(57)【要約】  免疫グロブリン（Ｉｇ）軽鎖ポリペプチドの定常領域にスルファターゼモチーフ含有タグを含む抗体が開示される。スルファターゼモチーフは、ホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）によって、ホルミルグリシン（ｆＧｌｙ）修飾Ｉｇ軽鎖ポリペプチドを産生するように変換され得る。本抗体のｆＧｌｙ修飾Ｉｇ軽鎖ポリペプチドは、抗体複合体を提供するように対象の部分に共有結合かつ部位特異的に結合され得る。本開示はまた、そのようなタグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチド、ｆＧｌｙ修飾Ｉｇ軽鎖ポリペプチド、および抗体複合体を産生する方法、ならびにその使用方法を包含する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
定常領域において、以下の式のアミノ酸配列を含む免疫グロブリン（Ｉｇ）軽鎖ポリペプチドを含む抗体を含む組成物であって、    Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）  式中、    Ｚ１は、システイン、セリン、２−ホルミルグリシン（ｆＧｌｙ）、またはｆＧｌｙ’であり、ｆＧｌｙ’が、ペイロードに共有結合しているｆＧｌｙ残基であり、    Ｚ２は、プロリンまたはアラニンであり、    Ｚ３は、脂肪族アミノ酸または塩基性アミノ酸であり、    Ｘ１は、存在するか、または非存在であり、存在する場合、任意のアミノ酸であり得、    Ｘ２およびＸ３はそれぞれ独立して、任意のアミノ酸であり、  前記アミノ酸配列が、Ｚ１がｆＧｌｙである場合に、前記ｆＧｌｙと前記ペイロードとの複合体化が少なくとも０．５のペイロード対抗体の平均モル比を提供するように、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド中に位置付けられる、組成物。
【請求項２】
前記Ｉｇ軽鎖ポリペプチドの前記定常領域が、以下のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の組成物。
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【請求項３】
Ｚ３がアルギニンである、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
Ｘ１が存在する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
Ｘ１が、グリシン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、ヒスチジン、チロシン、バリン、セリン、システイン、またはトレオニンである、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
Ｘ２およびＸ３がそれぞれ独立して、セリン、トレオニン、アラニン、バリン、グリシン、またはシステインである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
前記Ｉｇ軽鎖ポリペプチド定常領域が、配列番号４６〜８２のうちの２つ以上を含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
前記抗体が、癌細胞上の腫瘍抗原を特異的に結合する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３が、ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）またはＬＳＴＰＳＲ（配列番号１５９）である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０】
Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３が、ＭＣＴＰＳＲ（配列番号１６０）、ＶＣＴＰＳＲ（配列番号１６１）、ＬＣＳＰＳＲ（配列番号１６２）、ＬＣＡＰＳＲ（配列番号１６３）、ＬＣＶＰＳＲ（配列番号１６４）、ＬＣＧＰＳＲ（配列番号１６５）、ＩＣＴＰＡＲ（配列番号１６６）、ＬＣＴＰＳＫ（配列番号１６７）、ＭＣＴＰＳＫ（配列番号１６８）、ＶＣＴＰＳＫ（配列番号１６９）、ＬＣＳＰＳＫ（配列番号１７０）、ＬＣＡＰＳＫ（配列番号１７１）、ＬＣＶＰＳＫ（配列番号１７２）、ＬＣＧＰＳＫ（配列番号１７３）、ＬＣＴＰＳＡ（配列番号１７４）、ＩＣＴＰＡＡ（配列番号１７５）、ＭＣＴＰＳＡ（配列番号１７６）、ＶＣＴＰＳＡ（配列番号１７７）、ＬＣＳＰＳＡ（配列番号１７８）、ＬＣＡＰＳＡ（配列番号１７９）、ＬＣＶＰＳＡ（配列番号１８０）、ＬＣＧＰＳＡ（配列番号１８１）、ＭＳＴＰＳＲ（配列番号１８２）、ＶＳＴＰＳＲ（配列番号１８３）、ＬＳＳＰＳＲ（配列番号１８４）、ＬＳＡＰＳＲ（配列番号１８５）、ＬＳＶＰＳＲ（配列番号１８６）、ＬＳＧＰＳＲ（配列番号１８７）、ＩＳＴＰＡＲ（配列番号１８８）、ＬＳＴＰＳＫ（配列番号１８９）、ＭＳＴＰＳＫ（配列番号１９０）、ＶＳＴＰＳＫ（配列番号１９１）、ＬＳＳＰＳＫ（配列番号１９２）、ＬＳＡＰＳＫ（配列番号１９３）、ＬＳＶＰＳＫ（配列番号１９４）、ＬＳＧＰＳＫ（配列番号１９５）、ＬＳＴＰＳＡ（配列番号１９６）、ＩＳＴＰＡＡ（配列番号１９７）、ＭＳＴＰＳＡ（配列番号１９８）、ＶＳＴＰＳＡ（配列番号１９９）、ＬＳＳＰＳＡ（配列番号２００）、ＬＳＡＰＳＡ（配列番号２０１）、ＬＳＶＰＳＡ（配列番号２０２）、およびＬＳＧＰＳＡ（配列番号２０３）から選択される、請求項１〜８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記抗体を含むｆＧｌｙ修飾抗体を含み、Ｚ１がｆＧｌｙである、請求項１〜８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１２】
Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３が、Ｌ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号１５７）である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２
Ｘ３Ｚ３が、Ｍ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号２０４）、Ｖ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号２０５）、Ｌ（ｆＧｌｙ）ＳＰＳＲ（配列番号２０６）、Ｌ（ｆＧｌｙ）ＡＰＳＲ（配列番号２０７）、Ｌ（ｆＧｌｙ）ＶＰＳＲ（配列番号２０８）、Ｌ（ｆＧｌｙ）ＧＰＳＲ（配列番号２０９）、Ｉ（ｆＧｌｙ）ＴＰＡＲ（配列番号２１０）、Ｌ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＫ（配列番号２１１）、Ｍ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＫ（配列番号２１２）、Ｖ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＫ（配列番号２１３）、Ｌ（ｆＧｌｙ）ＳＰＳＫ（配列番号２１４）、Ｌ（ｆＧｌｙ）ＡＰＳＫ（配列番号２１５）、Ｌ（ｆＧｌｙ）ＶＰＳＫ（配列番号２１６）、Ｌ（ｆＧｌｙ）ＧＰＳＫ（配列番号２１７）、Ｌ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＡ（配列番号２１８）、Ｉ（ｆＧｌｙ）ＴＰＡＡ（配列番号２１９）、Ｍ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＡ（配列番号２２０）、Ｖ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＡ（配列番号２２１）、Ｌ（ｆＧｌｙ）ＳＰＳＡ（配列番号２２２）、Ｌ（ｆＧｌｙ）ＡＰＳＡ（配列番号２２３）、Ｌ（ｆＧｌｙ）ＶＰＳＡ（配列番号２２４）、およびＬ（ｆＧｌｙ）ＧＰＳＡ（配列番号２２５）から選択される、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１４】
前記ペイロードに共有結合している前記抗体を含む抗体複合体を含み、Ｚ１がｆＧｌｙ’である、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１５】
Ｘ１（ｆＧｌｙ’）Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３が、Ｌ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２６）である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
Ｘ１（ｆＧｌｙ’）Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３が、Ｍ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２７）、Ｖ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２８）、Ｌ（ｆＧｌｙ’）ＳＰＳＲ（配列番号２２９）、Ｌ（ｆＧｌｙ’）ＡＰＳＲ（配列番号２３０）、Ｌ（ｆＧｌｙ’）ＶＰＳＲ（配列番号２３１）、Ｌ（ｆＧｌｙ’）ＧＰＳＲ（配列番号２３２）、Ｉ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＡＲ（配列番号２３３）、Ｌ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＫ（配列番号２３４）、Ｍ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＫ（配列番号２３５）、Ｖ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＫ（配列番号２３６）、Ｌ（ｆＧｌｙ’）ＳＰＳＫ（配列番号２３７）、Ｌ（ｆＧｌｙ’）ＡＰＳＫ（配列番号２３８）、Ｌ（ｆＧｌｙ’）ＶＰＳＫ（配列番号２３９）、Ｌ（ｆＧｌｙ’）ＧＰＳＫ（配列番号２４０）、Ｌ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＡ（配列番号２４１）、Ｉ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＡＡ（配列番号２４２）、Ｍ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＡ（配列番号２４３）、Ｖ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＡ（配列番号２４４）、Ｌ（ｆＧｌｙ’）ＳＰＳＡ（配列番号２４５）、Ｌ（ｆＧｌｙ’）ＡＰＳＡ（配列番号２４６）、Ｌ（ｆＧｌｙ’）ＶＰＳＡ（配列番号２４７）、およびＬ（ｆＧｌｙ’）ＧＰＳＡ（配列番号２４８）から選択される、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１７】
前記抗体が、ヒドラゾン、オキシム、セミカルバゾン、アルキル、アルケニル、アシルオキシ、ヒドラジニル−インドリル、ヒドラジニル−イミダゾイル、ヒドラジニル−ピロリル、ヒドラジニル−フラニル、またはピラザリノン結合を介して前記ペイロードに共有結合している、請求項１４〜１６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１８】
前記抗体が、結合基を介して前記ペイロードに共有結合している、請求項１４〜１７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１９】
前記結合基が、４−アミノピペリジン誘導体（４ＡＰ）を含む、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
前記ペイロードが、薬物、検出可能な標識、水溶性ポリマー、および合成ペプチドから選択される、請求項１４〜１９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２１】
前記ペイロードが、小分子薬物である、請求項１４〜２０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２２】
前記小分子薬物が、癌化学療法剤である、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
前記癌化学療法剤が、アルキル化剤、ニトロソウレア、代謝拮抗物質、抗腫瘍抗生物質、ビンカアルカロイド、またはステロイドホルモンである、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
前記水溶性ポリマーが、ポリ（エチレングリコール）である、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２５】
前記検出可能な標識が、イメージング剤である、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２６】
前記ペイロードが、ウイルス融合阻害剤である、請求項１４〜１９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２７】
前記Ｉｇ軽鎖ポリペプチドの前記定常領域が、以下のアミノ酸配列を含む、請求項１４〜２６のいずれか１項に記載の組成物。
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【請求項２８】
ペイロードに共有結合している抗体を含む抗体複合体であって、前記抗体が、定常領域において、以下の式のアミノ酸配列を含む免疫グロブリン（Ｉｇ）軽鎖ポリペプチドを含み、    Ｘ１（ｆＧｌｙ’）Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３  式中、  ｆＧｌｙ’は、前記ペイロードに共有結合しているｆＧｌｙ残基であり、    Ｚ２は、プロリンまたはアラニンであり、    Ｚ３は、脂肪族アミノ酸または塩基性アミノ酸であり、    Ｘ１は、存在するか、または非存在であり、存在する場合、任意のアミノ酸であり得、    Ｘ２およびＸ３はそれぞれ独立して、任意のアミノ酸であり、  前記Ｉｇ軽鎖ポリペプチドの前記定常領域が、以下のアミノ酸配列を含む、抗体複合体。
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【請求項２９】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の組成物の前記抗体の前記軽鎖定常領域をコードするヌクレオチド配列を含む組換え核酸であって、Ｚ１がシステインまたはセリンである、組換え核酸。
【請求項３０】
請求項２９に記載の核酸を含む組換え発現ベクターであって、前記軽鎖定常領域をコードするヌクレオチド配列が、プロモーターに操作可能に結合している、組換え発現ベクター。
【請求項３１】
Ｉｇ重鎖ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列をさらに含む、請求項３０に記載の組換え発現ベクター。
【請求項３２】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の組成物の抗体を発現するように遺伝子修飾された宿主細胞であって、Ｚ１が、システイン、セリン、またはｆＧｌｙである、宿主細胞。
【請求項３３】
前記抗体のＩｇ軽鎖ポリペプチドをｆＧｌｙ修飾Ｉｇ軽鎖ポリペプチドに変換するのに十分な様式で、ホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）を発現するように遺伝子修飾されている、請求項３２に記載の宿主細胞。
【請求項３４】
前記宿主細胞が、哺乳動物細胞である、請求項３２または３３に記載の宿主細胞。
【請求項３５】
抗体複合体を産生する方法であって、反応混合物中で、  請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の組成物と、  ペイロードおよびアルデヒド反応性基を含む反応性パートナーとを、  前記アルデヒド反応性基が前記ｆＧｌｙ修飾抗体の前記ｆＧｌｙ残基のアルデヒド基と反応するのに十分な条件下で組み合わせて、それによって、前記ペイロードを、共有結合を介して前記ｆＧｌｙ残基と複合体化して、抗体複合体を生成することと、  前記抗体複合体を前記反応混合物から単離することと、を含む、方法。
【請求項３６】
前記アルデヒド反応性基が、ヒドラジン、ヒドラジド、アミノオキシ、セミカルバジド、ヒドラジニル−インドール、ヒドラジニル−イミダゾール、ヒドラジニル−ピロール、ヒドラジニル−フラン、およびピラザリノン基からなる群から選択される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記反応性パートナーが、前記アルデヒド反応性基を前記ペイロードと共有結合させる結合基を含む、請求項３５または３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記結合基が、４−アミノピペリジン誘導体（４ＡＰ）を含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
請求項３５〜３８のいずれか１項に記載の方法によって産生される抗体複合体。
【請求項４０】
請求項１４〜２７のいずれか１項に記載の組成物、または請求項２８に記載の抗体複合体と、  薬学的に許容される賦形剤と、を含む、製剤。
【請求項４１】
個体の癌を治療する方法であって、請求項１４〜２３のいずれか１項に記載の組成物、または請求項２８に記載の抗体複合体の治療有効量を個体に投与することを含む、方法。  
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
関連出願の相互参照  本出願は、２０１６年４月２６日に出願された米国仮出願第６２／３２７，９０６号の優先権の利益を主張し、その出願がその全体において参照により本明細書に組み込まれる。  
【０００２】
抗体は、様々な診断および治療用途において使用を見出す。抗体はまた、薬物を送達するためにも使用され得る。しかしながら、薬物の抗体への複合体化は、制御することが困難であり得、結合される薬物分子の数が異なる複合体の異種混合物をもたらす。これは、患者へ投与される量の制御を困難にする。
【発明の概要】
【０００３】
免疫グロブリン（Ｉｇ）軽鎖ポリペプチドの定常領域にスルファターゼモチーフ含有タグを含む抗体が開示される。タグのスルファターゼモチーフは、ホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）によって、ホルミルグリシン（ｆＧｌｙ）修飾Ｉｇ軽鎖ポリペプチドを産生するように変換され得る。抗体のｆＧｌｙ修飾Ｉｇ軽鎖ポリペプチドは、抗体複合体を提供するように対象の部分（すなわち、ペイロード、例えば、薬物）に部位特異的に共有結合され得る。本開示はまた、そのようなタグ付きＩＧ軽鎖ポリペプチド、ｆＧｌｙ修飾Ｉｇ軽鎖ポリペプチド、および抗体複合体を産生する方法、ならびにその使用方法を包含する。  
【０００４】
定常領域に、式、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）のアミノ酸配列を含む免疫グロブリン（Ｉｇ）軽鎖ポリペプチドを含む抗体が本明細書に提供され、式中、Ｚ１は、システイン、セリン、２−ホルミルグリシン（ｆＧｌｙ）、またはｆＧｌｙ’であり、ｆＧｌｙ’は、ペイロードに共有結合しているｆＧｌｙ残基であり、Ｚ２は、プロリンまたはアラニンであり、Ｚ３は、脂肪族アミノ酸または塩基性アミノ酸であり、Ｘ１は、存在するか、または非存在であり、存在する場合、任意のアミノ酸であり得、Ｘ２およびＸ３はそれぞれ独立して、任意のアミノ酸であり、アミノ酸配列が、Ｚ１がｆＧｌｙである場合に、ｆＧｌｙ（例えば、本抗体を含む組成物中で）とペイロードとの複合体化が少なくとも０．５のペイロード対抗体の平均モル比を提供するようにＩｇ軽鎖ポリペプチド中に位置付けられる。いくつかの実施形態において、Ｉｇ軽鎖ポリペプチドの定常領域は、以下のアミノ酸配列を含む。  
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（［＊／＊］は、「／」によって分離されるアミノ酸残基（または配列）から選択された代替的なアミノ酸（またはアミノ酸配列）を示す。）いくつかの実施形態において、Ｚ３は、アルギニンである。いくつかの実施形態において、Ｘ１は、存在する。いくつかの実施形態において、Ｘ１は、グリシン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、ヒスチジン、チロシン、バリン、セリン、システイン、またはトレオニンである。いくつかの実施形態において、Ｘ２およびＸ３はそれぞれ独立して、セリン、トレオニン、アラニン、バリン、グリシン、またはシステインである。  
【０００５】
任意の実施形態において、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド定常領域は、配列番号４６〜８２の２つ以上を含み得る。  
【０００６】
任意の実施形態において、抗体は、癌細胞上の腫瘍抗原を特異的に結合し得る。  
【０００７】
いくつかの実施形態において、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３は、ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）またはＬＳＴＰＳＲ（配列番号１５９）である。いくつかの実施形態において、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３は、ＭＣＴＰＳＲ（配列番号１６０）、ＶＣＴＰＳＲ（配列番号１６１）、ＬＣＳＰＳＲ（配列番号１６２）、ＬＣＡＰＳＲ（配列番号１６３）、ＬＣＶＰＳＲ（配列番号１６４）、ＬＣＧＰＳＲ（配列番号１６５）、ＩＣＴＰＡＲ（配列番号１６６）、ＬＣＴＰＳＫ（配列番号１６７）、ＭＣＴＰＳＫ（配列番号１６８）、ＶＣＴＰＳＫ（配列番号１６９）、ＬＣＳＰＳＫ（配列番号１７０）、ＬＣＡＰＳＫ（配列番号１７１）、ＬＣＶＰＳＫ（配列番号１７２）、ＬＣＧＰＳＫ（配列番号１７３）、ＬＣＴＰＳＡ（配列番号１７４）、ＩＣＴＰＡＡ（配列番号１７５）、ＭＣＴＰＳＡ（配列番号１７６）、ＶＣＴＰＳＡ（配列番号１７７）、ＬＣＳＰＳＡ（配列番号１７８）、ＬＣＡＰＳＡ（配列番号１７９）、ＬＣＶＰＳＡ（配列番号１８０）、ＬＣＧＰＳＡ（配列番号１８１）、ＭＳＴＰＳＲ（配列番号１８２）、ＶＳＴＰＳＲ（配列番号１８３）、ＬＳＳＰＳＲ（配列番号１８４）、ＬＳＡＰＳＲ（配列番号１８５）、ＬＳＶＰＳＲ（配列番号１８６）、ＬＳＧＰＳＲ（配列番号１８７）、ＩＳＴＰＡＲ（配列番号１８８）、ＬＳＴＰＳＫ（配列番号１８９）、ＭＳＴＰＳＫ（配列番号１９０）、ＶＳＴＰＳＫ（配列番号１９１）、ＬＳＳＰＳＫ（配列番号１９２）、ＬＳＡＰＳＫ（配列番号１９３）、ＬＳＶＰＳＫ（配列番号１９４）、ＬＳＧＰＳＫ（配列番号１９５）、ＬＳＴＰＳＡ（配列番号１９６）、ＩＳＴＰＡＡ（配列番号１９７）、ＭＳＴＰＳＡ（配列番号１９８）、ＶＳＴＰＳＡ（配列番号１９９）、ＬＳＳＰＳＡ（配列番号２００）、ＬＳＡＰＳＡ（配列番号２０１）、ＬＳＶＰＳＡ（配列番号２０２）、およびＬＳＧＰＳＡ（配列番号２０３）から選択される。  
【０００８】
いくつかの実施形態において、組成物は、ｆＧｌｙ修飾抗体を含み、抗体のＺ１がｆＧｌｙである。いくつかの実施形態において、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３は、Ｌ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号１５７）である。いくつかの実施形態において、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３は、Ｍ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号２０４）、Ｖ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号２０５）、Ｌ（ｆＧｌｙ）ＳＰＳＲ（配列番号２０６）、Ｌ（ｆＧｌｙ）ＡＰＳＲ（配列番号２０７）、Ｌ（ｆＧｌｙ）ＶＰＳＲ（配列番号２０８）、Ｌ（ｆＧｌｙ）ＧＰＳＲ（配列番号２０９）、Ｉ（ｆＧｌｙ）ＴＰＡＲ（配列番号２１０）、Ｌ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＫ（配列番号２１１）、Ｍ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＫ（配列番号２１２）、Ｖ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＫ（配列番号２１３）、Ｌ（ｆＧｌｙ）ＳＰＳＫ（配列番号２１４）、Ｌ（ｆＧｌｙ）ＡＰＳＫ（配列番号２１５）、Ｌ（ｆＧｌｙ）ＶＰＳＫ（配列番号２１６）、Ｌ（ｆＧｌｙ）ＧＰＳＫ（配列番号２１７）、Ｌ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＡ（配列番号２１８）、Ｉ（ｆＧｌｙ）ＴＰＡＡ（配列番号２１９）、Ｍ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＡ（配列番号２２０）、Ｖ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＡ（配列番号２２１）、Ｌ（ｆＧｌｙ）ＳＰＳＡ（配列番号２２２）、Ｌ（ｆＧｌｙ）ＡＰＳＡ（配列番号２２３）、Ｌ（ｆＧｌｙ）ＶＰＳＡ（配列番号２２４）、およびＬ（ｆＧｌｙ）ＧＰＳＡ（配列番号２２５）から選択される。  
【０００９】
いくつかの実施形態において、組成物は、ペイロードに共有結合している抗体を含む抗体複合体を含み、Ｚ１がｆＧｌｙ’である。いくつかの実施形態において、Ｘ１（ｆＧｌｙ’）Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３は、Ｌ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２６）である。いくつかの実施形態において、Ｘ１（ｆＧｌｙ’）Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３は、Ｍ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２７）、Ｖ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２８）、Ｌ（ｆＧｌｙ’）ＳＰＳＲ（配列番号２２９）、Ｌ（ｆＧｌｙ’）ＡＰＳＲ（配列番号２３０）、Ｌ（ｆＧｌｙ’）ＶＰＳＲ（配列番号２３１）、Ｌ（ｆＧｌｙ’）ＧＰＳＲ（配列番号２３２）、Ｉ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＡＲ（配列番号２３３）、Ｌ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＫ（配列番号２３４）、Ｍ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＫ（配列番号２３５）、Ｖ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＫ（配列番号２３６）、Ｌ（ｆＧｌｙ’）ＳＰＳＫ（配列番号２３７）、Ｌ（ｆＧｌｙ’）ＡＰＳＫ（配列番号２３８）、Ｌ（ｆＧｌｙ’）ＶＰＳＫ（配列番号２３９）、Ｌ（ｆＧｌｙ’）ＧＰＳＫ（配列番号２４０）、Ｌ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＡ（配列番号２４１）、Ｉ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＡＡ（配列番号２４２）、Ｍ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＡ（配列番号２４３）、Ｖ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＡ（配列番号２４４）、Ｌ（ｆＧｌｙ’）ＳＰＳＡ（配列番号２４５）、Ｌ（ｆＧｌｙ’）ＡＰＳＡ（配列番号２４６）、Ｌ（ｆＧｌｙ’）ＶＰＳＡ（配列番号２４７）、およびＬ（ｆＧｌｙ’）ＧＰＳＡ（配列番号２４８）から選択される。  
【００１０】
任意の実施形態において、抗体は、ヒドラゾン、オキシム、セミカルバゾン、アルキル、アルケニル、アシルオキシ、ヒドラジニル−インドリル、ヒドラジニル−イミダゾイル、ヒドラジニル−ピロリル、ヒドラジニル−フラニル、またはピラザリノン結合を介してペイロードに共有結合し得る。  
【００１１】
任意の実施形態において、抗体は、結合基を介してペイロードに共有結合し得る。いくつかの実施形態において、結合基は、４−アミノピペリジン誘導体（４ＡＰ）を含む。  
【００１２】
任意の実施形態において、ペイロードは、薬物、検出可能な標識、水溶性ポリマー、および合成ペプチドから選択され得る。いくつかの実施形態において、ペイロードは、小分子薬物である。いくつかの実施形態において、小分子薬物は、癌化学療法剤である。いくつかの実施形態において、癌化学療法剤は、アルキル化剤、ニトロソウレア、代謝拮抗物質、抗腫瘍抗生物質、ビンカアルカロイド、またはステロイドホルモンである。いくつかの実施形態において、水溶性ポリマーは、ポリ（エチレングリコール）である。いくつかの実施形態において、検出可能な標識は、イメージング剤である。いくつかの実施形態において、ペイロードは、ウイルス融合阻害剤である。  
【００１３】
任意の実施形態において、Ｉｇ軽鎖ポリペプチドの定常領域は、以下のアミノ酸配列を含み得る。
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【００１４】
ペイロードに共有結合している抗体を含む抗体複合体もまた本明細書に提供され、抗体が、定常領域に、式、Ｘ１（ｆＧｌｙ’）Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３のアミノ酸配列を含む免疫を含む免疫グロブリン（Ｉｇ）軽鎖ポリペプチドを含み、式中、ｆＧｌｙ’は、ペイロードに共有結合しているｆＧｌｙ残基であり、Ｚ２は、プロリンまたはアラニンであり、Ｚ３は、脂肪族アミノ酸または塩基性アミノ酸であり、Ｘ１は、存在するか、または非存在であり、存在する場合、任意のアミノ酸であり得、Ｘ２およびＸ３はそれぞれ独立して、任意のアミノ酸であり、Ｉｇ軽鎖ポリペプチドの定常領域は、以下のアミノ酸配列を含む。
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【００１５】
本開示の抗体の軽鎖定常領域をコードするヌクレオチド配列を含む組換え核酸もまたは本明細書に提供され、Ｚ１がシステインまたはセリンである。本開示の抗体の軽鎖定常領域をコードする核酸を含む組換え発現ベクターもまたは本明細書に提供され、軽鎖定常領域コードヌクレオチド配列が、プロモーターに操作可能に結合されている。いくつかの実施形態において、組換え発現ベクターは、Ｉｇ重鎖ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列をさらに含む。  
【００１６】
本開示の抗体を発現するように遺伝子修飾された宿主細胞もまた本明細書に提供され、Ｚ１が、システイン、セリン、またはｆＧｌｙである。いくつかの実施形態において、宿主細胞は、抗体のＩｇ軽鎖ポリペプチドをｆＧｌｙ修飾Ｉｇ軽鎖ポリペプチドに変換するのに十分な様式で、ホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）を発現するように遺伝子修飾されている。いくつかの実施形態において、宿主細胞は、哺乳動物細胞である。  
【００１７】
抗体複合体を産生する方法であって、反応混合物中で、ｆＧｌｙ修飾抗体を含む上記の実施形態のいずれかの組成物と、ペイロードおよびアルデヒド反応性基を含む反応性パートナーとを、アルデヒド反応性基をｆＧｌｙ修飾抗体のｆＧｌｙ残基のアルデヒド基と反応させるのに十分な条件下で組み合わせて、それによって、共有結合を介してペイロードをｆＧｌｙ残基に複合体化させて、抗体複合体を生成することと、抗体複合体を反応混合物から単離することと、を含む、方法もまた提供される。いくつかの実施形態において、アルデヒド反応性基は、ヒドラジン、ヒドラジド、アミノオキシ、セミカルバジド、ヒドラジニル−インドール、ヒドラジニル−イミダゾール、ヒドラジニル−ピロール、ヒドラジニル−フラン、およびピラザリノン基からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、反応性パートナーは、ペイロードでアルデヒド反応性基を共有結合している結合基を含む。いくつかの実施形態において、結合基は、４−アミノピペリジン誘導体（４ＡＰ）を含む。  
【００１８】
抗体複合体を含む上記の実施形態のいずれかの組成物、または本開示の抗体、および薬学的に許容される賦形剤を含む配合もまた本明細書に提供される。  
【００１９】
抗体複合体を含む上記の実施形態のいずれかの組成物または本開示の抗体複合体の治療有効量を個体に投与することによって、個体の癌を治療する方法もまた提供される。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】本開示の実施形態による、ヒト免疫グロブリン（Ｉｇ）カッパ軽鎖定常領域アミノ酸配列（配列番号１〜１４）におけるスルファターゼモチーフ（ＬＣＴＰＳＲ）の走査挿入を例解する概略図を示す。
【図２Ａ】本開示の実施形態による、そのＩｇ軽鎖アミノ酸配列の定常領域において、配列番号１に関連して定義される、示される位置に対して隣接かつＣ末端のスルファターゼモチーフの挿入で修飾された抗原特異的抗体の発現力価（ｙ軸）を示すグラフである。スルファターゼモチーフは、図１に概略的に示されるように、示されるアミノ酸位置の直後に挿入されている。
【図２Ｂ】本開示の実施形態による、そのＩｇ軽鎖アミノ酸配列の定常領域において、配列番号１に関連して定義される、示される位置に対して隣接かつＣ末端のスルファターゼモチーフの挿入で修飾された抗原特異的抗体の発現力価（ｙ軸）を示すグラフである。スルファターゼモチーフは、図１に概略的に示されるように、示されるアミノ酸位置の直後に挿入されている。
【図３】本開示の実施形態による、そのＩｇ軽鎖アミノ酸配列の定常領域において、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって測定された、配列番号１に関連して定義される、示される位置に対して隣接かつＣ末端のスルファターゼモチーフの挿入で修飾された抗原特異的抗体の凝集の百分率を列挙する表である。
【図４】本開示の実施形態による、抗体が、Ｉｇ軽鎖アミノ酸配列の定常領域において、配列番号１に関連して定義される、抗体が示される位置に対して隣接かつＣ末端に挿入されるスルファターゼモチーフを有することによって修飾された、疎水性ペイロードに複合体化された抗原特異的抗体の薬物対抗体比（ＤＡＲ）を示すグラフである。
【図５】本開示の実施形態による、抗体が、Ｉｇ軽鎖アミノ酸配列の定常領域において、配列番号１に関連して定義される、示される位置に対して隣接かつＣ末端に挿入されるスルファターゼモチーフを有することによって修飾された、疎水性ペイロードに複合体化された抗原特異的抗体のＤＡＲを示すグラフである。
【図６Ａ】本開示の実施形態による、抗体が、そのＩｇ軽鎖アミノ酸配列の定常領域において、配列番号１に関連して定義される、示される位置に対して隣接かつＣ末端に挿入されるスルファターゼモチーフを有することによって修飾された、細胞障害性薬物に複合体化された抗原特異的抗体の抗原結合活性を示すグラフの集合である。
【図６Ｂ】本開示の実施形態による、抗体が、そのＩｇ軽鎖アミノ酸配列の定常領域において、配列番号１に関連して定義される、示される位置に対して隣接かつＣ末端に挿入されるスルファターゼモチーフを有することによって修飾された、細胞障害性薬物に複合体化された抗原特異的抗体の抗原結合活性を示すグラフの集合である。
【図６Ｃ】本開示の実施形態による、抗体が、そのＩｇ軽鎖アミノ酸配列の定常領域において、配列番号１に関連して定義される、示される位置に対して隣接かつＣ末端に挿入されるスルファターゼモチーフを有することによって修飾された、細胞障害性薬物に複合体化された抗原特異的抗体の抗原結合活性を示すグラフの集合である。
【図６Ｄ】本開示の実施形態による、抗体が、そのＩｇ軽鎖アミノ酸配列の定常領域において、配列番号１に関連して定義される、示される位置に対して隣接かつＣ末端に挿入されるスルファターゼモチーフを有することによって修飾された、細胞障害性薬物に複合体化された抗原特異的抗体の抗原結合活性を示すグラフの集合である。
【図６Ｅ】本開示の実施形態による、抗体が、そのＩｇ軽鎖アミノ酸配列の定常領域において、配列番号１に関連して定義される、示される位置に対して隣接かつＣ末端に挿入されるスルファターゼモチーフを有することによって修飾された、細胞障害性薬物に複合体化された抗原特異的抗体の抗原結合活性を示すグラフの集合である。
【図７Ａ】本開示の実施形態による、そのＩｇ軽鎖アミノ酸配列の定常領域において、配列番号１に関連して定義される、示される位置に対して隣接かつＣ末端に挿入されるスルファターゼモチーフを有する抗原特異的抗体に複合体化された細胞障害性薬物の効能を示すグラフの集合である。
【図７Ｂ】本開示の実施形態による、そのＩｇ軽鎖アミノ酸配列の定常領域において、配列番号１に関連して定義される、示される位置に対して隣接かつＣ末端に挿入されるスルファターゼモチーフを有する抗原特異的抗体に複合体化された細胞障害性薬物の効能を示すグラフの集合である。
【図８Ａ】本開示の実施形態による、抗体が、Ｉｇ軽鎖アミノ酸配列の定常領域において、配列番号１に関連して定義される、示される位置に対して隣接かつＣ末端に挿入されるスルファターゼモチーフを有することによって修飾された、抗原特異的抗体の細胞障害性薬物（疎水性ペイロード）への複合体化の際に観察される、ＤＡＲに関連して溶媒接触可能ループ領域を比較する表である。
【図８Ｂ】本開示の実施形態による、抗体が、Ｉｇ軽鎖アミノ酸配列の定常領域において、配列番号１に関連して定義される、示される位置に対して隣接かつＣ末端に挿入されるスルファターゼモチーフを有することによって修飾された、抗原特異的抗体の細胞障害性薬物（疎水性ペイロード）への複合体化の際に観察される、ＤＡＲに関連して溶媒接触可能ループ領域を比較する表である。
【図８Ｃ】本開示の実施形態による、抗体が、Ｉｇ軽鎖アミノ酸配列の定常領域において、配列番号１に関連して定義される、示される位置に対して隣接かつＣ末端に挿入されるスルファターゼモチーフを有することによって修飾された、抗原特異的抗体の細胞障害性薬物（疎水性ペイロード）への複合体化の際に観察される、ＤＡＲに関連して溶媒接触可能ループ領域を比較する表である。
【図９】ヒト免疫グロブリンカッパ軽鎖ポリペプチド（配列番号１）の定常領域のアミノ酸配列、および異なるアロタイプ（「Ｋｍ＊」）で存在するアミノ酸変化の位置を示す。
【図１０Ａ】本開示の実施形態による、挿入されたスルファターゼモチーフ（下線）を有するまたは有さない、ヒトＩｇカッパ軽鎖定常領域アミノ酸配列のアミノ酸配列を示す。
【図１０Ｂ】本開示の実施形態による、挿入されたスルファターゼモチーフ（下線）を有するまたは有さない、ヒトＩｇカッパ軽鎖定常領域アミノ酸配列のアミノ酸配列を示す。
【図１０Ｃ】本開示の実施形態による、挿入されたスルファターゼモチーフ（下線）を有するまたは有さない、ヒトＩｇカッパ軽鎖定常領域アミノ酸配列のアミノ酸配列を示す。
【図１０Ｄ】本開示の実施形態による、挿入されたスルファターゼモチーフ（下線）を有するまたは有さない、ヒトＩｇカッパ軽鎖定常領域アミノ酸配列のアミノ酸配列を示す。
【図１１】本開示の実施形態による、抗原特異的抗体の軽鎖ポリペプチドをコードする発現ベクターのベクター地図を示す。
【図１２】抗原特異的抗体の重鎖ポリペプチドをコードする発現ベクターのベクター地図を示す。
【図１３Ａ】本開示の実施形態による、ＤＮＡ断片のＰＣＲプライマーおよびアセンブリ戦略を示す概略図の集合である。
【図１３Ｂ】本開示の実施形態による、ＤＮＡ断片のＰＣＲプライマーおよびアセンブリ戦略を示す概略図の集合である。
【図１４Ａ】本開示の実施形態による、クローンを増幅するために使用されるプライマーセットを列挙する、表３を示す。
【図１４Ｂ】本開示の実施形態による、クローンを増幅するために使用されるプライマーセットを列挙する、表３を示す。
【図１４Ｃ】本開示の実施形態による、クローンを増幅するために使用されるプライマーセットを列挙する、表３を示す。
【図１４Ｄ】本開示の実施形態による、クローンを増幅するために使用されるプライマーセットを列挙する、表３を示す。
【図１４Ｅ】本開示の実施形態による、クローンを増幅するために使用されるプライマーセットを列挙する、表３を示す。
【図１５】本開示の実施形態による、軽鎖タグ付き抗体の複合体化の結果を列挙する、表４を示す。
【００２１】
定義  量、持続時間などの測定可能な値を示す場合に本明細書で使用される際の用語「約」は、特定の値から±２０％または±１０％、より好ましくは±５％、さらにより好ましくは±１％、さらにより好ましくは±０．１％の変化を包含し、そのため、そのような変化は、開示される組成物を特徴付ける測定値の典型であるか、または開示される方法を行うために適切である。  
【００２２】
用語「ポリペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」は、本明細書で交換可能に使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマー形態を指す。特に別段の指示がない限り、「ポリペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」は、概して、コードされたおよびコードされていないアミノ酸、化学的または生化学的に修飾されているかもしくは誘導体化されているアミノ酸、ならびに修飾されたペプチド骨格を有するポリペプチドを含み得る。用語は、これらに限定されないが、異種アミノ酸配列を有する融合タンパク質、異種および相同リーダー配列を有する融合、少なくとも１つのＮ末端メチオニン残基を含むタンパク質（例えば、組換え細菌宿主細胞中で産生を容易にする）を含む融合タンパク質、免疫学的にタグ付きタンパク質などを含む。  
【００２３】
「天然アミノ酸配列」または「親アミノ酸配列」は、免疫グロブリンの文脈において本明細書で交換可能に使用され、異種アルデヒドタグを含む修飾の前の免疫グロブリンのアミノ酸配列を指す。  
【００２４】
用語「抗体」は、広義に使用され、モノクロー
ナル抗体、および多特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、ヒト化抗体、キメラ抗体、および抗原結合抗体断片（例えば、Ｆａｂ断片）を含む。標的抗原は、抗体の１つ以上の可変領域によって形成される相補性決定領域（ＣＤＲ）によって認識される、エピトープとも呼ばれる１つ以上の結合部位を有し得る。  
【００２５】
本明細書で使用される際の「免疫グロブリンポリペプチド」は、軽鎖ポリペプチドの少なくとも定常領域または重鎖ポリペプチドの少なくとも定常領域を含むポリペプチドを指す。  
【００２６】
免疫グロブリン軽鎖または重鎖ポリペプチド可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」とも呼ばれる、高度可変領域によって遮られる３つのフレームワーク領域（ＦＲ）から構成されている。フレームワーク領域およびＣＤＲの範囲は、画定されている（“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”Ｅ．Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，１９９１を参照されたい）。構成軽鎖および重鎖の組み合されたフレームワーク領域である抗体のフレームワーク領域は、ＣＤＲを位置づけ、一致させるために役立つ。ＣＤＲは、抗原のエピトープへの結合の一次的な要因である。免疫グロブリン軽鎖は、ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４−ＣＬとして、Ｎ末端〜Ｃ末端の、概略的に表される構造を有し得、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３が、フレームワーク領域を４つ（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４）に遮る高度可変領域であり、ＣＬが、定常領域である。免疫グロブリン重鎖は、ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４−ＣＨ１−Ｈ−ＣＨ２−ＣＨ３として、Ｎ末端〜Ｃ末端の、概略的に表される構造を有し得、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３が、フレームワーク領域を４つ（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４）に遮る高度可変領域であり、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３が、定常領域であり、Ｈが、ヒンジ領域である。  
【００２７】
用語「自然抗体」は、重鎖および軽鎖が作製され、多細胞生物の免疫系によって対になっている抗体を指す。脾臓、リンパ節、骨髄、および血清は、自然抗体を産生する組織の例である。例えば、抗体で免疫化された第一の動物から単離された細胞を生成する抗体によって産生される抗体は、自然抗体である。  
【００２８】
「親Ｉｇポリペプチド」は、本明細書に説明されるようにタグ付き定常領域を欠乏するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。親ポリペプチドは、天然配列定常領域を含み得、または既存のアミノ酸配列修飾（付加、欠失、および／または置換など）を有する定常領域を含み得る。  
【００２９】
Ｉｇポリペプチドの文脈において、用語「定常領域」は、当該技術分野で十分に理解され、Ｉｇ重鎖またはＩｇ軽鎖のＣ末端領域を指す。Ｉｇ重鎖定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３ドメイン（ならびに、重鎖がμまたはε重鎖であるＣＨ４ドメイン）を含む。天然Ｉｇ重鎖において、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３（および、存在する場合、ＣＨ４）ドメインは、重鎖可変（ＶＨ）領域の直後（Ｃ末端に）に開始し、それぞれ、約１００個のアミノ酸〜約１３０個のアミノ酸の長さである。天然Ｉｇ軽鎖において、定常領域は、軽鎖可変（ＶＬ）領域の直後（Ｃ末端に）に開始し、それぞれ、約１００個のアミノ酸〜約１２０個のアミノ酸の長さである。  
【００３０】
いくつかの実施形態において、「機能性Ｆｃ領域」は、天然配列Ｆｃ領域の「エフェクター機能」を所有する。例示的な「エフェクター機能」としては、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞傷害、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、食作用、細胞表面受容体のダウンレギュレーション（例えば、Ｂ細胞受容体；ＢＣＲ）などが挙げられる。そのようなエフェクター機能は、概して、Ｆｃ領域が結合ドメイン（例えば、抗体可変ドメイン）と組み合わされることを必要とし、当該技術分野で周知の様々なアッセイを使用して評価され得る。  
【００３１】
抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」および「ＡＤＣＣ」は、ＦｃＲ（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、およびマクロファージ）を発現する非特異的細胞傷害性細胞が、標的細胞常で結合抗体を認識し、続いて標的細胞の崩壊を引き起こす細胞媒介性反応を指す。ＡＤＣＣ、ＮＫ細胞を媒介するための第一次細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現し、そこで単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、およびＦｃγＲＩＩＩを発現する。用語「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を説明するために使用される。  
【００３２】
用語「ヒト化抗体」または「ヒト化免疫グロブリン」は、ヒト抗体から対応的に位置付けられるアミノ酸で置換されている１つ以上のアミノ酸（レームワーク領域で、例えば、定常領域またはＣＤＲ）を含む非ヒト（例えば、マウスまたはウサギ）抗体を指す。概して、ヒト化抗体は、同じ抗体の非ヒト化版と比較した場合に、ヒト宿主中で低減された免疫反応を生成する。抗体は、例えば、ＣＤＲグラフティング、ベニヤリングまたは表面再生、および鎖シャッフリングを含む、当該技術分野で既知の種々の技術を使用してヒト化され得る。特定の実施形態において、フレームワーク置換は、ＣＤＲおよびフレームワーク残基の相互作用のモデリングによって特定され、抗原結合および配列比較に重要なフレームワーク残基を特定し、異常フレームワー残基を特定の位置で特定する。  
【００３３】
用語「キメラ抗体」は、抗体の軽鎖および重鎖遺伝子が、典型的には遺伝子操作することによって、異なる種に属している抗体可変および定常領域遺伝子から構築されている抗体を指す。例えば、マウスモノクローナル抗体からの遺伝子の可変セグメントは、ガンマ１およびガンマ３などのヒト定常セグメントに結合され得る。治療用キメラ抗体の一例は、マウス抗体からの可変または抗原結合ドメインおよびヒト抗体からの定常またはエフェクタードメインから構成されているハイブリッドタンパク質であるが、他の哺乳動物種からのドメインも使用され得る。  
【００３４】
ポリペプチド、ペプチド、またはタンパク質のアミノ酸配列に関して使用される「遺伝子的にコード可能な」は、アミノ酸配列が、細胞内または無細胞インビトロ転写／翻訳系において生じ得る、そのアミノ酸配列をコードする核酸の転写および翻訳によって生成することができるアミノ酸残基から構成されることを意味する。  
【００３５】
用語「制御配列」は、特定の発現系、例えば、哺乳動物細胞、細菌細胞、無細胞合成などにおいて操作可能に結合されたコード配列の発現を容易にするＤＮＡ配列を指す。原核生物に好適な制御配列は、例えば、プロモーター、任意にオペレーター配列、およびリボソーム結合部位を含む。真核細胞系は、プロモーター、ポリアデニレーションシグナル、およびエンハンサーを利用し得る。  
【００３６】
核酸は、それが別の核酸配列との機能的関係に置かれる場合に、「任意に結合される」。例えば、配列または分泌リーダーのＤＮＡは、それがポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現される場合に、ポリペプチドのＤＮＡに操作可能に結合されており、プロモーターまたはエンハンサーは、それが配列の転写に影響する場合に、操作可能に結合されており、またはリボソーム結合部位は、翻訳の開始を容易にするためにそれが位置付けられる場合に、コード配列に操作可能に結合されている。概して、「操作可能に結合される」は、結合されているＤＮＡ配列が連続的であり、分泌リーダーの場合、連続的およびリーディングフレームにある。結合は、結紮によってまたは増幅反応を通して達成される。合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーは、従来の実施に従って配列を結合するために使用され得る。  
【００３７】
本明細で使用される際の用語「発現カセット」は、核酸のセグメント、通常ＤＮＡを指し、それは核酸に挿入され得る（例えば、対象の構築物への結紮と適合性のある制限部位の使用によってまたは対象の構築物もしくは宿主細胞ゲノムへの相同組換えによって）。概して、核酸セグメントは、対象のポリペプチド（例えば、タグ付きＩｇタンパク質）をコードするポリヌクレオチドを含み、カセットおよび制限部位は、転写および翻訳のために適切なリーディングフレームにおいてカセットの挿入を容易にするように設計される。発現カセットはまた、宿主細胞中で対象のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの発現を容易にする要素を含む。これらの要素は、プロモーター、ミニマルプロモーター、エンハンサー、反応要素、ターミネーター配列、ポリアデニレーション配列などを含み得るが、これらに限定されない。  
【００３８】
本明細書で使用される際の「単離された」は、化合物が自然に生じる環境とは異なる環境にある対象の化合物を説明することを意味する。「単離された」は、対象の化合物のために実質的に富化されているおよび／または対象の化合物が部分的にもしくは実質的に精製された試料中にある化合物含むことを意味する。  
【００３９】
本明細書で使用される場合、用語「実質的に精製された」は、化合物が、その天然環境から除去され、それが天然に関連する他の構成成分を少なくとも６０％含まない、少なくとも７５％含まない、少なくとも８０％含まない、少なくとも８５％含まない、少なくとも９０％含まない、少なくとも９５％含まない、少なくとも９８％含まない、または９８％超を含まない化合物を指す。  
【００４０】
用語「生理的条件」は、生細胞と適合性のあるそれらの条件、例えば、生細胞と互換性のある温度、ｐＨ、塩分などの主に水性条件を包含する。  
【００４１】
「Ｎ末端」は、非Ｎ末端アミノ酸残基中のアミン基が、通常、ポリペプチドの共有結合性骨格の部分を形成する、遊離アミン基を有するポリペプチドの末端アミノ酸残基を指す。  
【００４２】
「Ｃ末端」は、非Ｃ末端アミノ酸残基中のカルボキシル基が、通常、ポリペプチドの共有結合性骨格の部分を形成する、遊離カルボキシル基を有するポリペプチドの末端アミノ酸残基を指す。  
【００４３】
ポリペプチドまたはポリペプチドのアミノ酸配列に関して使用される際の「内部部位」は、Ｎ末端またはＣ末端でないポリペプチドの領域を意味する。  
【００４４】
本明細書で使用される場合、「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療」、「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、および同様の用語は、望ましい薬理学的および／または生理学的効果を取得することを指す。この効果は、疾患またはその症状を完全にまたは部分的に予防する点で予防的であり得、および／または疾患の部分的または完全な治癒および／または疾患に起因する有害作用の点で治療的であり得る。本明細書で使用される「治療」は、哺乳動物、特にヒトにおける疾患のいかなる治療もカバーし、以下、（ａ）疾患に予備配設され得るが、罹患していると診断されていない対象において疾患の発生防止することを防止すること、（ｂ）疾患を阻害すること、すなわちその発症を阻止すること、および（ｃ）疾患を緩和すること、例えば、疾患の退行を引き起こすこと、例えば、疾患の症状を完全にまたは部分的に除去することを含む。  
【００４５】
「治療有効量」は、望ましい治療結果を達成するために、投与量および必要な時間の期間で、有効な量を指す。治療薬剤の治療有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別、および体重などの要素、および個体において望ましい反応を誘発するための治療薬剤の能力によって変化し得る。治療有効量はまた、治療薬剤の任意の毒性または有害な効果を、治療的に有益な効果が上回るものである。  
【００４６】
「タグ」は、ホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）の作用によって、アミノ酸配列モチーフが変換されることができ、２−ホルミルグリシン残基（本明細書で「ｆＧｌｙ」として言及される）を含むスルファターゼ（本明細書で以下「
スルファターゼモチーフ」）中に見出されるアミノ酸配列モチーフを含むアミノ酸配列を意味する。ＦＧＥによって生成されるｆＧｌｙ残基はしばしば、「ホルミルグリシン」として文献中で言及される。言い換えれば、用語「タグ」は、「変換されていない」スルファターゼモチーフ（すなわち、システインまたはセリンがＦＧＥによってｆＧｌｙに変換されていないが、変換されることができるスルファターゼモチーフ）を含むアミノ酸配列を示すために本明細書で使用される。スルファターゼモチーフは、「ＦＧＥ基質モチーフ」と交換可能であり得る。「タグ付き」ポリペプチドは、アミノ酸配列モチーフ、例えば、ＦＧＥによって、ｆＧｌｙを含むように変換され得るスルファターゼモチーフを含む。  
【００４７】
スルファターゼモチーフ上のホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）の作用の文脈において使用される際の「変換」は、スルファターゼモチーフにおいてホルミルグリシン（ｆＧｌｙ）残基（例えば、ＣｙｓからｆＧｌｙへ、またはＳｅｒからｆＧｌｙへ）へのシステインまたはセリン残基の生化学的修飾を指す。  
【００４８】
本明細書で使用される際の「アルデヒドタグ」または「ａｌｄ−タグ」は、ＦＧＥの作用によって、ｆＧｌｙを含むように変換されたスルファターゼモチーフを含むタグを指し得る。変換されたタグは、「変換された」スルファターゼモチーフ（すなわち、システインまたはセリンがＦＧＥの作用によってｆＧｌｙに変換されているスルファターゼモチーフ）を含むアミノ酸配列を示す。「アルデヒドタグ付き」ポリペプチドは、アミノ酸配列モチーフ、例えば、ＦＧＥによって、ｆＧｌｙを含むように変換されたスルファターゼモチーフを含む。  
【００４９】
「反応性パートナー」は、別の反応性パートナーと特異的に反応し、反応生成物を生成する分子または分子部分を意味する。例示的な反応性パートナーは、スルファターゼモチーフおよびＦＧＥのシステインまたはセリンを含み、それは反応して、モチーフ中のシステインまたはセリンの代わりにｆＧｌｙを含む変換されたアルデヒドタグの反応生成物を形成する。他の例示的な反応性パートナーは、変換されたアルデヒドタグのホルミルグリシン（ｆＧｌｙ）残基のアルデヒドおよび「アルデヒド反応性反応性パートナー」を含み、それは、アルデヒド反応性基および対象の部分（すなわち、ペイロード、例えば、薬物）を含み、それは反応して、ｆＧｌｙ残基を介してｆＧｌｙ修飾ポリペプチドに複合体化されたペイロード（例えば、薬物）を有する修飾されたアルデヒドタグ付きポリペプチドの反応生成物を形成する。  
【００５０】
「複合体」は、第２の部分と安定して関連する第１の部分を意味する。「安定して関連する」は、部分が別の部分または標準条件下での構造に結合されていることを意味する。特定の実施形態において、第１および第２の部分は、１つ以上の共有結合を通して互いに結合されている。複合体の第１または第２の部分は、「ペイロード」としても称され得る。  
【００５１】
本開示がさらに説明される前に、本開示の主題は、記載される特定の実施形態に限定されず、当然のことながら、変化する可能性があることを理解されたい。本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を記載するためのものであるにすぎず、本開示の範囲は添付の特許請求の範囲のみによって限定されるため、限定的であることは意図されないこともまた理解されたい。  
【００５２】
値の範囲が提供される場合、文脈上明確に指示されていない限り、下限の単位の１０分の１まで、それぞれの介在値は、その範囲の上限と下限との間であり、記載された他の値またはその記載された範囲内のまたは介在値は、開示される主題内に包含されることを理解されたい。これらのより小さい範囲の上限および下限は、独立して、より小さな範囲に含めることができ、本開示の主題の範囲内にさらに包含され、記載された範囲内で特に除外された制限を受ける。述べられる範囲が限界の一方または両方を備える場合、それらの含まれる限界のうちのいずれかまたは両方を除外する範囲もまた、本開示の主題に含まれる。  
【００５３】
別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本開示の主題が属する当業者に一般に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと同様または同等の任意の方法および材料はまた、本開示の主題の実施または試験においても使用することができるが、好ましい方法および材料をここで説明する。本明細書で言及される全ての公開物は、公開物が引用されるものとの関連で方法および／または材料を開示し、記載するために、参照によって本明細書に組み込まれる。  
【００５４】
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が別途明確に指示しない限り、複数の参照を含むことに留意すべきである。したがって、例えば、「抗体」への言及は、そのような複数の抗体を含み、「抗原」への言及は、当業者に既知の１つ以上の抗原およびその等価物への言及を含む。特許請求の範囲は、いかなる任意の要素も除外するように立案され得ることにさらに留意されたい。したがって、この記述は、特許請求の要素の列挙に関連して「専ら」、「唯一の」などのような排他的な用語の使用または「否定的な」制限の使用のための先行基準としての役割を果たすことを意図している。  
【００５５】
明瞭さのために別の実施形態の文脈中で記載された、本開示の主題の特定の特徴は、また単一の実施形態と組み合わせて提供され得ることが理解される。逆に、簡潔にするために、単一の実施形態の文脈で説明される本開示の主題の様々な特徴は、さらに、別々にまたは任意の適切なサブコンビネーションで提供されてもよい。本開示の主題に係る実施形態の全ての組み合わせは、本発明によって具体的に包含され、まさに各および全ての組み合わせが個々にまたは明示的に開示されているかのように本明細書に開示される。加えて、様々な実施形態およびその要素の全てのサブコンビネーションもまた、本開示によって特異的に包含され、まさにそのようなサブコンビネーションが本明細書に個別に、明示的に開示されているかのように、本明細書に開示されている。  
【００５６】
本明細書に論じられる公開物は専ら、本出願の出願日前のそれらの開示のためだけに提供される。本明細書内のいずれのものも、本開示の主題が先行の発明という理由によりそのような公開物に先立する権利がないという了解として解釈されるべきではない。さらに、示されている公開日は、実際の公開日とは異なる場合があり、別個に確認する必要がある。
【発明を実施するための形態】
【００５７】
上記に要約されているように、タグ、例えば、免疫グロブリン（Ｉｇ）軽鎖ポリペプチド中でスルファターゼモチーフを含むタグを含む抗体が開示される。タグは、ＦＧＥがセリンまたはシステイン残基を基質モチーフ中で２−ホルミルグリシン残基（ｆＧｌｙ）に変換（酸化）し得るホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）の基質モチーフを含み、それによって、ｆＧｌｙ修飾抗体を生成する。ｆＧｌｙ修飾抗体は、対象の部分（すなわち、ペイロード、例えば、薬物）がｆＧｌｙを介して軽鎖に部位特異的に共有結合される抗体複合体を生成するためにアルデヒド反応性パートナーとさらに反応し得る。  
【００５８】
本開示のタグ付き抗体、複合体、組成物、および方法は、本明細書で「タグ」として言及される、タグとしての使用へ天然型遺伝子的にコード可能なスルファターゼモチーフを利用して、Ｉｇポリペプチドの部位特異的修飾を指図する。スルファターゼの活性部位で見出されるモチーフに基づくモチーフである、タグのスルファターゼモチーフは、ＦＧＥ発現宿主細胞の細胞に基づく系内（例えば、細胞中でａｌｄタグ含有タンパク質の翻訳の際）であるか、または無細胞系内（例えば、無細胞系内でａｌｄタグ含有タンパク質をＦＧＥと接触させることによって）のいずれかにおいて、ホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）の作用によって２−ホルミルグリシン（ｆＧｌｙ）残基に変換（酸化）されることができるセリンまたはシステイン残基を含む。結果として得られるｆＧｌｙ残基のアルデヒド部分は、「ケミカルハンドル」として使用され得、Ｉｇポリペプチドの部位特異的化学修飾、およびひいてはペイロード（例えば、薬物）の部位特異的結合を容易にする。例えば、α−求核剤含有部分（例えば、アミノオキシまたはヒドラジド部分）を含むように修飾されたペプチドは、ｆＧｌｙ含有Ｉｇポリペプチドと反応させて、Ｉｇポリペプチドおよびペプチドが共有結合、例えば、ヒドラゾンもしくはオキシム結合、または還元的アミノ化などの代替的なアルデヒド特異的化学反応によって結合されている複合体を産出することができる。このようにして、アルデヒドの反応性は、Ｉｇポリペプチドの生体直交型および化学選択的な修飾を可能にし、ひいては、順に最終複合体におけるペイロードの部位特的結合を提供するために利用され得る化学修飾のための部位特異的手段を提供する。  
【００５９】
タグは、タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチド、タグ付き軽鎖ポリペプチドを有する抗体、または両方が１つ以上の望ましい特性を示すように、任意の好適な様式でＩｇ軽鎖ポリペプチド中に位置付けられ得る。特性は、例えば、インビトロ（すなわち、細胞発現系内）で産生されたタグ付きおよび／もしくはｆＧｌｙ修飾抗体、ならびに／またはｆＧｌｙを通して抗体に共有結合しているペイロード（例えば、薬物）を有する抗体複合体と関連し得る。望ましい特性は、制限なく、それぞれの特性についての基準尺度に対して、抗体産生のより高い力価、より高い変換速度、より高い複合収率（例えば、ペイロード対抗体、例えば、薬物対抗体の平均モル比によって決定されるような）、より低い凝集速度、より低い免疫原性、および／または血清中のより高い安定性を含み得る。本開示の、タグ付き、ｆＧｌｙ修飾、または複合体化された抗体は、それぞれ閾値力価および／または閾値収率より高い発現力価および／または複合収率（例えば、ペイロード対抗体比（ＰＡＲ）、例えば、ペイロードが薬物である、薬物対抗体比、またはＤＡＲ）などの１つ以上の閾値基準、例えば、２つ以上の閾値基準を満たすことを特徴とし得る。  
【００６０】
本開示のタグ付きまたはｆＧｌｙ修飾抗体は、発現の望ましい力価を示し得る。「発現の力価」、「発現力価」、および「力価」は、本明細書で交換可能に使用され、抗体に関して、抗体をコードする好適な発現構築物で遺伝子修飾された培養細胞によって細胞培養上清中に分泌される抗体の量を示す。細胞は、遺伝子修飾され得、タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチドと共に任意の好都合なＩｇ重鎖ポリペプチドを共発現する。細部は、酵素をコードする追加の発現構築物、または任意の他のポリペプチドでさらに遺伝子修飾され得る。いくつかの場合において、細胞は、本明細書に説明されるように、遺伝子修飾され得、ホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）を発現する。発現の閾値力価は、いくつかの場合において、約５ｍｇ／Ｌ以上、例えば、約６ｍｇ／Ｌ以上、約８ｍｇ／Ｌ以上、約１０ｍｇ／Ｌ以上、約１５ｍｇ／Ｌ以上、約２０ｍｇ／Ｌ以上、約３０ｍｇ／Ｌ以上、または約４０ｍｇ／Ｌ以上であり得る。いくつかの実施形態において、発現の閾値力価は、約５〜約５００ｍｇ／Ｌ、例えば、約６〜約５００ｍｇ／Ｌ、約８〜約２００ｍｇ／Ｌ、約１０〜約２００ｍｇ／Ｌ、約２０〜２００ｍｇ／Ｌ、または約３０〜約２００ｍｇ／Ｌの範囲である。抗体力価は、例えば、ＢＬＩｔｚ（登録商標）システム（Ｆｏｒｔｅ  Ｂｉｏ，ＣＡ）上で実行するプロテインＡに基づくバイオセンサーアッセイなどのバイオセンサーチップシステムを使用して測定され得る。  
【００６１】
本開示のタグ付きまたはｆＧｌｙ修飾抗体は、溶液中で凝集の許容可能なレベルを示し得る。凝集は、２つ以上の抗体を引き起こし、互いに物理的に関連する抗体間の非共有または共有相互作用を指し得る。このようにして、タグ付きまたはｆＧｌｙ修飾抗体の凝集レベルは、抗体の抗体結合特性、複合収率（以下に説明されるような）免
疫原性などで妨げないように十分に低くてもよい。いくつかの場合において、タグ付きまたはｆＧｌｙ修飾抗体は、約２０％以下、例えば、約１％以下を含む、約１８％以下、約１６％以下、約１４％以下、約１２％以下、約１０％以下、約５％以下、約３％以下、約２％以下の凝集レベルを示す。いくつかの場合において、タグ付きまたはｆＧｌｙ修飾抗体は、約０〜約２０％、例えば、約１％〜約１０％を含む、約０％〜約１６％、約１％〜約１２％の凝集レベルを示す。凝集レベルは、例えば、サイズ排除クロマトグラフィーを使用して測定され得る。  
【００６２】
本明細書に説明されるように、各Ｉｇ軽鎖ポリペプチド定常領域に存在する変換されたタグを含むｆＧｌｙ修飾抗体は、ｆＧｌｙ修飾抗体が、好適な反応混合物中でｆＧｌｙを通して薬物などのペイロードと複合体化される場合に、ペイロード対抗体（ＰＡＲ）（例えば、ペイロードが薬物である、薬物−抗体比（ＤＡＲ））平均モル比によって表される望ましい複合収率を示し得る。ｆＧｌｙ修飾抗体との複合体化の前に、ペイロードは、好適な反応性基、例えば、好適な条件下で反応混合物中でｆＧｌｙ修飾抗体のｆＧｌｙ残基のアルデヒドと反応するアルデヒド反応性基に共有結合され得る。いくつかの実施形態において、複合収率は、約０．５以上、例えば、約０．７５以上、約１．０以上、約１．１以上、約１．２以上、約１．３以上、または約１．６以上、および最大２．０である。いくつかの実施形態において、複合収率は、約０．５〜約２．０、例えば、約０．５〜約１．９、約０．７５〜約１．８、約１．０〜約１．８、または約１．３〜約１．８の範囲である。複合収率は、例えば、複合体化反応の後に、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）を行うことによって測定され得る。  
【００６３】
本開示の抗体複合体は、親抗体（すなわち、それに複合体化されたペイロードを有さない抗体、または定常領域に挿入されたタグ配列を有さないＩｇ軽鎖ポリペプチドを有する抗体）と比較して、好適な結合活性（例えば、特異性、結合親和性など）を有する抗原を結合し得る。いくつかの場合において、抗体複合体は、Ｉｇ軽鎖ポリペプチドの定常領域に挿入されたタグ配列を有さない親抗体の結合活性と実質的に同じである抗原に対する結合活性を有する。結合活性は、例えば、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）によって測定され得る。  
【００６４】
本抗体複合体は、抗体複合体が、標的部位に特異的であるか、または標的部位で富化された抗原に特異的に結合し得る標的部位に複合体化されたペイロード（例えば、薬物）を送達することにおいて使用を見出し得る。例えば、抗体複合体は、腫瘍抗原を特異的に認識し得、抗体に複合体化された化学療法薬物の腫瘍への部位特異的送達を高める。  
【００６５】
本開示のさらなる態様がここで説明される。  
【００６６】
スルファターゼモチーフを含むタグ  本開示の抗体は、タグを含み、すなわち、ＦＧＥの作用によって、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド定常領域で、スルファターゼモチーフ中でｆＧｌｙを提供するように変換されることができるスルファターゼモチーフを含むアミノ酸配列を含む。タグは、５個以上のアミノ酸残基、例えば、１０個以上のアミノ酸残基を含む、６個以上のアミノ酸残基、７個以上のアミノ酸残基、８個以上のアミノ酸残基の長さを有するスルファターゼモチーフを含み得、いくつかの場合において、１５個以下のアミノ酸残基、例えば、８個以下のアミノ酸残基を含む、１２個以下のアミノ酸残基、１１個以下のアミノ酸残基、１０個以下のアミノ酸残基の長さを有し得る。いくつかの実施形態において、タグは、５〜１５個のアミノ酸残基、例えば、６〜８個の残基を含む、５〜１２個のアミノ酸残基、５〜１０個のアミノ酸残基の範囲の長さを有するスルファターゼモチーフを含む。いくつかの実施形態において、スルファターゼモチーフは、５または６個のアミノ酸残基を含む。  
【００６７】
いくつかの実施形態において、タグは、少なくともミニマルスルファターゼモチーフ（「コンセンサススルファターゼモチーフ」とも称される）を含み、５または６個のアミノ酸残基、およびミニマルスルファターゼモチーフに隣接している追加の配列を有する。追加の配列は、ミニマルスルファターゼモチーフに対してＮおよび／またはＣ末端であり得る。  
【００６８】
特定の実施形態において、スルファターゼモチーフは、以下の式によって説明され得、             Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）（Ｉ）式中、Ｚ１は、システインまたはセリン（（Ｃ／Ｓ）によっても表され得る）であり、Ｚ２は、プロリンまたはアラニン残基（（Ｐ／Ａ）によっても表され得る）のいずれかであり、Ｚ３は、塩基性アミノ酸（例えば、アルギニン（Ｒ）、およびリシン（Ｋ）またはヒスチジン（Ｈ）、一般にはリシンであり得る）、または脂肪族アミノ酸（アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、ロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）、またはプロリン（Ｐ）、一般にはＡ、Ｇ、Ｌ、Ｖであり、またはＩ、Ｘ１は、または非存在であり、存在する場合、任意のアミノ酸であり得るが、一般には脂肪族アミノ酸、硫黄含有アミノ酸、または極性、非荷電アミノ酸、（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）、一般にはＬ、Ｍ、Ｖ、Ｓ、またはＴ、より一般にはＬ、Ｍ、Ｓ、またはＶであり得、Ｘ２およびＸ３は独立して、任意のアミノ酸であり得るが、一般には脂肪族アミノ酸、極性、非荷電アミノ酸、または硫黄含有アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）、一般にはＳ、Ｔ、Ａ、Ｖ、Ｇ、またはＣ、より一般にはＳ、Ｔ、Ａ、Ｖ、またはＧであり得る。  
【００６９】
このようにして、本開示は、抗体のＩｇ軽鎖ポリペプチドが、少なくとも５個のアミノ酸を有し、式、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）を有するタグを提供するように修飾された定常領域アミノ酸配列を含む抗体を提供し、式中、Ｚ１は、システインまたはセリンであり、Ｚ２は、プロリンまたはアラニン残基であり、Ｚ３は、脂肪族アミノ酸または塩基性アミノ酸であり、Ｘ１は、または非存在であり、存在する場合、任意のアミノ酸であり、Ｘ２およびＸ３はそれぞれ独立して、任意のアミノ酸であり、Ｉｇ軽鎖ポリペプチドが、以下にさらに説明されるように表１に示される配列番号４６〜８２に記載されているアミノ酸配列のうちの１つ以上、例えば、２つ以上、または３つ以上を含む軽鎖定常領域を含む。  
【００７０】
スルファターゼモチーフ上のＦＧＥの以下の作用後に、Ｚ１は酸化されて、ホルミルグリシン（ｆＧｌｙ）残基を生成することが留意されるべきである。さらに、ＦＧＥ媒介性変換および対象の部分（すなわち、ペイロード、例えば、薬物、検出可能な標識、水溶性ポリマー、ポリペプチドなど）を含む反応性パートナーとの反応の両方の後に、上記の式中のＺ１におけるｆＧｌｙ位置は、ペイロードに共有結合される。  
【００７１】
タグのスルファターゼモチーフは、概して、選択されたＦＧＥ、例えば、本開示の抗体が発現される宿主細胞中に存在するＦＧＥまたは無細胞インビトロ方法において本開示の抗体と接触されるＦＧＥによって変換することができるように選択される。  
【００７２】
タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む標的抗体中のｆＧｌｙを含むためにタグの変換を提供するタグの選択およびＦＧＥは、当該技術分野で利用可能な情報の観点から容易に達成され得る。概して、真核ＦＧＥによる変換の影響を受けやすいスルファターゼモチーフは、上記の式Ｉ（例えば、Ｘ１ＣＸ２ＰＸ３Ｚ３）において、システインおよびプロラインを含み（すなわち、それぞれＺ１およびＺ２におけるシステインおよびプロライン、「ＳＵＭＦ１型」ＦＧＥによって修飾される（Ｃｏｓｍａ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ  ２００３，１１３，（４），４４５−５６、Ｄｉｅｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ  ２００３，１１３，（４），４３５−４４）。原核ＦＧＥによる変換の影響を受けやすいスルファターゼモチーフは、上記の式Ｉ（例えば、Ｘ１（Ｃ／Ｓ）Ｘ２ＰＸ３Ｚ３）において、スルファターゼモチーフ中で、システインまたはセリンのいずれか、およびプロラインを含み（すなわち、それぞれＺ１におけるシステインまたはセリン、Ｚ２におけるプロライン、「ＳＵＭＦ１型」ＦＧＥまたは「ＡｔｓＢ型」ＦＧＥのいずれかによって修飾される（Ｓｚａｍｅｉｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  １９９９，２７４，（２２），１５３７５−８１）。原核ＦＧＥによる変換の影響を受けやすい他のスルファターゼモチーフは、上記の式ＩまたはＩＩ（例えば、Ｘ１ＣＸ２ＰＸ３Ｒ、Ｘ１ＳＸ２ＰＸ２Ｒ、Ｘ１ＣＸ２ＡＸ３Ｒ、Ｘ１ＳＸ２ＡＸ３Ｒ、ＣＸ１ＰＸ２Ｒ、ＳＸ１ＰＸ２Ｒ、ＣＸ１ＡＸ２Ｒ、ＳＸ１ＡＸ２Ｒ、Ｘ１ＣＸ２ＰＸ３Ｚ３、Ｘ１ＳＸ２ＰＸ２Ｚ３、Ｘ１ＣＸ２ＡＸ３Ｚ３、Ｘ１ＳＸ２ＡＸ３Ｚ３、ＣＸ１ＰＸ２Ｚ３、ＳＸ１ＰＸ２Ｚ３、ＣＸ１ＡＸ２Ｚ３、ＳＸ１ＡＸ２Ｚ３）において、スルファターゼモチーフ中で、システインまたはセリンのいずれか、およびプロラインまたはアラニンのいずれかを含み（すなわち、それぞれＺ１におけるシステインまたはセリン、Ｚ２におけるプロラインまたはアラニン、例えば、ファーミキューテス（例えば、ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ））（Ｂｅｒｔｅａｕ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．．２００６；２８１：２２４６４−２２４７０を参照されたい）のＦＧＥまたは結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）のＦＧＥによって修飾され得ることによる修飾の影響を受けやすい。  
【００７３】
したがって、例えば、ＦＧＥが真核ＦＧＥ（例えば、ヒトＦＧＥを含む、哺乳動物）である場合、スルファターゼモチーフは一般に、式、Ｘ１ＣＸ２ＰＸ３Ｚ３であり、Ｘ１が存在または非存在であり得、存在する場合、任意のアミノ酸であり得るが、一般には脂肪族アミノ酸、硫黄含有アミノ酸、または極性、非荷電アミノ酸、（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）、一般にはＬ、Ｍ、Ｓ、またはＶであり、Ｘ２およびＸ３は独立して、任意のアミノ酸であり得るが、一般には脂肪族アミノ酸、硫黄含有アミノ酸、または極性、非荷電アミノ酸、または硫黄含有アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）、一般にはＳ、Ｔ、Ａ、Ｖ、Ｇ、またはＣ、より一般にはＳ、Ｔ、Ａ、Ｖ、またはＧであり得、Ｚ３は、塩基性アミノ酸（例えば、アルギニン（Ｒ）、およびリシン（Ｋ）またはヒスチジン（Ｈ）であり得、一般にはリシン）、または脂肪族アミノ酸（アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、ロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）、またはプロライン（Ｐ）、一般にはＡ、Ｇ、Ｌ、Ｖ、またはＩである。  
【００７４】
スルファターゼモチーフの特定の例としては、ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５
８）、ＭＣＴＰＳＲ（配列番号１６０）、ＶＣＴＰＳＲ（配列番号１６１）、ＬＣＳＰＳＲ（配列番号１６２）、ＬＣＡＰＳＲ（配列番号１６３）、ＬＣＶＰＳＲ（配列番号１６４）、ＬＣＧＰＳＲ（配列番号１６５）、ＩＣＴＰＡＲ（配列番号１６６）、ＬＣＴＰＳＫ（配列番号１６７）、ＭＣＴＰＳＫ（配列番号１６８）、ＶＣＴＰＳＫ（配列番号１６９）、ＬＣＳＰＳＫ（配列番号１７０）、ＬＣＡＰＳＫ（配列番号１７１）、ＬＣＶＰＳＫ（配列番号１７２）、ＬＣＧＰＳＫ（配列番号１７３）、ＬＣＴＰＳＡ（配列番号１７４）、ＩＣＴＰＡＡ（配列番号１７５）、ＭＣＴＰＳＡ（配列番号１７６）、ＶＣＴＰＳＡ（配列番号１７７）、ＬＣＳＰＳＡ（配列番号１７８）、ＬＣＡＰＳＡ（配列番号１７９）、ＬＣＶＰＳＡ（配列番号１８０）、ＬＣＧＰＳＡ（配列番号１８１）、ＬＳＴＰＳＲ（配列番号１５９）、ＭＳＴＰＳＲ（配列番号１８２）、ＶＳＴＰＳＲ（配列番号１８３）、ＬＳＳＰＳＲ（配列番号１８４）、ＬＳＡＰＳＲ（配列番号１８５）、ＬＳＶＰＳＲ（配列番号１８６）、ＬＳＧＰＳＲ（配列番号１８７）、ＩＳＴＰＡＲ（配列番号１８８）、ＬＳＴＰＳＫ（配列番号１８９）、ＭＳＴＰＳＫ（配列番号１９０）、ＶＳＴＰＳＫ（配列番号１９１）、ＬＳＳＰＳＫ（配列番号１９２）、ＬＳＡＰＳＫ（配列番号１９３）、ＬＳＶＰＳＫ（配列番号１９４）、ＬＳＧＰＳＫ（配列番号１９５）、ＬＳＴＰＳＡ（配列番号１９６）、ＩＳＴＰＡＡ（配列番号１９７）、ＭＳＴＰＳＡ（配列番号１９８）、ＶＳＴＰＳＡ（配列番号１９９）、ＬＳＳＰＳＡ（配列番号２００）、ＬＳＡＰＳＡ（配列番号２０１）、ＬＳＶＰＳＡ（配列番号２０２）、およびＬＳＧＰＳＡ（配列番号２０３）が挙げられる。他の特定のスルファターゼモチーフは、本明細書に提供される開示から容易に明らかである。  
【００７５】
タグ付き免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを含む抗体  本開示の抗体は、タグが、対応する親Ｉｇ軽鎖ポリペプチド、例えば、定常領域でタグを有さないＩｇ軽鎖ポリペプチドの定常領域で２つ連続するアミノ酸の間に位置付けられるＩｇ軽鎖ポリペプチド定常領域のアミノ酸配列中に上記に説明されるようなタグを含む。言い換えると、本タグのアミノ酸配列は、第１の連続する配列が親Ｉｇ軽鎖定常領域アミノ酸配列中で第２の連続配列に対してよりＮ末端であり、第１および第２の連続配列が親Ｉｇ軽鎖定常領域アミノ酸配列で連続的である対応する親Ｉｇ軽鎖定常領域で、第１の連続する配列と同一のタグアミノ酸配列が第１の隣接する配列によってＮ末端的に直接隣接する、および対応する親Ｉｇ軽鎖定常領域で第２の連続配列と同一である第２の隣接する配列によってＣ末端的に直接隣接するように、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド中に存在し得る（例えば、図１も参照されたい）。  
【００７６】
親軽鎖ポリペプチドは、例えば、図１に示されるようなＩｇ定常領域アミノ酸配列を有する、Ｉｇカッパ軽鎖ポリペプチドであり得る。したがって、いくつかの場合において、Ｉｇ軽鎖ポリペプチドは、ヒトＩｇ軽鎖ポリペプチドである。いくつかの場合において、Ｉｇ軽鎖定常領域は、ヒトＩｇ軽鎖定常領域である。いくつかの場合において、親Ｉｇ軽鎖ポリペプチドは、定常領域アミノ酸配列の７５％以上、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、および配列番号１に記載されているアミノ酸配列と同一である最大１００％を含む。したがって、タグを含む本開示の抗体は、抗体が、７５％、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、および配列番号１に記載されているアミノ酸配列と同一である最大１００％である任意のタグを除いて、定常領域アミノ酸配列を含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含むＩｇカッパ軽鎖ポリペプチドに基づく親Ｉｇ軽鎖ポリペプチドに由来するＩｇ軽鎖を含む得る。  
【００７７】
本開示は、Ｉｇカッパ軽鎖の任意の好適なアロタイプ、例えば、ヒトアロタイプに基づいてＩｇ軽鎖を含む抗体を考慮する。対象のＩｇカッパ軽鎖アロタイプは、制限なく、Ｋｍ１（配列番号１の位置４５でのＶおよび位置８３でのＬを有する）、Ｋｍ１，２（配列番号１の位置８３でのＬを有する）、およびＫｍ３（配列番号１に対応する）を含む。したがって、いくつかの場合において、抗体は、７５％以上、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、および位置４５がＶ、位置８３がＬである配列番号１に記載されているアミノ酸配列を有するＩｇカッパ軽鎖のＫｍ１アロタイプと同一である最大１００％である任意のタグを除いて、定常領域アミノ酸配列を含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの場合において、抗体は、７５％以上、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、および位置８３がＬである配列番号１に記載されているアミノ酸配列を有するＩｇカッパ軽鎖のＫｍ１、２アロタイプと同一である最大１００％である任意のタグを除いて、定常領域アミノ酸配列を含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの場合において、抗体は、７５％以上、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、および配列番号１に記載されているアミノ酸配列を有するＩｇカッパ軽鎖のＫｍ３アロタイプと同一である最大１００％である任意のタグを除いて、定常領域アミノ酸配列を含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。  
【００７８】
いくつかの場合において、タグは、Ｉｇ軽鎖ポリペプチドの溶媒接触可能領域内かそれに隣接して位置付けられ、いくつかの場合において、タグは、Ｉｇ軽鎖ポリペプチドの溶媒接触可能領域内かそれに隣接して位置付けられない。抗体の溶媒接触可能ループは、分子モデリングによって、または既知の抗体構造との比較によって特定され得る。アミノ酸残基の相対的接触性はまた、ＤＳＳＰ（Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｓｅｃｏｎｄａｒｙ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ、Ｋａｂｓｃｈ  ａｎｄ  Ｓａｎｄｅｒ  １９８３  Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ  ２２：２５７７−６３７）の方法を使用して計算され得、アミノ酸の溶媒接触可能表面領域は、当該技術分野で既知のアルゴリズムを使用して、抗体の３次元モデルに基づいて計算され得る（例えば、Ｃｏｎｎｏｌｌｙ，Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｃｒｙｓｔ．１６，５４８（１９８３）およびＬｅｅ  ａｎｄ  Ｒｉｃｈａｒｄｓ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．５５，３７９（１９７１）、それらの両方が参照により本明細書に組み込まれる）。Ｉｇ軽鎖（例えば、ヒトカッパ軽鎖）の例示的な溶媒接触可能ループ領域は、図９に示されるように、１）ＴＶＡＡＰ（配列番号４６４）；２）ＰＰＳ；３）Ｇｌｙ（例えば、図９に表される、配列番号１に記載されているヒトカッパ軽鎖配列の位置２０でのＧｌｙを参照されたい）；４）ＹＰＲＥＡ（配列番号４６５）；５）ＰＲＥＡ（配列番号４６６）；６）ＤＮＡＬＱＳＧＮ（配列番号４６７）；７）ＴＥＱＤＳＫＤＳＴ（配列番号４６８）；８）ＨＫ；９）ＨＱＧＬＳＳ（配列番号４６９）；および１０）ＲＧＥＣ（配列番号４７０）を含む。  
【００７９】
本開示のタグは、上記に説明されるように、抗体がタグ付き、またはアルデヒドタグ付き、Ｉｇ軽鎖ポリペプチドを含む場合に、１つ以上の閾値基準と一致する望ましい特性を有する抗体を提供するために、抗体のＩｇ軽鎖ポリペプチド、例えば、Ｉｇカッパ軽鎖ポリペプチドの定常領域に位置付けられる。本開示の抗体は、約５ｍｇ／Ｌ以上の抗体力価を提供し、タグが変換される場合に、約０．５以上の、ペイロード対抗体（ＰＡＲ、例えば薬物対抗体比（ＤＡＲ））の平均モル比によって表される、複合体化効率性を提供する。したがって、抗体は、タグが、式、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）のアミノ酸配列を含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ１、Ｚ２およびＺ３が、上記に説明される通りであり、Ｉｇ軽鎖ポリペプチドが、表１の配列番号４６〜８２に記載されているアミノ酸配列のうちのいずれか１つ以上（例えば、２つ以上、または３つ以上）を含む定常領域を含むＩｇ軽鎖ポリペプチド中にタグを含み得る。いくつかの実施形態において、Ｚ３は、アルギニンである。いくつかの実施形態において、Ｘ１は、グリシン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、ヒスチジン、チロシン、バリン、セリン、システイン、またはトレオニンである。いくつかの実施形態において、Ｘ２およびＸ３はそれぞれ独立して、セリン、トレオニン、アラニン、バリン、グリシン、またはシステインである。いくつかの実施形態において、タグは、アミノ酸配列ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）を含む。特定の実施形態において、Ｉｇ軽鎖ポリペプチドは、表２に示される配列番号８３〜１１９に記載されているアミノ酸配列のうちのいずれか１つ以上（例えば、３つ以上を含む、２つ以上）を含む定常領域を含む。  
【００８０】
2019515677.tif 000006
（［＊／＊］は、「／」によって分離されるアミノ酸残基（または配列）から選択された代替的なアミノ酸（またはアミノ酸配列）を示す。）  
【００８１】
2019515677.tif 000007
（［＊／＊］は、「／」によって分離されるアミノ酸残基（または配列）から選択された代替的なアミノ酸（またはアミノ酸配列）を示す。）  
【００８２】
上記に説明されるように、タグは、対応する親Ｉｇ軽鎖ポリペプチド、例えば、定常領域でタグを有さないＩｇ軽鎖ポリペプチドの定常領域で２つ連続するアミノ酸の間に位置付けられ得る。したがって、Ｉｇ軽鎖アミノ酸配列中のタグの位置は、そのＮ末端端でタグに隣接するアミノ酸配列の最もＣ末端のアミノ酸の位置によって画定され得る。いくつかの実施形態において、タグは、配列番号１の残基１、２、３、４、５、６、１９、２０、２１、２２、２９、３０、３１、３２、４２、４３、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、６０、６２、６３、６４、６５、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、または９６のうちの１つ以上（例えば、３つ以上を含む、２つ以上）に対応するＩｇカッパ軽鎖ポリペプチドのアミノ酸残基に対して隣接かつＣ末端の位置付けられる。  
【００８３】
親Ｉｇ軽鎖ポリペプチドは、修飾されて、そのＩｇ軽鎖ポリペプチド中のタグを含む抗体が、約５ｍｇ／Ｌ以上の抗体力価および／または約０．５以上の抗体（例えば、ペイロードが薬物である、ＤＡＲ）の全量に対して複合体化された部分（例えば、薬物）の平均量によって表される複合体化効率性を達成するように定常領域のアミノ酸配列中にタグを挿入し得る。Ｉｇ軽鎖ポリペプチド中の対象の挿入部位は、配列番号１の位置１、２、３、４、５、６、１９、２０、２１、２２、２９、３０、３１、３２、４２、４３、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、６０、６２、６３、６４、６５、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、または９６のうちの１つ以上（例えば、３つ以上を含む、２つ以上）に対応するＩｇカッパ軽鎖ポリペプチドのアミノ酸残基に対する位置Ｃ末端を直ちに含む。  
【００８４】
特定の実施形態において、本開示の抗体は、約５ｍｇ／Ｌ以上の抗体力価を提供し、タグが変換される場合に約１．３以上の複合体化効率性（例えば、ＤＡＲ）を提供する。いくつかの実施形態において、抗体は、タグが、式、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）のアミノ酸配列を含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ１、Ｚ２およびＺ３が、上記に説明される通りであり、Ｉｇ軽鎖ポリペプチドが、Ｉｇ軽鎖ポリペプチドが表１の配列番号４７、４９、５０、５３〜５５、６３、６５〜６８、７４、７７、７９、８１、および８２に記載されているアミノ酸配列のう
ちのいずれか１つ以上（例えば、３つ以上を含む、２つ以上）を含む定常領域を含む、Ｉｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、Ｚ３は、アルギニンである。いくつかの実施形態において、Ｘ１は、グリシン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、ヒスチジン、チロシン、バリン、セリン、システイン、またはトレオニンである。いくつかの実施形態において、Ｘ２およびＸ３はそれぞれ独立して、セリン、トレオニン、アラニン、バリン、グリシン、またはシステインである。いくつかの実施形態において、タグは、アミノ酸配列ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）を含む。特定の実施形態において、Ｉｇ軽鎖ポリペプチドは、表２の配列番号８４、８６、８７、９０〜９２、１００、１０２〜１０５、１１１、１１４、１１６、１１８、および１１９に記載されているアミノ酸配列のうちのいずれか１つ以上（例えば、３つ以上を含む、２つ以上）を含む定常領域を含む。  
【００８５】
タグは、対応する親Ｉｇ軽鎖ポリペプチド、例えば、定常領域でタグを有さないＩｇ軽鎖ポリペプチドの定常領域で２つ連続するアミノ酸の間に位置付けられ得る。したがって、Ｉｇ軽鎖アミノ酸配列中のタグの位置は、そのＮ末端端でタグに隣接するアミノ酸配列の最もＣ末端のアミノ酸の位置によって画定され得る。いくつかの実施形態において、タグは、配列番号１の残基２、４、５、２０、２１、２２、４６、４８、４９、５０、５１、６５、９１、９３、９５、または９６のうちの１つ以上（例えば、３つ以上を含む、２つ以上）に対応するＩｇカッパ軽鎖ポリペプチドのアミノ酸残基に対して隣接かつＣ末端に位置付けられる。  
【００８６】
いくつかの場合において、親Ｉｇ軽鎖ポリペプチドは、修飾されて、そのＩｇ軽鎖ポリペプチド中のタグを含む抗体が、約１５ｍｇ／Ｌ以上の抗体力価を提供するように、およびタグが変換される場合に約１．３以上の複合体化効率性（例えば、ＤＡＲ）を提供するように定常領域のアミノ酸配列中にタグを挿入する。Ｉｇ軽鎖ポリペプチド中の対象の挿入部位は、配列番号１の位置２、４、５、２０、２１、２２、４６、４８、４９、５０、５１、６５、９１、９３、９５、または９６のうちの１つ以上（例えば、３つ以上を含む、２つ以上）に対応するＩｇカッパ軽鎖ポリペプチドのアミノ酸残基に対する位置Ｃ末端を直ちに含む。  
【００８７】
いくつかの実施形態において、タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチドは、定常領域アミノ酸配列中に、３つ以上など、２つ以上のタグを含み得る。Ｉｇ軽鎖ポリペプチドが定常領域アミノ酸配列中で３つ以上などの２つ以上のタグを含む場合、タグの位置は、アミノ酸残基に対して隣接かつＣ末端の３つ以上の部位などの、配列番号１の残基２、４、５、２０、２１、２２、４６、４８、４９、５０、５１、６５、９１、９３、９５、または９６のうちの１つ以上に対応する（例えば、３つ以上を含む、２つ以上）Ｉｇカッパ軽鎖ポリペプチドの任意の２つ以上であり得、但し、タグが互いに重複しないように任意の２つのタグ間で親Ｉｇポリペプチドアミノ酸配列に対応する十分な数のアミノ酸残基があることを条件とする。  
【００８８】
本開示の抗体は、概して、本明細書に説明されるように、タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチド定常領域、および可変領域（ＶＬ）を含み、抗体が抗原を結合する定常領域（ＣＨ１、Ｈ、ＣＨ２、ＣＨ３領域）を有するＩｇ重鎖および可変領域（ＶＨ）を含む。言い換えると、タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチドは、Ｉｇ重鎖ポリペプチドと好適に組み合された場合に、抗原結合抗体を形成する。Ｉｇ重鎖定常領域は、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプ重鎖またはその任意のアロタイプ変異体、例えば、ヒト重鎖定常領域配列またはマウス重鎖定常領域配列、雑種重鎖定常領域、合成重鎖定常領域、またはコンセンサス重鎖定常領域配列などの重鎖定常領域配列を含み得る。Ｉｇ重鎖は、１つ以上の修飾、例えば、グリコシル化などを含み得る。  
【００８９】
いくつかの実施形態において、本抗体は、例えば、重鎖定常領域でタグを含まない、タグを含まないＩｇ重鎖を含む。いくつかの実施形態において、タグがＩｇ重鎖定常領域の溶媒接触可能ループ領域内かそれに隣接して位置付けられ、抗体は、１つ以上、例えば、３つ以上を含む、２つ以上のタグ、すなわちスルファターゼモチーフを含むタグを有するＩｇ重鎖を含む。定常領域でタグを有する任意の好適なＩｇ重鎖ポリペプチドが使用され得る。定常領域でタグ（すなわち、ＦＧＥ基質モチーフ）を有する好適なＩｇ重鎖ポリペプチドは、例えば、ＵＳ２０１２／０１８３５６６に開示されており、それは参照によって本明細書に組み込まれる。  
【００９０】
特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、アミノ酸配列がタグ、すなわち、ＦＧＥ基質モチーフ：ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）を含む図１０Ａ〜１０Ｄに示される配列番号２〜７、および１５〜４５に記載されている任意の１つと同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチドを有する抗体は、約５ｍｇ／Ｌ以上、例えば、約１０ｍｇ／Ｌ以上、約１５ｍｇ／Ｌ以上、約２０ｍｇ／Ｌ以上、または約３０ｍｇ／Ｌ以上の抗体力価を示し得、タグが変換される場合に、いくつかの場合において、約０．５以上、例えば、約１．０以上、または約１．３以上の複合体化効率性（例えば、ＤＡＲ）を示し得る。Ｉｇ軽鎖ポリペプチドは、可変領域（ＶＬ）を含み得、抗体は、定常領域（例えば、Ｆｃ領域）を有するＩｇ重鎖および可変領域（ＶＨ）を含み得る。Ｉｇ重鎖定常領域は、任意の好適なアイソタイプ（例えば、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４）の重鎖定常領域配列、そのアロタイプ変異体；ヒト、マウス、雑種、合成、またはコンセンサス重鎖定常領域配列；修飾された（例えば、グリコシル化された）重鎖定常領域などを含み得る。いくつかの場合において、Ｉｇ重鎖定常領域は、１つ以上のタグを含む。  
【００９１】
特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド定常領域が、配列番号１の位置１でアミノ酸残基に対して隣接かつＣ末端に挿入される式、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）のタグを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３は、上記に説明される通りである配列番号１に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ｆＧｌｙがＺ１にある修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、ｆＧｌｙ’がＺ１に位置付けられ、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）を複合体化したｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、アミノ酸配列がタグ：ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）を含む配列番号２（図１０Ａの「１Ｔ」）に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号１５７）に変換される修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２６）であり、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されているｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。そのＩｇ軽鎖ポリペプチド中にタグを有する抗体は、約５ｍｇ／Ｌ以上、例えば、約３０ｍｇ／Ｌ以上を含む、約１０ｍｇ／Ｌ以上、約１５ｍｇ／Ｌ以上、約２０ｍｇ／Ｌ以上の抗体力価を示し得、タグが変換される場合に、約１．０以上を含む、約０．５以上の複合体化効率性（例えば、ＤＡＲ）を示し得る。  
【００９２】
特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド定常領域が、配列番号１の位置２でアミノ酸残基に対して隣接かつＣ末端に挿入される式、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）のタグを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３は、上記に説明される通りである配列番号１に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ｆＧｌｙがＺ１にある修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、ｆＧｌｙ’がＺ１に位置付けられ、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されたｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、アミノ酸配列がタグ：ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）を含む配列番号３（図１０Ａの「２Ｖ」）に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号１５７）に変換される修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２６）であり、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されているｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチド有する抗体は、約５ｍｇ／Ｌ以上、例えば、約２０ｍｇ／Ｌ以上を含む、約１０ｍｇ／Ｌ以上、約１５ｍｇ／Ｌ以上の抗体力価を示し得、タグが変換される場合に、約０．５以上、例えば、約１．６以上を含む、約１．０以上、約１．３以上の複合体化効率性（例えば、ＤＡＲ）を示し得る。  
【００９３】
特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド定常領域が、配列番号１の位置３でアミノ酸残基に対して隣接かつＣ末端に挿入される式、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）のタグを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３は、上記に説明される通りである配列番号１に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ｆＧｌｙがＺ１にある修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、ｆＧｌｙ’がＺ１に位置付けられ、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されたｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、アミノ酸配列がタグ：ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）を含む配列番号４（図１０Ａの「３Ａ」）に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号１５７）に変換される修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２６
）であり、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されているｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチドを有する抗体は、約５ｍｇ／Ｌ以上、例えば、約３０ｍｇ／Ｌ以上を含む、約１０ｍｇ／Ｌ以上、約１５ｍｇ／Ｌ以上、約２０ｍｇ／Ｌの抗体力価を示し得、タグが変換される場合に、約１．０以上を含む、約０．５以上の複合体化効率性（例えば、ＤＡＲ）を示し得る。  
【００９４】
特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド定常領域が、配列番号１の位置４でアミノ酸残基に対して隣接かつＣ末端に挿入される式、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）のタグを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３は、上記に説明される通りである配列番号１に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ｆＧｌｙがＺ１にある修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、ｆＧｌｙ’がＺ１に位置付けられ、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されたｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、アミノ酸配列がタグ：ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）を含む配列番号５（図１０Ａの「４Ａ」）に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号１５７）に変換される修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２６）であり、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されているｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチド有する抗体は、約５ｍｇ／Ｌ以上、例えば、約２０ｍｇ／Ｌ以上を含む、約１０ｍｇ／Ｌ以上、約１５ｍｇ／Ｌ以上の抗体力価を示し得、タグが変換される場合に、約０．５以上、例えば、約１．３以上を含む、約１．０以上の複合体化効率性（例えば、ＤＡＲ）を示し得る。  
【００９５】
特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド定常領域が、配列番号１の位置５でアミノ酸残基に対して隣接かつＣ末端に挿入される式、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）のタグを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３は、上記に説明される通りである配列番号１に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ｆＧｌｙがＺ１にある修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、ｆＧｌｙ’がＺ１に位置付けられ、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されたｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、アミノ酸配列がタグ：ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）を含む配列番号６（図１０Ａの「５Ｐ」）に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号１５７）に変換される修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２６）であり、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されているｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチド有する抗体は、約５ｍｇ／Ｌ以上、例えば、約１５ｍｇ／Ｌを含む、約１０ｍｇ／Ｌ以上の抗体力価を示し得、タグが変換される場合に、約０．５以上、例えば、約１．３以上を含む、約１．０以上の複合体化効率性（例えば、ＤＡＲ）を示し得る。  
【００９６】
特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド定常領域が、配列番号１の位置６でアミノ酸残基に対して隣接かつＣ末端に挿入される式、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）のタグを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３は、上記に説明される通りである配列番号１に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ｆＧｌｙがＺ１にある修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、ｆＧｌｙ’がＺ１に位置付けられ、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されたｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、アミノ酸配列がタグ：ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）を含む配列番号７（図１０Ａの「６Ｓ」）に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号１５７）に変換される修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２６）であり、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されているｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチド有する抗体は、約５ｍｇ／Ｌ以上、例えば、約２０ｍｇ／Ｌ以上を含む、約１０ｍｇ／Ｌ以上、約１５ｍｇ／Ｌ以上の抗体力価を示し得、タグが変換される場合に、約１．０以上を含む、約０．５以上の複合体化効率性（例えば、ＤＡＲ）を示し得る。  
【００９７】
特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド定常領域が、配列番号１の位置１９でアミノ酸残基に対して隣接かつＣ末端に挿入される式、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）のタグを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３は、上記に説明される通りである配列番号１に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ｆＧｌｙがＺ１にある修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、ｆＧｌｙ’がＺ１に位置付けられ、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されたｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、アミノ酸配列がタグ：ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）を含む配列番号１５（図１０Ａの「１９Ｓ」）に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号１５７）に変換される修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２６）であり、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されているｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチド有する抗体は、約５ｍｇ／Ｌ以上、例えば、約２０ｍｇ／Ｌ以上を含む、約１０ｍｇ／Ｌ以上、約１５ｍｇ／Ｌ以上の抗体力価を示し得、タグが変換される場合に、約０．５以上の複合体化効率性（例えば、ＤＡＲ）を示し得る。  
【００９８】
特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド定常領域が、配列番号１の位置２０でアミノ酸残基に対して隣接かつＣ末端に挿入される式、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）のタグを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３は、上記に説明される通りである配列番号１に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ｆＧｌｙがＺ１にある修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、ｆＧｌｙ’がＺ１に位置付けられ、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されたｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、アミノ酸配列がタグ：ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）を含む配列番号１６（図１０Ａの「２０Ｇ」）に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号１５７）に変換される修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２６）であり、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されているｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチド有する抗体は、約５ｍｇ／Ｌ以上、例えば、約２０ｍｇ／Ｌ以上を含む、約１０ｍｇ／Ｌ以上、約１５ｍｇ／Ｌ以上の抗体力価を示し得、タグが変換される場合に、約０．５以上、例えば、約１．３以上を含む、約１．０以上の複合体化効率性（例えば、ＤＡＲ）を示し得る。  
【００９９】
特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド定常領域が、配列番号１の位置２１でアミノ酸残基に対して隣接かつＣ末端に挿入される式、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）のタグを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３は、上記に説明される通りである配列番号１に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ｆＧｌｙがＺ１にある修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、ｆＧｌｙ’がＺ１に位置付けられ、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されたｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、アミノ酸配列がタグ：ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）を含む配列番号１７（図１０Ａの「２１Ｔ」）に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号１５７）に変換される
修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２６）であり、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されているｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチド有する抗体は、約５ｍｇ／Ｌ以上、例えば、約２０ｍｇ／Ｌ以上を含む、約１０ｍｇ／Ｌ以上、約１５ｍｇ／Ｌ以上の抗体力価を示し得、タグが変換される場合に、約０．５以上、例えば、約１．６以上を含む、約１．０以上、約１．３以上の複合体化効率性（例えば、ＤＡＲ）を示し得る。  
【０１００】
特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド定常領域が、配列番号１の位置２２でアミノ酸残基に対して隣接かつＣ末端に挿入される式、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）のタグを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３は、上記に説明される通りである配列番号１に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ｆＧｌｙがＺ１にある修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、ｆＧｌｙ’がＺ１に位置付けられ、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されたｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、アミノ酸配列がタグ：ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）を含む配列番号１８（図１０Ａの「２２Ａ」）に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号１５７）に変換される修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２６）であり、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されているｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチド有する抗体は、約５ｍｇ／Ｌ以上、例えば、約２０ｍｇ／Ｌ以上を含む、約１０ｍｇ／Ｌ以上、約１５ｍｇ／Ｌ以上の抗体力価を示し得、タグが変換される場合に、約０．５以上、例えば、約１．６以上を含む、約１．０以上、約１．３以上の複合体化効率性（例えば、ＤＡＲ）を示し得る。  
【０１０１】
特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド定常領域が、配列番号１の位置２９でアミノ酸残基に対して隣接かつＣ末端に挿入される式、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）のタグを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３は、上記に説明される通りである配列番号１に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ｆＧｌｙがＺ１にある修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、ｆＧｌｙ’がＺ１に位置付けられ、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されたｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、アミノ酸配列がタグ：ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）を含む配列番号１９（図１０Ｂの「２９Ｎ」）に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号１５７）に変換される修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２６）であり、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されているｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチド有する抗体は、約５ｍｇ／Ｌ以上、例えば、約１５ｍｇ／Ｌ以上を含む、約１０ｍｇ／Ｌ以上の抗体力価を示し得、タグが変換される場合に、約０．５以上の複合体化効率性（例えば、ＤＡＲ）を示し得る。  
【０１０２】
特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド定常領域が、配列番号１の位置３０でアミノ酸残基に対して隣接かつＣ末端に挿入される式、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）のタグを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３は、上記に説明される通りである配列番号１に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ｆＧｌｙがＺ１にある修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、ｆＧｌｙ’がＺ１に位置付けられ、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されたｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、アミノ酸配列がタグ：ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）を含む配列番号２０（図１０Ｂの「３０Ｎ」）に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号１５７）に変換される修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２６）であり、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されているｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチド有する抗体は、約５ｍｇ／Ｌ以上、例えば、約２０ｍｇ／Ｌ以上を含む、約１０ｍｇ／Ｌ以上、約１５ｍｇ／Ｌ以上の抗体力価を示し得、タグが変換される場合に、約１．０以上を含む、約０．５以上の複合体化効率性（例えば、ＤＡＲ）を示し得る。  
【０１０３】
特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド定常領域が、配列番号１の位置３１でアミノ酸残基に対して隣接かつＣ末端に挿入される式、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）のタグを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３は、上記に説明される通りである配列番号１に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ｆＧｌｙがＺ１にある修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、ｆＧｌｙ’がＺ１に位置付けられ、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されたｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、アミノ酸配列がタグ：ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）を含む配列番号２１（図１０Ｂの「３１Ｆ」）に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号１５７）に変換される修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２６）であり、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されているｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチド有する抗体は、約５ｍｇ／Ｌ以上、例えば、３０ｍｇ／Ｌ以上を含む、約１０ｍｇ／Ｌ以上、約１５ｍｇ／Ｌ以上、約２０ｍｇ／Ｌ以上の抗体力価を示し得、タグが変換される場合に、約０．５以上の複合体化効率性（例えば、ＤＡＲ）を示し得る。  
【０１０４】
特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド定常領域が、配列番号１の位置３２でアミノ酸残基に対して隣接かつＣ末端に挿入される式、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）のタグを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３は、上記に説明される通りである配列番号１に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ｆＧｌｙがＺ１にある修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、ｆＧｌｙ’がＺ１に位置付けられ、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されたｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、アミノ酸配列がタグ：ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）を含む配列番号２２（図１０Ｂの「３２Ｙ」）に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号１５７）に変換される修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２６）であり、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されているｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチド有する抗体は、約５ｍｇ／Ｌ以上、例えば、約１５ｍｇ／Ｌ以上を含む、約１０ｍｇ／Ｌ以上の抗体力価を示し得、タグが変換される場合に、約０．５以上の複合体化効率性（例えば、ＤＡＲ）を示し得る。  
【０１０５】
特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド定常領域が、配列番号１の位置４２でアミノ酸残基に対して隣接かつＣ末端に挿入される式、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）のタグを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３は、上記に説明される通りである配列番号１に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ｆＧｌｙがＺ１にある修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、ｆＧｌｙ’がＺ１に位置付けられ、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されたｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、アミノ酸配列がタグ：ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）を含む配列番号２３（図１０Ｂの「４２Ｖ」）に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において
、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号１５７）に変換される修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２６）であり、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されているｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチド有する抗体は、約５ｍｇ／Ｌ以上、例えば、約２０ｍｇ／Ｌ以上を含む、約１０ｍｇ／Ｌ以上、約１５ｍｇ／Ｌ以上の抗体力価を示し得、タグが変換される場合に、約０．５以上の複合体化効率性（例えば、ＤＡＲ）を示し得る。  
【０１０６】
特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド定常領域が、配列番号１の位置４３でアミノ酸残基に対して隣接かつＣ末端に挿入される式、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）のタグを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３は、上記に説明される通りである配列番号１に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ｆＧｌｙがＺ１にある修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、ｆＧｌｙ’がＺ１に位置付けられ、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されたｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、アミノ酸配列がタグ：ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）を含む配列番号２４（図１０Ｂの「４３Ｄ」）に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号１５７）に変換される修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２６）であり、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されているｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチド有する抗体は、約５ｍｇ／Ｌ以上、例えば、３０ｍｇ／Ｌ以上を含む、約１０ｍｇ／Ｌ以上、約１５ｍｇ／Ｌ以上、約２０ｍｇ／Ｌ以上の抗体力価を示し得、タグが変換される場合に、約０．５以上の複合体化効率性（例えば、ＤＡＲ）を示し得る。  
【０１０７】
特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド定常領域が、配列番号１の位置４５でアミノ酸残基に対して隣接かつＣ末端に挿入される式、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）のタグを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３は、上記に説明される通りである配列番号１に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ｆＧｌｙがＺ１にある修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、ｆＧｌｙ’がＺ１に位置付けられ、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されたｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、アミノ酸配列がタグ：ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）を含む配列番号２５（図１０Ｂの「４５Ａ」）に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号１５７）に変換される修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２６）であり、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されているｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチド有する抗体は、約５ｍｇ／Ｌ以上、例えば、３０ｍｇ／Ｌ以上を含む、約１０ｍｇ／Ｌ以上、約１５ｍｇ／Ｌ以上、約２０ｍｇ／Ｌ以上の抗体力価を示し得、タグが変換される場合に、約０．５以上の複合体化効率性（例えば、ＤＡＲ）を示し得る。  
【０１０８】
特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド定常領域が、配列番号１の位置４６でアミノ酸残基に対して隣接かつＣ末端に挿入される式、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）のタグを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３は、上記に説明される通りである配列番号１に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ｆＧｌｙがＺ１にある修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、ｆＧｌｙ’がＺ１に位置付けられ、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されたｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、アミノ酸配列がタグ：ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）を含む配列番号２６（図１０Ｂの「４６Ｌ」）に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号１５７）に変換される修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２６）であり、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されているｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチド有する抗体は、約５ｍｇ／Ｌ以上の抗体力価を示し得、タグが変換される場合に、約０．５以上、例えば、約１．３以上を含む、約１．０以上の複合体化効率性（例えば、ＤＡＲ）を示し得る。  
【０１０９】
特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド定常領域が、配列番号１の位置４７でアミノ酸残基に対して隣接かつＣ末端に挿入される式、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）のタグを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３は、上記に説明される通りである配列番号１に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ｆＧｌｙがＺ１にある修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、ｆＧｌｙ’がＺ１に位置付けられ、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されたｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、アミノ酸配列がタグ：ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）を含む配列番号２７（図１０Ｂの「４７Ｑ」）に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号１５７）に変換される修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２６）であり、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されているｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチド有する抗体は、約５ｍｇ／Ｌ以上、例えば、約３０ｍｇ／Ｌ以上を含む、約１０ｍｇ／Ｌ以上、約１５ｍｇ／Ｌ以上、約２０ｍｇ／Ｌ以上の抗体力価を示し得、タグが変換される場合に、約０．５以上の複合体化効率性（例えば、ＤＡＲ）を示し得る。  
【０１１０】
特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド定常領域が、配列番号１の位置４８でアミノ酸残基に対して隣接かつＣ末端に挿入される式、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）のタグを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３は、上記に説明される通りである配列番号１に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ｆＧｌｙがＺ１にある修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、ｆＧｌｙ’がＺ１に位置付けられ、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されたｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、アミノ酸配列がタグ：ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）を含む配列番号２８（図１０Ｂの「４８Ｓ」）に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号１５７）に変換される修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２６）であり、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されているｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチド有する抗体は、約５ｍｇ／Ｌ以上、例えば、約３０ｍｇ／Ｌ以上を含む、約１０ｍｇ／Ｌ以上、約１５ｍｇ／Ｌ以上、約２０ｍｇ／Ｌ以上の抗体力価を示し得、タグが変換される場合に、約０．５以上、例えば、約１．３以上を含む、約１．０以上の複合体化効率性（例えば、ＤＡＲ）を示し得る。  
【０１１１】
特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド定常領域が、配列番号１の位置４９でアミノ酸残基に対して隣接かつＣ末端に挿入される式、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）のタグを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３は、上記に説明される通りである配列番号１に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ｆＧｌｙがＺ１にある修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、ｆＧｌｙ’がＺ１に位置付けられ、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されたｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、アミノ酸配列がタグ：ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）を含む配列番号２９（図１０Ｃの「４９Ｇ」）に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポ
リペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号１５７）に変換される修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２６）であり、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されているｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチド有する抗体は、約５ｍｇ／Ｌ以上、例えば、約３０ｍｇ／Ｌ以上を含む、約１０ｍｇ／Ｌ以上、約１５ｍｇ／Ｌ以上、約２０ｍｇ／Ｌ以上の抗体力価を示し得、タグが変換される場合に、約０．５以上、例えば、約１．３以上を含む、約１．０以上の複合体化効率性（例えば、ＤＡＲ）を示し得る。  
【０１１２】
特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド定常領域が、配列番号１の位置５０でアミノ酸残基に対して隣接かつＣ末端に挿入される式、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）のタグを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３は、上記に説明される通りである配列番号１に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ｆＧｌｙがＺ１にある修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、ｆＧｌｙ’がＺ１に位置付けられ、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されたｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、アミノ酸配列がタグ：ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）を含む配列番号３０（図１０Ｃの「５０Ｎ」）に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号１５７）に変換される修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２６）であり、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されているｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチド有する抗体は、約５ｍｇ／Ｌ以上、例えば、約３０ｍｇ／Ｌ以上を含む、約１０ｍｇ／Ｌ以上、約１５ｍｇ／Ｌ以上、約２０ｍｇ／Ｌ以上の抗体力価を示し得、タグが変換される場合に、約０．５以上、例えば、約１．３以上を含む、約１．０以上の複合体化効率性（例えば、ＤＡＲ）を示し得る。  
【０１１３】
特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド定常領域が、配列番号１の位置５１でアミノ酸残基に対して隣接かつＣ末端に挿入される式、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）のタグを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３は、上記に説明される通りである配列番号１に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ｆＧｌｙがＺ１にある修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、ｆＧｌｙ’がＺ１に位置付けられ、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されたｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、アミノ酸配列がタグ：ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）を含む配列番号３１（図１０Ｃの「５１Ｓ」）に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号１５７）に変換される修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２６）であり、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されているｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチド有する抗体は、約５ｍｇ／Ｌ以上、例えば、約３０ｍｇ／Ｌ以上を含む、約１０ｍｇ／Ｌ以上、約１５ｍｇ／Ｌ以上、約２０ｍｇ／Ｌ以上の抗体力価を示し得、タグが変換される場合に、約０．５以上、例えば、約１．３以上を含む、約１．０以上の複合体化効率性（例えば、ＤＡＲ）を示し得る。  
【０１１４】
特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド定常領域が、配列番号１の位置５２でアミノ酸残基に対して隣接かつＣ末端に挿入される式、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）のタグを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３は、上記に説明される通りである配列番号１に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ｆＧｌｙがＺ１にある修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、ｆＧｌｙ’がＺ１に位置付けられ、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されたｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、アミノ酸配列がタグ：ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）を含む配列番号３２（図１０Ｃの「５２Ｑ」）に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号１５７）に変換される修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２６）であり、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されているｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチド有する抗体は、約５ｍｇ／Ｌ以上、例えば、約２０ｍｇ／Ｌ以上を含む、約１０ｍｇ／Ｌ以上、約１５ｍｇ／Ｌ以上の抗体力価を示し得、タグが変換される場合に、約１．０以上を含む、約０．５以上の複合体化効率性（例えば、ＤＡＲ）を示し得る。  
【０１１５】
特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド定常領域が、配列番号１の位置６０でアミノ酸残基に対して隣接かつＣ末端に挿入される式、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）のタグを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３は、上記に説明される通りである配列番号１に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ｆＧｌｙがＺ１にある修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、ｆＧｌｙ’がＺ１に位置付けられ、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されたｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、アミノ酸配列がタグ：ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）を含む配列番号３３（図１０Ｃの「６０Ｓ」）に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号１５７）に変換される修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２６）であり、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されているｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチド有する抗体は、約５ｍｇ／Ｌ以上、例えば、約３０ｍｇ／Ｌ以上を含む、約１０ｍｇ／Ｌ以上、約１５ｍｇ／Ｌ以上、約２０ｍｇ／Ｌ以上の抗体力価を示し得、タグが変換される場合に、約０．５以上の複合体化効率性（例えば、ＤＡＲ）を示し得る。  
【０１１６】
特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド定常領域が、配列番号１の位置６２でアミノ酸残基に対して隣接かつＣ末端に挿入される式、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）のタグを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３は、上記に説明される通りである配列番号１に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ｆＧｌｙがＺ１にある修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、ｆＧｌｙ’がＺ１に位置付けられ、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されたｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、アミノ酸配列がタグ：ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）を含む配列番号３４（図１０Ｃの「６２Ｄ」）に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号１５７）に変換される修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２６）であり、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されているｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチド有する抗体は、約５ｍｇ／Ｌ以上、例えば、約３０ｍｇ／Ｌ以上を含む、約１０ｍｇ／Ｌ以上、約１５ｍｇ／Ｌ以上、約２０ｍｇ／Ｌ以上の抗体力価を示し得、タグが変換される場合に、約０．５以上の複合体化効率性（例えば、ＤＡＲ）を示し得る。  
【０１１７】
特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド定常領域が、配列番号１の位置６３でアミノ酸残基に対して隣接かつＣ末端に挿入される式、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）のタグを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３は、上記に説明される通りである配列番号１に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ｆＧｌｙがＺ１にある修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、ｆＧｌｙ’がＺ１に位置付けられ、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されたｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、ア
ミノ酸配列がタグ：ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）を含む配列番号３５（図１０Ｃの「６３Ｓ」）に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号１５７）に変換される修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２６）であり、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されているｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチド有する抗体は、約５ｍｇ／Ｌ以上、例えば、約２０ｍｇ／Ｌ以上を含む、約１０ｍｇ／Ｌ以上、約１５ｍｇ／Ｌ以上の抗体力価を示し得、タグが変換される場合に、約０．５以上の複合体化効率性（例えば、ＤＡＲ）を示し得る。  
【０１１８】
特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド定常領域が、配列番号１の位置６４でアミノ酸残基に対して隣接かつＣ末端に挿入される式、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）のタグを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３は、上記に説明される通りである配列番号１に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ｆＧｌｙがＺ１にある修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、ｆＧｌｙ’がＺ１に位置付けられ、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されたｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、アミノ酸配列がタグ：ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）を含む配列番号３６（図１０Ｃの「６４Ｔ」）に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号１５７）に変換される修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２６）であり、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されているｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチド有する抗体は、約５ｍｇ／Ｌ以上、例えば、約３０ｍｇ／Ｌ以上を含む、約１０ｍｇ／Ｌ以上、約１５ｍｇ／Ｌ以上、約２０ｍｇ／Ｌ以上の抗体力価を示し得、タグが変換される場合に、約０．５以上の複合体化効率性（例えば、ＤＡＲ）を示し得る。  
【０１１９】
特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド定常領域が、配列番号１の位置６５でアミノ酸残基に対して隣接かつＣ末端に挿入される式、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）のタグを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３は、上記に説明される通りである配列番号１に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ｆＧｌｙがＺ１にある修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、ｆＧｌｙ’がＺ１に位置付けられ、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されたｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、アミノ酸配列がタグ：ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）を含む配列番号３７（図１０Ｃの「６５Ｙ」）に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号１５７）に変換される修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２６）であり、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されているｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチド有する抗体は、約５ｍｇ／Ｌ以上、例えば、約１５ｍｇ／Ｌ以上を含む、約１０ｍｇ／Ｌ以上の抗体力価を示し得、タグが変換される場合に、約０．５以上、例えば、約１．３以上を含む、約１．０以上の複合体化効率性（例えば、ＤＡＲ）を示し得る。  
【０１２０】
特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド定常領域が、配列番号１の位置８９でアミノ酸残基に対して隣接かつＣ末端に挿入される式、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）のタグを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３は、上記に説明される通りである配列番号１に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ｆＧｌｙがＺ１にある修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、ｆＧｌｙ’がＺ１に位置付けられ、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されたｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、アミノ酸配列がタグ：ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）を含む配列番号３８（図１０Ｃの「８９Ｔ」）に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号１５７）に変換される修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２６）であり、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されているｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチド有する抗体は、約５ｍｇ／Ｌ以上、例えば、約２０ｍｇ／Ｌ以上を含む、約１０ｍｇ／Ｌ以上、約１５ｍｇ／Ｌ以上の抗体力価を示し得、タグが変換される場合に、約０．５以上の複合体化効率性（例えば、ＤＡＲ）を示し得る。  
【０１２１】
特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド定常領域が、配列番号１の位置９０でアミノ酸残基に対して隣接かつＣ末端に挿入される式、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）のタグを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３は、上記に説明される通りである配列番号１に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ｆＧｌｙがＺ１にある修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、ｆＧｌｙ’がＺ１に位置付けられ、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されたｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、アミノ酸配列がタグ：ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）を含む配列番号３９（図１０Ｄの「９０Ｈ」）に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号１５７）に変換される修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２６）であり、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されているｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチド有する抗体は、約５ｍｇ／Ｌ以上、例えば、約１５ｍｇ／Ｌ以上を含む、約１０ｍｇ／Ｌ以上の抗体力価を示し得、タグが変換される場合に、約１．０以上を含む、約０．５以上の複合体化効率性（例えば、ＤＡＲ）を示し得る。  
【０１２２】
特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド定常領域が、配列番号１の位置９１でアミノ酸残基に対して隣接かつＣ末端に挿入される式、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）のタグを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３は、上記に説明される通りである配列番号１に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ｆＧｌｙがＺ１にある修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、ｆＧｌｙ’がＺ１に位置付けられ、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されたｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、アミノ酸配列がタグ：ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）を含む配列番号４０（図１０Ｄの「９１Ｑ」）に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号１５７）に変換される修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２６）であり、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されているｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチド有する抗体は、約５ｍｇ／Ｌ以上、例えば、約１５ｍｇ／Ｌ以上を含む、約１０ｍｇ／Ｌ以上の抗体力価を示し得、タグが変換される場合に、約０．５以上、例えば、約１．３以上を含む、約１．０以上の複合体化効率性（例えば、ＤＡＲ）を示し得る。  
【０１２３】
特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド定常領域が、配列番号１の位置９２でアミノ酸残基に対して隣接かつＣ末端の式、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）のタグを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３は、上記に説明される通りである配列番号１に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ｆＧｌｙがＺ１にある修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、ｆＧｌｙ’がＺ１に位置付けられ、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されたｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％
、例えば、アミノ酸配列がタグ：ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）を含む配列番号４１（図１０Ｄの「９２Ｇ」）に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号１５７）に変換される修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２６）であり、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されているｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチド有する抗体は、約５ｍｇ／Ｌ以上、例えば、約２０ｍｇ／Ｌ以上を含む、約１０ｍｇ／Ｌ以上、約１５ｍｇ／Ｌ以上の抗体力価を示し得、タグが変換される場合に、約０．５以上の複合体化効率性（例えば、ＤＡＲ）を示し得る。  
【０１２４】
特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド定常領域が、配列番号１の位置９３でアミノ酸残基に対して隣接かつＣ末端に挿入される式、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）のタグを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３は、上記に説明される通りである配列番号１に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ｆＧｌｙがＺ１にある修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、ｆＧｌｙ’がＺ１に位置付けられ、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されたｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、アミノ酸配列がタグ：ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）を含む配列番号４２（図１０Ｄの「９３Ｌ」）に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号１５７）に変換される修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２６）であり、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されているｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチド有する抗体は、約５ｍｇ／Ｌ以上、例えば、約１５ｍｇ／Ｌ以上を含む、約１０ｍｇ／Ｌ以上の抗体力価を示し得、タグが変換される場合に、約０．５以上、例えば、約１．３以上を含む、約１．０以上の複合体化効率性（例えば、ＤＡＲ）を示し得る。  
【０１２５】
特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド定常領域が、配列番号１の位置９４でアミノ酸残基に対して隣接かつＣ末端に挿入される式、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）のタグを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３は、上記に説明される通りである配列番号１に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ｆＧｌｙがＺ１にある修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、ｆＧｌｙ’がＺ１に位置付けられ、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されたｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、アミノ酸配列がタグ：ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）を含む配列番号４３（図１０Ｄの「９４Ｓ」）に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号１５７）に変換される修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２６）であり、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されているｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチド有する抗体は、約５ｍｇ／Ｌ以上、例えば、約１５ｍｇ／Ｌ以上を含む、約１０ｍｇ／Ｌ以上の抗体力価を示し得、タグが変換される場合に、約１．０以上を含む、約０．５以上の複合体化効率性（例えば、ＤＡＲ）を示し得る。  
【０１２６】
特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド定常領域が、配列番号１の位置９５でアミノ酸残基に対して隣接かつＣ末端に挿入される式、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）のタグを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３は、上記に説明される通りである配列番号１に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ｆＧｌｙがＺ１にある修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、ｆＧｌｙ’がＺ１に位置付けられ、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されたｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、アミノ酸配列がタグ：ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）を含む配列番号４４（図１０Ｄの「９５Ｓ」）に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号１５７）に変換される修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２６）であり、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されているｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチド有する抗体は、約５ｍｇ／Ｌ以上、例えば、約１５ｍｇ／Ｌ以上を含む、約１０ｍｇ／Ｌ以上の抗体力価を示し得、タグが変換される場合に、約０．５以上、例えば、約１．３以上を含む、約１．０以上の複合体化効率性（例えば、ＤＡＲ）を示し得る。  
【０１２７】
特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド定常領域が、配列番号１の位置９６でアミノ酸残基に対して隣接かつＣ末端に挿入される式、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）のタグを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３は、上記に説明される通りである配列番号１に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ｆＧｌｙがＺ１にある修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、ｆＧｌｙ’がＺ１に位置付けられ、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されたｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。特定の実施形態において、本開示の抗体は、アミノ酸配列を少なくとも９０％、例えば、アミノ酸配列がタグ：ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）を含む配列番号４５（図１０Ｄの「９６Ｐ」）に記載されている配列と同一である１００％を含む、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号１５７）に変換される修飾された抗体である。いくつかの場合において、抗体は、タグがＬ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２６）であり、ｆＧｌｙ’がペイロード（例えば、薬物）に複合体化されているｆＧｌｙである抗体複合体の一部である。タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチド有する抗体は、約５ｍｇ／Ｌ以上、例えば、約２０ｍｇ／Ｌ以上を含む、約１０ｍｇ／Ｌ以上、約１５ｍｇ／Ｌ以上の抗体力価を示し得、タグが変換される場合に、約０．５以上、例えば、約１．６以上を含む、約１．０以上、約１．３以上の複合体化効率性（例えば、ＤＡＲ）を示し得る。  
【０１２８】
本開示の抗体、または本明細書に説明されるようなその修飾された形態（例えば、ｆＧｌｙ修飾抗体または抗体複合体）は、好適な組成物中に提供され得る。したがって、本開示は、抗体、例えば、抗体の複数のメンバー、または本開示のそれらの修飾された形態を含む組成物を提供する。組成物は、抗体と適合性のある任意の他の好適な構成成分（例えば、緩衝液、安定剤、防腐剤など）、またはそれらの修飾された形態を含み得る。いくつかの場合において、組成物は、水などの水性媒体、または水性緩衝液を含む。いくつかの場合において、組成物は、好適な塩（すなわち、生理食塩水である）を含む。いくつかの実施形態において、組成物は、本抗体および任意に緩衝液または塩構成成分からなる再構成可能な貯蔵安定性粉末または液体である。いくつかの場合において、組成物は、以下にさらに説明されるように、薬学的組成物である。  
【０１２９】
本開示の抗体は、様々な抗原結合特異性のいずれかを有し得る。抗体は、例えば、癌細胞上に存在する抗原；自己免疫細胞上に存在する抗原；病原性微生物上に存在する抗原；ウイルス感染細胞上に存在する抗原（例えば、ヒト免疫不全ウイルス感染細胞）、例えば、ＣＤ４またはｇｐ１２０；疾患細胞上に存在する抗原などを含む様々な抗体のいずれかを結合し得る。例えば、抗体は、上記のように、抗原が細胞の表面上に存在する抗原を結合し得る。  
【０１３０】
例えば、本開示の抗体は、癌細胞上に存在する抗原を特異的に結合し得る。本開示の抗体によって認識および結合（例えば、特異的結合）され得る癌抗原の非限定的な例としては、癌腫、プロテアーゼ癌細胞、乳癌細胞、大腸癌細胞、メラノーマ細胞、Ｔ細胞白血病細胞、Ｔ細胞リンパ腫細胞、Ｂ細胞リンパ腫細胞、非ホジキンリンパ腫細胞などに存在する抗原が挙げられる。  
【０１３１】
特定の癌細胞上に存在する抗原の非限定的な例としては、例えば、ＣＡ１２５、ＣＡ１５−３、ＣＡ１９−９、Ｌ６、ルイスＹ、ルイスＸ、アルファフェトプロテイン、ＣＡ２４２、胎盤アルカリホスファターゼ、前立腺特異抗原、前立腺酸性ホスファターゼ、上皮成長因子、ＭＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−２、ＭＡＧＥ−３、ＭＡＧＥ−４、抗トランスフェリン受容体、ｐ９７、ＭＵＣ１−ＫＬＨ、ＨＥＲ２、ＣＥＡ、ｇｐ１００、ＭＡＲＴ１、前立腺特異抗原、ヒト絨毛性ゴナドトロピン、ＩＬ−２受容体、ＥｐｈＢ２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ５２、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ムチン、Ｐ２１、ＭＰＧ、およびＮｅｕ癌遺伝子産物が挙げられる。いくつかの実施形態において、抗原はＣＤ１９である。他の実施形態において、抗原はＣＤ２２である。  
【０１３２】
上記に説明されるように、タグを含むように修飾され得る抗体の非限定的な例としては、抗ＣＤ１９抗体、および抗ＣＤ２２抗体が挙げられるが、これらに限定されない。  
【０１３３】
ＦＧＬＹ修飾抗体  上記に説明されるように、タグ付き抗体は、例えば、上記に説明されるように、タグが２−ホルミルグリシン残基（ｆ
Ｇｌｙ）を含む変換されたタグに変換されるようにタグ中のシステインまたはセリン残基の側鎖のアルデヒド側鎖への酸化によって修飾され得、ｆＧｌｙ修飾抗体を生成する。Ｉｇ軽鎖ポリペプチドが、上記に説明されるように、式Ｉのホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）基質モチーフを含むタグを含む場合、Ｚ１は、ＦＧＥの作用を通してｆＧｌｙに修飾され得、式、Ｘ１（ｆＧｌｙ）Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３のアミノ酸配列を含む変換されたタグを生成し、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ２、およびＺ３は、上記に説明される通りである。  
【０１３４】
スルファターゼモチーフ中でシステインまたはセリンをｆＧｌｙに酸化する酵素は、本明細書においてホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）として言及される。上記で論じられるように、「ＦＧＥ」は、スルファターゼモチーフのシステイン（Ｃ）のｆＧｌｙへの変換を媒介するｆＧｌｙ生成酵素、ならびにスルファターゼモチーフのセリン（Ｓ）のｆＧｌｙへの変換を媒介するｆＧｌｙ生成酵素を示すために本明細書で使用される。概して、文献は、スルファターゼモチーフ中でＦＧＥとしてＣをｆＧｌｙに変換するｆＧｌｙ生成酵素を指し、スルファターゼモチーフ中でＡｔｓ−ＢなどとしてＳをｆＧｌｙに変換する酵素を指すことを留意されるべきである。しかしながら、本開示の目的のために、「ＦＧＥ」は、一般的に、適切なＦＧＥが適切なスルファターゼモチーフ（すなわち、Ｃ含有またはＳ含有）を含む標的反応性パートナーに従って選択されるであろうという理解の下で、ｆＧｌｙ生成酵素の両方の型を示すために使用される。  
【０１３５】
概して、標的ポリペプチドのタグのスルファターゼモチーフ中でシステインまたはセリンのｆＧｌｙへの変換を容易にするために使用されるＦＧＥは、タグ中に存在するスルファターゼモチーフに従って選択される。ＦＧＥは、タグ含有ポリペプチドが発現される宿主細胞、また遺伝子修飾され、適切なＦＧＥを発現し得る宿主細胞に対して天然であり得る。いくつかの実施形態において、ヒトＦＧＥ（例えば、ＳＵＭＦ１型ＦＧＥ、例えば、Ｃｏｓｍａ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ  １１３，４４５−５６（２００３）、Ｄｉｅｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ  １１３，４３５−４４（２００３）を参照されたい）と適合性のあるスルファターゼモチーフを使用すること、およびＦＧＥを発現するヒト細胞中または宿主細胞中、一般にはヒトＦＧＥを発現するように遺伝子修飾された哺乳動物細胞でアルデヒドタグ付きタンパク質を発現することが望ましくあり得る。  
【０１３６】
概して、本明細書に開示される方法での使用へのＦＧＥは、天然型供給源から得ることができるか、または合成的に生成され得る。例えば、適切なＦＧＥは、ＦＧＥを天然に生成するか、またはＦＧＥをコードする組換え遺伝子を発現するように遺伝子修飾されている生物学的供給源に由来し得る。多くのＦＧＥをコードする核酸は、当該技術分野で既知であり、容易に利用可能である（例えば、Ｐｒｅｕｓｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２００５Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８０（１５）：１４９００−１０（Ｅｐｕｂ  ２００５  Ｊａｎ  １８）、Ｆａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．２００４  Ｊ  ＢｉｏｌＣｈｅｍ．７９（１５）：１４５７０−８（Ｅｐｕｂ  ２００４  Ｊａｎ  ２８）、Ｌａｎｄｇｒｅｂｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｅ．２００３  Ｏｃｔ  １６；３１６：４７−５６、Ｄｉｅｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．１９９８  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．４２３（１）：６１−５、Ｄｉｅｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ．２００３  Ｍａｙ  １６；１１３（４）：４３５−４４、Ｃｏｓｍａ  ｅｔ  ａｌ．（２００３  Ｍａｙ  １６）Ｃｅｌｌ  １１３（４）：４４５−５６、Ｂａｅｎｚｉｇｅｒ（２００３  Ｍａｙ  １６）Ｃｅｌｌ  １１３（４）：４２１−２（ｒｅｖｉｅｗ）、Ｄｉｅｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ．２００５  Ｍａｙ  ２０；１２１（４）：５４１−５２、Ｒｏｅｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００６  Ｊａｎ  ３）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １０３（１）：８１−６、Ｓａｒｄｉｅｌｌｏ  ｅｔ  ａｌ．（２００５Ｎｏｖ  １）Ｈｕｍ  Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ．１４（２１）：３２０３−１７、ＷＯ２００４／０７２２７５、ＷＯ２００８／０３６３５０、米国特許公開第２００８／０１８７９５６号、およびＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿１８２７６０を参照されたい。したがって、本開示は、標的ポリペプチドのタグとの使用へ適合性のあるＦＧＥを発現するように遺伝子修飾された組換え宿主細胞を提供する。特定の実施形態において、使用されるＦＧＥは、天然型酵素（野生型アミノ酸配列を有し得る）であり得る。他の実施形態において、使用されるＦＧＥは、非天然型であり得、その場合、それは特定の場合において、野生型酵素のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％同一、少なくとも９０％同一、または少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有し得る。ＦＧＥが構造的および機能的に研究されており、そのような酵素のいくつかの例のアミノ酸配列が利用可能なため、酵素活性を保持する変異体は容易に設計可能であるべきである。  
【０１３７】
無細胞がスルファターゼモチーフ含有ポリペプチドを変換するために使用される場合、単離されたＦＧＥが使用され得る。任意の好都合なタンパク質精製手順は、ＦＧＥを単離するために使用され得、例えば、Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，（Ｄｅｕｔｈｓｅｒ  ｅｄ．）（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９９０）を参照されたい。例えば、ライセートは、望ましいＦＧＥを産生する細胞から調製され得、ＨＰＬＣ、排除クロマトグラフィー、ゲル電気泳動法、アフィニティークロマトグラフィーなどを使用して精製され得る。  
【０１３８】
そのＩｇポリペプチド、例えばＩｇ軽鎖ポリペプチド中でスルファターゼモチーフを有し、ｆＧｌｙ残基を含むためのタグを変換するタグ付き抗体を生成する任意の好適な方法は、例えば、ＵＳ２０１２０１８３５６６に記載されているように使用され得、それは参照によって本明細書に組み込まれる。  
【０１３９】
したがって、本開示は、変換されたタグが以下の式のアミノ酸配列を含むｆＧｌｙ修飾Ｉｇ軽鎖ポリペプチド、例えば、ｆＧｌｙ修飾Ｉｇカッパ軽鎖ポリペプチド中に変換されたタグを含むｆＧｌｙ修飾抗体を含み、                Ｘ１（ｆＧｌｙ）Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（ＩＩ）式中、ｆＧｌｙは、ホルミルグリシン残基であり、Ｚ２は、プロリンまたはアラニン残基（（Ｐ／Ａ）によっても表され得る）のいずれかであり、Ｚ３は、塩基性アミノ酸（例えば、アルギニン（Ｒ）、およびリシン（Ｋ）またはヒスチジン（Ｈ）、一般にはリシンであり得る）、または脂肪族アミノ酸（アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、ロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）、またはプロリン（Ｐ）、一般にはＡ、Ｇ、Ｌ、Ｖであり、またはＩ、Ｘ１は、または非存在であり、存在する場合、任意のアミノ酸であり得るが、一般には脂肪族アミノ酸、硫黄含有アミノ酸、または極性、非荷電アミノ酸、（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）、一般にはＬ、Ｍ、Ｖ、Ｓ、またはＴ、より一般にはＬ、Ｍ、Ｓ、またはＶであり得、Ｘ２およびＸ３は独立して、任意のアミノ酸であり得るが、一般には脂肪族アミノ酸、極性、非荷電アミノ酸、または硫黄含有アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）、一般にはＳ、Ｔ、Ａ、Ｖ、Ｇ、またはＣ、より一般にはＳ、Ｔ、Ａ、Ｖ、またはＧであり得る。  
【０１４０】
変換されたタグが、例えば、ＦＧＥの作用を介したシステインまたはセリンの酸化を通して、変換されていないタグに由来し得ると、タグのスルファターゼモチーフ中で、変換されたタグの位置は、上記に説明されるように、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド中のタグの位置によって画定され得る。したがって、いくつかの実施形態において、本開示のｆＧｌｙ修飾抗体は、式、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（配列番号４７８）のアミノ酸配列を有する変換されたタグを含むｆＧｌｙ修飾Ｉｇ軽鎖ポリペプチドを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ２、およびＺ３は、上記に説明される通りであり、Ｚ１は、ｆＧｌｙであり、ｆＧｌｙ修飾Ｉｇ軽鎖ポリペプチドは、Ｚ１がｆＧｌｙであり、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ２、およびＺ３が上記に説明される通りである表１に示される配列番号４６〜８２に記載されているアミノ酸配列のうちのいずれか１つ以上（例えば、３つ以上を含む、２つ以上）を含む定常領域を含む。いくつかの実施形態において、ｆＧｌｙ修飾Ｉｇ軽鎖ポリペプチドに含まれる変換されたタグは、アミノ酸配列Ｌ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号１５７）を有する。いくつかの実施形態において、ｆＧｌｙ修飾Ｉｇ軽鎖ポリペプチドは、ＣｙｓがｆＧｌｙで置換されている表２に示される配列番号８３〜１１９に記載されているアミノ酸配列のうちのいずれか１つ以上（例えば、３つ以上を含む、２つ以上）を含む定常領域を含む。上記に説明されるように、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド定常領域に変換されたタグを含む抗体は、約０．５以上のペイロード対抗体（例えば、薬物対抗体（ＤＡＲ））の平均モル比によって表される、複合体化効率性を示し得る。  
【０１４１】
いくつかの場合において、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド定常領域に変換されたタグを含む本抗体は、約１．３以上の、抗体の全量に対して複合体化された部分（例えば、薬物）の平均量によって表される、複合体化効率性を提供する。そのような場合において、ｆＧｌｙ修飾Ｉｇ軽鎖ポリペプチドは、Ｚ１がｆＧｌｙであり、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ２、およびＺ３が上記に説明される通りである表１の配列番号４７、４９、５０、５３〜５５、６３、６５〜６８、７４、７７、７９、８１、および８２に記載されているアミノ酸配列のうちのいずれか１つ以上（例えば、３つ以上を含む、２つ以上）を含む定常領域を含む。いくつかの場合において、タグがＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）である場合、ｆＧｌｙ修飾Ｉｇ軽鎖ポリペプチドは、ＣｙｓがｆＧｌｙで置換されている表２の配列番号８４、８６、８７、９０〜９２、１００、１０２〜１０５、１１１、１１４、１１６、１１８、および１１９に記載されているアミノ酸配列のうちのいずれか１つ以上（例えば、３つ以上を含む、２つ以上）を含む定常領域を含む。  
【０１４２】
抗体複合体  ｆＧｌｙ修飾Ｉｇ軽鎖ポリペプチドを含む抗体は、上記に説明されるように、部位特異的様式で対象の部分（すなわち、ペイロード、例えば、薬物）に共有結合するように修飾され得、抗体複合体を産生する。上記に説明されるように、Ｉｇ軽鎖ポリペプチドの変換されたタグ中のｆＧｌｙ残基のアルデヒド部分は、ペイロード、例えば、アルデヒド反応性基で機能化された薬物に結合しているアルデヒド反応性基が、化学選択的様式で反応し得、ｆＧｌｙ残基を介してペイロード（例えば、薬物）とＩｇ軽鎖ポリペプチドとの間に共有結合を形成する生体直交型反応性側鎖を提供し、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド複合体を形成する。本開示の抗体に複合体化されたペイロードは、ｆＧｌｙ修飾抗体への複合体化の前に、ペイロードに結合しているアルデヒド反応性基を含むアルデヒド反応性反応性パートナーから機能化され得る任意の好適な部分（例えば、薬物、検出可能な標識、水溶性ポリマー、ポリペプチドなど）を含む。  
【０１４３】
したがって、本開示は、修飾されたタグが以下の式のアミノ酸配列を含むＩｇ軽鎖ポリペプチド、例えば、Ｉｇカッパ軽鎖ポリペプチド中で修飾されたタグを含む抗体複合体を含み、              Ｘ１（ｆ
Ｇｌｙ’）Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（ＩＩＩ）式中、ｆＧｌｙ’は、そこに共有結合しているペイロード（例えば、薬物）で修飾されたホルミルグリシン残基であり、Ｚ２は、プロリンまたはアラニン残基（（Ｐ／Ａ）によっても表され得る）のいずれかであり、Ｚ３は、塩基性アミノ酸（例えば、アルギニン（Ｒ）、およびリシン（Ｋ）またはヒスチジン（Ｈ）、一般にはリシンであり得る）、または脂肪族アミノ酸（アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、ロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）、またはプロリン（Ｐ）、一般にはＡ、Ｇ、Ｌ、Ｖであり、またはＩ、Ｘ１は、または非存在であり、存在する場合、任意のアミノ酸であり得るが、一般には脂肪族アミノ酸、硫黄含有アミノ酸、または極性、非荷電アミノ酸、（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）、一般にはＬ、Ｍ、Ｖ、Ｓ、またはＴ、より一般にはＬ、Ｍ、Ｓ、またはＶであり得、Ｘ２およびＸ３は独立して、任意のアミノ酸であり得るが、一般には脂肪族アミノ酸、極性、非荷電アミノ酸、または硫黄含有アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）、一般にはＳ、Ｔ、Ａ、Ｖ、Ｇ、またはＣ、より一般にはＳ、Ｔ、Ａ、Ｖ、またはＧであり得る。  
【０１４４】
そこへ複合体化されたペイロード（例えば、薬物）を有する修飾されたタグが、例えば、ｆＧｌｙのペイロード（例えば、ｆＧｌｙのアルデヒド基を有する薬物を含むアルデヒド反応性反応性パートナーの反応を通して、変換されたタグに由来し得ると、修飾されたタグの位置は、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド中の変換されたタグの位置によって画定され得、Ｉｇ軽鎖ポリペプチドは、上記に説明されるように、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド中でタグの位置によって画定され得る。したがって、いくつかの実施形態において、本開示の抗体複合体は、式、Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３Ｉｇ（配列番号４７８）のアミノ酸配列を有する変換されたタグを含む軽鎖ポリペプチド複合体を含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ２、およびＺ３は、上記に説明される通りであり、Ｚ１は、ｆＧｌｙ’であり、ｆＧｌｙ’は、そこへ共有結合しているペイロード（例えば、薬物）で修飾されたホルミルグリシン残基であり、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド複合体は、Ｚ１がｆＧｌｙ’であり、ｆＧｌｙ’がそこへ共有結合しているペイロード（例えば、薬物）で修飾されたホルミルグリシン残基であり、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｚ２、およびＺ３は、上記に説明される通りである表１に示される配列番号４６〜８２に記載されているアミノ酸配列のいずれか１つを含む定常領域を含む。いくつかの実施形態において、抗体複合体は、定常領域でアミノ酸配列Ｌ（ｆＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号２２６）を有するＩｇ軽鎖ポリペプチド複合体を含む。いくつかの実施形態において、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド複合体は、ＣｙｓがｆＧｌｙ’で置換されており、ｆＧｌｙ’がそこへ共有結合しているペイロード（例えば、薬物）で修飾されたホルミルグリシン残基である表２に示される配列番号８３〜１１９に記載されているアミノ酸配列のうちのいずれか１つを含む定常領域を含む。  
【０１４５】
ｆＧｌｙ’の構造は、変化し得、ｆＧｌｙ修飾Ｉｇ軽鎖ポリペプチドの変換されたタグ中でペイロード（例えば、薬物）を含む反応性パートナーをｆＧｌｙ残基のアルデヒド側鎖と反応させるために使用されるアルデヒド反応性基の構造に依存し得る。ｆＧｌｙ’は、Ｉｇポリペプチド骨格とペイロード（例えば、薬物）との間に任意の好適な結合を含み得る。いくつかの実施形態において、ペイロード（例えば、薬物）は、ｆＧｌｙを通して変換されたタグに共有結合され、それは、アルデヒド反応性基とのその反応を通して修飾され、ペイロード（例えば、薬物）と共に、ヒドラゾン、オキシム、セミカルバゾン（例えば、チオセミカルボゾン）、アルキル、アルケニル、アシルオキシ、ヒドラジニル−インドリル、ヒドラジニル−イミダゾイル、ヒドラジニル−ピロリル、ヒドラジニル−フラニルまたはピラザリノン由来結合、およびそのような結合の誘導体を形成する。ヒドラジニル−インドリル結合は、例えば、部分的不飽和ピラゾールまたはピリダジン環、もしくは部分的不飽和ピリダジンまたは１，２−ジアゼピン環を含み得る。ピラザリノン由来結合は、ピラザリノン由来の環式結合を含み得る。いくつかの実施形態において、ヒドラジニル置換ヘテロアリール環由来結合は、例えば、環中の１つ以上の原子がヘテロ原子（例えば、Ｎ、Ｏ、またはＳ）であるヒドラジニル置換５員ヘテロアリール環化合物に由来する環式結合を含む。ヒドラジニル置換ヘテロアリール環由来結合は、ヒドラジニル−イミダゾイル、ヒドラジニル−ピロリル、またはヒドラジニル−フラニル結合を有し得る。変換されたタグのｆＧｌｙとペイロードとの間の好適な結合は、例えば、ＵＳ２０１２／０１８３５６６、ＵＳ２０１４／０１４１０２５、およびＷＯ２０１４／０７４２１８に記載されており、それらの各々は、参照によって本明細書に組み込まれる。  
【０１４６】
ペイロード（例えば、薬物）は、いくつかの場合において、アルデヒド反応性基と変換されたタグのｆＧｌｙのアルデヒド基との間の反応によって形成される共有結合に加えて、１つ以上の結合基を介して変換されたタグのｆＧｌｙに共有結合され得、したがって、結合基は、ペイロード（例えば、薬物）とＩｇ軽鎖ポリペプチド複合体中のタグの修飾されたｆＧｌｙを有する共有結合との間のスペーサーとして役立ち得る。結合基は、任意の好適な結合基であり得る。いくつかの場合において、結合基としては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）；アミノ酸；置換されたアルキル基を含む、アルキル基；プロテアーゼ切断可能基；エステル；置換されたアシルオキシ基を含む、アシルオキシ基などが挙げられる。好適な結合基は、例えば、ＵＳ２０１５／０１５７７３６に記載されており、それは本明細書において参照によって組み込まれる。いくつかの実施形態において、結合基は、４−アミノピペリジン（４ＡＰ）誘導体を含む。  
【０１４７】
本開示の抗体複合体は、１）ペイロード（例えば、薬物）に複合体化されていないＩｇ重鎖定常領域、および対象のペイロード（例えば、薬物）に複合体化されたＩｇ軽鎖定常領域、または２）ペイロード（例えば、薬物）に複合体化されたＩｇ重鎖定常領域、およびペイロード（例えば、薬物）に複合体化されたＩｇ軽鎖定常領域を含み得る。主題の抗体複合体はまた、ＶＨおよび／またはＶＬドメインを含み得る。  
【０１４８】
抗体複合体は、例えば、癌細胞上に存在する抗原；自己免疫細胞上に存在する抗原；病原性微生物上に存在する抗原；ウイルス感染細胞上に存在する抗原（例えば、ヒト免疫不全ウイルス感染細胞）、例えば、ＣＤ４またはｇｐ１２０；疾患細胞上に存在する抗原などを含む上記に説明されるような様々な抗原結合特異性のうちのいずれかを有し得る。例えば、抗体複合体は、上記のように、抗原が細胞の表面上に存在する抗原を結合し得る。抗体複合体の結合特異性、親和性などは、抗体複合体に含まれる少なくとも軽鎖および重鎖可変領域ＣＤＲ配列および／または軽鎖および重鎖可変領域（フレームワーク領域を含む）によって決定され得る。したがって、抗体複合体の結合特異性、親和性などは、典型的には、ペイロードに複合体化され得ない、またはタグ付けされ得る抗体として、実質的に同じ抗原結合特異性、親和性などを有し得、それは、抗体複合体として少なくとも同じ軽鎖および重鎖可変領域ＣＤＲ配列および／または同じ軽鎖および重鎖可変領域を有する。  
【０１４９】
本開示の抗体複合体は、好適な結合親和性、例えば、約５ｘ１０−６Ｍ〜約１０−７Ｍ、約１０−７Ｍ〜約５ｘ１０−７Ｍ、約５ｘ１０−７Ｍ〜約１０−８Ｍ、約１０−８Ｍ〜約５ｘ１０−８Ｍ、約５ｘ１０−８Ｍ〜１０−９Ｍ、または１０−９Ｍ超の結合親和性を有する抗原を結合し得る。  
【０１５０】
非限定的な例として、主題の抗体複合体は、癌細胞（例えば、腫瘍特異的抗原、癌細胞上に過剰発現される抗原など）上に存在する抗原を結合し得、結合されたペイロードは、細胞傷害性化合物（例えば、細胞傷害性小分子、細胞傷害性合成ペプチドなど）であり得る。例えば、主題の抗体複合体は、結合されたペイロードが細胞傷害性化合物（例えば、細胞傷害性小分子、細胞傷害性合成ペプチドなど）であるＣＤ１９に対して特異的であり得る。別の例として、主題の抗体複合体は、結合されたペイロードが細胞傷害性化合物（例えば、細胞傷害性小分子、細胞傷害性合成ペプチドなど）であるＣＤ２２に対して特異的であり得る。  
【０１５１】
さらなる非限定的な例として、主題の抗体複合体は、ウイルス（例えば、抗原がウイルスによってコードされる、抗原がウイルスに感染した細胞型上に発現されるなど）に感染した細胞上に存在する抗原を結合し得、ペイロードは、ウイルス融合阻害剤であり得る。例えば、主題の抗体複合体は、ＣＤ４を結合し得、結合されたペイロードは、ウイルス融合阻害剤であり得る。別の例として、主題の抗体複合体は、ｇｐ１２０を結合し得、結合されたペイロードは、ウイルス融合阻害剤であり得る。  
【０１５２】
上記に記載されるように、本開示の抗体に複合体化されたペイロードは、ｆＧｌｙ修飾された抗体への複合体化の前に、ペイロードに結合しているアルデヒド反応性基を含むアルデヒド反応性反応性パートナーから機能化され得る任意の好適な部分（例えば、薬物、検出可能な標識、水溶性ポリマー、ポリペプチドなど）を含む。  
【０１５３】
本開示の抗体複合体は、ペイロード（例えば、薬物）として、例えば、薬物（例えば、ペプチド薬物、小分子薬物など）、水溶性ポリマー、検出可能な標識、合成ペプチドなどの上記に説明されるような様々な化合物のうちのいずれかを含み得る。概して、ペイロード（例えば、薬物）は、幅広い様々な機能または特徴うちの１つ以上を提供し得る。対象の部分として、制限なく、検出可能な標識（例えば、色素標識（例えば、発色団、蛍光体）、生物物理学的プローブ（スピン標識、核磁気共鳴（ＮＭＲ）プローブ）、Ｆｏｒｓｔｅｒ共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）型標識（例えば、蛍光体／消光剤対の少なくとも１つのメンバーを含む、ＦＲＥＴ対の少なくとも１つのメンバー）、生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）型標識（例えば、ＢＲＥＴ対の少なくとも１つのメンバー）、免疫検出可能なタグ（例えば、ＦＬＡＧ（例えば、ＤＹＫＤＤＤＤＫ（配列番号２４９））、Ｈｉｓ（６）など）、局在化タグ（例えば、組織または分子細胞レベルでタグ付きポリペプチドの関連を特定する（例えば、組織型、または特定の細胞膜との関連））など；光活性化動的部分（例えば、アゾベンゼン媒介孔閉鎖、アゾベンゼン媒介構造変化、光脱ケージング認識モチーフ）；水溶性ポリマー（例えば、ＰＥＧ化）；精製タグ（例えば、親和性クロマトグラフィーによって単離を容易にする（例えば、ＦＬＡＧエピトープの結合、例えば、ＤＹＫＤＤＤＤＫ（配列番号２４９）））；膜局在化ドメイン（例えば、脂質またはグリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）型アンカー）；免疫化タグ（例えば、選択的結合を含む、表面へのポリペプチドの結合を容易にする）；薬物（例えば、例えば薬物の抗体への結合を通して、薬物標的を容易にする）；毒素；標的された送達部分（標的受容体に結合するためのリガンド（例えば、ウイルス結合、リポソーム上に存在する標的タンパク質の結合など））、細胞へ送達するための他の分子であって、薬理学的活性を提供し得るか、または他の分子の送達のための標的として役立ち得る、他の分子などが挙げられる。  
【０１５４】
結合パートナー（例えば、リガンド、受容体のリガンド結合部分、リガンドの受容体結合部分など）の対のうちの１つを含む共有結合されたペイロード（例えば、薬物）もまたは考慮される。例えば、ペイロードは、ウイルス受容体として役立つポリペプチドを含み得、ウイルス外被タンパク質またはウイルスカプシドタンパク質と結合する場合に、抗体複合体が関連、例えば、結合される細胞表面へのウイルスの結合を容易にする。代替的には、ペイロードは、抗体（例えば、モノクローナル抗体）によって特異的に結合される抗原を含み、ペイロードを含む抗体複合体に結合している宿主細胞の検出および／または分離を容易にする。  
【０１５５】
水溶性ポリマー  いくつかの場合において、抗体複合体は、水溶性ポリマーである共有結合されたペイロードを含む。特定の対象の部分は、水溶性ポリマーである。「水溶性ポリマー」は、水中で可溶性であり、一般に実質的に非免疫原性であり、一般に１，０００ダルトン超の原子的分子量を有するポリマーを指す。本明細書に説明される方法および組成物は、１つ以上の水溶性ポリマーをタグ付きおよび変換されたポリペプチドに結合するために使用され得る。ポリペプチドの水溶性ポリマー（例えば、ＰＥＧ）の結合、特に薬学的活性（治療的）ポリペプチドは、修飾が、増加されたタンパク質性安定性および／または減少された腎クリアランスの結果として、血清半減期を増加させることによって治療的指標を増加し得るとして望ましくあり得る。さらに、１つ以上のポリマー（例えば、ＰＥＧ化）の結合は、タンパク質医薬品の免疫原性を低減し得る。  
【０１５６】
いくつかの実施形態において、水溶性ポリマーは、約１０，０００Ｄａ超、約２０，０００〜５００，０００Ｄａ超、約４０，０００Ｄａ〜３００，０００Ｄａ超、約５０，０００Ｄａ〜７０，０００Ｄａ超、一般には約６０，０００Ｄａ超の有効な流体力学的分子量を有する。いくつかの実施形態において、水溶性ポリマーは、約１０ｋＤａ〜約２０ｋＤａ、約２０ｋＤａ〜約２５ｋＤａ、約２５ｋＤａ〜約３０ｋＤａ、約３０ｋＤａ〜約５０ｋＤａ、または約５０ｋＤａ〜約１００ｋＤａの有効な流体力学的分子量を有する。「有効な流体力学的分子量」は、水性サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって測定される場合のポリマー鎖の有効な水溶媒和サイズを意図する。水溶性ポリマーが、エチレンオキシド繰り返し単位などのポリアルキレンオキシド繰り返し単位を有するポリマー鎖を含む場合、各鎖は、特定の対象の２，０００〜約２０，０００Ｄａと共に、約２００Ｄａ〜約８０，０００Ｄａ、または約１，５００Ｄａ〜約４２，０００Ｄａの原子的分子量を有し得る。具体的に言及しない限り、分子量は、原子的分子量を指すことを意図する。直鎖、分岐、および末端荷電水溶性ポリマー（例えば、ＰＥＧ）は、特定の対象である。  
【０１５７】
抗体複合体を形成するためにｆＧｌｙ修飾抗体に複合体化される部分として有用なポリマーは、広範囲の分子量、およびポリマーサブユニットを有し得る。これらのサブユニットは、生物学的ポリマー、合成ポリマー、またはそれらの組み合わせを含み得る。そのような水溶性ポリマーの例としては、デキストランサルフェートを含むデキストランおよびデキストラン誘導体、Ｐ−アミノ架橋デキストリン、およびカルボキシメチルデキストリン、メチルセルロースおよびカルボキシメチルセルロースを含むセルロースならびにセルロース誘導体、スターチおよびデキストリン、ならびにスターチの誘導体および加水分解物、ポリエチレングリコールを含むポリアルキレングリコールおよびその誘導体、メトキシポリエチレングリコール、ポリエチレングリコールホモポリマー、ポリプロピレングリコールホモポリマー、プロピレングリコールを有するエチレングリコールのコポリマーが挙げられ、該ホモポリマーおよびコポリマーは、アルキル基、ヘパリンおよびヘパリンの断片、ポリビニルアルコールおよびポリビニルエチルエーテル、ポリビニルピロリドン、アスパルトアミド、ならびにデキストランおよびデキストラン誘導体、デキストリンおよびデキストリン誘導体を有するポリオキシエチル化ポリオールで１つの端で置換されていないか、または置換されている。具体的に列挙される水溶性ポリマーの様々な誘導体もまた考慮されることを理解されよう。  
【０１５８】
上記に説明されるようなものなどの水溶性ポリマー、特に、ポリエチレングリコール「ＰＥＧ」などのポリアルキレンオキシド系ポリマーが周知である。好適なポリマーとしては、制限なく、ポリアルキレンオキシドを含むもの、ポリアミドアルキレンオキシド、またはそれらの誘導体が挙げられ、式、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）−のエチレンオキシド繰り返し単位を含むポリアルキレンオキシドおよびポリアミドアルキレンオキシドを含む。対象のさらなる例示的なポリマーは、式、−［Ｃ（Ｏ）−Ｘ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｙ−ＮＨ］ｎ−または−［ＮＨ−Ｙ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｘ−Ｃ（Ｏ）］ｎ−の約１，０００ダルトン超の分子量を有するポリアミドを含み、式中、ＸおよびＹは、同じまたは異なり得る、分岐または直鎖であり得る二価ラジカルであり、ｎは、２〜１００、一般には２〜５０の離散整数であり、ＸおよびＹのいずれかまたは両方は、直鎖または分岐であり得る、生物的適合性の、実質的に非抗原性水溶性繰り返し単位である。さらなる例示的な水溶性繰り返し単位は、式、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）−または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）−のエチレンオキシドを含む。そのような水溶性繰り返し単位の数は、２〜５００、２〜４００、２〜３００、２〜２００、２〜１００、および最も一般には２〜５０であるそのような単位の一般的な数で著しく変化し得る。例示的な実施形態は、ＸおよびＹのうちのいずれか１つまたは両方が、−（（ＣＨ２）ｎ１−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ２−（ＣＨ２）−または−（（ＣＨ２）ｎ１−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｎ２−（ＣＨ２）ｎ−１−）から選択されるものであり、式中、ｎ１は、１〜６、１〜５、１〜４、および最も一般的には１〜３である、ｎ２は、２〜５０、２〜２５、２〜１５、２〜１０、２〜８、および最も一般には２〜５である。さらなる例示的な実施形態は、Ｘが、−（ＣＨ２−ＣＨ２）−であるものであり、Ｙが、−（ＣＨ２−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）３−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２）−または−（ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）３−ＣＨ２）−である。  
【０１５９】
ポリマーは、１つ以上のスペーサーまたはリンカーを含み得る。例示的なスペーサーまたはリンカーは、例えば、最大１８個の炭素原子またはさらに追加のポリマー鎖を含み得るアルキル、アリール、ヘテロアルキル、アルコキシ、などを含む、水溶性ポリマー、ジアミノおよびまたは二酸単位、天然または非天然アミノ酸もしくはその誘導体、ならびに脂肪族部分で用いられる１つ以上の繰り返し単位を含む直鎖または分岐の部分を含む。  
【０１６０】
ポリマー部分、または存在する場合にポリマー部分のスペーサーもしくはリンカーの１つ以上は、生体安定または生分解性であるポリマー鎖または単位を含み得る。例えば、繰り返し結合を有するポリマーは、結合不安定性に応じて生理学的条件下で安定性の様々な程度を有する。そのような結合を有するポリマーは、低分子量類似体、例えば、あまり安定でないところからより安定であるまで、例えば、ポリウレタン（−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−）＞ポリオルトエステル（−Ｏ−Ｃ（（ＯＲ）（Ｒ’））−Ｏ−）＞ポリアミド（−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−）の既知の加水分解速度に基づいて、生理学的条件下でそれらの相対比によって分類化され得る。同様に、水溶性ポリマーを標的分子に結合している結合系は、生体安定または生分解性、例えば、あまり安定でないところからより安定であるまで：カーボネート（−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−）＞エステル（−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−）＞ウレタン（−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−）＞オルトエステル（−Ｏ−Ｃ（（ＯＲ）（Ｒ’））−Ｏ−）＞アミド（−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−）であり得る。概して、硫酸基の不安定性に応じて、硫酸化多糖類の使用を避けることが望ましくあり得る。さらに、ポリカーボネートおよびポリエステルを使用することはあまり望ましくない可能性がある。これらの結合は、実施例の方法によって提供され、本明細書に記載されている修飾アルデヒドタグ付きポリペプチドにおいて有用な水溶性ポリマーのポリマー鎖または結合系内で用いることが可能な結合の型を制限することを意図していない。  
【０１６１】
合成ペプチド  いくつかの場合において、抗体複合体は、共有結合されたペプチド、例えば、抗体のＩｇ軽鎖ポリペプチドの変換されたタグのｆＧｌｙに共有結合されたペプチドを含む。好適なペプチドとしては、細胞傷害性ペプチド、血管新生ペプチド、抗血管新生ペプチド、Ｂ細胞を活性化するペプチド、Ｔ細胞を活性化するペプチド、抗ウイルスペプチド、ウイルス融合を阻害するペプチド、１つ以上のリンパ球集団の生成を増加させるペプチド、抗微生物ペプチド、成長因子、成長ホルモン放出因子、血管作動性ペプチド、抗炎症ペプチド、グルコース代謝を調節するペプチド、抗血栓性ペプチド、抗侵害受容性ペプチド、血管拡張剤ペプチド、血小板凝集阻害剤、鎮痛剤などが挙げられるが、これらに限定されない。  
【０１６２】
共有結合された部分がペプチドである場合、ペプチドは、変換されたｆＧｌｙ含有Ｉｇポリペプチドと反応性の基を含むために化学的に合成され得る。好適な合成ペプチドは、約５個のアミノ酸〜約１００個のアミノ酸の長さ、または１００個のアミノ酸より長い長さを有し、例えば、好適なペプチドは、約５個のアミノ酸（ａａ）〜約１０個のａａ、約１０個のａａ〜約１５個のａａ、約１５個のａａ〜約２０個のａａ、約２０個のａａ〜約２５個のａａ、約２５個のａａ〜約３０個のａａ、約３０個のａａ〜約４０個のａａ、約４０個のａａ〜約５０個のａａ、約５０個のａａ〜約６０個のａａ、約６０個のａａ〜約７０個のａａ、約７０個のａａ〜約８０個のａａ、約８０個のａａ〜約９０個のａａ、または約９０個のａａ〜約１００個のａａの長さを有する。  
【０１６３】
ペプチドは、α−求核剤含有部分（例えば、アミノオキシまたはヒドラジド部分）を含むように修飾され得、例えば、Ｉｇポリペプチドと反応され得、アルデヒドタグ付きＩｇポリペプチドおよびペプチドが、それぞれヒドラゾンまたはオキシム結合によって結合されている複合体を産出する。反応性基を含む合成ペプチドペプチドが変換されたアルデヒドタグと反応するように合成する例示的な方法は、上記に記載されている。  
【０１６４】
好適なペプチドとしては、ｈＬＦ−１１（ラクトフェリンの１１−アミノ酸Ｎ末端断片）、抗微生物ペプチド；グラニュライシン、抗微生物ペプチド；プレクタシン（ＮＺ２１１４、ＳＡＲ２１５５００）、抗微生物ペプチド；フゼオン（エンフュヴァタイド）などのウイルス融合阻害剤、ＴＲＩ−１２４９（Ｔ−１２４９、例えば、Ｍａｔｏｓ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ５：ｅ９８３０を参照されたい）、ＴＲＩ−２６３５（Ｔ−２６３５、例えば、Ｅｇｇｉｎｋ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８４：２６９４１を参照されたい）、Ｔ６５１、およびＴＲＩ−１１４４；ＰＭＸ−５３、ＪＰＥ−１３７５、およびＪＳＭ−７７１７などのＣ５ａ受容体阻害剤；ＰＯＴ−４、ヒト補体因子Ｃ３阻害剤；膵臓（ＩＮＧＡＰ誘導体配列、ＨＩＰヒト膵島タンパク質）；ソマトスタチン；ＤＥＢＩＯ  ８６０９（Ｓａｎｖａｒ）、オクトレオチド、オクトレオチド（Ｃ２Ｌ）、オクトレオチドＱＬＴ、オクトレオチドＬＡＲ、サンドスタ
チンＬＡＲ、細胞体ＬＡＲ、ソマチュリン（ランレオチド）などのソマトスタチン類似体、例えば、Ｄｅｇｈｅｎｇｈｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  １４：２９を参照されたい；ＴＨ９５０７（テサモレリン、成長ホルモン放出因子）；ＰＯＬ７０８０（プロテグリン類似体、抗微生物ペプチド）；レラキシン；ウロテンシン、サウバギンなどのコルチコトロピン放出因子作動剤；ＤｉａＰｅｐ２７７などの熱ショックタンパク質誘導体；ヒト免疫不全ウイルス侵入阻害剤；ＡＺＸ１００などの熱ショックタンパク質−２０模倣物；ＴＰ５０８（Ｃｈｒｙｓａｌｉｎ）などのペプチドを活性化しているトロンビン受容体；ウロコルチン−２などのウロコルチン２模倣物（例えば、ＣＲＦ２作動剤）；Ｚａｄａｘｉｎ（チマルファシン、チモシン−α１）などの免疫活性剤、例えば、Ｓｊｏｇｒｅｎ（２００４）Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｈｅｐａｔｏｌ．１９：Ｓ６９を参照されたい；ＨＣＶ３などのＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）侵入阻害剤Ｅ２ペプチド；ＨＡＮＰ（Ｓｕｎ４９３６、カルペリチド）などの心房性ナトリウム利尿ペプチド；アネキシンペプチド；ｈＢＤ２−４などのデフェンシン（抗微生物ペプチド）；ｈＢＤ−３などのデフェンシン（抗微生物ペプチド）；ＰＭＸ−３００６３などのデフェンシン（抗微生物ペプチド）；ヒスタチン−３、ヒスタチン−５、ヒスタチン−６、およびヒスタチン−９などのヒスタチン（抗微生物ペプチド）；ＰＡＣ−１１３などのヒスタチン（抗微生物ペプチド）；ＭＸ−５９４ＡＮ（オムニガニン、ＣＬＳ００１）などのインドリシジン（抗微生物ペプチド）；Ｏｍｎｉｇａｒｄ（ＭＢＩ−２２６、ＣＰＩ−２２６）などのインドリシジン（抗微生物ペプチド）；昆虫セクロピンなどの抗微生物ペプチド；ラクトフェリン（タラクトフェリン）などの抗微生物ペプチド；Ｐ６０．４（ＯＰ−１４５）などのＬＬ−３７／カテリシジン誘導体（抗微生物ペプチド）；Ｐｅｘｉｇａｎａｎ（ＭＳＩ−７８、Ｓｕｐｏｎｅｘ）などのマガイニン（抗微生物ペプチド）；ＩＢ−３６７（イセガナン）などのプロテグリン（抗微生物ペプチド）；アガンペプチド；Ｎａｔｒｅｃｏｒ、またはＮｏｒａｔａｋ（ネシリチド）、またはウラリチドなどのベータ−ナトリウム利尿ペプチド；ビバリルジン（Ａｎｇｉｏｍａｘ）、トロンビン阻害剤；Ｃペプチド誘導体；Ｍｉａｃａｌｃｉｎ（Ｆｏｒｔｉｃａｌ）などのカルシトニン；エンケファリン誘導体；ヘマタイドなどの赤血球産生刺激ペプチド；Ｄａｎｅｇａｐｔｉｄｅ（ＺＰ１６０９）などのギャップ結合調節剤；ガストリン放出ペプチド；グレリン；グルカゴン様ペプチド；ＺＰ１８４６またはＺＰ１８４８などのグルカゴン様ペプチド−２類似体；ＧＭＤＰなどのグルコサミニルムラミルジペプチド；オリタバンシンなどのグリコペプチド系抗生物質；ダルババンシンなどのテイコプラニン誘導体；ゾラデックス（Ｌｕｐｏｎ）またはトリプトレリンなどのゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）；ＰＭ０２７３４（Ｉｒｖａｌｅｃ）などのヒストン脱アセチル化（ＨＤＡＣ）阻害剤デプシペプチド；エプチフィバチドなどのインテグリン；ヒューマログなどのインスリン類似体；ＰＭ０２７３４などのカ���ラリドデプシペプチド；Ｋａｌｂｉｔｏｒ（ｅｃａｌｌａｎｔｉｄｅ）などのカリクレイン阻害剤；テラバンシンなどの抗生物質；キュビシンまたはＭＸ−２４０１リポペプチド；ゴセレリンなどの黄体ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）；Ｔｒｅｉｓｔａｒ（ｔｒｉｐｔｏｒｅｌｉｎ  ｐａｍｏａｔｅ）などのＬＨＲＨ合成デカペプチド作動剤；ＥｌｉｇａｒｄなどのＬＨＲＨ；Ｍ２タンパク質チャネルペプチド阻害剤；メトレレプチン；ブレマラノチド／ＰＴ−１４１などのメラノコルチン受容体作動剤ペプチド；メラノコルチン；Ｍｅｐａｃｔ（ミファムルチド）などのムラミルトリペプチド；ＭＢＰ８２９８（ジルコチド）などのミエリン塩基性ペプチド；ジコノチド（Ｐｒｉａｌｔ）などのＮ型電位開口型カルシウムチャネル遮断薬；副甲状腺ホルモンペプチド；７６８９７４などの副甲状腺類似体；ＵＧＰ２８１などのペプチドホルモン類似体；ＰＤＣ３１などのプロスタグランジンＦ２−α受容体阻害剤；ＰＰＬ−１００などのプロテアーゼ阻害剤；サーファクシン；ＣＶＸ−０４５またはＡＢＴ５１０トロンボスポンジン−１（ＴＳＰ−１）模倣物；血管作動性腸管ペプチド；バソプレシン；ＲＧ７０８９などのＹ２Ｒ作動剤ペプチド；オビネペプチド；およびＴＭ３０３３９が挙げられるが、これらに限定されない。  
【０１６５】
抗体に複合体化されたペイロードとしての薬物  本開示の抗体に複合体化されたペイロードは、任意の数の薬物であり得る。例示的な薬物は、小分子薬物およびペプチド薬物を含む。したがって、本開示は、薬物が、抗体のＩｇ軽鎖ポリペプチドの変換されたタグのｆＧｌｙに共有結合されている薬物−抗体複合体を提供する。  
【０１６６】
本明細書で使用される場合の「小分子薬物」は、化合物、例えば、有機化合物を指し、それは、対象の薬学的活性を示し、それが概して、約８００Ｄａ以下、または２０００Ｄａ以下の分子量であるが、最大５ｋＤａの分子を包含し得、約１０ｋＤａと同じ程度の大きさであり得る。小無機分子は、炭素原子を含まない分子を指すが、小有機分子は少なくとも１つの炭素原子を含む化合物を指す。  
【０１６７】
本明細書で使用される場合の「ペプチド薬物」は、ポリマー化合物を含むアミノ酸を指し、天然型および非天然型ペプチド、オリゴペプチド、環式ペプチド、およびタンパク質、ならびにペプチド模倣物を包含することを意図する。ペプチド薬物は、化学合成によって得られることができるか、または遺伝子的にコードされた供給源（例えば、組換え源）から生成され得る。ペプチド薬物は、分子量を範囲し得、２００Ｄａ〜１０ｋＤａまたはそれを超える分子量であり得る。  
【０１６８】
いくつかの場合において、薬物は、癌化学療法剤である。例えば、抗体が、腫瘍細胞に対する特異性を有する場合、抗体は、本明細書に説明されるようにアルデヒドタグを含むように修飾され得、ｆＧｌｙ修飾抗体に実質的に変換され得、次いで、癌化学療法剤に複合体化され得る。癌化学療法剤は、癌細胞の増殖を低減する非ペプチド性（すなわち、非タンパク質性）化合物を含み、細胞傷害性剤および細胞増殖抑制剤を包含する。化学療法剤の非限定的な例としては、アルキル化剤、ニトロソウレア、代謝拮抗物質、抗腫瘍抗生物質、植物（ビンカ）アルカロイド、またはステロイドホルモンが挙げられる。ペプチド性化合物もまたは使用され得る。  
【０１６９】
好適な癌化学療法剤は、ドラスタチンならびにその活性類似体および誘導体と、オーリスタチンならびにその活性類似体および誘導体とを含む。例えば、ＷＯ９６／３３２１２、ＷＯ９６／１４８５６、および米国特許第６，３２３，３１５号を参照されたい。例えば、ドラスタチン１０またはオーリスタチンＰＥは、本開示の抗体−薬物複合体に含まれ得る。好適な癌化学療法剤はまた、マイタンシノイドならびにその活性類似体および誘導体（例えば、ＥＰ１３９１２１３、およびＬｉｕ  ｅｔ  ａｌ（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９３：８６１８−８６２３を参照されたい）と、デュオカルマイシンならびにその活性類似体および誘導体（例えば、合成類似体、ＫＷ−２１８９、およびＣＢ１−ＴＭ１を含む）とを含む。いくつかの場合において、癌化学療法剤は、ピロロベンゾジアゼピン化合物を含む。  
【０１７０】
細胞増殖を低減するために作用する薬剤は、当該技術分野で既知であり、幅広く使用される。そのような薬剤としては、これらに限定されないが、メクロレタミン、シクロホスファミド（シトキサン（商標））、メルファラン（Ｌ−サルコリシン）、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、セムスチン（メチル−ＣＣＮＵ）、ストレプトゾシン、クロロゾトシン、ウラシルマスタード、クロルメチン、イホスファミド、クロラムブシル、ピポブロマン、トリエチレンメラミン、トリエチレンチオホスホラミン、ブスルファン、ダカルバジン、およびテモゾロミドを含む、ナイトロジェンマスタード、ニトロソウレア、エチレンイミン誘導体、アルキルスルホネート、およびトリアゼンなどのアルキル化剤が挙げられる。  
【０１７１】
代謝拮抗剤としては、これらに限定されないが、シタラビン（ＣＹＴＯＳＡＲ−Ｕ）、シトシンアラビノシド、フルオロウラシル（５−ＦＵ）、フロクスウリジン（ＦｕｄＲ）、６−チオグアニン、６−メルカプトプリン（６−ＭＰ）、ペントスタチン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、メトトレキサート、１０−プロパルギル−５，８−ジデアザフォレート（ＰＤＤＦ、ＣＢ３７１７）、５，８−ジデアザテトラヒドロ葉酸（ＤＤＡＴＨＦ）、ロイコボリン、リン酸フルダラビン、ペントスタチン、およびゲムシタビンを含む、葉酸類似体、ピリミジン類似体、プリン類似体、およびアデノシンデアミナーゼ阻害剤が挙げられる。  
【０１７２】
好適な天然生成物およびそれらの誘導体（例えば、ビンカアルカロイド、抗腫瘍抗生物質、酵素、リンホカイン、およびエピポドフィロトキシン）としては、Ａｒａ−Ｃ、パクリタキセル（タキソール（登録商標））、ドセタキセル（タキソテール（登録商標））、デオキシコホルマイシン、マイトマイシン−Ｃ、Ｌ−アスパラギナーゼ、アザチオプリン；ブレキナル；アルカロイド、例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンデシンなど；ポドフィロトキシン、例えば、エトポシド、テニポシドなど；抗生物質、例えば、アントラサイクリン、ダウノルビシン塩酸塩（ダウノマイシン、ルビドマイシン、セルビジン）、イダルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、およびモルホリノ誘導体など；フェノキシゾンビスシクロペプチド、例えば、クチノマイシン；塩基糖ペプチド、例えば、ブレオマイシン；アントラキノン配糖体、例えば、プリカマイシン（ミトラマイシン）；アントラセンジオン、例えば、ミトキサントロン；アジリノピロロインドールジオン、例えば、マイトマイシン；大環状免疫抑制剤、例えば、シクロスポリン、ＦＫ−５０６（タクロリムス、プログラフ）、ラパマイシンなどが挙げられるが、これらに限定されない。  
【０１７３】
他の抗増殖性細胞傷害性剤は、ナベルビン、ＣＰＴ−１１、アナストロゾール、レトロゾール、カペシタビン、ラロキサフェン、シクロホスファミド、イホスファミド、およびドロロキシフェンである。  
【０１７４】
抗増殖性活性を有する微小管作用剤はまた、使用するのに好適であり、これらに限定されないが、アロコルヒチン（ＮＳＣ  ４０６０４２）、ハリコンドリンＢ（ＮＳＣ  ６０９３９５）、コルヒチン（ＮＳＣ  ７５７）、コルヒチン誘導体（例えば、ＮＳＣ  ３３４１０）、ドラスタチン１０（ＮＳＣ  ３７６１２８）、メイタンシン（ＮＳＣ  １５３８５８）、リゾキシン（ＮＳＣ  ３３２５９８）、パクリタキセル（タキソール（登録商標））、タキソール（登録商標）誘導体、ドセタキセル（タキソテール（登録商標））、チオコルヒチン（ＮＳＣ  ３６１７９２）、トリチルシステイン、ビンブラスチンサルフェート、ビンクリスチンサルフェート、これらに限定されないが、エポチロンＡ、エポチロンＢ、ジスコデルモリドを含む天然および合成エポチロン；エストラムスチン、ノコダゾールなどが挙げられる。  
【０１７５】
使用するのに好適であるホルモン調節剤およびステロイド（合成類似体を含む）としては、これらに限定されないが、副腎皮質ステロイド、例えば、プレドニゾン、デキサメタゾンなど；エストロゲンおよびプレゲスチン、例えば、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、メドロキシプロゲステロンアセテート、メゲストロールアセテート、エストラジオール、クロミフェン、タモキシフェンなど；および副腎皮質抑制剤、例えば、アミノグルテチミド；１７α−エチニルエストラジオール；ジエチルスチルベストロール、テストステロン、フルオキシメステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、テストラクトン、メチルプレドニゾロン、メチル−テスト
ステロン、プレドニゾン、トリアムシノロン、クロロトリアニセン、ヒドロキシプロゲステロン、アミノグルテチミド、エストラムスチン、メドロキシプロゲステロンアセテート、ロイプロリド、フルタミド（ドロゲニル（Ｄｒｏｇｅｎｉｌ））、トレミフェン（フェアストン（Ｆａｒｅｓｔｏｎ））、およびゾラデックス（登録商標）が挙げられる。エストロゲンは増殖および分化を刺激し、それ故に、エストロゲン受容体に結合する化合物がこの活性を抑止するために使用される。副腎皮質ステロイドは、Ｔ細胞増殖を阻害し得る。  
【０１７６】
他の好適な化学療法剤としては、金属錯体、例えばシスプラチン（シス−ＤＤＰ）、カルボプラチンなど；尿素、例えばヒドロキシ尿素；およびヒドラジン、例えばＮ−メチルヒドラジン；エピドフィロトキシン；トポイソメラーゼ阻害剤；プロカルバジン；ミトキサントロン；ロイコボリン；テガフールなどが挙げられる。対象の他の抗増殖性剤としては、免疫抑制剤、例えば、ミコフェノール酸、サリドマイド、デオキシスペルグアリン、アザスポリン、レフルノミド、ミゾリビン、アザスピラン（ＳＫＦ  １０５６８５）；イレッサ（登録商標）（ＺＤ  １８３９、４−（３−クロロ−４−フルオロフェニルアミノ）−７−メトキシ−６−（３−（４−モルホリニル）プロポキシ）キナゾリン）などが挙げられる。  
【０１７７】
タキサンは、使用するのに好適である。「タキサン」は、パクリタキセル、ならびに任意の活性タキサン誘導体またはプロドラッグを含む。「パクリタキセル」（例えば、ドセタキセル、タキソール（登録商標）、タキソテール（登録商標）、パクリタキセルの１０−デスアセチル類似体、およびパクリタキセルの３’Ｎ−デスベンゾイル−３’Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル類似体などの類似体、製剤、および誘導体を含むことを本明細書で理解されるべきである）は、当業者に既知の技術を利用して容易に調製され得るか（ＷＯ９４／０７８８２、ＷＯ９４／０７８８１、ＷＯ９４／０７８８０、ＷＯ９４／０７８７６、ＷＯ９３／２３５５５、ＷＯ９３／１００７６、米国特許第５，２９４，６３７号、第５，２８３，２５３号、第５，２７９，９４９号、第５，２７４，１３７号、第５，２０２，４４８号、第５，２００，５３４号、第５，２２９，５２９号、およびＥＰ５９０，２６７もまた参照されたい）、または例えば、Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏを含む様々な市販の供給源から得ることができる（Ｔａｘｕｓ  ｂｒｅｖｉｆｏｌｉａからのＴ７４０２、またはＴａｘｕｓ  ｙａｎｎａｎｅｎｓｉｓからのＴ−１９１２）。  
【０１７８】
パクリタキセルは、一般の化学的に利用可能な形態のパクリタキセルのみではなく、類似体および誘導体（例えば、上記に記載されるようなタキソテール（登録商標）ドセタキセル）ならびにパクリタキセル複合体（例えば、パクリタキセル−ＰＥＧ，パクリタキセル−デキストラン、またはパクリタキセル−キシロース）も指すことを理解されるべきである。  
【０１７９】
親水性誘導体、および疎水性誘導体の両方を含む、様々な既知の誘導体もまた、用語「タキサン」の内に含まれる。タキサン誘導体としては、これらに限定されないが、国際特許出願第ＷＯ９９／１８１１３号に記載されているガラクトースおよびマンノース誘導体；ＷＯ９９／１４２０９に記載されているピペラジノおよび他の誘導体；ＷＯ９９／０９０２１、ＷＯ９８／２２４５１、および米国特許第５，８６９，６８０号に記載されているタキサン誘導体；ＷＯ９８／２８２８８６に記載されている６−チオ誘導体；米国特許第５，８２１，２６３号に記載されているスルフェンアミド誘導体；および米国特許第５，４１５，８６９号に記載されているタキソール誘導体が挙げられる。それは、これらに限定されないが、ＷＯ９８／５８９２７、ＷＯ９８／１３０５９、および米国特許第５，８２４，７０１号に記載されているものを含む、パクリタキセルのプロドラッグもさらに含む。  
【０１８０】
使用するのに好適な生物学的反応修飾剤としては、これらに限定されないが、（１）チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）活性の阻害剤；（２）セリン／トレオニンキナーゼ活性の阻害剤；（３）腫瘍抗原に特異的に結合する抗体などの腫瘍関連抗原拮抗剤；（４）アポトーシス受容体作動剤；（５）インターロイキン−２；（６）ＩＦＮ−α；（７）ＩＦＮ−γ；（８）コロニー刺激因子；および（９）血管新生の阻害剤が挙げられる。  
【０１８１】
製剤  本開示の抗体複合体は、様々な異なる方法で調製され得る。概して、抗体複合体が抗体−薬物複合体である場合、抗体複合体はＩｇポリペプチド（例えば、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド）に複合体化された薬物、処置される条件、および使用される投与の経路と適合性のある様式で調製される。  
【０１８２】
抗体複合体（例えば、抗体−薬物複合体）は、任意の好適な形態、例えば、薬学的に許容される塩の形態で提供され得、投与の任意の好適な経路、例えば、経口、局所、または非経口のために調製され得る。抗体複合体が注射可能な液体（それらが静脈内または直接的に組織に投与されるそれらの実施形態においてなど）として提供される場合、抗体複合体は、すぐに使用できる剤形として、または再構成可能な貯蔵安定性粉末もしくは薬学的に許容される担体および賦形剤からなる液体として提供され得る。  
【０１８３】
抗体複合体を調製する方法は、当該技術分野で利用可能なものから適応され得る。例えば、抗体複合体は、抗体複合体および薬学的に許容される担体（例えば、サリン）の有効量を含む薬学的組成物中に提供され得る。薬学的組成物は、任意に、他の添加剤（例えば、緩衝剤、安定剤、防腐剤など）を含み得る。いくつかの実施形態において、特に対象のものは、哺乳動物、特にヒトへの投与に好適なものへの投与に好適な製剤である。  
【０１８４】
核酸、発現ベクター、および宿主細胞  本開示は、タグを含むＩｇ軽鎖ポリペプチドをコードする核酸、ならびに核酸を含む構築物および宿主細胞を提供する。そのような核酸は、タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチドをコードし、ほとんどの実施形態において適切な条件下で、発現されることができるオープンリーディングフレームを有するＤＮＡの配列を含む。「核酸」は、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、およびそのような核酸を含むベクターを包含する。  
【０１８５】
本開示は、上記に説明されるように、タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む組換え核酸を提供する。組換え核酸は、  
【０１８６】
１）タグ付きＩｇ軽鎖定常領域（Ｉｇ軽鎖可変領域ではない、すなわち、組換え核酸がＩｇＶＬドメインをコードするヌクレオチド配列を欠乏している領域）をコードするヌクレオチド配列と、  
【０１８７】
２）ＩｇポリペプチドがＩｇＶＬドメインおよびタグ付きＩｇ軽鎖定常領域を含むタグ付きＩｇポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と、  
【０１８８】
３）Ｉｇ重鎖定常領域（Ｉｇ重鎖可変領域ではない、すなわち、組換え核酸がＩｇＶＨドメインをコードするヌクレオチド配列を欠乏している領域）をコードするヌクレオチド配列、およびタグ付きＩｇ軽鎖定常領域（Ｉｇ軽鎖可変領域ではない、すなわち、組換え核酸がＩｇＶＬドメインをコードするヌクレオチド配列を欠乏している領域）をコードするヌクレオチド配列と、  
【０１８９】
４）上記に説明されるように、タグ付きＩｇ重鎖定常領域（Ｉｇ重鎖可変領域ではない、すなわち、組換え核酸がＩｇＶＨドメインをコードするヌクレオチド配列を欠乏している領域）をコードするヌクレオチド配列、およびタグ付きＩｇ軽鎖定常領域（Ｉｇ軽鎖可変領域ではない、すなわち、組換え核酸がＩｇＶＬドメインをコードするヌクレオチド配列を欠乏している領域）をコードするヌクレオチド配列と、  
【０１９０】
５）第１のアルデヒドタグ付きＩｇポリペプチドが、ＩｇＶＨドメインおよびタグ付きＩｇ重鎖定常領域を含む第１のタグ付きＩｇポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、および第２のタグ付きＩｇポリペプチドがＩｇＶＬドメインおよびタグ付きＩｇ軽鎖定常領域を含む第２のアルデヒドタグ付きＩｇポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と、  
【０１９１】
６）第１のＩｇポリペプチドが、ＩｇＶＨドメインおよびＩｇ重鎖定常領域を含む第１のＩｇポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、および第２のＩｇポリペプチドがタグを含み、第２のＩｇポリペプチドがタグを含み、第２のＩｇポリペプチドがＩｇＶＬドメインおよびタグ付きＩｇ軽鎖定常領域を含む第２のＩｇポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と、を含み得る。  
【０１９２】
本開示は、Ｉｇポリペプチドをコードするヌクレオチド配列がプロモーターに操作可能に結合されている上記に説明されるような核酸を含む組換え発現ベクターを提供する。いくつかの実施形態において、主題の組換え発現ベクターがＩｇ重鎖および軽鎖（Ｉｇ可変領域ありまたはなしで）の両方をコードする場合、重鎖および軽鎖コード配列は、同じプロモーターに操作可能に結合されるか、またはプロモーターを分離する。  
【０１９３】
組換え発現ベクターが、重鎖可変（ＶＨ）領域および／または軽鎖可変（ＶＬ）領域をコードするヌクレオチド配列を含む場合、大きな数のＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、およびそれをコードするヌクレオチド配列が、当該技術分野で既知であり、使用され得ることが理解されよう。例えば、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）を参照されたい。  
【０１９４】
組換え発現ベクターが可変領域配列なしでＩｇ重鎖またはＩｇ軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含むそれらの例において、ベクターは、Ｉｇポリペプチドコードヌクレオチド配列のＩｇ可変領域５’への挿入部位を含み得る。例えば、組換え発現ベクターは、５’〜３’の順番で、  
【０１９５】
１）ＶＬドメインをコードするヌクレオチド配列への挿入部位；および、タグ付きＩｇ軽鎖定常領域をコードするヌクレオチド配列；または  
【０１９６】
２）ＶＨドメインをコードするヌクレオチド配列への挿入部位；および、タグを含んでも含まなくてもよいＩｇ重鎖定常領域をコードするヌクレオチド配列を含み得る。  
【０１９７】
本明細書で考慮される核酸は、ベクターの一部として提供され得、幅広い様々なベクターが当該技術分野で既知である。例示的なベクターとして、これらに限定されないが、プラスミド、コスミド、ウイルスベクター（例えば、レトロウイルスベクター）、非ウイルスベクター、人工染色体（酵母人工染色体（ＹＡＣ）、ＢＡＣなど）、ミニ染色体などが挙げられる。ベクターの選択は、伝播が望ましい細胞の型および伝播の目的などの様々な因子に依存するであろう。  
【０１９８】
ベクターは、宿主細胞内で染色体外維持を提供し得るか、または宿主細胞ゲノム内に組込みを提供し得る。ベクターは、例えば、Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，（１９９９）Ｆ．Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓを含む、当業者に周知の多数の出版物に十分に記載されている。ベクターは、対象のポリペプチド（例えば、タグ付きポリペプチド、ＦＧＥなど）をコードする核酸の発現を提供し得るか、主題の核酸の伝播を提供するか、またはその両方である。  
【０１９９】
使用され得る例示的なベクターとしては、これらに限定されないが、組換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、またはコスミドＤＮＡに由来するものが挙げられる。例えば、ｐＢＲ３２２、ｐＵＣ  １９／１８、ｐＵＣ  １１８、１１９、およびＭ１３ｍｐ系列のベクターなどのプ
ラスミドベクターが使用され得る。バクテリオファージベクターは、λｇｔ１０、λｇｔ１１、λｇｔ１８〜２３、λＺＡＰ／Ｒ、およびＥＭＢＬ系列のバクテリオファージベクターを含み得る。利用され得るコスミドベクターとしては、これらに限定されないが、ｐＪＢ８、ｐＣＶ  １０３、ｐＣＶ  １０７、ｐＣＶ  １０８、ｐＴＭ、ｐＭＣＳ、ｐＮＮＬ、ｐＨＳＧ２７４、ＣＯＳ２０２、ＣＯＳ２０３、ｐＷＥ１５、ｐＷＥ１６、およびｃｈａｒｏｍｉｄ９系列のベクターが挙げられる。代替的には、組換えウイルスベクターは操作され得、これらに限定されないが、ヘルペスウイルス、レトロウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス、またはウシパピローマウイルスなどのウイルスに由来するものを含む。  
【０２００】
対象のタンパク質（例えば、タグ付きＩｇポリペプチドまたはＦＧＥ）の発現には、発現カセットが用いられ得る。したがって、本発明は、主題の核酸を含む組換え発現ベクターを提供する。発現ベクターは、転写調節配列および翻訳調節配列を提供し、誘導性または構成的な発現を提供し得、コード領域が、転写開始領域の転写制御、ならびに転写終端領域および翻訳終端領域下で操作可能に結合される。これらの制御領域は、ポリペプチド（例えば、ＩｇポリペプチドまたはＦＧＥ）をコードする遺伝子に対して天然であり得るか、または外因的供給源に由来し得る。概して、転写調節配列および翻訳調節配列は、これらに限定されないが、プロモーター配列、リボソーム結合部位、転写開始および停止配列、翻訳開始および停止配列、およびエンハンサーまたは活性化配列を含み得る。構成的および誘導性プロモーターに加えて、強力なプロモーター（例えば、Ｔ７、ＣＭＶなど）は、特に高発現レベルがインビボ（細胞に基づく）またはインビトロ発現系中で望ましい、本明細書で説明される構築物における使用を見出す。さらなる例示的なプロモーターとしては、マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）プロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーター、アデノウイルスプロモーター、ヒトＣＭＶ（Ｂｏｓｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ４１：５２１−５３０，１９８５）の最初期遺伝子からのプロモーター、およびＲＳＶ（Ｇｏｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７９：６７７７−６７８１，１９８２）の長い末端反復（ＬＴＲ）からのプロモーターが挙げられる。プロモーターはまた、例えば、５’ＵＴＲのレトロウイルスによって提供され得る。  
【０２０１】
発現ベクターは概して、プロモーター配列の近くに位置する好都合な制限部位を有し、対象のタンパク質をコードする核酸配列の挿入を提供する。発現宿主内で操作性の選択可能なマーカーは、ベクターを含む細胞の選択を容易にするために存在し得る。加えて、発現構築物は、追加の要素を含み得る。例えば、発現ベクターは、１つまたは２つの複製系を有し得、したがって、それが有機体中で、例えば、発現のための哺乳動物または昆虫細胞内ならびにクローニングおよび増幅のための原核宿主中で、持されることを可能にする。加えて、発現構築物は、転換された宿主細胞の選択を可能にするために選択可能なマーカー遺伝子を含み得る。選択遺伝子は、当該技術分野で周知であり、使用される宿主細胞と共に変化するであろう。  
【０２０２】
タグ付きＩｇポリペプチドをコードする発現構築物はまた、増幅方法（例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ））を使用して生成され得、少なくとも１つの増幅プライマー（すなわち、フォワードプライマーまたはリバースプライマーのうちの少なくとも１つ）が、アルデヒドタグをコードする核酸配列を含む。例えば、タグアミノ酸配列コードヌクレオチド配列を有する増幅プライマーは、Ｉｇポリペプチドをコードする核酸の増幅を提供するように設計される。タグ付きフォワードプライマーからのポリメラーゼ媒体合成から得られる拡張生成物は、タグ付きＩｇポリペプチドからなる融合タンパク質をコードする核酸増幅生成物を生成する。次いで、増幅生成物は、タグ付きポリペプチド発現構築物を提供するために選択の発現構築物に挿入される。  
【０２０３】
宿主細胞  本開示は、上記に説明されるように組換え発現ベクターを含む遺伝子修飾された宿主細胞を含む、主題の核酸を含む遺伝子修飾された宿主細胞を提供する。多くの好適な宿主細胞は、本タグ付きＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む抗体の産生において使用され得る。タグ付きＩｇポリペプチドを含む抗体の産生に使用される宿主細胞は、任意に、ＦＧＥ媒体変換を提供し得、そうすることによって産生される抗体がｆＧｌｙ修飾Ｉｇポリペプチドを含み、タグが、ｆＧｌｙを含むように変換され、ＦＧＥによる発現および修飾が後に続く。代替的に、宿主細胞は、タグ付きおよび変換されていないＩｇ軽鎖ポリペプチドを含む抗体の産生を提供し得る（例えば、タグの変換を容易にするＦＧＥの発現の欠乏に起因する）。  
【０２０４】
変換されたタグのアルデヒド部分は、これらに限定されないが、蛍光またはエピトープ標識を使用した可視化（例えば、アルデヒド反応性基を伴う金粒子を使用した電子顕微鏡法）；タンパク質固定化（例えば、タンパク質マイクロアレイ生成）；タンパク質動力学および局在化研究ならびに用途；およびペイロード（例えば、親タンパク質の半減期（例えば、ポリ（エチレングリコール））、標的部分（例えば、作用の部位への送達を高めるため）、および生物学的活性部分（例えば、治療的部分）とのタンパク質の複合体化を含む様々な用途に使用され得る。  
【０２０５】
概して、本明細書に説明されるポリペプチドは、発現の目的に応じて、従来の方法に従って原核生物または真核生物中で発現され得る。したがって、本発明は、宿主細胞、例えば、タグ付きポリペプチドをコードする核酸を含む遺伝子修飾された宿主細胞、さらに提供する。宿主細胞は、組換えＦＧＥさらに任意に含み、それは、宿主細胞に対して内因性または異種性であり得る。したがって、いくつかの場合において、宿主細胞は、ＦＧＥを発現するように遺伝子修飾される。  
【０２０６】
タグ付きおよび変換されていない、もしくは（宿主細胞が好適なＦＧＥを発現する）タグ付きおよび変換されたＩｇポリペプチドの生成（大規模生成を含む）、またはＦＧＥ（例えば、無細胞方法での使用への）の生成のための宿主細胞は、様々な利用可能な宿主細胞のうちのいずれかから選択され得る。例示的な宿主細胞は、細菌（例えば、大腸菌株、バチルス属菌種（例えば、バチルス・サブチリス）など）酵母菌または菌類（例えば、サッカロマイセス・セレヴィシエ、ピキア属菌種など）などの原核または真核の単細胞生物のものを含み、他のそのような宿主細胞が使用され得る。昆虫、脊椎動物、特に哺乳動物（例えば、ＣＨＯ、ＨＥＫなど）などの高等生物にもともと由来する例示的な宿主細胞は、発現宿主細胞として使用され得る。  
【０２０７】
好適な哺乳動物細胞系としては、これらに限定されないが、ＨｅＬａ細胞（例えば、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ））番号ＣＣＬ−２）、ＣＨＯ細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ９６１８およびＣＲＬ９０９６）、ＣＨＯ  ＤＧ４４細胞（Ｕｒｌａｕｂ（１９８３）Ｃｅｌｌ３３：４０５）、ＣＨＯ−Ｋ１細胞（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−６１）、２９３細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−１５７３）、Ｖｅｒｏ細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−１６５８）、Ｈｕｈ−７細胞、ＢＨＫ細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ１０）、ＰＣ１２細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１７２１）、ＣＯＳ細胞、ＣＯＳ−７細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１６５１）、ＲＡＴ１細胞、マウスＬ細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬＩ．３）、ヒト胚性腎臓（ＨＥＫ）細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１５７３）、ＨＬＨｅｐＧ２細胞などが挙げられる。  
【０２０８】
対象の特異的発現系は、発現系に由来する細菌、酵母菌、昆虫の細胞および哺乳動物細胞を含む。これらの部類の各々からの代表的な系は、以下に提供される。  
【０２０９】
生成物は、当該技術分野で既知の任意の適切な手段によって回収され得る。さらに、任意の好都合なタンパク質精製手順が用いられ得、好適なタンパク質精製方法論がＧｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，（Ｄｅｕｔｈｓｅｒ  ｅｄ．）（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９９０）に記載されている。例えば、ライセートは、タグ付きＩｇポリペプチドを発現する発現ベクターを含む細胞から調製され得、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、排除クロマトグラフィー、ゲル電気泳動法、アフィニティークロマトグラフィーなどを使用して精製され得る。  
【０２１０】
方法タグの変換および修飾の方法  抗体のタグ付きＩｇポリペプチドを中に存在するタグの変換、例えば、タグ中のスルファターゼモチーフは、細胞に基づく（インビボ）または無細胞の方法（インビトロ）によって達成され得る。同様に、タグ付きポリペプチドの変換されたタグの修飾は、細胞に基づく（インビボ）または無細胞の方法（インビトロ）によって達成され得る。これらは、以下により詳細に説明される。  
【０２１１】
「インビボ」宿主細胞変換および修飾  抗体のアルデヒドタグ付きポリペプチドのタグの変換、例えば、タグ中のスルファターゼモチーフは、好適なＦＧＥを含む細胞中のタグ付きポリペプチドの発現によって達成され得る。この実施形態において、タグのシステインまたはセリンの変換は、宿主細胞中の翻訳中またはその後に生じる。宿主細胞のＦＧＥは、宿主細胞に対して内因性であり得るか、または宿主細胞は、宿主細胞に対して異種性である好適なＦＧＥへの組換え体であり得る。ＦＧＥ発現は、ＦＧＥ遺伝子に対して内因性の発現系によって提供され得る（例えば、発現は、プロモーターおよび宿主細胞の天然ＦＧＥ遺伝子中に存在する他の制御要素によって提供される）か、またはＦＧＥコード配列が、構成的または誘導性発現を提供するように異種性プロモーターに操作可能に結合されている組換え発現系からによって提供され得る。  
【０２１２】
反応性パートナー部分のタグ付きポリペプチドへの複合体化を達成するための使用に好適な条件は、Ｍａｈａｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７Ｍａｙ１６）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７６（５３１５）：１１２５−８に記載されているものに類似している。  
【０２１３】
いくつかの例において、本本法は、細胞中で実施され、細胞はインビトロ、例えば、インビトロ細胞培養、例えば、細胞が単細胞懸濁液中でインビトロでまたは付着性細胞として培養される。いくつかの実施形態において、細胞は、ＦＧＥを活性化し得る酸化試薬の存在下で培養される。いくつかの実施形態において、ＦＧＥを発現する細胞は、培地で好適な量のＣｕ２＋の存在下で培養される。特定の態様において、Ｃｕ２＋は、０．１μＭ〜１０ｍＭ、１μＭ〜１ｍＭ、２μＭ〜５００μＭ、４μＭ〜３００μＭ、または５μＭ〜２００μＭ（例えば、１０μＭ〜１５０μＭ）などの１ｎＭ〜１００ｍＭの濃度で細胞培地に存在する。培地は、Ｃｕ２＋を提供するように任意の好適な銅塩が補充され得る。好適な銅塩としては、これらに限定されないが、硫酸銅（すなわち、硫酸銅（ＩＩ）、ＣｕＳＯ４）、クエン酸銅、酒石酸銅、硝酸銅、およびそれらの任意の組み合わせが挙げられる。  
【０２１４】
「インビトロ」（無細胞）変換および修飾  抗体のタグ付きポリペプチドのタグのインビトロ（無細胞）変換、例えば、タグ中のスルファターゼモチーフは、タグのスルファターゼモチーフのシステインまたはセリンのｆＧｌｙへの変換に好適な条件下でタグ付きポリペプチドをＦＧＥと接触させることによって達成され得る。例えば、タグ付きポリペプチドをコードする核酸は、タグ付きおよび変換されたＩｇポリペプチドの生成を提供するために好適なＦＧＥの存在下でインビトロ転写／翻訳系中で発現され得る。  
【０２１５】
代替的には、単離された、変換されていない、タグ付きＩｇポ
リペプチドは、単離され得、好適なＦＧＥを欠乏する宿主細胞中でまたは合成生成中で組換え生成が後に続く。次いで、単離されたタグ付きＩｇポリペプチドは、タグ変換を提供するための条件下で好適なＦＧＥと接触される。タグ付きＩｇポリペプチドは、当該技術分野で既知の方法（例えば、熱、ｐＨの調製、カオトロピック剤（例えば、尿素など）、有機溶媒（例えば、炭化水素：オクタン、ベンゼン、クロロホルム）の使用など）および好適なＦＧＥと接触されている変性タンパク質によって折り畳まれていない状態であり得る。次いで、タグ付きＩｇポリペプチドは、好適な条件下で再折り畳みされ得る。  
【０２１６】
抗体のタグ付きおよび変換されたＩｇポリペプチドの修飾に関して、例えば、ペイロード（例えば、薬物）をそこに部位特異的に共有結合するために、修飾は通常、インビトロで実施される。変換されたアルデヒドタグ付きＩｇポリペプチドを含む抗体は、生成供給源（例えば、組換え宿主細胞生成、合成生成）から単離されており、抗体のＩｇポリペプチド、例えば、Ｉｇ軽鎖ポリペプチド中のタグのｆＧｌｙへの薬物または他の部分の複合体化を提供するために好適な条件下で、反応性パートナー含有薬物または他の部分と接触されている。  
【０２１７】
いくつかの例において、細胞に基づく変換および無細胞変換の組み合わせは、変換されたタグを生成するために実施され、その後、変換されたタグの無細胞修飾が続く。いくつかの例において、無細胞変換および細胞に基づく変換の組み合わせが実施される。  
【０２１８】
抗体複合体を産生する方法  本開示の態様は、本明細書に説明されるように、抗体複合体を産生する方法を含む。一般論として、方法は、反応混合物中で、上記に説明されるように、抗体がＩｇ軽鎖ポリペプチド中の変換されたタグを有するｆＧｌｙ修飾抗体と、反応性パートナー、例えば、ペイロード（例えば、薬物）およびアルデヒド反応性基を含むアルデヒド反応性反応性パートナーとを組み合わせることを含み得る。いくつかの場合において、反応性パートナーは、式、Ｐ−（Ｌ）−Ｒによって表され得、式中、Ｐは、任意の結合基を通してＲ、アルデヒド反応性基に共有結合しているペイロードである。好適な条件下で、アルデヒド反応性基は、反応混合物中でｆＧｌｙ修飾抗体（「Ａ」）の変換されたタグ中のｆＧｌｙのアルデヒド基と反応し得、ペイロード（例えば、薬物）と変換されたタグ（抗体のＩｇポリペプチドの各々に存在するタグの数に応じて、式、Ｐ−（Ｌ）−Ａ、またはＰ−（Ｌ）−Ａ−（Ｌ）−Ｐによって表され得る）のｆＧｌｙ残基でｆＧｌｙ修飾抗体との間に共有結合を形成する。反応は、例えば、ＵＳ２０１２／０１８３５６６、ＵＳ２０１４／０１４１０２５、およびＷＯ２０１４／０７４２１８に記載されているものなどの任意の好適な条件で実施され得、それらの各々は、参照によって本明細書に組み込まれる。  
【０２１９】
ペイロード（Ｐ）は、上記に記載されているような任意の好適な部分（例えば、薬物、水溶性ポリマー、検出可能な標識、合成ペプチドなど）であり得、アルデヒド反応性基と機能化され得る化合物であり得る。アルデヒド反応性基と（Ｒ）は、本ｆＧｌｙ修飾抗体と反応性パートナーとの間で複合体化反応を実施するのに好適な任意の好適な官能基であり得る。いくつかの場合において、アルデヒド反応性基は、アミノオキシまたはヒドラジン基などのα−求核剤である。好適なアルデヒド反応性基としては、限定することなく、ヒドラジン化合物、ヒドラジド化合物、アミノオキシ化合物、セミカルバジド（例えば、チオセミカルバジド）化合物、ヒドラジニル−インドール化合物、ヒドラジニル−イミダゾール化合物、ヒドラジニル−ピロール化合物、ヒドラジニル−フラン化合物、およびピラザリノン化合物が挙げられる。  
【０２２０】
いくつかの実施形態において、反応性パートナーは、ヒドラジニル−インドール基に基づくアルデヒド反応性基（Ｒ）に結合されたペイロード（Ｐ）（例えば、薬物）を含み、任意の好適な方法、例えば、ＵＳ２０１４／０１４１０２５に記載されているような方法を使用して生成され得、それは参照によって本明細書に組み込まれる。ヒドラジニル−インドール含有反応性パートナーは、本明細書に説明されるようにｆＧｌｙ修飾抗体中で変換されたタグ中のｆＧｌｙのアルデヒドと反応し得、ヒドラジニル−インドール連結部分のヒドラジンが、分子内環化を経て部分的不飽和ピラゾールまたはピラリジン環を形成し、ペイロード（例えば、薬物）を抗体Ｉｇ軽鎖ポリペプチドに共有結合する。代替的には、ヒドラジニル−インドール連結部分のヒドラジンは、分子内環化を経て、部分的不飽和ピリダジンまたは１，２−ジアゼピン環を形成し、ペイロード（例えば、薬物）を抗体Ｉｇ軽鎖ポリペプチドに共有結合し得る。  
【０２２１】
いくつかの場合において、反応性パートナーは、ピラザリノン基に基づくアルデヒド反応性基（Ｒ）に結合されたペイロード（Ｐ）（例えば、薬物）を含み、任意の好適な方法、例えば、ＷＯ２０１４／０７４２１８に記載されているような方法を使用して生成され得、それは参照によって本明細書に組み込まれる。ピラザリノン含有反応性パートナーは、本明細書に説明されるようにｆＧｌｙ修飾抗体中で変換されたタグ中のｆＧｌｙのアルデヒドと反応し得、環式結合を通して反応性パートナーのペイロード（例えば、薬物）を抗体Ｉｇ軽鎖ポリペプチドに共有結合する。  
【０２２２】
いくつかの場合において、反応性パートナーは、環中の１つ以上の原子がヘテロ原子（例えば、Ｎ、Ｏ、またはＳ）であるヒドラジニル置換５員ヘテロアリール環化合物などの、ヒドラジン置換ヘテロアリール環化合物に基づくアルデヒド反応性基（Ｒ）に結合されたペイロード（Ｐ）（例えば、薬物）を含む。ヒドラジニル置換ヘテロアリール環化合物は、ヒドラジニル−イミダゾール化合物、ヒドラジニル−ピロール化合物、またはヒドラジニル−フラン化合物を含み得る。したがって、ヒドラジニル置換ヘテロアリール環化合物（例えば、ヒドラジニル−イミダゾール化合物、ヒドラジニル−ピロール化合物、ヒドラジニル−フラン化合物）は、本明細書に説明されるようにｆＧｌｙ修飾抗体中で変換されたタグ中のｆＧｌｙのアルデヒドと反応し得、環式結合を通してペイロード（例えば、薬物）を抗体Ｉｇ軽鎖ポリペプチドに共有結合する。  
【０２２３】
反応性パートナーは、共有結合を通してペイロード（Ｐ）（例えば、薬物）およびアルデヒド反応性基（Ｒ）を架橋する結合基（Ｌ）をさらに含み得る。結合基は、任意の好適な結合基であり得る。いくつかの場合において、結合基としては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）；アミノ酸；置換されたアルキル基を含む、アルキル基；プロテアーゼ切断可能基；エステル；置換されたアシルオキシ基を含む、アシルオキシ基などが挙げられる。好適な結合基ならびにペイロード（例えば、薬物）およびアルデヒド反応性基を架橋するためにそれを使用する方法は、例えば、ＵＳ２０１５／０１５７７３６に記載されており、それは本明細書において参照によって組み込まれる。いくつかの実施形態において、結合基は、４−アミノピペリジン（４ＡＰ）誘導体を含む。  
【０２２４】
いくつかの場合において、ペイロードは、薬物、例えば、ペプチド薬物である。いくつかの場合において、ｆＧｌｙ修飾抗体のタグ付きおよび変換されたＩｇポリペプチドに複合体化されるペプチド薬物は、タグ付きおよび変換されたＩｇポリペプチドのｆＧｌｙ残基のアルデヒドとの反応へのアルデヒド反応性基を組み込むように修飾され得る。タグ付きおよび変換されたポリペプチド修飾の方法が、従来の化学的プロセスと適合性があるため、幅広い様々な市販の試薬のいずれかが複合体化を達成するために使用され得る。例えば、対象の部分の数のアミノオキシ、ヒドラジド、ヒドラジン、チオセミカルバジド、ヒドラジニル−インドール、ヒドラジニル−イミダゾール、ヒドラジニル−ピロール、ヒドラジニル−フラン、またはピラザリノン誘導体は、好適な反応性パートナーであり、容易に利用可能であるか、または標準化学的方法を使用して生成され得る。  
【０２２５】
薬物が、ペプチド薬物である場合、反応性部分（例えば、アミノオキシまたはヒドラジドは、Ｎ末端領域、Ｎ終末、Ｃ末端領域、Ｃ終末で、またはペプチドに対して内部の位置で位置付けられ得る。例えば、１つ方法は、アミノオキシ基を有するペプチド薬物を合成することを伴う。この例において、ペプチドは、Ｂｏｃ保護前駆体から合成される。ペプチドのアミノ基は、カルボン酸基およびオキシ−Ｎ−Ｂｏｃ基を含む化合物と反応し得る。例として、ペプチドのアミノ基は、３−（２，５−ジオキソピロリジン−１−イルオキシ）プロパン酸と反応する。カルボン酸基およびオキシ−Ｎ−保護基を含む化合物上の他の変化は、アルキレンリンカーおよびアルキレンリンカー上の置換基中に異なる数の炭素を含み得る。ペプチドのアミノ基とカルボン酸基およびオキシ−Ｎ−保護基を含む化合物との間の反応は、標準ペプチド連結化学を通して生じる。使用され得るペプチド連結試薬の例としては、これらに限定されないが、ＤＣＣ（ジシクロヘキシルカルボジイミド）、ＤＩＣ（ジイソプロピルカルボジイミド）、ジ−ｐ−トルオイルカルボジイミド、ＢＤＰ（１−ベンゾトリアゾールジエチルホスフェート−１−シクロヘキシル−３−（２−モルフォリニルエチル）カルボジイミド）、ＥＤＣ（１−（３−ジメチルアミノプロピル−３−エチル−カルボジイミド塩酸塩）、フッ化シアヌル、塩化シアヌル、ＴＦＦＨ（テトラメチルフルオロホルムアミジニウムヘキサフルオロホスフェート）、ＤＰＰＡ（ジフェニルホスホルアジデート）、ＢＯＰ（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート）、ＨＢＴＵ（Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート）、ＴＢＴＵ（Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−ｙｌ−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボラート）、ＴＳＴＵ（Ｏ−（Ｎ−スクシンイミジル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボラート）、ＨＡＴＵ（Ｎ−［（ジメチルアミノ）−１−Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５，６］−ピリジン−１−イルメチレン］−Ｎ−メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ−オキシド）、ＢＯＰ−Ｃｌ（ビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィン酸クロリド）、ＰｙＢＯＰ（（１−Ｈ−１，２，３−ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）−トリス（ピロリジノ）ホスホニウムテトラフルオロホスフェート）、ＢｒＯＰ（ブロモトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート）、ＤＥＰＢＴ（３−（ジエトキシホスホリルオキシ）−１，２，３−ベンゾトリアジン−４（３Ｈ）−オン）ＰｙＢｒＯＰ（ブロモトリス（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート）が挙げられる。非限定的な例として、ＨＯＢｔおよびＤＩＣは、ペプチド連結試薬として使用され得る。  
【０２２６】
アミノオキシ機能性を曝露するための脱保護は、Ｎ保護基を含むペプチド上で行われる。Ｎ−オキシスクシンイミド基の脱保護は、例えば、環式アミノ基の標準脱保護条件に従って生じる。脱保護条件は、Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３ｒｄ  Ｅｄ．，１９９９，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ  ａｎｄ  Ｈａｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌに見出され得る。特定の脱保護条件は、ヒドラジン試薬、アミノ試薬、または水素化ホウ素ナトリウムを含む。Ｂｏｃ保護基の脱保護は、ＴＦＡと共に生じる。脱保護の他の試薬としては、これらに限定されないが、ヒドラジン、メチルヒドラジン、フェニルヒドラジン、水素化ホウ素ナトリウム、およびメチルアミンが挙げられる。生成物および中間体は、ＨＰＬＣ精製などの従来の手段によって精製され得る。  
【０２２７】
当業者は、ｐＨ及立体障害（すなわち、対象の反
応性パートナーと反応するためのアルデヒドタグの接触性）などの因子が重要であることを理解するであろう。最適な複合体化条件を提供するための修飾反応条件は、当業者内で良好であり、当該技術分野で慣例である。概して、約５．５、約６、最適である通常約５．５のｐＨで、７未満のｐＨで複合体化反応を行うことが通常望ましい。複合体化が、生細胞内または生細胞上に存在するタグ付きおよび変換されたポリペプチドで行われる場合、条件は、生理学的に適合性となるように選択される。例えば、ｐＨは、生じる反応を見込むのに十分な時間の間、一次的に低下され得るが、アルデヒドタグを有する細胞によって耐容される期間内（例えば、約３０分〜１時間）ではない。細胞表面上でタグ付きおよび変換されたポリペプチドの修飾を行うための生理学的条件は、細胞表面アジドを保有する細胞の修飾中のケトン−アジド反応において使用されるものに類似し得る（例えば、ＵＳ６，５７０，０４０を参照されたい）。  
【０２２８】
変換されたタグのｆＧｌｙのアルデヒドと共に反応性パートナーとして役立つα−求核性基を含むか、または含むように修飾されている小分子化合物はまた、本開示のＩｇ−薬物複合体中の薬物としての使用へ考慮される。一般的な方法は、化学的合成スキームおよび対象の化合物を合成するのに有用な条件で当該技術分野で既知である（例えば、Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｍａｒｃｈ，Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，２００１、またはＶｏｇｅｌ，Ａ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  Ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｆｏｕｒｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｌｏｎｇｍａｎ，１９７８を参照されたい）。  
【０２２９】
したがって、タグ付きおよび変換されたＩｇポリペプチドのｆＧｌｙのアルデヒドとの反応へのアミノオキシまたはヒドラゾン基を有する小分子は、利用可能であるか、または容易に合成され得る。アミノオキシまたはヒドラゾン基は、標準合成化学技術を使用して小分子に導入される。  
【０２３０】
個体を治療する方法  本開示の抗体−薬物複合体は、親薬物（すなわち、抗体への複合体化の前の薬物）の投与による治療を受けることが可能な対象の状態または疾患の治療において使用を見出す。「治療」は、宿主を悩ませる状態に関連する症状の少なくとも改善が達成されることを意味し、改善が、パラメータの大きさ、例えば、治療されている状態と関連する症状の少なくとも低減を指すために広義で使用される。したがって、病的状態、またはそれと関連する少なくとも症状が、状態、または状態を特徴付ける少なくとも症状を患わないよう宿主が完全に阻害され、例えば、発生を予防、または停止、例えば、終了する治療はまた、状況を含む。したがって、治療は、（ｉ）予防、すなわち、例えば、有害な状態への疾患進行を予防する臨床症状を引き起こすことを含む、臨床症状の発現の危険性を低減すること、（ｉｉ）阻害、すなわち、臨床症状の発現またはさらなる発現を阻止すること、例えば、活性疾患を緩和または完全に阻害すること、および／または（ｉｉｉ）軽減、すなわち、臨床症状の退縮を引き起こすことを含む。  
【０２３１】
癌の文脈において、用語「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、固形腫瘍の成長を低減すること、癌細胞の複製を阻害すること、全体的腫瘍量を低減すること、および癌に関連する１つ以上の症状を改善することのうちのいずれかまたは全てを含む。したがって、本開示は、癌を有する個体に癌化学療法剤を送達するための方法を提供する。方法は、癌腫、肉腫、白血病、およびリンパ腫を含む幅広い様々な癌を治療するために有用である。本方法によって治療される癌は、限定することなく、肺、肝臓、胸、前立腺、卵巣、腎臓、脳、結腸、腸、脾臓、胃、口腔、喉、皮膚、血液細胞などの様々な組織器官の癌であり得る。  
【０２３２】
抗体に対して、ペイロード、例えば、癌化学療法剤などの薬物が結合されている抗体は、標的にされペイロードによって作用される細胞（複数可）または組織（複数可）と共に抗原に特異的に結合し得る。  
【０２３３】
本方法は、本明細書に説明されるように、抗体複合体、例えば、抗体−薬物複合体の治療有効量を個体に投与することを含み得る。抗体複合体は、本明細書に説明されるように、任意の好適な製剤、例えば、薬学的に許容される賦形剤で調製される製剤中にあり得る。  
【０２３４】
治療される対象は、治療の必要がある対象であって、治療される宿主が、親薬物を使用して治療を受けることが可能である宿主である。したがって、様々な対象は、本明細書に開示される抗体−薬物複合体を使用して治療を受けることが可能であり得る。概してそのような対象は、特定の対象の人間を伴う「哺乳動物」である。他の対象は、家庭動物（例えば、イヌおよびネコ）、家畜（例えば、ウシ、ブタ、ヤギ、ウマなど）、齧歯動物（例えば、マウス、モルモット、およびラット、例えば、動物の疾患モデルのように）、ならびに非ヒト霊長類（例えば、チンパンジー、およびサルを含み得る。  
【０２３５】
投与される抗体−薬物複合体の量は、親薬物の用量および／または投与量レジメンの指導に基づいて最初に決定され得る。概して、投与される抗体−薬物複合体は、結合薬物の標的送達および／または高められた血清半減期を提供し得、このようにして、投与量レジメン低減された用量または低減された投与のうちの少なくとも１つを提供する。したがって、抗体−薬物複合体は、本開示のＩｇ薬物複合体中で複合体化される前に親薬物に対して投与量レジメンの低減された用量および／または低減された投与を提供し得る。  
【０２３６】
さらに、上記のように、抗体−薬物複合体は、薬物送達の制御された化学量論を提供し得るため、抗体−薬物複合体の投与量は、抗体−薬物複合体主成分当たりに提供される薬物分子の数に基づいて計算され得る。  
【０２３７】
いくつかの実施形態において、抗体−薬物複合体の複数の用量が投与され得る。抗体−薬物複合体の投与の頻度は、様々な因子、例えば、症状の重症度などのいずれかに依存して変化し得る。例えば、いくつかの実施形態において、Ｉｇ薬物複合体は、１ヵ月当たり１回、１ヵ月当たり２回、１ヵ月当たり３回、１週間おきに（ｑｏｗ）、１週間に１回（ｑｗ）、１週間に２回（ｂｉｗ）、１週間に３回（ｔｉｗ）、１週間に４回、１週間に５回、１週間に６回、１日おきに（ｑｏｄ）、毎日（ｑｄ）、１日２回（ｑｉｄ）、または１日３回（ｔｉｄ）で投与される。［実施例］  
【０２３８】
以下の実施例は、当業者に、完全な開示および開示される主題の製造方法ならびに使用方法を提供するように記載され、発明者がそれらの発明とみなす範囲を限定することは意図されず、以下の実験が全てであるか、または実験のみが行われることを表示するのを意図しない。使用された数字（例えば量、温度など）に対する精度を確保する努力がなされたが、ある程度の実験誤差および偏差が考慮されるべきである。別段の指示がない限り、部分は、重量部であり、分子量は重量平均分子量であり、温度は摂氏であり、圧力は大気圧またはそれに近い圧力である。標準的な略語が使用され得、例えば、ｂｐ、塩基対（複数可）；ｋｂ、キロベース（複数可）；ｐｌ、ピコリットル（複数可）；ｓまたはｓｅｃ、秒（複数可）；ｍｉｎ、分（複数可）；ｈまたはｈｒ、時間（複数可）；ａａ、アミノ酸（複数可）；ｋｂ、キロベース（複数可）；ｂｐ、塩基対（複数可）；ｎｔ、ヌクレオチド（複数可）；ｉ．ｍ．、筋肉内の（筋肉内に）；ｉ．ｐ．、腹腔内の（腹腔内に）；ｓ．ｃ．、皮下の（皮下に）などである。  
【０２３９】
実施例１：タグ付き軽鎖構築物の生成およびタグ付き軽鎖を含む抗体の生成  ヒトカッパ軽鎖の定常領域内の位置を、タグ挿入によって組織的に走査した。タグ付き軽鎖構築物の群を、軽鎖定常領域に異なる部位で隣接するアミノ酸の間にタグ配列：ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）を挿入することによって生成した（図１）。各構築物はまた、細胞表面抗原に特異的な抗体の軽鎖可変領域を含んだ。軽鎖定常領域の全体の長さを走査し、各々が異なる位置で挿入されたタグを有する１０６個の変異体を生成した（例えば、図  １０Ａ〜１０Ｄを参照されたい）。各軽鎖変異体を、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞中の発現のために発現ベクター内に提供した。方法および材料  
【０２４０】
抗原特異的抗体の軽鎖発現ベクターを生成し、野生型ヒトカッパ軽鎖定常領域を除去するためにＢａｍＨＩおよびＤｒａＩＩＩで消化した（図１１）。消化されたプラスミドＤＮＡを、ゲル電気泳動法およびＱＩＡｑｕｉｃｋゲル抽出キット（Ｑｉａｇｅｎ，ＭＤ）によって精製した。精製されたプラスミド骨格を、様々な位置でタグを含む変異体ヒトカッパ軽鎖定常遺伝子をクローニングするために使用した。  
【０２４１】
ヒトカッパ軽鎖定常領域にタグを挿入するために、２つのＰＣＲ増幅を、Ｐｈｕｓｉｏｎ  ＤＮＡポリメラーゼ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ，ＭＡ）を有するテンプレートとして軽鎖発現ベクターを使用して行った。ＰＣＲサイクリング条件は、９８℃で１分間の予熱工程、その後に続く９８℃で１０秒間、６０度で１０秒間、７２℃で２０秒間の３０サイクル、その後に続く最終拡張の７２℃で１分間を含んだ。ヒトカッパ軽鎖定常領域の５’部分のＰＣＲ増幅を、ｏＲＷ１００１（５’ＴＣＡＡＡＣＧＴＧＡＧＴＡＧＡＡＴＴＴＡＡＡＣＴＴＴ  ３’（配列番号２５０））を有するリバースプライマー（図１４Ａ〜１４Ｅの表３、および図１３Ａ）を使用して行い、ＤＮＡ断片の３’部分を、フォワードプライマーおよびｏＲＷ１００２（５’ＡＡＡＧＧＧＣＧＡＡＡＡＡＣＣＧＴＣＴＡＴＣＡＧＧ  ３’（配列番号２５１））を使用して増幅した（表３および図１３Ａ）。フォワードプライマーおよびリバースプライマーの全ての対を、ヒトカッパ軽鎖定常領域を通して、タグ配列ＬＣＴＰＳＲ（配列番号１５８）を挿入するように設計した（図１４Ａ〜１４Ｅの表３）。増幅された５’ＤＮＡ断片および対応する３’ＤＮＡ断片は、図１３Ｂに示されるように、アセンブリについて適合する重複を有した。増幅された５’および３’ＤＮＡ断片を組み合わせて、合計１０６対のＤＮＡ混合物を得た。ベクターを、ＢａｍＨＩおよびＤｒａＩＩＩを使用して線状化し、ＤＮＡ混合物に添加した。反応物を、製造業者の手順書に従ってギブソンアセンブリマスターミックス（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ，ＭＡ）を使用してギブソンアセンブリに施した。  
【０２４２】
組み立てられたＤＮＡを、熱衝撃法によってＥ．ｃｏｌｉ  Ｔｏｐ１０化学的コンピテントセル（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に転換した。この目的のために、３μｌの組み立てられたプラスミドＤＮＡを、５０μｌの化学的コンピテントＥ．ｃｏｌｉ  Ｔｏｐ１０に添加し、混合物を、３０分間氷上でインキュベートし、次いで、４２℃で４５秒間熱衝撃に施した。次いで、懸濁液を１分間氷上に置き、５００μｌのＳＯＣ媒体（Ｔｅｋｎｏｖａ，ＣＡ）を添加した。この混合物を、３７℃で１時間、振盪器上でインキュベートした。これらの細胞を、選択マーカーとして抗生物質カルベニシリン（１００μｇ／ｍｌ）でＬＢ寒天培地（Ｔｅｋｎｏｖａ，ＣＡ）上でめっきし、３７℃のインキュベータで一晩成長させた。寒天平板上に見られた群体を、個々に採取し、３ｍｌのＬＢ培地にインキュベートし、３７℃で一晩の間成長させ、その後、製造者の手順書に従って、プラスミドＤＮＡ単離キット（Ｑｉａｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用してプラスミドＤＮＡ精製が続いた。全ての１０６個のクローンＤＮＡ配列の整合性を、配列サービス供給業者に送ることによって確認した。  
【０２４３】
実施例２：軽鎖中でタグを有する抗体の発現力価の分析  抗体の発現の力価上で軽鎖に沿って
異なる位置でタグを挿入する影響を、抗原特異的抗体の重鎖ポリペプチドをコードする第２の発現ベクター、およびホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）をコードする第３の発現ベクターと共に、実施例１に説明されるように生成された変異体軽鎖の各々を含む発現ベクターでＣＨＯ細胞（ＥｘｐｉＣＨＯ（商標）細胞）をトランスフェクションすることによって試験した。次いで、軽鎖定常領域の異なる位置に沿って挿入されたタグを有する抗体を発現する細胞によって培地に分泌される抗体の量を測定した。測定された抗体力価は、挿入位置がＣＨＯ細胞からの発現の効率性に影響したことを示した（図２Ａおよび２Ｂ）。  
【０２４４】
［図２Ａおよび２Ｂ］抗体が、そのＩｇ軽鎖アミノ酸配列の定常領域において、配列番号１に関連して定義される、示される位置に対して隣接かつＣ末端に挿入されるスルファターゼモチーフをそれぞれ有する変異体タグ付き抗体のＥｘｐｉＣＨＯ（商標）細胞中の発現力価（ｙ軸）。ＦＧＥが共発現される（「ＦＧＥを有するＷＴ  Ａｂ」）か、または共発現されない（「ＷＴ  Ａｂ」）細胞から軽鎖中でタグ挿入を有さない制御抗体の発現の力価は、図２Ｂに示される。  
【０２４５】
材料および方法  Ｅｘｐｉ−ＣＨＯ−Ｓ細胞を、３７℃、および８％のＣＯ２で、発現媒体（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）中で１５０ｍｌの振盪フラスコ中で日常的に維持した。トランスフェクションの１日前に、Ｅｘｐｉ−ＣＨＯ−Ｓ細胞を、４ｘ１０６細胞／ｍｌの最終細胞密度で新鮮なＣＨＯ発現媒体に播種した。翌日に、懸濁培養中の細胞数を、ＴＣ２０細胞計数器（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，ＣＡ）を使用して測定し、追加のＣＨＯ発現媒体を添加することによって細胞密度を６ｘ１０６細胞／ｍｌに調製した。この工程で、１００ｍＭのＣｕＳＯ４を、１００μＭの最終濃度に補充した。６ｍｌの細胞を、トランスフェクションのために使い捨てミニバイオリアクタチューブ（Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ）に播種した。重鎖の１．８ｕｇの発現ベクター（図１２）および１．５ｕｇのＦＧＥ発現プラスミドＤＮＡを、上記に説明されるように、２４０μｌのＯｐｔｉ−ＳＦＭ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，ＣＡ）中で２．７ｕｇの軽鎖発現ベクターと混合し、その後に２４０ｕｌのＯｐｔｉ−ＳＦＭ中で１９．２ｕｌのＥｘｐｉ−Ｃｈｏフェクタミンを含有するリポフェクタミン混合物と組み合わせた。  
【０２４６】
Ｅｘｐｉ−ＣＨＯフェクタミンおよびＤＮＡ複合体を、細胞に直接的に添加し、かき混ぜることによって簡単に混合した。１日間の１８０ｒｐｍの軌道振盪で、３７℃、および８％のＣＯ２での培養後、Ｅｘｐｉ−ＣＨＯトランスフェクションキット（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，ＣＡ）に提供された３６μｌのエンハンサー溶液および９６０μｌの供給材料を、細胞に添加し、細胞を、１８０ｒｐｍの軌道振盪で、３７℃および８％のＣＯ２で保持した。４日後、追加の９６０ｕｌの供給材料を、細胞に添加し、細胞を、さらに５日間同じ培養条件で保持した。培養上清を、遠心分離および０．４５μｍのＰＥＳフィルターを伴う濾過によって収穫し、その後プロテインＡバイオセンサーチップを使用してＢｌｉｔｚシステム（Ｆｏｒｔｅ  Ｂｉｏ，ＣＡ）と共にＩｇＧ定量化が続いた（図２Ａおよび２Ｂ）。  
【０２４７】
実施例３：軽鎖中でタグを有する抗体の凝集の分析  ［図２Ａおよび２Ｂ］抗体が、そのＩｇ軽鎖アミノ酸配列の定常領域において、配列番号１に関連して定義される、示される位置に対して隣接かつＣ末端に挿入されるスルファターゼモチーフをそれぞれ有するタグ付き抗体の凝集上の軽鎖に沿って異なる位置でタグを挿入する影響を試験した（図３）。凝集を測定するために、試料を、３００ｍＭのＮａＣｌ、２５ｍＭのリン酸ナトリウムｐＨ６．８と共に移動相分析的サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ；Ｔｏｓｏｈ＃０８５４１）を使用して分析した。  
【０２４８】
実施例４：軽鎖中でタグを有する抗体の複合体化効率性の分析  実施例２に示されるように、力価に基づいて選択される挿入部位のサブセットを、抗体−薬物非（ＤＡＲ）によって決定されるように複合体化効率性を研究するために選択した。タグ付き（ｆＧｌｙ含有）軽鎖ポリペプチドを有する抗体を、疎水性ペイロード、薬物の代用物として役立つ検出可能な標識で複合体化した。疎水性ペイロードとの複合体化後のタグ付き抗体のＤＡＲの測定値は、異なる挿入部位にわたって可変複合体効率性を示した（図４）。  
【０２４９】
チューブ内の６ｍｌの培養体積中でＥｘｐｉＣＨＯ（商標）細胞中に発現される軽鎖タグ付き抗体の複合収率は、フラスコ内で２０ｍｌの培養体積中でＥｘｐｉＣＨＯ（商標）細胞中に発現される場合の複合体化効率性に類似し、疎水性ペイロードを有する軽鎖タグ付き抗体の複合体化効率性が、異なる培養条件下で産生されたタグ付き抗体の間で一貫性であったことを示した（図５）。  
【０２５０】
材料および方法  最終生成物の抗体−薬物比（ＤＡＲ）を決定するために、抗体−複合体（ＡＤＣ）を、移動相Ａ：１．５Ｍの硫酸アンモニウム、２５ｍＭのリン酸ナトリウムｐＨ７．０、および移動相Ｂ：イソプロパノール、１８．７５ｍＭのリン酸ナトリウムｐＨ７．０と共に分析的ＨＩＣ（Ｔｏｓｏｈ＃１４９４７）によって試験した。  
【０２５１】
実施例５：抗体−薬物複合体の機能的特性  軽鎖タグ付き抗体−薬物複合体を選択し、ＥＬＩＳＡを使用して抗原結合について試験した。試験された全ての軽鎖タグ付き抗体−薬物複合体は、親抗体に類似する抗原結合特性を有した（図６Ａ〜６Ｅ）。  
【０２５２】
細胞傷害性薬物に複合体化された軽鎖タグ付き抗体を選択し、細胞表面上で抗原を発現する細胞に対する細胞傷害性活性について試験した。試験された全ての軽鎖タグ付き抗体−薬物複合体は、薬物を含まない、重鎖タグ付き抗体−薬物複合体と類似の効能と比較して高められた細胞傷害性を示した。材料および方法  
【０２５３】
軽鎖タグ付き抗体（１ｍｇ／ｍＬ）を、５０ｍＭのクエン酸ナトリウム、０．８５％のジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）を含む５０ｍＭのＮａＣｌ  ｐＨ５．５中で３７℃で１６〜２４時間、アルデヒド反応性基（３６０モル当量薬物：抗体）と機能化された疎水性ペイロード（細胞傷害性薬物）に複合体化した。複合体化されていない薬物を、１０ｋＤの分画分子量（ＭＷＣＯ）で遠心濃縮機を使用して繰り返された緩衝剤交換によって除去した。  
【０２５４】
本開示が本明細書の特定の実施形態に関連して説明されているが、様々な変更が行われ得、等価物が本開示の真の主旨および範囲から逸脱することなく代用され得ることが当業者によって理解されるべきである。さらに、多くの修飾は、特定の状況、材料、物質の組成物、プロセス、プロセス工程または工程を、本開示の対象の主旨および範囲に適合するように行われ得る。全てのそのような修飾は、本明細書に添付される請求項の範囲内であることを意図される。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図６Ｅ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図９】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１０Ｄ】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１４Ｃ】
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【図１４Ｄ】
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【図１４Ｅ】
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【図１５】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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