(57)【要約】  本開示は、STAT3活性を調節するタンパク質を発現する外来核酸を含有するように修飾されている、修飾されたウイルス、例えば、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスに関する。これは少なくとも幾分かは、PIAS3をコードする、及びPIAS3又はその断片を発現する核酸を含有するように修飾されたワクシニアウイルスは、STAT3活性を阻害し、ワクシニアウイルスの抗癌活性を増強し得るという発見に基づいている。したがって、本開示は、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス及び癌の治療においてそれを使用する方法を提供する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
外来核酸を含む腫瘍溶解性ワクシニアウイルスであって、前記外来核酸は、STAT3媒介性遺伝子活性化を調節するタンパク質又はその断片をコードする、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項２】
外来核酸が、タンパク質をコードする、請求項1に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項３】
外来核酸が、断片をコードする、請求項1に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項４】
タンパク質又はその断片が、STAT3認識ドメイン又は前記認識ドメイン内のブロッキング断片を含む、請求項1に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項５】
ブロッキング断片を含み、ブロッキング断片が、STAT3媒介性遺伝子活性化を調節する、請求項4に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項６】
タンパク質又はその断片が、SOCS3タンパク質若しくはその断片、TCPTPタンパク質若しくはその断片、又はドミナントネガティブ突然変異体STAT3タンパク質若しくはその断片である、請求項1から5のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項７】
タンパク質又はその断片が、PIAS3タンパク質又はその断片である、請求項1から5のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項８】
外来核酸が、PIAS3タンパク質又はその断片の発現の増加のためにコドン最適化されている、請求項7に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項９】
PIAS3タンパク質をコードする外来核酸を含み、外来核酸が、配列番号8〜10及び40〜43からなる群から選択される核酸配列に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同である、請求項7又は8に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項１０】
PIAS3タンパク質をコードする外来核酸を含み、外来核酸が、配列番号8〜10及び40〜43からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項7から9のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項１１】
PIAS3タンパク質をコードする外来核酸を含み、外来核酸が、配列番号8〜10及び40〜43からなる群から選択される核酸配列の全長に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同である、請求項7から9のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項１２】
PIAS3タンパク質をコードする外来核酸を含み、外来核酸が、配列番号8〜10及び40〜43からなる群から選択される核酸配列の画分に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同である、請求項7から9のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項１３】
PIAS3タンパク質断片をコードする外来核酸を含み、外来核酸が、配列番号8〜10及び40〜43からなる群から選択されるヌクレオチド配列の核酸断片に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同である、請求項7又は8に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項１４】
PIAS3タンパク質断片をコードする外来核酸を含み、外来核酸が、配列番号8〜10及び40〜43からなる群から選択されるヌクレオチド配列の核酸断片を含む、請求項7、8又は13に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項１５】
核酸断片が、配列番号8〜10及び40〜43からなる群から選択されるヌクレオチド配列に由来するヌクレオチドの連続ストレッチを含む、請求項13又は14に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項１６】
ヌクレオチドの連続ストレッチが、3ヌクレオチド〜552ヌクレオチドの長さを有する、請求項15に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項１７】
核酸断片が、配列番号8〜10及び40〜43からなる群から選択されるヌクレオチド配列に由来する非連続ヌクレオチドを含む、請求項13又は14に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項１８】
PIAS3タンパク質をコードする外来核酸を含み、PIAS3タンパク質が、配列番号1〜7及び24〜27からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であるアミノ酸配列並びにその保存的置換を含む、請求項7から17のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項１９】
PIAS3タンパク質をコードする外来核酸を含み、PIAS3タンパク質が、配列番号1のアミノ酸配列に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であるアミノ酸配列及びその保存的置換を含む、請求項7から18のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項２０】
PIAS3タンパク質をコードする外来核酸を含み、PIAS3タンパク質が、配列番号1〜7及び24〜27からなる群から選択されるアミノ酸配列の全長に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であるアミノ酸配列並びにその保存的置換を含む、請求項7から19のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項２１】
PIAS3タンパク質をコードする外来核酸を含み、PIAS3タンパク質が、配列番号1のアミノ酸配列の全長に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であるアミノ酸配列及びその保存的置換を含む、請求項7から20のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項２２】
PIAS3タンパク質をコードする外来核酸を含み、PIAS3タンパク質が、配列番号1〜7及び24〜27からなる群から選択されるアミノ酸配列の全長の画分に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であるアミノ酸配列並びにその保存的置換を含む、請求項7から17のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項２３】
PIAS3タンパク質をコードする外来核酸を含み、PIAS3タンパク質が、配列番号1のアミノ酸配列の全長の画分に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であるアミノ酸配列及びその保存的置換を含む、請求項7から17及び22のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項２４】
PIAS3タンパク質断片をコードする外来核酸を含み、PIAS3タンパク質断片が、配列番号1〜7及び24〜27のうちいずれか1つに由来するアミノ酸断片に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であるアミノ酸配列並びにその保存的置換を含む、請求項7から21及び22から23のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項２５】
PIAS3タンパク質断片をコードする外来核酸を含み、PIAS3タンパク質断片が、配列番号1に由来するアミノ酸断片に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であるアミノ酸配列及びその保存的置換を含む、請求項7から17及び22から24のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項２６】
PIAS3タンパク質又はその断片が、配列番号6のアミノ酸配列のアミノ酸400〜523及びその保存的置換を含む、請求項7に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項２７】
STAT3活性を調節するタンパク質又はその断片が、SOCS3タンパク質又はその断片及びその保存的置換である、請求項1から6のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項２８】
SOCS3タンパク質又はその断片が、ヒトSOCS3タンパク質又はその断片及びその保存的置換を含む、請求項27に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項２９】
SOCS3タンパク質又はその断片が、配列番号28及び30からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約85%相同であるアミノ酸配列並びにその保存的置換を含む、請求項27又は28に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項３０】
SOCS3タンパク質又はその断片が、配列番号28のアミノ酸配列に対して少なくとも約85%相同であるアミノ酸配列及びその保存的置換を含む、請求項27又は28に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項３１】
SOCS3タンパク質又はその断片が、配列番号28及び30からなる群から選択されるアミノ酸配列の全長に対して少なくとも約85%相同であるアミノ酸配列並びにその保存的置換を含む、請求項27から30のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項３２】
SOCS3タンパク質又はその断片が、配列番号28及び30からなる群から選択されるアミノ酸配列の全長の画分に対して少なくとも約85%相同であるアミノ酸配列並びにその保存的置換を含む、請求項27から30のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項３３】
STAT3活性を調節するタンパク質又はその断片が、TCPTPタンパク質又はその断片及びその保存的置換である、請求項1から6のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項３４】
TCPTPタンパク質又はその断片が、ヒトTCPTPタンパク質又はその断片及びその保存的置換である、請求項33に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項３５】
TCPTPタンパク質又はその断片が、配列番号32及び34からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約85%相同であるアミノ酸配列並びにその保存的置換を含む、請求項33又は34に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項３６】
TCPTPタンパク質又はその断片が、配列番号32のアミノ酸配列に対して少なくとも約85%相同であるアミノ酸配列及びその保存的置換を含む、請求項33から35のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項３７】
TCPTPタンパク質又はその断片が、配列番号32及び34からなる群から選択されるアミノ酸配列の全長に対して少なくとも約85%相同であるアミノ酸配列並びにその保存的置換を含む、請求項33から36のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項３８】
TCPTPタンパク質又はその一部が、配列番号32及び34からなる群から選択されるアミノ酸配列の全長の画分に対して少なくとも約85%相同であるアミノ酸配列並びにその保存的置換を含む、請求項33から36に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項３９】
STAT3活性を調節するタンパク質又はその断片が、ドミナントネガティブ突然変異体STAT3タンパク質又はその断片及びその保存的置換である、請求項1から6のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項４０】
ドミナントネガティブ突然変異体STAT3タンパク質又はその断片が、ヒトドミナントネガティブ突然変異体STAT3タンパク質又はその断片及びその保存的置換である、請求項39に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項４１】
ドミナントネガティブ突然変異体STAT3タンパク質又はその断片が、配列番号36及び38からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約85%相同であるアミノ酸配列並びにその保存的置換を含む、請求項39又は40に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項４２】
ドミナントネガティブ突然変異体STAT3タンパク質又はその断片が、配列番号36及び38からなる群から選択されるアミノ酸配列の全長に対して少なくとも約85%相同であるアミノ酸配列並びにその保存的置換を含む、請求項39から41のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項４３】
ドミナントネガティブ突然変異体STAT3タンパク質又はその断片が、配列番号36及び38からなる群から選択されるアミノ酸配列の全長の一部に対して少なくとも約85%相同であるアミノ酸配列並びにその保存的置換を含む、請求項39から42のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項４４】
外来核酸が、細胞透過性タンパク質をさらにコードする、請求項1に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項４５】
細胞透過性タンパク質をさらにコードする外来核酸を含み、細胞透過性タンパク質が、HIV-1のTATタンパク質又はその断片、YopM、トランスポータン、ペネトラチン、ポリアルギニン又はそれらの任意の組合せを含む、請求項44に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項４６】
細胞透過性タンパク質をさらにコードする外来核酸を含み、外来核酸が、配列番号12、13、15、17、19、21及び23に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同である配列又はその断片をさらに含む、請求項44又は45に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項４７】
細胞透過性タンパク質をさらにコードする外来核酸を含み、外来核酸が、配列番号12、13、15、17、19、21及び23の全長に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同である配列をさらに含む、請求項44から46のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項４８】
細胞透過性タンパク質をさらにコードする外来核酸を含み、外来核酸が、配列番号12、13、115、17、19、21及び23の長さの画分に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同である配列をさらに含む、請求項44から47のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項４９】
TATタンパク質又はその断片をコードする外来核酸を含み、TATタンパク質又はその断片が、配列番号11、14、16、18、20及び22に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%同一である配列並びにその保存的置換又はその断片並びにその保存的置換を含む、請求項44から48のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項５０】
STAT3活性を調節するタンパク質又はその断片が、配列番号11のアミノ酸配列に対して少なくとも約85%相同であるアミノ酸を有する細胞透過性ペプチドにコンジュゲートされる、請求項1から49のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項５１】
STAT3活性を調節するタンパク質又はその断片が、配列番号11のアミノ酸配列を含む細胞透過性ペプチドにコンジュゲートされる、請求項1から49のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項５２】
タンパク質又はその断片が、ブロッキング断片を含み、ブロッキング断片が、配列番号1のアミノ酸126〜176を含む、請求項4に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項５３】
タンパク質又はその断片が、PIAS3タンパク質又はその断片を含み、PIAS3タンパク質又はその断片が、配列番号1のアミノ酸129〜316、133〜316、132〜177、126〜176又は400〜528を含む、請求項52に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項５４】
外来核酸が、ワクシニアウイルスゲノム中に挿入される、請求項1から53のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項５５】
外来核酸が、ワクシニアウイルスゲノムのチミジンキナーゼ遺伝子座中に挿入される、請求項54に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項５６】
細胞外エンベロープウイルス(EEV)である、請求項1から55のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項５７】
腫瘍細胞中のM2マクロファージ内で複製する、請求項1から56のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項５８】
腫瘍細胞中のM2マクロファージ内で複製して、細胞外エンベロープウイルス(EEV)を主に含有するウイルスの集団を生成する、請求項1から57のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項５９】
M2マクロファージ内で複製することによって免疫抑制を部分的に避ける、請求項57又は58に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項６０】
請求項1から59のいずれか一項に規定される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス及び賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項６１】
賦形剤が、緩衝剤、安定剤、抗酸化剤、結合剤、希釈剤、分散剤、レートコントロール剤、滑沢剤、流動促進剤、崩壊剤、可塑剤、保存剤又はそれらの任意の組合せのうち1以上を含む、請求項60に記載の医薬組成物。
【請求項６２】
賦形剤が、リン酸水素二ナトリウム二水和物、リン酸二水素ナトリウム二水和物、塩化ナトリウム、ミオイノシトール、ソルビトール又はそれらの任意の組合せを含む、請求項61に記載の医薬組成物。
【請求項６３】
保存剤を含まない、請求項60から62のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項６４】
保存剤、希釈剤及び担体のうち1種以上をさらに含む、請求項60から63のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項６５】
さらなる有効成分又はその塩をさらに含む、請求項60から64のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項６６】
さらなる有効成分を含み、さらなる有効成分が、さらなる腫瘍溶解性ワクシニアウイルスである、請求項65に記載の医薬組成物。
【請求項６７】
請求項1から59のいずれか一項に規定される腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを製造するための方法であって、(i)ワクシニアウイルス塩基核酸配列を、請求項1から59のいずれか一項に規定される外来核酸配列と作動可能に連結することによって、修飾されたワクシニアウイルスDNAベクターを作製するステップ、(ii)哺乳動物細胞を、修飾されたワクシニアウイルスDNAベクターを用いてトランスフェクトするステップ、(iii)ウイルス複製に適した条件において哺乳動物細胞を培養するステップ、及び(iv)ウイルス粒子を回収するステップを含む、方法。
【請求項６８】
哺乳動物細胞が、HeLa細胞、293細胞又はVero細胞を含む、請求項67に記載の方法。
【請求項６９】
修飾されたワクシニアウイルスDNAベクター中の請求項1から59のいずれか一項に規定される外来核酸が、細胞外エンベロープウイルス(EEV)を主に含有するウイルス粒子の集団を促進する、請求項67又は68に記載の方法。
【請求項７０】
癌を治療する方法であって、治療上有効量の請求項1から59いずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は請求項60から66のいずれか一項に記載の医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法。
【請求項７１】
治療上有効量の請求項1から59いずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は請求項60から66のいずれか一項に記載の医薬組成物の投与を含み、癌が、固形腫瘍、白血病又はリンパ腫である、請求項70に記載の方法。
【請求項７２】
腫瘍を治療する方法であって、治療上有効量の請求項1から59いずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は請求項60から66のいずれか一項に記載の医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法。
【請求項７３】
治療上有効量の請求項1から59いずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は請求項60から66のいずれか一項に記載の医薬組成物の投与を含み、腫瘍が、固形腫瘍、白血病又はリンパ腫である、請求項72に記載の方法。
【請求項７４】
癌又は腫瘍を治療する方法であって、治療上有効量の請求項1から59いずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は請求項60から66のいずれか一項に記載の医薬組成物を、さらなる療法と組み合わせてそれを必要とする対象に投与することを含む、方法。
【請求項７５】
さらなる療法の投与を含み、さらなる療法が、化学療法、放射線照射、さらなるウイルスを用いる腫瘍溶解性ウイルス療法、免疫調節性タンパク質を用いる治療、STAT3阻害剤、抗癌剤又はそれらの任意の組合せを含む、請求項74に記載の方法。
【請求項７６】
さらなる療法の投与を含み、さらなる療法が、同時に又は逐次投与される、請求項74又は75に記載の方法。
【請求項７７】
さらなる療法の逐次投与を含み、さらなる療法が、請求項1から59いずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は請求項60から66のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与する前に投与される、請求項74、75又は76に記載の方法。
【請求項７８】
さらなる療法の逐次投与を含み、さらなる療法が、請求項1から59いずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は請求項60から66のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与した後に投与される、請求項74、75又は76に記載の方法。
【請求項７９】
癌患者を癌療法に対して少なくとも部分的に再感作させる方法であって、治療上有効量の請求項1から59いずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は請求項60から66のいずれか一項に記載の医薬組成物を、腫瘍細胞内のワクシニアウイルスの複製を増強する薬物と組み合わせてそれを必要とする対象に投与することを含む、方法。
【請求項８０】
治療上有効量の請求項1から59いずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は請求項60から66のいずれか一項に記載の医薬組成物の投与を含み、癌療法が、化学療法、放射線照射、ウイルス療法、免疫調節性タンパク質を用いる治療又はそれらの組合せを含む、請求項79に記載の方法。
【請求項８１】
癌細胞において毒性効果をもたらす方法であって、治療上有効量の請求項1から59いずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は請求項60から66のいずれか一項に記載の医薬組成物を、癌細胞の集団に投与することを含む、方法。
【請求項８２】
治療上有効量の請求項1から59いずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は請求項60から66のいずれか一項に記載の医薬組成物の投与を含み、癌細胞の集団中の全ての癌細胞が、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスに感染するわけではない、請求項81に記載の方法。
【請求項８３】
非感染癌細胞の成長が、直接感染なしで阻害される、請求項82に記載の方法。
【請求項８４】
腫瘍溶解性ワクシニアウイルスの感染力を決定する方法であって、(i)対象から第1の生体サンプルを採取し、第1の生体サンプルにおけるSTAT3のレベルを決定するステップ、(ii)有効な治療上有効量の請求項1から59いずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は請求項60から66のいずれか一項に記載の医薬組成物を、単独で又はさらなる療法と組み合わせて対象に投与するステップ、(iii)ステップ(ii)における投与の約2時間〜約72時間後に対象から第2の生体サンプルを採取し、第2の生体サンプルにおけるSTAT3タンパク質のレベルを検出するステップを含む、方法。
【請求項８５】
さらなる療法の投与を含み、さらなる療法が、化学療法、放射線照射、さらなるウイルスを用いる腫瘍溶解性ウイルス療法、免疫調節性タンパク質を用いる治療、STAT3阻害剤、抗癌剤又はそれらの任意の組合せを含む、請求項84に記載の方法。
【請求項８６】
さらなる療法の投与を含み、さらなる療法が、同時に又は逐次投与される、請求項84又は85に記載の方法。
【請求項８７】
さらなる療法の逐次投与を含み、さらなる療法が、請求項1から59いずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は請求項60から66のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与する前に投与される、請求項84、85又は86に記載の方法。
【請求項８８】
さらなる療法の逐次投与を含み、さらなる療法が、請求項1から59いずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は請求項60から66のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与した後に投与される、請求項84、85又は86に記載の方法。
【請求項８９】
単独での又はさらなる療法と組み合わせた腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は医薬組成物の投与前(ステップi)及び後(ステップiii)に、STAT3のレベルを決定することを含み、STAT3のレベルが、ステップ(i)においてよりもステップ(iii)において低い場合に、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスが感染性であると決定される、請求項84から88のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９０】
請求項1から59いずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は請求項60から66のいずれか一項に記載の医薬組成物の投与を含み、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は医薬組成物が、約106PFU/mL〜約108PFU/mLの腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを含む投与量で投与される、請求項70から89のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９１】
請求項1から59いずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は請求項60から66のいずれか一項に記載の医薬組成物の投与を含み、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は医薬組成物が、第1の期間の間、初期用量で、第2の期間の間、中間用量で、第3の期間の間、高用量で独立に投与される、請求項70から90のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９２】
初期の、中間の及び高用量の投与を独立に含み、初期用量が、中間用量よりも低く、中間用量が、高用量よりも低い、請求項91に記載の方法。
【請求項９３】
第1、第2及び第3の期間が各々、約1週〜約3週である、請求項91又は92に記載の方法。
【請求項９４】
請求項1から59いずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は請求項60から66のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含み、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス及び医薬組成物が独立に、約1mL〜約5mL、約5mL〜10mL、約15mL〜約20mL、約25mL〜約30mL、約30mL〜約50mL、約50mL〜約100mL、約100mL〜150mL、約150mL〜約200mL、約200mL〜約250mL、約250mL〜約300mL、約300mL〜約350mL、約350mL〜約400mL、約400mL〜約450mL、約450mL〜500mL、約500mL〜750mL又は約750mL〜1000mLの容量で投与される液体投与形を含む、請求項70から93のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９５】
請求項1から59いずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は請求項60から66のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含み、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は医薬組成物が、液体投与形、固体投与形、吸入可能投与形、経鼻投与形で、リポソーム製剤、ナノ粒子を含む投与形、マイクロ粒子を含む投与形、ポリマー投与形又はそれらの任意の組合せで投与される、請求項70から94のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９６】
請求項1から59いずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は請求項60から66のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含み、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は医薬組成物が、約1週、約2週、約3週、約4週、約6週、約7週、約8週、約9週、約10週又は約12週の間投与される、請求項70から95のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９７】
請求項1から59いずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は請求項60から66のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含み、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は医薬組成物が、1日に1回、1日に2回、週に1回、2週に1回又は3週に1回投与される、請求項70から96のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９８】
請求項1から59いずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は請求項60から66のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含み、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は医薬組成物が、静脈内に又は腫瘍内注射によって投与される、請求項70から97のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９９】
請求項1から59いずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は請求項60から66のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含み、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は医薬組成物の投与が、第1の用量の投与から約1時間〜約3日後に第1のピークウイルス負荷及び約3日〜約7日後に第2のピークウイルス負荷をもたらす、請求項70から98のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１００】
さらなる療法の投与を含み、さらなる療法が、約1週、約2週、約3週、約4週、約6週、約7週、約8週、約9週、約10週又は約12週の間投与される、請求項74から99のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０１】
さらなる療法の投与を含み、さらなる療法が、1日に1回、週に1回、2週に1回又は3週に1回投与される、請求項73から100のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０２】
さらなる療法の投与を含み、さらなる療法が、液体投与形、固体投与形、吸入可能投与形、経鼻投与形で、リポソーム製剤、ナノ粒子を含む投与形、マイクロ粒子を含む投与形、ポリマー投与形又はそれらの任意の組合せで投与される、請求項73から101のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０３】
さらなる療法の投与を含み、さらなる療法が、経口的に、静脈内に、腫瘍内注射によって、又は放射線照射によって投与される、請求項73から102のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０４】
請求項1から59いずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は請求項60から66のいずれか一項に記載の医薬組成物のそれを必要とする対象への投与を含み、対象がヒトである、請求項70から103のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０５】
対象からの第1及び第2の生体サンプルの採取を含み、第1及び第2の生体サンプルが、ヒト組織サンプルである、請求項104に記載の方法。
【請求項１０６】
対象からの第1及び第2の生体サンプルの採取を含み、対象がヒトであり、第1及び第2の生体サンプルが、ヒト対象から得た血液又は血漿である、請求項105に記載の方法。
【請求項１０７】
請求項1から59いずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は請求項60から66のいずれか一項に記載の医薬組成物のそれを必要とする対象への投与を含み、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は医薬組成物の投与の前に、対象が、癌又は腫瘍を有すると診断されている、請求項70から106のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０８】
請求項1から59いずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は請求項60から66のいずれか一項に記載の医薬組成物のそれを必要とする対象への投与を含み、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は医薬組成物の投与の前に、対象が、癌又は腫瘍を有すると診断される、請求項70から107のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０９】
請求項1から59いずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は請求項60から66のいずれか一項に記載の医薬組成物の、さらなる療法と組み合わせたそれを必要とする対象への投与を含み、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は医薬組成物又はさらなる療法の投与の前に、対象が、癌又は腫瘍を有すると診断されている、請求項70から108のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１０】
請求項1から59いずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は請求項60から66のいずれか一項に記載の医薬組成物の、さらなる療法と組み合わせたそれを必要とする対象への投与を含み、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は医薬組成物の投与の前に、対象が、癌又は腫瘍を有すると診断される、請求項70から109のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１１】
外来核酸を含むウイルスであって、前記外来核酸が、STAT3媒介性遺伝子活性化を調節するタンパク質又はその断片をコードする、ウイルス。
【請求項１１２】
外来核酸配列を含み、ワクシニアウイルスである、請求項111に記載のウイルス。
【請求項１１３】
外来核酸を含み、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスが、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスである、請求項112に記載のウイルス。
【請求項１１４】
タンパク質又はその断片が、PIAS3タンパク質又はその断片である、請求項111から113のいずれか一項に記載のウイルス。
【請求項１１５】
PIAS3タンパク質又はその断片をコードする外来核酸を含み、外来核酸が、配列番号8〜10からなる群から選択される核酸配列又はその断片に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同である、請求項114に記載のウイルス。
【請求項１１６】
PIAS3タンパク質又はその断片をコードする外来核酸を含み、PIAS3タンパク質又はその断片が、配列番号1〜7及び24〜27のいずれか1つに由来するアミノ酸に対して少なくとも約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%又は100%相同であるアミノ酸配列又はその断片を含む、請求項111から115のいずれか一項に記載のウイルス。
【請求項１１７】
外来核酸が、HIV-1のTATタンパク質又はその断片をさらにコードする、請求項111から116のいずれか一項に記載のウイルス。
【請求項１１８】
TATタンパク質をさらにコードする外来核酸を含み、外来核酸が、配列番号12又はその断片に対して約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%又は100%相同である配列をさらに含む、請求項117に記載のウイルス。
【請求項１１９】
TATタンパク質又はその断片をさらにコードする外来核酸を含み、TAT又はその断片タンパク質が、配列番号11又はその断片に対して約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%又は100%同一である配列を含む、請求項111から118のいずれか一項に記載のウイルス。
【請求項１２０】
PIAS3タンパク質又はその断片をコードする外来核酸を含み、PIAS3タンパク質又はその断片が、配列番号1のアミノ酸129〜316、133〜316、132〜177、126〜176又は400〜528を含む、請求項111から119のいずれか一項に記載のウイルス。
【請求項１２１】
PIAS3タンパク質又はその断片をコードする外来核酸を含み、PIAS3タンパク質又はその断片が、配列番号1のアミノ酸126〜176を含む、請求項111から120のいずれか一項に記載のウイルス。
【請求項１２２】
STAT3媒介性遺伝子活性化を調節するタンパク質又はその断片が、STAT3阻害剤である、請求項1から59のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項１２３】
STAT3媒介性遺伝子活性化を調節するタンパク質又はその断片が、STAT3阻害剤である、請求項111から122のいずれか一項に記載のウイルス。
【請求項１２４】
対象が、請求項1から59いずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は請求項60から66のいずれか一項に記載の医薬組成物の投与の前、それと同時に又はその後にケトン食を投与される、請求項70から89のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２５】
外来核酸が、配列番号8〜10、29、31、33、35、37及び39〜43からなる群から選択されるヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列に由来するヌクレオチドの非連続ストレッチを含む核酸断片を含む、請求項1に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項１２６】
外来核酸が、配列番号8のヌクレオチド配列を含む、請求項1に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項１２７】
外来核酸が、配列番号9のヌクレオチド配列を含む、請求項1に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項１２８】
外来核酸が、配列番号10のヌクレオチド配列を含む、請求項1に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項１２９】
外来核酸が、配列番号29のヌクレオチド配列を含む、請求項1に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項１３０】
外来核酸が、配列番号31のヌクレオチド配列を含む、請求項1に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項１３１】
外来核酸が、配列番号33のヌクレオチド配列を含む、請求項1に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項１３２】
外来核酸が、配列番号35のヌクレオチド配列を含む、請求項1に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項１３３】
外来核酸が、配列番号37のヌクレオチド配列を含む、請求項1に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項１３４】
外来核酸が、配列番号39のヌクレオチド配列を含む、請求項1に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項１３５】
外来核酸が、配列番号40のヌクレオチド配列を含む、請求項1に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項１３６】
外来核酸が、配列番号41のヌクレオチド配列を含む、請求項1に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項１３７】
外来核酸が、配列番号42のヌクレオチド配列を含む、請求項1に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項１３８】
外来核酸が、配列番号43のヌクレオチド配列を含む、請求項1に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
助成金情報
本開示は、米国国立衛生研究所(National Institutes of Health)によって与えられたCA178766の下、政府の支援を受けて行われた。政府は、本開示において一定の権利を有する。
【０００２】
参照による組込み
すべての刊行物、本明細書において言及される特許、特許出願及びNCBI受託番号は、各個々の刊行物、特許又は特許出願が、参照により組み込まれるように具体的に、個別に示されのと、及びその全文が示されるのと同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。本明細書において使用されるような用語と、組み込まれた参考文献において定義されるような用語の間の矛盾の事象では、本開示の定義が支配する。
【０００３】
相互参照
本出願は、参照によりその全文が本明細書に組み込まれる2016年7月19日に出願された米国仮出願第62/364,095号の利益を主張する。
【０００４】
緒言
本明細書における実施形態は、STAT3(シグナル伝達兼転写活性化因子3)媒介性遺伝子活性化を調節し得る腫瘍溶解性ウイルスに関する。
【発明の概要】
【０００５】
本明細書において一実施形態では、外来核酸を含み得る腫瘍溶解性ワクシニアウイルスであって、前記外来核酸は、STAT3媒介性遺伝子活性化を調節し得るタンパク質又はその断片をコードし得る、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを提供する。特定の実施形態では、外来核酸は、タンパク質をコードし得る。特定の実施形態では、外来核酸は、断片をコードし得る。
【０００６】
特定の実施形態では、タンパク質又はその断片は、STAT3認識ドメイン又は前記認識ドメイン内のブロッキング断片を含み得る。特定の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ブロッキング断片を含むことがあり、ブロッキング断片は、STAT3媒介性遺伝子活性化を調節し得る。
【０００７】
特定の実施形態では、タンパク質又はその断片は、PIAS3タンパク質又はその断片であり得る。特定の実施形態では、タンパク質又はその断片は、SOCS3タンパク質若しくはその断片、TCPTPタンパク質若しくはその断片又はSTAT3タンパク質若しくはその断片であり得る。
【０００８】
特定の実施形態では、タンパク質又はその断片は、PIAS3タンパク質又はその断片であり得る。特定の実施形態では、外来核酸は、PIAS3タンパク質若しくはその断片、SOCS3タンパク質若しくはその断片、TCPTPタンパク質若しくはその断片又はドミナントネガティブ突然変異体STAT3タンパク質若しくはその断片の発現の増加のためにコドン最適化することができる。特定の実施形態では、外来核酸は、PIAS3タンパク質をコードすることがあり、外来核酸は、配列番号8〜10及び40〜43からなる群から選択される核酸配列に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であり得る。特定の実施形態では、外来核酸は、PIAS3タンパク質をコードすることがあり、外来核酸は、配列番号8〜10及び40〜43からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み得る。特定の実施形態では、PIAS3タンパク質をコードする外来核酸、外来核酸は、配列番号8〜10及び40〜43からなる群から選択される核酸配列の全長に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であり得る。特定の実施形態では、外来核酸は、PIAS3タンパク質をコードすることがあり、外来核酸は、配列番号8〜10及び40〜43からなる群から選択される核酸配列の画分に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であり得る。特定の実施形態では、外来核酸は、PIAS3タンパク質断片をコードすることがあり、外来核酸は、配列番号8〜10及び40〜43からなる群から選択されるヌクレオチド配列の核酸断片に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であり得る。特定の実施形態では、外来核酸は、PIAS3タンパク質断片をコードすることがあり、外来核酸は、配列番号8〜10及び40〜43からなる群から選択され得るヌクレオチド配列の核酸断片を含む。特定の実施形態では、核酸断片は、配列番号8〜10及び40〜43からなる群から選択されるヌクレオチド配列に由来するヌクレオチドの連続ストレッチを含み得る。特定の実施形態では、ヌクレオチドの連続ストレッチは、3ヌクレオチド〜552ヌクレオチドの長さを有し得る。特定の実施形態では、核酸断片は、配列番号8〜10及び40〜43からなる群から選択されるヌクレオチド配列に由来する非連続ヌクレオチドを含み得る。
【０００９】
特定の実施形態では、PIAS3タンパク質をコードする外来核酸、PIAS3タンパク質は、配列番号1〜7及び24〜27からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であり得るアミノ酸配列並びにその保存的置換を含む。特定の実施形態では、PIAS3タンパク質をコードする外来核酸、PIAS3タンパク質は、配列番号1のアミノ酸配列に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であるアミノ酸配列及びその保存的置換を含み得る。特定の実施形態では、外来核酸は、PIAS3タンパク質をコードすることがあり、PIAS3タンパク質は、配列番号1〜7及び24〜27からなる群から選択されるアミノ酸配列の全長に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であり得るアミノ酸配列並びにその保存的置換を含み得る。特定の実施形態では、外来核酸は、PIAS3タンパク質をコードすることがあり、PIAS3タンパク質は、配列番号1のアミノ酸配列の全長に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であるアミノ酸配列及びその保存的置換を含み得る。特定の実施形態では、外来核酸は、PIAS3タンパク質をコードすることがあり、PIAS3タンパク質は、配列番号1〜7及び24〜27からなる群から選択されるアミノ酸配列の全長の画分に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であるアミノ酸配列並びにその保存的置換を含み得る。特定の実施形態では、外来核酸は、PIAS3タンパク質をコードすることがあり、PIAS3タンパク質は、配列番号1のアミノ酸配列の全長の画分に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であり得るアミノ酸配列及びその保存的置換を含み得る。特定の実施形態では、PIAS3タンパク質断片をコードする外来核酸、PIAS3タンパク質断片は、配列番号1〜7及び24〜27のうちいずれか1つに由来するアミノ酸断片に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約(bout)97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であり得るアミノ酸配列並びにその保存的置換を含み得る。特定の実施形態では、外来核酸は、PIAS3タンパク質断片をコードすることがあり、PIAS3タンパク質断片は、配列番号1に由来するアミノ酸断片に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であり得るアミノ酸配列及びその保存的置換を含み得る。特定の実施形態では、本明細書において開示される外来核酸によってコードされるPIAS3タンパク質又はその断片は、配列番号1のアミノ酸配列のアミノ酸400〜528及びその保存的置換を含み得る。特定の実施形態では、本明細書において開示される外来核酸によってコードされるPIAS3タンパク質���はその断片は、配列番号6のアミノ酸配列のアミノ酸400〜523及びその保存的置換を含み得る。
【００１０】
特定の実施形態では、STAT3活性を調節する、例えば、STAT3媒介性遺伝子活性化を調節するタンパク質又はその断片は、SOCS3タンパク質又はその断片及びその保存的置換である。特定の実施形態では、SOCS3タンパク質又はその断片は、ヒトSOCS3タンパク質又はその断片及びその保存的置換を含み得る。特定の実施形態では、SOCS3タンパク質又はその断片は、配列番号28及び30からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約85%相同であり得るアミノ酸配列並びにその保存的置換を含み得る。特定の実施形態では、SOCS3タンパク質又はその断片は、配列番号28のアミノ酸配列に対して少なくとも約85%相同であり得るアミノ酸配列及びその保存的置換を含み得る。特定の実施形態では、SOCS3タンパク質又はその断片は、配列番号28及び30からなる群から選択されるアミノ酸配列の全長に対して少なくとも約85%相同であり得るアミノ酸配列並びにその保存的置換を含み得る。特定の実施形態では、SOCS3タンパク質又はその断片は、配列番号28及び30からなる群から選択されるアミノ酸配列の全長の画分に対して少なくとも約85%相同であり得るアミノ酸配列並びにその保存的置換を含み得る。
【００１１】
特定の実施形態では、STAT3活性を調節する、例えば、STAT3媒介性遺伝子活性化を調節するタンパク質又はその断片は、TCPTPタンパク質又はその断片及びその保存的置換であり得る。特定の実施形態では、TCPTPタンパク質又はその断片は、ヒトTCPTPタンパク質又はその断片及びその保存的置換であり得る。特定の実施形態では、TCPTPタンパク質又はその断片は、配列番号32及び34からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約85%相同であり得るアミノ酸配列並びにその保存的置換を含み得る。特定の実施形態では、TCPTPタンパク質又はその断片は、配列番号32のアミノ酸配列に対して少なくとも約85%相同であり得るアミノ酸配列及びその保存的置換を含み得る。特定の実施形態では、TCPTPタンパク質又はその断片は、配列番号32及び34からなる群から選択されるアミノ酸配列の全長に対して少なくとも約85%相同であり得るアミノ酸配列並びにその保存的置換を含み得る。特定の実施形態では、TCPTPタンパク質又はその一部は、配列番号32及び34からなる群から選択されるアミノ酸配列の全長の画分に対して少なくとも約85%相同であり得るアミノ酸配列並びにその保存的置換を含み得る。
【００１２】
特定の実施形態では、STAT3活性を調節する、例えば、STAT3媒介性遺伝子活性化を調節するタンパク質又はその断片は、ドミナントネガティブ突然変異体STAT3タンパク質又はその断片及びその保存的置換であり得る。特定の実施形態では、ドミナントネガティブ突然変異体STAT3タンパク質又はその断片は、ヒトドミナントネガティブ突然変異体STAT3タンパク質又はその断片及びその保存的置換であり得る。特定の実施形態では、ドミナントネガティブ突然変異体STAT3タンパク質又はその断片は、配列番号36及び38からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約85%相同であり得るアミノ酸配列並びにその保存的置換を含み得る。特定の実施形態では、ドミナントネガティブ突然変異体STAT3タンパク質又はその断片は、配列番号36及び38からなる群から選択されるアミノ酸配列の全長に対して少なくとも約85%相同であり得るアミノ酸配列並びにその保存的置換を含み得る。特定の実施形態では、ドミナントネガティブ突然変異体STAT3タンパク質又はその断片は、配列番号36及び38からなる群から選択されるアミノ酸配列の全長の一部に対して少なくとも約85%相同であり得るアミノ酸配列並びにその保存的置換を含み得る。
【００１３】
特定の実施形態では、外来核酸は、ワクシニアウイルスゲノム中に挿入され得る。
【００１４】
特定の実施形態では、外来核酸は、ワクシニアウイルスゲノムのチミジンキナーゼ遺伝子座中に挿入され得る。特定の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、細胞外エンベロープウイルス(EEV)であり得る。特定の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、腫瘍細胞中のM2マクロファージ内で複製し得る。特定の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、腫瘍細胞中のM2マクロファージ内で複製して、細胞外エンベロープウイルス(EEV)を主に含有するウイルスの集団を生成し得る。特定の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、M2マクロファージ内で複製することによって免疫抑制を部分的に避けることができる。
【００１５】
本開示は、本明細書において記載されるような腫瘍溶解性ワクシニアウイルス及び賦形剤を含み得る医薬組成物をさらに提供する。特定の実施形態では、賦形剤は、緩衝剤、安定剤、抗酸化剤、結合剤、希釈剤、分散剤、レートコントロール剤、滑沢剤、流動促進剤、崩壊剤、可塑剤、保存剤又はそれらの任意の組合せのうち1つを含み得る。特定の実施形態では、賦形剤は、リン酸水素二ナトリウム二水和物、リン酸二水素ナトリウム二水和物、塩化ナトリウム、ミオイノシトール、ソルビトール又はそれらの任意の組合せを含み得る。特定の実施形態では、医薬組成物は、保存剤を含まないこともある。特定の実施形態では、医薬組成物は、保存剤、希釈剤及び担体のうち1種以上をさらに含み得る。特定の実施形態では、医薬組成物は、さらなる有効成分又はその塩をさらに含み得る。特定の実施形態では、医薬組成物は、さらなる有効成分を含んでいてもよく、さらなる有効成分は、さらなる腫瘍溶解性ワクシニアウイルスであり得る。
【００１６】
本開示は、本明細書において記載されるような腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを製造するための方法であって、(i)ワクシニアウイルス塩基核酸配列を、上記のような外来核酸配列と作動可能に連結することによって、修飾されたワクシニアウイルスDNAベクターを作製するステップ、(ii)哺乳動物細胞を、修飾されたワクシニアウイルスDNAベクターを用いてトランスフェクトするステップ、(iii)ウイルス複製に適した条件において哺乳動物細胞を培養するステップ、及び(iv)ウイルス粒子を回収するステップを含み得る、方法をさらに提供し得る。特定の実施形態では、哺乳動物細胞は、HeLa細胞、293細胞又はVero細胞を含む。特定の実施形態では、修飾されたワクシニアウイルスDNAベクター中の外来核酸は、細胞外エンベロープウイルス(EEV)を主に含有するウイルス粒子の集団を促進し得る。
【００１７】
本開示は、開示されるワクシニアウイルスのうち1種以上を投与することによって治療する方法を提供する。特定の実施形態では、癌を治療する方法は、治療上有効量の本開示の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は本明細書において記載されるような医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することを含み得る。いくつかの実施形態では、方法は、治療上有効量の本開示の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は本明細書において記載されるような医薬組成物の投与を含むことができ、癌は、固形腫瘍、白血病又はリンパ腫であり得る。
【００１８】
1つの限定されない実施形態は、腫瘍を治療する方法であって、治療上有効量の本開示の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は本明細書において記載されるような医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することを含み得る、方法を提供する。特定の実施形態では、方法は、治療上有効量の本開示の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は本明細書において記載されるような医薬組成物の投与を含むことができ、腫瘍は、固形腫瘍、白血病又はリンパ腫であり得る。
【００１９】
1つの限定されない実施形態は、癌又は腫瘍を治療する方法であって、治療上有効量の本開示の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は本明細書において記載されるような医薬組成物を、さらなる療法と組み合わせてそれを必要とする対象に投与することを含み得る、方法を提供する。特定の実施形態では、方法は、さらなる療法の投与を含むことができ、さらなる療法は、化学療法、放射線照射、さらなるウイルスを用いる腫瘍溶解性ウイルス療法、免疫調節性タンパク質を用いる治療、STAT3阻害剤、抗癌剤又はそれらの任意の組合せを含み得る。特定の実施形態では、方法は、さらなる療法の投与を含むことができ、さらなる療法は、同時に又は逐次投与され得る。特定の実施形態では、方法は、さらなる療法の逐次投与を含むことができ、さらなる療法は、本開示の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は本明細書において記載されるような医薬組成物を投与する前に投与され得る。特定の実施形態では、方法は、さらなる療法の逐次投与を含むことができ、さらなる療法は、本開示の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は本明細書において記載されるような医薬組成物を投与した後に投与され得る。
【００２０】
1つの限定されない実施形態は、癌患者を癌療法に対して少なくとも部分的に再感作させる方法であって、治療上有効量の本開示の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は本明細書において記載されるような医薬組成物を、腫瘍細胞内のワクシニアウイルスの複製を増強し得る薬物と組み合わせてそれを必要とする対象に投与することを含み得る、方法を提供する。特定の実施形態では、方法は、治療上有効量の本開示の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は本明細書において記載されるような医薬組成物の投与を含むことができ、癌療法は、化学療法、放射線照射、ウイルス療法、免疫調節性タンパク質を用いる治療又はそれらの任意の組合せを含み得る。
【００２１】
1つの限定されない実施形態は、癌細胞において毒性効果をもたらす方法であって、治療上有効量の本開示の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は本明細書において記載されるような医薬組成物を、癌細胞の集団に投与することを含み得る、方法を提供する。特定の実施形態では、方法は、治療上有効量の本開示の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は本明細書において記載されるような医薬組成物の投与を含むことができるが、癌細胞の集団中の全ての癌細胞が、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスに感染し得るわけではない。特定の実施形態では、非感染癌細胞の成長は、直接感染なしで阻害され得る。
【００２２】
1つの限定されない実施形態は、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスの感染力を決定する方法であって、(i)対象から第1の生体サンプルを採取し、第1の生体サンプルにおけるSTAT3のレベルを決定するステップ、(ii)有効な治療上有効量の本開示の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は本明細書に記載されるような医薬組成物を、単独で又はさらなる療法と組み合わせて対象に投与するステップ、(iii)ステップ(ii)における投与の約2時間〜約72時間後に対象から第2の生体サンプルを採取し、第2の生体サンプルにおけるSTAT3タンパク質のレベルを検出するステップを含み得る、方法を提供する。特定の実施形態では、方法は、さらなる療法の投与を含むことができ、さらなる療法は、化学療法、放射線照射、さらなるウイルスを用いる腫瘍溶解性ウイルス療法、免疫調節性タンパク質を用いる治療、STAT3阻害剤、抗癌剤又はそれらの任意の組合せを含み得る。特定の実施形態では、方法は、さらなる療法の投与を含むことができ、さらなる療法は、同時に又は逐次投与され得る。特定の実施形態では、方法は、さらなる療法の逐次投与を含むことができ、さらなる療法は、本開示の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は本明細書において記載されるような医薬組成物を投与する前に投与され得る。特定の実施形態では、方法は、さらなる療法の逐次投与を含むことができ、さらなる療法は、本開示の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は本明細書において記載されるような医薬組成物を投与した後に投与され得る。
【００２３】
特定の実施形態では、方法は、単独での又はさらなる療法と組み合わせた腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は医薬組成物の投与前(ステップi)及び後(ステップiii)に、STAT3のレベルを決定することを含むことができ、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、STAT3のレベルが、ステップ(i)においてよりもステップ(iii)において低い場合に、感染性であると決定され得る。
【００２４】
特定の実施形態では、方法は、本開示の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は本明細書において記載されるような医薬組成物の投与を含むことができ、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は医薬組成物は、約106PFU/mL〜約108PFU/mLの腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを含み得る投与量で投与され得る。特定の実施形態では、方法は、本開示の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は本明細書において記載されるような医薬組成物の投与を含むことができ、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は医薬組成物は、第1の期間の間、初期用量で、第2の期間の間、中間用量で、第3の期間の間、高用量で独立に投与され得る。特定の実施形態では、方法は、初期の、中間の及び高用量の投与を独立に含むことができ、初期用量は、中間用量よりも低いものであり得、中間用量は、高用量よりも低い。特定の実施形態では、第1、第2及び第3の期間は各々、約1週〜約3週であり得る。特定の実施形態では、方法は、本開示の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は本明細書において記載されるような医薬組成物を投与することを含むことができ、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス及び医薬組成物は独立に、約1mL〜約5mL、約5mL〜10mL、約15mL〜約20mL、約25mL〜約30mL、約30mL〜約50mL、約50mL〜約100mL、約100mL〜150mL、約150mL〜約200mL、約200mL〜約250mL、約250mL〜約300mL、約300mL〜約350mL、約350mL〜約400mL、約400mL〜約450mL、約450mL〜500mL、約500mL〜750mL又は約750mL〜1000mLの容量で投与され得る液体投与形を含み得る。特定の実施形態では、方法は、本開示の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は本明細書において記載されるような医薬組成物を投与することを含むことができ、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は医薬組成物は、液体投与形、固体投与形、吸入可能投与形、経鼻投与形で、リポソーム製剤、ナノ粒子を含む投与形、マイクロ粒子を含む投与形、ポリマー投与形又はそれらの任意の組合せで投与され得る。特定の実施形態では、方法は、本開示の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は本明細書において記載されるような医薬組成物を投与することを含むことができ、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は医薬組成物は、約1週、約2週、約3週、約4週、約6週、約7週、約8週、約9週、約10週又は約12週の間投与され得る。特定の実施形態では、方法は、本開示の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は本明細書において記載されるような医薬組成物を投与することを含むことができ、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は医薬組成物は、1日に1回、1日に2回、週に1回、2週に1回又は3週に1回投与され得る。特定の実施形態では、方法は、本開示の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は本明細書において記載されるような医薬組成物を投与することを含むことができ、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は医薬組成物は、静脈内に又は腫瘍内注射によって投与され得る。特定の実施形態では、方法は、本開示の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は本明細書において記載されるような医薬組成物を投与することを含むことができ、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は医薬組成物の投与は、第1の用量の投与から約1時間〜約3日後に第1のピークウイルス負荷及び約3日〜約7日後に第2のピークウイルス負荷をもたらし得る。特定の実施形態では、方法は、さらなる療法の投与を含むことができ、さらなる療法は、約1週、約2���、約3週、約4週、約6週、約7週、約8週、約9週、約10週又は約12週の間投与され得る。特定の実施形態では、方法は、さらなる療法の投与を含むことができ、さらなる療法は、1日に1回、週に1回、2週に1回又は3週に1回投与され得る。特定の実施形態では、方法は、さらなる療法の投与を含むことができ、さらなる療法は、液体投与形、固体投与形、吸入可能投与形、経鼻投与形で、リポソーム製剤、ナノ粒子を含む投与形、マイクロ粒子を含む投与形、ポリマー投与形又はそれらの任意の組合せで投与され得る。特定の実施形態では、方法は、さらなる療法の投与を含むことができ、さらなる療法は、経口的に、静脈内に、腫瘍内注射によって、又は放射線照射によって投与され得る。特定の実施形態では、方法は、本開示の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は本明細書において記載されるような医薬組成物の、それを必要とする対象への投与を含むことができ、対象は、ヒトであり得る。特定の実施形態では、方法は、対象からの第1及び第2の生体サンプルの採取を含むことができ、第1及び第2の生体サンプルは、ヒト組織サンプルであり得る。特定の実施形態では、方法は、対象からの第1及び第2の生体サンプルの採取を含むことができ、対象は、ヒトであり得、第1及び第2の生体サンプルは、ヒト対象から得た血液又は血漿であり得る。特定の実施形態では、方法は、本開示の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は本明細書において記載されるような医薬組成物の、それを必要とする対象への投与を含むことができ、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は医薬組成物投与の前に、対象は、癌又は腫瘍を有すると診断されていることもある。特定の実施形態では、本開示の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は本明細書において記載されるような医薬組成物の、それを必要とする対象への投与を含むことができ、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は医薬組成物の投与の前に、対象は、癌又は腫瘍を有すると診断され得る。特定の実施形態では、方法は、本開示の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は本明細書において記載されるような医薬組成物の、さらなる療法と組み合わせたそれを必要とする対象への投与を含むことができ、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は医薬組成物又はさらなる療法の投与の前に、対象は、癌又は腫瘍を有すると診断されていることもある。特定の実施形態では、方法は、本開示の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は本明細書において記載されるような医薬組成物の、さらなる療法と組み合わせたそれを必要とする対象への投与を含み、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は医薬組成物の投与の前に、対象は、癌又は腫瘍を有すると診断されていることもある。
【００２５】
1つの限定されない実施形態は、外来核酸を含むウイルスであって、前記外来核酸は、STAT3媒介性遺伝子活性化を調節し得るタンパク質又はその断片をコードし得るウイルスを提供する。特定の実施形態では、ウイルスは、外来核酸配列を含むことができ、ワクシニアウイルスであり得る。特定の実施形態では、ウイルスは、外来核酸を含むことができ、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスであり得る。特定の実施形態では、タンパク質又はその断片は、PIAS3タンパク質又はその断片であり得る。特定の実施形態では、ウイルスは、PIAS3タンパク質又はその断片をコードする外来核酸を含むことができ、外来核酸は、配列番号8〜10及び40〜43からなる群から選択される核酸配列に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であるか、又はその断片であり得る。特定の実施形態では、ウイルスは、PIAS3タンパク質又はその断片をコードする外来核酸を含むことができ、PIAS3タンパク質又はその断片は、配列番号1〜7及び24〜27のいずれか1つに由来するアミノ酸に対して少なくとも約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%又は100%相同であり得るアミノ酸配列又はその断片を含み得る。
【００２６】
特定の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、配列番号1のアミノ酸配列のアミノ酸400〜528及びその保存的置換を含み得るPIAS3タンパク質又はその断片をコードし得る外来核酸配列を含み得る。特定の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、配列番号6のアミノ酸配列のアミノ酸400〜523及びその保存的置換を含み得るPIAS3タンパク質又はその断片をコードし得る外来核酸配列を含み得る。
【００２７】
特定の実施形態では、STAT3活性を調節する、例えば、STAT3媒介性遺伝子活性化を調節するタンパク質又はその断片は、SOCS3タンパク質又はその断片及びその保存的置換であり得る。特定の実施形態では、外来核酸は、ヒトSOCS3タンパク質又はその断片及びその保存的置換を含むSOCS3タンパク質又はその断片を含み得る。特定の実施形態では、SOCS3タンパク質又はその断片は、配列番号28及び30からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約85%相同であるアミノ酸配列並びにその保存的置換を含み得る。特定の実施形態では、SOCS3タンパク質又はその断片は、配列番号28のアミノ酸配列に対して少なくとも約85%相同であり得るアミノ酸配列及びその保存的置換を含み得る。特定の実施形態では、SOCS3タンパク質又はその断片は、配列番号28及び30からなる群から選択されるアミノ酸配列の全長に対して少なくとも約85%相同であり得るアミノ酸配列並びにその保存的置換を含み得る。特定の実施形態では、SOCS3タンパク質又はその断片は、配列番号28及び30からなる群から選択されるアミノ酸配列の全長の画分に対して少なくとも約85%相同であり得るアミノ酸配列並びにその保存的置換を含む。
【００２８】
特定の実施形態では、STAT3活性を調節する、例えば、STAT3媒介性遺伝子活性化を調節するタンパク質又はその断片をコードし得る外来核酸は、TCPTPタンパク質又はその断片及びその保存的置換であり得る。特定の実施形態では、外来核酸は、TCPTPタンパク質又はその断片を含むことができ、TCPTPタンパク質又はその断片は、ヒトTCPTPタンパク質又はその断片及びその保存的置換である。特定の実施形態では、TCPTPタンパク質又はその断片は、配列番号32及び34からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約85%相同であり得るアミノ酸配列並びにその保存的置換を含み得る。特定の実施形態では、TCPTPタンパク質又はその断片は、配列番号32のアミノ酸配列に対して少なくとも約85%相同であり得るアミノ酸配列及びその保存的置換を含み得る。特定の実施形態では、TCPTPタンパク質又はその断片は、配列番号32及び34からなる群から選択されるアミノ酸配列の全長に対して少なくとも約85%相同であり得るアミノ酸配列並びにその保存的置換を含み得る。特定の実施形態では、TCPTPタンパク質又はその断片は、配列番号32及び34からなる群から選択されるアミノ酸配列の全長の画分に対して少なくとも約85%相同であり得るアミノ酸配列並びにその保存的置換を含み得る。
【００２９】
特定の実施形態では、STAT3活性を調節する、例えば、STAT3媒介性遺伝子活性化を調節するタンパク質又はその断片は、ドミナントネガティブ突然変異体STAT3タンパク質又はその断片及びその保存的置換であり得る。特定の実施形態では、ドミナントネガティブ突然変異体STAT3タンパク質又はその断片は、ヒトドミナントネガティブ突然変異体STAT3タンパク質又はその断片及びその保存的置換であり得る。特定の実施形態では、ドミナントネガティブ突然変異体STAT3タンパク質又はその断片は、配列番号36及び38からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約85%相同であり得るアミノ酸配列並びにその保存的置換を含み得る。特定の実施形態では、ドミナントネガティブ突然変異体STAT3タンパク質又はその断片は、配列番号36及び38からなる群から選択されるアミノ酸配列の全長に対して少なくとも約85%相同であり得るアミノ酸配列並びにその保存的置換を含み得る。特定の実施形態では、ドミナントネガティブ突然変異体STAT3タンパク質又はその断片は、配列番号36及び38からなる群から選択されるアミノ酸配列の全長の画分に対して少なくとも約85%相同であり得るアミノ酸配列並びにその保存的置換を含み得る。
【００３０】
特定の実施形態では、外来核酸は、細胞透過性タンパク質をさらにコードすることができ、細胞透過性タンパク質は、HIV-1のTATタンパク質又はその断片、YopM、トランスポータン、ペネトラチン、ポリアルギニン又はそれらの任意の組合せを含む。特定の実施形態では、外来核酸は、細胞透過性タンパク質をさらにコードすることができ、外来核酸は、配列番号12、13、115、17、19、21及び23に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であり得る配列又はその断片をさらに含む。特定の実施形態では、核酸は、細胞透過性タンパク質をさらにコードすることができ、外来核酸は、配列番号12、13、115、17、19、21及び23の全長に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であり得る配列をさらに含み得る。特定の実施形態では、外来核酸は、細胞透過性タンパク質をさらにコードすることができ、外来核酸は、配列番号12、13、115、17、19、21及び23の長さの画分に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であり得る配列をさらに含み得る。特定の実施形態では、外来核酸は、細胞透過性ペプチド又はその断片をコードすることができ、細胞透過性ペプチド又はその断片は、配列番号11、14、16、18、20及び22に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%同一である配列並びにその保存的置換又はその断片並びにその保存的置換を含み得る。特定の実施形態では、STAT3活性を調節するタンパク質又はその断片は、配列番号11のアミノ酸配列に対して少なくとも約85%相同であり得るアミノ酸を有する細胞透過性ペプチドにコンジュゲートされ得る。
【００３１】
特定の実施形態では、STAT3活性を調節するタンパク質又はその断片は、配列番号11のアミノ酸配列を含む細胞透過性ペプチドにコンジュゲートされ得る。特定の実施形態では、タンパク質又はその断片は、ブロッキング断片を含むことができ、ブロッキング断片は、配列番号1のアミノ酸126〜176を含み得る。特定の実施形態では、タンパク質又はその断片は、PIAS3タンパク質又はその断片を含むことができ、PIAS3タンパク質又はその断片は、配列番号1のアミノ酸129〜316、133〜316、132〜177、126〜176又は400〜528を含み得る。
【００３２】
特定の実施形態では、STAT3媒介性遺伝子活性化を調節し得るタンパク質又はその断片は、STAT3阻害剤であり得る。
【００３３】
本開示の特定の限定されない方法では、対象は、本開示の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は本明細書において記載されるような医薬組成物の投与の前、それと同時に又はその後にケトン食を投与され得る。
【００３４】
特定の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、外来核酸を含み、外来核酸は、配列番号8〜10、29、31、33、35、37及び39〜43からなる群から選択されるヌクレオチド配列からなる群から選択され得るヌクレオチド配列に由来するヌクレオチドの非連続ストレッチを含み得る核酸断片を含み得る。特定の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、外来核酸を含み、外来核酸は、配列番号8のヌクレオチド配列を含み得る。特定の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、外来核酸を含むことができ、外来核酸は、配列番号9のヌクレオチド配列を含み得る。特定の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、外来核酸を含み、外来核酸は、配列番号10のヌクレオチド配列を含み得る。特定の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、外来核酸を含み、外来核酸は、配列番号29のヌクレオチド配列を含み得る。特定の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、外来核酸を含むことができ、外来核酸は、配列番号31のヌクレオチド配列を含み得る。特定の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、外来核酸を含み、外来核酸は、配列番号33のヌクレオチド配列を含み得る。特定の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、外来核酸を含み、外来核酸は、配列番号35のヌクレオチド配列を含み得る。特定の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、外来核酸を含み、外来核酸は、配列番号37のヌクレオチド配列を含み得る。特定の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、外来核酸を含み、外来核酸は、配列番号39のヌクレオチド配列を含み得る。特定の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、外来核酸を含み、外来核酸は、配列番号40のヌクレオチド配列を含み得る。特定の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、外来核酸を含み、外来核酸は、配列番号41のヌクレオチド配列を含み得る。特定の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、外来核酸を含み、外来核酸は、配列番号42のヌクレオチド配列を含み得る。特定の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、外来核酸を含み、外来核酸は、配列番号43のヌクレオチド配列を含み得る。
【図面の簡単な説明】
【００３５】
【図１】図1は、PIAS3の構造的ドメインを示す図である。
【図２】図2は、PIAS3を発現する種々のワクシニアウイルス構築物のそのSTAT3ブロッキング機能を示す図である。
【図３】図3は、PIAS3又はPIAS3のドメインの発現が、ヒト腫瘍細胞株のワクシニア媒介性死滅を増強することを示す図である。
【図４】図4は、PIAS3を発現するワクシニアウイルスを使用して正常細胞株においてさらなる死滅が観察されないことを示す図である。
【図５】図5は、PIAS3ドメインの発現が、腫瘍細胞(143b)におけるウイルスプラークの大きさを増大するが、正常細胞(HFF)においては増大しないことを示す図である。
【図６】図6は、PIAS3又はPIAS3のドメインが発現される場合に、腫瘍細胞においてウイルス複製が増加されることを示す図である。
【図７】図7は、PIAS3ドメインが発現される場合に、腫瘍におけるウイルスルシフェラーゼ遺伝子発現(複製)が、増加されることを示す図である。
【図８】図8は、マウスRENCA腫瘍モデルにおける、PIAS3を発現する種々のワクシニアウイルスの治療効果を示す図である。
【図９】図9は、hPIAS3126〜176、mPIAS3400〜523、mTCPTP又はmSOCS3を発現するワクシニアウイルスの発現が、腫瘍細胞株におけるサイクリンD発現の減少をもたらすことを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００３６】
詳細な説明
本開示の好ましい実施形態が、本明細書において示され、記載されているが、このような実施形態は単に例として提供されるということは当業者には明らかであろう。多数の変法、変化及び置換は、本開示から逸脱することなく当業者には思い浮かぶであろう。本明細書において記載される本開示の実施形態の種々の代替法も、本開示の実行において使用してよいということは理解されなくてはならない。以下の特許請求の範囲が、本開示の範囲を規定し、これらの特許請求の範囲の範囲内の方法及び構造並びにその等価物がそれによって対象とされることが意図される。
【００３７】
特定の定義
本明細書において使用される技術用語は、単に特定の場合を説明する目的のためのものであって、限定であるように意図されない。
【００３８】
本明細書において、単数形「1つの(a)」、「1つの(an)」及び「その(the)」は、文脈が別のものを明確に示さない限り複数形も同様に含み得る。さらに、用語「含有する(contains)」、「含有している(containing)」、「含んでいる(including)」、「含む(includes)」、「有している(having)」、「有する(has)」、「有する(with)」又はその異形が、詳細な説明及び/又は特許請求の範囲のいずれかにおいて使用される場合、このような用語は、用語「含んでいる(comprising)」と同様の方法で含めたものであるよう意図される。
【００３９】
用語「約」又は「およそ」は、当業者によって決定されるような特定の値の許容される誤差範囲内を意味することができ、これは、幾分かは、その値が測定される又は決定される方法、例えば、測定システムの制限に依存する。例えば、「約」は、所与の値における実行あたり1以内又は1より大きい標準偏差を意味し得る。本出願及び特許請求の範囲において特定の値が記載される場合には、特に断りのない限り、用語「約」は、用語「約」によって修飾された値の±10%など、特定の値の許容可能な誤差範囲を意味すると想定されなければならない。
【００４０】
用語「個体」、「患者」又は「対象」は、同義的に使用される。用語のいずれも、医療従事者(例えば、医師、看護師、ナース・プラクティショナー、医師助手、雑役係又はホスピス職員)の監督(例えば、恒常的な又は断続的な)を必要とすることはない、又はそれを特徴とする状態に制限されない。特定の実施形態では、患者、対象又は個体は、医療従事者の監督下にあり得る。
【００４１】
用語「異種核酸配列」又は「外来核酸配列」とは、本明細書において、特定のウイルスに関連して、特定のウイルス以外の供給源を起源とする核酸配列を指し得る。
【００４２】
用語「突然変異」とは、本明細書において、異種核酸の欠失、挿入、当技術分野で一般に理解されるようなオープンリーディングフレームを切断する突然変異を含む逆位又は置換を指し得る。
【００４３】
用語「遺伝子」は、本明細書において、個々のタンパク質又はRNA(「コード配列」又は「コーディング領域」とも呼ばれる)をコードする核酸のセグメントを、任意選択で、コード配列の上流又は下流に位置し得るプロモーター、オペレーター、ターミネーターなどといった関連する調節領域と一緒に指し得る。
【００４４】
本明細書において同義的に使用されるような用語「突然変異体ウイルス」及び「修飾されたウイルス」とは、そのゲノム中に、それだけには限らないが、欠失、異種核酸の挿入、逆位、置換又はそれらの組合せを含む1つ以上の突然変異を含むウイルスを指し得る。
【００４５】
用語「天然に存在する」とは、本明細書において、ウイルスとの関連で、ウイルスが天然に見い出され得る、すなわち、天然における供給源から単離され得る、及び意図的に修飾されていないことを示し得る。
【００４６】
本明細書において言及される用語「阻害」、「低減」又は「防止」又はこれらの用語の任意の変形は、所望の結果を達成するための任意の測定可能な低下又は完全な阻害を含み得る。
【００４７】
「プロモーター」は、本明細書において、転写の開始及び速度が制御される核酸配列の領域である制御配列であり得る。特定の実施形態では、プロモーターは、RNAポリメラーゼ及びその他の転写因子などの調節タンパク質及び分子が結合し得る遺伝子エレメントを含有し得る。用語「作動可能に位置付けられる」、「作動可能に連結される」、「制御下に」及び「転写制御下に」とは、プロモーターが、その配列の転写開始及び/又は発現を制御するために、正しい機能的位置にある及び/又は核酸配列に関連した配向にあることを意味し得る。特定の実施形態では、プロモーターは、核酸配列の転写活性化に関与するシス作用性調節配列を指す「エンハンサー」とともに使用される場合も使用されない場合もある。
【００４８】
用語「相同性」とは、本明細書において、最適比較目的で配列をアラインすること(例えば、ギャップが第1の配列の配列中に導入され得る)によって決定され得る2種以上のヌクレオチド又はアミノ酸配列間の「相同性」又は「相同性パーセント」の計算であり得る。次いで、対応する位置のヌクレオチドを比較してもよく、2種の配列間の同一性パーセントは、配列によって共有される同一位置の数の関数であり得る(すなわち、相同性%=同一位置の数/位置の総数×100)。例えば、第1の配列中の位置は、第2の配列中の対応する位置と同一のヌクレオチドによって占められ得ると、分子はその位置で同一である。2つの配列間の相同性パーセントは、2つの配列の最適アラインメントのために導入される必要があるギャップの数及び各ギャップの長さを考慮した、配列によって共有される同一位置の数の関数であり得る。特定の実施形態では、比較目的でアラインされる配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも約30%、40%、50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%又は95%であり得る。BLAST(登録商標)検索は、2つの配列間の相同性を決定し得る。2つの配列は、遺伝子、ヌクレオチド配列、タンパク質配列、ペプチド配列、アミノ酸配列又はその断片であり得る。2つの配列の実際の比較は、周知の方法によって、例えば、制限としてではないが、数学的アルゴリズムを使用して達成され得る。このような数学的アルゴリズムの限定されない例は、Karlin, S.及びAltschul, S.、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、第90巻5873〜5877頁(1993年)に記載されている。Altschul, S.ら、Nucleic Acids Res.、第25巻:3389〜3402頁(1997年)に記載されるように、このようなアルゴリズムは、NBLAST及びXBLASTプログラム(バージョン2.0)に組み込まれることがある。BLAST及びGapped BLASTプログラムを利用する場合には、それぞれのプログラム(例えば、NBLAST)の任意の関連パラメータが使用され得る。例えば、配列比較のパラメータは、スコア=100、ワード長=12で設定され得る、又は変更され得る(例えば、W=5又はW=20)。その他の例として、Myers及びMiller、CABIOS(1989)のアルゴリズム、ADVANCE、ADAM、BLAT及びFASTAが挙げられる。別の限定されない実施形態では、2つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、例えば、GCGソフトウェアパッケージ(Accelrys、英国、ケンブリッジ)中のGAPプログラムを使用して達成され得る。
【００４９】
用語「対象」とは、それだけには限らないが、霊長類(例えば、ヒト)、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット又はマウスを含む動物を指し得る。用語「対象」及び「患者」は、例えば、ヒト対象などの哺乳動物対象に関して本明細書において同義的に使用される。
【００５０】
用語「治療する」、「治療すること」及び「治療」は、障害、疾患若しくは状態、又は障害、疾患若しくは状態と関連する症状のうち1つ以上を軽減若しくは抑制すること、又は障害、疾患若しくは状態自体の原因を軽減若しくは根絶することを含むように意図され得る。特定の実施形態では、治療は、予防のため又は臨床病理の過程の間のいずれかで実施され得る。治療の望ましい効果として、それだけには限らないが、疾患の発生又は再発を予防すること、症状を軽減すること、疾患の任意の直接的又は間接的病理学的帰結を減少させること、転移を防ぐこと、疾患進行の速度を低下させること、疾患状態の寛解又は緩和及び緩解又は予後の改善を挙げることができる。
【００５１】
本明細書において同義的に使用されるような用語「治療上有効量」又は「有効量」とは、投与された場合に、治療されている障害、疾患又は状態のうち1つ以上の発生を防ぐ、又は、ある程度まで軽減するのに十分であり得る化合物の量を指すことができる。用語「治療上有効量」とは、研究者、獣医、医師又は臨床医によって探されている細胞、組織、系、動物又はヒトの生物学的又は医学的応答を排除するのに十分である化合物の量を指すことができる。
【００５２】
用語「医薬上許容される担体」、「医薬上許容される賦形剤」、「生理学的に許容される担体」又は「生理学的に許容される賦形剤」とは、液体若しくは固体増量剤、希釈剤、賦形剤、溶媒又はカプセル化剤などの医薬上許容される材料、組成物又は媒体を指すことができる。成分は、医薬製剤のその他の成分と適合しているという意味で「医薬上許容され」得る。合理的なベネフィット/リスク比と釣り合った、過度の毒性、刺激作用、アレルギー反応、免疫原性又はその他の問題又は合併症を伴わない、ヒト及び動物の組織又は臓器と接触して使用するのに適したものであり得る。Remington: The Science and Practice of Pharmacy、第21版;Lippincott Williams & Wilkins:ペンシルバニア州、フィラデルフィア、2005年、Handbook of Pharmaceutical Excipients、第5版、Roweら編、The Pharmaceutical Press and the American Pharmaceutical Association:2005年及びHandbook of Pharmaceutical Additives、第3版;Ash及びAsh編、Gower Publishing Company:2007年、Pharmaceutical Preformulation and Formulation、Gibson編、CRC Press LLC:フロリダ州、ボカラトン、2004年)を参照のこと。
【００５３】
用語「医薬組成物」とは、本明細書において、本明細書において開示される化合物の、その他の化学成分、例えば、希釈剤又は担体との混合物を指し得る。医薬組成物は、生物への化合物の投与を促進できる。それだけには限らないが、経口、注射、エアロゾル、非経口及び局所投与を含む、化合物を投与する複数の技術が、当技術分野には存在する。医薬組成物はまた、化合物を、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、p-トルエンスルホン酸、サリチル酸などといった無機又は有機酸と反応させることによって得ることができる。
【００５４】
「抗癌剤」とは、本明細書において、例えば、癌細胞を死滅させること、癌細胞においてアポトーシスを誘導すること、癌細胞の成長速度を低減すること、罹患率若しくは転移数を低減すること、腫瘍の大きさを低減すること、腫瘍成長を阻害すること、腫瘍若しくは癌細胞への血液供給を低減すること、癌細胞若しくは腫瘍に対する免疫応答を促進すること、癌の進行を防止若しくは阻害すること又は癌を有する対象の寿命を増加することによって、対象において癌に負に影響を及ぼすことが可能である薬剤又は療法を指すことができる。抗癌剤の限定されない例として、生物学的製剤(生物学的療法)、化学療法剤及び放射線療法剤を挙げることができる。
【００５５】
用語「腫瘍溶解性」とは、本明細書において、例えば、癌又は腫瘍細胞の直接溶解を介する腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの物質による、癌又は腫瘍細胞に対する免疫応答を刺激すること、アポトーシス、毒性タンパク質の発現、自食作用及びタンパク質合成のシャットダウン、抗腫瘍性免疫性の誘導又はそれらの組合せによる癌又は腫瘍細胞の死滅を指すことができる。腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの物質に感染した癌又は腫瘍細胞の直接溶解は、前記細胞内のウイルスの複製の結果であり得る。特定の例では、用語「腫瘍溶解性」とは、癌又は腫瘍細胞の溶解を伴わない、前記細胞の死滅を指す。
【００５６】
用語「ドミナントネガティブ突然変異」とは、本明細書において、タンパク質の野生型形態に対して拮抗的に作用するタンパク質の突然変異形態をもたらすタンパク質をコードする、タンパク質のアミノ酸配列又はヌクレオチド配列中の突然変異を指すことができる。
【００５７】
修飾されたウイルス
特定の実施形態では、STAT3活性、例えば、STAT-3媒介性遺伝子活性化のモジュレーターをコードする外来核酸配列を含有する修飾されたウイルス、例えば、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスが提供される。STAT3は、その他の転写因子の発現又はその他の転写因子との生理学的関連を媒介することによって、いくつかの標的遺伝子を間接的に調節して、遺伝子調節におけるその機能を増強又は抑制できる。STAT3調節性遺伝子の例として、それだけには限らないが、p53(NG_017013.2)、Fas(NG_009089.2)、Hsp70(NC_000005.10)、サイクリン-D1(NG_007375.1)、IL-10(NG_012088.1)などが挙げられる。例えば、参照により本明細書に組み込まれるCarpenter及びLo、Cancers、2014年、第6巻、897〜925頁を参照のこと。
【００５８】
特定の実施形態では、本明細書において記載されるウイルスは、STAT3の活性を調節できる、結果として、STAT3によって調節される遺伝子の活性化も調節できる物資をコードするmRNAを生成できる、別に、導入遺伝子と呼ばれる、1種以上の外来核酸配列を含む。したがって、本明細書において提供される特定の例は、STAT-3媒介性遺伝子活性化を調節できる物質をコードし得る外来核酸配列を含有する腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを提供する。語句「STAT3媒介性遺伝子活性化を調節する」とは、本明細書において、STAT3活性が調節され、結果として、STAT3によって調節される1種以上の遺伝子の活性化も調節されるプロセスを指すことができる。
【００５９】
特定の実施形態では、STAT3媒介性遺伝子活性化を調節できる物質は、タンパク質又はその断片である。特定の実施形態では、タンパク質又はその断片は、STAT3活性及びSTAT3媒介性遺伝子活性化を阻害、低減又は最小化できる。STAT3活性及びSTAT3媒介性遺伝子活性化を阻害、低減及び/又は最小化するタンパク質又はその断片は、例えば、STAT3の、STAT3応答性遺伝子のプロモーター領域中のDNA結合配列との結合を遮断できる。さらなる例では、STAT3活性及びSTAT3媒介性遺伝子活性化を阻害、低減又は最小化するタンパク質又はその断片は、例えば、SH2ドメインでSTAT3タンパク質と直接的に結合できる。特定の実施形態では、STAT3活性を阻害、低減及び/又は最小化するタンパク質は、STAT3のリン酸化を遮断、防止、低減及び/若しくは最小化する、並びに/又はSTAT3を脱リン酸化する。特定の限定されない実施形態では、STAT3活性を調節するタンパク質は、ホスホチロシンホスファターゼ(PTP)、活性化STATのタンパク質阻害剤(PIAS)及びサイトカインシグナル伝達(SOCS)タンパク質のサプレッサーを含み得る。
【００６０】
特定の実施形態では、STAT3活性及びSTAT3媒介性遺伝子活性化を阻害、低減又は最小化するタンパク質又はその断片は、PIAS3タンパク質又はその断片であり得る。例えば、制限としてではないが、修飾されたウイルス、例えば、本開示の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、PIAS3タンパク質又はその断片を発現し得る。特定の実施形態では、修飾されたウイルスは、例えば、配列番号1のアミノ酸配列に対して少なくとも約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%又は100%相同であるアミノ酸配列又はその断片及びその保存的置換を含み得るヒトPIAS3タンパク質を発現し得る。
【００６１】
特定の実施形態では、修飾されたウイルスは、例えば、配列番号6のアミノ酸配列に対して少なくとも約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%又は100%相同であるアミノ酸配列又はその断片及びその保存的置換を含み得る、マウスPIAS3タンパク質又はその断片を発現し得る。
【００６２】
特定の実施形態では、ウイルスは、例えば、配列番号7のアミノ酸配列に対して少なくとも約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%又は100%相同であるアミノ酸配列又はその断片及びその保存的置換を含み得る、ラットPIAS3タンパク質又はその断片を発現し得る。
【００６３】
特定の実施形態では、本開示は、PIAS3タンパク質のPINIT(プロリン、イソロイシン、アスパラギン、イソロイシン、トレオニン)断片を発現し得る修飾されたウイルス、例えば、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを提供する。特定の実施形態では、PINIT断片は、配列番号1のアミノ酸126〜176及びその保存的置換を含み得る。例えば、制限としてではないが、PINIT断片は、配列番号4に示されるアミノ酸配列及びその保存的置換を含み得る。特定の実施形態では、PINIT断片は、配列番号1のアミノ酸132〜177及びその保存的置換を含み得る。特定の実施形態では、PINIT断片は、配列番号3に示されるアミノ酸配列及びその保存的置換を含み得る。
【００６４】
特定の実施形態では、本開示は、PIAS3タンパク質のPINITドメインを発現し得る、修飾されたウイルス、例えば、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを提供する。特定の実施形態では、PINITドメインは、配列番号1のアミノ酸129〜316又はその保存的置換を含み得る。例えば、制限としてではないが、PINITドメインは、配列番号5に示されるアミノ酸配列及びその保存的置換を含み得る。特定の実施形態では、PINITドメインは、配列番号1のアミノ酸133〜316又はその保存的置換を含み得る。特定の実施形態では、PINITドメインは、配列番号2に示されるアミノ酸配列及びその保存的置換を含み得る。
【００６５】
特定の実施形態では、本発明は、ヒトPIAS3タンパク質の酸性ドメインを発現するウイルス、例えば、ワクシニアウイルスを提供する。特定の実施形態では、酸性ドメインは、配列番号1のアミノ酸400〜528及びその保存的置換を含む。例えば、制限としてではないが、酸性ドメインは、配列番号24に示されるアミノ酸配列及びその保存的置換を含む。特定の実施形態では、マウスPIAS3タンパク質の酸性ドメインは、配列番号6のアミノ酸400〜523及びその保存的置換を含む。例えば、制限としてではないが、酸性ドメインは、配列番号26に示されるアミノ酸配列及びその保存的置換を含む。
【００６６】
特定の実施形態では、本開示は、配列番号1〜7及び24〜27からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%又は100%相同であるアミノ酸配列又はその断片並びにその保存的置換を含み得るPIAS3タンパク質又はその断片を発現し得る、修飾されたウイルス、例えば、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを提供する。特定の実施形態では、PIAS3タンパク質又はその断片は、配列番号1〜7及び24〜27からなる群から選択されるアミノ酸配列の全長に対して少なくとも約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%又は100%相同であるアミノ酸配列を含み得る。特定の実施形態では、PIAS3タンパク質又はその断片は、配列番号1〜7及び24〜27からなる群から選択されるアミノ酸配列の全長の画分に対して少なくとも約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%又は100%相同であるアミノ酸配列を含み得る。さらなる例では、PIAS3タンパク質又はその断片は、配列番号1のアミノ酸配列の全長に対して少なくとも約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%又は100%相同であるアミノ酸配列を含み得る。さらにその他の例では、PIAS3タンパク質又はその断片は、配列番号1のアミノ酸配列の全長の画分に対して少なくとも約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%又は100%相同であるアミノ酸配列を含み得る。特定の実施形態では、PIAS3タンパク質は、本明細書において開示されるような細胞透過性ペプチドにさらにコンジュゲートされてもよく、外来核酸は、細胞透過性ペプチドをさらにコードし得る。
【００６７】
特定の実施形態では、本開示は、上記のように、STAT3活性及びSTAT3媒介性遺伝子活性化を阻害、低減又は最小化し得るタンパク質又はその断片をコードする1種以上の異種核酸、例えば、遺伝子を含むように修飾され得る、修飾されたウイルス、例えば、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを提供する。特定の実施形態では、本開示は、STAT3活性を阻害、低減又は最小化し得るタンパク質をコードする核酸を有する、修飾されたウイルス、例えば、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを提供する。例えば、制限としてではないが、本開示は、本明細書において開示されるような、PIAS3タンパク質又はその断片(例えば、PIAS3タンパク質のPINITドメイン又はPINIT断片)をコードし得る1種以上の核酸を有する、修飾されたウイルス、例えば、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを提供する。特定の実施形態では、PIAS3タンパク質をコードし得る核酸は、配列番号8〜10及び40〜43からなる群から選択されるヌクレオチド配列又はその断片を含み得る。特定の実施形態では、PIAS3タンパク質をコードし得る核酸は、配列番号8〜10及び40〜43からなる群から選択される核酸配列の全長に対して少なくとも約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%又は100%相同であるヌクレオチド配列を含み得る。特定の実施形態では、PIAS3タンパク質をコードし得る核酸は、配列番号8〜10及び40〜43からなる群から選択される核酸配列の画分に対して少なくとも約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%又は100%相同であり得る。特定の実施形態では、PIAS3タンパク質をコードし得る核酸は、配列番号8のヌクレオチド配列を含み得る。特定の実施形態では、PIAS3タンパク質をコードし得る核酸は、配列番号9のヌクレオチド配列を含み得る。特定の実施形態では、PIAS3タンパク質をコードし得る核酸は、配列番号10のヌクレオチド配列を含み得る。特定の限定されない実施形態では、PIAS3タンパク質をコードする核酸は、配列番号40のヌクレオチド配列を含む。特定の限定されない実施形態では、PIAS3タンパク質をコードする核酸は、配列番号41のヌクレオチド配列を含む。特定の限定されない実施形態では、PIAS3タンパク質をコードする核酸は、配列番号42のヌクレオチド配列を含む。特定の限定されない実施形態では、PIAS3タンパク質をコードする核酸は、配列番号43のヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態では、断片は、配列番号8〜10及び40〜43からなる群から選択されるヌクレオチド配列に由来する約3〜約6ヌクレオチド、約6〜約9ヌクレオチド、約9〜約12ヌクレオチド、約12〜約15ヌクレオチド、約15〜約18ヌクレオチド、約18〜約21ヌクレオチド、約21〜約24ヌクレオチド、約24〜約99ヌクレオチド、約99〜約120ヌクレオチド、約120〜約150ヌクレオチド、約150〜約153ヌクレオチド、約156ヌクレオチド〜約573ヌクレオチド、約576ヌクレオチド〜約600ヌクレオチド又はそれ以上の長さを有し得る。特定の実施形態では、断片は、配列番号8〜10及び40〜43から選択されるヌクレオチド配列に由来するヌクレオチドの連続ストレッチを含み得る。特定の実施形態では、断片は、配列番号8〜10及び40〜43から選択されるヌクレオチド配列に由来する非連続ヌクレオチドを含み得る。
【００６８】
特定の実施形態では、STAT3活性及びSTAT3媒介性遺伝子活性化を阻害、低減又は最小化するタンパク質又はその断片は、SOCS3タンパク質又はその断片であり得る。例えば、制限としてではないが、修飾されたウイルス、例えば、本開示の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、SOCS3タンパク質又はその断片を発現し得る。特定の実施形態では、修飾されたウイルスは、例えば、配列番号28又は30のアミノ酸配列に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であるアミノ酸配列又はその断片及びその保存的置換を含み得るヒトSOCS3タンパク質を発現し得る。特定の実施形態では、修飾されたウイルスは、SOCS3タンパク質又はその断片を発現し得る外来核酸を含んでいてもよく、前記核酸は、配列番号29又は31のアミノ酸配列に対して少なくとも約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%又は100%相同であるヌクレオチド配列又はその断片を含み得る。特定の実施形態では、SOCS3タンパク質又はその断片は、配列番号28及び30からなる群から選択されるアミノ酸配列の全長に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であるアミノ酸配列を含み得る。特定の実施形態では、SOCS3タンパク質又はその断片は、配列番号28及び30からなる群から選択されるアミノ酸配列の全長の画分に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であるアミノ酸配列を含み得る。特定の実施形態では、SOCS3タンパク質は、本明細書において開示されるような細胞透過性ペプチドにさらにコンジュゲートされてもよく、外来核酸は、細胞透過性ペプチドをさらにコードし得る。
【００６９】
特定の実施形態では、STAT3活性及びSTAT3媒介性遺伝子活性化を阻害、低減又は最小化するタンパク質又はその断片は、TCPTPタンパク質又はその断片であり得る。例えば、制限としてではないが、修飾されたウイルス、例えば、本開示の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、TCPTPタンパク質又はその断片を発現し得る。特定の実施形態では、修飾されたウイルスは、配列番号32又は34のアミノ酸配列に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であるアミノ酸配列を含み得るヒトTCPTPタンパク質又はその断片及びその保存的置換を発現し得る。特定の実施形態では、修飾されたウイルスは、TCPTPタンパク質又はその断片を発現し得る外来核酸を含んでいてもよく、前記核酸は、配列番号33又は35のアミノ酸配列に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であるヌクレオチド配列又はその断片を含み得る。特定の実施形態では、TCPTPタンパク質又はその断片は、配列番号32及び34からなる群から選択されるアミノ酸配列の全長に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であるアミノ酸配列を含み得る。特定の実施形態では、TCPTPタンパク質又はその断片は、配列番号32及び34からなる群から選択されるアミノ酸配列の全長の画分に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であるアミノ酸配列を含み得る。特定の実施形態では、TCPTPタンパク質は、本明細書において開示されるような細胞透過性ペプチドにさらにコンジュゲートされてもよく、外来核酸は、細胞透過性ペプチドをさらにコードし得る。
【００７０】
特定の実施形態では、STAT3活性及びSTAT3媒介性遺伝子活性化を阻害、低減又は最小化するタンパク質又はその断片は、STAT3タンパク質であり得る。例えば、制限としてではないが、修飾されたウイルス、例えば、本開示の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、STAT3タンパク質又はその断片を発現し得る。特定の実施形態では、修飾されたウイルスは、例えば、配列番号36又は38のアミノ酸配列に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であるアミノ酸配列又はその断片及びその保存的置換を含み得る、ヒトSTAT3タンパク質を発現し得る。特定の実施形態では、修飾されたウイルスは、STAT3タンパク質又はその断片を発現し得る外来核酸を含んでいてもよく、前記核酸は、配列番号37又は39のアミノ酸配列に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であるヌクレオチド配列又はその断片を含み得る。特定の実施形態では、TCPTPタンパク質又はその断片は、配列番号36及び38からなる群から選択されるアミノ酸配列の全長に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であるアミノ酸配列を含み得る。特定の実施形態では、TCPTPタンパク質又はその断片は、配列番号36及び38からなる群から選択されるアミノ酸配列の全長の画分に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であるアミノ酸配列を含み得る。特定の実施形態では、STAT3タンパク質は、本明細書において開示されるような細胞透過性ペプチドにさらにコンジュゲートされてもよく、外来核酸は、細胞透過性ペプチドをさらにコードし得る。
【００７１】
特定の実施形態では、核酸は、ウイルスにとって内因性のプロモーターエレメント又は別に、導入された外来プロモーターなどのプロモーターエレメントに作動可能に連結され得る。特定の実施形態では、プロモーターは、それだけには限らないが、vSC8ワクシニア株由来の合成ワクシニアウイルスプロモーター「P11後期」又はvSC56ワクシニア株由来の「合成初期/後期プロモーター」を含む高発現ウイルスプロモーターである。特定の実施形態では、プロモーターは、それだけには限らないが、vGKワクシニア株由来の「P7.5初期/後期」プロモーターを含む低発現ウイルスプロモーターであり得る。
【００７２】
特定の実施形態では、STAT3活性及びSTAT3媒介性遺伝子活性化を調節し得るタンパク質又はその断片をコードし得る外来核酸は、ウイルスゲノムの任意の位置に、例えば、非必須遺伝子座中に独立に挿入され得る。腫瘍溶解性ウイルスへの挿入は、日常的な分子生物学によって、例えば、Sambrookら(2001年、Molecular Cloning-A Laboratory Manual、Cold Spring Harbor Laboratory)に記載されるように実施され得る。アデノウイルスベクターまたポックスウイルスベクターへの挿入は、Chartierら(1996年、J. Virol.第70巻:4805〜10頁)及びPaulら(2002年、Cancer gene Ther.第9巻:470〜7頁)にそれぞれ記載されるような相同組換えによって実施され得る。例えば、TK、RR及びF2L遺伝子並びに遺伝子間領域は、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスにおける挿入にとって適切な例示的遺伝子座並びに腫瘍溶解性ウイルスにおける挿入のためのE3及びE4領域である。特定の実施形態では、核酸は、チミジンキナーゼ(TK)酵素をコードするJ2R遺伝子座に挿入され、TK遺伝子座の破壊をもたらす。
【００７３】
本開示のいくつかの限定されない実施形態は、PIAS3タンパク質若しくはその断片、SOCS3タンパク質若しくはその断片、TCPTPタンパク質若しくはその断片又は1以上のドミナントネガティブ突然変異を含むSTAT3タンパク質をコードし得る核酸であって、TK遺伝子中に挿入されてもよく、チミジンキナーゼ不活性化をもたらす核酸を含み得る修飾されたワクシニアウイルスを提供する。或いは、核酸は、ウイルスゲノム内の任意の非必須遺伝子内に又はウイルスゲノム内の任意の遺伝子内領域内に挿入されてもよい。
【００７４】
特定の実施形態では、PIAS3タンパク質又はその断片をコードする外来核酸は、細胞透過性ペプチドをさらにコードし得る。例えば、制限としてではないが、細胞透過性ペプチドは、HIV-1 tat遺伝子に由来し得る。特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、例えば、ヌクレオチド配列TATGGCAGGAAGAAGCGGAGACAGCGACGAAGA(配列番号12)を有するHIV-1ゲノムのヌクレオチド残基5515〜5547(NCB1/UniProtKB受託番号NC001802.1において示される)に由来する、アミノ酸配列YGRKKRRQRRR(配列番号11)を有する、NCBI/UniProtKB受託番号NP057853.1のTAT47〜57を含み得る。特定の実施形態では、TATタンパク質をコードする核酸は、配列番号12の全長に対して少なくとも約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%又は100%相同であり得るヌクレオチド配列を含み得る。特定の実施形態では、TATタンパク質をコードし得る核酸は、配列番号12の全長の画分に対して少なくとも約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%又は100%相同である。特定の実施形態では、配列番号11のアミノ配列は、ヌクレオチド配列TATGGACGAAAAAAACGACGACAACGACGACGA(配列番号13)によってコードされる。特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、HIV-1 tat遺伝子を含んでいてもよく、それに由来してもよく、アミノ酸配列RQRRKKRG(配列番号15)を有するペプチドをコードする、ヌクレオチド配列CGACAACGACGAAAGAAGCGAGGT(配列番号14)を有する。
【００７５】
特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、アミノ酸配列KSKTEYYNAWSEWERNAPPGNGEQREMAVSRLRDCLDRQA(配列番号16)を有するエルシニア・ペスチス(Yersinia pestis)病原性エフェクターYopMのN末端ドメイン(NTD)であり得る。特定の実施形態では、YopM NTD細胞透過性ペプチドは、ヌクレオチド配列AAGAGTAAGACGGAGTATTACAATGCTTGGTCAGAGTGGGAGCGAAACGCCCCTCCAGGCAATGGGGAGCAGCGAGAGATGGCGGTGAGTCGGTTGAGGGACTGTCTCGACAGGCAGGCA(配列番号17)を有する。
【００７６】
特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、アミノ酸配列GWTLNSAGYLLGKINLKALAALAKKIL(配列番号18)を有するトランスポータンであり得る。特定の実施形態では、トランスポータン細胞透過性ペプチドは、ヌクレオチド配列GGCTGGACACTTAACAGCGCAGGATATTTGCTTGGCAAAATCAATTTGAAGGCCTTGGCTGCGCTTGCAAAAAAAATTCTC(配列番号19)によってコードされる。
【００７７】
特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、アミノ酸配列RQIKIWFQNRRMKWKK(配列番号20)を有するペネトラチンであり得る。特定の実施形態では、ペネトラチン細胞透過性ペプチドは、ヌクレオチド配列CGGCAGATAAAAATCTGGTTCCAGAATCGGCGCATGAAATGGAAGAAA(配列番号21)によってコードされる。
【００７８】
特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、アミノ酸配列RRRRRRRRRHHHHHH(配列番号22)を有するポリアルギニンであり得る、例えば、配列番号25及び27を参照のこと。特定の実施形態では、ポリアルギニン細胞透過性ペプチドは、ヌクレオチド配列AGGCGGCGAAGACGCCGCAGGAGACGGCACCACCATCACCATCAC(配列番号23)によってコードされる。
【００７９】
特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、PIAS3遺伝子構築物のN末端又はC末端に直接又はそれに近接近して位置付けられるPIAS3タンパク質又はその断片にコンジュゲートされ得る。特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、SOCS3遺伝子構築物のN末端又はC末端に直接又はそれに近接近して位置付けられるSOCS3タンパク質又はその断片にコンジュゲートされ得る。特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、TCPTP遺伝子構築物のN末端又はC末端に直接又はそれに近接近して位置付けられるTCPTPタンパク質又はその断片にコンジュゲートされ得る。特定の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、ドミナントネガティブSTAT3核酸構築物のN末端又はC末端に直接又はそれに近接近して位置付けられるTCPTPタンパク質又はその断片にコンジュゲートされ得る。
【００８０】
特定の実施形態では、上記の修飾は、当技術分野で公知の任意のウイルスにおいて行われ得る。例えば、当技術分野で公知のワクシニアウイルスは、本開示において使用されるように上記のように修飾され得る。限定されない例として、ウエスタンリザーブ(Western Reserve)(WR)株、コペンハーゲン(Copenhagen)株、ワイス(Wyeth)(NYCBOH)株、チアンチアン(Tian Tian)株又はUSSR株が挙げられる。特定の実施形態では、上記の修飾は、それだけには限らないが、その他のポックスウイルス、HSV、アデノウイルス、レオウイルス、ニューカッスル病ウイルス、麻疹ウイルス、マラバ(Maraba)ウイルス、水泡性口内炎ウイルス、AAV及びレトロウイルスなどのウイルスにおいて行われ得る。特定の実施形態では、本明細書において開示される修飾されたワクシニアウイルスは、WR株のものである。本明細書において示されるように修飾されたベースのワクシニアウイルス株は、それ自体、その親株に対して1以上の突然変異、例えば、それだけには限らないが、以下のうち1以上を含み得る:TKにおける欠失、VGFにおける欠失、SPI-1欠失及びSPI-2欠失。代替実施形態では、本開示の腫瘍溶解性ウイルスは、欠陥TK及びリボヌクレオチドレダクターゼ(RR)活性を含むワクシニアウイルスであることがあり、RR欠陥は、ウイルスゲノムによって保持されるI4L及び/又はF4L遺伝子における不活性化突然変異に起因する。別の限定されない実施形態では、本開示の腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルスゲノムのF2L遺伝子における不活性化突然変異に起因する、dUTPアーゼについて欠陥を単独で、又はこれらとTK及びRR活性のうち少なくとも一方又は両方の破壊との組み合わせを有するワクシニアウイルスであり得る。特定の実施形態では、ワクシニアウイルス株はまた、B8R(IFNγ結合タンパク質;例えば、Symonsら、1995年、Cell.第81巻(4号):551〜60頁を参照のこと)、B18R(I型IFN結合タンパク質;例えば、Colamoniciら、1995年、J.Biol.Chem.第270巻(27号):15974〜8頁を参照のこと)、B15R(IL-1β結合タンパク質;例えば、Alcamiら、1992年、Cell.第71巻(1号):153〜67頁を参照のこと)、IL-18BP(例えば、C12L欠失)、B5R(例えば、B5R欠失)及び/又はC16(例えば、C16L欠失;Fahyら、2008年、J.Gen.Virol.第89巻:2377〜2387頁を参照のこと)における突然変異及び/又は欠失を含み得る。参照によりその全文が本明細書に組み込まれるWO2015/027163も参照のこと。
【００８１】
ワクシニアウイルスは、通常、単一エンベロープ型細胞内成熟ビリオン(IMV)、三重エンベロープ型細胞内エンベロープ型ビリオン(IEV)及び二重エンベロープ型細胞結合エンベロープ型ビリオン(CEV)及び細胞外エンベロープ型ビリオン(EEV)を含む4種のビリオン形態を産生する。EEV形態は、長期のウイルス拡散と関連し得る。本開示の特定の実施形態では、本明細書において記載されるような腫瘍溶解性ウイルスの集団は、EEV形態を主に含み得る。特定の実施形態では、開示される修飾されたワクシニアウイルスは、腫瘍細胞中のM2マクロファージ内で複製する。例えば、制限としてではないが、ワクシニアウイルスは、腫瘍細胞中のM2マクロファージ内で複製して、細胞外エンベロープウイルス(EEV)を主に含有するウイルスの集団を生成する。特定の実施形態では、ワクシニアウイルスは、M2マクロファージ内で複製することによって免疫抑制を部分的に避ける。
【００８２】
PIAS3(活性化STAT3のタンパク質阻害剤;本明細書において示されたPIAS3)
特定の実施形態では、PIAS3タンパク質は、NCBI/UniProtKB受託番号NP006090.2に示されるようなアミノ酸配列又はそれと少なくとも約95パーセント又は少なくとも約98パーセント相同であるアミノ酸配列を有するヒトPIAS3タンパク質であり得る。
【００８３】
特定の実施形態では、PIAS3タンパク質は、以下に示されるような配列番号1の配列:
2019520847.tif 000003
(配列番号1)又はそれに対して少なくとも約95パーセント又は少なくとも約98パーセント相同なアミノ酸配列を有するアミノ酸配列を含み得る。
【００８４】
特定の実施形態では、本開示のPIAS3タンパク質は、少なくとも20個若しくは少なくとも30個若しくは少なくとも40個若しくは少なくとも50個若しくは少なくとも60個若しくは少なくとも70個若しくは少なくとも80個若しくは少なくとも90個若しくは少なくとも100個若しくは少なくとも200個のアミノ酸若しくはそれ以上の長さである配列番号1の連続断片であるアミノ酸配列又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同であるアミノ酸配列を有し得る。
【００８５】
特定の実施形態では、PIAS3タンパク質は、配列番号1のアミノ酸133〜316又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同であるアミノ酸配列を含み得る。例えば、制限としてではないが、PIAS3タンパク質は、以下に示されるような配列番号2のアミノ酸配列:
2019520847.tif 000004
2019520847.tif 000005
(配列番号2)又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同であるアミノ酸配列を含み得る。
【００８６】
特定の実施形態では、PIAS3タンパク質は、配列番号1のアミノ酸132〜177又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同であるアミノ酸配列を含み得る。例えば、制限としてではないが、PIAS3タンパク質は、以下に示されるような配列番号3のアミノ酸配列:LPFYEVYGELIRPTTLASTSSQRFEEAHFTFALTPQQVQQILTSRE(配列番号3)又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同であるアミノ酸配列を含み得る。
【００８７】
特定の実施形態では、PIAS3タンパク質は、配列番号1のアミノ酸126〜176又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同であるアミノ酸配列を含み得る。例えば、制限としてではないが、PIAS3タンパク質は、以下に示されるような配列番号4のアミノ酸配列:DVTMKPLPFYEVYGELIRPTTLASTSSQRFEEAHFTFALTPQQVQQILTSR(配列番号4)又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同であるアミノ酸配列を含み得る。
【００８８】
特定の実施形態では、PIAS3タンパク質は、配列番号1のアミノ酸129〜316又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同であるアミノ酸配列を含み得る。例えば、制限としてではないが、PIAS3タンパク質は、以下に示されるような配列番号5のアミノ酸配列:
2019520847.tif 000006
(配列番号5)又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同であるアミノ酸配列を含み得る。
【００８９】
特定の実施形態では、PIAS3タンパク質は、配列番号1のアミノ酸400〜528又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同であるアミノ酸配列を含む。例えば、制限としてではないが、PIAS3タンパク質は、以下に示されるような配列番号24のアミノ酸配列:
2019520847.tif 000007
(配列番号24)又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同であるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、PIAS3タンパク質のC末端は、アミノ酸配列RRRRRRRRRHHHHHH(配列番号22)を含むポリアルギニン細胞透過性ペプチドを含むよう修飾され得る。例えば、制限としてではないが、ポリアルギニン細胞透過性ペプチドにコンジュゲートされたPIAS3タンパク質は、以下に示されるような配列番号25のアミノ酸配列:
2019520847.tif 000008
(配列番号25)又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同であるアミノ酸配列を含む。
【００９０】
特定の実施形態では、PIAS3タンパク質は、NCBI/UniProtKB受託番号NP_001159421.1に示されるようなアミノ酸配列又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同であるアミノ酸配列を有するマウスPIAS3タンパク質であり得る。例えば、制限としてではないが、マウスPIAS3タンパク質は、以下に示されるような配列番号6のアミノ酸配列:
2019520847.tif 000009
(配列番号6)又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同であるアミノ酸配列を含む。
【００９１】
限定されない実施形態では、本発明のPIAS3タンパク質は、少なくとも20個若しくは少なくとも30個若しくは少なくとも40個若しくは少なくとも50個若しくは少なくとも60個若しくは少なくとも70個若しくは少なくとも80個若しくは少なくとも90個若しくは少なくとも100個若しくは少なくとも200個のアミノ酸若しくはそれ以上の長さである配列番号6の連続部分であるアミノ酸配列又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同であるアミノ酸配列を有し得る。
【００９２】
特定の実施形態では、マウスPIAS3タンパク質は、配列番号6のアミノ酸400〜523又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同であるアミノ酸配列を含む。例えば、制限としてではないが、PIAS3タンパク質は、以下に示されるような配列番号26のアミノ酸配列:
2019520847.tif 000010
2019520847.tif 000011
(配列番号26)又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同であるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、配列番号26のアミノ酸配列を有するPIAS3タンパク質のC末端は、ポリアルギニンを含むように修飾され得る。例えば、制限としてではないが、PIAS3タンパク質は、以下に示されるような配列番号27のアミノ酸配列:
2019520847.tif 000012
(配列番号27)又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同であるアミノ酸配列を含む。
【００９３】
特定の実施形態では、PIAS3タンパク質は、NCBI/UniProtKB受託番号NP_113972.2に示されるようなアミノ酸配列又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同であるアミノ酸配列を有するラットPIAS3タンパク質であり得る。例えば、制限としてではないが、ラットPIAS3タンパク質は、以下にしめされるような配列番号7のアミノ酸配列:
2019520847.tif 000013
(配列番号7)又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同であるアミノ酸配列を含む。
【００９４】
限定されない実施形態では、本発明のPIAS3タンパク質は、少なくとも20個若しくは少なくとも30個若しくは少なくとも40個若しくは少なくとも50個若しくは少なくとも60個若しくは少なくとも70個若しくは少なくとも80個若しくは少なくとも90個若しくは少なくとも100個若しくは少なくとも200個のアミノ酸若しくはそれ以上の長さである配列番号7の連続部分であるアミノ酸配列又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同であるアミノ酸配列を有し得る。
【００９５】
特定の実施形態では、本開示のPIAS3タンパク質は、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号24、配列番号25、配列番号26又は配列番号27の配列を含むアミノ酸配列を有し得る。特定の実施形態では、P1AS3タンパク質は、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号24、配列番号25、配列番号26又は配列番号27の配列に対して少なくとも約95パーセント相同であるアミノ酸配列を有し得る。特定の実施形態では、P1AS3タンパク質は、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号24、配列番号25、配列番号26又は配列番号27の配列に対して少なくとも約98パーセント相同であるアミノ酸配列を有し得る。
【００９６】
特定の実施形態では、ヒトPIAS3タンパク質をコードする核酸は、GenBank受託番号CR457090.1に示されるような核酸配列又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同である核酸配列を含み得る。例えば、制限としてではないが、核酸は、以下に示されるような配列番号8のヌクレオチド配列:
2019520847.tif 000014
2019520847.tif 000015
(配列番号8)又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同である核酸配列を含む。
【００９７】
特定の実施形態では、PIAS3タンパク質をコードする核酸は、以下に示されるような配列番号9の核酸配列:
2019520847.tif 000016
(配列番号9)又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同である核酸配列を含み得る。
【００９８】
特定の実施形態では、PIAS3タンパク質をコードする核酸は、以下に示されるような配列番号10の核酸配列:
2019520847.tif 000017
(配列番号10)又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同である核酸配列を含み得る。
【００９９】
特定の実施形態では、配列番号1のアミノ酸400〜528を含むヒトPIAS3タンパク質の断片をコードする核酸は、以下に示されるような配列番号40のヌクレオチド配列:
2019520847.tif 000018
(配列番号40)又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同であるヌクレオチド配列を含み得る。
【０１００】
特定の実施形態では、配列番号1のアミノ酸400〜528を含むヒトPIAS3タンパク質の断片及びポリアルギニン細胞透過性ペプチドをコードする核酸は、以下に示されるような配列番号41のヌクレオチド配列:
2019520847.tif 000019
(配列番号41)又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同であるヌクレオチド配列を含み得る。
【０１０１】
特定の実施形態では、配列番号1のアミノ酸400〜523を含むマウスPIAS3タンパク質の断片をコードする核酸は、以下に示されるような配列番号42のヌクレオチド配列:
2019520847.tif 000020
(配列番号42)又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同であるヌクレオチド配列を含み得る。
【０１０２】
特定の実施形態では、配列番号1のアミノ酸400〜523を含むマウスPIAS3タンパク質の断片及びポリアルギニン細胞透過性ペプチドをコードする核酸は、以下に示されるような配列番号43のヌクレオチド配列:
2019520847.tif 000021
(配列番号43)又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同であるヌクレオチド配列を含み得る。
【０１０３】
特定の実施形態では、本発明において使用するための核酸は、配列番号1のアミノ酸配列を含むPIAS3タンパク質又はその断片をコードする。例えば、制限としてではないが、本発明において使用するための核酸は、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号24、配列番号25、配列番号26若しくは配列番号27のアミノ酸配列又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同であるアミノ酸配列を含むPIASタンパク質をコードし得る。特定の実施形態では、本発明において使用するための核酸は、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号24、配列番号25、配列番号26若しくは配列番号27のアミノ酸配列又はそれに対して少なくとも約95パーセント相同であるアミノ酸配列を含むPIASタンパク質をコードし得る。特定の実施形態では、本発明において使用するための核酸は、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号24、配列番号25、配列番号26若しくは配列番号27のアミノ酸配列又はそれに対して少なくとも約98パーセント相同であるアミノ酸配列を含むPIASタンパク質をコードし得る。例えば、制限としてではないが、本発明において使用するための核酸は、配列番号8〜10及び40〜43に示されるヌクレオチド配列を含み得る。
【０１０４】
特定の実施形態では、PIAS3タンパク質又はその断片は、本明細書において記載されるような修飾されたウイルス、例えば、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスの腫瘍特異的活性の増強と関連し得る。
【０１０５】
SOCS3(サイトカインシグナル伝達3のサプレッサー;本明細書において示されるSOCS3)
特定の実施形態では、STAT3活性のモジュレーターは、SOCS3タンパク質又はその断片であり得る。
【０１０６】
特定の実施形態では、SOCS3タンパク質は、GenBank受託番号CAG46495.1に示されるようなアミノ酸配列又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同であるアミノ酸配列を有するヒトSOCS3タンパク質であり得る。特定の実施形態では、以下に示される配列番号28の配列を有するアミノ酸配列:
2019520847.tif 000022
(配列番号28)又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同であるアミノ酸配列を含み得るヒトSOCS3タンパク質。
【０１０７】
特定の実施形態では、ヒトSOCS3タンパク質をコードする核酸は、GenBank受託番号CR541694.1に示されるような核酸配列又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同である核酸配列を含み得る。特定の実施形態では、ヒトSOCS3タンパク質をコードする核酸は、以下に示されるような配列番号29のヌクレオチド配列:
2019520847.tif 000023
2019520847.tif 000024
(配列番号29)又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同である核酸配列を含む。
【０１０８】
特定の実施形態では、SOCS3タンパク質は、以下に示されるような配列番号30の配列を有するアミノ酸配列:
2019520847.tif 000025
(配列番号30)又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同であるアミノ酸配列を含み得るマウスSOCS3タンパク質であり得る。
【０１０９】
特定の実施形態では、マウスSOCS3タンパク質をコードする核酸は、以下に示されるような配列番号31のヌクレオチド配列:
2019520847.tif 000026
(配列番号31)又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同である核酸配列を含む。
【０１１０】
限定されない実施形態では、本開示のSOCS3タンパク質は、少なくとも20個若しくは少なくとも30個若しくは少なくとも40個若しくは少なくとも50個若しくは少なくとも60個若しくは少なくとも70個若しくは少なくとも80個若しくは少なくとも90個若しくは少なくとも100個及び最大200個のアミノ酸の長さである配列番号28又は30の連続部分であり得るアミノ酸配列又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同であるアミノ酸配列を有し得る。特定の実施形態では、SOCS3タンパク質は、配列番号28又は30の配列に対して少なくとも約95パーセント相同であるアミノ酸配列を有し得る。特定の実施形態では、SOCS3タンパク質は、28又は30の配列に対して少なくとも約98パーセント相同であるアミノ酸配列を有し得る。
【０１１１】
特定の実施形態では、本開示において使用するための核酸は、SOCS3タンパク質又はその断片をコードする。例えば、制限としてではないが、本開示において使用するための核酸は、配列番号28又は配列番号30のアミノ酸配列又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同であるアミノ酸配列を含むSOCS3タンパク質をコードし得る。例えば、制限としてではないが、本開示において使用するための核酸は、配列番号29及び31に示されるヌクレオチド配列又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同であるヌクレオチド配列を含み得る。特定の実施形態では、本開示において使用するための核酸は、配列番号29及び31に示されるヌクレオチド配列又はそれに対して少なくとも約95パーセント相同であるヌクレオチド配列を含み得る。特定の実施形態では、本開示において使用するための核酸は、配列番号29及び31に示されるヌクレオチド配列又はそれに対して少なくとも約98パーセント相同であるヌクレオチド配列を含み得る。
【０１１２】
TCPTP(T細胞タンパク質チロシンホスファターゼ;本明細書においてTCPTPとして示される)
特定の実施形態では、STAT3活性のモジュレーターは、TCPTPタンパク質であり得る。
【０１１３】
特定の実施形態では、TCPTPタンパク質は、NCBI/UniProtKB受託番号NP_536347.1に示されるようなアミノ酸配列又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同であるアミノ酸配列を有するヒトTCPTPアイソフォーム2タンパク質であり得る。特定の実施形態では、ヒトTCPTPアイソフォーム2タンパク質は、以下に示される配列番号32の配列を有するアミノ酸配列
2019520847.tif 000027
(配列番号32)又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同であるアミノ酸配列を含み得る。
【０１１４】
特定の実施形態では、ヒトTCPTPアイソフォーム2タンパク質をコードする核酸は、NCBI/UniProtKB受託番号NM_080422.2に示されるような核酸配列又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同である核酸配列を含み得る。特定の実施形態では、ヒトTCPTPアイソフォーム2タンパク質をコードする核酸は、以下に示されるような配列番号33のヌクレオチド配列:
2019520847.tif 000028
(配列番号33)又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同である核酸配列を含み得る。
【０１１５】
特定の実施形態では、マウスTCPTPアイソフォーム2タンパク質は、以下に示される配列番号34の配列を有するアミノ酸配列:
2019520847.tif 000029
(配列番号34)又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同であるアミノ酸配列を含み得る。
【０１１６】
特定の実施形態では、マウスTCPTPアイソフォーム2タンパク質をコードする核酸は、以下に示されるような配列番号35のヌクレオチド配列:
2019520847.tif 000030
(配列番号35)又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同である核酸配列を含み得る。
【０１１７】
特定の実施形態では、本開示のTCPTPタンパク質は、少なくとも20個若しくは少なくとも30個若しくは少なくとも40個若しくは少なくとも50個若しくは少なくとも60個若しくは少なくとも70個若しくは少なくとも80個若しくは少なくとも90個若しくは少なくとも100個及び最大200個のアミノ酸の長さである配列番号32又は34の連続部分であり得るアミノ酸配列又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同であるアミノ酸配列を有し得る。特定の実施形態では、TCPTPタンパク質は、配列番号32又は34の配列に対して少なくとも約95パーセント相同であるアミノ酸配列を有し得る。特定の実施形態では、TCPTPタンパク質は、配列番号32又は34の配列に対して少なくとも約98パーセント相同であるアミノ酸配列を有し得る。
【０１１８】
特定の実施形態では、本発明において使用するための核酸は、TCPTPタンパク質をコードする。例えば、制限としてではないが、本発明において使用するための核酸は、配列番号32又は配列番号34のアミノ酸配列又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同であるアミノ酸配列を含むTCPTPタンパク質、すなわち、TCPTPアイソフォーム2タンパク質をコードし得る。特定の実施形態では、本開示において使用するための核酸は、配列番号33及び35に示されるヌクレオチド配列又はそれに対して少なくとも約95パーセント相同であるヌクレオチド配列を含み得る。特定の実施形態では、本開示において使用するための核酸は、配列番号33及び35に示されるヌクレオチド配列又はそれに対して少なくとも約98パーセント相同であるヌクレオチド配列を含み得る。例えば、制限としてではないが、本発明において使用するための核酸は、配列番号33及び35に示されるヌクレオチド配列を含み得る。
【０１１９】
ドミナントネガティブ突然変異を含有するSTAT3
特定の実施形態では、STAT3活性のモジュレーターは、1以上のドミナントネガティブ突然変異を有するSTAT3タンパク質であり得る。特定の実施形態では、ドミナントネガティブ突然変異体STAT3タンパク質は、ドミナントネガティブ突然変異体ヒトSTAT3タンパク質であり得る。
【０１２０】
特定の実施形態では、ドミナントネガティブ突然変異体ヒトSTAT3タンパク質は、アミノ酸705に突然変異、例えば、Y705Fを有し得る。例えば、制限としてではないが、ドミナントネガティブ突然変異体STAT3タンパク質は、以下に示される配列番号36の配列を有するアミノ酸配列:
2019520847.tif 000031
2019520847.tif 000032
(配列番号36)又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同であるアミノ酸配列を含み得る。
【０１２１】
特定の実施形態では、配列番号36は、以下に示されるような配列番号37のヌクレオチド配列:
2019520847.tif 000033
2019520847.tif 000034
(配列番号37)又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同である核酸配列によってコードされ得る。
【０１２２】
特定の実施形態では、ドミナントネガティブ突然変異体STAT3タンパク質は、アミノ酸434及び/又は435に1以上の突然変異、例えば、E434A及びE435Aを有し得る。例えば、制限としてではないが、ドミナントネガティブ突然変異体ヒトSTAT3タンパク質は、以下に示される配列番号38の配列を有するアミノ酸配列:
2019520847.tif 000035
2019520847.tif 000036
(配列番号38)又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同であるアミノ酸配列を含む。
【０１２３】
特定の実施形態では、配列番号38は、以下に示されるような配列番号39のヌクレオチド配列:
2019520847.tif 000037
2019520847.tif 000038
(配列番号39)又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同であるヌクレオチド配列によってコードされ得る。
【０１２４】
特定の実施形態では、本開示において使用するための核酸は、ドミナントネガティブ突然変異体STAT3タンパク質をコードし得る。例えば、制限としてではないが、本開示において使用するための核酸は、配列番号36又は配列番号38のアミノ酸配列又はそれに対して少なくとも約95パーセント若しくは少なくとも約98パーセント相同であるアミノ酸配列を含むドミナントネガティブ突然変異体STAT3タンパク質をコードし得る。特定の実施形態では、ドミナントネガティブ突然変異体STAT3タンパク質は、配列番号36又は38の配列に対して少なくとも約95パーセント相同であるアミノ酸配列を有し得る。特定の実施形態では、ドミナントネガティブ突然変異体STAT3タンパク質は、36又は38の配列に対して少なくとも約98パーセント相同であるアミノ酸配列を有し得る。特定の実施形態では、本開示において使用するための核酸は、配列番号37及び39に示されるヌクレオチド配列又はそれに対して少なくとも約95パーセント相同であるヌクレオチド配列を含み得る。特定の実施形態では、本開示において使用するための核酸は、配列番号37及び39に示されるヌクレオチド配列又はそれに対して少なくとも約98パーセント相同であるヌクレオチド配列を含み得る。
【０１２５】
特定の実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは、配列番号1〜7、11、14、16、18、20、22、24〜28、30、32、34、36及び38のいずれか1つのアミノ酸配列に対して95%相同であるアミノ酸配列を含み得る。特定の実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは、配列番号1〜7、11、14、16、18、20、22、24〜28、30、32、34、36及び38のいずれか1つのアミノ酸配列に対して98%相同であるアミノ酸配列を含み得る。
【０１２６】
特定の実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは、配列番号8〜10、12〜13、15、17、19、21、23、29、31、33、35、37及び39〜43のいずれか1つのヌクレオチド配列に対して95%相同であるヌクレオチド配列を含み得る。特定の実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは、配列番号8〜10、12〜13、15、17、19、21、23、29、31、33、35、37及び39〜43のいずれか1つのヌクレオチド配列に対して98%相同であるヌクレオチド配列を含み得る。
【０１２７】
特定の実施形態では、上記で示されるPIAS3、SOCS3又はTCPTPタンパク質のアミノ酸配列の変更は、得られるタンパク質が、STAT3のモジュレーターとして機能する能力を維持する場合に行われ得る。特定の実施形態では、このような変更は、保存的置換と呼ばれる。本明細書において、用語「保存的置換」及び「保存的修飾」とは、アミノ酸配列を含む現在開示されるSTAT3モジュレータータンパク質の結合特徴に大幅に影響を及ぼさない又は変更しないアミノ酸修飾を指す。このような保存的修飾は、アミノ酸置換、付加及び欠失を含む。修飾は、部位特異的突然変異誘発及びPCR媒介突然変異誘発などの当技術分野で公知の標準技術によって本開示のSTAT3モジュレータータンパク質中に導入され得る。アミノ酸は、電荷及び極性などのその物理化学的特性に従ってグループに分類され得る。
【０１２８】
保存的アミノ酸置換は、アミノ酸残基が同一グループ内のアミノ酸で置換されるものである。例えば、アミノ酸は、電荷によって分類され得る:正電荷を有するアミノ酸として、リジン、アルギニン、ヒスチジンが挙げられ、負電荷を有するアミノ酸として、アスパラギン酸、グルタミン酸が挙げられ、中性電荷を有するアミノ酸として、アラニン、アスパラギン、システイン、グルタミン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン及びバリンが挙げられる。さらに、アミノ酸は、極性によって分類され得る:極性アミノ酸として、アルギニン(塩基性極性)、アスパラギン、アスパラギン酸(酸性極性)、グルタミン酸(酸性極性)、グルタミン、ヒスチジン(塩基性極性)、リジン(塩基性極性)、セリン、トレオニン及びチロシンが挙げられ;非極性アミノ酸として、アラニン、システイン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン及びバリンが挙げられる。したがって、開示されるSTAT3モジュレーター内の1以上のアミノ酸残基は、同一グループに由来するその他のアミノ酸残基で置換されてもよく、変更されたSTAT3モジュレータータンパク質は、本明細書において記載される機能アッセイを使用して保持された機能について試験され得る。特定の実施形態では、特定の配列内の1以下、2以下、3以下、4以下、5以下の残基が変更される。例示的な保存的アミノ酸置換は、表1に示されている。
【０１２９】
【表１】
2019520847.tif 000039
【０１３０】
癌標的
本開示の特定の実施形態では、本明細書において記載されるような腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの修飾されたウイルスの送達による、癌又は腫瘍などの過剰増殖性疾患を治療する方法が考慮される。修飾されたウイルス、例えば、本開示のSTAT3媒介性遺伝子活性化のモジュレーターをコードする外来核酸を含み得る修飾されたワクシニアウイルスによって治療され得る癌として、それだけには限らないが、黒色腫、肝細胞癌腫、乳癌、肺癌、前立腺癌、膀胱癌、卵巣癌、白血病、リンパ腫、腎癌腫、膵臓癌、上皮性癌、胃癌、結腸癌腫、十二指腸癌、膵臓腺癌、中皮腫、多形神経膠芽腫、星状細胞腫、多発性骨髄腫、前立腺癌腫、肝細胞癌腫、胆管肉腫、膵臓腺癌、頭頸部扁平上皮癌、結腸直腸癌、腸型胃腺癌、子宮頸部扁平細胞癌腫、骨肉腫、卵巣上皮癌腫、急性リンパ芽球性リンパ腫、骨髄増殖性腫瘍及び肉腫を挙げることができる。
【０１３１】
本開示の方法によって治療できる癌細胞として、膀胱、血液、骨、骨髄、脳、乳房、結腸、食道、胃腸、歯肉、頭部、腎臓、肝臓、肺、上咽頭、頸部、卵巣、前立腺、皮膚、胃、精巣、舌又は子宮に由来する細胞が挙げられる。さらに、癌は、具体的には、以下の組織学的種類のものであり得るが、これらに制限されない:新生物、悪性;癌腫;癌腫、未分化;巨細胞及び紡錘細胞癌腫;小細胞癌腫;乳頭癌;扁平上皮癌;リンパ上皮性癌;基底細胞癌;石灰化上皮腫(pilomatrix carcinoma);移行上皮癌;乳頭状移行上皮癌;腺癌;ガストリン産生腫瘍、悪性;胆管癌;肝細胞癌腫;混合型肝細胞癌腫及び胆管癌;索状腺癌(trabecular adenocarcinoma);腺様嚢胞癌;腺腫性ポリープにおける腺癌;腺癌、家族性大腸ポリポーシス;固形癌腫;カルチノイド腫瘍、悪性;細気管支肺胞腺癌(branchiolo-alveolar adenocarcinoma);乳頭状腺癌;嫌色素性癌腫;好酸球性癌腫;好酸性腺癌;好塩基球性癌腫;明細胞腺癌;顆粒細胞癌腫;濾胞性腺癌;乳頭状及び濾胞性腺癌;非被包性硬化性癌腫;副腎皮質癌;類内膜癌;皮膚付属器癌;アポクリン腺癌;皮脂腺癌;耳道腺癌;粘表皮癌;嚢胞腺癌;乳頭状嚢胞腺癌;乳頭状漿液性嚢胞腺癌;粘液性嚢胞腺癌;粘液性腺癌;印環細胞癌;浸潤性乳管癌;髄様癌;小葉癌;炎症性癌腫;パジェット病、乳房;腺房細胞癌;腺扁平上皮癌;扁平上皮化生随伴腺癌;胸腺腫、悪性;卵巣間質性腫瘍、悪性;莢膜細胞腫、悪性;顆粒膜細胞腫、悪性;セルトリ間質細胞腫瘍、悪性;セルトリ細胞癌腫;ライディッヒ細胞腫、悪性;脂質細胞腫瘍、悪性;傍神経節腫、悪性;乳房外傍神経節腫、悪性;褐色細胞腫;グロムス血管肉腫(glomangiosarcoma);悪性黒色腫;無色素性黒色腫;表在拡大型黒色腫;巨大色素性母斑における悪性黒色腫;類上皮細胞黒色腫;青色母斑、悪性;肉腫;線維肉腫;線維性組織球腫、悪性;粘液肉腫;脂肪肉腫;平滑筋肉腫;横紋筋肉腫;胎児性横紋筋肉腫;肺胞横紋筋肉腫;間質肉腫;混合腫瘍、悪性;ミュラー管混合腫瘍;腎芽細胞腫;肝芽腫;癌肉腫;間葉腫、悪性;ブレンナー腫瘍、悪性;葉状腫瘍、悪性;滑膜肉腫;中皮腫、悪性;未分化胚細胞腫;胚性癌腫;奇形腫、悪性;卵巣甲状腺腫、悪性;絨毛癌;中腎腫、悪性;血管肉腫;血管内皮腫、悪性;カポジ肉腫;血管外皮腫、悪性;リンパ管肉腫;骨肉腫;傍骨性骨肉腫;軟骨肉腫;軟骨芽細胞腫、悪性;間葉系軟骨肉腫;骨の巨細胞腫;ユーイング肉腫;歯原性腫瘍、悪性;エナメル芽細胞歯牙肉腫;エナメル上皮腫、悪性;エナメル芽細胞線維肉腫;松果体腫、悪性;脊索腫;神経膠腫、悪性;上衣腫;星状細胞腫;原形質星状細胞腫;線維性星細胞腫;星状芽細胞腫;神経膠芽腫;乏突起神経膠腫;乏突起神経膠芽細胞腫;原始神経外胚葉性;小脳肉腫;神経節芽細胞腫;神経芽細胞腫;網膜芽細胞腫;嗅神経原腫瘍;髄膜腫、悪性;神経線維肉腫;神経鞘腫、悪性;顆粒細胞腫瘍、悪性;悪性リンパ腫;ホジキン病;ホジキン型;側肉芽腫;悪性リンパ腫、小リンパ性;悪性リンパ腫、大細胞、びまん性;悪性リンパ腫、濾胞性;菌状息肉症;その他の特定の非ホジキンリンパ腫;悪性組織球増殖症;多発性骨髄腫;肥満細胞肉腫;免疫増殖性小腸疾患;白血病;リンパ性白血病;形質細胞性白血病;赤白血病;リンパ肉腫細胞白血病;骨髄性白血病;好塩基球性白血病;好酸球性白血病;単球性白血病;肥満細胞白血病;巨核芽球性白血病;骨髄肉腫;及びヘアリー細胞白血病。種々の例では、本明細書において開示される癌標的を治療するために使用できる腫��溶解性ワクシニアウイルスなどの本開示の修飾されたウイルスにおける使用のための、STAT3媒介性遺伝子活性化のモジュレーターは、PIAS3タンパク質又はその断片、SOCS3タンパク質又はその断片、TCPTPタンパク質又はその断片、STAT3タンパク質又はその断片、例えば、ドミナントネガティブ突然変異を含み得るSTAT3タンパク質であり得る。
【０１３２】
本開示はまた、任意の種類の原発性癌の局所侵襲性又は転移又は両方を阻害する又は防止する方法を企図する。例えば、原発性癌は、黒色腫、非小細胞肺、小細胞肺、肺、肝細胞癌、網膜芽細胞腫、星状細胞腫、神経膠芽腫、歯肉、舌、白血病、神経芽細胞腫、頭部、頸部、乳房、膵臓、前立腺、腎臓、骨、精巣、卵巣、中皮腫、子宮頸部、胃腸、リンパ腫、脳、結腸又は膀胱であり得る。特定の実施形態では、原発性癌は、肺癌であり得る。例えば、制限としてではないが、肺癌は、非小細胞肺癌であり得る。さらに、本開示は、癌を予防するため、又は異形成、形成異常及び過形成を含む前癌性若しくは前悪性細胞を治療するために使用できる。扁平上皮化生、形成異常、良性前立腺過形成細胞、過形成病変などといった望ましくはないが、良性の細胞を阻害するために使用できる。特定の実施形態では、本明細書において論じられるような腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの修飾されたウイルスによってコードされ得るSTAT3調節剤を含む本開示の方法によって、癌への、又は癌のより重症形態への進行が、停止、撹乱又は遅延され得る。種々の例では、任意の種類の原発性癌の局所侵襲性又は転移又は両方を阻害又は予防するために使用できる、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの本開示の修飾されたウイルスにおいて使用するためのSTAT3媒介性遺伝子活性化のモジュレーターは、SOCS3タンパク質又はその断片、TCPTPタンパク質又はその断片、STAT3タンパク質又はその断片、STAT3タンパク質、例えばドミナントネガティブ突然変異を含み得るPIAS3タンパク質又はその断片であり得る。
【０１３３】
治療の方法並びに有効性及び薬物動態をアッセイする方法
本開示は、1種以上の本明細書において開示されるような修飾されたウイルスの投与によって対象を治療する方法を提供する。本明細書において同義的に使用されるような「個体」又は「対象」とは、ヒト又は非ヒト対象を指す。非ヒト対象の限定されない例として、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、ブタ、家禽、ウマ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、クジラ類などが挙げられる。特定の実施形態では、対象は、ヒトである。
【０１３４】
本開示は、癌細胞において毒性効果をもたらす方法であって、癌細胞に、治療上有効量の、上記のような腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの修飾されたウイルス又はそれを含有する医薬組成物を投与することを含む方法を提供する。本開示は、第2の癌細胞の成長及び/又は増殖の阻害で阻害する方法であって、第1の癌細胞に、上記のような修飾されたウイルスを投与することを含み、その結果、第1の癌細胞が前記ウイルスに感染する方法をさらに提供する。したがって、本明細書において開示される方法の特定の実施形態では、全ての癌又は腫瘍細胞が、治療上有効量の、本明細書において記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又はそれを含有する医薬組成物を投与する際に感染するわけではなく、感染していない細胞の成長が、直接感染を伴わずに阻害され得ることが考慮される。
【０１３５】
特定の実施形態では、本開示の方法及び組成物を使用して、腫瘍溶解を誘導し、細胞を死滅させ、成長を阻害し、転移を阻害し、腫瘍の大きさを減少させ、そうでなければ、腫瘍細胞の悪性表現型を逆転させる若しくは低減するために、癌細胞又は腫瘍を、治療上有効用量の本明細書において記載されるような例示的腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又はそれを含有する医薬組成物と接触させることができる。特定の実施形態では、有効量の、本明細書において記載されるような腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの本開示の修飾されたウイルスは、腫瘍溶解、癌細胞の破壊若しくは溶解又は癌細胞の成長若しくは大きさの阻害若しくは低減を誘導するのに十分な量を含み得る。癌細胞の成長を低減することは、例えば、細胞死又は複製速度の遅延又は細胞を含む腫瘍の成長速度の低減又は癌細胞を含有する対象の長期生存によって示され得る。
【０１３６】
本開示は、癌患者を癌療法に対して少なくとも部分的に再感作させる方法であって、治療上有効量の本明細書において開示される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は本明細書において開示される医薬組成物を、腫瘍細胞内のワクシニアウイルスの複製を増強する薬物と組み合わせてそれを必要とする対象に投与することを含む、方法をさらに提供する。
【０１３７】
特定の実施形態では、癌又は腫瘍を有する対象を治療する方法であって、対象に、有効量の、上記のような修飾されたウイルスを投与することを含む方法が提供される。このような方法における有効量は、癌の成長速度若しくは広がりを低減する、又は対象において生存を延長する量を含み得る。本開示は、腫瘍の成長を低減する方法を提供し、該方法は、腫瘍に、有効量の上記のような修飾されたウイルスを投与することを含み得る。特定の実施形態では、有効量の修飾されたウイルス又はその医薬組成物は、腫瘍の成長又は大きさにおいて遅延、阻害又は低減を誘導するのに十分な量を含み得、腫瘍の根絶を含み得る。腫瘍の成長を低減することは、例えば、成長速度の低減又は腫瘍を含有する対象の生存の延長によって示され得る。
【０１３８】
本開示はまた、本明細書において記載されるような腫瘍溶解性ワクシニアウイルスの感染力又は抗腫瘍活性を決定する方法を提供し、該方法は、(i)対象から第1の生体サンプルを採取すること及び第1の生体サンプルにおけるSTAT3のレベルを決定すること、(ii)対象に、治療上有効量の、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は本開示の医薬組成物を、単独又はさらなる療法と組み合わせて投与すること、(iii)ステップ(ii)における投与の約15分〜約72時間後に対象から第2の生体サンプルを採取すること及び(iii)第2の生体サンプルにおけるSTAT3タンパク質のレベルを検出することを含むことができ、STAT3のレベルが、ステップ(i)においてよりもステップ(iii)において低い場合に、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、感染性であると決定されるか、又は抗腫瘍活性を実証する。特定の実施形態では、上記で開示される方法は、ステップ(i)及び(iii)において、Asp53(Uniprot受託番号P04637-1)、Fas(Uniprot受託番号P25445)、Hsp70(Uniprot受託番号P0DMV8.)、サイクリン-D1(Uniprot受託番号P24385)、IL-10(Uniprot受託番号P22301.1)などのようなSTAT3によって調節される1種以上のタンパク質のレベルを検出することをさらに含み得る。例えば、Carpenter及びLo、Cancers 2014年、第6巻、897〜925頁を参照のこと。
【０１３９】
特定の実施形態では、抗腫瘍効力は、前記対象へ、治療上有効量の、本明細書において記載されるような腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの本開示の修飾されたウイルス又はそれを含む医薬組成物を投与した後に、対象から採取された血漿サンプル中のサイトカインレベル、例えば、IL-2、IL-7、IL-8、IL-10、IFN-γ、GM-CSF、TNF-α、IL-6、IL-4、IL-5及びIL-13をアッセイすることによって決定される。
【０１４０】
治療上有効量の、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの本開示の修飾されたウイルス又は本明細書において記載されるようなワクシニアウイルスを含有する医薬組成物の投与後に、薬物動態をモニタリングする方法が、本明細書においてさらに提供される。薬物動態をモニタリングする例示的方法は、以下のステップ:(i)対象に、治療上有効量の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又はそれを含む医薬組成物を、単独又はさらなる療法と組み合わせて投与するステップ、(ii)ステップ(ii)における投与後約15分、約30分、約45分、約60分、約75分、約90分、約120分、約180分及び約240分から選択される1以上の時点で対象から生体サンプルを採取するステップ及び(iii)上記の時点で採取された生体サンプル中のウイルスゲノムの量を検出するステップを含み得る。特定の実施形態では、ウイルスゲノムコピー/mLは、15分の時点で採取されたサンプル中で最大であることがあり、さらに、240分の時点で採取されたサンプルは、検出可能な量のウイルスゲノムを含有しないこともある。したがって、特定の実施形態では、ウイルスピークは、投与後約15分で観察されることがあり、ウイルスの大部分は、約240分(又は4時間)後に対象の系から排除され得る。特定の実施形態では、第1のウイルスピークは、投与の約15分後に観察されることがあり、第2のウイルスピークは、その後の時点で、例えば、約30分、約45分、約60分又は約90分で採取された生体サンプルにおいて観察され得る。生体サンプルは、特定の実施形態では、血液であることがあり、ウイルスゲノムの量/mLは、定量的PCR又はその他の適当な技術によって決定され得る。特定の実施形態では、第1のウイルスピークは、投与の約15分後に観察されることがあり、第2のウイルスピークは、本明細書において記載されるような腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの本開示の修飾されたウイルスの投与の約3時間〜約72時間後に観察され得る。
【０１４１】
修飾されたウイルスの送達
特定の実施形態では、対象に投与される腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの本開示の修飾されたウイルスの量は、約103から1012個の感染性ウイルス粒子若しくはプラーク形成単位(PFU)の間又は約105から1010PFUの間又は約105から108 PFUの間又は約108から1010PFUの間であり得る。Thorne及びKim、2009年、Nat Rev Cancer第9巻: 64〜71頁も参照のこと。特定の実施形態では、対象に投与される腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの本開示の修飾されたウイルスの量は、約103から1012ウイルス粒子若しくはPFUの間又は約105から1010PFUの間又は約105から108PFUの間又は約108から1010PFUの間であり得る。特定の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの本開示の修飾されたウイルスは、約103PFU/用量〜約104PFU/用量、約104PFU/用量〜約105PFU/用量、約105PFU/用量〜約106PFU/用量、約107PFU/用量〜約108PFU/用量、約109PFU/用量〜約1010 PFU/用量、約1010PFU/用量〜約1011PFU/用量、約1011PFU/用量〜約1012PFU/用量、約1012PFU/用量〜約1013PFU/用量、約1013PFU/用量〜約1014PFU/用量又は約1014PFU/用量〜約1015 PFU/用量を含み得る用量で投与され得る。特定の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの本開示の修飾されたウイルスは、約103個のウイルス粒子/用量〜約104個のウイルス粒子/用量、約104個のウイルス粒子/用量〜約105個のウイルス粒子/用量、約105個のウイルス粒子/用量〜約106個のウイルス粒子/用量、約107個のウイルス粒子/用量〜約108個のウイルス粒子/用量、約109個のウイルス粒子/用量〜約1010個のウイルス粒子/用量、約1010個のウイルス粒子/用量〜約1011個のウイルス粒子/用量、約1011個のウイルス粒子/用量〜約1012個のウイルス粒子/用量、約1012個のウイルス粒子/用量〜約1013個のウイルス粒子/用量、約1013個のウイルス粒子/用量〜約1014個のウイルス粒子/用量又は約1014個のウイルス粒子/用量〜約1015個のウイルス粒子/用量を含み得る用量で投与され得る。
【０１４２】
特定の実施形態では、本開示の修飾されたウイルスは、約103PFU/kg〜約104PFU/kg、約104PFU/kg〜約105PFU/kg、約105PFU/kg〜約106PFU/kg、約107PFU/kg〜約108PFU/kg、約109PFU/kg〜約1010PFU/kg、約1010PFU/kg〜約1011PFU/kg、約1011 PFU/kg〜約1012PFU/kg、約1012PFU/kg〜約1013PFU/kg、約1013PFU/kg〜約1014PFU/kg又は約1014PFU/kg〜約1015PFU/kgを含み得る用量で投与され得る。特定の実施形態では、本開示の修飾されたウイルスは、約103個のウイルス粒子/kg〜約104個のウイルス粒子/kg、約104個のウイルス粒子/kg〜約105個のウイルス粒子/kg、約105個のウイルス粒子/kg〜約106個のウイルス粒子/kg、約107個のウイルス粒子/kg〜約108個のウイルス粒子/kg、約109個のウイルス粒子/kg〜約1010個のウイルス粒子/kg、約1010個のウイルス粒子/kg〜約1011個のウイルス粒子/kg、約1011個のウイルス粒子/kg〜約1012個のウイルス粒子/kg、約1012個のウイルス粒子/kg〜約1013個のウイルス粒子/kg、約1013個のウイルス粒子/kg〜約1014個のウイルス粒子/kg又は約1014個のウイルス粒子/kg〜約1015個のウイルス粒子/kgを含み得る用量で投与され得る。
【０１４３】
本明細書において記載されるような腫瘍溶解性ワクシニアウイルスの液体投与形は、特定の実施形態では、約103PFU/mL〜約104PFU/mL、約104PFU/mL〜約105PFU/mL、約105PFU/mL〜約106PFU/mL、約107PFU/mL〜約108PFU/mL、約109PFU/mL〜約1010PFU/mL、約1010PFU/mL〜約1011PFU/mL、約1011PFU/mL〜約1012PFU/mL、約1012PFU/mL〜約1013PFU/mL、約1013PFU/mL〜約1014PFU/mL又は約1014PFU/mL〜約1015PFU/mLのウイルス用量を含み得る。修飾されたウイルスが注射によって投与される特定の実施形態では、投与量は、注射あたり約103個のウイルス粒子、注射あたり104個のウイルス粒子、注射あたり105個のウイルス粒子、注射あたり106個のウイルス粒子、注射あたり107個のウイルス粒子、注射あたり108個のウイルス粒子、注射あたり109個のウイルス粒子、注射あたり1010個のウイルス粒子、注射あたり1011個のウイルス粒子、注射あたり1012個のウイルス粒子、注射あたり2×1012個のウイルス粒子、注射あたり1013個のウイルス粒子、注射あたり1014個のウイルス粒子又は注射あたり1015個のウイルス粒子を含み得る。修飾されたウイルスが注射によって投与されるさらなる例では、投与量は、注射あたり約103個の感染性ウイルス粒子、注射あたり104個の感染性ウイルス粒子、注射あたり105個の感染性ウイルス粒子、注射あたり106個の感染性ウイルス粒子、注射あたり107個の感染性ウイルス粒子、注射あたり108個の感染性ウイルス粒子、注射あたり109個の感染性ウイルス粒子、注射あたり1010個の感染性ウイルス粒子、注射あたり1011個の感染性ウイルス粒子、注射あたり1012個の感染性ウイルス粒子、注射あたり2×1012個の感染性ウイルス粒子、注射あたり1013個の感染性ウイルス粒子、注射あたり1014個の感染性ウイルス粒子又は注射あたり1015個の感染性ウイルス粒子を含み得る。さらなる実施形態では、本開示の修飾されたウイルスは、約103組織培養阻害剤用量50%(TCID50)/kg、104TCID50/kg、104TCID50/kg、104TCID50/kg、104TCID50/kg、104TCID50/kg、104TCID50/kg、104TCID50/kg、104TCID50/kg、104TCID50/kg、104TCID50/kg、104TCID50/kg、104TCID50/kg、3×108TCID50/kg、4×108TCID50/kg、5×108TCID50/kg、3×109TCID50/kg、4×109TCID50/kg、5×109TCID50/kg、3×1010TCID50/kg、4×1010TCID50/kg又は4×1010TCID50/kgであり得る用量で投与され得る。本明細書において10xは、1eXとして別に表されるということは留意されたい。特定の実施形態では、修飾されたウイルスは、1以上の用量で投与され得る。特定の実施形態では、ウイルスは、腫瘍中の細胞の少なくとも約20%において、腫瘍中の細胞の少なくとも約30%において、腫瘍中の細胞の少なくとも約40%において、腫瘍中の細胞の少なくとも約50%において、腫瘍中の細胞の少なくとも約60%において、腫瘍中の細胞の少なくとも約70%において、腫瘍中の細胞の少なくとも約80%において、又は腫瘍中の細胞の少なくとも約90%において腫瘍溶解を誘導するのに十分な量で投与され得る。特定の実施形態では、ウイルスの単回用量は、1、2、5、10、15、20又は24時間の期間にわたって対象又は腫瘍に投与される量を指し得る。特定の実施形態では、用量は、経時的に又は別個の注射によって広げられ得る。特定の実施形態では、複数用量(例えば、2、3、4、5、6又はそれ以上の用量)のワクシニアウイルスが、対象に投与されてもよく、例えば、第2の治療は、第1の治療の1、2、3、4、5、6、7日又は数週間内に起こり得る。特定の実施形態では、複数用量の修飾されたウイ��スは、1、2、3、4、5、6、7日若しくはそれ以上又は数週の期間にわたって対象に投与され得る。特定の実施形態では、本明細書において記載されるような腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は医薬組成物は、約1週〜約2週、約2週〜約3週、約3週〜約4週、約4週〜約5週、約6週〜約7週、約7週〜約8週、約8週〜約9週、約9週〜約10週、約10週〜約11週、約11週〜約12週、約12週〜約24週、約24週〜約48週、約48週又は約52週の期間にわたって投与され得る。本明細書において記載されるような腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は医薬組成物の投与の頻度は、特定の場合には、1日に1回、1日に2回、週に1回、3週に1回、4週に1回(又は月に1回)、8週に1回(又は2カ月に1回)、12週に1回(又は3カ月に1回)又は24週に1回(又は6カ月に1回)であり得る。本明細書において開示される方法の特定の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は医薬組成物は、第1の期間の間、初期用量で、第2の期間の間、中間用量で、第3の期間の間、高用量で独立に投与され得る。特定の実施形態では、初期用量は、中間用量よりも低く、中間用量は、高用量よりも低い。特定の実施形態では、第1、第2及び第3の期間は、独立に、約1週〜約2週、約2週〜約3週、約3週〜約4週、約4週〜約5週、約6週〜約7週、約7週〜約8週、約8週〜約9週、約9週〜約10週、約10週〜約11週、約11週〜約12週、約12週〜約24週、約24週〜約48週、約48週又は約52週であるか又はそれより長い。
【０１４４】
特定の実施形態では、対象は、本明細書において記載される治療の方法のいずれかに従う、本明細書において記載されるような腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの修飾されたウイルス又はそれを含む医薬組成物の投与の前、それと同時に及びその後に、還元炭水化物食、例えば、ケトン食をとってもよい。特定の実施形態では、対象は、1日あたり500グラム未満の炭水化物の、1日あたり450グラム未満の炭水化物の、1日あたり400グラム未満の炭水化物の、1日あたり350グラム未満の炭水化物の、1日あたり300グラム未満の炭水化物の、1日あたり250グラム未満の炭水化物の、1日あたり200グラム未満の炭水化物の、1日あたり150グラム未満の炭水化物の、1日あたり100グラム未満の炭水化物の、1日あたり90グラム未満の炭水化物の、1日あたり80グラム未満の炭水化物の、1日あたり70グラム未満の炭水化物の、1日あたり60グラム未満の炭水化物の、1日あたり50グラム未満の炭水化物の、1日あたり40グラム未満の炭水化物の、1日あたり30グラム未満の炭水化物の、1日あたり20グラム未満の炭水化物の、1日あたり10グラム未満の炭水化物の消費を含み得る食事をとる。
【０１４５】
癌又は腫瘍細胞への、本明細書において記載されるような腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの本開示の修飾されたウイルス又はそれを含む医薬組成物の送達のための例示的方法は、腫瘍内注射によってであり得る。しかし、投与の代替法、例えば、静脈内、注入による、非経口、静脈内、皮内、筋肉内、経皮、直腸、尿道内、膣内、鼻腔内、くも膜下腔内又は腹腔内も使用され得る。投与経路は、腫瘍の位置及び性質によって変わり得る。特定の実施形態では、投与経路は、歯内、経皮、非経口、静脈内、筋肉内、鼻腔内、皮下、局所(例えば、特に、脈管構造を有する腫瘍に近接して、又は腫瘍の脈管構造に隣接して)、経皮、くも膜下腔内、気管内、腹腔内、動脈内、膀胱内、腫瘍内、吸入、灌流、洗浄によって又は経口であり得る。特定の実施形態では、修飾されたウイルスは、患者に埋め込まれた供給源から患者に投与され得る。特定の実施形態では、修飾されたウイルスの投与は、選択された期間にわたる連続注入によって起こり得る。特定の実施形態では、本明細書において記載されるような腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又はそれを含有する医薬組成物は、治療上有効用量で約15分、約30分、約45分、約50分、約55分、約60分、約75分、約90分、約100分又は約120分又はそれより長い期間にわたる注入によって投与され得る。本開示の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス又は医薬組成物は、液体投与量として投与されてもよく、投与の総容量は、約1ml〜約5ml、約5ml〜10ml、約15ml〜約20ml、約25ml〜約30ml、約30ml〜約50ml、約50ml〜約100ml、約100ml〜150ml、約150ml〜約200ml、約200ml〜約250ml、約250ml〜約300ml、約300ml〜約350ml、約350ml〜約400ml、約400ml〜約450ml、約450ml〜500ml、約500ml〜750ml又は約750ml〜1000mlである。
【０１４６】
医薬組成物
本開示は、本明細書において開示される修飾されたウイルスを含む医薬組成物をさらに提供する。特定の実施形態では、本明細書において記載されるような腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの修飾されたウイルスを含有する医薬組成物は、溶液、グリセロール中の分散物、液体ポリエチレングリコール及びオイル中のそれらの任意の組合せとして、固体投与形で、吸入可能投与形として、鼻腔内投与形として、リポソーム製剤、ナノ粒子を含む投与形、マイクロ粒子を含む投与形、ポリマー投与形又はそれらの任意の組合せとして調製され得る。医薬組成物は、特定の投与経路に関連して製剤化される。例えば、制限としてではないが、非経口的に、静脈内に、皮内に、筋肉内に、経皮的に又は腹腔内に投与され得る医薬組成物は、米国特許第5,543,158号、同5,641,515号及び同5,399,363号に記載されており、それらの開示内容は、その全文が参照により本明細書に組み込まれる。
【０１４７】
特定の実施形態では、本明細書において記載されるような医薬組成物は、賦形剤を含み得る。賦形剤は、Handbook of Pharmaceutical Excipients、American Pharmaceutical Association (1986年)に記載される賦形剤であり得る。適した賦形剤の限定されない例として、緩衝剤、保存剤、安定剤、結合剤、圧縮剤、滑沢剤、キレート剤、分散促進剤、崩壊剤、着香剤、甘味料、着色剤を挙げることができる。
【０１４８】
特定の実施形態では、賦形剤は、緩衝剤であり得る。適した緩衝剤の限定されない例として、クエン酸ナトリウム、炭酸マグネシウム、重炭酸マグネシウム、炭酸カルシウム及び重炭酸カルシウムを挙げることができる。緩衝剤として、重炭酸ナトリウム、重炭酸カリウム、水酸化マグネシウム、乳酸マグネシウム、グルコン酸マグネシウム、水酸化アルミニウム、クエン酸ナトリウム、酒石酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、ポリリン酸ナトリウム、ポリリン酸カリウム、ピロリン酸ナトリウム、ピロリン酸カリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素二カリウム、リン酸三ナトリウム、リン酸三カリウム、メタリン酸カリウム、酸化マグネシウム、水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウム、ケイ酸マグネシウム、酢酸カルシウム、グリセロリン酸カルシウム、塩化カルシウム、水酸化カルシウム及びその他のカルシウム塩又はそれらの組合せを、医薬製剤において使用できる。
【０１４９】
特定の実施形態では、賦形剤は、保存剤を含み得る。適した保存剤の限定されない例として、アルファ-トコフェロール及びアスコルベートなどの抗酸化剤並びにパラベン、クロロブタノール及びフェノールなどの抗菌剤を挙げることができる。抗酸化剤として、それだけには限らないが、EDTA、クエン酸、アスコルビン酸、ブチル化ヒドロキシトルエン(BHT)、ブチル化ヒドロキシアニソール(BHA)、亜硫酸ナトリウム、p-アミノ安息香酸、グルタチオン、没食子酸プロピル、システイン、メチオニン、エタノール及びN-アセチルシステインをさらに挙げることができる。特定の実施形態では、保存剤として、バリダマイシンA、TL-3、オルトバナジン酸ナトリウム、フッ化ナトリウム、N-a-トシル-Phe-クロロメチルケトン、N-a-トシル-Lys-クロロメチルケトン、アプロチニン、フェニルメチルスルホニルフルオリド、ジイソプロピルフルオロホスフェート、キナーゼ阻害剤、ホスファターゼ阻害剤、カスパーゼ阻害剤、グランザイム阻害剤、細胞間接着阻害剤、細胞分裂阻害剤、細胞周期阻害剤、脂質シグナル伝達阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、還元剤、アルキル化剤、抗菌剤、オキシダーゼ阻害剤又はその他の阻害剤を挙げることができる。
【０１５０】
特定の実施形態では、本明細書において記載されるような医薬組成物は、賦形剤として結合剤を含み得る。適した結合剤の限定されない例として、デンプン、アルファ化デンプン、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、セルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、ポリアクリルアミド、ポリビニルオキソアゾリドン、ポリビニルアルコール、C12〜C18脂肪酸アルコール、ポリエチレングリコール、ポリオール、サッカライド、オリゴ糖及びそれらの組合せを挙げることができる。医薬製剤において使用できる結合剤は、デンプン、例えば、ジャガイモデンプン、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、糖、例えば、スクロース、グルコース、デキストロース、ラクトース、マルトデキストリン、天然及び合成ゴム、ゼラチン、セルロース誘導体、例えば、微晶質セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ポリビニルピロリドン(ポビドン)、ポリエチレングリコール(PEG)、ワックス、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、アルコール、例えば、ソルビトール、キシリトール、マンニトール及び水又はそれらの組合せから選択され得る。
【０１５１】
特定の実施形態では、本明細書において記載されるような医薬組成物は、賦形剤として滑沢剤を含み得る。適した滑沢剤の限定されない例として、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、硬化植物油、ステロテクス(sterotex)、モノステアリン酸ポリオキシエチレン、タルク、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウム及び軽油を挙げることができる。医薬製剤において使用できる滑沢剤は、ステアリン酸金属塩(例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸アルミニウム)、脂肪酸エステル(例えば、フマル酸ステアリルナトリウム)、脂肪酸(例えば、ステアリン酸)、脂肪アルコール、ベヘン酸グリセリル、鉱油、パラフィン、硬化植物油、ロイシン、ポリエチレングリコール(PEG)、ラウリル硫酸金属塩(例えば、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウム)、塩化ナトリウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム及びタルク又はそれらの組合せから選択され得る。
【０１５２】
特定の実施形態では、医薬製剤は、賦形剤として分散増強剤を含み得る。適した分散剤の限定されない例として、高HLB乳化剤界面活性剤としてのデンプン、アルギン酸、ポリビニルピロリドン、グアーガム、カオリン、ベントナイト、精製木材セルロース、デンプングリコール酸ナトリウム、イソアモルファスシリケート(isoamorphous silicate)及び微晶質セルロースを挙げることができる。
【０１５３】
特定の実施形態では、本明細書において記載されるような医薬組成物は、賦形剤として崩壊剤を含み得る。特定の実施形態では、崩壊剤は、非発泡性崩壊剤であり得る。適した非発泡性崩壊剤の限定されない例として、デンプン、例えば、トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、それらのアルファ化及び修飾されたデンプン、甘味料、クレイ、例えば、ベントナイト、微結晶性セルロース、アルギン酸、デンプングリコール酸ナトリウム、ゴム、例えば、寒天、グアー、ローカストビーン、カラヤ、ペシチン(pecitin)及びトラガカントを挙げることができる。特定の実施形態では、崩壊剤は、発泡性崩壊剤であり得る。適した発泡性崩壊剤の限定されない例として、クエン酸と組み合わせた重炭酸ナトリウム及び酒石酸と組み合わせた重炭酸ナトリウムを挙げることができる。
【０１５４】
特定の実施形態では、賦形剤は、着香剤を含み得る。外層中に組み込まれる着香剤は、合成フレーバーオイル及び香味芳香族化合物、天然オイル、植物、葉、花及び果実からの抽出物並びにそれらの組合せから選択され得る。特定の実施形態では、着香剤は、桂皮油、ウィンターグリーンのオイル、ペパーミントオイル、クローバーオイル、ヘイオイル、アニスオイル、ユーカリ、バニラ、シトラスオイル、例えば、レモンオイル、オレンジオイル、グレープ及びグレープフルーツオイル並びにリンゴ、モモ、ナシ、イチゴ、ラズベリー、チェリー、プラム、パイナップル及びアプリコットを含むフルーツエッセンスからなる群から選択される。
【０１５５】
特定の実施形態では、賦形剤は、甘味料を含み得る。適した甘味料の限定されない例として、グルコース(コーンシロップ)、デキストロース、転化糖、フルクトース及びそれらの混合物(担体として使用されない場合)、サッカリン及びその種々の塩、例えば、ナトリウム塩、ジペプチド甘味料、例えば、アスパルテーム、ジヒドロカルコン化合物、グリチルリチン、ステビア・レバウディアナ(Stevia Rebaudiana)(ステビオシド(Stevioside))、スクロースのクロロ誘導体、例えば、スクラロース及び糖アルコール、例えば、ソルビトール、マンニトール、シリトールなどを挙げるこができる。
【０１５６】
特定の実施形態では、本明細書において記載されるような医薬組成物は、着色剤を含み得る。適した着色剤の限定されない例として、食品、医薬品及び化粧品カラー(FD&C)、医薬品及び化粧品カラー(D&C)及び外用医薬品及び化粧品カラー(Ext. D&C)を挙げることができる。着色剤は、染料又はその対応するレーキとして使用され得る。
【０１５７】
特定の実施形態では、本明細書において記載されるような医薬組成物は、キレート剤を含み得る。いくつかの場合には、キレート剤は、殺真菌性キレート剤であり得る。例として、それだけには限らないが、エチレンジアミン-N,N,N',N'-四酢酸(EDTA);EDTAの二ナトリウム、三ナトリウム、四ナトリウム、二カリウム、三カリウム、二リチウム及び二アンモニウム塩;EDTAのバリウム、カルシウム、コバルト、銅、ジスプロシウム、ユウロピウム、鉄、インジウム、ランタン、マグネシウム、マンガン、ニッケル、サマリウム、ストロンチウム又は亜鉛キレート;トランス-1,2-ジアミノシクロヘキサン-N,N,N',N'-四酢酸一水和物;N,N-ビス(2-ヒドロキシエチル)グリシン;1,3-ジアミノ-2-ヒドロキシプロパン-N,N,N',N'-四酢酸;1,3-ジアミノプロパン-N,N,N',N'-四酢酸;エチレンジアミン-N,N'-二酢酸;エチレンジアミン-N,N'-二プロピオン酸ジヒドロクロリド;エチレンジアミン-N,N'-ビス(メチレンホスホン酸)半水和物;N-(2-ヒドロキシエチル)エチレンジアミン-N,N',N'-三酢酸;エチレンジアミン-N,N,N',N'-テトラキス(メチレンホスホン酸(phosponic acid));O,O'-ビス(2-アミノエチル)エチレングリコール-N,N,N',N'-四酢酸;N,N-ビス(2-ヒドロキシベンジル)エチレンジアミン-N,N-二酢酸;1,6-ヘキサメチレンジアミン-N,N,N',N'-四酢酸;N-(2-ヒドロキシエチル)イミノ二酢酸;イミノ二酢酸;1,2-ジアミノプロパン-N,N,N',N'-四酢酸;ニトリロ三酢酸;ニトリロ三プロピオン酸;ニトリロトリスの三ナトリウム塩(メチレンリン酸);7,19,30-トリオキサ-1,4,10,13,16,22,27,33-オクタアザビシクロ[11,11,11]ペンタトリアコンタンヘキサヒドロブロミド;又はトリエチレンテトラミン-N,N,N',N",N''',N'''-六酢酸を挙げることができる。
【０１５８】
1以上の本明細書において開示される修飾されたウイルス並びに1以上のその他の抗菌剤又は抗真菌剤、例えば、アンホテリシンB、アンホテリシンB脂質複合体(ABCD)、リポソームアンホテリシンB(L-AMB)及びリポソームナイスタチンなどのポリエン、ボリコナゾール、フルコナゾール、ケトコナゾール、イトラコナゾール、ポザコナゾール(pozaconazole)などのアゾール及びトリアゾールなど;カスポファンギン、ミカファンギン(FK463)及びV-エキノキャンディン(LY303366)などのグルカンシンターゼ阻害剤;グリセオフルビン;テルビナフィンなどのアリルアミン;フルシトシン又は本明細書において記載されるものを含むその他の抗真菌剤を含む組合せ製品も考慮される。さらに、ペプチドが、シクロピロクスオラミン、ハロプロジン、トルナフタート、ウンデシレン酸塩、局所ナイスタチン(nysatin)、アモロルフィン、ブテナフィン、ナフチフィン、テルビナフィンなどの局所抗真菌剤及びその他の局所薬剤と組み合わされ得ることが考慮される。特定の実施形態では、医薬組成物は、さらなる薬剤を含み得る。いくつかの場合には、さらなる薬剤は、医薬組成物中に治療上有効な量で存在し得る。
【０１５９】
貯蔵及び使用の普通の条件下では、本明細書において記載されるような医薬組成物は、微生物の成長を防ぐために保存剤を含み得る。特定の例では、本明細書において記載されるような医薬組成物は、保存剤を含まないこともある。注射用使用に適した医薬形態として、滅菌水溶液又は分散液及び滅菌注射用溶液又は分散物の即時調製のための滅菌散剤を挙げることができる。医薬組成物は、例えば、水、エタノール、ポリオール(例えば、グリセロール、プロピレングリコール及び液体ポリエチレングリコールなど)及び/又は植物油又はそれらの任意の組合せを含有する溶媒又は分散媒である担体を含み得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散物の場合には必要な粒径の維持によって及び界面活性剤の使用によって維持され得る。微生物の作用の防止は、種々の抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどによって引き起こされ得る。多数の場合には、等張剤、例えば、糖又は塩化ナトリウムを含むことが好ましいであろう。注射用組成物の吸収の延長は、吸収を遅延する薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンの組成物中での使用によって引き起こされ得る。
【０１６０】
水溶液での非経口投与のために、例えば、液体投与形は、必要に応じて適宜緩衝され、液体希釈剤は、十分な生理食塩水又はグルコースを用いて等張性にされ得る。液体投与形は、静脈内、筋肉内、皮下、腫瘍内及び腹腔内投与に特に適している。これに関連して、使用され得る滅菌水性媒体は、本開示に照らして当業者に公知であろう。例えば、1投与量は、1mL〜20mLの等張性NaCl溶液に溶解され、100mL〜1000mLの流体、例えば、重炭酸ナトリウム緩衝生理食塩水に添加されるか、又は提案される注入部位に注射され得る。
【０１６１】
特定の実施形態では、滅菌注射用溶液を、本明細書において記載されるような腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの本開示の修飾されたウイルス又はそれを含有する医薬組成物を、必要な量で、必要に応じて上記で列挙された種々のその他の成分とともに適当な溶媒中に組み込むことと、それに続く、濾過滅菌によって調製できる。一般に、分散物は、種々の滅菌有効成分を、基本分散媒及び上記で列挙されたものから必要なその他の成分を含有する滅菌媒体中に組み込むことによって調製する。本明細書において開示される組成物は、中性又は塩形態で製剤化してもよい。医薬上許容される塩として、(タンパク質の遊離アミノ基を用いて形成される)及び例えば、塩酸若しくはリン酸などの無機酸又は酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸などのような有機酸を用いて形成される酸付加塩が挙げられる。遊離カルボキシル基を用いて形成される塩はまた、例えば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム又は水酸化第二鉄などの無機塩基及びイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジン、プロカインなどのような有機塩基から導くことができる。製剤化の際、医薬組成物は、投与量製剤と適合する方法で、治療上有効であるような量で投与され得る。
【０１６２】
特定の実施形態では、本開示の医薬組成物は、医薬上許容される担体と組み合わされた、有効量の、本明細書において開示される修飾されたウイルスを含み得る。「医薬上許容される」とは、本明細書において、有効成分の生物活性の有効性を緩衝しない、及び/又は投与される患者にとって毒性ではない任意の担体を含む。適した医薬担体の限定されない例として、リン酸緩衝生理食塩水溶液、水、油/水エマルジョンなどのエマルジョン、種々の種類の湿潤剤及び滅菌溶液が挙げられる。医薬上適合する担体のさらなる限定されない例として、ゲル、生体吸着性(bioadsorbable)マトリックス材料、修飾されたウイルス又は任意のその他の適した媒体を含有する移植エレメント、送達又は分散手段又は材料を挙げることができる。このような担体は、従来法によって製剤化でき、対象に有効量で投与できる。
【０１６３】
製造の方法
本開示の修飾されたウイルスは、当業者に公知の方法によって製造できる。特定の実施形態では、修飾されたウイルスは、適した宿主細胞において増殖させ、宿主細胞から単離し、経時的な感染力の喪失が最小化されるようなウイルスの安定性及び完全性を促進する条件で保存できる。宿主細胞の限定されない例として、HeLa細胞、HEK293細胞及びVero細胞が挙げられる。特定の例示的な方法では、修飾されたウイルスは、細胞スタック、ローラーボトル又は灌流バイオリアクターを使用して宿主細胞において増殖される。特定の実施形態では、修飾されたウイルスの精製のための下流方法は、濾過(例えば、深層濾過、タンジェンシャルフロー濾過又はそれらの組合せ)、超遠心分離法又はクロマトグラフィー捕獲を含み得る。修飾されたウイルスは、凍結乾燥などによって凍結又は乾燥することによって保存できる。特定の実施形態では、投与の前に、保存された修飾されたウイルスを再構成し(貯蔵のために乾燥されている場合には)、投与のために医薬上許容される担体で希釈してもよい。
【０１６４】
併用療法
特定の実施形態では、本開示の方法は、本明細書において開示されるような修飾されたウイルス又はそれを含有する医薬組成物と、それに続く、それに先行する、又はそれと組み合わせた1以上のさらなる療法を投与することを含む。さらなる療法の例として、それだけには限らないが、化学療法、放射線照射、さらなるウイルスを用いる腫瘍溶解性ウイルス療法、免疫調節性タンパク質を用いる治療、STAT3阻害剤、抗癌剤又はそれらの任意の組合せを挙げることができる。さらなる療法は、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの修飾されたウイルスの投与に関して、同時に又は逐次投与され得る。特定の実施形態では、本開示の方法は、本明細書において開示されるような修飾されたウイルスと、それに続く、それに先行する、又はそれと組み合わせた1以上の抗癌剤又は癌療法を投与することを含む。抗癌剤として、それだけには限らないが、化学療法薬、放射線治療薬、サイトカイン、免疫チェックポイント阻害剤、抗脈管形成剤、アポトーシス誘導剤、抗癌抗体及び/又は抗サイクリン依存性キナーゼ剤を挙げることができる。特定の実施形態では、癌療法として、化学療法、生物学的療法、放射線療法、免疫療法、ホルモン療法、抗血管(anti-vascular)療法、クライオセラピー、毒素療法及び/又は手術又はそれらの組合せを挙げることができる。特定の実施形態では、本開示の方法は、本明細書において開示される修飾されたウイルスと、それに続く、それに先行する、又はそれと組み合わせた1種以上のSTAT3阻害剤を投与することを含み得る。STAT3阻害剤の限定されない例として、STAT3の発現及び/又は活性を阻害及び/又は低減する化合物、分子、化学物質、ポリペプチド及びタンパク質が挙げられる。特定の実施形態では、STAT3阻害剤として、STAT3二量体化又はDNA結合を遮断するように設計されたペプチドアプタマー、哺乳動物タンパク質SOCS3及びGRIM-19、それだけには限らないが、S3I-201、S31-2001、STA-21、1S3-295、ウィタクニスチン(withacnistin)、ガリエララクトン(galiellalactone)、ニクロサミド、スタティック(stattic)及びククルビタシン(例えば、ククルビタシンI)などの小分子又はそれらの組合せを挙げることができる。STAT3阻害剤のさらなる限定されない例は、Yueら、Expert Opin. Investig. Drugs第18巻(1号):45〜56頁(2009年)、Siveenら、Biochimica et Biophysica Acta第1845巻:136〜154頁(2014年)、Buら、Gene第512巻(2号):198〜205頁(2013年)及びFurtekらACS Chem. Biol.第11巻(2号):308〜318頁(2016年)に開示されており、それらの開示内容は、その全文が参照により本明細書に組み込まれる。特定の実施形態では、STAT3阻害剤は、STAT3シグナル伝達及び/又は活性を部分的又は完全に遮断し得る抗体又は抗体断片であり得る。STAT3阻害剤のさらなる限定されない例として、リボザイム(ribozyines)、アンチセンスオリゴヌクレオチド、STAT3応答エレメントを模倣することによってSTAT3 DNA結合部位を遮断するデコイオリゴヌクレオチド、STAT3の発現又は活性を特異的に阻害及び/又は低減するshRNA分子及びsiRNA分子を挙げることができる。STAT3阻害剤の1つの限定されない例は、アンチセンス、STAT3核酸配列の少なくとも一部に対して相同であるshRNA又はsiRNA核酸配列を含むことができ、STAT3配列に対する部分の相同性は、少なくとも約75又は少なくとも約80又は少なくとも約85又は少なくとも約90又は少���くとも約95又は少なくとも約98パーセントであることがあり、相同性パーセントは、例えば、BLAST又はFASTAソフトウェアによって決定され得る。特定の実施形態では、相補性部分は、少なくとも10ヌクレオチド又は少なくとも15ヌクレオチド又は少なくとも20ヌクレオチド又は少なくとも25ヌクレオチド又は少なくとも30ヌクレオチドを構成することがあり、アンチセンス核酸であるshRNA又はsiRNA分子は、最大15又は最大20又は最大25又は最大30又は最大35又は最大40又は最大45又は最大50又は最大75又は最大100ヌクレオチドの長さであり得る。アンチセンス、shRNA又はsiRNA分子は、DNA又は非定型又は天然に存在しない残基、例えば、それだけには限らないが、ホスホロチオエート残基を含み得る。RNA分子は、ベクターから発現させ、化学的に若しくは合成によって製造できる。適当なdsRNA又はdsRNAをコードするベクターを選択するための方法は、配列が公知である遺伝子について当技術分野で周知である(例えば、Tuschl, T.ら(1999年);Elbashir, S.M.ら(2001年);Hannon, G J.(2002年); McManus, M T.ら(2002年);Brummelkamp, T R.ら(2002年);米国特許第6,573,099号及び同6,506,559号;並びにPCT特許出願第WO2001/036646号、同WO1999/032619号及び同WO2001/068836号を参照のこと)。
【０１６５】
特定の実施形態では、修飾されたウイルスを使用する治療は、単独で又は1種以上の免疫調節薬と組み合わせて使用できる。免疫調節薬として、腫瘍又は癌と関連する抗ウイルス免疫を抑制可能な任意の化合物、分子又は物質を挙げることができる。特定の実施形態では、免疫調節薬は、修飾されたウイルスに対する自然免疫又は適応免疫を抑制可能であり得る。免疫調節薬の限定されない例として、抗CD33抗体又はその可変領域、抗CD11b抗体又はその可変領域、COX2阻害剤、例えば、セレコキシブ、サイトカイン、例えばIL-12、GM-CSF、IL-2、IFN3及び1FNy並びにMIP-1、MCP-1及びIL-8などのケモカインが挙げられる。特定の実施形態では、免疫調節薬として、それだけには限らないが、抗CTLA4、抗PD-1、抗PDL1及びTLRアゴニスト(例えば、ポリ1:C)などの免疫チェックポイント阻害剤が挙げられる。
【０１６６】
さらなる療法が放射線照射である特定の例では、例示的線量は、5,000ラド(50Gy)〜100,000ラド(1000Gy)又は50,000ラド(500Gy)又は列挙される範囲内のその他の適当な線量であり得る。或いは、放射線照射線量は、約30〜60Gy、約40〜約50Gy、約40〜48Gy又は約44Gy又は列挙される範囲内のその他の適当な線量である場合があり、線量は、例えば、上記のように線量測定研究によって決定される。「Gy」とは、本明細書において、100ラドに等しい放射線照射の指定の吸収される線量の単位を指し得る。Gyは、「グレイ(Gray)」の略語である。
【０１６７】
さらなる療法が化学療法である特定の例では、例示的化学療法薬として、制限するものではないが、アルキル化剤(例えば、ナイトロジェンマスタード誘導体、エチレンイミン、アルキルスルホネート、ヒドラジン及びトリアジン、ニトロソウレア(nitrosureas)及び金属塩)、植物アルカロイド(例えば、ビンカアルカロイド、タキサン、ポドフィロトキシン及びカンプトテカン類似体)、抗腫瘍抗生物質(例えば、アントラサイクリン、クロモマイシンなど)、代謝拮抗剤(例えば、葉酸アンタゴニスト、ピリミジンアンタゴニスト、プリンアンタゴニスト及びアデノシンデアミナーゼ阻害剤)、トポイソメラーゼI阻害剤、トポイソメラーゼII阻害剤及び種々の抗悪性腫瘍薬(例えば、リボヌクレオチドレダクターゼ阻害剤、副腎皮質ステロイド阻害剤、酵素、微小管阻害剤及びレチノイド)を挙げることができる。例示的化学療法薬として、制限するものではないが、アナストロゾール(アリミデックス(登録商標))、ビカルタミド(カソデックス(登録商標))、硫酸ブレオマイシン(ブレノキサン(登録商標))、ブスルファン(ミレラン(登録商標))、ブスルファン注射(ブスルフェクス(登録商標))、カペシタビン(ゼローダ(登録商標))、N4-ペントキシカルボニル-5-デオキシ-5-フルオロシチジン、カルボプラチン(パラプラチン(登録商標))、カルムスチン(BiCNU(登録商標))、クロラムブシル(ロイケラン(登録商標))、シスプラチン(プラチノール(Platinol)(登録商標))、クラドリビン(ロイスタチン(登録商標))、シクロホスファミド(シトキサン(登録商標)又はネオサル(Neosar)(登録商標))、シタラビン、シトシンアラビノシド(サイトサール(Cytosar)-U(登録商標))、シタラビンリポソーム注射(デポサイト(登録商標))、ダカルバジン(DTIC-ドーム(Dome)(登録商標))、ダクチノマイシン(アクチノマイシンD、コスメガン(Cosmegan))、ダウノルビシン塩酸塩(セルビジン(登録商標))、ダウノルビシンクエン酸塩リポソーム注射(ダウノゾーム(DaunoXome)(登録商標))、デキサメタゾン、ドセタキセル(タキソテール(登録商標))、ドキソルビシン塩酸塩(アドリアマイシン(登録商標)、ルベックス(Rubex)(登録商標))、エトポシド(ベプシド(登録商標))、フルダラビンリン酸塩(フルダラ(登録商標))、5-フルオロウラシル(アドルシル(Adrucil)(登録商標)、エフデックス(Efudex)(登録商標))、フルタミド(ユーレキシン(Eulexin)(登録商標))、テザシチビン(tezacitibine)、ゲムシタビン(ジフルオロデオキシシチジン)、ヒドロキシ尿素(ハイドレア(登録商標))、イダルビシン(イダマイシン(登録商標))、イホスファミド(IFEX(登録商標))、イリノテカン(カンプトサル(Camptosar)(登録商標))、L-アスパラギナーゼ(ELSPAR(登録商標))、ロイコボリンカルシウム、メルファラン(アルケラン(登録商標))、6-メルカププリン(プリネトール(Purinethol)(登録商標))、メトトレキサート(フォレックス(Folex)(登録商標))、ミトキサントロン(ノバントロン(登録商標))、マイロターグ、パクリタキセル(タキソール(登録商標))、フェニックス(phoenix)(Yttrium90/MX-DTPA)、ペントスタチン、カルムスチンインプラントを伴うポリフェプロサン(polifeprosan)20(ギリアデル(登録商標))、タモキシフェンクエン酸塩(ノルバデックス(登録商標))、テニポシド(ブモン(Vumon)(登録商標))、6-チオグアニン、チオテパ、チラパザミン(チラゾン(Tirazone)(登録商標))、注射用トポテカン塩酸塩(ヒカンプチン(Hycamptin)(登録商標))、ビンブラスチン(ベルバン(Velban)(登録商標))、ビンクリスチン(オンコビン(登録商標))及びビノレルビン(ナベルビン(登録商標))、イブルチニブ、イデラリシブ及びブレンツキシマブベドチンを挙げることができる。
【０１６８】
例示的アルキル化剤として、制限するものではないが、ナイトロジェンマスタード、エチレンイミン誘導体、アルキルスルホネート、ニトロソウレア及びトリアゼン):ウラシルマスタード(アミノウラシルマスタード(登録商標)、クロレタミナシル(Chlorethaminacil)(登録商標)、デメチルドパン(Demethyldopan)(登録商標)、デスメチルドパン(Desmethyldopan)(登録商標)、ヘマンタミン(Haemanthamine)(登録商標)、ノルドパン(Nordopan)(登録商標)、ウラシルナイトロジェンマスタード(登録商標)、ウラシロスト(Uracillost)(登録商標)、ウラシルモスタザ(Uracilmostaza)(登録商標)、ウラムスチン(Uramustin)(登録商標)、ウラムスチン(Uramustine)(登録商標))、クロルメチン(マスタージェン(Mustargen)(登録商標))、シクロホスファミド(シトキサン(登録商標)、ネオサル(Neosar)(登録商標)、クラフェン(Clafen)(登録商標)、エンドキサン(Endoxan)(登録商標)、プロシトックス(Procytox)(登録商標)、レビムン(Revimmune)(商標))、イホスファミド(ミトキサナ(Mitoxana)(登録商標))、メルファラン(アルケラン(登録商標))、クロラムブシル(ロイケラン(登録商標))、ピポブロマン(アメデル(Amedel)(登録商標)、ベルサイト(Vercyte)(登録商標))、トリエチレンメラミン(ヘメル(Hemel)(登録商標)、ヘキサレン(Hexalen)(登録商標)、ヘキサスタット(Hexastat)(登録商標))、トリエチレンチオホスホラミン、テモゾロミド(テモダール(Temodar)(登録商標))、チオテパ(チオプレックス(Thioplex)(登録商標))、ブスルファン(ブシルベックス(Busilvex)(登録商標)、ミレラン(登録商標))、カルムスチン(BiCNU(登録商標))、ロムスチン(CeeNU(登録商標))、ストレプトゾシン(ザノサール(Zanosar)(登録商標))及びダカルバジン(DTIC-ドーム(Dome)(登録商標))を挙げることができる。さらなる例示的アルキル化剤として、それだけには限らないが、オキサリプラチン(エロキサチン(登録商標))、テモゾロミド(テモダール(Temodar)(登録商標)及びテモダール(Temodal)(登録商標))、ダクチノマイシン(アクチノマイシン-D、コスメゲン(登録商標)としても知られる)、メルファラン(L-PAM、L-サルコリシン及びフェニルアラニンマスタード、アルケラン(登録商標)としても知られる)、アルトレタミン(ヘキサメチルメラミン(HMM)、ヘキサレン(Hexalen)(登録商標)としても知られる)、カルムスチン(BiCNU(登録商標))、ベンダムスチン(トレアンダ(登録商標))、ブスルファン(ブスルフェクス(登録商標)及びミレラン(登録商標))、カルボプラチン(パラプラチン(登録商標))、ロムスチン(CCNU、CeeNU(登録商標)としても知られる)、シスプラチン(CDDP、プラチノール(Platinol)(登録商標)及びプラチノール(Platinol)(登録商標)-AQとしても知られる)、クロラムブシル(ロイケラン(登録商標))、シクロホスファミド(シトキサン(登録商標)及びネオサル(Neosar)(登録商標))、ダカルバジン(DTIC、DIC及びイミダゾールカルボキサミド、DTIC-ドーム(Dome)(登録商標)としても知られる)、アルトレタミン(ヘキサメチルメラミン(HMM)、ヘキサレン(Hexalen)(登録商標)としても知られる)、イホスファミド(イフェックス(Ifex)(登録商標))、プレドヌムスチン(Prednumustine)、プロカルバジン(マツラン(Matulane)(登録商標))、メクロレタミン(ナイトロジェンマスタード、ムスチン(mustine)及びメクロロエタミン塩酸塩(mechloroethamine hydrochloride)、マスタージェン(Mustargen)(登録商標)としても知られる)、ストレプトゾシン(ザノサール(Zanosar)(登録商標))、チオテパ(チ���ホスホアミド、TESPA及びTSPA、チオプレックス(Thioplex)(登録商標)としても知られる)、シクロホスファミド(エンドキサン(Endoxan)(登録商標)、シトキサン(登録商標)、ネオサル(Neosar)(登録商標)、プロシトックス(Procytox)(登録商標)、レビムン(Revimmune)(登録商標))及びベンダムスチンHCl(トレアンダ(登録商標))が挙げられる。
【０１６９】
例示的アントラサイクリンとして、それだけには限らないが、例えば、ドキソルビシン(アドリアマイシン(登録商標)及びルベックス(Rubex)(登録商標))、ブレオマイシン(レノキサン(Lenoxane)(登録商標))、ダウノルビシン(ダウオルビシン塩酸塩(dauorubicin hydrochloride)、ダウノマイシン及びルビドマイシン(rubidomycin)塩酸塩、セルビジン(登録商標))、ダウノルビシンリポソーム(ダウノルビシンクエン酸塩リポソーム、ダウノゾーム(DaunoXome)(登録商標))、ミトキサントロン(DHAD、ノバントロン(登録商標))、エピルビシン(エレンス(Ellence)(商標))、イダルビシン(イダマイシン(登録商標)、イダマイシンPFS(登録商標))、マイトマイシンC(ムタマイシン(Mutamycin)(登録商標))、ゲルダナマイシン、ハービマイシン、ラビドマイシン(ravidomycin)及びデスアセチルラビドマイシン(desacetylravidomycin)を挙げることができる。
【０１７０】
例示的ビンカアルカロイドとして、それだけには限らないが、ビノレルビン酒石酸塩(ナベルビン(登録商標))、ビンクリスチン(オンコビン(登録商標))及びビンデシン(エルジシン(Eldisine)(登録商標)))、ビンブラスチン(ビンブラスチン硫酸塩、ビンカロイコブラスチン(vincaleukoblastine)及びVLB、アルカバン(Alkaban)-AQ(登録商標)及びベルバン(Velban)(登録商標)としても知られる)及びビノレルビン(ナベルビン(登録商標))を挙げることができる。
【０１７１】
例示的プロテオソーム阻害剤として、それだけには限らないが、ボルテゾミブ(ベルケード(登録商標))、カルフィルゾミブ(PX-171-007、(S)-4-メチル-N-((S)-1-(((S)-4-メチル-1-((R)-2-メチルオキシラン-2-イル)-1-オキソペンタン-2-イル)アミノ)-1-オキソ-3-フェニルプロパン-2-イル)-2-((S)-2-(2-モルホリノアセタミド)-4-フェニルブタンアミド)-ペンタンアミド)、マリゾミブ(NPI-0052)、イキサゾミブクエン酸塩(MLN-9708)、デランゾミブ(CEP-18770)及びO-メチル-N-[(2-メチル-5-チアゾリル)カルボニル]-L-セリル-O-メチル-N-[(1S)-2-[(2R)-2-メチル-2-オキシラニル]-2-オキソ-1-(フェニルメチル)エチル]-L-セリンアミド(ONX-0912)を挙げることができる。
【０１７２】
「と組み合わせて」とは、本明細書において、本明細書において記載されるような腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの修飾されたウイルス又はそれを含む医薬組成物及び1種以上の薬剤を含むさらなる療法などのさらなる療法が、治療レジメン又はプランの一部として対象に投与されることを意味する。特定の実施形態では、組み合わせて使用されていることは、修飾されたウイルス及び1種以上の薬剤が、投与の前に物理的に組み合わされることを必要としない、又はそれらは同一時間枠にわたって投与される。例えば、制限としてではないが、修飾されたウイルス及び1種以上の薬剤は、治療されている対象に同時に投与され得る、又は同一時間に若しくは時間中の異なる点で任意の順序で逐次投与され得る。
【０１７３】
さらなる療法は、種々の実施形態で、液体投与形、固体投与形、坐剤、吸入可能投与形、鼻腔内投与形で、リポソーム製剤、ナノ粒子を含む投与形、マイクロ粒子を含む投与形、ポリマー投与形又はそれらの任意の組合せで投与され得る。特定の実施形態では、さらなる療法は、約1週〜約2週、約2週〜約3週、約3週〜約4週、約4週〜約5週、約6週〜約7週、約7週〜約8週、約8週〜約9週、約9週〜約10週、約10週〜約11週、約11週〜約12週、約12週〜約24週、約24週〜約48週、約48週又は約52週又はそれ以上の期間にわたって投与される。さらなる療法の投与の頻度は、特定の場合には、1日に1回、1日に2回、週に1回、3週に1回、4週に1回(又は月に1回)、8週に1回(又は2カ月に1回)、12週に1回(又は3カ月に1回)又は24週に1回(6カ月に1回)であり得る。
【０１７４】
特定の実施形態では、癌を有する対象を治療する方法は、対象に、有効量の、STAT3の活性を調節するタンパク質をコードする1以上の外来核酸を含む修飾されたウイルス、例えば、ワクシニアウイルスを投与することを含む。例えば、制限としてではないが、癌を有する対象を治療する方法は、対象に、有効量の、STAT3活性を阻害、低減及び/又は最小化するタンパク質をコードする1以上の外来核酸を含む、修飾されたウイルス、例えば、ワクシニアウイルスを投与することを含む。特定の実施形態では、開示された(discloses)方法において使用するためのワクシニアウイルスは、PIAS3タンパク質又はその断片、SOCS3タンパク質又はその断片、TCPTPタンパク質又はその断片及び/又はドミナントネガティブ突然変異体STAT3タンパク質をコードする外来核酸を含む。特定の実施形態では、本開示の方法は、対象に、有効量の、1種以上の薬剤を投与することをさらに含み得る。例えば、制限としてではないが、薬剤は、上記のような抗癌剤、STAT3阻害剤及び/又は免疫調節薬であり得る。
【０１７５】
特定の実施形態では、癌を有する対象を治療する方法は、対象に、有効量の、配列番号1〜7及び24〜27からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であるアミノ酸配列並びにその保存的置換、例えば、配列番号1及びその保存的置換を含むPIAS3タンパク質をコードする1種以上の核酸を発現する修飾されたウイルス、例えば、ワクシニアウイルスを投与することを含む。例えば、制限としてではないが、本発明の修飾されたウイルスは、配列番号8〜10及び40〜43からなる群から選択される核酸配列に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であるヌクレオチド配列を含む核酸を含み得る。特定の実施形態では、PIAS3タンパク質は、本明細書において開示されるような細胞透過性ペプチドにさらにコンジュゲートされてもよく、外来核酸は、細胞透過性ペプチドをさらにコードし得る。特定の実施形態では、本開示の方法は、対象に、有効量の、1種以上の薬剤を投与することをさらに含み得る。例えば、制限としてではないが、薬剤は、上記のような抗癌剤、STAT3阻害剤及び/又は免疫調節薬であり得る。
【０１７６】
特定の実施形態では、癌を有する対象を治療する方法は、対象に、有効量の、配列番号28及び30からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であるアミノ酸配列並びにその保存的置換、例えば、配列番号28及びその保存的置換を含むSOCS3タンパク質をコードする1種以上の核酸を発現する修飾されたウイルス、例えば、ワクシニアウイルスを投与することを含む。例えば、制限としてではないが、本発明の修飾されたウイルスは、配列番号29及び31からなる群から選択される核酸配列に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であるヌクレオチド配列を含む核酸を含む。特定の実施形態では、SOCS3タンパク質は、本明細書において開示されるような細胞透過性ペプチドにさらにコンジュゲートされてもよく、外来核酸は、細胞透過性ペプチドをさらにコードし得る。特定の実施形態では、本開示の方法は、対象に、有効量の、1種以上の薬剤を投与することをさらに含み得る。例えば、制限としてではないが、薬剤は、上記のような抗癌剤、STAT3阻害剤及び/又は免疫調節薬であり得る。
【０１７７】
特定の実施形態では、癌を有する対象を治療する方法は、対象に、有効量の、配列番号32及び34からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であるアミノ酸配列並びにその保存的置換、例えば、配列番号32及びその保存的置換を含むTCPTPタンパク質をコードする1種以上の核酸を発現する修飾されたウイルス、例えば、ワクシニアウイルスを投与することを含む。例えば、制限としてではないが、本発明の修飾されたウイルスは、配列番号33及び35からなる群から選択される核酸配列に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であるヌクレオチド配列を含む核酸を含み得る。特定の実施形態では、TCPTPタンパク質は、本明細書において開示されるような細胞透過性ペプチドにコンジュゲートされてもよく、外来核酸は、細胞透過性ペプチドをさらにコードし得る。特定の実施形態では、本開示の方法は、対象に、有効量の、1種以上の薬剤を投与することをさらに含み得る。例えば、制限としてではないが、薬剤は、上記のような抗癌剤、STAT3阻害剤及び/又は免疫調節薬であり得る。
【０１７８】
特定の実施形態では、癌を有する対象を治療する方法は、対象に、有効量の、配列番号36及び38からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であるアミノ酸配列並びにその保存的置換、例えば、配列番号36及びその保存的置換を含むドミナントネガティブ突然変異体STAT3タンパク質をコードする1種以上の核酸を発現する修飾されたウイルス、例えば、ワクシニアウイルスを投与することを含む。例えば、制限としてではないが、本発明の修飾されたウイルスは、配列番号37及び39からなる群から選択される核酸配列に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であるヌクレオチド配列を含む核酸を含み得る。特定の実施形態では、ドミナントネガティブ突然変異体STAT3タンパク質は、本明細書において開示されるような細胞透過性ペプチドにさらにコンジュゲートされてもよく、外来核酸は、細胞透過性ペプチドをさらにコードし得る。
【０１７９】
キット
本開示は、1種以上の本明細書において記載される開示される腫瘍溶解性ウイルスを含むキットをさらに提供する。実施形態では、本開示は、本明細書において記載されるような修飾されたウイルスを投与するためのキットを提供する。特定の実施形態では、本開示のキットは、修飾されたウイルス又は上記のような修飾されたウイルスを含む医薬組成物を含み得る。特定の実施形態では、本開示のキットは、使用のための説明書、デバイス及びさらなる試薬などの1種以上の構成成分並びに上記で開示される方法を実施するためのチューブ、容器及びシリンジなどの構成成分をさらに含み得る。特定の実施形態では、本開示のキットは、修飾されたウイルスと組み合わせて投与され得る、1種以上の薬剤、例えば、抗癌剤、STAT3阻害剤及び/又は免疫調節薬をさらに含み得る。
【０１８０】
特定の実施形態では、本開示のキットは、本明細書において開示される修飾されたウイルスを含有する1以上の容器を含み得る。例えば、制限としてではないが、本開示のキットは、PIAS3タンパク質又はその断片、SOCS3タンパク質又はその断片、TCPTPタンパク質又はその断片、ドミナントネガティブ突然変異体STAT3タンパク質又はその断片又はそれらの任意の組合せのうち1種以上を発現する、修飾されたワクシニアウイルスを含有する1以上の容器を含み得る。特定の実施形態では、STAT3活性を調節するタンパク質は、細胞透過性ペプチドにコンジュゲートされてもよい。
【０１８１】
特定の実施形態では、本開示のキットは、有効量の、配列番号1〜7及び24〜27からなる群から選択されるアミノ酸配列少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であり得るアミノ酸配列並びにその保存的置換に対してを含み得るPIAS3タンパク質をコードする1種以上の核酸を含む修飾されたワクシニアウイルスを含み得る。特定の実施形態では、本開示のキットは、配列番号1又はその断片、例えば、配列番号1のアミノ酸133〜316、129〜316、126〜176、132〜177又は400〜528のアミノ酸配列を有するPIAS3タンパク質をコードする1種以上の核酸を含む修飾されたワクシニアウイルスを含み得る。
【０１８２】
特定の実施形態では、本開示のキットは、有効量の、配列番号28及び30からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であり得るアミノ酸配列並びにその保存的置換を含むSOCS3タンパク質をコードし得る1種以上の核酸を含む修飾されたワクシニアウイルスを含み得る。特定の実施形態では、本開示のキットは、配列番号28のアミノ酸配列を有するSOCS3タンパク質又はその断片をコードする1種以上の核酸を含む、修飾されたワクシニアウイルスを含み得る。
【０１８３】
特定の実施形態では、本開示のキットは、配列番号32及び34からなる群から選択されるアミノ酸配列並びにその保存的置換に対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であり得るアミノ酸配列を含む、TCPTPタンパク質、例えば、TCPTPアイソフォーム2タンパク質をコードする1種以上の核酸を含む、有効量の修飾されたワクシニアウイルスを含み得る。特定の実施形態では、本開示のキットは、配列番号32のアミノ酸配列を有するTCPTPタンパク質又はその断片をコードし得る1種以上の核酸を含む修飾されたワクシニアウイルスを含み得る。
【０１８４】
特定の実施形態では、本開示のキットは、配列番号36及び38からなる群から選択されるアミノ酸配列対して少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%又は100%相同であり得るアミノ酸配列並びにその保存的置換を含むドミナントネガティブ突然変異体STAT3タンパク質をコードし得る1種以上の核酸を含む、有効量の修飾されたワクシニアウイルスを含み得る。特定の実施形態では、本開示のキットは、配列番号36のアミノ酸配列を有するドミナントネガティブ突然変異体STAT3タンパク質又はその断片をコードし得る1種以上の核酸を含む修飾されたワクシニアウイルスを含み得る。
【０１８５】
特定の実施形態では、本開示のキットは、使用のための説明書、対象に修飾されたウイルスを投与するためのデバイス又は対象にさらなる薬剤又は化合物を投与するためのデバイスを含み得る。例えば、制限としてではないが、説明書は、修飾されたウイルス及び任意選択でキット中に含まれるその他の構成成分並びに修飾されたウイルスを投与するための、対象の適切な状態、適切な投与量及び適切な投与方法を調べるための方法を含む投与のための方法の説明を含み得る。説明書はまた、治療期間にわたって対象をモニタリングするための手引きを含み得る。
【０１８６】
特定の実施形態では、本開示のキットは、修飾されたウイルスを対象に投与するためのデバイスを含み得る。医薬及び医薬組成物を投与するための当技術分野で公知の種々のデバイスのいずれも、本明細書において提供されるキット中に含めることができる。例えば、制限としてではないが、このようなデバイスとして、皮下針、静脈内針、カテーテル、ニードルレス注射デバイス、吸入器及び点眼器などの液体ディスペンサーが挙げられる。特定の実施形態では、例えば、静脈内注射によって全身送達される修飾されたウイルスを、皮下針及びシリンジとともにキット中に含めることができる。
【実施例】
【０１８７】
以下の実施例は、本開示の範囲を制限することなく、記載される実施形態をさらに例示する。
【０１８８】
[実施例1]
PIAS3は、STAT3機能を遮断する
図1に示されるように、ヒトPIAS3は、アミノ酸133-316を含むPINITドメインを含む628個のアミノ酸のタンパク質である。PINITドメインは、アミノ酸132〜177を含むPINIT断片を含む。
【０１８９】
PIAS3タンパク質又はその断片を発現する例示的腫瘍溶解性ウイルスは、以下のとおりに調製した:ヒトPIAS3 DNAは、頬側細胞スワブに由来するmRNAでの逆転写PCRによって入手した。全長PIAS3、セグメント133〜316又はセグメント132〜177を、ルシフェラーゼリポーター及びワクシニアウイルスTK遺伝子のセグメントを有するフランキング領域を含有するベクター中にクローニングした。ベクターは、PIAS3構築物の種類、ウイルスプロモーター及びPIAS3配列に連結されたHIV TAT由来の又はその他の細胞透過性ペプチド配列を含むこと又は含まないことによって異なっていた。種々のPIAS3構築物は、以下のとおりであった:全長PIAS3遺伝子、P11プロモーターを有するPIAS3133〜316+TAT(DCP)、P7.5プロモーターを有するPIAS3133〜316+TAT(DC7)、P11プロモーターを有するPIAS3133〜316(DNP)、P7.5プロモーターを有するPIAS3133〜316(DN7)、P11プロモーターを有するPIAS3132〜177+TAT(FCP)、P7.5プロモーターを有するPIAS3132〜177+TAT(FC7)、P11プロモーターを有するPIAS3132〜177(FNP)及びP7.5プロモーターを有するPIAS3132〜177(FN7)。次いで、ベクターを、ミドリザル腎臓上皮細胞株CV-1中にトランスフェクトし、これを野生型ワクシニアウイルスのWestern Reserve株を用いて同時に感染させた。これらの細胞のトランスフェクション及び感染は、ベクター中のTK部位間の非相同組換えをもたらし、ワクシニアゲノム中のTK遺伝子がPIAS3構築物の1種及びルシフェラーゼリポーターと置き変わった。PIAS3を発現するワクシニアウイルスを、6ラウンドのルシフェラーゼ陽性ウイルスプラーク精製によって選択し、DNAシーケンシングによって確認した。
【０１９０】
PIAS3、PINITドメイン又はPINIT断片を発現するワクシニアウイルスの、STAT3活性を遮断する能力を、ヒト類上皮細胞癌腫細胞株、PANC1及びマウス腎皮質腺癌細胞株、RENCAにおいて、STAT3によって調製されるタンパク質の発現レベルを決定することによって解析した。Western Reserveワクシニア株は、BEI Resources(ヴァージニア州、マナサス)から入手し、使用されるか、又は構築されたすべての組換えワクシニアウイルスは、この株に基づいていた。STAT3阻害性構築物又はヒトPIAS3のアミノ酸133〜316を発現するワクシニアウイルスを用いる処理の際の、STAT3によって調製されるタンパク質、BCL-xL及びサイクリン-D1の発現レベルを解析した。図2に示されるように、STAT3阻害性構築物及びヒトPIAS3のアミノ酸133〜316を発現するワクシニアウイルスは、PIAS3構築物を発現しなかったTK-ワクシニアウイルス対照と比較してBCL-xL及びサイクリン-D1の発現を低減した。
【０１９１】
[実施例2]
PIAS3の発現は、癌細胞の細胞死を増強する
PIAS3の発現がヒト腫瘍細胞株に対して有する効果を試験するために、腎細胞癌細胞株、RCC4、膵臓腺癌上皮細胞株、PL45、膵臓類上皮細胞癌腫細胞株、PANC1及び腎皮質腺癌細胞株、RENCAに、PIAS3又はPIAS3ドメインを発現するワクシニアウイルスを感染させ、このような細胞の生存力を経時的にモニタリングした。細胞生存力を測定するために、感染後1週間の毎日、細胞でMTSアッセイ(CELLTITER96(登録商標)AQueous非放射活性細胞増殖アッセイ、Promega)を実施した。
【０１９２】
図3に示されるように、PIAS3の発現は、対照及びSTAT3阻害剤、ククルビタシンIと比較して、ヒト腫瘍細胞株のワクシニアウイルス媒介性死滅を増強した。さらに、図4に示されるように、対照と比較して、正常細胞株、例えば、ヒト包皮線維芽細胞(HFF)及びマウス胚線維芽細胞(MEF)では、PIAS3発現ワクシニアウイルスによるさらなる死滅は観察されなかった。特に、PIAS3又はその断片、例えば、PIAS133〜316、PIAS132〜177又はPIAS132〜177 TATを発現するワクシニアウイルスは、ククルビタシンIよりも少ない毒性しか示さなかった。
【０１９３】
さらに、図5に示されるように、PIAS133〜316を発現するワクシニアウイルスによる感染は、正常細胞株、HFFと比較して、骨肉腫腫瘍細胞株、143bにおいてプラークの大きさの増大をもたらした。より大きなプラークの大きさは、ウイルス複製の増強及び/又はウイルスの広がりの増強と解釈され得る。
【０１９４】
これらの結果は、PIAS3のPINITドメイン又はPINIT断片の発現は、癌細胞死を促進するのに十分であるということを示す。
【０１９５】
[実施例3]
ウイルス複製は、PIAS3発現によって増加される
ウイルス複製が、PIAS3発現によって影響を受けるか否かを調べるために、実施例2においてと同一パネルのヒト腫瘍細胞株に、PIAS3のドメイン及びルシフェラーゼ遺伝子を発現するワクシニアウイルスを感染させた。ウイルス複製は、ウイルスプラークアッセイによって測定し、1mLあたりのプラーク形成単位(PFU/mL)として示されている。図6に示されるように、PIAS133〜316、PIAS132〜177又はPIAS132〜177 TATの発現によって腫瘍細胞においてウイルス複製は、TK-であるウイルスと比較して増加した。
【０１９６】
腫瘍におけるウイルス遺伝子発現は、in vivoでのルシフェラーゼ発現の生物発光イメージングによって測定した。図7に示されるように、RENCA腫瘍モデル(BALB/cマウスにおいて皮下に移植された)において、1x108PFUの修飾されたワクシニアウイルスの単回静脈内用量を用いて、腫瘍内に注射した。PIAS3ドメインが発現された場合には、腫瘍におけるウイルスルシフェラーゼ発現は増加しており、これはPIAS3ドメインの発現によって腫瘍細胞においてウイルス複製が増加されたことを確認するものである(図7)。特に、ウイルス遺伝子発現は、PIAS3ドメインの発現によって約5〜10倍増加した。
【０１９７】
[実施例4]
PIAS3の発現は、腫瘍体積を低減した
PIAS3発現が、腫瘍体積に影響を及ぼしたか否かを調べるために、BALB/cマウスにおいてRENCA細胞の移植によって作製された腫瘍を、PIAS3又はその断片、例えば、PIAS133〜316、PIAS132〜177又はPIAS132〜177 TATを発現するワクシニアウイルスを用いて処理した。マウスあたり1x108PFUの単回静脈内用量を、腫瘍内に投与した。高用量投与のために、5x109PFUの単回静脈内用量を、腫瘍内に投与した。図8で示されるように、腫瘍体積は、対照又はTKが欠失したワクシニアウイルスと比較して、PIAS133〜316、PIAS132〜177又はPIAS132〜177 TATの発現によって低減した。
【０１９８】
[実施例5]
PIAS3の酸性ドメインの発現及びTCPTP又はSOCS3の発現は、STAT3活性を低下させた
PIAS3の酸性ドメインが、STAT3の下流標的、サイクリンD1の発現に影響を及ぼしたか否かを調べるために、コンフルエントマウス細胞株4T1又はB16の12ウェルプレートを、TK-ワクシニアウイルス又はhPIAS3126〜176若しくはmPIAS3400〜523を発現するワクシニアウイルスのいずれかを用いて5MOIで感染させた。18時間後、2×Laemmliバッファーを用いて細胞を溶解し、5分間沸騰させ、ウエスタンブロッティングのためにSDS-PAGEで流した。STAT3によって調節される遺伝子の変化を検出するために、メンブランを抗サイクリンD1又は抗BCL-xL抗体を用いて染色し、β-チュブリンの対照染色と比較した。結果は、β-チュブリン発現に対するSTAT3によって調節される遺伝子のバンド強度の割合として示されている。図9に示されるように、PIAS3の酸性ドメインは、サイクリンD1発現の減少をもたらした。
【０１９９】
STAT3活性のさらなるレギュレーターが、サイクリンD1の発現に影響を及ぼし得る否かを調べるために、4T1又はB16に、mTCPTP又はmSOCS3を発現するワクシニアウイルスを用いて5MOで感染させた。図9に示されるように、mTCPTPを発現するワクシニアウイルス及びmSOCS3を発現するワクシニアウイルスは、サイクリンD1発現の減少をもたらした。
【０２００】
種々のNCBI受託番号、刊行物、特許及び特許出願が本明細書において言及されているが、その開示内容は、参照によりその全文が本明細書に組み込まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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