、ＣＤ２８、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、またはＩＣＯＳを含む、請求項２７に記載の宿主細胞。
【請求項２９】
前記細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ε、ＣＤ３δ、ＣＤ３ζ、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ４７、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＣＤ３５７（ＧＩＴＲ）、ＣＡＲＤ１１、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＦｃＲα、ＦｃＲβ、ＦｃＲγ、Ｆｙｎ、Ｌｃｋ、ＬＡＴ、ＬＲＰ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＯＴＣＨ１、ＮＯＴＣＨ２、ＮＯＴＣＨ３、ＮＯＴＣＨ４、ＲＯＲ２、Ｒｙｋ、Ｓｌｐ７６、ｐＴα、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＲＩＭ、Ｚａｐ７０、ＰＴＣＨ２の細胞内シグナル伝達ドメイン、もしくはこれらのうちのいずれかの組み合わせを含み、そして／または前記キメラ抗原レセプターの該細胞内シグナル伝達部分は、必要に応じてＣＤ３  ζに由来する一次活性化シグナル伝達ドメインを含み、共刺激ドメインを含まず、そして／またはＣＤ２８シグナル伝達ドメイン、４−１ＢＢシグナル伝達ドメインおよび／もしくはＩＣＯＳシグナル伝達ドメインを含まない、請求項２６〜２８のいずれか１項に記載の宿主細胞。
【請求項３０】
前記細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）の共刺激ドメイン、またはこれらのうちのいずれかの組み合わせを含む、請求項２６〜２９のいずれか１項に記載の宿主細胞。
【請求項３１】
前記細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）もしくはＣＤ２８の共刺激ドメイン、またはこれらのうちのいずれかの組み合わせを含む、請求項２６〜３０のいずれか１項に記載の宿主細胞。
【請求項３２】
前記細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８の共刺激ドメインを含む、請求項２６〜３１のいずれか１項に記載の宿主細胞。
【請求項３３】
前記細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）の共刺激ドメインを含む、請求項２６〜３２のいずれか１項に記載の宿主細胞。
【請求項３４】
前記細胞内シグナル伝達ドメインは、第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、請求項２６〜３３のいずれか１項に記載の宿主細胞。
【請求項３５】
前記第２の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、請求項３４に記載の宿主細胞。
【請求項３６】
前記ＣＡＲ抗原結合ドメインは、前記抗原に対して特異的な抗体結合フラグメントまたはｓｃＦｖである、請求項２６〜３３のいずれか１項に記載の宿主細胞。
【請求項３７】
前記宿主細胞は、少なくとも２種の抗原結合タンパク質を含み、ここで該少なくとも２種の抗原結合タンパク質は、ＴＣＲおよびＣＡＲを含む、先行する請求項のいずれか１項に記載の宿主細胞。
【請求項３８】
抗原に対して特異的なＴＣＲまたはキメラ抗原レセプターを含むＴ細胞における前記融合タンパク質の発現は、該Ｔ細胞と実質的に同じであるが、該融合タンパク質を含まない細胞と比較して、該抗原の結合に応答しておよび／または被験体への投与後に、該Ｔ細胞によって、生存、拡大、細胞毒性、サイトカイン分泌、および／または複数回の刺激への応答において、少なくとも約１．５倍、２倍、または３倍の増加を生じる、ならびに／あるいは該細胞が投与される被験体の生存の時間、無病生存期間、または１もしくはこれより多くの疾患症状の改善において少なくとも約１．５倍、２倍、または３倍の増加を生じる、請求項１〜３７のいずれかに記載の宿主細胞。
【請求項３９】
前記宿主細胞は、免疫系細胞である、先行する請求項のいずれか１項に記載の宿主細胞。
【請求項４０】
前記免疫系細胞は、Ｔ細胞である、請求項３９に記載の宿主細胞。
【請求項４１】
前記Ｔ細胞は、ＣＤ４＋  Ｔ細胞である、請求項４０に記載の宿主細胞。
【請求項４２】
前記Ｔ細胞は、ＣＤ８＋  Ｔ細胞である、請求項４０に記載の宿主細胞。
【請求項４３】
請求項１〜４２のいずれか１項に記載の融合タンパク質および抗原結合タンパク質をコードする核酸分子を含む、宿主細胞。
【請求項４４】
ベクターを含む宿主細胞であって、ここで該ベクターは、請求項１〜４２のいずれか１項に記載の融合タンパク質および抗原結合タンパク質をコードする核酸分子を含む、宿主細胞。
【請求項４５】
前記ベクターは、ウイルスベクターである、請求項４４に記載の宿主細胞。
【請求項４６】
前記ウイルスベクターは、レンチウイルスベクターまたはレトロウイルスベクターである、請求項４５に記載の宿主細胞。
【請求項４７】
前記ウイルスベクターは、レンチウイルスベクターである、請求項４６に記載の宿主細胞。
【請求項４８】
前記ＴＣＲは、抗原特異的ＴＣＲである、先行する請求項のいずれか１項に記載の宿主細胞。
【請求項４９】
被験体において疾患を処置するための方法であって、該方法は、請求項１〜４８のいずれか１項に記載の宿主細胞、および／または請求項６２〜６６のいずれかに記載の融合タンパク質、核酸、ベクター、組成物、または複合体を、該被験体に投与するステップを包含する方法。
【請求項５０】
前記疾患は、ウイルス感染症、細菌感染症、がん、および自己免疫疾患からなる群より選択される、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記疾患は、がんである、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記がんは、腫瘍である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記腫瘍は、血液腫瘍であり、該血液腫瘍は、必要に応じてＣＬＬもしくはＭＣＬであり、そして／または固形腫瘍であり、該固形腫瘍は、必要に応じて乳がん、肺がん、卵巣がん、もしくは膵臓がんの腫瘍であり、該固形腫瘍は、必要に応じて肺腺癌、腺癌、扁平上皮癌、小細胞癌、非定型カルチノイド、またはトリプルネガティブ乳がんである、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記腫瘍は、原発性腫瘍、転移性腫瘍、または両方を含む、請求項５２または５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記腫瘍細胞は、ＷＴ−１、メソテリン、ＲＯＲ１またはサイクリン−Ａ１を過剰発現する、請求項５２〜５４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５６】
前記被験体は、ヒトである、請求項４９〜５５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５７】
ウイルス感染症、細菌感染症、がん、または自己免疫疾患を処置することにおける使用のための請求項１〜４８のいずれか１項に記載の宿主細胞。
【請求項５８】
サイトカイン結合ドメインの全てまたは一部を含む細胞外構成要素、膜貫通ドメインおよび１種もしくはこれより多くの種のＩＬ−２Ｒ鎖のシグナル伝達ドメインまたはそのシグナル伝達部分（複数可）を含む細胞内構成要素を含む融合タンパク質であって、ここで該サイトカイン結合ドメインは、ＩＬ−２結合ドメインではない、融合タンパク質。
【請求項５９】
請求項５８に記載の融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む核酸であって、必要に応じて、ここで融合タンパク質は、配列番号６もしくは７のポリヌクレオチド配列を含むか、または該ポリヌクレオチドからなるか、または該ポリヌクレオチドと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９８％の同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされる、核酸。
【請求項６０】
（ａ）前記融合タンパク質は、第１の融合タンパク質であり、前記サイトカイン結合ドメインの前記全てまたは一部は、該サイトカイン結合ドメインの第１の部分であり、（ｂ）前記核酸は、第２の融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列をさらに含み、該第２の融合タンパク質は、該サイトカイン結合ドメインの第２の部分、第２の膜貫通ドメインおよび第２のＩＬ−２Ｒ鎖シグナル伝達ドメインもしくはそのシグナル伝達部分を含む第２の細胞内構成要素を含み、そして必要に応じて抗原レセプターもしくはその一部をコードするヌクレオチド配列をさらに含む、請求項５９に記載の核酸。
【請求項６１】
請求項５９または６０に記載の核酸を含む、ベクター。
【請求項６２】
請求項５９に記載の核酸およびさらなる核酸を含む組成物であって、ここで（ａ）前記融合タンパク質は、第１の融合タンパク質であり、前記サイトカイン結合ドメインの前記全てもしくは一部は、該サイトカイン結合ドメインの第１の部分であり、そして（ｂ）該さらなる核酸は、第２の融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含み、該第２の融合タンパク質は、該サイトカイン結合ドメインの第２の部分、第２の膜貫通ドメイン、および第２のＩＬ−２Ｒ鎖シグナル伝達ドメインもしくはそのシグナル伝達部分を含む第２の細胞内構成要素を含み、ここで該核酸およびさらなる核酸は、必要に応じて同じまたは異なるベクターから発現され、そして必要に応じて抗原レセプターもしくはその一部をコードする核酸をさらに含む、組成物。
【請求項６３】
第１の融合タンパク質である請求項５８に記載の融合タンパク質を含み、そして第２の融合タンパク質をさらに含む分子複合体であって、該第２の融合タンパク質は、前記サイトカイン結合ドメインの第２の部分、第２の膜貫通ドメインおよび第２のＩＬ−２Ｒ鎖シグナル伝達ドメインもしくはそのシグナル伝達部分を含む第２の細胞内構成要素を含み、ここで該第１のおよび第２の融合タンパク質は、共有結合的相互作用または非共有結合的相互作用を介して、複合体で存在する、分子複合体。
【請求項６４】
請求項５８〜６３のいずれかに記載の融合タンパク質、核酸、ベクター、組成物、または複合体であって、ここで前記第１および／または第２の融合タンパク質は、必要に応じて配列番号９もしくは配列番号１１と少なくとも９０％同一性を有する、ヒトＧＭ−ＣＳＦＲの細胞外構成要素、および必要に応じて配列番号１０もしくは配列番号１２と少なくとも９０％同一性を有する、ヒトＩＬ−２Ｒ複合鎖の細胞内シグナル伝達部分を含む、融合タンパク質、核酸、ベクター、組成物、または複合体。
【請求項６５】
前記第１のおよび／もしくは第２の融合タンパク質のうちの一方は、ヒトＣＳＦ２Ｒβ鎖の細胞外構成要素およびヒトＩＬ−２Ｒβ鎖の細胞内シグナル伝達部分を含み、ここで該ＣＳＦ２Ｒβ鎖およびヒトＩＬ−２Ｒβ鎖の細胞内シグナル伝達部分は、必要に応じてそれぞれ、配列番号１１および配列番号１２と少なくとも９０％同一性を有し、そして／または該第１のおよび／もしくは第２の融合タンパク質のうちの一方は、ヒトＣＳＦ２Ｒα鎖の細胞外構成要素およびヒトＩＬ−２Ｒγ鎖の細胞内シグナル伝達部分を含み、ここで該ＣＳＦ２Ｒβ鎖およびヒトＩＬ−２Ｒβ鎖の細胞内シグナル伝達部分は、必要に応じてそれぞれ、配列番号９および配列番号１０と少なくとも９０％同一性を有する、請求項６４に記載の融合タンパク質、核酸、ベクター、組成物、または複合体。
【請求項６６】
請求項１〜４８のいずれかに記載の宿主細胞の１種または複数種の融合タンパク質をコードする、請求項５８〜６３のいずれかに記載の融合タンパク質、核酸、ベクターまたは組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
配列に関する陳述
本出願と関連する配列表は、紙によるコピーの代わりにテキスト形式で提供され、本明細書に参考として援用される。その配列表を含むテキストファイルの名称は、３６００５６＿４４２ＷＯ＿ＳＥＱＵＥＮＣＥ＿ＬＩＳＴＩＮＧ．ｔｘｔである。そのテキストファイルは、４８．８  ＫＢであり、２０１７年４月２０日に作成され、ＥＦＳ−Ｗｅｂを介して電子的に提出されている。
【背景技術】
【０００２】
背景
Ｔ細胞ベースの免疫療法は、腫瘍反応性Ｔ細胞が腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬｓ）の集団の中で見出されたときに開発され始めた（Ｃｌａｒｋら，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ２９：７０５，  １９６９）。養子Ｔ細胞移入として公知の１つのストラテジーは、状況によっては、腫瘍反応性に関して予め選択された腫瘍浸潤リンパ球の単離、ＩＬ−２の存在下で抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８抗体によって誘導される腫瘍反応性Ｔ細胞のクローン性拡大、および最終的には、腫瘍を有する患者に拡大した細胞集団を（化学療法およびＩＬ−２の反復投与とともに）注入して戻すことを含む（Ｄｕｄｌｅｙら，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２９８：８５０，  ２００２）。腫瘍浸潤リンパ球での養子Ｔ細胞治療のこの形態は、技術的に扱いづらい可能性があり、黒色腫を有する患者の僅かな割合においてのみ完全寛解をもたらし、他のがんにおいては希に有効である（Ｂｅｓｓｅｒら，  Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  １６：２６４６，  ２０１０）。
【０００３】
腫瘍反応性Ｔ細胞クローンの単離は、別の免疫療法アプローチ（特定の抗原に対して特異的な組換えＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）の生成）の開発をもたらし、これは、例えば、ベクター送達系を使用して、腫瘍細胞上に発現される主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子（ヒトにおいてヒト白血球抗原（ＨＬＡ）分子として公知）によって提示される腫瘍関連ペプチドのような所望の標的に対する特異性を付与するために、Ｔ細胞へと導入され得る。別のアプローチは、一次シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＣＲシグナル伝達ドメインまたは状況によっては、共刺激シグナル伝達ドメイン）のようなエフェクタードメインを含む１種またはこれより多くの種の細胞内構成要素に連結された合成レセプター（キメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）といわれ、一般に抗原結合ドメインを含み、該レセプターは、例えば、抗腫瘍治療の状況において、腫瘍特異的抗原または腫瘍関連抗原に結合し得る）を導入する。ＴＩＬの投与とは異なり、操作されたＴＣＲまたはＣＡＲ  Ｔ細胞免疫療法の基本的手順は一般に、腫瘍標的化部分をコードする導入遺伝子でヒトＴ細胞を遺伝的に改変すること、その組換えＴ細胞のエキソビボ拡大、およびその拡大した組換えＴ細胞を患者へと輸注して戻すことである。
【０００４】
組換えＴＣＲを発現するＴ細胞を使用する養子Ｔ細胞療法は、特に、ある種のＢ細胞がんで有望な臨床上の利益を有することが示されてきた。しかし、有効なＴ細胞活性化はしばしば、同時の共刺激シグナルを要求するかまたはそれによって増強される（Ｃｈｅｎ  ａｎｄ  Ｆｌｉｅｓ，  Ｎａｔ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １３：  ２２７−２４２，  ２０１３）。腫瘍微小環境において、共刺激分子は、概してダウンレギュレートされる。結果として、ＩＬ−２を介する外因性刺激は、代表的には、がん抗原に対して特異的な組換えＴＣＲを発現するＴ細胞にとって必要である。
【０００５】
Ｔ細胞の活性化は、ＴＣＲが抗原提示細胞（ＡＰＣ）上のＭＨＣにおいて提示される特異的ペプチドを結合する場合に開始される（Ｒｏｓｓｙら，  Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ３：１，  ２０１２）。複数のサイトカイン（ＩＬ−２を含む）が、Ｔ細胞増殖および生存に影響を及ぼし得る。Ｔ細胞応答の大きさは、サイトカインレセプターを通じてＴ細胞へと送達されるシグナルによって一部調節される。そのＩＬ−２レセプター（ＩＬ−２Ｒ）複合体は、特有のα鎖（ＣＤ２５）、ＩＬ−１５レセプターと共有されるβ鎖、ならびにＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−９、およびＩＬ−１５レセプター（これらは全て、増殖シグナルをも送達し得る）と共有されるγ鎖から構成されるヘテロトリマーである（Ｎｅｌｓｏｎ  ａｎｄ  Ｗｉｌｌｅｒｆｏｒｄ，  Ａｄｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ７０：１  ，  １９９８）。
【０００６】
ＣＤ８＋  Ｔ細胞は、エフェクターＴ細胞（ＣＴＬ）への分化後にＩＬ−２を生成する能力を概して失う（Ａｒｕｇａら，  Ｊ．  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｂｉｏｌ．  ６１：５０７，  １９９７）。分化したエフェクターＣＤ８＋  Ｔ細胞はまた、多くのサイトカイン（顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）が挙げられる）を分泌する能力を保持する（Ａｒｕｇａら，  １９９７）が、ＧＭ−ＣＳＦレセプターを発現しない。外因性ＩＬ−２を全身的に投与することは、ＣＴＬ寿命をインビボで延ばすために使用され得る（Ｃｈｅｅｖｅｒ  ａｎｄ  Ｃｈｅｎ，  Ｉｍｍｕｎｏ．  Ｒｅｖ．  １５７：１７７，  １９９７）が、ＩＬ−２処置は、重篤な毒性と関連してきた（Ｄａｌｇｌｅｉｓｈ，  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．  １：８３，  １９９４）。
【０００７】
インビボでの応答性ＣＤ８＋  Ｔ細胞における、ＩＬ−２Ｒによる増強されたシグナル伝達および有効性が、免疫療法分野において未だに必要である。本開示の実施形態は、これらの必要性に対処し、他の関連する利点を提供する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｃｌａｒｋら，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ２９：７０５，  １９６９
【非特許文献２】Ｄｕｄｌｅｙら，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２９８：８５０，  ２００２
【非特許文献３】Ｂｅｓｓｅｒら，  Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  １６：２６４６，  ２０１０
【非特許文献４】Ｃｈｅｎ  ａｎｄ  Ｆｌｉｅｓ，  Ｎａｔ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １３：  ２２７−２４２，  ２０１３
【非特許文献５】Ｒｏｓｓｙら，  Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ３：１，  ２０１２
【非特許文献６】Ｎｅｌｓｏｎ  ａｎｄ  Ｗｉｌｌｅｒｆｏｒｄ，  Ａｄｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ７０：１  ，  １９９８
【非特許文献７】Ａｒｕｇａら，  Ｊ．  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｂｉｏｌ．  ６１：５０７，  １９９７
【非特許文献８】Ｃｈｅｅｖｅｒ  ａｎｄ  Ｃｈｅｎ，  Ｉｍｍｕｎｏ．  Ｒｅｖ．  １５７：１７７，  １９９７
【非特許文献９】Ｄａｌｇｌｅｉｓｈ，  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．  １：８３，  １９９４
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】図１は、定量的ＰＣＲ（データは、３回の、独立して導かれた、原発性浸潤腫瘍（膵管腺癌（ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｄｕｃｔａｌ  ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ）、ＰＤＡ）および対をなす転移性細胞調製物の平均±ＳＥＭを表す）によって決定される場合の選択したサイトカインおよびケモカインの相対的遺伝子発現を示し、浸潤前細胞（preinvasive  cell）における発現に対して正規化する。
【図２】図２は、本開示の例示的融合タンパク質の図示である。第１の融合タンパク質は、ＣＳＦ２Ｒαに由来する細胞外構成要素およびＩＬ−２Ｒγに由来する細胞内構成要素を含み、第２の融合タンパク質は、ＣＳＦ２Ｒβに由来する細胞外構成要素およびＩＬ−２Ｒβに由来する細胞内構成要素を含む。その図解は、細胞膜（例えば、Ｔ細胞膜）に配置され、複合体（これはヘテロダイマーである）を形成する融合タンパク質を示す。
【図３】図３Ａおよび３Ｂは、（Ａ）野生型およびＭｓｌｎ−／−マウスから単離された最高のアビディティーのＭＳＬＮ４０６−４１４特異的Ｔ細胞クローンからクローニングしたＶα４およびＶβ９鎖のＣＤＲ３配列；ならびに（Ｂ）養子移入後に、ＧＭ−ＣＳＦＲ細胞外モチーフを発現した動物の血液中のドナー（Ｔｈｙ１．１＋／Ｖβ９＋に対してゲーティング（メソテリン特異的ＴＣＲ１０４５＋を示す））ＣＤ８＋  Ｔ細胞のパーセンテージのフローサイトメトリー評価の結果（左パネル）を示す。Ｔ細胞上のモチーフの検出は、ＧＭ−ＣＳＦ：：ＩＬ−２Ｒ融合タンパク質の発現を示した。単球の染色（右パネル）は、ＧＭ−ＣＳＦＲを発現し、陽性コントロールとして供した。
【図４Ａ】図４Ａ〜４Ｃは、（Ａ）養子移入後経時的に（０日目、５日目、１０日目、１５日目、２０日目、２５日目に）血液中で検出されるドナー（Ｔｈｙ１．１＋、ＣＤ８＋に対してゲーティング）Ｔ細胞の全体的パーセンテージ；（Ｂ）０日目および１４日目での血液中のドナー（Ｔｈｙ１．１＋／Ｖβ９＋に対してゲーティング）ＣＤ８＋  Ｔ細胞のパーセンテージ（それぞれ、左パネルおよび右パネル）（ここでＧＭ−ＣＳＦＲ細胞外モチーフが検出され、これはＧＭ−ＣＳＦ：：ＩＬ−２Ｒ融合タンパク質の発現を示した）を示し；（Ｃ）融合タンパク質が検出されなかったもの（「ＴＣＲ１０４５」）と比較して、ＧＭ−ＣＳＦ：：ＩＬ−２Ｒ融合タンパク質（「ＧＭ／ＩＬ２Ｒ  ＴＣＲ１０４５」）を発現する細胞によって表される血液中のドナー細胞の相対的パーセンテージを示し、これは、融合タンパク質が、この研究においてメソテリン標的化ＴＣＲ１０４５発現Ｔ細胞に生存および／または拡大の利点を提供したことを示す。
【図４Ｂ】図４Ａ〜４Ｃは、（Ａ）養子移入後経時的に（０日目、５日目、１０日目、１５日目、２０日目、２５日目に）血液中で検出されるドナー（Ｔｈｙ１．１＋、ＣＤ８＋に対してゲーティング）Ｔ細胞の全体的パーセンテージ；（Ｂ）０日目および１４日目での血液中のドナー（Ｔｈｙ１．１＋／Ｖβ９＋に対してゲーティング）ＣＤ８＋  Ｔ細胞のパーセンテージ（それぞれ、左パネルおよび右パネル）（ここでＧＭ−ＣＳＦＲ細胞外モチーフが検出され、これはＧＭ−ＣＳＦ：：ＩＬ−２Ｒ融合タンパク質の発現を示した）を示し；（Ｃ）融合タンパク質が検出されなかったもの（「ＴＣＲ１０４５」）と比較して、ＧＭ−ＣＳＦ：：ＩＬ−２Ｒ融合タンパク質（「ＧＭ／ＩＬ２Ｒ  ＴＣＲ１０４５」）を発現する細胞によって表される血液中のドナー細胞の相対的パーセンテージを示し、これは、融合タンパク質が、この研究においてメソテリン標的化ＴＣＲ１０４５発現Ｔ細胞に生存および／または拡大の利点を提供したことを示す。
【図４Ｃ】図４Ａ〜４Ｃは、（Ａ）養子移入後経時的に（０日目、５日目、１０日目、１５日目、２０日目、２５日目に）血液中で検出されるドナー（Ｔｈｙ１．１＋、ＣＤ８＋に対してゲーティング）Ｔ細胞の全体的パーセンテージ；（Ｂ）０日目および１４日目での血液中のドナー（Ｔｈｙ１．１＋／Ｖβ９＋に対してゲーティング）ＣＤ８＋  Ｔ細胞のパーセンテージ（それぞれ、左パネルおよび右パネル）（ここでＧＭ−ＣＳＦＲ細胞外モチーフが検出され、これはＧＭ−ＣＳＦ：：ＩＬ−２Ｒ融合タンパク質の発現を示した）を示し；（Ｃ）融合タンパク質が検出されなかったもの（「ＴＣＲ１０４５」）と比較して、ＧＭ−ＣＳＦ：：ＩＬ−２Ｒ融合タンパク質（「ＧＭ／ＩＬ２Ｒ  ＴＣＲ１０４５」）を発現する細胞によって表される血液中のドナー細胞の相対的パーセンテージを示し、これは、融合タンパク質が、この研究においてメソテリン標的化ＴＣＲ１０４５発現Ｔ細胞に生存および／または拡大の利点を提供したことを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
詳細な説明
本開示は、宿主細胞（例えば、免疫細胞）におけるシグナル伝達を調整する融合タンパク質を提供する。例えば、本開示の融合タンパク質は、ヒトＴ細胞への活性化または増殖シグナルを提供し得、ここで上記Ｔ細胞は、必要に応じて、好ましい抗原特異的Ｔ細胞レセプター（ＴＣＲ）もしくはキメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）、または両方を有するように操作され得る。例えば、これらの融合タンパク質は、目的のサイトカインまたはケモカインと相互作用して、抗原特異的ＴＣＲまたはＣＡＲを含むT細胞などのT細胞に、生存および／または拡大の利点を提供することができ、これは、腫瘍微小環境における効力の改善を含む、持続性および移入した細胞への曝露を改善するための構築物の有用性と一致する。
【００１１】
ある種の局面において、本開示は、融合タンパク質を含む宿主細胞（例えば、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞）、融合タンパク質をコードするベクター、および種々の治療適用（被験体における疾患（例えば、がん、感染性疾患）の処置を含む）のための融合タンパク質を含むＴ細胞を活性化するための方法を提供する。
【００１２】
本明細書本文において、任意の濃度範囲、パーセンテージ範囲、比の範囲、または整数範囲は、別段示されなければ、その記載される範囲内の任意の整数および適切な場合には、その分数（例えば、整数の１／１０および１／１００）の値を含むことが理解されるべきである。また、任意の物理的特徴（例えば、ポリマーサブユニット、サイズまたは厚み）に関連する本明細書で記載される任意の数値範囲は、別段示されなければ、その記載される範囲内の任意の整数を含むことが理解されるべきである。本明細書で使用される場合、用語「約（ａｂｏｕｔ）」とは、別段示されなければ、その示される範囲、値、または構造の±２０％を意味する。用語「１つの、ある（ａ）」および「１つの、ある（ａｎ）」とは、本明細書で使用される場合、列挙された構成要素の「１またはこれより多く（ｏｎｅ  ｏｒ  ｍｏｒｅ）」に言及することが理解されるべきである。選択肢（例えば、「もしくは、または（ｏｒ）」）の使用は、その選択肢のうちの一方、両方、またはその任意の組み合わせのいずれかを意味することが理解されるべきである。本明細書で使用される場合、用語「含む、包含する（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「有する（ｈａｖｅ）」、および「含む、包含する（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」は、類義語として使用され、これらの用語およびその変形は、非限定的であると解釈されることが意図される。
【００１３】
用語「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」とは、請求項の範囲を、特定された材料もしくはステップに、または特許請求される発明の基本的特徴に実質的に影響を及ぼさない範囲に限定する。例えば、タンパク質ドメイン、領域、もしくはモジュール（例えば、結合ドメイン、ヒンジ領域、リンカーモジュール）またはタンパク質（１またはこれより多くのドメイン、領域、またはモジュールを有し得る）は、ドメイン（複数可）、領域（複数可）もしくはモジュール（複数可）またはタンパク質のアミノ酸配列が、組み合わせにおいて、ドメイン、領域、もしくはモジュールまたはタンパク質の長さのうちの多くても２０％（例えば、多くても１５％、１０％、８％、６％、５％、４％、３％、２％、または１％）に寄与し、そのドメイン、領域、モジュールまたはタンパク質の活性（例えば、結合タンパク質の標的結合親和性）に実質的に影響を及ぼさない（すなわち、４０％以下、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、または１％など、５０％を超えてその活性を低下させない、）伸長、欠失、変異、またはこれらのうちのいずれかの組み合わせ（例えば、アミノ末端もしくはカルボキシ末端における、またはドメイン間の、アミノ酸）を含む場合、特定のアミノ酸配列「から本質的になる」。
【００１４】
本明細書で使用される場合、「異種の」または「非内因性の」または「外因性の」とは、宿主細胞もしくは被験体に対して天然でない任意の遺伝子、タンパク質、化合物、分子、もしくは活性に言及するか、または構造、活性もしくは両方が天然の分子と変異した分子との間でのように異なるように変化もしくは変異した、宿主もしくは宿主細胞に対して天然の任意の遺伝子、タンパク質、化合物、分子もしくは活性である。ある種の実施形態において、異種の、非内因性の、または外因性の分子（例えば、レセプター、リガンド）は、宿主細胞または被験体に対して内因性でなくてもよいが、代わりに、このような分子をコードする核酸は、結合体化、形質転換、トランスフェクション、エレクトロポレーションなどによって宿主細胞に付加されていてもよく、ここでその付加された核酸分子は、宿主細胞ゲノムへと組みこまれ得るか、または染色体外遺伝物質として（例えば、プラスミドもしくは他の自己複製性のベクターとして）存在し得る。用語「相同な」または「ホモログ」とは、宿主細胞、種、もしくは株の中で見出されるか、またはこれらに由来する分子または活性に言及する。例えば、異種のもしくは外因性の分子またはその分子をコードする遺伝子は、それぞれ、天然の宿主もしくは宿主細胞分子またはその分子をコードする遺伝子に相同であり得るが、変化した構造、配列、発現レベルまたはこれらの組み合わせを有し得る。非内因性の分子は、同じ種、異なる種、またはこれらの組み合わせに由来し得る。
【００１５】
本明細書で使用される場合、用語「内因性の」または「天然の（ｎａｔｉｖｅ）」とは、宿主または宿主細胞に通常、存在し、操作された変化を有しない遺伝子、タンパク質、化合物、分子、または活性に言及する。
【００１６】
「結合ドメイン」（「結合領域」または「結合部分」ともいわれる）は、本明細書で使用される場合、標的分子を特異的におよび非共有結合的に会合するか、合体するか、または結びつける能力を有するペプチド、オリゴペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質のような分子に言及する。結合ドメインは、生物学的分子または目的の他の標的またその結合タンパク質の任意の天然に存在する、合成の、半合成の、または組換え生成された結合パートナーを含む。いくつかの実施形態において、結合ドメインは、例えば、抗体もしくはＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）に由来する抗原結合ドメインであるか、または機能的結合ドメインもしくはその抗原結合フラグメントを含む（例えば、ドメイン抗体、ｓＦｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、一本鎖ＴＣＲ（ｓｃＴＣＲ）など）。他の実施形態において、結合ドメインまたはその結合部分は、サイトカインまたはケモカイン（例えば、ＧＭ−ＣＳＦ）に結合する。
【００１７】
いくつかの実施形態において、「特異的に結合する」とは、結合ドメインまたはその融合タンパク質の、１０５  Ｍ−１に等しいかもしくはこれより大きな親和性もしくはＫａ（すなわち、１／Ｍの単位を有する特定の結合相互作用の平衡結合定数）で標的分子への会合または合体（ｕｎｉｏｎ）に言及するか、あるいはこのような標的分子に結合する一方で、サンプル中の任意の他の分子または構成要素と有意に会合または合体しない。結合ドメイン（またはその融合タンパク質）は、「高親和性」結合ドメイン（またはその融合タンパク質）または「低親和性」結合ドメイン（またはその融合タンパク質）として分類され得る。「高親和性」結合ドメインとは、少なくとも１０７  Ｍ−１、少なくとも１０８  Ｍ−１、少なくとも１０９Ｍ−１、少なくとも１０１０Ｍ−１、少なくとも１０１１Ｍ−１、少なくとも１０１２Ｍ−１、または少なくとも１０１３Ｍ−１というＫａを有するそれら結合ドメインに言及する。「低親和性」結合ドメインとは、１０７Ｍ−１まで、まで１０６Ｍ−１まで、１０５Ｍ−１までというＫａを有するそれら結合ドメインに言及する。あるいは、親和性は、Ｍの単位（例えば、１０−５Ｍ〜１０−１３Ｍ）を有する特定の結合相互作用の平衡解離定数（Ｋｄ）として定義され得る。ある種の実施形態において、結合ドメインは、「増強された親和性（ｅｎｈａｎｃｅｄ  ａｆｆｉｎｉｔｙ）」を有し得、これは、野生型（または親の）結合ドメインより強い標的抗原への結合を有する選択されたまたは操作された結合ドメインに言及する。例えば、増強された親和性は、野生型結合ドメインより高い標的抗原に対するＫａ（平衡結合定数）に起因し得るか、または野生型結合ドメインのものより低い標的抗原に対するＫｄ（解離定数）に起因し得るか、または野生型結合ドメインのものより低い標的抗原に対する解離速度（ｏｆｆ−ｒａｔｅ）（Ｋｏｆｆ）に起因し得る。種々のアッセイが、特定の標的を特異的に結合する本開示の結合ドメインを同定する、および結合ドメインまたは融合タンパク質の親和性を決定することについて公知である（例えば、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、およびＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）分析（例えば、Ｓｃａｔｃｈａｒｄら，  Ａｎｎ．  Ｎ．Ｙ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ５１：６６０，  １９４９；および米国特許第５，２８３，１７３号、同第５，４６８，６１４号、またはその同等物もまた参照のこと）。
【００１８】
本明細書で使用される場合、「融合タンパク質」とは、一本鎖において、少なくとも２個の別個のドメインを有するポリペプチドであって、ここでそのドメインがタンパク質の中で天然には一緒に見出されないものをいう。融合タンパク質をコードする核酸分子は、ＰＣＲを使用して構築され得るか、組換え操作されるなどであり得るか、またはこのような融合タンパク質は、タンパク質合成の方法を使用して作製され得る。融合タンパク質は、タグまたは生体活性分子のような、他の構成要素をさらに含み得る（例えば、共有結合される）。ある種の実施形態において、宿主細胞（例えば、Ｔ細胞）によって発現または産生される融合タンパク質は、細胞表面に位置し、その細胞表面では、融合タンパク質が細胞外に配置された融合タンパク質の一部（例えば、結合ドメインを含む）および細胞内に配置された融合タンパク質の一部（例えば、シグナル伝達ドメインを含む）で細胞膜に繋がれる。
【００１９】
本明細書で使用される場合、「細胞外構成要素」とは、細胞の外側に配置されかつ別の分子または化合物と特異的に相互作用または会合して、融合タンパク質の細胞内構成要素にシグナル伝達することによって、生物学的効果を誘導し得る融合タンパク質の一部またはドメインをいう。例えば、サイトカイン結合ドメインは、特定のサイトカインと会合し、融合タンパク質の細胞内構成要素を介して細胞へのシグナル伝達を誘導することができる。
【００２０】
本明細書で使用される場合、「細胞内構成要素」とは、宿主細胞の細胞質中に配置されかつシグナル伝達分子とまたは他の細胞内構成要素と相互作用することによって、「細胞内シグナル伝達ドメイン」を介して細胞へとシグナル伝達し得る融合タンパク質の一部またはドメインをいう。
【００２１】
本明細書で使用される場合、「細胞内シグナル伝達ドメイン」は、応答（例えば、適切なシグナルを受容したときに細胞において共刺激、正の、または活性化する生物学的または生理学的応答）を直接的にまたは間接的に促進し得る分子の細胞内部分（例えば、本開示の融合タンパク質において使用されるもの）である。ある種の実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、結合したときにシグナルを受容するタンパク質またはタンパク質複合体の一部であるか、またはそれ自体が、標的分子に直接結合して、細胞中の他の構成要素にシグナル伝達し得る。細胞内シグナル伝達ドメインは、これが１またはこれより多くのシグナル伝達ドメインまたはモチーフ（例えば、Ｂｏｘ  １モチーフ（例えば、共通のγ鎖上で見出されるＪＡＫ相互作用ドメイン）、キナーゼドメイン、免疫レセプターチロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、共刺激ドメインなど）を含む場合に、細胞応答を直接的に促進し得る。他の実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、１またはこれより多くの他のタンパク質と会合することによって、細胞応答を間接的に促進し、これは、次には、細胞応答を直接的に促進する。
【００２２】
本明細書で使用される場合、「その部分（ｐｏｒｔｉｏｎ  ｔｈｅｒｅｏｆ）」とは、タンパク質の特定の領域（例えば、細胞外部分、膜貫通部分、または細胞内部分）に言及するか、またはタンパク質またはタンパク質領域のドメイン、モチーフ、またはフラグメントであって、そのタンパク質またはタンパク質領域のドメイン、モチーフ、またはフラグメントと関連した機能を保持するものをいう。例えば、サイトカイン結合ドメインのその部分は、サイトカインをなお結合し得るこのドメインのフラグメントを意味する。
【００２３】
ある種の実施形態において、融合タンパク質は、「リンカー」を含み得、上記リンカーは、２つの１本鎖融合タンパク質の相互作用、または１種もしくはこれより多くの種の結合ドメインの位置付けを促進するようにスペーサー機能を提供し得、その結果、その得られたポリペプチド構造が標的分子への特異的結合親和性を維持するか、もしくはシグナル伝達活性（例えば、エフェクタードメイン活性）を維持するか、または両方を維持する。例示的なリンカーとしては、ＧｌｙｘＳｅｒｙの１〜約１０回反復（ここでｘおよびｙは、独立して、１〜５の整数である）が挙げられる。
【００２４】
「ジャンクションアミノ酸（Ｊｕｎｃｔｉｏｎ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ）」または「ジャンクションアミノ酸残基」とは、融合タンパク質の２個の隣接するモチーフ、領域、もしくはドメインの間の（例えば、結合ドメインと隣接する疎水性構成要素との間の）、または疎水性構成要素の一方の末端もしくは両方の末端上の、１個もしくはこれより多くの（例えば、約２〜２０）個のアミノ酸残基に言及する。ジャンクションアミノ酸は、融合タンパク質の構築デザインから生じ得る（例えば、融合タンパク質をコードする核酸分子の構築の間の制限酵素部位の使用から生じるアミノ酸残基）。ある種の実施形態において、ジャンクションアミノ酸は、リンカー（例えば、ＧｌｙｘＳｅｒｙの１〜約１０回反復（ここでｘおよびｙは、独立して、１〜５の整数である）を有するもの）を形成する。
【００２５】
本明細書で使用される場合、「免疫系細胞」とは、骨髄中の造血幹細胞に由来する免疫系のうちのいずれかの細胞を意味し、造血幹細胞は、２種の主要な系統、骨髄系前駆細胞（これは、単球、マクロファージ、樹状細胞、巨核球および顆粒球のような骨髄系細胞を生じる）およびリンパ系前駆細胞（これは、Ｔ細胞、Ｂ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞のようなリンパ系細胞を生じる）を生じる。例示的な免疫系細胞としては、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、ＣＤ４−  ＣＤ８−ダブルネガティブＴ細胞、γδ  Ｔ細胞、調節性Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、および樹状細胞が挙げられる。マクロファージおよび樹状細胞は、「抗原提示細胞」または「ＡＰＣ」といわれ得、これら細胞は、ペプチドと複合体化したＡＰＣの表面上の主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）レセプターがＴ細胞の表面上のＴＣＲと相互作用したときにＴ細胞を活性化し得る専門化した細胞である。
【００２６】
「Ｔ細胞」は、胸腺において成熟し、Ｔ細胞レセプター（ＴＣＲ）を生成する免疫系細胞である。Ｔ細胞は、ナイーブ（抗原に曝されていない；ＴＣＭと比較して、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ１２７、およびＣＤ４５ＲＡの増加した発現、ならびにＣＤ４５ＲＯの低下した発現）、メモリーＴ細胞（ＴＭ）（抗原を経験し、長期生存性）、およびエフェクター細胞（抗原を経験し、細胞傷害性）であり得る。ＴＭは、セントラルメモリーＴ細胞（ＴＣＭ，  ナイーブＴ細胞と比較して、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ１２７、ＣＤ４５ＲＯ、およびＣＤ９５の増加した発現、ならびにＣＤ５４ＲＡの低下した発現）およびエフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ，  ナイーブＴ細胞もしくはＴＣＭと比較して、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ４５ＲＡの低下した発現、およびＣＤ１２７の増加した発現）のサブセットへとさらに分けられ得る。エフェクターＴ細胞（ＴＥ）とは、ＴＣＭと比較して、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８の低下した発現を有しかつグランザイムおよびパーフォリンに関して陽性である、抗原を経験したＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球をいう。他の例示的Ｔ細胞としては、調節性Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４＋  ＣＤ２５＋（Ｆｏｘｐ３＋）調節性Ｔ細胞およびＴｒｅｇ１７細胞）、ならびにＴｒ１、Ｔｈ３、ＣＤ８＋ＣＤ２８−、およびＱａ−１拘束性Ｔ細胞が挙げられる。
【００２７】
「Ｔ細胞レセプター」（ＴＣＲ）とは、ＣＤ３と会合して、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子に結合した抗原の認識を概して担う、Ｔ細胞（またはＴリンパ球）の表面に見出される分子をいう。このＴＣＲは、大部分のＴ細胞において高度に可変性のα鎖およびβ鎖（それぞれ、ＴＣＲαおよびＴＣＲβとしても公知）のジスルフィド連結したヘテロダイマーを有する。Ｔ細胞の小さなサブセットにおいて、そのＴＣＲは、可変性のγ鎖およびδ鎖（それぞれ、ＴＣＲγおよびＴＣＲδとしても公知）のヘテロダイマーから作られる。ＴＣＲの各鎖は、免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーであり、１つのＮ末端免疫グロブリン可変ドメイン、１つの免疫グロブリン定常ドメイン、膜貫通領域、およびＣ末端にある短い細胞質テールを有する（Ｊａｎｅｗａｙら，  Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ：  Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍ  ｉｎ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｄｉｓｅａｓｅ，  第３版，  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，  ｐ．  ４：３３，  １９９７を参照のこと）。ＴＣＲは、本開示で使用される場合、種々の動物種（ヒト、マウス、ラット、ネコ、イヌ、ヤギ、ウマ、または他の哺乳動物が挙げられる）に由来し得る。ＴＣＲは、細胞に結合していてもよいし（すなわち、膜貫通領域またはドメインを有する）または可溶性形態にあってもよい。
【００２８】
「主要組織適合遺伝子複合体分子」（ＭＨＣ分子）は、交換可能に使用され、ヒト対応ヒト白血球抗原（ＨＬＡ分子）ともいわれることが理解され、細胞表面にペプチド抗原を送達する糖タンパク質を指す。ＭＨＣクラスＩ分子は、膜スパニングα鎖（３個のαドメインを有する）および非共有結合的に会合したβ２ミクログロブリンからなるヘテロダイマーである。ＭＨＣクラスＩＩ分子は、２種の膜貫通糖タンパク質、αおよびβ（これらはともに、膜跨いでいる）から構成される。各鎖は、２個のドメインを有する。ＭＨＣ（ＨＬＡ）クラスＩ分子は、サイトゾルに由来する（originating）ペプチドを細胞表面へと送達し、この場合、ペプチド：ＭＨＣ（またはペプチド：ヒトにおけるＨＬＡ）複合体は、ＣＤ８＋  Ｔ細胞によって認識される。ＭＨＣ（ＨＬＡ）クラスＩＩ分子は、小胞系に由来するペプチドを細胞表面へと送達し、この場合、それらは、ＣＤ４＋  Ｔ細胞によって認識される。ＭＨＣ分子は、種々の動物種（ヒト、マウス、ラット、または他の哺乳動物が挙げられる）に由来し得る。
【００２９】
「核酸分子」、またはポリヌクレオチドは、ＲＮＡまたはＤＮＡの形態にあり得、そのＤＮＡとしては、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、および合成ＤＮＡが挙げられる。核酸分子は、二本鎖であっても一本鎖であってもよく、一本鎖である場合、コード鎖または非コード鎖（アンチセンス鎖）であってもよい。コード分子は、当該分野で公知のコード鎖と同一のコード配列を有してもよいし、遺伝コードの重複性もしくは縮重性の結果として、またはスプライシングによって、同じポリペプチドをコードし得る異なるコード鎖を有してもよい。
【００３０】
本開示の核酸分子またはポリヌクレオチドの改変体はまた、企図される。改変体ポリヌクレオチドは、本明細書で記載されるとおりの定義された配列のポリヌクレオチドのうちの１つと、または約６５〜６８℃において０．０１５Ｍ  塩化ナトリウム、０．００１５Ｍ  クエン酸ナトリウムの、もしくは約４２℃において０．０１５Ｍ  塩化ナトリウム、０．００１５Ｍ  クエン酸ナトリウム、および５０％  ホルムアミドのストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で定義された配列の、それらポリヌクレオチドのうちの１つとハイブリダイズするものと、少なくとも９０％、および好ましくは９５％、９９％または９９．９％同一である。上記ポリヌクレオチド改変体は、本明細書で記載される機能性を有する結合ドメインまたはその融合タンパク質をコードする能力を保持する。
【００３１】
用語「ストリンジェントな」とは、当該分野でストリンジェントとして一般に理解される条件に言及するために使用される。ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーは、温度、イオン強度、および変性剤（例えば、ホルムアミド）の濃度によって主に決定される。ハイブリダイゼーションおよび洗浄のストリンジェントな条件の例は、約６５〜６８℃において０．０１５Ｍ  塩化ナトリウム、０．００１５Ｍ  クエン酸ナトリウム、または約４２℃において０．０１５Ｍ  塩化ナトリウム、０．００１５Ｍ  クエン酸ナトリウム、および５０％  ホルムアミドである（Ｓａｍｂｒｏｏｋら，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  第２版，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  Ｎ．Ｙ．，  １９８９を参照のこと）。
【００３２】
よりストリンジェントな条件（例えば、より高い温度、より低いイオン強度、より高いホルムアミド、または他の変性剤）もまた、使用され得る；しかし、ハイブリダイゼーションの速度は、影響を受ける。デオキシオリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションに関する場合、さらなる例示的なストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、３７℃（１４塩基のオリゴヌクレオチドについて）、４８℃（１７塩基のオリゴヌクレオチドについて）、５５℃（２０塩基のオリゴヌクレオチドについて）、および６０℃（２３塩基のオリゴヌクレオチドについて）において６×ＳＳＣ、０．０５％  ピロリン酸ナトリウム中での洗浄を含む。
【００３３】
「ベクター」とは、別の核酸を輸送し得る核酸分子である。ベクターは、例えば、プラスミド、コスミド、ウイルス、またはファージであり得る。「発現ベクター」とは、適切な環境において存在する場合、そのベクターによって運ばれる１またはこれより多くの遺伝子によってコードされるタンパク質の発現を指向し得るベクターである。
【００３４】
「レトロウイルス」とは、ＲＮＡゲノムを有するウイルスである。「ガンマレトロウイルス（ｇａｍｍａｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓ）」とは、レトロウイルス科の中のある属をいう。例示的なガンマレトロウイルスとしては、マウス幹細胞ウイルス、マウス白血病ウイルス、ネコ白血病ウイルス、ネコ肉腫ウイルス、およびトリ細網内皮症ウイルスが挙げられる。
【００３５】
「レンチウイルス」とは、分裂細胞および非分裂細胞に感染し得るレトロウイルスのある属に言及する。レンチウイルスのいくつかの例としては、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス；ＨＩＶタイプ１、およびＨＩＶタイプ２を含む）；ウマ伝染性貧血ウイルス；ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）；ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）；およびサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）が挙げられる。
【００３６】
用語「同一の」または「％同一性（ｐｅｒｃｅｎｔ  ｉｄｅｎｔｉｔｙ）」とは、２種もしくはこれより多くのポリペプチドまたは核酸分子の配列の状況において、当該分野で公知の方法を使用して（例えば、配列比較アルゴリズム、手動でのアラインメントによって、もしくは目視によって）測定される場合、比較ウインドウまたは指定された領域にわたって最大の一致のために比較および整列された場合、特定の領域にわたって同じであるか、またはその領域にわたって同じであるアミノ酸残基またはヌクレオチドの特定のパーセンテージ（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）を有する２種もしくはこれより多くの配列もしくは部分配列を意味する。例えば、％配列同一性および配列類似性を決定するために適した好ましいアルゴリズムは、ＢＬＡＳＴおよびＢＬＡＳＴ  ２．０アルゴリズムであり、これらは、以下に記載される：それぞれ、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２５：３３８９，  １９７７）およびＡｌｔｓｃｈｕｌら（Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２１５：４０３，  １９９０）。
【００３７】
「処置する、処理する（ｔｒｅａｔ）」または「処置、処理（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」または「改善する（ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ）」とは、被験体（例えば、ヒトまたは非ヒト哺乳動物（例えば、霊長類、ウマ、イヌ、マウス、もしくはラット））の疾患、障害、または状態の医学的管理をいう。一般に、本開示の融合タンパク質を発現する宿主細胞を含む適切な用量または処置レジメン、および必要に応じてアジュバント療法または補助的療法（ａｄｊｕｎｃｔｉｖｅ  ｔｈｅｒａｐｙ）は、治療上の利益または予防上の利益を引き出すために十分な量で投与される。治療上のまたは予防上の／防止上の利益としては、改善された臨床転帰；疾患と関連する症状の低減または緩和；症状の出現の減少；クオリティー・オブ・ライフの改善；より長い無病状態；疾患の程度の減少、疾患状態の安定化；疾患進行の遅延；寛解；生存；生存の長期化；またはこれらのうちのいずれかの組み合わせが挙げられる。
【００３８】
融合タンパク質または本開示の融合タンパク質を発現する細胞の「治療上有効な量」または「有効量」とは、処置されている疾患または状態の状況において、満足のいく有意な様式での処置されている疾患の１またはこれより多くの症状の改善（例えば、感染の低減、腫瘍サイズの縮小、がん成長の阻害など）を生じるために十分な融合タンパク質の量または細胞の数に言及する。
【００３９】
核酸、融合タンパク質、および宿主細胞
ある種の局面において、本開示は、本明細書で記載される融合タンパク質のうちのいずれか１種またはこれより多くの種をコードする核酸分子を提供し、その本明細書で記載される融合タンパク質は、サイトカイン結合ドメインの全てまたは一部を含む細胞外構成要素、膜貫通ドメインおよび１種またはこれより多くの種のＩＬ−２Ｒ鎖のシグナル伝達ドメインまたはそのシグナル伝達部分（複数可）を含む細胞内構成要素を含む融合タンパク質であり得、ここで上記サイトカイン結合ドメインは、ＩＬ−２結合ドメインではない。このような核酸分子は、目的の宿主細胞（例えば、Ｔ細胞）の中に導入するための適切なベクター（例えば、ウイルスベクターまたは非ウイルスプラスミドベクター）へと挿入され得る。
【００４０】
ある種の実施形態において、本開示は、サイトカイン結合ドメインまたはその一部を含む細胞外構成要素と、ＩＬ−２Ｒ細胞内部分、細胞内シグナル伝達ドメインまたはその一部を含む細胞内構成要素との間に配置された膜貫通ドメインを含む融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを提供する。いくつかの実施形態において、そのコードされる細胞内構成要素は、ＩＬ−２Ｒγ、ＩＬ−２Ｒβ、ＩＬ−４Ｒ、ＩＬ−７Ｒ、ＩＬ−９Ｒ、ＩＬ−１５Ｒ、ＩＬ−２１Ｒ、またはこれらのうちのいずれかの組み合わせに由来する細胞内部分、細胞内シグナル伝達ドメインまたはその一部から構成される。関連実施形態において、そのコードされる細胞内構成要素は、ヒトＩＬ−２Ｒγ、ヒトＩＬ−２Ｒβ、ヒトＩＬ−４Ｒ、ヒトＩＬ−７Ｒ、ヒトＩＬ−９Ｒ、ヒトＩＬ−１５Ｒ、ヒトＩＬ−２１Ｒ、またはこれらのうちのいずれかの組み合わせに由来する細胞内部分、細胞内シグナル伝達ドメインまたはその一部から構成される。
【００４１】
他の実施形態において、本開示は、サイトカイン結合ドメインの全てまたは一部を含む細胞外構成要素、膜貫通ドメインおよび１種またはこれより多くの種のＩＬ−２Ｒ鎖のシグナル伝達ドメインまたはそのシグナル伝達部分を含む細胞内構成要素を含む融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを提供し、ここで上記サイトカイン結合ドメインは、ＩＬ−２結合ドメインではない。ある種の実施形態において、ポリヌクレオチドは、（ａ）第１の融合タンパク質であって、サイトカイン結合ドメインの全てまたは一部は、サイトカイン結合ドメインの第１の部分であるもの、ならびに（ｂ）サイトカイン結合ドメインの第２の部分、第２の膜貫通ドメインおよび第２のＩＬ−２Ｒ鎖シグナル伝達ドメインまたはそのシグナル伝達部分を含む第２の細胞内構成要素を含む第２の融合タンパク質をコードし、必要に応じて、抗原レセプターもしくはその一部または抗原結合タンパク質（例えば、抗原特異的ＴＣＲまたはＣＡＲ）をコードするポリヌクレオチドをさらに含む。
【００４２】
さらなる実施形態において、本開示は、サイトカイン結合ドメインまたはその一部を含む細胞外構成要素と、ＩＬ−２Ｒγ細胞内部分、細胞内シグナル伝達ドメインまたはその一部（必要に応じてヒトＩＬ−２Ｒγ）を含む細胞内構成要素との間に配置された膜貫通ドメインを含む融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを提供する。特定の実施形態において、ポリヌクレオチドは、サイトカイン結合ドメインまたはその一部を含む細胞外構成要素と、細胞内構成要素との間に配置された膜貫通ドメインを含む融合タンパク質をコードし、ここで上記コードされる融合タンパク質の細胞外構成要素の非サイトカイン結合部分、膜貫通ドメイン、および細胞内構成要素は、配列番号１０に示されるアミノ酸配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有する。なおさらなる実施形態において、そのコードされる融合タンパク質のそのコードされる非サイトカイン結合細胞外部分、膜貫通ドメイン、および細胞内部分は、配列番号１０に示されるアミノ酸配列から構成されるかまたはそのアミノ酸配列からなる。
【００４３】
ある種の実施形態において、前述のポリヌクレオチドのうちのいずれかは、サイトカイン結合ドメインおよび非サイトカイン結合細胞外部分を含むＩＬ−２Ｒ鎖の一部を含む細胞外構成要素、ＩＬ−２Ｒ鎖の膜貫通ドメイン、ならびにＩＬ−２Ｒ鎖（例えば、ＩＬ−２ＲγもしくはヒトＩＬ−２Ｒγ）の細胞内部分を含む融合タンパク質をコードする。さらなる実施形態において、ＩＬ−２Ｒ鎖の非サイトカイン結合細胞外部分、膜貫通ドメイン、および細胞内部分は、配列番号６のヌクレオチド９６１〜１，３０８と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされる。なおさらなる実施形態において、ＩＬ−２Ｒ鎖の非サイトカイン結合細胞外部分、膜貫通ドメイン、および細胞内部分は、配列番号６のヌクレオチド９６１〜１，３０８を含むかまたはこれからなるポリヌクレオチドによってコードされる。
【００４４】
未ださらなる実施形態において、本開示は、サイトカイン結合ドメインまたはその一部を含む細胞外構成要素と、ＩＬ−２Ｒβ細胞内部分、細胞内シグナル伝達ドメインまたはその一部（必要に応じてヒトＩＬ−２Ｒβ）を含む細胞内構成要素との間に配置される膜貫通ドメインを含む融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを提供する。特定の実施形態において、ポリヌクレオチドは、サイトカイン結合ドメインまたはその一部を含む細胞外構成要素と、細胞内構成要素との間に配置される膜貫通ドメインを含む融合タンパク質をコードし、ここで上記コードされる融合タンパク質の膜貫通ドメインおよび細胞内構成要素は、配列番号１２に示される配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有する。なおさらなる実施形態において、そのコードされる融合タンパク質のそのコードされる膜貫通ドメインおよび細胞内部分は、配列番号１２に示されるアミノ酸配列から構成されるかまたはそのアミノ酸配列からなる。
【００４５】
ある種の実施形態において、前述のポリヌクレオチドのうちのいずれかは、サイトカイン結合ドメインを含む細胞外構成要素、ＩＬ−２Ｒ鎖の膜貫通ドメイン、およびＩＬ−２Ｒ鎖の細胞内部分（例えば、ＩＬ−２ＲβまたはヒトＩＬ−２Ｒβ）を含む融合タンパク質をコードする。さらなる実施形態において、上記ＩＬ−２Ｒ鎖の膜貫通ドメインおよび細胞内部分は、配列番号７のヌクレオチド１，３１５〜２，２５０と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされる。なおさらなる実施形態において、上記ＩＬ−２Ｒ鎖の非サイトカイン結合細胞外部分、膜貫通ドメイン、および細胞内部分は、配列番号７のヌクレオチド１，３１５〜２，２５０を含むかまたはこれからなるポリヌクレオチドによってコードされる。
【００４６】
前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、そのコードされる細胞外構成要素は、ＣＳＦ２ＲＡ（ＧＭ−ＣＳＦＲまたはＣＳＦ２Ｒともいわれる）、ＣＳＦ２ＲＢ（ＩＬ３ＲＢ、ＩＬ５ＲＢ、ＣＤ１３１ともいわれる）、ＣＳＦ１Ｒ（Ｍ−ＣＳＦＲまたはＣＳＦＲともいわれる）、ＣＳＦ３Ｒ（Ｇ−ＣＳＦＲまたはＣＤ１１４ともいわれる）、ＣＸＣＲ２（ＩＬ８ＲＡ、ＩＬ８ＲＢ、ＩＬ８Ｒ２またはＣＤ１８２ともいわれる）、またはＣＣＲ８（ＣＹ６またはＴＥＲ１ともいわれる）の細胞外ドメインまたはその一部を含む。さらなる実施形態において、そのコードされる細胞外構成要素は、ヒトＣＳＦ２ＲＡ、ヒトＣＳＦ２ＲＢ、ヒトＣＳＦ１Ｒ、ヒトＣＳＦ３Ｒ、ヒトＣＸＣＲ２、またはヒトＣＣＲ８の細胞外ドメインまたはその一部を含む。
【００４７】
前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、そのコードされるサイトカイン結合ドメインまたはその結合部分は、ＧＭ−ＣＳＦ（ＣＳＦ２ともいわれる）、Ｍ−ＣＳＦ（ＣＳＦ１ともいわれる）、Ｇ−ＣＳＦ（ＣＳＦ３ともいわれる）、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、またはＣＣＬ１に特異的に結合する。さらなる実施形態において、そのコードされるサイトカイン結合ドメインまたはその結合部分は、ヒトＧＭ−ＣＳＦ、ヒトＭ−ＣＳＦ、ヒトＧ−ＣＳＦ、ヒトＣＸＣＬ１、ヒトＣＸＣＬ２、ヒトＣＣＬ１に特異的に結合する。
【００４８】
ある種の実施形態において、前述のポリヌクレオチドのうちのいずれかは、ＣＳＦ２に対して特異的なサイトカイン結合ドメイン（例えば、ＣＳＦ２ＲＡまたはＣＳＦ２ＲＢの細胞外部分）を含む融合タンパク質をコードする。さらなる実施形態において、ＣＳＦ２ＲＡの細胞外部分は、配列番号６のヌクレオチド１〜９６０と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされる。なおさらなる実施形態において、ＣＳＦ２ＲＡの細胞外部分は、配列番号６のヌクレオチド１〜９６０を含むかまたはこれからなるポリヌクレオチドによってコードされる。関連実施形態において、ＣＳＦ２ＲＡのそのコードされる細胞外部分は、配列番号９に示されるアミノ酸配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である。なおさらなる実施形態において、ＣＳＦ２ＲＡのそのコードされる細胞外部分は、配列番号９に示されるアミノ酸配列から構成されるかまたはこれからなる。他の実施形態において、ＣＳＦ２ＲＢの細胞外部分は、配列番号７のヌクレオチド１〜１，３１４と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされる。なおさらなる実施形態において、ＣＳＦ２ＲＢの細胞外部分は、配列番号６のヌクレオチド１〜１，３１４を含むかまたはこれからなるポリヌクレオチドによってコードされる。関連実施形態において、ＣＳＦ２ＲＢのそのコードされる細胞外部分は、配列番号１１に示されるアミノ酸配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である。さらに他の実施形態において、ＣＳＦ２ＲＢのそのコードされる細胞外部分は、配列番号１１に示されるアミノ酸配列から構成されるかまたはこれからなる。
【００４９】
ある種の実施形態において、前述のポリヌクレオチドのうちのいずれかは、膜貫通ドメイン（例えば、ＩＬ−２ＲＧ、ＩＬ−２ＲＢ、ＣＳＦ２ＲＡ、ＣＳＦ２ＲＢ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＳＦ３Ｒ、ＣＸＣＲ２、ＣＣＲ８、ＩＬ−２ＲＡ、ＩＬ−４Ｒ、ＩＬ−７Ｒ、ＩＬ−９Ｒ、ＩＬ−１５Ｒ、ＩＬ−２１Ｒ、ＣＤ２、ＣＤ３ε、ＣＤ３δ、ＣＤ３ζ、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ９５（Ｆａｓ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４）、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２７２（ＢＴＬＡ）、ＣＤ２７３（ＰＤ−Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ−Ｌ１）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＣＤ２７９（ＰＤ−１）、ＣＤ３００、ＣＤ３５７（ＧＩＴＲ）、Ａ２ａＲ、ＤＡＰ１０、ＦｃＲα、ＦｃＲβ、ＦｃＲγ、Ｆｙｎ、ＧＡＬ９、ＫＩＲ、Ｌｃｋ、ＬＡＴ、ＬＲＰ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＯＴＣＨ１、ＮＯＴＣＨ２、ＮＯＴＣＨ３、ＮＯＴＣＨ４、ＰＴＣＨ２、ＲＯＲ２、Ｒｙｋ、Ｓｌｐ７６、ＳＩＲＰα、ｐＴα、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＩＭ３、ＴＲＩＭ、ＬＰＡ５、またはＺａｐ７０の膜貫通ドメイン）を含む融合タンパク質をコードする。いくつかの実施形態において、そのコードされる膜貫通ドメインは、ヒトＩＬ−２ＲＧ、ヒトＩＬ−２ＲＢ、ヒトＣＳＦ２ＲＡ、ヒトＣＳＦ２ＲＢ、ヒトＣＳＦ１Ｒ、ヒトＣＳＦ３Ｒ、ヒトＣＸＣＲ２、ヒトＣＣＲ８、ヒトＩＬ−２ＲＡ、ヒトＩＬ−４Ｒ、ヒトＩＬ−７Ｒ、ヒトＩＬ−９Ｒ、ヒトＩＬ−１５Ｒ、ヒトＩＬ−２１Ｒ、ヒトＣＤ２、ヒトＣＤ３ε、ヒトＣＤ３δ、ヒトＣＤ３ζ、ヒトＣＤ２５、ヒトＣＤ２７、ヒトＣＤ２８、ヒトＣＤ４０、ヒトＣＤ７９Ａ、ヒトＣＤ７９Ｂ、ヒトＣＤ８０、ヒトＣＤ８６、ヒトＣＤ９５（Ｆａｓ）、ヒトＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ヒトＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ヒトＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ヒトＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４）、ヒトＣＤ２００Ｒ、ヒトＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ヒトＣＤ２７０（ＨＶＥＭ）、ヒトＣＤ２７２（ＢＴＬＡ）、ヒトＣＤ２７３（ＰＤ−Ｌ２）、ヒトＣＤ２７４（ＰＤ−Ｌ１）、ヒトＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ヒトＣＤ２７９（ＰＤ−１）、ヒトＣＤ３００、ヒトＣＤ３５７（ＧＩＴＲ）、ヒトＡ２ａＲ、ヒトＤＡＰ１０、ヒトＦｃＲα、ヒトＦｃＲβ、ヒトＦｃＲγ、ヒトＦｙｎ、ヒトＧＡＬ９、ヒトＫＩＲ、ヒトＬｃｋ、ヒトＬＡＴ、ヒトＬＲＰ、ヒトＮＫＧ２Ｄ、ヒトＮＯＴＣＨ１、ヒトＮＯＴＣＨ２、ヒトＮＯＴＣＨ３、ヒトＮＯＴＣＨ４、ヒトＰＴＣＨ２、ヒトＲＯＲ１、ヒトＲＯＲ２、ヒトＲｙｋ、ヒトＳｌｐ７６、ヒトＳＩＲＰα、ヒトｐＴα、ヒトＴＣＲα、ヒトＴＣＲβ、ヒトＴＩＭ３、ヒトＴＲＩＭ、ヒトＬＰＡ５、またはヒトＺａｐ７０のものである。特定の実施形態において、前述のポリヌクレオチドのうちのいずれかは、配列番号２２または２３に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である膜貫通ドメインを含む融合タンパク質をコードする。他の実施形態において、そのコードされる膜貫通ドメインは、配��番号２２または２３に示されるアミノ酸配列を含むかまたはこれからなる。
【００５０】
抗原結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドの場合、このようなコードされる抗原結合タンパク質は、前述の膜貫通ドメイン実施形態のうちのいずれかに従う膜貫通ドメインを含み得る。
【００５１】
ある種の実施形態において、本開示は、サイトカイン結合ドメインまたはその一部を含む細胞外構成要素と、細胞内構成要素との間に配置された膜貫通ドメインを含む融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを提供し；ここでそのコードされる細胞外構成要素は、ＣＳＦ２ＲＡの細胞外部分およびＩＬ−２Ｒγの非サイトカイン結合細胞外部分を含み、そしてそのコードされる膜貫通ドメインおよびコードされる細胞内構成要素は、ＩＬ−２Ｒγの一部を含む。さらなる実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号１に示されるとおりのアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有する融合タンパク質をコードする。なおさらなる実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号１に示されるとおりのアミノ酸配列を含むかまたはこれからなる融合タンパク質をコードする。
【００５２】
ある種の実施形態において、本開示は、サイトカイン結合ドメインまたはその一部を含む細胞外構成要素と、細胞内構成要素との間に配置された膜貫通ドメインを含む融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを提供し；ここでそのコードされる細胞外構成要素は、ＣＳＦ２ＲＢの細胞外部分を含み、そのコードされる膜貫通ドメインおよびコードされる細胞内構成要素は、ＩＬ−２Ｒβの一部を含む。さらなる実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号２に示されるとおりのアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有する融合タンパク質をコードする。さらなる実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号２に示されるとおりのアミノ酸配列を含むかまたはこれからなる融合タンパク質をコードする。
【００５３】
配列番号１および配列番号９の最初の２２個のアミノ酸、ならびに配列番号２および配列番号１１の最初の１６個のアミノ酸は、それぞれ、ヒトＣＳＦ２ＲＡおよびＣＳＦ２ＲＢのシグナル配列に相当する。ある種の実施形態において、配列番号１、配列番号２、配列番号９および配列番号１１の融合タンパク質は、宿主細胞の表面で発現され、成熟タンパク質であり、すなわち、その成熟タンパク質は、シグナル配列を欠いている。例えば、配列番号９に従うＣＳＦ２ＲＡの成熟タンパク質は、配列番号９のアミノ酸２３〜３２０に相当し、配列番号１１に従うＣＳＦ２ＲＢの成熟タンパク質は、配列番号１１のアミノ酸１７〜４３８に相当する。
【００５４】
いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、ＩＬ−２Ｒ（例えば、ＩＬ−２ＲγまたはＩＬ−２Ｒβ）に由来する細胞内シグナル伝達ドメインまたは機能的フラグメントまたはその一部を含む融合タンパク質をコードする。他の実施形態において、ポリヌクレオチドは、ＣＤ３ε、ＣＤ３δ、ＣＤ３ζ、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ４７、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４  １ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＣＤ３５７（ＧＩＴＲ）、ＣＡＲＤ１１、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＦｃＲα、ＦｃＲβ、ＦｃＲγ、Ｆｙｎ、Ｌｃｋ、ＬＡＴ、ＬＲＰ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＯＴＣＨ１、ＮＯＴＣＨ２、ＮＯＴＣＨ３、ＮＯＴＣＨ４、ＲＯＲ２、Ｒｙｋ、Ｓｌｐ７６、ｐＴα、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＲＩＭ、Ｚａｐ７０、ＰＴＣＨ２、またはこれらのうちのいずれかの組み合わせに由来する細胞内シグナル伝達ドメインまたは機能的フラグメントまたはその一部を含む抗原結合タンパク質をコードする。いくつかの実施形態において、融合タンパク質または抗原結合タンパク質のコードされる細胞内シグナル伝達ドメインまたは機能的フラグメントまたはその一部は、ＣＤ３ζを含まない。
【００５５】
本明細書で使用される場合、用語「組換え（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ）」または「非天然の（ｎｏｎ−ｎａｔｕｒａｌ）」とは、少なくとも１つの遺伝的変化を含むかまたは外因性核酸分子の導入によって改変された生物、微生物、細胞、核酸分子、またはベクターに言及し、ここでこのような変化または改変は、遺伝子操作によって導入される。遺伝的変化としては、例えば、タンパク質、融合タンパク質もしくは酵素をコードする発現可能な核酸分子を導入する改変、または他の核酸分子の付加、欠失、置換、もしくは細胞の遺伝物質の他の機能的破壊が挙げられる。さらなる改変は、例えば、その改変が遺伝子またはオペロンの発現を変化させる非コード調節領域を含む。ある種の実施形態において、被験体から得られる細胞（例えば、Ｔ細胞）は、本明細書で記載されるとおりの融合タンパク質をコードする核酸を導入することによって非天然のまたは組換え細胞（例えば、非天然または組換えＴ細胞）へと変換され得、それによって、その細胞は、融合タンパク質を発現する。
【００５６】
ある種の実施形態において、ポリヌクレオチドは、複数の融合タンパク質、複数の抗原結合タンパク質、またはこれらの組み合わせをコードし、ここでその複数の融合タンパク質、抗原結合タンパク質、またはこれらの組み合わせのうちの２またはこれより多くは、切断部位によって分離される。いくつかの実施形態において、切断部位は、融合タンパク質または抗原結合タンパク質に対してアミノ末端側にある２〜約２０アミノ酸のプロテアーゼ切断部位、融合タンパク質または抗原結合タンパク質のカルボキシ末端側にある２〜約２０アミノ酸のプロテアーゼ切断部位、自己切断アミノ酸配列、またはコレラの組み合わせを含む。
【００５７】
ある種の実施形態において、コードされる切断部位は、ブタテッショウウイルス−１（Ｐ２Ａ）（配列番号１３）、Ｔｈｏｓｅａ  ａｓｉｇｎａウイルス（Ｔ２Ａ）（配列番号１４）、ウマ鼻炎Ａウイルス（Ｅ２Ａ）（配列番号１５）、口蹄疫ウイルス（Ｆ２Ａ）（配列番号１６）に由来する２Ａペプチド、またはこれらのうちのいずれかの組み合わせを含む自己切断アミノ酸配列である（例えば、Ｋｉｍら，  ＰＬＯＳ  Ｏｎｅ  ６：ｅ１８５５６，  ２０１１を参照のこと）。さらなる実施形態において、複数の融合タンパク質、複数の抗原結合タンパク質、またはこれらの組み合わせをコードするポリヌクレオチドは、上記タンパク質のうちの２個またはこれより多くの間に位置した自己切断ペプチドをコードする配列を含み、それは、以下であり得る：（ａ）配列番号１７に示されるとおりのポリヌクレオチドによってコードされるＰ２Ａペプチド；（ｂ）配列番号１８に示されるとおりのコドン最適化ポリヌクレオチドによってコードされるＰ２Ａペプチド；（ｃ）Ｔ２Ａペプチドは配列番号１９に示されるとおりのポリヌクレオチドによってコードされる；（ｄ）Ｅ２Ａペプチドは配列番号２０に示されるとおりのポリヌクレオチドによってコードされる；（ｅ）Ｆ２Ａペプチドは配列番号２１に示されるとおりのポリヌクレオチドによってコードされる；または（ｆ）これらのうちのいずれかの組み合わせ。
【００５８】
ある種の実施形態において、本開示のポリヌクレオチド、第１の融合タンパク質、第２の融合タンパク質および必要に応じて抗原結合タンパク質、ここでその第１の融合タンパク質は、サイトカイン結合ドメインまたはその一部を含む細胞外構成要素と、ＩＬ−２Ｒγ（必要に応じてヒトＩＬ−２Ｒγ）、細胞内部分または細胞内シグナル伝達ドメインもしくはその一部を含むか、これからなるか、またはこれと少なくとも９０％同一性を有するか、あるいは必要に応じて配列番号１０に示されるアミノ酸配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有する細胞内構成要素との間に配置された膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号１に示されるとおりのアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有する第１の融合タンパク質をコードする。なおさらなる実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号１に示されるとおりのアミノ酸配列を含むかまたはこれからなる第１の融合タンパク質をコードする。
【００５９】
さらなる実施形態において、本開示のポリヌクレオチドは、第１の融合タンパク質、第２の融合タンパク質および必要に応じて抗原結合タンパク質をコードし、ここでそのコードされる第１の融合タンパク質は、サイトカイン結合ドメインまたはその一部を含む細胞外構成要素と、ＩＬ−２Ｒβ（必要に応じてヒトＩＬ−２Ｒβ）、細胞内部分または細胞内シグナル伝達ドメインもしくはその一部を含むか、これからなるか、またはこれと少なくとも９０％同一性を有するか、あるいは必要に応じて配列番号１２に示されるアミノ酸配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有する細胞内構成要素との間に配置された膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号２に示されるとおりのアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有する第１の融合タンパク質をコードする。さらなる実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号２に示されるとおりのアミノ酸配列を含むかまたはこれからなる第１の融合タンパク質をコードする。
【００６０】
なおさらなる実施形態において、本開示のポリヌクレオチドは、第１の融合タンパク質、第２の融合タンパク質、および必要に応じて抗原結合タンパク質をコードし、ここでそのコードされる第１の融合タンパク質は、配列番号１に示されるかまたは配列番号１のアミノ酸２３〜４３５（成熟融合タンパク質）に示されるアミノ酸配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有し；そのコードされる第２の融合タンパク質は、配列番号２に示されるかまたは配列番号２のアミノ酸１７〜７４９（成熟融合タンパク質）に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有し；そしてここで必要に応じた抗原結合タンパク質は、抗原特異的ＴＣＲまたは抗原特異的ＣＡＲを含み、ここで抗原は、必要に応じてがん特異的抗原（例えば、ＷＴ−１、メソテリン、ＲＯＲ１またはサイクリン−Ａ１抗原）である。
【００６１】
これらの実施形態の各々において、第１の融合タンパク質、第２の融合タンパク質、および必要に応じて抗原結合タンパク質は、単一のポリヌクレオチドによって全てコードされ得るか、またはそれらは全て、２種のポリヌクレオチドによってコードされ得る（例えば、第１のポリヌクレオチドは、その第１の融合タンパク質をコードし、第２のポリヌクレオチドは、その第２の融合タンパク質および必要に応じた抗原結合タンパク質をコードするか；あるいは第１のポリヌクレオチドは、その第２の融合タンパク質をコードし、第２のポリヌクレオチドは、その第１の融合タンパク質および必要に応じた抗原結合タンパク質をコードするか；あるいは第１のポリヌクレオチドは、その第１の融合タンパク質および第２の融合タンパク質をコードし、第２のポリヌクレオチドは、その必要に応じた抗原結合タンパク質をコードするか、またはこれらのうちのいずれかの組み合わせである）。
【００６２】
ある種の実施形態において、単一のポリヌクレオチドは、本開示の第１の融合タンパク質および本開示の第２の融合タンパク質をコードし、ここで配列番号１７〜２１のうちのいずれか１つに示されるとおりの自己切断ペプチドをコードするポリヌクレオチドは、その第１の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドとその第２の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドとの間に配置され、これらを連結する。特定の実施形態において、その第１の融合タンパク質は、配列番号６に示されるヌクレオチド配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、ｏｒ  少なくとも９８％の同一性を有するポリペプチドによってコードされ、その第２の融合タンパク質は、配列番号７に示されるヌクレオチド配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされる。さらなる実施形態において、その第１の融合タンパク質は、配列番号６に示されるヌクレオチド配列を含むかまたはこれからなるポリヌクレオチドによってコードされ、その第２の融合タンパク質は、配列番号７に示されるヌクレオチド配列を含むかまたはこれからなるポリヌクレオチドによってコードされる。
【００６３】
前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、本開示の、融合タンパク質、抗原結合タンパク質または両方をコードするポリヌクレオチドは、ある種のタイプの細胞（例えば、Ｔ細胞）における発現を増強または最大化するようにコドン最適化され得る（Ｓｃｈｏｌｔｅｎら，  Ｃｌｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １１９：  １３５−１４５，  ２００６）。
【００６４】
本開示のポリヌクレオチドのうちのいずれかは、ベクターの中に含まれ得るか、または宿主細胞（例えば、Ｔ細胞）へとベクターを介して送達され得る。コアウイルスをコードするベクターは、「ウイルスベクター」と本明細書でいわれる。ヒト遺伝子治療適用のために同定されたものを含め、本開示の組成物とともに使用するために適した多くの利用可能なウイルスベクターが存在する（Ｐｆｅｉｆｅｒ  ａｎｄ  Ｖｅｒｍａ，  Ａｎｎ．  Ｒｅｖ．  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  Ｈｕｍ．  Ｇｅｎｅｔ．  ２：１７７，  ２００１を参照のこと）。適切なウイルスベクターは、ＲＮＡウイルスに基づくベクター（例えば、レトロウイルス由来のベクター、例えば、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）由来のベクター）を含み、より複雑なレトロウイルス由来のベクター（例えば、レンチウイルス由来のベクター）を含む。ＨＩＶ−１由来のベクターは、このカテゴリーに属する。他の例としては、ＨＩＶ−２、ＦＩＶ、ウマ伝染性貧血ウイルス、ＳＩＶ、およびマエディ・ヴィスナウイルス（ヒツジレンチウイルス）に由来するレンチウイルスベクターが挙げられる。レトロウイルスおよびレンチウイルスのウイルスベクターならびにキメラ抗原レセプター導入遺伝子を含むウイルス粒子で哺乳動物宿主細胞を形質導入するためのパッケージング細胞を使用するための方法は、当該分野で公知であり、例えば、米国特許第８，１１９，７７２号；Ｗａｌｃｈｌｉら，  ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ６：３２７９３０，  ２０１１；  Ｚｈａｏら，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １７４：４４１５，  ２００５；  Ｅｎｇｅｌｓら，  Ｈｕｍ．  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．  １４：１１５５，  ２００３；  Ｆｒｅｃｈａら，  Ｍｏｌ．  Ｔｈｅｒ．  １８：１７４８，  ２０１０；  Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ５０６：９７，  ２００９において以前に記載されている。レトロウイルスベクター構築物およびレンチウイルスベクター構築物ならびに発現系はまた、市販されている。
【００６５】
ある種の実施形態において、ウイルスベクターは、本明細書で開示されるとおりの融合タンパク質をコードする非内因性のポリヌクレオチドもしくは本明細書で開示されるとおりの標的に対して特異的な抗原結合タンパク質をコードする非内因性のポリヌクレオチド、または両方を導入するために使用される。ウイルスベクターは、レトロウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターであり得る。ウイルスベクターはまた、形質導入に関するマーカーをコードする核酸配列を含み得る。ウイルスベクターのための形質導入マーカーは、当該分野で公知であり、選択マーカー（これは、薬物耐性を付与し得る）または検出マーカー（例えば、蛍光マーカーまたはフローサイトメトリーのような方法によって検出され得る細胞表面タンパク質）を含む。特定の実施形態において、ウイルスベクターはさらに、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、ヒトＣＤ２の細胞外ドメイン、または短縮型ヒトＥＧＦＲ（ｈｕＥＧＦＲｔ；Ｗａｎｇら，  Ｂｌｏｏｄ  １１８：１２５５，  ２０１１を参照のこと）を含む形質導入に関する遺伝子マーカーを含む。ウイルスベクターゲノムが、別個の転写物として宿主細胞において発現されるべき複数の核酸配列を含む場合、そのウイルスベクターはまた、バイシストロン性またはマルチシストロン性の発現を可能にするその２つの（またはこれより多くの）転写物の間にさらなる配列を含み得る。ウイルスベクターにおいて使用されるこのような配列の例としては、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、フリン切断部位、ウイルス２Ａペプチド、またはこれらのうちのいずれかの組み合わせが挙げられる。
【００６６】
他のベクターはまた、ＤＮＡウイルスベクター（例えば、アデノウイルスベースのベクターおよびアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベースのベクター；単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）由来のベクター（アンプリコンベクター、複製欠損ＨＳＶおよび弱毒化ＨＳＶ（Ｋｒｉｓｋｙら，  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．  ５：  １５１７，  １９９８）が挙げられる）を含む）を含むポリヌクレオチド送達のために使用され得る。
【００６７】
遺伝子治療用途のために最近開発された他のベクターはまた、本開示の組成物および方法とともに使用され得る。このようなベクターとしては、バキュロウイルスおよびα−ウイルスに由来するもの（Ｆｒｉｅｄｍａｎｎ  Ｔ．編．    Ｔｈｅ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ．    Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂの中のＪｏｌｌｙ，  Ｄ  Ｊ．  １９９９．    Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  Ｖｉｒａｌ  Ｖｅｃｔｏｒｓ．    ｐｐ  ２０９−４０）、またはプラスミドベクター（例えば、ｓｌｅｅｐｉｎｇ  ｂｅａｕｔｙベクターまたは他のトランスポゾンベクター）が挙げられる。いくつかの実施形態において、ウイルスベクターまたはプラスミドベクターはさらに、形質導入に関する遺伝子マーカー（例えば、緑色蛍光タンパク質、ｈｕＥＧＦＲｔ）を含む。
【００６８】
いくつかの実施形態において、ベクターは、１より多くの融合タンパク質をコードする本明細書で開示されるとおりのポリヌクレオチドを含み、必要に応じて本開示の抗原結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む。例えば、ベクターは、２種の異なる融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含み得、および必要に応じて本開示の抗原結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含み得る。
【００６９】
いくつかの実施形態において、本明細書で開示されるとおりの融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含むベクターは、抗原特異的ＴＣＲもしくはＣＡＲをさらにコードし得るか、または抗原特異的ＴＣＲもしくはＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、その抗原特異的ＴＣＲは、外因性である。いくつかの実施形態において、その抗原特異的ＴＣＲは、ＨＬＡ（ＭＨＣ）クラスＩ拘束性抗原に対して特異的である。いくつかの実施形態において、その抗原は、がん特異的抗原である。がん特異的抗原がＷＴ−１、メソテリン、ＲＯＲ１またはサイクリン−Ａ１を含む実施形態はまた、本開示の範囲内にある。
【００７０】
本明細書で開示されるポリヌクレオチドのうちのいずれかが、宿主細胞の中に含まれ得、ここでその宿主細胞は、融合タンパク質、抗原結合タンパク質、または両方を発現および産生する。ある種の局面において、本開示は、融合タンパク質および抗原結合タンパク質を含む宿主細胞を提供し、ここでその融合タンパク質は、サイトカイン結合ドメインまたはその一部を含む細胞外構成要素と、ＩＬ−２Ｒ細胞内部分、細胞内シグナル伝達ドメインまたはその一部を含む細胞内構成要素との間に配置された膜貫通ドメインを含み；そしてここでその抗原結合タンパク質は、Ｔ細胞レセプター（ＴＣＲ）；キメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）；または必要に応じて複数の抗原結合タンパク質である。いくつかの実施形態において、本開示の宿主細胞は、複数の抗原結合タンパク質（例えば、ＴＣＲおよびＣＡＲの両方）を含む。
【００７１】
さらなる局面において、本開示は、第１の融合タンパク質、第２の融合タンパク質および必要に応じて抗原結合タンパク質を含む宿主細胞を提供し、ここでその第１の融合タンパク質は、サイトカイン結合ドメインまたはその一部を含む細胞外構成要素と、ＩＬ−２Ｒγ（必要に応じてヒトＩＬ−２Ｒγ）、細胞内部分もしくは細胞内シグナル伝達ドメインもしくはその一部から構成されるか、またはこれと少なくとも９０％同一性を有するか、あるいは必要に応じて配列番号１０に示されるアミノ酸配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有する細胞内構成要素との間に配置された膜貫通ドメインを含み；ここでその第２の融合タンパク質は、サイトカイン結合ドメインまたはその一部を含む細胞外構成要素と、ＩＬ−２Ｒβ（必要に応じてヒトＩＬ−２Ｒβ）、細胞内シグナル伝達ドメインもしくはその一部および／またはＩＬ−４Ｒ、ＩＬ−７Ｒ、ＩＬ−９Ｒ、ＩＬ−１５ＲもしくはＩＬ−２１Ｒ鎖のシグナル伝達ドメインもしくはその一部から構成されるか、またはこれと少なくとも９０％同一性を有するか、あるいは必要に応じて配列番号１２に示されるアミノ酸配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有する細胞内構成要素との間に配置された膜貫通ドメインを含み；そしてここでその必要に応じた抗原結合タンパク質は、Ｔ細胞レセプター（ＴＣＲ）；キメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）を含み；そして必要に応じて複数の抗原結合タンパク質を含む。いくつかの実施形態において、本開示の宿主細胞は、複数の抗原結合タンパク質（例えば、ＴＣＲおよびＣＡＲの両方）を含む。
【００７２】
さらなる局面において、本開示は、第１の融合タンパク質、第２の融合タンパク質、および必要に応じて抗原結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞を提供し、ここでそのコードされる第１の融合タンパク質は、配列番号１のアミノ酸２３〜４３５（成熟融合タンパク質）に示されるアミノ酸配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有し；そのコードされる第２の融合タンパク質は、配列番号２のアミノ酸１７〜７４９（成熟融合タンパク質）に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有し；そしてその必要に応じた抗原結合タンパク質は、抗原特異的ＴＣＲまたは抗原特異的ＣＡＲを含み、ここでその抗原は、必要に応じてがん特異的抗原（例えば、ＷＴ−１、メソテリン、ＲＯＲ１またはサイクリン−Ａ１抗原）である。
【００７３】
ある種の実施形態において、本開示のポリヌクレオチドを含む宿主細胞は、宿主細胞表面上でヘテロマルチマーを形成するように会合できる少なくとも２種のコードされた融合タンパク質を含み、必要に応じて、ここでその宿主細胞表面上のヘテロマルチマーは、ヘテロダイマーまたはヘテロトリマーである。
【００７４】
さらなる実施形態において、融合タンパク質は各々、異なる細胞外構成要素を含み、ここで異なる細胞外構成要素は、機能的サイトカイン結合ドメインを形成するように互いと会合できる。特定の実施形態において、異なるコードされる細胞外構成要素のうちの一方は、ＣＳＦ２Ｒα、必要に応じてヒトＣＳＦ２Ｒα、細胞外部分、細胞外サイトカイン結合ドメインもしくはその一部のアミノ酸配列から構成されるか、またはこれと少なくとも９０％のアミノ酸同一性を有するか、あるいは必要に応じて配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％のアミノ酸同一性を有し、他方の異なる細胞外構成要素は、ＣＳＦ２Ｒβ、必要に応じてヒトＣＳＦ２Ｒβ、細胞外部分、細胞外サイトカイン結合ドメインもしくはその一部のアミノ酸配列から構成されるか、またはこれと少なくとも９０％のアミノ酸同一性を有するか、あるいは必要に応じて配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９０％のアミノ酸同一性を有する。これらの実施形態のうちのいずれかにおいて、融合タンパク質は各々、異なる細胞内構成要素を含み、ここで異なる細胞内構成要素は、機能的細胞内シグナル伝達ドメインを形成するように互いと会合できる。さらなる実施形態において、異なる細胞内構成要素のうちの少なくとも一方は、ＩＬ−２Ｒγ細胞内部分、細胞内シグナル伝達ドメインもしくはその一部から構成されるか、またはこれと少なくとも９０％同一性を有するか、あるいは必要に応じて配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有する。なおさらなる実施形態において、異なる細胞内構成要素のうちの少なくとも一方は、ＩＬ−２Ｒβ、ＩＬ−４ＲＡ、ＩＬ−７Ｒ、ＩＬ−１５ＲＡ、またはＩＬ−２１Ｒ細胞内部分、細胞内シグナル伝達ドメインもしくはその一部から構成されるか、またはこれと少なくとも９０％同一性を有し、いずれの場合にも、個々に、必要に応じてヒト由来であるか、あるいは必要に応じて配列番号１２と少なくとも９０％同一性を有する。
【００７５】
他の実施形態において、本開示の融合タンパク質または複数の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞は、抗原結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドをさらに含み得る。いくつかの実施形態において、そのコードされる抗原結合タンパク質は、Ｔ細胞レセプター（ＴＣＲ）であるか、または必要に応じて抗原特異的ＴＣＲであり、必要に応じてそのＴＣＲは、抗原：：ＨＬＡ複合体に高親和性で（例えば、１０７  Ｍ−１に等しいかまたはこれより大きなＫａで）結合する。さらなる実施形態において、そのコードされる抗原特異的ＴＣＲは、その宿主細胞に対して、またはその宿主細胞が投与される被験体に対して異種である。特定の実施形態において、そのコードされるＴＣＲは、ＨＬＡクラスＩ拘束性抗原に対して特異的である。前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、その抗原結合タンパク質は、がん特異的抗原（例えば、ＷＴ−１、メソテリン、ＲＯＲ１またはサイクリン−Ａ１）に対して特異的である。いくつかの実施形態において、そのＴＣＲは、Ｃ４と称されるＷＴ−１特異的ＴＣＲである。
【００７６】
なおさらなる実施形態において、本開示の融合タンパク質または複数の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞は、抗原結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドをさらに含み得、ここでその抗原結合タンパク質は、ＣＡＲである。その宿主細胞において発現される例示的なＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメインおよびＴ細胞に一次シグナルを送達し得る細胞内シグナル伝達ドメインおよび必要に応じて共刺激ドメインを含み得るか；またはその細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激分子（例えば、ＣＤ２８、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、またはＩＣＯＳに由来する）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態において、コードされる細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ε、ＣＤ３δ、ＣＤ３ζ、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ４７、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＣＤ３５７（ＧＩＴＲ）、ＣＡＲＤ１１、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＦｃＲα、ＦｃＲβ、ＦｃＲγ、Ｆｙｎ、Ｌｃｋ、ＬＡＴ、ＬＲＰ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＯＴＣＨ１、ＮＯＴＣＨ２、ＮＯＴＣＨ３、ＮＯＴＣＨ４、ＲＯＲ２、Ｒｙｋ、Ｓｌｐ７６、ｐＴα、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＲＩＭ、Ｚａｐ７０、ＰＴＣＨ２の細胞内シグナル伝達ドメイン、もしくはこれらのうちのいずれかの組み合わせを含み、そして／またはキメラ抗原レセプターの細胞内シグナル伝達部分は、必要に応じてＣＤ３  ζに由来する一次活性化シグナル伝達ドメインを含み、共刺激ドメインを含まず、そして／またはＣＤ２８シグナル伝達ドメイン、４−１ＢＢシグナル伝達ドメインおよび／もしくはＩＣＯＳシグナル伝達ドメインを含まない。
【００７７】
ある種の実施形態において、そのコードされる細胞内シグナル伝達ドメインは、以下の共刺激ドメインを含む：（ａ）ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）、またはこれらのうちのいずれかの組み合わせ；（ｂ）ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）もしくはＣＤ２８、またはこれらのうちのいずれかの組み合わせ；（ｃ）ＣＤ２８；あるいは（ｄ）ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）。特定の実施形態において、そのコードされる細胞内シグナル伝達ドメインは、第２の細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）の細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。
【００７８】
さらなる実施形態において、ＣＡＲのそのコードされる抗原結合ドメインは、抗原に対して特異的な抗体結合フラグメントまたはｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態において、本明細書で記載されるとおりの宿主細胞は、少なくとも２種の抗原結合タンパク質を含み、ここでその少なくとも２種の抗原結合タンパク質は、ＴＣＲおよびＣＡＲを含む。ある特定の実施形態において、抗原に対して特異的なＴＣＲまたはキメラ抗原レセプターを含むＴ細胞における融合タンパク質の発現は、Ｔ細胞と実質的に同じであるが、融合タンパク質を含まない細胞と比較して、抗原の結合に応答しておよび／または被験体への投与後に、Ｔ細胞によって、生存、拡大、細胞毒性、サイトカイン分泌、および／または複数回の刺激への応答において、少なくとも約１．５倍、２倍、または３倍の増加を生じる、ならびに／あるいは細胞が投与される被験体の生存の時間、無病生存期間、または１もしくはこれより多くの疾患症状の改善において少なくとも約１．５倍、２倍、または３倍の増加を生じる。
【００７９】
本開示の融合タンパク質、抗原結合タンパク質、およびこれらをコードするポリヌクレオチドとともに使用するための例示的な宿主細胞としては、免疫系細胞（例えば、Ｔ細胞）が挙げられる。Ｔ細胞は、ＣＤ４＋  Ｔ細胞またはＣＤ８＋  Ｔ細胞であり得る。
【００８０】
いくつかの実施形態において、本開示の融合タンパク質を細胞表面上に発現し得る宿主細胞は、免疫細胞である。いくつかの実施形態において、本開示の融合タンパク質を細胞表面上に発現し得る宿主細胞は、ヒト、マウス、ラット、または他の哺乳動物に由来する初代細胞または細胞株を含むＴ細胞である。哺乳動物から得られる場合、Ｔ細胞は、多くの供給源（血液、骨髄、リンパ節、胸腺、または他の組織もしくは体液が挙げられる）から得られ得る。Ｔ細胞は、富化または精製され得る。Ｔ細胞株は、当該分野で周知であり、そのうちのいくつかは、Ｓａｎｄｂｅｒｇら，  Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ２１：２３０，  ２０００に記載される。ある種の実施形態において、ＴＣＲα鎖およびβ鎖の内因性発現を欠くＴ細胞が使用される。このようなＴ細胞は、ＴＣＲα鎖およびβ鎖の内因性発現を天然に欠いていてもよいし、発現をブロックする（例えば、ＴＣＲα鎖およびβ鎖を発現しないトランスジェニックマウスに由来するＴ細胞またはＴＣＲα鎖およびβ鎖の発現を阻害するように操作された細胞）ようにか、またはＴＣＲα鎖、ＴＣＲβ鎖、もしくは両方の遺伝子をノックアウトするように改変されていてもよい。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、特定の抗原に対して特異的なＴＣＲを発現するように操作され得る。
【００８１】
ある種の実施形態において、本開示の融合タンパク質を発現するようにトランスフェクトされる宿主細胞は、機能的Ｔ細胞（例えば、ウイルス特異的Ｔ細胞、腫瘍抗原特異的細胞傷害性Ｔ細胞、ナイーブＴ細胞、メモリーステムＴ細胞、セントラルもしくはエフェクターメモリーＴ細胞、γδ  Ｔ細胞、またはＣＤ４＋  ＣＤ２５＋調節性Ｔ細胞）である。さらなる実施形態において、本開示の融合タンパク質をコードする核酸分子は、バルクＣＤ８＋  Ｔ細胞、ナイーブ  ＣＤ８＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  ＴＣＭ細胞、ＣＤ８＋  ＴＥＭ細胞、またはこれらのうちのいずれかの組み合わせへと導入される。なおさらなる実施形態において、本開示の融合タンパク質をコードする核酸分子は、バルクＣＤ４＋  Ｔ細胞、ナイーブ  ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ４＋  ＴＣＭ細胞、ＣＤ４＋  ＴＥＭ細胞、またはこれらのうちのいずれかの組み合わせへと導入される。他の実施形態において、本開示の融合タンパク質をコードする核酸分子は、ナイーブＣＤ８＋  Ｔ細胞およびＣＤ８＋  ＴＣＭ細胞に関して富化されたＴ細胞の集団へと導入される。さらに他の実施形態において、本開示の融合タンパク質をコードする核酸分子は、ナイーブＣＤ４＋  Ｔ細胞およびＣＤ４＋  ＴＣＭ細胞に関して富化されたＴ細胞の集団へと導入される。前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、そのＴ細胞はさらに、操作された抗原特異的Ｔ細胞レセプター（ＴＣＲ）、操作された抗原特異的高親和性ＴＣＲ、外因性共刺激分子、キメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）、またはこれらのうちのいずれかの組み合わせをコードする核酸分子を含む。
【００８２】
ある種の実施形態において、本開示の融合タンパク質を発現するようにトランスフェクトされる宿主細胞は、機能的ナチュラルキラー細胞である。
【００８３】
本開示の融合タンパク質を発現するＴ細胞の増殖を促進する１種またはこれより多くの種の成長因子サイトカインは、Ｔ細胞を拡大するために使用される培養物へと添加され得る。サイトカインは、ヒトまたは非ヒトであり得る。Ｔ細胞増殖を促進するために使用され得る例示的な成長因子サイトカインとしては、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−２、ＩＬ−１５などが挙げられる。
【００８４】
ある種の実施形態において、本開示の融合タンパク質を発現するようにトランスフェクトされる宿主Ｔ細胞は、ＨＬＡ（ＭＨＣ）クラスＩ拘束性抗原に対して特異的な抗原特異的高親和性ＴＣＲをも発現するＣＤ４＋  Ｔ細胞である（Ｓｏｔｏら，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．  ６２：  ３５９−３６９，  ２０１３を参照のこと）。
【００８５】
ある種の実施形態において、本開示の融合タンパク質を発現するようにトランスフェクトされる宿主Ｔ細胞はまた、がん抗原に対して特異的な組換えＴＣＲを発現する。いくつかの実施形態において、そのがん抗原は、ＷＴ１である。「ＷＴ１」とは、、Ｃ末端に４個のジンクフィンガーモチーフおよびＮ末端にプロリン／グルタミンリッチＤＮＡ結合ドメインを含む転写因子であるウィルムス腫瘍１をいう。ＷＴ１は、泌尿生殖系の正常の発生において必須の役割を有し、ウィルムス腫瘍を有する患者の小さな部分セットにおいて変異している。ＷＴ１の高発現は、種々のがん（乳がん、卵巣がん、急性白血病、血管新生物、黒色腫、結腸がん、肺がん、甲状腺がん、骨肉腫および軟部組織肉腫、ならびに食道がんが挙げられる）において観察されている。選択的スプライシングは、ＷＴ１に関して特に言及されている。
【００８６】
ある種の実施形態において、本開示の融合タンパク質を発現するようにトランスフェクトされる宿主Ｔ細胞はまた、メソテリンに対して特異的な組換えＴＣＲを発現する。「メソテリン」（ＭＳＬＮ）とは、２つの生成物、巨核球増強因子（ｍｅｇａｋａｒｙｏｃｙｔｅ  ｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ）およびメソテリンへと切断される前駆タンパク質をコードする遺伝子に言及する。巨核球増強因子は、骨髄巨核球におけるコロニー形成を刺激し得るサイトカインとして機能する。メソテリンは、細胞接着タンパク質として機能し得るグリコシルホスファチジルイノシトールアンカー細胞表面タンパク質である。このタンパク質は、上皮型中皮腫、卵巣がんにおいて、および特定の扁平上皮癌において過剰発現される。選択的スプライシングは、複数の転写物改変体を生じる。
【００８７】
ある種の実施形態において、本開示の融合タンパク質を発現するようにトランスフェクトされる宿主Ｔ細胞はまた、サイクリン−Ａ１に対して特異的な組換えＴＣＲを発現する。
【００８８】
ある種の実施形態において、本開示の融合タンパク質を発現するようにトランスフェクトされる宿主Ｔ細胞はまた、ＣＡＲを発現する。
【００８９】
使用
本開示で記載されるとおりの融合タンパク質を発現する細胞で処置され得る疾患としては、がん、感染性疾患（ウイルス感染症、細菌感染症、原生動物感染症）、および免疫疾患（例えば、自己免疫）が挙げられる。養子免疫治療および遺伝子治療は、種々のタイプのがん（Ｍｏｒｇａｎら，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３１４：１２６，  ２００６；  Ｓｃｈｍｉｔｔら，  Ｈｕｍ．  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．  ２０：１２４０，  ２００９；  Ｊｕｎｅ，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  １１７：１４６６，  ２００７）および感染性疾患（Ｋｉｔｃｈｅｎら，  ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ４：３８２０８，  ２００９；  Ｒｏｓｓｉら，  Ｎａｔ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ２５：１４４４，  ２００７；  Ｚｈａｎｇら，  ＰＬｏＳ  Ｐａｔｈｏｇ．  ６：ｅ１００１０１８，  ２０１０；  Ｌｕｏら，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｍｅｄ．  ８９：９０３，  ２０１１）に有望な処置である。
【００９０】
ある種の実施形態において、本明細書で提供される方法は、血液悪性腫瘍または固形がんである過剰増殖性疾患を処置するためのものである。例えば、処置されるべき血液悪性腫瘍は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性好酸球性白血病（ＣＥＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、または多発性骨髄腫（ＭＭ）であり得る。処置されるべき例示的な固形がんは、胆嚢がん、膀胱がん、骨および軟部組織癌、脳腫瘍、乳がん、子宮頚がん、結腸がん、結腸直腸腺癌、結腸直腸がん、類腱腫、胚性がん、子宮内膜がん、食道がん、胃がん、胃腺癌、多形膠芽腫、婦人科腫瘍、頭頚部扁平上皮癌、肝がん、肺がん、悪性黒色腫、骨肉腫、卵巣がん、膵臓がん、膵管腺癌、原発性星細胞腫瘍、原発性甲状腺がん、前立腺がん、腎臓がん、腎細胞癌、横紋筋肉腫、皮膚がん、軟部組織肉腫、精巣胚細胞腫瘍、尿路上皮がん、子宮肉腫、または子宮がんであり得る。
【００９１】
処置され得るがんの他の例示的なタイプとしては、以下が挙げられる：胸部、前立腺、および結腸の腺癌；肺の気管支原性癌の全ての形態；骨髄性白血病；黒色腫；ヘパトーマ；神経芽腫；乳頭腫；アプドーマ；分離腫；鰓腫（branchioma）；悪性カルチノイド症候群；カルチノイド心疾患；および癌（例えば、ウォーカー、基底細胞、基底有棘細胞、ブラウン・ピアース、腺管（ｄｕｃｔａｌ）、エールリッヒ腫瘍、クレブス２、メルケル細胞、粘液、非小細胞肺、燕麦細胞、乳頭、硬性、細気管支、気管支原性、扁平上皮、および移行上皮）。処置され得るがんのさらなるタイプとしては、以下が挙げられる：組織球性障害；悪性組織球症；白血病；ホジキン病；免疫増殖性小腸疾患（ｉｍｍｕｎｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｓｍａｌｌ）；非ホジキンリンパ腫；形質細胞腫；細網内皮症；黒色腫；軟骨芽細胞腫；軟骨腫；軟骨肉腫；線維腫；線維肉腫；巨細胞腫瘍；組織球腫；脂肪腫；脂肪肉腫；中皮腫；粘液腫；粘液肉腫；骨腫；骨肉腫；脊索腫；頭蓋咽頭腫；未分化胚細胞腫；過誤腫；間葉腫；中腎腫；筋肉腫；エナメル上皮腫；セメント質腫；歯牙腫；奇形腫；胸腺腫；栄養膜腫瘍。さらに、以下のタイプのがんがまた、処置の影響を受けやすいとして企図される：腺腫；胆管腫；真珠腫；円柱腫（ｃｙｃｌｉｎｄｒｏｍａ）；嚢胞腺癌；嚢胞腺腫；顆粒膜細胞腫；卵巣男性胚腫（ｇｙｎａｎｄｒｏｂｌａｓｔｏｍａ）；ヘパトーマ；汗腺腫；膵島細胞腫瘍；ライディッヒ細胞腫瘍；乳頭腫；セルトリ細胞腫；莢膜細胞腫；平滑筋腫（ｌｅｉｍｙｏｍａ）；平滑筋肉腫；筋芽細胞腫；筋腫（ｍｙｏｍｍａ）；筋肉腫；横紋筋腫；横紋筋肉腫；上衣腫；神経節細胞腫；神経膠腫；髄芽腫；髄膜腫；神経鞘腫；神経芽腫；神経上皮腫；神経線維腫；神経腫；傍神経節腫；非クローム親和性傍神経節腫。処置され得るがんのタイプはまた、以下が挙げられる：被角血管腫；好酸球性血管リンパ球性増殖症（ａｎｇｉｏｌｙｍｐｈｏｉｄ  ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ  ｗｉｔｈ  ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｉａ）；硬化性血管腫；血管腫症；グロムス血管腫；血管内皮腫；血管腫；血管周皮腫；血管肉腫；リンパ管腫；リンパ管筋腫；リンパ管肉腫；松果体腫；癌肉腫；軟骨肉腫；葉状嚢胞肉腫；線維肉腫；血管肉腫；平滑筋肉腫；白血肉腫；脂肪肉腫；リンパ管肉腫；筋肉腫；粘液肉腫；卵巣がん；横紋筋肉腫；肉腫；新生物；神経線維腫症（ｎｅｒｏｆｉｂｒｏｍａｔｏｓｉｓ）；および子宮頚部異形成。
【００９２】
融合タンパク質Ｔ細胞療法に影響を受けやすい例示の種々の過剰増殖性障害としては、Ｂ細胞がん（Ｂ細胞リンパ腫（例えば、ホジキン病の種々の形態、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）または中枢神経系リンパ腫が挙げられる）、白血病（例えば、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、ヘアリーセル白血病、慢性骨髄性白血病のＢ細胞芽球形質転換（ｃｅｌｌ  ｂｌａｓｔ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ））および骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）である。さらなるＢ細胞がんとしては、以下が挙げられる：小リンパ球性リンパ腫、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、脾辺縁帯リンパ腫、形質細胞骨髄腫、骨の孤立性形質細胞腫、骨外性形質細胞腫、粘膜関連リンパ組織型節外性辺縁帯リンパ腫（ｅｘｔｒａ−ｎｏｄａｌ  ｍａｒｇｉｎａｌ  ｚｏｎｅ  Ｂ−ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ  ｏｆ  ｍｕｃｏｓａ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ（ＭＡＬＴ）  ｌｙｍｐｈｏｉｄ  ｔｉｓｓｕｅ）、節性辺縁帯Ｂ細胞性リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、バーキットリンパ腫／白血病、悪性の可能性のあるＢ細胞増殖（Ｂ−ｃｅｌｌ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｕｎｃｅｒｔａｉｎ  ｍａｌｉｇｎａｎｔ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ）、リンパ腫様肉芽腫症、および移植後リンパ増殖性障害。
【００９３】
炎症性疾患および自己免疫疾患としては、以下が挙げられる：関節炎、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、変形性関節症、多発軟骨炎、乾癬性関節炎、乾癬、皮膚炎、多発性筋炎／皮膚筋炎、封入体筋炎、炎症性筋炎、中毒性表皮壊死症、全身性強皮症および硬化症、クレスト症候群、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、呼吸窮迫症候群、成人性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、髄膜炎、脳炎、ぶどう膜炎、大腸炎、糸球体腎炎、アレルギー状態、湿疹、喘息、Ｔ細胞の浸潤および慢性炎症応答が関わる状態、アテローム性動脈硬化症、自己免疫性心筋炎、白血球接着不全症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、亜急性皮膚エリテマトーデス、円板状エリテマトーデス、ループス脊髄炎、ループス脳炎、若年発症糖尿病、多発性硬化症、アレルギー性脳脊髄炎、視神経脊髄炎、リウマチ熱、シデナム舞踏病、サイトカインおよびＴリンパ球によって媒介される急性および遅延型過敏症と関連する免疫応答、結核、類肉腫症、ウェゲナー肉芽腫症およびチャーグ・ストラウス病を含む肉芽腫症、無顆粒球症、血管炎（過敏性血管炎／脈管炎、ＡＮＣＡおよびリウマトイド血管炎を含む）、再生不良性貧血、ダイアモンド・ブラックファン貧血、自己免疫性溶血性貧血（ＡＩＨＡ）を含む免疫性溶血性貧血、悪性貧血、赤芽球癆（ＰＲＣＡ）、第ＶＩＩＩ因子欠乏症、血友病Ａ、自己免疫好中球減少症、汎血球減少症、白血球減少症、白血球遊出が関わる疾患、中枢神経系（ＣＮＳ）炎症性障害、多臓器障害症候群（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｏｒｇａｎ  ｉｎｊｕｒｙ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、重症筋無力症、抗原−抗体複合体媒介性の疾患、抗糸球体基底膜疾患、抗リン脂質抗体症候群、アレルギー性神経炎、ベーチェット病、キャッスルマン症候群、グッドパスチャー症候群、ランバート・イートン筋無力症症候群、レイノー症候群、シェーグレン症候群、スティーブンス・ジョンソン症候群、固形臓器移植片拒絶、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、水疱性類天疱瘡、天疱瘡、自己免疫性多内分泌腺症候群、血清反応陰性脊椎関節症、ライター病、スティフ・マン症候群、巨細胞性動脈炎、免疫複合体腎炎、ＩｇＡ腎症、ＩｇＭ多発ニューロパチーまたはＩｇＭ媒介性ニューロパチー、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、自己免疫性血小板減少症、自己免疫精巣炎および自己免疫卵巣炎を含む精巣および卵巣の自己免疫疾患、原発性甲状腺機能低下症；自己免疫甲状腺炎、慢性甲状腺炎（橋本甲状腺炎）、亜急性甲状腺炎、特発性甲状腺機能低下症、アジソン病、グレーブス病、多腺性自己免疫症候群（または多腺性内分泌障害症候群）、インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）ともいわれるＩ型糖尿病およびシーハン症候群を含む自己免疫性内分泌疾患；自己免疫性肝炎、リンパ球性間質性肺炎（ＨＩＶ）、閉塞性細気管支炎（非移植）、非特異性間質性肺炎（ＮＳＩＰ）、ギラン・バレー症候群、大型血管炎（リウマチ性多発筋痛症および巨細胞性（高安）動脈炎を含む）、中型血管炎（川崎病および結節性多発動脈炎を含む）、結節性多発動脈炎（ＰＡＮ）、強直性脊椎炎、バージャー病（ＩｇＡ腎症）、急速進行性糸球体腎炎、原発性胆汁性肝硬変、セリアックスプルー（グルテン性腸症）、クリオグロブリン血症、肝炎と関連するクリオグロブリン血症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、冠動脈疾患、家族性地中海熱、顕微鏡的多発血管炎、コーガン症候群、ウィスコット・オルドリッチ症候群および閉塞性血栓血管炎。
【００９４】
特定の実施形態において、本明細書で開示されるとおりの融合タンパク質で被験体を処置するための方法は、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、および慢性骨髄性白血病を含む。
【００９５】
感染性疾患としては、感染性因子と関連するものが挙げられ、以下のうちのいずれかが挙げられる：種々の細菌（例えば、病原性Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｓ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｂ．ａｎｔｈｒａｃｉｓ、Ｃ．ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｃ．ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ、Ｖ．ｃｈｏｌｅｒａｅ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｓｐｐ．、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｓｐｐ．、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｓｐｐ．など）、マイコバクテリア、および寄生生物（原生動物の中の任意の公知の寄生生物メンバーを含む）。感染性ウイルスとしては、真核生物ウイルス（例えば、アデノウイルス、ブンヤウイルス、ヘルペスウイルス、パポバウイルス、パピローマウイルス（例えば、ＨＰＶ）、パラミクソウイルス、ピコルナウイルス、ラブドウイルス（例えば、狂犬病）、オルソミクソウイルス（例えば、インフルエンザ）、ポックスウイルス（例えば、ワクシニア）、レオウイルス、レトロウイルス、レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ）、フラビウイルス（例えば、ＨＣＶ、ＨＢＶ）などが挙げられる。ある種の実施形態において、抗原がプロセシングされ、ＨＬＡ（ＭＨＣ）クラスＩ分子とともに示されるサイトゾル病原体での感染は、本開示の融合タンパク質で処置される。
【００９６】
本開示の融合タンパク質は、細胞結合形態（例えば、標的細胞集団（成熟Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８＋またはＣＤ４＋  Ｔ細胞）またはＴ細胞系統の他の細胞）の遺伝子治療）において被験体へと投与され得る。特定の実施形態において、被験体に投与される融合タンパク質を発現するＴ細胞系統の細胞は、同系細胞、同種異系細胞、または自己由来細胞である。
【００９７】
本開示の融合タンパク質を含む薬学的組成物は、医療分野の当業者によって決定される場合、処置される（または防止される）べき疾患または状態に適した様式で投与され得る。組成物の適切な用量、適切な継続時間、および投与頻度は、その患者の状態、サイズ、疾患のタイプおよび重篤度、活性成分の特定の形態、ならびに投与法のような因子によって決定される。本開示は、本明細書で開示されるとおりの融合タンパク質を発現する細胞および薬学的に受容可能なキャリア、希釈剤または賦形剤を含む薬学的組成物を提供する。適切な賦形剤としては、水、食塩水、デキストロース、グリセロールなどおよびこれらの組み合わせが挙げられる。
【００９８】
いくつかの実施形態において、本開示は、免疫細胞の活性を増加させる、免疫応答を増強または長期化する、抗原特異的Ｔ細胞応答を刺激する、免疫抑制シグナル伝達経路を阻害する、がんもしくは腫瘍を処置する、がん細胞の免疫抵抗性を阻害する、または感染症を処置するための方法に関し、上記方法は、その必要性のある被験体に、有効量の本明細書で記載されるとおりの融合タンパク質を発現する宿主細胞を投与するステップを包含する。さらなる実施形態において、前述の方法のうちのいずれかにおける使用のための宿主細胞は、操作された抗原特異的ＴＣＲ、操作された抗原特異的高親和性ＴＣＲ、ＣＡＲ、共刺激分子、またはこれらのうちのいずれかの組み合わせをさらに発現する。特定の実施形態において、白血病を処置するための方法が提供され、上記方法は、本明細書で開示されるとおりの融合タンパク質および組換え抗原特異的ＴＣＲを共発現するステップを包含する。
【００９９】
いくつかの実施形態において、ＣＤ４＋  Ｔ細胞によるクラスＩ  ＨＬＡ応答を誘導または増強するための方法が提供され、上記方法は、その必要性のある被験体に、有効量の本明細書で記載されるとおりの融合タンパク質を発現する  ＣＤ４＋  Ｔ細胞を投与するステップを包含する。さらなる実施形態において、ＣＤ４＋  Ｔ細胞によるクラスＩ  ＨＬＡ応答を誘導または増強することにおいて使用するための宿主細胞は、操作された抗原特異的ＴＣＲ、操作された抗原特異的高親和性ＴＣＲ、ＣＡＲ、共刺激分子、またはこれらのうちのいずれかの組み合わせをさらに発現する。
【０１００】
前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、上記方法は、外因性ＩＬ−２を投与するステップの非存在下で有効である。
【０１０１】
さらに他の実施形態において、前述の方法のうちのいずれかの被験体は、補助的療法（例えば、化学療法）でさらに処置される。例示的な化学療法剤としては、以下が挙げられる：例えば、アルキル化剤（例えば、チオテパおよびシクロホスファミド）；アルキルスルホネート（例えば、ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファン）；アジリジン（例えば、ベンゾドパ、カルボコン、メツレドパ、およびウレドパ）；エチレンイミンおよびメチラメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅ）（アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミドおよびトリメチロールメラミン（trimethylolomelamine）を含む）；ナイトロジェンマスタード（例えば、クロラムブシル、クロルナファジン、コロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、塩酸メクロレタミンオキシド、メルファラン、ノベムビチン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード）；ニトロソウレア（nitrosurea）（例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン）；抗生物質（例えば、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アントラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カリケアマイシン、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カミノマイシン（ｃａｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン（ｄｅｔｏｒｕｂｉｃｉｎ）、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン（ｍａｒｃｅｌｌｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン（ｏｌｉｖｏｍｙｃｉｎ）、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン）；代謝拮抗物質（例えば、メトトレキサートおよび５−フルオロウラシル（５−ＦＵ））；葉酸アナログ（例えば、デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン（ｐｔｅｒｏｐｔｅｒｉｎ）、トリメトレキサート）；プリンアナログ（例えば、フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン）；ピリミジンアナログ（例えば、アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、５−ＦＵ）；アンドロゲン（例えば、カルステロン、ドロモスタノロンプロピオネート、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン）；抗副腎皮質物質（ａｎｔｉ−ａｄｒｅｎａｌ）（例えば、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン）；葉酸補充剤（例えば、フロリン酸）；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトレキサート；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルシン；ジアジコン；エルホルミチン（ｅｌｆｏｒｍｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダミン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫＴＭ；ラゾキサン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２′，２″−トリクロロトリエチルアミン；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキサン（例えば、パクリタキセル（タキソールＴＭ、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，  Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，  Ｎ．Ｊ．）およびドセタキセル（タキソテールＴＭ、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ，  Ａｎｔｏｎｙ，  Ｆｒａｎｃｅ）；クロラムブシル；ゲムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金アナログ（例えば、シスプラチンおよびカルボプラチン）；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；マイトマイシンＣ；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ナベルビン；ノバントロン；テニポシド；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼインヒビターＲＦＳ  ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸；エスペラミシン、カペシタビン；ならびに上記のうちのいずれかの薬学的に受容可能な塩、酸または誘導体。
【０１０２】
いくつかの実施形態において、補助的療法は、ワクチン、免疫抑制シグナルのインヒビター、Ｂ−Ｒａｆインヒビター、ＭＥＫインヒビター、チロシンキナーゼインヒビター、細胞傷害性薬剤、化学療法剤、またはこれらのうちのいずれかの組み合わせである。いくつかの実施形態において、免疫抑制シグナルのインヒビターは、抗体またはｓｉＲＮＡである。いくつかの実施形態において、その抗体またはｓｉＲＮＡは、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＬＡＧ３、ＫＩＲ、ＣＤ２４４、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ａＲ、またはこれらのうちのいずれかの組み合わせに対して特異的である。
【実施例】
【０１０３】
実施例１
癌細胞におけるサイトカインおよびケモカインプロフィール
培養物中の精製膵臓癌細胞によって発現される可溶性因子を、定量的ＰＣＲによってプロファイリングした。簡潔には、全ＲＮＡを、ＫＰＣ腫瘍上皮細胞および同じ動物の肝臓への対の転移性細胞（各々ｎ＝３）の初代培養物から抽出し（ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉｐｒｅｐ  Ｋｉｔ，  Ｑｉａｇｅｎ）、浸潤前膵管上皮細胞からも抽出した。ＲＮＡを、Ｈｉｇｈ  Ｃａｐａｃｉｔｙ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ  Ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用してｃＤＮＡへと変換した。定量的ＰＣＲを、ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎマスターミックスを使用して行い、三連のサンプルをＣ１０００  Ｔｈｅｒｍａｌ  Ｃｙｃｌｅｒ（ＢｉｏＲａｄ）で実行した。プライマーは、刊行された文献に基づいたか、またはＰｒｉｍｅｒ−ＢＬＡＳＴソフトウェアを使用して設計した。定量を内因性ｃｙｃＡに対して正規化し、浸潤前細胞と比較した浸潤細胞および転移性細胞における遺伝子発現の倍数変化を、ΔΔＣＴ法を使用して計算した。ＰＤＡの遺伝子操作したＫｒａｓＬＳＬ−Ｇ１２Ｄ／＋；Ｔｒｐ５３ＬＳＬ−Ｒ１７２Ｈ／＋；Ｃｒｅ（ＫＰＣ）マウスモデルは、Ｈｉｎｇｏｒａｎｉら（Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ７：４６９，  ２００５）によって以前に記載された。
【０１０４】
浸潤細胞および転移性細胞の分泌プロフィールは、両方の顆粒球（例えば、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２）および単球（例えば、ＣＣＬ２）の輸送に関与する成長因子およびケモカインの合成に対する実質的関与を明らかにした（データは示さず）。顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、および単球コロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）はまた、浸潤前管細胞と比較して、腫瘍上皮細胞においてアップレギュレートされた。定量的ＰＣＲによる相対的遺伝子発現から、浸潤前細胞に対して浸潤細胞においてこれらの因子の増加が確認された（図１，  Ｓｔｒｏｍｎｅｓら，  Ｇｕｔ  ６３：１７６９，  ２０１４を参照のこと）。これらの３種の骨髄造血サイトカインのうち、ＧＭ−ＣＳＦは、顆粒球性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）生存をインビトロで促進することに対して最も顕著な効果を有した（データは示さず）。
【０１０５】
本明細書で記載されるように、本明細書で提供される実施形態（例えば、融合タンパク質および複合体）は、いくつかの局面において、腫瘍微小環境（例えば、転移性腫瘍または浸潤腫瘍の環境）のこれらおよび／または関連する特徴に基づく。いくつかの実施形態において、免疫療法の抗腫瘍活性を増強するための組成物および方法が提供される（例えば、ＣＳＦ２Ｒ（ＧＭ−ＣＳＦＲ）に由来する細胞外構成要素およびＩＬ−２Ｒに由来する細胞内構成要素から構成される例示的な融合タンパク質が、図２に図示される）。
【０１０６】
実施例２
高親和性メソテリン特異的ＴＣＲの生成
Ｂ６  Ｍｓｌｎ−／−マウスおよび野生型（ＷＴ）マウスを、マウスＭｓｌｎ（Ａｄ−Ｍｓｌｎ）を発現する組換えアデノウイルスで免疫して、反応性Ｔ細胞を誘発した。エピトープＭｓｌｎ３４３−３５１、Ｍｓｌｎ４８４−４９２、Ｍｓｌｎ５４４−５５２、およびＭｓｌｎ５８３−５９１に対して特異的なＴ細胞を、ＷＴマウスからではなくＭｓｌｎ−／−マウスから単離し、。これは、中枢性トレランスと一致した（Ｓｔｒｏｍｎｅｓら，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２８：６３８，  ２０１５）。しかし、Ｍｓｌｎ−／−マウスおよびＷＴマウスはともに、Ｂ６卵巣がん細胞株によってプロセシングされかつ提示されることが以前に示された（Ｈｕｎｇら，  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．  １４：９２１，  ２００７）Ｍｓｌｎ４０６−４１４への応答を生じた。ＷＴマウスから単離されたＭｓｌｎ４０６−４１４特異的Ｔ細胞はＶβ９  ＴＣＲ鎖を、Ｍｓｌｎ−／−マウスに由来するＭｓｌｎ４０６−４１４特異的Ｔ細胞の大部分が発現した（Ｓｔｒｏｍｎｅｓら，  ２０１５）のと同様に、一様に発現した。Ｖβ９の類似のレベルを発現するにも拘わらず、Ｍｓｌｎ−／−マウスに由来するＭｓｌｎ４０６−４１４特異的Ｔ細胞系統は、テトラマーでより明るく染色され、これは、より高い親和性と一致した（Ｓｔｒｏｍｎｅｓら，  ２０１５）。Ｍｓｌｎ−／−  Ｍｓｌｎ４０６−４１４特異的Ｔ細胞クローンはまた、その相当するＷＴクローンより低い抗原濃度に応答した（Ｓｔｒｏｍｎｅｓら，  ２０１５）。ＷＴマウスおよびＭｓｌｎ−／−マウスから単離した大部分のＴ細胞クローンは、同じ生殖細胞系列Ｖα４およびＶβ９  ＴＣＲ鎖を使用し、それぞれの系統からの最も高親和性のクローンの間でのいかなる配列差異をもＣＤＲ３に制限した（図３Ａ）。
【０１０７】
実施例３
マウスモデルにおける例示的ＣＳＦ２Ｒ：：ＩＬ−２Ｒ構築物の評価
例示的ＣＳＦ２Ｒ：：ＩＬ−２Ｒキメラ構築物、および抗原特異的操作Ｔ細胞の機能に対するそれらの影響を、マウスＣ５７ＢＬ／６フレンドウイルス誘導性赤白血病（ＦＢＬ）およびＴＣＲｇａｇトランスジェニックマウスに基づいて、播種性の白血病の前臨床マウスモデルにおいて評価した。
【０１０８】
マウス遺伝子（図２に図示されるものに類似）に基づくＣＳＦ２Ｒ：：ＩＬ−２Ｒキメラ構築物および／またはメソテリン標的化Ｔ細胞レセプター（ＴＣＲ１０４５（ＭＳＬＮ４０６−４１４特異的））コード構築物（Ｓｔｒｏｍｎｅｓら，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２８：６３８，  ２０１５、ここでＴＣＲ１０４５（配列を含む）は、本明細書に参考として援用される）を、ｐＭＰ７１レトロウイルスベクターへと挿入し、抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８抗体で刺激した初代Ｐ１４  Ｔｈｙ１．１＋マウス脾細胞を形質導入するために使用した。融合タンパク質構築物を、ＰＣＲによって生成した。次いで、その構築物を、ｐＥＮＴＲＴＭ／Ｄ−ＴＯＰＯ（登録商標）ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）へと方向性を保ってＴＯＰＯクローニングし、レトロウイルスベクターｐＭＰ７１−ａｔｔＲへとＧａｔｅｗａｙ（登録商標）技術（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して移入した。レトロウイルスパッケージング細胞株Ｐｌａｔ−Ｅ（Ｍｏｒｉｔａら，  ２０００，  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ７：１０６３−１０６６，  ２０００；  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌａｂｓ，  Ｉｎｃ．）を、ｅｆｆｅｃｔｅｎｅ形質導入試薬（Ｑｉａｇｅｎ）を使用してレトロウイルスベクターで形質導入した。ウイルス上清をトランスフェクション後２日目および３日目に集め、次いで、ＴＣＲ１０４５を含むいくつかの場合に、Ｔ細胞を形質導入するために使用した。トランスフェクションの１日前に、Ｐ１４  Ｔｈｙ１．１＋  Ｔ細胞を、抗ＣＤ３／ＣＤ２８および１００  Ｕ／ｍＬ  ｒｈＩＬ−２で刺激した。Ｐ１４  Ｔｈｙ１．１＋  Ｔ細胞の形質導入を、９０分間、１０００ｇでのスピンフェクションによってＩＬ−２およびポリブレンの存在下で１２ウェルプレートの中で行った。ＴＣＲ１０４５を形質導入したＴ細胞を、抗ＣＤ３／ＣＤ２８でのＴ細胞活性化後にＭｓｌｎ４０６−４１４ペプチド（ＧＱＫＭＮＡＱＡＩ，  １μｇ／ｍｌ）および組換えヒトＩＬ−２（ｒ−ＩＬ２，  ５０  ＩＵ／ｍｌ）で７日間パルスした照射Ｔｈｙ１．２＋脾細胞で再刺激した。抗原再刺激後５日目に、＞９０％  Ｔ細胞が、導入されたＴＣＲを発現した。ＴＣＲ１０４５を発現する５×１０６細胞を、Ｔｈｙ１．２＋  Ｃ５７ＢＬ／６（Ｂ６）マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）へと、組換えマウスメソテリンを発現するように操作された５×１０８  ｐｆｕの組換え弱毒化アデノウイルス（Ａｄ−Ｍｓｌｎ）ワクチンと一緒に（ｉ．ｍ．）注入した。その注入したＴＣＲ１０４５＋ドナー細胞は、ＧＭ／ＩＬ２Ｒ融合タンパク質を発現する集団（「ＧＭ／ＩＬ２Ｒ」）およびその構築物を発現しない集団（「ＷＴ」）を含んだ。ドナー細胞を、注入後０日目、８日目、１４日目、および２１日目に追跡した。
【０１０９】
より詳細には、ＴＣＲ１０４５＋ドナー（Ｔｈｙ１．１＋／Ｖβ９＋ゲーティングした）Ｔ細胞を、ＧＭ−ＣＳＦＲの細胞外部分を含む分子の表面発現に関してフローサイトメトリーによって分析した（単球上での発現を陽性コントロールとして使用した）。０日目に、ＴＣＲ１０４５＋ドナーＴ細胞のうちのおよそ５０％が、キメラ分子を発現することをこのアッセイによって観察した（図３Ｂ）。
【０１１０】
動物の血液中のドナーＴ細胞の存在を、経時的にモニターし続けた。ドナーＴ細胞は持続し、移入後少なくとも２１日間血液中で検出可能であった（図４Ａ）。
【０１１１】
図４Ｂおよび図４Ｃに示されるように、ＣＳＦ２Ｒ：：ＩＬ−２Ｒ融合タンパク質を発現するドナーＴ細胞（抗ＧＭ−ＣＳＦ染色によって決定される場合）（「ＧＭ／ＩＬ２Ｒ」）は、融合タンパク質を発現しないドナーＴ細胞（「ＷＴ」）と比較して、生存および／または増殖の優位を示した。例えば、移入後１４日目まで、２１日目まで続けて、ＧＭ／ＩＬ２Ｒ発現細胞は、血液中で検出されたドナーＴ細胞のうちのほぼ全てが該当した（図４Ｂおよび図４Ｃ）。これらの結果は、融合タンパク質がＴＣＲ１０４５を発現する養子移入したＴ細胞に持続性の優位を提供したことを示す。
【０１１２】
これらのデータは、本開示の融合タンパク質がいくつかの実施形態においてＴ細胞（例えば、抗原特異的ＴＣＲを含むＴ細胞）に、生存および／または拡大の利点を提供することを示し、これは、腫瘍微小環境における有効性を改善することを含め、持続性および移入した細胞への曝露を改善する構築物の有用性と一致する。
【０１１３】
本明細書において言及されるかまたは出願データシートにおいて列挙される米国特許、米国特許出願公開、米国特許出願、外国特許、外国特許出願および非特許刊行物の全て（米国仮特許出願第６２／３２５，４２８号（２０１６年４月２０日出願）が挙げられるが、これに限定されない）は、それらの全体において本明細書に参考として援用される。実施形態の局面は、必要であれば、種々の特許、出願および刊行物の概念を使用して、なおさらなる実施形態を提供するために、改変され得る。
【０１１４】
これらおよび他の変更は、上記の詳細な記載を考慮して実施形態に対して行われ得る。一般に、以下の請求項において、使用される用語は、請求項を本明細書および請求項の中で開示される具体的実施形態に限定すると解釈されるべきではないが、このような請求項が権利化される均等物の全範囲とともに、全ての考えられる実施形態を含むと解釈されるべきである。よって、請求項は、本開示によって限定されない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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