【手続補正書】
【提出日】令和3年11月30日(2021.11.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
約５５／４５以上のｓｎ１／ｓｎ２特異度比を有することによって特徴付けられるホスホリパーゼＡ１を含む単離ポリペプチドであって、前記ホスホリパーゼＡ１は、０．０２未満のリゾホスホリパーゼ／ホスホリパーゼ活性比及び／又は０．１２未満のＮＡＬＰＥ／ＮＡＰＥ活性比を有する、単離ポリペプチド。
【請求項２】
前記ｓｎ１／ｓｎ２特異度比は、約６０／４０、約７０／３０、約８０／２０、約９０／１０、約９５／５、約９９／１、約７４／２６、又は約８９／１１である、請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項３】
前記リゾホスホリパーゼ／ホスホリパーゼ活性比は、０．００９未満、０．００８未満、０．００７未満、０．００６未満、０．００５未満、０００４未満、０．００３未満、０．００２未満、または０．００１未満である、請求項１または２に記載の単離ポリペプチド。
【請求項４】
前記ホスホリパーゼＡ１は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４又は配列番号１６と少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％の配列同一性を有するタンパク質配列を含む酵素であり、任意選択で、配列番号６と少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％の配列同一性を有するタンパク質配列を含む酵素である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の単離ポリペプチド。
【請求項５】
前記リゾホスホリパーゼ／ホスホリパーゼ活性比は、０．０１９未満、０．０１８未満、０．０１７未満、０．０１６未満、０．０１５未満、０．０１４未満、０．０１３未満、０．０１２未満、０．０１１未満、０．０１未満である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の単離ポリペプチド。
【請求項６】
前記ＮＡＬＰＥ／ＮＡＰＥ活性比は、０．１１未満、０．１０未満、０．０９未満、０．０８未満、０．０７未満、０．０６未満、０．０５未満、０．０４未満、または０．０３未満である、請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項７】
配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４又は配列番号１６と少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％の配列同一性を有するタンパク質配列を含み、任意選択で、配列番号６と少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の配列同一性を有するタンパク質配列を含むホスホリパーゼＡ１酵素を含む単離ポリペプチド。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の単離ポリペプチドを含む生地。
【請求項９】
改善された生地伸展性及び／又は安定性を有する、請求項８に記載の生地。
【請求項１０】
生地及び／又はそれから製造される焼成製品を改善するために有用な少なくとも１種の追加の酵素をさらに含む、請求項８または９に記載の生地。
【請求項１１】
前記追加の酵素は、アミラーゼ、シクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ、ペプチダーゼ、トランスグルタミナーゼ、リパーゼ、ガラクトリパーゼ、前記ホスホリパーゼＡ１と異なるホスホリパーゼ、セルラーゼ、ヘミセルラーゼ、プロテアーゼ、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼ、グリコシルトランスフェラーゼ、ペルオキシダーゼ、リポキシゲナーゼ、ラッカーゼ及びオキシダーゼからなる群から選択される、請求項８〜１０のいずれか一項に記載の生地。
【請求項１２】
前記アミラーゼは、エキソアミラーゼである、請求項１１に記載の生地。
【請求項１３】
前記エキソアミラーゼは、マルトース生成アミラーゼまたは非マルトース生成アミラーゼである、請求項１２に記載の生地。
【請求項１４】
前記非マルトース生成アミラーゼは、主に４〜８つのＤ−グルコピラノシル単位を含む１つ又は複数の直鎖マルトオリゴ糖をアミロペクチンの側鎖の非還元末端から切断することにより、デンプンを加水分解する、請求項１３に記載の生地。
【請求項１５】
前記追加の酵素は、ホスホリパーゼであり、任意選択で、前記ホスホリパーゼは、ガラクトリパーゼ活性を有する、請求項１１に記載の生地。
【請求項１６】
前記ホスホリパーゼは、配列番号１７及び／又は配列番号１８を含む、請求項１５に記載の生地。
【請求項１７】
請求項８〜１６のいずれか一項に記載の生地を焼成するステップを含む、焼成製品を調製する方法。
【請求項１８】
請求項１７に記載の方法によって得ることができる焼成製品。
【請求項１９】
改善されたクラム孔径、気泡の改善された均質性、クラストとクラムとが分離していないこと、増加した体積、増加したクラストのカリっとした食感及び改善されたオーブンスプリングからなる群から選択される少なくとも１つの改善された特性を有し、任意選択で、前記改善された特性は、クラストのカリっとした食感である、請求項１８に記載の焼成製品。
【請求項２０】
小麦粉と、請求項１〜７のいずれか一項に記載の単離ポリペプチドとを含む焼成用プレミックス。
【請求項２１】
生地及び／又はそれから製造される焼成製品を改善するために有用な少なくとも１種の追加の酵素をさらに含む、請求項２０に記載のプレミックス。
【請求項２２】
前記追加の酵素は、アミラーゼ、シクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ、ペプチダーゼ、トランスグルタミナーゼ、リパーゼ、ガラクトリパーゼ、前記ホスホリパーゼＡ１と異なるホスホリパーゼ、セルラーゼ、ヘミセルラーゼ、プロテアーゼ、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼ、グリコシルトランスフェラーゼ、ペルオキシダーゼ、リポキシゲナーゼ、ラッカーゼ及びオキシダーゼからなる群から選択される、請求項２１に記載のプレミックス。
【請求項２３】
前記アミラーゼは、エキソアミラーゼである、請求項２２に記載のプレミックス。
【請求項２４】
前記エキソアミラーゼは、マルトース生成アミラーゼまたは非マルトース生成アミラーゼである、請求項２３に記載のプレミックス。
【請求項２５】
前記非マルトース生成アミラーゼは、主に４〜８つのＤ−グルコピラノシル単位を含む１つ又は複数の直鎖マルトオリゴ糖をアミロペクチンの側鎖の非還元末端から切断することにより、デンプンを加水分解する、請求項２４に記載のプレミックス。
【請求項２６】
前記追加の酵素は、ホスホリパーゼであり、前記前記ホスホリパーゼは、ガラクトリパーゼ活性を有する、請求項２２に記載のプレミックス。
【請求項２７】
前記ホスホリパーゼは、配列番号１７及び／又は配列番号１８を含む、請求項２６に記載のプレミックス。
【請求項２８】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の単離ポリペプチドを含む顆粒又は凝集粉を含有する焼成改良剤。
【請求項２９】
生地及び／又はそれから製造される焼成製品を改善するために有用な少なくとも１種の追加の酵素をさらに含む、請求項２８に記載の焼成改良剤。
【請求項３０】
前記追加の酵素は、アミラーゼ、シクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ、ペプチダーゼ、トランスグルタミナーゼ、リパーゼ、ガラクトリパーゼ、前記ホスホリパーゼＡ１と異なるホスホリパーゼ、セルラーゼ、ヘミセルラーゼ、プロテアーゼ、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼ、グリコシルトランスフェラーゼ、ペルオキシダーゼ、リポキシゲナーゼ、ラッカーゼ及びオキシダーゼからなる群から選択される、請求項２９に記載の焼成改良剤。
【請求項３１】
前記アミラーゼは、エキソアミラーゼである、請求項３０に記載の焼成改良剤。
【請求項３２】
前記エキソアミラーゼは、マルトース生成アミラーゼまたは非マルトース生成アミラーゼである、請求項３１に記載の焼成改良剤。
【請求項３３】
前記非マルトース生成アミラーゼは、主に４〜８つのＤ−グルコピラノシル単位を含む１つ又は複数の直鎖マルトオリゴ糖をアミロペクチンの側鎖の非還元末端から切断することにより、デンプンを加水分解する、請求項３２に記載の焼成改良剤。
【請求項３４】
前記追加の酵素は、ホスホリパーゼであり、任意選択で、前記ホスホリパーゼは、ガラクトリパーゼ活性を有する、請求項３０に記載の焼成改良剤。
【請求項３５】
前記ホスホリパーゼは、配列番号１７及び／又は配列番号１８を含む、請求項３４に記載の焼成改良剤。
【請求項３６】
生地を製造する方法であって、小麦粉、食塩、水、砂糖、脂肪、レシチン、油、乳化剤及び酵母からなる群から選択される生地成分を、請求項１〜７のいずれか一項に記載のホスホリパーゼＡ１を含む単離ポリペプチドと混合するステップを含む方法。
【請求項３７】
生地及び／又はそれから製造される焼成製品を改善するために有用な少なくとも１種の追加の酵素を添加するステップをさらに含む、請求項３６に記載の生地を製造する方法。
【請求項３８】
前記追加の酵素は、アミラーゼ、シクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ、ペプチダーゼ、トランスグルタミナーゼ、リパーゼ、ガラクトリパーゼ、前記ホスホリパーゼＡ１と異なるホスホリパーゼ、セルラーゼ、ヘミセルラーゼ、プロテアーゼ、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼ、グリコシルトランスフェラーゼ、ペルオキシダーゼ、リポキシゲナーゼ、ラッカーゼ及びオキシダーゼからなる群から選択される、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記アミラーゼは、エキソアミラーゼである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記エキソアミラーゼは、マルトース生成アミラーゼまたは非マルトース生成アミラーゼである、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記非マルトース生成アミラーゼは、主に４〜８つのＤ−グルコピラノシル単位を含む１つ又は複数の直鎖マルトオリゴ糖をアミロペクチンの側鎖の非還元末端から切断することにより、デンプンを加水分解する、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記追加の酵素は、ホスホリパーゼであり、任意選択で、前記ホスホリパーゼは、ガラクトリパーゼ活性を有する、請求項３８に記載の方法。
【請求項４３】
前記ホスホリパーゼは、配列番号１７及び／又は配列番号１８を含む、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
乳化剤を添加するステップをさらに含む、請求項３６〜４３のいずれか一項に記載の生地を製造する方法。
【請求項４５】
前記乳化剤は、ｉ）レシチン若しくはリゾ−レシチンなどのリン脂質乳化剤；又はｉｉ）ＤＡＴＥＭ、モノグリセリド若しくはジグリセリドなどの非リン脂質乳化剤からなる群から選択される、請求項４４に記載の生地を製造する方法。
【請求項４６】
リン脂質乳化剤の修飾の方法であって、請求項１〜７のいずれか一項に記載の単離ポリペプチドを含む酵素による乳化剤の処理を含み、任意選択で、前記リン脂質乳化剤は、レシチン又はリゾ−レシチンである、方法。
【請求項４７】
脂質含有食品マトリックス中においてリゾリン脂質を生成する方法であって、前記脂質含有食品マトリックスに、請求項１〜７のいずれか一項に記載の単離ポリペプチドを添加するステップを含む方法。
【請求項４８】
前記脂質含有食品マトリックスは、卵及び卵含有食品、焼き菓子製品の生地、加工肉、牛乳を主成分とする製品及び植物油からなる群から選択される、請求項４７に記載の脂質含有食品マトリックス中においてリゾリン脂質を生成する方法。
【請求項４９】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の単離ポリペプチドをコードする核酸配列を含む単離ポリヌクレオチド。
【請求項５０】
請求項４９に記載のポリヌクレオチドを含む組換え発現ベクター。
【請求項５１】
請求項５０に記載の組換え発現ベクターを含む宿主細胞。