(57)【要約】本明細書では、外因性ターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）を発現する非ヒト動物に関連する方法および組成物が提供される。特定の態様では、本明細書で提供されるのは、それらのゲノム中に、ターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする外因性核酸を含む遺伝子改変非ヒト動物、ならびにこのような非ヒト動物の作製および使用方法である。いくつかの実施形態では、外因性ＴｄＴは、ヒトＴｄＴである。いくつかの実施形態では、外因性ＴｄＴは、内因性種由来のものである（例えば、マウスでは、外因性ＴｄＴは、マウス配列を有する）。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、例えば、プロＢ細胞および／またはプレＢ細胞において、Ｂ細胞発生中に外因性核酸によってコードされるＴｄＴを発現する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
遺伝子改変非ヒト動物であって、そのゲノム中に：
転写制御エレメントに作動可能に連結された外因性ターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列と、
免疫グロブリン定常領域遺伝子に作動可能に連結された未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントを含む免疫グロブリン可変領域と、を含む、遺伝子改変非ヒト動物。
【請求項２】
前記転写制御エレメントが、プロＢ細胞および／またはプレＢ細胞における外因性ＴｄＴをコードする核酸配列の発現を駆動する、請求項１に記載の遺伝子改変非ヒト動物。
【請求項３】
前記転写制御エレメントが、ＲＡＧ１転写制御エレメント、ＲＡＧ２転写制御エレメント、免疫グロブリン重鎖転写制御エレメント、免疫グロブリンκ軽鎖転写制御エレメント、および／または免疫グロブリンλ軽鎖転写制御エレメントからなる群から選択される、請求項２に記載の遺伝子改変非ヒト動物。
【請求項４】
前記外因性ＴｄＴをコードする前記核酸配列が、免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリン重鎖遺伝子座、ＲＡＧ１遺伝子座、ＲＡＧ２遺伝子座に位置する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の遺伝子改変非ヒト動物。
【請求項５】
前記動物におけるＶ−Ｊ免疫グロブリン軽鎖連結の少なくとも１０％が、非鋳型付加を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の遺伝子改変非ヒト動物。
【請求項６】
前記ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントが、ヒト重鎖可変領域遺伝子セグメントである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の遺伝子改変非ヒト動物。
【請求項７】
前記定常領域遺伝子が、重鎖定常領域遺伝子である、請求項６に記載の遺伝子改変非ヒト動物。
【請求項８】
前記重鎖定常領域遺伝子が、内因性種由来である、請求項７に記載の遺伝子改変非ヒト動物。
【請求項９】
前記免疫グロブリン可変領域および前記免疫グロブリン定常領域遺伝子が、内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子座に位置する、請求項６〜８のいずれか１項に記載の遺伝子改変非ヒト動物。
【請求項１０】
ゲノム中に第２の免疫グロブリン定常領域遺伝子に作動可能に連結された未再編成ヒト軽鎖可変領域遺伝子セグメントを含む免疫グロブリン可変領域をさらに含む、請求項６〜９のいずれか１項に記載の遺伝子改変非ヒト動物。
【請求項１１】
前記第２の免疫グロブリン定常領域遺伝子に作動可能に連結された前記免疫グロブリン可変領域が、内因性免疫グロブリン軽鎖遺伝子座に位置する、請求項１０に記載の遺伝子改変非ヒト動物。
【請求項１２】
前記第２の免疫グロブリン定常領域遺伝子に作動可能に連結された前記ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントが、ヒトκ鎖可変領域遺伝子セグメントである、請求項１１に記載の遺伝子改変非ヒト動物。
【請求項１３】
前記第２の免疫グロブリン定常領域遺伝子に作動可能に連結された前記ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントが、ヒトλ鎖可変領域遺伝子セグメントである、請求項１１に記載の遺伝子改変非ヒト動物。
【請求項１４】
前記第２の定常領域遺伝子が、κ定常領域遺伝子である、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の遺伝子改変非ヒト動物。
【請求項１５】
前記第２の定常領域遺伝子が、λ定常領域遺伝子である、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の遺伝子改変非ヒト動物。
【請求項１６】
前記κ定常領域遺伝子が、内因性種由来のものである、請求項１４に記載の遺伝子改変非ヒト動物。
【請求項１７】
前記λ定常領域遺伝子が、内因性種由来のものである、請求項１５に記載の遺伝子改変非ヒト動物。
【請求項１８】
前記内因性免疫グロブリン軽鎖遺伝子座が、免疫グロブリンκ遺伝子座である、請求項１６に記載の遺伝子改変非ヒト動物。
【請求項１９】
前記内因性免疫グロブリン軽鎖遺伝子座が、免疫グロブリンλ遺伝子座である、請求項１７に記載の遺伝子改変非ヒト動物。
【請求項２０】
前記未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントが、Ｂ細胞発生中に再編成され、前記非ヒト動物の前記Ｂ細胞において再編成された可変領域遺伝子を生成する、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の遺伝子改変非ヒト動物。
【請求項２１】
前記再編成可変領域遺伝子の少なくとも１０％が、非鋳型付加を含む、請求項２０に記載の遺伝子改変非ヒト動物。
【請求項２２】
遺伝子改変非ヒト動物であって、そのゲノム中に：
転写制御エレメントに作動可能に連結された外因性ターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列と、
ＴＣＲ定常領域遺伝子に作動可能に連結された未再編成ヒトＴＣＲ可変領域遺伝子セグメントを含むＴ細胞受容体（ＴＣＲ）可変領域と、を含む、遺伝子改変非ヒト動物。
【請求項２３】
前記ヒトＴＣＲ可変領域遺伝子セグメントが、ヒトＴＣＲα可変領域遺伝子セグメントである、請求項２２に記載の遺伝子改変非ヒト動物。
【請求項２４】
前記ヒトＴＣＲ可変領域遺伝子セグメントが、ヒトＴＣＲβ可変領域遺伝子セグメントである、請求項２２に記載の遺伝子改変非ヒト動物。
【請求項２５】
前記未再編成ヒトＴＣＲ可変領域遺伝子セグメントが、Ｔ細胞発生中に再編成され、前記非ヒト動物の前記Ｔ細胞において再編成されたＴＣＲ可変領域遺伝子を生成する、請求項２２〜２４のいずれか１項に記載の遺伝子改変非ヒト動物。
【請求項２６】
前記再編成可変領域遺伝子の少なくとも１０％が、非鋳型付加を含む、請求項２５に記載の遺伝子改変非ヒト動物。
【請求項２７】
遺伝子改変非ヒト動物であって、そのゲノム中に：
転写制御エレメントに作動可能に連結された外因性ターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列と、
ＴＣＲ定常領域遺伝子に作動可能に連結された未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントを含む免疫グロブリン可変領域と、を含む、遺伝子改変非ヒト動物。
【請求項２８】
前記ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントが、重鎖遺伝子セグメントである、請求項２７に記載の遺伝子改変非ヒト動物。
【請求項２９】
前記ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントが、κ鎖遺伝子セグメントである、請求項２７に記載の遺伝子改変非ヒト動物。
【請求項３０】
前記ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントが、λ鎖遺伝子セグメントである、請求項２７に記載の遺伝子改変非ヒト動物。
【請求項３１】
前記ＴＣＲ定常領域遺伝子が、ＴＣＲα定常領域遺伝子である、請求項２８または２９のいずれか１項に記載の遺伝子改変非ヒト動物。
【請求項３２】
前記ＴＣＲ定常領域遺伝子が、ＴＣＲβ定常領域遺伝子である、請求項２８に記載の遺伝子改変非ヒト動物。
【請求項３３】
前記転写制御エレメントが、ＣＤ４／ＣＤ８ダブルネガティブ（ＤＮ）胸腺細胞および／またはＣＤ４／ＣＤ８ダブルポジティブ（ＤＰ）胸腺細胞における外因性ＴｄＴをコードする核酸配列の発現を駆動する、請求項２２〜３２のいずれか１項に記載の遺伝子改変非ヒト動物。
【請求項３４】
前記転写制御エレメントが、ＲＡＧ１転写制御エレメント、ＲＡＧ２転写制御エレメント、ＴＣＲα転写制御エレメント、ＴＣＲβ転写制御エレメント、ＴＣＲγ転写制御エレメント、および／またはＴＣＲδ転写制御エレメントである、請求項３３に記載の遺伝子改変非ヒト動物。
【請求項３５】
前記外因性ＴｄＴをコードする前記核酸配列が、ＲＡＧ１遺伝子座、ＲＡＧ２遺伝子座、ＴＣＲα鎖遺伝子座、ＴＣＲβ鎖遺伝子座、ＴＣＲγ鎖遺伝子座、および／またはＴＣＲδ鎖遺伝子座に位置する、請求項２２〜３４のいずれか１項に記載の遺伝子改変非ヒト動物。
【請求項３６】
前記非ヒト動物が、哺乳動物である、請求項１〜３５のいずれか１項に記載の遺伝子改変非ヒト動物。
【請求項３７】
前記哺乳動物が、齧歯類である、請求項３６に記載の遺伝子改変非ヒト動物。
【請求項３８】
前記齧歯類が、ラットまたはマウスである、請求項３７に記載の遺伝子改変非ヒト動物。
【請求項３９】
ヒト可変ドメインを含む抗体の発現を誘導する方法であって、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の遺伝子改変非ヒト動物を抗原に曝露することであって、それにより、前記遺伝子改変非ヒト動物が前記抗原に特異的なヒト可変ドメインを含む抗体を産生する、曝露することを含む、方法。
【請求項４０】
ＭＨＣ上に提示されるペプチドに特異的なヒト可変ドメインを含むＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するＴ細胞を作製する方法であって、
（ａ）請求項２２〜２６のいずれか１項に記載の遺伝子改変非ヒト動物を、ペプチドを含む抗原またはペプチドを含む抗原をコードする核酸に曝露することであって、それにより、前記ペプチドが前記非ヒト動物においてＭＨＣ上に提示される、曝露することと、
（ｂ）（ａ）の前記遺伝子改変非ヒト動物から前記ＭＨＣ上に提示された前記ペプチドに特異的なＴＣＲを発現するＴ細胞を得ることと、を含む、方法。
【請求項４１】
ＭＨＣ上に提示されるペプチドに特異的な、ヒト免疫グロブリン可変ドメインおよび免疫グロブリン定常を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するＴ細胞を作製する方法であって、
（ａ）請求項２７〜３２のいずれか１項に記載の遺伝子改変非ヒト動物を、ペプチドを含む抗原またはペプチドを含む抗原をコードする核酸に曝露することであって、それにより、前記ペプチドが前記非ヒト動物においてＭＨＣ上に提示される、曝露することと、
（ｂ）（ａ）の前記遺伝子改変非ヒト動物から前記ＭＨＣ上に提示された前記ペプチドに特異的なＣＡＲを発現するＴ細胞を得ることと、を含む、方法。
【請求項４２】
遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞であって、そのゲノム中に：
外因性ターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列と、
免疫グロブリン定常領域遺伝子に作動可能に連結された未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントを含む免疫グロブリン可変領域と、を含む、遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞。
【請求項４３】
遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞であって、そのゲノム中に：
外因性ターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列と、
ＴＣＲ定常領域遺伝子に作動可能に連結された未再編成ヒトＴＣＲ可変領域遺伝子セグメントを含むＴ細胞受容体（ＴＣＲ）可変領域と、を含む、遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞。
【請求項４４】
遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞であって、そのゲノム中に：
外因性ターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列と、
ＴＣＲ定常領域遺伝子に作動可能に連結された未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントを含む免疫グロブリン可変領域と、を含む、遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞。
【請求項４５】
請求項４２〜４４のいずれか１項に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を使用することを含む、遺伝子改変非ヒト動物を作製する方法。
【請求項４６】
遺伝子改変を含む非ヒト動物を作製する方法であって、前記非ヒト動物がその生殖系列中に：
外因性ターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列と、
免疫グロブリン定常領域遺伝子に作動可能に連結された未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントを含む免疫グロブリン可変領域と、を含むように操作することを含む、方法。
【請求項４７】
遺伝子改変を含む非ヒト動物を作製する方法であって、前記非ヒト動物がその生殖系列中に：
外因性ターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列と、
ＴＣＲ定常領域遺伝子に作動可能に連結された未再編成ヒトＴＣＲ可変領域遺伝子セグメントを含むＴ細胞受容体（ＴＣＲ）可変領域と、を含むように操作することを含む、方法。
【請求項４８】
遺伝子改変を含む非ヒト動物を作製する方法であって、前記非ヒト動物がその生殖系列中に：
外因性ターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列と、
ＴＣＲ定常領域遺伝子に作動可能に連結された未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントを含む免疫グロブリン可変領域と、を含むように操作することを含む、方法。
【請求項４９】
前記ターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）が、ヒトＴｄＴである、請求項１〜４８のいずれか１項に記載の遺伝子改変非ヒト動物、非ヒト動物ＥＳ細胞、または方法。
【請求項５０】
前記ターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）が、ＴｄＴの短いアイソフォーム（ＴｄＴＳ）である、請求項１〜４９のいずれか１項に記載の遺伝子改変非ヒト動物、非ヒト動物ＥＳ細胞、または方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、２０１６年６月３日に出願された米国仮特許出願第６２／３４５，５２４号に対する優先権の利益を主張する。
【背景技術】
【０００２】
非ヒト動物、特にマウスおよびラットは、治療用抗体の価値ある供給源であることが証明されており、潜在的に他の抗原結合分子の供給源として役立つ可能性がある。このような非ヒト動物における高レベルの抗原受容体多様性は、免疫化後に所望の治療特性を有する抗原結合分子が生成される可能性を高める。したがって、治療用抗原結合分子の産生を改善するために、抗原受容体多様性が増大した遺伝子操作された非ヒト動物が必要とされている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
特定の態様では、本明細書で提供されるのは、それらのゲノム中に、ターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする外因性核酸を含む遺伝子改変非ヒト動物、ならびにこのような非ヒト動物の作製および使用方法である。いくつかの実施形態では、外因性ＴｄＴは、ヒトＴｄＴである。いくつかの実施形態では、外因性ＴｄＴは、内因性種由来のものである（例えば、マウスでは、外因性ＴｄＴは、マウス配列を有する）。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、例えば、プロＢ細胞および／またはプレＢ細胞において、Ｂ細胞発生中に外因性核酸によってコードされるＴｄＴを発現する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、例えば、ダブルネガティブ（ＤＮ）胸腺細胞および／またはダブルポジティブ（ＤＰ）胸腺細胞において、Ｔ細胞発生中に外因性核酸によってコードされるＴｄＴを発現する。いくつかの実施形態では、遺伝子改変非ヒト動物は、ＴｄＴをコードする外因性核酸の複数のコピー（例えば、少なくとも２、３、４、５、６、７、または８つのコピー）を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子改変非ヒト動物は、齧歯類（例えば、マウスまたはラット）などの哺乳動物である。
【０００４】
いくつかの実施形態では、遺伝子改変非ヒト動物は、そのゲノム中に、免疫グロブリン定常領域遺伝子（例えば、重鎖定常領域遺伝子、κ鎖定常領域遺伝子、λ鎖定常領域遺伝子）に作動可能に連結された未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメント（例えば、重鎖遺伝子セグメント、κ鎖遺伝子セグメント、λ鎖遺伝子セグメント）を含む免疫グロブリン可変領域を含む。いくつかの実施形態では、定常領域遺伝子は、ヒト定常領域遺伝子、マウス定常領域遺伝子、またはラット定常領域遺伝子である。いくつかの実施形態では、定常領域遺伝子は、内因性種由来である。いくつかの実施形態では、可変領域および定常領域遺伝子は、内因性免疫グロブリン遺伝子座（例えば、重鎖遺伝子座、κ遺伝子座、λ遺伝子座）に位置する。いくつかの実施形態では、遺伝子改変非ヒト生物は、免疫グロブリン可変領域に由来するヒト免疫グロブリン可変ドメインおよび免疫グロブリン定常領域遺伝子によってコードされる免疫グロブリン定常ドメインを含む抗体を発現する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ヒト免疫グロブリン可変ドメインをコードする抗体、Ｂ細胞、ハイブリドーマ、または核酸を作製するために、このような遺伝子改変非ヒト動物を使用する方法である。
【０００５】
特定の実施形態では、遺伝子改変非ヒト動物は、そのゲノム中に、ＴＣＲ定常領域遺伝子（例えば、ＴＣＲα定常領域遺伝子、ＴＣＲβ定常領域遺伝子、ＴＣＲγ定常領域遺伝子、ＴＣＲδ定常領域遺伝子）に作動可能に連結された未再編成ヒトＴＣＲ可変領域遺伝子セグメント（例えば、ＴＣＲα遺伝子セグメント、ＴＣＲβ遺伝子セグメント、ＴＣＲγ遺伝子セグメント、ＴＣＲδ遺伝子セグメント）を含むＴ細胞受容体（ＴＣＲ）可変領域を含む。いくつかの実施形態では、定常領域遺伝子は、ヒト定常領域遺伝子、マウス定常領域遺伝子、またはラット定常領域遺伝子である。いくつかの実施形態では、定常領域遺伝子は、内因性種由来である。いくつかの実施形態では、可変領域および定常領域遺伝子は、内因性ＴＣＲ遺伝子座（例えば、ＴＣＲα遺伝子座、ＴＣＲβ遺伝子座、ＴＣＲγ遺伝子座、ＴＣＲδ遺伝子座）に位置する。いくつかの実施形態では、遺伝子改変非ヒト生物は、ＴＣＲ可変領域由来のヒトＴＣＲ可変ドメインおよびＴＣＲ定常領域遺伝子によってコードされるＴＣＲ定常ドメインを含むＴＣＲを発現する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、ヒトＴＣＲ可変ドメインをコードするＴＣＲ、Ｔ細胞、Ｔ細胞ハイブリドーマ、または核酸を作製するために、このような遺伝子改変非ヒト動物を使用する方法である。
【０００６】
いくつかの実施形態では、遺伝子改変非ヒト動物は、そのゲノム中に、ＴＣＲ定常領域遺伝子（例えば、ＴＣＲα定常領域遺伝子、ＴＣＲβ定常領域遺伝子、ＴＣＲγ定常領域遺伝子、ＴＣＲδ定常領域遺伝子）に作動可能に連結された未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメント（例えば、重鎖遺伝子セグメント、κ鎖遺伝子セグメント、λ鎖遺伝子セグメント）を含む免疫グロブリン可変領域を含む。いくつかの実施形態では、定常領域遺伝子は、ヒト定常領域遺伝子、マウス定常領域遺伝子、またはラット定常領域遺伝子である。いくつかの実施形態では、定常領域遺伝子は、内因性種由来である。いくつかの実施形態では、可変領域および定常領域遺伝子は、内因性ＴＣＲ遺伝子座（例えば、ＴＣＲα遺伝子座、ＴＣＲβ遺伝子座、ＴＣＲγ遺伝子座、ＴＣＲδ遺伝子座）に位置する。いくつかの実施形態では、遺伝子改変非ヒト生物は、免疫グロブリン可変領域由来のヒト免疫グロブリン可変ドメインおよびＴＣＲ定常領域遺伝子によってコードされるＴＣＲ定常ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、ヒト免疫グロブリン可変ドメインをコードするＣＡＲ、Ｔ細胞、Ｔ細胞ハイブリドーマ、または核酸を作製するために、このような遺伝子改変非ヒト動物を使用する方法である。
【０００７】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、本明細書に記載の遺伝子改変をその生殖系列に含むように非ヒト動物を操作することを含む、本明細書で開示される非ヒト動物を作製する方法である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、本明細書に記載の遺伝子改変を含む非ヒトＥＳ細胞である。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】マウスＲａｇ２遺伝子の一部が短いアイソフォームヒトＴｄＴ（ｈＴｄＴｓ）をコードするＤＮＡ配列で置換されているのに対し、例示的なターゲティングベクターの図（正確な縮尺ではない）を示す。例示的な実施形態では、ベクターは、ゲノムにランダムに組み込まれる。図中のラベリングが（例えば、選択カセット、ｌｏｘＰ部位などに関して）別段に示唆しない限り、塗りつぶした形および単一線はマウス配列を表し、空の形および二重線はヒト配列を表す。Ｅ１、Ｅ２などは特定の例示遺伝子のエクソンを表し、ＧＦＰは緑色蛍光タンパク質であり、ＣＭはクロラムフェニコール耐性遺伝子であり、ｎｅｏはネオマイシン耐性遺伝子である。接合１〜４は、表１に示す接合に対応する。
【０００９】
【図２】マウスＲａｇ２遺伝子の一部が短いアイソフォームヒトＴｄＴ（ｈＴｄＴｓ）をコードするＤＮＡ配列で置換されている例示的なターゲティングベクターの図（正確な縮尺ではない）を示す。図示した実施形態では、ベクターを用いて、マウスＲＡＧ２プロモーターにより駆動されるｈＴｄＴをＩｇκ遺伝子座に挿入する。図中のラベリングが（例えば、選択カセット、ｌｏｘＰ部位などに関して）別段に示唆しない限り、塗りつぶした形および単一線はマウス配列を表し、空の形および二重線はヒト配列を表す。Ｅ１、Ｅ２などは特定の例示遺伝子のエクソンを表し、ＧＦＰは緑色蛍光タンパク質であり、ＣＭはクロラムフェニコール耐性遺伝子であり、ｈｙｇはハイグロマイシン耐性遺伝子である。接合１〜７は、表２の接合に対応する。
【００１０】
【図３】ＶＨ１−７２プロモーターおよびＥμエンハンサーによって駆動されるヒトＴｄＴ（ｈＴｄＴｓ）をコードするＤＮＡ配列を免疫グロブリンκ遺伝子座に挿入するために使用される例示的なターゲティングベクターの図（正確な縮尺ではない）を示す。図中のラベリングが（例えば、選択カセット、ｌｏｘＰ部位などに関して）別段に示唆しない限り、塗りつぶした形および単一線はマウス配列を表し、空の形および二重線はヒト配列を表す。Ｅ１、Ｅ２などは特定の例示遺伝子のエクソンを表し、ＧＦＰは緑色蛍光タンパク質であり、ＣＭはクロラムフェニコール耐性遺伝子であり、ｈｙｇはハイグロマイシン耐性遺伝子である。接合１〜４は、表３の接合に対応する。
【００１１】
【図４】ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）対照マウスと比較したＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）ＴｄＴマウスのリンパ球におけるｈＴｄＴ  ｍＲＮＡの発現を示す。本明細書中のＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスは、多様なレパートリーの未再編成ヒト重鎖およびκ軽鎖可変（Ｖ（Ｄ）Ｊ）遺伝子セグメントを含むマウスである。Ｈｅｔはヘテロ接合マウスを示し、ＨＯはホモ接合マウスを示す。
【００１２】
【図５】ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）対照マウスと比較したｈＴｄＴを発現するＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスにおけるｈＩｇκ配列多様性（１０，０００のｈＩｇκシーケンシングリード当たりのユニーク軽鎖ＣＤＲ３配列の数）を示すグラフを示す。Ｈｅｔはヘテロ接合マウスを示し、ＨＯはホモ接合マウスを示す。
【００１３】
【図６】ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）対照マウスと比較したｈＴｄＴを発現するＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスにおけるｈＩｇκ非鋳型付加の分布を示すグラフを示す。Ｈｅｔはヘテロ接合マウスを示し、ＨＯはホモ接合マウスを示す。「ＮＴ」はヌクレオチドを表す。
【００１４】
【図７−１】２つのパネルを有する。パネル（Ａ）は、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）対照マウスと比較したｈＴｄＴを発現するＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスにおけるｈＩｇκ  ＣＤＲ３長の分布を示すグラフを示す。「ＡＡ」はアミノ酸を表す。パネル（Ｂ）は、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）対照マウスと比較したｈＴｄＴを発現するＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスにおけるＪＫセグメントの５’領域でのエキソヌクレアーゼ欠失長頻度を示すグラフを示す。Ｈｅｔはヘテロ接合マウスを示し、ＨＯはホモ接合マウスを示す。
【図７−２】２つのパネルを有する。パネル（Ａ）は、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）対照マウスと比較したｈＴｄＴを発現するＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスにおけるｈＩｇκ  ＣＤＲ３長の分布を示すグラフを示す。「ＡＡ」はアミノ酸を表す。パネル（Ｂ）は、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）対照マウスと比較したｈＴｄＴを発現するＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスにおけるＪＫセグメントの５’領域でのエキソヌクレアーゼ欠失長頻度を示すグラフを示す。Ｈｅｔはヘテロ接合マウスを示し、ＨＯはホモ接合マウスを示す。
【００１５】
【図８−１】２つのパネルを有する。パネル（Ａ）は、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）対照マウスと比較したｈＴｄＴを発現するＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスにおけるＶκ使用を示すグラフを示す。パネル（Ｂ）は、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）対照マウスと比較したｈＴｄＴを発現するＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスにおけるＪκ使用を示すグラフを示す。Ｈｅｔはヘテロ接合マウスを示し、ＨＯはホモ接合マウスを示す。
【図８−２】２つのパネルを有する。パネル（Ａ）は、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）対照マウスと比較したｈＴｄＴを発現するＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスにおけるＶκ使用を示すグラフを示す。パネル（Ｂ）は、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）対照マウスと比較したｈＴｄＴを発現するＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスにおけるＪκ使用を示すグラフを示す。Ｈｅｔはヘテロ接合マウスを示し、ＨＯはホモ接合マウスを示す。
【００１６】
【図９】ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）対照マウスと比較したｈＴｄＴを発現するＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスにおけるｍＩｇλ配列多様性（１０，０００のＩｇλシーケンシングリード当たりのユニーク軽鎖ＣＤＲ３配列の数）を示すグラフを示す。Ｈｅｔはヘテロ接合マウスを示し、ＨＯはホモ接合マウスを示す。
【００１７】
【図１０】ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）対照マウスと比較したｈＴｄＴを発現するＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスにおけるｍＩｇλ非鋳型付加の分布を示すグラフを示す。Ｈｅｔはヘテロ接合マウスを示し、ＨＯはホモ接合マウスを示す。「ＮＴ」はヌクレオチドを表す。
【００１８】
【図１１】ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）対照マウスと比較したｈＴｄＴを発現するＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスにおけるｍＩｇλ  ＣＤＲ３長の分布を示すグラフを示す。Ｈｅｔはヘテロ接合マウスを示し、ＨＯはホモ接合マウスを示す。「ＡＡ」はアミノ酸を表す。
【００１９】
【図１２】ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）対照マウスと比較したｈＴｄＴを発現するＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスにおけるＶλ使用を示すグラフを示す。Ｈｅｔはヘテロ接合マウスを示し、ＨＯはホモ接合マウスを示す。
【００２０】
【図１３】ｈＴｄＴ（左パネル、示されるように存在するｈＴｄＴ遺伝子）を発現するＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスならびにｈＴｄＴを発現しないＤＬＣおよびＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）対照マウスと比較したｈＴｄＴ（右パネル、示されるように存在するｈＴｄＴ遺伝子）を発現する二重軽鎖マウス（ＤＬＣ、２つの未再編成ヒトＶｋ遺伝子セグメントおよび５つの未再編成ヒトＪｋ遺伝子セグメント、ならびに多様なレパートリーの未再編成ヒト重鎖Ｖ、Ｄ、およびＪ遺伝子セグメントを含むマウス）におけるｈＩｇκ配列多様性（１０，０００Ｉｇκシーケンシングリード当たりのユニーク軽鎖ＣＤＲ３配列の数）を示すグラフを示す。ＨｅｔはｈＴｄＴのヘテロ接合マウスを示し、ＨＯはｈＴｄＴのホモ接合マウスを示す。
【００２１】
【図１４】ｈＴｄＴを発現しないＤＬＣ対照マウス（ＤＬＣ）と比較したｈＴｄＴを発現するマウスにおけるｈＩｇκ非鋳型付加の分布を示すグラフを示す。ＨｅｔはｈＴｄＴのヘテロ接合マウスを示し、ＨＯはｈＴｄＴのホモ接合マウスを示す。「ＮＴ」はヌクレオチドを表す。
【００２２】
【図１５】ｈＴｄＴを発現しないＤＬＣ対照マウスと比較したｈＴｄＴを発現するＤＬＣマウスにおけるｈＩｇκ  ＣＤＲ３長の分布を示すグラフを示す。ＨｅｔはｈＴｄＴのヘテロ接合マウスを示し、ＨＯはｈＴｄＴのホモ接合マウスを示す。
【００２３】
【図１６】ｈＴｄＴを発現しないＤＬＣ対照マウスと比較したｈＴｄＴを発現するＤＬＣマウスにおけるＶκ使用およびＪκ使用を示すグラフを示す。ＨｅｔはｈＴｄＴのヘテロ接合マウスを示し、ＨＯはｈＴｄＴのホモ接合マウスを示す。別々に示されている２つの異なるＲａｇ  ＴｄＴ  ｔｇ（ＨＯ）ＤＬＣマウスのみを使用する。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
一般
本明細書では、それらのゲノム中にＴｄＴ（例えば、ヒト、マウス、またはラットＴｄＴ）をコードする外因性核酸を含む非ヒト動物に関連する方法および組成物が提供される。いくつかの実施形態では、遺伝子改変非ヒト動物は、齧歯類（例えば、マウスまたはラット）などの哺乳動物である。特定の実施形態では、非ヒト動物のゲノムは、それがヒト可変ドメインを有する抗原結合分子（例えば、抗体、ＴＣＲ、および／またはＣＡＲ）を発現するようにさらなる改変を含む。
【００２５】
ＴｄＴは、Ｂリンパ球およびＴリンパ球における抗原−受容体多様性の増加をもたらす、Ｖ（Ｄ）Ｊ組換えにおける接合形成中の鋳型非依存性ヌクレオチド付加（Ｎ付加）を触媒するＤＮＡポリメラーゼである。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、それらのゲノムにＴｄＴをコードする外因性核酸を含まない対応する非ヒト動物（すなわち、同じ種および株の非ヒト動物）と比較して、Ｂ細胞発生および／またはＴ細胞発生中に増加したレベルのＴｄＴを発現する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、それらのゲノムにＴｄＴをコードする外因性核酸を含まない対応する非ヒト動物がＴｄＴを発現しない、Ｂ細胞発生および／またはＴ細胞発生中（例えば、プレＢ細胞段階中）にＴｄＴを発現する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される遺伝子改変非ヒト動物は、それらのゲノムにＴｄＴをコードする外因性核酸を含まない対応する非ヒト動物と比較して、増加した抗原−受容体多様性（例えば、抗体多様性、ＴＣＲ多様性、および／またはＣＡＲ多様性）を有する。
【００２６】
定義
冠詞「ａ」および「ａｎ」は、本明細書では、冠詞の文法的目的語の１つまたは２つ以上（すなわち、少なくとも１つ）を指すために使用される。例として、「ある要素」は、１つの要素または２つ以上の要素を意味する。
【００２７】
「アミノ酸」という用語は、アミノ官能基および酸性官能基の両方を含み、天然に存在するアミノ酸のポリマーに含めることができる、天然または合成のあらゆる分子を包含することを意図する。例示的なアミノ酸には、天然に存在するアミノ酸、それらの類似体、誘導体、および同族体、変異体側鎖を有するアミノ酸類似体、ならびに上記のいずれかのすべての立体異性体が含まれる。
【００２８】
本明細書中で使用される場合、「抗体」という用語は、インタクト抗体およびその抗原結合断片の両方を指し得る。インタクト抗体は、ジスルフィド結合によって相互連結された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質である。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＶＨと略記する）および重鎖定常領域を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶＬと略記する）および軽鎖定常領域を含む。ＶＨおよびＶＬ領域は、より保存的な、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる領域が点在する相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる、超可変性の領域にさらに細分することができる。各ＶＨおよびＶＬは、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順でアミノ末端からカルボキシ末端に配置された３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成される。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。「抗体」という用語は、単一ドメイン抗体、重鎖のみの抗体、重鎖上の軽鎖可変遺伝子セグメントを有する抗体なども含む。
【００２９】
本明細書で使用する抗原結合分子（例えば、抗体、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ））の「抗原結合断片」および「抗原結合部分」という用語は、抗原に結合する能力を保持する抗原結合分子の１つ以上の断片を指す。抗原結合断片は、インタクト抗原結合分子の可変領域の少なくとも一部分を保持し、抗原に結合することができる任意の抗体、ＴＣＲ、またはＣＡＲ断片を含み得る。「抗原結合断片」という用語内に包含される結合断片の例としては、これらに限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、Ｆｄ、単鎖抗体、可溶性ＴＣＲ、単鎖ＴＣＲ、可溶性ＣＡＲ、単鎖ＣＡＲ、単離ＣＤＲＨ３（抗体またはＴＣＲ）、およびインタクト抗原結合分子の可変領域の少なくとも一部分を保持する他の抗原結合断片が挙げられる。これらの抗原結合断片は、従来の組換え技術および／または酵素技術を用いて得ることができ、インタクト抗体と同じ方法で抗原結合についてスクリーニングすることができる。
【００３０】
非ヒト動物に関連する「対応する」という用語は、対応する非ヒト動物が発現しない一方で目的の非ヒト動物が外因性ＴｄＴを発現することを除き、目的の非ヒトと同じ遺伝子改変を含む同じ種の対照非ヒト動物の特徴を記載するために使用される。
【００３１】
本明細書で使用する「キメラ抗原受容体」または「ＣＡＲ」は、その中に免疫グロブリン抗原結合ドメイン（例えば、免疫グロブリン可変ドメイン）およびＴ細胞受容体（ＴＣＲ）定常ドメインまたはその一部分を含む抗原結合タンパク質を指す。本明細書中で使用される場合、ＴＣＲポリペプチドの「定常ドメイン」は、膜近位ＴＣＲ定常ドメインを含み、ＴＣＲ膜貫通ドメインおよび／またはＴＣＲ細胞質尾部も含み得る。例えば、いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＴＣＲβ定常ドメインに連結された免疫グロブリン重鎖可変ドメインを含む第１のポリペプチドおよびＴＣＲα定常ドメインに連結された免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン（例えば、κまたはλ可変ドメイン）を含む第２のポリペプチドを含む二量体である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＴＣＲα定常ドメインに連結された免疫グロブリン重鎖可変ドメインを含む第１のポリペプチドおよびＴＣＲβ定常ドメインに連結された免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン（例えば、κまたはλ可変ドメイン）を含む第２のポリペプチドを含む二量体である。
【００３２】
未再編成可変領域および／または未再編成可変領域遺伝子セグメントに「由来する」再編成された可変領域遺伝子または可変ドメインに関して使用される場合、「由来する」という語句は、（適用可能であれば、スプライス差および体細胞突然変異を考慮に入れて）可変ドメインを発現する再編成された可変領域遺伝子を形成するために再編成された未再編成可変領域遺伝子セグメントのセットまで遡って再編成可変領域遺伝子または可変ドメインの配列を追跡する能力を指す。例えば、体細胞突然変異を受けた再編成可変領域遺伝子は、それが未再編成可変領域遺伝子セグメントに由来するという事実を変化させない。
【００３３】
本明細書中で使用される場合、「遺伝子座」という用語は、関連する遺伝子エレメントのセット（例えば、遺伝子、遺伝子セグメント、調節エレメント）を含む染色体上の領域を指す。例えば、未再編成免疫グロブリン遺伝子座は、Ｖ（Ｄ）Ｊ組換えおよび免疫グロブリン発現を誘導する免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメント、１つ以上の免疫グロブリン定常領域遺伝子、および関連調節エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサー、スイッチエレメントなど）を含み得るが、未再編成ＴＣＲ遺伝子座は、Ｖ（Ｄ）Ｊ組換えおよびＴＣＲ発現を誘導するＴＣＲ可変領域遺伝子セグメント、ＴＣＲ定常領域遺伝子、および関連調節エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサーなど）を含み得る。同様に、未再編成ＣＡＲ遺伝子座は、Ｖ（Ｄ）Ｊ組換えおよびＣＡＲ発現を誘導する免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメント、ＴＣＲ定常領域遺伝子、および関連調節エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサーなど）を含み得る。遺伝子座は、内因性または非内因性であり得る。「内因性遺伝子座」という用語は、特定の遺伝子エレメントが天然に見出される染色体上の位置を指す。
【００３４】
未再編成可変領域遺伝子セグメントは、未再編成可変領域遺伝子セグメントが再編成されて、抗原結合タンパク質のポリペプチド鎖として定常領域遺伝子と併せて発現される再編成された可変領域遺伝子を形成することができる場合、隣接する定常領域遺伝子に「作動可能に連結」される。
【００３５】
「ポリヌクレオチド」および「核酸」という用語は、互換的に使用される。それらは、デオキシリボヌクレオチドもしくはリボヌクレオチド、またはこれらの類似体のいずれかの、任意の長さのポリマー形態のヌクレオチドを指す。ポリヌクレオチドは、任意の三次元構造を有することができ、任意の機能を果たすことができる。遺伝子または遺伝子断片のコードまたは非コード領域、連鎖解析から定義される遺伝子座（複数可）、エクソン、イントロン、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、トランスファーＲＮＡ、リボソームＲＮＡ、リボザイム、ｃＤＮＡ、組換えポリヌクレオチド、分岐ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、任意の配列の単離ＤＮＡ、任意の配列の単離ＲＮＡ、核酸プローブ、およびプライマーは、ポリヌクレオチドの非限定的な例である。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチドおよびヌクレオチド類似体のような、修飾ヌクレオチドを含み得る。存在する場合、ヌクレオチド構造の修飾は、ポリマーのアセンブリ前または後に付与され得る。ポリヌクレオチドは、例えば、標識成分とのコンジュゲーションにより、さらに修飾され得る。本明細書で提供されるすべての核酸配列において、Ｕヌクレオチドは、Ｔヌクレオチドと互換可能である。
【００３６】
本明細書中で使用される場合、「特異的結合」および「抗原特異性」は、抗原結合分子（例えば、抗体、ＴＣＲ、ＣＡＲ）が所定の標的、例えば、所定の抗原に結合する能力を指す。典型的には、抗原結合分子は、約１０−７Ｍ以下のＫＤに対応する親和性でその所定の標的に特異的に結合し、非特異的で無関係の標的（例えば、ＢＳＡ、カゼイン）についてそのＫＤより少なくとも１０倍低い、少なくとも１００倍低い、または少なくとも１０００倍低いＫＤに対応する親和性で所定の標的に結合する。いくつかの実施形態では、抗原結合分子は、約１０−８Ｍ以下、１０−９Ｍ以下、または１０−１０Ｍ以下のＫＤに対応する親和性でその所定の標的に特異的に結合する。
【００３７】
本明細書で使用する「Ｔ細胞受容体」または「ＴＣＲ」は、その中にＴＣＲ抗原結合ドメイン（例えば、ＴＣＲ可変ドメイン）およびＴＣＲ定常ドメインの少なくとも一部分の両方を含む抗原結合タンパク質を指す。本明細書中で使用される場合、ＴＣＲポリペプチドの「定常ドメイン」は、膜近位ＴＣＲ定常ドメインを含み、ＴＣＲ膜貫通ドメインおよび／またはＴＣＲ細胞質尾部も含み得る。特定の実施形態では、ＴＣＲは、可溶性ＴＣＲであり、ＴＣＲ膜貫通ドメインまたはＴＣＲ細胞質尾部を含まない。例えば、いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、ＴＣＲβ定常ドメイン（またはその断片）に連結されたＴＣＲβ可変ドメインを含む第１のポリペプチドおよびＴＣＲα定常ドメイン（またはその断片）に連結されたＴＣＲαを含む第２のポリペプチドを含む二量体である。
【００３８】
「未再編成」という用語は、Ｖ遺伝子セグメントおよびＪ遺伝子セグメントが（重またはＴＣＲβ可変領域について、Ｄ遺伝子セグメントも）別々に維持されているが、Ｖ（Ｄ）Ｊレパートリーの単一のＶ、（Ｄ）、Ｊを含む再編成されたＶ（Ｄ）Ｊ遺伝子（「可変領域遺伝子」）を形成するように連結することができる、免疫グロブリン、ＴＣＲまたはＣＡＲ可変領域遺伝子座または可変領域遺伝子セグメントの状態を含む。
【００３９】
遺伝子改変非ヒト動物およびＥＳ細胞
特定の態様では、本明細書では、それらのゲノム中にＴｄＴ（例えば、ヒト、マウス、またはラットＴｄＴ）をコードする外因性核酸を含む非ヒト動物およびＥＳ細胞が提供される。特定の実施形態では、非ヒト動物およびＥＳ細胞のゲノムは、例えば、ヒト可変ドメインを有する抗原結合分子（例えば、抗体、ＴＣＲ、および／またはＣＡＲ）の発現をもたらす改変を含む、さらなる改変を含む。
【００４０】
本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物およびＥＳ細胞は、当該技術分野で知られている任意の適切な方法を用いて作製され得る。例えば、標的化された遺伝子改変を含む非ヒト動物ＥＳ細胞は、各々が参照により本明細書に組み入れられる、米国特許第６，５８６，２５１号、同第６，５９６，５４１号、同第７，１０５，３４８号、およびＶａｌｅｎｚｕｅｌａ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）“Ｈｉｇｈ−ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍｏｕｓｅ  ｇｅｎｏｍｅ  ｃｏｕｐｌｅｄ  ｗｉｔｈ  ｈｉｇｈ−ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎａｌｙｓｉｓ”Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２１（６）：６５２−６５９、ならびに米国特許出願公開第２０１４／０３１０８２８号に記載されているＶＥＬＯＣＩＧＥＮＥ（登録商標）技術を用いて作製することができる。標的化された改変は、例えば、各々が参照により組み込まれる、米国特許第９，２２８，２０８号、ならびに米国特許出願公開第２０１５／０１５９１７４Ａ１号、同第２０１６／００６０６５７Ａ１号、同第２０１５／０３７６６５０Ａ１号、同第２０１５／０３７６６５１Ａ１号、同第２０１６／００４６９６０Ａ１号、同第２０１５／０３７６６２８Ａ１号、および同第２０１６／０１１５４８６Ａ１号に記載されているＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムを用いて行うこともできる。標的化された改変は、例えば、各々が参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第８，７０３，４８５号、同第８，５３０，２１４号、および同第８，６２４，０００号に記載されているメガヌクレアーゼを用いて行うこともできる。非標的化遺伝子改変は、例えば、各々が参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第６，１５０，５８４号、同第６，１１４，５９８号、同第５，６３３，４２５号、同第７，５０１，５５２号、同第６，２３５，８８３号、同第６，９９８，５１４号、および同第５，７７６，７７３号に記載されている標準的な方法を用いて行うことができる。
【００４１】
本明細書に記載のＥＳ細胞を使用して、当該技術分野で知られている方法を用いて非ヒト動物を作製することができる。例えば、本明細書に記載されるマウス非ヒト動物ＥＳ細胞は、各々が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第７，２９４，７５４号およびＰｏｕｅｙｍｉｒｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ２５：９１−９９（２００７）に記載されているＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）を使用して、遺伝子改変マウスを作製することができる。ラットＥＳ細胞を使用して、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２０１４／０３１０８２８号に記載されている方法を用いて改変ラットを作製することができる。得られたマウスまたはラットは、ホモ接合体に繁殖させることができる。別個に改変された動物の繁殖、または（例えば、本明細書に記載の方法を使用する）既に改変されたＥＳ細胞へのさらなる改変の導入のいずれかによって、単一遺伝子改変生物において複数の異なる改変を組み合わせることができる。
【００４２】
いくつかの実施形態では、非ヒト動物は、任意の非ヒト動物であり得る。いくつかの実施形態では、非ヒト動物は、脊椎動物である。いくつかの実施形態では、非ヒト動物は、哺乳動物である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子改変非ヒト動物は、マウス、ラット、ウサギ、ブタ、ウシ（例えば、カウ、ブル、バッファロー）、シカ、ヒツジ、ヤギ、ラマ、ニワトリ、ネコ、イヌ、フェレット、霊長類（例えば、マーモセット、アカゲザル）からなる群から選択され得る。適切な遺伝子改変可能なＥＳ細胞が容易に入手できない非ヒト動物については、他の方法を用いて、本明細書に記載の遺伝子改変を含む非ヒト動物を作製することができる。そのような方法には、例えば、非ＥＳ細胞ゲノム（例えば、線維芽細胞または誘導多能性細胞）を改変し、核移植を使用して改変ゲノムを卵母細胞のような適切な細胞に移入し、改変細胞（例えば、改変卵母細胞）を非ヒト動物において胚を形成するのに適した条件下で懐胎させることが含まれる。
【００４３】
いくつかの実施形態では、非ヒト動物は、哺乳動物である。いくつかの実施形態では、非ヒト動物は、例えば、スーパーファミリーＤｉｐｏｄｏｉｄｅａまたはＭｕｒｏｉｄｅａの小さな哺乳動物である。いくつかの実施形態では、非ヒト動物は、齧歯類である。特定の実施形態では、齧歯類は、マウス、ラット、またはハムスターである。いくつかの実施形態では、齧歯類は、スーパーファミリーＭｕｒｏｉｄｅａから選択される。いくつかの実施形態では、非ヒト動物は、Ｃａｌｏｍｙｓｃｉｄａｅ（例えば、マウス様ハムスター）、Ｃｒｉｃｅｔｉｄａｅ（例えば、ハムスター、ニューワールドラットおよびマウス、ハタネズミ）、Ｍｕｒｉｄａｅ（例えば、真正マウスおよびラット、アレチネズミ、トゲマウス、トサカラット）、Ｎｅｓｏｍｙｉｄａｅ（例えば、クライミングマウス、ロックマウス、オジロラット、マダガスカルラットおよびマウス）、Ｐｌａｔａｃａｎｔｈｏｍｙｉｄａｅ（例えば、トゲドーマウス）、およびＳｐａｌａｃｉｄａｅ（例えば、デバネズミ、バンブーラット、およびゾコール）から選択されるファミリーに由来する。いくつかの実施形態では、齧歯類は、真正マウスおよびラット（Ｍｕｒｉｄａｅファミリー）、アレチネズミ、トゲマウス、ならびにトサカラットから選択される。いくつかの実施形態では、マウスは、Ｍｕｒｉｄａｅファミリーのメンバーに由来する。いくつかの実施形態では、非ヒト動物は、齧歯類である。いくつかの実施形態では、齧歯類は、マウスおよびラットから選択される。いくつかの実施形態では、非ヒト動物は、マウスである。
【００４４】
いくつかの実施形態では、非ヒト動物は、Ｃ５７ＢＬ株のマウスである。いくつかの実施形態では、Ｃ５７ＢＬ株は、Ｃ５７ＢＬ／Ａ、Ｃ５７ＢＬ／Ａｎ、Ｃ５７ＢＬ／ＧｒＦａ、Ｃ５７ＢＬ／ＫａＬｗＮ、Ｃ５７ＢＬ／６、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ、Ｃ５７ＢＬ／６ＢｙＪ、Ｃ５７ＢＬ／６ＮＪ、Ｃ５７ＢＬ／１０、Ｃ５７ＢＬ／１０ＳｃＳｎ、Ｃ５７ＢＬ／１０Ｃｒ、およびＣ５７ＢＬ／Ｏｌａから選択される。いくつかの実施形態では、非ヒト動物は、１２９株のマウスである。いくつかの実施形態では、１２９株は、１２９Ｐ１、１２９Ｐ２、１２９Ｐ３、１２９Ｘ１、１２９Ｓ１（例えば、１２９Ｓ１／ＳＶ、１２９Ｓ１／ＳｖＩｍ）、１２９Ｓ２、１２９Ｓ４、１２９Ｓ５、１２９Ｓ９／ＳｖＥｖＨ、１２９Ｓ６（１２９／ＳｖＥｖＴａｃ）、１２９Ｓ７、１２９Ｓ８、１２９Ｔ１、１２９Ｔ２である株からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、遺伝子改変マウスは、１２９株およびＣ５７ＢＬ株の混合物である。いくつかの実施形態では、マウスは、１２９株の混合物および／またはＣ５７ＢＬ／６株の混合物である。いくつかの実施形態では、混合物の１２９株は、１２９Ｓ６（１２９／ＳｖＥｖＴａｃ）株である。いくつかの実施形態では、マウスは、ＢＡＬＢ株（例えば、ＢＡＬＢ／ｃ）である。いくつかの実施形態では、マウスは、ＢＡＬＢ株と別の株（例えば、Ｃ５７ＢＬ株および／または１２９株）の混合物である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、前述の株の任意の組み合わせに由来するマウスであり得る。
【００４５】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、ラットである。いくつかの実施形態では、ラットは、Ｗｉｓｔａｒラット、ＬＥＡ株、Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ株、Ｆｉｓｃｈｅｒ株、Ｆ３４４、Ｆ６、およびＤａｒｋ  Ａｇｏｕｔｉから選択される。いくつかの実施形態では、ラット株は、Ｗｉｓｔａｒ、ＬＥＡ、Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ、Ｆｉｓｃｈｅｒ、Ｆ３４４、Ｆ６、およびＤａｒｋ  Ａｇｏｕｔｉからなる群から選択される２つ以上の株の混合物である。
【００４６】
外因性ＴｄＴを発現する非ヒト動物
特定の態様では、それらの生殖系列および／またはゲノム中に外因性ターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列を含む遺伝子改変非ヒト動物およびＥＳ細胞が本明細書で提供される。デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）は、Ｂリンパ球およびＴリンパ球における抗原−受容体多様性の増加をもたらす、Ｖ（Ｄ）Ｊ組換えにおける接合形成中の鋳型非依存性ヌクレオチド付加（ＮＰ付加）を触媒するＤＮＡポリメラーゼである。鋳型非依存性付加、非鋳型付加、および非生殖系列付加はすべて、ＴｄＴによって触媒されるヌクレオチド付加を指し、これらの用語は本明細書では互換的に使用される。
【００４７】
特定の実施形態では、遺伝子改変非ヒト動物のゲノム中の外因性ＴｄＴの配列は、ＴｄＴまたはＴｄＴオルソログをコードする任意の動物由来であり得る。いくつかの実施形態では、ＴｄＴは、脊椎動物ＴｄＴである。いくつかの実施形態では、ＴｄＴは、哺乳動物ＴｄＴである。いくつかの実施形態では、ＴｄＴは、マウス、ラット、ウサギ、ブタ、ウシ（例えば、カウ、ブル、バッファロー）、シカ、ヒツジ、ヤギ、ラマ、ニワトリ、ネコ、イヌ、フェレット、霊長類（例えば、マーモセット、アカゲザル）、またはヒトからなる群から選択される哺乳動物に由来する。いくつかの実施形態では、ＴｄＴは、内因性種由来である（すなわち、ＴｄＴ配列は、遺伝子改変非ヒト動物と同じ種のものである）。いくつかの実施形態では、ＴｄＴは、ヒトＴｄＴ、マウスＴｄＴ、またはラットＴｄＴである。いくつかの実施形態では、核酸配列は、ゲノムＴｄＴ配列である（すなわち、エクソンおよびイントロンを含む）。いくつかの実施形態では、核酸配列は、ＴｄＴ  ｍＲＮＡ／ｃＤＮＡ（すなわち、１つ以上のＴｄＴアイソフォームのエクソン）をコードする。
【００４８】
ヒトＴｄＴ（ｈＴｄＴ）は、ヒト１０番染色体上に位置するＤＮＴＴ遺伝子によってコードされる。ｈＴｄＴの例示的なゲノムＤＮＡ配列は、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＣ＿００００１０．１１の位置９６３０４３２８〜９６３３８５６４で見ることができ、これは参照により本明細書に組み込まれる。ｈＴｄＴのアイソフォームの例示的なｍＲＮＡ配列は、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＭ＿００１０１７５２０．１およびＮＭ＿００４０８８．３によって提供され、これらの各々は参照により本明細書に組み込まれる。これらのアイソフォームによってコードされるタンパク質配列は、それぞれ、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＰ＿００１０１７５２０．１およびＮＰ＿００４０７９．３によって提供され、これらの各々は参照により本明細書に組み込まれる。ＴｄＴアイソフォームの中には、短いアイソフォーム（ｈＴｄＴＳ）および２つの長いアイソフォーム（ｈＴｄＴＬ１およびｈＴｄＴＬ２）がある。３つのアイソフォームの配列は、例えば、Ｔｈａｉ  ａｎｄ  Ｋｅａｒｎｅｙ，Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８６：１１３−３６（２００５）に提供されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。特定の実施形態では、外因性核酸配列は、ｈＴｄＴＳをコードする。いくつかの実施形態では、外因性核酸配列は、ｈＴｄＴＬ１をコードする。いくつかの実施形態では、外因性核酸配列は、ｈＴｄＴＬ２をコードする。特定の実施形態では、非ヒト生物は、複数のアイソフォームをコードする外因性核酸配列（例えば、ｈＴｄＴＳおよびｈＴｄＴＬ２の両方）を含む。特定の実施形態では、非ヒト生物は、３つすべてのヒトアイソフォームをコードする外因性核酸配列（例えば、ｈＴｄＴＳおよびｈＴｄＴＬ２の両方）を含む。
【００４９】
マウスＴｄＴ（ｍＴｄＴ）は、マウス１９番染色体上に位置するＤｎｔｔ遺伝子によってコードされる。ｍＴｄＴの例示的なゲノムＤＮＡ配列は、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＣ＿００００８５．６の位置４１０２９２７５〜４１０５９５２５で見ることができ、これは参照により本明細書に組み込まれる。ｍＴｄＴのアイソフォームの例示的なｍＲＮＡ配列は、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＭ＿００１０４３２２８．１およびＮＭ＿００９３４５．２によって提供され、これらの各々は参照により本明細書に組み込まれる。これらのアイソフォームによってコードされるタンパク質配列は、それぞれ、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＰ＿００１０３６６９３．１およびＮＰ＿０３３３７１．２によって提供され、これらの各々は参照により本明細書に組み込まれる。
【００５０】
ラットＴｄＴ（ｒＴｄＴ）は、ラット１番染色体上に位置するＤｎｔｔ遺伝子によってコードされる。ｒＴｄＴの例示的なゲノムＤＮＡ配列は、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＣ＿００５１００．４の位置２６０２８９６２６〜２６０３２１１７４で見ることができ、これは参照により本明細書に組み込まれる。ｒＴｄＴの例示的なｍＲＮＡ配列は、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＭ＿００１０１２４６１．１によって提供され、これは参照により本明細書に組み込まれる。このｍＲＮＡによってコードされるタンパク質配列は、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＰ＿００１０１２４７９．１によって提供され、これは参照により本明細書に組み込まれる。
【００５１】
いくつかの実施形態では、遺伝子改変非ヒト動物のゲノムは、外因性ＴｄＴをコードする核酸配列の複数のコピーを含む。いくつかの実施形態では、遺伝子改変非ヒト動物は、外因性ＴｄＴをコードする核酸配列の２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個のコピーを含む。いくつかの実施形態では、遺伝子改変非ヒト動物は、外因性ＴｄＴをコードする核酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個のコピーを含む。
【００５２】
いくつかの実施形態では、外因性ＴｄＴをコードする核酸配列は、１つ以上の転写制御エレメント（例えば、プロモーターおよび／またはエンハンサー）に作動可能に連結される。いくつかの実施形態では、転写制御エレメントは、構成的（すなわち、ユビキタス）プロモーターである。構成的プロモーターの例としては、これらに限定されないが、ＳＶ４０、ＣＭＶプロモーター、アデノウイルスプロモーター、ＥＦ１プロモーター、β−アクチンプロモーター、ＥＧＲ１プロモーター、ｅＩＦ４Ａ１プロモーター、ＦｅｒＨプロモーター、ＦｅｒＬプロモーター、ＧＡＰＤＨプロモーター、ＧＲＰ７８プロモーター、ＧＲＰ９４プロモーター、ＨＳＰ７０プロモーター、β−Ｋｉｎプロモーター、ＰＧＫ−１プロモーター、ＲＯＳＡプロモーター、およびユビキチンＢプロモーターが挙げられる。いくつかの実施形態では、核酸配列は、構成的プロモーターに作動可能に連結されない。
【００５３】
いくつかの実施形態では、転写制御エレメントは、Ｂ細胞発生中にコードされたＴｄＴの発現を誘導する。いくつかの実施形態では、転写制御エレメントは、プロＢ細胞および／またはプレＢ細胞におけるＴｄＴの発現を誘導する。いくつかの実施形態では、転写制御エレメントは、プロＢ細胞および／またはプレＢ細胞における、Ｂ細胞発生中に発現される遺伝子の転写制御エレメント（例えば、プロモーターおよび／またはエンハンサー）である。いくつかの実施形態では、転写制御エレメントは、ＲＡＧ１転写制御エレメント、ＲＡＧ２転写制御エレメント、免疫グロブリン重鎖転写制御エレメント、免疫グロブリンκ軽鎖転写制御エレメント、および／または免疫グロブリンλ軽鎖転写制御エレメントである。いくつかの実施形態では、転写制御エレメントは、内因性種由来である。いくつかの実施形態では、転写制御エレメントは、マウス転写制御エレメント、ラット転写制御エレメント、またはヒト転写制御エレメントである。いくつかの実施形態では、転写制御エレメントは、内因性転写制御エレメントである（例えば、外因性ＴｄＴをコードするヌクレオチド配列は、非ヒト動物のゲノムに、外因性ＴｄＴの発現が内因性転写制御エレメントによって少なくとも部分的に制御されるような位置で挿入される）。いくつかの実施形態では、転写制御エレメントとしては、ＲＡＧ１、ＲＡＧ２、λ５、ＶｐｒｅＢ、ＣＤ３４、ＣＤ４５、ＡＡ４．１、ＣＤ４５Ｒ、ＩＬ−７Ｒ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ３８、ＣＤ２０、ＣＤ４０の転写を調節するもの、様々な免疫グロブリン軽鎖および重鎖Ｖ遺伝子セグメントプロモーターおよびエンハンサー（例えば、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）ウェブサイト、ＩＭＧＴ、ｉｍｇｔ．ｏｒｇに列挙されている様々なＶ遺伝子セグメントのリストを参照のこと、例えば、マウスＶＨ１−７２プロモーター他など）を挙げることができる。転写制御エレメントは、ヒト、マウス、ラット、または他の種由来のものを含み得る。
【００５４】
いくつかの実施形態では、転写制御エレメントは、Ｔ細胞発生中にコードされたＴｄＴの発現を誘導する。いくつかの実施形態では、転写制御エレメントは、ＣＤ４／ＣＤ８ダブルネガティブ（ＤＮ）胸腺細胞および／またはＣＤ４／ＣＤ８ダブルポジティブ（ＤＰ）胸腺細胞におけるＴｄＴの発現を誘導する。いくつかの実施形態では、転写制御エレメントは、ＤＮ胸腺細胞および／またはＤＰ胸腺細胞における、Ｔ細胞発生中に発現される遺伝子の転写制御エレメント（例えば、プロモーターおよび／またはエンハンサー）である。いくつかの実施形態では、転写制御エレメントは、ＲＡＧ１転写制御エレメント、ＲＡＧ２転写制御エレメント、ＴＣＲα転写制御エレメント、ＴＣＲβ転写制御エレメント、ＴＣＲγ転写制御エレメント、および／またはＴＣＲδ転写制御エレメントである。いくつかの実施形態では、転写制御エレメントは、内因性種由来である。いくつかの実施形態では、転写制御エレメントは、マウス転写制御エレメント、ラット転写制御エレメント、またはヒト転写制御エレメントである。いくつかの実施形態では、転写制御エレメントは、内因性転写制御エレメントである（例えば、外因性ＴｄＴをコードするヌクレオチド配列は、非ヒト動物のゲノムに、外因性ＴｄＴの発現が内因性転写制御エレメントによって少なくとも部分的に制御されるような位置で挿入される）。いくつかの実施形態では、転写制御エレメントとしては、ＲＡＧ１、ＲＡＧ２、Ｌｃｋ、ＺＡＰ−７０、ＣＤ３４、ＣＤ２、ＨＳＡ、ＣＤ４４、ＣＤ２５、ＰＴα、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ６９の転写を調節するもの、様々なＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲδ、およびＴＣＲγＶ遺伝子セグメントプロモーターおよびエンハンサー（例えば、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）ウェブサイト、ＩＭＧＴ、ｉｍｇｔ．ｏｒｇに列挙されている様々なＶ遺伝子セグメントのリストを参照のこと）を挙げることができる。転写制御エレメントは、ヒト、マウス、ラット、または他の種由来のものを含み得る。
【００５５】
いくつかの実施形態では、ＴｄＴをコードする核酸は、非ヒト動物のゲノムに、プロＢ細胞および／またはプレＢ細胞における、Ｂ細胞発生中に発現される遺伝子のゲノム遺伝子座またはその近位（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または１００ｋｂ以内）に位置する。いくつかの実施形態では、ＴｄＴをコードする核酸配列は、免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリン重鎖遺伝子座、ＲＡＧ１遺伝子座、またはＲＡＧ２遺伝子座またはその近位に位置する。
【００５６】
いくつかの実施形態では、ＴｄＴをコードする核酸は、非ヒト動物のゲノムに、ＤＮ胸腺細胞および／またはＤＰ胸腺細胞における、Ｔ細胞発生中に発現される遺伝子のゲノム遺伝子座またはその近位（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または１００ｋｂ以内）に位置する。いくつかの実施形態では、ＴｄＴをコードする核酸配列は、ＴＣＲα鎖遺伝子座、ＴＣＲβ鎖遺伝子座、ＴＣＲγ鎖遺伝子座、ＴＣＲδ鎖遺伝子座、ＲＡＧ１遺伝子座、またはＲＡＧ２遺伝子座またはその近位に位置する。
【００５７】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物と比較して、（例えば、プロＢ細胞、プレＢ細胞、ＤＮ胸腺細胞、および／またはＤＰ胸腺細胞において）Ｔ細胞および／またはＢ細胞発生への１つ以上の段階中に上昇したレベルのＴｄＴ発現を発現する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物は、対応する非ヒト動物より、Ｔ細胞および／またはＢ細胞発現の１つ以上の段階において、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、２５０％、３００％、３５０％、４００％、４５０％、または５００％多くのＴｄＴを発現する。
【００５８】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな非鋳型付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における非鋳型付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より低い非鋳型付加を含まないＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における非鋳型付加を含まないＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％小さい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも１つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも１つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも２つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも２つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも３つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも３つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも４つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも４つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、動物におけるＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、または４０％は、非鋳型付加を含む。いくつかの実施形態では、非ヒト動物は、対応する非ヒト動物より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％大きいユニーク免疫グロブリンκ鎖ＣＤＲ３配列の頻度を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、１０，０００個の免疫グロブリンκ鎖ＣＤＲ３配列当たり少なくとも９００、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、１５００、または１７００個のユニーク免疫グロブリンκ鎖ＣＤＲ３配列を有する。
【００５９】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな非鋳型付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における非鋳型付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より低い非鋳型付加を含まないＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における非鋳型付加を含まないＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％小さい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも１つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも１つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも２つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも２つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも３つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも３つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも４つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも４つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、動物におけるＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、または４０％は、非鋳型付加を含む。いくつかの実施形態では、非ヒト動物は、対応する非ヒト動物より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％大きいユニーク免疫グロブリンλ鎖ＣＤＲ３配列の頻度を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、１０，０００個の免疫グロブリンλ鎖ＣＤＲ３配列当たり少なくとも１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、または３００個のユニーク免疫グロブリンλ鎖ＣＤＲ３配列を有する。
【００６０】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな非鋳型付加を含むＶ−Ｄ免疫グロブリン重鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における非鋳型付加を含むＶ−Ｄ免疫グロブリン重鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｄ免疫グロブリン重鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より低い非鋳型付加を含まないＶ−Ｄ免疫グロブリン重鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における非鋳型付加を含まないＶ−Ｄ免疫グロブリン重鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｄ免疫グロブリン重鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％小さい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも１つのＮ付加を含むＶ−Ｄ免疫グロブリン重鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも１つのＮ付加を含むＶ−Ｄ免疫グロブリン重鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｄ免疫グロブリン重鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも２つのＮ付加を含むＶ−Ｄ免疫グロブリン重鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも２つのＮ付加を含むＶ−Ｄ免疫グロブリン重鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｄ免疫グロブリン重鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも３つのＮ付加を含むＶ−Ｄ免疫グロブリン重鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも３つのＮ付加を含むＶ−Ｄ免疫グロブリン重鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｄ免疫グロブリン重鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも４つのＮ付加を含むＶ−Ｄ免疫グロブリン重鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも４つのＮ付加を含むＶ−Ｄ免疫グロブリン重鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｄ免疫グロブリン重鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、動物におけるＶ−Ｄ免疫グロブリン重鎖接合の少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、または４０％は、非鋳型付加を含む。いくつかの実施形態では、非ヒト動物は、対応する非ヒト動物より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％大きいユニーク免疫グロブリン重鎖ＣＤＲ３配列の頻度を有する。
【００６１】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな非鋳型付加を含むＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における非鋳型付加を含むＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より低い非鋳型付加を含まないＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における非鋳型付加を含まないＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％小さい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも１つのＮ付加を含むＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも１つのＮ付加を含むＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも２つのＮ付加を含むＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも２つのＮ付加を含むＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも３つのＮ付加を含むＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも３つのＮ付加を含むＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも４つのＮ付加を含むＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも４つのＮ付加を含むＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、動物におけるＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、または４０％は、非鋳型付加を含む。
【００６２】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな非鋳型付加を含むＶ−Ｊ  ＴＣＲα鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における非鋳型付加を含むＶ−Ｊ  ＴＣＲα鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ  ＴＣＲα鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より低い非鋳型付加を含まないＶ−Ｊ  ＴＣＲα鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における非鋳型付加を含まないＶ−Ｊ  ＴＣＲα鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ  ＴＣＲα鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％小さい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも１つのＮ付加を含むＶ−Ｊ  ＴＣＲα鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも１つのＮ付加を含むＶ−Ｊ  ＴＣＲα鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ  ＴＣＲα鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも２つのＮ付加を含むＶ−Ｊ  ＴＣＲα鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも２つのＮ付加を含むＶ−Ｊ  ＴＣＲα鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ  ＴＣＲα鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも３つのＮ付加を含むＶ−Ｊ  ＴＣＲα鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも３つのＮ付加を含むＶ−Ｊ  ＴＣＲα鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ  ＴＣＲα鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも４つのＮ付加を含むＶ−Ｊ  ＴＣＲα鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供��れる遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも４つのＮ付加を含むＶ−Ｊ  ＴＣＲα鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ  ＴＣＲα鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、動物におけるＶ−Ｊ  ＴＣＲα鎖接合の少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、または４０％は、非鋳型付加を含む。いくつかの実施形態では、非ヒト動物は、対応する非ヒト動物より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％大きいユニークＴＣＲα  ＣＤＲ３配列の頻度を有する。
【００６３】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな非鋳型付加を含むＶ−Ｄ  ＴＣＲβ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における非鋳型付加を含むＶ−Ｄ  ＴＣＲβ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｄ  ＴＣＲβ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より小さな非鋳型付加を含まないＶ−Ｄ  ＴＣＲβ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における非鋳型付加を含まないＶ−Ｄ  ＴＣＲβ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｄ  ＴＣＲβ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％小さい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも１つのＮ付加を含むＶ−Ｄ  ＴＣＲβ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも１つのＮ付加を含むＶ−Ｄ  ＴＣＲβ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｄ  ＴＣＲβ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも２つのＮ付加を含むＶ−Ｄ  ＴＣＲβ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも２つのＮ付加を含むＶ−Ｄ  ＴＣＲβ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｄ  ＴＣＲβ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも３つのＮ付加を含むＶ−Ｄ  ＴＣＲβ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも３つのＮ付加を含むＶ−Ｄ  ＴＣＲβ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｄ  ＴＣＲβ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも４つのＮ付加を含むＶ−Ｄ  ＴＣＲβ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提��される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも４つのＮ付加を含むＶ−Ｄ  ＴＣＲβ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｄ  ＴＣＲβ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、動物におけるＶ−Ｄ  ＴＣＲβ鎖接合の少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、または４０％は、非鋳型付加を含む。いくつかの実施形態では、非ヒト動物は、対応する非ヒト動物より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％大きいユニークＴＣＲβ  ＣＤＲ３配列の頻度を有する。
【００６４】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな非鋳型付加を含むＤ−Ｊ  ＴＣＲβ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における非鋳型付加を含むＤ−Ｊ  ＴＣＲβ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＤ−Ｊ  ＴＣＲβ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より小さな非鋳型付加を含まないＤ−Ｊ  ＴＣＲβ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における非鋳型付加を含まないＤ−Ｊ  ＴＣＲβ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＤ−Ｊ  ＴＣＲβ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％小さい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも１つのＮ付加を含むＤ−Ｊ  ＴＣＲβ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも１つのＮ付加を含むＤ−Ｊ  ＴＣＲβ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＤ−Ｊ  ＴＣＲβ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも２つのＮ付加を含むＤ−Ｊ  ＴＣＲβ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも２つのＮ付加を含むＤ−Ｊ  ＴＣＲβ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＤ−Ｊ  ＴＣＲβ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも３つのＮ付加を含むＤ−Ｊ  ＴＣＲβ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも３つのＮ付加を含むＤ−Ｊ  ＴＣＲβ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＤ−Ｊ  ＴＣＲβ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも４つのＮ付加を含むＤ−Ｊ  ＴＣＲβ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提��される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも４つのＮ付加を含むＤ−Ｊ  ＴＣＲβ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＤ−Ｊ  ＴＣＲβ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、動物におけるＤ−Ｊ  ＴＣＲβ鎖接合の少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、または４０％は、非鋳型付加を含む。
【００６５】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな非鋳型付加を含むＶ−Ｊ  ＴＣＲγ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における非鋳型付加を含むＶ−Ｊ  ＴＣＲγ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ  ＴＣＲγ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より低い非鋳型付加を含まないＶ−Ｊ  ＴＣＲγ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における非鋳型付加を含まないＶ−Ｊ  ＴＣＲγ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ  ＴＣＲγ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％小さい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも１つのＮ付加を含むＶ−Ｊ  ＴＣＲγ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも１つのＮ付加を含むＶ−Ｊ  ＴＣＲγ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ  ＴＣＲγ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも２つのＮ付加を含むＶ−Ｊ  ＴＣＲγ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも２つのＮ付加を含むＶ−Ｊ  ＴＣＲγ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ  ＴＣＲγ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも３つのＮ付加を含むＶ−Ｊ  ＴＣＲγ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも３つのＮ付加を含むＶ−Ｊ  ＴＣＲγ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ  ＴＣＲγ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも４つのＮ付加を含むＶ−Ｊ  ＴＣＲγ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供��れる遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも４つのＮ付加を含むＶ−Ｊ  ＴＣＲγ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ  ＴＣＲγ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、動物におけるＶ−Ｊ  ＴＣＲγ鎖接合の少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、または４０％は、非鋳型付加を含む。いくつかの実施形態では、非ヒト動物は、対応する非ヒト動物より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％大きいユニークＴＣＲγ  ＣＤＲ３配列の頻度を有する。
【００６６】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな非鋳型付加を含むＶ−Ｄ  ＴＣＲδ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における非鋳型付加を含むＶ−Ｄ  ＴＣＲδ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｄ  ＴＣＲδ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より低い非鋳型付加を含まないＶ−Ｄ  ＴＣＲδ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における非鋳型付加を含まないＶ−Ｄ  ＴＣＲδ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｄ  ＴＣＲδ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％小さい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも１つのＮ付加を含むＶ−Ｄ  ＴＣＲδ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも１つのＮ付加を含むＶ−Ｄ  ＴＣＲδ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｄ  ＴＣＲδ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも２つのＮ付加を含むＶ−Ｄ  ＴＣＲδ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも２つのＮ付加を含むＶ−Ｄ  ＴＣＲδ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｄ  ＴＣＲδ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも３つのＮ付加を含むＶ−Ｄ  ＴＣＲδ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも３つのＮ付加を含むＶ−Ｄ  ＴＣＲδ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｄ  ＴＣＲδ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも４つのＮ付加を含むＶ−Ｄ  ＴＣＲδ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供��れる遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも４つのＮ付加を含むＶ−Ｄ  ＴＣＲδ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｄ  ＴＣＲδ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、動物におけるＶ−Ｄ  ＴＣＲδ鎖接合の少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、または４０％は、非鋳型付加を含む。いくつかの実施形態では、非ヒト動物は、対応する非ヒト動物より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％大きいユニークＴＣＲδ  ＣＤＲ３配列の頻度を有する。
【００６７】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな非鋳型付加を含むＤ−Ｊ  ＴＣＲδ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における非鋳型付加を含むＤ−Ｊ  ＴＣＲδ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＤ−Ｊ  ＴＣＲδ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より低い非鋳型付加を含まないＤ−Ｊ  ＴＣＲδ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における非鋳型付加を含まないＤ−Ｊ  ＴＣＲδ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＤ−Ｊ  ＴＣＲδ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％小さい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも１つのＮ付加を含むＤ−Ｊ  ＴＣＲδ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも１つのＮ付加を含むＤ−Ｊ  ＴＣＲδ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＤ−Ｊ  ＴＣＲδ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも２つのＮ付加を含むＤ−Ｊ  ＴＣＲδ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも２つのＮ付加を含むＤ−Ｊ  ＴＣＲδ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＤ−Ｊ  ＴＣＲδ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも３つのＮ付加を含むＤ−Ｊ  ＴＣＲδ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも３つのＮ付加を含むＤ−Ｊ  ＴＣＲδ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＤ−Ｊ  ＴＣＲδ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも４つのＮ付加を含むＤ−Ｊ  ＴＣＲδ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供��れる遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも４つのＮ付加を含むＤ−Ｊ  ＴＣＲδ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＤ−Ｊ  ＴＣＲδ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、動物におけるＤ−Ｊ  ＴＣＲδ鎖接合の少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、または４０％は、非鋳型付加を含む。
【００６８】
いくつかの実施形態では、非ヒト生物における内因性ＴｄＴ遺伝子座は、インタクトである。いくつかの実施形態では、内因性ＴｄＴ遺伝子座は、不活性化される。例えば、いくつかの実施形態では、内因性ＴｄＴ遺伝子座は、非ヒト生物が内因性ＴｄＴを発現しないように、完全または部分的に欠失される。
【００６９】
ヒト可変ドメイン抗体および外因性ＴｄＴを発現する非ヒト動物
特定の実施形態では、本明細書に記載の外因性ＴｄＴを含む遺伝子改変非ヒト動物および非ヒト動物ＥＳ細胞は、それらの生殖系列および／またはゲノム中に、未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントを含む免疫グロブリン可変領域と、免疫グロブリン定常領域遺伝子を含み、未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントが免疫グロブリン定常領域遺伝子に作動可能に連結される免疫グロブリン定常領域と、を含有する、免疫グロブリン遺伝子座（外因性または内因性）も含む。いくつかの実施形態では、非ヒト動物および非ヒトＥＳ細胞は、それらの生殖系列および／またはゲノム中に、複数のこのような免疫グロブリン遺伝子座を含む。例えば、いくつかの実施形態では、遺伝子改変非ヒト動物および非ヒト動物ＥＳ細胞は、それらの生殖系列および／またはゲノム中に、未再編成ヒト重鎖可変領域遺伝子セグメントを含む少なくとも１つの免疫グロブリン遺伝子座および未再編成ヒト軽鎖可変領域遺伝子セグメント（例えば、κ鎖遺伝子セグメントおよび／またはλ鎖遺伝子セグメント）を含む少なくとも１つの免疫グロブリン遺伝子座を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子改変非ヒト動物および非ヒト動物ＥＳ細胞は、それらの生殖系列および／またはゲノム中に、未再編成ヒト重鎖可変領域遺伝子セグメントを含む少なくとも１つの免疫グロブリン遺伝子座、未再編成ヒトκ鎖可変領域遺伝子セグメントを含む少なくとも１つの免疫グロブリン遺伝子座、および未再編成ヒトλ鎖可変領域遺伝子セグメントを含む少なくとも１つの免疫グロブリン遺伝子座を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子改変非ヒト動物、例えば、遺伝子改変マウスまたはラットは、それらの生殖系列および／またはゲノム中に、マウスがヒト、ヒト化、部分ヒト、逆キメラ（ヒト可変領域および非ヒト定常領域）抗体を作製するように、遺伝子改変免疫グロブリン遺伝子座（遺伝子改変された再編成または未再編成免疫グロブリン遺伝子座）を含む。
【００７０】
ヒト可変領域遺伝子セグメントを含む免疫グロブリン遺伝子座は、当該技術分野で知られており、例えば、米国特許第５，６３３，４２５号、同第５，７７０，４２９号、同第５，８１４，３１８号、同第６，０７５，１８１号、同第６，１１４，５９８号、同第６，１５０，５８４号、同第６，９９８，５１４号、同第７，７９５，４９４号、同第７，９１０，７９８号、同第８，２３２，４４９号、同第８，５０２，０１８号、同第８，６９７，９４０号、同第８，７０３，４８５号、同第８，７５４，２８７号、同第８，７９１，３２３号、同第８，９０７，１５７号、同第９，０３５，１２８号、同第９，１４５，５８８号、および同第９，２０６，２６３号で見ることができ、これらの各々はその全体が本明細書に参照により組み込まれ、また米国特許出願公開第２００８／００９８４９０号、同第２０１０／０１４６６４７号、同第２０１１／０１９５４５４号、同第２０１２／０１６７２３７号、同第２０１３／０１４５４８４号、同第２０１３／０１６７２５６号、同第２０１３／０２１９５３５号、同第２０１３／０３２６６４７号、同第２０１３／００９６２８７号、同第２０１４／０１３２７５号、同第２０１４／０９３９０８号、および同第２０１５／０１１３６６８号で見ることができ、これらの各々はその全体が本明細書に参照により組み込まれ、ならびにＰＣＴ特許出願公開第ＷＯ２００７／１１７４１０号、同第ＷＯ２００８／１５１０８１号、同第ＷＯ２００９／１５７７７１号、同第ＷＯ２０１０／０３９９００号、同第ＷＯ２０１１／００４１９２号、同第ＷＯ２０１１／１２３７０８号、および同第ＷＯ２０１４／０９３９０８号で見ることができ、これらの各々はその全体が本明細書に参照により組み込まれる。
【００７１】
いくつかの実施形態では、ヒト未再編成免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントは、重鎖遺伝子セグメントであり、免疫グロブリン定常領域遺伝子は、重鎖定常領域遺伝子である。いくつかの実施形態では、ヒト未再編成免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントは、軽鎖、例えば、κ鎖遺伝子セグメントであり、免疫グロブリン定常領域遺伝子は、重鎖定常領域遺伝子である。
【００７２】
いくつかの実施形態では、ヒト未再編成免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントは、重鎖遺伝子セグメントであり、免疫グロブリン定常領域遺伝子は、κ鎖定常領域遺伝子である。いくつかの実施形態では、ヒト未再編成免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントは、κ鎖遺伝子セグメントであり、免疫グロブリン定常領域遺伝子は、κ鎖定常領域遺伝子である。いくつかの実施形態では、ヒト未再編成免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントは、λ鎖遺伝子セグメントであり、免疫グロブリン定常領域遺伝子は、κ鎖定常領域遺伝子である。いくつかの実施形態では、ヒト未再編成免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントは、λ鎖遺伝子セグメントであり、免疫グロブリン定常領域遺伝子は、λ鎖定常領域遺伝子である。
【００７３】
特定の実施形態では、免疫グロブリン可変領域は、未再編成ヒトＩｇ重鎖可変領域遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態では、未再編成ヒトＩｇ可変領域遺伝子セグメントは、複数のヒトＶＨセグメント、１つ以上のヒトＤＨセグメント、および１つ以上のヒトＪＨセグメントを含む。いくつかの実施形態では、未再編成ヒトＩｇ可変領域遺伝子セグメントは、少なくとも３つのＶＨ遺伝子セグメント、少なくとも１８個のＶＨ遺伝子セグメント、少なくとも２０個のＶＨ遺伝子セグメント、少なくとも３０個のＶＨ遺伝子セグメント、少なくとも４０個のＶＨ遺伝子セグメント、少なくとも５０個のＶＨ遺伝子セグメント、少なくとも６０個のＶＨ遺伝子セグメント、少なくとも７０個のＶＨ遺伝子セグメント、または少なくとも８０個のＶＨ遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態では、未再編成ヒトＩｇ遺伝子セグメントは、ヒトＤＨ遺伝子セグメントのすべてを含む。いくつかの実施形態では、未再編成ヒトＩｇ遺伝子セグメントは、ヒトＪＨ遺伝子セグメントのすべてを含む。Ｉｇ重鎖遺伝子セグメントを含む例示的な可変領域は、例えば、Ｍａｃｄｏｎａｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １１１：５１４７−５２および補足情報に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、（例えば、本明細書に参照により組み込まれる、米国特許出願公開第２０１３／００９６２８７号に記載されるように）単一の多型ヒトＶＨ遺伝子セグメント、複数のＤＨ遺伝子セグメント、および複数のＪＨ遺伝子セグメントによって特徴付けられる制限免疫グロブリン重鎖遺伝子座を有する。いくつかの実施形態では、ＶＨ遺伝子セグメントは、ＶＨ１−２またはＶＨ１−６９である。
【００７４】
様々な実施形態では、本明細書に記載の免疫グロブリン遺伝子座修飾は、非ヒト動物の生殖力に影響しない。いくつかの実施形態では、重鎖遺伝子座は、内因性Ａｄａｍ６ａ遺伝子、Ａｄａｍ６ｂ遺伝子、またはその両方を含み、遺伝子改変は、内因性Ａｄａｍ６ａ遺伝子、Ａｄａｍ６ｂ遺伝子、またはその両方の発現および／または機能に影響しない。いくつかの実施形態では、遺伝子改変非ヒト動物のゲノムは、異所的に位置するＡｄａｍ６ａ遺伝子、Ａｄａｍ６ｂ遺伝子、またはその両方を含む。外因性Ａｄａｍ６ａおよび／またはＡｄａｍ６ｂを発現する例示的な非ヒト動物は、米国特許第８，６４２，８３５号および同第８，６９７，９４０号に記載されており、これらの各々はその全体が本明細書に参照により組み込まれる。
【００７５】
いくつかの実施形態では、ヒト免疫グロブリン重鎖可変領域遺伝子セグメントは、Ｂ細胞発生中に再編成され、非ヒト生物のＢ細胞において再編成されたヒト重鎖可変領域遺伝子を生成する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな非鋳型付加を含むＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における非鋳型付加を含むＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より低い非鋳型付加を含まないＶ−Ｄ免疫グロブリン重鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における非鋳型付加を含まないＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％小さい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも１つのＮ付加を含むＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも１つのＮ付加を含むＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも２つのＮ付加を含むＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも２つのＮ付加を含むＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも３つのＮ付加を含むＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも３つのＮ付加を含むＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも４つのＮ付加を含むＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも４つのＮ付加を含むＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、動物におけるＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、または４０％は、非鋳型付加を含む。いくつかの実施形態では、非ヒト動物は、対応する非ヒト動物より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％大きいユニーク免疫グロブリン重鎖ＣＤＲ３配列の頻度を有する。
【００７６】
特定の実施形態では、免疫グロブリン可変領域は、未再編成ヒトＩｇκ可変領域遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態では、未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントは、複数のヒトＶκセグメントおよび１つ以上のヒトＪκセグメントを含む。いくつかの実施形態では、未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントは、ヒトＪκセグメントのすべてを含む。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントは、４つの機能的ＶκセグメントおよびすべてのヒトＪκセグメントを含む。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントは、１６個の機能的ＶκセグメントおよびすべてのヒトＪκセグメント（例えば、すべての機能的ヒトＶκセグメントおよびＪκセグメント）を含む。いくつかの実施形態では、未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントは、すべてのヒトＶκセグメントおよびすべてのヒトＪκセグメントを含む。Ｉｇκ遺伝子セグメントを含む例示的な可変領域は、例えば、Ｍａｃｄｏｎａｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １１１：５１４７−５２および補足情報に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、２つ以下のヒトＶＬ遺伝子セグメントおよび複数のＪＬ遺伝子セグメントによって特徴付けられる制限免疫グロブリン軽鎖遺伝子座を有する（例えば、本明細書に参照により組み込まれる、米国特許出願公開第２０１３／０１９８８８０号に記載の二重軽鎖マウス、またはＤＬＣ）。いくつかの実施形態では、ＶＬ遺伝子セグメントは、Ｖκ遺伝子セグメントである。いくつかの実施形態では、ＶＬ遺伝子セグメントは、Ｖλ遺伝子セグメントである。いくつかの実施形態では、Ｖκ遺伝子セグメントは、ＩＧＫＶ３−２０およびＩＧＫＶ１−３９である。
【００７７】
いくつかの実施形態では、ヒト免疫グロブリンκ可変領域遺伝子セグメントは、Ｂ細胞発生中に再編成され、非ヒト生物のＢ細胞において再編成されたヒトκ可変領域遺伝子を生成する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな非鋳型付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における非鋳型付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より低い非鋳型付加を含まないＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における非鋳型付加を含まないＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％小さい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも１つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも１つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも２つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも２つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも３つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも３つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３��％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも４つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも４つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、動物におけるＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、または４０％は、非鋳型付加を含む。いくつかの実施形態では、非ヒト動物は、対応する非ヒト動物より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％大きいユニーク免疫グロブリンκ鎖ＣＤＲ３配列の頻度を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、１０，０００個の免疫グロブリンκ鎖ＣＤＲ３配列当たり少なくとも９００、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、１５００、または１７００個のユニーク免疫グロブリンκ鎖ＣＤＲ３配列を有する。
【００７８】
特定の実施形態では、免疫グロブリン可変領域は、未再編成ヒトＩｇλ可変領域遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態では、未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントは、複数のヒトＶλセグメントおよび１つ以上のヒトＪλセグメントを含む。いくつかの実施形態では、未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントは、すべてのヒトＶλセグメントを含む。いくつかの実施形態では、未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントは、ヒトＪλセグメントのすべてを含む。Ｉｇλ遺伝子セグメントを含む例示的な可変領域は、例えば、米国特許出願公開第２０１２／００７３００４号および同第２００２／００８８０１６号に提供されており、これらの各々は、参照により本明細書に組み込まれる。
【００７９】
いくつかの実施形態では、ヒト免疫グロブリンλ可変領域遺伝子セグメントは、Ｂ細胞発生中に再編成され、非ヒト生物のＢ細胞において再編成されたヒトλ可変領域遺伝子を生成する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな非鋳型付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における非鋳型付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より低い非鋳型付加を含まないＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における非鋳型付加を含まないＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％小さい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも１つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも１つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも２つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも２つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも３つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも３つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３��％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも４つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも４つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、動物におけるＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、または４０％は、非鋳型付加を含む。いくつかの実施形態では、非ヒト動物は、対応する非ヒト動物より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％大きいユニーク免疫グロブリンλ鎖ＣＤＲ３配列の頻度を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、１０，０００個の免疫グロブリンλ鎖ＣＤＲ３配列当たり少なくとも１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、または３００個のユニーク免疫グロブリンλ鎖ＣＤＲ３配列を有する。
【００８０】
いくつかの実施形態では、未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントを含む免疫グロブリン可変領域は、ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子間配列も含む。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン可変領域は、非ヒト（例えば、齧歯類、ラット、マウス）Ｉｇ可変領域遺伝子間配列を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子間配列は、内因性種由来である。
【００８１】
いくつかの実施形態では、非ヒト生物は、その生殖系列および／またはゲノム中に、再編成された重鎖可変領域（ユニバーサル重鎖可変領域）を含む免疫グロブリン遺伝子座を含む。いくつかの実施形態では、再編成Ｉｇ重鎖可変領域遺伝子は、ヒト再編成Ｉｇ重鎖可変領域遺伝子である。例示的な再編成Ｉｇ重鎖可変領域は、米国特許出願公開第２０１４／０２４５４６８号に提供されており、これは本明細書に参照により組み込まれる。いくつかの実施形態では、ユニバーサル重鎖可変領域を含む非ヒト生物は、二重特異性抗体を産生するのに使用される。
【００８２】
いくつかの実施形態では、非ヒト生物は、その生殖系列および／またはゲノム中に、再編成された軽鎖可変領域（ユニバーサル軽鎖可変領域）を含む免疫グロブリン遺伝子座を含む。いくつかの実施形態では、再編成Ｉｇ軽鎖可変領域遺伝子は、ヒト再編成Ｉｇ軽鎖可変領域遺伝子である。例示的な再編成Ｉｇ軽鎖可変領域は、例えば、米国特許出願公開第２０１１／０１９５４５４号、同第２０１２／００２１４０９号、同第２０１２／０１９２３００号、同第２０１３／００４５４９２号、同第２０１３／０１８５８２１号、同第２０１３／０３０２８３６号、同第２０１５／０３１３１９３号、同第２０１５／００５９００９号、および同第２０１３／０１９８８７９号に提供されており、これらは本明細書に参照により組み込まれる。いくつかの実施形態では、ユニバーサル軽鎖可変領域を含む非ヒト生物（「ユニバーサル軽鎖」生物）は、二重特異性抗体を産生するのに使用される。
【００８３】
いくつかの実施形態では、非ヒト生物は、その生殖系列および／またはゲノム中に、限定されたレパートリーの軽鎖可変遺伝子セグメント（例えば、２つの軽鎖可変遺伝子セグメントを含む二重軽鎖可変領域）を含む軽鎖免疫グロブリン遺伝子座を含む。いくつかの実施形態では、限定されたレパートリーの軽鎖遺伝子セグメントにおける軽鎖可変遺伝子セグメントは、ヒト軽鎖遺伝子セグメントである。例示的な二重軽鎖可変領域は、米国特許出願公開第２０１３／０１９８８８０号に提供されており、これは本明細書に参照により組み込まれる。いくつかの実施形態では、二重軽鎖可変領域を含む非ヒト生物は、二重特異性抗体を産生するのに使用される。
【００８４】
さらに他の実施形態では、非ヒト生物は、その生殖系列および／またはゲノム中に、そのような非ヒト生物において産生される抗体にｐＨ依存性結合特性を導入するように設計されたヒスチジンコドンの挿入および／または置換を含む軽鎖および／または重鎖免疫グロブリン遺伝子座を含むことができる。このような実施形態のいくつかでは、ヒスチジンコドンは、ＣＤＲ３をコードする核酸配列において挿入および／または置換される。様々なこのような軽および／または重免疫グロブリン遺伝子座は、本明細書に参照により組み込まれる、米国特許第９，３０１，５１０号、同第９，３３４，３３４号、米国特許出願公開第２０１３／０２４７２３６号、同第２０１４／００１３４５６号に提供されている。
【００８５】
いくつかの実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、重鎖定常領域遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、重鎖定常領域遺伝子は、ヒト重鎖定常領域遺伝子である。いくつかの実施形態では、重鎖定常領域遺伝子は、内因性種由来である。いくつかの実施形態では、重鎖定常領域遺伝子は、マウス定常領域遺伝子またはラット定常領域遺伝子である。いくつかの実施形態では、定常領域遺伝子は、ヒト配列と非ヒト配列との混合物である。例えば、いくつかの実施形態では、定常領域遺伝子は、ヒトＣＨ１領域ならびに非ヒト（例えば、内因性種由来、マウス、ラット）ＣＨ２および／またはＣＨ３領域をコードする。いくつかの実施形態では、重鎖定常領域遺伝子は、Ｃμ、Ｃδ、Ｃγ（Ｃγ１、Ｃγ２、Ｃγ３、Ｃγ４）、Ｃα、またはＣε定常領域遺伝子である。いくつかの実施形態では、定常領域遺伝子は、内因性定常領域遺伝子である。いくつかの実施形態では、定常領域遺伝子は、非ヒト動物が重鎖のみの抗体を発現するように、突然変異したＣＨ１領域をコードする（例えば、本明細書に参照により組み込まれる、米国特許第８，７５４，２８７号、米国特許出願公開第２０１５／０２８９４８９号を参照のこと）。いくつかの実施形態では、例えば、目標が（例えば、ユニバーサルまたは二重軽鎖生物において）二重特異性抗体を作製する重鎖を生成することである場合、重鎖のＦｃドメインは、重鎖ヘテロ二量体形成を促進および／または重鎖ホモ二量体形成を阻害するための修飾を含む。このような修飾は、例えば、米国特許第５，７３１，１６８号、同第５，８０７，７０６号、同第５，８２１，３３３号、同第７，６４２，２２８号、および同第８，６７９，７８５号、ならびに米国特許出願公開第２０１３／０１９５８４９号において提供されており、これらの各々は、参照により本明細書に組み込まれる。
【００８６】
いくつかの実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、軽鎖定常領域遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖定常領域遺伝子は、κ定常領域遺伝子である。いくつかの実施形態では、軽鎖定常領域遺伝子は、λ定常領域遺伝子である。いくつかの実施形態では、軽鎖定常領域遺伝子は、内因性種由来である。いくつかの実施形態では、軽鎖定常領域遺伝子は、マウス定常領域遺伝子またはラット定常領域遺伝子である。いくつかの実施形態では、軽鎖定常領域遺伝子は、ヒト配列と非ヒト配列との混合物である。
【００８７】
いくつかの実施形態では、ヒト可変領域遺伝子セグメントを含む免疫グロブリン可変領域および可変領域遺伝子セグメントが作動可能に連結される免疫グロブリン定常領域遺伝子は、内因性免疫グロブリン遺伝子座に位置する。いくつかの実施形態では、内因性免疫グロブリン遺伝子座は、内因性重鎖遺伝子座である。いくつかの実施形態では、内因性免疫グロブリン遺伝子座は、内因性κ遺伝子座である。いくつかの実施形態では、内因性免疫グロブリン遺伝子座は、内因性λ遺伝子座である。いくつかの実施形態では、ヒト可変領域遺伝子セグメントが作動可能に連結される定常領域遺伝子は、内因性定常領域遺伝子である。
【００８８】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物のゲノム中の１つ以上の内因性免疫グロブリン遺伝子座または１つ以上の内因性遺伝子座の一部分（例えば、可変領域および／または定常領域）が不活性化される。内因性免疫グロブリン可変領域遺伝子座およびその一部分は、これらに限定されないが、生物のゲノムからの遺伝子座またはその一部分の欠失、遺伝子座またはその一部分の異なる核酸配列での置換、非ヒト生物のゲノムにおける別の位置への遺伝子座の一部分の逆位および／または遺伝子座の一部分の転位を含む、当該技術分野において知られている任意の方法を用いて不活性化することができる。いくつかの実施形態では、遺伝子座の不活性化は、部分的な不活性化に過ぎない。いくつかの実施形態では、遺伝子座の可変領域は不活性化されるが、定常領域は（例えば、非内因性可変領域遺伝子セグメントに作動可能に連結されているため）機能的なままである。
【００８９】
いくつかの実施形態では、遺伝子改変非ヒト動物は、不活性化された内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子座を含む。いくつかの実施形態では、内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子座またはその一部分は、内因性重鎖遺伝子座の内因性可変領域の少なくとも一部の欠失、置換、転位、および／または逆位によって不活性化される。いくつかの実施形態では、欠失、置換、転位、および／または逆位される内因性重鎖遺伝子座の可変領域の少なくとも一部は、可変領域のＪセグメントを含む。いくつかの実施形態では、内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子座またはその一部分は、内因性重鎖遺伝子座の内因性定常領域の少なくとも一部の欠失、置換、転位、および／または逆位によって不活性化される。いくつかの実施形態では、欠失、置換、転位、および／または逆位される内因性重鎖遺伝子座の定常領域の少なくとも一部は、内因性定常領域のＣμ遺伝子を含む。
【００９０】
いくつかの実施形態では、遺伝子改変非ヒト動物は、不活性化された内因性免疫グロブリンκ鎖遺伝子座を含む。いくつかの実施形態では、内因性免疫グロブリンκ鎖遺伝子座またはその一部分は、内因性κ鎖遺伝子座の内因性可変領域の少なくとも一部の欠失、置換、転位、および／または逆位によって不活性化される。いくつかの実施形態では、欠失、置換、転位、および／または逆位される内因性κ鎖遺伝子座の可変領域の少なくとも一部は、可変領域のＪセグメントを含む。いくつかの実施形態では、内因性免疫グロブリンκ鎖遺伝子座またはその一部分は、内因性κ鎖遺伝子座の内因性定常領域の少なくとも一部の欠失、置換、転位、および／または逆位によって不活性化される。いくつかの実施形態では、欠失、置換、転位、および／または逆位される内因性κ鎖遺伝子座の定常領域の少なくとも一部は、内因性定常領域のＣκ遺伝子を含む。
【００９１】
いくつかの実施形態では、遺伝子改変非ヒト動物は、不活性化された内因性免疫グロブリンλ鎖遺伝子座を含む。いくつかの実施形態では、内因性免疫グロブリンλ鎖遺伝子座またはその一部分は、内因性λ鎖遺伝子座の内因性可変領域の少なくとも一部の欠失、置換、転位、および／または逆位によって不活性化される。いくつかの実施形態では、内因性λ鎖遺伝子座における少なくとも１つのＶ−Ｊ−Ｃ遺伝子クラスターの少なくとも一部は、欠失、置換、転位、および／または逆位される。いくつかの実施形態では、内因性免疫グロブリンλ鎖遺伝子座またはその一部分は、内因性λ鎖遺伝子座の内因性定常領域の少なくとも一部の欠失、置換、転位、および／または逆位によって不活性化される。いくつかの実施形態では、欠失、置換、転位、および／または逆位される内因性λ鎖遺伝子座の定常領域の少なくとも一部は、内因性定常領域のＣλ遺伝子を含む。
【００９２】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物は、ヒト可変ドメイン（例えば、本明細書に記載の未再編成ヒト可変領域遺伝子セグメントに由来するヒト可変ドメイン）を有する抗体を発現する。いくつかの実施形態では、ヒト可変ドメインは、ヒト重鎖可変ドメインである。いくつかの実施形態では、抗体は、重鎖のみの抗体である。いくつかの実施形態では、ヒト可変ドメインは、ヒト軽鎖可変ドメインである。いくつかの実施形態では、非ヒト動物によって産生される抗体は、ヒト重鎖可変ドメインおよびヒト軽鎖可変ドメインの両方を有する。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト重鎖定常ドメインを有する。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト軽鎖定常ドメインを有する。いくつかの実施形態では、重鎖および／または軽鎖定常ドメインは、非ヒト由来である。例えば、いくつかの実施形態では、重鎖定常ドメインは、内因性種由来である。いくつかの実施形態では、重鎖定常ドメインは、マウスまたはラット由来である。いくつかの実施形態では、軽鎖定常ドメインは、内因性種由来である。いくつかの実施形態では、軽鎖定常ドメインは、ラットまたはマウス由来である。
【００９３】
ヒト可変ドメインＴ細胞受容体および外因性ＴｄＴを発現する非ヒト動物
特定の実施形態では、本明細書に記載の外因性ＴｄＴを含む遺伝子改変非ヒト動物および非ヒト動物ＥＳ細胞は、それらの生殖系列および／またはゲノム中に、未再編成ヒトＴＣＲ可変領域遺伝子セグメントを含むＴＣＲ可変領域と、ＴＣＲ定常領域遺伝子を含み、未再編成ヒトＴＣＲ可変領域遺伝子セグメントがＴＣＲ定常領域遺伝子に作動可能に連結されるＴＣＲ定常領域と、を含有する、ＴＣＲ遺伝子座（外因性または内因性）も含む。いくつかの実施形態では、様々な遺伝子改変非ヒト動物、例えば、遺伝子改変マウスは、それらの生殖系列および／またはゲノムにおいて、マウスがヒト、ヒト化、部分ヒト、逆キメラ（ヒト可変領域および非ヒト定常領域）Ｔ細胞受容体を発現するように、遺伝子改変Ｔ細胞受容体遺伝子座（遺伝子改変ＴＣＲα、β、γ、および／またはδ遺伝子座）を含む。一実施形態では、例示的な非ヒト動物は、参照により本明細書に組み入れられる、米国特許第９，１１３，６１６号および国際特許出願公開第ＷＯ２０１６／１６４４９２号において提供される。
【００９４】
いくつかの実施形態では、ＴＣＲ定常領域遺伝子は、非ヒトＴＣＲ定常領域遺伝子である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ定常領域遺伝子は、ラット定常領域遺伝子またはマウス定常領域遺伝子などの齧歯類定常領域遺伝子である。いくつかの実施形態では、定常領域遺伝子は、内因性種由来である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ定常領域遺伝子は、ヒト定常領域遺伝子である。
【００９５】
いくつかの実施形態では、非ヒト動物および非ヒトＥＳ細胞は、それらの生殖系列および／またはゲノム中に、複数のこのようなＴＣＲ遺伝子座を含む。例えば、いくつかの実施形態では、遺伝子改変非ヒト動物および非ヒト動物ＥＳ細胞は、それらの生殖系列および／またはゲノム中に、未再編成ＴＣＲα可変領域遺伝子セグメントを含む少なくとも１つのＴＣＲ遺伝子座および未再編成ＴＣＲβ可変領域遺伝子セグメントを含む少なくとも１つのＴＣＲ遺伝子座を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子改変非ヒト動物および非ヒト動物ＥＳ細胞は、それらの生殖系列および／またはゲノム中に、未再編成ヒトＴＣＲγ可変領域遺伝子セグメントを含む少なくとも１つのＴＣＲ遺伝子座および未再編成ヒトＴＣＲδ可変領域遺伝子セグメントを含む少なくとも１つのＴＣＲ遺伝子座を含む。
【００９６】
いくつかの実施形態では、ヒト未再編成ＴＣＲ可変領域遺伝子セグメントは、ＴＣＲα遺伝子セグメントであり、ＴＣＲ定常領域遺伝子は、ＴＣＲα定常領域遺伝子である。いくつかの実施形態では、ヒト未再編成ＴＣＲ可変領域遺伝子セグメントは、ＴＣＲβ鎖遺伝子セグメントであり、ＴＣＲ定常領域遺伝子は、ＴＣＲβ定常領域遺伝子である。いくつかの実施形態では、ヒト未再編成ＴＣＲ可変領域遺伝子セグメントは、ＴＣＲγ鎖遺伝子セグメントであり、ＴＣＲ定常領域遺伝子は、ＴＣＲγ定常領域遺伝子である。いくつかの実施形態では、ヒト未再編成ＴＣＲ可変領域遺伝子セグメントは、ＴＣＲδ鎖遺伝子セグメントであり、ＴＣＲ定常領域遺伝子は、ＴＣＲδ定常領域遺伝子である。ヒトＴＣＲ遺伝子セグメントを含む例示的な可変領域は、例えば、米国特許第９，１１３，６１６号およびＬｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １６：１０２９−１０３５（２０１０）において提供されており、これらの各々は、参照により本明細書に組み込まれる。
【００９７】
いくつかの実施形態では、ＴＣＲ可変領域は、未再編成ヒトＴＣＲβ可変領域遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＴＣＲβ可変領域遺伝子セグメントは、Ｔ細胞発生中に再編成され、非ヒト生物のＴ細胞において再編成されたヒトＴＣＲβ可変領域遺伝子を生成する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな非鋳型付加を含むＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ  ＴＣＲβ接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における非鋳型付加を含むＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ  ＴＣＲβ接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ  ＴＣＲβ接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より小さな非鋳型付加を含まないＶ−Ｄ  ＴＣＲβ接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における非鋳型付加を含まないＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ  ＴＣＲβ接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ  ＴＣＲβ接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％小さい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも１つのＮ付加を含むＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ  ＴＣＲβ接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも１つのＮ付加を含むＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ  ＴＣＲβ接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ  ＴＣＲβ接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも２つのＮ付加を含むＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ  ＴＣＲβ接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも２つのＮ付加を含むＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ  ＴＣＲβ接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ  ＴＣＲβ接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも３つのＮ付加を含むＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ  ＴＣＲβ接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物におけ��少なくとも３つのＮ付加を含むＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ  ＴＣＲβ接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ  ＴＣＲβ接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも４つのＮ付加を含むＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ  ＴＣＲβ接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも４つのＮ付加を含むＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ  ＴＣＲβ接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ  ＴＣＲβ接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、動物におけるＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ  ＴＣＲβ接合の少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、または４０％は、非鋳型付加を含む。いくつかの実施形態では、非ヒト動物は、対応する非ヒト動物より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％大きいユニークＴＣＲβ  ＣＤＲ３配列の頻度を有する。
【００９８】
いくつかの実施形態では、ＴＣＲ可変領域は、未再編成ヒトＴＣＲα可変領域遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＴＣＲα可変領域遺伝子セグメントは、Ｔ細胞発生中に再編成され、非ヒト生物のＴ細胞において再編成されたヒトＴＣＲα可変領域遺伝子を生成する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな非鋳型付加を含むＶ−Ｊ  ＴＣＲα接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における非鋳型付加を含むＶ−Ｊ  ＴＣＲα接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ  ＴＣＲα接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より低い非鋳型付加を含まないＶ−Ｄ  ＴＣＲα接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における非鋳型付加を含まないＶ−Ｊ  ＴＣＲα接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ  ＴＣＲα接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％小さい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも１つのＮ付加を含むＶ−Ｊ  ＴＣＲα接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも１つのＮ付加を含むＶ−Ｊ  ＴＣＲα接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ  ＴＣＲα接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも２つのＮ付加を含むＶ−Ｊ  ＴＣＲα接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも２つのＮ付加を含むＶ−Ｊ  ＴＣＲα接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ  ＴＣＲα接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも３つのＮ付加を含むＶ−Ｊ  ＴＣＲα接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも３つのＮ付加を含むＶ−Ｊ  ＴＣＲα接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ  ＴＣＲα接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも４つのＮ付加を含むＶ−Ｊ  ＴＣＲα接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも４つのＮ付加を含むＶ−Ｊ  ＴＣＲα接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ  ＴＣＲα接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、動物におけるＶ−Ｊ  ＴＣＲα接合の少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、または４０％は、非鋳型付加を含む。いくつかの実施形態では、非ヒト動物は、対応する非ヒト動物より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％大きいユニークＴＣＲα  ＣＤＲ３配列の頻度を有する。
【００９９】
いくつかの実施形態では、ＴＣＲ可変領域は、未再編成ヒトＴＣＲδ可変領域遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＴＣＲδ可変領域遺伝子セグメントは、Ｔ細胞発生中に再編成され、非ヒト生物のＴ細胞において再編成されたヒトＴＣＲδ可変領域遺伝子を生成する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな非鋳型付加を含むＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ  ＴＣＲδ接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における非鋳型付加を含むＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ  ＴＣＲδ接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ  ＴＣＲδ接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より低い非鋳型付加を含まないＶ−Ｄ  ＴＣＲδ接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における非鋳型付加を含まないＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ  ＴＣＲδ接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ  ＴＣＲδ接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％小さい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも１つのＮ付加を含むＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ  ＴＣＲδ接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも１つのＮ付加を含むＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ  ＴＣＲδ接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ  ＴＣＲδ接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも２つのＮ付加を含むＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ  ＴＣＲδ接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも２つのＮ付加を含むＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ  ＴＣＲδ接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ  ＴＣＲδ接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも３つのＮ付加を含むＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ  ＴＣＲδ接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における��なくとも３つのＮ付加を含むＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ  ＴＣＲδ接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ  ＴＣＲδ接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも４つのＮ付加を含むＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ  ＴＣＲδ接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも４つのＮ付加を含むＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ  ＴＣＲδ接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ  ＴＣＲδ接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、動物におけるＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ  ＴＣＲδ接合の少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、または４０％は、非鋳型付加を含む。いくつかの実施形態では、非ヒト動物は、対応する非ヒト動物より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％大きいユニークＴＣＲδ  ＣＤＲ３配列の頻度を有する。
【０１００】
いくつかの実施形態では、ＴＣＲ可変領域は、未再編成ヒトＴＣＲγ可変領域遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＴＣＲγ可変領域遺伝子セグメントは、Ｔ細胞発生中に再編成され、非ヒト生物のＴ細胞において再編成されたヒトＴＣＲγ可変領域遺伝子を生成する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな非鋳型付加を含むＶ−Ｊ  ＴＣＲγ接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における非鋳型付加を含むＶ−Ｊ  ＴＣＲγ接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ  ＴＣＲγ接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より低い非鋳型付加を含まないＶ−Ｄ  ＴＣＲγ接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における非鋳型付加を含まないＶ−Ｊ  ＴＣＲγ接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ  ＴＣＲγ接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％小さい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも１つのＮ付加を含むＶ−Ｊ  ＴＣＲγ接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも１つのＮ付加を含むＶ−Ｊ  ＴＣＲγ接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ  ＴＣＲγ接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも２つのＮ付加を含むＶ−Ｊ  ＴＣＲγ接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも２つのＮ付加を含むＶ−Ｊ  ＴＣＲγ接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ  ＴＣＲγ接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも３つのＮ付加を含むＶ−Ｊ  ＴＣＲγ接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも３つのＮ付加を含むＶ−Ｊ  ＴＣＲγ接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ  ＴＣＲγ接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも４つのＮ付加を含むＶ−Ｊ  ＴＣＲγ接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも４つのＮ付加を含むＶ−Ｊ  ＴＣＲγ接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ  ＴＣＲγ接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、動物におけるＶ−Ｊ  ＴＣＲγ接合の少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、または４０％は、非鋳型付加を含む。いくつかの実施形態では、非ヒト動物は、対応する非ヒト動物より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％大きいユニークＴＣＲγ  ＣＤＲ３配列の頻度を有する。
【０１０１】
いくつかの実施形態では、未再編成ヒトＴＣＲ可変領域遺伝子セグメントを含むＴＣＲ可変領域は、ヒトＴＣＲ可変領域遺伝子間配列も含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ可変領域は、非ヒト（例えば、齧歯類、ラット、マウス）ＴＣＲ可変領域遺伝子間配列を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子間配列は、内因性種由来である。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、ヒト可変領域遺伝子セグメントを含むＴＣＲ可変領域および可変領域遺伝子セグメントが作動可能に連結されるＴＣＲ定常領域遺伝子は、内因性ＴＣＲ遺伝子座に位置する。いくつかの実施形態では、内因性ＴＣＲ遺伝子座は、内因性ＴＣＲα遺伝子座である。いくつかの実施形態では、内因性ＴＣＲ遺伝子座は、内因性ＴＣＲβ遺伝子座である。いくつかの実施形態では、内因性ＴＣＲ遺伝子座は、内因性ＴＣＲγ遺伝子座である。いくつかの実施形態では、内因性ＴＣＲ遺伝子座は、内因性ＴＣＲδ遺伝子座である。いくつかの実施形態では、ヒト可変領域遺伝子セグメントが作動可能に連結される定常領域遺伝子は、内因性定常領域遺伝子、例えば、対応する内因性定常領域である。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物のゲノムにおける１つ以上の内因性ＴＣＲ遺伝子座または１つ以上の内因性遺伝子座の一部分（例えば、可変領域および／または定常領域）が不活性化される。内因性ＴＣＲ可変領域遺伝子座およびその一部分は、これらに限定されないが、生物のゲノムからの遺伝子座またはその一部分の欠失、遺伝子座またはその一部分の異なる核酸配列での置換、非ヒト生物のゲノムにおける別の位置への遺伝子座の一部分の逆位および／または遺伝子座の一部分の転位を含む、当該技術分野において知られている任意の方法を用いて不活性化することができる。いくつかの実施形態では、遺伝子座の不活性化は、部分的な不活性化に過ぎない。いくつかの実施形態では、遺伝子座の可変領域は不活性化されるが、定常領域は（例えば、非内因性可変領域遺伝子セグメントに作動可能に連結されているため）機能的なままである。不活性化ＴＣＲ遺伝子座の例は、例えば、Ｍｏｍｂａｅｒｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：３０８４−３０８７（１９９１）およびＭｏｍｂａｅｒｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３９０：２２５−２３１（１９９２）に記載されており、これらの各々は参照により本明細書に組み込まれる。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物は、ヒト可変ドメイン（例えば、本明細書に記載される未再編成ヒト可変領域遺伝子セグメントに由来するヒト可変ドメイン）を有するＴＣＲを発現する。いくつかの実施形態では、ヒト可変ドメインは、ヒトＴＣＲα可変ドメインである。いくつかの実施形態では、ヒト可変ドメインは、ヒトＴＣＲβ可変ドメインである。いくつかの実施形態では、ヒト可変ドメインは、ヒトＴＣＲγ可変ドメインである。いくつかの実施形態では、ヒト可変ドメインは、ヒトＴＣＲδ可変ドメインである。いくつかの実施形態では、非ヒト動物によって産生されるＴＣＲは、ヒトＴＣＲα可変ドメインおよびヒトＴＣＲβ可変ドメインの両方を有する。いくつかの実施形態では、非ヒト動物によって産生されるＴＣＲは、ヒトＴＣＲγ可変ドメインおよびヒトＴＣＲδ可変ドメインの両方を有する。いくつかの実施形態では、非ヒト動物によって産生されるＴＣＲは、ヒトＴＣＲα可変ドメインおよびヒトＴＣＲβ可変ドメインの両方、ならびにヒトＴＣＲγ可変ドメインおよびヒトＴＣＲδ可変ドメインの両方を有する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、ヒト定常ドメインを有する。いくつかの実施形態では、定常ドメインは、非ヒト由来である。例えば、いくつかの実施形態では、定常ドメインは、内因性種由来である。いくつかの実施形態では、定常ドメインは、マウスまたはラット由来である。
【０１０５】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）および外因性ＴｄＴを発現する非ヒト動物
特定の態様では、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）遺伝子座も含む、本明細書に記載の外因性ＴｄＴを含む遺伝子改変非ヒト動物および非ヒト動物ＥＳ細胞が本明細書で提供される。そのようなＣＡＲ遺伝子座は、一般に、可変領域および定常領域を含む。可変領域は、未再編成ヒトＩｇ可変領域遺伝子セグメントを含み、定常領域遺伝子座は、ＴＣＲ定常領域遺伝子を含み、Ｉｇ可変領域遺伝子セグメントは、定常領域遺伝子に作動可能に連結される。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ定常領域遺伝子は、非ヒトＴＣＲ定常領域遺伝子である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ定常領域遺伝子は、ラット定常領域遺伝子またはマウス定常領域遺伝子などの齧歯類定常領域遺伝子である。いくつかの実施形態では、定常領域遺伝子は、内因性種由来である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ定常領域遺伝子は、ヒト定常領域遺伝子である。
【０１０６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲ遺伝子座は、内因性ＴＣＲ遺伝子座に位置する。例えば、いくつかの実施形態では、ＴＣＲα定常領域遺伝子を含むＣＡＲ遺伝子座は、内因性ＴＣＲα定常領域遺伝子座に位置する。いくつかの実施形態では、このような遺伝子座は、ＴＣＲα未再編成可変領域の一部または全部を未再編成Ｉｇ可変領域で置換することによって作製される。いくつかの実施形態では、ＴＣＲβ定常領域遺伝子を含むＣＡＲ遺伝子座は、内因性ＴＣＲβ定常領域遺伝子座に位置する。いくつかの実施形態では、そのような遺伝子座は、ＴＣＲβ未再編成可変領域の一部または全部を未再編成Ｉｇ可変領域で置換することによって作製される。
【０１０７】
特定の実施形態では、ＣＡＲ可変領域遺伝子座は、未再編成ヒトＩｇ可変領域遺伝子セグメントを含む。ヒト可変領域遺伝子セグメントを含む例示的な可変領域遺伝子座は、当該技術分野において記載されている。例えば、そのような遺伝子座は、米国特許第５，６３３，４２５号、同第５，７７０，４２９号、同第５，８１４，３１８号、同第６，０７５，１８１号、同第６，１１４，５９８号、同第６，１５０，５８４号、同第６，９９８，５１４号、同第７，７９５，４９４号、同第７，９１０，７９８号、同第８，２３２，４４９号、同第８，５０２，０１８号、同第８，６９７，９４０号、同第８，７０３，４８５号、同第８，７５４，２８７号、同第８，７９１，３２３号、同第８，９０７，１５７号、同第９，０３５，１２８号、同第９，１４５，５８８号、および同第９，２０６，２６３号において記載されており、これらの各々はその全体が本明細書に参照により組み込まれ、米国特許出願公開第２００８／００９８４９０号、同第２０１０／０１４６６４７号、同第２０１１／０１９５４５４号、同第２０１２／０１６７２３７号、同第２０１３／０１４５４８４号、同第２０１３／０１６７２５６号、同第２０１３／０２１９５３５号、同第２０１３／０３２６６４７号、同第２０１４／０１３２７５号、同第２０１４／０９３９０８号、同第２０１５／０１１３６６８号、および同第２０１６／００８１３１４号において記載されており、これらの各々はその全体が本明細書に参照により組み込まれ、ＰＣＴ特許出願公開第ＷＯ２００７／１１７４１０号、同第ＷＯ２００８／１５１０８１号、同第ＷＯ２００９／１５７７７１号、同第ＷＯ２０１０／０３９９００号、同第ＷＯ２０１１／００４１９２号、同第ＷＯ２０１１／１２３７０８号、同第ＷＯ２０１４／０９３９０８号、および同第ＷＯ２０１６／０４４７４５号において記載されており、これらの各々はその全体が本明細書に参照により組み込まれる。
【０１０８】
特定の実施形態では、ＣＡＲ可変領域遺伝子座は、未再編成ヒトＩｇ重鎖可変領域遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態では、未再編成ヒトＩｇ可変領域遺伝子セグメントは、複数のヒトＶＨセグメント、１つ以上のヒトＤＨセグメント、および１つ以上のヒトＪＨセグメントを含む。いくつかの実施形態では、未再編成ヒトＩｇ可変領域遺伝子セグメントは、少なくとも３つのＶＨ遺伝子セグメント、少なくとも１８個のＶＨ遺伝子セグメント、少なくとも２０個のＶＨ遺伝子セグメント、少なくとも３０個のＶＨ遺伝子セグメント、少なくとも４０個のＶＨ遺伝子セグメント、少なくとも５０個のＶＨ遺伝子セグメント、少なくとも６０個のＶＨ遺伝子セグメント、少なくとも７０個のＶＨ遺伝子セグメント、または少なくとも８０個のＶＨ遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態では、未再編成ヒトＩｇ遺伝子セグメントは、ヒトＤＨ遺伝子セグメントのすべてを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ可変領域は、ＴＣＲβ可変領域遺伝子セグメント（例えば、Ｖ、Ｄ、および／またはＪ遺伝子セグメント）をさらに含む。一実施形態では、ＣＡＲ可変領域は、遠位ＴＣＲ  Ｖβ遺伝子セグメント、例えば、ＴＣＲ  Ｖβ３１遺伝子セグメントをさらに含む。別の実施形態では、遠位ＴＣＲ  Ｖβ遺伝子セグメント、例えば、ＴＣＲ  Ｖβ３１遺伝子セグメントは、機能的に不活性化または欠失されている。いくつかの実施形態では、未再編成ヒトＩｇ遺伝子セグメントは、ヒトＪＨ遺伝子セグメントのすべてを含む。Ｉｇ重鎖遺伝子セグメントを含む例示的な可変領域は、例えば、Ｍａｃｄｏｎａｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １１１：５１４７−５２および補足情報に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。
【０１０９】
いくつかの実施形態では、ヒト免疫グロブリン重鎖可変領域遺伝子セグメントは、Ｔ細胞発生中に再編成され、非ヒト生物のＴ細胞において再編成されたヒト重鎖可変領域遺伝子を生成する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな非鋳型付加を含むＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における非鋳型付加を含むＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より低い非鋳型付加を含まないＶ−Ｄ免疫グロブリン重鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における非鋳型付加を含まないＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％小さい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも１つのＮ付加を含むＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも１つのＮ付加を含むＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも２つのＮ付加を含むＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも２つのＮ付加を含むＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも３つのＮ付加を含むＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも３つのＮ付加を含むＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも４つのＮ付加を含むＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも４つのＮ付加を含むＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、動物におけるＶ−Ｄおよび／またはＤ−Ｊ免疫グロブリン重鎖接合の少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、または４０％は、非鋳型付加を含む。いくつかの実施形態では、非ヒト動物は、対応する非ヒト動物より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％大きいユニーク免疫グロブリン重鎖ＣＤＲ３配列の頻度を有する。
【０１１０】
いくつかの実施形態では、未再編成ヒトＩｇ重鎖可変領域遺伝子セグメントを含むＣＡＲ可変遺伝子座は、ヒトＩｇ重鎖可変領域遺伝子間配列も含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ可変遺伝子座は、非ヒト（例えば、齧歯類、ラット、マウス）Ｉｇ重鎖可変領域遺伝子間配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ可変遺伝子座は、ヒトまたは非ヒト（例えば、齧歯類、ラット、マウス）ＴＣＲβ可変領域遺伝子間配列を含む。例えば、いくつかの実施形態では、ＣＡＲ遺伝子座の未再編成可変領域は、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０）のトリプシノゲン（ＴＲＹ）遺伝子（例えば、ＴＣＲβ可変領域遺伝子座に通常存在するＴＲＹ遺伝子および／または偽遺伝子）を含む。いくつかの実施形態では、ＴＲＹ遺伝子は、非ヒト、例えば、マウスＴＲＹ遺伝子である。いくつかの実施形態では、マウスＴＲＹ遺伝子は、Ｔｒｙ１、Ｔｒｙ２、Ｔｒｙ３、Ｔｒｙ４、Ｔｒｙ５、Ｔｒｙ６、Ｔｒｙ７、Ｔｒｙ８、Ｔｒｙ９、Ｔｒｙ１０、Ｔｒｙ１１、Ｔｒｙ１２、Ｔｒｙ１３、Ｔｒｙ１４、Ｔｒｙ１５、Ｔｒｙ１６、Ｔｒｙ１７、Ｔｒｙ１８  、Ｔｒｙ１９、およびＴｒｙ２０からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、１つ以上のＴＲＹ遺伝子は、未再編成可変領域のＶＨセグメントの上流に位置する。いくつかの実施形態では、１つ以上のＴＲＹ遺伝子は、ＶＨセグメントの下流および未再編成可変領域のＤＨセグメントの上流に位置する。いくつかの実施形態では、Ｔｒｙ１〜７は、未再編成可変領域のＶＨセグメントの上流に位置し、Ｔｒｙ８〜２０は、ＶＨセグメントの下流および未再編成可変領域のＤＨセグメントの上流に位置する。ヒトおよび／またはマウスＴＣＲβ遺伝子座に位置するＴＲＹ遺伝子に関する追加情報は、Ｇｌｕｓｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １５：３３７−３４９（２００１）およびＳｋｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ８：３７８−３８７（２００７）に提供されており、これらの各々は参照により組み込まれる。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ遺伝子座は、非ヒト調節エレメント（例えば、非ヒトプロモーターおよび／またはエンハンサー）を含む。いくつかの実施形態では、非ヒト調節エレメントは、齧歯類調節エレメント（例えば、ラットまたはマウスプロモーターまたはエンハンサー）である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ遺伝子座は、ＩｇＭエンハンサー（Ｅμ）を含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＭエンハンサーは、非ヒトＥμ（例えば、マウスまたはラットＥμのような、齧歯類Ｅμ）である。
【０１１１】
特定の実施形態では、ＣＡＲ可変領域遺伝子座は、未再編成ヒトＩｇκ可変領域遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態では、未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントは、複数のヒトＶκセグメントおよび１つ以上のヒトＪκセグメントを含む。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントは、４つの機能的ＶκセグメントおよびすべてのヒトＪκセグメントを含む。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントは、１６個の機能的ＶκセグメントおよびすべてのヒトＪκセグメントを含む。いくつかの実施形態では、未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントは、ヒトＶκセグメントのすべておよびすべてのヒトＪκセグメント（例えば、すべての機能的ヒトＶκセグメントおよびＪκセグメント）を含む。Ｉｇκ遺伝子セグメントを含む例示的な可変領域は、例えば、Ｍａｃｄｏｎａｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １１１：５１４７−５２および補足情報に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントは、ヒトＪκセグメントのすべてを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ可変領域は、ＴＣＲα可変領域遺伝子セグメント（例えば、Ｖおよび／またはＪ遺伝子セグメント）をさらに含む。
【０１１２】
いくつかの実施形態では、ヒト免疫グロブリンκ可変領域遺伝子セグメントは、Ｔ細胞発生中に再編成され、非ヒト生物のＴ細胞において再編成されたヒトκ可変領域遺伝子を生成する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな非鋳型付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における非鋳型付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より低い非鋳型付加を含まないＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における非鋳型付加を含まないＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％小さい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも１つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも１つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも２つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも２つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも３つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも３つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３��％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも４つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも４つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、動物におけるＶ−Ｊ免疫グロブリンκ鎖接合の少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、または４０％は、非鋳型付加を含む。いくつかの実施形態では、非ヒト動物は、対応する非ヒト動物より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％大きいユニーク免疫グロブリンκ鎖ＣＤＲ３配列の頻度を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、１０，０００個の免疫グロブリンκ鎖ＣＤＲ３配列当たり少なくとも９００、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、１５００、または１７００個のユニーク免疫グロブリンκ鎖ＣＤＲ３配列を有する。
【０１１３】
特定の実施形態では、ＣＡＲ可変領域遺伝子座は、未再編成ヒトＩｇλ可変領域遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態では、未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントは、複数のヒトＶλセグメントおよび１つ以上のヒトＪλセグメントを含む。いくつかの実施形態では、未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントは、すべてのヒトＶλセグメント（例えば、すべての機能的ヒトＶλセグメント）を含む。いくつかの実施形態では、未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントは、すべてのヒトＪλセグメントを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ可変領域は、ＴＣＲα可変領域遺伝子セグメント（例えば、Ｖおよび／またはＪ遺伝子セグメント）をさらに含む。Ｉｇλ遺伝子セグメントを含む例示的な可変領域は、例えば、米国特許出願公開第２０１２／００７３００４号および同第２００２／００８８０１６号に提供されており、これらの各々は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１１４】
いくつかの実施形態では、ヒト免疫グロブリンλ可変領域遺伝子セグメントは、Ｔ細胞発生中に再編成され、非ヒト生物のＴ細胞において再編成されたヒトλ可変領域遺伝子を生成する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな非鋳型付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における非鋳型付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より低い非鋳型付加を含まないＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における非鋳型付加を含まないＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％小さい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも１つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも１つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも２つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも２つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも３つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも３つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３��％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、そのゲノム中に外因性ＴｄＴをコードする核酸を有さない対応する非ヒト動物より大きな少なくとも４つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子改変非ヒト動物における少なくとも４つのＮ付加を含むＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合は、対応する非ヒト動物におけるＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の割合より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、３０％、または４０％大きい。いくつかの実施形態では、動物におけるＶ−Ｊ免疫グロブリンλ鎖接合の少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、または４０％は、非鋳型付加を含む。いくつかの実施形態では、非ヒト動物は、対応する非ヒト動物より少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％大きいユニーク免疫グロブリンλ鎖ＣＤＲ３配列の頻度を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、１０，０００個の免疫グロブリンλ鎖ＣＤＲ３配列当たり少なくとも１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、または３００個のユニーク免疫グロブリンλ鎖ＣＤＲ３配列を有する。
【０１１５】
いくつかの実施形態では、未再編成ヒトＩｇ軽鎖可変領域遺伝子セグメントを含むＣＡＲ可変遺伝子座は、ヒトＩｇ軽鎖可変領域遺伝子間配列（例えば、κ可変領域遺伝子間配列および／またはλ可変領域遺伝子間配列）も含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ可変遺伝子座は、非ヒト（例えば、齧歯類、ラット、マウス）Ｉｇ軽鎖可変領域遺伝子間配列（例えば、κ可変領域遺伝子間配列および／またはλ可変領域遺伝子間配列）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ可変遺伝子座は、ヒトまたは非ヒト（例えば、齧歯類、ラット、マウス）ＴＣＲα可変領域遺伝子間配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ遺伝子座は、非ヒト調節エレメント（例えば、非ヒトプロモーターおよび／またはエンハンサー）を含む。いくつかの実施形態では、非ヒト調節エレメントは、齧歯類調節エレメント（例えば、ラットまたはマウスプロモーターまたはエンハンサー）である。
【０１１６】
いくつかの実施形態では、ＣＡＲ可変領域遺伝子座は、Ｉｇ重鎖可変領域遺伝子（ユニバーサル重鎖可変領域）を含む再編成された可変領域遺伝子座である。いくつかの実施形態では、再編成Ｉｇ重鎖可変領域遺伝子は、ヒト再編成Ｉｇ重鎖可変領域遺伝子である。ユニバーサル重鎖可変領域の使用は、少なくとも１つの抗原結合ドメインがペプチド／ＭＨＣ複合体について特異性を有する二重特異性抗体の生成を促進する。例示的な再編成Ｉｇ重鎖可変領域は、米国特許出願公開第２０１４／０２４５４６８号に提供されており、これは本明細書に参照により組み込まれる。
【０１１７】
いくつかの実施形態では、ＣＡＲ可変領域遺伝子座は、Ｉｇ軽鎖可変領域遺伝子（ユニバーサル軽鎖可変領域）を含む再編成された可変領域遺伝子座である。いくつかの実施形態では、再編成Ｉｇ軽鎖可変領域遺伝子は、ヒト再編成Ｉｇ軽鎖可変領域遺伝子である。ユニバーサル軽鎖可変領域の使用は、少なくとも１つの抗原結合ドメインがペプチド／ＭＨＣ複合体について結合特異性を有する二重特異性抗体の生成を促進する。例示的な再編成Ｉｇ重鎖可変領域は、米国特許出願公開第２０１３／０１８５８２１号に提供されており、これは本明細書に参照により組み込まれる。
【０１１８】
他の遺伝子改変
いくつかの実施形態では、外因性ＴｄＴ、ヒト化ＴＣＲ、またはＣＡＲを発現する本明細書に記載の遺伝子改変非ヒト動物およびＥＳ細胞は、それらのゲノムにおいて、ヒト化ＭＨＣクラスＩα鎖ポリペプチドをコードする遺伝子座（例えば、ヒト化ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−Ｆ、ＨＬＡ−ｇ、ＨＬＡ−Ｋ、および／またはＨＬＡ−Ｌ）も発現する、および／または含む。いくつかの実施形態では、ヒト化ＭＨＣクラスＩα鎖ポリペプチドは、完全にヒトである。いくつかの実施形態では、ヒト化ＭＨＣクラスＩα鎖ポリペプチドは、ヒト細胞外ドメイン（例えば、ヒトα１、α２、およびα３ドメイン）および内因性種由来の細胞質ドメインを含む。ヒト化ＭＨＣクラスＩα鎖ポリペプチド、ヒト化ＭＨＣクラスＩα鎖ポリペプチドをコードする遺伝子座、およびヒト化ＭＨＣクラスＩα鎖ポリペプチドを発現する非ヒト動物は、米国特許出願公開第２０１３／０１１１６１７号、同第２０１３／０１８５８１９号、および同第２０１４／０２４５４６７号に記載されており、これらの各々は本明細書に参照により組み込まれる。
【０１１９】
いくつかの実施形態では、外因性ＴｄＴ、ヒト化ＴＣＲ、またはＣＡＲを発現する本明細書に記載の遺伝子改変非ヒト動物およびＥＳ細胞は、それらのゲノムにおいて、ヒト化β−２ミクログロブリンポリペプチドをコードする遺伝子座も発現する、および／または含む。ヒト化β−２ミクログロブリンポリペプチド、ヒト化β−２ミクログロブリンポリペプチドをコードする遺伝子座、およびヒト化β−２ミクログロブリンポリペプチドを発現する非ヒト動物は、米国特許出願公開第２０１３／０１１１６１７号および同第２０１３／０１８５８１９号に記載されており、これらの各々は本明細書に参照により組み込まれる。
【０１２０】
いくつかの実施形態では、外因性ＴｄＴ、ヒト化ＴＣＲ、またはＣＡＲを発現する本明細書に記載の遺伝子改変非ヒト動物およびＥＳ細胞は、それらのゲノムにおいて、ヒト化ＭＨＣクラスＩＩα鎖ポリペプチドをコードする遺伝子座（例えば、ヒト化ＨＬＡ−ＤＭＡ、ＨＬＡ−ＤＯＡ、ＨＬＡ−ＤＰＡ、ＨＬＡ−ＤＱＡ、および／またはＨＬＡ−ＤＲＡ）も発現する、および／または含む。いくつかの実施形態では、ヒト化ＭＨＣクラスＩＩα鎖ポリペプチドは、完全にヒトである。いくつかの実施形態では、ヒト化ＭＨＣクラスＩＩα鎖ポリペプチドは、ヒト細胞外ドメインおよび内因性種由来の細胞質ドメインを含む。ヒト化ＭＨＣクラスＩＩα鎖ポリペプチド、ヒト化ＭＨＣクラスＩＩα鎖ポリペプチドをコードする遺伝子座、およびヒト化ＭＨＣクラスＩＩα鎖ポリペプチドを発現する非ヒト動物は、米国特許第８，８４７，００５号および同第９，０４３，９９６号、ならびに米国特許出願公開第２０１４／０２４５４６７号に記載されており、これらの各々は、本明細書に参照により組み込まれる。
【０１２１】
いくつかの実施形態では、外因性ＴｄＴ、ヒト化ＴＣＲ、またはＣＡＲを発現する本明細書に記載の遺伝子改変非ヒト動物およびＥＳ細胞は、それらのゲノムにおいて、ヒト化ＭＨＣクラスＩＩβ鎖ポリペプチドをコードする遺伝子座（例えば、ヒト化ＨＬＡ−ＤＭＢ、ＨＬＡ−ＤＯＢ、ＨＬＡ−ＤＰＢ、ＨＬＡ−ＤＱＢ、および／またはＨＬＡ−ＤＲＢ）も発現する、および／または含む。いくつかの実施形態では、ヒト化ＭＨＣクラスＩＩβ鎖ポリペプチドは、完全にヒトである。いくつかの実施形態では、ヒト化ＭＨＣクラスＩＩβ鎖ポリペプチドは、ヒト細胞外ドメインおよび内因性種由来の細胞質ドメインを含む。ヒト化ＭＨＣクラスＩＩβ鎖ポリペプチド、ヒト化ＭＨＣクラスＩＩβ鎖ポリペプチドをコードする遺伝子座、およびヒト化ＭＨＣクラスＩＩβ鎖ポリペプチドを発現する非ヒト動物は、米国特許第８，８４７，００５号および同第９，０４３，９９６号、ならびに米国特許出願公開第２０１４／０２４５４６７号に記載されており、これらの各々は、本明細書に参照により組み込まれる。
【０１２２】
外因性ＴｄＴ、ヒト化ＴＣＲ遺伝子座、ならびにヒト化ＭＨＣ  Ｉおよび／またはＭＨＣ  ＩＩ（ＭＨＣＩＩα／ＩＩβ）遺伝子座を含む遺伝子改変非ヒト動物は、従来の方法を用いて繁殖させることにより作製することができる。あるいは、それらは、１つ以上の遺伝子操作された遺伝子座（例えば、ヒト化ＴＣＲ遺伝子座）を既に含むＥＳ細胞における相同組換えによって作製することができ、上記ＥＳ細胞から非ヒト動物を作製することができる。
【０１２３】
外因性ＴｄＴ、ヒト化ＣＡＲ遺伝子座、ならびにヒト化ＭＨＣ  Ｉおよび／またはＭＨＣ  ＩＩ（ＭＨＣＩＩα／ＩＩβ）遺伝子座を含む遺伝子改変非ヒト動物は、従来の方法を用いて繁殖させることにより作製することができる。あるいは、それらは、１つ以上の遺伝子操作された遺伝子座（例えば、ヒト化ＣＡＲ遺伝子座）を既に含むＥＳ細胞における相同組換えによって作製することができ、上記ＥＳ細胞から非ヒト動物を作製することができる。
【０１２４】
いくつかの実施形態では、外因性ＴｄＴ、ヒト化ＴＣＲ、またはＣＡＲを発現する本明細書に記載の遺伝子改変非ヒト動物およびＥＳ細胞は、それらのゲノムにおいて、ヒト化ＣＤ８α鎖ポリペプチドをコードする遺伝子座も発現する、および／または含む。いくつかの実施形態では、ヒト化ＣＤ８α鎖ポリペプチドは、完全にヒトである。いくつかの実施形態では、ヒト化ＣＤ８α鎖ポリペプチドは、ヒト細胞外免疫グロブリンドメインおよび内因性種由来の細胞質ドメインを含む。ヒト化ＣＤ８α鎖ポリペプチド、ヒト化ＣＤ８α鎖ポリペプチドをコードする遺伝子座、およびヒト化ＣＤ８α鎖ポリペプチドを発現する非ヒト動物は、米国特許出願公開第２０１４／０２４５４６６号に記載されており、これは本明細書に参照により組み込まれる。
【０１２５】
いくつかの実施形態では、外因性ＴｄＴ、ヒト化ＴＣＲ、またはＣＡＲを発現する本明細書に記載の遺伝子改変非ヒト動物およびＥＳ細胞は、それらのゲノムにおいて、ヒト化ＣＤ８β鎖ポリペプチドをコードする遺伝子座も発現する、および／または含む。いくつかの実施形態では、ヒト化ＣＤ８β鎖ポリペプチドは、完全にヒトである。いくつかの実施形態では、ヒト化ＣＤ８β鎖ポリペプチドは、ヒト細胞外免疫グロブリンドメインおよび内因性種由来の細胞質ドメインを含む。ヒト化ＣＤ８β鎖ポリペプチド、ヒト化ＣＤ８β鎖ポリペプチドをコードする遺伝子座、およびヒト化ＣＤ８β鎖ポリペプチドを発現する非ヒト動物は、米国特許出願公開第２０１４／０２４５４６６号に記載されており、これは本明細書に参照により組み込まれる。
【０１２６】
いくつかの実施形態では、外因性ＴｄＴ、ヒト化ＴＣＲ、またはＣＡＲを発現する本明細書に記載の遺伝子改変非ヒト動物およびＥＳ細胞は、それらのゲノムにおいて、ヒト化ＣＤ４ポリペプチドをコードする遺伝子座も発現する、および／または含む。いくつかの実施形態では、ヒト化ＣＤ４ポリペプチドは、完全にヒトである。いくつかの実施形態では、ヒト化ＣＤ４ポリペプチドは、少なくとも１つのヒト細胞外免疫グロブリンドメインおよび内因性種由来の細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ヒト化ＣＤ４ポリペプチドは、少なくとも１つのヒトＤ１免疫グロブリンドメイン、ヒトＤ２免疫グロブリンドメイン、およびヒトＤ３免疫グロブリンドメイン、ならびに内因性種由来の細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ヒト化ＣＤ４ポリペプチドは、少なくとも１つのヒトＤ１免疫グロブリンドメイン、ヒトＤ２免疫グロブリンドメイン、ヒトＤ３免疫グロブリンドメイン、内因性種由来のＤ４免疫グロブリンドメイン、および内因性種由来の細胞質ドメインを含む。ヒト化ＣＤ４ポリペプチド、ヒト化ＣＤ４ポリペプチドをコードする遺伝子座、およびヒト化ＣＤ４ポリペプチドを発現する非ヒト動物は、米国特許出願公開第２０１４／０２４５４６６号に記載されており、これは本明細書に参照により組み込まれる。
【０１２７】
外因性ＴｄＴ、ヒト化ＴＣＲ遺伝子座、ならびにヒト化ＣＤ４および／またはＣＤ８（ＣＤ８α／ＣＤ８β）遺伝子座を含む遺伝子改変非ヒト動物は、従来の方法を用いて繁殖させることにより作製することができる。あるいは、それらは、１つ以上の遺伝子操作された遺伝子座（例えば、ヒト化ＴＣＲ遺伝子座）を既に含むＥＳ細胞における相同組換えによって作製することができ、上記ＥＳ細胞から非ヒト動物を作製することができる。
【０１２８】
外因性ＴｄＴ、ヒト化ＣＡＲ遺伝子座、ならびにヒト化ＣＤ４および／またはＣＤ８（ＣＤ８α／ＣＤ８β）遺伝子座を含む遺伝子改変非ヒト動物は、従来の方法を用いて繁殖させることにより作製することができる。あるいは、それらは、１つ以上の遺伝子操作された遺伝子座（例えば、ヒト化ＣＡＲ遺伝子座）を既に含むＥＳ細胞における相同組換えによって作製することができ、上記ＥＳ細胞から非ヒト動物を作製することができる。
【０１２９】
遺伝子改変非ヒト動物の使用方法
特定の態様では、抗原結合タンパク質（例えば、抗体、ＣＡＲ、ＴＣＲ）、そのような抗原結合タンパク質を発現する細胞（例えば、Ｂ細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞ハイブリドーマ、Ｔ細胞ハイブリドーマ）、およびそのような抗原結合タンパク質またはその一部分（例えば、可変ドメイン）をコードする核酸を生成するために本明細書に記載の遺伝子改変非ヒト動物を使用する方法が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、より多様な抗原結合タンパク質（例えば、抗体、ＣＡＲ、ＴＣＲ）を作製する方法が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、増加した数のヌクレオチド付加を有する抗原結合タンパク質（例えば、抗体、ＣＡＲ、ＴＣＲ）の再編成可変領域を作製する方法が本明細書で提供される。
【０１３０】
特定の実施形態では、本方法は、外因性ＴｄＴおよびヒト可変ドメインを有する抗体またはその抗原結合断片を発現するように改変された本明細書に記載の遺伝子改変非ヒト動物を抗原に、遺伝子改変非ヒト動物が抗原に特異的なヒト可変ドメインを含む抗体またはその抗原結合断片を産生するように曝露することを含む。
【０１３１】
いくつかの実施形態では、本方法は、外因性ＴｄＴおよびヒト可変ドメインを有する抗体またはその抗原結合断片を発現するように改変された本明細書に記載の遺伝子改変非ヒト動物を抗原に曝露することと、非ヒト動物から抗原に特異的なヒト可変ドメインを含む抗体またはその抗原結合断片を発現するＢ細胞を得ることと、を含む。
【０１３２】
いくつかの実施形態では、本方法は、外因性ＴｄＴおよびヒト可変ドメインを有する抗体またはその抗原結合断片を発現するように改変された本明細書に記載の遺伝子改変非ヒト動物を抗原に曝露することと、非ヒト動物から抗原に特異的なヒト可変ドメインを含む抗体またはその抗原結合断片を発現するＢ細胞を得ることと、Ｂ細胞からハイブリドーマを作製することと、を含む。
【０１３３】
いくつかの実施形態では、本方法は、外因性ＴｄＴおよびヒト可変ドメインを有する抗体またはその抗原結合断片を発現するように改変された本明細書に記載の遺伝子改変非ヒト動物を抗原に曝露することと、非ヒト動物から抗原に特異的なヒト免疫グロブリン可変ドメインをコードする核酸を得ることと、を含む。
【０１３４】
特定の実施形態では、本方法は、外因性ＴｄＴおよびヒト可変ドメインを有する抗体またはその抗原結合断片を発現するように改変された本明細書に記載の遺伝子改変非ヒト動物を抗原に曝露することと、非ヒト動物から抗原に特異的なヒト可変ドメインを含む抗体またはその抗原結合断片を発現するＢ細胞を得ることと、任意でＢ細胞からハイブリドーマを作製することと、Ｂ細胞またはハイブリドーマから抗原に特異的なヒト免疫グロブリン可変ドメインをコードする核酸を得ることと、を含む。
【０１３５】
いくつかの実施形態では、本方法は、外因性ＴｄＴおよびヒト可変ドメインを有する抗体またはその抗原結合断片を発現するように改変された本明細書に記載の非ヒト動物を抗原に曝露することと、非ヒト動物から抗原に特異的なヒト可変ドメインを含む抗体またはその抗原結合断片を発現するＢ細胞を得ることと、任意でＢ細胞からハイブリドーマを作製することと、Ｂ細胞またはハイブリドーマから抗原に特異的なヒト免疫グロブリン可変ドメインをコードする核酸を得ることと、宿主細胞において免疫グロブリン可変ドメインをコードする核酸とヒト免疫グロブリン定常ドメインをコードする核酸とを作動可能に連結することと、宿主細胞を、宿主細胞が免疫グロブリン可変ドメインおよび免疫グロブリン定常ドメインを含むヒト抗体を発現するような条件下で培養することと、を含む。
【０１３６】
いくつかの実施形態では、本方法は、外因性ＴｄＴおよびヒト可変ドメインを有するＴＣＲを発現するように改変された本明細書に記載の遺伝子改変非ヒト動物を、ペプチドまたはペプチドを含む抗原をコードする核酸を含む抗原に、ペプチドが非ヒト動物においてＭＨＣ上に提示されるように曝露することと、遺伝子改変非ヒト動物からＭＨＣ上に提示されるペプチドに特異的なＴＣＲを発現するＴ細胞を得ることと、を含む。
【０１３７】
いくつかの実施形態では、本方法は、外因性ＴｄＴおよびヒト可変ドメインを有するＴＣＲを発現するように改変された本明細書に記載の遺伝子改変非ヒト動物を、ペプチドまたはペプチドを含む抗原をコードする核酸を含む抗原に、ペプチドが非ヒト動物においてＭＨＣ上に提示されるように曝露することと、遺伝子改変非ヒト動物からＭＨＣ上に提示されるペプチドに特異的なＴＣＲを発現するＴ細胞を得ることと、Ｔ細胞からＴ細胞ハイブリドーマを作製することと、を含む。
【０１３８】
いくつかの実施形態では、本方法は、外因性ＴｄＴおよびヒト可変ドメインを有するＴＣＲを発現するように改変された本明細書に記載の非ヒト動物を、ペプチドまたはペプチドを含む抗原をコードする核酸を含む抗原に、ペプチドが非ヒト動物においてＭＨＣ上に提示されるように曝露することと、遺伝子改変非ヒト動物からＭＨＣ上に提示されるペプチドに特異的なＴＣＲを発現するＴ細胞を得ることと、Ｔ細胞からＴＣＲのヒトＴＣＲ可変ドメインをコードする核酸を単離することと、を含む。
【０１３９】
いくつかの実施形態では、本方法は、外因性ＴｄＴおよびヒト可変ドメインを有するＴＣＲを発現するように改変された本明細書に記載の非ヒト動物を、ペプチドまたはペプチドを含む抗原をコードする核酸を含む抗原に、ペプチドが非ヒト動物においてＭＨＣ上に提示されるように曝露することと、遺伝子改変非ヒト動物からＭＨＣ上に提示されるペプチドに特異的なＴＣＲを発現するＴ細胞を得ることと、Ｔ細胞からＴＣＲのＴＣＲ可変ドメインをコードする核酸を単離することと、細胞においてＴＣＲ可変ドメインをコードする核酸とＴＣＲ定常ドメインとを、細胞がＴＣＲ可変ドメインおよびＴＣＲ定常ドメインを含むＴＣＲを発現するように作動可能に連結することと、を含む。
【０１４０】
いくつかの実施形態では、本方法は、外因性ＴｄＴおよびヒト可変ドメインを有するＣＡＲを発現するように改変された本明細書に記載の遺伝子改変非ヒト動物を、ペプチドまたはペプチドを含む抗原をコードする核酸を含む抗原に、ペプチドが非ヒト動物においてＭＨＣ上に提示されるように曝露することと、遺伝子改変非ヒト動物からＭＨＣ上に提示されるペプチドに特異的なＣＡＲを発現するＴ細胞を得ることと、を含む。
【０１４１】
いくつかの実施形態では、本方法は、外因性ＴｄＴおよびヒト可変ドメインを有するＣＡＲを発現するように改変された本明細書に記載の遺伝子改変非ヒト動物を、ペプチドまたはペプチドを含む抗原をコードする核酸を含む抗原に、ペプチドが非ヒト動物においてＭＨＣ上に提示されるように曝露することと、遺伝子改変非ヒト動物からＭＨＣ上に提示されるペプチドに特異的なＣＡＲを発現するＴ細胞を得ることと、Ｔ細胞からＴ細胞ハイブリドーマを作製することと、を含む。
【０１４２】
いくつかの実施形態では、本方法は、外因性ＴｄＴおよびヒト可変ドメインを有するＣＡＲを発現するように改変された本明細書に記載の非ヒト動物を、ペプチドまたはペプチドを含む抗原をコードする核酸を含む抗原に、ペプチドが非ヒト動物においてＭＨＣ上に提示されるように曝露することと、遺伝子改変非ヒト動物からＭＨＣ上に提示されるペプチドに特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するＴ細胞を得ることと、Ｔ細胞からＣＡＲのヒトＴＣＲ可変ドメインをコードする核酸を単離することと、を含む。
【０１４３】
いくつかの実施形態では、本方法は、外因性ＴｄＴおよびヒト可変ドメインを有するＣＡＲを発現するように改変された本明細書に記載の非ヒト動物を、ペプチドまたはペプチドを含む抗原をコードする核酸を含む抗原に、ペプチドが非ヒト動物においてＭＨＣ上に提示されるように曝露することと、遺伝子改変非ヒト動物からＭＨＣ上に提示されるペプチドに特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するＴ細胞を得ることと、Ｔ細胞からＣＡＲのヒト免疫グロブリン可変ドメインをコードする核酸を単離することと、細胞においてヒト免疫グロブリン可変ドメインをコードする核酸とヒト免疫グロブリン定常ドメインとを、細胞がヒト免疫グロブリン可変ドメインおよびヒト免疫グロブリン定常ドメインを含む抗体を発現するように作動可能に連結することと、を含む。
【０１４４】
特定の実施形態では、本明細書に記載の方法は、免疫応答（例えば、Ｂ細胞免疫応答および／またはＴ細胞免疫応答）を誘導するために、本明細書に記載の非ヒト動物が抗原（免疫化）に曝露されるステップを含む。いくつかの実施形態では、遺伝子改変非ヒト動物は、全タンパク質抗原またはその断片で免疫化される。齧歯類は、当該技術分野で知られている任意の方法によって免疫化することができる（例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  １９８８  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｍａｌｉｋ  ａｎｄ  Ｌｉｌｌｅｈｏｊ（１９９４）Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，ＣＡ参照）。
【０１４５】
いくつかの実施形態では、遺伝子改変非ヒト動物は、抗原をコードする核酸配列を含むウイルス（例えば、レトロウイルス、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、またはレンチウイルス）を非ヒト動物に投与することによって、抗原に曝露される。ウイルスワクチン接種方法は、例えば、米国特許第６，００１，３４９号、同第８，６６３，６２２号、同第８，６９１，５０２号、同第８，３７７，６８８号、およびＰｒｅｃｏｐｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，ＪＥＭ  ２０４：１４０５−１４１６（２００７）において提供されており、これらの各々はその全体が本明細書に参照により組み込まれる。いくつかの実施形態では、非ヒト動物は、ウイルスが直接投与される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、樹状細胞などの抗原提示細胞）をインビトロまたはエクスビボでウイルスに感染させ、次いで非ヒト動物に投与する。いくつかの実施形態では、ウイルスは、ペプチド／ＭＨＣ複合体（例えば、一本鎖ペプチド／ＭＨＣ複合体）をコードする。一本鎖ペプチド／ＭＨＣベースのワクチンの例は、Ｔｒｕｓｃｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７８：６２８０−６２８９（２００７）、ＥＰ１７７３３８３、Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｖａｃｃｉｎｅ  ３０：２１７８−２１８６（２０１２）、Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８４：４４２３−４４３０（２０１０）で提供されており、これらの各々は本明細書に参照により組み込まれる。
【０１４６】
いくつかの実施形態では、遺伝子改変非ヒト動物は、抗原をコードする核酸を動物に投与することによって、抗原に曝露される。いくつかの実施形態では、非ヒト動物は、一本鎖ペプチド／ＭＨＣ複合体をコードする核酸が投与される。一本鎖ペプチド／ＭＨＣベースのワクチンの例は、Ｔｒｕｓｃｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７８：６２８０−６２８９（２００７）、ＥＰ１７７３３８３、Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｖａｃｃｉｎｅ  ３０：２１７８−２１８６（２０１２）、Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８４：４４２３−４４３０（２０１０）で提供されており、これらの各々は本明細書に参照により組み込まれる。特定の実施形態では、核酸は、ＤＮＡベクターである。核酸の送達は、ウイルス媒介性遺伝子導入およびリポソーム媒介性遺伝子導入を含む当該技術分野で知られている任意の技術によることができる。目的のポリヌクレオチドは、例えば、これらの各々が本明細書に参照により組み込まれる、米国特許第６，７７０，２９１号、同第７，００１，６１４号、同第６，７４９，８６３号、同第５，５１２，２９５号、および同第７，１１２，３３８号に記載されているように、リポソームと会合して遺伝子送達ビヒクルを形成する。いくつかの実施形態では、核酸は、ｍＲＮＡベクターである。ｍＲＮＡベクターを産生および投与するための例示的な方法は、例えば、米国特許第８，２７８，０３６号ならびに米国特許出願公開第２０１３／１５１７３６号および同第２０１２／１３５８０５号に記載されており、これらの各々は本明細書に参照により組み込まれる。
【０１４７】
いくつかの実施形態では、抗原は、癌関連抗原である。癌関連抗原の例としては、これらに限定されないが、アディポフィリン、ＡＩＭ−２、ＡＬＤＨ１Ａ１、α−アクチニン−４、α−フェトプロテイン（「ＡＦＰ」）、ＡＬＫ、ＡＮＫＲＤ３０Ａ、ＡＲＴＣ１、Ｂ−ＲＡＦ、ＢＡＧＥ−１、ＢＣＬＸ（Ｌ）、ＢＣＲ−ＡＢＬ融合タンパク質ｂ３ａ２、β−カテニン、ＢＩＮＧ−４、ＢＩＲＣ７、ＣＡ−１２５、ＣＡ９、ＣＡＬＣＡ、癌胎児性抗原（「ＣＥＡ」）、ＣＡＬＲ、ＣＡＳＰ−５、ＣＡＳＰ−８、ＣＣＲ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２７４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７９、Ｃｄｃ２７、ＣＤＫ１２、ＣＤＫ４、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＥＡ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＣＬＰＰ、ＣＯＡ−１、ＣＰＳＦ、ＣＳＮＫ１Ａ１、ＣＴＡＧ１、ＣＴＡＧ２、サイクリンＤ１、サイクリン−Ａ１、ｄｅｋ−ｃａｎ融合タンパク質、ＤＫＫ１、ＥＦＴＵＤ２、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ変異体ＩＩＩ、伸長因子２、ＥＮＡＨ（ｈＭｅｎａ）、Ｅｐ−ＣＡＭ、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、上皮腫瘍抗原（「ＥＴＡ」）、ＥＲＢＢ３、ＥＲＢＢ４、ＥＴＶ６−ＡＭＬ１融合タンパク質、ＥＺＨ２、ＦＣＲＬ３、ＦＧＦ５、ＦＬＴ３−ＩＴＤ、ＦＮ１、ＦＯＬＲ１、Ｇ２５０／ＭＮ／ＣＡＩＸ、ＧＡＧＥ−１，２，８、ＧＡＧＥ−３，４，５，６，７、ＧＡＳ７、グリピカン−３、ＧｎＴＶ、ｇｐ１００／Ｐｍｅｌ１７、ＧＰＮＭＢ、ＧＭ３、ＧＰＲ１１２、ＩＬ３ＲＡ、ＨＡＵＳ３、ヘプシン、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ、ＨＥＲＶ−Ｋ−ＭＥＬ、ＨＬＡ−Ａ１１、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−ＤＯＢ、ｈｓｐ７０−２、ＩＤＯ１、ＩＧＦ２Ｂ３、ＩＬ１３Ｒα２、腸内カルボキシルエステラーゼ、Ｋ−ｒａｓ、カリクレイン４、ＫＩＦ２０Ａ、ＫＩＴ、ＫＫ−ＬＣ−１、ＫＫＬＣ１、ＫＭ−ＨＮ−１、ＣＣＤＣ１１０としても知られているＫＭＨＮ１、ＫＲＡＳ、ＬＡＧＥ−１、ＬＤＬＲ−フコシルトランスフェラーゼＡＳ融合タンパク質、Ｌｅｎｇｓｉｎ、ＬＧＲ５、ＬＭＰ２、Ｍ−ＣＳＦ、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ９、ＭＡＧＥ−Ｃ１、ＭＡＧＥ−Ｃ２、リンゴ酸酵素、マンマグロビンＡ、ＭＡＲＴ２、ＭＡＴＮ、ＭＣ１Ｒ、ＭＣＳＰ、ｍｄｍ−２、ＭＥ１、メラン−Ａ／ＭＡＲＴ−１、メロエ、ミッドカイン、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−７、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３、ＭＵＣ４、ＭＵＣ５、ＭＵＣ５ＡＣ、ＭＵＣ１６、ムチン、ＭＵＭ−１、ＭＵＭ−２、ＭＵＭ−３、ミオシン、ミオシンクラスＩ、Ｎ−ｒａｗ、ＮＡ８８−Ａ、ネオ−ＰＡＰ、ＮＦＹＣ、ＮＹ−ＢＲ−１、ＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ−２、ＯＡ１、ＯＧＴ、ＯＳ−９、ＯＸ４０、Ｐポリペプチド、ｐ５３、ＰＡＰ、ＰＡＸ３、ＰＡＸ５、ＰＢＦ、ＰＬＡＣ１、ＰＭＥＬ、ｐｍｌ−ＲＡＲα融合タンパク質、多形性上皮ムチン（「ＰＥＭ」）、ＰＰＰ１Ｒ３Ｂ、ＰＲＡＭＥ、ＰＲＤＸ５、ＰＲＬＲ、ＰＳＡ、ＰＳＭＡ、ＰＴＰＲＫ、ＲＡＢ３８／ＮＹ−ＭＥＬ−１、ＲＡＧＥ−１、ＲＢＡＦ６００、ＲＥＴ、ＲＧＳ５、ＲｈｏＣ、ＲＮＦ４３、ＲＯＲ１、ＲＵ２ＡＳ、ＳＡＧ��、ＳＡＲＴ１、ＳＡＲＴ３、セセルニン１、ＳＩＲＴ２、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＣ３９Ａ６、ＳＮＲＰＤ１、ＳＯＸ１０、Ｓｐ１７、ＳＰＡ１７、ＳＳＸ−２、ＳＳＸ−４、ＳＴＥＡＰ１、ＳＴＥＡＰ２、サバイビン、ＳＹＴ−ＳＳＸ１または−ＳＳＸ２融合タンパク質、ＴＡＧ−１、ＴＡＧ−２、テロメラーゼ、ＴＥＲＴ、ＴＧＦ−βＲＩＩ、Ｔｈｏｍｐｓｏｎ−ｎｏｕｖｅｌｌｅ抗原、ＴＭＰＲＳＳ２、ＴＮＦＲＳＦ１７、ＴＰＢＧ、ＴＲＡＧ−３、トリオースリン酸イソメラーゼ、ＴＲＰ−１／ｇｐ７５、ＴＲＰ−２、ＴＲＰ２−ＩＮＴ２、チロシナーゼ、チロシナーゼ（「ＴＹＲ」）、ＵＰＫ３Ａ、ＶＥＧＦ、ＶＴＣＮ１、ＷＴ１、ＸＡＧＥ−１ｂ／ＧＡＧＥＤ２ａが挙げられる。いくつかの実施形態では、抗原は、新生抗原である。
【０１４８】
いくつかの実施形態では、抗原は、感染性病原体により発現される抗原である。いくつかの実施形態では、病原体は、ウイルス、細菌、真菌、蠕虫、または原生動物である。ウイルスの非限定的な例としては、ＨＩＶ、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ヘルペスウイルス（例えば、ＨＳＶ−１、ＨＳＶ−２、ＣＭＶ、ＨＡＶ−６、ＶＺＶ、エプスタイン−バーウイルス）、アデノウイルス、インフルエンザウイルス、フラビウイルス、エコーウイルス、ライノウイルス、コクサッキーウイルス、コロナウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ムンプスウイルス、ロタウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、パルボウイルス、ワクチニアウイルス、ＨＴＬＶ、デングウイルス、パピローマウイルス、軟属腫ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、ＪＣウイルス、エボラウイルス、およびアルボウイルス脳炎ウイルス抗原が挙げられる。いくつかの実施形態では、寄生生物は、マラリアである。いくつかの実施形態では、病原体は、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ｂｒｕｇｉａ、Ｃａｎｄｉｄａ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ、Ｃｏｃｃｉｄｉａ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｄｉｒｏｆｉｌａｒｉａ、Ｇｏｎｏｃｏｃｃｕｓ、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ、Ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃｉ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ、Ｐａｒａｍｅｃｉｕｍ、Ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ、Ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃｕｓ、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ、およびＶｉｂｒｉｏｃｈｏｌｅｒａｅである。例示的な種としては、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｅａ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ、Ｇｒｏｕｐ  Ｂ  Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．、Ｍｉｃｒｏｐｌａｓｍａ  ｈｏｍｉｎｉｓ、Ｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｄｕｃｒｅｙｉ、Ｇｒａｎｕｌｏｍａ  ｉｎｇｕｉｎａｌｅ、Ｌｙｍｐｈｏｐａｔｈｉａ  ｖｅｎｅｒｅｕｍ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ａｂｏｒｔｕｓ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ｍｅｌｉｔｅｎｓｉｓ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ｓｕｉｓ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ｃａｎｉｓ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｆｅｔｕｓ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｆｅｔｕｓ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｉｓ、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ  ｐｏｍｏｎａ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ｏｖｉｓ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｓｉｔｔａｃｉ、Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ  ｆｏｅｔｕｓ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｅｑｕｕｌｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ａｂｏｒｔｕｓ  ｏｖｉｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ａｂｏｒｔｕｓ  ｅｑｕｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｅｑｕｉ、Ｃｏｒｙｎｅ��ａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｃｉｌｕｓ  ｓｅｍｉｎｉｓ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｂｏｖｉｇｅｎｉｔａｌｉｕｍ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ、Ａｂｓｉｄｉａ  ｒａｍｏｓａ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｅｑｕｉｐｅｒｄｕｍ、Ｂａｂｅｓｉａ  ｃａｂａｌｌｉ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ、または、例えば、Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓなどの真菌、または、例えば、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍなどの他の病原体が挙げられる。
【０１４９】
本明細書に記載の方法のいくつかの実施形態では、本方法は、遺伝子改変非ヒト動物からＴ細胞および／またはまたはＢ細胞を得るステップを含む。特定の実施形態では、当該技術分野で知られている任意の方法を用いて、そのような細胞を得ることができる。例えば、そのようなＴ細胞および／またはＢ細胞は、動物の脾臓、リンパ節、および／または末梢血から得ることができる。このようなＴ細胞および／またはＢ細胞は、当該技術分野で利用可能な方法を用いて結合特異性についてスクリーニングすることができる。
【０１５０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、Ｂ細胞からＢ細胞ハイブリドーマを作製するステップを含む。Ｂ細胞ハイブリドーマを作製するのに有用な方法は、当該技術分野で知られ、例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  １９８８  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｍａｌｉｋ  ａｎｄ  Ｌｉｌｌｅｈｏｊ（１９９４）Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，ＣＡに記載されており、本明細書に参照により組み込まれる。
【０１５１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、Ｔ細胞からＴ細胞ハイブリドーマを作製するステップを含む。Ｔ細胞ハイブリドーマを作製するのに有用な方法は、当該技術分野で知られ、例えば、Ｈｅｄｒｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ３０：１４１−１５２（１９８２）および  Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ  Ｃｕｒｒ．Ｐｒｏｔｏｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｃｈａｐｔｅｒ  ３（２００１）およびＷｈｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １３４：１８５−１９３（２０００）に記載されており、これらの各々は本明細書に参照により組み込まれる。
【０１５２】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法は、ＩｇまたはＴＣＲ可変領域をコードする核酸を単離するステップを含む。本明細書に記載の方法のいくつかの実施形態では、任意の方法を用いて、ＩｇまたはＴＣＲ可変領域をコードする核酸を単離することができる。
【０１５３】
いくつかの実施形態では、核酸を単離するステップは、それぞれＢ細胞またはＴ細胞からＢ細胞またはＴ細胞ハイブリドーマを作製し、そのハイブリドーマから核酸を単離するステップを含む。いくつかの実施形態では、核酸は、核酸増幅プロセスを用いて単離される。例えば、いくつかの態様では、核酸増幅プロセスは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、リガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ）、鎖置換増幅（ＳＤＡ）、転写媒介性増幅（ＴＭＡ）、自家持続配列複製（３ＳＲ）、Ｑβレプリカ−ゼベース増幅、核酸配列ベース増幅（ＮＡＳＢＡ）、修復連鎖反応（ＲＣＲ）、ブーメランＤＮＡ増幅（ＢＤＡ）、またはローリングサークル増幅（ＲＣＡ）である。
【０１５４】
いくつかの実施形態では、核酸は、Ｂ細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞ハイブリドーマ、またはＴ細胞ハイブリドーマにおいて再編成されたＩｇまたはＴＣＲ可変領域遺伝子を配列決定し、再編成ＩｇまたはＴＣＲ可変領域遺伝子を含む核酸配列を合成することによって単離される。例示的な核酸配列決定プロセスとしては、これらに限定されないが、連鎖停止配列決定、ライゲーションによる配列決定、合成による配列決定、パイロシーケンシング、イオン半導体配列決定、単一分子リアルタイム配列決定、４５４配列決定、および／またはＤｉｌｕｔｅ−’Ｎ’−Ｇｏ配列決定が挙げられる。
【０１５５】
重鎖および／または軽鎖Ｉｇ可変領域をコードするＤＮＡ断片が得られる場合、これらのＤＮＡ断片は、標準組換えＤＮＡ技術によって、例えば、可変領域遺伝子を全長抗体鎖遺伝子に、Ｆａｂ断片遺伝子に、またはｓｃＦｖ遺伝子に変換するようにさらに操作され得る。これらの操作において、可変領域をコードするＤＮＡ断片は、抗体定常領域または可動性リンカーのような別のタンパク質をコードする別のＤＮＡ断片に作動可能に連結される。この文脈で使用される「作動可能に連結される」という用語は、２つのＤＮＡ断片が、その２つのＤＮＡ断片によってコードされるアミノ酸配列がインフレームのままであるように、連結されていることを意味することを意図している。
【０１５６】
重鎖可変領域をコードする単離されたＤＮＡは、可変領域をコードするＤＮＡを、重鎖定常領域（ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３）をコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結することによって全長重鎖遺伝子に変換することができる。ヒト重鎖定常領域遺伝子の配列は、当該技術分野において知られており（例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２、またはＬｅｆｒａｎｃ，Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，Ｌｏｎｄｏｎ：Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  ２００１参照）、これらの領域を包含するＤＮＡ断片は、標準的なＰＣＲ増幅によって得ることができる。重鎖定常ドメインは、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、またはＩｇＤ定常ドメインであり得る。Ｆａｂ断片重鎖遺伝子について、ＶＨコードＤＮＡは、重鎖ＣＨ１定常領域のみをコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結することができる。
【０１５７】
したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、宿主細胞において重鎖Ｉｇ可変ドメインをコードする核酸配列を、重鎖Ｉｇ定常ドメインをコードする核酸配列と、宿主細胞がＩｇ重鎖可変ドメインおよびＩｇ重鎖定常ドメインを含むＩｇ重鎖ポリペプチドを発現するように、作動可能に連結するステップを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、宿主細胞において軽鎖Ｉｇ可変ドメインをコードする核酸配列を、軽鎖Ｉｇ定常ドメインをコードする核酸配列と、宿主細胞がＩｇ軽鎖可変ドメインおよびＩｇ重鎖定常ドメインを含むＩｇ軽鎖ポリペプチドを発現するように、作動可能に連結するステップを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、宿主細胞が重鎖Ｉｇ可変ドメインおよび重鎖Ｉｇ定常ドメインを含む重鎖と軽鎖Ｉｇ可変ドメインおよび軽鎖Ｉｇ定常ドメインを含む軽鎖とを有する抗体を発現するように、宿主細胞において重鎖Ｉｇ可変ドメインをコードする核酸配列を、重鎖Ｉｇ定常ドメインをコードする核酸配列と作動可能に連結し、宿主細胞において軽鎖Ｉｇ可変ドメインをコードする核酸配列を、軽鎖Ｉｇ定常ドメインをコードする核酸配列と作動可能に連結するステップを含む。Ｉｇ可変領域は、当該技術分野で周知の標準的な分子生物学技術を用いてＩｇ定常領域と連結することができる。いくつかの実施形態では、免疫グロブリンポリペプチドを発現することができる任意の宿主細胞を使用することができる。いくつかの実施形態では、細胞は、ＣＨＯ細胞、ＨＥＫ−２９３細胞、ＢＨＫ細胞、ＮＳ０細胞、ＳＰ２／０細胞、もしくはベロ細胞、またはウイルス核酸配列を発現する網膜細胞（例えば、ＰＥＲＣ．６（商標）細胞）である。
【０１５８】
いくつかの実施形態では、重鎖定常ドメインをコードする核酸は、修飾Ｆｃドメイン（例えば、ＦｃとＦｃ受容体との間の相互作用を変化させる突然変異）を含む定常ドメインをコードする。例えば、いくつかの実施形態では、定常ドメインは、位置２３５、２３６、２３７、２３９、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２９８、３２６、３２７、３３０、３３２、３５０、３５１、３６６、３９２、３９４、４０５、および／または４０７（ＥＵナンバリングシステムを使用）でそのＦｃドメインに対する修飾を含む。いくつかの実施形態では、修飾は、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３６Ｅ、Ｇ２３７Ｆ、Ｓ２３９Ｅ、Ｓ２３９Ｄ、Ｄ２６５Ｅ、Ｄ２６５Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｓ２６７Ｄ、Ｓ２６７Ｇ、Ｈ２６８Ｅ、Ｈ２６８Ｄ、Ｅ２６９Ｌ、Ｄ２７０Ｎ、Ｄ２７０Ｅ、Ｓ２９８Ａ、Ｋ３２６Ａ、Ｋ３２６Ｄ、Ａ３２７Ｈ、Ａ３２７Ｖ、Ａ３２７Ｌ、Ａ３３０Ｉ、Ａ３３０Ｓ、Ｉ３３２Ｅ、Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２Ｍ、Ｋ３９２Ｌ、Ｔ３９４Ｗ、Ｆ４０５Ａ、および／またはＹ４０７Ｖ（ＥＵナンバリングシステムを使用）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、定常ドメインは、そのＦｃドメインに対する複数の修飾を含む。いくつかの実施形態では、複数の修飾は、Ｄ２７０Ｎ／Ｋ３２６Ｄ、Ｓ２３９Ｅ／Ｓ２９８Ａ／Ｋ３２６Ａ／Ａ３２７Ｈ、Ｌ２３５Ａ／Ｓ２３９Ｅ／Ｄ２６５Ｅ／Ａ３２７Ｈ、Ｇ２３６Ｅ／Ｇ２３７Ｆ／Ｓ２３９Ｅ、Ｇ２３７Ｆ／Ｓ２３９Ｅ／Ｄ２６５Ｅ、Ｇ３２７Ｆ／Ｓ２３９Ｅ／Ｈ２６８Ｄ、Ｇ２３６Ｅ／Ｄ２７０Ｎ／Ａ３２７Ｖ／Ｉ３３２Ｅ、Ｇ２３７Ｆ／Ｓ２３９Ｅ／Ａ３２７Ｈ、Ｇ２３７Ｆ／Ａ３２７Ｌ／Ａ３３０Ｉ、Ｓ２３９Ｄ／Ｄ２６５Ｓ／Ｓ２９８Ａ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｅ／Ｄ２６５Ｓ／Ｈ２６８Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｅ／Ｄ２６５Ｓ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｅ／Ｓ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｄ、Ｓ２３９Ｅ／Ａ３２７Ｌ／Ａ３３０Ｉ、Ｄ２６５Ｅ／Ｓ２６７Ｄ／Ａ３３０Ｓ、Ｓ２６７Ｇ／Ｈ２６８Ｅ／Ｄ２７０Ｅ、Ｈ２６８Ｄ／Ｅ２６９Ｌ／Ｓ２９８Ａ／Ｋ３２６Ａ／Ａ３２７Ｈ、Ｈ２６８Ｄ／／Ｋ３２６Ａ／Ａ３２７Ｈからなる群から選択される。追加のＦｃ修飾およびＦｃ修飾の組み合わせは、米国特許第５，６２４，８２１号、同第５，６４８，２６０号、同第６，５２８，６２４号、同第６，７３７，０５６号、同第７，１２２，６３７号、同第７，１８３，３８７号、同第７，２９７，７７５号、同第７，３１７，０９１号、同第７，３３２，５８１号、同第７，６３２，４９７号、同第７，６６２，９２５号、同第７，６９５，９３６号、同第８，０９３，３５９号、同第８，２１６，８０５号、同第８，２１８，８０５号、同第８，３８８，９５５号、および同第８，９３７，１５８号、ならびに米国特許公開第２００５／００５４８３２号、同第２００６／０２２２６５３号、同第２００６／０２７５２８２号、同第２００６／０２７５２８３号、同第２００７／０１９００６３号、同第２００８／０１５４０２５号、同第２００９／００４２２９１号、２０１３／０１０８６２３号、および同第２０１３／００８９５４１号において提供され、これらの各々は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１５９】
抗原結合タンパク質
特定の態様では、（例えば、本明細書に記載の非ヒト動物を使用して）本明細書に記載の方法によって得ることができるおよび／または得られる抗原結合タンパク質（例えば、抗体、ＴＣＲ、ＣＡＲ、およびその抗原結合断片）が本明細書で提供される。
【０１６０】
特定の実施形態では、本明細書で提供される抗原結合分子は、１０−６、１０−７、１０−８、または１０−９Ｍ以下の解離定数で標的抗原に特異的に結合することができる。いくつかの実施形態では、抗原結合タンパク質の抗原に対する結合親和性（ＫＤによって表される）は、抗原結合タンパク質の無関係の抗原に対する親和性より少なくとも１０倍、少なくとも１００倍、または少なくとも１０００倍低い。いくつかの実施形態では、抗原結合タンパク質は、１０−６、１０−７、１０−８、または１０−９Ｍ以下の解離定数でペプチド／ＭＨＣ複合体に結合する。いくつかの実施形態では、抗原結合タンパク質のペプチド／ＭＨＣ複合体に対する結合親和性（ＫＤによって表される）は、抗原結合タンパク質の無関係のペプチドを提示する同じＭＨＣタンパク質に対する親和性より少なくとも１０倍、少なくとも１００倍、または少なくとも１０００倍低い。抗原結合タンパク質の結合能力を評価するための標準的なアッセイは、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット、およびＲＩＡを含み、当該技術分野で知られている。抗原結合タンパク質の結合動力学（例えば、結合親和性）もまた、Ｂｉａｃｏｒｅ分析などの当該技術分野で知られている標準的なアッセイによって評価することができる。
【０１６１】
いくつかの実施形態では、抗原は、癌関連抗原のエピトープを含む、および／または癌関連抗原である。癌関連抗原の例としては、これらに限定されないが、アディポフィリン、ＡＩＭ−２、ＡＬＤＨ１Ａ１、α−アクチニン−４、α−フェトプロテイン（「ＡＦＰ」）、ＡＲＴＣ１、Ｂ−ＲＡＦ、ＢＡＧＥ−１、ＢＣＬＸ（Ｌ）、ＢＣＲ−ＡＢＬ融合タンパク質ｂ３ａ２、β−カテニン、ＢＩＮＧ−４、ＣＡ−１２５、ＣＡＬＣＡ、癌胎児性抗原（「ＣＥＡ」）、ＣＡＳＰ−５、ＣＡＳＰ−８、ＣＤ２７４、ＣＤ４５、Ｃｄｃ２７、ＣＤＫ１２、ＣＤＫ４、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＥＡ、ＣＬＰＰ、ＣＯＡ−１、ＣＰＳＦ、ＣＳＮＫ１Ａ１、ＣＴＡＧ１、ＣＴＡＧ２、サイクリンＤ１、サイクリン−Ａ１、ｄｅｋ−ｃａｎ融合タンパク質、ＤＫＫ１、ＥＦＴＵＤ２、伸長因子２、ＥＮＡＨ（ｈＭｅｎａ）、Ｅｐ−ＣＡＭ、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ３、上皮腫瘍抗原（「ＥＴＡ」）、ＥＴＶ６−ＡＭＬ１融合タンパク質、ＥＺＨ２、ＦＧＦ５、ＦＬＴ３−ＩＴＤ、ＦＮ１、Ｇ２５０／ＭＮ／ＣＡＩＸ、ＧＡＧＥ−１，２，８、ＧＡＧＥ−３，４，５，６，７、ＧＡＳ７、グリピカン−３、ＧｎＴＶ、ｇｐ１００／Ｐｍｅｌ１７、ＧＰＮＭＢ、ＨＡＵＳ３、ヘプシン、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ、ＨＥＲＶ−Ｋ−ＭＥＬ、ＨＬＡ−Ａ１１、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−ＤＯＢ、ｈｓｐ７０−２、ＩＤＯ１、ＩＧＦ２Ｂ３、ＩＬ１３Ｒα２、腸内カルボキシルエステラーゼ、Ｋ−ｒａｓ、カリクレイン４、ＫＩＦ２０Ａ、ＫＫ−ＬＣ−１、ＫＫＬＣ１、ＫＭ−ＨＮ−１、ＣＣＤＣ１１０としても知られているＫＭＨＮ１、ＬＡＧＥ−１、ＬＤＬＲ−フコシルトランスフェラーゼＡＳ融合タンパク質、Ｌｅｎｇｓｉｎ、Ｍ−ＣＳＦ、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ９、ＭＡＧＥ−Ｃ１、ＭＡＧＥ−Ｃ２、リンゴ酸酵素、マンマグロビンＡ、ＭＡＲＴ２、ＭＡＴＮ、ＭＣ１Ｒ、ＭＣＳＰ、ｍｄｍ−２、ＭＥ１、メラン−Ａ／ＭＡＲＴ−１、メロエ、ミッドカイン、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−７、ＭＵＣ１、ＭＵＣ５ＡＣ、ムチン、ＭＵＭ−１、ＭＵＭ−２、ＭＵＭ−３、ミオシン、ミオシンクラスＩ、Ｎ−ｒａｗ、ＮＡ８８−Ａ、ネオ−ＰＡＰ、ＮＦＹＣ、ＮＹ−ＢＲ−１、ＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ−２、ＯＡ１、ＯＧＴ、ＯＳ−９、Ｐポリペプチド、ｐ５３、ＰＡＰ、ＰＡＸ５、ＰＢＦ、ｐｍｌ−ＲＡＲα融合タンパク質、多形性上皮ムチン（「ＰＥＭ」）、ＰＰＰ１Ｒ３Ｂ、ＰＲＡＭＥ、ＰＲＤＸ５、ＰＳＡ、ＰＳＭＡ、ＰＴＰＲＫ、ＲＡＢ３８／ＮＹ−ＭＥＬ−１、ＲＡＧＥ−１、ＲＢＡＦ６００、ＲＧＳ５、ＲｈｏＣ、ＲＮＦ４３、ＲＵ２ＡＳ、ＳＡＧＥ、セセルニン１、ＳＩＲＴ２、ＳＮＲＰＤ１、ＳＯＸ１０、Ｓｐ１７、ＳＰＡ１７、ＳＳＸ−２、ＳＳＸ−４、ＳＴＥＡＰ１、サバイビン、ＳＹＴ−ＳＳＸ１または−ＳＳＸ２融合タンパク質、ＴＡＧ−１、ＴＡＧ−２、テロメラーゼ、ＴＧＦ−βＲＩＩ、ＴＰＢＧ、ＴＲＡＧ−３、トリオースリン酸イソメラーゼ、ＴＲＰ−１／ｇｐ７５、ＴＲＰ−２、ＴＲＰ２−ＩＮＴ２、チロシナーゼ、チロシナーゼ（「ＴＹＲ」）、ＶＥＧＦ、ＷＴ１、ＸＡＧＥ−１ｂ／ＧＡＧＥＤ２ａが挙げられる。いくつかの実施形態では、抗原は、新生抗原である。
【０１６２】
いくつかの実施形態では、抗原は、感染性病原体により発現される抗原のエピトープを含む、および／または感染性病原体により発現される抗原である。いくつかの実施形態では、病原体は、ウイルス、細菌、真菌、蠕虫、または原生動物である。ウイルスのいくつかの非限定的な例には、ＨＰＶ、ＨＢＶ、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ−１およびＨＩＶ−２）などのレトロウイルス、エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）などのヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２、ならびにインフルエンザウイルスが含まれる。いくつかの実施形態では、寄生生物は、マラリアである。いくつかの実施形態では、病原体は、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ｂｒｕｇｉａ、Ｃａｎｄｉｄａ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ、Ｃｏｃｃｉｄｉａ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｄｉｒｏｆｉｌａｒｉａ、Ｇｏｎｏｃｏｃｃｕｓ、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ、Ｐａｒａｍｅｃｉｕｍ、Ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ、Ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃｕｓ、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ、およびＶｉｂｒｉｏｃｈｏｌｅｒａｅである。例示的な種としては、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｅａ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ、Ｇｒｏｕｐ  Ｂ  Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．、Ｍｉｃｒｏｐｌａｓｍａ  ｈｏｍｉｎｉｓ、Ｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｄｕｃｒｅｙｉ、Ｇｒａｎｕｌｏｍａ  ｉｎｇｕｉｎａｌｅ、Ｌｙｍｐｈｏｐａｔｈｉａ  ｖｅｎｅｒｅｕｍ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ａｂｏｒｔｕｓが挙げられる。Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ｍｅｌｉｔｅｎｓｉｓ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ｓｕｉｓ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ｃａｎｉｓ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｆｅｔｕｓ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｆｅｔｕｓ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｉｓ、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ  ｐｏｍｏｎａ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ｏｖｉｓ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｓｉｔｔａｃｉ、Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ  ｆｏｅｔｕｓ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｅｑｕｕｌｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ａｂｏｒｔｕｓ  ｏｖｉｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ａｂｏｒｔｕｓ  ｅｑｕｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｅｑｕｉ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｃｉｌｕｓ  ｓｅｍｉｎｉｓ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｂｏｖｉｇｅｎｉｔａｌｉｕｍ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ、Ａｂｓｉｄｉａ  ｒａｍｏｓａ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｅｑｕｉｐｅｒｄｕｍ、Ｂａｂｅｓｉａ  ｃａｂａｌｌｉ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ、または、例えば、Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓなどの真菌、または、例えば、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍなどの他の病原体が挙げられる。
【０１６３】
いくつかの実施形態では、抗原は、炎症性疾患、皮膚または臓器移植拒絶、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、または自己免疫疾患において自己反応性Ｔ細胞の標的であるタンパク質のエピトープを含む、および／またはタンパク質である。自己免疫疾患の例には、例えば、糸球体腎炎、関節炎、拡張型心筋症様疾患、潰瘍性大腸炎、シェーグレン症候群、クローン病、全身性エリテマトーデス、慢性関節リウマチ、多発性硬化症、乾癬、アレルギー性接触皮膚炎、多発性筋炎、硬皮症、結節性動脈周囲炎、リウマチ熱、尋常性白斑、インスリン依存性糖尿病、ベーチェット病、橋本病、アジソン病、皮膚筋炎、重症筋無力症、ライター症候群、グレーブス病、悪性貧血、グッドパスチャー症候群、不妊症、慢性活動性肝炎、天疱瘡、自己免疫性血小板減少性紫斑、および自己免疫性溶血性貧血、活動性慢性肝炎、アジソン病、抗リン脂質抗体症候群、アトピー性アレルギー、自己免疫性萎縮性胃炎、自己免疫性無酸症、セリアック病、クッシング症候群、皮膚筋炎、円板状紅斑、狼瘡、グッドパスチャー症候群、橋本甲状腺炎、特発性副腎萎縮症、インスリン依存性糖尿病、ランバート−イートン症候群、ルポイド肝炎、リンパ球減少症のいくつかの症例、混合性結合組織病、類天疱瘡、尋常性天疱瘡、悪性貧血、水晶体起因性ブドウ膜炎、結節性多発動脈炎、多腺性自己免疫症候群、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、レイノー症候群、再発性多発性軟骨炎、シュミット症候群、限局性強皮症（またはクレスト症候群）、交感性眼炎、全身性悪液質性腹膜炎、強直性膀胱炎、多腺性自己随伴症、、交感神経眼炎、全身性紅斑性狼瘡、高安動脈炎、側頭動脈炎、甲状腺中毒症、Ｂ型インスリン抵抗性、潰瘍性大腸炎、ならびにウェゲナー肉芽腫症が含まれる。自己反応性Ｔ細胞によって標的化される例示的なタンパク質には、例えば、ｐ２０５、インスリン、甲状腺刺激ホルモン、チロシナーゼ、ＴＲＰ１、およびミエリンが含まれる。
【０１６４】
いくつかの実施形態では、抗原結合タンパク質は、抗体である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、ヒト重鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト重鎖定常ドメインを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、またはＩｇＤ定常ドメインを含む。ヒト重鎖定常ドメインの配列は、当該技術分野において知られている（例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２、またはＬｅｆｒａｎｃ，Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，Ｌｏｎｄｏｎ：Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  ２００１参照）。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、重鎖定常ドメインまたはその一部分を欠く。
【０１６５】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、修飾Ｆｃドメイン（例えば、ＦｃとＦｃ受容体との間の相互作用を変化させる変異）を含む。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、位置２３５、２３６、２３７、２３９、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２９８、３２６、３２７、３３０、３３２、３５０、３５１、３６６、３９２、３９４、４０５、および／または４０７（ＥＵナンバリングシステムを使用）でそれらのＦｃドメインに対する修飾を含む。いくつかの実施形態では、修飾は、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３６Ｅ、Ｇ２３７Ｆ、Ｓ２３９Ｅ、Ｓ２３９Ｄ、Ｄ２６５Ｅ、Ｄ２６５Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｓ２６７Ｄ、Ｓ２６７Ｇ、Ｈ２６８Ｅ、Ｈ２６８Ｄ、Ｅ２６９Ｌ、Ｄ２７０Ｎ、Ｄ２７０Ｅ、Ｓ２９８Ａ、Ｋ３２６Ａ、Ｋ３２６Ｄ、Ａ３２７Ｈ、Ａ３２７Ｖ、Ａ３２７Ｌ、Ａ３３０Ｉ、Ａ３３０Ｓ、Ｉ３３２Ｅ、Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２Ｍ、Ｋ３９２Ｌ、Ｔ３９４Ｗ、Ｆ４０５Ａ、および／またはＹ４０７Ｖ（ＥＵナンバリングシステムを使用）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗体は、それらのＦｃドメインに対する複数の修飾を含む。いくつかの実施形態では、複数の修飾は、Ｄ２７０Ｎ／Ｋ３２６Ｄ、Ｓ２３９Ｅ／Ｓ２９８Ａ／Ｋ３２６Ａ／Ａ３２７Ｈ、Ｌ２３５Ａ／Ｓ２３９Ｅ／Ｄ２６５Ｅ／Ａ３２７Ｈ、Ｇ２３６Ｅ／Ｇ２３７Ｆ／Ｓ２３９Ｅ、Ｇ２３７Ｆ／Ｓ２３９Ｅ／Ｄ２６５Ｅ、Ｇ３２７Ｆ／Ｓ２３９Ｅ／Ｈ２６８Ｄ、Ｇ２３６Ｅ／Ｄ２７０Ｎ／Ａ３２７Ｖ／Ｉ３３２Ｅ、Ｇ２３７Ｆ／Ｓ２３９Ｅ／Ａ３２７Ｈ、Ｇ２３７Ｆ／Ａ３２７Ｌ／Ａ３３０Ｉ、Ｓ２３９Ｄ／Ｄ２６５Ｓ／Ｓ２９８Ａ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｅ／Ｄ２６５Ｓ／Ｈ２６８Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｅ／Ｄ２６５Ｓ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｅ／Ｓ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｄ、Ｓ２３９Ｅ／Ａ３２７Ｌ／Ａ３３０Ｉ、Ｄ２６５Ｅ／Ｓ２６７Ｄ／Ａ３３０Ｓ、Ｓ２６７Ｇ／Ｈ２６８Ｅ／Ｄ２７０Ｅ、Ｈ２６８Ｄ／Ｅ２６９Ｌ／Ｓ２９８Ａ／Ｋ３２６Ａ／Ａ３２７Ｈ、Ｈ２６８Ｄ／／Ｋ３２６Ａ／Ａ３２７Ｈからなる群から選択される。追加のＦｃ修飾およびＦｃ修飾の組み合わせは、米国特許第５，６２４，８２１号、同第５，６４８，２６０号、同第６，５２８，６２４号、同第６，７３７，０５６号、第７，１２２，６３７号、第７，１８３，３８７号、第７，２９７，７７５号、同第７，３１７，０９１号、同第７，３３２，５８１号、同第７，６３２，４９７号、同第７，６６２，９２５号、同第７，６９５，９３６号、同第８，０９３，３５９号、同第８，２１６，８０５号、同第８，２１８，８０５号、同第８，３８８，９５５号、および同第８，９３７，１５８号、ならびに米国特許出願公開第２００５／００５４８３２号、同第２００６／０２２２６５３号、同第２００６／０２７５２８２号、同第２００６／０２７５２８３号、同第２００７／０１９００６３号、同第２００８／０１５４０２５号、同第２００９／００４２２９１号、同第２０１３／０１０８６２３号、および同第２０１３／００８９５４１号において提供されており、これらの各々は、本明細書に参照により組み込まれる。
【０１６６】
いくつかの実施形態では、抗体は、二重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体の２つの抗原結合ドメインは、別個の重鎖可変ドメインを有するが、同一の軽鎖可変ドメインを有する。いくつかの実施形態では、重鎖のＦｃドメインは、重鎖ヘテロ二量体形成を促進および／または重鎖ホモ二量体形成を阻害するための修飾を含む。このような修飾は、例えば、米国特許第５，７３１，１６８号、同第５，８０７，７０６号、同第５，８２１，３３３号、同第７，６４２，２２８号、および同第８，６７９，７８５号、ならびに米国特許出願公開第２０１３／０１９５８４９号において提供されており、これらの各々は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１６７】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、ヒト軽鎖可変ドメインを有する。いくつかの実施形態では、軽鎖可変ドメインは、λ軽鎖可変ドメインを有する。いくつかの実施形態では、軽鎖可変ドメインは、κ軽鎖可変ドメインを有する。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト軽鎖定常ドメインを有する。いくつかの実施形態では、軽鎖定常ドメインは、λ軽鎖定常ドメインである。いくつかの実施形態では、軽鎖定常ドメインは、κ軽鎖定常ドメインである。ヒト軽鎖定常ドメインの配列は、当該技術分野において知られている（例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２、またはＬｅｆｒａｎｃ，Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，Ｌｏｎｄｏｎ：Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  ２００１参照）。
【０１６８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体は、インタクトな抗体である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体は、抗原結合を保持する抗体断片である。いくつかの実施形態では、抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、Ｆｄ、単鎖抗体、単離ＣＤＲＨ３、またはインタクトな抗体の可変ドメインの少なくとも一部分を保持する別の抗体断片である。
【０１６９】
特定の実施形態では、抗原結合タンパク質は、ＣＡＲである。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、膜結合性である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、可溶性ＣＡＲである（例えば、膜貫通または細胞質ドメインを欠いている）。いくつかの実施形態では、そのようなＣＡＲは、Ｉｇ重鎖可変ドメインおよびＴＣＲβ定常ドメインを含む第１のＣＡＲポリペプチドならびにＩｇ軽鎖可変ドメイン（例えば、Ｉｇκ可変ドメインまたはＩｇλ可変ドメイン）およびＴＣＲα定常ドメインを含む第２のＣＡＲポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、Ｉｇ重鎖可変ドメインおよび／またはＩｇ軽鎖可変ドメインは、ヒトＩｇ可変ドメインである。いくつかの実施形態では、ＴＣＲβ定常ドメインおよび／またはＴＣＲα定常ドメインは、非ヒト定常ドメイン（例えば、ラットまたはマウス定常ドメイン）である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲβ定常ドメインおよび／またはＴＣＲα定常ドメインは、ヒト定常ドメインである。
【０１７０】
特定の実施形態では、抗原結合タンパク質は、ＴＣＲである。いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、膜結合性である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、可溶性ＴＣＲである（例えば、膜貫通または細胞質ドメインを欠いている）。いくつかの実施形態では、そのようなＴＣＲは、ＴＣＲβ可変ドメインおよびＴＣＲβ定常ドメインを含む第１のＴＣＲポリペプチドならびにＴＣＲα可変ドメインおよびＴＣＲα定常ドメインを含む第２のＴＣＲポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲα可変ドメインおよび／またはＴＣＲβ可変ドメインは、ヒトＴＣＲ可変ドメインである。いくつかの実施形態では、ＴＣＲβ定常ドメインおよび／またはＴＣＲα定常ドメインは、非ヒト定常ドメイン（例えば、ラットまたはマウス定常ドメイン）である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲβ定常ドメインおよび／またはＴＣＲα定常ドメインは、ヒト定常ドメインである。
【０１７１】
薬学的組成物
特定の実施形態では、組成物、例えば、薬学的に許容される担体と共に製剤化される本明細書に記載の少なくとも１つの薬剤（例えば、本明細書に記載の非ヒト動物から得られる、本明細書に記載の抗体、ＣＡＲ、またはＴＣＲのような、本明細書に記載の抗原結合分子）を含む、薬学的組成物が本明細書で提供される。
【０１７２】
本明細書で提供される薬学的組成物は、固体または液体形態での投与のために特別に製剤化することができ、以下のために適合されたものを含む：（１）経口投与、例えば、ドレンチ（水性または非水性溶液または懸濁液）、錠剤、例えば、口腔、舌下、および全身吸収を目的としたもの、ボーラス、粉末、顆粒、舌への塗布のためのペースト、あるいは（２）例えば、滅菌溶液もしくは懸濁液、または徐放性製剤としての皮下、筋肉内、静脈内、または硬膜外注射による非経口投与。
【０１７３】
非経口投与に適した本明細書で提供される薬学的組成物は、糖、アルコール、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、製剤を意図されたレシピエントの血液と等張にする溶質、または懸濁剤もしくは増粘剤を含有してもよい、１つ以上の薬学的に許容される滅菌等張水溶液もしくは非水溶液、分散液、懸濁液もしくはエマルジョン、または使用直前に滅菌注射液もしくは分散液に再構成され得る滅菌粉末と組み合わされた、本明細書に記載の１つ以上の薬剤を含む。
【０１７４】
本明細書で提供される薬学的組成物において使用され得る適切な水性および非水性担体の例には、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）およびそれらの適切な混合物、オリーブ油のような植物油、ならびにオレイン酸エチルのような注入可能な有機エステルが含まれる。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材料の使用、分散液の場合には必要とされる粒子サイズの維持、および界面活性剤の使用によって維持することができる。
【０１７５】
特定の実施形態では、組成物は、本明細書に記載の抗体、ＴＣＲ、および／またはＣＡＲを、所望の用量に適した重量／体積をもたらす濃度で含む。抗体、ＴＣＲ、および／またはＣＡＲは、組成物中に、少なくとも１ｍｇ／ｍＬ、少なくとも５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも２０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも２５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも３０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも３５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも４０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも４５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも５０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも５５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも６０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも６５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも７０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも７５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも８０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも８５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも９０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも９５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１００ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１０５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１１０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１１５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１２０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１２５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１３０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１３５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１４０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１５０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも２００ｍｇ／ｍＬ、少なくとも２５０ｍｇ／ｍＬ、または少なくとも３００ｍｇ／ｍＬの濃度で存在し得る。
【０１７６】
いくつかの実施形態では、組成物は、治療される特定の適応症に必要な１つ以上の活性化合物、典型的には互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を有するものを含む。このような追加の活性化合物は、意図する目的に有効な量で組み合わされて適切に存在する。
【０１７７】
いくつかの実施形態では、組成物は、本明細書に記載の抗体、ＴＣＲ、および／またはＣＡＲを、緩衝剤、糖類、塩、界面活性剤、可溶化剤、ポリオール、希釈剤、結合剤、安定剤、塩、親油性溶媒、アミノ酸、キレート剤、防腐剤などを含むがこれらに限定されない、任意の生理学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤（Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，１２ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌ．Ｂｒｕｎｔｏｎ，ｅｔ  ａｌ．ａｎｄ  Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９９９））と混合することによって、所望の最終濃度の凍結乾燥組成物または水溶液の形態に調製される。許容される担体、賦形剤、または安定剤は、使用される用量および濃度でレシピエントに無毒であり、ヒスチジン、リン酸塩、クエン酸塩、グリシン、酢酸塩、および他の有機酸などの緩衝剤、アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤、防腐剤（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチル、またはベンジルアルコール、メチルまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３−ペンタノール、およびｍ−クレゾールなど）、低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド、タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリン、ポリビニルピロリドンのような親水性ポリマー、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリジンなどのアミノ酸、単糖類、二糖類、およびトレハロース、グルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む他の炭水化物、ＥＤＴＡのようなキレート剤、スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトールなどの糖類、ナトリウムのような塩形成対イオン、金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）、ならびに／またはＴＷＥＥＮ、ポリソルベート８０、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）、もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含む。
【０１７８】
いくつかの実施形態では、緩衝剤は、ヒスチジン、クエン酸塩、リン酸塩、グリシン、または酢酸塩である。糖類賦形剤は、トレハロース、スクロース、マンニトール、マルトース、またはラフィノースであってもよい。界面活性剤は、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート８０、またはＰｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ６８であってもよい。塩は、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＭｇＣｌ２、またはＣａＣｌ２であってもよい。
【０１７９】
いくつかの実施形態では、組成物は、改善されたｐＨ制御を提供する緩衝剤またはｐＨ調節剤を含む。そのような組成物は、約３．０〜約９．０、約４．０〜約８．０、約５．０〜約８．０、約５．０〜約７．０、約５．０〜約６．５、約５．５〜約８．０、約５．５〜約７．０、または約５．５〜約６．５のｐＨを有し得る。さらなる実施形態では、そのような組成物は、約３．０、約３．５、約４．０、約４．５、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４、約５．５、約５．６、約５．７、約５．８、約５．９、約６．０、約６．１、約６．２、約６．３、約６．４、約６．５、約６．６、約６．７、約６．８、約６．９、約７．０、約７．５、約８．０、約８．５、または約９．０のｐＨを有する。特定の実施形態では、組成物は、約６．０のｐＨを有する。当業者は、組成物のｐＨが、一般に、組成物中で使用される特定の抗体、ＴＣＲ、またはＣＡＲの等電点と等しくあるべきではないことを理解する。典型的には、緩衝剤は、有機または無機の酸または塩基から調製された塩である。代表的な緩衝剤としては、これらに限定されないが、クエン酸、アスコルビン酸、グルコン酸、炭酸、酒石酸、コハク酸、酢酸、もしくはフタル酸の塩のような有機酸塩、トリス、トロメタミン塩酸塩、またはリン酸塩緩衝液が挙げられる。さらに、アミノ酸成分も、緩衝能において機能することができる。組成物中で緩衝剤として利用され得る代表的なアミノ酸成分としては、グリシンおよびヒスチジンが挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、緩衝剤は、ヒスチジン、クエン酸塩、リン酸塩、グリシン、および酢酸塩から選択される。特定の実施形態では、緩衝剤は、ヒスチジンである。別の特定の実施形態では、緩衝剤は、クエン酸塩である。さらに別の特定の実施形態では、緩衝剤は、グリシンである。緩衝剤の純度は、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、または少なくとも９９．５％でなければならない。本明細書で使用されるように、ヒスチジンおよびグリシンの文脈における「純度」という用語は、例えば、Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘ，１３ｔｈ  ｅｄ．，Ｏ’Ｎｅｉｌ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄ．（Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．，２００１）に記載されるように、当該技術分野で理解されるヒスチジンまたはグリシンの化学的純度を指す。
【０１８０】
特定の実施形態では、組成物は、緩衝剤としてヒスチジンを含む。特定の実施形態では、ヒスチジンは、組成物中に、少なくとも約１ｍＭ、少なくとも約５ｍＭ、少なくとも約１０ｍＭ、少なくとも約２０ｍＭ、少なくとも約３０ｍＭ、少なくとも約４０ｍＭ、少なくとも約５０ｍＭ、少なくとも約７５ｍＭ、少なくとも約１００ｍＭ、少なくとも約１５０ｍＭ、または少なくとも約２００ｍＭのヒスチジンの濃度で存在する。別の実施形態では、組成物は、約１ｍＭ〜約２００ｍＭ、約１ｍＭ〜約１５０ｍＭ、約１ｍＭ〜約１００ｍＭ、約１ｍＭ〜約７５ｍＭ、約１０ｍＭ〜約２００ｍＭ、約１０ｍＭ〜約１５０ｍＭ、約１０ｍＭ〜約１００ｍＭ、約１０ｍＭ〜約７５ｍＭ、約１０ｍＭ〜約５０ｍＭ、約１０ｍＭ〜約４０ｍＭ、約１０ｍＭ〜約３０ｍＭ、約２０ｍＭ〜約７５ｍＭ、約２０ｍＭ〜約５０ｍＭ、約２０ｍＭ〜約４０ｍＭ、または約２０ｍＭ〜約３０ｍＭのヒスチジンを含む。さらなる実施形態では、組成物は、約１ｍＭ、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約６０ｍＭ、約７０ｍＭ、約８０ｍＭ、約９０ｍＭ、約１００ｍＭ、約１５０ｍＭ、または約２００ｍＭのヒスチジンを含む。特定の実施形態では、組成物は、約１０ｍＭ、約２５ｍＭのヒスチジンを含むか、またはヒスチジンを含まない場合がある。
【０１８１】
いくつかの実施形態では、組成物は、炭水化物賦形剤を含む。炭水化物賦形剤は、例えば、増粘剤、安定剤、増量剤、可溶化剤などとして作用することができる。炭水化物賦形剤は、一般的には、約１重量％または体積％〜約９９重量％または体積％、例えば、約０．１％〜約２０％、約０．１％〜約１５％、約０．１％〜約５％、約１％〜約２０％、約５％〜約１５％、約８％〜約１０％、約１０％〜約１５％、約１５％〜約２０％、０．１％〜２０％、５％〜１５％、８％〜１０％、１０％〜１５％、１５％〜２０％、約０．１％〜約５％、約５％〜約１０％、または約１５％〜約２０％で存在する。さらに他の特定の実施形態では、炭水化物賦形剤は、１％、または１．５％、または２％、または２．５％、または３％、または４％、または５％、または１０％、または１５％、または２０％で存在する。
【０１８２】
いくつかの実施形態では、組成物は、炭水化物賦形剤を含む。組成物での使用に適した炭水化物賦形剤としては、フルクトース、マルトース、ガラクトース、グルコース、Ｄ−マンノース、ソルボースなどの単糖類；ラクトース、スクロース、トレハロース、セロビオースなどの二糖類；ラフィノース、メレジトース、マルトデキストリン、デキストラン、デンプンなどの多糖類；およびマンニトール、キシリトール、マルチトール、ラクチトール、キシリトールソルビトール（グルシトール）などのアルジトールが挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、本明細書で提供される組成物での使用のための炭水化物賦形剤は、スクロース、トレハロース、ラクトース、マンニトール、およびラフィノースから選択される。特定の実施形態では、炭水化物賦形剤は、トレハロースである。別の特定の実施形態では、炭水化物賦形剤は、マンニトールである。さらに別の特定の実施形態では、炭水化物賦形剤は、スクロースである。さらに別の特定の実施形態では、炭水化物賦形剤は、ラフィノースである。炭水化物賦形剤の純度は、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、または少なくとも９９．５％でなければならない。
【０１８３】
いくつかの実施形態では、組成物は、トレハロースを含む。特定の実施形態では、組成物は、少なくとも約１％、少なくとも約２％、少なくとも約４％、少なくとも約８％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、または少なくとも約４０％のトレハロースを含む。別の実施形態では、組成物は、約１％〜約４０％、約１％〜約３０％、約１％〜約２０％、約２％〜約４０％、約２％〜約３０％、約２％〜約２０％、約４％〜約４０％、約４％〜約３０％、または約４％〜約２０％のトレハロースを含む。さらなる実施形態では、組成物は、約１％、約２％、約４％、約６％、約８％、約１５％、約２０％、約３０％、または約４０％のトレハロースを含む。特定の実施形態では、組成物は、約４％、約６％、または約１５％のトレハロースを含む。
【０１８４】
特定の実施形態では、組成物は、賦形剤を含む。特定の実施形態では、組成物は、糖、塩、界面活性剤、アミノ酸、ポリオール、キレート剤、乳化剤、および保存剤から選択される少なくとも１つの賦形剤を含む。特定の実施形態では、組成物は、塩、例えば、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＣａＣｌ２、およびＭｇＣｌ２から選択される塩を含む。特定の実施形態では、組成物は、ＮａＣｌを含む。
【０１８５】
いくつかの実施形態では、組成物は、アミノ酸、例えば、リジン、アルギニン、グリシン、ヒスチジン、またはアミノ酸塩を含む。組成物は、少なくとも約１ｍＭ、少なくとも約１０ｍＭ、少なくとも約２５ｍＭ、少なくとも約５０ｍＭ、少なくとも約１００ｍＭ、少なくとも約１５０ｍＭ、少なくとも約２００ｍＭ、少なくとも約２５０ｍＭ、少なくとも約３００ｍＭ、少なくとも約３５０ｍＭ、または少なくとも約４００ｍＭのアミノ酸を含み得る。別の実施形態では、組成物は、約１ｍＭ〜約１００ｍＭ、約１０ｍＭ〜約１５０ｍＭ、約２５ｍＭ〜約２５０ｍＭ、約２５ｍＭ〜約３００ｍＭ、約２５ｍＭ〜約３５０ｍＭ、約２５ｍＭ〜約４００ｍＭ、約５０ｍＭ〜約２５０ｍＭ、約５０ｍＭ〜約３００ｍＭ、約５０ｍＭ〜約３５０ｍＭ、約５０ｍＭ〜約４００ｍＭ、約１００ｍＭ〜約２５０ｍＭ、約１００ｍＭ〜約３００ｍＭ、約１００ｍＭ〜約４００ｍＭ、約１５０ｍＭ〜約２５０ｍＭ、約１５０ｍＭ〜約３００ｍＭ、または約１５０ｍＭ〜約４００ｍＭのアミノ酸を含み得る。さらなる実施形態では、組成物は、約１ｍＭ、１．６ｍＭ、２５ｍＭ、約５０ｍＭ、約１００ｍＭ、約１５０ｍＭ、約２００ｍＭ、約２５０ｍＭ、約３００ｍＭ、約３５０ｍＭ、または約４００ｍＭのアミノ酸を含む。
【０１８６】
いくつかの実施形態では、組成物は、界面活性剤を含む。本明細書で使用される「界面活性剤」という用語は、両親媒性構造を有する有機物質を指す。すなわち、それらは反対の溶解性傾向の基、典型的には油溶性炭化水素鎖および水溶性イオン基からなる。界面活性剤は、界面活性部分の電荷に応じて、アニオン性、カチオン性、および非イオン性界面活性剤に分類することができる。界面活性剤は、生物学的材料の様々な薬学的組成物および調製物のための湿潤剤、乳化剤、可溶化剤、および分散剤としてしばしば使用される。ポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０または８０）；ポリオキサマー（例えば、ポロキサマー１８８）；トリトン；オクチルグリコシドナトリウム；ラウリル−、ミリスチル−、リノレイル−、またはステアリル−スルホベタイン；ラウリル−、ミリスチル−、リノレイル−、またはステアリル−サルコシン；リノレイル−、ミリスチル−、またはセチル−ベタイン；ラウロアミドプロピル−、コカミドプロピル−、リノレアミドプロピル−、ミリスタミドプロピル−、パイミドプロピル−（ｐａＩｍｉｄｏｐｒｏｐｙｌ−）、またはイソステアラミドプロピル−ジメチルアミン；メチルココイルタウリン酸ナトリウム、またはメチルオレイルタウリン酸二ナトリウム；ならびにＭＯＮＡＱＵＡ（登録商標）シリーズ（Ｍｏｎａ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｐａｔｅｒｓｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、ポリエチルグリコール、ポリプロピルグリコール、およびエチレンとプロピレングリコールとのコポリマー（例えば、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）ＰＦ６８など）のような薬学的に許容される界面活性剤を、任意で組成物に添加して、凝集を低減することができる。特定の実施形態では、組成物は、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、またはポリソルベート８０を含む。界面活性剤は、ポンプまたはプラスチック容器を使用して組成物を投与する場合に特に有用である。薬学的に許容される界面活性剤の存在は、タンパク質が凝集する傾向を緩和する。組成物は、約０．００１％〜約１％、または約０．００１％〜約０．１％、または約０．０１％〜約０．１％の範囲の濃度であるポリソルベートを含み得る。他の特定の実施形態では、組成物は、０．００１％、または０．００２％、または０．００３％、または０．００４％、または０．００５％、または０．００６％、または０．００７％、または０．００８％、または０．００９％、または０．０１％、または０．０１５％、または０．０２％の濃度であるポリソルベートを含む。
【０１８７】
いくつかの実施形態において、組成物は、希釈剤、結合剤、安定剤、親油性溶媒、保存剤、アジュバントなどを含むが、これらに限定されない、他の賦形剤および／または添加物をさらに含む。薬学的に許容可能な賦形剤および／または添加剤は、本明細書で提供される組成物中で使用されてもよい。一般に使用される賦形剤／添加剤、例えば、薬学的に許容可能なキレート剤（例えばこれらに限らないが、ＥＤＴＡ、ＤＴＰＡまたはＥＧＴＡ）を、任意で組成物に加えて、凝集を減らすことができる。これらの添加剤は、ポンプまたはプラスチック容器を使用して組成物を投与する場合に特に有用である。
【０１８８】
いくつかの実施形態において、組成物は保存剤を含む。フェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、亜硝酸フェニル水銀、フェノキシエタノール、ホルムアルデヒド、クロロブタノール、塩化マグネシウム（例えばこれに限らないが、六水和物）、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチルなど）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウムおよびチメロサールまたはそれらの混合物などの保存剤は、約０．００１％〜約５％の範囲、または該範囲内の任意の範囲または値の任意の好適な濃度で、任意で組成物に加えることができる。組成物中に使用される保存剤の濃度は、微生物効果を得るために十分な濃度である。そのような濃度は、選択された保存剤に依存しており、当業者によって容易に決定される。
【０１８９】
いくつかの実施形態において、組成物はヒト血液と等張であり、組成物はヒト血液と本質的に同じ浸透圧を有する。このような等張組成物は、一般に、約２５０ｍＯＳｍ〜約３５０ｍＯＳｍの浸透圧を有する。等張性は、例えば、蒸気圧または凍結型浸透圧計を用いて測定することができる。組成物の張度は張性調整剤の使用によって調節される。「張度調節剤」は、組成物に加えて該組成物の等張性を提供することができる薬学的に許容可能な不活性物質である。本明細書で提供される組成物に適した張度調整剤としては、サッカリド、塩およびアミノ酸が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１９０】
特定の実施形態において、組成物は、発熱物質を含まず、エンドトキシンおよび／または関連する発熱物質を実質的に含まない。エンドトキシンには、微生物内部に閉じ込められた毒素が含まれ、微生物が分解または死んだ場合にのみ放出される。発熱物質にはまた、細菌および他の微生物の外膜由来の、発熱を引き起こす耐熱性物質もある。これらの物質はどちらも、ヒトに投与される場合、発熱、低血圧およびショックを引き起こす恐れがある。有害作用の可能性があるため、少量のエンドトキシンでも静脈内投与される医薬品溶液から除去されなければならない。米国食品医薬品局（「ＦＤＡ」）は、静脈内薬剤投与の場合、１投与につき体重１キログラム当たり１時間以内に５エンドトキシン単位（ＥＵ）の上限を設定している（Ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌ  Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ，Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌ  Ｆｏｒｕｍ  ２６（１）：２２３（２０００））。目的のタンパク質（例えば、抗体）の場合のように、治療用タンパク質が体重１キログラムあたり数百または数千ミリグラムの量で投与される場合、有害で危険なエンドトキシンの痕跡量も除去されなければならない。いくつかの実施形態において、組成物中のエンドトキシンおよび発熱物質のレベルは、１０ＥＵ／ｍｇ未満、または５ＥＵ／ｍｇ未満、または１ＥＵ／ｍｇ未満、または０．１ＥＵ／ｍｇ未満、または０．０１ＥＵ／ｍｇ未満、または０．００１ＥＵ／ｍｇ未満である。
【０１９１】
インビボ投与に使用する場合、本明細書に記載の組成物は滅菌でなければならない。組成物は、滅菌濾過、放射線などを含む種々の滅菌方法によって滅菌することができる。特定の実施形態において、組成物は、予め滅菌した０．２２ミクロンのフィルターで濾過滅菌する。注射用の滅菌組成物は、“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ”，２１ｓｔ  ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，（２００５）に記載のように従来の薬学的実務に従って処方することができる。本明細書に開示されているような目的のタンパク質（例えば、抗体またはＴＣＲまたはＣＡＲ）を含む組成物は、通常、凍結乾燥形態または溶液中に保存される。目的のタンパク質（例えば、抗体、ＴＣＲまたはＣＡＲ）を含む滅菌組成物を、滅菌取り出し口を有する容器、例えば皮下注射針で突き刺すことができるストッパーのように、組成物の回収を可能にするアダプターを有する静脈内溶液バッグまたはバイアルに配置することが考えられる。特定の実施形態において、組成物は、予め充填された注射器として提供される。
【０１９２】
特定の実施形態において、組成物は凍結乾燥製剤である。用語「凍結乾燥」または「フリーズドライ」は、凍結乾燥などの乾燥手順に付された物質の状態を含み、少なくとも５０％の水分が除去されている。
【０１９３】
選択された投与経路に関わらず、適切な水和形態で使用し得る本明細書で提供される薬剤、および／または本明細書で提供される医薬組成物は、当業者に既知の従来の方法によって薬学的に許容可能な剤形に製剤される。
【０１９４】
治療法
特定の態様において、抗原結合タンパク質（例えば、完全ヒト抗体、ＴＣＲまたはＣＡＲのような本明細書に記載の抗体、ＴＣＲおよび／またはＣＡＲ）を対象に投与することを含む疾患または障害を治療する方法を本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、抗体、ＴＣＲおよび／またはＣＡＲは、本明細書に記載の方法から得られる、または該方法を用いて（例えば、本明細書に記載の非ヒト動物を用いて）得ることができる、抗体、ＴＣＲおよび／またはＣＡＲである。
【０１９５】
特定の実施形態において、本明細書に記載の医薬組成物（例えば、本明細書に記載の非ヒト動物から得られる、本明細書に記載の完全ヒト抗体、ＴＣＲまたはＣＡＲなどの本明細書に記載の抗体を含む医薬組成物）を対象に投与することを含む、対象の癌を治療する方法を本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法は、任意の癌性または前癌性腫瘍を治療するために使用することができる。本明細書に記載の方法および組成物によって治療することができる癌として、膀胱、血液、骨、骨髄、脳、乳房、結腸、食道、胃腸管、歯肉、頭部、腎臓、肝臓、肺、鼻咽頭、頸部、卵巣、前立腺、皮膚、胃、精巣、舌または子宮の癌細胞が挙げられるが、これに限定されるものではない。種々の組織学的タイプの癌の非限定的な例としては、新生物（悪性）；癌；癌（未分化）；巨細胞癌および紡錘体細胞癌；小細胞癌；乳頭状癌；扁平上皮癌；リンパ上皮癌；基底細胞癌；毛母癌；移行上皮癌；乳頭状移行上皮癌；腺癌；ガストリン産生腫瘍（悪性）；胆管癌；肝細胞癌；混合性肝細胞癌および胆管癌；小柱腺癌；腺様嚢胞癌；腺腫性ポリープの腺癌；腺癌、家族性大腸ポリポージス；固形癌；カルチノイド腫瘍（悪性）；細気管支肺胞性腺癌；乳頭状腺癌；嫌色素性癌；好酸癌；酸親和性腺癌；好塩基性癌；明細胞腺癌；顆粒細胞癌；卵胞腺癌；乳頭状および卵胞腺癌；非カプセル化硬化性癌；副腎皮質癌；類内膜癌；皮膚付属器癌；アポクリン腺癌；皮脂性腺癌；耳垢腺癌；粘液性類表皮癌；嚢胞腺癌；乳頭状嚢胞腺癌；乳頭状漿液性嚢胞腺癌；粘液性嚢胞腺癌；粘液性腺癌；印環細胞癌；浸潤性導管癌；髄様癌；小葉癌；炎症性癌；ページェット病（乳房）；腺房細胞癌；腺扁平上皮癌；扁平上皮化生付腺癌；胸腺腫（悪性）；卵巣間質性腫瘍（悪性）；卵胞膜細胞腫（悪性）；顆粒膜細胞腫（悪性）；およびロバストマ（悪性）；セルトリ細胞癌；ライディッヒ細胞腫（悪性）；脂質細胞腫瘍（悪性）；パラガングリオーマ（悪性）；乳房外パラガングリオーマ（悪性）；褐色細胞腫；血管球血管肉腫；悪性黒色腫；メラニン欠乏性黒色腫；表在拡大型黒色腫；巨大色素性母斑の悪性黒色腫；類上皮細胞黒色腫；青色母斑（悪性）；肉腫；線維肉腫；線維性組織球腫（悪性）；粘液肉腫；脂肪肉腫；平滑筋肉腫；横紋筋肉腫；胚性横紋筋肉腫；胞巣状横紋筋肉腫；間質性肉腫；混合腫瘍（悪性）；ミュラー混合腫瘍；腎芽腫；肝芽細胞腫；癌肉腫；間葉細胞腫（悪性）；ブレンナー腫瘍（悪性）；仮葉腫瘍（悪性）；滑膜肉腫；中皮腫（悪性）；未分化胚細胞腫；胎児性癌；奇形腫（悪性）；卵巣甲状腺腫（悪性）；絨毛癌；中腎腫（悪性）；血管肉腫；血管内皮腫（悪性）；カポジ肉腫；血管周囲細胞腫（悪性）；リンパ管肉腫；骨肉腫；傍骨性骨肉腫；軟骨肉腫；軟骨芽細胞腫（悪性）；間充織軟骨肉腫；骨巨細胞腫；ユーイング肉腫；歯原性腫瘍（悪性）；エナメル芽細胞歯肉腫；エナメル上皮腫（悪性）；エナメル芽細胞線維肉腫；松果体腫（悪性）；脊索腫；神経膠腫（悪性）；上衣腫；星細胞腫；原形質性星状細胞腫；線維性星細胞腫；神経膠星状芽細胞腫；グリア芽細胞腫；希突起膠細胞腫；乏突起神経膠芽細胞腫；初期神経外胚葉性；小脳肉腫；神経節芽細胞腫；神経芽細胞腫；網膜芽細胞腫；嗅神経原性腫瘍；髄膜腫（悪性）；神経線維肉腫；神経鞘腫（悪性）；顆粒細胞腫（悪性）；悪性リンパ腫；ホジキン病；ホジキンリンパ腫；側肉芽腫；悪性リンパ腫（小リンパ球性）；悪性リンパ腫（大細胞、びまん性）；悪性リンパ腫（卵胞）；菌状息肉腫；他の特定の非ホジキンリンパ腫；悪性組織球症；多発性骨髄腫；肥満細胞肉腫；免疫増殖性小腸病；白血病；リンパ性白血病；形質細胞白血病；赤白血病；リンパ肉腫細胞白血病；骨髄白血病；好塩基球性白血病；好酸球性白血病；単球白血病；肥胖細胞性白血病；巨核芽球白血病；骨髄肉腫；および毛様細胞性白血病が挙げられる。
【０１９６】
特定の実施形態において、対象に投与した医薬組成物中の抗体、ＴＣＲまたはＣＡＲは、癌関連抗原のエピトープ（例えば、治療中の癌によって発現されるエピトープ）に対する結合特異性を有する。癌関連抗原の例としては、アディポフィリン、ＡＩＭ−２、ＡＬＤＨ１Ａ１、α−アクチニン−４、α−フェトプロテイン（「ＡＦＰ」）、ＡＲＴＣ１、Ｂ−ＲＡＦ、ＢＡＧＥ−１、ＢＣＬＸ（Ｌ）、ＢＣＲ−ＡＢＬ融合タンパク質ｂ３ａ２、β−カテニン、ＢＩＮＧ−４、ＣＡ−１２５、ＣＡＬＣＡ、癌胎児性抗原（「ＣＥＡ」）、ＣＡＳＰ−５、ＣＡＳＰ−８、ＣＤ２７４、ＣＤ４５、Ｃｄｃ２７、ＣＤＫ１２、ＣＤＫ４、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＥＡ、ＣＬＰＰ、ＣＯＡ−１、ＣＰＳＦ、ＣＳＮＫ１Ａ１、ＣＴＡＧ１、ＣＴＡＧ２、サイクリンＤ１、サイクリン−Ａ１、ｄｅｋ−ｃａｎ融合タンパク質、ＤＫＫ１、ＥＦＴＵＤ２、伸長因子２、ＥＮＡＨ（ｈＭｅｎａ）、Ｅｐ−ＣＡＭ、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ３，上皮性腫瘍抗原（「ＥＴＡ」）、ＥＴＶ６−ＡＭＬ１融合タンパク質、ＥＺＨ２、ＦＧＦ５、ＦＬＴ３−ＩＴＤ、ＦＮ１、Ｇ２５０／ＭＮ／ＣＡＩＸ、ＧＡＧＥ−１，２，８、ＧＡＧＥ−３，４，５，６，７、ＧＡＳ７、グリピカン−３、ＧｎＴＶ、ｇｐ１００／Ｐｍｅｌ１７、ＧＰＮＭＢ、ＨＡＵＳ３、ヘプシン、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ、ＨＥＲＶ−Ｋ−ＭＥＬ、ＨＬＡ−Ａ１１、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−ＤＯＢ、ｈｓｐ７０−２、ＩＤＯ１、ＩＧＦ２Ｂ３、ＩＬ１３Ｒａｌｐｈａ２、腸カルボキシルエステラーゼ、Ｋ−ｒａｓ、カリクレイン４、ＫＩＦ２０Ａ、ＫＫ−ＬＣ−１、ＫＫＬＣ１、ＫＭ−ＨＮ−１、ＫＭＨＮ１（別名ＣＣＤＣ１１０）、ＬＡＧＥ−１、ＬＤＬＲ−フコシルトランスフェラーゼＡＳ融合タンパク質、Ｌｅｎｇｓｉｎ、Ｍ−ＣＳＦ、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ９、ＭＡＧＥ−Ｃ１、ＭＡＧＥ−Ｃ２、リンゴ酸酵素、マンマグロビン−Ａ、ＭＡＲＴ２、ＭＡＴＮ、ＭＣ１Ｒ、ＭＣＳＰ、ｍｄｍ−２、ＭＥ１、メラン−Ａ／ＭＡＲＴ−１、メロエ、ミッドカイン、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−７、ＭＵＣ１、ＭＵＣ５ＡＣ、ムチン、ＭＵＭ−１、ＭＵＭ−２、ＭＵＭ−３、ミオシン、ミオシンクラスＩ、Ｎ−ｒａｗ、ＮＡ８８−Ａ、ネオ−ＰＡＰ、ＮＦＹＣ、ＮＹ−ＢＲ−１、ＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ−２、ＯＡ１、ＯＧＴ、ＯＳ−９、Ｐポリペプチド、ｐ５３、ＰＡＰ、ＰＡＸ５、ＰＢＦ、ｐｍｌ−ＲＡＲα融合タンパク質、多形性上皮ムチン（「ＰＥＭ」）、ＰＰＰ１Ｒ３Ｂ、ＰＲＡＭＥ、ＰＲＤＸ５、ＰＳＡ、ＰＳＭＡ、ＰＴＰＲＫ、ＲＡＢ３８／ＮＹ−ＭＥＬ−１、ＲＡＧＥ−１、ＲＢＡＦ６００、ＲＧＳ５、ＲｈｏＣ、ＲＮＦ４３、ＲＵ２ＡＳ、ＳＡＧＥ、セセルニン１、ＳＩＲＴ２、ＳＮＲＰＤ１、ＳＯＸ１０、Ｓｐ１７、ＳＰＡ１７、ＳＳＸ−２、ＳＳＸ−４、ＳＴＥＡＰ１、サバイビン、ＳＹＴ−ＳＳＸ１または−ＳＳＸ２融合タンパク質、ＴＡＧ−１、ＴＡＧ−２、テロメラーゼ、ＴＧＦ−βＲＩＩ、ＴＰＢＧ、ＴＲＡＧ−３、トリオースリン酸イソメラーゼ、ＴＲＰ−１／ｇｐ７５、ＴＲＰ−２、ＴＲＰ２−ＩＮＴ２、チロシナーゼ、チロシナーゼ（「ＴＹＲ」）、Ｖ��ＧＦ、ＷＴ１、ＸＡＧＥ−１ｂ／ＧＡＧＥＤ２ａが挙げられるが、これらに限定されるものではない。いくつかの実施形態では、抗原は新生抗原である。
【０１９７】
特定の実施形態において、ウイルス感染、真菌感染、細菌感染、蠕虫感染または原生動物感染などの感染症に罹患している対象を治療する方法であって、本明細書に記載の医薬組成物（例えば、本明細書に記載の非ヒト動物から得られる本明細書に記載の抗体、ＴＣＲまたはＣＡＲを含む医薬組成物）を対象に投与することを含む、方法を本明細書で提供する。ウイルス性感染症の非限定的な例としては、ＨＰＶ、ＨＢＶ、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ−１およびＨＩＶ−２）などレトロウイルス、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）などヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２ならびにインフルエンザウイルスが挙げられる。寄生虫感染の非限定的な例には、マラリアがある。細菌性、真菌性および他の病原性疾患の非限定的な例としては、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ，Ｂｒｕｇｉａ，Ｃａｎｄｉｄａ，Ｃｈｌａｍｙｄｉａ，Ｃｏｃｃｉｄｉａ，Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ，Ｄｉｒｏｆｉｌａｒｉａ，Ｇｏｎｏｃｏｃｃｕｓ，Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ，Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ，Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ，Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ，Ｐａｒａｍｅｃｉｕｍ，Ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ，Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ，Ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃｕｓ，Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ，Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ，Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ，Ｓｈｉｇｅｌｌａ，Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ，Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ，ＴｏｘｏｐｌａｓｍａおよびＶｉｂｒｉｏｃｈｏｌｅｒａｅが挙げられる。例示的な種としては、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｅａ，Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ，Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ，Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ，Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ，Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ，Ｇｒｏｕｐ  Ｂ  Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．，Ｍｉｃｒｏｐｌａｓｍａ  ｈｏｍｉｎｉｓ，Ｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｄｕｃｒｅｙｉ，Ｇｒａｎｕｌｏｍａ  ｉｎｇｕｉｎａｌｅ，Ｌｙｍｐｈｏｐａｔｈｉａ  ｖｅｎｅｒｅｕｍ，Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ，Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ａｂｏｒｔｕｓ．Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ｍｅｌｉｔｅｎｓｉｓ，Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ｓｕｉｓ，Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ｃａｎｉｓ，Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｆｅｔｕｓ，Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｆｅｔｕｓ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｉｓ，Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ  ｐｏｍｏｎａ，Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ，Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ｏｖｉｓ，Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｓｉｔｔａｃｉ，Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ  ｆｏｅｔｕｓ，Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ，Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ，Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｅｑｕｕｌｉ，Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ａｂｏｒｔｕｓ  ｏｖｉｓ，Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ａｂｏｒｔｕｓ  ｅｑｕｉ，Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ，Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｅｑｕｉ，Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ，Ａｃｔｉｎｏｂａｃｃｉｌｕｓ  ｓｅｍｉｎｉｓ，Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｂｏｖｉｇｅｎｉｔａｌｉｕｍ，Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ，Ａｂｓｉｄｉａ  ｒａｍｏｓａ，Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｅｑｕｉｐｅｒｄｕｍ，Ｂａｂｅｓｉａ  ｃａｂａｌｌｉ，Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ，Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ；または、Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓなどの真菌、または、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍなどの他の病原体が挙げられる。
【０１９８】
特定の実施形態において、対象に投与した医薬組成物中の抗体、ＴＣＲまたはＣＡＲは、感染性病原体によって発現される抗原のエピトープ（例えば、治療中の感染性病原体によって発現されるエピトープ）に対する結合特異性を有する。
【０１９９】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の医薬組成物（例えば、本明細書に記載の非ヒト動物から得られた本明細書に記載の抗体、ＴＣＲまたはＣＡＲを含む医薬組成物）を対象へ投与することを含む、炎症性疾患、皮膚または臓器移植拒絶反応、移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）または自己免疫疾患を治療する方法を本明細書で提供する。例えば、自己免疫疾患の例として、糸球体腎炎、関節炎、拡張型心筋症様疾患、潰瘍性大腸炎、シェーグレン症候群、クローン病、全身性エリテマトーデス、慢性関節リウマチ、多発硬化、乾癬、アレルギー性接触性皮膚炎、多発筋炎、強皮症、結節性動脈周囲炎、リウマチ熱、尋常性白斑、インスリン依存型糖尿病、ベーチェット病、橋本病、アジソン病、皮膚筋炎、重症筋無力症、ライター症候群、グレーブス病、貧血悪性熱、グッドパスチャー症候群、無菌性疾患、慢性活動性肝炎、天疱瘡、自己免疫血小板減少性紫斑病、および自己免疫溶血性貧血、活動性慢性肝炎、アジソン病、抗リン脂質抗体症候群、アトピー性アレルギー、自己免疫性萎縮性胃炎、自己免疫無酸症、腹腔疾患、クッシング症候群、皮膚筋炎、円板状狼瘡、エリテマトーデス、グッドパスチャー症候群、橋本甲状腺炎、特発性副腎萎縮症、特発性血小板減少症、インスリン依存型糖尿病、ランバート−イートン症候群、ルポイド肝炎、リンパ球減少症の一部の症例、混合型結合組織病、類天疱瘡、尋常天疱瘡、悪性貧血、水晶体起因性ブドウ膜炎、結節性多発動脈炎、多腺性自己免疫症候群、原発性胆汁性肝硬変症、原発性硬化性胆管炎、レイノー症候群、再発性多発性軟骨炎、シュミット症候群、限局性強皮症（またはクレスト症候群）、交感性眼炎、全身性エリテマトーデス、高安動脈炎、側頭動脈炎、甲状腺中毒症、Ｂ型インスリン抵抗症、潰瘍性大腸炎およびヴェーゲナー肉芽腫症が挙げられる。
【０２００】
特定の実施形態において、対象に投与した医薬組成物中の抗体、ＴＣＲまたはＣＡＲは、治療中の疾患における自己反応性Ｔ細胞の標的（例えば、自己免疫疾患における自己反応性Ｔ細胞の標的となるエピトープ）に結合特異性を有する。自己反応性Ｔ細胞の標的となる、を含む、例示的なタンパク質として、例えば、ｐ２０５、インシュリン、甲状腺刺激ホルモン、チロシナーゼ、ＴＲＰ１およびミエリンが挙げられる。
【０２０１】
本明細書に記載の医薬組成物は、任意の適切な投与経路によって送達されてもよく、例えばスプレーによる経口的、経鼻的な投与、粉末、軟膏または点滴による経直腸的、経膣的、非経口的、大槽内、および局所的な投与、口腔投与および舌下投与が挙げられる。特定の実施形態において、医薬組成物は、一般的に（例えば、経口または非経口投与によって）送達される。
【０２０２】
本明細書に記載の医薬組成物中の活性成分の実際の投与量レベルは、患者にとって有毒にならずに、特定の患者、組成物、および投与モードに対して所望の治療反応を達成するのに有効な活性成分の量を得るように変化してもよい。
【０２０３】
選択された投与量レベルは、使用される特定の薬剤の活性、投与経路、投与時間、使用される特定の化合物の排泄または代謝速度、治療期間、その他治療される患者の年齢、性別、体重、状態、全般的な健康状態および以前の病歴、ならびに医学分野において周知の同様の要因を含む種々の要因に依存する。
【０２０４】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲおよび／またはＴＣＲは、Ｔ細胞ベースの治療に使用される。例えば、特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲおよび／またはＴＣＲを発現するＴ細胞を対象に投与して、対象においてＴ細胞ベースの免疫応答を誘導する。Ｔ細胞ベースの治療に有用な方法は、例えば、Ｓｃｈｕｍａｃｈｅｒ  Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：５１２−５１９（２００２）およびＢｉｔｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  ４：ｄ３８６−３９３（１９９９）に記載されており、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる。
【０２０５】
いくつかの態様において、対象における免疫応答（例えば、Ｔ細胞ベースの免疫応答）を誘導する方法を本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、方法は、本明細書に記載のＣＡＲまたはＴＣＲを発現する細胞（例えば、ＣＤ４Ｔ細胞またはＣＤ８Ｔ細胞などのヒトＴ細胞）を対象に投与することを含む。
【０２０６】
いくつかの実施形態において、対象は、それを必要とする対象である。いくつかの実施形態において、対象は、癌を有する対象、または病原体に感染した対象である。このような実施形態において、ＣＡＲまたはＴＣＲによって認識されるペプチド／ＭＨＣ複合体中のペプチドは、癌抗原のペプチドまたは感染性病原体によって発現される抗原由来のペプチドである。
【０２０７】
いくつかの態様において、対象における免疫応答を阻害する方法を本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、方法は、記載されたＣＡＲまたはＴＣＲを発現する調節性Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４＋、ＣＤ−２５＋、およびＦｏｘｐ３＋調節性Ｔ細胞またはＴｒｅｇ１７Ｔ細胞）を対象に投与することを含む。
【０２０８】
いくつかの実施形態において、対象は、それを必要とする対象、例えば、自己免疫疾患を有する対象である。このような実施形態において、Ｔ細胞は、調節性Ｔ細胞（すなわちサプレッサーＴ細胞）であり、ＴＣＲまたはＣＡＲによって認識されるペプチド／ＭＨＣ複合体中のペプチドは、対象が自己免疫応答を受けている自己抗原である。
【０２０９】
核酸分子
本明細書に記載の抗体、ＴＣＲまたはＣＡＲ、および／または本明細書に記載の抗体、ＴＣＲおよびＣＡＲの一部をコードする核酸分子を本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、核酸は、本明細書に記載の抗体、ＴＣＲまたはＣＡＲの可変ドメインをコードする。核酸分子は、例えば全細胞、細胞溶解物、または部分的に精製された、または実質的に純粋な形態に存在し得る。
【０２１０】
特定の態様において、本明細書に記載の抗体、ＴＣＲおよび／またはＣＡＲポリペプチドまたはその一部をコードする核酸を本明細書で提供する。核酸は、例えば、全細胞、細胞溶解物、または部分的に精製された、または実質的に純粋な形態に存在し得る。本明細書に記載の核酸は、標準的な分子生物学技術を用いて得ることができる。例えば、本明細書に記載の核酸分子は、標準的なＰＣＲ技術を使用してクローニングクローニングでき、または化学的に合成できる。ハイブリドーマによって発現されるＣＡＲ、ＴＣＲまたは抗体をコードする核酸については、標準的なＰＣＲ増幅またはｃＤＮＡクローニング技術によって、ハイブリドーマによって作製される抗体、ＴＣＲまたはＣＡＲの各鎖をコードするｃＤＮＡを得ることができる。
【０２１１】
特定の実施形態において、本明細書に記載の核酸分子を含有するベクターを本明細書で提供する。本明細書で使用される場合、用語「ベクター」は、それが連結されている別の核酸を輸送することができる核酸分子を意味する。ベクターの一タイプは、「プラスミド」であり、追加のＤＮＡセグメントに連結され得る環状二本鎖ＤＮＡループを意味する。別のタイプのベクターはウイルスベクターであり、追加のＤＮＡセグメントをウイルスゲノムに連結することができる。特定のベクター（例えば、細菌の複製起点およびエピソーム哺乳動物ベクターを有する細菌ベクター）は、それらが導入される宿主細胞において自律的複製が可能である。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入時に宿主細胞のゲノムに組み込まれ、それにより宿主ゲノムと共に複製され得る。さらに、特定のベクターは、遺伝子の発現を指示することができる。このようなベクターは、本明細書では「組換え発現ベクター」（または単に「発現ベクター」）と呼ばれる。
【０２１２】
特定の実施形態において、本明細書に記載の核酸（例えば、本明細書に記載の抗体、ＴＣＲもしくはＣＡＲをコードする核酸、またはその一部をコードする核酸）を含有する細胞を本明細書で提供する。細胞は、例えば、原核生物、真核生物、哺乳動物、鳥類、マウスおよび／またはヒトであり得る。特定の実施形態において、本明細書に記載の核酸は、プロモーターなどの転写制御エレメントに作動可能に連結される。いくつかの実施形態において、細胞は、本明細書に記載の核酸を転写し、それによって、抗体、その抗原結合断片または本明細書に記載のポリペプチドを発現する。核酸分子は、細胞のゲノムに組み込まれていてもよく、またはそれは染色体外であってもよい。
【０２１３】
本明細書で提供される核酸分子は、標準的な分子生物学技術を用いて得ることができる。例えば、本明細書に記載の核酸分子は、標準的なＰＣＲ技術を使用してクローニングクローニングでき、または化学的に合成できる。
【０２１４】
本明細書に記載の抗体およびＣＡＲ核酸については、ＶＨおよびＶＬセグメントをコードするＤＮＡ断片が得られると、これらのＤＮＡ断片を標準的な組換えＤＮＡ技術によってさらに操作でき、例えば、可変領域遺伝子を全長抗体鎖遺伝子、Ｆａｂ断片遺伝子、またはｓｃＦｖ遺伝子に変換することができる。これらの操作において、ＶＬまたはＶＨをコードするＤＮＡ断片は、抗体定常領域または可動性リンカーのような他のタンパク質をコードする別のＤＮＡ断片に作動可能に連結される。この文脈で使用される場合、用語「作動可能に連結された」は、２つのＤＮＡ断片が、その２つのＤＮＡ断片によってコードされるアミノ酸配列がインフレームに残るように、連結されているという意味を意図する。
【０２１５】
重鎖可変領域をコードする単離されたＤＮＡは、重鎖定常領域（例えば、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）をコードする別のＤＮＡ分子に重鎖可変領域ＤＮＡを作動可能に連結することによって、全長重鎖遺伝子に変換することができる。ヒト重鎖定常領域遺伝子の配列は、当該技術分野で既知であり（例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２，ｏｒ  Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，Ｌｏｎｄｏｎ：Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  ２００１を参照されたい）、これらの領域を包含するＤＮＡ断片は、標準的なＰＣＲ増幅によって得ることができる。重鎖定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、またはＩｇＤ定常領域であり得る。Ｆａｂ断片重鎖遺伝子については、ＶＨをコードするＤＮＡを、重鎖ＣＨ１定常領域のみをコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結することができる。
【０２１６】
軽鎖可変領域をコードする単離されたＤＮＡは、軽鎖定常領域をコードする別のＤＮＡ分子に、ＤＮＡをコードする軽鎖可変領域を作動可能に連結することによって、全長軽鎖遺伝子（ならびにＦａｂ軽鎖遺伝子）に変換することができる。ヒト軽鎖定常領域遺伝子の配列は、当該技術分野で既知であり（例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２，ｏｒ  Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，Ｌｏｎｄｏｎ：Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  ２００１を参照されたい）、これらの領域を包含するＤＮＡ断片は、標準的なＰＣＲ増幅によって得ることができる。軽鎖定常領域は、カッパまたはラムダ定常領域であり得る。
【０２１７】
追加の例示的実施形態
例示的実施形態１において、ヒトターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ｈＴｄＴ）をコードする核酸配列をゲノム中に含む、遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２１８】
例示的実施形態２において、ｈＴｄＴをコードする核酸配列が転写制御エレメントに作動可能に連結される、実施形態１に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２１９】
例示的実施形態３において、転写制御エレメントが、プロＢ細胞および／またはプレＢ細胞中の外因性ｈＴｄＴをコードする核酸配列の発現を駆動する、実施形態２に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２２０】
例示的実施形態４において、転写制御エレメントが、ＲＡＧ１転写制御エレメント、ＲＡＧ２転写制御エレメント、免疫グロブリン重鎖転写制御エレメント、免疫グロブリンκ軽鎖転写制御エレメントおよび／または免疫グロブリンλ軽鎖転写制御エレメントからなる群から選択される、実施形態２に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２２１】
例示的実施形態５において、非ヒト動物がプロＢ細胞および／またはプレＢ細胞中のｈＴｄＴを発現する、実施形態１〜４のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２２２】
例示的実施形態６において、転写制御エレメントが、ＣＤ４／ＣＤ８ダブルネガティブ（ＤＮ）胸腺細胞および／またはＣＤ４／ＣＤ８ダブルポジティブ（ＤＰ）胸腺細胞中のｈＴｄＴをコードする核酸配列の発現を駆動する、実施形態２に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２２３】
例示的実施形態７において、転写制御エレメントが、ＲＡＧ１転写制御エレメント、ＲＡＧ２転写制御エレメント、ＴＣＲα転写制御エレメント、ＴＣＲβ転写制御エレメント、ＴＣＲγ転写制御エレメントおよび／またはＴＣＲδ転写制御エレメントである、実施形態２に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２２４】
例示的実施形態８において、非ヒト動物がＤＮ胸腺細胞および／またはＤＰ胸腺細胞中のｈＴｄＴを発現する、実施形態１〜７のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２２５】
例示的実施形態９において、ｈＴｄＴをコードする核酸配列が、免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリン重鎖遺伝子座、ＲＡＧ１遺伝子座、ＲＡＧ２遺伝子座、ＴＣＲα鎖遺伝子座、ＴＣＲβ鎖遺伝子座、ＴＣＲγ鎖遺伝子座および／またはＴＣＲδ鎖遺伝子座に位置する、実施形態１〜８のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２２６】
例示的実施形態１０において、ｈＴｄＴをコードする核酸配列が構成的な転写制御エレメントに作動可能に連結されない、実施形態１〜９のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２２７】
例示的実施形態１１において、ｈＴｄＴが構成的に発現されない、実施形態１〜１０のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２２８】
例示的実施形態１２において、動物内の少なくとも１０％のＶ−Ｊ免疫グロブリン軽鎖接合が非鋳型付加を含む、実施形態１〜１１のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２２９】
例示的実施形態１３において、動物内の少なくとも２０％のＶ−Ｊ免疫グロブリン軽鎖接合が非鋳型付加を含む、実施形態１２に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２３０】
例示的実施形態１４において、動物内の少なくとも４０％のＶ−Ｊ免疫グロブリン軽鎖接合が非鋳型付加を含む、実施形態１２に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２３１】
例示的実施形態１５において、外因性ターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列、および免疫グロブリン定常領域遺伝子に作動可能に連結される、未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントを含む免疫グロブリン可変領域をゲノム中に含む遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２３２】
例示的実施形態１６において、外因性ＴｄＴがヒトＴｄＴである、実施形態１５に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２３３】
例示的実施形態１７において、外因性ＴｄＴをコードする核酸配列が転写制御エレメントに作動可能に連結される、実施形態１５または１６に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２３４】
例示的実施形態１８において、転写制御エレメントが、プロＢ細胞および／またはプレＢ細胞中の外因性ＴｄＴをコードする核酸配列の発現を駆動する、実施形態１７に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２３５】
例示的実施形態１９において、転写制御エレメントが、ＲＡＧ１転写制御エレメント、ＲＡＧ２転写制御エレメント、免疫グロブリン重鎖転写制御エレメント、免疫グロブリンκ軽鎖転写制御エレメントおよび／または免疫グロブリンλ軽鎖転写制御エレメントからなる群から選択される、実施形態１７に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２３６】
例示的実施形態２０において、非ヒト動物が、プロＢ細胞および／またはプレＢ細胞中の外因性ＴｄＴを発現する、実施形態１５〜１９のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２３７】
例示的実施形態２１において、転写制御エレメントが、ＣＤ４／ＣＤ８ダブルネガティブ（ＤＮ）胸腺細胞および／またはＣＤ４／ＣＤ８ダブルポジティブ（ＤＰ）胸腺細胞中の外因性ＴｄＴをコードする核酸配列の発現を駆動する、実施形態１７に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２３８】
例示的実施形態２２において、転写制御エレメントが、ＲＡＧ１転写制御エレメント、またはＲＡＧ２転写制御エレメントである、実施形態１７に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２３９】
例示的実施形態２３において、非ヒト動物がＤＮ胸腺細胞および／またはＤＰ胸腺細胞中の外因性ＴｄＴを発現する、実施形態１５〜２２のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２４０】
例示的実施形態２４において、外因性ＴｄＴをコードする核酸配列が、免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリン重鎖遺伝子座、ＲＡＧ１遺伝子座、ＲＡＧ２遺伝子座、ＴＣＲα鎖遺伝子座、ＴＣＲβ鎖遺伝子座、ＴＣＲγ鎖遺伝子座および／またはＴＣＲδ鎖遺伝子座に位置する、実施形態１５〜２３のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２４１】
例示的実施形態２５において、外因性ＴｄＴをコードする核酸配列が構成的な転写制御エレメントに作動可能に連結されない、実施形態１５〜２４のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２４２】
例示的実施形態に２６おいて、外因性ＴｄＴが構成的に発現されない、実施形態１５〜２５のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２４３】
例示的実施形態２７において、動物内の少なくとも１０％のＶ−Ｊ免疫グロブリン軽鎖接合が非鋳型付加を含む、実施形態１５〜２６のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２４４】
例示的実施形態２８において、動物内の少なくとも２０％のＶ−Ｊ免疫グロブリン軽鎖接合が非鋳型付加を含む、実施形態２７に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２４５】
例示的実施形態２９において、動物内の少なくとも４０％のＶ−Ｊ免疫グロブリン軽鎖接合が非鋳型付加を含む、実施形態２７に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２４６】
例示的実施形態３０において、ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントがヒト重鎖可変領域遺伝子セグメントである、実施形態１５〜２６のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２４７】
例示的実施形態３１において、定常領域遺伝子が重鎖定常領域遺伝子である、実施形態３０に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２４８】
例示的実施形態３２において、重鎖定常領域遺伝子がＣμ遺伝子，Ｃδ遺伝子、Ｃγ遺伝子、Ｃε遺伝子、またはＣα遺伝子である、実施形態３１に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２４９】
例示的実施形態３３において、重鎖定常領域遺伝子が内因性種由来のものである、実施形態３１または３２に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２５０】
例示的実施形態３４において、重鎖定常領域遺伝子がマウス定常領域遺伝子である、実施形態３１または３２に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２５１】
例示的実施形態３５において、重鎖定常領域遺伝子がラット定常領域遺伝子である、実施形態３１または３２に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２５２】
例示的実施形態３６において、重鎖定常領域遺伝子がヒト定常領域遺伝子である、実施形態３１または３２に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２５３】
例示的実施形態３７において、重鎖定常領域遺伝子がヒトＣＨ１ドメインならびに非ヒトＣＨ２およびＣＨ３ドメインを有する、実施形態３１または３２に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２５４】
例示的実施形態３８において、非ヒトＣＨ２およびＣＨ３ドメインが内因性種由来のものである、実施形態３７記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２５５】
例示的実施形態３９において、非ヒトＣＨ２およびＣＨ３ドメインがマウスＣＨ２およびＣＨ３ドメインである、実施形態３７に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２５６】
例示的実施形態４０において、非ヒトＣＨ２およびＣＨ３ドメインがラットＣＨ２およびＣＨ３ドメインである、実施形態３７に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２５７】
例示的実施形態１０において、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、またはそれらの組み合わせから選択される免疫グロブリン重鎖定常領域において、動物が機能性ＣＨ１ドメインを欠いている、実施形態１５〜４０に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２５８】
例示的実施形態２０において、免疫グロブリン可変領域および免疫グロブリン定常領域遺伝子が、内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子座に位置する、実施形態３１〜４１のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２５９】
例示的実施形態４３において、第２の免疫グロブリン定常領域遺伝子に作動可能に連結される、非再編成ヒト軽鎖可変領域遺伝子セグメントを含む免疫グロブリン可変領域をゲノム中にさらに含む、実施形態３０〜４２のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２６０】
例示的実施形態４４において、第２の免疫グロブリン定常領域遺伝子に作動可能に連結される、ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントが、ヒトκ鎖可変領域遺伝子セグメントである、実施形態４３に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２６１】
例示的実施形態４５において、第２の免疫グロブリン定常領域遺伝子に作動可能に連結される、ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントが、ヒトλ鎖可変領域遺伝子セグメントである、実施形態４３に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２６２】
例示的実施形態４６において、第２の定常領域遺伝子が軽鎖定常領域遺伝子である、実施形態４３〜４５のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２６３】
例示的実施形態４７において、第２の定常領域遺伝子がκ定常領域遺伝子である、実施形態４６に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２６４】
例示的実施形態４８において、第２の定常領域遺伝子がλ定常領域遺伝子である、実施形態４６に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２６５】
例示的実施形態４９において、第２の定常領域遺伝子が内因性種由来のものである、実施形態４３〜４８のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２６６】
例示的実施形態５０において、第２の定常領域遺伝子がマウス定常領域遺伝子である、実施形態４３〜４８のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２６７】
例示的実施形態５１において、第２の定常領域遺伝子がラット定常領域遺伝子である、実施形態４３〜４８のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２６８】
例示的実施形態５２において、第２の定常領域遺伝子がヒト定常領域遺伝子である、実施形態４３〜４８のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２６９】
例示的実施形態５３において、第２の免疫グロブリン定常領域遺伝子に作動可能に連結される、免疫グロブリン可変領域が内因性免疫グロブリン軽鎖遺伝子座に位置する、実施形態４３〜５２のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２７０】
例示的実施形態５４において、第２の定常領域遺伝子がκ定常領域遺伝子であり、内因性免疫グロブリン軽鎖遺伝子座は免疫グロブリンκ遺伝子座である、実施形態５３に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２７１】
例示的実施形態５５において、第２の定常領域遺伝子がλ定常領域遺伝子であり、内因性免疫グロブリン軽鎖遺伝子座は免疫グロブリンλ遺伝子座である、実施形態５３に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２７２】
例示的実施形態５６において、第２の免疫グロブリン定常領域遺伝子に作動可能に連結される、再編成ヒト軽鎖可変領域（Ｖ／Ｊ）遺伝子セグメントを含む免疫グロブリン可変領域をゲノム中にさらに含む、実施形態３０〜４２のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２７３】
例示的実施形態５７において、第２の免疫グロブリン定常領域遺伝子に作動可能に連結される、再編成ヒト軽鎖可変領域（Ｖ／Ｊ）遺伝子セグメントが、Ｖκ１−３９およびＶκ３−２０から選択されるＶκ遺伝子セグメントを含み、Ｊκ遺伝子セグメントに再編成される、実施形態５６に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２７４】
例示的実施形態５８において、動物が、Ｖκ１−３９／Ｊκ５またはＶκ３−２０／Ｊκ１配列を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域をゲノム中に含む、実施形態５７に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２７５】
例示的実施形態５９において、第２の免疫グロブリン定常領域遺伝子に作動可能に連結される、限られたレパートリーのヒト軽鎖可変領域（ＶおよびＪ）遺伝子セグメントを含む免疫グロブリン可変領域をゲノム中にさらに含む、実施形態３０〜４２のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２７６】
例示的実施形態６０において、第２の免疫グロブリン定常領域遺伝子に作動可能に連結される、ヒト軽鎖可変領域（ＶおよびＪ）遺伝子セグメントの限られたレパートリーが、２つのＶ遺伝子セグメントおよび少なくとも２つ、好ましくは５つのＪ遺伝子セグメントを含む、実施形態５９に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２７７】
例示的実施形態６１において、２つのＶ遺伝子セグメントがＶκ１−３９およびＶκ３−２０遺伝子セグメントである、実施形態６０に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２７８】
例示的実施形態６２において、ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントがヒト軽鎖可変領域遺伝子セグメントである、実施形態１５〜２９のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２７９】
例示的実施形態６３において、ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントがヒトκ鎖可変領域遺伝子セグメントである、実施形態６２に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２８０】
例示的実施形態６４において、ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントがヒトλ鎖可変領域遺伝子セグメントである、実施形態６３に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２８１】
例示的実施形態６５において、定常領域遺伝子が軽鎖定常領域遺伝子である、実施形態６２〜６４のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２８２】
例示的実施形態６６において、定常領域遺伝子がκ定常領域遺伝子である、実施形態６５に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２８３】
例示的実施形態６７において、定常領域遺伝子がλ定常領域遺伝子である、実施形態６５に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２８４】
例示的実施形態６８において、定常領域遺伝子が重鎖定常領域遺伝子である、実施形態６２〜６４のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２８５】
例示的実施形態６９において、定常領域遺伝子が内因性種由来のものである、実施形態６２〜６８のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２８６】
例示的実施形態７０において、定常領域遺伝子がマウス定常領域遺伝子である、実施形態６２〜６８のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２８７】
例示的実施形態７１において、定常領域遺伝子がラット定常領域遺伝子である、実施形態６２〜６８のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２８８】
例示的実施形態７２において、定常領域遺伝子がヒト定常領域遺伝子である、実施形態６２〜６８のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２８９】
例示的実施形態７３において、免疫グロブリン可変領域および免疫グロブリン定常領域遺伝子が内因性免疫グロブリン軽鎖遺伝子座に位置する、実施形態６２〜７２のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２９０】
例示的実施形態７４において、定常領域遺伝子がκ定常領域遺伝子であり、内因性免疫グロブリン軽鎖遺伝子座が免疫グロブリンκ遺伝子座である、実施形態７３に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２９１】
例示的実施形態７５において、定常領域遺伝子がλ定常領域遺伝子であり、内因性免疫グロブリン軽鎖遺伝子座が免疫グロブリンλ遺伝子座である、実施形態７３に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２９２】
例示的実施形態７６において、免疫グロブリン可変領域がヒト由来の免疫グロブリン可変領域遺伝子間配列を含む、実施形態１５〜７５のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２９３】
例示的実施形態７７において、免疫グロブリン可変領域が内因性種由来の免疫グロブリン可変領域遺伝子間配列を含む、実施形態１５〜７５のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２９４】
例示的実施形態７８において、免疫グロブリン可変領域がマウス由来の免疫グロブリン可変領域遺伝子間配列を含む、実施形態１５〜７５のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２９５】
例示的実施形態７９において、免疫グロブリン可変領域がラット由来の免疫グロブリン可変領域遺伝子間配列を含む、実施形態１５〜７５のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２９６】
例示的実施形態８０において、不活性化内因性免疫グロブリン遺伝子座をゲノム中にさらに含む、実施形態１５〜７９のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２９７】
例示的実施形態８１において、不活性化内因性免疫グロブリン遺伝子座が内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子座である、実施形態８０に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２９８】
例示的実施形態８２において、内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子座が、内因性重鎖遺伝子座の可変領域の少なくとも一部の欠失により不活性化される、実施形態８１に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０２９９】
例示的実施形態８３において、可変領域の少なくとも一部の欠失が可変領域のＪ遺伝子セグメントの欠失を含む、実施形態８２に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３００】
例示的実施形態８４において、内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子座が、内因性重鎖遺伝子座の定常領域の少なくとも一部の欠失により不活性化される、実施形態８１に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３０１】
例示的実施形態８５において、定常領域の少なくとも一部の欠失が定常領域のＣμ遺伝子の欠失を含む、実施形態８４に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３０２】
例示的実施形態８６において、不活性化内因性免疫グロブリン遺伝子座が内因性免疫グロブリンκ鎖遺伝子座である、実施形態８０に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３０３】
例示的実施形態８７において、内因性免疫グロブリンκ鎖遺伝子座が、内因性κ鎖遺伝子座の可変領域の少なくとも一部の欠失により不活性化される、実施形態８６に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３０４】
例示的実施形態８８において、可変領域の少なくとも一部の欠失が可変領域のＪ遺伝子セグメントの欠失を含む、実施形態８７に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３０５】
例示的実施形態８９において、内因性免疫グロブリンκ遺伝子座が、内因性κ鎖遺伝子座の定常領域の少なくとも一部の欠失により不活性化される、実施形態８６に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３０６】
例示的実施形態９０において、定常領域の少なくとも一部の欠失が定常領域のＣκ遺伝子の欠失を含む、実施形態８９に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３０７】
例示的実施形態９１において、不活性化内因性免疫グロブリン遺伝子座が内因性免疫グロブリンλ鎖遺伝子座である、実施形態８０に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３０８】
例示的実施形態９２において、内因性免疫グロブリンλ鎖遺伝子座が、内因性λ鎖遺伝子座のＶ−Ｊ−Ｃクラスターの少なくとも一部の欠失により不活性化される、実施形態９１に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３０９】
例示的実施形態９３において、未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントが、Ｂ細胞発生中に再編成されて、非ヒト動物のＢ細胞中の再編成可変領域遺伝子を生成する、実施形態１５〜９２のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３１０】
例示的実施形態に９４おいて、少なくとも１０％の再編成可変領域遺伝子が非鋳型付加を含む、実施形態９３に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３１１】
例示的実施形態に９５おいて、少なくとも２０％の再編成可変領域遺伝子が非鋳型付加を含む、実施形態９３に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３１２】
例示的実施形態に９６おいて、少なくとも４０％の再編成可変領域遺伝子が非鋳型付加を含む、実施形態９３に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３１３】
例示的実施形態９７において、動物が、再編成可変領域遺伝子によってコードされる可変ドメイン、および定常領域遺伝子によってコードされる定常ドメインを含む、抗体を発現する、実施形態９３〜９６のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３１４】
例示的実施形態９８において、機能的異所性マウスＡｄａｍ６遺伝子をさらに含む、実施形態１５〜９７のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３１５】
例示的実施形態９９において、外因性ターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列、およびＴＣＲ定常領域遺伝子に作動可能に連結される、非再編成ヒトＴＣＲ可変領域遺伝子セグメントを含むＴ細胞受容体（ＴＣＲ）可変領域をゲノム中に含む、遺伝子改変非ヒト動物本明細書で提供する。
【０３１６】
例示的実施形態１００において、外因性ＴｄＴがヒトＴｄＴである、実施形態９９に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３１７】
例示的実施形態１０１において、外因性ＴｄＴをコードする核酸配列が転写制御エレメントに作動可能に連結される、実施形態９９または１００に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３１８】
例示的実施形態１０２において、転写制御エレメントが、ＣＤ４／ＣＤ８ダブルネガティブ（ＤＮ）胸腺細胞および／またはＣＤ４／ＣＤ８ダブルポジティブ（ＤＰ）胸腺細胞中の外因性ＴｄＴをコードする核酸配列の発現を駆動する、実施形態１０１に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３１９】
例示的実施形態１０３において、転写制御エレメントが、ＲＡＧ１転写制御エレメント、ＲＡＧ２転写制御エレメント、ＴＣＲα転写制御エレメント、ＴＣＲβ転写制御エレメント、ＴＣＲγ転写制御エレメントおよび／またはＴＣＲδ転写制御エレメントである、実施形態１０１に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３２０】
例示的実施形態１０４において、非ヒト動物が、ＤＮ胸腺細胞および／またはＤＰ胸腺細胞中の外因性ＴｄＴを発現する、実施形態９９〜１０３のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３２１】
例示的実施形態１０５において、外因性ＴｄＴをコードする核酸配列が、ＲＡＧ１遺伝子座、ＲＡＧ２遺伝子座、ＴＣＲα鎖遺伝子座、ＴＣＲβ鎖遺伝子座、ＴＣＲγ鎖遺伝子座および／またはＴＣＲδ鎖遺伝子座に位置する、実施形態９９〜１０４のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３２２】
例示的実施形態１０６において、外因性ＴｄＴをコードする核酸配列が構成的な転写制御エレメントに作動可能に連結されない、実施形態９９〜１０５のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３２３】
例示的実施形態に１０７おいて、外因性ＴｄＴが構成的に発現されない、実施形態９９〜１０６のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３２４】
例示的実施形態１０８において、ヒトＴＣＲ可変領域遺伝子セグメントがヒトＴＣＲα可変領域遺伝子セグメントである、実施形態９９〜１０７のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３２５】
例示的実施形態１０９において、ヒトＴＣＲ可変領域遺伝子セグメントがヒトＴＣＲβ可変領域遺伝子セグメントである、実施形態９９〜１０７のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３２６】
例示的実施形態１１０において、ＴＣＲ定常領域遺伝子がＴＣＲα定常領域遺伝子である、実施形態９９〜１０８のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３２７】
例示的実施形態１１１において、ＴＣＲ定常領域遺伝子がＴＣＲβ定常領域遺伝子である、実施形態９９〜１０７および１０９のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３２８】
例示的実施形態１１２において、ＴＣＲ定常領域遺伝子が内因性種由来のものである、実施形態９９〜１１１のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３２９】
例示的実施形態１１３において、ＴＣＲ定常領域遺伝子がマウス定常領域遺伝子である、実施形態９９〜１１１のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３３０】
例示的実施形態１１４において、ＴＣＲ定常領域遺伝子がラット定常領域遺伝子である、実施形態９９〜１１１のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３３１】
例示的実施形態１１５において、ＴＣＲ定常領域遺伝子がヒト定常領域遺伝子である、実施形態９９〜１１１のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３３２】
例示的実施形態１１６において、ＴＣＲ可変領域およびＴＣＲ定常領域遺伝子が内因性ＴＣＲ遺伝子座に位置する、実施形態９９〜１１５のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３３３】
例示的実施形態１１７において、内因性ＴＣＲ遺伝子座が内因性ＴＣＲα遺伝子座である、実施形態９９〜１０８、１１０、１１２〜１１５のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３３４】
例示的実施形態１１８において、内因性ＴＣＲ遺伝子座がＴＣＲβ遺伝子座である、実施形態９９〜１０７、１０９、１１１〜１１５のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３３５】
例示的実施形態１１９において、ＴＣＲ可変領域がヒト由来のＴＣＲ可変領域遺伝子間配列を含む、実施形態９９〜１１８のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３３６】
例示的実施形態１２０において、ＴＣＲ可変領域が内因性種由来のＴＣＲ可変領域遺伝子間配列を含む、実施形態９９〜１１８のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３３７】
例示的実施形態１２１において、不活性化内因性ＴＣＲ遺伝子座をゲノム中にさらに含む、実施形態９９〜１２０のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３３８】
例示的実施形態１２２において、不活性化内因性ＴＣＲ遺伝子座がＴＣＲα遺伝子座である、実施形態１２１に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３３９】
例示的実施形態１２３において、不活性化内因性ＴＣＲ遺伝子座がＴＣＲβ遺伝子座である、実施形態１２１に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３４０】
例示的実施形態１２４において、非再編成ヒトＴＣＲ可変領域遺伝子セグメントが、Ｔ細胞発生中に再編成されて、非ヒト動物のＴ細胞中の再編成ＴＣＲ可変領域遺伝子を生成する、実施形態９９〜１２３のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３４１】
例示的実施形態に１２５おいて、少なくとも１０％の再編成可変領域遺伝子が非鋳型付加を含む、実施形態１２４に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３４２】
例示的実施形態に１２６おいて、少なくとも２０％の再編成可変領域遺伝子が非鋳型付加を含む、実施形態１２４に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３４３】
例示的実施形態に１２７おいて、少なくとも４０％の再編成可変領域遺伝子が非鋳型付加を含む、実施形態１２４に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３４４】
例示的実施形態１２８において、動物が、再編成ＴＣＲ可変領域遺伝子によってコードされる可変ドメイン、およびＴＣＲ定常領域遺伝子によってコードされる定常ドメインを含む、ＴＣＲを発現する、実施形態１２４〜１２７のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３４５】
例示的実施形態１２９において、外因性ターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列、およびＴＣＲ定常領域遺伝子に作動可能に連結される、非再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントを含む免疫グロブリン可変領域をゲノム中に含む、遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３４６】
例示的実施形態１３０において、外因性ＴｄＴがヒトＴｄＴである、実施形態１２９に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３４７】
例示的実施形態１３１において、外因性ＴｄＴをコードする核酸配列が転写制御エレメントに作動可能に連結される、実施形態１２９または１３０に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３４８】
例示的実施形態１３２において、転写制御エレメントが、ＣＤ４／ＣＤ８ダブルネガティブ（ＤＮ）胸腺細胞および／またはＣＤ４／ＣＤ８ダブルポジティブ（ＤＰ）胸腺細胞中の外因性ＴｄＴをコードする核酸配列の発現を駆動する、実施形態１３１に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３４９】
例示的実施形態１３３において、転写制御エレメントが、ＲＡＧ１転写制御エレメント、ＲＡＧ２転写制御エレメント、ＴＣＲα転写制御エレメント、ＴＣＲβ転写制御エレメント、ＴＣＲγ転写制御エレメントおよび／またはＴＣＲδ転写制御エレメントである、実施形態１３１に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３５０】
例示的実施形態１３４において、非ヒト動物が、ＤＮ胸腺細胞および／またはＤＰ胸腺細胞中の外因性ＴｄＴを発現する、実施形態１３１〜１３２のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３５１】
例示的実施形態１３５において、外因性ＴｄＴをコードする核酸配列が、ＲＡＧ１遺伝子座、ＲＡＧ２遺伝子座、ＴＣＲα鎖遺伝子座、ＴＣＲβ鎖遺伝子座、ＴＣＲγ鎖遺伝子座および／またはＴＣＲδ鎖遺伝子座に位置する、実施形態１２９〜１３４のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３５２】
例示的実施形態１３６において、外因性ＴｄＴをコードする核酸配列が構成的な転写制御エレメントに作動可能に連結されない、実施形態１２９〜１３５のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３５３】
例示的実施形態に１３７おいて、外因性ＴｄＴが構成的に発現されない、実施形態１２９〜１３６のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３５４】
例示的実施形態１３８において、ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントがヒト軽鎖可変領域遺伝子セグメントである、実施形態１２９〜１３７のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３５５】
例示的実施形態１３９において、ヒト軽鎖可変領域遺伝子セグメントがκ遺伝子セグメントである、実施形態１３８に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３５６】
例示的実施形態１４０において、ヒト軽鎖可変領域遺伝子セグメントがλ遺伝子セグメントである、実施形態１３８に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３５７】
例示的実施形態１４１において、動物内の少なくとも１０％のＶ−Ｊ免疫グロブリン軽鎖接合が非鋳型付加を含む、実施形態１３８〜１４０のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３５８】
例示的実施形態１４２において、動物内の少なくとも２０％のＶ−Ｊ免疫グロブリン軽鎖接合が非鋳型付加を含む、実施形態１４１に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３５９】
例示的実施形態１４３において、動物内の少なくとも４０％のＶ−Ｊ免疫グロブリン軽鎖接合が非鋳型付加を含む、実施形態１４１に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３６０】
例示的実施形態１４４において、ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントがヒト重鎖可変領域遺伝子セグメントである、実施形態１２９〜１３７のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３６１】
例示的実施形態１４５において、ＴＣＲ定常領域遺伝子がＴＣＲα定常領域遺伝子である、実施形態１２９〜１４３のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３６２】
例示的実施形態１４６において、免疫グロブリン可変領域およびＴＣＲα定常領域遺伝子が内因性ＴＣＲα遺伝子座に位置する、実施形態１４５に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３６３】
例示的実施形態１４７において、ＴＣＲ定常領域遺伝子がＴＣＲβ定常領域遺伝子である、実施形態１４４に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３６４】
例示的実施形態１４８において、免疫グロブリン可変領域およびＴＣＲβ定常領域遺伝子が内因性ＴＣＲβ遺伝子座に位置する、実施形態１４７に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３６５】
例示的実施形態１４９において、ＴＣＲ定常領域遺伝子が内因性種由来のものである、実施形態１２９〜１４８のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３６６】
例示的実施形態１５０において、ＴＣＲ定常領域遺伝子がマウス定常領域遺伝子である、実施形態１２９〜１４８のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３６７】
例示的実施形態１５１において、ＴＣＲ定常領域遺伝子がラット定常領域遺伝子である、実施形態１２９〜１４８のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３６８】
例示的実施形態１５２において、ＴＣＲ定常領域遺伝子がヒト定常領域遺伝子である、実施形態１２９〜１４８のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３６９】
例示的実施形態１５３において、免疫グロブリン可変領域がヒト由来の免疫グロブリン可変領域遺伝子間配列を含む、実施形態１２９〜１５２のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３７０】
例示的実施形態１５４において、免疫グロブリン可変領域が内因性種由来の免疫グロブリン可変領域遺伝子間配列を含む、実施形態１４１〜１５２のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３７１】
例示的実施形態１５５において、免疫グロブリン可変領域がマウス由来の免疫グロブリン可変領域遺伝子間配列を含む、実施形態１４１〜１５２のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３７２】
例示的実施形態１５６において、免疫グロブリン可変領域がラット由来の免疫グロブリン可変領域遺伝子間配列を含む、実施形態１４１〜１５２のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３７３】
例示的実施形態１５７において、不活性化内因性免疫グロブリン遺伝子座をゲノム中にさらに含む、実施形態１４１〜１５５のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３７４】
例示的実施形態１５８において、不活性化内因性免疫グロブリン遺伝子座が内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子座である、実施形態１５７に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３７５】
例示的実施形態１５９において、内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子座が、内因性重鎖遺伝子座の可変領域の少なくとも一部の欠失により不活性化される、実施形態１５８に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３７６】
例示的実施形態１６０において、可変領域の少なくとも一部の欠失が可変領域のＪ遺伝子セグメントの欠失を含む、実施形態１５９に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３７７】
例示的実施形態１６１において、内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子座が、内因性重鎖遺伝子座の定常領域の少なくとも一部の欠失により不活性化される、実施形態１５８に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３７８】
例示的実施形態１６２において、定常領域の少なくとも一部の欠失が定常領域のＣμ遺伝子の欠失を含む、実施形態１６１に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３７９】
例示的実施形態１６３において、不活性化内因性免疫グロブリン遺伝子座が内因性免疫グロブリンκ鎖遺伝子座である、実施形態１５７に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３８０】
例示的実施形態１６４において、内因性免疫グロブリンκ鎖遺伝子座が、内因性κ鎖遺伝子座の可変領域の少なくとも一部の欠失により不活性化される、実施形態１６３に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３８１】
例示的実施形態１６５において、可変領域の少なくとも一部の欠失が可変領域のＪ遺伝子セグメントの欠失を含む、実施形態１６４に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３８２】
例示的実施形態１６６において、内因性免疫グロブリンκ遺伝子座が、内因性κ鎖遺伝子座の定常領域の少なくとも一部の欠失により不活性化される、実施形態１６３に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３８３】
例示的実施形態１６７において、定常領域の少なくとも一部の欠失が定常領域のＣκ遺伝子の欠失を含む、実施形態１６４に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３８４】
例示的実施形態１６８において、不活性化内因性免疫グロブリン遺伝子座が内因性免疫グロブリンλ鎖遺伝子座である、実施形態１５７に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３８５】
例示的実施形態１６９において、内因性免疫グロブリンλ鎖遺伝子座が、内因性λ鎖遺伝子座のＶ−Ｊ−Ｃクラスターの少なくとも一部の欠失により不活性化される、実施形態１６８に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３８６】
例示的実施形態１７０において、未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントが、Ｔ細胞発生中に再編成されて、非ヒト動物のＴ細胞中の再編成免疫グロブリン可変領域遺伝子を生成する、実施形態１２９〜１６９のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３８７】
例示的実施形態に１７１おいて、少なくとも１０％の再編成可変領域遺伝子が非鋳型付加を含む、実施形態１７０に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３８８】
例示的実施形態に１７２おいて、少なくとも２０％の再編成可変領域遺伝子が非鋳型付加を含む、実施形態１７０に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３８９】
例示的実施形態に１７３おいて、少なくとも４０％の再編成可変領域遺伝子が非鋳型付加を含む、実施形態１７０に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３９０】
例示的実施形態１７４において、動物が、再編成可変領域遺伝子によってコードされる可変ドメイン、およびＴＣＲ定常領域遺伝子によってコードされる定常ドメインを含む、キメラ抗原受容体を発現する、実施形態１７０〜１７３のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３９１】
例示的実施形態１７５において、非ヒト動物が哺乳動物である、実施形態１〜１７４のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３９２】
例示的実施形態１７６において、哺乳動物が齧歯類である、実施形態１７５に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３９３】
例示的実施形態１７７において、齧歯類がラットまたはマウスである、実施形態１７６に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３９４】
例示的実施形態１７８において、齧歯類がマウスである、実施形態１７６に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３９５】
例示的実施形態１７９において、齧歯類がラットである、実施形態１７６に記載の遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０３９６】
例示的実施形態１８０において、ヒト可変ドメインを含む抗体の発現を誘導する方法であって、遺伝子改変非ヒト動物が抗原に特異的なヒト可変ドメインを含む抗体を産生するように、実施形態９７の遺伝子改変非ヒト動物を抗原に曝露すること、を含む方法を本明細書で提供する。
【０３９７】
例示的実施形態１８１において、ヒト可変ドメインを含む抗体を発現するＢ細胞を作製する方法であって、（ａ）実施形態９７の遺伝子改変非ヒト動物を抗原に曝露することと、（ｂ）非ヒト動物から抗原に特異的なヒト可変ドメインを含む抗体を発現するＢ細胞を得ることと、を含む方法を本明細書で提供する。
【０３９８】
例示的実施形態１８２において、ヒト可変ドメインを含む抗体を発現するハイブリドーマを作製する方法であって、（ａ）実施形態９７の遺伝子改変非ヒト動物を抗原に曝露することと、（ｂ）非ヒト動物から抗原に特異的なヒト可変ドメインを含む抗体を発現するＢ細胞を得ることと、（ｃ）工程（ｂ）のＢ細胞からハイブリドーマを作製することと、を含む方法を本明細書で提供する。
【０３９９】
例示的実施形態１８３において、ヒト免疫グロブリン可変ドメインをコードする核酸を作製する方法であって、（ａ）実施形態９７の遺伝子改変非ヒト動物を抗原に曝露することと、（ｂ）非ヒト動物から抗原に特異的なヒト免疫グロブリン可変ドメインをコードする核酸を得ることと、を含む方法を本明細書で提供する。
【０４００】
例示的実施形態１８４において、ヒト免疫グロブリン可変ドメインをコードする核酸を作製する方法であって、（ａ）実施形態９７の遺伝子改変非ヒト動物を抗原に曝露することと、（ｂ）非ヒト動物から抗原に特異的なヒト可変ドメインを含む抗体を発現するＢ細胞を得ることと、（ｃ）工程（ｂ）のＢ細胞からハイブリドーマを作製することと、（ｄ）ハイブリドーマから抗原に特異的なヒト免疫グロブリン可変ドメインをコードする核酸を得ることと、を含む方法を本明細書で提供する。
【０４０１】
例示的実施形態１８５において、ヒト可変ドメインおよびヒト定常ドメインを含む抗体を作製する方法であって、（ａ）実施形態９７の遺伝子改変非ヒト動物を抗原に曝露することと、（ｂ）非ヒト動物から抗原に特異的なヒト免疫グロブリン可変ドメインをコードする核酸を得ることと、（ｃ）免疫グロブリン可変ドメインをコードする核酸を宿主細胞中のヒト免疫グロブリン定常ドメインをコードする核酸に作動可能に連結することと、（ｄ）宿主細胞が免疫グロブリン可変ドメインおよび免疫グロブリン定常ドメインを含むヒト抗体を発現するような条件下で、宿主細胞を培養することと、を含む方法を本明細書で提供する。
【０４０２】
例示的実施形態１８６において、抗原に特異的なヒト可変ドメインおよびヒト定常ドメインを含む抗体を作製する方法であって、（ａ）実施形態９７の非ヒト動物を抗原に曝露することと、（ｂ）非ヒト動物から抗原に特異的なヒト可変ドメインを含む抗体を発現するＢ細胞を得ることと、（ｃ）工程（ｂ）のＢ細胞からハイブリドーマを作製することと、（ｄ）ハイブリドーマから抗原に特異的なヒト免疫グロブリン可変ドメインをコードする核酸を得ることと、（ｅ）免疫グロブリン可変ドメインをコードする核酸を宿主細胞中のヒト免疫グロブリン定常ドメインをコードする核酸に作動可能に連結することと、（ｆ）宿主細胞が免疫グロブリン可変ドメインおよび免疫グロブリン定常ドメインを含むヒト抗体を発現するような条件下で、宿主細胞を培養することと、を含む方法を本明細書で提供する。
【０４０３】
例示的実施形態１８７において、ＭＨＣ上に提示されるペプチドに特異的なヒト可変ドメインを含むＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するＴ細胞を作製する方法であって、（ａ）ペプチドが非ヒト動物のＭＨＣ上に提示されるように、ペプチドを含む抗原をコードするペプチドまたは核酸を含む抗原に対して実施形態１２８の遺伝子改変非ヒト動物を曝露することと、（ｂ）（ａ）の遺伝子改変非ヒト動物から、ＭＨＣ上に提示されるペプチドに特異的なＴＣＲを発現するＴ細胞を得ることと、を含む方法を本明細書で提供する。
【０４０４】
例示的実施形態１８８において、ＭＨＣ上に提示されるペプチドに特異的なヒト可変ドメインを含むＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するＴ細胞ハイブリドーマを作製する方法であって、（ａ）ペプチドが非ヒト動物のＭＨＣ上に提示されるように、ペプチドを含む抗原をコードするペプチドまたは核酸を含む抗原に対して実施形態１２８の遺伝子改変非ヒト動物を曝露することと、（ｂ）（ａ）の遺伝子改変非ヒト動物から、ＭＨＣ上に提示されるペプチドに特異的なＴＣＲを発現するＴ細胞を得ることと、（ｃ）工程（ｂ）のＴ細胞からＴ細胞ハイブリドーマを作製することと、を含む方法を本明細書で提供する。
【０４０５】
例示的実施形態１８９において、ＭＨＣ上に提示されるペプチドに特異的なヒトＴ細胞受容体（ＴＣＲ）可変ドメインをコードする核酸を作製する方法であって、（ａ）ペプチドが非ヒト動物のＭＨＣ上に提示されるように、ペプチドを含む抗原をコードするペプチドまたは核酸を含む抗原に対して実施形態１２８の非ヒト動物を曝露することと、（ｂ）（ａ）の遺伝子改変非ヒト動物から、ＭＨＣ上に提示されるペプチドに特異的なＴＣＲを発現するＴ細胞を得ることと、（ｃ）Ｔ細胞からＴＣＲのヒトＴＣＲ可変ドメインをコードする核酸を単離することと、を含む方法を本明細書で提供する。
【０４０６】
例示的実施形態１９０において、ＭＨＣ上に提示されるペプチドに特異的なヒト可変ドメインおよびヒト定常ドメインを有するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を作製する方法であって、（ａ）ペプチドが非ヒト動物のＭＨＣ上に提示されるように、ペプチドを含む抗原をコードするペプチドまたは核酸を含む抗原に対して実施形態１２８の非ヒト動物を曝露することと、（ｂ）（ａ）の遺伝子改変非ヒト動物から、ＭＨＣ上に提示されるペプチドに特異的なＴＣＲを発現するＴ細胞を得ることと、（ｃ）Ｔ細胞からＴＣＲのＴＣＲ可変ドメインをコードする核酸を単離することと、（ｄ）細胞がＴＣＲ可変ドメインおよびＴＣＲ定常ドメインを含むＴＣＲを発現するように、ＴＣＲ可変ドメインをコードする核酸を細胞中のＴＣＲ定常ドメインに作動可能に連結することと、を含む方法を本明細書で提供する。
【０４０７】
例示的実施形態１９１において、ＭＨＣ上に提示されるペプチドに特異的なヒト免疫グロブリン可変ドメインおよび免疫グロブリン定常を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するＴ細胞を作製する方法であって、（ａ）ペプチドが非ヒト動物のＭＨＣ上に提示されるように、ペプチドを含む抗原をコードするペプチドまたは核酸を含む抗原に対して実施形態１７４の遺伝子改変非ヒト動物を曝露することと、（ｂ）（ａ）の遺伝子改変非ヒト動物から、ＭＨＣ上に提示されるペプチドに特異的なＣＡＲを発現するＴ細胞を得ることと、を含む方法を本明細書で提供する。
【０４０８】
例示的実施形態１９２において、ＭＨＣ上に提示されるペプチドに特異的なヒトＴＣＲ可変ドメインおよび免疫グロブリン定常ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するＴ細胞ハイブリドーマを作製する方法であって、（ａ）ペプチドが非ヒト動物のＭＨＣ上に提示されるように、ペプチドを含む抗原をコードするペプチドまたは核酸を含む抗原に対して実施形態１７４の遺伝子改変非ヒト動物を曝露することと、（ｂ）（ａ）の遺伝子改変非ヒト動物から、ＭＨＣ上に提示されるペプチドに特異的なＣＡＲを発現するＴ細胞を得ることと、（ｃ）工程（ｂ）のＴ細胞からＴ細胞ハイブリドーマを作製することと、を含む方法を本明細書で提供する。
【０４０９】
例示的実施形態１９３において、ＭＨＣ上に提示されるペプチドに特異的なヒト免疫グロブリン可変ドメインをコードする核酸を作製する方法であって、（ａ）ペプチドが非ヒト動物のＭＨＣ上に提示されるように、ペプチドを含む抗原をコードするペプチドまたは核酸を含む抗原に対して実施形態１７４の非ヒト動物を曝露することと、（ｂ）（ａ）の遺伝子改変非ヒト動物から、ＭＨＣ上に提示されるペプチドに特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するＴ細胞を得ることと、（ｃ）Ｔ細胞からＣＡＲのヒトＴＣＲ可変ドメインをコードする核酸を単離することと、を含む方法を本明細書で提供する。
【０４１０】
例示的実施形態１９４において、ＭＨＣ上に提示されるペプチドに特異的なヒト可変ドメインおよびヒト定常ドメインを有する抗体を作製する方法であって、（ａ）ペプチドが非ヒト動物のＭＨＣ上に提示されるように、ペプチドを含む抗原をコードするペプチドまたは核酸を含む抗原に対して実施形態１７４の非ヒト動物を曝露することと、（ｂ）（ａ）の遺伝子改変非ヒト動物から、ＭＨＣ上に提示されるペプチドに特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するＴ細胞を得ることと、（ｃ）Ｔ細胞からＣＡＲのヒト免疫グロブリン可変ドメインをコードする核酸を単離することと、（ｄ）細胞がヒト免疫グロブリン可変ドメインおよびヒト免疫グロブリン定常ドメインを含む抗体を発現するように、ヒト免疫グロブリン可変ドメインをコードする核酸を細胞中のヒト免疫グロブリン定常ドメインに作動可能に連結することと、を含む方法を本明細書で提供する。
【０４１１】
例示的実施形態１９５において、非ヒト動物が哺乳動物である、実施形態１８０〜１９４のいずれか１つに記載の方法を本明細書で提供する。
【０４１２】
例示的実施形態１９６において、哺乳動物が齧歯類である、実施形態１９５に記載の方法を本明細書で提供する。
【０４１３】
例示的実施形態１９７において、齧歯類がラットまたはマウスである、実施形態１９６に記載の方法を本明細書で提供する。
【０４１４】
例示的実施形態１９８において、実施形態１８０、１８５、１８６または１９４の方法に従って産生された抗体を本明細書で提供する。
【０４１５】
例示的実施形態１９９において、実施形態１８１、１８７、または１９１の方法に従って産生された細胞を本明細書で提供する。
【０４１６】
例示的実施形態２００において、実施形態１８２、１８８、または１９２の方法に従って産生されたハイブリドーマを本明細書で提供する。
【０４１７】
例示的実施形態２０１において、実施形態１８３、１８４、１８９、または１９３の方法に従って産生された核酸を本明細書で提供する。
【０４１８】
例示的実施形態２０２において、ヒトターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ｈＴｄＴ）をコードする核酸配列をゲノム中に含む、遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４１９】
例示的実施形態２０３において、ｈＴｄＴをコードする核酸配列が転写制御エレメントに作動可能に連結される、実施形態２０２に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４２０】
例示的実施形態２０４において、転写制御エレメントが、プロＢ細胞および／またはプレＢ細胞中の外因性ｈＴｄＴをコードする核酸配列の発現を駆動する、実施形態２０３に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４２１】
例示的実施形態２０５において、転写制御エレメントが、ＲＡＧ１転写制御エレメント、ＲＡＧ２転写制御エレメント、免疫グロブリン重鎖転写制御エレメント、免疫グロブリンκ軽鎖転写制御エレメントおよび／または免疫グロブリンλ軽鎖転写制御エレメントからなる群から選択される、実施形態２０３に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４２２】
例示的実施形態２０６において、非ヒト動物がプロＢ細胞および／またはプレＢ細胞中のｈＴｄＴを発現する、実施形態２０２〜２０４のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４２３】
例示的実施形態２０７において、転写制御エレメントが、ＣＤ４／ＣＤ８ダブルネガティブ（ＤＮ）胸腺細胞および／またはＣＤ４／ＣＤ８ダブルポジティブ（ＤＰ）胸腺細胞中の外因性ｈＴｄＴをコードする核酸配列の発現を駆動する、実施形態２０３に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４２４】
例示的実施形態２０８において、転写制御エレメントが、ＲＡＧ１転写制御エレメント、ＲＡＧ２転写制御エレメント、ＴＣＲα転写制御エレメント、ＴＣＲβ転写制御エレメント、ＴＣＲγ転写制御エレメントおよび／またはＴＣＲδ転写制御エレメントである、実施形態２０３に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４２５】
例示的実施形態２０９において、ＥＳ細胞由来の非ヒト動物が、ＤＮ胸腺細胞および／またはＤＰ胸腺細胞中のｈＴｄＴを発現する、実施形態２０２〜２０７のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４２６】
例示的実施形態２１０において、ｈＴｄＴをコードする核酸配列が、免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリン重鎖遺伝子座、ＲＡＧ１遺伝子座、ＲＡＧ２遺伝子座、ＴＣＲα鎖遺伝子座、ＴＣＲβ鎖遺伝子座、ＴＣＲγ鎖遺伝子座および／またはＴＣＲδ鎖遺伝子座に位置する、実施形態２０２〜２０９のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４２７】
例示的実施形態２１１において、ｈＴｄＴをコードする核酸配列が構成的な転写制御エレメントに作動可能に連結されない、実施形態２０２〜２１０のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４２８】
例示的実施形態２１２において、非ヒト動物ＥＳ細胞由来の非ヒト動物において、ｈＴｄＴが構成的に発現されない、実施形態２０２〜２１１のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４２９】
例示的実施形態２１３において、ＥＳ細胞由来の非ヒト動物の少なくとも１０％のＶ−Ｊ免疫グロブリン軽鎖接合が非鋳型付加を含む、実施形態２０２〜２１２のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４３０】
例示的実施形態２１４において、ＥＳ細胞由来の動物の少なくとも２０％のＶ−Ｊ免疫グロブリン軽鎖接合が非鋳型付加を含む、実施形態２１３に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４３１】
例示的実施形態２１５において、ＥＳ細胞由来の動物の少なくとも４０％のＶ−Ｊ免疫グロブリン軽鎖接合が非鋳型付加を含む、実施形態２１３に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４３２】
例示的実施形態２１６において、外因性ターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列、および免疫グロブリン定常領域遺伝子に作動可能に連結される、未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントを含む免疫グロブリン可変領域をゲノム中に含む、遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４３３】
例示的実施形態２１７において、外因性ＴｄＴがヒトＴｄＴである、実施形態２１６に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４３４】
例示的実施形態２１８において、外因性ＴｄＴをコードする核酸配列が転写制御エレメントに作動可能に連結される、実施形態２１６または２１７に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４３５】
例示的実施形態２１９において、転写制御エレメントが、プロＢ細胞および／またはプレＢ細胞中の外因性ＴｄＴをコードする核酸配列の発現を駆動する、実施形態２１８に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４３６】
例示的実施形態２２０において、転写制御エレメントが、ＲＡＧ１転写制御エレメント、ＲＡＧ２転写制御エレメント、免疫グロブリン重鎖転写制御エレメント、免疫グロブリンκ軽鎖転写制御エレメントおよび／または免疫グロブリンλ軽鎖転写制御エレメントからなる群から選択される、実施形態２１８に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４３７】
例示的実施形態２２１において、ＥＳ細胞由来の非ヒト動物が、プロＢ細胞および／またはプレＢ細胞中の外因性ＴｄＴを発現する、実施形態２１６〜２２０のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４３８】
例示的実施形態２２２において、転写制御エレメントが、ＣＤ４／ＣＤ８ダブルネガティブ（ＤＮ）胸腺細胞および／またはＣＤ４／ＣＤ８ダブルポジティブ（ＤＰ）胸腺細胞中の外因性ＴｄＴをコードする核酸配列の発現を駆動する、実施形態２１８に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４３９】
例示的実施形態２２３において、転写制御エレメントが、ＲＡＧ１転写制御エレメント、またはＲＡＧ２転写制御エレメントである、実施形態２１８に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４４０】
例示的実施形態２２４において、ＥＳ細胞由来の非ヒト動物が、ＤＮ胸腺細胞および／またはＤＰ胸腺細胞中の外因性ＴｄＴを発現する、実施形態２１６〜２２３のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４４１】
例示的実施形態２２５において、外因性ＴｄＴをコードする核酸配列が、免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリン重鎖遺伝子座、ＲＡＧ１遺伝子座、ＲＡＧ２遺伝子座、ＴＣＲα鎖遺伝子座、ＴＣＲβ鎖遺伝子座、ＴＣＲγ鎖遺伝子座および／またはＴＣＲδ鎖遺伝子座に位置する、実施形態２１６〜２２４のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４４２】
例示的実施形態２２６において、外因性ＴｄＴをコードする核酸配列が構成的な転写制御エレメントに作動可能に連結されない、実施形態２１６〜２２５のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４４３】
例示的実施形態２２７において、ＥＳ細胞由来の非ヒト動物において、外因性ＴｄＴが構成的に発現されない、実施形態２１６〜２２６のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４４４】
例示的実施形態２２８において、ＥＳ細胞由来の非ヒト動物の少なくとも１０％のＶ−Ｊ免疫グロブリン軽鎖接合が非鋳型付加を含む、実施形態２１６〜２２７のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４４５】
例示的実施形態２２９において、動物内の少なくとも２０％のＶ−Ｊ免疫グロブリン軽鎖接合が非鋳型付加を含む、実施形態２２８に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４４６】
例示的実施形態２３０において、動物内の少なくとも４０％のＶ−Ｊ免疫グロブリン軽鎖接合が非鋳型付加を含む、実施形態２２８に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４４７】
例示的実施形態２３１において、ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントがヒト重鎖可変領域遺伝子セグメントである、実施形態２１６〜２２７のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４４８】
例示的実施形態２３２において、定常領域遺伝子が重鎖定常領域遺伝子である、実施形態２３１に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４４９】
例示的実施形態２３３において、重鎖定常領域遺伝子がＣμ遺伝子，Ｃδ遺伝子、Ｃγ遺伝子、Ｃε遺伝子、またはＣα遺伝子である、実施形態２３２に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４５０】
例示的実施形態２３４において、重鎖定常領域遺伝子が内因性種由来のものである、実施形態２３２または２３３に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４５１】
例示的実施形態２３５において、重鎖定常領域遺伝子がマウス定常領域遺伝子である、実施形態２３２または２３３に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４５２】
例示的実施形態２３６において、重鎖定常領域遺伝子がラット定常領域遺伝子である、実施形態２３２または２３３に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４５３】
例示的実施形態２３７において、重鎖定常領域遺伝子がヒト定常領域遺伝子である、実施形態２３２または２３３に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４５４】
例示的実施形態２３８において、重鎖定常領域遺伝子がヒトＣＨ１ドメインならびに非ヒトＣＨ２およびＣＨ３ドメインを有する、実施形態２３２または２３３に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４５５】
例示的実施形態２３９において、非ヒトＣＨ２およびＣＨ３ドメインが内因性種由来のものである、実施形態２３８記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４５６】
例示的実施形態２４０において、非ヒトＣＨ２およびＣＨ３ドメインがマウスＣＨ２およびＣＨ３ドメインである、実施形態２３８に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４５７】
例示的実施形態２４１において、非ヒトＣＨ２およびＣＨ３ドメインがラットＣＨ２およびＣＨ３ドメインである、実施形態２３８に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４５８】
例示的実施形態２４２において、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、またはそれらの組み合わせから選択される免疫グロブリン重鎖定常領域において、動物が機能性ＣＨ１ドメインを欠いている、実施形態２１６〜２４１に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４５９】
例示的実施形態２４３において、免疫グロブリン可変領域および免疫グロブリン定常領域遺伝子が内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子座に位置する、実施形態２３２〜２４２のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４６０】
例示的実施形態２４４において、第２の免疫グロブリン定常領域遺伝子に作動可能に連結される、非再編成ヒト軽鎖可変領域遺伝子セグメントを含む免疫グロブリン可変領域をゲノム中にさらに含む、実施形態２３１〜２４３のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４６１】
例示的実施形態２４５において、第２の免疫グロブリン定常領域遺伝子に作動可能に連結される、ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントが、ヒトκ鎖可変領域遺伝子セグメントである、実施形態２４４に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４６２】
例示的実施形態２４６において、第２の免疫グロブリン定常領域遺伝子に作動可能に連結される、ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントが、ヒトλ鎖可変領域遺伝子セグメントである、実施形態２４４に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４６３】
例示的実施形態２４７において、第２の定常領域遺伝子が軽鎖定常領域遺伝子である、実施形態２４４〜２４６のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４６４】
例示的実施形態２４８において、第２の定常領域遺伝子がκ定常領域遺伝子である、実施形態２４７に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４６５】
例示的実施形態２４９において、第２の定常領域遺伝子がλ定常領域遺伝子である、実施形態２４７に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４６６】
例示的実施形態２５０において、第２の定常領域遺伝子が内因性種由来のものである、実施形態２４４〜２４９のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４６７】
例示的実施形態２５１において、第２の定常領域遺伝子がマウス定常領域遺伝子である、実施形態２４４〜２４９のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４６８】
例示的実施形態２５２において、第２の定常領域遺伝子がラット定常領域遺伝子である、実施形態２４４〜２４９のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４６９】
例示的実施形態２５３において、第２の定常領域遺伝子がヒト定常領域遺伝子である、実施形態２４４〜２４９のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４７０】
例示的実施形態２５４において、第２の免疫グロブリン定常領域遺伝子に作動可能に連結される、免疫グロブリン可変領域および第２の免疫グロブリン定常領域遺伝子が、内因性免疫グロブリン軽鎖遺伝子座に位置する、実施形態２４４〜２５３のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４７１】
例示的実施形態２５５において、第２の定常領域遺伝子がκ定常領域遺伝子であり、内因性免疫グロブリン軽鎖遺伝子座が免疫グロブリンκ遺伝子座である、実施形態２５４に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４７２】
例示的実施形態２５６において、第２の定常領域遺伝子がλ定常領域遺伝子であり、内因性免疫グロブリン軽鎖遺伝子座が免疫グロブリンλ遺伝子座である、実施形態２５４に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４７３】
例示的実施形態２５７において、第２の免疫グロブリン定常領域遺伝子に作動可能に連結される、再編成ヒト軽鎖可変領域（Ｖ／Ｊ）遺伝子セグメントを含む免疫グロブリン可変領域をゲノム中にさらに含む、実施形態２３１〜２４３のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４７４】
例示的実施形態２５８において、第２の免疫グロブリン定常領域遺伝子に作動可能に連結される、再編成ヒト軽鎖可変領域（Ｖ／Ｊ）遺伝子セグメントが、Ｖκ１−３９およびＶκ３−２０から選択されるＶκ遺伝子セグメントを含み、Ｊκ遺伝子セグメントに再編成される、実施形態２５７に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４７５】
例示的実施形態２５９において、動物が、Ｖκ１−３９／Ｊκ５またはＶκ３−２０／Ｊκ１配列を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域をゲノム中に含む、実施形態２５８に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４７６】
例示的実施形態２６０において、第２の免疫グロブリン定常領域遺伝子に作動可能に連結される、限定的なレパートリーのヒト軽鎖可変領域（ＶおよびＪ）遺伝子セグメントを含む免疫グロブリン可変領域をゲノム中にさらに含む、実施形態２３１〜２４３のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４７７】
例示的実施形態２６１において、第２の免疫グロブリン定常領域遺伝子に作動可能に連結される、ヒト軽鎖可変領域（ＶおよびＪ）遺伝子セグメントの限定的なレパートリーが、２つのＶ遺伝子セグメントおよび少なくとも２つ、好ましくは５つのＪ遺伝子セグメントを含む、実施形態２６０に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４７８】
例示的実施形態２６２において、２つのＶ遺伝子セグメントがＶκ１−３９およびＶκ３−２０遺伝子セグメントである、実施形態２６１に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４７９】
例示的実施形態２６３において、ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントがヒト軽鎖可変領域遺伝子セグメントである、実施形態２１６〜２３０のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４８０】
例示的実施形態２６４において、ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントがヒトκ鎖可変領域遺伝子セグメントである、実施形態２６３に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４８１】
例示的実施形態２６５において、ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントがヒトλ鎖可変領域遺伝子セグメントである、実施形態２６３に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４８２】
例示的実施形態２６６において、定常領域遺伝子が軽鎖定常領域遺伝子である、実施形態２６３〜２６５のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４８３】
例示的実施形態２６７において、定常領域遺伝子がκ定常領域遺伝子である、実施形態２６６に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４８４】
例示的実施形態２６８において、定常領域遺伝子がλ定常領域遺伝子である、実施形態２６６に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４８５】
例示的実施形態２６９において、定常領域遺伝子が重鎖定常領域遺伝子である、実施形態２６３〜２６５のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４８６】
例示的実施形態２７０において、定常領域遺伝子が内因性種由来のものである、実施形態２６３〜２６９のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４８７】
例示的実施形態２７１において、定常領域遺伝子がマウス定常領域遺伝子である、実施形態２６３〜２６９のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４８８】
例示的実施形態２７２において、定常領域遺伝子がラット定常領域遺伝子である、実施形態２６３〜２６９のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４８９】
例示的実施形態２７３において、定常領域遺伝子がヒト定常領域遺伝子である、実施形態２６３〜２６９のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４９０】
例示的実施形態２７４において、免疫グロブリン可変領域および免疫グロブリン定常領域遺伝子が内因性免疫グロブリン軽鎖遺伝子座に位置する、実施形態２６３〜２７３のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４９１】
例示的実施形態２７５において、定常領域遺伝子がκ定常領域遺伝子であり、内因性免疫グロブリン軽鎖遺伝子座が免疫グロブリンκ遺伝子座である、実施形態２７４に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４９２】
例示的実施形態２７６において、定常領域遺伝子がλ定常領域遺伝子であり、内因性免疫グロブリン軽鎖遺伝子座が免疫グロブリンλ遺伝子座である、実施形態２７４に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４９３】
例示的実施形態２７７において、免疫グロブリン可変領域がヒト由来の免疫グロブリン可変領域遺伝子間配列を含む、実施形態２１６〜２７６のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４９４】
例示的実施形態２７８において、免疫グロブリン可変領域が内因性種由来の免疫グロブリン可変領域遺伝子間配列を含む、実施形態２１６〜２７６のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４９５】
例示的実施形態２７９において、免疫グロブリン可変領域がマウス由来の免疫グロブリン可変領域遺伝子間配列を含む、実施形態２１６〜２７６のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４９６】
例示的実施形態２８０において、免疫グロブリン可変領域がラット由来の免疫グロブリン可変領域遺伝子間配列を含む、実施形態２１６〜２７６のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４９７】
例示的実施形態２８１において、不活性化内因性免疫グロブリン遺伝子座をゲノム中にさらに含む、実施形態２１６〜２８０のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４９８】
例示的実施形態２８２において、不活性化内因性免疫グロブリン遺伝子座が内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子座である、実施形態２８１に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０４９９】
例示的実施形態２８３において、内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子座が、内因性重鎖遺伝子座の可変領域の少なくとも一部の欠失により不活性化される、実施形態２８２に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５００】
例示的実施形態２８４において、可変領域の少なくとも一部の欠失が可変領域のＪ遺伝子セグメントの欠失を含む、実施形態２８３に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５０１】
例示的実施形態２８５において、内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子座が、内因性重鎖遺伝子座の定常領域の少なくとも一部の欠失により不活性化される、実施形態２８２に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５０２】
例示的実施形態２８６において、定常領域の少なくとも一部の欠失が定常領域のＣμ遺伝子の欠失を含む、実施形態２８５に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５０３】
例示的実施形態２８７において、不活性化内因性免疫グロブリン遺伝子座が内因性免疫グロブリンκ鎖遺伝子座である、実施形態２８１に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５０４】
例示的実施形態２８８において、内因性免疫グロブリンκ鎖遺伝子座が、内因性κ鎖遺伝子座の可変領域の少なくとも一部の欠失により不活性化される、実施形態２８７に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５０５】
例示的実施形態２８９において、可変領域の少なくとも一部の欠失が可変領域のＪ遺伝子セグメントの欠失を含む、実施形態２８８に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５０６】
例示的実施形態２９０において、内因性免疫グロブリンκ遺伝子座が、内因性κ鎖遺伝子座の定常領域の少なくとも一部の欠失により不活性化される、実施形態２８７に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５０７】
例示的実施形態２９１において、定常領域の少なくとも一部の欠失が定常領域のＣκ遺伝子の欠失を含む、実施形態２９０に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５０８】
例示的実施形態２９２において、不活性化内因性免疫グロブリン遺伝子座が内因性免疫グロブリンλ鎖遺伝子座である、実施形態２８１に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５０９】
例示的実施形態２９３において、内因性免疫グロブリンλ鎖遺伝子座が、内因性λ鎖遺伝子座のＶ−Ｊ−Ｃクラスターの少なくとも一部の欠失により不活性化される、実施形態２９２に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５１０】
例示的実施形態２９４において、未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントが、Ｂ細胞発生中に再編成されて、ＥＳ細胞由来の非ヒト動物のＢ細胞中の再編成可変領域遺伝子を生成する、実施形態２１６〜２９３のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５１１】
例示的実施形態２９５において、非ヒト動物内の少なくとも１０％の再編成可変領域遺伝子が非鋳型付加を含む、実施形態２９４に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５１２】
例示的実施形態２９６において、非ヒト動物内の少なくとも２０％の再編成可変領域遺伝子が非鋳型付加を含む、実施形態２９４に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５１３】
例示的実施形態２９７において、非ヒト動物内の少なくとも４０％の再編成可変領域遺伝子が非鋳型付加を含む、実施形態２９４に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５１４】
例示的実施形態２９８において、ＥＳ細胞由来の動物が、再編成可変領域遺伝子によってコードされる可変ドメイン、および定常領域遺伝子によってコードされる定常ドメインを含む、抗体を発現する、実施形態２９４〜２９７のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５１５】
例示的実施形態２９９において、外因性ターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列、およびＴＣＲ定常領域遺伝子に作動可能に連結される、非再編成ヒトＴＣＲ可変領域遺伝子セグメントを含むＴ細胞受容体（ＴＣＲ）可変領域をゲノム中に含む、遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５１６】
例示的実施形態３００において、外因性ＴｄＴがヒトＴｄＴである、実施形態２９９に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５１７】
例示的実施形態３０１において、外因性ＴｄＴをコードする核酸配列が転写制御エレメントに作動可能に連結される、実施形態２９９または３００に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５１８】
例示的実施形態３０２において、転写制御エレメントが、ＣＤ４／ＣＤ８ダブルネガティブ（ＤＮ）胸腺細胞および／またはＣＤ４／ＣＤ８ダブルポジティブ（ＤＰ）胸腺細胞中の外因性ＴｄＴをコードする核酸配列の発現を駆動する、実施形態３０１に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５１９】
例示的実施形態３０３において、転写制御エレメントが、ＲＡＧ１転写制御エレメント、ＲＡＧ２転写制御エレメント、ＴＣＲα転写制御エレメント、ＴＣＲβ転写制御エレメント、ＴＣＲγ転写制御エレメントおよび／またはＴＣＲδ転写制御エレメントである、実施形態３０１に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５２０】
例示的実施形態３０４において、ＥＳ細胞由来の非ヒト動物が、ＤＮ胸腺細胞および／またはＤＰ胸腺細胞中の外因性ＴｄＴを発現する、実施形態２９９〜３０３のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５２１】
例示的実施形態３０５において、外因性ＴｄＴをコードする核酸配列が、ＲＡＧ１遺伝子座、ＲＡＧ２遺伝子座、ＴＣＲα鎖遺伝子座、ＴＣＲβ鎖遺伝子座、ＴＣＲγ鎖遺伝子座および／またはＴＣＲδ鎖遺伝子座に位置する、実施形態２９９〜３０４のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５２２】
例示的実施形態３０６において、外因性ＴｄＴをコードする核酸配列が構成的な転写制御エレメントに作動可能に連結されない、実施形態２９９〜３０５のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５２３】
例示的実施形態３０７において、ＥＳ細胞由来の非ヒト動物によって外因性ＴｄＴが構成的に発現されない、実施形態２９９〜３０６のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５２４】
例示的実施形態３０８において、ヒトＴＣＲ可変領域遺伝子セグメントがヒトＴＣＲα可変領域遺伝子セグメントである、実施形態２９９〜３０７のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５２５】
例示的実施形態３０９において、ヒトＴＣＲ可変領域遺伝子セグメントがヒトＴＣＲβ可変領域遺伝子セグメントである、実施形態２９９〜３０７のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５２６】
例示的実施形態３１０において、ＴＣＲ定常領域遺伝子がＴＣＲα定常領域遺伝子である、実施形態２９９〜３０８のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５２７】
例示的実施形態３１１において、ＴＣＲ定常領域遺伝子がＴＣＲβ定常領域遺伝子である、実施形態２９９〜３０７および３０９のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５２８】
例示的実施形態３１２において、ＴＣＲ定常領域遺伝子が内因性種由来のものである、実施形態２９９〜３１１のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５２９】
例示的実施形態３１３において、ＴＣＲ定常領域遺伝子がマウス定常領域遺伝子である、実施形態２９９〜３１１のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５３０】
例示的実施形態３１４において、ＴＣＲ定常領域遺伝子がラット定常領域遺伝子である、実施形態２９９〜３１１のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５３１】
例示的実施形態３１５において、ＴＣＲ定常領域遺伝子がヒト定常領域遺伝子である、実施形態２９９〜３１１のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５３２】
例示的実施形態３１６において、ＴＣＲ可変領域およびＴＣＲ定常領域遺伝子が内因性ＴＣＲ遺伝子座に位置する、実施形態２９９〜３１５のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５３３】
例示的実施形態３１７において、内因性ＴＣＲ遺伝子座が内因性ＴＣＲα遺伝子座である、実施形態２９９〜３０８、３１０、３１３〜３１５のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５３４】
例示的実施形態３１８において、内因性ＴＣＲ遺伝子座がＴＣＲβ遺伝子座である、実施形態２９９〜３０７、３０９、３１１〜３１５のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５３５】
例示的実施形態３１９において、ＴＣＲ可変領域がヒト由来のＴＣＲ可変領域遺伝子間配列を含む、実施形態２９９〜３１８のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５３６】
例示的実施形態３２０において、ＴＣＲ可変領域が内因性種由来のＴＣＲ可変領域遺伝子間配列を含む、実施形態２９９〜３１８のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５３７】
例示的実施形態３２１において、不活性化内因性ＴＣＲ遺伝子座をゲノム中にさらに含む、実施形態２９９〜３２０のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５３８】
例示的実施形態３２２において、不活性化内因性ＴＣＲ遺伝子座がＴＣＲα遺伝子座である、実施形態３２１に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５３９】
例示的実施形態３２３において、不活性化内因性ＴＣＲ遺伝子座がＴＣＲβ遺伝子座である、実施形態３２１に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５４０】
例示的実施形態３２４において、非再編成ヒトＴＣＲ可変領域遺伝子セグメントが、Ｔ細胞発生中に再編成されて、ＥＳ細胞由来の非ヒト動物のＴ細胞中の再編成ＴＣＲ可変領域遺伝子を生成する、実施形態２９９〜３２３のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５４１】
例示的実施形態３２５において、ＥＳ細胞由来の非ヒト動物の少なくとも１０％の再編成可変領域遺伝子が非鋳型付加を含む、実施形態３２４に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５４２】
例示的実施形態３２６において、ＥＳ細胞由来の非ヒト動物の少なくとも２０％の再編成可変領域遺伝子が非鋳型付加を含む、実施形態３２４に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５４３】
例示的実施形態３２７において、ＥＳ細胞由来の非ヒト動物の少なくとも４０％の再編成可変領域遺伝子が非鋳型付加を含む、実施形態３２４に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５４４】
例示的実施形態３２８において、ＥＳ細胞由来の動物が、再編成ＴＣＲ可変領域遺伝子によってコードされる可変ドメイン、およびＴＣＲ定常領域遺伝子によってコードされる定常ドメインを含む、ＴＣＲを発現する、実施形態３２４〜３２７のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５４５】
例示的実施形態３２９において、外因性ターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列、およびＴＣＲ定常領域遺伝子に作動可能に連結される、未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントを含む免疫グロブリン可変領域をゲノム中に含む、遺伝子改変非ヒト動物を本明細書で提供する。
【０５４６】
例示的実施形態３３０において、外因性ＴｄＴがヒトＴｄＴである、実施形態３２９に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５４７】
例示的実施形態３３１において、外因性ＴｄＴをコードする核酸配列が転写制御エレメントに作動可能に連結される、実施形態３２９または３３０に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５４８】
例示的実施形態３３２において、転写制御エレメントが、ＣＤ４／ＣＤ８ダブルネガティブ（ＤＮ）胸腺細胞および／またはＣＤ４／ＣＤ８ダブルポジティブ（ＤＰ）胸腺細胞中の外因性ＴｄＴをコードする核酸配列の発現を駆動する、実施形態３３１に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５４９】
例示的実施形態３３３において、転写制御エレメントが、ＲＡＧ１転写制御エレメント、ＲＡＧ２転写制御エレメント、ＴＣＲα転写制御エレメント、ＴＣＲβ転写制御エレメント、ＴＣＲγ転写制御エレメントおよび／またはＴＣＲδ転写制御エレメントである、実施形態３３１に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５５０】
例示的実施形態３３４において、ＥＳ細胞由来の非ヒト動物が、ＤＮ胸腺細胞および／またはＤＰ胸腺細胞中の外因性ＴｄＴを発現する、実施形態３３１〜３３３のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５５１】
例示的実施形態３３５において、外因性ＴｄＴをコードする核酸配列が、ＲＡＧ１遺伝子座、ＲＡＧ２遺伝子座、ＴＣＲα鎖遺伝子座、ＴＣＲβ鎖遺伝子座、ＴＣＲγ鎖遺伝子座および／またはＴＣＲδ鎖遺伝子座に位置する、実施形態３３１〜３３４のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５５２】
例示的実施形態３３６において、外因性ＴｄＴをコードする核酸配列が構成的な転写制御エレメントに作動可能に連結されない、実施形態３３１〜３３５のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５５３】
例示的実施形態３３７において、ＥＳ細胞由来の非ヒト動物において、外因性ＴｄＴが構成的に発現されない、実施形態３３１〜３３６のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５５４】
例示的実施形態３３８において、ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントがヒト軽鎖可変領域遺伝子セグメントである、実施形態３３１〜３３７のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５５５】
例示的実施形態３３９において、ＥＳ細胞由来の非ヒト動物の少なくとも１０％のＶ−Ｊ免疫グロブリン軽鎖接合が非鋳型付加を含む、実施形態３３８に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５５６】
例示的実施形態３４０において、動物内の少なくとも２０％のＶ−Ｊ免疫グロブリン軽鎖接合が非鋳型付加を含む、実施形態３３９に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５５７】
例示的実施形態３４１において、動物内の少なくとも４０％のＶ−Ｊ免疫グロブリン軽鎖接合が非鋳型付加を含む、実施形態３３９に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５５８】
例示的実施形態３４２において、ヒト軽鎖可変領域遺伝子セグメントがκ遺伝子セグメントである、実施形態３３８〜３４１のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５５９】
例示的実施形態３４３において、ヒト軽鎖可変領域遺伝子セグメントがλ遺伝子セグメントである、実施形態３３８〜３４１のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５６０】
例示的実施形態３４４において、ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントがヒト重鎖可変領域遺伝子セグメントである、実施形態３３１〜３３７のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５６１】
例示的実施形態３４５において、ＴＣＲ定常領域遺伝子がＴＣＲα定常領域遺伝子である、実施形態３３１〜３４３のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５６２】
例示的実施形態３４６において、免疫グロブリン可変領域およびＴＣＲα定常領域遺伝子が内因性ＴＣＲα遺伝子座に位置する、実施形態３４５に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５６３】
例示的実施形態３４７において、ＴＣＲ定常領域遺伝子がＴＣＲβ定常領域遺伝子である、実施形態３４４に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５６４】
例示的実施形態３４８において、免疫グロブリン可変領域およびＴＣＲβ定常領域遺伝子が内因性ＴＣＲβ遺伝子座に位置する、実施形態３４７に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５６５】
例示的実施形態３４９において、ＴＣＲ定常領域遺伝子が内因性種由来のものである、実施形態３３１〜３４４のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５６６】
例示的実施形態３５０において、ＴＣＲ定常領域遺伝子がマウス定常領域遺伝子である、実施形態３３１〜３４８のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５６７】
例示的実施形態３５１において、ＴＣＲ定常領域遺伝子がラット定常領域遺伝子である、実施形態３３１〜３４８のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５６８】
例示的実施形態３５２において、ＴＣＲ定常領域遺伝子がヒト定常領域遺伝子である、実施形態３３１〜３４８のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５６９】
例示的実施形態３５３において、免疫グロブリン可変領域がヒト由来の免疫グロブリン可変領域遺伝子間配列を含む、実施形態３３１〜３５２のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５７０】
例示的実施形態３５４において、免疫グロブリン可変領域が内因性種由来の免疫グロブリン可変領域遺伝子間配列を含む、実施形態３４０〜３５２のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５７１】
例示的実施形態３５５において、免疫グロブリン可変領域がマウス由来の免疫グロブリン可変領域遺伝子間配列を含む、実施形態３４１〜３５２のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５７２】
例示的実施形態３５６において、免疫グロブリン可変領域がラット由来の免疫グロブリン可変領域遺伝子間配列を含む、実施形態３４１〜３５２のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５７３】
例示的実施形態３５７において、不活性化内因性免疫グロブリン遺伝子座をゲノム中にさらに含む、実施形態３４１〜３５６のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５７４】
例示的実施形態３５８において、不活性化内因性免疫グロブリン遺伝子座が内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子座である、実施形態３５７に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５７５】
例示的実施形態３５９において、内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子座が、内因性重鎖遺伝子座の可変領域の少なくとも一部の欠失により不活性化される、実施形態３５８に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５７６】
例示的実施形態３６０において、可変領域の少なくとも一部の欠失が可変領域のＪ遺伝子セグメントの欠失を含む、実施形態３５９に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５７７】
例示的実施形態３６１において、内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子座が、内因性重鎖遺伝子座の定常領域の少なくとも一部の欠失により不活性化される、実施形態３５８に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５７８】
例示的実施形態３６２において、定常領域の少なくとも一部の欠失が定常領域のＣμ遺伝子の欠失を含む、実施形態３６１に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５７９】
例示的実施形態３６３において、不活性化内因性免疫グロブリン遺伝子座が内因性免疫グロブリンκ鎖遺伝子座である、実施形態３５７に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５８０】
例示的実施形態３６４において、内因性免疫グロブリンκ鎖遺伝子座が、内因性κ鎖遺伝子座の可変領域の少なくとも一部の欠失により不活性化される、実施形態３６３に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５８１】
例示的実施形態３６５において、可変領域の少なくとも一部の欠失が可変領域のＪ遺伝子セグメントの欠失を含む、実施形態３６４に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５８２】
例示的実施形態３６６において、内因性免疫グロブリンκ遺伝子座が、内因性κ鎖遺伝子座の定常領域の少なくとも一部の欠失により不活性化される、実施形態３６５に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５８３】
例示的実施形態３６７において、定常領域の少なくとも一部の欠失が定常領域のＣκ遺伝子の欠失を含む、実施形態３６６に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５８４】
例示的実施形態３６８において、不活性化内因性免疫グロブリン遺伝子座が内因性免疫グロブリンλ鎖遺伝子座である、実施形態３５７に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５８５】
例示的実施形態３６９において、内因性免疫グロブリンλ鎖遺伝子座が、内因性λ鎖遺伝子座のＶ−Ｊ−Ｃクラスターの少なくとも一部の欠失により不活性化される、実施形態３６８に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５８６】
例示的実施形態３７０において、未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントが、Ｔ細胞発生中に再編成されて、ＥＳ細胞由来の非ヒト動物のＴ細胞中の再編成免疫グロブリン可変領域遺伝子を生成する、実施形態３３１〜３６９のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５８７】
例示的実施形態３７１において、ＥＳ細胞由来の非ヒト動物において、少なくとも１０％の再編成可変領域遺伝子が非鋳型付加を含む、実施形態３７０に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５８８】
例示的実施形態３７２において、ＥＳ細胞由来の非ヒト動物において、少なくとも２０％の再編成可変領域遺伝子が非鋳型付加を含む、実施形態３７０に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５８９】
例示的実施形態３７３において、ＥＳ細胞由来の非ヒト動物において、少なくとも４０％の再編成可変領域遺伝子が非鋳型付加を含む、実施形態３７０に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５９０】
例示的実施形態３７４において、ＥＳ細胞に由来する非ヒト動物が、再編成可変領域遺伝子によってコードされる可変ドメイン、およびＴＣＲ定常領域遺伝子によってコードされる定常ドメインを含む、キメラ抗原受容体を発現する、実施形態３７０〜３７２のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５９１】
例示的実施形態３７５において、機能的異所性マウスＡｄａｍ６遺伝子をさらに含む、実施形態２０２〜３７４のいずれか１つに記載の遺伝子改変ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５９２】
例示的実施形態３７６において、非ヒト動物が哺乳動物である、実施形態２０２〜３７５のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５９３】
例示的実施形態３７７において、哺乳動物が齧歯類である、実施形態３７６に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５９４】
例示的実施形態３７８において、齧歯類がラットまたはマウスである、実施形態３７７に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５９５】
例示的実施形態３７９において、齧歯類がマウスである、実施形態３７７に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５９６】
例示的実施形態３８０において、齧歯類がラットである、実施形態３７７に記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を本明細書で提供する。
【０５９７】
例示的実施形態３８１において、実施形態２０２〜３８０のいずれか１つに記載の遺伝子改変非ヒト動物ＥＳ細胞を使用することを含む、遺伝子改変非ヒト動物を作製する方法を本明細書で提供する。
【０５９８】
例示的実施形態３８２において、ヒトターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ｈＴｄＴ）をコードする核酸配列を生殖系列中に含むように非ヒト動物を操作することを含む遺伝子改変を含む、非ヒト動物を作製する方法を本明細書で提供する。
【０５９９】
例示的実施形態３８３において、外因性ターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列、および免疫グロブリン定常領域遺伝子に作動可能に連結される、未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントを含む免疫グロブリン可変領域を生殖系列中に含むように非ヒト動物を操作することを含む遺伝子改変を含む、非ヒト動物を作製する方法を本明細書で提供する。
【０６００】
例示的実施形態３８５において、外因性ターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列、およびＴＣＲ定常領域遺伝子に作動可能に連結される、未再編成ヒトＴＣＲ可変領域遺伝子セグメントを含むＴ細胞受容体（ＴＣＲ）可変領域を生殖系列中に含むように非ヒト動物を操作することを含む遺伝子改変を含む、非ヒト動物を作製する方法を本明細書で提供する。
【０６０１】
例示的実施形態３８６において、外因性ターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列、およびＴＣＲ定常領域遺伝子に作動可能に連結される、未再編成ヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントを含む免疫グロブリン可変領域を生殖系列中に含むように非ヒト動物を操作することを含む遺伝子改変を含む、非ヒト動物を作製する方法を本明細書で提供する。
【０６０２】
例示的実施形態３８７において、非ヒト動物が哺乳動物である、実施形態３８２〜３８５のいずれか１つに記載の方法を本明細書で提供する。
【０６０３】
例示的実施形態３８８において、哺乳動物が齧歯類である、実施形態３８６に記載の方法を本明細書で提供する。
【０６０４】
例示的実施形態３８９において、齧歯類がラットまたはマウスである、実施形態３８７に記載の方法を本明細書で提供する。
【０６０５】
例示的実施形態３９０において、齧歯類がマウスである、実施形態３８７に記載の方法を本明細書で提供する。
【実施例】
【０６０６】
本発明は、以下の非限定的な実施例によってさらに説明される。これらの実施例は、本発明の理解を助けるために記載されているが、決して本発明の範囲を限定することを意図するものではなく、またそのように解釈されるべきではない。実施例は、当業者に周知である従来の方法（分子クローニング技術など）の詳細な記載を含まない。特記しない限り、部は重量部であり、分子量は平均分子量であり、温度は摂氏で示され、圧力は大気圧またはそれに近い圧力である。
【０６０７】
実施例１：ヒトＴｄＴを発現するマウスの作製
ランダム導入遺伝子としてのまたは免疫グロブリンκ遺伝子座に標的化されたかのいずれかのヒトＴｄＴ遺伝子を含むマウスは、ＶＥＬＯＣＩＧＥＮＥ（登録商標）遺伝子工学技術（例えば、米国特許第６，５８６，２５１号およびＶａｌｅｎｚｕｅｌａ，Ｄ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｈｉｇｈ−ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍｏｕｓｅ  ｇｅｎｏｍｅ  ｃｏｕｐｌｅｄ  ｗｉｔｈ  ｈｉｇｈ−ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２１（６）：６５２−６５９参照）を用いて作製され、そこでは細菌相同組換えを用いたＢＡＣライブラリーに由来するヒト配列を用いて、ヒトＴｄＴ遺伝子座のゲノム断片を含む、ＴｄＴがＩｇＫ遺伝子座に標的化される場合には、マウスＥＳ細胞においてＬＴＶＥＣをＩｇＫ遺伝子座に標的化するターゲティングアームに隣接する、大きなターゲティングベクター（ＬＴＶＥＣ）が作製される。ＬＴＶＥＣは、Ｖａｌｅｎｚｕｅｌａ  ｅｔ  ａｌに従って線状化され、マウスＥＳ細胞系に電気穿孔される。ＥＳ細胞は、ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）によってスクリーニングされ、遺伝子コピー数（ランダムに組み込まれた導入遺伝子）またはＩｇＫ遺伝子座への正しいターゲティングのいずれかが決定される。
【０６０８】
あるいは、短いアイソフォームヒトＴｄＴ（ＴｄＴＳ）ｃＤＮＡは、デノボ合成され（Ｂｌｕｅ  Ｈｅｒｏｎ  Ｂｉｏ）、上記のようにＥＳ細胞への導入のためのターゲティングに組み込まれる。
【０６０９】
標的化されたＥＳ細胞クローンは、ＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）法（Ｐｏｕｅｙｍｉｒｏｕ，Ｗ．Ｔ．（２００７）によって８細胞期（またはそれ以前の）マウス胚に導入される。即座の表現型分析を可能にする遺伝子標的化胚性幹細胞から完全に誘導されたＦ０世代マウス（Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２５：９１−９９）。ヒトＴｄＴ遺伝子座を有するＶＥＬＯＣＩＭＩＣＥ（登録商標）（ドナーＥＳ細胞から完全に誘導されたＦ０マウス）は、ヒト対立遺伝子アッセイのゲインにおけるＴＡＱＭＡＮ（登録商標）によるスクリーニングによって同定される（Ｖａｌｅｎｚｕｅｌａ  ｅｔ  ａｌ．）。Ｆ０仔は遺伝子型が決定され、ホモ接合体に繁殖させる。ヒトＴｄＴ遺伝子座についてホモ接合性のマウスが作製され、表現型が決定される。以下の実施例１に具体的に記載されるように、ヒトＴｄＴＳならびに未再編成ヒト可変軽鎖および重鎖遺伝子座を含むマウスは、機能的異所性マウスＡｄａｍ６遺伝子を含むＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスにおいて、ヒトＴｄＴＳランダム導入遺伝子を導入またはヒトＴｄＴＳをＩｇＫ遺伝子座にターゲティングすることによって作製される。しかしながら、少なくともランダムに導入されたヒトＴｄＴＳ導入遺伝子について、このような動物は、以下に記載するヒトＴｄＴＳを含むＥＳ細胞をまず作製し、それからマウスを作製し、ランダムに組み込まれたヒトＴｄＴＳ遺伝子座を含むマウスを機能的異所性マウスＡｄａｍ６遺伝子を含むＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスと繁殖させることによって作製することもできる。
【０６１０】
実施例１．１．マウスラグ調節エレメント（Ｒａｇ−ＴｄＴ  ｔｇ）の制御下でのヒトＴｄＴの短いアイソフォーム（ＴｄＴＳ）を発現する導入遺伝子の作製
簡潔には、図１に詳細に示される大きなターゲティングベクター（ＬＴＶＥＣ）は、マウスＲａｇ２遺伝子（エクソン３のＡＴＧ開始コドンからエクソン３のＴＧＡ終止コドンまで）が、短いアイソフォーム、ＴｄＴＳ（エクソン１のＡＴＧ開始コドンからエクソン１３のポリＡシグナルの約０．５ｋｂ  ３’まで）のみをコードするヒトターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴまたはＤＮＴＴ）遺伝子で置換された、マウスおよびヒトＢＡＣクローンから構築した。ＴｄＴエクソン７および１２のＲＮＡスプライス部位を突然変異させて、長いアイソフォーム（ＴｄＴＬ１およびＬ２）の発現を防止した。同じＬＴＶＥＣにおいて、エクソン２のＡＴＧ開始コドンからエクソン２のＴＡＡ終止コドンまでのマウスＲａｇ１遺伝子を、増強緑色蛍光タンパク質（ＥＧＦＰ）およびＬａｃＺ  ３’ＵＴＲ−ｐｏｌｙＡシグナルのコード配列で置換した。ＬＴＶＥＣは、１３０ｋｂのマウスＲａｇ２遺伝子の上流調節配列５’および８．８ｋｂのマウスＲａｇ１遺伝子の上流調節配列３’、ならびに５．６ｋｂのＲａｇ２−Ｒａｇ１遺伝子間領域を含む。
【０６１１】
ＬＴＶＥＣは、Ｒａｇ２およびＲａｇ１遺伝子を含むマウスＢＡＣクローンＲＰ２３−３７４ｆ１０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ／Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ならびにＴｄＴ遺伝子を含むヒトＢＡＣクローンＲＰ１１−１０７０ｏ２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ／Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）から、標準分子生物学およびＰＣＲ、制限消化／ライゲーション、Ｇｉｂｓｏｎ  Ｉｓｏｔｈｅｒｍａｌ  Ａｓｓｅｍｂｌｙ、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９、細菌相同組換えなどの組換工学技術を用いて構築した。最終的なＬＴＶＥＣは、５’〜３’まで、（１）ＥＳ細胞または細菌における選択のためのＬｏｘｐ−ｐｇｋｐ−ｅｍ７−ｎｅｏ−ｌｏｘｐカセット、（２）Ｒａｇ２エクソン１の１２９，４４０ｂｐ上流で始まり、Ｒａｇ２エクソン３の開始から２５ｂｐで終わる、１３４，０６９ｂｐのマウスゲノム配列（ＧＲＣｍ３８アセンブリに基づくマウスゲノム座標２：１０１，４９５，２７８−１０１，６２９，３４７）、（３）エクソン１のＡＴＧ開始コドンで始まり、ポリＡシグナルの５１４ｂｐの３’で終わる、３４，５７３ｂｐのヒトＴｄＴゲノム配列（ＧＲＣｈ３８アセンブリに基づくヒトゲノム座標１０：９６，３０４，４９８−９６，３３９，０６３）（ヒトＴｄＴ遺伝子内では、エクソン７のスプライスドナー部位を欠失させ、ＮｏｔＩ部位により置換し、ＴｄＴＬ２アイソフォームの発現を防止し、エクソン１２のスプライス受容部位を欠失させ、ＴｄＴＬ１アイソフォーム（以下に詳述）の発現を防止する）、（４）ＡｓｉＳＩ部位、（５）Ｒａｇ２エクソン３の３’ＵＴＲ（１５９９ｂｐ）、５７５３ｂｐのＲａｇ２／Ｒａｇ１遺伝子間領域、およびＲａｇ１エクソン２の３’ＵＴＲ（３３９０ｂｐ）を含む１０，７４２ｂｐのマウスゲノム配列（ＧＲＣｍ３８ゲノム座標２：１０１，６３０，９３１−１０１，６４１，６７２）、（６）ＦｓｅＩ部位、（７）２４９ｂｐのＬａｃＺのポリＡシグナルおよび７９３ｂｐのＥＧＦＰのＣＤＳを含むマイナス鎖上の１，０６８ｂｐ、（８）Ｒａｇ１エクソン２のＡＴＧ開始コドンで始まり、Ｒａｇ１の転写開始部位の８，７５０ｂｐの３’で終わる、マイナス鎖上のＲａｇ１を含む１３，４５９ｂｐのマウスゲノム配列（ＧＲＣｍ３８座標２：１０１，６４４，７９３−１０１，６５８，２５１）、ならびに（９）細菌における選択のためのＥｍ７−ＣＭカセットを含む（図１参照）。
【０６１２】
詳細には、短いアイソフォームＴｄＴＳをコードする転写物のスプライシングを依然として可能にしながら、（それぞれ長いアイソフォームＴｄＴＬ２およびＴｄＴＬ１を作製するために使用される）ＴｄＴエクソン７および１２を用いた選択的スプライシングを防止するＴｄＴ遺伝子の２つの改変を作製するためのクローニングステップは、ＢＨＲおよびライゲーションを用いてＢＡＣクローンＲＰ１１−１０７０ｏ２から構築した：
（１）エクソン７のスプライスドナー部位を含む１３ｂｐ（ＧＴＣＧＧＧＴＣＧＴＧＧＴ（配列番号１））、スプライスドナー下線）を欠失させ、ＮｏｔＩ部位（ＧＣＧＧＣＣＧＣ（配列番号２））で置換した。これにより重複するＳａｃＩＩ部位（ＣＣＧＣＧＧ（配列番号３））が形成され、
（２）エクソン１２の２ｂｐスプライス受容部位を欠失させた。
【０６１３】
最終的なＬＴＶＥＣを図１に示し、様々な配列接合のおよその位置を図示する。接合も以下の表１にまとめる。
【表１】
2019521668.tif 000002
【０６１４】
最終的なＬＴＶＥＣを線状化し、機能的異所性マウスＡｄａｍ６遺伝子を含むＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）ＥＳ細胞に電気穿孔した（例えば、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第８，６４２，８３５号参照）。Ｎｅｏでの選択後、ＥＳ細胞をＴＡＱＭＡＮ（登録商標）によりスクリーニングして導入遺伝子のコピー数を決定した。ヒトＲａｇ−ＴｄＴ導入遺伝子の単一のコピー、２つのコピー、または複数のコピーを含むＥＳ細胞が得られた。
【０６１５】
Ｒａｇ−ＴｄＴ導入遺伝子の組み込み部位は、当該技術分野で知られている方法を介して決定される。一実施形態では、組み込み部位は、全マウスゲノムの低カバレッジペアエンドシーケンシングを用いて決定される（シーケンシングライブラリー−Ｎｅｘｔｅｒａ  ＤＮＡ  Ｌｉｂｒａｒｙ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ，Ｉｌｌｕｍｉｎａ；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ−Ｍｉｓｅｑ，Ｉｌｌｕｍｉｎａ）。例えば、１つの例において、Ｒａｇ−ＴｄＴ導入遺伝子は、１番染色体上の座標４１１３０４９２と４１１３０５０２（ＧＲＣｍ３８／ｍｍ１０アセンブリの座標）との間の２つのタンデム頭部−尾部コピーとして、いずれのコード領域も破壊することなく組み込まれたことが確認された。
【０６１６】
実施例１．２．マウスＲａｇ調節エレメント（Ｒａｇ−ＴｄＴ  ＩｇＫ）の制御下でのヒトＴｄＴの短いアイソフォーム（ＴｄＴＳ）の標的化免疫グロブリンκ遺伝子座挿入の作製
マウス免疫グロブリンκ遺伝子座上のＲａｇ調節エレメントの制御下でヒトＴｄＴを含むマウスを作製するために、ＥＳ細胞における組換えのためのマウスＩｇＫ相同性アームを、実施例１．１および図１に記載されているように作製された構築物の５’および３’末端に付加した。一般に、マウスＩｇＫアームは、（１）Ｉ−ＣｅｕＩおよびＰＩ−ＳｃｅＩ制限酵素部位に隣接する選択カセット（例えば、Ｈｙｇ、Ｎｅｏなど）を挿入する細菌相同組換えによってマウスＩｇＫ  ＢＡＣを改変すること、ならびに（２）Ｉ−ＣｅｕＩおよびＰＩ−ＳｃｅＩライゲーションによってマウスＩｇＫ  ＢＡＣにＴｄＴ構築物を挿入することにより付加される。最終的なＬＴＶＥＣを図２に示す。
【０６１７】
この最終的なＬＴＶＥＣは、５’〜３’まで、（１）細菌における選択のためのＳｐｅｃカセット、（２）ＩｇＫｃ遺伝子、ＩｇＫ３’エンハンサー、および３’ＩｇＫ組換え配列（ＲＳ）を含む２８５９１ｂｐの５’マウス相同性アーム（ＧＲＣｍ３８ゲノム座標６：７０，７２５，８２３−７０，７５４，４１５）（マウスアームは約２．６ｋｂのＲＳの３’で終わる）、（３）ＰＩ−ＳｃｅＩ部位、（４）ＥＳ細胞または細菌における選択のためのｌｏｘｐ−ＵｂＣｐ−ｅｍ７−ｈｙｇ−ｌｏｘｐカセット、（５）Ｒａｇ２プロモーター−ヒトＴｄＴＳおよびＲａｇ１−ＥＧＦＰ遺伝子を含む実施例１．１および図１に上述された構築物、（６）Ｉ−ＣｅｕＩ部位、（７）４４，９００ｂｐの３’マウスＩｇＫ相同性アーム（ＧＲＣｍ３８ゲノム座標６：７０，７５４，５０８−７０，７９９，６７８）、ならびに（８）細菌における選択のためのＣＭカセットを含む。
【０６１８】
最終的なＬＴＶＥＣを図２に示し、様々な配列接合のおよその位置を図示する。接合も以下の表２にまとめる。
【表２−１】
2019521668.tif 000003
【表２−２】
2019521668.tif 000004
【０６１９】
得られたＬＴＶＥＣを線状化し、機能的異所性マウスＡｄａｍ６遺伝子を含むＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）ＥＳ細胞に電気穿孔した（例えば、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第８，６４２，８３５号参照）。Ｈｙｇ耐性の選択後、対立遺伝子アッセイのＴＡＱＭＡＮ（登録商標）改良物によりＥＳ細胞をスクリーニングし（Ｖａｌｅｎｚｕｅｌａ  ｅｔ  ａｌ、前掲）、正しく標的化されたクローンを同定した。
【０６２０】
実施例１．３．共にマウス免疫グロブリン重鎖イントロンエンハンサー（Ｅμ）およびマウスＩｇＶＨ１−７２プロモーター（それぞれｍＩｇＨ−Ｅμ−ＶＨ１−７２−ＴｄＴ  ｔｇおよびｍＩｇＨ−Ｅμ−ＶＨ１−７２−ＴｄＴ  ＩｇＫ）の制御下での、ヒトＴｄＴの短いアイソフォーム（ＴｄＴＳ）のランダムトランスジェニックおよび標的化免疫グロブリンκ遺伝子座挿入の作製
実施例１．１および１．２のＲａｇ−ＴｄＴを作製するために用いたものと同じヒトＴｄＴＳ遺伝子（すなわち、ＡＴＧ開始コドンから約５１４ｂｐのポリＡシグナルの３’まで）を、６８９ｂｐのマウスＥμエンハンサーおよび３０３ｂｐのマウスＩｇＶＨ１−７２プロモーターの制御下に置いた。この構築物は、マウスゲノムにランダムに組み込まれたか、または免疫グロブリンＫ（ＩｇＫ）遺伝子座に標的化されたかのいずれかであった。標的化された組み込みについて、遺伝子は、実施例１．２のＬＴＶＥＣを作製するために使用されたのと同じ５’および３’マウスＩｇＫ相同性アームの間に挿入された。
【０６２１】
具体的には、最終的なＬＴＶＥＣは、５’〜３’まで、（１）細菌における選択のためのＳｐｅｃカセット、（２）ＩｇＫ定常（ＩｇＫＣ）遺伝子、ＩｇＫ３’エンハンサー、および３’ＩｇＫ組換え配列（ＲＳ）を含む２８５９１ｂｐの５’マウス相同性アーム（ＧＲＣｍ３８ゲノム座標６：７０，７２５，８２３−７０，７５４，４１５）（マウスアームは約２．６ｋｂのＲＳの３’で終わる）、（３）Ｉ−ＣｅｕＩ部位、（４）ＥＳ細胞または細菌における選択のための逆向きのｌｏｘｐ−ＵｂＣｐ−ｅｍ７−ｈｙｇ−ｌｏｘｐカセット、（５）上の実施例で使用されたのと同じ３４，５７３ｂｐの逆向きのヒトＴｄＴＳ遺伝子、（６）３０３ｂｐの逆向きのマウスＩｇＨＶ１−７２プロモーター（ＧＲＣｍ３８ゲノム座標１２：１１５，７５８，４１７−１１５，７５８，７１９）、（７）６８９ｂｐの逆向きのマウスＥμエンハンサー（ＥｃｏＲＩ−ＸｂａＩ断片、ＧＲＣｍ３８ゲノム座標１２：１１３，４２７，２８４−１１３，４２７，９７２）、（８）ＰＩ−ＳｃｅＩ部位、（９）４４，９００ｂｐの３’マウスＩｇＫ相同性アーム（ＧＲＣｍ３８ゲノム座標６：７０，７５４，５０８−７０，７９９，６７８）、ならびに（１０）細菌における選択のためのＣＭカセットを含む。
【０６２２】
最終的なベクターにおける特定の配列接合のおよその位置を図３に示し、それらの配列を下の表３に示す。
【表３】
2019521668.tif 000005
【０６２３】
得られたＬＴＶＥＣを線状化し、機能的異所性マウスＡｄａｍ６遺伝子を含むＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）ＥＳ細胞に電気穿孔した（例えば、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第８，６４２，８３５号参照）。Ｈｙｇ耐性の選択後、ＥＳ細胞クローンをＴＡＱＭＡＮ（登録商標）によってマウスＩｇＫ遺伝子座への正しいターゲティング（ｍＩｇＨ−Ｅμ−ＶＨ１−７２−ＴｄＴ  ＩｇＫ）または導入遺伝子コピー数（ｍＩｇＨ−Ｅμ−ＶＨ１−７２−ＴｄＴ  ｔｇ）についてスクリーニングした。
【０６２４】
実施例１．４．ＴｄＴＳ  ｃＤＮＡからの標的化免疫グロブリンκ遺伝子座挿入およびトランスジェニックヒトＴｄＴＳの作製
あるいは、ＴｄＴＳ  ｃＤＮＡは、３６８２ｂｐのＤＮＡ断片としてデノボ合成され（Ｂｌｕｅ  Ｈｅｒｏｎ  Ｂｉｏ）、ＥＳ細胞への導入のためのターゲティングベクターに組み込まれる。ターゲティングベクターは、５’〜３’まで、ＰＩ−ＳｃｅＩ部位、６８９ｂｐのマウスＩｇＨイントロンエンハンサー（ＥｃｏＲＩ−ＸｂａＩ断片）、３０３ｂｐのマウスＶＨ１−７２プロモーター、イントロン媒介性発現増強のためにエクソン２と３との間に保持された７３５ｂｐのイントロン２を含む１５３０ｂｐのヒトＴｄＴＳのＣＤＳ（ＮＣＢＩ  ＲｅｆＳｅｑ  ＮＭ＿００４０８８）、３４０ｂｐのヒトＴｄＴ  ３’  ＵＴＲ／ポリＡシグナル、ｌｏｘｐ−ｎｅｏ−ｌｏｘｐカセットでのライゲーションのためのＮｏｔＩおよびＳａｌＩ制限酵素部位、ならびにＩ−ＣｅｕＩ部位を含む。ベクターは、実施例１．２のＬＴＶＥＣを作製するために使用されたのと同じ５’および３’マウスＩｇＫ相同性アームの間に挿入され、ＩｇＫ遺伝子座に標的化されたか、またはマウスゲノムにランダムに組み込まれたかのいずれかであった。
【０６２５】
得られたＬＴＶＥＣを線状化し、機能的異所性マウスＡｄａｍ６遺伝子を含むＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）ＥＳ細胞に電気穿孔する（例えば、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第８，６４２，８３５号参照）。Ｈｙｇ耐性の選択後、ＥＳ細胞クローンをＴＡＱＭＡＮ（登録商標）によってマウスＩｇＫ遺伝子座への正しいターゲティング（ＩｇＫ標的化バージョン）または導入遺伝子コピー数（トランスジェニックバージョン）についてスクリーニングする。
【０６２６】
実施例１．５．ヒトＴｄＴＳを発現するマウス
上記のように、正しく標的化されたＥＳ細胞が産生されると、それらはＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）法により８細胞期（またはそれ以前の）マウス胚に導入され、対立遺伝子アッセイのゲインにおいてスクリーニングされ、続いてホモ接合体に繁殖させる。ヘテロ接合性またはホモ接合性動物は、ヒトＴｄＴＳと共にヒト可変軽鎖および重鎖ドメインならびにマウス定常領域を含む抗体を発現する（これらのマウスは、それぞれ内因性ＩｇＫおよびＩｇＨ遺伝子座でヒト免疫グロブリン可変軽および重遺伝子セグメントを含むため、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標））。
【０６２７】
ヒトＴｄＴＳマウスのいくつかのバージョンが作製され、試験され、それらは共にＲａｇプロモーターおよびＥμ−ＶＨ１−７２制御エレメントの制御下にあるランダムトランスジェニックおよびＩｇＫ標的化ＴｄＴＳを含んだ。また、１、２、または数コピーのＴｄＴＳ導入遺伝子を含むバージョン、ならびにゲノムＴｄＴおよびｃＤＮＡ  ＴｄＴ配列から作製されたバージョンが含まれた。残りの例は、Ｒａｇ−ゲノムＴｄＴＳの導入遺伝子（上の実施例１．１に記載されるような１番染色体上の２コピーのタンデム挿入）およびＩｇＫ遺伝子座に標的化されたＥμ−ＶＨ１−７２ゲノムＴｄＴＳ（実施例１．３）を含むマウスで得られたデータを示す。
【０６２８】
まず、ＴｄＴの発現についてマウスを試験する。ＰＴ−ＰＣＲを使用し、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）対照、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）＋Ｒａｇ−ゲノムＴｄＴＳ導入遺伝子、またはＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）＋ＩｇＫ遺伝子座に標的化されたＥμ−ＶＨ１−７２−ゲノムＴｄＴＳマウスのいずれかの骨髄由来のＴｄＴ転写産物を増幅した。全ＲＮＡを、Ｏｌｉｇｏ−ｄＴプライマーを用いたＳＵＰＥＳＣＲＩＰＴ（登録商標）ＩＩＩ逆転写酵素（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）による逆転写に使用した。βアクチンのプライマー（対照）、エクソン１〜２を増幅するように設計されたプライマー、エクソン４〜６を増幅するように設計されたプライマー、エクソン７〜９を増幅するように設計されたプライマー、およびエクソン９〜１１を増幅するように設計されたプライマーのいずれかで、ＳｓｏＡｄｖａｎｃｅｄ（商標）Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ＳＹＢＲ（登録商標）Ｇｒｅｅｎ  Ｓｕｐｅｒｍｉｘを用いてＰＣＲを行った。図４に示すように、ヒトＴｄＴエクソンの存在は、両方のバージョンのマウスで検出されたが、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）対照マウスでは非存在であった。
【０６２９】
実施例２．ヒトＴｄＴＳを含むマウスにおけるヒト免疫グロブリンκ接合多様性
実施例１に上述された様々なＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）ヒトＴｄＴＳマウスモデルにおける免疫グロブリンレパートリー配列多様性を評価するために、ＩｇＫ配列を、ｍＩｇＫ定常プライマーを用いて様々なマウスの脾臓から５’  ＲＡＣＥにより増幅し、Ｉｌｌｕｍｉｎａ  ＭｉＳｅｑを用いて配列決定した。
【０６３０】
具体的には、抗ＣＤ１９（マウス）磁気ビーズおよびＭＡＣＳ（登録商標）カラム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）を用いた磁気細胞選別により、脾臓Ｂ細胞を全脾細胞から積極的に濃縮した。ＲＮｅａｓｙ  Ｐｌｕｓ  ＲＮＡ単離キット（Ｑｉａｇｅｎ）を用い、製造元の指示に従って、精製した脾臓Ｂ細胞から全ＲＮＡを単離した。ＳＭＡＲＴｅｒ（商標）ＲＡＣＥ  ｃＤＮＡ増幅キット（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）およびＩｇκ特異的プライマーを用い、逆転写を行ってＩｇκ定常領域配列を含むｃＤＮＡを生成した（表４）。このプロセスの間に、プライマーＰＥ２−ＰＩＩＡの３’に逆相補的であるＤＮＡ配列を、新たに合成したｃＤＮＡの３’末端に結合させた。次いで精製されたＩｇκ特異的ｃＤＮＡを、ＰＥ２−ＰＩＩＡプライマーおよび表４に記載のＩｇκ定常特異的プライマーを使用する第１ラウンドＰＣＲによって増幅した。Ｐｉｐｐｉｎ  Ｐｒｅｐ（ＳＡＧＥ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）を用いて４５０〜７００ｂｐのＰＣＲ産物を単離した。これらの産物を、表４に列挙されたプライマー（「ＸＸＸＸＸＸ」は、配列決定のための試料の多重化を可能にする６ｂｐインデックス配列を表す）を使用する第２ラウンドＰＣＲによってさらに増幅した。４００ｂｐ〜７００ｂｐのＰＣＲ産物を単離し、精製し、ＫＡＰＡライブラリー定量化キット（ＫＡＰＡ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いるｑＰＣＲにより定量化した後、Ｍｉｓｅｑシーケンサー（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）に装填し、Ｍｉｓｅｑ試薬キットｖ３を用いて配列決定した（６００サイクル）。
【表４】
2019521668.tif 000006
【０６３１】
バイオインフォマティクス分析のために、生のＩｌｌｕｍｉｎａ配列を脱多重化し、κ定常領域プライマーに対する質、長さ、および完全一致に基づいてフィルタリングした。重複するペアエンドリードをマージし、カスタムインハウスパイプラインを使用して分析した。このパイプラインは、ヒト生殖系列ＶおよびＪ遺伝子データベースに再編成された軽鎖配列を整列させるＩｇＢＬＡＳＴ（ＮＣＢＩ、ｖ２．２．２５＋）のローカルインストールを用いた。終止コドンが検出されず、ＶＪ接合がＪセグメントとインフレームであった場合、再編成を生産的とみなした。そうでなければ再編成は非生産的とみなし、分析から除外した。
【０６３２】
ＣＤＲ３配列を、国際免疫遺伝情報システム（ＩＭＧＴ）境界を用いて抽出した。注釈付きのＶセグメントとＪセグメントとの間の接合領域は、ＰおよびＮヌクレオチドとして分類した。Ｎ／Ｐ付加を有する領域を各配列から抽出し、その長さを計算した。抗体レパートリーの多様性は、固有のクローン型を分析することによって計算した。配列多様性は、ランダムに選択された１０，０００リードにおける多数のユニークＣＤＲ３配列として定義した。
【０６３３】
図５は、ヒトＴｄＴＳを含まないＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスと比較して、ヒトＴｄＴＳマウスモデルにおいてユニークＣＤＲ３アミノ酸配列の数の２倍までの増加が検出されたことを示す。ＣＤＲ３多様性の増加は、ヌクレオチドレベルでも観察された（データは示さず）。図５は、Ｒａｇ−ゲノムＴｄＴＳ（Ｒａｇ  ＴｄＴ  Ｔｇ）およびＩｇＫ遺伝子座に標的化されたＥμ−ＶＨ１−７２−ゲノムＴｄＴＳ（ｍＩｇＨ−Ｅμ−ＶＨ１−７２  ＴｄＴ  ＩｇＫ）の２コピーの導入遺伝子（ホモ接合バージョンおよびヘテロ接合バージョンの両方）を含むマウスで得られたデータのみを示すが、同様のデータが他のバージョンのマウスから得られた（図示せず）。
【０６３４】
実施例３．ヒトＴｄＴＳを含むマウスにおける非生殖系列付加の増加
上記実施例２に記載の次世代シーケンシングから、（ＶκおよびＪκ遺伝子セグメントの両方の部分からなる）ＣＤＲ３における非生殖系列ヌクレオチド付加の割合も決定した。
【０６３５】
図６に示すように、機能的異所性マウスＡｄａｍ６遺伝子を含むＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスにおける約１０％と比較して、Ｂ細胞におけるヒト化κ軽鎖の約４５％が、ヒト化ＴｄＴＳマウスの両方のバージョンにおいて非生殖系列付加を有することが示された。脾臓からの免疫グロブリン軽鎖の配列分析は、ヒトＴｄＴＳマウスの軽鎖において０〜８個の非鋳型付加を示した（図中の８個は８個以上の非鋳型付加を有する配列を含む）。
【０６３６】
実施例４．ヒトＴｄＴＳマウスから得られた免疫グロブリンにおけるヒト軽鎖ＣＤＲ３長
ＣＤＲ３配列を、国際免疫遺伝情報システム（ＩＭＧＴ）境界を用いて抽出した。非鋳型ヌクレオチドを、既知の軽鎖ＶおよびＪ配列に基づいて決定した。
【０６３７】
図７Ａに示すように、上記の実施例２および３に記載のヒトＴｄＴＳマウスの２つのバージョンで観察された非鋳型付加の増加は、対照（機能的異所性マウスＡｄａｍ６遺伝子を含むＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標））と比較してκ軽鎖ＣＤＲ３長の増加をもたらした。図７Ｂに示すように、配列分析は、対照（機能的異所性マウスＡｄａｍ６遺伝子を含むＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標））と比較してＲａｇ−ＴｄＴＳマウス（ここではヘテロ接合マウスのデータのみを示す）における５’Ｊトリミング速度に影響を及ぼす広範なエキソヌクレアーゼ活性を示さなかった。
【０６３８】
実施例５．ヒトＴｄＴＳマウスにおけるヒト軽鎖ＶκおよびＪκ遺伝子セグメントの使用
図８Ａおよび８Ｂに示すように、上記の実施例２および３に記載のマウスの２つのバージョンにおけるヒトＴｄＴＳの導入は、機能的異所性マウスＡｄａｍ６遺伝子を含むＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスと比較して、Ｖκ遺伝子セグメントまたはＪκ遺伝子セグメントのいずれかの使用を顕著に変化させなかった。
【０６３９】
実施例６．ヒトＴｄＴＳを含むマウスにおける軽鎖λ免疫グロブリン遺伝子座および他の再編成遺伝子座における接合多様性
ヒト免疫グロブリンκ遺伝子座に加えて、Ｂ（λ軽鎖、重鎖）およびＴ（α／β）リンパ球からの他の遺伝子座における抗原−受容体多様を調査することができる。
【０６４０】
例えば、機能的異所性マウスＡｄａｍ６遺伝子を含むＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスにおけるＣλ１含有λ軽接合多様性を、上記実施例１に記載のヒトＴｄＴ導入遺伝子を含む同じＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスと、実施例２に記載の同じ配列決定方法および表５に列記したプライマーを使用して比較した場合、トランスジェニックマウスのマウスλ遺伝子座で増加した配列多様性（約２倍）が観察された（図９）。さらに、我々は、マウス免疫グロブリンλ非鋳型付加の増加率を観察した（図１０）。ＴｄＴトランスジェニックマウスにおけるλ鎖のＣＤＲ３長を図１１に示す。最後に、様々な試験動物間でマウスＶλ使用の差異は観察されなかった（図１２）。
【表５】
2019521668.tif 000007
【０６４１】
上記の機能的異所性マウスＡｄａｍ６遺伝子を含むもの（例えば、本明細書に参照により組み込まれる、米国特許第８，８７８，００１号、同第９，０７８，４１８号、同第９，１２５，３８６号）を含む、未再編成ヒト重鎖および軽鎖可変遺伝子セグメントを含むＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウス、または未再編成ヒト重鎖可変遺伝子セグメントもしくは未再編成ヒト軽鎖可変遺伝子セグメントのみを含むマウスに加えて、ヒトＴｄＴＳを含む他の動物を作製することができる。いくつかのそのような動物としては、内因性マウスλまたはκ遺伝子座のいずれかのヒトλ可変領域（米国特許第９，０３５，１２８号、同第９，０６６，５０２号、同第９，１６３，０９２号、同第９，１２０，６６２号、同第９，０２９，６２８号、同第９，００６，５１１号、同第９，０１２，７１７号）、内因性重鎖遺伝子座のヒトκ可変領域（例えば、米国特許出願公開第２０１２／００９６５７２号）、ヒト化ＴＣＲαおよびβ遺伝子座（例えば、米国特許第９，１１３，６１６号）、ならびにそれらの様々な並べ替えを含むもの、二重軽鎖マウスおよびその並べ替え（米国特許出願公開第２０１３／０１９８８８０号）、ユニバーサル軽鎖マウスおよびその並べ替え（例えば、米国特許出願公開第２０１１／０１９５４５４号、同第２０１３／０１８５８２号）、ユニバーサル重鎖マウスおよびその並べ替え（例えば、米国特許第９，２０４，６２４号）、それらの生殖系列ゲノムにヒスチジン置換を含むマウス（例えば、米国特許第９，３３４，３３４号および同第９，３０１，５１０号、米国特許出願公開第２０１３／０２４７２３６号、同第２０１４／００１３４５６号）、キメラ抗原受容体マウス（例えば、米国特許出願公開第２０１６／００８１３１４号）、ＣＨ１ドメインを欠くマウス（例えば、米国特許第８，７５４，２８７号および米国特許出願公開第２０１５／０２８９４８９号）が挙げられ、すべて本明細書に参照により組み込まれる。軽鎖および／または重鎖（例えば、ヒト軽鎖および／または重鎖）のいずれかの接合多様性を増加させることが望ましい任意のそのような動物は、そのような改変を含むＥＳ細胞に、本明細書に記載のヒトＴｄＴＳの導入遺伝子または標的化挿入のいずれかを導入することによって作製され得る。ランダムに組み込まれたＴｄＴＳ導入遺伝子を含むＥＳ細胞から作製されたマウス（およびＩｇＫ遺伝子座が改変されていない場合、例えば、ヒト化ＴＣＲ遺伝子座マウス）の場合、それらは様々な上記改変を含むマウスとの繁殖によっても作製され得る。このような動物へのＴｄＴＳ対立遺伝子の組み込みの成功は、本明細書で上記のように決定され、様々な遺伝子座での接合多様性の生成に対するヒトＴｄＴＳ発現の効果は、本明細書で上記のように決定される。未改変再編成遺伝子座、例えば、内因性マウス免疫グロブリンおよびＴ細胞遺伝子座への影響も研究されている。
【０６４２】
二重軽鎖マウスの接合多様性に対するＴｄＴ導入の効果が研究された１つのそのような実施例を、以下の実施例７〜１０に示す。
【０６４３】
実施例７．ヒトＴｄＴＳを含む二重軽鎖（ＤＬＣ）マウスにおけるヒト免疫グロブリンκ接合多様性
二重軽鎖遺伝子座およびヒトＴｄＴＳを含むマウスは、機能的マウスＡｄａｍ６遺伝子（米国特許第８，６４２，８３５号および同第８，６９７，９４０号参照）および外因性ヒトＴｄＴＳを含むＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスを、二重軽鎖遺伝子座（本明細書に参照により組み込まれる、米国特許出願公開第２０１３／０１９８８８０号）を含むマウスと繁殖させることにより作製した。
【０６４４】
２つの未再編成Ｖκ遺伝子セグメント：ＩＧＶＫ３−２０およびＩＧＶＫ１−３９のみを含む制限されたＩｇκ遺伝子座、ならびに５つの未再編成ＩＧＪＫ遺伝子セグメントを有するＤＬＣヒトＴｄＴＳマウスモデル（本明細書に参照により組み込まれる、米国特許出願公開第２０１３／０１９８８８０号）における免疫グロブリンレパートリー配列多様性を評価するために、Ｉｇκ配列をｍＩｇＫ定常プライマーで様々なマウスの脾臓から５’ＲＡＣＥにより増幅し、Ｉｌｌｕｍｉｎａ  ＭｉＳｅｑを用いて配列決定した。ほとんどの実験において、Ｒａｇ  ＴｄＴ  Ｔｇにホモ接合性であり、ＤＬＣ遺伝子座にホモ接合性である何匹かのマウス（Ｒａｇ  ＴｄＴ  ｔｇ（ＨＥＴ）ＤＬＣ）およびＲａｇ  ＴｄＴ  Ｔｇにホモ接合性であり、ＤＬＣ遺伝子座にホモ接合性である２匹のマウス（Ｒａｇ  ＴｄＴ  ｔｇ（ＨＯ）ＤＬＣ）を使用した。Ｒａｇ  ＴｄＴ  ｔｇ（ＨＥＴ）ＤＬＣのデータは、試験したすべてのマウスの平均として示すが、２匹のＲａｇ  ＴｄＴ  ｔｇ（ＨＯ）ＤＬＣマウスは個別に示す。
【０６４５】
具体的には、抗ＣＤ１９（マウス）磁気ビーズおよびＭＡＣＳ（登録商標）カラム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）を用いた磁気細胞選別により、脾臓Ｂ細胞を全脾細胞から積極的に濃縮した。ＲＮｅａｓｙ  Ｐｌｕｓ  ＲＮＡ単離キット（Ｑｉａｇｅｎ）を用い、製造元の指示に従って、精製した脾臓Ｂ細胞から全ＲＮＡを単離した。ＳＭＡＲＴｅｒ（商標）ＲＡＣＥ  ｃＤＮＡ増幅キット（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）およびＩｇκ特異的プライマーを用い、逆転写を行ってＩｇκ定常領域配列を含むｃＤＮＡを生成した（表４）。このプロセスの間に、プライマーＰＥ２−ＰＩＩＡの３’に逆相補的であるＤＮＡ配列を、新たに合成したｃＤＮＡの３’末端に結合させた。次いで精製されたＩｇκ特異的ｃＤＮＡを、ＰＥ２−ＰＩＩＡプライマーおよび表４に記載のＩｇκ定常特異的プライマーを使用する第１ラウンドＰＣＲによって増幅した。Ｐｉｐｐｉｎ  Ｐｒｅｐ（ＳＡＧＥ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）を用いて４５０〜７００ｂｐのＰＣＲ産物を単離した。これらの産物を、表４に列挙されたプライマー（「ＸＸＸＸＸＸ」は、配列決定のための試料の多重化を可能にする６ｂｐインデックス配列を表す）を使用する第２ラウンドＰＣＲによってさらに増幅した。４００ｂｐ〜７００ｂｐのＰＣＲ産物を単離し、精製し、ＫＡＰＡライブラリー定量化キット（ＫＡＰＡ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いるｑＰＣＲにより定量化した後、Ｍｉｓｅｑシーケンサー（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）に装填し、Ｍｉｓｅｑ試薬キットｖ３を用いて配列決定した（６００サイクル）。
【０６４６】
バイオインフォマティクス分析のために、生のＩｌｌｕｍｉｎａ配列を脱多重化し、κ定常領域プライマーに対する質、長さ、および完全一致に基づいてフィルタリングした。重複するペアエンドリードをマージし、カスタムインハウスパイプラインを使用して分析した。このパイプラインは、ヒト生殖系列ＶおよびＪ遺伝子データベースに再編成された軽鎖配列を整列させるＩｇＢＬＡＳＴ（ＮＣＢＩ、ｖ２．２．２５＋）のローカルインストールを用いた。終止コドンが検出されず、ＶＪ接合がＪセグメントとインフレームであった場合、再編成を生産的とみなした。そうでなければ再編成を非生産的とみなし、分析から除外した。
【０６４７】
ＣＤＲ３配列を、国際免疫遺伝情報システム（ＩＭＧＴ）境界を用いて抽出した。注釈付きのＶセグメントとＪセグメントとの間の接合領域は、ＰおよびＮヌクレオチド（非鋳型付加）として分類した。Ｎ／Ｐ付加を有する領域を各配列から抽出し、その長さを計算した。抗体レパートリーの多様性は、固有のクローン型を分析することによって計算した。配列多様性は、ランダムに選択された１０，０００リードにおける多数のユニークＣＤＲ３配列として定義した。
【０６４８】
図１３は、導入されたヒトＴｄＴＳを含まないＤＬＣマウスと比較して、ＤＬＣヒトＴｄＴＳマウスモデルにおいてユニークＣＤＲ３アミノ酸配列の数の２倍超の増加が検出されたことを示す。
【０６４９】
実施例８．ヒトＴｄＴＳを含むＤＬＣマウスにおける非生殖系列付加の増加
上記実施例７に記載の次世代シーケンシングから、ＤＬＣ  ＴｄＴマウスの免疫グロブリン配列における（ＶκおよびＪκ遺伝子セグメントの両方の部分からなる）ＣＤＲ３における非生殖系列ヌクレオチド付加の割合も決定した。
【０６５０】
図１４に示すように、ＤＬＣ対照マウス（ＴｄＴが導入されていないＤＬＣマウス）における約１０％と比較して、Ｂ細胞におけるヒト化κ軽鎖の約半分が、ＤＬＣヒト化ＴｄＴＳマウス（ＴｄＴのＨＥＴおよびＨＯの両方）において非生殖系列付加を有することが示された。
【０６５１】
実施例９．ヒトＴｄＴＳを含むＤＬＣマウスから得られた免疫グロブリンにおけるヒト軽鎖ＣＤＲ３長
ＣＤＲ３配列を、国際免疫遺伝情報システム（ＩＭＧＴ）境界を用いて抽出した。非鋳型ヌクレオチドを、既知の軽鎖ＶおよびＪ配列から決定した。
【０６５２】
図１５に示すように、記載されたＤＬＣヒト化ＴｄＴＳマウス（ＨＥＴおよびＨＯの両方）において観察された非鋳型付加の増加は、対照（ヒトＴｄＴが導入されていないＤＬＣマウス）と比較してκ軽鎖ＣＤＲ３長の増加をもたらした。
【０６５３】
実施例１０．ヒトＴｄＴＳを含むＤＬＣマウスにおけるヒト軽鎖ＶκおよびＪκ遺伝子セグメントの使用
図１６に示すように、ＤＬＣマウスにおけるヒトＴｄＴＳの導入は、ＤＬＣ対照マウス（ヒトＴｄＴが導入されていないＤＬＣマウス）と比較して、Ｖκ遺伝子セグメントまたはＪκ遺伝子セグメントのいずれかの使用を顕著に変化させなかった。
【０６５４】
参照による組み込み
本明細書中に言及されるすべての刊行物、特許、および特許出願は、各刊行物、特許、または特許出願が、具体的かつ個別に参照により組み込まれると示されるように、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。矛盾する場合には、本明細書中の任意の定義を含む、本出願が優先される。
【０６５５】
等価物
当業者であれば、本明細書に記載された本発明の特定の実施形態に対する多くの等価物を認識するか、または日常的な実験のみを用いて確認することができるであろう。そのような等価物は、下記の特許請求の範囲によって包含されることが意図される。
【図１】
2019521668.tif 000008
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７−１】
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【図７−２】
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【図８−１】
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【図８−２】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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