【手続補正書】
【提出日】令和3年11月12日(2021.11.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
表面上の湿気および空気に対する腸溶ポリマーバリアを含む粒子であって、前記腸溶ポリマーバリアは、１から３のｐＨで胃内で分解されるポリマーから形成され、前記粒子において、合成ポリマー、タンパク質、または炭水化物を含む不活性マトリクス内に脂溶性微量栄養素および水溶性微量栄養素、ならびに／あるいはビタミンが同時カプセル化されている、粒子。
【請求項２】
有機溶媒中の前記脂溶性微量栄養素の乳化および水性溶媒中の前記水溶性微量栄養素の乳化によって製剤化されている、請求項１に記載の粒子。
【請求項３】
噴霧乾燥またはスピンディスク処理によって形成される、請求項１または２に記載の粒子。
【請求項４】
前記粒子が、鉄微量栄養素を含み、前記腸溶ポリマーバリアが、前記鉄の酸化を防止する、請求項１から３のいずれかに記載の粒子。
【請求項５】
前記微量栄養素が、カプセル化の前またはカプセル化のときに、不活化マトリクスの材料と混合される、請求項１から４のいずれかに記載の粒子。
【請求項６】
必要に応じて溶媒中の微量栄養素を、不活化マトリクスの材料に噴霧乾燥またはスピンディスク処理することによって形成される、請求項１から５のいずれかに記載の粒子。
【請求項７】
前記マトリクスの材料が、デンプン、ヒアルロン酸、シクロデキストリン、コラーゲン、アルギネート、キチン、またはそれらの誘導体からなる群より選択される、請求項６に記載の粒子。
【請求項８】
鉄微量栄養素を含む、請求項１から７のいずれかに記載の粒子。
【請求項９】
ヒアルロン酸と混合された硫酸鉄を、約１：４〜約１：１０の間の鉄：ヒアルロン酸の比で含む、請求項８に記載の粒子。
【請求項１０】
前記脂溶性微量栄養素が、ビタミンＡ、ビタミンＥ、およびビタミンＤからなる群より選択される１つまたは複数のビタミンである、請求項１から９のいずれかに記載の粒子。
【請求項１１】
前記水溶性微量栄養素が、ビタミンＣ、Ｂ３、Ｂ７、Ｂ９およびＢ１２、ならびに微量元素、例えば亜鉛およびヨウ素からなる群より選択される、請求項１から１０のいずれかに記載の粒子。
【請求項１２】
前記水溶性微量栄養素が、親水性または両親媒性ポリマーによって形成された第１のマトリクス内にカプセル化され、次に、胃で分解される腸溶ポリマーによって形成された第２のマトリクスによってさらにコーティングまたはカプセル化される、請求項１から１１のいずれかに記載の粒子。
【請求項１３】
前記微量栄養素が、前記粒子の凝集および変形を防止するデンプン粉末などの粉末に、噴霧乾燥またはスピニングディスク微粒化などのマイクロカプセル化技術を使用してカプセル化される、請求項１２に記載の粒子。
【請求項１４】
製剤が、１００℃で１時間まで、または４０℃で湿度７５％において少なくとも６０日間安定である、請求項１から１３のいずれかに記載の粒子。
【請求項１５】
１ミクロン〜１ミリメートルの間、好ましくは約１５０ミクロンの直径を有する、請求項１から１４のいずれかに記載の粒子。
【請求項１６】
胃で分解される前記ポリマーが、約１〜５、好ましくは約１〜３、より好ましくは約１〜２のｐＨで溶解する、請求項１から１５のいずれか一項に記載の粒子。
【請求項１７】
胃で分解される前記ポリマーが、約５〜８、好ましくは約５〜７、より好ましくは約５〜６のｐＨで溶解する、請求項１から１５のいずれか一項に記載の粒子。
【請求項１８】
前記ｐＨ感受性ポリマーが、ポリメタクリレートである、請求項１から１７のいずれか一項に記載の粒子。
【請求項１９】
それを必要とする個体に鉄および／または他の微量栄養素を提供するための、請求項１から１８のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項２０】
必要に応じて塩と混合されたか、または塩でコーティングされた前記製剤が、食品と混合される、請求項１９に記載の製剤。
【請求項２１】
前記製剤が、農業用動物にバルク形態で提供される、請求項１９に記載の製剤。
【請求項２２】
請求項１から１８のいずれかに記載の粒子を作製するための方法であって、
抗酸化ポリマー、例えばヒアルロン酸および／または１つもしくは複数の脂溶性ビタミンと混合された鉄補給剤の粒子を提供するステップと、
鉄混合物またはビタミンを、ｐＨ感受性腸溶ポリマーに分散させるステップと、
噴霧乾燥またはスピンディスク処理によって粒子を形成するステップと
を含み、
前記粒子が脂溶性ビタミンを含有する場合、前記粒子が、デンプンまたは他の非凝集性ポリマー粉末に噴霧されて、粉末コーティングが形成される、方法。
【請求項２３】
水溶性微量栄養素および脂溶性微量栄養素を、腸溶ポリマーバリアでコーティングされた請求項１から１８のいずれかに記載の粒子内に同時カプセル化する方法であって、
前記水溶性微量栄養素を、水性溶媒に溶解および／または分散させて、必要に応じて、合成ポリマー、タンパク質、または炭水化物を含む不活化マトリクスの材料を含む水溶性微量栄養素溶液を形成するステップと、
前記微量栄養素を前記水性溶媒に溶解もしくは分散させるとき、またはその後に、油を添加するステップと、
前記脂溶性微量栄養素を、有機溶媒および／または油ならびに腸溶ポリマーに溶解および／または分散させて、脂溶性微量栄養素ポリマー溶液を形成するステップと、
前記水溶性微量栄養素溶液を、前記脂溶性微量栄養素ポリマーで乳化するステップと、
噴霧乾燥、スピンディスク処理または溶媒除去などの方法を使用して、前記溶媒を除去するステップと
を含む、方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２５１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２５１】
結果
第１のヒト研究では、ＨＡ−ＥＰＯのＭＰへのＦｅカプセル化によって、非カプセル化鉄と比較して鉄バイオアベイラビリティが低下することが示されたが、カプセル化系は、調理条件とは独立に、生体利用可能な鉄をヒトに送達することにおいて有効性が実証された。微量栄養素をカプセル化する材料は、吸収を妨害するおそれがあることが既に報告されている（Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ，  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｖｉｔａｍ  Ｎｕｔｒ  Ｒｅｓ，  ７４，  ４５３−４６１  （２００４））。したがって、腸管での鉄吸収においてＨＡおよびＥＰＯが独立に演じる役割を調査した。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ研究を、Ｆｅ−ＨＡ−ＥＰＯのＭＰを経口摂取した後のヒトにおける腸上皮細胞バリアへの鉄透過条件を模擬するように設計した。商業的に利用可能なヒト腸上皮細胞バリアモデル（ＥｐｉＩｎｔｅｓｔｉｎａｌ、ＭａｔＴｅｋ、Ａｓｈｌａｎｄ、ＭＡ）により、鉄、ＨＡおよびＥＰＯの相対濃度を系統的に変えることによって、ＭＰ構成要素が腸管での鉄吸収に対して有する効果を調査するための試験プラットフォームを提供した。モデルは、健康なヒトドナーから得た初代小腸上皮細胞からなっており、ここで細胞を、酵素的に解離させ、１２ウェルプレート内でカスタマイズされた培地中、細胞培養インサート上で培養して、円柱様の機能的３Ｄ上皮バリア層を形成した（Ｍａｓｃｈｍｅｙｅｒ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｉｏｐｈａｒｍ，  ９５，  ７７−８７  （２０１５））。ウェルプレートの上方コンパートメントにおける細胞培養インサートとして接近可能な腸管バリアの頂端膜側に試料を添加し、１時間のインキュベーション期間後、組織バリアを通過し、ウェルプレートの下方コンパートメントにおける培養培地の分析によって決定され得る量として鉄輸送を定量化することによって、鉄製剤の経口投与をモデル化した。ＨＡおよび／またはＥＰＯと組み合わせて添加した鉄の輸送を、ＨＡまたはＥＰＯがない状態で添加した遊離鉄の輸送のパーセンテージとして表した。ＨＡの存在は、腸管バリアを介する鉄輸送に対して著しい影響を示さなかった（図１２Ａ）。さらに、鉄は、この第１のヒト研究で試験したＭＰにおいて使用したＦｅ：ＨＡ比で、バリアを介して容易に輸送された。それとは対照的に、鉄にパーセンテージを増大して添加した非カプセル化ＥＰＯは、腸管バリアを介する鉄輸送を著しく低減した（図１２Ｂ、丸）。特に、鉄は、ヒト被験体で試験したＭＰにおけるＥＰＯパーセントに相当する９６％のＥＰＯパーセンテージで存在する場合、バリアを介して輸送されにくかった。現在のＭＰ製剤に存在するＥＰＯのパーセンテージでは、鉄輸送は、遊離鉄と比較して３７％に低下した。同様に、鉄輸送は、ＳＧＦにおいてインキュベーションによって解離されたＭＰの中和内容物が腸管バリアに添加されると、遊離鉄について測定された鉄輸送の３３％に低下した（図１２Ｂ、黒色四角）。興味深いことに、ＥＰＯパーセンテージが低下すると、ＥＰＯの鉄輸送阻害効果は無視することができ、このことは、より低いパーセンテージのＥＰＯを含有する製剤が、腸を介する鉄輸送を阻害し得ないことを示している。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
表面上の湿気および空気に対する腸溶ポリマーバリアを含む粒子であって、前記粒子において、デンプンまたはヒアルロン酸を含む不活性マトリクス内に脂溶性微量栄養素および水溶性微量栄養素が同時カプセル化されている、粒子。
（項目２）
有機溶媒中の前記脂溶性微量栄養素の乳化および水性溶媒中の前記水溶性微量栄養素の乳化によって製剤化されている、項目１に記載の粒子。
（項目３）
噴霧乾燥またはスピンディスク処理によって形成される、項目１または２に記載の粒子。
（項目４）
前記粒子が、鉄微量栄養素を含み、前記腸溶ポリマーバリアが、前記鉄の酸化を防止する、項目１から３のいずれかに記載の粒子。
（項目５）
前記微量栄養素が、カプセル化の前またはカプセル化のときに、ヒアルロン酸と混合される、項目１から４のいずれかに記載の粒子。
（項目６）
必要に応じて溶媒中の微量栄養素を、デンプン、ヒアルロン酸、シクロデキストリン、コラーゲン、アルギネート、キチン、またはそれらの誘導体に噴霧乾燥またはスピンディスク処理することによって形成される、項目１から５のいずれかに記載の粒子。
（項目７）
鉄微量栄養素を含む、項目１から６のいずれかに記載の粒子。
（項目８）
ヒアルロン酸と混合された硫酸鉄を、約１：４〜約１：１０の間の鉄：ヒアルロン酸の比で含む、項目７に記載の粒子。
（項目９）
前記脂溶性微量栄養素が、ビタミンＡ、ビタミンＥ、およびビタミンＤからなる群より選択される１つまたは複数のビタミンである、項目１から８のいずれかに記載の粒子。
（項目１０）
前記水溶性微量栄養素が、ビタミンＣ、Ｂ３、Ｂ７、Ｂ９およびＢ１２、ならびに微量元素、例えば亜鉛およびヨウ素からなる群より選択される、項目１から９のいずれかに記載の粒子。
（項目１１）
前記水溶性微量栄養素が、親水性または両親媒性ポリマー、例えばヒアルロン酸またはゼラチンによって形成された第１のマトリクス内にカプセル化され、次に、腸溶ポリマーによって形成された第２のマトリクスによってさらにコーティングまたはカプセル化される、項目１から１０のいずれかに記載の粒子。
（項目１２）
前記微量栄養素が、前記粒子の凝集および変形を防止するデンプン粉末などの粉末に、噴霧乾燥またはスピニングディスク微粒化などのマイクロカプセル化技術を使用してカプセル化される、項目１１に記載の粒子。
（項目１３）
製剤が、１００℃で１時間まで、または４０℃で湿度７５％において少なくとも６０日間安定である、項目１から１２のいずれかに記載の粒子。
（項目１４）
１ミクロン〜１ミリメートルの間、好ましくは約１５０ミクロンの直径を有する、項目１から１３のいずれかに記載の粒子。
（項目１５）
ｐＨ感受性ポリマーが、約１〜５、好ましくは約１〜３、より好ましくは約１〜２のｐＨで溶解する、項目１から１４のいずれか一項に記載の粒子。
（項目１６）
前記ｐＨ感受性ポリマーが、約５〜８、好ましくは約５〜７、より好ましくは約５〜６のｐＨで溶解する、項目１から１４のいずれか一項に記載の粒子。
（項目１７）
前記ｐＨ感受性ポリマーが、ポリメタクリレートである、項目１から１６のいずれか一項に記載の粒子。
（項目１８）
有効量の項目１から１７のいずれか一項に記載の製剤を、それを必要とする個体に提供するステップを含む、鉄および／または他の微量栄養素を提供する方法。
（項目１９）
必要に応じて塩と混合されたか、または塩でコーティングされた前記製剤が、食品と混合される、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
前記製剤が、農業用動物にバルク形態で提供される、項目１８に記載の方法。
（項目２１）
項目１から１７のいずれかに記載の粒子を作製するための方法であって、
抗酸化ポリマー、例えばヒアルロン酸および／または１つもしくは複数の脂溶性ビタミンと混合された鉄補給剤の粒子を提供するステップと、
鉄混合物またはビタミンを、ｐＨ感受性腸溶ポリマーに分散させるステップと、
噴霧乾燥またはスピンディスク処理によって粒子を形成するステップと
を含み、
前記粒子が脂溶性ビタミンを含有する場合、前記粒子が、デンプンまたは他の非凝集性ポリマー粉末に噴霧されて、粉末コーティングが形成される、方法。
（項目２２）
水溶性微量栄養素および脂溶性微量栄養素を、腸溶ポリマーバリアでコーティングされた項目１から１７のいずれかに記載の粒子内に同時カプセル化する方法であって、
前記水溶性微量栄養素を、水性溶媒に溶解および／または分散させて、必要に応じてデンプン、ヒアルロン酸、シクロデキストリン、コラーゲン、アルギネート、キチン、またはそれらの誘導体を含む水溶性微量栄養素溶液を形成するステップと、
前記微量栄養素を前記水性溶媒に溶解もしくは分散させるとき、またはその後に、油を添加するステップと、
前記脂溶性微量栄養素を、有機溶媒および／または油および腸溶ポリマーに溶解および／または分散させて、脂溶性微量栄養素ポリマー溶液を形成するステップと、
前記水溶性微量栄養素溶液を、前記脂溶性微量栄養素ポリマーで乳化するステップと、
噴霧乾燥、スピンディスク処理または溶媒除去などの方法を使用して、前記溶媒を除去するステップと
を含む、方法。