(57)【要約】  被験者を治療する方法は、必要とする被験者に、有効量のキラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を投与し、それによって、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化することを含み得る。がんを治療する方法は、それを必要とする被験者に、有効量のキラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を投与することを含み得る。これらの方法は、さまざまながん、例えば、黒色腫、肺がん、膵がん、神経膠腫、乳がん、卵巣がんを治療することができる。
2019518791.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験者を治療する方法において、
必要とする被験者に、有効量のキラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を投与し、それによって、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化することを含む、方法。
【請求項２】
がんを治療する方法において、
それを必要とする被験者に、有効量のキラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を投与することを含む、方法。
【請求項３】
請求項１または２に記載の方法において、
前記結合剤は、抗体もしくはその抗原結合断片、または抗体模倣物である、方法。
【請求項４】
請求項３に記載の方法において、
前記抗体もしくはその抗原結合断片、または抗体模倣物は、ヒトまたはヒト化抗体を含む、方法。
【請求項５】
請求項３に記載の方法において、
前記抗体もしくはその抗原結合断片、または抗体模倣物は、
ａ．ＫＬＲＧ１を結合させる完全長抗体のＦａｂ部分；
ｂ．Ｅ−カドヘリンを結合させる完全長抗体のＦａｂ部分；
ｃ．Ｎ−カドヘリンを結合させる完全長抗体のＦａｂ部分；
ｄ．Ｒ−カドヘリンを結合させる完全長抗体のＦａｂ部分；
ｅ．融合タンパク質Ｅ−カドヘリン／Ｆｃ；
ｆ．融合タンパク質Ｒ−カドヘリン／Ｆｃ；
ｇ．融合タンパク質Ｎ−カドヘリン／Ｆｃ；
ｈ．キメラ抗原受容体；または、
ｉ．多特異性抗体、
を含む、方法。
【請求項６】
請求項５に記載の方法において、
前記キメラ抗原受容体を含み、
前記キメラ抗原受容体は、Ｔ細胞に移植されたＫＬＲＧ１抗体の特異性部分を含む、方法。
【請求項７】
請求項５に記載の方法において、
多特異性抗体を含み、
前記多特異性抗体は、二重特異性または三重特異性抗体を含む、方法。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法において、
前記結合剤はＫＬＲＧ１を結合させる、方法。
【請求項９】
請求項８に記載の方法において、
前記ＫＬＲＧ１は、ヒトＫＬＲＧ１の細胞外ドメインである、方法。
【請求項１０】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法において、
前記結合剤は、ＫＬＲＧ１リガンドを結合させる、方法。
【請求項１１】
請求項１０に記載の方法において、
前記ＫＬＲＧ１リガンドは、ヒトＥ−カドヘリン、Ｎ−カドヘリン、またはＲ−カドヘリンである、方法。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法において、
前記結合剤は、ＫＬＲＧ１／カドヘリン結合部位でＫＬＲＧ１および／またはカドヘリンを結合させる、方法。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法において、
前記被験者は、上皮がんを有する、方法。
【請求項１４】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法において、
前記被験者は、癌腫を有する、方法。
【請求項１５】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法において、
前記被験者は、ブドウ膜黒色腫、子宮がん、子宮癌肉腫、甲状腺がん、胸腺腫、精巣胚細胞腫瘍、黒色腫、肉腫、直腸腺がん、前立腺がん、褐色細胞腫、膵臓腺がん、卵巣嚢胞腺がん、中皮腫、肺扁平上皮がん、肺腺がん、肝細胞がん、乳頭状腎細胞がん、腎臓明細胞がん、色素嫌性腎がん、腎細胞がん、頭頸部扁平上皮がん、多形神経膠芽腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、結腸腺がん、胆管がん、子宮頸がんおよび／もしくは子宮頸管がん、浸潤性乳がん、脳の低悪性度神経膠腫、膀胱がん、または急性骨髄性白血病を有する、方法。
【請求項１６】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法において、
前記被験者は、黒色腫を有する、方法。
【請求項１７】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法において、
前記被験者は、肺がんを有する、方法。
【請求項１８】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法において、
前記被験者は、膵がんを有する、方法。
【請求項１９】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法において、
前記被験者は、神経膠腫を有する、方法。
【請求項２０】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法において、
前記被験者は、乳がんを有する、方法。
【請求項２１】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法において、
前記被験者は、卵巣がんを有する、方法。
【請求項２２】
請求項１〜２１のいずれか１項に記載の方法において、
前記被験者に、有効量のチェックポイントモジュレーター療法を投与することをさらに含む、方法。
【請求項２３】
請求項２２に記載の方法において、
前記ＫＬＲＧ１／リガンド結合剤およびチェックポイントモジュレーター療法は、共同作用的である、方法。
【請求項２４】
請求項１〜２１のいずれか１項に記載の方法において、
前記被験者に、有効量のがんワクチン療法を投与することをさらに含む、方法。
【請求項２５】
請求項２４に記載の方法において、
前記ＫＬＲＧ１／リガンド結合剤およびがんワクチン療法は、共同作用的である、方法。
【請求項２６】
黒色腫を治療する方法において、
それを必要とする被験者に、有効量のキラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を投与することを含み、
前記結合剤は、ヒトＫＬＲＧ１の細胞外ドメインおよび／またはヒトＥ−カドヘリン、Ｎ−カドヘリン、もしくはＲ−カドヘリンを結合させ、それによって、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化する、抗体もしくはその抗原結合断片、または抗体模倣物である、方法。
【請求項２７】
肺がんを治療する方法において、
それを必要とする被験者に、有効量のキラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を投与することを含み、
前記結合剤は、ヒトＫＬＲＧ１の細胞外ドメインおよび／またはヒトＥ−カドヘリン、Ｎ−カドヘリン、もしくはＲ−カドヘリンを結合させ、それによって、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化する、抗体もしくはその抗原結合断片、または抗体模倣物である、方法。
【請求項２８】
膵がんを治療する方法において、
それを必要とする被験者に、有効量のキラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を投与することを含み、
前記結合剤は、ヒトＫＬＲＧ１の細胞外ドメインおよび／またはヒトＥ−カドヘリン、Ｎ−カドヘリン、もしくはＲ−カドヘリンを結合させ、それによって、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化する、抗体もしくはその抗原結合断片、または抗体模倣物である、方法。
【請求項２９】
神経膠腫を治療する方法において、
それを必要とする被験者に、有効量のキラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を投与することを含み、
前記結合剤は、ヒトＫＬＲＧ１の細胞外ドメインおよび／またはヒトＥ−カドヘリン、Ｎ−カドヘリン、もしくはＲ−カドヘリンを結合させ、それによって、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化する、抗体もしくはその抗原結合断片、または抗体模倣物である、方法。
【請求項３０】
乳がんを治療する方法において、
それを必要とする被験者に、有効量のキラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を投与することを含み、
前記結合剤は、ヒトＫＬＲＧ１の細胞外ドメインおよび／またはヒトＥ−カドヘリン、Ｎ−カドヘリン、もしくはＲ−カドヘリンを結合させ、それによって、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化する、抗体もしくはその抗原結合断片、または抗体模倣物である、方法。
【請求項３１】
卵巣がんを治療する方法において、
それを必要とする被験者に、有効量のキラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を投与することを含み、
前記結合剤は、ヒトＫＬＲＧ１の細胞外ドメインおよび／またはヒトＥ−カドヘリン、Ｎ−カドヘリン、もしくはＲ−カドヘリンを結合させ、それによって、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化する、抗体もしくはその抗原結合断片、または抗体模倣物である、方法。
【請求項３２】
請求項１〜３１のいずれか１項に記載の方法において、
前記結合剤は、前記結合剤を符号化するｍＲＮＡを前記被験者に提供することにより、投与される、方法。
【請求項３３】
キラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）アンタゴニストにおいて、
（ｉ）キラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤、または（ｉｉ）ＫＬＲＧ１発現を抑制するＲＮＡｉ剤を含む、ＫＬＲＧ１アンタゴニスト。
【請求項３４】
請求項３３に記載のＫＬＲＧ１アンタゴニストにおいて、
前記アンタゴニストは、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、それによって、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化する、ＫＬＲＧ１アンタゴニスト。
【請求項３５】
請求項３３または３４に記載のＫＬＲＧ１アンタゴニストにおいて、
前記アンタゴニストは、ヒトＫＬＲＧ１の細胞外ドメインを結合させるか、またはＫＬＲＧ１リガンドを結合させる、ＫＬＲＧ１アンタゴニスト。
【請求項３６】
請求項３３〜３５のいずれか１項に記載のＫＬＲＧ１アンタゴニストにおいて、
抗体または抗原結合断片を含む、ＫＬＲＧ１アンタゴニスト。
【請求項３７】
請求項３３〜３５のいずれか１項に記載のＫＬＲＧ１アンタゴニストにおいて、
Ｆｃ−カドヘリン融合タンパク質を含む、ＫＬＲＧ１アンタゴニスト。
【請求項３８】
請求項３６に記載のＫＬＲＧ１アンタゴニストにおいて、
前記抗体はモノクローナル抗体である、ＫＬＲＧ１アンタゴニスト。
【請求項３９】
請求項３６に記載のＫＬＲＧ１アンタゴニストにおいて、
前記抗体は、ヒトまたはヒト化抗体である、ＫＬＲＧ１アンタゴニスト。
【請求項４０】
請求項３３〜３９のいずれか１項に記載のＫＬＲＧ１アンタゴニストにおいて、
ＫＬＲＧ１−リガンド結合を遮断するか、またはこれと競合する、結合剤を含む、ＫＬＲＧ１アンタゴニスト。
【請求項４１】
請求項３３〜３９のいずれか１項に記載のＫＬＲＧ１アンタゴニストにおいて、
ヒトおよびカニクイザルＫＬＲＧ１の細胞外ドメイン、またはヒトおよびカニクイザルＫＬＲＧ１リガンドと交差反応する、結合剤を含む、ＫＬＲＧ１アンタゴニスト。
【請求項４２】
請求項３３〜３９のいずれか１項に記載のＫＬＲＧ１アンタゴニストにおいて、
（ｉ）ＫＬＲＧ１の細胞外ドメインまたは（ｉｉ）ＫＬＲＧ１リガンド、のエピトープであって、前記エピトープは、ヒトおよびカニクイザルにおいて少なくとも９０％同一である、エピトープ、または（ｉｉｉ）クローン１３Ｆ１２Ｆ２、１４Ｃ２Ａ０７、ＳＡ２３１Ａ２、２Ｆ１、１３Ａ２、またはＲＥＡ２６１のうちのいずれか１つと同じエピトープ、に結合する結合剤を含む、ＫＬＲＧ１アンタゴニスト。
【請求項４３】
請求項３３〜３９のいずれか１項に記載のＫＬＲＧ１アンタゴニストにおいて、
ＫＬＲＧ１に結合し、かつクローン１３Ｆ１２Ｆ２、１４Ｃ２Ａ０７、ＳＡ２３１Ａ２、２Ｆ１、１３Ａ２、またはＲＥＡ２６１ではない、結合剤を含む、ＫＬＲＧ１アンタゴニスト。
【請求項４４】
請求項３３〜３９のいずれか１項に記載のＫＬＲＧ１アンタゴニストにおいて、
ＫＬＲＧ１に結合し、かつマウス抗体ではない、結合剤を含む、ＫＬＲＧ１アンタゴニスト。
【請求項４５】
請求項３３〜３５のいずれか１項に記載のＫＬＲＧ１アンタゴニストにおいて、
ＲＮＡｉ剤を含む、ＫＬＲＧ１アンタゴニスト。
【請求項４６】
請求項３８に記載のＫＬＲＧ１アンタゴニストにおいて、
ｓｉＲＮＡまたはｍＲＮＡを含む、ＫＬＲＧ１アンタゴニスト。
【請求項４７】
ｍＲＮＡまたはｃＤＮＡにおいて、
請求項３３〜４６のいずれか１項に記載のＫＬＲＧ１アンタゴニストを符号化する、ｍＲＮＡまたはｃＤＮＡ。
【請求項４８】
被験者を治療する方法において、
必要とする被験者に、請求項３３〜４７のいずれか１項に記載の有効量のＫＬＲＧ１アンタゴニストを投与し、それによって、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化することを含む、方法。
【請求項４９】
がんを治療する方法において、
それを必要とする被験者に、請求項３３〜４７のいずれか１項に記載の有効量のＫＬＲＧ１アンタゴニストを投与することを含む、方法。
【請求項５０】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法において、
前記被験者は、腎がんを有する、方法。
【請求項５１】
腎がんを治療する方法において、
それを必要とする被験者に、有効量のキラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を投与することを含み、
前記結合剤は、ヒトＫＬＲＧ１の細胞外ドメインおよび／またはヒトＥ−カドヘリン、Ｎ−カドヘリン、もしくはＲ−カドヘリンを結合させ、それによって、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化する、抗体もしくはその抗原結合断片、または抗体模倣物である、方法。
【請求項５２】
請求項５０または５１に記載の方法において、
前記腎がんは、腎細胞がんである、方法。
【請求項５３】
請求項１７または２７に記載の方法において、
前記肺がんは、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）である、方法。
【請求項５４】
請求項３３〜３９のいずれか１項に記載のＫＬＲＧ１アンタゴニストにおいて、
前記アンタゴニストは、クローン１３Ｆ１２Ｆ２、１４Ｃ２Ａ０７、ＳＡ２３１Ａ２、２Ｆ１、１３Ａ２、またはＲＥＡ２６１のうちの少なくとも１つと交差競合する、ＫＬＲＧ１アンタゴニスト。
【請求項５５】
請求項３３〜３９のいずれか１項に記載のＫＬＲＧ１アンタゴニストにおいて、
前記アンタゴニストは、ＫＬＲＧ１／Ｅ−カドヘリン結合を中和する、ＫＬＲＧ１アンタゴニスト。
【請求項５６】
キラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤において、
ＫＬＲＧ１／カドヘリン結合を中和し、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、それによって、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化する、結合剤。
【請求項５７】
請求項５６に記載の結合剤において、
前記結合剤は、クローン１３Ｆ１２Ｆ２、１４Ｃ２Ａ０７、ＳＡ２３１Ａ２、２Ｆ１、１３Ａ２、またはＲＥＡ２６１のうちの少なくとも１つと交差競合する、結合剤。
【請求項５８】
請求項５７に記載の結合剤において、
前記結合剤は、ヒトもしくはヒト化モノクローナル抗体であるか、またはそれらの結合断片、または抗体模倣物である、結合剤。
【請求項５９】
請求項１〜３２または４８〜５３のいずれか１項に記載の方法において、
前記被験者は、高度のＫＬＲＧ１発現を有する、方法。
【請求項６０】
請求項５９に記載の方法において、
前記高度のＫＬＲＧ１発現は、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞における高度のＫＬＲＧ１発現を含む、方法。
【請求項６１】
請求項５９または６０に記載の方法において、
高度のＫＬＲＧ１発現について前記被験者を試験することをさらに含む、方法。
【請求項６２】
請求項１〜３２または４８〜５３のいずれか１項に記載の方法において、
前記被験者は、高度のカドヘリン発現を有する、方法。
【請求項６３】
請求項６２に記載の方法において、
前記高度のカドヘリン発現は、がん細胞における高度のカドヘリン発現を含む、方法。
【請求項６４】
請求項６２または６３に記載の方法において、
高度のカドヘリン発現について前記被験者を試験することをさらに含む、方法。
【請求項６５】
請求項１〜２１のいずれか１項に記載の方法において、
前記被験者に、有効量のがん化学療法を投与することをさらに含む、方法。
【請求項６６】
請求項２２または２３に記載の方法において、
前記チェックポイントモジュレーター療法は、抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ１、または抗ＣＴＬＡ−４療法を含む、方法。
【請求項６７】
請求項１〜３２または４８〜５３のいずれか１項に記載の方法において、
前記被験者は、先行するがん療法に失敗しているか、または反応していない、方法。
【発明の詳細な説明】
【開示の内容】
【０００１】
〔発明の分野〕
本発明は、概してＫＬＲＧ１シグナリングセラピーに関し、さまざまな実施形態では、より具体的には、ＫＬＲＧ１に基づくがん療法に関する。
【０００２】
〔背景〕
免疫細胞における免疫チェックポイントシグナリング分子の発現は、免疫系制御にとって重要である。チェックポイント分子の同時発現は、Ｔ細胞ならびにがん細胞において生じ得る。がん細胞および処理されたがん抗原を有する樹状細胞へのＴ細胞の長期曝露は、それらの免疫エフェクター機能の完全または部分的喪失を引き起こし得、免疫枯渇を生じる。したがって、チェックポイント分子、例えばＣＴＬＡ−４およびＰＤ−１、の阻害は、免疫系を再活性化し、かつ有効な腫瘍治療をもたらし得る。Ｔ細胞ならびに他の免疫細胞上で発現される多くのチェックポイントシグナリング分子は特定されている。しかしながら、これらのシグナリング分子に基づく治療の開発は限られており、医学療法のために免疫チェックポイントシグナリング経路を用いる新しい治療の必要性が残っている。
【０００３】
〔発明の概要〕
本発明は、キラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）が、いくつかの他のＴ細胞共抑制受容体、例えばＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＬＡＧ−３、およびＴＩＭ−３のように共抑制受容体として機能し得るという発見に、少なくとも部分的に基づいている。マウスの場合、および多くの先行研究の教示とは異なり、ヒトでは、ＫＬＲＧ１は、免疫療法、例えばがん免疫療法の好標的である。例えば、必要とする被験者に有効量のキラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を投与すると、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化し得る。よって、本発明には、多くの治療用途がある。例えば、本発明は、有効量のキラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤の投与を通じてがんを治療するのに使用され得る。
【０００４】
本発明の利点は、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を優先的に標的化する能力を含む。本発明の利点は、より高い効力、および副作用の減少を含む。例えば、ＫＬＲＧ１発現免疫細胞集団は、ＣＴＬＡ−４またはＰＤ−１発現免疫細胞集団よりも豊富に細胞傷害性分子を発現するので、効力が高くなる可能性があり；ＫＬＲＧ１は、抗原発現と共に増加するマーカーであり、さらに具体的な抗原指向性免疫応答を、したがって、副作用の減少の可能性を予測する。
【０００５】
さまざまな態様および実施形態では、本発明は治療方法を提供し、この方法は、必要とする被験者に、有効量のキラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を投与し、それによって、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化させることを含む。
【０００６】
さまざまな態様および実施形態では、本発明はがんを治療する方法を提供し、この方法は、それを必要とする被験者に、有効量のキラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を投与することを含む。
【０００７】
さまざまな態様および実施形態では、本発明は、（ｉ）キラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤、または（ｉｉ）ＫＬＲＧ１発現を抑制するＲＮＡｉ剤を含む、キラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）アンタゴニストを提供する。
【０００８】
さまざまな態様および実施形態では、本発明は、本発明によるＫＬＲＧ１アンタゴニストを符号化するｍＲＮＡまたはｃＤＮＡを提供する。
【０００９】
さまざまな態様および実施形態では、本発明は、ＫＬＲＧ１／カドヘリン（例えば、Ｅ−カドヘリン）結合を中和し、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、それによってＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化する、キラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を提供する。結合剤は、クローン１３Ｆ１２Ｆ２、１４Ｃ２Ａ０７、ＳＡ２３１Ａ２、２Ｆ１、１３Ａ２、またはＲＥＡ２６１のうちの少なくとも１つと交差競合する（cross compete）ことができる。結合剤は、ヒトもしくはヒト化モノクローナル抗体、またはそれらの結合断片、または抗体模倣物（antibody mimetic）であってよい。
【００１０】
さまざまな態様および実施形態では、本発明は、被験者を治療する方法を提供し、この方法は、必要とする被験者に、有効量のＫＬＲＧ１アンタゴニストを投与し、それによって、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化することを含む。
【００１１】
さまざまな態様および実施形態では、本発明は、がんを治療する方法を提供し、この方法は、それを必要とする被験者に、有効量のＫＬＲＧ１アンタゴニストを投与することを含む。
【００１２】
本発明は、黒色腫を治療する方法を提供し、この方法は、それを必要とする被験者に、有効量のキラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を投与することを含み、結合剤は、ヒトＫＬＲＧ１の細胞外ドメインおよび／またはヒトＥ−カドヘリン、Ｎ−カドヘリン、もしくはＲ−カドヘリンを結合させ、それによって、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化させる、抗体もしくはその抗原結合断片、または抗体模倣物である。
【００１３】
本発明は、肺がんを治療する方法を提供し、この方法は、それを必要とする被験者に、有効量のキラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を投与することを含み、結合剤は、ヒトＫＬＲＧ１の細胞外ドメインおよび／またはヒトＥ−カドヘリン、Ｎ−カドヘリン、もしくはＲ−カドヘリンを結合させ、それによって、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化する、抗体もしくはその抗原結合断片、または抗体模倣物である。
【００１４】
本発明は、膵がんを治療する方法を提供し、この方法は、それを必要とする被験者に、有効量のキラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を投与することを含み、結合剤は、ヒトＫＬＲＧ１の細胞外ドメインおよび／またはヒトＥ−カドヘリン、Ｎ−カドヘリン、もしくはＲ−カドヘリンのを結合させ、それによって、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化させる、抗体もしくはその抗原結合断片、または抗体模倣物である。
【００１５】
本発明は、神経膠腫を治療する方法を提供し、この方法は、それを必要とする被験者に、有効量のキラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を投与することを含み、結合剤は、ヒトＫＬＲＧ１の細胞外ドメインおよび／またはヒトＥ−カドヘリン、Ｎ−カドヘリン、もしくはＲ−カドヘリンを結合させ、それによって、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化させる、抗体もしくはその抗原結合断片、または抗体模倣物である。
【００１６】
本発明は、乳がんを治療する方法を提供し、この方法は、それを必要とする被験者に、有効量のキラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を投与することを含み、結合剤は、ヒトＫＬＲＧ１の細胞外ドメインおよび／またはヒトＥ−カドヘリン、Ｎ−カドヘリン、もしくはＲ−カドヘリンを結合させ、それによって、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化させる、抗体もしくはその抗原結合断片、または抗体模倣物である。
【００１７】
本発明は、卵巣がんを治療する方法を提供し、この方法は、それを必要とする被験者に、有効量のキラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を投与することを含み、結合剤は、ヒトＫＬＲＧ１の細胞外ドメインおよび／またはヒトＥ−カドヘリン、Ｎ−カドヘリン、もしくはＲ−カドヘリンを結合させ、それによって、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化させる、抗体もしくはその抗原結合断片、または抗体模倣物である。
【００１８】
さまざまな実施形態では、被験者は、哺乳動物、例えばヒトである。
【００１９】
さまざまな実施形態では、本発明による方法は、（例えば、ｅｘ  ｖｉｖｏとは対照的に）ｉｎ  ｖｉｖｏで実行される。
【００２０】
さまざまな実施形態では、結合剤は、抗体もしくはその抗原結合断片、または抗体模倣物である。
【００２１】
さまざまな実施形態では、抗体もしくはその抗原結合断片、または抗体模倣物は、ヒトまたはヒト化抗体を含む。
【００２２】
さまざまな実施形態では、抗体もしくはその抗原結合断片、または抗体模倣物は以下を含む：
ａ．ＫＬＲＧ１を結合させる完全長抗体のＦａｂ部分；
ｂ．Ｅ−カドヘリンを結合させる完全長抗体のＦａｂ部分；
ｃ．Ｎ−カドヘリンを結合させる完全長抗体のＦａｂ部分；
ｄ．Ｒ−カドヘリンを結合させる完全長抗体のＦａｂ部分；
ｅ．融合タンパク質Ｅ−カドヘリン／Ｆｃ；
ｆ．融合タンパク質Ｒ−カドヘリン／Ｆｃ；
ｇ．融合タンパク質Ｎ−カドヘリン／Ｆｃ；
ｈ．キメラ抗原受容体；または、
ｉ．多特異性抗体。
【００２３】
さまざまな実施形態では、結合剤はキメラ抗原受容体であり、キメラ抗原受容体は、Ｔ細胞に移植されたＫＬＲＧ１抗体の特異性部分を含む。
【００２４】
さまざまな実施形態では、結合剤は多特異性抗体である。多特異性抗体は、二重特異性または三重特異性抗体を含み得る。
【００２５】
さまざまな実施形態では、結合剤はＫＬＲＧ１を結合させる。
【００２６】
さまざまな実施形態では、ＫＬＲＧ１は、ヒトＫＬＲＧ１の細胞外ドメインである。
【００２７】
さまざまな実施形態では、結合剤は、ＫＬＲＧ１リガンドを結合させる。
【００２８】
さまざまな実施形態では、ＫＬＲＧ１リガンドは、ヒトＥ−カドヘリン、Ｎ−カドヘリン、またはＲ−カドヘリンである。
【００２９】
さまざまな実施形態では、結合剤は、ＫＬＲＧ１／カドヘリン結合部位でＫＬＲＧ１および／またはカドヘリンを結合させる。
【００３０】
さまざまな実施形態では、被験者は、上皮がんを有する。
【００３１】
さまざまな実施形態では、被験者は、癌腫を有する。
【００３２】
さまざまな実施形態では、被験者は、ブドウ膜黒色腫、子宮がん、子宮癌肉腫、甲状腺がん、胸腺腫、精巣胚細胞腫瘍、黒色腫、肉腫、直腸腺がん、前立腺がん、褐色細胞腫、膵臓腺がん、卵巣嚢胞腺がん（ovarian cystadenocarcinoma）、中皮腫、肺扁平上皮がん、肺腺がん、肝細胞がん、乳頭状腎細胞がん（kidney papillary cell carcinoma）、腎臓明細胞がん（kidney clear cell carcinoma）、色素嫌性腎がん（kidney chromophobe carcinoma）、頭頸部扁平上皮がん、多形神経膠芽腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、結腸腺がん、胆管がん、子宮頸がんおよび／もしくは子宮頸管がん、浸潤性乳がん、脳の低悪性度神経膠腫、膀胱がん、または急性骨髄性白血病を有する。
【００３３】
さまざまな実施形態では、被験者は、黒色腫を有する。
【００３４】
さまざまな実施形態では、被験者は、肺がんを有する。
【００３５】
さまざまな実施形態では、被験者は、膵がんを有する。
【００３６】
さまざまな実施形態では、被験者は、神経膠腫を有する。
【００３７】
さまざまな実施形態では、被験者は、乳がんを有する。
【００３８】
さまざまな実施形態では、被験者は、卵巣がんを有する。
【００３９】
さまざまな実施形態では、方法は、被験者に、有効量のチェックポイントモジュレーター療法を投与することをさらに含む。
【００４０】
さまざまな実施形態では、ＫＬＲＧ１／リガンド結合剤およびチェックポイントモジュレーター療法は、共同作用的である。
【００４１】
さまざまな実施形態では、方法は、被験者に有効量のがんワクチン療法を投与することをさらに含む。
【００４２】
さまざまな実施形態では、ＫＬＲＧ１／リガンド結合剤およびがんワクチン療法は、共同作用的である。
【００４３】
さまざまな実施形態では、本発明は、ＫＬＲＧ１／リガンド結合剤と、１つ以上の追加の有効活性成分（ＡＰＩ）との組み合わせを使用し得る。いくつかの実施形態では、ＡＰＩは、ポリヌクレオチド（オリゴヌクレオチドを含む）タンパク質または小分子であってよい。ＡＰＩは、例えば、抗がん剤、抗生物質製剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、または鎮痛剤を含み得る。
【００４４】
さまざまな実施形態では、方法は、被験者に有効量のがん化学療法を投与することをさらに含む。
【００４５】
さまざまな実施形態では、チェックポイントモジュレーター療法は、抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ１、または抗ＣＴＬＡ−４療法を含む。
【００４６】
さまざまな実施形態では、被験者は、先行するがん療法に失敗しているか、または反応していない。
【００４７】
さまざまな実施形態では、被験者は、高度のＫＬＲＧ１発現を有する。高度のＫＬＲＧ１発現は、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞における高度のＫＬＲＧ１発現を含み得る。さまざまな実施形態では、方法は、（例えば、療法を開始する前および／または療法の間に）被験者を高度のＫＬＲＧ１発現について試験することをさらに含み得る。
【００４８】
さまざまな実施形態では、被験者は、高度のカドヘリン発現（例えば、Ｅ−カドヘリン）を有する。高度のカドヘリン発現は、がん細胞における高度のカドヘリン発現を含み得る。さまざまな実施形態では、方法は、（例えば、療法を開始する前および／または療法の間に）被験者を高度のカドヘリン発現について試験することをさらに含み得る。
【００４９】
さまざまな実施形態では、治療は、被験者の生存を長くすることができる。さまざまな実施形態では、治療は、進行、またはがんおよび／もしくは転移を防ぐか、または減少させることができる。
【００５０】
さまざまな実施形態では、結合剤は、結合剤を符号化するｍＲＮＡを被験者に提供することにより、投与される。
【００５１】
さまざまな実施形態では、アンタゴニストは、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、それによって、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化させる。
【００５２】
さまざまな実施形態では、アンタゴニストは、ヒトＫＬＲＧ１の細胞外ドメインを結合させるか、またはＫＬＲＧ１リガンドを結合させる。
【００５３】
さまざまな実施形態では、ＫＬＲＧ１アンタゴニストは、抗体または抗原結合断片を含む。
【００５４】
さまざまな実施形態では、ＫＬＲＧ１アンタゴニストは、Ｆｃ−カドヘリン融合タンパク質を含む。
【００５５】
さまざまな実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。
【００５６】
さまざまな実施形態では、抗体は、ヒトまたはヒト化抗体である。
【００５７】
さまざまな実施形態では、ＫＬＲＧ１アンタゴニストは、ＫＬＲＧ１−リガンド結合を遮断するか、またはこれと競合する、結合剤を含む。
【００５８】
さまざまな実施形態では、ＫＬＲＧ１アンタゴニストは、ヒトおよびカニクイザルＫＬＲＧ１の細胞外ドメイン、またはヒトおよびカニクイザルＫＬＲＧ１リガンドと交差反応する、結合剤を含む。
【００５９】
さまざまな実施形態では、ＫＬＲＧ１アンタゴニストは、（ｉ）ＫＬＲＧ１の細胞外ドメインまたは（ｉｉ）ＫＬＲＧ１リガンド、のエピトープに結合する結合剤を含み、エピトープは、ヒトおよびカニクイザルにおいて少なくとも９０％同一である。一実施形態では、ＫＬＲＧ１アンタゴニストは、クローン１３Ｆ１２Ｆ２、１４Ｃ２Ａ０７、ＳＡ２３１Ａ２、２Ｆ１、１３Ａ２、またはＲＥＡ２６１のうちのいずれか１つと同じエピトープに結合する結合剤を含む。
【００６０】
さまざまな実施形態では、ＫＬＲＧ１アンタゴニストは、ＫＬＲＧ１に結合し、かつクローン１３Ｆ１２Ｆ２、１４Ｃ２Ａ０７、ＳＡ２３１Ａ２、２Ｆ１、１３Ａ２、またはＲＥＡ２６１（または別の前述した抗ＫＬＲＧ１抗体）ではない、結合剤を含む。
【００６１】
さまざまな実施形態では、ＫＬＲＧ１アンタゴニストは、ＫＬＲＧ１に結合し、かつマウス抗体ではない、結合剤を含む。
【００６２】
さまざまな実施形態では、アンタゴニストまたは結合剤は、クローン１３Ｆ１２Ｆ２、１４Ｃ２Ａ０７、ＳＡ２３１Ａ２、２Ｆ１、１３Ａ２、またはＲＥＡ２６１のうちの少なくとも１つと交差競合する。
【００６３】
さまざまな実施形態では、アンタゴニスト、例えば結合剤は、ＫＬＲＧ１／Ｅ−カドヘリン結合を中和する。
【００６４】
さまざまな実施形態では、結合剤は、ヒトまたはヒト化モノクローナル抗体、またはその結合断片、または抗体模倣物である。
【００６５】
さまざまな実施形態では、ＫＬＲＧ１アンタゴニストは、ＲＮＡｉ剤を含む。ＲＮＡｉ剤は、とりわけ、ｓｉＲＮＡまたはｍＲＮＡであってよい。
【００６６】
本テクノロジーのこれらおよび他の利点は、添付図面および以下の説明を参照すれば、明らかとなるであろう。
【００６７】
本発明は、多くの異なる形態の実施形態を含むが、本開示がテクノロジーの原理の例示であるとみなされ、本発明を、示された実施形態に制限することを意図していないという了解の下に、いくつかの特定の実施形態が図面に示され、詳細に本明細書に説明されている。
【００６８】
〔配列の簡単な説明〕
配列ＩＤ番号１は、ヒトＫＬＲＧ１  ＥＣＤのアイソタイプ１の配列である。
配列ＩＤ番号２は、ヒトＫＬＲＧ１  ＥＣＤのアイソタイプ２の配列である。
配列ＩＤ番号３は、カニクイザルＫＬＲＧ１  ＥＣＤの配列である。
配列ＩＤ番号４は、ヒトＥ−カドヘリンの配列である。
配列ＩＤ番号５は、ヒトＮ−カドヘリンの配列である。
配列ＩＤ番号６は、ヒトＲ−カドヘリンの配列である。
配列ＩＤ番号７は、ヒトＫＬＲＧ１  ｍＲＮＡの配列である。
【００６９】
〔詳細な説明〕
本発明は、ＫＬＲＧ１が、いくつかの他のＴ細胞共抑制受容体、例えばＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＬＡＧ−３、およびＴＩＭ−３のように共抑制受容体として機能し得るという発見に、少なくとも部分的に基づいている。マウスの場合、および多くの先行研究の教示とは異なり、ヒトでは、ＫＬＲＧ１は、免疫療法（例えばがん免疫療法）の好標的である。例えば、必要とする被験者に有効量のキラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を投与すると、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化し得る。よって、本発明には、多くの治療用途がある。例えば、本発明は、有効量のキラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤の投与を通じてがんを治療するのに使用され得る。
【００７０】
本発明の利点は、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を優先的に標的化する能力を含む。本発明の利点は、より高い効力、および、副作用の減少を含む。例えば、ＫＬＲＧ１発現免疫細胞集団は、ＣＴＬＡ−４またはＰＤ−１発現免疫細胞集団よりも豊富に細胞傷害性分子を発現するので、効力が高くなる可能性があり；ＫＬＲＧ１は、抗原発現（experience）と共に増加するマーカーであり、さらに具体的な抗原指向性免疫応答を、したがって、副作用の減少の可能性を予測する。
【００７１】
したがって、さまざまな態様および実施形態では、本発明は、被験者を治療する方法を提供し、この方法は、必要とする被験者に、有効量のキラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を投与し、それによって、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化させることを含む。本発明は、がんを治療する方法も提供し、この方法は、それを必要とする被験者に、有効量のキラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を投与することを含む。
【００７２】
さまざまな態様および実施形態では、本発明は、（ｉ）キラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤、または（ｉｉ）ＫＬＲＧ１発現を抑制するＲＮＡｉ剤を含む、キラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）アンタゴニストを提供する。本発明は、本発明によるＫＬＲＧ１アンタゴニストを符号化するｍＲＮＡまたはｃＤＮＡも提供する。本発明は、被験者を治療する方法も提供し、この方法は、必要とする被験者に、有効量のＫＬＲＧ１アンタゴニストを投与し、それによって、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化することを含む。本発明は、がんを治療する方法も提供し、この方法は、それを必要とする被験者に、有効量のＫＬＲＧ１アンタゴニストを投与することを含む。
【００７３】
本発明のさまざまな特徴、例えばＫＬＲＧ１およびそのリガンド、結合剤、組み合わせ療法、治療および投与、がん、ならびに例示的な実施例については、以下で論じる。
【００７４】
キラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）およびそのリガンド
キラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）は、ＴおよびＮＫ細胞の活性を調整するＩＩ型膜貫通タンパク質表面共抑制受容体である。その細胞外部分は、既知のリガンドがカドヘリンであるＣ型レクチンドメインを含み、その細胞内部分は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）介在性シグナリングの共抑制に反応する免疫受容抑制性チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ）ドメインを含む（Ｔｅｓｓｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００７）。さまざまな実施形態では、リガンドは、Ｅ−カドヘリン、Ｎ−カドヘリン、Ｒ−カドヘリン、またはそれらの組み合わせであってよい。
【００７５】
ＫＬＲＧ１分布および機能は、ヒトと比べ、齧歯類では異なる。もともとは齧歯類のマスト細胞株上で特定されており（Ｇｕｔｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５）、ＫＬＲＧ１は、ヒトのマスト細胞、好塩基球、単球、または好中球上では発現されない（Ｖｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２）。ヒトＫＬＲＧ１は、マウスＫＬＲＧ１よりも強い共抑制受容体である。生理学的条件下でのＫＬＲＧ１介在性抑制は、ＫＬＲＧ１二量体が単量体より高い効力を有し、ヒトＫＬＲＧ１がもっぱら二量体を形成するのに対し、マウスＫＬＲＧ１は単量体および二量体として存在するため、ヒトのリンパ球でのみ観察される（Ｈｏｆｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１２）。
【００７６】
ヒトにおけるＫＬＲＧ１発現は、ＴおよびＮＫ細胞に限られる。これは、ヘルパーＴ細胞より大きな割合の細胞傷害性ＴおよびＮＫ細胞上で発現される（図１、リンパ球サブセットのＫＬＲＧ１発現、ヒト血液フローサイトメトリー）。具体的には、図１は、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞よりも細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＮＫ細胞上で多くのＫＬＲＧ１発現を示す。ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞集団内で、ＫＬＲＧ１発現の増加は、抗原特異的効力の増加と相関する（図２Ａおよび図２Ｂ）。具体的には、図２は、分化の増加に伴うＴ細胞上でのＫＬＲＧ１発現の増加を示している。図２Ａ（ＣＤ８＋Ｔ細胞サブセットの細胞傷害性およびサイトカイン、ヒト血液遺伝子発現）は、Ｔ細胞の細胞傷害能がＴＮ→ＴＣＭ→ＴＥＭ→ＴＥＭＲＡと増加しているのを示す。図２Ｂ（フローサイトメトリーによるヒト血液ＣＤ８＋分集団のＫＬＲＧ１＋ＣＤ６＋Ｔ細胞の割合（％））は、ＫＬＲＧ１発現がＴＮ→ＴＣＭ→ＴＥＭ→ＴＥＭＲＡと増加しているのを示す。ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞が、抗原に応答して、ナイーブＴ細胞から、セントラルメモリー、エフェクターメモリー、およびエフェクターメモリーＲＡ細胞へと分化すると、これらは、増加した量のＫＬＲＧ１を発現する。よって、ＫＬＲＧ１は、細胞傷害性死滅（cytotoxic killing）について高い能力で細胞をマークする。この細胞傷害性は、（自己免疫疾患および移植片拒絶の場合に）望ましくないか、または（がんもしくは慢性感染性疾患の場合に）望ましい場合がある。
【００７７】
ヒトにおけるＫＬＲＧ１機能は、マウスにおけるＫＬＲＧ１機能とは実質的に異なるので、マウスのデータは、ヒトの疾患の治療に対して適用性が限られている。しかしながら、ヒトの疾患においては、公開されたＫＬＲＧ１応用データ（translational data）がほぼ完全に存在しない。任意のヒトの疾患組織サンプルまたは健康組織サンプルにおける免疫組織化学によるＫＬＲＧ１発現の研究は公開されていない。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）以外のヒトの疾患組織サンプルにおけるフローサイトメトリーによるＫＬＲＧ１発現に関する小規模なデータを含む４つの研究が公開されている：肝細胞がんにおける腫瘍浸潤リンパ球（Ｂｒｕｎｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１５）および腎細胞がんにおける腫瘍浸潤リンパ球（Ａｔｔｉｇ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００９）；黒色腫における腫瘍浸潤リンパ節（Ｌｅｇａｔ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１３）；ならびに関節リウマチおよび脊椎関節症における滑液Ｔ細胞（Ｍｅｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１４）。約５つの公開された研究が、疾患ＰＢＭＣにおけるＫＬＲＧ１発現に関する小規模なデータを含む。
【００７８】
ＫＬＲＧ１は、いくつかの他のＴ細胞共抑制受容体のような共抑制受容体であり、したがって、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３と比較することができる。これらの後者の（ｌａｔｅｒ）共抑制受容体は、Ｔ細胞枯渇のマーカーとして認識されており（Ｂｌａｃｋｂｕｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００９）、それらのうち２つ（ＣＴＬＡ−４およびＰＤ−１）は、がん治療のための免疫療法によってうまく標的化される（Ｍａｈｏｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１５）が、ＫＬＲＧ１は、枯渇マーカーとして認識されておらず、むしろ、免疫老化のマーカーとして認識されている（Ａｋｂａｒ  ａｎｄ  Ｈｅｎｓｏｎ，  ２０１１、Ａｐｅｔｏｈ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１５）。免疫老化のマーカーとして、ＫＬＲＧ１は、免疫療法の好ましくない標的とみなされている（Ａｋｂａｒ  ａｎｄ  Ｈｅｎｓｏｎ，  ２０１１）。
【００７９】
免疫療法の好標的としてのＣＴＬＡ−４およびＰＤ−１への関心ならびに学問（science）の大半が、マウス生物学の研究の結果として発展してきた。ＣＴＬＡ−４ノックアウトマウスが、致命的な自発的全身的自己免疫を有したという証明により、がん自己免疫を生成するこの経路を標的化することに対する関心を促した（Ｔｉｖｏｌ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５）。ＰＤ−１ノックアウトマウスが自発的自己免疫を有したという証明により、同じように、活動が、ヒト治療の可能性のためのＰＤ−１標的化に集中した（Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９９）。
【００８０】
これとは対照的に、マウスにおけるＫＬＲＧ１発現は、ＰＤ−１と逆の相関関係があるとみなされてきた（Ｂｌａｃｋｂｕｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００９）。ＣＴＬＡ−４およびＰＤ−１ノックアウトマウスとは異なり、ＫＬＲＧ１ノックアウトマウスは、自発的自己免疫を示さない（Ｇｒｕｎｄｅｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１０）。複数の製薬工業主導の臨床開発プログラムが大部分の他の共抑制Ｔ細胞受容体について存在する（図３、製薬会社による共抑制受容体調節のための薬品開発プログラム。グレーのボックスは、パブリックドメインプログラムが存在することを示す）が、ＫＬＲＧ１に関する薬品開発プログラムは、パブリックドメインにおいて現在知られていない。
【００８１】
さらに、老化を示すものとして特徴づけられ、がん免疫療法のための標的化に好ましくないとみなされているにもかかわらず、ＫＬＲＧ１＋Ｔ細胞は、ＫＬＲＧ１受容体をそのリガンドで調節した後、増殖することができる（Ｈｅｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００９、Ｈｅｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１２、Ｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１４）。ＫＬＲＧ１ノックアウトマウスの自発的自己免疫表現型がないにもかかわらず、これらのマウスは、ヒト型結核菌感染後に生存の増加を示し、ＫＬＲＧ１の非存在下で免疫力の高まりを示唆している（Ｃｙｋｔｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１３）。
【００８２】
免疫腫瘍学療法の目的は、抑制されたＣＤ８＋細胞傷害性ＴおよびＮＫ細胞の活性化である。現在ＦＤＡで承認された薬品は、ＣＴＬＡ−４およびＰＤ−１を対象としている。これらの分子は、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＤ８＋）またはＮＫ細胞よりもＴヘルパー細胞（ＣＤ４＋）で高くまたは同様に発現されるが、ＫＲＬＧ１発現は、ＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞よりもＣＤ８＋ＴおよびＮＫ細胞で高い（図４Ａおよび図４Ｂ）。図４Ａ（リンパ球サブセットのチェックポイント発現、ヒト血液フローサイトメトリー）は、ＣＴＬＡ−４およびＰＤ−１よりもリンパ球サブセットにおいて比例して高いＫＬＲＧ１発現を示す。図４Ｂ（フローサイトメトリーによるヒト血液ＣＤ８＋分集団の細胞の割合（％））は、ＫＬＲＧ１が、ＣＴＬＡ−４またはＰＤ−１より大きい割合のリンパ球において発現され、ＴＮ→ＴＣＭ→ＴＥＭ→ＴＥＭＲＡと増大し、一方、ＰＤ−１およびＣＴＬＡ−４発現が、ＴＥＭ→ＴＥＭＲＡと減少することを示す。したがって、本発明の１つの利点は、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞の優先的標的化である。別の利点は、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞およびＮＫ細胞の最も強い（すなわち、最も高い細胞傷害能を有する）分集団の標的化である。
【００８３】
これらの新たな見識を得て、これまで分析されていないデータをさらに分析すると、ＫＬＲＧ１発現Ｔ細胞による多くの腫瘍型の広範な浸潤、およびこれらの腫瘍サンプルにおけるＫＬＲＧ１リガンドであるＥ−カドヘリンの発現が証明される（図５、また以下の実施例３および４も参照のこと）。Ｅ−カドヘリンの発現は、幅広い腫瘍においてＰＤ−１リガンドであるＰＤ−Ｌ１よりも実質的に多い。
【００８４】
さまざまな態様および実施形態では、ＫＬＲＧ１は、任意の機能部分を含む、ヒトまたはカニクイザルＫＬＲＧ１、好ましくはヒトＫＬＲＧ１である。例えば、ＫＬＲＧ１は、任意の機能部分を含む、ヒト−ＫＬＲＧ１−ＥＣＤ−アイソタイプ１（配列ＩＤ番号１）であってよい。
【００８５】
さまざまな態様および実施形態では、ＫＬＲＧ１は、任意の機能部分を含む、ヒト−ＫＬＲＧ１−ＥＣＤ−アイソタイプ２（配列ＩＤ番号２）である。
【００８６】
さまざまな態様および実施形態では、ＫＬＲＧ１は、任意の機能部分を含む、カニクイザル−ＫＬＲＧ１（配列ＩＤ番号３）である。
【００８７】
さまざまな態様および実施形態では、ＫＬＲＧ１リガンドは、任意の機能部分を含む、カドヘリン、好ましくはヒトカドヘリンである。
【００８８】
さまざまな態様および実施形態では、ＫＬＲＧ１リガンドは、任意の機能部分を含む、ヒトＥ−カドヘリン（配列ＩＤ番号４）である。
【００８９】
さまざまな態様および実施形態では、ＫＬＲＧ１リガンドは、任意の機能部分を含む、ヒトＮ−カドヘリン（配列ＩＤ番号５）である。
【００９０】
さまざまな態様および実施形態では、ＫＬＲＧ１リガンドは、任意の機能部分を含む、ヒトＲ−カドヘリン（配列ＩＤ番号６）である。
【００９１】
いくつかの実施形態では、結合剤は、カドヘリンの結合に関与するＫＬＲＧ１配列におけるアミノ酸を標的化する。例えば、一実施形態では、結合剤は、配列ＩＤ番号１および配列ＩＤ番号２の（１５７）ＮＳＦＶＱ（１６２）および／または（１７２）ＱＡＳＳＣＥＶ（１７８）をそれぞれ結合させる。
【００９２】
アンタゴニスト、結合剤
さまざまな態様および実施形態では、キラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）アンタゴニストは、（ｉ）キラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤または（ｉｉ）ＫＬＲＧ１発現を抑制するＲＮＡｉ剤を含む。さまざまな態様および実施形態では、結合剤は、抗体もしくはその抗原結合断片、または抗体模倣物である。一般的に、アンタゴニストは、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、それによって、（例えば、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化することによって）治療効果を達成する。さまざまな実施形態では、アンタゴニストは、ヒトＫＬＲＧ１の細胞外ドメインを結合させるか、またはＫＬＲＧ１リガンドを結合させる（よって、例えばＫＬＲＧ１シグナリングを中断する）。
【００９３】
用語「抗体」は、最も広い意味で使用され、具体的には、例えば、単一の抗ＫＬＲＧ１または抗ＫＬＲＧ１リガンドモノクローナル抗体を包含する。本明細書で使用される用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均一の抗体の集団から得られた抗体を指し、例えば、集団を構成する個々の抗体は、若干存在し得る、可能性のある自然発生突然変異を除き、同一である。抗体はモノクローナル抗体であってよい。抗体は、ヒトまたはヒト化抗体であってよい。
【００９４】
「抗体断片」は、無傷の抗体の一部、好ましくは無傷の抗体の抗原結合または可変領域を含み得る。抗体断片の例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ断片、二重特異性抗体、線形抗体、一本鎖抗体分子、ならびに抗体断片から形成された多特異性抗体を含む。
【００９５】
「Ｆｖ」は、完全抗原認識および結合部位を含む、最小抗体断片を含む。この領域は、１つの重鎖可変ドメインおよび１つの軽鎖可変ドメインが堅い非共有結合性会合をなす二量体からなる。この構成では、各可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用して、ＶＨ−ＶＬ二量体の表面上で抗原−結合部位を定める。まとめて、６つのＣＤＲは、抗原結合特異性を抗体に与える。しかしながら、単一の可変ドメイン（または、抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦＶの半分）であっても、抗原を認識し結合する能力を有するが、結合部位全体よりも親和性は低い。Ｆａｂ断片も、軽鎖の定常ドメイン、および重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）を含む。Ｆａｂ断片は、抗体ヒンジ領域からの１つ以上のシステインを含む重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端にいくつかの残基を追加することによって、Ｆａｂ’断片とは異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、本明細書では、定常ドメインのシステイン残基が遊離チオール基を有するＦａｂ’の呼称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、もともと、ヒンジシステインを間に有するＦａｂ’断片対として生成された。抗体断片の他の化学的結合も既知である。
【００９６】
それらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンは、異なる分類に割り当てられ得る。免疫グロブリンの５つの主要な分類：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭがあり、これらのうちのいくつかは、下位分類（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＡ２へとさらに分割され得る。「一本鎖Ｆｖ」または「ｓＦｖ」抗体断片は、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含み、これらのドメインは、１本鎖ポリペプチドに存在する。好ましくは、Ｆｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、これは、ｓＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にする。
【００９７】
さまざまな実施形態では、抗体もしくはその抗原結合断片、または抗体模倣物は、ヒトまたはヒト化抗体を含む。非ヒト（例えばネズミ）抗体のヒト化形態は、非ヒト免疫グロブリンから得られた最小配列を含むキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖またはその断片（例えば、抗体のＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２または他の抗原結合サブ配列）である。ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）からの残基が、所望の特異性、親和性および能力を有する非ヒト種（ドナー抗体）、例えばマウス、ラットまたはウサギのＣＤＲからの残基で置き換えられた、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）を含む。いくつかの場合、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられる。ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも、インポートされたＣＤＲまたはフレームワーク配列にも見られない、残基も含み得る。一般的に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み得、ＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべては、非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ領域に対応し、ＦＲ領域のすべてまたは実質的にすべては、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のＦＲ領域である。非ヒト抗体をヒト化する方法は、当技術分野で周知である。
【００９８】
結合剤は、例えば当技術分野で既知の選択および／または突然変異生成方法を用いて、親和性が成熟されてもよい。一般的に、「親和性成熟」抗体は、その１つ以上の超可変領域に１つ以上の変質を有するもので、これは、それらの変質を有さない親抗体と比べて、抗原への抗体の親和性を改善させる。一実施形態では、親和性成熟抗体は、標的抗原に対し、ナノモルまたはピコモルの親和性を有する。好ましい親和性成熟抗体は、成熟抗体が準備される開始抗体（一般的にはネズミ、ヒト化またはヒト）より、５倍、さらに好ましくは１０倍、よりいっそう好ましくは２０または３０倍高い親和性を有する。
【００９９】
特定のポリペプチド、または特定のポリペプチド上のエピトープに「結合する」か、「特異的に結合する」か、または「特異的である」抗体は、任意の他のポリペプチドまたはポリペプチドエピトープに実質的に結合せずに、その特定のポリペプチド、または特定のポリペプチド上のエピトープに結合するものである。したがって、ＫＬＲＧ１／リガンド結合剤は、本発明による抗ＫＬＲＧ１／リガンド抗体の機能的等価物を含む。ＫＬＲＧ１／リガンド結合剤は、ＫＬＲＧ１（例えばヒトＫＬＲＧ１）に結合するか、または特異的に結合する結合剤であってよい。場合によっては、ＫＬＲＧ１／リガンド結合剤は、さまざまな同様のＫＬＲＧ１タンパク質（例えば、１つには最も高い親和性を有するもの、例えば例えばヒトＨＬＲＧ１であり、他方ではより低い親和性を有するもの、例えばマウスＫＬＲＧ１）と交差反応し得る。ＫＬＲＧ１／リガンド結合剤は、ＫＬＲＧ１リガンドに結合するか、または特異的に結合する結合剤であってよい。やはり、ＫＬＲＧ１／リガンド結合剤は、１つのＫＬＲＧ１リガンドに結合するか、もしくは特異的に結合するか、または場合によっては２つ以上のＫＬＲＧ１リガンド（例えば１つ以上のヒトカドヘリン）と交差反応する、結合剤であってよい。
【０１００】
さまざまな実施形態では、結合剤は、遮断薬またはアンタゴニスト結合剤である。「遮断」または「アンタゴニスト」は、その薬剤（例えば抗体または結合断片／その模倣物）が、結合する抗原の生物活性を阻害または低減するものであることを意味する。特定の遮断薬またはアンタゴニスト剤は、抗原の生物活性を実質的にまたは完全に阻害する。例えば、ＫＬＲＧ１／リガンド結合剤は、ＫＬＲＧ１シグナリングを遮断する（例えば、それによって、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化する）。実施例２１は、中和活性を有する抗体を識別および／または特徴づけるための、１つの例としての方法を提示する。
【０１０１】
さまざまな実施形態では、抗体もしくはその抗原結合断片、または抗体模倣物は以下を含む：
ａ．ＫＬＲＧ１を結合させる完全長抗体のＦａｂ部分；
ｂ．Ｅ−カドヘリンを結合させる完全長抗体のＦａｂ部分；
ｃ．Ｎ−カドヘリンを結合させる完全長抗体のＦａｂ部分；
ｄ．Ｒ−カドヘリンを結合させる完全長抗体のＦａｂ部分；
ｅ．融合タンパク質Ｅ−カドヘリン／Ｆｃ；
ｆ．融合タンパク質Ｒ−カドヘリン／Ｆｃ；
ｇ．融合タンパク質Ｎ−カドヘリン／Ｆｃ；
ｈ．キメラ抗原受容体；または、
ｉ．多特異性抗体。
【０１０２】
さまざまな実施形態では、結合剤はキメラ抗原受容体であり、キメラ抗原受容体は、Ｔ細胞に移植されたＫＬＲＧ１抗体の特異性部分を含む。
【０１０３】
さまざまな実施形態では、結合剤は多特異性抗体である。多特異性抗体は、二重特異性または三重特異性抗体を含み得る。
【０１０４】
さまざまな実施形態では、結合剤はＫＬＲＧ１を結合させる。
【０１０５】
さまざまな実施形態では、ＫＬＲＧ１は、ヒトＫＬＲＧ１の細胞外ドメインである。
【０１０６】
さまざまな実施形態では、結合剤は、ＫＬＲＧ１リガンドを結合させる。
【０１０７】
さまざまな実施形態では、ＫＬＲＧ１リガンドは、ヒトＥ−カドヘリン、Ｎ−カドヘリン、またはＲ−カドヘリンである。
【０１０８】
さまざまな実施形態では、結合剤は、ＫＬＲＧ１／カドヘリン結合部位でＫＬＲＧ１および／またはカドヘリンを結合させる。
【０１０９】
さまざまな実施形態では、結合剤は、先行技術の抗体ではない。既知の抗ＫＬＲＧ１抗体は、細胞外ドメインに結合し、フローサイトメトリーにおいてヒト細胞に対して証明された反応性を有する、マウス抗ヒトＫＬＲＧ１抗体である、クローン１３Ｆ１２Ｆ２（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、抗ヒトＫＬＲＧ１抗体であると報告されているクローン１４Ｃ２Ａ０７（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）およびＳＡ２３１Ａ２（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ならびに、いくつかのベンダー（例えばＢｉｏｌｅｇｅｎｄ）がヒトに対して反応性であると報告し、他のベンダー（例えばＡｂｃａｍ）がマウスのみへの反応性を報告している、ハムスター抗マウスＫＬＲＧ１抗体である、クローン２Ｆ１、を含む。これらの抗体の試験では、ヒトＫＬＲＧ１への反応性を証明することができなかった。クローン１３Ａ２（ＥＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）は、同様のエピトープをクローン１３Ｆ１２Ｆ２に結合させると言われている。クローンＲＥＡ２６１（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）も、報告によれば、ヒトＫＬＲＧ１を結合させる。（結合は立証されていない）。既知の抗Ｅ−カドヘリン抗体は、ベンダーによって説明され、以下の例を含む：クローン６７Ａ４、クローンＭＢ２、クローンＨＥＣＤ１（すべてＡｂｃａｍが販売）；ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅが販売するＤＥＣＭＡ１；ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓが販売するクローン３６／Ｅ−カドヘリン。さまざまな実施形態では、ＫＬＲＧ１アンタゴニストは、ＫＬＲＧ１に結合し、かつクローン１３Ｆ１２Ｆ２、１４Ｃ２Ａ０７、ＳＡ２３１Ａ２、２Ｆ１、１３Ａ２、またはＲＥＡ２６１（もしくは別のこれまでに説明された抗ＫＬＲＧ１抗体）ではない、結合剤を含む。
【０１１０】
さまざまな実施形態では、ＫＬＲＧ１／リガンド結合剤は、結合剤を符号化するｍＲＮＡを被験者に提供することによって投与され得る。このようなｍＲＮＡアプローチは、Ｍｏｄｅｒｎａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓなどによって開発されている。
【０１１１】
さまざまな実施形態では、ＫＬＲＧ１アンタゴニストは、ＫＬＲＧ１−リガンド結合を遮断するか、またはこれと競合する結合剤を含む。
【０１１２】
さまざまな実施形態では、ＫＬＲＧ１アンタゴニストは、ヒトおよびカニクイザルＫＬＲＧ１の細胞外ドメイン、またはヒトおよびカニクイザルＫＬＲＧ１リガンドと交差反応する結合剤を含む。
【０１１３】
さまざまな実施形態では、ＫＬＲＧ１アンタゴニストは、（ｉ）ＫＬＲＧ１の細胞外ドメインまたは（ｉｉ）ＫＬＲＧ１リガンド、のエピトープに結合する結合剤を含み、エピトープは、ヒトおよびカニクイザルにおいて少なくとも９０％同一である。一実施形態では、ＫＬＲＧ１アンタゴニストは、クローン１３Ｆ１２Ｆ２、１４Ｃ２Ａ０７、ＳＡ２３１Ａ２、２Ｆ１、１３Ａ２、またはＲＥＡ２６１のうちのいずれか１つと同じエピトープに結合する結合剤を含む。
【０１１４】
さまざまな実施形態では、ＫＬＲＧ１アンタゴニストは、ＫＬＲＧ１に結合し、かつマウス抗体ではない結合剤を含む。
【０１１５】
さまざまな実施形態では、アンタゴニストは、ＫＬＲＧ１／Ｅ−カドヘリン結合を中和する。
【０１１６】
さまざまな実施形態では、本発明は、ＫＬＲＧ１／カドヘリン（例えばＥ−カドヘリン）結合を中和し、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、それによって、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化する、キラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を提供する。
【０１１７】
さまざまな実施形態では、アンタゴニストまたは結合剤は、クローン１３Ｆ１２Ｆ２、１４Ｃ２Ａ０７、ＳＡ２３１Ａ２、２Ｆ１、１３Ａ２、またはＲＥＡ２６１のうちの少なくとも１つと交差競合する。
【０１１８】
さまざまな実施形態では、結合剤は、ヒトまたはヒト化モノクローナル抗体、またはその結合断片である。
【０１１９】
さまざまな実施形態では、ＫＬＲＧ１アンタゴニストはＲＮＡｉ剤を含む。ＲＮＡｉ剤は、とりわけ、ｓｉＲＮＡまたはｍＲＮＡであってよい。
【０１２０】
抗体（およびそれらの等価物）のように、本発明で適用され得るＲＮＡｉ剤は、当技術分野で既知である。手短に言うと、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、ＲＮＡ分子が、典型的には特異的ｍＲＮＡ分子の破壊を引き起こすことによって、遺伝子発現を阻害する、生物学的プロセスである。ＲＮＡｉは現在、遺伝子抑制のためのアンチセンステクノロジーより、正確で、有効で、安定し、良好であるとして知られている。２種類の小型リボ核酸（ＲＮＡ）分子であるマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）および低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）は、ＲＮＡ干渉の中核を成す。ＲＮＡは、遺伝子の直接的な生成物であり、これらの小型ＲＮＡは、他の特異的なメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）分子に結合し、例えばｍＲＮＡがタンパク質を生成するのを防ぐことによって、それらの活性を増加または減少させることができる。しかしながら、本発明は、必ずしもｓｉＲＮＡおよびｍＲＮＡに制限されるものではない。
【０１２１】
チェッポイントモジュレーター療法
さまざまな実施形態では、方法は、被験者に、有効量のチェックポイントモジュレーター療法を投与することをさらに含む。本明細書で使用される用語「チェックポイントモジュレーター療法」は、（例えばがんを治療するための）免疫系機能の調節を通じて治療効果を有する薬剤を含む。免疫チェックポイントは、刺激性または抑制性であってよい。チェックポイント療法は、（例えば免疫系を避けるためにがんによって使用される場合）抑制性チェックポイントを遮断し、免疫系機能を回復させ得る。承認された市販のチェックポイントモジュレーター療法の例は、ペンブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標））、ニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標））、イピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標））を含む。多くの他のチェックポイントモジュレーター療法は、開発中であり、また臨床試験中である（例えば図３を参照）。
【０１２２】
チェックポイントモジュレーター療法およびＫＬＲＧ１／リガンド結合剤は、被験者に、本質的に同時に（例えば、一致して、同じ日の間に、同じ治療過程の間に）、またはチェックポイントモジュレーター療法およびＫＬＲＧ１／リガンド結合剤が所望の効果（例えば、有効な治療、相乗効果）を達成するために有利に組み合わせられる期間中に、投与され得る。いくつかのチェックポイントモジュレーターは、モジュレータの有効性に対抗するＫＬＲＧ１発現を誘発し得；ＫＬＲＧ１と組み合わせると、それらの有効性を回復する。さまざまな実施形態では、ＫＬＲＧ１／リガンド結合剤およびチェックポイントモジュレーター療法は共同作用的である。相乗効果は、当技術分野で既知のさまざまな方法で測定され得る、追加（または別様に予想された）効果よりも高い効果を有する組み合わせとして定義され得る。
【０１２３】
さまざまな実施形態では、チェックポイントモジュレーター療法は、ペンブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）；抗ＰＤ−１）である。制限なしに、このような実施形態では、がんは、肺がん（例えば非小細胞肺がん）または黒色腫（例えば転移性黒色腫）であってよい。
【０１２４】
さまざまな実施形態では、チェックポイントモジュレーター療法はニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標））である。制限なしに、このような実施形態では、がんは、肺がん（例えば非小細胞肺がん）または黒色腫（例えば転移性黒色腫）または腎がん（例えば腎細胞がん）であってよい。
【０１２５】
さまざまな実施形態では、チェックポイントモジュレーター療法はイピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標））である。制限なしに、このような実施形態では、がんは、黒色腫（例えば転移性黒色腫またはＩＩＩ期黒色腫）であってよい。
【０１２６】
さまざまな実施形態では、チェックポイントモジュレーター療法はＰＦ−０５０８２５６６（Ｐｆｉｚｅｒ；抗４−１ＢＢアゴニスト）である。制限なしに、このような実施形態では、がんは、固形腫瘍または黒色腫（例えば転移性黒色腫）であってよい。
【０１２７】
さまざまな実施形態では、チェックポイントモジュレーター療法はウレルマブ（ＢＭＳ；抗４−１ＢＢアゴニスト）である。制限なしに、このような実施形態では、がんは、固形腫瘍、頭頸部がん、または黒色腫（例えば転移性黒色腫）であってよい。
【０１２８】
さまざまな実施形態では、チェックポイントモジュレーター療法はアテゾリズマブ（Ｒｏｃｈｅ；抗ＰＤ−Ｌ１）である。制限なしに、このような実施形態では、がんは、固形腫瘍、局所進行性または転移性尿路上皮がんもしくは肺がん（例えば非小細胞肺がん）または膀胱がんであってよい。
【０１２９】
さまざまな実施形態では、チェックポイントモジュレーター療法はデュルバルマブ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ；抗ＰＤ−Ｌ１）である。制限なしに、このような実施形態では、がんは、固形腫瘍、肺がん（例えば非小細胞肺がん）、または黒色腫（例えば転移性黒色腫）であってよい。
【０１３０】
さまざまな実施形態では、チェックポイントモジュレーター療法はトレメリムマブ（Ａｓｔｒａ−Ｚｅｎｅｃａ；抗ＣＴＬＡ−４）である。制限なしに、このような実施形態では、がんは、固形腫瘍、非小細胞肺がん（例えばＮＳＣＬＣ）、扁平上皮細胞がん（例えば、頭頸部の）、黒色腫（例えば転移性黒色腫）、膀胱がん、膵がん、胃がん、または肝がん（例えばＨＣＣ）であってよい。
【０１３１】
さまざまな実施形態では、チェックポイントモジュレーター療法はＢＭＳ９８６０１６（ＢＭＳ；抗ＬＡＧ−３）である。制限なしに、このような実施形態では、がんは、固形腫瘍または黒色腫（例えば転移性黒色腫）であってよい。
【０１３２】
さまざまな実施形態では、チェックポイントモジュレーター療法はＭＧＢ４５３（Ｎｏｖａｒｔｉｓ；抗ＴＩＭ−３）である。制限なしに、このような実施形態では、がんは、固形腫瘍または黒色腫（例えば転移性黒色腫）であってよい。
【０１３３】
前述した例示的な実施例にも関わらず、当業者は、ＫＬＲＧ１／リガンド結合剤が、他のチェックポイントモジュレーター療法と組み合わせられ、かつ／または異なる適応に使用され得ることを、認識するであろう。
【０１３４】
がんワクチン療法
さまざまな実施形態では、方法は、被験者に、有効量のがんワクチン療法を投与することをさらに含む。本明細書で使用される用語「がんワクチン療法」は、がんを治療するために免疫系反応を刺激する薬剤を含む。用語「がんワクチン療法」は、がんを後で引き起こし得る病原体に対するワクチン（例えば、肝炎を防ぐが、肝炎感染が原因要素である、その後の肝がんは防がない、肝炎ワクチン）を含まない。承認され市販されているがんワクチン療法の例は、前立腺がんのためのＳｉｐｕｌｅｕｃｅｌ−Ｔ（Ｐｒｏｖｅｎｇｅ（登録商標））を含む。他のがんワクチン療法は、開発中であり、臨床試験中である。
【０１３５】
がんワクチン療法およびＫＬＲＧ１／リガンド結合剤は、被験者に、本質的に同時に（例えば、一致して、同じ日の間に、同じ治療過程の間に）、またはがんワクチン療法およびＫＬＲＧ１／リガンド結合剤が所望の効果（例えば、有効な治療、相乗効果）を達成するために有利に組み合わせられる期間中に、投与され得る。いくつかの実施形態では、抗ＫＬＲＧ１療法は、ワクチンに対する、より効果的なＴ細胞反応を可能にする。さまざまな実施形態では、ＫＬＲＧ１／リガンド結合剤およびがんワクチン療法は、共同作用的である。相乗効果は、当技術分野で既知のさまざまな方法で測定され得る、追加（または別様に予想された）効果よりも高い効果を有する組み合わせとして定義され得る。
【０１３６】
さまざまな実施形態では、がんワクチン療法は、Ｓｉｐｕｌｅｕｃｅｌ−Ｔ（Ｐｒｏｖｅｎｇｅ（登録商標））である。制限なしに、このような実施形態では、がんは、前立腺がんであってよい。
【０１３７】
さまざまな実施形態では、がんワクチン療法は、ＩＮＯ−３１１２（Ｉｎｏｖｉｏ）である。制限なしに、このような実施形態では、がんは、ヒト・パピローマウイルス（ＨＰＶ）で引き起こされるがん（例えば頭頸部がん）であってよい。
【０１３８】
さまざまな実施形態では、がんワクチン療法は、ＩＮＯ−５１５０（Ｉｎｏｖｉｏ）である。制限なしに、このような実施形態では、がんは、前立腺がんであってよい。
【０１３９】
さまざまな実施形態では、がんワクチン療法は、ＴＰＩＶ  ２００（ＴａｐＩｍｍｕｎｅ）である。制限なしに、このような実施形態では、がんは、卵巣がんであってよい。
【０１４０】
前述した例示的な実施例にも関わらず、当業者は、ＫＬＲＧ１／リガンド結合剤が、他のがんワクチン療法と組み合わせられ、かつ／または異なる適応に使用され得ることを、認識するであろう。
【０１４１】
他の有効活性成分
さまざまな実施形態では、本発明は、ＫＬＲＧ１／リガンド結合剤と１つ以上の追加の有効活性成分（ＡＰＩ）との組み合わせを使用し得る。したがって、本発明は、ＫＬＲＧ１／リガンド結合剤の効力を高め、かつ／またはＫＬＲＧ１／リガンド結合剤による望ましくない副作用を減少させることができる。
【０１４２】
さまざまな実施形態では、方法は、被験者に、有効量のがん化学療法を投与することをさらに含む。
【０１４３】
さまざまな実施形態では、チェックポイントモジュレーター療法は、抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ１、または抗ＣＴＬＡ−４療法を含む。
【０１４４】
さまざまな実施形態では、被験者は、先行するがん療法に失敗しているか、または反応していない。
【０１４５】
さまざまな実施形態では、被験者は、高度のＫＬＲＧ１発現を有する。高度のＫＬＲＧ１発現は、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞における高度のＫＬＲＧ１発現を含み得る。さまざまな実施形態では、方法は、（例えば、療法を開始する前および／または療法の間に）被験者を高度のＫＬＲＧ１発現について試験することをさらに含み得る。
【０１４６】
さまざまな実施形態では、被験者は、高度のカドヘリン発現（例えば、Ｅ−カドヘリン）を有する。高度のカドヘリン発現は、がん細胞における高度のカドヘリン発現を含み得る。さまざまな実施形態では、方法は、（例えば、療法を開始する前および／または療法の間に）被験者を高度のカドヘリン発現について試験することをさらに含み得る。
【０１４７】
いくつかの実施形態では、ＡＰＩは、ポリヌクレオチド（オリゴヌクレオチドを含む）タンパク質または小分子であってよい。
【０１４８】
一実施形態では、ＡＰＩはポリヌクレオチドである。ポリヌクレオチドは、ゲノムＤＮＡ断片、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｓｄＲＮＡ、ＤｓｉＲＮＡ、ＬＮＡ、およびアンチセンスＤＮＡまたはＲＮＡであってよい。
【０１４９】
あるいは、ＡＰＩは、小分子薬剤であってよい。好ましくは、分子は、約１５００ｇ／モル〜約５０ｇ／モルの分子量を有する。
【０１５０】
ＡＰＩは、例えば以下のうちの２つ以上を含み得る：抗がん剤、抗生物質製剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、または鎮痛剤。
【０１５１】
例示的な抗がん剤は、アシビシン、アクラルビシン、アコダゾール、アメタントロン、アミノグルテチミド、アントラマイシン、アスパラギナーゼ、アザシチジン、アゼテパ、ビスアントレン、ブレオマイシン、ブスルファン、カクチノマイシン、カルステロン、カラセミド、カルボプラチン、カーフィルゾミブ、カルムスチン、カルビシン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デザグアニン、ジアジクオン、ドセタキセル、ドキソルビシン、エピプロピジン、エルロチニブ、エトポシド、エトプリン、フロクスウリジン、フルダラビン、フルオロウラシル、フルオロシタビン（fluorocitabine）、ヒドロキシウレア、イプロプラチン、酢酸リュープロリド、ロムスチン、メクロレタミン、酢酸メゲストロール、酢酸メレンゲストロール、メルカプトプリン、メトトレキサート、メトプリン、ミトクロミン、ミトギリン、マイトマイシン、ミトスペル（mitosper）、ミトキサントロン、ミコフェノール酸、ノコダゾール、ノガラマイシン、オキシスラン、パクリタキセル、ペリオマイシン（peliomycin）、ペンタムスチン、ポルフィロマイシン、プレドニムスチン、塩酸プロカルバジン、ピューロマイシン、ピラゾフリン、リボプリン、セムスチン、スパルソマイシン、スピロゲルマニウム、スピロムスチン、スピロプラチン、ストレプトゾシン、タリソマイシン、テガフール、テニポシド、テロキシロン、チアミプリン、チオグアニン、チアゾフリン、リン酸トリシリビン、トリエチレンメラミン、トリメトレキサート、ウラシルマスタード、ウレデパ、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビネピジン、ビンロシジン（vinrosidine）、ビンゾリジン（vinzolidine）、ジノスタチン、ゾルビシンを含み得るが、これらに制限されない。
【０１５２】
例示的な抗生物質製剤は、アミノグリコシド；アミカシン；ゲンタマイシン；カナマイシン；ネオマイシン；ネチルマイシン；ストレプトマイシン（steptomycin）；トブラマイシン；アンサマイシン；ゲルダナマイシン；ハービマイシン；カルバセフェム；ロラカルベフ；カルバペネム（arbacepenem）；エルタペネム；ドリペネム；イミペネム／シラスタチン；メロペネム；セファロスポリン；セファドロキシル；セファゾリン；セファロチン（cefalotin）またはセファロチン（cefalothin）；セファレキシン；セファクロル；セファマンドール；セフォキシチン；セフプロジル；セフロキシム；セフィキシム；セフジニル；セフジトレン；セフォペラゾン；セフォタキシム；セフポドキシム；セフタジジム；セフチブテン；セフチゾキシム；セフトリアキソン；セフェピム；セフトビプロール；グリコペプチド；テイコプラニン；バンコマイシン；マクロライド；アジスロマイシン；クラリスロマイシン；ジリスロマイシン；エリスロマイシン（erythromicin）；ロキシスロマイシン；トロレアンドマイシン；テリスロマイシン；スペクチノマイシン；モノバクタム；アズトレオナム；ペニシリン；アモキシシリン；アンピシリン；アズロシリン；カルベニシリン；クロキサシリン；ジクロキサシリン；フルクロキサシリン；メズロシリン；メチシリン；ナフシリン；オキサシリン；ペニシリン、ピペラシリン、チカルシリン；バシトラシン；コリスチン；ポリミキシンＢ；キノロン；シプロフロキサシン；エノキサシン；ガチフロキサシン；レボフロキサシン；ロメフロキサシン；モキシフロキサシン；ノルフロキサシン；オフロキサシン；トロバフロキサシン；スルホンアミド；マフェニド；プロントジル（古い（archaic））；スルファセタミド；スルファメチゾール；スルファニルアミド（sufanilimide）（古い）；スルファサラジン；スルフイソキサゾール；トリメトプリム；トリメトプリム・スルファメトキサゾール合剤（コトリモキサゾール）（ＴＭＰ−ＳＭＸ）；テトラサイクリン；デメクロサイクリン；ドキシサイクリン；ミノサイクリン；オキシテトラサイクリン；テトラサイクリン；アルスフェナミン；クロラムフェニコール；クリンダマイシン；リンコマイシン；エタンブトール；ホスホマイシン；フシジン酸；フラゾリドン；イソニアジド；リネゾリド；メトロニダゾール；ムピロシン；ニトロフラントイン（nitrofuantoin）；プラテンシマイシン；ポリミキシン、ピラジナミド（purazinamide）；キヌプリスチン／ダルホプリスチン；リファンピンまたはリファンピシン；チミダゾール（timidazole）を含み得るが、これらに制限されない。
【０１５３】
特定の実施形態では、抗がん剤は、ダウノルビシン、ドキソルビシン、パクリタキセル、ドセタキセル、シスプラチン、カルボプラチン、シタラビン、フロクスウリジン、フルダラビン、フルオロウラシル、イプロプラチン、酢酸リュープロリド、カーフィルゾミブ、メトトレキサートから選択される。
【０１５４】
例示的な抗ウイルス剤は、チオセミカルバゾン；メチサゾン；ヌクレオシドおよび／またはヌクレオチド；アシクロビル；イドクスウリジン；ビダラビン；リバビリン；ガンシクロビル；ファムシクロビル；バラシクロビル；シドホビル；ペンシクロビル；バルガンシクロビル；ブリブジン；リバビリン、環状アミン；リマンタジン；トロマンタジン；ホスホン酸誘導体；ホスカルネット（foscamet）；ホスホネット；プロテアーゼ阻害薬；サキナビル；インジナビル；リトナビル；ネルフィナビル；アンプレナビル；ロピナビル；ホスアンプレナビル；アタザナビル；チプラナビル；ヌクレオシドおよびヌクレオチド逆転写酵素阻害薬；ジドブジン；ジダノシン；ザルシタビン；スタブジン；ラミブジン；アバカビル；テノホビルジソプロキシル；アデホビルジピボキシル；エムトリシタビン；エンテカビル；非ヌクレオシド系逆転写酵素阻害薬；ネビラピン；デラビルジン；エファビレンツ；ノイラミニダーゼ阻害剤；ザナミビル；オセルタミビル；モロキシジン；イノシンプラノベクス；プレコナリル；エンフビルチドを含み得るが、これらに制限されない。
【０１５５】
例示的な抗真菌剤は、アリルアミン；テルビナフィン；代謝拮抗薬；フルシトシン；アゾール；フルコナゾール；イトラコナゾール；ケトコナゾール；ラブコナゾール；ポサコナゾール；ボリコナゾール；グルカン合成阻害剤；カスポファンギン；ミカファンギン；アニデュラファンギン；ポリエン；アンホテリシンＢ；アンホテリシンＢコロイド状分散体（ＡＢＣＤ）；グリセオフルビンを含み得るが、これらに制限されない。
【０１５６】
例示的な鎮痛剤は、オピエート誘導体、コデイン、メペリジン、メサドン、モルヒネを含み得るが、これらに制限されない。
【０１５７】
医薬組成物
さまざまな実施形態では、ＫＬＲＧ１／リガンド結合剤は、医薬組成物として、例えば薬物として使用される医薬組成物として、調製される。さまざまな実施形態では、医薬組成物は、がん治療用物質として使用されるためのものである。さまざまな実施形態では、医薬組成物は、１つ以上の抗生物質、抗ウイルス物質、抗糖尿病薬、抗高血圧薬、抗真菌薬、または鎮痛剤を含み得る。
【０１５８】
当業者は、既知の方法に従って医薬組成物としてＫＬＲＧ１／リガンド結合剤を調合し得る。
【０１５９】
医薬組成物は担体を含み得る。本明細書で使用される「担体」は、使用される用量および濃度でこれにさらされる細胞または被験者に対して非毒性（または比較的非毒性）である、薬学的に許容可能な担体、賦形剤、または安定剤を含み得る。しばしば、生理学的に許容可能な担体は、ｐＨ緩衝水溶液である。生理学的に許容可能な担体の例は、緩衝剤、例えばホスフェート、シトラート、および他の有機酸；アスコルビン酸を含む抗酸化剤；低分子量（約１０残基未満の）ポリペプチド；タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えばポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンまたはリジン；単糖、二糖、およびグルコース、マンノース、またはデキストリンを含む他の炭水化物；キレート剤、例えばＥＤＴＡ；糖アルコール、例えばマンニトールまたはソルビトール；塩形成対イオン、例えばナトリウム；および／または非イオン界面活性剤、例えばＴＷＥＥＮ（商標）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、およびＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）を含む。
【０１６０】
さまざまな実施形態では、ＫＬＲＧ１／リガンド結合剤は、注射可能な製剤、例えば、皮下、静脈内、筋内、髄膜下または腹膜内注射製剤で構成される。注射可能な製剤は、水溶液、例えば生理学的に適合性の緩衝剤、例えばハンクス液、リンガー溶液、または生理的食塩緩衝液（physiological saline buffer）中にあってよい。注射可能な製剤は、調合剤（formulatory agents）、例えば懸濁化剤、安定化剤および／または分散剤を含有し得る。あるいは、ＫＬＲＧ１／リガンド結合剤は、使用前に適切なビヒクル、例えば滅菌発熱性物質除去蒸留水により構成されるように乾燥または粉末形態であってよい。
【０１６１】
治療および投与、がん
本発明は、本明細書に開示する態様もしくは実施形態のいずれかによるＫＬＲＧ１／リガンド結合剤、または本明細書に開示する態様もしくは実施形態のいずれかによる医薬組成物を、それを必要とする被験者に投与することを含む方法を提供する。さまざまな実施形態では、被験者はヒトである。さまざまな実施形態では、本発明による方法は、（例えばｅｘ  ｖｉｖｏとは対照的に）ｉｎ  ｖｉｖｏで実行される。本明細書で使用される「治療（treatment）」は、治療学的治療（therapeutic treatment）および予防的または防止的手段の両方を指すことができ、目的は、目標の病状または疾患を防止するかまたは遅らせる（軽減する）ことである。治療が必要な人は、既に疾患にかかっている人、疾患を有する傾向がある人、または疾患が防止されるべき人、を含み得る。
【０１６２】
さまざまな態様および実施形態では、本発明は、被験者を治療する方法を提供し、この方法は、必要とする被験者に、有効量のキラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を投与し、それによって、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化することを含む。
【０１６３】
本発明は、がんを治療する方法を提供し、この方法は、それを必要とする被験者に、有効量のキラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を投与することを含む。
【０１６４】
「投与（Administration）」および「治療（treatment）」は、動物、ヒト、実験の被験者、細胞、組織、臓器または生物学的流体に適用される場合、外来性の医薬品、治療薬、診断薬、または組成物を、動物、ヒト、被験者、細胞、組織、臓器または生物学的流体に接触させることを含み得る。「投与」および「治療」は、ｉｎ  ｖｉｖｏ、ならびにいくつかの実施形態ではｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏの治療を含む。
【０１６５】
「治療する（Treat）」または「治療すること（treating）」は、治療薬、例えば本発明の結合剤のうちのいずれかを含有する組成物を、その薬剤が治療活性を有する、１つ以上の病徴を有するか、または病気を有する疑いがある被験者または患者に、体内または体外投与することを意味する。典型的には、この薬剤は、任意の臨床的に測定可能な程度だけ、そのような病徴の進行の退行を誘発するか、またはその進行を抑制することによって、治療される被験者または集団の１つ以上の病徴を緩和するのに有効な量で投与される。任意の特定の病徴を緩和するのに有効な治療薬の量は、患者の病態、年齢、および体重、ならびに、その薬剤が被験者における所望の反応を誘発する能力などの要因に応じて、変化し得る。病徴が緩和されたかどうかは、典型的にはその病徴の深刻さまたは進行状態を評価するために医師または他の熟練した医療提供者によって使用される、任意の臨床的測定により、評価され得る。
【０１６６】
したがって、さまざまな実施形態では、用語「有効量」は、特定の定められた目的の達成をもたらす、ＫＬＲＧ１／リガンド結合剤の濃度または量である。ＫＬＲＧ１／リガンド結合剤の「有効量」は、経験的に決定され得る。さらに、「治療有効量」は、定められた治療効果を達成するのに有効である、ＫＬＲＧ１／リガンド結合剤の濃度または量である。この量も、経験的に決定され得る。
【０１６７】
本発明は、黒色腫を治療する方法を提供し、この方法は、それを必要とする被験者に、有効量のキラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を投与することを含み、結合剤は、ヒトＫＬＲＧ１の細胞外ドメインおよび／またはヒトＥ−カドヘリン、Ｎ−カドヘリン、もしくはＲ−カドヘリンを結合させ、それによって、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化する、抗体もしくはその抗原結合断片、または抗体模倣物である。
【０１６８】
本発明は、肺がんを治療する方法を提供し、この方法は、それを必要とする被験者に、有効量のキラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を投与することを含み、結合剤は、ヒトＫＬＲＧ１の細胞外ドメインおよび／またはヒトＥ−カドヘリン、Ｎ−カドヘリン、もしくはＲ−カドヘリンを結合させ、それによって、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化する、抗体もしくはその抗原結合断片、または抗体模倣物である。
【０１６９】
本発明は、膵がんを治療する方法を提供し、この方法は、それを必要とする被験者に、有効量のキラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を投与することを含み、結合剤は、ヒトＫＬＲＧ１の細胞外ドメインおよび／またはヒトＥ−カドヘリン、Ｎ−カドヘリン、もしくはＲ−カドヘリンを結合させ、それによって、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化する、抗体もしくはその抗原結合断片、または抗体模倣物である。
【０１７０】
本発明は、神経膠腫を治療する方法を提供し、この方法は、それを必要とする被験者に、有効量のキラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を投与することを含み、結合剤は、ヒトＫＬＲＧ１の細胞外ドメインおよび／またはヒトＥ−カドヘリン、Ｎ−カドヘリン、もしくはＲ−カドヘリンを結合させ、それによって、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化する、抗体もしくはその抗原結合断片、または抗体模倣物である。
【０１７１】
本発明は、乳がんを治療する方法を提供し、この方法は、それを必要とする被験者に、有効量のキラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を投与することを含み、結合剤は、ヒトＫＬＲＧ１の細胞外ドメインおよび／またはヒトＥ−カドヘリン、Ｎ−カドヘリン、もしくはＲ−カドヘリンを結合させ、それによって、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化する、抗体もしくはその抗原結合断片、または抗体模倣物である。
【０１７２】
本発明は、卵巣がんを治療する方法を提供し、この方法は、それを必要とする被験者に、有効量のキラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を投与することを含み、結合剤は、ヒトＫＬＲＧ１の細胞外ドメインおよび／またはヒトＥ−カドヘリン、Ｎ−カドヘリン、もしくはＲ−カドヘリンを結合させ、それによって、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化する、抗体もしくはその抗原結合断片、または抗体模倣物である。
【０１７３】
より一般的には、本発明は、被験者のがん細胞および／または組織を含む、がん細胞および／または組織を治療する方法を提供する。がんは、臓器不全をもたらす細胞および組織の異常成長によって形成される悪性腫瘍により引き起こされ得る。
【０１７４】
さまざまな実施形態では、被験者は、上皮がんを有する。
【０１７５】
さまざまな実施形態では、被験者は、癌腫を有する。
【０１７６】
固形腫瘍は、血液、骨髄、またはリンパ細胞以外の身体組織細胞の異常成長によって形成される、新生物（細胞の新生物）または病変（解剖学的構造の損傷または生理学的機能の障害）であり得る。固形腫瘍は、異なる組織種類、例えば黒色腫、肺、膵臓、神経膠腫、乳房、または卵巣に由来し得、また、最初はその細胞起源の臓器内で成長する、細胞の異常な塊からなる。しかしながら、このようながんは、病気の進行した段階で転移性腫瘍成長を通じて他の臓器に広がり得る。
【０１７７】
治療されている被験者は、がんと診断された人であってよい。被験者は、局所進行性、切除不可能、または転移性のがんを有し得、かつ／または先行技術の第一選択療法を失敗していてよい。
【０１７８】
さまざまな実施形態では、被験者は、ブドウ膜黒色腫、子宮がん、子宮癌肉腫、甲状腺がん、胸腺腫、精巣胚細胞腫瘍、黒色腫、肉腫、直腸腺がん、前立腺がん、褐色細胞腫、膵臓腺がん、卵巣嚢胞腺がん、中皮腫、肺扁平上皮がん、肺腺がん、肝細胞がん、乳頭状腎細胞がん、腎臓明細胞がん、色素嫌性腎がん、頭頸部扁平上皮がん、多形神経膠芽腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、結腸腺がん、胆管がん、子宮頸がんおよび／もしくは子宮頸管がん、浸潤性乳がん、脳の低悪性度神経膠腫、膀胱がん、または急性骨髄性白血病を有する。
【０１７９】
さまざまな実施形態では、被験者は黒色腫を有する。
【０１８０】
さまざまな実施形態では、被験者は、肺がんを有する。
【０１８１】
さまざまな実施形態では、被験者は、膵がんを有する。
【０１８２】
さまざまな実施形態では、被験者は、神経膠腫を有する。
【０１８３】
さまざまな実施形態では、被験者は、乳がんを有する。
【０１８４】
さまざまな実施形態では、被験者は、卵巣がんを有する。
【０１８５】
さまざまな実施形態では、ＫＬＲＧ１／リガンド結合剤は、結合剤を符号化するｍＲＮＡを被験者に提供することによって投与され得る。
【０１８６】
さまざまな実施形態では、治療は、被験者の生存を長くすることができる。さまざまな実施形態では、治療は、進行、またはがんおよび／もしくは転移を防ぐか、または減少させることができる。
【０１８７】
以下の実施例は、例示的なものであり、制限するものではない。テクノロジーの多くの変形体が、本開示を検討すれば、当業者には明らかになるであろう。したがって、テクノロジーの範囲は、実施例の参照によって決定すべきではなく、代わりに、特許請求の範囲を、その等価物の全範囲と共に参照することで、決定すべきである。
【０１８８】
〔実施例〕
実施例１：ＫＬＲＧ１への抗体
ＫＬＲＧ１を結合させる抗体を、精製組み換えタンパク質抗原でのマウスの免疫処置によって生成した：ヒト−ＫＬＲＧ１−ＥＣＤ−アイソタイプ１（配列ＩＤ番号１）、ヒト−ＫＬＲＧ１−ＥＣＤ−アイソタイプ２（配列ＩＤ番号２）、およびカニクイザル−ＫＬＲＧ１（配列ＩＤ番号３）。マウスは、２週間ごとに免疫処置し、血清を、２回目および４回目の免疫処置後に試験のために収集した。
【０１８９】
図６Ａは、免疫処置されたマウスにおけるカニクイザルＫＬＲＧ１への特異的血清反応を示す。図６Ｂは、免疫処置されたマウスにおけるヒトＫＬＲＧ１への特異的血清反応を示す。抗ＫＬＲＧ１抗体活性は、ＥＬＩＳＡで測定した。反応は、ヒトおよびカニクイザルＫＬＲＧ１を認識する抗体がマウスにおいて生成されることにより介在されることが示された。
【０１９０】
図７は、免疫処置されたマウスから単離された９つのハイブリドーマクローンの用量依存性結合曲線を示す。ＥＬＩＳＡは、最初に、免疫吸着剤を使った９６ウェルプレート上でヒトＫＬＲＧ１（配列ＩＤ番号２）を固定し、その後、抗体の用量依存性滴定を受けさせることによって、行った。結合した抗体は、抗マウス−ＨＲＰ共役検出（conjugated detection）により可視化した。よって、図７は、免疫処置されたマウスの脾臓から単離された脾細胞が、ＫＬＲＧ１を認識する抗体を生成し得ることを示す。
【０１９１】
実施例２：ＫＬＲＧ１の遺伝子発現は、ＣＤ４＋Ｔ細胞よりもＣＤ８＋およびＮＫ細胞の中で高く、ＣＤ８＋Ｔ細胞細胞傷害能と相関し、かつ、チェックポイント共抑制受容体であるＣＴＬＡ−４およびＰＤ−１の遺伝子発現より高い。
【０１９２】
遺伝子発現データセットの分析は、ＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞（相対倍率１．０）と比べてＣＤ８＋細胞（相対倍率（relative-fold）４．０）でＫＬＲＧ１の高い発現を示す（図８、ヒト血液のＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＫＬＲＧ１遺伝子発現）。抗原曝露に反応して、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞は、ナイーブ細胞から、セントラルメモリー（ＴＣＭ）、エフェクターメモリー（ＴＥＭ）、およびエフェクター（ＴＥＭＲＡ）細胞によって特徴づけられる、ますます強いエフェクター細胞へと分化する。細胞傷害性分子であるグランザイムおよびサイトカインの遺伝子発現により反映されるような、これらの分化サブセット内のＣＤ８＋Ｔ細胞の細胞傷害能は、ＫＬＲＧ１の発現と大いに相関するが、他のチェックポイント阻害剤標的共抑制受容体のＰＤ−１およびＣＴＬＡ−４とは相関しない（図９Ａ：ＣＤ８＋Ｔ細胞サブセットの細胞傷害性およびサイトカイン、ヒト血液遺伝子発現；ならびに図９Ｂ：ＣＤ８＋Ｔ細胞サブセットのチェックポイント発現、ヒト血液遺伝子発現、を参照）。
【０１９３】
実施例３：ヒトのがんにおけるＫＬＲＧ１の発現の増加
Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｏｍｎｉｂｕｓ（ＧＥＯ）およびＥｕｒｏｐｅａｎ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＥＢＩ）からのマイクロアレイデータを、コンパイルし、正規化し、倍率差（fold-differences）および有意水準について分析した。使用したデータセットは以下のとおりであった：Ｅ−ＴＡＢＭ−４０、ＧＳＥ４９９５４、ＧＳＥ２６４９５、ＧＳＥ１４９２６、ＧＳＥ７２６４２、ＧＳＥ５８１７３、ＧＳＥ６５０１０、ＧＳＥ１１５０７；ＴＣＧＡデータ（ｈｔｔｐ：／／ｃａｎｃｅｒｇｅｎｏｍｅ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）、ＧＴＥＸデータ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｔｅｘｐｏｒｔａｌ．ｏｒｇ／）。
【０１９４】
ＫＬＲＧ１は、ＲＮＡｓｅｑ発現により検出されるように、広範ながんにおいて腫瘍浸潤リンパ球によって発現される。図５は、多くのがん型の腫瘍サンプル（９，７５５のサンプルおよび３２のがん型）における、ＰＤ−１およびそのリガンドのＰＤ−Ｌ１の発現と比較した、ＫＬＲＧ１およびそのリガンドのＥ−カドヘリンの発現を示す。左から右へと列挙したがん型は次のとおりである：ブドウ膜黒色腫、子宮がん、子宮癌肉腫、甲状腺がん、胸腺腫、精巣胚細胞腫瘍、黒色腫、肉腫、直腸腺がん、前立腺がん、褐色細胞腫、膵臓腺がん、卵巣嚢胞腺がん、中皮腫、肺扁平上皮がん、肺腺がん、肝細胞がん、乳頭状腎細胞がん、腎臓明細胞がん、色素嫌性腎がん（kidney chromophobe）、頭頸部扁平上皮がん、多形神経膠芽腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、結腸腺がん、胆管がん、子宮頸がんおよび子宮頸管がん、浸潤性乳がん、脳の低悪性度神経膠腫、膀胱がん、および急性骨髄性白血病。任意の特定の理論に束縛されることを望むものではないが、これらのがんは、免疫原性があることが知られているため（例えば、黒色腫、肺がん、結腸がん、頭頸部がん）、本発明と共に使用される特に有望な標的である。それらのＥ−カドヘリンの高い発現は、ＫＬＲＧ１＋ＴおよびＮＫ細胞による免疫攻撃の活発な侵害の可能性を示す。したがって、このようながんは、本発明による療法にとって、特に魅力的な標的である。
【０１９５】
実施例４：ヒトのがんにおけるＥ−カドヘリンの発現の増加
Ｂｉｏｇｐｓポータルを通じて入手可能な国立癌研究所のＮＣＩ−６０  Ｕ１３３Ａマイクロアレイデータセットの分析は、複数のがん細胞株におけるＥ−カドヘリン過剰発現を示す（図１０に示すマイクロアレイデータ分析）。Ｔｈｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｔｌａｓ（ＴＣＧＡ）ＲＮＡｓｅｑデータの分析では、腫瘍生検サンプルでのＥ−カドヘリンの発現は、ＰＤ−１リガンドのＰＤ−Ｌ１よりも一貫して高い（図５）。したがって、肺がん、乳がん、結腸がん、前立腺がん、黒色腫、卵巣がんは、本発明による療法にとって、特に魅力的な標的である。
【０１９６】
実施例５：ヒトＫＬＲＧ１を結合させる抗体の生成
ＫＬＲＧ１の細胞外部分に結合し、そのリガンドであるＥ−カドヘリン／Ｎ−カドヘリン／Ｐ−カドヘリンを中和するかまたはそれと競合する抗体は、以下を含むがこれらに限定されないいくつかの技術によって生成され得る：マウスハイブリドーマテクノロジー、ファージ提示法、酵母提示法（yeast display）、レトロ細胞ディスプレイ（retrocyte display）、ヒト化マウステクノロジー、リボソームディスプレイ（ribosome display）。他の方法および追加の方法が、当技術分野で既知であり、本発明の適用に関連して開発され得る。
【０１９７】
例えば、マウスハイブリドーマテクノロジーを使用して、ＫＬＲＧ１に結合し、Ｅ−カドヘリンの結合を中和する（またはＫＬＲＧ１発現細胞を枯渇させる）抗体を生成することができる。抗体生成に一般的に使用されるマウス株が使用され得、例えば：Ｂａｌｂ／ｃまたはＳＪＬ株である。複数のマウスが、免疫応答を生じるよう、抗原を２週間間隔で繰り返し注射され得る。いくつかの形態の抗原が、単独で、または補助剤、例えば外来抗原に対する宿主の免疫応答を高めることが知られているＫＬＨ（キーホールリンペットヘモシアニン）と組み合わせて、また、それを追加して、注射され得る。抗原は、精製組み換えＫＬＲＧ１、ＫＬＲＧ１をコード化するｃＤＮＡ、表面にＫＬＲＧ１を発現する細胞、またはＫＬＲＧ１の配列から得られたペプチドの形態であってよい。
【０１９８】
マウスに抗原を投与するたびに、ＫＬＲＧ１に対する免疫応答を、ＥＬＩＳＡの力価によって監視することができる。ＥＬＩＳＡは、適切なＥＬＩＳＡマイクロタイタープレート上で組み換えのＫＬＲＧ１を最初に固定することによって行われ得る。１２時間インキュベーションした後、プレートを、リン酸食塩水（phosphate saline）で洗浄し、リン酸緩衝食塩水中１％のＢＳＡ溶液でブロッキングすることができる。免疫処置されたマウス由来の血清は、リン酸緩衝食塩水中で連続して希釈され、マイクロタイタープレートで表面結合抗原と相互作用させられ得る。余分な血清は、洗い流され得、結合量は、標準技術、例えばＨＲＰに共役された抗マウス抗体の追加、を用いて、可視化され得る。マウスは、十分に高いレベルの信号がそれらの血清中で検出され得るまで、抗原でブーストされ得、その時点で、脾臓がマウスから除去され得る。免疫処置されたマウス由来の脾細胞は、当技術分野で使用される標準プロトコルを用いて得られた（ＳＰ２／０）骨髄腫と融合され得る。結果として得られるハイブリドーマ細胞は、ＥＬＩＳＡを用いて組み換えのＫＬＲＧ１への結合を試験され、またＦＡＣＳを用いて、細胞が発現したＫＬＲＧ１への結合を試験され得る、抗体を発現および分泌し得る。所望の結合特徴を有する抗体を生成するハイブリドーマ細胞株は、サブクローニングされ得、抗体の可変領域は配列が決定され得る。これらの可変マウス領域およびヒト定常領域を用いた組み換え抗体は、標準技術によって生成され得、（例えば結合、中和活性について）機能アッセイにおいて評価され得る。
【０１９９】
実施例６：Ｅ−カドヘリンへのヒトＫＬＲＧ１結合を中和する抗体の識別のためのアッセイ
ＫＬＲＧ１は、比較的低い親和性でＥ−カドヘリンに結合する（ＫＤはおよそ２００μＭと測定されている）。この低い結合親和性により、動力学的結合アッセイは、例えば実施例２１に説明するように、ＫＬＲＧ１と結合してＥ−カドヘリン相互作用と競合する抗体の能力を測定するのに使用され得る。このアッセイは、ＫＬＲＧ１と相互作用する抗体がＥ−カドヘリンの結合を防ぐかどうか確かめるためにＯＣＴＥＴ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ，  Ｉｎｃ．）によって測定されるような動力学的結合パラメータを使用し得る。アッセイは、直接吸収により、または親和性標識、例えば抗Ｈｉｓもしくは抗ＦＬＡＧを用いることにより、組み換えのＫＬＲＧ１細胞外ドメインをｏｃｔｅｔバイオセンサーに固定し得る。装填されたセンサーは次に、目的の抗体を含有する溶液に曝露され得、結合事象（binding even）が器具により測定された場合、検査されている抗体は、「バインダー」とみなされ、さらなる研究開発のために保持され得る。そうでない場合、抗体は、「非バインダー」とみなされ、廃棄される。
【０２００】
実施例７：抗ＫＬＲＧ１中和抗体は、ｅｘ  ｖｉｖｏでのヒトＣＤ８＋およびＮＫ細胞増殖の増加を引き起こし得る
ヒトＰＢＭＣから単離されたＣＤ８＋Ｔ細胞およびＮＫ細胞は、カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）で標識され、プレートで覆われた（plate coated）抗ＣＤ３（ＯＫＴ３クローン）および照射を受けたＡＰＣで刺激され得る。抗ＫＬＲＧ１抗体の存在に反応する増殖は、ＣＳＦＥ染色を希釈してＴ細胞とＮＫ細胞との割合を監視することによりＦＡＣＳによって３日目および６日目に測定され得る。さまざまな実施形態では、抗ＫＬＲＧ１処理細胞は、対照のＩｇＧ処理細胞と比べて、速い速度で増殖し得る。
【０２０１】
実施例８：抗ＫＬＲＧ１中和抗体は、他のチェックポイント阻害剤、例えば抗ＰＤ−１または抗ＰＤ−Ｌ１との相乗効果で、ｅｘ  ｖｉｖｏでのヒトＣＤ８＋およびＮＫ細胞増殖を引き起こし得る
ヒトＰＢＭＣから単離されたＣＤ８＋Ｔ細胞およびＮＫ細胞は、カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）で標識され、プレートで覆われた抗ＣＤ３（ＯＫＴ３クローン）および照射を受けたＡＰＣで刺激され得る。抗ＰＤ１抗体または抗ＰＤＬ１の存在に反応する増殖は、ＣＳＦＥ染色を希釈してＴ細胞およびＮＫ細胞の増殖を監視することによりＦＡＣＳによって３日目および６日目に測定され得る。その後、抗ＫＬＲＧ１抗体による２回目の処理は、Ｔ細胞のさらなる増殖を測定するために実施され得る。抗ＫＬＲＧ１抗体または対照に反応する増殖は、ＣＳＦＥ染色の希釈によるＴ細胞およびＮＫ細胞の増殖を監視することによって、ＦＡＣＳにより３日目および６日目に測定され得る。さまざまな実施形態では、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１遮断後の抗ＫＬＲＧ１処理は、抗ＰＤ−１または抗ＰＤ−Ｌ１処理のみの場合と比べて、増殖をさらに高め得る。
【０２０２】
実施例９：抗ＫＬＲＧ１中和抗体は、他のチェックポイント阻害剤、例えば抗ＰＤ−１および抗ＰＤ−Ｌ１抗体と相乗作用を示し、ｅｘ  ｖｉｖｏでのヒトＣＤ８＋およびＮＫ細胞のサイトカイン分泌を増加させ得る
ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＮＫ細胞は、他のチェックポイント阻害剤、例えば抗ＰＤ１または抗ＰＤ−Ｌ１またはＩｇＧ対照抗体の存在下で、ヒトＰＢＭＣから単離され、プレートで覆われた抗ＣＤ３（ＯＫＴ３クローン）および照射を受けた抗原提示細胞（ＡＰＣ）で刺激され、抗ＫＬＲＧ１抗体で処理され得る。炎症促進性サイトカイン、例えばＩＬ２およびＩＦＮ−γの分泌は、ＥＬＩＳＡまたは類似技術によって、培地中で、刺激後３日および６日目に測定され得る。さまざまな実施形態では、抗ＫＬＲＧ１と、抗ＰＤ−１または抗ＰＤ−Ｌ１のいずれかとの組み合わせによる処理は、抗体のいずれかのみで処理された細胞と比べ、炎症促進性サイトカインの分泌の増加を引き起こし得る。
【０２０３】
実施例１０：黒色腫
図１１は、ＧＴＥＸデータ（Ｇｅｎｏｔｙｐｅ−Ｔｉｓｓｕｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｔｅｘｐｏｒｔａｌ．ｏｒｇ／）からの正常な皮膚組織と比較した、黒色腫のＴＣＧＡ  ＲＮＡｓｅｑデータにおけるＥ−カドヘリンおよびＰＤ−Ｌ１の倍率変化を示す。Ｅ−カドヘリンの発現は、黒色腫で高く（倍率変化０．７７）、ＰＤ−Ｌ１（倍率変化０．４５）よりも高い。したがって、黒色腫は、本発明による療法にとって特に魅力的な標的である。
【０２０４】
実施例１１：肺がん
図１２は、ＧＴＥＸデータからの正常な肺組織と比べた、肺がんのＴＣＧＡ  ＲＮＡｓｅｑデータにおけるＥ−カドヘリンおよびＰＤ−Ｌ１の倍率変化を示す。Ｅ−カドヘリンの発現は、肺がんで高く（倍率変化０．３１）、ＰＤ−Ｌ１（倍率変化−０．５７）よりも高い。したがって、肺がんは、本発明による療法にとって特に魅力的な標的である。
【０２０５】
実施例１２：膵がん
図１３は、ＧＴＥＸデータからの正常な膵臓組織と比べた、膵がんのＴＣＧＡ  ＲＮＡｓｅｑデータにおけるＥ−カドヘリンおよびＰＤ−Ｌ１の倍率変化を示す。Ｅ−カドヘリンの発現は、膵がんで高く（倍率変化１．１０）、ＰＤ−Ｌ１（倍率変化０．０１）よりも高い。したがって、前立腺がんは、本発明による療法にとって特に魅力的な標的である。
【０２０６】
実施例１３：神経膠腫
図１４は、ＧＴＥＸデータからの正常な脳組織と比べた、神経膠腫のＴＣＧＡ  ＲＮＡｓｅｑデータにおけるＥ−カドヘリンおよびＰＤ−Ｌ１の倍率変化を示す。Ｅ−カドヘリンの発現は、神経膠腫で高く（倍率変化０．８０）、ＰＤ−Ｌ１（倍率変化−０．１９）よりも高い。したがって、脳がん（例えば神経膠腫）は、本発明による療法にとって特に魅力的な標的である。
【０２０７】
実施例１４：乳がん
図１５は、ＧＴＥＸデータからの正常な乳房組織と比べた、乳がんのＴＣＧＡ  ＲＮＡｓｅｑデータにおけるＥ−カドヘリンおよびＰＤ−Ｌ１の倍率変化を示す。Ｅ−カドヘリンの発現は、乳がんで高く（倍率変化０．８４）、ＰＤ−Ｌ１（倍率変化０．０１）よりも高い。したがって、乳がんは、本発明による療法にとって特に魅力的な標的である。
【０２０８】
実施例１５：卵巣がん
図１６は、ＧＴＥＸデータからの正常な卵巣組織と比べた、卵巣がんのＴＣＧＡ  ＲＮＡｓｅｑデータにおけるＥ−カドヘリンおよびＰＤ−Ｌ１の倍率変化を示す。Ｅ−カドヘリンの発現は、卵巣がんで高く（倍率変化１．４１）、ＰＤ−Ｌ１（倍率変化０．０８）よりも高い。したがって、卵巣がんは、本発明による療法にとって特に魅力的な標的である。
【０２０９】
実施例１６：黒色腫
ＫＬＲＧ１は、黒色腫患者生検（ＲＮＡ−ｓｅｑデータのＧＥＯデータベース、受入番号ＧＳＥ７２０５６）内のかなりの割合のＣＤ８＋Ｔ細胞によって発現される。具体的には、（１７の患者黒色腫生検サンプルにわたって）ＫＬＲＧ１を発現するＣＤ８＋Ｔ細胞の平均パーセンテージは、４４％であり、ＰＤ−１を発現する平均パーセンテージは４７％であり（図１７Ａ、黒色腫患者サンプルによるＫＬＲＧ１およびＰＤ−１のＣＤ８＋発現）、これらは類似しており、有意差のある割合ではない。相当な数のＰＤ−１陰性のＣＤ８＋Ｔ細胞はＫＬＲＧ１＋であり、ＫＬＲＧ１を標的化すると、既存の薬剤、例えばニボルマブまたはペンブロリズマブでＰＤ−１を標的化することによって影響を受けない細胞集団に、影響し得る。具体的には、１７の患者黒色腫生検サンプルにわたって、ＰＤ−１陰性のＣＤ８＋Ｔ細胞の平均４６％（２０％〜７８％の範囲）が、ＫＬＲＧ１を発現する（図１７Ｂ、ＰＤ−１陰性のＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＫＬＲＧ１発現、図１７Ｃ、黒色腫患者サンプルによるＫＬＲＧ１＋であるＰＤ−１陰性のＣＤ８＋細胞）。ＫＬＲＧ１の発現レベルは、これらのＫＬＲＧ１＋であるＰＤ−１陰性のＣＤ８＋細胞の多くで高い（最大で６〜８ＴＰＭベース）（図１７Ｄ、１７の患者黒色腫生検サンプルからのＰＤ−１陰性のＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＫＬＲＧ１発現）。さらに、悪性黒色腫細胞による関連のあるリガンドの発現に関するこの単一細胞データセットの分析は、ＫＬＲＧ１のリガンドであるＥ−カドヘリンが、かなりの割合の黒色腫悪性細胞で発現され（１４人の患者で平均７６％）、ＰＤ−１リガンドであるＰＤ−Ｌ１（平均１１％）よりもはるかに大きな割合であることを示す（図１８Ａ〜図１８Ｄ）。したがって、黒色腫は、本発明による療法にとって特に魅力的な標的である。
【０２１０】
実施例１７：Ｅ−カドヘリンおよびＰＤ−Ｌ１に関するがん組織と正常な適合組織とにおける相対発現の概要
図１９は、Ｅ−カドヘリンおよびＰＤ−Ｌ１に関するがん組織と正常な適合組織とにおける相対発現の概要を示す。これらのデータは、図１１〜図１６のデータを反映しており、ここでは比較のため１つの図で提示されている。
【０２１１】
実施例１８：ＲＮＡｉによるＫＬＲＧ１遺伝子発現のダウンレギュレーション
ヒト末梢血単核細胞（「ＰＢＭＣ」）が、コーディングｍＲＮＡを標的化することによってＫＬＲＧ１遺伝子の発現を特異的にダウンレギュレートさせるようデザインされたＲＮＡｉで、単離および処理され得る。ＲＮＡｉ構造物は、（例えば、Ｂｒｏｗｎ  ｅｔ  ａｌ．  （２００２）  ＲＮＡ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ  ｉｎ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｅｌｌ  ｃｕｌｔｕｒｅ：  ｄｅｓｉｇｎ，  ｅｘｅｃｕｔｉｏｎ，  ａｎｄ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｓｉＲＮＡ  ｅｆｆｅｃｔ．  Ａｍｂｉｏｎ  ＴｅｃｈＮｏｔｅｓ  ９（１）：  ３−５．に記載されるように）周知の技術を適用してデザインされ得る。目的の標的についてｍＲＮＡ（例えば、ＫＬＲＧ１ｍＲＮＡ配列ＩＤ番号７）から開始して、２０の塩基対に対応する配列が、選択され、構造物の「センス」領域を構成する。ＲＮＡｉ構造物は、一般的には、５’の「センス」配列（5 prime “sense” sequence）の後に「ループ」領域およびセンス配列に相補的な「アンチセンス」配列を含む。構造物は、デリバリーレトロウイルスベクター（delivery retroviral vector）へと合成およびクローン化され得る。健康なボランティアから単離されたＰＢＭＣは、ＲＮＡｉコーディングベクターを有するウイルス粒子に感染させられ得、それらの増殖能力は、抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）による刺激によって試験され得る。このようなＲＮＡｉで処理されたＰＢＭＣは、未処理のＰＢＭＣと比べて高いレベルの増殖を示し得る。
【０２１２】
実施例１８：黒色腫
３人の患者からのヒト黒色腫生検の免疫組織化学は、腫瘍に浸潤する多くのＫＬＲＧ１＋細胞（Ａ〜Ｃ）を示すが、正常な皮膚にはＫＬＲＧ１＋細胞はないことを示す（Ｄ）（図２０）。腫瘍組織におけるＫＬＲＧ１＋細胞の存在は、黒色腫を、本発明による療法にとって特に魅力的な標的にする。
【０２１３】
実施例１９：腎細胞がん
４人の患者からのヒト腎細胞がん生検の免疫組織化学は、腫瘍に浸潤する多くのＫＬＲＧ１＋細胞を示す（図２１）。腫瘍組織におけるＫＬＲＧ１＋細胞の存在は、腎細胞がんを、本発明による療法にとって特に魅力的な標的にする。
【０２１４】
実施例２０：非小細胞肺がん
４人の患者からのヒト非小細胞肺がん生検の免疫組織化学は、腫瘍に浸潤する多くのＫＬＲＧ１＋細胞を示す（図２２）。腫瘍組織におけるＫＬＲＧ１＋細胞の存在は、非小細胞肺がんを、本発明による療法にとって特に魅力的な標的にする。
【０２１５】
実施例２１：組み換えのヒトＥ−カドヘリンのヒトＫＬＲＧ１への結合、および中和活性を有する抗体の検出
ＥＬＩＳＡベースのＫＬＲＧ１／Ｅ−カドヘリン競合アッセイが、ＫＬＲＧ１／Ｅ−カドヘリン結合ならびにＫＬＲＧ１／Ｅ−カドヘリン結合の中和を測定するために開発された。
【０２１６】
Ｅ−カドヘリン／ＫＬＲＧ１結合
実施例６に付け加えて、ｈ（ヒト）ＫＬＲＧ１のｈ（ヒト）Ｅ−カドヘリンへの結合が、ＥＬＩＳＡにより検出され得る。ＥＬＩＳＡは、Ｅ−カドヘリンのプレートで覆われたＫＬＲＧ１への結合を検出し、中和抗体を、用量依存的にＫＬＲＧ１へのＥ−カドヘリン結合を減少させる効果を有するものと定める。
【０２１７】
図２３は、プレートで覆われたｈＫＬＲＧ１への可溶性ｈＥ−カドヘリン結合の結果を示す。この曲線から、ＥＣ５０およびＥＣ８０はそれぞれ２５および１００ｎＭと計算された。最適なＫＬＲＧ１／Ｅ−カドヘリン相互作用は、以下の組成を有する緩衝剤中で観察された：１ｘＰＢＳ、１％ＢＳＡ、２％粉乳、０．０５％Ｔｗｅｅｎ。
【０２１８】
抗ＫＬＲＧ１キメラ抗体
うち１つが市販のものである、３つのネズミ抗ＫＬＲＧ１抗体を用いて、マウス−ヒトキメラ抗体を生成した（標識ＨＹＢ０１、ＨＹＢ０２、ＨＹＢ０３）。この３つのキメラ抗体を、中和活性およびｈＫＬＲＧ１結合に関して比較した。
【０２１９】
ｈＥ−カドヘリン／ｈＫＬＲＧ１結合の中和
図２４は、ｈＥ−カドヘリン／ｈＫＬＲＧ１結合を中和する３つのマウス−ヒトキメラ抗体の結果を提示する。可溶性Ｅ−カドヘリンの濃度は、ＥＣ８０値が１００ｎＭで一定であったが、キメラ抗体の濃度は変化させた。キメラ抗体ＨＹＢ０３は、用量依存性の中和を示す（ＩＣ５０が１．１ｎＭ）。キメラ抗体ＨＹＢ０１およびＨＹＢ０２は、効果的には用量依存性の中和を示さない（ＩＣ５０は該当なし）。
【０２２０】
キメラ抗体／ｈＫＬＲＧ１結合
図２５は、ＥＬＩＳＡによって決定されるような、用量依存的な形の、プレートで覆われたＫＬＲＧ１への３つのマウス−ヒトキメラ抗体結合の結果を提示する。ＨＹＢ０１は、ＥＣ５０が０．６ｎＭであり、ＨＹＢ０２は、ＥＣ５０が０．１８ｎＭであり、ＨＹＢ０３は、ＥＣ５０が０．２８ｎＭである。
【０２２１】
まとめ
試験した３つすべてのマウス−ヒトキメラ抗体（ＨＹＢ０１、ＨＹＢ０２、ＨＹＢ０３）が用量依存的にｈＫＬＲＧ１を結合させるが、１つのみ（ＨＹＢ０３）は、用量依存性の中和も示す。よって、中和アッセイは、単にＫＬＲＧ１結合しているものから、中和抗体を識別することができる。
【０２２２】
参考文献
Ａｋｂａｒ  ＡＮ，  Ｈｅｎｓｏｎ  ＳＭ．  Ａｒｅ  ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｅｘｈａｕｓｔｉｏｎ  ｉｎｔｅｒｔｗｉｎｅｄ  ｏｒ  ｕｎｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ  ｔｈａｔ  ｃｏｍｐｒｏｍｉｓｅ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ？  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２０１１；１１（４）：２８９−９５．
Ａｐｅｔｏｈ  Ｌ，  Ｓｍｙｔｈ  ＭＪ，  Ｄｒａｋｅ  ＣＧ，  Ａｂａｓｔａｄｏ  ＪＰ，  Ａｐｔｅ  ＲＮ，  Ａｙｙｏｕｂ  Ｍ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ  ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  ｆｏｒ  ＣＤ８＋  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．  ２０１５；４（４）：ｅ９９８５３８．
Ａｔｔｉｇ  Ｓ，  Ｈｅｎｎｅｎｌｏｔｔｅｒ  Ｊ，  Ｐａｗｅｌｅｃ  Ｇ，  Ｋｌｅｉｎ  Ｇ，  Ｋｏｃｈ  ＳＤ，  Ｐｉｒｃｈｅｒ  Ｈ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ  ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｏｌｙｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｅｆｆｅｃｔｏｒ  ａｎｄ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎｔｏ  ｒｅｎａｌ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ２００９；６９（２１）：８４１２−９．
Ｂｌａｃｋｂｕｒｎ  ＳＤ，  Ｓｈｉｎ  Ｈ，  Ｈａｉｎｉｎｇ  ＷＮ，  Ｚｏｕ  Ｔ，  Ｗｏｒｋｍａｎ  ＣＪ，  Ｐｏｌｌｅｙ  Ａ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｏｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＣＤ８＋  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｅｘｈａｕｓｔｉｏｎ  ｂｙ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｄｕｒｉｎｇ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｖｉｒａｌ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．  Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２００９；１０（１）：２９−３７．
Ｂｒｕｎｎｅｒ  ＳＭ，  Ｒｕｂｎｅｒ  Ｃ，  Ｋｅｓｓｅｌｒｉｎｇ  Ｒ，  Ｍａｒｔｉｎ  Ｍ，  Ｇｒｉｅｓｓｈａｍｍｅｒ  Ｅ，  Ｒｕｅｍｍｅｌｅ  Ｐ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｕｍｏｒ−ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ，  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−３３−ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ  ｅｆｆｅｃｔｏｒ−ｍｅｍｏｒｙ  ＣＤ８＋  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｒｅｓｅｃｔｅｄ  ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｐｒｏｌｏｎｇ  ｐａｔｉｅｎｔ  ｓｕｒｖｉｖａｌ．  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ．  ２０１５；６１（６）：１９５７−６７．
Ｃｙｋｔｏｒ  ＪＣ，  Ｃａｒｒｕｔｈｅｒｓ  Ｂ，  Ｓｔｒｏｍｂｅｒｇ  Ｐ，  Ｆｌａｎｏ  Ｅ，  Ｐｉｒｃｈｅｒ  Ｈ，  Ｔｕｒｎｅｒ  Ｊ．  Ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌ  ｌｅｃｔｉｎ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｇ１  ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ａｆｔｅｒ  Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ．  ２０１３；８１（４）：１０９０−９．
Ｇｒｕｎｄｅｍａｎｎ  Ｃ，  Ｓｃｈｗａｒｔｚｋｏｐｆｆ  Ｓ，  Ｋｏｓｃｈｅｌｌａ  Ｍ，  Ｓｃｈｗｅｉｅｒ  Ｏ，  Ｐｅｔｅｒｓ  Ｃ，  Ｖｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｄ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｈｅ  ＮＫ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＫＬＲＧ１  ｉｓ  ｄｉｓｐｅｎｓａｂｌｅ  ｆｏｒ  ｖｉｒｕｓ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ＮＫ  ａｎｄ  ＣＤ８＋  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２０１０；４０（５）：１３０３−１４．
Ｇｕｔｈｍａｎｎ  ＭＤ，  Ｔａｌ  Ｍ，  Ｐｅｃｈｔ  Ｉ．  Ａ  ｎｅｗ  ｍｅｍｂｅｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃ−ｔｙｐｅ  ｌｅｃｔｉｎ  ｆａｍｉｌｙ  ｉｓ  ａ  ｍｏｄｕｌａｔｏｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍａｓｔ  ｃｅｌｌ  ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ．  Ｉｎｔ  Ａｒｃｈ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １９９５；１０７（１−３）：８２−６．
Ｈｅｎｓｏｎ  ＳＭ，  Ｆｒａｎｚｅｓｅ  Ｏ，  Ｍａｃａｕｌａｙ  Ｒ，  Ｌｉｂｒｉ  Ｖ，  Ａｚｅｖｅｄｏ  ＲＩ，  Ｋｉａｎｉ−Ａｌｉｋｈａｎ  Ｓ，  ｅｔ  ａｌ．  ＫＬＲＧ１  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ  Ａｋｔ  （ｓｅｒ４７３）  ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｉｇｈｌｙ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ  ＣＤ８＋  Ｔ  ｃｅｌｌｓ．  Ｂｌｏｏｄ．  ２００９；１１３（２６）：６６１９−２８．
Ｈｅｎｓｏｎ  ＳＭ，  Ｍａｃａｕｌａｙ  Ｒ，  Ｆｒａｎｚｅｓｅ  Ｏ，  Ａｋｂａｒ  ＡＮ．  Ｒｅｖｅｒｓａｌ  ｏｆ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｄｅｆｅｃｔｓ  ｉｎ  ｈｉｇｈｌｙ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ  ｙｏｕｎｇ  ａｎｄ  ｏｌｄ  ＣＤ８＋  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ＰＤＬ  ｂｌｏｃｋａｄｅ．  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．  ２０１２；１３５（４）：３５５−６３．
Ｈｏｆｍａｎｎ  Ｍ，  Ｓｃｈｗｅｉｅｒ  Ｏ，  Ｐｉｒｃｈｅｒ  Ｈ．  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｃａｐａｃｉｔｉｅｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ａｎｄ  ｍｏｕｓｅ  ＫＬＲＧ１  ａｒｅ  ｌｉｎｋｅｄ  ｔｏ  ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｚａｔｉｏｎｓ．  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２０１２；４２（９）：２４８４−９０．
Ｌｅｇａｔ  Ａ，  Ｓｐｅｉｓｅｒ  ＤＥ，  Ｐｉｒｃｈｅｒ  Ｈ，  Ｚｅｈｎ  Ｄ，  Ｆｕｅｒｔｅｓ  Ｍａｒｒａｃｏ  ＳＡ．  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｄｅｐｅｎｄｓ  Ｍｏｒｅ  Ｄｏｍｉｎａｎｔｌｙ  ｏｎ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｔｈａｎ  “Ｅｘｈａｕｓｔｉｏｎ”  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  ＣＤ８＋  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ．  Ｆｒｏｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２０１３；４：４５５．
Ｍａｈｏｎｅｙ  ＫＭ，  Ｒｅｎｎｅｒｔ  ＰＤ，  Ｆｒｅｅｍａｎ  ＧＪ．  Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｄ  ｎｅｗ  ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ  ｔａｒｇｅｔｓ．  Ｎａｔｕｒｅ  ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｄｒｕｇ  ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ．  ２０１５；１４（８）：５６１−８４．
Ｍｅｌｉｓ  Ｌ，  Ｖａｎ  Ｐｒａｅｔ  Ｌ，  Ｐｉｒｃｈｅｒ  Ｈ，  Ｖｅｎｋｅｎ  Ｋ，  Ｅｌｅｗａｕｔ  Ｄ．  Ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ  ｍａｒｋｅｒ  ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌ  ｌｅｃｔｉｎ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｇ１  （ＫＬＲＧ１）  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ  ｔｏ  ＴＮＦ−ａｌｐｈａ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｉｔｓ  ｓｏｌｕｂｌｅ  Ｅ−ｃａｄｈｅｒｉｎ  ｌｉｇａｎｄ  ｉｎ  ｃｈｒｏｎｉｃａｌｌｙ  ｉｎｆｌａｍｅｄ  ｊｏｉｎｔｓ．  Ａｎｎ  Ｒｈｅｕｍ  Ｄｉｓ．  ２０１４；７３（６）：１２２３−３１．
Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ  Ｈ，  Ｎｏｓｅ  Ｍ，  Ｈｉａｉ  Ｈ，  Ｍｉｎａｔｏ  Ｎ，  Ｈｏｎｊｏ  Ｔ．  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｌｕｐｕｓ−ｌｉｋｅ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｄｉｓｅａｓｅｓ  ｂｙ  ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＰＤ−１  ｇｅｎｅ  ｅｎｃｏｄｉｎｇ  ａｎ  ＩＴＩＭ  ｍｏｔｉｆ−ｃａｒｒｙｉｎｇ  ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ．  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．  １９９９；１１（２）：１４１−５１．
Ｓｈｉ  Ｌ，  Ｗａｎｇ  ＪＭ，  Ｒｅｎ  ＪＰ，  Ｃｈｅｎｇ  ＹＱ，  Ｙｉｎｇ  ＲＳ，  Ｗｕ  ＸＹ，  ｅｔ  ａｌ．  ＫＬＲＧ１  ｉｍｐａｉｒｓ  ＣＤ４＋  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｖｉａ  ｐ１６ｉｎｋ４ａ  ａｎｄ  ｐ２７ｋｉｐ１  ｐａｔｈｗａｙｓ：  ｒｏｌｅ  ｉｎ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｂ  ｖａｃｃｉｎｅ  ｆａｉｌｕｒｅ  ｉｎ  ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ  ｗｉｔｈ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２０１４；１９２（２）：６４９−５７．
Ｄｉｍｉｔｒｉ  Ｄ，  Ｂｅｎｖｅｎｉｓｔｅ  Ｏ，  Ｄｕｂｏｕｒｇ  Ｏ，  Ｍａｉｓｏｎｏｂｅ  Ｔ，  Ｅｙｍａｒｄ  Ｂ，  Ａｍｏｕｒａ  Ｚ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｈａｒｅｄ  ｂｌｏｏｄ  ａｎｄ  ｍｕｓｃｌｅ  ＣＤ８＋  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｅｘｐａｎｓｉｏｎｓ  ｉｎ  ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ  ｂｏｄｙ  ｍｙｏｓｉｔｉｓ．  Ｂｒａｉｎ  ：  ａ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ２００６；  １２９（Ｐｔ  ４）：  ９８６−９５．
Ｍａｒｃｏｌｉｎｏ  Ｉ，  Ｐｒｚｙｂｙｌｓｋｉ  ＧＫ，  Ｋｏｓｃｈｅｌｌａ  Ｍ，  Ｓｃｈｍｉｄｔ  ＣＡ，  Ｖｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｄ，  Ｓｃｈｌｅｓｉｅｒ  Ｍ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｆｒｅｑｕｅｎｔ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＫＬＲＧ１  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｃｏｒｄ  ｂｌｏｏｄ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ：  ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｒｅｐｌｉｃａｔｉｖｅ  ｈｉｓｔｏｒｙ．  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００４；  ３４（１０）：  ２６７２−８０．
Ｍｕｎｔｚｉｎｇ  Ｋ，  Ｌｉｎｄｂｅｒｇ  Ｃ，  Ｍｏｓｌｅｍｉ  ＡＲ，  Ｏｌｄｆｏｒｓ  Ａ．  Ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ  ｂｏｄｙ  ｍｙｏｓｉｔｉｓ：  ｃｌｏｎａｌ  ｅｘｐａｎｓｉｏｎｓ  ｏｆ  ｍｕｓｃｌｅ−ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｐｅｒｓｉｓｔ  ｏｖｅｒ  ｔｉｍｅ．  Ｓｃａｎｄｉｎａｖｉａｎ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２００３；  ５８（２）：  １９５−２００．
Ｖｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｄ，  Ｋｏｓｃｈｅｌｌａ  Ｍ，  Ｐｉｒｃｈｅｒ  Ｈ．  Ｌａｃｋ  ｏｆ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｃａｐａｃｉｔｙ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｅｆｆｅｃｔｏｒ  ａｎｄ  ｍｅｍｏｒｙ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌ  ｌｅｃｔｉｎｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｇ１  （ＫＬＲＧ１）．  Ｂｌｏｏｄ  ２００２；  １００（１０）：  ３６９８−７０２．
【０２２３】
〔実施の態様〕
（１）  被験者を治療する方法において、
必要とする被験者に、有効量のキラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を投与し、それによって、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化することを含む、方法。
（２）  がんを治療する方法において、
それを必要とする被験者に、有効量のキラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を投与することを含む、方法。
（３）  実施態様１または２に記載の方法において、
前記結合剤は、抗体もしくはその抗原結合断片、または抗体模倣物である、方法。
（４）  実施態様３に記載の方法において、
前記抗体もしくはその抗原結合断片、または抗体模倣物は、ヒトまたはヒト化抗体を含む、方法。
（５）  実施態様３に記載の方法において、
前記抗体もしくはその抗原結合断片、または抗体模倣物は、
ａ．ＫＬＲＧ１を結合させる完全長抗体のＦａｂ部分；
ｂ．Ｅ−カドヘリンを結合させる完全長抗体のＦａｂ部分；
ｃ．Ｎ−カドヘリンを結合させる完全長抗体のＦａｂ部分；
ｄ．Ｒ−カドヘリンを結合させる完全長抗体のＦａｂ部分；
ｅ．融合タンパク質Ｅ−カドヘリン／Ｆｃ；
ｆ．融合タンパク質Ｒ−カドヘリン／Ｆｃ；
ｇ．融合タンパク質Ｎ−カドヘリン／Ｆｃ；
ｈ．キメラ抗原受容体；または、
ｉ．多特異性抗体、
を含む、方法。
【０２２４】
（６）  実施態様５に記載の方法において、
前記キメラ抗原受容体を含み、
前記キメラ抗原受容体は、Ｔ細胞に移植されたＫＬＲＧ１抗体の特異性部分を含む、方法。
（７）  実施態様５に記載の方法において、
多特異性抗体を含み、
前記多特異性抗体は、二重特異性または三重特異性抗体を含む、方法。
（８）  実施態様１〜７のいずれかに記載の方法において、
前記結合剤はＫＬＲＧ１を結合させる、方法。
（９）  実施態様８に記載の方法において、
前記ＫＬＲＧ１は、ヒトＫＬＲＧ１の細胞外ドメインである、方法。
（１０）  実施態様１〜７のいずれかに記載の方法において、
前記結合剤は、ＫＬＲＧ１リガンドを結合させる、方法。
【０２２５】
（１１）  実施態様１０に記載の方法において、
前記ＫＬＲＧ１リガンドは、ヒトＥ−カドヘリン、Ｎ−カドヘリン、またはＲ−カドヘリンである、方法。
（１２）  実施態様１〜１１のいずれかに記載の方法において、
前記結合剤は、ＫＬＲＧ１／カドヘリン結合部位でＫＬＲＧ１および／またはカドヘリンを結合させる、方法。
（１３）  実施態様１〜１２のいずれかに記載の方法において、
前記被験者は、上皮がんを有する、方法。
（１４）  実施態様１〜１２のいずれかに記載の方法において、
前記被験者は、癌腫を有する、方法。
（１５）  実施態様１〜１２のいずれかに記載の方法において、
前記被験者は、ブドウ膜黒色腫、子宮がん、子宮癌肉腫、甲状腺がん、胸腺腫、精巣胚細胞腫瘍、黒色腫、肉腫、直腸腺がん、前立腺がん、褐色細胞腫、膵臓腺がん、卵巣嚢胞腺がん、中皮腫、肺扁平上皮がん、肺腺がん、肝細胞がん、乳頭状腎細胞がん、腎臓明細胞がん、色素嫌性腎がん、腎細胞がん、頭頸部扁平上皮がん、多形神経膠芽腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、結腸腺がん、胆管がん、子宮頸がんおよび／もしくは子宮頸管がん、浸潤性乳がん、脳の低悪性度神経膠腫、膀胱がん、または急性骨髄性白血病を有する、方法。
【０２２６】
（１６）  実施態様１〜１２のいずれかに記載の方法において、
前記被験者は、黒色腫を有する、方法。
（１７）  実施態様１〜１２のいずれかに記載の方法において、
前記被験者は、肺がんを有する、方法。
（１８）  実施態様１〜１２のいずれかに記載の方法において、
前記被験者は、膵がんを有する、方法。
（１９）  実施態様１〜１２のいずれかに記載の方法において、
前記被験者は、神経膠腫を有する、方法。
（２０）  実施態様１〜１２のいずれかに記載の方法において、
前記被験者は、乳がんを有する、方法。
【０２２７】
（２１）  実施態様１〜１２のいずれかに記載の方法において、
前記被験者は、卵巣がんを有する、方法。
（２２）  実施態様１〜２１のいずれかに記載の方法において、
前記被験者に、有効量のチェックポイントモジュレーター療法を投与することをさらに含む、方法。
（２３）  実施態様２２に記載の方法において、
前記ＫＬＲＧ１／リガンド結合剤およびチェックポイントモジュレーター療法は、共同作用的である、方法。
（２４）  実施態様１〜２１のいずれかに記載の方法において、
前記被験者に、有効量のがんワクチン療法を投与することをさらに含む、方法。
（２５）  実施態様２４に記載の方法において、
前記ＫＬＲＧ１／リガンド結合剤およびがんワクチン療法は、共同作用的である、方法。
【０２２８】
（２６）  黒色腫を治療する方法において、
それを必要とする被験者に、有効量のキラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を投与することを含み、
前記結合剤は、ヒトＫＬＲＧ１の細胞外ドメインおよび／またはヒトＥ−カドヘリン、Ｎ−カドヘリン、もしくはＲ−カドヘリンを結合させ、それによって、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化する、抗体もしくはその抗原結合断片、または抗体模倣物である、方法。
（２７）  肺がんを治療する方法において、
それを必要とする被験者に、有効量のキラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を投与することを含み、
前記結合剤は、ヒトＫＬＲＧ１の細胞外ドメインおよび／またはヒトＥ−カドヘリン、Ｎ−カドヘリン、もしくはＲ−カドヘリンを結合させ、それによって、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化する、抗体もしくはその抗原結合断片、または抗体模倣物である、方法。
（２８）  膵がんを治療する方法において、
それを必要とする被験者に、有効量のキラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を投与することを含み、
前記結合剤は、ヒトＫＬＲＧ１の細胞外ドメインおよび／またはヒトＥ−カドヘリン、Ｎ−カドヘリン、もしくはＲ−カドヘリンを結合させ、それによって、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化する、抗体もしくはその抗原結合断片、または抗体模倣物である、方法。
（２９）  神経膠腫を治療する方法において、
それを必要とする被験者に、有効量のキラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を投与することを含み、
前記結合剤は、ヒトＫＬＲＧ１の細胞外ドメインおよび／またはヒトＥ−カドヘリン、Ｎ−カドヘリン、もしくはＲ−カドヘリンを結合させ、それによって、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化する、抗体もしくはその抗原結合断片、または抗体模倣物である、方法。
（３０）  乳がんを治療する方法において、
それを必要とする被験者に、有効量のキラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を投与することを含み、
前記結合剤は、ヒトＫＬＲＧ１の細胞外ドメインおよび／またはヒトＥ−カドヘリン、Ｎ−カドヘリン、もしくはＲ−カドヘリンを結合させ、それによって、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化する、抗体もしくはその抗原結合断片、または抗体模倣物である、方法。
【０２２９】
（３１）  卵巣がんを治療する方法において、
それを必要とする被験者に、有効量のキラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を投与することを含み、
前記結合剤は、ヒトＫＬＲＧ１の細胞外ドメインおよび／またはヒトＥ−カドヘリン、Ｎ−カドヘリン、もしくはＲ−カドヘリンを結合させ、それによって、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化する、抗体もしくはその抗原結合断片、または抗体模倣物である、方法。
（３２）  実施態様１〜３１のいずれかに記載の方法において、
前記結合剤は、前記結合剤を符号化するｍＲＮＡを前記被験者に提供することにより、投与される、方法。
（３３）  キラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）アンタゴニストにおいて、
（ｉ）キラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤、または（ｉｉ）ＫＬＲＧ１発現を抑制するＲＮＡｉ剤を含む、ＫＬＲＧ１アンタゴニスト。
（３４）  実施態様３３に記載のＫＬＲＧ１アンタゴニストにおいて、
前記アンタゴニストは、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、それによって、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化する、ＫＬＲＧ１アンタゴニスト。
（３５）  実施態様３３または３４に記載のＫＬＲＧ１アンタゴニストにおいて、
前記アンタゴニストは、ヒトＫＬＲＧ１の細胞外ドメインを結合させるか、またはＫＬＲＧ１リガンドを結合させる、ＫＬＲＧ１アンタゴニスト。
【０２３０】
（３６）  実施態様３３〜３５のいずれかに記載のＫＬＲＧ１アンタゴニストにおいて、
抗体または抗原結合断片を含む、ＫＬＲＧ１アンタゴニスト。
（３７）  実施態様３３〜３５のいずれかに記載のＫＬＲＧ１アンタゴニストにおいて、
Ｆｃ−カドヘリン融合タンパク質を含む、ＫＬＲＧ１アンタゴニスト。
（３８）  実施態様３６に記載のＫＬＲＧ１アンタゴニストにおいて、
前記抗体はモノクローナル抗体である、ＫＬＲＧ１アンタゴニスト。
（３９）  実施態様３６に記載のＫＬＲＧ１アンタゴニストにおいて、
前記抗体は、ヒトまたはヒト化抗体である、ＫＬＲＧ１アンタゴニスト。
（４０）  実施態様３３〜３９のいずれかに記載のＫＬＲＧ１アンタゴニストにおいて、
ＫＬＲＧ１−リガンド結合を遮断するか、またはこれと競合する、結合剤を含む、ＫＬＲＧ１アンタゴニスト。
【０２３１】
（４１）  実施態様３３〜３９のいずれかに記載のＫＬＲＧ１アンタゴニストにおいて、
ヒトおよびカニクイザルＫＬＲＧ１の細胞外ドメイン、またはヒトおよびカニクイザルＫＬＲＧ１リガンドと交差反応する、結合剤を含む、ＫＬＲＧ１アンタゴニスト。
（４２）  実施態様３３〜３９のいずれかに記載のＫＬＲＧ１アンタゴニストにおいて、
（ｉ）ＫＬＲＧ１の細胞外ドメインまたは（ｉｉ）ＫＬＲＧ１リガンド、のエピトープであって、前記エピトープは、ヒトおよびカニクイザルにおいて少なくとも９０％同一である、エピトープ、または（ｉｉｉ）クローン１３Ｆ１２Ｆ２、１４Ｃ２Ａ０７、ＳＡ２３１Ａ２、２Ｆ１、１３Ａ２、またはＲＥＡ２６１のうちのいずれか１つと同じエピトープ、に結合する結合剤を含む、ＫＬＲＧ１アンタゴニスト。
（４３）  実施態様３３〜３９のいずれかに記載のＫＬＲＧ１アンタゴニストにおいて、
ＫＬＲＧ１に結合し、かつクローン１３Ｆ１２Ｆ２、１４Ｃ２Ａ０７、ＳＡ２３１Ａ２、２Ｆ１、１３Ａ２、またはＲＥＡ２６１ではない、結合剤を含む、ＫＬＲＧ１アンタゴニスト。
（４４）  実施態様３３〜３９のいずれかに記載のＫＬＲＧ１アンタゴニストにおいて、
ＫＬＲＧ１に結合し、かつマウス抗体ではない、結合剤を含む、ＫＬＲＧ１アンタゴニスト。
（４５）  実施態様３３〜３５のいずれかに記載のＫＬＲＧ１アンタゴニストにおいて、
ＲＮＡｉ剤を含む、ＫＬＲＧ１アンタゴニスト。
【０２３２】
（４６）  実施態様３８に記載のＫＬＲＧ１アンタゴニストにおいて、
ｓｉＲＮＡまたはｍＲＮＡを含む、ＫＬＲＧ１アンタゴニスト。
（４７）  ｍＲＮＡまたはｃＤＮＡにおいて、
実施態様３３〜４６のいずれかに記載のＫＬＲＧ１アンタゴニストを符号化する、ｍＲＮＡまたはｃＤＮＡ。
（４８）  被験者を治療する方法において、
必要とする被験者に、実施態様３３〜４７のいずれかに記載の有効量のＫＬＲＧ１アンタゴニストを投与し、それによって、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化することを含む、方法。
（４９）  がんを治療する方法において、
それを必要とする被験者に、実施態様３３〜４７のいずれかに記載の有効量のＫＬＲＧ１アンタゴニストを投与することを含む、方法。
（５０）  実施態様１〜１２のいずれかに記載の方法において、
前記被験者は、腎がんを有する、方法。
【０２３３】
（５１）  腎がんを治療する方法において、
それを必要とする被験者に、有効量のキラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を投与することを含み、
前記結合剤は、ヒトＫＬＲＧ１の細胞外ドメインおよび／またはヒトＥ−カドヘリン、Ｎ−カドヘリン、もしくはＲ−カドヘリンを結合させ、それによって、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化する、抗体もしくはその抗原結合断片、または抗体模倣物である、方法。
（５２）  実施態様５０または５１に記載の方法において、
前記腎がんは、腎細胞がんである、方法。
（５３）  実施態様１７または２７に記載の方法において、
前記肺がんは、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）である、方法。
（５４）  実施態様３３〜３９のいずれかに記載のＫＬＲＧ１アンタゴニストにおいて、
前記アンタゴニストは、クローン１３Ｆ１２Ｆ２、１４Ｃ２Ａ０７、ＳＡ２３１Ａ２、２Ｆ１、１３Ａ２、またはＲＥＡ２６１のうちの少なくとも１つと交差競合する、ＫＬＲＧ１アンタゴニスト。
（５５）  実施態様３３〜３９のいずれかに記載のＫＬＲＧ１アンタゴニストにおいて、
前記アンタゴニストは、ＫＬＲＧ１／Ｅ−カドヘリン結合を中和する、ＫＬＲＧ１アンタゴニスト。
【０２３４】
（５６）  キラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤において、
ＫＬＲＧ１／カドヘリン結合を中和し、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、それによって、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化する、結合剤。
（５７）  実施態様５６に記載の結合剤において、
前記結合剤は、クローン１３Ｆ１２Ｆ２、１４Ｃ２Ａ０７、ＳＡ２３１Ａ２、２Ｆ１、１３Ａ２、またはＲＥＡ２６１のうちの少なくとも１つと交差競合する、結合剤。
（５８）  実施態様５７に記載の結合剤において、
前記結合剤は、ヒトもしくはヒト化モノクローナル抗体であるか、またはそれらの結合断片、または抗体模倣物である、結合剤。
（５９）  実施態様１〜３２または４８〜５３のいずれかに記載の方法において、
前記被験者は、高度のＫＬＲＧ１発現を有する、方法。
（６０）  実施態様５９に記載の方法において、
前記高度のＫＬＲＧ１発現は、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞における高度のＫＬＲＧ１発現を含む、方法。
【０２３５】
（６１）  実施態様５９または６０に記載の方法において、
高度のＫＬＲＧ１発現について前記被験者を試験することをさらに含む、方法。
（６２）  実施態様１〜３２または４８〜５３のいずれかに記載の方法において、
前記被験者は、高度のカドヘリン発現を有する、方法。
（６３）  実施態様６２に記載の方法において、
前記高度のカドヘリン発現は、がん細胞における高度のカドヘリン発現を含む、方法。
（６４）  実施態様６２または６３に記載の方法において、
高度のカドヘリン発現について前記被験者を試験することをさらに含む、方法。
（６５）  実施態様１〜２１のいずれかに記載の方法において、
前記被験者に、有効量のがん化学療法を投与することをさらに含む、方法。
【０２３６】
（６６）  実施態様２２または２３に記載の方法において、
前記チェックポイントモジュレーター療法は、抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ１、または抗ＣＴＬＡ−４療法を含む、方法。
（６７）  実施態様１〜３２または４８〜５３のいずれかに記載の方法において、
前記被験者は、先行するがん療法に失敗しているか、または反応していない、方法。
【図面の簡単な説明】
【０２３７】
【図１】ヒトＫＬＲＧ１が、ヘルパーＴ細胞よりも大きな割合の細胞傷害性ＴおよびＮＫ細胞上で発現されていることを示す。
【図２Ａ】分化の増加と共にＴ細胞でのＫＬＲＧ１の発現の増加が進むことを示す。
【図２Ｂ】分化の増加と共にＴ細胞でのＫＬＲＧ１の発現の増加が進むことを示す。
【図３】さまざまな製薬会社による共抑制受容体調節のための公開された薬剤開発プログラムのまとめを示す。
【図４Ａ】ＣＴＬＡ−４およびＰＤ−１が、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＤ８＋）またはＮＫ細胞よりもＴヘルパー細胞（ＣＤ４＋）において高いかまたは同様に発現されており、ＫＲＬＧ１発現がＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞よりもＣＤ８＋ＴおよびＮＫ細胞で高いことを示す。
【図４Ｂ】ＣＴＬＡ−４およびＰＤ−１が、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＤ８＋）またはＮＫ細胞よりもＴヘルパー細胞（ＣＤ４＋）において高いかまたは同様に発現されており、ＫＲＬＧ１発現がＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞よりもＣＤ８＋ＴおよびＮＫ細胞で高いことを示す。
【図５】ＫＬＲＧ１発現Ｔ細胞による多くの腫瘍型の広範な浸潤、およびこれらの腫瘍サンプルにおけるＫＬＲＧ１リガンドであるＥ−カドヘリンの発現を示す。
【図６Ａ】免疫処置されたマウスのＫＬＲＧ１に対する血清反応を示す。
【図６Ｂ】免疫処置されたマウスのＫＬＲＧ１に対する血清反応を示す。
【図７】ハイブリドーマクローンから得られた抗体の、ヒトＫＬＲＧ１細胞外ドメインへの結合を示す。
【図８】ＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞と比べて、ＣＤ８＋細胞におけるＫＬＲＧ１の高い発現を示す、遺伝子発現データセットの分析を示す。
【図９Ａ】細胞傷害性分子であるグランザイムおよびサイトカインの遺伝子発現によって反映されるような、ＣＤ８＋Ｔ細胞の細胞傷害能が、ＫＬＲＧ１の発現と大いに相関するが、他のチェックポイント阻害剤標的共抑制受容体とは相関しないことを示す。
【図９Ｂ】細胞傷害性分子であるグランザイムおよびサイトカインの遺伝子発現によって反映されるような、ＣＤ８＋Ｔ細胞の細胞傷害能が、ＫＬＲＧ１の発現と大いに相関するが、他のチェックポイント阻害剤標的共抑制受容体とは相関しないことを示す。
【図１０】Ｅ−カドヘリンがさまざまながん細胞株で過剰発現されることを示す。
【図１１】正常な皮膚組織と比べた、黒色腫のＴＣＧＡ  ＲＮＡｓｅｑデータにおけるＥ−カドヘリンおよびＰＤ−Ｌ１の倍率変化を示す。
【図１２】正常な肺組織と比べた、肺がんのＴＣＧＡ  ＲＮＡｓｅｑデータにおけるＥ−カドヘリンおよびＰＤ−Ｌ１の倍率変化を示す。
【図１３】正常な膵臓組織と比べた、膵がんのＴＣＧＡ  ＲＮＡｓｅｑデータにおけるＥ−カドヘリンおよびＰＤ−Ｌ１の倍率変化を示す。
【図１４】正常な脳組織と比べた、神経膠腫のＴＣＧＡ  ＲＮＡｓｅｑデータにおけるＥ−カドヘリンおよびＰＤ−Ｌ１の倍率変化を示す。
【図１５】正常な乳房組織と比べた、乳がんのＴＣＧＡ  ＲＮＡｓｅｑデータにおけるＥ−カドヘリンおよびＰＤ−Ｌ１の倍率変化を示す。
【図１６】正常な卵巣組織と比べた、卵巣がんのＴＣＧＡ  ＲＮＡｓｅｑデータにおけるＥ−カドヘリンおよびＰＤ−Ｌ１の倍率変化を示す。
【図１７Ａ】ＫＬＲＧ１が、ＰＤ−１陰性のＴ細胞を含む、大きな割合の黒色腫浸潤Ｔ細胞によって発現されることを示す。図１７Ａは、ＫＬＲＧ１またはＰＤ−１を発現する浸潤ＣＤ８＋Ｔ細胞の割合の比較を示す。
【図１７Ｂ】ＫＬＲＧ１が、ＰＤ−１陰性のＴ細胞を含む、大きな割合の黒色腫浸潤Ｔ細胞によって発現されることを示す。図１７Ｂは、ＫＬＲＧ１を発現するＰＤ−１陰性のＣＤ８＋Ｔ細胞の割合を示す。
【図１７Ｃ】ＫＬＲＧ１が、ＰＤ−１陰性のＴ細胞を含む、大きな割合の黒色腫浸潤Ｔ細胞によって発現されることを示す。図１７Ｃは、１７の黒色腫患者サンプルそれぞれによって組織化された、ＫＬＲＧ１を発現するＰＤ−１陰性のＣＤ８＋Ｔ細胞の割合を示す（例えば、Ｐ５３は、ＧＥＯデータベース内のデータセットＧＳＥ７２０５６からの患者５３である）。
【図１７Ｄ】ＫＬＲＧ１が、ＰＤ−１陰性のＴ細胞を含む、大きな割合の黒色腫浸潤Ｔ細胞によって発現されることを示す。図１７Ｄは、各患者サンプルによって組織化されたＫＬＲＧ１の個々のＣＤ８＋Ｔ細胞発現レベル（ｌｏｇ２  ＴＰＭ）を示す。
【図１８Ａ】ＫＬＲＧ１リガンドであるＥ−カドヘリンおよびＮ−カドヘリンが、悪性黒色腫細胞によって、ＰＤ−１リガンドであるＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２よりはるかに高く発現されることを示す。図１８Ａは、１１８４の患者生検黒色腫細胞におけるＫＬＲＧ１およびＰＤ−１リガンドの発現の単一細胞ＲＮＡ−ｓｅｑ分析が、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２より顕著に高いＥ−カドヘリンおよびＮ−カドヘリン発現を示すことを示している。平均およびＳＥＭが図示される。
【図１８Ｂ】ＫＬＲＧ１リガンドであるＥ−カドヘリンおよびＮ−カドヘリンが、悪性黒色腫細胞によって、ＰＤ−１リガンドであるＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２よりはるかに高く発現されることを示す。図１８Ｂは、黒色腫細胞の１１％がＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２を発現するのと比べて、平均７６％がＥ−カドヘリンまたはＮ−カドヘリンを発現することを１４の黒色腫患者サンプルが示すことを示している。
【図１８Ｃ】ＫＬＲＧ１リガンドであるＥ−カドヘリンおよびＮ−カドヘリンが、悪性黒色腫細胞によって、ＰＤ−１リガンドであるＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２よりはるかに高く発現されることを示す。図１８Ｃおよび図１８Ｄは、各患者サンプルにより組織化されたＥ−カドヘリン（図１８Ｃ）の個々の黒色腫細胞（１１８４の細胞）の発現レベル（ｌｏｇ２  ＴＰＭ）が、ＰＤ−Ｌ１（図１８Ｄ）を大きく超えていることを示す。
【図１８Ｄ】ＫＬＲＧ１リガンドであるＥ−カドヘリンおよびＮ−カドヘリンが、悪性黒色腫細胞によって、ＰＤ−１リガンドであるＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２よりはるかに高く発現されることを示す。図１８Ｃおよび図１８Ｄは、各患者サンプルにより組織化されたＥ−カドヘリン（図１８Ｃ）の個々の黒色腫細胞（１１８４の細胞）の発現レベル（ｌｏｇ２  ＴＰＭ）が、ＰＤ−Ｌ１（図１８Ｄ）を大きく超えていることを示す。
【図１９】Ｅ−カドヘリンおよびＰＤ−Ｌ１について、がん組織と正常な適合組織との相対発現のまとめを示す。
【図２０】例としての患者における黒色腫腫瘍に浸潤するＫＬＲＧ１＋細胞を示す。
【図２１】例としての患者における腎細胞がん腫瘍に浸潤するＫＬＲＧ１＋細胞を示す。
【図２２】例としての患者における非小細胞肺がん腫瘍に浸潤するＫＬＲＧ１＋細胞を示す。
【図２３】可溶性ｈＥ−カドヘリンの、プレートで覆われたｈＫＬＲＧ１への結合の結果を提示する。
【図２４】ｈＥ−カドヘリン／ｈＫＬＲＧ１結合の中和について試験された３つのキメラ抗体の結果を提示し、１つのキメラ抗体のみが中和活性を示している。
【図２５】用量依存的な形の、３つのキメラ抗体の、プレートで覆われたＫＬＲＧ１への結合の結果を提示する。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７】
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【図８】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０−１】
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【図１０−２】
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【図１０−３】
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【図１０−４】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【図１７Ｃ】
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【図１７Ｄ】
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【図１８Ａ】
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【図１８Ｂ】
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【図１８Ｃ】
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【図１８Ｄ】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【配列表】
2019518791000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成31年2月1日(2019.2.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
組成物において、
ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化するために被験者に使用される、キラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を含む、組成物。
【請求項２】
組成物において、
被験者のがんを治療するために使用される、キラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を含む、組成物。
【請求項３】
請求項１または２に記載の組成物において、
前記結合剤は、抗体もしくはその抗原結合断片、または抗体模倣物であり、好ましくは、前記抗体もしくはその抗原結合断片、または抗体模倣物は、ヒトまたはヒト化抗体を含む、組成物。
【請求項４】
請求項３に記載の組成物において、
前記抗体もしくはその抗原結合断片、または抗体模倣物は、
ａ．ＫＬＲＧ１を結合させる完全長抗体のＦａｂ部分；
ｂ．Ｅ−カドヘリンを結合させる完全長抗体のＦａｂ部分；
ｃ．Ｎ−カドヘリンを結合させる完全長抗体のＦａｂ部分；
ｄ．Ｒ−カドヘリンを結合させる完全長抗体のＦａｂ部分；
ｅ．融合タンパク質Ｅ−カドヘリン／Ｆｃ；
ｆ．融合タンパク質Ｒ−カドヘリン／Ｆｃ；
ｇ．融合タンパク質Ｎ−カドヘリン／Ｆｃ；
ｈ．キメラ抗原受容体；または、
ｉ．多特異性抗体、
を含む、組成物。
【請求項５】
請求項４に記載の組成物において、
Ｔ細胞に移植されたＫＬＲＧ１抗体の特異性部分を含む、前記キメラ抗原受容体を含むか、または、二重特異性もしくは三重特異性抗体を含む、多特異性抗体を含む、組成物。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物において、
前記結合剤はＫＬＲＧ１またはＫＬＲＧ１リガンドを結合させる、組成物。
【請求項７】
請求項６に記載の組成物において、
前記ＫＬＲＧ１は、ヒトＫＬＲＧ１の細胞外ドメインである、組成物。
【請求項８】
請求項６に記載の組成物において、
前記ＫＬＲＧ１リガンドは、ヒトＥ−カドヘリン、Ｎ−カドヘリン、またはＲ−カドヘリンである、組成物。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の組成物において、
前記結合剤は、ＫＬＲＧ１／カドヘリン結合部位でＫＬＲＧ１および／またはカドヘリンを結合させる、組成物。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の組成物において、
前記被験者は、上皮がん、癌腫、ブドウ膜黒色腫、子宮がん、子宮癌肉腫、甲状腺がん、胸腺腫、精巣胚細胞腫瘍、黒色腫、肉腫、直腸腺がん、前立腺がん、褐色細胞腫、膵臓腺がん、卵巣嚢胞腺がん、中皮腫、肺扁平上皮がん、肺腺がん、肝細胞がん、乳頭状腎細胞がん、腎臓明細胞がん、色素嫌性腎がん、腎細胞がん、頭頸部扁平上皮がん、多形神経膠芽腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、結腸腺がん、胆管がん、子宮頸がんおよび／もしくは子宮頸管がん、浸潤性乳がん、脳の低悪性度神経膠腫、膀胱がん、または急性骨髄性白血病のうちの１つを有する、組成物。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の組成物において、
前記被験者に、有効量のチェックポイントモジュレーター療法を投与することをさらに含む、組成物。
【請求項１２】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の組成物において、
前記被験者に、有効量のがんワクチン療法を投与することをさらに含む、組成物。
【請求項１３】
組成物において、
黒色腫、肺がん、膵がん、神経膠腫、乳がん、または卵巣がんのうちの１つを治療するのに使用される、キラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を含み、
前記結合剤は、ヒトＫＬＲＧ１の細胞外ドメインおよび／またはヒトＥ−カドヘリン、Ｎ−カドヘリン、もしくはＲ−カドヘリンを結合させ、それによって、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化する、抗体もしくはその抗原結合断片、または抗体模倣物である、組成物。
【請求項１４】
請求項１３に記載の組成物において、
前記結合剤は、前記結合剤を符号化するｍＲＮＡを前記被験者に提供することにより、投与される、組成物。
【請求項１５】
組成物において、
がんを治療するのに使用される、キラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）アンタゴニストを含み、
前記アンタゴニストは、（ｉ）キラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤、または（ｉｉ）ＫＬＲＧ１発現を抑制するＲＮＡｉ剤を含む、組成物。
【請求項１６】
請求項１５に記載の組成物において、
前記アンタゴニストは、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、それによって、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化する、組成物。
【請求項１７】
請求項１５または１６に記載の組成物において、
前記アンタゴニストは、ヒトＫＬＲＧ１の細胞外ドメインを結合させるか、またはＫＬＲＧ１リガンドを結合させる、組成物。
【請求項１８】
請求項１５〜１７のいずれか１項に記載の組成物において、
抗体または抗原結合断片を含む、組成物。
【請求項１９】
請求項１５〜１８のいずれか１項に記載の組成物において、
Ｆｃ−カドヘリン融合タンパク質を含む、組成物。
【請求項２０】
請求項１８に記載の組成物において、
前記抗体はモノクローナル抗体、好ましくはヒトまたはヒト化抗体である、組成物。
【請求項２１】
請求項１５に記載の組成物において、
ＫＬＲＧ１−リガンド結合を遮断するか、もしくはこれと競合し、かつ／または、ヒトおよびカニクイザルＫＬＲＧ１の細胞外ドメイン、もしくはヒトおよびカニクイザルＫＬＲＧ１リガンドと交差反応し、かつ／または、（ｉ）ＫＬＲＧ１の細胞外ドメインもしくは（ｉｉ）ＫＬＲＧ１リガンド、のエピトープであって、前記エピトープは、ヒトおよびカニクイザルにおいて少なくとも９０％同一である、エピトープ、もしくは（ｉｉｉ）クローン１３Ｆ１２Ｆ２、１４Ｃ２Ａ０７、ＳＡ２３１Ａ２、２Ｆ１、１３Ａ２、もしくはＲＥＡ２６１のうちのいずれか１つと同じエピトープ、に結合し、かつ／または、ＫＬＲＧ１に結合し、かつクローン１３Ｆ１２Ｆ２、１４Ｃ２Ａ０７、ＳＡ２３１Ａ２、２Ｆ１、１３Ａ２、もしくはＲＥＡ２６１ではない、かつ／または、ＫＬＲＧ１に結合し、かつマウス抗体ではない、結合剤を含む、組成物。
【請求項２２】
請求項１５に記載の組成物において、
ＲＮＡｉ剤を含む、組成物。
【請求項２３】
請求項２２に記載の組成物において、
ｓｉＲＮＡまたはｍＲＮＡを含む、組成物。
【請求項２４】
請求項１５〜２３のいずれか１項に記載の組成物において、
ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化するために使用される、組成物。
【請求項２５】
請求項１５〜２３のいずれか１項に記載の組成物において、
がんを治療するのに使用される、組成物。
【請求項２６】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の組成物において、
腎がんを治療するのに使用される、組成物。
【請求項２７】
組成物において、
腎がんを治療するのに使用される、キラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を含み、
前記結合剤は、ヒトＫＬＲＧ１の細胞外ドメインおよび／またはヒトＥ−カドヘリン、Ｎ−カドヘリン、もしくはＲ−カドヘリンを結合させ、それによって、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化する、抗体もしくはその抗原結合断片、または抗体模倣物である、組成物。
【請求項２８】
請求項２７に記載の組成物において、
前記腎がんは、腎細胞がんである、組成物。
【請求項２９】
請求項１３に記載の組成物において、
前記肺がんは、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）である、組成物。
【請求項３０】
組成物において、
ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞を活性化するために使用される、ＫＬＲＧ１／カドヘリン結合を中和し、ＫＬＲＧ１シグナリングを中断する、キラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）／リガンド結合剤を含む、組成物。
【請求項３１】
請求項１５に記載の組成物において、
前記アンタゴニストは、クローン１３Ｆ１２Ｆ２、１４Ｃ２Ａ０７、ＳＡ２３１Ａ２、２Ｆ１、１３Ａ２、もしくはＲＥＡ２６１のうちの少なくとも１つと交差競合し、かつ／または、前記アンタゴニストは、ＫＬＲＧ１／カドヘリン結合を中和する、組成物。
【請求項３２】
請求項３に記載の組成物において、
前記結合剤は、クローン１３Ｆ１２Ｆ２、１４Ｃ２Ａ０７、ＳＡ２３１Ａ２、２Ｆ１、１３Ａ２、またはＲＥＡ２６１のうちの少なくとも１つと交差競合し、好ましくは、前記結合剤は、ヒトもしくはヒト化モノクローナル抗体であるか、またはそれらの結合断片、または抗体模倣物である、組成物。
【請求項３３】
請求項１〜１４、２４、２５、および２７のいずれか１項に記載の組成物において、
高度のＫＬＲＧ１発現を有する被験者に使用され、好ましくは、前記高度のＫＬＲＧ１発現は、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔおよび／またはＮＫ細胞における高度のＫＬＲＧ１発現を含む、組成物。
【請求項３４】
請求項３３に記載の組成物において、
高度のＫＬＲＧ１発現について前記被験者を試験するためにさらに使用される、組成物。
【請求項３５】
請求項１〜１４、２４、２５、および２７のいずれか１項に記載の組成物において、
高度のカドヘリン発現を有する被験者に使用される、組成物。
【請求項３６】
請求項３５に記載の組成物において、
前記高度のカドヘリン発現は、がん細胞における高度のカドヘリン発現を含む、組成物。
【請求項３７】
請求項３６に記載の組成物において、
高度のカドヘリン発現について前記被験者を試験するためにさらに使用される、組成物。
【請求項３８】
請求項１〜１４のいずれか１項に記載の組成物において、
がん化学療法を含む組み合わせ療法に使用される、組成物。
【請求項３９】
請求項１１に記載の組成物において、
前記チェックポイントモジュレーター療法は、抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ１、または抗ＣＴＬＡ−４療法を含む、組成物。
【請求項４０】
請求項１〜１４、２４、２５、および２７のいずれか１項に記載の組成物において、
先行するがん療法に失敗しているか、または反応していない被験者に使用される、組成物。
【国際調査報告】
2019518791.tif 000041
2019518791.tif 000042