(57)【要約】本発明は、対象におけるメラノーマまたは任意の他のMyc発現がんを予防するかまたは治療するために有用な化合物、組成物および方法を含む。特定の態様では、化合物は、がん細胞の分化を増加させるエストロゲン(エストロゲン誘導体またはアナログを含む）、選択的GPERアゴニストおよび/または他の小分子Gタンパク質共役受容体(GPCR)アゴニストを含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
がんにおける細胞の分化を増加させる治療有効量のエストロゲンおよび/またはGタンパク質共役受容体(GPCR)アゴニストを、それを必要とする対象に投与する工程
を含む、対象におけるMyc発現がんを治療するかまたは予防する方法であって、
該対象に、少なくとも1つの免疫療法剤がさらに同時投与される、方法。
【請求項２】
GPCRアゴニストが選択的Gタンパク質共役エストロゲン受容体(GPER)アゴニストを含む、請求項1記載の方法。
【請求項３】
Myc発現がんが、メラノーマ、バーキットリンパ腫、白血病、肉腫、リンパ腫、多発性骨髄腫、脳腫瘍、神経芽腫、髄芽腫、星状細胞腫、膠芽腫、卵巣がん、子宮頸がん、子宮がん、結腸直腸がん、乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん、甲状腺がん、肝臓がん、前立腺がん、食道がん、腎臓がん、膀胱がん、および胆嚢がんからなる群より選択される少なくとも1つである、請求項1記載の方法。
【請求項４】
Myc発現がんが、メラノーマ、膵臓がん、および肺がんからなる群より選択される少なくとも1つである、請求項3記載の方法。
【請求項５】
免疫療法剤が免疫チェックポイント阻害剤を含む、請求項1記載の方法。
【請求項６】
免疫チェックポイント阻害剤が、PD-1阻害剤、PD-L1阻害剤、CTLA-4阻害剤、TIGIT阻害剤、LAG3阻害剤、IDO(1/2)阻害剤、およびB7-H3阻害剤からなる群より選択される、請求項5記載の方法。
【請求項７】
エストロゲンおよび/またはGPCRアゴニストと、少なくとも1つの免疫チェックポイント阻害剤とが、対象に同時投与される、請求項1記載の方法。
【請求項８】
エストロゲンおよび/またはGPCRアゴニストと、少なくとも1つの免疫チェックポイント阻害剤とが、同時製剤化される、請求項7記載の方法。
【請求項９】
がんにおける細胞の分化を増加させる治療有効量のエストロゲンおよび/またはGタンパク質共役受容体(GPCR)アゴニストを、それを必要とする対象に投与する工程
を含む、対象におけるMyc発現がんを治療するかまたは予防する方法であって、
該対象に、少なくとも1つのヒストン脱アセチル化阻害剤(HDAC)がさらに同時投与される、方法。
【請求項１０】
Myc発現がんが、メラノーマ、バーキットリンパ腫、白血病、肉腫、リンパ腫、多発性骨髄腫、脳腫瘍、神経芽腫、髄芽腫、星状細胞腫、膠芽腫、卵巣がん、子宮頸がん、子宮がん、結腸直腸がん、乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん、甲状腺がん、肝臓がん、前立腺がん、食道がん、腎臓がん、膀胱がん、および胆嚢がんからなる群より選択される少なくとも1つである、請求項9記載の方法。
【請求項１１】
Myc発現がんが、メラノーマ、膵臓がん、および肺がんからなる群より選択される少なくとも1つである、請求項10記載の方法。
【請求項１２】
GPCRアゴニストが選択的Gタンパク質共役エストロゲン受容体(GPER)アゴニストを含む、請求項9記載の方法。
【請求項１３】
少なくとも1つのHDAC阻害剤が、バルプロ酸、ボリノスタット、ロミデプシン、トリコスタチンA、およびパノビノスタットからなる群より選択される、請求項9記載の方法。
【請求項１４】
エストロゲンおよび/またはGPCRアゴニストと、少なくとも1つのHDACとが、対象に同時投与される、請求項9記載の方法。
【請求項１５】
エストロゲンおよび/またはGPCRアゴニストと、少なくとも1つのHDACとが、同時製剤化される、請求項14記載の方法。
【請求項１６】
がんにおける細胞の分化を増加させる治療有効量のエストロゲンおよび/またはGタンパク質共役受容体(GPCR)アゴニストを、それを必要とする対象に投与する工程
を含む、対象におけるがんを治療するかまたは予防する方法であって、
該がんが、メラノーマ、膵臓がん、および肺がんからなる群より選択される、方法。
【請求項１７】
GPCRアゴニストが選択的Gタンパク質共役エストロゲン受容体(GPER)アゴニストを含む、請求項16記載の方法。
【請求項１８】
エストロゲンおよび/またはGPCRアゴニストが、対象に投与される唯一の抗がん剤である、請求項16記載の方法。
【請求項１９】
エストロゲンおよび/またはGPCRアゴニストが、対象におけるがんを治療するかまたは予防するために十分な量で対象に投与される唯一の抗がん剤である、請求項16記載の方法。
【請求項２０】
GPCRが、Gタンパク質共役エストロゲン受容体(GPER)、MC1R、CYSLTR2、F2R、HRH2、LPAR2/3/6、PTGER1、S1PR2、S1PR3、およびTBXA2Rからなる群より選択される、請求項1〜19のいずれか一項記載の方法。
【請求項２１】
GPCRが、GPER、F2R、PTGER1、およびTBXA2Rからなる群より選択される、請求項1〜19のいずれか一項記載の方法。
【請求項２２】
エストロゲンが、エストロン(E1)、エストラジオール(E2)、エストリオール(E3)、エステトロール(E4)、17β-エストラジオール、27-ヒドロキシコレステロール、デヒドロエピアンドロステロン(DHEA)、7-オキソ-DHEA、7α-ヒドロキシ-DHEA、16α-ヒドロキシ-DHEA、7β-ヒドロキシエピアンドロステロン、Δ4-アンドロステンジオン、Δ5-アンドロステンジオール、3α-アンドロスタンジオール、3β-アンドロスタンジオール、2-ヒドロキシエストロン、16-ヒドロキシエストロン、シピオン酸エストラジオール、吉草酸エストラジオール、酢酸エストラジオール、安息香酸エストラジオール、エチニルエストラジオール(EE)、メストラノール、モキセストロール、キネストロール、ジエチルスチルベストロールベンゼストロール、ジエネストロール、酢酸ジエネストロール、ジプロピオン酸ジエチルスチルベストロール、ホスフェストロール、ヘキセストロール、ジプロピオン酸メテストロール、外因性エストロゲン、植物エストロゲン、および菌類エストロゲンからなる群より選択される少なくとも1つ、またはその塩、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体もしくはジアステレオ異性体を含む、請求項1〜19のいずれか一項記載の方法。
【請求項２３】
GPERアゴニストが、G-1、タモキシフェン、フルベストラント、およびラロキシフェンからなる群より選択される少なくとも1つ、またはその塩、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体もしくはジアステレオ異性体を含む、請求項20記載の方法。
【請求項２４】
GPERアゴニストが、
式(I)の分子：
2019518048.tif 000029
(I)中
R1は=O、=N-OH、=N-NHC(=O)(p-メトキシフェニル)、=N-NHC(=O)CH(OMe)フェニル、および=N-NH(5-ヨード-ピリド-2-イル)からなる群より選択され；
R2はC1〜C4アルキルおよびC1〜C4ハロアルキルからなる群より選択され；
結合aが二重結合であれば、R3およびR4はHであり、かつ
結合aが単結合であれば、R3はH、-OH、-OAc、およびハロからなる群より選択され；R4はH、-OH、-OAcおよび-S(o-ニトロフェニル)からなる群より選択されるか；またはR3およびR4は一緒になって、-CH2-、-OCH2O-、-OCH(CH3)O-、および-OC(CH3)2O-からなる群より選択されるジラジカルを形成するように
結合aは単結合または二重結合であり；
R5はH、ベンジル、C1〜C4アルキル、およびアセチルからなる群より選択され；
R6はH、ハロ、-NO2、C1〜C4アルキル、-C≡CH、-C≡C-Si(CH3)3(または-C≡C-TMS)、-O-ベンジル、-OH、-OAc、C1〜C4アルコキシ、-COOH、および-COO(C1〜C4アルキル)からなる群より選択され；
R7はH、ハロ、-NO2、C1〜C4アルキル、-OH、-OAc、およびC1〜C4アルコキシからなる群より選択され；
R8はH、ハロ、-NO2、C1〜C4アルキル、-O-ベンジル、-N(R)(R)、-SR、-COOH、-COO(C1〜C4アルキル)、-OH、-OAc、C1〜C4アルコキシ、3-チエチル-メトキシ、-SO2(モルホリノ)、および-OCH2CH=CH2からなる群より選択され、ここでRは各出現時に独立して、HおよびC1〜C4アルキルからなる群より選択され；
R9はH、ハロ、-NO2、C1〜C4アルキル、-OH、-OAc、およびC1〜C4アルコキシからなる群より選択されるか、
またはR8およびR9は一緒になって、-OCH2O-、-OCH(CH3)O-、-OC(CH3)2O-、-O(CH2)2O-、-O-CH=CH-、および-CH=CH-O-からなる群より選択されるジラジカルを形成し；
R10はH、C1〜C4アルキル、およびハロからなる群より選択され；
ここでベンジルは各出現時に独立して、C1〜C4アルキル、-OH、C1〜C4アルコキシ、ハロ、および-NO2からなる群より選択される少なくとも1つの基で置換されてもよい；ならびに
式(II)の分子：
2019518048.tif 000030
(II)中
R1は=Oおよび=N-OHからなる群より選択され；
R2はC1〜C4アルキルであり；
R5はH、ベンジルおよびC1〜C4アルキルからなる群より選択され；
R8およびR9は独立して、HおよびC1〜C4アルコキシからなる群より選択されるか、またはR8およびR9は一緒になって、-OCH2O-、-OCH(CH3)O-および-OC(CH3)2O-からなる群より選択されるジラジカルを形成する
からなる群より選択される少なくとも1つ、またはその塩、溶媒化合物、互変異性体、鏡像異性体もしくはジアステレオ異性体、またはその任意の混合物
を含む、請求項20記載の方法。
【請求項２５】
GPERアゴニストが、
式(I-1)の分子：
2019518048.tif 000031
(I-1)中
R1は=Oおよび=N-OHからなる群より選択され；
R2はC1〜C4アルキルであり；
結合aが二重結合であれば、R3およびR4はHであり、かつ
結合aが単結合であれば、R3およびR4は独立して、Hおよび-OHからなる群より選択されるか、またはR3およびR4は一緒になって、-OCH2O-、-OCH(CH3)O-および-OC(CH3)2O-からなる群より選択されるジラジカルを形成するように
結合aは単結合または二重結合であり；
R5はH、ベンジルおよびC1〜C4アルキルからなる群より選択され；
R6はHおよびハロからなる群より選択され；
R8およびR9は独立して、HおよびC1〜C4アルコキシからなる群より選択されるか、またはR8およびR9は一緒になって、-OCH2O-、-OCH(CH3)O-および-OC(CH3)2O-からなる群より選択されるジラジカルを形成する；ならびに
式(II)の分子：
2019518048.tif 000032
(II)中
R1は=Oおよび=N-OHからなる群より選択され；
R2はC1〜C4アルキルであり；
R5はH、ベンジルおよびC1〜C4アルキルからなる群より選択され；
R7およびR8は独立して、HおよびC1〜C4アルコキシからなる群より選択されるか、またはR7およびR8は一緒になって、-OCH2O-、-OCH(CH3)O-および-OC(CH3)2O-からなる群より選択されるジラジカルを形成する
からなる群より選択される少なくとも1つ、またはその塩、溶媒化合物、互変異性体、鏡像異性体もしくはジアステレオ異性体、またはその任意の混合物
を含む、請求項20記載の方法。
【請求項２６】
GPERアゴニストが、
G-1；CMPD1(rel-1-((3aS,4R,9bR)-4-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-3a,4,5,9b-テトラヒドロ-3H-シクロペンタ[c]キノリン-8-イル)エタン-1-オン)；CMPD2(rel-1-((3aS,4R,9bR)-4-(6-ブロモベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-5-メチル-3a,4,5,9b-テトラヒドロ-3H-シクロペンタ[c]キノリン-8-イル)エタン-1-オン)；CMPD3(rel-1-((3aS,4R,9bR)-4-(6-ブロモベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-2,3,3a,4,5,9b-ヘキサヒドロ-1H-シクロペンタ[c]キノリン-8-イル)エタン-1-オン)；CMPD4(rel-1-((3aS,4R,9bR)-5-ベンジル-4-(6-ブロモベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-3a,4,5,9b-テトラヒドロ-3H-シクロペンタ[c]キノリン-8-イル)エタン-1-オン)；CMPD5(rel-1-((3aS,4R,9bR)-4-(2-ブロモフェニル)-3a,4,5,9b-テトラヒドロ-3H-シクロペンタ[c]キノリン-8-イル)エタン-1-オン)；CMPD6(rel-1-((3aS,4R,9bR)-4-(6-ブロモベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-3a,4,5,9b-テトラヒドロ-3H-シクロペンタ[c]キノリン-8-イル)エタン-1-オンオキシム)；CMPD7(rel-1-((3aS,4R,9bR)-4-(2-ブロモ-4,5-ジメトキシフェニル)-3a,4,5,9b-テトラヒドロ-3H-シクロペンタ[c]キノリン-8-イル)エタン-1-オン)；CMPD8(rel-1-((3aS,4R,9bR)-4-(6-クロロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-3a,4,5,9b-テトラヒドロ-3H-シクロペンタ[c]キノリン-8-イル)エタン-1-オン)；CMPD9(rel-1-((6R,6aS,7aS,10aR,10bR)-6-(6-ブロモベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-9,9-ジメチル-6,6a,7,7a,10a,10b-ヘキサヒドロ-5H-[1,3]ジオキソロ[4',5':3,4]シクロペンタ[1,2-c]キノリン-2-イル)エタン-1-オン)；CMPD10(rel-1-((1R,2S,3aS,4R,9bR)-4-(6-ブロモベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-1,2-ジヒドロキシ-2,3,3a,4,5,9b-ヘキサヒドロ-1H-シクロペンタ[c]キノリン-8-イル)エタン-1-オン)；CMPD11(rel-1-((3aS,4R,9bR)-4-(2-ブロモ-4,5-ジメトキシフェニル)-2,3,3a,4,5,9b-ヘキサヒドロ-1H-シクロペンタ[c]キノリン-8-イル)エタン-1-オン)；およびCMPD12(rel-1-((4S,5aS,6R,11aR)-4,5,5a,6,11,11a-ヘキサヒドロ-4,6-メタノ[1,3]ジオキソロ[4',5':5,6]ベンゾ[1,2-c]アクリジン-8-イル)エタン-1-オン)
からなる群より選択される少なくとも1つ、またはその塩、溶媒化合物、互変異性体、鏡像異性体もしくはジアステレオ異性体、またはその任意の混合物
を含む、請求項20記載の方法。
【請求項２７】
GPCRアゴニストが、
アファメラノチド(N-アセチル-L-セリル-L-チロシル-L-セリル-L-ノルロイシル-L-α-グルタミル-L-ヒスチジル-D-フェニルアラニル-L-アルギニル-L-トリプトフィルグリシル-L-リシル-L-プロリル-L-バリンアミド)、N-メチルLTC4(N-メチル-5S-ヒドロキシ-6R-(S-グルタチオニル)-7E,9E,11Z,14Z-エイコサテトラエン酸)、TFLLR-NH2(Thr-Phe-Leu-Leu-Arg-NH2)、インプロミジン(2-[3-(1H-イミダゾール-5-イル)プロピル]-1-[2-[(5-メチル-1H-イミダゾール-4-イル)メチルスルファニル]エチル]グアニジン)、カルバコール(2-[(アミノカルボニル)オキシ]-N,N,N-トリメチルエタンアミニウム塩化物)、スルプロストン((Z)-7-[(1R,3R)-3-ヒドロキシ-2-[(E,3R)-3-ヒドロキシ-4-フェノキシブタ-1-エニル]-5-オキソシクロペンチル]-N-メチルスルホニルヘプタ-5-エンアミド)、FTY720(2-アミノ-2-[2-(4-オクチル-フェニル)-エチル]-プロパン-1,3-ジオール塩酸塩)およびU46619((E)-7-((1R,4R,5S,6R)-6-((S,Z)-3-ヒドロキシオクタ-1-エン-1-イル)-2-オキサビシクロ[2.2.1]ヘプタン-5-イル)ヘプタ-5-エン酸)
からなる群より選択される、請求項20記載の方法。
【請求項２８】
エストロゲンまたはGPCRアゴニストが、少なくとも1つの薬学的に許容される担体をさらに含む薬学的組成物として対象に投与される、請求項1〜19のいずれか一項記載の方法。
【請求項２９】
対象に、少なくとも1つの追加の抗がん治療がさらに施される、請求項1〜19のいずれか一項記載の方法。
【請求項３０】
少なくとも1つの追加の抗がん治療が、化学療法、操作したキメラ抗原受容体(CAR)T細胞、免疫チェックポイント阻害剤、および/または放射線療法を含む、請求項29記載の方法。
【請求項３１】
化学療法が、ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤(HDAC)、テモゾロミド、ダカルバジン(DTIC)、ベムラフェニブ、ダブラフェニブおよびトラメチニブからなる群より選択される、請求項30記載の方法。
【請求項３２】
免疫チェックポイント阻害剤が、PD-1阻害剤、PD-L1阻害剤、CTLA-4阻害剤、LAG3阻害剤、IDO(1/2)阻害剤、TIGIT阻害剤、およびB7-H3阻害剤からなる群より選択される、請求項30記載の方法。
【請求項３３】
エストロゲンまたはGPCRアゴニストが、吸入、経口、直腸、経膣、非経口、局所、経皮、経肺、鼻腔内、頬側、眼内、髄腔内、頭蓋内、および静脈内からなる群より選択される少なくとも1つの投与経路によって対象に投与される、請求項1〜19のいずれか一項記載の方法。
【請求項３４】
対象ががんを有していないかまたはがんを患っていると診断されたことがなく、かつエストロゲンおよび/またはGPCRアゴニストが3週間以下の期間にわたって対象に投与される、請求項1〜33のいずれか一項記載の方法。
【請求項３５】
エストロゲンまたはGPCRアゴニストが2週間以下の期間にわたって対象に投与される、請求項34記載の方法。
【請求項３６】
エストロゲンまたはGPCRアゴニストが1週間以下の期間にわたって対象に投与される、請求項35記載の方法。
【請求項３７】
対象が哺乳類である、請求項1〜36のいずれか一項記載の方法。
【請求項３８】
哺乳類がヒトである、請求項37記載の方法。
【請求項３９】
(i)エストロゲンおよび/またはGPCRアゴニストと、(ii)化学療法、操作したCAR-T細胞、および/または免疫チェックポイント阻害剤とを含む、組成物。
【請求項４０】
免疫チェックポイント阻害剤が、PD-1阻害剤、PD-L1阻害剤、CTLA-4阻害剤、LAG3阻害剤、IDO(1/2)阻害剤、TIGIT阻害剤、およびB7-H3阻害剤からなる群より選択される、請求項39記載の組成物。
【請求項４１】
(i)エストロゲンおよび/またはGPCRアゴニストと、(ii)化学療法、操作したCAR-T細胞、免疫チェックポイント阻害剤および/または放射線療法と、対象におけるがんを治療するかまたは予防する際のその使用のための説明資料とを含む、キット。
【請求項４２】
免疫チェックポイント阻害剤が、PD-1阻害剤、PD-L1阻害剤、CTLA-4阻害剤、LAG3阻害剤、IDO(1/2)阻害剤、TIGIT阻害剤、およびB7-H3阻害剤からなる群より選択される、請求項41記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は2016年6月17日に出願の米国仮特許出願第62/351,599号および2016年7月27日に出願の第62/367,174号に対する、米国特許法第119条(e)項に基づく優先権を主張し、該出願はすべてそれら全体において参照により本明細書に組み入れられる。
【０００２】
連邦政府による資金提供を受けた研究開発の記載
本発明は国立がん研究所により授与されたF31CA206325の下で政府の支援によって行われた。政府は発明において一定の権利を有する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
メラノーマは皮膚がんのうちで最も致死性の形態であり、メラノサイトとして公知の色素含有細胞から発症する。メラノーマは典型的には皮膚で生じるが、口、腸または目でも生じることもある。メラノーマの主因は、特に皮膚の色素(メラニン)レベルが低い明色の皮膚を有する人において、紫外線曝露によって引き起こされるDNA損傷である。メラノーマの大部分が、既存の母斑(ほくろ)から発症する。皮膚色素のベースラインレベルが低い、ほくろが多い、家族に病歴がある、および免疫機能が不十分な人々はメラノーマを発症する危険性がより高い。米国では年間80,000件を超えるメラノーマの症例がある。現時点では治療選択肢は限定的であり、メラノーマが転移した患者で5年以上生存するのはわずか30％である。
【０００４】
当技術分野においては、対象におけるメラノーマおよび他のがんを予防しかつ/または治療するために用いることができる化合物、組成物および方法の必要性がある。そのような化合物、組成物および方法は、現在の抗がん治療薬と同等および/またはそれらより優れた臨床的有効性を呈するか、あるいは併用療法で用いられた場合に他の抗がん治療薬の有効性を向上させるべきである。本発明はこの必要性を満たす。
【発明の概要】
【０００５】
発明は、対象におけるGPCR発現がんを治療するかまたは予防する方法を提供する。発明は、対象におけるMyc発現がんを治療するかまたは予防する方法をさらに提供する。発明は、(i)エストロゲンおよび/またはGPCRアゴニストと、(ii)化学療法、操作したCAR-T細胞、および/または免疫チェックポイント阻害剤とを含む組成物をさらに提供する。発明は、(i)エストロゲンおよび/またはGPCRアゴニストと、(ii)化学療法、操作したCAR-T細胞、免疫チェックポイント阻害剤および/または放射線療法と、対象におけるがんを治療するかまたは予防する際のその使用のための説明資料とを含むキットをさらに提供する。
【０００６】
特定の態様では、方法は、がんにおける細胞の分化を増加させる治療有効量のエストロゲンおよび/またはGタンパク質共役受容体(GPCR)アゴニストを、それを必要とする対象に投与する工程を含む。別の態様では、対象には、少なくとも1つの免疫療法剤がさらに同時投与される。さらに別の態様では、対象には、少なくとも1つのヒストン脱アセチル化酵素阻害剤(HDAC)がさらに同時投与される。
【０００７】
特定の態様では、GPCRアゴニストは選択的Gタンパク質共役エストロゲン受容体(GPER)アゴニストを含む。
【０００８】
特定の態様では、Myc発現がんは、メラノーマ、バーキットリンパ腫、白血病、肉腫、リンパ腫、多発性骨髄腫、脳腫瘍、神経芽腫、髄芽腫、星状細胞腫、膠芽腫、卵巣がん、子宮頸がん、子宮がん、結腸直腸がん、乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん、甲状腺がん、肝臓がん、前立腺がん、食道がん、腎臓がん、膀胱がん、および胆嚢がんからなる群より選択される少なくとも1つである。別の態様では、Myc発現がんは、メラノーマ、膵臓がん、および肺がんからなる群より選択される少なくとも1つである。
【０００９】
特定の態様では、GPCR発現がんは、メラノーマ、バーキットリンパ腫、白血病、肉腫、リンパ腫、多発性骨髄腫、脳腫瘍、神経芽腫、髄芽腫、星状細胞腫、膠芽腫、卵巣がん、子宮頸がん、子宮がん、結腸直腸がん、乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん、甲状腺がん、肝臓がん、前立腺がん、食道がん、腎臓がん、膀胱がん、および胆嚢がんからなる群より選択される少なくとも1つである。別の態様では、GPCR発現がんは、メラノーマ、膵臓がん、および肺がんからなる群より選択される少なくとも1つである。
【００１０】
特定の態様では、がんは、メラノーマ、膵臓がん、および肺がんからなる群より選択される。
【００１１】
特定の態様では、免疫療法剤は免疫チェックポイント阻害剤を含む。別の態様では、免疫チェックポイント阻害剤は、PD-1阻害剤、PD-L1阻害剤、CTLA-4阻害剤、TIGIT阻害剤、LAG3阻害剤、IDO(1/2)阻害剤、およびB7-H3阻害剤からなる群より選択される。
【００１２】
特定の態様では、少なくとも1つのHDAC阻害剤は、バルプロ酸、ボリノスタット、ロミデプシン、トリコスタチンA、およびパノビノスタットからなる群より選択される。
【００１３】
特定の態様では、エストロゲンおよび/またはGPCRアゴニストと、少なくとも1つの免疫チェックポイント阻害剤とは対象に同時投与される。別の態様では、エストロゲンおよび/またはGPCRアゴニストと、少なくとも1つの免疫チェックポイント阻害剤とは同時製剤化される。
【００１４】
特定の態様では、エストロゲンおよび/またはGPCRアゴニストと、少なくとも1つのHDACとは対象に同時投与される。別の態様では、エストロゲンおよび/またはGPCRアゴニストと、少なくとも1つのHDACとは同時製剤化される。
【００１５】
特定の態様では、エストロゲンおよび/またはGPCRアゴニストは、対象に投与される唯一の抗がん剤である。別の態様では、エストロゲンおよび/またはGPCRアゴニストは、対象におけるがんを治療するかまたは予防するために十分な量で対象に投与される唯一の抗がん剤である。
【００１６】
特定の態様では、GPCRは、Gタンパク質共役エストロゲン受容体(GPER)、MC1R、CYSLTR2、F2R、HRH2、LPAR2/3/6、PTGER1、S1PR2、S1PR3、およびTBXA2Rからなる群より選択される。別の態様では、GPCRは、GPER、F2R、PTGER1、およびTBXA2Rからなる群より選択される。
【００１７】
特定の態様では、エストロゲンは、エストロン(E1)、エストラジオール(E2)、エストリオール(E3)、エステトロール(E4)、17β-エストラジオール、27-ヒドロキシコレステロール、デヒドロエピアンドロステロン(DHEA)、7-オキソ-DHEA、7α-ヒドロキシ-DHEA、16α-ヒドロキシ-DHEA、7β-ヒドロキシエピアンドロステロン、Δ4-アンドロステンジオン、Δ5-アンドロステンジオール、3α-アンドロスタンジオール、3β-アンドロスタンジオール、2-ヒドロキシエストロン、16-ヒドロキシエストロン、シピオン酸エストラジオール、吉草酸エストラジオール、酢酸エストラジオール、安息香酸エストラジオール、エチニルエストラジオール(EE)、メストラノール、モキセストロール、キネストロール、ジエチルスチルベストロールベンゼストロール、ジエンストロール、酢酸ジエネストロール、ジプロピオン酸ジエチルスチルベストロール、ホスフェストロール、ヘキセストロール、ジプロピオン酸メテストロール、外因性エストロゲン、植物エストロゲン、および菌類エストロゲンからなる群より選択される少なくとも1つ、またはその塩、溶媒和物、互変異性体、エナンチオマーもしくはジアステレオ異性体を含む。
【００１８】
特定の態様では、GPERアゴニストは、G-1、タモキシフェン、フルベストラント、およびラロキシフェンからなる群より選択される少なくとも1つ、またはその塩、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体もしくはジアステレオ異性体を含む。
【００１９】
特定の態様では、GPERアゴニストは、
式(I)の分子：
2019518048.tif 000002
(I)中
R1は=O、=N-OH、=N-NHC(=O)(p-メトキシフェニル)、=N-NHC(=O)CH(OMe)フェニル、および=N-NH(5-ヨード-ピリド-2-イル)からなる群より選択され；
R2はC1〜C4アルキルおよびC1〜C4ハロアルキルからなる群より選択され；
結合aが二重結合であれば、R3およびR4はHであり、かつ
結合aが単結合であれば、R3はH、-OH、-OAc、およびハロからなる群より選択され；R4はH、-OH、-OAcおよび-S(o-ニトロフェニル)からなる群より選択されるか；またはR3およびR4は一緒になって、-CH2-、-OCH2O-、-OCH(CH3)O-、および-OC(CH3)2O-からなる群より選択されるジラジカルを形成するように
結合aは単結合または二重結合であり；
R5はH、ベンジル、C1〜C4アルキル、およびアセチルからなる群より選択され；
R6はH、ハロ、-NO2、C1〜C4アルキル、-C≡CH、-C≡C-Si(CH3)3(または-C≡C-TMS)、-O-ベンジル、-OH、-OAc、C1〜C4アルコキシ、-COOH、および-COO(C1〜C4アルキル)からなる群より選択され；
R7はH、ハロ、-NO2、C1〜C4アルキル、-OH、-OAc、およびC1〜C4アルコキシからなる群より選択され；
R8はH、ハロ、-NO2、C1〜C4アルキル、-O-ベンジル、-N(R)(R)、-SR、-COOH、-COO(C1〜C4アルキル)、-OH、-OAc、C1〜C4アルコキシ、3-チエチル-メトキシ、-SO2(モルホリノ)、および-OCH2CH=CH2からなる群より選択され、ここでRは各出現時に独立して、HおよびC1〜C4アルキルからなる群より選択され；
R9はH、ハロ、-NO2、C1〜C4アルキル、-OH、-OAc、およびC1〜C4アルコキシからなる群より選択されるか、
またはR8およびR9は一緒になって、-OCH2O-、-OCH(CH3)O-、-OC(CH3)2O-、-O(CH2)2O-、-O-CH=CH-、および-CH=CH-O-からなる群より選択されるジラジカルを形成し；
R10はH、C1〜C4アルキル、およびハロからなる群より選択され；
ここでベンジルは各出現時に独立して、C1〜C4アルキル、-OH、C1〜C4アルコキシ、ハロ、および-NO2からなる群より選択される少なくとも1つの基で置換されてもよい；ならびに
式(II)の分子：
2019518048.tif 000003
(II)中
R1は=Oおよび=N-OHからなる群より選択され；
R2はC1〜C4アルキルであり；
R5はH、ベンジルおよびC1〜C4アルキルからなる群より選択され；
R8およびR9は独立して、HおよびC1〜C4アルコキシからなる群より選択されるか、またはR8およびR9は一緒になって、-OCH2O-、-OCH(CH3)O-および-OC(CH3)2O-からなる群より選択されるジラジカルを形成する
からなる群より選択される少なくとも1つ、またはその塩、溶媒化合物、互変異性体、鏡像異性体もしくはジアステレオ異性体、またはその任意の混合物を含む。
【００２０】
特定の態様では、GPERアゴニストは、
式(I-1)の分子：
2019518048.tif 000004
(I-1)中
R1は=Oおよび=N-OHからなる群より選択され；
R2はC1〜C4アルキルであり；
結合aが二重結合であれば、R3およびR4はHであり、かつ
結合aが単結合であれば、R3およびR4は独立して、Hおよび-OHからなる群より選択されるか、またはR3およびR4は一緒になって、-OCH2O-、-OCH(CH3)O-および-OC(CH3)2O-からなる群より選択されるジラジカルを形成するように
結合aは単結合または二重結合であり；
R5はH、ベンジルおよびC1〜C4アルキルからなる群より選択され；
R6はHおよびハロからなる群より選択され；
R8およびR9は独立して、HおよびC1〜C4アルコキシからなる群より選択されるか、またはR8およびR9は一緒になって、-OCH2O-、-OCH(CH3)O-および-OC(CH3)2O-からなる群より選択されるジラジカルを形成する；ならびに
式(II)の分子：
2019518048.tif 000005
(II)中
R1は=Oおよび=N-OHからなる群より選択され；
R2はC1〜C4アルキルであり；
R5はH、ベンジルおよびC1〜C4アルキルからなる群より選択され；
R7およびR8は独立して、HおよびC1〜C4アルコキシからなる群より選択されるか、またはR7およびR8は一緒になって、-OCH2O-、-OCH(CH3)O-および-OC(CH3)2O-からなる群より選択されるジラジカルを形成する
からなる群より選択される少なくとも1つ、またはその塩、溶媒化合物、互変異性体、鏡像異性体もしくはジアステレオ異性体、またはその任意の混合物を含む。
【００２１】
特定の態様では、GPERアゴニストは、G-1；CMPD1(rel-1-((3aS,4R,9bR)-4-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-3a,4,5,9b-テトラヒドロ-3H-シクロペンタ[c]キノリン-8-イル)エタン-1-オン)；CMPD2(rel-1-((3aS,4R,9bR)-4-(6-ブロモベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-5-メチル-3a,4,5,9b-テトラヒドロ-3H-シクロペンタ[c]キノリン-8-イル)エタン-1-オン)；CMPD3(rel-1-((3aS,4R,9bR)-4-(6-ブロモベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-2,3,3a,4,5,9b-ヘキサヒドロ-1H-シクロペンタ[c]キノリン-8-イル)エタン-1-オン)；CMPD4(rel-1-((3aS,4R,9bR)-5-ベンジル-4-(6-ブロモベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-3a,4,5,9b-テトラヒドロ-3H-シクロペンタ[c]キノリン-8-イル)エタン-1-オン)；CMPD5(rel-1-((3aS,4R,9bR)-4-(2-ブロモフェニル)-3a,4,5,9b-テトラヒドロ-3H-シクロペンタ[c]キノリン-8-イル)エタン-1-オン)；CMPD6(rel-1-((3aS,4R,9bR)-4-(6-ブロモベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-3a,4,5,9b-テトラヒドロ-3H-シクロペンタ[c]キノリン-8-イル)エタン-1-オンオキシム)；CMPD7(rel-1-((3aS,4R,9bR)-4-(2-ブロモ-4,5-ジメトキシフェニル)-3a,4,5,9b-テトラヒドロ-3H-シクロペンタ[c]キノリン-8-イル)エタン-1-オン)；CMPD8(rel-1-((3aS,4R,9bR)-4-(6-クロロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-3a,4,5,9b-テトラヒドロ-3H-シクロペンタ[c]キノリン-8-イル)エタン-1-オン)；CMPD9(rel-1-((6R,6aS,7aS,10aR,10bR)-6-(6-ブロモベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-9,9-ジメチル-6,6a,7,7a,10a,10b-ヘキサヒドロ-5H-[1,3]ジオキソロ[4',5':3,4]シクロペンタ[1,2-c]キノリン-2-イル)エタン-1-オン)；CMPD10(rel-1-((1R,2S,3aS,4R,9bR)-4-(6-ブロモベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-1,2-ジヒドロキシ-2,3,3a,4,5,9b-ヘキサヒドロ-1H-シクロペンタ[c]キノリン-8-イル)エタン-1-オン)；CMPD11(rel-1-((3aS,4R,9bR)-4-(2-ブロモ-4,5-ジメトキシフェニル)-2,3,3a,4,5,9b-ヘキサヒドロ-1H-シクロペンタ[c]キノリン-8-イル)エタン-1-オン)；およびCMPD12(rel-1-((4S,5aS,6R,11aR)-4,5,5a,6,11,11a-ヘキサヒドロ-4,6-メタノ[1,3]ジオキソロ[4',5':5,6]ベンゾ[1,2-c]アクリジン-8-イル)エタン-1-オン)からなる群より選択される少なくとも1つ、またはその塩、溶媒化合物、互変異性体、鏡像異性体もしくはジアステレオ異性体、またはその任意の混合物を含む。
【００２２】
特定の態様では、GPCRアゴニストは、アファメラノチド(N-アセチル-L-セリル-L-チロシル-L-セリル-L-ノルロイシル-L-α-グルタミル-L-ヒスチジル-D-フェニルアラニル-L-アルギニル-L-トリプトフィルグリシル-L-リシル-L-プロリル-L-バリンアミド)、N-メチルLTC4(N-メチル-5S-ヒドロキシ-6R-(S-グルタチオニル)-7E,9E,11Z,14Z-エイコサテトラエン酸)、TFLLR-NH2(Thr-Phe-Leu-Leu-Arg-NH2)、インプロミジン(2-[3-(1H-イミダゾール-5-イル)プロピル]-1-[2-[(5-メチル-1H-イミダゾール-4-イル)メチルスルファニル]エチル]グアニジン)、カルバコール(2-[(アミノカルボニル)オキシ]-N,N,N-トリメチルエタンアミニウム塩化物)、スルプロストン((Z)-7-[(1R,3R)-3-ヒドロキシ-2-[(E,3R)-3-ヒドロキシ-4-フェノキシブタ-1-エニル]-5-オキソシクロペンチル]-N-メチルスルホニルヘプタ-5-エンアミド)、FTY720(2-アミノ-2-[2-(4-オクチル-フェニル)-エチル]-プロパン-1,3-ジオール塩酸塩)およびU46619((E)-7-((1R,4R,5S,6R)-6-((S,Z)-3-ヒドロキシオクタ-1-エン-1-イル)-2-オキサビシクロ[2.2.1]ヘプタン-5-イル)ヘプタ-5-エン酸)からなる群より選択される。
【００２３】
特定の態様では、エストロゲンまたはGPCRアゴニストは、少なくとも1つの薬学的に許容される担体をさらに含む薬学的組成物として対象に投与される。別の態様では、対象に、少なくとも1つの追加の抗がん治療がさらに施される。さらに別の態様では、少なくとも1つの追加の抗がん治療は、化学療法、操作したキメラ抗原受容体(CAR)T細胞、免疫チェックポイント阻害剤、および/または放射線療を含む。さらに別の態様では、化学療法は、ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤(HDAC)、テモゾロミド、ダカルバジン(DTIC)、ベムラフェニブ、ダブラフェニブおよびトラメチニブからなる群より選択される。さらに別の態様では、免疫チェックポイント阻害剤は、PD-1阻害剤、PD-L1阻害剤、CTLA-4阻害剤、LAG3阻害剤、IDO(1/2)阻害剤、TIGIT阻害剤、およびB7-H3阻害剤からなる群より選択される。さらに別の態様では、エストロゲンまたはGPCRアゴニストは、吸入、経口、直腸、経膣、非経口、局所、経皮、経肺、鼻腔内、頬側、眼内、髄腔内、頭蓋内、および静脈内からなる群より選択される少なくとも1つの投与経路によって対象に投与される。特定の態様では、対象は哺乳類である。別の態様では、哺乳類はヒトである。
【００２４】
特定の態様では、対象はがんを有するか、またはがんを患っていると診断されたことがある。別の態様では、対象はがんを有していないか、またはがんを患っていると診断されたことがない。さらに別の態様では、エストロゲンおよび/またはGPCRアゴニストは3週間以下の期間にわたって対象に投与される。別の態様では、エストロゲンまたはGPCRアゴニストは2週間以下の期間にわたって対象に投与される。さらに別の態様では、エストロゲンまたはGPCRアゴニストは1週間以下の期間にわたって対象に投与される。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
発明の特定の態様の以下の詳細な説明は添付の図面と併せて読んだ場合によりよく理解されるであろう。発明を図示する目的のため特定の態様を図面に示す。しかしながら、発明は図面に示す態様の厳密な配置および装備に限定されないと理解すべきである。
【００２６】
【図１】性ホルモンがメラノサイトにおける正常な色素産生および/または分化プログラムにどのように影響を及ぼすかの非限定的な概略モデルである。
【図２】正常なホメオスタシス条件下での分化および増殖の非限定的なバランスを示し、一方、より分化した細胞は一般的に腫瘍原性が低いと考えられている。
【図３】メラニン色素産生の増加によって示されるように、継続的な妊娠関連性の生理的レベルのエストロゲンへのメラノサイトの曝露がメラノサイトの分化状態を増加させるという知見を示した一連のグラフおよび画像である。同じ濃度でのわずか4日間のエストロゲンへの一時的な曝露は、メラノサイトの分化における同一の変化を誘導し、これは永続性がありエストロゲン休止後も無期限に持続する。
【図４Ａ】図4A〜4Fは、GPERシグナル伝達がマウスおよびヒトのメラノーマにおいて増殖を遅らせかつ分化を駆動するという知見を示す。図4A：エストロゲン(E2)で処理したB16F10、WM46(BRAFV600E)、WM51(BRAFV600E)、およびWM3702(NRASQ61L)細胞の5日間の増殖アッセイであり、*は両側T検定による有意性を表し、一群あたりn=3である。
【図４Ｂ】図4A〜4Fは、GPERシグナル伝達がマウスおよびヒトのメラノーマにおいて増殖を遅らせかつ分化を駆動するという知見を示す。図4B：E2で処理したB16F10、WM46(BRAFV600E)、WM51(BRAFV600E)、およびWM3702(NRASQ61L)細胞の5日間のメラニンアッセイであり、*は両側T検定による有意性を表し、一群あたりn=3である。
【図４Ｃ】図4A〜4Fは、GPERシグナル伝達がマウスおよびヒトのメラノーマにおいて増殖を遅らせかつ分化を駆動するという知見を示す。図4C：GPERアゴニスト(G-1)で処理したB16F10、WM46(BRAFV600E)、WM51(BRAFV600E)、およびWM3702(NRASQ61L)細胞の5日間の増殖アッセイであり、*は両側T検定による有意性を表し、一群あたりn=3である。
【図４Ｄ】図4A〜4Fは、GPERシグナル伝達がマウスおよびヒトのメラノーマにおいて増殖を遅らせかつ分化を駆動するという知見を示す。図4D：G-1で処理したB16F10、WM46(BRAFV600E)、WM51(BRAFV600E)、およびWM3702(NRASQ61L)細胞の5日間のメラニンアッセイであり、*は両側T検定による有意性を表し、一群あたりn=3である。
【図４Ｅ】図4A〜4Fは、GPERシグナル伝達がマウスおよびヒトのメラノーマにおいて増殖を遅らせかつ分化を駆動するという知見を示す。図4E：G-1の用量反応で処理したB16F10細胞の3日間の増殖アッセイであり、*はテューキーの多重比較検定による一元配置分散分析での有意性を表し、一群あたりn=5である。
【図４Ｆ】図4A〜4Fは、GPERシグナル伝達がマウスおよびヒトのメラノーマにおいて増殖を遅らせかつ分化を駆動するという知見を示す。図4F：G-1の飽和用量反応で16時間処理したB16F10細胞のウエスタンブロットである。すべてのエラーバーは試料の標準偏差と等しい。
【図５】エストロゲン前処理がインビボでのメラノーマ細胞株の成長を阻害するという知見を示す一連のグラフおよび画像である。
【図６】G-1によるインビボ処理がインビボでのマウスメラノーマ細胞株B16F10の成長を阻害するという知見を示すグラフである。
【図７Ａ】図7A〜7Cは多胎妊娠がメラノーマ形成を阻害するという知見を示す。図7A：ドキシサイクリン誘導型BRAF(V600E)、ドミナントネガティブp53(R248W)、活性型CDK4(R24C)およびhTERTによる正常なヒトメラノサイトの形質導入を確認したウエスタンブロットである。
【図７Ｂ】図7A〜7Cは多胎妊娠がメラノーマ形成を阻害するという知見を示す。図7B：ヒト遺伝子操作メラノーマ異種移植片を有するSCIDマウスの代表的な写真である。
【図７Ｃ】図7A〜7Cは多胎妊娠がメラノーマ形成を阻害するという知見を示す。図7C：非繁殖および繁殖マウス全体にわたるMITF免疫組織化学的検査であり、*は図１に示す複製物を表す。スケールバー=100μMである。
【図８Ａ】図8A〜8Eは多胎妊娠がメラノーマ形成を阻害しかつ分化を駆動するという知見を示す。図8A：SCIDマウスに対する遺伝学的に定義されたヒト異種移植メラノーマの実験スケジュールであり、一群あたりn=5である。
【図８Ｂ】図8A〜8Eは多胎妊娠がメラノーマ形成を阻害しかつ分化を駆動するという知見を示す。図8B：ヘマトキシリン・エオシン(H/E)、メラノサイトおよび増殖マーカーMITF、Ki67/MART、ならびにフォンタナ・マッソン(メラニン)を含む、代表的な正所性の皮膚および結果として得られる腫瘍の組織学的特性決定である。スケールバー=100μMである。
【図８Ｃ】図8A〜8Eは多胎妊娠がメラノーマ形成を阻害しかつ分化を駆動するという知見を示す。図8C：表皮MITF染色の定量であり、*はマン・ホイットニー検定による有意性を表す。
【図８Ｄ】図8A〜8Eは多胎妊娠がメラノーマ形成を阻害しかつ分化を駆動するという知見を示す。図8D：Ki67増殖指数の定量であり、*はマン・ホイットニー検定による有意性を表す。
【図８Ｅ】図8A〜8Eは多胎妊娠がメラノーマ形成を阻害しかつ分化を駆動するという知見を示す。図8E：表皮ケラチノサイトにおけるメラニン染色の定量であり、*はマン・ホイットニー検定による有意性を表す。
【図９】MSH(アファメラノチドの内因性等価物)およびアファメラノチド(メラノチドIIまたはNDP-α-MSHとしても公知である)がヒトメラノサイトにおける色素産生(上)および分化(下)を増加させるという知見を示す一連の棒グラフである。
【図１０】図10A〜10Dは炎症関連メラノサイトGPCRの特定のアゴニスト(CCR10、F2R、PTGER1、およびTBXA2R)がヒトメラノサイトにおけるメラニン合成を調節するという知見を示す一連の棒グラフである。図10Aは分化の減少を実証する一方で、図10B〜10Dのそれぞれは分化の増加を実証する。
【図１１Ａ】図11A〜11EはGPERシグナル伝達が正常なヒトメラノサイトにおいておよびメラノーマにおいて安定した分化を駆動するという知見を示す。図11A：正常なヒトメラノサイトをプロゲステロン(P4)またはエストロゲン(E2)で一時的に処理した長期メラニンアッセイである。これらの群(赤)のサブセットを27日目にP4の追加の一時的なパルスで処理した。エラーバーは試料の標準偏差と等しい。
【図１１Ｂ】図11A〜11EはGPERシグナル伝達が正常なヒトメラノサイトにおいておよびメラノーマにおいて安定した分化を駆動するという知見を示す。図11B：ビヒクルまたはエストロゲンのいずれかによる一時的な4日間の処理に続く8日間の休止期間後のメラノサイト分化マーカーのウエスタンブロットである。
【図１１Ｃ】図11A〜11EはGPERシグナル伝達が正常なヒトメラノサイトにおいておよびメラノーマにおいて安定した分化を駆動するという知見を示す。図11C：マウスおよびヒトメラノーマ細胞のエストロゲンまたはGPERアゴニスト(G-1)前処理の実験スケジュールであり、一群あたりn=5である。
【図１１Ｄ】図11A〜11EはGPERシグナル伝達が正常なヒトメラノサイトにおいておよびメラノーマにおいて安定した分化を駆動するという知見を示す。図11D：エストロゲンで前処理したマウスおよびヒトメラノーマの相対的な腫瘍重量であり、*はマン・ホイットニー検定による有意性を表す。
【図１１Ｅ】図11A〜11EはGPERシグナル伝達が正常なヒトメラノサイトにおいておよびメラノーマにおいて安定した分化を駆動するという知見を示す。図11E：G-1で前処理したマウスおよびヒトメラノーマの相対的な腫瘍重量であり、*はマン・ホイットニー検定による有意性を表す。
【図１２】図12はGPERシグナル伝達がメラノーマにおけるc-Mycの喪失をもたらすという知見を示す。パネルA〜C：E2による3日間の一時的な処理に続く4日間の休止期間後のheMel(パネルA)、WM46(パネルB)、およびB16F10(パネルC)メラノーマのウエスタンブロットである。パネルD：特異的GPERアゴニスト(G-1)で16時間処理したWM46細胞のウエスタンブロットである。パネルE：G-1で16時間処理したルシフェラーゼまたはc-Myc形質導入WM46細胞のウエスタンブロットである。パネルF：G-1で経時的に処理したWM46細胞のウエスタンブロットである。パネルG：G-1、100μMのPKA阻害剤Rp-8-Br-cAMPS(PKAi)、またはそれらの両方で1時間処理したWM46細胞のウエスタンブロットである。パネルH：G-1、2.5μMのプロテアソーム阻害剤(MG132)、またはそれらの両方で1時間処理したWM46細胞のウエスタンブロットである。パネルI：G-1を用いておよび用いずに10μg/mlのシクロヘキサミド(CHX)で処理したWM46細胞のウエスタンブロットである。
【図１３Ａ】図13A〜13Gは一時的なGPERの活性化がメラノーマにおいて増殖を阻害しかつ免疫療法に対する応答を増強するという知見を示す。図13A：妊娠関連濃度のE2(25nM)または至適濃度のG-1(500nM)による一時的な処理後のB16F10メラノーマ細胞のウエスタンブロットである。
【図１３Ｂ】図13A〜13Gは一時的なGPERの活性化がメラノーマにおいて増殖を阻害しかつ免疫療法に対する応答を増強するという知見を示す。図13B：妊娠関連濃度のE2(25nM)または至適濃度のG-1(500nM)による一時的な処理後のWM46メラノーマ細胞のウエスタンブロットである。
【図１３Ｃ】図13A〜13Gは一時的なGPERの活性化がメラノーマにおいて増殖を阻害しかつ免疫療法に対する応答を増強するという知見を示す。図13C：妊娠関連濃度のE2(25nM)または至適濃度のG-1(500nM)による一時的な処理後のYUMM1.7メラノーマ細胞のウエスタンブロットである。
【図１３Ｄ】図13A〜13Gは一時的なGPERの活性化がメラノーマにおいて増殖を阻害しかつ免疫療法に対する応答を増強するという知見を示す。図13D：ビヒクルまたはG-1による前処理に続いてαPD-1抗体またはアイソタイプ抗体対照(2A3)のいずれかで処理したB16F10細胞の実験スケジュールであり、一群あたりn=5である。
【図１３Ｅ】図13A〜13Gは一時的なGPERの活性化がメラノーマにおいて増殖を阻害しかつ免疫療法に対する応答を増強するという知見を示す。図13E：14日目の処理群の腫瘍体積であり、*はテューキーの多重比較検定による一元配置分散分析での有意性を表す。
【図１３Ｆ】図13A〜13Gは一時的なGPERの活性化がメラノーマにおいて増殖を阻害しかつ免疫療法に対する応答を増強するという知見を示す。図13F：ビヒクルまたはG-1による前処理に続いてアイソタイプ抗体対照(2A3)またはαPD-1抗体で処理した腫瘍を有するマウスの生存曲線である。ログランク(マンテル・コックス)検定による群間の有意性を下の表に記載する。
【図１３Ｇ】図13A〜13Gは一時的なGPERの活性化がメラノーマにおいて増殖を阻害しかつ免疫療法に対する応答を増強するという知見を示す。図13G：G-1で16時間処理したルシフェラーゼまたはc-Myc形質導入WM46細胞のウエスタンブロットである。
【図１４Ａ】図14A〜14FはG-1およびαPD-1免疫療法によるメラノーマ担持マウスの処理が生存期間を劇的に延ばすという知見を示す。図14A：ビヒクルまたはG-1、およびαPD-1抗体またはアイソタイプ抗体対照(2A3)で処理したB16F10担持マウスの実験スケジュールであり、一群あたりn=10である。
【図１４Ｂ】図14A〜14FはG-1およびαPD-1免疫療法によるメラノーマ担持マウスの処理が生存期間を劇的に延ばすという知見を示す。図14B：14日目の処理群の腫瘍体積であり、*はテューキーの多重比較検定による一元配置分散分析での有意性を表す。
【図１４Ｃ】図14A〜14FはG-1およびαPD-1免疫療法によるメラノーマ担持マウスの処理が生存期間を劇的に延ばすという知見を示す。図14C：ビヒクルまたはG-1、およびアイソタイプ抗体対照(2A3)またはαPD-1抗体で処理したマウスの生存曲線である。ログランク(マンテル・コックス)検定による群間の有意性を下の表に記載する。
【図１４Ｄ】図14A〜14FはG-1およびαPD-1免疫療法によるメラノーマ担持マウスの処理が生存期間を劇的に延ばすという知見を示す。図14D：ビヒクルまたはG-1、およびアイソタイプ抗体対照(2A3)またはαPD-1抗体で処理したYUMM1.7担持マウスの実験の概要である。腫瘍が直径4〜5mmに達した後14日目に治療を開始した。一群当たりn=5である。
【図１４Ｅ】図14A〜14FはG-1およびαPD-1免疫療法によるメラノーマ担持マウスの処理が生存期間を劇的に延ばすという知見を示す。図14E：処理群の経時的な腫瘍体積。
【図１４Ｆ】図14A〜14FはG-1およびαPD-1免疫療法によるメラノーマ担持マウスの処理が生存期間を劇的に延ばすという知見を示す。図14F：ビヒクルまたはG-1、およびαPD-1抗体またはアイソタイプ抗体対照(2A3)で処理したマウスの生存曲線である。ログランク(マンテル・コックス)検定による群間の有意性を図14F中の表に記載する。
【図１５Ａ】図15A〜15CはインビボでのG-1処理が腫瘍浸潤免疫細胞を改変させるという知見を示す。図15A：YUMM1.7メラノーマ担持マウスのビヒクルまたはG-1処理に関する実験スケジュールである。
【図１５Ｂ】図15A〜15CはインビボでのG-1処理が腫瘍浸潤免疫細胞を改変させるという知見を示す。図15B：生物学的複製物全体の免疫プロファイリングを要約したヒートマップであり、一群あたりn=5であり、*は各免疫集団が免疫の活性化を単独で測定したものであると仮定した場合の二元配置分散分析による有意性を表す。
【図１５Ｃ】図15A〜15CはインビボでのG-1処理が腫瘍浸潤免疫細胞を改変させるという知見を示す。図15C：図15Bからの個別免疫集団の定量であり、一群あたりn=5である。
【図１６Ａ】図16A〜16CはG-1処理がメラノーマにおいてヒストンアセチル化を駆動しかつHDAC阻害剤と相乗作用するという知見を示す。図16A：エストロゲンで一時的に処理した正常なヒトメラノサイトの質量分析であり、赤いデータ点(*)は有意な上方調節を表し、CBP/p300はヒストンアセチル化を調節した。
【図１６Ｂ】図16A〜16CはG-1処理がメラノーマにおいてヒストンアセチル化を駆動しかつHDAC阻害剤と相乗作用するという知見を示す。図16B：G-1、HDACi、または組み合わせによる処理後のメラノーマ細胞におけるp-RB、c-Myc、およびH3K56acのウエスタンブロットである。
【図１６Ｃ】図16A〜16CはG-1処理がメラノーマにおいてヒストンアセチル化を駆動しかつHDAC阻害剤と相乗作用するという知見を示す。図16C：G-1、HDACi、または組み合わせによる処理後のB16F10メラノーマ細胞の増殖アッセイである。
【図１７Ａ】図17A〜17DはGPERシグナル伝達がインビトロおよびインビボでの膵管腺がん(PDAC)細胞の増殖を低減させるという知見を示す。図17A：500nMのG-1で1時間処理したいくつかのPDAC細胞株におけるc-Mycのウエスタンブロットである。
【図１７Ｂ】図17A〜17DはGPERシグナル伝達がインビトロおよびインビボでの膵管腺がん(PDAC)細胞の増殖を低減させるという知見を示す。図17B：500nMのG-1で5日間にわたって処理したいくつかのPDAC細胞株の増殖アッセイである。
【図１７Ｃ】図17A〜17DはGPERシグナル伝達がインビトロおよびインビボでの膵管腺がん(PDAC)細胞の増殖を低減させるという知見を示す。図17C：PDAC腫瘍担持マウスのビヒクルまたはG-1処理に関する実験スケジュールである。
【図１７Ｄ】図17A〜17DはGPERシグナル伝達がインビトロおよびインビボでの膵管腺がん(PDAC)細胞の増殖を低減させるという知見を示す。図17D：ビヒクルまたはG-1のいずれかで処理したPDAC腫瘍担持マウスの腫瘍重量である。
【図１８Ａ】図18A〜18GはGPERシグナル伝達がインビトロおよびインビボでのNSCLC細胞の増殖を低減させかつαPD-1免疫療法との組み合わせ効果を有するという知見を示す。図18A：500nMのG-1で30分間処理したLLC1細胞のpCREBに関するウエスタンブロットである。
【図１８Ｂ】図18A〜18GはGPERシグナル伝達がインビトロおよびインビボでのNSCLC細胞の増殖を低減させかつαPD-1免疫療法との組み合わせ効果を有するという知見を示す。図18B：500nMのG-1で6日間処理したLLC1の増殖アッセイである。
【図１８Ｃ】図18A〜18GはGPERシグナル伝達がインビトロおよびインビボでのNSCLC細胞の増殖を低減させかつαPD-1免疫療法との組み合わせ効果を有するという知見を示す。図18C：500nMのG-1で6日間処理したLLC1細胞のc-Mycに関するウエスタンブロットである。
【図１８Ｄ】図18A〜18GはGPERシグナル伝達がインビトロおよびインビボでのNSCLC細胞の増殖を低減させかつαPD-1免疫療法との組み合わせ効果を有するという知見を示す。図18D：500nMのG-1で経時的に処理したLLC1細胞のc-Mycに関するウエスタンブロットである。
【図１８Ｅ】図18A〜18GはGPERシグナル伝達がインビトロおよびインビボでのNSCLC細胞の増殖を低減させかつαPD-1免疫療法との組み合わせ効果を有するという知見を示す。図18E：500nMのG-1で1時間処理したTC-1細胞のpCREBおよびc-Mycに関するウエスタンブロットである。
【図１８Ｆ】図18A〜18GはGPERシグナル伝達がインビトロおよびインビボでのNSCLC細胞の増殖を低減させかつαPD-1免疫療法との組み合わせ効果を有するという知見を示す。図18F：ビヒクルまたはG-1、およびαPD-1抗体またはアイソタイプ抗体対照(2A3)で処理したLLC1腫瘍担持マウスの経時的な腫瘍体積である。
【図１８Ｇ】図18A〜18GはGPERシグナル伝達がインビトロおよびインビボでのNSCLC細胞の増殖を低減させかつαPD-1免疫療法との組み合わせ効果を有するという知見を示す。図18G：ビヒクルまたはG-1、およびαPD-1抗体またはアイソタイプ抗体対照(2A3)で処理したマウスの生存曲線である。ログランク(マンテル・コックス)検定による群間の有意性を下の表に記載する。
【図１９】G-1の用量を増加させて処理したWM46メラノーマ細胞に由来するウエスタンブロット画像である。データはGPERアゴニストG-1濃度の増加に応答したpRBおよびc-mycレベルの低減ならびにGPER発現の上昇を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
発明の詳細な説明
本発明はエストロゲンおよび/または小分子Gタンパク質共役受容体(GPCR)アゴニストが、メラノサイトの分化を増加させ、対象における、非限定的にはメラノーマ、膵臓がんおよび/または非小細胞肺がんなどのGPCR発現(GPER発現など)および/またはMyc発現がんを予防しかつ/または治療するために用いることができるという予想外の発見に関する。特定の態様では、GPCRはGタンパク質共役エストロゲン受容体(GPER)、メラノコルチン受容体(MC1R)、または同様の下流シグナル伝達事象を活性化させる他のGPCRである。
【００２８】
Mycタンパク質はエンハンサーボックス配列に結合することおよび/またはヒストンアセチル化酵素を動員することによっていくつかの遺伝子の発現を活性化させる転写因子である。Mycは転写抑制因子としても作用でき、特定の標的遺伝子の発現を阻害する。MycはDNA複製、細胞増殖、分化、がん浸潤、血管新生、細胞生存、および免疫監視からのがん細胞の回避の制御において直接的な役割を有する。Mycは多くのがん型で発現しており機能的に重要である。よってこれは生物学的に魅力的な治療標的となる。しかしながら、Mycを薬理化合物の標的にすることは極めて困難であり、現在承認されている制がん剤はMycを直接的な標的にしていない。
【００２９】
Mycは血清刺激などの様々な細胞分裂促進シグナルによって、またはWnt、ShhおよびEGF(MAPK/ERK経路を介して)によって活性化される。Mycはメラノーマ、バーキットリンパ腫、白血病、肉腫、リンパ腫、多発性骨髄腫、脳腫瘍、神経芽腫、髄芽腫、星状細胞腫、膠芽腫、卵巣がん、子宮頸がん、子宮がん、結腸直腸がん、乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん、甲状腺がん、肝臓がん、前立腺がん、食道がん、腎臓がん、膀胱がん、および/または胆嚢がんなどの多くのがん型で上方調節されていることがよく見られる強力な発がん性タンパク質である。
【００３０】
メラノーマの起始細胞であるメラノサイトおよび多くの他のヒト細胞型は、非標準的(non-canonical)ステロイドホルモン受容体Gタンパク質共役エストロゲン受容体1(GPER1)を発現する。本明細書において実証されるように、エストロゲンまたは例示的で非限定的な選択的GPER特異的アゴニスト(G-1)のいずれかによるメラノサイトにおけるGPERの活性化がヒトメラノサイトの分化状態を増加させることが分かった。そうする際にGPERアゴニストはメラノサイトの増殖能力を阻害し、それらのメラニン色素の産生およびメラノサイト分化抗原タンパク質を増加させ(図1)、かつがんを形成するそれらの能力を減少させる。これは、通常の条件下では分化および増殖のバランスがとれ、分化したメラノサイトが多ければ腫瘍原性が低いと一般的に考えられるという事実を反映している(図2)。
【００３１】
1つの局面では、発明は、エストロゲンおよび/またはGPCRアゴニスト(G-1などの選択的GPERアゴニストなど)が、エストロゲンおよび他の性ホルモンに応答することが古典的に知られたがん(例えば、非限定的には乳がん、卵巣がん、前立腺がんおよび/または子宮内膜がんなどの生殖組織において発症するがんを含む)だけでなく、がん細胞がGPERまたは任意の他のGPCRを発現する任意のがん、例えば非限定的にはMyc発現がんを治療しかつ/または予防するためにも用いることができるという予想外の発見に関する。いかなる理論によって限定されることを望まないが、エストロゲンおよび/またはGPCRアゴニストは、GPCRに結合し、がん細胞においてMycの下方制御を引き起こす。図19で実証されるように、エストロゲンまたはGPCRアゴニスト(GPERのための選択的アゴニストとしてのG-1など)によるGPER発現細胞の処理は、Mycタンパク質の著しい枯渇およびGPERタンパク質の予想外の増加を引き起こす。GPER自体のこの増加は、G-1および/または他のGPCRアゴニストの効果に対してがん細胞をさらに増感させる。
【００３２】
本明細書において示されるように、マウスおよびヒトのメラノーマ細胞は、腫瘍細胞増殖を遅らせるエストロゲンに対して同様に応答した。エストロゲンまたは特異的合成GPERアゴニストG-1で処理したヒトおよびマウスのメラノーマ細胞は、マウスではよりゆっくりと成長し、形成された腫瘍は有意に小さかった(図5〜6)。抗腫瘍効果が観察されるにはエストロゲンまたはG-1に対する短い一時的な曝露で十分であった。いかなる理論によって限定されることを望まないが、細胞をより分化した状態に維持するエピジェネティックメモリーを誘導するためには一時的なエストロゲン曝露で十分であった。本明細書において記載のデータは、エストロゲンで一時的に処理したメラノサイトが、チロシナーゼ、チロシナーゼ関連タンパク質、MC1R、メランA、およびドパクロムトートメラーゼを含む主要なメラノサイト分化マーカーの多くの上方調節された発現を維持することを示している(図3)。
【００３３】
この発見は、メラノーマを有する女性が、他の点では同一の腫瘍を有する男性よりも概して予後が良好であるという臨床的観察を説明するのに役立つ。また、過去に妊娠したことがあり、よって高濃度のGPERアゴニストエストロゲンに曝露された女性は、同年齢であり出産したことがない女性よりもメラノーマと診断された場合の予後が良好であり、この防護作用は過去の妊娠回数とともに増加する。いかなる特定の理論によって限定されることを望まないが、これは妊娠によるホルモンの影響がメラノーマの危険性を低下させることを示唆している。
【００３４】
特定の局面では、エストロゲン、G-1、または任意の他のGPCRアゴニスト(選択的GPERアゴニストなど)による治療(一時的な治療を含む)は、女性および男性の両方でメラノーマの危険性を長期間減少させる。発明の方法によれば、実際の妊娠に耐える必要なく、両方の性別において、妊娠の持つ有益な抗メラノーマ効果を享受できる。
【００３５】
特定の局面では、メラノーマ患者のGPCRアゴニスト治療は、腫瘍成長を遅らせかつ全生存期間を延ばすのに役立つ。
【００３６】
特定の局面では、対象は、非限定的にはバルプロ酸、ボリノスタット(SAHA)、ロミデプシン、トリコスタチンA(TSA)、JQ1、または他のブロモドメイン標的阻害剤などのヒストン脱アセチル化阻害剤でさらに治療される。これらの化合物は選択的GPERアゴニストとしてのG-1を含むGPCRアゴニストの効果を予想外に増強する。
【００３７】
特定の局面では、対象は、非限定的には化学療法、操作したキメラ抗原受容体(CAR)T細胞、任意の免疫療法剤(免疫チェックポイント阻害剤など)、および/または放射線療法などの抗がん治療剤でさらに治療される。メラノーマ細胞を標的とするCARは、MC1R、HGFR(Met)、MART-1、VEGFR、ガングリオシドGD3、GP100、チロシナーゼおよびNY-ESO-1を非限定的に含むタンパク質の細胞外ドメインに基づき得る。非限定的にはMC1R、MART、TYR、および/またはDCTなどの分化タンパク質を指向するワクチンも発明において企図される。
【００３８】
免疫チェックポイント療法(非限定的には、PD-1および/またはCTLA4を標的とする阻害剤など)は、腫瘍細胞上の抗原を認識する細胞傷害性T細胞を活性化することによって機能する。メラノーマ上のこれらの抗原は、メラニン細胞分化マーカー(チロシナーゼ、チロシナーゼ関連タンパク質、MC1R、メランA、およびドパクロムトートメラーゼ)を含むことが多い。エストロゲン、G-1、または任意の他のGPCRアゴニスト(GPERアゴニストなど)による対象の治療はこれらの抗原性タンパク質の発現を増加させる。特定の態様では、エストロゲンおよび/またはGPERアゴニストによる対象の治療は、分化タンパク質を指向する免疫チェックポイント阻害剤および/またはワクチンを伴う現在の標準治療レジメンを含む免疫療法の有効性を高める。
【００３９】
特定の態様では、メラノーマの危険性が高い対象(例えば、以前にメラノーマが発生した、メラノーマの家族歴がある、および/または移植レシピエントである対象)または任意の他のタイプのGPCR発現(GPER発現など)および/もしくはMyc発現がんの危険性が高い対象にはエストロゲンおよび/またはGPCRアゴニスト(選択的GPERアゴニストなど)による治療から恩恵があり得る。別の態様では、対象全般において、GPCR発現(GPER発現など)および/またはMyc発現がんの将来的な発生に対する予防または維持治療として作用するエストロゲンおよび/またはGPCRアゴニスト(選択的GPERアゴニストなど)による治療からの恩恵があり得る。さらに別の態様では、現在のがん患者において、エストロゲンおよび/またはGPCRアゴニスト(選択的GPERアゴニストなど)による治療単独による、HDACと組み合わせての、および/または免疫療法(例えば、免疫チェックポイント阻害剤を用いた)、標的化学療法、伝統的な非選択的化学療法、または放射線療法を非限定的に含む任意の他の治療法と組み合わせての恩恵があり得る。
【００４０】
特定の態様では、エストロゲンおよび/またはGPERアゴニスト(G-1など)、および/または任意の他のGPCRアゴニストは、経口投与(例えば、丸剤として)、静脈内もしくは筋肉内投与、および/または局所投与(例えば、局所用クリーム、ゲルおよび/または軟膏)用に製剤化される。別の態様では、エストロゲン、GPERアゴニスト(G-1など)、および/または他のGPCRアゴニストは、良性のほくろ(すなわち、色素性母斑)がメラノーマへと発展する可能性を減少させるために用いられる。
【００４１】
本発明は、非限定的にはメラノーマなどのGPCR発現(GPER発現など)および/またはMyc発現がんの治療におけるGPERアゴニストの使用に限定されると解釈されるべきではない。GPERに加えて、メラノサイトおよび他の組織型で生じる腫瘍が、活性化するとGPERと同じ下流経路を通じてシグナル伝達し同様に分化を駆動する他のGタンパク質共役受容体(表1で強調したメラノサイトGPCR)を発現する(図9)。特定の態様では、これらの受容体に対するアゴニストは単独でおよび/または免疫療法薬を非限定的に含む他の治療剤と組み合わせるかのいずれかで抗腫瘍活性を有する。そのような受容体リガンドの非限定的な例は、メラノチドIIまたはNDP-α-MSHとしても公知であるアファメラノチドなどのMSHペプチド誘導体を含む。図10A〜10Dは、炎症メラノサイトGPCRの特定のアゴニストがヒトメラノサイトにおけるメラニンの合成をどのように調節するかを示す。そのため、メラノサイトの分化を増加させるGPCRアゴニストは本発明において有用である。特定の態様では、そのようなGPCRアゴニストの非限定的な例は、MC1R、CYSLTR2、F2R、HRH2、LPAR2/3/6、PTGER1、S1PR2、S1PR3、および/またはTBXA2R向けのアゴニストを含む。別の態様では、そのようなGPCRアゴニストの非限定的な例は、F2R、PTGER1、および/またはTBXA2R向けのアゴニストを含む。さらに別の態様では、発明において有用なアゴニストの非限定的な例は、アファメラノチド(N-アセチル-L-セリル-L-チロシル-L-セリル-L-ノルロイシル-L-α-グルタミル-L-ヒスチジル-D-フェニルアラニル-L-アルギニル-L-トリプトフィルグリシル-L-リシル-L-プロリル-L-バリンアミド)、N-メチルLTC4(N-メチル-5S-ヒドロキシ-6R-(S-グルタチオニル)-7E,9E,11Z,14Z-エイコサテトラエン酸)、TFLLR-NH2(Thr-Phe-Leu-Leu-Arg-NH2)、インプロミジン(2-[3-(1H-イミダゾール-5-イル)プロピル]-1-[2-[(5-メチル-1H-イミダゾール-4-イル)メチルスルファニル]エチル]グアニジン)、カルバコール(2-[(アミノカルボニル)オキシ]-N,N,N-トリメチルエタンアミニウム塩化物)、スルプロストン((Z)-7-[(1R,3R)-3-ヒドロキシ-2-[(E,3R)-3-ヒドロキシ-4-フェノキシブタ-1-エニル]-5-オキソシクロペンチル]-N-メチルスルホニルヘプタ-5-エンアミド)、FTY720(2-アミノ-2-[2-(4-オクチル-フェニル)-エチル]-プロパン-1,3-ジオール塩酸塩またはフィンゴリモド塩酸塩)およびU46619((E)-7-((1R,4R,5S,6R)-6-((S,Z)-3-ヒドロキシオクタ-1-エン-1-イル)-2-オキサビシクロ[2.2.1]ヘプタン-5-イル)ヘプタ-5-エン酸)を含む。
【００４２】
（表１）天然または合成リガンドによって活性化されると細胞の分化およびメラニン色素の産生を促進するメラノサイトGPCR
2019518048.tif 000006
【００４３】
定義
本明細書において用いるように、以下の用語はそれぞれこのセクションにおいてはその用語から連想される意味を有する。
【００４４】
特に定義のない場合を除いて、本明細書において用いられるすべての技術用語および科学用語は、通常は、本発明が属する技術分野における当業者によって一般的に解釈されるのと同じ意味を有する。通常は、本明細書において用いられる命名法ならびに細胞培養、分子遺伝学および化学における実験室手法は当技術分野において周知でありかつ一般的に採用されるものである。
【００４５】
本明細書において用いるように、冠詞「1つの(a)」および「1つの(an)」は冠詞の文法上の目的語の1つまたは複数(すなわち、少なくとも1つ)を指す。例としては「元素(an element)」は1つの元素または1つより多い元素を意味する。
【００４６】
本明細書で用いられるように、「約」という用語は当業者によって理解され、かつそれが用いられる文脈によってある程度異なるであろう。量、時間的な長さなどの計測可能な値を指す場合に本明細書において用いるように、「約」という用語は特定された値から±20％または±10％、±5％、±1％、または±0.1％のバラツキを包含することを意味しており、そのようなバラツキでも開示の方法を実施するには適切である。
【００４７】
本明細書において用いるように、単独でまたは別の用語と組み合わせて採用された「アルコキシ」という用語は、特に記載のない限り、本明細書においてどこかで規定するように、指定した数の炭素原子数を有し、酸素原子を介して分子の残りに繋がったアルキル基、例えば、メトキシ、エトキシ、1-プロポキシ、2-プロポキシ(またはイソプロポキシ)ならびにより高級な同族体および異性体などを意味する。具体例は、非限定的にはエトキシおよびメトキシなどの(C1〜C3)アルコキシである。
【００４８】
本明細書において用いるように、それ自体または別の置換基の一部としての「アルキル」という用語は、特に記載のない限り、指定した炭素原子数(すなわち、C1〜C10は1〜10個の炭素原子を意味する)を有する直鎖または分岐鎖炭化水素を意味し、直鎖、分枝鎖、または環状置換基を含む。例はメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、tert-ブチル、ペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、およびシクロプロピルメチルを含む。具体的な態様は、非限定的にはエチル、メチル、イソプロピル、n-ブチル、イソブチル、t-ブチル、およびシクロプロピルメチルなどの(C1〜C4)アルキルである。
【００４９】
「疾患」とは、動物が恒常性を維持することができず、かつ疾患が改善されない場合には動物の健康が悪化し続ける、動物の健康状態である。対照的に、動物における「障害」とは、動物が恒常性を維持することが可能であるが、動物の健康状態が障害の非存在下におけるものより好ましくない健康状態である。未治療のままにしておいても障害が必ずしも動物の健康状態をさらに低下させることはない。
【００５０】
「有効量」または「治療有効量」は本明細書においては区別なく用いられ、特定の生物学的結果を達成するためまたは治療上または予防上の利益を提供するために有効な本明細書において記載するような化合物、製剤、材料、または組成物の量を指す。そのような結果は当技術分野において好適な任意の手段によって決定される抗腫瘍活性を非限定的に含んでもよい。
【００５１】
本明細書において用いるように「内因性」とは生物、細胞、組織または系からのまたはそれらの内部で産生されるあらゆる物質を指す。
【００５２】
本明細書において用いる「エストロゲン(estrogen)」または「エストロゲン(oestrogen)」は天然ホルモンであるエストロゲンの効果を模倣する天然または合成(エストロゲンのアナログおよび誘導体を含む)のあらゆる物質を指す。エストロゲンの種類はエストロン(E1)、エストラジオール(E2)、エストリオール(E3)、エステトロール(E4)、17β-エストラジオール、27-ヒドロキシコレステロール、デヒドロエピアンドロステロン(DHEA)、7-オキソ-DHEA、7α-ヒドロキシ-DHEA、16α-ヒドロキシ-DHEA、7β-ヒドロキシエピアンドロステロン、Δ4-アンドロステンジオン、Δ5-アンドロステンジオール、3α-アンドロスタンジオール、3β-アンドロスタンジオール、2-ヒドロキシエストロン、16-ヒドロキシエストロン、シピオン酸エストラジオール、吉草酸エストラジオール、酢酸エストラジオール、安息香酸エストラジオール、エチニルエストラジオール(EE)、メストラノール、モキセストロール、キネストロール、ジエチルスチルベストロールベンゼストロール、ジエネストロール、酢酸ジエネストロール、ジプロピオン酸ジエチルスチルベストロール、ホスフェストロール、ヘキセストロール、ジプロピオン酸メテストロール、外因性エストロゲン、植物エストロゲン、および/または菌類エストロゲンを非限定的に含む。
【００５３】
本明細書において用いるように、単独でまたは別の置換基の一部としての「ハロ」または「ハロゲン」という用語は特に記載のない限りフッ素、塩素、臭素、またはヨウ素原子を指す。
【００５４】
本明細書において用いるように、「GPCR」という用語はGタンパク質共役受容体を指す。
【００５５】
本明細書において用いるように、「GPER」という用語はGPCRの一種であるGタンパク質共役エストロゲン受容体を指す。
【００５６】
本明細書において用いるように、「説明資料」は出版物、音声案内、図表、または発明の組成物および方法の有用性を伝えるために用いることができる任意の他の表現媒体を含む。発明のキットの説明資料は、例えば、発明の核酸、ペプチド、および/もしくは組成物を含有する容器に添付されてもよいし、または核酸、ペプチド、および/もしくは組成物を含有する容器と共に発送されてもよい。あるいは、説明資料は説明資料および化合物がレシピエントによって協調的に用いられることを意図して容器とは別に発送されてもよい。
【００５７】
本明細書において用いるように、「免疫チェックポイント阻害剤」とはがん細胞に対する免疫系の攻撃を誘発する薬物(例えば、小分子、ペプチドおよび/または抗体)を指す。免疫チェックポイント阻害剤の例は抗体、PD-1阻害剤(すなわち、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、抗PD-1)、PD-L1阻害剤(すなわちアテゾリズマブ、抗-PD-L1)、CTLA-4阻害剤(すなわち、イピリムマブ、抗-B7-1/B7-2、抗CTLA-4)、インドールアミン(2,3)-ジオキシゲナーゼ(IDO1/2)阻害剤、B7ホモログ3(B7-H3)阻害剤、リンパ球活性化遺伝子3(LAG3)阻害剤、およびTIGIT(IgおよびITIMドメインを持つT細胞免疫受容体)標的抗体および薬剤を非限定的に含む。
【００５８】
本明細書において用いるように「修飾された」という用語によって、発明の分子または細胞の変化した状態または構造を意味する。分子は化学的、構造的、および機能的を含む多くの様式で修飾されてもよい。細胞は核酸の導入を通じて修飾されてもよい。
【００５９】
本明細書において用いられるように「調節する」という用語によって、治療または化合物の非存在下での対象における応答レベルと比較しかつ/または未治療である以外は同一の対象における応答レベルと比較して対照における応答レベルの検出可能な増加または減少を媒介することを意味する。該用語は生来のシグナルまたは応答を混乱させかつ/またはそれに影響を及ぼし、これにより対象、好ましくはヒトにおいて有益な治療応答を媒介することを包含する。
【００６０】
本明細書において用いるように、「Myc発現がん」という用語はその発生および/または増殖がMycの活性化、調節異常、変異、および/または異常な機能に依存しかつ/またはそれらよって加速される種類のがんを指す。Myc発現がんの非限定的な例はメラノーマ、バーキットリンパ腫、白血病、肉腫、リンパ腫、多発性骨髄腫、脳腫瘍、神経芽腫、髄芽腫、星状細胞腫、膠芽腫、卵巣がん、子宮頸がん、子宮がん、結腸直腸がん、乳がん、膵臓がん、肺がん、胃がん、甲状腺がん、肝臓がん、前立腺がん、食道がん、腎臓がん、膀胱がん、および胆嚢がんを含む。
【００６１】
免疫原性組成物の「非経口」投与は、例を挙げると、皮下(s.c.)、静脈内(i.v.)、筋肉内(i.m.)、もしくは胸骨内注射、または注入技術を含む。
【００６２】
本明細書において用いるように、「薬学的組成物」または「組成物」という用語は発明において有用な少なくとも1つの化合物と、担体、安定剤、希釈剤、分散剤、懸濁剤、増粘剤および/または賦形剤などの他の化学成分との混合物を指す。薬学的組成物は生物への化合物の投与を容易にする。静脈内、経口、エアロゾル、非経口、眼内、経肺、頭蓋内、経皮および局所投与を非限定的に含む化合物を投与する様々な技術が当技術分野に存在する。特定の態様では、投与は局所投与を含む。
【００６３】
本明細書において用いるように、「薬学的に許容される」という用語は組成物の生物学的活性または特性を抑止せず、比較的非毒性である担体または希釈剤などの物質を指す、すなわち、該物質は、望ましくない生物学的効果を引き起こすかまたはそれが含有される組成物のあらゆる構成要素とも有害な様式で相互作用することなく、個体に投与し得る。
【００６４】
本明細書において用いるように、「薬学的に許容される担体」という用語は、発明において有用な化合物がその意図した機能を果たし得るように、患者内でまたは患者へ化合物を運搬するかまたは輸送するのに関与する液体または固体の充填剤、安定剤、分散剤、懸濁剤、希釈剤、賦形剤、増粘剤、溶媒またはカプセル化物質などの薬学的に許容される物質、組成物または担体を意味する。典型的には、そのような構築物は1つの臓器つまり身体の一部から別の臓器つまり身体の別の一部へと運搬されるかまたは輸送される。各担体は、発明において有用な化合物を含む、製剤の他の成分と適合性があり、かつ患者に有害でないという意味で「許容され」なければならない。薬学的に許容される担体としての役割を果たし得る物質のいくつかの例はラクトース、グルコースおよびスクロースなど糖；コーンスターチおよびジャガイモデンプンなどのデンプン；セルロースならびに、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロースなどのその誘導体；粉末トラガント；麦芽；ゼラチン；タルク；カカオバターおよび座剤ワックスなどの賦形剤；ラッカセイ油、綿実油、べニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油およびダイズ油などの油；プロピレングリコールなどのグリコール；グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコールなどの多価アルコール；オレイン酸エチルおよびラウリンエチルなどのエステル；寒天；水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムなどの緩衝剤；界面活性剤；アルギン酸；発熱物質不含水；等張食塩水；リンゲル液；エチルアルコール；リン酸緩衝液；ならびに医薬製剤で採用される他の非毒性で適合性のある物質を含む。本明細書において用いるように、「薬学的に許容される担体」は発明において有用な化合物の活性と適合性があり、対象にとって生理学的に許容されるあらゆるコーティング剤、抗菌剤および抗真菌剤、ならびに吸収遅延剤なども含む。補助活性化合物も組成物に組み込まれてもよい。「薬学的に許容される担体」は発明において有用な化合物の薬学的に許容される塩をさらに含んでもよい。発明の実施において用いられる薬学的組成物に含まれてもよい他の追加の成分は当技術分野では公知であり、例えば、参照により本明細書に組み入れられるRemington's Pharmaceutical Sciences (Genaro, Ed., Mack Publishing Co., 1985, Easton, PA)に記載されている。
【００６５】
本明細書において用いるように、「薬学的に許容される塩」という言葉は無機酸、無機塩基、有機酸、無機塩基、溶媒和物(水和物を含む)およびこれらの包接化合物を含む薬学的に許容される非毒性の酸および/または塩基から調製される投与化合物の塩を指す。
【００６６】
本明細書において用いるように、化合物の「薬学的有効量」、「治療有効量」または「有効量」は化合物が投与される対象に有益な効果を提供するのに十分な化合物の量である。
【００６７】
本明細書において用いる「防止する」、「防止すること」または「防止」という用語は、薬剤または化合物の投与が開始された時点では疾患または状態に関連する症状を発症していない対象におけるそのような症状の発生を回避するかまたは遅延することを意味する。疾患、状態および障害は本明細書においては区別なく用いられる。
【００６８】
本明細書において用いる「特異的に結合する」という用語によって、第1の分子が第2の分子(例を挙げると、特定の受容体または酵素)に優先的に結合するが必ずしもその第2の分子にのみ結合するわけではないことを意味する。
【００６９】
「対象」という用語は免疫応答が誘発され得る生物(例を挙げると、哺乳類)を含むように意図されている。本明細書において用いる「対象」または「患者」はヒトまたはヒト以外の哺乳類であってもよい。ヒト以外の哺乳類は、例えば、ヒツジ、ウシ、ブタ、イヌ、ネコおよびネズミ哺乳類などの家畜およびペットを含む。好ましくは、対象はヒトである。
【００７０】
本明細書において用いるように、「実質的に精製された」細胞とは他の細胞型を本質的に含んでいない細胞である。実質的に精製された細胞は、その天然に存在する状態では通常は関連している他の細胞型からは分離された細胞も指す。特定の態様では、実質的に精製された細胞の集団とは細胞の均質な集団を指す。別の態様では、この用語は細胞がそれらの天然の状態では当然ながら関連している細胞からは分離された細胞を単に指す。さらに別の態様では、細胞はインビトロで培養される。さらに別の態様では、細胞はインビトロで培養されない。
【００７１】
本明細書において用いる「治療的」という用語は治療および/または予防を意味する。治療的効果は病態の抑制、寛解、または根絶によって得られる。
【００７２】
本明細書において用いるように、「局所投与」または「局所適用」は皮膚または粘膜などの体表面に適用される薬を指す。
【００７３】
疾患を「治療する」とは該用語が本明細書において用いられるように、対象が経験する疾患または障害の少なくとも1つの徴候または症状の頻度または重症度を低減することを意味する。本明細書において用いるように、「治療」または「治療する」という用語は、疾患または障害、疾患または障害の症状、または疾患または障害を発症する可能性を治す、治癒する、軽減する、取り除く、改変する、是正する、改善する、好転させるかまたは影響することを目的とした、疾患または障害、疾患または障害の症状、または疾患または障害を発症する可能性を有する対象への治療剤すなわち発明において有用な組成物の適用または投与(単独でまたは別の医薬品と組み合わせて)、あるいは対象からの単離された組織または細胞株への治療剤の適用または投与(例を挙げると、診断またはエクスビボ適用のため)として規定される。そのような治療は、薬理ゲノム学の分野から得られた知識に基づいて特に適合させたかまたは変更したものであってもよい。
【００７４】
本明細書において用いるように、「UV」という用語は紫外線を指す。
【００７５】
「異種」とは異なる種の動物に由来する任意の材料を指す。
【００７６】
本開示全体にわたり、発明の様々な局面が範囲の形式で表され得る。範囲の形式での記載は単に利便性および簡潔性のためであると理解すべきであり、発明の範囲に対する不変の限定として解釈すべきではない。したがって、範囲の記載は、可能なより狭い範囲や、その範囲内の個々の数値をすべて具体的に開示していると解釈すべきである。例えば、1〜6などの範囲の記載は1〜3、1〜4、1〜5、2〜4、2〜6、3〜6などのより狭い範囲や、その範囲内の個々の数字、例えば、1、2、2.7、3、4、5、5.3、および6を具体的に開示していると解釈すべきである。これは範囲の広さにかかわらず適用される。
【００７７】
化合物および組成物
1つの局面では、本発明は、Gタンパク質共役エストロゲン受容体GPERなどのGPCRに結合しかつそれを活性化するエストロゲンおよび/または他の小分子を企図する。これは、腫瘍細胞の分化状態を増加させる細胞シグナル伝達事象を誘導する。これは、腫瘍細胞の増殖を遅らせ、腫瘍成長全体を遅らせ、かつ腫瘍細胞を免疫細胞にとってより可視化しかつ/または感受性化する。特定の態様では、本発明は他のGPCRのアゴニストとしての役割を果たす他の分子を企図する。そのような分子は、GPERによって活性化されるのと同じ下流経路の多くを係合することによって細胞の分化を誘導する。
【００７８】
特定の態様では、発明の化合物またはその塩、溶媒化合物、互変異性体、鏡像異性体もしくはジアステレオ異性体は、式(I)の少なくとも1つの化合物であり：
2019518048.tif 000007
(I)中
R1は=O、=N-OH、=N-NHC(=O)(p-メトキシフェニル)、=N-NHC(=O)CH(OMe)フェニル、および=N-NH(5-ヨード-ピリド-2-イル)からなる群より選択され；
R2はC1〜C4アルキルおよびC1〜C4ハロアルキル(非限定的には-CF3など)からなる群より選択され；
結合aが二重結合であれば、R3およびR4はHであり、かつ
結合aが単結合であれば、R3はH、-OH、-OAc、およびハロからなる群より選択され；R4はH、-OH、-OAcおよび-S(o-ニトロフェニル)からなる群より選択されるか；またはR3およびR4は一緒になって、-CH2-、-OCH2O-、-OCH(CH3)O-、および-OC(CH3)2O-からなる群より選択されるジラジカルを形成するように
結合aは単結合または二重結合であり；
R5はH、ベンジル、C1〜C4アルキル、およびアセチルからなる群より選択され；
R6はH、ハロ、-NO2、C1〜C4アルキル、-C≡CH、-C≡C-Si(CH3)3(または-C≡C-TMS)、-O-ベンジル、-OH、-OAc、C1〜C4アルコキシ、-COOH、および-COO(C1〜C4アルキル)からなる群より選択され；
R7はH、ハロ、-NO2、C1〜C4アルキル、-OH、-OAc、およびC1〜C4アルコキシからなる群より選択され；
R8はH、ハロ、-NO2、C1〜C4アルキル、-O-ベンジル、-N(R)(R)、-SR、-COOH、-COO(C1〜C4アルキル)、-OH、-OAc、C1〜C4アルコキシ、3-チエチル-メトキシ、-SO2(モルホリノ)、および-OCH2CH=CH2からなる群より選択され、ここでRは各出現時に独立して、HおよびC1〜C4アルキルからなる群より選択され；
R9はH、ハロ、-NO2、C1〜C4アルキル、-OH、-OAc、およびC1〜C4アルコキシからなる群より選択されるか、
またはR8およびR9は一緒になって、-OCH2O-、-OCH(CH3)O-、-OC(CH3)2O-、-O(CH2)2O-、-O-CH=CH-、および-CH=CH-O-からなる群より選択されるジラジカルを形成し；
R10はH、C1〜C4アルキル、およびハロからなる群より選択され；
ここでベンジルは各出現時に独立して、C1〜C4アルキル、-OH、C1〜C4アルコキシ、ハロ、および-NO2からなる群より選択される少なくとも1つの基で置換されてもよい。
【００７９】
特定の態様では、発明の化合物またはその塩、溶媒化合物、互変異性体、鏡像異性体もしくはジアステレオ異性体は、式(I-1)の少なくとも1つの化合物であり：
2019518048.tif 000008
(I-1)中
R1は=Oおよび=N-OHからなる群より選択され；
R2はC1〜C4アルキルであり；
結合aが二重結合であれば、R3およびR4はHであり、かつ
結合aが単結合であれば、R3およびR4は独立して、Hおよび-OHからなる群より選択されるか、またはR3およびR4は一緒になって、-OCH2O-、-OCH(CH3)O-および-OC(CH3)2O-からなる群より選択されるジラジカルを形成するように
結合aは単結合または二重結合であり；
R5はH、ベンジルおよびC1〜C4アルキルからなる群より選択され；
R6はHおよびハロからなる群より選択され；
R8およびR9は独立して、HおよびC1〜C4アルコキシからなる群より選択されるか、またはR8およびR9は一緒になって、-OCH2O-、-OCH(CH3)O-および-OC(CH3)2O-からなる群より選択されるジラジカルを形成する。
【００８０】
特定の態様では、化合物はG-1ではない。別の態様では、化合物はG-1である。
【００８１】
特定の態様では、R1は=Oである。別の態様では、R1は=N-OHである。
【００８２】
特定の態様では、R2はメチル、トリフルオロメチル、エチル、1-プロピル、および2-プロピルからなる群より選択される。別の態様では、R2はメチルまたはトリフルオロメチルである。
【００８３】
特定の態様では、結合aは二重結合であり、R3およびR4はHである。
【００８４】
特定の態様では、結合aは単結合であり、R3およびR4は独立して、Hおよび-OHからなる群より選択される。別の態様では、結合aは単結合であり、R3およびR4はHである。さらに別の態様では、結合aは単結合であり、R3およびR4は-OHである。さらに別の態様では、結合aは単結合であり、R3およびR4は-OHであり互いに対してシスである。さらに別の態様では、結合aは単結合であり、R3およびR4は-OHであり互いに対してトランスである。
【００８５】
特定の態様では、結合aは単結合であり、R3およびR4は一緒になって-OC(CH3)2O-を形成する。
【００８６】
特定の態様では、R5はH、ベンジル、メチル、エチル、1-プロピルおよび2-プロピルからなる群より選択される。特定の態様では、R5はH、ベンジルおよびメチルからなる群より選択される。
【００８７】
特定の態様では、R6はH、F、Cl、BrおよびIからなる群より選択される。特定の態様では、R5はH、ClおよびBrからなる群より選択される。
【００８８】
特定の態様では、R8およびR9は独立して、HおよびC1〜C4アルコキシからなる群より選択される。別の態様では、R8およびR9は独立して、H、メトキシ、エトキシ、1-プロポキシおよび2-プロポキシからなる群より選択される。さらに別の態様では、R8およびR9は独立して、Hおよびメトキシからなる群より選択される。
【００８９】
特定の態様では、R8およびR9は一緒になって、-OCH2O-、-O(CH2)2O-、-OCH(CH3)O-および-OC(CH3)2O-からなる群より選択されるジラジカルを形成する。
【００９０】
特定の態様では、化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体もしくはジアステレオ異性体は、
2019518048.tif 000009
からなる群より選択される少なくとも1つである。
【００９１】
特定の態様では、化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体もしくはジアステレオ異性体は、
2019518048.tif 000010
からなる群より選択される少なくとも1つである。
【００９２】
特定の態様では化合物はA1である。別の態様では化合物はA2である。さらに別の態様では化合物はA3である。さらに別の態様では化合物はA4である。さらに別の態様では化合物はA5である。さらに別の態様では化合物はA6である。さらに別の態様では化合物はA7である。さらに別の態様では化合物はA8である。さらに別の態様では化合物はA9である。さらに別の態様では化合物はA10である。さらに別の態様では化合物はA11である。さらに別の態様では化合物はA12である。さらに別の態様では化合物はA13である。さらに別の態様では化合物はA14である。さらに別の態様では化合物はA15である。
【００９３】
特定の態様では化合物はA1ではない。別の態様では化合物はA2ではない。さらに別の態様では化合物はA3ではない。さらに別の態様では化合物はA4ではない。さらに別の態様では化合物はA5ではない。さらに別の態様では化合物はA6ではない。さらに別の態様では化合物はA7ではない。さらに別の態様では化合物はA8ではない。さらに別の態様では化合物はA9ではない。さらに別の態様では化合物はA10ではない。さらに別の態様では化合物はA11ではない。さらに別の態様では化合物はA12ではない。さらに別の態様では化合物はA13ではない。さらに別の態様では化合物はA14ではない。さらに別の態様では化合物はA15ではない。
【００９４】
特定の態様では、化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体もしくはジアステレオ異性体は、
2019518048.tif 000011
2019518048.tif 000012
2019518048.tif 000013
からなる群より選択される少なくとも1つである。
【００９５】
特定の態様では化合物はA16である。別の態様では化合物はA17である。さらに別の態様では化合物はA18である。さらに別の態様では化合物はA19である。さらに別の態様では化合物はA20である。さらに別の態様では化合物はA21である。さらに別の態様では化合物はA22である。さらに別の態様では化合物はA23である。さらに別の態様では化合物はA24である。さらに別の態様では化合物はA25である。さらに別の態様では化合物はA26である。さらに別の態様では化合物はA27である。さらに別の態様では化合物はA28である。さらに別の態様では化合物はA29である。さらに別の態様では化合物はA30である。さらに別の態様では化合物はA31である。さらに別の態様では化合物はA32である。さらに別の態様では化合物はA33である。さらに別の態様では化合物はA34である。さらに別の態様では化合物はA35である。さらに別の態様では化合物はA36である。さらに別の態様では化合物はA37である。さらに別の態様では化合物はA38である。さらに別の態様では化合物はA39である。さらに別の態様では化合物はA40である。さらに別の態様では化合物はA41である。さらに別の態様では化合物はA42である。さらに別の態様では化合物はA43である。さらに別の態様では化合物はA44である。さらに別の態様では化合物はA45である。さらに別の態様では化合物はA46である。さらに別の態様では化合物はA47である。さらに別の態様では化合物はA48である。さらに別の態様では化合物はA49である。さらに別の態様では化合物はA50である。さらに別の態様では化合物はA51である。さらに別の態様では化合物はA52である。さらに別の態様では化合物はA53である。さらに別の態様では化合物はA54である。さらに別の態様では化合物はA55である。さらに別の態様では化合物はA56である。さらに別の態様では化合物はA57である。さらに別の態様では化合物はA58である。さらに別の態様では化合物はA59である。さらに別の態様では化合物はA60である。さらに別の態様では化合物はA61である。さらに別の態様では化合物はA62である。さらに別の態様では化合物はA63である。さらに別の態様では化合物はA64である。さらに別の態様では化合物はA65である。さらに別の態様では化合物はA66である。さらに別の態様では化合物はA67である。さらに別の態様では化合物はA68である。さらに別の態様では化合物はA69である。さらに別の態様では化合物はA70である。さらに別の態様では化合物はA71である。さらに別の態様では化合物はA72である。さらに別の態様では化合物はA73である。さらに別の態様では化合物はA74である。さらに別の態様では化合物はA75である。さらに別の態様では化合物はA76である。さらに別の態様では化合物はA77である。さらに別の態様では化合物はA78である。さらに別の態様では化合物はA79である。さらに別の態様では化合物はA80である。さらに別の態様では化合物はA81である。さらに別の態様では化合物はA82である。さらに別の態様では化合物はA83である。さらに別の態様では化合物はA84である。さらに別の態様では化合物はA85である。さらに別の態様では化合物はA86である。さらに別の態様では化合物はA87である。さらに別の態様では化合物はA88である。さらに別の態様では化合物はA89である。さらに別の態様では化合物はA90である。さらに別の態様では化合物はA91である。さらに別の態様では化合物はA92である。さらに別の態様では化合物はA93である。さらに別の態様では化合物はA94である。さらに別の態様では化合物はA95である。さらに別の態様では化合物はA96である。さらに別の態様では化合物はA97である。さらに別の態様では化合物はA98である。さらに別の態様では化合物はA99である。さらに別の態様では化合物はA100である。さらに別の態様では化合物はA101である。さらに別の態様では化合物はA102である。さらに別の態様では化合物はA103である。さらに別の態様では化合物はA104である。
【００９６】
特定の態様では化合物はA16ではない。別の態様では化合物はA17ではない。さらに別の態様では化合物はA18ではない。さらに別の態様では化合物はA19ではない。さらに別の態様では化合物はA20ではない。さらに別の態様では化合物はA21ではない。さらに別の態様では化合物はA22ではない。さらに別の態様では化合物はA23ではない。さらに別の態様では化合物はA24ではない。さらに別の態様では化合物はA25ではない。さらに別の態様では化合物はA26ではない。さらに別の態様では化合物はA27ではない。さらに別の態様では化合物はA28ではない。さらに別の態様では化合物はA29ではない。さらに別の態様では化合物はA30ではない。さらに別の態様では化合物はA31ではない。さらに別の態様では化合物はA32ではない。さらに別の態様では化合物はA33ではない。さらに別の態様では化合物はA34ではない。さらに別の態様では化合物はA35ではない。さらに別の態様では化合物はA36ではない。さらに別の態様では化合物はA37ではない。さらに別の態様では化合物はA38ではない。さらに別の態様では化合物はA39ではない。さらに別の態様では化合物はA40ではない。さらに別の態様では化合物はA41ではない。さらに別の態様では化合物はA42ではない。さらに別の態様では化合物はA43ではない。さらに別の態様では化合物はA44ではない。さらに別の態様では化合物はA45ではない。さらに別の態様では化合物はA46ではない。さらに別の態様では化合物はA47ではない。さらに別の態様では化合物はA48ではない。さらに別の態様では化合物はA49ではない。さらに別の態様では化合物はA50ではない。さらに別の態様では化合物はA51ではない。さらに別の態様では化合物はA52ではない。さらに別の態様では化合物はA53ではない。さらに別の態様では化合物はA54ではない。さらに別の態様では化合物はA55ではない。さらに別の態様では化合物はA56ではない。さらに別の態様では化合物はA57ではない。さらに別の態様では化合物はA58ではない。さらに別の態様では化合物はA59ではない。さらに別の態様では化合物はA60ではない。さらに別の態様では化合物はA61ではない。さらに別の態様では化合物はA62ではない。さらに別の態様では化合物はA63ではない。さらに別の態様では化合物はA64ではない。さらに別の態様では化合物はA65ではない。さらに別の態様では化合物はA66ではない。さらに別の態様では化合物はA67ではない。さらに別の態様では化合物はA68ではない。さらに別の態様では化合物はA69ではない。さらに別の態様では化合物はA70ではない。さらに別の態様では化合物はA71ではない。さらに別の態様では化合物はA72ではない。さらに別の態様では化合物はA73ではない。さらに別の態様では化合物はA74ではない。さらに別の態様では化合物はA75ではない。さらに別の態様では化合物はA76ではない。さらに別の態様では化合物はA77ではない。さらに別の態様では化合物はA78ではない。さらに別の態様では化合物はA79ではない。さらに別の態様では化合物はA80ではない。さらに別の態様では化合物はA81ではない。さらに別の態様では化合物はA82ではない。さらに別の態様では化合物はA83ではない。さらに別の態様では化合物はA84ではない。さらに別の態様では化合物はA85ではない。さらに別の態様では化合物はA86ではない。さらに別の態様では化合物はA87ではない。さらに別の態様では化合物はA88ではない。さらに別の態様では化合物はA89ではない。さらに別の態様では化合物はA90ではない。さらに別の態様では化合物はA91ではない。さらに別の態様では化合物はA92ではない。さらに別の態様では化合物はA93ではない。さらに別の態様では化合物はA94ではない。さらに別の態様では化合物はA95ではない。さらに別の態様では化合物はA96ではない。さらに別の態様では化合物はA97ではない。さらに別の態様では化合物はA98ではない。さらに別の態様では化合物はA99ではない。さらに別の態様では化合物はA100ではない。さらに別の態様では化合物はA101ではない。さらに別の態様では化合物はA102ではない。さらに別の態様では化合物はA103ではない。さらに別の態様では化合物はA104ではない。
【００９７】
特定の態様では、発明の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体もしくはジアステレオ異性体は、
2019518048.tif 000014
からなる群より選択される少なくとも1つの化合物である。別の態様では化合物はA105ではない。別の態様では化合物はA106ではない。
【００９８】
特定の態様では、発明の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体もしくはジアステレオ異性体は、
2019518048.tif 000015
である。別の態様では化合物はA107ではない。
【００９９】
特定の態様では、化合物は、
G1またはG-1(rel-1-[4-(6-ブロモ-1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-3aR,4S,5,9bS-テトラヒドロ-3H-シクロペンタ[c]キノリン-8-イル]-エタノン)：
2019518048.tif 000016
CMPD4(rel-1-((3aS,4R,9bR)-5-ベンジル-4-(6-ブロモベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-3a,4,5,9b-テトラヒドロ-3H-シクロペンタ[c]キノリン-8-イル)エタン-1-オン)：
2019518048.tif 000017
CMPD5(rel-1-((3aS,4R,9bR)-4-(2-ブロモフェニル)-3a,4,5,9b-テトラヒドロ-3H-シクロペンタ[c]キノリン-8-イル)エタン-1-オン)：
2019518048.tif 000018
CMPD6(rel-1-((3aS,4R,9bR)-4-(6-ブロモベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-3a,4,5,9b-テトラヒドロ-3H-シクロペンタ[c]キノリン-8-イル)エタン-1-オンオキシム)：
2019518048.tif 000019
CMPD7(rel-1-((3aS,4R,9bR)-4-(2-ブロモ-4,5-ジメトキシフェニル)-3a,4,5,9b-テトラヒドロ-3H-シクロペンタ[c]キノリン-8-イル)エタン-1-オン)：
2019518048.tif 000020
CMPD8(rel-1-((3aS,4R,9bR)-4-(6-クロロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-3a,4,5,9b-テトラヒドロ-3H-シクロペンタ[c]キノリン-8-イル)エタン-1-オン):
2019518048.tif 000021
CMPD9(rel-1-((6R,6aS,7aS,10aR,10bR)-6-(6-ブロモベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-9,9-ジメチル-6,6a,7,7a,10a,10b-ヘキサヒドロ-5H-[1,3]ジオキソロ[4',5':3,4]シクロペンタ[1,2-c]キノリン-2-イル)エタン-1-オン)：
2019518048.tif 000022
CMPD10(rel-1-((1R,2S,3aS,4R,9bR)-4-(6-ブロモベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-1,2-ジヒドロキシ-2,3,3a,4,5,9b-ヘキサヒドロ-1H-シクロペンタ[c]キノリン-8-イル)エタン-1-オン)：
2019518048.tif 000023
CMPD11(rel-1-((3aS,4R,9bR)-4-(2-ブロモ-4,5-ジメトキシフェニル)-2,3,3a,4,5,9b-ヘキサヒドロ-1H-シクロペンタ[c]キノリン-8-イル)エタン-1-オン)：
2019518048.tif 000024
からなる群より選択される少なくとも1つである。
【０１００】
特定の態様では、発明の化合物またはその塩、溶媒化合物、互変異性体、鏡像異性体もしくはジアステレオ異性体は、式(II)の少なくとも1つの化合物であり：
2019518048.tif 000025
(II)中
R1は=Oおよび=N-OHからなる群より選択され；
R2はC1〜C4アルキルであり；
R5はH、ベンジルおよびC1〜C4アルキルからなる群より選択され；
R8およびR9は独立して、HおよびC1〜C4アルコキシからなる群より選択されるか、またはR8およびR9は一緒になって、-OCH2O-、-OCH(CH3)O-および-OC(CH3)2O-からなる群より選択されるジラジカルを形成する
【０１０１】
特定の態様では、式(II)の化合物は、CMPD12(rel-1-((4S,5aS,6R,11aR)-4,5,5a,6,11,11a-ヘキサヒドロ-4,6-メタノ[1,3]ジオキソロ[4',5':5,6]ベンゾ[1,2-c]アクリジン-8-イル)エタン-1-オン)：
2019518048.tif 000026
である。
【０１０２】
特定の態様では、発明の方法において有用な化合物またはその塩、溶媒和物、鏡像異性体もしくはジアステレオ異性体は、米国特許出願公開第2008/0167334号および第2011/0092533号に記載の少なくとも1つのGPERアゴニストであり、それらはすべてそれらの全体において参照により本明細書に組み入れられ：
2019518048.tif 000027
式中
Xは=N-、O、S、またはN-Rであるが、但しXがN-RでありかつRが結合である場合、NはR1と一緒になって、5〜7員の置換されてもよいヘテロ環式基を形成し；
Rは結合、H、-OH、-NO2、置換されてもよいC1〜C6ヒドロカルビル(置換されてもよいアルキルなど)、置換されてもよいアリール、置換されてもよいヘテロアリール、置換されてもよいヘテロ環、置換されてもよい-C(O)-(C1〜C6)アルキル(アミド)、置換されてもよい-C(O)-O-(C1〜C6)アルキル(ウレタン)、置換されてもよい-C(O)-NH(C1〜C6)アルキル(尿素)、置換されてもよい-C(O)-N(C1〜C6)ジアルキル、置換されてもよい-C(O)-NH(アリール)、置換されてもよい-C(O)-N(ジアリール)、置換されてもよい-C(O)-NH(ヘテロアリール)、置換されてもよい-C(O)-N(ジヘテロアリール)、置換されてもよい-C(O)-NH(ヘテロ環)または置換されてもよい-C(O)-Ｎ(ジヘテロ環)であり；
R1、R2およびR5はそれぞれ独立して、H、-OH、-NO2、ハロゲン、C1〜C6置換されてもよいカルボン酸基、置換されてもよいO-(C1〜C6)アルキル、置換されてもよいC1〜C6ヒドロカルビル、置換されてもよいアリール、置換されてもよいヘテロアリール、置換されてもよいヘテロ環、置換されてもよい-C(O)-(C1〜C6)アルキル(ケトン)、置換されてもよい-C(O)-O-(C1〜C6)アルキル(エステル)、置換されてもよいO-C(O)-(C1〜C6)アルキル(エステル)、置換されてもよい-C(O)-NH(C1〜C6)アルキル(尿素)、置換されてもよい-C(O)-N(C1〜C6)ジアルキル、置換されてもよい-C(O)-NH(アリール)、置換されてもよい-C(O)-N(ジアリール)、置換されてもよい-C(O)-NH(ヘテロアリール)、置換されてもよい-C(O)-N(ジヘテロアリール)、置換されてもよい-C(O)-NH(ヘテロ環)または置換されてもよい-C(O)-N(ジヘテロ環)より選択され；
R3およびR4はそれぞれ独立して、H、-OH、-NO2、ハロゲン、C1〜C6置換されてもよいカルボン酸基、置換されてもよいO-(C1〜C6)アルキル、置換されてもよいC1〜C6ヒドロカルビル、置換されてもよいアリール、置換されてもよいヘテロアリール、置換されてもよいヘテロ環、置換されてもよい-C(O)-(C1〜C6)アルキル(ケトン)、置換されてもよい-C(O)-O-(C1〜C6)アルキル(エステル)、置換されてもよいO-C(O)-(C1〜C6)アルキル(エステル)、置換されてもよい-C(O)-NH(C1〜C6)アルキル(尿素)、置換されてもよい-C(O)-N(C1〜C6)ジアルキル、置換されてもよい-C(O)-NH(アリール)、置換されてもよい-C(O)-N(ジアリール)、置換されてもよい-C(O)-NH(ヘテロアリール)、置換されてもよい-C(O)-N(ジヘテロアリール)、置換されてもよい-C(O)-NH(ヘテロ環)もしくは置換されてもよい-C(O)-N(ジヘテロアリール)より選択されるか、またはR3およびR4は一緒になって、5または6員の置換されてもよい炭素環(飽和であっても不飽和でもよい)、置換されてもよいアリール、置換されてもよいヘテロアリールもしくは置換されてもよいヘテロ環基を形成し；
R6およびR7はそれぞれ独立して、存在しないかまたはH、-OH、-NO2、ハロゲン、C1〜C6置換されてもよいカルボン酸基、置換されてもよいO-(C1〜C6)アルキル、置換されてもよいC1〜C6ヒドロカルビル、置換されてもよいアリール、置換されてもよいヘテロアリール、置換されてもよいヘテロ環、置換されてもよい-C(O)-(C1〜C6)アルキル(ケトン)、置換されてもよい-C(O)-O-(C1〜C6)アルキル(エステル)、置換されてもよいO-C(O)-(C1〜C6)アルキル(エステル)、置換されてもよい-C(O)-NH(C1〜C6)アルキル(尿素)、置換されてもよい-C(O)-N(C1〜C6)ジアルキル、置換されてもよい-C(O)-NH(アリール)、置換されてもよい-C(O)-N(ジアリール)、置換されてもよい-C(O)-NH(ヘテロアリール)、置換されてもよい-C(O)-N(ジヘテロアリール)、置換されてもよい-C(O)-NH(ヘテロ環)もしくは置換されてもよい-C(O)-N(ジヘテロアリール)であるか、またはR6およびR7は一緒になって、4、5、6もしくは7員の置換されてもよい炭素環(飽和であっても不飽和でもよい)、置換されてもよいアリール、置換されてもよいヘテロアリールもしくは置換されてもよいヘテロ環基を形成するか、または5〜9員の置換されてもよい炭素環式またはヘテロ環式二環式基を形成するが、但しR7'およびR7''の両方が存在しない場合はR7が存在し；
R6'は存在しないか、H、C1〜C6置換されてもよいヒドロカルビル基(H、CH3またはCH2CH3など)またはR6と一緒になって=Oを形成し；
R7'は存在しないか、H、置換されてもよいヒドロカルビル基(H、CH3またはCH2CH3など)またはR7と一緒になって=Oを形成し；
R7''は存在しないか、H、-OH、ハロゲン、置換されてもよいO-(C1〜C6)アルキル、置換されてもよいC1〜C6ヒドロカルビル、置換されてもよいアリール、置換されてもよいヘテロアリール、置換されてもよいヘテロ環、置換されてもよい-C(O)-(C1〜C6)アルキル(ケトン)、置換されてもよい-C(O)-O-(C1〜C6)アルキル(エステル)、置換されてもよいO-C(O)-(C1〜C6)アルキル(エステル)、置換されてもよい-C(O)-NH(C1〜C6)アルキル(尿素)、置換されてもよい-C(O)-N(C1〜C6)ジアルキル、置換されてもよい-C(O)-NH(アリール)、置換されてもよい-C(O)-N(ジアリール)、置換されてもよい-C(O)-NH(ヘテロアリール)、置換されてもよい-C(O)-N(ジヘテロアリール)、置換されてもよい-C(O)-NH(ヘテロ環)または置換されてもよい-C(O)-N(ジヘテロアリール)であり；
R8'は存在しない(R8'が繋がった炭素およびR6が繋がった炭素が任意の二重結合を形成する場合)か、H、CH3またはCH2CH3であり；
R10、R11、R12およびR13はそれぞれ独立して、H、-OH、-NO2、ハロゲン、C1〜C6置換されてもよいカルボン酸基、置換されてもよいO-(C1〜C6)アルキル、置換されてもよいC1〜C6ヒドロカルビル、置換されてもよいアリール、置換されてもよいヘテロアリール、置換されてもよいヘテロ環、置換されてもよい-C(O)-(C1〜C6)アルキル(ケトン)、置換されてもよい-C(O)-O-(C1〜C6)アルキル(エステル)、置換されてもよいO-C(O)-(C1〜C6)アルキル(エステル)、置換されてもよい-C(O)-NH(C1〜C6)アルキル(尿素)、置換されてもよい-C(O)-N(C1〜C6)ジアルキル、置換されてもよい-C(O)-NH(アリール)、置換されてもよい-C(O)-N(ジアリール)、置換されてもよい-C(O)-NH(ヘテロアリール)、置換されてもよい-C(O)-N(ジヘテロアリール)、置換されてもよい-C(O)-NH(ヘテロ環)または置換されてもよい-C(O)-N(ジヘテロアリール)であり；
R14はH、-OH、-NO2、ハロゲン、C1〜C6置換されてもよいカルボン酸基、置換されてもよいO-(C1〜C6)アルキル、置換されてもよいC1〜C6ヒドロカルビル、置換されてもよいアリール、置換されてもよいヘテロアリール、置換されてもよいヘテロ環、置換されてもよい-C(O)-(C1〜C6)アルキル(ケトン)、置換されてもよい-C(O)-O-(C1〜C6)アルキル(エステル)、置換されてもよいO-C(O)-(C1〜C6)アルキル(エステル)、置換されてもよい-C(O)-NH(C1〜C6)アルキル(尿素)、置換されてもよい-C(O)-N(C1〜C6)ジアルキル、置換されてもよい-C(O)-NH(アリール)、置換されてもよい-C(O)-N(ジアリール)、置換されてもよい-C(O)-NH(ヘテロアリール)、置換されてもよい-C(O)-N(ジヘテロアリール)、置換されてもよい-C(O)-NH(ヘテロ環)もしくは置換されてもよい-C(O)-N(ジヘテロ環)であるか、またはR7が繋がった炭素と一緒になって、5、6もしくは7員の置換されてもよい炭素環(飽和であっても不飽和でもよい)、置換されてもよいアリール、置換されてもよいヘテロアリールもしくは置換されてもよいヘテロ環基を形成し；
Yはnが0、1または2である置換されてもよい(CH2)n基、置換されてもよい=CH-基、C=O基、O、S、置換されてもよいN-(C1〜C6)アルキル、置換されてもよいN-アリール、置換されてもよいN-ヘテロアリール、置換されてもよいN-ヘテロ環、置換されてもよいN-C(O)-(C1〜C6)アルキル、置換されてもよいN-C(O)-アリール、置換されてもよいN-C(O)-ヘテロアリール、置換されてもよいN-C(O)-ヘテロ環であり；
Zはnが1または2である置換されてもよい(CH2)n基、置換されてもよい=CH-基、C=O基、O、S、置換されてもよいN-(C1〜C6)アルキル、置換されてもよいN-アリール、置換されてもよいN-ヘテロアリール、置換されてもよいN-ヘテロ環、置換されてもよいN-C(O)-(C1〜C6)アルキル、置換されてもよいN-C(O)-アリール、置換されてもよいN-C(O)-ヘテロアリール、置換されてもよいN-C(O)-ヘテロ環である。
【０１０３】
特定の態様では、発明の化合物またはその塩、溶媒和物、鏡像異性体もしくはジアステレオ異性体は、PCT特許出願第WO2016/014847号に記載の少なくとも1つのGPERアゴニストであり、これはその全体において参照により本明細書に組み入れられ：
2019518048.tif 000028
(i)〜(iv)中
環AはN、O、またはSなどの1つまたは複数のヘテロ原子を含有する芳香族またはヘテロ芳香族の5または6員環であり；
R1は独立して、SO2NH2、SO2NRaRb、COOH、CONH2およびCONRaRb、およびHより選択される。R1では、RaおよびRbは各出現時に独立して、H、アルキル(C1〜C6)、アルケニル(C2〜C6)、アルキニル(C2〜C6)、アルコキシ(C2〜C6)、シクロアルキル(C3〜C7)、アルキルチオ、アルキルアリール、ならびに芳香族およびヘテロ芳香族環より選択される。芳香環およびヘテロ芳香環は電子求引性および供与性の基でさらに置換することができる。RaおよびRbは1つまたは複数のヘテロ原子を任意で含有する環式環(C3〜C7)または芳香族環を形成することができる。そのような芳香環はハロゲン、-COOH、-CN、-NO2などの電子吸引基またはアルキル基などの電子供与基でさらに置換することができ；
R2はH、ハロゲンまたはN、OもしくはSなどのヘテロ原子であり；
環Aは芳香族またはヘテロ芳香族環(5または6員)であり；
環Bは示された位置にNを含有する6員の飽和または芳香環である。環Bの窒素は任意でアルキル、アリール、またはアルカリール置換基で置換することができ；
環Cは、独立して、置換されたかもしくは非置換の炭素環、二環式環、芳香環、縮合芳香環、またはヘテロ芳香環である。さらに、炭素環式環である場合には、これは1つまたは複数の二重結合と1つまたは複数のN、O、またはSなどのヘテロ原子を含有してもよい。これはまたα-β不飽和ケトン官能基を有してもよく；
R3は独立して、H、ハロゲン、-OH、CN、(C1〜C6)アルキル、(C2〜C6)アルケニル、(C2〜C6)アルキニル、(C1〜C6)アルコキシ、(C3〜C7)シクロアルキル、(C1〜C6)アルキルチオ、NRaRb、RaRbまたはハロアルキル(例を挙げると、CF3)より選択される。R3では、RaおよびRbは各出現時に独立して、水素もしくはC1〜C6)アルキルであるか、またはRaおよびRbは３〜7個の環原子を含有する飽和もしくは不飽和ヘテロ環を形成し、この環はN、O、およびSより選択されるもう1つのヘテロ原子を任意で含有してもよく、(C1〜C4)アルキル、フェニル、およびベンジルより選択される同じまたは異なってもよい1〜3個の基で任意で置換されてもよく；mは1〜4であり；
環BおよびCは特定の態様ではシス縮合され；
環DおよびBは直接接続されているかまたはスペーサー(C1〜C2)を介して接続されている。直接接続されている場合、それらは環BおよびCの縮合に対してシスまたはトランスであることができる。環DはN、O、またはSなどの1つまたは複数のヘテロ原子を含有する芳香族またはヘテロ芳香族環である。これは独立して選択されるR5およびR6基で、または-R6R5もしくはR5R6で任意で置換することができ；
R5は独立して、H、ハロゲン、電子供与基、および電子吸引基、例えば、アルキル、ハロアルキル、アルコキシ、-NO2、-SF5、-CNなどより選択され；
R6はNHC(O)ORc、OC(O)NHRc、C(O)O(CH2)nRc、OC(O)(CH2)nRc、C(O)NHRc、またはNHC(O)Rcであることができ、ここでn=0〜4であるか；またはR6はアルキル、分岐アルキル(C1〜C10)、アルキニル(C1〜C10)、炭素環、アルケニル(C1〜C10)、ハロゲン、CN、COOH、CONH2、-OH、もしくはNH2であることができる。Rcはアルキル、分岐アルキル(C1〜C10)、アルコキシ、アルキルアミノ、アシル、アルキニル(C1〜C8)またはアルケニル(C1〜C6)である。R6はX(CH2)n-Eであることもでき、ここでXはNH、O、S、C≡C、またはHC=CHであり、n=0〜2であり、Eは、独立して、置換されたかまたは非置換の炭素環式環、二環式環、芳香環、縮合芳香環またはヘテロ芳香環であり；
特定の態様では、R1はカルボキシル、カルボキサミド、カルボキシアルキル、カルボキシアリール、シアノ、ニトロ、ヒドロキシル、スルホニル、スルホンアミド、アルキルスルホンアミド、アリールスルホンアミド、アルキルスルホニル、アラルキルスルホンアミド、トリフルオロメチルスルホンアミド、トリフルオロメチルスルホニルカルボキサミド、およびスルホニルカルバミドからなる群より選択される。特定の態様では、R1はスルホンアミド、アルキルスルホンアミド、またはアリールスルホンアミドである。R2はN、O、およびSより選択される1または2個のヘテロ原子を任意で含有する3、4、5、または6員の飽和または芳香族炭素環または環系であることができ、環または環系はシアノ、ハロ、アシル、アシルオキシ、アルキル、アルコキシ、ヘテロアルキル、アルキルエステル、アルキルアミド、アルキルアミノ、アリール、アリールオキシ、アリールアルキル、アリールエステル、アジド、アルキルハロ、アルケニル、アルキニル、アルキルエーテル、ニトロ、チオハロ、およびチオシアノからなる群より選択される1つまたは複数の置換基で置換されてもよい。R3はHまたは、1つもしくは複数のシアノ、ニトロ、およびN、OもしくはSを含有する1つもしくは複数の芳香族もしくはヘテロ芳香族基で置換されてもよいC1〜C5アルキルもしくはシクロアルキル基であることができる。AおよびDは独立して、CH、CH2、N、およびOより選択することができ、それらを繋ぐ結合は選択された原子に関して適切な単結合または二重結合である。X、Y、およびZは独立して、無原子(すなわち、それらは存在しない)、CH、C-ハロゲン、N、O、およびSより選択され；
特定の態様では、R2は-RdReRfによってかまたは-RdCOReRfによって表される置換基であり、ここでRd、Re、およびRfはN、O、およびSより選択される1または2個のヘテロ原子を任意で含有する3、4、5、または6員の飽和または芳香族炭素環または環系であり、環または環系はシアノ、ハロ、アシル、アシルオキシ、アルキル、アルコキシ、ヘテロアルキル、アルキルエステル、アルキルアミド、アルキルアミノ、アリール、アリールオキシ、アリールアルキル、アリールエステル、アジド、アルキルハロ、アルケニル、アルキニル、アルキルエーテル、ニトロ、チオハロ、およびチオシアノからなる群より選択される1つまたは複数の置換基で置換されてもよい。
【０１０４】
発明の化合物は、本明細書において記載される方法、当技術分野で公知の方法、および/または非限定的にはPCT出願公開第WO2004/072046号および第WO2016/014847号；米国特許出願第10/511,083号；米国特許出願公開第US2008/0167334号およびUS2011/0092533号；ならびにBurai, et al., 2010, Org. & Biomol. Chem. 8:2252-2259などの特定の文献に記載の方法に従って調製してもよく、それらはすべてそれらの全体において参照により組み入れられる。
【０１０５】
発明の化合物は1つまたは複数の立体中心を持つことがあり、各立体中心は独立して、(R)または(S)配置のいずれかで存在してもよい。特定の態様では、本明細書において記載される化合物は光学活性形態またはラセミ形態で存在する。本明細書において記載される化合物は本明細書において記載される治療上有用な特性を持つラセミ、光学活性、位置異性体および立体異性体形態、またはこれらの組み合わせを包含する。光学活性形態の調製は非限定的な例としては再結晶化技術によるラセミ形態の分割、光学活性出発物質からの合成、キラル合成、またはキラル固定相を用いたクロマトグラフィー分離を含む任意の好適な様式で達成される。ラセミの式によって本明細書において図示される化合物は2つの鏡像異性体のいずれかもしくはそれらの混合物、または2つ以上のキラル中心が存在する場合にはすべてのジアステレオマーもしくはそれらの混合物を表す。
【０１０６】
特定の態様では、発明の化合物は互変異性体として存在する。すべての互変異性体が本明細書において記される化合物の範囲内に含まれる。
【０１０７】
本明細書において記載される化合物は、1つまたは複数の原子が、同じ原子番号を有するが自然界で通常は見られる原子質量または質量数とは異なる原子質量または質量数を有する原子と置き換えられた同位体標識化合物も含む。本明細書において記載される化合物への挿入に適した同位体の例は2H、3H、11C、13C、14C、36Cl、18F、123I、125I、13N、15N、15O、17O、18O、32P、および35Sを非限定的に含む。特定の態様では、重水素などのより重い同位体との置換がより大きな化学的安定性をもたらす。同位体標識化合物は任意の好適な方法によるか、または適切な同位体標識試薬を、これを用いないのであれば採用される非標識試薬の代わりに用いたプロセスによって調製される。
【０１０８】
特定の態様では、本明細書において記載される化合物は、発色団もしくは蛍光部分、生物発光標識、または化学発光標識の使用を非限定的に含む別の手段によって標識される。
【０１０９】
本明細書において提供される態様のすべてにおいて、好適な任意の置換基の例は、特許請求される発明の範囲を限定することを意図していない。発明の化合物は、本明細書において提供されるあらゆる置換基または置換基の組み合わせを含有してもよい。
【０１１０】
特定の態様では、発明は、少なくとも1つの発明の化合物と少なくとも1つの薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物をさらに提供する。別の態様では、薬学的組成物は、吸入、経口、直腸、経膣、非経口、局所、経皮、経肺、鼻腔内、頬側、眼内、髄腔内、頭蓋内、または静脈内投与向けに製剤化される。発明において企図される化合物のあらゆる製剤が、非限定的にはメラノーマなどのGPCR発現（GPER発現など）および/またはMyc発現がんを治療するかまたは予防するために用いられてもよい。
【０１１１】
特定の態様では、発明の医薬組成物は、少なくとも1つの追加の抗がん剤と少なくとも1つの発明の化合物とを含む。追加の抗がん剤の例は、化学療法および免疫チェックポイント阻害剤を非限定的に含む。化学療法の非限定的な例は、HDAC、テモゾロミド、ダカルバジン(DTIC)、ベムラフェニブ、ダブラフェニブおよびトラメチニブを非限定的に含む。チェックポイント阻害剤の非限定的な例は、PD-1阻害剤(すなわち、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、抗PD-1)、PD-L1阻害剤(すなわちアテゾリズマブ、抗-PD-L1)、CTLA-4阻害剤(すなわち、イピリムマブ、抗-B7-1/B7-2、抗CTLA-4)、インドールアミン(2,3)-ジオキシゲナーゼ(IDO1/2)阻害剤、B7ホモログ3(B7-H3)阻害剤、リンパ球活性化遺伝子3(LAG3)阻害剤、およびTIGIT(IgおよびITIMドメインを持つT細胞免疫受容体)標的抗体および薬剤を非限定的に含む。
【０１１２】
本発明は、本明細書において記載される発明の方法のうちのいずれかの範囲内で有用なキットにも関する。そのようなキットは、例えばヒトなどの対象における非限定的にはメラノーマなどのGPCR発現(GPER発現など)および/またはMyc発現がんを治療するかまたは予防するための組成物および方法を含む、本明細書において記載される方法のいずれかで有用な成分と、本明細書のどこかに記載される発明の態様のいずれかの成分を収容するための1つまたは複数の容器(例を挙げると、試験管、細胞培養皿、細胞培養プレート、細胞培養フラスコ、細胞培養バッグ)と、説明資料とを含む。
【０１１３】
塩
本明細書において記載される化合物は、酸または塩基と塩を形成してもよく、そのような塩は本発明に含まれる。「塩」という用語は、発明の方法における有用な遊離酸または塩基の付加塩を包含する。「薬学的に許容される塩」という用語は、薬学的用途において有用性をもたらす範囲内の毒性プロファイルを持つ塩を指す。特定の態様では、塩は薬学的に許容される塩である。薬学的に許容されない塩は、それでもなお、高い結晶性などの特性を有することがあり、本発明を実施する上での有用性、例えば、発明の方法において有用な化合物の合成、精製または配合のプロセスにおいて有用性を有する。
【０１１４】
好適な薬学的に許容される酸付加塩は、無機酸からまたは有機酸から調製されてもよい。無機酸の例は、硫酸塩(sulfate)、硫酸水素塩(hydrogen sulfate)、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硝酸、炭酸、硫酸、およびリン酸(リン酸水素およびリン酸二水素を含む)を含む。適切な有機酸は脂肪酸、脂環式酸、芳香族酸、芳香脂肪酸、ヘテロ環式酸、カルボン酸およびスルホン酸クラスの有機酸より選択されてもよく、これらの例は、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、グルコン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、グルクロン酸、マレイン酸、フマル酸、ピルビン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、安息香酸、アントラニル酸、4-ヒドロキシ安息香酸、フェニル酢酸、マンデル酸、エンボン酸(すなわちパモ酸)、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、パントテン酸、スルファニル酸、2-ヒドロキシエタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、p-トルエンスルホン酸、シクロへキシルアミノスルホン酸、ステアリン酸、アルギン酸、β-ヒドロキシ酪酸、サリチル酸、ガラクタル酸、ガラクツロン酸、グリセロホスホン酸およびサッカリン(例を挙げると、サッカリネート、サッカレート)を含む。塩は、発明の任意の化合物に対して1モル当量未満の、1モル当量の、または1モル当量を超える酸または塩基を含んでもよい。
【０１１５】
発明の化合物の好適な薬学的に許容される塩基付加塩は、例えば、アンモニウム塩ならびに、アルカリ金属、アルカリ土類金属および遷移金属の塩、例えば、カルシウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウムおよび亜鉛の塩などを含む金属塩を含む。薬学的に許容される塩基付加塩は、塩基性アミン、例えば、N,N'-ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグルミン(すなわちN-メチルグルカミン)およびプロカインなどから作製される有機塩も含む。これらの塩はすべて、例えば、適切な酸または塩基を化合物と反応させることによって対応する化合物から調製してもよい。
【０１１６】
方法
本発明は、対象における非限定的にはメラノーマ、膵臓がん、および/または肺がんなど(非限定的には非小細胞肺がんなど)のGPCR発現(GPER発現など)および/またはMyc発現がんを治療するかまたは予防する方法を提供する。特定の態様では、方法は、細胞の分化を増加させる治療有効量のエストロゲンおよび/またはGPCRアゴニストをそれを必要とする対象に投与する工程を含み、これによって対象におけるGPCR発現(GPER発現など)および/またはMyc発現がんが治療されるかまたは予防される。
【０１１７】
特定の態様では、GPCRはGPERである。別の態様では、GPERアゴニストはG-1を含む。特定の態様では、GPERアゴニストはエストラジオール(E2)、タモキシフェン、フルベストラント、およびラロキシフェン(6-ヒドロキシ-2-(4-ヒドロキシフェニル)-ベンゾチオフェン-3-イル]-[4-[2-(1-ピペリジル)エトキシ]フェニル]-メタノンとしても公知である)からなる群より選択される。
【０１１８】
特定の態様では、前記エストロゲンは、天然のホルモンであるエストロゲンの効果を模倣する天然または合成の任意の物質である。発明において企図されるエストロゲンの例は、エストロン(E1)、エストラジオール(E2)、エストリオール(E3)、エステトロール(E4)、17β-エストラジオール、27-ヒドロキシコレステロール、デヒドロエピアンドロステロン(DHEA)、7-オキソ-DHEA、7α-ヒドロキシ-DHEA、16α-ヒドロキシ-DHEA、7β-ヒドロキシエピアンドロステロン、Δ4-アンドロステンジオン、Δ5-アンドロステンジオール、3α-アンドロスタンジオール、3β-アンドロスタンジオール、2-ヒドロキシエストロン、16-ヒドロキシエストロン、シピオン酸エストラジオール、吉草酸エストラジオール、酢酸エストラジオール、安息香酸エストラジオール、エチニルエストラジオール(EE)、メストラノール、モキセストロール、キネストロール、ジエチルスチルベストロールベンゼストロール、ジエネストロール、酢酸ジエネストロール、ジプロピオン酸ジエチルスチルベストロール、ホスフェストロール、ヘキセストロール、ジプロピオン酸メテストロール、外因性エストロゲン、植物エストロゲン、および/または菌類エストロゲンを非限定的に含む。
【０１１９】
特定の態様では、エストロゲンおよび/またはGPCRアゴニストは少なくとも1つの薬学的に許容される担体をさらに含む薬学的組成物として対象に投与される。
【０１２０】
特定の態様では、対象は少なくとも1つの抗がん治療がさらに行なわれる。抗がん治療の例は化学療法、放射線療法、手術、および/または免疫チェックポイント阻害剤を非限定的に含む。化学療法の例はHDAC、テモゾロミド、ダカルバジン(DTIC)、ベムラフェニブ、ダブラフェニブおよびトラメチニブを非限定的に含む。免疫チェックポイント阻害剤の例はPD-1阻害剤(すなわち、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、抗PD-1)、PD-L1阻害剤(すなわちアテゾリズマブ、抗-PD-L1)、CTLA-4阻害剤(すなわち、イピリムマブ、抗-B7-1/B7-2、抗CTLA-4)、インドールアミン(2,3)-ジオキシゲナーゼ(IDO1/2)阻害剤、B7ホモログ3(B7-H3)阻害剤、リンパ球活性化遺伝子3(LAG3)阻害剤、およびTIGIT(IgおよびITIMドメインを持つT細胞免疫受容体)標的抗体および薬剤を非限定的に含む。別の態様では、化学療法または免疫チェックポイント阻害剤はエストロゲンまたはGPCRアゴニストと同時投与されるかまたは同時製剤化される。
【０１２１】
特定の態様では、エストロゲンまたはGPCRアゴニストは、吸入、経口、直腸、経膣、非経口、局所、経皮、経肺、鼻腔内、頬側、眼内、髄腔内、頭蓋内、または静脈内という投与経路によって対象に投与される。別の態様では、エストロゲンまたはGPCRアゴニストは、対象に投与される唯一の抗がん剤である。さらに別の態様では、エストロゲンまたはGPCRアゴニストは、対象におけるがんを治療するかまたは予防するために十分な量で対象に投与される唯一の抗がん剤である。
【０１２２】
特定の態様では、がんは乳がんである。別の態様では、がんは乳がんではない。さらに別の態様では、がんは卵巣がんである。さらに別の態様では、がんは卵巣がんではない。さらに別の態様では、がんは前立腺がんである。さらに別の態様では、がんは前立腺がんではない。さらに別の態様では、がんは去勢抵抗性前立腺がん(CRPC)である。さらに別の態様では、がんはCRPCではない。さらに別の態様では、がんは子宮内膜がんである。さらに別の態様では、がんは子宮内膜がんではない。さらに別の態様では、対象は哺乳類である。さらに別の態様では、哺乳類はヒトである。
【０１２３】
発明は、エストロゲンおよび/またはGPCRアゴニスト(選択的GPCRアゴニストなど)による治療から恩恵を受けるであろう、がんを患っている患者を選択する方法をさらに提供する。方法は、対象のがんから試料を得る工程、および試料からの少なくとも1つのがん細胞がGPERおよび/または別のGPCRを発現するかどうかを決定する工程を含む。試料中のGPERおよび/または別のGPCRの検出および/または定量は、本明細書において記載される方法のいずれかまたは当技術分野で公知の任意の方法を用いて行うことができる。特定の態様では、がん細胞がGPERおよび/または別のGPCRを発現していれば、次いで対象はエストロゲンおよび/または選択的GPERアゴニストおよび/または別のGPCRアゴニストを任意で少なくとも1つの免疫療法剤および/またはHDAC阻害剤と組み合わせて含むがん治療を受けるように助言される。別の態様では、がん細胞がGPERおよび/または別のGPCRを発現していれば、次いで対象にはエストロゲンおよび/または選択的GPERアゴニストおよび/または別のGPCRアゴニストを任意で少なくとも1つの免疫療法剤および/またはHDAC阻害剤と組み合わせて含むがん治療が施される。別の態様では、がん細胞がGPERおよび/または別のGPCRを発現していないのであれば、対象はエストロゲンおよび/または選択的GPERアゴニストおよび/または別のGPCRアゴニストを任意で少なくとも1つの免疫療法剤および/またはHDAC阻害剤と組み合わせて含むがん治療を受けないように助言される。さらに別の態様では、がん細胞がGPERを発現していないのであれば、対象はエストロゲンおよび/または選択的GPERアゴニストおよび/または別のGPCRアゴニストを任意で少なくとも1つの免疫療法剤および/またはHDAC阻害剤と組み合わせて含むがん治療が行われない。
【０１２４】
製剤/投与
発明の薬学的組成物における活性成分、薬学的に許容される担体、および任意のさらなる成分の相対的な量は、治療される対象の属性、大きさ、および状態に応じて異なるであろう。例としては、組成物は活性剤を約0.005%〜約100%(w/w)またはその任意の分数もしくは倍数で含んでもよい。
【０１２５】
特定の態様では、発明の方法を実施するために有用な薬学的組成物は、1ng/kg/日〜100mg/kg/日との間、例えば1〜50mg/kg/日などの用量を送達するように投与されてもよい。別の態様では、発明を実施するために有用な薬学的組成物は、1ng/kg/日〜1,000mg/kg/日との間の用量を送達するように投与されてもよい。
【０１２６】
発明において企図される化合物を含む組成物は、1日に数回程度の頻度で哺乳類に投与することができるか、またはより少ない頻度、例えば、1日に1回、1週間に1回、2週間に1回、1ヶ月に1回、またはさらに少ない頻度、例えば、数ヶ月毎に1回または1年に1回以下投与してもよい。
【０１２７】
1日に投薬される化合物の量は、非限定的な例では毎日、隔日、2日毎、3日毎、4日毎、または5日毎に投与されてもよいと理解される。例えば、隔日投与では、月曜日に1日当たり0.5〜5mgの用量が開始され、水曜日に最初の1日当たり0.5〜5mgの後続用量が投与され、金曜日に2回目の1日当たり0.5〜5mgの用量が投与されるという具合であってもよい。投与の頻度は当業者には容易に明らかであり、非限定的には治療されている疾患の種類および重症度、動物の種類および年齢などの任意の数の要因に応じて異なるであろう。
【０１２８】
本明細書において提供される薬学的組成物の説明は主にヒトへの倫理的投与に適した薬学的組成物を指向しているが、当業者であればそのような組成物はあらゆる種類の動物への投与に通常は適していることを理解するであろう。薬学的組成物を様々な動物への投与に適したものにするためのヒトへの投与に適した薬学的組成物の改変は十分に理解されており、通常の技術を有する獣医薬理学者であれば、もし行われるのであれば単なる通常の実験のみでそのような改変を設計しかつ実施し得る。発明の薬学的組成物の投与が企図される対象はヒトおよび他の霊長類、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ネコ、およびイヌなどの商業目的の哺乳類を含む哺乳類を非限定的に含む。
【０１２９】
特定の態様では、発明において企図される化合物を含む組成物は、1つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤または担体を用いて製剤化される。特定の態様では、発明の薬学的組成物は治療有効量の発明において企図される少なくとも1つの化合物と薬学的に許容される担体とを含む。有用である薬学的に許容される担体は、グリセロール、水、食塩水、エタノール、ならびにリン酸塩および有機酸の塩などの他の薬学的に許容される塩溶液を非限定的に含む。これらおよび他の薬学的に許容される担体の例はRemington's Pharmaceutical Sciences (1991, Mack Publication Co., New Jersey)に記載されている。
【０１３０】
製剤は従来の賦形剤、すなわち、経口、非経口、経鼻、静脈内、皮下、経腸、または当技術分野で公知の任意の他の好適な投与方式に適した薬学的に許容される有機または無機担体物質と混合して採用されてもよい。特定の態様では、投与は局所投与を含む。薬学的調製物は滅菌され、所望であれば助剤、例を挙げると、滑沢剤、防腐剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響を与えるための塩、緩衝剤、着色、香味および/または芳香物質などと混合してもよい。それらは所望の場合には他の活性剤、例を挙げると、他の鎮痛剤と組み合わせてもよい。
【０１３１】
本明細書において用いるように、「追加の成分」とは以下のうちの1つまたは複数を非限定的に含む：賦形剤；界面活性剤；分散剤；不活性希釈剤；造粒および崩壊剤；結合剤；滑沢剤；甘味剤；香味剤；着色剤；防腐剤；ゼラチンなどの生理的に分解可能な組成物；水性のビヒクルおよび溶媒；油性のビヒクルおよび溶媒；懸濁剤；分散または湿潤剤；乳化剤、粘滑剤；緩衝剤；塩；増粘剤；充填剤；乳化剤；酸化防止剤；抗生剤；抗真菌剤；安定剤；および薬学的に許容される高分子性または疎水性材料。発明の薬学的組成物に含まれてもよい他の「追加の成分」は当技術分野において公知であり、例えば、参照により本明細書に組み入れられるGenaro, ed.(1985, Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA)に記載されている。
【０１３２】
局所投与
医薬品の局所投与に対する障害物は表皮の角質層である。角質はタンパク質、コレステロール、スフィンゴ脂質、遊離脂肪酸および様々な他の脂質からなる抵抗性が高い層であり、角化細胞および生細胞を含む。角質を通る化合物の浸透速度(フラックス)を制限する要因の1つは皮膚表面上に塗布または適用し得る活性物質の量である。皮膚の単位面積当たりに適用される活性物質の量が多いほど、皮膚表面と皮膚の下層との間の濃度勾配は大きくなり、今度は皮膚を通る活性物質の拡散力が大きくなる。そのため活性物質をより高濃度で含有する製剤は、他の条件が同じであれば、濃度が低い製剤よりも皮膚を通して活性物質が浸透する可能性がより高くなり、より多ければより一貫した速度になる。
【０１３３】
局所投与に適した製剤は、塗布薬、ローション、水中油型または油中水型エマルジョン、例えば、クリーム、軟膏またはペースト、および溶液または懸濁液などの液体または半液体調製物を非限定的に含む。そのような製剤は、皮膚に直接またはスワブ、アプリケーター、へらなどの使用を介してや経皮パッチの形態で塗布することができる。特定の態様では、パッチは、皮膚の洗浄、摩擦、引っ掻きおよび/または擦りによる医薬品の喪失を最小限に抑える。別の態様では、パッチは、医薬品に対する皮膚の曝露を最小限に抑えつつ皮膚を介した医薬品の吸収を増加させる。
【０１３４】
浸透促進剤を用いてもよい。これらの物質は皮膚を通過する薬物の浸透速度を高める。当技術分野における典型的な促進剤は、エタノール、モノラウリン酸グリセロール、PGML(モノラウリン酸ポリエチレングリコール)、ジメチルスルホキシドなどを含む。他の促進剤は、オレイン酸、オレイルアルコール、エトキシジグリコール、ラウロカプラム、アルカンカルボン酸、ジメチルスルホキシド、極性脂質、またはN-メチル-2-ピロリドンを含む。発明の組成物のいくつかの局所送達用の1つの許容されるビヒクルは、リポソームを含有してもよい。リポソームの組成およびそれらの使用は当技術分野において公知である(例えば、米国特許第6,323,219号)。
【０１３５】
非経口投与
本明細書において用いるように、薬学的組成物の「非経口投与」は、対象の組織の物理的な切り込み(breaching)と、切り込み部を通じた組織内への薬学的組成物の投与とを特徴とするあらゆる投与経路を含む。よって非経口投与は、組成物の注射によるか、外科的切開部を通した組成物の適用によるか、組織を貫通した非外科的創傷を通した組成物の適用によるかなどの薬学的組成物の投与を非限定的に含む。特に、非経口投与は、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内、胸骨内注射、および腎臓透析注入技術を非限定的に含むことが企図される。
【０１３６】
制御放出製剤および薬物送達システム
特定の態様では、本発明の製剤は、非限定的には、短期放出製剤、急速作用消失(rapid-offset)製剤や、制御放出製剤、例えば、持続放出製剤、遅延放出製剤およびパルス放出製剤であってもよい。
【０１３７】
持続放出という用語は、長期間にわたる薬物の漸進的な放出を提供し、必ずということではないが長期間にわたる薬物の実質的に一定の血中濃度をもたらすことがある薬物製剤を指すようその従来の意味で用いられる。期間は長くて1ヶ月またはそれ以上であってもよく、ボーラス形態で同じ量の薬剤が投与されるよりも長い放出となるべきである。
【０１３８】
持続放出のためには、化合物は、化合物に持続放出特性を提供する好適な高分子または疎水性材料と製剤化されてもよい。そのため、発明の方法の範囲内で有用な化合物は微粒子の形態で、例えば注射によって、またはウエハもしくはディスクの形態で埋め込みによって投与されてもよい。
【０１３９】
発明の1つの態様では、発明の化合物は持続放出製剤を用いて単独でまたは他の医薬品と組み合わせて患者に投与される。
【０１４０】
遅延放出という用語は、本明細書においては、薬物投与に続いてある程度の遅延後に薬物の初期放出を提供し、必ずしもというわけではないが約10分〜最大で約12時間までの遅延を含むことがある薬物製剤を指すようその従来の意味で用いられる。
【０１４１】
パルス放出という用語は、本明細書においては、薬物投与後に薬物のパルス状の血漿プロファイルを生成するような様式で薬物の放出を提供する薬物製剤を指すようにその従来の意味で用いられる。
【０１４２】
即時放出という用語は、薬物投与直後に薬物の放出を提供する薬物製剤を指すようにその従来の意味で用いられる。
【０１４３】
本明細書において用いるように、短期とは、薬物投与後の約8時間、約7時間、約6時間、約5時間、約4時間、約3時間、約2時間、約1時間、約40分、約20分、約10分、または約1分以下、およびこれらの任意またはすべての全体的なまたは部分的なインクリメントという任意の期間を指す。
【０１４４】
本明細書において用いるように、急速作用消失とは、薬物投与後の約8時間、約7時間、約6時間、約5時間、約4時間、約3時間、約2時間、約1時間、約40分、約20分、約10分、または約1分以下、ならびにこれらの任意およびすべての全体的なまたは部分的なインクリメントという任意の期間を指す。
【０１４５】
当業者であれば、本明細書において記載される具体的な手順、態様、請求項、および実施例に対する多くの均等物を認識するか、または通常の実験のみを用いて確認できるであろう。そのような均等物は、本発明の範囲内であり、本明細書に添付する請求項に包含されるとみなされる。例えば、反応時間、反応の規模/体積、ならびに実験試薬、例えば、溶媒、触媒、圧力、周囲条件、例を挙げると窒素雰囲気、および還元/酸化剤を非限定的に含む反応条件を当技術分野で認知された代替物と置き換えることおよび単に通常の実験を用いることは本願の範囲内であると理解されるべきである。
【０１４６】
本明細書において値および範囲が提供されている場合は、これらの値および範囲に包含されるすべての値および範囲が本発明の範囲内に包含されるという意味であることを理解されたい。また、これらの範囲内に入るすべての値や、値の範囲の上限または下限も本願によって企図される。
【０１４７】
以下の実施例は本発明の局面をさらに説明する。しかしながら、それらは本明細書において記載の本発明の教示または開示を何ら限定するものではない。
【実施例】
【０１４８】
実験例
次の実施例を参照して発明を説明する。これらの実施例は例示のみを目的として提供され、発明はこれらの実施例に限定されず、むしろ本明細書において提供される教示の結果として明らかになるすべての変形例を包含する。
【０１４９】
実施例1：エストロゲンおよびG-1処理はインビトロおよびインビボでメラノーマ細胞の増殖を遅らせかつ分化を駆動する
腫瘍細胞の増殖は、エストロゲンまたは特異的GPERアゴニストであるG-1で処理した後にマウスおよびヒトのメラノーマ細胞の両方で遅くなった。マウスおよびヒトのメラノーマ細胞株をインビトロにてエストロゲン(25nMのE2)(図4A〜4F)、GPERアゴニストG-1(100nMのG1)、または送達ビヒクルのいずれかで処理した。細胞の増殖および分化(メラニン産生)を測定した。結果はエストロゲンおよびG-1処理の両方がインビトロでメラノーマ細胞の増殖を遅らせかつ分化を駆動することを示した(図4A〜4F)。
【０１５０】
エストロゲンまたは特異的GPERアゴニストG-1で処理したヒトおよびマウスのメラノーマ細胞はマウスにおいてはよりゆっくりと成長し、形成された腫瘍は有意に小さかった(図5〜6)。マウス(B16)およびヒト(WM46)細胞株をインビトロで1週間、エストロゲン、G-1、またはビヒクルで前処理し、次いでマウスの左側腹部(ビヒクル処理)または右側腹部(E2処理)に同数注射して腫瘍形成を誘導した(一群あたりのマウスN=5)(図5)。14〜16日後にマウスを撮像し、腫瘍を採取して秤量した。エストロゲンによる前処理はインビボでは腫瘍の成長をほぼ3倍阻害した(図5)。同様に、G-1による処理はインビボでは腫瘍の成長を阻害した(図6)。
【０１５１】
より分化した状態を維持するエピジェネティックメモリーを誘導するには一時的なエストロゲン曝露で十分であった。正常なヒトメラノサイトに4日間のエストロゲン処理に続く8日間の休薬期間からなるエストロゲンのパルス処理を行った。RNAseqは、エストロゲンで一時的に処理したメラノサイトが、チロシナーゼ(TYR)、チロシナーゼ関連タンパク質(TRP1)、メラノコルチン1受容体(MC1R)、メランA(MLANA)、およびドパクロムトートメラーゼ(DCT)を含む全ての主要なメラノサイト分化マーカーの上方調節された発現を維持し、プレメラノソームタンパク質(PMEL)などの侵攻性メラノーママーカーの発現を減少させることを示した(図3)。メラノサイト分化マーカー量の変化はタンパク質レベルではより顕著であった。エストロゲン処理細胞もより多くの色素を生成し、これはそれらが対照(ビヒクル処理)細胞と比べてより分化していることを示している(図3)。
【０１５２】
実施例2：多胎妊娠はメラノーマ形成を制限しかつ分化を駆動する
細胞株および皮下腫瘍は迅速かつ容易であるためにがん研究によく用いられるが、それらは現実のヒト疾患の生理学的に忠実なモデルにならないことがある。ヒトメラノーマのよりよいモデルを提供する、操作したヒト異種移植モデルを本明細書では記載する。
【０１５３】
メラノーマと関連することが公知の変異腫瘍性タンパク質を発現させるために、レンチウイルスによりヒトメラノーマ異種移植片を操作して、正常なヒトメラノサイトに入れた。初代メラノサイトにdiBRAfV600E、CDK4R24C、dnp53R248W、およびhTERTを形質導入した(図7A)。次に器官型の皮膚をインビトロで樹立し、次いで雌マウスの背中に移植した(図7B)。マウスを非繁殖および繁殖の2群に分け(一群あたりマウスN=3)、その後15週間にわたってメラノーマを形成させた。組織を採取し、変異した遺伝子を分析した。非繁殖群では、肥大成長期のメラノーマに特徴的な、上向きに広がったメラノサイトの大きな増殖性の胞巣が観察された(図7C))。表皮に移行したメラニンの量は限定的であり、これはメラノサイトがもはやそれらの分化機能を果たしていないことを示していた。繁殖群では、大きな増殖性の胞巣は観察されず、表皮に移行したメラニン量の増加が見られ、これはメラノサイトが繁殖対照よりも良好にそれらの分化機能を果たしていることを示していた。まとめると、これは多胎妊娠(この実験では3回)がメラノーマ形成を制限しかつ分化を駆動する役割を果たすことを示す。
【０１５４】
図8A〜8Eに示すように、移植組織が治癒した後にマウスを無作為に非繁殖群または繁殖群に分け、次いでドキシサイクリン飼料を与えてすべての動物でBRAFV600Eがん遺伝子を誘導した。繁殖群では15週および3回連続した妊娠後(または非繁殖群では妊娠なし)、ヒト組織を採取し組織学的に分析した(図8A)。非繁殖群からの移植片は、細胞異型を持つ大きな有糸分裂的に活性のあるメラノサイトの胞巣を含むヒトメラノーマの顕著な特徴を持つメラノサイト新生物に進展した。対照的に、繁殖群からの組織は、比較的に特徴がなく、基底表皮層に限定された主に静止状態の単一の非増殖性メラノサイトを含有していた。これらの結果は、妊娠を繰り返すとBRaf駆動ヒトメラノサイト新生物の成長を阻害することを示している(図8B〜8D)。
【０１５５】
完全に分化した表皮メラノサイトの主な役割は紫外線を皮膚から保護するメラニン色素を産生することである。ほとんどの細胞型と同様に、メラノサイトの分化および増殖は逆の相関関係があり、正常な皮膚のメラノサイトは周期上の毛嚢の外部で増殖することは稀である。メラノーマ組織は正常なメラノサイトまたは良性の母斑より分化が一般的に少ない。本異種移植研究では、増殖性のメラノサイトおよび対応する表皮メラニンの増加の相対的な欠如によって証明されるように、妊娠は非繁殖群と比較してメラノサイトの分化の増加と関連していた。メラノーマを発症した非繁殖群は繁殖群よりも移植皮膚中にメラノサイトが有意に多かったが、周囲の表皮ケラチノサイト内のメラニン存在量は劇的に減少していた(図8E)。よって、妊娠はメラノサイトの分化を誘導することによってメラノーマの発症を阻害する。
【０１５６】
実施例3：GPERシグナル伝達は正常なヒトメラノサイトにおいておよびメラノーマにおいて安定した分化を駆動する
妊娠関連ホルモンが、形質転換に対するメラノサイトの将来的な感受性に影響を及ぼし得るメラノサイトの分化における長期持続的な変化を誘導するかどうかを試験するために、初代ヒトメラノサイトをエストロゲンまたはプロゲステロンに一時的に曝露した(図11A〜11E)。エストロゲンはメラニン産生の増加と関連する分化を駆動した一方で、プロゲステロンは逆の効果を有した(図11A)。
【０１５７】
ホルモンの休止後、プロゲステロン処理細胞はそれらのメラニン産生がベースラインレベルまで急速に戻った。対照的に、エストロゲン処理細胞はエストロゲンの休止後もより分化したままであり、その後50日間にわたって継続的な細胞分裂を通じてより多くのメラニンを安定的に産生した。エストロゲンに対する一時的な曝露によって分化した細胞のサブセットをその後プロゲステロンで処理した。これはエストロゲンの効果を逆転し、メラニン産生は最初のプロゲステロン処理時に見られたベースラインレベル未満にまで減少した。プロゲステロンの休止後、これらの細胞は最初のエストロゲン曝露によって誘導された高分化状態に完全に戻った。細胞分化の増加と一致して、エストロゲン曝露はチロシナーゼおよびMC1Rを含む古典的なメラノサイト分化抗原の安定した増加と関連していた(図11B)。これらの結果は、一時的なエストロゲンがメラノサイトにおいて耐久性があり長期持続的な分化プログラムを誘導することを示している。
【０１５８】
一時的なGPERシグナル伝達がインビボでその後の腫瘍増殖に影響を及ぼす永続的な分化状態をメラノーマ細胞において誘導するかどうかを試験するために、メラノーマ細胞をインビトロにてエストロゲン、G-1、またはビヒクルで処理し、続いて同数の処理細胞を宿主マウスに注射した(図11C)。エストロゲンまたはG-1による前処理がその後の腫瘍サイズを著しく減少させ(図11D〜11E)、これは一時的なGPERの活性化が腫瘍成長に対して耐久性のある効果を有することを示している。
【０１５９】
実施例4：GPERシグナル伝達はメラノーマにおけるc-Mycの喪失をもたらす
c-Myc(分化に拮抗しかつ増殖、生存、および免疫監視からの回避を促進する転写因子)の増幅はメラノーマを含むヒトがんにおける最も一般的な遺伝的変異の1つである。GPERシグナル伝達はc-Mycタンパク質を枯渇させた(図12、パネルA〜C)。
【０１６０】
さらに、GPERシグナル伝達は、マウスおよびヒトのメラノーマ細胞の両方におけるRbの低リン酸化と関連する相対的な成長の停止を誘導した(図12、パネルD)。GPERの活性化にも関わらずc-Mycタンパク質を維持するように操作したメラノーマ細胞はG-1に対して抵抗性があり、これはc-Mycの喪失が抗増殖的なGPER効果の主要なメディエーターであることを示している(図12、パネルE)。
【０１６１】
GPERの活性化に続くc-Mycの喪失は急速かつPKA依存的であり、これは標準的刺激性Gタンパク質共役受容体のシグナル伝達がc-Mycタンパク質を不安定化したことを示唆している(図12、パネルF〜G)。これと一致して、c-Mycの半減期はプロテアソームに依存する様式でGPERの活性化後に著しく短くなった(図12、パネルH〜I)。
【０１６２】
実施例5：インビボでのG-1処理は免疫調節タンパク質を改変する
増殖および分化におけるその役割の他に、c-Mycは、PDL1を含む複数の抑制性免疫チェックポイント調節因子の発現を正に調節する。メラノーマ細胞における一時的な薬理学的なGPERの活性化は、c-MycおよびPD-L1の両方を平行して減少させた(図13A〜13C)。GPERアゴニストの存在下でc-Mycを維持するように操作した細胞ではPD-L1は保持された(図13G)。
【０１６３】
実施例6：一時的なGPERの活性化は増殖を阻害しかつ免疫療法に対する応答を増強する
本明細書において実証するように、GPERシグナル伝達は、腫瘍増殖に拮抗しかつ免疫抑制タンパク質の腫瘍細胞発現を減少させる、腫瘍細胞における安定的な変化を誘導した。よって、GPERの活性化が免疫チェックポイント遮断阻害剤の抗腫瘍活性を増強するかどうかを調べた。
【０１６４】
腫瘍細胞固有のGPERシグナル伝達が免疫チェックポイント療法に対するメラノーマの脆弱性に影響を与えるかどうかを判断するために、GPER駆動分化が長期持続的であるという知見に基づいて研究を実施した。G-1を用いてインビトロでマウスB16F10メラノーマ細胞においてGPERを活性化しかつ分化を駆動した(図13D)。次いで、同数のビヒクルまたはG-1処理腫瘍細胞を同系のC57BL/6マウスに注射し、動物をαPD-1抗体またはアイソタイプ抗体対照のいずれかで処理した。
【０１６５】
対照と比較して、G-1の前処理のみでその後の腫瘍成長が抑制されかつ生存期間が延びた。αPD-1抗体の単独療法も同様に生存期間を延長した。しかしながら、G-1の前処理とαPD-1抗体との組み合わせはいずれかの薬剤単独で見られたものを以上に生存期間を劇的に延ばし、これは腫瘍細胞におけるGPER活性が全身投与されたαPD-1療法の抗腫瘍活性を向上させるのに十分な腫瘍における継続的変化を誘導することを示している(図13E〜13F)。
【０１６６】
実施例7：G-1およびaPD-1免疫療法によるメラノーマ担持マウスの処理は生存期間を劇的に延ばす
免疫チェックポイント阻害剤の有無にかかわらずG-1が全身送達剤としての治療的有用性を有するかどうかを判断するために、B16F10メラノーマ担持同系マウスをG-1、αPD-1抗体、またはそれらの両方で皮下処理し、生存期間をビヒクルおよびアイソタイプ抗体対照で処理した対応するマウス(特に、非特異的アイソタイプ対照抗体2A3)と比較した(図14A)。5〜50日後に総腫瘍体積を評価した。
【０１６７】
G-1はマウスで忍容性が高く、単独療法がαPD-1と同程度まで生存期間を延ばした。各単独療法およびαPD-1とG-1との併用治療が腫瘍成長を遅らせた(図14B)。驚くべきことに、αPD-1とG-1との併用治療はいずれかの薬剤単独よりも生存期間を7倍延ばし、これは著しい相乗効果を示している(図14C)。
【０１６８】
B16F10メラノーマはメラノーマの免疫学研究のために最もよく用いられるモデルであり、実験結果は大部分がヒトに置き換えられてきたが、B16F10はほとんどのヒトメラノーマに存在するBRafまたはNRas腫瘍ドライバー変異を欠如している。より医学的に関連する可能性があるモデルにおいてGPERシグナル伝達が類似の抗メラノーマ活性を有するかどうかを試験するために、Yale University Mouse Melanoma collection (YUMM)から入手した遺伝的に定義されたメラノーマ細胞を用いた。この研究資源は、特に免疫学研究を容易にするために、C57BL/6バックグラウンドに戻し交配した樹立された遺伝子操作マウスモデルから発生させたメラノーマ株を含む。YUMM1.7細胞(BRafV600E/wt Pten-/-Cdkn2-/-)をC57BL/6マウスに注射し、腫物が直径3〜4mmに達した後にG-1処理をαPD-1と共にまたはこれを伴わずに開始した(14日目)(図14D)。
【０１６９】
B16F10メラノーマで観察された結果と同様に、G-1またはαPD-1の単独療法は中程度ではあるが有意な生存期間の増加をもたらした一方で、併用治療は長期の生存者を含めてそれ以上に生存期間を劇的に延ばした(図14E〜14F)。
【０１７０】
実施例8：インビボでのG-1処理は腫瘍浸潤免疫細胞を改変する
本結果は、GPERの抗腫瘍活性が腫瘍オンコドライバーからは独立していることを示している。GPERの活性化が免疫浸潤の性質を変更するという仮説と一致して、メラノーマ担持マウスにおけるG-1処理は、T細胞およびNK細胞を含むいくつかの免疫細胞サブセットを増加させ、これはより強い炎症反応を示唆している(図15A〜15C)。
【０１７１】
実施例9：G-1処理はメラノーマにおいてヒストンアセチル化を促進しかつHDAC阻害剤と相乗作用する
GPER活性化後の安定したメラノサイトの分化の背後にある可能性が高いエピジェネティックな変化の同定を開始するために、質量分析法を用いて、エストロゲン処理したMCにおけるヒストン翻訳後修飾の包括的な解析結果を得た。CREB活性を伴うメカニズムと一致して、H3K122、H3K23、およびH3K18を含むCREB結合パートナーCBP/P300によって調節される多くのヒストンアセチル化標識において有意な増加(3つの独立した生物学的複製物において)が観察された(図16A)。
【０１７２】
対照的に、CBP/P300によって表されないH3K9ac標識はエストロゲン処理後に減少した。アセチル化を含むヒストン翻訳後修飾は他の状況では遺伝的な転写メモリーを仲介するので、特定の非限定的な態様では、CBP/P300が調節するヒストン修飾は細胞分裂にわたってメラノサイトの分化が高まった状態の維持を担っている。メラノーマ組織および腫瘍形成性のメラノーマ細胞株と比較して、良性のヒト母斑および非腫瘍形成性のメラノーマ細胞ではCBPにより表されたヒストンアセチル標識のレベルがより高い。まとめると、これはヒストンのアセチル化がGPER刺激メラノーマ細胞の分化し抗増殖性である非腫瘍形成状態を維持できることを示している。
【０１７３】
ヒストンアセチル標識は多くのがんで調節が異常になるいくつかのヒストン脱アセチル化酵素(HDAC)によって除去される。HDAC阻害剤は皮膚リンパ腫、骨髄腫、および膵臓がんについては抗がん剤として承認されているが、メラノーマにおけるそれらの有用性は不明である。ヒトでの試験では、HDAC阻害剤(HDACi)は、概して、単独治療剤として中程度の抗メラノーマ活性しか示さなかった。HDACの有効性は、ヒストン上にアセチル化標識の形成を促進する分化ドライバーまたはその後HDACiによって安定化されるであろう他の重要な腫瘍性タンパク質(c-Mycなど)を用いずに試験が実施されたという事実によって制限された可能性がある。いかなる理論によって限定されることも望まないが、HDAC阻害剤の抗がん効果は機能的に重要な部位でのヒストンのアセチル化も促進する併用薬物レジメンによって増強することができる。HDACiおよびGPERアゴニストは独立してメラノーマ細胞の分化を促進し、また協働して互いの活性を増強する(図16B〜16C)。
【０１７４】
実施例10：GPERシグナル伝達はインビトロおよびインビボでPDAC細胞増殖を低減させる
膵臓がんは女性では男性ほど一般的ではなく、またエストロゲン単独のホルモン療法の利用者でも一般的ではなく、これは、GPERが膵臓がんにおいても腫瘍を抑制する役割を有し得ることを示唆している。同系膵管腺がん(PDAC)細胞株の新たに利用可能なセットを用いて、c-Mycタンパク質レベルに対するGPERの活性化効果を調べた。G-1への曝露後、メラノーマ細胞株で観察された変化と一致してこれらの細胞株ではc-MycおよびpRBが低減した(図17A)。
【０１７５】
これらのシグナル伝達分子のレベルが変化することに加えて、これらの細胞株の増殖速度も、G-1を通じたGPERの活性化によって抑制された(図17B)。
【０１７６】
G-1の全身投与がインビボでの腫瘍成長を改変させたことを実証するために、PDAC腫瘍をマウスにおいて18日間成長させ、次いで標準的なG-1用量を3日間連続して与えた(図17C)。
【０１７７】
処理後4日という短い追跡期間であっても、2つの独立したPDAC細胞株において腫瘍は有意に小さく、これはGPERの活性化がPDACにおいて強力な抗腫瘍効果を有し得ることを示唆している(図17D)。
【０１７８】
実施例11：GPERシグナル伝達はインビトロおよびインビボでのNSCLC細胞の増殖を低減させかつαPD-1免疫療法との組み合わせ効果を有する
出産歴も肺がんに影響を与える。有した子供の数と相関して、女性の肺がんの危険性は低下する。G-1/GPERシグナル伝達がNSCLC株LLC1において活性を有することを実証するために、この株をG-1で処理し、上昇したpCREBレベルを30分後に観察した(図18A)。
【０１７９】
G-1によるLLC1の長期間の処理は、増殖の低下(図18B)およびc-Mycタンパク質の減少(図18C)をもたらした。
【０１８０】
c-Mycの枯渇は急速に生じ(図18D)、同じシグナル伝達効果がさらなるNSCLC株TC-1でも生じる(図18E)。
【０１８１】
G-1がインビボで活性を有しかつPD-1免疫療法と相乗作用するかどうかを試験するために、G-1、αPD-1抗体、またはそれらの両方で皮下処理したマウスにおいてLLC1腫瘍を成長させ、ビヒクルおよびアイソタイプ抗体対照で処理した対応するマウスと生存期間を比較した。G-1またはαPD-1のいずれかによる単独療法は初期には腫瘍成長を遅らせた(図18F)が、最終的には生存期間を有意には改変しなかった(図18G)。G-1とαPD-1との併用療法は腫瘍成長をさらに遅らせ(図18F)、また生存期間を有意に延ばした(図18G)。
【０１８２】
明細書において引用したあらゆる特許、特許出願、および刊行物はそれら全体において参照により本明細書に組み入れられる。具体的な態様を参照して本発明を開示したが、本発明の他の態様および変形例が発明の真の精神および範囲から逸脱することなく他の当業者によって為されてもよいことが明らかである。添付の請求項はすべてのそのような態様および均等な変形例を含むと解釈されることを意図している。
【図１】
2019518048.tif 000033
【図２】
2019518048.tif 000034
【図３】
2019518048.tif 000035
【図４Ａ】
2019518048.tif 000036
【図４Ｂ】
2019518048.tif 000037
【図４Ｃ】
2019518048.tif 000038
【図４Ｄ】
2019518048.tif 000039
【図４Ｅ】
2019518048.tif 000040
【図４Ｆ】
2019518048.tif 000041
【図５】
2019518048.tif 000042
【図６】
2019518048.tif 000043
【図７Ａ】
2019518048.tif 000044
【図７Ｂ】
2019518048.tif 000045
【図７Ｃ】
2019518048.tif 000046
【図８Ａ】
2019518048.tif 000047
【図８Ｂ】
2019518048.tif 000048
【図８Ｃ】
2019518048.tif 000049
【図８Ｄ】
2019518048.tif 000050
【図８Ｅ】
2019518048.tif 000051
【図９】
2019518048.tif 000052
【図１０】
2019518048.tif 000053
【図１１Ａ】
2019518048.tif 000054
【図１１Ｂ】
2019518048.tif 000055
【図１１Ｃ】
2019518048.tif 000056
【図１１Ｄ】
2019518048.tif 000057
【図１１Ｅ】
2019518048.tif 000058
【図１２】
2019518048.tif 000059
【図１３Ａ】
2019518048.tif 000060
【図１３Ｂ】
2019518048.tif 000061
【図１３Ｃ】
2019518048.tif 000062
【図１３Ｄ】
2019518048.tif 000063
【図１３Ｅ】
2019518048.tif 000064
【図１３Ｆ】
2019518048.tif 000065
【図１３Ｇ】
2019518048.tif 000066
【図１４Ａ】
2019518048.tif 000067
【図１４Ｂ】
2019518048.tif 000068
【図１４Ｃ】
2019518048.tif 000069
【図１４Ｄ】
2019518048.tif 000070
【図１４Ｅ】
2019518048.tif 000071
【図１４Ｆ】
2019518048.tif 000072
【図１５Ａ】
2019518048.tif 000073
【図１５Ｂ】
2019518048.tif 000074
【図１５Ｃ】
2019518048.tif 000075
【図１６Ａ】
2019518048.tif 000076
【図１６Ｂ】
2019518048.tif 000077
【図１６Ｃ】
2019518048.tif 000078
【図１７Ａ】
2019518048.tif 000079
【図１７Ｂ】
2019518048.tif 000080
【図１７Ｃ】
2019518048.tif 000081
【図１７Ｄ】
2019518048.tif 000082
【図１８Ａ】
2019518048.tif 000083
【図１８Ｂ】
2019518048.tif 000084
【図１８Ｃ】
2019518048.tif 000085
【図１８Ｄ】
2019518048.tif 000086
【図１８Ｅ】
2019518048.tif 000087
【図１８Ｆ】
2019518048.tif 000088
【図１８Ｇ】
2019518048.tif 000089
【図１９】
2019518048.tif 000090
【国際調査報告】
2019518048.tif 000091
2019518048.tif 000092