(57)【要約】本開示は、脂質ナノ粒子組成物を含む改良された脂質系組成物、ならびに核酸及びタンパク質を含む薬剤をインビボで送達するためのその使用方法を提供する。これらの組成物は、血中クリアランス促進の影響を受けず、インビボにおける毒性プロファイルが改善される。本開示は、一部分において、免疫系によって認識されにくく、それ故クリアランスの影響を受けにくい新規な脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）及びＬＮＰ製剤を提供する。本明細書に提供するＬＮＰは、驚くほど改善されたクリアランス、場合によっては毒性プロファイルを有する。【選択図】図２３
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象に対して、治療薬を封入する脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を、前記ＬＮＰの後続の投与に応答して血中クリアランス促進（ＡＢＣ）を推進する免疫応答を引き起こすことなく送達する方法であって、前記方法は、
前記対象へのＬＮＰの初回投与が、ＬＮＰの第二回投与の実施に際してＡＢＣを推進する免疫応答を誘導しないものである前記初回投与を実施すること、及び
前記対象へのＬＮＰの第二回投与を実施することを含み、前記対象は、ＬＮＰの前記第二回投与に対するＡＢＣ反応を有さず、前記対象は、疾患を治療するため、有効量の前記治療薬を受ける、前記方法。
【請求項２】
ＡＢＣを推進する前記免疫応答が、前記ＬＮＰに結合することができる天然のＩｇＭ分子の産生を含み、前記対象において天然のＩｇＭは、ＡＢＣを推進するレベルまで誘導されない、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＡＢＣを推進する免疫応答が、Ｂ１ａ細胞の活性化を含み、前記対象においてＢ１ａ細胞は、ＡＢＣを推進するレベルまで活性化されない、請求項１〜２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４】
ＡＢＣを推進する前記免疫応答が、前記ＬＮＰに結合することができる天然のＩｇＧ分子の産生を含み、前記対象において天然のＩｇＧは、ＡＢＣを推進するレベルまで誘導されない、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
ＡＢＣを推進する免疫応答が、Ｂ１ｂ細胞の活性化を含み、前記対象においてＢ１ｂ細胞は、ＡＢＣを推進するレベルまで活性化されない、請求項１〜２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
ＡＢＣを推進する前記免疫応答が、ＩＬ６の産生を含み、前記対象においてＩＬ６は、ＡＢＣを推進するレベルまで誘導されない、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
ＡＢＣを推進する免疫応答が、形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）の活性化を含み、前記対象においてｐＤＣは、ＡＢＣを推進するレベルまで活性化されない、請求項１〜２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記ＬＮＰが、ＣＤ３６またはＢ１ａ細胞を活性化するエピトープを実質的に含まない、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
ＣＤ３６またはＢ１ａ細胞を活性化する前記エピトープが、ホスファチジルコリン（ＰＣ）である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＬＮＰが、Ｂ１ｂ細胞を活性化するエピトープを実質的に含まない、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
Ｂ１ｂ細胞を活性化する前記エピトープが、ホスファチジルセリン（ＰＳ）である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＬＮＰが、コア部分で連結された極性部分及び脂質部分を含むヘルパー脂質を含み、前記ヘルパー脂質が、Ｂ１ａ細胞またはＢ１ｂ細胞を活性化しない、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＬＮＰが、ＰＣを実質的に含まない、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＬＮＰが、ＰＳを実質的に含まない、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記ヘルパー脂質が、ホスファチジルコリン類似体である、請求項１２〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記ホスファチジルコリン類似体が、修飾されたＰＣ頭基、修飾されたＰＣコア基、及び／または修飾されたＰＣ脂質尾基を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記ヘルパー脂質が、ホスファチジルコリンのＣＤ３６に対する結合を競合的に阻害する、請求項１２〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記ヘルパー脂質が、ＣＤ３６に結合しないか、または、ＣＤ３６に対する結合活性が低い、請求項１２〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＬＮＰが、オレイン酸またはオレイン酸類似体を含む、請求項１２〜１６のいずれか一項に記載の方法
【請求項２０】
前記ＬＮＰが、ＰＥＧまたはＰＥＧ化脂質を実質的に含まない、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記ＬＮＰが、さらにＰＥＧ化脂質を含む、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記ＰＥＧ化脂質が、アルキルＰＥＧ化脂質である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記ＰＥＧ化脂質が、メトキシＰＥＧ化脂質である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
前記ＰＥＧ化脂質が、ＤＭＧ−ＰＥＧである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】
前記ＰＥＧ化脂質が、ヒドロキシＰＥＧ化脂質である、請求項２１に記載の方法
【請求項２６】
前記ＰＥＧ化脂質が、０．５％（ｗ／ｗ）未満である、請求項２１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記ＰＥＧ化脂質が、０．２５％（ｗ／ｗ）未満である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記ＬＮＰが、さらにカチオン性脂質を含む、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記カチオン性脂質が、ＭＣ３またはＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡである、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記ＬＮＰが、さらにステロールを含む、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記ステロールが、コレステロールである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記ＬＮＰがＣｍｐｄ１８である、請求項１に記載の方法。
【請求項３３】
前記治療薬が、タンパク質または核酸である、請求項１に記載の方法。
【請求項３４】
前記治療薬が、治療用タンパク質をコードするｍＲＮＡである、請求項１に記載の方法。
【請求項３５】
前記ＬＮＰが、複数回投与で前記対象に投与される、請求項１〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
２回の連続した投与の間隔が、２週間未満である、請求項３５に記載の方法
【請求項３７】
前記２回の連続した投与の間隔が、１週間未満である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
対象に対して、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を、後続の前記ＬＮＰの投与に応答して血中クリアランス促進（ＡＢＣ）を推進する免疫応答を引き起こすことなく送達する方法であって、前記方法は、
ＬＮＰの第二回投与の実施に際してＡＢＣを推進する免疫応答を誘導することが可能なＬＮＰの初回投与を前記対象に対して実施すること、
前記ＬＮＰによって誘導される免疫応答を阻害する薬剤を投与すること、及び
前記対象へのＬＮＰの第二回投与を実施することを含み、前記対象は、ＬＮＰの前記第二回投与に対するＡＢＣ反応を有さない、前記方法。
【請求項３９】
前記ＬＮＰによって誘導される免疫応答を阻害する前記薬剤が、Ｂ１ａ細胞が媒介する免疫応答を阻害する薬剤である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
Ｂ１ａ細胞が媒介する免疫応答を阻害する薬剤が、前記ＬＮＰに対する前記Ｂ１ａ細胞の結合を阻害する、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
Ｂ１ａ細胞が媒介する免疫応答を阻害する薬剤が、前記ＬＮＰに対する前記Ｂ１ａ細胞上のＣＤ３６の結合を阻害する、請求項３９に記載の方法。
【請求項４２】
前記ＬＮＰによって誘導される免疫応答を阻害する前記薬剤が、Ｂ１ｂ細胞が媒介する免疫応答を阻害する薬剤である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４３】
前記ＬＮＰによって誘導される免疫応答を阻害する前記薬剤が、天然のＩｇＭ活性を阻害する薬剤である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４４】
天然のＩｇＭ活性を阻害する薬剤が、前記ＬＮＰに対する天然のＩｇＭの結合を阻害する、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
天然のＩｇＭ活性を阻害する薬剤が、天然のＩｇＭの誘導を阻害する、請求項４３に記載の方法。
【請求項４６】
前記薬剤が、前記ＬＮＰに結合することが可能な天然のＩｇＭの産生を阻害する、または前記ＬＮＰに結合することが可能な天然のＩｇＭを中和する、請求項３８に記載の方法
【請求項４７】
前記薬剤が、Ｂ１ａ細胞上のＣＤ３６に結合する、請求項３８に記載の方法。
【請求項４８】
前記ＬＮＰによって誘導される免疫応答を阻害する前記薬剤が、ＩＬ６活性を阻害する薬剤である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４９】
ＩＬ６活性を阻害する薬剤が、ＩＬ６の誘導を阻害する、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記薬剤が、前記ＬＮＰの投与の前、後、または前記ＬＮＰの投与と同時に前記対象に投与される、請求項３８〜４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
前記ＬＮＰが、治療用ｍＲＮＡを封入する、請求項３８〜４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を介した薬物送達を含む治療計画で治療されている対象における用量制限毒性（ＤＬＴ）を低減する方法であって、前記方法は、
Ｂ１細胞活性化、ｐＤＣ活性化、または血小板活性化と関連する免疫応答を誘導しないＬＮＰを前記対象に投与すること、及び
任意に、前記ＬＮＰによって誘導される免疫応答を阻害する薬剤を投与することを含み、その結果、前記治療計画で治療されている前記対象においてＤＬＴが低減される、前記方法。
【請求項５３】
前記ＤＬＴが、凝血障害、播種性血管内凝固症候群（ＤＩＣ）、血管内血栓、補体活性化関連仮性アレルギー（ＣＡＲＰＡ）、またはそれらの組合せを含む、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記免疫応答が、補体古典経路（ＣＰ）を含まない、請求項５２〜５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
前記免疫応答が、補体第二経路（ＡＰ）を含まない、請求項５２〜５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
前記ＬＮＰが、血小板の活性化または凝集を促進しない、請求項５２〜５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
前記ＬＮＰが、ＣＤ３６またはＢ１ａ細胞を活性化するエピトープを実質的に含まない、請求項５２〜５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
ＣＤ３６またはＢ１ａ細胞を活性化する前記エピトープが、ホスファチジルコリン（ＰＣ）である、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記ＬＮＰが、Ｂ１ｂ細胞を活性化するエピトープを実質的に含まない、請求項５２〜５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６０】
Ｂ１ｂ細胞を活性化する前記エピトープが、ホスファチジルセリン（ＰＳ）である、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記ＬＮＰが、コア部分で連結された極性部分及び脂質部分を含むヘルパー脂質を含み、前記ヘルパー脂質が、Ｂ１ａ細胞及び／またはＢ１ｂ細胞を活性化しない、請求項５２〜６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６２】
前記ＬＮＰが、少なくとも８Ｃの脂肪酸鎖を少なくとも１つ及び極性部分を少なくとも１つ含むヘルパー脂質を含み、前記ヘルパー脂質が、Ｂ１ａ細胞及び／またはＢ１ｂ細胞を活性化しない、請求項５２〜６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６３】
前記ＬＮＰが、ＰＣを実質的に含まない、請求項５２〜６２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６４】
前記ＬＮＰが、ＰＳを実質的に含まない、請求項５２〜６２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６５】
前記ヘルパー脂質が、ホスファチジルコリン類似体である、請求項６２〜６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６６】
前記ホスファチジルコリン類似体が、修飾されたＰＣ頭基、修飾されたＰＣコア基、及び／または修飾されたＰＣ脂質尾基を含む、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記ヘルパー脂質が、ホスファチジルコリンのＣＤ３６に対する結合を競合的に阻害する、請求項６２〜６６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６８】
前記ヘルパー脂質が、ＣＤ３６に結合しないか、または、ＣＤ３６に対する結合活性が低い、請求項６２〜６６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６９】
前記ＬＮＰが、オレイン酸またはオレイン酸類似体を含む、請求項６２〜６６のいずれか一項に記載の方法
【請求項７０】
前記ＬＮＰが、ＰＥＧまたはＰＥＧ化脂質を実質的に含まない、請求項５２〜６９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７１】
前記ＬＮＰが、さらにＰＥＧ化脂質を含む、請求項５２〜７０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７２】
前記ＰＥＧ化脂質が、０．２５％（ｗ／ｗ）未満である、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
前記ＬＮＰが、さらにカチオン性脂質を含む、請求項５２〜７２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７４】
前記カチオン性脂質が、ＭＣ３またはＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡである、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記ＬＮＰが、さらにステロールを含む、請求項５２〜７４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７６】
前記ステロールが、コレステロールである、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
前記ＬＮＰによって誘導される免疫応答を阻害する前記薬剤が前記対象に投与される、請求項５２に記載の方法。
【請求項７８】
免疫応答を阻害する前記薬剤が、Ｂ１ａ細胞が媒介する免疫応答を阻害する薬剤、Ｂ１ｂ細胞が媒介する免疫応答を阻害する薬剤、天然のＩｇＭ活性を阻害する薬剤、またはＩＬ６活性を阻害する薬剤である、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
前記薬剤が、前記ＬＮＰの投与の前、後、または前記ＬＮＰの投与と同時に前記対象に投与される、請求項７７〜７８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８０】
前記薬物が、治療用タンパク質をコードするｍＲＮＡを含む治療薬である、請求項５２〜７９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８１】
脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を介した薬物送達を含む治療計画で治療されている対象における用量制限毒性（ＤＬＴ）を低減する方法であって、
ＬＮＰ及び血小板活性化を阻害する薬剤を前記対象に投与することを含み、その結果、治療計画で治療されている前記対象においてＤＬＴが低減される、前記方法。
【請求項８２】
前記ＤＬＴが、凝血障害、播種性血管内凝固症候群（ＤＩＣ）、血管内血栓、活性化関連仮性アレルギー（ＣＡＲＰＡ）、またはそれらの組合せを含む、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
血小板活性化を阻害する前記薬剤が、前記ＬＮＰの投与の前、後、または前記ＬＮＰの投与と同時に前記対象に投与される、請求項８１または８２に記載の方法。
【請求項８４】
前記薬物が、治療用タンパク質をコードするｍＲＮＡを含む治療薬である、請求項８１〜８３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８５】
血小板活性化を阻害する前記薬剤が、ＬＮＰ関連の毒性に伴う少なくとも１つの症状を軽減する、請求項８１〜８４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８６】
前記薬剤が、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）または抗ヒスタミン剤であり、前記抗ヒスタミン剤が、ヒスタミン受容体遮断薬、例えば、Ｈ１アンタゴニストまたはＨ１逆アゴニストである、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
前記ＮＳＡＩＤが、ＣＯＸ−２及び／または５−ＬＯＸ阻害剤である、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
前記抗ヒスタミン剤が、ヒスタミン受容体遮断薬である、請求項８６に記載の方法。
【請求項８９】
前記ヒスタミン受容体遮断薬が、Ｈ１アンタゴニストまたはＨ１逆アゴニストである、請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
前記Ｈ１アンタゴニストが、ジフェンヒドラミン（ベナドリル）、フェキソフェナジン（アレグラ）、またはロラタジン（クラリチン）であり、前記Ｈ１逆アゴニストがセチリジンである、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
血小板活性化を阻害する前記薬剤が、ＣＡＲＰＡを阻害する、請求項８１〜８４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９２】
血小板活性化を阻害する前記薬剤が、古典経路（ＣＰ）を阻害する、請求項９１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９３】
血小板活性化を阻害する前記薬剤が、第二経路を阻害する、請求項９１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９４】
血小板活性化を阻害する前記薬剤が、血小板凝集阻害剤である、請求項８１〜８４、及び９１〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９５】
前記血小板凝集阻害剤が、ＡＤＰ受容体アンタゴニストである、請求項９４に記載の方法。
【請求項９６】
前記血小板凝集阻害剤が、アスピリンまたはクロピドグレル（Ｐｌａｖｉｘ（登録商標））である、請求項９５に記載の方法。
【請求項９７】
前記血小板凝集阻害剤が、アスピリン／プラバスタチン、シロスタゾール、プラスグレル、アスピリン／ジピリダモール、チカグレロル、カングレロル、エリノグレル、ジピリダモール、及びチクロピジンから選択される、請求項９５に記載の方法。
【請求項９８】
血小板活性化を阻害する前記薬剤が、ＣＤ３６活性化を阻害する、請求項８１〜８４、及び９１〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９９】
血小板活性化を阻害する前記薬剤が、ＴＬＲ受容体、ＣＤ６２Ｐ、プロパージン、前記補体系の成分、Ｃ反応性タンパク質、または急性期反応の他のタンパク質を阻害する、請求項８１〜８４、及び９１〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１００】
血小板活性化を阻害する前記薬剤が、ＣＤ３６のそのリガンドに対する結合を阻害する、請求項８１〜８４、及び９１〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０１】
治療レベルの目的のタンパク質を対象に送達する方法であって、前記方法は、
目的の前記タンパク質をコードするｍＲＮＡを封入する脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）の初回投与を前記対象に実施することを含み、ＬＮＰの前記初回投与が、ＬＮＰの第二回投与の実施に際して血中クリアランス促進（ＡＢＣ）を推進する免疫応答を誘導しない、前記方法。
【請求項１０２】
さらに、ＬＮＰの第二回投与を前記対象に実施することを含む請求項１０１に記載の方法であって、前記対象は、ＬＮＰの前記第二回投与に対するＡＢＣ反応を有さない、前記方法。
【請求項１０３】
ＡＢＣを推進する免疫応答が、Ｂ１ａ細胞の活性化を含み、前記対象においてＢ１ａ細胞は、ＡＢＣを推進するレベルまで活性化されない、請求項１０１〜１０２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０４】
ＡＢＣを推進する前記免疫応答が、前記ＬＮＰに結合することができる天然のＩｇＭ分子の産生を含み、前記対象において天然のＩｇＭは、ＡＢＣを推進するレベルまで誘導されない、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０５】
ＡＢＣを推進する免疫応答が、Ｂ１ｂ細胞の活性化を含み、前記対象においてＢ１ｂ細胞は、ＡＢＣを推進するレベルまで活性化されない、請求項１０１〜１０２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０６】
ＡＢＣを推進する前記免疫応答が、ＩＬ６の産生を含み、前記対象においてＩＬ６は、ＡＢＣを推進するレベルまで誘導されない、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０７】
ＡＢＣを推進する免疫応答が、形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）の活性化を含み、前記対象においてｐＤＣは、ＡＢＣを推進するレベルまで活性化されない、請求項１０１〜１０２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０８】
前記ＬＮＰが、コア部分で連結された極性部分及び脂質部分を含むヘルパー脂質を含み、前記ヘルパー脂質が、Ｂ１ａ細胞及び／またはＢ１ｂ細胞を活性化しない、請求項１０１〜１０１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０９】
前記ＬＮＰが、ＰＣを実質的に含まない、請求項１０１〜１０８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１０】
前記ＬＮＰが、ＰＳを実質的に含まない、請求項１０１〜１０８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１１】
前記ヘルパー脂質が、ホスファチジルコリン類似体である、請求項１０８〜１１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１２】
ＡＢＣを推進する前記免疫応答が、用量制限毒性（ＤＬＴ）を引き起こす、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１１３】
前記ＤＬＴが、凝血障害、播種性血管内凝固症候群（ＤＩＣ）、血管内血栓、活性化関連仮性アレルギー（ＣＡＲＰＡ）、またはそれらの組合せを含む、請求項１１２に記載の方法。
【請求項１１４】
前記ＬＮＰが、ＣＡＲＰＡを促進しない、請求項１１３に記載の方法。
【請求項１１５】
前記ＬＮＰが、血小板の活性化または凝集を促進しない、請求項１１３に記載の方法。
【請求項１１６】
前記ＬＮＰが、少なくとも８Ｃの脂肪酸鎖を少なくとも１つ及び極性部分を少なくとも１つ含むヘルパー脂質を含み、前記ヘルパー脂質が、前記ＬＮＰに結合することが可能な天然のＩｇＭの産生を誘導せず、Ｂ１ａ細胞を活性化せず、ＣＤ３６を活性化せず、及び／または血小板を活性化しない、請求項１０１〜１１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１７】
前記ＬＮＰが、ホスファチジルコリン（ＰＣ）を含まない、請求項１０１〜１１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１８】
前記ヘルパー脂質が、ホスファチジルコリン類似体である、請求項１１６または１１７に記載の方法。
【請求項１１９】
前記ホスファチジルコリン類似体が、修飾されたＰＣ頭基、修飾されたＰＣコア基、及び／または修飾されたＰＣ脂質尾基を含む、請求項１１８に記載の方法。
【請求項１２０】
前記ヘルパー脂質が、ホスファチジルコリンのＣＤ３６に対する結合を競合的に阻害する、請求項１１６〜１１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２１】
前記ＬＮＰが、オレイン酸またはオレイン酸類似体を含む、請求項１０１〜１２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２２】
前記ＬＮＰが、ＰＥＧまたはＰＥＧ化脂質を含まない、請求項１０１〜１２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２３】
前記ＬＮＰが、さらにＰＥＧ化脂質を含む、請求項１０１〜１２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２４】
ＬＮＰの前記初回投与が、ＡＢＣを推進する免疫応答を阻害するのに有効な量の薬剤の同時投与の結果として、前記免疫応答を誘導しない、請求項１０１〜１２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２５】
前記薬剤が、前記ＬＮＰに結合することが可能な天然のＩｇＭの産生を阻害する、または前記ＬＮＰに結合することが可能な天然のＩｇＭを中和する、請求項１２４に記載の方法。
【請求項１２６】
前記薬剤が、天然のＩｇＭの標的への結合を阻害する、請求項１２５に記載の方法。
【請求項１２７】
前記薬剤が、Ｂ１ａ細胞を除去する、または標的とする、請求項１２４に記載の方法。
【請求項１２８】
前記薬剤が、Ｂ細胞を除去する、または標的とする、請求項１２４に記載の方法。
【請求項１２９】
Ｂ細胞もしくはＢ１ａ細胞を除去する、または標的とする前記薬剤が、リツキシマブである、請求項１２７または１２８に記載の方法。
【請求項１３０】
前記薬剤が、Ｂ１ａ細胞の活性化を阻害する、請求項１２４に記載の方法。
【請求項１３１】
前記薬剤が、Ｂ１ａ細胞上のＣＤ６に結合及び／またはＢ１ａ細胞上のＣＤ６を阻害する、請求項１２４に記載の方法。
【請求項１３２】
Ｂ１ａ細胞上のＣＤ６に結合及び／またはＢ１ａ細胞上のＣＤ６を阻害する前記薬剤が、抗ＣＤ６抗体である、請求項１３１に記載の方法。
【請求項１３３】
前記抗ＣＤ６抗体が、アルズマブである、請求項１３１に記載の方法。
【請求項１３４】
前記薬剤が、Ｂ１ａ細胞上のＣＤ３６に結合及び／またはＢ１ａ細胞上のＣＤ３６を阻害する、請求項１２４に記載の方法。
【請求項１３５】
前記薬剤が、前記ＬＮＰの投与の前、または前記ＬＮＰの投与と同時に投与される、請求項１２４〜１３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３６】
ＬＮＰが、複数回投与で前記対象に投与される、請求項１０１〜１３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３７】
２回の連続した投与の間隔が、２週間未満である、請求項１３６に記載の方法。
【請求項１３８】
２回の連続した投与の間隔が、１週間未満である、請求項１３７に記載の方法。
【請求項１３９】
前記薬剤が、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）または抗ヒスタミン剤であり、前記ＮＳＡＩＤが、ＣＯＸ−２及び／または５−ＬＯＸ阻害剤であり、前記抗ヒスタミン剤が、ヒスタミン受容体遮断薬であり、任意に、前記ヒスタミン受容体遮断薬が、Ｈ１アンタゴニストまたはＨ１逆アゴニストであり、前記Ｈ１アンタゴニストが、ジフェンヒドラミン（ベナドリル）、フェキソフェナジン（アレグラ）、またはロラタジン（クラリチン）であり、前記Ｈ１逆アゴニストがセチリジンである、請求項１２４に記載の方法。
【請求項１４０】
前記薬剤が、凝集阻害剤等の血小板阻害剤であり、前記血小板凝集阻害剤が、任意にＡＤＰ受容体アンタゴニストである、請求項１２４に記載の方法。
【請求項１４１】
前記薬剤が、ホスタマチニブ等の血小板調節因子である、請求項１２４に記載の方法。
【請求項１４２】
前記血小板凝集阻害剤が、アスピリン／プラバスタチン、シロスタゾール、プラスグレル、アスピリン／ジピリダモール、チカグレロル、カングレロル、エリノグレル、ジピリダモール、及びチクロピジンクロピドグレル（Ｐｌａｖｉｘ（登録商標））から選択される、請求項１４１に記載の方法。
【請求項１４３】
脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を介した薬物送達を含む治療計画で治療されている対象における用量制限毒性（ＤＬＴ）及び／または血中クリアランス促進（ＡＢＣ）を低減する方法であって、前記方法は、
目的のタンパク質をコードするｍＲＮＡを封入する脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）の初回投与を前記対象に実施することを含み、ＬＮＰの前記初回投与が、ＬＮＰの第二回投与の実施に際して、免疫細胞におけるＣＤ３６依存性シグナル伝達経路を活性化しない、前記方法。
【請求項１４４】
前記免疫細胞が、血小板またはＢ１ａ細胞である、請求項１４３に記載の方法。
【請求項１４５】
さらに、前記対象に対して、ＬＮＰの第二回投与を実施することを含む請求項１４３または１４４に記載の方法であって、前記対象は、ＬＮＰの前記第二回投与に対するＡＢＣ反応を有さない、前記方法。
【請求項１４６】
前記ＬＮＰが、ホスファチジルコリン（ＰＣ）を含まない、請求項１４４に記載の方法。
【請求項１４７】
前記ＬＮＰが、ＣＤ３６に結合しない、もしくはＣＤ３６に対する結合活性が低い、または、ホスファチジルコリンのＣＤ３６に対する結合を競合的に阻害するヘルパー脂質を含む、請求項１４３〜１４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４８】
前記ヘルパー脂質が、少なくとも８Ｃの脂肪酸鎖を少なくとも１つ及び極性部分を少なくとも１つ含む、請求項１４７に記載の方法。
【請求項１４９】
前記ヘルパー脂質が、ホスファチジルコリン類似体である、請求項１４７または１４８に記載の方法。
【請求項１５０】
前記ホスファチジルコリン類似体が、修飾されたＰＣ頭基、修飾されたＰＣコア基、及び／または修飾されたＰＣ脂質尾基を含む、請求項１４９に記載の方法。
【請求項１５１】
前記ＬＮＰが、オレイン酸またはオレイン酸類似体を含む、請求項１４３〜１５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５２】
カチオン性脂質、ＰＥＧ脂質、ステロール、及びヘルパー脂質を含む、血中クリアランス促進（ＡＢＣ）非感受性脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）であって、前記ヘルパー脂質が、ホスファチジルコリン（ＰＣ）を含まない、前記脂質ナノ粒子。
【請求項１５３】
前記ヘルパー脂質が、ホスファチジルコリン（ＰＣ）類似体を含む、請求項１５２に記載のＡＢＣ非感受性ＬＮＰ。
【請求項１５４】
前記ＰＣ類似体が、修飾されたＰＣ頭基、修飾されたＰＣコア基、及び／または修飾されたＰＣ脂質尾基を含む、請求項１５２に記載のＡＢＣ非感受性ＬＮＰ。
【請求項１５５】
前記ＬＮＰが、ホスファチジルコリンを含むＬＮＰと比較して、Ｂ１ａ刺激活性がないか、または減少している、先行請求項のいずれか一項に記載のＡＢＣ非感受性ＬＮＰ。
【請求項１５６】
前記ＬＮＰが、ホスファチジルコリンを含むＬＮＰと比較して、ＣＤ３６と結合しないか、またはＣＤ３６に対する結合が減少している、先行請求項のいずれか一項に記載のＡＢＣ非感受性ＬＮＰ。
【請求項１５７】
前記ＰＣ類似体が、ホスファチジルコリン（ＰＣ）と比較してＣＤ３６と結合しないか、またはＣＤ３６に対する結合が減少している、先行請求項のいずれか一項に記載のＡＢＣ非感受性ＬＮＰ。
【請求項１５８】
前記ＰＣ類似体が、ホスファチジルコリン（ＰＣ）と比較して、ＣＤ３６結合がないか、または減少している、先行請求項のいずれか一項に記載のＡＢＣ非感受性ＬＮＰ。
【請求項１５９】
前記ヘルパー脂質が、オレイン酸またはオレイン酸類似体を含む、先行請求項のいずれか一項に記載のＡＢＣ非感受性ＬＮＰ。
【請求項１６０】
前記ＬＮＰが、０．５％（ｗ／ｗ）未満のＰＥＧ化脂質を含む、先行請求項のいずれか一項に記載のＡＢＣ非感受性ＬＮＰ。
【請求項１６１】
０．２５％未満の前記ＰＥＧ化脂質を含む、請求項１６０に記載のＡＢＣ非感受性ＬＮＰ。
【請求項１６２】
前記ＰＥＧ化脂質が、アルキルＰＥＧ化脂質である、請求項１６０に記載のＡＢＣ非感受性ＬＮＰ。
【請求項１６３】
前記ＰＥＧ化脂質が、メトキシＰＥＧ化脂質である、請求項１６０に記載のＡＢＣ非感受性ＬＮＰ。
【請求項１６４】
前記ＰＥＧ化脂質が、ＤＭＧ−ＰＥＧである、請求項１６０に記載のＡＢＣ非感受性ＬＮＰ。
【請求項１６５】
さらに、ヒドロキシＰＥＧにコンジュゲートされた脂質（ヒドロキシＰＥＧ化脂質）を含む、請求項１５２〜１５９のいずれか一項に記載のＡＢＣ非感受性ＬＮＰ。
【請求項１６６】
前記ＬＮＰが、メトキシＰＥＧ化脂質を含むＬＮＰと比較して、血小板凝集活性が減少している、請求項１５２〜１６２のいずれか一項に記載のＡＢＣ非感受性ＬＮＰ。
【請求項１６７】
前記カチオン性脂質が、ＭＣ３（またはＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）である、請求項１５２に記載のＡＢＣ非感受性ＬＮＰ。
【請求項１６８】
カチオン性脂質、
非カチオン性非ＰＣ脂質、
０．５％（ｗ／ｗ）未満のＰＥＧ化脂質、及び
ステロールを含む脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）であって、
前記ＬＮＰは、１０日以内にインビボで反復投与される際に血中クリアランス促進に対して非感受性である、前記脂質ナノ粒子。
【請求項１６９】
さらに、タンパク質または核酸を含む、請求項１６８に記載のＬＮＰ。
【請求項１７０】
前記核酸がＤＮＡである、請求項１６９に記載のＬＮＰ。
【請求項１７１】
前記核酸がＲＮＡである、請求項１６９に記載のＬＮＰ。
【請求項１７２】
前記核酸がｍＲＮＡである、請求項１６９に記載のＬＮＰ。
【請求項１７３】
タンパク質をコードするｍＲＮＡを封入する脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）であって、
カチオン性脂質、
少なくとも８Ｃの脂肪酸鎖を少なくとも１つ及び極性頭基部分を少なくとも１つ含み、ホスファチジルコリン（ＰＣ）ではない非カチオン性ヘルパー脂質、
ＰＥＧ脂質、ならびに
ステロールを含み、
さらに、前記ＬＮＰによる免疫応答を阻害する薬剤を含む、前記脂質ナノ粒子。
【請求項１７４】
前記ＬＮＰによる免疫応答を阻害する前記薬剤が、ｍｉＲ結合部位である、請求項１７３に記載のＬＮＰ。
【請求項１７５】
前記ｍｉＲ結合部位が、ｍｉＲ１２６、ｍｉＲ１５５、及びｍｉＲ１４２  ３ｐから選択される、請求項１７４に記載のＬＮＰ。
【請求項１７６】
前記ｍｉＲ結合部位が、ｍＲＮＡに組み込まれる、請求項１７３に記載のＬＮＰ。
【請求項１７７】
前記ｍｉＲ結合部位が、前記ｍＲＮＡから分離している、請求項１７３に記載のＬＮＰ。
【請求項１７８】
タンパク質をコードするｍＲＮＡを封入する脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）であって、
カチオン性脂質、
少なくとも８Ｃの脂肪酸鎖を少なくとも１つ及び極性頭基部分を少なくとも１つ含み、ホスファチジルコリン（ＰＣ）を含まない非カチオン性ヘルパー脂質、
ＰＥＧ脂質、ならびに
ステロールを含む前記ＬＮＰであり、
前記非カチオン性ヘルパー脂質が、双性イオン性非カチオン性ヘルパー脂質、ＤＳＰＣ類似体、オレイン酸、オレイン酸類似体、または１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）代替物であり、及び／または前記ＰＥＧ脂質が、アルキルＰＥＧ化脂質、ヒドロキシＰＥＧ等の非アルキルＰＥＧ、ヒドロキシＰＥＧ化脂質等の非アルキルＰＥＧ化脂質、Ｃｍｐｄ４２０、Ｃｍｐｄ３９６、Ｃｍｐｄ３９４、Ｃｍｐｄ３９７、Ｃｍｐｄ３９５、Ｃｍｐｄ４１７、Ｃｍｐｄ４１８、もしくはＣｍｐｄ４１９、Ｃｍｐｄ４２１、Ｃｍｐｄ４２２、Ｃｍｐｄ４０３であるか、または、前記ＰＥＧ脂質が、他の成分に対して０．５％未満のモル比のＰＥＧ脂質を含む、前記脂質ナノ粒子。
【請求項１７９】
前記ＤＳＰＣ類似体が、修飾された４級アミン頭基である修飾された頭基を有する、請求項１７８に記載のＬＮＰ。
【請求項１８０】
前記ＤＳＰＣ類似体が、修飾されたコア基を有する、請求項１７８に記載のＬＮＰ。
【請求項１８１】
前記ＤＳＰＣ類似体が、修飾された脂質尾基を有する、請求項１７８に記載のＬＮＰ。
【請求項１８２】
前記ＰＥＧ脂質が、他の成分に対して少なくとも０．０００１％、少なくとも０．０００５％、少なくとも０．００１％、少なくとも０．００５％、少なくとも０．０１％、少なくとも０．０５％、少なくとも０．１％、少なくとも０．１５％、少なくとも０．２％、少なくとも０．２５％、少なくとも０．３％、少なくとも０．３５％、少なくとも０．４％、少なくとも０．４５％、及び０．５％未満のモル比のＰＥＧ脂質を含む、請求項１７８に記載のＬＮＰ。
【請求項１８３】
前記ＬＮＰが、モル比約４５〜６５％のカチオン性脂質、約０．１５〜１５％のＰＥＧ脂質、約１５〜４５％のコレステロール、及び約５〜２５％の非カチオン性ヘルパー脂質を有する、請求項１７３または１７８に記載のＬＮＰ。
【請求項１８４】
前記ｍＲＮＡが、プソイドウリジン、Ｎ１−メチルプソイドウリジン、Ｎ１−エチルプソイドウリジン、２−チオウリジン、４’−チオウリジン、５−メチルシトシン、２−チオ−１−メチル−１−デアザプソイドウリジン、２−チオ−１−メチルプソイドウリジン、２−チオ−５−アザウリジン、２−チオジヒドロプソイドウリジン、２−チオジヒドロウリジン、２−チオプソイドウリジン、４−メトキシ−２−チオプソイドウリジン、４−メトキシプソイドウリジン、４−チオ−１−メチルプソイドウリジン、４−チオプソイドウリジン、５−アザウリジン、ジヒドロプソイドウリジン、５−メトキシウリジン、及び２’−Ｏ−メチルウリジンからなる群から選択される化学的修飾を含む、請求項１７３〜１８３のいずれか一項に記載のＬＮＰ。
【請求項１８５】
前記カチオン性脂質が、ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｄ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ、またはＤＯＤＭＡから選択される、請求項１８３に記載のＬＮＰ。
【請求項１８６】
対象に薬剤を送達する方法であって、対象に対して、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）に製剤化された薬剤を投与することを含み、前記対象が、血小板阻害剤を投与される、前記方法。
【請求項１８７】
前記血小板阻害剤が、ＬＮＰに製剤化された前記薬剤と同時に前記対象に投与される、請求項１８６に記載の方法。
【請求項１８８】
前記血小板阻害剤が、ＬＮＰに製剤化された前記薬剤の１分〜２４時間前に前記対象に投与される、請求項１８６に記載の方法。
【請求項１８９】
前記血小板阻害剤が、ＬＮＰに製剤化された前記薬剤の２４〜４８時間前に前記対象に投与される、請求項１８６に記載の方法。
【請求項１９０】
さらに、前記対象に対してヒスタミン受容体遮断薬を投与することを含む、請求項１８６〜１８９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９１】
さらに、前記対象に対して、ＣＯＸ酵素の非特異的阻害剤を投与することを含む、請求項１８６〜１９０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９２】
前記薬剤が核酸である、請求項１８６〜１９１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９３】
前記核酸がＲＮＡである、請求項１８６に記載の方法。
【請求項１９４】
前記ＲＮＡがｓｉＲＮＡまたはｍＲＮＡである、請求項１８０に記載の方法。
【請求項１９５】
前記ＬＮＰが、カチオン性脂質、ＰＥＧ脂質、コレステロール、及びヘルパー脂質を含む、請求項１７３〜１８１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９６】
前記対象が、コルチコステロイドを投与されない、請求項１７３〜１８２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９７】
前記血小板阻害剤が、Ｐ２Ｙ１２サブタイプ受容体の阻害剤である、請求項１８６に記載の方法。
【請求項１９８】
前記血小板阻害剤が、クロピドグレルである、請求項１８６に記載の方法。
【請求項１９９】
前記血小板阻害剤が、チカグレロルである、請求項１８６に記載の方法。
【請求項２００】
前記血小板阻害剤が、プラスグレル、チクロピジン、カングレロル、またはエリノグレルである、請求項１８６に記載の方法。
【請求項２０１】
前記ヒスタミン受容体遮断薬が、抗ヒスタミン剤である、請求項１７７に記載の方法。
【請求項２０２】
前記抗ヒスタミン剤が、ベナドリルである、請求項１８８に記載の方法。
【請求項２０３】
ＣＯＸ酵素の前記非特異的阻害剤が、アスピリンである、請求項１８６に記載の方法。
【請求項２０４】
ＣＯＸ酵素の前記非特異的阻害剤が、ＣＯＸ−２阻害剤である、請求項１８６に記載の方法。
【請求項２０５】
ＣＯＸ酵素の前記非特異的阻害剤が、ＣＯＸ−２及び５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯＸ）阻害剤である、請求項１８６に記載の方法。
【請求項２０６】
タンパク質をコードするｍＲＮＡを封入する脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）であって、
カチオン性脂質、
非ホスファチジルコリン（ＰＣ）双性イオン性脂質、ＤＳＰＣ類似体、オレイン酸、オレイン酸類似体、または１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）代替物を含む非カチオン性ヘルパー脂質、
アルキルＰＥＧ化脂質、ヒドロキシＰＥＧ等の非アルキルＰＥＧ、ヒドロキシＰＥＧ化脂質等の非アルキルＰＥＧ化脂質、Ｃｍｐｄ４２０、Ｃｍｐｄ３９６、Ｃｍｐｄ３９４、Ｃｍｐｄ３９７、Ｃｍｐｄ３９５、Ｃｍｐｄ４１７、Ｃｍｐｄ４１８、もしくはＣｍｐｄ４１９、Ｃｍｐｄ４２１、Ｃｍｐｄ４０３、Ｃｍｐｄ４２２であるか、または、前記ＰＥＧ脂質が、他の成分に対して０．５％未満のモル比のＰＥＧ脂質を含むＰＥＧ脂質、ならびに
ステロールを含む前記ＬＮＰであり、
前記ｍＲＮＡが、プソイドウリジン、Ｎ１−メチルプソイドウリジン、２−チオウリジン、４’−チオウリジン、５−メチルシトシン、２−チオ−１−メチル−１−デアザ−プソイドウリジン、２−チオ−１−メチルプソイドウリジン、２−チオ−５−アザ−ウリジン、２−チオ−ジヒドロプソイドウリジン、２−チオ−ジヒドロウリジン、２−チオ−プソイドウリジン、４−メトキシ−２−チオ−プソイドウリジン、４−メトキシ−プソイドウリジン、４−チオ−１−メチル−プソイドウリジン、４−チオ−プソイドウリジン、５−アザ−ウリジン、ジヒドロプソイドウリジン、５−メトキシウリジン、及び２’−Ｏ−メチルウリジンからなる群から選択される化学的修飾を含み、さらにｍｉＲ結合部位を含む、前記脂質ナノ粒子。
【請求項２０７】
対象において、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を介した薬物送達を含む治療計画の治療指数を高める方法であって、前記治療計画で治療されている前記対象においてＤＬＴが低減されるように、Ｂ１細胞活性化または血小板活性化と関連する免疫応答を誘導しないＬＮＰの前記対象への投与、及び任意に、前記ＬＮＰが誘導する免疫応答を阻害する薬剤の投与による、前記方法。
【請求項２０８】
脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を介した薬物送達で治療されている対象の治療指数を高める方法であって、ＬＮＰで治療されている前記対象において用量制限毒性（ＤＬＴ）が低減されるように、ＬＮＰ及び血小板活性化を阻害する薬剤を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項２０９】
脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を介した薬物送達を含む治療計画で治療されている対象において用量制限毒性（ＤＬＴ）を低減する方法であって、前記方法は、前記治療計画で治療されている前記対象においてＤＬＴが低減されるように、治療用核酸を含むＬＮＰを前記対象に投与すること、及びＢ細胞を除去する、または標的とする薬剤を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項２１０】
前記薬剤が、Ｂ１ａ細胞を除去または標的とする、請求項２０９に記載の方法。
【請求項２１１】
前記薬剤が、リツキシマブである、請求項２０９または２１０に記載の方法。
【請求項２１２】
前記薬剤が、前記ＬＮＰの投与の前、後、または前記ＬＮＰの投与と同時に前記対象に投与される、請求項２０９〜２１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１３】
ＬＮＰが、前記対象に対して複数回投与で投与される、請求項２１２に記載の方法。
【請求項２１４】
前記治療用核酸が、ｍＲＮＡである、請求項２１２に記載の方法。
【請求項２１５】
式（Ｖ）：
【化３３４】
2019504002.tif 000375
（Ｖ）
の化合物、またはその塩を含むＰＥＧ脂質であって、式中：
Ｒ３は−ＯＲＯであり、
ＲＯは、水素、任意に置換されるアルキル、または酸素保護基であり、
ｒは、１と１００を含めた１〜１００の整数であり、
Ｒ５は、任意に置換されるＣ１０−４０アルキル、任意に置換されるＣ１０−４０アルケニル、または任意に置換されるＣ１０−４０アルキニルであり、任意に、Ｒ５の１つ以上のメチレン基は、任意に置換されるカルボシクリレン、任意に置換されるヘテロシクリレン、任意に置換されるアリーレン、任意に置換されるヘテロアリーレン、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、または−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ−で交換され、
ＲＮの各場合は、独立して、水素、任意に置換されるアルキル、または窒素保護基である、前記ＰＥＧ脂質。
【請求項２１６】
式（Ｖ）の化合物が、式（Ｖ−ＯＨ）：
【化３３５】
2019504002.tif 000376
（Ｖ−ＯＨ）
のもの、またはその塩である、請求項２１５に記載のＰＥＧ脂質。
【請求項２１７】
式（Ｖ）の前記化合物が、以下の式：
【化３３６】
2019504002.tif 000377
のうちの１つのもの、またはその塩である、請求項２１５に記載のＰＥＧ脂質。
【請求項２１８】
式（Ｖ）の前記化合物が：
【化３３７】
2019504002.tif 000378
またはその塩である、請求項２１５に記載のＰＥＧ脂質。
【請求項２１９】
請求項２１５〜２１８のいずれか一項に記載のＰＥＧ脂質を含む脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）。
【請求項２２０】
さらに、式（Ｖ）：
【化３３８】
2019504002.tif 000379
（Ｖ）
の脂質、またはその塩もしくは異性体を含む、請求項２２０に記載のＬＮＰであって、式中：
Ｒ１は、Ｃ５−３０アルキル、Ｃ５−２０アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群から選択され、
Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１−１４アルキル、Ｃ２−１４アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ＊ＯＲ”からなる群から選択されるか、または、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合する原子と一緒になってヘテロ環または炭素環を形成し、
Ｒ４は、Ｃ３−６炭素環、−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、−ＣＱ（Ｒ）２、及び未置換のＣ１−６アルキルからなる群から選択され、ここで、Ｑは、炭素環、ヘテロ環、−ＯＲ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＸ２Ｈ、−ＣＸＨ２、−ＣＮ、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｒ８、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（ＯＲ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ９）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＲ、及び−Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、各ｎは、独立して１、２、３、４、及び５から選択され、
各Ｒ５は、独立して、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ６は、独立して、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
Ｍ及びＭ’は、独立して、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｓ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ−Ｓ−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
Ｒ７は、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
Ｒ８は、Ｃ３−６炭素環及びヘテロ環からなる群から選択され、
Ｒ９は、Ｈ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１−６アルキル、−ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ３−６炭素環、及びヘテロ環からなる群から選択され、
各Ｒは、独立して、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ’は、独立して、Ｃ１−１８アルキル、Ｃ２−１８アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ”は、独立して、Ｃ３−１４アルキル及びＣ３−１４アルケニルからなる群から選択され、
各Ｒ＊は、独立して、Ｃ１−１２アルキル及びＣ２−１２アルケニルからなる群から選択され、
各Ｙは、独立して、Ｃ３−６炭素環であり、
各Ｘは、独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群から選択され、
ｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択される、前記ＬＮＰ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、米国特許法第１１９条（ｅ）の定めにより、２０１５年１２月１０日に出願された米国仮出願第６２／２６５，９７３号、２０１５年１２月１２日に出願された米国仮出願第６２／２６６，５８１号、２０１６年３月２１日に出願された米国仮出願第６２／３１１，３８８号、２０１６年６月１４日に出願された米国仮出願第６２／３５０，１７２号、２０１６年１０月２６日に出願された米国仮出願第６２／４１３，０２７号、２０１６年３月２１日に出願された米国仮出願第６２／３１１，３８６号、２０１６年６月１４日に出願された米国仮出願第６２／３５０，１６５号、２０１６年３月２６日に出願された米国仮出願第６２／３１１，３８０号、及び２０１６年１０月２６日に出願された米国仮出願第６２／４１３，０５０号の利益を主張する。当該仮出願の各々は、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
小分子薬物、タンパク質、ペプチド、及び核酸等の活性薬剤の効果的なインビボ送達は、継続的な医療の課題を象徴する。いくつかの活性薬剤は、免疫系によって認識され、有効性が低下する。この問題に対処するため、ある特定の活性薬剤製剤は、当該薬剤を包み込む、または覆い隠すと考えられるポリエチレングリコール等のポリマーを組み込み、それにより、その抗原性及び免疫原性を低減している。しかしながら、活性を失うことなく繰り返し及び頻繁に、例えば、何日にもわたって投与することができないこと等、これらの「ステルス」製剤でさえ限界がある。
【０００３】
さらに、いくつかの薬剤または製剤は、インビボで投与されると、１つ以上の細胞または因子と相互作用する場合があり、潜在的にそれらの機能を阻害し、最終的には副作用をもたらす。かかる副作用は、該薬剤の投与頻度及び／または投薬量を制限する場合や、インビボでの使用を全く不可能にする場合もある。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本開示は、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）の成分が自然免疫応答を誘導し得るという発見に少なくとも一部基づいている。いくつかの実施形態では、ＬＮＰの成分、例えば、ホスファチジルコリンは、天然のＩｇＭ及び／またはＩｇＧ分子の産生を誘導する場合があり、これは、Ｂ１細胞、例えば、Ｂ１ａ及び／またはＢ１ｂ細胞の活性化によって媒介され得る。これらの生物学的機序は、血中クリアランス促進（ＡＢＣ）及び用量制限毒性、例えば、急性期反応（ＡＰＲ）及び補体活性化関連仮性アレルギー（ＣＡＲＰＡ）を含めたＬＮＰが引き起こす薬物反応に寄与する可能性がある。Ｂ１ａ細胞も血小板もＣＤ３６を発現し、これがホスファチジルコリンに結合し得る。
【０００５】
ＬＮＰによるＢ１細胞及び血小板の活性化は、ホスファチジルコリン等のＬＮＰの成分によるＣＤ３６受容体の活性化によって媒介され得る。さらに、ＬＮＰ上のＰＥＧ−脂質は、天然のＩｇＭ及び／または抗ＰＥＧ  ＩｇＧ及びＩｇＭの産生に寄与し得る。従って、天然のＩｇＭ産生、天然のＩｇＧ産生、抗ＰＥＧ  ＩｇＭ、抗ＰＥＧ  ＩｇＧ、Ｂ１ａ細胞活性化、Ｂ１ｂ細胞活性化、ｐＤＣ細胞活性化、及び／または血小板凝集及び／または活性化を特徴とする自然免疫応答を誘発しないＬＮＰを用いることにより、及び／または、第二の薬剤、特に、この自然免疫応答の産生を阻害するだけでなく、ＬＮＰ関連の薬物反応につながる下流シグナル伝達経路を抑制する薬物を用いることにより、本明細書に記載されるものと同じ程度のＬＮＰ関連の薬物反応を促進することなく、対象に対してＬＮＰを送達するための方法及び組成物を本明細書に提供する。
【０００６】
本開示は、一部分において、免疫系によって認識されにくく、それ故クリアランスの影響を受けにくい新規な脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）及びＬＮＰ製剤を提供する。本明細書に提供するＬＮＰは、驚くほど改善されたクリアランス、場合によっては毒性プロファイルを有する。いかなる特定の機序にも理論にも拘束されることを意図するものではないが、該改善されたクリアランスプロファイルは、ある特定の免疫細胞による認識及び／またはある特定の免疫細胞に対する結合が減少し、これら及び他の免疫細胞ならびに因子に対して総体的な作用が少ないと考えられる。より具体的には、本明細書に提供するＬＮＰのいくつかは、Ｂ１ａ及び／またはＢ１ｂ細胞に対する結合、Ｂ１ａ及び／またはＢ１ｂ活性化能、ｐＤＣ活性化能、血小板凝集活性、及び／または血小板活性化能が全くないかまたは低い。この活性は、ＬＮＰの成分、または該ＬＮＰ成分が誘導する免疫応答を阻害する薬剤に少なくとも一部起因し得る。かかる薬剤は、投与されるＬＮＰの中に組み込まれてもよいし、別々に処方されてもよい。
【０００７】
同様に、ＬＮＰ等の投与されるナノ粒子に対する免疫応答を調節する、製剤を含めた化合物及び組成物を本開示に提供する。同様に、かかる化合物及び組成物の、特にインビボでの免疫調節に関する使用方法を本明細書に提供する。同様に、ある特定のクラスの第二の薬剤とのＬＮＰの使用方法を提供し、例えば、ある特定の第二の薬剤を同時に投薬されている、例えば、前投薬されている対象におけるＬＮＰの使用を含む。同様に、ＬＮＰ投与に応答する患者を特定し、任意に、かかる患者をその応答の度合いに応じて分類する予備投与及び／または予備治療スクリーニング法を提供する。かかる対象の特定は、場合によっては、治療計画の修正につながり得る。
【０００８】
本明細書に提供するＬＮＰのいくつかは、カチオン性脂質、ヘルパー脂質、構造脂質、及び、別の脂質にコンジュゲートされて供給されてもされなくてもよい安定剤を含む。
【０００９】
該カチオン性脂質は、ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｄ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ、及びＤＯＤＭＡでよいが、これらに限定されない。該カチオン性脂質は、イオン性脂質でよい。
【００１０】
該構造脂質は、例えば、コレステロール等のステロールでよいが、これに限定されない。
【００１１】
該ヘルパー脂質は、両親媒性の表面活性脂質、または界面活性剤である。いくつかの実施形態では、それは非カチオン性脂質である。該ヘルパー脂質は、少なくとも１つの非極性鎖及び少なくとも１つの極性頭基部分を含んでよい。ヘルパー脂質はまた、補足脂質とも呼ばれる場合があり、言い換えれば、該脂質は、アミノ脂質を「補足」し、二重層の膜融合性を増加させてエンドソーム脱出を支援するように働く。いくつかの実施形態では、該非極性鎖は脂質である。他の実施形態では、それは少なくとも８Ｃの脂肪酸である。例示的な実施形態では、該ヘルパー脂質は、非自然発生（例えば、ヒト対象において自然発生でない）であるか、または外因性である。
【００１２】
該ＬＮＰのいくつかは、いかなるホスファチジルコリン（ＰＣ）脂質も有さない（すなわち、ホスファチジルコリン（ＰＣ）を含まない）。本明細書に提供するＬＮＰのいくつかは、ＤＳＰＣ等であるがこれに限定されない特定のホスファチジルコリン脂質を有さない。該ＬＮＰのいくつかは、ホスファチジルコリン類似体を含み、かかる類似体は、修飾された頭基（例えば、修飾４級アミン頭基）、修飾されたコア基、及び／または修飾された脂質尾基を含む。かかる類似体は、非ＰＣ双性イオン基である双性イオン基を含んでよい。該ヘルパー脂質は、本明細書に提供する式Ｉ、Ｉ−ａ、Ｉ−ｂ、Ｉ−ｂ−１、Ｉ−ｂ−２、Ｉ−ｂ−３、Ｉ−ｂ−４、Ｉ−ｃ、Ｉ−ｃ−１、Ｉ−ｃ−２、Ｉ−ｃ−３、もしくはＩＩのいずれか１つ、またはそれらの任意の組合せの脂質でよい。
【００１３】
ある特定のＬＮＰは、例えば、オレイン酸またはオレイン酸類似体を含めた他のヘルパー非カチオン性脂質を含む。該ヘルパー脂質は、本明細書に提供する式ＩＶの脂質でよい。
【００１４】
該安定剤はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）でよい。ＰＥＧは、脂質にコンジュゲートされてもよく、それ故、例えば、ＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧまたはＰＥＧ−ＤＭＧとして提供されてもよい。該安定剤は、コンジュゲートされた形で提供されようと未コンジュゲートの形で提供されようと、ＬＮＰの１．５ｍｏｌ％を構成してもよいし、ＬＮＰの０．５ｍｏｌ％未満を構成してもよい。例えば、それは、０．４ｍｏｌ％未満、０．３ｍｏｌ％未満、０．２ｍｏｌ％未満、または０．１ｍｏｌ％未満を構成する。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【００１５】
該ＬＮＰは、式ＩＩＩ−ＯＨ、ＩＩＩ−ａ−１、ＩＩＩ−ａ−２、ＩＩＩ−ｂ−１、ＩＩＩＩ−ｂ−２、ＩＩＩ−ｂ−１−ＯＨ、ＩＩＩ−ｂ−２−ＯＨ、Ｖ、Ｖ−ＯＨを含めた式ＩＩＩのＰＥＧ化脂質を含んでよい。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【００１６】
本明細書に提供するＬＮＰのいくつかは、アルキルＰＥＧ化脂質を含まないか、これが低レベルであることを含め、ＰＥＧ化脂質を含まないか、または低レベルのＰＥＧ化脂質を含み、本明細書ではＰＥＧまたはＰＥＧ化脂質を含まないとして見なされる。従って、いくつかのＬＮＰは、０．５ｍｏｌ％未満のＰＥＧ化脂質を含む。いくつかの例では、ＰＥＧは、メトキシＰＥＧ等のアルキルＰＥＧであり得る。さらに他のＬＮＰは、ヒドロキシＰＥＧ等の非アルキルＰＥＧ及び／またはヒドロキシＰＥＧ化脂質等の非アルキルＰＥＧを含む。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【００１７】
該ＰＥＧ化脂質は、Ｃｍｐｄ４２０、Ｃｍｐｄ３９６、Ｃｍｐｄ３９４、Ｃｍｐｄ３９７、Ｃｍｐｄ３９５、Ｃｍｐｄ４１７、Ｃｍｐｄ４１８、またはＣｍｐｄ４１９でよい。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【００１８】
いくつかの例では、該ＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％、１０ｍｏｌ％のヘルパー脂質、１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ化脂質、及び３８．５ｍｏｌ％の構造脂質を含み得る。
【００１９】
いくつかの例では、該ＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％、１０ｍｏｌ％のヘルパー脂質、０．５ｍｏｌ％未満のＰＥＧ化脂質、及び３９．５ｍｏｌ％の構造脂質を含み得る。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【００２０】
いくつかの実施形態では、該安定剤は、脂質にコンジュゲートされていてもいなくてもよいＸＴＥＮペプチド等の非ＰＥＧ部分である。該ＸＴＥＮペプチドは、その親水性に起因して、ＬＮＰの周りに水和シェルを形成することが可能である。それはさらに、安定剤を欠く（または安定性がない）ＬＮＰと比較して、当該ＬＮＰの半減期を延長する働きをする。ＰＥＧと異なり、しかしながら、それは生分解性であり、非免疫原性であることが報告されている。該ＸＴＥＮペプチドは、アミノ酸配列
ＭＡＥＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＴＰＧＳＧＴＡＳＳＳＰＧＳＳＴＰＳＧＡＴＧＳＰＧＡＳＰＧＴＳＳＴＧＳ（配列番号１）またはＭＡＥＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＡＳＰＧＴＳＳＴＧＳＰＧＳＳＴＰＳＧＡＴＧＳＰＧＳＳＴＰＳＧＡＴＧＳ（配列番号２）を有し得る。他のＸＴＥＮアミノ酸配列は当技術分野で知られ、例えば、米国特許第９，０６２，２９９号に報告されたものが挙げられる。ＸＴＥＮがコンジュゲートされた脂質の例としては、Ｃｍｐｄ４３１、及びＣｍｐｄ４３２、ならびにＣｍｐｄ４３３が挙げられるがこれらに限定されない。クリックケミストリーを用いてＸＴＥＮペプチドを脂質にコンジュゲートさせてもよい。
【００２１】
いくつかの実施形態では、該安定剤は、ＰＡＳペプチド等の非ＰＥＧ部分である。ＰＡＳペプチドは、これらだけではないが、主にプロリン、アラニン、及びセリンを含むペプチドである。ＰＥＧ及びＸＴＥＮペプチドと同様、ＰＡＳペプチドは、ＬＮＰの周りに水和シェルを形成することが可能である。それもまた、安定剤を欠く（または安定性がない）ＬＮＰと比較して、ＬＮＰの半減期を延長する働きをする。ＸＴＥＮペプチドと異なり、しかしながら、ＰＡＳペプチドは、電荷が中性である傾向があり、それ故、少なくともこの点において、ＰＥＧとより類似している。ＰＡＳペプチドは、アミノ酸配列
ＳＡＰＳＳＰＳＰＳＡＰＳＳＰＳＰＡＳＰＳＳＡＰＳＳＰＳＰＳＡＰＳＳＰＳＰＡＳＰＳＳＡＰＳＳＰＳＰＳＡＰＳＳＰＳＰＡＳＰＳ（配列番号３）または
ＡＡＳＰＡＡＰＳＡＰＰＡＡＡＳＰＡＡＰＳＡＰＰＡＡＡＳＰＡＡＰＳＡＰＰＡＡＡＳＰＡＡＰＳＡＰＰＡ（配列番号４）を有し得る。他のＰＡＳアミノ酸配列は当技術分野で知られ、例えば、ＷＯ２００８１５５１３４に報告されたものが含まれる。
【００２２】
本開示は、上記の特性の組合せを備えたＬＮＰを企図する。かかるＬＮＰは、さらに、Ｂ１ａ細胞に対する結合が少なく、及び／またはＢ１ａ細胞の活性化能が低いと特徴づけられ得る。その上、または代替的に、それらはさらに、血小板凝集活性が低いと特徴づけられる場合があり、このことは、血小板活性化能が低いとして示され得る。
【００２３】
本開示はさらに、かかるＬＮＰが、血中クリアランス促進（ＡＢＣ）を引き起こすことなく、タンパク質や核酸等の薬剤を送達するためにインビボで使用され得ることを企図する。従って、かかるＬＮＰは、対象に対して繰り返し、短期間に、脂質処方薬剤を含めた様々な投与剤について以前に報告されているような免疫系によるクリアランスの強化のリスクなしに投与することができる。従って、該ＬＮＰ及びさらに重要なことにはそれらのカーゴは、以前に可能であったよりも頻繁に、高用量で、これらの短期間に効果的に投与することができる。
【００２４】
さらにいっそう驚くべきことに、これらＬＮＰのいくつかはまた、投与時に低毒性を示す。この場合もやはり、いかなる特定の機序にも理論にも拘束されることを意図するものではないが、これは、これらのＬＮＰの低血小板凝集活性に起因すると考えられる。この血小板を凝集できないことまたは血小板の低凝集能は、インビボでＬＮＰ投与後に観察されている凝血障害関連の毒性の可能性及び重症度を低減する。
【００２５】
ある特定のＬＮＰがＡＢＣに対する感受性の減少及びインビボ毒性の減少という二重の利点を有することは全く予想外であった。結果として、これらのＬＮＰは、薬剤を封入するＬＮＰの毒性プロファイルの低減に一部起因して、対象に投与される封入薬剤のより高用量を可能にする。該ＬＮＰはまた、ＡＢＣに対する感受性の減少に一部起因して、ＬＮＰに関する、ひいてはそのカーゴに関する半減期の延長をもたらす。これは、投与間でカーゴのより高いかつ安定なレベルにつながる。さらに、カーゴが繰り返しの頻繁な投与を要する場合、本明細書に提供するＬＮＰは、かかる投与を容易にする。これは、現在可能であり得るよりも頻繁な投与を可能にすることにより、ある特定の薬剤の有効性を高める働きをする。これはまた、これらの制限のためにこれまでインビボで使用されなかった可能性のある有用な他の薬剤を提供する働きをする。
【００２６】
本開示はさらに、他の新規な製剤、及びＬＮＰ製剤を含めたＬＮＰの使用方法を提供する。具体的には、血小板凝集阻害剤が挙げられるがこれに限定されない抗血小板薬とのＬＮＰ及びＬＮＰ製剤の使用方法を本明細書に提供する。本開示は、ＬＮＰの投与に先立って、及び／または投与と実質的に同時に、及び／または投与後でも、かかる薬剤が対象に投与され得ることを企図する。従って、かかる薬剤は、ＬＮＰとともに製剤化されてもよいし、別々に製剤化され、同じ経路を介して、及び／または同時にもしくは実質的に同時に一緒に投与されてもよい。重要なことには、これらの抗血小板薬での対象の前投薬または同時投薬は、凝血障害関連の毒性を含めた毒性の低下をもたらし、ＡＢＣのより少ない及び比較的軽度の発生をもたらす。ある特定の実施形態によれば、対象は、血小板凝集阻害剤、抗ヒスタミン剤、及びＮＳＡＩＤもしくはＣＯＸ酵素阻害剤を含めた第二の薬剤の組合せで前投薬または同時投薬され得る。ある特定の使用され得る第二の薬剤は、二重機能性を有する（すなわち、それらは、全部または一部において、血小板凝集を阻害することができ、一般的な抗炎症作用もまた有する）場合がある。１つのかかる例はアスピリンである。
【００２７】
タンパク質をコードするｍＲＮＡを封入する脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を本発明のいくつかの態様において提供する。該ＬＮＰは、カチオン性脂質、少なくとも８Ｃの脂肪酸鎖を少なくとも１つ及び極性頭基部分を少なくとも１つ含む非カチオン性ヘルパー脂質であって、ホスファチジルコリン（ＰＣ）ではないヘルパー脂質、ＰＥＧ脂質、ならびにステロールを有する。いくつかの態様では、該ＬＮＰは、該ＬＮＰによる免疫応答を阻害する薬剤をさらに含む。他の態様では、該非カチオン性ヘルパー脂質は、双性イオン性非カチオン性ヘルパー脂質、ＤＳＰＣ類似体、オレイン酸、オレイン酸類似体、または１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）代替物である。
【００２８】
ある特定の実施形態では、本発明に有用な非カチオン性脂質は、ＤＳＰＣ類似体であり、この場合、ホスホコリン部分は異なる双性イオン基に置換される。ある特定の実施形態では、該異なる双性イオン基は、ホスホコリン基ではない。ある特定の実施形態では、本発明で有用な非カチオン性脂質は、式（ＩＩ）の化合物である。本明細書に提供するのは、式（ＩＩ）：
【化１】
2019504002.tif 000003
（ＩＩ）
の化合物またはその塩であり、式中：
Ｚは双性イオン部分であり、
該双性イオン部分は、式：
【化２】
2019504002.tif 000004
のものではなく、
ｍは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
Ａは、式：
【化３】
2019504002.tif 000005
のものであり、
Ｌ２の各場合は、独立して、結合または任意に置換されるＣ１−６アルキレンであり、該任意に置換されるＣ１−６アルキレンの１つのメチレン単位は、−Ｏ−、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ−、または−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−で任意に交換され、
Ｒ２の各場合は、独立して、任意に置換されるＣ１−３０アルキル、任意に置換されるＣ１−３０アルケニル、または任意に置換されるＣ１−３０アルキニルであり、任意に、Ｒ２の１つ以上のメチレン単位は、独立して、任意に置換されるカルボシクリレン、任意に置換されるヘテロシクリレン、任意に置換されるアリーレン、任意に置換されるヘテロアリーレン、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、または−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ−で交換され、
ＲＮの各場合は、独立して、水素、任意に置換されるアルキル、または窒素保護基であり、
環Ｂは、任意に置換されるカルボシクリル、任意に置換されるヘテロシクリル、任意に置換されるアリール、または任意に置換されるヘテロアリールであり、
ｐは、１または２である。
【００２９】
ある特定の実施形態では、Ｚはアミノ酸またはその誘導体である。ある特定の実施形態では、Ｚは以下の式：
【化４】
2019504002.tif 000006
のうちの１つであり、
式中、ＲＯは、水素、任意に置換されるアルキル、または酸素保護基である。ある特定の実施形態では、式（ＩＩ）の化合物は、以下の式：
【化５】
2019504002.tif 000007
のうちの１つ、またはその塩である。
【００３０】
ある特定の実施形態では、式（ＩＩ）の化合物は、以下の式：
【化６】
2019504002.tif 000008
【化７】
2019504002.tif 000009
のうちの１つ、またはその塩である。
【００３１】
例えば、ある特定の実施形態では、式（ＩＩ）の化合物は、以下：
【化８】
2019504002.tif 000010
【化９】
2019504002.tif 000011
【化１０】
2019504002.tif 000012
【化１１】
2019504002.tif 000013
、
またはそれらの塩のうちの１つである。
【００３２】
本発明で有用な非カチオン性脂質はまた、オレイン酸の類似体を含む。本明細書に記載の通り、オレイン酸類似体は、修飾されたオレイン酸尾部、修飾されたカルボン酸部分、またはその両方を含むことができる。ある特定の実施形態では、オレイン酸の類似体は、式（ＩＶ）の化合物である。本明細書に提供するのは、式（ＩＶ）：
【化１２】
2019504002.tif 000014
（ＩＶ）
の化合物またはその塩であり、式中：
Ｒ４は、任意に置換されるＣ１０−４０アルキル、任意に置換されるＣ１０−４０アルケニル、任意に置換されるＣ１０−４０アルキニルであり、Ｒ４の少なくとも１つのメチレン基は、独立して、任意に置換されるカルボシクリレン、任意に置換されるヘテロシクリレン、任意に置換されるアリーレン、任意に置換されるヘテロアリーレン、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、または−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ−で交換され、
ＲＮの各場合は、独立して、水素、任意に置換されるアルキル、または窒素保護基である。
【００３３】
ある特定の実施形態では、式（ＩＶ）の化合物は、以下：
【化１３】
2019504002.tif 000015
またはそれらの塩のうちの１つである。
【００３４】
ある特定の実施形態では、オレイン酸類似体は、オレイン酸のカルボン酸部分が異なる基で交換された化合物である。ある特定の実施形態では、本発明で有用なオレイン酸類似体は、以下：
【化１４】
2019504002.tif 000016
またはそれらの塩のうちの１つである。
【００３５】
非カチオン性脂質の例としては、以下：
【化１５】
2019504002.tif 000017
【化１６】
2019504002.tif 000018
【化１７】
2019504002.tif 000019
が挙げられるがこれらに限定されない。
【００３６】
タンパク質をコードするｍＲＮＡを封入する脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を本発明のいくつかの態様において提供する。該ＬＮＰは、カチオン性脂質、少なくとも８Ｃの脂肪酸鎖を少なくとも１つ及び極性頭基部分を少なくとも１つ含む非カチオン性ヘルパー脂質、ＰＥＧ脂質、ならびにステロールを有する。いくつかの態様では、該ＬＮＰは、該ＬＮＰによる免疫応答を阻害する薬剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、該ＰＥＧ脂質は、アルキルＰＥＧ化脂質、ヒドロキシＰＥＧ等の非アルキルＰＥＧ、ヒドロキシＰＥＧ化脂質等の非アルキルＰＥＧ化脂質、Ｃｍｐｄ４２０、Ｃｍｐｄ３９６、Ｃｍｐｄ３９４、Ｃｍｐｄ３９７、Ｃｍｐｄ３９５、Ｃｍｐｄ４１７、Ｃｍｐｄ４１８、もしくはＣｍｐｄ４１９、Ｃｍｐｄ４２１、Ｃｍｐｄ４２２であるか、または、該ＰＥＧ脂質は、他の成分に対して０．５％未満のモル比のＰＥＧ脂質を含む。ある特定の実施形態では、本発明で有用なＰＥＧ脂質は、式（ＩＩＩ）の化合物である。本明細書に提供するのは、式（ＩＩＩ）：
【化１８】
2019504002.tif 000020
（ＩＩＩ）
の化合物またはその塩であり、式中：
Ｒ３は−ＯＲＯであり、
ＲＯは、水素、任意に置換されるアルキル、または酸素保護基であり、
ｒは、１と１００を含めた１〜１００の整数であり、
Ｌ１は、任意に置換されるＣ１−１０アルキレンであり、該任意に置換されるＣ１−１０アルキレンの少なくとも１つのメチレンは、独立して、任意に置換されるカルボシクリレン、任意に置換されるヘテロシクリレン、任意に置換されるアリーレン、任意に置換されるヘテロアリーレン、−Ｏ−、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ−、または−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−で交換され、
Ｄは、クリックケミストリーによって得られる部分または生理的条件下で開裂可能な部分であり、
ｍは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
Ａは、式：
【化１９】
2019504002.tif 000021
のものであり、
Ｌ２の各場合は、独立して、結合または任意に置換されるＣ１−６アルキレンであり、該任意に置換されるＣ１−６アルキレンの１つのメチレン単位は、−Ｏ−、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ−、または−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−で任意に交換され、
Ｒ２の各場合は、独立して、任意に置換されるＣ１−３０アルキル、任意に置換されるＣ１−３０アルケニル、または任意に置換されるＣ１−３０アルキニルであり、任意に、Ｒ２の１つ以上のメチレン単位は、独立して、任意に置換されるカルボシクリレン、任意に置換されるヘテロシクリレン、任意に置換されるアリーレン、任意に置換されるヘテロアリーレン、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、または−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ−で交換され、
ＲＮの各場合は、独立して、水素、任意に置換されるアルキル、または窒素保護基であり、
環Ｂは、任意に置換されるカルボシクリル、任意に置換されるヘテロシクリル、任意に置換されるアリール、または任意に置換されるヘテロアリールであり、
ｐは、１または２である。
【００３７】
ある特定の実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物は、ＰＥＧ−ＯＨ脂質である（すなわち、Ｒ３が−ＯＲＯ、及びＲＯが水素である）。ある特定の実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物は、式（ＩＩＩ−ＯＨ）：
【化２０】
2019504002.tif 000022
（ＩＩＩ−ＯＨ）
のもの、またはその塩である。
【００３８】
ある特定の実施形態では、Ｄは、クリックケミストリーによって得られる部分である（例えば、トリアゾール）。ある特定の実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物は、式（ＩＩＩ−ａ−１）もしくは（ＩＩＩ−ａ−２）：
【化２１】
2019504002.tif 000023
のもの、またはその塩である。
【００３９】
ある特定の実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物は、以下の式：
【化２２】
2019504002.tif 000024
のうちの１つのもの、またはその塩であり、式中
ｓは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。
【００４０】
ある特定の実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物は、以下の式：
【化２３】
2019504002.tif 000025
のうちの１つのもの、またはその塩である。
【００４１】
ある特定の実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物は、以下の式：
【化２４】
2019504002.tif 000026
のうちの１つのもの、またはその塩である。
【００４２】
ある特定の実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物は、以下の式：
【化２５】
2019504002.tif 000027
【化２６】
2019504002.tif 000028
のうちの１つのもの、またはその塩である。
【００４３】
ある特定の実施形態では、Ｄは、生理的条件下で開裂可能な部分である（例えば、エステル、アミド、カーボネート、カルバメート、尿素）。ある特定の実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物は、式（ＩＩＩ−ｂ−１）もしくは（ＩＩＩ−ｂ−２）：
【化２７】
2019504002.tif 000029
のもの、またはその塩である。ある特定の実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物は、式（ＩＩＩ−ｂ−１−ＯＨ）もしくは（ＩＩＩ−ｂ−２−ＯＨ）：
【化２８】
2019504002.tif 000030
のもの、またはその塩である。
【００４４】
ある特定の実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物は、以下の式：
【化２９】
2019504002.tif 000031
のうちの１つのもの、またはその塩である。
【００４５】
ある特定の実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物は、以下の式：
【化３０】
2019504002.tif 000032
【化３１】
2019504002.tif 000033
のうちの１つのもの、またはその塩である。
【００４６】
ある特定の実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物は、以下の式：
【化３２】
2019504002.tif 000034
のうちの１つのもの、またはその塩である。
【００４７】
ある特定の実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物は、以下の式：
【化３３】
2019504002.tif 000035
のうちの１つのもの、またはその塩である。
【００４８】
ある特定の実施形態では、本発明で有用なＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ化脂肪酸である。ある特定の実施形態では、本発明で有用なＰＥＧ脂質は、式（Ｖ）の化合物である。本明細書に提供するのは、式（Ｖ）：
【化３４】
2019504002.tif 000036
（Ｖ）
の化合物、またはその塩であり、式中：
Ｒ３は−ＯＲＯであり、
ＲＯは、水素、任意に置換されるアルキル、または酸素保護基であり、
ｒは、１と１００を含めた１〜１００の整数であり、
Ｒ５は、任意に置換されるＣ１０−４０アルキル、任意に置換されるＣ１０−４０アルケニル、または任意に置換されるＣ１０−４０アルキニルであり、任意に、Ｒ５の１つ以上のメチレン基は、任意に置換されるカルボシクリレン、任意に置換されるヘテロシクリレン、任意に置換されるアリーレン、任意に置換されるヘテロアリーレン、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、または−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ−で交換され、
ＲＮの各場合は、独立して、水素、任意に置換されるアルキル、または窒素保護基である。
【００４９】
ある特定の実施形態では、式（Ｖ）の化合物は、式（Ｖ−ＯＨ）：
【化３５】
2019504002.tif 000037
（Ｖ−ＯＨ）
のもの、またはその塩である。
【００５０】
ある特定の実施形態では、式（Ｖ）の化合物は、以下の式：
【化３６】
2019504002.tif 000038
【化３７】
2019504002.tif 000039
のうちの１つのもの、またはその塩である。
【００５１】
他の態様では、該非カチオン性ヘルパー脂質は、双性イオン性非カチオン性ヘルパー脂質、ホスファチジルコリン（ＰＣ）ではない脂質、ＤＳＰＣ類似体、オレイン酸、オレイン酸類似体、または１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）代替物である。
【００５２】
いくつかの実施形態では、ＬＮＰによる免疫応答を阻害する該薬剤は、ｍｉＲ結合部位を含む。他の実施形態では、該ｍｉＲ結合部位は、ｍｉＲ１２６、ｍｉＲ１５５、及びｍｉＲ１４２  ３ｐから選択される。該ｍｉＲ結合部位は、いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡに組み込まれる。他の実施形態では、該ｍｉＲ結合部位は、該ｍＲＮＡから分離している。
【００５３】
いくつかの実施形態では、ＬＮＰによる免疫応答を阻害する該薬剤は、ｍｉＲ結合部位を含むｍＲＮＡを含む。様々な実施形態では、該ｍＲＮＡは、１〜４、すなわち、１、２、３、または４つのｍｉＲ結合部位を含み、該ｍｉＲ結合部位のうちの少なくとも１つは、ｍｉＲ−１２６結合部位である。１つの実施形態では、該ｍＲＮＡは、少なくとも２つのマイクロＲＮＡ結合部位を含み、該マイクロＲＮＡ結合部位のうちの少なくとも１つは、ｍｉＲ−１２６結合部位である。１つの実施形態では、該ｍＲＮＡ、例えば、ｍｍＲＮＡは、ｍｉＲ−１２６結合部位、ならびにｍｉＲ−１４２−３ｐ、ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｍｉＲ−１４６−３ｐ、ｍｉＲ−１４６−５ｐ、ｍｉＲ−１５５、ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−２１、ｍｉＲ−２２３、ｍｉＲ−２４、及びｍｉＲ−２７からなる群から選択されるｍｉＲ用の第二のマイクロＲＮＡ結合部位を含む。別の実施形態では、該ｍＲＮＡは、ｍｉＲ−１２６（例えば、ｍｉＲ−１２６−３ｐ）結合部位及びｍｉＲ−１４２（例えば、ｍｉＲ−１４２−３ｐ）結合部位を含む。本明細書で無作為に参照されるｍｉＲは、同じプレｍｉＲＮＡの両アーム由来の２つの成熟マイクロＲＮＡのいずれかを指すことができる（例えば、３ｐまたは５ｐマイクロＲＮＡのいずれか）。本明細書で無作為に参照されるすべてのｍｉＲは、３ｐ及び５ｐアーム／配列の両方を含むことを意図する。現在、免疫細胞で発現されるマイクロＲＮＡのための少なくとも１つのマイクロＲＮＡ結合部位（例えば、ｍｉＲ−１２６、ｍｉＲ−１４２、ｍｉＲ−１５５、及びそれら組合せ）をｍＲＮＡ構築物に組み込むことで、該ｍＲＮＡを含む該脂質含有化合物または組成物が対象に投与された場合にＡＢＣを低減または阻害することができることが分かっている。１つの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位（複数可）の作用機序は、マイクロＲＮＡ「スポンジ」であり、該構築物またはＬＮＰのｍｉＲＮＡ結合部位（複数可）は、該結合部位（複数可）に結合するマイクロＲＮＡを「吸い取る」。
【００５４】
該ＤＳＰＣ類似体は、修飾された４級アミン頭基である修飾された頭基、修飾されたコア基、または修飾された脂質尾基を有し得る。いくつかの実施形態では。他の実施形態における該ＰＥＧ脂質は、他の成分に対して少なくとも０．０００１％、少なくとも０．０００５％、少なくとも０．００１％、少なくとも０．００５％、少なくとも０．０１％、少なくとも０．０５％、少なくとも０．１％、少なくとも０．１５％、少なくとも０．２％、少なくとも０．２５％、少なくとも０．３％、少なくとも０．３５％、少なくとも０．４％、少なくとも０．４５％、及び０．５％未満のモル比のＰＥＧ脂質を含む。
【００５５】
いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、モル比約４５〜６５％のカチオン性脂質、約０．１５〜１５％のＰＥＧ脂質、約１５〜４５％のコレステロール、及び約５〜２５％の非カチオン性ヘルパー脂質、または、モル比約５５％のカチオン性脂質、約２．５％のＰＥＧ脂質、約３２．５％のコレステロール、及び約１０％の非カチオン性脂質を有し得る。
【００５６】
他の実施形態では、該カチオン性脂質は、ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｄ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ、またはＤＯＤＭＡから選択される。他の実施形態では、該カチオン性脂質は、本明細書に提供する脂質のＣｍｐｄ番号から選択される。
【００５７】
いくつかの態様における本発明は、対象に対して脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を送達する方法であり、これは、後続のＬＮＰ投与に応答して血中クリアランス促進（ＡＢＣ）を推進する免疫応答を引き起こさない。本方法は、該対象へのＬＮＰの初回投与が、ＬＮＰの第二回投与の実施に際してＡＢＣを推進する免疫応答を誘導しないものである該初回投与を実施すること、及び該対象へのＬＮＰの第二回投与を実施することを含み、該対象は、ＬＮＰの該第二回投与に対するＡＢＣ反応を有さない。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、治療薬を封入し、当該対象は、疾患治療のために有効量の該治療薬を受ける。
【００５８】
他の態様では、本発明は、対象に対して脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を送達する方法であって、これは、後続のＬＮＰ投与に応答して血中クリアランス促進（ＡＢＣ）を推進する免疫応答を引き起こさないものであり、ＬＮＰの第二回投与の実施に際してＡＢＣを推進する免疫応答を誘導することができるＬＮＰの該対象に対する初回投与を実施すること、該ＬＮＰによって誘導される免疫応答を阻害する薬剤を投与すること、及び該対象に対するＬＮＰの第二回投与を実施することによる方法であり、該対象は、ＬＮＰの該第二回投与に対するＡＢＣ反応を有さない。
【００５９】
さらに他の態様では、本発明は、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を介した薬物送達を含む治療計画で治療されている対象における用量制限毒性（ＤＬＴ）を低減する方法であり、これは、該治療計画で治療されている対象においてＤＬＴが低減されるように、Ｂ１細胞活性化または血小板活性化と関連する免疫応答を誘導しないＬＮＰを該対象へ投与すること、及び任意に、該ＬＮＰが誘導する免疫応答を阻害する薬剤を投与することによる。
【００６０】
さらに他の態様では、本発明は、対象において、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を介した薬物送達を含む治療計画の治療指数を高める方法であり、これは、該治療計画で治療されている対象においてＤＬＴが低減されるように、Ｂ１細胞活性化または血小板活性化と関連する免疫応答を誘導しないＬＮＰを該対象へ投与すること、及び任意に、該ＬＮＰが誘導する免疫応答を阻害する薬剤を投与することによる。
【００６１】
脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を介した薬物送達を含む治療計画で治療されている対象における用量制限毒性（ＤＬＴ）を低減する方法は、本発明の他の態様で提供される。該方法は、治療計画で治療されている該対象においてＤＬＴが低減されるように、ＬＮＰ及び血小板活性化を阻害する薬剤を該対象に投与することを含む。
【００６２】
治療レベルの目的のタンパク質を対象に送達する方法は、本発明の他の態様で提供される。該方法は、目的のタンパク質をコードするｍＲＮＡを封入する脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）の初回投与を該対象に実施することを含み、ＬＮＰの該初回投与は、ＬＮＰの第二回投与の実施に際して血中クリアランス促進（ＡＢＣ）を推進する免疫応答を誘導しない。
【００６３】
他の態様によれば、本発明は、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を介した薬物送達を含む治療計画で治療されている対象における用量制限毒性（ＤＬＴ）及び／または血中クリアランス促進（ＡＢＣ）を低減する方法であり、これは、目的のタンパク質をコードするｍＲＮＡを封入する脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）の初回投与を該対象に実施することによるものであり、ＬＮＰの該初回投与は、ＬＮＰの第二回投与の実施に際して免疫細胞におけるＣＤ３６依存性シグナル伝達経路を活性化しない。
【００６４】
カチオン性脂質、ＰＥＧ脂質、ステロール、及びヘルパー脂質を有し、該ヘルパー脂質が、ホスファチジルコリン（ＰＣ）を含まない、血中クリアランス促進（ＡＢＣ）非感受性脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）は、本発明の他の態様で提供される。
【００６５】
他の態様によれば、本発明は、カチオン性脂質、非カチオン性非ＰＣ脂質、０．５％（ｗ／ｗ）未満のＰＥＧ化脂質、及びステロールを有する脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）である。該ＬＮＰは、２日〜３週間以内にインビボで反復投与される際の血中クリアランス促進に対して非感受性である。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、４〜１２日以内にインビボで反復投与される際に血中クリアランス促進に対して非感受性である。
【００６６】
いくつかの態様では、本発明は、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）の反復投与を含む治療計画で治療されている対象において血中クリアランス促進（ＡＢＣ）を低減する方法であり、該方法は、該対象にＬＮＰを投与することを含み、該ＬＮＰは、Ｂ１ａ細胞を活性化せず、及び／または該ＬＮＰに結合することができる天然のＩｇＭ分子の産生を誘導せず、従って、該ＬＮＰが該対象に反復投与される際のＡＢＣが低減される。
【００６７】
いくつかの態様では、本発明は、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）の複数回投与を含む治療計画で治療されている対象において血中クリアランス促進（ＡＢＣ）を低減する方法であり、該方法は、該対象にある用量のＬＮＰを投与することを含み、該ＬＮＰは、Ｂ１ａ細胞を活性化せず、及び／または該ＬＮＰに結合することができる天然のＩｇＭ分子の産生を誘導せず、従って、該ＬＮＰの１つ以上の後続用量が該対象に投与される際のＡＢＣが低減される。
【００６８】
いくつかの態様では、本発明は、複数回投与または反復投与の治療計画で治療されている対象において脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）の血中クリアランス促進（ＡＢＣ）を低減する方法であり、該方法は、該対象にＬＮＰを投与することを含み、該ＬＮＰは、Ｂ１ａ細胞を活性化せず、及び／または該ＬＮＰに結合することができる天然のＩｇＭ分子の産生を誘導せず、従って、該対象へのＬＮＰの後続または反復投与時のＡＢＣが低減される。
【００６９】
いくつかの態様において、本発明は、ＬＮＰの血中クリアランスを減速する方法であり、該方法は、対象に対してＬＮＰを投与することを含み、該ＬＮＰは、Ｂ１ａ細胞を活性化せず、及び／または該ＬＮＰに結合することができる天然のＩｇＭ分子の産生を誘導せず、従って、該対象に対して該ＬＮＰの後続投与が実施される際の該ＬＮＰの血中クリアランスが減速される。本明細書で使用される、「減速」または「減速された」とは、血中クリアランスを遅くすること、遅延すること、または抑制することを指す。
【００７０】
いくつかの態様では、本発明は、血中クリアランス促進（ＡＢＣ）を推進することなく対象に対して脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を送達する方法であり、該方法は、ＬＮＰを該対象に投与することを含み、該ＬＮＰはＡＢＣを推進しない。
【００７１】
いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、該ＬＮＰに結合することができる天然のＩｇＭ分子の産生を誘導しない。
【００７２】
いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、Ｂ１ａ細胞を活性化しない。
【００７３】
いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、ＣＤ３６またはＢ１ａ細胞を活性化しない。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、Ｂ１ａ細胞を活性化するエピトープを含まない。
【００７４】
いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、ヘルパー脂質を含み、これは、少なくとも８Ｃの脂肪酸鎖を少なくとも１つ及び極性部分を少なくとも１つ含み、該ヘルパー脂質は、Ｂ１ａ細胞を活性化しない。
【００７５】
いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、ホスファチジルコリン（ＰＣ）を含まない。他の実施形態では、該ヘルパー脂質は、ホスファチジルコリン類似体である。いくつかの実施形態では、該ホスファチジルコリン類似体は、修飾されたＰＣ頭基、修飾されたＰＣコア基、及び／または修飾されたＰＣ脂質尾基を含む。いくつかの実施形態では、該ヘルパー脂質は、ホスファチジルコリンのＣＤ３６に対する結合を競合的に阻害する。いくつかの実施形態では、該ヘルパー脂質は、ＣＤ３６に結合しないか、または、ＣＤ３６に対する結合活性が低い。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、オレイン酸またはオレイン酸類似体を含む。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、ＰＥＧまたはＰＥＧ化脂質を含まない。
【００７６】
いくつかの実施形態では、該ＬＮＰはさらに、ＰＥＧ化脂質を含む。他の実施形態では、該ＰＥＧ化脂質は、アルキルＰＥＧ化脂質である。いくつかの実施形態では、該ＰＥＧ化脂質は、メトキシＰＥＧ化脂質である。いくつかの実施形態では、該ＰＥＧ化脂質は、ＤＭＧ−ＰＥＧである。いくつかの実施形態では、該ＰＥＧ化脂質は、ヒドロキシＰＥＧ化脂質である。いくつかの実施形態では、該ＰＥＧ化脂質は、０．５％（ｗ／ｗ）未満である。いくつかの実施形態では、該ＰＥＧ化脂質は、０．２５％（ｗ／ｗ）未満である。
【００７７】
いくつかの実施形態では、該ＬＮＰはさらに、カチオン性脂質を含む。いくつかの実施形態では、該カチオン性脂質は、ＭＣ３またはＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡである。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰはさらにステロールを含む。いくつかの実施形態では、該ステロールはコレステロールである。
【００７８】
いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは治療薬を封入する。いくつかの実施形態では、該治療薬は、タンパク質または核酸である。いくつかの実施形態では、該治療薬は、治療用タンパク質をコードするｍＲＮＡである。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、複数回投与で当該対象に投与される。いくつかの実施形態では、２回の連続した投与の間隔は、２週間未満である。いくつかの実施形態では、２回の連続した投与の間隔は、１週間未満である。他の実施形態では、該投与は、２日〜３週間、３日〜３週間、４日〜３週間、５日〜３週間、２日〜２週間、３日〜２週間、４日〜２週間、５日〜２週間、２〜１５日、３〜１５日、３〜１０日、または３〜７日間隔である。
【００７９】
いくつかの態様では、本発明は、ｍＲＮＡを封入する脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）の血中クリアランス促進（ＡＢＣ）を低減する方法であり、該方法は、それを必要とする対象に対して、該ＬＮＰの初回投与を実施すること、及び該対象に対して、該ＬＮＰの第二回投与を実施することを含み、該初回投与、該第二回投与、またはその両方は、約０．３ｍｇ／ｋｇ以下である。
【００８０】
いくつかの実施形態では、該初回投与、該第二回投与、またはその両方は、約０．２ｍｇ／ｋｇ以下である。いくつかの実施形態では、該初回投与、該第二回投与、またはその両方は、約０．１ｍｇ／ｋｇ以下である。いくつかの実施形態では、該初回投与、該第二回投与、またはその両方は、約０．１〜０．３ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、該初回投与と該第二回投与の間隔は２週間未満である。いくつかの実施形態では、該初回投与と該第二回投与の間隔は１週間未満である。いくつかの実施形態では、ＬＮＰに封入される該ｍＲＮＡは、治療用ｍＲＮＡである。いくつかの実施形態では、ＬＮＰに封入される該ｍＲＮＡは、ワクチン抗原をコードするｍＲＮＡである。いくつかの実施形態では、ＬＮＰに封入される該ｍＲＮＡは、複数のタンパク質をコードする。
【００８１】
いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、該ＬＮＰに結合することができる天然のＩｇＭ分子の産生を誘導しない。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、Ｂ１ａ細胞を活性化しない。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、Ｂ１ａ細胞を活性化するエピトープを含まない。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、ヘルパー脂質を含み、これは、少なくとも８Ｃの脂肪酸鎖を少なくとも１つ及び極性部分を少なくとも１つ含み、該ヘルパー脂質は、Ｂ１ａ細胞を活性化しない。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、ホスファチジルコリン（ＰＣ）を含まない。
【００８２】
いくつかの実施形態では、該ヘルパー脂質は、ホスファチジルコリン類似体である。いくつかの実施形態では、該ホスファチジルコリン類似体は、修飾されたＰＣ頭基、修飾されたＰＣコア基、及び／または修飾されたＰＣ脂質尾基を含む。いくつかの実施形態では、該ヘルパー脂質は、ホスファチジルコリンのＣＤ３６に対する結合を競合的に阻害する。いくつかの実施形態では、該ヘルパー脂質は、ＣＤ３６に結合しないか、または、ＣＤ３６に対する結合活性が低い。
【００８３】
いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、オレイン酸またはオレイン酸類似体を含む。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、ＰＥＧまたはＰＥＧ化脂質を含まない。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰはさらにＰＥＧ化脂質を含む。いくつかの実施形態では、該ＰＥＧ化脂質は、アルキルＰＥＧ化脂質である。いくつかの実施形態では、該ＰＥＧ化脂質は、メトキシＰＥＧ化脂質である。いくつかの実施形態では、該ＰＥＧ化脂質は、ＤＭＧ−ＰＥＧである。いくつかの実施形態では、該ＰＥＧ化脂質は、ヒドロキシＰＥＧ化脂質である。いくつかの実施形態では、該ＰＥＧ化脂質は、０．５％（ｗ／ｗ）未満である。いくつかの実施形態では、該ＰＥＧ化脂質は、０．２５％（ｗ／ｗ）未満である。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【００８４】
いくつかの実施形態では、該ＬＮＰはさらにカチオン性脂質を含む。いくつかの実施形態では、該カチオン性脂質は、ＭＣ３またはＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡである。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰはさらにステロールを含む。いくつかの実施形態では、該ステロールはコレステロールである。
【００８５】
いくつかの態様では、本発明は、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）の反復投与を含む治療計画で治療されている対象において血中クリアランス促進（ＡＢＣ）を低減する方法であり、該方法は、該対象にＬＮＰ及び該ＬＮＰが誘導するＢ１ａ細胞が媒介する免疫応答を阻害する薬剤を投与することを含み、その結果、該対象に対する該ＬＮＰの反復投与の際にＡＢＣが低減される。
【００８６】
いくつかの態様では、本発明は、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）の複数回投与を含む治療計画で治療されている対象において血中クリアランス促進（ＡＢＣ）を低減する方法であり、該方法は、該対象にＬＮＰ及び該ＬＮＰが誘導するＢ１ａ細胞が媒介する免疫応答を阻害する薬剤を投与することを含み、その結果、該対象に対する該ＬＮＰの１回以上の後続投与の実施の際にＡＢＣが低減される。
【００８７】
いくつかの態様では、本発明は、複数回投与または反復投与の治療計画で治療されている対象において脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）の血中クリアランス促進（ＡＢＣ）を低減する方法であり、該方法は、該対象にＬＮＰ及び該ＬＮＰが誘導するＢ１ａ細胞が媒介する免疫応答を阻害する薬剤を投与することを含み、その結果、該対象へのＬＮＰの後続または反復投与時のＡＢＣが低減される。
【００８８】
いくつかの態様では、本発明は、ＬＮＰの血中クリアランスを減速する方法であり、該方法は、対象に対してＬＮＰ及び該ＬＮＰが誘導するＢ１ａ細胞が媒介する免疫応答を阻害する薬剤を投与することを含み、その結果、該対象に対する該ＬＮＰの後続投与の実施の際に該ＬＮＰの血中クリアランスが減速される。
【００８９】
いくつかの態様では、本発明は、対象において脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）の血中クリアランス促進（ＡＢＣ）を低減または阻害する方法であり、該方法は、該対象にＬＮＰ及び該ＬＮＰが誘導する免疫応答を阻害する薬剤を投与することを含み、その結果、該ＬＮＰのＡＢＣが低減または阻害される。
【００９０】
いくつかの態様では、本発明は、対象において脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）の血中クリアランス促進（ＡＢＣ）を低減または阻害する方法であり、該方法は、該対象にＬＮＰ及び該ＬＮＰが誘導する免疫応答を阻害する薬剤を投与することを含み、その結果、該ＬＮＰのＡＢＣが低減または阻害される。いくつかの例では、本明細書に記載の任意の方法で使用される該薬剤の量は、本明細書に記載の任意の免疫応答を阻害するのに十分である。
【００９１】
いくつかの実施形態では、該薬剤は、該ＬＮＰに結合することができる天然のＩｇＭの産生を阻害するか、または、該天然のＩｇＭを中和する。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰが誘導する免疫応答は、Ｂ１ａ細胞の活性化である。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰが誘導する免疫応答は、該ＬＮＰに対する天然のＩｇＭの結合である。いくつかの実施形態では、該薬剤は、Ｂ１ａ細胞上のＣＤ３６に結合し、及び／またはこれを阻害する。
【００９２】
いくつかの実施形態では、該薬剤は、該ＬＮＰの投与の前、後、またはそれと同時に当該対象に投与される。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、治療薬を封入する。いくつかの実施形態では、該治療薬は、タンパク質または核酸である。いくつかの実施形態では、該治療薬は、治療用タンパク質をコードするｍＲＮＡである。
【００９３】
いくつかの実施形態では、該対象は、該ＬＮＰを複数回投与にて投与される。いくつかの実施形態では、２回の連続した投与の間隔は、２週間未満である。いくつかの実施形態では、２回の連続した投与の間隔は、１週間未満である。いくつかの実施形態では、２回の連続した投与の間隔は、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１日未満である。いくつかの実施形態では、該対象は、１日１回、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、または２１日に１回投与される。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【００９４】
いくつかの態様では、本発明は、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を介した薬物送達を含む治療計画で治療されている対象における用量制限毒性（ＤＬＴ）を低減する方法であり、該方法は、該対象にＬＮＰを投与することを含み、該ＬＮＰは、血小板活性化を促進せず、従って、治療計画で治療されている該対象においてＤＬＴが低減される。
【００９５】
いくつかの態様では、本発明は、対象に対する脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）で封入された薬物の治療用量の送達に関連した毒性を低減する方法であり、該方法は、ＬＮＰを該対象に投与することを含み、該ＬＮＰは、血小板活性化を促進せず、従って、該毒性が低減される。
【００９６】
いくつかの態様では、本発明は、対象に対して脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を、ＬＮＰ関連の毒性を促進することなく送達する方法であり、該方法は、該対象にＬＮＰを投与することを含み、該ＬＮＰは、ＬＮＰ関連の毒性を促進しない。
【００９７】
いくつかの態様では、該ＬＮＰ関連の毒性は、凝血障害、播種性血管内凝固症候群（ＤＩＣ）、血管内血栓、補体活性化関連仮性アレルギー（ＣＡＲＰＡ）、またはそれらの組合せを含む。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、古典経路（ＣＰ）を促進しない。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、第二経路（ＡＰ）を促進しない。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、血小板活性化または凝集を促進しない。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、ＣＤ３６を活性化しない。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、ＣＤ３６を活性化するエピトープを含まない。
【００９８】
いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、ヘルパー脂質を含み、これは、少なくとも８Ｃの脂肪酸鎖を少なくとも１つ及び極性部分を少なくとも１つ含み、該ヘルパー脂質は、Ｂ１ａ細胞を活性化しない。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、ホスファチジルコリン（ＰＣ）を含まない。いくつかの実施形態では、該ヘルパー脂質は、ホスファチジルコリン類似体である。いくつかの実施形態では、該ホスファチジルコリン類似体は、修飾されたＰＣ頭基、修飾されたＰＣコア基、及び／または修飾されたＰＣ脂質尾基を含む。いくつかの実施形態では、該ヘルパー脂質は、ホスファチジルコリンのＣＤ３６に対する結合を競合的に阻害する。いくつかの実施形態では、該ヘルパー脂質は、ＣＤ３６に結合しないか、または、ＣＤ３６に対する結合活性が低い。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、オレイン酸またはオレイン酸類似体を含む。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、ＰＥＧまたはＰＥＧ化脂質を含まない。
【００９９】
いくつかの実施形態では、該ＬＮＰはさらにＰＥＧ化脂質を含む。いくつかの実施形態では、該ＰＥＧ化脂質は、アルキルＰＥＧ化脂質である。いくつかの実施形態では、該ＰＥＧ化脂質は、メトキシＰＥＧ化脂質である。いくつかの実施形態では、該ＰＥＧ化脂質は、ＤＭＧ−ＰＥＧである。いくつかの実施形態では、該ＰＥＧ化脂質は、ヒドロキシＰＥＧ化脂質である。いくつかの実施形態では、該ＰＥＧ化脂質は、０．５％（ｗ／ｗ）未満である。いくつかの実施形態では、該ＰＥＧ化脂質は、０．２５％（ｗ／ｗ）未満である。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【０１００】
いくつかの実施形態では、該ＬＮＰはさらにカチオン性脂質を含む。いくつかの実施形態では、該カチオン性脂質は、ＭＣ３またはＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡである。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰはさらにステロールを含む。いくつかの実施形態では、該ステロールはコレステロールである。
【０１０１】
いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは治療薬を封入する。いくつかの実施形態では、該治療薬は、タンパク質または核酸である。いくつかの実施形態では、該治療薬は、治療用タンパク質をコードするｍＲＮＡである。
【０１０２】
いくつかの態様では、本発明は、対象に対してｍＲＮＡを封入する脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を、ＬＮＰ関連の毒性を促進することなく送達する方法であり、該方法は、ある期間に対象に対してある量の該ＬＮＰを投与することを含み、当該投与期間中の該対象における該ＬＮＰの血清濃度は、ＬＮＰ関連の毒性を誘導するには十分でない。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、該ＬＮＰ関連の毒性は、凝血障害、播種性血管内凝固症候群（ＤＩＣ）、血管内血栓、活性化関連仮性アレルギー（ＣＡＲＰＡ）、急性期反応（ＡＰＲ）、またはそれらの組合せを含む。いくつかの実施形態では、当該投与期間中の該対象における該ＬＮＰの血清濃度は、ＣＡＲＰＡまたはＡＰＲを誘導するには十分でない。いくつかの実施形態では、当該投与期間中の該対象における該ＬＮＰの血清濃度は、古典経路（ＣＰ）を誘導するには十分でない。いくつかの実施形態では、当該投与期間中の該対象における該ＬＮＰの血清濃度は、第二経路（ＡＰ）を誘導するには十分でない。いくつかの実施形態では、当該投与期間中の該対象における該ＬＮＰの血清濃度は、血小板活性化または凝集を誘導するには十分でない。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、該ＬＮＰの投与量は、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０２ｍｇ．ｋｇ、または０．０１ｍｇ／ｋｇ未満である。いくつかの実施形態では、該投与期間は、少なくとも９６時間、７２時間、４８時間、２４時間、または１２時間である。
【０１０５】
いくつかの実施形態では、ＬＮＰに封入される該ｍＲＮＡは、治療用ｍＲＮＡである。いくつかの実施形態では、ＬＮＰに封入される該ｍＲＮＡは、ワクチン抗原をコードするｍＲＮＡである。いくつかの実施形態では、ＬＮＰに封入される該ｍＲＮＡは、複数のタンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、ヘルパー脂質を含み、これは、少なくとも８Ｃの脂肪酸鎖を少なくとも１つ及び極性部分を少なくとも１つ含み、該ヘルパー脂質は、Ｂ１ａ細胞を活性化しない。
【０１０６】
いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、ホスファチジルコリン（ＰＣ）を含まない。いくつかの実施形態では、該ヘルパー脂質は、ホスファチジルコリン類似体である。いくつかの実施形態では、該ホスファチジルコリン類似体は、修飾されたＰＣ頭基、修飾されたＰＣコア基、及び／または修飾されたＰＣ脂質尾基を含む。いくつかの実施形態では、該ヘルパー脂質は、ホスファチジルコリンのＣＤ３６に対する結合を競合的に阻害する。いくつかの実施形態では、該ヘルパー脂質は、ＣＤ３６に結合しないか、または、ＣＤ３６に対する結合活性が低い。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、オレイン酸またはオレイン酸類似体を含む。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、ＰＥＧまたはＰＥＧ化脂質を含まない。
【０１０７】
いくつかの実施形態では、該ＬＮＰはさらにＰＥＧ化脂質を含む。いくつかの実施形態では、該ＰＥＧ化脂質は、アルキルＰＥＧ化脂質、メトキシＰＥＧ化脂質、ＤＭＧ−ＰＥＧ、またはヒドロキシＰＥＧ化脂質である。いくつかの実施形態では、該ＰＥＧ化脂質は、０．５％（ｗ／ｗ）未満である。いくつかの実施形態では、該ＰＥＧ化脂質は、０．２５％（ｗ／ｗ）未満である。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰはさらにカチオン性脂質を含む。いくつかの実施形態では、カチオン性脂質は、ＭＣ３またはＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡである。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰはさらにステロールを含む。いくつかの実施形態では、該ステロールはコレステロールである。
【０１０８】
いくつかの態様では、本発明は、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を介した薬物送達を含む治療計画で治療されている対象における用量制限毒性（ＤＬＴ）を低減する方法であり、該方法は、ＬＮＰ及び血小板活性化を阻害する薬剤を該対象に投与することを含み、その結果、治療計画で治療されている該対象においてＤＬＴが低減される。
【０１０９】
いくつかの態様では、本発明は、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を介した薬物送達で治療されている対象の治療指数を高める方法であり、該方法は、ＬＮＰ及び血小板活性化を阻害する薬剤を該対象に投与することを含み、その結果、ＬＮＰで治療されている対象において用量制限毒性（ＤＬＴ）が低減される。
【０１１０】
さらに他の態様では、本発明は、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を介した薬物送達を含む治療計画の方法であり、これは、Ｂ１細胞活性化または血小板活性化と関連する免疫応答を誘導しないＬＮＰを該対象へ投与すること、及び任意に、該ＬＮＰが誘導する免疫応答を阻害する薬剤を投与することによるものであり、その結果、該治療計画で治療されている対象においてＤＬＴが低減される。
【０１１１】
いくつかの態様では、本発明は、対象に対する脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）で封入された薬物の治療用量の送達に関連した毒性を低減する方法であり、該方法は、ＬＮＰ及び血小板活性化を阻害する薬剤を該対象に投与することを含み、その結果、該毒性が低減される。
【０１１２】
いくつかの態様では、本発明は、対象における脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）関連の毒性を低減する方法であり、該方法は、該対象に対して、ＬＮＰ及び薬剤を、該ＬＮＰ関連の毒性を阻害するのに、または少なくとも１つのその症状を軽減するのに有効な量で投与することを含む。
【０１１３】
いくつかの実施形態では、該ＬＮＰ関連の毒性は、凝血障害、播種性血管内凝固症候群（ＤＩＣ）、血管内血栓、活性化関連仮性アレルギー（ＣＡＲＰＡ）、急性期反応（ＡＰＲ）、またはそれらの組合せを含む。いくつかの実施形態では、該薬剤は、該ＬＮＰの投与の前、後、またはそれと同時に当該対象に投与される。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、治療薬を封入する。いくつかの実施形態では、該治療薬は、タンパク質または核酸である。いくつかの実施形態では、該治療薬は、治療用タンパク質をコードするｍＲＮＡである。いくつかの実施形態では、該薬剤は、該ＬＮＰ関連の毒性と関連した少なくとも１つの症状を軽減する。いくつかの実施形態では、該薬剤は、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）または抗ヒスタミン剤であり、該抗ヒスタミン剤は、ヒスタミン受容体遮断薬、例えば、Ｈ１アンタゴニストまたはＨ１逆アゴニストである。いくつかの実施形態では、該ＮＳＡＩＤは、ＣＯＸ−２及び／または５−ＬＯＸ阻害剤である。いくつかの実施形態では、該抗ヒスタミン剤は、ヒスタミン受容体遮断薬である。いくつかの実施形態では、該ヒスタミン受容体遮断薬は、Ｈ１アンタゴニストまたはＨ１逆アゴニストである。いくつかの実施形態では、該Ｈ１アンタゴニストは、ジフェンヒドラミン（ベナドリル）、フェキソフェナジン（アレグラ）、またはロラタジン（クラリチン）であり、該Ｈ１逆アゴニストはセチリジンである。いくつかの実施形態では、該薬剤は、ＣＡＲＰＡまたはＡＲＰを阻害する。いくつかの実施形態では、該薬剤は、古典経路（ＣＰ）を阻害する。いくつかの実施形態では、該薬剤は、第二経路を阻害する。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【０１１４】
いくつかの実施形態では、該薬剤は、血小板活性化を阻害する。いくつかの実施形態では、該薬剤は、血小板凝集阻害剤である。いくつかの実施形態では、該血小板凝集阻害剤は、ＡＤＰ受容体アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、該血小板凝集阻害剤は、アスピリンまたはクロピドグレル（ＰＬＡＶＩＸ（登録商標））である。いくつかの実施形態では、該血小板凝集阻害剤は、アスピリン／プラバスタチン、シロスタゾール、プラスグレル、アスピリン／ジピリダモール、チカグレロル、カングレロル、エリノグレル、ジピリダモール、及びチクロピジンから選択される。いくつかの実施形態では、該薬剤は、ＣＤ３６を阻害する。いくつかの実施形態では、該薬剤は、ＴＬＲ受容体、ＣＤ６２Ｐ、プロパージン、補体系の成分、Ｃ反応性タンパク質、または急性期反応の他のタンパク質を阻害する。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【０１１５】
いくつかの態様では、本発明は、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を介した薬物送達を含む治療計画で治療されている対象における用量制限毒性（ＤＬＴ）及び／または血中クリアランス促進（ＡＢＣ）を低減する方法を含み、該方法は、治療薬を封入するＬＮＰを該対象に投与することを含み、該ＬＮＰは、ＣＤ３６等の免疫細胞のトロンボスポンジン受容体を活性化せず、従って、該対象に対して該ＬＮＰが反復投与される際にＡＢＣが低減される。いくつかの実施形態では、該免疫細胞は、血小板及び／またはＢ細胞、特に、Ｂ１ａ細胞である。
【０１１６】
いくつかの態様では、本発明は、対象に対して、治療有効量の治療薬を、脂質ナノ粒子を介して送達する方法を含み、該方法は、該治療薬を封入するＬＮＰを該対象に投与することを含み、該ＬＮＰはＣＤ３６を活性化しない。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、ＣＤ３６を活性化するエピトープを含まない。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、ホスファチジルコリン（ＰＣ）を含まない。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、ＣＤ３６に結合しないか、もしくは、ＣＤ３６に対する結合活性が低いヘルパー脂質を含むか、または、ホスファチジルコリンのＣＤ３６に対する結合を競合的に阻害する。いくつかの実施形態では、該ヘルパー脂質は、少なくとも８Ｃの脂肪酸鎖を少なくとも１つ及び極性部分を少なくとも１つ含む。いくつかの実施形態では、該ヘルパー脂質は、ホスファチジルコリン類似体である。いくつかの実施形態では、該ホスファチジルコリン類似体は、修飾されたＰＣ頭基、修飾されたＰＣコア基、及び／または修飾されたＰＣ脂質尾基を含む。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、オレイン酸またはオレイン酸類似体を含む。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、ＰＥＧまたはＰＥＧ化脂質を含まない。
【０１１７】
いくつかの実施形態では、該ＬＮＰはさらにＰＥＧ化脂質を含む。いくつかの実施形態では、該ＰＥＧ化脂質は、アルキルＰＥＧ化脂質、メトキシＰＥＧ化脂質、ＤＭＧ−ＰＥＧ、またはヒドロキシＰＥＧ化脂質である。いくつかの実施形態では、該ＰＥＧ化脂質は、０．５％（ｗ／ｗ）未満である。いくつかの実施形態では、該ＰＥＧ化脂質は、０．２５％（ｗ／ｗ）未満である。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰはさらにカチオン性脂質を含む。いくつかの実施形態では、該カチオン性脂質は、ＭＣ３またはＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡである。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰはさらにステロールを含む。いくつかの実施形態では、該ステロールはコレステロールである。
【０１１８】
いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、治療薬を封入する。いくつかの実施形態では、該治療薬は、タンパク質または核酸である。いくつかの実施形態では、該治療薬は、治療用タンパク質をコードするｍＲＮＡである。
【０１１９】
いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、複数回投与で当該対象に投与される。いくつかの実施形態では、２回の連続した投与の間隔は、２週間未満である。いくつかの実施形態では、２回の連続した投与の間隔は、１週間未満である。
【０１２０】
いくつかの態様では、本発明は、治療レベルの目的のタンパク質を対象に送達する方法であり、該方法は、目的のタンパク質をコードするｍＲＮＡを封入する脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を該対象に投与することを含み、該ＬＮＰは、Ｂ１ａ細胞を活性化せず、及び／または血小板を活性化せず、その結果、治療レベルの該目的のタンパク質が該対象に送達される。
【０１２１】
いくつかの態様では、本発明は、治療レベルの目的のタンパク質を対象に送達する方法であり、該方法は、目的のタンパク質をコードするｍＲＮＡを封入する脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を該対象に投与することを含み、該ＬＮＰは、ＬＮＰと関連する薬物反応を誘導しない。いくつかの実施形態では、ＬＮＰと関連する該薬物反応は、血中クリアランス促進である。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、該ＬＮＰに結合することができる天然のＩｇＭ分子の産生を誘導しない。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、Ｂ１ａ細胞を活性化しない。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、Ｂ１ａ細胞を活性化するエピトープを含まない。
【０１２２】
いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、複数回投与で当該対象に投与される。いくつかの実施形態では、２回の連続した投与の間隔は、２週間未満である。いくつかの実施形態では、２回の連続した投与の間隔は、１週間未満である。いくつかの実施形態では、ＬＮＰと関連する該薬物反応は、該ＬＮＰが誘導する有害反応である。いくつかの実施形態では、該有害反応は、凝血障害、播種性血管内凝固症候群（ＤＩＣ）、血管内血栓、活性化関連仮性アレルギー（ＣＡＲＰＡ）、急性期反応（ＡＰＲ）、またはそれらの組合せを含む。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、ＣＡＲＰＡまたはＡＰＲを促進しない。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、古典経路（ＣＰ）を促進しない。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、第二経路（ＡＰ）を促進しない。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、血小板活性化または凝集を促進しない。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、ＣＤ３６を活性化しない。
【０１２３】
いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、ヘルパー脂質を含み、これは、少なくとも８Ｃの脂肪酸鎖を少なくとも１つ及び極性部分を少なくとも１つ含み、該ヘルパー脂質は、該ＬＮＰに結合することができる天然のＩｇＭの産生を誘導せず、Ｂ１ａ細胞を活性化せず、ＣＤ３６を活性化せず、及び／または血小板を活性化しない。
【０１２４】
いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、ホスファチジルコリン（ＰＣ）を含まない。いくつかの実施形態では、該ヘルパー脂質は、ホスファチジルコリン類似体である。いくつかの実施形態では、該ホスファチジルコリン類似体は、修飾されたＰＣ頭基、修飾されたＰＣコア基、及び／または修飾されたＰＣ脂質尾基を含む。いくつかの実施形態では、該ヘルパー脂質は、ホスファチジルコリンのＣＤ３６に対する結合を競合的に阻害する。いくつかの実施形態では、該ヘルパー脂質は、ＣＤ３６に結合しないか、または、ＣＤ３６に対する結合活性が低い。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、オレイン酸またはオレイン酸類似体を含む。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、ＰＥＧまたはＰＥＧ化脂質を含まない。
【０１２５】
いくつかの実施形態では、該ＬＮＰはさらにＰＥＧ化脂質を含む。いくつかの実施形態では、該ＰＥＧ化脂質は、アルキルＰＥＧ化脂質である。いくつかの実施形態では、該ＰＥＧ化脂質は、メトキシＰＥＧ化脂質、ＤＭＧ−ＰＥＧ、またはヒドロキシＰＥＧ化脂質である。いくつかの実施形態では、該ＰＥＧ化脂質は、０．５％（ｗ／ｗ）未満である。いくつかの実施形態では、該ＰＥＧ化脂質は、０．２５％（ｗ／ｗ）未満である。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰはさらにカチオン性脂質を含む。いくつかの実施形態では、該カチオン性脂質は、ＭＣ３またはＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡである。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰはさらにステロールを含む。いくつかの実施形態では、該ステロールはコレステロールである。
【０１２６】
いくつかの実施形態では、該ｍＲＮＡは、治療用タンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、該ｍＲＮＡは、ワクチン抗原をコードする。
【０１２７】
いくつかの態様では、本発明は、治療レベルの目的のタンパク質を対象に送達する方法であり、該方法は、目的のタンパク質をコードするｍＲＮＡを封入する脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）、及び薬剤を、該ＬＮＰが誘導する血小板活性化及び／またはＢ細胞活性化、特にＢ１ａ細胞の活性化を阻害するのに有効な量で該対象に投与することを含み、その結果、治療レベルの該目的のタンパク質が該対象に送達される。
【０１２８】
いくつかの態様では、本発明は、治療レベルの目的のタンパク質を対象に送達する方法であり、該方法は、該目的のタンパク質をコードするｍＲＮＡを封入する脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）、及び薬剤を、該ＬＮＰが誘導する薬物反応を阻害するのに、または少なくとも１つのその症状を軽減するのに有効な量で該対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、該薬物反応は、血中クリアランス促進である。いくつかの実施形態では、該薬剤は、該ＬＮＰに結合することができる天然のＩｇＭの産生を阻害するか、または、該天然のＩｇＭを中和する。いくつかの実施形態では、該薬剤は、標的に対する天然のＩｇＭの結合を阻害する。いくつかの実施形態では、該薬剤は、Ｂ１ａ細胞の活性化を阻害する。いくつかの実施形態では、該薬剤は、Ｂ１ａ細胞上のＣＤ３６に結合する。
【０１２９】
いくつかの実施形態では、該薬剤は、該ＬＮＰの投与の前、またはそれと同時に当該対象に投与される。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、複数回投与で当該対象に投与される。いくつかの実施形態では、２回の連続した投与の間隔は、２週間未満である。いくつかの実施形態では、２回の連続した投与の間隔は、１週間未満である。いくつかの実施形態では、該薬物反応は、ＬＮＰ関連の毒性である。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰ関連の毒性は、凝血障害、播種性血管内凝固症候群（ＤＩＣ）、血管内血栓、活性化関連仮性アレルギー（ＣＡＲＰＡ）、急性期反応（ＡＰＲ）、またはそれらの組合せを含む。
【０１３０】
いくつかの実施形態では、該薬剤は、該ＬＮＰの投与の前、後、またはそれと同時に当該対象に投与される。いくつかの実施形態では、該薬剤は、該ＬＮＰ関連の毒性と関連した少なくとも１つの症状を軽減する。いくつかの実施形態では、該薬剤は、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）または抗ヒスタミン剤である。いくつかの実施形態では、該ＮＳＡＩＤは、ＣＯＸ−２及び／または５−ＬＯＸ阻害剤である。いくつかの実施形態では、該抗ヒスタミン剤は、ヒスタミン受容体遮断薬である。いくつかの実施形態では、該ヒスタミン受容体遮断薬は、Ｈ１アンタゴニストまたはＨ１逆アゴニストである。いくつかの実施形態では、該Ｈ１アンタゴニストは、ジフェンヒドラミン（ベナドリル）、フェキソフェナジン（アレグラ）、またはロラタジン（クラリチン）であり、該Ｈ１逆アゴニストはセチリジンである。いくつかの実施形態では、該薬剤は、ＣＡＲＰＡまたはＡＲＰを阻害する。いくつかの実施形態では、該薬剤は、古典経路（ＣＰ）を阻害する。いくつかの実施形態では、該薬剤は、第二経路を阻害する。
【０１３１】
いくつかの実施形態では、該薬剤は、血小板活性化を阻害する。いくつかの実施形態では、該薬剤は、血小板凝集阻害剤である。いくつかの実施形態では、該血小板凝集阻害剤は、ＡＤＰ受容体アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、該血小板凝集阻害剤は、アスピリンまたはクロピドグレル（ＰＬＡＶＩＸ（登録商標））である。いくつかの実施形態では、該血小板凝集阻害剤は、アスピリン／プラバスタチン、シロスタゾール、プラスグレル、アスピリン／ジピリダモール、チカグレロル、カングレロル、エリノグレル、ジピリダモール、及びチクロピジンから選択される。いくつかの実施形態では、該薬剤は、ＣＤ３６を阻害する。いくつかの実施形態では、該薬剤は、ＴＬＲ受容体、ＣＤ６２Ｐ、プロパージン、補体系の成分、Ｃ反応性タンパク質、または急性期反応の他のタンパク質を阻害する。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【０１３２】
いくつかの態様では、本発明は、イオン性カチオン性脂質、ＰＥＧ脂質、ステロール、及びヘルパー脂質を含む血中クリアランス促進（ＡＢＣ）非感受性脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）であり、該ヘルパー脂質はホスファチジルコリン（ＰＣ）を含まない。いくつかの例では、該非感受性ＬＮＰは、本明細書に記載の成分から本質的になる。例えば、かかるＬＮＰは、本明細書に記載の成分、及び、任意に、本明細書に記載のＬＮＰの基本的及び新規な特徴に実質的に影響を与えない他の成分を含む。例えば、該さらなる成分は、含まれるとしても、該ＬＮＰの薬物送達機能に実質的に影響を与えない可能性がある（例えば、それらの薬物送達における機能が重要でないようなごく少量で）。
【０１３３】
いくつかの実施形態では、該ヘルパー脂質は、ホスファチジルコリン（ＰＣ）類似体を含む。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、対象に対して、１０日以内の期間に少なくとも２回投与された場合、血中クリアランス促進（ＡＢＣ）の影響を受けない。いくつかの実施形態では、該ＰＣ類似体は、修飾されたＰＣ頭基、修飾されたＰＣコア基、及び／または修飾されたＰＣ脂質尾基を含む。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、ホスファチジルコリンを含むＬＮＰと比較して、Ｂ１ａ刺激活性がないか、または減少している。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、ホスファチジルコリンを含むＬＮＰと比較して、ＣＤ３６と結合しないか、またはＣＤ３６に対する結合が減少している。いくつかの実施形態では、該ＰＣ類似体は、ホスファチジルコリン（ＰＣ）と比較してＣＤ３６と結合しないか、またはＣＤ３６に対する結合が減少している。いくつかの実施形態では、該ＰＣ類似体は、ホスファチジルコリン（ＰＣ）と比較して、ＣＤ３６結合がないか、または減少している。いくつかの実施形態では、該ヘルパー脂質は、オレイン酸またはオレイン酸類似体を含む。
【０１３４】
いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、０．５％（ｗ／ｗ）未満のＰＥＧ化脂質を含む。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、０．２５％未満の該ＰＥＧ化脂質を含む。いくつかの実施形態では、該ＰＥＧ化脂質は、アルキルＰＥＧ化脂質、メトキシＰＥＧ化脂質、ＤＭＧ−ＰＥＧ、ヒドロキシＰＥＧにコンジュゲートされた脂質（ヒドロキシＰＥＧ化脂質）である。
【０１３５】
いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、メトキシＰＥＧ化脂質を含むＬＮＰと比較して、血小板凝集活性が減少している。いくつかの実施形態では、該カチオン性脂質は、ＭＣ３（またはＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）である。
【０１３６】
いくつかの態様では、本発明は、カチオン性脂質、非カチオン性非ＰＣ脂質、０．５％（ｗ／ｗ）未満のＰＥＧ化脂質、及びステロールを含む、またはこれらから本質的になる脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）であり、該ＬＮＰは、１０日以内のインビボでの反復投与の際に血中クリアランス促進に対して非感受性である。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰはさらに、タンパク質または核酸を含む。いくつかの実施形態では、該核酸はＤＮＡである。いくつかの実施形態では、該核酸はＲＮＡである。いくつかの実施形態では、該核酸はｍＲＮＡである。
【０１３７】
いくつかの態様では、本発明は、対象の血液試料を脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）製剤と接触させ、該血液試料の該ＬＮＰ製剤に対する反応性を測定し、治療薬を含むＬＮＰ製剤を、該対象が当該ＬＮＰ製剤に対して反応性を示さないか、または低い反応性を示す場合に、該対象に投与することを含む、対象におけるＡＢＣ効果を低減する方法である。いくつかの実施形態では、該治療薬は、２週間、１週間、またはそれより短い間隔で投与される。
【０１３８】
いくつかの態様では、本発明は、対象に薬剤を送達する方法であり、該対象に対して、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）に製剤化された薬剤を投与することを含み、該対象は、血小板阻害剤を投与される。いくつかの実施形態では、該血小板阻害剤は、ＬＮＰに製剤化された薬剤と同時に該対象に投与される。いくつかの実施形態では、該血小板阻害剤は、ＬＮＰに製剤化された薬剤の１分〜２４時間前に該対象に投与される。いくつかの実施形態では、該血小板阻害剤は、ＬＮＰに製剤化された薬剤の２４〜４８時間前に該対象に投与される。いくつかの実施形態では、本発明はさらに、該対象に対してヒスタミン受容体遮断薬を投与することを含む。いくつかの実施形態では、本発明は、該対象に対して、ＣＯＸ酵素の非特異的阻害剤を投与することを含む。
【０１３９】
いくつかの実施形態では、該薬剤は核酸である。いくつかの実施形態では、該核酸はＲＮＡである。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、ｓｉＲＮＡまたはｍＲＮＡである。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、カチオン性脂質、ＰＥＧを含む。いくつかの実施形態では、該対象は、コルチコステロイドを投与されない。
【０１４０】
いくつかの実施形態では、該血小板阻害剤は、Ｐ２Ｙ１２サブタイプ受容体の阻害剤である。いくつかの実施形態では、該血小板阻害剤はクロピドグレルである。いくつかの実施形態では、該血小板阻害剤はチカグレロルである。いくつかの実施形態では、プラスグレル、チクロピジン、カングレロル、またはエリノグレルである。いくつかの実施形態では、該ヒスタミン受容体遮断薬は、抗ヒスタミン剤である。いくつかの実施形態では、該抗ヒスタミン剤はベナドリルである。いくつかの実施形態では、ＣＯＸ酵素の該非特異的阻害剤は、アスピリンである。いくつかの実施形態では、ＣＯＸ酵素の該非特異的阻害剤は、ＣＯＸ−２阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＣＯＸ酵素の該非特異的阻害剤は、ＣＯＸ−２及び５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯＸ）阻害剤である。
【０１４１】
他の態様では、本発明は、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を介した薬物送達を含む治療計画で治療されている対象において用量制限毒性（ＤＬＴ）を低減する方法であり、これは、治療用核酸を含むＬＮＰを該対象に投与すること、及びＢ細胞を除去する、または標的とする薬剤を該対象に投与することによるものであり、その結果、該治療計画で治療されている該対象においてＤＬＴが低減される。いくつかの実施形態では、該薬剤は、Ｂ１ａ細胞を除去またはこれを標的とする。他の実施形態では、該薬剤はリツキシマブである。さらに他の実施形態では、該薬剤は、該ＬＮＰの投与の前、後、またはそれと同時に該対象に投与される。該ＬＮＰは、該対象に対して複数回投与で投与されてもよい。他の実施形態では、該治療用核酸は、ｍＲＮＡである。
【０１４２】
他の態様では、本発明は、式（Ｖ）：
【化３８】
2019504002.tif 000040
（Ｖ）
の化合物、またはその塩を含むＰＥＧ脂質であり、式中：
Ｒ３は−ＯＲＯであり、
ＲＯは、水素、任意に置換されるアルキル、または酸素保護基であり、
ｒは、１と１００を含めた１〜１００の整数であり、
Ｒ５は、任意に置換されるＣ１０−４０アルキル、任意に置換されるＣ１０−４０アルケニル、または任意に置換されるＣ１０−４０アルキニルであり、任意に、Ｒ５の１つ以上のメチレン基は、任意に置換されるカルボシクリレン、任意に置換されるヘテロシクリレン、任意に置換されるアリーレン、任意に置換されるヘテロアリーレン、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、または−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ−で交換され、
ＲＮの各場合は、独立して、水素、任意に置換されるアルキル、または窒素保護基である。
【０１４３】
いくつかの実施形態では、式（Ｖ）の化合物は、式（Ｖ−ＯＨ）：
【化３９】
2019504002.tif 000041
（Ｖ−ＯＨ）
のもの、またはその塩である。
【０１４４】
他の実施形態では、式（Ｖ）の化合物は、以下の式：
【化４０】
2019504002.tif 000042
のうちの１つのもの、またはその塩である。
【０１４５】
さらに他の実施形態では、式（Ｖ）の化合物は：
【化４１】
2019504002.tif 000043
（Ｃｍｐｄ４０３）、
またはその塩である。
【０１４６】
いくつかの態様では、本発明は、本明細書に記載のＰＥＧ脂質、及び任意にさらに、式（Ｖ）：
【化４２】
2019504002.tif 000044
（Ｖ）
の脂質、またはその塩もしくは異性体を含む脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）であり、式中：
Ｒ１は、Ｃ５−３０アルキル、Ｃ５−２０アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群から選択され、
Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１−１４アルキル、Ｃ２−１４アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ＊ＯＲ”からなる群から選択されるか、または、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合する原子と一緒になってヘテロ環または炭素環を形成し、
Ｒ４は、Ｃ３−６炭素環、−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、−ＣＱ（Ｒ）２、及び未置換のＣ１−６アルキルからなる群から選択され、ここで、Ｑは、炭素環、ヘテロ環、−ＯＲ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＸ２Ｈ、−ＣＸＨ２、−ＣＮ、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｒ８、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（ＯＲ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ９）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＲ、及び−Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、各ｎは、独立して１、２、３、４、及び５から選択され、
各Ｒ５は、独立して、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ６は、独立して、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
Ｍ及びＭ’は、独立して、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｓ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ−Ｓ−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
Ｒ７は、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
Ｒ８は、Ｃ３−６炭素環及びヘテロ環からなる群から選択され、
Ｒ９は、Ｈ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１−６アルキル、−ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ３−６炭素環、及びヘテロ環からなる群から選択され、
各Ｒは、独立して、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ’は、独立して、Ｃ１−１８アルキル、Ｃ２−１８アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ”は、独立して、Ｃ３−１４アルキル及びＣ３−１４アルケニルからなる群から選択され、
各Ｒ＊は、独立して、Ｃ１−１２アルキル及びＣ２−１２アルケニルからなる群から選択され、
各Ｙは、独立して、Ｃ３−６炭素環であり、
各Ｘは、独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群から選択され、
ｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択される。
【０１４７】
これら及び他の実施形態及び態様は、本明細書でより詳細に記載する。
【０１４８】
以下の図面を提供し、これらはグレースケールである。
【図面の簡単な説明】
【０１４９】
【図１】ＰＥ−ＬＮＰ、ＰＥ＋ＬＮＰ、または媒体単独とのインキュベーションの後のＣＤ３＋Ｔ細胞及びＣＤ１９＋Ｂ細胞のフィコエリトリン（ＰＥ）蛍光。このデータは、エキソビボの培養条件下で、Ｔ細胞ではなく脾臓Ｂ細胞によるＬＮＰの取り込みを示す。
【図２】図２Ａ〜２Ｂ：ＰＥ−ＬＮＰ、ＰＥ＋ＬＮＰ、または媒体単独とのインキュベーションの時間の関数としてのＣＤ３＋Ｔ細胞及びＣＤ１９＋Ｂ細胞のフィコエリトリン（ＰＥ）蛍光。このデータは、Ｔ細胞ではなくＢ細胞によるＬＮＰの取り込みが、これらのエキソビボの培養条件下で急速に起こることを示す。
【図３】ＥＧＦＰ  ｍＲＮＡを含むＰＥ＋ＬＮＰとのインキュベーションの時間の関数としてのＣＤ１９＋細胞のＥＧＦＰ蛍光。それらの細胞による大規模なＬＮＰの取り込みにもかかわらず、いずれの時点でもＢ細胞によるＥＧＦＰの発現は認められない。
【図４】図４Ａ〜４Ｂ：ＣＤ−１非脾臓摘出（ＣＤ−１）及び脾臓摘出マウスへのｈＥＰＯ  ｍＲＮＡカーゴを有するＬＮＰの初回、第二回、及び第三回投与（ｈＥＰＯ）ならびに初回及び第二回（ＩｇＭ）投与後のインビボでのｈＥＰＯ濃度及び抗ＰＥＧ  ＩｇＭレベル。
【図５】ＰＥ＋及びＰＥ−ＬＮＰと、２、４、６、及び２４時間インキュベーション後のＣＤ１９＋循環Ｂ細胞におけるＰＥ−ローダミン蛍光。
【図６Ａ】インキュベーション時間の関数としての循環Ｂ細胞によるＬＮＰ取り込み。
【図６Ｂ】インキュベーション時間の関数としての循環Ｂ細胞によるＥＧＦＰ発現。
【図７】ＰＥ−及びＰＥ＋ＬＮＰとのインキュベーション後の脾臓細胞及び循環Ｂ細胞におけるＣＤ８６発現。ＬＮＰを取り込む脾臓細胞及び循環Ｂ細胞は活性化される。
【図８】ＰＥ＋ＬＮＰを取り込む、または取り込まない脾臓細胞及び循環Ｂ細胞におけるＣＤ８６発現。ＣＤ８６発現の増加からも明らかなように、ＬＮＰを取り込む脾臓細胞及び循環Ｂ細胞は活性化される。
【図９】様々なインキュベーション時間における脾臓Ｂ細胞によるＬＮＰ取り込みの関数としてのＣＤ８６発現。
【図１０】ＰＥ＋及びＰＥ−ＬＮＰとともに２４時間インキュベートしたＢ細胞によるＩＬ−６及びＴＮＦ−アルファの分泌。
【図１１】図１１Ａ〜１１Ｂ：２４時間でのＣＤ１９＋Ｂ細胞による空のＰＥ＋ＬＮＰ取り込み（図１１Ａ）、ならびに４及び２４時間の経時変化（図１１Ｂ）。
【図１２Ａ】空のＰＥ＋ＬＮＰを取り込んだＢ細胞におけるＣＤ８６発現。脾臓Ｂ細胞は、空のＬＮＰによって用量依存的に活性化される。
【図１２Ｂ】空のＰＥ＋ＬＮＰとともにインキュベートされたＢ細胞によるＩＬ−６及びＴＮＦ−アルファの分泌。
【図１３−１】図１３Ａ〜１３Ｄ：野生型（ＷＴ）、ＡｐｏＥ欠損、及びＬＤＬ受容体欠損マウス由来のＢ細胞によるＰＥ＋ＬＮＰ（図１３Ａ）ならびにＰＥ−ＬＮＰ（図１３Ｂ）における取り込み及びサイトカイン分泌。ＣＤ１９＋ＰＥ＋細胞のパーセンテージ（図１３Ｃ）及びｐｇ／ｍｌ単位でのサイトカインレベル（図１３Ｄ）も示す。
【図１３−２】図１３Ａ〜１３Ｄ：野生型（ＷＴ）、ＡｐｏＥ欠損、及びＬＤＬ受容体欠損マウス由来のＢ細胞によるＰＥ＋ＬＮＰ（図１３Ａ）ならびにＰＥ−ＬＮＰ（図１３Ｂ）における取り込み及びサイトカイン分泌。ＣＤ１９＋ＰＥ＋細胞のパーセンテージ（図１３Ｃ）及びｐｇ／ｍｌ単位でのサイトカインレベル（図１３Ｄ）も示す。
【図１３−３】図１３Ａ〜１３Ｄ：野生型（ＷＴ）、ＡｐｏＥ欠損、及びＬＤＬ受容体欠損マウス由来のＢ細胞によるＰＥ＋ＬＮＰ（図１３Ａ）ならびにＰＥ−ＬＮＰ（図１３Ｂ）における取り込み及びサイトカイン分泌。ＣＤ１９＋ＰＥ＋細胞のパーセンテージ（図１３Ｃ）及びｐｇ／ｍｌ単位でのサイトカインレベル（図１３Ｄ）も示す。
【図１４】遊離のＰＥＧまたは抗ＰＥＧ  ＩｇＧとのＢ細胞のプレインキュベーション後のＬＮＰの取り込み。
【図１５】Ｂ細胞による、ＰＥＧもしくはＰＥＧ−ＯＨを含む、またはＰＥＧを含まない（ＰＥＧレス）ＬＮＰの取り込み。
【図１６】Ｂ細胞による、ＰＥＧもしくはＰＥＧ−ＯＨを含む、またはＰＥＧを含まない（ＰＥＧレス）ＬＮＰの取り込み。
【図１７】ＬＮＰ取り込みの関数としての、ＰＥＧレスＬＮＰまたはＰＥＧ−ＯＨ  ＬＮＰとともにインキュベートされたＢ細胞におけるＣＤ８６発現。
【図１８】ＬＮＰのリン脂質含量の関数としてのＬＮＰの取り込み。
【図１９】ＣＤ１９＋Ｂ細胞及びＣＤ５＋Ｂ細胞におけるＬＮＰのリン脂質ならびにＰＥＧ含量の関数としてのＬＮＰの取り込み。
【図２０】リン脂質及びＰＥＧ含量の関数としての、ＣＤ１９＋、ＣＤ１９＋ＣＤ５＋、またはＣＤ１９＋ＣＤ５−Ｂ細胞によるＬＮＰの取り込み。
【図２１】ＤＭＧ−ＰＥＧまたはＰＥＧ−ＯＨを含むＬＮＰ及びＰＥＧレスＬＮＰの投与の１時間後と４時間後の脾臓由来の非従来型Ｔ（ＣＤ３−）ならびにＢ（ＣＤ１９−）細胞におけるＥＧＦＰ発現。
【図２２】図２２Ａ〜２２Ｂ：リン脂質及びＰＥＧ含量の関数としてのインビボにおけるＢ細胞によるＬＮＰの取り込み。
【図２３−１】図２３Ａ〜２３Ｅ：ＤＭＧ−ＰＥＧ（図２３Ａ）もしくはＣｍｐｄ４１８（図２３Ｂ）を含むＬＮＰ、またはＰＥＧレスＬＮＰ（図２３Ｃ）の注入後のＢ細胞におけるＣＤ８６発現レベル。ＣＤ８６発現レベルは、ＬＮＰの注入の１時間後（図２３Ｄ）及び４時間後（図１２Ｅ）で評価した。
【図２３−２】図２３Ａ〜２３Ｅ：ＤＭＧ−ＰＥＧ（図２３Ａ）もしくはＣｍｐｄ４１８（図２３Ｂ）を含むＬＮＰ、またはＰＥＧレスＬＮＰ（図２３Ｃ）の注入後のＢ細胞におけるＣＤ８６発現レベル。ＣＤ８６発現レベルは、ＬＮＰの注入の１時間後（図２３Ｄ）及び４時間後（図１２Ｅ）で評価した。
【図２３−３】図２３Ａ〜２３Ｅ：ＤＭＧ−ＰＥＧ（図２３Ａ）もしくはＣｍｐｄ４１８（図２３Ｂ）を含むＬＮＰ、またはＰＥＧレスＬＮＰ（図２３Ｃ）の注入後のＢ細胞におけるＣＤ８６発現レベル。ＣＤ８６発現レベルは、ＬＮＰの注入の１時間後（図２３Ｄ）及び４時間後（図１２Ｅ）で評価した。
【図２４Ａ】図２４Ａ〜２４Ｂ：ＤＭＧ−ＰＥＧもしくはＰＥＧ  ＯＨを含むＬＮＰまたはＰＥＧレスＬＮＰの注入の１時間後（図２４Ａ）及び４時間後（図２４Ｂ）のインビボにおけるＢ細胞によるＰＥ＋ＬＮＰの取り込み。
【図２４Ｂ】図２４Ａ〜２４Ｂ：ＤＭＧ−ＰＥＧもしくはＰＥＧ  ＯＨを含むＬＮＰまたはＰＥＧレスＬＮＰの注入の１時間後（図２４Ａ）及び４時間後（図２４Ｂ）のインビボにおけるＢ細胞によるＰＥ＋ＬＮＰの取り込み。
【図２５】ＬＮＰのＤＭＧ−ＰＥＧ含量の関数としてのＢ細胞におけるＬＮＰの取り込み（中間含量試験）。
【図２６】ＬＮＰのＤＭＧ−ＰＥＧ含量の関数としてのＬＮＰ取り込み後のＢ細胞活性化。このデータは、４本のバーのセットで示し、各セットの４本のバーは、それぞれ、左から右へ、ＬＮＰ  ＰＥ陰性、ＬＮＰ−ＰＥ陽性低、ＬＮＰ−ＰＥ陽性中、及びＬＮＰ−ＰＥ陽性高を表している。従って、これらのバーは、増加する量のＬＮＰと関連した、またはこれを取り込んだ細胞集団を表す。
【図２７】ＬＮＰのＤＭＧ−ＰＥＧ含量の関数としてのＢ細胞におけるＬＮＰの取り込み（低含量試験）。
【図２８】Ｃｍｐｄ３９５、Ｃｍｐｄ４０４、及びオレイン酸を含むＬＮＰと接触させたＣＤ１９＋Ｂ細胞のＰＥ＋染色。
【図２９】図２９Ａ〜２９Ｂ：活性化Ｂ細胞集団（ＣＤ１９＋ＣＤ８６＋ＣＤ６９＋）の増加を介して測定されたＢ細胞活性化。図２９Ａは、イミキモドなしのＤＭＧ−ＰＥＧのｍｏｌ％の関数としてのＢ細胞活性化を示し、図２９Ｂは、イミキモドありのＤＭＧ−ＰＥＧのｍｏｌ％の関数としてのＢ細胞活性化を示す。
【図３０】図３０Ａ〜３０Ｂ：イミキモドの存在下または非存在下でのＤＭＧ−ＰＥＧのｍｏｌ％の関数としての、エキソビボでのヒトＢ細胞培養における炎症性サイトカイン放出（図３０ＡにＩＦＮ−γ、図３０ＢにＴＮＦ−α）。
【図３１−１】図３１Ａ〜３１Ｄ：ホスファチジルコリン（ＰＣ）及びＤＳＰＣの類似体及び代替物であるヘルパー脂質のリン脂質設計。これらの修飾は、ＬＮＰの会合、例えば受容体による認識、及び／または取り込みを、例えば、ＰＣ頭基（図３１Ａ）、ＰＣコア（図３１Ｂ）の修飾によって、または脂質の平面性の低減（図３１Ｃ）によって低減する。オレイン酸のバリアントも示す（図３１Ｄ）。
【図３１−２】図３１Ａ〜３１Ｄ：ホスファチジルコリン（ＰＣ）及びＤＳＰＣの類似体及び代替物であるヘルパー脂質のリン脂質設計。これらの修飾は、ＬＮＰの会合、例えば受容体による認識、及び／または取り込みを、例えば、ＰＣ頭基（図３１Ａ）、ＰＣコア（図３１Ｂ）の修飾によって、または脂質の平面性の低減（図３１Ｃ）によって低減する。オレイン酸のバリアントも示す（図３１Ｄ）。
【図３２−１】図３２Ａ〜３２Ｃ：短い脂質尾基、クリックリンカー、及びヒドロキシ（ＯＨ）ＰＥＧ末端基を含むＰＥＧ化脂質の例。図３２Ａは、Ｃｍｐｄ３９４、Ｃｍｐｄ３９５、Ｃｍｐｄ３９６、及びＣｍｐｄ３９７を示す。図３２Ｂは、Ｃｍｐｄ３９８及びＣｍｐｄ３９９を示す。図３２Ｃは、Ｃｍｐｄ４００〜４０３を示す。
【図３２−２】図３２Ａ〜３２Ｃ：短い脂質尾基、クリックリンカー、及びヒドロキシ（ＯＨ）ＰＥＧ末端基を含むＰＥＧ化脂質の例。図３２Ａは、Ｃｍｐｄ３９４、Ｃｍｐｄ３９５、Ｃｍｐｄ３９６、及びＣｍｐｄ３９７を示す。図３２Ｂは、Ｃｍｐｄ３９８及びＣｍｐｄ３９９を示す。図３２Ｃは、Ｃｍｐｄ４００〜４０３を示す。
【図３３】第二回投与の実施の９６時間後のフローサイトメトリー（ビーズ）によって測定された抗ＰＥＧまたは抗ＤＳＰＣ  ＩｇＭの反応。ＤＳＰＣまたはＰＥＧに対するＩｇＭの反応は、ビーズが単独またはともに使用される場合で等しく測定される。ＰＥＧ  ＤＭＧ、ＰＥＧ  ＤＳＰＥ、またはＣｍｐｄ４３０  ＬＮＰは抗ＬＮＰ反応を誘導した。抗ＰＥＧ  ＩｇＭ及び抗ＤＳＰＣ  ＩｇＭがともに認められ、このＩｇＭ反応が天然のＩｇＭ反応であることを示唆した。
【図３４】第二回投与の実施の９６時間後のＥＬＩＳＡによって測定された抗ＰＥＧ  ＩｇＭ及びフローサイトメトリー（ビーズ）によって測定された抗ＰＥＧまたは抗ＤＳＰＣ  ＩｇＭ。ＥＬＩＳＡ及びビーズによって測定された抗ＰＥＧ  ＩｇＭは同様であり、有意な差は検出されなかった。
【図３５】時間とＬＮＰ組成の関数としての血小板とのＬＮＰの会合。血小板と会合したＬＮＰのパーセント（フィコエリトリン（ＰＥ）蛍光で示される）を、ＰＢＳ、ＤＭＧ−ＰＥＧを含むＬＮＰ、ＰＥＧ−ＯＨを含むＬＮＰ、及びＰＥＧレスＬＮＰの投与後の３つの時点（１５、６０、及び２４０分）（各時点に関して左から右）で示す。これらの実験は、示した各種時点で対象から採取した精製血小板にて行った。
【図３６】ＬＮＰ組成の関数としての血小板活性化。血小板活性化（血小板活性化マーカーＣＤ６２Ｐ（ＭＦＩ）の発現で示される）を、ＰＢＳ、ＤＭＧ−ＰＥＧ  ＬＮＰ、ＰＥＧ−ＯＨ  ＬＮＰ、及びＰＥＧレスＬＮＰの投与後の３つの時点（１５、６０、及び２４０分）（左から右）で測定した。
【図３７】図３７Ａ〜３７Ｂ：時間とＬＮＰ組成の関数としてのインビボにおける血小板凝集体中のＢ２２０＋Ｂ細胞及びＦ４／８０＋マクロファージの存在。ＰＢＳ、ＤＭＧ−ＰＥＧ  ＬＮＰ、ＰＥＧ−ＯＨ  ＬＮＰ、及びＰＥＧレスＬＮＰの投与後の３つの時点（１５、６０、及び２４０分）（左から右）でのＢ細胞のパーセント（Ｂ２２０＋染色で示される、図３７Ａ）及びマクロファージのパーセント（Ｆ４／８０＋染色で示される、図３７Ｂ）を示す。
【図３８】ＬＮＰとの接触後のＣＤ３１及びＣＤ６２Ｐ活性化マーカーの上方制御によって評価される血小板のインビトロでの活性化。
【図３９−１】図３９Ａ〜３９Ｄ：媒体、ＬＰＳ、及びＤＳＰＣ含有ＬＮＰの投与後１０分（図３９Ａ）、３０分（図３９Ｂ）、６０分（図３９Ｃ）、及び１２０分（図３９Ｄ）での対照（媒体）と比較したＣＤ３１発現の増加によって示される血小板のインビトロでの活性化。
【図３９−２】図３９Ａ〜３９Ｄ：媒体、ＬＰＳ、及びＤＳＰＣ含有ＬＮＰの投与後１０分（図３９Ａ）、３０分（図３９Ｂ）、６０分（図３９Ｃ）、及び１２０分（図３９Ｄ）での対照（媒体）と比較したＣＤ３１発現の増加によって示される血小板のインビトロでの活性化。
【図４０Ａ】図４０Ａ〜４０Ｂ：全血アッセイを用いたインビトロでの血小板凝集。媒体（第１列）、ＬＰＳ（第２列）、及びＤＳＰＣ  ＬＮＰ（第３列）との接触後、凝集細胞を採取し、ＣＤ４１発現（最初の段）、高順方向散乱及び側方散乱（第二の段）、ならびにＦ４／８０（ｙ軸）及びＣＤ１１ｂ（ｘ軸）発現（第三の段）に基づいてゲートした。血小板凝集体は、図４０Ａの第二の段に示す通り、ＣＤ４１＋発現ならびに高ＦＣＳ及び高ＳＳＣに基づいて単離した。媒体、ＬＰＳ、及びＤＳＰＣ  ＬＮＰ（左から右）の投与後にＣＤ１１ｂ＋Ｆ４／８０＋二重陽性である凝集細胞のパーセントを示す（図４０Ｂ）。
【図４０Ｂ】図４０Ａ〜４０Ｂ：全血アッセイを用いたインビトロでの血小板凝集。媒体（第１列）、ＬＰＳ（第２列）、及びＤＳＰＣ  ＬＮＰ（第３列）との接触後、凝集細胞を採取し、ＣＤ４１発現（最初の段）、高順方向散乱及び側方散乱（第二の段）、ならびにＦ４／８０（ｙ軸）及びＣＤ１１ｂ（ｘ軸）発現（第三の段）に基づいてゲートした。血小板凝集体は、図４０Ａの第二の段に示す通り、ＣＤ４１＋発現ならびに高ＦＣＳ及び高ＳＳＣに基づいて単離した。媒体、ＬＰＳ、及びＤＳＰＣ  ＬＮＰ（左から右）の投与後にＣＤ１１ｂ＋Ｆ４／８０＋二重陽性である凝集細胞のパーセントを示す（図４０Ｂ）。
【図４１】図４１Ａ〜４１Ｂ：全血の媒体、ＬＰＳ、及びＤＳＰＣ  ＬＮＰ（左から右）との３０分（図４１Ａ）及び１２０分（図４１Ｂ）のインキュベーション後のＢ細胞（ＣＤ１９＋）及びマクロファージ（ＣＤ１１ｂ＋及びＦ４／８０＋）によるインビトロでの血小板凝集。
【図４２−１】図４２Ａ〜４２Ｃ：全血の媒体、ＬＰＳ、及びＤＳＰＣ  ＬＮＰ（左から右）との３０分及び１２０分のインキュベーション後のマクロファージ（図４２Ａ及び４２Ｂ）及びＢ細胞（図４２Ｃ）によるインビトロでの血小板凝集。
【図４２−２】図４２Ａ〜４２Ｃ：全血の媒体、ＬＰＳ、及びＤＳＰＣ  ＬＮＰ（左から右）との３０分及び１２０分のインキュベーション後のマクロファージ（図４２Ａ及び４２Ｂ）及びＢ細胞（図４２Ｃ）によるインビトロでの血小板凝集。
【図４３】図４３Ａ〜４３Ｂ：血小板の媒体（対照）、ＤＳＰＣ  ＬＮＰ、ＤＯＰＣ  ＬＮＰ、ＤＯＰＧ  ＬＮＰ、ＤＭＧ−ＰＥＧ  ＬＮＰ、及びＬＰＳ（左から右）とのインビトロでの０、１０、３０、及び６０分間のインキュベーション後の、フローサイトメトリーによって測定された血小板活性化マーカーＣＤ３１（図４３Ａ）及びＣＤ６２Ｐ（図４３Ｂ）の上方制御。
【図４４】図４４Ａ〜４４Ｂ：血小板の媒体（対照）、ＤＳＰＣ  ＬＮＰ、ＤＯＰＣ  ＬＮＰ、ＤＯＰＧ  ＬＮＰ、ＤＭＧ−ＰＥＧ  ＬＮＰ、及びＬＰＳとのインビトロでの０、１０、３０、及び６０分間のインキュベーション後の、フローサイトメトリーによって測定された活性化マーカーＣＤ３１（図４４Ａ）及びＣＤ６２Ｐ（図４４Ｂ）の上方制御。
【図４５】ＬＮＰの血小板に対する影響のモデル。ＤＭＧ−ＰＥＧ  ＬＮＰは血小板と物理的に会合し血小板を活性化する。ＤＳＰＣ  ＬＮＰは血小板と物理的に会合しないが、血小板を活性化することができる。どちらのＬＮＰ型も、Ｂ細胞とマクロファージの同時動員で血小板を凝集させる。ＰＥＧ−ＯＨ及びＰＥＧレスＬＮＰは、検出可能に血小板と結合せず、ＤＭＧ−ＰＥＧのＬＮＰ−血小板結合における役割を示唆する。ＤＭＧ−ＰＥＧの非存在下でも、しかしながら、血小板活性化は存在し、血小板とＬＮＰにおけるリン脂質成分、及び特に該ＰＣ頭基の間の相互作用を示唆する。
【図４６Ａ】図４６Ａ〜４６Ｂ：Ｂ１ａ及びＢ１ｂ細胞は脾臓を要する。図４６Ａは、脾臓摘出または疑似手術後のＢ１ａ（上）及びＢ２ｂ（下）細胞レベルを示す。図４６Ｂは、脾臓摘出後のＢ１ａ（上）及びＢ２ｂ（下）抗体レベルを示す。Ｂ１ｂ細胞は、抗体分泌能を失う。
【図４６Ｂ】図４６Ａ〜４６Ｂ：Ｂ１ａ及びＢ１ｂ細胞は脾臓を要する。図４６Ａは、脾臓摘出または疑似手術後のＢ１ａ（上）及びＢ２ｂ（下）細胞レベルを示す。図４６Ｂは、脾臓摘出後のＢ１ａ（上）及びＢ２ｂ（下）抗体レベルを示す。Ｂ１ｂ細胞は、抗体分泌能を失う。
【図４７】無傷の及び脾臓摘出された非ヒト霊長類（ＮＨＰ）における網状赤血球数。
【図４８】脾臓摘出されたＮＨＰでヘマトクリットは維持される。
【図４９−１】図４９Ａ〜４９Ｄ：ＮＨＰの脾臓摘出試験の結果。図４９Ａ〜４９Ｂは、ｈＥＰＯ−ｍＲＮＡ−ＭＣ３（図４９Ａ）及びｈＥＰＯ（図４９Ｂ）からの曲線下面積（ＡＵＣ）の結果を示す。ｈＥＰＯ−ｍＲＮＡ−ＭＣ３（図４９Ｃ）及びｈＥＰＯ（図４９Ｄ）のＣｍａｘ値も示す。
【図４９−２】図４９Ａ〜４９Ｄ：ＮＨＰの脾臓摘出試験の結果。図４９Ａ〜４９Ｂは、ｈＥＰＯ−ｍＲＮＡ−ＭＣ３（図４９Ａ）及びｈＥＰＯ（図４９Ｂ）からの曲線下面積（ＡＵＣ）の結果を示す。ｈＥＰＯ−ｍＲＮＡ−ＭＣ３（図４９Ｃ）及びｈＥＰＯ（図４９Ｄ）のＣｍａｘ値も示す。
【図５０Ａ】図５０Ａ〜５０Ｂ：補体活性化指標であるＣ３ａ（図５０Ａ）及びＣ５ｂ９（図５０Ｂ）のレベルで示される脾臓摘出されたＮＨＰにおける補体活性化の抑制。
【図５０Ｂ】図５０Ａ〜５０Ｂ：補体活性化指標であるＣ３ａ（図５０Ａ）及びＣ５ｂ９（図５０Ｂ）のレベルで示される脾臓摘出されたＮＨＰにおける補体活性化の抑制。
【図５１Ａ】図５１Ａ〜５１Ｂ：脾臓摘出されたＮＨＰにおけるサイトカイン発現。ＩＬ−６（図５１Ａ）及びＩＬ−１０（図５１Ｂ）のレベルを示す。
【図５１Ｂ】図５１Ａ〜５１Ｂ：脾臓摘出されたＮＨＰにおけるサイトカイン発現。ＩＬ−６（図５１Ａ）及びＩＬ−１０（図５１Ｂ）のレベルを示す。
【図５２】図５２Ａ〜５２Ｂ：抗ＰＥＧ  ＩｇＭ（図５２Ａ）及び抗ＰＥＧ  ＩｇＧ（図５２Ｂ）レベルは、脾臓の非存在下で大きく低下する。
【図５３】図５３Ａ〜５３Ｂは、ＬＮＰ製剤の投与後の抗ＰＥＧ  ＩｇＭ産生を示す一連のグラフである。
【図５４】異なる双性イオン基によるリン脂質の置換を示す図である。
【図５５】図５５Ａ〜５５Ｂは、ＣＤ−１マウスにおけるＬＮＰ製剤投与後のＬｕｃ  ｍＲＮＡ発現（図５５Ａ）及びＢ細胞活性化（図５５Ｂ）を示す一連のグラフである。ＣＤ−１マウスに、０．０５ｍｇ／ｋｇのＬｕｃ  ｍＲＮＡを投与し、Ｌｕｃ発現を６時間後に測定した。
【図５６−１】図５６Ａ〜５６Ｅは、Ｌｕｃ発現及びＢ細胞活性化に対するＬＮＰ製剤の影響を示す。図５６Ｂは、ＣＤ８６発現（Ｂ細胞活性化）を示すグラフであり、図５６Ｃは、全光束によって測定されるＬｕｃの発現レベルを示すグラフである。構造を図５６Ａ、５６Ｄ、及び５６Ｅに示す。
【図５６−２】図５６Ａ〜５６Ｅは、Ｌｕｃ発現及びＢ細胞活性化に対するＬＮＰ製剤の影響を示す。図５６Ｂは、ＣＤ８６発現（Ｂ細胞活性化）を示すグラフであり、図５６Ｃは、全光束によって測定されるＬｕｃの発現レベルを示すグラフである。構造を図５６Ａ、５６Ｄ、及び５６Ｅに示す。
【図５６−３】図５６Ａ〜５６Ｅは、Ｌｕｃ発現及びＢ細胞活性化に対するＬＮＰ製剤の影響を示す。図５６Ｂは、ＣＤ８６発現（Ｂ細胞活性化）を示すグラフであり、図５６Ｃは、全光束によって測定されるＬｕｃの発現レベルを示すグラフである。構造を図５６Ａ、５６Ｄ、及び５６Ｅに示す。
【図５６−４】図５６Ａ〜５６Ｅは、Ｌｕｃ発現及びＢ細胞活性化に対するＬＮＰ製剤の影響を示す。図５６Ｂは、ＣＤ８６発現（Ｂ細胞活性化）を示すグラフであり、図５６Ｃは、全光束によって測定されるＬｕｃの発現レベルを示すグラフである。構造を図５６Ａ、５６Ｄ、及び５６Ｅに示す。
【図５７−１】図５７Ａ〜５７Ｃは、Ｂ細胞及び血小板に対する様々なＬＮＰ製剤の影響を示す。図５７Ａは、投与の２４時間後の活性化されたＢ細胞の頻度を示すグラフである。図５７Ｂは、投与後１５分の血小板の凝集を示すグラフである。図５７Ｃは、血小板凝集体における細胞の動員を示すグラフである。
【図５７−２】図５７Ａ〜５７Ｃは、Ｂ細胞及び血小板に対する様々なＬＮＰ製剤の影響を示す。図５７Ａは、投与の２４時間後の活性化されたＢ細胞の頻度を示すグラフである。図５７Ｂは、投与後１５分の血小板の凝集を示すグラフである。図５７Ｃは、血小板凝集体における細胞の動員を示すグラフである。
【図５８】図５８Ａ〜５８Ｂは、ＬＮＰにおけるオレイン酸の陽性効果を示す。図５８Ａは、ＣＤ−１マウスへの送達の６時間後の全光束によって測定されるルシフェラーゼの発現レベルを示す。図５８Ｂは、該投与の２４時間後のマウス脾細胞におけるインビボでのＢ細胞活性化を示す。
【図５９】経時的なｈＥＰＯ濃度を示すグラフである。ＭＣ３とは対照的に、本発明の粒子での発現の差の改善が、化学修飾されたｍＲＮＡによって実証された。
【図６０】図６０Ａ〜６０Ｃは、本発明のＬＮＰ製剤における化学修飾されたｍＲＮＡでの免疫活性化プロファイルの改良を示す一連のグラフである。図６０Ａは、ｈＥＰＯをロードした粒子またはＰＢＳの投与の２４時間後のインビボでのＢ細胞活性化を示すグラフである。図６０Ｂは、ｈＥＰＯをロードした粒子またはＰＢＳの投与の６時間後のＩＬ−６濃度で示すグラフである。図６０Ｃは、ｈＥＰＯをロードした粒子またはＰＢＳの投与の６時間後のＩＰ−１０濃度を示すグラフである。
【図６１】ＰＥ＋ＣＤ１９＋Ｂ細胞パーセントで測定されるＢ細胞によるＬＮＰの取り組みを示すグラフである。
【図６２】Ｂ細胞でのＣＤ８６発現によって測定されるＬＮＰによるＢ細胞活性化を示すグラフである。
【図６３】図６３Ａ〜６３Ｂは、ＬＮＰの第二回投与の９６時間後（図６３Ａ）またはＬＮＰの第三回投与の９６時間後（図６３Ｂ）に産生されたＰＥＧ  ＩｇＭの量を示す一連のグラフである。
【図６４】ｈＥＰＯ  ｍＲＮＡ−ＬＮＰ製剤のＩＶによる１、２、３、及び４週目での週１回の投与の６時間後のｈＥＰＯ発現を示すグラフである。
【図６５】ｈＥＰＯ  ｍＲＮＡ−ＬＮＰ製剤の第三回投与の９６時間後の抗ＰＥＧ  ＩｇＭ産生を示すグラフである。
【図６６】ＣＤ−１マウスにおいてＩＶによって注入された異なる頭基の様々なリン脂質を有するＬＮＰの単回投与試験からのデータを示すグラフである。各リン脂質は、注入後の３つの時点（３、６、及び２４時間）で測定する。リン脂質の構造は、図６９に示す。
【図６７−１】図６７Ａ〜６７Ｃは、エキソビボでのヒトＢ細胞活性化の指標としてのサイトカイン放出を示す一連のグラフである。ＩＦＮ−ガンマ（図６７Ａ）、ＬＩ−６（図６７）、及びＴＮＦ−アルファ（図６７Ｃ）のレベルを測定した。
【図６７−２】図６７Ａ〜６７Ｃは、エキソビボでのヒトＢ細胞活性化の指標としてのサイトカイン放出を示す一連のグラフである。ＩＦＮ−ガンマ（図６７Ａ）、ＬＩ−６（図６７）、及びＴＮＦ−アルファ（図６７Ｃ）のレベルを測定した。
【図６８】様々なＬＮＰ製剤の結果としてのＢ細胞活性化の量を示すグラフである。オレイン酸を含むＬＮＰ製剤は、脾臓Ｂ細胞活性化の低下を示した。
【図６９】リン脂質の構造を示す。
【図７０】新規なＰＣ及びオレイン酸誘導体からなる様々なＬＮＰ製剤に封入されたＬＵＣ  ｍＲＮＡの投与から３、６、及び２４時間後のＬｕｃ発現レベルを示すグラフである。
【図７１】図７１Ａ〜７１Ｂは、ＣＤ１９＋ＰＥ＋細胞のパーセンテージで評価される様々なＬＮＰ製剤とのＢ細胞相互作用／会合を示す一連のグラフである。いくつかのＬＮＰ製剤を図７１Ａに示す。オレイン酸及びＣｍｐｄ１２５を図７１Ｂに示す。
【図７２】ＣＤ８６発現の蛍光強度の中央値によって評価される様々なＬＮＰ製剤でのＢ細胞活性化を示す一連のグラフである。いくつかのＬＮＰ製剤を図７２Ａに示す。オレイン酸及びＣｍｐｄ１２５を図７２Ｂに示す。
【図７３−１】図７３Ａ〜７３Ｃは、投与の３時間後（図７３Ａ）、６時間後（図７３Ｂ）、及び２４時間後（図７３Ｃ）の全光束の測定によって評価される様々なＬＮＰ製剤でのＬｕｃ発現を示す一連のグラフである。
【図７３−２】図７３Ａ〜７３Ｃは、投与の３時間後（図７３Ａ）、６時間後（図７３Ｂ）、及び２４時間後（図７３Ｃ）の全光束の測定によって評価される様々なＬＮＰ製剤でのＬｕｃ発現を示す一連のグラフである。
【図７４】図７４Ａ〜７４Ｂは、ｈＥＰＯ  ｍＲＮＡ−ＬＮＰ製剤の１、２、及び３週目での週１回のＩＶ投与の６時間後のｈＥＰＯ発現（ｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。
【図７５】ＬＮＰ製剤の第二回投与の実施の９６時間後の抗ＰＥＧ  ＩｇＭ産生（ｎｇ／ｍＬ）を示すグラフである。
【図７６】様々なＬＮＰ製剤のＬｕｃ発現を示すグラフである。Ｌｕｃ発現は、全身ＢＬ１画像化を用いた投与の３時間後の全光束（ｐ／ｓ）の測定によって評価した。
【図７７】Ｂ細胞活性化を示すグラフである。ＬＮＰ製剤に対する脾臓ＣＤ１９＋細胞における活性化Ｂ細胞（ＣＤ８６＋ＣＤ６９＋）のパーセンテージを測定した。
【図７８】ＥＰＯ発現を示すグラフである。ＥＰＯ濃度（ｎｇ／ｍＬ）を処理前血、６時間、及び２４時間で、６週間毎週測定した。
【図７９】ｈＥＰＯ  ｍＲＮＡ−ＬＮＰ製剤の週１回のＩＶ投与の前、投与の２時間後、６時間後、１２時間後、２４時間後、４８時間後、及び７２時間後のｈＥＰＯ発現（ｎｇ／ｍＬ）を示すグラフである。
【図８０】ｈＥＰＯ  ｍＲＮＡ−ＬＮＰ製剤の週１回のＩＶ投与後の抗ＰＥＧ  ＩｇＭ（Ｕ／ｍＬ）のレベルを示すグラフである。
【図８１】ｈＥＰＯ  ｍＲＮＡ−ＬＮＰ製剤の週１回のＩＶ投与後の抗ＰＥＧ  ＩｇＧ（Ｕ／ｍＬ）のレベルを示すグラフである。
【図８２】Ｂ細胞活性化を示すグラフである。ＬＮＰ製剤に対するＣＤ１９＋細胞における活性化Ｂ細胞（ＣＤ８６＋ＣＤ２７＋）のパーセンテージを測定した。
【図８３】ＬＮＰ製剤に対して測定された単球活性化を示すグラフである。
【図８４】図８４Ａ〜８４Ｂは、ＥＰＯ発現を示すグラフである。ＥＰＯ濃度（ｎｇ／ｍＬ）を、初回注入及び第５回注入の２時間後、６時間後、１２時間後、２４時間後、及び４８時間後に測定した。
【図８５】図８５Ａ〜８５Ｅは、ＥＰＯ発現を示すグラフである。ＥＰＯ濃度（ｎｇ／ｍＬ）は、各共投薬群について、１日目及び２９日目の２時間、６時間、１２時間、２４時間、及び４８時間に測定した。
【図８６】図８６Ａ〜８６Ｃは、免疫細胞集団を示すグラフである。−７日、初回注入の２４時間後、及び第５回注入の２４時間後の各共投薬群についてのＰＢＭＣ中のＢ細胞（図８６Ａ）、Ｂ１ａ細胞（図８６Ｂ）、及び単球（図８６Ｃ）のパーセンテージを示す。
【図８７】Ｂ細胞活性化を示すグラフである。循環Ｂ細胞中の活性化Ｂ細胞のパーセンテージを、−７日、初回注入の２４時間後、及び第５回注入の２４時間後の各共投薬群について測定した。
【図８８】単球活性化を示すグラフである。循環ＰＢＭＣ中の活性化単球／マクロファージのパーセンテージを、−７日、初回注入の２４時間後、及び第５回注入の２４時間後の各共投薬群について測定した。
【図８９】図８９Ａ〜８９Ｂは、抗ＰＥＧ反応を示すグラフである。抗ＰＥＧ  ＩｇＭレベル（Ｕ／ｍＬ）（図８９Ａ）及び抗ＰＥＧ  ＩｇＧレベル（Ｕ／ｍＬ）（図８９Ｂ）を、ベースライン、初回注入後９日目、及び第５回注入後３４日目の各共投薬群について測定した。
【図９０】図９０Ａ〜９０Ｂは、図７８の群のうちの２群、すなわち、Ｃ５７Ｂｌ６Ｊ（図９０Ａ）及びｓＩｇＭ−／−（図９０Ｂ）における抗ＰＥＧ  ＩｇＭレベル（Ｕ／ｍＬ）及びＥＰＯレベル（ｎｇ／ｍＬ）を示す２つのグラフである。図９０Ａでは、抗ＰＥＧ  ＩｇＭレベルを、ライトグレーの丸でグラフにし、図９０Ｂでは、それらを黒丸で表す。ＥＰＯ濃度は、黒丸（図９０Ａ）及び黒四角（図９０Ｂ）で示す。
【図９１Ａ】図９１Ａ〜９１Ｂ：ＮＨＰのＡＢＣに対する共投薬の影響。共投薬は、ＮＨＰにおいてサイトカイン（ＩＬ−６）産生を軽減し（図９１Ａ）、ジレニアとの共投薬は、抗ＰＥＧ  ＩｇＭ産生を低減し、ＡＢＣの低下と一致する（図９１Ｂ）。
【図９１Ｂ】図９１Ａ〜９１Ｂ：ＮＨＰのＡＢＣに対する共投薬の影響。共投薬は、ＮＨＰにおいてサイトカイン（ＩＬ−６）産生を軽減し（図９１Ａ）、ジレニアとの共投薬は、抗ＰＥＧ  ＩｇＭ産生を低減し、ＡＢＣの低下と一致する（図９１Ｂ）。
【図９２】Ｂ細胞は、ＤＳＰＣ  ＬＮＰの存在下で増殖する。脾細胞をＣＦＳＥで染色し、洗浄後、ＩＬ−６、抗ＢＣＲ、ＤＯＰＣリポソーム、ｍＲＮＡを含むＤＳＰＣ  ＬＮＰ、ｓｉＲＮＡを含むＤＳＰＣ  ＬＮＰ、または空のＬＮＰとともに３７℃で４日間インキュベートした。４日目、これらの細胞を採取し、洗浄し、表面マーカー、（ＣＤ１９及びＣＤ３）について染色し、その後、それらをＢＤＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーターにて測定し、ＭｏｄＦｉｔ４．１ソフトウェアで分析した。
【図９３】ＤＳＰＣ  ＬＮＰは、Ｂ細胞におけるカルシウム放出を誘導する。脾細胞をカルシウムセンサー色素ｅＦｌｕｏｒ（登録商標）５１４、ＣＤ１９、及びＣＤ３で染色した。洗浄後、カルシウムのベースラインをＢＤＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーターにて３０秒間取得した。直後に、これらの細胞をｍＲＮＡを含むＤＳＰＣ  ＬＮＰ、ＤＯＰＣリポソーム、オレイン酸ＬＮＰ、または抗ＢＣＲとともにインキュベートし、カルシウムシグナルを３６０秒間取得した。その後、細胞刺激カクテルをこれらの細胞に加え、シグナルをさらに３０秒間取得した。この分析は、ＭｏｄＦｉｔ４．１ソフトウェアを用いて行った。
【発明を実施するための形態】
【０１５０】
詳細な説明
本開示は、ＡＢＣの影響を受けない、及び／または毒性が低い脂質含有化合物及び組成物、ならびに、ＡＢＣ及びＬＮＰが誘導する毒性（例えば、凝血障害、播種性血管内凝固症候群、血管内血栓、ＣＡＲＰＡ、ＡＰＲ、またはそれらの組合せ）を含めたＬＮＰ関連の薬物反応を促進することなく、対象に対してＬＮＰを送達する方法を提供する。
【０１５１】
脂質含有化合物及び組成物は、１つ以上の脂質を含む、またはこれにコンジュゲートされた化合物及び組成物である。これらの薬剤は、本明細書では、脂質コンジュゲート薬剤または脂質付加薬剤と呼ばれる場合がある。代替的に、かかる脂質は、予防用、治療用、及び診断用薬剤等の薬剤を封入してもよい。これらの薬剤は、本明細書では、脂質封入薬剤または脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）封入薬剤と呼ばれる場合がある。
【０１５２】
従って、本開示は、インビボ投与に際してＡＢＣ及び毒性を低減または除去するための改良された化合物及び組成物を提供すると理解されたい。簡潔にするため、本開示はしかしながら、場合によっては、脂質ナノ粒子もしくはＬＮＰ等の組成物または製剤を指す場合がある。これは、例示的な目的を意図し、本明細書に提供する様々な開示は、明示的に別段の定めのない限り、脂質コンジュゲート化合物等の個々の化合物に等しく適用されると理解されたい。
【０１５３】
血中クリアランス促進
本発明は、反復投与される活性薬剤、例えば、生物活性物質に対するＡＢＣの影響を低減するための化合物、組成物、及びその使用方法を提供する。容易に明らかになるように、投与される活性薬剤に対するＡＢＣの影響を低減または完全に除去することは、その半減期を効果的に延長し、ひいてはその有効性を高める。
【０１５４】
いくつかの実施形態では、ＡＢＣを低減するという表現は、陽性参照対照であるＡＢＣを誘導するＬＮＰ、例えば、ＭＣ３  ＬＮＰと比較した、ＡＢＣのあらゆる低下を指す。ＡＢＣを誘導するＬＮＰは、所定の期間内の第二回または後続の投与時、活性薬剤の血中濃度の低下を引き起こす。従って、ＡＢＣの低下とは、標準的なＬＮＰと比較して、第二回または後続の薬剤投与時の血中薬剤のクリアランスがより低いことを指す。該低下は、例えば、少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または１００％であり得る。いくつかの実施形態では、該低下は、１０〜１００％、１０〜５０％、２０〜１００％、２０〜５０％、３０〜１００％、３０〜５０％、４０％〜１００％、４０〜８０％、５０〜９０％、または５０〜１００％である。代替的に、ＡＢＣの低下は、第二回もしくは後続の投与後の血中薬剤の少なくとも検出可能な濃度、または、標準的なＬＮＰの投与後の血中薬剤と比較して、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍の血中薬剤増加を特徴とし得る。いくつかの実施形態では、該低下は、２〜１００倍、２〜５０倍、３〜１００倍、３〜５０倍、３〜２０倍、４〜１００倍、４〜５０倍、４〜４０倍、４〜３０倍、４〜２５倍、４〜２０倍、４〜１５倍、４〜１０倍、４〜５倍、５〜１００倍、５〜５０倍、５〜４０倍、５〜３０倍、５〜２５倍、５〜２０倍、５〜１５倍、５〜１０倍、６〜１００倍、６〜５０倍、６〜４０倍、６〜３０倍、６〜２５倍、６〜２０倍、６〜１５倍、６〜１０倍、８〜１００倍、８〜５０倍、８〜４０倍、８〜３０倍、８〜２５倍、８〜２０倍、８〜１５倍、８〜１０倍、１０〜１００倍、１０〜５０倍、１０〜４０倍、１０〜３０倍、１０〜２５倍、１０〜２０倍、１０〜１５倍、２０〜１００倍、２０〜５０倍、２０〜４０倍、２０〜３０倍、または２０〜２５倍である。
【０１５５】
本開示は、脂質含有化合物及び組成物を提供し、これらは、クリアランスに対する感受性が低く、ひいてはインビボ半減期が長い。これは、特に、該組成物が、長期投与等の反復を目的とした場合であり、さらにいっそう具体的には、かかる反復投与が数日から数週間以内に行われる場合である。
【０１５６】
重要なことには、これらの組成物は、観察された血中クリアランス促進（ＡＢＣ）現象の影響を受けにくいか、または該現象を完全に回避する。ＡＢＣは、ある特定の体外から投与された薬剤が、第二回及び後続の投与時に血中から急速に除去される現象である。この現象は、一部には、脂質付加薬剤、リポソームまたは他の脂質系送達媒体、及び脂質封入薬剤が挙げられるがこれらに限定されない様々な脂質含有組成物に認められている。これまで、ＡＢＣの原理はほとんど解明されておらず、いくつかの場合には、液性免疫応答に起因し、それに応じて、特に臨床の場でインビボでのその影響を制限するための方法は、依然として分かりにくい。
【０１５７】
本開示は、ＡＢＣに対して、仮に感受性であったとしても、低感受性である化合物及び組成物を提供する。いくつかの重要な態様では、かかる化合物及び組成物は、脂質含有化合物または組成物である。本開示の脂質含有化合物または組成物は、意外にも、第二回及び後続のインビボ投与時にＡＢＣを経験しない。ＡＢＣに対するこの耐性は、これらの化合物及び組成物を、数日から１〜２週間等の短期間以内の反復使用を含め、特にインビボでの反復使用に好適にする。この向上した安定性及び／または半減期は、一部には、これら組成物がＢ１ａ及び／またはＢ１ｂ細胞及び／または従来のＢ細胞、ｐＤＣ、及び／または血小板を活性化できないことに起因する。
【０１５８】
本開示は、従って、血中クリアランス促進（ＡＢＣ）の発現機序の解明を提供する。本明細書に提供する本開示及び本発明によれば、少なくとも脂質及び脂質ナノ粒子に関連するＡＢＣ現象は、Ｂ１ａ及び／またはＢ１ｂ細胞、ｐＤＣ、及び／または血小板に関与する自然免疫応答を少なくとも一部介する。Ｂ１ａ細胞は、通常、自然抗体を循環ＩｇＭの形態で分泌することに関与している。このＩｇＭは、多反応性であり、これは、それがそれぞれに対して比較的低親和性であるにもかかわらず、様々な抗原に結合することができることを意味する。
【０１５９】
本発明によれば、インビボ投与されたいくつかの脂質付加薬剤または脂質含有製剤、例えば、脂質ナノ粒子は、ＡＢＣを引き起こし、その影響を受けることが分かっている。本発明によれば、該ＬＮＰの初回投与の実施に際して、自然免疫応答の生成に関与する１つ以上の細胞（本明細書ではセンサーと呼ばれる）がかかる薬剤に結合し、活性化され、その後、ＡＢＣ及び毒性を促進する免疫性因子（本明細書ではエフェクターと呼ばれる）のカスケードを開始する。例えば、Ｂ１ａ及びＢ１ｂ細胞は、ＬＮＰに結合し、活性化し（単独でまたは他のｐＤＣ等のセンサー及び／またはＩＬ６等のエフェクターの存在下）、該ＬＮＰに結合する天然のＩｇＭを分泌し得る。当該対象に予め存在する天然のＩｇＭもまた、該ＬＮＰを認識してこれに結合し、それにより、補体結合を引き起こす。初回投与の実施後、天然のＩｇＭの産生は、該ＬＮＰの投与後１〜２時間以内に始まる。通常約２〜３週間で、天然のＩｇＭは、ＩｇＭの自然の半減期によって系から除去される。天然のＩｇＧは、該ＬＮＰの投与のおよそ９６時間後から産生される。該薬剤は、ナイーブの設定で投与された場合、Ｂ１ａ細胞もしくはＢ１ｂ細胞または天然のＩｇＧの活性化後に産生された天然のＩｇＭによって比較的邪魔されることなくその生物学的効果を発揮することができる。該天然のＩｇＭ及び天然のＩｇＧは、非特異的であり、それ故、抗ＰＥＧ  ＩｇＭ及び抗ＰＥＧ  ＩｇＧとは異なる。
【０１６０】
出願人は、機序によって拘束されないものの、提案されるのは、ＬＮＰは、以下の機序を介してＡＢＣ及び／または毒性を引き起こすということである。ＬＮＰが対象に投与されると、該ＬＮＰは血液によって脾臓まで迅速に輸送されると考えられている。該ＬＮＰは、血中及び／または脾臓で免疫細胞と出会う可能性がある。血中及び／または脾臓内で該ＬＮＰの存在に反応して、迅速な自然免疫応答が引き起こされる。出願人は、本明細書において、ＬＮＰの投与から数時間以内に、いくつかの免疫センサーが該ＬＮＰの存在に対して反応することを示している。これらのセンサーとしては、免疫応答の生成に関与する免疫細胞、例えば、Ｂ細胞、ｐＤＣ、及び血小板が挙げられるがこれらに限定されない。該センサーは、脾臓、例えば、脾臓の辺縁帯及び／または血中に存在し得る。該ＬＮＰは、１つ以上のセンサーと物理的に相互作用する場合があり、これらは他のセンサーと相互作用し得る。かかる場合には、該ＬＮＰは、該センサーと直接または間接的に相互作用している。該センサーは、該ＬＮＰの認識に応じて互いに直接相互作用し得る。例えば、多くのセンサーは脾臓にあり、互いに容易に相互作用することができる。代替的に、該センサーの１つ以上は、血中のＬＮＰと反応し、活性化する場合がある。活性化されたセンサーは、その後、他のセンサーと直接相互作用する場合も、間接的な場合もある（例えば、サイトカイン、例えば、ＩＬ６等のメッセンジャーの刺激または産生を介して）。
【０１６１】
いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、以下のセンサーの各々と直接相互作用し、これを活性化し得る：ｐＤＣ、Ｂ１ａ細胞、Ｂ１ｂ細胞、及び血小板。これらの細胞は、その後互いに直接または間接的に相互作用し、最終的にＬＮＰの反復投与に関連するＡＢＣ及び／または毒性につながるエフェクターの産生を開始し得る。例えば、出願人は、ＬＮＰ投与は、ｐＤＣ活性化、血小板凝集及び活性化、ならびにＢ細胞活性化につながることを示している。ＬＮＰに反応して、血小板は同様に凝集し、Ｂ細胞とともに活性化され、凝集する。ｐＤＣ細胞は活性化される。ＬＮＰは、比較的迅速に血小板及びＢ細胞の表面と相互作用することが見出されている。ＬＮＰに反応したこれらのセンサーのいずれか１つまたは組合せの活性化の遮断は、通常生じる免疫応答を抑制するのに有用である。この免疫応答の抑制は、ＡＢＣ及び／または毒性の回避につながる。
【０１６２】
一度活性化されたセンサーは、エフェクターを産生する。本明細書で使用されるエフェクターは、Ｂ細胞等の免疫細胞が産生する免疫分子である。エフェクターとしては、免疫グロブリン、例えば、天然のＩｇＭ及び天然のＩｇＧならびにＩＬ６等のサイトカインが挙げられるがこれらに限定されない。Ｂ１ａ及びＢ１ｂ細胞は、ＬＮＰの投与後２〜６時間以内に天然のＩｇＭの産生を刺激する。天然のＩｇＧは、９６時間以内に検出することができる。ＩＬ６濃度は、数時間以内に増加する。該天然のＩｇＭ及びＩｇＧは、数日から数週間、体内を循環する。この間に、該循環エフェクターは、新たに投与されたＬＮＰと相互作用することができ、これらのＬＮＰの体内のクリアランスを引き起こす。例えば、エフェクターは、ＬＮＰを認識しこれに結合し得る。該エフェクターのＦｃ領域は、マクロファージによって認識される可能性があり、マクロファージによる、該加飾されたＬＮＰの取り込みを引き起こし得る。該マクロファージは、その後脾臓に輸送される。免疫センサーによるエフェクターの産生は、一過性の応答であり、これは、ＡＢＣに見られるタイミングと相関する。
【０１６３】
投薬量が第二回または後続の投薬量の場合、及び係る第二回または後続の投与が予め誘導された天然のＩｇＭ及び／またはＩｇＧが系から除去される前に実施された場合（例えば、２〜３の猶予時間前）、かかる第二回または後続の投与は、補体第二経路活性化を引き起こし、それ自体迅速に除去される循環する天然のＩｇＭ及び／または天然のＩｇＧまたはＦｃによって標的とされる。エフェクターが体内から除去された後、または数を減らされた後にＬＮＰが投与される場合、ＡＢＣは観察されない。
【０１６４】
従って、本発明の態様によれば、ＬＮＰと１つ以上のセンサーとの間の相互作用を阻害すること、ＬＮＰによる（直接または間接的な）１つ以上のセンサーの活性化を阻害すること、１つ以上のエフェクターの産生を阻害すること、及び／または１つ以上のエフェクターの活性化を阻害することは有用である。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、該ＬＮＰとセンサーの相互作用を制限または遮断するように設計される。例えば、該ＬＮＰは、変更されたＰＣ及び／またはＰＥＧを有してセンサーとの相互作用を防いでもよい。代替的に、またはさらに、ＬＮＰが誘導する免疫応答を阻害する薬剤を用いてこれらの効果の任意の１つ以上を達成してもよい。
【０１６５】
通常のＢ細胞もまたＡＢＣにかかわることも確定している。具体的には、薬剤の初回投与時、本明細書ではＣＤ１９（＋）と呼ばれる通常のＢ細胞は、該薬剤に結合し、これと反応する。しかしながら、Ｂ１ａ及びＢ１ｂ細胞と異なり、通常のＢ細胞は、最初にＩｇＭ反応を始める（該ＬＮＰの投与のおよそ９６時間後から）ことができ、その後ＩｇＧ反応（該ＬＮＰの投与のおよそ１４日後から）が記憶反応と同時に起こる。従って、通常のＢ細胞は、投与された薬剤と反応し、ＩｇＭ（及び最終的にはＩｇＧ）に寄与し、これがＡＢＣを媒介する。該ＩｇＭ及びＩｇＧは、通常、抗ＰＥＧ  ＩｇＭ及び抗ＰＥＧ  ＩｇＧである。
【０１６６】
いくつかの例では、大部分のＡＢＣ反応は、Ｂ１ａ細胞及びＢ１ａ細胞が媒介する免疫応答を介して媒介されることが企図される。さらに、いくつかの例では、該ＡＢＣ反応は、ＩｇＭ及びＩｇＧの両方によって媒介され、通常のＢ細胞及びＢ１ａ細胞の両方がかかる作用を媒介することが企図される。さらに他の例では、該ＡＢＣ反応は、天然のＩｇＭ分子によって媒介され、そのうちのいくつかは、活性化されたＢ１ａ細胞が産生し得る天然のＩｇＭに結合することができる。該天然のＩｇＭは、ＬＮＰの１つ以上の成分に結合する場合があり、例えば、ＬＮＰのリン脂質成分に結合し（例えば、該リン脂質のＰＣ部分に結合し）、及び／または該ＬＮＰのＰＥＧ脂質成分に結合する（例えば、ＰＥＧ−ＤＭＧに結合、特に、ＰＥＧ−ＤＭＧのＰＥＧ部分に結合する）。Ｂ１ａはＣＤ３６を発現し、ホスファチジルコリンはそれに対するリガンドであるため、ＣＤ３６受容体がＢ１ａ細胞の活性化を媒介し、ひいては天然のＩｇＭの産生を媒介する場合があることが企図される。さらに他の例では、該ＡＢＣ反応は、通常のＢ細胞によって主に媒介される。
【０１６７】
本発明によれば、ＡＢＣ現象は、Ｂ１ａ細胞を活性化しない化合物及び組成物（例えば、薬剤、送達媒体、及び製剤）の使用を介して少なくとも一部低減または排除することができることが分かっている。Ｂ１ａ細胞を活性化しない化合物及び組成物は、本明細書では、Ｂ１ａ不活性化合物及び組成物と呼ばれる場合がある。さらに、本発明によれば、該ＡＢＣ現象は、通常のＢ細胞を活性化しない化合物及び組成物の使用を介して少なくとも一部低減または排除することができる。通常のＢ細胞を活性化しない化合物及び組成物は、いくつかの実施形態では、本明細書においてＣＤ１９不活性化合物及び組成物と呼ばれる場合がある。従って、本明細書に提供するいくつかの実施形態では、該化合物及び組成物は、Ｂ１ａ細胞を活性化せず、かつ、それらは通常のＢ細胞を活性化しない。Ｂ１ａ細胞及び通常のＢ細胞を活性化しない化合物ならびに組成物は、いくつかの実施形態では、本明細書において、Ｂ１ａ／ＣＤ１９不活性化合物及び組成物と呼ばれる場合がある。
【０１６８】
これらの発症機序は、これまで理解されておらず、この現象におけるＢ１ａ及びＢ１ｂ細胞の役割ならびにそれらの通常のＢ細胞との相互作用もまた理解されなかった。
【０１６９】
従って、本開示は、ＡＢＣを推進しない化合物及び組成物を提供する。これらはさらに、Ｂ１ａ及び／またはＢ１ｂ細胞、血小板及び／またはｐＤＣ、ならびに任意に通常のＢ細胞も同様に活性化することができないと特徴づけられる場合がある。これらの化合物（例えば、生物活性物質、例えば、予防薬、治療薬、及び診断薬を含めた薬剤、リポソーム、脂質ナノ粒子、及び他の脂質系封入構造を含めた送達媒体等）ならびに組成物（例えば、製剤等）は、特に反復投与を要する用途、特に、短期間（例えば１〜２週間）内に行われる反復投与に好ましい。これは、例えば、該薬剤が、対象に対して一定の接近した間隔で提供される核酸系治療薬である場合である。本明細書に提供する知見は、同様に投与される及び／またはＡＢＣの影響を受けるこれら及び他の薬剤に適用され得る。
【０１７０】
特に重要なのは、脂質含有化合物、脂質含量粒子、及び脂質含有組成物であり、これは、これらがＡＢＣの影響を受けることが知られているからである。かかる脂質含有化合物、粒子、及び組成物は、生物活性物質として、またはかかる薬剤の送達媒体として広く用いられている。従って、かかる薬剤のそれらの有効性を改善する能力は、該薬剤自体またはその送達媒体に対するＡＢＣの影響を低減することによるかにかかわらず多種多様の活性薬剤にとって有益である。
【０１７１】
１つ以上の生物活性物質の反復投与の実施と関連する急性期反応（ＡＲＰ）を刺激も増強もしない組成物もまた本明細書に提供する。
【０１７２】
該組成物は、いくつかの例では、天然のＩｇＭが挙げられるがこれに限定されないＩｇＭに結合しない場合がある。
【０１７３】
該組成物は、いくつかの例では、Ｃ反応性タンパク質等であるがこれに限定されない急性期タンパク質に結合しない場合がある。
【０１７４】
該組成物は、いくつかの例では、ＣＤ５（＋）が媒介する免疫応答を引き起こさない場合がある。本明細書で使用される、ＣＤ５（＋）が媒介する免疫応答とは、Ｂ１ａ及び／またはＢ１ｂ細胞が媒介する免疫応答である。かかる応答は、ＡＢＣ反応、急性期反応、天然のＩｇＭ及び／またはＩｇＧの誘導等を含み得る。
【０１７５】
該組成物は、いくつかの例では、ＣＤ１９（＋）が媒介する免疫応答を引き起こさない場合がある。本明細書で使用される、ＣＤ１９（＋）が媒介する免疫応答とは、通常のＣＤ１９（＋）、ＣＤ５（−）Ｂ細胞が媒介する免疫応答である。かかる応答は、ＩｇＭの誘導、ＩｇＧの誘導、記憶Ｂ細胞の誘導、ＡＢＣ反応、タンパク質がＬＮＰに封入されていてもよい抗タンパク質反応を含めた抗薬物抗体（ＡＤＡ）反応等を含み得る。
【０１７６】
Ｂ１ａ細胞は、自然免疫に関与するＢ細胞のサブセットである。これらの細胞は、自然抗体または自然血清抗体と呼ばれる循環ＩｇＭの起源である。自然ＩｇＭ抗体は、多くの抗原に対して弱い親和性を有することを特徴とし、それ故、複数の抗原に結合するそれらの能力を示す「多特異性」または「多反応性」と呼ばれる。Ｂ１ａ細胞は、ＩｇＧを産生することができない。さらに、それらは、記憶細胞には発展せず、それ故、適応免疫応答には寄与しない。しかしながら、それらは、活性化時、ＩｇＭを分泌することができる。分泌されたＩｇＭは、通常、約２〜３週間で除去され、この時点で、当該免疫系は以前に投与された抗原に対して比較的ナイーブにされる。この期間後（例えば、最初の曝露後約３週間）に同じ抗原が提示された場合、この抗原は迅速に除去されない。しかしながら、重要なことには、該抗原がその期間内（例えば、２週間以内、１週間以内、または数日以内を含めて）に提示された場合、該抗原は、迅速に除去される。連続した投与間のこの遅延は、ある特定の脂質含有治療薬または診断薬を使用に適さないようにしている。
【０１７７】
ヒトでは、Ｂ１ａ細胞は、ＣＤ１９（＋）、ＣＤ２０（＋）、ＣＤ２７（＋）、ＣＤ４３（＋）、ＣＤ７０（−）、及びＣＤ５（＋）である。マウスでは、Ｂ１ａ細胞は、ＣＤ１９（＋）、ＣＤ５（＋）、及びＣＤ４５  Ｂ細胞アイソフォームＢ２２０（＋）である。通常、Ｂ１ａ細胞を他の通常Ｂ細胞から区別するのは、ＣＤ５の発現である。Ｂ１ａ細胞は、高レベルのＣＤ５を発現する場合があり、これに基づいて、低レベルまたは検出不能なレベルのＣＤ５を発現するＢ−１ｂ細胞等の他のＢ−１細胞から区別され得る。ＣＤ５は、汎Ｔ細胞表面糖タンパク質である。Ｂ１ａ細胞はまた、脂肪酸トランスロカーゼとしても知られるＣＤ３６を発現する。ＣＤ３６は、クラスＢスカベンジャー受容体ファミリーのメンバーである。ＣＤ３６は、酸化低密度リポタンパク質、天然リポタンパク質、酸化リン脂質、及び長鎖脂肪酸を含めた多くのリガンドに結合することができる。
【０１７８】
Ｂ１ｂ細胞は、自然免疫に関与するＢ細胞の別のサブセットである。これらの細胞は、循環天然ＩｇＭの別の起源である。ＰＳを含めたいくつかの抗原は、Ｂ１ｂ活性化を介してＴ細胞非依存性免疫を誘導することができる。ＣＤ２７は、通常、抗原活性化に反応してＢ１ｂ細胞上で上方制御される。Ｂ１ａ細胞と同様、Ｂ１ｂ細胞は、通常、特定の身体位置、例えば脾臓及び腹腔にあり、血中では極めて少量である。Ｂ１ｂが分泌する天然のＩｇＭは、通常、約２〜３週間で除去され、この時点で、当該免疫系は以前に投与された抗原に対して比較的ナイーブにされる。この期間後（例えば、最初の曝露後約３週間）に同じ抗原が提示された場合、この抗原は迅速に除去されない。しかしながら、重要なことには、該抗原がその期間内（例えば、２週間以内、１週間以内、または数日以内を含めて）に提示された場合、該抗原は、迅速に除去される。連続した投与間のこの遅延は、ある特定の脂質含有治療薬または診断薬を使用に適さないようにしている。
【０１７９】
いくつかの実施形態では、Ｂ１ａ及び／またはＢ１ｂ細胞の活性化を遮断することが望ましい。Ｂ１ａ及び／またはＢ１ｂ細胞活性化を遮断するための１つの方法は、脂質ナノ粒子のどの成分がＢ細胞の活性化を促進するかを判断し、それらの成分を中和することを含む。本明細書では、少なくともＰＥＧ及びホスファチジルコリン（ＰＣ）がＢ１ａ及びＢ１ｂ細胞の他の細胞との相互作用及び／または活性化に寄与することが見出されている。ＰＥＧは、Ｂ１細胞と血小板の間の凝集を促進する役割を果たす場合があり、これが活性化につながる場合がある。ＰＣ（ＬＮＰのヘルパー脂質）もまた、恐らくＢ細胞表面のＣＤ３６受容体との相互作用を介してＢ１細胞の活性化に関与する。多くの粒子はＰＥＧ脂質代替物、ＰＥＧレス、及び／またはＰＣ置換脂質（例えば、オレイン酸またはその類似体）を有し、設計ならびに試験されている。出願人は、さもなければ反復投与に際してＡＢＣを推進するＬＮＰ内のこれらの成分の１つ以上の置換が、天然のＩｇＭの産生及び／またはＢ細胞の活性化を低減することによってＡＢＣを防止するのに有用であることを立証している。従って、本発明は、Ｂ細胞の誘因の包含を排除する設計の結果として、ＡＢＣを低減するＬＮＰを包含する。
【０１８０】
Ｂ１ａ及び／またはＢ１ｂ細胞の活性化を遮断する別の方法は、ＬＮＰが誘導する免疫応答を阻害する薬剤を使用することを含む。これらのタイプの薬剤は、以下により詳しく述べる。いくつかの実施形態では、これらの薬剤は、Ｂ１ａ／Ｂ１ｂ細胞及びＬＮＰ、もしくは血小板、またはｐＤＣ間の相互作用を遮断する。例えば、該薬剤は、該相互作用を物理的に遮断する抗体または他の結合剤であり得る。この一例は、ＣＤ３６またはＣＤ６に結合する抗体である。該薬剤はまた、活性化後または活性化の前にＢ１ａ／Ｂ１ｂ細胞がシグナル伝達することを防ぐ、またはできないようにする化合物でもよい。例えば、Ｂ細胞のＬＮＰまたは他の免疫細胞との相互作用の結果であるＢ１ａ／Ｂ１ｂシグナル伝達カスケードにおける１つ以上の成分を遮断することが可能である。他の実施形態では、該薬剤は、活性化後にＢ１ａ／Ｂ１ｂ細胞によって産生される１つ以上のエフェクターとして作用する場合がある。これらのエフェクターとしては、例えば、天然のＩｇＭ及びサイトカインが挙げられる。
【０１８１】
本発明の態様によれば、ｐＤＣ細胞の活性化が遮断されると、ＬＮＰに応答したＢ細胞活性化が減少することが実証されている。従って、ＡＢＣ及び／または毒性を回避するため、ｐＤＣ活性化を防ぐことが望ましい場合がある。上述した方法と同様、ｐＤＣ細胞の活性化は、ｐＤＣ及びＬＮＰ及び／またはＢ細胞／血小板間の相互作用を妨げる薬剤によって遮断され得る。代替的に、ｐＤＣに作用してその活性化される能力を遮断するか、またはそのエフェクターに作用する薬剤を該ＬＮＰと一緒に用いてＡＢＣを回避することができる。
【０１８２】
血小板もまた、ＡＢＣ及び毒性において重要な役割を果たす。対象に対するＬＮＰの初回投与の実施後極めて迅速に、血小板は該ＬＮＰと会合し、凝集し、活性化される。いくつかの実施形態では、血小板の凝集及び／または活性化を遮断することが望ましい。血小板の凝集及び／または活性化を遮断するための１つの方法は、脂質ナノ粒子のどの成分が血小板の凝集及び／または活性化を促進するかを判断し、それらの成分を中和することを含む。本明細書では、少なくともＰＥＧが血小板の凝集、活性化、及び／または他の細胞との相互作用に寄与することが見出されている。多くの粒子はＰＥＧ脂質代替物を有し、ＰＥＧレスが設計及び試験されている。出願人は、さもなければ反復投与に際してＡＢＣを推進するＬＮＰ内のこれらの成分の１つ以上の置換が、天然のＩｇＭの産生及び／または血小板の凝集を低減することによってＡＢＣを防止するのに有用であることを立証している。従って、本発明は、血小板の誘因の包含を排除する設計の結果として、ＡＢＣを低減するＬＮＰを包含する。代替的に、血小板に作用して、それが活性化された時点でその活性を遮断するか、またはそのエフェクターに作用する薬剤を該ＬＮＰと一緒に用いてＡＢＣを回避することができる。
【０１８３】
ＡＢＣ活性及び関連する活性の測定
ＬＮＰを含めた本明細書に提供する様々な化合物及び組成物は、インビボ投与に際してＡＢＣ活性を推進しない。これらのＬＮＰは、多くのアッセイのいずれか、例えば、これらに限定されないが、以下に記載するもの、ならびに実施例の節、及びこれら実施例の方法の小節に開示するアッセイのいずれかによって特徴づけられる場合及び／または特定される場合がある。
【０１８４】
いくつかの実施形態では、該方法は、ＡＢＣを推進する免疫応答を引き起こすことなくＬＮＰを投与することを含む。ＡＢＣを推進する免疫応答には、１つ以上のセンサー、例えば、Ｂ１細胞、ｐＤＣ、または血小板、及び１つ以上のエフェクター、例えば、天然のＩｇＭ、天然のＩｇＧ、またはＩＬ６等のサイトカインの活性化が含まれる。従って、ＡＢＣを推進する免疫応答を生じることのないＬＮＰの投与は、最低でも、１つ以上のセンサーの著しい活性化及び１つ以上のエフェクターの著しい産生なしでのＬＮＰの投与を含む。この状況で使用される著しいとは、ＡＢＣを引き起こすＬＮＰの第二回投与に対して予想される血中クリアランスのレベルに関して、第二回投与のすべてまたは一部の血中クリアランス促進の生理学的影響につながる量を指す。例えば、該免疫応答は、第二回投与後に観察されるＡＢＣが、ＡＢＣを引き起こすＬＮＰに対して予想されるよりも低くなるように弱めるべきである。
【０１８５】
Ｂ１ａまたはＢ１ｂ活性化アッセイ
本開示で提供するある特定の組成物は、Ｂ細胞、例えば、Ｂ１ａもしくはＢ１ｂ細胞（ＣＤ１９＋ＣＤ５＋）及び／または通常のＢ細胞（ＣＤ１９＋ＣＤ５−）を活性化しない。Ｂ１ａ細胞、Ｂ１ｂ細胞、または通常のＢ細胞の活性化は、多くの方法で測定することができ、そのうちのいくつかを以下に示す。Ｂ細胞集団は、分画Ｂ細胞集団として提供されても、脾細胞または末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の未分画集団として提供されてもよい。後者の場合、該細胞集団は、最適なＬＮＰとともに一定期間インキュベートされ、その後さらなる分析のために採取されてもよい。代替的に、その上清を採取し分析してもよい。
【０１８６】
活性化マーカーの細胞表面発現の上方制御
Ｂ１ａ細胞、Ｂ１ｂ細胞、または通常のＢ細胞の活性化は、ＣＤ８６等の後期活性化マーカーを含めたＢ細胞活性化マーカーの発現の増加として実証され得る。例示的な非限定的なアッセイでは、未分画Ｂ細胞を脾細胞集団またはＰＢＭＣ集団として提供し、最適なＬＮＰとともに特定の期間インキュベートし、その後、ＣＤ１９等の標準的Ｂ細胞マーカーについて、及びＣＤ８６等の活性化マーカーについて染色し、例えばフローサイトメトリーを用いて分析する。適切な陰性対照は、同じ集団を媒体とともにインキュベートし、その後同じ染色及び視覚化段階を実施することを含む。陰性対照と比較した試験集団におけるＣＤ８６発現の増加は、Ｂ細胞の活性化を示す。
【０１８７】
炎症性サイトカインの放出
Ｂ細胞活性化はまた、サイトカイン放出アッセイでも評価され得る。例えば、活性化は、目的のＬＮＰによる暴露時の、サイトカイン、例えば、ＩＬ−６及び／またはＴＮＦ−アルファの産生及び／または分泌によって評価してもよい。
【０１８８】
かかるアッセイは、当技術分野で周知の通常のサイトカイン分泌アッセイを用いて実施され得る。サイトカイン分泌の増加は、Ｂ細胞活性化を示す。
【０１８９】
Ｂ細胞に対するＬＮＰの結合／会合及び／またはＢ細胞によるＬＮＰの取り込み
Ｂ細胞に対するＬＮＰの会合または結合をまた、目的のＬＮＰを評価し、かかるＬＮＰをさらに特徴づけるために用いてもよい。会合／結合及び／または取り込み／内在化は、検出可能に標識された、例えば、蛍光標識されたＬＮＰを用い、様々なインキュベーション期間の後、Ｂ細胞の中または上でのかかるＬＮＰの位置を追跡することによって評価され得る。
【０１９０】
本発明はさらに、本明細書に提供する組成物が、ＡＢＣの下流メディエーター、例えば、循環ＩｇＭ及び／または急性期反応メディエーター、例えば、急性期タンパク質（例えば、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ））による認識または検出及び任意にこれらによる結合を避けることができる場合があることを企図する。
【０１９１】
ＡＢＣを低減するための使用方法
治療薬等の薬剤を封入し得るＬＮＰを、ＡＢＣを推進することなく対象に対して送達する方法もまた本明細書に提供する。
【０１９２】
いくつかの実施形態では、該方法は、ＡＢＣを推進しない、例えば、当該ＬＮＰに結合する天然のＩｇＭの産生を誘導しない、Ｂ１ａ及び／またはＢ１ｂ細胞を活性化しない、本明細書に記載のＬＮＰのいずれかを投与することを含む。本明細書で使用される、「ＡＢＣを推進しない」ＬＮＰとは、実質的なＡＢＣにつながる免疫応答を誘導しない、または、実質的なＡＢＣをもたらすには十分でない著しく低レベルの免疫応答を誘導するＬＮＰを指す。ＬＮＰに結合する天然のＩｇＭの産生を誘導しないＬＮＰとは、ＬＮＰに対する天然のＩｇＭ結合を誘導しない、または、実質的なＡＢＣをもたらすには十分でない著しく低レベルの天然のＩｇＭ分子を誘導するのうちのいずれかであるＬＮＰを指す。Ｂ１ａ及び／またはＢ１ｂ細胞を活性化しないＬＮＰとは、ＬＮＰに結合する天然のＩｇＭを産生するためのＢ１ａ及び／またはＢ１ｂ細胞の反応を誘導しない、または、実質的なＡＢＣをもたらすには十分でない著しく低レベルのＢ１ａ及び／またはＢ１ｂ反応を誘導するＬＮＰを指す。
【０１９３】
いくつかの実施形態では、活性化しない及び産生を誘導しないという表現は、参照値または条件に対する相対的な減少である。いくつかの実施形態では、該参照値または条件は、標準的なＬＮＰ、例えばＭＣ３  ＬＮＰによるＩｇＭ等の分子の活性化または産生の誘導の量である。いくつかの実施形態では、該相対的な減少は、少なくとも３０％、例えば、少なくとも３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の減少である。他の実施形態では、Ｂ細胞等の細胞を活性化しない及びＩｇＭ等のタンパク質の産生を誘導しないという表現は、当該活性細胞または特定のタンパク質の検出できない量を指す場合がある。
【０１９４】
いくつかの例では、本明細書に記載のＬＮＰは、Ｂ１ａ細胞を活性化するエピトープを含まない、例えば、ＣＤ３６またはＣＤ６を活性化する、またはこれと相互作用するエピトープを含まない場合がある。かかるＬＮＰは、Ｂ１ａ細胞もしくはＣＤ３６を活性化することができるエピトープを含まないか、または実質的なＡＢＣを誘導するために十分高いレベルにＢ１ａもしくはＣＤ３６を活性化するには十分でない著しく低い量でかかるエピトープを含むかのいずれかである。他の実施形態では、本明細書に記載のＬＮＰは、Ｂ１ｂ細胞を活性化するエピトープを含まない場合がある。実質的に含まないというのは、ＬＮＰが、記載された薬剤の９９％未満を含むことが、メアクラシカルｐｎｔ（ｍｅａｃｌａｓｓｉｃａｌ  ｐｎｔ）であるということである。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは記載された薬剤を全く含まない場合がある。いくつかの例では、本明細書に記載のＬＮＰは、少なくとも８Ｃの脂肪酸鎖を少なくとも１つ及び極性部分を少なくとも１つ含み得る本明細書に記載の１つ以上のヘルパー脂質を含んでよい。いくつかの例では、該ヘルパー脂質は、Ｂ１ａ及び／またはＢ１ｂ細胞を活性化しない。他の例では、該ヘルパー脂質は、ＣＤ３６に結合しないか、またはＣＤ３６に対する親和性が低い。代替的に、該ヘルパー脂質は、ホスファチジルコリンのＣＤ３６に対する結合を競合的に阻害し得る。
【０１９５】
代替的に、該ＬＮＰは、ＢまたはＢ１ａ細胞を除去するまたはこれを標的とする薬剤と併用（ともに、それより前または後に投与）されても、これとともに製剤化されてもよい。ＢまたはＢ１ａ細胞を除去するまたはこれを標的とする薬剤は、リツキシマブでよい。リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｂｉｏｇｅｎ）は、免疫系のＢ細胞の表面に主に見られるタンパク質ＣＤ２０に対するモノクローナル抗体である。リツキシマブは、Ｂ細胞表面のＣＤ２０と相互作用し、Ｂ細胞を破壊する。実施例に示すように、リツキシマブとＬＮＰの組合せは、ＬＮＰの後続投与に際して著しくＡＢＣを低減した。
【０１９６】
他の実施形態では、該薬剤は、Ｂ１ａ細胞上のＣＤ６に結合及び／またはこれを阻害し得る。Ｂ１ａ細胞上のＣＤ６に結合及び／またはこれを阻害する例示的な薬剤は、抗ＣＤ６抗体、例えば、アルズマブである。アルズマブ（イトリズマブ、Ｂｉｏｃｏｎ）は、ヒト化ＩｇＧ１モノクローナル抗体であり、ＣＤ６、すなわち、Ｔ細胞の同時刺激、接着、及び成熟に関与する汎Ｔ細胞マーカーを選択的に標的とする。アルズマブはまた、Ｂ１ａ細胞表面のＣＤ６に結合する。
【０１９７】
いくつかの例では、かかる方法は、
（ｉ）対象に対して薬剤の初回投与を実施すること、
（ｉｉ）該対象に対して、該薬剤の第二回または後続の投与を実施することであって、該第二回または後続の投与は、初回または前の投与から２週間以内に実施されるもの、及び
（ｉｉｉ）ステップ（ｉｉ）を１回以上繰り返すことを含む場合があり、該薬剤は、ＡＢＣを推進しないＬＮＰとともに製剤化される。
【０１９８】
対象に対して薬剤を送達する別の方法は、
（ｉ）対象に対して薬剤の初回投与を実施すること、
（ｉｉ）該対象に対して、該薬剤の第二回または後続の投与を実施することであって、該第二回または後続の投与は、該初回または前の投与から２週間以内に実施されるもの、及び
（ｉｉｉ）ステップ（ｉｉ）を１回以上繰り返すことを含み、該第二回及び後続の投与後の該薬剤の半減期は、初回投与後の該薬剤の半減期の少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれ以上である。
【０１９９】
対象に対して薬剤を送達するさらに別の方法は、
（ｉ）対象に対して薬剤の初回投与を実施すること、
（ｉｉ）該対象に対して、該薬剤の第二回または後続の投与を実施することであって、該第二回または後続の投与は、初回または前の投与から２週間以内に実施されるもの、及び
（ｉｉｉ）ステップ（ｉｉ）を１回以上繰り返すことを含み、
該第二回及び後続の投与後の該薬剤の活性または血中濃度は、該初回投与後の該薬剤の活性または血中濃度の少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれ以上である。
【０２００】
第二回または後続の投与は、初回または前の投与から１週間以内、もしくは６日以内、もしくは５日以内、もしくは４日以内、もしくは３日以内、もしくは２日以内、または１日以内に実施され得る。
【０２０１】
該薬剤は、生物活性物質、例えば、診断薬または治療薬でよいが、そのように限定されない。
【０２０２】
薬剤は、２回以上、３回以上、４回以上等投与してもよい。薬剤の投与は、それ故、１回、２回、３、４、５、６、７、８、９、１０回、またはそれ以上反復され得る。該薬剤は、その目的に応じて、慢性的または急性的に投与され得る。
【０２０３】
該方法は、特に当該生物活性物質が治療薬である場合に、該生物活性物質から恩恵を受ける状態を有するまたは有する危険がある対象の治療方法であり得る。代替的に、該方法は、対象の診断方法の場合があり、この場合は、該生物活性物質は診断薬である。
【０２０４】
生物活性物質の第二回及び後続の投与は、該第二回または後続の投与の実施後少なくとも１日、２日、３日、４日、５日、６日、または７日間、初回投与の活性の少なくとも５０％、もしくは初回投与の少なくとも６０％、もしくは初回投与の少なくとも７０％、もしくは初回投与の少なくとも７５％、もしくは初回投与の少なくとも８０％、もしくは初回投与の少なくとも８５％、もしくは初回投与の少なくとも９０％、もしくは初回投与の少なくとも９５％、またはそれ以上の活性を維持し得る。
【０２０５】
該生物活性物質がｍＲＮＡ（治療用ｍＲＮＡまたはワクチン抗原をコードするｍＲＮＡ）の場合、該ｍＲＮＡを封入するＬＮＰのＡＢＣを低減する方法は、初回投与及び／または第二回投与（ならびに後続の投与）に少量のＬＮＰを用いて行うことができる。該少用量とは、０．３ｍｇ／ｋｇ以下、例えば、０．２ｍｇ／ｋｇ、または０．１ｍｇ／ｋｇでよい。いくつかの例では、初回投与、第二回投与、またはその両方は、０．１〜０．３ｍｇ／ｋｇの範囲である。
【０２０６】
本明細書に記載の方法のいずれかにおける初回投与と第二回投与の間隔は、２週間以内、例えば、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１日未満でよい。いくつかの例では、当該対象は、本明細書に記載の方法のいずれかにおいて、１日１回、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、または２１日に１回の投与を実施され得る。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【０２０７】
さらに、対象におけるＬＮＰのＡＢＣの阻害は、ＬＮＰが誘導する免疫応答を阻害する１つ以上の第二の薬剤の使用によって達成することができ、例えば、センサーに対する結合またはセンサーの活性、例えば、天然のＩｇＭの産生、天然のＩｇＧの産生、Ｂ１ａ細胞の活性化、Ｂ１ｂ細胞の活性化、及び／または血小板及びまたは樹状細胞の活性化、または任意のエフェクターの活性もしくは産生を阻害する。該第二の薬剤は、代替的に、ＬＮＰが誘導する免疫応答を阻害する薬剤と呼ばれる。いくつかの例では、該第二の薬剤は、ＬＮＰに結合する天然のＩｇＭの産生を阻害する場合もあれば、かかる天然のＩｇＭを中和する場合もある。他の例では、該第二の薬剤は、Ｂ１ａ細胞の活性化を阻害する場合もあれば、Ｂ１ａ細胞を除去する場合もある。例えば、かかる第二の薬剤は、ＣＤ３６が挙げられるがこれに限定されないＢ１ａ細胞の表面受容体を阻害し得る。代替的に、またはさらに、該第二の薬剤は、ＩｇＭがその標的に結合するのを妨害し得る。他の実施形態では、該第二の薬剤は、ＬＮＰに結合する天然のＩｇＧの産生を阻害する場合もあれば、かかる天然のＩｇＧを中和する場合もあれば、ＩｇＧがその標的に結合するのを妨害する場合もある。他の例では、該第二の薬剤は、Ｂ１ｂ細胞の活性化を阻害する場合もあれば、Ｂ１ｂ細胞を除去する場合もある。
【０２０８】
血小板作用及び毒性
本発明はさらに、ＬＮＰ投与と関連する用量制限毒性の発現機序の解明を一部前提としている。かかる毒性は、凝血障害、急性・慢性にかかわらず、播種性血管内凝固症候群（ＤＩＣ、消費性凝固障害とも呼ばれる）、及び／または血管内血栓を含み得る。いくつかの例では、ＬＮＰに関連する用量制限毒性は、急性期反応（ＡＰＲ）または補体活性化関連仮性アレルギー（ＣＡＲＰＡ）である。
【０２０９】
本明細書で使用される、凝血障害とは、インビボでの凝固（血液凝固）の増加を指す。本開示に報告する知見は、かかる凝固の増加と一致し、発症機序を大いに洞察する。凝固は、多くの異なる要因及び細胞型が関与する過程であり、これまで、ＬＮＰと血小板の間の関係及び相互作用は、この関連で理解されていない。本開示は、かかる相互作用の証拠を提供し、血小板会合の低下、血小板凝集の減少、及び／または血小板凝集の減少を含め、血小板作用が低減されるように修飾された化合物及び組成物も提供する。かかる血小板作用を、好ましくは下方制御する等の調節する能力は、ＬＮＰ投与後の凝血障害の発生及び／または重症度を低減することができる。これは、次に、かかるＬＮＰに関連する毒性を低減し、それにより、ＬＮＰ、及び重要なことには、それを必要とする患者に投与されるそれらのカーゴのより高い用量を可能にする。
【０２１０】
ＣＡＲＰＡは、過敏性反応（ＨＳＲ）という形で現れる急性免疫毒性のクラスであり、これはナノ医薬及び生物学的製剤によって引き起こされる場合がある。アレルギー反応と異なり、ＣＡＲＰＡは、通常、ＩｇＥに関与しないが、病原体を除去する体の能力を高める自然免疫系の一部である補体系の活性化の結果生じる。以下の経路、すなわち、補体古典経路（ＣＰ）、第二経路（ＡＰ）、及びレクチン経路（ＬＰ）の１つ以上がＣＡＲＰＡに関与している可能性がある。Ｓｚｅｂｅｎｉ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６１：１６３−１７３（２０１４）。
【０２１１】
古典経路は、Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、Ｃ１ｓ、またはＣ１ｑｒ２ｓ２を含むＣ１複合体の活性化によって引き起こされる。Ｃ１複合体の活性化は、Ｃ１ｑがＩｇＭまたはＩｇＧの抗原複合体に結合した場合、またはＣ１ｑが病原体の表面に直接結合した場合に生じる。かかる結合は、Ｃ１ｑ分子の構造変化につながり、これがＣ１ｒの活性化につながり、これが次にＣ１ｓを開裂する。Ｃ１ｒ２ｓ２成分はここでＣ４、その後Ｃ２を分割し、Ｃ４ａ、Ｃ４ｂ、Ｃ２ａ、及びＣ２ｂを産生する。Ｃ４ｂ及びＣ２ｂは結合して古典経路Ｃ３コンベルターゼ（Ｃ４ｂ２ｂ複合体）を形成し、これがＣ３のＣ３ａ及びＣ３ｂへの開裂を促進する。Ｃ３ｂはその後、Ｃ３コンベルターゼに結合し、Ｃ５コンベルターゼ（Ｃ４ｂ２ｂ３ｂ複合体）を形成する。第二経路は、自発的なＣ３加水分解の結果連続的に活性化される。Ｐ因子（プロパージン）は、第二経路の正の調節因子である。プロパージンのオリゴマー化でＣ３コンベルターゼは安定化され、これがその後さらに多くのＣ３を開裂することができる。該Ｃ３分子は、表面に結合することができ、より多くのＢ、Ｄ、及びＰ活性を動員することができ、補体活性化の増幅につながる。
【０２１２】
急性期反応（ＡＰＲ）は、感染を予防し、潜在的病原体を除去するための複雑な全身性自然免疫応答である。多くのタンパク質がＡＰＲに関与し、Ｃ反応性タンパク質は、よく特徴づけられたものである。
【０２１３】
本発明によれば、ある特定のＬＮＰは、インビボ投与のほぼ直後に血小板と物理的に会合することができる一方、他のＬＮＰは、血小板と全く会合しないか、バックグラウンドレベルでのみ会合することが見出されている。重要なことには、血小板と会合するこれらのＬＮＰはまた、その後形成される血小板凝集体を外見上安定化する。血小板とある特定のＬＮＰとの物理的な接触は、かかる血小板が凝集を維持する能力または投与後長期間連続して凝集体を形成する能力と相関する。かかる凝集体は、活性化された血小板ならびにマクロファージ及びＢ細胞等の自然免疫細胞を含む。
【０２１４】
血小板凝集は、ＬＮＰ投与の直後に認められ、ＣＤ３１及びＣＤ６２Ｐ等の血小板活性化マーカーの発現の増加からも明らかなように、血小板活性化と同時に、または潜在的にその前に生じると思われる。有意な数の血小板と会合しないが、より強固なＬＮＰ（前述）より低い程度に血小板を活性化することができるＬＮＰもまた、投与後極めて早期、恐らくは血小板活性化前に血小板凝集を引き起こす。従って、インビボで、血小板とのＬＮＰの会合は、血小板の凝集とほぼ同時、恐らくは血小板活性化のピークの前に生じると思われる。
【０２１５】
同様に重要なのは、ＬＮＰのサブセットが、血小板との感知できる物理的会合がなくても血小板を活性化することができるという追加観察である。このサブセットはまた、Ｂ細胞及びマクロファージを含む血小板凝集体を形成することができる。
【０２１６】
ある特定のＬＮＰはまた、血小板（活性化されているかどうかにかかわらず）とマクロファージ及びＢ細胞間の早期相互作用を刺激し、それにより、これら後者の細胞も同様に活性化することも示している。Ｂ細胞及びマクロファージに対するＬＮＰの影響は、それ故、直接及び間接的の両方であるが、最終的にはかかる細胞の活性化の増加につながり得る。
【０２１７】
血小板の活性化は、補体活性化を媒介することができる。従って、ある特定のＬＮＰは、血小板及び続いて補体系の活性化を介してＣＡＲＰＡ及びＡＰＲ等の用量制限毒性を誘導し得ることが企図される。ＬＮＰのある特定の脂質成分、例えば、ホスファチジルコリンは、血小板上のＣＤ３６に結合し、これを活性化する場合があり、これがＴＬＲ２／４／６シグナル伝達を引き起こし、該血小板の凝集及び活性化につながる。活性化された血小板は、Ｃ３ｂ結合タンパク質であり、補体カスケードを始動させることができるＣＤ６２Ｐ（Ｐセレクチン）を発現する。活性化された血小板はまた、サイトカイン（例えば、ＩＬ−６）分泌を含めたさらなる免疫応答につながるマクロファージ及び好中球等の免疫細胞を動員する。さらに、プロパージンが、例えば、ＣＤ６２Ｐを介して活性化された血小板に直接結合することが見出され、Ｃ３ｂまたはＣ３（Ｈ２Ｏ）を動員し、ひいては第二経路を始動させる。Ｓａｇｇｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９０：６４５７−６４６７（２０１３）。
【０２１８】
従って、血小板の活性化及び／または凝集を誘導しない、及び／または補体系（例えば、古典経路及び／または第二経路）の活性化を促進しないＬＮＰの使用で、ＬＮＰ関連の毒性の危険性を低減することができる。かかるＬＮＰは、血小板及び／または補体系の活性化を全く誘導しない可能性がある。代替的に、かかるＬＮＰは、実質的な用量制限毒性をもたらすには十分でない実質的に低レベルの血小板活性化及び／または補体系の活性化を誘導する可能性がある。
【０２１９】
代替的に、またはさらに、初期の血小板活性化／凝集、補体系の初期の活性化、及び／または下流の補体カスケードを古典経路または第二経路のいずれかで遮断する第二の薬剤を用いて、ＬＮＰ関連の毒性を防止または低減することができる。いくつかの例では、かかる第二の薬剤は、血小板の活性化を阻害する場合があり、例えば、ＬＮＰが引き起こすＣＤ３６の活性化を阻害する場合がある。他の例では、該第二の薬剤は、ＣＡＲＰＡまたはＡＲＰを阻害する場合があり、例えば、古典経路及び／または第二経路を阻害する場合がある。かかる第二の薬剤は、補体系の少なくとも１つの成分またはＡＲＰに関与するタンパク質を標的とする場合があり、それにより、当該反応カスケードを遮断する。例えば、該第二の薬剤は、ＴＬＲ受容体（ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、またはＴＬＲ６）のアンタゴニスト、ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ３１、プロパージン、補体系の成分（例えば、Ｃｌｑ、Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、Ｃ５ａ、及びＣ５ｂ）でよい。さらに他の例では、該第二の薬剤は、少なくとも１つのＬＮＰ関連の毒性の症状を軽減することができる薬剤でよい。かかる薬剤としては、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）または抗ヒスタミン剤が挙げられるがこれに限定されず、これは、ヒスタミン受容体遮断薬、例えば、Ｈ１アンタゴニストまたはＨ１逆アゴニストであり得る。
【０２２０】
いくつかの実施形態では、用量制限毒性及び／またはＡＢＣは、ＬＮＰを介した薬物送達を含む治療計画で治療されている対象において、免疫細胞（例えばＢ１ａまたはＢ１ｂ細胞）の表面で発現され得るトロンボスポンジン受容体（例えば、ＣＤ３６）を活性化しないＬＮＰ、または用量制限毒性及び／またはＡＢＣにつながる免疫応答の誘発に関与する他の表面受容体を活性化しないＬＮＰを用いることで低減することができる。かかるＬＮＰは、該トロンボスポンジン受容体を全く活性化しない場合があるか、または、臨床的に有意な用量制限毒性及び／またはＡＢＣを誘導するには十分でない実質的に低レベルのその活性を誘導するのみの可能性がある。代替的に、またはさらに、用量制限毒性及び／またはＡＢＣは、ＬＮＰを介した薬物送達を含む治療計画で治療されている対象において、免疫細胞及び血小板の表面で発現されるトロンボスポンジン受容体（例えば、ＣＤ３６）の活性を阻害する１つ以上の第二の薬剤を用いて低減することができる。該トロンボスポンジン（ＴＳＰ）は、血小板等の細胞の表面で発現される、または該細胞が分泌する多官能タンパク質のファミリーである。該ファミリーは、トロンボスポンジン１〜５からなる。ＴＳＰ−１は、ＣＤ３６の抑制性リガンドである。
【０２２１】
これらの知見に基づき、本開示は、血小板の会合が減少しており、及び／または血小板の活性化が低い及び／または血小板の凝集活性が低いＬＮＰならびにＬＮＰ処方活性薬剤を企図ならびに提供する。かかるＬＮＰの、例えば、活性薬剤の送達媒体としての使用で、凝血障害、例えば、急性または慢性にかかわらず、播種性血管内凝固症候群（ＤＩＣ、消費性凝固障害とも呼ばれる）、及び／または血管内血栓の発症の危険性、ならびにそれらに関連した任意の毒性が低減される。かかる毒性が用量制限毒性である場合、これらのＬＮＰの使用で、より高用量のＬＮＰの投与が可能になり、より重要なことには、かかるＬＮＰが運ぶ活性薬剤カーゴのより高用量の送達が可能になる。
【０２２２】
ＬＮＰの投与後の血小板応答の減少は、さらなる望ましい影響を有し、そのうちのいくつかは相乗的であり得る。ＬＮＰは、投与の直後に補体を活性化することが報告されている。この活性化は、直接的の場合も間接的の場合もある。例えば、活性化された血小板は、補体を活性化することができることが報告されている。従って、血小板の活性化を低減または防止するＬＮＰは、補体の活性化も同様に間接的に低減または防止する。補体の活性化はまた、例えば、補体を介したトロンビン生成による凝固に寄与する可能性がある。トロンビンは、利用可能なフィブリノゲンをフィブリンに変換し、これは次に血小板とともに凝血塊を形成する。活性化された血小板は、その表面にトロンビン受容体を有し、それ故、トロンビンの局所濃度を動員及び／または上げることができ、それにより、フィブリン産生及び最終的には凝血塊生成を高める。本開示は、従って、補体を活性化しない、または、既存のＬＮＰと同じ程度まで補体を活性化しない追加のＬＮＰを企図及び提供する。本明細書に提供するさらに追加のＬＮＰは、血小板を活性化せず、補体を活性化しない。
【０２２３】
同様に、本開示は、血小板に結合するプロパージンを妨害するＬＮＰを企図する。プロパージンは、補体系の第二経路の正の調節因子である。それは、活性化された血小板に結合し、それにより、該活性化された血小板に応答して、及びその近くの第二経路を活性化することが示されている。従って、本明細書に提供するＬＮＰと組み合わせたプロパージン阻害剤の使用を、以下に定義される通り、かかるＬＮＰが血小板を活性化するかしないかにかかわらず、さらに企図する。プロパージン阻害剤は、ＤＮＡ及び硫酸化グルココンジュゲートを含み、その両方がプロパージンによって結合され、活性化された血小板に対するプロパージンの結合を妨害し得る。
【０２２４】
本開示は従って、いくつかの態様では、血小板の会合の減少、及び／または血小板の活性化の低下、及び／または血小板の凝集活性の低下等、血小板効果が低下しているＬＮＰ及びＬＮＰ製剤を企図ならびに提供する。ある特定のＬＮＰは、これらの血小板活性のうちの１つ、２つ、または３つすべてに影響し得る。例えば、いくつかのＬＮＰは、血小板の会合活性が低下しているか、もしくは血小板の凝集活性が低下しているか、または血小板の活性化能が低下している。いくつかのＬＮＰは、血小板の会合活性が低下し、及びまたは血小板の活性化能が低下しており、もしくは血小板の会合活性が低下し、かつ血小板の活性化能が低下しており、または、血小板の凝集活性が低下し、かつ血小板の活性化能が低下している可能性がある。いくつかのＬＮＰは、血小板の会合活性が低下し、血小板の凝集活性が低下し、かつ血小板の活性化能が低下している可能性がある。
【０２２５】
本開示は、いくつかのＬＮＰが、大部分の患者またはすべての患者における投与に際して、それらが上述の血小板活性の１つ以上を下方制御する（または、まず第一に刺激しない）ことを意図して、普遍的なＬＮＰであり得ることを企図する。
【０２２６】
さらに、本開示は、いくつかのＬＮＰが、いくつかの例において、患者特異的であると定義され、ひいては特定され得ることを企図する。すなわち、いくつかのＬＮＰは、すべてではなく一部の患者において、本明細書に記載の通り、血小板応答の下方制御に効果的であり得る。従って、いくつかの例では、いくつかのＬＮＰ及びＬＮＰ製剤は、特定の患者に対して特定される場合があり、その後それらの特定の患者に対してのみ使用され得る。
【０２２７】
いくつかの例では、本明細書に提供する知見は、生物活性物質に直接適用され得る。例えば、脂質であるか、脂質にコンジュゲートされている、または、ＰＥＧ部分に直接または間接的にコンジュゲートされている該生物活性物質は、本明細書に記載の通りに修飾され、該物質が血小板応答またはカスケードを刺激できないようにされる場合がある。
【０２２８】
血小板活性アッセイ
これらの様々な活性は、本明細書に記載の通り、及び／または当技術分野で実施される通りに測定され得る。例えば、血小板活性化は、ＣＤ３１及びＣＤ６２Ｐ等の活性化マーカーの発現の増加によって評価され得る。血小板の凝集は、フローサイトメトリーで評価され得る。同様に、フローサイトメトリーを用いて、かかる凝集体の中のＢ細胞及びマクロファージ等の非血小板型を検出してもよい。ＬＮＰの血小板効果は、インビボで、例えば、動物モデル中で、ならびに例えば、ヒトの血液を用いてインビトロで評価することができると理解されたい。これらのアッセイを用いて、上述の活性の１つ以上を有するＬＮＰをスクリーニング及び／または特定してもよい。
【０２２９】
ＬＮＰを含む化合物及び組成物
本開示は、クリアランスの影響を受けにくく、ひいてはインビボ半減期が長い脂質含有組成物を提供する。これは、特に、該組成物が、長期投与等の反復を目的とした場合、さらにいっそう具体的には、かかる反復投与が数日から数週間以内に行われる場合に重要である。
【０２３０】
重要なことには、これらの組成物は、実際の血中クリアランス促進（ＡＢＣ）現象の影響を受けにくいか、または該現象を完全に回避する。ＡＢＣは、脂質を含む体外から投与された薬剤が、第二回及び後続の投与時に血中から急速に除去される現象である。この現象は、様々な脂質含有組成物に認められており、リポソーム、脂質ナノ粒子、及び脂質封入薬剤が挙げられるがこれらに限定されない。これまで、ＡＢＣの原理はほとんど解明されておらず、結果的に、それを回避するための方法は、依然として分かりにくい。
【０２３１】
本開示の脂質含有組成物は、意外にも、第二回及び後続のインビボ投与時にＡＢＣを経験しないか、またはＡＢＣによる影響が最小限である。ＡＢＣに対するこの耐性は、これらの組成物を、数日または１〜２週間等の短期間以内の反復使用を含め、特にインビボでの反復使用に好適にする。
【０２３２】
ＡＢＣに対するこの耐性は、一部には、これら組成物がＢ１ａ細胞を活性化できないことに起因する。かかる組成物は、従って、これらの組成物がＢ１ａ細胞と混合された場合に、Ｂ１ａ細胞を活性化しないことを意図して、本明細書においてＢ１ａ不活性組成物、または、実質的なＢ１ａを活性化しない組成物と呼ばれる。Ｂ１ａ細胞の活性化は、ＣＤ８６等の活性化マーカーの発現、ならびにサイトカインの発現及び／または分泌の増加が挙げられるがこれらに限定されない多くの方法で測定され得る。これらの組成物は、Ｂ１ａ細胞に結合する場合もしない場合もあり、それらは循環ＩｇＭに結合する場合もしない場合もある。従って、これらの組成物は、循環ＩｇＭによる及び／またはＢ１ａ細胞による検出を回避する場合がある。
【０２３３】
Ｂ１ａ細胞は、自然免疫に関与するＢ細胞のサブセットである。これらの細胞は、自然抗体または自然血清抗体と呼ばれる循環ＩｇＭの起源である。これらのＩｇＭ抗体は、多くの抗原に対して弱い親和性を有することを特徴とし、それ故、複数の抗原に結合するそれらの能力を示す「多特異性」または「多反応性」と呼ばれる。かかるＩｇＭを産生することはできるが、Ｂ１ａ細胞はＩｇＧを産生することができない。さらに、それらは、記憶細胞には発展せず、それ故、適応免疫応答には寄与しない。しかしながら、それらは、活性化時、ＩｇＭを分泌することができる。分泌されたＩｇＭは、通常、約１２日間以内に除去され（血清中のＩｇＭの半減期は約５〜８日である。Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ２，５２−６２，Ｊａｎｕａｒｙ  ２００３）、この時点で、当該免疫系は以前に投与された抗原に対して比較的ナイーブにされる。この期間後（例えば、最初の曝露後約２週間）に同じ抗原が提示された場合、該抗原は迅速に除去されない。しかしながら、重要なことには、該抗原がその期間内（例えば、２週間以内、１週間以内、または数日以内を含めて）に提示された場合、該抗原は、迅速に除去される。連続した投与間のこの遅延は、ある特定の脂質含有治療用組成物または診断用組成物を反復使用に適さないようにしている。
【０２３４】
本明細書に記載の化合物、粒子、及び組成物は、これらの制限を克服し、それにより、様々な脂質含有組成物を有効な治療薬及び診断薬に変換する。本明細書に提供するＢ１ａ脂質組成物は、反復投与に際して血中クリアランス促進を受けず、それ故、対象に対して、活性を失うことなく、短期間内を含め、反復して投与することができる。
【０２３５】
ＡＢＣに対する耐性はまた、一部には、これら組成物がＢ１ｂ細胞、ｐＤＣ、及び／または血小板を活性化できないことに起因する。かかる組成物は、従って、これらの組成物がＢ１ｂ細胞、ｐＤＣ、及び／または血小板と混合された場合に、それぞれ、Ｂ１ｂ細胞、ｐＤＣ、及び／または血小板を活性化しないことを意図して、本明細書においてＢ１ｂ、ｐＤＣ、及び／または血小板不活性組成物、または、実質的なＢ１ｂ、ｐＤＣ、及び／または血小板を活性化しない組成物と呼ばれる。Ｂ１ｂ細胞、ｐＤＣ、及び／または血小板の活性化は、ＣＤ１１ｂ（Ｂ１ｂ細胞用）等の活性化マーカーの発現、ならびにサイトカインの発現及び／または分泌、ならびにＢ細胞を活性化する能力（ｐＤＣ）の増加が挙げられるがこれらに限定されない多くの方法で測定され得る。これらの組成物は、Ｂ１ｂ細胞、ｐＤＣ、及び／または血小板に結合する場合もしない場合もあり、それらは循環ＩｇＭまたはＩｇＧに結合する場合もしない場合もある。従って、これらの組成物は、循環ＩｇＭ、ＩｇＧ、及び／またはＢ１ａ細胞、ｐＤＣ、及び／または血小板による検出を回避する場合がある。
【０２３６】
粒子、例えば、ＬＮＰは、通常、以下の成分の１つ以上を含む：脂質（カチオン性脂質、中性脂質であり得るヘルパー脂質、双性イオン性脂質、アニオン性脂質等を含み得る）、構造脂質、例えば、コレステロールまたはコレステロール類似体、脂肪酸、ポリマー、安定剤、塩、緩衝剤、溶媒等。
【０２３７】
本明細書に提供するＬＮＰのいくつかは、カチオン性脂質、ヘルパー脂質、構造脂質、及び、別の脂質にコンジュゲートされて供給されてもされなくてもよい安定剤を含む。
【０２３８】
該カチオン性脂質は、ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｄ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ、及びＤＯＤＭＡでよいが、これらに限定されない。該カチオン性脂質は、イオン性脂質でよい。
【０２３９】
該構造脂質は、例えば、コレステロール等のステロールでよいが、これに限定されない。
【０２４０】
該ヘルパー脂質は、非カチオン性脂質である。該ヘルパー脂質は、少なくとも８Ｃの脂肪酸鎖を少なくとも１つ及び極性頭基部分を少なくとも１つ含み得る。
【０２４１】
該ＬＮＰのいくつかは、いかなるホスファチジルコリン（ＰＣ）脂質も有さない（すなわち、ホスファチジルコリン（ＰＣ）を含まない）。本明細書に提供するＬＮＰのいくつかは、ＤＳＰＣ等であるがこれに限定されない特定のホスファチジルコリン脂質を有さない。該ＬＮＰのいくつかは、ホスファチジルコリン類似体を含み、かかる類似体は、修飾された頭基（例えば、修飾４級アミン頭基）、修飾されたコア基、及び／または修飾された脂質尾基を含む。かかる類似体は、非ＰＣ双性イオン基である双性イオン基を含んでよい。該ヘルパー脂質は、本明細書に提供する式Ｉ、Ｉ−ａ、Ｉ−ｂ、Ｉ−ｂ−１、Ｉ−ｂ−２、Ｉ−ｂ−３、Ｉ−ｂ−４、Ｉ−ｃ、Ｉ−ｃ−１、Ｉ−ｃ−２、Ｉ−ｃ−３、もしくはＩＩのいずれか１つ、またはそれらの任意の組合せの脂質でよい。
【０２４２】
該ＬＮＰのいくつかは、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）代替物を含むか、または最低限量のＤＳＰＣを含む。ある特定の実施形態では、該ＤＳＰＣ代替物は、リン脂質ではない脂質である。
【０２４３】
ある特定のＬＮＰは、例えば、オレイン酸またはオレイン酸類似体を含めた他のヘルパー非カチオン性脂質を含む。該ヘルパー脂質は、本明細書に提供する式ＩＶの脂質でよい。該オレイン酸は、代替物でもよいし、該ＬＮＰにおける別の脂質に加えてもよい。当業者には理解されるように、オレイン酸の修飾された型または関連する脂肪酸も同様に使用され得る。
【０２４４】
いくつかの例では、該ＬＮＰは、ＰＥＧ化脂質または他の安定剤部分（または安定剤）、例えば、これらに限定されないが、ＸＴＥＮ及びＰＡＳポリペプチド等にコンジュゲートされた脂質を含む。従って、本開示は、ＰＥＧを含まないＬＮＰまたはその製剤を企図及び提供する。ある特定の実施形態では、該ＬＮＰは、ＨＯ−ＰＥＧを含む。他の実施形態では、該ＬＮＰは、ＰＥＧ代替物、例えば、異なるポリマーを含む。
【０２４５】
ＰＥＧが該安定剤として使用される場合、それは、脂質にコンジュゲートされてもよく、それ故、例えば、ＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧまたはＰＥＧ−ＤＭＧとして提供されてもよい。該安定剤は、コンジュゲートされた形で提供されようと未コンジュゲートの形で提供されようと、ＬＮＰの１．５ｍｏｌ％を構成してもよいし、ＬＮＰの０．５ｍｏｌ％未満を構成してもよい。例えば、それは、０．４ｍｏｌ％未満、０．３ｍｏｌ％未満、０．２ｍｏｌ％未満、または０．１ｍｏｌ％未満を構成し得る。
【０２４６】
さらに他の実施形態では、ＬＮＰは、他の成分に対して、０．５％未満のモル比のＰＥＧ脂質を含み得る。従って、ＬＮＰは、少なくとも０．０００１％、少なくとも０．０００５％、少なくとも０．００１％、少なくとも０．００５％、少なくとも０．０１％、少なくとも０．０５％、少なくとも０．１％、少なくとも０．１５％、少なくとも０．２％、少なくとも０．２５％、少なくとも０．３％、少なくとも０．３５％、少なくとも０．４％、少なくとも０．４５％、及び０．５％未満（モルパーセンテージで表される）のＰＥＧ化脂質を含み得る。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【０２４７】
該ＬＮＰは、式ＩＩＩ−ＯＨ、ＩＩＩ−ａ−１、ＩＩＩ−ａ−２、ＩＩＩ−ｂ−１、ＩＩＩＩ−ｂ−２、ＩＩＩ−ｂ−１−ＯＨ、ＩＩＩ−ｂ−２−ＯＨ、Ｖ、Ｖ−ＯＨを含めた式ＩＩＩのＰＥＧ化脂質を含んでよい。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【０２４８】
本明細書に提供するＬＮＰのいくつかは、アルキルＰＥＧ化脂質を含まないか、これが低レベルであることを含め、ＰＥＧ化脂質を含まないか、または低レベルのＰＥＧ化脂質を含み、本明細書ではＰＥＧまたはＰＥＧ化脂質を含まないと見なされ得る。従って、いくつかのＬＮＰは、０．５ｍｏｌ％未満のＰＥＧ化脂質を含む。いくつかの例では、ＰＥＧは、メトキシＰＥＧ等のアルキルＰＥＧでよい。さらに他のＬＮＰは、ヒドロキシＰＥＧ等の非アルキルＰＥＧ及び／またはヒドロキシＰＥＧ化脂質等の非アルキルＰＥＧ化脂質を含む。
【０２４９】
該ＰＥＧ化脂質は、Ｃｍｐｄ４２０、Ｃｍｐｄ３９６、Ｃｍｐｄ３９４、Ｃｍｐｄ３９７、Ｃｍｐｄ３９５、Ｃｍｐｄ４１７、Ｃｍｐｄ４１８、またはＣｍｐｄ４１９でよい。
【０２５０】
いくつかの例では、該ＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％、１０ｍｏｌ％のヘルパー脂質、１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ化脂質、及び３８．５ｍｏｌ％の構造脂質を含み得る。
【０２５１】
いくつかの例では、該ＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％、１０ｍｏｌ％のヘルパー脂質、０．５ｍｏｌ％未満のＰＥＧ化脂質、及び３９．５ｍｏｌ％の構造脂質を含み得る。
【０２５２】
いくつかの実施形態では、該安定剤は、脂質にコンジュゲートされていてもいなくてもよいＸＴＥＮペプチド等の非ＰＥＧ部分である。該ＸＴＥＮペプチドは、その親水性に起因して、ＬＮＰの周りに水和シェルを形成することが可能である。それはさらに、安定剤を欠く（または含まない）ＬＮＰと比較して、当該ＬＮＰの半減期を延長する働きをする。ＰＥＧと異なり、しかしながら、それは生分解性であり、非免疫原性であることが報告されている。該ＸＴＥＮペプチドは、アミノ酸配列
ＭＡＥＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＴＰＧＳＧＴＡＳＳＳＰＧＳＳＴＰＳＧＡＴＧＳＰＧＡＳＰＧＴＳＳＴＧＳ（配列番号１）またはＭＡＥＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＡＳＰＧＴＳＳＴＧＳＰＧＳＳＴＰＳＧＡＴＧＳＰＧＳＳＴＰＳＧＡＴＧＳ（配列番号２）を有し得る。他のＸＴＥＮアミノ酸配列は当技術分野では知られ、例えば、米国特許第９，０６２，２９９号に報告されたものが挙げられる。ＸＴＥＮがコンジュゲートされた脂質の例としては、Ｃｍｐｄ４３１、及びＣｍｐｄ４３２、ならびにＣｍｐｄ４３３が挙げられるがこれらに限定されない。クリックケミストリーを用いてＸＴＥＮペプチドを脂質にコンジュゲートさせてもよい。
【０２５３】
いくつかの実施形態では、該安定剤は、ＰＡＳペプチド等の非ＰＥＧ部分である。ＰＡＳペプチドは、これらだけではないが、主にプロリン、アラニン、及びセリンを含むペプチドである。ＰＥＧ及びＸＴＥＮペプチドと同様、該ＰＡＳペプチドは、ＬＮＰの周りに水和シェルを形成することが可能である。それもまた、安定剤を欠く（または含まない）ＬＮＰと比較して、ＬＮＰの半減期を延長する働きをする。ＸＴＥＮペプチドと異なり、しかしながら、ＰＡＳペプチドは、電荷が中性である傾向があり、それ故、少なくともこの点において、ＰＥＧとより類似している。該ＰＡＳペプチドは、アミノ酸配列
ＳＡＰＳＳＰＳＰＳＡＰＳＳＰＳＰＡＳＰＳＳＡＰＳＳＰＳＰＳＡＰＳＳＰＳＰＡＳＰＳＳＡＰＳＳＰＳＰＳＡＰＳＳＰＳＰＡＳＰＳ（配列番号３）または
ＡＡＳＰＡＡＰＳＡＰＰＡＡＡＳＰＡＡＰＳＡＰＰＡＡＡＳＰＡＡＰＳＡＰＰＡＡＡＳＰＡＡＰＳＡＰＰＡ（配列番号４）を有し得る。他のＰＡＳアミノ酸配列は当技術分野で知られ、例えば、ＷＯ２００８１５５１３４に報告されたものが含まれる。
【０２５４】
ＬＮＰが誘導する免疫応答を阻害する薬剤もまた、標準的なＡＢＣを誘導するＬＮＰとともに、または本発明の修飾されたＬＮＰとともに、本発明の方法において用いてもよい。ＬＮＰが誘導する免疫応答を阻害する薬剤は、センサーの活性化を阻害する、ＬＮＰとセンサー間もしくはセンサー同士の相互作用を阻害する（例えば、ｐＤＣとＢ細胞間の相互作用を遮断する）、及び／またはエフェクターの産生もしくは活性を阻害する化合物である。いくつかの例では、該薬剤は、特定のセンサーまたはエフェクターに特異的である。他の実施形態では、ＬＮＰが誘導する免疫応答を阻害する薬剤は、より一般的な機序により、通常は、該センサーに影響を及ぼすことができる他の細胞成分に間接的に作用して、複数のセンサーの活性化を抑える働きをする。複数のセンサーに間接的に作用する薬剤の例は、ｍｉＲ結合部位である。
【０２５５】
本発明によれば、ｍｉＲ結合部位の供給は、ＡＢＣと関連する免疫応答を阻害し、ＡＢＣに対して感受性の期間にＬＮＰによる対象の反復投与を提供するために用いることができることが分かっている。該ｍｉＲ結合部位は、ＬＮＰに供給される治療用核酸に組み込まれる場合がある。代替的に、該ｍｉＲ結合部位は、別々に、治療用核酸を組み込む同じＬＮＰに組み込まれてもよいし、異なるＬＮＰに組み込まれてもよい。該ｍｉＲ結合部位は、該対象に対して、該ＬＮＰと同時にまたは異なる時点で別々のビヒクルで投与されてもよいし、ＬＮＰに組み込まれても組み込まれなくてもよい。いくつかの実施形態では、該ｍｉＲ結合部位は、ｍｉＲスポンジの場合がある。
【０２５６】
出願人は、機序によって拘束されないものの、該ｍｉＲ結合部位は、内因性の標的化された目的のｍｉＲＮＡを吸い取るように作用し、ｍｉＲＮＡが細胞内で機能できないようにすると考えられる。免疫細胞の機能の調節に有効な役割を果たすｍｉＲＮＡを標的とすることは可能である。内因性のｍｉＲＮＡの機能を阻害することで、該ｍｉＲ結合部位は、該ｍｉＲＮＡの機能及びこの標的化阻害に起因する他の下流効果を遮断するための阻害剤として作用する。該ｍｉＲＮＡ結合剤は、脾臓や免疫細胞等の特定の組織または細胞でのタンパク質翻訳を防ぐことによって、同様にまたは代替的に機能し得る。例えば、免疫細胞を多く含む特定の組織においてＬＮＰに封入された治療用ｍＲＮＡの翻訳を防ぐことによって、それらの組織での免疫応答が減少する一方、他の組織でのｍＲＮＡの発現には影響を及ぼさない。
【０２５７】
ｍｉＲ１２６（ｐＤＣに非常に豊富に含まれる）等のｍｉＲ結合部位の導入が、該ｍｉＲ結合部位なしの対応するＬＮＰが供給する応答と比較して、Ｂ細胞活性化の低下、ｐＤＣ活性化の低下、ＩＬ６及びＩＦＮ−ガンマ等のサイトカイン発現の減少、ならびにＩｇＭの減少をもたらすことが実証されている。
【０２５８】
いくつかの実施形態では、該ｍｉＲ結合部位は、ｍｉＲ１２６、ｍｉＲ１５５、及び／またはｍｉＲ１４２．３ｐ結合部位である。いくつかの実施形態では、該ｍＲＮＡは、少なくとも１つのｍｉＲ結合部位を含み、それによりＡＢＣを低減または阻害することができる。該ｍｉＲ結合部位は、例えば、該ｍＲＮＡの３’ＵＴＲに見出され得る。例えば、１つの実施形態では、該ｍＲＮＡは、ｍｉＲ−１２２結合部位を含み、それにより、正常な肝細胞と比較して、肝癌細胞（例えば肝細胞癌細胞）において該ｍＲＮＡがコードするポリペプチドの発現を増加させることができ、また、例えば、ｍｉＲ−１４２、ｍｉＲ−１４６、ｍｉＲ−１５５、ｍｉＲ−１２６、ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−２１、ｍｉＲ−２２３、ｍｉＲ−２４、ｍｉＲ−２７からなる群から選択される１つ以上のｍｉＲ結合部位も含む。
【０２５９】
本明細書で使用される、ＬＮＰとセンサーの間の相互作用を阻害する化合物は、ＬＮＰとＢ１細胞、血小板、またはｐＤＣの間の相互作用を阻害する。例えば、ＬＮＰとＢ１細胞の間のいくつかの相互作用は、Ｂ１細胞上のＣＤ３６受容体及び該ＬＮＰ上のＰＣによって媒介される。該化合物は、該ＰＣまたはＣＤ３６を遮断及び中和し得る。いくつかの実施形態では、該化合物は、ＣＤ３６を認識し、これに結合する抗体、もしくは、その抗原結合断片もしくは誘導体、またはＣＤ３６アンタゴニストである。ＣＤ３６アンタゴニストは、ＣＤ３６もしくはその断片に結合する抗体またはアプタマー、ＣＤ３６またはその断片に結合する可溶性リガンド、そのリガンドに結合する可溶性ＣＤ３６、ＣＤ３６の活性を阻害する融合ポリペプチド、ペプチド、小分子、ペプチド模倣薬、及びＣＤ３６の発現を特異的に阻害する核酸分子からなる群から選択され得る。好ましくは、かかるＣＤ３６アンタゴニストは、好ましくは特異的に、ＣＤ３６分子またはその断片を認識し、これに結合するアンタゴニストであり、好ましくは、ＣＤ３６もしくはその断片を特異的に認識し、これに結合する抗体またはアプタマー、ＣＤ３６の発現を特異的に阻害する核酸分子、及びＣＤ３６の活性を阻害する小分子からなる群から選択される。より好ましくは、該ＣＤ３６アンタゴニストは、ＣＤ３６に対する機能遮断モノクローナル抗体である。他の実施形態では、該ＣＤ３６アンタゴニストは、サルビアノール酸Ｂ、ロスマリン酸、ダンシェンスナトリウム、３−シンナモイルインドール、１３−ペンチルベルベリン、ヘキサレリン、ナノブロッカー、スタチンまたは抗酸化剤、例えば、アルファ−トコフェロール及びＳＳペプチド、スルホ−Ｎ−スクシンイミジルオレエート及びウルソール酸、ならびにそれらの任意の組合せからなる群から選択される小分子である。代替的に、該ＣＤ３６アンタゴニストは、ＣＤ３６を認識し、これに結合する抗体、またはその抗原結合断片もしくは誘導体を含み得る。好ましくは、該抗体またはその抗原結合断片もしくは誘導体は、ＣＤ３６の細胞外ドメインに対して向けられる。該抗体は、完全長抗体の場合がある。好ましくは、該抗体はモノクローナル抗体である。該抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＥ、またはＩｇＤ型のもの、好ましくは、ＩｇＧ型のものでよい。該抗体は、ヒト化、キメラ、またはヒト抗体でよい。該抗体はまた、ラクダ科重鎖抗体、特にヒト化ラクダ科重鎖抗体でもよい。好ましくは、該抗体またはその抗原結合断片もしくは誘導体は、二価である。特に、該抗原結合断片は、Ｆ（ａｂ’）２ジ−ｓｃＦＶ、ｓｃ（Ｆｖ）２断片、（ＶＨＨ）２断片、及びジアボディからなる群から選択される。
【０２６０】
エフェクターの活性を阻害する化合物は、エフェクターのセンサーによる産生またはエフェクターの機能を防止する化合物である。例えば、該薬剤は、Ｂ１細胞の合成経路を妨害することによって、ＬＮＰと結合する天然のＩｇＭの産生を阻害し得る。代替的に、該薬剤は、かかる天然のＩｇＭまたはＩｇＧを中和し得る。該薬剤は、天然のＩｇＭまたはＩｇＧに結合し、それを中和する抗体またはその抗原結合部分の場合がある。代替的に、該薬剤は、ＩｇＭまたはＩｇＧがその標的に結合するのを妨害し得る。他の実施形態では、ＬＮＰが誘導する免疫応答を阻害する薬剤は、ＩＬ６の活性を阻害する薬剤である。ＩＬ６の活性を阻害する薬剤としては、例えば、ＩＬ−６及び／またはＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒ複合体に結合することができる抗体、その断片、特定のヒト化抗体ならびにその断片及びバリアントが挙げられる。これらの抗体は、可溶性ＩＬ−６または細胞表面に発現するＩＬ−６に結合し得る。
【０２６１】
脂質ナノ粒子、全般
いくつかの実施形態では、該脂質ナノ粒子は、カチオン性脂質、ＰＥＧ修飾脂質、ステロール、及び非カチオン性脂質を含む。いくつかの実施形態では、該脂質ナノ粒子担体は、モル比約２０〜６０％のカチオン性脂質：５〜２５％の非カチオン性脂質：２５〜５５％のステロール：及び０．５〜１５％のＰＥＧ修飾脂質を含む。いくつかの実施形態では、該カチオン性脂質は、イオン性カチオン性脂質である。いくつかの実施形態では、該非カチオン性脂質は、中性脂質である。いくつかの実施形態では、該ステロールはコレステロールである。いくつかの実施形態では、該カチオン性脂質は、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチレート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、及びジ（（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）から選択される。いくつかの実施形態では、該脂質ナノ粒子は、多分散値が０．４未満である。いくつかの実施形態では、該脂質ナノ粒子は、中性ｐＨで正味の中性電荷を有する。いくつかの実施形態では、該脂質ナノ粒子は、平均粒径５０〜２００ｎｍを有する。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表している。
【０２６２】
脂質ナノ粒子は、カチオン性／イオン性脂質、非カチオン性脂質、構造脂質、リン脂質、ならびにヘルパー脂質が挙げられるがこれらに限定されない１つ以上の脂質種を含み得る。これらの脂質のいずれかは、ポリエチレングリコ−ル（ＰＥＧ）にコンジュゲートされてもよく、それ故、ＰＥＧ化脂質またはＰＥＧ修飾脂質と呼ばれ得る。
【０２６３】
脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）の生成は、当技術分野で知られる方法によって、及び／または、参照することによって全体として本明細書に組み込まれる、米国公開第２０１２／０１７８７０２号に記載の通りに行われ得る。
【０２６４】
脂質ナノ粒子製剤は、これらに限定されないが、カチオン性脂質成分の選択、カチオン性脂質の飽和度、非カチオン性脂質成分の選択、非カチオン性脂質の飽和度、構造脂質成分の選択、ＰＥＧ化の性質、全成分の比、及びサイズ等の生物物理パラメータによって影響を受ける場合がある。ある特定の非限定的な例では、ＬＮＰは４つの主要成分を含む：（１）カチオン性脂質、（２）非カチオン性脂質（例えば、ＤＳＰＣ等のリン脂質）、（３）構造脂質（例えば、コレステロール等のステロール）、及び（４）ＰＥＧまたはＰＥＧ修飾脂質。Ｓｅｍｐｌｅら（Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２０１０  ２８：１７２−１７６、参照することにより全体として本明細書に組み込まれる）による１つの例では、該脂質ナノ粒子製剤は、以下のモル比からなる：５７．１％のカチオン性脂質、７．１％のジパルミトイルホスファチジルコリン、３４．３％のコレステロール、及び１．４％のＰＥＧ−ｃ−ＤＭＡ。別の例として、カチオン性脂質の組成を変更することで、様々な抗原提示細胞に対してｓｉＲＮＡをより効率的に送達することができる（Ｂａｓｈａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．２０１１  １９：２１８６−２２００、参照することにより全体として本明細書に組み込まれる）。
【０２６５】
本明細書に記載の脂質ナノ粒子は、１つ以上の脂質を含む。ある特定の実施形態では、該脂質ナノ粒子製剤は、カチオン性脂質及び非カチオン性脂質を含む。ある特定の実施形態では、該ＬＮＰ製剤は、カチオン性脂質及びＤＳＰＣ代替物を含む。ある特定の実施形態では、該ＬＮＰ製剤は、カチオン性脂質及び脂肪酸を含む。ある特定の実施形態では、該ＬＮＰ製剤は、カチオン性脂質及び及びオレイン酸を含む。ある特定の実施形態では、該ＬＮＰ製剤は、カチオン性脂質及びオレイン酸類似体を含む。
【０２６６】
カチオン性脂質は、正電荷を持つ脂質であり、当該脂質／ＬＮＰベースの送達系において核酸と会合し得る。該ＬＮＰの正電荷は、負電荷を持つ細胞膜との会合を促進し、細胞の取り込みを高める。カチオン性脂質はまた、負電荷を持つ脂質と結合して非二重層構造を誘導し、これが細胞内輸送を促進する。本明細書に開示のＬＮＰの作製に用いるのに適したカチオン性脂質は、イオン性カチオン性脂質、例えば、アミノ脂質、及び本明細書に開示のものでよい。
【０２６７】
ある特定の実施形態では、該脂質ナノ粒子製剤は、カチオン性脂質、非カチオン性脂質、及び構造脂質を含む。ある特定の実施形態では、該ＬＮＰ製剤は、カチオン性脂質、脂肪酸、及び構造脂質を含む。ある特定の実施形態では、該ＬＮＰ製剤は、カチオン性脂質、オレイン酸、及び構造脂質を含む。ある特定の実施形態では、該ＬＮＰ製剤は、カチオン性脂質、オレイン酸類似体、及び構造脂質を含む。ある特定の実施形態では、該ＬＮＰ製剤は、カチオン性脂質、脂肪酸、及びステロールを含む。ある特定の実施形態では、該ＬＮＰ製剤は、カチオン性脂質、オレイン酸、及びステロールを含む。ある特定の実施形態では、該ＬＮＰ製剤は、カチオン性脂質、オレイン酸、及びコレステロールを含む。
【０２６８】
ある特定の実施形態では、該脂質ナノ粒子製剤は、カチオン性脂質、非カチオン性脂質、及びＰＥＧまたはＰＥＧ脂質を含む。ある特定の実施形態では、該ＬＮＰ製剤は、カチオン性脂質、非カチオン性脂質、及びＰＥＧ脂質を含む。ある特定の実施形態では、該ＬＮＰ製剤は、カチオン性脂質、非カチオン性脂質、及びＰＥＧ−ＯＨ脂質を含む。ある特定の実施形態では、該脂質ナノ粒子製剤は、カチオン性脂質、非カチオン性脂質、及びＰＥＧ−ＯＨ脂質を含む。ある特定の実施形態では、該脂質ナノ粒子製剤は、カチオン性脂質、脂肪酸、及びＰＥＧ−ＯＨ脂質を含む。ある特定の実施形態では、該脂質ナノ粒子製剤は、カチオン性脂質、オレイン酸、及びＰＥＧ−ＯＨ脂質を含む。ある特定の実施形態では、該脂質ナノ粒子製剤は、カチオン性脂質、オレイン酸類似体、及びＰＥＧ−ＯＨ脂質を含む。
【０２６９】
ある特定の実施形態では、該脂質ナノ粒子製剤は、カチオン性脂質、非カチオン性脂質（例えば、リン脂質または脂肪酸）、構造脂質、及びＰＥＧ脂質を含む。ある特定の実施形態では、該脂質ナノ粒子製剤は、カチオン性脂質、非カチオン性脂質（例えば、リン脂質または脂肪酸）、構造脂質、及びＰＥＧ−ＯＨ脂質を含む。ある特定の実施形態では、該脂質ナノ粒子製剤は、カチオン性脂質、非カチオン性脂質（例えば、リン脂質または脂肪酸）、及び構造脂質を含む。ある特定の実施形態では、該脂質ナノ粒子製剤は、カチオン性脂質、脂肪酸（例えば、オレイン酸またはその類似体）、構造脂質、及びＰＥＧ脂質を含む。ある特定の実施形態では、該脂質ナノ粒子製剤は、カチオン性脂質、脂肪酸（例えば、オレイン酸またはその類似体）、構造脂質、及びＰＥＧ−ＯＨ脂質を含む。ある特定の実施形態では、該脂質ナノ粒子製剤は、カチオン性脂質、オレイン酸、構造脂質（例えば、ステロール）、及びＰＥＧ−ＯＨ脂質を含む。ある特定の実施形態では、該脂質ナノ粒子製剤は、カチオン性脂質、オレイン酸、及び構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。ある特定の実施形態では、該脂質ナノ粒子製剤は、１つ以上のカチオン性または非カチオン性脂質、脂肪酸（例えば、オレイン酸）、及びＰＥＧ脂質を含む。ある特定の実施形態では、該脂質ナノ粒子製剤は、１つ以上のカチオン性または非カチオン性脂質、脂肪酸（例えば、オレイン酸）、及びＰＥＧ−ＯＨ脂質を含む。
【０２７０】
いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、脂肪酸を含む。いくつかの実施形態では、該脂肪酸は、モノ不飽和脂肪酸である。ある特定の実施形態では、該脂肪酸は、ポリ不飽和脂肪酸である。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、オレイン酸を含む。ある特定の実施形態では、該脂質ナノ粒子製剤は、１つ以上のカチオン性または非カチオン性脂質、及び脂肪酸（例えば、オレイン酸）を含む。ある特定の実施形態では、該脂質ナノ粒子製剤は、１つ以上のカチオン性または非カチオン性脂質、及びオレイン酸を含む。ある特定の実施形態では、該ＬＮＰがオレイン酸を含む場合、該ＬＮＰはリン脂質を含まない。ある特定の実施形態では、該ＬＮＰがオレイン酸を含む場合、該ＬＮＰはＤＳＰＣを含まない。ある特定の実施形態では、該ＬＮＰが脂肪酸を含む場合、該ＬＮＰはリン脂質を含まない。ある特定の実施形態では、該ＬＮＰが脂肪酸を含む場合、該ＬＮＰはＤＳＰＣを含まない。
【０２７１】
いくつかの実施形態では、該ＬＮＰは、ＰＥＧ−ＯＨ脂質を含む。ある特定の実施形態では、該脂質ナノ粒子製剤は、１つ以上のカチオン性または非カチオン性脂質、およびＰＥＧ−ＯＨ脂質を含む。
【０２７２】
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、モルパーセンテージで、３５〜４５％のカチオン性脂質、４０％〜５０％のカチオン性脂質、５０％〜６０％のカチオン性脂質、及び／または５５％〜６５％のカチオン性脂質を含み得る。いくつかの実施形態では脂質ナノ粒子における脂質の核酸（例えば、ｍＲＮＡ）に対する比は、５：１〜２０：１、１０：１〜２５：１、１５：１〜３０：１、及び／または少なくとも３０：１でよい。
【０２７３】
いくつかの実施形態では、該脂質ナノ粒子製剤におけるＰＥＧの比は、該脂質ナノ粒子製剤の薬物動態及び／または生体内分布を変更するために増減される場合があり、及び／または該ＰＥＧ脂質の炭素鎖の長さは、Ｃ１４〜Ｃ１８に変更される場合がある。ある特定の実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、他の成分に対して、０．５％〜３．０％、１．０％〜３．５％、１．５％〜４．０％、２．０％〜４．５％、２．５％〜５．０％、及び／または３．０％〜６．０％の脂質モル比のＰＥＧ脂質を含み得る。非限定的な例として、脂質ナノ粒子製剤は、該カチオン性脂質、ＤＳＰＣ、及びコレステロールと比べて、０．５％〜３．０％、１．０％〜３．５％、１．５％〜４．０％、２．０％〜４．５％、２．５％〜５．０％、及び／または３．０％〜６．０％の脂質モル比のＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧ（Ｒ−３−［（ω−メトキシ−ポリ（エチレングリコール）２０００）カルバモイル）］−１，２−ジミリスチルオキシプロピル−３−アミン）（本明細書ではＰＥＧ−ＤＯＭＧとも呼ばれる）を含み得る。いくつかの実施形態では、該ＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧは、ＰＥＧ脂質、例えば、限定されないが、ＰＥＧ−ＤＳＧ（１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロール，メトキシポリエチレングリコール）、ＤＭＧ−ＰＥＧ（１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロール）、及び／またはＰＥＧ−ＤＰＧ（１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロール，メトキシポリエチレングリコール）と交換されてもよい。該カチオン性脂質は、ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、Ｃ１２−２００、及びＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ等であるがこれらに限定されない当技術分野で知られる任意の脂質から選択され得る。ある特定の実施形態では、該脂質ナノ粒子は、ＰＥＧ脂質を含まない。ある特定の実施形態では、該脂質ナノ粒子は、ＰＥＧ脂質代替物、例えば、ＰＥＧ−ＯＨ脂質を含む。該脂質ナノ粒子製剤へのＰＥＧ−ＯＨ脂質の組み込みで、該脂質ナノ粒子製剤の薬物動態及び／または生体内分布を改良することができる。例えば、該ナノ粒子製剤へのＰＥＧ−ＯＨ脂質の組み込みは、ＡＢＣ効果を低減することができる。ある特定の実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、他の成分（例えば、該カチオン性、中性、及び構造脂質）に対して、０．５％〜３．０％、１．０％〜３．５％、１．５％〜４．０％、２．０％〜４．５％、２．５％〜５．０％、及び／または３．０％〜６．０％の脂質モル比のＰＥＧ−ＯＨ脂質を含み得る。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【０２７４】
いくつかの実施形態では、ＬＮＰ製剤は、少なくとも１つの脂質を含むナノ粒子である。ある特定の実施形態では、該脂質は、カチオン性／イオン性脂質、非カチオン性脂質（例えば、脂肪酸及びリン脂質）、ＰＥＧ脂質、構造脂質（例えば、ステロール）、ならびにＰＥＧ−ＯＨ脂質から選択される。該脂質は、ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ、９８Ｎ１２−５、Ｃ１２−２００、ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ、ＤＯＤＭＡ、ＰＬＧＡ、ＰＥＧ、ＰＥＧ−ＤＭＧ、ＰＥＧ化脂質、及びアミノアルコール脂質から選択され得るが、これに限定されない。いくつかの実施形態では、該脂質は、カチオン性脂質、例えば、ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｄ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ、ＤＯＤＭＡ、及びアミノアルコール脂質であり得るが、これに限定されない。該アミノアルコールのカチオン性脂質は、参照することにより全体として本明細書に組み込まれる米国特許公開第ＵＳ２０１３／０１５０６２５号に記載の脂質及び／またはここに記載の方法で作製される脂質でよい。非限定的な例として、該カチオン性脂質は、２−アミノ−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］−２−｛［（９Ｚ，２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］メチル｝プロパン−１−オール（ＵＳ２０１３／０１５０６２５の化合物１）、２−アミノ−３−［（９Ｚ）−オクタデカ−９−エン−１−イルオキシ］−２−｛［（９Ｚ）−オクタデカ−９−エン−１−イルオキシ］メチル｝プロパン−１−オール（ＵＳ２０１３０１５０６２５の化合物２）、２−アミノ−３−「（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］−２−［（オクチルオキシ）メチル］プロパン−１−オール（ＵＳ２０１３／０１５０６２５の化合物３）、及び２−（ジメチルアミノ）−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］−２−｛［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］メチル｝プロパン−１−オール（ＵＳ２０１３／０１５０６２５の化合物４）、または、その任意の医薬的に許容される塩もしくは立体異性体でよい。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【０２７５】
脂質ナノ粒子製剤は、脂質、特に、イオン性カチオン性脂質、例えば、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチレート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、またはジ（（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）を含むことができ、さらに、非カチオン性脂質（例えば、リン脂質または脂肪酸）、構造脂質（例えば、コレステロール等のステロール）、及び粒子の凝集を低減することができる分子、例えば、ＰＥＧまたはＰＥＧ修飾脂質（例えば、ＰＥＧ−ＯＨ脂質）を含む。ある特定の実施形態では、該製剤は、該ＰＥＧ脂質を含まない。
【０２７６】
いくつかの実施形態では、該ＬＮＰ製剤は、モル比２０〜６０％のカチオン性脂質、５〜２５％の非カチオン性脂質、２５〜５５％のステロール、０．５〜１５％のＰＥＧ脂質から基本的になる。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰ製剤は、モル比２０〜６０％のカチオン性脂質、５〜２５％の非カチオン性脂質、２５〜５５％のステロール、０．５〜１５％のＰＥＧ−ＯＨ脂質から基本的になる。いくつかの実施形態では、該ＬＮＰ製剤は、モル比２０〜６０％のカチオン性脂質、５〜２５％の非カチオン性脂質、及び２５〜５５％のステロールから基本的になる。ある特定の実施形態では、該非カチオン性脂質は脂肪酸である。ある特定の実施形態では、該非カチオン性脂質はオレイン酸またはその類似体である。ある特定の実施形態では、該ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ−ＯＨ脂質である。
【０２７７】
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、（ｉ）２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチレート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、及びジ（（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）からなる群から選択される少なくとも１つの脂質、（ｉｉ）ＤＳＰＣ、ＤＰＰＣ、ＰＯＰＣ、ＤＯＰＥ、及びＳＭから選択される非カチオン性脂質、（ｉｉｉ）ステロール、例えば、コレステロール、ならびに（ｉｖ）ＰＥＧ脂質、例えば、ＰＥＧ−ＤＭＧまたはＰＥＧ−ｃＤＭＡから、モル比２０〜６０％のカチオン性脂質、５〜２５％の非カチオン性脂質、２５〜５５％のステロール、０．５〜１５％のＰＥＧ脂質で基本的になる。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【０２７８】
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、（ｉ）２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチレート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、及びジ（（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）からなる群から選択される少なくとも１つの脂質、（ｉｉ）ＤＳＰＣ代替物としての非カチオン性脂質（例えば、異なるリン脂質または脂肪酸）、（ｉｉｉ）構造脂質（例えば、コレステロール等のステロール）、ならびに（ｉｖ）ＰＥＧ脂質またはＰＥＧ−ＯＨ脂質（例えば、ＰＥＧ−ＤＭＧもしくはＰＥＧ−ｃＤＭＡ）から、モル比２０〜６０％のカチオン性脂質、５〜２５％のＤＳＰＣ代替物、２５〜５５％の構造脂質、０．５〜１５％のＰＥＧ脂質で基本的になる。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【０２７９】
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、モル基準で２５％〜７５％のカチオン性脂質を含む。該カチオン性脂質は、例えば、モル基準で、３５〜６５％、４５〜６５％、６０％、５７．５％、５０％、または４０％の２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチレート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、及びジ（（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）から選択され得る。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【０２８０】
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、モル基準で０．５％〜１５％の非カチオン性脂質、例えば、モル基準で３〜１２％、５〜１０％もしくは１５％、１０％、または７．５％含む。ある特定の実施形態では、該非カチオン性脂質は、リン脂質である。ある特定の実施形態では、該非カチオン性脂質は、ＤＳＰＣ代替物（例えば、ＤＳＰＣ以外のリン脂質または脂肪酸）である。ある特定の実施形態では、該非カチオン性脂質は、脂肪酸（例えば、オレイン酸またはその類似体）である。他の非カチオン性脂質の例としては、制限なく、ＰＯＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＯＰＥ、及びＳＭが挙げられる。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、モル基準で０．５％〜１５％の脂肪酸、例えば、モル基準で３〜１２％、５〜１０％もしくは１５％、１０％、または７．５％含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、モル基準で０．５％〜１５％のオレイン酸、例えば、モル基準で３〜１２％、５〜１０％もしくは１５％、１０％、または７．５％含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、モル基準で０．５％〜１５％のオレイン酸類似体、例えば、モル基準で３〜１２％、５〜１０％もしくは１５％、１０％、または７．５％含む。
【０２８１】
いくつかの実施形態では、該製剤は、モル基準で５％〜５０％の構造脂質、例えば、モル基準で１５〜４５％、２０〜４０％、４０％、３８．５％、３５％、または３１％含む。いくつかの実施形態では、該製剤は、モル基準で５％〜５０％のステロール、例えば、モル基準で１５〜４５％、２０〜４０％、４０％、３８．５％、３５％、または３１％含む。ステロールの非限定的な例はコレステロールである。
【０２８２】
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、モル基準で０．５％〜２０％のＰＥＧまたはＰＥＧ修飾脂質、例えば、モル基準で０．５〜１０％、０．５〜５％、１．５％、０．５％、１．５％、３．５％、または５％含む。いくつかの実施形態では、ＰＥＧまたはＰＥＧ修飾脂質は、平均分子量２，０００ＤａのＰＥＧ分子を含む。いくつかの実施形態では、ＰＥＧまたはＰＥＧ修飾脂質は、平均分子量２，０００未満、例えば、約１，５００Ｄａ、約１，０００Ｄａ、または約５００ＤａのＰＥＧ分子を含む。ＰＥＧ修飾脂質の非限定的な例としては、ＰＥＧジステアロイルグリセロール（ＰＥＧ−ＤＭＧ）（本明細書ではＣｍｐｄ４２２とも呼ばれる）、ＰＥＧ−ｃＤＭＡ（Ｒｅｙｅｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，１０７，２７６−２８７（２００５）にさらに論じられる。その内容は、参照することにより全体として本明細書に組み込まれる）が挙げられる。本明細書に記載されるように、任意のＰＥＧ脂質またはＰＥＧ修飾脂質は、ＰＥＧ−ＯＨ脂質でよい。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、モル基準で０．５％〜２０％のＰＥＧ−ＯＨ脂質、例えば、モル基準で０．５〜１０％、０．５〜５％、１．５％、０．５％、１．５％、３．５％、または５％含む。
【０２８３】
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、モル基準で２５〜７５％のカチオン性脂質、０．５〜１５％の非カチオン性脂質、５〜５０％の構造脂質、及び０．５〜２０％のＰＥＧまたはＰＥＧ修飾脂質を含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、モル基準で２５〜７５％のカチオン性脂質、０．５〜１５％の非カチオン性脂質、５〜５０％の構造脂質、及び０．５〜２０％のＰＥＧ−ＯＨ脂質を含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、モル基準で２５〜７５％のカチオン性脂質、０．５〜１５％の非カチオン性脂質、及び５〜５０％の構造脂質を含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチレート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、及びジ（（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）から選択される２５〜７５％のカチオン性脂質を含む。
【０２８４】
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、モル基準で３５〜６５％のカチオン性脂質、３〜１２％の非カチオン性脂質、１５〜４５％の構造脂質、及び０．５〜１０％のＰＥＧまたはＰＥＧ修飾脂質を含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、モル基準で３５〜６５％のカチオン性脂質、３〜１２％の非カチオン性脂質、１５〜４５％の構造脂質、及び０．５〜１０％のＰＥＧ−ＯＨ脂質を含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、モル基準で３５〜６５％のカチオン性脂質、３〜１２％の非カチオン性脂質、及び１５〜４５％の構造脂質を含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイルメチル−４−ジメチルアミノブチレート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、及びジ（（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）から選択される３５〜６５％のカチオン性脂質を含む。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【０２８５】
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、モル基準で４５〜６５％のカチオン性脂質、５〜１０％の非カチオン性脂質、２５〜４０％の構造脂質、及び０．５〜１０％のＰＥＧまたはＰＥＧ修飾脂質を含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、モル基準で４５〜６５％のカチオン性脂質、５〜１０％の非カチオン性脂質、２５〜４０％の構造脂質、及び０．５〜１０％のＰＥＧ−ＯＨ脂質を含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、モル基準で４５〜６５％のカチオン性脂質、５〜１０％の非カチオン性脂質、及び２５〜４０％の構造脂質を含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチレート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、及びジ（（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）から選択される４５〜６５％のカチオン性脂質を含む。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【０２８６】
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、モル基準で６０％のカチオン性脂質、７．５％の非カチオン性脂質、３１％の構造脂質、及び１．５％のＰＥＧまたはＰＥＧ修飾脂質を含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、モル基準で６０％のカチオン性脂質、７．５％の非カチオン性脂質、３１％の構造脂質、及び１．５％のＰＥＧ−ＯＨ脂質を含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、モル基準で６０％のカチオン性脂質、９％の非カチオン性脂質、及び３１％の構造脂質を含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイルメチル−４−ジメチルアミノブチレート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、及びジ（（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）から選択される６０％のカチオン性脂質を含む。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【０２８７】
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、モル基準で５０％のカチオン性脂質、１０％の非カチオン性脂質、３８．５％の構造脂質、及び１．５％のＰＥＧまたはＰＥＧ修飾脂質を含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、モル基準で５０％のカチオン性脂質、１０％の非カチオン性脂質、３８．５％の構造脂質、及び１．５％のＰＥＧ−ＯＨ脂質を含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、モル基準で５０％のカチオン性脂質、１０％の非カチオン性脂質、及び４０％の構造脂質を含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチレート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、及びジ（（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）から選択される５０％のカチオン性脂質を含む。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【０２８８】
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、モル基準で４０％のカチオン性脂質、１５％の非カチオン性脂質、４０％の構造脂質、及び５％のＰＥＧまたはＰＥＧ修飾脂質を含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、モル基準で４０％のカチオン性脂質、１５％の非カチオン性脂質、４０％の構造脂質、及び５％のＰＥＧ−ＯＨ脂質を含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、モル基準で４０％のカチオン性脂質、２０％の非カチオン性脂質、４０％の構造脂質を含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチレート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、及びジ（（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）から選択される４０％のカチオン性脂質を含む。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【０２８９】
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、モル基準で５７．２％のカチオン性脂質、７．１％の非カチオン性脂質、３４．３％のステロール、及び１．４％のＰＥＧまたはＰＥＧ修飾脂質を含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、モル基準で５７．２％のカチオン性脂質、７．１％の非カチオン性脂質、３４．３％の構造脂質、及び１．４％のＰＥＧ−ＯＨ脂質を含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、モル基準で５７．２％のカチオン性脂質、８．５％の非カチオン性脂質、及び３４．３％の構造脂質を含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイルメチル−４−ジメチルアミノブチレート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、及びジ（（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）から選択される５７．２％のカチオン性脂質を含む。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【０２９０】
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、モル比２０〜７０％のカチオン性脂質、５〜４５％の非カチオン性脂質、２０〜５５％の構造脂質、０．５〜１５％のＰＥＧ修飾脂質の脂質混合物から基本的になる。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、モル比２０〜７０％のカチオン性脂質、５〜４５％の非カチオン性脂質（例えば、リン脂質または脂肪酸）、２０〜５５％の構造脂質、及び０．５〜１５％のＰＥＧ−ＯＨ脂質の脂質混合物から基本的になる。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、モル比２０〜７０％のカチオン性脂質、５〜４５％の非カチオン性脂質（例えば、リン脂質または脂肪酸）、２０〜５５％の構造脂質（例えば、ステロール）、及び０．５〜１５％のＰＥＧ−ＯＨ脂質の脂質混合物から基本的になる。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、モル比２０〜７０％のカチオン性脂質、５〜４５％の非カチオン性脂質（例えば、リン脂質または脂肪酸）、及び２０〜５５％の構造脂質（例えば、ステロール）の脂質混合物から基本的になる。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、モル比２０〜７０％のカチオン性脂質、５〜４５％の非カチオン性脂質（例えば、オレイン酸またはその類似体）、２０〜５５％の構造脂質（例えば、ステロール）、及び０．５〜１５％のＰＥＧ−ＯＨ脂質の脂質混合物から基本的になる。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、モル比２０〜７０％のカチオン性脂質、５〜４５％の脂肪酸（例えば、オレイン酸またはその類似体）、及び２０〜５５％の構造脂質（例えば、ステロール）の脂質混合物から基本的になる。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、モル比２０〜７０％のカチオン性脂質、５〜４５％のオレイン酸、２０〜５５％の構造脂質（例えば、ステロール）、及び０．５〜１５％のＰＥＧ−ＯＨ脂質の脂質混合物から基本的になる。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、モル比２０〜７０％のカチオン性脂質、５〜４５％のオレイン酸、及び２０〜５５％の構造脂質（例えば、ステロール）の脂質混合物から基本的になる。
【０２９１】
いくつかの実施形態では、該脂質モル比は５０／１０／３８．５／１．５（ｍｏｌ％カチオン性脂質／非カチオン性脂質／構造脂質／ＰＥＧ脂質）である。いくつかの実施形態では、該脂質モル比は５７．２／７．１１３４．３／１．４（ｍｏｌ％カチオン性脂質／非カチオン性脂質／構造脂質／ＰＥＧ脂質）である。いくつかの実施形態では、該脂質モル比は４０／１５／４０／５（ｍｏｌ％カチオン性脂質／非カチオン性脂質／構造脂質／ＰＥＧ脂質）である。いくつかの実施形態では、該脂質モル比は５０／１０／３５／４．５／０．５（ｍｏｌ％カチオン性脂質／非カチオン性脂質／構造脂質／ＰＥＧ脂質）である。いくつかの実施形態では、該脂質モル比は５０／１０／３５／５（ｍｏｌ％カチオン性脂質／非カチオン性脂質／構造脂質／ＰＥＧ脂質）である。いくつかの実施形態では、該脂質モル比は４０／１０／４０／１０（ｍｏｌ％カチオン性脂質／非カチオン性脂質／構造脂質／ＰＥＧ脂質）である。いくつかの実施形態では、該脂質モル比は３５／１５／４０／１０（ｍｏｌ％カチオン性脂質／非カチオン性脂質／構造脂質／ＰＥＧ脂質）である。いくつかの実施形態では、該脂質モル比は５２／１３／３０／５（ｍｏｌ％カチオン性脂質／非カチオン性脂質／構造脂質／ＰＥＧ脂質）である。本明細書に記載の通り、任意の非カチオン性脂質は、ＤＳＰＣ代替物、例えば、非ＤＳＰＣリン脂質または脂肪酸（例えば、オレイン酸）でよい。本明細書に記載の通り、任意のＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ−ＯＨ脂質でよい。
【０２９２】
脂質ナノ粒子組成物の非限定的な例及びその作製方法は、例えば、Ｓｅｍｐｌｅ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｎａｔ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２８：１７２−１７６；Ｊａｙａｒａｍａ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２），Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．，５１：８５２９−８５３３、及びＭａｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ２１，１５７０−１５７８に記載されている（これらの各々の内容は、参照することにより全体として本明細書に組み込まれる）。
【０２９３】
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、カチオン性脂質、ＰＥＧ脂質（例えば、ＰＥＧ−ＯＨ脂質）を含んでよく、任意に非カチオン性脂質（例えば、リン脂質または脂肪酸）を含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、カチオン性脂質、ＰＥＧ脂質（例えば、ＰＥＧ−ＯＨ脂質）、及び構造脂質（例えば、ステロール）を含んでよく、任意に非カチオン性脂質（例えば、リン脂質または脂肪酸）を含む。
【０２９４】
本明細書に記載の脂質ナノ粒子は、ペイロードを含めずに２つ以上の成分（例えば、脂質）を含んでよい。ある特定の実施形態では、該ＬＮＰは、ペイロードを含めずに２つの成分（例えば、脂質）を含む。ある特定の実施形態では、該脂質ナノ粒子は、ペイロードを含めずに５つの成分（例えば、脂質）を含む。ある特定の実施形態では、該ＬＮＰは、ペイロードを含めずに６つの成分（例えば、脂質）を含む。
【０２９５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の脂質ナノ粒子製剤は、４成分の脂質ナノ粒子でよい。４成分のＬＮＰは、本明細書に記載のいずれかから選択される４つの異なる脂質を含み得る。該４つの成分はペイロードを含まない。該脂質ナノ粒子は、カチオン性脂質、非カチオン性脂質、ＰＥＧ脂質、及び構造脂質を含んでよい。ある特定の実施形態では、該脂質ナノ粒子は、カチオン性脂質、脂肪酸、ＰＥＧ脂質、及び構造脂質を含む。ある特定の実施形態では、該脂質ナノ粒子は、カチオン性脂質、脂肪酸、ＰＥＧ−ＯＨ脂質、及び構造脂質を含む。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【０２９６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の該脂質ナノ粒子製剤は、３成分の脂質ナノ粒子でよい。３成分のＬＮＰは、本明細書に記載の３つの異なる脂質を含み得る。該脂質ナノ粒子は、カチオン性脂質、非カチオン性脂質（例えば、リン脂質または脂肪酸）、及び構造脂質を含んでよい。ある特定の実施形態では、該脂質ナノ粒子は、カチオン性脂質、脂肪酸、ＰＥＧ脂質、及び構造脂質を含む。ある特定の実施形態では、該脂質ナノ粒子は、カチオン性脂質、脂肪酸、及び構造脂質を含む。ある特定の実施形態では、該脂質ナノ粒子は、カチオン性脂質、リン脂質、及び構造脂質を含む。
【０２９７】
いくつかの実施形態では、ナノ粒子（例えば、脂質ナノ粒子）は、平均径１０〜５００ｎｍ、２０〜４００ｎｍ、３０〜３００ｎｍ、または４０〜２００ｎｍを有する。いくつかの実施形態では、ナノ粒子（例えば、脂質ナノ粒子）は、平均径５０〜１５０ｎｍ、５０〜２００ｎｍ、８０〜１００ｎｍ、または８０〜２００ｎｍを有する。
【０２９８】
１つの実施形態では、該ＬＮＰ製剤は、国際公開第ＷＯ２０１１１２７２５５号または同第ＷＯ２００８１０３２７６号に記載の方法によって製剤化され得る。これらの各々の内容は、参照することにより全体として本明細書に組み込まれる。非限定的な例として、ＷＯ２０１１１２７２５５及び／またはＷＯ２００８１０３２７６に記載のＬＮＰ製剤の各々は、参照することにより全体として本明細書に組み込まれる。
【０２９９】
１つの実施形態では、該脂質ナノ粒子は、米国特許公開第ＵＳ２０１３／０１５６８４５号または国際公開第ＷＯ２０１３／０９３６４８号もしくは同第ＷＯ２０１２０２４５２６号に記載の方法によって製剤化され得る。これらの各々は、参照することにより全体として本明細書に組み込まれる。
【０３００】
本明細書に記載の脂質ナノ粒子は、参照することにより全体として本明細書に組み込まれる、米国特許公開第ＵＳ２０１３０１６４４００号に記載のシステム及び／または方法によって、無菌環境にて作製され得る。
【０３０１】
１つの実施形態では、該ＬＮＰ製剤は、その内容が参照することにより全体として本明細書に組み込まれる、米国特許第８，４９２，３５９号に記載の核酸−脂質粒子等のナノ粒子に製剤化され得る。
【０３０２】
非限定的な例として、該脂質粒子は、１つ以上の活性薬剤または治療薬（例えば、ＲＮＡ）、該粒子に存在する全脂質の約５０ｍｏｌ％〜約８５ｍｏｌ％を構成する１つ以上のカチオン性脂質、該粒子に存在する全脂質の約１３ｍｏｌ％〜約４９．５ｍｏｌ％を構成する１つ以上の非カチオン性脂質、及び該粒子に存在する全脂質の約０．５ｍｏｌ％〜約２ｍｏｌ％を構成する粒子の凝集を阻害する１つ以上の構造脂質を含み得る。
【０３０３】
１つの実施形態では、該ＬＮＰ製剤は、国際公開第ＷＯ２０１１１２７２５５号または第ＷＯ２００８１０３２７６号に記載の方法によって製剤化され得る。これらの各々の内容は、参照することにより全体として本明細書に組み込まれる。非限定的な例として、ＷＯ２０１１１２７２５５及び／またははＷＯ２００８１０３２７６に記載のＬＮＰ製剤を含み、それらの各々の内容は、参照することにより全体として本明細書に組み込まれる。１つの実施形態では、本明細書に記載のＬＮＰ製剤は、ポリカチオン性組成物を含んでよい。非限定的な例として、該ポリカチオン性組成物は、その内容が参照することにより全体として本明細書に組み込まれる、米国特許公開第ＵＳ２００５０２２２０６４号の式１〜６０から選択され得る。
【０３０４】
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは脂質ＫＬ５２（参照することにより全体として本明細書に明示的に組み込まれる、米国出願公開第２０１２／０２９５８３２号に開示のアミノ脂質）を含む。ＬＮＰ投与の活性及び／または安全性（ＡＬＴ／ＡＳＴ、白血球数、及びサイトカイン誘導のうちの１つ以上を調べることで測定される）は、かかる脂質を組み込むことで改善され得る。ＫＬ５２を含むＬＮＰは、静脈内に、及び／または１回以上投与され得る。いくつかの実施形態では、ＫＬ５２を含むＬＮＰの投与は、ＭＣ３を含むＬＮＰと比較して等しいまたは改良されたｍＲＮＡ及び／またはタンパク質の発現をもたらす。
【０３０５】
非限定的な例として、該ＬＮＰは、カチオン性ペプチドまたはポリペプチド、例えば、これらに限定されないが、ポリリジン、ポリオルニチン、及び／またはポリアルギニンならびに各々が参照することにより全体として本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２０１２０１３３２６号もしくは米国特許公開第ＵＳ２０１３０１４２８１８号に記載のカチオン性ペプチドを含んでよい。いくつかの実施形態では、該脂質ナノ粒子は、非カチオン性脂質、例えば、これに限定されないが、コレステロールまたはジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）を含む。
【０３０６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の脂質ナノ粒子は、直径０．１ｕｍ未満〜１００ｎｍ、例えば、これらに限定されないが、０．１ｕｍ未満、１．０ｕｍ未満、５ｕｍ未満、１０ｕｍ未満、１５ｕｍ未満、２０ｕｍ未満、２５ｕｍ未満、３０ｕｍ未満、３５ｕｍ未満、４０ｕｍ未満、５０ｕｍ未満、５５ｕｍ未満、６０ｕｍ未満、６５ｕｍ未満、７０ｕｍ未満、７５ｕｍ未満、８０ｕｍ未満、８５ｕｍ未満、９０ｕｍ未満、９５ｕｍ未満、１００ｕｍ未満、１２５ｕｍ未満、１５０ｕｍ未満、１７５ｕｍ未満、２００ｕｍ未満、２２５ｕｍ未満、２５０ｕｍ未満、２７５ｕｍ未満、３００ｕｍ未満、３２５ｕｍ未満、３５０ｕｍ未満、３７５ｕｍ未満、４００ｕｍ未満、４２５ｕｍ未満、４５０ｕｍ未満、４７５ｕｍ未満、５００ｕｍ未満、５２５ｕｍ未満、５５０ｕｍ未満、５７５ｕｍ未満、６００ｕｍ未満、６２５ｕｍ未満、６５０ｕｍ未満、６７５ｕｍ未満、７００ｕｍ未満、７２５ｕｍ未満、７５０ｕｍ未満、７７５ｕｍ未満、８００ｕｍ未満、８２５ｕｍ未満、８５０ｕｍ未満、８７５ｕｍ未満、９００ｕｍ未満、９２５ｕｍ未満、９５０ｕｍ未満、９７５ｕｍ未満を有することができる。
【０３０７】
別の実施形態では、ＬＮＰは、直径約１ｎｍ〜約１００ｎｍ、約１ｎｍ〜約１０ｎｍ、約１ｎｍ〜約２０ｎｍ、約１ｎｍ〜約３０ｎｍ、約１ｎｍ〜約４０ｎｍ、約１ｎｍ〜約５０ｎｍ、約１ｎｍ〜約６０ｎｍ、約１ｎｍ〜約７０ｎｍ、約１ｎｍ〜約８０ｎｍ、約１ｎｍ〜約９０ｎｍ、約５ｎｍ〜約１００ｎｍ、約５ｎｍ〜約１０ｎｍ、約５ｎｍ〜約２０ｎｍ、約５ｎｍ〜約３０ｎｍ、約５ｎｍ〜約４０ｎｍ、約５ｎｍ〜約５０ｎｍ、約５ｎｍ〜約６０ｎｍ、約５ｎｍ〜約７０ｎｍ、約５ｎｍ〜約８０ｎｍ、約５ｎｍ〜約９０ｎｍ、約１０〜約５０ｎｍ、約２０〜約５０ｎｍ、約３０〜約５０ｎｍ、約４０〜約５０ｎｍ、約２０〜約６０ｎｍ、約３０〜約６０ｎｍ、約４０〜約６０ｎｍ、約２０〜約７０ｎｍ、約３０〜約７０ｎｍ、約４０〜約７０ｎｍ、約５０〜約７０ｎｍ、約６０〜約７０ｎｍ、約２０〜約８０ｎｍ、約３０〜約８０ｎｍ、約４０〜約８０ｎｍ、約５０〜約８０ｎｍ、約６０〜約８０ｎｍ、約２０〜約９０ｎｍ、約３０〜約９０ｎｍ、約４０〜約９０ｎｍ、約５０〜約９０ｎｍ、約６０〜約９０ｎｍ、及び／または約７０〜約９０ｎｍを有し得る。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【０３０８】
ナノ粒子組成物は、比較的均質であり得る。多分散性指数を用いて、ナノ粒子組成物の均質性、例えば、ナノ粒子組成物の粒径分布が示され得る。低い（例えば、０．３未満）の多分散性指数は、通常、狭い粒径分布を示す。ナノ粒子組成物は、多分散性指数約０〜約０．２５、例えば、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１０、０．１１、０．１２、０．１３、０．１４、０．１５、０．１６、０．１７、０．１８、０．１９、０．２０、０．２１、０．２２、０．２３、０．２４、または０．２５を有し得る。いくつかの実施形態では、ナノ粒子組成物の多分散性指数は、約０．１０〜約０．２０でよい。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【０３０９】
ナノ粒子組成物のゼータ電位は、該組成物の界面動電位を示すために使用され得る。例えば、ゼータ電位は、ナノ粒子組成物の表面電荷を表す場合がある。より高荷電種は、細胞、組織、及び他の体内の要素と不必要に相互作用することがあるため、比較的低い電荷の正または負のナノ粒子組成物が一般的に望ましい。いくつかの実施形態では、ナノ粒子組成物のゼータ電位は、約−１０ｍＶ〜約＋２０ｍＶ、約−１０ｍＶ〜約＋１５ｍＶ、約−１０ｍＶ〜約＋１０ｍＶ、約−１０ｍＶ〜約＋５ｍＶ、約−１０ｍＶ〜約０ｍＶ、約−１０ｍＶ〜約−５ｍＶ、約−５ｍＶ〜約＋２０ｍＶ、約−５ｍＶ〜約＋１５ｍＶ、約−５ｍＶ〜約＋１０ｍＶ、約−５ｍＶ〜約＋５ｍＶ、約−５ｍＶ〜約０ｍＶ、約０ｍＶ〜約＋２０ｍＶ、約０ｍＶ〜約＋１５ｍＶ、約０ｍＶ〜約＋１０ｍＶ、約０ｍＶ〜約＋５ｍＶ、約＋５ｍＶ〜約＋２０ｍＶ、約＋５ｍＶ〜約＋１５ｍＶ、または約＋５ｍＶ〜約＋１０ｍＶでよい。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【０３１０】
治療薬の封入効率は、最初の供給量に対して、封入される、さもなければナノ粒子組成物と調製後に会合する治療薬の量を表す。該封入効率は、高い（例えば、１００％に近い）のが望ましい。該封入効率は、例えば、該ナノ粒子組成物を含む溶液中の治療薬の量を、１つ以上の有機溶媒または界面活性剤で該ナノ粒子組成物を破壊する前後で比較することによって測定され得る。蛍光を用いて、溶液中の遊離の治療薬（例えば、核酸）の量を測定してもよい。本明細書に記載のナノ粒子組成物に関して、治療薬の封入効率は、少なくとも５０％、例えば、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％でよい。いくつかの実施形態では、該封入効率は、少なくとも８０％でよい。いくつかの実施形態では、該封入効率は、少なくとも９０％でよい。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【０３１１】
ナノ粒子組成物は、任意に１つ以上のコーティングを含んでよい。例えば、ナノ粒子組成物は、コーティングを有するカプセル、フィルム、または錠剤に製剤化され得る。本明細書に記載の組成物を含むカプセル、フィルム、または錠剤は、任意の有用なサイズ、引張強さ、硬度、または密度を有し得る。
【０３１２】
いくつかの実施形態では、かかるＬＮＰは、マイクロ流体ミキサーを含む方法を用いて合成される。例示的なマイクロ流体ミキサーとしては、Ｍｉｃｒｏｉｎｎｏｖａ（Ａｌｌｅｒｈｅｉｌｉｇｅｎ  ｂｅｉ  Ｗｉｌｄｏｎ，Ａｕｓｔｒｉａ）製のものに限定されないが、これを含めたスリット型インターデジタルマイクロミキサー及び／またはスタガード・ヘリンボーン・マイクロミキサー（ＳＨＭ）（Ｚｈｉｇａｌｔｓｅｖ，Ｉ．Ｖ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｏｔｔｏｍ−ｕｐ  ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｌｉｍｉｔ  ｓｉｚｅ  ｌｉｐｉｄ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ  ｓｙｓｔｅｍｓ  ｗｉｔｈ  ａｑｕｅｏｕｓ  ａｎｄ  ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ  ｃｏｒｅｓ  ｕｓｉｎｇ  ｍｉｌｌｉｓｅｃｏｎｄ  ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃ  ｍｉｘｉｎｇが公開されている（Ｌａｎｇｍｕｉｒ．  ２０１２．  ２８：３６３３−４０；Ｂｅｌｌｉｖｅａｕ，Ｎ．Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｈｉｇｈｌｙ  ｐｏｔｅｎｔ  ｌｉｍｉｔ−ｓｉｚｅ  ｌｉｐｉｄ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ｆｏｒ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｓｉＲＮＡ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ−Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ．  ２０１２．  １：ｅ３７；Ｃｈｅｎ，Ｄ．ｅｔ  ａｌ．，Ｒａｐｉｄ  ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  ｐｏｔｅｎｔ  ｓｉＲＮＡ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｌｉｐｉｄ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ｅｎａｂｌｅｄ  ｂｙ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ．Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ．２０１２．  １３４（１６）：６９４８−５１；これらの各々は、参照することにより全体として本明細書に組み込まれる）。
【０３１３】
いくつかの実施形態では、ＳＨＭを含むＬＮＰの生成方法はさらに、微細構造によるカオス的移流（ＭＩＣＡ）によって混合が生じる少なくとも２つの入力ストリームの混合を含む。この方法によれば、流体のストリームは、旋回流を生じ、該流体を互いの周りに折り曲げるヘリンボーン模様に存在する溝を通って流れる。この方法はまた、流体混合用の表面を含んでもよく、流体の循環の過程で該表面は方向を変える。ＳＨＭを用いたＬＮＰの生成方法としては、米国出願公開第２００４／０２６２２２３号及び同第２０１２／０２７６２０９号に開示のものが挙げられる。これらの各々は、参照することにより全体として明示的に本明細書に組み込まれる。
【０３１４】
１つの実施形態では、該脂質ナノ粒子は、マイクロミキサー、例えば、スリット型インターデジタルマイクロミキサー（ＳＩＭＭ−Ｖ２）もしくは標準的スリット型インターデジタルマイクロミキサー（ＳＳＩＭＭ）またはキャタピラー型（ＣＰＭＭ）もしくは衝突噴流型（ＩＪＭＭ）、Ｉｎｓｔｉｔｕｔ  ｆｕｒ  Ｍｉｋｒｏｔｅｃｈｎｉｋ  Ｍａｉｎｚ  ＧｍｂＨ，  Ｍａｉｎｚ  Ｇｅｒｍａｎｙ製）に限定されないがこれらを用いて製剤化され得る。
【０３１５】
１つの実施形態では、該脂質ナノ粒子は、マイクロ流体技術を用いて創製される（Ｗｈｉｔｅｓｉｄｅｓ，Ｇｅｏｒｇｅ  Ｍ．Ｔｈｅ  Ｏｒｉｇｉｎｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｆｕｔｕｒｅ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ．Ｎａｔｕｒｅ，２００６  ４４２：３６８−３７３；及びＡｂｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｈａｏｔｉｃ  Ｍｉｘｅｒ  ｆｏｒ  Ｍｉｃｒｏｃｈａｎｎｅｌｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００２  ２９５：６４７−６５１参照。これらの各々は、参照することにより全体として本明細書に組み込まれる）。非限定的な例として、制御されたマイクロ流体処方としては、低レイノルズ数でマイクロ流路中定常圧力駆動流のストリームの混合のための受動的方法が挙げられる（例えば、Ａｂｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｈａｏｔｉｃ  Ｍｉｘｅｒ  ｆｏｒ  Ｍｉｃｒｏｃｈａｎｎｅｌｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００２  ２９５：６４７６５１参照。これは、参照することにより全体として本明細書に組み込まれる）。
【０３１６】
１つの実施形態では、本発明のｍＲＮＡは、Ｈａｒｖａｒｄ  Ａｐｐａｒａｔｕｓ（Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ，ＭＡ）またはＤｏｌｏｍｉｔｅ  Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ（Ｒｏｙｓｔｏｎ，ＵＫ）製のものに限定されないが、これら等のマイクロミキサーチップを用いて創製された脂質ナノ粒子に製剤化され得る。マイクロミキサーチップは、スプリット及び再結合機構で２つ以上の流体ストリームを急速に混合するために用いることができる。
【０３１７】
１つの実施形態では、該脂質ナノ粒子は、直径約１０〜約１００ｎｍ、例えば、これらに限定されないが、約１０〜約２０ｎｍ、約１０〜約３０ｎｍ、約１０〜約４０ｎｍ、約１０〜約５０ｎｍ、約１０〜約６０ｎｍ、約１０〜約７０ｎｍ、約１０〜約８０ｎｍ、約１０〜約９０ｎｍ、約２０〜約３０ｎｍ、約２０〜約４０ｎｍ、約２０〜約５０ｎｍ、約２０〜約６０ｎｍ、約２０〜約７０ｎｍ、約２０〜約８０ｎｍ、約２０〜約９０ｎｍ、約２０〜約１００ｎｍ、約３０〜約４０ｎｍ、約３０〜約５０ｎｍ、約３０〜約６０ｎｍ、約３０〜約７０ｎｍ、約３０〜約８０ｎｍ、約３０〜約９０ｎｍ、約３０〜約１００ｎｍ、約４０〜約５０ｎｍ、約４０〜約６０ｎｍ、約４０〜約７０ｎｍ、約４０〜約８０ｎｍ、約４０〜約９０ｎｍ、約４０〜約１００ｎｍ、約５０〜約６０ｎｍ、約５０〜約７０ｎｍ、約５０〜約８０ｎｍ、約５０〜約９０ｎｍ、約５０〜約１００ｎｍ、約６０〜約７０ｎｍ、約６０〜約８０ｎｍ、約６０〜約９０ｎｍ、約６０〜約１００ｎｍ、約７０〜約８０ｎｍ、約７０〜約９０ｎｍ、約７０〜約１００ｎｍ、約８０〜約９０ｎｍ、約８０〜約１００ｎｍ、及び／または約９０〜約１００ｎｍを有し得る。１つの実施形態では、該脂質ナノ粒子は、直径約１０〜５００ｎｍを有し得る。１つの実施形態では、該脂質ナノ粒子は、直径１００ｎｍ超、１５０ｎｍ超、２００ｎｍ超、２５０ｎｍ超、３００ｎｍ超、３５０ｎｍ超、４００ｎｍ超、４５０ｎｍ超、５００ｎｍ超、５５０ｎｍ超、６００ｎｍ超、６５０ｎｍ超、７００ｎｍ超、７５０ｎｍ超、８００ｎｍ超、８５０ｎｍ超、９００ｎｍ超、９５０ｎｍ超、または１０００ｎｍ超を有し得る。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【０３１８】
いくつかの実施形態では、該脂質ナノ粒子は、多分散値が０．４未満である。いくつかの実施形態では、該脂質ナノ粒子は、中性ｐＨで正味の中性電荷を有する。いくつかの実施形態では、該脂質ナノ粒子は、平均径５０〜２００ｎｍを有する。
【０３１９】
脂質
本明細書で一般に定義される「脂質」という用語は、疎水性または両親媒性を有する小分子を指す。脂質は、天然に存在しても合成品でもよい。脂質の分類の例としては、脂肪、ワックス、ステロール含有代謝物、ビタミン、脂肪酸、グリセロ脂質、グリセロリン脂質、スフィンゴ脂質、糖脂質、及びポリケチド、ならびにプレノール脂質が挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの例では、いくつかの脂質の両親媒性は、それらが水性媒体中でリポソーム、小胞、または膜を形成するようにする。
【０３２０】
カチオン性／イオン性脂質
ナノ粒子組成物は、１つ以上のカチオン性及び／またはイオン性脂質（例えば、生理的ｐＨで正または部分正電荷を有し得る脂質）を含み得る。カチオン性及び／またはイオン性脂質は、３−（ジドデシルアミノ）−Ｎ１，Ｎ１，４−トリドデシル−１−ピペラジンエタンアミン（ＫＬ１０）、Ｎ１−［２−（ジドデシルアミノ）エチル］Ｎ１，Ｎ４，Ｎ４−トリドデシル−１，４−ピペラジンジエタンアミン（ＫＬ２２）、１４，２５−ジトリデシル−１５，１８，２１，２４−テトラアザ−オクタトリアコンタン（ＫＬ２５）、１，２−ジリノレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ−ＤＭＡ）、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノメチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ）、ヘプタトリアコンタ−６，９，２８，３１−テトラエン−１９−イル−４−（ジメチルアミノ）ブタノエート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、２，２−ジリノレイル−４−（２−ジメチルアミノエチル）−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、１，２−ジオレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＯＤＭＡ）、２−（｛８［（３β）−コレスト−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（オクチル−ＣＬｉｎＤＭＡ）、（２Ｒ）−２−（｛８−［（３β）−コレスト−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（オクチル−ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｒ））、及び（２Ｓ）２−（｛８−［（３β）−コレスト−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（オクチル−ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｓ））からなる非限定的な群から選択され得る。これらに加え、カチオン性脂質はまた、環状アミン基を含む脂質の場合がある。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【０３２１】
１つの実施形態では、該カチオン性脂質は、国際公開第ＷＯ２０１２０４０１８４号、第ＷＯ２０１１１５３１２０号、第ＷＯ２０１１１４９７３３号、第ＷＯ２０１１０９０９６５号、第ＷＯ２０１１０４３９１３号、第ＷＯ２０１１０２２４６０号、第ＷＯ２０１２０６１２５９号、第ＷＯ２０１２０５４３６５号、第ＷＯ２０１２０４４６３８号、第ＷＯ２０１００８０７２４号、第ＷＯ２０１０２１８６５号、第ＷＯ２００８１０３２７６号、第ＷＯ２０１３０８６３７３号、及び第ＷＯ２０１３０８６３５４号、米国特許第７，８９３，３０２号、第７，４０４，９６９号、第８，２８３，３３３号、及び第８，４６６，１２２号、ならびに米国特許公開第ＵＳ２０１０００３６１１５号、第ＵＳ２０１２０２０２８７１号、第ＵＳ２０１３００６４８９４号、第ＵＳ２０１３０１２９７８５号、第ＵＳ２０１３０１５０６２５号、第ＵＳ２０１３０１７８５４１号、及び第Ｓ２０１３０２２５８３６号に記載のカチオン性脂質から選択され得るが、これに限定されない。これらの各々の内容は、参照することにより全体として本明細書に組み込まれる。
【０３２２】
別の実施形態では、該カチオン性脂質は、国際公開第ＷＯ２０１２０４０１８４号、第ＷＯ２０１１１５３１２０号、第ＷＯ２０１１１４９７３３号、第ＷＯ２０１１０９０９６５号、第ＷＯ２０１１０４３９１３号、第ＷＯ２０１１０２２４６０号、第ＷＯ２０１２０６１２５９号、第ＷＯ２０１２０５４３６５号、第ＷＯ２０１２０４４６３８号、及び第ＷＯ２０１３１１６１２６号、または米国特許公開第ＵＳ２０１３０１７８５４１号及び第ＵＳ２０１３０２２５８３６号に記載の式Ａから選択され得るがこれらに限定されない。これらの各々の内容は、参照することにより全体として本明細書に組み込まれる。さらに別の実施形態では、該カチオン性脂質は、国際公開第ＷＯ２００８１０３２７６号の式ＣＬ１−ＣＬＸＸＩＸ、米国特許第７，８９３，３０２号の式ＣＬＩ−ＣＬＸＸＩＸ、米国特許第７，４０４，９６９号の式ＣＬＩ−ＣＬＸＸＸＸＩＩ、及び米国特許公開第ＵＳ２０１０００３６１１５号の式Ｉ−ＶＩ、米国特許公開第ＵＳ２０１３０１２３３３８号の式Ｉから選択され得るがこれらに限定されない。これらの各々は、参照することにより全体として本明細書に組み込まれる。
【０３２３】
非限定的な例として、該カチオン性脂質は、（２０Ｚ，２３Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルノナコサ−２０，２３−ジエン−１０−アミン、（１７Ｚ，２０Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルヘキサコサ−１７，２０−ジエン−９−アミン、（１Ｚ，１９Ｚ）−Ｎ５Ｎ−ジメチルペンタコサ−１６、１９−ジエン−８−アミン、（１３Ｚ，１６Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルドコサ−１３，１６−ジエン−５−アミン、（１２Ｚ，１５Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルヘンイコサ−１２，１５−ジエン−４−アミン、（１４Ｚ，１７Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルトリコサ−１４，１７−ジエン−６−アミン、（１５Ｚ，１８Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルテトラコサ−１５，１８−ジエン−７−アミン、（１８Ｚ，２１Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルヘプタコサ−１８，２１−ジエン−１０−アミン、（１５Ｚ，１８Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルテトラコサ−１５，１８−ジエン−５−アミン、（１４Ｚ，１７Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルトリコサ−１４，１７−ジエン−４−アミン、（１９Ｚ，２２Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルオクタコサ−１９，２２−ジエン−９−アミン、（１８Ｚ，２１Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルヘプタコサ−１８，２１−ジエン−８−アミン、（１７Ｚ，２０Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルヘキサコサ−１７，２０−ジエン−７−アミン、（１６Ｚ，１９Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルペンタコサ−１６，１９−ジエン−６−アミン、（２２Ｚ，２５Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルヘントリアコンタ−２２，２５−ジエン−１０−アミン、（２１Ｚ，２４Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルトリアコンタ−２１，２４−ジエン−９−アミン、（１８Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルヘプタコサ−１８−エン−１０−アミン、（１７Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルヘキサコサ−１７−エン−９−アミン、（１９Ｚ，２２Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルオクタコサ−１９，２２−ジエン−７−アミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルヘプタコサン−１０−アミン、（２０Ｚ，２３Ｚ）−Ｎ−エチル−Ｎ−メチルノナコサ−２０，２３−ジエン−ｌ０−アミン、１−［（１１Ｚ，１４Ｚ）−ｌ−ノニルイコサ−１１，１４−ジエン−１−イル］ピロリジン、（２０Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルヘプタコサ−２０−エン−１０−アミン、（１５Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルヘプタコサ−１５−エン−１０−アミン、（１４Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルノナコサ−１４−エン−１０−アミン、（１７Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルノナコサ−１７−エン−１０−アミン、（２４Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルトリトリアコンタ−２４−エン−１０−アミン、（２０Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルノナコサ−２０−エン−１０−アミン、（２２Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルヘントリアコンタ−２２−エン−１０−アミン、（１６Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルペンタコサ−１６−エン−８−アミン、（１２Ｚ，１５Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−ノニルヘンイコサ−１２，１５−ジエン−１−アミン、（１３Ｚ，１６Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−ノニルドコサ−ｌ３，１６−ジエン−ｌ−アミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−ｌ−［（ｌＳ，２Ｒ）−２−オクチルシクロプロピル］ヘプタデカン−８−アミン、１−［（１Ｓ，２Ｒ）−２−ヘキシルシクロプロピル］−Ｎ，Ｎ−ジメチルノナデカン−１０−アミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−［（１Ｓ，２Ｒ）−２−オクチルシクロプロピル］ノナデカン−１０−アミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−２１−［（ｌＳ，２Ｒ）−２−オクチルシクロプロピル］ヘンイコサン−１０−アミン，Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−［（１Ｓ，２Ｓ）−２−｛［（ｌＲ，２Ｒ）−２−ペンチルシクロプロピル］メチル｝シクロプロピル］ノナデカン−１０−アミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−［（１Ｓ，２Ｒ）−２−オクチルシクロプロピル］ヘキサデカン−８−アミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−［（ｌＲ，２Ｓ）−２−ウンデシルシクロプロピル］テトラデカン−５−アミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−｛７−［（１Ｓ，２Ｒ）−２−オクチルシクロプロピル］へプチル｝ドデカン−１−アミン、１−［（１Ｒ，２Ｓ）−２−へプチルシクロプロピル］−Ｎ，Ｎ−ジメチルオクタデカン−９−アミン、１−［（１Ｓ，２Ｒ）−２−デシルシクロプロピル］−Ｎ，Ｎ−ジメチルペンタデカン−６−アミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−ｌ−［（ｌＳ，２Ｒ）−２−オクチルシクロプロピル］ペンタデカン−８−アミン、Ｒ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］−３−（オクチルオキシ）プロパン−２−アミン、Ｓ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］−３−（オクチルオキシ）プロパン−２−アミン、１−｛２−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］−１−［（オクチルオキシ）メチル］エチル｝ピロリジン、（２Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］−３−［（５Ｚ）−オクタ−５−エン−１−イルオキシ］プロパン−２−アミン、１−｛２−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］−１−［（オクチルオキシ）メチル］エチル｝アゼチジン、（２Ｓ）−１−（ヘキシルオキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−２−アミン、（２Ｓ）−１−（へプチルオキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−２−アミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−（ノニルオキシ）−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−２−アミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−［（９Ｚ）−オクタデカ−９−エン−１−イルオキシ］−３−（オクチルオキシ）プロパン−２−アミン、（２Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−［（６Ｚ，９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−６，９，１２−トリエン−１−イルオキシ］−３−（オクチルオキシ）プロパン−２−アミン、（２Ｓ）−１−［（１１Ｚ，１４Ｚ）−イコサ−１１，１４−ジエン−１−イルオキシ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（ペンチルオキシ）プロパン−２−アミン、（２Ｓ）−１−（ヘキシルオキシ）−３−［（１１Ｚ，１４Ｚ）−イコサ−１１，１４−ジエン−１−イルオキシ］−Ｎ，Ｎ−ジメチルプロパン−２−アミン、１−［（１１Ｚ，１４Ｚ）−イコサ−１１，１４−ジエン−１−イルオキシ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（オクチルオキシ）プロパン−２−アミン、１−［（１３Ｚ，１６Ｚ）−ドコサ−ｌ３，１６−ジエン−１−イルオキシ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（オクチルオキシ）プロパン−２−アミン、（２Ｓ）−１−［（１３Ｚ，１６Ｚ）−ドコサ−１３，１６−ジエン−１−イルオキシ］−３−（ヘキシルオキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルプロパン−２−アミン、（２Ｓ）−１−［（１３Ｚ）−ドコサ−１３−エン−１−イルオキシ］−３−（ヘキシルオキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルプロパン−２−アミン、１−［（１３Ｚ）−ドコサ−１３−エン−１−イルオキシ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（オクチルオキシ）プロパン−２−アミン、１−［（９Ｚ）−ヘキサデカ−９−エン−１−イルオキシ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（オクチルオキシ）プロパン−２−アミン、（２Ｒ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｈ（１−メトイルオクチルオキシ］−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−２−アミン、（２Ｒ）−１−［（３，７−ジメチルオクチル）オキシ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−２−アミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−（オクチルオキシ）−３−（｛８−［（１Ｓ，２Ｓ）−２−｛［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ペンチルシクロプロピル］メチル｝シクロプロピル］オクチル｝オキシ）プロパン−２−アミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−｛［８−（２−オクチルシクロプロピル）オクチル］オキシ｝−３−（オクチルオキシ）プロパン−２−アミン、及び（１ｌＥ，２０Ｚ，２３Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルノナコサ−１１，２０，２−トリエン−１０−アミン、またはそれらの医薬的に許容される塩もしくは立体異性体から選択され得る。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【０３２４】
カチオン性脂質のさらなる例としては、以下が挙げられる：
【化４３】
2019504002.tif 000045
【化４４】
2019504002.tif 000046
【０３２５】
１つの実施形態では、該脂質は、参照することにより全体として本明細書に組み込まれる国際公開第ＷＯ２０１２１７０８８９号に記載のもの等の開裂可能な脂質でよい。別の実施形態では、該脂質は、カチオン性脂質、例えば、その内容が参照することにより全体として本明細書に組み込まれる米国特許出願第ＵＳ２０１３００６４８９４号の式（Ｉ）でよいがこれに限定されない。１つの実施形態では、該カチオン性脂質は、当技術分野で知られる方法によって、及び／または国際公開第ＷＯ２０１３０８６３５４号に記載の方法によって合成され得る。これらの各々の内容は、参照することにより全体として本明細書に組み込まれる。別の実施形態では、該カチオン性脂質は、トリアルキルカチオン性脂質でよい。トリアルキルカチオン性脂質ならびに該トリアルキルカチオン性脂質の作製方法及び使用方法の非限定的な例は、その内容が参照することにより全体として本明細書に組み込まれる、国際特許公開第ＷＯ２０１３１２６８０３号に記載されている。
【０３２６】
いくつかの実施形態では、追加の脂質は、式（Ｘ）：
【化４５】
2019504002.tif 000047
（Ｘ）
の化合物、またはその塩もしくは異性体を含んでよく、式中：
Ｒ１は、Ｃ５−３０アルキル、Ｃ５−２０アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群から選択され、
Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１−１４アルキル、Ｃ２−１４アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ＊ＯＲ”からなる群から選択されるか、または、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合する原子と一緒になってヘテロ環または炭素環を形成し、
Ｒ４は、Ｃ３−６炭素環、−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、−ＣＱ（Ｒ）２、及び未置換のＣ１−６アルキルからなる群から選択され、ここで、Ｑは、炭素環、ヘテロ環、−ＯＲ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＸ２Ｈ、−ＣＸＨ２、−ＣＮ、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｒ８、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（ＯＲ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ９）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＲ、及び−Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、各ｎは、独立して１、２、３、４、及び５から選択され、
各Ｒ５は、独立して、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ６は、独立して、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
Ｍ及びＭ’は、独立して、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｓ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ−Ｓ−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
Ｒ７は、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
Ｒ８は、Ｃ３−６炭素環及びヘテロ環からなる群から選択され、
Ｒ９は、Ｈ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１−６アルキル、−ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ３−６炭素環、及びヘテロ環からなる群から選択され、
各Ｒは、独立して、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ’は、独立して、Ｃ１−１８アルキル、Ｃ２−１８アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ”は、独立して、Ｃ３−１４アルキル及びＣ３−１４アルケニルからなる群から選択され、
各Ｒ＊は、独立して、Ｃ１−１２アルキル及びＣ２−１２アルケニルからなる群から選択され、
各Ｙは、独立して、Ｃ３−６炭素環であり、
各Ｘは、独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群から選択され、
ｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択される。
【０３２７】
いくつかの実施形態では、式（Ｘ）の化合物のサブセットは、Ｒ４が−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、または−ＣＱ（Ｒ）２の場合、（ｉ）Ｑは、ｎが１、２、３、４、もしくは５の場合、−Ｎ（Ｒ）２ではなく、または（ｉｉ）Ｑは、ｎが１もしくは２の場合、５、６、または７員のヘテロシクロアルキルではない化合物を含む。
【０３２８】
いくつかの実施形態では、式（Ｘ）の化合物の別のサブセットは、
Ｒ１が、Ｃ５−３０アルキル、Ｃ５−２０アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群から選択され、
Ｒ２及びＲ３が、独立して、Ｈ、Ｃ１−１４アルキル、Ｃ２−１４アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ＊ＯＲ”からなる群から選択されるか、または、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合する原子と一緒になってヘテロ環または炭素環を形成し、
Ｒ４が、Ｃ３−６炭素環、−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、−ＣＱ（Ｒ）２、及び未置換のＣ１−６アルキルからなる群から選択され、ここで、Ｑは、Ｃ３−６炭素環、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つ以上のヘテロ原子を有する５〜１４員のヘテロアリール、−ＯＲ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＸ２Ｈ、−ＣＸＨ２、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−ＣＲＮ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｒ８、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（ＯＲ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ９）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＲ、ならびにオキソ（＝Ｏ）、ＯＨ、アミノ、モノもしくはジアルキルアミノ、及びＣ１−３アルキルから選択される１つ以上の置換基で置換される、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つ以上のヘテロ原子を有する５〜１４員のヘテロシクロアルキルから選択され、各ｎは、独立して１、２、３、４、及び５から選択され、
各Ｒ５が、独立して、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ６が、独立して、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
Ｍ及びＭ’が、独立して、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｓ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ−Ｓ−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
Ｒ７が、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
Ｒ８が、Ｃ３−６炭素環及びヘテロ環からなる群から選択され、
Ｒ９が、Ｈ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１−６アルキル、−ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ３−６炭素環、及びヘテロ環からなる群から選択され、
各Ｒが、独立して、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ’が、独立して、Ｃ１−１８アルキル、Ｃ２−１８アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ”が、独立して、Ｃ３−１４アルキル及びＣ３−１４アルケニルからなる群から選択され、
各Ｒ＊が、独立して、Ｃ１−１２アルキル及びＣ２−１２アルケニルからなる群から選択され、
各Ｙが、独立して、Ｃ３−６炭素環であり、
各Ｘが、独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群から選択され、
ｍが、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択される化合物、またはそれらの塩もしくは異性体を含む。
【０３２９】
いくつかの実施形態では、式（Ｘ）の化合物の別のサブセットは、
Ｒ１が、Ｃ５−３０アルキル、Ｃ５−２０アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群から選択され、
Ｒ２及びＲ３が、独立して、Ｈ、Ｃ１−１４アルキル、Ｃ２−１４アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ＊ＯＲ”からなる群から選択されるか、または、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合する原子と一緒になってヘテロ環または炭素環を形成し、
Ｒ４が、Ｃ３−６炭素環、−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、−ＣＱ（Ｒ）２、及び未置換のＣ１−６アルキルからなる群から選択され、ここで、Ｑは、Ｃ３−６炭素環、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つ以上のヘテロ原子を有する５〜１４員のヘテロ環、−ＯＲ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＸ２Ｈ、−ＣＸＨ２、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−ＣＲＮ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｒ８、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（ＯＲ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ９）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＲ、及び−Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２から選択され、各ｎは、独立して１、２、３、４、及び５から選択され、Ｑが５〜１４員のヘテロ環でありかつ、（ｉ）Ｒ４が−（ＣＨ２）ｎＱであり、ｎが１もしくは２、もしくは（ｉｉ）Ｒ４が−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲであり、ｎが１、または（ｉｉｉ）Ｒ４が−ＣＨＱＲ及び−ＣＯ（Ｒ）２の場合、Ｑは、５〜１４員のヘテロアリールもしくは８〜１４員のヘテロシクロアルキルのいずれかであり、
各Ｒ５が、独立して、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ６が、独立して、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
Ｍ及びＭ’が、独立して、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｓ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ−Ｓ−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
Ｒ７が、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
Ｒ８が、Ｃ３−６炭素環及びヘテロ環からなる群から選択され、
Ｒ９が、Ｈ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１−６アルキル、−ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ３−６炭素環、及びヘテロ環からなる群から選択され、
各Ｒが、独立して、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ’が、独立して、Ｃ１−１８アルキル、Ｃ２−１８アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ”が、独立して、Ｃ３−１４アルキル及びＣ３−１４アルケニルからなる群から選択され、
各Ｒ＊が、独立して、Ｃ１−１２アルキル及びＣ２−１２アルケニルからなる群から選択され、
各Ｙが、独立して、Ｃ３−６炭素環であり、
各Ｘが、独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群から選択され、
ｍが、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択される化合物、またはそれらの塩もしくは異性体を含む。
【０３３０】
いくつかの実施形態では、式（Ｘ）の化合物の別のサブセットは、
Ｒ１が、Ｃ５−３０アルキル、Ｃ５−２０アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群から選択され、
Ｒ２及びＲ３が、独立して、Ｈ、Ｃ１−１４アルキル、Ｃ２−１４アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ＊ＯＲ”からなる群から選択されるか、または、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合する原子と一緒になってヘテロ環または炭素環を形成し、
Ｒ４が、Ｃ３−６炭素環、−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、−ＣＱ（Ｒ）２、及び未置換のＣ１−６アルキルからなる群から選択され、ここで、Ｑは、Ｃ３−６炭素環、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つ以上のヘテロ原子を有する５〜１４員のヘテロアリール、−ＯＲ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＸ２Ｈ、−ＣＸＨ２、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−ＣＲＮ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｒ８、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（ＯＲ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ９）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＲ、及び−Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２から選択され、各ｎは、独立して１、２、３、４、及び５から選択され、
各Ｒ５が、独立して、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ６が、独立して、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
Ｍ及びＭ’が、独立して、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｓ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ−Ｓ−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
Ｒ７が、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
Ｒ８が、Ｃ３−６炭素環及びヘテロ環からなる群から選択され、
Ｒ９が、Ｈ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１−６アルキル、−ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ３−６炭素環、及びヘテロ環からなる群から選択され、
各Ｒが、独立して、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ’が、独立して、Ｃ１−１８アルキル、Ｃ２−１８アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ”が、独立して、Ｃ３−１４アルキル及びＣ３−１４アルケニルからなる群から選択され、
各Ｒ＊が、独立して、Ｃ１−１２アルキル及びＣ２−１２アルケニルからなる群から選択され、
各Ｙが、独立して、Ｃ３−６炭素環であり、
各Ｘが、独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群から選択され、
ｍが、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択される化合物、またはそれらの塩もしくは異性体を含む。
【０３３１】
いくつかの実施形態では、式（Ｘ）の化合物の別のサブセットは、
Ｒ１が、Ｃ５−３０アルキル、Ｃ５−２０アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群から選択され、
Ｒ２及びＲ３が、独立して、Ｈ、Ｃ２−１４アルキル、Ｃ２−１４アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ＊ＯＲ”からなる群から選択されるか、または、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合する原子と一緒になってヘテロ環または炭素環を形成し、
Ｒ４が、−（ＣＨ２）ｎＱまたは−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲであり、ここで、Ｑは、−Ｎ（Ｒ）２であり、ｎは、３、４、及び５から選択され、
各Ｒ５が、独立して、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ６が、独立して、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
Ｍ及びＭ’が、独立して、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｓ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ−Ｓ−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
Ｒ７が、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒが、独立して、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ’が、独立して、Ｃ１−１８アルキル、Ｃ２−１８アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ”が、独立して、Ｃ３−１４アルキル及びＣ３−１４アルケニルからなる群から選択され、
各Ｒ＊が、独立して、Ｃ１−１２アルキル及びＣ１−１２アルケニルからなる群から選択され、
各Ｙが、独立して、Ｃ３−６炭素環であり、
各Ｘが、独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群から選択され、
ｍが、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択される化合物、またはそれらの塩もしくは異性体を含む。
【０３３２】
いくつかの実施形態では、式（Ｘ）の化合物の別のサブセットは、
Ｒ１が、Ｃ５−３０アルキル、Ｃ５−２０アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群から選択され、
Ｒ２及びＲ３が、独立して、Ｃ１−１４アルキル、Ｃ２−１４アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ＊ＯＲ”からなる群から選択されるか、または、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合する原子と一緒になってヘテロ環または炭素環を形成し、
Ｒ４が、−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、及び−ＣＱ（Ｒ）２からなる群から選択され、ここで、Ｑは、−Ｎ（Ｒ）２であり、ｎは、１、２、３、４、及び５から選択され、
各Ｒ５が、独立して、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ６が、独立して、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
Ｍ及びＭ’が、独立して、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｓ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ−Ｓ−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
Ｒ７が、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒが、独立して、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ’が、独立して、Ｃ１−１８アルキル、Ｃ２−１８アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ”が、独立して、Ｃ３−１４アルキル及びＣ３−１４アルケニルからなる群から選択され、
各Ｒ＊が、独立して、Ｃ１−１２アルキル及びＣ２−１２アルケニルからなる群から選択され、
各Ｙが、独立して、Ｃ３−６炭素環であり、
各Ｘが、独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群から選択され、
ｍが、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択される化合物、またはそれらの塩もしくは異性体を含む。
【０３３３】
いくつかの実施形態では、式（Ｘ）の化合物のサブセットは、式（ＸＡ）：
【化４６】
2019504002.tif 000048
（ＸＡ）
の化合物、またはその塩もしくは異性体を含み、式中、ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され、ｍは、５、６、７、８、及び９から選択され、Ｍ１は、結合またはＭ’であり、Ｒ４は、未置換のＣ１−３アルキル、または−（ＣＨ２）ｎＱであり、ここで、Ｑは、ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｒ８、−ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−ＮＨＣ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、ヘテロアリール、またはヘテロシクロアルキルであり、Ｍ及びＭ’は、独立して、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ−Ｓ−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１−１４アルキル、及びＣ２−１４アルケニルからなる群から選択される。
【０３３４】
いくつかの実施形態では、式（Ｘ）の化合物のサブセットは、式（ＸＩ）：
【化４７】
2019504002.tif 000049
（ＩＩ）
の化合物、またはその塩もしくは異性体を含み、式中、ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され、Ｍ１は、結合またはＭ’であり、Ｒ４は、未置換のＣ１−３アルキル、または−（ＣＨ２）ｎＱであり、ｎは、２、３、または４であり、Ｑは、ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｒ８、−ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−ＮＨＣ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、ヘテロアリール、またはヘテロシクロアルキルであり、Ｍ及びＭ’は、独立して、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ−Ｓ−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１−１４アルキル、及びＣ２−１４アルケニルからなる群から選択される。
【０３３５】
いくつかの実施形態では、式（Ｘ）の化合物のサブセットは、式（ＸＩａ）、（ＸＩｂ）、（ＸＩｃ）、もしくは（ＸＩｅ）：
【化４８】
2019504002.tif 000050
の化合物、またはその塩もしくは異性体を含み、式中、Ｒ４は本明細書に記載される通りである。
【０３３６】
いくつかの実施形態では、式（Ｘ）の化合物のサブセットは、式（ＸＩｄ）：
【化４９】
2019504002.tif 000051
（ＩＩｄ）
の化合物、またはその塩もしくは異性体を含み、式中、ｎは、２、３、または４であり、ｍ、Ｒ’、Ｒ”、及びＲ２〜Ｒ６は、本明細書に記載される通りである。例えば、Ｒ２及びＲ３の各々は、独立してＣ５−１４アルキル及びＣ５−１４アルケニルからなる群から選択され得る。
【０３３７】
いくつかの実施形態では、式（Ｘ）の化合物のサブセットは、式（ＸＩａ）、（ＸＩｂ）、（ＸＩｃ）、もしくは（ＸＩｅ）：
【化５０】
2019504002.tif 000052
の化合物またはその塩もしくは異性体を含み、式中、Ｒ４は、本明細書に記載される通りである。
【０３３８】
いくつかの実施形態では、式（Ｘ）の化合物のサブセットは、式（ＸＩｄ）：
【化５１】
2019504002.tif 000053
（ＸＩｄ）
の化合物、またはその塩もしくは異性体を含み、式中、ｎは、２、３、または４であり、ｍ、Ｒ’、Ｒ”、及びＲ２〜Ｒ６は、本明細書に記載される通りである。例えば、Ｒ２及びＲ３の各々は、独立してＣ５−１４アルキル及びＣ５−１４アルケニルからなる群から選択され得る。
【０３３９】
いくつかの実施形態では、式（Ｘ）の化合物は、以下からなる群から選択される：
【化５２】
2019504002.tif 000054
【化５３】
2019504002.tif 000055
【化５４】
2019504002.tif 000056
【化５５】
2019504002.tif 000057
【化５６】
2019504002.tif 000058
【化５７】
2019504002.tif 000059
【化５８】
2019504002.tif 000060
【化５９】
2019504002.tif 000061
【化６０】
2019504002.tif 000062
【化６１】
2019504002.tif 000063
【０３４０】
さらなる実施形態では、式（Ｘ）の化合物は、以下からなる群から選択される：
【化６２】
2019504002.tif 000064
【化６３】
2019504002.tif 000065
【０３４１】
いくつかの実施形態では、式（Ｘ）の化合物は、以下からなる群から選択される：
【化６４】
2019504002.tif 000066
【化６５】
2019504002.tif 000067
【化６６】
2019504002.tif 000068
【化６７】
2019504002.tif 000069
【化６８】
2019504002.tif 000070
【化６９】
2019504002.tif 000071
【化７０】
2019504002.tif 000072
【化７１】
2019504002.tif 000073
【化７２】
2019504002.tif 000074
【化７３】
2019504002.tif 000075
【化７４】
2019504002.tif 000076
【化７５】
2019504002.tif 000077
【化７６】
2019504002.tif 000078
【化７７】
2019504002.tif 000079
【化７８】
2019504002.tif 000080
【化７９】
2019504002.tif 000081
【化８０】
2019504002.tif 000082
【化８１】
2019504002.tif 000083
【化８２】
2019504002.tif 000084
【化８３】
2019504002.tif 000085
【化８４】
2019504002.tif 000086
【化８５】
2019504002.tif 000087
【化８６】
2019504002.tif 000088
【化８７】
2019504002.tif 000089
【化８８】
2019504002.tif 000090
【化８９】
2019504002.tif 000091
ならびにそれらの塩及び異性体。
【０３４２】
いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、以下の化合物を含む：
【化９０】
2019504002.tif 000092
またはその塩もしくは異性体。
【０３４３】
いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に記載の化合物（例えば、式（Ｘ）、（ＸＡ）、（ＸＩ）、（ＸＩａ）、（ＸＩｂ）、（ＸＩｃ）、（ＸＩｄ）、または（ＸＩｅ）に従う化合物）を含む脂質成分を含むナノ粒子組成物を特徴とする。
【０３４４】
非カチオン性ヘルパー脂質を含む非カチオン性脂質
該ナノ粒子の脂質成分は、任意の中性及び／または非カチオン性脂質（例えば、生理的ｐＨで中性または非カチオン性脂質である脂質）を含んでよい。非カチオン性脂質の脂質としては、脂肪酸、グリセロ脂質、及びプレノール脂質を挙げることができるがこれらに限定されない。ある特定の実施形態では、該非カチオン性脂質は脂肪酸である。該脂肪酸は、飽和でも不飽和でもよい。不飽和脂肪酸の例としては、ミリストレイン酸、パルミトレイン酸、サピエン酸、オレイン酸、エライジン酸、バクセン酸、リノール酸、リノエライジン酸、アルファ−リノエライジン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、エルカ酸、ドコサヘキサン酸、またはそれらの任意のｃｉｓ／ｔｒａｎｓ二重結合異性体が挙げられるがこれらに限定されない。ある特定の実施形態では、該脂質はオレイン酸である。ある特定の実施形態では、該脂質は、オレイン酸の異性体である（例えば、その二重結合がオレイン酸に対して脂肪族鎖に沿って異なる位置にある）。ある特定の実施形態では、該脂質は、オレイン酸の類似体である（例えば、その脂肪族鎖が、オレイン酸の脂肪族鎖より１〜１０炭素長いまたは１〜１０炭素短い）。飽和脂肪酸の例としては、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、ベヘン酸、リグノセリン酸、及びセロチン酸が挙げられるがこれらに限定されない。ある特定の実施形態では、該非カチオン性脂質は、脂肪酸のグリシン誘導体（例えば、Ｎ−パリトイルグリシンまたはＮ−オレオグリシン）である。ある特定の実施形態では、該非カチオン性脂質は、グリセロ脂質（例えば、モノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリド）である。ある特定の実施形態では、該非カチオン性脂質は、モノグリセリドである。ある特定の実施形態では、該非カチオン性脂質は、ジグリセリドである。ある特定の実施形態では、該非カチオン性脂質は、トリグリセリドである。ある特定の実施形態では、該非カチオン性脂質は、糖部（例えば、糖類、二糖類、多糖類）を含む。非カチオン性脂質の例としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：
【化９１】
2019504002.tif 000093
【化９２】
2019504002.tif 000094
【０３４５】
糖を含む非カチオン性脂質の例としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：
【化９３】
2019504002.tif 000095
【０３４６】
双性イオン性非カチオン性脂質
ある特定の実施形態では、本発明で有用な非カチオン性脂質は、ＤＳＰＣ類似体であり、この場合、ホスホコリン部分が異なる双性イオン基と交換されている。
【０３４７】
ＤＳＰＣは以下の構造を有する：
【化９４】
2019504002.tif 000096
【０３４８】
異なる双性イオン基との交換は、図７３に示される。
【０３４９】
ある特定の実施形態では、該異なる双性イオン基は、ホスホコリン基ではない。ある特定の実施形態では、本発明で有用な非カチオン性脂質は、式（ＩＩ）の化合物である。本明細書に提供するのは、式（ＩＩ）：
【化９５】
2019504002.tif 000097
（ＩＩ）
の化合物またはその塩であり、式中：
Ｚは双性イオン部分であり、
該双性イオン部分は、式：
【化９６】
2019504002.tif 000098
のものではなく、
ｍは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
Ａは、式：
【化９７】
2019504002.tif 000099
のものであり、
Ｌ２の各場合は、独立して、結合または任意に置換されるＣ１−６アルキレンであり、該任意に置換されるＣ１−６アルキレンの１つのメチレン単位は、−Ｏ−、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ−、または−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−で任意に交換され、
Ｒ２の各場合は、独立して、任意に置換されるＣ１−３０アルキル、任意に置換されるＣ１−３０アルケニル、または任意に置換されるＣ１−３０アルキニルであり、任意に、Ｒ２の１つ以上のメチレン単位は、独立して、任意に置換されるカルボシクリレン、任意に置換されるヘテロシクリレン、任意に置換されるアリーレン、任意に置換されるヘテロアリーレン、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、または−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ−で交換され、
ＲＮの各場合は、独立して、水素、任意に置換されるアルキル、または窒素保護基であり、
環Ｂは、任意に置換されるカルボシクリル、任意に置換されるヘテロシクリル、任意に置換されるアリール、または任意に置換されるヘテロアリールであり、
ｐは、１または２である。
【０３５０】
ある特定の実施形態では、Ｚはアミノ酸またはその誘導体である。ある特定の実施形態では、Ｚは以下の式：
【化９８】
2019504002.tif 000100
のうちの１つのものであり、
式中、ＲＯは、水素、任意に置換されるアルキル、または酸素保護基である。ある特定の実施形態では、式（ＩＩ）の化合物は、以下の式：
【化９９】
2019504002.tif 000101
のうちの１つのもの、またはその塩である。
【０３５１】
ある特定の実施形態では、式（ＩＩ）の化合物は、以下の式：
【化１００】
2019504002.tif 000102
のうちの１つのもの、またはその塩である。
【０３５２】
例えば、ある特定の実施形態では、式（ＩＩ）の化合物は、以下：
【化１０１】
2019504002.tif 000103
【化１０２】
2019504002.tif 000104
【化１０３】
2019504002.tif 000105
【化１０４】
2019504002.tif 000106
、
またはそれらの塩のうちの１つである。
【０３５３】
オレイン酸類似体
本明細書に記載の通り、本発明で有用な非カチオン性脂質は、オレイン酸の類似体を含む。本明細書に記載の通り、オレイン酸類似体は、修飾されたオレイン酸尾部、修飾されたカルボン酸部分、またはその両方を含むことができる。ある特定の実施形態では、オレイン酸の類似体は、式（ＩＶ）の化合物である。本明細書に提供するのは、式（ＩＶ）：
【化１０５】
2019504002.tif 000107
（ＩＶ）
の化合物またはその塩であり、式中：
Ｒ４は、任意に置換されるＣ１０−４０アルキル、任意に置換されるＣ１０−４０アルケニル、任意に置換されるＣ１０−４０アルキニルであり、Ｒ４の少なくとも１つのメチレン基は、独立して、任意に置換されるカルボシクリレン、任意に置換されるヘテロシクリレン、任意に置換されるアリーレン、任意に置換されるヘテロアリーレン、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、または−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ−で交換され、
ＲＮの各場合は、独立して、水素、任意に置換されるアルキル、または窒素保護基である。
【０３５４】
ある特定の実施形態では、式（ＩＶ）の化合物は、以下：
【化１０６】
2019504002.tif 000108
またはそれらの塩のうちの１つである。
【０３５５】
ある特定の実施形態では、オレイン酸類似体は、オレイン酸のカルボン酸部分が異なる基で交換された化合物である。ある特定の実施形態では、本発明で有用なオレイン酸類似体は、以下：
【化１０７】
2019504002.tif 000109
またはそれらの塩のうちの１つである。
【０３５６】
ある特定の実施形態では、本発明で有用なオレイン酸類似体は：
【化１０８】
2019504002.tif 000110
である。
【０３５７】
ＰＥＧ化脂質
ナノ粒子組成物の脂質成分は、１つ以上のＰＥＧまたはＰＥＧ修飾脂質を含み得る。かかる種は、代替的にＰＥＧ化脂質と呼ばれる場合がある。ＰＥＧ脂質は、ポリエチレングリコールで修飾された脂質である。ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、及びそれらの混合物からなる非限定的な群から選択され得る。例えば、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧ、ＰＥＧ−ＤＭＧ、ＰＥＧ−ＤＬＰＥ、ＰＥＧ−ＤＭＰＥ、ＰＥＧ−ＤＰＰＣ、またはＰＥＧ−ＤＳＰＥ脂質でよい。
【０３５８】
いくつかの実施形態では、該ＰＥＧ修飾脂質は、ＰＥＧ  ＤＭＧの修飾形である。ＰＥＧ−ＤＭＧは、以下の構造：
【化１０９】
2019504002.tif 000111
を有する。
【０３５９】
１つの実施形態では、本発明で有用なＰＥＧ脂質は、その内容が参照することにより全体として本明細書に組み込まれる国際公開第ＷＯ２０１２０９９７５５号に記載のＰＥＧ化脂質でよい。本明細書に記載のこれら例示的なＰＥＧ脂質のいずれかは、当該ＰＥＧ鎖にヒドロキシル基を含むように修飾されてもよい。ある特定の実施形態では、該ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ−ＯＨ脂質である。本明細書で一般的に定義される、「ＰＥＧ−ＯＨ脂質」（本明細書では「ヒドロキシＰＥＧ化脂質」とも呼ばれる）は、当該脂質上に１つ以上のヒドロキシル（−ＯＨ）基を有するＰＥＧ化脂質である。ある特定の実施形態では、該ＰＥＧ−ＯＨ脂質は、当該ＰＥＧ鎖上に１つ以上のヒドロキシル基を含む。ある特定の実施形態では、ＰＥＧ−ＯＨまたはヒドロキシＰＥＧ化脂質は、当該ＰＥＧ鎖の末端に−ＯＨ基を含む。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【０３６０】
ＰＥＧ及びＰＥＧ−ＯＨ脂質
ある特定の実施形態では、本発明で有用なＰＥＧ脂質は、式（ＩＩＩ）の化合物である。本明細書に提供するのは、式（ＩＩＩ）：
【化１１０】
2019504002.tif 000112
（ＩＩＩ）
の化合物またはその塩であり、式中：
Ｒ３は−ＯＲＯであり、
ＲＯは、水素、任意に置換されるアルキル、または酸素保護基であり、
ｒは、１と１００を含めた１〜１００の整数であり、
Ｌ１は、任意に置換されるＣ１−１０アルキレンであり、該任意に置換されるＣ１−１０アルキレンの少なくとも１つのメチレンは、独立して、任意に置換されるカルボシクリレン、任意に置換されるヘテロシクリレン、任意に置換されるアリーレン、任意に置換されるヘテロアリーレン、−Ｏ−、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ−、または−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−で交換され、
Ｄは、クリックケミストリーによって得られる部分または生理的条件下で開裂可能な部分であり、
ｍは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
Ａは、式：
【化１１１】
2019504002.tif 000113
のものであり、
Ｌ２の各場合は、独立して、結合または任意に置換されるＣ１−６アルキレンであり、該任意に置換されるＣ１−６アルキレンの１つのメチレン単位は、−Ｏ−、Ｎ（ＲＮ）−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ−、または−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−で任意に交換され、
Ｒ２の各場合は、独立して、任意に置換されるＣ１−３０アルキル、任意に置換されるＣ１−３０アルケニル、または任意に置換されるＣ１−３０アルキニルであり、任意に、Ｒ２の１つ以上のメチレン単位は、独立して、任意に置換されるカルボシクリレン、任意に置換されるヘテロシクリレン、任意に置換されるアリーレン、任意に置換されるヘテロアリーレン、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、または−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ−で交換され、
ＲＮの各場合は、独立して、水素、任意に置換されるアルキル、または窒素保護基であり、
環Ｂは、任意に置換されるカルボシクリル、任意に置換されるヘテロシクリル、任意に置換されるアリール、または任意に置換されるヘテロアリールであり、
ｐは、１または２である。
【０３６１】
ある特定の実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物は、ＰＥＧ−ＯＨ脂質である（すなわち、Ｒ３が−ＯＲＯ、及びＲＯが水素である）。ある特定の実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物は、式（ＩＩＩ−ＯＨ）：
【化１１２】
2019504002.tif 000114
（ＩＩＩ−ＯＨ）
のもの、またはその塩である。
【０３６２】
ある特定の実施形態では、Ｄは、クリックケミストリーによって得られる部分である（例えば、トリアゾール）。ある特定の実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物は、式（ＩＩＩ−ａ−１）もしくは（ＩＩＩ−ａ−２）：
【化１１３】
2019504002.tif 000115
のもの、またはその塩である。
【０３６３】
ある特定の実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物は、以下の式：
【化１１４】
2019504002.tif 000116
のうちの１つのもの、またはその塩であり、式中
ｓは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。
【０３６４】
ある特定の実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物は、以下の式：
【化１１５】
2019504002.tif 000117
のうちの１つのもの、またはその塩である。
【０３６５】
ある特定の実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物は、以下の式：
【化１１６】
2019504002.tif 000118
のうちの１つのもの、またはその塩である。
【０３６６】
ある特定の実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物は、以下の式：
【化１１７】
2019504002.tif 000119
【化１１８】
2019504002.tif 000120
のうちの１つのもの、またはその塩である。
【０３６７】
ある特定の実施形態では、Ｄは、生理的条件下で開裂可能な部分である（例えば、エステル、アミド、カーボネート、カルバメート、尿素）。ある特定の実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物は、式（ＩＩＩ−ｂ−１）もしくは（ＩＩＩ−ｂ−２）：
【化１１９】
2019504002.tif 000121
のもの、またはその塩である。ある特定の実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物は、式（ＩＩＩ−ｂ−１−ＯＨ）もしくは（ＩＩＩ−ｂ−２−ＯＨ）：
【化１２０】
2019504002.tif 000122
のもの、またはその塩である。
【０３６８】
ある特定の実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物は、以下の式：
【化１２１】
2019504002.tif 000123
のうちの１つのもの、またはその塩である。
【０３６９】
ある特定の実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物は、以下の式：
【化１２２】
2019504002.tif 000124
【化１２３】
2019504002.tif 000125
のうちの１つのもの、またはその塩である。
【０３７０】
ある特定の実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物は、以下の式：
【化１２４】
2019504002.tif 000126
のうちの１つのもの、またはその塩である。
【０３７１】
ある特定の実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物は、以下の式：
【化１２５】
2019504002.tif 000127
のうちの１つのもの、またはその塩である。
【０３７２】
ある特定の実施形態では、本発明で有用なＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ化脂肪酸である。ある特定の実施形態では、本発明で有用なＰＥＧ脂質は、式（Ｖ）の化合物である。本明細書に提供するのは、式（Ｖ）：
【化１２６】
2019504002.tif 000128
（Ｖ）
の化合物、またはその塩であり、式中：
Ｒ３は−ＯＲＯであり、
ＲＯは、水素、任意に置換されるアルキル、または酸素保護基であり、
ｒは、１と１００を含めた１〜１００の整数であり、
Ｒ５は、任意に置換されるＣ１０−４０アルキル、任意に置換されるＣ１０−４０アルケニル、または任意に置換されるＣ１０−４０アルキニルであり、任意に、Ｒ５の１つ以上のメチレン基は、任意に置換されるカルボシクリレン、任意に置換されるヘテロシクリレン、任意に置換されるアリーレン、任意に置換されるヘテロアリーレン、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、または−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ−で交換され、
ＲＮの各場合は、独立して、水素、任意に置換されるアルキル、または窒素保護基である。
【０３７３】
ある特定の実施形態では、式（Ｖ）の化合物は、式（Ｖ−ＯＨ）：
【化１２７】
2019504002.tif 000129
（Ｖ−ＯＨ）
のもの、またはその塩である。
【０３７４】
ある特定の実施形態では、式（Ｖ）の化合物は、以下の式：
【化１２８】
2019504002.tif 000130
【化１２９】
2019504002.tif 000131
のうちの１つのもの、またはその塩である。
【０３７５】
異なるＰＥＧ脂質を有する多くのＬＮＰ製剤を、以下に挙げる実施例に論じる通りに調製し、活性を調べた。
【０３７６】
ヘルパーリン脂質を含むリン脂質
本明細書で定義されるリン脂質は、リン酸基を含む任意の脂質である。リン脂質は、非カチオン性脂質のサブセットである。ナノ粒子組成物の脂質成分は、１つ以上のリン脂質、例えば、１つ以上の（ポリ）不飽和脂質を含んでよい。リン脂質は、１つ以上の脂質二重層内に集合し得る。一般に、リン脂質は、リン脂質部分及び１つ以上の脂肪酸部分を含み得る。リン脂質部分は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、２−リソホスファチジルコリン、及びスフィンゴミエリンからなる非限定的な群から選択され得る。脂肪酸部分は、ラウリン酸、ミリスチン酸、ミリストレイン酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、アルファ−リノレン酸、エルカ酸、フィタン酸、アラキジン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ベヘン酸、ドコサペンタエン酸、及びドコサヘキサエン酸からなる非限定的な群から選択され得る。分岐、酸化、環化、及びアルキンを含めた修飾ならびに置換を備えた天然腫を含めた非天然腫もまた企図される。例えば、リン脂質は、１つ以上のアルキン（例えば、１つ以上の二重結合が三重結合で交換されるアルケニル基）で官能化または架橋され得る。適切な反応条件下で、アルキン基は、アジドへ曝露されると、銅触媒付加環化を受ける場合がある。かかる反応は、ナノ粒子組成物の脂質二重層を官能化し、膜透過もしくは細胞認識を促進すること、または、標的化もしくは画像化部分（例えば、色素）等の有用な成分にナノ粒子組成物をコンジュゲートすることにおいて有用な場合がある。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【０３７７】
該組成物及び方法に有用なリン脂質は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、
１，２−ジオレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、
１，２−ジリノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、
１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、
１，２−ジオレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、
１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、
１，２−ジウンデカノイル−ｓｎ−グリセロホスホコリン（ＤＵＰＣ）、
１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、
１，２−ジ−Ｏ−オクタデセニル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０ジエーテルＰＣ）、
１−オレオイル−２−コレステリルヘミスクシノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、
１−ヘキサデシル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｃ１６ＬｙｓｏＰＣ）、
１，２−ジリノレノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、
１，２−ジアラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、
１，２−ジドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、
１，２−ジフィタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＭＥ１６．０ＰＥ）、
１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、
１，２−ジリノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、
１，２−ジリノレノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、
１，２−ジアラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、
１，２−ジドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、
１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、及びスフィンゴミエリンからなる非限定的な群から選択され得る。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【０３７８】
いくつかの実施形態では、ナノ粒子組成物はＤＳＰＣを含む。ある特定の実施形態では、ナノ粒子組成物はＤＯＰＥを含む。いくつかの実施形態では、ナノ粒子組成物はＤＳＰＣ及びＤＯＰＥの両方を含む。リン脂質の例としては、以下：
【化１３０】
2019504002.tif 000132
【化１３１】
2019504002.tif 000133
が挙げられるがこれらに限定されない。
【０３７９】
ある特定の実施形態では、本発明で有用なリン脂質は、ＤＳＰＣの類似体またはバリアントである。ある特定の実施形態では、本発明で有用なリン脂質は、式（Ｉ）：
【化１３２】
2019504002.tif 000134
（Ｉ）
の化合物またはその塩であり、式中：
各Ｒ１は、独立して、任意に置換されるアルキルであるか、もしくは、任意に２つのＲ１が介在原子とともに結合して任意に置換される単環式カルボシクリルもしくは任意に置換される単環式ヘテロシクリルを形成するか、または、任意に３つのＲ１が介在原子とともに結合して任意に置換される二環式カルボシクリルもしくは任意に置換される二環式ヘテロシクリルを形成し、
ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
ｍは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
Ａは、式：
【化１３３】
2019504002.tif 000135
のものであり、
Ｌ２の各場合は、独立して、結合または任意に置換されるＣ１−６アルキレンであり、該任意に置換されるＣ１−６アルキレンの１つのメチレン単位は、−Ｏ−、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ−、または−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−で任意に交換され、
Ｒ２の各場合は、独立して、任意に置換されるＣ１−３０アルキル、任意に置換されるＣ１−３０アルケニル、または任意に置換されるＣ１−３０アルキニルであり、任意に、Ｒ２の１つ以上のメチレン単位は、独立して、任意に置換されるカルボシクリレン、任意に置換されるヘテロシクリレン、任意に置換されるアリーレン、任意に置換されるヘテロアリーレン、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、または−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ−で交換され、
ＲＮの各場合は、独立して、水素、任意に置換されるアルキル、または窒素保護基であり、
環Ｂは、任意に置換されるカルボシクリル、任意に置換されるヘテロシクリル、任意に置換されるアリール、または任意に置換されるヘテロアリールであり、
ｐは、１または２である。
ただし、該化合物は、式：
【化１３４】
2019504002.tif 000136
のものではなく、式中、Ｒ２の各場合は、独立して、未置換のアルキル、未置換のアルケニル、または未置換のアルキニルである。
【０３８０】
リン脂質の頭基の修飾
ある特定の実施形態では、本発明で有用なリン脂質は、修飾されたリン脂質の頭基（例えば、修飾されたコリン基）を含む。ある特定の実施形態では、修飾された頭基を備えたリン脂質は、修飾された４級アミンを備えたＤＳＰＣ、またはその類似体である。例えば、式（Ｉ）の実施形態では、少なくとも１つのＲ１はメチルではない。ある特定の実施形態では、少なくとも１つのＲ１は水素でもメチルでもない。ある特定の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、以下の式：
【化１３５】
2019504002.tif 000137
のうちの１つのもの、またはその塩であり、式中：
各ｔは、独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
各ｕは、独立して、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
各ｖは、独立して、１、２、または３である。
【０３８１】
ある特定の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、以下の式：
【化１３６】
2019504002.tif 000138
のうちの１つのもの、またはその塩である。
【０３８２】
ある特定の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、以下：
【化１３７】
2019504002.tif 000139
【化１３８】
2019504002.tif 000140
【化１３９】
2019504002.tif 000141
のうちの１つ、またはその塩である。
【０３８３】
リン脂質のコアの修飾
ある特定の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ−ａ）：
【化１４０】
2019504002.tif 000142
（Ｉ−ａ）
のもの、またはその塩である。
【０３８４】
ある特定の実施形態では、本発明で有用なリン脂質は、修飾されたコアを含む（例えば、図４７Ｂ参照）。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の修飾されたコアを備えたリン脂質は、修飾されたコア構造を備えたＤＳＰＣまたはその類似体である。例えば、式（Ｉ−ａ）のある特定の実施形態では、Ａ基は、以下の式のものではない：
【化１４１】
2019504002.tif 000143
。
【０３８５】
ある特定の実施形態では、式（Ｉ−ａ）の化合物は、以下の式：
【化１４２】
2019504002.tif 000144
のうちの１つのもの、またはその塩である。
【０３８６】
ある特定の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、以下：
【化１４３】
2019504002.tif 000145
またはそれらの塩のうちの１つである。
【０３８７】
ある特定の実施形態では、本発明で有用なリン脂質は、グリセリド部分の代わりに環状部分を含む。ある特定の実施形態では、本発明で有用なリン脂質は、グリセリド部分の代わりに環状部分を備えたＤＳＰＣまたはその類似体である。ある特定の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ−ｂ）：
【化１４４】
2019504002.tif 000146
（Ｉ−ｂ）
のもの、またはその塩である。
【０３８８】
ある特定の実施形態では、式（Ｉ−ｂ）の化合物は、式（Ｉ−ｂ−１）：
【化１４５】
2019504002.tif 000147
（Ｉ−ｂ−１）
のもの、またはその塩であり、式中：
ｗは、０、１、２、または３である。
【０３８９】
ある特定の実施形態では、式（Ｉ−ｂ）の化合物は、式（Ｉ−ｂ−２）：
【化１４６】
2019504002.tif 000148
（Ｉ−ｂ−２）
のもの、またはその塩である。
【０３９０】
ある特定の実施形態では、式（Ｉ−ｂ）の化合物は、式（Ｉ−ｂ−３）：
【化１４７】
2019504002.tif 000149
（Ｉ−ｂ−３）
のもの、またはその塩である。
【０３９１】
ある特定の実施形態では、式（Ｉ−ｂ）の化合物は、式（Ｉ−ｂ−４）：
【化１４８】
2019504002.tif 000150
（Ｉ−ｂ−４）
のもの、またはその塩である。
【０３９２】
ある特定の実施形態では、式（Ｉ−ｂ）の化合物は、以下：
【化１４９】
2019504002.tif 000151
またはそれらの塩のうちの１つである。
【０３９３】
リン脂質の尾基の修飾
ある特定の実施形態では、本発明で有用なリン脂質は、修飾された尾基を含む。ある特定の実施形態では、本発明で有用なリン脂質は、修飾された尾基を備えたＤＳＰＣまたはその類似体である。本明細書に記載される「修飾された尾基」は、より短いもしくはより長い脂肪族鎖、分岐が導入された脂肪族鎖、置換が導入された脂肪族鎖、１つ以上のメチレンが環状もしくはヘテロ原子基で交換された脂肪族鎖、またはそれらの任意の組合せを備えた尾基でよい。例えば、ある特定の実施形態では、（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ−ａ）のもの、またはその塩であり、この場合、Ｒ２の各場合のＲ２の少なくとも１つの例は、任意に置換されるＣ１−３０アルキルであり、Ｒ２の１つ以上のメチレン単位は、独立して、任意に置換されるカルボシクリレン、任意に置換されるヘテロシクリレン、任意に置換されるアリーレン、任意に置換されるヘテロアリーレン、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、または−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ−で交換される。
【０３９４】
ある特定の実施形態では、式（Ｉ−ａ）の化合物は、式（Ｉ−ｃ）：
【化１５０】
2019504002.tif 000152
（Ｉ−ｃ）
のもの、またはその塩であり、式中：
各ｘは、独立して、０と３０を含めた０〜３０の整数であり、
Ｇの各場合は、独立して、任意に置換されるカルボシクリレン、任意に置換されるヘテロシクリレン、任意に置換されるアリーレン、任意に置換されるヘテロアリーレン、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、または−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ−からなる群から選択される。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【０３９５】
ある特定の実施形態では、式（Ｉ−ｃ）の化合物は、式（Ｉ−ｃ−１）：
【化１５１】
2019504002.tif 000153
（Ｉ−ｃ−１）
のもの、またはその塩であり、式中：
ｖの各場合は、独立して、１、２、または３である。
【０３９６】
ある特定の実施形態では、式（Ｉ−ｃ）の化合物は、式（Ｉ−ｃ−２）：
【化１５２】
2019504002.tif 000154
（Ｉ−ｃ−２）
のもの、またはその塩である。
【０３９７】
ある特定の実施形態では、式（Ｉ−ｃ）の化合物は、以下の式：
【化１５３】
2019504002.tif 000155
のもの、またはその塩である。
【０３９８】
ある特定の実施形態では、式（Ｉ−ｃ）の化合物は、以下：
【化１５４】
2019504002.tif 000156
またはその塩である。
【０３９９】
ある特定の実施形態では、式（Ｉ−ｃ）の化合物は、式（Ｉ−ｃ−３）：
【化１５５】
2019504002.tif 000157
（Ｉ−ｃ−３）
のもの、またはその塩である。
【０４００】
ある特定の実施形態では、式（Ｉ−ｃ）の化合物は、以下の式：
【化１５６】
2019504002.tif 000158
のもの、またはその塩である。
【０４０１】
ある特定の実施形態では、式（Ｉ−ｃ）の化合物は、以下：
【化１５７】
2019504002.tif 000159
またはその塩である。
【０４０２】
ホスホコリンリンカーの修飾
ある特定の実施形態では、本発明で有用なリン脂質は、修飾されたホスホコリン部分を含み、この場合、当該４級アミンをホスホリル基につなぐアルキル鎖はエチレンではない（例えば、ｎは２ではない）。従って、ある特定の実施形態では、本発明で有用なリン脂質は、式（Ｉ）の化合物であり、この場合、ｎは１、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。例えば、ある特定の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、以下の式：
【化１５８】
2019504002.tif 000160
のうちの１つのもの、またはその塩である。
【０４０３】
ある特定の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、以下：
【化１５９】
2019504002.tif 000161
【化１６０】
2019504002.tif 000162
またはそれらの塩のうちの１つである。
【０４０４】
ＤＳＰＣ以外のリン脂質を有する多くのＬＮＰ製剤を以下の実施例に示す通りに調製し、活性を調べた。例示的なリン脂質を、図７５Ａ、７５Ｄ、及び７５Ｅを含めた図に示す。
【０４０５】
以下の表は、該リン脂質の概要を与え、該リン脂質に関するデータを含む実施例を示す。
【表１−１】
2019504002.tif 000163
【表１−２】
2019504002.tif 000164
【表１−３】
2019504002.tif 000165
【０４０６】
構造脂質
ナノ粒子組成物の脂質成分は、１つ以上の構造脂質を含んでよい。該脂質ナノ粒子に構造脂質を組み込むことで、該粒子内での他の脂質の凝集を軽減することに役立つ場合がある。構造脂質は、コレステロール、フェコステロール、シトステロール、エルゴステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、トマチジン、トマチン、ウルソール酸、アルファ−トコフェロール、ホパノイド、フィトステロール、ステロイド、及びそれらの混合物からなる群から選択することができるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、該構造脂質は、ステロールである。本明細書で定義される、「ステロール」は、ステロイドアルコールからなるステロイドの下位集団である。ある特定の実施形態では、該構造脂質はステロイドである。ある特定の実施形態では、該構造脂質はコレステロールである。ある特定の実施形態では、該構造脂質はコレステロールの類似体である。ある特定の実施形態では、該構造脂質はアルファ−トコフェロールである。構造脂質の例としては、以下：
【化１６１】
2019504002.tif 000166
が挙げられるがこれらに限定されない。
【０４０７】
化学的定義
特定の官能基及び化学用語の定義を以下にさらに詳細に記載する。化学元素は、ｔｈｅ  Ｐｅｒｉｏｄｉｃ  Ｔａｂｌｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｌｅｍｅｎｔｓ，ＣＡＳ  ｖｅｒｓｉｏｎ，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｐｈｙｓｉｃｓ，７５ｔｈ  Ｅｄ．、内表紙に従って識別され、特定の官能基は、概してその中に記載の通りに定義される。さらに、有機化学の一般原則、ならびに特定の官能基及び反応性は、Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｔｈｏｍａｓ  Ｓｏｒｒｅｌｌ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｂｏｏｋｓ，Ｓａｕｓａｌｉｔｏ，１９９９；Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｍａｒｃｈ，Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，２００１、Ｌａｒｏｃｋ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８９；及びＣａｒｒｕｔｈｅｒｓ，Ｓｏｍｅ  Ｍｏｄｅｒｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，１９８７に記載される。
【０４０８】
本明細書に記載の化合物は、１つ以上の不斉中心を含むことができ、それ故、様々な立体異性体、例えば、エナンチオマー及び／またはジアステレオマーで存在することができる。例えば、本明細書に記載の化合物は、個々のエナンチオマー、ジアステレオマー、または幾何異性体の形態でもよいし、ラセミ混合物及び１つ以上の立体異性体が濃縮された混合物を含めた立体異性体の混合物の形態でもよい。異性体は、キラル高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）ならびにキラルな塩の形成及び結晶化を含めた当技術分野で知られる方法で混合物から単離してもよいし、好ましい異性体を不斉合成によって調製してもよい。例えば、Ｊａｃｑｕｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ，Ｒａｃｅｍａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ（Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８１）；Ｗｉｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ３３：２７２５（１９７７）；Ｅｌｉｅｌ，Ｅ．Ｌ．Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｃａｒｂｏｎ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ（ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，ＮＹ，１９６２）、及びＷｉｌｅｎ，Ｓ．Ｈ．，Ｔａｂｌｅｓ  ｏｆ  Ｒｅｓｏｌｖｉｎｇ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｏｐｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  ｐ．２６８（Ｅ．Ｌ．Ｅｌｉｅｌ，Ｅｄ．，Ｕｎｉｖ．ｏｆ  Ｎｏｔｒｅ  Ｄａｍｅ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｏｔｒｅ  Ｄａｍｅ，ＩＮ  １９７２）を参照されたい。本発明は、さらに、他の異性体を実質的に含まない個々の異性体としての化合物、及び代替的に、様々な異性体の混合物としての化合物を包含する。
【０４０９】
式中、
【化１６２】
2019504002.tif 000167
は、それに対して直接結合する部分の立体化学が特定されていない単結合であり、
【化１６３】
2019504002.tif 000168
は、存在しないまたは単結合であり、
【化１６４】
2019504002.tif 000169
または
【化１６５】
2019504002.tif 000170
は、単結合もしくは二重結合である。
【０４１０】
特に明記しない限り、本明細書に示す構造は、１つ以上の同位体濃縮原子の存在下においてのみが異なる化合物を含むこともまた意図する。例えば、水素の重水素もしくは三重水素による置換、１９Ｆの１８Ｆによる置換、または１２Ｃの１３Ｃもしくは１４Ｃによる置換以外の本構造を有する化合物は、本開示の範囲内である。かかる化合物は、例えば、生物学的アッセイにおける分析ツールまたはプローブとして有用である。
【０４１１】
値の範囲が記載される場合、各値及び該値内の部分的な範囲を包含することを意図する。例えば、「Ｃ１−６アルキル」は、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ１−６、Ｃ１−５、Ｃ１−４、Ｃ１−３、Ｃ１−２、Ｃ２−６、Ｃ２−５、Ｃ２−４、Ｃ２−３、Ｃ３−６、Ｃ３−５、Ｃ３−４、Ｃ４−６、Ｃ４−５、及びＣ５−６アルキルを包含することを意図する。
【０４１２】
「脂肪族」という用語は、アルキル、アルケニル、アルキニル、及び炭素環基を指す。同様に、「ヘテロ脂肪族」という用語は、ヘテロアルキル、ヘテロアルケニル、ヘテロアルキニル、及びヘテロ環基を指す。
【０４１３】
「アルキル」という用語は、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖または分岐飽和炭化水素基のラジカルを指す（「Ｃ１−１０アルキル」）。いくつかの実施形態では、アルキル基は１〜９個の炭素原子を有する（「Ｃ１−９アルキル」）。いくつかの実施形態では、アルキル基は１〜８個の炭素原子を有する（「Ｃ１−８アルキル」）。いくつかの実施形態では、アルキル基は１〜７個の炭素原子を有する（「Ｃ１−７アルキル」）。いくつかの実施形態では、アルキル基は１〜６個の炭素原子を有する（「Ｃ１−６アルキル」）。いくつかの実施形態では、アルキル基は１〜５個の炭素原子を有する（「Ｃ１−５アルキル」）。いくつかの実施形態では、アルキル基は１〜４個の炭素原子を有する（「Ｃ１−４アルキル」）。いくつかの実施形態では、アルキル基は１〜３個の炭素原子を有する（「Ｃ１−３アルキル」）。いくつかの実施形態では、アルキル基は１〜２個の炭素原子を有する（「Ｃ１−２アルキル」）。いくつかの実施形態では、アルキル基は１個の炭素原子を有する（「Ｃ１アルキル」）。いくつかの実施形態では、アルキル基は２〜６個の炭素原子を有する（「Ｃ２−６アルキル」）。Ｃ１−６アルキル基の例としては、メチル（Ｃ１）、エチル（Ｃ２）、プロピル（Ｃ３）（例えば、ｎ−プロピル、イソプロピル）、ブチル（Ｃ４）（例えば、ｎ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル）、ペンチル（Ｃ５）（例えば、ｎ−ペンチル、３−ペンチル、アミル、ネオペンチル、３−メチル−２−ブタニル、第三アミル）、及びヘキシル（Ｃ６）（例えば、ｎ−ヘキシル）が挙げられる。アルキル基のさらなる例としては、ｎ−へプチル（Ｃ７）、ｎ−オクチル（Ｃ８）等が挙げられる。特別の定めのない限り、アルキル基の各場合は、独立して未置換（「未置換のアルキル」）であるか、または１つ以上の置換基（例えば、Ｆ等のハロゲン）で置換される（「置換アルキル」）。ある特定の実施形態では、該アルキル基は、未置換のＣ１−１０アルキル（例えば、未置換のＣ１−６アルキル、例えば、−ＣＨ３（Ｍｅ）、未置換のエチル（Ｅｔ）、未置換のプロピル（Ｐｒ、例えば、未置換のｎ−プロピル（ｎ−Ｐｒ）、未置換のイソプロピル（ｉ−Ｐｒ））、未置換のブチル（Ｂｕ、例えば、未置換のｎ−ブチル（ｎ−Ｂｕ）、未置換のｔｅｒｔ−ブチル（ｔｅｒｔ−Ｂｕまたはｔ−Ｂｕ）、未置換のｓｅｃ−ブチル（ｓｅｃ−Ｂｕ）、未置換のイソブチル（ｉ−Ｂｕ））である。ある特定の実施形態では、該アルキル基は、置換Ｃ１−１０アルキル（例えば、置換Ｃ１−６アルキル、例えば、−ＣＦ３、Ｂｎ）である。
【０４１４】
「ハロアルキル」という用語は、置換アルキル基であり、この場合、１つ以上の水素原子が、独立して、ハロゲン、例えば、フルオロ、ブロモ、クロロ、またはヨードで置換される。いくつかの実施形態では、該ハロアルキル部分は、１〜８個の炭素原子を有する（「Ｃ１−８ハロアルキル」）。いくつかの実施形態では、該ハロアルキル部分は、１〜６個の炭素原子を有する（「Ｃ１−６ハロアルキル」）。いくつかの実施形態では、該ハロアルキル部分は、１〜４個の炭素原子を有する（「Ｃ１−４ハロアルキル」）。いくつかの実施形態では、該ハロアルキル部分は、１〜３個の炭素原子を有する（「Ｃ１−３ハロアルキル」）。いくつかの実施形態では、該ハロアルキル部分は、１〜２個の炭素原子を有する（「Ｃ１−２ハロアルキル」）。ハロアルキル基の例としては、−ＣＨＦ２、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＦ３、−ＣＨ２ＣＦ３、−ＣＦ２ＣＦ３、−ＣＦ２ＣＦ２ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＦＣｌ２、−ＣＦ２Ｃｌ等が挙げられる。
【０４１５】
「ヘテロアルキル」という用語は、酸素、窒素、もしくはイオウから選択される少なくとも１個のヘテロ原子（例えば、１、２、３、もしくは４個のヘテロ原子）を、親鎖の中（すなわち、隣接する炭素原子間に挿入）及び／または１つ以上の末端位置（複数可）にさらに含むアルキル基を指す。ある特定の実施形態では、ヘテロアルキル基は、１〜１０個の炭素原子及び１個以上のヘテロ原子を親鎖内に有する飽和基を指す（「ヘテロＣ１−１０アルキル」）。いくつかの実施形態では、ヘテロアルキル基は、１〜９個の炭素原子及び１個以上のヘテロ原子を親鎖内に有する飽和基である（「ヘテロＣ１−９アルキル」）。いくつかの実施形態では、ヘテロアルキル基は、１〜８個の炭素原子及び１個以上のヘテロ原子を親鎖内に有する飽和基である（「ヘテロＣ１−８アルキル」）。いくつかの実施形態では、ヘテロアルキル基は、１〜７個の炭素原子及び１個以上のヘテロ原子を親鎖内に有する飽和基である（「ヘテロＣ１−７アルキル」）。いくつかの実施形態では、ヘテロアルキル基は、１〜６個の炭素原子及び１個以上のヘテロ原子を親鎖内に有する飽和基である（「ヘテロＣ１−６アルキル」）。いくつかの実施形態では、ヘテロアルキル基は、１〜５個の炭素原子及び１または２個のヘテロ原子を親鎖内に有する飽和基である（「ヘテロＣ１−５アルキル」）。いくつかの実施形態では、ヘテロアルキル基は、１〜４個の炭素原子及び１または２個のヘテロ原子を親鎖内に有する飽和基である（「ヘテロＣ１−４アルキル」）。いくつかの実施形態では、ヘテロアルキル基は、１〜３個の炭素原子及び１個のヘテロ原子を親鎖内に有する飽和基である（「ヘテロＣ１−３アルキル」）。いくつかの実施形態では、ヘテロアルキル基は、１〜２個の炭素原子及び１個のヘテロ原子を親鎖内に有する飽和基である（「ヘテロＣ１−２アルキル」）。いくつかの実施形態では、ヘテロアルキル基は、１個の炭素原子及び１個のヘテロ原子を有する飽和基である（「ヘテロＣ１アルキル」）。いくつかの実施形態では、ヘテロアルキル基は、２〜６個の炭素原子及び１または２個のヘテロ原子を親鎖内に有する飽和基である（「ヘテロＣ２−６アルキル」）。特に明記しない限り、ヘテロアルキル基の各場合は、独立して未置換（「未置換のヘテロアルキル」）であるか、または１つ以上の置換基で置換される（「置換ヘテロアルキル」）。ある特定の実施形態では、該ヘテロアルキル基は、未置換のヘテロＣ１−１０アルキルである。ある特定の実施形態では、該ヘテロアルキル基は、置換ヘテロＣ１−１０アルキルである。
【０４１６】
「アルケニル」という用語は、２〜１０個の炭素原子及び１つ以上の炭素間二重結合（例えば、１、２、３、または４個の二重結合）を有する直鎖または分岐炭化水素基のラジカルを指す。いくつかの実施形態では、アルケニル基は２〜９個の炭素原子を有する（「Ｃ２−９アルケニル」）。いくつかの実施形態では、アルケニル基は２〜８個の炭素原子を有する（「Ｃ２−８アルケニル」）。いくつかの実施形態では、アルケニル基は２〜７個の炭素原子を有する（「Ｃ２−７アルケニル」）。いくつかの実施形態では、アルケニル基は２〜６個の炭素原子を有する（「Ｃ２−６アルケニル」）。いくつかの実施形態では、アルケニル基は２〜５個の炭素原子を有する（「Ｃ２−５アルケニル」）。いくつかの実施形態では、アルケニル基は２〜４個の炭素原子を有する（「Ｃ２−４アルケニル」）。いくつかの実施形態では、アルケニル基は２〜３個の炭素原子を有する（「Ｃ２−３アルケニル」）。いくつかの実施形態では、アルケニル基は２個の炭素原子を有する（「Ｃ２アルケニル」）。該１つ以上の炭素間二重結合は、内部（例えば、２−ブテニルにおいて）でも末端（例えば、１−ブテニルにおいて）でもよい。Ｃ２−４アルケニル基の例としては、エテニル（Ｃ２）、１−プロペニル（Ｃ３）、２−プロペニル（Ｃ３）、１−ブテニル（Ｃ４）、２−ブテニル（Ｃ４）、ブタジエニル（Ｃ４）等が挙げられる。Ｃ２−６アルケニル基の例としては、上述のＣ２−４アルケニル基ならびにペンテニル（Ｃ５）、ペンタジエニル（Ｃ５）、ヘキセニル（Ｃ６）等が挙げられる。アルケニルのさらなる例としては、へプテニル（Ｃ７）、オクテニル（Ｃ８）、オクタトリエニル（Ｃ８）等が挙げられる。特別の定めのない限り、アルケニル基の各場合は、独立して未置換（「未置換のアルケニル」）であるか、または１つ以上の置換基で置換される（「置換アルケニル」）。ある特定の実施形態では、該アルケニル基は、未置換のＣ２−１０アルケニルである。ある特定の実施形態では、該アルケニル基は、置換Ｃ２−１０アルケニルである。アルケニル基では、立体化学が特定されていないＣ＝Ｃ二重結合（例えば、−ＣＨ＝ＣＨＣＨ３または
【化１６６】
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）は、（Ｅ）−二重結合でも（Ｚ）−二重結合でもよい。
【０４１７】
「ヘテロアルケニル」という用語は、酸素、窒素、もしくはイオウから選択される少なくとも１個のヘテロ原子（例えば、１、２、３、もしくは４個のヘテロ原子）を、親鎖の中（すなわち、隣接する炭素原子間に挿入）及び／または１つ以上の末端位置（複数可）にさらに含むアルケニル基を指す。ある特定の実施形態では、ヘテロアルケニル基は、２〜１０個の炭素原子、少なくとも１つの二重結合、及び１個以上のヘテロ原子を親鎖内に有する基を指す（「ヘテロＣ２ー１０アルケニル」）。いくつかの実施形態では、ヘテロアルケニル基は、２〜９個の炭素原子、少なくとも１つの二重結合、及び１個以上のヘテロ原子を親鎖内に有する（「ヘテロＣ２ー９アルケニル」）。いくつかの実施形態では、ヘテロアルケニル基は、２〜８個の炭素原子、少なくとも１つの二重結合、及び１個以上のヘテロ原子を親鎖内に有する（「ヘテロＣ２ー８アルケニル」）。いくつかの実施形態では、ヘテロアルケニル基は、２〜７個の炭素原子、少なくとも１つの二重結合、及び１個以上のヘテロ原子を親鎖内に有する（「ヘテロＣ２ー７アルケニル」）。いくつかの実施形態では、ヘテロアルケニル基は、２〜６個の炭素原子、少なくとも１つの二重結合、及び１個以上のヘテロ原子を親鎖内に有する（「ヘテロＣ２ー６アルケニル」）。いくつかの実施形態では、ヘテロアルケニル基は、２〜５個の炭素原子、少なくとも１つの二重結合、及び１または２個のヘテロ原子を親鎖内に有する（「ヘテロＣ２ー５アルケニル」）。いくつかの実施形態では、ヘテロアルケニル基は、２〜４個の炭素原子、少なくとも１つの二重結合、及び１または２個のヘテロ原子を親鎖内に有する（「ヘテロＣ２ー４アルケニル」）。いくつかの実施形態では、ヘテロアルケニル基は、２〜３個の炭素原子、少なくとも１つの二重結合、及び１個のヘテロ原子を親鎖内に有する（「ヘテロＣ２ー３アルケニル」）。いくつかの実施形態では、ヘテロアルケニル基は、２〜６個の炭素原子、少なくとも１つの二重結合、及び１または２個のヘテロ原子を親鎖内に有する（「ヘテロＣ２ー６アルケニル」）。特に明記しない限り、ヘテロアルケニル基の各場合は、独立して未置換（「未置換のヘテロアルケニル」）であるか、または１つ以上の置換基で置換される（「置換ヘテロアルケニル」）。ある特定の実施形態では、該ヘテロアルケニル基は、未置換のヘテロＣ２ー１０アルケニルである。ある特定の実施形態では、該ヘテロアルケニル基は、置換ヘテロＣ２ー１０アルケニルである。
【０４１８】
「アルキニル」という用語は、２〜１０個の炭素原子及び１つ以上の炭素間三重結合（例えば、１、２、３、または４個の三重結合）を有する直鎖または分岐炭化水素基のラジカルを指す（「Ｃ２−１０アルキニル」）。いくつかの実施形態では、アルキニル基は２〜９個の炭素原子を有する（「Ｃ２−９アルキニル」）。いくつかの実施形態では、アルキニル基は２〜８個の炭素原子を有する（「Ｃ２−８アルキニル」）。いくつかの実施形態では、アルキニル基は２〜７個の炭素原子を有する（「Ｃ２−７アルキニル」）。いくつかの実施形態では、アルキニル基は２〜６個の炭素原子を有する（「Ｃ２−６アルキニル」）。いくつかの実施形態では、アルキニル基は２〜５個の炭素原子を有する（「Ｃ２−５アルキニル」）。いくつかの実施形態では、アルキニル基は２〜４個の炭素原子を有する（「Ｃ２−４アルキニル」）。いくつかの実施形態では、アルキニル基は２〜３個の炭素原子を有する（「Ｃ２−３アルキニル」）。いくつかの実施形態では、アルキニル基は２個の炭素原子を有する（「Ｃ２アルキニル」）。該１つ以上の炭素間三重結合は、内部（例えば、２−ブチニルにおいて）でも末端（例えば、１−ブチニルにおいて）でもよい。Ｃ２−４アルキニル基の例としては、制限なく、エチニル（Ｃ２）、１−プロピニル（Ｃ３）、２−プロピニル（Ｃ３）、１−ブチニル（Ｃ４）、２−ブチニル（Ｃ４）等が挙げられる。Ｃ２−６アルケニル基の例としては、上述のＣ２−４アルキニル基ならびにペンチニル（Ｃ５）、ヘキシニル（Ｃ６）等が挙げられる。アルキニルのさらなる例としては、へプチニル（Ｃ７）、オクチニル（Ｃ８）等が挙げられる。特別の定めのない限り、アルキニル基の各場合は、独立して未置換（「未置換のアルキニル」）であるか、または１つ以上の置換基で置換される（「置換アルキニル」）。ある特定の実施形態では、該アルキニル基は、未置換のＣ２−１０アルキニルである。ある特定の実施形態では、該アルキニル基は、置換Ｃ２−１０アルキニルである。
【０４１９】
「ヘテロアルキニル」という用語は、酸素、窒素、もしくはイオウから選択される少なくとも１個のヘテロ原子（例えば、１、２、３、もしくは４個のヘテロ原子）を、親鎖の中（すなわち、隣接する炭素原子間に挿入）及び／または１つ以上の末端位置（複数可）にさらに含むアルキニル基を指す。ある特定の実施形態では、ヘテロアルキニル基は、２〜１０個の炭素原子、少なくとも１つの三重結合、及び１個以上のヘテロ原子を親鎖内に有する基を指す（「ヘテロＣ２ー１０アルキニル」）。いくつかの実施形態では、ヘテロアルキニル基は、２〜９個の炭素原子、少なくとも１つの三重結合、及び１個以上のヘテロ原子を親鎖内に有する（「ヘテロＣ２ー９アルキニル」）。いくつかの実施形態では、ヘテロアルキニル基は、２〜８個の炭素原子、少なくとも１つの三重結合、及び１個以上のヘテロ原子を親鎖内に有する（「ヘテロＣ２ー８アルキニル」）。いくつかの実施形態では、ヘテロアルキニル基は、２〜７個の炭素原子、少なくとも１つの三重結合、及び１個以上のヘテロ原子を親鎖内に有する（「ヘテロＣ２ー７アルキニル」）。いくつかの実施形態では、ヘテロアルキニル基は、２〜６個の炭素原子、少なくとも１つの三重結合、及び１個以上のヘテロ原子を親鎖内に有する（「ヘテロＣ２ー６アルキニル」）。いくつかの実施形態では、ヘテロアルキニル基は、２〜５個の炭素原子、少なくとも１つの三重結合、及び１または２個のヘテロ原子を親鎖内に有する（「ヘテロＣ２ー５アルキニル」）。いくつかの実施形態では、ヘテロアルキニル基は、２〜４個の炭素原子、少なくとも１つの三重結合、及び１または２個のヘテロ原子を親鎖内に有する（「ヘテロＣ２ー４アルキニル」）。いくつかの実施形態では、ヘテロアルキニル基は、２〜３個の炭素原子、少なくとも１つの三重結合、及び１個のヘテロ原子を親鎖内に有する（「ヘテロＣ２ー３アルキニル」）。いくつかの実施形態では、ヘテロアルキニル基は、２〜６個の炭素原子、少なくとも１つの三重結合、及び１または２個のヘテロ原子を親鎖内に有する（「ヘテロＣ２ー６アルキニル」）。特に明記しない限り、ヘテロアルキニル基の各場合は、独立して未置換（「未置換のヘテロアルキニル」）であるか、または１つ以上の置換基で置換される（「置換ヘテロアルキニル」）。ある特定の実施形態では、該ヘテロアルキニル基は、未置換のヘテロＣ２ー１０アルキニルである。ある特定の実施形態では、該ヘテロアルキニル基は、置換ヘテロＣ２ー１０アルキニルである。
【０４２０】
「カルボシクリル」または「炭素環式」という用語は、３〜１４個の環炭素原子を有する非芳香族環状炭化水素基（「Ｃ３−１４カルボシクリル」）の、該非芳香族環系にヘテロ原子がないラジカルを指す。いくつかの実施形態では、カルボシクリル基は、３〜１０個の環炭素原子を有する（「Ｃ３−１０カルボシクリル」）。いくつかの実施形態では、カルボシクリル基は、３〜８個の環炭素原子を有する（「Ｃ３−８カルボシクリル」）。いくつかの実施形態では、カルボシクリル基は、３〜７個の環炭素原子を有する（「Ｃ３−７カルボシクリル」）。いくつかの実施形態では、カルボシクリル基は、３〜６個の環炭素原子を有する（「Ｃ３−６カルボシクリル」）。いくつかの実施形態では、カルボシクリル基は、４〜６個の環炭素原子を有する（「Ｃ４−６カルボシクリル」）。いくつかの実施形態では、カルボシクリル基は、５〜６個の環炭素原子を有する（「Ｃ５−６カルボシクリル」）。いくつかの実施形態では、カルボシクリル基は、５〜１０個の環炭素原子を有する（「Ｃ５−１０カルボシクリル」）。例示的なＣ３−６カルボシクリル基としては、制限なく、シクロプロピル（Ｃ３）、シクロプロペニル（Ｃ３）、シクロブチル（Ｃ４）、シクロブテニル（Ｃ４）、シクロペンチル（Ｃ５）、シクロペンテニル（Ｃ５）、シクロヘキシル（Ｃ６）、シクロヘキセニル（Ｃ６）、シクロヘサジエニル（Ｃ６）等が挙げられる。例示的なＣ３−８カルボシクリル基としては、制限なく、上述のＣ３−６カルボシクリル基、ならびにシクロヘプチル（Ｃ７）、シクロヘプテニル（Ｃ７）、シクロヘプタジエニル（Ｃ７）、シクロヘプタトリエニル（Ｃ７）、シクロオクチル（Ｃ８）、シクロオクテニル（Ｃ８）、ビシクロ［２．２．１］ヘプタニル（Ｃ７）、ビシクロ［２．２．２］オクタニル（Ｃ８）等が挙げられる。例示的なＣ３−１０カルボシクリル基としては、制限なく、上述のＣ３−８カルボシクリル基、ならびにシクロノニル（Ｃ９）、シクロノネニル（Ｃ９）、シクロデシル（Ｃ１０）、シクロデセニル（Ｃ１０）、オクタヒドロ−１Ｈ−インデニル（Ｃ９）、デカヒドロナフタレニル（Ｃ１０）、スピロ［４．５］デカニル（Ｃ１０）等が挙げられる。前述の例が示す通り、ある特定の実施形態では、該カルボシクリル基は、単環式（「単環式カルボシクリル」）または多環式（例えば、縮合、架橋、もしくはスピロ環系、例えば、二環系（「二環式カルボシクリル」）または三環系（「三環式カルボシクリル」を含む）のいずれかであり、飽和でもよいし、１つ以上の炭素間二重結合もしくは三重結合を含んでもよい。「カルボシクリル」はまた、上記で定義されるカルボシクリル環が、結合点が該カルボシクリル環上で１つ以上のアリールまたはヘテロアリール基と縮合する環系も含み、かかる場合では、炭素数は、依然として該炭素環式環系における炭素数を指定する。特別の定めのない限り、カルボシクリル基の各場合は、独立して未置換（「未置換のカルボシクリル」）であるか、または１つ以上の置換基で置換される（「置換カルボシクリル」）。ある特定の実施形態では、該カルボシクリル基は、未置換のＣ３−１４カルボシクリルである。ある特定の実施形態では、該カルボシクリル基は、置換Ｃ３−１４カルボシクリルである。
【０４２１】
いくつかの実施形態では、「カルボシクリル」は、３〜１４個の環炭素原子を有する単環式飽和カルボシクリル基である（「Ｃ３−１４シクロアルキル」）。いくつかの実施形態では、シクロアルキル基は、３〜１０個の環炭素原子を有する（「Ｃ３−１０シクロアルキル」）。いくつかの実施形態では、シクロアルキル基は、３〜８個の環炭素原子を有する（「Ｃ３−８シクロアルキル」）。いくつかの実施形態では、シクロアルキル基は、３〜６個の環炭素原子を有する（「Ｃ３−６シクロアルキル」）。いくつかの実施形態では、シクロアルキル基は、４〜６個の環炭素原子を有する（「Ｃ４−６シクロアルキル」）。いくつかの実施形態では、シクロアルキル基は、５〜６個の環炭素原子を有する（「Ｃ５−６シクロアルキル」）。いくつかの実施形態では、シクロアルキル基は、５〜１０個の環炭素原子を有する（「Ｃ５−１０シクロアルキル」）。Ｃ５−６シクロアルキル基の例としては、シクロペンチル（Ｃ５）及びシクロヘキシル（Ｃ５）が挙げられる。Ｃ３−６シクロアルキル基の例としては、上述のＣ５−６シクロアルキル基、ならびにシクロプロピル（Ｃ３）及びシクロブチル（Ｃ４）が挙げられる。Ｃ３−８シクロアルキル基の例としては、上述のＣ３−６シクロアルキル基、ならびにシクロヘプチル（Ｃ７）及びシクロオクチル（Ｃ８）が挙げられる。特別の定めのない限り、シクロアルキル基の各場合は、独立して未置換（「未置換のシクロアルキル」）であるか、または１つ以上の置換基で置換される（「置換シクロアルキル」）。ある特定の実施形態では、該シクロアルキル基は、未置換のＣ３−１４シクロアルキルである。ある特定の実施形態では、該シクロアルキル基は、置換Ｃ３−１４シクロアルキルである。
【０４２２】
「ヘテロシクリル」または「ヘテロ環式」という用語は、環炭素原子及び１〜４個の環ヘテロ原子を有する３〜１４員の非芳香族環系のラジカルを指し、この場合、各ヘテロ原子は独立して、窒素、酸素、及びイオウから選択される（「３〜１４員のヘテロシクリル」）。１個以上の窒素原子を含むヘテロシクリル基では、結合点は、価数に応じて炭素原子でも窒素原子でもよい。ヘテロシクリル基は、単環式（「単環式ヘテロシクリル」）または多環式（例えば、縮合、架橋、もしくはスピロ環系、例えば、二環系（「二環式ヘテロシクリル」）または三環系（「三環式ヘテロシクリル」）のいずれかでよく、飽和でもよいし、１つ以上の炭素間二重結合もしくは三重結合を含んでもよい。ヘテロシクリル多環式環系は、１つまたは両方の環に１個以上のヘテロ原子を含むことができる。「ヘテロシクリル」はまた、上記で定義されるヘテロシクリル環が、結合点が該カルボシクリルまたはヘテロシクリル環上のいずれかで１つ以上のカルボシクリル基と縮合する環系、または、上記で定義されるヘテロシクリル環が、結合点が該ヘテロシクリル環上で１つ以上のアリールもしくはヘテロアリール基と縮合する環系も含み、かかる場合では、環員数は、依然として該ヘテロシクリル環系における環員数を指定する。特別の定めのない限り、ヘテロシクリルの各場合は、独立して未置換（「未置換のヘテロシクリル」）であるか、または１つ以上の置換基で置換される（「置換ヘテロシクリル」）。ある特定の実施形態では、該ヘテロシクリル基は、未置換の３〜１４員ヘテロシクリルである。ある特定の実施形態では、該ヘテロシクリル基は、置換３〜１４員ヘテロシクリルである。
【０４２３】
いくつかの実施形態では、ヘテロシクリル基は、環炭素原子及び１〜４個の環ヘテロ原子を有する５〜１０員の非芳香族環系であり、この場合、各ヘテロ原子は独立して、窒素、酸素、及びイオウから選択される（「５〜１０員のヘテロシクリル」）。いくつかの実施形態では、ヘテロシクリル基は、環炭素原子及び１〜４個の環ヘテロ原子を有する５〜８員の非芳香族環系であり、この場合、各ヘテロ原子は独立して、窒素、酸素、及びイオウから選択される（「５〜８員のヘテロシクリル」）。いくつかの実施形態では、ヘテロシクリル基は、環炭素原子及び１〜４個の環ヘテロ原子を有する５〜６員の非芳香族環系であり、この場合、各ヘテロ原子は独立して、窒素、酸素、及びイオウから選択される（「５〜６員のヘテロシクリル」）。いくつかの実施形態では、該５〜６員のヘテロシクリルは、窒素、酸素、及びイオウから選択される１〜３個の環ヘテロ原子を有する。いくつかの実施形態では、該５〜６員のヘテロシクリルは、窒素、酸素、及びイオウから選択される１〜２個の環ヘテロ原子を有する。いくつかの実施形態では、該５〜６員のヘテロシクリルは、窒素、酸素、及びイオウから選択される１個の環ヘテロ原子を有する。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【０４２４】
１個のヘテロ原子を含む例示的な３員のヘテロシクリル基としては、制限なく、アジリジニル、オキシラニル、及びチイラニルが挙げられる。１個のヘテロ原子を含む例示的な４員のヘテロシクリル基としては、制限なく、アゼチジニル、オキセタニル、及びチエタニルが挙げられる。１個のヘテロ原子を含む例示的な５員のヘテロシクリル基としては、制限なく、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロチオフェニル、ジヒドロチオフェニル、ピロリジニル、ジヒドロピロリル、及びピロリル−２，５−ジオンが挙げられる。２個のヘテロ原子を含む例示的な５員のヘテロシクリル基としては、制限なく、ジオキソラニル、オキサチオラニル、及びジチオラニルが挙げられる。３個のヘテロ原子を含む例示的な５員のヘテロシクリル基としては、制限なく、チアゾリニル、オキサジアゾリニル、及びチアジアゾリニルが挙げられる。１個のヘテロ原子を含む例示的な６員のヘテロシクリル基としては、制限なく、ピペリジニル、テトラヒドロピラニル、ジヒドロピリジニル、及びチアニルが挙げられる。２個のヘテロ原子を含む例示的な６員のヘテロシクリル基としては、制限なく、ピペラジニル、モルホリニル、ジチアニル、及びジオキサニルが挙げられる。２個のヘテロ原子を含む例示的な６員のヘテロシクリル基としては、制限なく、トリアジナニルが挙げられる。１個のヘテロ原子を含む例示的な７員のヘテロシクリル基としては、制限なく、アゼパニル、オキセパニル、及びチエパニルが挙げられる。１個のヘテロ原子を含む例示的な８員のヘテロシクリル基としては、制限なく、アゾカニル、オキセカニル、及びチオカニルが挙げられる。例示的な二環式ヘテロシクリル基としては、制限なく、インドリニル、イソインドリニル、ジヒドロベンゾフラニル、ジヒドロベンゾチエニル、テトラヒドロベンゾチエニル、テトラヒドロベンゾフラニル、テトラヒドロインドリル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、デカヒドロキノリニル、デカヒドロイソキノリニル、オクタヒドロクロメニル、オクタヒドロイソクロメニル、デカヒドロナフチリジニル、デカヒドロ−１，８−ナフチリジニル、オクタヒドロピロロ［３，２−ｂ］ピロール、インドリニル、フタルイミジル、ナフタルイミジル、クロマニル、クロメニル、１Ｈ−ベンゾ［ｅ］［１，４］ジアゼピニル、１，４，５，７−テトラヒドロピラノ［３，４−ｂ］ピロリル、５，６−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，２−ｂ］ピロリル、６，７−ジヒドロ−５Ｈ−フロ［３，２−ｂ］ピラニル、５，７−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピラニル、２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジニル、２，３−ジヒドロフロ［２，３−ｂ］ピリジニル、４，５，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジニル、４，５，６，７−テトラヒドロフロ［３，２−ｃ］ピリジニル、４，５，６，７−テトラヒドロチエノ［３，２−ｂ］ピリジニル、１，２，３，４−テトラヒドロ−１，６−ナフチリジニル等が挙げられる。
【０４２５】
「アリール」という用語は、６〜１４個の環炭素原子を有する単環式または多環式（例えば、二環式もしくは三環式）４ｎ＋２芳香環系（例えば、環状アレイで共有される６、１０、または１４個のπ電子を有する）の、該芳香環系にヘテロ原子がないラジカルを指す（「Ｃ６−１４アリール」）。いくつかの実施形態では、アリール基は、６個の環炭素原子を有する（「Ｃ６アリール」、例えば、フェニル）。いくつかの実施形態では、アリール基は、１０個の環炭素原子を有する（「Ｃ１０アリール」、例えば、１−ナフチル及び２−ナフチル等のナフチル）。いくつかの実施形態では、アリール基は、１４個の環炭素原子を有する（「Ｃ１４アリール」、例えば、アントラシル）。「アリール」はまた、上記で定義されるアリール環が、結合ラジカルまたは点が該アリール環上で１つ以上のカルボシクリルまたはヘテロシクリル基と縮合する環系も含み、かかる場合では、炭素原子数は、依然として該アリール環系における炭素原子数を指定する。特別の定めのない限り、アリール基の各場合は、独立して未置換（「未置換のアリール」）であるか、または１つ以上の置換基で置換される（「置換アリール」）。ある特定の実施形態では、該アリール基は、未置換のＣ６−１４アリールである。ある特定の実施形態では、該アリール基は、置換Ｃ６−１４アリールである。
【０４２６】
「ヘテロアリール」という用語は、当該芳香環系に環炭素原子及び１〜４個の環ヘテロ原子を有する５〜１４員の単環式または多環式（例えば、二環式、三環式）４ｎ＋２芳香環系（例えば、環状アレイで共有される６、１０、または１４個のπ電子を有する）のラジカルを指し、この場合各ヘテロ原子は独立して、窒素、酸素、及びイオウから選択される（「５〜１４員のヘテロアリール」）。１個以上の窒素原子を含むヘテロアリール基では、結合点は、価数に応じて炭素原子でも窒素原子でもよい。ヘテロアリール多環式環系は、１つまたは両方の環に１個以上のヘテロ原子を含むことができる。「ヘテロアリール」は、上記で定義されるヘテロアリール環が、結合点が該ヘテロアリール環上で１つ以上のカルボシクリルまたはヘテロシクリル基と縮合する環系を含み、かかる場合では、環員数は、依然として該ヘテロアリール環系における環員数を指定する。「ヘテロアリール」はまた、上記で定義されるヘテロアリール環が、結合点が該アリールまたはヘテロアリール環上のいずれかである１つ以上のアリール基と縮合する環系も含み、かかる場合では、環員数は、該縮合多環式（アリール／ヘテロアリール）環系における環員数を指定する。１つの環がヘテロ原子を含まない多環式ヘテロアリール基（例えば、インドリル、キノリニル、カルバゾリル等）の結合点は、いずれかの環、すなわち、ヘテロ原子を有する環（例えば、２−インドリル）、またはヘテロ原子を含まない環（例えば、５−インドリル）のいずれかにおいてでよい。
【０４２７】
いくつかの実施形態では、ヘテロアリール基は、芳香環系に環炭素原子及び１〜４個の環ヘテロ原子を有する５〜１０員の芳香環系であり、この場合、各ヘテロ原子は独立して、窒素、酸素、及びイオウから選択される（「５〜１０員のヘテロアリール」）。いくつかの実施形態では、ヘテロアリール基は、芳香環系に環炭素原子及び１〜４個の環ヘテロ原子を有する５〜８員の芳香環系であり、この場合、各ヘテロ原子は独立して、窒素、酸素、及びイオウから選択される（「５〜８員のヘテロアリール」）。いくつかの実施形態では、ヘテロアリール基は、芳香環系に環炭素原子及び１〜４個の環ヘテロ原子を有する５〜６員の芳香環系であり、この場合、各ヘテロ原子は独立して、窒素、酸素、及びイオウから選択される（「５〜６員のヘテロアリール」）。いくつかの実施形態では、該５〜６員のヘテロアリールは、窒素、酸素、及びイオウから選択される１〜３個の環ヘテロ原子を有する。いくつかの実施形態では、該５〜６員のヘテロアリールは、窒素、酸素、及びイオウから選択される１〜２個の環ヘテロ原子を有する。いくつかの実施形態では、該５〜６員のヘテロアリールは、窒素、酸素、及びイオウから選択される１個の環ヘテロ原子を有する。特別の定めのない限り、ヘテロアリール基の各場合は、独立して未置換（「未置換のヘテロアリール」）であるか、または１つ以上の置換基で置換される（「置換ヘテロアリール」）。ある特定の実施形態では、該ヘテロアリール基は、未置換の５〜１４員ヘテロアリールである。ある特定の実施形態では、該ヘテロアリール基は、置換５〜１４員ヘテロアリールである。
【０４２８】
１個のヘテロ原子を含む例示的な５員のヘテロアリール基としては、制限なく、ピロリル、フラニル、及びチオフェニルが挙げられる。２個のヘテロ原子を含む例示的な５員のヘテロアリール基としては、制限なく、イミダゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、及びイソチアゾリルが挙げられる。３個のヘテロ原子を含む例示的な５員のヘテロアリール基としては、制限なく、トリアゾリル、オキサジアゾリル、及びチアジアゾリルが挙げられる。４個のヘテロ原子を含む例示的な５員のヘテロアリール基としては、制限なく、テトラゾリルが挙げられる。１個のヘテロ原子を含む例示的な６員のヘテロアリール基としては、制限なく、ピリジニルが挙げられる。２個のヘテロ原子を含む例示的な６員のヘテロアリール基としては、制限なく、ピリダジニル、ピリミジニル、及びピラジニルが挙げられる。３または４個のヘテロ原子を含む例示的な６員のヘテロアリール基としては、制限なく、それぞれ、トリアジニル及びテトラジニルが挙げられる。１個のヘテロ原子を含む例示的な７員のヘテロアリール基としては、制限なく、アゼピニル、オキセピニル、及びチエピニルが挙げられる。例示的な５，６−二環式ヘテロアリール基としては、制限なく、インドリル、イソインドリル、インダゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾチオフェニル、イソベンゾチオフェニル、ベンゾフラニル、ベンゾイソフラニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、ベンゾオキサジアゾリル、ベンズチアゾリル、ベンゾイソチアゾリル、ベンズチアジアゾリル、インドリジニル、及びプリニルが挙げられる。例示的な６，６−二環式ヘテロアリール基としては、制限なく、ナフチリジニル、プテリジニル、キノリニル、イソキノリニル、シンノリニル、キノキサリニル、フタラジニル、及びキナゾリニルが挙げられる。例示的な三環式ヘテロアリール基としては、制限なく、フェナントリジニル、ジベンゾフラニル、カルバゾリル、アクリジニル、フェノチアジニル、フェノキサジニル、及びフェナジニルが挙げられる。
【０４２９】
「不飽和結合」という用語は、二重または三重結合を指す。「不飽和」または「部分不飽和」という用語は、少なくとも１つの二重または三重結合を含む部分を指す。「飽和」という用語は、二重結合も三重結合も含まない部分、すなわち、単結合のみを含む部分を指す。
【０４３０】
基に末尾「エン」を加えることは、当該基が二価の部分であることを示し、例えば、アルキレンは、アルキルの二価の部分であり、アルケニレンは、アルケニルの二価の部分であり、アルキニレンは、アルキニルの二価の部分であり、ヘテロアルキレンは、ヘテロアルキルの二価の部分であり、ヘテロアルケニレンは、ヘテロアルケニルの二価の部分であり、ヘテロアルキニレンは、ヘテロアルキニルの二価の部分であり、カルボシクリレンは、カルボシクリルの二価の部分であり、ヘテロシクリレンは、ヘテロシクリルの二価の部分であり、アリーレンは、アリールの二価の部分であり、ヘテロアリーレンは、ヘテロアリールの二価の部分である。
【０４３１】
基は、明確に特別の定めのない限り、任意に置換される。「任意に置換される」という表現は、置換されるまたは未置換であることを指す。ある特定の実施形態では、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ヘテロアルケニル、ヘテロアルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリール基は、任意に置換される。「任意に置換される」は、置換でも未置換でもよい基を指す（例えば、「置換」もしくは「未置換」アルキル、「置換」もしくは「未置換」アルケニル、「置換」もしくは「未置換」アルキニル、「置換」もしくは「未置換」ヘテロアルキル、「置換」もしくは「未置換」ヘテロアルケニル、「置換」もしくは「未置換」ヘテロアルキニル、「置換」もしくは「未置換」カルボシクリル、「置換」もしくは「未置換」ヘテロシクリル、「置換」もしくは「未置換」アリール、または「置換」もしくは「未置換」ヘテロアリール基）。一般に、「置換」という用語は、基に存在する少なくとも１つの水素が、許容される置換基、例えば、置換後に安定化合物、例えば、転位、環化、脱離、または他の反応による等の変換を自然に受けない化合物をもたらす置換基で置換されることを意味する。特に断りのない限り、「置換される」基は、当該基の１つ以上の置換可能な位置に置換基を有し、任意の所定の構造の２か所以上が置換される場合、当該置換基は、各位置で同一または異なるかのいずれかである。「置換される」という用語は、有機化合物のすべての許容される置換基での置換を含むことを企図し、安定化合物の形成をもたらす本明細書に記載の置換基のいずれかを含む。本発明は、安定化合物に至るようなありとあらゆる組合せを企図する。本発明の目的のため、窒素等のヘテロ原子は、水素置換基、及び／または、当該ヘテロ原子の価数を満たし、安定部分の形成をもたらす本明細書に記載の任意の適切な置換基を有し得る。本発明は、いかなる方法によっても、本明細書に記載の例示的な置換基によって限定されることを意図しない。
【０４３２】
例示的な炭素原子の置換基としては、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｎ３、−ＳＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲａａ、−ＯＮ（Ｒｂｂ）２、−Ｎ（Ｒｂｂ）２、−Ｎ（Ｒｂｂ）３＋Ｘ−、−Ｎ（ＯＲｃｃ）Ｒｂｂ、−ＳＨ、−ＳＲａａ、−ＳＳＲｃｃ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒａａ、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＨＯ、−Ｃ（ＯＲｃｃ）２、−ＣＯ２Ｒａａ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒａａ、−ＯＣＯ２Ｒａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−ＮＲｂｂＣ（＝Ｏ）Ｒａａ、−ＮＲｂｂＣＯ２Ｒａａ、−ＮＲｂｂＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）Ｒａａ、−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）ＯＲａａ、−ＯＣ（＝ＮＲｂｂ）Ｒａａ、−ＯＣ（＝ＮＲｂｂ）ＯＲａａ、−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−ＯＣ（＝ＮＲｂｂ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−ＮＲｂｂＣ（＝ＮＲｂｂ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｂｂＳＯ２Ｒａａ、−ＮＲｂｂＳＯ２Ｒａａ、−ＳＯ２Ｎ（Ｒｂｂ）２、−ＳＯ２Ｒａａ、−ＳＯ２ＯＲａａ、−ＯＳＯ２Ｒａａ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒａａ、−ＯＳ（＝Ｏ）Ｒａａ、−Ｓｉ（Ｒａａ）３、−ＯＳｉ（Ｒａａ）３、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲａａ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲａａ、−ＳＣ（＝Ｓ）ＳＲａａ、−ＳＣ（＝Ｏ）ＳＲａａ、−ＯＣ（＝Ｏ）ＳＲａａ、−ＳＣ（＝Ｏ）ＯＲａａ、−ＳＣ（＝Ｏ）Ｒａａ、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒａａ）２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲｃｃ）２、−ＯＰ（＝Ｏ）（Ｒａａ）２、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲｃｃ）２、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｎ（Ｒｂｂ）２）２、−ＯＰ（＝Ｏ）（Ｎ（Ｒｂｂ）２）２、−ＮＲｂｂＰ（＝Ｏ）（Ｒａａ）２、−ＮＲｂｂＰ（＝Ｏ）（ＯＲｃｃ）２、−ＮＲｂｂＰ（＝Ｏ）（Ｎ（Ｒｂｂ）２）２、−Ｐ（Ｒｃｃ）２、−Ｐ（ＯＲｃｃ）２、−Ｐ（Ｒｃｃ）３＋Ｘ−、−Ｐ（ＯＲｃｃ）３＋Ｘ−、−Ｐ（Ｒｃｃ）４、−Ｐ（ＯＲｃｃ）４、−ＯＰ（Ｒｃｃ）２、−ＯＰ（Ｒｃｃ）３＋Ｘ−、−ＯＰ（ＯＲｃｃ）２、−ＯＰ（ＯＲｃｃ）３＋Ｘ−、−ＯＰ（Ｒｃｃ）４、−ＯＰ（ＯＲｃｃ）４、−Ｂ（Ｒａａ）２、−Ｂ（ＯＲｃｃ）２、−ＢＲａａ（ＯＲｃｃ）、Ｃ１−１０アルキル、Ｃ１−１０パーハロアルキル、Ｃ２−１０アルケニル、Ｃ２−１０アルキニル、ヘテロＣ１−１０アルキル、ヘテロＣ２−１０アルケニル、ヘテロＣ２−１０アルキニル、Ｃ３−１０カルボシクリル、３〜１４員のヘテロシクリル、Ｃ６−１４アリール、及び５〜１４員のヘテロアリールが挙げられるがこれらに限定されず、この場合、各アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ヘテロアルケニル、ヘテロアルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールは、独立して、０、１、２、３、４、もしくは５個のＲｄｄ基で置換され、Ｘ−は対イオンであり、
または、炭素原子上の２つのジェミナル水素は、＝Ｏ、＝Ｓ、＝ＮＮ（Ｒｂｂ）２、＝ＮＮＲｂｂＣ（＝Ｏ）Ｒａａ、＝ＮＮＲｂｂＣ（＝Ｏ）ＯＲａａ、＝ＮＮＲｂｂＳ（＝Ｏ）２Ｒａａ、＝ＮＲｂｂ、または＝ＮＯＲｃｃの基で交換され、
Ｒａａの各場合は、独立して、Ｃ１−１０アルキル、Ｃ１−１０パーハロアルキル、Ｃ２−１０アルケニル、Ｃ２−１０アルキニル、ヘテロＣ１−１０アルキル、ヘテロＣ２−１０アルケニル、ヘテロＣ２−１０アルキニル、Ｃ３−１０カルボシクリル、３〜１４員のヘテロシクリル、Ｃ６−１４アリール、及び５〜１４員のヘテロアリールから選択されるか、または２つのＲａａ基が一緒になって３〜１４員のヘテロシクリルもしくは５〜１４員のヘテロアリール環を形成し、この場合、各アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ヘテロアルケニル、ヘテロアルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールは、独立して、０、１、２、３、４、もしくは５個のＲｄｄ基で置換され、
Ｒｂｂの各場合は、独立して、水素、−ＯＨ、−ＯＲａａ、−Ｎ（Ｒｃｃ）２、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｃｃ）２、−ＣＯ２Ｒａａ、−ＳＯ２Ｒａａ、−Ｃ（＝ＮＲｃｃ）ＯＲａａ、−Ｃ（＝ＮＲｃｃ）Ｎ（Ｒｃｃ）２、−ＳＯ２Ｎ（Ｒｃｃ）２、−ＳＯ２Ｒｃｃ、−ＳＯ２ＯＲｃｃ、−ＳＯＲａａ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒｃｃ）２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲｃｃ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲｃｃ、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒａａ）２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲｃｃ）２、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｎ（Ｒｃｃ）２）２、Ｃ１−１０アルキル、Ｃ１−１０パーハロアルキル、Ｃ２−１０アルケニル、Ｃ２−１０アルキニル、ヘテロＣ１−１０アルキル、ヘテロＣ２−１０アルケニル、ヘテロＣ２−１０アルキニル、Ｃ３−１０カルボシクリル、３〜１４員のヘテロシクリル、Ｃ６−１４アリール、及び５〜１４員のヘテロアリールから選択されるか、または２つのＲｂｂ基が一緒になって３〜１４員のヘテロシクリルもしくは５〜１４員のヘテロアリール環を形成し、この場合、各アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ヘテロアルケニル、ヘテロアルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールは、独立して、０、１、２、３、４、もしくは５個のＲｄｄ基で置換され、Ｘ−は対イオンであり、
Ｒｃｃの各場合は、独立して、水素、Ｃ１−１０アルキル、Ｃ１−１０パーハロアルキル、Ｃ２−１０アルケニル、Ｃ２−１０アルキニル、ヘテロＣ１−１０アルキル、ヘテロＣ２−１０アルケニル、ヘテロＣ２−１０アルキニル、Ｃ３−１０カルボシクリル、３〜１４員のヘテロシクリル、Ｃ６−１４アリール、及び５〜１４員のヘテロアリールから選択されるか、または２つのＲｃｃ基が一緒になって３〜１４員のヘテロシクリルもしくは５〜１４員のヘテロアリール環を形成し、この場合、各アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ヘテロアルケニル、ヘテロアルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールは、独立して、０、１、２、３、４、もしくは５個のＲｄｄ基で置換され、
Ｒｄｄの各場合は、独立して、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｎ３、−ＳＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲｅｅ、−ＯＮ（Ｒｆｆ）２、−Ｎ（Ｒｆｆ）２、−Ｎ（Ｒｆｆ）３＋Ｘ−、−Ｎ（ＯＲｅｅ）Ｒｆｆ、−ＳＨ、−ＳＲｅｅ、−ＳＳＲｅｅ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｅｅ、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２Ｒｅｅ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒｅｅ、−ＯＣＯ２Ｒｅｅ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｆｆ）２、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｆｆ）２、−ＮＲｆｆＣ（＝Ｏ）Ｒｅｅ、−ＮＲｆｆＣＯ２Ｒｅｅ、−ＮＲｆｆＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｆｆ）２、−Ｃ（＝ＮＲｆｆ）ＯＲｅｅ、−ＯＣ（＝ＮＲｆｆ）Ｒｅｅ、−ＯＣ（＝ＮＲｆｆ）ＯＲｅｅ、−Ｃ（＝ＮＲｆｆ）Ｎ（Ｒｆｆ）２、−ＯＣ（＝ＮＲｆｆ）Ｎ（Ｒｆｆ）２、−ＮＲｆｆＣ（＝ＮＲｆｆ）Ｎ（Ｒｆｆ）２、−ＮＲｆｆＳＯ２Ｒｅｅ、−ＳＯ２Ｎ（Ｒｆｆ）２、−ＳＯ２Ｒｅｅ、−ＳＯ２ＯＲｅｅ、−ＯＳＯ２Ｒｅｅ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒｅｅ、−Ｓｉ（Ｒｅｅ）３、−ＯＳｉ（Ｒｅｅ）３、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒｆｆ）２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲｅｅ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲｅｅ、−ＳＣ（＝Ｓ）ＳＲｅｅ、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲｅｅ）２、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒｅｅ）２、−ＯＰ（＝Ｏ）（Ｒｅｅ）２、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲｅｅ）２、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６パーハロアルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、ヘテロＣ１−６アルキル、ヘテロＣ２−６アルケニル、ヘテロＣ２−６アルキニル、Ｃ３−１０カルボシクリル、３〜１０員のヘテロシクリル、Ｃ６−１０アリール、５〜１０員のヘテロアリールから選択され、この場合、各アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ヘテロアルケニル、ヘテロアルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールは、独立して、０、１、２、３、４、もしくは５個のＲｇｇ基で置換されるか、または、２つのジェミナルＲｄｄ置換基が一緒になって＝Ｏもしくは＝Ｓを形成することができ、Ｘ−は対イオンであり、
Ｒｅｅの各場合は、独立して、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６パーハロアルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、ヘテロＣ１−６アルキル、ヘテロＣ２−６アルケニル、ヘテロＣ２−６アルキニル、Ｃ３−１０カルボシクリル、Ｃ６−１０アリール、３〜１０員のヘテロシクリル、及び３〜１０員のヘテロアリールから選択され、この場合、各アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ヘテロアルケニル、ヘテロアルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールは、独立して、０、１、２、３、４、もしくは５個のＲｇｇ基で置換され、
Ｒｆｆの各場合は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６パーハロアルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、ヘテロＣ１−６アルキル、ヘテロＣ２−６アルケニル、ヘテロＣ２−６アルキニル、Ｃ３−１０カルボシクリル、３〜１０員のヘテロシクリル、Ｃ６−１０アリール、及び５〜１０員のヘテロアリールから選択されるか、または２つのＲｆｆ基が一緒になって３〜１０員のヘテロシクリルもしくは５〜１０員のヘテロアリール環を形成し、この場合、各アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ヘテロアルケニル、ヘテロアルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールは、独立して、０、１、２、３、４、もしくは５個のＲｇｇ基で置換され、
Ｒｇｇの各場合は、独立して、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｎ３、−ＳＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＯＨ、−ＯＣ１−６アルキル、−ＯＮ（Ｃ１−６アルキル）２、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）２、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）３＋Ｘ−、−ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）２＋Ｘ−、−ＮＨ２（Ｃ１−６アルキル）＋Ｘ−、−ＮＨ３＋Ｘ−、−Ｎ（ＯＣ１−６アルキル）（Ｃ１−６アルキル）、−Ｎ（ＯＨ）（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨ（ＯＨ）、−ＳＨ、−ＳＣ１−６アルキル、−ＳＳ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２（Ｃ１−６アルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−ＯＣＯ２（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｃ１−６アルキル）２、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨＣＯ２（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｃ１−６アルキル）２、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（＝ＮＨ）Ｏ（Ｃ１−６アルキル）、−ＯＣ（＝ＮＨ）（Ｃ１−６アルキル）、−ＯＣ（＝ＮＨ）ＯＣ１−６アルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）Ｎ（Ｃ１−６アルキル）２、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−ＯＣ（＝ＮＨ）Ｎ（Ｃ１−６アルキル）２、−ＯＣ（ＮＨ）ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）、−ＯＣ（ＮＨ）ＮＨ２、−ＮＨＣ（ＮＨ）Ｎ（Ｃ１−６アルキル）２、−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２（Ｃ１−６アルキル）、−ＳＯ２Ｎ（Ｃ１−６アルキル）２、−ＳＯ２ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２Ｃ１−６アルキル、−ＳＯ２ＯＣ１−６アルキル、−ＯＳＯ２Ｃ１−６アルキル、−ＳＯＣ１−６アルキル、−Ｓｉ（Ｃ１−６アルキル）３、−ＯＳｉ（Ｃ１−６アルキル）３、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｃ１−６アルキル）２、Ｃ（＝Ｓ）ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）、Ｃ（＝Ｓ）ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｓ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＣ１−６アルキル、−ＳＣ（＝Ｓ）ＳＣ１−６アルキル、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＣ１−６アルキル）２、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）２、−ＯＰ（＝Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）２、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＣ１−６アルキル）２、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６パーハロアルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、ヘテロＣ１−６アルキル、ヘテロＣ２−６アルケニル、ヘテロＣ２−６アルキニル、Ｃ３−１０カルボシクリル、Ｃ６−１０アリール、３〜１０員のヘテロシクリル、５〜１０員のヘテロアリールであるか、または、２つのジェミナルＲｇｇ置換基が一緒になって＝Ｏもしくは＝Ｓを形成することができ、Ｘ−は対イオンである。
【０４３３】
「ハロ」または「ハロゲン」という用語は、フッ素（フルオロ、−Ｆ）、塩素（クロロ、−Ｃｌ）、臭素（ブロモ、−Ｂｒ）、またはヨウ素（ヨード、−Ｉ）を指す。
【０４３４】
「ヒドロキシル」または「ヒドロキシ」という用語は、−ＯＨ基を指す。従って、「置換ヒドロキシル」または「置換ヒドロキシル」という用語は、親分子に直接結合する酸素原子が、水素以外の基で置換されるヒドロキシル基を指し、−ＯＲａａ、−ＯＮ（Ｒｂｂ）２、−ＯＣ（＝Ｏ）ＳＲａａ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒａａ、−ＯＣＯ２Ｒａａ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−ＯＣ（＝ＮＲｂｂ）Ｒａａ、−ＯＣ（＝ＮＲｂｂ）ＯＲａａ、−ＯＣ（＝ＮＲｂｂ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−ＯＳ（＝Ｏ）Ｒａａ、−ＯＳＯ２Ｒａａ、−ＯＳｉ（Ｒａａ）３、−ＯＰ（Ｒｃｃ）２、−ＯＰ（Ｒｃｃ）３＋Ｘ−、−ＯＰ（ＯＲｃｃ）２、−ＯＰ（ＯＲｃｃ）３＋Ｘ−、−ＯＰ（＝Ｏ）（Ｒａａ）２、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲｃｃ）２、及び−ＯＰ（＝Ｏ）（Ｎ（Ｒｂｂ））２から選択される基を含み、Ｘ−、Ｒａａ、Ｒｂｂ、及びＲｃｃは、本明細書で定義される通りである。
【０４３５】
「アミノ」という用語は、−ＮＨ２基を指す。従って、「置換アミノ」という用語は、一置換アミノ、二置換アミノ、または三置換アミノを指す。ある特定の実施形態では、「置換アミノ」は、一置換アミノまたは二置換アミノ基である。
【０４３６】
「一置換アミノ」という用語は、親分子に直接結合する窒素原子が、１つの水素及び１つの水素以外の基で置換されるアミノ基を指し、−ＮＨ（Ｒｂｂ）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒａａ、−ＮＨＣＯ２Ｒａａ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−ＮＨＣ（＝ＮＲｂｂ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−ＮＨＳＯ２Ｒａａ、−ＮＨＰ（＝Ｏ）（ＯＲｃｃ）２、及び−ＮＨＰ（＝Ｏ）（Ｎ（Ｒｂｂ）２）２から選択される基を含み、Ｒａａ、Ｒｂｂ、及びＲｃｃは、本明細書で定義される通りであるが、−ＮＨ（Ｒｂｂ）基のＲｂｂは、水素ではない。
【０４３７】
「二置換アミノ」という用語は、親分子に直接結合する窒素原子が、２つの水素以外の基で置換されるアミノ基を指し、−Ｎ（Ｒｂｂ）２、−ＮＲｂｂＣ（＝Ｏ）Ｒａａ、−ＮＲｂｂＣＯ２Ｒａａ、−ＮＲｂｂＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−ＮＲｂｂＣ（＝ＮＲｂｂ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−ＮＲｂｂＳＯ２Ｒａａ、−ＮＲｂｂＰ（＝Ｏ）（ＯＲｃｃ）２、及び−ＮＲｂｂＰ（＝Ｏ）（Ｎ（Ｒｂｂ）２）２から選択される基を含み、Ｒａａ、Ｒｂｂ、及びＲｃｃは、本明細書で定義される通りであるが、ただし、親分子に直接結合する窒素原子は、水素で置換されない。
【０４３８】
「三置換アミノ」という用語は、親分子に直接結合する窒素原子が、３つの基で置換されるアミノ基を指し、−Ｎ（Ｒｂｂ）３及び−Ｎ（Ｒｂｂ）３＋Ｘ−から選択される基を含み、Ｒｂｂ及びＸ−は、本明細書で定義される通りである。
【０４３９】
「スルホニル」という用語は、−ＳＯ２Ｎ（Ｒｂｂ）２、−ＳＯ２Ｒａａ、及び−ＳＯ２ＯＲａａから選択される基を指し、Ｒａａ及びＲｂｂは、本明細書で定義される通りである。
【０４４０】
「スルフィニル」という用語は、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒａａ基を指し、Ｒａａは、本明細書で定義される通りである。
【０４４１】
「アシル」という用語は、一般式−Ｃ（＝Ｏ）ＲＸ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＸ１、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）ＲＸ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲＸ１、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＸ１）２、−Ｃ（＝Ｓ）ＲＸ１、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（ＲＸ１）２、及び−Ｃ（＝Ｓ）Ｓ（ＲＸ１）、−Ｃ（＝ＮＲＸ１）ＲＸ１、−Ｃ（＝ＮＲＸ１）ＯＲＸ１、−Ｃ（＝ＮＲＸ１）ＳＲＸ１、ならびに−Ｃ（＝ＮＲＸ１）Ｎ（ＲＸ１）２を有する基を指し、式中、ＲＸ１は、水素、ハロゲン、置換もしくは未置換のヒドロキシル、置換もしくは未置換のチオール、置換もしくは未置換のアミノ、置換もしくは未置換のアシル、環式もしくは非環式、置換もしくは未置換、分岐もしくは非分岐の脂肪族、環式もしくは非環式、置換もしくは未置換、分岐もしくは非分岐のヘテロ脂肪族、環式もしくは非環式、置換もしくは未置換、分岐もしくは非分岐のアルキル、環式もしくは非環式、置換もしくは未置換、分岐もしくは非分岐のアルケニル、置換もしくは未置換のアルキニル、置換もしくは未置換のアリール、置換もしくは未置換のヘテロアリール、脂肪族オキシ、ヘテロ脂肪族オキシ、アルキルオキシ、ヘテロアルキルオキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、脂肪族チオキシ、ヘテロ脂肪族チオキシ、アルキルチオキシ、ヘテロアルキルチオキシ、アリールチオキシ、ヘテロアリールチオキシ、モノもしくはジ脂肪族アミノ、モノもしくはジヘテロ脂肪族アミノ、モノもしくはジアルキルアミノ、モノもしくはジヘテロアルキルアミノ、モノもしくはジアリールアミノ、またはモノもしくはジヘテロアリールアミノであるか、または、２つのＲＸ１基が一緒になって、５〜６員のヘテロ環式環を形成する。例示的なアシル基としては、アルデヒド（−ＣＨＯ）、カルボン酸（−ＣＯ２Ｈ）、ケトン、ハロゲン化アシル、エステル、アミド、イミン、カーボネート、カルバメート、及び尿素が挙げられる。アシル置換基としては、安定部分の形成をもたらす本明細書に記載の置換基のいずれか（例えば、脂肪族、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロ脂肪族、ヘテロ環式、アリール、ヘテロアリール、アシル、オキソ、イミノ、チオオキソ、シアノ、イソシアノ、アミノ、アジド、ニトロ、ヒドロキシ、チオール、ハロ、脂肪族アミノ、ヘテロ脂肪族アミノ、アルキルアミノ、ヘテロアルキルアミノ、アリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、アルキルアリール、アリールアルキル、脂肪族オキシ、ヘテロ脂肪族オキシ、アルキルオキシ、ヘテロアルキルオキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、脂肪族チオキシ、ヘテロ脂肪族チオキシ、アルキルチオキシ、ヘテロアルキルチオキシ、アリールチオキシ、ヘテロアリールチオキシ、アシルオキシ等、これらの各々はさらに置換されていてもいなくてもよい）が挙げられるがこれらに限定されない。
【０４４２】
「カルボニル」という用語は、親分子に直接結合する炭素がｓｐ２混成であり、酸素、窒素、またはイオウ原子で置換される基、例えば、ケトン（−Ｃ（＝Ｏ）Ｒａａ）、カルボン酸（−ＣＯ２Ｈ）、アルデヒド（−ＣＨＯ）、エステル（−ＣＯ２Ｒａａ、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲａａ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲａａ）、アミド（−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｂｂＳＯ２Ｒａａ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒｂｂ）２）、及びイミン（−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）Ｒａａ、−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）ＯＲａａ）、−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）Ｎ（Ｒｂｂ）２）から選択される基を指し、Ｒａａ及びＲｂｂは、本明細書で定義される通りである。
【０４４３】
窒素原子は、価数に応じて置換されても未置換でもよく、第１級、第２級、第３級、及び第４級窒素原子を含むことができる。例示的な窒素原子の置換基としては、水素、−ＯＨ、−ＯＲａａ、−Ｎ（Ｒｃｃ）２、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｃｃ）２、−ＣＯ２Ｒａａ、−ＳＯ２Ｒａａ、−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）Ｒａａ、−Ｃ（＝ＮＲｃｃ）ＯＲａａ、−Ｃ（＝ＮＲｃｃ）Ｎ（Ｒｃｃ）２、−ＳＯ２Ｎ（Ｒｃｃ）２、−ＳＯ２Ｒｃｃ、−ＳＯ２ＯＲｃｃ、−ＳＯＲａａ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒｃｃ）２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲｃｃ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲｃｃ、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲｃｃ）２、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒａａ）２、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｎ（Ｒｃｃ）２）２、Ｃ１−１０アルキル、Ｃ１−１０パーハロアルキル、Ｃ２−１０アルケニル、Ｃ２−１０アルキニル、ヘテロＣ１−１０アルキル、ヘテロＣ２−１０アルケニル、ヘテロＣ２−１０アルキニル、Ｃ３−１０カルボシクリル、３〜１４員のヘテロシクリル、Ｃ６−１４アリール、及び５〜１４員のヘテロアリールが挙げられるがこれらに限定されず、または、Ｎ原子に結合する２つのＲｃｃ基が一緒になって３〜１４員のヘテロシクリルもしくは５〜１４員のヘテロアリール環を形成し、この場合、各アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ヘテロアルケニル、ヘテロアルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールは、独立して、０、１、２、３、４、もしくは５個のＲｄｄ基で置換され、Ｒａａ、Ｒｂｂ、Ｒｃｃ、及びＲｄｄは、上記で定義される通りである。
【０４４４】
ある特定の実施形態では、窒素原子上に存在する置換基は、窒素保護基（本明細書では、「アミノ保護基」とも呼ばれる）である。窒素保護基としては、−ＯＨ、−ＯＲａａ、−Ｎ（Ｒｃｃ）２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｃｃ）２、−ＣＯ２Ｒａａ、−ＳＯ２Ｒａａ、−Ｃ（＝ＮＲｃｃ）Ｒａａ、−Ｃ（＝ＮＲｃｃ）ＯＲａａ、−Ｃ（＝ＮＲｃｃ）Ｎ（Ｒｃｃ）２、−ＳＯ２Ｎ（Ｒｃｃ）２、−ＳＯ２Ｒｃｃ、−ＳＯ２ＯＲｃｃ、−ＳＯＲａａ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒｃｃ）２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲｃｃ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲｃｃ、Ｃ１−１０アルキル（例えば、アラルキル、ヘテロアラルキル）、Ｃ２−１０アルケニル、Ｃ２−１０アルキニル、ヘテロＣ１−１０アルキル、ヘテロＣ２−１０アルケニル、ヘテロＣ２−１０アルキニル、Ｃ３−１０カルボシクリル、３〜１４員のヘテロシクリル、Ｃ６−１４アリール、及び５〜１４員のヘテロアリール基が挙げられるがこれらに限定されず、この場合、各アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ヘテロアルケニル、ヘテロアルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アラルキル、アリール、及びヘテロアリールは、独立して、０、１、２、３、４、もしくは５個のＲｄｄ基で置換され、Ｒａａ、Ｒｂｂ、Ｒｃｃ、及びＲｄｄは、本明細書で定義される通りである。窒素保護基は、当技術分野で周知であり、参照することにより本明細書に組み込まれるＰｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，３ｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，１９９９に詳細に記載されているものを含む。
【０４４５】
例えば、アミド基（例えば、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒａａ）等の窒素保護基としては、ホルムアミド、アセトアミド、クロロアセトアミド、トリクロロアセトアミド、トリフルオロアセトアミド、フェニルアセトアミド、３−フェニルプロパンアミド、ピコリンアミド、３−ピリジルカルボキサミド、Ｎ−ベンゾイルフェニルアラニル誘導体、ベンズアミド、ｐ−フェニルベンズアミド、ｏ−ニトロフェニルアセトアミド、ｏ−ニトロフェノキシアセトアミド、アセトアセトアミド、（Ν’−ジチオベンジルオキシアシルアミノ）アセトアミド、３−（ｐ−ヒドロキシフェニル）プロパンアミド、３−（ｏ−ニトロフェニル）プロパンアミド、２−メチル−２−（ｏ−ニトロフェノキシ）プロパンアミド、２−メチル−２−（ｏ−フェニルアゾフェノキシ）プロパンアミド、４−クロロブタンアミド、３−メチル−３−ニトロブタンアミド、ｏ−ニトロシンナミド、Ｎ−アセチルメチオニン誘導体、ｏ−ニトロベンズアミド、及びｏ−（ベンゾイルオキシメチル）ベンズアミドが挙げられるがこれらに限定されない。
【０４４６】
カルバメート基（例えば、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲａａ）等の窒素保護基としては、メチルカルバメート、エチルカルバメート、９−フルオレニルメチルカルバメート（Ｆｍｏｃ）、９−（２−スルホ）フルオレニルメチルカルバメート、９−（２，７−ジブロモ）フルオレニルメチルカルバメート、２，７−ジ−ｔ−ブチル−［９−（１０，１０−ジオキソ−１０，１０，１０，１０−テトラヒドロチオキサンチル）］メチルカルバメート（ＤＢＤ−Ｔｍｏｃ）、４−メトキシフェナシルカルバメート（Ｐｈｅｎｏｃ）、２，２，２−トリクロロエチルカルバメート（Ｔｒｏｃ）、２−トリメチルシリルエチルカルバメート（Ｔｅｏｃ）、２−フェニルエチルカルバメート（ｈＺ）、１−（１−アダマンチル）−１−メチルエチルカルバメート（Ａｄｐｏｃ）、１，１−ジメチル−２−ハロエチルカルバメート、１，１−ジメチル−２，２−ジブロモエチルカルバメート（ＤＢ−ｔ−ＢＯＣ）、１，１−ジメチル−２，２，２−トリクロロエチルカルバメート（ＴＣＢＯＣ）、１−メチル−１−（４−ビフェニリル）エチルカルバメート（Ｂｐｏｃ）、１−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−１−メチルエチルカルバメート（ｔ−Ｂｕｍｅｏｃ）、２−（２’−及び４’−ピリジル）エチルカルバメート（Ｐｙｏｃ）、２−（Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシルカルボキサミド）エチルカルバメート、ｔ−ブチルカルバメート（ＢＯＣまたはＢｏｃ）、１−アダマンチルカルバメート（Ａｄｏｃ）、ビニルカルバメート（Ｖｏｃ）、アリルカルバメート（Ａｌｌｏｃ）、１−イソプロピルアリルカルバメート（Ｉｐａｏｃ）、シンナミルカルバメート（Ｃｏｃ）、４−ニトロシンナミルカルバメート（Ｎｏｃ）、８−キノリルカルバメート、Ｎ−ヒドロキシピペリジニルカルバメート、アルキルジチオカルバメート、ベンジルカルバメート（Ｃｂｚ）、ｐ−メトキシベンジルカルバメート（Ｍｏｚ）、ｐ−ニトロベンジルカルバメート、ｐ−ブロモベンジルカルバメート、ｐ−クロロベンジルカルバメート、２，４−ジクロロベンジルカルバメート、４−メチルスルフィニルベンジルカルバメート（Ｍｓｚ）、９−アントリルメチルカルバメート、ジフェニルメチルカルバメート、２−メチルチオエチルカルバメート、２−メチルスルホニルエチルカルバメート、２−（ｐ−トルエンスルホニル）エチルカルバメート、［２−（１，３−ジチアニル）］メチルカルバメート（Ｄｍｏｃ）、４−メチルチオフェニルカルバメート（Ｍｔｐｃ）、２，４−ジメチルチオフェニルカルバメート（Ｂｍｐｃ）、２−ホスホニオエチルカルバメート（Ｐｅｏｃ）、２−トリフェニルホスホニオイソプロピルカルバメート（Ｐｐｏｃ）、１，１−ジメチル−２−シアノエチルカルバメート、ｍ−クロロ−ｐ−アシルオキシベンジルカルバメート、ｐ−（ジヒドロキシボリル）ベンジルカルバメート、５−ベンゾイソオキサゾリルメチルカルバメート、２−（トリフルオロメチル）−６−クロモニルメチルカルバメート（Ｔｃｒｏｃ）、ｍ−ニトロフェニルカルバメート、３，５−ジメトキシベンジルカルバメート、ｏ−ニトロベンジルカルバメート、３，４−ジメトキシ−６−ニトロベンジルカルバメート、フェニル（ｏ−ニトロフェニル）メチルカルバメート、ｔ−アミルカルバメート、Ｓ−ベンジルチオカルバメート、ｐ−シアノベンジルカルバメート、シクロブチルカルバメート、シクロヘキシルカルバメート、シクロペンチルカルバメート、シクロプロピルメチルカルバメート、ｐ−デシルオキシベンジルカルバメート、２，２−ジメトキシアシルビニルカルバメート、ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジメチルカルボキサミド）ベンジルカルバメート、１，１−ジメチル−３−（Ｎ，Ｎ−ジメチルカルボキサミド）プロピルカルバメート、１，１−ジメチルプロピニルカルバメート、ジ（２−ピリジル）メチルカルバメート、２−フラニルメチルカルバメート、２−ヨードエチルカルバメート、イソボルニルカルバメート、イソブチルカルバメート、イソニコチニルカルバメート、ｐ−（ｐ’−メトキシフェニルアゾ）ベンジルカルバメート、１−メチルシクロブチルカルバメート、１−メチルシクロヘキシルカルバメート、１−メチル−１−シクロプロピルメチルカルバメート、１−メチル−１−（３，５−ジメトキシフェニル）エチルカルバメート、１−メチル−１−（ｐ−フェニルアゾフェニル）エチルカルバメート、１−メチル−１−フェニルエチルカルバメート、１−メチル−１−（４−ピリジル）エチルカルバメート、フェニルカルバメート、ｐ−（フェニルアゾ）ベンジルカルバメート、２，４，６−トリ−ｔ−ブチルフェニルカルバメート、４−（トリメチルアンモニウム）ベンジルカルバメート、及び２，４，６−トリメチルベンジルカルバメートが挙げられるがこれらに限定されない。
【０４４７】
スルホンアミド基（例えば、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒａａ）等の窒素保護基としては、ｐ−トルエンスルホンアミド（Ｔｓ）、ベンゼンスルホンアミド、２，３，６−トリメチル−４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｒ）、２，４，６−トリメトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｂ）、２，６−ジメチル−４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｐｍｅ）、２，３，５，６−テトラメチル−４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｅ）、４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｂｓ）、２，４，６−トリメチルベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｓ）、２，６−ジメトキシ−４−メチルベンゼンスルホンアミド（ｉＭｄｓ）、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホンアミド（Ｐｍｃ）、メタンスルホンアミド（Ｍｓ）、β−トリメチルシリルエタンスルホンアミド（ＳＥＳ）、９−アントラセンスルホンアミド、４−（４’，８’−ジメトキシナフチルメチル）ベンゼンスルホンアミド（ＤＮＭＢＳ）、ベンジルスルホンアミド、トリフルオロメチルスルホンアミド、及びフェナシルスルホンアミドが挙げられるがこれらに限定されない。
【０４４８】
他の窒素保護基としては、フェノチアジニル−（１０）−アシル誘導体、Ｎ’−ｐ−トルエンスルホニルアミノアシル誘導体、Ｎ’−フェニルアミノチオアシル誘導体、Ｎ−ベンゾイルフェニルアラニル誘導体、Ｎ−アセチルメチオニン誘導体、４，５−ジフェニル−３−オキサゾリン−２−オン、Ｎ−フタルイミド、Ｎ−ジチアスクシンイミド（Ｄｔｓ）、Ｎ−２，３−ジフェニルマレイミド、Ｎ−２，５−ジメチルピロール、Ｎ−１，１，４，４−テトラメチルジシリルアザシクロペンタン付加物（ＳＴＡＢＡＳＥ）、５−置換１，３−ジメチル−１，３，５−トリアザシクロヘキサン−２−オン、５−置換１，３−ジベンジル−１、３，５−トリアザシクロヘキサン−２−オン、１−置換３，５−ジニトロ−４−ピリドン、Ｎ−メチルアミン、Ｎ−アリルアミン、Ｎ−［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチルアミン（ＳＥＭ）、Ｎ−３−アセトキシプロピルアミン、Ｎ−（１−イソプロピル−４−ニトロ−２−オキソ−３−ピロリン−３−イル）アミン、４級アンモニウム塩、Ｎ−ベンジルアミン、Ｎ−ジ（４−メトキシフェニル）メチルアミン、Ｎ−５−ジベンゾスベリルアミン、Ｎ−トリフェニルメチルアミン（Ｔｒ）、Ｎ−［（４−メトキシフェニル）ジフェニルメチル］アミン（ＭＭＴｒ）、Ｎ−９−フェニルフルオレニルアミン（ＰｈＦ）、Ｎ−２，７−ジクロロ−９−フルオレニルメチレンアミン、Ｎ−フェロセニルメチルアミノ（Ｆｃｍ）、Ｎ−２−ピコリルアミノＮ’−オキシド、Ｎ−１，１−ジメチルチオメチレンアミン、Ｎ−ベンジリデンアミン、Ｎ−ｐ−メトキシベンジリデンアミン、Ｎ−ジフェニルメチレンアミン、Ｎ−［（２−ピリジル）メシチル］メチレンアミン、Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノメチレン）アミン、Ν，Ν’−イソプロピリデンジアミン、Ｎ−ｐ−ニトロベンジリデンアミン、Ｎ−サリチリデンアミン、Ｎ−５−クロロサリチリデンアミン、Ｎ−（５−クロロ−２−ヒドロキシフェニル）フェニルメチレンアミン、Ｎ−シクロヘキシリデンアミン、Ｎ−（５，５−ジメチル−３−オキソ−１−シクロヘキセニル）アミン、Ｎ−ボラン誘導体、Ｎ−ジフェニルボリン酸誘導体、Ｎ−［フェニル（ペンタアシルクロミウム−またはタングステン）アシル］アミン、Ｎ−銅キレート、Ｎ−亜鉛キレート、Ｎ−ニトロアミン、Ｎ−ニトロソアミン、アミンＮ−オキシド、ジフェニルホスフィンアミド（Ｄｐｐ）、ジメチルチオホスフィンアミド（Ｍｐｔ）、ジフェニルチオホスフィンアミド（Ｐｐｔ）、ジアルキルホスホロアミデート、ジベンジルホスホロアミデート、ジフェニルホスホロアミデート、ベンゼンスルフェンアミド、ｏ−ニトロベンゼンスルフェンアミド（Ｎｐｓ）、２，４−ジニトロベンゼンスルフェンアミド、ペンタクロロベンゼンスルフェンアミド、２−ニトロ−４−メトキシベンゼンスルフェンアミド、トリフェニルメチルスルフェンアミド、及び３−ニトロピリジンスルフェンアミド（Ｎｐｙｓ）が挙げられるがこれらに限定されない。
【０４４９】
ある特定の実施形態では、酸素原子上に存在する置換基は、酸素保護基（本明細書では「ヒドロキシル保護基」とも呼ばれる）である。酸素保護基としては、−Ｒａａ、−Ｎ（Ｒｂｂ）２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒａａ、−ＣＯ２Ｒａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）Ｒａａ、−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）ＯＲａａ、−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒａａ、−ＳＯ２Ｒａａ、−Ｓｉ（Ｒａａ）３、−Ｐ（Ｒｃｃ）２、−Ｐ（Ｒｃｃ）３＋Ｘ−、−Ｐ（ＯＲｃｃ）２、−Ｐ（ＯＲｃｃ）３＋Ｘ−、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒａａ）２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲｃｃ）２、及び−Ｐ（＝Ｏ）（Ｎ（Ｒｂｂ）２）２が挙げられるがこれらに限定されず、ここで、Ｘ−、Ｒａａ、Ｒｂｂ、及びＲｃｃは、本明細書で定義される通りである。酸素保護基は、当技術分野で周知であり、参照することにより本明細書に組み込まれるＰｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，３ｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，１９９９に詳細に記載されているものを含む。
【０４５０】
例示的な酸素保護基としては、メチル、メトキシメチル（ＭＯＭ）、メチルチオメチル（ＭＴＭ）、ｔ−ブチルチオメチル、（フェニルジメチルシリル）メトキシメチル（ＳＭＯＭ）、ベンジルオキシメチル（ＢＯＭ）、ｐ−メトキシベンジルオキシメチル（ＰＭＢＭ）、（４−メトキシフェノキシ）メチル（ｐ−ＡＯＭ）、グアイアコールメチル（ＧＵＭ）、ｔ−ブトキシメチル、４−ペンテニルオキシメチル（ＰＯＭ）、シロキシメチル、２−メトキシエトキシメチル（ＭＥＭ）、２，２，２−トリクロロエトキシメチル、ビス（２−クロロエトキシ）メチル、２−（トリメチルシリル）エトキシメチル（ＳＥＭＯＲ）、テトラヒドロピラニル（ＴＨＰ）、３−ブロモテトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、１−メトキシシクロヘキシル、４−メトキシテトラヒドロピラニル（ＭＴＨＰ）、４−メトキシテトラヒドロチオピラニル、４−メトキシテトラヒドロチオピラニルＳ，Ｓ−ジオキシド、１−［（２−クロロ−４−メチル）フェニル］−４−メトキシピペリジン−４−イル（ＣＴＭＰ）、１，４−ジオキサン−２−イル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフラニル、２，３，３ａ，４，５，６，７，７ａ−オクタヒドロ−７，８，８−トリメチル−４，７−メタノベンゾフラン−２−イル、１−エトキシエチル、１−（２−クロロエトキシ）エチル、１−メチル−１−メトキシエチル、１−メチル−１−ベンジルオキシエチル、１−メチル−１−ベンジルオキシ−２−フルオロエチル、２，２，２−トリクロロエチル、２−トリメチルシリルエチル、２−（フェニルセレニル）エチル、ｔ−ブチル、アリル、ｐ−クロロフェニル、ｐ−メトキシフェニル、２，４−ジニトロフェニル、ベンジル（Ｂｎ）、ｐ−メトキシベンジル、３，４−ジメトキシベンジル、ｏ−ニトロベンジル、ｐ−ニトロベンジル、ｐ−ハロベンジル、２，６−ジクロロベンジル、ｐ−シアノベンジル、ｐ−フェニルベンジル、２−ピコリル、４−ピコリル、３−メチル−２−ピコリルＮ−オキシド、ジフェニルメチル、ｐ，ｐ’−ジニトロベンズヒドリル、５−ジベンゾスベリル、トリフェニルメチル、α−ナフチルジフェニルメチル、ｐ−メトキシフェニルジフェニルメチル、ジ（ｐ−メトキシフェニル）フェニルメチル、トリ（ｐ−メトキシフェニル）メチル、４−（４’−ブロモフェナシルオキシフェニル）ジフェニルメチル、４，４’，４”−トリス（４，５−ジクロロフタルイミドフェニル）メチル、４，４’，４”−トリス（レブリノイルオキシフェニル）メチル、４，４’，４”−トリス（ベンゾイルオキシフェニル）メチル、３−（イミダゾール−１−イル）ビス（４’，４”−ジメトキシフェニル）メチル、１，１−ビス（４−メトキシフェニル）−１’−ピレニルメチル、９−アントリル、９−（９−フェニル）キサンテニル、９−（９−フェニル−１０−オキソ）アントリル、１，３−ベンゾジチオラン−２−イル、ベンゾイソチアゾリルＳ，Ｓ−ジオキシド、トリメチルシリル（ＴＭＳ）、トリエチルシリル（ＴＥＳ）、トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）、ジメチルイソプロピルシリル（ＩＰＤＭＳ）、ジエチルイソプロピルシリル（ＤＥＩＰＳ）、ジメチルテキシルシリル、ｔ−ブチルジメチル���リル（ＴＢＤＭＳ）、ｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、トリベンジルシリル、トリ−ｐ−キシリルシリル、トリフェニルシリル、ジフェニルメチルシリル（ＤＰＭＳ）、ｔ−ブチルメトキシフェニルシリル（ＴＢＭＰＳ）、ホルメート、ベンゾイルホルメート、アセテート、クロロアセテート、ジクロロアセテート、トリクロロアセテート、トリフルオロアセテート、メトキシアセテート、トリフェニルメトキシアセテート、フェノキシアセテート、ｐ−クロロフェノキシアセテート、３−フェニルプロピオネート、４−オキソペンタノエート（レブリネート）、４，４−（エチレンジチオ）ペンタノエート（レブリノイルジチオアセタール）、ピバロエート、アダマントエート、クロトネート、４−メトキシクロトネート、ベンゾエート、ｐ−フェニルベンゾエート、２，４，６−トリメチルベンゾエート（メシトエート）、メチルカーボネート、９−フルオレニルメチルカーボネート（Ｆｍｏｃ）、エチルカーボネート、２，２，２−トリクロロエチルカーボネート（Ｔｒｏｃ）、２−（トリメチルシリル）エチルカーボネート（ＴＭＳＥＣ）、２−（フェニルスルホニル）エチルカーボネート（Ｐｓｅｃ）、２−（トリフェニルホスホニオ）エチルカーボネート（Ｐｅｏｃ）、イソブチルカーボネート、ビニルカーボネート、アリルカーボネート、ｔ−ブチルカーボネート（ＢＯＣまたはＢｏｃ）、ｐ−ニトロフェニルカーボネート、ベンジルカーボネート、ｐ−メトキシベンジルカーボネート、３，４−ジメトキシベンジルカーボネート、ｏ−ニトロベンジルカーボネート、ｐ−ニトロベンジルカーボネート、Ｓ−ベンジルチオカーボネート、４−エトキシ−１−ナフチルカーボネート、メチルジチオカーボネート、２−ヨードベンゾエート、４−アジドブチレート、４−ニトロ−４−メチルペンタノエート、ｏ−（ジブロモメチル）ベンゾエート、２−ホルミルベンゼンスルホネート、２−（メチルチオメトキシ）エチル、４−（メチルチオメトキシ）ブチレート、２−（メチルチオメトキシメチル）ベンゾエート、２，６−ジクロロ−４−メチルフェノキシアセテート、２，６−ジクロロ−４−（１，１，３，３−テトラメチルブチル）フェノキシアセテート、２，４−ビス（１，１−ジメチルプロピル）フェノキシアセテート、クロロジフェニルアセテート、イソブチレート、モノスクシノエート、（Ｅ）−２−メチル−２−ブテノエート、ｏ−（メトキシアシル）ベンゾエート、α−ナフトエート、ニトレート、アルキルＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルホスホロジアミデート、アルキルＮ−フェニルカルバメート、ボレート、ジメチルホスフィノチオイル、アルキル２，４−ジニトロフェニルスルフェネート、スルフェート、メタンスルホネート（メシレート）、ベンジルスルホネート、及びトシレート（Ｔｓ）が挙げられるがこれらに限定されない。
【０４５１】
ある特定の実施形態では、イオウ原子上に存在する置換基は、イオウ保護基（「チオール保護基」とも呼ばれる）である。イオウ保護基としては、−Ｒａａ、−Ｎ（Ｒｂｂ）２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒａａ、−ＣＯ２Ｒａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）Ｒａａ、−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）ＯＲａａ、−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒａａ、−ＳＯ２Ｒａａ、−Ｓｉ（Ｒａａ）３、−Ｐ（Ｒｃｃ）２、−Ｐ（Ｒｃｃ）３＋Ｘ−、−Ｐ（ＯＲｃｃ）２、−Ｐ（ＯＲｃｃ）３＋Ｘ−、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒａａ）２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲｃｃ）２、及び−Ｐ（＝Ｏ）（Ｎ（Ｒｂｂ）２）２が挙げられるがこれらに限定されず、ここで、Ｒａａ、Ｒｂｂ、及びＲｃｃは、本明細書で定義される通りである。イオウ保護基は、当技術分野で周知であり、参照することにより本明細書に組み込まれるＰｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，３ｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，１９９９に詳細に記載されているものを含む。
【０４５２】
「対イオン」または「アニオン性対イオン」は、電気的中性を維持するため、正電荷を持つ基と会合した負電荷を持つ基である。アニオン性対イオンは、一価（すなわち、１つの形式負電荷を含む）でよい。アニオン性対イオンはまた、多価（すなわち、複数の形式負電荷を含む）、例えば、二価または三価でもよい。例示的な対イオンとしては、ハロゲン化物イオン（例えば、Ｆ−、Ｃｌ−、Ｂｒ−、Ｉ−）、ＮＯ３−、ＣｌＯ４−、ＯＨ−、Ｈ２ＰＯ４−、ＨＣＯ３−、ＨＳＯ４−、スルホネートイオン（例えば、メタンスルホネート、トリフルオロメタンスルホネート、ｐ−トルエンスルホネート、ベンゼンスルホネート、１０−カンファースルホネート、ナフタレン−２−スルホネート、ナフタレン−１−スルホン酸−５−スルホネート、エタン−１−スルホン酸−２−スルホネート等）、カルボキシレートイオン（例えば、アセテート、プロパノエート、ベンゾエート、グリセレート、ラクテート、タルトレート、グリコレート、グルコネート等）、ＢＦ４−、ＰＦ４−、ＰＦ６−、ＡｓＦ６−、ＳｂＦ６−、Ｂ［３，５−（ＣＦ３）２Ｃ６Ｈ３］４］−、Ｂ（Ｃ６Ｆ５）４−、ＢＰｈ４−、Ａｌ（ＯＣ（ＣＦ３）３）４−、ならびにカーボネートアニオン（例えば、ＣＢ１１Ｈ１２−または（ＨＣＢ１１Ｍｅ５Ｂｒ６）−）が挙げられる。多価でありうる例示的な対イオンとしては、ＣＯ３２−、ＨＰＯ４２−、ＰＯ４３−、Ｂ４Ｏ７２−、ＳＯ４２−、Ｓ２Ｏ３２−、カルボキシレートアニオン（例えば、タルトレート、シトレート、フマレート、マレエート、マレート、マロネート、グルコネート、スクシネート、グルタレート、アジペート、ピメレート、スベレート、アゼレート、セバケート、サリチレート、フタレート、アルパルテート、グルタメート等）、及びカルボランが挙げられる。
【０４５３】
本明細書で使用される、「少なくとも１つの例」という成句の使用は、１、２、３、４、またはそれより多い例を指すが、範囲、例えば、端点を含めて、１〜４、１〜３、１〜２、２〜４、２〜３、または３〜４の例も包含する。
【０４５４】
これら及び他の例示的な置換基は、全体にわたってより詳細に記載する。本発明は、いかなる方法によっても上記例示的な置換基のリストにより限定されることを意図しない。
【０４５５】
本明細書で使用される、「塩」という用語は、ありとあらゆる塩を指し、医薬的に許容される塩を包含する。
【０４５６】
「医薬的に許容される塩」という用語は、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応等なくヒト及び下等動物の組織と接触する用途に適し、合理的なリスク・ベネフィット比に見合った塩を指す。医薬的に許容される塩は、当技術分野で周知である。例えば、Ｂｅｒｇｅらは、参照することにより本明細書に組み込まれるＪ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９７７，  ６６，  １−１９において医薬的に許容される塩を詳細に記載している。本発明の化合物の医薬的に許容される塩としては、適切な無機及び有機酸ならびに塩基由来のものが挙げられる。医薬的に許容される、非毒性酸付加塩の例は、無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸、及び過塩素酸、または有機酸、例えば、酢酸、シュウ酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸、もしくはマロン酸で形成される、または、イオン交換等の当技術分野で知られる他の方法を用いて形成されるアミノ基の塩である。他の医薬的に許容される塩としては、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、カンファースルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、グルコン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩等が挙げられる。適切な塩基由来の塩としては、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、アンモニウム塩、及びＮ＋（Ｃ１−４アルキル）４−塩が挙げられる。代表的なアルカリまたはアルカリ土類金属塩としては、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム等が挙げられる。さらなる医薬的に許容される塩としては、適切な場合、対イオン、例えば、ハロゲン化物、ヒドロキシド、カルボキシレート、スルフェート、ホスフェート、ニトレート、低級アルキルスルホネート、及びアリールスルホネートを用いて形成される非毒性のアンモニウム、４級アンモニウム、及びアミンカチオンが挙げられる。
【０４５７】
生物活性物質
本開示は、本明細書に提供するＬＮＰ及び／または本明細書に提供する様々な併用療法が、対象に様々な薬剤を送達するために使用され得ることを企図する。かかる薬剤は、通常、生物活性物質であろう。生物活性物質は、インビボで効果があり、好ましくは、望ましい免疫調節、免疫刺激、免疫抑制、細胞死滅、細胞保存、変更遺伝子発現、タンパク質補給等のような有益な効果がある薬剤である。生物活性物質としては、予防薬、治療薬、及び診断薬が挙げられるがこれらに限定されない。生物活性物質は、免疫調節剤、例えば、免疫賦活または免疫抑制剤、抗原、抗体及び抗体断片、例えば、抗原結合抗体断片、アジュバント、サイトカイン、例えば、インターロイキン、抗細菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、駆虫剤、抗がん剤、抗炎症剤等が挙げられる。
【０４５８】
かかる薬剤は、制限なく、核酸、タンパク質もしくはペプチド、小有機化合物、炭水化物及び／または多糖等でよい。それらは、核酸及び／またはタンパク質を細胞にて、特にかかる核酸もしくはタンパク質が不足している、またはかかる核酸もしくはタンパク質の突然変異型を有する細胞にて発現させるために使用され得る。それらは、例えば、免疫付与またはワクチン接種プロトコルに照らして行われ得るように、当該細胞もしくは有機体に生来のものでない核酸またはタンパク質を導入する及び発現させるために使用され得る。この点において、該核酸もしくはタンパク質は、それが投与される対象にとって異物である場合があり（例えば、かかる対象において自然発生でない、または自然に全く生じない）、それは、かかる核酸もしくはタンパク質に対する免疫応答を誘導及び／または強化するために該対象に投与される。本明細書に提供する核酸は、かかる目的に使用され得る。
【０４５９】
他の生物活性物質は、単独で使用しても、またはかかる核酸もしくはタンパク質と一緒に製剤化されたもの、本開示のＬＮＰに製剤化されたものを含め、かかる核酸もしくはタンパク質と一緒に使用してもよい。
【０４６０】
核酸
本明細書で使用される、「核酸」という用語は、核酸塩基及び酸性部分を含む化合物、例えば、ヌクレオシド、ヌクレオチド、またはヌクレオチドのポリマーを指す。通常、ポリマー核酸、例えば、３個以上のヌクレオチドを含む核酸分子は、線状分子であり、隣接するヌクレオチドは、リン酸ジエステル結合で互いに連結されている。いくつかの実施形態では、「核酸」は、個々の核酸残基を指す（例えば、ヌクレオチド及び／またはヌクレオシド）。いくつかの実施形態では、「核酸」は、３個以上の個々のヌクレオチド残基を含むオリゴヌクレオチド鎖を指す。本明細書で使用される、「オリゴヌクレオチド」及び「ポリヌクレオチド」という用語は、ヌクレオチドのポリマーを指すために互換的に使用され得る（例えば、少なくとも３ヌクレオチドの鎖）。いくつかの実施形態では、「核酸」は、ＲＮＡならびに一本鎖及び／または二本鎖ＤＮＡを包含する。核酸配列は、別段の指示がない限り、５’から３’の方向に示される。
【０４６１】
核酸としては、ヌクレオチドのポリマーを含む任意の化合物及び／または物質が挙げられる。これらのポリマーは、ポリヌクレオチドと呼ばれる。核酸は、例えば、リボ核酸（ＲＮＡ）、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、トレオース核酸（ＴＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ、β−Ｄ−リボ配置を有するＬＮＡ、α−Ｌ−リボ配置を有するα−ＬＮＡ（ＬＮＡのジアステレオマー）、２’−アミノ機能化を有する２’−アミノ−ＬＮＡ、及び２’−アミノ機能化を有する２’−アミノ−α−ＬＮＡを含む）、エチレン核酸（ＥＮＡ）、シクロヘキセニル核酸（ＣｅＮＡ）、またはそれらのキメラもしくは組合せであり得るか、またはそれらを含み得る。
【０４６２】
核酸は、例えば、ゲノム、転写産物、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｎＲＮＡ、プラスミド、コスミド、染色体、染色分体、または他の天然起源の核酸分子という観点から、天然起源であり得る。一方、核酸分子は、非天然起源の分子、例えば、組み換えＤＮＡもしくはＲＮＡ、人工染色体、遺伝子組み換えゲノム、もしくはその断片、または合成ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッドである場合もあれば、非天然起源のヌクレオチドもしくはヌクレオシドを含んでいる場合もある。核酸は、天然源から精製すること、組み換え発現系を用いて産生し、任意に精製すること、化学合成すること等ができる。
【０４６３】
さらに、用語「核酸」、「ＤＮＡ」、「ＲＮＡ」、及び／または同様の用語には、核酸類似体、すなわち、リン酸ジエステル骨格以外を有する類似体が含まれる。
【０４６４】
適切な場合、例えば、化学合成分子の場合、核酸は、ヌクレオシド類似体、例えば、化学的に修飾された塩基または糖、及び骨格の修飾を有する類似体を含むことができる。いくつかの実施形態では、核酸は、天然のヌクレシド（例えば、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、ウリジン、デオキシアデノシン、デオキシチミジン、デオキシグアノシン、及びデオキシシチジン）、ヌクレオシド類似体（例えば、２−アミノアデノシン、２−チオチミジン、イノシン、ピロロピリミジン、３−メチルアデノシン、５−メチルシチジン、２−アミノアデノシン、Ｃ５−ブロモウリジン、Ｃ５−フルオロウリジン、Ｃ５−ヨードウリジン、Ｃ５−プロピニル−ウリジン、Ｃ５−プロピニル−シチジン、Ｃ５−メチルシチジン、２−アミノアデノシン、７−デアザアデノシン、７−デアザアグアノシン、８−オキソアデノシン、８−オキソグアノシン、Ｏ（６）−メチルグアニン、及び２−チオシチジン）、化学的に修飾された塩基、生物学的に修飾された塩基（例えば、メチル化塩基）、インターカレートした塩基、修飾された糖（例えば、２’−フルオロリボース、リボース、２’−デオキシリボース、アラビノース、及びヘキソース）、及び／または修飾されたリン酸基（例えば、ホスホロチオエート及び５’−Ｎ−ホスホロアミダイト結合）であるか、またはこれらを含む。
【０４６５】
「ヌクレオシド」は、糖分子（例えば、ペントースもしくはリボース）またはその誘導体を、有機塩基（例えば、プリンもしくはピリミジン）またはその誘導体（本明細書では「核酸塩基」とも呼ばれる）と組み合わせて含む化合物を指す。「ヌクレオチド」は、リン酸基を含めたヌクレオシドを指す。修飾されたヌクレオチドを、任意の有用な方法、例えば、化学的に、酵素的に、または組み換えで合成し、１つ以上の修飾された、もしくは非天然のヌクレオシドを含めてもよい。ポリヌクレオチドは、連結されたヌクレオシドの領域または複数の領域を含んでもよい。かかる領域は、異なる骨格結合を有してよい。該結合は、標準的なリン酸ジエステル結合でもよく、この場合、該ポリヌクレオチドは、ヌクレオチドの領域を含む。
【０４６６】
修飾されたヌクレオチド塩基対合は、標準的なアデノシン−チミン、アデノシン−ウラシル、またはグアノシン−シトシン塩基対だけでなく、非標準もしくは修飾された塩基を含むヌクレオチド及び／または修飾されたヌクレオチド間で形成される塩基対を包含し、この場合、水素結合供与体と水素結合受容体の配置は、非標準の塩基と標準の塩基間、または２個の相補的非標準塩基構造間の水素結合を可能にする。かかる非標準の塩基対合の一例は、修飾されたヌクレオチドイノシン及びアデニン、シトシンまたはウラシル間の塩基対合である。任意の塩基／糖またはリンカーの組合せを、本開示のポリヌクレオチドに組み込んでもよい。
【０４６７】
当業者には、特に指定のない限り、本出願に記載されるポリヌクレオチド配列が、代表的なＤＮＡ配列では「Ｔ」を列挙するが、該配列がＲＮＡを表す場合、「Ｔ」は「Ｕ」で置き換えられることが理解されよう。
【０４６８】
本明細書に記載の治療薬で有用なポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡポリヌクレオチド、例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチド）の修飾としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：２−メチルチオ−Ｎ６−（ｃｉｓ−ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン、２−メチルチオ−Ｎ６−メチルアデノシン、２−メチルチオ−Ｎ６−トレオニルカルバモイルアデノシン、Ｎ６−グリシニルカルバモイルアデノシン、Ｎ６−イソペンテニルアデノシン、Ｎ６−メチルアデノシン、Ｎ６−トレオニルカルバモイルアデノシン、１，２’−Ｏ−ジメチルアデノシン、１−メチルアデノシン、２’−Ｏ−メチルアデノシン、２’−Ｏ−リボシルアデノシン（ホスフェート）、２−メチルアデノシン、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデノシン、２−メチルチオ−Ｎ６−ヒドロキシノルバリルカルバモイルアデノシン、２’−Ｏ−メチルアデノシン、２’−Ｏ−リボシルアデノシン（ホスフェート）、イソペンテニルアデノシン、Ｎ６−（ｃｉｓ−ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン、Ｎ６，２’−Ｏ−ジメチルアデノシン、Ｎ６，２’−Ｏ−ジメチルアデノシン、Ｎ６，Ｎ６，２’−Ｏ−トリメチルアデノシン、Ｎ６，Ｎ６−ジメチルアデノシン、Ｎ６−アセチルアデノシン、Ｎ６−ヒドロキシノルバリルカルバモイルアデノシン、Ｎ６−メチル−Ｎ６−トレオニルカルバモイルアデノシン、２−メチルアデノシン、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデノシン、７−デアザ−アデノシン、Ｎ１−メチル−アデノシン、Ｎ６，Ｎ６（ジメチル）アデニン、Ｎ６−ｃｉｓ−ヒドロキシ−イソペンテニル−アデノシン、α−チオ−アデノシン、２−（アミノ）アデニン、２−（アミノプロピル）アデニン、２（メチルチオ）Ｎ６（イソペンテニル）アデニン、２−（アルキル）アデニン、２−（アミノアルキル）アデニン、２−（アミノプロピル）アデニン、２−（ハロ）アデニン、２−（ハロ）アデニン、２−（プロピル）アデニン、２’−アミノ−２’−デオキシ−ＡＴＰ、２’−アジド−２’−デオキシ−ＡＴＰ、２’−デオキシ−２’−ａ−アミノアデノシン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’−ａ−アジドアデノシン  ＴＰ、６（アルキル）アデニン、６（メチル）アデニン、６−（アルキル）アデニン、６−（メチル）アデニン、７（デアザ）アデニン、８（アルケニル）アデニン、８（アルキニル）アデニン、８（アミノ）アデニン、８（チオアルキル）アデニン、８−（アルケニル）アデニン、８−（アルキル）アデニン、８−（アルキニル）アデニン、８−（アミノ）アデニン、８−（ハロ）アデニン、８−（ヒドロキシル）アデニン、８−（チオアルキル）アデニン、８−（チオール）アデニン、８−アジド−アデノシン、アザアデニン、デアザアデニン、Ｎ６（メチル）アデニン、Ｎ６−（イソペンチル）アデニン、７−デアザ−８−アザ−アデノシン、７−メチルアデニン、１−デアザアデノシン  ＴＰ、２’フルオロ−Ｎ６−Ｂｚ−デオキシアデノシン  ＴＰ、２’−ＯＭｅ−２−アミノ−ＡＴＰ、２’Ｏ−メチル−Ｎ６−Ｂｚ−デオキシアデノシン  ＴＰ、２’−ａ−エチニルアデノシン  ＴＰ、２−アミノアデニン、２−アミノアデノシン  ＴＰ、２−アミノ−ＡＴＰ、２’−ａ−トリフルオロメチ��アデノシン  ＴＰ、２−アジドアデノシン  ＴＰ、２’−ｂ−エチニルアデノシン  ＴＰ、２−ブロモアデノシン  ＴＰ、２’−ｂ−トリフルオロメチルアデノシン  ＴＰ、２−クロロアデノシン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’，２’−ジフルオロアデノシン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’−ａ−メルカプトアデノシン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’−ａ−チオメトキシアデノシン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−アミノアデノシン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−アジドアデノシン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−ブロモアデノシン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−クロロアデノシン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−フルオロアデノシン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−ヨードアデノシン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−メルカプトアデノシン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−チオメトキシアデノシン  ＴＰ、２−フルオロアデノシン  ＴＰ、２−ヨードアデノシン  ＴＰ、２−メルカプトアデノシン  ＴＰ、２−メトキシ−アデニン、２−メチルチオ−アデニン、２−トリフルオロメチルアデノシン  ＴＰ、３−デアザ−３−ブロモアデノシン  ＴＰ、３−デアザ−３−クロロアデノシン  ＴＰ、３−デアザ−３−フルオロアデノシン  ＴＰ、３−デアザ−３−ヨードアデノシン  ＴＰ、３−デアザアデノシン  ＴＰ、４’−アジドアデノシン  ＴＰ、４’−カルボサイクリックアデノシン  ＴＰ、４’−エチニルアデノシン  ＴＰ、５’−ホモ−アデノシン  ＴＰ、８−アザ−ＡＴＰ、８−ブロモ−アデノシン  ＴＰ、８−トリフルオロメチルアデノシン  ＴＰ、９−デアザアデノシン  ＴＰ、２−アミノプリン、７−デアザ−２，６−ジアミノプリン、７−デアザ−８−アザ−２，６−ジアミノプリン、７−デアザ−８−アザ−２−アミノプリン、２，６−ジアミノプリン、７−デアザ−８−アザ−アデニン、７−デアザ−２−アミノプリン、２−チオシチジン、３−メチルシチジン、５−ホルミルシチジン、５−ヒドロキシメチルシチジン、５−メチルシチジン、Ｎ４−アセチルシチジン、２’−Ｏ−メチルシチジン、２’−Ｏ−メチルシチジン、５，２’−Ｏ−ジメチルシチジン、５−ホルミル−２’−Ｏ−メチルシチジン、リシジン、Ｎ４，２’−Ｏ−ジメチルシチジン、Ｎ４−アセチル−２’−Ｏ−メチルシチジン、Ｎ４−メチルシチジン、Ｎ４，Ｎ４−ジメチル−２’−ＯＭｅ−シチジン  ＴＰ、４−メチルシチジン、５−アザ−シチジン、プソイド−イソ−シチジン、ピロロ−シチジン、α−チオ−シチジン、２−（チオ）シトシン、２’−アミノ−２’−デオキシ−ＣＴＰ、２’−アジド−２’−デオキシ−ＣＴＰ、２’−デオキシ−２’−ａ−アミノシチジン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’−ａ−アジドシチジン  ＴＰ、３−（デアザ）−５−（アザ）シトシン、３−（メチル）シトシン、３−（アルキル）シトシン、３−（デアザ）５（アザ）シトシン、３−（メチル）シチジン、４，２’−Ｏ−ジメチルシチジン、５（ハロ）シトシン、５（メチル）シトシン、５（プロピニル）シトシン、５（トリフルオロメチル）シトシン、５−（アルキル）シトシン、５−（アルキニル）シトシン、５−（ハロ）シトシン、５−（プロピニル）シトシン、５−（トリフルオロメチル）シトシン、５−ブロモ−シチジン、５−ヨード−シチジン、５−プロピニルシトシン、６−（アゾ）シトシン、６−アザ−シチジン、アザシトシン、デアザシトシン、Ｎ４−（アセチル）シトシン、１−メチル−１−デアザ−プソイドイソシチジン、１−メチル−プソイドイソシチジン、２−メトキシ−５−メチル−シチジン、２−メトキシ−シチジン、２−チオ−５−メチル−シチジン、４−メトキシ−１−メチル−プソイドイソシチジン、４−メトキシ−プソイドイソシチジン、４−チオ−１−メチル−１−デアザ−プソイドイソシチジン、４−チオ−１−メチル−プソイドイソシチジン、４−チオ−プソイドイソシチジン、５−アザ−ゼブラリン、５−メチル−ゼブラリン、ピロロ−プソイドイソシチジン、ゼブラリン、（Ｅ）−５−（２−ブロモ−ビニル）シチジン  ＴＰ、２，２’−アンヒドロ−シチジン  ＴＰ  塩酸塩、２’フルオロ−Ｎ４−Ｂｚ−シチジン  ＴＰ、２’フルオロ−Ｎ４−アセチル−シチジン  ＴＰ、２’−Ｏ−メチル−Ｎ４−アセチル−シチジン  ＴＰ、２’Ｏ−メチル−Ｎ４−Ｂｚ−シチジン  ＴＰ、２’−ａ−エチニルシチジン  ＴＰ、２’−ａ−トリフルオロメチルシチジン  ＴＰ、２’−ｂ−エチニルシチジン  ＴＰ、２’−ｂ−トリフルオロメチルシチジン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’，２’−ジフルオロシチジン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’−ａ−メルカプトシチジン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’−ａ−チオメトキシシチジン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−アミノシチジン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−アジドシチジン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−ブロモシチジン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−クロロシチジン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−フルオロシチジン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−ヨードシチジン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−メルカプトシチジン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−チオメトキシシチジン  ＴＰ、２’−Ｏ−メチル−５−（１−プロピニル）シチジン  ＴＰ、３’−エチニルシチジン  ＴＰ、４’−アジドシチジン  ＴＰ、４’−カルボサイクリック  シチジン  ＴＰ、４’−エチニルシチジン  ＴＰ、５−（１−プロピニル）アラ−シチジン  ＴＰ、５−（２−クロロ−フェニル）−２−チオシチジン  ＴＰ、５−（４−アミノ−フェニル）−２−チオシチジン  ＴＰ、５−アミノアリル−ＣＴＰ、５−シアノシチジン  ＴＰ、５−エチニルアラ−シチジン  ＴＰ、５−エチニルシチジン  ＴＰ、５’−ホモ−シチジン  ＴＰ、５−メトキシシチジン  ＴＰ、５−トリフルオロメチル−シチジン  ＴＰ、Ｎ４−アミノ−シチジン  ＴＰ、Ｎ４−ベンゾイル−シチジン  ＴＰ、プソイドイソシチジン、７−メチルグアノシン、Ｎ２，２’−Ｏ−ジメチルグアノシン、Ｎ２−メチルグアノシン、ワイオシン、１，２’−Ｏ−ジメチルグアノシン、１−メチルグアノシン、２’−Ｏ−メチルグアノシン、２’−Ｏ−リボシルグアノシン（ホスフェート）、２’−Ｏ−メチルグアノシン、２’−Ｏ−リボシルグアノシン（ホスフェート）、７−アミノメチル−７−デアザグアノシン、７−シアノ−７−デアザグアノシン、アルカエオシン、メチルワイオシン、Ｎ２，７−ジメチルグアノシン、Ｎ２，Ｎ２，２’−Ｏ−トリメチルグアノシン、Ｎ２，Ｎ２，７−トリメチルグアノシン、Ｎ２，Ｎ２−ジメチルグアノシン、Ｎ２，７，２’−Ｏ−トリメチルグアノシン、６−チオ−グアノシン、７−デアザ−グアノシン、８−オキソ−グアノシン、Ｎ１−メチル−グアノシン、α−チオ−グアノシン、２（プロピル）グアニン、２−（アルキル）グアニン、２’−アミノ−２’−デオキシ−ＧＴＰ、２’−アジド−２’−デオキシ−ＧＴＰ、２’−デオキシ−２’−ａ−アミノグアノシン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’−ａ−アジドグアノシン  ＴＰ、６（メチル）グアニン、６−（アルキル）グアニン、６−（メチル）グアニン、６−メチル−グアノシン、７−（アルキル）グアニン、７−（デアザ）グアニン、７−（メチル）グアニン、７−（アルキル）グアニン、７−（デアザ）グアニン、７−（メチル）グアニン、８（アルキル）グアニン、８（アルキニル）グアニン、８（ハロ）グアニン、８（チオアルキル）グアニン、８−（アルケニル）グアニン、８−（アルキル）グアニン、８−（アルキニル）グアニン、８−（アミノ）グアニン、８−（ハロ）グアニン、８−（ヒドロキシル）グアニン、８−（チオアルキル）グアニン、８−（チオール）グアニン、アザグアニン、デアザグアニン、Ｎ（メチル）グアニン、Ｎ−（メチル）グアニン、１−メチル−６−チオ−グアノシン、６−メトキシ−グアノシン、６−チオ−７−デアザ−８−アザ−グアノシン、６−チオ−７−デアザ−グアノシン、６−チオ−７−メチル−グアノシン、７−デアザ−８−アザ−グアノシン、７−メチル−８−オキソ−グアノシン、Ｎ２，Ｎ２−ジメチル−６−チオ−グアノシン、Ｎ２−メチル−６−チオ−グアノシン、１−Ｍｅ−ＧＴＰ、２’フルオロ−Ｎ２−イソブチル−グアノシン  ＴＰ、２’Ｏ−メチル−Ｎ２−イソブチル−グアノシン  ＴＰ、２’−ａ−エチニルグアノシン  ＴＰ、２’−ａ−トリフルオロメチルグアノシン  ＴＰ、２’−ｂ−エチニルグアノシン  ＴＰ、２’−ｂ−トリフルオロメチルグアノシン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’，２’−ジフルオログアノシン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’−ａ−メルカプトグアノシン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’−ａ−チオメトキシグアノシン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−アミノグアノシン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−アジドグアノシン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−ブロモグアノシン  ＴＰ、２
’−デオキシ−２’−ｂ−クロログアノシン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−フルオログアノシン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−ヨードグアノシン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−メルカプトグアノシン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−チオメトキシグアノシン  ＴＰ、４’−アジドグアノシン  ＴＰ、４’−カルボサイクリックグアノシン  ＴＰ、４’−エチニルグアノシン  ＴＰ、５’−ホモ−グアノシン  ＴＰ、８−ブロモ−グアノシン  ＴＰ、９−デアザグアノシン  ＴＰ、Ｎ２−イソブチル−グアノシン  ＴＰ、１−メチルイノシン、イノシン、１，２’−Ｏ−ジメチルイノシン、２’−Ｏ−メチルイノシン、７−メチルイノシン、２’−Ｏ−メチルイノシン、エポキシクエオシン、ガラクトシル−クエオシン、マンノシルクエオシン、クエオシン、アリルアミノ−チミジン、アザチミジン、デアザチミジン、デオキシ−チミジン、２’−Ｏ−メチルウリジン、２−チオウリジン、３−メチルウリジン、５−カルボキシメチルウリジン、５−ヒドロキシウリジン、５−メチルウリジン、５−タウリノメチル−２−チオウリジン、５−タウリノメチルウリジン、ジヒドロウリジン、プソイドウリジン、（３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）ウリジン、１−メチル−３−（３−アミノ−５−カルボキシプロピル）プソイドウリジン、１−メチルプソイドウリジン、１−メチル−プソイドウリジン、２’−Ｏ−メチルウリジン、２’−Ｏ−メチルプソイドウリジン、２’−Ｏ−メチルウリジン、２−チオ−２’−Ｏ−メチルウリジン、３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）ウリジン、３，２’−Ｏ−ジメチルウリジン、３−メチル−プソイド−ウリジン  ＴＰ、４−チオウリジン、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウリジン、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウリジンメチルエステル、５，２’−Ｏ−ジメチルウリジン、５，６−ジヒドロ−ウリジン、５−アミノメチル−２−チオウリジン、５−カルバモイルメチル−２’−Ｏ−メチルウリジン、５−カルバモイルメチルウリジン、５−カルボキシヒドロキシメチルウリジン、５−カルボキシヒドロキシメチルウリジンメチルエステル、５−カルボキシメチルアミノメチル−２’−Ｏ−メチルウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチルウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチルウリジン、５−カルバモイルメチルウリジン  ＴＰ、５−メトキシカルボニルメチル−２’−Ｏ−メチルウリジン、５−メトキシカルボニルメチル−２−チオウリジン、５−メトキシカルボニルメチルウリジン、５−メチルウリジン、５−メトキシウリジン、５−メチル−２−チオウリジン、５−メチルアミノメチル−２−セレノウリジン、５−メチルアミノメチル−２−チオウリジン、５−メチルアミノメチルウリジン、５−メチルジヒドロウリジン、５−オキシ酢酸−ウリジン  ＴＰ、５−オキシ酢酸メチルエステル−ウリジン  ＴＰ、Ｎ１−メチル−プソイド−ウリジン、ウリジン５−オキシ酢酸、ウリジン５−オキシ酢酸メチルエステル、３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）−ウリジン  ＴＰ、５−（イソ−ペンテニルア��ノメチル）−２−チオウリジン  ＴＰ、５−（イソ−ペンテニルアミノメチル）−２’−Ｏ−メチルウリジン  ＴＰ、５−（イソ−ペンテニルアミノメチル）ウリジン  ＴＰ、５−プロピニルウラシル、α−チオ−ウリジン、１（アミノアルキルアミノ−カルボニルエチレニル）−２（チオ）−プソイドウラシル、１（アミノアルキルアミノカルボニルエチレニル）−２，４−（ジチオ）プソイドウラシル、１（アミノアルキルアミノカルボニルエチレニル）−４（チオ）プソイドウラシル、１（アミノアルキルアミノカルボニルエチレニル）−プソイドウラシル、１（アミノカルボニルエチレニル）−２（チオ）−プソイドウラシル、１（アミノカルボニルエチレニル）−２，４−（ジチオ）プソイドウラシル、１（アミノカルボニルエチレニル）−４−（チオ）プソイドウラシル、１（アミノカルボニルエチレニル）プソイドウラシル、１置換２（チオ）−プソイドウラシル、１置換２，４−（ジチオ）プソイドウラシル、１置換４（チオ）プソイドウラシル、１置換プソイドウラシル、１−（アミノアルキルアミノ−カルボニルエチレニル）−２−（チオ）−プソイドウラシル、１−メチル−３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）プソイドウリジン  ＴＰ、１−メチル−３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−プソイド−ＵＴＰ、２（チオ）プソイドウラシル、２’デオキシウリジン、２’フルオロウリジン、２−（チオ）ウラシル、２，４−（ジチオ）プソイドウラシル、２’メチル，２’アミノ，２’アジド，２’フルオロ−グアノシン、２’−アミノ−２’−デオキシ−ＵＴＰ、２’−アジド−２’−デオキシ−ＵＴＰ、２’−アジド−デオキシウリジン  ＴＰ、２’−Ｏ−メチルプソイドウリジン、２’−デオキシウリジン、２’フルオロウリジン、２’−デオキシ−２’−ａ−アミノウリジン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’−ａ−アジドウリジン  ＴＰ、２−メチルプソイドウリジン、３−（３アミノ−３−カルボキシプロピル）ウラシル、４（チオ）プソイドウラシル、４−（チオ）プソイドウラシル、４−（チオ）ウラシル、４−チオウラシル、５（１，３−ジアゾール−１−アルキル）ウラシル、５（２−アミノプロピル）ウラシル、５（アミノアルキル）ウラシル、５（ジメチルアミノアルキル）ウラシル、５（グアニジニウムアルキル）ウラシル、５（メトキシカルボニルメチル）−２−（チオ）ウラシル、５（メトキシカルボニル−メチル）ウラシル、５（メチル）２（チオ）ウラシル、５（メチル）２，４（ジチオ）ウラシル、５（メチル）４（チオ）ウラシル、５（メチルアミノメチル）−２（チオ）ウラシル、５（メチルアミノメチル）−２，４（ジチオ）ウラシル、５（メチルアミノメチル）−４−（チオ）ウラシル、５−（プロピニル）ウラシル、５（トリフルオロメチル）ウラシル、５−（２−アミノプロピル）ウラシル、５−（アルキル）−２−（チオ）プソイドウラシル、５−（アルキル）−２，４（ジチオ）プソイドウラシル、５−（アルキル）−４−（チオ）プソイドウラシル、５−（アルキル）プソイドウラシル、５−（アルキル）ウラシル、５−（アルキニル）ウラシル、５−（アリルアミノ）ウラシル、５−（シアノアルキル）ウ���シル、５−（ジアルキルアミノアルキル）ウラシル、５−（ジメチルアミノアルキル）ウラシル、５−（グアニジニウムアルキル）ウラシル、５−（ハロ）ウラシル、５−（１，３−ジアゾール−ｌ−アルキル）ウラシル、５−（メトキシ）ウラシル、５−（メトキシカルボニルメチル）−２−（チオ）ウラシル、５−（メトキシカルボニル−メチル）ウラシル、５−（メチル）２（チオ）ウラシル、５−（メチル）２，４（ジチオ）ウラシル、５−（メチル）４（チオ）ウラシル、５−（メチル）−２−（チオ）プソイドウラシル、５−（メチル）−２，４（ジチオ）プソイドウラシル、５−（メチル）−４（チオ）プソイドウラシル、５−（メチル）プソイドウラシル、５−（メチルアミノメチル）−２（チオ）ウラシル、５−（メチルアミノメチル）−２，４（ジチオ）ウラシル、５−（メチルアミノメチル）−４−（チオ）ウラシル、５−（プロピニル）ウラシル、５−（トリフルオロメチル）ウラシル、５−アミノアリル−ウリジン、５−ブロモ−ウリジン、５−ヨード−ウリジン、５−ウラシル、６（アゾ）ウラシル、６−（アゾ）ウラシル、６−アザ−ウリジン、アリルアミノ−ウラシル、アザウラシル、デアザウラシル、Ｎ３（メチル）ウラシル、プソイド−ＵＴＰ−１−２−エタン酸、プソイドウラシル、４−チオ−プソイド−ＵＴＰ、１−カルボキシメチル−プソイドウリジン、１−メチル−１−デアザ−プソイドウリジン、１−プロピニル−ウリジン、１−タウリノメチル−１−メチル−ウリジン、１−タウリノメチル−４−チオ−ウリジン、１−タウリノメチル−プソイドウリジン、２−メトキシ−４−チオ−プソイドウリジン、２−チオ−１−メチル−１−デアザ−プソイドウリジン、２−チオ−１−メチル−プソイドウリジン、２−チオ−５−アザ−ウリジン、２−チオ−ジヒドロプソイドウリジン、２−チオ−ジヒドロウリジン、２−チオ−プソイドウリジン、４−メトキシ−２−チオ−プソイドウリジン、４−メトキシ−プソイドウリジン、４−チオ−１−メチル−プソイドウリジン、４−チオ−プソイドウリジン、５−アザ−ウリジン、ジヒドロプソイドウリジン、（±）１−（２−ヒドロキシプロピル）プソイドウリジン  ＴＰ、（２Ｒ）−１−（２−ヒドロキシプロピル）プソイドウリジン  ＴＰ、（２Ｓ）−１−（２−ヒドロキシプロピル）プソイドウリジン  ＴＰ、（Ｅ）−５−（２−ブロモ−ビニル）アラ−ウリジン  ＴＰ、（Ｅ）−５−（２−ブロモ−ビニル）ウリジン  ＴＰ、（Ｚ）−５−（２−ブロモ−ビニル）アラ−ウリジン  ＴＰ、（Ｚ）−５−（２−ブロモ−ビニル）ウリジン  ＴＰ、１−（２，２，２−トリフルオロエチル）−プソイド−ＵＴＰ、１−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）プソイドウリジン  ＴＰ、１−（２，２−ジエトキシエチル）プソイドウリジン  ＴＰ、１−（２，４，６−トリメチルベンジル）プソイドウリジン  ＴＰ、１−（２，４，６−トリメチル−ベンジル）プソイド−ＵＴＰ、１−（２，４，６−トリメチル−フェニル）プソイド−ＵＴＰ、１−（２−アミノ−２−カルボキシエチル）プソイド−ＵＴＰ、１−（２−アミノ−エチル）プソイド−ＵＴＰ、１−（２−ヒドロキシエチル）プソイドウリジン  ＴＰ、１−（２−メト���シエチル）プソイドウリジン  ＴＰ、１−（３，４−ビス−トリフルオロメトキシベンジル）プソイドウリジン  ＴＰ、１−（３，４−ジメトキシベンジル）プソイドウリジン  ＴＰ、１−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）プソイド−ＵＴＰ、１−（３−アミノ−プロピル）プソイド−ＵＴＰ、１−（３−シクロプロピル−プロパ−２−イニル）プソイドウリジン  ＴＰ、１−（４−アミノ−４−カルボキシブチル）プソイド−ＵＴＰ、１−（４−アミノ−ベンジル）プソイド−ＵＴＰ、１−（４−アミノ−ブチル）プソイド−ＵＴＰ、１−（４−アミノ−フェニル）プソイド−ＵＴＰ、１−（４−アジドベンジル）プソイドウリジン  ＴＰ、１−（４−ブロモベンジル）プソイドウリジン  ＴＰ、１−（４−クロロベンジル）プソイドウリジン  ＴＰ、１−（４−フルオロベンジル）プソイドウリジン  ＴＰ、１−（４−ヨードベンジル）プソイドウリジン  ＴＰ、１−（４−メタンスルホニルベンジル）プソイドウリジン  ＴＰ、１−（４−メトキシベンジル）プソイドウリジン  ＴＰ、１−（４−メトキシ−ベンジル）プソイド−ＵＴＰ、１−（４−メトキシ−フェニル）プソイド−ＵＴＰ、１−（４−メチルベンジル）プソイドウリジン  ＴＰ、１−（４−メチル−ベンジル）プソイド−ＵＴＰ、１−（４−ニトロベンジル）プソイドウリジン  ＴＰ、１−（４−ニトロ−ベンジル）プソイド−ＵＴＰ、１（４−ニトロフェニル）プソイド−ＵＴＰ、１−（４−チオメトキシベンジル）プソイドウリジン  ＴＰ、１−（４−トリフルオロメトキシベンジル）プソイドウリジン  ＴＰ、１−（４−トリフルオロメチルベンジル）プソイドウリジン  ＴＰ、１−（５−アミノ−ペンチル）プソイド−ＵＴＰ、１−（６−アミノ−ヘキシル）プソイド−ＵＴＰ、１，６−ジメチル−プソイド−ＵＴＰ、１−［３−（２−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオニル］プソイドウリジン  ＴＰ、１−｛３−［２−（２−アミノエトキシ）−エトキシ］−プロピオニル｝プソイドウリジン  ＴＰ、１−アセチルプソイドウリジン  ＴＰ、１−アルキル−６−（１−プロピニル）−プソイド−ＵＴＰ、１−アルキル−６−（２−プロピニル）−プソイド−ＵＴＰ、１−アルキル−６−アリル−プソイド−ＵＴＰ、１−アルキル−６−エチニル−プソイド−ＵＴＰ、１−アルキル−６−ホモアリル−プ
ソイド−ＵＴＰ、１−アルキル−６−ビニル−プソイド−ＵＴＰ、１−アリルプソイドウリジン  ＴＰ、１−アミノメチル−プソイド−ＵＴＰ、１−ベンゾイルプソイドウリジン  ＴＰ、１−ベンジルオキシメチルプソイドウリジン  ＴＰ、１−ベンジル−プソイド−ＵＴＰ、１−ビオチニル−ＰＥＧ２−プソイドウリジン  ＴＰ、１−ビオチニルプソイドウリジン  ＴＰ、１−ブチル−プソイド−ＵＴＰ、１−シアノメチルプソイドウリジン  ＴＰ、１−シクロブチルメチル−プソイド−ＵＴＰ、１−シクロブチル−プソイド−ＵＴＰ、１−シクロへプチルメチル−プソイド−ＵＴＰ、１−シクロへプチル−プソイド−ＵＴＰ、１−シクロヘキシルメチル−プソイド−ＵＴＰ、１−シクロヘキシル−プソイド−ＵＴＰ、１−シクロオクチルメチル−プソイド−ＵＴＰ、１−シクロオクチル−プソイド−ＵＴＰ、１−シクロペンチルメチル−プソイド−ＵＴＰ、１−シクロペンチル−プソイド−ＵＴＰ、１−シクロプロピルメチル−プソイド−ＵＴＰ、１−シクロプロピル−プソイド−ＵＴＰ、１−エチル−プソイド−ＵＴＰ、１−ヘキシル−プソイド−ＵＴＰ、１−ホモアリルプソイドウリジン  ＴＰ、１−ヒドロキシメチルプソイドウリジン  ＴＰ、１−イソ−プロピル−プソイド−ＵＴＰ、１−Ｍｅ−２−チオ−プソイド−ＵＴＰ、１−Ｍｅ−４−チオ−プソイド−ＵＴＰ、１−Ｍｅ−アルファ−チオ−プソイド−ＵＴＰ、１−メタンスルホニルメチルプソイドウリジン  ＴＰ、１−メトキシメチルプソイドウリジン  ＴＰ、１−メチル−６−（２，２，２−トリフルオロエチル）プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−（４−モルホリノ）プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−（４−チオモルホリノ）−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−（置換フェニル）プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−アミノ−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−アジド−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−ブロモ−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−ブチル−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−クロロ−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−シアノ−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−ジメチルアミノ−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−エトキシ−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−エチルカルボキシレート−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−エチル−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−フルオロ−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−ホルミル−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−ヒドロキシアミノ−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−ヒドロキシ−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−ヨード−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−イソ−プロピル−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−メトキシ−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−メチルアミノ−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−フェニル−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−プロピル−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−ｔｅｒｔ−ブチル−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−トリフルオロメトキシ−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−トリフルオロメチル−プソイド−ＵＴＰ、１−モルホリノメチルプソイドウリジン  ＴＰ、１−ペンチル−プソイド−ＵＴＰ、１−フェニル−プソイド−ＵＴＰ、１−ピバロイルプソイドウリジン  ＴＰ、１−プロパルギルプソイドウリジン  ＴＰ、１−プロピル−プソイド−ＵＴＰ、１−プロピニル−プソイドウリジン、１−ｐ−トリル−プソイド−ＵＴＰ、１−ｔｅｒｔ−ブチル−プソイド−ＵＴＰ、１−チオメトキシメチルプソイドウリジン  ＴＰ、１−チオモルホリノメチルプソイドウリジン  ＴＰ、１−トリフルオロアセチルプソイドウリジン  ＴＰ、１−トリフルオロメチル−プソイド−ＵＴＰ、１−ビニルプソイドウリジン  ＴＰ、２，２’−アンヒドロ−ウリジン  ＴＰ、２’−ブロモ−デオキシウリジン  ＴＰ、２’−Ｆ−５−メチル−２’−デオキシ−ＵＴＰ、２’−ＯＭｅ−５−Ｍｅ−ＵＴＰ、２’−ＯＭｅ−プソイド−ＵＴＰ、２’−ａ−エチニルウリジン  ＴＰ、２’−ａ−トリフルオロメチルウリジン  ＴＰ、２’−ｂ−エチニルウリジン  ＴＰ、２’−ｂ−トリフルオロメチルウリジン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’，２’−ジフルオロウリジン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’−ａ−メルカプトウリジン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’−ａ−チオメトキシウリジン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−アミノウリジン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−アジドウリジン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−ブロモウリジン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−クロロウリジン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−フルオロウリジン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−ヨードウリジン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−メルカプトウリジン  ＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−チオメトキシウリジン  ＴＰ、２−メトキシ−４−チオ−ウリジン、２−メトキシウリジン、２’−Ｏ−メチル−５−（１−プロピニル）ウリジン  ＴＰ、３−アルキル−プソイド−ＵＴＰ、４’−アジドウリジン  ＴＰ、４’−カルボサイクリックウリジン  ＴＰ、４’−エチニルウリジン  ＴＰ、５−（１−プロピニル）アラ−ウリジン  ＴＰ、５−（２−フラニル）ウリジン  ＴＰ、５−シアノウリジン  ＴＰ、５−ジメチルアミノウリジン  ＴＰ、５’−ホモ−ウリジン  ＴＰ、５−ヨード−２’−フルオロ−デオキシウリジン  ＴＰ、５−フェニルエチニルウリジン  ＴＰ、５−トリジューテロメチル−６−ジューテロウリジン  ＴＰ、５−トリフルオロメチル−ウリジン  ＴＰ、５−ビニルアラウリジン  ＴＰ、６−（２，２，２−トリフルオロエチル）−プソイド−ＵＴＰ、６−（４−モルホリノ）−プソイド−ＵＴＰ、６−（４−チオモルホリノ）−プソイド−ＵＴＰ、６−（置換−フェニル）−プソイド−ＵＴＰ、６−アミノ−プソイド−ＵＴＰ、６−アジド−プソイド−ＵＴＰ、６−ブロモ−プソイド−ＵＴＰ、６−ブチル−プソイド−ＵＴＰ、６−クロロ−プソイド−ＵＴＰ、６−シアノ−プソイド−ＵＴＰ、６−ジメチルアミノ−プソイド−ＵＴＰ、６−エトキシ−プソイド−ＵＴＰ、６−エチルカルボキシレート−プソイド−ＵＴＰ、６−エチル−プソイド−ＵＴＰ、６−フルオロ−プソイド−ＵＴＰ、６−ホルミル−プソイド−ＵＴＰ、６−ヒドロキシアミノ−プソイド−ＵＴＰ、６−ヒドロキシ−プソイド−ＵＴＰ、６−ヨード−プソイド−ＵＴＰ、６−イソ−プロピル−プソイド−ＵＴＰ、６−メトキシ−プソイド−ＵＴＰ、６−メチルアミノ−プソイド−ＵＴＰ、６−メチル−プソイド−ＵＴＰ、６−フェニル−プソイド−ＵＴＰ、６−フェニル−プソイド−ＵＴＰ、６−プロピル−プソイド−ＵＴＰ、６−ｔｅｒｔ−ブチル−プソイド−ＵＴＰ、６−トリフルオロメトキシ−プソイド−ＵＴＰ、６−トリフルオロメチル−プソイド−ＵＴＰ、アルファ−チオ−プソイド−ＵＴＰ、プソイドウリジン  １−（４−メチルベンゼンスルホン酸）  ＴＰ、プソイドウリジン  １−（４−メチル安息香酸）  ＴＰ、プソイドウリジン  ＴＰ  １−［３−（２−エトキシ）］プロピオン酸、プソイドウリジン  ＴＰ  １−［３−｛２−（２−［２−（２−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸、プソイドウリジン  ＴＰ  １−［３−｛２−（２−［２−｛２（２−エトキシ）−エトキシ｝−エトキシ］−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸、プソイドウリジン  ＴＰ  １−［３−｛２−（２−［２−エトキシ］−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸、プソイドウリジン  ＴＰ  １−［３−｛２−（２−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸、プソイドウリジン  ＴＰ  １−メチルホスホン酸、プソイドウリジン  ＴＰ  １−メチルホスホン酸  ジエチルエステル、プソイド−ＵＴＰ−Ｎ１−３−プロピオン酸、プソイド−ＵＴＰ−Ｎ１−４−ブタン酸、プソイド−ＵＴＰ−Ｎ１−５−ペンタン酸、プソイド−ＵＴＰ−Ｎ１−６−ヘキサン酸、プソイド−ＵＴＰ−Ｎ１−７−ヘプタン酸、プソイド−ＵＴＰ−Ｎ１−メチル−ｐ−安息香酸、プソイド−ＵＴＰ−Ｎ１−ｐ−安息香酸、ワイブトシン、ヒドロキシワイブトシン、イソワイオシン、ペルオキシワイブトシン、未修飾のヒドロキシワイブトシン、４−デメチルワイオシン、２，６−（ジアミノ）プリン；１−（アザ）−２−（チオ）−３−（アザ）−フェノキサジン−１−イル、１，３−（ジアザ）−２−（オキソ）−フェノチアジン−１−イル；１，３−（ジアザ）−２−（オキソ）−フェノキサジン−１−イル、１，３，５−（トリアザ）−２，６−（ジオキサ）−ナフタレン、２（アミノ）プリン、２，４，５−（トリメチル）フェニル、２’メチル，２’アミノ，２’アジド，２’フルオロ−シチジン；２’メチル，２’アミノ，２’アジド，２’フルオロ−アデニン、２’メチル，２’アミノ，２’アジド，２’フルオロ−ウリジン、２’−アミノ−２’−デオキシリボース、２−アミノ−６−クロロ−プリン、２−アザ−イノシニル、２’−アジド−２’−デオキシリボース、２’フルオロ−２’−デオキシリボース、２’−フルオロ−修飾塩基、２’−Ｏ−メチル−リボース、２−オキソ−７−アミノピリドピリミジン−３−イル、２−オキソ−ピリドピリミジン−３−イル、２−ピリジノン、３ニトロピロール、３−（メチル）−７−（プロピニル）イソカルボスチリリル、３−（メチル）イソカルボスチリリル、４−（フルオロ）−６−（メチル）ベンゾイミダゾール、４−（メチル）ベンゾイミダゾール、４−（メチル）インドリル、４，６−（ジメチル）インドリル、５ニトロインドール、５置換ピリミジン、５−（メチル）イソカルボスチリリル、５−ニトロインドール、６−（アザ）ピリミジン、６−（アゾ）チミン、６−（メチル）−７−（アザ）インドリル、６−クロロ−プリン、６−フェニル−ピロロ−ピリミジン−２−オン−３−イル、７−（アミ���アルキルヒドロキシ）−１−（アザ）−２−（チオ）−３−（アザ）−フェノチアジン−１−イル、７−（アミノアルキルヒドロキシ）−１−（アザ）−２−（チオ）−３−（アザ）−フェノキサジン−１−イル、７−（アミノアルキルヒドロキシ）−１，３−（ジアザ）−２−（オキソ）フェノキサジン−１−イル、７−（アミノアルキルヒドロキシ）−１，３−（ジアザ）−２−（オキソ）−フェノチアジン−１−イル、７−（アミノアルキルヒドロキシ）−１，３−（ジアザ）−２−（オキソ）−フェノキサジン−１−イル、７−（アザ）インドリル、７−（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）−１−（アザ）−２−（チオ）−３−（アザ）フェノキサジン１−イル、７−（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）−１−（アザ）−２−（チオ）−３−（アザ）−フェノチアジン−１−イル、７−（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）−１−（アザ）−２−（チオ）−３−（アザ）−フェノキサジン−１−イル、７−（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）−１，３−（ジアザ）−２−（オキソ）−フェノキサジン−１−イル、７−（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）−１，３−（ジアザ）−２−（オキソ）−フェノチアジン−１−イル、７−（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）−１，３−（ジアザ）−２−（オキソ）−フェノキサジン−１−イル、７−（プロピニル）イソカルボスチリリル、７−（プロピニル）イソカルボスチリリル、プロピニル−７−（アザ）インドリル、７−デアザ−イノシニル、７−置換１−（アザ）−２−（チオ）−３−（アザ）−フェノキサジン−１−イル、７−置換１，３−（ジアザ）−２−（オキソ）−フェノキサジン−１−イル、９−（メチル）−イミダゾピリジニル、アミノインドリル、アントラセニル、ビス−オルソ−（アミノアルキルヒドロキシ）−６−フェニル−ピロロ−ピリミジン−２−オン−３−イル、ビス−オルソ−置換−６−フェニル−ピロロ−ピリミジン−２−オン−３−イル、ジフルオロトリル、ハイポキサンチン、イミダゾピリジニル、イノシニル、イソカルボスチリリル、イソグアニシン、Ｎ２−置換プリン、Ｎ６−メチル−２−アミノ−プリン、Ｎ６−置換プリン、Ｎ−アルキル化誘導体、ナフタレニル、ニトロベンゾイミダゾリル、ニトロイミダゾリル、ニトロインダゾリル、ニトロピラゾリル、ネブラリン、Ｏ６−置換プリン、Ｏ−アルキル
化誘導体、オルソ−（アミノアルキルヒドロキシ）−６−フェニル−ピロロ−ピリミジン−２−オン−３−イル、オルソ−置換−６−フェニル−ピロロ−ピリミジン−２−オン−３−イル、オキソホルマイシン  ＴＰ、パラ−（アミノアルキルヒドロキシ）−６−フェニル−ピロロ−ピリミジン−２−オン−３−イル、パラ−置換−６−フェニル−ピロロ−ピリミジン−２−オン−３−イル、ペンタセニル、フェナントラセニル、フェニル、プロピニル−７−（アザ）インドリル、ピレニル、ピリドピリミジン−３−イル、ピリドピリミジン−３−イル、２−オキソ−７−アミノ−ピリドピリミジン−３−イル、ピロロ−ピリミジン−２−オン−３−イル、ピロロピリミジニル、ピロロピリジニル、スチルベンジル、置換１，２，４−トリアゾール、テトラセニル、ツベルシジン、キサンチン、キサントシン−５’−ＴＰ、２−チオ−ゼブラリン、５−アザ−２−チオ−ゼブラリン、７−デアザ−２−アミノ−プリン、ピリジン−４−オンリボヌクレオシド、２−アミノ−リボシド−ＴＰ、ホルマイシンＡ  ＴＰ、ホルマイシンＢ  ＴＰ、ピロロシン  ＴＰ、２’−ＯＨ−アラ−アデノシン  ＴＰ、２’−ＯＨ−アラ−シチジン  ＴＰ、２’−ＯＨ−アラ−ウリジン  ＴＰ、２’−ＯＨ−アラ−グアノシン  ＴＰ、５−（２−カルボメトキシビニル）ウリジン  ＴＰ、及びＮ６−（１９−アミノ−ペンタオキサノナデシル）アデノシン  ＴＰ。
【０４６９】
いくつかの実施形態では、該ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡポリヌクレオチド、例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチド）は、少なくとも２つ（例えば、２、３、４、またはそれ以上）の前述の修飾された核酸塩基の組合せを含む。
【０４７０】
いくつかの実施形態では、該ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡポリヌクレオチド、例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチド）における修飾された核酸塩基は、プソイドウリジン（ψ）、Ｎ１−メチルプソイドウリジン（ｍ１ψ）、Ｎ１−エチルプソイドウリジン、２−チオウリジン、４’−チオウリジン、５−メチルシトシン、２−チオ−１−メチル−１−デアザ−プソイドウリジン、２−チオ−１−メチル−プソイドウリジン、２−チオ−５−アザ−ウリジン、２−チオ−ジヒドロプソイドウリジン、２−チオ−ジヒドロウリジン、２−チオ−プソイドウリジン、４−メトキシ−２−チオ−プソイドウリジン、４−メトキシ−プソイドウリジン、４−チオ−１−メチル−プソイドウリジン、４−チオ−プソイドウリジン、５−アザ−ウリジン、ジヒドロプソイドウリジン、５−メチルウリジン、５−メトキシウリジン、及び２’−Ｏ−メチルウリジンからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、該ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡポリヌクレオチド、例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチド）は、少なくとも２つ（例えば、２、３、４、またはそれ以上）の前述の修飾された核酸塩基の組合せを含む。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【０４７１】
いくつかの実施形態では、該ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡポリヌクレオチド、例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチド）における修飾された核酸塩基は、１−メチル−プソイドウリジン（ｍ１ψ）、５−メトキシ−ウリジン（ｍｏ５Ｕ）、５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）、プソイドウリジン（ψ）、α−チオ−グアノシン、及びα−チオ−アデノシンからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、該ポリヌクレオチドは、少なくとも２つ（例えば、２、３、４、またはそれ以上）の前述の修飾された核酸塩基の組合せを含む。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【０４７２】
いくつかの実施形態では、該ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡポリヌクレオチド、例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチド）は、プソイドウリジン（ψ）及び５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態では、該ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡポリヌクレオチド、例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチド）は、１−メチル−プソイドウリジン（ｍ１ψ）を含む。いくつかの実施形態では、該ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡポリヌクレオチド、例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチド）は、１−メチル−プソイドウリジン（ｍ１ψ）及び５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態では、該ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡポリヌクレオチド、例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチド）は、２−チオウリジン（ｓ２Ｕ）を含む。いくつかの実施形態では、該ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡポリヌクレオチド、例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチド）は、２−チオウリジン及び５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態では、該ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡポリヌクレオチド、例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチド）は、メトキシ−ウリジン（ｍｏ５Ｕ）を含む。いくつかの実施形態では、該ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡポリヌクレオチド、例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチド）は、５−メトキシ−ウリジン（ｍｏ５Ｕ）及び５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態では、該ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡポリヌクレオチド、例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチド）は、２’−Ｏ−メチルウリジンを含む。いくつかの実施形態では、該ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡポリヌクレオチド、例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチド）は、２’−Ｏ−メチルウリジン及び５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態では、該ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡポリヌクレオチド、例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチド）は、Ｎ６−メチル−アデノシン（ｍ６Ａ）を含む。いくつかの実施形態では、該ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡポリヌクレオチド、例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチド）は、Ｎ６−メチル−アデノシン（ｍ６Ａ）及び５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【０４７３】
いくつかの実施形態では、該ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡポリヌクレオチド、例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチド）は、特定の修飾のために均一に修飾される（例えば、完全に修飾される、すなわち、全配列を通して修飾される）。例えば、ポリヌクレオチドは、当該ｍＲＮＡ配列のすべてのシトシン残基が５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）と交換されることを意味する、５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）で均一に修飾することができる。同様に、ポリヌクレオチドは、当該配列に存在する任意のタイプのヌクレオシド残基に合わせて、修飾された残基、例えば、上記のもののいずれかと交換することで、均一に修飾することができる。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【０４７４】
いくつかの実施形態では、該修飾された核酸塩基は、修飾されたシトシンである。修飾されたシトシンを有する核酸塩基及びヌクレオシドの例としては、Ｎ４−アセチル−シチジン（ａｃ４Ｃ）、５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）、５−ハロ−シチジン（例えば、５−ヨード−シチジン）、５−ヒドロキシメチル−シチジン（ｈｍ５Ｃ）、１−メチル−プソイドシチジン、２−チオ−シチジン（ｓ２Ｃ）、２−チオ−５−メチル−シチジンが挙げられる。
【０４７５】
いくつかの実施形態では、修飾された核酸塩基は、修飾されたウリジンである。修飾されたウリジンを有する核酸塩基及びヌクレオシドの例としては、５−シアノウリジンまたは４’−チオウリジンが挙げられる。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【０４７６】
いくつかの実施形態では、修飾された核酸塩基は、修飾されたアデニンである。修飾されたアデニンを有する核酸塩基及びヌクレオシドの例としては、７−デアザ−アデニン、１−メチル−アデノシン（ｍ１Ａ）、２−メチル−アデニン（ｍ２Ａ）、Ｎ６−メチル−アデノシン（ｍ６Ａ）、及び２，６−ジアミノプリンが挙げられる。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【０４７７】
いくつかの実施形態では、修飾された核酸塩基は、修飾されたグアニンである。修飾されたグアニンを有する核酸塩基及びヌクレオシドの例としては、イノシン（Ｉ）、１−メチル−イノシン（ｍ１Ｉ）、ワイオシン（ｉｍＧ）、メチルワイオシン（ｍｉｍＧ）、７−デアザ−グアノシン、７−シアノ−７−デアザ−グアノシン（ｐｒｅＱ０）、７−アミノメチル−７−デアザ−グアノシン（ｐｒｅＱ１）、７−メチル−グアノシン（ｍ７Ｇ）、１−メチル−グアノシン（ｍ１Ｇ）、８−オキソ−グアノシン、７−メチル−８−オキソ−グアノシンが挙げられる。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【０４７８】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）として機能する。「メッセンジャーＲＮＡ」（ｍＲＮＡ）は、（少なくとも１つの）ポリペプチド（自然発生、非自然発生、または修飾されたアミノ酸ポリマー）をコードし、翻訳されてコードされたポリペプチドをインビトロ、インビボ、インサイチュ、またはエキソビボで産生することができる任意のポリヌクレオチドを指す。ｍＲＮＡ分子の主要成分は、通常、少なくとも１つのコード領域、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）、３’ＵＴＲ、５’キャップ、及びポリＡ尾部を含む。ポリヌクレオチドは、ｍＲＮＡとして機能し得るが、核酸ベースの治療を用いる効果的なポリペプチド発現の既存の問題を克服する働きをするそれらの機能及び／または構造設計特性において野生型のｍＲＮＡと区別することができる。
【０４７９】
本明細書に提供するｍＲＮＡは、少なくとも１つの目的のポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有する少なくとも１つ（１つ以上）のリボ核酸（ＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡのＲＮＡポリヌクレオチドは、２〜１０、２〜９、２〜８、２〜７、２〜６、２〜５、２〜４、２〜３、３〜１０、３〜９、３〜８、３〜７、３〜６、３〜５、３〜４、４〜１０、４〜９、４〜８、４〜７、４〜６、４〜５、５〜１０、５〜９、５〜８、５〜７、５〜６、６〜１０、６〜９、６〜８、６〜７、７〜１０、７〜９、７〜８、８〜１０、８〜９、または９〜１０個のポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡのＲＮＡポリヌクレオチドは、少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または１００個のポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡのＲＮＡポリヌクレオチドは、少なくとも１００個または少なくとも２００個のポリペプチドをコードする。
【０４８０】
いくつかの実施形態では、該核酸は、治療用ｍＲＮＡである。本明細書で使用される、「治療用ｍＲＮＡ」という用語は、治療用タンパク質をコードするｍＲＮＡを指す。治療用タンパク質は、疾患を治療するため、または疾患の兆候及び症状を改善するため、宿主細胞または対象における様々な作用を媒介する。例えば、治療用タンパク質は、欠損したまたは異常なタンパク質を置き換え、内因性タンパク質の機能を増加させ、細胞に新規な機能を与え（例えば、内因性の細胞活性を阻害または活性化し）、または、別の治療用化合物（例えば、抗体薬物コンジュゲート）のための送達薬剤として作用することができる。治療用ｍＲＮＡは、以下の疾患及び状態の治療に有用であり得る：細菌感染症、ウイルス感染症、寄生虫感染症、細胞増殖障害、遺伝性疾患、及び自己免疫疾患。
【０４８１】
従って、本発明の構造は、治療薬または予防薬として使用することができる。それらは、医薬で用いるために提供される。例えば、本明細書に記載の構造のｍＲＮＡは、対象に投与することができ、該ポリヌクレオチドはインビボで翻訳され、治療用ペプチドを産生する。提供するのは、ヒト及び他の哺乳類における疾患もしくは状態の診断、治療、または予防のための組成物、方法、キット、及び試薬である。本発明の活性治療薬は、該構造、構造を含む細胞、または該構造に含まれるポリヌクレオチドから翻訳されるポリペプチドを含む。
【０４８２】
該構造は、細胞、組織、または有機体内での翻訳用に誘導され得る。かかる翻訳は、インビボ、エキソビボ、培養下、またはインビトロで可能である。該細胞、組織、または有機体は、各々がペプチドをコードする翻訳可能領域を少なくとも１つ有するｍＲＮＡポリヌクレオチドを含む構造を含む組成物の有効量と接触される。
【０４８３】
該構造の「有効量」は、少なくとも一部には、標的組織、標的細胞のタイプ、投与手段、該ポリヌクレオチド及び当該核酸の他の成分の物性（例えば、サイズ、及び修飾されたヌクレオシドの程度）、ならびに他の決定要因を基にして提供される。一般に、有効量の該核酸は、該細胞内で誘導されるまたは強化されるペプチド産生をもたらす。
【０４８４】
本発明のｍＲＮＡは、生物製剤、抗体、ワクチン、治療用タンパク質もしくはペプチド、細胞透過性ペプチド、分泌タンパク質、形質膜タンパク質、細胞質もしくは細胞骨格タンパク質、細胞内膜結合タンパク質、核タンパク質、ヒト疾患に関連するタンパク質、標的部分、または、治療適応が同定されていないが、それにもかかわらず研究及び発見の分野において有用性を有するヒトゲノムによってコードされるタンパク質が挙げられるがこれらに限定されないいくつかの標的カテゴリーのいずれかから選択される目的のポリペプチドをコードするように設計され得る。「治療用タンパク質」は、細胞に投与された場合に治療的、診断的、及び／または予防的効果を有する、及び／または所望の生物学的及び／または薬理学的効果を誘発するタンパク質を指す。
【０４８５】
本明細書に開示するｍＲＮＡは、１つ以上の生物製剤をコードし得る。本明細書で使用される、「生物製剤」は、本明細書に提供する方法で製造されるポリペプチドベースの分子であり、重篤なもしくは生命に関わる疾患または病状の治療、治癒、軽減、予防、または診断に用いられ得るものである。本発明の生物製剤としては、特に、アレルゲンエキス（例えば、アレルギー注射及び検査のため）、血液成分、遺伝子治療薬、移植に使用されるヒト組織もしくは細胞産物、ワクチン、モノクローナル抗体、サイトカイン、成長因子、酵素、血栓溶解剤、及び免疫刺激剤が挙げられるがこれらに限定されない。
【０４８６】
本発明によれば、現在販売されている、または開発中の１つ以上の生物製剤は、本発明のｍＲＮＡによってコードされ得る。理論に拘束されることを望むものではないが、既知の生物製剤のコードするポリヌクレオチドの本発明のｍＲＮＡへの組み込みは、当該構築物設計の特異性、純度、及び／または選択性に少なくとも一部起因する治療効果の改良をもたらす。
【０４８７】
本明細書に開示するｍＲＮＡは、１つ以上の抗体またはその断片をコードし得る。「抗体」という用語は、モノクローナル抗体（免疫グロブリンＦｃ領域を有する完全長抗体を含む）、ポリエピトープ特異性を備えた抗体組成物、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体、ジアボディ、及び一本鎖分子）、ならびに抗体断片を含む。「免疫グロブリン」（Ｉｇ）という用語は、本明細書では「抗体」と交換可能に用いられる。本明細書で使用される、「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均質な抗体の集団から得られ、すなわち、該集団を構成する個々の抗体は、少量存在し得る、起こり得る自然発生の突然変異及び／または翻訳後修飾（例えば、異性化、アミド化）以外は同一である。モノクローナル抗体は、単一の抗原部位に対して高度に特異的に指向される。
【０４８８】
本明細書におけるモノクローナル抗体は特に、重鎖及び／または軽鎖の一部が、特定の種由来の抗体、または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一または相同である一方、当該鎖（複数可）の残部が、別の種由来の抗体、または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一または相同である「キメラ」抗体（免疫グロブリン）、ならびに、所望の生物活性を示す限り、かかる抗体の断片を含む。本明細書における目的のキメラ抗体としては、非ヒト霊長類（例えば、旧世界ザル、サル等）由来の可変ドメインの抗原結合配列及びヒト定常領域の配列を含む「霊長類化」抗体が挙げられるがこれに限定されない。
【０４８９】
「抗体断片」は、無傷の抗体の一部、好ましくは、無傷の抗体の抗原結合及び／または可変領域を含む。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片、ジアボディ、線状抗体、ナノボディ、一本鎖抗体分子、及び抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられる。
【０４９０】
免疫グロブリンの５つのクラス、すなわち、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭのいずれかは、本発明のｍＲＮＡによってコードされる場合があり、それぞれ、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、及びミューに指定される重鎖を含む。同様に含まれるのは、サブクラスであるガンマ及びミューをコードするポリヌクレオチド配列である。従って、抗体のサブクラスのいずれかは、部分的に、または全体的にコードされる場合があり、以下のサブクラスを含む：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２。本発明によれば、現在販売されている、または開発中の１つ以上の抗体または断片は、本発明のｍＲＮＡによってコードされ得る。
【０４９１】
本発明のｍＲＮＡにおいてコードされる抗体は、血液、心臓血管、ＣＮＳ、中毒（抗毒素を含む）、皮膚病、内分泌、胃腸、医用画像、筋骨格、腫瘍、免疫、呼吸、感覚、及び抗感染等であるがこれらに限定されない多くの治療分野における状態または疾患を治療するために使用され得る。
【０４９２】
１つの実施形態では、本明細書に開示するｍＲＮＡは、モノクローナル抗体及び／またはそのバリアントをコードし得る。抗体のバリアントとしては、置換型バリアント、保存アミノ酸置換、挿入バリアント、欠失バリアント、及び／または共有結合性誘導体を挙げることができるがこれらに限定されない。１つの実施形態では、本明細書に開示するｍＲＮＡは、免疫グロブリンＦｃ領域をコードし得る。別の実施形態では、該ｍＲＮＡは、バリアントの免疫グロブリンＦｃ領域をコードし得る。
【０４９３】
本明細書に開示するｍＲＮＡは、１つ以上のワクチン抗原をコードし得る。本明細書で使用される、「ワクチン抗原」は、特定の疾患または感染性因子に対する免疫を改良する生物学的製剤である。本発明によれば、現在販売されている、または開発中の１つ以上のワクチン抗原は、本発明のｍＲＮＡによってコードされ得る。本発明のｍＲＮＡにおいてコードされるワクチン抗原は、がん、アレルギー、及び感染性疾患等であるがこれらに限定されない多くの治療分野における状態または疾患の治療に使用され得る。
【０４９４】
本発明のｍＲＮＡは、１つ以上の抗菌性ペプチド（ＡＭＰ）または抗ウイルス性ペプチド（ＡＶＰ）をコードするように設計され得る。ＡＭＰ及びＡＶＰは、微生物、無脊椎動物、植物、両生類、鳥類、魚類、及び哺乳類等であるがこれらに限定されない広範囲の動物から単離され、特徴づけられている。本明細書に記載の抗菌性ポリペプチドは、細胞融合及び／または１つ以上のエンベロープウイルス（例えば、ＨＩＶ、ＨＣＶ）によるウイルスの進入を遮断し得る。例えば、該抗菌性ポリペプチドは、領域、例えば、ウイルスエンベロープ・タンパク質の膜貫通サブユニット、例えば、ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０またはｇｐ４１の少なくとも約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、または６０アミノ酸の連続配列に対応する合成ペプチドを含んでも、これからなってもよい。ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０またはｇｐ４１のアミノ酸及びヌクレオチド配列は、例えば、Ｋｕｉｋｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）．“ＨＩＶ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ，”Ｌｏｓ  Ａｌａｍｏｓ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙに記載されている。
【０４９５】
いくつかの実施形態では、該抗菌性ポリペプチドは、対応するウイルスタンパク質配列に対して少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％の配列相同性を有し得る。いくつかの実施形態では、該抗菌性ポリペプチドは、対応するウイルスタンパク質配列に対して少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％の配列相同性を有し得る。
【０４９６】
他の実施形態では、該抗菌性ポリペプチドは、領域、例えば、カプシド結合タンパク質の結合ドメインの少なくとも約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、または６０アミノ酸の連続配列に対応する合成ペプチドを含んでも、これからなってもよい。いくつかの実施形態では、該抗菌性ポリペプチドは、該カプシド結合タンパク質の対応する配列に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％の配列相同性を有し得る。
【０４９７】
本明細書に記載の抗菌性ポリペプチドは、プロテアーゼ二量体化を遮断し、機能タンパク質へのウイルスプロタンパク質の開裂（例えば、ＨＩＶ  Ｇａｇ−ｐｏｌプロセッシング）を阻害する場合があり、それにより、１つ以上のエンベロープウイルス（例えば、ＨＩＶ、ＨＣＶ）の放出を防ぐ。いくつかの実施形態では、該抗菌性ポリペプチドは、対応するウイルスタンパク質配列に対して少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％の配列相同性を有し得る。
【０４９８】
他の実施形態では、該抗菌性ポリペプチドは、領域、例えば、プロテアーゼ結合タンパク質の結合ドメインの少なくとも約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、または６０アミノ酸の連続配列に対応する合成ペプチドを含んでも、これからなってもよい。いくつかの実施形態では、該抗菌性ポリペプチドは、該プロテアーゼ結合タンパク質の対応する配列に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％の配列相同性を有し得る。
【０４９９】
該ｍＲＮＡワクチン抗原または抗菌性ポリペプチドが治療し得る感染性疾患の非限定的な例を以下に示す：ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、マイコバクテリア感染症につながるＨＩＶ、エイズ関連悪液質、エイズ関連サイトメガロウイルス感染症、ＨＩＶ関連腎症、リポジストロフィー、エイズ関連クリプトコッカス髄膜炎、エイズ関連の好中球減少症、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｉｔｉｓ  ｊｉｒｏｖｅｃｉ（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｉｔｉｓ  ｃａｒｉｎｉｉ）感染症、エイズ関連トキソプラズマ症、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、もしくはＥ型肝炎、ヘルペス、帯状疱疹（水痘）、風疹（風疹ウイルス）、黄熱病、デング熱等（フラビウイルス）、流感（インフルエンザウイルス）、出血性感染症（マールブルグもしくはエボラウイルス）、細菌感染症、例えばレジオネラ症（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）、胃潰瘍（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ）、コレラ（Ｖｉｂｒｉｏ）、Ｅ．ｃｏｌｉ感染症、ブドウ球菌感染症、サルモネラ感染症もしくは連鎖球菌感染症、破傷風（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ）、原虫感染症（マラリア、睡眠病、リーシュマニア症、トキソプラズマ症、すなわち、マラリア原虫、トリパノソーマ、リーシュマニア、及びトキソプラズマによって引き起こされる感染症）、ジフテリア、ハンセン病、麻疹、百日咳、狂犬病、破傷風、結核、腸チフス、水痘、下痢性感染症、例えば、アメーバ症、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ関連の下痢（ＣＤＡＤ）、クリプトスポリジア症、ランブル鞭毛虫症、サイクロスポーラ症、及びロタウイルス胃腸炎、脳炎、例えば、日本脳炎、西部ウマ脳炎及びダニ媒介脳炎（ＴＢＥ）、真菌性皮膚疾患、例えば、カンジダ症、爪真菌症、頭部白癬／頭皮白癬、体白癬／体部白癬、頑癬／いんきんたむし、スポロトリクム症、及び足白癬／水虫、髄膜炎、例えば、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  ｂ型（Ｈｉｂ）、髄膜炎、ウイルス、髄膜炎菌感染症、及び肺炎球菌感染症、顧みられない熱帯病、例えば、アルゼンチン出血熱、リーシュマニア症、線虫／回虫感染症、ロスリバーウイルス感染症、及び西ナイルウイルス（ＷＮＶ）疾患、非ＨＩＶ  ＳＴＤ、例えば、トリコモナス症、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）感染症、性行為感染クラミジア症、軟性下疳、及び梅毒、非腐敗性細菌感染症、例えば、蜂巣炎、ライム病、ＭＲＳＡ感染症、シュードモナス、ブドウ球菌感染症、ボタン熱、レプトスピラ症、リウマチ熱、ボツリヌス中毒症、リケッチア病、及び乳様突起炎、寄生虫感染症、例えば嚢虫症、エキノコックス症、吸虫／ジストマ感染症、旋毛虫症、バベシア症、ハイポデルマ症、裂頭条虫症、及びトリパノソーマ症、呼吸器感染症、例えば、アデノウイルス感染症、アスペルギルス感染症、トリ（Ｈ５Ν１）インフルエンザ、インフルエンザ、ＲＳＶ感染症、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、副鼻腔炎、レジオネラ症、コクシジオイデス症、及びブタ（Ｈ１Ｎ１）インフルエンザ、敗血症、例えば、菌血症、敗血症／敗血症性ショック、未熟児における敗血症、尿路感染症、例えば、膣感染症（細菌性）、膣感染症（真菌性）、及び淋菌感染症、ウイルス性皮膚疾患、例えば、Ｂ１９パルボウイルス感染症、イボ、性器ヘルペス、口腔顔面ヘル��ス、帯状疱疹、内耳感染症、胎児サイトメガロウイルス症候群、食品由来疾病、例えば、ブルセラ症（Ｂｒｕｃｅｌｌａ種）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ（イプシロントキシン）、Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｏ１５７：Ｈ７（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、サルモネラ症（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ種）、細菌性赤痢（Ｓｈｉｎｇｅｌｌａ）、ビブリオ症、及びリステリア症、バイオテロリズム及び潜在的流行病、例えばエボラ出血熱、ラッサ熱、マールブルグ出血熱、ペスト、炭疽ニパウイルス病、ハンタウイルス、天然痘、鼻疽（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｍａｌｌｅｉ）、類鼻疽（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｐｓｅｕｄｏｍａｌｌｅｉ）、オウム病（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｓｉｔｔａｃｉ）、Ｑ熱（Ｃｏｘｉｅｌｌａ  ｂｕｒｎｅｔｉｉ）、野兎病（Ｆａｎｃｉｓｅｌｌａ  ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ）、風疹、おたふく風邪、ならびにポリオ。
【０５００】
本明細書に開示するｍＲＮＡは、１つ以上の有効性が認められた、もしくは「試験中の」治療用タンパク質またはペプチドをコードし得る。本発明によれば、現在販売されている、または開発中の１つ以上の治療用タンパク質またはペプチドは、本発明のｍＲＮＡによってコードされ得る。本発明のｍＲＮＡにおいてコードされる治療用タンパク質及びペプチドは、血液、心臓血管、ＣＮＳ、中毒（抗毒素を含む）、皮膚病、内分泌、遺伝、尿生殖器、胃腸、筋骨格、腫瘍、及び免疫、呼吸、感覚、ならびに抗感染等であるがこれらに限定されない多くの治療分野における状態または疾患を治療するために使用され得る。
【０５０１】
本明細書に開示するｍＲＮＡは、１つ以上の細胞透過性ポリペプチドをコードし得る。本明細書で使用される、「細胞透過性ポリペプチド」またはＣＰＰは、分子の細胞取り込みを促進し得るポリペプチドを指す。本発明の細胞透過性ポリペプチドは、１つ以上の検出可能な標識を含んでもよい。該ポリペプチドは、部分的に標識されてもよいし、全体にわたって完全に標識されてもよい。該ｍＲＮＡは、該検出可能な標識を完全にまたは部分的にコードする場合もあれば、全くコードしない場合もある。該細胞透過性ペプチドはまた、シグナル配列を含んでもよい。本明細書で使用される、「シグナル配列」とは、タンパク質翻訳の過程で新生タンパク質のアミノ末端で結合するアミノ酸残基の配列を指す。該シグナル配列は、該細胞透過性ポリペプチドの分泌をシグナル伝達するために使用され得る。
【０５０２】
１つの実施形態では、該ｍＲＮＡはまた、融合タンパク質をコードし得る。該融合タンパク質は、荷電タンパク質を治療用タンパク質に作動可能に連結することによって創製され得る。本明細書で使用される、「作動可能に連結される」とは、該治療用タンパク質及び該荷電タンパク質が、細胞に導入された際に該複合体の発現を可能にする方法で接続されることを指す。本明細書で使用される、「荷電タンパク質」は、正、負、または全体として中性の電荷を有するタンパク質を指す。好ましくは、該治療用タンパク質は、融合タンパク質の形成において、該荷電タンパク質に共有結合され得る。表面電荷の合計または表面アミノ酸に対する比は、およそ０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、または０．９でよい。
【０５０３】
該ｍＲＮＡによってコードされる細胞透過性ポリペプチドは、翻訳後に複合体を形成し得る。該複合体は、該細胞透過性ポリペプチドに連結された、例えば、共有結合された荷電タンパク質を含み得る。
【０５０４】
１つの実施形態では、該細胞透過性ポリペプチドは、第一のドメイン及び第二のドメインを含み得る。該第一のドメインは、過荷電ポリペプチドを含み得る。該第二のドメインは、タンパク質結合パートナーを含み得る。本明細書で使用される、「タンパク質結合パートナー」としては、抗体及びその機能的断片、骨格タンパク質、またはペプチドが挙げられるがこれに限定されない。該細胞透過性ポリペプチドはさらに、該タンパク質結合パートナーのための細胞内結合パートナーを含み得る。該細胞透過性ポリペプチドは、該ｍＲＮＡが導入され得る細胞から分泌可能であり得る。該細胞透過性ポリペプチドはまた、第一の細胞を透過することが可能であり得る。
【０５０５】
１つの実施形態では、該ｍＲＮＡは、タンパク質結合パートナーを含み得る細胞透過性ポリペプチドをコードし得る。該タンパク質結合パートナーとしては、抗体、過荷電抗体、または機能的断片を挙げることができるがこれに限定されない。該ｍＲＮＡは、該タンパク質結合パートナーを含む細胞透過性ポリペプチドが導入される細胞に導入され得る。
【０５０６】
本開示のいくつかの実施形態は、少なくとも１つの抗原性ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有する少なくとも１つのリボ核酸（ＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含む治療用ｍＲＮＡを提供し、該ＲＮＡのＲＮＡポリヌクレオチドは、少なくとも１つの化学的修飾を含む。いくつかの実施形態では、該化学的修飾は、プソイドウリジン、Ｎ１−メチルプソイドウリジン、Ｎ１−エチルプソイドウリジン、２−チオウリジン、４’−チオウリジン、５−メチルシトシン、２−チオ−１−メチル−１−デアザ−プソイドウリジン、２−チオ−１−メチル−プソイドウリジン、２−チオ−５−アザ−ウリジン、２−チオ−ジヒドロプソイドウリジン、２−チオ−ジヒドロウリジン、２−チオ−プソイドウリジン、４−メトキシ−２−チオ−プソイドウリジン、４−メトキシ−プソイドウリジン、４−チオ−１−メチル−プソイドウリジン、４−チオ−プソイドウリジン、５−アザ−ウリジン、ジヒドロプソイドウリジン、５−メチルウリジン、５−メトキシウリジン、及び２’−Ｏ−メチルウリジンから選択される。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【０５０７】
本開示の前述のポリヌクレオチドのいずれかは、いくつかの実施形態では、コドン最適化される。コドン最適化方法は、当技術分野で知られており、本明細書に示す通りに使用され得る。コドン最適化は、いくつかの実施形態では、標的及び宿主有機体におけるコドン頻度を一致させ、適切な折り畳みを確保するため、ＧＣ含量にバイアスをかけてｍＲＮＡの安定性を高め、もしくは二次構造を低減するため、遺伝子構成もしくは発現を損ない得るタンデムリピートコドンもしくは塩基の連続を最小にするため、転写及び翻訳調節領域をカスタマイズするため、タンパク質輸送配列を挿入もしくは除去するため、コードされるタンパク質の翻訳後修飾部位（例えば、グリコシル化部位）を除去／付加するため、タンパク質ドメインを付加、除去、もしくは入れ替えるため、制限酵素認識部位を挿入もしくは削除するため、リボソーム結合部位及びｍＲＮＡ分解部位を修飾するため、翻訳速度を調節し、タンパク質の様々なドメインを正確に折り畳むため、または、該ポリヌクレオチド内の問題のある二次構造を低減もしくは取り除くために使用され得る。コドン最適化ツール、アルゴリズム、及びサービスは、当技術分野で知られており、非限定的な例としては、ＧｅｎｅＡｒｔ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＤＮＡ２．０（Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ  ＣＡ）からのサービス、及び／または独自方法が挙げられる。いくつかの実施形態では、該オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）配列は、最適化アルゴリズムを用いて最適化される。
【０５０８】
いくつかの実施形態では、コドン最適化配列は、自然発生または野生型配列（例えば、目的のポリペプチドもしくはタンパク質（例えば、抗原タンパク質もしくはポリペプチド）をコードする自然発生または野生型ｍＲＮＡ配列）に対して９５％未満の配列同一性を共有する。いくつかの実施形態では、コドン最適化配列は、自然発生または野生型配列（例えば、目的のポリペプチドもしくはタンパク質（例えば、抗原タンパク質もしくはポリペプチド）をコードする自然発生または野生型ｍＲＮＡ配列）に対して９０％未満の配列同一性を共有する。いくつかの実施形態では、コドン最適化配列は、自然発生または野生型配列（例えば、目的のポリペプチドもしくはタンパク質（例えば、抗原タンパク質もしくはポリペプチド）をコードする自然発生または野生型ｍＲＮＡ配列）に対して８５％未満の配列同一性を共有する。いくつかの実施形態では、コドン最適化配列は、自然発生または野生型配列（例えば、目的のポリペプチドもしくはタンパク質（例えば、抗原タンパク質もしくはポリペプチド）をコードする自然発生または野生型ｍＲＮＡ配列）に対して８０％未満の配列同一性を共有する。いくつかの実施形態では、コドン最適化配列は、自然発生または野生型配列（例えば、目的のポリペプチドもしくはタンパク質（例えば、抗原タンパク質もしくはポリペプチド）をコードする自然発生または野生型ｍＲＮＡ配列）に対して７５％未満の配列同一性を共有する。
【０５０９】
いくつかの実施形態では、コドン最適化配列は、自然発生または野生型配列（例えば、目的のポリペプチドもしくはタンパク質（例えば、抗原タンパク質もしくはポリペプチド）をコードする自然発生または野生型ｍＲＮＡ配列）に対して６５％〜８５％（例えば、約６７％〜約８５％もしくは約６７％〜約８０％）の配列同一性を共有する。いくつかの実施形態では、コドン最適化配列は、自然発生または野生型配列（例えば、目的のポリペプチドもしくはタンパク質（例えば、抗原タンパク質もしくはポリペプチド）をコードする自然発生または野生型ｍＲＮＡ配列）に対して６５％〜７５または約８０％の配列同一性を共有する。
【０５１０】
いくつかの実施形態では、コドン最適化ＲＮＡは、例えば、Ｇ／Ｃレベルが高められたものでよい。核酸分子のＧ／Ｃ含量は、ＲＮＡの安定性に影響を与え得る。グアニン（Ｇ）及び／またはシトシン（Ｃ）残基の量が増加したＲＮＡは、大量のアデニン（Ａ）及びチミン（Ｔ）またはウラシル（Ｕ）ヌクレオチドを含む核酸より機能的に安定であり得る。ＷＯ０２／０９８４４３は、翻訳領域における配列の修飾によって安定化されたｍＲＮＡを含む医薬組成物を開示している。遺伝暗号の縮退のため、該修飾は、得られるアミノ酸を変更することなくＲＮＡの安定性をさらに高めるものに既存のコドンを置換することによって機能する。該方法は、該ＲＮＡのコード領域に限定される。
【０５１１】
本明細書で使用される、ポリペプチドに言及する場合のアミノ酸系の実施形態に関して「部位」という用語は、「アミノ酸残基」及び「アミノ酸側鎖」と同意語として用いられる。本明細書で使用される、ポリヌクレオチドに言及する場合のヌクレオチド系の実施形態に関して「部位」という用語は、「ヌクレオチド」と同意語として用いられる。ある部位は、当該ポリペプチドもしくはポリヌクレオチド系分子内で修飾、操作、変更、誘導体化、または変化され得るペプチド、もしくはポリペプチド、またはポリヌクレオチド内の位置を表す。
【０５１２】
本明細書で使用される、ポリペプチドもしくはポリヌクレオチドを指す場合の「ｔｅｒｍｉｎｉ（末端）」または「ｔｅｒｍｉｎｕｓ（末端）」という用語は、それぞれ、ポリペプチドまたはポリヌクレオチドの端を指す。かかる端は、該ポリペプチドもしくはポリヌクレオチドの最初または最後の部位のみに限定されず、当該末端領域の追加のアミノ酸またはヌクレオチドも含み得る。ポリペプチド系分子は、Ｎ末端（遊離のアミノ基（ＮＨ２）を備えたアミノ酸で終端される）及びＣ末端（遊離のカルボキシル基（ＣＯＯＨ）を備えたアミノ酸で終端される）の両方を有することを特徴とし得る。タンパク質は、いくつかの場合では、ジスルフィド結合によって、または非共有結合力によって一緒にされた複数のポリペプチド鎖で構成される（マルチマー、オリゴマー）。これらのタンパク質は、複数のＮ及びＣ末端を有する。代替的に、ポリペプチドの末端は、それらが場合によっては、非ポリペプチド系部分、例えば、有機コンジュゲートで開始または終端するように修飾され得る。
【０５１３】
当業者には認められるように、タンパク質断片、機能タンパク質ドメイン、及び相同タンパク質もまた、目的のポリペプチドの範囲内であると見なされる。例えば、本明細書に提供するのは、アミノ酸長が１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、または１００を超える、比較タンパク質の任意のタンパク質断片（比較ポリペプチド配列より少なくとも１アミノ酸残基短いがそれ以外は同一であるポリペプチド配列を意味する）である。別の例では、本明細書に記載の配列のいずれかに対して４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または１００％同一の２０、３０、４０、５０、または１００アミノ酸のストレッチを含む任意のタンパク質を、本開示に従って使用することができる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、本明細書に提供するまたは参照する配列のいずれかに示す通り、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれを超える突然変異を含む。別の例では、本明細書に記載の配列のいずれかに対して８０％超、９０％、９５％、または１００％同一の２０、３０、４０、５０、または１００アミノ酸のストレッチを含む任意のタンパク質であって、本明細書に記載の配列のいずれかに対して８０％、７５％、７０％、６５％、または６０％未満同一の５、１０、１５、２０、２５、または３０アミノ酸のストレッチを有するタンパク質を本開示に従って使用することができる。
【０５１４】
本開示のポリペプチドまたはポリヌクレオチド分子は、比較分子（例えば、比較ポリペプチドまたは比較ポリヌクレオチド）と、例えば、当技術分野において記載されている分子（例えば、人工的に作り出されるまたは設計される分子または野生型分子）と、ある特定の配列相同性または同一性度を共有し得る。当技術分野で知られる「同一性」という用語は、２つ以上のポリペプチドまたはポリヌクレオチドの配列間の関係を指し、該配列を比較して決定される。当技術分野では、同一性はまた、それらの間の配列相関性の程度も意味し、２つ以上のアミノ酸残基または核酸残基のストリング間の一致数によって決定される。同一性は、特定の数学的モデルまたはコンピュータプログラム（例えば、「アルゴリズム」）によって対処される、ギャップアラインメント（もしあれば）を有する２つ以上の配列の小さい方の間の完全な一致のパーセントを測定する。関連するペプチドの同一性は、既知の方法で容易に計算することができる。ポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列に適用される「％同一性」は、当該配列を整列させ、必要に応じてギャップを導入して最大パーセント同一性を達成した後の第二の配列のアミノ酸配列または核酸配列における残基と同一の、アミノ酸または核酸の候補配列における残基（アミノ酸残基または核酸残基）のパーセンテージと定義される。該アラインメントのための方法及びコンピュータプログラムは、当技術分野で周知である。同一性は、パーセント同一性の計算に依存するが、該計算に導入されるギャップ及びペナルティによって値が異なり得ることが理解される。一般に、特定のポリヌクレオチドまたはポリペプチドのバリアントは、特定の比較ポリヌクレオチドまたはポリペプチドに対して、本明細書に記載の当業者に知られる配列アラインメントプログラム及びパラメータによって決定される、少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％であるが１００％未満の配列同一性を有する。かかるアラインメント用のツールとしては、ＢＬＡＳＴスイート（Ｓｔｅｐｈｅｎ  Ｆ．Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ  ａｌ（１９９７），“Ｇａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴ  ａｎｄ  ＰＳＩ−ＢＬＡＳＴ：ａ  ｎｅｗ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｄａｔａｂａｓｅ  ｓｅａｒｃｈ  ｐｒｏｇｒａｍｓ”，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２）のものが挙げられる。別のよく知られたローカルアラインメント技術は、Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズム（Ｓｍｉｔｈ，Ｔ．Ｆ．＆Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ｍ．Ｓ．（１９８１）“Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｏｍｍｏｎ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｃｅｓ．”Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１４７：１９５−１９７）を基にしている。動的計画法に基づく一般的なグローバルアラインメント技術は、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ−Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズム（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ，Ｓ．Ｂ．＆Ｗｕｎｓｃｈ，Ｃ．Ｄ．（１９７０）“Ａ  ｇｅｎｅｒａｌ  ｍｅｔｈｏｄ  ａｐｐｌｉｃａｂｌｅ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｓｅａｒｃｈ  ｆｏｒ  ｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅ��  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｗｏ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ．”Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３−４５３．）である。さらに最近では、Ｆａｓｔ  Ｏｐｔｉｍａｌ  Ｇｌｏｂａｌ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  Ａｌｇｏｒｉｔｈｍ（ＦＯＧＳＡＡ）が開発され、これは、その称するところでは、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ−Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズムを含めた他の最適グローバルアラインメント法よりも速く、ヌクレオチド及びタンパク質配列のグローバルアラインメントを生じる。他のツールは、とりわけ以下の「同一性」の定義において、本明細書に記載する。
【０５１５】
本明細書で使用される、「相同性」という用語は、ポリマー分子間、例えば、核酸分子（例えば、ＤＮＡ分子及び／またはＲＮＡ分子）間、及び／またはポリペプチド分子間の全体的な関連性を指す。一致する残基のアラインメントによって決定される類似性または同一性の閾値を共有するポリマー分子（例えば、核酸分子（例えば、ＤＮＡ分子及び／またはＲＮＡ分子）及び／またはポリペプチド分子）を相同と呼ぶ。相同性は、分子間の関係を示す定性的な用語であり、定量的な類似性または同一性を基にすることができる。類似性または同一性は、２つの比較配列間の配列の一致の程度を決める定量的な用語である。いくつかの実施形態では、ポリマー分子は、それらの配列が、少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％同一または類似である場合に互いに「相同」であると見なされる。「相同」という用語は、必然的に、少なくとも２つの配列（ポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列）間の比較を指す。２つのポリヌクレオチド配列は、それらがコードするポリペプチドが、少なくとも２０アミノ酸の少なくとも１つのストレッチについて、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、またはさらに９９％である場合に相同と見なされる。いくつかの実施形態では、相同ポリヌクレオチド配列は、少なくとも４〜５個の独自に特定されるアミノ酸のストレッチをコードする能力を特徴とする。６０ヌクレオチド長未満のポリヌクレオチド配列については、相同性は、少なくとも４〜５個の独自に特定されるアミノ酸のストレッチをコードする能力によって決定される。２つのタンパク質配列は、該タンパク質が、少なくとも２０アミノ酸の少なくとも１つのストレッチについて、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％同一である場合に相同であると見なされる。
【０５１６】
相同性は、比較配列が共通の起源から進化中に枝分かれしたことを暗示する。「ホモログ」という用語は、共通の祖先配列からの系統が、第二のアミノ酸配列または核酸配列と関連する第一のアミノ酸配列または核酸配列（例えば、遺伝子（ＤＮＡもしくはＲＮＡ）またはタンパク質配列）を指す。「ホモログ」という用語は、種形成事象によって分離された遺伝子及び／またはタンパク質間の関係、または遺伝子複製事象によって分離された遺伝子及び／またはタンパク質間の関係に適用され得る。「オルソログ」は、種形成によって共通の祖先遺伝子（またはタンパク質）から進化した異なる種における遺伝子（またはタンパク質）である。通常、オルソログは、進化の過程で同じ機能を保持する。「パラログ」は、ゲノム内の複製によって関連付けられる遺伝子（またはタンパク質）である。オルソログは、進化の過程で同じ機能を保持するが、パラログは、たとえ本来の機能と関連していたとしても新たな機能を進化させる。
【０５１７】
「同一性」という用語は、ポリマー分子間、例えば、ポリヌクレオチド分子（例えば、ＤＮＡ分子及び／またはＲＮＡ分子）間、及び／またはポリペプチド分子間の全体的な関連性を指す。２つのポリ核酸配列間のパーセント同一性の計算は、例えば、最適な比較目的のために２つの配列を整列させることによって行うことができる（例えば、最適アラインメントのためにギャップを第一及び第二の核酸配列の一方または両方に導入してもよいし、非同一配列を比較目的のために無視してもよい）。ある特定の実施形態では、比較目的のために整列させた配列の長さは、比較配列の長さの少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％である。対応するヌクレオチド位置でのヌクレオチドを次に比較する。第一の配列における位置が、第二の配列の対応する位置と同じヌクレオチドで占められている場合、該分子はその位置で同一である。２つの配列間のパーセント同一性は、ギャップ数、及び、該２つの配列の最適アラインメントのために導入される必要がある各ギャップの長さを考慮に入れて、該配列によって共有される同一位置の数の関数である。配列の比較及び２つの配列間のパーセント同一性の決定は、数学的アルゴリズムを用いて達成することができる。例えば、２つの核酸配列間のパーセント同一性は、各々が参照することにより本明細書に組み込まれる、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８８、Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．，ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９３、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８７；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ  Ｉ，Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．，ａｎｄ  Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．，ｅｄｓ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ，１９９４、及びＳｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ，Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．ａｎｄ  Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｄｓ．，Ｍ  Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９１に記載のもの等の方法を用いて決定することができる。例えば、２つの核酸配列間のパーセント同一性は、ＰＡＭ１２０重み付け残基表、ギャップ長ペナルティ１２、及びギャップペナルティ４を用いたＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれた、Ｍｅｙｅｒｓ及びＭｉｌｌｅｒのアルゴリズム（ＣＡＢＩＯＳ，１９８９，  ４：１１−１７）を用いて決定することができる。２つの核酸配列間のパーセント同一性は、代替的に、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックスを用いたＧＣＧソフトウェアパッケージのＧＡＰプログラムを用いて決定することができる。配列間のパーセント同一性を決定するために一般的に使用される方法としては、参照すること���より本明細書に組み込まれる、Ｃａｒｉｌｌｏ，Ｈ．，ａｎｄ  Ｌｉｐｍａｎ，Ｄ．，ＳＩＡＭ  Ｊ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈ．，４８：１０７３（１９８８）に開示されているものが挙げられるがこれらに限定されない。同一性を決定するための技術は、公開されているコンピュータプログラムに体系化されている。２つの配列間の相同性を決定するための例示的なコンピュータソフトウェアとしては、ＧＣＧプログラムパッケージ、Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１２（１），３８７（１９８４））、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、及びＦＡＳＴＡ  Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．，２１５，  ４０３（１９９０））が挙げられるがこれらに限定されない。
【０５１８】
免疫調節剤は、免疫賦活剤または免疫抑制剤でよい。
【０５１９】
免疫賦活剤は、単独であるか別の薬剤との併用であるかにかかわらず、それが投与される対象において免疫応答を刺激する（既存の免疫応答を高めることを含む）薬剤である。例としては、抗原、アジュバント（例えば、ＴＬＲリガンド、例えば、イミキモド、イミダゾキノリン、非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含む核酸、モノホスホリルリピドＡまたは他のリポ多糖誘導体、一本鎖または二本鎖ＲＮＡ、フラジェリン、ムラミルジペプチド）、インターロイキン（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１５（もしくはこれらサイトカインのスーパーアゴニスト／変異型）、ＩＬ−１２、ＩＦＮ−ガンマ、ＩＦＮ−アルファ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＬＴ３リガンド等）を含めたサイトカイン、免疫賦活抗体（例えば、抗ＣＴＬＡ−４、抗ＣＤ２８、抗ＣＤ３、もしくはこれら分子の一本鎖／抗体断片）等が挙げられる。
【０５２０】
免疫抑制剤は、単独であるか別の薬剤との併用であるかにかかわらず、それが投与される対象において免疫応答を阻害する薬剤である。例としては、ステロイド、レチノイン酸、デキサメタゾン、シクロホスファミド、抗ＣＤ３抗体または抗体断片、及び他の免疫抑制剤が挙げられる。
【０５２１】
アジュバントは、免疫応答を高める薬剤である。該アジュバントは、制限なく、ミョウバン（例えば、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム）、ＱＳ２１等のＱ．ｓａｐｏｎａｒｉａの木の樹皮から精製されるサポニン（ＨＰＬＣ分別による２１番目のピークに溶出する糖脂質、Ａｎｔｉｇｅｎｉｃｓ，Ｉｎｃ．，Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒ，Ｍａｓｓ．）、ポリ［ジ（カルボキシラトフェノキシ）ホスファゼン］（ＰＣＰＰポリマー、Ｖｉｒｕｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＵＳＡ）、Ｆｌｔ３リガンド、リーシュマニア延長因子（精製リーシュマニアタンパク質、Ｃｏｒｉｘａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｓｅａｔｔｌｅ，Ｗａｓｈ．）、ＩＳＣＯＭＳ（混合サポニン、脂質を含み、抗原を保持することができる細孔を有するウイルスサイズの粒子を形成する免疫賦活性複合体、ＣＳＬ，Ｍｅｌｂｏｕｒｎｅ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ）、Ｐａｍ３Ｃｙｓ、ＳＢ−ＡＳ４（ミョウバン及びＭＰＬを含むＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍアジュバントシステム４、ＳＢＢ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）、ＣＲＬ１００５等のミセルを形成する非イオン性ブロックコポリマー（これらは、両側にポリオキシエチレン鎖が配置された疎水性ポリオキシプロピレンの直鎖を含む、Ｖａｘｃｅｌ，Ｉｎｃ．，Ｎｏｒｃｒｏｓｓ，Ｇａ．）、ならびにＭｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＭＳ（例えば、ＩＭＳ  １３１２、可溶性免疫賦活薬と混合された水性ナノ粒子、Ｓｅｐｐｉｃ）でよい。
【０５２２】
アジュバントはＴＬＲリガンドでよい。ＴＬＲ３を介して作用するアジュバントとしては、制限なく、二本鎖ＲＮＡが挙げられる。ＴＬＲ４を介して作用するアジュバントとしては、制限なく、リポ多糖誘導体、例えば、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬＡ、Ｒｉｂｉ  ＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ｍｏｎｔ．）及びムラミルジペプチド（ＭＤＰ、Ｒｉｂｉ）ならびにトレオニルムラミルジペプチド（ｔ−ＭＤＰ、Ｒｉｂｉ）、ＯＭ−１７４（リピドＡに関連するグルコサミン二糖、ＯＭ  Ｐｈａｒｍａ  ＳＡ，Ｍｅｙｒｉｎ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）が挙げられる。ＴＬＲ５を介して作用するアジュバントとしては、制限なく、フラジェリンが挙げられる。ＴＬＲ７及び／またはＴＬＲ８を介して作用するアジュバントとしては、一本鎖ＲＮＡ、オリゴリボヌクレオチド（ＯＲＮ）、合成低分子量化合物、例えば、イミダゾキノリンアミン（例えば、イミキモド、レシキモド）が挙げられる。ＴＬＲ９を介して作用するアジュバントとしては、ウイルスもしくは細菌起源のＤＮＡ、または合成オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、例えば、ＣｐＧ  ＯＤＮが挙げられる。別のアジュバントのクラスは、ホスホロチオエートを含む分子、例えば、ホスホロチオエートヌクレオチド類似体及びホスホロチオエート骨格結合を含む核酸である。
【０５２３】
該抗原は、制限なく、がん抗原、自己抗原、微生物抗原、アレルゲン、または環境抗原であり得る。該抗原は、本質的にペプチド、脂質、または炭水化物でもよいが、そのように限定されない。
【０５２４】
がん抗原は、がん細胞によって優先的に発現される抗原（すなわち、それはがん細胞において非がん細胞よりも高レベルで発現される）であり、いくつかの例では、それはがん細胞によってのみ発現される。該がん抗原は、がん細胞内で、または該がん細胞の表面で発現され得る。該がん抗原は、ＭＡＲＴ−１／Ｍｅｌａｎ−Ａ、ｇｐ１００、アデノシンデアミナーゼ結合タンパク質（ＡＤＡｂｐ）、ＦＡＰ、シクロフィリンｂ、結腸直腸関連抗原（ＣＲＣ）−−Ｃ０１７−１Ａ／ＧＡ７３３、がん胎児抗原（ＣＥＡ）、ＣＡＰ−１、ＣＡＰ−２、ｅｔｖ６、ＡＭＬ１、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、ＰＳＡ−１、ＰＳＡ−２、ＰＳＡ−３、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、Ｔ細胞受容体／ＣＤ３−ゼータ鎖、及びＣＤ２０でよい。該がん抗原は、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ５、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ７、ＭＡＧＥ−Ａ８、ＭＡＧＥ−Ａ９、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａ１１、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＭＡＧＥ−Ｘｐ２（ＭＡＧＥ−Ｂ２）、ＭＡＧＥ−Ｘｐ３（ＭＡＧＥ−Ｂ３）、ＭＡＧＥ−Ｘｐ４（ＭＡＧＥ−Ｂ４）、ＭＡＧＥ−Ｃ１、ＭＡＧＥ−Ｃ２、ＭＡＧＥ−Ｃ３、ＭＡＧＥ−Ｃ４、ＭＡＧＥ−Ｃ５）からなる群から選択され得る。該がん抗原は、ＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ＧＡＧＥ−３、ＧＡＧＥ−４、ＧＡＧＥ−５、ＧＡＧＥ−６、ＧＡＧＥ−７、ＧＡＧＥ−８、ＧＡＧＥ−９からなる群から選択され得る。該がん抗原は、ＢＡＧＥ、ＲＡＧＥ、ＬＡＧＥ−１、ＮＡＧ、ＧｎＴ−Ｖ、ＭＵＭ−１、ＣＤＫ４、チロシナーゼ、ｐ５３、ＭＵＣファミリー、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ｐ２１ｒａｓ、ＲＣＡＳ１、α−フェトプロテイン、Ｅ−カドヘリン、α−カテニン、β−カテニン、γ−カテニン、ｐ１２０ｃｔｎ、ｇｐ１００Ｐｍｅｌ１１７、ＰＲＡＭＥ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ｃｄｃ２７、大腸腺腫症タンパク質（ＡＰＣ）、フォドリン、コネクシン３７、Ｉｇ−イディオタイプ、ｐ１５、ｇｐ７５、ＧＭ２ガングリオシド、ＧＤ２ガングリオシド、ヒトパピローマウイルスタンパク質、腫瘍抗原のＳｍａｄファミリー、ｌｍｐ−１、Ｐ１Ａ、ＥＢＶコード核抗原（ＥＢＮＡ）−１、脳グリコーゲンホスホリラーゼ、ＳＳＸ−１、ＳＳＸ−２（ＨＯＭ−ＭＥＬ−４０）、ＳＳＸ−１、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＣＰ−１及びＣＴ−７、ＣＤ２０、ならびにｃ−ｅｒｂＢ−２からなる群から選択され得る。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【０５２５】
微生物抗原は、微生物種、例えば、制限なく、細菌、ウイルス、真菌、寄生虫、及びマイコバクテリア種由来の抗原である。従って、微生物抗原としては、細菌抗原、ウイルス抗原、真菌抗原、寄生虫抗原、及びマイコバクテリア抗原が挙げられる。細菌、ウイルス、真菌、寄生虫、及びマイコバクテリア種の例を本明細書に提供する。該微生物抗原は、微生物種の一部であってもよいし、微生物全体であってもよい。
【０５２６】
抗がん剤は、短期間のみだとしても、がんと関連する症状を全体的にまたは部分的に阻害することを含め、がんの発生または進行を少なくとも部分的に阻害する薬剤である。いくつかの抗がん剤は、ＤＮＡ損傷剤として分類することができ、これらには、トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、エトポシド、ランプトテシン、トポテカン、テニポシド、ミトキサントロン）、ＤＮＡアルキル化剤（例えば、シスプラチン、メクロレタミン、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン、コラムブシル、ブスルファン、チオテパ、カルムスチン、ロムスチン、カルボプラチン、ダカルバジン、プロカルバジン）、ＤＮＡ鎖切断誘発剤（例えば、ブレオマイシン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、イダルビシン、マイトマイシンＣ）、微小管阻害薬（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン）、代謝拮抗剤（例えば、シタラビン、メトトレキサート、ヒドロキシ尿素、５−フルオロウラシル、フロクスウリジン、６−チオグアニン、６−メルカプトプリン、フルダラビン、ペントスタチン、クロロデオキシアデノシン）、アントラサイクリン、ビンカアルカロイド、またはエピポドフィロトキシンが含まれる。
【０５２７】
抗がん剤の例としては、制限なく、アシビシン、アクラルビシン、アコダゾール塩酸塩、アクロニン、アドゼレシン、アルデスロイキン、アルトレタミン、アムボマイシン、アメタントロン酢酸塩、アミノグルテチミド、アムサクリン、アナストロゾール、アントラマイシン、アスパラギナーゼ、アスペルリン、アザシチジン、アゼテパ、アゾトマイシン、バチマスタット、ベンゾデパ、ビカルタミド、ビスアントレン塩酸塩、ビスナフィドジメシラート、ビゼレシン、硫酸ブレオマイシン、ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ）、ブレキナルナトリウム、ブロピリミン、ブスルファン、カクチノマイシン、カルステロン、カラセミド、カルベチマー、カルボプラチン（白金含有レジメン）、カルムスチン、カルビシン塩酸塩、カルゼレシン、セデフィンゴル、クロラムブシル、シロレマイシン、シスプラチン（白金含有レジメン）、クラドリビン、メシル酸クリスナトール、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デシタビン、デキソルマプラチン、デザグアニン、ジアジクオン、ドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ）、ドキソルビシン、ドロロキシフェン、ドロモスタノロン、ズアゾマイシン、エダトレキセート、エフロルニチン、エルサミトルシン、エンロプラチン、エンプロマート、エピプロピジン、エピルビシン、エルブロゾール、エルロチニブ（ＴＡＲＣＥＶＡ）、エソルビシン、エストラムスチン、エタニダゾール、エトポシド、エトプリン、ファドロゾール、ファザラビン、フェンレチニド、フロクスウリジン、フルダラビン、５−フルオロウラシル、フルロシタビン、ホスキドン、フォストリエシン、ゲフィチニブ（ＩＲＥＳＳＡ）、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、イダルビシン、イホスファミド、イルモホシン、メシル酸イマチニブ（ＧＬＥＥＶＡＣ）、インターフェロンアルファ−２ａ、インターフェロンアルファ−２ｂ、インターフェロンアルファ−ｎ１、インターフェロンアルファ−ｎ３、インターフェロンベータ−Ｉａ、インターフェロンガンマ−Ｉｂ、イプロプラチン、イリノテカン、ランレオチド、レナリドマイド（ＲＥＶＬＩＭＩＤ、ＲＥＶＩＭＩＤ）、レトロゾール、ロイプロリド、リアロゾール、ロメトレキソール、ロムスチン、ロソキサントロン、マソプロコール、メイタンシン、メクロレタミン、メゲストロール、メレンゲストロール、メルファラン、メノガリル、メルカプトプリン、メトトレキサート、メトプリン、メツレデパ、メチンドミド、ミトカルシン、ミトクロミン、ミトギリン、ミトマルシン、マイトマイシン、ミトスペル、ミトタン、ミトキサントロン、ミコフェノール酸、ノコダゾール、ノガラマイシン、オルマプラチン、オキシスラン、パクリタキセル、ペメトレキセド（ＡＬＩＭＴＡ）、ペガスパルガーゼ、ペリオマイシン、ペンタムスチン、ペントモン、ペプロマイシン、ペルホスファミド、ピポブロマン、ピポスルファン、イセチオン酸ピリトレキシム、ピロキサントロン、プリカマイシン、プロメスタン、ポルフィマー、ポルフィロマイシン、プレドニムスチン、プロカルバジン、ピューロマイシン、ピラゾフリン、リボプリン、ログレチミド、サフィンゴール、セムスチン、シムトラゼン、シトグルシド、スパルホサート、スパルソマイシン、スピロゲルマニウム、スピロムスチン、スピロプラチン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、スロフェヌア、タリソマイシン、タムスロシン、タキソール、タキソテール、テコガラン、テガフール、テロキサントロン、テモポルフィン、テモゾロミド（ＴＥＭＯＤＡＲ）、テニポシド、テロキシロン、テストラクトン、サリドマイド（ＴＨＡＬＯＭＩＤ）及びその誘導体、チアミプリン、チオグアニン、チオテパ、チアゾフリン、チラパザミン、トポテカン、トレミフェン、トレストロン、トリシリビン、トレメトレキサート、トリプトレリン、ツブロゾール、ウラシルマスタード、ウレデパ、バプレオチド、ベルテポルフィン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビネピジン、ビングリシナート、ビンロイロシン、ビノレルビン、ビンロシジン、ビンゾリジン、ボロゾール、ゼニプラチン、ジノスタチン、ゾルビシンが挙げられる。
【０５２８】
該抗がん剤は、制限なく、チロシンキナーゼ阻害剤、ＣＤＫ阻害剤、ＭＡＰキナーゼ阻害剤、またはＥＧＦＲ阻害剤を含めた酵素阻害剤であり得る。該チロシンキナーゼ阻害剤は、制限なく、ゲニステイン（４’，５，７−トリヒドロキシイソフラボン）、チルホスチン２５（３，４，５−トリヒドロキシフェニル），メチレン］プロパンジニトリル、ハービマイシンＡ、ダイゼイン（４’，７−ジヒドロキシイソフラボン）、ＡＧ−１２６、ｔｒａｎｓ−１−（３’−カルボキシ−４’−ヒドロキシフェニル）−２−（２”，５”−ジヒドロキシ−フェニル）エタン、またはＨＤＢＡ（２−ヒドロキシ−５−（２，５−ジヒドロキシベンジルアミノ）−２−ヒドロキシ安息香酸でよい。該ＣＤＫ阻害剤は、制限なく、ｐ２１、ｐ２７、ｐ５７、ｐ１５、ｐ１６、ｐ１８、またはｐ１９でよい。該ＭＡＰキナーゼ阻害剤は、制限なく、ＫＹ１２４２０（Ｃ２３Ｈ２４Ｏ８）、ＣＮＩ−１４９３、ＰＤ９８０５９、または４−（４−フルオロフェニル）−２−（４−メチルスルフィニルフェニル）−５−（４−ピリジル）１Ｈ−イミダゾールでよい。該ＥＧＦＲ阻害剤は、制限なく、エルロチニブ（ＴＡＲＣＥＶＡ）、ゲフィチニブ（ＩＲＥＳＳＡ）、ＷＨＩ−Ｐ９７（キナゾリン誘導体）、ＬＦＭ−Ａ１２（レフルノミド代謝産物類似体）、ＡＢＸ−ＥＧＦ、ラパチニブ、カネルチニブ、ＺＤ−６４７４（ＺＡＣＴＩＭＡ）、ＡＥＥ７８８、及びＡＧ１４５８でよい。
【０５２９】
該抗がん剤は、ＶＥＧＦ阻害剤でよく、制限なく、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴｌＮ）、ラニビズマブ（ＬＵＣＥＮＴＩＳ）、ペガプタニブ（ＭＡＣＵＧＥＮ）、ソラフェニブ、スニチニブ（ＳＵＴＥＮＴ）、バタラニブ、ＺＤ−６４７４（ＺＡＣＴＩＭＡ）、アネコルタブ（ＲＥＴＡＡＮＥ）、乳酸スクアラミン、及びセマフォリンを含む。
【０５３０】
該抗がん剤は、抗体または抗体断片でよく、制限なく、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ）、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ）、アレムツズマブ（ＣＡＭＰＡＴＨ、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病の治療に適応される）、ゲムツズマブ（ＭＹＬＯＴＡＲＧ、ｈＰ６７．６、抗ＣＤ３３、急性骨髄性白血病等の白血病の治療に適応される）、リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ）、トシツモマブ（ＢＥＸＸＡＲ、抗ＣＤ２０、Ｂ細胞悪性腫瘍の治療に適応される）、ＭＤＸ−２１０（ＨＥＲ−２／ｎｅｕがん遺伝子タンパク質産物及び免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）に対するＩ型Ｆｃ受容体（ＦｃガンマＲＩ）に同時に結合する二重特異性抗体）、オレゴボマブ（ＯＶＡＲＥＸ、卵巣癌の治療に適応される）、エドレコロマブ（ＰＡＮＰＲＥＸ）、ダクリズマブ（ＺＥＮＡＰＡＸ）、パリビズマブ（ＳＹＮＡＧＩＳ、ＲＳＶ感染症等の呼吸器疾患の治療に適応される）、イブリツモマブチウキセタン（ＺＥＶＡＬＩＮ、非ホジキンリンパ腫の治療に適応される）、セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ）、ＭＤＸ−４４７、ＭＤＸ−２２、ＭＤＸ−２２０（抗ＴＡＧ−７２）、ＩＯＲ−Ｃ５、ＩＯＲ−Ｔ６（抗ＣＤ１）、ＩＯＲ  ＥＧＦ／Ｒ３、セロゴバブ（ＯＮＣＯＳＣＩＮＴ  ＯＶ１０３）、エプラツズマブ（ＬＹＭＰＨＯＣＩＤＥ）、ペムツモマブ（ＴＨＥＲＡＧＹＮ）、及びグリオマブ−Ｈ（脳癌、メラノーマの治療に適応される）が挙げられるがこれらに限定されない抗体または抗体断片を含む。
【０５３１】
本明細書では造影剤と呼ばれる場合がある診断薬は、シグナルを直接または間接的に発し、それにより、インビボでのその検出を可能にする薬剤である。診断薬、例えば、コントラスト剤及び放射性薬剤は、医用画像技術、例えば、核医学検査及び磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）を用いて検出することができる。磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）用の造影剤としては、Ｇｄ（ＤＯＴＡ）、酸化鉄もしくは金ナノ粒子が挙げられ、核医学用の造影剤としては、２０１Ｔｌ、ガンマ放射性核種９９ｍＴｃが挙げられ、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）用の造影剤としては、陽電子放出同位体、（１８）Ｆ−フルオロデオキシグルコース（（１８）ＦＤＧ）、（１８）Ｆ−フルオライド、銅６４、ガドアミド、及びＰｂ（ＩＩ）の放射性同位体、例えば、２０３Ｐｂ、及び１１Ｉｎ、インビボ蛍光イメージング用の造影剤、例えば、蛍光色素または色素コンジュゲートナノ粒子が挙げられる。他の実施形態では、送達される薬剤は、診断薬にコンジュゲートされるか、融合されるか、混合されるか、または結合される。
【０５３２】
該化合物及び組成物は、本明細書で企図する薬剤の送達から恩恵を受けやすい任意の対象のタイプに実質的に投与され得る。ヒト対象は、本発明のいくつかの実施形態では、好ましい対象である。対象には、動物、例えば、ペット（例えば、イヌ、ネコ、ウサギ、フェレット等）、家畜または農場動物（例えば、ウシ、ブタ、ヒツジ、ニワトリ、及び他の家禽）、ウマ、例えば、サラブレッドのウマ、実験動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ等）等も含まれる。対象には、魚類及び他の水生動物種も含まれる。
【０５３３】
該薬剤が送達される対象は、正常な対象でよい。代替的に、該対象は、１つ以上の特定の薬剤の局所的送達から診断することができる、または恩恵を受ける可能性がある状態を有していてもよいし、その進行のリスクがあってもよい。かかる状態としては、がん（例えば、固形腫瘍がん）、感染症（特に、体内の特定の領域または組織に限局される感染症）、自己免疫疾患、アレルギーまたはアレルギー状態、喘息、移植片拒絶反応等が挙げられる。いくつかの実施形態では、該対象は、遺伝子欠陥と診断されており、核酸に基づいた治療を施されている。
【０５３４】
薬剤は、全身的に投与されても局所的に投与されてもよい。薬剤は、有効量で投与され得る。有効量は、医学的に望ましい結果を提供するのに十分な該薬剤の用量である。該有効量は、治療される特定の状態、治療される対象の年齢及び健康状態、状態の重症度、治療期間、併用または混合療法（もしあれば）の性質、具体的な投与経路、ならびに医療従事者の知識及び見解の範囲内の同様の因子によって異なる。一般に、最大投与量、すなわち、健全な医学的判断に従う最大の安全量が使用される。
【０５３５】
本発明は、医薬組成物を提供する。医薬組成物は、薬剤を含み、送達媒体、ナノ粒子等を好ましくは医薬的に許容される担体中に含んでもよい無菌の組成物である。「医薬的に許容される担体」という用語は、ヒトまたは本発明が企図する他の対象に対する投与に適した１つ以上の相溶性のある固体もしくは液体充填剤、希釈剤、または封入物質を意味する。「担体」という用語は、投与を容易にするために細胞、ナノ粒子、及び薬剤（複数可）が混合される有機もしくは無機の天然または合成成分を意味する。医薬組成物の成分は、それらの所望の医薬的効率を実質的に損なう相互作用が起きないようにする方法で混合される。
【０５３６】
該化合物及び組成物は、それらを全身的に送達することが望ましい場合、注射による、例えば、ボーラス注入または持続注入による非経口投与用に処方され得る。注射用製剤は、単位剤形、例えば、アンプルまたは複数回投与容器に含んでもよい。医薬非経口製剤は、成分の水溶液を含む。水性注射懸濁液は、該懸濁液の粘度を高める物質、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、またはデキストランを含んでよい。代替的に、成分の懸濁液は、油性の懸濁液、例えば、当技術分野で知られるもの、または、本開示に基づいて当業者に容易に明らかになるものとして調製され得る。
【０５３７】
本開示はさらに、通常当該対象の治療に適応される薬剤を含めた１つ以上の第二の薬剤と一緒のＬＮＰの使用を企図する。
【０５３８】
いくつかの例では、該ＬＮＰは、該第二の薬剤と実質的に同時に投与され得る。実質的に同時にとは、ＬＮＰが第二の薬剤の投与と時間的に接近して、例えば、１時間で、３０分以内に、１０分以内に、または５分以内に対象に投与されることを意味する。
【０５３９】
いくつかの例では、該第二の薬剤（複数可）は、該ＬＮＰの前に投与され得る。例えば、該第二の薬剤（複数可）は、該ＬＮＰの投与前の２４時間以内、もしくは１８時間以内、もしくは１２時間以内、もしくは６時間以内、もしくは３時間以内、または２時間以内に投与され得る。該第二の薬剤（複数可）は、ＬＮＰ投与の１８〜２４時間前、もしくはＬＮＰ投与の１２〜１８時間前、もしくはＬＮＰ投与の６〜１２時間前、またはＬＮＰ投与の２〜６時間前に投与され得る。
【０５４０】
ＬＮＰ投与の２時間以上前に１つ以上の第二の薬剤を投与されている対象は、かかる薬剤（複数可）で予備投薬治療を受けたと呼ばれ得る。ＬＮＰ投与の前１時間以内に１つ以上の第二の薬剤を投与されている対象は、かかる薬剤（複数可）で同時投薬治療を受けたと呼ばれ得る。
【０５４１】
いくつかの例では、該第二の薬剤（複数可）は、当該対象に対して持続して、必要に応じて、または一定のスケジュール（例えば、毎日、２日に１回等）で投与され得る。
【０５４２】
他の例では、該第二の薬剤は、該ＬＮＰの投与の前または後に投与され得る。
【０５４３】
かかる第二の薬剤としては、抗ヒスタミン剤、抗血小板薬、及び抗ステロイド性抗炎症薬を挙げることができるがこれらに限定されない。ある特定の実施形態では、該ＬＮＰは、コルチコステロイド、例えば、これに限定されないがデキサメタゾンとともに処方されず、対象は、これによる予備投薬治療も同時投薬治療も受けない。
【０５４４】
ある特定の実施形態では、抗炎症及び抗血小板作用を有する単一の第二の薬剤が用いられる。かかる薬剤の一例はアスピリンである。
【０５４５】
ある特定の実施形態では、アスピリン、クロピドログレル（Ｐｌａｖｉｘ（登録商標））、及び抗ヒスタミン剤、例えば、これに限定されないが、ジフェンヒドラミン（ベナドリル）、フェキソフェナジン（アレグラ）、ロラタジン（クラリチン）、またはセチリジンの組合せが用いられる。１つ以上の第二の薬剤は、ＬＮＰの投与あたり１回投与され得る一方、他のものはより頻繁に投与され得る。例えば、クロピドログレル（Ｐｌａｖｉｘ（登録商標））は、ＬＮＰの投与あたり１回投与され得る一方、アスピリン及び／または抗ヒスタミン剤は毎日投与され得る。
【０５４６】
抗ヒスタミン剤には、Ｈ１受容体アンタゴニスト及びＨ１受容体逆アゴニストが含まれる。
【０５４７】
Ｈ１受容体アンタゴニストの例としては、アクリバスチン、アリメマジン、酒石酸アリメマジン、アンタゾリン、アステミゾール、アザタジン、マレイン酸アザタジン、アゼラスチン、バミピン、ベンズキナミド、ベポタスチン、ベシル酸ベポタスチン、ビラスチン、ブロマジン、ブロムフェニラミン、ブクリジン、カルビノキサミン、クロルフェノキサミン、クロルシクリジン、シンノペンタゾン、ヒスタピロジン、クロロジフェンヒドラミン、クロロピラミン、クロロフェナミン、クロルプロマジン、シンナリジン、クレマスチン、クレミゾール、クロシニジン、シクリジン、シプロヘプタジン、デスロラタジン、デプトロピン、デクスクロルフェニラミン、デクスブロムフェニラミン、ジメンヒドリナート、ジメチンデン、ジメトチアジン、ジフェンヒドラミン（ベネドリル）、ジフェニルピラリン、ドキセピン、ドキシラミン、エバスチン、エフレチリジン、エンブラミン、エメダスチン、エピナスチン、フェキソフェナジン（アレグラ）、フルナリジン、ホモクロルシクリジン、ヒドロキシジン、イソチペンジル、ケトチフェン、レボカバスチン（第２世代）、ロラタジン（クラリチン）、メブヒドロリン、メクロジン、メピラミン、メキタジン、メトジラジン、ミルタザピン、ミゾラスチン、ニアプラジン、オロパタジン、オルフェナドリン、オキサトミド、オキソメマジン、ペミロラスト、フェニンダミン、フェニラミン、フェニルトロキサキン、ピメチキセン、ピプリンヒドリナート、プロメタジン、プロピオマジン、ピロブタミン、クエチアピン、キフェナジン、ルパタジン、セタスチン、テルフェナジン、テニルジアミン、チエチルペラジン、トンジルアミン、トルプロパミン、トリメトベンズアミン、トリペレナミン、トリプロリジン、及びトリトクアリンが挙げられるがこれらに限定されない。
【０５４８】
Ｈ１受容体逆アゴニストの例としては、ピリラミン、セチリジン、レボセチリジン、及びデスロラタジンが挙げられるがこれらに限定されない。
【０５４９】
抗血小板薬としては、活性化阻害剤、凝集阻害剤、接着アンタゴニスト、抗凝固薬（血小板を直接標的としない）、及び血小板算定または数を低減する薬剤が挙げられるがこれらに限定されない。
【０５５０】
活性化阻害剤の例としては、（１）トロンビン受容体ＰＡＲ−１阻害剤、例えば、ＳＣＨ  ５３０３４８（ボラパクサール）、Ｅ−５５５５（アトパキサール）、ＳＣＨ７９７９７、ＦＲ１７１１１３、ＲＷＪ５６１１０、ＢＭＳ−２００６６１、ＲＷＪ−５８２５９、ＳＣＨ２０５８３１、Ｐｉｐａｌ−７ペプデュシン、Ｐ１ｐａｌ−１２ペプデュシン、（２）トロンビン受容体ＰＡＲ−４阻害剤、例えば、ＭＬ  ３５４、ｔｃＹ−ＮＨ２、Ｐ４ｐａｌ−１０ペプデュシン、Ｐ４ｐａｌ−ｉ１ペプデュシン、（３）ＦＳＬＬＲＹ−ＮＨ２（ＰＡＲ−２ペプチドアンタゴニスト）、（４）ＴｘＡ２受容体アンタゴニスト、例えばＡＨ  ２３，８４８、ＳＱ  ２９，５４８、またはＲ  ６８，０７０、Ｓ−１４５２、イオサルタン、セラトロダスト、（５）トロンボキサン受容体アンタゴニスト、例えば、テルトロバン、（６）ＡＤＰ  Ｐ２Ｙ１２  受容体阻害剤、例えば、チクロピジン、クロピドグレル、プラスグレル、チカグレロル、カングレロル、エリノグレル、ＡＺＤ６１４０、ＡＲ−Ｃ６９９３１、ＣｏＡ、（７）ＡＤＰ  Ｐ２Ｙ１受容体阻害剤、例えば、Ａ２Ｐ５Ｐ、Ａ３Ｐ５Ｐ、ＭＲＳ２１７９、ＭＲＳ２２７９、ＭＲＳ２５００、パルミトイル−ＣｏＡ（Ｐ２Ｙ１２にも作用する）、及びＴｈａｌｊｉ  ｅｔ  ａｌ．  ２０１０によるＳＡＲ研究からの他の化合物、（８）５−ＨＴ２Ａアンタゴニスト、例えば、Ｒ−１０１２４４４、ナフチドロフリル、サルポグレラート、ＡＴ−１０１５、（９）トロンボキサンシンターゼ阻害剤、例えば、ダゾキシベン、ＣＳ−５１８（ＴＸＡ２シンターゼ阻害剤）、ＳＢ  ２０３５８０、Ｕ６３５５７Ａ、イミダゾ（１，５−２）ピリジン−５−ヘキサン酸、（１０）ＣＯＸ−１阻害剤、例えば、アスピリン、ＮＣＸ−４０１６、リドグレル、Ｓ１８８８６、ピコタミド、ラマトロバン（ＴＸＡ２受容体アンタゴニストでもある）、ＳＣ−５６０、ＦＲ１２２０４７、モフェゾラク、Ｐ６、ＴＦＡＰ、イブプロフェン、及びナプロキセン（Ｃｏｘ−２阻害剤でもある）、（１１）ＣＯＸ−２阻害剤、例えば、トリフルサル（ＣＯＸ−１及びＰＤＥ阻害剤でもある）、エトリコキシブ、ロフェコキシブ、セレコキシブ、メロキシカム、ならびに（１２）ＰＩ３Ｋ阻害剤、例えば、ＡＺＤ６４８２が挙げられるがこれらに限定されない。
【０５５１】
凝集阻害剤の例としては、（１）ＧＰＩａ／ＩＩａ阻害剤、例えば、ＥＭＳ１６、（２）ＧＰＶＩ阻害剤、例えば、モノクローナル抗体及びｍＡｂ  １２Ａ５のＦａｂ断片、（３）ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ阻害剤、例えば、アブシキシマブ、エプチフィバチド、チロフィバン、（４）ＰＤＥ阻害剤、例えば、ジピリダモール（アデノシン再取り込み阻害剤でもある）、シロスタゾール（ｃＡＭＰの増加及びＰＫＡ活性化をもたらすＰＤＥ３阻害剤）、ならびに（５）ＡＤＰ受容体アンタゴニストが挙げられるがこれらに限定されない。他の血小板凝集阻害剤としては、アスピリン、クロピドログレル（Ｐｌａｖｉｘ（登録商標））、アスピリン／プラバスタチン、シロスタゾール、プラスグレル、アスピリン／ジピリダモール、チカグレロル、カングレロル、エリノグレル、ジピリダモール、及びチクロピジンが挙げられる。
【０５５２】
接着アンタゴニスト（フィブリノゲンに対する）の例としては、Ｃ１ｑＴＮＦ関連タンパク質−１、ＤＺ−６９７ｂ、ＲＧ１２９８６が挙げられるがこれらに限定されない。
【０５５３】
非血小板型抗凝固薬の例としては、ワルファリン、Ｘａ因子阻害剤、例えば、リバロキサバン、アピキサバン、エドキサバン、ベトリキサバン、ダレキサバン、オタミキサバン、トロンビン阻害剤、例えば、ビバリルジン、ヒルジン、ダビガトラン、レピルジン、デシルジン、アルガトロバン、メラガトラン、ダビガトラン、ＣＤＳＯ３、ＦＤＳＯ３、ＳＤＳＯ３、及び、Ｓｉｄｈｕらの論文によって報告された追加の硫酸ベンゾフランアロステリック阻害剤が挙げられるがこれらに限定されない。
【０５５４】
血小板算定または数を低減する薬剤の例としては、（１）ｃＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤（例えば、アナグレリド）、６，７−ジクロロ−１，５−ジヒドロイミダゾ−［２，１−ｂ］キナゾリン−２（３Ｈ）−オンまたは６，７−ジクロロ−１，２，３，５−テトラヒドロイミダゾ［２，１−ｂ］キナゾリン−２−オン（米国特許第３，９３２，４０７号、第４，１４６，７１８号、ＲＥ３１，６１７、Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ  １９９２  ７７：４０−３）、（２）血小板もしくは巨核細胞が特異的に発現する細胞表面受容体に対する抗体、例えば、糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体抗体、（３）ほとんどの化学療法抗がん剤、例えば、ブスルファン（Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．１９８６  ６２：２２９−３７）、ヒドロキシ尿素（Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  １９９５  ３３２：１１３２−６）、ヘプスルファン、リン３２（Ｂｒ  Ｊ  Ｒａｄｉｏｌ  １９９７  ７０：１１６９−７３）、ピポブロマン（Ｓｃａｎｄ  Ｊ．  Ｈａｅｍａｔｏｌ  １９８６  ３７：３０６−９）、シクロホスファミド（Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  １９８２  １１２：２２２−８）、ある特定のアルキル化剤及びある特定の代謝拮抗剤、（４）サイトカイン、成長因子、及びインターロイキン、例えば、アルファ−インターフェロン（Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  １９８７  ２５：２６６−７３）、ガンマ−インターフェロン、形質転換成長因子−ベータ、好中球活性化ペプチド−２及びその類似体（米国特許第５，４７２，９４４号）、マクロファージ炎症性タンパク質及びその類似体（米国特許第５，３０６，７０９号）、（５）血小板もしくは巨核細胞のいずれかが分泌する化合物、例えば、血小板第４因子（米国特許第５，１８５，３２３号）、形質転換成長因子−ベータ、巨核細胞が産生する１２〜１７ｋＤの糖タンパク質、トロンビン及びトロンボスポンジンならびにそのアミノ（１〜１７４アミノ酸）末端断片（Ｊ  Ｌａｂ  Ｃｌｉｎ  Ｍｅｄ  １９９７  １２９：２３１−８）、ならびに（６）抗ケロイド剤、例えば、トラニラスト（リザベン）（Ｊ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  １９９８  ２５：７０６−９）、フォルスコリン、及び脾臓抗成熟因子（米国特許第４，０８８，７５３号）を含めた他の薬剤が挙げられるがこれらに限定されない。
【０５５５】
抗血小板薬はまた、抗血栓薬、血栓溶解薬、直接トロンビン阻害薬、糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体阻害薬、細胞接着分子に結合し、白血球がかかる分子に付着する能力を阻害する薬剤、カルシウムチャネル遮断薬、ベータ−アドレナリン受容体遮断薬、シクロオキシゲナーゼ−２阻害薬、及びアンジオテンシン系阻害薬としても特徴づけられ得る。
【０５５６】
抗血栓薬は、複数の潜在的機序を介して血栓形成を防止する薬剤として定義され、それらとしては、血栓溶解薬、抗凝固薬、及び血小板機能の阻害薬が挙げられる。
【０５５７】
血栓溶解薬は、通常は酵素作用によるフィブリンの溶解を介して、血栓（例えば、血塊）を溶解する薬剤と定義される。血栓溶解薬の例としては、アンクロド、アニストレプラーゼ、乳酸ビソブリン、ブリノラーゼ、ハーゲマン因子（即ち、第ＸＩＩ因子）断片、モルシドミン、プラスミノーゲン活性化因子、例えば、ストレプトキナーゼ、組織プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）、及びウロキナーゼ、ならびにプラスミン及びプラスミノーゲンが挙げられるがこれらに限定されない。抗凝固薬にはまた、第Ｘａ因子、ＴＦＰＩ因子、第ＶＩＩａ因子、第ＩＸｃ因子、第Ｖａ因子、第ＶＩＩＩａ因子の阻害薬、ならびに他の凝固因子の阻害薬が含まれる。
【０５５８】
抗凝固薬は、血塊の形成に必須の因子の産生、沈着、開裂、及び／または活性化に悪影響を与えることによって凝固経路を阻害する薬剤である。抗凝固薬としては、ビタミンＫアンタゴニスト、例えば、クマリン及びクマリン誘導体（例えば、ワルファリンナトリウム）、グリコサアミノグリカン、例えば、未分画の形態及び低分子量の形態の両方のヘパリン、アルデパリンナトリウム、ビバリルジン、ブロミンジオン、クマリン、ダルテパリンナトリウム、デシルジン、ジクマロール、リアポラートナトリウム、メシル酸ナファモスタット、フェンプロクモン、スルファチド、及びチンザパリンナトリウムが挙げられるがこれらに限定されない。
【０５５９】
他の「抗凝固」及び／または「血栓溶解」薬としては、プラスミノーゲン、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、アニソイル化プラスミノーゲン−ストレプトキナーゼ活性化剤複合体、プロウロキナーゼ（Ｐｒｏ−ＵＫ）、ｒＴＰＡ（アルテプラーゼまたはアクチバーゼ、ｒは組み換えを意味する）、ｒＰｒｏ−ＵＫ、アボキナーゼ、エミナーゼ、ストレプターゼ、塩酸アナグレリド、ビバリルジン、ダルテパリンナトリウム、ダナパロイドナトリウム、塩酸ダゾキシベン、硫酸エフェガトラン、エノキサパリンナトリウム、イフェトロバン、イフェトロバンナトリウム、チンザパリンナトリウム、レタプラーゼ、トリフェナグレル、ワルファリン、デキストランが挙げられる。
【０５６０】
さらに他の抗凝固薬としては、アンクロド、抗凝固剤クエン酸デキストロース溶液、抗凝固剤クエン酸リン酸デキストロースアデニン溶液、抗凝固剤クエン酸リン酸デキストロース溶液、抗凝固剤ヘパリン溶液、抗凝固剤クエン酸ナトリウム溶液、アルデパリンナトリウム、ブロムインジオン、デシルジン、ジクマロール、ヘパリンカルシウム、ヘパリンナトリウム、リアポラートナトリウム、メシル酸ナファモスタット、フェンプロクモンが挙げられるがこれらに限定されない。
【０５６１】
血塊溶解剤としては、組織プラスミノーゲン活性化因子、ストレプトキナーゼ、及びニモジピンが挙げられるがこれらに限定されない。
【０５６２】
血小板機能阻害薬は、成熟血小板がそれらの正常な生理学的役割（すなわち、それらの正常機能）を果たす能力を損なう薬剤である。血小板は、通常、複数の生理学的過程、例えば、接着、例えば細胞実体及び非細胞実体に対するもの、凝集、例えば、血塊を形成する目的のもの、ならびに成長因子（例えば、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ））及び血小板粒子状成分等の因子の放出に関与する。血小板機能阻害剤の１つの下位カテゴリーは、血小板凝集の阻害剤であり、これは、血小板がそれら自体で、または他の細胞もしくは非細胞成分と物理的に会合する能力を低減または中断し、それにより、血小板が血栓を形成する能力をなくす化合物である。
【０５６３】
血小板機能の有用な阻害剤の例としては、アカデシン、アナグレリド、アニパミル、アルガトロバン、アスピリン、クロピドグレル、シクロオキシゲナーゼ阻害剤、例えば、非ステロイド系抗炎症薬及び合成化合物ＦＲ−１２２０４７、ダナパロイドナトリウム、塩酸ダゾキシベン、ジアデノシン５’，５’’’−Ｐ１，Ｐ４−四リン酸（Ａｐ４Ａ）類似体、ジフィブロチド、塩酸ジラゼプ、１，２−及び１，３−グリセリルジニトレート、ジピリダモール、ドーパミン及び３−メトキシチラミン、硫酸エフェガトラン、エノキサパリンナトリウム、グルカゴン、糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａアンタゴニスト、例えば、Ｒｏ−４３−８８５７及びＬ−７００，４６２、イフェトロバン、イフェトロバンナトリウム、イロプロスト、イソカルバサイクリンメチルエステル、イソソルビド−５−モノニトレート、イタジグレル、ケタンセリン及びＢＭ−１３．１７７、ラミフィバン、リファリジン、モルシドミン、ニフェジピン、オキサグレラート、ＰＧＥ、血小板活性化因子アンタゴニスト、例えば、レキシパファント、プロスタサイクリン（ＰＧＩ２）、ピラジン、ピリジノールカルバメート、ＲｅｏＰｒｏ（すなわち、アブシキシマブ）、スルフィンピラゾン、合成化合物ＢＮ−５０７２７、ＢＮ−５２０２１、ＣＶ−４１５１、Ｅ−５５１０、ＦＫ−４０９、ＧＵ−７、ＫＢ−２７９６、ＫＢＴ−３０２２、ＫＣ−４０４、ＫＦ−４９３９、ＯＰ−４１４８３、ＴＲＫ−１００、ＴＡ−３０９０、ＴＦＣ−６１２、及びＺＫ−３６３７４、２，４，５，７−テトラチアオクタン、２，４，５，７−テトラチアオクタン２，２−ジオキシド、２，４，５−トリチアヘキサン、テオフィリン、ペントキシフィリン、トロンボキサン及びトロンボキサンシンテターゼ阻害剤、例えば、ピコタミド及びスロトロバン、チクロピジン、チロフィバン、トラピジル及びチクロピジン、トリフェナグレル、トリリノレイン、３−置換５，６−ビス（４−メトキシフェニル）−１，２，４−トリアジン、及び糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａに対する抗体、ならびに米国特許第５，４４０，０２０号に開示のもの、ならびに抗セロトニン薬、クロピドグレル、スルフィンピラゾン、アスピリン、ジピリダモール、クロフィブラート、ピリジノールカルバメート、ＰＧＥ、グルカゴン、抗セロトニン薬、カフェイン、テオフィリン、ペントキシフェリン、チクロピジンが挙げられるがこれらに限定されない。
【０５６４】
「直接トロンビン阻害剤」としては、ヒルジン、ヒルゲン、ヒルログ、アルガトロバン、ＰＰＡＣＫ、トロンビンアプタマーが挙げられる。
【０５６５】
「糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体阻害剤」は、抗体及び非抗体の両方であり、ＲｅｏＰｒｏ（アブシキシマブ）、ラミフィバン、チロフィバンが含まれるがこれらに限定されない。
【０５６６】
「カルシウムチャネル遮断薬」は、様々な疾患の抑制において重要な治癒価値を有する化学的に多様なクラスの化合物である（Ｆｌｅｃｋｅｎｓｔｅｉｎ，Ｃｉｒ．Ｒｅｓ．ｖ．５２，（ｓｕｐｐｌ．１），ｐ．１３−１６（１９８３）、Ｆｌｅｃｋｅｎｓｔｅｉｎ，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｆａｃｔｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８３）；ＭｃＣａｌｌ，Ｄ．，Ｃｕｒｒ  Ｐｒａｃｔ  Ｃａｒｄｉｏｌ，ｖ．１０，ｐ．１−１１（１９８５））。カルシウムチャネル遮断薬は、細胞のカルシウムチャネルを調整することによって細胞内へのカルシウムの進入を妨害または減速する薬物の混成群である（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｎｉｎｅｔｅｅｎｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｔｏｎ，ＰＡ，ｐ．９６３（１９９５））。ほとんどの現在入手可能な本発明に照らして有用なカルシウムチャネル遮断薬は、薬物の３つの主要な化学基、すなわち、ジヒドロピリジン、例えば、ニフェジピン、フェニルアルキルアミン、例えば、ベラパミル、及びベンゾチアゼピン、例えば、ジルチアゼムのうちの１つに属する。本発明に照らして有用な他のカルシウムチャネル遮断薬としては、アムリノン、アムロジピン、ベンシクラン、フェロジピン、フェンジリン、フルナリジン、イスラジピン、ニカルジピン、ニモジピン、ペルヘキシレン、ガロパミル、チアパミル及びチアパミル類似体（例えば、１９９３ＲＯ−１１−２９３３）、フェニトイン、バルビツレート、ならびにペプチドダイノルフィン、オメガ−コノトキシン、及びオメガ−アガトキシン等、及び／またはそれらの医薬的に許容される塩が挙げられるがこれらに限定されない。
【０５６７】
「ベータ−アドレナリン受容体遮断薬」は、狭心症、高血圧、及び心不整脈におけるカテコールアミンの心臓血管への影響に拮抗する薬物のクラスである。ベータ−アドレナリン受容体遮断薬としては、アテノロール、アセブトロール、アルプレノロール、ベフノロール、ベタキソロール、ブニトロロール、カルテオロール、セリプロロール、ヘドロキサロール、インデノロール、ラベタロール、レボブノロール、メピンドロール、メチプラノール、メチンドール、メトプロロール、メトリゾラノロール、オクスプレノロール、ピンドロール、プロプラノロール、プラクトロール、プラクトロール、ソタノールナドロール、チプレノロール、トマロロール、チモロール、ブプラノロール、ペンブトロール、トリメプラノール、２−（３−（１，１−ジメチルエチル）−アミノ−２−ヒドロキシプロポキシ）−３−ピリジンカルボニトリルＨＣｌ、１−ブチルアミノ−３−（２，５−ジクロロフェノキシ）−２−プロパノール、１−イソプロピルアミノ−３−（４−（２−シクロプロピルメトキシエチル）フェノキシ）−２−プロパノール、３−イソプロピルアミノ−１−（７−メチルインダン−４−イルオキシ）−２−ブタノール、２−（３−ｔ−ブチルアミノ−２−ヒドロキシ−プロピルチオ）−４−（５−カルバモイル−２−チエニル）チアゾール、７−（２−ヒドロキシ−３−ｔ−ブチルアミンプロポキシ）フタリドが挙げられるがこれらに限定されない。上記に示した化合物は、異性体混合物として、またはそれらのそれぞれの左旋性もしくは右旋性型で使用することができる。
【０５６８】
シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）は、最近同定されたシクロオキシゲナーゼの型である。「シクロオキシゲナーゼ」は、アラキドン酸から様々なプロスタグランジン及びトロンボキサンを産生するほとんどの組織に存在する酵素複合体である。非ステロイド系抗炎症薬は、それらの抗炎症性、鎮痛及び解熱作用のほとんどを発揮し、シクロオキシゲナーゼ（プロスタグランジンＧ／Ｈシンターゼ及び／またはプロスタグランジンエンドペルオキシドシンターゼとしても知られる）の阻害を介して、ホルモンが誘発する子宮収縮及びある特定のタイプのがんの増殖を阻害する。当初は、シクロオキシゲナーゼの１つの型のみ、すなわち、「構成酵素」またはシクロオキシゲナーゼ−１（ＣＯＸ−１）が知られていた。それは、最初はウシ精嚢で識別された。
【０５６９】
シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）は、最初はニワトリ、マウス、及びヒト源からクローニングされ、配列決定され、特徴づけられた（例えば、米国特許第５，５４３，２９７号、１９９６年８月６日発行、Ｃｒｏｍｌｉｓｈら、Ｍｅｒｃｋ  Ｆｒｏｓｓｔ  Ｃａｎａｄａ，Ｉｎｃ．，Ｋｉｒｋｌａｎｄ，ＣＡ，発明の名称：“Ｈｕｍａｎ  ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ−２  ｃＤＮＡ  ａｎｄ  ａｓｓａｙｓ  ｆｏｒ  ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ  ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ−２  ａｃｔｉｖｉｔｙ”参照）。
【０５７０】
複数の選択的「ＣＯＸ−２阻害剤」が当技術分野で知られている。これらとしては、すべてＭｅｒｃｋ  Ｆｒｏｓｓｔ  Ｃａｎａｄａ，  Ｉｎｃ．（Ｋｉｒｋｌａｎｄ，ＣＡ）に譲渡された、米国特許第５，４７４，９９５号“Ｐｈｅｎｙｌ  ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｓ  ａｓ  ｃｏｘ−２  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ”、米国特許第５，５２１，２１３号“Ｄｉａｒｙｌ  ｂｉｃｙｃｌｉｃ  ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｓ  ａｓ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ−２”、米国特許第５，５３６，７５２号“Ｐｈｅｎｙｌ  ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｓ  ａｓ  ＣＯＸ−２  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ”、米国特許第５，５５０，１４２号“Ｐｈｅｎｙｌ  ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｓ  ａｓ  ＣＯＸ−２  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ”、米国特許第５，５５２，４２２号“Ａｒｙｌ  ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ  ５，５  ｆｕｓｅｄ  ａｒｏｍａｔｉｃ  ｎｉｔｒｏｇｅｎ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ａｓ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ａｇｅｎｔｓ”、米国特許第５，６０４，２５３号“Ｎ−ｂｅｎｚｙｌｉｎｄｏｌ−３−ｙｌ  ｐｒｏｐａｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ａｓ  ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ”、米国特許第５，６０４，２６０号“５−ｍｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎａｍｉｄｏ−１−ｉｎｄａｎｏｎｅｓ  ａｓ  ａｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ−２”、米国特許第５，６３９，７８０号“Ｎ−ｂｅｎｚｙｌ  ｉｎｄｏｌ−３−ｙｌ  ｂｕｔａｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ａｓ  ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ”、米国特許第５，６７７，３１８号“Ｄｉｐｈｅｎｙｌ−１，２−３−ｔｈｉａｄｉａｚｏｌｅｓ  ａｓ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ａｇｅｎｔｓ”、米国特許第５，６９１，３７４号“Ｄｉａｒｙｌ−５−ｏｘｙｇｅｎａｔｅｄ−２−（５Ｈ）−ｆｕｒａｎｏｎｅｓ  ａｓ  ＣＯＸ−２  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ”、米国特許第５，６９８，５８４号“３，４−ｄｉａｒｙｌ−２−ｈｙｄｒｏｘｙ−２，５−ｄｉｈｙｄｒｏｆｕｒａｎｓ  ａｓ  ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ｔｏ  ＣＯＸ−２  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ”、米国特許第５，７１０，１４０号“Ｐｈｅｎｙｌ  ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｓ  ａｓ  ＣＯＸ−２  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ”、米国特許第５，７３３，９０９号“Ｄｉｐｈｅｎｙｌ  ｓｔｉｌｂｅｎｅｓ  ａｓ  ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ｔｏ  ＣＯＸ−２  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ”、米国特許第５，７８９，４１３号“Ａｌｋｙｌａｔｅｄ  ｓｔｙｒｅｎｅｓ  ａｓ  ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ｔｏ  ＣＯＸ−２  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ”、米国特許第５，８１７，７００号“Ｂｉｓａｒｙｌ  ｃｙｃｌｏｂｕｔｅｎｅｓ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ａｓ  ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ”、米国特許第５，８４９，９４３号“Ｓｔｉｌｂｅｎｅ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ｕｓｅｆｕｌ  ａｓ  ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ−２  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ”、米国特許第５，８６１，４１９号“Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ  ｐｙｒｉｄｉｎｅｓ  ａｓ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ−２  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ”、米国特許第５，９２２，７４２号“Ｐｙｒｉｄｉｎｙｌ−２−ｃｙｃｌｏｐｅｎｔｅｎ−１−ｏｎｅｓ  ａｓ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ−２  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ”、米国特許第５，９２５，６３１号“Ａｌｋｙｌａｔｅｄ  ｓｔｙｒｅｎｅｓ  ａｓ  ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ｔｏ  ＣＯＸ−２  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ”に記載されるＣＯＸ−２阻害剤が挙げられるがこれらに限定されない。さらなるＣＯＸ−２阻害剤はまた、米国特許第５，６４３，９３３号、Ｇ．Ｄ．Ｓｅａｒｌｅ＆Ｃｏ．（Ｓｋｏｋｉｅ，  ＩＬ）に譲渡された、発明の名称“Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ  ｓｕｌｆｏｎｙｌｐｈｅｎｙｌｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｓ  ａｓ  ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ−２  ａｎｄ  ５−ｌｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ”にも記載されている。アスピリンは、ＣＯＸ−２阻害剤の一例である。
【０５７１】
上記で示した複数のＣＯＸ−２阻害剤は、選択的ＣＯＸ−２阻害剤のプロドラッグであり、インビボでの活性かつ選択的なＣＯＸ−２阻害剤への変換により、それらの作用を発揮する。上記で示したＣＯＸ−２阻害剤のプロドラッグから形成される活性かつ選択的なＣＯＸ−２阻害剤は、１９９５年１月５日公開のＷＯ９５／００５０１、１９９５年７月１３日公開のＷＯ９５／１８７９９、及び１９９５年１２月１２日に発行された米国特許第５，４７４，９９５号に詳細に記載されている。米国特許第５，５４３，２９７号、発明の名称：“Ｈｕｍａｎ  ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ−２  ｃＤＮＡ  ａｎｄ  ａｓｓａｙｓ  ｆｏｒ  ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ  ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ−２  ａｃｔｉｖｉｔｙ”の教示を前提とすると、当業者には、薬剤が選択的ＣＯＸ−２阻害剤であるか、ＣＯＸ−２阻害剤の前駆体、ひいては本発明の一部であるかを判断することが可能である。
【０５７２】
非ステロイド系抗炎症薬としては、ナプロキセンナトリウム、ジクロフェナク、スリンダク、オキサプロジン、ジフルニサル、アスピリン、ピロキシカム、インドメタシン、エトドラク、イブプロフェン、フェノプロフェン、ケトプロフェン、メフェナム酸、ナブメトン、トルメチンナトリウム、及びケトロラクトロメタミンが挙げられるがこれらに限定されない。
【０５７３】
いくつかの実施形態では、該第二の薬剤は、ＬＮＰによる天然のＩｇＭ、ＩｇＧの産生、及び／またはＢ１ａ及び／またはＢ１ｂ細胞の活性化を阻害する薬剤であり得る。かかる薬剤は、Ｂ１ａ細胞（例えば、ＣＤ３６及びＣ５ａ）またはＢ１ｂ細胞の表面受容体のアンタゴニスト、例えば、該表面受容体に結合し、その同族リガンド（例えば、ある特定のＬＮＰにおけるホスファチジルコリン等の脂質成分）に対するその結合を妨害する抗体または小分子阻害剤でよい。
【０５７４】
他の実施形態では、該第二の薬剤は、ＬＮＰによる血小板及び／または補体系（古典経路または第二経路）の活性化を阻害する薬剤でよい。かかる薬剤は、ＣＤ３６アンタゴニスト、ＴＬＲアンタゴニスト、または該補体カスケードにおける任意の成分のアンタゴニストでよい。かかるアンタゴニストは、当該標的の１つに対して特異的なアンタゴニスト抗体でよい。いくつかの例では、該アンタゴニストは、補体系の１つ以上のセリンプロテアーゼ成分を標的とするプロテアーゼ阻害剤でよい。他のＣＤ３６アンタゴニストとしては、サルビアノール酸もしくはその代謝産物（例えば、ＲＡ及びＤＳＳ）、３−シンナモイルインドール、１３−ペンチルベルベリン、ヘキサレリン、またはＤＨＡ等のある特定の脂肪酸が挙げられるがこれらに限定されない。
【０５７５】
本開示は、例えば、ＭＣ３等のカチオン性脂質、ＤＳＰＣもしくはＤＯＰＥ等のヘルパー脂質、コレステロール等の構造脂質、及びＤＭＧ−ＰＥＧ等のメトキシＰＥＧ化脂質を含むものを含め、かかるメトキシ−ＰＥＧ化脂質が、１．５％等の０．５％超のモルパーセンテージで使用される場合を含めた、本明細書に提供するＬＮＰのいずれかとの１つ以上の前述の第二の薬剤の使用を企図すると理解されたい。従って、本開示は、さもなければ血小板応答を引き起こすＬＮＰが、１つ以上の抗血小板性の第二の薬剤を含む第二の薬剤とともに使用され得ることを企図する。かかる組合せは、インビボでのＬＮＰの使用に関連したＡＢＣの頻度及び／または重症度ならびに毒性を低減することを意図する。
【０５７６】
また、ｍＲＮＡを封入するＬＮＰに関連したＡＢＣ及び用量制限毒性を含めた薬物反応の低減方法を本明細書に提供する。
【０５７７】
ＡＢＣは、閾値現象であり、これは、臨床的に有意なＡＢＣ（実質的）を誘導するためには、ＬＮＰ等の薬剤の投与量が閾値に達する必要があることを意味する。従って、閾値未満の投与量の使用が、ＡＢＣを減少させること、またはその発生を防止することができることを企図する。代替的に、本明細書に記載のＬＮＰは、Ｂ１ａ及び／またはＢ１ｂ及び／または天然のＩｇＭ刺激活性を低下させ、ひいては投薬閾値を高めることができる。
【０５７８】
いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡを封入する脂質ＬＮＰのＡＢＣを低減する方法は、少なくとも（ｉ）それを必要とする対象に対して該ＬＮＰの初回投与を実施すること、及び（ｉｉ）該対象に対して、該ＬＮＰの第二回投与を実施することによって行うことができ、この場合、該初回投与、該第二回投与、またはその両方は、約０．３ｍｇ／ｋｇ以下である。例えば、該初回投与、該第二回投与、もしくはその両方は、０．２ｍｇ／ｋｇまたは０．１ｍｇ／ｋｇ以下の場合がある。いくつかの例では、該初回投与、該第二回投与、またはその両方は、約０．１〜０．３ｍｇ／ｋｇの範囲の場合がある。該初回投与と第二回投与の間隔は、２週間未満、例えば１０日未満、１週間未満、４日未満、または２日未満の場合がある。後続の投与が必要な場合、本明細書に記載の同じ低用量が使用され得る。２回の連続した投与の間隔は、２週間未満、例えば１０日未満、１週間未満、４日未満、または２日未満でよい。
【０５７９】
用量制限毒性、例えば、ＣＡＲＰＡは、用量もしくは治療レベルの増加を妨げるのに十分重篤な薬物または他の治療の副作用を指す。臨床的に有意な用量制限毒性を引き起こすための閾値未満の血清ＬＮＰ濃度を維持することができる治療計画を用いることで、かかる毒性を低減し、またはその発生を防止することが企図される。
【０５８０】
従って、ＬＮＰ関連の毒性を促進することなく、対象に対してｍＲＮＡを封入する脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を送達する方法を本明細書に提供する。かかる方法は、ある期間に対象に対してある量のＬＮＰを投与することを含み、当該投与期間中の該対象における該ＬＮＰの血清濃度は、ＬＮＰ関連の毒性を誘導するには十分でない。該ＬＮＰ関連の毒性は、凝血障害、播種性血管内凝固症候群（ＤＩＣ）、血管内血栓、活性化関連仮性アレルギー（ＣＡＲＰＡ）、急性期反応（ＡＰＲ）、またはそれらの組合せであり得る。
【０５８１】
該ＬＮＰの血清濃度を閾値未満に維持するように該ｍＲＮＡ封入ＬＮＰの適切な用量及び該投与（例えば、注入）期間を選択すること、、当業者の知識の範囲内である。例えば、大量投与が、目的の治療効果に達するために必要な場合、より長い投与期間を使用することができる。任意の用量制限毒性の発生は、医療行為における従来の方法で監視することができる。用量及び投与期間は、該毒性に関係する任意の症状が見られた際に調整することができる。いくつかの例では、該ＬＮＰの用量は、１ｍｇ／ｋｇ未満、例えば、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、または０．１ｍｇ／ｋｇでよい。他の例では、該ＬＮＰの用量は、０．５〜１ｍｇ／ｋｇ（例えば０．３〜０．５ｍｇ／ｋｇ）の範囲でよい。該投与期間は、３０分〜３時間の範囲、例えば、１〜２時間でよい。いくつかの例では、該投与期間は、１時間以上、例えば、１．５時間以上、２時間以上、２．５時間以上、または３時間以上である。
【０５８２】
本明細書に記載の方法のいずれかにおいて、ＬＮＰに封入されるｍＲＮＡは、治療用ｍＲＮＡの場合があり、これは治療用タンパク質をコードし得る。ＬＮＰに封入される該ｍＲＮＡはまた、ワクチン抗原をコードするｍＲＮＡでもよい。いくつかの例では、ＬＮＰに封入されるｍＲＮＡは、複数のタンパク質をコードしてもよい。いくつかの実施形態では、本方法に用いられるＬＮＰは、本明細書に記載のＬＮＰのいずれかであり得る。
【０５８３】
さらに詳述することなく、当業者には、上記の説明を基に、本発明を最大限に利用することができると考えられる。以下の具体的な実施形態は、従って、単に例示であり、いかなる方法によっても本開示の残部を限定するものではないと解釈されたい。本明細書に引用するすべての刊行物は、その目的または本明細書に参照する主題のため、参照することにより組み込まれる。
【実施例】
【０５８４】
例示的なアッセイ方法：
１．フローサイトメトリーによるビーズアッセイ：
ストレプトアビジンＣＭＬラテックスビーズ（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ）を、製造業者の推奨通りにビオチン化ＤＳＰＣ（６ｍｍビーズ）またはビオチン化ＰＥＧ（１０ｍｍビーズ）と結合させた。結合させたビーズ（ＤＳＰＣ結合及びＰＥＧ結合）を、異なるＬＮＰを注入したマウスの希釈血清とともに室温で３０分間インキュベートした。洗浄後、ビーズを次にラット抗マウスＩｇＭ  ＩｇＧ（ＢＤ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）とともに室温で１５分間インキュベートした。洗浄後、細胞をＰＢＳ＋２％ＢＳＡに再懸濁し、ＢＤ  Ｆｏｒｔｅｓｓａ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）にてフローサイトメトリーにより分析した。抗ＬＮＰ  ＩｇＭのタイターは、抗ＰＥＧ  ＩｇＭモノクローナル抗体で得られた標準曲線を基に算出した。分析は、ＦｌｏｗＪｏ及びＰｒｉｓｍソフトウェアを用いて行った。
【０５８５】
２．ＬＮＰまたはＬＮＰ成分によるインビトロ血小板活性化アッセイ
血液試料を、１ｍＬの抗凝固剤クエン酸デキストロース（ＢＤ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を含む６ｍＬのＢＤバキュテイナに採取し、２００×ｇで２２℃にて２０分間、加速なしかつブレーキなしで遠心分離した。多血小板血漿（ＰＲＰ）の上部透明層を１５ｍＬのコニカルチューブに移し、ＰＢＳ＋２％ウシ胎児血清中で洗浄した。カウント後、１０５個の細胞を、室温にて、異なる時点について、異なるＬＮＰもしくはＬＰＳまたは異なるＬＮＰ成分とともにインキュベートし、蛍光標識した抗ＣＤ４１、ＣＤ３１、及びＣＤ６２Ｐで、氷上にて２０分間染色した。洗浄後、細胞を固定し、ＢＤ  Ｆｏｒｔｅｓｓａ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）にてフローサイトメトリーにより分析した。分析は、ＦｌｏｗＪｏ及びＰｒｉｓｍソフトウェアを用いて行った。
【０５８６】
３．マクロファージ、Ｂ細胞によるインビトロ血小板凝集
血液試料を、１ｍＬの抗凝固剤クエン酸デキストロース（ＢＤ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を含む６ｍＬのＢＤバキュテイナに採取した。１０〜２５ｍＬの血液を、室温にて、異なる時点について、異なるＬＮＰまたはＬＰＳとともにインキュベートし、蛍光標識した抗ＣＤ４１、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１９、及びＦ４／８０で、氷上にて２０分間染色した。洗浄後、細胞を固定し、ＢＤ  Ｆｏｒｔｅｓｓａ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）にてフローサイトメトリーにより分析した。分析は、ＦｌｏｗＪｏ及びＰｒｉｓｍソフトウェアを用いて行った。
【０５８７】
４．インビボ血小板活性化アッセイ
マウスに、異なるＬＮＰを静注した。異なる時点の後、血液試料を、１ｍＬの抗凝固剤クエン酸デキストロース（ＢＤ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を含む６ｍＬのＢＤバキュテイナに採取し、２００×ｇで２２℃にて２０分間、加速なしかつブレーキなしで遠心分離した。多血小板血漿（ＰＲＰ）の上部透明層を１５ｍＬのコニカルチューブに移し、ＰＢＳ＋２％ウシ胎児血清中で洗浄した。カウント後、１０５個の細胞を、蛍光標識した抗ＣＤ４１、ＣＤ３１、及びＣＤ６２Ｐで、氷上にて２０分間染色した。洗浄後、細胞を固定し、ＢＤ  Ｆｏｒｔｅｓｓａ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）にてフローサイトメトリーにより分析した。分析は、ＦｌｏｗＪｏ及びＰｒｉｓｍソフトウェアを用いて行った。
【０５８８】
５．マクロファージ、Ｂ細胞によるインビボ血小板凝集
マウスに、異なるＬＮＰを静注した。異なる時点の後、血液試料を、１ｍＬの抗凝固剤クエン酸デキストロース（ＢＤ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を含む６ｍＬのＢＤバキュテイナに採取した。１０〜２５ｍＬの血液を、蛍光標識した抗ＣＤ４１、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１９、及びＦ４／８０で、氷上にて２０分間染色した。洗浄後、細胞を固定し、ＢＤ  Ｆｏｒｔｅｓｓａ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）にてフローサイトメトリーにより分析した。分析は、ＦｌｏｗＪｏ及びＰｒｉｓｍソフトウェアを用いて行った。
【０５８９】
６．インビボ脾臓Ｂ細胞活性化アッセイ：
蛍光ＬＮＰを注入した動物の脾臓を、生理食塩水緩衝液に採取した。脾細胞の細胞懸濁液は、この脾臓を７０μＭメッシュの細胞ストレーナー（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を通して軽く圧迫することによって調製した。洗浄後、赤血球を溶解し、細胞をＰＢＳ＋２％ウシ胎児血清に再懸濁した。洗浄及びカウント後、１０５個の細胞を、蛍光標識した抗ＣＤ１９、ＣＤ８６、及びＣＤ６９で、氷上にて２０分間染色した。洗浄後、細胞を固定し、ＢＤ  Ｆｏｒｔｅｓｓａ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）にてフローサイトメトリーにより分析した。分析は、ＦｌｏｗＪｏ及びＰｒｉｓｍソフトウェアを用いて行った。
【０５９０】
７．インビボにおけるＬＮＰのＢ細胞との相互作用：
蛍光ＬＮＰを注入した動物の脾臓を、生理食塩水緩衝液に採取した。脾細胞の細胞懸濁液は、この脾臓を７０μＭメッシュの細胞ストレーナー（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を通して軽く圧迫することによって調製した。洗浄後、赤血球を溶解し、細胞をＰＢＳ＋２％ウシ胎児血清に再懸濁した。洗浄及びカウント後、１０５個の細胞を、蛍光標識した抗ＣＤ１９及びＣＤ５で、氷上にて２０分間染色した。洗浄後、細胞を固定し、ＢＤ  Ｆｏｒｔｅｓｓａ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）にてフローサイトメトリーにより分析した。分析は、ＦｌｏｗＪｏ及びＰｒｉｓｍソフトウェアを用いて行った。
【０５９１】
８．インビトロ脾臓Ｂ細胞活性化アッセイ：
蛍光ＬＮＰを注入した動物の脾臓を、生理食塩水緩衝液に採取した。脾細胞の細胞懸濁液は、この脾臓を７０μＭメッシュの細胞ストレーナー（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を通して軽く圧迫することによって調製した。洗浄後、赤血球を溶解し、細胞をＰＢＳ＋２％ウシ胎児血清に再懸濁した。カウント後、１０５個の細胞を、表示した時点について、３７Ｃにて異なるＬＮＰまたは媒体とともにインキュベートした。インキュベート後、細胞を、蛍光標識した抗ＣＤ１９、ＣＤ８６、及びＣＤ６９で、氷上にて２０分間染色した。洗浄後、細胞を固定し、ＢＤ  Ｆｏｒｔｅｓｓａ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）にてフローサイトメトリーにより分析した。分析は、ＦｌｏｗＪｏ及びＰｒｉｓｍソフトウェアを用いて行った。
【０５９２】
９．インビトロにおけるＬＮＰのＢ細胞との相互作用：
蛍光ＬＮＰを注入した動物の脾臓を、生理食塩水緩衝液に採取した。脾細胞の細胞懸濁液は、この脾臓を７０μＭメッシュの細胞ストレーナー（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を通して軽く圧迫することによって調製した。洗浄後、赤血球を溶解し、細胞をＰＢＳ＋２％ウシ胎児血清に再懸濁した。カウント後、１０５個の細胞を、表示した時点について、３７℃にて異なるＬＮＰまたは媒体とともにインキュベートした。インキュベート後、細胞を、蛍光標識した抗ＣＤ１９及びＣＤ５で、氷上にて２０分間染色した。洗浄後、細胞を固定し、ＢＤ  Ｆｏｒｔｅｓｓａ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）にてフローサイトメトリーにより分析した。分析は、ＦｌｏｗＪｏ及びＰｒｉｓｍソフトウェアを用いて行った。
【０５９３】
１０．ヒトＢ細胞活性化アッセイ：
ヒトＰＢＭＣは、フィコール勾配分離後に単離した。カウント後、１０５個の細胞を、表示した時点について、３７Ｃにて異なるＬＮＰまたは媒体とともにインキュベートした。インキュベート後、細胞を洗浄し、蛍光標識した抗ＣＤ１９、ＣＤ８６、及びＣＤ６９で、氷上にて２０分間染色した。洗浄後、細胞を固定し、ＢＤ  Ｆｏｒｔｅｓｓａ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）にてフローサイトメトリーにより分析した。分析は、ＦｌｏｗＪｏ及びＰｒｉｓｍソフトウェアを用いて行った。
【０５９４】
抗ＰＥＧ  ＩｇＭ：図面のいくつかにおいて、抗ＰＥＧ  ＩｇＭという用語は、概してＩｇＭを指すために用いられる。ＩｇＭが、ＬＮＰの送達後、９６時間より速い時点で検出される場合、このＩｇＭは天然のＩｇＭである。ＩｇＭが９６時間後に測定される場合、このＩｇＭは抗ＰＥＧ  ＩｇＭ及び／または天然のＩｇＭであり得る。天然のＩｇＭは、ＰＥＧではなくホスホコリンモチーフに結合する。
【０５９５】
実施例１．
２×１０５個の無菌未分画脾細胞を、ＰＥ＋またはＰＥ−ＬＮＰ  ＰＥ−ローダミン配合ＥＧＦＰ  ｍＲＮＡ２００ｎｇとともにインキュベートした。ＬＮＰは、ＭＣ３、ＤＭＧ−ＰＥＧ（１．５％）、ＤＳＰＣ及びコレステロール、ＥＧＦＰを発現するｍＲＮＡ、及びＬＮＰの存在を可視化するためのＰＥを含有した。２、４、６、２４、４８、または１２０時間後、細胞をＣＤ３及びＣＤ１９について染色し、ＰＥ取り込み及びＥＧＦＰ発現をフローサイトメトリーで分析した。並行して、１０５個のＨｅＬａ細胞を、ＬＮＰ  ＰＥ−ローダミン配合ＥＧＦＰ  ｍＲＮＡ１００ｎｇとともにインキュベートし、ＥＧＦＰ発現をＩｎｃｕＣｙｔｅ技術による顕微鏡法で観察した。ＰＥ＝フィコエリトリンは、５６２ｎｍで蛍光を発する。ＰＥ蛍光は、ＬＮＰの存在を示す。高感度緑色蛍光タンパク質（ＥＧＦＰ）は、翻訳後、最大発光波長５０９ｎｍを有する。ＥＧＦＰ蛍光は、このＬＮＰのカーゴが翻訳されたことを示す。
【０５９６】
図１に示す通り、ＬＮＰは、エキソビボの培養条件下で、Ｔ細胞（ＣＤ３＋細胞）ではなく主にＢ細胞（ＣＤ１９＋細胞）と会合し、またはこれに取り込まれる。予想通り、ＰＥを欠くＬＮＰまたは媒体単独とインキュベートした脾細胞は、ＰＥ−ローダミン蛍光を示さない。
【０５９７】
ＣＤ３＋Ｔ細胞もしくはＣＤ１９＋Ｂ細胞によるＬＮＰの会合または取り込みの経時変化をそれぞれ図２Ａ及び２Ｂに示す。ＣＤ１９＋Ｂ細胞は、エキソビボ培養インキュベーションで急速に、かつ、ＣＤ３＋Ｔ細胞よりはるかに多くＬＮＰと会合及び／またはこれを取り込む。ＣＤ１９＋Ｂ細胞の約２０％が、約４８時間のインキュベーションまでＰＥに対してポジティブに染色される。ＣＤ３＋Ｔ細胞の約５％のみ、ひいてはインキュベーションから４８時間後のみにＰＥで染色される。従って、Ｂ細胞は、Ｔ細胞よりはるかに多くかつより速くＬＮＰと会合及び／またはこれを取り込むと思われる。
【０５９８】
しかしながら、ＣＤ１９＋Ｂ細胞は、図３に示す通り、ＬＮＰのｍＲＮＡカーゴを発現しない。ＣＤ１９＋Ｂ細胞からはＥＧＦＰの蛍光が認められない。試験時間は、ＣＤ１９＋による最大のＬＮＰの会合及び／または取り込みが観察された期間に相当する（すなわち、４８時間を含めて４８時間まで）。従って、Ｂ細胞は、ＬＮＰと会合及び／またはこれを取り込むが、ＬＮＰのｍＲＮＡカーゴを発現しないと思われる。
【０５９９】
これらの実験におけるカーゴＥＧＦＰ  ｍＲＮＡの保存性を評価するため、対照実験を行い、ＨｅＬａ細胞を、いずれもＥＧＦＰ  ｍＲＮＡを含むＰＥ＋及びＰＥ−ＬＮＰとともにインキュベートし、ＰＥ及びＥＧＦＰの蛍光を調べた。画像はＩｎｃｕＣｙｔｅを用いて得た。予想通り、ＰＥ＋ＬＮＰとともにインキュベートした細胞は赤色蛍光を示した一方、ＰＥ−ＬＮＰとともにインキュベートした細胞はこれを示さなかった。両細胞集団は、しかしながら、緑色の蛍光を発し、両集団においてこのＬＮＰ  ｍＲＮＡカーゴが発現されたことを示した。
【０６００】
実施例２．
別の実験では、ＬＮＰの更新及びｍＲＮＡカーゴの発現に対する脾臓及び脾細胞集団の影響を分析した。ＣＤ−１マウスの脾臓を摘出し、その後ＬＮＰを静注（ｉ．ｖ．）した。このＬＮＰは、ｈＥＰＯ  ｍＲＮＡカーゴを有し、ＭＣ３、ＤＭＧ−ＰＥＧ（１．５％）、ＤＳＰＣ、及びコレステロールを含有した。図４Ａに示す通り、血中ｈＥＰＯタンパク質濃度は、ＬＮＰの初回、第二回、及び第三回投与後に測定した。非脾臓摘出及び脾臓摘出マウスの両方において、ｈＥＰＯの濃度は連続的な投与につれて低下した。このデータは、血中クリアランス促進現象とよく似ている。
【０６０１】
図４Ｂに示す通り、これらのマウスにおいて、ＬＮＰの初回及び第二回投与後の抗ＰＥＧ  ＩｇＭ抗体の濃度も測定した。抗ＰＥＧ  ＩｇＭの濃度は、初回及び第二回投与の間で減少したが、非脾臓摘出マウスにおいてのみであった。脾臓摘出マウスではその一方、両時点で抗ＥＰＧ  ＩｇＭの濃度が低く、第二回投与後にそのようなＩｇＭ濃度の低下は見られなかった。
【０６０２】
実施例３．
２×１０５個のフィコール精製末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をＬＮＰ  ＰＥ−ローダミンを配合したＥＧＦＰ  ｍＲＮＡ２００ｎｇとともにインキュベートした。２、４、６、２４時間後、細胞をＣＤ３及びＣＤ１９について染色し、ＰＥ取り込み及びＥＧＦＰ発現をフローサイトメトリーで分析した。このＬＮＰは、ＭＣ３、ＤＭＧ−ＰＥＧ（１．５％）、ＤＳＰＣ、及びコレステロールを含有した。
【０６０３】
図５に示す通り、循環ＣＤ１９＋Ｂ細胞によるＰＥ＋ＬＮＰの取り込みのレベルの上昇は、２〜２４時間のインキュベーション後に観察された。予想通り、ＰＥ−ＬＮＰまたは媒体単独とインキュベートした細胞は、ＰＥ蛍光を示さなかった。経時変化を図６Ａに示す。これは、ＬＮＰの会合及び／または取り込みが、２時間から２４時間まで徐々に増加したことを示す。循環Ｂ細胞によるＬＮＰの取り込みは、脾臓Ｂ細胞で認められるものと同様である。図６Ｂは、脾臓Ｂ細胞と同様、循環ＣＤ１９＋ＢにおいてＥＧＦＰ発現が生じないことを示す。
【０６０４】
実施例４．
２×１０５個の脾細胞またはＰＢＭＣを、ＬＮＰを含むＰＥ−ローダミンまたはＬＮＰを欠くＰＥ−ローダミン（非ＰＥ−ローダミン）を配合したＥＧＦＰ  ｍＲＮＡ２００ｎｇとともにインキュベートした。２４時間後、細胞をＣＤ３、ＣＤ１９、及びＣＤ８６について染色し、ＰＥ取り込み及びＣＤ８６の上方制御をフローサイトメトリーで分析した。ＣＤ８６発現は、ＰＥ＋ＬＮＰ及びＰＥ−ＬＮＰとともにインキュベートしたＢ細胞間、ならびにＰＥ＋ＬＮＰを取り込んだＢ細胞及びＰＥ＋ＬＮＰを取り込まなかったＢ細胞の間で比較した。細胞培養上清へのＩＬ−６及びＴＮＦ−アルファの分泌は、２４時間の培養後、ＥＬＩＳＡで測定した。
【０６０５】
ＬＮＰを取り込む脾臓及び循環Ｂ細胞は、ＣＤ８６の上方制御で測定される通りに活性化される。図７は、ＰＥ＋またはＰＥ−ＬＮＰのいずれかとのインキュベーション後に脾臓及び循環Ｂ細胞が活性化されることを示す。図８は、同様に、ＣＤ８６発現の増加が、脾臓及び循環Ｂ細胞によるＬＮＰの会合または取り込みと相関することを示す。図９は、ＬＮＰを取り込む脾臓Ｂ細胞が、ＬＮＰの用量依存的に活性化されることを示す。活性化は一過性の現象であり、２４時間後に減少し始める。ＰＥ＋またはＰＥ−ＬＮＰとともに２４時間インキュベートしたＢ細胞は、炎症性サイトカインであるＩＬ−６及びＴＮＦ−アルファの分泌レベルが上昇する（図１０）。
【０６０６】
実施例５．
２×１０５個の脾細胞をＰＥ＋ＬＮＰとともにインキュベートした。４及び２４時間後、細胞をＣＤ３、ＣＤ１９、及びＣＤ８６について染色し、ＰＥ取り込み及びＣＤ８６の上方制御をフローサイトメトリーで分析した。ＩＬ−６及びＴＮＦ−アルファの細胞培養上清への分泌は、２４時間の培養後、ＥＬＩＳＡで測定した。
【０６０７】
脾臓Ｂ細胞は、空のＰＥ＋ＬＮＰを４時間（図１１Ｂ）及び２４時間（図１１Ａ及び１１Ｂ）で取り込む。脾臓Ｂ細胞による空のＰＥ＋ＬＮＰの取り込みは、ＥＧＦＰ  ｍＲＮＡカーゴを有するＰＥ＋ＬＮＰで認められるものと同様である。空のＰＥ＋ＬＮＰは、ＣＤ８６発現の上昇から明らかなように、Ｂ細胞を活性化することができる。脾臓Ｂ細胞は、図１２Ａに示す通り、空のＰＥ＋ＬＮＰによって用量依存的に活性化される。同様に、空のＰＥ＋ＬＮＰは、図１２Ｂに示す通り、脾臓Ｂ細胞からのＩＬ−６及びＴＮＦ−アルファの分泌を誘導することが可能であった。
【０６０８】
実施例６．
野生型（ＷＴ）、及びＡｐｏＥ−／−またはＬＤＬ−Ｒ−／−ノックアウトマウス由来の２×１０５個の脾細胞を、ＰＥ＋またはＰＥ−ＬＮＰを配合したＥＧＦＰ  ｍＲＮＡ２００ｎｇとともにインキュベートした。２４時間後、細胞をＣＤ３、ＣＤ１９について染色し、ＰＥ取り込みをフローサイトメトリーで分析した。ＩＬ−１アルファ、ＫＣ−ＧＲＯ、及びＴＮＦ−アルファの細胞培養上清への分泌は、ＥＬＩＳＡで測定した。
【０６０９】
図１３Ａ〜１３Ｃに示す通り、２４時間でのＬＮＰの取り込みは、ＡｐｏＥがない場合またはＬＤＬ受容体がない場合に一部無効にされる。図１３Ｄは、野生型及びＡｐｏ欠損Ｂ細胞が、ＬＮＰとのインキュベーション後に、同様のレベルのＴＮＦ−アルファ及びＫＣ／ＧＲＯを分泌し、これらは、ＬＤＬＲ欠損Ｂ細胞によって分泌されるレベルより高いことを示す。野生型Ｂ細胞はしかしながら、ＬＮＰとのインキュベーション後に、Ａｐｏ欠損及びＬＤＬ受容体欠損Ｂ細胞の両方より高いレベルのＩＬ−１ベータを分泌する。
【０６１０】
実施例７．
２×１０５個の脾細胞を、遊離のＰＥＧまたは抗ＰＥＧ  ＩｇＧとともに２時間プレインキュベートし、その後、ＰＥ＋またはＰＥ−ＬＮＰを配合したＥＧＦＰ  ｍＲＮＡ２００ｎｇとともにインキュベートした。２４時間のＬＮＰのインキュベーション後、細胞をＣＤ３、ＣＤ１９について染色し、ＰＥの取り込みをフローサイトメトリーで分析した。
【０６１１】
ＬＮＰの取り込みは、図１４に示す通り、遊離のＰＥＧまたは抗ＰＥＧ  ＩｇＧ抗体とのＢ細胞のプレインキュベーション後でもなお生じた。従って、かかるプレインキュベーションは、Ｂ細胞に対する結合においてＰＥＧを含むＬＮＰと競合しないと思われた。抗ＰＥＧ抗体とのプレインキュベーションもまた、ＬＮＰのＢ細胞に対する結合能力を妨げないと思われた。
【０６１２】
実施例８．
脾細胞を、ＰＥＧもしくはＰＥ−ＯＨを含む、またはＰＥＧを含まない（ＰＥＧレス）のいずれかのＰＥ＋ＬＮＰを配合したＥＧＦＰ  ｍＲＮＡ２００ｎｇとともにインキュベートした。２４時間後、細胞を、ＣＤ３、ＣＤ１９について染色し、ＰＥの取り込みをフローサイトメトリーで分析した。
【０６１３】
ＰＥＧを欠くＬＮＰ（「ＰＥＧレス」ＬＮＰ）またはヒドロキシＰＥＧ（ＰＥＧ−ＯＨ）を含むＬＮＰの取り込みは、図１５及び１６に示す通り、メトキシＰＥＧを含むＬＮＰと比較して一部無効にされた。ＰＥＧレスＬＮＰ及びＰＥＧ−ＯＨ  ＬＮＰはしかしながら、図１７で明らかなように、ほんのわずかのＢ細胞をなお活性化する。Ｂ細胞の非ＰＥＧ媒介活性化が明らかである。より多量のＬＮＰを取り込むＢ細胞がより高いＣＤ８６発現レベルを示すことから、ＣＤ８６発現に基づく活性化もまた、用量依存的であると思われる。
【０６１４】
実施例９．
脾細胞を、異なるＰＥ＋またはＰＥ−ＬＮＰを配合したＥＧＦＰ  ｍＲＮＡ２００ｎｇとともにインキュベートした。これらのＬＮＰは、リン脂質を欠いていた（「リン脂質レス」）か、または、ＤＳＰＣ、オレイン酸、ＤＯＰＣ、もしくはＤＯＰＥをヘルパー脂質として含有した。他の実験では、ＬＮＰは、ＰＥＧ、ＰＥ−ＯＨ、ＤＯＰＥ  ＰＥＧのいずれかを含有したか、またはＰＥＧを含有しなかった（ＰＥＧレス）。２４時間後、細胞を、ＣＤ３、ＣＤ１９、及びＣＤ５について染色し、ＬＮＰの取り込みをフローサイトメトリーで分析した。
【０６１５】
図１８は、ＤＳＰＣ、オレイン酸、ＤＯＰＣ、及びＤＯＰＥをヘルパー脂質として含むＬＮＰ、またはヘルパー脂質を欠くＬＮＰに関して、ＬＮＰの取り込みを示す。Ｂ細胞による取り込みは、ＤＯＰＥを含むＬＮＰで最も多く、ＤＯＰＣを含むＬＮＰ、及びＤＳＰＣを含むＬＮＰが続く。Ｂ細胞による最も低い取り込みは、オレイン酸を含むＬＮＰまたはヘルパー脂質を欠くＬＮＰで見られた。これらのデータは、Ｂ細胞によるＬＮＰの取り込みが、ＬＮＰのリン脂質の内容に一部依存することを示す。
【０６１６】
図１９は、ＰＥＧレスまたはＰＥＧ−ＯＨ  ＬＮＰの取り込みが、主にＣＤ１９＋ＣＤ５＋脾臓Ｂ細胞の存在に起因することを示す。このＣＤ５＋Ｂ細胞集団は、Ｂ１ａ細胞を示す。これらの細胞は、天然のＩｇＭの産生に関与している。ＰＥＧレス及びＰＥＧ−ＯＨ  ＬＮＰで認められる残りの取り込みは、主にＣＤ１９＋ＣＤ５−の通常のＢ細胞に起因する。これらのデータは、ヘルパー脂質として、ヒドロキシＰＥＧまたはＰＥＧなしとオレイン酸の組合せ利用が、Ｂ細胞によるＬＮＰの取り込みをなくすまたは低くすることができることを示唆している。
【０６１７】
図２０は、ＣＤ５＋Ｂ細胞が、ＰＥＧ−ＯＨ、ＤＳＰＥ，及びＰＥＧを含む、またはＰＥＧレスＬＮＰの大部分の取り込みに関与することを示す。ＣＤ５−細胞は、ＤＭＧ−ＰＥＧを含むＬＮＰの大部分の取り込みに関与した。ＰＥＧレスまたはＰＥＧ−ＯＨ  ＬＮＰの取り込みは、ＣＤ１９＋ＣＤ５＋脾臓マウスＢ細胞の存在に主に起因する。
【０６１８】
実施例１０．
様々なＬＮＰのインビボ試験を実施し、脾臓Ｂ細胞によるＬＮＰの取り込みに対する様々なリン脂質及びＰＥＧの組合せの影響を評価した。対照群及び試験群を以下の表２に要約する。これら様々なＬＮＰは、ＤＭＧ−ＰＥＧ及びＤＳＰＣ、ＰＥＧ−ＯＨ及びＤＳＰＣ、またはＰＥＧなし（ＰＥＧレス）でＤＳＰＣを含有した。すべてのＬＮＰは、さらにカチオン性脂質ＭＣ３を含み、ＥＧＦＰ  ｍＲＮＡも有した。単回投与０．１ｍＬの０．１ｍｇ／ｋｇの投与（濃度０．０２ｍｇ／ｍＬ）を実施した。
【表２】
2019504002.tif 000172
【０６１９】
図２１は、ＥＧＦＰの発現が、ＤＭＧ−ＰＥＧ、ＰＥＧ−ＯＨ、及びＰＥＧレスＬＮＰの投与後早くも１時間で脾臓の非従来型Ｔ（ＣＤ３−）及びＢ細胞（ＣＤ１９−）で観察されたことを示す。投与後４時間で、ＥＧＦＰの発現レベルは、すべての試験群で１時間のレベルに対して増加した。しかしながら、発現は、ＰＥＧレス群で最も低かった。
【０６２０】
図２２Ａ及び２２Ｂは、Ｂ細胞のインビボでの取り込みが、エキソビボで観察された取り込みと同様であり、ＤＭＧ−ＰＥＧに一部左右されることを示す。Ｂ細胞の取り込みは、ＰＢＳ、またはＤＭＧ−ＰＥＧもしくはＰＥＧ  ＯＨを含むＬＮＰ、またはＰＥＧを欠くＬＮＰ（ＰＥＧレスＬＮＰ）の注入後１時間（図２２Ａ）及び注入後４時間（図２２Ｂ）で測定された。
【０６２１】
図２３Ａ〜２３Ｃは、ＤＭＧ−ＰＥＧ（図２３Ａ）もしくはＣｍｐｄ４１８（図２３Ｂ）を含むＬＮＰまたはＰＥＧレスＬＮＰ（図２３Ｃ）のＢ細胞による取り込みが、ＬＮＰの用量依存的にＣＤ８６の発現で示されるＢ細胞の活性化をもたらすことを示す。ＬＮＰの取り込みは、ＰＢＳ、またはＤＭＧ−ＰＥＧもしくはＰＥＧ  ＯＨを含むＬＮＰ、またはＰＥＧレスＬＮＰの注入後１時間（図２３Ｄ）及び注入後４時間（図２３Ｅ）で測定した。Ｂ細胞の取り込みも同様にフローサイトメトリーで分析する（図２３Ａ〜２３Ｃ）。注入後１時間での活性化のレベルは、異なるＬＮＰ間で同様であった。注入後４時間では、ＰＥＧ  ＯＨを含むＬＮＰまたはＰＥＧを欠くＬＮＰでは、ＤＭＧ−ＰＥＧを含むＬＮＰより促進が少なかった。
【０６２２】
ＣＤ１９＋Ｂ細胞を個々に染色及び分析した。ＬＮＰ（ＰＥ、赤）染色及びＬＮＰとＣＤ１９染色（緑）間の重複を調べた。ＬＮＰは、主にＢ細胞膜にある。ＤＭＧ−ＰＥＧを含むＬＮＰと比較して少ないＰＥＧレスＬＮＰ及びＣｍｐｄ４１８を含むＬＮＰが、この膜で観察された。
【０６２３】
次に、ＣＤ５＋Ｂ細胞によるＬＮＰの取り込みを分析した。結果を図２４Ａ〜２４Ｂに示す。ＣＤ５＋Ｂ細胞によるインビボでのＬＮＰの取り込みは、ＬＮＰがＰＥＧ−ＯＨを含む場合、またはＬＮＰがＰＥＧを欠く場合にわずかに減少する。ＬＮＰの取り込みは、ＰＢＳ、またはＤＭＧ−ＰＥＧもしくはＰＥＧ  ＯＨを含むＬＮＰ、またはＰＥＧレスＬＮＰの注入後１時間（図２４Ａ）及び注入後４時間（図２４Ｂ）で測定する。
【０６２４】
ＣＤ５＋Ｂ細胞を個々に染色及び分析した。ＬＮＰ（ＰＥ、赤）染色及びＬＮＰとＣＤ１９染色（緑）間の重複を調べた。ＬＮＰは、主にＢ細胞膜にある。ＤＭＧ−ＰＥＧを含むＬＮＰと比較して少ないＰＥＧレスＬＮＰ及びＰＥＧ−ＯＨを含むＬＮＰが、この膜で観察された。
【０６２５】
実施例１１．
表３は、異なる量のＤＭＧ−ＰＥＧを含むＬＮＰの影響を分析するために計画された試験を要約する。すべての試験ＬＮＰは、カチオン性脂質ＭＣ３、ヘルパー脂質ＤＳＰＣ、構造脂質コレステロールを含み、ｈＥＰＯ  ｍＲＮＡカーゴを有していた。これらのＬＮＰは、ＤＭＧ−ＰＥＧ含量が異なり、ＤＭＧ−ＰＥＧ含量は、０％から、０．２５％、０．５％、０．７５％、１％、１．２５％、及び１．５％の範囲であった。パーセンテージは、理論ｍｏｌ％を反映する。この表の第３列は、理論ｍｏｌ％として表されるＬＮＰの脂質組成を示す。
【表３】
2019504002.tif 000173
【０６２６】
以下の実験を行い、ＬＮＰのＤＭＧ−ＰＥＧ含量の増加が、マウス脾細胞及びマウスＢ細胞の活性化ならびにマウスＢ細胞によるＬＮＰの取り込みに与える影響を測定した。Ｂ細胞のＰＥ＋染色（ひいては会合及び／または取り込み）が観察された。ＬＮＰの取り込みは、ＤＭＧ−ＰＥＧのパーセンテージが０．２５％未満の場合に大きく低下する。ＤＭＧ−ＰＥＧのパーセントが０．５％より高い場合にＰＥ高細胞が増加（ＬＮＰの取り込みが増加）する。フルデータセットを図２５に示す。これは、ＤＭＧ−ＰＥＧのパーセンテージが０．５％未満の場合にＬＮＰの取り込みが大きく低下することを示す。全体的なＰＥ＋Ｂ細胞のパーセンテージは、０．５％以上のＤＭＧ−ＰＥＧを含むＬＮＰで比較的一定である。
【０６２７】
次に、異なる量のＤＭＧ−ＰＥＧを有するＬＮＰの取り込み後のＣＤ８６発現によって測定されるＢ細胞の活性化を分析した。これらのデータを図２６に示す。ＣＤ８６発現は、ＤＭＧ−ＰＥＧのｍｏｌパーセンテージが増加するにつれ、Ｂ細胞の表面で増加した。Ｂ細胞の活性化は、Ｂ細胞の取り込みと一致する。さらに、最も活性化された細胞は、最もＬＮＰと会合した、または最もＬＮＰを取り込んだ（ＬＮＰ  ＰＥ高で示される）ものである。
【０６２８】
実施例１２．
表４は、異なる量のＤＭＧ−ＰＥＧを含むＬＮＰの影響を分析するために計画された試験を要約する。いくつかの試験ＬＮＰは、カチオン性脂質ＭＣ３、ヘルパー脂質ＤＳＰＣ、構造脂質コレステロールを含み、ｈＥＰＯ  ｍＲＮＡカーゴを有していた。いくつかの試験ＬＮＰは、カチオン性脂質ＭＣ３、ローダミンにコンジュゲートされたヘルパー脂質ＤＯＰＥ、構造脂質コレステロールを含み、ｈＥＰＯ  ｍＲＮＡカーゴを有していた。各ＬＮＰのサブセットで、ＤＭＧ−ＰＥＧ含量は、０％から、０．０５％、０．１％、０．１５％、０．２％、及び０．２５％に変化した。パーセンテージは、理論ｍｏｌ％を反映する。この表の第３列は、理論ｍｏｌ％として表されるＬＮＰの脂質組成を示す。
【表４−１】
2019504002.tif 000174
【表４−２】
2019504002.tif 000175
【０６２９】
以下の実験を行い、ＬＮＰのＤＭＧ−ＰＥＧ含量の減少が、Ｂ細胞によるＬＮＰの取り込み及びＢ細胞の活性化に与える影響を測定した。Ｂ細胞のＰＥ＋染色（ひいては会合及び／または取り込み）を調べた。ＬＮＰの取り込みは、調べたすべてのＤＭＧ−ＰＥＧ濃度（すなわち、すべて０．５％未満）で大きく低下する。フルデータセットを図２７に示す。これは、ＬＮＰの取り込みが、調べたすべてのＤＭＧ−ＰＥＧｍｏｌ％（すなわち、０〜０．２５ｍｏｌ％）で大きく低下することを示す。これらのより低いＤＭＧ−ＰＥＧｍｏｌ％では、Ｂ細胞によるＬＮＰの取り込みがないか、または大きく低下する。１．５ｍｏｌ％のＤＭＧ−ＰＥＧを有するＬＮＰと比較して、調べたすべてのＬＮＰに関して、ＣＤ８６発現によって測定されるＢ細胞の活性化は大きく低下している。Ｂ細胞集団でのＣＤ８６発現は、０、０．０５、０．１、０．１５、０．２、及び０．２５ｍｏｌ％のＤＭＧ−ＰＥＧを含むＬＮＰの取り込みがないこと、低、中間、及び高い取り込みを示した（データは示さず）。
【０６３０】
実施例１３．
表５は、異なるヘルパー脂質を含むＬＮＰ及び異なるＰＥＧコンジュゲーション化学が、Ｂ細胞によるかかるＬＮＰの取り込みに与える影響を分析するために計画された試験を要約する。すべての試験ＬＮＰは、カチオン性脂質ＭＣ３及び構造脂質コレステロールを含有した。これらのＬＮＰは、ヘルパー脂質が異なり、いくつかのＬＮＰは、オレイン酸、ＤＳＰＣ、ＤＯＰＥ（ローダミンにコンジュゲートされた）、オレイン酸及びＤＯＰＥ、またはＤＳＰＣ及びＤＯＰＥを含有した。これらのＬＮＰはまた、ＰＥＧ化脂質成分が異なり、いくつかのＬＮＰは、ＤＭＧ−ＰＥＧを含み、他はバリアントＣｍｐｄ３９５を含有した。第２列は、ＬＮＰの脂質組成に関する詳細を示す。第３列は、各ＬＮＰ成分のｍｏｌ％に関する詳細を示す。Ｃｍｐｄ３９５バリアントの構造を図３１Ａに示す。
【表５−１】
2019504002.tif 000176
【表５−２】
2019504002.tif 000177
【０６３１】
オレイン酸、Ｃｍｐｄ３９５、及びＣｍｐｄ４０４を含むＬＮＰに対するＣＤ１９＋Ｂ細胞のＰＥ＋染色（ひいては会合及び／または取り込み）。これらのＬＮＰ組成物は、図４０で同定される。フルデータセットを図２８に示す。Ｃｍｐｄ３９５バリアントを含むＬＮＰは、Ｂ細胞による取り込みがより高いと思われる。Ｂ細胞集団におけるＣＤ８６発現は、Ｃｍｐｄ３９５、Ｃｍｐｄ４０４、及びオレイン酸を含むＬＮＰの取り込みがそれぞれ、ないこと、低、中間、及び高い取り込みを示した。オレイン酸の存在下では活性化はなかった。
【０６３２】
実施例１４．
本実験は、ＬＮＰのＤＭＧ−ＰＥＧ含量の関数としての（ＣＤ１９＋ＣＤ８６＋ＣＤ６９＋）として定義される活性化Ｂ細胞集団のパーセンテージをイミキモドの存在下及び非存在下で評価した。ＤＭＧ−ＰＥＧのｍｏｌ％は、０、０．２５、０．５、０．７５、１、１．２５、及び１．５ｍｏｌ％であった。これらのデータを図２９Ａ（イミキモドなし）及び２９Ｂ（イミキモドあり）に示す。Ｂ細胞の活性化は、ＤＭＧ−ＰＥＧのパーセンテージが増加すると増加する。０．５％のＤＭＧ−ＰＥＧが閾値に相当すると思われ、これ未満では、Ｂ細胞は活性化されないか、または最小限に活性化される。エキソビボ培養におけるこれらの同じＬＮＰが誘導する炎症性サイトカイン放出を、図３０Ａ（ＩＦＮ−ガンマ）及び図３０Ｂ（ＴＮＦ−アルファ）に示す。このサイトカイン分泌のデータは、Ｂ細胞活性化のデータと一致する。ＤＭＧ−ＰＥＧのｍｏｌ％が増加した場合にサイトカイン分泌の増加が観察された。０．５％が閾値と思われ、これ未満ではサイトカイン分泌が認められないか、または低レベルのサイトカイン分泌が観察された。
【０６３３】
実施例１５．
リン脂質の設計の変化及びＤＳＰＣを含めたＰＣの置換、脂質を図３１Ａ〜３１Ｄに示す。これらの修飾は、ＬＮＰのＢ細胞との会合、受容体によるＬＮＰの認識、及び最終的にはＢ細胞による取り込みを減少させる働きをし得る。企図される変化としては、ＰＣ頭基（図３１Ａ）、ＰＣコア（図３１Ｂ）の修飾、または脂質の平面性の低減（図３１Ｃ）によるものが挙げられるがこれらに限定されない。他のバリアントまたは代替物としては、図３１Ｄに示す修飾されたオレイン酸が挙げられる。
【０６３４】
ＤＭＧ−ＰＥＧの変化もまた企図され、これらとしては、例えば、より短い脂質尾部、クリックリンカー、及び／またはＰＥＧ部分のヒドロキシ末端基（ＰＥＧ−ＯＨ、もしくはヒドロキシＰＥＧ）を有するバリアントが挙げられる。図３２Ａは、Ｃｍｐｄ３９４、Ｃｍｐｄ３９５、Ｃｍｐｄ３９６、及びＣｍｐｄ３９７バリアントの構造を示す。図３２Ｂは、例示的なＣｍｐｄ３９８及びＣｍｐｄ３９９を示す。
【０６３５】
マウスでの異なるＰＥＧ脂質及び／またはＰＥＧの代替物によるＦＦＬｕｃ反復投与試験のパラメータの表を表６に示す。この試験は、異なる表面安定化ＬＮＰ成分がＩｇＧ産生に与える影響を調べるために計画した。すべての試験ＬＮＰは、カチオン性脂質ＭＣ３、ヘルパー脂質ＤＳＰＣ、及び構造脂質コレステロールを同じ割合で含有した。それらはすべてカーゴのＬｕｃ  ｍＲＮＡも含有した。このＬＮＰは、ＰＥＧ化脂質の点で異なった。第二回投与の実施９６時間後のフローサイトメトリー（ビーズ）によって測定された抗ＰＥＧまたは抗ＤＳＰＣ  ＩｇＭの反応を図３３に示す。ＰＥＧ  ＤＭＧ、ＰＥＧ  ＤＳＰＥ、またはＰＥＧ  ＤＳＧ  ＬＮＰは抗ＬＮＰ反応を誘導した。図３４に示すデータは、第二回投与の実施の９６時間後にＥＬＩＳＡによって測定された抗ＰＥＧ  ＩｇＭ及びフローサイトメトリー（ビーズ）によって測定された抗ＰＥＧまたは抗ＤＳＰＣ  ＩｇＭを示す。ＥＬＩＳＡ及びビーズによって測定された抗ＰＥＧ  ＩｇＭは同様であり、有意な差は検出されなかった。
【表６】
2019504002.tif 000178
【０６３６】
実施例１６．
表７に要約する試験設計を用いてさらなる分析を行い、インビボでの様々なＬＮＰの血小板に対する結合を評価した。試験ＬＮＰは、ＤＭＧ−ＰＥＧ  ＬＮＰ（ＤＭＧ−ＰＥＧ、ヘルパー脂質ＤＳＰＣ、カチオン性脂質ＭＣ３、及び構造脂質コレステロールを含む）、ＰＥＧ−ＯＨ  ＬＮＰ（ＰＥＧ−ＯＨ、ヘルパー脂質ＤＳＰＣ、カチオン性脂質ＭＣ３、及び構造脂質コレステロールを含む）、ならびにＰＥＧレスＬＮＰ（ヘルパー脂質ＤＳＰＣ、カチオン性脂質ＭＣ３、及び構造脂質コレステロールを含むがＰＥＧを欠く）と表す。
【表７】
2019504002.tif 000179
【０６３７】
血小板とのＬＮＰの会合を図３５に示す。血小板と会合したＬＮＰのパーセント（フィコエリトリン（ＰＥ）蛍光で示される）を、ＰＢＳ、ＤＭＧ−ＰＥＧを含むＬＮＰ、ＰＥＧ−ＯＨを含むＬＮＰ、及びＰＥＧレスＬＮＰの投与後の３つの時点（１５、６０、及び２４０分）（各時点に関して左から右）で示す。これらの実験は、各種時点で対象から採取した精製血小板にて行った。静注後、ＤＭＧ−ＰＥＧを含むＬＮＰは血小板と会合した。この会合は、急速だが一時的であり、６０分後にはもはや見えなかった。ＤＭＧ−ＰＥＧの代わりにヒドロキシＰＥＧ（ＰＥＧ−ＯＨ）を用いた場合には会合は生じず、いかなるＰＥＧも存在しない（ＰＥＧレスと呼ばれる）場合にも生じないことから、ＤＭＧ−ＰＥＧ、より具体的にはメトキシＰＥＧ部分が、観察されたＬＮＰの会合に関与していることが予想された。
【０６３８】
ＬＮＰ投与後の血小板活性化を図３６に示す。血小板活性化（血小板活性化マーカーＣＤ６２Ｐ（ＭＦＩ）の発現で示される）を、ＰＢＳ、ＤＭＧ−ＰＥＧ  ＬＮＰ、ＰＥＧ−ＯＨ  ＬＮＰ、及びＰＥＧレスＬＮＰの投与後の３つの時点（１５、６０、及び２４０分）（左から右）で測定した。これらのＬＮＰは、表７に記載の通りである。ＬＮＰの投与が、ＣＤ６２Ｐの発現の増加につながった。この活性化は、ＤＭＧ−ＰＥＧ群で最も高いが、ＰＥＧ−ＯＨ及びＰＥＧレス群でも測定可能である。活性化は、注入後１５分で検出可能であり、注入後６０分が最大である。血小板とのＬＮＰの会合と同様、活性化は一時的であり、時間とともに減少する。
【０６３９】
従って、血小板は、注入されたＬＮＰと最初に会合し、その後かかる血小板が活性化されると思われる。ＤＭＧ−ＰＥＧを含むＬＮＰは、投与から１５分以内に血小板と会合し、その後、投与から６０及び２４０分以内に血小板を活性化することができる。ＰＥＧ−ＯＨを含むＬＮＰ及びＰＥＧレスＬＮＰはその一方、血小板と顕著な会合を示さないが、６０及び２４０分の時点で血小板を活性化することがなお可能である。ＰＥＧ−ＯＨ及びＰＥＧレスＬＮＰで観察される血小板活性化のレベルは、ＤＭＧ−ＰＥＧ  ＬＮＰで観察されるものよりわずかに低い。従って、血小板は、投与されたＬＮＰとの感知できる会合なしでも活性化することができる。ＤＭＧ−ＰＥＧ  ＬＮＰの血小板に対する会合は、他のＬＮＰタイプの血小板に対する会合よりも安定であり、インビボで会合しても、かかる会合はアッセイの過程で崩壊する場合がある。
【０６４０】
血小板凝集体中の他の細胞の存在も評価した。図３７Ａ及び３７Ｂは、ＤＭＧ−ＰＥＧ  ＬＮＰ、ＰＥＧ−ＯＨ  ＬＮＰ、及びＰＥＧレスＬＮＰの静注後の血小板凝集体中に存在するＢ２２０＋Ｂ細胞及びＦ４／８０＋マクロファージのパーセンテージを示す。ＰＢＳ、ＤＭＧ−ＰＥＧ  ＬＮＰ、ＰＥＧ−ＯＨ  ＬＮＰ、及びＰＥＧレスＬＮＰの投与後の３つの時点（１５、６０、及び２４０分）（左から右）でのＢ細胞のパーセント（Ｂ２２０＋染色で示される、図３７Ａ）及びマクロファージのパーセント（Ｆ４／８０＋染色で示される、図３７Ｂ）を示す。Ｂ細胞及びマクロファージは、血小板凝集体と会合した。マクロファージ及びＢ細胞は、３つのすべてのＬＮＰタイプ（ＤＭＧ−ＰＥＧ  ＬＮＰ、ＰＥＧ−ＯＨ  ＬＮＰ、及びＰＥＧレスＬＮＰ）の投与後に血小板凝集体と会合した。Ｂ細胞の会合は、これら３つのＬＮＰタイプ間で同様であり、本現象においてＰＥＧは最小限の役割を果たすこと、または何の役割も果たさないことを示唆した。マクロファージの会合は、これら３つのＬＮＰタイプ間でわずかに異なり、最も高いマクロファージの会合は、ＤＭＧ−ＰＥＧを含むＬＮＰで観察された。どちらの細胞型に関しても、２４０分の時点でより大きな差が観察された。ＬＮＰ組成及びＰＥＧ含量にかかわらず、会合は一時的であり、時間とともに減少した。興味深いことに、ＰＥＧ−ＯＨ  ＬＮＰ及びＰＥＧレスＬＮＰの存在下で血小板との観察できる「ＬＮＰの会合」がなくても（図３５参照）、血小板凝集体には検出可能なＢ細胞及びマクロファージが存在する。
【０６４１】
さらなる実験をインビトロで行い、これらの血小板相互作用を調べた。血小板をインビトロで媒体、ＬＰＳ、またはヘルパー脂質ＤＳＰＣを含む（さらにカチオン性脂質ＭＣ３、ＤＭＧ−ＰＥＧ、及び構造脂質コレステロールを含む）ＬＮＰとともにインキュベートした。血小板の活性化は、ＣＤ４１＋血小板集団におけるＣＤ３１及びＣＤ６２Ｐの発現によって評価した。血小板は、ＬＮＰとの接触後、ＣＤ３１及びＣＤ６２Ｐの活性化マーカーの上方制御で示されるように、急速かつ強力に活性化された。血小板活性化ピークは、ＬＮＰがインビボで投与された場合には６０分であったのに対して、１５分で観察された。試験した各時点で、ＤＳＰＣ  ＬＮＰは、ＬＰＳ及び媒体より大きく血小板を刺激した。これらのデータを図３８及び３９Ａ〜３９Ｄに示す。
【０６４２】
次に、ＬＮＰが全血アッセイにおいて血小板凝集を誘導する能力を測定した。これらのデータは、図４０Ａ〜４０Ｂに示す。媒体（第１列）、ＬＰＳ（第２列）、及びＤＳＰＣ  ＬＮＰ（第３列）との接触後、凝集細胞を採取し、ＣＤ４１発現（最初の段）、高順方向散乱及び側方散乱（第二の段）、ならびにＦ４／８０（ｙ軸）及びＣＤ１１ｂ（ｘ軸）発現（第三の段）に基づいてゲートした。血小板凝集体は、図４０Ａの第二の段に示す通り、ＣＤ４１＋発現ならびに高ＦＣＳ及び高ＳＳＣに基づいて単離した。媒体、ＬＰＳ、及びＤＳＰＣ  ＬＮＰ（左から右）の投与後にＣＤ１１ｂ＋Ｆ４／８０＋二重陽性（マクロファージ）である凝集細胞のパーセントを示す（図４０Ｂ）。ＤＳＰＣ  ＬＮＰは、血小板凝集体においてより大きなマクロファージのパーセンテージをもたらした。
【０６４３】
図４１Ａ〜４１Ｂは、全血の媒体、ＬＰＳ、及びＤＳＰＣ  ＬＮＰとの３０分（図４１Ａ）及び１２０分（図４１Ｂ）のインキュベーション後、血小板に結合したＣＤ１９＋Ｂ細胞、ＣＤ１１ｂ＋マクロファージ、及びＦ４／８０＋マクロファージの程度を示す。これらのデータは、図４２Ａ及び４２Ｂ（マクロファージ）ならびに図４２Ｃ（Ｂ細胞）にも示す。
【０６４４】
さらなる実験を行い、フローサイトメトリーで測定されるＣＤ３１及びＣＤ６２Ｐの発現によって示される血小板活性化をＬＮＰ脂質含量の関数として評価した。図４３Ａ〜４３Ｂは、媒体（対照）、ＤＳＰＣ  ＬＮＰ、ＤＯＰＣ  ＬＮＰ、ＤＯＰＧ  ＬＮＰ、ＤＭＧ−ＰＥＧ  ＬＮＰ、及びＬＰＳ（左から右）との０、１０、３０、及び６０分間（左から右）のＬＮＰ血小板のインキュベーション後の、ＣＤ３１（図４３Ａ）及びＣＤ６２Ｐ（図４３Ｂ）の発現に基づく活性化を示す。ＤＳＰＣ及びＤＯＰＣの存在は、インビトロで血小板を強く活性化する。ＤＭＧ−ＰＥＧは血小板を活性化するが、この活性化は、ＤＳＰＣまたはＤＯＰＣによる活性化より低い。特にＤＯＰＣによって観察された活性化と比較して、ＤＯＰＧによる活性化がないことは、このＰＣモチーフが、ＤＯＰＣ及びＤＳＰＣによる活性化に関与することを強く示唆する。これらのデータは、図４４Ａ〜４４Ｂにも示す。
【０６４５】
実施例１７．
表８に要約する試験設計を用いてさらなる分析を行い、脾臓摘出非ヒト霊長類（ＮＨＰ）の薬物動態及び薬力学パラメータを評価した。
【表８】
2019504002.tif 000180
【０６４６】
一般に、脾臓は、血小板がリンパ球に接触する唯一の場所である。脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）と接触すると、血小板は、２つの血小板活性化マーカーであるＣＤ３１及びＣＤ６２の両方の上方制御で示されるように、急速かつ強力に活性化される（図３８、３９Ａ〜３９Ｄ）。全血アッセイは、ＬＮＰの存在下、血小板がマクロファージと凝集することを示した（図４０Ａ〜４０Ｂ、４２Ａ〜４２Ｂ）。脾臓では、Ｂ細胞によるＬＮＰの取り込みが、エキソビボ培養条件下で速度論的に急速に生じることが示された一方、Ｔ細胞によるＬＮＰの特異的な取り込みは観察されなかった（図２Ａ〜２Ｂ）。さらに、Ｂ細胞、特にＢ１サブセットは、空のＬＮＰによって用量依存的に活性化されることが示された（図１２Ａ〜１２Ｂ）。脾臓摘出後Ｂ１ａは失われ、Ｂ１ｂ細胞は抗体分泌能を失うため、Ｂ１ａ及びＢ２ｂ細胞の両方が脾臓を必要とすることが示された（図４６Ａ〜４６Ｂ）。
【０６４７】
無傷の機能性脾臓（対照群）の存在下及び脾臓摘出非ヒト霊長類（ＮＨＰ）で、修飾ｍＲＮＡ処理のレベル及びそのエリスロポエチン産生を比較するための実験を行った（表８）。動物（１群当たりｎ＝３）は、ｒｈＥＰＯ  ｍＲＮＡ−ＬＮＰの６０分間の注入を速度５ｍＬ／ｋｇ／時間（投与濃度０．０４ｍｇ／ｍＬ）で、合計０．２０ｍｇ／ｋｇ／週受けた。２９日間にわたり、注入前及び注入終了後（４８時間まで）血液試料を採取した。ＰＫＰＤ  ｍＲＮＡレベル及びｈＥＰＯ産生をｂＤＮＡ及びタンパク質ＥＬＩＳＡを用いて測定した。
【０６４８】
最初に、網状赤血球数に脾臓摘出が与える影響を調べた。網状赤血球、すなわち、未熟赤血球は、ホルモンエリスロポエチン（ＥＰＯ）によって制御される過程である赤血球生成を経て成熟赤血球になる。脾臓は血液を濾過し、血行から感染細胞及び赤血球を除去するが、これは生命の維持に必要ではなく、脾臓摘出された対象は、器官の適応を示し、感染と戦う能力及び血行から古い赤血球を除去する能力が増加する。上記のＬＮＰ−ｍｏｄＲＮＡ−ｈＥＰＯ処理後（１、８、１５、及び２９日目）、網状赤血球のレベルはｍＲＮＡの注入とともに増加したが、１５日目以降、無傷のＮＨＰ（対照）群でこのレベルは低下した。脾臓摘出群では、このレベルは１５日目以降徐々に低下した（図４７）。ヘマトクリットは、脾臓摘出群において同じ処理条件でも維持されることが分かった（図４８）。
【０６４９】
ｍＲＮＡ及びｈＥＰＯの曲線下面積（ＡＵＣ）及びＣｍａｘ値を２９日間及び５回のｍＲＮＡ−ｈＥＰＯ−ＬＮＰ投与にわたって測定した。ＡＵＣ、すなわち、測定された物質の経時的なバイオアベイラビリティの尺度は、この物質に対する全身曝露があったことを示した（図４９Ａ〜４９Ｂ）。Ｃｍａｘは、投与後のこの物質またはこの物質の産物のピーク濃度を表す（図４９Ｃ〜４９Ｄ）。脾臓摘出されたＮＨＰでは、ｍＲＮＡ及びｈＥＰＯのレベルは、本試験の間、反復投与（ＩＶ注入）により全身的に維持される。無傷（対照）群とは対照的に、ＮＨＰのｍＲＮＡ及びｈＥＰＯは、１５日目を起点として大きく低下する（図４９Ａ〜４９Ｄ）。
【０６５０】
補体活性化も測定し、これら２群間で比較した。脾臓摘出されたＮＨＰは、無傷（対照）のＮＨＰと比較して、補体活性化指標Ｃ３ａ（図５０Ａ）及びＣ５ｂ９（図５０Ｂ）によって測定される補体活性化の抑制を示すことが分かった。さらに、サイトカイン発現は、脾臓摘出されたＮＨＰでほとんど存在しないことが分かった（ＩＬ−６、図５１Ａ及びＩＬ−１０、図５１Ｂ）。抗ＰＥＧ  ＩｇＭ（図５２Ａ）及び抗ＰＥＧ  ＩｇＧ（図５２Ｂ）もまた、脾臓の非存在下で大きく減少することが分かった。
【０６５１】
要約すれば、ＬＮＰは、ＡＢＣ効果を推進する複数のインビボ細胞間相互作用を有し、これには、血小板、単球、顆粒球、及びＢ細胞を含めたクオラムセンシング事象が含まれ得る。主な中心点は、脾臓であると思われ、これは、ＡＢＣがＢ１細胞機能によって推進されるという仮説を高度に支持する。Ｂ１細胞は、天然のＩｇＭに関与し、とりわけ、ＰＥＧ、リン脂質、及び恐らくはコレステロール結晶を認識することができる。Ｂ１ｂ細胞は、刺激された場合にＩｇＧを産生することもできる。上に示したように、脾臓の除去は、ＡＢＣに大きく寄与し得るＢ細胞（Ｂ１細胞を含む）の活性化を防ぐ。脾臓摘出された動物は、ＰＥＧに対するＩｇＭ／ＩｇＧが低いかこれを示さず、ＲＮＡまたはタンパク質のクリアランスを示さず、サイトカイン／補体活性化が低いかこれを示さず、Ｂ１細胞が血中クリアランス促進を推進することを示した。
【０６５２】
実施例１８
実施例１８は、ＣＤ３６結合及び抗ＰＥＧ  ＩｇＭの産生を低減するように設計されたＬＮＰ製剤を示す。ｈＥＰＯをロードした多くの新規なＬＮＰ製剤を調製し、発現レベル、Ｂ細胞活性化（例えば、ＣＤ３６を介する）、及び抗ＰＥＧ  ＩｇＭ産生に与える脂質の変更の影響を測定するために試験した。市販の天然リン脂質及び脂肪酸をＬＮＰに組み込み、非天然のＤＳＰＣ類似体の設計及び合成と並行してスクリーニングした。図５４は、異なる双性イオン基によるリン脂質の置換を示す図である。
【０６５３】
ＣＤ−１マウスに、Ｃｍｐｄ４０５、Ｃｍｐｄ３９６、Ｃｍｐｄ４０６、Ｃｍｐｄ３９４、Ｃｍｐｄ４０７、Ｃｍｐｄ４０３、Ｃｍｐｄ４３４、Ｃｍｐｄ４０６、Ｃｍｐｄ４０５、及びＣｍｐｄ４０７のＬＮＰを毎週投与した。反復投与は３週間で行った。
【０６５４】
この試験で、ｈＥＰＯの発現は、６時間（ｐｇ／ｍｌ）で測定し、抗ＰＥＧ  ＩｇＭは、第２週に測定した。このデータを図５３Ａ〜５３Ｂに示す。図５３Ａ〜５３Ｂは、ＬＮＰ製剤の投与後の抗ＰＥＧ  ＩｇＭ産生を示す一連のグラフである。このＰＥＧ脂質は、反復投与時にインビボで生成される抗ＰＥＧ  ＩｇＭの量に影響を与える。４つのＰＥＧ脂質は、低い抗ＰＥＧ  ＩｇＭのレベルと、中程度のレベルのｈＥＰＯ発現を示した。Ｃｍｐｄ３９６、Ｃｍｐｄ４１６、Ｃｍｐｄ４０３、及びＣｍｐｄ４０５。Ｃｍｐｄ４１３は比較的高いＰＥＧ  ＩｇＭを産生した。一般に、ヒドロキシ末端のより速く拡散するＰＥＧ脂質は、抗ＰＥＧ  ＩｇＭのレベルの低下をもたらす。
【０６５５】
いくつかのＬＮＰ製剤を、どのタイプのＤＳＰＣの修飾が免疫細胞のＣＤ３６によるＬＮＰの認識を低減するかを判断するために設計した。本発明の態様によれば、ＤＳＰＣによる免疫系の活性化は、血小板のＣＤ３６及びＢ細胞及び／またはグリセロールコアとの相互作用によって引き起こされると考えられる。ＤＳＰＣの頭基及び脂質尾基の平面性は、この分子がＣＤ３６リガンドと相互作用する能力に関与し得る。従って、いくつかの修飾されたＤＳＰＣを生成し、脂質に組み込み、Ｂ細胞及び血小板に与える影響を調べた。
【０６５６】
天然のＰＣ類似体が細胞の活性化及び発現レベルに与える影響を調べた。図５５Ａ〜５５Ｂは、ＣＤ−１マウスにおけるＬＮＰ製剤投与後のＬｕｃ  ｍＲＮＡ発現（図５５Ａ）及びＢ細胞活性化（図５５Ｂ）を示す。この天然のＰＣ類似体は、Ｂ細胞の活性化をもたらし、いくつかは、実施したアッセイにおいて発現を妨害すると思われる（ＤＯＰＧ及びＤＯＰＡ）。しかしながら、オレイン酸は、十分なレベルのＬｕｃ発現を維持しながら、著しく低下したＢ細胞の活性化を示す。
【０６５７】
いくつかのオレイン酸誘導体を合成し、発現レベル、Ｂ細胞活性化、及び血小板凝集に与える影響を調べた。このデータを図５６Ａ〜５６Ｅ及び５７Ａ〜５７Ｃに示す。これらの構造を図５６Ａに示す。図５６Ｂは、ＣＤ８６発現（Ｂ細胞活性化）を示すグラフであり、図５６Ｃは、全光束によって測定されるＬｕｃの発現レベルを示すグラフである。図５７Ａは、投与の２４時間後の活性化されたＢ細胞の頻度を示すグラフである。図５７Ｂは、投与後１５分の血小板の凝集を示すグラフである。図５７Ｃは、血小板凝集体における細胞の動員を示すグラフである。オレイン酸誘導体は、図５６Ｂ（ＣＤ８６の発現を示すグラフ）及び図５６Ｃ（全光束を示すグラフ）に示すように、良好な発現ならびにＤＳＰＣと比較して低いインビトロでのＢ細胞活性化を示す。
【０６５８】
オレイン酸誘導体を含むＣｍｐｄ１８のＬＮＰに関する免疫活性化プロフィールを調べた。これらのオレイン酸誘導体は、免疫活性化プロフィールの改良を示した。このデータを図５８Ａ〜５８Ｂ、５９、及び６０Ａ〜６０Ｃに示す。好ましいオレイン酸の効果がＣｍｐｄ１８によって維持された。図５８Ａは、ＣＤ−１マウスへの送達の６時間後の全光束によって測定されるルシフェラーゼの発現レベルを示す。図５８Ｂは、この投与の２４時間後のマウス脾細胞におけるインビボでのＢ細胞活性化を示す。図５９は、経時的なｈＥＰＯ濃度を示すグラフである。ＭＣ３とは対照的に、本発明の粒子での発現の差の改善が、化学修飾されたｍＲＮＡによって実証された。図６０Ａ〜６０Ｃは、本発明のＬＮＰ製剤における化学修飾されたｍＲＮＡでの免疫活性化プロフィールの改良を示す一連のグラフである。図６０Ａは、ｈＥＰＯをロードした粒子またはＰＢＳの投与の２４時間後のインビボでのＢ細胞活性化を示すグラフである。図６０Ｂは、ｈＥＰＯをロードした粒子またはＰＢＳの投与の６時間後のＩＬ−６濃度で示すグラフである。図６０Ｃは、ｈＥＰＯをロードした粒子またはＰＢＳの投与の６時間後のＩＰ−１０濃度を示すグラフである。
【０６５９】
これらのデータは、オレイン酸及びオレイン酸類似体を含めたいくつかのＤＳＰＣ代替物は、ＬＮＰに製剤化することができ、インビボでのＢ細胞活性化の低下をもたらすことを示す。さらに、より速い拡散及び低下した表面疎水性によって低減された抗ＰＥＧ  ＩｇＭ誘導特性を有するＰＥＧ脂質（ＰＥＧ−ＤＭＧ）代替物が特定された。
【０６６０】
実施例１９
オレイン酸及びＰＣ誘導体を含む新規なＬＮＰ製剤を用いたＢ細胞の会合及び活性化を実施例１９に示す。ＬＮＰにオレイン酸及びＰＣ誘導体を組み込むことがＢ細胞に与える影響を測定する試験を、表９に示す材料を用いて構成した。得られた粒子の特性も表９に示す。
【表９−１】
2019504002.tif 000181
【表９−２】
2019504002.tif 000182
【表９−３】
2019504002.tif 000183
【０６６１】
このデータを図６１〜６２に示す。図６１は、ＰＥ＋ＣＤ１９＋Ｂ細胞パーセントで測定されるＢ細胞によるＬＮＰの取り込みを示すグラフである。図６２は、Ｂ細胞でのＣＤ８６発現によって測定されるＬＮＰによるＢ細胞活性化を示すグラフである。
【０６６２】
実施例２０
新規なＰＥＧ脂質から構成されるｈＥＰＯ含有ＬＮＰ製剤のインビボ評価を実施例２０に示す。異なるＰＥＧ脂質が発現レベル及び抗ＰＥＧ  ＩｇＭ産生に与える影響を調べるためのインビボ試験を行った。この試験は、異なる脂質尾部の長さ（拡散）及び末端基、例えば、−ＯＨ（ＯＭｅに対して）とクリックリンカーまたはアミド基との比較を含んだ。試験した構造及び実験計画を表１０に示す。
【表１０−１】
2019504002.tif 000184
【表１０−２】
2019504002.tif 000185
【０６６３】
ＬＮＰに供給されたｍＲＮＡからのｈＥＰＯの発現レベルをＬＮＰのＩＶ投与後１、２、３、及び４週目に測定した。ｈＥＰＯは、ｍＲＮＡ−ＬＮＰ製剤の各々によって発現された。発現のレベルは、他の製剤に対してＤＳＧ  ＰＥＧ  ＯＭｅ  ＬＮＰで減少した。
【０６６４】
抗ＰＥＧ  ＩｇＭレベルは、ＬＮＰの第二回及び第三回投与の９６時間後にも検出された。図６３Ａ〜６３Ｂは、ＬＮＰの第二回投与の９６時間後（図６３Ａ）またはＬＮＰの第三回投与の９６時間後（図６３Ｂ）に産生されたＰＥＧ  ＩｇＭの量を示す一連のグラフである。試験した化合物は、図６３Ａ及び６３Ｂの両方において左から右に以下の順序のレーンに対応する：ＰＢＳ、Ｐｅｇレス、Ｃｍｐｄ４０８、Ｃｍｐｄ４０５、Ｃｍｐｄ４０６、Ｃｍｐｄ４０９、Ｃｍｐｄ４１０、Ｃｍｐｄ４１１、Ｃｍｐｄ４１２、Ｃｍｐｄ４１３、及びＣｍｐｄ４１４。ＤＳＧ及びＤＭＧは、比較的知られた対照の役割を果たす。このＤＭＧ対照は、第三回投与により増加する。これら新規製剤の多くがＤＭＧ対照より少ないＩｇＭを産生した。Ｃｍｐｄ４０５、Ｃｍｐｄ３９６、Ｃｍｐｄ４０３（単一Ｃ１８尾部）、Ｃｍｐｄ４１６（二脂質の尾部）はすべて低い抗ＰＥＧ  ＩｇＭの誘導を示した。Ｃｍｐｄ４０５及びＣｍｐｄ３９６は両投与後、最小のＰＥＧ  ＩｇＭしか示さなかった。Ｃｍｐｄ３９６は、最小のＰＥＧ  ＩｇＭを産生することにおいて試験した最良の候補だと思われた。
【０６６５】
ｈＥＰＯの発現は概してすべての群で維持されたが、ＯＨ末端のＰＥＧは、抗ＰＥＧ  ＩｇＭレベルの低下を示した。Ｃ１０ＰＥＧ脂質もまた、抗ＰＥＧ  ＩｇＭ産生の低下を示した。
【０６６６】
実施例２１
オレイン酸及びＤＳＰＣによる滴定がＡＢＣ／毒性の免疫成分に与える影響を測定するため、滴定データを作成した。ＭＣ３のＬＮＰ中でのオレイン酸及びＤＳＰＣの濃度を低下させた（例えば、コリンの濃度を低下）。これらのＬＮＰにｈＥＰＯをロードし、これらを表１１に示す通りに処方した。これらのＬＮＰをマウスに対して週１回、４週間ＩＶにて投与した。
【表１１】
2019504002.tif 000186
【０６６７】
データを図６４〜６５に示す。図６４は、ｈＥＰＯ  ｍＲＮＡ−ＬＮＰ製剤のＩＶによる１、２、３、及び４週目での週１回の投与の６時間後のｈＥＰＯ発現を示すグラフである。これらの結果は、バイナリスイッチではなく用量反応を示す。オレイン酸に関しては、１０〜２０％が最適だと思われる。オレイン酸の量を増加させることは、これがＤＳＰＣの約半分のサイズしかないことから、安定粒子の製造においてさらなる利点を提供し得る。図６５は、ｈＥＰＯ  ｍＲＮＡ−ＬＮＰ製剤の第三回投与の９６時間後の抗ＰＥＧ  ＩｇＭ産生を示すグラフである。
【０６６８】
実施例２２
異なる頭基を有するリン脂質から構成されるＬＮＰを調製し、単回投与試験において試験した。この試験の目的は、標準的なＤＳＰＣ製剤と比較した異なるリン脂質頭基の発現を評価することであった。異なる頭基の様々なリン脂質を有するＭＣ３のＬＮＰの単回投与をＣＤ−１マウスに対してＩＶで実施した。注入後３、６、及び２４時間で、１００ｕｌの血液を１５分間採取した。
【０６６９】
これらの結果を図６６に示す。各リン脂質は、注入後の３つの時点（３、６、及び２４時間）で測定する。リン脂質の構造は、図６９に示す。これらの製剤はすべて良好に発現した（ＤＯＰＡ及びＤＯＰＧは最も低い発現を有した）。
【０６７０】
いくつかの新たなＬＮＰを合成し、Ｂ１ａ／Ｂ細胞活性化を調べた。これらの処方を表１２に示す。
【表１２】
2019504002.tif 000187
【０６７１】
すべての製剤が、陰性対照と比較して活性化Ｂ細胞集団（ＣＤ１９＋ＣＤ８６＋ＣＤ６９＋）の増加をもたらした。しかしながら、ＤＳＰＣをオレイン酸で置換することで、Ｂ細胞の活性化レベルの減少につながった。エキソビボでのヒトＢ細胞の活性化もまた、サイトカイン放出を測定することによって評価した。図６７Ａ〜６７Ｃは、エキソビボでのヒトＢ細胞活性化の指標としてのサイトカイン放出を示す一連のグラフである。ＩＦＮ−ガンマ（図６７Ａ）、ＩＬ−６（図６７Ｂ）、及びＴＮＦ−アルファ（図６７Ｃ）のレベルを測定した。図６７Ａでは、非ＤＳＰＣ  ＬＮＰでＩＦＮｇ放出に大きな差が観察された。オレイン酸によるＤＳＰＣの置換は、ＩＦＮ−ｇ放出に大きな減少をもたらす。図６７Ｂでは、非ＤＳＰＣ  ＬＮＰでＩＬ−６に大きな差が観察された。オレイン酸によるＤＳＰＣの置換は、ＩＬ−６分泌に大きな減少をもたらした。オレイン酸によるＤＳＰＣの置換はまた、ＴＮＦ−ａ分泌にも大きな減少をもたらした（図６７Ｃ）。この減少は、ＩＦＮ−ｇ及びＩＬ−６で観察された減少より大きかった。
【０６７２】
脾臓ＶＢ細胞の活性化も評価した。これらの結果を図６８に示す。図６８は、様々なＬＮＰ製剤の結果としてのＢ細胞活性化の量を示すグラフである。オレイン酸を含むＬＮＰ製剤は、脾臓Ｂ細胞活性化の低下を示した。
【０６７３】
実施例２３
新規なＰＣ及びオレイン酸誘導体から構成されるＬＮＰを調製し、Ｌｕｃ発現、血小板凝集、及びＢ細胞活性化に与える影響を調べた。これらのＬＮＰは、表１３に記載する通りに処方し、単回投与としてＣＤ−１マウスに対してＩＶで実施した。これらの脂質は、図５６Ａに示す構造を有するＤＳＰＣ置換物であった。これら脂質のいくつかは、修飾されたＰＣ様頭基を有する。他のものは、安定化を調べるための修飾された尾基を有する。Ｃｍｐｄ１２５は、双性イオン頭基を有する。
【表１３−１】
2019504002.tif 000188
【表１３−２】
2019504002.tif 000189
これらのＲＮＡは、Ｎ１−メチルプソイドウリジンで修飾される。これらの脂質の構造を図５６Ａに示す。
【０６７４】
これらの結果を図７０に示す。図７０は、新規なＰＣ及びオレイン酸誘導体から構成される様々なＬＮＰ製剤に封入されたＬＵＣ  ｍＲＮＡの投与後の、投与から３、６、及び２４時間後のＬｕｃ発現レベルを示すグラフである。発現レベルは様々であった。分子の立体障害が大きくなるにつれ、発現は減少するように思われた。オレイン酸及びその誘導体の発現レベルは依然として高かった。
【０６７５】
インビトロでのＣｍｐｄ−ＬＮＰとＢ細胞の相互作用及び活性化も評価した。このデータを図７１Ａ〜７１Ｂ及び７２Ａ〜７２Ｂに示す。
【０６７６】
図７１Ａ〜７１Ｂは、ＣＤ１９＋ＰＥ＋細胞のパーセンテージで評価される様々なＬＮＰ製剤とのＢ細胞相互作用／会合を示す一連のグラフである。いくつかのＬＮＰ製剤を図７１Ａに示す。オレイン酸及びＣｍｐｄ１２５を図７１Ｂに示す。図７２Ａ〜７２Ｂは、ＣＤ８６発現の蛍光強度の中央値によって評価される様々なＬＮＰ製剤でのＢ細胞活性化を示す一連のグラフである。いくつかのＬＮＰ製剤を図７２Ａに示す。オレイン酸及びＣｍｐｄ１２５を図７２Ｂに示す。
【０６７７】
実施例２４
新規なＰＣ及びオレイン酸誘導体からなるＬＮＰを調製し、標準的なＤＳＰＣ製剤と比較して、発現、血小板活性化、及びＢ細胞活性化を単回投与試験で調べた。これらのＬＮＰは、表１４に記載する通りに処方し、単回投与としてＣＤ−１マウスに対してＩＶで実施した。
【表１４−１】
2019504002.tif 000190
【表１４−２】
2019504002.tif 000191
【０６７８】
これらのＲＮＡは、Ｎ１−メチルプソイドウリジンで修飾される。試験した脂質の構造を図５６Ｄに示す。
【０６７９】
このデータを図７３Ａ〜７３Ｃに示す。様々なＬＮＰ製剤でのＬｕｃ発現を、投与の３時間後（図７３Ａ）、６時間後（図７３Ｂ）、及び２４時間後（図７３Ｃ）の全光束の測定によって評価した。
【０６８０】
実施例２５
サルに、ＭＣ３−ＬＮＰ内のｈＥＰＯ  ｍＲＮＡ（化学的に修飾された）を週１回、４週間投与した。ヒトと等しいｍｇ／ｋｇ用量の経口デキサメタゾン、ＣＯＸ−２阻害剤（動物用）、ラニチジン、及びセチリジンの共投薬計画を文献に記載の通りに実施した。メトトレキサートを毎週投与し、標的化Ｂ細胞阻害を評価した。実験計画を表１５に示す。
【表１５】
2019504002.tif 000192
【０６８１】
このデータを図９１Ａ〜９１Ｂに示す。図９１Ａは、共投薬計画の１日目及び２２日目でのＮＨＰにおけるサイトカイン（ＩＬ−６）産生を示すグラフである。図９１Ｂは、ジレニアとの共投薬が、ＡＢＣの低下と一致して抗Ｐｅｇ  ＩｇＭ産生を低減することを示すグラフである。これらの結果は、以前に治療された動物は、高いベースラインの陽性ＩｇＭまたはＩｇＧタイターを有すると思われることを示す。しかしながら、一部の動物は、ＬＮＰ投与後のＩｇＭ及び／またはＩｇＧの増加を示さなかった。ＮＨＰは、高頻度の抗ＰＥＧ反応、すなわち、ＩｇＭまたはＩｇＧのいずれかを示す（約５０％）。ジレニア及び抗血小板／Ｓｙｋ／Ｄｅｘ／ＰＩ３Ｋデルタを含めたいくつかの共投薬計画は、霊長類におけるＡＢＣを改善すると思われる。図９１Ａ〜９１Ｂに示す通り、これは、ＩＬ−６産生の低下及び抗ＰＥＧ  Ｉｇ反応の低下をもたらす。共投薬は、１日目の発現を高めると思われ、ベースラインのＡＢＣ反応が生じていることを示す（図９１Ａ）。これら共投薬計画の結果を表１６に示す。
【表１６】
2019504002.tif 000193
【０６８２】
実施例２６
１．ＣＦＳＥアッセイ
細胞は、脾臓から、ＰＢＳの存在下、組織を７０ｎｍのフィルターを通して破砕することによって単離した。洗浄後、赤血球をＡＣＫ緩衝液で溶解した。ＰＢＳでさらに洗浄した後、１試料当たり２×１０６個の細胞を、ＰＢＳ中、ＣＦＳＥにて室温で５分間染色した。インキュベーション後直ちに染色反応を１５ｍＬの媒体で室温にてクエンチした。これらの細胞を次に遠心分離し、媒体で２回洗浄した。これらの細胞をその後異なる刺激の存在下、３７℃で３日間インキュベートした。分析はＭｏｄＦｉｔ４．１ソフトウェアを用いて行った。図９２は、Ｂ細胞がＤＳＰＣ  ＬＮＰの存在下で増殖することを示す。
【０６８３】
２．カルシウム流
細胞は、脾臓から、ＰＢＳの存在下、組織を７０ｎｍのフィルターを通して破砕することによって単離した。洗浄後、赤血球をＡＣＫ緩衝液で溶解した。さらに洗浄した後、１試料当たり２×１０６個の細胞を、５ｕＭのカルシウムセンサー色素ｅＦｌｕｏｒ（登録商標）５１４（番号６５−０８５９−３９、ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）にて３７℃で３０分間染色した。さらに洗浄した後、細胞をＣＤ１９にて氷上で２０分間染色した。これらの細胞をその後フローサイトメトリーで分析した。ベースラインを３０秒間取得し、次に刺激の添加後、そのシグナルを３６０秒間測定した。望ましい結果を伴う刺激（細胞刺激カクテル、番号００−４９７０−０３  ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を添加した後、そのシグナルをさらに３０秒間記録した。この分析は、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを用いて行った。図９３は、ＤＳＰＣ  ＬＮＰが、Ｂ細胞におけるカルシウム放出を誘導することを示す。
【０６８４】
実施例２７
先行研究では、ＡＢＣ現象として知られる反復投与時のＰＥＧ化ナノ粒子の有効性の低下を詳細に特徴づけている。ＬＮＰの投与に応答して生成された抗ＰＥＧ  ＩｇＭは、このＬＮＰのＰＥＧ脂質成分を認識し、ＬＮＰに結合し、それらを血行から除去する。ＬＮＰのリン脂質成分、特にＤＳＰＣは、血小板とＢ細胞を両方とも活性化し、サイトカインと「天然のＩｇＭ」の放出を引き起こし、これが投与されたＬＮＰに対する免疫応答をさらに促進し、ＡＢＣに寄与する。オレイン酸は、ＤＳＰＣ代替物として特定されている。オレイン酸によるＤＳＰＣの置換は、封入されたｍＲＮＡから同等のタンパク質発現をもたらすが、標準的なＬＮＰ製剤、例えば、ＭＣ３系のＬＮＰ製剤と比較して、Ｂ細胞の活性化を低減する。ＰＥＧ脂質として使用することができる新規なＰＥＧ脂質、例えば、ＰＥＧ  ＤＭＧ代替物もまた上記で特定される。理論に拘束されるものではないが、かかる新規なＰＥＧ脂質は、より速い拡散（より短い脂質尾基）及び低下した表面疎水性（−ＯＨ対−ＯＭｅ）によって、抗ＰＥＧ  ＩｇＭ生成を低下させると考えられる。
【０６８５】
マウスにおける最近のｈＥＰＯの複数回投与試験で、タンパク質発現のレベルが良好になり、かつ抗ＰＥＧ  ＩｇＭのレベルが低くなるＰＥＧ脂質が特定されている。本試験は、マウスにおける反復投与試験においてかかる脂質を調べるため、任意に新規なカチオン性アミノ脂質と組み合わせ、ｍＲＮＡ投与用のＬＮＰ製剤において設計した。特定のパラメータ、例えば、タンパク質発現、抗ＰＥＧ  ＩｇＭ、インビボＢ細胞活性化、及びサイトカイン発現を調べ、好ましい有効性を基にＬＮＰを差別化した。
【０６８６】
新規なＰＥＧ／Ｃｍｐｄ１８とＰＥＧ／ＭＣ３の組合せをｈＥＰＯとともに静脈内（ＩＶ）投与することによる３週間の試験をマウスで行った。具体的には、ＭＣ３の新規ＰＥＧ  ＬＮＰ及びＣｍｐｄ１８の新規ＰＥＧ  ＬＮＰを調製し、発現、抗ＰＥＧ  ＩｇＭ、インビボＢ細胞活性化、及びサイトカイン発現を複数回投与試験にて付き合わせて調べた。これらのＬＮＰ製剤をＣＤ−１マウスに対して３つの固定体積用量にてＩＶで投与した。直径のサイズ（ｎｍ）、多分散性指数（ＰＤＩ）、封入効率（ＥＥ）、ｍＲＮＡ濃度（ｕｇ／ｍＬ）、及びエンドトキシン濃度（ＥＵ／ｍＬ）をこれら新規ＬＮＰについて測定した。表１は、初回投与の実施後、これら新規なＰＥＧ脂質とのＭＣ３及びＣｍｐｄ１８のＬＮＰの上記の測定を示す。表１７のデータが示す通り、これらＬＮＰはインビボ投与に十分なサイズ、ＰＤＩ、及びＥＥを有していた。
【表１７−１】
2019504002.tif 000194
【表１７−２】
2019504002.tif 000195
【０６８７】
ＭＣ３の新規ＰＥＧ  ＬＮＰ及びＳＭ８６の新規ＰＥＧ  ＬＮＰの直径のサイズ（ｎｍ）、多分散性指数（ＰＤＩ）、封入効率、ｍＲＮＡ濃度（ｕｇ／ｍＬ）、及びエンドトキシン濃度を投与後３週間で同様に測定した。このデータを以下の表１８に示す。表１７及び１８のデータは、ＭＣ３及びＣｍｐｄ１８の両ＬＮＰの生理化学的特性が、この試験を通して依然として一定であったことを示す。さらに、表１７及び１８に示すこれら新規ＬＮＰのＥＥ及びサイズは、当技術分野で承認されている範囲内である。
【表１８】
2019504002.tif 000196
【０６８８】
さらなるデータを図７４Ａ〜７４Ｂに示す。図７４Ａ〜７４Ｂは、ｈＥＰＯ  ｍＲＮＡ−ＬＮＰ製剤の１、２、及び３週目での週１回のＩＶ投与の６時間後のｈＥＰＯ発現を示す。これらのデータは、Ｃｍｐｄ１８系ＬＮＰの優れた発現を示し、さらに、試験した新規ＰＥＧ脂質のいくつかによるかなりのタンパク質発現を証明する。
【０６８９】
ＭＣ３及びＣｍｐｄ１８のＬＮＰにおけるサイトカイン発現を表１９〜２２に示す。ＩＦＮ−γ誘導タンパク質１０（ＩＰ−１０）は、炎症に関与するケモカインであり、インターロイキン６（ＩＬ−６）は炎症性サイトカインである。第１週でのＭＣ３及びＣｍｐｄ１８のＬＮＰの投与の６時間後のＩＰ−１０（表１９）及びＩＬ−６（表２０）の濃度（ｐｇ／ｍＬ）を示す。
【表１９】
2019504002.tif 000197
【表２０−１】
2019504002.tif 000198
【表２０−２】
2019504002.tif 000199
【０６９０】
第２週でのＭＣ３及びＳＭ８６のＬＮＰの投与の６時間後のＩＰ−１０ならびにＩＬ−６の濃度（ｐｇ／ｍＬ）をそれぞれ、表２１及び表２２に示す。これらのデータは、試験した新規ＰＥＧ脂質のいくつかが、特に、ある特定の新規ＰＥＧ脂質がカチオン性アミノ脂質としてＣｍｐｄ１８と併せて処方された場合に、低レベルの炎症性ケモカイン／サイトカイン発現をもたらすことを示す。
【表２１】
2019504002.tif 000200
【表２２】
2019504002.tif 000201
【０６９１】
図７５では、第二回投与の９６時間後の抗ＰＥＧ  ＩｇＭのレベル（ｎｇ／ｍＬ）を測定した。このグラフのデータは、これら新規ＰＥＧ脂質に対して、低いレベルの抗ＰＥＧ  ＩｇＭ生成を示す。上記のデータは、ある特定の新規ＰＥＧ脂質がＬＮＰ製剤に用いられた場合は血中クリアランス促進が観察されなかったことを示す。興味深いことに、ＭＣ３群のほとんどが発現を維持した一方、Ｃｍｐｄ１８群のほとんどは３週間の試験を通して発現を増加させた。試験した新規ＰＥＧ脂質のうち、Ｃｍｐｄ４０５、Ｃｍｐｄ３９６、及びＣｍｐｄ４０３は、抗ＰＥＧ  ＩｇＭのレベルが最も低かった。頭基において１つのメチル基がＤＳＰＣと異なるに過ぎないＣｍｐｄ１６０が、インビボでＩＶ投与されたＬＮＰにおいて試験した際に本質的に免疫が活動しなかったことは、本試験ならびに以前に記載された試験において非常に驚くべき観察であった。
【０６９２】
実施例２８
新規なＤＳＰＣ及び／オレイン酸誘導体を含むＬＮＰを調製し、単回投与試験において、標準的なＤＳＰＣ製剤と比較したルシフェラーゼ（ｍ１ψ修飾ｍＲＮＡがコードするルシフェラーゼ）の発現及びＢ細胞の活性化を試験した。試験したＤＳＰＣ／オレイン酸類似体を以下の表２３に示す。
【表２３−１】
2019504002.tif 000202
【表２３−２】
2019504002.tif 000203
【化１６７】
2019504002.tif 000204
【化１６８】
2019504002.tif 000205
【０６９３】
表２３に示す通り、これらのＬＮＰをマウスに対して単回投与としてＩＶで実施した。このデータを図７６及び７７に示す。様々なＬＮＰ製剤によるＬｕｃ発現を、全身ＢＬＩ画像化を用いた投与の３、６、及び９時間後の全光束（ｐ／ｓ）の測定によって評価した（図７６参照）。脾臓ＣＤ１９＋細胞における活性化Ｂ細胞（ＣＤ８６＋ＣＤ６９＋）のパーセンテージも測定した。これらの活性化Ｂ細胞の頻度を図７７に示す。
【０６９４】
一般に、光束は３時間から６時間まで増加し、２４時間までに発現の低下を示した。一部発現のばらつきが観察されたものの、試験したすべての処方がインビボでかなりのルシフェラーゼ発現を示した。この脾臓中の脾臓ＣＤ１９＋細胞（Ｂリンパ球）におけるＣＤ８６＋ＣＤ６９＋Ｂ細胞の％もまた、Ｂ細胞活性化の指標として、これらＬＮＰ処方について測定した。試験したすべての処方は、ＤＳＣＰ対照処方のものより低い、及び多くの場合かなり低いレベルでＢ細胞活性化を示した。
【０６９５】
実施例２９
修飾されたＰＥＧ脂質を備えたＣｍｐｄ１８含有ＬＮＰ内のｈＥＰＯ  ｍＲＮＡの反復投与を次に非ヒト霊長類にて行った。簡潔には、カニクイザルを、静脈内（ＩＶ）注入によって投与されたＬＮＰ封入ｍＲＮＡで処理した。オレイン酸及びＣｍｐｄ４０３含有ＬＮＰを分析し、それらが血中クリアランス促進（ＡＢＣ）に与える影響を測定した。特に、ＤＳＰＣ及びＰＥＧ脂質の置換が、低Ｂ細胞活性化、低抗ＰＥＧ  ＩｇＭ、及び高等種におけるタンパク質発現の維持を示すかどうかを判断することが目的であった。以下の４つの群を比較した：ＭＣ３／ＤＳＰＣ／Ｃｈｏｌ／Ｃｍｐｄ４２２（対照）、Ｃｍｐｄ１８／ＤＳＰＣ／Ｃｈｏｌ／Ｃｍｐｄ４２２（対照）、Ｃｍｐｄ１８／ＤＳＰＣ／Ｃｈｏｌ／Ｃｍｐｄ４０３（試験群）、及びＣｍｐｄ１８／オレイン酸／Ｃｈｏｌ／Ｃｍｐｄ４２２（試験群）。これらのサルに、上記ＬＮＰ中、プソイドウリジンで修飾されたｈＥＰＯ  ｍＲＮＡ（０．２ｍｇ／ｋｇ）の毎週投与を６週間実施した。
【０６９６】
ＡＵＣを含めた薬物動態パラメータをＣｍｐｄ１８：Ｃｍｐｄ４０３の組合せについて測定した。構成的ＡＵＣが、ベースラインを補完して経時的に見られ、サイトカインレベル及び低〜全くないレベルのＩｇＭが観察された。
【０６９７】
これら処方の各々に関する粒子特性を以下の表２４に示す。本試験に用いたｍＲＮＡは、ＥＰＯをコードするｍ１ψ修飾ｍＲＮＡであった。処方は、成分を以下のｍｏｌ％、すなわち、５０：１０：３８．５：１．５で含む。表２４は、サイズ、封入効率（ＥＥ）、及び多分散性指数（ＰＤＩ）を示す。粒子は、インビボ試験の許容限界内の特性を有していた。
【表２４】
2019504002.tif 000206
【０６９８】
６週間の実験を通して、ｈＥＰＯタンパク質発現、抗ＰＥＧ  ＩｇＭ及びＩｇＧレベル、ＩｇＭ、ＩｇＧ、及びサイトカインならびに補体レベルをこれらの新規ＬＮＰについて測定した。図７９は、１日目、８日目、１５日目、２２日目、２９日目、３６日目、及び４３日目におけるｈＥＰＯ  ｍＲＮＡ−ＬＮＰ製剤の週１回のＩＶ投与の前、投与の２時間後、６時間後、１２時間後、２４時間後、４８時間後、及び７２時間後のｈＥＰＯ発現（ｎｇ／ｍＬ）を示す。
【０６９９】
図８０では、１日目、８日目、１５日目、２２日目、２９日目、３６日目、及び４３日目におけるｈＥＰＯ  ｍＲＮＡ−ＬＮＰ製剤の週１回のＩＶ投与後に、抗ＰＥＧ  ＩｇＭのレベル（Ｕ／ｍＬ）を測定した。図８１は、１日目、８日目、１５日目、２２日目、２９日目、３６日目、及び４３日目におけるｈＥＰＯ  ｍＲＮＡ−ＬＮＰ製剤の週１回のＩＶ投与後に測定した抗ＰＥＧ  ＩｇＧのレベル（Ｕ／ｍＬ）を示す。Ｃｍｐｄ４０３群は、６週間にわたるタンパク質発現の維持、抗ＰＥＧ  ＩｇＭ及び抗ＰＥＧ  ＩｇＧのベースラインレベルの維持を示し、補体活性化を示さず、最小のサイトカイン活性化を示した。抗ＰＥＧ  ＩｇＭ及びＩｇＧ、補体、ならびにサイトカインレベルの上昇は、タンパク質発現の減少と逆の相関関係があると思われる。ＭＣ３及びＣｍｐｄ１８の対照ならびにオレイン酸群は、すべて第６週でｈＥＰＯタンパク質発現の低下を示した。オレイン酸群は、最も高いタンパク質産生の初期レベルを示した。ＭＣ３及びＣｍｐｄ１８の対照及びＣｍｐｄ４０３群は、同様のｈＥＰＯ発現レベルを示した。Ｃｍｐｄ１８／ＤＳＰＣは、０．２ｍｇ／ｋｇにおいてＭＣ３／ＤＳＰＣと比較してｈＥＰＯ発現の増加を示さなかったが、Ｃｍｐｄ１８／オレイン酸は、ＭＣ３／ＤＳＰＣ及びＣｍｐｄ１８／ＤＳＰＣと比較して、タンパク質発現の増加（３倍）を示した。表２５は、これら４種のＬＮＰ群のＡＵＣによって測定されたｈＥＰＯ発現を示す。具体的には、ｈＥＰＯ  ＡＵＣ（ｎｇ／ｍＬ＊時間）を、６週間の試験の各週に測定した。
【表２５】
2019504002.tif 000207
【０７００】
カチオン性アミノ脂質としてＣｍｐｄ１８を用いて処方された粒子は、霊長類における反復投与を通して、タンパク質発現に関して標準的なＭＣ３系ＬＮＰより優れていた。ＤＳＰＣ置換物としてのオレイン酸は、初期に高いタンパク質発現をもたらしたが、本試験にわたって完全にはＡＢＣを改善しなかった。ＰＥＧ脂質置換物としての化合物４０３は、本試験にわたるｈＥＰＯ  ＡＵＣの維持からも明らかなように、ＡＢＣの低減をもたらした。総合すれば、これらのデータは、Ｂ細胞の削除が、５回の注入後にＡＢＣがないことにつながることを示す。特に、ＬＮＰ注入の７日前の抗ＣＤ２０の単回注入は、（１）ＰＥＧに対するＩｇＭ／ＩｇＧが低い／ないこと、（２）ＲＮＡまたはタンパク質のクリアランスがないこと、及び（３）サイトカイン／補体活性化が低い／ないことにつながり、これをＬＮＰ封入ｍＲＮＡを特徴づける共投与計画の魅力的な候補にする。
【０７０１】
図８２は、本試験の処理前血、１日目、２２日目、４３日目、及び４４日目においてＣＤ１９＋細胞中の活性化Ｂ細胞（ＣＤ８６＋ＣＤ２７＋）のパーセンテージを示す。図８２に示す通り、すべてのＬＮＰ群が低いＢ細胞活性化を示した。Ｃｍｐｄ１８／ＤＳＰＣ／Ｃｈｏｌ／Ｃｍｐｄ４０３またはＣｍｐｄ１８／オレイン酸／Ｃｈｏｌ／Ｃｍｐｄ４２２を投与した対象のほぼすべては、ＣＤ１９＋細胞のＢ細胞活性化が５％未満であり、２．５％に近い平均Ｂ細胞活性化パーセンテージを示し、これが本試験を通じて維持された。単球活性化のパーセンテージも本試験の処理前血、１日目、２２日目、４３日目、及び４４日目で測定した。これらの結果を図８３に反映する。これらＬＮＰ群のすべてが、低い単球活性化を示し、Ｃｍｐｄ１８／ＤＳＰＣ／Ｃｈｏｌ／Ｃｍｐｄ４０３またはＣｍｐｄ１８／オレイン酸／Ｃｈｏｌ／Ｃｍｐｄ４２２を投与した対象のすべてが、本試験を通じて平均３％未満の単球活性化を維持した。
【０７０２】
実施例３０
上記のデータは、Ｂ細胞の活性化が、ＬＮＰに封入された核酸、例えばｍＲＮＡを投与された動物におけるＡＢＣ現象の主な誘因であることを示す。先行技術研究は、デキサメタゾン及び／またはコルチコステロイド等の化合物でＡＢＣ現象を軽減しようと試みた。本発明者らは、特にＬＮＰに封入されたｍＲＮＡの投与に関係があるＡＢＣ現象の詳細な機構的理解を提供している。ＬＮＰは、ＡＢＣ効果を推進することが証明されているインビボでの複数の細胞間相互作用を有する。ＬＮＰのＩＶ注入は、抗ＰＣ  ＩｇＭ（天然のＩｇＭ）の分泌の増加及び抗ＰＥＧ  ＩｇＭ反応の進行の誘発につながる。さらに、ＬＮＰのＩＶ注入の反復は、天然のＩｇＭのレベルの増加につながる。主な中心点は、脾臓であると思われ、ＡＢＣがＢ１細胞機能によって推進されるという仮説を高度に支持する。これらの細胞は、「天然のＩｇＭ」（例えばＢ１ａ細胞）の分泌に関与するが、Ｂ１ｂ細胞は刺激された場合にＩｇＧを産生することもできる。これらの免疫グロブリンは、ＬＮＰの表面に存在するＰＥＧ、リン脂質、及び最も可能性高くコレステロールドメインを認識する。本明細書では、天然のＩｇＭは、標準的なＬＮＰ（例えば、ＤＳＰＣ含有ＬＮＰ）の表面に存在するＰＣモチーフを認識する可能性があることが示される。
【０７０３】
ＬＮＰのＩＶ注入は、Ｂ１ａ細胞の急速な活性化につながり、抗ＰＣ  ＩｇＭ（天然のＩｇＭ）の分泌を増加させ、ＬＮＰのＩＶ注入の反復は、天然のＩｇＭのレベルの増加につながる。脾臓の除去は、ＡＢＣに大きく寄与し得るＢ細胞（特にＢ１）の活性化を防ぐ。特に、脾臓摘出された動物は、（１）ＰＥＧに対するＩｇＭ／ＩｇＧが低く／なく、（２）ＲＮＡまたはタンパク質のクリアランスがなく、及び（３）サイトカイン／補体活性化が低い／ない。本明細書におけるＡＢＣ効果に関与する機構及び細胞型に基づいて、本発明者らは、特に、長期投与の反復が所望の治療指数に必要な場合に、ある特定のＢ細胞を標的化する共投与計画が、ＬＮＰに封入されたｍＲＮＡによる対象の治療に有用であり得るという仮説を立てた。
【０７０４】
共投与でのＩＶ注入によるｈＥＰＯ  ｍＲＮＡの反復投与試験をカニクイザルで行った。サルに、表２６に示す実験計画に従うＭＣ３−ＬＮＰ内のｈＥＰＯ  ｍＲＮＡを投与し、表２７に示す計画に従って、リツキシマブ、イデラリシブ、フォスタマチニブ、またはフィンゴリモドのうちの１つを共投与した。
【表２６】
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【表２７】
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【０７０５】
この実験データを図８４Ａ〜９０に示す。図８４Ａ及び８４Ｂは、初回注入後及び第５回注入後のＥＰＯ発現を示す。具体的には、ＥＰＯ濃度（ｎｇ／ｍＬ）を、初回注入及び第５回注入の２時間後、６時間後、１２時間後、２４時間後、及び４８時間後に測定した。図８５Ａ〜８５Ｅは、本試験の１日目及び２９日目の各共投薬のＥＰＯ発現を示す。特に、ＥＰＯ濃度（ｎｇ／ｍＬ）を、各共投薬群について、１日目及び２９日目の２時間、６時間、１２時間、２４時間、及び４８時間に測定した。免疫細胞集団も測定した。具体的には、−７日、初回注入の２４時間後、及び第５回注入の２４時間後の各共投薬群について、ＰＢＭＣ中のＢ細胞（図８６Ａ）、Ｂ１ａ細胞（図８６Ｂ）、及び単球（図８６Ｃ）のパーセンテージを測定した。Ｂ細胞の活性化を図８７に反映する。循環Ｂ細胞中の活性化Ｂ細胞のパーセンテージを、−７日、初回注入の２４時間後、及び第５回注入の２４時間後の各共投薬群について測定した。
【０７０６】
対照群では、活性化Ｂ細胞のパーセンテージは、初回注入の２４時間後、さらに第５回注入の２４時間後に増加し、従って、より多くのＬＮＰ注入がより高いＢ細胞の活性化をもたらすことを示した。活性化Ｂ細胞のパーセンテージは、リツキシマブ群の対象でＢ細胞が削除されたという事実のため、この群で初回注入の２４時間後に急激に減少した。Ｂ細胞の枯渇は、３４日目（第５回注入の後）でもなお、抗ＰＥＧ  ＩｇＭ及びＩｇＧの減少と相関した。Ｂ細胞の枯渇はまた、タンパク質発現の維持とよく相関した。特に、Ｂ細胞の枯渇は、５回の注入後に、ＡＢＣがないことを示す発現の低下をもたらし、Ｂ細胞の枯渇はさらに、抗ＰＥＧ反応をもたらさなかった。Ｂ細胞の活性化は、イデラリシブ群で観察されず、Ｂ細胞の頻度は、わずかに減少した（図８６Ａ参照）。フォスタマチニブ及びフィンゴリモド群は、対照群のものと同様の正常なＢ細胞の活性化を示した。Ｂ１ａ細胞に関しては、Ｂ１ａ細胞の頻度は、すべての共投薬群で、注入前は正常であった（図８６Ｂ参照）。Ｂ１ａ細胞の頻度がわずかに低下したリツキシマブ群を除き、すべての共投薬群がＬＮＰ注入後にＢ１ａ細胞の頻度の増加を示し、ＬＮＰの注入がＢ１ａの活性化及び増殖につながることを意味した。
【０７０７】
単球活性化を図８８に反映する。循環ＰＢＭＣ中の活性化単球／マクロファージのパーセンテージを、−７日、初回注入の２４時間後、及び第５回注入の２４時間後の各共投薬群について測定した。図８６Ｃに示す通り、単球の頻度は、大きな低下が観察されたフィンゴリモドを除き、すべての共投薬群で正常であった。注入後の活性化単球／マクロファージのパーセンテージの増加は、フィンゴリモドの共投薬群で観察されたのみであった。フィンゴリモド群で単球の頻度が注入後に大きく低下したことから、このデータは、アポトーシス前の単球の活性化を示唆する。
【０７０８】
図８９Ａ及び８９Ｂは、抗ＰＥＧ反応を示す。抗ＰＥＧ  ＩｇＭレベル（Ｕ／ｍＬ）（図８９Ａ）及び抗ＰＥＧ  ＩｇＧレベル（Ｕ／ｍＬ）（図８９Ｂ）を、ベースライン、初回注入後９日目、及び第５回注入後３４日目の各共投薬群について測定した。
【０７０９】
実施例３１
ＡＢＣ現象におけるＩｇＭの役割をさらに調べるため、ＬＮＰに封入されたＥＰＯをコードするｍＲＮＡを対照マウス及び分泌ＩｇＭを欠くマウス（ｓＩｇＭ−／−マウス）に投与した。図７８は、６週間の試験にわたって、循環ＩｇＭを除去することがＥＰＯ発現に与える影響を示す。特に、ＥＰＯ濃度（ｎｇ／ｍＬ）を処理前血、６時間、及び２４時間で、６週間毎週測定した。陰性対照の２群、すなわち、ｃ５７Ｂｌ６Ｊ／ＰＢＳ及びｓＩｇＭ−／−ＰＢＳでは、ＥＰＯのレベルは本試験を通してベースラインにとどまったが、ｍＲＮＡ処理群では、ＥＰＯ濃度は投与後６時間でピークに達し、その後、ｍＲＮＡ投与の２週間後までにベースラインに戻った。第１週では、ＥＰＯ濃度は、６時間の時点（投与後ピーク発現）でｃ５７Ｂｌ６Ｊマウス及びｓＩｇＭ−／−マウスでほぼ同じであったことに留意されたい。しかしながら、本実験の時間経過とともに、ｃ５７Ｂｌ６Ｊマウスにおいて、ＥＰＯ発現に関するＡＵＣの減少から明らかなように、ＡＢＣ現象が観察された。対照的に、ｓＩｇＭ−／−マウスは、本実験の期間を通してＬＮＰに封入されたｍＲＮＡの各反復投与後に一貫して高いレベルのＥＰＯを産生した。従って、循環ＩｇＭの非存在下では、５回のｍＲＮＡの注入後でもなお発現の低下が観察されず、ＡＢＣが全くないことを証明した。
【０７１０】
図９０は、ＡＢＣ現象における抗ＰＥＧ  ＩｇＭの重要性をさらに示す。図９０Ａ〜９０Ｂは、図７８の群のうちの２群、すなわち、Ｃ５７Ｂｌ６Ｊ（図９０Ａ）及びｓＩｇＭ−／−（図９０Ｂ）マウスにおける抗ＰＥＧ  ＩｇＭレベル（Ｕ／ｍＬ）及びＥＰＯレベル（ｎｇ／ｍＬ）を示す２つのグラフである。図９０Ａでは、抗ＰＥＧ  ＩｇＭレベルを、ライトグレーの丸でグラフにし、抗ＰＥＧ  ＩｇＭの増加は、ＡＢＣの発現と相関している。ｓＩｇＭ−／−マウスでは、これは黒丸で表され、ベースラインにとどまっている（図９０Ｂ）。ＥＰＯ濃度は、黒丸（図９０Ａ）及び黒四角（図９０Ｂ）で示す。これらのデータは、タンパク質発現と抗ＰＥＧ  ＩｇＭレベルの間の逆相関を明らかに示す。ＩｇＭレベルが高い場合にＥＰＯ発現は抑制され、ＡＢＣが生じていることを示す。ＩｇＭレベルが抑制されると、例えば、ノックアウトマウスにおいて、ＥＰＯ発現は大きく向上し、ＡＢＣが低下する。従って、循環ＩｇＭの非存在下では、発現の低下は観察されず（ＡＢＣがない）、抗ＰＥＧ反応がないことと相関した。
【０７１１】
実施例３２
例示化合物の合成は以下の通りである：
化合物３９３：Ｎ−（２−（ジドデシルアミノ）エチル）−Ｎ−ドデシルグリシン
メチルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−ドデシルグリシネート
【化１６９】
2019504002.tif 000210
化学式：Ｃ２０Ｈ３９ＮＯ４
分子量：３５７．５４
Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）グリシンメチルエステル（７．７ｇ、４０．７ｍｍｏｌ）の０℃のＤＭＦ（１００ｍＬ）溶液を、ＮａＨ（６０％、１．７１ｇ、４２．７ｍｍｏｌ）と反応させ、この混合物を３０分間攪拌した。この溶液を室温に戻し、その後１−ブロモドデカン（１５．２ｇ、６１．０ｍｍｏｌ）を加え、この反応物を一夜攪拌した。この反応物を水でクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出した。この有機物をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、減圧濃縮した。ＩＳＣＯシリカフラッシュクロマトグラフィー（０〜２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）による精製で、メチルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−ドデシルグリシネートを得た（４．０３ｇ、２８％）。
１Ｈ−ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ：  ｐｐｍ  ４．０１−３．８４  （ｂｒ．  ｍ，  ２Ｈ）；３．７５  （ｓ，  ３Ｈ）；３．２７  （ｂｒ．  ｍ，  ２Ｈ）；１．６７−１．３９  （ｂｒ．  ｍ，  １１Ｈ）；１．２８  （ｂｒ，  １８Ｈ）；０．９０  （ｔ，  ３Ｈ）．
【０７１２】
メチルドデシルグリシネート
【化１７０】
2019504002.tif 000211
化学式：Ｃ１５Ｈ３１ＮＯ２
分子量：２５７．４２
メチルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−ドデシルグリシネート（４．０３ｇ、１１．３ｍｍｏｌ）の０℃のＤＣＭ（１７ｍＬ）溶液に、ＴＦＡ（１７ｍＬ、２２６ｍｍｏｌ）を滴加した。この反応物を室温に戻し、６時間攪拌した。この反応混合物を減圧濃縮し、その粗物質をＤＣＭに溶解した。この溶液を１０％ＮａＯＨ、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、減圧濃縮してメチルドデシルグリシネートを得た（２．８４ｇ、９８％）。
１Ｈ−ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ：  ｐｐｍ  ３．７５  （ｓ，  ３Ｈ）；３．４４  （ｓ，  ２Ｈ）；２．６２  （ｔ，  ２Ｈ）；１．７０  （ｂｒ，  １Ｈ）；１．５１  （ｍ，  ２Ｈ）；１．２９  （ｂｒ，  １８Ｈ）；０．９０  （ｔ，  ３Ｈ）．
【０７１３】
２−（ジドデシルアミノ）エタン−１−オール
【化１７１】
2019504002.tif 000212
化学式：Ｃ２６Ｈ５５ＮＯ
分子量：３９７．７３
１−ブロモドデカン（１０ｇ、４０．１ｍｍｏｌ）のＭｅＣＮ（８４ｍＬ）溶液に、エタノールアミン（１．１０ｍＬ、１８．２ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（１１．１ｇ、８０．１ｍｍｏｌ）、及びＫＩ（３０２ｍｇ、１．８２ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を８２℃で４８時間攪拌した。この反応混合物を室温に冷却し、濾過し、その固体をヘキサンで洗浄した。この濾液をヘキサンで抽出し、合わせた抽出物を減圧濃縮した。ＩＳＣＯシリカフラッシュクロマトグラフィー（０〜２０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）による精製で、２−（ジドデシルアミノ）エタン−１−オールを得た（３．８７ｇ、５３％）。
ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：    ＲＴ  ＝  ２．６９分．  ＭＳ  （ＥＳ）：  Ｃ２６Ｈ５５ＮＯに対するｍ／ｚ  （ＭＨ＋）  ３９８．５６
１Ｈ−ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ：  ｐｐｍ  ３．５７  （ｔ，  ２Ｈ）；２．６３  （ｔ，  ２Ｈ）；２．４９  （ｂｒ．  ｍ，  ４Ｈ）；１．４８  （ｂｒ．  ｍ，  ４Ｈ）；１．２９  （ｂｒ，  ３６Ｈ）；０．９１  （ｔ，  ６Ｈ）．
【０７１４】
Ｎ−（２−クロロエチル）−Ｎ−ドデシルドデカン−１−アミン
【化１７２】
2019504002.tif 000213
化学式：Ｃ２６Ｈ５４ＣｌＮ
分子量：４１６．１８
２−（ジドデシルアミノ）エタン−１−オール（３．８７ｇ、９．７３ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１．７６ｍＬ、１２．６ｍｍｏｌ）の０℃のＤＣＭ（５０ｍＬ）溶液に、メタンスルホニルクロリド（０．９４１ｍＬ、１２．２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５ｍＬ）溶液を滴加した。この反応物を室温に戻し、１６時間攪拌した。この反応物を水の添加によってクエンチし、ＤＣＭで抽出した。この有機層を飽和ＮａＨＣＯ３、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、減圧濃縮した。ＩＳＣＯシリカフラッシュクロマトグラフィー（０〜１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）による精製で、Ｎ−（２−クロロエチル）−Ｎ−ドデシルドデカン−１−アミンを得た（１．９２ｇ、４７％）。
１Ｈ−ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ：  ｐｐｍ  ３．５１  （ｔ，  ２Ｈ）；２．７８  （ｔ，  ２Ｈ）；２．４７  （ｂｒ．  ｍ，  ４Ｈ）；１．４４  （ｂｒ．  ｍ，  ４Ｈ）；１．２８  （ｂｒ，  ３６Ｈ）；０．９０  （ｔ，  ６Ｈ）．
【０７１５】
メチルＮ−（２−（ジドデシルアミノ）エチル）−Ｎ−ドデシルグリシネート
【化１７３】
2019504002.tif 000214
化学式：Ｃ４１Ｈ８４Ｎ２Ｏ２
分子量：６３７．１４
メチルドデシルグリシネート（４２５ｍｇ、１．６５ｍｍｏｌ）のＭｅＣＮ（１０ｍＬ）溶液に、Ｎ−（２−クロロエチル）−Ｎ−ドデシルドデカン−１−アミン（８２５ｍｇ、１．９８ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（４５７ｍｇ、３．３０ｍｍｏｌ）、及びＫＩ（２７ｍｇ、０．１６５ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を８２℃で７２時間攪拌した。この反応混合物を濾過し、その固体をヘキサンで洗浄した。この濾液を減圧濃縮し、粗生成物を得た。ＩＳＣＯシリカフラッシュクロマトグラフィー（０〜２０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）による精製で、メチルＮ−（２−（ジドデシルアミノ）エチル）−Ｎ−ドデシルグリシネートを得た（６５２ｍｇ、６２％）。
ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：    ＲＴ  ＝  ３．７７分．  ＭＳ  （ＥＳ）：Ｃ４１Ｈ８４Ｎ２Ｏ２に対するｍ／ｚ  （ＭＨ＋）  ６３８．１８
１Ｈ−ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ：  ｐｐｍ  ３．７２  （ｓ，  ３Ｈ）；３．４１  （ｓ，  ２Ｈ）；２．９０−２．２０  （ｂｒ．  ｍ，  １０Ｈ）；１．６０−１．００  （ｂｒ．  ｍ，  ６０Ｈ）；０．９０  （ｔ，  ９Ｈ）．
【０７１６】
Ｎ−（２−（ジドデシルアミノ）エチル）−Ｎ−ドデシルグリシン
化合物３９３
【化１７４】
2019504002.tif 000215
化学式：Ｃ４０Ｈ８２Ｎ２Ｏ２
分子量：６２３．１１
メチルＮ−（２−（ジドデシルアミノ）エチル）−Ｎ−ドデシルグリシネート（６５２ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（６ｍＬ）及び１ＭのＬｉＯＨ（５ｍＬ、５ｍｍｏｌ）溶液を、６５℃で１６時間攪拌した。この反応物を室温に冷却し、１０％ＨＣｌで酸性にした。この混合物をクロロホルムで抽出し、その有機物をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、減圧濃縮した。ＩＳＣＯシリカフラッシュクロマトグラフィー（０〜２０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）による精製で、Ｎ−（２−（ジドデシルアミノ）エチル）−Ｎ−ドデシルグリシンを得た（１５３ｍｇ、２４％）。
ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：    ＲＴ  ＝  ３．６０分．  ＭＳ  （ＥＳ）：Ｃ４０Ｈ８２Ｎ２Ｏ２に対する  ｍ／ｚ  （ＭＨ＋）  ６２４．０７
１Ｈ−ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ：  ｐｐｍ  ４．０２−３．４０  （ｂｒ．  ｍ，  ６Ｈ）；３．１６  （ｂｒ，  ６Ｈ）；１．７８  （ｂｒ，  ６Ｈ）；１．４６−１．０１  （ｂｒ．  ｍ，  ５４Ｈ）；０．９０  （ｔ，  ９Ｈ）．
【０７１７】
化合物１２５：３−（（８−（ヘプタデカン−９−イルオキシ）−８−オキソオクチル）（８−（ノニルオキシ）−８−オキソオクチル）アミノ）プロパン酸
ヘプタデカン−９−イル８−ブロモオクタノエート
【化１７５】
2019504002.tif 000216
化学式：Ｃ２５Ｈ４９ＢｒＯ２
分子量：４６１．５７
８−ブロモオクタン酸（１．０４ｇ、４．６ｍｍｏｌ）及びヘプタデカン−９−オール（１．５ｇ、５．８ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２０ｍＬ）溶液に、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩（１．１ｇ、５．８ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３．３ｍＬ、１８．７ｍｍｏｌ）、及びＤＭＡＰ（１１４ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を室温で１８時間攪拌した。この反応物をジクロロメタンで希釈し、飽和重炭酸ナトリウムで洗浄した。この有機層を分離し、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥した。この有機層を濾過し、減圧蒸発させた。この残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜１０％酢酸エチル）で精製し、ヘプタデカン−９−イル８−ブロモオクタノエートを得た（８７５ｍｇ、１．９ｍｍｏｌ、４１％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ：  ｐｐｍ  ４．８９  （ｍ，  １Ｈ）；３．４２  （ｍ，  ２Ｈ）；２．３１  （ｍ，  ２Ｈ）；１．８９  （ｍ，  ２Ｈ）；１．７３−１．１８  （ｂｒ．  ｍ，  ３６Ｈ）；０．８８  （ｍ，  ６Ｈ）．
【０７１８】
ノニル８−ブロモオクタノエート
【化１７６】
2019504002.tif 000217
化学式：Ｃ１７Ｈ３３ＢｒＯ２
分子量：３４９．３５
８−ブロモオクタン酸（５ｇ、２２ｍｍｏｌ）及びノナン−１−オール（６．４６ｇ、４５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１００ｍＬ）溶液に、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩（４．３ｇ、２２ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（５４７ｍｇ、４．５ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を室温で１８時間攪拌した。この反応物をジクロロメタンで希釈し、飽和重炭酸ナトリウムで洗浄した。この有機層を分離し、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥した。この有機層を濾過し、減圧下で蒸発させた。この残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜１０％酢酸エチル）で精製し、ノニル８−ブロモオクタノエートを得た（６．１ｇ、１７ｍｍｏｌ、７７％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ：  ｐｐｍ  ４．０６  （ｔ，  ２Ｈ）；３．４０  （ｔ，  ２Ｈ）；２．２９  （ｔ，  ２Ｈ）；１．８５  （ｍ，  ２Ｈ）；１．７２−０．９７  （ｍ，  ２２Ｈ）；０．８８  （ｍ，  ３Ｈ）．
【０７１９】
ヘプタデカン−９−イル８−（（３−ヒドロキシプロピル）アミノ）オクタノエート
【化１７７】
2019504002.tif 000218
化学式：Ｃ２８Ｈ５７ＮＯ３
分子量：４５５．７７
８．８７ｇ（１９．２ｍｍｏｌ）のヘプタデカン−９−イル８−ブロモオクタノエート及び２９ｍＬ（３８４ｍｍｏｌ）の３−アミノプロパノールの２５０ｍＬエタノール溶液を５０℃に加熱して２０時間攪拌したところ、出発臭化物は、ＬＣ／ＭＳでは残っていなかった。この溶液を室温に冷却し、濃縮し、その残渣をＤＣＭに溶解した。この溶液を、５％の重炭酸ナトリウム水溶液で２回洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、その濾液を無色油になるまで濃縮した。これをシリカにて、１００％ＤＣＭから１０％ＤＣＭ／９０％  ８０：２０：１ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨでクロマトグラフィーに付し、ヘプタデカン−９−イル８−（（３−ヒドロキシプロピル）アミノ）オクタノエート（７．９８ｇ、１７．５ｍｍｏｌ、９１％）を無色油として得た。
ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：  ＲＴ  ＝  ２．５２分．  ＭＳ  （ＥＳ）：Ｃ２８Ｈ５７ＮＯ３に対する  ｍ／ｚ  （ＭＨ＋）  ４５６．８．
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ：  ｐｐｍ  ４．８６  （五重項，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ６  Ｈｚ）；３．８１  （ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．５  Ｈｚ）；２．８８  （ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．５  Ｈｚ）；２．６０  （ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．５  Ｈｚ）；２．４４  （ｂｒ．  ｓ，  １Ｈ）；２．２７  （ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．５  Ｈｚ）；１．７０  （ｍ，  ２Ｈ）；１．６１  （ｍ，  ２Ｈ）；１．４９  （ｍ，  ６Ｈ）；１．２５  （ｂｒ．  ｍ，  ３１Ｈ）；０．８８  （ｔ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．５  Ｈｚ）．
【０７２０】
ヘプタデカン−９−イル８−（（３−ヒドロキシプロピル）（８−（ノニルオキシ）−８−オキソオクチル）アミノ）オクタノエート
【化１７８】
2019504002.tif 000219
化学式：Ｃ４５Ｈ８９ＮＯ５
分子量：７２４．２１
７．９８ｇ（１７．５ｍｍｏｌ）のヘプタデカン−９−イル８−（（３−ヒドロキシプロピル）アミノ）オクタノエート及び６．１２ｇ（１７．５ｍｍｏｌ）のノニル８−ブロモオクタノエートの１００ｍＬ乾燥アセトニトリル混合物に、乾燥窒素下、３．２ｇ（１９．３ｍｍｏｌ）のヨウ化カリウム、次いで９．７ｇ（７０ｍｍｏｌ）の炭酸カリウムを加え、この混合物を２５ｍＬの乾燥シクロペンチルメチルエーテルで希釈した。得られた白色混合物を９０℃まで加熱して２８時間攪拌し、その後室温に冷却し、濾過し、この濾過固体をＤＣＭで洗浄し、その濾液を濃縮した。この残渣を５％重炭酸ナトリウム水溶液及びＤＣＭ間で分配し、相を分離し、水相をＤＣＭで２回抽出した。有機相を合わせ、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そのろ液を黄色油になるまで濃縮した。これをシリカにて、１００％ＤＣＭから５０％ＤＣＭ／５０％  ８０：２０：１ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨでクロマトグラフィーに付し、ヘプタデカン−９−イル８−（（３−ヒドロキシプロピル）（８−（ノニルオキシ）−８−オキソオクチル）アミノ）オクタノエート（１０．１４ｇ、１４ｍｍｏｌ、８０％）を淡黄色油として得た。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ：  ｐｐｍ  ４．８６  （ｐ，  １Ｈ）；４．０５  （ｔ，  ２Ｈ）；３．８０  （ｍ，  ２Ｈ）；２．９２−２．３６  （ｂｒ．  ｍ，  ５Ｈ）；２．２９  （ｍ，  ４Ｈ）；１．８９−１．４２  （ｂｒ．  ｍ，  １６Ｈ）；１．４２−１．０２  （ｂｒ．  ｍ，  ５０Ｈ）；０．８８  （ｍ，  ９Ｈ）．
ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：  ＲＴ  ＝  ４．５１分．  ＭＳ  （ＥＳ）：Ｃ４５Ｈ８９ＮＯ５に対するｍ／ｚ  （ＭＨ＋）  ７２５．１９．
【０７２１】
ヘプタデカン−９−イル８−（（８−（ノニルオキシ）−８−オキソオクチル）アミノ）オクタノエート
【化１７９】
2019504002.tif 000220
化学式：Ｃ４２Ｈ８３ＮＯ４
分子量：６６６．１３
−７８℃で、塩化オキサリル（０．２５ｍＬ、３．０ｍｍｏｌ）の３ｍＬジクロロメタン溶液に、ＤＭＳＯ（０．４３ｍＬ、６．０ｍｍｏｌ）の２ｍＬジクロロメタン溶液を滴加し、その後、ヘプタデカン−９−イル８−（（３−ヒドロキシプロピル）（８−（ノニルオキシ）−８−オキソオクチル）アミノ）オクタノエート（１．４５ｇ、２．０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１０ｍＬ）溶液を直ちに加えた。この温度で３０分間これを攪拌した後、トリエチルアミン（１．４５ｍＬ、１０．４ｍｍｏｌ）を加え、この反応混合物を室温まで加温した。ＴＬＣ及びＭＳで完全な反応（Ｍ＋１：７２２．７）が示されると、この反応混合物を水で希釈し、ヘキサンで抽出した（２回）。合わせた有機層をブラインで洗浄した。硫酸ナトリウムで乾燥した後、この濾液を濃縮し、残渣をＩＳＣＯ（ＳｉＯ２：ＥｔＯＡｃ／ヘキサン／０．５％Ｅｔ３Ｎ  ０〜５０％）で精製し、生成物を褐色油として得た（８１０ｍｇ、６１％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ：  ｐｐｍ  ４．８５  （ｐ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．０  Ｈｚ）；４．０５  （ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．９  Ｈｚ）；２．５６  （ｔ，  ４Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．１  Ｈｚ）；２．３１−２．２４  （ｍ，  ４Ｈ）；１．６７−１．１９  （ｍ，  ６３Ｈ）；０．８７  （ｍ，  ９Ｈ）．
ＭＳ  （ＡＰＣＩ）：  ｍ／ｚ  （ＭＨ＋）  ６６６．７．
【０７２２】
ヘプタデカン−９−イル８−（（３−（ベンジルオキシ）−３−オキソプロピル）（８−（ノニルオキシ）−８−オキソオクチル）アミノ）オクタノエート
【化１８０】
2019504002.tif 000221
化学式：Ｃ５２Ｈ９３ＮＯ６
分子量：８２８．３２
ヘプタデカン−９−イル８−（（８−（ノニルオキシ）−８−オキソオクチル）アミノ）オクタノエート（７９８ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）及びアクリル酸ベンジル（２９３ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２０ｍＬ）溶液を室温で１６時間攪拌した。ＴＬＣ及びＭＳでほとんど反応が示されないと、１０ｍＬのＭｅＯＨを加え、この反応混合物を室温で１６時間攪拌した。ＭＳで、少量のメチルエステルを含んだ生成物が示された（Ｍ＋１：８２９．８、７５２．７）。この反応混合物を濃縮乾固し、ＩＳＣＯ（ＳｉＯ２：ＥｔＯＡｃ／ヘキサン０〜３５％）で精製し、生成物を無色油として得た（２８０ｍｇ、２８％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ：  ｐｐｍ  ７．３６−７．３２  （ｍ，  ５Ｈ）；５．１０  （ｓ，  ２Ｈ）；４．８５  （ｐ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．０  Ｈｚ）；４．０４  （ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．９  Ｈｚ）；２．７８  （ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．９  Ｈｚ）；２．４６  （ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．０  Ｈｚ）；２．３６  （ｔ，  ４Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．９  Ｈｚ）；２．３０−２．２４  （ｍ，  ４Ｈ）；１．６７−１．１９  （ｍ，  ６２Ｈ）；０．８７  （ｍ，  ９Ｈ）．
ＭＳ  （ＡＰＣＩ）：  ｍ／ｚ  （ＭＨ＋）  ８２９．８．
【０７２３】
３−（（８−（ヘプタデカン−９−イルオキシ）−８−オキソオクチル）（８−（ノニルオキシ）−８−オキソオクチル）アミノ）プロパン酸
化合物１２５
【化１８１】
2019504002.tif 000222
化学式：Ｃ４５Ｈ８７ＮＯ６
分子量：７３８．１９
ヘプタデカン−９−イル８−（（３−（ベンジルオキシ）−３−オキソプロピル）（８−（ノニルオキシ）−８−オキソオクチル）アミノ）オクタノエート（２８０ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）及びＰｄ／Ｃ（１０％、２８ｍｇ）の２０ｍＬ  ＥｔＯＡｃ混合物を水素バルーン下で１時間攪拌した。ＭＳで完全な反応が示された。この反応混合物を濾過し、濾液を濃縮した。この残渣をＩＳＣＯ（ＳｉＯ２：ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２  ０〜１０％）で精製し、生成物を無色油として得た（２３０ｍｇ、９１％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ：  ｐｐｍ  ４．８５  （ｐ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．０  Ｈｚ）；４．０４  （ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．６  Ｈｚ）；２．８５  （ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．０  Ｈｚ）；２．６５  （ｔ，  ４Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．７  Ｈｚ）；２．４８  （ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．０  Ｈｚ）；２．３２−２．２４  （ｍ，  ４Ｈ）；１．６７−１．１７  （ｍ，  ６３Ｈ）；０．８７  （ｍ，  ９Ｈ）．
ＬＣ／ＵＶ  （２１４  ｎｍ）：  ＲＴ  ＝  １２．３８分．
ＭＳ  （ＡＰＣＩ）：  ｍ／ｚ  （ＭＨ＋）  ８３８．７．
【０７２４】
化合物１５４  ３−（（（２−シアノエトキシ）（ジイソプロピルアミノ）ホスフィノ）オキシ）プロパン−１，２−ジイルジパルミテート
４−（（ベンジルオキシ）メチル）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン（参照：ＥＰ１９１６２５５Ａ２、２９ページ）
【化１８２】
2019504002.tif 000223
化学式：Ｃ１３Ｈ１８Ｏ３
分子量：２２２．２８
０℃で、ＮａＨ（６０％、４．４ｇ、０．１１モル）のＴＨＦ／ＤＭＦ（２５ｍＬ／１２０ｍＬ）混合物に、（２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−イル）メタノール（１３．２ｇ、０．１モル）のＴＨＦ／ＤＭＦ（２５ｍＬ／２５ｍＬ）溶液を滴加した。添加後、この混合物を１時間攪拌し、その後塩化ベンジル（１２．６ｍＬ、０．１１モル）を加えた。この混合物を室温まで加温し、１６時間攪拌した。ＴＬＣで完了を確認した後、この反応物を飽和塩化アンモニウム（３００ｍＬ）でクエンチし、エーテルで抽出した（２×３００ｍＬ）。合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過及び真空による濃縮の後、４−（（ベンジルオキシ）メチル）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソランを褐色油として得（２３．３ｇ、定量的）、これをさらに精製することなく次のステップに用いた。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ７．２５−７．４１  （ｍ，  ５Ｈ），  ４．５２−４．６１  （ｍ，  ２Ｈ），  ４．２５−４．３４  （ｍ，  １Ｈ），  ４．０２−４．０８  （ｍ，  １Ｈ），  ３．７１−３．７８  （ｍ，  １Ｈ），  ３．４３−３．５８  （ｍ，  ２Ｈ），  １．４１  （ｓ，  ３Ｈ），  １．３５  （ｓ，  ３Ｈ）．
【０７２５】
３−（ベンジルオキシ）プロパン−１，２−ジオール（参照：ＥＰ１９１６２５５Ａ２、３０ページ）
【化１８３】
2019504002.tif 000224
化学式：Ｃ１０Ｈ１４Ｏ３
分子量：１８２．２２
４−（（ベンジルオキシ）メチル）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン（２３．３ｇ、０．１モル）の１５０ｍＬ  ＭｅＯＨ溶液に、１ＮのＨＣｌ（４０ｍＬ）を加え、この混合物を室温で１６時間攪拌した。ＴＬＣで完了を確認した後、この反応混合物を飽和重炭酸ナトリウムで中和してｐＨ＝７にし、ジクロロメタンで抽出した（４×３００ｍＬ）。合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過及び真空による濃縮の後、この粗物質をＩＳＣＯ（３３０ｇＳｉＯ２：ＥｔＯＡｃ／ヘキサン０〜１００％）で精製し、３−（ベンジルオキシ）プロパン−１，２−ジオールを淡黄色油として得た（１３．３９ｇ、７３％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ７．２５−７．３８  （ｍ，  ５Ｈ），  ４．５５  （ｓ，  ２Ｈ），  ３．５４−３．７５  （ｍ，  ４Ｈ），  ３．８５−３．９５  （ｍ，  １Ｈ），  ２．６２  （ｔ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ４．７  Ｈｚ），  ２．１２  （ｍ，  １Ｈ）．
【０７２６】
３−（ベンジルオキシ）プロパン−１，２−ジイルジパルミテート（参照：ＥＰ１９１６２５５Ａ２、３０ページ）
【化１８４】
2019504002.tif 000225
化学式：Ｃ４２Ｈ７４Ｏ５
分子量：６５９．０５
３−（ベンジルオキシ）プロパン−１，２−ジオール（７．５７ｇ、４１．５ｍｍｏｌ）、パルミチン酸（２１．３ｇ、８３ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ（１７．５ｇ、９１．４ｍｍｏｌ）、及びＤＭＡＰ（１．０２ｇ、８．３ｍｍｏｌ）の１５０ｍＬジクロロメタン混合物を室温で４８時間攪拌した。この反応混合物を水で希釈し、ジクロロメタンで抽出し（２×５００ｍＬ）、合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過及び真空下で濃縮後、その粗物質をヘキサンに溶解しシリカゲルのパッドを通して濾過することによって精製し、その後ＥｔＯＡｃ／ヘキサン０〜２０％で溶出し、３−（ベンジルオキシ）プロパン−１，２−ジイルジパルミテートを無色油として得た（２１．０ｇ、７６％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ７．２７−７．３３  （ｍ，  ５Ｈ），  ５．３１−５．３６  （ｍ，  １Ｈ），  ５．２９  （ｓ，  ２Ｈ），  ５．２１−５．２６  （ｍ，  １Ｈ），  ４．５３  （ｄｄ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  １２．３  Ｈｚ，  １５．８  Ｈｚ），  ４．３３  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １１．８  Ｈｚ，  ３．８  Ｈｚ），  ４．１８  （ｄｔ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １２．０  Ｈｚ，  ６．４  Ｈｚ），  ３．５８  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ５．２  Ｈｚ），  ２．２４−２．３３  （ｍ，  ４Ｈ），  １．９５−２．０２  （ｍ，  ２Ｈ），  １．５５−１．６３  （ｍ，  ３Ｈ），  １．２４  （ｂｓ，  ４４Ｈ），  ０．８７  （ｔ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ）．
【０７２７】
３−ヒドロキシプロパン−１，２−ジイルジパルミテート
【化１８５】
2019504002.tif 000226
化学式：Ｃ３５Ｈ６８Ｏ５
分子量：５６８．９２
３−（ベンジルオキシ）プロパン−１，２−ジイルジパルミテート（５．１４ｇ、７．８ｍｍｏｌ）及びＰｄ／Ｃ（５％、Ｄｅｇａｕｓｓａ  Ｅ１０００２Ｕ／Ｗ、Ａｌｄｒｉｃｈ  ３３０１２４、５１４ｍｇ）の１００ｍＬ  ＥｔＯＡｃ混合物を窒素と水素でそれぞれ３回パージし、その後この反応物を室温でバルーンを付けて１６時間攪拌した。この懸濁液を、セライトを通して濾過し、ジクロロメタン（３００ｍＬ）で洗浄した。減圧下で濃縮した後、この残渣をＩＳＣＯ（８０ｇＳｉＯ２：ＥｔＯＡｃ／ヘキサン０〜４０％）で精製し、３−ヒドロキシプロパン−１，２−ジイルジパルミテートを白色固体として得た（３．１７ｇ、７１％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ５．０７  （五重項，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ５．２  Ｈｚ），  ４．２７  （ｄｄｄ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ４．４  Ｈｚ，  １１．９  Ｈｚ，  ２４．９  Ｈｚ），  ３．７２  （ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ４．９  Ｈｚ），  ２．３３  （ｑ，  ４Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．１  Ｈｚ），  １．９９  （ｔ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．６  Ｈｚ），  １．５６−１．６６  （ｍ，  ４Ｈ），  １．２４  （ｂｓ，  ４８Ｈ），  ０．８７  （ｔ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ）．
【０７２８】
ステップ５：３−（（（２−シアノエトキシ）（ジイソプロピルアミノ）ホスフィノ）オキシ）プロパン−１，２−ジイルジパルミテート
【化１８６】
2019504002.tif 000227
化学式：Ｃ４４Ｈ８５Ｎ２Ｏ６Ｐ
分子量：７６９．１５
３−ヒドロキシプロパン−１，２−ジイルジパルミテート（２．７０ｇ、４．７５ｍｍｏｌ）及びテトラゾール（ＭｅＣＮの０．４５Ｍ溶液、２１ｍＬ、９．４９０ｍｍｏｌ）の８０ｍＬジクロロメタン溶液に、３−（（クロロ（ジイソプロピルアミノ）ホスフィノ）オキシ）プロパンニトリル（３．０ｍＬ、９．４９ｍｍｏｌ）の２０ｍＬジクロロメタン溶液を滴加し、この反応混合物を室温で１時間攪拌した。この混合物を濃縮し、ＩＳＣＯ（８０ｇＳｉＯ２：ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１％Ｅｔ３Ｎ）０〜１０％）で精製し、３−（（（２−シアノエトキシ）（ジイソプロピルアミノ）ホスフィノ）オキシ）プロパン−１，２−ジイルジパルミテートを白色固体として得た（３．２２ｇ、８８％）。この収率は、このカラムを過剰のヘキサン／１％Ｅｔ３Ｎで予め溶出することによって改善することができる。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ５．１４−５．２１  （ｍ，  １Ｈ），  ４．３３  （ｄｔ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １１．２  Ｈｚ，  ３．８  Ｈｚ），  ４．１１−４．２０  （ｍ，  １Ｈ），  ３．５６−３．８７  （ｍ，  ５Ｈ），  ２．６２  （ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．６  Ｈｚ），  ２．２９  （ｔ，  ４Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．９  Ｈｚ），  １．５５−１．６４  （ｍ，  ３Ｈ），  １．２４  （ｂｓ，  ５０Ｈ），  １．１７  （ｄ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ），  １．１６  （ｄ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ），  ０．８７  （ｔ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．３  Ｈｚ）．
【０７２９】
３−ヒドロキシ−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルプロパン−１−アミニウムトシレート（参照：Ｅｕｒ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１３，６６，４６）
【化１８７】
2019504002.tif 000228
化学式：Ｃ１３Ｈ２３ＮＯ４Ｓ
分子量：２８９．３９
３−（ジメチルアミノ）プロパン−１−オール（２．２７ｇ、２２ｍｍｏｌ）及びメチルトシレート（３．０ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）の２０ｍＬ  ＭｅＣＮ溶液を４時間加熱還流した。この反応混合物を減圧下濃縮し、アセトン中で沈殿させ、３−ヒドロキシ−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルプロパン−１−アミニウムトシレートを白色固体として得た（５．５０ｇ、８６％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ７．４７  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．９  Ｈｚ），  ７．１１  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．９  Ｈｚ），  ４．８０  （ｔ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝４．９  Ｈｚ），  ３．４７  （ｑ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ５．８  Ｈｚ），  ３．３４  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．０４  （ｓ，  ９Ｈ），  ２．２８  （ｓ，  ３Ｈ），  １．７９−１．８５  （ｍ，  ２Ｈ）．
【０７３０】
３−（（（２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロポキシ）（２−シアノエトキシ）ホスホリル）オキシ）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルプロパン−１−アミニウムクロリド
【化１８８】
2019504002.tif 000229
化学式：Ｃ４４Ｈ８６ＣｌＮ２Ｏ８Ｐ
分子量：８３７．６０
３−（（（２−シアノエトキシ）（ジイソプロピルアミノ）ホスフィノ）オキシ）プロパン−１，２−ジイルジパルミテート（７６９ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）及び３−ヒドロキシ−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルプロパン−１−アミニウムトシレート（２８９ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の１０ｍＬジクロロメタン溶液に、テトラゾールのＭｅＣＮ溶液（０．４５Ｍ、２．２ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ）を徐々に加え、その後、この反応物を室温で１６時間攪拌した。３−（（（２−シアノエトキシ）（ジイソプロピルアミノ）ホスフィノ）オキシ）プロパン−１，２−ジイルジパルミテートの消失を確認した後、ｔＢｕＯＯＨ（０．８０ｍＬ、４．０ｍｍｏｌ）を加え、この混合物を４時間攪拌した。この反応混合物をジクロロメタンで希釈し、１０％重硫酸ナトリウム及びブラインで洗浄し、その後硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過及び減圧下で濃縮後、この黄色フォーム残渣をＩＳＣＯ（２４ｇＳｉＯ２：ＭｅＯＨ／ジクロロメタン０〜１０％）で精製し、３−（（（２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロポキシ）（２−シアノエトキシ）ホスホリル）オキシ）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルプロパン−１−アミニウムクロリドを白色固体として得た（４０７ｍｇ、４８％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ５．２０−５．２８  （ｍ，  １Ｈ），  ４．１５−４．３５  （ｍ，  ４Ｈ），  ３．７１−３．８２  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．３１  （ｓ，  ９Ｈ），  ２．８３  （ｍ，  ２Ｈ），  ２．２０−２．３６  （ｍ，  ７Ｈ），  １．９８  （ｓ，  ３Ｈ），  １．５３−１．６５  （ｍ，  ４Ｈ），  １．２４  （ｂｓ，  ４８Ｈ），  ０．８７  （ｔ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．６  Ｈｚ）．
【０７３１】
２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロピル（３−（トリメチルアンモニオ）プロピル）ホスフェート
化合物１５４
【化１８９】
2019504002.tif 000230
化学式：Ｃ４１Ｈ８２ＮＯ８Ｐ
分子量：７４８．０８
３−（（（２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロポキシ）（２−シアノエトキシ）ホスホリル）オキシ）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルプロパン−１−アミニウムクロリド（４０７ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．６２ｍＬ、３．５ｍｍｏｌ）の２０ｍＬ  ＭｅＣＮ溶液を６０℃に１６時間加熱した。この反応混合物を減圧下で濃縮し、ＩＳＣＯ（ゴールド２４ｇＳｉＯ２：ＭｅＯＨ／ジクロロメタン０〜６０％）で精製し、所望の生成物、２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロピル（３−（トリメチルアンモニオ）プロピル）ホスフェートを白色固体として得た（２８０ｍｇ、７８％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ５．２０  （ｍ，  １Ｈ），  ４．４０  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １２．２  Ｈｚ，  ２．７  Ｈｚ），  ４．１３  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １１．７  Ｈｚ，  ７．１  Ｈｚ），  ３．９３−４．０３  （ｍ，  ４Ｈ），  ３．８２−３．８８  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．２８  （ｓ，  ９Ｈ），  ２．２３−２．３０  （ｍ，  ４Ｈ），  ２．１３  （ｍ，  ２Ｈ），  １．５６  （ｍ，  ４Ｈ），  １．２４  （ｂｓ，  ４８Ｈ），  ０．８７  （ｔ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．６  Ｈｚ）．
【０７３２】
化合物１５５：２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロピル（２−（４−メチルモルホリノ−４−イウム）エチル）ホスフェート
Ｓ４−（２−ヒドロキシエチル）−４−メチルモルホリン−４−イウム４−メチルベンゼンスルホネート（参照：Ｅｕｒ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００９，４４，４９７０）
【化１９０】
2019504002.tif 000231
化学式：Ｃ１４Ｈ２３ＮＯ５Ｓ
分子量：３１７．４０
２−モルホリノエタン−１−オール（２．７ｍＬ、２２ｍｍｏｌ）及びメチルトシレート（３．０ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）の２０ｍＬ  ＭｅＣＮ溶液を４時間加熱還流した。この反応混合物を減圧下で濃縮し、アセトン中で沈殿させ、３−ヒドロキシ−４−メチルモルホリン−４−イウム４−メチルベンゼンスルホネートを帯褐色固体として得た（５．５７ｇ、８７％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ７．４７  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ），  ７．１１  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ），  ５．３２  （ｔ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ４．８  Ｈｚ），  ３．８６−３．９６  （ｍ，  ６Ｈ），  ３．３８−３．５８  （ｍ，  ６Ｈ），  ３．１９  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．２８  （ｓ，  ３Ｈ）．
【０７３３】
４−（２−（（（２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロポキシ）（２−シアノエトキシ）ホスホリル）オキシ）エチル）−４−メチルモルホリン−４−イウムクロリド
【化１９１】
2019504002.tif 000232
化学式：Ｃ４５Ｈ８６ＣｌＮ２Ｏ９Ｐ
分子量：８６５．６１
３−（（（２−シアノエトキシ）（ジイソプロピルアミノ）ホスフィノ）オキシ）プロパン−１，２−ジイルジパルミテート（７６９ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）３−ヒドロキシ−４−メチルモルホリン−４−イウム４−メチルベンゼンスルホネート（３１７ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の１０ｍＬジクロロメタン溶液に、テトラゾールのＭｅＣＮ溶液（０．４５Ｍ、２．２ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ）を徐々に加え、その後この反応物を室温で４８時間攪拌した。３−（（（２−シアノエトキシ）（ジイソプロピルアミノ）ホスフィノ）オキシ）プロパン−１，２−ジイルジパルミテートの消失を確認した後、ｔＢｕＯＯＨ（０．８０ｍＬ、４．０ｍｍｏｌ）を加え、この混合物を４時間攪拌した。この反応混合物をジクロロメタンで希釈し、１０％重硫酸ナトリウム及びブラインで洗浄し、その後硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過及び減圧下で濃縮後、この黄色フォーム残渣をＩＳＣＯ（２４ｇＳｉＯ２：ＭｅＯＨ／ジクロロメタン０〜１０％）で精製し、４−（２−（（（２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロポキシ）（２−シアノエトキシ）ホスホリル）オキシ）エチル）−４−メチルモルホリン−４−イウムクロリドを白色固体として得た（７１３ｍｇ、８６％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ５．２４  （ｍ，  １Ｈ），  ４．７３  （ｍ，  ２Ｈ），  ４．１１−４．３８  （ｍ，  ７Ｈ），  ４．０２  （ｍ，  ３Ｈ），  ３．６７  （ｍ，  ３Ｈ），  ３．４８  （ｍ，  ２Ｈ），  ２．５８−２．８３  （ｍ，  ５Ｈ），  ２．２７−２．３４  （ｍ，  ５Ｈ），  １．５８  （ｍ，  ４Ｈ），  １．１９−１．３４  （ｂｓ，  ４８Ｈ），  ０．８７  （ｔ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．６  Ｈｚ）．
【０７３４】
２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロピル（２−（４−メチルモルホリノ−４−イウム）エチル）ホスフェート  化合物１５５
【化１９２】
2019504002.tif 000233
化学式：Ｃ４２Ｈ８２ＮＯ９Ｐ
分子量：７７６．０９
４−（２−（（（２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロポキシ）（２−シアノエトキシ）ホスホリル）オキシ）エチル）−４−メチルモルホリン−４−イウムクロリド（７１３ｍｇ、０．８６ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（１．０５ｍＬ、６．０ｍｍｏｌ）の２０ｍＬ  ＭｅＣＮ溶液を６０℃に１６時間加熱した。この反応混合物を減圧下で濃縮し、ＩＳＣＯ（ゴールド２４ｇＳｉＯ２：ＭｅＯＨ／ジクロロメタン０〜６０％）で精製し、所望の生成物、２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロピル（２−（４−メチルモルホリノ−４−イウム）エチル）ホスフェートを白色固体として得た（４４６ｍｇ、６７％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ５．２０  （ｍ，  １Ｈ），  ４．３６−４．４２  （ｍ，  ３Ｈ），  ４．１０  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １２．１  Ｈｚ，  ７．４  Ｈｚ），  ３．９０−４．０２  （ｍ，  ６Ｈ），  ３．６９  （ｍ，  ４Ｈ），  ３．５０  （ｍ，  １Ｈ），  ２．２８  （ｑ，  ８Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ），  １．５２−１．６１  （ｍ，  ４Ｈ），  １．２４  （ｂｓ，  ４８Ｈ），  ０．８７  （ｔ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．１  Ｈｚ）．
【０７３５】
化合物１５６：  ２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロピル（４−（トリメチルアンモニオ）ブチル）ホスフェート
４−ヒドロキシ−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルブタン−１−アミニウム４−メチルベンゼンスルホネート（参照：Ｅｕｒ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１３，６６，４６）
【化１９３】
2019504002.tif 000234
化学式：Ｃ１４Ｈ２５ＮＯ４Ｓ
分子量：３０３．４２
４−（ジメチルアミノ）ブタン−１−オール（２．５８ｇ、２２ｍｍｏｌ）及びメチルトシレート（３．０ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）の２０ｍＬ  ＭｅＣＮ溶液を１６時間加熱還流した。この反応混合物を減圧下で濃縮し、アセトン中で沈殿させ、４−ヒドロキシ−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルブタン−１−アミニウム４−メチルベンゼンスルホネートを白色固体として得た（５．１３ｇ、８４％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ７．４６  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ），  ７．１１  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ），  ４．５８  （ｔ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ４．９  Ｈｚ），  ３．４３  （ｑ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ５．２  Ｈｚ），  ３．２４−３．３０  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．０２  （ｓ，  ９Ｈ），  ２．２８  （ｓ，  ３Ｈ），  １．６４−１．７３  （ｍ，  ２Ｈ），  １．３６−１．４５  （ｍ，  ２Ｈ）．
【０７３６】
４−（（（２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロポキシ）（２−シアノエトキシ）ホスホリル）オキシ）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルブタン−１−アミニウムクロリド
【化１９４】
2019504002.tif 000235
化学式：Ｃ４５Ｈ８８ＣｌＮ２Ｏ８Ｐ
分子量：８５１．６３
３−（（（２−シアノエトキシ）（ジイソプロピルアミノ）ホスフィノ）オキシ）プロパン−１，２−ジイルジパルミテート（７６９ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）３４−ヒドロキシ−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルブタン−１−アミニウム４−メチルベンゼンスルホネート（３０３ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の１０ｍＬジクロロメタン溶液に、テトラゾールのＭｅＣＮ溶液（０．４５Ｍ、２．２ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ）を徐々に加え、その後この反応物を室温で１６時間攪拌した。３−（（（２−シアノエトキシ）（ジイソプロピルアミノ）ホスフィノ）オキシ）プロパン−１，２−ジイルジパルミテートの消失を確認した後、ｔＢｕＯＯＨ（０．８０ｍＬ、４．０ｍｍｏｌ）を加え、この混合物を４時間攪拌した。この反応混合物をジクロロメタンで希釈し、１０％重硫酸ナトリウム及びブラインで洗浄し、その後硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過及び減圧下で濃縮後、この黄色フォーム残渣をＩＳＣＯ（２４ｇＳｉＯ２：ＭｅＯＨ／ジクロロメタン０〜１０％）で精製し、４−（（（２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロポキシ）（２−シアノエトキシ）ホスホリル）オキシ）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルブタン−１−アミニウムクロリドを白色固体として得た（５３１ｍｇ、６５％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ５．２２−５．２６  （ｍ，  １Ｈ），  ４．１１−４．３５  （ｍ，  ８Ｈ），  ３．６２−３．６８  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．３１  （ｓ，  ９Ｈ），  ２．７８−２．８４  （ｍ，  ２Ｈ），  ２．３２  （ｑ，  ４Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ），  １．５２−２．０１  （ｍ，  ８Ｈ），  １．１５−１．３２  （ｍ，  ４８Ｈ），  ０．８７  （ｔ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．１  Ｈｚ）．
【０７３７】
２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロピル（４−（トリメチルアンモニオ）ブチル）ホスフェート  化合物１５６
【化１９５】
2019504002.tif 000236
化学式：Ｃ４２Ｈ８４ＮＯ８Ｐ
分子量：７６２．１１
４−（（（２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロポキシ）（２−シアノエトキシ）ホスホリル）オキシ）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルブタン−１−アミニウムクロリド（５３１ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．７９ｍＬ、４．５６ｍｍｏｌ）の２０ｍＬ  ＭｅＣＮ溶液を６０℃に１６時間加熱した。この反応混合物を減圧下で濃縮し、ＩＳＣＯ（ゴールド２４ｇＳｉＯ２：ＭｅＯＨ／ジクロロメタン０〜６０％）で精製し、所望の生成物、２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロピル（４−（トリメチルアンモニオ）ブチル）ホスフェートを白色固体として得た（３８３ｍｇ、７７％）。
％）．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ５．２０  （ｍ，  １Ｈ），  ４．４０  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １１．９  Ｈｚ，  ２．７  Ｈｚ），  ４．１５  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １１．９  Ｈｚ，  ６．８  Ｈｚ），  ３．８９−３．９８  （ｍ，  ４Ｈ），  ３．６５−３．７２  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．２９  （ｓ，  ９Ｈ），  ２．２２−２．３４  （ｍ，  ６Ｈ），  １．９４−２．０２  （ｍ，  ２Ｈ），  １．６９−１．７３  （ｍ，  ２Ｈ），  １．１５−１．６１  （ｍ，  ２Ｈ），  １．２４  （ｂｓ，  ４８Ｈ），  ０．８７  （ｔ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．１  Ｈｚ）．
【０７３８】
化合物１５０：２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロピル（２−（トリエチルアンモニオ）エチル）ホスフェート
２−（（（２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロポキシ）（２−シアノエトキシ）ホスファニル）オキシ）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリエチルエタン−１−アミニウムクロリド
【化１９６】
2019504002.tif 000237
化学式：Ｃ４６Ｈ９０ＣｌＮ２Ｏ８Ｐ
分子量：８６５．６６
３−（（（２−シアノエトキシ）（ジイソプロピルアミノ）ホスフィノ）オキシ）プロパン−１，２−ジイルジパルミテート（７６９ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ，Ｎ−トリエチル−２−ヒドロキシエタンアミニウムヨージド（１２６ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）の１０ｍＬジクロロメタン溶液に、テトラゾールのＭｅＣＮ溶液（０．４５Ｍ、１．０３ｍＬ、０．４６ｍｍｏｌ）を徐々に加え、その後この反応物を室温で１６時間攪拌した。３−（（（２−シアノエトキシ）（ジイソプロピルアミノ）ホスフィノ）オキシ）プロパン−１，２−ジイルジパルミテートの消失を確認した後、ｔＢｕＯＯＨ（０．３７ｍＬ、１．８４ｍｍｏｌ）を加え、この混合物を４時間攪拌した。この反応混合物をジクロロメタンで希釈し、１０％重硫酸ナトリウム及びブラインで洗浄し、その後硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過及び減圧下で濃縮後、この黄色フォーム残渣をＩＳＣＯ（１２ｇＳｉＯ２：ＭｅＯＨ／ジクロロメタン０〜５０％）で精製し、２−（（（２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロポキシ）（２−シアノエトキシ）ホスファニル）オキシ）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリエチルエタン−１−アミニウムクロリドを黄色フォームとして得た（１８０ｍｇ、４５％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ５．２６  （ｍ，  １Ｈ），  ４．７０  （ｍ，  ２Ｈ），  ４．０５−４．４５  （ｍ，  ６Ｈ），  ３．５６  （ｑ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．１  Ｈｚ），  ２．８７  （ｍ，  ２Ｈ），  ２．２８−２．３６  （ｍ，  ４Ｈ），  １．７０  （ｍ，  ２Ｈ），  １．５８  （ｍ，  ４Ｈ），  １．４１  （ｔ，  ９Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．１  Ｈｚ），  １．２４  （ｂｓ，  ４８Ｈ），  ０．８７  （ｔ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．１  Ｈｚ）．
【０７３９】
２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロピル（２−（トリエチルアンモニオ）エチル）ホスフェート  化合物１５０
【化１９７】
2019504002.tif 000238
化学式：Ｃ４３Ｈ８６ＮＯ８Ｐ
分子量：７７６．１３
２−（（（２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロポキシ）（２−シアノエトキシ）ホスファニル）オキシ）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリエチルエタン−１−アミニウムクロリド（１８０ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．２７ｍＬ、１．５３ｍｍｏｌ）の５ｍＬ  ＭｅＣＮ溶液を６０℃に１６時間加熱した。この反応混合物を減圧下で濃縮し、ＩＳＣＯ（ゴールド１２ｇＳｉＯ２：ＭｅＯＨ／ジクロロメタン０〜６０％）で精製し、所望の生成物、２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロピル（２−（トリエチルアンモニオ）エチル）ホスフェートを白色固体として得た（１１４ｍｇ、７０％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ５．２１  （ｍ，  １Ｈ），  ４．４１  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １１．９  Ｈｚ，  ２．７  Ｈｚ），  ４．３１  （ｍ，  ２Ｈ），    ４．１５  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １１．９  Ｈｚ，  ６．８  Ｈｚ），  ４．０１  （ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．６  Ｈｚ），  ３．５１  （ｑ，  ８Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．４  Ｈｚ），  ２．２８  （ｑ，  ４Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．３  Ｈｚ），  １．７１  （ｍ，  ４Ｈ），  １．３７  （ｔ，  ９Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．４  Ｈｚ），  １．２４  （ｂｓ，  ４８Ｈ），  ０．８７  （ｔ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．１  Ｈｚ）．
【０７４０】
化合物１５１：２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロピル（２−（トリプロピルアンモニオ）エチル）ホスフェート
Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−Ｎ，Ｎ−ジプロピルプロパン−１−アミニウムブロミド（参照：  Ｄａｌｔｏｎ  Ｔｒａｎｓ．２０１５，４４，１６６８０）
【化１９８】
2019504002.tif 000239
化学式：Ｃ１１Ｈ２６ＢｒＮＯ
分子量：２６８．２４
トリプロピルアミン（３．８ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）及び２−ブロモエタノール（１．４２ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）の２０ｍＬ  ＭｅＣＮ溶液を１６時間加熱還流した。この反応混合物を濃縮し、その残渣をヘキサン／ＥｔＯＡｃ混合物中で沈殿させＮ−（２−ヒドロキシエチル）−Ｎ，Ｎ−ジプロピルプロパン−１−アミニウムブロミドを白色固体として得た（３．８１ｇ、７１％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ５．２５  （ｔ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ５．２  Ｈｚ），  ３．７７  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．３３  （ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．１  Ｈｚ），  ３．１７−３．２３  （ｍ，  ６Ｈ），  １．５６−１．６８  （ｍ，  ６Ｈ），  ０．８８  （ｔ，  ９Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．１  Ｈｚ）．
【０７４１】
Ｎ−（２−（（（２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロポキシ）（２−シアノエトキシ）ホスファニル）オキシ）エチル）−Ｎ，Ｎ−ジプロピルプロパン−１−アミニウムクロリド
【化１９９】
2019504002.tif 000240
化学式：Ｃ４９Ｈ９６ＣｌＮ２Ｏ８Ｐ
分子量：９０７．７４
３−（（（２−シアノエトキシ）（ジイソプロピルアミノ）ホスフィノ）オキシ）プロパン−１，２−ジイルジパルミテート（７６９ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）及びＮ−（２−ヒドロキシエチル）−Ｎ，Ｎ−ジプロピルプロパン−１−アミニウムブロミド（２６８ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の１０ｍＬジクロロメタン溶液に、テトラゾールのＭｅＣＮ溶液（０．４５Ｍ、２．２ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ）を徐々に加え、その後この反応物を室温で１６時間攪拌した。３−（（（２−シアノエトキシ）（ジイソプロピルアミノ）ホスフィノ）オキシ）プロパン−１，２−ジイルジパルミテートの消失を確認した後、ｔＢｕＯＯＨ（０．８０ｍＬ、４．０ｍｍｏｌ）を加え、この混合物を４時間攪拌した。この反応混合物をジクロロメタンで希釈し、１０％重硫酸ナトリウム及びブラインで洗浄し、その後硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過及び減圧下で濃縮後、この黄色フォーム残渣をＩＳＣＯ（２４ｇＳｉＯ２：ＭｅＯＨ／ジクロロメタン０〜５０％）で精製し、Ｎ−（２−（（（２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロポキシ）（２−シアノエトキシ）ホスファニル）オキシ）エチル）−Ｎ，Ｎ−ジプロピルプロパン−１−アミニウムクロリドを白色フォームとして得た（５２０ｍｇ、６０％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ５．２６  （ｍ，  １Ｈ），  ４．６４  （ｍ，  ２Ｈ），  ４．１０−４．４２  （ｍ，  ６Ｈ），  ３．９７  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．３１  （ｍ，  ６Ｈ），  ２．８７  （ｍ，  ２Ｈ），  ２．３２  （ｑ，  ４Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．７  Ｈｚ），  １．５４−２．００  （ｍ，  １０Ｈ），  １．２４  （ｍ，  ４８Ｈ），  １．０３  （ｔ，  ９Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．１  Ｈｚ），  ０．８７  （ｔ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．１  Ｈｚ）．
【０７４２】
２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロピル（２−（トリプロピルアンモニオ）エチル）ホスフェート
化合物１５１
【化２００】
2019504002.tif 000241
化学式：Ｃ４６Ｈ９２ＮＯ８Ｐ
分子量：８１８．２１
Ｎ−（２−（（（２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロポキシ）（２−シアノエトキシ）ホスファニル）オキシ）エチル）−Ｎ，Ｎ−ジプロピルプロパン−１−アミニウムクロリド（５２０ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．７５ｍＬ、４．２９ｍｍｏｌ）の２０ｍＬ  ＭｅＣＮ溶液を６０℃に１６時間加熱した。この反応混合物を減圧下で濃縮し、ＩＳＣＯ（ゴールド２４ｇＳｉＯ２：ＭｅＯＨ／ジクロロメタン０〜６０％）で精製し、所望の生成物、２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロピル（２−（トリプロピルアンモニオ）エチル）ホスフェートを白色固体として得た（３６０ｍｇ、７３％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ５．２０  （ｍ，  １Ｈ），  ４．４１  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １１．９  Ｈｚ，  ２．７  Ｈｚ），  ４．２８  （ｍ，  ２Ｈ），  ４．１３  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １１．９  Ｈｚ，  ６．８  Ｈｚ），  ４．００  （ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．６  Ｈｚ），  ３．６２  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．３１−３．３８  （ｍ，  ６Ｈ），  ２．２７  （ｄｄ，  ４Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．０  Ｈｚ），  １．６６−１．８０  （ｍ，  ６Ｈ），  １．５２−１．６１  （ｍ，  ４Ｈ），  １．２４  （ｂｓ，  ４８Ｈ），  １．０４  （ｔ，  ９Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．４  Ｈｚ），  ０．８７  （ｔ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．１  Ｈｚ）．
【０７４３】
化合物１５２：  ２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロピル（２−（１−メチルピペリジン−１−イウム−１−イル）エチル）ホスフェート
４−（２−ヒドロキシエチル）−４−メチルモルホリン−４−イウム４−メチルベンゼンスルホネート（参照：Ｅｕｒ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００９，４４，４９７０）
【化２０１】
2019504002.tif 000242
化学式：Ｃ１５Ｈ２５ＮＯ４Ｓ
分子量：３１５．４３
２−モルホリノエタン−１−オール（２．７ｍＬ、２２ｍｍｏｌ）及びメチルトシレート（３．０ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）の２０ｍＬ  アセトニトリル溶液を４時間加熱還流した。この反応混合物を減圧下で濃縮し、アセトン中で沈殿させ、３−ヒドロキシ−４メチルモルホリン−４−イウム４−メチルベンゼンスルホネートを帯褐色固体として得た（５．５７ｇ、８７％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ７．４７  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ），  ７．１１  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ），  ５．２７  （ｔ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ４．８  Ｈｚ），  ３．７９−３．８６  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．３６−３．４６  （ｍ，  ６Ｈ），  ３．０６  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．２８  （ｓ，  ３Ｈ），  １．７２−１．８３  （ｍ，  ４Ｈ），  １．４６−１．５５  （ｍ，  ２Ｈ）．
【０７４４】
１−（２−（（（２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロポキシ）（２−シアノエトキシ）ホスファニル）オキシ）エチル）−１−メチルピペリジン−１−イウムクロリド
【化２０２】
2019504002.tif 000243
化学式：Ｃ４６Ｈ８８ＣｌＮ２Ｏ８Ｐ
分子量：８６３．６４
３−（（（２−シアノエトキシ）（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル）オキシ）プロパン−１，２−ジイルジパルミテート（７６９ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）及び１−（２−ヒドロキシエチル）−１−メチルピペリジン−１−イウム４−メチルベンゼンスルホネート（３１５ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の１０ｍＬジクロロメタン溶液に、テトラゾールのＭｅＣＮ溶液（０．４５Ｍ、２．２ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ）を徐々に加え、その後この反応物を室温で１６時間攪拌した。３−（（（２−シアノエトキシ）（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル）オキシ）プロパン−１，２−ジイルジパルミテートの消失を確認した後、ｔＢｕＯＯＨ（０．８０ｍＬ、４．０ｍｍｏｌ）を加え、この混合物を４時間攪拌した。この反応混合物をジクロロメタンで希釈し、１０％重硫酸ナトリウム及びブラインで洗浄し、その後硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過及び減圧下で濃縮後、この黄色フォーム残渣をＩＳＣＯ（２４ｇＳｉＯ２：ＭｅＯＨ／ジクロロメタン０〜５０％）で精製し、１−（２−（（（２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロポキシ）（２−シアノエトキシ）ホスファニル）オキシ）エチル）−１−メチルピペリジン−１−イウムクロリドを白色フォームとして得た（６９０ｍｇ、８４％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ５．２５  （ｍ，  １Ｈ），  ４．６６  （ｍ，  ２Ｈ），  ４．０５−４．３２  （ｍ，  ７Ｈ），  ３．４８  （ｓ，  ２Ｈ），  ３．５２−３．７０  （ｍ，  ３Ｈ），  ３．３２  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．８４  （ｍ，  ２Ｈ），  ２．３２  （ｑ，  ４Ｈ，  Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ），  １．９２  （ｍ，  ４Ｈ），  １．７７  （ｍ，  ２Ｈ），  １．５９  （ｍ，  ４Ｈ），  １．１９−１．３４  （ｂｓ，  ４８Ｈ），  ０．８７  （ｔ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ）．
【０７４５】
２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロピル（２−（１−メチルピペリジン−１−イウム−１−イル）エチル）ホスフェート
化合物１５２
【化２０３】
2019504002.tif 000244
化学式：Ｃ４３Ｈ８４ＮＯ８Ｐ
分子量：７７４．１２
１−（２−（（（２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロポキシ）（２−シアノエトキシ）ホスファニル）オキシ）エチル）−１−メチルピペリジン−１−イウムクロリド（６９０ｍｇ、０．８３ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（１．０２ｍＬ、５．８３ｍｍｏｌ）の２０ｍＬ  ＭｅＣＮ溶液を６０℃に１６時間加熱した。この反応混合物を減圧下で濃縮し、ＩＳＣＯ（ゴールド２４ｇＳｉＯ２：ＭｅＯＨ／ジクロロメタン０〜６０％）で精製し、所望の生成物、２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロピル（２−（１−メチルピペリジン−１−イウム−１−イル）エチル）ホスフェートを白色固体として得た（４９５ｍｇ、７７％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ５．１８−５．２０  （ｍ，  １Ｈ），  ４．３０−４．４２  （ｍ，  ３Ｈ），  ４．１２  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １１．９  Ｈｚ，  ７．１  Ｈｚ），  ３．９８  （ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ５．７  Ｈｚ），  ３．８２  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．６０−３．７１  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．４６−３．５５  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．３３  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．２７  （ｑ，  ４Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．４  Ｈｚ），  ２．１０  （ｍ，  ２Ｈ），  １．８４−１．９６  （ｍ，  ４Ｈ），  １．６６−１．７６  （ｍ，  ２Ｈ），  １．５０−１．６３  （ｍ，  ２Ｈ），  １．２４  （ｂｓ，  ４８Ｈ），  ０．８７  （ｔ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．６  Ｈｚ）．
【０７４６】
化合物１５３：２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロピル（２−（４−メチルモルホリノ−４−イウム）エチル）ホスフェート
１−（２−ヒドロキシエチル）キヌクリジン−１−イウムブロミド（参照：Ｏｒｇ．Ｂｉｏｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２０１０，  ４２５）
【化２０４】
2019504002.tif 000245
化学式：Ｃ９Ｈ１８ＢｒＮＯ
分子量：２３６．１５
キヌクリジン（２．２２ｇ、２０ｍｍｏｌ）及び２−ブロモエタノール（１．４２ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）の２０ｍＬ  ＴＨＦ溶液を５０℃に５時間加熱した。室温に冷却した後、その固体を濾過し、エーテルで洗浄し、１−（２−ヒドロキシエチル）キヌクリジン−１−イウムブロミドを白色固体として得た（４．６１ｇ、９７％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ５．２４  （ｔ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ４．６  Ｈｚ），  ３．７６−３．８３  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．４６  （ｔ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ），  ３．２１  （ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ５．５  Ｈｚ），  ２．０１−２．０８  （ｍ，  １Ｈ），  １．８１−１．８８  （ｍ，  ６Ｈ）．
【０７４７】
１−（２−（（（２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロポキシ）（２−シアノエトキシ）ホスファニル）オキシ）エチル）キヌクリジン−１−イウムクロリド
【化２０５】
2019504002.tif 000246
化学式：Ｃ４７Ｈ８８ＣｌＮ２Ｏ８Ｐ
分子量：８７５．６５
３−（（（２−シアノエトキシ）（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル）オキシ）プロパン−１，２−ジイルジパルミテート（７６９ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）及び１−（２−ヒドロキシエチル）キヌクリジン−１−イウムブロミド（２３６ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の１０ｍＬジクロロメタン溶液に、テトラゾールのＭｅＣＮ溶液（０．４５Ｍ、２．２ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ）を徐々に加え、その後この反応物を室温で１６時間攪拌した。３−（（（２−シアノエトキシ）（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル）オキシ）プロパン−１，２−ジイルジパルミテートの消失を確認した後、ｔＢｕＯＯＨ（０．８０ｍＬ、４．０ｍｍｏｌ）を加え、この混合物を４時間攪拌した。この反応混合物をジクロロメタンで希釈し、１０％重硫酸ナトリウム及びブラインで洗浄し、その後硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過及び減圧下で濃縮後、この黄色フォーム残渣をＩＳＣＯ（２４ｇＳｉＯ２：ＭｅＯＨ／ジクロロメタン０〜１０％）で精製し、１−（２−（（（２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロポキシ）（２−シアノエトキシ）ホスファニル）オキシ）エチル）キヌクリジン−１−イウムクロリドを白色固体として得た（６４６ｍｇ、７６％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ５．２５  （ｍ，  １Ｈ），  ４．６３  （ｍ，  ２Ｈ），  ４．１３−４．４４  （ｍ，  ６Ｈ），  ３．８５  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．６５  （ｍ，  ６Ｈ），  ３．２７  （ｍ，  ４Ｈ），  ２．８７  （ｍ，  ２Ｈ），  ２．３２  （ｑ，  ４Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ），  ２．１９  （ｍ，  １Ｈ），  ２．０４  （ｍ，  ４Ｈ），  １．５９  （ｍ，  ２Ｈ），  １．１８−１．４２  （ｍ，  ４８Ｈ），  ０．８７  （ｔ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．０  Ｈｚ）．
【０７４８】
２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロピル（２−（４−メチルモルホリノ−４−イウム）エチル）ホスフェート
化合物１５３
【化２０６】
2019504002.tif 000247
化学式：Ｃ４４Ｈ８４ＮＯ８Ｐ
分子量：７８６．１３
１−（２−（（（２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロポキシ）（２−シアノエトキシ）ホスファニル）オキシ）エチル）キヌクリジン−１−イウムクロリド（６４６ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．９４ｍＬ、５．３８ｍｍｏｌ）の２０ｍＬ  ＭｅＣＮ溶液を６０℃に１６時間加熱した。この反応混合物を減圧下で濃縮し、ＩＳＣＯ（ゴールド２４ｇＳｉＯ２：ＭｅＯＨ／ジクロロメタン０〜６０％）で精製し、所望の生成物、２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロピル（２−（４−メチルモルホリノ−４−イウム）エチル）ホスフェートを白色固体として得た（４４４ｍｇ、７４％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ５．２２  （ｍ，  １Ｈ），  ４．４０  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １１．６  Ｈｚ，  ２．８  Ｈｚ），  ４．３０  （ｍ，  ２Ｈ），  ４．１２  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １１．８  Ｈｚ，  ７．０  Ｈｚ），  ３．９８  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．６３−３．７３  （ｍ，  ８Ｈ），  ２．１５−２．３４  （ｍ，  ８Ｈ），  ２．００  （ｍ，  ５Ｈ），  １．５０−１．６２  （ｍ，  ２Ｈ），  １．１８−１．４２  （ｍ，  ４８Ｈ），  ０．８７  （ｔ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．０  Ｈｚ）．
【０７４９】
化合物１６０：２，３−ビス（ステアロイルオキシ）プロピル（２−（トリエチルアンモニオ）エチル）ホスフェート
３−（ベンジルオキシ）プロパン−１，２−ジイルジステアレート（参照：ＥＰ１９１６２５５Ａ２、３０ページ）
【化２０７】
2019504002.tif 000248
化学式：Ｃ４６Ｈ８２Ｏ５
分子量：７１５．１６
３−（ベンジルオキシ）プロパン−１，２−ジオール（１３．３９ｇ、７３．５ｍｍｏｌ）、ステアリン酸（４１．８ｇ、０．１４７モル）、ＥＤＣＩ（３１．０ｇ、０．１６１モル）、及びＤＭＡＰ（１．８０ｇ、１４．７ｍｍｏｌ）の３００ｍＬジクロロメタン混合物を室温で４０時間攪拌した。この反応混合物を水で希釈し、ジクロロメタンで抽出し（２×５００ｍＬ）、合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過及び減圧下で濃縮後、この粗物質をヘキサンに溶解し、シリカゲルのパッドを通して濾過することによって精製し、その後ＥｔＯＡｃ／ヘキサン０〜３０％で溶出し、３−（ベンジルオキシ）プロパン−１，２−ジイルジステアレートを白色固体として得た（４８．２ｇ、９１％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ７．２７−７．３４  （ｍ，  ５Ｈ），  ５．２１−５．２５  （ｍ，  １Ｈ），  ４．５３  （ｍ，  ２Ｈ），  ４．３４  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ３．８  Ｈｚ，  １１．８  Ｈｚ），  ４．１８  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．６  Ｈｚ，  １１．８  Ｈｚ），  ３．５８  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．０  Ｈｚ），  ２．２４−２．３４  （ｍ，  ４Ｈ），  １．５４−１．６３  （ｍ，  ４Ｈ），  １．２４  （ｓ，  ５６Ｈ），  ０．８７  （ｔ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．３  Ｈｚ）．
【０７５０】
３−ヒドロキシプロパン−１，２−ジイルジステアレート
【化２０８】
2019504002.tif 000249
化学式：Ｃ３９Ｈ７６Ｏ５
分子量：６２５．０３
３−（ベンジルオキシ）プロパン−１，２−ジイルジステアレート（４８．２ｇ、６７．４ｍｍｏｌ）及びＰｄ／Ｃ（５％、Ｄｅｇａｕｓｓａ  Ｅ１０００２Ｕ／Ｗ、Ａｌｄｒｉｃｈ  ３３０１２４、４．８ｇ）の１Ｌ  ＥｔＯＡｃ混合物を窒素及び水素でそれぞれ３回パージし、その後この反応物を室温でバルーンを付けて１６時間攪拌した。この懸濁液を、セライトを通して濾過し、ジクロロメタン（３Ｌ）で洗浄した。減圧下で濃縮した後、その固体をジクロロメタン中で沈殿させ、３−ヒドロキシプロパン−１，２−ジイルジステアレートを白色固体として得た（４０．６７ｇ、９６％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ５．０５−５．１１  （ｍ，  １Ｈ），  ４．３１  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ４．６  Ｈｚ，  １１．９  Ｈｚ），  ４．２３  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ５．７  Ｈｚ，  １１．９  Ｈｚ），  ３．７０−３．７４  （ｍ，  ２Ｈ），  ２．３３  （ｑ，  ４Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．１  Ｈｚ），  ２．００  （ｔ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．３  Ｈｚ），  １．５７−１．６２  （ｍ，  ４Ｈ），  １．２４  （ｓ，  ５６Ｈ），  ０．８７  （ｔ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．１  Ｈｚ）．
【０７５１】
３−（（（２−シアノエトキシ）（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル）オキシ）プロパン−１，２−ジイルジステアレート
【化２０９】
2019504002.tif 000250
化学式：Ｃ４８Ｈ９３Ｎ２Ｏ６Ｐ
分子量：８２５．２５
３−ヒドロキシプロパン−１，２−ジイルジステアレート（５．００ｇ、８．０ｍｍｏｌ）及びテトラゾール（ＭｅＣＮの０．４５Ｍ溶液、３５．６ｍＬ、１６．０ｍｍｏｌ）の１５０ｍＬジクロロメタン溶液に、３−（（クロロ（ジイソプロピルアミノ）ホスフィノ）オキシ）プロパンニトリル（５．１ｍＬ、１６．０ｍｍｏｌ）の１００ｍＬジクロロメタン溶液を滴加し、この反応混合物を室温で４時間攪拌した。この混合物を濃縮し、ＩＳＣＯ（１２０ｇＳｉＯ２：ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１％Ｅｔ３Ｎ）０〜１０％）で精製し、３−（（（２−シアノエトキシ）（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル）オキシ）プロパン−１，２−ジイルジステアレートを白色固体として得た（３．７３ｇ、５６％）。この収率は、このカラムを過剰のヘキサン／１％Ｅｔ３Ｎで予め溶出することによって改善することができる。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ５．１６−５．２０  （ｍ，  １Ｈ），  ４．２８−４．３７  （ｍ，  １Ｈ），  ４．１１−４．１７  （ｍ，  １Ｈ），  ２．６２  （ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．３  Ｈｚ），  ２．２６−２．３２  （ｍ，  ８Ｈ），  １．５７−１．６４  （ｍ，  ６Ｈ），  １．２４  （ｓ，  ５６Ｈ），  １．１４−１．１９  （ｍ，  １２Ｈ），  ０．８７  （ｔ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．３  Ｈｚ）．
【０７５２】
２−（（（２，３−ビス（ステアロイルオキシ）プロポキシ）（２−シアノエトキシ）ホスホリル）オキシ）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリエチルエタンアミニウムクロリド
【化２１０】
2019504002.tif 000251
化学式：Ｃ５０Ｈ９８ＣｌＮ２Ｏ８Ｐ
分子量：９２１．７６
３−（（（２−シアノエトキシ）（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル）オキシ）プロパン−１，２−ジイルジステアレート（７００ｍｇ、０．８４８ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ，Ｎ−トリエチル−２−ヒドロキシエタンアミニウムヨージド（２３２ｍｇ、０．８４８ｍｍｏｌ）の１０ｍＬジクロロメタン溶液に、テトラゾールのＭｅＣＮ溶液（０．４５Ｍ、１．９ｍＬ、０．８４８ｍｍｏｌ）を徐々に加え、その後この反応物を室温で１６時間攪拌した。３−（（（２−シアノエトキシ）（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル）オキシ）プロパン−１，２−ジイルジステアレートの消失を確認した後、ｔＢｕＯＯＨ（０．６８ｍＬ、３．３９ｍｍｏｌ）を加え、この混合物を４時間攪拌した。この反応混合物をジクロロメタンで希釈し、１０％重硫酸ナトリウム及びブラインで洗浄し、その後硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過及び減圧下で濃縮後、この黄色フォーム残渣をＩＳＣＯ（２４ｇＳｉＯ２：ＭｅＯＨ／ジクロロメタン０〜１０％）で精製し、２−（（（２，３−ビス（ステアロイルオキシ）プロポキシ）（２−シアノエトキシ）ホスホリル）オキシ）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリエチルエタンアミニウムクロリドを帯黄色フォームとして得た（３３２ｍｇ、４３％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ５．２９  （ｍ，  １Ｈ），  ４．６７  （ｍ，  １Ｈ），  ４．１４−４．４４  （ｍ，  ７Ｈ），  ３．９８  （ｍ，  １Ｈ），  ３．５１  （ｑ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．  ２  Ｈｚ），  ２．８７  （ｍ，  ２Ｈ），  ２．２８−２．３７  （ｍ，  ４Ｈ），  １．６０  （ｍ，  ５Ｈ），  １．４１  （ｔ，  ９Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．１  Ｈｚ），  １．２４  （ｓ，  ５６Ｈ），  ０．８７  （ｔ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．２  Ｈｚ）．
【０７５３】
２，３−ビス（ステアロイルオキシ）プロピル（２−（トリエチルアンモニオ）エチル）ホスフェート  化合物１６０
【化２１１】
2019504002.tif 000252
化学式：Ｃ４７Ｈ９４ＮＯ８Ｐ
分子量：８３２．２４
２−（（（２，３−ビス（ステアロイルオキシ）プロポキシ）（２−シアノエトキシ）ホスホリル）オキシ）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリエチルエタンアミニウムクロリド（３３２ｍｇ、０．３７４ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．４６ｍＬ、２．６２ｍｍｏｌ）の１０ｍＬ  ＭｅＣＮ溶液を６０℃に１６時間加熱した。この反応混合物を減圧下で濃縮し、ＩＳＣＯ（ゴールド２４ｇＳｉＯ２：ＭｅＯＨ／ジクロロメタン０〜６０％）で精製し、所望の生成物、２，３−ビス（ステアロイルオキシ）プロピル（２−（トリエチルアンモニオ）エチル）ホスフェートを白色固体として得た（２００ｍｇ、６４％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ５．１８−５．２５  （ｍ，  １Ｈ），  ４．４１  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝２．７  Ｈｚ，  １１．８  Ｈｚ），  ４．２９  （ｍ，  ２Ｈ），  ４．１３  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝７．０  Ｈｚ，  １１．８  Ｈｚ），  ４．００  （ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．６  Ｈｚ），  ３．５７−３．６２  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．５２  （ｑ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．４  Ｈｚ），  ２．２７  （ｑ，  ４Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．６  Ｈｚ），  １．５２−１．６２  （ｍ，  ４Ｈ），  １．３７  （ｔ，  ９Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．１  Ｈｚ），  １．２４  （ｓ，  ５６Ｈ），  ０．８７  （ｔ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．１  Ｈｚ）．
【０７５４】
化合物１６１：２，３−ビス（ステアロイルオキシ）プロピル（２−（１−メチルピペリジン−１−イウム−１−イル）エチル）ホスフェート
１−（２−（（（２，３−ビス（ステアロイルオキシ）プロポキシ）（２−シアノエトキシ）ホスホリル）オキシ）エチル）−１−メチルピペリジン−１−イウムクロリド
【化２１２】
2019504002.tif 000253
化学式：Ｃ５０Ｈ９６ＣｌＮ２Ｏ８Ｐ
分子量：９１９．７５
３−（（（２−シアノエトキシ）（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル）オキシ）プロパン−１，２−ジイルジステアレート（７００ｍｇ、０．８４８ｍｍｏｌ）及び１−（２−ヒドロキシエチル）−１−メチルピペリジン−１−イウム４−メチルベンゼンスルホネート（２６７ｍｇ、０．８４８ｍｍｏｌ）の１０ｍＬジクロロメタン溶液に、テトラゾールのＭｅＣＮ溶液（０．４５Ｍ、１．９ｍＬ、０．８４８ｍｍｏｌ）を徐々に加え、その後この反応物を室温で１６時間攪拌した。３−（（（２−シアノエトキシ）（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル）オキシ）プロパン−１，２−ジイルジステアレートの消失を確認した後、ｔＢｕＯＯＨ（０．６８ｍＬ、３．３９ｍｍｏｌ）を加え、この混合物を４時間攪拌した。この反応混合物をジクロロメタンで希釈し、１０％重硫酸ナトリウム及びブラインで洗浄し、その後硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過及び減圧下で濃縮後、この黄色フォーム残渣をＩＳＣＯ（２４ｇＳｉＯ２：ＭｅＯＨ／ジクロロメタン０〜１０％）で精製し、１−（２−（（（２，３−ビス（ステアロイルオキシ）プロポキシ）（２−シアノエトキシ）ホスホリル）オキシ）エチル）−１−メチルピペリジン−１−イウムクロリドを白色固体として得た（４７０ｍｇ、６２％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ５．２５  （ｍ，  １Ｈ），  ４．６７  （ｍ，  ２Ｈ），  ４．１２−４．４２  （ｍ，  ７Ｈ），  ３．４８  （ｓ，  ２Ｈ），  ３．５５−３．７０  （ｍ，  ３Ｈ），  ３．３２  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．７７−２．８５  （ｍ，  ２Ｈ），  ２．３２  （ｑ，  ４Ｈ，  Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ），  １．９３  （ｍ，  ４Ｈ），  １．７０−１．７８  （ｍ，  ２Ｈ），  １．５９  （ｍ，  ４Ｈ），  １．１９−１．３４  （ｂｓ，  ５６Ｈ），  ０．８７  （ｔ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ）．
【０７５５】
２，３−ビス（ステアロイルオキシ）プロピル（２−（１−メチルピペリジン−１−イウム−１−イル）エチル）ホスフェート  化合物１６１
【化２１３】
2019504002.tif 000254
化学式：Ｃ４７Ｈ９２ＮＯ８Ｐ
分子量：８３０．２３
１−（２−（（（２，３−ビス（ステアロイルオキシ）プロポキシ）（２−シアノエトキシ）ホスホリル）オキシ）エチル）−１−メチルピペリジン−１−イウムクロリド（４７０ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．６５ｍＬ、３．７２ｍｍｏｌ）の１５ｍＬ  ＭｅＣＮ溶液を６０℃に１６時間加熱した。この反応混合物を減圧下で濃縮し、ＩＳＣＯ（ゴールド２４ｇＳｉＯ２：ＭｅＯＨ／ジクロロメタン０〜６０％）で精製し、所望の生成物、２，３−ビス（ステアロイルオキシ）プロピル（２−（１−メチルピペリジン−１−イウム−１−イル）エチル）ホスフェートを白色固体として得た（２６９ｍｇ、６１％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ５．１８−５．２４  （ｍ，  １Ｈ），  ４．４０  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １２．１  Ｈｚ，  ３．０  Ｈｚ），  ４．３４  （ｍ，  ２Ｈ），  ４．１２  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １１．９  Ｈｚ，  ７．１  Ｈｚ），  ３．９９  （ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ５．７  Ｈｚ），  ３．８２  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．６２−３．７１  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．４６−３．５５  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．３４  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．２７  （ｑ，  ４Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．４  Ｈｚ），  １．８４−１．９６  （ｍ，  ４Ｈ），  １．６８−１．７６  （ｍ，  ２Ｈ），  １．５２−１．６３  （ｍ，  ４Ｈ），  １．２４  （ｂｓ，  ５６Ｈ），  ０．８７  （ｔ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．６  Ｈｚ）．
【０７５６】
化合物１６２：２，３−ビス（ステアロイルオキシ）プロピル（３−（トリメチルアンモニオ）プロピル）ホスフェート
３−（（（２，３−ビス（ステアロイルオキシ）プロポキシ）（２−シアノエトキシ）ホスホリル）オキシ）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルプロパン−１−アミニウムクロリド
【化２１４】
2019504002.tif 000255
化学式：Ｃ４８Ｈ９４ＣｌＮ２Ｏ８Ｐ
分子量：８９３．７１
３−（（（２−シアノエトキシ）（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル）オキシ）プロパン−１，２−ジイルジステアレート（７００ｍｇ、０．８４８ｍｍｏｌ）及び３−ヒドロキシ−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルプロパン−１−アミニウムトシレート（２４５ｍｇ、０．８４８ｍｍｏｌ）の１０ｍＬジクロロメタン溶液に、テトラゾールのＭｅＣＮ溶液（０．４５Ｍ、１．９ｍＬ、０．８４８ｍｍｏｌ）を徐々に加え、その後この反応物を室温で１６時間攪拌した。３−（（（２−シアノエトキシ）（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル）オキシ）プロパン−１，２−ジイルジステアレートの消失を確認した後、ｔＢｕＯＯＨ（０．６８ｍＬ、３．３９ｍｍｏｌ）を加え、この混合物を４時間攪拌した。この反応混合物をジクロロメタンで希釈し、１０％重硫酸ナトリウム及びブラインで洗浄し、その後硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過及び減圧下で濃縮後、この黄色フォーム残渣をＩＳＣＯ（２４ｇＳｉＯ２：ＭｅＯＨ／ジクロロメタン０〜１０％）で精製し、３−（（（２，３−ビス（ステアロイルオキシ）プロポキシ）（２−シアノエトキシ）ホスホリル）オキシ）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルプロパン−１−アミニウムクロリドを白色フォームとして得た（５０２ｍｇ、６８％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ５．２５  （ｍ，  １Ｈ），  ４．１５−４．３５  （ｍ，  ７Ｈ），  ３．７８  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．３１  （ｓ，  ９Ｈ），  ２．８３  （ｍ，  ２Ｈ），  ２．２７−２．３５  （ｍ，  １０Ｈ），  １．９８  （ｍ，  ３Ｈ），  １．５９  （ｍ，  ４Ｈ），  １．２４  （ｓ，  ５０Ｈ），  ０．８７  （ｔ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．０  Ｈｚ）．
【０７５７】
２，３−ビス（ステアロイルオキシ）プロピル（３−（トリメチルアンモニオ）プロピル）ホスフェート  化合物１６２
【化２１５】
2019504002.tif 000256
化学式：Ｃ４５Ｈ９０ＮＯ８Ｐ
分子量：８０４．１９
３−（（（２，３−ビス（ステアロイルオキシ）プロポキシ）（２−シアノエトキシ）ホスホリル）オキシ）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルプロパン−１−アミニウムクロリド（５０２ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．７１ｍＬ、４．１ｍｍｏｌ）の１５ｍＬ  ＭｅＣＮ溶液を６０℃に１６時間加熱した。この反応混合物を減圧下で濃縮し、ＩＳＣＯ（ゴールド２４ｇＳｉＯ２：ＭｅＯＨ／ジクロロメタン０〜６０％）で精製し、所望の生成物、２，３−ビス（ステアロイルオキシ）プロピル（３−（トリメチルアンモニオ）プロピル）ホスフェートを白色固体として得た（３８５ｍｇ、８２％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ５．０２  （ｍ，  １Ｈ），  ４．４０  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ３．０  Ｈｚ，  １１．８  Ｈｚ），  ４．１３  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．２  Ｈｚ，  １１．８  Ｈｚ），  ３．９１−４．００  （ｍ，  ４Ｈ），  ３．７７−３．８３  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．２８  （ｓ，  ９Ｈ），  ２．０７−２．３２  （ｍ，  １０Ｈ），  １．２４  （ｓ，  ５６Ｈ），  ０．８７  （ｔ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．０  Ｈｚ）．
【０７５８】
化合物１６３：２，３−ビス（ステアロイルオキシ）プロピル（３−（トリメチルアンモニオ）ブチル）ホスフェート
４−（（（２，３−ビス（ステアロイルオキシ）プロポキシ）（２−シアノエトキシ）ホスホリル）オキシ）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルブタン−１−アミニウムクロリド
【化２１６】
2019504002.tif 000257
化学式：Ｃ４９Ｈ９６ＣｌＮ２Ｏ８Ｐ
分子量：９０７．７４
３−（（（２−シアノエトキシ）（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル）オキシ）プロパン−１，２−ジイルジステアレート（７００ｍｇ、０．８４８ｍｍｏｌ）及び３−ヒドロキシ−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルブタン−１−アミニウム４−メチルベンゼンスルホネート（２５７ｍｇ、０．８４８ｍｍｏｌ）の１０ｍＬジクロロメタン溶液に、テトラゾールのＭｅＣＮ溶液（０．４５Ｍ、１．９ｍＬ、０．８４８ｍｍｏｌ）を徐々に加え、その後この反応物を室温で１６時間攪拌した。３−（（（２−シアノエトキシ）（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル）オキシ）プロパン−１，２−ジイルジステアレートの消失を確認した後、ｔＢｕＯＯＨ（０．６８ｍＬ、３．３９ｍｍｏｌ）を加え、この混合物を４時間攪拌した。この反応混合物をジクロロメタンで希釈し、１０％重硫酸ナトリウム及びブラインで洗浄し、その後硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過及び減圧下で濃縮後、この黄色フォーム残渣をＩＳＣＯ（２４ｇＳｉＯ２：ＭｅＯＨ／ジクロロメタン０〜１０％）で精製し、３−（（（２，３−ビス（ステアロイルオキシ）プロポキシ）（２−シアノエトキシ）ホスホリル）オキシ）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルブタン−１−アミニウムクロリドを白色固体として得た（６４８ｍｇ、８７％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ５．１９−５．２７  （ｍ，  １Ｈ），  ４．１１−４．３４  （ｍ，  ８Ｈ），  ３．６０−３．６８  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．３２  （ｓ，  ９Ｈ），  ２．７７−２．８５  （ｍ，  ２Ｈ），  ２．３１  （ｑ，  ４Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ），  １．９０−２．００  （ｍ，  ２Ｈ），  １．７８−１．８６  （ｍ，  ２Ｈ），  １．５４−１．６４  （ｍ，  ４Ｈ），  １．１９−１．３５  （ｍ，  ５６Ｈ），  ０．８６  （ｔ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ）．
【０７５９】
２，３−ビス（ステアロイルオキシ）プロピル（３−（トリメチルアンモニオ）ブチル）ホスフェート  化合物１６３
【化２１７】
2019504002.tif 000258
化学式：Ｃ４６Ｈ９２ＮＯ８Ｐ
分子量：８１８．２１
３−（（（２，３−ビス（ステアロイルオキシ）プロポキシ）（２−シアノエトキシ）ホスホリル）オキシ）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルブタン−１−アミニウムクロリド（６４８ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．９１ｍＬ、５．２ｍｍｏｌ）の２０ｍＬ  ＭｅＣＮ溶液を６０℃に１６時間加熱した。この反応混合物を減圧下で濃縮し、ＩＳＣＯ（ゴールド２４ｇＳｉＯ２：ＭｅＯＨ／ジクロロメタン０〜６０％）で精製し、所望の生成物、２，３−ビス（ステアロイルオキシ）プロピル（３−（トリメチルアンモニオ）ブチル）ホスフェートを白色固体として得た（３３０ｍｇ、５４％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ５．１８−５．２４  （ｍ，  １Ｈ），  ４．４０  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １２．０  Ｈｚ，  ３．０  Ｈｚ），  ４．１５  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １１．９  Ｈｚ，  ６．８  Ｈｚ），  ３．９０−３．９８  （ｍ，  ４Ｈ），  ３．９４−３．９８  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．２８  （ｓ，  ９Ｈ），  １．９４−２．３２  （ｍ，  ６Ｈ），  １．６８−１．７３  （ｍ，  ２Ｈ），  １．５２−１．６２  （ｍ，  ４Ｈ），  １．２４  （ｂｓ，  ５６Ｈ），  ０．８７  （ｔ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．６  Ｈｚ）．
【０７６０】
化合物１６４：２，３−ビス（ステアロイルオキシ）プロピル（２−（キヌクリジン−１−イウム−１−イル）エチル）ホスフェート
１−（２−（（（２，３−ビス（ステアロイルオキシ）プロポキシ）（２−シアノエトキシ）ホスホリル）オキシ）エチル）キヌクリジン−１−イウムクロリド
【化２１８】
2019504002.tif 000259
化学式：Ｃ５１Ｈ９６ＣｌＮ２Ｏ８Ｐ
分子量：９３１．７６
３−（（（２−シアノエトキシ）（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル）オキシ）プロパン−１，２−ジイルジステアレート（７００ｍｇ、０．８４８ｍｍｏｌ）及び１−（２−ヒドロキシエチル）キヌクリジン−１−イウムブロミド（２００ｍｇ、０．８４８ｍｍｏｌ）の１０ｍＬジクロロメタン溶液に、テトラゾールのＭｅＣＮ溶液（０．４５Ｍ、１．９ｍＬ、０．８４８ｍｍｏｌ）を徐々に加え、その後この反応物を室温で１６時間攪拌した。３−（（（２−シアノエトキシ）（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル）オキシ）プロパン−１，２−ジイルジステアレートの消失を確認した後、ｔＢｕＯＯＨ（０．６８ｍＬ、３．３９ｍｍｏｌ）を加え、この混合物を４時間攪拌した。この反応混合物をジクロロメタンで希釈し、１０％重硫酸ナトリウム及びブラインで洗浄し、その後硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過及び減圧下で濃縮後、この黄色フォーム残渣をＩＳＣＯ（２４ｇＳｉＯ２：ＭｅＯＨ／ジクロロメタン０〜１０％）で精製し、１−（２−（（（２，３−ビス（ステアロイルオキシ）プロポキシ）（２−シアノエトキシ）ホスホリル）オキシ）エチル）キヌクリジン−１−イウムクロリドを白色固体として得た（５７２ｍｇ、７５％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ５．２６  （ｍ，  １Ｈ），  ４．６２  （ｍ，  ２Ｈ），  ４．１６−４．４２  （ｍ，  ６Ｈ），  ３．８５  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．６３−３．７３  （ｍ，  ６Ｈ），  ２．８４−２．９２  （ｍ，  ２Ｈ），  ２．３２  （ｑ，  ４Ｈ，  Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ），  ２．２０  （ｍ，  １Ｈ），  ２．０４  （ｍ，  ６Ｈ），  １．５２−１．８４  （ｍ，  １０Ｈ），  １．１８−１．３３  （ｍ，  ５０Ｈ），  ０．８７  （ｔ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ）．
【０７６１】
２，３−ビス（ステアロイルオキシ）プロピル（２−（キヌクリジン−１−イウム−１−イル）エチル）ホスフェート  化合物１６４
【化２１９】
2019504002.tif 000260
化学式：Ｃ４８Ｈ９２ＮＯ８Ｐ
分子量：８４２．２４
１−（２−（（（２，３−ビス（ステアロイルオキシ）プロポキシ）（２−シアノエトキシ）ホスホリル）オキシ）エチル）キヌクリジン−１−イウムクロリド（５７２ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．７８ｍＬ、４．４７ｍｍｏｌ）の１５ｍＬ  ＭｅＣＮ溶液を６０℃に１６時間加熱した。この反応混合物を減圧下で濃縮し、ＩＳＣＯ（ゴールド２４ｇＳｉＯ２：ＭｅＯＨ／ジクロロメタン０〜６０％）で精製し、所望の生成物、２，３−ビス（ステアロイルオキシ）プロピル（２−（キヌクリジン−１−イウム−１−イル）エチル）ホスフェートを白色固体として得た（３８７ｍｇ、７２％）。
％）．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ５．１７−５．２３  （ｍ，  １Ｈ），  ４．４０  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １１．９  Ｈｚ，  ２．６  Ｈｚ），  ４．３２  （ｍ，  ２Ｈ），  ４．１２  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １１．９  Ｈｚ，  ７．１  Ｈｚ），  ３．９９  （ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．４  Ｈｚ），  ３．６４−３．７３  （ｍ，  ９Ｈ），  ２．５２  （ｍ，  ４Ｈ），  ２．２８  （ｑ，  ４Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．７  Ｈｚ），  ２．１４−２．２１  （ｍ，  １Ｈ），  ２．０１  （ｍ，  ３Ｈ），  １．５２−１．６０  （ｍ，  ４Ｈ），  １．３６−１．４６  （ｍ，  ４Ｈ），  １．１９−１．３２  （ｂｓ，  ５０Ｈ），  ０．８７  （ｔ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．６  Ｈｚ）．
【０７６２】
化合物１６５：２，３−ビス（ステアロイルオキシ）プロピル（２−（トリプロピルアンモニオ）エチル）ホスフェート
Ｎ−（２−（（（２，３−ビス（ステアロイルオキシ）プロポキシ）（２−シアノエトキシ）ホスホリル）オキシ）エチル）−Ｎ，Ｎ−ジプロピルプロパン−１−アミニウムクロリド
【化２２０】
2019504002.tif 000261
化学式：Ｃ５３Ｈ１０４ＣｌＮ２Ｏ８Ｐ
分子量：９６３．８４
３−（（（２−シアノエトキシ）（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル）オキシ）プロパン−１，２−ジイルジステアレート（７００ｍｇ、０．８４８ｍｍｏｌ）及びＮ−（２−ヒドロキシエチル）−Ｎ，Ｎ−ジプロピルプロパン−１−アミニウムブロミド（２２７ｍｇ、０．８４８ｍｍｏｌ）の１０ｍＬジクロロメタン溶液に、テトラゾールのＭｅＣＮ溶液（０．４５Ｍ、１．９ｍＬ、０．８４８ｍｍｏｌ）を徐々に加え、その後この反応物を室温で１６時間攪拌した。３−（（（２−シアノエトキシ）（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル）オキシ）プロパン−１，２−ジイルジステアレートの消失を確認した後、ｔＢｕＯＯＨ（０．６８ｍＬ、３．３９ｍｍｏｌ）を加え、この混合物を４時間攪拌した。この反応混合物をジクロロメタンで希釈し、１０％重硫酸ナトリウム及びブラインで洗浄し、その後硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過及び減圧下で濃縮後、この黄色フォーム残渣をＩＳＣＯ（２４ｇＳｉＯ２：ＭｅＯＨ／ジクロロメタン０〜１０％）で精製し、Ｎ−（２−（（（２，３−ビス（ステアロイルオキシ）プロポキシ）（２−シアノエトキシ）ホスホリル）オキシ）エチル）−Ｎ，Ｎ−ジプロピルプロパン−１−アミニウムクロリドを帯黄色フォームとして得た（５３５ｍｇ、６８％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ８．８２  （ｂｓ，  １Ｈ），  ５．１８−５．２７  （ｍ，  １Ｈ），  ４．６４  （ｍ，  １Ｈ），  ４．１２−４．４２  （ｍ，  ４Ｈ），  ３．９８  （ｍ，  １Ｈ），  ３．２７−３．３４  （ｍ，  ４Ｈ），  ２．８４−２．９１  （ｍ，  １Ｈ），  ２．２７−２．３５  （ｍ，  ３Ｈ），  １．６９−１．８２  （ｍ，  ４Ｈ），  １．５２−１．６４  （ｍ，  ５Ｈ），  １．３９  （ｄ，  １２Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．３  Ｈｚ），  １．１９−１．３３  （ｂｓ，  ５６Ｈ），  ０．９９−１．０６  （ｍ，  ５Ｈ），  ０．８７  （ｔ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ）．
【０７６３】
２，３−ビス（ステアロイルオキシ）プロピル（２−（トリプロピルアンモニオ）エチル）ホスフェート  化合物１６６５
【化２２１】
2019504002.tif 000262
化学式：Ｃ５０Ｈ１００ＮＯ８Ｐ
分子量：８７４．３２
２−（（（２，３−ビス（ステアロイルオキシ）プロポキシ）（２−シアノエトキシ）ホスホリル）オキシ）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリプロピルエタンアミニウムクロリド（５３５ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．７０ｍＬ、４．０３ｍｍｏｌ）の２０ｍＬ  ＭｅＣＮ溶液を６０℃に１６時間加熱した。この反応混合物を減圧下で濃縮し、ＩＳＣＯ（ゴールド２４ｇＳｉＯ２：ＭｅＯＨ／ジクロロメタン０〜６０％）で精製し、所望の生成物、２，３−ビス（ステアロイルオキシ）プロピル（２−（トリプロピルアンモニオ）エチル）ホスフェートを白色固体として得た（４７２ｍｇ、９４％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ５．１６−５．２３  （ｍ，  １Ｈ），  ４．４１  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １１．９  Ｈｚ，  ３．３  Ｈｚ），  ４．２６  （ｍ，  ２Ｈ），  ４．１３  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １１．９  Ｈｚ，  ７．１  Ｈｚ），  ４．０２  （ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．３  Ｈｚ），  ３．６０  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．２２８−３．３７  （ｍ，  ６Ｈ），  ２．２２−２．３１  （ｍ，  ４Ｈ），  １．３３−１．９６  （ｍ，  １５Ｈ），  １．２４  （ｂｓ，  ５１Ｈ），  １．０４  （ｔ，  ９Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．１  Ｈｚ），  ０．８７  （ｔ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．６  Ｈｚ）．
【０７６４】
化合物１６６：２，３−ビス（ステアロイルオキシ）プロピル（２−（４−メチルモルホリノ−４−イウム）エチル）ホスフェート
４−（２−（（（２，３−ビス（ステアロイルオキシ）プロポキシ）（２−シアノエトキシ）ホスホリル）オキシ）エチル）−４−メチルモルホリン−４−イウムクロリド
【化２２２】
2019504002.tif 000263
化学式：Ｃ４９Ｈ９４ＣｌＮ２Ｏ９Ｐ
分子量：９２１．７２
３−（（（２−シアノエトキシ）（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル）オキシ）プロパン−１，２−ジイルジステアレート（７００ｍｇ、０．８４８ｍｍｏｌ）及び３−ヒドロキシ−４−メチルモルホリン−４−イウム４−メチルベンゼンスルホネート（２６９ｍｇ、０．８４８ｍｍｏｌ）の１０ｍＬジクロロメタン溶液に、テトラゾールのＭｅＣＮ溶液（０．４５Ｍ、１．９ｍＬ、０．８４８ｍｍｏｌ）を徐々に加え、その後この反応物を室温で１６時間攪拌した。３−（（（２−シアノエトキシ）（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル）オキシ）プロパン−１，２−ジイルジステアレートの消失を確認した後、ｔＢｕＯＯＨ（０．６８ｍＬ、３．３９ｍｍｏｌ）を加え、この混合物を４時間攪拌した。この反応混合物をジクロロメタンで希釈し、１０％重硫酸ナトリウム及びブラインで洗浄し、その後硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過及び減圧下で濃縮後、この黄色フォーム残渣をＩＳＣＯ（２４ｇＳｉＯ２：ＭｅＯＨ／ジクロロメタン０〜１０％）で精製し、４−（２−（（（２，３−ビス（ステアロイルオキシ）プロポキシ）（２−シアノエトキシ）ホスホリル）オキシ）エチル）−４−メチルモルホリン−４−イウムクロリドを帯黄色フォームとして得た（４５６ｍｇ、６０％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ５．２６  （ｍ，  １Ｈ），  ４．７２  （ｍ，  ２Ｈ），  ４．１２−４．４０  （ｍ，  ８Ｈ），  ３．９６−４．０８  （ｍ，  ４Ｈ），  ３．７２  （ｍ，  ４Ｈ），  ３．５２  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．８４  （ｍ，  ２Ｈ），  ２．３２  （ｑ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．９  Ｈｚ），  １．５９  （ｍ，  ４Ｈ），  １．１４−１．３１  （ｍ，  ５４Ｈ），  ０．８７  （ｔ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．６  Ｈｚ）．
【０７６５】
２，３−ビス（ステアロイルオキシ）プロピル（２−（４−メチルモルホリノ−４−イウム）エチル）ホスフェート  化合物１６６
【化２２３】
2019504002.tif 000264
化学式：Ｃ４６Ｈ９０ＮＯ９Ｐ
分子量：８３２．２０
４−（２−（（（２，３−ビス（ステアロイルオキシ）プロポキシ）（２−シアノエトキシ）ホスホリル）オキシ）エチル）−４−メチルモルホリン−４−イウムクロリド（４５６ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．６３ｍＬ、４．０３ｍｍｏｌ）の１５ｍＬ  ＭｅＣＮ溶液を６０℃に１６時間加熱した。この反応混合物を減圧下で濃縮し、ＩＳＣＯ（ゴールド２４ｇＳｉＯ２：ＭｅＯＨ／ジクロロメタン０〜６０％）で精製し、所望の生成物、２，３−ビス（ステアロイルオキシ）プロピル（２−（４−メチルモルホリノ−４−イウム）エチル）ホスフェートを白色固体として得た（３６０ｍｇ、８４％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ５．２１  （ｍ，  １Ｈ），  ４．３６−４．４２  （ｍ，  ３Ｈ），  ４．１０  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １２．１  Ｈｚ，  ７．４  Ｈｚ），  ３．９３−４．０６  （ｍ，  ８Ｈ），  ３．６６−３．７２  （ｍ，  ４Ｈ），  ３．５２  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．２７  （ｑ，  ４Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．１  Ｈｚ），  １．９２−２．０６  （ｍ，  ２Ｈ），  １．５２−１．６２  （ｍ，  ４Ｈ），  １．２４  （ｍ，  ５４Ｈ），  ０．８７  （ｔ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．６  Ｈｚ）．
【０７６６】
Ｎ−（（２−アミノエチル）スルホニル）オレアミドトリフルオロアセテート
ｔｅｒｔ−ブチル（２−スルファモイルエチル）カルバメート（参照：ＷＯ２００７／０４１６３４）
【化２２４】
2019504002.tif 000265
化学式：Ｃ７Ｈ１６Ｎ２Ｏ４Ｓ
分子量：２２４．２８
２−アミノエタン−１−スルホンアミド（３．３７ｇ、２１ｍｍｏｌ）、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（６．８７ｇ、３１．５ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１１．７ｍＬ、８４ｍｍｏｌ）、及びＮ，Ｎ−ジメチルピリジン−４−アミン（２６０ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）の１２０ｍＬジクロロメタン混合物を室温で１６時間攪拌した。この反応混合物を水で希釈し、ジクロロメタンで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過及び濃縮後、その残渣をＩＳＣＯ（８０ｇＳｉＯ２：ＥｔＯＡｃ／ヘキサン０〜１００％）で精製し、ｔｅｒｔ−ブチル（２−スルファモイルエチル）カルバメートを白色固体として得た（１．４０ｇ、３０％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ５．０８  （ｂｓ，  １Ｈ），  ４．８７  （ｂｓ，  １Ｈ），  ３．６７  （ｑ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．０  Ｈｚ），  ３．２８  （ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．０  Ｈｚ），  １．４４  （ｓ，  ９Ｈ）．
【０７６７】
ｔｅｒｔ−ブチル（２−（Ｎ−オレオイルスルファモイル）エチル）カルバメート（参照：ＷＯ２００８／０８７１９０）
【化２２５】
2019504002.tif 000266
化学式：Ｃ２５Ｈ４８Ｎ２Ｏ５Ｓ
分子量：４８８．７３
ｔｅｒｔ−ブチル（２−スルファモイルエチル）カルバメート（１．４０ｇ、６．２４ｍｍｏｌ）、オレイン酸（２．０ｍＬ、６．２４ｍｍｏｌ）、１，１’−カルボニルジイミダゾール（１．０１ｇ、６．２４ｍｍｏｌ）、及び１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（２．０ｍＬ、１３．７ｍｍｏｌ）の６０ｍＬ  Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド混合物を室温で１６時間攪拌した。ＴＬＣで生成物の生成が示された。この反応混合物を４ＮのＨＣｌ溶液で酸性にしてｐＨ＝２にし、その後、エーテルで抽出した。硫酸ナトリウムで乾燥した後、この溶液を濾過し、濃縮した。この残渣をＩＳＣＯ（８０ｇＳｉＯ２：ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、０〜１０％）で精製し、ｔｅｒｔ−ブチル（２−（Ｎ−オレオイルスルファモイル）エチル）カルバメートを得た（２．３４ｇ、７６％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ５．２９−５．３４  （ｍ，  ２Ｈ），  ５．０７  （ｂｓ，  １Ｈ），  ３．６０  （ｂｓ，  ４Ｈ），  ２．３３  （ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．５  Ｈｚ），  １．９７−２．０３  （ｍ，  ４Ｈ），  １．６２−１．６８  （ｍ，  ３Ｈ），  １．４３  （ｓ，  ９Ｈ），  １．２３−１．３０  （ｍ，  ２０  Ｈ），    ０．８７  （ｔ，  ３Ｈ，  Ｊ  ＝  ５．８  Ｈｚ）．
【０７６８】
Ｎ−（（２−アミノエチル）スルホニル）オレアミドトリフルオロアセテート
【化２２６】
2019504002.tif 000267
化学式：Ｃ２２Ｈ４１Ｆ３Ｎ２Ｏ４Ｓ
分子量：４８６．６４
ｔｅｒｔ−ブチル（２−（Ｎ−オレオイルスルファモイル）エチル）カルバメート（３７８ｍｍｏｌ、０．７７ｍｍｏｌ）の１０ｍＬジクロロメタン溶液に、トリフルオロ酢酸（２ｍＬ）を徐々に加え、室温で４時間攪拌した。ＴＬＣでｔｅｒｔ−ブチル（２−（Ｎ−オレオイルスルファモイル）エチル）カルバメートの消失が示された。この反応混合物を濃縮乾固し、ヘキサンで粉砕し、Ｎ−（（２−アミノエチル）スルホニル）オレアミドトリフルオロアセテートを白色固体として得た（３４４ｍｇ、８８％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ７．８５  （ｂｓ，  ２Ｈ），  ５．２８−５．３６  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．８４  （ｂｓ，  ２Ｈ），  ３．４８  （ｂｓ，  ２Ｈ），  ２．３０−２．４０  （ｍ，  ２Ｈ），  １．９４−２．０４  （ｍ，  ４Ｈ），  １．１８−１．３６  （ｍ，  ２０Ｈ），  ０．８７  （ｔ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ）．
ＭＳ  （ＡＰＣＩ）：  ｍ／ｚ  （ＭＨ＋）  ３８９．３，  ３７１．３．
【０７６９】
Ｎ−（（２−（ジメチルアミノ）エチル）スルホニル）オレアミド
【化２２７】
2019504002.tif 000268
化学式：Ｃ２２Ｈ４４Ｎ２Ｏ３Ｓ
分子量：４１６．６７
（参照：ＷＯ２００８／０８７１９０）２−（ジメチルアミノ）エタン−１−スルホンアミド（５００ｍｇ、３．２８ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．９２ｍＬ、６．５７ｍｍｏｌ）、及びＮ，Ｎ−ジメチルピリジン−４−アミン（４０ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）の３０ｍＬジクロロメタン溶液に、オレオイルクロリド（１．３ｍＬ、３．９４ｍｍｏｌ）を滴加し、この反応混合物を室温まで加温した。ＭＳで完全な反応が示された。この反応混合物を水で希釈し、ジクロロメタンで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過及び濃縮後、この残渣をＩＳＣＯ（２４ｇＳｉＯ２：ＭｅＯＨ／ジクロロメタン０〜１０％）で精製し、Ｎ−（（２−（ジメチルアミノ）エチル）スルホニル）オレアミドを白色固体として得た（４３７ｍｇ、３２％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ５．２８−５．３４  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．４４  （ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．３  Ｈｚ），  ３．０３  （ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．３  Ｈｚ），  ２．４８  （ｓ，  ６Ｈ），  ２．３２  （ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ），  １．９５−２．０２  （ｍ，  ４Ｈ），  １．５６−１．６４  （ｍ，  ２Ｈ），  １．２０−１．３８  （ｍ，  ２０Ｈ），  ０．８７  （ｔ，  ３Ｈ，  Ｊ  ＝    ６．６  Ｈｚ）．
ＭＳ  （ＡＰＣＩ）：  ｍ／ｚ  （ＭＨ＋）  ４１７．３．
【０７７０】
Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル−２−（Ｎ−オレオイルスルファモイル）エタン−１−アミニウムヨージド
【化２２８】
2019504002.tif 000269
化学式：Ｃ２３Ｈ４７ＩＮ２Ｏ３Ｓ
分子量：５５８．６０
Ｎ−（（２−（ジメチルアミノ）エチル）スルホニル）オレアミド（１７２ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）及びヨードメタン（３ｍＬ）の１５ｍＬジメトキシエタン溶液を室温で１６時間攪拌した。ＴＬＣで完全な反応が示された。濃縮後、この粗物質をゴールドＩＳＣＯ（２４ｇＳｉＯ２：ＭｅＯＨ／ジクロロメタン０〜２０％）で精製し、Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル−２−（Ｎ−オレオイルスルファモイル）エタン−１−アミニウムヨージドを淡黄色フォームとして得た（２１７ｍｇ、９４％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ５．２８−５．３８  （ｍ，  ２Ｈ），  ４．２４  （ｂｓ，  ４Ｈ），  ３．４５  （ｓ，  ９Ｈ），  ２．５４−２．６４  （ｍ，  ２Ｈ），  １．９４−２．０６  （ｍ，  ４Ｈ），  １．５６−１．６８  （ｍ，  ２Ｈ），  １．２０−１．３８  （ｍ，  ２０Ｈ），  ０．８７  （ｔ，  ３Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．６  Ｈｚ）．
ＭＳ  （ＡＰＣＩ）：  ｍ／ｚ  （ＭＨ＋）  ４１７．３，  ３９１．３．
【０７７１】
Ｎ−（（３−（ジメチルアミノ）プロピル）スルホニル）オレアミド
３−クロロ−Ｎ，Ｎ−ビス（４−メトキシベンジル）プロパン−１−スルホンアミド
【化２２９】
2019504002.tif 000270
化学式：Ｃ１９Ｈ２４ＣｌＮＯ４Ｓ
分子量：３９７．９１
０℃にて、３−クロロプロパン−１−スルホニルクロリド（２．６８ｍＬ、２２ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（７．８ｍＬ、５６ｍｍｏｌ）の８０ｍＬジクロロメタン溶液に、ビス（４−メトキシベンジル）アミン（５．１５ｇ、２０ｍｍｏｌ）の２０ｍＬジクロロメタン溶液を徐々に加え、その後この反応物を室温まで１６時間加温した。この反応混合物を水で希釈し、ジクロロメタンで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。この溶液をシリカゲルのパッドを通して濾過し、３０％ＥｔＯＡｃのヘキサン溶液で溶出した。濃縮後、この粗物質をＩＳＣＯ（１２０ｇＳｉＯ２：ＥｔＯＡｃ／ヘキサン０〜３０％）で精製し、３−クロロ−Ｎ，Ｎ−ビス（４−メトキシベンジル）プロパン−１−スルホンアミドを褐色油として得た（４．９５、６２％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ７．２０−７．２５  （ｍ，  ４Ｈ），  ６．８５−６．９０  （ｍ，  ４Ｈ），  ４．２７  （ｓ，  ４Ｈ），  ３．８１  （ｓ，  ６Ｈ），  ３．６０  （ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ），  ２．９９  （ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．１  Ｈｚ），  ２．１９−２．２８  （ｍ，  ２Ｈ）．
【０７７２】
３−（ジメチルアミノ）−Ｎ，Ｎ−ビス（４−メトキシベンジル）プロパン−１−スルホンアミド
【化２３０】
2019504002.tif 000271
化学式：Ｃ２１Ｈ３０Ｎ２Ｏ４Ｓ
分子量：４０６．５４
密閉チューブ内で、３−クロロ−Ｎ，Ｎ−ビス（４−メトキシベンジル）プロパン−１−スルホンアミド（４．９５ｇ、１２．４ｍｍｏｌ）のジメチルアミンのＴＨＦ溶液（２．０Ｍ、３０ｍＬ、６０ｍｍｏｌ）混合物を７０℃に１６時間加熱した。ＭＳで生成物が示された。室温に冷却した後、この反応混合物を濾過し、ジクロロメタンで洗浄した。この濾液を濃縮し、その粗物質をＩＳＣＯ（１２０ｇＳｉＯ２：ＭｅＯＨ／ジクロロメタン０〜７％）で精製し、３−（ジメチルアミノ）−Ｎ，Ｎ−ビス（４−メトキシベンジル）プロパン−１−スルホンアミドを褐色油として得た（４．０４、８０％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ７．１５−７．２５  （ｍ，  ４Ｈ），  ６．８２−６．８９  （ｍ，  ４Ｈ），  ４．２５  （ｓ，  ４Ｈ），  ３．８０  （ｓ，  ６Ｈ），  ２．８５−２．９５  （ｍ，  ２Ｈ），  ２．２８  （ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．６  Ｈｚ），  ２．１７  （ｓ，  ６Ｈ），  １．８７−１．９６  （ｍ，  ２Ｈ）．
【０７７３】
３−（ジメチルアミノ）プロパン−１−スルホンアミド（参照：ＷＯ２０１５／１１２４４１）
【化２３１】
2019504002.tif 000272
化学式：Ｃ５Ｈ１４Ｎ２Ｏ２Ｓ
分子量：１６６．２４
３−（ジメチルアミノ）−Ｎ，Ｎ−ビス（４−メトキシベンジル）プロパン−１−スルホンアミド（１．２２ｇ、３．０ｍｍｏｌ）及びアニソール（３．３ｍＬ）の１５ｍＬジクロロメタン溶液に、２２ｍＬのトリフルオロ酢酸を滴加し、その後室温で１６時間攪拌した。ＭＳで生成物が示された。この反応混合物を濃縮乾固し、３−（ジメチルアミノ）プロパン−１−スルホンアミドを半固体として得（１．００ｇ、定量的）、これをさらに精製することなく次のステップに用いた。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）  δ  ３．２８−３．３４  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．１８  （ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．６  Ｈｚ），  ２．９０  （ｓ，  ６Ｈ），  ２．１７−２．２９  （ｍ，  ２Ｈ）．
ＭＳ  （ＡＰＣＩ）：  ｍ／ｚ  （ＭＨ＋）  １６７．１．
【０７７４】
Ｎ−（（３−（ジメチルアミノ）プロピル）スルホニル）オレアミド
【化２３２】
2019504002.tif 000273
化学式：Ｃ２３Ｈ４６Ｎ２Ｏ３Ｓ
分子量：４３０．６９
３−（ジメチルアミノ）プロパン−１−スルホンアミド（１．００ｇ、３．０ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１．２６ｍＬ、９．０ｍｍｏｌ）、及びＮ，Ｎ−ジメチルピリジン−４−アミン（３７ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）の６０ｍＬジクロロメタン溶液に、オレオイルクロリド溶液（１．２ｍＬ、３．６ｍｍｏｌ）を滴加し、その後室温で１６時間攪拌した。ＭＳで生成物が示された。この反応混合物を水で希釈し、ジクロロメタンで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過及び濃縮後、その残渣をＩＳＣＯ（４０ｇＳｉＯ２：ＭｅＯＨ／ジクロロメタン０〜１０％）で精製し、Ｎ−（（３−（ジメチルアミノ）プロピル）スルホニル）オレアミドを白色固体として得た（２２５ｍｇ、２０％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ５．３１−５．３６  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．３７  （ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．１  Ｈｚ），  ２．９９  （ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．０  Ｈｚ），  ２．８２  （ｂｓ，  １Ｈ），  ２．６８  （ｓ，  ６Ｈ），  ２．３７  （ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ），  ２．２１−２．２９  （ｍ，  ２Ｈ），  １．９６−２．０２  （ｍ，  ４Ｈ），  １．５７−１．６６  （ｍ，  ２Ｈ），  １．２０−１．３６  （ｍ，  ２０Ｈ），  ０．８７  （ｔ，  ３Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．６  Ｈｚ）．
ＭＳ  （ＡＰＣＩ）：  ｍ／ｚ  （ＭＨ＋）  ４３１．３．
【０７７５】
Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル−３−（Ｎ−オレオイルスルファモイル）プロパン−１−アミニウムヨージド
【化２３３】
2019504002.tif 000274
化学式：Ｃ２４Ｈ４９ＩＮ２Ｏ３Ｓ
分子量：５７２．６３
Ｎ−（（３−（ジメチルアミノ）プロピル）スルホニル）オレアミド（３８９ｍｇ、０．９０ｍｍｏｌ）の２０ｍＬジメトキシエタン溶液に、ヨードメタン（５ｍＬ）を加え、この反応混合物を室温で１６時間攪拌した。ヨードメタンを多くしても時間を長くしても収率は上がらなかった。この反応混合物を濃縮し、ゴールドＩＳＣＯ（２４ｇＳｉＯ２：ＭｅＯＨ／ジクロロメタン０〜３０％）で精製し、Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル−３−（Ｎ−オレオイルスルファモイル）プロパン−１−アミニウムヨージドを黄色フォームとして得た（２３７ｍｇ、４６％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）  δ  ５．３２−５．３６  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．４８−３．５７  （ｍ，  ４Ｈ），  ３．１７  （ｓ，  ９Ｈ），  ２．２８−２．３７  （ｍ，  ４Ｈ），  １．９９−２．０６  （ｍ，  ４Ｈ），  １．５７−１．６６  （ｍ，  ２Ｈ），  １．２４−１．３７  （ｍ，  ２０Ｈ），  ０．８７  （ｔ，  ３Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．６  Ｈｚ）．
【０７７６】
２−オクタデシルイコサン酸
ジエチル２，２−ジオクタデシルマロネート（参照：ＷＯ２０１４／１９５４３２）
【化２３４】
2019504002.tif 000275
化学式：Ｃ４３Ｈ８４Ｏ４
分子量：６６５．１４
０℃で、ＮａＨ（１．２０ｇ、３０ｍｍｏｌ）をマロン酸ジエチル（１．５２ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）の６０ｍＬ  Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液に加えた。３０分間攪拌した後、１−ブロモオクタデカン（８．３３ｇ、２５ｍｍｏｌ）の６０ｍＬ  ＴＨＦ溶液を徐々に加え、この反応混合物を室温まで加温し、その後５０℃に６時間加熱した。この反応物を室温に冷却した後、ＭｅＯＨ、酢酸、及び氷冷した水（各５ｍＬ）を加えてこの反応をクエンチした。ジクロロメタンで抽出した後、合わせた有機層をブラインで洗浄した（分離は困難であった）。硫酸ナトリウムで乾燥した後、この溶液を濾過及び濃縮し、その粗物質をＩＳＣＯ（２２０ＳｉＯ２：エーテル／ヘキサン０〜５％）で精製し、ジエチル２，２−ジオクタデシルマロネートを白色固体として得た（５．９６ｇ、８５％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ４．１６  （ｑ，  ４Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．１  Ｈｚ），  １．８１−１．８７  （ｍ，  ４Ｈ），  １．０６−１．３３  （ｍ，  ７０Ｈ），  ０．８７  （ｔ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．１  Ｈｚ）．
【０７７７】
２，２−ジオクタデシルマロン酸
【化２３５】
2019504002.tif 000276
化学式：Ｃ３９Ｈ７６Ｏ４
分子量：６０９．０３
ジエチル２，２−ジオクタデシルマロネート（３．３９ｇ、５．１ｍｍｏｌ）の６０ｍＬ  ｉＰｒＯＨ溶液に、水酸化カリウム（１１．０ｇ）の６０ｍＬ水溶液を加え、この混合物を４８時間加熱還流した。ＴＬＣで出発物質の消失と少量のモノエステルが示された。この反応混合物を室温に冷却し、水で希釈した。４７％硫酸を加えてｐＨ＝２に調整すると、沈殿が観察された。この懸濁液を濾過し、水及びジクロロメタンで洗浄した。この固体をエーテルに溶解し、硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過及び濃縮後、２，２−ジオクタデシルマロン酸を白色固体として得た（２．１３ｇ、６８％）。
％）．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  １．８９−１．９４  （ｍ，  ４Ｈ），  １．０９−１．３２  （ｍ，  ６６Ｈ），  ０．８８  （ｔ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．１  Ｈｚ）．
【０７７８】
【化２３６】
2019504002.tif 000277
化学式：Ｃ３８Ｈ７６Ｏ２
分子量：５６５．０２
２，２−ジオクタデシルマロン酸（２．１３ｇ、３．５ｍｍｏｌ）の６０ｍＬ  ｎ−デカン混合物を１６時間加熱還流した。揮発性物質を減圧下で除去した後、この粗物質をクロロホルム中で沈殿させ、２−オクタデシルイコサン酸を白色固体として得た（１．７６ｇ、８９％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ２．２８−２．３６  （ｍ，  １Ｈ），  １．４０−１．５６  （ｍ，  ４Ｈ），  １．０８−１．３３  （ｍ，  ６４Ｈ），  ０．８７  （ｔ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．１  Ｈｚ）．
【０７７９】
Ｎ−（メチルスルホニル）−２−オクタデシルイコサンアミド
【化２３７】
2019504002.tif 000278
化学式：Ｃ３９Ｈ７９ＮＯ３Ｓ
分子量：６４２．１３
０℃で、塩化オキサリル（８５μＬ、１ｍｍｏｌ）を２−オクタデシルイコサン酸（５６５ｍｇ、１ｍｍｏｌ）の２０ｍＬジクロロメタン懸濁液に徐々に加え、次いで５滴のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを加え、その後、この反応混合物を室温まで１時間加温して透明溶液に変化させた。トリエチルアミン（０．５６ｍＬ、４ｍｍｏｌ）、メタンスルホンアミド（９５ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、及びＮ，Ｎ−ジメチルピリジン−４−アミン（１２ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）を加え、この混合物を室温で４８時間攪拌した。この反応混合物を水で希釈し、ジクロロメタンで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過及び濃縮後、この粗物質をジクロロメタン中で沈殿させ、Ｎ−（メチルスルホニル）−２−オクタデシルイコサンアミドを白色固体として得た（５０２ｍｇ、７８％）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  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