(57)【要約】  本発明は、種々の癌の治療のためのＮ−（３−フルオロ−４−（１−メチル−６−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−イルオキシ）フェニル）−１−（４−フルオロフェニル）−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミド（メレスチニブ、ＬＹ２８０１６５３）またはその医薬的に許容される塩と、プログラム細胞死１リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）またはプログラム細胞死１（ＰＤ−１）などのヒト共抑制免疫チェックポイントに結合する抗体の組み合わせ治療に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効な量のメレスチニブまたはその医薬的に許容される塩を、有効な量の抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体または抗ヒトＰＤ−１抗体と組み合わせて、患者に投与することを含む、患者において癌を治療する方法であって、癌が、肺癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、乳癌、黒色腫、結腸直腸癌、膵臓癌、胆管癌、黒色腫（ぶどう膜メラノーマを含む）、肉腫、膀胱癌、腎臓癌、尿路癌、頭部癌、頸部癌、甲状腺癌、卵巣癌、遺伝性乳頭状腎細胞癌、肝細胞癌、胃癌および／またはＭＥＴ、ＭＳＴＲ１（別名  ＲＯＮ）、ＡＸＬ、ＫＲＡＳ、ＦＬＴ３、ＤＤＲ１／２、ＲＯＳ１、ＮＴＲＫ１／２／３、ＭＫＮＫ１／２およびその基質ＥＩＦ４Ｅにおける変更を示す腫瘍である、方法。
【請求項２】
前記抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体が、アテゾリズマブ、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＥＤＩ−４７３６、ＭＳＢ−００１０７１８Ｃ、ＭＤＰＬ３２８０Ａ、デュルバルマブ、アベルマブまたはＭＤＸ−１１０５である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体がＬＹ３３０００５４である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記抗ヒトＰＤ−１抗体が、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピジリズマブまたはＡＭＰ−２２４である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記癌が、乳癌、黒色腫、および／または結腸直腸癌である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
メレスチニブまたはその医薬的に許容される塩が、２１日サイクルまたは２８日サイクルで、１日に１回、４０ｍｇ〜１２０ｍｇの用量で投与され、前記抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体または前記抗ヒトＰＤ−１抗体は、１４日サイクルの１日目に、２１日サイクルの１日目に、２１日サイクルの１日目と８日目に、２１日サイクルの１日目と１５日目に、２１日目サイクルの１日目、８日目および１５日目に、２８日サイクルの１日目に、または２８日サイクルの１日目と１５日目に、１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
メレスチニブまたはその医薬的に許容される塩が、前記抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体または抗ヒトＰＤ−１抗体と同時に投与される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
癌の治療における同時の使用、別個の使用または連続的な使用のための、メレスチニブまたはその医薬的に許容される塩と、抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体または抗ヒトＰＤ−１抗体とを含む組み合わせであって、前記癌が、肺癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、乳癌、黒色腫、結腸直腸癌、膵臓癌、胆管癌、黒色腫（ぶどう膜メラノーマを含む）、肉腫、膀胱癌、腎臓癌、尿路癌、頭部癌、頸部癌、甲状腺癌、卵巣癌、遺伝性乳頭状腎細胞癌、肝細胞癌、胃癌および／またはＭＥＴ、ＭＳＴＲ１（別名  ＲＯＮ）、ＡＸＬ、ＫＲＡＳ、ＦＬＴ３、ＤＤＲ１／２、ＲＯＳ１、ＮＴＲＫ１／２／３、ＭＫＮＫ１／２およびその基質ＥＩＦ４Ｅにおける変更を示す腫瘍である、組み合わせ。
【請求項９】
前記抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体が、アテゾリズマブ、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＥＤＩ−４７３６、ＭＳＢ−００１０７１８Ｃ、ＭＤＰＬ３２８０Ａ、デュルバルマブ、アベルマブまたはＭＤＸ−１１０５である、請求項８に記載の組み合わせ。
【請求項１０】
前記抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体がＬＹ３３０００５４である、請求項８に記載の組み合わせ。
【請求項１１】
前記抗ヒトＰＤ−１抗体が、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピジリズマブまたはＡＭＰ−２２４である、請求項８に記載の組み合わせ。
【請求項１２】
前記癌が、乳癌、黒色腫、および／または結腸直腸癌である、請求項８〜１１のいずれか一項に記載の組み合わせ。
【請求項１３】
メレスチニブまたはその医薬的に許容される塩が、２１日サイクルまたは２８日サイクルで、１日に１回、４０ｍｇ〜１２０ｍｇの用量で投与され、前記抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体または前記抗ヒトＰＤ−１抗体は、１４日サイクルの１日目に、２１日サイクルの１日目に、２１日サイクルの１日目と８日目に、２１日サイクルの１日目と１５日目に、２１日目サイクルの１日目、８日目および１５日目に、２８日サイクルの１日目に、または２８日サイクルの１日目と１５日目に、１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項８〜１２のいずれか一項に記載の組み合わせ。
【請求項１４】
メレスチニブまたはその医薬的に許容される塩が、抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体または抗ヒトＰＤ−１抗体と同時に使用されるためのものである、請求項１３に記載の組み合わせ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、種々の癌の治療のためのＮ−（３−フルオロ−４−（１−メチル−６−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−イルオキシ）フェニル）−１−（４−フルオロフェニル）−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミド（メレスチニブ、ＬＹ２８０１６５３）またはその医薬的に許容される塩と、プログラム細胞死１リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）またはプログラム細胞死１（ＰＤ−１）などのヒト共抑制免疫チェックポイントに結合する抗体の組み合わせ治療に関する。
【背景技術】
【０００２】
腫瘍細胞は、種々の機構を介する免疫系による検出と除去から逃れる。内生的に、免疫チェックポイント経路は、Ｔ細胞活性化の自己免疫寛容および制御の管理に使用される。Ｔ細胞上のＰＤ−１受容体に対するＰＤ−１リガンド、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２の結合は、Ｔ細胞の増殖およびサイトカインの産生を阻害する。ＰＤ−１リガンドのアップレギュレーションは、いくつかの腫瘍で起こり、この経路を介するシグナル伝達は、活性Ｔ細胞の腫瘍の免疫監視機構の阻害に寄与する。ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１の阻害によって、免疫が介在する腫瘍の破壊が回復することを示している。臨床研究は、これらの少なくとも１つのタンパク質に対するアンタゴニスト抗体を用いてＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１を標的とすると、抗腫瘍応答を含む免疫応答のＰＤ−１経路が介在する阻害を解除することを発見した。
【０００３】
癌を治療するためのいくつかの免疫チェックポイント治療は、抗ＰＤ−１抗体（ペムブロリズマブ／ＫＥＹＴＲＵＤＡ（商標）；ニボルマブ／ＯＰＤＩＶＯ（商標））および抗ＰＤ−Ｌ１抗体（アテゾリズマブ／ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（商標））を含め、近年、ＦＤＡによって承認されている。これらの癌免疫化合物は、複数の腫瘍型における治療応答を示す。しかし、治療応答は、承認された腫瘍適応の患者の部分的な集合にしか示されていない。
【０００４】
Ｎ−（３−フルオロ−４−（１−メチル−６−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−イルオキシ）フェニル）−１−（４−フルオロフェニル）−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミド（ＣＡＳ番号１２０６７９９−１５−６）
【化１】
2019525934.tif 000002
【０００５】
（ここでは、メレスチニブと呼ばれる）は、ＭＥＴおよびＭＳＴ１Ｒ（ａｋａ  ＲＯＮ）を標的とするＡＴＰ競合ＩＩ型キナーゼ阻害剤である。ＭＥＴおよびＭＳＴ１Ｒに加え、メレスチニブは、ＡＸＬ、ＭＥＲＴＫ、ＴＥＫ（ａｋａ  Ｔｉｅ２）、ＮＴＲＫ１／２／３、ＲＯＳ１およびＭＫＮＫ１／２を含め、他の癌化キナーゼも標的とする（Ｙａｎ，Ｓ．Ｂ．ら、Ｉｎｖｅｓｔ  Ｎｅｗ  Ｄｒｕｇｓ．Ｖｏｌ  ３１：８３３−８４４、２０１３）。これらのメレスチニブ標的は、制御不能になるとき（例えば、変異、増幅が活性化するか、または染色体転座を伴う）、腫瘍の癌化誘発に関与する。さらに、これらの標的のいくつか、例えば、ＭＳＴ１Ｒ、ＡＸＬおよびＭＥＲＴＫも、免疫細胞の機能に何らかの役割を果たし得る（Ｅｙｏｂ、Ｈ．ら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓ．Ｖｏｌ  ３：７５１−７６０、２０１３；Ｌｅｍｋｅ、Ｇ．、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ  Ｂｉｏｌ．Ｖｏｌ  ５：ａ００９０７６、２０１３；Ｌｅｍｋｅ、Ｇ．ら、Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｖｏｌ  ８：３２７−３３６、２００８；Ｒｏｔｈｌｉｎ、Ｃ．Ｖ．，Ｌｅｍｋｅ、Ｇ．，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｖｏｌ  ２２：７４０−７４６、２０１０；Ｐａｏｌｉｎｏ，Ｍ．ら、Ｎａｔｕｒｅ、Ｖｏｌ  ５０７：５０８−５１２、２０１４）。この文献からの最近のデータは、１１種類の異なる腫瘍におけるＥＭＴ（上皮間葉移行）の主要なマーカーの１つとして、ＡＸＬも特定した（Ｍａｋ、Ｍ．Ｐ．ら、Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．Ｖｏｌ  ２２：６０９−６２０、２０１６）。これらの腫瘍型におけるＥＭＴマーカーの上昇が、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１などの腫瘍における免疫チェックポイントマーカーの発現増加と正の相関関係にあることがわかった。腫瘍に対するこれらの免疫チェックポイントマーカーのアップレギュレーションは、腫瘍が免疫監視機構を逃れ、腫瘍の転移および成長を引き起こす、あり得る機構である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
癌について広く適用可能な治療は、依然として見つかりにくいままであり、そのため、癌の治療に効果的であると判明し得るさらなる異なる治療の必要性が存在する。メレスチニブは、免疫チェックポイント剤（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１または抗ＰＤ−１抗体）と組み合わせると、異なる腫瘍型を有する患者における腫瘍退縮の治療応答を向上させ、広範囲にする相乗効果を与え得る。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
抗ＰＤ−Ｌ１抗体と、メレスチニブを含むＭＥＴ阻害剤とを用いる組み合わせ治療は、開示されている（ＷＯ２０１６／０６１１４２号を参照）。しかし、本発明は、メレスチニブまたはその医薬的に許容される塩と、抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体または抗ヒトＰＤ−１抗体との組み合わせた活性から、いずれかの薬剤単独で与えられる治療効果と比較して、向上した利益および／または予想されない利益を与える患者において、癌、例えば、肺癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、乳癌、黒色腫、結腸直腸癌、膵臓癌、胆管癌、黒色腫（ぶどう膜メラノーマを含む）、肉腫、膀胱癌、腎臓癌、尿路癌、頭部癌、頸部癌、甲状腺癌、卵巣癌、遺伝性乳頭状腎細胞癌、肝細胞癌、胃癌および／またはＭＥＴ、ＭＳＴＲ１（ａｋａ  ＲＯＮ）、ＡＸＬ、ＫＲＡＳ、ＦＬＴ３、ＤＤＲ１／２、ＲＯＳ１、ＮＴＲＫ１／２／３、ＭＫＮＫ１／２およびその基質ＥＩＦ４Ｅにおける変更を示す腫瘍を治療する方法を本明細書に開示する。さらに、本発明は、メレスチニブまたはその医薬的に許容される塩と、抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体または抗ヒトＰＤ−１抗体との組み合わせた活性から、いずれかの薬剤単独で与えられる治療効果と比較して、向上した利益および／または予想されない利益を与える特定の治療計画の一部として、患者において、癌、例えば、肺癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、乳癌、黒色腫、結腸直腸癌、膵臓癌、胆管癌、肉腫、膀胱癌、腎臓癌、甲状腺癌、卵巣癌、尿路癌、黒色腫（ぶどう膜メラノーマを含む）、頭部癌、頸部癌、遺伝性乳頭状腎細胞癌、胃癌および／またはＭＥＴ、ＭＳＴＲ１（ａｋａ  ＲＯＮ）、ＡＸＬ、ＫＲＡＳ、ＦＬＴ３、ＤＤＲ１／２、ＲＯＳ１、ＮＴＲＫ１／２／３、ＭＫＮＫ１／２およびその基質ＥＩＦ４Ｅにおける変更を示す腫瘍を治療する方法を開示する。
【０００８】
したがって、本発明は、有効な量のメレスチニブまたはその医薬的に許容される塩を、有効な量の抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体または抗ヒトＰＤ−１抗体と組み合わせて患者に投与することを含む、患者における癌を治療する方法を提供する。
【０００９】
また、本発明は、癌の治療において同時の使用、別個の使用、または連続的な使用のための、メレスチニブまたはその医薬的に許容される塩と、抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体または抗ヒトＰＤ−１抗体とを含む組み合わせも提供する。
【００１０】
さらに、本発明は、さらに、抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体が、アテゾリズマブ、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＥＤＩ−４７３６、ＭＳＢ−００１０７１８Ｃ、デュルバルマブ、アベルマブまたはＭＤＸ−１１０５であることを提供する。
また、本発明は、抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体がＬＹ３３０００５４であることを提供する。
また、本発明は、抗ヒトＰＤ−１抗体が、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピジリズマブまたはＡＭＰ−２２４であることにも関する。
【００１１】
本発明は、さらに、癌が、肺癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、乳癌、黒色腫、結腸直腸癌、膵臓癌、胆管癌、黒色腫（ぶどう膜メラノーマを含む）、肉腫、膀胱癌、腎臓癌、尿路癌、頭部癌、頸部癌、甲状腺癌、卵巣癌、遺伝性乳頭状腎細胞癌、肝細胞癌、胃癌および／またはＭＥＴ、ＭＳＴＲ１（ａｋａ  ＲＯＮ）、ＡＸＬ、ＫＲＡＳ、ＦＬＴ３、ＤＤＲ１／２、ＲＯＳ１、ＮＴＲＫ１／２／３、ＭＫＮＫ１／２およびその基質ＥＩＦ４Ｅにおける変更を示す腫瘍であることを提供する。好ましくは、癌は、乳癌、黒色腫、および／または結腸直腸癌である。また、好ましくは、癌は、乳癌および／または結腸直腸癌である。
【００１２】
また、本発明は、有効な量のメレスチニブまたはその医薬的に許容される塩を、有効な量の抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体または抗ヒトＰＤ−１抗体と組み合わせて患者に投与することを含み、メレスチニブまたはその医薬的に許容される塩は、２１日サイクルまたは２８日サイクルで、１日に１回４０ｍｇ〜１２０ｍｇの用量で投与され、抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体または抗ヒトＰＤ−１抗体は、１４日サイクルの１日目に、２１日サイクルの１日目に、２１日サイクルの１日目と８日目に、２１日サイクルの１日目と１５日目に、２１日サイクルの１日目、８日目、１５日目に、２８日サイクルの１日目に、または２８日サイクルの１日目と１５日目に、１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、患者において癌を治療する方法も提供する。投与は、好ましくは、同時である。
【００１３】
また、本発明は、癌の治療における同時の使用、別個の使用または連続的な使用のための、メレスチニブまたはその医薬的に許容される塩と、抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体または抗ヒトＰＤ−１抗体との組み合わせであって、メレスチニブまたはその医薬的に許容される塩は、２１日サイクルまたは２８日サイクルで、１日に１回４０ｍｇ〜１２０ｍｇの用量で投与され、抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体または抗ヒトＰＤ−１抗体は、１４日サイクルの１日目に、２１日サイクルの１日目に、２１日サイクルの１日目と８日目に、２１日サイクルの１日目と１５日目に、２１日サイクルの１日目、８日目、１５日目に、２８日サイクルの１日目に、または２８日サイクルの１日目と１５日目に、１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、組み合わせも提供する。使用は、好ましくは、同時である。
【００１４】
また、本発明は、抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体または抗ヒトＰＤ−１抗体を用いて既に治療されている患者の治療計画に、メレスチニブまたはその医薬的に許容される塩のいずれかを追加することも提供する。
【００１５】
また、本発明は、メレスチニブまたはその医薬的に許容される塩を用いて既に治療されている患者の治療計画に、抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体または抗ヒトＰＤ−１抗体のいずれかを追加することも提供する。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
「ＰＤ−１阻害剤」との用語は、完全にヒトであるか、ヒト化ＩｇＧであり、場合により最適化されているモノクローナル抗体または低分子阻害剤である抗ＰＤ−１抗体を意味する。抗ＰＤ−１抗体は、好ましいＰＤ−１阻害剤である。ＰＤ−１阻害剤としては、ニボルマブおよびペムブロリズマブが挙げられる。ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ（商標））は、ｉＭＤＸ−１１０６、ＭＤＸ−１１０６−０４、ＯＮＯ−４５３８またはＢＭＳ−９３６５５８としても知られており、ＣＡＳ登録番号は９４６４１４−９４−４である。ニボルマブは、ＰＤ−１を特異的にブロックする完全ヒトＩｇＧ４モノクローナル抗体である。ＰＤ−１に特異的に結合するニボルマブ（クローン５Ｃ４）および他のヒトモノクローナル抗体は、ＵＳ８，００８，４４９号およびＷＯ２００６／１２１１６８号に開示されている。ペムブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ（商標））（以前はラムブロリズマブ）は、Ｍｅｒｃｋ  ３７４５、ＭＫ−３４７５またはＳＣＨ−９００４７５としても知られており、ＰＤ−１に結合するヒト化ＩｇＧ４モノクローナル抗体である。ペムブロリズマブは、Ｈａｍｉｄ、Ｏ．ら、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、２０１３、３６９（２）：１３４−４４；ＷＯ２００９／１１４３３５号およびＵＳ８，３５４，５０９号に開示される。さらなる抗ＰＤ−１抗体としては、ピジリズマブ（ＣＴ−０１１）およびＡＭＰ−２２４も挙げられる。他の抗ＰＤ−１抗体は、ＵＳ８，６０９，０８９号；ＵＳ２０１００２８３３０号および／またはＵＳ２０１２０１１４６４９号に開示されている。
【００１７】
「ＰＤ−Ｌ１阻害剤」との用語は、完全なヒト、またはヒト化ＩｇＧ、場合により最適化されたモノクローナル抗体または低分子阻害剤である抗ＰＤ−Ｌ１抗体を意味する。抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、好ましいＰＤ−Ｌ１阻害剤である。ＰＤ−Ｌ１阻害剤としては、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ−４７３６、ＭＳＢ−００１０７１８ＣおよびＭＤＸ−１１０５が挙げられる。ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０は、ＷＯ２０１０／０７７６３４号およびＵＳ２０１００２０３０５６号に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。ＭＤＰＬ３２８０Ａ（ＲＧ７４４６、ＲＯ５５４１２６７およびアテゾリズマブとしても知られる）は、ＰＤ−Ｌ１に結合するＦｃエフェクター機能を欠く、完全にヒト化されたＦｃ最適化ＩｇＧ１モノクローナル抗体である。ＭＤＰＬ３２８０ＡおよびＰＤ−Ｌ１に対する他のヒトモノクローナル抗体は、ＵＳ７，９４３，７４３号およびＵＳ２０１２００３９９０６号に開示されている。ＭＥＤＩ−４７３６（デュルバルマブとしても知られる）は、ＰＤ−Ｌ１に対するＦｃ最適化抗体である。ＭＳＢ−００１０７１８Ｃ（アベルマブとしても知られる）は、ＰＤ−Ｌ１に対する完全なヒトＩｇＧ１モノクローナル抗体である。ＭＤＸ−１１０５は、ＢＭＳ−９３６５５９としても知られ、ＷＯ２００７／００５８７４号に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。
【００１８】
ＬＹ３３０００５４は、Ｆｃエフェクター機能を欠くＩｇＧ１バリアント抗体であり、ヒトＰＤ−Ｌ１（配列番号１）に結合し、軽鎖（ＬＣ）と重鎖（ＨＣ）を含み、軽鎖が軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、重鎖が重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、ＬＣＶＲが、それぞれアミノ酸配列ＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＴＶＮ（配列番号５）、ＹＧＮＳＮＲＰＳ（配列番号６）およびＱＳＹＤＳＳＬＳＧＳＶ（配列番号７）からなる軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含み、ＨＣＶＲが、それぞれアミノ酸配列ＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＡＩＳ（配列番号２）、ＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３）およびＡＲＳＰＤＹＳＰＹＹＹＹＧＭＤＶ（配列番号４）からなる重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含む。
【００１９】
ＬＹ３３０００５４のいくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＰＤ−Ｌ１に結合し、軽鎖（ＬＣ）と重鎖（ＨＣ）を含み、軽鎖は、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、重鎖は、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、ＬＣＶＲは、配列番号９に与えられるアミノ酸配列を有し、ＨＣＶＲは、配列番号８に与えられるアミノ酸配列を有する。ＬＹ３３０００５４のいくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＰＤ−Ｌ１に結合し、軽鎖（ＬＣ）と重鎖（ＨＣ）を含み、ＬＣは、配列番号１０に与えられるアミノ酸を有し、ＨＣは、配列番号１１に与えられるアミノ酸配列を有する。一実施形態では、抗体であるＬＹ３３０００５４は、２つの軽鎖と２つの重鎖を含み、各軽鎖が、配列番号１１で与えられるアミノ酸配列を有し、各重鎖が、配列番号１０で与えられるアミノ酸配列を有する。
【００２０】
本明細書で使用される場合、「患者」との用語は、哺乳動物、好ましくはヒトを指す。
【００２１】
「治療」、「治療する」、「治療すること」との用語は、患者が患っている癌についての１つ以上の症状を緩和し、遅らせ、止めるか、または逆行させ、癌が実際に除去されない場合であっても、癌の進行を遅らせ、止めるか、または逆行させるための介入、例えば、メレスチニブとＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤の投与の完全なスペクトルを含むことを意味する。
【００２２】
「組み合わせ」、「治療の組み合わせ」、「医薬的な組み合わせ」との用語は、場合により組み合わせ投与のための指示書と一緒にパッケージ化される、固定されていない用量の組み合わせを指し、個々の治療薬剤メレスチニブまたはその医薬的に許容される塩または水和物と、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤とを、同時に独立して投与してもよく、治療薬剤が協働して効果を発揮する時間間隔で別個に投与してもよい。
【００２３】
「同時」投与との用語は、メレスチニブとＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤をそれぞれ患者に投与することを意味し、１回の操作で行ってもよく、または同時に、または実質的に同時の操作で行ってもよく、例えば、メレスチニブと、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤をそれぞれ、実質的に同時に独立して投与するか、またはメレスチニブとＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤が協働して効果を発揮する時間間隔で別個に投与する。
【００２４】
「別個の」投与との用語は、メレスチニブとＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤をそれぞれ患者に、固定されていない用量投薬形態で、同時に、実質的に同時に、または任意の順序で連続して、投与することを意味する。メレスチニブとＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤それぞれの投与について、所定の時間間隔が存在してもよく、または存在しなくてもよい。
【００２５】
「連続の」投与との用語は、メレスチニブとＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤をそれぞれ患者に、固定されていない（別個の）投薬形態で、別個の作業で投与することを意味する。この２回の投与作業は、特定の時間間隔でリンクしていてもよく、またはリンクしていなくてもよい。例えば、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤を投薬することなく（Ｔ．Ｉ．Ｗ．）メレスチニブを２日間投与するか、またはＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤を１４〜２１日に１回、所定の時間に投与する。
【００２６】
「〜と組み合わせて」との句は、治療が必要な癌患者への、それぞれのメレスチニブおよびＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤の同時の投与、別個の投与および連続的な投与を含む。
【００２７】
ＰＤ−Ｌ１について、抗マウスＰＤ−Ｌ１クローン（１７８Ｇ７）が、ＬＹ３３０００５４のためのサロゲート抗体として使用される。１７８Ｇ７およびＬＹ３３０００５４の両方が、ＰＤ−Ｌ１に対するＰＤ−１の結合をブロックする。１７８Ｇ７およびＬＹ３３０００５４の両方が、ＣＤ８０（ａｋａ  Ｂ７−１）に対するＰＤ−Ｌ１の結合をブロックする。１７８Ｇ７は、既に同定されているサロゲート抗体１０Ｆ．９Ｇ２と競合し、サロゲート抗体１０Ｆ．９Ｇ２は、ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１相互作用をブロックすることが知られており、臨床において、抗ヒト抗体の既知のサロゲートである（Ｅｐｐｉｈｉｍｅｒら、Ｍｉｃｒｏｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２００２：９（２）：１３３）。
【００２８】
１７８Ｇ７のＨＣが配列番号１４であり、１７８Ｇ７のＬＣが配列番号１５である。
【００２９】
特定の実施形態では、本発明の方法のために本明細書で提供される抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加または減少させるように改変される。抗体に対するグリコシル化部位の付加または欠失は、簡便には、１つ以上のグリコシル化部位が作成されるか、または除去されるようにアミノ酸配列を変えることによって達成されてもよい。
【００３０】
抗体がＦｃ領域を含む場合、これに接続する炭水化物は、改変されていてもよい。哺乳動物細胞によって産生されるネイティブ抗体は、典型的には、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に対してＮ結合によって一般的に接続する分岐した二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔら、ＴＩＢＴＥＣＨ  １５：２６−３２（１９９７）を参照。オリゴ糖は、種々の炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、およびシアル酸、および二分岐オリゴ糖構造の「幹部」のＧｌｃＮＡｃに接続するフコースを含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、関連する抗体におけるオリゴ糖の改変は、特定の改良された特性を有する抗体バリアントを作成するために行われてもよい。  さらに、いくつかの実施形態では、関連する抗体におけるオリゴ糖の改変は、このような抗体を含む適切な医薬組成物を容易に得るために行われてもよい。さらに、いくつかの実施形態では、関連する抗体におけるオリゴ糖の改変は、投与中にこのような改変を考慮に入れるために、本明細書に示される抗体投薬量に対する適切な調整を必要とする場合があるが、好ましくは、本明細書に与えられる投薬量は、活性物質を基準とする。
【００３１】
抗体バリアントは、Ｆｃ領域に（直接的または間接的に）接続するフコースを欠いた炭水化物構造を有していてもよい。例えば、このような抗体中のフコースの量は、１％〜８０％、１％〜６５％、５％〜６５％または２０％〜４０％であってもよい。フコースの量は、例えばＷＯ２００８／０７７５４６号に記載されるように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析計によって決定されるような、Ａｓｎ２９７に接続する全ての糖構造（例えば、複合体、ハイブリッドおよび高マンノース構造）の合計に対し、Ａｓｎ２９７での糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域のほぼ２９７位（Ｆｃ領域のＥｕナンバリング）に位置するアスパラギン残基を指す。しかし、Ａｓｎ２９７は、抗体中の小さな配列変動に起因して、位置２９７の上流またな下流の約±３アミノ酸に、すなわち、位置２９４から３００の間に位置していてもよい。このようなフコシル化バリアントは、改良されたＡＤＣＣ機能を有していてもよい。例えば、米国特許公開ＵＳ２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ、Ｌ．）；ＵＳ２００４／００９３６２１号（Ｋｙｏｗａ  Ｈａｋｋｏ  Ｋｏｇｙｏ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を参照。「脱フコシル化」または「フコースを欠いた」抗体バリアントに関連する刊行物の例としては、ＵＳ２００３／０１５７１０８号；ＷＯ２０００／６１７３９号；ＷＯ２００１／２９２４６号；ＵＳ２００３／０１１５６１４号；ＵＳ２００２／０１６４３２８号；およびＹａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉら、Ｂｉｏｔｅｃｈ．  Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）が挙げられる。脱フコシル化抗体を産生することができる細胞株の例としては、タンパク質のフコシル化がされていないＬｅＣ１３  ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａら、Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３−５４５（１９８６）；米国特許出願ＵＳ２００３／０１５７１０８Ａ１号、Ｐｒｅｓｔａ、Ｌ；およびＷＯ２００４／０５６３１２Ａ１号、Ａｄａｍｓら）、およびノックアウト細胞株、例えば、α−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉら、Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）；Ｋａｎｄａ，Ｙ．ら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．、９４（４）：６８０−６８８（２００６）；およびＷＯ２００３／０８５１０７号を参照）が挙げられる。
【００３２】
本明細書で使用される場合、「キット」との用語は、少なくとも２つの別個の容器を含み、第１の容器は、メレスチニブまたはその医薬的に許容される塩を含み、第２の容器は、共抑制免疫チェックポイントの１つ以上の阻害剤、好ましくは、ＰＤ−１抗体またはＰＤ−Ｌ１抗体を含む、パッケージを指す。「キット」は、これらの第１および第２の容器の内容物の全てまたは一部を癌患者に投与するための指示書も含んでいてもよい。
【００３３】
本明細書で使用される場合、「癌」および「癌性」との用語は、典型的には制御不能な細胞増殖を特徴とする患者の生理学的状態を指すか、または記述する。
【００３４】
本明細書で使用される場合、「原発性腫瘍」または「原発性癌」との用語は、元々の癌を意味し、被験体の体内の別の組織、臓器または位置に位置する転移性病変を意味しない。
【００３５】
本明細書で使用される場合、「有効な量」との用語は、診断または治療で患者に有効な応答を与えるメレスチニブまたはその医薬的に許容される塩の量または用量と、共抑制免疫チェックポイント阻害剤、好ましくは抗抗体ＰＤ−１または抗抗体ＰＤ−Ｌ１の量または用量を指す。
【００３６】
本発明の組み合わせ治療が、体内で、有効なレベルの共抑制免疫チェックポイント阻害剤、好ましくは、抗体ＰＤ−１または抗体ＰＤ−Ｌ１と、ＭＥＴまたはＭＳＴ１Ｒ阻害剤である化合物、またはその医薬的に許容される塩、好ましくは、メレスチニブまたはその医薬的に許容される塩を与える任意の様式で、共抑制免疫チェックポイント阻害剤、好ましくは、抗体ＰＤ−１または抗体ＰＤ−Ｌ１を、ＭＥＴ、ＡＸＬ、ＭＥＲＴＫ、ＭＫＮＫ１／２、ＰＤＧＦＲＡ、ＴＥＫまたはＭＳＴ１Ｒ阻害剤である化合物、またはその医薬的に許容される塩、好ましくは、メレスチニブまたはその医薬的に許容される塩と共に投与することによって行われることが理解される。
【００３７】
本明細書で使用される場合、薬剤の組み合わせを用いた治療に対する患者の「有効な応答」または患者の「応答性」との用語は、ＭＥＴまたはＭＳＴ１Ｒ阻害剤である化合物またはその医薬的に許容される塩、好ましくは、メレスチニブまたはその医薬的に許容される塩と、共抑制免疫チェックポイント阻害剤、好ましくは抗体ＰＤ−１または抗体ＰＤ−Ｌ１とを投与するとき、患者に与えられる臨床または治療上の便益を指す。
【００３８】
本明細書で使用される場合、「〜と組み合わせて」との用語は、ＭＥＴまたはＭＳＴ１Ｒ阻害剤またはその医薬的に許容される塩が、共抑制免疫チェックポイント阻害剤の前に投与される、ＭＥＴまたはＭＳＴ１Ｒ阻害剤である化合物またはその医薬的に許容される塩、好ましくはメレスチニブまたはその医薬的に許容される塩と、共抑制免疫チェックポイント阻害剤、好ましくは抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体の投与を指す。
【００３９】
メレスチニブまたはその医薬的に許容される塩は、好ましくは、医薬的に許容される担体を用い、医薬組成物として配合され、種々の経路で投与される。好ましくは、このような組成物は、経口投与用である。ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤は、好ましくは、医薬的に許容される担体を用いた医薬組成物として配合され、非経口経路、好ましくは、静脈内点滴によって投与される。好ましくは、このような組成物は、凍結乾燥した粉末または液体組成物であってもよい。投薬量を投与する準備をするための再構築および希釈は、ラベルに従うか、または当業者によって通常に行われる。このような医薬組成物およびこれを調製するためのプロセスは、当該技術分野でよく知られている。例えば、ＨＡＮＤＢＯＯＫ  ＯＦ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＥＸＣＩＰＩＥＮＴＳ、第５版、Ｒｏｗｅら編集、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ（２００６）；およびＲＥＭＩＮＧＴＯＮ：ＴＨＥ  ＳＣＩＥＮＣＥ  ＡＮＤ  ＰＲＡＣＴＩＣＥ  ＯＦ  ＰＨＡＲＭＡＣＹ（Ｔｒｏｙら編集、第２１版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００６）を参照。
【００４０】
メレスチニブは、多くの無機および有機の対イオンと反応し、医薬的に許容される塩を形成することができる。このような医薬的に許容される塩およびこれを調製するための一般的な方法論は、当該技術分野でよく知られている。例えば、Ｐ．Ｓｔａｈｌら、ＨＡＮＤＢＯＯＫ  ＯＦ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＳＡＬＴＳ：ＰＲＯＰＥＲＴＩＥＳ，ＳＥＬＥＣＴＩＯＮ  ＡＮＤ  ＵＳＥ，（ＶＣＨＡ／Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，２００２）；Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅら、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｖｏｌ．６６、Ｎｏ．１、１９７７年１月を参照。メレスチニブの医薬的に許容される塩は、投与中に塩を考慮に入れるために、本明細書に示されるメレスチニブ投薬量に対する適切な調整を必要とする場合があるが、好ましくは、本明細書に与えられる投薬量は、活性物質を基準とする。
【００４１】
付き添う診断医によって、当業者として、既知の技術を使用し、類似した状況下で得られる結果を観察することによって、有効な量を容易に決定することができる。患者のための有効な量を決定する際に、付き添う診断医は、多くの因子を考慮し、このような因子には、限定されないが、患者の種、その大きさ、年齢、全体的な健康状態、関与する具体的な疾患または障害、その疾患または障害の関与の程度または重篤度、個々の患者の応答、投与される特定の化合物、投与態様、投与される調製物のバイオアベイラビリティ特徴、選択する投薬計画、併用薬の使用、他の関連する状況が含まれる。
【００４２】
メレスチニブまたはその医薬的に許容される塩は、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせて、２１日サイクルまたは２８日サイクルで、１日１回４０ｍｇ〜１２０ｍｇの用量で投与される。より好ましくは、メレスチニブまたはその医薬的に許容される塩は、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせて、２１日サイクルまたは２８日サイクルで、１日１回８０ｍｇの用量で投与される。さらにより好ましくは、メレスチニブまたはその医薬的に許容される塩は、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせて、２１日サイクルまたは２８日サイクルで、１日１回１２０ｍｇの用量で投与される。
【００４３】
抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、１４日サイクルの１日目に、２１日サイクルの１日目に、２１日サイクルの１日目と８日目に、２１日サイクルの１日目と１５日目に、２１日目サイクルの１日目、８日目、１５日目に、２８日サイクルの１日目に、または２８日サイクルの１日目と１５日目に、メレスチニブまたはその医薬的に許容される塩と、２１日サイクルまたは２８日サイクルで１日に１回４０ｍｇ〜１２０ｍｇの用量で、より好ましくは８０ｍｇまたは１２０ｍｇの用量で組み合わせて、１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。より好ましくは、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、１４日サイクルの１日目に、２１日サイクルの１日目に、２１日サイクルの１日目と８日目に、２１日サイクルの１日目と１５日目に、２１日目サイクルの１日目、８日目、１５日目に、２８日サイクルの１日目に、または２８日サイクルの１日目と１５日目に、メレスチニブまたはその医薬的に許容される塩と、２１日サイクルまたは２８日サイクルで１日に１回４０ｍｇ〜１２０ｍｇの用量で、より好ましくは８０ｍｇまたは１２０ｍｇの用量で組み合わせて、２ｍｇ／ｋｇ〜８ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。さらにより好ましくは、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、１４日サイクルの１日目に、２１日サイクルの１日目に、２１日サイクルの１日目と８日目に、２１日サイクルの１日目と１５日目に、２１日目サイクルの１日目、８日目、１５日目に、２８日サイクルの１日目に、または２８日サイクルの１日目と１５日目に、メレスチニブまたはその医薬的に許容される塩と、２１日サイクルまたは２８日サイクルで１日に１回４０ｍｇ〜１２０ｍｇの用量で、より好ましくは８０ｍｇまたは１２０ｍｇの用量で組み合わせて、５ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
ＬＹ３３０００５４は、１４日サイクルの１日目に、２１日サイクルの１日目に、２１日サイクルの１日目と８日目に、２１日サイクルの１日目と１５日目に、２１日目サイクルの１日目、８日目、１５日目に、２８日サイクルの１日目に、または２８日サイクルの１日目と１５日目に、メレスチニブまたはその医薬的に許容される塩と、２１日サイクルまたは２８日サイクルで１日に１回４０ｍｇ〜１２０ｍｇの用量で、より好ましくは８０ｍｇまたは１２０ｍｇの用量で組み合わせて、１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。より好ましくは、ＬＹ３３０００５４は、１４日サイクルの１日目に、２１日サイクルの１日目に、２１日サイクルの１日目と８日目に、２１日サイクルの１日目と１５日目に、２１日目サイクルの１日目、８日目、１５日目に、２８日サイクルの１日目に、または２８日サイクルの１日目と１５日目に、メレスチニブまたはその医薬的に許容される塩と、２１日サイクルまたは２８日サイクルで１日に１回４０ｍｇ〜１２０ｍｇの用量で、より好ましくは８０ｍｇまたは１２０ｍｇの用量で組み合わせて、２ｍｇ／ｋｇ〜８ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。さらにより好ましくは、ＬＹ３３０００５４は、１４日サイクルの１日目に、２１日サイクルの１日目に、２１日サイクルの１日目と８日目に、２１日サイクルの１日目と１５日目に、２１日目サイクルの１日目、８日目、１５日目に、２８日サイクルの１日目に、または２８日サイクルの１日目と１５日目に、メレスチニブまたはその医薬的に許容される塩と、２１日サイクルまたは２８日サイクルで１日に１回４０ｍｇ〜１２０ｍｇの用量で、より好ましくは８０ｍｇまたは１２０ｍｇの用量で組み合わせて、５ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
【００４４】
抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、１４日サイクルの１日目に、２１日サイクルの１日目に、２１日サイクルの１日目と８日目に、２１日サイクルの１日目と１５日目に、２１日目サイクルの１日目、８日目、１５日目に、２８日サイクルの１日目に、または２８日サイクルの１日目と１５日目に、メレスチニブまたはその医薬的に許容される塩と、２１日サイクルまたは２８日サイクルで１日に１回４０ｍｇ〜１２０ｍｇの用量で、より好ましくは８０ｍｇまたは１２０ｍｇの用量で組み合わせて、５０ｍｇ〜１５００ｍｇの用量で投与される。より好ましくは、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、１４日サイクルの１日目に、２１日サイクルの１日目に、２１日サイクルの１日目と８日目に、２１日サイクルの１日目と１５日目に、２１日目サイクルの１日目、８日目、１５日目に、２８日サイクルの１日目に、または２８日サイクルの１日目と１５日目に、メレスチニブまたはその医薬的に許容される塩と、２１日サイクルまたは２８日サイクルで１日に１回４０ｍｇ〜１２０ｍｇの用量で、より好ましくは８０ｍｇまたは１２０ｍｇの用量で組み合わせて、２００ｍｇ〜１２００ｍｇの用量で投与される。さらにより好ましくは、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、１４日サイクルの１日目に、２１日サイクルの１日目に、２１日サイクルの１日目と８日目に、２１日サイクルの１日目と１５日目に、２１日目サイクルの１日目、８日目、１５日目に、２８日サイクルの１日目に、または２８日サイクルの１日目と１５日目に、メレスチニブまたはその医薬的に許容される塩と、２１日サイクルまたは２８日サイクルで１日に１回４０ｍｇ〜１２０ｍｇの用量で、より好ましくは８０ｍｇまたは１２０ｍｇの用量で組み合わせて、７００ｍｇの用量で投与される。
【００４５】
ＬＹ３３０００５４は、１４日サイクルの１日目に、２１日サイクルの１日目に、２１日サイクルの１日目と８日目に、２１日サイクルの１日目と１５日目に、２１日目サイクルの１日目、８日目、１５日目に、２８日サイクルの１日目に、または２８日サイクルの１日目と１５日目に、メレスチニブまたはその医薬的に許容される塩と、２１日サイクルまたは２８日サイクルで１日に１回４０ｍｇ〜１２０ｍｇの用量で、より好ましくは８０ｍｇまたは１２０ｍｇの用量で組み合わせて、５０ｍｇ〜１５００ｍｇの用量で投与される。さらにより好ましくは、ＬＹ３３０００５４は、１４日サイクルの１日目に、２１日サイクルの１日目に、２１日サイクルの１日目と８日目に、２１日サイクルの１日目と１５日目に、２１日目サイクルの１日目、８日目、１５日目に、２８日サイクルの１日目に、または２８日サイクルの１日目と１５日目に、メレスチニブまたはその医薬的に許容される塩と、２１日サイクルまたは２８日サイクルで１日に１回４０ｍｇ〜１２０ｍｇの用量で、より好ましくは８０ｍｇまたは１２０ｍｇの用量で組み合わせて、２００ｍｇ〜１２００ｍｇの用量で投与される。さらにより好ましくは、ＬＹ３３０００５４は、１４日サイクルの１日目に、２１日サイクルの１日目に、２１日サイクルの１日目と８日目に、２１日サイクルの１日目と１５日目に、２１日目サイクルの１日目、８日目、１５日目に、２８日サイクルの１日目に、または２８日サイクルの１日目と１５日目に、メレスチニブまたはその医薬的に許容される塩と、２１日サイクルまたは２８日サイクルで１日に１回４０ｍｇ〜１２０ｍｇの用量で、より好ましくは８０ｍｇまたは１２０ｍｇの用量で組み合わせて、７００ｍｇの用量で投与される。
【００４６】
短期間または長期間の治療の中断または投与の中断は、例えば、臨床スケジュールの遅れ、治療の緊急な有害事象を軽減するための時間的許容、関連する癌種の回復などに起因して、種々の時間で行われてもよい。さらなる治療または投与が望ましいか、または必要な場合、本発明は、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体と共にメレスチニブの治療または投与するのを再び開始してもよく、または再開してもよい投薬計画を含む。
【００４７】
ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤は、ＵＳ８，００８，４４９号およびＷＯ２００６／１２１１６８号；Ｈａｍｉｄ，Ｏ．ら、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、２０１３、３６９（２）：１３４−４４；ＷＯ２００９／１１４３３５号およびＵＳ８，３５４，５０９号；ＵＳ８，６０９，０８９号、ＵＳ２０１００２８３３０号および／またはＵＳ２０１２０１１４６４９号；ＷＯ２００７／００５８７４号；ＷＯ２０１０／０７７６３４号；ＵＳ７，９４３，７４３号およびＵＳ２０１２００３９９０６号に記載される手順によって、または当業者によってよく知られており、通常使用される手順によって調製されてもよい。
【００４８】
投与経路は、任意の様式でさまざまであってもよく、薬物の物理特性および患者および介護者の簡便さによって制限される。好ましくは、抗体ＰＤ−１または抗体ＰＤ−Ｌ１、好ましくは、ＬＹ３３０００５４は、非経口投与、例えば、静脈内または皮下投与のために配合される。好ましくは、メレスチニブまたはその医薬的に許容される塩は、静脈内または皮下投与を含め、経口または非経口投与のために配合される。
【００４９】
メレスチニブは、錠剤またはカプセルに配合されてもよい。このような医薬組成物およびこれを調製するプロセスが、当該技術分野でよく知られている。（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、Ｌ．Ｖ．Ａｌｌｅｎ、Ｅｄｉｔｏｒ、第２２版、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ、２０１２を参照）。例えば、メレスチニブは、錠剤に配合されてもよい。このような錠剤は、２０％  メレスチニブ：ヒドロキシプロピルメチルセルロース酢酸エステルコハク酸エステル（ＨＰＭＣＡＳ）Ｍｅｄｉｕｍ  Ｇｒａｄｅ（Ｍ）（ＨＰＭＣＡＳ−Ｍ）Ｓｐｒａｙ  Ｄｒｉｅｄ  Ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ（ＳＤＤ）の組成物から製造することができる。２０％  メレスチニブ：ＨＰＭＣＡＳ−Ｍ  ＳＤＤは、メレスチニブ（１％）、ＨＰＭＣＡＳ−Ｍ（４％）、アセトン（８５．５％）、精製水（９．５％）を含有する噴霧溶液組成物（ｗｔ％）から製造される。ポリマーを添加する前に、確実に、メレスチニブをアセトン／水溶液に完全に溶解させる。スプレー乾燥してＳＤＤ組成物を製造する前に、ポリマーが溶解していることを視覚的に確認する。得られるＳＤＤ組成物は、２０％メレスチニブ：ＨＰＭＣＡＳ−Ｍ  ＳＤＤ（ｍｇ／ｇ）であり、メレスチニブ（２００ｍｇ／ｇ）とＨＰＭＣＡＳ−Ｍ（８００ｍｇ／ｇ）を含む。必要な場合、薬物基質のアッセイを考慮して、薬物基質の量を調整してもよい。物質収支を維持するのに必要な場合、薬物基質のアッセイのわずかな変化に従って、ＨＰＭＣＡＳ−Ｍの重量を調整してもよい。処理する間に、アセトンおよび精製水は残留レベルまで除去される。製剤組成物は、例えば、ＳＤＤメレスチニブと、他の賦形剤、例えば、希釈剤（例えば、微晶質セルロースおよびマンニトール）、崩壊剤（例えば、クロスカルメロースナトリウム）、界面活性剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）、滑剤（例えば、シロイド二酸化ケイ素）および／または潤滑剤（例えば、フマル酸ステアリルナトリウム）を含んでいてもよい。錠剤の製造は、スプレー乾燥し、メレスチニブのＳＤＤを製造し、その後、ローラ圧密、錠剤への圧縮を含む。次いで、錠剤は、ＨＰＭＣ系の着色混合物でフィルムコーティングされる。
【００５０】
例えば、メレスチニブは、錠剤に配合されてもよい。このような錠剤は、２０％  メレスチニブ：ヒドロキシプロピルメチルセルロース酢酸エステルコハク酸エステル（ＨＰＭＣＡＳ）Ｍｅｄｉｕｍ  Ｇｒａｄｅ（Ｍ）（ＨＰＭＣＡＳ−Ｍ）Ｓｐｒａｙ  Ｄｒｉｅｄ  Ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ（ＳＤＤ）の組成物から製造することができる。２０％  メレスチニブ：ＨＰＭＣＡＳ−Ｍ  ＳＤＤは、メレスチニブ（１％）、ＨＰＭＣＡＳ−Ｍ（４％）、アセトン（８５．５％）、精製水（９．５％）を含有する噴霧溶液組成物（ｗｔ％）から製造される。ポリマーを添加する前に、確実に、メレスチニブをアセトン／水溶液に完全に溶解させる。スプレー乾燥してＳＤＤ組成物を製造する前に、ポリマーが溶解していることを視覚的に確認する。得られるＳＤＤ組成物は、２０％メレスチニブ：ＨＰＭＣＡＳ−Ｍ  ＳＤＤ（ｍｇ／ｇ）であり、メレスチニブ（２００ｍｇ／ｇ）とＨＰＭＣＡＳ−Ｍ（８００ｍｇ／ｇ）を含む。必要な場合、薬物基質のアッセイを考慮して、薬物基質の量を調整してもよい。物質収支を維持するのに必要な場合、薬物基質のアッセイのわずかな変化に従って、ＨＰＭＣＡＳ−Ｍの重量を調整してもよい。処理する間に、アセトンおよび精製水は残留レベルまで除去される。製剤組成物は、例えば、ＳＤＤメレスチニブと、他の賦形剤、例えば、希釈剤（例えば、微晶質セルロースおよびマンニトール）、崩壊剤（例えば、クロスカルメロースナトリウム）、界面活性剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）、滑剤（例えば、シロイド二酸化ケイ素）および／または潤滑剤（例えば、フマル酸ステアリルナトリウム）を含んでいてもよい。錠剤の製造は、スプレー乾燥し、メレスチニブのＳＤＤを製造し、その後、ローラ圧密、錠剤への圧縮を含む。次いで、錠剤は、ＨＰＭＣ系の着色混合物でフィルムコーティングされる。
【００５１】
用量強度が４０ｍｇのメレスチニブＳＤＤフィルムコーティング錠剤の単位処方のための錠剤の例をチャート１に記載する。
チャート１
Ｎ−（３−フルオロ−４−（１−メチル−６−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−イルオキシ）フェニル）−１−（４−フルオロフェニル）−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミド（メレスチニブ）錠剤４０ｍｇの単位処方の例
【表１】
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１．必要な場合、分散物のアッセイを考慮して、ＳＤＤの量を調整する。
２．特に言及されないかぎり、各賦形剤について、合理的な±１０％の変動は許容される。
３．ＳＤＤ効能の変化に適応させ、錠剤の全重量を維持するために、微晶質セルロースの重量を必要な場合に調整してもよい。
４．処理中に、精製水は残留レベルまで除去される。
【００５２】
本発明の抗体、またはこれを含む医薬組成物を非経口経路（例えば皮下および静脈内）で投与してもよい。本発明の抗体は、医薬的に許容される担体、希釈剤または賦形剤と共に、１回分または複数回分の用量で患者に投与されてもよい。本発明の医薬組成物は、当該技術分野でよく知られた方法によって調製することができ（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２２版、（２０１２）、Ａ．Ｌｏｙｄら、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ）、本明細書に開示する抗体と、１つ以上の医薬的に許容される担体、希釈剤または賦形剤とを含む。
【００５３】
本発明の組み合わせ治療の効能は、限定されないが、腫瘍退縮、腫瘍の重量または大きさの縮小、進行までの時間、全体的な生存、進行のない状態での生存、全体的な応答率、応答の持続期間、クオリティオブライブを含め、癌治療の評価に一般的に使用される種々のエンドポイントによって測定することができる。本発明で使用される治療薬剤は、原発性腫瘍を縮小することなく転移性の広がりを阻害し得るが、原発性腫瘍の収縮を誘発してもよく、または単純に腫瘍静止効果を発揮してもよい。本発明が、固有の抗腫瘍剤の組み合わせの使用に関するため、例えば、血管形成および／または細胞周期活性の血漿または尿マーカーの測定、血管形成および／または細胞周期活性のための組織に基づくバイオマーカー、免疫細胞の組織に基づく評価、放射線イメージングを介する応答の測定を含め、本発明の任意の特定の組み合わせ治療の効能を決定する新しい手法が、場合により使用されてもよい。以下の実施例は、メレスチニブのみ、ＰＤ−１阻害剤のみ、またはＰＤ−Ｌ１阻害剤のみ、メレスチニブとＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤の組み合わせそれぞれについての活性を示す。
【００５４】
ＬＹ３３０００５４の精製および特性決定
抗体の発現および精製
ＬＹ３３０００５４の重鎖および軽鎖の可変領域のポリペプチド、完全な重鎖および軽鎖のアミノ酸配列、これをコードするヌクレオチド配列は、「アミノ酸およびヌクレオチド配列」の名称の章で、以下に列挙する。  これに加え、ＬＹ３３０００５４の軽鎖、重鎖、軽鎖可変領域、重鎖可変領域の配列番号をチャート２に示す。
【００５５】
限定されないが、ＬＹ３３０００５４を含む本発明の抗体を、本質的に以下のように製造し、調製することができる。適切な宿主細胞（例えばＨＥＫ２９３またはＣＨＯ）が、最適な所定のＨＣ：ＬＣベクター比を用いる抗体を分泌するための発現系を用いるか、またはＨＣとＬＣを両方ともコードする単一のベクター系を用い、一時的または安定にトランスフェクトされてもよい。抗体が分泌した分類された培地を、任意の多くの一般的に使用される技術を用いて精製してもよい。例えば、培地を、簡便には、Ｆａｂフラグメントのために、適合性バッファー（例えば、リン酸緩衝化食塩水（ｐＨ７．４））を用いて平衡化した、ＭａｂＳｅｌｅｃｔカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）またはＫａｐｐａＳｅｌｅｃｔカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に適用してもよい。カラムを洗浄し、非特異性の結合要素を洗浄してもよい。結合した抗体は、例えば、ｐＨ勾配によって（例えば、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓバッファー（ｐＨ７）から１０ｍＭのクエン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ３．０）まで、またはリン酸緩衝化食塩水（ｐＨ７．４）から１００ｍＭのグリシンバッファー（ｐＨ３．０）まで）によって溶出させてもよい。抗体フラクションは、例えば、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）によって検出されてもよく、次いで、プールされてもよい。さらなる精製は、意図する用途に応じて、任意である。抗体は、一般的な技術を用い、濃縮されてもよく、および／または滅菌濾過されてもよい。可溶性凝集物およびマルチマーは、サイズ排除、疎水性相互作用、イオン交換、多様な、またはヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーを含め、一般的な技術によって効果的に除去され得る。これらのクロマトグラフィーの後のＬＹ３３０００５４の純度は、９５％より大きい。生成物を−７０℃ですぐに凍結させてもよく、または凍結乾燥させてもよい。
チャート２：配列番号
【表２】
2019525934.tif 000004
【００５６】
結合速度論およびアフィニティ
ヒトＰＤ−Ｌ１の速度論および平衡解離定数（ＫＤ）は、表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ）を用い、本発明の抗体について決定される。
センサチップ表面へのリガンドとしての本発明の抗体の固定化は、２５℃で行う。可溶性ヒトＰＤ−Ｌ１−Ｆｃ融合タンパク質（ある場合には、カニクイザルＰＤ−Ｌ１−Ｆｃ融合タンパク質）を検体として、０．０１２３ｎＭ〜９ｎＭの濃度で注射する。分析を３７℃で行う。各サンプルの接触時間は、３０μＬ／分で１８０秒である。解離時間は、２４０〜１５００秒である。固定された表面は、０．９５Ｍ  ＮａＣｌ／２５ｍＭ  ＮａＯＨを３０μＬ／分で用いて１８秒間で再生され、次いで、３０秒間安定化される。結合速度論は、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェア（Ｖｅｒｓｉｏｎ  ３．０）を用いて分析される。データは、ブランクフローセルを参照して示され、そのデータを１：１結合モデルに対してフィッティングする。
【００５７】
このアッセイに本質的に記載するように行われた実験で、ＬＹ３３０００５４は、８２ｐＭのＫＤで、ヒトＰＤ−Ｌ１に結合する。
チャート３：ＬＹ３３０００５４のＳＰＲによる結合
【表３】
2019525934.tif 000005
【００５８】
ＥＬＩＳＡ分析：ＬＹ３３０００５４は、組換えＰＤ−Ｌ１に結合する
本発明の抗体がヒトＰＤ−Ｌ１に結合する能力をＥＬＩＳＡアッセイで測定することができる。ＰＤ−Ｌ１結合アッセイについて、９６ウェルプレート（ＮＵＮＣ（登録商標））を、ヒトＰＤ−Ｌ１−Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用い、４℃で一晩コーティングする。ブロッキングバッファー（５％脱脂乾燥乳を含むＰＢＳ）で、ウェルを２時間ブロックする。０．１％  ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０を含むＰＢＳで、ウェルを３回洗浄する。次いで、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはコントロールＩｇＧ（１００μＬ）を加え、室温で１時間インキュベートする。洗浄後、プレートを、１００μＬのヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆ（ａｂ’）２−ＨＲＰ接合体（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）と共に、室温で１時間インキュベートする。プレートを洗浄し、次いで、１００μＬの３，３’，５，５’−テトラ−メチルベンジジンと共にインキュベートする。４５０ｎｍでの吸光度をマイクロプレートリーダーで読み取る。半数効果濃度（ＥＣ５０）は、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６ソフトウェアを用いて計算される。
このアッセイに本質的に記載するように行われた実験で、ＬＹ３３０００５４は、０．１１ｎＭのＥＣ５０で、ヒトＰＤ−Ｌ１に結合する。ＬＹ３３０００５４は、３種類全ての温度条件（４℃、２５℃、４０℃）で４週間後、その結合活性を保持している。ＬＹ３３０００５４は、ＰＤ−Ｌ１に対し、Ｓ７０および２．１４Ｈ９ＯＰＴと同様の結合活性を示した。
【００５９】
フローサイトメトリー分析：ＬＹ３３０００５４は、細胞表面ＰＤ−Ｌ１に結合する
本発明の抗体が、細胞表面で発現したヒトＰＤ−Ｌ１に結合する能力をフローサイトメトリーアッセイで測定することができる。ＭＤＡ−ＭＢ  ２３１細胞（ＰＤ−Ｌ１陽性ヒト乳腺腺癌細胞株）を、１．５ｘ１０５細胞／ウェルで、２００μＬの染色バッファー中、９６ウェルのＵ字底プレートに加え、４℃で３０分間インキュベートする。プレートを１２００ｒｐｍで５分間遠心分離処理し、上清を除去する。１００μＬの抗体−ビオチン（１０μｇ／ｍｌから出発し、段階的に１：４まで希釈）を添加する。合計６回の段階希釈物を評価する。４℃で３０分間インキュベートした後、細胞をＤＰＢＳで洗浄する。５μＬのストレプトアビジン−ＰＥを含む１００μＬの検出バッファーを添加する。４℃で３０分間インキュベートした後、プレートを遠心分離処理し、ＤＰＢＳで２回洗浄する。ＦＡＣＳ分析のために２００μＬのＤＰＢＳで細胞を再懸濁する。
このアッセイに本質的に記載するように行われた実験で、ＬＹ３３０００５４は、用量に依存する様式で、０．１４ｎＭのＥＣ５０で、ＭＤＡ−ＭＢ２３１細胞上の細胞表面ＰＤ−Ｌ１に結合する。
【００６０】
ＥＬＩＳＡ分析：ＬＹ３３０００５４は、ＰＤ−Ｌ１とＰＤ−１の相互作用をブロックする
本発明の抗体が、ＰＤ−１に対するＰＤ−Ｌ１の結合をブロックする能力をＥＬＩＳＡアッセイで測定することができる。受容体−リガンドブロックアッセイについて、さまざまな量（の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはコントロールＩｇＧ）を、一定量のビオチニル化ＰＤ−Ｌ１−Ｆｃ融合タンパク質（１００ｎｇ／ウェル）と混合し、室温で１時間インキュベートする。混合物を、ＰＤ−１−Ｆｃ（１μｇ／ｍｌ）でプレコートした９６ウェルプレートに移し、次いで、室温でさらに１時間インキュベートする。洗浄後、ストレプトアビジンＨＲＰ接合体を加え、４５０ｎｍでの吸光度を読み取る。ＩＣ５０は、ＰＤ−１に対するＰＤ−Ｌ１の結合を５０％阻害するのに必要な抗体濃度を表す。
このアッセイに本質的に記載するように行われた実験で、ＬＹ３３０００５４は、０．９５ｎＭのＩＣ５０で、ＰＤ−Ｌ１とＰＤ−１の相互作用をブロックする。ＬＹ３３０００５４は、３種類全ての温度条件（４℃、２５℃、４０℃）で４週間後、そのブロック活性を保持している。ＬＹ３３０００５４は、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との相互作用に対し、Ｓ７０および２．１４Ｈ９ＯＰＴと同様のブロック能力を示す。
【００６１】
ＥＬＩＳＡ分析：ＬＹ３３０００５４は、ＰＤ−Ｌ１とＢ７−１（ａｋａ  ＣＤ８０）の相互作用をブロックする
ヒトＰＤ−Ｌ１は、Ｂ７−１にも結合する。本発明の抗体が、Ｂ７−１に対するＰＤ−Ｌ１の結合をブロックする能力をＥＬＩＳＡアッセイで測定することができる。ＰＤ−Ｌ１／Ｂ７−１ブロックアッセイの手順は、ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１ブロックアッセイと似ているが、但し、プレートを１μｇ／ｍｌのＢ７−１−Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）でコーティングする。ＰＤ−１に対するＰＤ−Ｌ１結合を５０％阻害するのに必要な抗体濃度（ＩＣ５０）は、ＧｒａｐｈＰａｄ  ｐｒｉｓｍ  ６ソフトウェアを用いて計算される。
このアッセイに本質的に記載するように行われた実験で、ＬＹ３３０００５４は、２．４ｎＭのＩＣ５０で、ＰＤ−Ｌ１とＢ７−１の相互作用をブロックする。ＬＹ３３０００５４は、ＰＤ−Ｌ１とＢ７−１との相互作用に対し、Ｓ７０および２．１４Ｈ９ＯＰＴと同様のブロック能力を示す。
【００６２】
前臨床同系マウス腫瘍モデルにおけるメレスチニブと抗ＰＤ−Ｌ１抗体の組み合わせの評価
合理的な実験
同系マウス腫瘍モデルを使用し、メレスチニブと抗ＰＤ−Ｌ１抗体の潜在的な組み合わせ効果を評価し、このモデルは、マウス結腸直腸癌株ＣＴ２６を用いるＣＴ２６結腸直腸癌モデルである。この実験は、免疫適格マウスで行われる（Ｇｒｏｓｓｏ  ａｎｄ  Ｊｕｒｅ−Ｋｕｎｋｅｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  Ｖｏｌ．１３，ｐ．５，２０１３年１月；Ｄｕｒａｉｓｗａｍｙら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２０１３年６月１５日、７３；３５９１）。抗ＰＤ−Ｌ１抗体サロゲート（１７８Ｇ７、ＬＳＮ３３７０１８１）（Ｅｐｐｉｈｉｍｅｒら、Ｍｉｃｒｏｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２００２：９（２）：１３３）をこのマウス試験で使用する。
【００６３】
動物
Ｅｎｖｉｇｏ（Ｈａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）からの雌ＢＡＬＢ／ｃマウス（１８〜２０グラム）をこの試験に使用する。餌と水を不断給餌する。実験操作の前に、動物を１週間順応させる。この試験は、ＡＡＬＡＣ公認の機関ガイドラインに従って行われる。
【００６４】
化合物の調製
メレスチニブを、９０％（２０％カプチゾール水溶液）中の１０％ＰＥＧ  ４００溶液として週に１回配合する。抗ＰＤ−Ｌ１抗体（１７８Ｇ７、ＬＳＮ３３７０１８１）を、ＰＢＳ（リン酸緩衝化食塩水）中で配合する。
【００６５】
試験設計
ＣＴ２６細胞（体内のｉｎ  ｖｉｖｏ薬理学細胞培養群ロット番号ＣＴ２６．ＷＴ．３１８４８７８）を移植に使用する。ＨＢＳＳ中の約１×１０６個の細胞を、麻酔下、動物の右後部脇腹に皮下移植する。
試験Ｓ０８２０１５は、４つの群を有している。（１）ビヒクルコントロール（９０％［２０％カプチゾール水］中の１０％のＰＥＧ  ４００）を１日に１回、２１日間経口投与する。（２）単剤メレスチニブを１日に１回、６ｍｇ／ｋｇを２１日間経口投与する。（３）単剤メレスチニブを、１日に１回、１２ｍｇ／ｋｇを２１日間経口投与する。（４）単剤メレスチニブを、１日に１回、２４ｍｇ／ｋｇを２１日間経口投与する。メレスチニブの投薬は、ＣＴ２６細胞を移植してから６日目に開始する。群あたり１５匹の動物が存在する。免疫機能に対するメレスチニブの効果を調べるために脾臓と腫瘍を収集するために、群あたり５匹の動物が、ＣＴ２６細胞移植から１３日目と２０日目に取り出される。群あたり５匹の動物が、試験終了まで残っている（２６日目）。腫瘍の体積と体重を週に２回測定する。腫瘍の体積を、式：ｖ＝ｌ×ｗ２×０．５３６を用いることによって概算し、ここで、ｌ＝測定した直径のうち大きい方、ｗ＝垂直方向の小さい方の直径である。試験終了時に、動物をＣＯ２および頸椎脱臼を用いて屠殺する。
【００６６】
試験Ｓ０１０５１６は、６つの群を有している。（１）ビヒクルコントロール（９０％［２０％カプチゾール水］中の１０％のＰＥＧ  ４００）を１日１回、２１日間経口投与し、投与は、ＣＴ２６細胞を移植してから６日目から開始する。（２）単剤抗ＰＤ−Ｌ１抗体（１７８Ｇ７、ＬＳＮ３３７０１８１）を、ＣＴ２６細胞を移植してから６日目から開始し、ＩＰを介し、週に１回、５００μｇ／動物を３週間投与する。（３）単剤メレスチニブを、ＣＴ２６細胞を移植してから６日目から開始し、週に１回、１２ｍｇ／ｋｇを２１日間経口投与する。（４）ＣＴ２６細胞を移植してから６日目から開始し、メレスチニブ（１２ｍｇ／ｋｇを１日に１回、２１日間経口）と抗ＰＤ−Ｌ１抗体（５００μｇ／動物を週に１回、ＩＰを介して３週間）の同時の組み合わせ。（５）メレスチニブ（１２ｍｇ／ｋｇを１日に１回、２１日間経口を、ＣＴ２６細胞を移植してから６日目から開始）と抗ＰＤ−Ｌ１抗体（ＣＴ２６細胞を移植してから１３日目から開始し、５００μｇ／動物を週に１回、ＩＰを介して３週間）の連続的な組み合わせ。（６）ＣＴ２６細胞を移植してから１０日目から開始し、メレスチニブ（１２ｍｇ／ｋｇを１日に１回、２１日間経口）と抗ＰＤ−Ｌ１抗体（５００μｇ／動物を週に１回、ＩＰを介して３週間）の遅延して始まる同時の組み合わせ。
【００６７】
群あたり１５匹の動物が存在する。免疫機能に対するメレスチニブと抗ＰＤ−Ｌ１抗体の組み合わせとの組み合わせの効果を調べるために脾臓と腫瘍を収集するために、群あたり５匹の動物が、ＣＴ２６細胞移植から２０日目に取り出される。群あたり１０匹の動物が、試験の持続時間中、維持されるが、試験プロトコルであらかじめ定義したように、腫瘍の体積が２５００ｍｍ３を超えるか、または潰瘍化したら動物を屠殺する。腫瘍の体積と体重を週に２回測定する。腫瘍の体積を、式：ｖ＝ｌ×ｗ２×０．５３６を用いることによって概算し、ここで、ｌ＝測定した直径のうち大きい方、ｗ＝垂直方向の小さい方の直径である。
【００６８】
最後の用量の薬物を、第２群、第３群、第４群、第５群、第６群にそれぞれ、２０日目、２７日目、２７日目、２７日目、３１日目に摂取させる。薬物投薬が終了してから約１ヶ月〜１．５ヶ月の６４日目に、まだ生きており、腫瘍応答がＰＲ（部分応答体）またはＣＲ（完全応答体）に分類される動物を、ＣＴ２６腫瘍細胞（ＨＢＳＳ中１×１０６個の細胞）を、麻酔しつつ、動物の後部脇腹の反対側（左側）に皮下で新しく移植して、再チャレンジする。ＰＲおよびＣＲの定義は、以下の統計学的方法の章にある。３匹のナイーブ動物（試験プロトコルＳ０３５１１６）をコントロールとして使用し、同じバッチのＣＴ２６腫瘍細胞（ＨＢＳＳ中１×１０６個の細胞）を、麻酔しつつ、動物の左側後部脇腹に皮下移植する。動物において、腫瘍の成長を監視し、測定する。腫瘍の体積を、式：ｖ＝ｌ×ｗ２×０．５３６を用いることによって概算し、ここで、ｌ＝測定した直径のうち大きい方、ｗ＝垂直方向の小さい方の直径である。８２日目が、試験Ｓ０１０５１６の最終日である。
試験終了時に、動物をＣＯ２および頸椎脱臼を用いて屠殺する。
【００６９】
統計学的方法
時間と治療群の分散を等しくするために、腫瘍の体積をログスケールに変換する。ログでの体積データを、ＳＡＳソフトウェア（Ｖｅｒｓｉｏｎ  ９．３）のＭＩＸＥＤ手順を用い、時間および治療による変数の二元配置の繰り返し測定分析を用いて分析する。この繰り返し測定の補正モデルは、空間パワー（ｓｐａｔｉａｌ  ｐｏｗｅｒ）である。それぞれの時間点で、治療群をコントロール群と比較する。ＭＩＸＥＤ手順を、各治療群にも別個に使用し、各時間点で最小二乗平均と標準誤差を計算する。両方の分析は、各動物内の自己相関と、動物が３３日目前に除去されるか、または失われたときに起こるデータの消失を考慮する。
【００７０】
２種類の治療の組み合わせの相加性に対する影響の増加を統計的に示すために、これらのデータを３３日目にも分析する。組み合わせられる２種類の特定の治療を用い、各時間点で相互作用の影響を調べるために、コントラスト記述を使用する。これは、Ｂｌｉｓｓ  Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ法と等価な方法であり、腫瘍の体積が理論的にゼロに達し得る（すなわち完全に退縮する）と仮定する。この組み合わせについて予想される相加性応答（ＥＡＲ）は、腫瘍の体積のスケールで、応答（ＥＡＲ）ＥＡＲ体積＝Ｖ１＊Ｖ２／Ｖ０として計算され、ここで、Ｖ０、Ｖ１、Ｖ２は、それぞれビヒクルコントロール、治療１のみ、治療２のみについて、腫瘍の体積平均の概算値である。相互作用試験が有意である場合、その組み合わせ効果は、観察される組み合わせの平均体積がＥＡＲ体積よりもそれぞれ小さいか、または大きいことに依存して、相加状態より大きいか、または小さいと統計的に示される。組み合わせ群が、ビヒクルおよびそれぞれの単剤の場合よりも統計的に小さくなる場合、統計学的結論は、相加的である。その他の点では、組み合わせ効果は存在しない。
【００７１】
順序ロジスティック回帰分析を使用し、６４日目で、相乗性、相加性、拮抗作用について、組み合わせ治療の効果の事後確率を得る。各動物を、６４日目の腫瘍の体積に基づき、４種類の応答カテゴリーの１つに分類する。（Ｉ）進行性疾患（ＰＤ）、（ＩＩ）成長の遅れ（ＧＤ）、（ＩＩＩ）部分的な応答（ＰＲ）または（ＩＶ）完全かつ持続性の退縮（ＣＲ）。ＣＲは、特定の時間点に腫瘍の体積≦２５ｍｍ３であると定義される。ＰＲは、退縮の発生がある程度測定され、治療終了以降も持続するか、または持続する安定な疾患を含め、所定の後の時間点で持続していると定義される。ＧＤは、明確に観察可能な遅れ、または成長の遅れであり、ビヒクルとは異なるが、停止状態または退縮のレベルには達していないと定義される。ＰＤは、ビヒクル動物と同様に、対数成長が変化していないものと定義される。これらのカテゴリーを用い、比例オッズ順序ロジスティック回帰モデルは、相互作用治療構造を有する変数の二元配置分析を用い、相互作用効果パラメータがゼロ値であることが、実際の相加性に対応すると定義される。相加活性の範囲は、相互作用パラメータについてログオッズスケールで−１．１〜＋１．１であると定義され、これは、ＰＤカテゴリーにおいて、または一般的に、さらに低いカテゴリーセットにおいて、実際の相加性に対し、オッズの３倍減少または３倍増加に対応する。相互作用パラメータの値が−１．１未満であることは、相乗性（実際の相加性に対し、ＰＤのオッズが小さいと定義される）を示し、＋１．１より大きい値は、拮抗作用を示す。Ｂａｙｅｓｉａｎ分析法を使用してモデルをフィッティングし、組み合わせ治療について、相乗性、相加性または拮抗作用の範囲にあるデータを与える事後確率を得る。最も高い事後確率を有する範囲は、最も組み合わせ効果がありそうなことが示される。
【００７２】
フローサイトメトリー分析
所定の試験日に、動物の部分集合から脾臓および腫瘍を集め、組織ストレーナーを介して組織を均質化し、培地中の単細胞懸濁物を調製することによって、ＦＡＣＳ分析のために処理する。次いで、単細胞懸濁物を、蛍光標識した抗体で染色し、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１９、ＣＤ４５、ＦｏｘＰ３、ＰＤ−Ｌ１、Ｆ４／８０および固定可能な生存率色素を含む免疫マーカーを同定する。ＢＤ  ＬＳＲ  ＩＩフローサイトメーターを用い、細胞を分析する。データを集め、Ｆｌｏｗｊｏ（Ｔｒｅｅ  Ｓｔａｒ，Ｉｎｃ．）を用いて分析し、各組織において生存している全リンパ球（生存、ＣＤ４５＋）の割合（％）を測定する。次いで、免疫細胞の部分集合をＣＤ４５＋細胞の割合（％）として測定するか、または中間の親集合の割合（％）として測定する。
【００７３】
免疫ランドスケープ分析
各治療アーム（試験Ｓ０１０５１６）からの５匹の動物から、試験２０日目に集めたサンプルの凍結した腫瘍フラグメントを、Ｑｕａｎｔｉｇｅｎｅマウス−８０パネル（ｍｕ−８０免疫パネル番号２１６８１）を用い、８０種類のマーカーの遺伝子発現について分析する。ＭＡＧＭＡＸ（商標）９６  Ｔｏｔａｌ  ＲＮＡ単離キット（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用い、溶解したサンプルから全ＲＮＡを単離した。急速凍結した腫瘍フラグメントを、５００μＬの調製した溶解／結合バッファー（ＭＡＧＭＡＸ（商標）９６  Ｔｏｔａｌ  ＲＮＡ単離キット）と単一のステンレス鋼ビーズ（５ｍｍ）とを加えることによって、溶解し、次いで、ＴｉｓｓｕｅＬｙｓｅｒ（Ｑｉａｇｅｎ）を用い、２５Ｈｚで２分間均質化した。次いで、２００μＬの溶解物を、１２０μＬの１００％イソプロパノールおよび４０μＬの調製した磁気ビーズ混合物と共に、９６の深皿ウェル処理プレートに移す。一連の洗浄およびＤＮａｓｅインキュベート工程は、ＭＡＧＭＡＸ（商標）Ｅｘｐｒｅｓｓ−９６  Ｄｅｅｐ  Ｗｅｌｌ  Ｍａｇｎｅｔｉｃ  Ｐａｒｔｉｃｌｅ  Ｐｒｏｃｅｓｓｏｒ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で処理される。最後の洗浄工程の後、１００μＬの溶出バッファーを用い、ＲＮＡを磁気ビーズから溶出させる。ＲＮＡ濃度を分光光度法によって決定し、２６０ｎｍおよび２８０ｎｍでの光学密度を決定し、次いで、最終濃度２５ｎｇ／μｌになるまで希釈する。次いで、免疫に関連する遺伝子の組織発現を、特注のプローブセット（ｍｕ−８０免疫パネル番号２１６８１、表６）を用い、ＱｕａｎｔｉＧｅｎｅ（登録商標）２．０  Ｐｌｅｘ  ａｓｓａｙ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）を用いて測定する。４種類のハウスキーピング遺伝子（ＨＫＧ：Ｇｕｓｂ、Ｈｐｒｔ１、Ｐｐｉｂ、Ｒｐｓ１８）を使用し、遺伝子発現データを正規化する。データを正規化し、Ｇｅｎｅｐａｔｔｅｒｎ  ｓｃｒｉｐｔ  ｖ２８．８を用いて監視する。統計学およびバイオインフォマティクスを使用し、データを分析する。
【００７４】
分析されるサンプル由来の５００ｎｇの全ＲＮＡを、ＱｕａｎｔｉＧｅｎｅ（登録商標）磁気捕捉ビーズ、ＱｕａｎｔｉＧｅｎｅ（登録商標）プローブセット番号２１６８１、ＱｕａｎｔｉＧｅｎｅ（登録商標）ブロック試薬が入った９６ウェルハイブリダイゼーションプレートの個々のウェルに２個ずつ、最終体積が１００μＬになるように加える。次いで、ハイブリダイゼーションプレートを密封し、６００ｒｐｍで１６時間撹拌しつつ、５４℃でインキュベートする。次いで、サンプルを９６ウェルアッセイプレートに移し、その後、まず、１００μｌのＱｕａｎｔｉＧｅｎｅ（登録商標）Ｐｒｅ−Ａｍｐｌｉｆｉｅｒ  Ｐｒｏｂｅ、次いで、ＱｕａｎｔｉＧｅｎｅ（登録商標）Ａｍｐｌｉｆｉｅｒ  Ｐｒｏｂｅ、最後にＱｕａｎｔｉＧｅｎｅ（登録商標）Ｌａｂｅｌ  Ｐｒｏｂｅを用い、ビーズを連続してハイブリダイズする（各工程について、５０℃で１時間、各工程の間に、磁気捕捉プレートを用いて２〜３回の洗浄）。最後のハイブリダイゼーション工程の後に、ストレプトアビジンが接合したＲ−Ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｒｉｎ（ＳＡＰＥ、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）を加え、６００ｒｐｍで撹拌しつつ、室温で３０分間インキュベートする。次いで、サンプルをＦＬＥＸＭＡＰ  ３Ｄ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｘ装置（Ｌｕｍｉｎｅｘ  Ｃｏｒｐ）で分析する。ビーズ（ｍＲＮＡ標的）を、赤色レーザで同定し、一方、ＲＮＡは、Ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｒｉｎの平均蛍光強度（ＭＦＩ）を緑色レーザで測定することによって決定される。次いで、生ＭＦＩデータを、各遺伝子について、ＧｅｎｅＰａｔｔｅｒｎ（Ｂｒｏａｄ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）を用いた品質制御分析スクリプトを用い、相対的な遺伝子発現に変換する（正規化された調整済みネットＭＦＩ、バックグラウンドを引き算し、４種類のハウスキーピング遺伝子に対して正規化する）。このスクリプトは、各サンプルの各遺伝子について「ネットＭＦＩ」（サンプルＭＦＩ−ブランクウェルのバックグラウンドＭＦＩ）を計算することによって、各サンプルの各ゲノム測定値について以下の計算を行う。次に、検出下限（ＬＬＯＤ）を決定する（平均バックグラウンドＭＦＩ＋３標準偏差（ＳＤ））。次いで、ＬＬＯＤを使用し、「調整済みネットＭＦＩ」を計算する（ＭＦＩ＞ＬＬＯＤの場合、「調整済みネットＭＦＩ」＝「ネットＭＦＩ」であり、ＭＦＩ＜ＬＬＯＤである場合、「調整済みネットＭＦＩ」＝ＬＬＯＤ−バックグラウンドである）。次いで、表６に示されるように、Ｈｐｒｔ１、Ｇｕｓｂ、Ｒｐｓ１８、Ｐｐｉｂを含む選択したハウスキーピング遺伝子（ＨＫＧ）のＭＦＩに対して各遺伝子の調整済みネットＭＦＩを正規化することによって、相対的な遺伝子発現を計算する（サンプル調整済みネットＭＦＩ／幾何平均の調整済みネットＨＫＧ  ＭＦＩ）に、スケーリング因子の１００を掛け算する）。次いで、各治療群において、サンプルあたりの各遺伝子の遺伝子発現の倍率変化を、以下の式を用い、コントロール群と比較して決定する（正規化された調整済みネットＭＦＩ治療サンプル／コントロールサンプルの正規化された調整済みネットＭＦＩの平均）。倍率変化の値が１未満＝負の倍率変化、倍率変化の値が１以上＝正の倍率変化。統計分析のために、正規化された調整済みネットＭＦＩをＬｏｇ２スケールに変換する。次いで、各遺伝子、治療、動物および／または時間について、技術的な繰り返しに対する平均を計算する。次いで、各遺伝子について、治療群をｏｎｅ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡで分析し、統計学的有意さを決定する。ＦＤＲ（偽発見率）の手順を使用し、偽陽性の割合を制御する。全ての遺伝子にわたって、ＡＮＯＶＡモデルからのそれぞれの特定のコントラストについて、ＦＤＲ手順を計算する。
【００７５】
結果
ＣＴ２６  ＣＲＣ腫瘍細胞は、ＫＲＡＳ活性化変異Ｇ１２Ｄを有している。ウェスタンブロット分析は、ＣＴ２６細胞が、低レベルのＭＥＴを発現するが、検出可能なレベルのホスホ−ＭＥＴ（ｐ−ＭＥＴ）を発現しないことを示す。ＣＴ２６細胞も、ウェスタンブロット分析によって、高レベルのホスホ−ＡＸＬ（ｐ−ＡＸＬ）を発現し、メレスチニブは、マウスホスホ−ＲＴＫアレイにおいて、５００ｎＭの濃度で、６０％を超えてｉｎ  ｖｉｔｒｏでｐ−ＡＸＬを減らすことが示されているが、ＣＴ２６細胞増殖に対しては非常に少ない効果を示す（ＩＣ５０＞２０μＭ）。
【００７６】
試験Ｓ０８２０１５
単剤メレスチニブは、ＣＴ２６同系マウス腫瘍モデルに対して、評価した３種類全ての用量で、ビヒクルコントロールと比較して、腫瘍静止能を達成する２４ｍｇ／ｋｇ用量で、有意な抗腫瘍効果を有することが示されている（表１）。３種類全ての用量のメレスチニブが、体重の有意な減少がなかったため、十分に忍容性である。１日に１回、１２ｍｇ／ｋｇの用量のメレスチニブを選択し、ＣＴ２６同系マウスモデルにおいて、抗ＰＤ−Ｌ１抗体との組み合わせ評価に使用する。
【００７７】
試験Ｓ０１０５１６
組み合わせ試験Ｓ０１０５１６において、ＣＴ２６腫瘍細胞の移植を０日目に行い、薬物投薬の最後の日は、治療アームに応じて、２６日目と３０日目である。ビヒクルコントロール群における動物の最後の腫瘍測定は、全ての腫瘍の体積が２５００ｍｍ３を超えたため、３３日目であり、ビヒクル群の動物は、腫瘍負荷に起因して屠殺される。ＣＴ２６同系マウス腫瘍モデルにおける３３日目のメレスチニブと抗ＰＤ−Ｌ１抗体の組み合わせの抗腫瘍効果からのデータを表２に示す。全ての治療群は、大きな腫瘍負荷に起因する以外の死がなかったため、十分に忍容性であるように思われる。治療を受ける全５群は、３３日目にビヒクルコントロール群と比較して、有意な抗腫瘍効果を示す。６日目に開始するメレスチニブと抗ＰＤ−Ｌ１抗体の同時の組み合わせ治療（第４群）は、３３日目に、ベースラインから４３．５％の腫瘍収縮を伴う腫瘍退縮を示し、最も強い抗腫瘍効果を示す。同時の組み合わせ（第４群）の抗腫瘍効果は、３３日目のいずれかの単剤のみよりも有意に良好である（表３．３）。同時の組み合わせ（第４群）の抗腫瘍効果も、３３日目に相加性であることが示されている（表３．１および表３．２）。
【００７８】
薬物治療を止めた後、腫瘍の体積を連続して監視する。単剤群としてのメレスチニブの場合、２１日間の投薬期間が終了すると（２６日目が最後の投薬日）、全ての動物における腫瘍が、その後の３３〜４０日目に対数的に成長した。抗ＰＤ−Ｌ１抗体治療群の動物の半分において、腫瘍が３３日目に応答と退縮を示し（表４）、次の３０日間にあたって退縮し続ける。組み合わせ治療群の動物の一部における腫瘍は、３３日目から６４日目までの間、連続した退縮を示す。このことは、表４に示される応答カテゴリーの変化で実証される。６日目に開始した投薬を含む同時の組み合わせでは、完全かつ持続する退縮応答体（ＣＲ）が、３３日目の３匹から６４日目の９匹まで増加する。連続的な組み合わせ群では、完全かつ持続する退縮応答体が、３３日目の０匹から６４日目の２匹まで増加する。
【００７９】
メレスチニブについて、また、６日目に開始する抗ＰＤ−Ｌ１抗体についての試験Ｓ０１０５１６における単剤治療アームにおいて唯一比較されるように、順序回帰分析を、６日目に投薬を開始したメレスチニブと抗ＰＤ−Ｌ１抗体の同時の組み合わせについてのみ行う。この組み合わせの事後確率は、相乗性について６５％、相加性について３１％、拮抗作用について４％である。メレスチニブと抗ＰＤ−Ｌ１抗体の組み合わせの相互作用効果の大きさ（相加性を超える相乗性）は、組み合わせが相加性のみを達成する場合よりも進行性の疾患のメジアンオッズが５．８倍低い（１４４倍低い値から２．５倍高い値までの確率が９０％）。Ｂａｙｅｓｉａｎ順序回帰分析データは、メレスチニブを抗ＰＤ−Ｌ１抗体治療と組み合わせたとき、相乗性の抗腫瘍効果を示す。
【００８０】
メレスチニブ（６日目に開始する）と抗ＰＤ−Ｌ１抗体（１３日目に開始する）の連続的な組み合わせは、病歴データに基づき、いずれかの単剤のみよりも高い抗腫瘍効果を示唆している。病歴データは、ＣＴ２６モデルにおいて抗ＰＤ−Ｌ１抗体投薬を１３日目に開始すると、なんら治療の便益が得られないことを示す。連続的な組み合わせにメレスチニブを追加すると、２匹の部分応答体と、１匹の完全かつ持続する退縮応答体が６４日目に生じる（表４）。
【００８１】
６４日目に、抗ＰＤ−Ｌ１群における５匹の動物（２匹の部分応答体と３匹の完全かつ持続する退縮応答体）（表４）と、同時の組み合わせ群における９匹の動物（９匹の完全かつ持続する退縮応答体）（表４）を、ＣＴ２６腫瘍細胞（１×１０６個の細胞）を反対側の（左の）後部脇腹領域に皮下で再チャレンジする。腫瘍の成長を、試験最終日の８２日目まで監視し、測定する。表５に示すように、以前の治療または以前のＣＴ２６細胞移植を行っていないナイーブ動物は、ＣＴ２６細胞由来の腫瘍の迅速な成長を示し、腫瘍の体積が４８３〜９０６ｍｍ３になった。抗ＰＤ−Ｌ１抗体群の５匹の動物と、同時の組み合わせ群の９匹の動物において、腫瘍の成長はみられず（表５）、このことは、同時の治療によって、ＣＴ２６腫瘍細胞を用いて再チャレンジすると、免疫記憶と、腫瘍成長の阻害が起こることを示している。この免疫記憶は、臨床的に翻訳すると重要な場合があり、この組み合わせ治療が、長期間持続する応答を生じることを示唆しており、この応答は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体のみの治療よりも治療された患者の大部分で長期間にわたって生存するという便益に翻訳され得る。
【００８２】
腫瘍に対する８０−マウス免疫遺伝子パネルでのメレスチニブ、抗ＰＤ−Ｌ１、同時の組み合わせの治療効果を表７に示す。メレスチニブ単独は、選択した８０種類のマウス免疫遺伝子パネルに基づく免疫ランドスケープに対し、なんら顕著な変化を誘発しない（８０種類の測定した免疫遺伝子のうちたった１つの乱れ値だけが、ビヒクルコントロール群と比較して、２倍を超える変化とｐ値＜０．０５を示す）が、抗ＰＤ−Ｌ１抗体治療は、炎症環境を誘発する。ビヒクルコントロール群と比較して、抗ＰＤ−Ｌ１抗体群に有意な差がある４６種類の免疫遺伝子の中で、Ｃｄ４、Ｉｆｎγ、Ｃｃｌ３、Ｃｃｌ４などの炎症マーカーのアップレギュレーションが存在する（表７）。同時の組み合わせ治療群は、ビヒクルコントロール群と比較して、測定した８０種類の免疫遺伝子の内、５６種類が有意に外れている。メレスチニブ治療群と抗ＰＤ−Ｌ１抗体群に共通のたった１つの遺伝子（ＣＤＨ１）は、ビヒクルコントロールとは有意に異なっている（表８ａ）。この同時の組み合わせ群において、メレスチニブのみの群および抗ＰＤ−Ｌ１抗体のみの群と比較して、有意に異なる遺伝子発現パターンが存在する（表９）。
【００８３】
目的のものの中で、同時の治療群によって固有に発現し、ビヒクルコントロールとは有意に異なる２７種類の遺伝子が存在する（表８ｂ）。同時の組み合わせ治療の遺伝子発現パターンは、炎症腫瘍環境を示す。ＣＤ４５（Ｐｔｐｒｃ）、Ｃｄ３、Ｃｄ４、Ｃｄ８などの腫瘍浸潤リンパ球のマーカーのアップレギュレーションが存在する。Ｉｆｎγ、Ｔｎｆｒｓｆ１８とそのリガンドＴｎｆｓｆ１８、Ｔｎｆｒｓｆ４とそのリガンドＴｎｆｓｆ４、およびＣｄ４０（抗原提示細胞に対する共刺激受容体）に対するリガンド（Ｃｄ４０Ｉｇ）などの免疫活性化マーカーのアップレギュレーションも存在する。Ｉｔｇａｍ／Ｃｄ１１ｂおよびＩｔｇａｘ／Ｃｄ１１ｃマーカーのアップレギュレーションも存在し、このことは、それぞれ、マクロファージと樹状細胞の存在を示している。Ａｒｇ１、Ｎｏｓ２、Ｍｐｏ、Ｔｄｏ２などの免疫抑制酵素のアップレギュレーションも存在し、これは、初期の炎症シグナルに対する応答であると思われる。Ｓｅｌｅ（Ｅ−セレクチン）のダウンレギュレーションは、白血球ローリングの抑止を示唆しており、一方、ＩＣＡＭ１のアップレギュレーションは、抗原提示細胞の活性化、遊走、溢出と、炎症応答の指標であり得る。
【００８４】
同時の組み合わせ群の遺伝子発現シグネチャは、さらに、これら２種類の化合物の組み合わせの相乗性を裏付けるものであり、治療された動物が、持続する腫瘍全体の退縮を有し、腫瘍細胞を用いた再チャレンジ中の腫瘍成長を予防する免疫記憶を有する割合が増える。
【００８５】
結論
（１）ＣＴ２６  ＣＲＣ腫瘍細胞は、ＫＲＡＳを活性化する変異Ｇ１２Ｄを有しており、低レベルのＭｅｔを発現し、検出不可能なレベルのｐ−Ｍｅｔと高レベルのｐ−Ａｘｌを発現する。ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、メレスチニブは５００ｎＭで、ｐ−Ａｘｌを６０％を超えて減らすが、ＣＴ２６細胞増殖に対して非常に少ない効果を示す（ＩＣ５０＞２０μＭ）。
（２）単剤メレスチニブは、ＣＴ２６同系マウス腫瘍モデルにおいて、ｉｎ  ｖｉｖｏで、ビヒクルコントロールと比較して、有意な抗腫瘍効果を示す。腫瘍の成長において、ＣＴ２６細胞を移植してから６日目に開始する、１日に１回、経口投与する用量に依存する低下を示す（６ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、２４ｍｇ／ｋｇ）。３種類全ての用量が、十分に忍容性である。
（３）１日に１回、１２ｍｇ／ｋｇの用量のメレスチニブが、抗ＰＤ−Ｌ１抗体との組み合わせ試験に選択される。メレスチニブ単剤は、投薬２１日目終了時に有意な抗腫瘍効果を示す。しかし、腫瘍は、投薬を止めてから１週間以内に指数関数的に成長する。抗ＰＤ−Ｌ１抗体のみも、ＣＴ２６同系マウス腫瘍モデルにおいて、ｉｎ  ｖｉｖｏで、動物あたり５００μｇの用量で（約２４ｍｇ／ｋｇ）、週に１回（３回投薬）、ＩＰ注射によって投与すると、腫瘍細胞の移植から６日に開始する場合、有意な抗腫瘍効果を示す。動物の部分集合における腫瘍は、最後の治療の後、その後の３０日間の観察にわたって、連続して退縮し続けた。
（４）腫瘍細胞を移植してから６日目に開始する、メレスチニブを１日に１回１２ｍｇ／ｋｇ経口投与（２１日間）、抗ＰＤ−Ｌ１抗体を５００μｇ（約２４ｍｇ／ｋｇ）で週に１回（３回の投薬）の同時の組み合わせは、それぞれの単剤のみよりも有意に向上した抗腫瘍活性を有することがわかっている。この組み合わせは、十分に忍容性である。この組み合わせは、Ｂａｙｅｓｉａｎ順序回帰分析を用い、６４日目まで、相乗的であることがわかっており（２種類の単剤の予想される相加効果よりも大きい）、事後確率は、相乗性について６５％である。
（５）この同時の組み合わせは、完全かつ持続する腫瘍退縮の応答率も、抗ＰＤ−１抗体のみの群の３０％（３／１０）と比較して、試験６４日目までに９０％（９／１０）まで増加させる。この同時の組み合わせは、「免疫記憶」も生じ、９匹の完全応答体のマウスにおいて、ＣＴ２６腫瘍細胞の新しい移植を用いる再チャレンジのときに、腫瘍の成長を予防する。
（６）メレスチニブのみ、または抗ＰＤ−Ｌ１抗体のみで治療した動物由来の免疫細胞において、フローサイトメトリーによって評価する場合、同時の組み合わせと比較して、またはビヒクルコントロールと比較して、有意な変化はない。
（７）メレスチニブ治療のみは、ビヒクルコントロールと比較して、８０種類の免疫遺伝子パネル（ｍＲＮＡ発現）の７９種類において有意な変化を示さない。同時の組み合わせ群の８０種類の免疫遺伝子発現のシグネチャは、それぞれの単剤のみの場合とは有意に異なっている。
（８）この前臨床試験からのデータは、メレスチニブとＰＤ−Ｌ１を標的とする免疫チェックポイント（抗ＰＤ−Ｌ１抗体）の臨床的な組み合わせが、治療応答体の割合を増加させ、癌患者の生存を延長することを強く裏付ける。
【００８６】
表１：試験Ｓ０８２０１５−ビヒクルコントロール群と比較した、２６日目に報告された腫瘍の体積と体重の分析
【表４】
2019525934.tif 000006
∧Ｔ／Ｃは、治療群の／ビヒクルコントロール群の腫瘍の体積である。
＊統計学的に有意である（ｐ＜０．０５）
ＮＡ−適用不可能
【表５】
2019525934.tif 000007
∧ビヒクル群におけるかなり大きな体重増加は、腫瘍負荷に起因するものである。
＊統計学的に有意である（ｐ＜０．０５）
ＮＡ−適用不可能
【００８７】
表２：試験Ｓ０１０５１６−ビヒクルコントロール群と比較した、治療群の３３日目に報告された腫瘍の体積分析
【表６】
2019525934.tif 000008
∧Ｔ／Ｃは、治療群の腫瘍の体積／ビヒクルコントロール群の腫瘍の体積である。１５日目でのベースラインからの全群の総平均を使用し、Ｔ／Ｃまたは退縮の変化を計算した。
＊統計学的に有意である（ｐ＜０．０５）
ＮＡ−適用不可能
【００８８】
表３．１：試験３３日目に、相互作用試験−メレスチニブと抗ＰＤ−Ｌ１抗体についての腫瘍の体積は、同時の組み合わせ（６日目に開始する）が相加性であることを示す
【表７】
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【００８９】
表３．２：試験３３日目に、相互作用試験−メレスチニブと抗ＰＤ−Ｌ１抗体についての腫瘍の体積は、同時の組み合わせ（６日目に開始する）が相加性であることを示す
【表８】
2019525934.tif 000010
ａ％応答は、ベースラインを上回る腫瘍の体積の％ΔＴ／Ｃであり、％退縮は、ベースラインを下回る腫瘍の体積である。
【００９０】
表３．３：治療の比較（ビヒクル、抗ＰＤ−Ｌ１抗体のみ、メレスチニブのみ、同時の組み合わせ）−３３日目でのログスケール
【表９】
2019525934.tif 000011
＊統計学的に有意である（ｐ＜０．０５）
ｂ差＝治療１−治療２
【００９１】
表４：治療群（１０匹の動物／群）による３３日目および６４日目までの治療応答体
【表１０】
2019525934.tif 000012
ｃ進行性疾患（ＰＤ）、成長の遅れ（ＧＤ）、部分応答体（ＰＲ）、完全かつ持続する退縮（ＣＲ）ＣＲは、特定の時間点に腫瘍の体積≦２５ｍｍ３であると定義される。ＰＲは、退縮の発生がある程度起こり、治療終了以降も持続するか、または所定の後の時間点で持続していると定義される。これは、持続する安定な疾患も含むだろう。ＧＤは、明確に観察可能な遅れ、または成長の遅れであり、ビヒクルとは異なるが、停止状態または退縮のレベルには達していないと定義される。ＰＤは、ビヒクル動物と同様に、対数成長が変化していないものと定義される。
【００９２】
表５：６４日目にＣＴ２６腫瘍細胞を用いて再チャレンジした後の動物における、８２日目での腫瘍の体積
【表１１】
2019525934.tif 000013
＊−ＣＴ２６細胞の以前の移植を受けておらず、試験Ｓ０１０５１６の再チャレンジについて、同じバッチのＣＴ２６細胞を移植されたナイーブ動物（試験Ｓ０３５１１６）腫瘍細胞を６４日目の同じ日に移植し、８２日目の同じ日に測定する。
【００９３】
表６：マウス−８０免疫遺伝子パネルにおける遺伝子のリスト
【表１２】
2019525934.tif 000014
【００９４】
表７：メレスチニブ、抗ＰＤ−Ｌ１抗体または同時の組み合わせをビヒクルコントロールと比較した免疫遺伝子の倍率変化の差次的分析
以下に示す全ての遺伝子は、一元配置ＡＮＯＶＡから、ビヒクルコントロールとは有意に異なっている（ｐ≦０．０５）。
【表１３】
2019525934.tif 000015
【００９５】
表８ａ：ビヒクルコントロールとは有意に差がある、メレスチニブのみの治療と抗ＰＤ−Ｌ１抗体のみの治療に共通の免疫遺伝子発現
以下に示す全ての遺伝子は、一元配置ＡＮＯＶＡから、各単剤のみとは有意に異なっている（ｐ≦０．０５）。
【表１４】
2019525934.tif 000016
【００９６】
表８ｂ：ビヒクルコントロールとは有意に差がある、同時の組み合わせ群に固有の免疫遺伝子発現
以下に示す全ての遺伝子は、一元配置ＡＮＯＶＡから、各単剤のみとは有意に異なっている（ｐ≦０．０５）。
【表１５】
2019525934.tif 000017
【００９７】
表９：同時の組み合わせ治療（メレスチニブ＋抗ＰＤ−Ｌ１）を各単剤と比較した倍率変化の差次的分析
以下に示す全ての遺伝子は、一元配置ＡＮＯＶＡから、各単剤のみとは有意に異なっている（ｐ≦０．０５）。
【表１６】
2019525934.tif 000018
【００９８】
ＥＭＴ６同系マウス乳癌腫瘍モデルにおける、メレスチニブ（ＬＹ２８０１６５３）と抗ＰＤ−Ｌ１抗体の組み合わせのｉｎ  ｖｉｖｏでの評価
合理的な実験
ＥＭＴ６モデル（Ｒｏｃｋｗｅｌｌ、ＳＣ、Ｋａｌｌｍａｎ、ＲＦ、Ｆａｊａｒｄｏ、ＬＦ）における同系マウス腫瘍モデルを使用し、メレスチニブと抗ＰＤ−Ｌ１抗体の潜在的な組み合わせ効果を評価する。連続して移植したマウス乳癌とその組織培養に適合した誘導体の特性決定。Ｊ  Ｎａｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ．１９７２；４９：７３５−７４９）。抗ＰＤ−Ｌ１抗体サロゲート（１７８Ｇ７、ＬＳＮ３３７０１８１）（Ｅｐｐｉｈｉｍｅｒら、Ｍｉｃｒｏｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２００２：９（２）：１３３）をこのマウス試験で使用する。
【００９９】
動物
Ｅｎｖｉｇｏ（Ｈａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）からの雌ＢＡＬＢ／ｃマウス（１８〜２０グラム）をこの試験に使用する。餌と水を不断給餌する。実験操作の前に、動物を少なくとも１週間順応させる。この試験は、ＡＡＬＡＣ公認の機関ガイドラインに従って行われる。
化合物の調製
メレスチニブを、９０％（２０％カプチゾールＨ２Ｏ液）中の１０％ＰＥＧ  ４００溶液として週に１回配合する。抗ＰＤ−Ｌ１抗体（ＬＳＮ３３７０１８１）を、ＰＢＳ（リン酸緩衝化食塩水）中で配合する。
【０１００】
試験設計
ＥＭＴ６細胞（体内のｉｎ  ｖｉｖｏ薬理学細胞培養群ロット番号ＥＭＴ６−３１８４８８２）を移植に使用する。ＨＢＳＳ中の約５×１０５個の細胞を、麻酔下、動物の右後部脇腹に皮下移植する。薬物投与を行う前に、体重に基づき、動物を無作為に治療群に分ける。
この試験では、群あたり１５匹の動物を含む４種類のアームが存在する。（１）ビヒクルコントロール、（２）メレスチニブ１２ｍｇ／ｋｇ  ＱＤｘ２１、ＰＯ、（３）ＬＳＮ３３７０１８１（抗ＰＤ−Ｌ１）０．５ｍｇ／マウスを週に１回、ＩＰによって３週間、（４）メレスチニブ＋抗ＰＤ−Ｌ１抗体の組み合わせ。組み合わせ治療は、単剤治療と同じ投薬スケジュールに従っている。腫瘍細胞移植から６日目に治療を開始し、２１日間続ける（２６日目に最後の用量を投与）。腫瘍の体積と体重を週に２回測定する。腫瘍の体積を、式：ｖ＝ｌ×ｗ２×０．５３６を用いることによって概算し、ここで、ｌ＝測定した直径のうち大きい方、ｗ＝垂直方向の小さい方の直径である。動物をＣＯ２および頸椎脱臼を用いて屠殺する。
腫瘍細胞移植から２０日目に、作用機序（ＭＯＡ）試験のために脾臓および腫瘍を収集するために、各群から５匹の動物を取り出す（ＦＡＣの分析、遺伝子発現）。残りの動物は、上述のように治療を続ける。投薬期間終了時に（腫瘍細胞を移植してから２７日目）、４３日間の腫瘍成長について、動物を観察する。腫瘍の負荷が２５００ｍｍ３に達するか、または超えたら、動物を試験から除外する。免疫記憶を評価するために、腫瘍細胞を移植してから７０日目に、試験に残っていた動物（完全応答体および部分応答体）に、ＥＭＴ６細胞を反対側に新しく移植して再チャレンジし、１５日間の腫瘍成長について観察する。
【０１０１】
統計学的方法
時間と治療群の分散を等しくするために、腫瘍の体積をログスケールに変換する。ログでの体積データを、ＳＡＳソフトウェア（Ｖｅｒｓｉｏｎ  ９．３）のＭＩＸＥＤ手順を用い、時間および治療による変数の二元配置の繰り返し測定分析を用いて分析する。この繰り返し測定の補正モデルは、空間パワー（ｓｐａｔｉａｌ  ｐｏｗｅｒ）である。それぞれの時間点で、治療群をコントロール群と比較する。ＭＩＸＥＤ手順を、各治療群にも別個に使用し、各時間点で最小二乗平均と標準誤差を計算する。両方の分析は、各動物内の自己相関と、動物が試験終了前に除去されるか、または失われたときに起こるデータの消失を考慮する。
Ｂａｙｅｓｉａｎ順序ロジスティック回帰分析を使用し、この試験で６９日目に、相乗性、相加性または拮抗作用について、組み合わせ治療の効果の事後確率を得る。各動物を、６９日目の腫瘍の体積に基づき、部費クルデータと比較することによって、３種類の応答カテゴリーの１つに分類した。（Ｉ）非応答体（ＮＲ）、（ＩＩ）部分応答体（ＰＲ）、（ＩＩＩ）完全応答体（ＣＲ）。ＣＲは、６９日目に腫瘍の体積≦２５ｍｍ３であると定義される。ＮＲは、ビヒクル動物と同様に、対数成長が変化していないものと定義される。少なくとも２つの時間点で、ビヒクル平均マイナス３ＳＤよりも小さい腫瘍体積を有する場合、動物をＰＲであると分類する。これらのカテゴリーを用い、比例オッズ順序ロジスティック回帰モデルは、相互作用治療構造を有する変数の二元配置分散分析を用い、相互作用効果パラメータがゼロ値であることが、実際の相加性に対応するようにフィッティングする。相加活性の範囲は、相互作用パラメータについてログオッズスケールで−１．１〜＋１．１であると定義され、これは、ＮＲカテゴリーにおいて、または一般的に、さらに低いカテゴリーセットにおいて、実際の相加性に対し、オッズの３倍減少または３倍増加に対応する。相互作用パラメータの値が−１．１未満であることは、相乗性（実際の相加性に対し、ＮＲのオッズが小さい）を示し、＋１．１より大きい値は、拮抗作用を示す。Ｂａｙｅｓｉａｎ分析法を使用してモデルをフィッティングし、組み合わせ治療について、相乗性、相加性または拮抗作用の範囲にあるデータを与える事後確率を得た。最も高い事後確率を有する範囲は、最も組み合わせ効果がありそうなことが示された。
【０１０２】
結果
メレスチニブ（ＬＹ２８０１６５３）（１２ｍｇ／ｋｇ）は、ＥＭＴ６同系マウス乳癌腫瘍モデルにおいて、弱い単剤抗腫瘍活性を示した。治療中に腫瘍成長の遅れがみられたが（表１）、１回のメレスチニブ投与によって、腫瘍の成長が迅速に止まった（表１）。治療の最終日は、２６日目であった。表１に示すデータは、試験日３１日目のデータであった。ビヒクル群の動物のうち４匹が、腫瘍の負荷に起因して（腫瘍の体積≧２５００ｍｍ３）、３１日目までに除去された。メレスチニブ治療群の３１日目の腫瘍の体積は、コントロール群と比較して、Ｔ／Ｃ＝３５．２％であった（表１）。試験４９日目に、メレスチニブ治療群の全ての動物を、腫瘍負荷に起因して除去した（腫瘍の体積≧２５００ｍｍ３）。抗ＰＤ−Ｌ１治療群と、メレスチニブ治療と抗ＰＤ−Ｌ１の組み合わせ治療群は、３１日目までに腫瘍の退縮を示し（表１）、この組み合わせ治療群ではさらに退縮した。この２つの治療群の動物の一部における腫瘍は、６９日目まで次の３８日間、退縮が続いた。
【０１０３】
抗ＰＤ−Ｌ１抗体（ＬＳＮ３３７０１８１）は、このモデルにおいて、単剤として、強力かつ持続する抗腫瘍活性を有することが示され、試験終了時（６９日目）に６／１０の完全応答体を含んでいた（表２）。メレスチニブと抗ＰＤ−Ｌ１とを組み合わせると、いずれか単剤の場合と比較して、大きな効能が得られ、動物の１０匹中９匹が、試験終了（６９日目）までに完全な応答体であった（表２）。メレスチニブと抗ＰＤ−Ｌ１抗体の組み合わせについて行ったＢａｙｅｓｉａｎ順序ロジスティック回帰分析から、この組み合わせの事後確率は、相乗性について７８％、相加性について１９％、拮抗作用について３％であると決定された。したがって、メレスチニブと抗ＰＤ−Ｌ１抗体の組み合わせによって、相乗的な抗腫瘍効果が得られる。
移植後７０日目に、完全応答体に分類された全ての動物と、何匹かの部分応答体について、ＥＭＴ６細胞を用い、反対側に再チャレンジし、免疫記憶を評価した。表３は、再チャレンジ時と、再チャレンジ後の２つのさらなる時間点での原発性腫瘍の測定値を与える。二次腫瘍の測定も、この表に与えている。完全応答体に分類された動物は、再チャレンジに耐え、このことは、免疫記憶の誘発を示しており、一方、部分応答体に分類された３匹の動物は、原発部位および二次部位の両方で、腫瘍の成長が観察された。
治療は、コントロール群と比較して、有意な臨床的に意味のある体重減少がなかったため、十分に忍容性であった（データは示していない）。
【０１０４】
表１０：治療群とビヒクルコントロール群とを比較した、３１日目に報告された腫瘍の体積分析
【表１７】
2019525934.tif 000019
表１０のデータは、抗ＰＤ−Ｌ１治療群よりも、組み合わせ治療群において、さらに大きな腫瘍の退縮がみられたことを示している。メレスチニブ治療群では、腫瘍の退縮はみられなかった。
【０１０５】
表１１：Ｂａｙｅｓｉａｎ順序ロジスティック回帰分析について、治療群（１０匹の動物／群）による、６９日目までの治療応答体
【表１８】
2019525934.tif 000020
ｃ非応答体（ＮＲ）、部分応答体（ＰＲ）、完全応答体（ＣＲ）ＣＲは、６９日目に腫瘍の体積≦２５ｍｍ３であると定義される。ＮＲは、ビヒクル動物と同様に、対数成長が変化していないものと定義された。少なくとも２つの時間点で、ビヒクル平均マイナス３ＳＤよりも小さい腫瘍体積を有する場合、動物をＰＲであると分類することが必要であった。
表１１のデータは、メレスチニブと抗ＰＤ−Ｌ１の組み合わせにより、いずれかの単剤と比較して、より大きな効能が得られたことを示している。各動物を、治療の応答について、３つのカテゴリーの１つに分類する。応答データをＢａｙｅｓｉａｎの通常のロジスティック回帰分析に使用し、組み合わせ治療が相乗的であることを示す。
【０１０６】
表１２：ＥＭＴ６モデルにおいて再チャレンジした腫瘍の体積
【表１９】
2019525934.tif 000021
元々の腫瘍を右側に移植した。再チャレンジされたＥＭＴ６を、試験７０日目に左側に移植した。ＷｅｂＤｉｒｅｃｔｏｒで捕捉した測定からデータをアセンブリした（Ｓ００３６１７）。
【０１０７】
表１２のデータは、この組み合わせ治療によって、腫瘍の完全な退縮（ＣＲ）が起こらなかったが、免疫記憶を誘発したことを示す。臨床転帰へ翻訳すると、この組み合わせ治療は、患者において持続性の回復を起こし得る。
【０１０８】
進行した難治性固形腫瘍を有する参加者（ＰＡＣＴ）における抗ＰＤ−Ｌ１チェックポイント抗体（ＬＹ３３０００５４）のみと、組み合わせでの試験。試験治療アームＤ：ＬＹ３３０００５４＋メレスチニブ
臨床試験設計
臨床試験ＮＣＴ０２７９１３３４は、複数施設の第１相試験（以下「試験」と称する）であり、アームＤは、単剤治療と、進行した難治性固形腫瘍を有する患者に対して安全に投与し得るメレスチニブとの組み合わせの両方で、ＰＤ−Ｌ１阻害剤ＬＹ３３０００５４の安全性と忍容性を評価するためのものである。
【０１０９】
試験目的と測定指標
この第１相での試験の主な目的は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤ＬＹ３３０００５４の安全性と忍容性を評価することであり、それによって、単剤治療、メレスチニブとの組み合わせで、進行した固形腫瘍を有する参加者に投与されるＬＹ３３０００５４の第２相での推奨用量を特定することである。主な結果の測定指標は、この試験において、用量を制限する毒性（ＤＬＴ）を示す参加者の数を特定することである。
この第１相での試験の第２の目的は、固形腫瘍を有する患者において、（ｉ）単剤治療として投与されるＰＤ−Ｌ１阻害剤ＬＹ３３０００５４、（ｉｉ）メレスチニブとの組み合わせで投与されるＰＤ−Ｌ１阻害剤ＬＹ３３０００５４、（ｉｉｉ）ＬＹ３３０００５４との組み合わせで投与されるときのメレスチニブの薬物動態を評価することである。第２の結果の測定指標は、限定されないが、（ｉ）単剤治療として、また、メレスチニブと組み合わせて投与されるときの、ＬＹ３３０００５４の最小濃度（Ｃｍｉｎ）と適切な最大濃度（Ｃｍａｘ）、（ｉｉ）ＬＹ３３０００５４と組み合わせて投与されるときのメレスチニブのＣｍｉｎおよび適切なＣｍａｘ、（ｉｉｉ）ＲＥＣＩＳＴ基準ｖ．１．１によって決定される、完全応答体（ＣＲ）または部分応答体（ＰＲ）である参加者の割合を特定するための客体応答率（ＯＲＲ）、（ｉｖ）進行のない状態での生存（ＰＦＳ）、（ｖ）応答の持続期間（ＤＯＲ）、（ｖｉ）応答するまでの時間（ＴＴＲ）、（ｖｉｉ）疾患制御率（ＤＣＲ）を含む。
【０１１０】
アミノ酸およびヌクレオチド配列
配列番号1(ヒトPD-L1)
MRIFAVFIFMTYWHLLNAFTVTVPKDLYVVEYGSNMTIECKFPVEKQLDLAALIVYWEMEDKNIIQFVHGEEDLKVQHSSYRQRARLLKDQLSLGNAALQITDVKLQDAGVYRCMISYGGADYKRITVKVNAPYNKINQRILVVDPVTSEHELTCQAEGYPKAEVIWTSSDHQVLSGKTTTTNSKREEKLFNVTSTLRINTTTNEIFYCTFRRLDPEENHTAELVIPELPLAHPPNERTHLVILGAILLCLGVALTFIFRLRKGRMMDVKKCGIQDTNSKKQSDTHLEET
配列番号2(LY3300054のHCDR1)
KASGGTFSSYAIS
配列番号3(LY3300054のHCDR2)
GIIPIFGTANYAQKFQG
配列番号4(LY3300054のHCDR3)
ARSPDYSPYYYYGMDV
配列番号5(LY3300054のLCDR1)
SGSSSNIGSNTVN
配列番号6(LY3300054のLCDR2)
YGNSNRPS
配列番号7(LY3300054のLCDR3)
QSYDSSLSGSV
配列番号8(LY3300054のHCVR)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSPDYSPYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
配列番号9(LY3300054のLCVR)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNTVNWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCQSYDSSLSGSVFGGGIKLTVLG
配列番号10(LY3300054のHC)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSPDYSPYYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号11(LY3300054のLC)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNTVNWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCQSYDSSLSGSVFGGGIKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPAECS
配列番号12(LY3300054のHCのDNA)
CAGGTCCAGCTGGTCCAGTCAGGGGCCGAGGTCAAAAAGCCAGGGTCATCTGTCAAAGTGTCTTGTAAGGCATCCGGGGGCACATTTTCCAGCTACGCTATCTCCTGGGTGAGACAGGCACCAGGGCAGGGTCTGGAGTGGATGGGCGGAATCATTCCCATCTTCGGGACCGCCAACTACGCTCAGAAGTTTCAGGGAAGGGTCACTATTACCGCCGACAAAAGCACATCTACTGCTTATATGGAGCTGTCTAGTCTGAGGTCTGAAGATACCGCAGTGTACTATTGCGCCCGGAGTCCCGACTATAGCCCTTACTATTACTATGGCATGGATGTCTGGGGCCAGGGAACCACAGTGACAGTCTCATCCGCTAGCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGAGGGGGCACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTATGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAAGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCATCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAAGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATTCCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGCAAA
配列番号13(LY3300054のLCのDNA)
CAGTCCGTCCTGACACAGCCACCCTCAGCCTCTGGCACCCCTGGGCAGCGAGTGACAATCTCTTGTTCTGGGAGTTCCTCAAATATTGGTAGTAACACCGTGAATTGGTACCAGCAGCTGCCCGGCACAGCACCTAAGCTGCTGATCTATGGAAACTCAAATAGGCCATCCGGAGTCCCCGACCGGTTCTCTGGTAGTAAATCAGGCACTTCCGCCAGCCTGGCTATTAGCGGGCTGCAGTCTGAGGACGAAGCCGATTACTATTGCCAGTCTTACGATTCCAGCCTGTCTGGAAGTGTGTTTGGCGGAGGGATCAAGCTGACCGTCCTGGGCCAGCCTAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTACCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTGCAGAATGCTCT
配列番号14(HC 178G7)
QVQLQQSGADLAKPGSSVKISCKASGYNFNSYYINWIKQTTGQGLEYIGYINTVSGTTKYSEKFKGKATLTVDKSSSTAFMQLSSLTPDDSAVYYCARGTIVLDDYWGQGVKVTVSSAETTAPSVYPLAPGTALKSNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGALSSGVHTFPAVLQSGLYTLTSSVTVPSSTWPSQTVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRNCGGDCKPCICTGSEVSSVFIFPSKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISQDDPEVHFSWFVDDVEVHTAQTRPPEEQFNSTFRSVSELPILHQDWLNGRTFRCKVTSAAFPSPIEKTISKPEGRTQVPHVYTMSPTKEEMTQNEVSITCMVKGFYPPDIYVEWQMNGQPQENYKNTPPTMDTDGSYFLYSKLNVKKEKWQQGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGK
配列番号15(LC 178G7)
DIVMTQTPSSQAVSAGEKVTMSCKSSQSLLYNEKKKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFLGSGSGTDFTLTINSVQAEDLAVYYCQQSYDFPRTFGGGTKLELKRADAAPTVSIFPPSTEQLATGGASVVCLMNNFYPRDISVKWKIDGTERRDGVLDSVTDQDSKDSTYSMSSTLSLTKADYESHNLYTCEVVHKTSSSPVVKSFNRNEC
【配列表】
2019525934000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成31年1月25日(2019.1.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
メレスチニブまたはその医薬的に許容される塩を含む、抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体または抗ヒトＰＤ−１抗体と組み合わせて患者に投与されるように用いられることを特徴とする、患者において癌を治療するための医薬組成物であって、癌が、肺癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、乳癌、黒色腫、結腸直腸癌、膵臓癌、胆管癌、黒色腫（ぶどう膜メラノーマを含む）、肉腫、膀胱癌、腎臓癌、尿路癌、頭部癌、頸部癌、甲状腺癌、卵巣癌、遺伝性乳頭状腎細胞癌、肝細胞癌、胃癌および／またはＭＥＴ、ＭＳＴＲ１（別名  ＲＯＮ）、ＡＸＬ、ＫＲＡＳ、ＦＬＴ３、ＤＤＲ１／２、ＲＯＳ１、ＮＴＲＫ１／２／３、ＭＫＮＫ１／２およびその基質ＥＩＦ４Ｅにおける変更を示す腫瘍である、医薬組成物。
【請求項２】
前記抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体が、アテゾリズマブ、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＥＤＩ−４７３６、ＭＳＢ−００１０７１８Ｃ、ＭＤＰＬ３２８０Ａ、デュルバルマブ、アベルマブまたはＭＤＸ−１１０５である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体がＬＹ３３０００５４である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記抗ヒトＰＤ−１抗体が、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピジリズマブまたはＡＭＰ−２２４である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記癌が、乳癌、黒色腫、および／または結腸直腸癌である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
メレスチニブまたはその医薬的に許容される塩が、２１日サイクルまたは２８日サイクルで、１日に１回、４０ｍｇ〜１２０ｍｇの用量で投与され、前記抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体または前記抗ヒトＰＤ−１抗体は、１４日サイクルの１日目に、２１日サイクルの１日目に、２１日サイクルの１日目と８日目に、２１日サイクルの１日目と１５日目に、２１日目サイクルの１日目、８日目および１５日目に、２８日サイクルの１日目に、または２８日サイクルの１日目と１５日目に、１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与されるように用いられることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項７】
メレスチニブまたはその医薬的に許容される塩が、前記抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体または抗ヒトＰＤ−１抗体と同時に投与される、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
癌の治療における同時の使用、別個の使用または連続的な使用のための、メレスチニブまたはその医薬的に許容される塩と、抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体または抗ヒトＰＤ−１抗体とを含む組み合わせ医薬であって、前記癌が、肺癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、乳癌、黒色腫、結腸直腸癌、膵臓癌、胆管癌、黒色腫（ぶどう膜メラノーマを含む）、肉腫、膀胱癌、腎臓癌、尿路癌、頭部癌、頸部癌、甲状腺癌、卵巣癌、遺伝性乳頭状腎細胞癌、肝細胞癌、胃癌および／またはＭＥＴ、ＭＳＴＲ１（別名  ＲＯＮ）、ＡＸＬ、ＫＲＡＳ、ＦＬＴ３、ＤＤＲ１／２、ＲＯＳ１、ＮＴＲＫ１／２／３、ＭＫＮＫ１／２およびその基質ＥＩＦ４Ｅにおける変更を示す腫瘍である、組み合わせ医薬。
【請求項９】
前記抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体が、アテゾリズマブ、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＥＤＩ−４７３６、ＭＳＢ−００１０７１８Ｃ、ＭＤＰＬ３２８０Ａ、デュルバルマブ、アベルマブまたはＭＤＸ−１１０５である、請求項８に記載の組み合わせ医薬。
【請求項１０】
前記抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体がＬＹ３３０００５４である、請求項８に記載の組み合わせ医薬。
【請求項１１】
前記抗ヒトＰＤ−１抗体が、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピジリズマブまたはＡＭＰ−２２４である、請求項８に記載の組み合わせ医薬。
【請求項１２】
前記癌が、乳癌、黒色腫、および／または結腸直腸癌である、請求項８〜１１のいずれか一項に記載の組み合わせ医薬。
【請求項１３】
メレスチニブまたはその医薬的に許容される塩が、２１日サイクルまたは２８日サイクルで、１日に１回、４０ｍｇ〜１２０ｍｇの用量で投与され、前記抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体または前記抗ヒトＰＤ−１抗体は、１４日サイクルの１日目に、２１日サイクルの１日目に、２１日サイクルの１日目と８日目に、２１日サイクルの１日目と１５日目に、２１日目サイクルの１日目、８日目および１５日目に、２８日サイクルの１日目に、または２８日サイクルの１日目と１５日目に、１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与されるように用いられることを特徴とする、請求項８〜１２のいずれか一項に記載の組み合わせ医薬。
【請求項１４】
メレスチニブまたはその医薬的に許容される塩が、抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体または抗ヒトＰＤ−１抗体と同時に使用されるためのものである、請求項１３に記載の組み合わせ医薬。
【国際調査報告】
2019525934.tif 000022
2019525934.tif 000023
2019525934.tif 000024