(57)【要約】  本発明は、ポリオウイルス受容体（ＰＶＲ）を認識し、ＩｇおよびＩＴＩＭドメイン（ＴＩＧＩＴ）を有するＴ細胞免疫受容体へのその結合を阻害するモノクローナル抗体を提供する。本発明はさらに、抗体を含む医薬組成物、および癌免疫療法、感染症の処置、および診断に使用するための方法を提供する。【選択図】  無し【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトポリオウイルス受容体（ＰＶＲ）に結合する単離されたモノクローナル抗体、あるいは、少なくとも抗原結合部分を含むその抗体フラグメントであって、
前記単離されたモノクローナル抗体または抗体フラグメントは、
（ｉ）．ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７７を含む重鎖（ＨＣ）可変領域の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７９を含む軽鎖（ＬＣ）可変領域の３つのＣＤＲ、または、前記モノクローナル抗体またはフラグメントの配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するそのアナログまたは誘導体；
（ｉｉ）．ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６９を含む重鎖可変領域の３つのＣＤＲ、および、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７１を含む軽鎖可変領域の３つのＣＤＲ、あるいは、前記モノクローナル抗体またはフラグメントの配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するそのアナログまたは誘導体；あるいは、
（ｉｉｉ）．ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７３を含む重鎖可変領域の３つのＣＤＲ、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７５を含む軽鎖可変領域の３つのＣＤＲ、または、前記モノクローナル抗体またはフラグメントの配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するそのアナログまたは誘導体、を含む、モノクローナル抗体、あるいは、その抗体フラグメント。
【請求項２】
ｉ．６つのＣＤＲのＣＤＲセットであって、ここで、ＨＣ  ＣＤＲ１は、ＧＹＴＦＳＮＹＷＩＥ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６）およびＳＮＹＷＩＥ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８４）から選択され；ＨＣ  ＣＤＲ２はＥＩＦＰＧＳＧＲＩＮＦＮＥＫＦＫＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８）であり；ＨＣ  ＣＤＲ３はＴＫＩＹＧＮＳＦＤＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０）であり；ＬＣ  ＣＤＲ１は、ＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４）およびＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８５）から選択され；ＬＣ  ＣＤＲ２は、ＷＡＳＳＲＨＮ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６）、ＷＡＳＳＲＨＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５６）、ＷＡＳＳＲＨＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５７）、ＷＡＳＳＲＨＤ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５８）、ＷＡＳＳＲＨＥ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９）、ＷＡＳＳＲＨＰ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６０）、およびＷＡＳＳＲＨＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６１）からなる群から選択され；および、ＬＣ  ＣＤＲ３はＱＱＹＳＲＹＰＬＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８）である、６つのＣＤＲのＣＤＲセット、
ｉｉ．６つのＣＤＲのＣＤＲセットであって、ここで、ＨＣ  ＣＤＲ１は、ＧＦＤＦＳＲＹＷ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４）およびＲＹＷＭＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８０）から選択され；ＨＣ  ＣＤＲ２は、ＥＩＨＰＤＳＳＫＩＮＹＴＰＳＱ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６）およびＥＩＨＰＤＳＳＫＩＮＹＴＰＳＱＫＤ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８１）から選択され；ＨＣ  ＣＤＲ３は、ＰＤＧＮＹＮＡＬＤＹＷ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８）およびＰＤＧＮＹＮＡＬＤＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８２）から選択され；ＬＣ  ＣＤＲ１はＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２）であり；ＬＣ  ＣＤＲ２はＷＡＳＴＲＨＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４）であり；および、ＬＣ  ＣＤＲ３はＱＱＹＳＲＹＰＹＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６）である、６つのＣＤＲのＣＤＲセット、および、
ｉｉｉ．６つのＣＤＲのＣＤＲセットであって、ここで、ＨＣ  ＣＤＲ１は、ＧＹＴＦＴＥＹＴＭＨ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０）およびＥＹＴＭＨ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８３）から選択され；ＨＣ  ＣＤＲ２はＧＩＤＰＮＮＧＧＴＮＹＮＱＮＦＫＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２）であり；ＨＣ  ＣＤＲ３はＶＩＰＬＥＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４）であり；ＬＣ  ＣＤＲ１はＫＡＳＱＮＶＹＴＮＶＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８）であり；ＬＣ  ＣＤＲ２はＳＡＳＹＲＹＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０）であり；および、ＬＣ  ＣＤＲ３はＱＱＹＮＳＹＰＬＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２）である、６つのＣＤＲのＣＤＲセット、
からなる群から選択されたＣＤＲセットを含む、請求項１に記載のモノクローナル抗体、あるいは、その抗体フラグメント。
【請求項３】
ＨＣ  ＣＤＲ１は配列ＳＮＹＷＩＥ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８４）を含み、ＨＣ  ＣＤＲ２はＥＩＦＰＧＳＧＲＩＮＦＮＥＫＦＫＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８）に記載される配列を含み、および、ＨＣ  ＣＤＲ３は配列：ＴＫＩＹＧＮＳＦＤＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０）を含む、請求項１に記載のモノクローナル抗体、あるいは、その抗体フラグメント。
【請求項４】
ＬＣ  ＣＤＲ１は配列ＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８５）を含み、ＬＣ  ＣＤＲ２は配列：ＷＡＳＳＲＨＮ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６）を含み、および、ＬＣ  ＣＤＲ３は配列：ＱＱＹＳＲＹＰＬＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８）を含む、請求項１−３のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体、あるいは、その抗体フラグメント。
【請求項５】
ＨＣ  ＣＤＲ１配列は、ＧＹＴＦＳＮＹＷＩＥ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６）およびＳＮＹＷＩＥ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８４）からなる群から選択され；ＨＣ  ＣＤＲ２配列は配列ＥＩＦＰＧＳＧＲＩＮＦＮＥＫＦＫＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８）からなり；ＨＣ  ＣＤＲ３は配列：ＴＫＩＹＧＮＳＦＤＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０）からなり；ＬＣ  ＣＤＲ１配列は、ＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４）およびＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８５）からなる群から選択され；ＬＣ  ＣＤＲ２は、配列ＷＡＳＳＲＨＮ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６）からなり、および、ＬＣ  ＣＤＲ３は配列：ＱＱＹＳＲＹＰＬＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８）からなる、請求項１−４のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体、あるいは、その抗体フラグメント。
【請求項６】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７７から選択される重鎖可変領域、または前記重鎖可変領域の配列と少なくとも９５％の配列類似性を持つアナログを含む、請求項１−５のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体、あるいは、その抗体フラグメント。
【請求項７】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７９から選択される軽鎖可変領域配列、または前記軽鎖可変領域配列と少なくとも９５％の配列類似性を持つアナログを含む、請求項１−６のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体、あるいは、その抗体フラグメント。
【請求項８】
重鎖と軽鎖を含み、ここで、重鎖はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４を含み、軽鎖はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２を含む、請求項１−７のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体、あるいは、その抗体フラグメント。
【請求項９】
重鎖と軽鎖を含み、ここで、重鎖はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７７を含み、軽鎖はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７９を含む、請求項１−７のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体、あるいは、その抗体フラグメント。
【請求項１０】
請求項８または９のいずれか１つの単離されたモノクローナル抗体または抗体フラグメントの変異体であって、前記モノクローナル抗体の重鎖または軽鎖と少なくとも９５％の同一性を有する、変異体。
【請求項１１】
ＨＣ  ＣＤＲ１配列は、ＧＹＴＦＳＮＹＷＩＥ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６）およびＳＮＹＷＩＥ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８４）からなる群から選択され、ＨＣ  ＣＤＲ２配列はＥＩＦＰＧＳＧＲＩＮＦＮＥＫＦＫＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８）からなり、ＨＣ  ＣＤＲ３は配列：ＴＫＩＹＧＮＳＦＤＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０）からなり、ＬＣ  ＣＤＲ１配列は、ＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４）およびＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８５）からなる群から選択され、ＬＣ  ＣＤＲ２配列は、ＷＡＳＳＲＨＮ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６）、ＷＡＳＳＲＨＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５６）、ＷＡＳＳＲＨＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５７）、ＷＡＳＳＲＨＤ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５８）、ＷＡＳＳＲＨＥ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９）、ＷＡＳＳＲＨＰ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６０）、およびＷＡＳＳＲＨＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６１）からなる群から選択され、および、ＬＣ  ＣＤＲ３は配列：ＱＱＹＳＲＹＰＬＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８）からなる、請求項１に記載のモノクローナル抗体、あるいは、その抗体フラグメント。
【請求項１２】
ＨＣ  ＣＤＲ１は、ＧＦＤＦＳＲＹＷ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４）およびＲＹＷＭＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８０）からなる群から選択され、ＨＣ  ＣＤＲ２は、配列：ＥＩＨＰＤＳＳＫＩＮＹＴＰＳＱ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６）を含み、ＨＣ  ＣＤＲ３は、配列ＰＤＧＮＹＮＡＬＤＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８２）を含む、請求項１に記載のモノクローナル抗体、あるいは、その抗体フラグメント。
【請求項１３】
ＬＣ  ＣＤＲ１は配列：ＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２）を含み、ＬＣ  ＣＤＲ２は配列ＷＡＳＴＲＨＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４）を含み、および、ＬＣ  ＣＤＲ３は配列：ＱＱＹＳＲＹＰＹＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６）を含む、請求項１、２、または１２のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体、あるいは、その抗体フラグメント。
【請求項１４】
ＨＣ  ＣＤＲ１配列は、ＧＦＤＦＳＲＹＷ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４）およびＲＹＷＭＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８０）からなる群から選択され、ＨＣ  ＣＤＲ２配列は、ＥＩＨＰＤＳＳＫＩＮＹＴＰＳＱ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６）およびＥＩＨＰＤＳＳＫＩＮＹＴＰＳＱＫＤ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８１）からなる群から選択され、ＨＣ  ＣＤＲ３配列は、ＰＤＧＮＹＮＡＬＤＹＷ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８）およびＰＤＧＮＹＮＡＬＤＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８２）からなる群から選択され、ＬＣ  ＣＤＲ１は配列：ＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２）からなり、ＬＣ  ＣＤＲ２は配列：ＷＡＳＴＲＨＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４）からなり、および、ＬＣ  ＣＤＲ３は配列ＱＱＹＳＲＹＰＹＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６）からなる、請求項１、２、１２、および１３のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体、あるいは、その抗体フラグメント。
【請求項１５】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６９から選択される重鎖可変領域、または前記重鎖可変領域の配列と少なくとも９５％の配列類似性を持つアナログを含む、請求項１、２、および１２乃至１４のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体、あるいは、その抗体フラグメント。
【請求項１６】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７１から選択される軽鎖可変領域、あるいは前記軽鎖可変領域の配列と少なくとも９５％の配列類似性を持つアナログを含む、請求項１、２、および１２乃至１５のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体、あるいは、その抗体フラグメント。
【請求項１７】
重鎖と軽鎖を含み、ここで、重鎖はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２を含み、軽鎖はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０を含む、請求項１、２、および１２乃至１６のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体、あるいは、その抗体フラグメント。
【請求項１８】
重鎖と軽鎖を含み、ここで、重鎖はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６９を含み、軽鎖はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７１を含む、請求項１、２、および１２乃至１６のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体、あるいは、その抗体フラグメント。
【請求項１９】
請求項１７または１８のいずれか１つの単離されたモノクローナル抗体または抗体フラグメントの変異体であって、前記モノクローナル抗体の重鎖または軽鎖と少なくとも９５％の同一性を有する、変異体。
【請求項２０】
ＨＣ  ＣＤＲ１は、配列ＥＹＴＭＨ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８３）を含み、ＨＣ  ＣＤＲ２は配列ＧＩＤＰＮＮＧＧＴＮＹＮＱＮＦＫＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２）を含み、ＨＣ  ＣＤＲ３は配列ＶＩＰＬＥＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４）を含む、請求項１に記載のモノクローナル抗体、あるいは、その抗体フラグメント。
【請求項２１】
ＬＣ  ＣＤＲ１は配列：ＫＡＳＱＮＶＹＴＮＶＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８）を含み、ＬＣ  ＣＤＲ２は配列：ＳＡＳＹＲＹＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０）を含み、および、ＬＣ  ＣＤＲ３は配列ＱＱＹＮＳＹＰＬＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２）を含む、請求項１、２、または２０のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体、あるいは、その抗体フラグメント。
【請求項２２】
ＨＣ  ＣＤＲ１配列は、ＧＹＴＦＴＥＹＴＭＨ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０）およびＥＹＴＭＨ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８３）からなる群から選択され、ＨＣ  ＣＤＲ２はＧＩＤＰＮＮＧＧＴＮＹＮＱＮＦＫＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２）からなり、ＨＣ  ＣＤＲ３は配列：ＶＩＰＬＥＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４）からなり、ＬＣ  ＣＤＲ１は配列：ＫＡＳＱＮＶＹＴＮＶＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８）からなり、ＬＣ  ＣＤＲ２は配列：ＳＡＳＹＲＹＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０）からなり、および、ＬＣ  ＣＤＲ３は配列：ＱＱＹＮＳＹＰＬＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２）からなる、請求項１、２、２０、および２１のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体、あるいは、その抗体フラグメント。
【請求項２３】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７３から選択される重鎖可変領域、または前記重鎖可変領域の配列と少なくとも９５％の配列類似性を持つアナログを含む、請求項１、２、および２０乃至２２のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体、あるいは、その抗体フラグメント。
【請求項２４】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７５から選択される軽鎖可変領域、または前記軽鎖可変領域の配列と少なくとも９５％の配列類似性を持つアナログを含む、請求項１、２、および２０乃至２３のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体、あるいは、その抗体フラグメント。
【請求項２５】
重鎖と軽鎖を含み、ここで、重鎖はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８を含み、軽鎖はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６を含む、請求項１、２、および２０乃至２４のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体、あるいは、その抗体フラグメント。
【請求項２６】
重鎖と軽鎖を含み、ここで、重鎖はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７３を含み、軽鎖はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７５を含む、請求項１、２、および２０乃至２５のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体、あるいは、その抗体フラグメント。
【請求項２７】
請求項２５または２６のいずれか１つの単離されたモノクローナル抗体または抗体フラグメントの変異体であって、前記モノクローナル抗体の重鎖または軽鎖と少なくとも９５％の同一性を有する、変異体。
【請求項２８】
ＩｇおよびＩＴＩＭのドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）に対するＰＶＲの結合を防ぐことができる、請求項１乃至２７のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体、あるいは、その抗体フラグメント。
【請求項２９】
請求項１乃至２８のいずれか１つのモノクローナル抗体、あるいは、その抗体フラグメントのＨＣまたはＬＣ配列の少なくとも１つの領域をコードするポリヌクレオチド配列。
【請求項３０】
モノクローナル抗体の重鎖可変領域をコードし、ポリヌクレオチド配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７６からなる群から選択される配列、あるいは前記配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するその変異体を含む、請求項２９に記載のポリヌクレオチド配列。
【請求項３１】
モノクローナル抗体の軽鎖可変領域をコードし、ポリヌクレオチド配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７０、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７８、あるいは前記配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するその変異体からなる群から選択される、請求項２９に記載のポリヌクレオチド配列。
【請求項３２】
請求項２９−３１のいずれか１つに記載の少なくとも１つのポリヌクレオチド配列を含むプラスミド。
【請求項３３】
請求項２９−３１のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド配列を含むハイブリドーマ細胞。
【請求項３４】
請求項１−２８のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体を生成することができるハイブリドーマ細胞。
【請求項３５】
細胞毒性部分、放射性部分、または識別可能な部分に付けられる、請求項１−２８のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体、あるいは、その抗体フラグメント。
【請求項３６】
活性成分として、請求項１−２８および３５のいずれか１つに記載の少なくとも１つの単離された抗体またはそのフラグメント、および、薬学的に許容可能な賦形剤、希釈剤、塩、または担体とを含む、医薬組成物。
【請求項３７】
ＴＩＧＩＴに対するＰＶＲの結合を阻害することにより免疫系を調節する際に使用される、請求項３６に記載の医薬組成物
【請求項３８】
癌の処置で使用される、請求項３６に記載の医薬組成物。
【請求項３９】
被験体におけるウイルス感染の予防または処置で使用される、請求項３６に記載の医薬組成物。
【請求項４０】
血管新生に関連する疾患または障害の処置で使用される、請求項３６に記載の医薬組成物。
【請求項４１】
血管新生に関連する疾患または障害は、癌、目の細胞増殖性疾患、網膜障害、および炎症性疾患からなる群から選択される、請求項４０に記載の医薬組成物。
【請求項４２】
請求項３６に記載の医薬組成物を、必要としている被験体に投与する工程を含む、癌を処置する方法。
【請求項４３】
手術、化学療法、放射線療法、および免疫療法から選択されたさらなる抗癌治療をさらに含む、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記被験体に、追加の免疫調節薬、活性化リンパ球細胞、キナーゼ阻害剤、化学療法剤、または他の抗癌剤を投与する工程をさらに含む、請求項４２に記載の方法。
【請求項４５】
追加の免疫調節薬は、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、ＰＤＬ−１、ＣＥＡＣＡＭ１、ＮＫＧ２Ａ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＶＩＳＴＡ、ＣＤ１１２Ｒ、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３）、ＣＤ１３７、ＯＸ４０（ＣＤ１３４とも呼ばれる）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、ＴＩＧＩＴ、および任意のこれらの組み合わせからなる群から選択された免疫チェックポイント分子に対する抗体である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
癌は固形癌である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４７】
癌は血液の癌である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４８】
処置は、被験体における転移の形成、増殖、または拡散の防止または減少をもたらす、請求項４２に記載の方法。
【請求項４９】
被験体における癌を診断する方法であって、請求項１〜２８のいずれか１つの抗体または抗体フラグメントに生体サンプルを接触させる工程を含む、方法。
【請求項５０】
請求項１〜２８のいずれか１つの少なくとも１つの抗体または抗体フラグメントを含む、被験体における癌を診断するためのキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は免疫療法の分野であり、タンパク質ポリオウイルス受容体に結合する抗体とそのフラグメント、これらの抗体をコードするポリヌクレオチド配列、および、これらの抗体を産生するハイブリドーマ細胞に関する。本発明はさらに、これらの抗体を含む治療用および診断用の組成物と、これらのモノクローナル抗体を使用して疾患、とりわけ癌を処置および診断する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
腫瘍の免疫療法は、例えば、腫瘍細胞上の抗原に特異的な抗体を用いる処置、腫瘍細胞を有する抗原提示細胞の融合、あるいは抗腫瘍Ｔ細胞の特異的な活性化によって、抗腫瘍免疫反応を生成および増大するために利用される。患者における腫瘍細胞に対して免疫細胞（例えばＴ細胞）を補充する能力は、これまで不治であると考えられてきた癌の種類および転移と戦う治療手段を提供する。
【０００３】
Ｔ細胞媒介性の免疫反応は、免疫反応の規模を制御する共刺激信号と共抑制信号との間の平衡によって調節された複数の連続する工程を含んでいる。免疫チェックポイントと呼ばれる抑制信号は、自己寛容の維持と、免疫媒介性の付随的な組織損傷の限定にも必要不可欠である。感染または免疫の誘発が取り除かれるか、悪化するか、持続すると、これらの信号は変化し、そうした変化はＴ細胞の応答に影響を与え、免疫反応を再度形作る。
【０００４】
免疫のチェックポイントタンパク質の発現は腫瘍によって調節可能である。例えば、癌細胞表面上のプログラムされたデス−１リガンド（ＰＤ−Ｌ１）のアップレギュレーションは、さもなければこれらの腫瘍細胞を攻撃することがあるＰＤ−１に結合することを介してＴ細胞を阻害することにより、それらが宿主免疫系から逃れることを可能にする。したがって、免疫チェックポイントは、癌に対する機能的な細胞性免疫の活性化の重大な障害を表す。従って、免疫細胞上の抑制リガンドに特異的なアンタゴニスト抗体は生存可能な抗ガン剤であるとみなされ、診療所で評価されている（例えば、ニボルマブおよびペンブロリズマブ）。免疫チェックポイント分子の他の例は、ＩｇおよびＩＴＩＭのドメイン（ＴＩＧＩＴ）を有するＴ細胞免疫受容体である。ＴＩＧＩＴは、Ｔ細胞およびナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）を含む様々な免疫細胞上で発現される共抑制分子である。ＴＩＧＩＴはポリオウイルス受容体（ＰＶＲ）に高親和性で結合する。
【０００５】
ＣＤ１５５とも呼ばれるポリオウイルス受容体（ＰＶＲ）は、細胞外マトリックス分子に対する細胞接着の媒介に関与する膜貫通糖タンパク質である。それは以前に腫瘍抗原と記載され、その発現が膵臓癌（Ｎｉｓｈｉｗａｄａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ２０１５，  ３５（４）：  ２２８７−９７）と同様に、多形神経膠芽腫、髄芽腫、および結腸直腸癌を含む神経外胚葉性癌においてもアップレギュレートされることから（Ｓｏｌｅｃｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２００２，  ２７７：  ２５６９７−７００）治療的介入のための有望なターゲットとしても記載されてきた。ＰＶＲは、Ｒａｓ−Ｒａｆ−ＭＥＫ−ＥＲＫシグナル伝達の血清に誘発された活性化、サイクリンＤ２およびＥのアップレギュレート、およびダウンレギュレートしたｐ２７Ｋｉｐ１、最終的には細胞周期のＧ０／Ｇ１期の期間の短縮を増強すると知られており（Ｋａｋｕｎａｇａ  ２００４，  Ｊ．  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  ２７９，  ３６４１９−３６４２５）、その理由で腫瘍細胞上のＰＶＲの遮断は腫瘍細胞の生存率を減少させると予想される。ＰＶＲは血管新生で重大な役割も担っており、インテグリンα（ｖ）βを用いるＶＥＧＦＲ２の相互作用の制御によりＶＥＧＦに誘発された血管新生、およびＶＥＧＦＲ２媒介性のＲａｐ１−Ａｋｔシグナル伝達経路を調節することが示唆されている（Ｋｉｎｕｇａｓａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１２，  Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ．  ２０１２，  １１０（５），７１６−２６）。付加的に、ＰＶＲはＩＧＦ１Ｒで複合化し、およびＭｅｔシグナル伝達に関与し、複合体形成を阻害することで細胞の生存率と血管新生が減少した（Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  ２０１４，  ２０，  ４，  ７１３９）。
【０００６】
転移でのＰＶＲの関与は、マウスの尾部に癌細胞を注入し、肺に対する転移を測定することにより実証された。癌細胞中のアップレギュレートされたＰＶＲは血小板におけるその反受容体とトランス相互作用（ｔｒａｎｓｉｎｔｅｒａｃｔ）し、このトランス−相互作用は、肺に対する癌細胞の転移を増強する（Ｍｏｒｉｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  （２００８）  ２７，  ２６４−２７３）。
【０００７】
米国特許出願第２００７００４１９８５号は、ＰＶＲまたはその任意の誘導体の少なくとも１つの細胞内または細胞外ドメインに特異的に結合する分子を開示しており、ここで、分子は、ＰＶＲまたはその任意の誘導体を発現する細胞の受容体媒介性の付着、輸送、および／または侵入挙動を調節する能力を有する。
【０００８】
米国特許出願第２００９０２１５１７５号は、細胞の付着、輸送、侵入、および／または転移の可能性に必要とされるＰＶＲの機能を調節する分子（例えば、小さな化合物、オリゴヌクレオチド、ポリペプチド、抗体、および抗体フラグメント）を提供する。分子は、転移能、転移、および癌を有する細胞の処置に使用することができる。
【０００９】
ＰＣＴ出願公開第２００６／１２４６６７号は、そのリガンドＰＶＲに結合するＴＩＧＩＴを遮断するモノクローナル抗体によるタンパク質ｚＢ７Ｒ１（ＴＩＧＩＴ）の調節を開示している。
【００１０】
単独で、あるいは他の薬剤を組み合わせて、ＴＩＧＩＴに結合するＰＶＲを阻害することにより腫瘍またはウイルスに感染した細胞を攻撃する免疫系の細胞を増強する、さらなる、かつ、より効果的で、特異的で、安全で、および／または安定した薬剤を提供するという満たされていないニーズがある。
【発明の概要】
【００１１】
本発明は、ポリオウイルス受容体（ＰＶＲ）を認識し、ＩｇおよびＩＴＩＭのドメイン（ＴＩＧＩＴ）を有するＴ細胞免疫受容体に対するその結合を防ぎ、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞およびＴ細胞などのリンパ球上の抑制活性を阻害する、抗体およびそのフラグメントを提供する。本明細書に開示される抗ＰＶＲの抗体は癌細胞に存在するＰＶＲに結合することができる。これらの抗体およびそのフラグメントは、ＰＶＲに対して相補性決定領域（ＣＤＲ）配列、高親和性、および高特異性の特有のセットを有することにより特徴づけられ、スタンドアロンの治療法として、および他の抗ガン剤と組み合わせて、腫瘍免疫回避と戦うための癌免疫療法に有用である。抗体はさらにウイルス感染を処置するのに有用である。
【００１２】
本明細書において開示された高親和性抗ＰＶＲ抗体がＴＩＧＩＴ−ＰＶＲ相互作用を遮断し、ＴおよびＮＫ細胞の活性を回復させることがここで開示されている。抗体はヒトＰＶＲに対して高い特異性を示した。これらの特性は、本発明のモノクローナル抗体（ｍＡｂｓ）を、癌免疫療法で使用するための価値のある候補とし、副作用の少ない低投与量の投与を可能にする。
【００１３】
有利に、本発明にかかる抗ＰＶＲのｍＡｂｓは、インビトロモデル（Ａ５４９）のＰＤ−Ｌ１において抗ＰＤ−１およびＣＴＬＡ−４  ｍＡｂｓよりも優れたＴ細胞増殖を誘発することができる。誘発効果は、末梢性の単核血球（ＰＭＢＣ）および精製されたＣＤ４およびＣＤ８Ｔ細胞について示された。加えて、ＰＶＲ  ｍＡｂｓは、試験した大部分の標的細胞においてＮＫ細胞活性化を誘発することができた。さらに、本明細書に記載された抗ＰＶＲの抗体の一部は、既知の薬剤（現在治療で使用されているＥｒｂｉｔｕｘ（登録商標））のものに対してインビトロでの匹敵する抗癌活性を有する。さらに、抗ＰＤ−１およびＣＴＬＡ−１抗体および表皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）などのさらなる抗ガン剤と組み合わされると、本明細書に記載された抗ＰＶＲの抗体のいくつかは相乗効果を示した。加えて、抗ＰＶＲの抗体のいくつかは抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘発することが発見された。本明細書に記載のいくつかの抗ＰＶＲ抗体はＤＮＡＭ１の共刺激シグナル伝達に対する遮断効果を有しておらず、したがって、他の免疫誘導シグナルに有害な効果を有していないことも開示されている。
【００１４】
興味深いことには、ヒトおよびげっ歯動物のＰＶＲ配列の間に高い配列類似性があるにもかかわらず、本発明の抗体はヒトＰＶＲに対して非常に特異的である。
【００１５】
予想外に、ヒト定常鎖を含むいくつかのキメラモノクローナル抗体は、同等のマウスモノクローナル抗体と比較して、免疫細胞活性化に対する増強された効果を示したことも開示されている。
【００１６】
本明細書に記載される抗ＰＶＲ  ｍＡｂｓのいくつかは、腫瘍細胞上のＰＶＲを遮断することにより免疫に依存しない手法で腫瘍細胞生存率を減少させことができた。任意の作用メカニズムに束縛されることを期待せず、この活性は細胞周期のＧ０／Ｇ１期の期間を短くするＰＶＲの能力に起因することが示唆されている。
【００１７】
１つの態様によれば、本発明は、ポリオウイルス受容体（ＰＶＲ）に結合する単離されたモノクローナル抗体、あるいは、少なくとも抗原結合部分を含むその抗体フラグメントを提供し、単離された抗体または抗体フラグメントは、以下からなる群から選択される：
ｉ．ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７７を含む重鎖（ＨＣ）可変領域の３つのＣＤＲ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７９を含む軽鎖（ＬＣ）可変領域の３つのＣＤＲ、または、上記抗体またはフラグメント配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するそのアナログまたは誘導体；
ｉｉ．ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６９を含む重鎖（ＨＣ）可変領域の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）、および、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７１を含む軽鎖（ＬＣ）可変領域の３つのＣＤＲ、または、上記抗体またはフラグメント配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するそのアナログまたは誘導体；および、
ｉｉｉ．ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７３を含む重鎖（ＨＣ）可変領域の３つのＣＤＲ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７５を含む軽鎖（ＬＣ）可変領域の３つのＣＤＲ、または、上記抗体またはフラグメント配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するそのアナログまたは誘導体。
【００１８】
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏｓ：２、１０、１８、２６、３４、あるいは４２に相同する重鎖と軽鎖に含まれるＣＤＲ配列を含む抗体は、本発明の範囲内に含まれる。いくつかの実施形態によれば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６９と交換可能である。いくつかの実施形態によれば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７１と交換可能である。いくつかの実施形態によれば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７３と交換可能である。いくつかの実施形態によれば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７５と交換可能である。いくつかの実施形態によれば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７７と交換可能である。いくつかの実施形態によれば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７９と交換可能である。
【００１９】
所定の抗体分子のＣＤＲ配列を決定するための当該技術分野で知られているいくつかの方法があるが、標準的な明解な方法はない。抗体の重鎖および軽鎖の可変領域からＣＤＲ配列の決定は、限定されないが、ＫＡＢＡＴ、Ｃｈｏｔｈｉａ、およびＩＭＧＴとして知られている方法を含む任意の方法に従ってされ得る。ＣＤＲの選択されたセットは、１つを超える方法によって同定された配列を含んでもよく、すなわち、いくつかのＣＤＲ配列はＫＡＢＡＴを使用して決定されても良く、例えば、ＩＭＧＴを使用して決定されてもよい。
【００２０】
いくつかの実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体またはフラグメントは、抗ＰＶＲ  ４Ｅ５（（あるいはｈＰＶＲ．０７）と表示されたモノクローナル抗体のＣＤＲ配列、すなわち、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６９で説明される重鎖可変領域に含まれる３つのＣＤＲ配列と、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  ７１で説明される軽鎖可変領域に含まれる３つのＣＤＲ配列を含む。
【００２１】
いくつかの実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体あるいは抗体フラグメントは、配列ＧＦＤＦＳＲＹＷ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４）を含む重鎖ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体あるいは抗体フラグメントは、配列ＥＩＨＰＤＳＳＫＩＮＹＴＰＳＱ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６）を含む重鎖ＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体または抗体フラグメントは、配列ＰＤＧＮＹＮＡＬＤＹＷ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８）を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。
【００２２】
いくつかの実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体または抗体フラグメントは、配列ＲＹＷを含む重鎖ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体または抗体フラグメントは、配列ＲＹＷＭＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８０）を含む重鎖ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体または抗体フラグメントは、配列ＰＤＧＮＹＮＡＬＤＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８２）を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。
【００２３】
特定の実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体または抗体フラグメントは以下のものを含む：（ｉ）配列ＧＦＤＦＳＲＹＷ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４）を含むＨＣ  ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列：ＥＩＨＰＤＳＳＫＩＮＹＴＰＳＱ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６）を含むＨＣ  ＣＤＲ２；および（ｉｉｉ）配列：ＰＤＧＮＹＮＡＬＤＹＷ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８）を含むＨＣ  ＣＤＲ３。
【００２４】
特定の実施形態によると、単離されたモノクローナル抗体または抗体フラグメントは以下のものを含む：（ｉ）配列ＲＹＷを含むＨＣ  ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列：ＥＩＨＰＤＳＳＫＩＮＹＴＰＳＱ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６）を含むＨＣ  ＣＤＲ２；および（ｉｉｉ）配列：ＰＤＧＮＹＮＡＬＤＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８２）を含むＨＣ  ＣＤＲ３。
【００２５】
いくつかの実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体または抗体フラグメントは、配列ＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２）を含む軽鎖ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体または抗体フラグメントは、配列ＷＡＳＴＲＨＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４）を含む軽鎖ＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体または抗体フラグメントは、配列ＱＱＹＳＲＹＰＹＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６）を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。
【００２６】
特定の実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体または抗体フラグメントは以下のものを含む：（ｉ）ＬＣ  ＣＤＲ１は配列ＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２）を含み、（ｉｉ）  ＬＣ  ＣＤＲ２は配列：ＷＡＳＴＲＨＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４）を含み、および、（ｉｉｉ）ＨＣ  ＣＤＲ３は配列：ＱＱＹＳＲＹＰＹＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６）を含む。
【００２７】
いくつかの特定の実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体またはフラグメントは、配列：ＧＦＤＦＳＲＹＷ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４）を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列：ＥＩＨＰＤＳＳＫＩＮＹＴＰＳＱ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６）を含む重鎖ＣＤＲ２、配列：ＰＤＧＮＹＮＡＬＤＹＷ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８）を含む重鎖ＣＤＲ３）、配列：ＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２）を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列：ＷＡＳＴＲＨＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４）を含む軽鎖ＣＤＲ２）および配列：ＱＱＹＳＲＹＰＹＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６）を含む軽鎖ＣＤＲ３、あるいは超可変領域（ＨＶＲ）配列においてせいぜい５％のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を含むそのアナログを含んでいる。
【００２８】
いくつかの特定の実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体またはフラグメントは、以下からなる６つのＣＤＲ配列の１セットを含む：ｉ．ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８０からなる群から選択された配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ｉｉ．ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８１からなる群から選択された配列を有する重鎖ＣＤＲ２、ｉｉｉ．ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８２からなる群から選択された配列を有する重鎖ＣＤＲ３、ｉｖ．ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２で説明される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ｖ．ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４で説明される配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、ｖｉ．ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６で説明される配列を有する軽鎖ＣＤＲ３。
【００２９】
いくつかの特定の実施形態の、単離されたモノクローナル抗体またはフラグメントは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６からなる６つのＣＤＲ配列の１セットを含む。
【００３０】
他の特定の実施形態の、単離されたモノクローナル抗体またはフラグメントは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８０、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６からなる６つのＣＤＲ配列の１セットを含む。
【００３１】
いくつかの実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体またはフラグメントは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６９で説明される重鎖可変領域、またはその重鎖可変領域配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するそのアナログまたは誘導体を含む。
【００３２】
いくつかの実施形態によれば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２のアナログは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６９で説明される配列を有する重鎖可変領域である。
【００３３】
いくつかの実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体またはフラグメントは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７１で説明される軽鎖可変領域、またはその軽鎖可変領域配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアナログを含む。
【００３４】
いくつかの実施形態によれば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０のアナログは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７１で説明される配列を有する軽鎖可変領域である。
【００３５】
特定の実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体またはフラグメントは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６９で説明される配列を有する重鎖可変領域、ならびにＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７１で説明される配列を有する軽鎖可変領域、あるいは軽鎖および／または重鎖の配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するそのアナログを含む。
【００３６】
本発明はさらに、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）４Ｅ５が結合するヒトＰＶＲタンパク質内のエピトープに対して高い親和性で結合することができる抗体または抗体フラグメントを包含する。
【００３７】
他の実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体は、７Ｄ４（あるいはｈＰＶＲ．０１）と表示されたモノクローナル抗体のＣＤＲ配列、すなわち、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７３で説明される重鎖可変領域に含まれる３つのＣＤＲ配列と、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７５で説明される軽鎖可変領域に含まれる３つのＣＤＲ配列を含む。
【００３８】
いくつかの実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体または抗体フラグメントは、配列ＧＹＴＦＴＥＹＴＭＨ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０）を含む重鎖ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体または抗体フラグメントは、配列ＧＩＤＰＮＮＧＧＴＮＹＮＱＮＦＫＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２）を含む重鎖ＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体または抗体フラグメントは、配列ＶＩＰＬＥＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４）を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。特定の実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体または抗体フラグメントは以下のものを含む：（ｉ）ＨＣ  ＣＤＲ１は配列ＧＹＴＦＴＥＹＴＭＨ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０）を含み、（ｉｉ）  ＨＣ  ＣＤＲ２は配列：ＧＩＤＰＮＮＧＧＴＮＹＮＱＮＦＫＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２）を含み、および、（ｉｉｉ）ＨＣ  ＣＤＲ３は配列：ＶＩＰＬＥＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４）を含む。
【００３９】
いくつかの実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体または抗体フラグメントは、配列ＥＹＴＭＨ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８３）を含む重鎖ＣＤＲ１を含む。
【００４０】
いくつかの実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体または抗体フラグメントは、配列ＫＡＳＱＮＶＹＴＮＶＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８）を含む軽鎖ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体または抗体フラグメントは、配列ＳＡＳＹＲＹＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０）を含む軽鎖ＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体または抗体フラグメントは、配列ＱＱＹＮＳＹＰＬＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２）を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。特定の実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体または抗体フラグメントは以下のものを含む：（ｉ）ＬＣ  ＣＤＲ１は配列ＫＡＳＱＮＶＹＴＮＶＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８）を含み、（ｉｉ）  ＬＣ  ＣＤＲ２は配列：ＳＡＳＹＲＹＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０）を含み、および、（ｉｉｉ）ＨＣ  ＣＤＲ３は配列：ＱＱＹＮＳＹＰＬＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２）を含む。
【００４１】
いくつかの特定の実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体は、配列ＧＹＴＦＴＥＹＴＭＨ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０）を含む重鎖ＣＤＲ１、配列：ＧＩＤＰＮＮＧＧＴＮＹＮＱＮＦＫＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２）を含む重鎖ＣＤＲ２、配列：ＶＩＰＬＥＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４）を含む重鎖ＣＤＲ３）、配列：ＫＡＳＱＮＶＹＴＮＶＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８）を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列：ＳＡＳＹＲＹＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０）を含む軽鎖ＣＤＲ２）、および配列：ＱＱＹＮＳＹＰＬＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２）を含む軽鎖ＣＤＲ３、あるいはＨＶＲ配列におけるせいぜい５％のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を含むそのアナログを含む。
【００４２】
いくつかの特定の実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体またはフラグメントは、以下からなる６つのＣＤＲ配列の１セットを含む：ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０とＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８３からなる群から選択された配列を有するＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４で説明される配列を有する重鎖ＣＤＲ３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８で説明される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０で説明される配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２で説明される配列を有する軽鎖ＣＤＲ３。
【００４３】
いくつかの特定の実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体またはフラグメントは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２からなる６つのＣＤＲ配列の１セットを含む。
【００４４】
他の特定の実施形態の、単離されたモノクローナル抗体またはフラグメントは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２からなる６つのＣＤＲ配列の１セットを含む。
【００４５】
いくつかの実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体またはフラグメントは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７３で記載される重鎖可変領域、あるいはその重鎖可変領域配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアナログまたは誘導体を含む。
【００４６】
いくつかの実施形態によれば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８のアナログは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７３で説明される配列を有する重鎖可変領域である。
【００４７】
いくつかの実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体またはフラグメントは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７５で説明される軽鎖可変領域、またはその軽鎖可変領域配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアナログを含む。
【００４８】
いくつかの実施形態によれば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０のアナログは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７５で説明される配列を有する軽鎖可変領域である。
【００４９】
特定の実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体またはフラグメントは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７３で説明される配列を有する重鎖可変領域、ならびにＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７５で説明される配列を有する軽鎖可変領域、あるいは軽鎖および／または重鎖の配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するそのアナログを含む。
【００５０】
本発明はさらに、ｍＡｂ７Ｄ４が結合するヒトＰＶＲタンパク質内のエピトープに対して高い親和性で結合することができる抗体または抗体フラグメントを包含する。
【００５１】
他の実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体は、５Ｂ９（あるいはｈＰＶＲ．０９）と表示されたモノクローナル抗体のＣＤＲ配列、すなわち、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７７で説明される重鎖可変領域に含まれる３つのＣＤＲ配列と、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７９で説明される軽鎖可変領域に含まれる３つのＣＤＲ配列を含む。
【００５２】
いくつかの実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４で説明される重鎖可変領域に含まれる相補性決定領域（ＣＤＲ）配列と、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４９、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５０、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５３、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４からなる群から選択された軽鎖可変領域配列に含まれる３つのＣＤＲ配列を含む。それぞれの可能性は、本発明の別の実施形態を表わす。
【００５３】
いくつかの実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体または抗体フラグメントは、配列ＧＹＴＦＳＮＹＷＩＥ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６）を含む重鎖ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体または抗体フラグメントは、配列ＥＩＦＰＧＳＧＲＩＮＦＮＥＫＦＫＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８）を含む重鎖ＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体または抗体フラグメントは、配列ＴＫＩＹＧＮＳＦＤＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０）を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体または抗体フラグメントは、配列ＳＮＹＷＩＥ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８４）を含む重鎖ＣＤＲ１を含む。
【００５４】
特定の実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体または抗体フラグメントは以下のものを含む：（ｉ）ＨＣ  ＣＤＲ１は配列ＳＮＹＷＩＥ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８４）を含み、（ｉｉ）ＨＣ  ＣＤＲ２は配列：ＥＩＦＰＧＳＧＲＩＮＦＮＥＫＦＫＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８）を含み、および、（ｉｉｉ）ＨＣ  ＣＤＲ３は配列：ＴＫＩＹＧＮＳＦＤＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０）を含む。
【００５５】
いくつかの実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体または抗体フラグメントは、配列ＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４）を含む軽鎖ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体または抗体フラグメントは、配列ＷＡＳＳＲＨＮ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６）を含む軽鎖ＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体または抗体フラグメントは、配列ＱＱＹＳＲＹＰＬＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８）を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。
【００５６】
いくつかの実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体または抗体フラグメントは、配列ＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８５）を含む軽鎖ＣＤＲ１を含む。
【００５７】
特定の実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体または抗体フラグメントは以下のものを含む：（ｉ）ＬＣ  ＣＤＲ１は配列ＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８５）を含み、（ｉｉ）  ＬＣ  ＣＤＲ２は配列：ＷＡＳＳＲＨＮ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６）を含み、および、（ｉｉｉ）ＨＣ  ＣＤＲ３は配列：ＱＱＹＳＲＹＰＬＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８）を含む。
【００５８】
さらなる実施形態の、ＬＣ  ＣＤＲ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏｓ：４６、５６、５７、５８、５９、または６１で記載される配列を含む。それぞれの可能性は、本発明の別の実施形態を表わす。
【００５９】
いくつかの特定の実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体またはフラグメントは、配列：ＧＹＴＦＳＮＹＷＩＥ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６）を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列：ＥＩＦＰＧＳＧＲＩＮＦＮＥＫＦＫＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８）を含む重鎖ＣＤＲ２、配列：ＴＫＩＹＧＮＳＦＤＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０）を含む重鎖ＣＤＲ３、配列：ＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４）を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列：ＷＡＳＳＲＨＮ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６）を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列：ＱＱＹＳＲＹＰＬＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８）を含む軽鎖ＣＤＲ３、あるいはＨＶＲ配列におけるせいぜい５％のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を含むそのアナログを含む。
【００６０】
いくつかの特定の実施形態によれば、以下からなる単離されたモノクローナル抗体またはフラグメントがある：ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６とＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８４からなる群から選択された配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８で説明される配列を有する重鎖ＣＤＲ２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０で説明される配列を有する重鎖ＣＤＲ３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４とＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８５からなる群から選択された配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６で説明される配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８で説明される配列を有する軽鎖ＣＤＲ３。
【００６１】
いくつかの特定の実施形態によれば、以下からなる単離されたモノクローナル抗体またはフラグメントがある：ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８４で説明される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８で説明される配列を有する重鎖ＣＤＲ２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０で説明される配列を有する重鎖ＣＤＲ３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８５で説明される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６０、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６１からなる群から選択された配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８で説明される配列を有する軽鎖ＣＤＲ３。それぞれの可能性は、本発明の別の実施形態を表わす。
【００６２】
いくつかの実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体またはフラグメントは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７７で記載される重鎖可変領域、あるいはその重鎖可変領域配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアナログまたは誘導体を含む。
【００６３】
いくつかの実施形態によれば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４のアナログは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７７で説明される配列を有する重鎖可変領域である。
【００６４】
いくつかの実施形態によれば、単離されたモノクローナル抗体またはフラグメントは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７９で説明される軽鎖可変領域、またはその軽鎖可変領域配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアナログを含む。
【００６５】
いくつかの実施形態によれば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２のアナログは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９に記載される配列を有する軽鎖可変領域である。
【００６６】
特異的な実施形態によれば、単離したモノクローナル抗体又はそのフラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７から成る群から選択される配列を有する重鎖可変領域、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９から成る群から選択される配列を有する軽鎖可変領域、或いは、軽鎖及び／又は重鎖配列との少なくとも９０％の配列同一性を持つそれらのアナログを含む。
【００６７】
いくつかの実施形態によれば、単離したモノクローナル抗体又はそのフラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４に記載される配列を有する重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５３又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４に記載される配列を有する軽鎖可変領域；又は、軽鎖及び／又は重鎖配列との少なくとも９０％の配列同一性を持つそれらのアナログを含む。可能性はそれぞれ、本発明の別個の実施形態を表わす。
【００６８】
本発明はまた、ｍＡｂ ５Ｂ９が結合するヒトＰＶＲタンパク質内でエピトープに対する高親和性での結合を可能にする抗体又は抗体フラグメントを囲む。
【００６９】
いくつかの実施形態によれば、単離した抗体又はそのフラグメントは、少なくとも１０−８Ｍの親和性を持つヒトＰＶＲを認識する。他の実施形態によれば、抗体又は抗体フラグメントは、１０−８Ｍ、５ｘ１０−９Ｍ、１０−９Ｍ、５ｘ１０−１０Ｍ、１０−１０Ｍ、５ｘ１０−１１Ｍ、又はそれより上の親和性で、ヒトＰＶＲに結合する。可能性はそれぞれ、本発明の別個の実施形態を表わす。
【００７０】
単離したｍＡｂ抗体のアナログ及び誘導体、及び上述の抗体フラグメントも、本発明の範囲内である。いくつかの実施形態において、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、１０、１８、２６、３４、及び４２から成る群から選択された配列に記載される少なくとも１つの可変領域を含む、特定のアナログ又は単離したｍＡｂ或いはそのフラグメントも、本発明の範囲内である。いくつかの実施形態において、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９、７１、７３、７５、７７、及び７９から成る群から選択された配列に記載される少なくとも１つの可変領域を含む、単離したｍＡｂ或いはそのフラグメントも、本発明の範囲内である。
【００７１】
いくつかの実施形態によれば、抗体又は抗体フラグメントのアナログは、基準抗体配列の超可変領域との少なくとも９０％の配列同一性を持つ。
【００７２】
特異的な実施形態によれば、単離した抗体のアナログ又は誘導体、或いはそのフラグメントは、基準抗体配列の可変領域との少なくとも９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の配列同一性を持つ。可能性はそれぞれ、本発明の別個の実施形態を表わす。
【００７３】
いくつかの実施形態によれば、本発明に係る抗体又は抗体フラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９に記載される重鎖可変領域、又は前記配列との少なくとも９５％の配列類似性を持つアナログを含む。他の実施形態によれば、本発明に係る抗体又は抗体フラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３に記載される重鎖可変領域、又は前記配列との少なくとも９５％の配列類似性を持つアナログを含む。他の実施形態によれば、本発明に係る抗体又は抗体フラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７に記載される重鎖可変領域、又は前記配列との少なくとも９５％の配列類似性を持つアナログを含む。
【００７４】
いくつかの実施形態によれば、抗体又は抗体フラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１に記載される軽鎖可変領域、又は前記配列との少なくとも９５％の配列類似性を持つアナログを含む。他の実施形態によれば、抗体又は抗体フラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５に記載される軽鎖可変領域、又は前記配列との少なくとも９５％の配列類似性を持つアナログを含む。他の実施形態によれば、抗体又は抗体フラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９に記載される軽鎖可変領域、又は前記配列との少なくとも９５％の配列類似性を持つアナログを含む。
【００７５】
いくつかの実施形態によれば、抗体又は抗体フラグメントは重鎖と軽鎖を含み、ここで：（ｉ）重鎖はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２を含み、軽鎖はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０を含み；（ｉｉ）重鎖はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８を含み、軽鎖はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６を含み；又は（ｉｉｉ）重鎖はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４を含み、軽鎖はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２を含む。前記重鎖又は軽鎖との少なくとも９５％の配列類似性を持つ抗体又はフラグメントのアナログも、含まれる。
【００７６】
他の実施形態によれば、抗体又は抗体フラグメントは重鎖と軽鎖を含み、ここで：（ｉ）重鎖はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９を含み、軽鎖はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１を含み；（ｉｉ）重鎖はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３を含み、軽鎖はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５を含み；又は（ｉｉｉ）重鎖はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７を含み、軽鎖はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９を含む。前記重鎖又は軽鎖との少なくとも９５％の配列類似性を持つ抗体又はフラグメントのアナログも、含まれる。
【００７７】
いくつかの実施形態によれば、アナログは、上述の抗体の軽鎖又は重鎖の可変領域との少なくとも９６、９７、９８、又は９９％の配列同一性を持つ。いくつかの実施形態によれば、アナログは、超可変領域の１つ以上のＣＤＲ配列、即ちＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、６、８、１２、１４、１６、２０、２２、２４、２８、３０、３２、３６、３８、４０、４４、４６、４８、８０、８１、８２、８３、８４、及び８５に記載されるＣＤＲ配列の何れか１つへの、わずか１つのアミノ酸の置換、欠失、又は追加しか含まない。可能性はそれぞれ、本発明の別個の実施形態を表わす。いくつかの実施形態によれば、アミノ酸置換は保守的置換である。
【００７８】
いくつかの実施形態によれば、抗体又は抗体フラグメントは、１、２、３、４、又は５つのアミノ酸が置換され、欠失され、及び／又は追加される、上記に定義される軽鎖及び重鎖を持つ超可変領域（ＨＶＲ）を含む。可能性はそれぞれ、本発明の別個の実施形態を表わす。
【００７９】
いくつかの実施形態によれば、抗体又は抗体フラグメントは、１つのアミノ酸が置換される、上記に定義される軽鎖及び重鎖を持つＨＶＲを含む。特異的な実施形態によれば、抗体又は抗体フラグメントは、１つのアミノ酸が置換される、上記で定義されるようなＣＤＲを含む。いくつかの特異的な実施形態によれば、抗体又は抗体フラグメントは、１つのアミノ酸が置換される、上記で定義されるような軽鎖ＣＤＲ２を含む。
【００８０】
いくつかの特異的な実施形態によれば、抗体又は抗体フラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５（ＷＡＳＳＲＨＸ）に記載される配列を持つ軽鎖ＣＤＲ２を含み、ここでＸは、Ａ、Ｒ、Ｄ、Ｅ、Ｐ及びＴから成る群から選択される。可能性はそれぞれは、本発明の別個の実施形態を表わす。
【００８１】
いくつかの実施形態によれば、抗体又は抗体フラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６−６１から成る群から選択される配列を持つ軽鎖ＣＤＲ２を含む。
【００８２】
いくつかの実施形態によれば、単離したモノクローナル抗体又は抗体フラグメントは、以下から成る群から選択されたＣＤＲセットを含む：
ｉ．６つのＣＤＲのＣＤＲセットであって、ここで、ＨＣ ＣＤＲ１は、ＧＹＴＦＳＮＹＷＩＥ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６）及びＳＮＹＷＩＥ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８４）から選択され；ＨＣ ＣＤＲ２はＥＩＦＰＧＳＧＲＩＮＦＮＥＫＦＫＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８）であり；ＨＣ ＣＤＲ３はＴＫＩＹＧＮＳＦＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０）であり；ＬＣ ＣＤＲ１は、ＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＶ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４）及びＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８５）から選択され；ＬＣ ＣＤＲ２は、ＷＡＳＳＲＨＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６）、ＷＡＳＳＲＨＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６）、ＷＡＳＳＲＨＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７）、ＷＡＳＳＲＨＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８）、ＷＡＳＳＲＨＥ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９）、ＷＡＳＳＲＨＰ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０）及びＷＡＳＳＲＨＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１）から成る群から選択され；及び、ＬＣ ＣＤＲ３はＱＱＹＳＲＹＰＬＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８）である。
ｉｉ．６つのＣＤＲのＣＤＲセットであって、ここで、ＨＣ ＣＤＲ１配列は、ＧＦＤＦＳＲＹＷ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）及びＲＹＷＭＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８０）から選択され；ＨＣ ＣＤＲ２は、ＥＩＨＰＤＳＳＫＩＮＹＴＰＳＱ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）及びＥＩＨＰＤＳＳＫＩＮＹＴＰＳＱＫＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１）から選択され；ＨＣ ＣＤＲ３は、ＰＤＧＮＹＮＡＬＤＹＷ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）及びＰＤＧＮＹＮＡＬＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２）から選択され；ＬＣ ＣＤＲ１はＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）であり；ＬＣ ＣＤＲ２はＷＡＳＴＲＨＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４）であり；及び、ＬＣ ＣＤＲ３はＱＱＹＳＲＹＰＹＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）である。
ｉｉｉ．６つのＣＤＲのＣＤＲセットであって、ここで、ＨＣ ＣＤＲ１配列は、ＧＹＴＦＴＥＹＴＭＨ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０）及びＥＹＴＭＨ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３）から選択され；ＨＣ ＣＤＲ２はＧＩＤＰＮＮＧＧＴＮＹＮＱＮＦＫＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）であり；ＨＣ ＣＤＲ３はＶＩＰＬＥＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）であり；ＬＣ ＣＤＲ１はＫＡＳＱＮＶＹＴＮＶＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８）であり；ＬＣ ＣＤＲ２はＳＡＳＹＲＹＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）であり；及び、ＬＣ ＣＤＲ３はＱＱＹＮＳＹＰＬＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２）である。
【００８３】
本発明は、特異的にヒトタンパク質ＰＶＲを結合するモノクローナル抗体、又はその結合フラグメントを提供し、ここで前記モノクローナル抗体又はフラグメントは、６つのＣＤＲ配列のセットを含み、前記セットは以下から成る群から選択される：
ｉ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．４、６、８、１２、１４、及び１６；
ｉｉ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２０、２２、２４、２８、３０、及び３２；
ｉｉｉ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．３６、３８、４０、４４、４６、及び４８；
ｉｖ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．３６、３８、４０、４４、５５、及び４８；
ｖ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．８０、８１、８２、１２、１４、及び１６；
ｖｉ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．８３、２２、２４、２８、３０、及び３２；
ｖｉｉ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．８４、３８、４０、８５、４６及び４８；並びに
ｖｉｉｉ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．８４、３８、４０、８５、５５、及び４８。
【００８４】
本発明はまた、重鎖及び軽鎖を含む、モノクローナル抗体及びその結合フラグメントを提供し、ここで、前記鎖は重鎖可変領域配列及び軽鎖可変領域配列を含み、前記セットは以下から成る群から選択される：
ｉ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２及び１０；
ｉｉ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９及び７１；
ｉｉｉ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８及び２６；
ｉｖ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３及び７５；
ｖ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４及び４２；並びに
ｖｉ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７及び７９。
【００８５】
いくつかの実施形態によれば、抗体又は抗体フラグメントは、Ｔ細胞又はＮＫ細胞の上で発現されるＴＩＧＩＴに結合するヒトＰＶＲを阻害することができる。
【００８６】
特異的な実施形態によれば、ｍＡｂは、キメラ抗体、及び抗体の少なくとも抗原結合部分を含む抗体フラグメントから成る群から選択される。特異的な実施形態によれば、抗体はキメラ抗体である。また他の実施形態によれば、キメラ抗体はヒト不変部領域を含む。また他の実施形態によれば、キメラモノクローナル抗体はヒトＩｇＧ１不変部領域を含む。特異的な実施形態によれば、抗体フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｄ’、Ｆｖ、ｄＡｂ、単離したＣＤＲ領域、単鎖抗体（痂皮（ｓｃａｂ））、「二重特異性抗体」、及び「直鎖抗体」から成る群から選択される。可能性はそれぞれ、本発明の別個の実施形態を表わす。
【００８７】
いくつかの実施形態によれば、抗体又は抗体フラグメントは、マウスＩｇＧ２ａ、マウスＩｇＧ２ｂ、マウスＩｇＧ３、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ３、及びヒトＩｇＧ４から成る群から選択されたフレームワーク配列を含む。可能性はそれぞれ、本発明の別個の実施形態を表わす。
【００８８】
いくつかの実施形態によれば、上述のような抗体又はそのフラグメントを含む複合体が提供される。
【００８９】
いくつかの実施形態によれば、複合体は担体タンパク質を含む。
【００９０】
モノクローナル抗体をコードするポリヌクレオチド配列は、ＰＶＲに加え、これらポリヌクレオチド配列を持つベクターと宿主細胞に対する高親和性及び特異性を持っており、本発明の別の態様に従い提供される。
【００９１】
いくつかの実施形態によれば、上記のＨＣ可変領域及びＬＣ可変領域のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列が提供される。
【００９２】
いくつかの実施形態によれば、ポリヌクレオチド配列は、ヒトＰＶＲタンパク質内でエピトープに結合することができる抗体、抗体フラグメント、又は鎖をコードし、前記ヒトＰＶＲタンパク質は、（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の重鎖可変領域及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０の軽鎖可変領域を持つモノクローナル抗体（本明細書では４Ｅ５と識別される）；（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８の重鎖可変領域及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６の軽鎖可変領域を持つモノクローナル抗体（本明細書では７Ｄ４と識別される）；又は（ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４の重鎖可変領域及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２の軽鎖可変領域を持つモノクローナル抗体（本明細書では５Ｂ９と識別される）に結合する。
【００９３】
いくつかの実施形態によれば、ポリヌクレオチド配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９に記載される配列を含む、抗体、抗体フラグメント、又は鎖をコードする。いくつかの実施形態によれば、ポリヌクレオチド配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１に記載される配列を含む、抗体、抗体フラグメント、又は鎖をコードする。
【００９４】
他の実施形態によれば、ポリヌクレオチド配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３に記載される配列を含む、抗体、抗体フラグメント、又は鎖をコードする。付加的な実施形態によれば、ポリヌクレオチド配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５に記載される配列を含む、抗体、抗体フラグメント、又は鎖をコードする。
【００９５】
他の実施形態によれば、ポリヌクレオチド配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７に記載される配列を含む、抗体、抗体フラグメント、又は鎖をコードする。付加的な実施形態によれば、ポリヌクレオチド配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９に記載される配列を含む、抗体、抗体フラグメント、又は鎖をコードする。
【００９６】
またいくつかの実施形態によれば、本発明に係るポリヌクレオチド配列は、以下の６つのＣＤＲ配列を含む、抗体、抗体フラグメント、又は鎖をコードする：（ｉ）配列：ＧＦＤＦＳＲＹＷ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）又はＲＹＷＭＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８０）を持つ重鎖ＣＤＲ１、配列：ＥＩＨＰＤＳＳＫＩＮＹＴＰＳＱ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）を持つ重鎖ＣＤＲ２、配列：ＰＤＧＮＹＮＡＬＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２）を持つ重鎖ＣＤＲ３、配列：ＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）を持つ軽鎖ＣＤＲ１、配列：ＷＡＳＴＲＨＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４）を持つ軽鎖ＣＤＲ２、及び配列：ＱＱＹＳＲＹＰＹＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）を持つ軽鎖ＣＤＲ３；（ｉｉ）配列：ＥＹＴＭＨ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３）を持つ重鎖ＣＤＲ１、配列：ＧＩＤＰＮＮＧＧＴＮＹＮＱＮＦＫＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）を持つ重鎖ＣＤＲ２、配列：ＶＩＰＬＥＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）を持つ重鎖ＣＤＲ３、配列：ＫＡＳＱＮＶＹＴＮＶＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８）を持つ軽鎖ＣＤＲ１、配列：ＳＡＳＹＲＹＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）を持つ軽鎖ＣＤＲ２、及び配列：ＱＱＹＮＳＹＰＬＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２）を持つ軽鎖ＣＤＲ３；又は（ｉｉｉ）配列：ＳＮＹＷＩＥ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８４）を持つ重鎖ＣＤＲ１、配列：ＥＩＦＰＧＳＧＲＩＮＦＮＥＫＦＫＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８）を持つ重鎖ＣＤＲ２、配列：ＴＫＩＹＧＮＳＦＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０）を持つ重鎖ＣＤＲ３、配列：ＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８５）を持つ軽鎖ＣＤＲ１、配列：ＷＡＳＳＲＨＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６）を持つ軽鎖ＣＤＲ２、及び配列：ＱＱＹＳＲＹＰＬＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８）を持つ軽鎖ＣＤＲ３。
【００９７】
いくつかの実施形態によれば、上記で定義されたポリヌクレオチド配列は、抗体、少なくとも抗原結合部分を含む抗体フラグメント、及び前記抗体又は抗体フラグメントを含む抗体複合体から成る群から選択される分子をコードする。可能性はそれぞれ、本発明の別個の実施形態を表わす。
【００９８】
いくつかの実施形態によれば、モノクローナル抗体重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチド配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８に記載される配列、又は少なくとも９０％の配列同一性を持つその変異体を含む。
【００９９】
いくつかの実施形態によれば、モノクローナル抗体重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチド配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２に記載される配列、又は少なくとも９０％の配列同一性を持つその変異体を含む。
【０１００】
いくつかの実施形態によれば、モノクローナル抗体重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチド配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６に記載される配列、又は少なくとも９０％の配列同一性を持つその変異体を含む。
【０１０１】
いくつかの実施形態によれば、モノクローナル抗体軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチド配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０に記載される配列、又は少なくとも９０％の配列同一性を持つその変異体を含む。
【０１０２】
いくつかの実施形態によれば、モノクローナル抗体軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチド配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４に記載される配列、又は少なくとも９０％の配列同一性を持つその変異体を含む。
【０１０３】
いくつかの実施形態によれば、モノクローナル抗体軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチド配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８に記載される配列、又は少なくとも９０％の配列同一性を持つその変異体を含む。
【０１０４】
本発明は、いくつかの実施形態によれば、上記に開示された少なくとも１つのポリヌクレオチド配列でコードされた少なくとも１つの配列を含むポリペプチドを提供する。
【０１０５】
更なる態様において、本発明は、本発明に従い少なくとも１つの抗体鎖又はそのフラグメントをコードする核酸分子を含む、核酸構築物を提供する。いくつかの実施形態によれば、核酸構築物はプラスミドである。
【０１０６】
いくつかの実施形態によれば、プラスミドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３に記載されるポリヌクレオチド配列を含む。
【０１０７】
いくつかの実施形態によれば、プラスミドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６に記載されるポリヌクレオチド配列を含む。
【０１０８】
他の実施形態によれば、プラスミドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１に記載されるポリヌクレオチド配列を含む。
【０１０９】
他の実施形態によれば、プラスミドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８に記載されるポリヌクレオチド配列を含む。
【０１１０】
また別の態様において、本発明は、上記で定義される特異的なＣＤＲ配列及び／又は特異的な重鎖及び軽鎖可変領域を含む抗体又は抗体フラグメントを生成することができるハイブリドーマ細胞を提供する。
【０１１１】
いくつかの実施形態によれば、上記に開示された少なくとも１つのポリヌクレオチド配列を含むハイブリドーマ細胞が提供される。
【０１１２】
いくつかの実施形態によれば、ハイブリドーマは、以下の６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を含むモノクローナル抗体を生成することができる：（ｉ）配列：ＧＦＤＦＳＲＹＷ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）又はＲＹＷＭＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８０）を持つ重鎖ＣＤＲ１、配列：ＥＩＨＰＤＳＳＫＩＮＹＴＰＳＱ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）を持つ重鎖ＣＤＲ２、配列：ＰＤＧＮＹＮＡＬＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２）を持つ重鎖ＣＤＲ３、配列：ＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）を持つ軽鎖ＣＤＲ１、配列：ＷＡＳＴＲＨＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４）を持つ軽鎖ＣＤＲ２、及び配列：ＱＱＹＳＲＹＰＹＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）を持つ軽鎖ＣＤＲ３；（ｉｉ）配列：ＥＹＴＭＨ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３）を持つ重鎖ＣＤＲ１、配列：ＧＩＤＰＮＮＧＧＴＮＹＮＱＮＦＫＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）を持つ重鎖ＣＤＲ２、配列：ＶＩＰＬＥＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）を持つ重鎖ＣＤＲ３、配列：ＫＡＳＱＮＶＹＴＮＶＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８）を持つ軽鎖ＣＤＲ１、配列：ＳＡＳＹＲＹＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）を持つ軽鎖ＣＤＲ２、及び配列：ＱＱＹＮＳＹＰＬＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２）を持つ軽鎖ＣＤＲ３；又は（ｉｉｉ）配列：ＳＮＹＷＩＥ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８４）を持つ重鎖ＣＤＲ１、配列：ＥＩＦＰＧＳＧＲＩＮＦＮＥＫＦＫＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８）を持つ重鎖ＣＤＲ２、配列：ＴＫＩＹＧＮＳＦＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０）を持つ重鎖ＣＤＲ３、配列：ＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８５）を持つ軽鎖ＣＤＲ１、配列：ＷＡＳＳＲＨＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６）を持つ軽鎖ＣＤＲ２、及び配列：ＱＱＹＳＲＹＰＬＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８）を持つ軽鎖ＣＤＲ３。
【０１１３】
本発明のそれらの抗体又はフラグメントは、細胞傷害性部分、放射性部分、又は識別可能な部分に付けられ得る。
【０１１４】
本発明は、別の態様に従い、高親和性及び特異性を持つＰＶＲを認識する有効成分、少なくとも１つの抗体、又はその抗体フラグメント或いは複合体と、随意に少なくとも１つの薬学的に許容可能な賦形剤、希釈剤、塩、又は担体とを含む、医薬組成物を提供する。
【０１１５】
いくつかの実施形態によれば、医薬組成物は、以下から成る群から選択されるモノクローナル抗体に結合するヒトＰＶＲタンパク質内でエピトープに結合することができる、モノクローナル抗体又はそのフラグメントを含む：（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の重鎖可変領域及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０の軽鎖可変領域を持つ４Ｅ５（ＰＶＲ．０７とも称される）として本明細書で識別される抗体；（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８の重鎖可変領域及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６の軽鎖可変領域を持つ７Ｄ４（ＰＶＲ．０１とも称される）として本明細書で識別される抗体；及び（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４の重鎖可変領域及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２の軽鎖可変領域を持つ５Ｂ９（ＰＶＲ．０９とも称される）として本明細書で識別される抗体。
【０１１６】
いくつかの実施形態によれば、医薬組成物は、以下の６つのＣＤＲを含むモノクローナル抗体又はその抗体フラグメントを含む：（ｉ）配列：ＧＦＤＦＳＲＹＷ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）又はＲＹＷＭＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８０）を持つ重鎖ＣＤＲ１、配列：ＥＩＨＰＤＳＳＫＩＮＹＴＰＳＱ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）を持つ重鎖ＣＤＲ２、配列：ＰＤＧＮＹＮＡＬＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２）を持つ重鎖ＣＤＲ３、配列：ＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）を持つ軽鎖ＣＤＲ１、配列：ＷＡＳＴＲＨＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４）を持つ軽鎖ＣＤＲ２、及び配列：ＱＱＹＳＲＹＰＹＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）を持つ軽鎖ＣＤＲ３；（ｉｉ）配列：ＥＹＴＭＨ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３）を持つ重鎖ＣＤＲ１、配列：ＧＩＤＰＮＮＧＧＴＮＹＮＱＮＦＫＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）を持つ重鎖ＣＤＲ２、配列：ＶＩＰＬＥＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）を持つ重鎖ＣＤＲ３、配列：ＫＡＳＱＮＶＹＴＮＶＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８）を持つ軽鎖ＣＤＲ１、配列：ＳＡＳＹＲＹＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）を持つ軽鎖ＣＤＲ２、及び配列：ＱＱＹＮＳＹＰＬＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２）を持つ軽鎖ＣＤＲ３；又は（ｉｉｉ）配列：ＳＮＹＷＩＥ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８４）を持つ重鎖ＣＤＲ１、配列：ＥＩＦＰＧＳＧＲＩＮＦＮＥＫＦＫＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８）を持つ重鎖ＣＤＲ２、配列：ＴＫＩＹＧＮＳＦＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０）を持つ重鎖ＣＤＲ３、配列：ＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８５）を持つ軽鎖ＣＤＲ１、配列：ＷＡＳＳＲＨＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６）を持つ軽鎖ＣＤＲ２、及び配列：ＱＱＹＳＲＹＰＬＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８）を持つ軽鎖ＣＤＲ３。
【０１１７】
いくつかの実施形態によれば、医薬組成物は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７から成る群から選択される配列を持つ重鎖可変領域を含む、モノクローナル抗体又はそのフラグメントを含む。可能性はそれぞれ、本発明の別個の実施形態を表わす。
【０１１８】
いくつかの実施形態によれば、医薬組成物は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９から成る群から選択される配列を持つ軽鎖可変領域を含む、モノクローナル抗体又はそのフラグメントを含む。可能性はそれぞれ、本発明の別個の実施形態を表わす。
【０１１９】
特異的な実施形態によれば、医薬組成物は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９に記載される配列を持つ重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１に記載される配列を持つ軽鎖可変領域含む、モノクローナル抗体又はそのフラグメントを含む。
【０１２０】
特異的な実施形態によれば、医薬組成物は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３に記載される配列を持つ重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６又はＤＥＳ  ＩＤ  ＮＯ：７５に記載される配列を持つ軽鎖可変領域を含む、モノクローナル抗体又はそのフラグメントを含む。
【０１２１】
特異的な実施形態によれば、医薬組成物は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７に記載される配列を持つ重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９に記載される配列を持つ軽鎖可変領域を含むモノクローナル抗体又はそのフラグメントを含む。
【０１２２】
いくつかの実施形態によれば、医薬組成物は、ヒトＰＶＲを認識する、少なくとも２つの抗体又は抗体フラグメントの組み合わせを含む。
【０１２３】
また他の実施形態によれば、医薬組成物は、本発明に係るＰＶＲに特異的に結合する１つのｍＡｂ又はフラグメント、及び、細胞受容体、腫瘍抗原、又は免疫調節タンパク質などの異なる抗原に特異的に結合する１つのｍＡｂ又はフラグメントを含む。
【０１２４】
また、ＮＫ細胞の上で発現されるＴＩＧＩＴへのＰＶＲの結合を阻害することによってＮＫ細胞傷害性を戻す際に使用するための、本発明に係る少なくとも１つの抗体、抗体フラグメント、又は抗体複合体を含む医薬組成物も提供される。
【０１２５】
いくつかの実施形態によれば、抗体、抗体フラグメント、又は抗体複合体は、Ｔ細胞の上で発現されるＴＩＧＩＴに結合するヒトＰＶＲを阻害することができる。
【０１２６】
いくつかの実施形態によれば、本発明の医薬組成物は、癌免疫療法において又は免疫応答の増強において使用するためのものである。
【０１２７】
癌は、ＰＶＲを発現する癌であり得る。いくつかの実施形態によれば、癌はＰＶＲを過剰発現する。
【０１２８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、癌は転移癌である。いくつかの実施形態によれば、本発明の医薬組成物は、被験体における転移の形成又は分布を阻害する又は転移の総数を減らすために使用するためのものである。
【０１２９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、癌は、黒色腫、乳癌、卵巣癌、膵臓癌、大腸癌、結腸癌、子宮頚癌、腎癌、肺癌、甲状腺癌、前立腺癌、脳癌、腎癌、咽喉癌、喉頭細胞腫、膀胱癌、肝臓癌、線維肉腫、子宮内膜細胞癌、膠芽腫、肉腫、骨髄性、白血病、及びリンパ腫から成る群から選択される。可能性はそれぞれ、本発明の別個の実施形態を表わす。
【０１３０】
いくつかの実施形態によれば、癌は固形癌である。いくつかの特異的な実施形態によれば、固形癌は、黒色腫（皮膚）、肺癌、結腸癌、乳癌、子宮癌、及び腎癌から成る群から選択される。特異的な実施形態によれば、癌は、乳癌、肺癌、及び脂肪肉腫から成る群から選択される。
【０１３１】
他の実施形態によれば、癌は血液の癌である。いくつかの実施形態によれば、血液の癌は、骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、骨髄増殖性疾患、多発性骨髄腫、又は骨髄異形成症候群である。可能性はそれぞれ、本発明の別個の実施形態を表わす。特異的な実施形態によれば、癌は白血病である。特異的な実施形態によれば、癌は急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。
【０１３２】
いくつかの実施形態によれば、本発明に係る医薬組成物は、ウイルス感染の処置に使用される。
【０１３３】
いくつかの実施形態によれば、ウイルス感染は、感染細胞の表面上のＰＶＲを介して標的細胞に結合するウイルスによって引き起こされる。
【０１３４】
いくつかの実施形態によれば、本発明の医薬組成物は血管新生に関連する疾患または障害の処置に使用される。特定の実施形態によると、血管新生に関連する疾患または障害は、以下から成る群から選択される：癌、眼の細胞増殖性疾患（眼の疾患）、網膜障害および炎症性疾患。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表わす。
【０１３５】
さらに別の態様によれば、本発明は、上記で定義されたモノクローナル抗体または抗体フラグメントの使用により、少なくとも１つのリガンドとヒトＰＶＲの結合を阻害する方法を提供する。
【０１３６】
さらなる態様によれば、本発明は、上記で定義された治療上有効な量のモノクローナル抗体、抗体フラグメントまたは抗体複合体を上記被験体に投与する工程を含む、それを必要とする被験体における免疫応答を増強するための方法を提供する。
【０１３７】
さらに別の態様によれば、本発明は、高親和性および特異性を備えたヒトＰＶＲを認識し、および、そのリガンドへの結合を阻害することができる、少なくとも１つの抗体、抗体フラグメントまたはその複合体を含む、治療上有効な量の医薬組成物を、それを必要とする被験体に投与することを含む、癌を処置する工程を提供する。
【０１３８】
いくつかの実施形態によれば、投与された医薬組成物における抗体は、以下から成る群から選択される：（ｉ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２に記載の重鎖可変領域に含まれるＣＤＲ配列、および、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０に記載の軽鎖可変領域に含まれるＣＤＲ配列、を含むモノクローナル抗体；（ｉｉ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８に記載の重鎖可変領域に含まれるＣＤＲ配列、および、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６に記載の軽鎖可変領域に含まれるＣＤＲ配列、を含むモノクローナル抗体；または、（ｉｉｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４に記載の重鎖可変領域に含まれるＣＤＲ配列、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２に記載の軽鎖可変領域に含まれるＣＤＲ配列、を含むモノクローナル抗体。
【０１３９】
いくつかの特定の実施形態によれば、投与された医薬組成物におけるモノクローナル抗体は、以下を含む：重鎖ＣＤＲ１は、ＧＦＤＦＳＲＹＷ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４）およびＲＹＷＭＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８０）から成る群から選択された配列を含む；重鎖ＣＤＲ２は配列：ＥＩＨＰＤＳＳＫＩＮＹＴＰＳＱ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６）を含む；重鎖ＣＤＲ３は配列：ＰＤＧＮＹＮＡＬＤＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８２）を含む；軽鎖ＣＤＲ１は配列：ＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２）を含む；軽鎖ＣＤＲ２は配列：ＷＡＳＴＲＨＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４）を含む；および、軽鎖ＣＤＲ３は配列：ＱＱＹＳＲＹＰＹＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６）を含む。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表わす。
【０１４０】
他の特定の実施形態によれば、投与された医薬組成物におけるモノクローナル抗体は、以下を含む：重鎖ＣＤＲ１は配列ＥＹＴＭＨ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８３）を含む；重鎖ＣＤＲ２は配列：ＧＩＤＰＮＮＧＧＴＮＹＮＱＮＦＫＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２）を含む；重鎖ＣＤＲ３は配列：ＶＩＰＬＥＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４）を含む；軽鎖ＣＤＲ１は配列：ＫＡＳＱＮＶＹＴＮＶＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８）を含む；軽鎖ＣＤＲ２は配列：ＳＡＳＹＲＹＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０）を含む；および、軽鎖ＣＤＲ３は配列：ＱＱＹＮＳＹＰＬＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２）を含む。
【０１４１】
他の特定の実施形態によれば、投与された医薬組成物におけるモノクローナル抗体は、以下を含む：重鎖ＣＤＲ１は配列ＳＮＹＷＩＥ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８４）を含む；重鎖ＣＤＲ２は配列：ＥＩＦＰＧＳＧＲＩＮＦＮＥＫＦＫＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８）を含む；重鎖ＣＤＲ３は配列：ＴＫＩＹＧＮＳＦＤＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０）を含む；軽鎖ＣＤＲ１は配列：ＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８５）を含む；軽鎖ＣＤＲ２は配列：ＷＡＳＳＲＨＮ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６）を含む；および、軽鎖ＣＤＲ３は配列：ＱＱＹＳＲＹＰＬＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８）を含む。
【０１４２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、治療上有効な量は、被験体における腫瘍の大きさまたは転移の数の低減をもたらす。
【０１４３】
いくつかの実施形態によれば、癌を処置する方法は、少なくとも１つの追加的な抗癌治療を投与または実施する工程を含む。特定の実施形態によると、追加的な抗癌治療は、手術、化学療法、放射線療法または免疫療法である。
【０１４４】
いくつかの実施形態によれば、癌を処置する方法は、高親和性および特異性を備えたヒトＰＶＲを認識するモノクローナル抗体と、追加の抗癌剤と、の投与を含む。いくつかの実施形態によれば、追加の抗癌剤は以下から成る群から選択される：免疫調節剤、活性化リンパ球細胞、キナーゼ阻害剤および化学療法剤。
【０１４５】
他の実施形態によれば、さらなる免疫調節剤は、ヒトＰＶＲ以外の抗原に対して結合する、抗体、抗体フラグメントまたは抗体複合体である。
【０１４６】
いくつかの実施形態によれば、追加の免疫調節剤は免疫チェックポイント分子に対する抗体である。いくつかの実施形態によれば、追加の免疫調節剤は、ヒトプログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２、癌胎児抗原関連細胞接着分子１（ＣＥＡＣＡＭ１）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３）、ＣＤ１３７、ＯＸ４０（ＣＤ１３４とも呼ばれる）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、ＴＩＧＩＴ、および、任意のそれらの組み合わせ、からなる群から選択される免疫チェックポイント分子に対する抗体である。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表わす。
【０１４７】
いくつかの実施形態によれば、抗癌剤は以下のことから成る群から選択される：エルビタックス、シタラビン、フルダラビン、フルオロウラシル、メルカプトプリン、メトトレキセート、チオグアニン、ゲムシタビン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、カルムスチン、ロムスチン、クロラムブチル、シクロホスファミド、シスプラチン、カルボプラチン、イホスファミド、メクロレタミン、メルファラン、チオテパ、ダカルバジン、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、イダルビシン、マイトマイシン、ミトキサントロン、プリカマイシン、エトポシド、テニポシド、および任意のそれらの組み合わせ。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表わす。
【０１４８】
いくつかの実施形態によれば、抗癌剤は、表皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤である。いくつかの実施形態によれば、ＥＧＦＲ阻害剤は以下から成る群から選択される：セツキシマブ（エルビタックス（登録商標））、パニツムマブ（ベクティビックス（登録商標））およびネシツムマブ（ポルトラッザ（Ｐｏｒｔｒａｚｚａ）（登録商標））。いくつかの実施形態によれば、ＥＧＦＲ阻害剤はセツキシマブ（エルビタックス（登録商標））である。
【０１４９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、被験体はヒトの被験体である。
【０１５０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、使用は、免疫共抑制受容体の活性または発現をダウンレギュレートする薬剤の使用をさらに含む。
【０１５１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、免疫細胞はＴ細胞である。
【０１５２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、免疫共抑制受容体は、ＰＤ−１、ＴＩＧＩＴ、ＤＮＡＭ−１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７Ｈ４、ＣＤ９６、ＢＹ５５、ＬＡＩＲ１、ＳＩＧＬＥＣ１０および２Ｂ４から成る群から選択される。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表わす。
【０１５３】
ある態様によれば、本発明は、本発明に係る抗体を使用して、ＴＩＧＩＴへのＰＶＲの結合を調節することを含む、免疫系の機能および／または活性を調節するための方法を提供する。
【０１５４】
ある態様によれば、本発明は、ＣＤ１５５を進入受容体として使用するウイルスのウイルス感染を、必要とする被験体において予防または処置する方法を提供し、この方法は、本明細書に記載の抗ＰＶＲモノクローナル抗体の治療上有効な量を被験体に投与する工程を含む。いくつかの実施形態によれば、ウイルスは以下から成る群から選択される：ポリオウイルス、コクサッキーウィルス、アデノウイルスおよびヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）。
【０１５５】
さらに別の態様によれば、本発明は、血管新生に関連する疾患または障害を処置するための方法を提供する。特定の実施形態によると、血管新生に関連する疾患または障害は、以下から成る群から選択される：癌、眼の細胞の増殖性疾患（眼の疾患）、網膜障害および炎症性疾患。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表わす。
【０１５６】
いくつかの実施形態によれば、癌を処置する方法は、血管新生を阻害することにより、被験体における転移の形成、成長、または核酸を防止または減少させることに関わる。
【０１５７】
ある態様によれば、本発明は、被験体の癌または感染性疾患を診断または予知する方法を提供し、該方法は、本明細書に記載の少なくとも１つの抗体を用いて上記被験体の生物学的サンプル中のＰＶＲの発現レベルを判定する工程を含む。
【０１５８】
さらに別の態様によれば、本発明は、ＰＶＲの発現を判定または定量化する方法を含み、該方法は、生物学的サンプルを抗体または抗体フラグメントと接触させる工程、および、複合体形成のレベルを測定する工程を含み、ここにおいて、抗体または抗体フラグメントは、以下からなる群から選択される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む：（ｉ）配列：ＧＦＤＦＳＲＹＷ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４）またはＲＹＷＭＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８０）を有する重鎖ＣＤＲ１、配列：ＥＩＨＰＤＳＳＫＩＮＹＴＰＳＱ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６）を有する重鎖ＣＤＲ２、配列：ＰＤＧＮＹＮＡＬＤＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８２）を有する重鎖ＣＤＲ３、配列：ＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２）を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列：ＷＡＳＴＲＨＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４）を有する軽鎖ＣＤＲ２、および、配列：ＱＱＹＳＲＹＰＹＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６）を有する軽鎖ＣＤＲ３；（ｉｉ）配列ＥＹＴＭＨ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８３を有する重鎖ＣＤＲ１、配列：ＧＩＤＰＮＮＧＧＴＮＹＮＱＮＦＫＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２）を有する重鎖ＣＤＲ２、配列：ＶＩＰＬＥＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４）を有する重鎖ＣＤＲ３、配列：ＫＡＳＱＮＶＹＴＮＶＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８）を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列：ＳＡＳＹＲＹＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０）を有する軽鎖ＣＤＲ２、および、配列：ＱＱＹＮＳＹＰＬＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２）を有する軽鎖ＣＤＲ３；または、（ｉｉｉ）配列ＳＮＹＷＩＥ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８４）を有する重鎖ＣＤＲ１：配列：ＥＩＦＰＧＳＧＲＩＮＦＮＥＫＦＫＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８）を有する重鎖ＣＤＲ２、配列：ＴＫＩＹＧＮＳＦＤＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０）を有する重鎖ＣＤＲ３、配列：ＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８５）を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列：ＷＡＳＳＲＨＮ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６）を有する軽鎖ＣＤＲ２、、および、配列：ＱＱＹＳＲＹＰＬＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８）を有する軽鎖ＣＤＲ３。
【０１５９】
判定および定量化の方法は、いくつかの実施形態によればインビトロまたはエクスビボで実施してもよく、または、ＰＶＲの発現に関連する症状を診断する際に使用してもよい。本発明に係る抗体はまた、スクリーニングの方法を構成するために使用されてもよい。例えば、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、または放射線免疫測定（ＲＩＡ）は、当技術分野において公知の抗体および方法を使用して、分泌されたポリペプチドまたは、細胞関連のポリペプチドのレベルを測定するために構築されることができる。
【０１６０】
いくつかの実施形態によれば、ＰＶＲの存在を検出または定量化する方法は、以下の工程を含む：
ｉ．ＰＶＲに特異的な抗体、または、少なくとも抗原結合部分を含むその抗体フラグメントを備えたサンプルをインキュベートする工程；
ｉｉ．検出可能なプローブを使用して結合ＰＶＲを検出する工程。
いくつかの実施形態によれば、方法は、さらに以下の工程を含む：
ｉｉｉ．ＰＶＲの既知量を包含している基準のサンプルから得られた標準曲線と（ｉｉ）の量を比較する工程；および、
ｉｖ．標準曲線のサンプルにおけるＰＶＲの量を算出する工程。
【０１６１】
いくつかの特定の実施形態によれば、サンプルは体液である。
【０１６２】
いくつかの実施形態によれば、方法はインビトロまたはエクスビボで実施される。
【０１６３】
生体サンプルにおいてＰＶＲの発現を測定するためのキットも、以下から成る群から選択された相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む少なくとも１つの抗体または抗体フラグメントを含んで提供される：（ｉ）配列：ＧＦＤＦＳＲＹＷ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４）またはＲＹＷＭＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８０）を有する重鎖ＣＤＲ１、配列：ＥＩＨＰＤＳＳＫＩＮＹＴＰＳＱ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６）を有する重鎖ＣＤＲ２、配列：ＰＤＧＮＹＮＡＬＤＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８２）を有する重鎖ＣＤＲ３、配列：ＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２）を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列：ＷＡＳＴＲＨＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４）を有する軽鎖ＣＤＲ２、および、配列：ＱＱＹＳＲＹＰＹＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６）を有する軽鎖ＣＤＲ３；（ｉｉ）配列ＥＹＴＭＨ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８３）を有する重鎖ＣＤＲ１、配列：ＧＩＤＰＮＮＧＧＴＮＹＮＱＮＦＫＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２）を有する重鎖ＣＤＲ２、配列：ＶＩＰＬＥＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４）を有する重鎖ＣＤＲ３、配列：ＫＡＳＱＮＶＹＴＮＶＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８）を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列：ＳＡＳＹＲＹＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０）を有する軽鎖ＣＤＲ２、および、配列：ＱＱＹＮＳＹＰＬＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２）を有する軽鎖ＣＤＲ３；または、（ｉｉｉ）配列ＳＮＹＷＩＥ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８４）を有する重鎖ＣＤＲ１、配列：ＥＩＦＰＧＳＧＲＩＮＦＮＥＫＦＫＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８）を有する重鎖ＣＤＲ２、配列：ＴＫＩＹＧＮＳＦＤＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０）を有する重鎖ＣＤＲ３、配列：ＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８５）を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列：ＷＡＳＳＲＨＮ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６）を有する軽鎖ＣＤＲ２、および、配列：ＱＱＹＳＲＹＰＬＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８）を有する軽鎖ＣＤＲ３。
【０１６４】
ある態様によれば、本発明は、癌を検出するためのキットを提供し、該診断キットは、本明細書中に開示されるそのフラグメントの抗体を含む。
【０１６５】
いくつかの実施形態によれば、本発明は、免疫関連疾患または増殖性疾患の診断、重症度の評価、または、病期分類の方法を提供し、該方法は、本発明に係る抗体またはそのフラグメントまたは複合体を用いて被験体由来のサンプル中のＰＶＲの発現または活性を判定する工程、および、ＰＶＲの発現または活性を基準のＰＶＲの発現または活性と比較する工程を含む。上記基準量は、正常な被験体から採取したサンプルから得てもよく、疾患の異なる病期にある同じ被験体から採取したサンプルから得てもよく、または、多数の被験体の臨床データから判定してもよい。
【０１６６】
さらなる実施形態および本発明の適用可能性の全範囲は、以下に与えられた詳細な説明から明らかになるだろう。しかしながら、本発明の精神と範囲内の様々な変更と修正がこの詳細な記載から当業者に明らかとなるため、詳細な説明と具体的な実施例は、本発明の好ましい実施形態を示しつつも、単なる例示として与えられるに過ぎないことを理解されたい。
【図面の簡単な説明】
【０１６７】
【図１Ａ】図１Ａは、生存確率と（示されるように高いまたは低い）ＰＶＲ  ｍＲＮＡ発現レベルとの相関を示すグラフである。相関を肺癌（図１Ａ）について測定した。ｍＲＮＡ発現のデータセットを、以下のように、ＧＥＯサイトから得てｂｉｏｐｒｏｆｉｌｉｎｇ．ｄｅサイトを用いて分析した：肺癌についてはＧＥＯデータセットＩＤ：ＧＳＥ３１２１０。
【図１Ｂ】図１Ｂは、生存確率と（示されるように高いまたは低い）ＰＶＲ  ｍＲＮＡ発現レベルとの相関を示すグラフである。相関を乳癌（図１Ｂ）について測定した。ｍＲＮＡ発現のデータセットを、以下のように、ＧＥＯサイトから得てｂｉｏｐｒｏｆｉｌｉｎｇ．ｄｅサイトを用いて分析した：乳癌についてはＧＥＯデータセットＩＤ：ＧＳＥ２５０５５。
【図１Ｃ】図１Ｃは、生存確率と（示されるように高いまたは低い）ＰＶＲ  ｍＲＮＡ発現レベルとの相関を示すグラフである。相関を脂肪肉腫（図１Ｃ）について測定した。ＲＮＡ発現のデータセットを、以下のように、ＧＥＯサイトから得てｂｉｏｐｒｏｆｉｌｉｎｇ．ｄｅサイトを用いて分析した：  脂肪肉腫についてはＧＥＯデータセットＩＤ：ＧＳＥ３０９２９。
【図２】図２は、免疫および腫瘍細胞上の受容体発現の模式的な例示である。ＴＩＧＩＴは、多くの免疫細胞（例えばＴ細胞）上の共抑制受容体に関する；ＤＮＡＭ−１（ＣＤ２２６とも称される）は、多くの免疫細胞（例えばＴ細胞）上の活性化受容体に関する；Ｆｃ受容体は、主としてＮＫ細胞だけでなく、好中球およびマクロファージを含む骨髄性細胞でも発現される、強力な活性化受容体に関する；ＰＶＲは、多くの腫瘍細胞で発現される、ＴＩＧＩＴ（ＤＮＡＭ−１に対してより弱く結合する）に対する抑制リガンドに関する；ネクチン−２は、多くの腫瘍細胞で発現される、ＤＮＡＭ−１（ＴＩＧＩＴによる周辺認識（ｍａｒｇｉｎａｌ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ））に対する活性化リガンドに関する。本発明に係る抗ＰＶＲの結合は二重の効果を示す：１）Ｆｃ受容体を介して腫瘍細胞の死滅を増強すること；および、２）ＴＩＧＩＴとの相互作用の遮断により免疫細胞の活性化を増大させること。
【図３】図３のＡ−Ｄは、生成された４つの抗ＰＶＲ抗体のＦＡＣＳ分析を検出するグラフである。ＴＩＧＩＴ−Ｆｃの腫瘍細胞系への直接結合を遮断する際の抗体の効力を示す。図３のＡは、非遮断抗ＰＶＲ抗体（抗ＰＶＲ  ｍＡｂ抗体２Ｇ３、ｈＰＶＲ．１７とも呼ばれる）を例示する。図３のＢ−Ｄは、生成された抗体のうち３つ、すなわち５Ｂ９（ｈＰＶＲ．０９とも呼ばれる）、７Ｄ４（ｈＰＶＲ．０１とも呼ばれる）および４Ｅ５（ｈＰＶＲ．０７とも呼ばれる）が、それぞれ、ＴＩＧＩＴ−Ｉｇ結合の遮断によるより示されるような抗ＰＶＲ遮断ｍＡｂであることを示す。ハイブリドーマスープ（Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ｓｏｕｐｓ）（ウェルあたり５μｌ）をＨｅｐＧ２細胞に加えた。ＴＩＧＩＴ−Ｆｃを２０μｇ／ｍｌの最終濃度まで２μｇ／ウェルで使用し、蛍光標識抗ＦｃＡｂを加えた後、ＦＡＣＳによって細胞結合ＴＩＧＩＴのレベルを測定した。塗りつぶされたヒストグラムは、抗Ｆｃ試薬によるバックグラウンド染色を示す。
【図４】図４は、抗ＰＶＲ  ｍＡｂ抗体７Ｄ４（ｈＰＶＲ．０１とも呼ばれる）とのＰＶＲ−ＴＩＧＩＴ相互作用の遮断が、ヒト細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−２３１（乳腺癌）のＮＫ細胞死滅をどのように増強するかを示すグラフである。特異的な死滅は標的細胞からの［３５Ｓ］−−メチオニンの分泌に基づいて算出される。対照（Ｃｔｒｌ）は非関連マウスＩｇＧである。Ｐ値＝０．００５６。
【図５】図５は、抗ＰＶＲ  ｍＡｂ４Ｅ５（ｈＰＶＲ．０７とも呼ばれる）を使用するＰＶＲ−ＴＩＧＩＴ相互作用の遮断が、ヒト癌細胞系ＨｅｐＧ２（肝細胞癌）のＮＫ細胞死滅を増強させることを示すグラフである。無―ｍＡｂなしでのＨｅｐＧ２の死滅；抗ＰＶＲ  ４Ｅ５−マウス抗ＰＶＲ  ４Ｅ５ｍＩｇＧ１でのＨｅｐＧ２の死滅（ヒトＦｃ受容体の活性化なし）；抗ＰＶＲ  ４ｅ５ｈＩｇＧ１−抗ＰＶＲ  ４Ｅ５−ｈＩｇＧ１でのＨｅｐＧ２の死滅（ヒトＦｃ受容体の活性化）、エルビタックス（Ｐ．Ｃ）−陽性対照ｍＡｂエルビタックス（抗ＥＧＦＲ）。ｍＡｂはすべて１０μｇ／ｍｌで使用された。Ｐ値：抗ＰＶＲ  ４Ｅ５−０．０４、抗ＰＶＲ  ４ｅ５ｈＩｇＧ１−０．０００７４６、および、エルビタックス（陽性対照）−０．００３２１９。
【図６Ａ】図６Ａは、ヒト腫瘍細胞株がＰＶＲおよびネクチン−２を発現することを図示するグラフである。メラノーマ細胞（図６Ａ−Ｅ）はＰＶＲおよびネクチン−２を発現する。ｍＡｂは０．２μｇ／ウェルで使用された：市販の抗ネクチン−２  ｍＡｂおよび抗ＰＶＲのｍＡｂ  ４Ｅ５（ｈＰＶＲ．０７とも呼ばれる）。
【図６Ｂ】図６Ｂは、ヒト腫瘍細胞株がＰＶＲおよびネクチン−２を発現することを図示するグラフである。メラノーマ細胞（図６Ａ−Ｅ）はＰＶＲおよびネクチン−２を発現する。  ｍＡｂは０．２μｇ／ウェルで使用された：市販の抗ネクチン−２  ｍＡｂおよび抗ＰＶＲのｍＡｂ  ４Ｅ５（ｈＰＶＲ．０７とも呼ばれる）。
【図６Ｃ】図６Ｃは、ヒト腫瘍細胞株がＰＶＲおよびネクチン−２を発現することを図示するグラフである。メラノーマ細胞（図６Ａ−Ｅ）はＰＶＲおよびネクチン−２を発現する。ｍＡｂは０．２μｇ／ウェルで使用された：  市販の抗ネクチン−２  ｍＡｂおよび抗ＰＶＲのｍＡｂ  ４Ｅ５（ｈＰＶＲ．０７とも呼ばれる）。
【図６Ｄ】図６Ｄは、ヒト腫瘍細胞株がＰＶＲおよびネクチン−２を発現することを図示するグラフである。メラノーマ細胞（図６Ａ−Ｅ）はＰＶＲおよびネクチン−２を発現する。ｍＡｂは０．２μｇ／ウェルで使用された：  市販の抗ネクチン−２  ｍＡｂおよび抗ＰＶＲのｍＡｂ  ４Ｅ５（ｈＰＶＲ．０７とも呼ばれる）。
【図６Ｅ】図６Ｅは、ヒト腫瘍細胞株がＰＶＲおよびネクチン−２を発現することを図示するグラフである。メラノーマ細胞（図６Ａ−Ｅ）はＰＶＲおよびネクチン−２を発現する。  ｍＡｂは０．２μｇ／ウェルで使用された：  市販の抗ネクチン−２  ｍＡｂおよび抗ＰＶＲのｍＡｂ  ４Ｅ５（ｈＰＶＲ．０７とも呼ばれる）。
【図６Ｆ】図６Ｆは、ヒト腫瘍細胞株がＰＶＲおよびネクチン−２を発現することを図示するグラフである。乳癌細胞（図６Ｆ−Ｈ）はＰＶＲおよびネクチン−２を発現する。ｍＡｂは０．２μｇ／ウェルで使用された：市販の抗ネクチン−２  ｍＡｂおよび抗ＰＶＲのｍＡｂ  ４Ｅ５（ｈＰＶＲ．０７とも呼ばれる）。
【図６Ｇ】図６Ｇは、ヒト腫瘍細胞株がＰＶＲおよびネクチン−２を発現することを図示するグラフである。乳癌細胞（図６Ｆ−Ｈ）はＰＶＲおよびネクチン−２を発現する。ｍＡｂは０．２μｇ／ウェルで使用された：市販の抗ネクチン−２  ｍＡｂおよび抗ＰＶＲのｍＡｂ  ４Ｅ５（ｈＰＶＲ．０７とも呼ばれる）。
【図６Ｈ】図６Ｈは、ヒト腫瘍細胞株がＰＶＲおよびネクチン−２を発現することを図示するグラフである。乳癌細胞（図６Ｆ−Ｈ）はＰＶＲおよびネクチン−２を発現する。ｍＡｂは０．２μｇ／ウェルで使用された：市販の抗ネクチン−２  ｍＡｂおよび抗ＰＶＲのｍＡｂ  ４Ｅ５（ｈＰＶＲ．０７とも呼ばれる）。
【図６Ｉ】図６Ｉは、ヒト腫瘍細胞株がＰＶＲおよびネクチン−２を発現することを図示するグラフである。大腸細胞（図６Ｉ）はＰＶＲおよびネクチン−２を発現する。ｍＡｂは０．２μｇ／ウェルで使用された：市販の抗ネクチン−２  ｍＡｂおよび抗ＰＶＲのｍＡｂ  ４Ｅ５（ｈＰＶＲ．０７とも呼ばれる）。
【図６Ｊ】図６Ｊは、ヒト腫瘍細胞株がＰＶＲおよびネクチン−２を発現することを図示するグラフである。腎臓細胞（図６Ｊ）はＰＶＲおよびネクチン−２を発現する。ｍＡｂは０．２μｇ／ウェルで使用された：市販の抗ネクチン−２  ｍＡｂおよび抗ＰＶＲのｍＡｂ  ４Ｅ５（ｈＰＶＲ．０７とも呼ばれる）。
【図６Ｋ】図６Ｋは、ヒト腫瘍細胞株がＰＶＲおよびネクチン−２を発現することを図示するグラフである。肺癌細胞（図６Ｋ）はＰＶＲおよびネクチン−２を発現する。ｍＡｂは０．２μｇ／ウェルで使用された：市販の抗ネクチン−２  ｍＡｂおよび抗ＰＶＲのｍＡｂ  ４Ｅ５（ｈＰＶＲ．０７とも呼ばれる）。
【図６Ｌ】図６Ｌは、ヒト腫瘍細胞株がＰＶＲおよびネクチン−２を発現することを図示するグラフである。前立腺癌細胞（図６Ｌ）はＰＶＲおよびネクチン−２を発現する。ｍＡｂは０．２μｇ／ウェルで使用された：市販の抗ネクチン−２  ｍＡｂおよび抗ＰＶＲのｍＡｂ  ４Ｅ５（ｈＰＶＲ．０７とも呼ばれる）。
【図６Ｍ】図６Ｍは、ヒト腫瘍細胞株がＰＶＲおよびネクチン−２を発現することを図示するグラフである。脳腫瘍細胞（図６Ｍ）はＰＶＲおよびネクチン−２を発現する。ｍＡｂは０．２μｇ／ウェルで使用された：市販の抗ネクチン−２  ｍＡｂおよび抗ＰＶＲのｍＡｂ  ４Ｅ５（ｈＰＶＲ．０７とも呼ばれる）。
【図６Ｎ】図６Ｎは、ヒト腫瘍細胞株がＰＶＲおよびネクチン−２を発現することを図示するグラフである。肝細胞癌細胞（図６Ｎ−Ｏ）はＰＶＲおよびネクチン−２を発現する。ｍＡｂは０．２μｇ／ウェルで使用された：市販の抗ネクチン−２  ｍＡｂおよび抗ＰＶＲのｍＡｂ  ４Ｅ５（ｈＰＶＲ．０７とも呼ばれる）。
【図６Ｏ】図６Ｏは、ヒト腫瘍細胞株がＰＶＲおよびネクチン−２を発現することを図示するグラフである。肝細胞癌細胞（図６Ｎ−Ｏ）はＰＶＲおよびネクチン−２を発現する。ｍＡｂは０．２μｇ／ウェルで使用された：市販の抗ネクチン−２  ｍＡｂおよび抗ＰＶＲのｍＡｂ  ４Ｅ５（ｈＰＶＲ．０７とも呼ばれる）。
【図７】図７のＡ−Ｃは、ＰＶＲが主なＴＩＧＩＴリガンドであることを示すＦＡＣＳ分析のグラフである。図７のＡは、ＨｅｐＧ２細胞（ヒト肝細胞癌細胞）がＰＶＲおよびネクチン−２を発現することを例証する。図７のＢは、精製された抗ＰＶＲ  ｍＡｂ  ４Ｅ５（ｈＰＶＲ．０７とも呼ばれる）（０．１５μｇ）は、これらの細胞もネクチン−２を発現するという事実にもかかわらず、ほぼ完全に（９７％超）ＴＩＧＩＴ−Ｉｇ（２μｇ／ｍｌ）結合を遮断することを例示する。図７のＣは、ＣＨＯ細胞が高レベルのｈネクチン−２を発現することを例証する。図７のＤは、すべてのＰＶＲ  ｍＡｂによる図７のＣと同じＣＨＯ細胞の染色の欠如を示し、これは抗ＰＶＲ  ｍＡｂによるネクチン−２の直接的な認識がないことを意味し、したがって、図７のＢに見られるＴＩＧＩＴ結合の遮断は、ネクチン−２の遮断によって説明することはできず、むしろそれは直接的なＰＶＲ遮断の結果であるということを示す。
【図８Ａ】図８Ａ−Ｃは、ヒトＰＶＲに対する抗ＰＶＲのｍＡｂのすべての同様の結合効力を図示する。全ての３つの遮断クローンは、内因性ＰＶＲ  ＨｅｐＧ２細胞（図８Ａ）および過剰発現ｈＰＶＲ  Ｂ１６−ｈＰＶＲ細胞（図８Ｂ）の両方に対し同様の（１０％未満の差異の）結合を生じる。ヒトＰＶＲと９３％の類似性を有するＰＶＲタンパク質を発現するアフリカミドリザル由来のベロ細胞株（図８Ｃ）も用いて結合を調べた。この場合は、異なるＡｂは異なる染色強度を示した。０．２μｇの各ｍＡｂをすべての場合に使用した。
【図８Ｂ】図８Ａ−Ｃは、ヒトＰＶＲに対する抗ＰＶＲのｍＡｂのすべての同様の結合効力を図示する。全ての３つの遮断クローンは、内因性ＰＶＲ  ＨｅｐＧ２細胞（図８Ａ）および過剰発現ｈＰＶＲ  Ｂ１６−ｈＰＶＲ細胞（図８Ｂ）の両方に対し同様の（１０％未満の差異の）結合を生じる。ヒトＰＶＲと９３％の類似性を有するＰＶＲタンパク質を発現するアフリカミドリザル由来のＶｅｒｏ細胞株（図８Ｃ）も用いて結合を調べた。この場合は、異なるＡｂは異なる染色強度を示した。０．２μｇの各ｍＡｂをすべての場合に使用した。
【図８Ｃ】図８Ａ−Ｃは、ヒトＰＶＲに対する抗ＰＶＲのｍＡｂのすべての同様の結合効力を図示する。全ての３つの遮断クローンは、内因性ＰＶＲ  ＨｅｐＧ２細胞（図８Ａ）および過剰発現ｈＰＶＲ  Ｂ１６−ｈＰＶＲ細胞（図８Ｂ）の両方に対し同様の（１０％未満の差異の）結合を生じる。ヒトＰＶＲと９３％の類似性を有するＰＶＲタンパク質を発現するアフリカミドリザル由来のＶｅｒｏ細胞株（図８Ｃ）も用いて結合を調べた。この場合は、異なるＡｂは異なる染色強度を示した。０．２μｇの各ｍＡｂをすべての場合に使用した。
【図９】図９は、本発明の抗ＰＶＲの抗体はイヌのＰＶＲを認識しないことを示すグラフである。ヒトＴＩＧＩＴ−Ｆｃ（１０μｇ／ｍｌ）は強く交差反応し、イヌのＭＤＣＫ細胞株に結合する。いずれのＰＶＲ  ｍＡｂも、これらの細胞に結合することができず、これは、イヌのＰＶＲを認識しないことを示唆した。
【図１０Ａ】図１０Ａは、ネクチン−２がＤＮＡＭ−１によって優先的に結合され、ＴＩＧＩＴによって結合されないことを示す。ＰＶＲまたはネクチン−２のいずれかを発現する細胞は、示された抗体濃度を使用して染色された。図１０Ａは、ネクチン−２発現細胞へのＴＩＧＩＴ−Ｆｃの結合を例証する。
【図１０Ｂ】図１０Ｂは、ネクチン−２がＤＮＡＭ−１によって優先的に結合され、ＴＩＧＩＴによって結合されないことを示す。ＰＶＲまたはネクチン−２のいずれかを発現する細胞は、示された抗体濃度を使用して染色された。図１０Ｂは、ネクチン−２発現細胞へのＤＮＡＭ−ＦＣの結合を例証する。
【図１０Ｃ】図１０Ｃは、ネクチン−２がＤＮＡＭ−１によって優先的に結合され、ＴＩＧＩＴによって結合されないことを示す。ＰＶＲまたはネクチン−２のいずれかを発現する細胞は、示された抗体濃度を使用して染色された。図１０Ｃは、ＰＶＲ発現細胞へのＴＩＧＩＴの結合を例証する。
【図１０Ｄ】図１０Ｄは、ネクチン−２がＤＮＡＭ−１によって優先的に結合され、ＴＩＧＩＴによって結合されないことを示す。ＰＶＲまたはネクチン−２のいずれかを発現する細胞は、示された抗体濃度を使用して染色された。図１０Ｄは、ＰＶＲ発現細胞へのＤＮＡＭ−１の結合を例証する。
【図１１】図１１は、Ｔ細胞増殖に対する抗ＰＶＲ抗体の効果を示す。ヒトＰＢＭＣをＣＦＳＥ標識し、示された抗体の存在下で標的細胞とインキュベートした。結果は、対照と比較して増殖が増えた倍率として提示される。結果は、合計１０人の健康なドナーのプールされた７回の実験についての結果である。Ｐ値：ｍＡｂ  ４Ｅ５については０．０００２４１、ｍＡｂ    ５Ｂ９については１．９６Ｅ−０５、抗ＰＤ−１については０．０１６３０３、抗ＣＴＬＡ４については０．０００１７１、および、４Ｅ５ｈＩｇＧ１については０．００８１７６。
【図１２】図１２は、Ｔ細胞増殖に対する抗ＰＶＲ抗体および他の抗体の併用の効果を示す。ヒトＰＢＭＣをＣＦＳＥ標識し、示された抗体の組み合わせの存在下で標的細胞とインキュベートした。結果は、対照と比較して増殖が増えた倍率として提示される。結果は、１２人の健康なドナーを使用した７つの独立した実験である。Ｐ値：抗ＰＤ１＋抗ＣＴＬＡ−４７．５４Ｅ−０３、抗ＰＤ−１＋４Ｅ５−７．０２Ｅ−０２、抗ＰＤ−１＋５Ｂ９−１．１１Ｅ−０４、抗ＣＴＬＡ４＋４Ｅ５−１．３７Ｅ−０３、抗ＣＴＬＡ４＋５Ｂ９−５．４７Ｅ−０６。
【図１３】図１３は、ＣＤ８  Ｔ細胞の増殖に対する抗ＰＶＲ抗体の特定の効果を示す。ヒトＰＢＭＣをＣＦＳＥ標識し、示された抗体の存在下で標的細胞（Ａ５４９）とインキュベートした。ＣＤ８陽性細胞を９−１２日の培養後にＦＡＣＳにより集計した。結果は、対照と比較して増殖が増えた倍率として提示される。結果は、健康なＰＢＭＣドナーを使用した２つの独立した実験についてのものである。
【図１４】図１４は、異なる抗体による誘導後のＣＤ４細胞に対するＣＤ８細胞の比を示す。ヒトＰＢＭＣをＣＦＳＥ標識し、示された抗体の存在下で標的細胞（Ａ５４９）とインキュベートした。細胞を９−１２日の培養後に集計した。結果は、合計２人の健康なドナーのプールされた２回の実験についての結果である。
【図１５】図１５は、ＮＫ脱顆粒に対する抗ＰＶＲ抗体の効果を示す。ヒトＮＫ細胞を、示された抗体の存在下においてＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞（三種陰性乳癌細胞株）とインキュベートした。結果は、５つの異なる健康なＮＫ細胞ドナーで行われた７つの独立した実験の代表例である。Ｐ値：ＰＶＲ４Ｅ５‐０．００５０６３、ＰＶＲ５Ｂ９−０．００３７４、ＰＶＲ７Ｄ４‐０．０１９４４８、ＰＶＲ４Ｅ５−ｈＩｇＧ１‐２．０３Ｅ−０５、ＰＶＲ５Ｂ９−ｈＩｇＧ１‐１．４５Ｅ−０５、ＰＶＲ７Ｄ４−ｈＩｇＧ１‐５．８Ｅ−０５。
【図１６Ａ】図１６Ａは、免疫細胞のない状態において腫瘍細胞生存に対する抗ＰＶＲの抗体の効果を示す。Ａ５４９細胞（図１６Ａ）の生存を、５０マイクログラム／ｍｌの示されたｍＡｂの存在下において、２４時間の間、ＭＴＴ細胞生存アッセイを使用して検討した。有意性は、単一側の（ｓｉｎｇｌｅ  ｔａｉｌｅｄ）スチューデントＴ検定、＊＜０．０５、＊＊＜０．０３、および＊＊＊＜０．０２で計算される。
【図１６Ｂ】図１６Ｂは、免疫細胞のない状態において腫瘍細胞生存に対する抗ＰＶＲの抗体の効果を示す。Ｕ３７３細胞（図１６Ｂ）の生存を、５０マイクログラム／ｍｌの示されたｍＡｂの存在下において、２４時間の間、ＭＴＴ細胞生存アッセイを使用して検討した。有意性は、単一側の（ｓｉｎｇｌｅ  ｔａｉｌｅｄ）スチューデントＴ検定、＊＜０．０５、＊＊＜０．０３、および＊＊＊＜０．０２で計算される。
【図１６Ｃ】図１６Ｃは、免疫細胞のない状態において腫瘍細胞生存に対する抗ＰＶＲの抗体の効果を示す。ＨＣＴ１１６細胞（図１６Ｃ）の生存を、５０マイクログラム／ｍｌの示されたｍＡｂの存在下において、２４時間の間、ＭＴＴ細胞生存アッセイを使用して検討した。有意性は、単一側の（ｓｉｎｇｌｅ  ｔａｉｌｅｄ）スチューデントＴ検定、＊＜０．０５、＊＊＜０．０３、および＊＊＊＜０．０２で計算される。
【図１６Ｄ】図１６Ｄは、免疫細胞のない状態において腫瘍細胞生存に対する抗ＰＶＲの抗体の効果を示す。Ｍｅｌ−６２４（図１６Ｄ）の生存を、５０マイクログラム／ｍｌの示されたｍＡｂの存在下において、２４時間の間、ＭＴＴ細胞生存アッセイを使用して検討した。有意性は、単一側の（ｓｉｎｇｌｅ  ｔａｉｌｅｄ）スチューデントＴ検定、＊＜０．０５、＊＊＜０．０３、および＊＊＊＜０．０２で計算される。
【発明を実施するための形態】
【０１６８】
本発明はヒトポリオウイルス受容体（ＰＶＲ）に対して特異的なモノクローナル抗体を提供する。本発明はまた、治療剤としてのｍＡｂの産生および使用を提供する。特に、本発明のｍＡｂは、免疫細胞の抗腫瘍死滅活性を回復および増強するため、および診断試薬として、単独でまたは他の薬剤と組み合わせて使用することができる。
【０１６９】
明細書において使用されるような用語「抗原」は、抗体形成を引き起こすことができ、特異的に抗体により結合される分子または分子の一部を指す。抗原は１つ以上のエピトープを有していても良い。上記で言及された特異的な結合は、非常に選択的な方法で、抗原がその対応する抗体と反応し、他の抗原によって誘発され得る多数の他の抗体とは反応しない、ということを示すことを意味する。本発明のいくつかの実施形態に係る抗原はＰＶＲタンパク質である。
【０１７０】
本明細書において使用されるような用語「ＰＶＲ」は、ＣＤ１５５（分化１５５のクラスタ）としても知られる、ポリオウイルス受容体を指す。ＰＶＲは、Ｎ末端シグナル配列、３つの細胞外の免疫グロブリン（Ｉｇ）様ドメイン、膜貫通ドメイン、および、細胞質側末端を有する膜貫通糖タンパク質である。これは、約８０ｋＤａの分子サイズおよび３つのＩｇ様ドメイン、具体的には最も外側のＶ様ドメインと続いて２つのＣ２様ドメイン、からなる構造を有する。本発明に係る例示的なＰＶＲは、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号で記載される：ＮＰ＿００１１２９２４０．１、ＮＰ＿００１１２９２４１．１、ＮＰ＿００１１２９２４２．２およびＮＰ＿００６４９６．４。これらのポリオウイルス受容体は、細胞外のドメインの配列を共有し、したがって、本発明の親和性結合部分によって標的とすることができる。
【０１７１】
本明細書において使用されるような用語「抗原決定基」または「エピトープ」は、特定の抗体と特異的に反応する抗原分子の領域を指す。エピトープに由来するペプチド配列は、単独で、または担体部分と併せて、当技術分野で公知の方法を適用して、動物を免疫し、および、さらなるポリクローナルまたはモノクローナル抗体を産生するために使用することができる。エピトープに由来した単離したペプチドは、抗体を検出するために診断法に使用されてもよい。
【０１７２】
親和性を、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）（Ｓｃａｒａｎｏ  Ｓ，  Ｍａｓｃｉｎｉ  Ｍ，  Ｔｕｒｎｅｒ  ＡＰ，  Ｍｉｎｕｎｎｉ  Ｍ．  Ｓｕｒｆａｃｅ  ｐｌａｓｍｏｎ  ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｆｏｒ  ａｆｆｉｎｉｔｙ−ｂａｓｅｄ  ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ．  Ｂｉｏｓｅｎｓ  Ｂｉｏｅｌｅｃｔｒｏｎ．  ２０１０，  ２５：  ９５７−６６に記載）などの既知の方法を使用して定量化でき、および、より低いＫｄがより高い親和性を反映するように、例えば、解離定数Ｋｄを用いて算出することができることに留意されるべきである。
【０１７３】
本発明に係る抗体またはそれらのフラグメントはｈＰＶＲのエピトープに結合する。具体的には、抗体は、ＮＰ＿００６４９６．４に記載のＰＶＲのアミノ酸１−３４３内のエピトープに結合する。
【０１７４】
抗体または免疫グロブリンは、ジスルフィド結合および２つの軽鎖によって互いに結合された２つの重鎖を含み、それぞれの軽鎖は、「Ｙ」字構成のジスルフィド結合によってそれぞれの重鎖に連結される。抗体のタンパク質分解性の消化は、Ｆｖ（フラグメント可変）およびＦｃ（フラグメント結晶質）ドメインをもたらす。抗原結合ドメインＦａｂは、ポリペプチド配列が変化する領域を含む。用語Ｆ（ａｂ’）２は、ジスルフィド結合によって一緒に連結された２つのＦａｂ’アームを表す。
抗体の中心軸はＦｃフラグメントと呼ばれる。各重鎖は一端に可変ドメイン（ＶＨ）を有し、その後に多数の定常ドメイン（ＣＨ）が続く。各軽鎖は、一端に可変ドメイン（ＶＬ）を、および、他端に定常ドメイン（ＣＬ）を有し、軽鎖可変ドメインは重鎖の可変ドメインと整列し、軽鎖定常ドメインは重鎖（ＣＨ１）の第１の定常ドメインと整列している。軽鎖および重鎖の各対の可変ドメインは、抗原結合部位を形成する。軽鎖および重鎖上のドメインは同じ一般的な構造を有し、各ドメインは、４つのフレームワーク領域を含み、４つのフレームワーク領域の配列は、比較的保存され、相補性決定領域（ＣＤＲ１−３）として知られる３つの超可変ドメインによって結合されている。これらの領域は、抗原結合部位の特異性および親和性に寄与する。
【０１７５】
所与の重鎖可変配列または軽鎖可変配列からのＣＤＲ特定または判定は、当技術分野において公知の数少ない方法のうちの１つを使用して典型的になされる。例えば、そのような判定は、Ｋａｂａｔ  （Ｗｕ  Ｔ．ＴおよびＫａｂａｔ  Ｅ．Ａ．，  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ，  １９７０；  １３２：２１１−５０）およびＩＭＧＴ  （Ｌｅｆｒａｎｃ  Ｍ−Ｐ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｄｅｖ  Ｃｏｍｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，  ２００３，  ２７：５５−７７）に従ってなされる。
【０１７６】
用語「配列を有するＣＤＲ」または同様の用語が使用されるとき、これは、ＣＤＲが特定の配列を含む選択肢およびＣＤＲが特定の配列からなる選択肢も含む。
【０１７７】
抗体の抗原特異性は、超可変領域（ＨＶＲ）、すなわち抗原結合部位をともに形成する軽鎖および重鎖の両方の一意的なＣＤＲ配列、に基づいている。
【０１７８】
重鎖のアイソタイプ（ガンマ、アルファ、デルタ、イプシロンまたはミュー）は、免疫グロブリンクラス（それぞれＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥまたはＩｇＭ）を決定する。軽鎖は２つのアイソタイプ（カッパκまたはラムダλ）のどちらかである。両方のアイソトープはすべての抗体クラスに見られる。
【０１７９】
用語「抗体」は最も広い意味で使用され、所望の生物学的活性、すなわちヒトＰＶＲへの結合を提示するのに十分な長さのモノクローナル抗体（完全長または無処置（ｉｎｔａｃｔ）のモノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多価抗体、および抗体フラグメントを含む。
【０１８０】
本発明に係る抗体は、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体（ｍＡｂ）などの完全な抗体を含み、同様にそれらのタンパク質分解フラグメント、すなわちＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２フラグメントなどのフラグメントも含む。単鎖抗体もまた本発明の範囲内に属する。
【０１８１】
＜抗体フラグメント＞
「抗体フラグメント」は完全な抗体の一部のみを含み、一般的に完全な抗体の抗原結合部位を含み、およびしたがって抗原を結合する能力を保持する。本定義によって包含される抗体フラグメントの例は以下を含む：（ｉ）ＶＬ、ＣＬ、ＶＨおよびＣＨ１ドメインを有するＦＡｂフラグメント；（ｉｉ）Ｆａｂ’フラグメント、すなわちＣＨ１ドメインのＣ末端に１つ以上のシステイン残基を有するＦＡｂフラグメント；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインを有するＦｄフラグメント；（ｉｖ）ＶＨおよびＣＨ１ドメイン、およびＣＨ１ドメインのＣ末端にある１つ以上のシステイン残基を有するＦｄ’フラグメント；（ｖ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインを有するＦｖフラグメント；（ｖｉ）ＶＨドメインから成るｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  １９８９，３４１，５４４−５４６）；（ｖｉｉ）単離したＣＤＲ領域；（ｖｉｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、すなわちヒンジ領域において二硫化物架橋によりつながった２つのＦａｂ’フラグメントを含む二価のフラグメント；（ｉｘ）単鎖抗体分子（例えば単鎖Ｆｖ；ｓｃＦｖ）（Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９８８，２４２，４２３−４２６；およびＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）１９８８，８５，５８７９−５８８３）；（ｘ）同じポリペプチド鎖において軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に結合された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む、２つの抗原結合部位を伴う「二重特異性抗体」（例えば、ＥＰ  ４０４，０９７；国際公開第９３／１１１６１；およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９３，９０，６４４４−６４４８を参照）；（ｘｉ）補足的な軽鎖ポリペプチドと共に１対の抗原結合領域を形成する１対のタンデムＦｄセグメント（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）を含む「直鎖状の抗体」（Ｚａｐａｔａ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．，１９９５，８，１０５７−１０６２；および米国特許第５，６４１，８７０）。
【０１８２】
抗体フラグメントの産出のために様々な技術が開発されてきた。従来、これらのフラグメントは、完全な抗体のタンパク質消化によって得られた（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４：１０７−１１７（１９９２）、およびＢｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照）。しかしながら、これらのフラグメントは今では組換えホスト細胞によって直接産出することができる。例えば、抗体フラグメントを抗体ファージライブラリーから単離することができる。代替的に、Ｆａｂ’−ＳＨフラグメントを直接大腸菌から回収し、およびＦ（ａｂ’）２フラグメントを形成するために化学的に結合することができる（Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１６３−１６７（１９９２））。別のアプローチによれば、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを組換えホスト細胞の培養物から直接単離することができる。抗体フラグメントの生産のための他の技術は、当業者には明白であろう。他の実施形態では、選択される抗体は単鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）である。
【０１８３】
単鎖抗体は、抗原結合能力を有し、および免疫グロブリンの軽鎖および重鎖の可変領域、すなわち連鎖ＶＨ−ＶＬまたは単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）に相同または相似するアミノ酸配列を含む、単鎖合成ポリペプチドであり得る。単一鎖の抗体を産生するための技術（米国特許第４，９４６，７７８）は、ＰＶＲに対する単一鎖抗体を産生するのに応用することができる。
【０１８４】
本明細書において使用される用語「モノクローナル抗体」（ｍＡｂ）は、実質的に均質な抗体の集団から得られた抗体を指し、つまり集団を含む個々の抗体は、軽微な量で存在する自然に発生し得る突然変異を別にすれば同一である。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、単一の抗原を対象とする。さらに、典型的に異なる決定因子（エピトープ）を対象とする異なる抗体を含むポリクローナル抗体製剤とは対照的に、各モノクローナル抗体は抗原における単一の決定因子を対象とする。修飾語「モノクローナル」は、何らかの特定の方法による抗体の産生を要求するものとは解釈されない。ｍＡｂは当業者に既知の方法によって得られるだろう。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ等（Ｋｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  １９７５，２５６，４９５）によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって作られてもよく、または組換えＤＮＡ法（例えば米国特許第４，８１６，５６７を参照）によって作られてもよい。モノクローナル抗体はさらに、例えばＣｌａｃｋｓｏｎ等（Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  １９９１，３５２，６２４−６２８）またはＭａｒｋｓ等（Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９１，２２２：５８１−５９７）に記載の技術を使用して、ファージ抗体ライブラリーから単離されてもよい。
【０１８５】
機能性の可変重鎖（ＶＨ）および可変軽鎖（ＶＬ）遺伝子の素早い識別およびクローニングによる、モノクローナル抗体に由来する組換えの１価の抗原結合分子のデザインおよび開発、および組換えバクテリア中での発現に対し最適化された合成ＤＮＡ塩基配列のデザインおよびクローニングは、Ｆｉｅｌｄｓ等（Ｆｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｔ．２０１３，８（６）：１１２５−４８）に記載されている。
【０１８６】
本発明のｍＡｂは、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡおよびＩｇＤを含む任意の免疫グロブリンクラスでもよい。ｍＡｂを生成するハイブリドーマは、インビトロまたはインビボで培養され得る。ｍＡｂの高力価はインビボでの生成によって得ることができ、その場合は高濃度の望ましいｍＡＢを含む腹水を生成するために、個々のハイブリドーマからの細胞が初期刺激されたＢａｌｂ／ｃマウスに腹腔内投与される。ｍＡｂは、当業者に周知の方法を使用して、そのような腹水または培養上清から精製されてもよい。
【０１８７】
本発明の抗体の超可変領域に特異的に免疫反応する抗イディオタイプ抗体がさらに理解される。
【０１８８】
本発明は、軽鎖の３つのＣＤＲおよび重鎖の３つのＣＤＲを含む抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）を含むモノクローナル抗体または抗体フラグメントを提供し、前記ＡＢＤはモノクローナルマウス抗体のＡＢＤとの少なくとも９０％の配列同一性、または類似性を有し：（ｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６９を含む可変重鎖、およびアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７１（本明細書において４Ｅ５またはｈＰＶＲ．０７として特定された）を含む可変軽鎖；（ｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７３を含む可変重鎖、およびアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７５（本明細書において７Ｄ４またはｈＰＶＲ．０１として特定された）を含む可変軽鎖；または（ｉｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７７を含む可変重鎖、およびアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７９（本明細書において５Ｂ９またはｈＰＶＲ．０９として特定された）を含む可変軽鎖、を含むＡＢＤである。そのような抗体は、４Ｅ５、７Ｄ４または５Ｂ９の対応するＡＢＤに対して、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、少なくとも９９％の配列同一性または類似性、または１００％の配列同一性を有するＡＢＤドメインを有し得る。
【０１８９】
配列同一性は、２つの異なる配列間で正確に一致するアミノ酸またはヌクレオチドの量である。配列類似性は、アミノ酸の保守的置換を同一のアミノ酸として判定することを可能にする。
【０１９０】
本発明はさらに、本発明に係る抗体分子の保守的アミノ酸変異体を提供する。コードされたタンパク質の全体的な分子構造を保存する本発明に係る変異体がさらに作られ得る。開示されたタンパク質生成物を含む個々のアミノ酸の特性を考慮して、いくつかの合理的な置換が当業者によって認識されるだろう。アミノ酸置換、すなわち「保守的置換」は、例えば含まれる残基の極性、電荷、可溶性、疎水性、親水性、および／または両親媒性に基づいてなされる場合もある。本明細書において使用される用語「抗体アナログ（類似体）」は、１つ以上の保守的アミノ酸置換によって別の抗体から派生した抗体を指す。
【０１９１】
本明細書において使用される用語「抗体変異体」は、本発明の抗体を含む任意の分子を指す。例えば、抗体またはその抗原結合フラグメントが別の化学成分に連結される融合タンパク質は、抗体変異体と考えられる。
【０１９２】
抗体配列の類似体および変異体もまた、本出願の範囲内にある。これらは限定されないが、配列内のアミノ酸の保守的および非保守的置換、挿入および欠失を含む。そのような修飾および結果として生じた抗体アナログまたは変異体は、それらがヒトＰＶＲへの抗体の結合をもたらし、またはさらに結合を向上させるのであれば、本発明の範囲内にある。
【０１９３】
当業者に知られているようなアミノ酸の保存的置換は、本発明の範囲内にある。アミノ酸の保守的置換は、１つのアミノ酸を、同じ種類の官能基または側鎖、例えば脂肪族、芳香族、正電荷、負電荷のものを有する別のアミノ酸に置き換えることを含む。これらの置換は、経口バイオアベイラビリティ、浸透性、および特定の細胞集団および免疫原性などを標的とすること、を増強し得る。当業者は、コードされた配列において単一のアミノ酸または数パーセントのアミノ酸を変質、付加、または欠失させる、ペプチドまたはポリペプチドまたはタンパク質配列への個々の置換、欠失、または付加が、変質によって化学的に類似するアミノ酸でのアミノ酸の置換がもたらされる「保守的に修飾された変異体」であることを認識するだろう。機能的に類似するアミノ酸を提供する保守的置換のリストは当技術分野において周知である。例えば、当技術分野において既知のリストによれば、以下の６つの群はそれぞれ、互いに対する保守的置換であるアミノ酸を含んでいる：
１）アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）；
２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）；
３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）；
４）アルギニン（Ｒ）、リジン（Ｋ）；
５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）；および
６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）。
【０１９４】
変異体鎖の配列は特定のプライマーを使用した配列決定方法によって判定されることが強調されるべきである。技術的な問題および異なるプライマーゆえに、同じ配列上で使用された異なる配列決定方法は、特に配列の末端において、わずかに異なる配列をもたらし得る。したがって、抗ＰＶＲ可変鎖配列の異なる変異体は、本発明に沿って特定される。
【０１９５】
本明細書において使用される用語「抗体の抗原結合部分を有する分子」および「抗原結合フラグメント」は、アイソタイプでありかつ任意の動物細胞株または微生物によって産生される完全な免疫グロブリン分子だけでなく、限定されないがＦＡｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、それらの重鎖および／または軽鎖の可変部分を含む抗原結合反応性断片、Ｆａｂ小抗体（例えば、国際公開第９３／１５２１０、米国特許出願第０８／２５６，７９０、国際公開第９６／１３５８３、米国特許出願第０８／８１７，７８８、国際公開第９６／３７６２１、米国特許出願第０８／９９９，５５４を参照）、およびそのような反応性断片を組み込んでいる単一鎖抗体、また同様にそのような反応性断片が物理的に挿入されている他の任意の種類の分子も含むように意図される。そのような分子は、限定されないが、酵素的開裂、ペプチド合成または組換え技術を含む既知の技術によって提供され得る。
【０１９６】
本明細書におけるモノクローナル抗体は特に、望ましい生物学的活性を示す限りにおいて、特定の種に由来するまたは特定の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体の対応する配列に、重鎖および／または軽鎖の一部が同一または相同であり、他方で、別の種に由来するまたは別の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体の対応する配列に、鎖の残りが同一または相同し、これはそのような抗体のフラグメントに関しても同様である「キメラ的な」抗体を含む（米国特許第４，８１６，５６７；およびＭｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：６８５１−６８５５［１９８４］））。加えて、相補性決定領域（ＣＤＲ）移植は、親和性または特異性を含む抗体分子の特定の特性を変化させるために行われる場合もある。ＣＤＲ移植の非限定的な例は米国特許第５，２２５，５３９に開示されている。
【０１９７】
キメラ抗体は、マウスのｍＡｂに由来する可変領域およびヒト免疫グロブリンの定常領域を有するもの等の、分子の種々の部分が異なる動物種に由来する分子である。実質的にヒト抗体（受容体抗体と呼ぶ）由来である可変領域フレームワーク残基、および実質的にマウス抗体（ドナー抗体と呼ぶ）由来であるＣＤＲを有する抗体もまた、ヒト化抗体と呼ばれる。キメラ抗体は、投与における免疫原性を減らし、かつ産生における産出を増加させるために主として使用され、例えば、マウスのｍＡｂにハイブリドーマからのより高い産出があるが、より高い免疫原性はヒトにある場合、ヒト／マウスのキメラ的ｍＡｂが使用される。キメラ抗体およびその製造方法は、当技術分野において既知である（例えば、ＰＣＴ特許出願国際公開第８６／０１５３３、国際公開第９７／０２６７１、国際公開第９０／０７８６１、国際公開第９２／２２６５３、および米国特許第５，６９３，７６２、５，６９３，７６１、５，５８５，０８９、５，５３０，１０１、および５，２２５，５３９）。
【０１９８】
いくつかの特定の実施形態によれば、モノクローナル抗体はキメラ的なモノクローナル抗体である。
【０１９９】
いくつかの実施形態によれば、キメラ抗体はヒト由来の定常領域を含む。
【０２００】
いくつかの実施形態によれば、キメラ抗体のヒト定常領域は、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ３、およびヒトＩｇＧ４から成る群から選択される。
【０２０１】
特定の実施形態によれば、キメラ的なモノクローナル抗体またはそのフラグメントは、ヒトＩｇＧ１サブタイプの定常領域サブクラスを含む。
【０２０２】
特定の実施形態によれば、ＰＶＲを認識するキメラ的なモノクローナル抗体が提供され、以下から成る群から選択される１セットの６つのＣＤＲを含む：（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４または８０、６または８１、８または８２、１２、１４、および１６；（ｉｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０または８３、２２、２４、２８、３０、および３２；および（ｉｉｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６または８４、３８、４０、４４または８５、４６、および４８。
【０２０３】
＜薬理学＞
医薬製剤および薬剤の製剤では、活性薬剤は好ましくは１つ以上の薬学的に許容可能な担体および随意に他の任意の治療成分と共に利用される。担体は、製剤の他の成分と適合性があり、およびその受容者にとって過度に有害でないという意味において、薬学的に許容可能であるべきである。活性薬剤は、上述のように所望の薬学的効果を達成するのに効果的な量で、および所望の暴露を達成するのに適切な量で提供される。
【０２０４】
典型的には、抗体の抗原結合部分を含む、またはペプチド模倣剤を含有する別のポリペプチドを含む本発明の抗体とフラグメントとその複合体は、治療に使用するために無菌の食塩水で懸濁される。医薬組成物は代替的に、有効成分（抗体の抗原結合部分を含む分子）の放出を制御するために、または患者の器官系内でのその存在を延長するために、調剤され得る。多くの適切な薬物送達システムが知られており、例えば、埋め込み薬物放出システム、ヒドロゲル、ヒドロキシメチルセルロース、マイクロカプセル、リポソーム、マイクロエマルジョン、ミクロスフェアなどが含まれる。制御放出製剤は、本発明に従って、分子を複合体にするための、または吸着するための重合体の使用を通じて調製することができる。例えば、生体適合性のある重合体は、ポリ（エチレン−コ−酢酸ビニル）のマトリックス、およびステアリン酸二量体およびセバシン酸のポリ無水共重合体のマトリックスを含む。本発明に係る分子の、つまり抗体または抗体フラグメントの、そのようなマトリックスからの放出速度は、分子の分子量、マトリックス内の分子の量、および分散した粒子のサイズに左右される。
【０２０５】
本発明の医薬組成物は、経口、局所、鼻腔内、皮下、筋肉内、静脈内、動脈内、関節内、傷害内、腫瘍内、または非経口などの、任意の適切な方法によって投与され得る。通常、静脈内（ｉ．ｖ．）投与は抗体を送達するために使用される。
【０２０６】
本発明に係る分子の治療上有効な量はとりわけ、投与スケジュール、投与される分子の単位用量、分子が他の治療薬と併用投与されたかどうか、患者の免疫状態および健康状態、投与された分子の治療活性、血液循環内でのその持続性、および処置を行う医師の判断に左右されることが、通常の当業者には明白であろう。
【０２０７】
本明細書において使用される用語「治療上有効な量」は、哺乳動物における疾患または障害を処置するのに有効な薬物の量を指す。癌の場合には、治療上有効な量の薬物は、癌細胞の数を減らし；腫瘍サイズを低減し；末梢器官への癌細胞の侵入を阻害し（すなわち、ある程度まで遅らせる、および好ましくは停止させる）；腫瘍転移を阻害し（すなわち、ある程度まで遅らせる、および好ましくは停止させる）；腫瘍増殖をある程度まで阻害し；および／または、傷害に関連する１つ以上の症状をある程度まで緩和し得る。薬物が既存の癌細胞の成長を防ぐ、および／またはそれを殺し得る程度まで、それは細胞増殖抑制性および／または細胞毒性であり得る。癌治療については、インビボでの有効性は、例えば生存期間、疾患進行の時間（ＴＴＰ）、奏効率（ＲＲ）、奏効の期間、および／またはクオリティー・オブ・ライフの評価を評価することで測定可能である。
【０２０８】
本発明による処置に関し、改めることが可能な癌は、限定されないが以下を含む：細胞腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、および白血病またはリンパ性悪性腫瘍。そのような癌のより多くの詳細な例は、扁平上皮癌、肺癌（小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌および肺扁平上皮癌を含む）、腹膜癌、肝細胞癌、胃癌（胃腸癌を含む）、膵臓癌、膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝臓癌、乳癌、結腸癌、大腸癌、子宮内膜癌または子宮体癌、唾液腺癌、腎臓癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝癌および様々な種類の頭頸部癌、さらにＢ細胞リンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽性ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度の小型非切れ込み核（ｓｍａｌｌ  ｎｏｎ−ｃｌｅａｖｅｄ  ｃｅｌｌ）ＮＨＬ；巨大腫瘤性ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；およびヴァルデンストレームマクログロブリン血症；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）；ヘアリー細胞白血病；慢性骨髄芽球性白血病；および移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、さらに母斑症、浮腫（脳腫瘍関連のものなど）およびメーグス症候群に関連する異常な欠陥増殖を含む。好ましくは、癌は、乳癌、大腸癌、直腸癌、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、腎細胞癌、前立腺癌、肝臓癌、膵臓癌、軟部組織肉腫、カポジ肉腫、カルチノイド癌腫、頭頸部癌、黒色腫、卵巣癌、中皮腫、および多発性骨髄腫から成る群から選択される。本発明の処置に関し、改めることが可能な癌性の疾病は転移癌を含む。
【０２０９】
他の実施形態によれば、本発明に係る医薬組成物は、ＰＶＲ過剰発現に特徴付けられる癌の処置に使用されるためのものである。癌の種類に関連するＰＶＲ過剰発現は、Ｔｈｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｔｌａｓ（ＴＣＧＡ）などの既知のデータベースを使用して特定することができる。特定の実施形態によれば、癌は、副腎皮質癌（ＡＣＣ）、腎明細胞癌（ｃｈｒｏｍｏｐｈｏｂｅ  ｒｅｎａｌ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＫＩＣＨ）、肝細胞癌（ＬＩＨＣ）、結腸および直腸の腺癌（ＣＯＡＤ、ＲＥＡＤ）、膵管腺癌（ＰＡＡＤ））、クロム親和細胞腫＆傍神経節腫（ＰＣＰＧ）、乳頭状腎臓癌（ＫＩＲＰ）、肺腺癌（ＬＵＡＤ）、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣ）、前立腺癌（ＰＲＡＤ）、子宮体子宮内膜癌（ＵＣＥＣ）、子宮頸癌（ＣＥＳＣ）、皮膚黒色腫（ＳＫＣＭ）、中皮腫（ＭＥＳＯ）、尿路上皮膀胱癌（ＢＬＣＡ）、明細胞腎臓癌（ＫＩＲＣ）、肺有棘細胞癌（ＬＵＳＣ）、子宮癌肉腫（ＵＣＳ）、肉腫（ＳＡＲＣ）、卵巣漿液性嚢胞腺癌（ＯＶ）、乳頭状甲状腺癌（ＴＨＣＡ）、多形神経膠芽腫（ＧＢＭ）、乳癌（ＢＲＣＡ）、低悪性度神経膠腫（ＬＧＧ）、およびびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣ）から成る群から選択される。個々の可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。
【０２１０】
本発明の分子は有効成分として、周知のように薬学的に許容可能でありかつ有効成分に親和性のある賦形剤に溶解、分散、または混合される。適切な賦形剤は、例えば水、食塩水、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、ブドウ糖、グリセリン、エタノールなど、またはそれらの組み合わせである。他の適切な担体は、当業者に周知である。加えて、望ましい場合には、組成物は湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝薬などの微量の補助剤を含むことができる。
【０２１１】
本発明による医薬組成物は抗新生物の組成物と共に投与されてもよい。
【０２１２】
本明細書で使用される用語「処置」は、治療的な処置、および予防的な処置または再発防止の処置の両方を指す。処置を必要とするものは、既に障害を有するものと共に、障害が予防されているものも含む。
【０２１３】
「癌」、「癌性である」という用語は、典型的には無秩序な細胞増殖を特徴とする、哺乳動物における生理学的な疾病を指す、または記述する。癌の例には、限定されないが、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫および白血病が含まれる。そのような癌のより詳細な例には、肺癌、甲状腺癌、乳癌、結腸癌、前立腺癌、肝癌、膀胱癌、腎癌、子宮頸癌、膵臓癌、白血病、リンパ腫、骨髄性白血病、卵巣癌、子宮癌、肉腫、胆道癌、および子宮内膜癌が含まれる。
【０２１４】
いくつかの実施形態によれば、癌を処置する方法は、少なくとも１つの追加の抗ガン剤の投与を含む処置レジメンの一部として医薬組成物を投与する工程を含む。
【０２１５】
いくつかの実施形態によれば、抗ガン剤は、代謝拮抗薬、分裂阻害剤、タキサン、トポイソメラーゼ阻害剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、アスパラギナーゼ、アルキル化薬、抗腫瘍抗生物質、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される。個々の可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。
【０２１６】
いくつかの実施形態によれば、代謝拮抗物質は、シタラビン、フルダラビン（ｇｌｕｄａｒａｂｉｎｅ）、フルオロウラシル、メルカプトプリン、メトトレキセート、チオグアニン、ゲムシタビン、およびヒドロキシ尿素から成る群から選択される。いくつかの実施形態によれば、分裂阻害剤は、ビンクリスチン、ビンブラスチンおよびビノレルビンから成る群から選択される。いくつかの実施形態によれば、トポイソメラーゼ阻害剤は、トポテカンおよびイリノテカンから成る群から選択される。いくつかの実施形態によれば、アルキル化薬は、ブスルファン、カルムスチン、ロムスチン、クロラムブチル、シクロホスファミド、シスプラチン、カルボプラチン、イホスファミド、メクロレタミン、メルファラン、チオテパ、ダカルバジン、およびプロカルバジンから成る群から選択される。いくつかの実施形態によれば、抗腫瘍抗生物質は、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、イダルビシン、マイトマイシン、ミトキサントロン、およびプリカマイシンから成る群から選択される。いくつかの実施形態によれば、トポイソメラーゼＩＩはエトポシドとテニポシドから成る群から選択される。個々の可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。
【０２１７】
いくつかの特定の実施形態によれば、追加の抗ガン剤は、ベバシズマブ、カルボプラチン、シクロホスファミド、塩酸ドキソルビシン、塩酸ゲムシタビン、塩酸トポテカン、チオテパ、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される。個々の可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。
【０２１８】
本発明によるモノクローナル抗体は少なくとも１つの抗ガン剤を用いた併用療法の一部として使用されてもよい。いくつかの実施形態によれば、追加の抗ガン剤は、免疫調節剤、活性化リンパ球細胞、キナーゼ阻害剤または化学療法薬である。
【０２１９】
いくつかの実施形態によれば、抗ガン剤は、免疫チェックポイント分子に対する抗体などの、アゴニストであろうと拮抗薬であろうと、免疫調節剤である。
【０２２０】
チェックポイント遮断免疫療法は、癌治療の新しく刺激的な場であることが証明されてきた。免疫チェックポイント経路は、生理条件下で自己寛容を維持しかつ免疫系による障害から組織を保護するために協力して機能する様々な共刺激分子および共抑制分子から成る。腫瘍は免疫系を回避するために特定のチェックポイント経路を利用する。したがって、そのような経路の阻害は抗癌処置の有望な方策であることが明らかになってきた。
【０２２１】
抗細胞傷害性リンパ球４（ＣＴＬＡ−４）抗体イピリムマブ（２０１１年に承認）は、癌患者の処置に有益性を示した最初の免疫療法剤であった。抗体は、Ｔ細胞への抗原提示の間に抑制性のシグナルを妨害する。抗プログラム細胞死１（ＰＤ−１）抗体ペムブロリズマブ（２０１４年に承認）は、Ｔ細胞によって発現したＰＤ−１受容体の負の免疫制御シグナルを遮断する。追加の抗ＰＤ−１剤は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）の処置のために、規制当局の承認を求めて２０１４年に提出された。現在、他の多くの免疫チェックポイントを探究する活発な研究が行われており、その中には：ＣＥＡＣＡＭ１、ＮＫＧ２Ａ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＶＩＳＴＡ、ＣＤ１１２Ｒ、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３）、ＣＤ１３７、ＯＸ４０（ＣＤ１３４とも呼ばれる）、およびキラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）が含まれる。
【０２２２】
いくつかの実施形態によれば、免疫調節剤は以下からなる群から選択される：ＣＴＬＡ−４を阻害する抗体、抗ヒトプログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２抗体、活性細胞傷害性リンパ球細胞、リンパ球活性化剤、ＣＥＡＣＡＭに対する抗体、ＴＩＧＩＴに対する抗体、およびＲＡＦ／ＭＥＫ経路阻害剤。個々の可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの特定の実施形態によれば、追加の免疫調節剤は、ＰＤ−１に対するｍＡｂ、ＰＤ−Ｌ１に対するｍＡｂ、ＰＤ−Ｌ２に対するｍＡｂ、ＣＥＡＣＡＭ１に対するｍＡｂ、ＣＴＬＡ−４に対するｍＡＢ、ＴＩＧＩＴに対するｍＡｂ、インターロイキン２（ＩＬ−２）またはリンホカイン活性キラー（ＬＡＫ）細胞から選択される。
【０２２３】
他の実施形態によれば、追加の抗ガン剤は化学療法薬である。化学療法薬は、本発明によれば抗体と共に、または別個に投与することが可能であったが、抗癌作用を示す当技術分野において既知の任意の薬剤を含んでもよく、限定されないが以下のものを含み得る：ミトキサントロン、トポイソメラーゼ阻害剤、紡錐体阻害剤ビンカ：ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン（タキソール）、パクリタキセル、ドセタセル；アルキル化薬：メクロレタミン、クロラムブチル、シクロホスファミド、メルファラン、イホスファミド；メトトレキサート；６−メルカプトプリン；５−フルオロウラシル、シタラビン、ゲムシタビン；ポドフィロトキシン：エトポシド、イリノテカン、トポテカン、ダカルバジン；抗生物質：ドキソルビシン（アドリアマイシン）、ブレオマイシン、マイトマイシン；ニトロソウレア：カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン、エピルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン；無機イオン：シスプラチン、カルボプラチン；インターフェロン、アスパラギナーゼ；ホルモン：タモキシフェン、リュープロリド、フルタミド、および酢酸メゲストロール。
【０２２４】
いくつかの実施形態によれば、化学療法薬は、アルキル化薬、代謝拮抗薬、葉酸類似体、ピリミジンアナログ、プリンアナログ、および関連する阻害剤、ビンカアルカロイド、エピポドフィロトキシン、抗生物質、Ｌ−アスパラギナーゼ、トポイソメラーゼ阻害剤、インターフェロン、プラチナ配位化合物、アントラセンジオン置換尿素、メチルヒドラジン誘導体、副腎皮質抑制薬、副腎皮質ステロイド、プロゲスチン、エストロゲン、抗エストロゲン、アンドロゲン、抗アンドロゲン、および性腺刺激ホルモン放出ホルモン類似体から選択される。別の実施形態によれば、化学療法薬は、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ロイコボリン（ＬＶ）、イリノテカン、オキサリプラチン、カペシタビン、パクリタキセルおよびドセタキセルから成る群から選択される。１つ以上の化学療法薬を使用することができる。
【０２２５】
いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物は、癌の処置のために、または免疫反応の増強のために使用される。
【０２２６】
用語「免疫反応を増強する」は、免疫系の反応性を増大させること、およびその記憶を誘発または延長することを指す。本発明の医薬組成物はワクチン注射に際して免疫系を刺激するために使用されてもよい。したがって一実施形態では、医薬組成物はワクチン注射を向上させるのに使用することができる。
【０２２７】
特定の実施形態では、癌は、肺癌、甲状腺癌、乳癌、結腸癌、黒色腫、前立腺癌、肝癌、膀胱癌、腎癌、子宮頸癌、膵臓癌、白血病、リンパ腫、骨髄性白血病、卵巣癌、子宮癌、肉腫、胆道癌、および子宮内膜癌から選択される。個々の可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。
【０２２８】
いくつかの実施形態によれば、本発明に係る少なくとも１つの抗体またはそのフラグメントを含む医薬組成物、および追加の免疫調節剤またはキナーゼ阻害剤を含む医薬組成物は、別個の投与によって癌の処置に使用される。
【０２２９】
さらに別の態様によれば、本発明は、必要としている被験体の癌を処置する方法を提供し、該方法は、前記被験体に治療上有効な量の本発明に係るモノクローナル抗体または抗体フラグメントを投与する工程を含む。
【０２３０】
本明細書に使用されるような用語「有効な量」は、被験体に投与されたときに、意図した治療効果を有する抗体フラグメントの十分な量を指す。治療最終結果を達成するのに必要とされる有効な量は、例えば、腫瘍の特定の型および患者の疾病の重症度、並びに組み合わせがさらに放射線と同時投与されるかどうかを含む、多くの因子に左右され得る。活性薬剤の有効な量（用量）は、本発明の関連で、限定されないが、腫瘍増殖の阻害、腫瘍増殖の速度の減少、腫瘍および転移の成長の予防および生存の増強を含む、被験体の有益な治療反応に経時的に影響を与えるのに十分な量であるべきである。
【０２３１】
本明細書に記載される組成物の毒性および治療効果は、例えば、ＩＣ５０（５０％の阻害を提供する濃度）および主題の化合物に対する最大耐量を判定することによって、細胞培養物または実験動物において標準の薬学的手順によって判定することができる。これらの細胞培養アッセイおよび動物研究から得られたデータは、ヒトにおける使用のための投薬量範囲の製剤に使用することができる。投薬量は、他の関連因子の中でも、とりわけ、利用される剤形、選ばれる投与レジメン、処置に使用される薬剤の組成および利用される投与経路によって左右され得る。正確な製剤、投与経路および投薬量は、患者の疾病を考慮して、個々の医師によって選ばれ得る。処置される疾病の重症度および反応性に応じて、投薬は、徐放性組成物の単一の投与でもあり、治療過程は、数日から数週間続くか、あるいは治癒が達成される又は疾患状態の減少が達成されるまで続き得る。投与される組成物の量は、もちろん、処置されている被験体、病気の重症度、投与の方法、処方する医師の判断、およびすべての他の関連因子に依存する。
【０２３２】
被験体に物質、化合物または薬剤を「投与すること（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｉｎｇ）」またはそれら「の投与（ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ）」という用語は、当業者に既知の様々な方法のうちの１つを使用して実行することができる。例えば、化合物または薬剤は、腸内に又は非経口で投与することができる。腸内にとは、経口、舌下にまたは直腸を含む胃腸管を介する投与を指す。非経口投与は、静脈内、皮内、筋肉内、腹腔内、皮下、眼、舌下、鼻腔内、吸入、脊髄内、脳内、および経皮（吸収による、例えば、皮膚ダクト（ｓｋｉｎ ｄｕｃｔ）を介する）による投与を含む。化合物または薬剤はまた、化合物または薬剤の持続放出、徐放または制御放出を提供する、再充填可能な又は生分解性のポリマーデバイスまたは他のデバイス、例えば、パッチ、ポンプ、すなわち製剤によって適切に導入することができる。投与はまた、例えば、１回、複数回、及び／又は１回以上の長期間にわたって実行することができる。幾つかの実施形態では、投与は、自己投与を含む直接投与、および薬物を処方する行為を含む間接投与の両方を含む。例えば、本明細書に使用されるように、患者に薬物を自己投与するように命じる又は薬物を別の人に投与してもらうように命じる、及び／又は患者に薬物の処方箋を提供する医師は、薬物を投与する。
【０２３３】
一般に、患者の重量の約０．１ｍｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇ、一般に０．５ｍｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇ、および頻繁に約１ｍｇ／ｋｇから約５ｍｇ／ｋｇの範囲で、抗体が投与される。これに関して、少なくとも１２時間、好ましくは少なくとも４日間、より好ましくは最大２１日間の循環半減期を有する抗体を使用することが好ましい。キメラ抗体は、最大１４−２１日間の循環半減期を有すると予期される。幾つかの場合では、処置期間にわたって大規模な負荷投与量、およびその後、周期的な（例えば、毎週の）維持量を投与することに利点があり得る。抗体はまた、徐放送達システム、ポンプ、および持続注入のための他の既知の送達システムによって送達することができる。
【０２３４】
用語「約」は、特定の値に対する許容可能なエラー範囲、例えば、最大５％または１０％が想定されるべきであることを意味している。
【０２３５】
＜血管新生＞
一態様によると、本発明は、血管新生関連の疾患または障害の処置に使用するための本発明に従う医薬組成物を提供する。
【０２３６】
血管新生は、血管内皮細胞が、増殖し、削られ（ｐｒｕｎｅ）、および再編成して、先在する血管網から新しい血管を形成する、重要な細胞事象である。血管供給の発達が、正常および病理学的な増殖プロセスおよび炎症にとって不可欠であるという説得力のある証拠がある。血管区画は、胚形成中の臓器の発達および分化だけでなく、成人の創傷治癒、組織修復および生殖機能にとっても必要である。
【０２３７】
血管新生はまた、限定されないが、腫瘍、増殖性網膜症、加齢黄斑変性症、関節リウマチ、および乾癬を含む、様々な障害の病態形成に関係する。
血管新生は、ほとんどの一次腫瘍の成長およびそれらの続く転移にとって不可欠である。
腫瘍は、最大１−２ｍｍのサイズまで単純拡散によって十分な栄養素および酸素を吸収することができ、その時点で、それらのさらなる成長は、血管供給の綿密さを必要とする。
このプロセスは、腫瘍量の方へ成長する、および続けてそれを浸潤する、新しい毛細血管の発芽を開始するために、隣接する宿主成熟脈管構造の動員を伴うと考えられる。
さらに、腫瘍血管新生は、新血管新生を促進するために、骨髄からの循環する内皮前駆細胞の動員を伴う。
【０２３８】
＜診断＞
本発明は、癌を診断する及び予知する方法をさらに開示する。一態様によると、本発明は、被験体の癌または感染症の診断及び／又は予後の方法を提供し、該方法は、本明細書に記載されるような少なくとも１つの抗体を使用して、前記被験体の生体サンプルにおけるＰＶＲの発現レベルを判定する工程を含む。
【０２３９】
用語「生体サンプル」は、診断またはモニタリングのアッセイに使用され得る、生物から得られた様々なサンプルタイプを包含する。該用語は、生物学的起源の血液および他の液体のサンプル、生検標本などの固体の組織サンプル、あるいは組織培養物またはそれに由来する細胞およびそれらの子孫を包含する。さらに、該用語は、循環する腫瘍または他の細胞を包含し得る。該用語は、臨床サンプルを具体的に包含し、さらに、細胞培養中の細胞、細胞上清、細胞溶解物、血清、血漿、尿、羊水、眼のサンプルのための房水および硝子体を含む生体液、並びに組織サンプルを含む。該用語はまた、試薬での処置、可溶化、または特定の成分の富化などの、調達後のあらゆる方法で操作されたサンプルを包含する。
【０２４０】
ＰＶＲの発現レベルの判定は、本明細書に記載されるような標識された抗ＰＶＲ抗体によって実行することができる。発現の判定は、例えば、ＥＬＩＳＡによって実行することができる。
【０２４１】
本発明の方法はさらに、発現のレベルを対照レベルと比較する工程を含むことができる。
【０２４２】
以下の実施例は、本発明の幾つかの実施形態をより十分に例示するために提示される。それらは、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
【実施例】
【０２４３】
＜実験手順＞
ここで以下の実施例が言及され、これらは、上記の記載と一緒に、限定しない方法で本発明を例示する。
【０２４４】
概して、本明細書で使用される用語および本発明で利用される検査法は、分子、生化学、微生物学および組換えＤＮＡの技術を含む。そのような技術は、当該技術分野で周知である。周知の手順を指す他の一般参照が、読み手の便宜のために本文書の全体にわたって提供される。
【０２４５】
実施例１．高いＰＶＲ発現は予後不良と相関する。
ＰＶＲおよびネクチン−２は、抑制性受容体ＴＩＧＩＴのためのリガンドである（図２）。結果は、高いＰＶＲ発現レベルが、肺癌、乳癌および脂肪肉腫の癌の予後不良と相関したことを例示している（それぞれ、図１Ａ−図１Ｃ）。ＰＶＲのＧＥＯ発現は、ｂｉｏｐｒｏｆｉｌｉｎｇ．ｄｅを使用する生存率に相関し、関連するデータは、ＩＤ：ＧＳＥ３１２１０、ＧＳＥ２５０５５、ＧＳＥ３０９２９である。さらに、同じ分析を使用すると、ネクチン−２発現は、ほとんどが生存率に対する陽性マーカーであった。
【０２４６】
実施例２．抗ＰＶＲ ｍＡｂの生成および精製
抗ＰＶＲ抗体を生成するために、免疫原としてヒトＰＶＲの細胞外の一部を免疫グロブリンＧ担体のヒトＦｃ領域と組み合わせる、組換えタンパク質、ｈＰＶＲ−Ｆｃを産生し、精製した。
【０２４７】
ＢＡＬＢ／ｃマウスに、完全なフロイントアジュバントにおいて及び２週間後には不完全なフロイントアジュバントにおいて５０μｇの免疫原を注入した。２週後、血清を、抗体価のためにスクリーニングした。最良のレスポンダー（血清を、抗ｈＰＶＲ−Ｆｃ抗体の力価のためにＥＬＩＳＡアッセイによってモニタリングした）は、ＰＢＳ中の免疫原が上昇した。３日後、脾臓細胞を収集し、赤血球の溶解後、ＳＰ２／０細胞と融合させた。細胞を、ハイブリドーマの選択のためにヒポキサンチン、アミノプテリン、およびチミジンを含有している２０％のＲＰＭＩ １６４０培地中に播種し、ＥＬＩＳＡを使用してｍＡｂのためにスクリーニングした。ＳＰ２／０骨髄細胞を免疫化されたマウスの脾臓細胞と融合させることによって、安定したハイブリドーマ細胞株を生成した。
【０２４８】
以下の幾つかの識別特徴を有する産物を開発するために、陽性転帰（ｈＰＶＲ−Ｆｃを認識する抗体を分泌する細胞株）をさらに選択した：ａ）抗体産生のコストを下げるための高収率；ｂ）マウスおよびヒトのＰＶＲと免疫細胞受容体の幾つかの他のリガンドとの間の交差反応性の欠如；ｃ）生細胞の表面上で発現された、天然の、成熟したヒトＰＶＲ分子に対する強い結合能（抗体を、異なる技術、例えば、フローサイトメトリー、ウエスタンブロット、ＥＬＩＳＡでｈＰＶＲを認識する証明された能力を有する包括的な抗ｈＰＶＲモノクローナル抗体プールから選んだ）。実際に、ヒトおよびマウスのＰＶＲは、高レベルの相同性を有し、ヒトのホモログを認識するマウスのモノクローナル抗体を生成するのは容易ではない。より重要なことに、ヒトＰＶＲは、の細胞外領域で広範囲にグリコシル化される。これらの理由で、共通抗原（エシェリキア・コリ由来の抗原など）を使用して天然タンパク質を認識する抗体を生成するのは容易ではない。
【０２４９】
本発明者は、哺乳動物のヒト胚腎臓２９３（ＨＥＫ ２９３Ｔ）細胞において産生され、免疫親和性クロマトグラフィーによって未変性条件（ｎａｔｉｖｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ）下で精製された分子である、ｈＰＶＲ−Ｆｃ免疫原を使用して、天然タンパク質、ヒトＰＶＲを密に模倣した。結論として、生成された抗ｈＰＶＲ ｍＡｂのプールから、生細胞上の天然のヒトＰＶＲ形態を認識する典型的なものを特定したが、これは、処置中にヒト免疫細胞反応に影響を与え得る誘導体を発達させる前提条件である。
【０２５０】
４つの抗ＰＶＲ抗体を生成した。これらのうち、３つの抗体、すなわち、抗体５Ｂ９（ｈＰＶＲ．０９とも呼ばれる）、抗体７Ｄ４（ｈＰＶＲ．０１とも呼ばれる）、および抗体４Ｅ５（ｈＰＶＲ．０７とも呼ばれる）は、抗ＰＶＲ ｍＡｂを遮断した。これらの抗体はすべて、ＴＩＧＩＴ−Ｉｇ結合を遮断する（それぞれ、図３のＢ−Ｄに例示される通り）。ＴＩＧＩＴ−Ｉｇ結合を遮断しない第４の抗体を生成し、これを２Ｇ３（ｈＰＶＲ．１７とも呼ばれる）と呼んだ（図３のＡ）。
【０２５１】
表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）のＢｉｏｓｅｎｓｏｒ Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）Ｔ１００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、抗体とｈＰＶＲとの間のＫｏｆｆ、ｋｏｎおよびＫＤを判定した（表１）。
【０２５２】
【表１】
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【０２５３】
（ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＡ０２９１４．１に対応する）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６に明記されるヒト重鎖定常ＩｇＧ１領域を含む、キメラモノクローナル抗体を、当該技術分野に既知の方法を使用して、上記の３つの抗体から産生した。
【０２５４】
実施例３．抗ＰＶＲ ｍＡｂとのＰＶＲ−ＴＩＧＩＴ相互作用の遮断は、ヒト細胞株のＮＫ細胞死滅を増強させた
標的細胞を、アッセイの１２時間前に［３５Ｓ］−メチオニンで標識した。示された抗体を、５μｇ／ｍｌの終濃度に加え、氷上で３０分間標識された標的（５０００細胞／ウェル）でインキュベートした。アッセイを、５時間３７℃で９６Ｕ形プレートにおいてＲＰＭＩ培地中で実行した。標識された標的を、１０：１のＥ：Ｔ比率でエフェクターＮＫ細胞によりインキュベートした。インキュベーション後、プレートを遠心分離にかけ（１６００ｒｐｍ、５分、４℃）、上清（５０μｌ）を収集し、不透明なＯｐｔｉプレート（Ｐａｃｋａｒｄ）に移した。１５０μｌのシンチレーション液体（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を加え、マイクロベータ、β−カウンター（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）によって分析した。１００μｌの０．１Ｎ ＮａＯＨを均一量ｎｏ標的（５０００／ウェル）に加えることによって、最大限の標識化を判定した。標的細胞のみを含有しているウェルにおいて、自発的放出を判定した。最終の具体的な死滅数を、以下の通りに計算した：（（放射性読み取り値−自発的放出）／（最大限の標識化−自発的放出））＊１００＝具体的な死滅数。図４に示されるように、抗ＰＶＲ ｍＡｂ ７Ｄ４（ｈＰＶＲ．０１とも呼ばれる）でのＮＫ細胞の培養は、ヒト乳腺腺癌細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−２３１のＮＫ細胞死滅を（２倍）増強させた。
【０２５５】
実施例４．抗ＰＶＲ ｍＡｂとのＰＶＲ−ＴＩＧＩＴ相互作用の遮断は、ヒト癌細胞株のＮＫ細胞死滅を増強させた
標的細胞を、アッセイの１２時間前に［３５Ｓ］−メチオニンで標識した。示された抗体を、５μｇ／ｍｌの終濃度に加え、氷上で３０分間標識された標的（５０００細胞／ウェル）でインキュベートした。細胞を、１０：１のＥ：Ｔ比率でエフェクターＮＫ細胞によりインキュベートした。アッセイを、５時間３７℃で９６Ｕ形プレートにおいてＲＰＭＩ培地中で実行した。インキュベーション後、プレートを遠心分離にかけ（１６００ｒｐｍ、５分、４℃）、上清（５０μｌ）を収集し、不透明なＯｐｔｉプレート（Ｐａｃｋａｒｄ）に移した。１５０μｌのシンチレーション液体（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を加え、マイクロベータ、β−カウンター（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）によって分析した。１００μｌの０．１Ｎ ＮａＯＨを均一量ｎｏ標的（５０００／ウェル）に加えることによって、最大限の標識化を判定した。標的細胞のみを含有しているウェルにおいて、自発的放出を判定した。最終の具体的な死滅数を、以下の通りに計算した：（（放射性読み取り値−自発的放出）／（最大限の標識化−自発的放出））＊１００＝具体的な死滅数。
【０２５６】
図５に示されるように、抗ＰＶＲ ｍＡｂ ４Ｅ５（ｈＰＶＲ．０７とも呼ばれる）とのＰＶＲ−ＴＩＧＩＴ相互作用の遮断は、ヒト癌細胞株ＨｅｐＧ２（肝細胞癌）のＮＫ細胞死滅を増強させた。したがって、ＰＶＲの遮断が標的細胞の死滅の増強につながることは明らかである。４Ｅ５のヒトＩｇＧ対応物がｍＡｂのキメラバージョンの使用されたときに、死滅はさらに増強される。死滅は、陽性対照（Ｅｒｂｉｔｕｘ（著作権））と同等である。
【０２５７】
実施例５．ヒト腫瘍細胞株は、ＰＶＲおよびネクチン−２を発現する
腫瘍細胞上のＰＶＲおよびネクチン−２の発現を検査するために、異なる腫瘍細胞株上のこれらのタンパク質の発現レベルを、抗ＰＶＲ−４Ｅ５ Ａｂおよび抗ネクチン−２ Ａｂ（クローンＴＸ−３１）を使用して、両方とも２μｇ／ｍｌで、ＦＡＣＳ分析によって検査した。図６Ａ−６Ｏに示されるように、様々なヒト腫瘍細胞株は、ＰＶＲおよびネクチン−２を発現する。具体的には、メラノーマ細胞（図６Ａ−６Ｅ）、乳癌細胞（図６Ｆ−６Ｈ）、大腸細胞（図６Ｉ）、腎臓細胞（図６Ｊ）、肺癌細胞（図６Ｋ）、前立腺癌細胞（図６Ｌ）、脳腫瘍細胞（図６Ｍ）、および肝細胞癌細胞（図６Ｎ−６Ｏ）はすべて、ＰＶＲおよびネクチン−２を発現すると示されている。
【０２５８】
実施例６．ＰＶＲは主要なＴＩＧＩＴリガンドである
図７のＡ−Ｃは、ＰＶＲが主要なＴＩＧＩＴリガンドであることを実証している。具体的には、ＨｅｐＧ２細胞（ヒト肝細胞癌細胞）が、ＰＶＲおよびネクチン−２の両方を発現することが示された（図７のＡ）。ｈＰＶＲ．０７（０．１５μｇ／ウェル）とも呼ばれる、精製された抗ＰＶＲ ｍＡｂ ４Ｅ５でのＨｅｐＧ２細胞の培養は、これらの細胞がネクチン−２も発現するという事実にもかかわらず、ＴＩＧＩＴ−Ｉｇ結合（２μｇ／ｍｌ）をほぼ完全に遮断した（図７のＢ）。図７のＣおよび図７のＤに示されるように、抗ＰＶＲ ｍＡｂによるネクチン−２の直接的な認識がなかったことは明らかである。
【０２５９】
実施例７．ヒトおよび霊長類のＰＶＲに対するｍＡｂクローンの結合
図８Ａ−Ｃに示されるように、試験されたすべての抗ＰＶＲ抗体クローンは、ＦＡＣＳ分析を使用して、ヒトＰＶＲ（ｈＰＶＲ）に結合する。簡潔には、細胞を、１ウェル当たり２＊１０５細胞での染色のためのトリプシン処理し、移した。示された抗体を、氷上に３０分間加えた。すべての抗体を、２μｇ／ｍｌの終濃度で使用した。結合された抗ＰＶＲ Ａｂの検出を、抗マウスＩｇＧ−６４７を使用して実行した。マウスＩｇＧ１カッパを、陰性対照として使用した。
【０２６０】
図８Ａは、ＨｅｐＧ２肝細胞癌細胞の表面に対するＦＡＣＳ染色によって内因性ｈＰＶＲが検出されたことを例証している。図８Ｂにおいて、マウス細胞株Ｂ１６を使用した。マウスＰＶＲ配列は、人類とは異なり、シグナルの欠如に見られるように（左パネル）抗ヒトＰＶＲ抗体によって認識されない。全長ｈＰＶＲタンパク質（ＮＰ＿００６４９６．４アミノ酸１−４１８）がこれらの細胞中で過剰発現されたときに、すべての３つのクローンは、同一のシグナル（右パネル）という結果となり、これは、この染色が、ヒトＰＶＲタンパク質へのこれらのＡｂの特異的結合の結果であるという主張をさらにサポートしている。
【０２６１】
ＰＶＲアミノ酸配列は、幾つかの種にわたって保存される。ヒトＰＶＲのアミノ酸保存を、インシリコでアフリカミドリザルのアミノ酸保存と比較し、ヒトＰＶＲに対する９３％の類似性を有することが分かった。アフリカミドリザルのベロ細胞のＦＡＣＳ染色は、アフリカミドリザルのＰＶＲが３つすべてのヒトｍＡｂによって効率的に認識されることを実証した（図８Ｃ）。これらのヒト抗ＰＶＲ抗体が、ハムスターまたはマウスなどのイヌ科の動物およびげっ歯類からＰＶＲを認識しないことがさらに分かった。図９は、ＭＤＣＫ細胞を発現するイヌ科の動物のＰＶＲのためのＦＡＣＳ分析を示す。見られるように、抗ヒトＡｂはいずれも陽性シグナルの結果にはならず、一方でＰＶＲ発現自体は、強いＴＩＧＩＴ−Ｉｇシグナルによって示唆されている。
【０２６２】
実施例８．ネクチン−２は、ＤＮＡＭ−１によって優先的に結合される
ＴＩＧＩＴ−ＦｃおよびＤＮＡＭ−１−Ｆｃを、図１０に示される濃度で使用して、ｈＮｅｃｔｉｎ−２を過剰発現する細胞を染色した：ＲＰＭＩ−８８６６細胞株（図１０Ａおよび図１０Ｂ）、またはＢ１６−ｈＰＶＲ細胞株（図１０Ｃおよび図１０Ｄ）。結合された融合タンパク質の検出を、抗ヒトＩｇＧ ＡＰＣを使用して行い、ＦＡＣＳによって分析した。
【０２６３】
ＰＶＲ結合に関して、ＴＩＧＩＴ−Ｆｃによるシグナルは、前のレポート（Ｙｕ．Ｘ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １０（１）：４８−５７）と同様に、ＤＮＡＭ−１−Ｆｃのシグナルより２−４倍高かった。同時に、ＤＮＡＭ−１−ＦｃへのｈＮｅｃｔｉｎ−２の結合は、ＴＩＧＩＴ−Ｆｃへのその結合より２−１０倍強く、これは、１つのレポート（Ｙｕ．Ｘ ｅｔ ａｌ ２００９）に矛盾しているが、別の試験（Ｚｈｕ Ｙ ｅｔ ａｌ．， ２０１６， Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．， ８；２１３（２）：１６７−７６）によって確証されている。まとめると、結果は、ＤＮＡＭ−１がネクチン−２結合のための優先的な受容体であることを例示している。したがって、ＤＮＡＭ−１による共刺激シグナル伝達を可能にしながら、ＰＶＲの遮断はＴＩＧＩＴの阻害シグナル伝達を防ぐ。ＤＮＡＭ−１は、そのリガンドを有する他の細胞への細胞接着を媒介する。
【０２６４】
実施例９．抗ＰＶＲ抗体はＴ細胞増殖を増強する
Ｔ細胞増殖に対する抗ＰＶＲ ｍＡｂの効果を試験するために、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）で染色し、４μｇ／ｍｌの濃度で抗体の存在下において標的細胞でインキュベートした。培養の５−９日後にＣＤ４５陽性細胞上でＣＦＳＥ希釈を測定した。図１１に示されるように、抗ＰＶＲ ５Ｂ９活性は、単一の薬剤としてＰＤ−１およびＣＴＬＡ４の抗体活性を超過する。また、ヒトＩｇＧ１定常領域を有しているキメラ抗ＰＶＲ ４Ｅ５ｈＩｇＧ１クローンは、そのマウス対応物より優れていた。次に、Ｔ細胞増殖を増強すると分かった抗ＰＶＲ ｍＡｂｓおよび他の抗体の併用効果を検査した。ヒトＰＢＭＣを、カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）で染色し、４μｇ／ｍｌの濃度で抗体の存在下において標的細胞でインキュベートした。培養の５−９日後にＣＤ４５陽性細胞上でＣＦＳＥ希釈を測定した。結果は、ＰＤ−１またはＣＴＬＡ−４のいずれかと併用されたときに、抗ＰＶＲ ５Ｂ９の増殖活性が、ＰＤ−１とＣＴＬＡ４の組み合わせの活性を超過することを示している（図１２）。また、抗ＰＶＲ ４Ｅ５とＣＴＬＡ−４の組み合わせの活性は、ＰＤ−１とＣＴＬＡ４の組み合わせと等しい。次に、ＣＤ８の特異的誘発を検査した。図１３に示されるように、抗ＰＶＲ抗体ＣＤ８のＴ細胞増殖活性は、ＰＤ１の活性を超過する。また、抗ＰＶＲ ５Ｂ９抗体の誘発活性は、ＣＴＬＡ１の誘発活性を超過する。ＣＤ８／ＣＤ４増殖の比率を、異なる抗体のために評価した（図１４）。抗ＰＶＲ ５Ｂ９は、最も高いＣＤ８／ＣＤ４比率を有していた。可変重鎖および可変軽鎖のＤＮＡ配列を使用して、ヒトＩｇＧ１アイソタイプ定常ドメインおよび定常光（ＣＬ）ヒトＩｇＧカッパドメインを含む、キメラ抗体を構築した。マウスおよびヒトのキメラ対応物の抗体によって誘発されたＴ細胞増殖を、ＣＦＳＥアッセイによって測定した。表２に示される数字は、対照と比較した増殖の相対レベルを表わす。
【０２６５】
【表２】
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【０２６６】
次に、ＮＫ脱顆粒に対するＰＶＲ抗体の効果を検査した。脱顆粒中に、ＮＫ細胞中の細胞溶解性顆粒を放出し、細胞溶解性顆粒の表面上に存在するリソソーム関連の膜タンパク質−１（ＬＡＭＰ−１、ＣＤ１０７ａ）を、細胞表面に輸送し、抗体結合が利用可能になる。このマーカーは、活性化されたＮＫ細胞の識別を可能にする。ＮＫ細胞を、抗ＰＶＲ抗体（マウスおよびそれらのキメラヒト対応物の抗体）と一緒に、５つの異なる標的細胞でインキュベートした。抗ＣＤ１０７ａ抗体を使用して、脱顆粒を評価した。
【０２６７】
【表３】
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【０２６８】
表３および図１５に示されるように、抗体はすべてＮＫ脱顆粒活性を示し、ここでキメラ抗体は、それらの対応したマウス抗体と比較して有意により高い活性を有していた。
【０２６９】
実施例１０．抗ＰＶＲ抗体は、免疫細胞がない状態で腫瘍細胞の生存率を低下させる。
Ａ５４９、Ｕ３７３、ＨＣＴ１１６、およびＭｅｌ−６２４の細胞の生存率を、２４時間５０マイクログラム／ｍｌの異なる抗ＰＶＲ ｍＡｂの存在下で、ＭＴＴ細胞の生存アッセイを使用して検査した。図１６Ａ−図１６Ｄおよび表４に示されるように、５Ｂ９ ｍＡｂによって遮断されたＰＶＲは、ｍＩｇＧと比較して生存率を有意に２０−４０％低下させた。
【０２７０】
【表４】
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【０２７１】
実施例１１．ヒト化されたマウスモデルにおけるヒト腫瘍に対する抗ＰＶＲ抗体のインビボでの効果−短期間のヒト化
抗体の抗腫瘍効果をインビボで試験する。ヒト癌の阻害における本明細書に記載される抗体の効果を評価するために、抗体を、ヒト起源の腫瘍およびリンパ球の両方を組み合わせるモデルにおいて試験する。ＮＯＤ ｓｃｉｄガンマ（ＮＳＧ）マウスに、ｈＰＢＭＣを移植して、免疫適格を回復させ、ヒト癌細胞で攻撃する（ｃｈａｌｌｅｎｇｅｄ）。予め決められた時点／腫瘍サイズで、マウスを、本発明による抗ヒトＰＶＲ抗体により、腫瘍攻撃後の異なる時点での複数回用量の投与によって処置する。同じ実験を、キメラ抗ＰＶＲ抗体で実行する。腫瘍成長曲線および体重を、３ｘ／週で測定し、マウスの屠殺後に、異なる臓器におけるＴＩＬおよび免疫集団の広範囲の表現型分析を実行する。
【０２７２】
ＰＢＭＣ ｈｕＮＳＧマウスにおける腫瘍株と類似したモデルを、Ｇｕｐｔａ Ｐ．， Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ． ２０１５ Ｍａｒ ６； ４（２）： ｅ９８１４４９に従って実行する。
【０２７３】
実施例１２．ヒト化されたマウスモデルにおけるヒト腫瘍に対する抗ＰＶＲ抗体のインビボでの効果−長期間のヒト化
ヒト癌の阻害における抗ＰＶＲ抗体の効果を評価するために、抗体を、ヒト起源の腫瘍およびリンパ球の両方を組み合わせるモデルにおいて試験する。新生のＮＯＤ ｓｃｉｄガンマ（ＮＳＧ）子犬に放射線を当て、ＣＤ３４＋ＨＳＣを移植して、免疫適格を回復させる。免疫細胞再構成の判定の１−２週間後に、マウスにヒト癌細胞で負荷を与え、予め決められた時点／腫瘍サイズで、マウスを、本発明による抗ヒトＰＶＲ抗体により異なる時点での複数回用量の投与によって処置する。ヒト化された抗ＰＶＲ抗体と同じ実験を実行する。腫瘍成長曲線および体重を、３ｘ／週で測定する。マウスを屠殺すると、異なる臓器におけるＴＩＬおよび免疫集団の広範囲の表現型分析を実行する。
【０２７４】
本発明の抗体の腫瘍抑制活性を試験するために使用される類似したモデルは、Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ （ｈｔｔｐ：／／ｉｍｍｕｎｅ−ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ．ｃｏｍ／ｗｐ−ｃｏｎｔｅｎｔ／ｕｐｌｏａｄｓ／ｓｉｔｅｓ／２４／２０１５／０１／Ｄａｙ−１−１５．４５−Ｒｉｃｋ−Ｈｕｎｔｒｅｓｓ．ｐｄｆ）によって確立された。
【０２７５】
実施例１３．ＩＦＮγ分泌の誘発
サイトカイン分泌に対する抗ＰＶＲ ｍＡｂｓの効果を試験するために、２人の健康なドナーからのヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、１μｇ／ｍｌおよび０．１μｇ／ｍｌの濃度で抗体（ｍＩｇＧ、５Ｂ９ｍＩｇＧ、イピリムマブと呼ばれる抗ＣＴＬ−４抗体）の存在下において標的細胞でインキュベートした。培養の６日後のＩＦＮγのレベルを測定した。抗ＰＶＲ ５Ｂ９抗体によるＩＦＮγの有意な誘発を観察した（１μｇ／ｍｌに対してＰ＝７．３４５４８Ｅ−１１および０．１μｇ／ｍｌに対して２．７３１７９Ｅ−０８）。
【０２７６】
ＩＦＮγの分泌は抗腫瘍免疫の主要な要素であり、抗ＰＶＲ ｍＡｂｓによるＩＦＮγの分泌の誘発は、癌処置におけるこれらの化合物の潜在的な追加の抗腫瘍効果を示す。
【０２７７】
具体的な実施形態の前述の記載は、現在の知識を適用することによって、他のものができる本発明の一般的な性質を十分に明らかにし、不要な実験をすることなく及び類概念から逸脱することなく、様々な用途のためにそのような具体的な実施形態を容易に修正する及び／又は適用し、それ故、そのような適用および修正は、開示された実施形態の同等物の意味および範囲内で理解されるべきであり、そのように意図される。本明細書で使用される語法または用語が、説明目的のものであり、限定するものではないことが理解されるべきである。
【図１Ａ】
2019511212.tif 000006
【図１Ｂ】
2019511212.tif 000007
【図１Ｃ】
2019511212.tif 000008
【図２】
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【図３】
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【図４】
2019511212.tif 000011
【図５】
2019511212.tif 000012
【図６Ａ】
2019511212.tif 000013
【図６Ｂ】
2019511212.tif 000014
【図６Ｃ】
2019511212.tif 000015
【図６Ｄ】
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【図６Ｅ】
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【図６Ｆ】
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【図６Ｇ】
2019511212.tif 000019
【図６Ｈ】
2019511212.tif 000020
【図６Ｉ】
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【図６Ｊ】
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【図６Ｋ】
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【図６Ｌ】
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【図６Ｍ】
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【図６Ｎ】
2019511212.tif 000026
【図６Ｏ】
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【図７】
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【図８Ａ】
2019511212.tif 000029
【図８Ｂ】
2019511212.tif 000030
【図８Ｃ】
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【図９】
2019511212.tif 000032
【図１０Ａ】
2019511212.tif 000033
【図１０Ｂ】
2019511212.tif 000034
【図１０Ｃ】
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【図１０Ｄ】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１６Ｃ】
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【図１６Ｄ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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