(57)【要約】  本開示は、代謝型グルタミン酸受容体５（ｍＧｌｕＲ５）のネガティブアロステリックモジュレーター（ＮＡＭ）の脳卒中後の損傷のような成熟脳損傷の治療における使用に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
成熟脳損傷の治療における使用のための代謝型グルタミン酸受容体５（ｍＧｌｕＲ５）のネガティブアロステリックモジュレーター（ＮＡＭ）。
【請求項２】
前記治療は成熟脳損傷を患う罹患体の脳機能の回復の改善をもたらす、請求項１に記載の使用のための代謝型グルタミン酸受容体５（ｍＧｌｕＲ５）のネガティブアロステリックモジュレーター（ＮＡＭ）。
【請求項３】
前記ＮＡＭは、
【化１−１】
2019515892.tif 000022
【化１−２】
2019515892.tif 000023
およびその薬学的に許容され得る塩並びに溶媒和物からなる群から選択される、
請求項１または２に記載の使用のためのＮＡＭ。
【請求項４】
前記ＮＡＭは、
【化２】
2019515892.tif 000024
およびその薬学的に許容され得る塩並びに溶媒和物からなる群から選択される、
請求項１または２に記載の使用のためのＮＡＭ。
【請求項５】
前記ＮＡＭは、
【化３】
2019515892.tif 000025
およびその薬学的に許容され得る塩並びに溶媒和物である、
請求項１または２に記載の使用のためのＮＡＭ。
【請求項６】
前記成熟脳損傷は、脳卒中、頭部外傷、心肺停止および急性脳損傷からなる群から選択される疾病によって引き起こされる、請求項１〜５の何れか１項に記載の使用のためのＮＡＭ。
【請求項７】
前記脳損傷は、認知障害、うつ病、疲労および感覚運動機能障害からなる群から選択される脳卒中後障害をもたらす脳卒中によって引き起こされる、請求項６に記載の使用のためのＮＡＭ。
【請求項８】
前記治療は、神経保護治療がもはや有効でなくなったら開始されるべきである、請求項１〜７の何れか１項に記載の使用のためのＮＡＭ。
【請求項９】
前記治療は、神経保護治療が完了した後に開始されるべきである、請求項８に記載の使用のためのＮＡＭ。
【請求項１０】
前記治療は、最初の急性脳損傷が発生してから４時間後以降に開始されるべきである、請求項１〜８の何れか１項に記載の使用のためのＮＡＭ。
【請求項１１】
前記治療は、経頭蓋磁気刺激、電気刺激および／または物理的および行動療法と組み合わせられる、請求項１〜１０の何れか１項に記載の使用のためのＮＡＭ。
【請求項１２】
成熟脳損傷を治療するかまたは緩和する方法であって、代謝型グルタミン酸受容体５（ｍＧｌｕＲ５）のネガティブアロステリックモジュレーター（ＮＡＭ）の治療有効量をそれを必要とする罹患体に投与することを含む方法。
【請求項１３】
前記治療は成熟脳損傷に苦しむ罹患体の脳機能の回復の改善をもたらす請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＮＡＭは、
【化４−１】
2019515892.tif 000026
【化４−２】
2019515892.tif 000027
およびその薬学的に許容され得る塩並びに溶媒和物からなる群から選択される請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＮＡＭは、
【化５】
2019515892.tif 000028
およびその薬学的に許容され得る塩並びに溶媒和物からなる群から選択される請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＮＡＭは、
【化６】
2019515892.tif 000029
およびその薬学的に許容され得る塩並びに溶媒和物である請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項１７】
前記成熟脳損傷は、脳卒中、頭部外傷、心肺停止および急性脳損傷からなる群から選択される疾病によって引き起こされる請求項１２〜１６の何れか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記脳損傷は、認知障害、うつ病、疲労および感覚運動機能障害からなる群から選択される脳卒中後障害をもたらす脳卒中によって引き起こされる、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記治療は、神経保護治療がもはや有効でなくなったら開始されるべきである、請求項１２〜１８の何れか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記治療は、神経保護治療が完了した後に開始されるべきである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記治療は、最初の急性脳損傷が発生してから４時間後以降に開始されるべきである、請求項１２〜２０の何れか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記治療は、経頭蓋磁気刺激、電気刺激および／または物理的および行動療法と組み合わせられる請求項１２〜２１の何れか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の分野】
【０００１】
本発明は、成熟脳損傷の治療における代謝型グルタミン酸受容体サブタイプ５（ｍＧｌｕＲ５）のネガティブアロステリックモジュレーター（ＮＡＭ）の使用に関する。
【背景】
【０００２】
グルタミン酸は、哺乳動物の中枢神経系における神経伝達物質であり、様々なグルタミン酸受容体と相互作用する。これらの受容体の幾つかは代謝型グルタミン酸受容体（ｍＧｌｕＲ）であり、その中には３つのグループに分けられる８種の異なるサブタイプがある。グループＩは、とりわけ、サブタイプ５であるｍＧｌｕＲ５を含む。
【０００３】
アロステリックモジュレーターは、受容体およびこの特定の場合には代謝型グルタミン酸受容体サブタイプ５のような標的タンパク質における他の物質（通常リガンドであり、それはアゴニストまたはアンタゴニストであり得、この場合はグルタメートである）の効果を間接的に調節する物質である。アロステリックモジュレーターは、アゴニストまたはアンタゴニストにおける受容体リガンド結合部位であるオルトステリック結合部位の位置とは異なる受容体上の部位に結合する。しばしば、アロステリックモジュレーターは、タンパク質構造内でコンフォメーション変化を誘起する。オルトステリック部位で作用する他の物質の効果について、ネガティブアロステリックモジュレーター（ＮＡＭ）はアテニュエーターであり、ポジティブアロステリックモジュレーター（ＰＡＭ）はエンハンサーである。ｍＧｌｕＲ５のＮＡＭは、グルタミン酸受容体サブタイプ５へのグルタミン酸の結合を調節する。ｍＧｌｕＲ５のＮＡＭは、ゆえに代謝型グルタミン酸受容体サブタイプ５のアンタゴニストと同等ではない。
【０００４】
実験研究では、２−メチル−６−フェニルエチニルピリジン（ＭＰＥＰ）のような少なくとも一部のｍＧｌｕＲ５のＮＡＭが、脳外傷後早期に投与された場合に神経保護作用を有することが、過去に示されている。しかしながら、これらの過去の研究によると、治療は外傷が起こった後非常に早期に、即ち、外傷後数分から最大４時間までの間に開始されなければならない。また、データは矛盾しており、ｍＧｌｕＲ５アンタゴニストおよびｍＧｌｕＲ５ ＮＡＭによる脳の保護を示すものもあれば、ｍＧｌｕＲ５アゴニストによる反対の効果または保護を示すデータもある。故に、ｍＧｌｕＲ５ＮＡＭの神経保護治療可能時間窓は狭く、恐らく損傷の間の急性興奮毒性の阻害を反映する。
【０００５】
本出願を通して参照される全ての文書の開示は、参照により本明細書に援用される。
【発明の概要】
【０００６】
本発明は、成熟脳損傷の治療における使用のための代謝型グルタミン酸受容体５（ｍＧｌｕＲ５）のネガティブアロステリックモジュレーター（ＮＡＭ）に関する。
【０００７】
本発明は更に、成熟脳損傷の治療のための医薬組成物の製造における代謝型グルタミン酸受容体５（ｍＧｌｕＲ５）のネガティブアロステリックモジュレーター（ＮＡＭ）の使用に関する。
【０００８】
本発明は更に、代謝型グルタミン酸受容体５（ｍＧｌｕＲ５）のネガティブアロステリックモジュレーター（ＮＡＭ）の治療有効量を罹患体に投与する、罹患体における成熟脳損傷を治療する方法に関する。
【０００９】
発明の詳細な説明
上述したように、本発明は、成熟脳損傷の治療における代謝型グルタミン酸受容体サブタイプ５（ｍＧｌｕＲ５）のネガティブアロステリックモジュレーター（ＮＡＭ）の使用に関する。当業者は、幾つかの異なるｍＧｌｕＲ５のＮＡＭが存在することを知っている。過去に記述され、かつ本発明に従って使用することができる代謝型グルタミン酸受容体サブタイプ５（ｍＧｌｕＲ５）のネガティブアロステリックモジュレーター（ＮＡＭ）の例を以下の表１に掲げる。表１では、種々のＮＡＭが２つの化学型にグループ分けされている。即ち、幾つかの化合物はアルキン系列、即ちアセチレン骨格構造を有する化合物に属し、他は非アルキン系列、即ち非アセチレン骨格構造を有する化合物に属する。アルキン系列に属する化合物は全て一般構造：
【００１０】
【化１】
2019515892.tif 000002
【００１１】
を有し、
式中、Ｒ１およびＲ２の意味は、それぞれ表１からのものである。
【００１２】
【表１−１】
2019515892.tif 000003
【００１３】
【表１−２】
2019515892.tif 000004
【００１４】
【表１−３】
2019515892.tif 000005
【００１５】
【表１−４】
2019515892.tif 000006
【００１６】
当業者は、特定の化合物がｍＧｌｕＲ５のＮＡＭであるか否かを決定するために使用され得る試験方法にも精通している。そのような試験方法（Vranesic et al,(2014) Bioorg. Med. Chem、22:5790-5803）の例は、放射性リガンド置換（Gasparini et al,(2002) Bioorg Med Chem Lett、12:407-409）、細胞Ｃａ２＋動員の阻害（Widler et al,(2010) J. Med. Chem、53:2250-2263）、およびイノシトールリン酸加水分解の阻害（Litschig et al.,(1999) Mol. Pharm、55:453-461）アッセイである。
【００１７】
本発明の幾つかの実施形態において、用いられるＮＡＭは、以下の化合物：
【００１８】
【化２−１】
2019515892.tif 000007
【００１９】
【化２−２】
2019515892.tif 000008
【００２０】
からなる群から選択される。
【００２１】
幾つかの実施形態において、用いられるＮＡＭは、
【００２２】
【化３】
2019515892.tif 000009
【００２３】
であり、下記の例においてＳＩＮ０１０と示される。
【００２４】
幾つかの実施形態において、用いられるＮＡＭは、
【００２５】
【化４】
2019515892.tif 000010
【００２６】
であり、下記の例においてＳＩＮ０１４と示され、これは下記の例においてＳＩＮ０１３と示される化合物のよく似た類似体である。
【００２７】
幾つかの実施形態において、用いられるＮＡＭは、
【００２８】
【化５】
2019515892.tif 000011
【００２９】
であり、下記の例においてＳＩＮ０１１と示される。
【００３０】
幾つかの実施形態において、用いられるＮＡＭは、
【００３１】
【化６】
2019515892.tif 000012
【００３２】
であり、下記の例においてＳＩＮ００８と示される。
【００３３】
幾つかの実施形態において、用いられるＮＡＭは、
【００３４】
【化７】
2019515892.tif 000013
【００３５】
であり、下記の例においてＳＩＮ０１５と示される。
【００３６】
幾つかの実施形態において、用いられるＮＡＭは、上記の特定の２０個の化合物の何れかの薬学的に許容され得る塩および溶媒和物からなる群から選択される。
【００３７】
この文脈において、薬学的に許容される塩は、本発明に従うＮＡＭの塩を意味し、これは、それが投与される罹患体に顕著な刺激を引き起こさず、且つ化合物の生物学的活性および特性を無効にしない。
【００３８】
本明細書に記載の化合物の溶媒和物は、融点、化学反応性、見かけの溶解度、溶解速度、光学的および電気的特性、蒸気圧および密度のような化学的および物理的特性を変更する目的で使用され得る。取り込まれた溶媒が水である場合、溶媒和物は一般に水和物としても知られる。
【００３９】
幾つかの実施形態において、ヒトに投与すると上記のＮＡＭの何れかに代謝される化合物を使用することが可能である。本発明に従うＮＡＭは、その場合間接的に使用される。
【００４０】
これらの化合物は以前から知られているので、当業者はそれらを合成する方法を知っている。
【００４１】
本発明によれば、ｍＧｌｕＲ５のＮＡＭは成熟脳損傷の治療に用いられる。
【００４２】
本発明の文脈において、用語「成熟脳損傷」とは、確立されており、それ以上進行しない任意の脳損傷または脳外傷をいう。これは、脳内の細胞死が治まると生じる。脳損傷または脳外傷は、脳細胞の破壊または変性に関連し、多数の様々な疾病、病気および／または外傷によって引き起こされ得、本発明の文脈においては、用語脳損傷は、医原性および非医原性の両方の脳損傷を含む。
【００４３】
幾つかの実施形態において、成熟脳損傷は脳卒中によって引き起こされたものであり得る。脳卒中は、虚血性脳卒中、出血性脳卒中および一過性虚血性発作からなる群から選択され得る。出血性脳卒中の場合、それは高血圧または動脈瘤および動静脈奇形を含む衰弱した血管の破裂によって引き起こされ得る。
【００４４】
脳卒中によって引き起こされる成熟脳損傷は、認知障害、感覚運動機能障害、うつ病または疲労からなる群から選択される１つ以上の疾病または障害へと進行している可能性がある。認知障害は、注意力、記憶および作業記憶、判断および評価、推理および「計算」、問題解決および意思決定、並びに言語の理解および生産の欠如を含み得、また、失語、記憶機能不全および半空間無視を含む群から選択される１つ以上の疾病を含み得る。
【００４５】
幾つかの実施形態において、成熟脳損傷は、心肺停止、急性脳損傷、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、手術、放射線、血管性認知症、てんかん発作、脳血管攣縮、および／または心肺停止又は溺水の結果としての脳の低酸素症によって引き起こされたものである。
【００４６】
成熟脳損傷を患っている罹患体に、本発明に従うｍＧｌｕＲ５ ＮＡＭを投与すると、ＮＡＭの投与なしで状況がどのようになるかと比較して、罹患体の脳機能の改善された回復を引き起こすであろう。本発明に従う治療は、成熟脳損傷が生じてから開始されるべきである。脳損傷または脳外傷が更に進行しなくなったとき、脳における細胞死は治まり、神経保護治療はもはや有効ではない。したがって、本発明に従う治療は、神経保護治療が損傷に対してもはや有意な効果を有さないときに開始されるべきである。したがって、幾つかの実施形態において、治療は、急性脳損傷が生じてから少なくとも４時間が経過するまで開始するべきではない。幾つかの実施形態において、治療は、急性脳損傷が生じてから５時間後以降に開始される。幾つかの実施形態において、治療は、急性脳損傷が生じてから６時間後以降に開始される。幾つかの実施形態において、治療は、急性脳損傷が生じてから８時間後以降に開始される。急性脳卒中などの急性脳損傷が、血栓溶解剤で、即ち、線維素溶解療法で、または脳動脈における血流を妨げる閉塞の機械的除去によって治療される場合、本発明に従う治療の開始のタイミングは、線維素溶解療法の終了と同時であってもよく、または閉塞の機械的除去の後であってもよい。再疎通（薬理学的または外科的の何れか）が使用される場合、本発明に従う治療は、再疎通が実施されるときか、またはその直後に開始され得る。
【００４７】
治療は早く開始されるほどより好ましい。しかしながら、急性脳損傷が確立されたはるか後、即ち、成熟脳損傷をもたらす初期の脳損傷または外傷のずっと後で、治療を開始することも可能である。成熟脳損傷の確立後、数日、数週間、数ヶ月、または数年後でさえも治療を開始することが可能である。本発明に従う治療のこの遅い開始は、成熟脳損傷の後期段階の間であっても規則的な物理療法が考慮され得る場合と同様である。
【００４８】
本発明に従う治療は、生涯にわたって行われ得る。或いは、治療は２〜７日間、２〜４週間、２〜４ヶ月間、或いは１年または数年間継続され得る。
【００４９】
本発明による治療は、１つ以上の他の治療と組み合わせてもよい。例えば、それは、経頭蓋磁気刺激法（Pollock et al、(2014) Interventions for improving upper limb limb function after stroke (review)、Chocrane Database Sys Rev、12:11）と組み合わせてもよい。或いは、本発明に従う治療は、脳の電気刺激（Pollock et al、2014）と組み合わせてもよく、そのような電気刺激は、陽極または陰極のいずれかであり得る。本発明に従う治療はまた、物理療法、コンピュータ支援バーチャルリアリティを含むリハビリ訓練、またはロボット支援訓練および療法（Laffont et al. Annals of Physical and Rehabilitation Medicine (2014) 57:543-551）と組み合わせてもよい。そのような物理的療法は、拘束誘発療法（constraint induced therapy）であり得る。これは例２でさらに議論される。
【００５０】
本明細書で用いられる用語「治療」は、疾患または疾病を治癒または緩和するための治療に関する。
【００５１】
用語「罹患体」は、本明細書で使用されるとき、本発明に従う治療を必要とする何れかのヒトまたは非ヒト哺乳動物に関する。
【００５２】
用語「治療有効量」は、所望の治療効果、即ち治療される成熟脳損傷に対する有益な効果をもたらす量に関する。
【００５３】
本発明に従うまたは本発明に従って用いられるＮＡＭは、医薬組成物または製剤に含ませられ得る。そのような組成物は、希釈剤および担体を含む薬学的賦形剤および／またはアジュバントを含み得る。医薬組成物は、本発明に従うＮＡＭの罹患体への投与を容易にする。医薬組成物はそれ自体知られた手段、例えば、慣用的な混合、溶解、顆粒化、糖衣錠製造、粉砕、乳化、カプセル化、封入または錠剤化プロセスの手段によって製造され得る。
【００５４】
本発明に従うＮＡＭまたは医薬組成物の投与は、何れかの慣用的な方法によって実施され得、適切な投与の経路は、例えば、経口、直腸、経粘膜、局所または腸内投与；筋肉内、皮下、静脈内、髄内注射、ならびに髄腔内、直接的な脳室内、腹腔内、鼻腔内、または眼内注射を含む非経口送達を含み得る。化合物は、長期投与のために、持続放出または制御放出投与形態で投与することができる。
【００５５】
本発明の１つの様態において、成熟脳損傷の治療における使用のための代謝型グルタミン酸受容体５（ｍＧｌｕＲ５）のネガティブアロステリックモジュレーター（ＮＡＭ）が提供される。
【００５６】
この様態の１つの実施形態において、治療は、成熟脳損傷を患う罹患体の脳機能の回復の改善をもたらす。
【００５７】
この様態の１つの実施形態において、前記ＮＡＭは
【００５８】
【化８−１】
2019515892.tif 000014
【００５９】
【化８−２】
2019515892.tif 000015
【００６０】
およびその薬学的に許容され得る塩並びに溶媒和物からなる群から選択される。
【００６１】
この様態の１つの実施形態において、前記ＮＡＭは
【００６２】
【化９】
2019515892.tif 000016
【００６３】
およびその薬学的に許容され得る塩並びに溶媒和物からなる群から選択される。
【００６４】
この様態の１つの実施形態において、前記ＮＡＭは
【００６５】
【化１０】
2019515892.tif 000017
【００６６】
およびその薬学的に許容され得る塩並びに溶媒和物である。
【００６７】
この様態の１つの実施形態において、前記成熟脳損傷は、脳卒中、頭部外傷、心肺停止および急性脳損傷からなる群から選択される疾病によって引き起こされたものである。
【００６８】
この様態の１つの実施形態において、前記脳損傷は、認知障害、うつ病、疲労および感覚運動機能障害からなる群から選択される脳卒中後障害をもたらす脳卒中によって引き起こされたものである。
【００６９】
この様態の１つの実施形態において、前記治療は、神経保護治療がもはや有効でなくなったら開始されるべきである。
【００７０】
この様態の１つの実施形態において、前記治療は、神経保護治療が完了した後に開始されるべきである。
【００７１】
この様態の１つの実施形態において、前記治療は、最初の急性脳損傷が発生してから４時間後以降に開始されるべきである。
【００７２】
この様態の１つの実施形態において、治療は、経頭蓋磁気刺激、電気刺激および／または物理的および行動療法と組み合わせられる。
【００７３】
本発明の１つの様態において、代謝型グルタミン酸受容体５（ｍＧｌｕＲ５）のネガティブアロステリックモジュレーター（ＮＡＭ）の治療有効量をそれが必要な罹患体に投与することを含む成熟脳損傷を治療しまたは緩和する方法が提供される。
【００７４】
この様態の１つの実施形態において、治療は成熟脳損傷を患う罹患体の脳機能の改善された回復をもたらす。
【００７５】
この様態の１つの実施形態において、前記ＮＡＭは
【００７６】
【化１１−１】
2019515892.tif 000018
【００７７】
【化１１−２】
2019515892.tif 000019
【００７８】
およびその薬学的に許容され得る塩並びに溶媒和物からなる群から選択される。
【００７９】
この様態の１つの実施形態において、前記ＮＡＭは
【００８０】
【化１２】
2019515892.tif 000020
【００８１】
およびその薬学的に許容され得る塩並びに溶媒和物からなる群から選択される。
【００８２】
この様態の１つの実施形態において、前記ＮＡＭは
【００８３】
【化１３】
2019515892.tif 000021
【００８４】
およびその薬学的に許容され得る塩並びに溶媒和物である。
【００８５】
この様態の１つの実施形態において、前記成熟脳損傷は、脳卒中、頭部外傷、心肺停止および急性脳損傷からなる群から選択される疾病によって引き起こされたものである。
【００８６】
この様態の１つの実施形態において、前記脳損傷は、認知障害、うつ病、疲労並びに感覚運動機能障害からなる群から選択される脳卒中後障害をもたらす脳卒中によって引き起こされる。
【００８７】
この様態の１つの実施形態において、前記治療は、神経保護治療がもはや有効でなくなったら開始されるべきである。
【００８８】
この様態の１つの実施形態において、前記治療は、神経保護治療が完了した後に開始されるべきである。
【００８９】
この様態の１つの実施形態において、前記治療は、最初の急性脳損傷が発生してから４時間後以降に開始されるべきである。
【００９０】
この様態の１つの実施形態において、治療は、経頭蓋磁気刺激、電気刺激および／または物理的および行動療法と組み合わせられる。
【図面の簡単な説明】
【００９１】
下記の例において、添付の図面を参照する。
【図１Ａ】図１Ａ〜Ｄは、アセチレン骨格構造を有するプロトタイプのｍＧｌｕＲ５ネガティブアロステリックモジュレーター：ＳＩＮ００７；３（（２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）エチニル）ピリジン；ＭＴＥＰの、ビヒクル（Ｖｈ）処置と比較した、ラットの脳卒中後の機能回復における効果を示す。図１Ａ：脳卒中２日後に開始した１２日間の治療後の機能回復。
【図１Ｂ】図１Ｂ：脳卒中後の梗塞のサイズ。
【図１Ｃ】図１Ｃ：機能回復の時間経過。ＳＩＮ００７（Ｓ）；ビヒクル（Ｖ）。
【図１Ｄ】図１Ｄ：５日間のＳＩＮ００７治療が停止された後の回復の持続。
【図２Ａ】図２Ａ〜Ｆは、プロトタイプのｍＧｌｕＲ５ネガティブアロステリックモジュレーターＳＩＮ００７での治療の、ビヒクル（Ｖｈ）処置と比較した、マウスの脳卒中後の機能回復における効果を示す。図２Ａ：治療の５日後の機能回復。
【図２Ｂ】図２Ｂ：脳卒中後の梗塞のサイズ。
【図２Ｃ】図２Ｃ：脳卒中の２日後（２ｄ）又は１０日後（１０ｄ）に開始した５日間の治療。
【図２Ｄ】図２Ｄ：ＳＩＮ００７での６日間の治療の１時間前の、ｍＧｌｕＲ５ポジティブアロステリックモジュレーターＳＩＮ００６；（Ｎ−シクロブチル−６−［２−（３−フルオロフェニル）エチニル］−３−ピリジンカルボキサミドヒドロクロリド）；ＶＵ０３６０１７２による事前処理。
【図２Ｅ】図２Ｅおよび２Ｆ：脳卒中の５日後、豊かな環境で飼育されるマウスは脳機能の回復を促進させ、ＳＩＮ００６（図２Ｅ）との併用治療では効果が失われたが、ＳＩＮ００７（図２Ｆ）との併用治療では更に促進された。
【図２Ｆ】図２Ｅおよび２Ｆ：脳卒中の５日後、豊かな環境で飼育されるマウスは脳機能の回復を促進させ、ＳＩＮ００６（図２Ｅ）との併用治療では効果が失われたが、ＳＩＮ００７（図２Ｆ）との併用治療では更に促進された。
【図３Ａ】図３Ａ〜Ｄは、経口利用可能なアセチレン性ｍＧｌｕＲ５ ＮＡＭの化合物の脳卒中後の機能回復における効果を示す。図３Ａ：ラットの機能的回復におけるＳＩＮ００８［６−フルオロ−２−［4−（ピリジン−２−イル）−３−ブチニル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン，ＡＤＸ７００８４］の効果。
【図３Ｂ】図３Ｂ：マウスの機能的回復におけるＳＩＮ０１１（５−ヒドロキシ−５−（ｍ−トリルエチニル）オクタヒドロ−１Ｈ−インドール−１−カルボン酸［３ａＳ，５Ｓ，７ａＲ］−メチル、mavoglurant）の効果。
【図３Ｃ】図３Ｃ：マウスの機能的回復におけるＳＩＮ０１３（［２−クロロ−４−（（２,５−ジメチル−１−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル））−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）エチニル）ピリジン、ＣＴＥＰ）の２回の投与の効果。
【図３Ｄ】図３Ｄ：野生型およびｍＧｌｕＲ５ＫＯラットの機能回復におけるＳＩＮ０１３の効果。
【図３Ｅ】図３Ｅ：マウスの脳卒中後の機能回復におけるＳＩＮ０１４［２，５，−ジメチル−１−［４−フルオロ−フェニル］イミダゾール−４−イル］エチニル］ピリジン、（ＲＧ７０９０、Ｂａｓｉｍｇｌｕｒａｎｔ））の効果。
【図３Ｆ】図３Ｆ：マウスの機能回復におけるＳＩＮ０１７（３−フルオロ−５−（５−（（２−メチルチアゾール−４−イル）エチニル）ピリジン−２−イル）ベンゾニトリル、ＳＴＸ１０７）の効果。
【図４Ａ】図４Ａ：脳卒中の１週間および２週間後のラットの機能回復におけるＳＩＮ０１０［１−（３−クロロフェニル）−３−（３−メチル−５−オキソ−４Ｈ−イミダゾール−２−イル）尿素、フェノバム）の効果。
【図４Ｂ】図４Ｂ：ラットの豊かな飼育の回復増強効果におけるＳＩＮ０１０治療の相加的効果。
【図４Ｃ】図４Ｃ：ラットの脳卒中後の機能回復におけるＳＩＮ０１５［３−フルオロ−５−（３−（５−フルオロピリジン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール５−イル）ベンゾニトリル］の効果。
【発明を実施するための形態】
【００９２】
例
以下の例は、本発明および特にその特定の実施形態を例証するために提供される。
【００９３】
例１：ラットの脳卒中後の機能回復におけるプロトタイプのアルキンｍＧｌｕＲ５ ＮＡＭ、ＳＩＮ００７の効果
実験手順
動物．全ての実験は、Ｍａｌｍｏｅ−Ｌｕｎｄ動物実験委員会の承認を得て、ＡＲＲＩＶＥガイドラインに従って実施した。動物を逆光条件下で飼育し、ラットが活動している暗期の間に試験を行った。実験は、オスのＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙラットで行った（１１週齢、Charles River、Scanbur A/S Karlslunde、デンマーク）。研究はランダム化され、手術および行動評価を行った研究者に盲検的な様式で行った。
【００９４】
材料．（３−［（２メチル−１,３−チアゾール−４−イル）エチニル］ピリジン、ＭＴＥＰ）はBeijing Honghui Meditech Co., Ltd（北京、中華人民共和国）で合成され、構造をＨ１−ＮＭＲで確認した。それを生理食塩水中の０．３％Ｔｗｅｅｎ８０に溶解した。
【００９５】
化合物の投与．この化合物を１ｍｌ／ｋｇの急速投与量として腹部の下部象限に注入した。
【００９６】
実験的な脳卒中．動物をイソフルラン（自発的換気下でＯ２中約２％）により麻酔し、定位フレームに配置した。手術中、直腸温度プローブを用いて温度を監視し、フィードバック制御を備えた加熱パッドによって動物を３７．０〜３７．５±０．２℃に維持した。矢状皮膚切開を行い、皮下結合組織を除去し、頭蓋骨を乾燥させた。その後、光増感色素ローズベンガル（１０ｍｇ／ｍＬで０．５ｍＬ）を尾静脈に注入した。注入の２分後、頭蓋骨に８ｍｍから４．５ｍｍまでの領域で冷光（Schott、ＫＬ１５００ＬＣＤ）を１５分間照射した（ブレグマから前後+４ｍｍから−４ｍｍまでおよび左側０．５ｍｍから５ｍｍまで）。その後、尾部および頭皮切開部を縫合し、ラットをそれらの飼育ケージに移した。脳卒中の発症の２時間後に、肢の配置試験を用いて機能不全を評価し、脳損傷半球の反対側の前肢および後肢両方についてスコア０を有する動物のみを研究に使用した。
【００９７】
神経機能の試験．足の配置試験．光血栓症によってもたらされる皮質損傷は、感覚運動野におけるニューロン損失および病変の近傍のニューロンネットワークにおける機能の低下に起因する欠損（deficit）を引き起こす。これは、足の配置試験における応答の喪失によって示される。この試験は、肢への刺激に対する触覚／自己受容性応答に関する情報を提供する。動物は、テーブル表面上に４本の全ての足を配置し、足を端に沿って試験した。試験する足がテーブル表面に緩く接触するように、ラットを端まで移動させた。ラットが端に向かって動くとき、その動物のテーブル表面上に肢を戻す能力を評価した。重要なことに、頭部を４５°の角度に保持して視覚および髭／鼻の刺激を防止した。テーブルへの肢の迅速な配置を１としてスコア付けした。肢の不完全な配置を０．５としてスコア付けし、肢および足の完全な伸張を０としてスコア付けした。薬剤またはビヒクルを用いた動物の処置の前に類似の機能的欠損を有する群を得るために、梗塞発達が治まったときである回復の時点の実験的脳卒中から２日後に選択的選別を行った。したがって、肢の配置の重度の欠損（スコア=０）を示した動物のみを研究に用いた。
【００９８】
組織採集．動物を深く麻酔し（イソフルラン）、４％のパラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）溶液で灌流固定した。脳を採集して４％のＰＦＡ溶液に４時間浸した後、２５％スクロースリン酸緩衝液（０．１ＭのＮａＨ２ＰＯ４、０．１ＭのＮａ２ＨＰＯ４）内に移動させ、４℃で保存した。次いで、ミクロトームを用いて脳を３０μｍに薄切りし、１つの切片を梗塞のサイズの測定のために各１ｍｍにした。他は免疫組織化学的検査および免疫蛍光検査のために保管した。全ての切片を凍結防止溶液（３０％エチレングリコール、３０％グリセロール、０．０１ＭのＮａＨ２ＰＯ４、０．０３ＭのＮａ２ＨＰＯ４）中に−２０℃で保管した。
【００９９】
免疫組織化学的検査．自由浮遊する脳切片をＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水）内で３回すすぎ、３％のＨ２Ｏ２および１０％のＭｅｔＯＨで１５分間クエンチした。ＰＢＳで洗浄した後、切片をブロッキング溶液（ＰＢＳ中の５％の正常なロバ血清、Jackson ImmunoResearch、英国および０．２５％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００）で室温で１時間ブロッキングした。切片を、１：１５００の希釈率のモノクローナルマウス抗ＮｅｕＮ抗体（Ａ６０／ＭＡＢ３７７、Millipore）とともに４℃で一晩インキュベートした。ＰＢＳ中の１％の正常なロバ血清および０．２５％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００で３回すすいだ後、切片をブロッキング溶液中１：４００の希釈率の適切な二次ビオチン化抗体（ロバ抗ウサギ／マウス、Vector Laboratories、米国）と共に９０分、室温（ＲＴ）でインキュベートした。可視化は、３，３−ジアミノベンジジン−テトラヒドロクロライド（ＤａｂＳａｆｅ、Saveen Werner、スウェーデン）、８％のＮｉＣｌおよび３％のＨ２Ｏ２を用いるＶｅｃｔｏｒｓｔａｉｎＡＢＣｋｉｔ（Vector）によって達成した。
【０１００】
梗塞測定．オリンパスＢＸ６０顕微鏡（Solna、スウェーデン）を用いて明視野画像を取得した。１ｍｍ間隔の１２枚の切片をスキャンし、ＩｍａｇｅＪソフトウェア（国立衛生研究所、米国）を用いて、梗塞半球および非病変対側半球の非損傷領域の輪郭を描き、測定した。無傷の対側半球の面積から非損傷の同側半球の面積を差し引くことによって梗塞容積（ｍｍ３）を決定し、各動物の容積積分によって計算した。
【０１０１】
結果
脳卒中の２日後に開始したＳＩＮ００７（５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）またはビヒクル（生理食塩水中の０．３％Ｔｗｅｅｎ８０）による５日間の毎日の治療の、脳卒中の１４日後に評価した足の配置スコアへの効果を図１Ａに示す。ＳＩＮ００７治療群（ｎ＝７）においては、ビヒクル（ｎ＝５）と比較して足の配置機能のほぼ完全な回復が見られた（ｐ＜０．００１、マンホイットニー検定）。図１Ｂは、図１Ａに含まれる動物の平均の梗塞のサイズを示す。梗塞のサイズは、ビヒクルで処置した動物においては１８．８±２．５ｍｍ３であり、ＳＩＮ００７の動物では１９．５±４．６ｍｍ３であった。ビヒクル群と治療群との間で梗塞のサイズに差はなかった。図１Ｃは、機能の回復の経過を示す。治療効果にはＳＩＮ００７による少なくとも４日間の治療が必要であり、最大限の治療効果のためには１４日間必要である（ＳＩＮ００７、ｓ２−ｓ７、ｎ＝１１；Ｖｈ、ｖ２−７、ｎ＝１１；ＳＩＮ００７、ｓ１４、ｎ＝７；Ｖｈ、ｖ１４、ｎ＝５）。図１Ｄは、ＳＩＮ００７による５日間の治療（ｎ＝４）およびそれに続くＳＩＮ００７による治療無しの回復期間（ＳＩＮ００７／ｏｆｆ）の効果を示す。ＳＩＮ００７を用いた５日間の治療によって提供される機能の回復は、治療の完了後少なくとも７日間持続する。まとめると、データは少なくとも４日間、好ましくは１４日間の脳卒中の２日後に開始するｍＧｌｕＲ５ ＮＡＭによる毎日の治療は、脳の保護を提供せずに脳機能の持続的な回復をもたらすことを実証した。したがって、ＳＩＮ００７は、うつであるが脳卒中によって損傷されていない脳ニューロンネットワークの機能回復をもたらす。
【０１０２】
例２．マウスの脳卒中後の機能回復におけるプロトタイプのアルキンｍＧｌｕＲ５ ＮＡＭ、ＳＩＮ００７の効果
実験手順
動物．全ての実験は、Ｍａｌｍｏｅ−Ｌｕｎｄ動物実験委員会の承認を得て、ＡＲＲＩＶＥガイドラインに従って実施した。実験はオスのＣ５７／ＢＬ６マウス（８週齢、Charles River Scanbur A/S Karlslunde、デンマーク）で行った。研究はランダム化され、手術および行動評価を行った研究者に盲検的な様式で行った。
【０１０３】
材料は例１と同様であり、薬剤の投与は例１と同様に行った。また、ｍＧｌｕＲ５受容体におけるポジティブアロステリックモジュレーター（ＰＡＭ）は、ＳＩＮ００６（Ｎ−シクロブチル−６−［２−（３−フルオロフェニル）エチニル］−３−ピリジンカルボキサミドヒドロクロリド；ＶＵ０３６０１７２）であった。
【０１０４】
マウスにおける脳卒中の誘発．マウスは、左感覚運動野の片側光血栓（photothrombotic、ＰＴ）皮質梗塞を受けた。手術の間、動物の体温を自己制御式加熱パッドを用いて３７℃に維持した。動物を１００％のＯ２において１．５〜２．５％のイソフルラン（Sigma）を用いて麻酔した。頭蓋骨の上の皮膚を切開した。２．５ｍｍの開口直径を有する光ファイバー束を冷光源（ＣＬ１５００ＥＣＯ、Zeiss、ドイツ）に接続し、感覚運動野の定位座標、即ち、ブレグマの０．５ｍｍ前方および正中線から１．５ｍｍ側方へ調整した。光を２０分間オンにする前に、０．２５ｍｌのローズベンガル（０．９％の生理食塩水中１０ｍｇ／ｍｌ；Sigma-Aldrich、ドイツ）の一回の腹腔内（ｉ．ｐ．）注入を５分間与えた。光ファイバー束の下の頭蓋骨表面が３８℃を超えないように注意した。手術後、動物を加熱パッド上で麻酔から目覚めさせ、飼料ペレットと水を自由に利用できるケージに戻した。
【０１０５】
豊かな飼育．豊かな環境下での齧歯類の飼育は、実験的な脳卒中後の回復を促進する、脳の様々な感覚運動系を刺激することはよく知られている。豊かな飼育は以下の手順で達成した。脳卒中の２日後の選択的選別の後、マウスを標準ケージ（ＳＴＤ、１７ｃｍ×１６ｃｍ×３４．５ｃｍ）または豊かなケージ（ＥＥ、３０ｃｍ×２７ｃｍ×４３ｃｍ）に無作為に分配した。マルチレベルの豊かなケージには、プラスチック製のトンネル、小屋、スライド、および齧歯類用走行輪などのさまざまな色の物体が装着され、２日ごとに物体の配置を変更した。マウスを標準ケージ（２匹／ケージ）または豊かなケージ（６〜８匹／ケージ）のどちらかで１２日間飼育した。標準ケージ内の動物は、飼育小屋の状態を除いて同様に扱われた。
【０１０６】
足の配置試験．マウスをその吻側尾側伸長に沿ってベンチの端に固定し、片側の前側および後側の両方の足をそれに沿って静かに押した。マウスが端に向かって動くとき、各足の配置を記録した。感覚運動障害を１、０．５および０のスコアを用いて評価した。（１）−足がすぐにテーブル表面上に配置される。（０．５）−肢は伸展しているが、何らかの動きがあり、足をテーブルの表面上に配置することを試みる。（０）−足は完全に固定され、垂れ下がり、動きがない。薬剤またはビヒクルによる動物の処置の前に同様の機能的欠損を有する群を得るために、実験的脳卒中の２日後、即ち、梗塞の発達が治まった時の回復の時点で選択的選別を行った。したがって、足の配置に重度の欠損を示した動物（スコア＝０）のみを研究に用いた。
【０１０７】
例１と同様に動物を潅流し、免疫染色し、梗塞のサイズを例１と同様に評価した。
【０１０８】
結果
脳卒中の２日後に開始された５日間のＳＩＮ００７（５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を用いたマウスの毎日の治療の効果を図２Ａに示す。ビヒクルで処置した動物（ｎ＝９）と比較して、ＳＩＮ００７で治療した動物（ｎ＝６）において強い回復増進効果が見られた（ｐ＜０．０１、マンホイットニー）。２つの群で梗塞の平均サイズは同じであったことから、回復は脳の保護に関連するものではない。梗塞は、ビヒクル群で７．９±１．５ｍｍ３であり、ＳＩＮ００７治療群で８．９±０．９ｍｍ３であった、図２Ｂ。治療が遅れ、脳卒中の１０日後に開始されても（ｎ＝５）、機能の回復は、治療が脳卒中の２日後に開始された場合（ｎ＝４）と同じである、図２Ｃ（Ｖｈ、ｎ＝８）（**は、ｐ＜０．０１を示す、クラスカル・ウォリス検定）。ＳＩＮ００７の回復増進効果がｍＧｌｕＲ５受容体の阻害により媒介されることを実証するために、ｍＧｌｕＲ５のポジティブアロステリックモジュレーター、ＳＩＮ００６（３０ｍｇ／ｋｇ、ｐ．ｏ．）によってマウスを毎日処置し、当該処置は脳卒中の２日後、ＳＩＮ００７による治療（５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）の１時間前から開始した（*はｐ＜０．０５を示し、**はｐ＜０．０１を示す、クラスカル・ウォリス、検定）、図２Ｄ。足の配置スコアを治療の５日後に評価した。ＳＩＮ００７（ｎ＝５）で治療した動物は、図２Ａにも示す通り、ビヒクルで処置した動物（ｎ＝６）と比較して足の機能を回復させた。しかしながら、ＳＩＮ００７の前にＳＩＮ００６（ｎ＝５）で処置した動物は機能を回復させなかった。脳卒中後の、脳機能の回復におけるｍＧｌｕＲ５受容体阻害の重要性は、物理的手段、即ち、豊かな環境に動物を置くことによって脳機能が促進される実験的パラダイムにも示されている。脳卒中後、標準的な飼育（ｎ＝３）における動物と比較して、豊かな環境で５日間飼育された動物（ｎ＝７）に明らかな機能の促進された回復、図２Ｅ、は、ｍＧｌｕＲ５アゴニスト、ＳＩＮ００６（３０ｍｇ／ｋｇ、ｐ．ｏ．、（ｎ＝４））の同時処置によって完全に阻止される。このことは、脳卒中後の脳機能の回復におけるｍＧｌｕＲ５受容体の関与を再度実証している（ｎ＝４）（*はｐ＜０．０５を示す、クラスカル・ウォリス検定）。更に、ＳＩＮ００７（１ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．、３日間毎日、ｎ＝５）による治療は、豊かな環境（ＥＥ）で飼育されたマウスに見られるのとほぼ同じ程度まで、機能の回復をやや促進する（ｎ＝７）。ＳＩＮ００７（１ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．、３日間、ｎ＝５）の治療を豊かな環境における飼育と組み合わせることは、回復を有意に促進し、それは感覚運動トレーニングへのｍＧｌｕＲ５ＮＡＭの追加の効果を示唆している。
【０１０９】
例３．経口的に利用可能なアルキンｍＧｌｕＲ５ ＮＡＭ、ＳＩＮ００８、ＳＩＮ０１１、ＳＩＮ０１３、ＳＩＮ０１４およびＳＩＮ０１７の脳卒中後の機能回復における効果。
【０１１０】
実験手順
動物．ラットは例１と同様のものであり、マウスは例２と同様のものである。ｍＧｌｕＲ５遺伝子を不活性化したｍＧｌｕＲ５ ＫＯラットは、SAGE、Research Labs、ボイヤータウン、ＰＡ、米国からのものである。
【０１１１】
材料．ＳＩＮ００８（６−フルオロ−２−［４−（ピリジン−２−イル）−３−ブチニル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン、（ＡＤＸ４９６２１、Dipraglurant）、ＳＩＮ０１３［２−クロロ−４−［２−［２，５，−ジメチル−１−［４−（トリフルオロメトキシ）フェニル］イミダゾール−４−イル］エチニル］ピリジン,（ＣＴＥＰ））、ＳＩＮ０１４［２，５，−ジメチル−１−［４−フルオロ−フェニル］イミダゾール−４−イル］エチニル］ピリジン、（ＲＧ７０９０、Basmiglurant））、ＳＩＮ０１７（３−フルオロ−５−（５−（（２−メチルチアゾール−４−イル）エチニル）ピリジン−２−イル）ベンゾニトリル（ＳＴＸ１０７））は、全てBeijing Honghui Meditech Co., Ltd（北京、中華人民共和国）で合成された。ＳＩＮ０１１（３ａＲ，４Ｓ，７ａＲ）−オクタヒドロ−４−ヒドロキシ−４［２−（３−メチルフェニル）エチニル］−１Ｈ−インドール−１−カルボン酸メチルエステル（ＡＦＱ０５６、Mavoglurant））はSv chembiotech、Edmonton、カナダからのものである。全ての化合物の構造をＨ１−ＮＭＲによって確認し、純度は＞９７％であった。ＳＩＮ０１１を蒸留水中の０．５％のヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）に懸濁し、ＳＩＮ００８を蒸留水中の２０％の２−ヒドロキシプロピルシクロデキストリンに懸濁し、ＳＩＮ０１７、ＳＩＮ０１３およびＳＩＮ０１４を塩水中の０．３％のＴｗｅｅｎ８０に懸濁した。ビヒクル中に懸濁した化合物は、安定な懸濁物を得るために１５分間超音波処理した。
【０１１２】
化合物の投与．化合物を胃の中に配置されたカテーテルによって経口的に投与した（ｐ．ｏ．）。溶液の量は、０．２ｍｌ／ラット、０．１ｍｌ／マウスであった。
【０１１３】
脳卒中の誘発は、ラットについては例１と同様に行い、マウスについては例２と同様に行った。神経機能の評価は、ラットについては例１と同様に行い、マウスについては例２と同様に行った。動物を例１と同様に潅流および免疫染色し、梗塞のサイズを例１と同様に評価した。
【０１１４】
結果
ＳＩＮ００８（ＡＤＸ４８６２１、dipraglurant、３０ｍｇ／ｋｇ、ｐ．ｏ．、２０％の２−ヒドロキシプロピルシクロデキストリン溶液中；ｎ＝４））又はビヒクル（ｎ＝７）による５日間の処置は、ラットにおける脳卒中の２日後に処置を開始したとき、神経機能を有意に促進した、図３Ａ。
【０１１５】
脳卒中後の足の配置試験におけるマウスへのＳＩＮ０１１（mavoglurant）（３０ｍｇ／ｋｇ、ｐ．ｏ．）又はビヒクル（０．５％のＨＰＭＣ）の毎日の投与の効果を図３Ｂに示す。処置を脳卒中の２日後に開始し、５日間続けた。ビヒクル群（ｎ＝５）においては回復は見られなかった一方、治療群（ｎ＝５）では足の機能の優位な回復が見られた（ｐ＜０．０１、マンホイットニー）。
【０１１６】
図３Ｃは、ＳＩＮ０１３（ＣＴＥＰ）（２ｍｇ／ｋｇ、４８時間ごと（ＳＩＮ０１３（ｌ）（ｎ＝５）または２ｍｇ／ｋｇ、毎日、ＳＩＮ０１３（ｈ）（ｎ＝７））或いはビヒクル（ｎ＝４）の投与の効果を示す。処置を脳卒中の２日後開始し、５日間続けた。ビヒクル処置群においては足の機能の改善は見られなかった一方、処置パラダイムの両方が機能の促進を提供し、それは２ｍｇ／ｋｇの毎日の投与計画において顕著であった（ｐ＜０．０５、クラスカル・ウォリス）。マウスにおけるＳＩＮ０１３による脳卒中後の回復の促進（図３Ｃ）は脳卒中のラットモデルにおいて確認した、図３Ｄ。ＳＩＮ０１３（２ｍｇ／ｋｇ／日、ｐ．ｏ．、生理食塩水中の０．３％のＴｗｅｅｎ８０中、ｎ＝８）による５日間の治療は、ビヒクル群（ｎ＝１１）と比較して足の配置機能を有意に改善した。処置は脳卒中の２日後に開始し、５日間続けた。ｍＧｌｕＲ５ＫＯラット（ｎ＝３）ではＳＩＮ０１３処置によって刺激された回復は見られず、欠損（deficit）はビヒクルで処置した野生型ラットにおけるものと似ていた。このことは、脳卒中後の失われた脳機能の回復におけるｍＧｌｕＲ５ＮＡＭの刺激効果はｍＧｌｕＲ５受容体によって媒介される証拠を確固たるものとしている（図２Ｄ）。
【０１１７】
ＳＩＮ０１４（basimglurant、ＲＧ７０９０；（ｌ）５ｍｇ／ｋｇ、ｐ．ｏ．および（ｈ）１０ｍｇ／ｋｇ、ｐ．ｏ．、生理食塩水中の０．３％Ｔｗｅｅｎ中）によるマウスの５日間の治療は、より多い投与量（１０ｍｇ／ｋｇ）で機能回復を改善した、図３Ｅ。
【０１１８】
ＳＩＮ０１７（３ｍｇ／ｋｇ、０．５％のＨＰＭＣ中、ｐ．ｏ．（ｎ＝３））（ＳＴＸ１０７）での５日間の毎日の治療も、ビヒクル群（ｎ＝４）と比較してマウスにおける失われた機能の回復を促進した、図３Ｆ。ＳＩＮ０１７での治療は脳卒中の２日後に開始した。
【０１１９】
例４．脳卒中後の機能回復における非アルキンｍＧｌｕＲ５ ＮＡＭ、ＳＩＮ０１０およびＳＩＮ０１５の効果
実験手順
動物は、例１および２と同様であった。
【０１２０】
ＳＩＮ０１０［１−（３−クロロフェニル）−３−（３−メチル−５−オキソ−４Ｈ−イミダゾール−２−イル）尿素、fenobam］およびＳＩＮ０１５［３−フルオロ−５−（３−（５−フルオロピリジン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール５−イル）ベンゾニトリル］はBeijing Honghui Meditech Co., Ltd,（北京、中華人民共和国）によって合成されたものである。全ての構造をＨ１−ＮＭＲによって確認し、純度は＞９７％である。ＳＩＮ１０を２０％の２−ヒドロキシシクロデキストリンに懸濁し、ＳＩＮ０１５を０．５％のＨＰＭＣに懸濁した。安定した懸濁物を得るために、ビヒクルに懸濁した化合物を１５分間超音波処理した。
【０１２１】
化合物の投与は例３と同様に行った。
【０１２２】
脳卒中の導入、神経機能の評価、動物の潅流、免疫染色および梗塞のサイズの評価は、例１と同様に行った。
【０１２３】
結果
毎日ｐ．ｏ．（１０ｍｇ／ｋｇ、ｐ．ｏ．、ｎ＝１２）で５日間（ＳＩＮ０１０（１ｗ）、ｎ＝８）、または１２日間（ＳＩＮ０１０（２ｗ）、ｎ＝４、（Ｖｈ、ｎ＝４）与えられたＳＩＮ０１０（fenobam）は、ラットにおける脳卒中後の回復を促進する、図４Ａ。治療は、脳卒中の２日後に開始した。機能の経時的な改善が見られ、それは１２日間の治療後においてビヒクルと比較して顕著であった。同様の改善が脳卒中の２日後に開始されたＳＩＮ０１０で治療された脳卒中に罹患したマウスにおいて見られる（図４Ｂ）。加えて、脳卒中の２日後のマウスにおいて、豊かな飼育をＳＩＮ０１０による毎日の治療と組み合わせることは、Ｖｈ（ｎ＝５）、ＥＥ単独（ｎ＝７）またはＳＩＮ０１０（ｎ＝５）治療単独と比較して回復を更に改善する、図４Ｂ。（ａ）はＶｈ対ＳＩＮ０１０治療、（ｂ）はＳＩＮ０１０処置＋ＥＥ対Ｖｈ処置、（ｃ）はＳＩＮ０１０治療＋ＥＥ対ＳＩＮ０１０単独におけるｐ＜０．０５を示す。この結果は、豊かな飼育と組み合わせてＳＩＮ００７で治療したマウスで見られたものと同様であり、図２Ｆ、組み合わせ治療の追加の効果を強く示唆している。脳卒中の２日後に開始され、３ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝４）の投与量で５日間与えられたＳＩＮ０１５、３−フルオロ−５−（３−（５−フルオロピリジン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール５−イル）ベンゾニトリルは機能の回復を改善した、図４Ｃ。
【図１Ａ】
2019515892.tif 000030
【図１Ｂ】
2019515892.tif 000031
【図１Ｃ】
2019515892.tif 000032
【図１Ｄ】
2019515892.tif 000033
【図２Ａ】
2019515892.tif 000034
【図２Ｂ】
2019515892.tif 000035
【図２Ｃ】
2019515892.tif 000036
【図２Ｄ】
2019515892.tif 000037
【図２Ｅ】
2019515892.tif 000038
【図２Ｆ】
2019515892.tif 000039
【図３Ａ】
2019515892.tif 000040
【図３Ｂ】
2019515892.tif 000041
【図３Ｃ】
2019515892.tif 000042
【図３Ｄ】
2019515892.tif 000043
【図３Ｅ】
2019515892.tif 000044
【図３Ｆ】
2019515892.tif 000045
【図４Ａ】
2019515892.tif 000046
【図４Ｂ】
2019515892.tif 000047
【図４Ｃ】
2019515892.tif 000048
【手続補正書】
【提出日】平成31年3月22日(2019.3.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
成熟脳損傷の治療における使用のための代謝型グルタミン酸受容体５（ｍＧｌｕＲ５）のネガティブアロステリックモジュレーター（ＮＡＭ）を含む、成熟脳損傷の治療における使用のための医薬組成物。
【請求項２】
前記治療は成熟脳損傷を患う罹患体の脳機能の回復の改善をもたらす、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記ＮＡＭは、
【化１−１】
2019515892.tif 000049
【化１−２】
2019515892.tif 000050
およびその薬学的に許容され得る塩並びに溶媒和物からなる群から選択される、
請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記ＮＡＭは、
【化２】
2019515892.tif 000051
、並びにその薬学的に許容され得る塩及び溶媒和物からなる群から選択される、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記ＮＡＭは、
【化３】
2019515892.tif 000052
およびその薬学的に許容され得る塩並びに溶媒和物からなる群から選択される、
請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記ＮＡＭは、
【化４】
2019515892.tif 000053
およびその薬学的に許容され得る塩並びに溶媒和物である、
請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記成熟脳損傷は、脳卒中、頭部外傷、心肺停止および急性脳損傷からなる群から選択される疾病によって引き起こされる、請求項１〜５の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記脳損傷は、認知障害、うつ病、疲労および感覚運動機能障害からなる群から選択される脳卒中後障害をもたらす脳卒中によって引き起こされる、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記治療は、神経保護治療がもはや有効でなくなったら開始されるべきである、請求項１〜８の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記治療は、神経保護治療が完了した後に開始されるべきである、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記治療は、最初の急性脳損傷が発生してから４時間後以降に開始されるべきである、請求項１〜９の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記治療は、経頭蓋磁気刺激、電気刺激および／または物理的および行動療法と組み合わせられる、請求項１〜１１の何れか１項に記載の医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２３】
結果
毎日ｐ．ｏ．（１０ｍｇ／ｋｇ、ｐ．ｏ．、ｎ＝１２）で５日間（ＳＩＮ０１０（１ｗ）、ｎ＝８）、または１２日間（ＳＩＮ０１０（２ｗ）、ｎ＝４、（Ｖｈ、ｎ＝４）与えられたＳＩＮ０１０（fenobam）は、ラットにおける脳卒中後の回復を促進する、図４Ａ。治療は、脳卒中の２日後に開始した。機能の経時的な改善が見られ、それは１２日間の治療後においてビヒクルと比較して顕著であった。同様の改善が脳卒中の２日後に開始されたＳＩＮ０１０で治療された脳卒中に罹患したマウスにおいて見られる（図４Ｂ）。加えて、脳卒中の２日後のマウスにおいて、豊かな飼育をＳＩＮ０１０による毎日の治療と組み合わせることは、Ｖｈ（ｎ＝５）、ＥＥ単独（ｎ＝７）またはＳＩＮ０１０（ｎ＝５）治療単独と比較して回復を更に改善する、図４Ｂ。（ａ）はＶｈ対ＳＩＮ０１０治療、（ｂ）はＳＩＮ０１０処置＋ＥＥ対Ｖｈ処置、（ｃ）はＳＩＮ０１０治療＋ＥＥ対ＳＩＮ０１０単独におけるｐ＜０．０５を示す。この結果は、豊かな飼育と組み合わせてＳＩＮ００７で治療したマウスで見られたものと同様であり、図２Ｆ、組み合わせ治療の追加の効果を強く示唆している。脳卒中の２日後に開始され、３ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝４）の投与量で５日間与えられたＳＩＮ０１５、３−フルオロ−５−（３−（５−フルオロピリジン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール５−イル）ベンゾニトリルは機能の回復を改善した、図４Ｃ。
以下に、本願出願の当初の特許請求の範囲に記載された発明を付記する。
［１］
成熟脳損傷の治療における使用のための代謝型グルタミン酸受容体５（ｍＧｌｕＲ５）のネガティブアロステリックモジュレーター（ＮＡＭ）。
［２］
前記治療は成熟脳損傷を患う罹患体の脳機能の回復の改善をもたらす、［１］に記載の使用のための代謝型グルタミン酸受容体５（ｍＧｌｕＲ５）のネガティブアロステリックモジュレーター（ＮＡＭ）。
［３］
前記ＮＡＭは、
【化１４−１】
2019515892.tif 000054
【化１４−２】
2019515892.tif 000055
およびその薬学的に許容され得る塩並びに溶媒和物からなる群から選択される、
［１］または［２］に記載の使用のためのＮＡＭ。
［４］
前記ＮＡＭは、
【化１５】
2019515892.tif 000056
およびその薬学的に許容され得る塩並びに溶媒和物からなる群から選択される、
［１］または［２］に記載の使用のためのＮＡＭ。
［５］
前記ＮＡＭは、
【化１６】
2019515892.tif 000057
およびその薬学的に許容され得る塩並びに溶媒和物である、
［１］または［２］に記載の使用のためのＮＡＭ。
［６］
前記成熟脳損傷は、脳卒中、頭部外傷、心肺停止および急性脳損傷からなる群から選択される疾病によって引き起こされる、［１］〜［５］の何れか１つに記載の使用のためのＮＡＭ。
［７］
前記脳損傷は、認知障害、うつ病、疲労および感覚運動機能障害からなる群から選択される脳卒中後障害をもたらす脳卒中によって引き起こされる、［６］に記載の使用のためのＮＡＭ。
［８］
前記治療は、神経保護治療がもはや有効でなくなったら開始されるべきである、［１］〜［７］の何れか１つに記載の使用のためのＮＡＭ。
［９］
前記治療は、神経保護治療が完了した後に開始されるべきである、［８］に記載の使用のためのＮＡＭ。
［１０］
前記治療は、最初の急性脳損傷が発生してから４時間後以降に開始されるべきである、［１］〜［８］の何れか１つに記載の使用のためのＮＡＭ。
［１１］
前記治療は、経頭蓋磁気刺激、電気刺激および／または物理的および行動療法と組み合わせられる、［１］〜［１０］の何れか１つに記載の使用のためのＮＡＭ。
［１２］
成熟脳損傷を治療するかまたは緩和する方法であって、代謝型グルタミン酸受容体５（ｍＧｌｕＲ５）のネガティブアロステリックモジュレーター（ＮＡＭ）の治療有効量をそれを必要とする罹患体に投与することを含む方法。
［１３］
前記治療は成熟脳損傷に苦しむ罹患体の脳機能の回復の改善をもたらす［１２］に記載の方法。
［１４］
前記ＮＡＭは、
【化１７−１】
2019515892.tif 000058
【化１７−２】
2019515892.tif 000059
およびその薬学的に許容され得る塩並びに溶媒和物からなる群から選択される［１２］または［１３］に記載の方法。
［１５］
前記ＮＡＭは、
【化１８】
2019515892.tif 000060
およびその薬学的に許容され得る塩並びに溶媒和物からなる群から選択される［１２］または［１３］に記載の方法。
［１６］
前記ＮＡＭは、
【化１９】
2019515892.tif 000061
およびその薬学的に許容され得る塩並びに溶媒和物である［１２］または［１３］に記載の方法。
［１７］
前記成熟脳損傷は、脳卒中、頭部外傷、心肺停止および急性脳損傷からなる群から選択される疾病によって引き起こされる［１２］〜［１６］の何れか１つに記載の方法。
［１８］
前記脳損傷は、認知障害、うつ病、疲労および感覚運動機能障害からなる群から選択される脳卒中後障害をもたらす脳卒中によって引き起こされる、［１７］に記載の方法。
［１９］
前記治療は、神経保護治療がもはや有効でなくなったら開始されるべきである、［１２］〜［１８］の何れか１つに記載の方法。
［２０］
前記治療は、神経保護治療が完了した後に開始されるべきである、［１９］に記載の方法。
［２１］
前記治療は、最初の急性脳損傷が発生してから４時間後以降に開始されるべきである、［１２］〜［２０］の何れか１つに記載の方法。
［２２］
前記治療は、経頭蓋磁気刺激、電気刺激および／または物理的および行動療法と組み合わせられる［１２］〜［２１］の何れか１つに記載の方法。
【国際調査報告】
2019515892.tif 000062
2019515892.tif 000063
2019515892.tif 000064
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2019515892.tif 000066