(57)【要約】  本出願は、一般に、神経系が向神経性ウイルス、細菌、寄生原虫、真菌又はプリオン、より詳細には向神経性ウイルス等の向神経性感染因子に感染している対象における、神経感覚疾患又は障害及び/又は神経認知疾患又は障害のバイオマーカーとしての、より詳細には予後バイオマーカー又は生物学的予測因子としての、嗅覚に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
神経系が向神経性感染因子に感染している対象における神経学的障害のインビボ診断における使用のためのキットであって、前記キットは、
-  臭気物質を含む第1の組成物であって、前記第1の組成物の前記臭気物質が少なくとも2種の異なる臭気物質からなる、第1の組成物と、
前記第1の組成物とは別に、又は区別して、
-  臭気物質を含む第2の組成物であって、前記第2の組成物の前記臭気物質が少なくとも2種の異なる臭気物質からなる、第2の組成物と、
前記第1の組成物及び第2の組成物とは別に、又は区別して、
-  臭気物質を含む第3の組成物であって、前記第3の組成物の前記臭気物質が少なくとも2種の異なる臭気物質からなる、第3の組成物、とを含み、
前記第2の組成物の前記臭気物質が、前記第3の組成物の前記臭気物質と同一の化合物であり、
前記第2の組成物中の臭気物質の相互の割合が、前記第3の組成物中の臭気物質の割合と同一であり、
前記第1の組成物の前記臭気物質が、前記第2の組成物の前記臭気物質及び前記第3の組成物の前記臭気物質と同一の化合物であり、
前記第1の組成物中の前記臭気物質の相互の割合が、前記第2の組成物中の前記臭気物質の割合及び前記第3の組成物中の前記臭気物質の割合と異なっており、前記使用が、前記第1の組成物、前記第2の組成物及び前記第3の組成物を、前記対象により連続的に匂うこと又は嗅ぐことを含む、キット。
【請求項２】
前記使用が、前記第1の組成物を前記第2及び第3の組成物から区別する前記対象の嗅覚能力の障害を検出することを更に含み、前記第1の組成物を前記第2及び第3の組成物から区別する前記対象の嗅覚能力の障害が、前記感染対象における神経学的障害のバイオマーカー又は生物学的予測因子である、請求項1に記載の使用のためのキット。
【請求項３】
前記神経学的障害が、神経変性、より詳細には、前記対象の中枢神経系(CNS)及び/又は末梢神経系(PNS)、より詳細にはCNSの神経変性である、請求項1又は2に記載の使用のためのキット。
【請求項４】
前記神経学的障害が、神経学的疾患又は障害、より詳細には神経感覚疾患又は障害、及び/又は神経認知疾患又は障害である、請求項1から3のいずれか一項に記載の使用のためのキット。
【請求項５】
前記向神経性感染因子が、向神経性微生物又はプリオン、より詳細には、向神経性ウイルス、細菌、寄生原虫及び真菌から選択される向神経性微生物、より詳細には向神経性ウイルスである、請求項1から4のいずれか一項に記載の使用のためのキット。
【請求項６】
前記向神経性感染因子が、神経幹細胞、より詳細にはヒト海馬及び/又はヒト嗅覚系の神経幹細胞に対する向性を示す、請求項1から5のいずれか一項に記載の使用のためのキット。
【請求項７】
前記向神経性感染因子が、サイトメガロウイルス(CMV)、より詳細にはヒトCMV(HCMV)、又はジカウイルス(ZIKV)である、請求項1から6のいずれか一項に記載の使用のためのキット。
【請求項８】
前記神経学的障害が、
中枢神経障害又は末梢神経障害、
難聴、より詳細には感音難聴(SNHL)、より詳細には非遺伝的SNHL、
精神遅滞、
言語発達遅滞又は言語障害、
精神運動遅滞又は精神運動障害、
視力喪失、
及びギランバレー症候群
のうちの少なくとも1つである、又は少なくとも1つをもたらす、請求項1から7のいずれか一項に記載の使用のためのキット。
【請求項９】
前記対象が少なくとも3歳のヒトである、請求項1から8のいずれか一項に記載の使用のためのキット。
【請求項１０】
前記第1、第2及び第3の組成物が、鼻の化学的感覚能力を評価するための臭い放出デバイスにそれぞれ別々に収容される、請求項1から9のいずれか一項に記載の使用のためのキット。
【請求項１１】
前記2種の異なる臭気物質のそれぞれが単分子化合物である、請求項1から10のいずれか一項に記載の使用のためのキット。
【請求項１２】
前記2種の異なる臭気物質のそれぞれが、アニス、リンゴ、バナナ、キャラメル、チョコレート、シナモン、クローブ、ココア、ココナッツ、コーヒー、コーラ、ディル、ユーカリ、魚、花、蜂蜜、ニンニク、ショウガ、グレープフルーツ、草、ラベンダー、皮革、レモン、ライラック、スズラン、リコリス、メロン、ミント、マッシュルーム、タマネギ、オレンジ、モモ、ナシ、ペパーミント、パイナップル、バラ、スペアミント、ターペンタイン、ラズベリー、ゴマ油、燻製肉、醤油及びバニラからなる群から選択される、臭い又は香りを発する単分子化合物からなる群から選択される、請求項1から11のいずれか一項に記載の使用のためのキット。
【請求項１３】
前記2種の異なる臭気物質のそれぞれが、R-カルボン、S-カルボン、イソアミルアセテート、アネトール、オイゲノール、2-フェニルエタノール、ゲラニオール、リナロール、シネオール、D-リモネン、L-リモネン、メントール、及びシナモンアルデヒドからなる群から選択される、請求項1から12のいずれか一項に記載の使用のためのキット。
【請求項１４】
対象の嗅覚検知閾値を測定するための複数の組成物を更に含み、前記複数の組成物のそれぞれが1種のみの臭気物質を含み、前記複数の組成物の全てが同一の1種の臭気物質を含み、前記同一の1種の臭気物質の段階希釈を形成する、請求項1から13のいずれか一項に記載の使用のためのキット。
【請求項１５】
前記使用が、第1の時点で、前記対象が、前記第1の組成物を前記第2及び第3の組成物から区別するかどうか、及び第2の時点で、前記対象が、前記第1の組成物を前記第2及び第3の組成物から区別するかどうかを検出することを更に含み、前記第2の時点が前記第1の時点と異なり、前記第1の時点の後であり、前記第1及び第2の時点のうちの少なくとも1つが、前記対象が前記感染及び/又は前記神経学的障害に対する治療を受けているか又は受けた時点にあり、前記第1の時点と前記第2の時点との間の前記対象の嗅覚識別能力の増大を検出することは、前記治療が治療的に有効であることを示す、請求項1から14のいずれか一項に記載の使用のためのキット。
【請求項１６】
神経系が向神経性感染因子に感染している対象における神経学的障害のインビボ診断における使用のための、臭気物質を含む第1の組成物であって、前記第1の組成物の臭気物質が、少なくとも2種の異なる臭気物質からなり、前記使用が、
-  前記第1の組成物とは別に、又は区別して、臭気物質を含む第2の組成物であって、前記第2の組成物の臭気物質が少なくとも2種の異なる臭気物質からなる、第2の組成物を使用すること、及び
-  前記第1の組成物及び前記第2の組成物とは別に、又は区別して、臭気物質を含む第3の組成物であって、前記第3の組成物の臭気物質が少なくとも2種の異なる臭気物質からなる、第3の組成物を使用すること、を含み、
前記第2の組成物の前記臭気物質が、前記第3の組成物の前記臭気物質と同一の化合物であり、
前記第2の組成物中の臭気物質の相互の割合が、前記第3の組成物中の臭気物質の割合と同一であり、
前記第1の組成物の前記臭気物質が、前記第2の組成物の前記臭気物質及び前記第3の組成物の前記臭気物質と同一の化合物であり、
前記第1の組成物中の臭気物質の相互の割合が、前記第2の組成物中の臭気物質の割合及び前記第3の組成物中の臭気物質の割合と異なっており、
-  前記使用が、前記第1の組成物、前記第2の組成物及び前記第3の組成物を、前記対象により連続的に匂うこと又は嗅ぐことを含む、第1の組成物。
【請求項１７】
神経系が向神経性感染因子に感染している対象における神経学的障害のインビボ診断における使用のための、臭気物質を含む第1の組成物であって、前記第1の組成物の臭気物質が少なくとも2種の異なる臭気物質からなる、第1の組成物、及び前記第1の組成物とは別に、又は区別して、臭気物質を含む第2の組成物であって、前記第2の組成物の前記臭気物質が少なくとも2種の異なる臭気物質からなる、第2の組成物において、前記使用が、
-  前記第1の組成物及び前記第2の組成物とは別に、又は区別して、臭気物質を含む第3の組成物であって、前記第3の組成物の臭気物質が少なくとも2種の異なる臭気物質からなる、第3の組成物を使用すること、を含み、
前記第2の組成物の前記臭気物質が、前記第3の組成物の前記臭気物質と同一の化合物であり、
前記第2の組成物中の臭気物質の相互の割合が、前記第3の組成物中の臭気物質の割合と同一であり、
前記第1の組成物の前記臭気物質が、前記第2の組成物の前記臭気物質及び前記第3の組成物の前記臭気物質と同一の化合物であり、
前記第1の組成物中の前記臭気物質の相互の割合が、前記第2の組成物中の臭気物質の割合及び前記第3の組成物中の臭気物質の割合と異なっており、
-  前記使用が、前記第1の組成物、前記第2の組成物及び前記第3の組成物を、前記対象により連続的に匂うこと又は嗅ぐことを含む、第1の組成物及び第2の組成物。
【請求項１８】
神経系が向神経性感染因子に感染している対象における神経学的障害のインビボ診断における使用のための、臭気物質を含む第1の組成物であって、前記第1の組成物の臭気物質が少なくとも2種の異なる臭気物質からなる、第1の組成物と、
前記第1の組成物とは別に、又は区別して、
-  臭気物質を含む第2の組成物であって、前記第2の組成物の前記臭気物質が少なくとも2種の異なる臭気物質からなる、第2の組成物と、
前記第1の組成物及び第2の組成物とは別に、又は区別して、
-  臭気物質を含む第3の組成物であって、前記第3の組成物の前記臭気物質が少なくとも2種の異なる臭気物質からなる、第3の組成物において、
前記第2の組成物の前記臭気物質が、前記第3の組成物の前記臭気物質と同一の化合物であり、
前記第2の組成物中の臭気物質の相互の割合が、前記第3の組成物中の臭気物質の割合と同一であり、
前記第1の組成物の前記臭気物質が、前記第2の組成物の前記臭気物質及び前記第3の組成物の前記臭気物質と同一の化合物であり、
前記第1の組成物中の臭気物質の相互の割合が、前記第2の組成物中の臭気物質の割合及び前記第3の組成物中の臭気物質の割合と異なっており、前記使用が、前記第1の組成物、前記第2の組成物及び前記第3の組成物を、前記対象により連続的に匂うこと又は嗅ぐことを含む、第1の組成物、第2の組成物、及び第3の組成物。
【請求項１９】
前記組成物が、請求項10から14のいずれか一項に規定の通りである、請求項16、17又は18のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項２０】
前記使用が、前記第1の組成物を前記第2及び第3の組成物から区別する前記対象の嗅覚能力の障害、及び前記第1の組成物を前記第2及び第3の組成物から区別する前記対象の嗅覚能力の障害を検出することを更に含む、請求項16、17又は18のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項２１】
前記神経学的障害が、神経変性、より詳細には、前記対象の中枢神経系(CNS)及び/又は末梢神経系(PNS)、より詳細にはCNSの神経変性である、請求項16から20のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項２２】
前記向神経性感染因子が、向神経性微生物又はプリオン、より詳細には、向神経性ウイルス、細菌、寄生原虫及び真菌から選択される向神経性微生物、より詳細には向神経性ウイルスである、請求項16から21のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項２３】
前記向神経性感染因子が、神経幹細胞、より詳細にはヒト海馬及び/又はヒト嗅覚系の神経幹細胞に対する向性を示す、請求項16から22のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項２４】
前記向神経性感染因子が、サイトメガロウイルス(CMV)、より詳細にはヒトCMV(HCMV)、又はジカウイルス(ZIKV)である、請求項16から23のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項２５】
前記神経学的障害が、
中枢神経障害又は末梢神経障害、
難聴、より詳細には感音難聴(SNHL)、より詳細には非遺伝的SNHL、
精神遅滞、
言語発達遅滞又は言語障害、
精神運動遅滞又は精神運動障害、
視力喪失、
及びギランバレー症候群
のうちの少なくとも1つである、又は少なくとも1つをもたらす、請求項16から24のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項２６】
前記対象が少なくとも3歳のヒトである、請求項16から25のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項２７】
対象の嗅覚検知閾値を測定するための複数の組成物を更に含み、前記複数の組成物のそれぞれが1種のみの臭気物質を含み、前記複数の組成物の全てが同一の1種の臭気物質を含み、前記同一の1種の臭気物質の段階希釈を形成する、請求項16から26のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項２８】
前記使用が、第1の時点で、前記対象が、前記第1の組成物を前記第2及び第3の組成物から区別するかどうか、及び第2の時点で、前記対象が、前記第1の組成物を前記第2及び第3の組成物から区別するかどうかを検出することを更に含み、前記第2の時点が前記第1の時点と異なり、前記第1の時点の後であり、前記第1及び第2の時点のうちの少なくとも1つが、前記対象が前記感染及び/又は前記神経学的障害に対する治療を受けているか又は受けた時点にあり、前記第1の時点と前記第2の時点との間の前記対象の嗅覚識別能力の増大を検出することは、前記治療が治療的に有効であることを示す、請求項16から26のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、異なる割合で混合された臭気物質を伴う嗅覚手段、及び神経系の感染を有する対象の嗅覚識別能力を判定するためのこれらの嗅覚手段の使用に関する。本出願によれば、これらの嗅覚手段によって測定されたこれら対象の嗅覚識別能力の低下は、神経学的合併症、例えば中枢神経障害又は末梢神経障害の発症、難聴、精神遅滞、言語発達遅滞、精神運動遅滞、又は視力喪失を示す。
【０００２】
本出願の手段によって、神経系感染の神経学的合併症の診断、より詳細には、神経系の感染を有する対象における神経学的障害の早期診断が可能になる。本出願の手段により、特に、感染及び/又は神経学的障害に対抗するための医学的治療の早期適用、並びに医学的治療の最適化された監視が可能になる。
【背景技術】
【０００３】
神経系、すなわち中枢神経系(CNS)及び/又は末梢神経系(PNS)に感染する感染因子としては、特に、向神経性ウイルス、細菌、寄生原虫、真菌又はプリオンが挙げられる。神経系の感染は、神経学的障害、例えば、神経変性、ひいては神経感覚又は神経認知疾患又は障害をもたらし得る。神経学的障害は、時間が経つにつれて必ずしも直線的に進行するとは限らず、感染が起こってから長い時間がかかって始まることもある。
【０００４】
感染因子の性質は比較的多様であり、細菌、寄生原虫、真菌、ウイルス及びプリオンを含む。例えば、ジカウイルス(ZIKV)及び先天性サイトメガロウイルス(CMV)は、胎児及び新生児の重篤な後遺症により、重大な公衆衛生問題である。
【０００５】
フランス領ポリネシアでのZIKVの流行中に、ZIKVに感染した母親からの胎児及び新生児における小頭症の頻度は、約1%であった。更に、成人のZIKV感染後において、ギラン-バレー症候群等の重度の神経学的合併症が見出された。
【０００６】
ヘルペスウイルス5型又はヒトサイトメガロウイルス(HCMV)は、ウイルス感染によって誘導される先天性脳奇形、精神遅滞及び非遺伝的感音難聴(SNHL)の第1の原因である、日和見病原体である。フランスでは、新生児の1%がHCMVに感染している。先天性CMV感染の新生児の10〜15%は症候性疾患を有し、視覚、聴覚又は前庭病変を含む神経性及び感覚神経学的障害等の有害な長期転帰を発生するリスクが高い。逆に、無症候性CMV感染新生児のうち、約10〜15%がSNHLのような長期間の後遺症を発症する。先天性CMV感染児の難聴は新生児期に出現する可能性があるが、幼児期後期にも起こることがあり、多くの場合進行性であり、継続的な聴覚学的評価が必要である。聴覚は、まれにしか改善されず、変動したり、より頻繁に悪化する場合がある。ウイルス性病因の知識と免疫学の知識との大きなギャップのために、HCMV感染の結果を予測することは困難である。HCMVの唯一のリザーバー種はヒトである。HCMV感染は、感染した宿主におけるその生存期間中のウイルスの存続期間によって特徴付けられる。HCMVは、免疫不全、免疫抑制又はいくつかの慢性疾患等の特定の状況で再活性化し、その後再発性疾患を引き起こす可能性がある。内皮細胞及び骨髄系統の細胞は、潜伏HCMVゲノムのための主要リザーバーを形成すると考えられている。HCMVの一次感染が出生後に起こった場合、免疫能のある感染宿主に神経症状はないが、先天性HCMVは多くの場合、脳機能障害を引き起こす。経胎盤感染後、HCMVは胎児の末梢及び中枢神経系(CNS)に侵入する。HCMVは、蝸牛の血管条、哺乳類の聴覚器官、及び脳の脳室周囲領域を標的とする。リンパ球の動員及びミクログリアの活性化を含む、HCMV感染に対する自然免疫応答及び適応免疫応答が存在するが、このウイルスに対処し、脳を神経学的損傷から保護する上で、胎児生活(fetal life)の間の免疫反応は限定的である。遅発性の長期転帰の発生は、脳構造内でのHCMVの再活性化によるものであろう。
【０００７】
本出願は、神経系感染の神経学的合併症を診断又は予測することを可能にする嗅覚手段を提供する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】WO2014/170206(PCT/EP2014/057277)
【特許文献２】米国特許出願公開第2016/0037494(A1)号
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Arctander S.「Perfume and flavor chemicals: (aroma chemicals)」、Allured Publishing Corporation、Carol Stream IL, 1994
【非特許文献２】Dotyら1984、Physiol. Behav. 32: 489-502
【非特許文献３】Dotyら1984, Laryngoscope 94 (2Pt1): 176-178
【非特許文献４】Dotyら1996, Laryngoscope 106 (3Pt1): 353-356
【非特許文献５】Cainら1988, Laryngoscope 98:83-88
【非特許文献６】Cain 1989, Ear Nose Throat J. 68: 316, 322-328
【非特許文献７】Kobalら1996, Rhinology 34: 222-226
【非特許文献８】Hummelら1997, Chem. Senses 22: 39-52
【非特許文献９】Kobalら2000, Eur. Arch. Otorhinolaryngol. 257: 205-211、
【非特許文献１０】Hummelら2001, Ann. Otol. Rhinol. and Laryngol. 110: 976-981
【非特許文献１１】Hummelら2007, Eur. Arch. Otorhinolaryngol. 364(3): 237-243
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本出願は、一般に、向神経性感染因子に感染した対象の嗅覚、より詳細には嗅覚識別能力、及び神経学的障害に関する。
【００１１】
本出願によれば、嗅覚、より詳細には嗅覚識別能力は、神経系が向神経性感染因子に感染している対象における、神経感覚疾患又は障害及び/又は神経認知疾患又は障害のバイオマーカー、より詳細には予後バイオマーカー(又は生物学的予測因子)であり得る。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本出願によれば、この結果を達成するための適切な嗅覚手段は、異なる割合で混合した臭気物質と、前記対象の嗅覚識別能力を判定するためのそれらの使用とを伴う。
神経系は、中枢神経系(CNS)及び/又は末梢神経系(PNS)、より詳細にはCNSであり得る。この感染症は先天性感染症であり得る。
【００１３】
本出願は、より詳細には、
-  臭気物質を含む第1の組成物であって、前記第1の組成物の臭気物質が少なくとも2種の異なる臭気物質からなる、第1の組成物、
及び、前記第1の組成物とは別に、又は区別して、
-  臭気物質を含む第2の組成物であって、前記第2の組成物の臭気物質が少なくとも2種の異なる臭気物質からなる、第2の組成物、
及び、前記第1の組成物及び第2の組成物とは別に、又は区別して、
-  臭気物質を含む第3の組成物であって、前記第3の組成物の臭気物質が少なくとも2種の異なる臭気物質からなる、第3の組成物、を含み、
前記第2の組成物の臭気物質が、前記第3の組成物の臭気物質と同一の化合物であり、
前記第2の組成物中の臭気物質の相互の割合が、前記第3の組成物中の臭気物質の割合と同一であり、
前記第1の組成物の臭気物質が、前記第2の組成物及び前記第3の組成物の臭気物質と同一の化合物であり、
前記第1の組成物中の臭気物質の相互の割合が、前記第2の組成物中の臭気物質の割合及び前記第3の組成物中の臭気物質の割合と異なっている、キットに関する。
前記キットは、神経系が向神経性感染因子に感染している対象における神経学的障害のインビボ診断における使用に特に好適である。
【００１４】
前記使用は、有利には、前記第1の組成物、前記第2の組成物及び前記第3の組成物を、前記対象が連続的に匂うこと又は嗅ぐことを含む。
前記キットにより、特に、前記第1の組成物を前記第2及び第3の組成物から区別する前記対象の嗅覚能力の障害を検出することが可能になる。
前記第1の組成物を前記第2及び第3の組成物から区別する前記対象の嗅覚能力の障害は、前記感染対象における神経学的障害のバイオマーカー又は生物学的予測因子である。
【００１５】
したがって、本発明はまた、臭気物質を含む第1の組成物であって、前記第1の組成物の臭気物質が少なくとも2種の異なる臭気物質からなり、神経系が向神経性感染因子に感染している対象における神経学的障害のインビボ診断における使用のためのものであり、前記使用が、
-  前記第1の組成物とは別に、又は区別して、臭気物質を含む第2の組成物であって、前記第2の組成物の臭気物質が少なくとも2種の異なる臭気物質からなる、第2の組成物を使用すること、及び
-  前記第1の組成物及び前記第2の組成物とは別に、又は区別して、臭気物質を含む第3の組成物であって、前記第3の組成物の臭気物質が少なくとも2種の異なる臭気物質からなる、第3の組成物を使用すること、を含み、
前記第2の組成物の臭気物質が、前記第3の組成物の臭気物質と同一の化合物であり、
前記第2の組成物中の臭気物質の相互の割合が、前記第3の組成物中の臭気物質の割合と同一であり、
前記第1の組成物の臭気物質が、前記第2の組成物及び前記第3の組成物の臭気物質と同一の化合物であり、
前記第1の組成物中の臭気物質の相互の割合が、前記第2の組成物中の臭気物質の割合及び前記第3の組成物中の臭気物質の割合と異なっており、
-  前記使用が、前記第1の組成物、前記第2の組成物及び前記第3の組成物を、前記対象により連続的に匂うこと又は嗅ぐことを含む、
第1の組成物を包含する。
【００１６】
代替的実施形態によれば、本発明は、
-  臭気物質を含む第1の組成物であって、前記第1の組成物の臭気物質が少なくとも2種の異なる臭気物質からなる、第1の組成物、及び前記第1の組成物とは別に、又は区別して、臭気物質を含む第2の組成物であって、前記第2の組成物の臭気物質が少なくとも2種の異なる臭気物質からなる、第2の組成物、であり、神経系が向神経性感染因子に感染している対象における神経学的障害のインビボ診断における使用のためのものであり、前記使用が、
-  前記第1の組成物及び前記第2の組成物とは別に、又は区別して、臭気物質を含む第3の組成物であって、前記第3の組成物の臭気物質が少なくとも2種の異なる臭気物質からなる、第3の組成物を使用すること、を含み、
前記第2の組成物の臭気物質が、前記第3の組成物の臭気物質と同一の化合物であり、
前記第2の組成物中の臭気物質の相互の割合が、前記第3の組成物中の臭気物質の割合と同一であり、
前記第1の組成物の臭気物質が、前記第2の組成物及び前記第3の組成物の臭気物質と同一の化合物であり、
前記第1の組成物中の臭気物質の相互の割合が、前記第2の組成物中の臭気物質の割合及び前記第3の組成物中の臭気物質の割合と異なっており、前記使用が、前記第1の組成物、前記第2の組成物及び前記第3の組成物を、前記対象により連続的に匂うこと又は嗅ぐことを含む、第1の組成物、及び第2の組成物に関する。
【００１７】
更に、本発明は、
-  臭気物質を含む第1の組成物であって、前記第1の組成物の臭気物質が少なくとも2種の異なる臭気物質からなる、第1の組成物、
及び、前記第1の組成物とは別に、又は区別して、
-  臭気物質を含む第2の組成物であって、前記第2の組成物の臭気物質が少なくとも2種の異なる臭気物質からなる、第2の組成物、
及び、前記第1の組成物及び第2の組成物とは別に、又は区別して、
-  臭気物質を含む第3の組成物であって、前記第3の組成物の臭気物質が少なくとも2種の異なる臭気物質からなる、第3の組成物、であり、
前記第2の組成物の臭気物質が、前記第3の組成物の臭気物質と同一の化合物であり、
前記第2の組成物中の臭気物質の相互の割合が、前記第3の組成物中の臭気物質の割合と同一であり、
前記第1の組成物の臭気物質が、前記第2の組成物及び前記第3の組成物の臭気物質と同一の化合物であり、
前記第1の組成物中の臭気物質の相互の割合が、前記第2の組成物中の臭気物質の割合及び前記第3の組成物中の臭気物質の割合と異なっており、神経系が向神経性感染因子に感染している対象における神経学的障害のインビボ診断における使用のためのものであり、前記使用が、前記第1の組成物、前記第2の組成物及び前記第3の組成物を、前記対象により連続的に匂うこと又は嗅ぐことを含む、第1の組成物、第2の組成物、及び第3の組成物に関する。
【００１８】
本出願が参照する図のいくつかはカラーである。提出された出願は、カラー印刷図を含み、これらは、特許庁の出願ファイル閲覧によりアクセスすることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】CMVの先天性感染が聴覚に及ぼす影響。a、妊娠中のCMV感染の動物モデル。深麻酔下で、妊娠Oncins France 1(OF1)マウスの胎盤内各胚にマウスCMV(スミス株)又はPBSを接種した。b、実験のタイムテーブル。マウスをE13でCMVに感染させた。8匹のCMV感染雄マウス、PBSを受けた2匹の偽マウス及び同齢の9匹の対照雄マウスを、オルファクトメーターを用い、埋め込み食物探査試験により分析した。これらのマウスの聴性脳幹反応(ABR)は、処置の最後に記録した。2匹の偽マウスの結果を、9匹の対照マウスの結果と共にプールした。(Eは胚を表し、Wは週を表す)。c、麻酔させたマウスのABR記録システム。d、波形I〜Vを描く典型的なABRトレース。e、クリックに対するABR聴力閾値(波形IVの検出のための最低強度)。1群あたりn=8の雄マウス。P値はシダックの多重比較試験によって計算する。棒グラフで、***P<0.001、平均±s.e.m。
【図２】CMVの先天性感染が聴覚に及ぼす影響。a、b、は埋め込み食物探査試験で埋め込み(a)食物又は目に見える(b)食物報酬を発見するための潜時を示す。結果は、15分間にわたって食物を発見しなかったマウスの%である。P値は、ゲーハン-ブレスロウ-ウィルコクソン検定により算出する。(a)c、ゴー-ノーゴー手続き。オルファクトメーターアイソレータは、臭気物質サンプリングポート及び送水チューブを含み、マウスに報酬を与える。動物は、2種の臭気物質、すなわち正の刺激(S+)及び負の刺激(S-)を区別するように訓練される。オルファクトメーターアイソレータは、迅速な臭気物質除去のために換気する。S+試行後のなめ応答とS-試行後の非なめ応答を、正しい応答として記録した。d、n-ブタノール(10-3希釈)及びその溶媒(水)を用いた識別課題で、基準能力(ブロックで75%の正しい応答)に達しなかったマウスの%。e、f、先天性CMV感染が嗅覚検知に及ぼす影響。結果は、n-ブタノールに対する検知閾値(臭気物質希釈倍率の-log10、平均±s.e.m.)(左)又は最終の希釈能力基準に対するマウスの%(右)として表す。1ブロックは、無作為の10S+及び10S-による、一連の20回の試行である。n=8CMV、n=11 CTL。P値は、ゲーハン-ブレスロウ-ウィルコクソン検定(a、b、d)及び両側スチューデントt検定(e)によって算出する。*p<0.05、**p<0.01。
【図３−１】嗅覚学習及び記憶に及ぼすCMV先天性感染の影響。a、b、は、イソアミルアセテート(S+)とアネトール(S-)との間の容易な(a)識別課題、又はそれらの二成分混合物(binary mixture)間の難しい(b)識別課題の、各ブロックにおける正しい応答のパーセンテージを示すグラフ。グラフには、イソアミルアセテートとアネトールとの混合比を示す。c〜e及びc〜eは、イソアミルアセテートとアネトール(c、g)との間の、D-リモネンとI(d、h)との間の、D-リモネンとアネトールとの間の識別課題の能力基準に達しなかったマウスの%。f、長期記憶試験。嗅覚記憶を評価するために、マウスを5日間連続して訓練して、D-リモネンとAnetholの区別を思い出させた。その後、トレーニングセッションの終了後にマウスをW16で再検査した(W12)。a、b、fにおいて、50%のスコアは、偶然のみ(破線)に基づいて予想される成功率に対応する。a、b、fの結果は、正しい応答の平均±s.e.mとして表す。P値は、繰り返し測定を用いた2元配置分散分析(ANOVA)(a、b、f)又はゲーハン-ブレスロウ-ウィルコクソン検定(c〜e)によって算出する。
【図３−２】図３−１の続きである。
【図４】OBに対するCMV先天性感染の影響。a、GCL及びGLを示すマウスOBの冠状切片。ドーパミン作動性ニューロン(チロシンヒドロキシラーゼ+、TH)は赤色染色され、新生ニューロンはGFP発現ウイルスベクターによって緑色標識する(方法参照)。b、cは、OSN(b)、TH(c)、CB(c)及びCR(c)特異的抗体によって発現するマウスCMVIE1(b)、嗅覚マーカータンパク質(OMP)による冠状OBスライスの染色を示し、CTL及び先天性CMV感染マウスにおけるOSN、TH+、CB+、CR+及びCMV+細胞を示す。dは、先天性CMV接種後の生後4ヶ月における、GL及び糸球体(グロム)サイズにおけるTH+、CB+及びCR+細胞密度を示す。細胞密度分析のために、n=5の雄CTL、n=2の雌CTL、n=4の雄CMV、n=4の雌CMV。グロムサイズについては、2匹の雌CTLからのn=212グロム、4匹の雌CMVからのn=409グロム、4匹の雄CTLからのn=499グロム、4匹の雄CMVからのn=262グロム。dの結果は平均±s.e.mである。P値は、ANOVAによって算出する。スケールバー:aで100μm、b、cで50μm。
【図５】CMV先天性感染は、SVZにおける前駆体細胞増殖を損なう。a.海馬の神経原性歯状回(DG)、側脳室(LV)、神経原性SVZ、吻側移動経路(RMS)及びOBを示す、マウス脳の矢状断面。成体のSVZで誕生した神経芽細胞はRMSを介してOBまで移動し、GCL又はGL介在ニューロンに分化する。b、d.は、CTL及び先天性CMV接種後の生後4ヶ月の先天性CMV感染マウスにおける、Ki67(b)、BrdU(b、d)、4',6-ジアミジノ-2-フェニルインドール(DAPI)(d)及びニューロンマーカーNeuN(d)抗体による冠状SVZ及びOBスライスの染色を示し、Ki67+神経前駆細胞及びBrdU+成体誕生ニューロンを示す。結果は平均±s.e.mを示す。n=5の雄CTL、n=4の雄CMV。P値は、ANOVAにより算出する。スケールバー:aで100μm、bで上100μm、bで下50μm、dで5μm。
【図６】OB及びDGの成体神経発生。先天性CMV接種後の生後4ヶ月の、GCL(a)及びGL(b)におけるBrdU+細胞密度、GCL(c)のサイズを示す。結果は平均±s.e.mを示す。n=5の雄CTL、n=4の雄CMV。P値は、スチューデントt検定(a、b)及びマンホイットニー検定(c)により算出する。
【図７】CMVの先天性感染が成長に及ぼす影響。a、妊娠13日目でマウスCMV感染後の生後8日齢マウスの体重(n=21CTL、n=35CMV)。CTLマウスに生理食塩水のみを注射した。異常値はROUTによって識別した。異常値のないCTL群とCMV群との間の分散は、異なっており(F(33,19)=2.433、P<0.05)、これが、9/34CMV仔の成長遅滞の根底にある。b、妊娠13日目でマウスCMV感染後の生後21日齢マウスの脳重量。CTLマウスに生理食塩水のみを注射した。1群あたりn=8の雄マウス。P値は、マン-ホイットニー検定によって算出する。棒グラフで、*P<0.05、***P<0.001、平均±s.e.m。
【図８】CMVの先天性感染が新生児嗅覚に及ぼす影響。a、超音波発声の放出と定量。超音波コールの記録は、オルファクトメーターの測定チャンバに仔を配置してから30秒後に開始された。超音波発声は、超音波音を可聴周波数範囲に変換するバット検出器に接続された超音波マイクロフォンを用いて検出した。b、先天性CMV感染後の離乳前の6日齢の子からの自発コール列の典型的な波形トレース。CTLに生理食塩水のみを接種した。c、実験のタイムテーブル。マウスをE13で、子宮内でCMVに感染させるか、又は生理食塩水を与えた。生後6日目にオルファクトメーターを用いて分析した。それらの超音波放出応答を、臭気物質なし(1分)の第1期間、次いで臭気物質暴露期間(1分)、最後に排気臭を用いた最終期間(1分30秒)中に記録した。d、e、fは、出生後6日目のシトラール臭気物質についての超音波コール(n=18 CTL、n=19 CMV)。d、e、fは、出生後8日目の雄性臭気物質についての超音波コール(n=18 CTL、n=8、n=11 CMV)。P値は、繰り返し測定を用いた2元配置ANOVAの後、シダックの多重比較試験(d)によって、又は両側スチューデントt検定(e、f、g、h)によって算出する。棒グラフで、*P<0.05、***P<0.001、****P<0.0001、平均±s.e.m。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本発明は、出願した特許請求の範囲に定義し、出願又は発明として本明細書に記述する主題に関する。
本出願において、他に特定されない限り、又は文脈上別段の指示がない限り、全ての用語は、関連分野においてそれらの用語の通常の意味を有する。
【００２１】
本出願は、一般に、向神経性感染因子に感染している対象における、神経感覚疾患又は障害及び/又は神経認知疾患又は障害のバイオマーカーとしての、より詳細には予後バイオマーカー(又は生物学的予測因子)としての、嗅覚、より詳細には嗅覚識別能力に関する。
本出願の嗅覚手段は、異なる割合で混合した臭気物質と、前記対象の嗅覚識別能力を判定するためのそれらの使用とを伴う。
【００２２】
本出願の嗅覚手段によって検出される嗅覚識別能力の障害は、向神経性感染因子に感染した対象における神経学的障害のバイオマーカー又は生物学的予測因子である。
【００２３】
本出願は、(少なくとも2種の)臭気物質を含む組成物、並びに前記臭気物質組成物を含む組成物のシリーズ又は組成物の(機能的)組み合わせに関する。組成物という用語は、混合物の意味を包含する。
【００２４】
したがって、キット、シリーズ、又は(機能的)組み合わせ(又は組成物の使用)は、同じ(少なくとも2種の)臭気物質を含むいくつかの組成物(又は組成物の使用)を含み、前記いくつかの組成物のそれぞれが同じ(少なくとも2種の異なる)臭気物質を含有し、前記(少なくとも2種の異なる)臭気物質が含まれる割合によって、前記いくつかの組成物のうちの少なくとも1つは、他の組成物と異なる。
【００２５】
したがって、キット、シリーズ、組成物又は(機能的な)組み合わせ又は使用は、
-  臭気物質を含む第1の組成物であって、前記第1の組成物の臭気物質が少なくとも2種の異なる臭気物質からなる、第1の組成物、
及び、前記第1の組成物とは別に、又は区別して、
-  臭気物質を含む第2の組成物であって、前記第2の組成物の臭気物質が少なくとも2種の異なる臭気物質からなる、第2の組成物、を含むことができ、
前記第1の組成物の臭気物質が、前記第2の組成物の臭気物質と同一の化合物であり、
前記第1の組成物中の臭気物質の相互の割合が、前記第2の組成物中の臭気物質の割合と異なっている。
【００２６】
キット、シリーズ、組成物又は組み合わせ又は使用は、有利には、
-  臭気物質を含む第1の組成物であって、前記第1の組成物の臭気物質が少なくとも2種の異なる臭気物質からなる、第1の組成物、
及び、前記第1の組成物とは別に、又は区別して、
-  臭気物質を含む第2の組成物であって、前記第2の組成物の臭気物質が少なくとも2種の異なる臭気物質からなる、第2の組成物、
及び、前記第1の組成物及び第2の組成物とは別に、又は区別して、
-  臭気物質を含む第3の組成物であって、前記第3の組成物の臭気物質が少なくとも2種の異なる臭気物質からなる、第3の組成物、を含み得る。
【００２７】
前記第2の組成物の臭気物質が、前記第3の組成物の臭気物質と同一の化合物であり、前記第2の組成物中の臭気物質の相互の割合が、前記第3の組成物中の臭気物質の割合と異なり、第3の組成物は、有利には前記第2の組成物の重複(すなわち、同一である)である。
【００２８】
前記第1の組成物の臭気物質が、前記第2の組成物及び前記第3の組成物の臭気物質と同一の化合物であり、前記第1の組成物中の臭気物質の相互の割合が、前記第2の組成物中の臭気物質の割合及び前記第3の組成物中の臭気物質の割合と異なっている。
【００２９】
神経系が向神経性感染因子に感染している対象における神経学的障害のインビボ診断のためのキット又は機能的アセンブリの製造において使用するための、上記で定義した組成物も本明細書において提供する。
【００３０】
したがって、本発明はまた、臭気物質を含む第1の組成物であって、前記第1の組成物の臭気物質が少なくとも2種の異なる臭気物質からなり、神経系が向神経性感染因子に感染している対象における神経学的障害のインビボ診断における使用のためのものであり、前記使用が、
-  前記第1の組成物とは別に、又は区別して、臭気物質を含む第2の組成物であって、前記第2の組成物の臭気物質が少なくとも2種の異なる臭気物質からなる、第2の組成物を使用すること、及び
-  前記第1の組成物及び前記第2の組成物とは別に、又は区別して、臭気物質を含む第3の組成物であって、前記第3の組成物の臭気物質が少なくとも2種の異なる臭気物質からなる、第3の組成物を使用すること、を含み、
前記第2の組成物の臭気物質が、前記第3の組成物の臭気物質と同一の化合物であり、
前記第2の組成物中の臭気物質の相互の割合が、前記第3の組成物中の臭気物質の割合と同一であり、
前記第1の組成物の臭気物質が、前記第2の組成物及び前記第3の組成物の臭気物質と同一の化合物であり、
前記第1の組成物中の臭気物質の相互の割合が、前記第2の組成物中の臭気物質の割合及び前記第3の組成物中の臭気物質の割合と異なっており、
-  前記使用が、前記第1の組成物、前記第2の組成物及び前記第3の組成物を、前記対象により連続的に匂うこと又は嗅ぐことを含む、第1の組成物を包含する。
【００３１】
代替的実施形態によれば、本発明は、
-  臭気物質を含む第1の組成物であって、前記第1の組成物の臭気物質が少なくとも2種の異なる臭気物質からなる、第1の組成物、及び前記第1の組成物とは別に、又は区別して、臭気物質を含む第2の組成物であって、前記第2の組成物の臭気物質が少なくとも2種の異なる臭気物質からなる、第2の組成物、において、神経系が向神経性感染因子に感染している対象における神経学的障害のインビボ診断における使用のためのものであり、前記使用が、
-  前記第1の組成物及び前記第2の組成物とは別に、又は区別して、臭気物質を含む第3の組成物であって、前記第3の組成物の臭気物質が少なくとも2種の異なる臭気物質からなる、第3の組成物を使用すること、を含み、
前記第2の組成物の臭気物質が、前記第3の組成物の臭気物質と同一の化合物であり、
前記第2の組成物中の臭気物質の相互の割合が、前記第3の組成物中の臭気物質の割合と同一であり、
前記第1の組成物の臭気物質が、前記第2の組成物及び前記第3の組成物の臭気物質と同一の化合物であり、
前記第1の組成物中の臭気物質の相互の割合が、前記第2の組成物中の臭気物質の割合及び前記第3の組成物中の臭気物質の割合と異なっており、
-  前記使用が、前記第1の組成物、前記第2の組成物及び前記第3の組成物を、前記対象により連続的に匂うこと又は嗅ぐことを含む、第1の組成物及び第2の組成物に関する。
【００３２】
更に、本発明は、
-  臭気物質を含む第1の組成物であって、前記第1の組成物の臭気物質が少なくとも2種の異なる臭気物質からなる、第1の組成物、
及び、前記第1の組成物とは別に、又は区別して、
-  臭気物質を含む第2の組成物であって、前記第2の組成物の臭気物質が少なくとも2種の異なる臭気物質からなる、第2の組成物、
及び、前記第1の組成物及び第2の組成物とは別に、又は区別して、
-  臭気物質を含む第3の組成物であって、前記第3の組成物の臭気物質が少なくとも2種の異なる臭気物質からなる、第3の組成物、であって、
前記第2の組成物の臭気物質が、前記第3の組成物の臭気物質と同一の化合物であり、
前記第2の組成物中の臭気物質の相互の割合が、前記第3の組成物中の臭気物質の割合と同一であり、
前記第1の組成物の臭気物質が、前記第2の組成物及び前記第3の組成物の臭気物質と同一の化合物であり、
前記第1の組成物中の臭気物質の相互の割合が、前記第2の組成物中の臭気物質の割合及び前記第3の組成物中の臭気物質の割合と異なっており、神経系が向神経性感染因子に感染している対象における神経学的障害のインビボ診断における使用のためのものであり、前記使用が、前記第1の組成物、前記第2の組成物及び前記第3の組成物を、前記対象により連続的に匂うこと又は嗅ぐことを含む、第1の組成物、第2の組成物、及び第3の組成物に関する。
【００３３】
本発明による診断のための使用によれば、嗅覚感度の変化が対象において検出され、前記変化は、アッセイされた臭気物質の検知閾値の変化、臭気物質の識別の変化、若しくは臭気物質の区別についての学習の変化、又はこれらの種類の変化の組み合わせを包含し得る。
【００３４】
したがって、本発明によれば、嗅覚感度の変化は、神経系が向神経性感染因子に感染している対象における神経学的障害のインビボ診断におけるマーカーである。この変化は、開示された少なくとも3種の組成物を用いて対象に対して実施したインビボアッセイの結果として検出される。特定の実施形態では、前記対象は、気分うつ病を伴う精神障害又は疾患がないことが知られているか又は検出されている対象である。特定の実施形態では、前記対象は、ニューロン感染因子、例えばCMV(若しくはHCMV)又はZIKV等のウイルスによる感染又は可能性のある感染について陽性であると検出される。
【００３５】
本明細書は、神経系が向神経性感染因子に感染している対象における神経学的障害のインビボ診断のための方法もまた提供し、前記方法は、対象に、第1の組成物、第2の組成物及び第3の組成物を、連続的に匂うこと又は嗅ぐこと実施してもらうことを含み、
-  前記第1の組成物は、臭気物質を含み、前記第1の組成物の臭気物質が少なくとも2種の異なる臭気物質からなり、
-  前記第2の組成物は、前記第1の組成物とは別に、又は区別されて、臭気物質を含み、前記第2の組成物の臭気物質が少なくとも2種の異なる臭気物質からなり、
-  前記第3の組成物は、前記第1の組成物及び前記第2の組成物とは別に、又は区別されて、臭気物質を含み、前記第3の組成物の臭気物質が少なくとも2種の異なる臭気物質からなり、
前記第2の組成物の臭気物質が、前記第3の組成物の臭気物質と同一の化合物であり、
前記第2の組成物中の臭気物質の相互の割合が、前記第3の組成物中の臭気物質の割合と同一であり、
前記第1の組成物の臭気物質が、前記第2の組成物及び前記第3の組成物の臭気物質と同一の化合物であり、
前記第1の組成物中の臭気物質の相互の割合が、前記第2の組成物中の臭気物質の割合及び前記第3の組成物中の臭気物質の割合と異なっている。
有利には、第1の組成物は、正常嗅覚を持ち、向神経性感染因子に感染していない対照の対象(例えば、対照ヒト)、すなわち健康な正常嗅覚の対照の対象によって、匂うこと又は嗅ぐことにより、前記第2の組成物又は前記第2及び第3の組成物とは異なるものとして意識的に知覚される組成物である。
【００３６】
換言すれば、前記第2の組成物と比較して、又は前記第2及び第3の組成物と比較して、前記第1の組成物における臭気物質の割合の差は、前記臭気物質組成物のそれぞれを、連続的に匂うか又は嗅ぐ健康な正常嗅覚の対照の対象(例えば、健康な正常嗅覚の対照ヒト)によって、前記第1の組成物が、前記第2の組成物、又は前記第2の組成物及び前記第3の組成物とは異なるものとして意識的に知覚されるのに十分である。
【００３７】
キット、シリーズ、第1、第2及び第3の組成物又は(機能的)組み合わせは、有利には、向神経性感染因子に感染している対象における、より詳細には、神経系が(向神経性)感染因子に感染している対象における神経学的障害のインビボ診断における使用のためのものである。
【００３８】
神経学的障害という用語は、当分野でのその通常の意味に従って意図され、いかなる神経学的欠損をも包含する。神経学的障害という用語は、特に神経学的能力障害を包含する。神経学的障害という用語は、より詳細には神経学的疾患又は障害を包含し、神経学的疾患又は障害の早期(無症候性又は症候性)段階を含む。
【００３９】
前記神経学的障害は、前記(向神経性)感染因子によって誘導されている、誘導されている可能性がある、神経学的障害である。
前記(向神経性)感染因子は、微生物又はプリオンであり得る。
【００４０】
前記使用は、前記キット、シリーズ、又は第1、第2及び第3の組成物、又は(機能的)組み合わせの各組成物を、前記対象により連続的に匂うこと又は嗅ぐことを含む。
実験者、実験技術者又は医師は、前記対象者が、同一のキット、シリーズ、若しくは(機能的)組み合わせ、又は(対象に実施するアッセイとして)使用の混合物又は組成物内に、(2種又は少なくとも2種)の臭気物質を、他の混合物又は組成物とは異なる割合で含む、少なくとも1種の混合物又は組成物を識別することに成功しているかどうかを、記録する。
【００４１】
当業者であれば、有利には前記連続的に匂うこと又は嗅ぐことは、嗅覚汚染を防止又は回避する条件下で実施することを理解するであろう。例えば、前記連続的に匂うこと又は嗅ぐことは、有利には、換気が腐敗汚染を防止又は回避するのに十分であり、時系列により、これによってある混合物又は組成物から次の混合物又は組成物への嗅覚汚染を防止するか又は回避する部屋で実施する。
【００４２】
当業者であれば、前記連続的に匂うこと又は嗅ぐことは、盲検法の下で実施できることを理解するであろう。
所望又は必要であれば、前記匂うこと又は嗅ぐことは、同じ及び/又は別の本出願の機能的組み合わせを用いて繰り返すことができる。
【００４３】
前記使用は、前記第1の組成物を前記第2の組成物又は前記第2及び第3の組成物から区別する前記対象の不全を検出することを更に含むことができる。この不全は、(健康な正常嗅覚の対照対象と比較して)前記対象の嗅覚能力の障害である。
【００４４】
この嗅覚識別障害は、前記感染対象における神経学的障害のバイオマーカー又は生物学的予測因子である。
この嗅覚識別障害は、前記感染対象における(長期の)神経学的転帰のバイオマーカー又は生物学的予測因子である。
【００４５】
したがって、前記使用は、
第1の時点で、前記対象が、前記第1の組成物を前記第2の組成物又は前記第2及び第3の組成物から区別するかどうかを検出すること、及び
第2の時点で、前記対象が、前記第1の組成物を前記第2の組成物又は前記第2及び第3の組成物から区別するかどうかを検出することを更に含んでもよく、
前記第2の時点は前記第1の時点と異なり、前記第1の時点の後であり、
前記第1及び第2の時点のうちの少なくとも1つは、前記対象が前記(神経系)感染及び/又は前記神経学的障害に対する治療を受けているか又は受けた時点にあり、
ここで、
前記第1の時点と前記第2の時点との間の前記対象の嗅覚識別能力の増大を検出することは、前記治療が治療的に有効であることを示し、及び/又は
前記第1の時点と前記第2の時点との間の前記対象の嗅覚識別能力の低下を検出することは、前記治療が治療的に有効ではないことを示す。
【００４６】
例えば、前記対象が、前記第1の時点で、前記第1の組成物を前記第2の組成物又は前記第2及び第3の組成物から区別しないが、前記第2の時点で、前記第1の組成物を前記第2の組成物又は前記第2及び第3の組成物から区別する場合、嗅覚識別能力の増大を検出する。
【００４７】
逆に、前記対象が、前記第1の時点で、前記第1の組成物を前記第2の組成物又は前記第2及び第3の組成物から区別するが、前記第2の時点で、前記第1の組成物を前記第2の組成物又は前記第2及び第3の組成物から区別しない場合、嗅覚識別能力の低下を検出する。
【００４８】
前記第1の時点と前記第2の時点との間の前記対象の識別能力の改変がない場合、前記治療がまだ治療的に有効ではないと(かつ、前記治療は、治療を更に施して、後で、治療上有効であるかどうかを決定すべきであると、)考慮することができる。
【００４９】
本出願はまた、前記神経学的障害の重篤度又は程度のインビボ診断における前記キット、シリーズ、組成物又は(機能的)組み合わせの使用に関する。
【００５０】
本出願はまた、前記神経学的障害及び/又は前記(神経系感染)のために意図された治療に対する反応又は非反応のインビボ診断における前記キット、シリーズ、組成物又は(機能的)組み合わせの使用に関する。
本出願はまた、前記神経学的障害の治療における前記キット、シリーズ、組成物又は(機能的)組み合わせの使用に関し、前記キット、シリーズ、組成物又は(機能的)組み合わせは、前記治療が、前記対象の嗅覚識別能力を改善するかどうかを監視するか又は決定するために使用する。前記嗅覚識別能力の改善は、前記治療が前記神経学的障害及び/又は前記神経系感染を治療するのに治療上有効であることを示す。前記嗅覚識別能力の改善がないことは、前記治療が前記神経学的障害及び/又は前記神経系感染を治療するのに治療上有効でないか、又はまだ有効ではないことを示す。
【００５１】
(神経系)感染に対する治療の例には、例えば、ガンシクロビル(9-[(1,3,-ジヒドロキシ-2-プロポキシ)メチル]グアニン、又はDHPG)及び/又はバルガンシクロビル(ガンシクロビルの経口バリンエステル)等の、ヌクレオシドグアノシンの非環式アナログ投与等の抗ウイルス治療の投与が含まれる。ガンシクロビル及び/又はバルガンシクロビルは、典型的には、感染がCMV又はHCMV感染である場合に投与する。神経学的障害に対する治療の例としては、(例えば、難聴の進行又は程度を低減又は制限することを意図することができる)補聴器の適用が挙げられる。
【００５２】
前記神経学的障害は、より詳細には、前記(感染)対象の中枢神経系(CNS)及び/又は末梢神経系(PNS)、より詳細にはCNSの神経変性、より詳細には(神経)変性であり得る。
前記神経学的障害は、より詳細には、神経学的疾患又は障害(神経変性疾患又は障害を含む)、より詳細には神経感覚疾患又は障害、及び/又は神経認知疾患又は障害であり得る。
【００５３】
前記向神経性感染因子は、より詳細には、向神経性微生物又はプリオン、より詳細には、向神経性ウイルス、細菌、寄生原虫及び真菌から選択される向神経性微生物、より詳細には向神経性ウイルスであり得る。
【００５４】
そのような細菌の例としては、髄膜炎をもたらす可能性のある細菌(髄膜炎菌(Neisseria meningitidis)、肺炎レンサ球菌(Streptococcus pneumoniae)等)、リステリア脳炎又は髄膜脳炎をもたらす可能性のある細菌(リステリア・モノサイトゲネス(Listeria monocytogenes)等)、破傷風をもたらす可能性のある細菌(クロストリジウム・テタニ(Clostridium tetani)等)、神経梅毒をもたらす可能性のある細菌(トレポネーマ・パリダム(Treponema pallidum)等)、ライム病をもたらす可能性のある細菌(ボレリア・ブルグドルフェリ(Borrelia burgdorferi)等)が挙げられる。
【００５５】
そのような寄生原虫の例としては、トキソプラズマ症をもたらす可能性のある寄生虫(トキソプラズマ・ゴンディ(Toxoplasma gondii)等)、ニューロマラリア(neuromalaria)又は脳マラリアをもたらす可能性のある寄生虫(熱帯熱マラリア原虫(Plasmodium falciparum)等)が挙げられる。
【００５６】
そのような真菌の例としては、神経系感染をもたらす可能性のある真菌(カンジダ・グラブラタ(Candida glabrata)、アスペルギルス・フミガタス(Aspergillus fumigatus)等)が挙げられる。
そのようなウイルスの例としては、風疹をもたらす可能性のあるウイルス(風疹ウイルス等)、ヘルペスウイルス科のウイルス((ヒト)サイトメガロウイルス又は単純ヘルペスウイルス等)、フラビウイルス属(Flavivirus genus)のウイルス(ジーファウイルス等)、ウイルス性髄膜炎をもたらす可能性のあるウイルス(エコーウイルス30( Echovirus 30)、コクサッキーウイルスB5(Coxsackievirus B5))が挙げられる。
そのようなプリオンの例としては、クロイツフェルト・ヤコブ病(Creutzfeld-Jakob disease)をもたらす可能性のあるプリオンが挙げられる。
【００５７】
前記向神経性感染因子は、より詳細には、ナイセリア(Neisseria)、ストレプトコッカス(Streptococcus)、リステリア(Listeria)、クロストリジウム(Clostridium)、トレポネーマ(Treponema)及びボレリア(Borrelia)から選択される、より詳細には、髄膜炎菌、肺炎レンサ球菌、リステリア・モノサイトゲネス、クロストリジウム・テタニ、トレポネーマ・パリダム及びボレリア・ブルグドルフェリから選択される、(向神経性)感染因子であり得る。
前記向神経性感染因子は、より詳細には、トキソプラズマ(Toxoplasma)及びプラスモディウム(Plasmodium)から選択される、より詳細には、トキソプラズマ・ゴンディイ及び熱帯熱マラリア原虫から選択される、(向神経性)寄生原虫であり得る。
【００５８】
前記向神経性感染因子は、より詳細には、カンジダ(Candida)及びアスペルギルス(Aspergillus)から選択される、より詳細には、カンジダ・グラブラタ及びアスペルギルス・フミガタスから選択される、(向神経性)真菌であり得る。
【００５９】
前記向神経性感染因子は、より詳細には、風疹ウイルス、ヘルペスウイルス科のウイルス、フラビウイルス属のウイルス、エコーウイルス及びコクサッキーウイルスから選択される、より詳細には、風疹ウイルス、(ヒト)サイトメガロウイルス、単純ヘルペスウイルス、ジカウイルス、エコーウイルス30及びコクサッキーウイルスB5から選択される、(向神経性)ウイルスであり得る。
【００６０】
前記向神経性感染因子は、より詳細には、(向神経性)プリオンであり得る。
【００６１】
前記向神経性感染因子は、より詳細には、ナイセリア、ストレプトコッカス、リステリア、クロストリジウム、トレポネーマ、ボレリア、トキソプラズマ、プラスモディウム、カンジダ、アスペルギルス、風疹ウイルス、ヘルペスウイルス科のウイルス、フラビウイルス属のウイルス、エコーウイルス及びコクサッキーウイルスから選択される、(向神経性)微生物であり得る。
前記向神経性感染因子は、より詳細には、髄膜炎菌、肺炎レンサ球菌、リステリア・モノサイトゲネス、クロストリジウム・テタニ、トレポネーマ・パリダム及びボレリア・ブルグドルフェリ、トキソプラズマ・ゴンディ、熱帯熱マラリア原虫、カンジダ・グラブラタ、アスペルギルス・フミガタス、風疹ウイルス、(ヒト)サイトメガロウイルス、単純ヘルペスウイルス、ジカウイルス、エコーウイルス30及びコクサッキーウイルスB5から選択される、(向神経性)微生物であり得る。
【００６２】
前記向神経性感染因子は、より詳細には、(向神経性)ウイルス、より詳細には、ヘルペスウイルス科のウイルス及びフラビウイルス属のウイルスから選択される(向神経性)ウイルス、より詳細には、サイトメガロウイルス(CMV)及びジカウイルス(ZIKV)から選択される(向神経性)ウイルス、より詳細には、ヒトサイトメガロウイルス(HCMV)及びジカウイルス(ZIKV)由来の(向神経性)ウイルスであり得る。前記向神経性感染因子は、より詳細には、CMV、より詳細にはHCMVであり得る。
【００６３】
前記向神経性感染因子は、神経幹細胞、より詳細にはヒト海馬及び/又はヒト嗅覚系の神経幹細胞に対する向性を示し得る。
【００６４】
前記向神経性感染因子は、神経幹細胞、より詳細にはヒト海馬及び/又はヒト嗅覚系の神経幹細胞に対する向性を示す、より詳細には向神経性微生物又はプリオン、より詳細には向神経性ウイルスであり得る。
【００６５】
前記神経学的障害は、神経学的能力障害、疾患若しくは障害であるか、又は神経学的能力障害、疾患又は障害を(治療上有効な治療の非存在下で)もたらす。
【００６６】
前記神経学的障害は、より詳細には、少なくとも1つ(すなわち、1つ又は複数)の中枢神経障害又は末梢神経障害、難聴、より詳細には内耳の損傷に起因する(より詳細には内耳の聴覚及び/又は前庭の構造の損傷に起因する)難聴、より詳細には感音難聴(SNHL)、より詳細には非遺伝的SNHL、精神遅滞、言語発達遅滞又は言語障害、精神運動遅滞又は精神運動障害、視力喪失、及びギランバレー症候群であり得るか、又はより詳細には(治療上有効な治療の非存在下で)これらをもたらし得る。
【００６７】
前記神経学的障害は、より詳細には、少なくとも1つ(すなわち、1つ又は複数)の中枢神経障害又は末梢神経障害、難聴、より詳細には内耳の損傷に起因する(より詳細には内耳の聴覚及び/又は前庭の構造の損傷に起因する)難聴、より詳細には感音難聴(SNHL)、より詳細には非遺伝的SNHL、精神遅滞、言語発達遅滞又は言語障害、精神運動遅滞又は精神運動障害、及び視力喪失であり得るか、又はより詳細には(治療上有効な治療の非存在下で)これらをもたらし得る。
【００６８】
この(これらの)神経学的障害は、対象(又は対象の神経系)がCMVに、より詳細にはHCMVに感染した場合に典型的に観察され得る。
【００６９】
前記神経学的障害は、より詳細には、ギラン-バレー症候群であり得るか、又はより詳細には(治療上有効な治療の非存在下で)ギラン-バレー症候群をもたらし得る。ギラン-バレー症候群は、対象(又は対象の神経系)がZIKVに感染した場合に典型的に観察され得る。
【００７０】
前記対象は、有利には哺乳動物、より詳細にはげっ歯類又はヒト、より詳細にはヒト、より詳細には少なくとも3歳のヒトである。
より詳細には、前記対象は
(1歳以上12歳未満の)子供、より詳細には3歳〜10歳の子供、
ティーンエイジャー(12歳以上18歳未満)、
成人(18歳以上60歳以下)、
妊娠中の女性、又は
(60歳超の)高齢者、より詳細には65歳超の高齢者、より詳細には70歳超の高齢者、より詳細には75歳超の高齢者、より詳細には80歳超の高齢者、である。
より詳細には、前記対象は
(1歳以上12歳未満の)子供、より詳細には3歳〜10歳の子供、
ティーンエイジャー(12歳以上18歳未満)、又は
妊娠中の女性、である。
【００７１】
有利には、前記対象は、胎児又は新生児又は乳児(1歳未満)ではない。
【００７２】
(向神経性)感染因子に感染している(又は、神経系が感染している)対象は、先天的に感染した対象であり得る。
【００７３】
換言すれば、(対象の神経系の)前記感染は、先天性感染、すなわち、ヒト胎児に母子感染し(又は、母子感染した可能性がある)、CNS及び/又はPNSに、より詳細には、ヒト胎児のCNSに侵入している(又は侵入している可能性がある)、微生物又はプリオンによる、より詳細には、ウイルスによる感染であり得る。
【００７４】
前記対象は、前記胎児から生まれた(少なくとも3歳の)ヒトであってもよい。
前記ウイルスは、例えば、CMV、より詳細にはHCMVであり得る。
前記ウイルスは、例えば、CHKVであり得る。
【００７５】
したがって、キット、シリーズ、組成物又は機能的組み合わせ
したがって、キット、シリーズ、組成物又は機能的組み合わせは、HCMVに感染している対象、特に子供において神経学的障害の診断に特に使用することができ、神経学的障害は、本発明による嗅覚機能不全又は変化として特定され、前記診断は、聴覚又は神経認知障害の発症リスクの診断である。
【００７６】
或いは、キット、シリーズ、組成物又は機能的組み合わせは、ZIKVに感染している対象、特に子供において神経学的障害の診断に特に使用することができ、神経学的障害は、本発明による嗅覚機能不全又は変化として特定され、前記診断は、神経認知障害の発症リスクの診断である。
【００７７】
(向神経性)感染因子に感染している(又は、神経系が感染している)対象は、神経学的障害又は神経変性の症状を示すことがあるか、又は神経学的障害又は神経変性の症状を全く示さないことがある。
有利には、本出願の嗅覚手段により、病理学的プロセスの初期段階で神経学的障害(又は神経変性)を検出することが可能となる。有利には、本出願の嗅覚手段により、病理学的プロセスの初期段階で、前記感染及び/又は前記神経学的障害又は神経変性に対する治療の適用が可能となる。
【００７８】
したがって、本明細書中に記載される種々の実施形態は、神経系が向神経性感染因子、より詳細には、CMV、HCMV又はZIKV等のウイルスに感染している対象、より詳細には、そのようなウイルスによる先天性感染に罹患した対象における神経学的障害をインビボ診断するのに使用するための、本明細書に開示されるキット、シリーズ、組成物又は機能的組み合わせであって、前記神経学的障害が嗅覚感度の変化の検出手段によって検出される、キット、シリーズ、組成物又は機能的組み合わせに関する。神経学的障害は、患者が神経感覚障害又は神経系疾患を発症するリスク又は予後と関連する可能性がある。
【００７９】
神経系が向神経性感染因子、特に、CMV、HCMV又はZIKV等のウイルスに感染している対象における、特に、そのようなウイルスによる先天性感染の結果としての、嗅覚感度の変化の早期検出のためのバイオマーカーを提供する、本明細書に開示される嗅覚手段の能力の観点から、本発明のキット、シリーズ、組成物又は機能的組み合わせの使用、又は前記感染を監視するための方法、特にその神経学的転帰を監視するための方法を提供する。
【００８０】
CMV、HCMV又はZIKVの感染が生じたことが知られているような場合、本発明による試験における嗅覚感度の変化を示す対象は、難聴の検出又はギラン-バレー症候群の検出へ向けられてもよい。
【００８１】
感染がCMV又はHCMV感染である場合、前記治療には、例えば、ガンシクロビル(9-[(1,3,-ジヒドロキシ-2-プロポキシ)メチル]グアニン、又はDHPG)及び/又はバルガンシクロビル(ガンシクロビルの経口バリンエステル)等の、ヌクレオシドグアノシンの非環式アナログ投与が含まれる。
【００８２】
神経学的障害又は神経変性が難聴である場合、前記治療は、例えば、(例えば、難聴の進行又は程度を低減又は制限することを意図することができる)補聴器の適用を含み得る。
【００８３】
本出願の嗅覚手段により、神経学的病理学的プロセスの発生又は進行を監視することが可能になり得る。したがって、この嗅覚手段により、このプロセスの初期段階(例えば、神経学的病理が確立される段階よりも早い段階、又は神経病理学的プロセスの最終段階よりも早い段階)を検出することが可能になり得る。
【００８４】
したがって、本出願の嗅覚手段は、病理学的過程のより早い段階又はより適切な段階で、対象が治療の緩和及び/又は治癒効果の恩恵を受けることにより、対象の治療を改善することができる。
【００８５】
本出願の嗅覚手段は、PCT国際出願WO2014/170206(PCT/EP2014/057277)又はその米国対応特許出願(例えば、US2016/0037494A1)に記載されているようなものであり得る。これらの出願の内容は、参照により本明細書に組み込まれる。より詳細には、嗅覚手段に関連する本出願の内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【００８６】
前記2種の、又は少なくとも2種の臭気物質は、(薬学的に許容される)ビヒクル、より詳細には、哺乳動物によって、又は少なくとも1つの哺乳類又は哺乳類種によって、有利には、少なくとも(健康な正常嗅覚の)ヒトによって、無臭であると知覚される(すなわち、嗅覚によって知覚される臭いや香りがない)ビヒクルとの混合物であり得る。有利には、前記ビヒクルは、前記2種の臭気物質それぞれ又は前記少なくとも2種の臭気物質それぞれによって放出される臭い又は香りを変えない。より詳細には、前記ビヒクルは、例えば溶媒、クリーム又はペースト等の前記2種又は少なくとも2種の臭気物質を一緒に均一に混合するのに、構造的に好適である。有利には、前記ビヒクルは(液体)溶媒である。より詳細には、前記ビヒクルは、水、鉱物油又はプロピレングリコール等の、無臭液体溶媒である。
【００８７】
本出願の各混合物又は組成物は、臭い又は香りを放出するための、より詳細には嗅覚試験のためのデバイス又は機器上に又はその中に含まれ得る。より詳細には、前記第1、第2及び第3の組成物は、それぞれ、鼻の化学的感覚能力を評価するための臭い放出デバイスに別々に収容されていてもよい。
【００８８】
本出願のデバイス又は機器は、このデバイス又は機器の中又は上に含まれる、本出願の混合物又は組成物によって発せられる臭い、香り又は匂いを放出するための構造を含む。より詳細には、本出願のデバイス又は機器の構造は、哺乳動物(より詳細にはヒト)が匂うこと又は嗅ぐことに、より詳細には、哺乳動物(より詳細にはヒト)が能動的に嗅ぐこと又は匂うことに適合するか、又は特に適合する。より詳細には、本出願のデバイス又は機器の構造は、哺乳動物(より詳細にはヒト)が、前記混合物又は組成物によって放出される臭気、香り又は匂いを[能動的に]嗅ぐこと又は匂うことができるように、に適合するか、又は特に適合する。
【００８９】
本出願のデバイス又は機器は、鼻の化学的感覚能力を評価するための臭い放出デバイスである。これは、完全に鼻の外又は鼻孔の外のデバイス若しくは機器、又は(部分的に)鼻の中又は鼻孔の中のデバイス若しくは機器として機能し得る。
【００９０】
臭い又は香りを放出するための、より詳細には嗅覚試験のためのデバイス又は機器は、当業者には入手可能である。これらの中には、
-  例えばSensonics社(P.O. Box 112 Haddon Heights, NJ 08035, USA)から「Smell Identification TestT」として市販されている「University of Pennsylvania Smell Identification Test」(UPSIT)[Dotyら1984, Physiol. Behav. 32: 489-502; Dotyら1984, Laryngoscope 94 (2Pt1): 176-178]、
-  その小スケール版である「Cross Cultural Smell Identification Test」(CC-SIT)[Dotyら1996, Laryngoscope 106 (3Pt1): 353-356]、
-  「Connecticut Chemosensory Clinical Research Center Test」(CCCRC)[Cainら1988, Laryngoscope 98:83-88; Cain 1989, Ear Nose Throat J. 68: 316, 322-328]、及び
-  例えばBurghardt Messtechnik社(Tinsdaler Weg 175, D-2280 Wedel, Germany;商品参照LA-13-00134, LA-13-00136, LA-13-00138, LA-13-00135及びLA-13-00137; http://www.burhart-mt.de)によって市販されている嗅覚試験バッテリー「SNIFFIN' STICKS(商標)」[Kobalら1996, Rhinology 34: 222-226、Hummelら1997, Chem. Senses 22: 39-52、Kobalら2000, Eur. Arch. Otorhinolaryngol. 257: 205-211、Hummelら2001, Ann. Otol. Rhinol. and Laryngol. 110: 976-981; Hummelら2007, Eur. Arch. Otorhinolaryngol. 364(3): 237-243]、において用いられている嗅覚デバイス又は機器が含まれる。
【００９１】
UPSIT及びCC-SIT試験等の試験において用いられる嗅覚デバイス又は機器は、複数のカード又は小冊子のページを含み、これらはそれぞれ、例えばバインダーでマイクロカプセル化することによってその中に埋め込まれた1種の臭気物質(又は対照物質)を含む。カード又はページの表面を引っ掻くことによって、臭気物質が放出される。
【００９２】
CCCRC試験等の試験に用いられる嗅覚デバイス又は機器は、例えばポリエチレンボトル等の複数のボトル又はジャーを含み、これらはそれぞれ、1種の臭気物質(又は対照物質)、例えば液体状態の臭気物質を含む。ボトル又はジャーには一般に、一方又は両方の鼻孔に適合し、嗅ぐユーザーに臭気物質を放出する飛び出し式の吐出口が設けられている。
【００９３】
SNIFFIN' STICKS(商標)試験等の試験で用いられる嗅覚デバイス又は機器は、キャップされた複数のフェルトチップペンを含み、これらはそれぞれ、ペンのフェルトチップに付随する貯蔵槽又は吸収材料の中に、1種の臭気物質(又は対照物質)を含む。ペンからキャップを取り外し、フェルトチップを鼻孔から数cm(例えば約2cm)のところに置き、フェルトチップを通して放出される臭気物質を匂い又は嗅ぐ。
【００９４】
したがって、本出願の嗅覚デバイス又は機器の例は、
-  任意選択により臭気物質をトラップするのに好適なマイクロカプセルを含むフィルター、カード又はページ等の吸収材料、より詳細には吸収性の繊維及び/又はセルロース材料、
-  ボトル又はジャー、例えば任意選択により一方又は両方の鼻孔に適合する飛び出し式の吐出口が設けられたポリエチレンボトル、
-  前記「SNIFFIN'STICKS(商標)」バッテリーのフェルトチップペン等のペン様放出デバイス、等の、臭気物質の貯蔵槽として、及び前記臭気物質のディスペンサーとして機能し得る任意の構造を含む。
【００９５】
有利には、デバイスの構造は、鼻の化学的感覚能力の評価、より詳細にはヒトの鼻の化学的感覚能力の評価に適合し、又は特に適合している。
【００９６】
したがって、本出願のキット、シリーズ、又は機能的組み合わせは、少なくとも2種又は3種の前記嗅覚デバイス又は機器(例えば、少なくとも2種又は3種の、前記「SNIFFIN'STICKS」バッテリーのフェルトチップペンのような、ペン様放出デバイス)を含み得る。第1の嗅覚デバイス又は機器は、前記第1の(臭気物質)組成物を含み得、第2の嗅覚デバイス又は機器は、第2の(臭気物質)組成物を含み得、(かつ第3の嗅覚デバイス又は機器は、前記第3の(臭気物質)組成物を含み得る)。
【００９７】
臭気物質は、臭い若しくは香りを発する任意の物質若しくは化合物、又は特有の匂いを有する任意の物質若しくは化合物である。臭い、香り又は匂いは、鼻孔を通して匂うこと、又は嗅ぐことにより哺乳動物によって意識的に知覚される(嗅覚認知)臭い、香り又は匂いである。
【００９８】
有利には、臭気物質は、前記哺乳動物によって、より詳細には臭気物質が意図しているヒト集団によって、より詳細にはヒトによって、より詳細には健康な正常嗅覚のヒトによって(嗅覚認知によって)特定することができる、物質又は化合物である。
【００９９】
臭気物質は、揮発性及び/又は疎水性、有利には揮発性かつ疎水性の物質又は化合物であり得る。
【０１００】
有利には、臭気物質は、一般に哺乳動物に、より詳細にはヒトに安全であると認められる物質又は化合物である。
【０１０１】
有利には、臭気物質は化合物、より詳細には単分子化合物である。
【０１０２】
本出願の1態様によれば、前記少なくとも2種の臭気物質のそれぞれ、より詳細には前記2種の臭気物質のそれぞれは、単分子化合物、より詳細にはヒトの嗅覚認知によって特定することができる単分子化合物、更により詳細には、揮発性、疎水性であって、(健康な正常嗅覚の)ヒトの嗅覚認知によって特定することができる単分子化合物、更にいっそうより詳細には、揮発性、疎水性であって、(健康な正常嗅覚の)ヒトの嗅覚認知によって特定することができ、一般にヒトに安全であると認められる単分子化合物である。
【０１０３】
「異なる臭気物質」という表現は、異なる臭い又は香りを発する臭気物質を意味する。したがって、ある臭気物質が、もう1つの臭気物質と異なるか、又は異なっていると知覚される臭い又は香りを発すれば、前記他の臭気物質と異なっている。より詳細には、臭気物質は、同じ哺乳動物の種又は種類に属する代表的な数の正常嗅覚の健康な哺乳動物(例えば、健康な正常嗅覚のヒト)の大多数が異なる臭い又は香りを発すると知覚すれば、もう1つの臭気物質と異なっている。より詳細には、ある臭気物質は、同じ哺乳動物の種又は種類に属する代表的な数の正常嗅覚の健康な哺乳動物の40%超が異なる臭い又は香りを発すると知覚すれば、もう1つの臭気物質と異なっている。より詳細には前記百分率は45%超、より詳細には50%超、より詳細には55%超、より詳細には60%超、より詳細には65%超である。同じ哺乳動物の種又は種類に属する正常嗅覚の健康な哺乳動物の代表的な数は、試験をする哺乳動物の種又は種類により、当業者によって決定することができる。そのような数は、一般に10を超え、より詳細には20を超える。
【０１０４】
本出願の1つの態様によれば、前記少なくとも2種の臭気物質のそれぞれ、より詳細には前記2種の臭気物質のそれぞれは、アニス、リンゴ、バナナ、キャラメル、チョコレート、シナモン、クローブ、ココア、ココナッツ、コーヒー、コーラ、ディル、ユーカリ、魚、花、蜂蜜、ニンニク、ショウガ、グレープフルーツ、草、ラベンダー、皮革、レモン、ライラック、スズラン、リコリス、メロン、ミント、マッシュルーム、タマネギ、オレンジ、モモ、ナシ、ペパーミント、パイナップル、バラ、スペアミント、ターペンタイン、ラズベリー、ゴマ油、燻製肉、醤油及びバニラからなる群から選択される、(健康な正常嗅覚のヒトによって知覚される)臭い又は香りを発する単分子化合物である。
【０１０５】
本出願の1つの態様によれば、前記少なくとも2種の臭気物質のそれぞれ、より詳細には前記2種の臭気物質のそれぞれはアニス、バナナ、クローブ、ディル及びスペアミントからなる群から選択される、(健康な正常嗅覚のヒトによって知覚される)臭い又は香りを発する単分子化合物である。
【０１０６】
そのような臭い又は香りを発する単分子化合物の例には、
-  スペアミントの臭い又は香りのためのR-カルボン(又はL-カルボン若しくはカルボン-)、
-  ディルの臭い又は香りのためのS-カルボン(又はD-カルボン若しくはカルボン+)、
-  バナナの臭い又は香りのためのイソアミルアセテート又はn-ブタノール、より詳細にはイソアミルアセテート、
-  アニスの臭い又は香りのためのアネトール、
-  クローブの臭い又は香りのためのオイゲノール、
-  バラの臭い又は香りのための2-フェニルエタノール、
-  バラの臭い又は香りのためのゲラニオール、
-  スズランの臭い又は香りのためのリナロール、
-  ユーカリの臭い又は香りのためのシネオール、
-  オレンジの臭い又は香りのためのD-リモネン(又はR-リモネン若しくはリモネン+)、
-  オレンジの臭い又は香りのためのD-リモネン(又はS-リモネン若しくはリモネン+)、
-  ミントの臭い又は香りのためのメントール、及び
-  シナモンの臭い又は香りのためのシナモンアルデヒド、が含まれる。
【０１０７】
そのような臭い又は香りを発する単分子化合物の例には、より詳細には、-スペアミントの臭い又は香りのためのR-カルボン(又はL-カルボン若しくはカルボン-)、
-  ディルの臭い又は香りのためのS-カルボン(又はD-カルボン若しくはカルボン+)、
-  バナナの臭い又は香りのためのイソアミルアセテート又はn-ブタノール、より詳細にはイソアミルアセテート、
-  アニスの臭い又は香りのためのアネトール、及び
-  クローブの臭い又は香りのためのオイゲノール、が含まれる。
【０１０８】
例えばArctander atlas (Arctander S.「Perfume and flavor chemicals: (aroma chemicals)」、Allured Publishing Corporation、Carol Stream IL, 1994)を参照されたい。
またhttp://senselab.med.yale.edu/odordb/eavObList.aspx?db=5&cl=1で入手可能なOdorDB database (Yale Center for Medical Informatics、U.S.A.)を参照されたい。
本出願の1つの態様によれば、前記少なくとも2種の臭気物質のそれぞれ、より詳細には前記2種の臭気物質のそれぞれは、R-カルボン、S-カルボン、イソアミルアセテート、アネトール及びオイゲノールからなる群から選択される、単分子化合物である。
【０１０９】
上述のように、前記少なくとも2種の臭気物質のそれぞれ、又は上記2種の臭気物質のそれぞれは、相互に異なっている。例えば、
-  前記少なくとも2種の、又は前記2種の臭気物質の一方はスペアミントの臭い又は香りを発する単分子化合物(例えばR-カルボン)であり、前記少なくとも2種の、又は前記2種の臭気物質の他方は:
ディルの臭い若しくは香りを発する単分子化合物(例えばS-カルボン)又は、
バナナの臭い若しくは香りを発する単分子化合物(例えばイソアミルアセテート)又は、
アニスの臭い若しくは香りを発する単分子化合物(例えばアネトール)又は、
クローブの臭い若しくは香りを発する単分子化合物(例えばオイゲノール)、
或いは
-  前記少なくとも2種の、又は前記2種の臭気物質の一方はディルの臭い又は香りを発する単分子化合物(例えばS-カルボン)であり、前記少なくとも2種の、又は前記2種の臭気物質の他方は:
スペアミントの臭い若しくは香りを発する単分子化合物(例えばR-カルボン)又は、
バナナの臭い若しくは香りを発する単分子化合物(例えばイソアミルアセテート)又は、
アニスの臭い若しくは香りを発する単分子化合物(例えばアネトール)又は、
クローブの臭い若しくは香りを発する単分子化合物(例えばオイゲノール)、
或いは
-  前記少なくとも2種の、又は前記2種の臭気物質の一方はバナナの臭い又は香りを発する単分子化合物(例えばイソアミルアセテート)であり、前記少なくとも2種の、又は前記2種の臭気物質の他方は:
ディルの臭い若しくは香りを発する単分子化合物(例えばS-カルボン)又は、
スペアミントの臭い若しくは香りを発する単分子化合物(例えばR-カルボン)又は、
アニスの臭い若しくは香りを発する単分子化合物(例えばアネトール)又は、
クローブの臭い若しくは香りを発する単分子化合物(例えばオイゲノール)、
或いは
-  前記少なくとも2種の、又は前記2種の臭気物質の一方はアニスの臭い又は香りを発する単分子化合物(例えばアネトール)であり、前記少なくとも2種の、又は前記2種の臭気物質の他方は:
ディルの臭い若しくは香りを発する単分子化合物(例えばS-カルボン)又は、
バナナの臭い若しくは香りを発する単分子化合物(例えばイソアミルアセテート)又は、
スペアミントの臭い若しくは香りを発する単分子化合物(例えばR-カルボン)又は、
クローブの臭い若しくは香りを発する単分子化合物(例えばオイゲノール)、
或いは
-  前記少なくとも2種の、又は前記2種の臭気物質の一方はクローブの臭い又は香りを発する単分子化合物(例えばオイゲノール)であり、前記少なくとも2種の、又は前記2種の臭気物質の他方は:
ディルの臭い若しくは香りを発する単分子化合物(例えばS-カルボン)又は、
バナナの臭い若しくは香りを発する単分子化合物(例えばイソアミルアセテート)又は、
アニスの臭い若しくは香りを発する単分子化合物(例えばアネトール)又は、
スペアミントの臭い若しくは香りを発する単分子化合物(例えばR-カルボン)である。
【０１１０】
例えば、前記少なくとも2種の、又は前記2種の臭気物質の一方はスペアミントの臭い又は香りを発する単分子化合物(例えばR-カルボン)であり、前記少なくとも2種の、又は前記2種の臭気物質の他方は、ディルの臭い又は香りを発する単分子化合物(例えばS-カルボン)である。
【０１１１】
例えば、前記少なくとも2種の、又は前記2種の臭気物質の一方はバナナの臭い又は香りを発する単分子化合物(例えばイソアミルアセテート)であり、前記少なくとも2種の、又は前記2種の臭気物質の他方は、アニスの臭い又は香りを発する単分子化合物(例えばアネトール)である。
【０１１２】
例えば、前記少なくとも2種の、又は前記2種の臭気物質の一方はアニスの臭い又は香りを発する単分子化合物(例えばアネトール)であり、前記少なくとも2種の、又は前記2種の臭気物質の他方は、クローブの臭い又は香りを発する単分子化合物(例えばオイゲノール)である。
【０１１３】
本出願の混合物又は組成物において、前記少なくとも2種の臭気物質、又は前記2種の臭気物質は、当業者が適切と見出す任意の割合で混合物中に含まれる。
【０１１４】
例えば、前記少なくとも2種の臭気物質、又は前記2種の臭気物質は、本出願の混合物又は組成物中に1:1〜1:5の範囲の割合で、より詳細には1:1.5〜1:4の範囲の割合で、例えば1:1.5、1:2、1:2.5、1:3、1:3.5又は1:4の割合で含まれる。「X:Y」の割合は、前記少なくとも2種の、又は前記2種の臭気物質の一方のX部に対する、前記少なくとも2種の、又は前記2種の臭気物質の他方のY部を意味する(X及びYは同一でも異なっていてもよい)。前記部の値は体積部又は重量部であり、より詳細には体積部である。
【０１１５】
例えば、前記少なくとも2種の臭気物質、又は前記2種の臭気物質は、本出願の混合物又は組成物中に0.8%/0.2%〜0.2%/0.8%〜0.2%/0.8%の範囲の割合で、より詳細には0.6%/0.4%〜0.4%/0.6%の範囲の割合で、例えば0.8%/0.2%、0.6%/0.4%、0.4%/0.6%又は0.2%/0.8%の割合で含まれる。「X%/Y%」の割合は、前記少なくとも2種の、又は前記2種の臭気物質の一方のX%に対して前記少なくとも2種の、又は前記2種の臭気物質の他方のY%を意味する。臭気物質の%値は、前記混合物中の混合物の全体積又は全重量、より詳細には前記混合物の全体積に対して表された、前記臭気物質の体積又は重量、より詳細には体積である。
【０１１６】
例えば、前記少なくとも2種の臭気物質、又は前記2種の臭気物質は、本出願の混合物又は組成物中に8/2〜2/8の範囲の割合で、より詳細には6/4〜4/6の範囲の割合で、例えば8/2、6/4、4/6又は2/8の割合で含まれる。「X/Y」の割合は、前記少なくとも2種の、又は前記2種の臭気物質の一方の濃度Xに対して、前記少なくとも2種の、又は前記2種の臭気物質の他方の濃度Yを意味する。X及びYの濃度は同じ単位で、例えば体積/体積パーセントで、体積/重量パーセントで、又は重量/重量パーセントで、より詳細には体積/体積パーセントで表され、前記混合物中の混合物の全体積又は全重量、より詳細には前記混合物の全体積に対して表される。
【０１１７】
例えば、前記少なくとも2種の、又は前記2種の臭気物質の一方はスペアミントの臭い又は香りを発する単分子化合物(例えばR-カルボン)であり、前記少なくとも2種の、又は前記2種の臭気物質の他方は、ディルの臭い又は香りを発する単分子化合物(例えばS-カルボン)であり、これらの2種の臭気物質は、前記第1の組成物中に2/8の割合で、前記第2の(又は第2及び第3の)組成物中に8/2の割合で含まれる。
【０１１８】
例えば、前記少なくとも2種の、又は前記2種の臭気物質の一方はバナナの臭い又は香りを発する単分子化合物(例えばイソアミルアセテート)であり、前記少なくとも2種の、又は前記2種の臭気物質の他方は、アニスの臭い又は香りを発する単分子化合物(例えばアネトール)であり、これらの2種の臭気物質は、前記第1の組成物中に8/2の割合で、前記第2の(又は第2及び第3の)組成物中に2/8の割合で含まれる。
例えば、前記少なくとも2種の、又は前記2種の臭気物質の一方はアニスの臭い又は香りを発する単分子化合物(例えばアネトール)であり、前記少なくとも2種の、又は前記2種の臭気物質の他方は、クローブの臭い又は香りを発する単分子化合物(例えばオイゲノール)であり、これらの2種の臭気物質は、前記第1の組成物中に8/2の割合で、前記第2の(又は第2及び第3の)組成物中に2/8の割合で含まれる。
【０１１９】
本出願のキット、シリーズ又は(機能的な)組み合わせでは、前記複数の(異なる)混合物又は組成物は、互いに区別されている(区別されたままである)か、又は互いに別にされている(別にされたままである)。したがって、それらが臭い又は香りを放出するためのデバイス又は機器の中又は上に含まれる場合、それらは一緒に混合されない。それらは同じデバイス又は機器の中に含まれていない。例えば、前記いくつかの混合物又は組成物のそれぞれは、上記のように(及び以下に示すように)鼻の化学的感覚能力を評価するための臭い放出デバイスに別々に収容されている。
【０１２０】
臭気物質は、同一のキット、シリーズ又は(機能的)組み合わせ、又は使用(若しくはアッセイ)に属する各混合物又は組成物において同じ臭気物質である、すなわち、それらは同じ物質又は化合物である。
【０１２１】
前記いくつかの混合物又は組成物のうちの少なくとも1つは、同じキット、シリーズ又は(機能的)組み合わせ又は使用(アッセイ)の他の混合物又は組成物とは異なる割合で、前記臭気物質を含有する。
【０１２２】
したがって、キット、シリーズ又は(機能的な)組み合わせ又はアッセイの第1の組成物における前記(少なくとも)2種の臭気物質のうちの一方に対する前記少なくとも2種の臭気物質の他方に対する割合は、同一のキット、シリーズ又は(機能的な)組み合わせ又は使用(アッセイ)の少なくとも1つの第2の組成物における割合と異なっている。
【０１２３】
例えば、前記少なくとも1つの第1の混合物又は組成物中の少なくとも1つの臭気物質の濃度は、前記少なくとも1つの第2の混合物又は組成物におけるその割合とは異なっている。
【０１２４】
例えば、少なくとも1つの第1の混合物又は組成物中の(少なくとも2種の)臭気物質のそれぞれの濃度は、少なくとも1つの第2の混合物又は組成物におけるそれぞれの濃度とは異なっている。
【０１２５】
本出願の有利な態様によれば、前記少なくとも1つの第1の組成物及び前記少なくとも1つの第2の組成物は、逐次使用のためのものであり、より詳細にはヒト、より詳細には罹患したヒトにおける嗅覚識別障害の検出における逐次使用のためのものである。
【０１２６】
本出願のキット、シリーズ又は(機能的)組み合わせ又は使用若しくはアッセイは、当業者が適切であると見出す本出願の任意の数の混合物又は組成物を含み得る。本出願のキット、シリーズ又は(機能的)組み合わせ又は使用若しくはアッセイは、本出願の2種又は3種の混合物又は組成物を含み得る。
【０１２７】
例えば、本出願のキット、シリーズ又は(機能的)組み合わせ又は使用は、互いに区別されているか、又は分離している、2種又は3種の本出願の混合物又は組成物を含み、前記2種又は3種の混合物又は組成物の臭気物質は同じであるが、前記2種又は3種の混合物又は組成物のうちの1つに、残りの1つ又は2種の混合物又は組成物と異なる割合で、含まれる。本出願の混合物又は組成物の数が3種の場合、前記残り2種の混合物又は組成物は同一、すなわち重複であってもよい。
【０１２８】
有利には、同じキット、シリーズ又は(機能的な)組み合わせ又は使用内での割合の差は、健康な正常嗅覚のヒトが区別し得るのに十分である。同じキット、シリーズ又は(機能的な)組み合わせ又は使用の他の混合物又は組成物とは異なる割合で前記臭気物質を含む少なくとも1つの混合物又は組成物は、同じキット、シリーズ又は(機能的な)組み合わせ又は使用の他の混合物又は組成物によって発せられる臭い又は香りとは異なる臭い又は香りを放出するものとして意識的に知覚される(嗅覚認知)。
【０１２９】
例えば、本出願のキット、シリーズ又は(機能的)組み合わせ又は使用は、互いに区別されているか、又は分離している、(少なくとも)2種の本出願の混合物又は組成物を含み、前記(少なくとも)2種の混合物又は組成物のそれぞれの臭気物質は、同一の2種又は同一の少なくとも2種の臭気物質であり、前記2種の、又は前記少なくとも2種の臭気物質の一方は前記(少なくとも)2種の混合物又は組成物の一方に8/2の割合で含まれ、一方、前記2種の、又は前記少なくとも2種の臭気物質の他方は、前記(少なくとも)2種の混合物又は組成物の他方に2/8の割合で含まれる。
【０１３０】
例えば、本出願のキット、シリーズ又は(機能的)組み合わせ又は使用は、互いに区別されているか、又は分離している、3種の本出願の混合物又は組成物を含み(前記3種の混合物又は組成物のうち2種は上述のように重複した組成物である)、前記3種の混合物又は組成物のそれぞれの臭気物質は、同一の2種又は同一の少なくとも2種の臭気物質であり、前記2種の、又は前記少なくとも2種の臭気物質の一方は前記3種の混合物又は組成物の一方に8/2の割合で含まれ、一方、前記2種の、又は前記少なくとも2種の臭気物質の他方は、他の2種の(重複した)混合物又は組成物のそれぞれに2/8の割合で含まれる。
【０１３１】
例えば、本出願のキット、シリーズ又は(機能的)組み合わせ又は使用は、互いに区別されているか、又は分離している、(少なくとも)2種の本出願の混合物又は組成物を含み、前記(少なくとも)2種の混合物又は組成物のそれぞれの臭気物質は、同一の2種又は同一の少なくとも2種の臭気物質であり、前記2種の、又は前記少なくとも2種の臭気物質の一方は前記(少なくとも)2種の混合物又は組成物の一方に6/4の割合で含まれ、一方、前記2種の、又は前記少なくとも2種の臭気物質の他方は、前記(少なくとも)2種の混合物又は組成物の他方に4/6の割合で含まれる。
【０１３２】
例えば、本出願のキット、シリーズ又は(機能的)組み合わせ又は使用は、互いに区別されているか、又は分離している、3種の本出願の混合物又は組成物を含み(前記3種の混合物又は組成物のうち2種は上述のように重複した組成物である)、前記3種の混合物又は組成物のそれぞれの臭気物質は、同一の2種又は同一の少なくとも2種の臭気物質であり、前記2種の、又は前記少なくとも2種の臭気物質の一方は前記3種の混合物又は組成物の一方に6/4の割合で含まれ、一方、前記2種の、又は前記少なくとも2種の臭気物質の他方は、他の2種の(重複した)混合物又は組成物のそれぞれに4/6の割合で含まれる。
【０１３３】
例えば、本出願のキット、シリーズ又は(機能的)組み合わせ又は使用は、互いに区別されているか、又は分離している、(少なくとも)2種の本出願の混合物又は組成物を含み、前記(少なくとも)2種の混合物又は組成物のそれぞれの臭気物質は、混合物中のR-カルボン及びS-カルボンであり、前記(少なくとも)2種の混合物又は組成物の一方はR-カルボン及びS-カルボンを8/2の割合で含み、一方、前記(少なくとも)2種の混合物又は組成物の他方は、R-カルボン及びS-カルボンを2/8の割合で含む。
【０１３４】
例えば、本出願のキット、シリーズ又は(機能的)組み合わせ又は使用は、互いに区別されているか、又は分離している、3種の本出願の混合物又は組成物を含み(前記3種の混合物又は組成物のうち2種は上述のように重複した組成物である)、前記3種の混合物又は組成物のそれぞれの臭気物質は、混合物中のR-カルボン及びS-カルボンであり、前記3種の混合物又は組成物の一方はR-カルボン及びS-カルボンを8/2の割合で含み、一方、他の2種の(重複した)混合物又は組成物のそれぞれは、R-カルボン及びS-カルボンを2/8の割合で含む。
【０１３５】
例えば、本出願のキット、シリーズ又は(機能的)組み合わせ又は使用は、互いに区別されているか、又は分離している、(少なくとも)2種の本出願の混合物又は組成物を含み、前記(少なくとも)2種の混合物又は組成物のそれぞれの臭気物質は、混合物中のイソアミルアセテート及びアネトールであり、前記(少なくとも)2種の混合物又は組成物の一方はイソアミルアセテート及びアネトールを8/2の割合で含み、一方、前記(少なくとも)2種の混合物又は組成物の他方は、イソアミルアセテート及びアネトールを2/8の割合で含む。
【０１３６】
例えば、本出願のキット、シリーズ又は(機能的)組み合わせ又は使用は、互いに区別されているか、又は分離している、3種の本出願の混合物又は組成物を含み(前記3種の混合物又は組成物のうち2種は上述のように重複した組成物である)、前記3種の混合物又は組成物のそれぞれの臭気物質は、混合物中のイソアミルアセテート及びアネトールであり、前記3種の混合物又は組成物の一方はイソアミルアセテート及びアネトールを8/2の割合で含み、一方、他の2種の(重複した)混合物又は組成物のそれぞれは、イソアミルアセテート及びアネトールを2/8の割合で含む。
【０１３７】
例えば、本出願のキット、シリーズ又は(機能的)組み合わせ又は使用は、互いに区別されているか、又は分離している、(少なくとも)2種の本出願の混合物又は組成物を含み、前記(少なくとも)2種の混合物又は組成物のそれぞれの臭気物質は、混合物中のアネトール及びオイゲノールであり、前記(少なくとも)2種の混合物又は組成物の一方はアネトール及びオイゲノールを8/2の割合で含み、一方、前記(少なくとも)2種の混合物又は組成物の他方は、アネトール及びオイゲノールを2/8の割合で含む。
【０１３８】
例えば、本出願のキット、シリーズ又は(機能的)組み合わせ又は使用は、互いに区別されているか、又は分離している、3種の本出願の混合物又は組成物を含み(前記3種の混合物又は組成物のうち2種は上述のように重複した組成物である)、前記3種の混合物又は組成物のそれぞれの臭気物質は、混合物中のアネトール及びオイゲノールであり、前記3種の混合物又は組成物の一方はアネトール及びオイゲノールを8/2の割合で含み、一方、他の2種の(重複した)混合物又は組成物のそれぞれは、アネトール及びオイゲノールを2/8の割合で含む。
【０１３９】
本出願の混合物又は組成物、より詳細には本出願のキット、シリーズ若しくは(機能的な)組み合わせ若しくは使用、又は本出願のキット、シリーズ若しくは(機能的な)組み合わせの集合体は、当業者が嗅覚能力を測定するため、より詳細には嗅覚障害を検出及び/又は測定するために適切と見出す少なくとも1つの追加的な手段、デバイス、機器、組成物、物質又は化合物等の他の任意の追加的な要素と更に機能的に組み合わせてもよく、又はこれらの任意の追加的な要素を更に含んでもよい。
【０１４０】
例えば、前記追加的な要素は、哺乳動物又はヒト、より詳細には罹患した哺乳動物又はヒトの嗅覚検知閾値を測定するための手段であってよい。
【０１４１】
嗅覚検知閾値を測定するための手段は、例えば複数の組成物を含んでもよく、前記複数の組成物のそれぞれが1種のみの臭気物質を含み、前記複数の組成物の全てが同一の1種の臭気物質を含み、前記同一の1種の臭気物質の段階希釈を形成する。
【０１４２】
前記臭気物質は上で定義されたものであり得る。例えば、前記臭気物質は、n-ブタノール又は2-フェニルエタノールであり得る。Hummelら1997,Chem.Senses22:39-52を参照されたい。
【０１４３】
「含む(comprising)」という用語は、「含む(including)」又は「含む(containing)」と同義でオープンエンドであり、追加の、列挙していない要素、成分又は方法工程を排除せず、一方、「からなる(consistingof)」という用語はクローズドタームであり、明確に列挙していない、いかなる追加の要素、工程、又は成分をも排除する。
【０１４４】
「本質的に〜からなる(essentially consistingof)」という用語は、部分的オープンタームであり、追加の要素、工程又は成分が本発明の基礎的で新規な特性に実質的に影響しない限り、追加の列挙されていない要素、工程又は成分を排除しない。
【０１４５】
したがって、「含む(comprising)」(又は「含む(comprise(s))」)という用語は、「からなる(consisting of)」(「からなる(consist(s) of)」)という用語、並びに「本質的に〜からなる(essentially consisting of)」(essentially consist(s) of)という用語を含んでいる。したがって、本出願において、「含む(comprising)」(又は「含む(comprise(s))」)という用語は、より詳細には「からなる(consisting of)」(「からなる(consist(s) of)」)という用語、並びに「本質的に〜からなる(essentially consistingof」(「本質的に〜からなる(essentially consist(s) of)」)という用語を包含することを意味する。
【０１４６】
本出願の読者を助けるため、本明細書は種々のパラグラフ又はセクションに分けてある。これらの分離は、あるパラグラフ又はセクションの内容を別のパラグラフ又はセクションの内容から切り離すものと考えるべきではない。それと反対に、本明細書は種々のセクション、パラグラフ及び文の意図し得る全ての組み合わせを包含する。
【０１４７】
本明細書に引用した全ての参考文献の関連する開示のそれぞれは、参照により具体的に組み込まれる。以下の実施例は、例示として提示され、限定として提示されるものではない。
【実施例】
【０１４８】
神経変性は、先天性サイトメガロウイルス(CMV)及びジカウイルス(ZIKV)等の多くの向神経性ウイルス及び細菌による感染の共通の特徴でもある。先天性CMV及びZIKVは、胎児及び新生児の重篤な後遺症、及び治療の欠如により、重大な公衆衛生問題である。先進国では、新生児の1%がCMV感染しており、神経認知障害及び感覚神経障害を発症する危険性がある。フランス領ポリネシアでのZIKVの流行中に、ZIKVに感染した母親からの胎児及び新生児における小頭症の頻度は、約1%であった。更に、成人のZIKV感染後において、ギラン-バレー症候群等の重度の神経性合併症が見出された(Watrinら、2016)。
【０１４９】
今日まで、これらのウイルス感染に対する有害な神経学的転帰の機序、バイオマーカー及び生物学的予測因子は、あまり知られていないままである。我々は、先天性CMV又はZIKV感染が嗅覚に及ぼす影響を調べた研究は、これまでにないと考えている。我々の仮説は、神経浸潤、神経変性及び嗅覚障害との間に関連が存在する可能性があり、かつ嗅覚障害は、これらの感染症の可能性のある神経学的転帰の臨床的マーカーであり得るという仮説である。
【０１５０】
(実施例1)
先天性サイトメガロウイルス(CMV)感染のマウスモデル
サイトメガロウイルス(CMV)は、重度の母子感染を引き起こし、先天性感染後の数年後に現れる場合がある重度の難聴を含む感覚神経障害をもたらす(Williamson W. D.ら、1992)。ヒト胎児では、CMV感染は不可逆的な嗅球(OB)損傷をもたらす(Tessier N.ら、2014)。ここでは、先天性マウスCMVがOBを攻撃し、マウスにおいて主要な嗅覚障害をもたらすことを示す。OBに対する感覚入力は変化しないが、CMVはOB糸球体のサイズを減少させ、OB中のドーパミン作動性細胞を枯渇させ、神経原性脳室下帯(SVZ)において細胞増殖を低下させる。嗅覚測定実験は、嗅覚の変化、特に、特に単分子臭気物質の二成分混合物の細部嗅覚識別の欠如を明らかにする。ヒトとマウスの間の脳の神経新生の違いにもかかわらず(Lui J. H.ら、2014)、これらの知見はともに、先天的感染によって引き起こされるCMV関連神経機能不全の早期検出を目指す新しい戦略を提供する。
【０１５１】
集団間におけるヘルペスウイルス5型又はCMVの高い血清有病率は、胎児及び新生児の重篤な後遺症の可能性、及びこれまでのワクチン又は治療薬の不在のために、重大な公衆衛生上の問題を構成する(Fowler K. B.ら、2006、Manicklal S.ら、2013)。CMVは体液を介して感染し、感染は通常無症候性であるか、又は母親から胎児に感染する場合を除いて、インフルエンザ型の症状を呈することがある。CMVは、トキソプラズマ症、リステリア、風疹、単純ヘルペス及び最近ではジカウイルス(Coyne C.B.ら、2016)を含む、胎児/新生児の脳に影響を及ぼし、子宮内又は腹腔内で感染する、TORCHクラスの最も一般的な病原体に属する。先進国では、今日まで、CMV感染が先天性奇形の第1原因である。子宮内感染では、末梢及び中枢神経系に造血細胞損傷及び神経幹細胞損傷を与える可能性がある(Tsutsui, Y.、2009、Teissier, N.ら、2011、Sakao-Suzuki, M.ら、2014)。先進国では、成人の50〜85%が40歳前に感染している(Cannon, M. J.ら、2010)。新生児の1%がCMVに感染しており、学習障害や難聴を発症するリスクが高いため、長期のフォローアップが必要となる(Williamson, W. D.ら、1992、Townsend, C. L.ら、2013)。
【０１５２】
今日まで、神経感覚後遺症の予後診断ツールはごくわずかしか開発されておらず、それらには、巨視的な脳の異常及び出生時のウイルス負荷の超音波検査が含まれる(Forner, G.ら、2015)。CMVは、造血前駆体(Ibanez, C. E.ら、1991、Cloarec R.ら、2016)及び胎児の嗅覚系の神経幹細胞(Teissier, N.ら、(2014)、van Den Polら、1999、Odeberg J.ら、2006)に対する向性を示し、したがってOBを損傷させるが、ウイルスが嗅覚に及ぼす影響を調べた研究は、これまでにない。他の研究では、神経毒性及びウイルス性病変によって引き起こされる嗅覚障害が報告されている(Lazarini, F.ら、2014; Khodosevich, K.ら、2013)。嗅覚障害は神経学的障害に先行し、嗅覚はパーキンソン病と最もよく相関する(Godoy, M. D.ら、2015; Nalls, M. A.ら、2015)。後者では、OB変性が黒質変性と症状の両方に先行するという証拠があるので、嗅覚低下はOB中の神経変性を部分的に反映している可能性がある(Braak, H.ら、2002)。このため、嗅覚障害の早期検出は、先天性CMV感染の貴重な予後診断ツールとなり得る。
【０１５３】
我々は、先天性CMV感染の動物モデルにおける嗅覚を調べた。このモデルは、妊娠中のOncins France 1(OF1)マウスに、深麻酔下でマウスCMVの胎内胎盤内接種を介することにより達成した(図1a)(Tsutsui Y、2009、Sakao-Suzukiら、2014)。このモデルは、先天性CMV感染を有する乳児において観察されるものを連想させる難聴表現型及び脳の変化を誘発することが確認された。聴性脳幹反応(ABR)の記録は、成体感染マウスにおいて、聴力閾値が約20dB増加することを示す(図1e、参照(Woolf, N. K.ら、1989; Juanjuan, C.ら、2011、Schachtele, S. J. 2011)と一致する)。
【０１５４】
同様に、CMVに感染したマウスは、隠れた食物の探索が低下していることを示すが(図2a)、食物が目に見える場合には探索の低下を示していない(図2b)。CMVによって、臭気物質の検知、識別、及び/又は学習の3種の嗅覚的次元が損なわれる可能性がある。それらがCMV感染に対して同等に感受性であるかどうかを特定するために、先天性感染マウスを、自動オルファクトメーターを用いて試験した(図2c-e)。
【０１５５】
我々は、自動オルファクトメーターにおけるオペラント識別パラダイムを用いて、臭いの知覚、識別及び記憶を評価した。CMV感染マウスの嗅覚の変化が見出された。更に、先天性CMV感染が、臭気物質、より詳細には、単分子臭気物質の二成分混合物の識別を破壊することが見出された。
【０１５６】
これらのデータにより、我々は、二成分臭気物質混合物の識別の評価に基づいて、神経疾患の早期検出及び治療のための嗅覚試験を提案することができた。この試験は非侵襲的で、子供でも使いやすく、速く(約15分)実施される。
【０１５７】
実験設計-材料及び方法
Charles Rivers社製のOF1妊娠マウスの仔に、Sakao-Suzukiらが記載したように、胎生13日目に、10(4.75)TCID 50/0.2mlのマウスCMV(Smith株、ATCC-VR1399)又はPBSを、麻酔(イソフルラン)下にて接種した。聴覚誘発電位を用いて難聴を評価した。
【０１５８】
次いで、これらのマウスのうち13匹(11匹のCMV感染雄マウス及びPBSを受けた2匹の偽マウス)並びに(CMV感染マウスと同じ年齢の)9匹の対照雄動物の嗅覚能力を、先に記載したように(Siopiら、2016)、特注のオルファクトメーターによって評価した。実験のタイムテーブルを図1に示す(E:胚; W:週)。2匹の偽マウスの結果を、9匹の対照マウスの結果と共にプールした。
【０１５９】
データ分析及び統計
GraphPad Prism(GraphPad Software社、USA)を用いてデータを分析した。結果は平均±s.e.mを示す。各実験の統計的検定及びサンプルサイズ(n)は、図の凡例に明記している。各実験(評価されたパラメータ、比較、正確なP値、自由度)についての完全な統計分析を表A及びBに示す。正規分布データは、対応のない両側スチューデントt検定及び2元配置規則又は反復測定分散分析(ANOVA)によって適宜分析した。非正規分布データは、ゲーハン-ブレスロウ-ウィルコクソン検定又はマン-ホイットニー検定によって適宜分析した。サンプルサイズを事前に決定するために統計的方法は用いなかったが、これは以前の出版物と一致する。
【０１６０】
聴性脳幹反応(ABR)
難聴はABR(OtoPhylab、RT Conception社、France)(Nguyen,U.ら、2009、Scimemi,P.ら、2014)を用いて評価した。針電極を、ケタミン(40mg/kg)及びキシラジン(4mg/kg)による麻酔下にて、皮下に配置した。参照電極は、耳の耳介下に、外側電極は頸部の皮膚下に、及び活性電極は背部の皮膚下に挿入した。適切なイヤープラグを備えたヘッドフォンを、音響トランスデューサとして使用した。クリックは12〜30Hzの範囲で与えた。フィルター設定は150〜3000Hzであった。1000回の掃引(sweep)からの応答を各強度レベルで平均した。まず、クリック強度は、音圧レベル(SPL)20dB又は10dBステップだけ下げて、次にSPL 5dBステップ下げて閾値付近にした。高強度刺激(>45dB)のために対側聴覚マスキングを使用した。
【０１６１】
閾値は、誘発トレースにおいて明確なIV波形が目に見える最も低い強度として定義し、マウス群の盲検応答の目視検査によって決定した。
【０１６２】
超音波の発声の記録及び分析
超音波コールの記録は、参照Lemassonら(2005)に記載のオルファクトメーター(www.olfacto-meter.com)の特注測定チャンバアイソレータに仔を配置してから30秒後に開始された。超音波発声は、超音波音を可聴周波数範囲に変換するバット検出器(周波数範囲10〜130kHz、Magenta BAT5デジタルバット検出器、RSPB社、英国)に接続された超音波マイクロフォンを用いて検出した。検出器の広帯域60kHz出力を使用して、Audacityオープンソフトウェア(www.audacityteam.org)を使用して、超音波コールをサンプリングし、記録し、分析した。超音波放出は、3種の連続した試験期間、すなわち、臭気物質なし(1分)の第1期間、社会的臭気物質(social odorant)又は非社会的臭気物質に暴露する第2期間(1分)、及び排気臭を用いた最終期間(1分30秒)の間に、オルファクトメーターに仔を5分間の孤立させた時間中に記録した社会的臭気物質は、6匹の慣れていない成体の雄OF1マウスの群の汚れた床敷10gからの雄の香りである。非社会的臭気物質は、シトラール(Sigma社)の10%液体鉱油希釈液10mlからの臭気香である。試験後、仔は直ちに母親のところに戻された。超音波放出の平均速度(コール/分)を各時間ブロックについて算出した。
【０１６３】
嗅覚試験
臭気物質。臭気物質は全て、シグマアルドリッチ(SIGMA-ALDRICH CHEMIE S.A.R.L.、L'Isle d'Abeau Chesnes、38297 Saint-Quentin Fallavier、France)製の単分子化合物であり、以下に示すように水又は鉱油に溶解させた。
n-ブタノールは不快な香り又は臭いがある。
【０１６４】
D-リモネンはオレンジの香り又は臭いを有する、シトロネラールはシトロネラの香り又は臭いを有する、アネトールはアニス(aneth)(又はanise)の香り又は臭いを有する、イソアミルアセテート(IAA)はバナナの香り又は臭いを有する。
【０１６５】
埋め込み食物探査試験
嗅覚を評価するために、記載されているように(Lazarini F.ら、2012)、食物欠乏の20時間後に埋め込み食物探査試験を用いた。テストケージの角部の床敷の下に、約10片の「Coco Pops」シリアルを隠した。マウスを反対側の角部に置き、15分以内で、食物を見つけるための潜時を記録した(シリアルを見つけて掘り出し始める時間と定義した)。13分後、マウスに、同じ試験であるが、床敷の上に配置された目に見えるcoco popsを用いて試験を行った。
【０１６６】
自動オルファクトメーター。マウスに1〜2mL/日の水を1週間与えることによって部分的水欠乏状態にし、次いで、特注の測定チャンバアイソレータ付きのコンピューター制御4チャネルのオルファクトメーターで、「ゴー-ノーゴー」識別課題について訓練した(図2参照)。臭気物質サンプリングポートの外(距離5cm)に設けられた送水チューブをなめることによって、臭気物質(正の刺激、S+)の提示に反応するように、マウスを訓練した。また、別の臭気物質又は溶媒(負の刺激、S-)の提示には反応しないようにマウスを訓練した。各試行において、単一の刺激(S+又はS-)を無作為に提示した。20回の試行の各シリーズは、10回の報酬臭気物質の提示と、10回の非報酬臭気物質の提示とを含む。S+試行後のなめ応答とS-試行後の非なめ応答を正答と採点し、それぞれヒット及び正しい拒絶と命名したヒットの場合、報酬として約10μLの水を与えた。S-試行後のなめ応答とS+試行後の非なめ応答を、誤答と採点し、それぞれ誤警報及び失敗と命名した。20回の試行の各シリーズについて、正確度(正答の百分率)を採点した[(ヒット+正しい拒絶)/20×100]。単分子着臭化合物及び二成分着臭混合物を用いて嗅覚能力を判定した。マウスには1日あたり8〜10シリーズのセッションを実施した。全ての臭気物質は実験の直前に水又は鉱油で希釈し、その濃度は飽和ボトル中の臭気物質の希釈倍率として与える。
【０１６７】
臭気物質検知閾値。n-ブタノールを報酬刺激(S+)として認識するように、オルファクトメーターでマウスを訓練した。マウスは、水で希釈して連続的に10分の1ずつ濃度が下がっているn-ブタノール(S+)を検知しなければならない。各セッションにおいて、S-として水を用いた。1セッションあたり臭気物質を10分の1に希釈して、1日に1〜2セッションを、マウスに与えた。基準能力達成(20回試行のシリーズで正答が75%以上)で、セッションを終了した。同じ臭気物質希釈倍率での2回の連続セッションで基準能力が達成されなければ、その前の希釈倍率を検知閾値と考えた。
【０１６８】
臭気物質識別課題以下の間の識別を行うようマウスを訓練した、すなわち、
-  D-リモネン(鉱油で10-2倍希釈、S+)とシトロネラール(鉱油で10-2倍希釈、S-)(簡単な識別課題)、
-  D-リモネン(鉱油で10-2倍希釈、S+)とアネトール(鉱油で10-2倍希釈、S-)(簡単な識別課題)、
-  0.1%イソアミルアセテート(水で10-3倍希釈、S+)と鉱油で希釈したアネトール(S-)(簡単な識別課題)。
次に、以下の2種のIAA-アネトール混合物課題(困難な識別課題)について、嗅覚識別能力を評価した:
-  第1の課題において、S+は0.8%IAA+と0.2%アネトールの溶液であり、S-は0.2%IAA+と0.8%アネトールの溶液であった。
-  第2の課題において、S+は0.6%IAA+と0.4%アネトールの溶液であり、S-は0.4%IAA+と0.6%アネトールの溶液であった。
【０１６９】
長期記憶試験。
マウスに、D-リモネン  アネトール識別課題(S +は鉱油で10-2倍希釈のリモネン溶液、及びS-は鉱油で10-2倍希釈のアネトール溶液であった)のための、8ブロックの20回試行の4日間トレーニングセッションを与えた。その後、マウスを30日間ホームケージに放置し、最後の7日間、部分的に水欠乏を実施した。29日目に水を与えず、翌日、各マウスに2臭気物質課題の20回試行記憶試験を実施した。このセッションでは、正答に対して補強(報酬)は与えなかった。
【０１７０】
ブロモデオキシウリジン注射
マウスに、DNA合成マーカー、5ブロモ-2'-デオキシウリジン(BrdU、100mg/kg、Sigma-Aldrich社)を、腹腔内注射した。これらのマウスに、細胞生存の分析のために、灌流の4週間前に1日に2時間間隔で4回の注射を与えた。
【０１７１】
レンチウイルス定位注射
SVZの神経新生により、OBの新たなニューロンが連続的に産生される(Lledo P.ら、2006)。これらの新しいニューロンは、RMSに沿ってOBに向かって移動する。それらを標識するために、本発明者らは、記載されるように(Nissant A.ら、2009)、GFPを発現する複製能欠損レンチベクター  200nlを、RMSに注入した。
【０１７２】
免疫組織化学、共焦点イメージング及び定量化。
マウスをペントバルビタールナトリウム(i.p.、100mg/kg、Sanofi社、France)で麻酔し、0.9%のNaCl及びヘパリン(5x10 3 U/ml、Sanofi社)を含有する溶液で経心腔的に灌流し、続いてリン酸塩緩衝液中4%のパラホルムアルデヒドで灌流した。振動ミクロトーム(VT1000S、ライカ社)を用いて、40マイクロメートルの冠状脳切片を得た。免疫染色は、抗OMP(1:2000、Wako社)、抗TH(1:4000、Immunostar社)、抗CB(Swant社、1:2000)、抗CR(Swant社、1:2000)、抗BrdU(1:1000、Abcys社)、抗Ki67(1:500、Abcam社)、抗NeuN(5μg/ml、Millipore社)、抗マウスCMV(IE1タンパク質に特異的、1:1000、S.Jonjicの好意により与えられた)(Cekinovic D.ら、2008)、抗IBA1(1:400、Wako社)、及び抗CD68(1:2000、Serotec社)を用いて、記載されているように(Siopi E.ら、2016)、フリーフローティング切片に実施した。
【０１７３】
細胞の計数のために、120μm離れた4〜8枚のスライスを各動物について選択した。OB全体又はSVZモザイクは、Olympus BX51顕微鏡(20倍対物レンズ)を用い、イムノペルオキシダーゼ標識細胞の分析のために、Compix Imagingソフトウェア(Hamamatsu Photonics社)を用い、又は免疫蛍光標識した細胞の分析のために、スピニングディスク型共焦点顕微鏡Cell Voyager(CV1000、Yokogawa社)を用いて得た。SVZ、RMS、GL、GCL及び糸球体の境界は、結果を盲検化して示した。陽性細胞は、Icyオープンソースプラットフォーム(www.icy.bioimage.analysis.org)(de Chaumont,F.ら、2012)の「spot detector」ツールを用いて自動的に計数した。
【０１７４】
結果及び考察
1.嗅覚検知
我々は、報酬が与えられる2種の臭気物質の識別課題において限界値を下げていく方法を用いて、n-ブタノール臭気物質の検知閾値を決定することによって、嗅覚感度を調べた。1セッションあたり臭気物質を10分の1に希釈して、1日に2セッションを、マウスに与えた。CMVに感染したマウスは、n-ブタノールとその水溶媒を区別することを学習するために、より多くの試行を必要とした(図2d)。CMV感染は、約3桁の検知閾値の増大をもたらした(図2e、左)。全てのCTL(対照)マウスはn-ブタノールの希釈液を検知することができたが、8匹中2匹のCMV感染マウスは純粋なn-ブタノールについても能力基準に達することができなかった(図2e、右)。
【０１７５】
図2eに示すように、先天性CMV感染は、嗅覚の鋭敏さを損なう。(それは約3桁の検知閾値の有意な低下を誘発する(3.0±1.5対6.0±1.9、t(15)=3.238、p<0.01対CTL)。全てのCTL(対照)マウスはn-ブタノールの強力な希釈液を検知することができたが、8匹中2匹のCMV感染マウスは純粋なn-ブタノールについても能力基準に達することができなかった(図2e)。
【０１７６】
2.嗅覚識別
嗅覚に対するCMVの強い影響を考慮して、我々は嗅覚の識別に及ぼす可能性のある影響を調べた。2種の臭気物質間の単純な嗅覚識別課題、及び強い濃度を使用して臭気物質の二成分混合物間の困難な嗅覚識別課題に、同じパラダイムを用いた(図3)。本発明者らは、CMVに感染したマウスは、特に単分子臭気物質の二成分混合物を用いた場合(すなわち、困難な課題)、臭気物質の識別を変化させたことを見出した。
【０１７７】
先天性CMV感染は、単純な嗅覚識別課題(図3a)において、マウスがIAAとアネトールとを識別する能力を変化させる。CTLと比較して、CMV感染マウスの獲得率は有意に低かった(反復測定を用いた二元配置ANOVA、ウイルス因子:F(1,17)=5,837、p<0.05)。図3c及び3gに示すように、CMV感染マウスは、これらの2種の臭気物質間の識別を学習するために、より多くの試行を必要とした(t(15)=2,674p<0.05)。CMV感染マウスは、n-ブタノールと水とを(図2d及び2f、t(14)=3,213 p<0.01)、D-リモネンとシトロネラールとを(図3d及び3h)、D-リモネンとアネトールとを(図3e及び3i、t(17)=2,398 p<0.05)、識別することを学習するために、より多くの試行を必要とした。
【０１７８】
IAA-アネトール二成分混合物(図3a)の困難な識別課題では、IAA-アネトールの6/4対4/6混合物を、CTLマウス(図3b、右パネル)は正しく識別することができず、CMV感染マウスも正しい識別を達成することができなかった(図3b、右パネル)。IAA-アネトールのより対比した8/2対2/8の混合物を、CTLマウス、は正確に識別することができ(図3b、左パネル)、CMV感染動物の能力は、CTLと比較して有意に劣っていた(8/2対2/8混合物について、反復測定による二元配置ANOVA、ウイルス因子:F(1,17)=14.63、p<0.01、図3b、左パネル)。
【０１７９】
二成分(すなわち2-臭気物質)混合物(図3b、左パネル)の識別は、1-臭気物質試験(図2d)よりもはるかに高い検知感度(p<0.01)を提供する。
【０１８０】
全体として、これらのデータは、CMV感染マウスが特に臭気物質の二成分混合物において嗅覚識別の鋭敏さ及び嗅覚識別の低下を有することを示している。
【０１８１】
長期嗅覚記憶の分析は、CMV感染マウスとCTLマウスとの間に差異がないことを示す(図3f)。全体として、これらのデータは、CMV接種マウスが、嗅覚記憶が損なわれないままである一方で、臭気物質検知及び嗅覚識別がより貧弱であることを示している。
【０１８２】
OB回路は、嗅覚系の最初の中央中継局を構成し、鼻をより高い脳構造と橋渡しするので、我々がここに報告する嗅覚障害は、CMVが嗅覚入力を損傷することから、OB回路への直接的損傷から及び/又は嗅覚野を損傷することから生じる。鼻上皮の嗅覚ニューロン(OSN)は、嗅神経を介してOBの表在糸球体層(GL)に投射される。糸球体と呼ばれる組織構造上の出力僧帽/房飾細胞の樹状突起上のOSNシナプス(Lledo, P. M.ら、2006)。出生後4ヶ月の脳の免疫組織化学分析は、以前の研究(Cekinovic D.ら、2008)と一致して、CMV感染マウスのGLにおけるウイルス発現を示す(図4a、b)。ウイルス粒子の存在にもかかわらず、CMV感染マウスのOBに対するOSNの神経支配は、CTLに類似している(図4b)。
【０１８３】
この知見は、ブニヤウイルス(Bunyavirus)のようないくつかの向神経性ウイルスによる末梢感染が、OB毛細管を介して、しかしOSN軸索を介さないで特定の脳神経浸潤をもたらすという以前の知見を連想させる(Winkler, C. W.ら、2015)。さらなる解剖学的調査は、ウイルス性OBの神経浸潤が、感染動物における糸球体の平均サイズの縮小を伴うことを実証する(図4d)。逆に、先天性CMV感染は、出力OBニューロンのニューロン活動を調節するGABA作動性介在ニューロンからなるOBの顆粒細胞層(GCL)のサイズを変化させない(図6c)。
【０１８４】
糸球体の大きさの変化は、特定のニューロン集団が欠損しているかどうかを確認することを促した。我々は、CMV感染マウスがOB糸球体においてドーパミン作動性細胞の集団の減少を示すことを見出した(図4a、c、d)。他の2種の糸球体集団、カルビンディン(CB)及びカルレチニン(CR)陽性細胞の細胞密度はCTLマウスに類似しており、球ドーパミン作動性ニューロンのCMV感染に対するより高い脆弱性を示している(図4c、d)。CMV感染動物で観察されるドーパミン作動性細胞の枯渇は、ドーパミン作動性神経新生の損傷、直接的なウイルス損傷又は神経炎症誘発性細胞死を反映している可能性がある。ドーパミン作動性ニューロンは、社会的及び非社会的臭気物質の嗅覚検知において重要な役割を果たし、その損傷は劇的な嗅覚欠損につながる(Lazarini、F.ら、2014)。げっ歯類OBにおけるドーパミン作動性細胞動員のピークは、出生後早期(De Marchis,S.ら、2007)に、脳成長の最大値(Semple.BD.ら、2013)で生じるので、先天性CMV感染によって球ドーパミン作動性ニューロンがこの期間に影響を受ける可能性がある。
【０１８５】
神経原性SVZは、成人OBにドーパミン作動性細胞を生涯にわたって与えていることに注意することが重要である。げっ歯類では、SVZはOBに向かって移動する1日あたり数千の神経芽細胞を生じ、OBではこれらの神経芽細胞が既存の神経回路を機能的に統合し、大部分が顆粒細胞及び糸球体介在ニューロンで分化する(Lledo,P.M.ら、2006)。我々は、CMVがマウスの成体神経新生に影響を及ぼすという見解を支持する、SVZにおける細胞増殖の減少を見出した(図5a-c)。我々は、BrdU注射の1ヶ月後にBrdU+細胞を計数することにより、OBにおける新生ニューロンの生存率を分析した。感染動物及びCTL動物において計数されたBrdU+細胞の数の間に差異は見られず(図6a、b)、
このことは、CMVが成人期における新生OBニューロンの細胞増殖を損なうが、OBにおけるそれらの生存は損なわれないことを示唆している(Sui,Y.Horneら、2012)。したがって、CMV感染マウスは、OB構造異常、神経発生の損傷、及び嗅覚欠損を支持する球ドーパミン作動性細胞がよりわずかであることを示す。神経侵襲と神経新生攻撃の両方の時間経過を明らかにし、このモデルにおける神経細胞喪失のウイルス機構を解明するために、さらなる実験が必要である。
【０１８６】
【表１Ａ】
2019521732.tif 000002
【０１８７】
【表１Ｂ】
2019521732.tif 000003
【０１８８】
【表２】
2019521732.tif 000004
【０１８９】
我々は、マウスCMV(図1a及びb)による胎盤感染が、ヒトにおける先天性CMV感染を想起させる発達遅滞及び小頭症を誘発することを確認した(8日齢の仔、CTL体重:7.065±0.1g、CMV体重:6.44±0.11g、マン-ホイットニーU(53)=15、p<0.001対CTL、図7a、21日齢の雄の仔、CTL脳重量:857.5±20.44mg、CMV脳重量:451.5±11.5mg、マン-ホイットニーU(7)=0、p<0.05対CTL、図7b)
【０１９０】
成長遅滞は、子宮内感染に暴露された子孫の25%で観察された(Li&Tsutsui、2000と一致して、34匹の仔のうち9匹)。このモデルは、先天性CMV感染を有する乳児において報告されているものを連想させる難聴表現型を発症することが確認された。聴性脳幹反応(ABR)の記録は、生後4週で対照マウスと感染マウスとの間で聴力閾値に差を示さなかったが、成体感染マウスでは約20dB増加した(86.25±2.455対65.00±3,780dB、t(14)=4.532、p<0;001対CTL、図1e)。
【０１９１】
我々は、胎盤MCMV感染を有する仔は、出生後6日目の早期に嗅覚障害を示すことを見出した(図8)。母親から分離してオルファクトメーターチャンバに孤立させた後、離乳前の仔は母子の相互作用を促進する超音波コールを発生させる(図8b、Branchiら、1998、Lemassonらと一致)。CMV感染した仔もまた、孤立後にそのような超音波発声を発する(図8b)。予想どおり、シトラール(21.67±4.83対65.22±9.011コール/分、t(17)=6.07、p<0.0001対臭気物質なし、図8e)又は雄の香り(t(7)=2.617、p<0.05対臭気物質なし、図8g)等の非社会的又は社会的臭気分子への暴露に反応して、CTLの仔は彼らのコールの発声を減少させる。対照的に、先天性CMV感染は、これらの臭気物質が引き金となって超音波コールを損ない(図8d及びh)、出生後6日目の早期にウイルスによって誘発された嗅覚の変化を示す(シトラール:CMV対CTL、69.05±11.14対21.67±4.83コール/分、t(105)=4.244、p<0.001、図8d)。
【０１９２】
同様に、CMVに感染した成体マウスは、隠れた食物の探索が低下していることを示すが(Chi2=4.032、p<0.05、図2a)、食物が目に見える場合には探索の低下を示していない(図2b)。したがって、胎児におけるウイルス暴露によって誘発された嗅覚欠損が確認される。
【０１９３】
CMVによって、臭気物質の検知、識別、及び/又は学習の3種の嗅覚的次元が損なわれる可能性がある。それらがCMV感染に対して同等に感受性であるかどうかを特定するために、先天性感染成体マウスを、自動オルファクトメーターを用いて試験した。
【０１９４】
本試験は、胎盤にCMVを直接感染させると成長遅滞を効率的に引き起こす可能性があり、聴覚及び嗅覚に著しく有害な影響を有することを示した。ここでは、MCMVによる胎盤感染後の生後6日児において嗅覚行動障害が存在するという直接的な証拠を提供する(図8)が、生後28日児においては、聴覚の差異は観察されなかった(図1e)。まとめると、これらのデータは、CMV誘発嗅覚機能障害が、聴覚障害又は神経認知障害の将来の発症の予後値を伴う早期表現型を示し得ることを示唆している。
【０１９５】
結論と展望
先天性CMV感染のマウスモデルは、嗅覚閾値がCMV感染によって変化することを示した。更に、CMV感染マウスは、単分子臭気物質の二成分混合物の細部識別を含む課題ではほとんど機能しないこと、及びこのような二成分混合物による嗅覚検査は、一臭気物質の嗅覚検査よりもはるかに感度が高いことが明らかになった。
【０１９６】
したがって、単分子臭気物質の二成分混合物による嗅覚試験は、神経学的障害の指標である。これは、細菌又はウイルス感染後の神経変性疾患及び神経学的合併症の早期診断及び治療に有用である。例えば、先天性CMV感染症では、誕生から数年後の小児期に難聴が発症し、多くの場合進行性になることがある。先天性CMV感染における嗅覚の探索は、中枢神経系、ひいては内耳のCMVの存在を評価することにより、聴力の低下の始まりを早期に検出し、又は難聴の発生を予測することができる。聴覚障害の影響を受けやすい子供の特定は、これらの小児のさらなる監視と、この障害の認知発達への影響を最小限に抑える補聴器の使用による早期治療が条件づけられるため、大きな関心事である。また、嗅覚障害の早期検出は、親-幼児の強い境界を維持するのに重要である食物摂取量の減少及び社会的嗅覚徴候の喪失を予測するのに関連し得る。我々の前臨床結果は、先天性CMV感染における臨床試験の実験的支援を提供する。嗅覚を評価することは、長期的な神経学的転帰を含むこの感染を監視するための新規な戦略につながる可能性がある。
【０１９７】
(実施例2)
先天性CMV感染児に関する臨床試験
上記の実施例1に示された結果により、二成分臭気物質混合物(3種の異なる二成分混合物、すなわち、カルボン(+)、カルボン(-)混合物(8/2及び2/8の割合)、イソアミルアセテート/アネトール(8/2及び2/8の割合)、及びアネトール/オイゲノール(8/2及び2/8の割合))の識別の評価に基づいて、子供を含む、ヒトにおける神経学的転帰の嗅覚試験を提案することが可能になった。
【０１９８】
臭気物質(全てSIGMA-ALDRICH社製)は安全と考えられ、食品や化粧品に使用されている。臭気物質は、BURGHARDT MESSTECHNIK GmbH(Tinsdaler Weg 175、D-2280 Wedel、Germany)によって市販されているSNIFFIN 'STICKS(商標)(Hummelら1997を参照のこと)に示されている。混合物の識別のために、3種のスティックが対象に提示され、2種は同じ臭気物質混合物を含有し、1つは異なる関連臭気物質混合物を含有する。対象は、異なる臭いのスティックを示すよう要求される。この試験は非侵襲的で、非常に幼い子供でも使いやすく、速く(約15分)実施される。
【０１９９】
この試験のパフォーマンスは(口頭による子供の同意及び書面による両親の同意の後、)、Robert Debre病院、Paris、France小児科ENT部が主導した(臨床プロトコールINFECSMELL CLIN CoRC N°2015-091を参照のこと)、
3歳から10歳までの子供、すなわち
先天性CMV感染症の子供80名(出生時に症状のあるCMV感染を経験した40名の子供、出生時に無症候性のCMV感染を経験した子供40名)、及び
40人の健康な対照(年齢及び性別に適合)、の臨床試験で評価する、
子供には慢性副鼻腔炎や鼻咽頭炎はない。
CMV感染は、生後3週間の尿及び/又は血液中の陽性CMV PCRによって診断する。遡及的診断は、生後3〜7日に実施したガスリー試験における陽性PCRの存在に基づいて行うことができる。
【０２００】
CMV感染は、典型的には出生時に以下の臨床徴候、すなわち、成長遅滞、未熟児、点状出血、脾腫、血小板減少症、黄疸、少ない血小板数、黄疸(ictere)、消化器疾患、のうち少なくとも1つが存在する場合、出生時に症候性であると考えられる。
【０２０１】
子供達はそれぞれ、カルボン(+)とカルボン(-)の混合物をそれぞれ含む、3種のSNIFFIN 'STICKS(商標)(赤いスティック、緑のスティック、青いスティック)を、順次臭う又は嗅ぐ[問題番号1]。これらの3種のスティックは、全て同じ2種の臭気物質を含んでいるが、3種のスティックのうちの1つは、これら2種の臭気物質の割合によって異なっている[2種のスティックの2/8、3番目のスティックの8/2の割合]。イソアミルアセテート(IAA)とアネトールとの混合物[問題番号2]、及びアネトールとオイゲノールとの混合物[問題番号3]で、同じ試験を実施する。
カルボン(+)=D-カルボン=S-カルボン
カルボン(-)=L-カルボン=R-カルボン
【０２０２】
【表３】
2019521732.tif 000005
【０２０３】
正答は、問題番号1では緑色スティック、問題番号2では緑色スティック、問題番号3では青色スティックである。
【０２０４】
他の2種のスティックとは異なるスティックを正しく識別する子供に1得点が与えられる。正しくない答は0得点になる。3種の問題[問題番号1、番号2、番号3]に答えた後、子供が合計2又は3得点を得た場合、嗅覚は正常と考えられる。総得点が0又は1の場合、嗅覚は変更されたと考えられる。
【０２０５】
総得点は、子供の嗅覚識別能力を反映し、CMV状態、より詳細には症候性CMV又は無症候性CMV状態と比較される。
【０２０６】
神経学的障害の性質及び程度は、各子供に対して決定する。先天性CMV感染児では、聴覚閾値は主観的聴力図又は客観的誘発電位のいずれかによって評価する。対照患者では、聴力の正常性は、Evoked OtoAcoustic Emissions(EOAE)を用いてスクリーニングする。
【０２０７】
嗅覚識別能力における各子供の得点は、健康な子供と比較して、CMVに感染した子供における神経学的障害の性質及び程度、より詳細には聴力障害の程度と比較される。
【０２０８】
各子供の嗅覚能力はまた、臭気物質の混合物を含有するのではなく、ただ1つの臭気物質、例えばスティックのうちの2種がアネトールを含み、3番目のスティックがIAAを含む、一連の3種の嗅ぎスティックを含むSNIFFIN 'STICKS(商標)を用いて測定する。
【０２０９】
CMV感染症を有する子供とその対応する対照について、トランスレーショナル臨床研究試験が現在進行中である(https://clinicaltrials.gov/ct2/show/study/NCT02782988を参照のこと)
【０２１０】
(実施例3)
ジカウイルス(ZIKV)感染患者に関する臨床研究
上記の実施例2に記載された試験では、フランスのカリブ諸島の集団のZIKAコホートについて分析する。この臨床研究は、ZIKASMELL臨床試験で評価する。
Antilles-Guyaneで2016〜17年の流行中のジカウイルス感染に関連する、神経学的障害の早期検出における嗅覚障害の検出の寄与。アルボウイルス(CARBO)に感染した患者のコホートの補助研究。N°Corc 2016-050(2016年12月16日承認)、N°CPP 2010-55(2016年9月12日承認)、NCT02782988(https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT01099852)。スポンサー:HU-Martinique(CHU-M)サポート:PHRC & REACTing.補助研究監督:F Lazarini、臨床研究者:A Lannuzel (PI、CHU Guadeloupe)、A Cabie(CHU-M)、F Djosou (CH Guyane)、S Matheron (CHU Bichat、Paris).
【０２１１】
急性ジカ感染症の398人の成人と3〜10歳の子供。研究終了:2019
【０２１２】
(参考文献)
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【図１】
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【図２】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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2019521732.tif 000019
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