(57)【要約】新規アミラーゼを含む無リン酸塩自動食器洗浄洗剤組成物。【特許請求の範囲】
【請求項１】
アミラーゼを含む無リン酸塩自動食器洗浄洗剤組成物であって、前記アミラーゼが、配列番号１又は配列番号２又は配列番号３のアミノ酸配列を有する親アミラーゼの変異体であり、前記アミラーゼが、配列番号１のアミノ酸配列に対して以下の位置：５１、２４６、及び／若しくは３３４のうちの１つ以上、又は１８６位に、
（ｉ）配列番号１に対して以下の位置：９、２６、３０、３３、８２、３７、１０６、１１８、１２８、１３３、１４９、１５０、１６０、１７８、１８２、１８６、１９３、１９５、２０３、２１４、２３１、２５６、２５７、２５８、２６９、２７０、２７２、２８３、２９５、２９６、２９８、２９９、３０３、３０４、３０５、３１１、３１４、３１５、３１８、３１９、３２０、３２３、３３９、３４５、３６１、３７８、３８３、４１９、４２１、４３７、４４１、４４４、４４５、４４６、４４７、４５０、４５８、４６１、４７１、４８２、４８４における１つ以上の置換であって、前記アミラーゼが、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する、１つ以上の置換、並びに／又は、
（ｉｉ）配列番号１に対して１８３位及び１８４位における欠失であって、前記アミラーゼが、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する、欠失、並びに／又は
（ｉｉｉ）前記アミラーゼが、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するもの、と組み合わせて突然変異を含む、組成物。
【請求項２】
前記突然変異が、Ａ５１Ｔ、Ｔ２４６（Ｉ／Ｌ／Ｖ）、Ｓ３３４Ｔ、及びこれらの混合物から選択されるか、又は前記突然変異がＡ１８６Ｄである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記アミラーゼが、以下の突然変異：
ａ）Ａ１８６Ｄ、
ｂ）Ｔ２４６Ｖ、
ｃ）Ｔ２４６Ｉ及びＳ３３４Ｔ、
ｄ）Ｔ２４６Ｌ及びＳ３３４Ｔ、
ｅ）Ｔ２４６Ｖ及びＳ３３４Ｔ、並びに
ｆ）Ａ５１Ｔ及びＴ２４６Ｉ及びＳ３３４Ｔ、のうちの１つを含む、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
前記アミラーゼが、配列番号１に対して以下の位置：９、１４９、１８２、１８６、２５７、２９５、２９９、３２３、３３９、及び３４５に１つ以上、好ましくは３つ以上の突然変異を含み、並びに任意に、以下の位置：１１８、１８３、１８４、１９５、３２０、及び４５８のうちの１つ以上、好ましくは全てに突然変異を有し、存在する場合、好ましくはＲ１１８Ｋ、Ｄ１８３＊、Ｇ１８４＊、Ｎ１９５Ｆ、Ｒ３２０Ｋ、及び／又はＲ４５８Ｋを含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記アミラーゼが、以下の突然変異Ｍ９Ｌ、Ｒ１１８Ｋ、Ｇ１４９Ａ、Ｇ１８２Ｔ、Ｄ１８３＊、Ｇ１８４＊、Ｇ１８６Ａ、Ｎ１９５Ｆ、Ｔ２５７Ｉ、Ｙ２９５Ｆ、Ｎ２９９Ｙ、Ｒ３２０Ｋ、Ｍ２３２Ｔ、Ａ３３９Ｓ、Ｅ３４５Ｒ、及びＲ４５８Ｋを含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
配列番号１に対して２０２位は変化しないままである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
前記組成物が漂白剤を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
前記組成物が、分散剤ポリマー、好ましくはカルボキシル化／スルホン化ポリマーを含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
メチルグリシン二酢酸、その塩及びこれらの誘導体、グルタミン酸−Ｎ，Ｎ−二酢酸、その塩及びこれらの誘導体、イミノジコハク酸、その塩及びこれらの誘導体、カルボキシメチルイヌリン、その塩及びこれらの誘導体、並びにこれらの混合物からなる群から選択される錯化剤を含み、好ましくは、前記錯化剤が、メチルグリシン二酢酸、その塩及びこれらの混合物からなる群から選択される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記組成物がマンガン漂白触媒を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記組成物が結晶成長阻害剤を含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
プロテアーゼを含む、請求項１〜１１のいずれかに記載の組成物。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の組成物であって、
ａ）前記組成物１ｇ当たり０．０２５〜０．３ｍｇのアミラーゼと、
ｂ）前記組成物１ｇ当たり０．２〜２ｍｇのプロテアーゼと、
ｃ）前記組成物の５〜２０重量％の漂白剤と、
ｄ）前記組成物の１〜４０重量％の錯化剤と、
ｅ）前記組成物の１〜１０重量％の分散剤ポリマーと、を含み、
前記組成物がリン酸塩を含まない、組成物。
【請求項１４】
前記組成物が単位用量形態であり、好ましくは水溶性パックの形態である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
自動食器洗浄方法であって、
ａ）汚れた食器を提供する工程と、
ｂ）前記食器を自動食器洗浄機に入れる工程と、
ｃ）請求項１〜１４のいずれか一項に記載の自動食器洗浄組成物を提供する工程と、
ｄ）前記食器を３０分以下、好ましくは２０分以下の洗浄サイクルに供する工程と、
を含む、方法。
【請求項１６】
自動食器洗浄方法であって、
ａ）汚れた食器を提供する工程と、
ｂ）前記汚れた食器を自動食器洗浄機に入れる工程と、
ｃ）請求項１〜１３のいずれか一項に記載の自動食器洗浄組成物を提供する工程と、
ｄ）前記食器を５０℃以下、好ましくは４０℃以下の温度で洗浄サイクルに供する工程と、
を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、洗剤の分野に属する。特に、本発明は、新規アミラーゼを含む自動食器洗浄洗剤組成物に関する。当該組成物は、低温及び短いサイクルでも従来のアミラーゼを含む組成物に対して改善された安定性及び改善された洗浄を提供するので、当該組成物は、従来の組成物よりも環境に優しいものになり、よりエネルギー効率の高い自動食器洗浄プロセスが可能になる。
【背景技術】
【０００２】
自動食器洗浄組成物の性能、その環境プロファイルを改善し、自動食器洗浄プロセスに必要なエネルギーを低減することが不変的に望まれている。酵素は、自動食器洗浄組成物における重要な成分である。自動食器洗浄用の酵素を設計するとき、いくつかの基準を満たす必要がある。当該酵素は、使用前に洗剤マトリックス中で安定でなければならず、洗浄中に安定でなければならず、また、洗浄中に活性が高くかつ迅速に作用しなければならない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明の目的は、より良い洗浄を提供し、性能を損なうことなく自動食器洗浄サイクルの温度及び長さを低減することができる、より安定な自動食器洗浄組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明の第１の態様によると、改善されたアミラーゼを含む自動食器洗浄組成物が提供される。本組成物は、リン酸塩を含まない。
【０００５】
アミラーゼは、配列番号１又は配列番号２又は配列番号３のアミノ酸配列の変異型である。アミラーゼは、配列番号１のアミノ酸配列に対して、以下の位置：５１、２４６、及び／若しくは３３４のうちの１つ以上、又は１８６位に突然変異を含む。加えて、アミラーゼは以下を含む。
（ｉ）配列番号１に対して以下の位置：９、２６、３０、３３、８２、３７、１０６、１１８、１２８、１３３、１４９、１５０、１６０、１７８、１８２、１８６、１９３、１９５、２０３、２１４、２３１、２５６、２５７、２５８、２６９、２７０、２７２、２８３、２９５、２９６、２９８、２９９、３０３、３０４、３０５、３１１、３１４、３１５、３１８、３１９、３２０、３２３、３３９、３４５、３６１、３７８、３８３、４１９、４２１、４３７、４４１、４４４、４４５、４４６、４４７、４５０、４５８、４６１、４７１、４８２、４８４における１つ以上の置換であって、アミラーゼが、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する、置換、又は
（ｉｉ）配列番号１に対して１８３位及び１８４位における欠失であって、アミラーゼが、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する、欠失、又は
（ｉｉｉ）アミラーゼが、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するもの。
【０００６】
配列番号１のアミノ酸配列に対して以下の位置：５１、２４６、及び／若しくは３３４のうちの１つ以上、又は１８６位に突然変異を有するアミラーゼは、非常に良好な安定性、活性、及び運動性を提示することが判明している。
【０００７】
本発明の第２及び第３の態様によれば、改善された環境プロファイルを有する自動食器洗浄プロセスを可能にする、短いサイクル及び／又は低温を伴う自動食器洗浄方法が提供される。
【０００８】
本発明の第１の態様に関連して説明される本発明の組成物の各要素は、変更すべきところは変更して、発明の他の態様にも適用される。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明は、自動食器洗浄組成物を包含する。当該組成物は、リン酸塩を含まず、改善されたアミラーゼを含む。当該組成物は、改善された安定性を示し、かつ従来のアミラーゼを含む洗浄組成物に対して改善された洗浄をもたらす。また、本発明は、改善された環境プロファイルを有する自動食器洗浄プロセスを可能にする、短いサイクル及び／又は低温を伴う自動食器洗浄方法も包含する。短いサイクル及び／又は低温下におけるアミラーゼの性能は、従来の長い高温サイクル下よりも困難である。
【００１０】
本発明の組成物のアミラーゼは、本明細書では、時に「本発明のアミラーゼ」と呼ばれる。
【００１１】
配列番号１のアミノ酸配列に対して以下の位置：５１、２４６、及び／若しくは３３４のうちの１つ以上、又は１８６位に、
（ｉ）配列番号１に対して以下の位置：９、２６、３０、３３、８２、３７、１０６、１１８、１２８、１３３、１４９、１５０、１６０、１７８、１８２、１８６、１９３、１９５、２０３、２１４、２３１、２５６、２５７、２５８、２６９、２７０、２７２、２８３、２９５、２９６、２９８、２９９、３０３、３０４、３０５、３１１、３１４、３１５、３１８、３１９、３２０、３２３、３３９、３４５、３６１、３７８、３８３、４１９、４２１、４３７、４４１、４４４、４４５、４４６、４４７、４５０、４５８、４６１、４７１、４８２、４８４における１つ以上の置換であって、アミラーゼが、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する、置換、と組み合わせて突然変異を含むアミラーゼは、
本明細書では、時に「第１のアミラーゼ」と呼ばれる。
【００１２】
配列番号１のアミノ酸配列に対して以下の位置：５１、２４６、及び／若しくは３３４のうちの１つ以上、又は１８６位に、
（ｉｉ）配列番号１に対して１８３位及び１８４位における欠失であって、アミラーゼが、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する、欠失、と組み合わせて突然変異を含むアミラーゼは、
本明細書では、時に「第２のアミラーゼ」と呼ばれる。
【００１３】
配列番号１のアミノ酸配列に対して以下の位置：５１、２４６、及び／若しくは３３４のうちの１つ以上、又は１８６に、
ｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するもの、と組み合わせて突然変異を含むアミラーゼアミラーゼは、
本明細書では、時に「第３のアミラーゼ」と呼ばれる。
【００１４】
配列番号１又は配列番号２又は配列番号３を有するアミラーゼは、本明細書では時に「親アミラーゼ」と呼ばれる。
【００１５】
２つのアミノ酸配列間又は２つのヌクレオチド配列間の関連性は、「配列同一性」のパラメータによって説明される。
【００１６】
本発明のために、２つのアミノ酸配列間の配列同一性は、好ましくはバージョン５．０．０以上のＥＭＢＯＳＳパッケージ（ＥＭＢＯＳＳ：Ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｏｐｅｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｓｕｉｔｅ，Ｒｉｃｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｇｅｎｅｔ．１６：２７６〜２７７）のＮｅｅｄｌｅプログラムにおいて実行されるようなＮｅｅｄｌｅｍａｎ−Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズム（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ，１９７０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３〜４５３）を用いて決定される。使用されるパラメータは、ギャップ開始ペナルティ１０、ギャップ伸長ペナルティ０．５、及びＥＢＬＯＳＵＭ６２（ＢＬＯＳＵＭ６２のＥＭＢＯＳＳバージョン）置換マトリックスであってよい。「最長同一性（longest identity）」と表示されるＮｅｅｄｌｅの出力（−ｎｏｂｒｉｅｆオプションを用いて得られる）が同一率として用いられ、これは以下のように計算される。
（同一残基×１００）／（アラインメントの長さ−アラインメント中のギャップの総数）
【００１７】
あるいは、使用されるパラメータは、ギャップ開始ペナルティ１０、ギャップ伸長ペナルティ０．５、及びＥＤＮＡＦＵＬＬ（ＮＣＢＩ  ＮＵＣ４．４のＥＭＢＯＳＳバージョン）置換マトリックスであってもよい。「最長同一性」と表示されるＮｅｅｄｌｅの出力（−ｎｏｂｒｉｅｆオプションを用いて得られる）が同一率として用いられ、これは以下のように計算される。
（同一デオキシリボヌクレオチド×１００）／（アライメントの長さ−アライメント中のギャップの総数）
本発明のアミラーゼ、すなわち、本発明のアミラーゼにおける突然変異したアミノ酸は、配列番号１（枯草菌（B. subtilis）のＡＡ５６０に対応）のアミノ酸付番を参照することによって定義される。
【００１８】
したがって、本発明の目的上、配列番号１に開示されるアミラーゼは、別のアミラーゼにおける対応するアミノ酸残基を決定するために使用される。別のアミラーゼのアミノ酸配列を配列番号１に開示されるアミラーゼに対してアラインメントし、そのアラインメントに基づいて、配列番号１に開示されるアミラーゼにおける任意のアミノ酸残基に対応するアミノ酸位置番号を、好ましくはバージョン５．０．０以上のＥＭＢＯＳＳパッケージ（ＥＭＢＯＳＳ：Ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｏｐｅｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｓｕｉｔｅ，Ｒｉｃｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｇｅｎｅｔ．１６：２７６〜２７７）のＮｅｅｄｌｅプログラムにおいて実行されるようなＮｅｅｄｌｅｍａｎ−Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズム（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ，１９７０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３〜４５３）を用いて決定する。使用されるパラメータは、ギャップ開始ペナルティ１０、ギャップ伸長ペナルティ０．５、及びＥＢＬＯＳＵＭ６２（ＢＬＯＳＵＭ６２のＥＭＢＯＳＳバージョン）置換マトリックスである。
【００１９】
別のアミラーゼにおける対応するアミノ酸残基の同定は、ＭＵＳＣＬＥ（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｂｙ  ｌｏｇ−ｅｘｐｅｃｔａｔｉｏｎ；バージョン３．５以上；Ｅｄｇａｒ，２００４，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ３２：１７９２〜１７９７）、ＭＡＦＦＴ（バージョン６．８５７以上；Ｋａｔｏｈ  ａｎｄ  Ｋｕｍａ，２００２，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ３０：３０５９〜３０６６；Ｋａｔｏｈ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ３３：５１１−５１８；Ｋａｔｏｈ  ａｎｄ  Ｔｏｈ，２００７，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ２３：３７２〜３７４；Ｋａｔｏｈ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ５３７：３９〜６４；Ｋａｔｏｈ  ａｎｄ  Ｔｏｈ，２０１０，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ２６：１８９９〜１９００）、及びＣｌｕｓｔａｌＷを使用するＥＭＢＯＳＳ  ＥＭＭＡ（１．８３以上；Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２２：４６７３〜４６８０）が挙げられるがこれらに限定されない、いくつかのコンピュータプログラムを使用し、これらのそれぞれのデフォルトパラメータを使用して、複数のポリペプチド配列のアラインメントによって決定することができる。
【００２０】
他のアミラーゼが配列番号１のアミラーゼから分岐しており、その結果従来の配列に基づく比較によってそれらの関係を検出できなとき（Ｌｉｎｄａｈｌ  ａｎｄ  Ｅｌｏｆｓｓｏｎ，２０００，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９５：６１３〜６１５）、他のペアワイズ配列比較アルゴリズムを使用してよい。データベースを検索するためにアミラーゼファミリーの確率的表現（プロファイル）を使用するサーチプログラムを使用すると、配列に基づく検索においてより高い感度を得ることができる。例えば、ＰＳＩ  ＢＬＡＳＴプログラムは、反復データベースサーチプロセスを通してプロファイルを作成し、リモートホモログを検出することができる（Ａｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９〜３４０２）。アミラーゼのファミリー又はスーパーファミリーが、タンパク質構造データベースにおいて１つ以上の表現を有する場合、より高い感度を得ることができる。ＧｅｎＴＨＲＥＡＤＥＲ（Ｊｏｎｅｓ，１９９９，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２８７：７９７〜８１５；ＭｃＧｕｆｆｉｎ  ａｎｄ  Ｊｏｎｅｓ，２００３，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  １９：８７４〜８８１）などのプログラムは、クエリー配列の構造上の折り畳みを予測するニューラルネットワークへのインプットとして、様々な源（ＰＳＩ  ＢＬＡＳＴ、二次構造予測、構造的アラインメントプロファイル、及び溶媒和電位）からの情報を利用する。同様に、Ｇｏｕｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３１３：９０３〜９１９の方法を使用して、未知の構造の配列をＳＣＯＰデータベースに存在するスーパーファミリーモデルに対してアラインメントすることができる。次に、これらアラインメントを使用してアミラーゼのホモロジーモデルを作成することができ、その目的のために開発された様々なツールを使用して、このようなモデルを精度について評価することができる。
【００２１】
既知の構造のタンパク質については、構造的アラインメントを検索及び作成するためにいくつかのツール及びリソースが利用可能である。例えば、タンパク質のＳＣＯＰスーパーファミリーは、構造的にアラインメントされており、これらアラインメントはアクセス可能かつダウンロード可能である。ディスタンスアラインメントマトリクス（distance alignment matrix）（Ｈｏｌｍ  ａｎｄ  Ｓａｎｄｅｒ，１９９８，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ３３：８８〜９６）又はコンビナトリアルエクステンション（combinatorial extension）（Ｓｈｉｎｄｙａｌｏｖ  ａｎｄ  Ｂｏｕｒｎｅ，１９９８，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  １１：７３９〜７４７）などの様々なアルゴリズムを使用して２つ以上のタンパク質構造をアラインメントすることができ、これらアルゴリズムの実行は、更に、可能性のある構造ホモログを見つけるために対象構造を構造データベースにクエリーするために利用することもできる（例えば、Ｈｏｌｍ  ａｎｄ  Ｐａｒｋ，２０００，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  １６：５６６〜５６７）。
【００２２】
本発明のアミラーゼ変異体の説明においては、参照を容易にするために下記命名法を適応する。一般に認められているＩＵＰＡＣの１文字又は３文字アミノ酸略記を用いる。
【００２３】
置換アミノ酸置換については、以下の命名法：オリジナルのアミノ酸、位置、置換されるアミノ酸を使用する。したがって、２２６位におけるスレオニンのアラニンによる置換は、「Ｔｈｒ２２６Ａｌａ」又は「Ｔ２２６Ａ」と表記される。複数の突然変異は、足し算マーク（「＋」）によって区切られ、例えば、「Ｇｌｙ２０５Ａｒｇ＋Ｓｅｒ４１１Ｐｈｅ」又は「Ｇ２０５Ｒ＋Ｓ４１１Ｆ」は、それぞれ２０５位のグリシン（Ｇ）がアルギニン（Ｒ）で、４１１位のセリン（Ｓ）がフェニルアラニン（Ｆ）で置換されていることを表す。
【００２４】
欠失アミノ酸欠失については、以下の命名法：オリジナルのアミノ酸、位置、＊を使用する。したがって、１９５位におけるグリシンの欠失は、「Ｇｌｙ１９５＊」又は「Ｇ１９５＊」と表記される。複数の欠失は、足し算マーク（「＋」）によって区切られ、例えば、「Ｇｌｙ１９５＊＋Ｓｅｒ４１１＊」又は「Ｇ１９５＊＋Ｓ４１１＊」となる。
【００２５】
挿入アミノ酸挿入については、以下の命名法：オリジナルのアミノ酸、位置、オリジナルのアミノ酸、挿入されたアミノ酸を使用する。したがって、１９５位におけるグリシンの後へのリジンの挿入は、「Ｇｌｙ１９５ＧｌｙＬｙｓ」又は「Ｇ１９５ＧＫ」と表記される。複数のアミノ酸の挿入は、［オリジナルのアミノ酸、位置、オリジナルのアミノ酸、挿入されたアミノ酸＃１、挿入されたアミノ酸２＃；等］と表記される。例えば、１９５位におけるグリシンの後へのリジン及びアラニンの挿入は、「Ｇｌｙ１９５ＧｌｙＬｙｓＡｌａ」又は「Ｇ１９５ＧＫＡ」と表記される。
【００２６】
このような場合、挿入されたアミノ酸残基は、挿入されたアミノ酸残基の前のアミノ酸残基の位置番号に小文字を付加することによって付番される。したがって、上記例では、配列は以下のようになる：
【００２７】
【表１】
2019520796.tif 000002
【００２８】
複数の変更。複数の変更を含む変異体は、足し算マーク（「＋」）によって区切られ、例えば、「Ａｒｇ１７０Ｔｙｒ＋Ｇｌｙ１９５Ｇｌｕ」又は「Ｒ１７０Ｙ＋Ｇ１９５Ｅ」は、それぞれ、１７０位のアルギニンがチロシンで、１９５位のグリシンがグルタミン酸で置換されていることを表す。
【００２９】
様々な変更。ある位置に様々な変更を導入することができる場合、様々な変更はカンマによって区切られ、例えば、「Ａｒｇ１７０Ｔｙｒ，Ｇｌｕ」は、１７０位のアルギニンがチロシン又はグルタミン酸で置換されることを表す。したがって、「Ｔｙｒ１６７Ｇｌｙ，Ａｌａ＋Ａｒｇ１７０Ｇｌｙ，Ａｌａ」は、以下の変異体を表す：
「Ｔｙｒ１６７Ｇｌｙ＋Ａｒｇ１７０Ｇｌｙ」、「Ｔｙｒ１６７Ｇｌｙ＋Ａｒｇ１７０Ａｌａ」、「Ｔｙｒ１６７Ａｌａ＋Ａｒｇ１７０Ｇｌｙ」、及び「Ｔｙｒ１６７Ａｌａ＋Ａｒｇ１７０Ａｌａ」。
【００３０】
用語「突然変異」は、本発明のアミラーゼに関して、参照アミノ酸配列（すなわち、配列番号１又は配列番号２又は配列番号３）内の１つ以上のアミノ酸が、異なるアミノ酸による置換又は欠失によって変化していることを意味する。更に、突然変異は、参照アミノ酸配列内の１つ以上の追加のアミノ酸の挿入に対応することもある。
【００３１】
用語「変異体」は、配列番号１又は配列番号２又は配列番号３の親アミラーゼに対して１つ以上の（例えば、いくつかの）位置に突然変異、すなわち、置換、挿入、及び／又は欠失を含むアミラーゼを意味する。置換とは、ある位置を占めているアミノ酸の異なるアミノ酸による置き換えを意味し、欠失とは、ある位置を占めているアミノ酸の除去を意味し、挿入とは、ある位置を占めているアミノ酸に隣接してかつその直後にアミノ酸を付加することを意味する。本発明の変異体は、配列番号１又は配列番号２又は配列番号３のアミラーゼのアミラーゼ同一性の少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％を有する。
【００３２】
用語「野生型」アミラーゼとは、自然界に見られる細菌、酵母、又は糸状菌などの天然微生物によって発現されるアミラーゼを意味する。
【００３３】
本発明のアミラーゼ
本発明のアミラーゼは、配列番号１又は配列番号２又は配列番号３のアミノ酸配列内の１つ以上の（例えば、いくつかの）位置に突然変異を含む。本発明のアミラーゼは、配列番号１又は配列番号２又は配列番号３のアミラーゼに比べて強化された洗浄性能を示す。本発明のアミラーゼは、配列番号１に対して以下の位置：５１、２４６、及び／若しくは３３４のうちの１つ以上に、又は配列番号１に対して１８６位に突然変異を含む。本発明のアミラーゼは３つの異なる変異体を含み、第１のアミラーゼ、第２のアミラーゼは、それぞれ、配列番号１又は配列番号２に対して少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する。第３のアミラーゼは、配列番号３に対して少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する。
【００３４】
本発明のアミラーゼは、配列番号１又は配列番号２又は配列番号３の親アルファアミラーゼの変異体であって、例えば、短いサイクル及び／又は低温でみられるもののようなストレス条件下でさえも、洗濯洗浄及び自動食器洗浄などの家庭及び／又は工業洗浄プロセス、特に自動食器洗浄において強化された洗浄性能を示す変異体を表す。
【００３５】
強化された洗浄性能に加えて、本発明のアミラーゼは、配列番号１又は配列番号２又は配列番号３の親アミラーゼに比べて以下の特性のうちの１つ以上においても改善を示す場合がある：
（ｉ）基質特異性、
（ｉｉ）基質結合、
（ｉｉｉ）比活性、
（ｉｖ）熱安定性
（ｖ）ｐＨ安定性プロファイル、
（ｖｉ）Ｃａ２＋依存性、
（ｖｉｉ）酸化安定性、
（ｖｉｉｉ）増加／減少したｐＩ、及び／又は
（ｉｘ）界面活性剤に対する感受性。
【００３６】
タンパク質の上記特性を決定するためのアッセイは、国際公開第２００６／００２６４３号、同第２００１／０６６７１２号、及び欧州特許出願公開第２  ２６４  ４６０（Ａ）号に記載されている。
【００３７】
好ましくは、本発明のアミラーゼは、Ａ５１Ｔ、Ｔ２４６（Ｉ／Ｌ／Ｖ）、Ｓ３３４Ｔ、及びこれらの混合物から選択される、配列番号１に対する突然変異を有する。
【００３８】
好ましくは、第１のアミラーゼは、配列番号１に対して以下の位置に１つ以上、好ましくは３つ以上の突然変異を含み：
９、１４９、１８２、１８６、２５７、２９５、２９９、３２３、３３９、及び３４５、並びに
任意に、以下の位置：１１８、１８３、１８４、１９５、３２０及び４５８のうちの１つ以上、好ましくは全てに突然変異を含み、存在する場合、好ましくはＲ１１８Ｋ、Ｄ１８３＊、Ｇ１８４＊、Ｎ１９５Ｆ、Ｒ３２０Ｋ、及び／又はＲ４５８Ｋを含む。
【００３９】
好ましい第１のアミラーゼ変異体のアミラーゼは、以下の突然変異Ｍ９Ｌ、Ｒ１１８Ｋ、Ｇ１４９Ａ、Ｇ１８２Ｔ、Ｄ１８３＊、Ｇ１８４＊、Ｇ１８６Ａ、Ｎ１９５Ｆ、Ｔ２５７Ｉ、Ｙ２９５Ｆ、Ｎ２９９Ｙ、Ｒ３２０Ｋ、Ｍ２３２Ｔ、Ａ３３９Ｓ、Ｅ３４５Ｒ、及びＲ４５８Ｋを含む。
【００４０】
特に好ましいものは、配列番号１に対して２０２位がメチオニンであるアミラーゼである。
【００４１】
好ましくは、第３のアミラーゼは、配列番号１に対して以下の位置Ｍ２０８、Ｓ２５５、１７２、及び／又はＭ２６１のうちの１つ以上に突然変異を含む。
【００４２】
好ましいアミラーゼは、Ａ５１Ｔ、Ａ５１Ｔ＋Ａ１８６Ｄ、Ａ５１Ｔ＋Ｔ２４６Ｉ、Ａ５１Ｔ＋Ｓ３３４Ｔ、Ａ１８６Ｄ、Ａ１８６Ｄ＋Ｔ２４６Ｉ、Ａ１８６Ｄ＋Ｓ３３４Ｔ、Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｉ、Ｌ２０２Ｍ＋Ｓ３３４Ｔ、Ｔ２４６Ｉ＋Ｓ３３４Ｔ、Ａ５１Ｔ＋Ａ１８６Ｄ、Ａ５１Ｔ＋Ａ１８６Ｄ＋Ｔ２４６Ｉ、Ａ５１Ｔ＋Ａ１８６Ｄ＋Ｓ３３４Ｔ、Ａ５１Ｔ＋Ｔ２４６Ｉ、Ａ５１Ｔ＋Ｓ３３４Ｔ、Ａ５１Ｔ＋Ｔ２４６Ｉ＋Ｓ３３４Ｔ、Ａ１８６Ｄ＋Ｔ２４６Ｉ、Ａ１８６Ｄ＋Ｓ３３４Ｔ、Ａ１８６Ｄ＋Ｔ２４６Ｉ＋Ｓ３３４Ｔ、Ｔ２４６Ｉ＋Ｓ３３４Ｔ、Ａ５１Ｔ＋Ａ１８６Ｄ＋Ｔ２４６Ｉ、Ａ５１Ｔ＋Ａ１８６Ｄ＋Ｓ３３４Ｔ、Ａ５１Ｔ＋Ａ１８６Ｄ＋Ｔ２４６Ｉ＋Ｓ３３４Ｔ、Ａ５１Ｔ＋Ｔ２４６Ｉ＋Ｓ３３４Ｔ、Ａ１８６Ｄ＋Ｔ２４６Ｉ＋Ｓ３３４Ｔ、及びＡ５１Ｔ＋Ａ１８６Ｄ＋Ｔ２４６Ｉ＋Ｓ３３４Ｔからなる群から選択される、配列番号１に対する突然変異を含む。
【００４３】
特に好ましいアミラーゼは、以下の突然変異：
ａ）Ｔ２４６Ｖ；
ｂ）Ｔ２４６Ｉ及びＳ３３４Ｔ；
ｃ）Ｔ２４６Ｌ及びＳ３３４Ｔ；
ｄ）Ｔ２４６Ｖ及びＳ３３４Ｔ；並びに
ｅ）Ａ５１Ｔ及びＴ２４６Ｉ及びＳ３３４Ｔのうちの１つを含む。
【００４４】
好ましいアミラーゼは、配列番号１に対して以下の位置における１つ以上、好ましくは３つ以上の突然変異からなり：
９、１４９、１８２、１８６、２５７、２９５、２９９、３２３、３３９、及び３４５、並びに
任意に、以下の位置：１１８、１８３、１８４、１９５、３２０及び４５８のうちの１つ以上、好ましくは全てに突然変異を有し、存在する場合、好ましくはＲ１１８Ｋ、Ｄ１８３＊、Ｇ１８４＊、Ｎ１９５Ｆ、Ｒ３２０Ｋ、及び／又はＲ４５８Ｋを、Ａ５１Ｔ、Ａ５１Ｔ＋Ａ１８６Ｄ、Ａ５１Ｔ＋Ｔ２４６Ｉ、Ａ５１Ｔ＋Ｓ３３４Ｔ、Ａ１８６Ｄ、Ａ１８６Ｄ＋Ｔ２４６Ｉ、Ａ１８６Ｄ＋Ｓ３３４Ｔ、Ｌ２０２Ｍ＋Ｔ２４６Ｉ、Ｌ２０２Ｍ＋Ｓ３３４Ｔ、Ｔ２４６Ｉ＋Ｓ３３４Ｔ、Ａ５１Ｔ＋Ａ１８６Ｄ、Ａ５１Ｔ＋Ａ１８６Ｄ＋Ｔ２４６Ｉ、Ａ５１Ｔ＋Ａ１８６Ｄ＋Ｓ３３４Ｔ、Ａ５１Ｔ、＋Ｔ２４６Ｉ、Ａ５１Ｔ＋、Ｓ３３４Ｔ、Ａ５１Ｔ＋Ｔ２４６Ｉ＋Ｓ３３４Ｔ、Ａ１８６Ｄ＋、Ｔ２４６Ｉ、Ａ１８６Ｄ＋、Ｓ３３４Ｔ、Ａ１８６Ｄ＋Ｔ２４６Ｉ＋Ｓ３３４Ｔ、Ｔ２４６Ｉ＋Ｓ３３４Ｔ、Ａ５１Ｔ＋Ａ１８６Ｄ＋、Ｔ２４６Ｉ、Ａ５１Ｔ＋Ａ１８６Ｄ＋、Ｓ３３４Ｔ、Ａ５１Ｔ＋Ａ１８６Ｄ＋Ｔ２４６Ｉ＋Ｓ３３４Ｔ、Ａ５１Ｔ＋、Ｔ２４６Ｉ＋Ｓ３３４Ｔ、Ａ１８６Ｄ＋、Ｔ２４６Ｉ＋Ｓ３３４Ｔ、及びＡ５１Ｔ＋Ａ１８６Ｄ＋、Ｔ２４６Ｉ＋Ｓ３３４Ｔからなる群から選択される、配列番号１に対する突然変異と組み合わせて含む。
【００４５】
特に好ましいアミラーゼは、配列番号１に対して以下の突然変異：Ｍ９Ｌ、Ｒ１１８Ｋ、Ｇ１４９Ａ、Ｇ１８２Ｔ、Ｄ１８３＊、Ｇ１８４＊、Ｇ１８６Ａ、Ｎ１９５Ｆ、Ｔ２５７Ｉ、Ｙ２９５Ｆ、Ｎ２９９Ｙ、Ｒ３２０Ｋ、Ｍ２３２Ｔ、Ａ３３９Ｓ、Ｅ３４５Ｒ、及びＲ４５８Ｋを、以下の突然変異：
ａ）Ｔ２４６Ｖ；
ｂ）Ｔ２４６Ｉ及びＳ３３４Ｔ；
ｃ）Ｔ２４６Ｌ及びＳ３３４Ｔ；
ｄ）Ｔ２４６Ｖ及びＳ３３４Ｔ；並びに
ｅ）Ａ５１Ｔ及びＴ２４６Ｉ及びＳ３３４Ｔのうちの１つと組み合わせて含む。
【００４６】
好ましくは、本発明の組成物は、少なくとも０．００５ｍｇ、好ましくは約０．００２５〜約０．０２５、より好ましくは約０．０５〜約０．３、特に約０．０１〜約０．２５ｍｇの活性アミラーゼを含む。
【００４７】
自動食器洗浄組成物
自動食器洗浄組成物は、任意の物理的形態であってよい。当該自動食器洗浄組成物は、ルース粉末であっても、ゲルであっても、又は単位用量形態で提示されてもよい。好ましくは、当該自動食器洗浄組成物は単位用量形態であり、単位用量形態としては、圧縮錠剤及び水溶性パックが挙げられる。本発明の自動食器洗浄組成物は、好ましくは、単位容量形態で提示され、固体、液体、及びゲルの形態を含む任意の物理的形態であり得る。本発明の組成物は、多区画型パックの形態、より具体的には、異なる物理的形態の組成物を有する区画、例えば固体形態の組成物を含む区画と液体形態の組成物を含む別の区画とを含む多区画型パックでの提供に非常によく適している。組成物は、好ましくは、ポリビニルアルコールなどの水溶性フィルムに封入される。厚さ１００μｍ未満のポリビニルアルコールフィルムに包まれた単位用量形態の組成物が特に好ましい。本発明の洗剤組成物は、約８〜約２５グラム、好ましくは約１０〜約２０グラムの重量を有する。この重量範囲は、食器洗い機のディスペンサーに余裕をもって収まる。この範囲は洗剤としては少ない量に相当するものであるが、洗剤は上記に述べたような効果のすべてを提供するように配合されている。
【００４８】
組成物は、リン酸塩を含まない。本明細書において「リン酸塩を含まない」とは、組成物が、組成物の１重量％未満、好ましくは０．１重量％未満のリン酸塩を含むものとして理解される。
【００４９】
好ましくは、本発明の組成物は、リン酸塩を含まず、分散剤ポリマー及び錯化剤を含む。本発明の目的のために、「錯化剤」は、カルシウム、マグネシウム、鉛、銅、亜鉛、カドミウム、水銀、マンガン、鉄、アルミニウム、及び他のカチオン性多価イオンのような多価イオンと結合して水溶性の錯体を形成することが可能な化合物である。錯化剤は、Ｃａ２＋に対する対数安定性定数（［ｌｏｇＫ］）が少なくとも５、好ましくは少なくとも６である。安定度定数ｌｏｇＫは、温度２５℃でイオン強度０．１の溶液中において測定される。
【００５０】
好ましくは、本発明の組成物は、好ましくはメチル−グリシン−二酢酸（ＭＧＤＡ）、その塩及び誘導体、グルタミン酸−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＧＬＤＡ）、その塩及び誘導体、イミノジコハク酸（ＩＤＳ）、その塩及び誘導体、カルボキシメチルイヌリン、その塩及び誘導体、ＡＳＤＡ（Ｌ−アスパラギン酸Ｎ，Ｎ−二酢酸四ナトリウム塩）、その塩及び誘導体、並びにこれらの混合物からなる群から選択される、アミノカルボキシル化錯化剤を含む。本明細書における使用に特に好ましい錯化剤は、ＭＧＤＡ及びその塩からなる群から選択され、本明細書における使用に特に好ましいのは、ＭＧＤＡの三ナトリウム塩である。好ましくは、錯化剤はＭＧＤＡの三ナトリウム塩であり、分散剤ポリマーはスルホン化ポリマーであり、より好ましくは２−アクリルアミド−２−メチルプロパンスルホン酸モノマーを含む。
【００５１】
分散剤ポリマー
分散剤ポリマーは、組成物の約０．１〜約２０重量％、好ましくは０．２〜約１５重量％、より好ましくは０．３〜重量％の任意の好適な量で使用され得る。
【００５２】
分散剤ポリマーは、自動食器洗浄プロセスにおいてカルシウム又は炭酸カルシウムを懸濁させることができる。
【００５３】
分散剤ポリマーは、２５℃で分散剤ポリマー１ｇあたり３０〜２５０ｍｇのＣａ、好ましくは、分散剤ポリマー１ｇあたり３５〜２００ｍｇのＣａ、より好ましくは、分散剤ポリマー１ｇあたり４０〜１５０ｍｇのＣａの範囲内のカルシウム結合能を有する。ポリマーが本発明の意味における分散剤ポリマーであるかどうかを判定するために、以下の指示に従って以下のカルシウム結合能判定を実施する：
【００５４】
カルシウム結合能試験法
本明細書において言及されるカルシウム結合能は、Ｍｅｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ  ＳｅｖｅｎＭｕｌｔｉ（商標）ベンチトップメーターなどのｐＨ／イオンメーター及びＰｅｒｆｅｃｔＩＯＮ（商標）櫛形Ｃａ複合電極を使用して、滴定を介して判定される。結合能を測定するために、ビーカー又はターゴトメーターポットに好適な加熱及び撹拌装置を２５℃に設定し、製造業者の指示書に従ってイオン電極付きメーターを較正する。電極を較正するための標準的な濃度は試験濃度を囲んでいなくてはならず、２５℃で測定されなければならない。３．６７ｇのＣａＣｌ２−２Ｈ２Ｏを１Ｌの脱イオン水に添加することによって１０００ｍｇ／ｇのＣａの原液を調製し、次いで、希釈して、それぞれ１００ｍｇ／ｇ、１０ｍｇ／ｇ、及び１ｍｇ／ｇの濃度のカルシウムを含む３つの作業溶液各１００ｍＬを調製する。１００ｍｇ  Ｃａ／ｇの作業溶液を滴定中に初期濃度として使用し、２５℃で滴定を実施する。それぞれに２．５ｇ／ＬのＮａＣｌを添加することによって、各作業溶液のイオン強度を調整する。１００ｍｇ  Ｃａ／ｇの作業溶液１００ｍＬを加熱し、２５℃に達するまで撹拌する。イオン電極を使用して溶液が２５℃に達したとき、カルシウムイオン濃度の初期読み出しを実施する。次いで、カルシウム作業溶液に試験ポリマーを漸増式に添加し（０．０１ｇ／Ｌ間隔で）、各漸増添加後５分間撹拌した後に測定する。溶液が１ｍｇ／ｇのカルシウムに達したとき、滴定を停止する。残り２つのカルシウム濃度の作業溶液を使用して、滴定手順を繰り返す。添加された試験ポリマー１Ｌあたりのグラムに対する測定されたカルシウム濃度の線形勾配として、試験ポリマーの結合能を計算する。
【００５５】
分散剤ポリマーは、好ましくは、６超のｐＨを有する水溶液に溶解させたとき、負の正味電荷を有する。
【００５６】
また、分散剤ポリマーは、より低いｐＨにおける負電荷を増加させ、硬水への分散特性を改善するために、スルホン化カルボン酸エステル又はアミドも有し得る。好ましい分散剤ポリマーは、スルホン化／カルボキシル化ポリマー、すなわち、スルホン化モノマー及びカルボキシル化モノマーの両方を含むポリマーである。
【００５７】
好ましくは、分散剤ポリマーは、ポリカルボン酸のスルホン化誘導体であり、２、３、４、又はそれ以上の異なるモノマー単位を含み得る。好ましいコポリマーは、以下を含有する。
【００５８】
一般式（ＩＩＩ）を有するカルボン酸モノマーに由来する少なくとも１つの構造単位：
【００５９】
【化１】
2019520796.tif 000003
（式中、Ｒ１〜Ｒ３は、独立して、水素、メチル、２〜１２個の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖の飽和アルキル基、２〜１２個の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖の一価又は多価の不飽和アルケニル基、−ＮＨ２又は−ＯＨ又は−ＣＯＯＨ又はＣＯＯＲ４で置換されている上述のアルキル又はアルケニル基から選択され、Ｒ４は、水素、アルカリ金属、又は２〜１２個の炭素を有する直鎖若しくは分枝鎖の飽和若しくは不飽和のアルキル若しくはアルケニル基から選択される）。
【００６０】
好ましいカルボン酸モノマーとしては、アクリル酸、マレイン酸、無水マレイン酸、イタコン酸、シトラコン酸、２−フェニルアクリル酸、ケイ皮酸、クロトン酸、フマル酸、メタクリル酸、２−エチルアクリル酸、メチレンマロン酸、又はソルビン酸のうちの１つ以上が挙げられる。アクリル及びメタクリル酸がより好ましい。
【００６１】
任意に、一般式（ＩＶ）を有する少なくとも１つの非イオン性モノマーに由来する１つ以上の構造単位：
【００６２】
【化２】
2019520796.tif 000004
（式中、Ｒ５〜Ｒ７は、独立して、水素、メチル、フェニル、又は１〜６個の炭素原子を含有するヒドロキシアルキル基から選択され、環状構造の一部であり得、Ｘは、任意に存在する、−ＣＨ２−、−ＣＯＯ−、−ＣＯＮＨ−、又は−ＣＯＮＲ８−から選択されるスペーサー基であり、Ｒ８は、１〜２２個の炭素原子を有する直鎖若しくは分枝鎖の飽和アルキルラジカル、又は６〜２２個の炭素原子を有する不飽和、好ましくは芳香族のラジカルから選択される）。
【００６３】
好ましい非イオン性モノマーとしては、ブテン、イソブテン、ペンテン、２−メチルペンタ−１−エン、３−メチルペンタ−１−エン、２，４，４−トリメチルペンタ−１−エン、２，４，４−トリメチルペンタ−２−エン、シクロペンテン、メチルシクロペンテン、２−メチル−３−メチル−シクロペンテン、ヘキセン、２，３−ジメチルヘキサ−１−エン、２，４−ジメチルヘキサ−１−エン、２，５−ジメチルヘキサ−１−エン、３，５−ジメチルヘキサ−１−エン、４，４−ジメチルヘキサ−１−エン、シクロヘキセン、メチルシクロヘキセン、シクロヘプテン、１０個以上の炭素原子を有するアルファオレフィン、例えば、デカ−１−エン、ドデカ−１−エン、ヘキサデカ−１−エン、オクタデカ−１−エン、及びドコサ−１−エンのうちの１つ以上が挙げられ、好ましい芳香族モノマーは、スチレン、アルファメチルスチレン、３−メチルスチレン、４−ドデシルスチレン、２−エチル−４−ベンジルスチレン、４−シクロヘキシルスチレン、４−プロピルスチロール、１−ビニルナフタレン、２−ビニルナフタレンであり；好ましいカルボン酸エステルモノマーは、メチル（メタ）アクリレート、エチル（メタ）アクリレート、プロピル（メタ）アクリレート、ｔ−ブチル（メタ）アクリレート、ペンチル（メタ）アクリレート、ヘキシル（メタ）アクリレート、２−エチルヘキシル（メタ）アクリレート、オクチル（メタ）アクリレート、ラウリル（メタ）アクリレート、ステアリル（メタ）アクリレート、及びベヘニル（メタ）アクリレートであり；好ましいアミドは、Ｎ−メチルアクリルアミド、Ｎ−エチルアクリルアミド、Ｎ−ｔ−ブチルアクリルアミド、Ｎ−２−エチルヘキシルアクリルアミド、Ｎ−オクチルアクリルアミド、Ｎ−ラウリルアクリルアミド、Ｎ−ステアリルアクリルアミド、Ｎ−ベヘニルアクリルアミドである。
【００６４】
加えて、一般式（Ｖ）及び（ＶＩ）を有する少なくとも１つのスルホン酸モノマーに由来する少なくとも１つの構造単位：
【００６５】
【化３】
2019520796.tif 000005
（式中、Ｒ７は、少なくとも１つのｓｐ２結合を含む基であり、Ａは、Ｏ、Ｎ、Ｐ、Ｓ、アミド又はエステル結合であり、Ｂは、単環式若しくは多環式の芳香族基又は脂肪族基であり、各ｔは独立して０又は１であり、Ｍ＋はカチオンである）。一態様では、Ｒ７は、Ｃ２〜Ｃ６アルケンである。別の態様では、Ｒ７は、エテン、ブテン又はプロペンである。
【００６６】
好ましいスルホン化モノマーとしては、１−アクリルアミド−１−プロパンスルホン酸、２−アクリルアミド−２−プロパンスルホン酸、２−アクリルアミド−２−メチル−１−プロパンスルホン酸、２−メタクリルアミド−２−メチル−１−プロパンスルホン酸、３−メタクリルアミド−２−ヒドロキシ−プロパンスルホン酸、アリルスルホン酸、メタアリルスルホン酸、アリルオキシベンゼンスルホン酸、メタアリルオキシベンゼンスルホン酸、２−ヒドロキシ−３−（２−プロペニルオキシ）プロパンスルホン酸、２−メチル−２−プロペン−１−スルホン酸、スチレンスルホン酸、ビニルスルホン酸、３−スルホプロピル、３−スルホ−プロピルメタクリレート、スルホメタクリルアミド、スルホメチルメタクリルアミド、及び上記酸又はその水溶性塩の混合物のうちの１つ以上が挙げられる。
【００６７】
好ましくは、このポリマーは、以下の濃度のモノマーを含む：ポリマーの約４０〜約９０重量％、好ましくは約６０〜約９０重量％の１種以上のカルボン酸モノマー；ポリマーの約５〜約５０重量％、好ましくは約１０〜約４０重量％の１種以上のスルホン酸モノマー、任意に、ポリマーの約１〜約３０重量％、好ましくは約２〜約２０重量％の、１種以上の非イオン性モノマー。特に好ましいポリマーは、ポリマーの約７０重量％〜約８０重量％の少なくとも１種のカルボン酸モノマー及びポリマーの約２０重量％〜約３０重量％の少なくとも１種のスルホン酸モノマーを含む。
【００６８】
ポリマー中、カルボン酸基又はスルホン酸基の全て又はいくつかが中和形態で存在していてよく、すなわちいくつか又は全ての酸性基中のカルボン酸基及び／又はスルホン酸基の酸性水素原子が、金属イオン、好ましくはアルカリ金属イオン、特にナトリウムイオンと置き換えられ得る。
【００６９】
カルボン酸は、好ましくは（メタ）アクリル酸である。スルホン酸モノマーは、好ましくは２−アクリルアミド−２−プロパンスルホン酸（ＡＭＰＳ）である。
【００７０】
好ましい市販のポリマーとしては、Ａｌｃｏ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社により供給されるＡｌｃｏｓｐｅｒｓｅ  ２４０、Ａｑｕａｔｒｅａｔ  ＡＲ  ５４０、及びＡｑｕａｔｒｅａｔＭＰＳ、Ｒｏｈｍ  ＆  Ｈａａｓ社により供給されるＡｃｕｍｅｒ  ３１００、Ａｃｕｍｅｒ  ２０００、Ａｃｕｓｏｌ  ５８７Ｇ、及びＡｃｕｓｏｌ  ５８８Ｇ、ＢＦ  Ｇｏｏｄｒｉｃｈ社により供給されるＧｏｏｄｒｉｃｈ  Ｋ−７９８、Ｋ−７７５、及びＫ−７９７；並びにＩＳＰ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ社により供給されるＡＣＰ  １０４２が挙げられる。特に好ましいポリマーは、Ｒｏｈｍ  ＆  Ｈａａｓ社により供給されるＡｃｕｓｏｌ  ５８７Ｇ及びＡｃｕｓｏｌ  ５８８Ｇである。
【００７１】
好適な分散剤ポリマーとしては、低分子量のアニオン性カルボン酸ポリマーが挙げられる。当該分散剤ポリマーは、約２００，０００ｇ／モル以下、又は約７５，０００ｇ／モル以下、又は約５０，０００ｇ／モル以下、又は約３，０００〜約５０，０００ｇ／モル、好ましくは約５，０００〜約４５，０００ｇ／モルの重量平均分子量を有するホモポリマー又はコポリマーであり得る。分散剤ポリマーは、１，０００〜２０，０００、特に２，０００〜１０，０００、特に好ましくは３，０００〜５，０００の平均分子量を有するポリアクリレートの低分子量ホモポリマーであり得る。
【００７２】
分散剤ポリマーは、分子量７０，０００未満の、アクリル酸とメタクリル酸、アクリル酸及び／又はメタクリル酸とマレイン酸、並びにアクリル酸及び／又はメタクリル酸とフマル酸とのコポリマーであり得る。これらの分子量は、２，０００〜８０，０００、より好ましくは２０，０００〜５０，０００、特に３０，０００〜４０，０００ｇ／モルの範囲であり、（メタ）アクリレートセグメントのマレエート又はフマレートセグメントに対する比は３０：１〜１：２である。
【００７３】
分散剤ポリマーは、３，０００〜１００，０００、あるいは４，０００〜２０，０００の分子量を有するアクリルアミドとアクリレートとのコポリマーであり得、分散剤ポリマーの５０重量％未満、あるいは２０重量％未満のアクリルアミド含量を使用することもできる。あるいは、このような分散剤ポリマーは、４，０００〜２０，０００の分子量及び当該ポリマーの０重量％〜１５重量％のアクリルアミド含量を有し得る。
【００７４】
本明細書で好適な分散剤ポリマーは、イタコン酸のホモポリマー及びコポリマーも含む。あるいは、分散剤ポリマーは、アルコキシル化ポリアルキレンイミン、アルコキシル化ポリカルボキシレート、ポリエチレングリコール、スチレンコポリマー、セルロース硫酸エステル、カルボキシル化多糖、両親媒性グラフトコポリマー、及びこれらの混合物からなる群から選択され得る。
【００７５】
漂白剤
本発明の組成物は、好ましくは、組成物の約１〜約２０重量％、より好ましくは約５〜約１８重量％、更により好ましくは約８〜約１５重量％の漂白剤を含む。
【００７６】
無機及び有機漂白剤が、本明細書における使用に好適である。無機漂白剤には、過ホウ酸塩、過炭酸塩、過リン酸塩、過硫酸塩、及び過ケイ酸塩などの過水和塩が挙げられる。無機過水和塩は、通常、アルカリ金属塩である。無機過水和塩は、追加の保護なしの結晶性固体として含まれ得る。代替的に、塩はコーティングされていてもよい。好適なコーティングには、硫酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、ケイ酸ナトリウム、及びこれらの混合物が挙げられる。上記コーティングは、表面に塗布される混合物として塗布されるか、又は順次積層して塗布され得る。
【００７７】
アルカリ金属過炭酸塩、特に過炭酸ナトリウムは、本明細書における使用に好ましい漂白剤である。過炭酸塩は、最も好ましくは、製品内安定性を提供するコーティングされた形態で製品に組み込まれる。
【００７８】
過酸化モノ過硫酸カリウムは、本明細書で有用な別の無機過水和塩である。
【００７９】
典型的な有機漂白剤は、有機ペルオキシ酸、特にドデカンジペルオキシ酸、テトラデカンジペルオキシ酸、及びヘキサデカンジペルオキシ酸である。モノ及びジペルアゼライン酸、モノ及びジペルブラシル酸も、本明細書において好適である。ジアシル及びテトラアシル過酸化物、例えば過酸化ジベンゾイル及び過酸化ジラウロイルは、本発明の関連において使用可能な他の有機過酸化物である。
【００８０】
更なる典型的な有機漂白剤としては、ペルオキシ酸が挙げられ、具体例は、アルキルペルオキシ酸及びアリールペルオキシ酸である。好ましい代表例は、（ａ）ペルオキシ安息香酸及びその環置換の誘導体、例えばアルキルペルオキシ安息香酸の他、ペルオキシ−α−ナフトエ酸及びモノペルフタル酸マグネシウム、（ｂ）脂肪族又は置換脂肪族ペルオキシ酸、例えばペルオキシラウリン酸、ペルオキシステアリン酸、ε−フタルイミドペルオキシカプロン酸［フタロイミノペルオキシヘキサン酸（ＰＡＰ）］、ｏ−カルボキシベンズアミドペルオキシカプロン酸、Ｎ−ノネニルアミドペルアジピン酸及びＮ−ノネニルアミドペルスクシネート、並びに（ｃ）脂肪族及び芳香脂肪族ペルオキシジカルボン酸、例えば１，１２−ジペルオキシカルボン酸、１，９−ジペルオキシアゼライン酸、ジペルオキシセバシン酸、ジペルオキシブラシル酸、ジペルオキシフタル酸、２−デシルジペルオキシブタン−１，４−二酸、Ｎ，Ｎ−テレフタロイルジ（６−アミノペルカプロン酸）である。
【００８１】
漂白活性化剤
漂白活性化剤は、典型的には、６０℃以下の温度での洗浄の過程で漂白作用を強化する有機過酸前駆体である。本明細書に用いるのに好適な漂白活性化剤としては、過加水分解（perhydrolysis）条件下で、好ましくは１〜１２個の炭素原子、特に２〜１０個の炭素原子を有する脂肪族ペルオキシカルボン酸、及び／又は任意に置換されている過安息香酸を生成する化合物が挙げられる。好適な物質は、炭素原子の数が指定されているＯ−アシル基及び／若しくはＮ−アシル基並び／又は任意に置換されているベンゾイル基を有する。ポリアシル化アルキレンジアミン、特にテトラアセチルエチレンジアミン（ＴＡＥＤ）、アシル化トリアジン誘導体、特に１，５−ジアセチル−２，４−ジオキソヘキサヒドロ−１，３，５−トリアジン（ＤＡＤＨＴ）、アシル化グリコールウリル、特にテトラアセチルグリコールウリル（ＴＡＧＵ）、Ｎ−アシルイミド、特にＮ−ノナノイルスクシンイミド（ＮＯＳＩ）、アシル化フェノールスルホネート、特にｎ−ノナノイル−又はイソノナノイルオキシベンゼンスルホネート（ｎ−又はイソ−ＮＯＢＳ）、デカノイルオキシ安息香酸（ＤＯＢＡ）、無水カルボン酸、特に無水フタル酸、アシル化多価アルコール、特にトリアセチン、二酢酸エチレングリコール及び２，５−ジアセトキシ−２，５−ジヒドロフラン、並びにクエン酸トリエチルアセチル（ＴＥＡＣ）も好まれる。存在する場合、本発明の組成物は、組成物の０．０１〜５、好ましくは０．２〜２重量％の漂白活性化剤、好ましくはＴＡＥＤを含む。
【００８２】
漂白触媒
本明細書の組成物は、好ましくは、漂白触媒、好ましくは金属含有漂白触媒を含有する。より好ましくは、金属含有漂白触媒は、遷移金属含有漂白触媒、特にマンガン又はコバルト含有漂白触媒である。
【００８３】
本明細書での使用に好ましい漂白触媒としては、マンガントリアザシクロノナン及び関連する錯体、Ｃｏ、Ｃｕ、Ｍｎ及びＦｅビスピリジルアミン及び関連する錯体、並びにペンタミン酢酸コバルト（ＩＩＩ）及び関連する錯体が挙げられる。
【００８４】
本発明の組成物は、好ましくは、組成物の０．００１〜０．５、より好ましくは０．００２〜０．０５重量％の漂白触媒を含む。好ましくは、漂白触媒は、マンガン系漂白触媒である。
【００８５】
無機ビルダー
本発明の組成物は、好ましくは、無機ビルダーを含む。好適な無機ビルダーは、炭酸塩、ケイ酸塩、及びこれらの混合物からなる群から選択される。炭酸ナトリウムが、本明細書における使用に特に好ましい。本発明の組成物は、好ましくは、組成物の５〜５０％、より好ましくは１０〜４０％、特に１５〜３０％の炭酸ナトリウムを含む。
【００８６】
界面活性剤
本明細書における使用に好適な界面活性剤には、非イオン性界面活性剤が挙げられ、好ましくは、組成物は、いかなる他の界面活性剤も含まない。従来より、非イオン性界面活性剤は、フィルム形成及びスポッティングを回避し、光沢を改善するための表面改質、特にシート化を目的として、自動食器洗浄機において使用されてきた。非イオン性界面活性剤は、汚れの再堆積の防止にも寄与することができることが判明している。
【００８７】
好ましくは、本発明の組成物は、非イオン性界面活性剤又は非イオン性界面活性剤系を含み、より好ましくは、非イオン性界面活性剤又は非イオン性界面活性剤系は、蒸留水中、濃度１％で測定した場合に４０〜７０℃、好ましくは４５〜６５℃の転相温度を有する。「非イオン性界面活性剤系」とは、本明細書において、２つ以上の非イオン性界面活性剤の混合物を意味する。本明細書における使用に好ましいのは、非イオン性界面活性剤系である。これらは、単一の非イオン性界面活性剤よりも、製品中で、改善された洗浄及び仕上がり特性、並びに良好な安定性を有すると考えられる。
【００８８】
転相温度とは、それよりも低い温度では界面活性剤又はその混合物が油膨張ミセルとして水性相中に優先的に分配され、それよりも高い温度では水膨張逆ミセルとして油性相に優先的に分配される温度である。転相温度は、混濁が生じる温度を識別することによって視覚的に判断することができる。
【００８９】
非イオン性界面活性剤又は系の転相温度は、以下のように判断することができる：蒸留水中、溶液の１重量％の対応する界面活性剤又は混合物を含有する溶液を調製する。溶液を軽く撹拌した後、転相温度を分析して、プロセスが化学平衡で生じることを確実にする。転相温度は、７５ｍｍ密封ガラス試験管中に溶液を浸漬することによって熱安定性の浴槽内で測定する。漏れがないことを確実にするために、転相温度の測定の前後に試験管を秤量しておく。温度が事前予測した転相温度より数度下に達するまで、温度を１℃／分未満の速度で徐々に増加させる。転相温度は、濁りの最初の兆候があった時点で視覚的に判断される。
【００９０】
好適な非イオン性界面活性剤としては、ｉ）６〜２０個の炭素原子を有するモノヒドロキシアルカノール又はアルキルフェノール（alkyphenol）と、アルコール又はアルキルフェノール１モル当たり、好ましくは少なくとも１２モル、特に好ましくは少なくとも１６モル、更により好ましくは少なくとも２０モルのエチレンオキシドと、の反応によって調製されるエトキシル化非イオン性界面活性剤、ｉｉ）６〜２０個の炭素原子及び少なくとも１つのエトキシ基及びプロポキシ基を有するアルコールアルコキシル化界面活性剤が挙げられる。本明細書における使用に好ましいのは、界面活性剤ｉ）とｉｉ）との混合物である。
【００９１】
別の好適な非イオン性界面活性剤は、次式で表されるエポキシキャップされたポリ（オキシアルキル化）アルコールである。
Ｒ１Ｏ［ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）Ｏ］ｘ［ＣＨ２ＣＨ２Ｏ］ｙ［ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）Ｒ２］    （Ｉ）
式中、Ｒ１は、４〜１８個の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖の脂肪族炭化水素基であり、Ｒ２は、２〜２６個の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖の脂肪族炭化水素基であり、ｘは、０．５〜１．５の平均値を有する、より好ましくは約１の整数であり、ｙは、少なくとも１５、より好ましくは少なくとも２０の値を有する整数である。
【００９２】
好ましくは、式Ｉの界面活性剤は、末端エポキシド単位［ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）Ｒ２］中に少なくとも約１０個の炭素原子を有する。本発明によれば、式Ｉの好適な界面活性剤は、例えば、Ｏｌｉｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎによって１９９４年１０月１３日に公開された国際公開第９４／２２８００号に記載の、Ｏｌｉｎ  ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎのＰＯＬＹ−ＴＥＲＧＥＮＴ（登録商標）ＳＬＦ−１８Ｂ非イオン性界面活性剤である。
【００９３】
酵素
本明細書の酵素変異体を説明する中で、参照しやすいように以下の命名法が用いられる：元のアミノ酸（複数可）：位置（複数可）：置換アミノ酸（複数可）。標準的な酵素ＩＵＰＡＣのアミノ酸の１文字コードを使用する。
【００９４】
プロテアーゼ
好適なプロテアーゼには、メタロプロテアーゼ、及び中性又はアルカリ性微生物セリンプロテアーゼ等のセリンプロテアーゼ、例えばスブチリシン（ＥＣ  ３．４．２１．６２）、並びにその化学的に又は遺伝的に修飾された突然変異体が挙げられる。好適なプロテアーゼとして、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｅｎｔｕｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｌｋａｌｏｐｈｉｌｕｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｕｍｉｌｕｓ及びＢａｃｉｌｌｕｓ  ｇｉｂｓｏｎｉｉ等のＢａｃｉｌｌｕｓ属由来のものを含むスブチリシン（ＥＣ  ３．４．２１．６２）が挙げられる。
【００９５】
本発明の洗剤に特に好ましいプロテアーゼは、バシラス・レンタス由来の野生型酵素と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％、更により好ましくは少なくとも９９％、特に１００％の同一性を示すポリペプチドであり、これは、本明細書に参照により援用する国際公開第００／３７６２７号に示されるようなＢＰＮ’番号付与システム及びアミノ酸略号を用いた場合に、以下に示す位置の１つ以上、好ましくは２つ以上、より好ましくは３つ以上に突然変異を含む：Ｖ６８Ａ、Ｎ８７Ｓ、Ｓ９９Ｄ、Ｓ９９ＳＤ、Ｓ９９Ａ、Ｓ１０１Ｇ、Ｓ１０１Ｍ、Ｓ１０３Ａ、Ｖ１０４Ｎ／Ｉ、Ｇ１１８Ｖ、Ｇ１１８Ｒ、Ｓ１２８Ｌ、Ｐ１２９Ｑ、Ｓ１３０Ａ、Ｙ１６７Ａ、Ｒ１７０Ｓ、Ａ１９４Ｐ、Ｖ２０５Ｉ及び／又はＭ２２２Ｓ。
【００９６】
最も好ましくは、プロテアーゼは、ＰＢ９２野生型（国際公開第０８／０１０９２５号中、配列番号２）又はスブチリシン３０９野生型（Ｎ８７Ｓの自然変異体を含む以外はＰＢ９２主鎖による配列）のいずれかに対して以下の突然変異（ＢＰＮ番号方式）を含む群から選択される。
【００９７】
（ｉ）Ｇ１１８Ｖ＋Ｓ１２８Ｌ＋Ｐ１２９Ｑ＋Ｓ１３０Ａ
（ｉｉ）Ｓ１０１Ｍ＋Ｇ１１８Ｖ＋Ｓ１２８Ｌ＋Ｐ１２９Ｑ＋Ｓ１３０Ａ
（ｉｉｉ）Ｎ７６Ｄ＋Ｎ８７Ｒ＋Ｇ１１８Ｒ＋Ｓ１２８Ｌ＋Ｐ１２９Ｑ＋Ｓ１３０Ａ＋Ｓ１８８Ｄ＋Ｎ２４８Ｒ
（ｉｖ）Ｎ７６Ｄ＋Ｎ８７Ｒ＋Ｇ１１８Ｒ＋Ｓ１２８Ｌ＋Ｐ１２９Ｑ＋Ｓ１３０Ａ＋Ｓ１８８Ｄ＋Ｖ２４４Ｒ
（ｖ）Ｎ７６Ｄ＋Ｎ８７Ｒ＋Ｇ１１８Ｒ＋Ｓ１２８Ｌ＋Ｐ１２９Ｑ＋Ｓ１３０Ａ
（ｖｉ）Ｖ６８Ａ＋Ｎ８７Ｓ＋Ｓ１０１Ｇ＋Ｖ１０４Ｎ
【００９８】
好適な市販のプロテアーゼ酵素としては、商品名Ｓａｖｉｎａｓｅ（登録商標）、Ｐｏｌａｒｚｙｍｅ（登録商標）、Ｋａｎｎａｓｅ（登録商標）、Ｏｖｏｚｙｍｅ（登録商標）、Ｅｖｅｒｌａｓｅ（登録商標）、及びＥｓｐｅｒａｓｅ（登録商標）でＮｏｖｏｚｙｍｅｓ  Ａ／Ｓ社（Ｄｅｎｍａｒｋ）により販売されるもの、商品名Ｐｒｏｐｅｒａｓｅ（登録商標）、Ｐｕｒａｆｅｃｔ（登録商標）、ＰｕｒａｆｅｃｔＰｒｉｍｅ（登録商標）、Ｐｕｒａｆｅｃｔ  Ｏｘ（登録商標）、ＦＮ３（登録商標）、ＦＮ４（登録商標）、Ｅｘｃｅｌｌａｓｅ（登録商標）、Ｕｌｔｉｍａｓｅ（登録商標）及びＰｕｒａｆｅｃｔ  ＯＸＰ（登録商標）でＧｅｎｅｎｃｏｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ社により販売されるもの、商品名Ｏｐｔｉｃｌｅａｎ（登録商標）及びＯｐｔｉｍａｓｅ（登録商標）でＳｏｌｖａｙ  Ｅｎｚｙｍｅｓ社により販売されるもの、Ｈｅｎｋｅｌ／Ｋｅｍｉｒａ社により販売されるもの、すなわちＢＬＡＰが挙げられる。
【００９９】
本発明の組成物中のプロテアーゼの好ましいレベルは、組成物１グラムあたり約０．２〜２ｍｇの活性プロテアーゼを含む。
【０１００】
他のアミラーゼ
本発明のアミラーゼに加えて、本発明の組成物は、他のアミラーゼを含み得る。好ましいアルカリ性アミラーゼは、バチルスの菌種、例えば、バチルス・リケニフォルミス、バチルス・アミロリケファシエンス、バチルス・ステロサーモフィラス、バチルス・ズブチルス又は他のバチルス種、例えば、バチルス種ＮＣＩＢ１２２８９、ＮＣＩＢ１２５１２、ＮＣＩＢ１２５１３、ＤＳＭ９３７５（米国特許第７，１５３，８１８号）、ＤＳＭ１２３６８、ＤＳＭＺ番号１２６４９、ＫＳＭ  ＡＰ１３７８（国際公開第９７／００３２４号）、ＫＳＭ  Ｋ３６又はＫＳＭ  Ｋ３８（欧州特許第１，０２２，３３４号）に由来する。好ましいアミラーゼとしては、以下が挙げられる：
（ａ）米国特許第５，８５６，１６４号、並びに国際公開第９９／２３２１１号、同第９６／２３８７３号、同第００／６００６０号、及び同第０６／００２６４３号に記載の変異体、特にＡＡ５６０の配列番号１に対して以下の位置に１つ以上の置換を有する変異体：
９、２６、３０、３３、８２、３７、１０６、１１８、１２８、１３３、１４９、１５０、１６０、１７８、１８２、１８６、１９３、１９５、２０２、２１４、２３１、２５６、２５７、２５８、２６９、２７０、２７２、２８３、２９５、２９６、２９８、２９９、３０３、３０４、３０５、３１１、３１４、３１５、３１８、３１９、３２０、３２３、３３９、３４５、３６１、３７８、３８３、４１９、４２１、４３７、４４１、４４４、４４５、４４６、４４７、４５０、４５８、４６１、４７１、４８２、４８４、好ましくはＤ１８３＊及びＧ１８４＊の欠失も含有する変異体。
（ｂ）配列番号３由来の野生型酵素と少なくとも９５％の同一性を示す変異体、特に以下の突然変異Ｍ２０２、Ｍ２０８、Ｓ２５５、Ｒ１７２、及び／又はＭ２６１のうちの１つ以上を含むもの。好ましくは、上記アミラーゼは、Ｍ２０２Ｌ又はＭ２０２Ｔ突然変異のうちの１つを含む。
【０１０１】
好適な市販のα−アミラーゼとしては、ＤＵＲＡＭＹＬ（登録商標）、ＬＩＱＵＥＺＹＭＥ（登録商標）、ＴＥＲＭＡＭＹＬ（登録商標）、ＴＥＲＭＡＭＹＬ  ＵＬＴＲＡ（登録商標）、ＮＡＴＡＬＡＳＥ（登録商標）、ＥＶＥＲＥＳＴ（登録商標）、ＳＵＰＲＡＭＹＬ（登録商標）、ＳＴＡＩＮＺＹＭＥ（登録商標）、ＳＴＡＩＮＺＹＭＥ  ＰＬＵＳ（登録商標）、ＦＵＮＧＡＭＹＬ（登録商標）及びＢＡＮ（登録商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ  Ａ／Ｓ（Ｂａｇｓｖａｅｒｄ，Ｄｅｎｍａｒｋ））、ＫＥＭＺＹＭ（登録商標）ＡＴ  ９０００（Ｂｉｏｚｙｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｔｒａｄｉｎｇ  ＧｍｂＨ（Ｗｅｈｌｉｓｔｒａｓｓｅ  ２７ｂ  Ａ−１２００  Ｗｉｅｎ  Ａｕｓｔｒｉａ）、ＲＡＰＩＤＡＳＥ（登録商標）、ＰＵＲＡＳＴＡＲ（登録商標）、ＥＮＺＹＳＩＺＥ（登録商標）、ＯＰＴＩＳＩＺＥ  ＨＴ  ＰＬＵＳ（登録商標）、ＰＯＷＥＲＡＳＥ（登録商標）、ＥＸＣＥＬＬＥＮＺ（商標）Ｓ  １０００及びＥＸＣＥＬＬＥＮＺ（商標）Ｓ  ２０００を含むＥＸＣＥＬＬＥＮＺ（商標）Ｓシリーズ、及びＰＵＲＡＳＴＡＲ  ＯＸＡＭ（登録商標）（ＤｕＰｏｎｔ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）、並びにＫＡＭ（登録商標）（花王株式会社（日本、１０３−８２１０、東京都中央区日本橋茅場町１丁目１４−１０））が挙げられる。本明細書に用いるのに特に好ましいアミラーゼとしては、ＮＡＴＡＬＡＳＥ（登録商標）、ＳＴＡＩＮＺＹＭＥ（登録商標）、ＳＴＡＩＮＺＹＭＥ  ＰＬＵＳ（登録商標）、ＥＸＣＥＬＬＥＮＺ（商標）Ｓ１０００、ＥＸＣＥＬＬＥＮＺ（商標）Ｓ  ２０００、及びこれらの混合物が挙げられる。
【０１０２】
好ましくは、本発明の組成物は、少なくとも０．００５ｍｇ、好ましくは約０．００２５〜約０．０２５、より好ましくは約０．０５〜約０．３、特に約０．０１〜約０．２５ｍｇの活性アミラーゼを含む。
【０１０３】
好ましくは、本発明の組成物のプロテアーゼ及び／又はアミラーゼは、顆粒の形態であり、当該顆粒は、顆粒の２９重量％超の硫酸ナトリウムを含む、及び／又は硫酸ナトリウムと活性酵素（プロテアーゼ及び／又はアミラーゼ）との重量比は、３：１〜１００：１、又は好ましくは４：１〜３０：１、又はより好ましくは５：１〜２０：１である。
【０１０４】
結晶成長抑制剤
結晶成長抑制剤は、炭酸カルシウム結晶に結合して、アラゴナイト及び方解石などの種の更なる成長を防止することができる材料である。
【０１０５】
本明細書における使用に特に好ましい結晶成長抑制剤は、ＨＥＤＰ（１−ヒドロキシエチリデン１，１−ジホスホン酸）である。本発明の組成物は、好ましくは製品の０．０１〜５重量％、より好ましくは０．０５〜３重量％、特に０．５〜２重量％の結晶成長抑制剤、好ましくはＨＥＤＰを含む。
【０１０６】
金属ケア剤
金属ケア剤は、アルミニウム、ステンレス鋼並びに銀及び銅等の非鉄金属を含む、金属の曇り、腐食、又は酸化を防止又は低減することができる。好ましくは、本発明の組成物は、製品の０．１〜５重量％、より好ましくは０．２〜４重量％、特に０．３〜３重量％の金属ケア剤を含み、好ましくは金属ケア剤はベンゾトリアゾール（ＢＴＡ）である。
【０１０７】
ガラスケア剤
ガラスケア剤は、食器洗浄プロセス中にガラス製品の外観を保護する。好ましくは、本発明の組成物は、組成物の０．１〜５重量％、より好ましくは０．２〜４重量％、特に０．３〜３重量％の金属ケア剤を含み、好ましくは、ガラスケア剤は、亜鉛含有材料、特に水亜鉛土である。
【０１０８】
本発明の自動食器洗浄組成物は、２０℃の蒸留水中の１重量／体積％の水溶液中で測定した場合に好ましくは約９〜約１２、より好ましくは約１０〜約１１．５未満、特に約１０．５〜約１１．５のｐＨを有する。
【０１０９】
本発明の自動食器洗浄組成物は、２０℃の１００グラムの製品を含むＮａＯＨ中で測定した場合に、ｐＨ９．５で、好ましくは約１０〜約２０、より好ましくは約１２〜約１８の予備アルカリ度を有する。
【０１１０】
本発明の好ましい自動食器洗浄組成物は、
ｉ）当該組成物の２〜２０重量％の漂白剤、好ましくは過炭酸ナトリウムと、
ｉｉ）好ましくは漂白活性化剤、より好ましくはＴＡＥＤと、
ｉｉｉ）酵素、好ましくはアミラーゼ及びプロテアーゼと、
ｉｖ）任意に、しかし好ましくは、当該組成物の５〜３０重量％の無機ビルダー、好ましくは炭酸ナトリウムと、
ｖ）任意に、しかし好ましくは、当該組成物の２〜１０重量％の非イオン性界面活性剤と、
ｖｉ）任意に、しかし好ましくは、漂白触媒、より好ましくはマンガン漂白触媒と、
ｖｉｉ）結晶成長抑制剤、好ましくはＨＥＤＰ、及びガラスケア剤を含む他の任意成分と、を含む。
【実施例】
【０１１１】
本明細書において以下に詳述する成分を含む２つの自動食器洗浄洗剤組成物を作製した：本発明に係るアミラーゼを含む組成物１及び比較参照として本発明の範囲外の市販されているアミラーゼを含む組成物２。固体及び液体成分は、洗浄の開始時に添加した。
【０１１２】
【表２】
2019520796.tif 000006
【０１１３】
【表３】
2019520796.tif 000007
【０１１４】
短いサイクルでの洗浄試験
製品が酵素感受性のある汚れを落とす性能について識別する、汚れをつけたメラミン製の食器洗浄機モニターである混合デンプン（ＤＭ７７）ＣＦＴタイル（Ｃｅｎｔｅｒ  Ｆｏｒ  Ｔｅｓｔｍａｔｅｒｉａｌｓ  ＢＶ，Ｓｔｏｏｍｌｏｇｇｅｒｗｅｇ  １１，３１３３  ＫＴ  Ｖｌａａｒｄｉｎｇｅｎ，ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用して、組成物１及び２を、その洗浄性能について比較した。
【０１１５】
混合デンプンの洗浄１回あたり２枚のタイルを、洗浄の開始時に食器洗浄洗剤組成物と同時に食器洗浄機（Ｍｉｅｌｅ  １０２２食器洗浄機）の一番上のラックに置いた。導入される水は、ＣａＣＯ３総レベルが１０ｐｐｍである（イオン交換カラムを介して）人工的に軟水化した水であった。食器洗浄機を、すすぎ及び乾燥段階を含んで合計３５分間の４０℃短サイクルに設定した。毎回新たなタイルを使用して試験を更に３回繰り返した。最後に、洗浄前後の汚れのＬ−ａ−ｂ値を測定するコンピュータ支援画像解析を使用して８枚のタイルを評価し、このデータを使用して、０％が未洗浄であり、１００％が完全な汚れ除去である０から１００までの連続的なスケールを有する汚れ除去指数を割り当てた。
【０１１６】
【表４】
2019520796.tif 000008
【０１１７】
このデータは、本発明に係る食器洗浄洗剤組成物１が、短いサイクルにおいて比較組成物に対して改善されたデンプン除去性能を有することを示す。
【０１１８】
通常サイクルでの洗浄試験。
製品が酵素感受性のある汚れを落とす性能について識別する、汚れをつけたメラミン製の食器洗浄機モニターである二重混合デンプン、着色（ＤＭ２７７）ＣＦＴタイル（Ｃｅｎｔｅｒ  Ｆｏｒ  Ｔｅｓｔｍａｔｅｒｉａｌｓ  ＢＶ，Ｓｔｏｏｍｌｏｇｇｅｒｗｅｇ  １１，３１３３  ＫＴ  Ｖｌａａｒｄｉｎｇｅｎ，ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用して、組成物１及び２を、その洗浄性能について比較した。
【０１１９】
二重混合デンプンの洗浄１回あたり２枚のタイルを、洗浄の開始時に食器洗浄洗剤組成物と同時に食器洗浄機（Ｍｉｅｌｅ  １０２２食器洗浄機）の一番上のラックに置いた。導入される水は、ＣａＣＯ３総レベルが１０ｐｐｍである（イオン交換カラムを介して）人工的に軟水化した水であった。食器洗浄機を、すすぎ及び乾燥段階を含んで合計８１分間の５０℃通常サイクルに設定した。毎回新たなタイルを使用して試験を更に３回繰り返した。最後に、洗浄前後の汚れのＬ−ａ−ｂ値を測定するコンピュータ支援画像解析を使用して８枚のタイルを評価し、このデータを使用して、０％が未洗浄であり、１００％が完全な汚れ除去である０から１００までの連続的なスケールを有する汚れ除去指数を割り当てた。
【０１２０】
【表５】
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【０１２１】
このデータは、本発明に係る食器洗浄洗剤組成物１が、通常サイクルにおいて比較組成物に対して改善されたデンプン除去性能を有することを示す。
【０１２２】
本明細書に開示した寸法及び値は、記載された正確な数値に厳密に限定されるものと理解されるべきではない。むしろ、特に指示がない限り、そのような各寸法は、記載された値及びその値の周辺の機能的に同等の範囲の両方を意味するものとする。例えば、「４０ｍｍ」として開示される寸法は、「約４０ｍｍ」を意味するものとする。
【配列表】
2019520796000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成30年11月26日(2018.11.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2019520796000001.app
【国際調査報告】
2019520796.tif 000010
2019520796.tif 000011
2019520796.tif 000012