(57)【要約】  ペットフード製品のコク味及び／又は嗜好性を高めるために用いることができる、カルシウム感知受容体の活性を調節、増加、及び／又は増強する少なくとも１つの化合物を含むフレーバー組成物が、本明細書に記載される。該化合物を特定するための方法も本明細書に開示される。
2019515668.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第２族元素の二価又は三価の塩を含む、フレーバー組成物。
【請求項２】
前記第２族元素が、ベリリウム（Ｂｅ）、マグネシウム（Ｍｇ）、カルシウム（Ｃａ）、ストロンチウム（Ｓｒ）、バリウム（Ｂａ）及びそれらの組合せからなる群より選択されることを特徴とする、請求項１に記載のフレーバー組成物。
【請求項３】
前記第２族元素が、マグネシウム（Ｍｇ）又はストロンチウム（Ｓｒ）であることを特徴とする、請求項２に記載のフレーバー組成物。
【請求項４】
ランタニドの二価又は三価の塩を含む、フレーバー組成物。
【請求項５】
前記ランタニドが、ランタン（Ｌａ）、セリウム（Ｃｅ）、プラセオジム（Ｐｒ）、ネオジム（Ｎｄ）、プロメチウム（Ｐｍ）、サマリウム（Ｓｍ）、ユウロピウム（Ｅｕ）、ガドリニウム（Ｇｄ）、テルビウム（Ｔｂ）、ジスプロシウム（Ｄｙ）、ホルミウム（Ｈｏ）、エルビウム（Ｅｒ）、ツリウム（Ｔｍ）、イッテルビウム（Ｙｂ）、ルテチウム（Ｌｕ）及びそれらの組合せからなる群より選択されることを特徴とする、請求項４に記載のフレーバー組成物。
【請求項６】
前記ランタニドが、ガドリニウム（Ｇｄ）、プラセオジム（Ｐｒ）、又はテルビウム（Ｔｂ）であることを特徴とする、請求項５に記載のフレーバー組成物。
【請求項７】
式Ｖｆｔ−１ａ又はＶｆｔ−１ｂの化合物を含む、フレーバー組成物：
【化１】
2019515668.tif 000039
［式中、
ｎは１〜６の範囲であり；
ｎ６及びｎ７は、独立して、１又は２であり；
Ｘ１及びＸ２は、独立して、酸素又は硫黄であり；
Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ、ＣＨ３、分岐又は非分岐低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ８）、（ＣＨ２）ｎ２アリール、（ＣＨ２）ｎ２ヘテロアリール、アリール、ヘテロアリール、ｃ−Ｃ３Ｈ５、ｃ−Ｃ４Ｈ７、ｃ−Ｃ５Ｈ９、ｃ−Ｃ６Ｈ１１、及び（ＣＨ２）ｎ３シクロアルキル（Ｃ３〜Ｃ６）からなる群より選択され；
Ｙ、Ｒ３及びＲ４は、独立して、Ｈ、ＯＨ、ＣＨ３、及び分岐又は非分岐低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ１０）からなる群より選択され；
Ｒ５及びＲ６は、独立して、Ｈ、ＯＨ、分岐又は非分岐低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）、Ｏ（ＣＨ２）ｎ４アリール、Ｏ（ＣＨ２）ｎ４ヘテロアリール、ＮＲ７Ｒ８、Ｎ（Ｒ９）ＯＨ、アリール、及びヘテロアリールからなる群より選択され；
Ｒ７及びＲ８は、独立して、Ｈ、ＯＨ、ＣＨ３、及び分岐又は非分岐低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ１０）からなる群より選択され；
Ｒ９、Ｒ１１、Ｒ１２、及びＲ１３は、独立して、Ｈ、ＣＨ３、低級アルキル分岐及び非分岐（Ｃ１〜Ｃ１０）からなる群より選択され；
ｎ２、ｎ３、及びｎ４は、独立して、０〜４の範囲であり；
ｎ５は、０、１、又は２であり；かつ
前記アリール及びアルキル（分岐及び非分岐の両方）基は、任意選択的に、ＣＨ３、ＯＨ、ＳＨ、ＯＣＨ３、ＳＣＨ３、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ１３、Ｓ（Ｏ）ｎ５Ｒ１、Ｃ（Ｏ）Ｒ１１、Ｃ（Ｏ）ＮＲ１１Ｒ１２、ＣＮ、ＮＲ１１Ｒ１２、ＮＲ１１Ｃ（Ｏ）Ｒ１２、アリール、メチレンジオキシ、アルキル（Ｃ１〜Ｃ５）、ＣＨ２ＳＳＣＨ２ＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＮＨ２）、ハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、ＮＯ２、ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、ＣＨＯ、ＣＦ３、Ｐ（＝Ｘ１）（ＯＲ１）２、又はＯＰ（＝Ｘ１）（ＯＲ１）２で置換される］。
【請求項８】
下記構造を含む式Ｖｆｔ−２の化合物を含むフレーバー組成物：
【化２】
2019515668.tif 000040
［式中、
ｎは、０〜６の範囲であり；
Ｗは、ＣＲ６Ｒ７、Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）ｎ２、Ｓｅ、Ｓｅ（Ｏ）ｎ２、Ｐ（Ｘ２）（ＯＲ１）２、ＯＰ（Ｘ２）（ＯＲ１）２、ＮＨ２、ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、Ｐｈ、インドール、及びヘテロアリールからなる群より選択され；
Ｘ１は、Ｈ、ＣＨ３、低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）、（ＣＨ２）ｎ３アリール、（ＣＨ２）ｎ３ヘテロアリール、アリール、ヘテロアリール、ＯＨ、ＮＲ１Ｒ２、ＮＨ（＝Ｃ）ＮＲ１Ｒ２、フェニル、ｐ−ヒドロキシフェニル、インドール、ＳＲ１、ＯＲ１、ＣＯＯＲ１、Ｓ（Ｏ）ｎ２、テトラゾール、イミダゾール、Ｐ（＝Ｘ２）（ＯＲ１）２、及びＯＰ（＝Ｘ２）（ＯＲ１）２からなる群より選択され；
Ｘ２は、酸素又は硫黄であり；
Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ、分岐又は非分岐低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ８）、（ＣＨ２）ｎ２アリール、（ＣＨ２）ｎ２ヘテロアリール、アリール、ヘテロアリール、ｃ−Ｃ３Ｈ５、ｃ−Ｃ４Ｈ７、ｃ−Ｃ５Ｈ９、ｃ−Ｃ６Ｈ１１、及び（ＣＨ２）ｎ３シクロアルキル（Ｃ３〜Ｃ６）からなる群より選択され；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ１１、Ｒ１２、及びＲ１３は、独立して、Ｈ、ＣＨ３、低級アルキル分岐及び非分岐（Ｃ１〜Ｃ１０）からなる群より選択され；
Ｒ５は、Ｈ、ＯＨ、分岐又は非分岐低級アルコキシド（Ｃ１〜Ｃ６）、ＯＣＨ３、ＯＥｔ、ＯＣＨ２Ｐｈ、Ｏ（ＣＨ２）ｎ４アリール，Ｏ（ＣＨ２）ｎ４ヘテロアリール、ＮＲ６Ｒ７、Ｎ（Ｒ８）ＯＨ、Ｏ−アリール、及びＯ−ヘテロアリールからなる群より選択され；
前記アリール及びアルキル（分岐及び非分岐の両方）基は、任意選択的に、ＣＨ３、ＯＨ、ＳＨ、ＯＣＨ３、ＳＣＨ３、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ１３、Ｓ（Ｏ）ｎ２Ｒ１、Ｃ（Ｏ）Ｒ１１、Ｃ（Ｏ）ＮＲ１１Ｒ１２、ＣＮ、ＮＲ１１Ｒ１２、ＮＲ１１Ｃ（Ｏ）Ｒ１２、アリール、メチレンジオキシ、アルキル（Ｃ１〜Ｃ５）、ＣＨ２ＳＳＣＨ２ＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＮＨ２）、ハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、ＮＯ２、ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、ＣＨＯ、ＣＦ３、Ｐ（＝Ｘ２）（ＯＲ１）２、又はＯＰ（＝Ｘ２）（ＯＲ１）２で置換され；
Ｒ８は、Ｈ又はＣＨ３であり；
ｎ２は０〜２の範囲であり；かつ
ｎ３及びｎ４は、独立して、０〜４の範囲である］。
【請求項９】
式Ｖｆｔ−２の化合物が（Ｒ）立体異性体であることを特徴とする、請求項８に記載のフレーバー組成物。
【請求項１０】
式Ｖｆｔ−２の化合物が（Ｓ）立体異性体であることを特徴とする、請求項８に記載のフレーバー組成物。
【請求項１１】
グリシン、サルコシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、ホモフェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、セリン、トレオニン、システイン、Ｓ−メチルシステイン、メチオニン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ＡＢＵ、セレノシステイン、Ｓｅ−（メチル）セレノシステイン、オルニチン、チオプロリン、ペニシラミン、及び５，５−ジメチルチアゾリジン−４−カルボン酸、ジアミノプロパン酸、及びβ−アラニンからなる群より選択されるアミノ酸のうちの１つ以上を含む、フレーバー組成物。
【請求項１２】
グルタミン酸及びアスパラギン酸のアミド結合が、α−カルボキシル基及び／又は側鎖カルボキシル基を介して形成されることを特徴とする、請求項１１に記載のフレーバー組成物。
【請求項１３】
グルタミン酸及びアスパラギン酸の遊離カルボキシル基がエステル化されて、低級アルキルエステルをもたらすことを特徴とする、請求項１１に記載のフレーバー組成物。
【請求項１４】
硫黄又はセレンを含むアミノ酸が酸化されて、Ｓ（Ｏ）ｎ３、Ｓｅ（Ｏ）ｎ３、及びＳ（Ｎ＝Ｏ）及びＳｅ（Ｎ＝Ｏ）からなる群より選択されるニトロソ種を与えることを特徴とする、請求項１１に記載のフレーバー組成物。
【請求項１５】
硫黄又はセレンを含むアミノ酸が酸化されて、対応するホモ二量体及びヘテロ二量体のジスルフィド及びジセレニドを与えることを特徴とする、請求項１１に記載のフレーバー組成物。
【請求項１６】
硫黄又はセレンを含むアミノ酸が、該硫黄又はセレンにおいてアルキル化されることを特徴とする、請求項１１に記載のフレーバー組成物。
【請求項１７】
下記構造を含む式Ｖｆｔ−３の化合物を含むフレーバー組成物：
【化３】
2019515668.tif 000041
［式中、
ＡＡ１及びＡＡ２は、独立して、請求項３に列挙されるアミノ酸、又は以下の構造：
【化４】
2019515668.tif 000042
を有する前記式Ｖｆｔ−３ｂのアミノ酸のいずれかであり、ここで、
ｎは、０〜６の範囲であり。
ｎ１及びｎ２は、独立して、０、１、２、又は３であり；
ｎ３は、０、１、又は２であり；
ｎ４は１〜６の範囲であり；
ｎ５は、０、１、２又は３であり；
Ｗは、Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）ｎ３、Ｓｅ、Ｓｅ（Ｏ）ｎ３、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、ＮＲ１Ｒ２、ＣＲ１Ｒ２、及びＣＨ２からなる群より選択され；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４は、Ｈ、ＣＨ３、低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）、（ＣＨ２）ｎ２インドール、（ＣＨ２）ｎ２アリール、（ＣＨ２）ｎ２ヘテロアリール、及びＯＨ、ＣＯＯＨからなる群より選択され；
Ｒ５は、Ｈ、ＣＨ３、低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）、Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ６、Ｃ（Ｏ）アリール、Ｃ（Ｏ）ヘテロアリール、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜Ｃ６、Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ２アリール、（ＣＨ２）ｎ２インドール、（ＣＨ２）ｎ２アリール、（ＣＨ２）ｎ２ヘテロアリール、ニトロソ、ＯＨ、アリール、及びインドールからなる群より選択され；
ＡＡ１又はＡＡ２が硫黄又はセレンを含む場合には、前記アミノ酸は、任意選択的に酸化されて、Ｓ（Ｏ）ｎ２、Ｓｅ（Ｏ）ｎ２、Ｓ（Ｎ＝Ｏ）又はＳｅ（Ｎ＝Ｏ）を与え；
ＡＡ１又はＡＡ２が硫黄又はセレンを含む場合には、前記アミノ酸は、任意選択的に、前記硫黄又はセレンにおいてアルキル化され；
前記アリール及びアルキル（分岐及び非分岐の両方）基が、任意選択的に、メチル、ＯＨ、ＳＨ、ＯＣＨ３、ＳＣＨ３、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ１３、Ｓ（Ｏ）ｎ３Ｒ１、Ｃ（Ｏ）Ｒ１１、Ｃ（Ｏ）ＮＲ１１Ｒ１２、ＣＮ、ＮＲ１１Ｒ１２、ＮＲ１１Ｃ（Ｏ）Ｒ１２、アリール、メチレンジオキシ、アルキル（Ｃ１〜Ｃ５）、ＣＨ２ＳＳＣＨ２ＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＮＨ２）、ハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、ＮＯ２、ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、ＣＨＯ、ＣＦ３、Ｐ（＝Ｘ１）（ＯＲ１）２、ＯＰ（＝Ｘ１）（ＯＲ１）２で置換され；かつ
Ｒ１１、Ｒ１２、及びＲ１３は、独立して、Ｈ、ＣＨ３、低級アルキルの分岐又は非分岐（Ｃ１〜Ｃ１０）に等しい］。
【請求項１８】
式Ｖｆｔ−３の化合物が（Ｒ）立体異性体であることを特徴とする、請求項１７に記載のフレーバー組成物。
【請求項１９】
式Ｖｆｔ−３の化合物が（Ｓ）立体異性体であることを特徴とする、請求項１７に記載のフレーバー組成物。
【請求項２０】
式Ｖｆｔ−３の化合物が、二官能性アミノ酸（例えば、アスパラギン酸及びグルタミン酸）であり、前記アミド結合が、前記α−カルボキシル基又は側鎖カルボキシル基において形成されることを特徴とする、請求項１７に記載のフレーバー組成物。
【請求項２１】
下記構造を含む式Ｖｆｔ−４の化合物を含むフレーバー組成物：
【化５】
2019515668.tif 000043
［式中、
ｎ１は、１〜５５０の範囲であり；
ｎ２は、０〜５の範囲であり；
Ｒは、ＮＲ１Ｒ２、Ｃ（＝Ｎ）ＮＨ２、ＮＲ１Ｃ（＝ＮＲ２）ＮＲ３Ｒ４及びイミダゾールからなる群より選択され；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４は、独立して、Ｈ、ＣＨ３及び低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）からなる群より選択される］。
【請求項２２】
前記式Ｖｆｔ−４の化合物が、個々の化合物のうちの１つ以上を含み（例えば、混合物中）、各個々の化合物が式Ｖｆｔ−４によって定められることを特徴とする、請求項１７に記載のフレーバー組成物。
【請求項２３】
下記構造を含む式Ｖｆｔ−５の化合物を含むフレーバー組成物：
Ｒ１−ＡＡｎ−Ｒ２
［式中、
ｎは１〜５５０であり；
各ＡＡは、独立して、請求項３に列挙されるアミノ酸からなる群より選択され；
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ（＝Ｏ）低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）、Ｃｂｚ、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）、Ｃ（＝Ｏ）アリール、Ｃ（＝Ｏ）ＯＥｔ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ３、Ｃ（＝Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３、Ｆｍｏｃ、Ｃ（ＣＨ３）３、ＣＨ２Ｐｈ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ＝ＣＨ２、ｐ−メトキシフェニル、ｐ−ニトロフェニル、Ｃ（Ｐｈ）３、Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ２ＣＣｌ３、及びＣ（＝Ｏ）ＣＨ３からなる群より選択され；
Ｒ２は、ＯＨ、ＮＲ２ａＲ３ａ、ＯＣＨ３、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６）、ＯＣＨ２アリール、及びＣ（ＣＨ３）３からなる群より選択され；かつ
Ｒ２ａ及びＲ３ａは、独立して、Ｈ、分岐又は非分岐低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ８）、及びＣＨ２フェニルからなる群より選択される］。
【請求項２４】
下記構造を含む式Ｖｆｔ−６の化合物を含むフレーバー組成物：
【化６】
2019515668.tif 000044
［式中、
ｎ１〜ｎ６は、独立して、０〜６の範囲であり、したがって、ｎ１〜ｎ６のうちの１つ以上が０に等しいとき、それは鎖末端を意味し；
Ｒ１〜Ｒ１２は、独立して、Ｈ、ＣＨ３、分岐又は非分岐低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）、ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２、アリール、フェニル、ＣＨ２アリール、及びＣＨ２Ｐｈからなる群より選択され；
Ｒａ〜Ｒｆは、独立して、Ｈ、ＣＨ３、分岐又は非分岐低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）、ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２、アリール、フェニル、ＣＨ２アリール、ＣＨ２Ｐｈ、及び（ＣＲ１３Ｒ１４）ｎ７ＮＲ１５Ｒ１６から選択され；
ｎ７は、２〜６の範囲であり；
Ｒ１３及びＲ１４は、独立して、Ｈ、ＣＨ３、分岐又は非分岐低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）、ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２、アリール、フェニル、ＣＨ２アリール、及びＣＨ２Ｐｈからなる群より選択され；かつ
Ｒ１５及びＲ１６は、独立して、Ｈ、ＣＨ３、分岐又は非分岐低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）、ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２、アリール、フェニル、ＣＨ２アリール、及びＣＨ２Ｐｈからなる群より選択され；かつ
任意選択的に、式Ｖｆｔ−６の化合物は、環構造を含み、ここで、点線は、２つの末端原子間の共有結合を表す］。
【請求項２５】
式Ｖｆｔ−６．５ａ、Ｖｆｔ−６．５ｂ又はＶｆｔ−６．５ｃの化合物を含むフレーバー組成物：
【化７】
2019515668.tif 000045
［式中、
ｎは１〜３の範囲であり；
ｎ１は０〜４の範囲であり；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、及びＲ６は、独立して、Ｈ、低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６分岐又は非分岐）、アリールアルキル（すなわち、ＣＨ２Ｐｈ）、アリール、Ｐｈ、ヘテロアリール、及びＰ（＝Ｘ３）ＯＲ７Ｒ８からなる群より選択され；
Ｒ７及びＲ８は、独立して、Ｈ、低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６分岐又は非分岐）、アリールアルキル（すなわち、ＣＨ２Ｐｈ）、アリール、Ｐｈ、及びヘテロアリールからなる群より選択され；
Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ、ＣＨ３、低級アルキルＣ１〜Ｃ６、ヘテロアリール、（ＣＨ２）ｎ１アリール、及び（ＣＨ２）ｎ１ヘテロアリールからなる群より選択され；
Ｒは、Ｈ、ＯＨ、ＣＨ３、低級アルキルＣ１〜Ｃ６、ヘテロアリール、（ＣＨ２）ｎ１アリール、（ＣＨ２）ｎ１ヘテロアリール、ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ、低級アルケン、及び低級アセチレンからなる群より選択され；かつ
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３は、独立して、Ｏ及びＳからなる群より選択される］。
【請求項２６】
ネオマイシン、トブラマイシン、ゲンタマイシン、リボスタマイシン、パロモマイシン、抗生物質ジェネティシン、アミカシン、ストレプトマイシン、ネアミン、パロマミン、アプラマイシン、ブチロシンＢ、リビドマイシンＡ、カナマイシンＡ、カナマイシンＢ、カナマイシントブラマイシン、アミカシン、ゲンタマイシンＣ１、ゲンタマイシンＣ２、ジェネティシン、シソマイシン、アルベカシン、アストロマイシン、ベカナマイシン、ディベカシン、ジヒドロストレプトマイシン、エルサミトゥルーイン（Elsamitruein）、ハイグロマイシンＢ、イセパマイシン、カスガマイシン、レゴマイシン（Legomycin）、リビドマイシン、ミクロノマイシン、ネアミン、ネオマイシン、ネチルマイシン、ノウルセオトライシン、プラゾマイシン、トブラマイシン、トウトマイシン、及びベルダマイシンからなる群より選択される１つ以上のアミノグリコシド系抗生物質を含む、フレーバー組成物。
【請求項２７】
Ｔｙｒ２１８、Ｔｈｒ１４５、Ｓｅｒ１４７、Ａｌａ１６８、Ｓｅｒ１７０、Ａｓｐ１９０、Ｇｌｕ２９７、Ａｌａ２９８、Ｓｅｒ２７２、Ｈｉｓ４１３、Ｔｈｒ４１２、Ｔｒｐ２９９、Ａｓｎ６４、Ｐｈｅ６５、Ａｓｎ１０２、Ｓｅｒ１６９、Ｇｌｎ１９３、Ａｓｐ２１６、Ａｌａ３００、Ｓｅｒ３０２、Ｌｅｕ３０４、Ｔｙｒ４１１、及びそれらの組合せからなる群より選択される、ＣａＳＲのヴィーナス・フライトラップ（ＶＦＴ）ドメイン相互作用部位における１つ以上のアミノ酸と相互作用する化合物を含む、フレーバー組成物。
【請求項２８】
Ｐｈｅ６８４、Ｇｌｙ６８５、Ｐｈｅ６８８、Ｇｌｎ７３５、Ｍｅｔ７７１、Ａｌａ７７２、Ｐｈｅ７７５、Ｌｅｕ７７６、Ｔｈｒ７８０、Ｐｈｅ８１４、Ｖａｌ８１７、Ｔｒｐ８１８、Ｐｈｅ８２１、Ｇｌｕ８３７、Ａｌａ８４０、Ｉｌｅ８４１、及びそれらの組合せからなる群より選択される、ＣａＳＲの７膜貫通（７ＴＭ）ドメイン相互作用部位における１つ以上のアミノ酸と相互作用する化合物を含む、フレーバー組成物。
【請求項２９】
次式からなる群より選択される化合物を含む、フレーバー組成物：
【化８−１】
2019515668.tif 000046
【化８−２】
2019515668.tif 000047
［式中、
Ｇ１〜Ｇ４は、独立して、Ｃ（Ｒ４ａＲ４ｂ）又はＮ（Ｒ４）であり；
Ｗは、ＯＲ４又はＳＲ４であり；
Ｘは、Ｏ又はＳであり；
Ｘ１〜Ｘ１０は、独立して、Ｃ又はＮであり；
Ｘ１１は、Ｃ、Ｏ、Ｎ、又はＳであり；
Ｘ１２は、Ｏ、ＮＨ、又はＳであり；
Ｘ１３は、ＣＲ４ａＲ４ｂ、Ｏ、Ｎ（Ｒ１２）、又はＳであり；
Ｚは、Ｈ、Ｏ、Ｎ、Ｓ、又はＣであり；
ｎ１、ｎ２、及びｎ３は、独立して、０〜４の範囲であり、したがって、ｎ１又はｎ２が０のとき、それは化学結合を意味し；
ｎ４は０〜２の範囲であり；
ｎ５は１〜３の範囲であり；
Ｒ１、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、及びＲ１ｃは、独立して、Ｈ、ＣＨ３、ＣＦ３、ＣＢｒ３、分岐又は非分岐低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）、シクロアルキル（Ｃ３〜Ｃ６）、ＣＯＯＲ１３、Ｃ（Ｏ）ＮＲ１６Ｒ１７、及びＳＯ２ＮＲ４ａＲ４ｂからなる群より選択され；かつ
Ｒ２は、ＣＨ３、ＣＦ３、ＣＢＲ３、ＮＯ２、低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）、シクロアルキル（Ｃ３〜Ｃ６）、アリール、及びヘテロアリールからなる群より選択され；
環Ａ及びＢ、並びに任意のアリール環は、任意選択的に、独立して官能基Ｒ３及び／又はＲ７で置換することができ、ここで、Ｒ３及びＲ７は、独立して、Ｈ、ＯＨ、分岐又は非分岐低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）、Ｏ（ＣＨ２）ｎ３アリール、Ｏ（ＣＨ２）ｎ３ヘテロアリール、ＮＲ１０Ｒ１１、Ｎ（Ｒ１２）ＯＨ、アリール、ヘテロアリール、メチル、ＯＨ、ＳＨ、ＯＣＨ３、ＳＣＨ３、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ１３、Ｓ（Ｏ）ｎ４Ｒ１４、Ｃ（Ｏ）Ｒ１５、Ｃ（Ｏ）ＮＲ１６Ｒ１７、ＣＮ、ＮＲ１８Ｒ１９、ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）Ｒ２１、アリール、メチレンジオキシ、アルキル（Ｃ１〜Ｃ５）、ＣＨ２ＳＳＣＨ２ＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＮＨ２）、ハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、又はＩを含む）、ＮＯ２、ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、ＣＨＯ、ＣＦ３、Ｐ（＝Ｘ１）（ＯＲ１）２、ＯＰ（＝Ｘ１）（ＯＲ１）２、テトラゾール、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１２）ＯＨ、ＣＦ３、ＯＲ４、ＳＲ４、Ｎ＝Ｃ＝Ｓ、Ｎ＝Ｃ＝Ｏ、Ｃ（Ｒ４）＝Ｃ（Ｒ４ａ）Ｒ４ｂ、（ＣＨ２）ｎ１ＣＨ＝ＣＨ２、ＮＨＣ（＝Ｘ１２）ＮＨ２、ＮＨＣ（＝Ｘ１２）ＮＨＲ４、ＳＯ２ＮＲ４ａＲ４ｂ、及びＣＣＲ４からなる群より選択され；
Ｒ４、Ｒ４ａ、及びＲ４ｂは、独立して、Ｈ、ＣＨ３、低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）、シクロアルキル（Ｃ３〜Ｃ６）、フェニル、アリール、及びヘテロアリールからなる群より選択され；
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ８及びＲ９は、独立して、Ｈ、ＣＨ３、分岐又は非分岐低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ１０）、アリール、ヘテロアリール、フェニル、ピリジル、フラン、ピラン、チオフェン、（ＣＨ２）ｎアリール、（ＣＨ２）ｎヘテロアリール、テトラヒドロピランからなる群より選択され、ここで、ｎは０〜４であり、ｎが０のとき、これは化学結合を意味し；
Ｒ１０及びＲ１１は、独立して、Ｈ、ＣＨ３、低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）、フェニルからなる群より選択され；
Ｒ１２は、Ｈ又はＣＨ３であり；
Ｒ１３は、Ｈ、ＣＨ３、低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）、及びＣＨ２アリールからなる群より選択され；
Ｒ１４は、Ｈ、ＣＨ３、低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）、及びＯＨからなる群より選択され；
Ｒ１５は、Ｈ、ＣＨ３、ＣＦ３、低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）、及びフェニルからなる群より選択され；
Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９、Ｒ２０、及びＲ２１は、各々独立して、Ｈ、ＣＨ３、低級アルキル、フェニル、ＣＨ２フェニル、及びシクロアルキル（Ｃ１〜Ｃ６）からなる群より選択され；
Ｒ２２は、Ｈ、Ｃ（Ｘ）Ｒ４からなる群より選択され、Ｒ２２が存在しない場合には、環Ａは芳香族であり；
Ｊは、アリール、フェニル、ピリジル、フラン、チオフェン、ピロール、ベンゾチオフェン、ベンゾチアゾール、ベンゾイミダゾール、ベンゾ［ｄ］オキサゾール、ベンゾフラン、インドール、キノリン、イソキノリン、キナゾリン、キノキサリン、シンノリン、チアゾロ［４，５−ｃ］ピリジン、チアゾロ［５，４−ｄ］ピリミジン、オキサゾロ［５，４−ｄ］ピリミジン、及びオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジンからなる群より選択され；
Ａｒｙｌ１は、フェニル、フラン、チオフェン、ピロール、ナフタレン、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、インドール、キノリン、イソキノリン、ヘテロアリール、及びアリールからなる群より選択され；かつ
Ｑは、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル（Ｃ１〜Ｃ７）、及びインダニルからなる群より選択される］。
【請求項３０】
フレーバー組成物であって、
（ａ）トリプトファン、フェニルアラニン、ヒスチジン、グリシン、システイン、アラニン、チロシン、セリン、メチオニン、ロイシン、アスパラギン、及びそれらの組合せからなる群より選択される第１のアミノ酸；
（ｂ）グルタミン酸、グルタミン酸ナトリウム、アスパラギン酸、アルギニン、リシン、及びそれらの組合せからなる群より選択される第２のアミノ酸；並びに
（ｃ）第トレオニン、イソロイシン、プロリン、ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シスチン、グルタミン、バリン、オルニチン、タウリン、及びそれらの組合せからなる群より選択される３のアミノ酸
を含む、フレーバー組成物。
【請求項３１】
請求項１〜２９のいずれか一項に記載のフレーバー組成物を含む食品であって、該フレーバー組成物が、味覚テスターのパネルによって決定して、前記食品のコク味を高めるのに有効な量で存在することを特徴とする、食品。
【請求項３２】
請求項１〜２９のいずれか一項に記載のフレーバー組成物を含む食品であって、該フレーバー組成物が、味覚テスターのパネルによって決定して、前記食品の嗜好性を高めるのに有効な量で存在することを特徴とする、食品。
【請求項３３】
前記フレーバー組成物が、前記食品中に、約１ｐＭ〜約１０Ｍ、約１ｐＭ〜約１Ｍ、約０．０００１％〜約１０％ｗ／ｗ、約０．００１％〜約５％ｗ／ｗ、又は約０．０１％〜約１％ｗ／ｗの濃度で存在することを特徴とする、請求項３１又は３２に記載の食品。
【請求項３４】
前記食品が、ペットフード製品を含むことを特徴とする、請求項３１〜３３のいずれか一項に記載の食品。
【請求項３５】
前記ペットフード製品が、ネコ用ペットフード製品又はイヌ用ペットフード製品であることを特徴とする、請求項３４に記載の食品。
【請求項３６】
前記ペットフード製品が、ウェットペットフード製品であることを特徴とする、請求項３４に記載の食品。
【請求項３７】
前記ペットフード製品がドライペットフード製品であることを特徴とする、請求項３４に記載の食品。
【請求項３８】
請求項１〜２９のいずれか一項に記載のフレーバー組成物を含む食品を混合することを含む、食品におけるコク味強度を高める方法であって、前記フレーバー組成物が、味覚テスターのパネルによって決定して、前記食品のコク味を高めるのに有効な量で存在することを特徴とする、方法。
【請求項３９】
前記フレーバー組成物が、前記混合物中に約１ｐＭ〜約１０Ｍ、約１ｐＭ〜約１Ｍ、約０．０００１％〜約１０％ｗ／ｗ、約０．００１％〜約５％ｗ／ｗ、又は約０．０１％〜約１％ｗ／ｗの濃度で存在することを特徴とする、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
ＣａＳＲを請求項１〜２９のいずれか一項に記載のフレーバー組成物と接触させることを含む、カルシウム感知受容体（ＣａＳＲ）の活性を調節する方法。
【請求項４１】
ＣａＳＲの活性を調節する組成物を特定する方法であって、
（ａ）試験薬をＣａＳＲと接触させること、
（ｂ）前記試験薬と、前記ＣａＳＲのヴィーナス・フライトラップ（ＶＦＴ）ドメイン相互作用部位、前記ＣａＳＲの７膜貫通（７ＴＭ）ドメイン相互作用部位、又はそれらの組合せにおける１つ以上のアミノ酸との相互作用を検出すること、及び
（ｃ）前記アミノ酸のうちの１つ以上と相互作用する試験薬を、前記組成物として選択すること
を含む、方法。
【請求項４２】
（ｂ）が、前記試験薬と、Ａｓｎ６４、Ｐｈｅ６５、Ａｓｎ１０２、Ｔｈｒ１４５、Ｓｅｒ１４７、Ａｌａ１６８、Ｓｅｒ１６９、Ｓｅｒ１７０、Ａｓｐ１９０、Ｇｌｎ１９３、Ａｓｐ２１６、Ｔｙｒ２１８、Ｓｅｒ２７２、Ｇｌｕ２９７、Ａｌａ２９８、Ｔｒｐ２９９、Ａｌａ３００、Ｓｅｒ３０２、Ｌｅｕ３０４、Ｔｙｒ４１１、Ｔｈｒ４１２、Ｈｉｓ４１３、及びそれらの組合せからなる群より選択される、前記ＣａＳＲのヴィーナス・フライトラップ（ＶＦＴ）ドメイン相互作用部位における１つ以上のアミノ酸との相互作用を検出することを含むことを特徴とする、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
（ｂ）が、前記試験薬と、ヘリックス３上のＰｈｅ６８４、Ｇｌｙ６８５、及び／又はＰｈｅ６８８、ヘリックス４上のＧｌｎ７３５、ヘリックス５上のＭｅｔ７７１、Ａｌａ７７２、Ｐｈｅ７７５、Ｌｅｕ７７６、及び／又はＴｈｒ７８０、ヘリックス６上のＰｈｅ８１４、Ｖａｌ８１７、Ｔｒｐ８１８、及び／又はＰｈｅ８２１、及び／又は、ヘリックス７上のＧｌｕ８３７、Ａｌａ８４０、及び／又はＩｌｅ８４１、及びそれらの組合せからなる群より選択される、前記ＣａＳＲの７膜貫通（７ＴＭ）ドメイン相互作用部位における１つ以上のアミノ酸との相互作用を検出することを含むことを特徴とする、請求項４１に記載の方法。
【請求項４４】
ステップ（ａ）の後に前記ＣａＳＲの活性を決定することをさらに含むことを特徴とする、請求項４１に記載の方法。
【請求項４５】
ＣａＳＲリガンドを前記ＣａＳＲに接触させることをさらに含むことを特徴とする、請求項４１〜４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
ステップ（ｃ）が、前記ＣａＳＲの活性を高める試験薬を、前記組成物として選択することをさらに含むことを特徴とする、請求項４１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
前記相互作用が、部位特異的変異導入、Ｘ線結晶構造解析、Ｘ線分光法、核磁気共鳴（ＮＭＲ）、架橋評価法（cross-linking assessment）、質量分析、電気泳動、置換分析（displacement assay）、及びそれらの組合せによって決定されることを特徴とする、請求項４１に記載の方法。
【請求項４８】
ＣａＳＲの活性を調節する組成物を特定する方法であって、
（ａ）ＣａＳＲアゴニストをＣａＳＲと接触させて、前記ＣａＳＲの活性を決定すること、
（ｂ）試験薬を前記ＣａＳＲと接触させて、前記ＣａＳＲの活性を決定すること、及び
（ｃ）前記（ｂ）の活性が前記（ａ）の活性より大きい場合に前記試験薬を前記組成物として選択すること
を含む、方法。
【請求項４９】
前記ＣａＳＲが細胞によって発現され、前記試験薬が前記細胞に接触することを特徴とする、請求項４１〜４８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
前記細胞がカルシウム結合発光タンパク質を発現することを特徴とする、請求項４９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の相互参照】
【０００１】
本出願は、その全体がここに参照することによって本願に援用される、２０１６年４月１４日出願の米国仮特許出願第６２／３２２，６４１号の優先権を主張する。
【技術分野】
【０００２】
本願で開示される主題は、カルシウム感知受容体（ＣａＳＲ）と相互作用する少なくとも１つの化合物を含む、コク味を調節するための化合物及びフレーバー組成物に関する。該フレーバー組成物は、ペットフード製品の嗜好性、味覚、及び／又はフレーバーを増強又は改変するのに用いることができる。フレーバー組成物は、化合物の組合せを含んでよく、さまざまな送達系フォーマットでペットフード製品に添加することができる。
【０００３】
配列表
本明細書はさらに、参照することによって、２０１７年４月１４日にＥＦＳを介してここに提出される配列表を取り込む。３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１．５２（ｅ）（５）に基づいて、ＣａＳＲｓｅｑｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔとして特定される配列表テキストファイルは、１３，９８９バイトであり、２０１７年４月１４日に作成された。ここに電子的に提出された配列表は、本明細書の範囲を超えて拡張されるものではなく、したがって、新規事項を含むものではない。
【背景技術】
【０００４】
食用組成物のための味覚プロファイルは、甘味、塩味、苦味、酸味、旨味及びコク味などの基本的な味覚を含む。これらの味を引き出す化合物は、しばしば味物質と呼ばれる。理論に縛られるわけではないが、味物質は、口や喉の味覚受容体によって感知され、該味覚受容体が脳に信号を送信し、そこで味物質及び結果としての味覚プロファイルが登録されると仮定される。味覚受容体は、細胞外カルシウムレベルの変化を検出するＧ−タンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）であり、かつ、Ｔ１Ｒ１、Ｔ１Ｒ２及びＴ１Ｒ３受容体、すなわち、甘味及び旨味受容体の近縁種である、カルシウム感知受容体（ＣａＳＲ）を含む。カルシウム感知受容体は、甘味、塩味及び旨味を増強し、コク味の受容体として機能することが示されている。
【０００５】
ペットフード製造業者は、長い間、栄養価が高いペットフード製品を提供することを望んでいる。加えて、特にネコ及びイヌ用の食品については、ペットフード製造業者は、ペットが自分の食べ物から栄養面での完全な利益を享受することができるように、高度の嗜好性を望んでいる。家畜、とりわけネコは、食品の嗜好性について気まぐれであることについては悪評が高く、時間が経つにつれて受け入れられたペットフード製品を食べることをしばしば拒否し、あるいは、最小限の量を超えてペットフード製品を食べることを拒む。この現象は、部分的には、味覚及び嗅覚系を原因として家畜が知覚することができる原材料の感覚プロファイルの微妙な違いに起因している可能性がある。結果として、ペット所有者は、ペットを健全かつ満足した状態に保つために、頻繁にペットフードのタイプ及び銘柄を変更する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
味覚及びフレーバーは最近、進歩はしているものの、ペットフード製品の味覚、テクスチャ、及び／又はフレーバープロファイルを増強又は改変することによってペットフード製品の嗜好性を増強又は改変することができる化合物が依然として必要とされている。増強又は改変は、望ましい属性の強度を高めること、ペットフードの製品に存在しないか、何らかの形で失われた望ましい属性を置き換えること、又は望ましくない属性の強度を低下させることでありうる。特に、ペットフード製品中の望ましい味物質の強度を増加することが望ましい。したがって、嗜好性を増強すること及び／又はペットフード製品のコク味を調節することが依然として組成物の技術分野で必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本願で開示される主題は、フレーバー組成物、並びに、さまざまなペットフード製品にわたってこのような組成物を製造及び改変するための方法を対象とする。特に、本開示は、カルシウム感知受容体（ＣａＳＲ）の活性を増強、増加、低減、及び／又は調節し、それによってコク味を調節する、１つ以上の化合物を含む組成物を対象とする。
【０００８】
ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、周期表の第２族元素の二価又は三価の塩を含む。ある特定の実施形態では、第２族元素は、ベリリウム（Ｂｅ）、マグネシウム（Ｍｇ）、カルシウム（Ｃａ）、ストロンチウム（Ｓｒ）、バリウム（Ｂａ）及びそれらの組合せからなる群より選択される。ある特定の実施形態では、第２族元素はマグネシウム（Ｍｇ）又はストロンチウム（Ｓｒ）である。ある特定の実施形態では、少なくとも１つのカルシウム感知受容体調節化合物は、ランタニドの二価又は三価の塩である。ある特定の実施形態では、ランタニドは、ランタン（Ｌａ）、セリウム（Ｃｅ）、プラセオジム（Ｐｒ）、ネオジム（Ｎｄ）、プロメチウム（Ｐｍ）、サマリウム（Ｓｍ）、ユウロピウム（Ｅｕ）、ガドリニウム（Ｇｄ）、テルビウム（Ｔｂ）、ジスプロシウム（Ｄｙ）、ホルミウム（Ｈｏ）、エルビウム（Ｅｒ）、ツリウム（Ｔｍ）、イッテルビウム（Ｙｂ）、ルテチウム（Ｌｕ）及びそれらの組合せからなる群より選択される。ある特定の実施形態では、ランタニドは、ガドリニウム（Ｇｄ）、プラセオジム（Ｐｒ）、又はテルビウム（Ｔｂ）である。
【０００９】
ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、次の構造：
【００１０】
【化１】
2019515668.tif 000003
【００１１】
のうちの１つを有する、式Ｖｆｔ−１ａ又はＶｆｔ−１ｂの化合物を含み、
ここで、ｎ、ｎ６、ｎ７、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、及びＹは、以下に記載されている。
【００１２】
ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、次の構造：
【００１３】
【化２】
2019515668.tif 000004
【００１４】
を有する式Ｖｆｔ−２の化合物を含み、
ここで、ｎ、Ｘ１、Ｘ２、Ｗ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５は、以下に記載されている。
【００１５】
ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、次の構造：
【００１６】
【化３】
2019515668.tif 000005
【００１７】
を有する式Ｖｆｔ−３の化合物を含み、
ここで、ＡＡ１及びＡＡ２は、以下に記載されており、任意選択的に、式Ｖｆｔ−３ｂ：
【００１８】
【化４】
2019515668.tif 000006
【００１９】
によって定められ、
ここで、ｎ、ｎ１、ｎ２、ｎ４、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５は、以下に記載されている。
【００２０】
ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、次の構造：
【００２１】
【化５】
2019515668.tif 000007
【００２２】
を有する式Ｖｆｔ−４の化合物を含み、
ここで、ｎ１、ｎ２、及びＲは、以下に記載されている。
【００２３】
ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、次の構造：
Ｒ１−ＡＡｎ−Ｒ２、
を有する式Ｖｆｔ−５の化合物を含み、
ここで、ｎ、ＡＡ、Ｒ１及びＲ２は、以下に記載されている。
【００２４】
ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、次の構造：
【００２５】
【化６】
2019515668.tif 000008
【００２６】
を有する式Ｖｆｔ−６の化合物を含み、
ここで、ｎ１〜ｎ６、Ｒ１〜Ｒ１２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒｅ、及びＲｆは、以下に記載されている。
【００２７】
ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、式Ｖｆｔ−６．５ａ、Ｖｆｔ−６．５ｂ、及びＶｆｔ−６．５ｃ：
【００２８】
【化７】
2019515668.tif 000009
【００２９】
のうちの１つに記載されるリンを含む化合物を含み、
ここで、ｎ、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６は、以下に記載されている。
【００３０】
ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、以下に記載されるアミノグリコシドを含む。
【００３１】
ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、アミノグリコシド系抗生物質を含む。
【００３２】
ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、例えば、次のアミノ酸群：Ａｓｎ６４、Ｐｈｅ６５、Ａｓｎ１０２、Ｔｈｒ１４５、Ｓｅｒ１４７、Ａｌａ１６８、Ｓｅｒ１６９、Ｓｅｒ１７０、Ａｓｐ１９０、Ｇｌｎ１９３、Ａｓｐ２１６、Ｔｙｒ２１８、Ｓｅｒ２７２、Ｇｌｕ２９７、Ａｌａ２９８、Ｔｒｐ２９９、Ａｌａ３００、Ｓｅｒ３０２、Ｌｅｕ３０４、Ｔｙｒ４１１、Ｔｈｒ４１２、及び／又はＨｉｓ４１３のうちの１つ以上のＣａＳＲ受容体のヴィーナス・フライトラップ（Venus Flytrap）ドメインの活性部位と相互作用する化合物を含む。
【００３３】
ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、カルシミメティクスを含む。ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、下記表１に開示されるカルシミメティクスを含む。例えば、カルシミメティクスは、下記式Ｔｍ−１の構造：
【００３４】
【化８】
2019515668.tif 000010
【００３５】
を有していてよく、ここで、ｎ１、ｎ２、Ｒ１〜Ｒ９、Ｘ１〜Ｘ１１、環Ａ及び環Ｂは、以下に記載されている。本開示のある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、本明細書に記載される式Ｔｍ−２〜Ｔｍ−１２のカルシミメティクスの１つ以上を含む。
【００３６】
ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、例えば、次のアミノ酸群：ヘリックス３上のＰｈｅ６８４、Ｇｌｙ６８５、及び／又はＰｈｅ６８８、ヘリックス４上のＧｌｎ７３５、ヘリックス５上のＭｅｔ７７１、Ａｌａ７７２、Ｐｈｅ７７５、Ｌｅｕ７７６、及び／又はＴｈｒ７８０、ヘリックス６上のＰｈｅ８１４、Ｖａｌ８１７、Ｔｒｐ８１８、及び／又はＰｈｅ８２１、及び／又は、ヘリックス７上のＧｌｕ８３７、Ａｌａ８４０、及び／又はＩｌｅ８４１のうちの１つ以上のＣａＳＲ受容体の７膜貫通ドメインの活性部位と相互作用する化合物を含む。
【００３７】
本開示は、本明細書に記載される化合物の塩及び立体異性体も提供する。
【００３８】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、本明細書に記載される少なくとも１つのアミノ酸をさらに含む。
【００３９】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、本明細書に記載される少なくとも１つの旨味受容体活性化膜貫通化合物をさらに含む。
【００４０】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、本明細書に記載される少なくとも１つの脂肪酸受容体（ＧＰＲ１２０）活性化化合物をさらに含む。
【００４１】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、本明細書に記載される少なくとも１つのヌクレオチド及び／又はヌクレオチド誘導体をさらに含む。
【００４２】
ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれ以上の第１のアミノ酸、及び／又は少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれ以上の第２のアミノ酸、及び／又は少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれ以上の第３のアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、第１のアミノ酸は、旨味受容体調節アミノ酸である。ある特定の実施形態では、第２のアミノ酸は、ＣａＳＲ受容体調節アミノ酸である。ある特定の実施形態では、第３のアミノ酸は、１つ以上の他の味覚受容体と相互作用することができ、かつ、第１のアミノ酸又は第２のアミノ酸と同じ受容体には結合しない、若しくは、カルシウム感知受容体又は旨味受容体への結合について第１のアミノ酸又は第２のアミノ酸とは競合しない。
【００４３】
ある特定の実施形態では、本開示は、例えば、インシリコ及びインビトロの方法でカルシウム感知受容体調節化合物を特定するための方法を提供する。
【００４４】
ある特定の実施形態では、本開示は、化合物を含むフレーバー組成物を含むペットフード製品を提供し、該フレーバー組成物は、味覚テスターのパネルによって決定される、食品のコク味を高めるのに有効な量で存在する。フレーバー組成物は、ペットフード製品に使用するために送達系に取り込まれうる。
【００４５】
ある特定の実施形態では、本開示は、化合物を含むフレーバー組成物を含むペットフード製品を提供し、該フレーバー組成物は、ペットフード製品に約０．０００１質量％〜約１０質量％（％ｗ／ｗ）、又は約０．００１％〜約１％ｗ／ｗの濃度で存在する。ある特定の実施形態では、ペットフード製品はネコ用ペットフード製品である。
【００４６】
ある特定の実施形態では、本開示は、化合物を含むフレーバー組成物を含むペットフード製品を提供する。ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、ペットフード製品に約０．００１ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍの濃度で存在する。代替的に又は追加的に、化合物は、ペットフード製品中に約１ｐＭ〜約１Ｍの濃度で存在しうる。
【００４７】
本開示はさらに、ペットフード製品の嗜好性を高める方法を提供する。ある特定の実施形態では、本方法は、ペットフード製品をフレーバー組成物と混合することを含む。ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、混合物に約０．００１質量％〜約１０質量％、又は約０．０１％〜約１％ｗ／ｗの濃度で存在する。
【００４８】
本開示のある特定の実施形態では、ペットフード製品の嗜好性を高める方法は、ペットフード製品をフレーバー組成物と混合することを含む。ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、混合物に約０．００１ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍの濃度で存在する。代替的に又は追加的に、少なくとも１つの化合物は、混合物中に約１ｐＭ〜約１Ｍの濃度で存在する。
【００４９】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、ペットフード製品の嗜好性を高めるのに有効な量で、ペットフード製品と混合される。
【００５０】
本願で開示される主題はまた、組成物を、例えば、配列番号１のアミノ酸配列を含むネコカルシウム感知受容体などのカルシウム感知受容体と接触させることを含む、カルシウム感知受容体の活性を調節する方法も提供し、ここで、該組成物は、ＶＦＴドメインのＡｓｎ６４、Ｐｈｅ６５、Ａｓｎ１０２、Ｔｈｒ１４５、Ｓｅｒ１４７、Ａｌａ１６８、Ｓｅｒ１６９、Ｓｅｒ１７０、Ａｓｐ１９０、Ｇｌｎ１９３、Ａｓｐ２１６、Ｔｙｒ２１８、Ｓｅｒ２７２、Ｇｌｕ２９７、Ａｌａ２９８、Ｔｒｐ２９９、Ａｌａ３００、Ｓｅｒ３０２、Ｌｅｕ３０４、Ｔｙｒ４１１、Ｔｈｒ４１２、及びＨｉｓ４１３及びそれらの組合せ、及び／又は、７ＴＭ膜貫通ドメインのヘリックス３上のＰｈｅ６８４、Ｇｌｙ６８５、及び／又はＰｈｅ６８８、ヘリックス４上のＧｌｎ７３５、ヘリックス５上のＭｅｔ７７１、Ａｌａ７７２、Ｐｈｅ７７５、Ｌｅｕ７７６、及び／又はＴｈｒ７８０、ヘリックス６上のＰｈｅ８１４、Ｖａｌ８１７、Ｔｒｐ８１８、及び／又はＰｈｅ８２１、及び／又は、ヘリックス７上のＧｌｕ８３７、Ａｌａ８４０、及び／又はＩｌｅ８４１；及びそれらの組合せからなる群より選択される、カルシウム感知受容体の相互作用部位における１つ以上のアミノ酸と相互作用する。本開示では、７ＴＭドメインヘリックスは、通常のＧＰＣＲ用語に従って順番に番号が付されている。
【００５１】
本願で開示される主題はまた、試験薬をカルシウム感知受容体と接触させること、及び該試験薬と、本明細書に記載されるカルシウム感知受容体の相互作用部位における１つ以上のアミノ酸との相互作用を決定することを含む、カルシウム感知受容体の活性を調節する組成物を特定する方法も提供する。
【００５２】
上記は、以下の詳細な説明をよりよく理解できるように、本出願の特徴及び技術的利点を広範囲に概説している。本出願の特許請求の範囲の主題を形成する、本出願の追加的な特徴及び利点については、以下に説明される。開示される概念及び特定の実施形態は、本出願の同じ目的を果たすために他の構造を改変又は設計するための基礎として容易に利用されうることが当業者に認識されるであろう。このような同等の構成が、添付の特許請求の範囲に記載される本願の精神及び範囲から逸脱しないこともまた、当業者に認識されるべきである。本出願の特徴と考えられる新規の特徴は、その組織及び動作方法の両方に関して、さらなる目的及び利点とともに、以下の説明からよりよく理解されるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１】ＣａＳＲ二量体を示す図
【図２】ＣａＳＲ二量体、及びＣａＳＲ上のさまざまな結合ドメインを示す図
【図３Ａ】ネコＣａＳＲのフライトラップドメインへの化合物Ｌ−アスパラギン酸の結合のインシリコ・モデリングにおける、結合化合物の構造を示す図
【図３Ｂ】ネコＣａＳＲのフライトラップドメインへの化合物Ｌ−アスパラギン酸の結合のインシリコ・モデリングにおける、ネコＣａＳＲに結合する化合物のモデルを示す図
【図３Ｃ】ネコＣａＳＲのフライトラップドメインへの化合物Ｌ−アスパラギン酸の結合のインシリコ・モデリングにおける、結合化合物と相互作用する推定上のＣａＳＲアミノ酸残基を示す図
【図４Ａ】ネコＣａＳＲのフライトラップドメインへの化合物Ｌ−リシンの結合のインシリコ・モデリングにおける、結合化合物の構造を示す図
【図４Ｂ】ネコＣａＳＲのフライトラップドメインへの化合物Ｌ−リシンの結合のインシリコ・モデリングにおける、ＣａＳＲに結合する化合物のモデルを示す図
【図４Ｃ】ネコＣａＳＲのフライトラップドメインへの化合物Ｌ−リシンの結合のインシリコ・モデリングにおける、結合化合物と相互作用する推定上のＣａＳＲアミノ酸残基を示す図
【図５Ａ】ネコＣａＳＲのフライトラップドメインへの化合物Ｌ−（＋）−２−アミノ−３−ホスホノプロピオン酸の結合のインシリコ・モデリングにおける、結合化合物の構造を示す図
【図５Ｂ】ネコＣａＳＲのフライトラップドメインへの化合物Ｌ−（＋）−２−アミノ−３−ホスホノプロピオン酸の結合のインシリコ・モデリングにおける、ＣａＳＲに結合する化合物のモデルを示す図
【図５Ｃ】ネコＣａＳＲのフライトラップドメインへの化合物Ｌ−（＋）−２−アミノ−３−ホスホノプロピオン酸の結合のインシリコ・モデリングにおける、結合化合物と相互作用する推定上のＣａＳＲアミノ酸残基を示す図
【図６Ａ】ネコＣａＳＲのフライトラップドメインへの化合物グルタチオンの結合のインシリコ・モデリングにおける、結合化合物の構造を示す図
【図６Ｂ】ネコＣａＳＲのフライトラップドメインへの化合物グルタチオンの結合のインシリコ・モデリングにおける、ＣａＳＲに結合する化合物のモデルを示す図
【図６Ｃ】ネコＣａＳＲのフライトラップドメインへの化合物グルタチオンの結合のインシリコ・モデリングにおける、結合化合物と相互作用する推定上のＣａＳＲアミノ酸残基を示す図
【図７Ａ】ネコＣａＳＲのフライトラップドメインへの化合物Ｈ−γ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−ＯＨの結合のインシリコ・モデリングにおける、結合化合物の構造を示す図
【図７Ｂ】ネコＣａＳＲのフライトラップドメインへの化合物Ｈ−γ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−ＯＨの結合のインシリコ・モデリングにおける、ＣａＳＲに結合する化合物のモデルを示す図
【図７Ｃ】ネコＣａＳＲのフライトラップドメインへの化合物Ｈ−γ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−ＯＨの結合のインシリコ・モデリングにおける、結合化合物と相互作用する推定上のＣａＳＲアミノ酸残基を示す図
【図８Ａ】ネコＣａＳＲのフライトラップドメインへの化合物Ｈ−γ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−ＯＨの結合のインシリコ・モデリングにおける、結合化合物の構造を示す図
【図８Ｂ】ネコＣａＳＲのフライトラップドメインへの化合物Ｈ−γ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−ＯＨの結合のインシリコ・モデリングにおける、ＣａＳＲに結合する化合物のモデルを示す図
【図８Ｃ】ネコＣａＳＲのフライトラップドメインへの化合物Ｈ−γ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−ＯＨの結合のインシリコ・モデリングにおける、結合化合物と相互作用する推定上のＣａＳＲアミノ酸残基を示す図
【図９Ａ】ネコＣａＳＲのフライトラップドメインへの化合物Ｈ−β−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−ＯＨの結合のインシリコ・モデリングにおける、結合化合物の構造を示す図
【図９Ｂ】ネコＣａＳＲのフライトラップドメインへの化合物Ｈ−β−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−ＯＨの結合のインシリコ・モデリングにおける、ＣａＳＲに結合する化合物のモデルを示す図
【図９Ｃ】ネコＣａＳＲのフライトラップドメインへの化合物Ｈ−β−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−ＯＨの結合のインシリコ・モデリングにおける、結合化合物と相互作用する推定上のＣａＳＲアミノ酸残基を示す図
【図１０Ａ】ネコＣａＳＲの７膜貫通ドメインへの化合物Ｎ−（１−（４−クロロフェニル）エチル）−３−（４−イソプロポキシフェニル）−３−フェニルプロパン−１−アミンの結合のインシリコ・モデリングにおける、結合化合物の構造を示す図
【図１０Ｂ】ネコＣａＳＲの７膜貫通ドメインへの化合物Ｎ−（１−（４−クロロフェニル）エチル）−３−（４−イソプロポキシフェニル）−３−フェニルプロパン−１−アミンの結合のインシリコ・モデリングにおける、ＣａＳＲに結合する化合物のモデルを示す図
【図１０Ｃ】ネコＣａＳＲの７膜貫通ドメインへの化合物Ｎ−（１−（４−クロロフェニル）エチル）−３−（４−イソプロポキシフェニル）−３−フェニルプロパン−１−アミンの結合のインシリコ・モデリングにおける、結合化合物と相互作用する推定上のＣａＳＲアミノ酸残基を示す図
【図１１Ａ】ネコＣａＳＲの７膜貫通ドメインへの化合物Ｎ−（１−（４−クロロフェニル）エチル）−３−（４−メトキシフェニル）−４−メチルペンタン−１−アミンの結合のインシリコ・モデリングにおける、結合化合物の構造を示す図
【図１１Ｂ】ネコＣａＳＲの７膜貫通ドメインへの化合物Ｎ−（１−（４−クロロフェニル）エチル）−３−（４−メトキシフェニル）−４−メチルペンタン−１−アミンの結合のインシリコ・モデリングにおける、ＣａＳＲに結合する化合物のモデルを示す図
【図１１Ｃ】ネコＣａＳＲの７膜貫通ドメインへの化合物Ｎ−（１−（４−クロロフェニル）エチル）−３−（４−メトキシフェニル）−４−メチルペンタン−１−アミンの結合のインシリコ・モデリングにおける、結合化合物と相互作用する推定上のＣａＳＲアミノ酸残基を示す図
【図１２Ａ】ネコＣａＳＲの７膜貫通ドメインに対する化合物３−（フラン−２−イル）−４−フェニル−Ｎ−（１−フェニルエチル）ブタン−１−アミンの結合のインシリコ・モデリングにおける、結合化合物の構造を示す図
【図１２Ｂ】ネコＣａＳＲの７膜貫通ドメインに対する化合物３−（フラン−２−イル）−４−フェニル−Ｎ−（１−フェニルエチル）ブタン−１−アミンの結合のインシリコ・モデリングにおける、ＣａＳＲに結合する化合物のモデルを示す図
【図１２Ｃ】ネコＣａＳＲの７膜貫通ドメインに対する化合物３−（フラン−２−イル）−４−フェニル−Ｎ−（１−フェニルエチル）ブタン−１−アミンの結合のインシリコ・モデリングにおける、結合化合物と相互作用する推定上のＣａＳＲアミノ酸残基を示す図
【図１３Ａ】ネコＣａＳＲの７膜貫通ドメインへの化合物３−（２，２−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）−３−フェニル−Ｎ−（１−フェニルエチル）プロパン−１−アミンの結合のインシリコ・モデリングにおける、結合化合物の構造を示す図
【図１３Ｂ】ネコＣａＳＲの７膜貫通ドメインへの化合物３−（２，２−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）−３−フェニル−Ｎ−（１−フェニルエチル）プロパン−１−アミンの結合のインシリコ・モデリングにおける、ＣａＳＲに結合する化合物のモデルを示す図
【図１３Ｃ】ネコＣａＳＲの７膜貫通ドメインへの化合物３−（２，２−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）−３−フェニル−Ｎ−（１−フェニルエチル）プロパン−１−アミンの結合のインシリコ・モデリングにおける、結合化合物と相互作用する推定上のＣａＳＲアミノ酸残基を示す図
【図１４Ａ】ネコＣａＳＲの７膜貫通ドメインへの化合物Ｎ−（（２，３−ジヒドロベンゾフラン−２−イル）メチル）−１−（キノリン−２−イル）エタンアミンの結合のインシリコ・モデリングにおける、結合化合物の構造を示す図
【図１４Ｂ】ネコＣａＳＲの７膜貫通ドメインへの化合物Ｎ−（（２，３−ジヒドロベンゾフラン−２−イル）メチル）−１−（キノリン−２−イル）エタンアミンの結合のインシリコ・モデリングにおける、ＣａＳＲに結合する化合物のモデルを示す図
【図１４Ｃ】ネコＣａＳＲの７膜貫通ドメインへの化合物Ｎ−（（２，３−ジヒドロベンゾフラン−２−イル）メチル）−１−（キノリン−２−イル）エタンアミンの結合のインシリコ・モデリングにおける、結合化合物と相互作用する推定上のＣａＳＲアミノ酸残基を示す図
【図１５Ａ】ネコＣａＳＲの７膜貫通ドメインへの化合物２，６−ジクロロ−４−（１−（（（１−メチル−２−（チオフェン−２−イル）ピペリジン−３−イル）メチル）アミノ）エチル）アニリンの結合のインシリコ・モデリングにおける、結合化合物の構造を示す図
【図１５Ｂ】ネコＣａＳＲの７膜貫通ドメインへの化合物２，６−ジクロロ−４−（１−（（（１−メチル−２−（チオフェン−２−イル）ピペリジン−３−イル）メチル）アミノ）エチル）アニリンの結合のインシリコ・モデリングにおける、ＣａＳＲに結合する化合物のモデルを示す図
【図１５Ｃ】ネコＣａＳＲの７膜貫通ドメインへの化合物２，６−ジクロロ−４−（１−（（（１−メチル−２−（チオフェン−２−イル）ピペリジン−３−イル）メチル）アミノ）エチル）アニリンの結合のインシリコ・モデリングにおける、結合化合物と相互作用する推定上のＣａＳＲアミノ酸残基を示す図
【図１６Ａ】ネコＣａＳＲの７膜貫通ドメインへの化合物１−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（２−（２，２−ジメチル−４−（ｐ−トリル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）エタンアミンの結合のインシリコ・モデリングにおける、結合化合物の構造を示す図
【図１６Ｂ】ネコＣａＳＲの７膜貫通ドメインへの化合物１−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（２−（２，２−ジメチル−４−（ｐ−トリル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）エタンアミンの結合のインシリコ・モデリングにおける、ＣａＳＲに結合する化合物のモデルを示す図
【図１６Ｃ】ネコＣａＳＲの７膜貫通ドメインへの化合物１−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（２−（２，２−ジメチル−４−（ｐ−トリル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）エタンアミンの結合のインシリコ・モデリングにおける、結合化合物と相互作用する推定上のＣａＳＲアミノ酸残基を示す図
【図１７Ａ】ネコＣａＳＲの７膜貫通ドメインへの化合物メチル２−（３−シアノフェニル）−２−（（４−フルオロ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）アミノ）アセテートの結合のインシリコ・モデリングにおける、結合化合物の構造を示す図
【図１７Ｂ】ネコＣａＳＲの７膜貫通ドメインへの化合物メチル２−（３−シアノフェニル）−２−（（４−フルオロ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）アミノ）アセテートの結合のインシリコ・モデリングにおける、ＣａＳＲに結合する化合物のモデルを示す図
【図１７Ｃ】ネコＣａＳＲの７膜貫通ドメインへの化合物メチル２−（３−シアノフェニル）−２−（（４−フルオロ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）アミノ）アセテートの結合のインシリコ・モデリングにおける、結合化合物と相互作用する推定上のＣａＳＲアミノ酸残基を示す図
【図１８Ａ】ネコＣａＳＲの７膜貫通ドメインへの化合物２−（２−アセチル−１，２−ジヒドロイソキノリン−１−イル）−Ｎ−（１−（３−ブロモフェニル）エチル）アセトアミドの結合のインシリコ・モデリングにおける、結合化合物の構造を示す図
【図１８Ｂ】ネコＣａＳＲの７膜貫通ドメインへの化合物２−（２−アセチル−１，２−ジヒドロイソキノリン−１−イル）−Ｎ−（１−（３−ブロモフェニル）エチル）アセトアミドの結合のインシリコ・モデリングにおける、ＣａＳＲに結合する化合物のモデルを示す図
【図１８Ｃ】ネコＣａＳＲの７膜貫通ドメインへの化合物２−（２−アセチル−１，２−ジヒドロイソキノリン−１−イル）−Ｎ−（１−（３−ブロモフェニル）エチル）アセトアミドの結合のインシリコ・モデリングにおける、結合化合物と相互作用する推定上のＣａＳＲアミノ酸残基を示す図
【図１９Ａ】ネコＣａＳＲの７膜貫通ドメインへの化合物１−（ベンゾ［ｄ］チアゾル−２−イル）−１−（２，４−ジメチルフェニル）エタノールの結合のインシリコ・モデリングにおける、結合化合物の構造を示す図
【図１９Ｂ】ネコＣａＳＲの７膜貫通ドメインへの化合物１−（ベンゾ［ｄ］チアゾル−２−イル）−１−（２，４−ジメチルフェニル）エタノールの結合のインシリコ・モデリングにおける、ＣａＳＲに結合する化合物のモデルを示す図
【図１９Ｃ】ネコＣａＳＲの７膜貫通ドメインへの化合物１−（ベンゾ［ｄ］チアゾル−２−イル）−１−（２，４−ジメチルフェニル）エタノールの結合のインシリコ・モデリングにおける、結合化合物と相互作用する推定上のＣａＳＲアミノ酸残基を示す図
【図２０Ａ】ネコＣａＳＲの７膜貫通ドメインへの化合物３−（４−（（４−フルオロ−４’−メチルビフェニル−２−イル）メトキシ）フェニル）プロピオン酸（ＴＵＧ８９１としても知られる）の結合のインシリコ・モデリングにおける、結合化合物の構造を示す図
【図２０Ｂ】ネコＣａＳＲの７膜貫通ドメインへの化合物３−（４−（（４−フルオロ−４’−メチルビフェニル−２−イル）メトキシ）フェニル）プロピオン酸（ＴＵＧ８９１としても知られる）の結合のインシリコ・モデリングにおける、ＣａＳＲに結合する化合物のモデルを示す図
【図２０Ｃ】ネコＣａＳＲの７膜貫通ドメインへの化合物３−（４−（（４−フルオロ−４’−メチルビフェニル−２−イル）メトキシ）フェニル）プロピオン酸（ＴＵＧ８９１としても知られる）の結合のインシリコ・モデリングにおける、結合化合物と相互作用する推定上のＣａＳＲアミノ酸残基を示す図
【図２１−１】実施例２に記載されるさまざまな化合物についてのネコＣａＳＲのインビトロ活性についての用量反応曲線を示す図
【図２１−２】図２１−１と同じ
【図２１−３】図２１−１と同じ
【図２１−４】図２１−１と同じ
【図２１−５】図２１−１と同じ
【図２１−６】図２１−１と同じ
【図２１−７】図２１−１と同じ
【図２１−８】図２１−１と同じ
【図２１−９】図２１−１と同じ
【図２１−１０】図２１−１と同じ
【図２１−１１】図２１−１と同じ
【図２１−１２】図２１−１と同じ
【図２１−１３】図２１−１と同じ
【図２１−１４】図２１−１と同じ
【図２１−１５】図２１−１と同じ
【図２１−１６】図２１−１と同じ
【図２１−１７】図２１−１と同じ
【図２１−１８】図２１−１と同じ
【図２１−１９】図２１−１と同じ
【図２１−２０】図２１−１と同じ
【図２１−２１】図２１−１と同じ
【図２１−２２】図２１−１と同じ
【図２１−２３】図２１−１と同じ
【図２１−２４】図２１−１と同じ
【図２１−２５】図２１−１と同じ
【図２１−２６】図２１−１と同じ
【図２１−２７】図２１−１と同じ
【図２１−２８】図２１−１と同じ
【図２１−２９】図２１−１と同じ
【図２１−３０】図２１−１と同じ
【図２１−３１】図２１−１と同じ
【図２１−３２】図２１−１と同じ
【図２１−３３】図２１−１と同じ
【図２１−３４】図２１−１と同じ
【図２１−３５】図２１−１と同じ
【図２１−３６】図２１−１と同じ
【図２１−３７】図２１−１と同じ
【図２１−３８】図２１−１と同じ
【図２１−３９】図２１−１と同じ
【図２１−４０】図２１−１と同じ
【図２１−４１】図２１−１と同じ
【図２１−４２】図２１−１と同じ
【図２１−４３】図２１−１と同じ
【図２１−４４】図２１−１と同じ
【図２１−４５】図２１−１と同じ
【図２１−４６】図２１−１と同じ
【図２１−４７】図２１−１と同じ
【図２１−４８】図２１−１と同じ
【図２１−４９】図２１−１と同じ
【図２１−５０】図２１−１と同じ
【図２１−５１】図２１−１と同じ
【図２１−５２】図２１−１と同じ
【図２１−５３】図２１−１と同じ
【図２１−５４】図２１−１と同じ
【図２１−５５】図２１−１と同じ
【図２１−５６】図２１−１と同じ
【図２１−５７】図２１−１と同じ
【図２１−５８】図２１−１と同じ
【図２１−５９】図２１−１と同じ
【図２１−６０】図２１−１と同じ
【図２１−６１】図２１−１と同じ
【図２１−６２】図２１−１と同じ
【図２１−６３】図２１−１と同じ
【図２１−６４】図２１−１と同じ
【図２１−６５】図２１−１と同じ
【図２１−６６】図２１−１と同じ
【図２１−６７】図２１−１と同じ
【図２１−６８】図２１−１と同じ
【図２１−６９】図２１−１と同じ
【図２１−７０】図２１−１と同じ
【図２１−７１】図２１−１と同じ
【図２１−７２】図２１−１と同じ
【図２１−７３】図２１−１と同じ
【図２１−７４】図２１−１と同じ
【図２１−７５】図２１−１と同じ
【図２１−７６】図２１−１と同じ
【図２１−７７】図２１−１と同じ
【図２１−７８】図２１−１と同じ
【図２１−７９】図２１−１と同じ
【図２１−８０】図２１−１と同じ
【図２１−８１】図２１−１と同じ
【図２１−８２】図２１−１と同じ
【図２１−８３】図２１−１と同じ
【図２１−８４】図２１−１と同じ
【図２１−８５】図２１−１と同じ
【図２１−８６】図２１−１と同じ
【図２１−８７】図２１−１と同じ
【図２１−８８】図２１−１と同じ
【図２１−８９】図２１−１と同じ
【図２１−９０】図２１−１と同じ
【図２１−９１】図２１−１と同じ
【図２２Ａ】表４に記載される４つのアミノ酸についてのＣａＳＲのインビトロ活性についての用量反応曲線を示す図
【図２２Ｂ】図２２Ａと同じ
【図２３−１】配列番号１として同定されるネコＣａＳＲのアミノ酸配列を示す図
【図２３−２】配列番号２として同定されるネコＣａＳＲのヌクレオチド配列を示す図
【図２３−３】図２３−２と同じ
【発明を実施するための形態】
【００５４】
現在に至るまで、さまざまなネコ用ペットフード製品の嗜好性を増加及び／又は増強することができるフレーバー改質剤が必要とされている。本願は、カルシウム感知受容体（ＣａＳＲ）の活性を調節する少なくとも１つの化合物を含む、フレーバー組成物に関する。フレーバー組成物は、嗜好性を増加する、及び／又は、栄養学的に完全なペットフードなど、さまざまなペットフード製品の味覚を増強又は改変するのに用いることができ、さまざまな送達系フォーマットのペットフード製品に添加することができる。フレーバー組成物は、アミノ酸、ヌクレオチド、及びフラノン（その各々の全体が参照することによって本明細書に取り込まれる、２０１３年１０月３１日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７２７８８号、２０１３年１０月３１日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７２７８９号、２０１３年１０月３１日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７２７９０号、及び２０１３年１０月３１日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７２７９４号に記載される）、及び／又は旨味受容体活性化膜貫通化合物（その全体が参照することによって本明細書に取り込まれる、２０１５年１２月１０日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ１５／６５０３６号に記載される）、及び／又はヌクレオチド誘導体（その全体が参照することによって本明細書に取り込まれる、２０１５年１２月１０日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ１５／６５０４６号に記載される）、及び／又は脂肪酸受容体（ＧＰＲ１２０）活性化合物（その全体が参照することによって本明細書に取り込まれる、２０１５年１２月１０日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ１５／６５１０６号に記載される）を含めた、化合物の組合せをさらに含みうる。
【００５５】
１．定義
本明細書で用いられる用語は、概して、本発明の文脈内、及び各用語が用いられる特定の文脈において、当技術分野における通常の意味を有する。本発明の組成物及び方法、並びにそれらの製造及び使用方法の説明における追加的なガイダンスを実施者に提供するために、ある特定の用語が、以下に又は明細書の他の箇所で論じられる。
【００５６】
本明細書で用いられる場合、語句「ａ」又は「ａｎ」の使用は、特許請求の範囲及び／又は明細書において用語「含む」と併せて使用される場合、「１つ」を意味してもよいが、それはまた、「１つ以上」、「少なくとも１つ」、及び「１又は１より大きい」の意味とも一致している。さらには、用語「有する」、「含む」、「含有する」、及び「包含する」は、交換可能であり、当業者は、これらの用語がオープンエンドの用語であることを認識している。 
【００５７】
用語「約」又は「おおよそ」とは、一部には、その値が測定又は決定される方法に応じて決まる、当業者によって決定される、特定の値についての許容される誤差範囲内（すなわち、測定システムの限界）を意味する。例えば、「約」とは、当技術分野での一実施あたりの３又は３を超える標準的な偏差を意味しうる。代替的に、「約」とは、所与の値の最大で２０％までの範囲、好ましくは１０％まで、さらに好ましくは５％まで、さらになお好ましくは１％まで範囲を意味しうる。代替的に、特に生物学的系又はプロセスに関して、この用語は、ある値の１桁以内の大きさ、好ましくは５倍、より好ましくは２倍以内の大きさを意味しうる。
【００５８】
本明細書で用いられる場合、「味覚」とは、対象の味蕾における受容体細胞の活性化又は抑制によって生じる感覚を指す。ある特定の実施形態では、味覚は、甘味、酸味、塩味、苦味、コク味、及び旨味からなる群より選択されうる。ある特定の実施形態では、味覚は、「味物質」によって対象に誘発される。ある特定の実施形態では、味物質は合成の味物質である。ある特定の実施形態では、味物質は、天然の供給源から調製される。
【００５９】
ある特定の実施形態では、「味覚」は、コク味を含みうる。例えば、その内容が参照することによって本明細書に取り込まれる、Ohsu et al., J. Biol. Chem., 285(2): 1016-1022 (2010)を参照。ある特定の実施形態では、コク味は、例えば受容体ＣａＳＲなど、対象の味蕾における受容体細胞の活性化又は抑制によって生じる感覚であり、例えば、甘味、塩味、及び旨味の味覚などの他の味覚とは区別されるが、これらの味覚の味覚エンハンサーとして作用することができる。
【００６０】
本明細書で用いられる場合、「味覚プロファイル」とは、例えば、甘味、酸味、塩味、苦味、旨味、コク味、及び遊離脂肪酸の味覚のうちの１つ以上など、味覚の組合せを指す。ある特定の実施形態では、味覚プロファイルは、同一又は異なる濃度で組成物中に存在する１つ以上の味物質によって生成される。ある特定の実施形態では、味覚プロファイルとは、対象又は当技術分野で知られているアッセイによって検出される、例えば、甘味、酸味、塩味、苦味、旨味、コク味、及び遊離脂肪酸の味覚など、味覚又は味覚の組合せの強度を指す。ある特定の実施形態では、味覚プロファイルにおける味物質の組合せを改変、変更、又は変化させることにより、対象の感覚経験を変化させることができる。
【００６１】
本明細書で用いられる場合、「フレーバー」とは、例えば、味（味覚）、匂い（嗅覚）、触感（触覚）及び温度（熱的）刺激のうちの１つ以上など、１つ以上の感覚刺激を指す。ある特定の非限定的な実施形態では、フレーバーに晒される対象の感覚経験は、特定のフレーバーの特徴的な経験として分類することができる。例えば、フレーバーは、限定はしないが、花、柑橘類、ベリー、ナッツ、カラメル、チョコレート、コショウ、スモーキー、チーズ、肉等のフレーバーとして、対象によって特定されうる。本明細書で用いられる場合、フレーバー組成物は、溶液、乾燥粉末、噴霧、ペースト、懸濁液、及びそれらの任意の組合せから選択されうる。フレーバーは、天然組成物、人工組成物、天然同一物（nature identical）、又はそれらの任意の組合せでありうる。
【００６２】
本明細書において互換的に使用される場合、「芳香」及び「匂い」とは、刺激に対する嗅覚反応を指す。例えば、限定するものではないが、芳香は、嗅覚系の匂い受容体によって知覚される芳香物質によって生成されうる。
【００６３】
本明細書で用いられる場合、「フレーバープロファイル」とは、例えば、甘味、酸味、苦味、塩味、旨味、コク味、及び遊離脂肪酸の味覚などの味覚、及び／又は嗅覚、触覚及び／又は熱的刺激などの感覚刺激の組合せを指す。ある特定の実施形態では、フレーバープロファイルは、対象の感覚経験に寄与するフレーバーのうちの１つ以上を含む。ある特定の実施形態では、フレーバープロファイルにおける刺激の組合せの改変、変更、又は変化は、対象の感覚経験を変化させることができる。
【００６４】
本明細書で用いられる場合、例えば「本出願のフレーバー組成物又はそれらの組合せを食品と混合する」などの「混合する」とは、フレーバー組成物、又はフレーバー組成物の個別の成分が、完成品と混合される、又は完成品に加えられる、又は製品の形成の間に該製品の成分の幾つか又はすべてと混合されるプロセス、又はこれらのステップの幾つかの組合せを指す。混合の意味で用いられる場合、用語「製品」とは、該製品又はその任意の成分を指す。この混合ステップは、製品にフレーバー組成物を加えること、製品にフレーバー組成物を噴霧すること、製品にフレーバー組成物をコーティングすること、フレーバー組成物に製品を懸濁すること、製品にフレーバー組成物を塗布すること、製品上にフレーバー組成物をペーストすること、製品をフレーバー組成物と一緒にカプセル化すること、フレーバー組成物を製品と混合すること、及びそれらの任意の組合せから選択されるプロセスを含みうる。フレーバー組成物は、液体、エマルション、乾燥粉末、噴霧、ペースト、懸濁液、及びそれらの任意の組合せでありうる。
【００６５】
ある特定の実施形態では、フレーバー組成物の化合物は、ペットフード製品中に存在する前駆体化合物から、例えば、殺菌、レトルト処理、及び／又は押出成形などのペットフード製品の処理中に生じうる。ある特定の実施形態では、フレーバー組成物の化合物は、ペットフード製品の処理中に生成してよく、フレーバー組成物の追加的な成分は、混合することによってペットフード製品に加えることができる。
【００６６】
本明細書で用いられる場合、「ｐｐｍ」とは、パーツ・パー・ミリオン（１００万分の１）を意味し、重量相対パラメータである。１００万分の１は、１グラム当たりのマイクログラムであり、したがって、１０ｐｐｍで存在する成分は、１グラムの凝集混合物あたり、１０マイクログラムで存在する。
【００６７】
本明細書で用いられる場合、「嗜好性」とは、動物がある特定の食品を食する全体的な意欲を指しうる。ペットフード製品の「嗜好性」の増加は、動物が「健康的な量」のペットフードを食することが確実になるように、愛玩動物によるペットフードの享受と受容の向上につながりうる。用語「健康量」のペットフードとは、本明細書で用いられる場合、「Mars Petcare Essential Nutrient Standards」に記載されるものなど、微量栄養素、多量栄養素、及びカロリーの点で愛玩動物が全体的な健康状態に寄与する摂取量を維持又は達成することが可能な量を指す。ある特定の実施形態では、「嗜好性」とは、１つの食品についての別の食品に対する動物の相対的な好みを意味しうる。例えば、動物が２つ以上の食品のうちの一方について嗜好性を示す場合、好ましい食品は、より「口に合う」、「高められた嗜好性」を有する。ある特定の実施形態では、１つ以上の他の食品と比較した１つの食品の相対的な嗜好性は、例えば、サイド・バイ・サイドで、例えば食品の相対的な消費によるなどの自由選択比較で、又は嗜好性を示す嗜好の他の適切な尺度によって決定することができる。嗜好性は、「ツーボウル試験」又は「対比試験」と呼ばれる試験など、動物が両方の食品に平等にアクセスできる標準的な試験プロトコルによって決定することができる。このような嗜好性は、動物の感覚のいずれかから生じうるが、とりわけ、味覚、後味、匂い、口当たり、及び／又はテクスチャに関連しうる。
【００６８】
用語「ペットフード」又は「ペットフード製品」とは、ネコ、イヌ、モルモット、ウサギ、トリ、及びウマなどの愛玩動物による消費が意図される製品又は組成物を意味する。例えば、限定するものではないが、愛玩動物は、イエネコ（Felis domesticus）などの「飼い」ネコでありうる。ある特定の実施形態では、愛玩動物は、例えば、イエイヌ（Canis lupus familiaris）などの「飼い」イヌでありうる。「ペットフード」又は「ペットフード製品」には、任意の食品、食餌、スナック、栄養補助食品、液体、飲料、おやつ、おもちゃ（チュアブル型及び／又は消費型のおもちゃ）、及び食事置換品又は食事代替品が含まれる。
【００６９】
本明細書で用いられる場合、「栄養学的に完全な」とは、例えば、愛玩動物の栄養の分野における認知された又は権限のある当局の勧告に基づいて、適切な量及び割合で、意図されるペットフード製品の受容者に必要な既知の栄養素がすべて含まれているペットフード製品を指す。したがって、このような食品は、補足的な栄養源を追加することなく、生活を維持するための栄養摂取の唯一の供給源として役立てることができる。
【００７０】
本明細書で用いられる場合、「フレーバー組成物」とは、動物又はヒトにおける天然又は合成の味物質、香料、味覚プロファイル、フレーバープロファイル、及び／又はテクスチャプロファイルの味覚、匂い、フレーバー、及び／又はテクスチャの増強、増幅、強化、減少、抑制、又は誘発を含む、それらを調節する少なくとも１つの化合物又はそれらの生物学的に許容される塩を指す。ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、化合物又はそれらの生物学的に許容される塩の組合せを含む。ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、１つ以上の賦形剤を含む。
【００７１】
本明細書で用いられる場合、用語「調節する」又は「改質する」とは、受容体の特定の活性の量、質、又は効果における増加又は低下、及び／又は、受容体の発現、活性、又は機能における増加又は低下のことを指す。「調節剤」とは、本明細書で用いられる場合、例えば、アゴニスト、アンタゴニスト、並びに、断片、変異体、及び模倣物を含めたそれらの相同体についてのインシリコ、インビトロ、及び／又はインビボのアッセイを使用して特定された抑制性化合物又は活性化化合物を指す。
【００７２】
本明細書で用いられる場合、「抑制剤」又は「アンタゴニスト」とは、受容体又は対象とする経路の生物学的活性及び／又は発現を低減、低下、遮断、防止、活性化の遅延、不活性化、脱感作、又はダウンレギュレーションする調節化合物を指す。
【００７３】
本明細書で用いられる場合、「誘導因子」、「活性化剤」、又は「アゴニスト」とは、受容体又は対象とする経路を増加、誘導、刺激、開放、活性化、促進、活性化を増強、感作、又はアップレギュレートする調節化合物を指す。
【００７４】
ある特定の実施形態では、「活性化合物」は、カルシウム感知受容体を調節する化合物、すなわち、カルシウム感知受容体に対して活性な化合物である。例えば、活性化合物は、アゴニスト、アンタゴニスト、ポジティブアロステリックモジュレータ（ＰＡＭ）、ネガティブアロステリックモジュレータとして、又は、例えば、アゴニスト活性とポジティブアロステリック調節活性、又はアゴニスト活性とネガティブアロステリック調節活性など、活性の混合を示すことによって、カルシウム感知受容体に対して活性でありうる。
【００７５】
本明細書で用いられる場合、用語「ベクター」及び「発現ベクター」とは、適切な大きさの別のＤＮＡ配列断片を組み込むことができる、線形又は円形のいずれかのＤＮＡ分子を指す。このようなＤＮＡ断片は、該ＤＮＡ配列断片にコードされた遺伝子の転写をもたらす、追加的なセグメントを含みうる。追加的なセグメントには、プロモーター、転写ターミネータ、エンハンサー、内部リボソーム進入部位、非翻訳領域、ポリアデニル化シグナル、選択マーカー、複製起点などが含まれうるが、それらに限られない。発現ベクターは、しばしば、プラスミド、コスミド、ウイルスベクスター、及び酵母人工染色体から誘導される。ベクターは、しばしば、幾つかの供給源に由来するＤＮＡ配列を含む組換え分子である。
【００７６】
用語「動作可能に連結された」とは、例えば発現ベクター内などのＤＮＡ配列に適用される場合、配列が、意図された目的を達成するために協調的に機能するように、すなわち、プロモーター配列が、転写の開始を可能にし、それによって連結されたコード配列を介して終結シグナルまで進行するように、配置されることを示している。
【００７７】
用語「核酸分子」及び「ヌクレオチド配列」とは、本明細書で用いられる場合、ヌクレオチドの一本鎖又は二本鎖の共有結合配列を指し、各ヌクレオチドの３’及び５’末端は、ホスホジエステル結合によって連結されている。核酸分子は、デオキシリボヌクレオチド塩基又はリボヌクレオチド塩基を含んでよく、インビトロで合成的に製造されてもよく、あるいは、天然の供給源から単離されてもよい。
【００７８】
本明細書において互換的に使用される用語「ポリペプチド」、「ペプチド」、「アミノ酸配列」及び「タンパク質」とは、少なくとも２つのアミノ酸の結合から形成される分子を指す。１つのアミノ酸残基とその次のアミノ酸残基との連結はアミド結合であり、時折、ペプチド結合とも称される。ポリペプチドは、天然の供給源からの単離、組換え発現系での発現、化学的合成、又は酵素合成を含めた当技術分野で知られている適切な方法によって得ることができる。用語は、１つ以上のアミノ酸残基が対応する天然のアミノ酸の人工の化学的模倣物であるアミノ酸ポリマー、並びに天然のアミノ酸ポリマー及び非天然のアミノ酸ポリマーに適用することができる。
【００７９】
用語「アミノ酸」とは、本明細書で用いられる場合、天然及び合成のアミノ酸、並びに、天然のアミノ酸に似た態様で機能するアミノ酸類似体及びアミノ酸模倣物を指す。天然のアミノ酸は、遺伝コードによってコードされたもの、並びに、例えば、ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタミン酸及びＯ−ホスホセリンなど、後に改変されたアミノ酸である。アミノ酸類似体及び誘導体とは、天然のアミノ酸と同じ基本的化学構造、すなわち、炭素が、水素、カルボキシル基、アミノ基、並びに、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド及びメチオニンメチルスルホニウムなどのＲ基に結合する化学構造を有する化合物を指しうる。このような類似体は、改変されたＲ基（例えば、ノルロイシン）又は改変されたペプチド主鎖を有しうるが、天然のアミノ酸と同じ基本的な化学構造を保持する。アミノ酸模倣物とは、アミノ酸の一般的な化学構造とは異なる構造を有するが、天然のアミノ酸と同様の態様で機能する化合物を意味する。
【００８０】
本明細書において互換的に使用される用語「単離された」又は「精製された」とは、天然に会合している成分から取り出された、核酸、ポリペプチド、又は他の生物学的部分を指す。用語「単離された」とは、分子が自然界で存在する、又は同じタイプの他の生物学的マクロ分子の実質的不存在下で存在する、生物全体とは別々の独立したポリペプチドを指しうる。ポリヌクレオチドに関して、用語「単離された」とは、本質的にそれに通常付随する配列の全部又は一部を欠いている核酸分子；又は、天然に存在するが、それに付随して異種配列を有する配列；又は、染色体から切り離された分子を指しうる。
【００８１】
本明細書で用いられる場合、用語「組み換え」は、核酸分子を説明するために用いることができ、かつ、その起源又は組み換え操作に起因して、本質的には付随しているポリヌクレオチドのすべて又は一部分が付随していない、ゲノム、ＲＮＡ、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ウイルス、半合成又は合成起源のポリヌクレオチドのことを指す。
【００８２】
用語「融合」とは、本明細書で用いられる場合、遺伝子的又は化学的方法による、異なるペプチド又はタンパク質セグメントの結合を指し、ペプチド又はタンパク質セグメントの結合末端は、互いに直接隣接していてもよく、あるいは、アミノ酸残基又は他の連結基などのリンカー又はスペーサ部分によって隔てられていてもよい。
【００８３】
用語「アルキル」とは、不飽和を含まず、単結合によって分子の残りの部分に結合する、炭素及び水素原子のみからなる直鎖又は分岐鎖Ｃ１〜Ｃ２０炭化水素基を指し、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、１−メチルエチル（イソプロピル）、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、１，１−ジメチルエチル（ｔ−ブチル）である。
【００８４】
用語「シクロアルキル」とは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどの不飽和の非芳香族単環式又は多環式炭化水素環系（例えば、Ｃ３〜Ｃ６を含む）を意味する。多環シクロアルキル基（例えば、Ｃ６〜Ｃ１５を含む）の例としては、ペルヒドロナフチル、アダマンチル及びノルボルニル基架橋環式基又は例えば、スピロ（４，４）ノン−２−イルなどのスピロ二環式基が挙げられる。
【００８５】
２．カルシウム感知受容体（ＣａＳＲ）
本願で開示される主題は、本開示の方法に使用するカルシウム感知受容体を提供する。本開示のカルシウム感知受容体は、限定はしないが、コク味活性化合物の特定のためのネコ、イヌ、及びヒトのカルシウム感知受容体など、哺乳動物のカルシウム感知受容体を含みうる。
【００８６】
ある特定の非限定的な実施形態では、本開示のカルシウム感知受容体は、その全体がここに参照することによって本明細書に取り込まれる、２０１５年１０月１２日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ１５／５５１４９号に記載される核酸によってコードされる。ある特定の非限定的な実施形態では、本開示のカルシウム感知受容体は、２０１５年１０月１２日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ１５／５５１４９号に記載されるアミノ酸配列を含む。
【００８７】
ある特定の非限定的な実施形態では、カルシウム感知受容体は、２０１５年１０月１２日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ１５／５５１４９号に記載されるネコ、イヌ、又はヒトのカルシウム感知受容体ヌクレオチド配列を含む。
【００８８】
ある特定の非限定的な実施形態では、カルシウム感知受容体は、２０１５年１０月１２日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ１５／５５１４９号に記載されるネコ、イヌ、又はヒトのカルシウム感知受容体アミノ酸配列を含む。
【００８９】
ある特定の実施形態では、本願で開示される主題に使用するためのカルシウム感知受容体は、ネコ、イヌ、又はヒトのカルシウム感知受容体ヌクレオチド配列に対し、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む受容体を含みうる。
【００９０】
ある特定の実施形態では、本願で開示される主題に使用するためのカルシウム感知受容体は、ネコ、イヌ、又はヒトのカルシウム感知受容体アミノ酸配列に対し、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む受容体を含みうる。
【００９１】
ある特定の実施形態では、本開示の主題は、単離又は精製されたカルシウム感知受容体及び／又はそれらの変異体及び断片の使用を提供する。本開示の主題はまた、配列変異体の使用も包含する。ある特定の実施形態では、変異は、カルシウム感知受容体のヌクレオチド配列のコード化及び非コード化領域のいずれかに生じうる。変異体は、生物の同じ遺伝子座にコードされた実質的に相同なタンパク質、すなわち、対立遺伝子変異体を含みうる。変異体はまた、例えばネコなどの生物他の遺伝子座に由来するが、カルシウム感知受容体と実質的な相同性を有するタンパク質、すなわち、相同体も包含する。変異体はまた、カルシウム感知受容体と実質的に相同であるが別の生物に由来するタンパク質、すなわち、オーソログも含みうる。変異体はまた、化学合成によって生成された、カルシウム感知受容体と実質的に相同なタンパク質も含む。変異体はまた、組換え法によって生成されたカルシウム感知受容体と実質的に相同なタンパク質も含む。
【００９２】
本開示の主題はまた、カルシウム感知受容体、又はそれらの断片を含む融合タンパク質も提供する。ある特定の実施形態では、本開示の融合タンパク質は、カルシウム感知受容体アゴニストの結合を検出することができる、検出可能なマーカー、担体などの官能基、標識、安定化配列、又は機構を含みうる。標識の非限定的な実施形態は、当技術分野で知られているＦＬＡＧタグ、Ｈｉｓタグ、ＭＹＣタグ、マルトース結合タンパク質及び他のものを含む。本願で開示される主題はまた、このような融合タンパク質をコードする核酸、融合タンパク質をコードする核酸を含むベクター、及びこのような核酸又はベクターを含む宿主細胞も提供する。ある特定の実施形態では、融合は、カルシウム感知受容体のアミノ末端（Ｎ−末端）又はカルシウム感知受容体のカルボキシ末端（Ｃ−末端）でなされうる。
【００９３】
ある特定の実施形態では、本明細書で開示されるカルシウム感知受容体は、例えば、本開示の主題の方法に用いられる場合に、配列のＮ−末端及び／又はＣ−末端に追加的なアミノ酸を含みうる。ある特定の実施形態では、追加的なアミノ酸は、スクリーニングの目的でポリペプチドの固定化を補助することができ、あるいは、ポリペプチドを、生物学的活性の検出の容易さのために、上記開示される融合タンパク質の一部とすることができる。
【００９４】
３．カルシウム感知受容体調節化合物
本開示は、カルシウム感知受容体（ＣａＳＲ）の活性を調節することができる少なくとも１つの化合物を含むフレーバー組成物に関する。本明細書で開示される化合物は、培養細胞によって発現されるネコＣａＳＲを活性化する化合物の能力を決定する、インビトロアッセイ、及び／又は、ＣａＳＲに結合する化合物の能力をインシリコで決定する、インシリコアッセイによって特定された。フレーバー組成物は、ペットフード製品の嗜好性、味覚、又はフレーバーを増強又は改変するのに用いられうる。ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるフレーバー組成物は、さまざまな送達系フォーマットでペットフード製品に加えることができる。フレーバー組成物は、例えば、その各々の全体がここに参照することによって本明細書に取り込まれる、本明細書並びに２０１３年１０月３１日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７２７８８号、２０１３年１０月３１日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７２７８９号、２０１３年１０月３１日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７２７９０号、２０１３年１０月３１日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７２７９４号に記載される１つ以上の化合物及び／又は１つ以上のアミノ酸及び／又は１つ以上のヌクレオチド及び／又は１つ以上のフラノン；及び／又は、本明細書及び２０１５年１２月１０日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ１５／６５０３６号に記載される１つ以上の旨味受容体活性化膜貫通化合物；及び／又は、本明細書及び２０１５年１２月１０日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ１５／６５０４６号に記載される１つ以上のヌクレオチド誘導体；及び／又は、本明細書及び２０１５年１２月１０日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ１５／６５１０６号に記載される１つ以上の脂肪酸受容体（ＧＰＲ１２０）活性化合物の組合せなど、化合物の組合せを含みうる。
【００９５】
ある特定の実施形態では、カルシウム感知受容体調節剤とも称されうる本出願のカルシウム感知受容体調節化合物は、例えば、ネコカルシウム感知受容体などのカルシウム感知受容体のインシリコ・モデリングを通じて特定され、本出願のカルシウム感知受容体調節剤は、カルシウム感知受容体の結合部位内に収まる構造を含む。ある特定の実施形態では、インシリコ方法は、本明細書及び本出願の実施例のセクションに記載されるインシリコ方法を含む。
【００９６】
ある特定の実施形態では、本出願のカルシウム感知受容体調節剤は、例えば、インビトロ方法を通じて特定され、ここで、カルシウム感知受容体アゴニスト化合物は、インビトロで細胞によって発現される、本明細書に開示されるカルシウム感知受容体を活性化及び／又は調節する。ある特定の実施形態では、インビトロ方法は、本明細書及び本出願の実施例のセクションに記載されるインビトロ方法を含む。
【００９７】
ある特定の実施形態では、化合物は、他の嗜好性増強剤なしにフレーバー組成物中に含まれる。ある特定の実施形態では、化合物は、さまざまな受容体（例えば、旨味受容体）のさまざまな活性部位を活性化する、例えば、本明細書に記載される、ヌクレオチド、ヌクレオチド誘導体、アミノ酸、フラノン、脂肪酸受容体活性化化合物、及び旨味受容体活性化膜貫通化合物などの１つ以上の追加的な嗜好性増強剤とともに、１つ以上のフレーバー組成物中に含まれる。
【００９８】
図１は、カルシウム感知受容体二量体の図を提供している。図２は、カルシウム感知受容体単量体の図を提供しており、２つの結合ドメイン、すなわち、ヴィーナス・フライトラップ（ＶＦＴ）ドメイン及び７膜貫通（７ＴＭ）ドメインが強調されている。図２はさらに、各ドメインにおける活性部位を示している。カルシウム感知受容体調節剤とも称されうるカルシウム感知受容体調節化合物は、それらが相互作用するドメインに関して説明される。
【００９９】
３．１  ＣａＳＲフライトラップドメイン結合化合物
本開示は、受容体のヴィーナス・フライトラップ（ＶＦＴ）ドメインと相互作用（例えば結合）することができる少なくとも１つのカルシウム感知受容体調節化合物を含むフレーバー組成物に関する。ある特定の実施形態では、カルシウム感知受容体のＶＦＴドメインとのこのような相互作用は、カルシウム感知受容体を刺激する。他の実施形態では、化合物は、他のカルシウム感知受容体アゴニスト又は調節剤と相乗的に作用して、カルシウム感知受容体の活性を調節する。さらに他の実施形態では、カルシウム感知受容体のＶＦＴドメインとの相互作用は、カルシウム感知受容体に拮抗する。ある特定の実施形態では、化合物は、受容体を活性化するカルシウム感知受容体アゴニストの能力を増強する（すなわち、化合物は、ポジティブアロステリックモジュレータとして機能する）。
【０１００】
ある特定の実施形態では、化合物は、例えば、Ａｓｎ６４、Ｐｈｅ６５、Ａｓｎ１０２、Ｔｈｒ１４５、Ｓｅｒ１４７、Ａｌａ１６８、Ｓｅｒ１６９、Ｓｅｒ１７０、Ａｓｐ１９０、Ｇｌｎ１９３、Ａｓｐ２１６、Ｔｙｒ２１８、Ｓｅｒ２７２、Ｇｌｕ２９７、Ａｌａ２９８、Ｔｒｐ２９９、Ａｌａ３００、Ｓｅｒ３０２、Ｌｅｕ３０４、Ｔｙｒ４１１、Ｔｈｒ４１２、及びＨｉｓ４１３のうちの１つ以上など、ＶＦＴドメイン内の１つ以上のアミノ酸と相互作用する。したがって、ある特定の実施形態では、カルシウム感知受容体調節化合物は、これらの残基の１つ以上との相互作用に基づいて特定及び／又は定義されうる。
【０１０１】
３．１．１  二価及び三価の金属塩
ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、第２族元素の二価又は三価の塩を含む。例えば、第２族元素は、ベリリウム（Ｂｅ）、マグネシウム（Ｍｇ）、カルシウム（Ｃａ）、ストロンチウム（Ｓｒ）、又はバリウム（Ｂａ）でありうる。ある特定の実施形態では、第２族元素はマグネシウム（Ｍｇ）である。ある特定の実施形態では、第２族元素はストロンチウム（Ｓｒ）である。他の特定の実施形態では、第２族元素は、Ｍｇ又はＳｒではない。ある特定の実施形態では、第２族元素はカルシウム（Ｃａ）ではない。
【０１０２】
ある特定の実施形態では、少なくとも１つのカルシウム感知受容体調節化合物は、ランタニドの二価又は三価の塩である。例えば、ランタニドは、ランタン（Ｌａ）、セリウム（Ｃｅ）、プラセオジム（Ｐｒ）、ネオジム（Ｎｄ）、プロメチウム（Ｐｍ）、サマリウム（Ｓｍ）、ユウロピウム（Ｅｕ）、ガドリニウム（Ｇｄ）、テルビウム（Ｔｂ）、ジスプロシウム（Ｄｙ）、ホルミウム（Ｈｏ）、エルビウム（Ｅｒ）、ツリウム（Ｔｍ）、イッテルビウム（Ｙｂ）、又はルテチウム（Ｌｕ）でありうる。ある特定の実施形態では、ランタニドはガドリニウム（Ｇｄ）である。ある特定の実施形態では、ランタニドはプラセオジム（Ｐｒ）である。ある特定の実施形態では、ランタニドはテルビウム（Ｔｂ）である。ある特定の実施形態では、ランタニドは、ガドリニウム（Ｇｄ）、プラセオジム（Ｐｒ）、又はテルビウム（Ｔｂ）ではない。
【０１０３】
３．１．２  リン含有化合物
ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、式Ｖｆｔ−６．５ａ、Ｖｆｔ−６．５ｂ又はＶｆｔ−６．５ｃのリン含有化合物を含み：
ここで、Ｖｆｔ−６．５ａは次の構造を有し：
【０１０４】
【化９】
2019515668.tif 000011
【０１０５】
Ｖｆｔ−６．５ｂは次の構造を有し：
【０１０６】
【化１０】
2019515668.tif 000012
【０１０７】
Ｖｆｔ−６．５ｃは次の構造を有し：
【０１０８】
【化１１】
2019515668.tif 000013
【０１０９】
ここで、Ｖｆｔ−６．５ａ、Ｖｆｔ−６．５ｂ及びＶｆｔ−６．５ｃにおいて：
ｎは１、２又は３であり、
ｎ１は０、１、２、３又は４であり、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６は、各々独立して、Ｈ、低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６分岐又は非分岐）、アリールアルキル（すなわち、ＣＨ２Ｐｈ）、アリール、Ｐｈ、ヘテロアリール又はＰ（＝Ｘ３）ＯＲ７Ｒ８であり；
Ｒ７及びＲ８は、各々独立して、Ｈ、低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６分岐又は非分岐）、アリールアルキル（すなわち、ＣＨ２Ｐｈ）、アリール、Ｐｈ、又はヘテロアリールであり；
Ｒ１及びＲ２は、各々独立して、Ｈ、ＣＨ３、低級アルキルＣ１〜Ｃ６、ヘテロアリール、（ＣＨ２）ｎ１アリール、又は（ＣＨ２）ｎ１ヘテロアリールであり；
Ｒは、独立して、Ｈ、ＯＨ、ＣＨ３、低級アルキルＣ１〜
Ｃ６、ヘテロアリール、（ＣＨ２）ｎ１アリール、（ＣＨ２）ｎ１ヘテロアリール、ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ、低級アルケン、又は低級アセチレンであり；及び
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３は、各々独立して、Ｏ又はＳである。
【０１１０】
３．１．３  α−アミノ酸Ｉ
ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、式Ｖｆｔ−１ａ又はＶｆｔ−１ｂの化合物：
【０１１１】
【化１２】
2019515668.tif 000014
【０１１２】
を含み、ここで、
ｎは１〜６の範囲であり；
ｎ６及びｎ７は、各々独立して、１又は２であり；
Ｘ１及びＸ２は、独立して、酸素又は硫黄であり；
Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ、ＣＨ３、分岐又は非分岐低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ８）、（ＣＨ２）ｎ２アリール、（ＣＨ２）ｎ２ヘテロアリール、アリール、ヘテロアリール、ｃ−Ｃ３Ｈ５、ｃ−Ｃ４Ｈ７、ｃ−Ｃ５Ｈ９、ｃ−Ｃ６Ｈ１１、及び（ＣＨ２）ｎ３シクロアルキル（Ｃ３〜Ｃ６）からなる群より選択され；
Ｙ、Ｒ３及びＲ４、Ｒ７、及びＲ８は、独立して、Ｈ、ＣＨ３、及び分岐又は非分岐低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ１０）からなる群より選択され；
Ｒ５及びＲ６は、独立して、Ｈ、ＯＨ、分岐又は非分岐低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）、Ｏ（ＣＨ２）ｎ４アリール、Ｏ（ＣＨ２）ｎ４ヘテロアリール、ＮＲ７Ｒ８、Ｎ（Ｒ９）ＯＨ、アリール、及びヘテロアリールからなる群より選択され；
Ｒ９、Ｒ１１、Ｒ１２、及びＲ１３は、独立して、Ｈ、ＣＨ３、低級アルキルの分岐又は非分岐（Ｃ１〜Ｃ１０）に等しく；
ｎ２、ｎ３、及びｎ４は、独立して、０〜４の範囲であり；
ｎ５は、０、１、又は２であり；
式Ｖｆｔ−１ａ及びＶｆｔ−１ｂにおいて、分岐及び非分岐アリール及びアルキル基は、任意選択的に、ＣＨ３、ＯＨ、ＳＨ、ＯＣＨ３、ＳＣＨ３、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ１３、Ｓ（Ｏ）ｎ４Ｒ１、Ｃ（Ｏ）Ｒ１１、Ｃ（Ｏ）ＮＲ１１Ｒ１２、ＣＮ、ＮＲ１１Ｒ１２、ＮＲ１１Ｃ（Ｏ）Ｒ１２、アリール、メチレンジオキシ、アルキル（Ｃ１〜Ｃ５）、ＣＨ２ＳＳＣＨ２ＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＮＨ２）、ハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、又はＩを含む）、ＮＯ２、ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、ＣＨＯ、ＣＦ３、Ｐ（＝Ｘ１）（ＯＲ１）２、及びＯＰ（＝Ｘ１）（ＯＲ１）２の１つ以上で置換されうる。
【０１１３】
式Ｖｆｔ−１ａ及びＶｆｔ−１ｂは、（Ｒ）及び（Ｓ）立体異性体の両方を含む。ある特定の実施形態では、化合物は（Ｒ）立体異性体である。ある特定の実施形態では、化合物は（Ｓ）立体異性体である。
【０１１４】
ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、Ｌ−アスパラギン酸、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−アルギニン、及びＬ−リシンのうちの少なくとも１つを含む。
【０１１５】
ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、Ｌ−アスパラギン酸、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−アルギニン、及びＬ−リシンのうちの少なくとも１つを含まない。
【０１１６】
３．１．４  α−アミノ酸ＩＩ
ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、次の構造：
【０１１７】
【化１３】
2019515668.tif 000015
【０１１８】
を有する式Ｖｆｔ−２の化合物を含み、ここで、
ｎは、０〜６の範囲であり；
Ｗは、ＣＲ６Ｒ７、Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）ｎ２、Ｓｅ、Ｓｅ（Ｏ）ｎ２、Ｐ（Ｘ２）（ＯＲ１）２、ＯＰ（Ｘ２）（ＯＲ１）２、ＮＨ２、ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、Ｐｈ、インドール、及びヘテロアリールからなる群より選択され；
Ｘ１は、Ｈ、ＣＨ３、低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）、（ＣＨ２）ｎ３アリール、（ＣＨ２）ｎ３ヘテロアリール、アリール、ヘテロアリール、ＯＨ、ＮＲ１Ｒ２、ＮＨ（＝Ｃ）ＮＲ１Ｒ２、フェニル、ｐ−ヒドロキシフェニル、インドール、ＳＲ１、ＯＲ１、ＣＯＯＲ１、Ｓ（Ｏ）ｎ２、テトラゾール、イミダゾール、Ｐ（＝Ｘ２）（ＯＲ１）２、及びＯＰ（＝Ｘ２）（ＯＲ１）２からなる群より選択され；
Ｘ２は、酸素又は硫黄であり；
Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ、分岐又は非分岐低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ８）、（ＣＨ２）ｎ２アリール、（ＣＨ２）ｎ２ヘテロアリール、アリール、ヘテロアリール、ｃ−Ｃ３Ｈ５、ｃ−Ｃ４Ｈ７、ｃ−Ｃ５Ｈ９、ｃ−Ｃ６Ｈ１１、及び（ＣＨ２）ｎ３シクロアルキル（Ｃ３〜Ｃ６）からなる群より選択され；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ１１、Ｒ１２、及びＲ１３は、独立して、Ｈ、ＣＨ３、低級アルキル分岐及び非分岐（Ｃ１〜Ｃ１０）からなる群より選択され；
Ｒ５は、Ｈ、ＯＨ、分岐又は非分岐低級アルコキシド（Ｃ１〜Ｃ６）、ＯＣＨ３、ＯＥｔ、ＯＣＨ２Ｐｈ、Ｏアルキル（Ｃ１〜Ｃ６）、Ｏ（ＣＨ２）ｎ４アリール、Ｏ（ＣＨ２）ｎ４ヘテロアリール、ＮＲ６Ｒ７、Ｎ（Ｒ８）ＯＨ、Ｏ−アリール、及びＯ−ヘテロアリールからなる群より選択され；
Ｒ８は、Ｈ又はＣＨ３であり；
ｎ２は０〜２の範囲であり；かつ
ｎ３及びｎ４は、独立して、０〜４の範囲である。
【０１１９】
アリール及びアルキル（分岐及び非分岐の両方）基は、任意選択的に、ＣＨ３、ＯＨ、ＳＨ、ＯＣＨ３、ＳＣＨ３、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ１３、Ｓ（Ｏ）ｎ２Ｒ１、Ｃ（Ｏ）Ｒ１１、Ｃ（Ｏ）ＮＲ１１Ｒ１２、ＣＮ、ＮＲ１１Ｒ１２、ＮＲ１１Ｃ（Ｏ）Ｒ１２、アリール、メチレンジオキシ、アルキル（Ｃ１〜Ｃ５）、ＣＨ２ＳＳＣＨ２ＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＮＨ２）、ハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、ＮＯ２、ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、ＣＨＯ、ＣＦ３、Ｐ（＝Ｘ２）（ＯＲ１）２、又はＯＰ（＝Ｘ２）（ＯＲ１）２で置換されてよく；Ｒ１１、Ｒ１２、及びＲ１３は、独立して、Ｈ、ＣＨ３、低級アルキルの分岐又は非分岐（Ｃ１〜Ｃ１０）である。
【０１２０】
式Ｖｆｔ−２は、（Ｒ）及び（Ｓ）立体異性体の両方を含む。ある特定の実施形態では、化合物は（Ｒ）立体異性体である。ある特定の実施形態では、化合物は（Ｓ）立体異性体である。
【０１２１】
ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、Ｌ−アスパラギン酸、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−アルギニン、Ｌ−リシン、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−トリプトファン及びＳｅ−（メチル）セレノシステインのうちの少なくとも１つを含む。
【０１２２】
ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、Ｌ−アスパラギン酸、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−アルギニン、Ｌ−リシン、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−トリプトファン及びＳｅ−（メチル）セレノシステインのうちの少なくとも１つを含まない。
【０１２３】
３．１．５  γ−グルタミル及びβ−アスパルチルジ−及びトリ−ペプチド
ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、次の構造を有する式Ｖｆｔ−３の化合物：
【０１２４】
【化１４】
2019515668.tif 000016
【０１２５】
を含み、ここで、
ｎは０又は１であり、したがって、ｎ１が０のとき、ＡＡ２は存在せず；
ＡＡ１−（ＡＡ２）ｎ１は、独立して、下記セクション３．１．６に列挙されるアミノ酸のいずれかであり；
ｎは、０〜６の範囲であり；
ｎ１及びｎ２は、独立して、０〜３の範囲であり；
ｎ３は０〜２の範囲であり；
ｎ４は１〜６の範囲であり；
ｎ５は０〜３の範囲である。
【０１２６】
加えて、ＡＡ１〜（ＡＡ２）ｎは、次の構造：
【０１２７】
【化１５】
2019515668.tif 000017
【０１２８】
を有する式Ｖｆｔ−３ｂのアミノ酸であり、ここで、
Ｗは、Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）ｎ３、Ｓｅ、Ｓｅ（Ｏ）ｎ３、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、ＮＲ１Ｒ２、ＣＲ１Ｒ２、ＣＨ２からなる群より選択され；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４は、Ｈ、ＣＨ３、低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）、（ＣＨ２）ｎ２インドール、（ＣＨ２）ｎ２アリール、（ＣＨ２）ｎ２ヘテロアリール、及びＯＨ、ＣＯＯＨからなる群より選択され；
Ｒ５は、Ｈ、ＣＨ３、低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）、Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ６、Ｃ（Ｏ）アリール、Ｃ（Ｏ）ヘテロアリール、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜Ｃ６、Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ２アリール、（ＣＨ２）ｎ２インドール、（ＣＨ２）ｎ２アリール、（ＣＨ２）ｎ２ヘテロアリール、ニトロソ、及びＯＨ、アリール、インドールからなる群より選択され；
ｎ２は０〜２の範囲であり；
ＡＡ１又はＡＡ２が硫黄又はセレンを含む場合には、アミノ酸は酸化されて、Ｓ（Ｏ）ｎ２又はＳｅ（Ｏ）ｎ２、並びにＳ（Ｎ＝Ｏ）又はＳｅ（Ｎ＝Ｏ）などのニトロソ種を与えることができ；かつ
ＡＡ１又はＡＡ２が硫黄又はセレンを含む場合には、アミノ酸は、硫黄又はセレンにおいてアルキル化されうる。
【０１２９】
式Ｖｆｔ−３では、分岐及び非分岐アリール及びアルキル基は、任意選択的に、メチル、ＯＨ、ＳＨ、ＯＣＨ３、ＳＣＨ３、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ１３、Ｓ（Ｏ）ｎ３Ｒ１、Ｃ（Ｏ）Ｒ１１、Ｃ（Ｏ）ＮＲ１１Ｒ１２、ＣＮ、ＮＲ１１Ｒ１２、ＮＲ１１Ｃ（Ｏ）Ｒ１２、アリール、メチレンジオキシ、アルキル（Ｃ１〜Ｃ５）、ＣＨ２ＳＳＣＨ２ＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＮＨ２）、ハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、又はＩを含む）、ＮＯ２、ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、ＣＨＯ、ＣＦ３、Ｐ（＝Ｘ１）（ＯＲ１）２、及びＯＰ（＝Ｘ１）（ＯＲ１）２の１つ以上で置換されてよく；
Ｒ１１、Ｒ１２、及びＲ１３は、独立して、Ｈ、ＣＨ３、低級アルキルの分岐又は非分岐（Ｃ１〜Ｃ１０）に等しい。式Ｖｆｔ−３は、（Ｒ）及び（Ｓ）立体異性体の両方を含む。ある特定の実施形態では、化合物は（Ｒ）立体異性体である。ある特定の実施形態では、化合物は（Ｓ）立体異性体である。
【０１３０】
アスパラギン酸及びグルタミン酸などの二官能性アミノ酸の場合には、アミド結合がα−カルボキシル基又は側鎖カルボキシル基において形成されることは、本発明の範囲内にある。
【０１３１】
ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、γ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ、γ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ、γ−Ｇｌｕ−Ａｌａ、γ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ、及びγ−Ｄ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐからなる群より選択される、γ−グルタミルジ−ペプチドを含む。ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、オフタルミン酸（γ−Ｇｌｕ−Ａｂｕ−Ｇｌｙ）、γ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ、Ｓ−メチルグルタチオン、Ｓ−（２−ヒドロキシエチル）グルタチオン、３−グルタチオニル−Ｓ−メチルインドール、グルタチオン（γ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ）及びＳ−ラクトイルグルタチオンからなる群より選択される、γ−グルタミルトリ−ペプチドを含む。ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、γ−Ｇｌｕ−Ｍｅｔ、γ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ、γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ、γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ、γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ、γ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ、γ−Ｇｌｕ−Ａｂｕ、γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎからなる群より選択される、γ−グルタミルペプチドを含む。ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、β−Ａｓｐ−Ａｌａ、β−Ａｓｐ−Ｇｌｙ、β−Ａｓｐ−Ｌｅｕ、及びβ−Ａｓｐ−Ｐｈｅからなる群より選択される、β−アスパルチルペプチドを含む。
【０１３２】
ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、前述のγ−グルタミルペプチドのうちの１つ以上を含まない。ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、前述のγ−グルタミルトリペプチドのうちの１つ以上を含まない。
【０１３３】
ある特定の実施形態では、式Ｖｆｔ−３は、グルタチオン（γ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ）（例えば、Ｌ−グルタチオン）、γ−Ｇｌｕ−Ａｌａ、γ−Ｇｌｕ−Ｍｅｔ、γ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ、γ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ、γ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ、γ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ、γ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ、γ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ、γ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ、γ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ、γ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ａｓｎ、γ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ、γ−Ｇｌｕ−Ａｂｕ−Ｇｌｙ、γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ、γ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ、γ−Ｇｌｕ−Ｏｒｎ、Ａｓｐ−Ｇｌｙ、Ｃｙｓ−Ｇｌｙ、Ｃｙｓ−Ｍｅｔ、Ｇｌｕ−Ｃｙｓ、Ｇｌｙ−Ｃｙｓ、Ｌｅｕ−Ａｓｐ、Ｄ−Ｃｙｓ、γ−Ｇｌｕ−Ｍｅｔ（Ｏ）、γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ、γ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−ＮＨ２、γ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−ｏｌ、γ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ、γ−Ｇｌｕ−Ｔａｕ、γ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ（Ｓ−Ｍｅ）（Ｏ）、γ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ、γ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ、γ−Ｇｌｕ−ｔ−Ｌｅｕ、及び／又はγ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ（Ｓ−Ｍｅ）を除外する以外は、上記のように定義される。
【０１３４】
３．１．６  多岐にわたるアミノ酸
ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、次のアミノ酸のうちの１つ以上を含む：グリシン、サルコシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、ホモフェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、セリン、トレオニン、システイン、Ｓ−メチルシステイン、メチオニン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ＡＢＵ、セレノシステイン、Ｓｅ−（メチル）セレノシステイン、オルニチン、チオプロリン、ペニシラミン、５，５−ジメチルチアゾリジン−４−カルボン酸、ジアミノプロパン酸、及びβ−アラニン。ある特定の実施形態では、グルタミン酸及びアスパラギン酸のアミド結合は、α−カルボキシル基又は側鎖カルボキシル基及び／又はその両方を介して形成されうる。ある特定の実施形態では、グルタミン酸及びアスパラギン酸の遊離カルボキシル基は、エステル化されて、低級アルキルエステル（メチル又はエチル）をもたらしうる。ある特定の実施形態では、硫黄又はセレンを含むアミノ酸は酸化されて、Ｓ（Ｏ）ｎ３及びＳｅ（Ｏ）ｎ３、並びにＳ（Ｎ＝Ｏ）、Ｓｅ（Ｎ＝Ｏ）などのニトロソ種を与えることができる。ある特定の実施形態では、硫黄又はセレンを含むアミノ酸はまた、酸化されて、対応するホモ二量体及びヘテロ二量体ジスルフィド及びジセレニドを与えうる。ある特定の実施形態では、それらの硫黄又はセレンを含むアミノ酸はまた、硫黄又はセレンにおいてアルキル化もされうる。
【０１３５】
３．１．７  多塩基ペプチド
ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、次の構造：
【０１３６】
【化１６】
2019515668.tif 000018
【０１３７】
を有する式Ｖｆｔ−４の化合物を含み、ここで、
ｎ１は、１〜５５０の範囲であり；
ｎ２は、０〜５の範囲であり；
Ｒは、ＮＲ１Ｒ２、Ｃ（＝Ｎ）ＮＨ２、ＮＲ１Ｃ（＝ＮＲ２）ＮＲ３Ｒ４又はイミダゾールであり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４は、独立して、Ｈ、ＣＨ３、又は低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）である。
【０１３８】
式Ｖｆｔ−４によって特定される、本開示の多塩基ペプチドは、１つ以上の個別の化合物を（例えば、混合物中に）含んでよく、各個別の化合物は、式Ｖｆｔ−４によって特定される。
【０１３９】
ある特定の実施形態では、化合物は、ポリアルギニン、ポリリシン、及びポリオルニチンのうちの少なくとも１つを含む。
【０１４０】
ある特定の実施形態では、化合物は、ポリアルギニン、ポリリシン、及びポリオルニチンのうちの少なくとも１つを含まない。
【０１４１】
ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、次の構造：
Ｒ１−ＡＡｎ−Ｒ２
を有する式Ｖｆｔ−５の化合物を含み、ここで、
ｎは１〜５５０であり；
各ＡＡは、独立して、セクション３．１．６で特定されるアミノ酸の群から選択され；
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ（＝Ｏ）低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）、Ｃｂｚ、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）、Ｃ（Ｏ）アリール、及び当業者に知られる窒素についての他の保護基からなる群より選択され；かつ
Ｒ２は、ＯＨ、ＮＲ２ａＲ３ａ、ＯＣＨ３、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６）、ＯＣＨ２アリール、及びＣ（ＣＨ３）３から選択され；
Ｒ２ａ及びＲ３ａは、独立して、Ｈ、分岐又は非分岐低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ８）、及びＣＨ２フェニルからなる群より選択される。
【０１４２】
ある特定の実施形態では、化合物は、ポリアルギニン（例えば、ポリ−Ｌ−アルギニン）、ポリリシン（例えば、ポリ−Ｌ−リシン）、又はポリオルニチン（例えば、ポリ−Ｌ−オルニチン）を含む。
【０１４３】
ある特定の実施形態では、式Ｖｆｔ−４は、ポリアルギニン（例えば、ポリ−Ｌ−アルギニン）、ポリリシン（例えば、ポリ−Ｌ−リシン）、及びポリオルニチン（例えば、ポリ−Ｌ−オルニチン）を除外する以外は、上記のように定義される。
【０１４４】
３．１．８  ポリアミン
ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、次の構造：
【０１４５】
【化１７】
2019515668.tif 000019
【０１４６】
を有する式Ｖｆｔ−６の化合物を含み、ここで、
ｎ１〜ｎ６は、独立して、０〜６の範囲であり、したがって、ｎ１〜ｎ６のうちの１つ以上が０に等しい場合、それは鎖末端を意味し；
Ｒ１〜Ｒ１２は、独立して、Ｈ、ＣＨ３、分岐又は非分岐低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）、ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２、アリール、フェニル、ＣＨ２アリール、及びＣＨ２Ｐｈからなる群より選択され；
Ｒａ〜Ｒｆは、独立して、Ｈ、ＣＨ３、分岐又は非分岐低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）、ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２、アリール、フェニル、ＣＨ２アリール、ＣＨ２Ｐｈ、及び（ＣＲ１３Ｒ１４）ｎ７ＮＲ１５Ｒ１６から選択され；
ｎ７は、２〜６の範囲であり；
Ｒ１３及びＲ１４は、独立して、Ｈ、ＣＨ３、分岐又は非分岐低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）、ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２、アリール、フェニル、ＣＨ２アリール、及びＣＨ２Ｐｈからなる群より選択され；
Ｒ１５及びＲ１６は、独立して、Ｈ、ＣＨ３、分岐又は非分岐低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）、ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２、アリール、フェニル、ＣＨ２アリール、及びＣＨ２Ｐｈからなる群より選択され；かつ
任意選択的に、式Ｖｆｔ−６の化合物は環構造を含み、ここで、点線は、２つの末端原子間の共有結合を表す。
【０１４７】
ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、線形の式Ｖｆｔ−６の化合物を含む。ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、環形状の式Ｖｆｔ−６の化合物を含む。
【０１４８】
ある特定の実施形態では、式Ｖｆｔ−５は、スペルミジン、スペルミン、及びプトレシンのうちの１つ以上を除外する以外は、上記のように定義される。
【０１４９】
３．１．９  アミノグリコシド系抗生物質
ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、アミノグリコシド系抗生物質を含む。例えば、アミノグリコシド系抗生物質は、ネオマイシン、トブラマイシン、ゲンタマイシン、リボスタマイシン、パロモマイシン、及び抗生物質ジェネティシンからなる群より選択されうる。さらなる例については、アミノグリコシド系抗生物質は、アミカシン、ストレプトマイシン、ネアミン、パロマミン、アプラマイシン、ブチロシンＢ、リビドマイシンＡ、カナマイシンＡ、カナマイシンＢ、カナマイシンＣ、トブラマイシン、アミカシン、ゲンタマイシンＣ１、ゲンタマイシンＣ２、ジェネティシン、シソマイシン、アルベカシン、アストロマイシン、ベカナマイシン、ディベカシン、ジヒドロストレプトマイシン、エルサミトゥルーイン（Elsamitruein）、ハイグロマイシンＢ、イセパマイシン、カスガマイシン、レゴマイシン（Legomycin）、リビドマイシン、ミクロノマイシン、ネアミン、ネオマイシン、ネチルマイシン、ノウルセオトライシン、プラゾマイシン、トブラマイシン、トウトマイシン、及びベルダマイシンからなる群より選択されうる。
【０１５０】
ある特定の実施形態では、アミノグリコシド系抗生物質は、ゲンタマイシン、トブラマイシン、リボスタマイシン、パロモマイシン、又は抗生物質ジェネティシンである。ある特定の実施形態では、アミノグリコシド系抗生物質はネオマイシンではない。
【０１５１】
３．１．１０  ＣａＳＲ  ＶＦＴドメインとの相互作用
ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、ＣａＳＲのＶＦＴドメインの活性部位と相互作用する化合物を含む。例えば、ＶＦＴドメインのヒンジ領域におけるリガンド配位（図２参照）は、次のアミノ酸群のうちの１つ以上において相互作用を生じうる：Ｔｙｒ２１８、Ｔｈｒ１４５、Ｓｅｒ１４７、Ａｌａ１６８、Ｓｅｒ１７０、Ａｓｐ１９０、Ｇｌｕ２９７、Ａｌａ２９８、及びＳｅｒ２７２。例えば、Ａｓｐ１９０及びＧｌｕ２９７は、リガンド上で両性イオンと他の窒素；例えば、活性アミノ酸、γ−グルタミル−ジ−及びトリ−ペプチド内の窒素と他の塩基性窒素含有化合物とを結合する役割を担う。
【０１５２】
加えて、より長いリガンドは、ヒンジ領域からさらに離れるように延びることができ、例えば、Ｈｉｓ４１３、Ｔｈｒ４１２、及びＴｒｐ２９９に対する他の特異的な相互作用を生じる。これは、Ａｓｎ６４、Ｐｈｅ６５、Ａｓｎ１０２、Ｓｅｒ１６９、Ｇｌｎ１９３、Ａｓｐ２１６、Ａｌａ３００、Ｓｅｒ３０２、Ｌｅｕ３０４、及び／又はＴｙｒ４１１への接触を生じさせることもできる。
【０１５３】
ある特定の実施形態では、ＶＦＴドメインのヒンジ領域に結合する、例えば、アゴニスト又はポジティブアロステリックモジュレータなどの活性化合物は、Ｃａ＋２についての一次結合部位におけるヒンジ領域へのＣａ＋２の結合を配位するのに役立ちうる。ある特定の実施形態では、このような一次結合部位は、ＶＦＴドメインのヒンジ領域におけるＣａ＋２にとっての唯一の結合部位ではない。
【０１５４】
したがって、ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、両性イオン又は塩基性窒素を含む化合物を含む。このような化合物は、Ａｓｐ１９０及び／又はＧｌｕ２９７と相互作用を形成しうる。
【０１５５】
ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、ＶＦＴドメインのヒンジ領域において２より多い相互作用を形成する化合物を含む。相互作用のうちの少なくとも１つは、Ｔｙｒ２１８、Ｔｈｒ１４５、Ｓｅｒ１４７、Ａｌａ１６８、Ｓｅｒ１７０、Ａｓｐ１９０、Ｇｌｕ２９７、Ａｌａ２９８、及び／又はＳｅｒ２７２に対するものでありうる。ある特定の実施形態では、２つ以上の相互作用は、Ｔｙｒ２１８、Ｔｈｒ１４５、Ｓｅｒ１４７、Ａｌａ１６８、Ｓｅｒ１７０、Ａｓｐ１９０、Ｇｌｕ２９７、Ａｌａ２９８、及び／又はＳｅｒ２７２に対するものである。ある特定の実施形態では、相互作用はすべて、Ｔｙｒ２１８、Ｔｈｒ１４５、Ｓｅｒ１４７、Ａｌａ１６８、Ｓｅｒ１７０、Ａｓｐ１９０、Ｇｌｕ２９７、Ａｌａ２９８、及び／又はＳｅｒ２７２に対するものである。
【０１５６】
ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、Ａｓｐ１９０及び／又はＧｌｕ２９７と１つ以上の相互作用を形成し、かつ、Ｔｙｒ２１８、Ｔｈｒ１４５、Ｓｅｒ１４７、Ａｌａ１６８、Ｓｅｒ１７０、Ａｓｐ１９０、Ｇｌｕ２９７、Ａｌａ２９８、及び／又はＳｅｒ２７２に対して２より多い相互作用をさらに形成する、両性イオン又は塩基性窒素を含む化合物を含む。
【０１５７】
ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、ＶＦＴドメインのヒンジ領域において相互作用を形成する化合物を含み、ここで、２つ以上の相互作用は、Ａｓｐ１９０、Ｇｌｕ２９７、Ｔｙｒ２１８、Ｔｈｒ１４５、Ｓｅｒ１４７、Ａｌａ１６８、Ｓｅｒ１７０、Ａｓｐ１９０、Ｇｌｕ２９７、Ａｌａ２９８、及び／又はＳｅｒ２７２に対するものであり、追加的な２つ以上の相互作用は、Ｔｙｒ２１８、Ｔｈｒ１４５、Ｓｅｒ１４７、Ａｌａ１６８、Ｓｅｒ１７０、Ａｓｐ１９０、Ｇｌｕ２９７、Ａｌａ２９８、及び／又はＳｅｒ２７２に対するものである。
【０１５８】
ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、ＶＦＴドメインのヒンジ領域に対して２つ以上の相互作用を形成する化合物を含み、ここで、２つ以上の相互作用は、Ａｓｐ１９０、Ｇｌｕ２９７、Ｔｙｒ２１８、Ｔｈｒ１４５、Ｓｅｒ１４７、Ａｌａ１６８、Ｓｅｒ１７０、Ａｓｐ１９０、Ｇｌｕ２９７、Ａｌａ２９８、及びＳｅｒ２７２に対するものであり、化合物はまた、ＶＦＴドメインのヒンジ領域に結合したＣａ＋２イオンを配位するのにも役立つ。
【０１５９】
３．２  ＣａＳＲ  ７膜貫通ドメイン結合化合物
本開示はさらに、受容体の７膜貫通（７ＴＭ）ドメインと相互作用する（例えば、それらに結合する）ことができる、少なくとも１つのカルシウム感知受容体調節化合物を含むフレーバー組成物に関する。ある特定の実施形態では、カルシウム感知受容体の７ＴＭドメインとのこのような相互作用は、カルシウム感知受容体を刺激する。他の実施形態では、化合物は、他のカルシウム感知受容体アゴニスト又は調節剤と相乗的に作用して、カルシウム感知受容体の活性を調節する。さらに他の実施形態では、カルシウム感知受容体の７ＴＭドメインとの相互作用は、カルシウム感知受容体に拮抗する。ある特定の実施形態では、化合物は、受容体を活性化するカルシウム感知受容体アゴニストの能力を増強する（すなわち、化合物は、ポジティブアロステリックモジュレータとして機能する）。
【０１６０】
ある特定の実施形態では、化合物は、例えば、受容体のヘリックス３、４、５、６、及び／又は７の１つ以上のアミノ酸など、７ＴＭドメイン内の１つ以上のアミノ酸と相互作用する。ヘリックス３上では、活性部位の残基は、Ｐｈｅ６８４、Ｇｌｙ６８５、及びＰｈｅ６８８を含む。ヘリックス４上では、活性部位の残基は、Ｇｌｎ７３５を含む。ヘリックス５上では、活性部位の残基は、Ｍｅｔ７７１、Ａｌａ７７２、Ｐｈｅ７７５、Ｌｅｕ７７６、及びＴｈｒ７８０を含む。ヘリックス６上では、活性部位の残基は、Ｐｈｅ８１４、Ｖａｌ８１７、Ｔｒｐ８１８、及びＰｈｅ８２１を含む。ヘリックス７上では、活性部位の残基は、Ｇｌｕ８３７、Ａｌａ８４０、及びＩｌｅ８４１を含む。したがって、ある特定の実施形態では、カルシウム感知受容体調節化合物は、これらの残基の１つ以上との相互作用に基づいて特定する及び／又は定めることができる。
【０１６１】
３．２．１  カルシミメティクス
ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、１つ以上のカルシミメティクスを含む。ある特定の実施形態では、カルシミメティクスは、４−クロロ−Ｎ−［（１Ｓ，２Ｓ）−２−［［（１Ｒ）−１−（１−ナフタレニル）エチル］アミノ］シクロヘキシル］−ベンズアミド塩酸塩を含む。ある特定の実施形態では、カルシミメティクスは、２−クロロ−６−［（２Ｒ）−３−（［１，１−ジメチル−２−（２−ナフタレニル）エチル］アミノ）−２−ヒドロキシプロポキシ］ベンゾニトリルを含む。
【０１６２】
ある特定の実施形態では、カルシミメティクスは、表１における式Ｔｍ−１〜Ｔｍ−１２のいずれかの構造を有しうる。
【０１６３】
【表１−１】
2019515668.tif 000020
【０１６４】
【表１−２】
2019515668.tif 000021
【０１６５】
Ｔｍ−１〜Ｔｍ−１２において、Ｇ１〜Ｇ４は、独立して、Ｃ（Ｒ４ａＲ４ｂ）、Ｎ（Ｒ４）、Ｓ、又はＯであり；
Ｗは、ＯＲ４又はＳＲ４であり；
Ｘは、ＮＲ１Ｒ２、ＣＲ１Ｒ２、Ｏ又はＳであり；
Ｘ１〜Ｘ１０は、独立して、Ｃ又はＮであり；
Ｘ１１は、Ｃ、Ｏ、Ｎ、又はＳであり；
Ｘ１２は、Ｏ、ＮＨ、又はＳであり；
Ｘ１３は、ＣＲ４ａＲ４ｂ、Ｏ、Ｎ（Ｒ１２）、又はＳであり；
Ｚは、Ｈ、Ｏ、Ｎ、Ｓ、又はＣ；
ｎ１、ｎ２、及びｎ３は、独立して、０〜４の範囲であり、したがって、ｎ１又はｎ２が０のとき、それは化学結合を意味し；
ｎ４は０〜２の範囲であり；
ｎ５は１〜３の範囲であり；
Ｒ１、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、及びＲ１ｃは、独立して、Ｈ、ＣＨ３、ＣＦ３、ＣＢｒ３、分岐又は非分岐低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）、シクロアルキル（Ｃ３〜Ｃ６）、ＣＯＯＲ１３、Ｃ（Ｏ）ＮＲ１６Ｒ１７、及びＳＯ２ＮＲ４ａＲ４ｂからなる群より選択され；かつ
Ｒ２は、ＣＨ３、ＣＦ３、ＣＢＲ３、ＮＯ２、低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）、シクロアルキル（Ｃ３〜Ｃ６）、アリール、及びヘテロアリールからなる群より選択される。
【０１６６】
Ｔｍ−１〜Ｔｍ−１２において、環Ａ及びＢは、独立して、官能基Ｒ３及び／又はＲ７で置換することができる、任意のアリール又はヘテロアリール環である。Ｒ３及びＲ７は、独立して、Ｈ、ＯＨ、分岐又は非分岐低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）、Ｏ（ＣＨ２）ｎ３アリール、Ｏ（ＣＨ２）ｎ３ヘテロアリール、ＮＲ１０Ｒ１１、Ｎ（Ｒ１２）ＯＨ、アリール、ヘテロアリール、メチル、ＯＨ、ＳＨ、ＯＣＨ３、ＳＣＨ３、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ１３、Ｓ（Ｏ）ｎ４Ｒ１４、Ｃ（Ｏ）Ｒ１５、Ｃ（Ｏ）ＮＲ１６Ｒ１７、ＣＮ、ＮＲ１８Ｒ１９、ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）Ｒ２１、アリール、メチレンジオキシ、アルキル（Ｃ１〜Ｃ５）、ＣＨ２ＳＳＣＨ２ＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＮＨ２）、ハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、又はＩを含む）、ＮＯ２、ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、ＣＨＯ、ＣＦ３、Ｐ（＝Ｘ１）（ＯＲ１）２、ＯＰ（＝Ｘ１）（ＯＲ１）２、テトラゾール、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１２）ＯＨ、ＣＦ３、ＯＲ４、ＳＲ４、Ｎ＝Ｃ＝Ｓ、Ｎ＝Ｃ＝Ｏ、Ｃ（Ｒ４）＝Ｃ（Ｒ４ａ）Ｒ４ｂ、（ＣＨ２）ｎ１ＣＨ＝ＣＨ２、ＮＨＣ（＝Ｘ１２）ＮＨ２、ＮＨＣ（＝Ｘ１２）ＮＨＲ４、ＳＯ２ＮＲ４ａＲ４ｂ、及びＣＣＲ４からなる群より選択することができる。
【０１６７】
Ｒ４、Ｒ４ａ、及びＲ４ｂは、独立して、Ｈ、ＣＨ３、低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）、シクロアルキル（Ｃ３〜Ｃ６）、フェニル、アリール、及びヘテロアリールからなる群より選択される。
【０１６８】
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ８及びＲ９は、独立して、Ｈ、ＣＨ３、分岐又は非分岐低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ１０）、アリール、ヘテロアリール、フェニル、ピリジル、フラン、ピラン、チオフェン、（ＣＨ２）ｎアリール、（ＣＨ２）ｎヘテロアリール、テトラヒドロピランからなる群より選択され、ここで、ｎは０〜４である。Ｎが０のとき、これは化学結合を意味する。
【０１６９】
Ｒ１０及びＲ１１は、独立して、Ｈ、ＣＨ３、低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）、フェニルからなる群より選択される。
【０１７０】
Ｒ１２は、Ｈ又はＣＨ３である。
【０１７１】
Ｒ１３は、Ｈ、ＣＨ３、低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）、及びＣＨ２アリールからなる群より選択される。
【０１７２】
Ｒ１４は、Ｈ、ＣＨ３、低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）、及びＯＨからなる群より選択される。
【０１７３】
Ｒ１５は、Ｈ、ＣＨ３、ＣＦ３、低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）、及びフェニルからなる群より選択される。
【０１７４】
Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９、Ｒ２０、及びＲ２１は、各々独立して、Ｈ、ＣＨ３、低級アルキル、フェニル、ＣＨ２フェニル、及びシクロアルキル（Ｃ１〜Ｃ６）からなる群より選択される。
【０１７５】
Ｒ２２は、Ｈ、Ｃ（Ｘ）Ｒ４からなる群より選択される。Ｒ２２が存在しない場合には、環Ａは芳香族である。
【０１７６】
独立して、環Ａ及び環Ｂは、飽和又は不飽和でありうる。加えて、環Ａ及び環Ｂは、独立して、縮合した五員又は六員の飽和又は不飽和の環を含む。例えば、環Ｂは、Ｘ１とＸ２の間、Ｘ２とＸ３の間、Ｘ３とＸ４の間、又はＸ４とＸ５の間に不飽和の六員環を含んでよく、例えば、ベンゾチオフェン、ベンゾフラン、２，３−ジヒドロベンゾフラン、インドール、シクロヘキシル、キノリン、イソキノリン、キナゾリン、キノキサリン、及びシンノリンなどのナフタレン環系又は他の縮合環系を生じうる。同様の方式で、環Ａは、Ｘ６とＸ７の間、Ｘ７とＸ８の間、Ｘ８とＸ９の間、又はＸ９とＸ１０の間に飽和又は不飽和の六員環を含んでよく、１つ以上の縮合環系を与えうる。
【０１７７】
Ｊは、アリール、フェニル、ピリジル、フラン、チオフェン、ピロール、ベンゾチオフェン、ベンゾチアゾール、ベンゾイミダゾール、ベンゾ［ｄ］オキサゾール、ベンゾフラン、インドール、キノリン、イソキノリン、キナゾリン、キノキサリン、シンノリン、チアゾロ［４，５−ｃ］ピリジン、チアゾロ［５，４−ｄ］ピリミジン、オキサゾロ［５，４−ｄ］ピリミジン、及びオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジンからなる群より選択されうる。
【０１７８】
Ａｒｙｌ１は、フェニル、フラン、チオフェン、ピロール、ナフタレン、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、インドール、キノリン、イソキノリン、ヘテロアリール、及びアリールからなる群より選択されうる。
【０１７９】
Ｑは、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル（Ｃ１〜Ｃ７）、及びインダニルからなる群より選択されうる。
【０１８０】
アルキル及びシクロアルキル基には、任意選択的に、次の官能基が付加されてもよい：Ｈ、ＯＨ、ＮＲ１０Ｒ１１、Ｎ（Ｒ１２）ＯＨ、アリール、ヘテロアリール、メチル、ＯＨ、ＳＨ、ＯＣＨ３、ＳＣＨ３、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ１３、Ｓ（Ｏ）ｎ４Ｒ１４、Ｃ（Ｏ）Ｒ１５、Ｃ（Ｏ）ＮＲ１６Ｒ１７、ＣＮ、ＮＲ１８Ｒ１９、ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）Ｒ２１、アリール、ハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉを含む）、ＮＯ２、ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、ＣＨＯ、ＣＦ３、Ｐ（＝Ｘ１）（ＯＲ１）２、ＯＰ（＝Ｘ１）（ＯＲ１）２、ＣＦ３、ＯＲ４、ＳＲ４、Ｃ（Ｒ４）＝Ｃ（Ｒ４ａ）Ｒ４ｂ、（ＣＨ２）ｎ１ＣＨ＝ＣＨ２、ＮＨＣ（＝Ｘ１２）ＮＨ２、ＮＨＣ（＝Ｘ１２）ＮＨＲ４、及びＳＯ２ＮＲ４ａＲ４ｂ。
【０１８１】
ある特定の実施形態では、式Ｔｍ−１又は式Ｔｍ−２の構造を有するカルシミメティクスは、Ｎ−（１−（４−クロロフェニル）エチル）−３−（４−メトキシフェニル）−６−メチルヘプタン−１−アミン、Ｎ−（１−（４−クロロフェニル）エチル）−３−（フラン−２−イル）−３−（ｐ−トリル）プロパン−１−アミン、Ｎ−（１−（４−クロロフェニル）エチル）−３−（４−イソプロポキシフェニル）−３−フェニルプロパン−１−アミン、Ｎ−（１−（４−クロロフェニル）エチル）−３−（４−メトキシフェニル）−４−メチルペンタン−１−アミン、Ｎ−（１−（４−クロロフェニル）エチル）−３−（４−イソプロポキシフェニル）−３−（２−メトキシフェニル）プロパン−１−アミン、３−（フラン−２−イル）−３−フェニル−Ｎ−（１−フェニルエチル）プロパン−１−アミン、Ｎ−（１−（４−クロロフェニル）エチル）−３−（フラン−２−イル）−３−（２−メトキシフェニル）プロパン−１−アミン、Ｎ−（１−（４−クロロフェニル）エチル）−３−（４−イソプロポキシフェニル）−６−メチルヘプタン−１−アミン、Ｎ−（１−（４−クロロフェニル）エチル）−３−（４−イソプロポキシフェニル）−４−メチルペンタン−１−アミン、３−（フラン−２−イル）−Ｎ−（１−フェニルエチル）−３−（ｐ−トリル）プロパン−１−アミン、３−（２，２−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）−３−フェニル−Ｎ−（１−フェニルエチル）プロパン−１−アミン、３−（フラン−２−イル）−Ｎ−（１−（チオフェン−２−イル）エチル）−３−（ｐ−トリル）プロパン−１−アミン、及びＮ−（１−（４−クロロフェニル）エチル）−３−（フラン−２−イル）−４−フェニルブタン−１−アミンから選択される。
【０１８２】
ある特定の実施形態では、式Ｔｍ−２の構造を有するカルシミメティクスは、３−（フラン−２−イル）−４−フェニル−Ｎ−（１−フェニルエチル）ブタン−１−アミン又はＮ−（１−（１Ｈ−インドール−２−イル）エチル）−１−（３，４−ジメチルフェニル）エタンアミンである。
【０１８３】
ある特定の実施形態では、式Ｔｍ−１、Ｔｍ−２、Ｔｍ−３又はＴｍ−４の構造を有するカルシミメティクスは、シナカルセトである。
【０１８４】
ある特定の実施形態では、式Ｔｍ−１、Ｔｍ−２、Ｔｍ−３、又はＴｍ−４の構造を有するカルシミメティクスは、シナカルセトではない。
【０１８５】
ある特定の実施形態では、式Ｔｍ−２又はＴｍ−５の構造を有するカルシミメティクスは、カリンドールである。
【０１８６】
ある特定の実施形態では、式Ｔｍ−２又はＴｍ−５の構造を有するカルシミメティクスは、カリンドールではない。
【０１８７】
ある特定の実施形態では、式Ｔｍ−３の構造を有するカルシミメティクスは、６−ブロモ−４−フルオロ−Ｎ−（１−（ピリジン−４−イル）エチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−アミン又はメチル２−（３−シアノフェニル）−２−（（４−フルオロ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）アミノ）アセテートである。
【０１８８】
ある特定の実施形態では、式Ｔｍ−４の構造を有するカルシミメティクスは、３−（（８−クロロ−２，３，４，５−テトラヒドロベンゾ［ｂ］オキセピン−５−イル）アミノ）−２−（ピリジン−２−イルメチル）プロパン−１−オールである。
【０１８９】
ある特定の実施形態では、式Ｔｍ−５の構造を有するカルシミメティクスは、Ｎ−（（２，３−ジヒドロベンゾフラン−２−イル）メチル）−１−（キノリン−２−イル）エタンアミンである。
【０１９０】
ある特定の実施形態では、式Ｔｍ−６の構造を有するカルシミメティクスは、６−ブロモ−４−フルオロ−Ｎ−（１−（ピリジン−４−イル）エチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−アミン又はメチル２−（３−シアノフェニル）−２−（（４−フルオロ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）アミノ）アセテートである。
【０１９１】
ある特定の実施形態では、式Ｔｍ−８の構造を有するカルシミメティクスは、３−フェニル−１−（１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−１−イル）ピロリジンである。
【０１９２】
ある特定の実施形態では、式Ｔｍ−９の構造を有するカルシミメティクスは、２−（２−アセチル−１，２−ジヒドロイソキノリン−１−イル）−Ｎ−（１−（３−ブロモフェニル）エチル）アセトアミドである。
【０１９３】
ある特定の実施形態では、式Ｔｍ−１０の構造を有するカルシミメティクスは、１−（ベンゾ［ｄ］チアゾル−２−イル）−１−（２，４−ジメチルフェニル）エタノール又は１−（４−アミノ−２，５−ジメトキシフェニル）−１−（ベンゾ［ｄ］チアゾル−２−イル）−２，２，２−トリフルオロエタノールである。
【０１９４】
ある特定の実施形態では、式Ｔｍ−１１の構造を有するカルシミメティクスは、２，６−ジクロロ−４−（１−（（（１−メチル−２−（チオフェン−２−イル）ピペリジン−３−イル）メチル）アミノ）エチル）アニリンである。
【０１９５】
ある特定の実施形態では、式Ｔｍ−１２の構造を有するカルシミメティクスは、１−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（２−（２，２−ジメチル−４−（ｐ−トリル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）エタンアミンである。
【０１９６】
ある特定の実施形態では、式Ｔｍ−１〜Ｔｍ−１２のいずれか１つの構造を有するカルシミメティクスは、前述のカルシミメティクス化合物の種のうちの１つ以上を含まない。
【０１９７】
３．２．２  ＣａＳＲ  ７ＴＭドメインとの相互作用
ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、ＣａＳＲの７ＴＭドメインの活性部位と相互作用する化合物を含む。例えば、活性化合物、例えば、７ＴＭドメインに結合するアゴニスト又はポジティブアロステリックモジュレータなどは、化合物からＧｌｕ８３７への塩橋又は水素結合を形成しうる。
【０１９８】
代替的に、又は加えて、活性化合物は、環スタッキング相互作用を被りうる。例えば、限定はしないが、環スタッキング相互作用は、Ｐｈｅ８２１、Ｐｈｅ７７５、Ｔｒｐ８１８、Ｐｈｅ６８４、及びＰｈｅ６８８のうちの１つ以上に対するものでありうる。
【０１９９】
ある特定の実施形態では、１つ以上の活性化合物は、例えば、活性部位における１つ以上の残基と疎水性相互作用を形成することによって、活性部位を満たすように相互作用しうる。例えば、活性化合物は、上述のヘリックス３、４、５、６、及び／又は７上の残基と相互作用することによって、活性部位を満たすことができる。ある特定の実施形態では、１つ以上の残基には、ヘリックス３上のＰｈｅ６８４、Ｇｌｙ６８５、及び／又はＰｈｅ６８８、ヘリックス４上のＧｌｎ７３５、ヘリックス５上のＭｅｔ７７１、Ａｌａ７７２、Ｐｈｅ７７５、Ｌｅｕ７７６、及び／又はＴｈｒ７８０、ヘリックス６上のＰｈｅ８１４、Ｖａｌ８１７、Ｔｒｐ８１８、及び／又はＰｈｅ８２１、及び／又は、ヘリックス７上のＧｌｕ８３７、Ａｌａ８４０、及び／又はＩｌｅ８４１が含まれる。化合物は、ヘリックスの任意の組合せにおける任意の数の残基と相互作用を形成することができる。例えば、ある特定の実施形態では、化合物は、ヘリックス３、４、５、６、又は７上の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれ以上の残基と疎水性相互作用を形成する。ある特定の実施形態では、化合物は、ヘリックス５、６、及び７上の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれ以上の残基、並びに、ヘリックス３、４、及び５上の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれ以上の残基と疎水性相互作用を形成する。
【０２００】
４．カルシウム感知受容体調節化合物を特定する方法
本開示はさらに、カルシウム感知受容体の活性及び／又は発現を調節する化合物を特定する方法を提供する。例えば、限定するものではないが、調節剤は、アゴニスト又はアンタゴニストでありうる。本願で開示される主題は、上記開示されるカルシウム感知受容体の活性及び／又は発現を調節する化合物を特定するためのインシリコ及びインビトロでの方法を提供する。
【０２０１】
４．１  インシリコ法
本願で開示される主題はさらに、例えば、ネコ、イヌ、又はヒトのカルシウム感知受容体など、カルシウム感知受容体と潜在的に相互作用することができる、及び／又はカルシウム感知受容体の活性及び／又は発現を調節することができる化合物をインシリコで特定する方法を提供する。
【０２０２】
ある特定の実施形態では、本方法は、カルシウム感知受容体の三次元構造（３Ｄ）を予測し、推定上のカルシウム感知受容体調節化合物（すなわち、試験化合物）を使用して、予測される３Ｄ構造をスクリーニングすることを含みうる。本方法は、推定上の化合物及び受容体のアミノ酸との相互作用の可能性を解析することによって、推定上の化合物が、受容体の結合部位と相互作用するかどうかを予測することをさらに含みうる。本方法は、化合物の３Ｄ構造が受容体の３Ｄ構造の結合部位内にフィットするかどうかを決定することによって、カルシウム感知受容体の生物学的活性を結合及び／又は調節することができる試験化合物を特定することをさらに含みうる。
【０２０３】
ある特定の実施形態では、本開示の方法に使用するカルシウム感知受容体は、２０１５年１０月１２日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ１５／５５１４９号に記載されるアミノ酸又はヌクレオチド配列、若しくはそれらの断片又は変異体を有しうる。
【０２０４】
本開示の方法を使用して試験することができる化合物（例えば、潜在的なカルシウム感知受容体調節剤）の非限定的な例としては、任意の小化学化合物、又は当技術分野で知られているペプチド、塩、及びアミノ酸などの任意の生物学的実体が挙げられうる。ある特定の実施形態では、試験化合物は小化学分子でありうる。
【０２０５】
ある特定の実施形態では、カルシウム感知受容体の構造モデルは、相同性モデリングのためのテンプレートとして密接に関連するＧＰＣＲの結晶構造を使用して構築されうる。ＣａＳＲのフライトラップドメインについては、ヒトカルシウム受容体フライトラップドメイン（ＶＦＴ）のＸ線結晶構造が、最近、解明されている。タンパク質データバンク（ＰＤＢ、ｗｗｗ．ｒｃｓｂ．ｏｒｇ）で利用可能な構造は次のとおりである：
ＰＤＢ  ＩＤ：５ＦＢＨ−Ｇｄ＋３が結合した、ヒトカルシウム感知受容体の細胞外ドメインの結晶構造；
ＰＤＢ  ＩＤ：５ＦＢＫ−ヒトカルシウム感知受容体の細胞外ドメインの結晶構造；
ＰＤＢ  ＩＤ：５Ｋ５Ｔ−ヒトカルシウム感知受容体細胞外ドメインの不活性型の結晶構造；
ＰＤＢ  ＩＤ：５Ｋ５Ｓ−ヒトカルシウム感知受容体細胞外ドメインの活性型の結晶構造
（それらの全体をここに参照することによってその開示が本明細書に取り込まれる、Geng, et al., Structural mechanism of ligand activation in human calcium-sensing receptor, Elife. 2016 Jul 19;5. pii: e13662; Zhang, et al., Structural basis for regulation of human calcium-sensing receptor by magnesium ions and an unexpected tryptophan derivative co-agonist, Sci Adv. 2016 May; 2(5): e1600241を参照）。
【０２０６】
ある特定の実施形態では、ＶＦＴ構造モデルは、ヒトＶＦＴに対する配列相同性に基づいて、ネコ及びイヌなど、対象とする他の種について生成することができる。ある特定の実施形態では、膜貫通ドメインのモデル構造は、その構造が結晶学的に決定されている、ＧＰＣＲの７膜貫通ドメイン（７ＴＭ）に対する配列相同性に基づいて生成されうる。
【０２０７】
例えば、限定するものではないが、膜貫通ドメインの構造モデルは、Ｃ群のＧＰＣＲの結晶構造を使用して生成することができる。ある特定の実施形態では、カルシウム感知受容体のフライトラップドメイン又は膜貫通ドメインのいずれかの構造モデルは、ＧＰＣＲの既知の結晶構造の組合せをベースとすることができる。（その各々の全体がここに参照することによって本明細書に取り込まれる、Binet et al., J. Biol. Chem, 282(16): 12154-63 (2007); Wu et. al., Science, 344(6179):58-64 (2014)；及びDore et al., Nature 511:557-562 (2014)を参照）。例えば、限定するものではないが、ネコ又はイヌの７膜貫通ドメインの構造モデルは、タンパク質データベース（ＰＤＢ）識別番号４ＯＲ２及び／又は４ＯＯ９を有する結晶構造に基づいて生成されうる。図３〜２０は、本開示のインシリコ方法に使用することができるカルシウム感知受容体の構造モデルを示している。当技術分野で知られている任意の適切なモデリングソフトウェアを使用することができる。ある特定の実施形態では、モデラー・ソフトウェアパッケージ（ダッソー・システムズ社のＢＩＯＶＩＡ（アクセルリス））を使用して、三次元タンパク質構造を生成することができる。
【０２０８】
ある特定の実施形態では、カルシウム感知受容体に結合する化合物を特定するインシリコ方法は、試験化合物が本明細書に記載されるカルシウム感知受容体相互作用ドメインの１つ以上のアミノ酸と相互作用するかどうかを決定することを含む。
【０２０９】
本開示のインシリコ方法によって特定される化合物は、本明細書に開示されるインビトロ方法を使用してさらにテストされうる。
【０２１０】
４．２  カルシウム感知受容体結合部位
本願は、例えば、ネコ、イヌ、又はヒトのカルシウム感知受容体など、カルシウム感知受容体の活性を調節する化合物をスクリーニングする方法を提供し、該化合物は、カルシウム感知受容体の１つ以上のアミノ酸と相互作用する。ある特定の実施形態では、カルシウム感知受容体の結合部位は、例えば、受容体の７膜貫通（７ＴＭ）ドメイン又はヴィーナス・フライトラップ（ＶＦＴ）ドメインなどの膜貫通ドメイン内にアミノ酸を含み、かつ、本明細書に記載されるインシリコ・モデリングを使用して、受容体の相互作用マップを生成することによって特定することができる。１つの非限定的な例では、相互作用マップ内のアミノ酸の存在は、残基がリガンド結合環境の近くにあり、かつリガンドと相互作用することを意味する。
【０２１１】
ある特定の実施形態では、化合物と本明細書に記載されるカルシウム感知受容体の１つ以上のアミノ酸との相互作用は、水素結合、共有結合、非共有結合、塩橋、物理的相互作用、及びそれらの組合せのうちの１つ以上を含みうる。相互作用はまた、当技術分野で知られているリガンド受容体相互作用の任意の相互作用特徴でもありうる。このような相互作用は、例えば、部位特異的変異導入、Ｘ線結晶構造解析、ｘ線又は他の分光法、核磁気共鳴（ＮＭＲ）、架橋評価法（cross-linking assessment）、質量分析又は電気泳動、低温顕微鏡法、既知のアゴニストに基づいた置換分析（displacement assays）、構造決定、及びそれらの組合せによって決定することができる。ある特定の実施形態では、相互作用は、例えば、分子ドッキング、分子モデリング、分子シミュレーション、又は当業者に知られている他の手段を使用して、例えば、化合物を本明細書に記載されるネコ又はイヌカルシウム感知受容体結合ポケット内にドッキングするなど、理論的手段によって、インシリコで決定される。
【０２１２】
ある特定の実施形態では、相互作用は、塩橋相互作用である。
【０２１３】
ある特定の実施形態では、相互作用は、水素結合相互作用である。
【０２１４】
ある特定の実施形態では、相互作用は、疎水性相互作用である。
【０２１５】
ある特定の実施形態では、相互作用は、環スタッキング相互作用である。
【０２１６】
ある特定の実施形態では、カルシウム感知受容体の活性を調節する、本明細書に記載される方法に従って特定される化合物は、カルシウム感知受容体のヴィーナス・フライトラップ（ＶＦＴ）ドメインの１つ以上のアミノ酸と相互作用する。ある特定の実施形態では、化合物が相互作用するアミノ酸は、例えば、ネコカルシウム感知受容体を含むカルシウム感知受容体などのカルシウム感知受容体内のＡｓｎ６４、Ｐｈｅ６５、Ａｓｎ１０２、Ｔｈｒ１４５、Ｓｅｒ１４７、Ａｌａ１６８、Ｓｅｒ１６９、Ｓｅｒ１７０、Ａｓｐ１９０、Ｇｌｎ１９３、Ａｓｐ２１６、Ｔｙｒ２１８、Ｓｅｒ２７２、Ｇｌｕ２９７、Ａｌａ２９８、Ｔｒｐ２９９、Ａｌａ３００、Ｓｅｒ３０２、Ｌｅｕ３０４、Ｔｙｒ４１１、Ｔｈｒ４１２、及びＨｉｓ４１３の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２又はそれ以上、若しくは、イヌカルシウム感知受容体又はヒトカルシウム感知受容体の機能的に同等のアミノ酸を含む。
【０２１７】
ある特定の実施形態では、カルシウム感知受容体の活性を調節する本明細書に記載される方法に従って特定される化合物は、例えば、７膜貫通（７ＴＭ）ドメインなどのカルシウム感知受容体の膜貫通ドメイン内の１つ以上のアミノ酸と相互作用する。ある特定の実施形態では、化合物が相互作用するアミノ酸は、例えば、ネコカルシウム感知受容体を含むカルシウム感知受容体などのカルシウム感知受容体のヘリックス３上のＰｈｅ６８４、Ｇｌｙ６８５、及び／又はＰｈｅ６８８、ヘリックス４上のＧｌｎ７３５、ヘリックス５上のＭｅｔ７７１、Ａｌａ７７２、Ｐｈｅ７７５、Ｌｅｕ７７６、及び／又はＴｈｒ７８０、ヘリックス６上のＰｈｅ８１４、Ｖａｌ８１７、Ｔｒｐ８１８、及び／又はＰｈｅ８２１、及び／又は、ヘリックス７上のＧｌｕ８３７、Ａｌａ８４０、及び／又はＩｌｅ８４１のうちの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６又はそれ以上、若しくは、イヌカルシウム感知受容体又はヒトカルシウム感知受容体の機能的に同等のアミノ酸を含む。
【０２１８】
ある特定の実施形態では、ネコカルシウム感知受容体の活性を調節する組成物を特定する方法は、（ａ）試験薬を、配列番号１のアミノ酸配列を含む、例えば、ネコカルシウム感知受容体などのカルシウム感知受容体と接触させること、（ｂ）試験薬と、ＶＦＴドメイン内のＡｓｎ６４、Ｐｈｅ６５、Ａｓｎ１０２、Ｔｈｒ１４５、Ｓｅｒ１４７、Ａｌａ１６８、Ｓｅｒ１６９、Ｓｅｒ１７０、Ａｓｐ１９０、Ｇｌｎ１９３、Ａｓｐ２１６、Ｔｙｒ２１８、Ｓｅｒ２７２、Ｇｌｕ２９７、Ａｌａ２９８、Ｔｒｐ２９９、Ａｌａ３００、Ｓｅｒ３０２、Ｌｅｕ３０４、Ｔｙｒ４１１、Ｔｈｒ４１２、及びＨｉｓ４１３、及び／又はヘリックス３上のＰｈｅ６８４、Ｇｌｙ６８５、及び／又はＰｈｅ６８８、ヘリックス４上のＧｌｎ７３５、ヘリックス５上のＭｅｔ７７１、Ａｌａ７７２、Ｐｈｅ７７５、Ｌｅｕ７７６、及び／又はＴｈｒ７８０、ヘリックス６上のＰｈｅ８１４、Ｖａｌ８１７、Ｔｒｐ８１８、及び／又はＰｈｅ８２１、及び／又は、ヘリックス７上のＧｌｕ８３７、Ａｌａ８４０、及び／又はＩｌｅ８４１、並びにそれらの組合せからなる群より選択される、カルシウム感知受容体の相互作用部位の１つ以上のアミノ酸との相互作用を決定すること、及び（ｃ）１つ以上のアミノ酸と相互作用する試験薬を、組成物として選択することを含む。
【０２１９】
ある特定の実施形態では、本方法は、ステップ（ａ）の後に、カルシウム感知受容体活性を決定すること、及び、カルシウム感知受容体活性を高める試験薬を組成物として選択することをさらに含む。
【０２２０】
ある特定の実施形態では、本方法は、カルシウム感知受容体を、例えばアゴニストなどのリガンドと接触させること、及びカルシウム感知受容体を活性化するアゴニストの能力を増加又は増強する試験薬を組成物として選択することをさらに含む。
【０２２１】
４．３  インビトロ法
本願で開示される主題はさらに、カルシウム感知受容体の活性及び／又は発現を調節することができる化合物をインビトロで特定する方法を提供する。
【０２２２】
本願で開示される方法に使用するカルシウム感知受容体は、単離された又は組換えのカルシウム感知受容体、若しくは、本明細書で開示されるカルシウム感知受容体を発現する細胞を含みうる。ある特定の実施形態では、本開示の方法に使用するカルシウム感知受容体は、２０１５年１０月１２日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ１５／５５１４９号に記載されるアミノ酸又はヌクレオチド配列、若しくはそれらの断片又は変異体を有しうる。
【０２２３】
ある特定の実施形態では、カルシウム感知受容体の活性及び／又は発現を調節する化合物を特定する方法は、試験化合物の不存在下及び／又は存在下でカルシウム感知受容体の生物学的活性を測定することを含む。ある特定の実施形態では、本方法は、さまざまな濃度の試験化合物の存在下でカルシウム感知受容体の生物学的活性を測定することを含みうる。本方法は、試験化合物の不存在下でのカルシウム感知受容体の活性及び／又は発現と比較した、カルシウム感知受容体の活性及び／又は発現の調節を結果的に生じる試験化合物を特定することをさらに含みうる。
【０２２４】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される方法に従って特定される化合物は、化合物が存在しない場合のカルシウム感知受容体の生物学的活性と比較して、カルシウム感知受容体の生物学的活性を、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、又はそれ以上高める。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される方法に従って特定される化合物は、化合物が存在しない場合のカルシウム感知受容体の生物学的活性と比較して、カルシウム感知受容体の生物学的活性を少なくとも約３０％、高める。
【０２２５】
ある特定の実施形態では、本方法は、２つ以上、３つ以上又は４つ以上の試験化合物を組み合わせて解析することをさらに含みうる。ある特定の実施形態では、２つ以上、３つ以上又は４つ以上の試験化合物は、例えば、アミノ酸及び小化学化合物など、異なる分類の化合物に由来するものでありうる。例えば、限定するものではないが、本方法は、１つ以上のアミノ酸試験化合物の存在下でのカルシウム感知受容体の生物学的活性及び／又は発現における１つ以上の小さい化学試験化合物の効果を解析することを含みうる。ある特定の実施形態では、カルシウム感知受容体の活性及び／又は発現における化合物の効果を特定する方法は、１つ以上のヌクレオチド又はヌクレオチド誘導体試験化合物の存在下でのカルシウム感知受容体の生物学的活性及び／又は発現における試験化合物の効果を解析することを含む。
【０２２６】
ある特定の実施形態では、カルシウム感知受容体の活性及び／又は発現を調節する化合物を特定する方法は、化合物が、例えば、アゴニスト又はアンタゴニストとして、受容体を直接調節するかどうかを決定することを含む。ある特定の実施形態では、本方法は、化合物が、例えば受容体活性の活性化又は抑制における他の化合物の効果を増強又は低減することによって、受容体の活性を間接的に（例えば、アロステリックモジュレータとして）調節するかどうかを決定することを含む。
【０２２７】
ある特定の実施形態では、カルシウム感知受容体の活性及び／又は発現を調節する化合物を特定する方法は、細胞株においてカルシウム感知受容体を発現すること、及び試験化合物の存在下及び／又は不存在下で受容体の生物学的活性を測定することを含む。本方法は、試験化合物の不存在下での受容体の活性と比較して、試験化合物の存在下での受容体の活性化における差異が存在するかどうかを決定することによって、受容体の活性を調節する試験化合物を特定することをさらに含みうる。ある特定の実施形態では、推定上のカルシウム感知受容体調節剤の選択性は、他のＧＰＣＲｓ又は、例えば、旨味、ＧＰＲ１２０、Ｔ１Ｒの受容体等の味覚受容体におけるその効果を比較することによって評価することができる。
【０２２８】
本開示の方法における受容体の活性化は、標識化合物及び／又は薬剤の使用を通して検出することができる。ある特定の実施形態では、カルシウム感知受容体活性は、限定はしないが、ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ、ＩＰ３、ＤＡＧ又はカルシウムなどの二次伝達物質の検出によって決定することができる。ある特定の実施形態では、カルシウム感知受容体活性は、細胞内カルシウムレベルの検出によって決定することができる。モニタリングは、カルシウム感受性蛍光色素など、発光又は蛍光検出によるものでありうる。ある特定の実施形態では、細胞内カルシウムレベルは、細胞染料、例えば、カルシウム４などの蛍光カルシウムインジケーターを使用して決定することができる。ある特定の実施形態では、細胞内カルシウムレベルは、例えばカルモジュリンなどのカルシウム結合タンパク質へのカルシウム結合レベルを測定することによって決定することができる。代替的に及び／又は加えて、カルシウム感知受容体の活性は、カルシウム感知受容体の１つ以上の下流タンパク質標的のリン酸化、転写レベル、及び／又はタンパク質レベルの検出によって決定することができる。
【０２２９】
本開示の方法に用いられる細胞は、カルシウム感知受容体を発現することができる任意の細胞型を含みうる。本開示の方法に用いることができる細胞の非限定的な例としては、ＨｅＬａ細胞、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細胞）、アフリカミドリザル腎細胞（ＣＯＳ細胞）、アフリカツメガエル卵細胞、ＨＥＫ−２９３細胞、及びマウス３Ｔ３線維芽細胞が挙げられる。ある特定の実施形態では、本方法は、ＣＨＯ−Ｋ１細胞においてカルシウム感知受容体を発現することを含みうる。ある特定の実施形態では、本方法は、ＨＥＫ−２９３細胞においてカルシウム感知受容体を発現することを含みうる。ある特定の実施形態では、本方法は、ＣＯＳ細胞においてカルシウム感知受容体を発現することを含みうる。ある特定の実施形態では、細胞は、カルシウム感知受容体を構成的に発現する。別の実施形態では、細胞によるカルシウム感知受容体の発現は誘導性である。
【０２３０】
ある特定の実施形態では、細胞はカルシウム結合発光タンパク質を発現し、該発光タンパク質は、カルシウムに結合すると発光する。ある特定の実施形態では、カルシウム結合発光タンパク質は、タンパク質クライチンを含む。ある特定の実施形態では、クライチンは組換えクライチンである。ある特定の実施形態では、クライチンは、例えば、発光ヒドロクラゲ（Clytia gregarium）から単離されるクライチンなど、単離されたクライチンを含む。ある特定の実施形態では、カルシウム結合発光タンパク質は、タンパク質イクオリン、例えば、組換えイクオリン又は、オワンクラゲ（Aequorea victoria）から単離されるイクオリンなどの単離されたイクオリンを含む。ある特定の実施形態では、カルシウム結合発光タンパク質は、タンパク質オベリン、例えば、組換えオベリン、又はオベリアクラゲ（Obelia longissima）から単離されるオベリンなどの単離される多オベリンを含む。
【０２３１】
ある特定の実施形態では、細胞におけるカルシウム感知受容体の発現は、カルシウム感知受容体をコードする核酸を細胞内に導入することによって行うことができる。例えば、限定するものではないが、２０１５年１０月１２日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ１５／５５１４９号に記載されるヌクレオチド配列を有する核酸又はそれらの断片を、細胞内に導入することができる。ある特定の実施形態では、細胞内への核酸の導入は、限定はしないが、トランスフェクション、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、ウイルス感染、又は核酸配列を含むバクテリオファージベクスター、細胞融合、染色体媒介性の遺伝子導入、微小細胞媒介性の遺伝子導入、スフェロプラスト融合等を含む、当技術分野で知られている任意の方法によって行われうる。細胞に外来遺伝子を導入するための多くの手法が当技術分野で知られており（例えば、それらの全体をここに参照することによってその開示が本明細書に取り込まれる、Loeffler and Behr, Meth. Enzymol. 217:599-618 (1993); Cohen et al., Meth. Enzymol. 217:618-644 (1993); Cline, Pharmac. Ther. 29:69-92 (1985)を参照）、本開示の主題に従って用いることができる。ある特定の実施形態では、該手法は、核酸が細胞によって発現可能であり、かつ、その子孫によって遺伝可能かつ発現可能になるように、細胞への核酸の安定した導入をもたらす。ある特定の実施形態では、該手法は、核酸が細胞によって発現可能になるように、細胞への核酸の一時的な導入をもたらすことができ、遺伝率及び発現度は、細胞の子孫のその後の世代で低下する。
【０２３２】
ある特定の実施形態では、本方法は、カルシウム感知受容体に結合する化合物を特定することを含みうる。本方法は、カルシウム感知受容体を試験化合物と接触させること、及び化合物とカルシウム感知受容体との間の結合を測定することを含みうる。例えば、限定するものではないが、本方法は、無細胞系に単離又は精製されたカルシウム感知受容体を提供すること、及び、無細胞系において受容体を試験化合物と接触させて、試験化合物がカルシウム感知受容体に結合するかどうかを決定することを含みうる。ある特定の実施形態では、本方法は、細胞の表面で発現したカルシウム感知受容体を試験化合物と接触させること、及びカルシウム感知受容体に対する試験化合物の結合を測定することを含みうる。結合は、例えば標識化した試験化合物を使用することによって、直接的に測定してもよく、あるいは、間接的に測定してもよい。ある特定の実施形態では、検出は、例えば、細胞内カルシウムレベルの増加など、カルシウム感知受容体に対する化合物の結合によって生じる細胞における生理学的事象を検出することを含む。例えば、限定するものではないが、検出は、カルシウム感受性蛍光色素などの蛍光検出、発光の検出、又は当技術分野で知られている任意の他の検出方法によって行われうる。
【０２３３】
ある特定の非限定的な実施形態では、インビトロアッセイは、細胞に固有のカルシウム感知受容体を発現する細胞を含む。天然のカルシウム感知受容体を発現するこのような細胞の例としては、例えば、限定はしないが、イヌ（canine）及び／又はネコ（feline）の味覚細胞（例えば、一次味覚受容体細胞）が挙げられる。ある特定の実施形態では、カルシウム感知受容体を発現するイヌ及び／又はネコの味覚細胞は、イヌ及び／又はネコから単離され、インビトロで培養される。ある特定の実施形態では、味覚受容体細胞は、例えば、イヌ及び／又はネコから単離される細胞が、培養で増殖させることができるように、不死化させることができる。
【０２３４】
ある特定の実施形態では、細胞におけるカルシウム感知受容体の発現は、カルシウム感知受容体遺伝子を細胞のゲノム内に組み込む、又は細胞に固有のカルシウム感知受容体遺伝子を編集又は改変するために、遺伝子編集、例えばＣＲＩＳＰＲ遺伝子編集システムを介して、誘発されうる。
【０２３５】
ある特定の実施形態では、カルシウム感知受容体に結合する化合物を特定するインビトロの方法は、試験化合物が、本明細書に記載されるカルシウム感知受容体相互作用ドメインの１つ以上のアミノ酸と相互作用するかどうかを決定することを含む。
【０２３６】
ある特定の実施形態では、カルシウム感知受容体の調節剤として特定される化合物は、それらの調節活性を確認または定量するために、限定はしないが、インビボアッセイを含む他の解析法で試験されうる。
【０２３７】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される方法は、カルシウム感知受容体調節剤が、例えばカルシウム感知受容体アゴニストなどのカルシウム感知味覚増強化合物であるかどうかを決定することを含みうる。
【０２３８】
ある特定の実施形態では、カルシウム感知受容体調節剤を特定する方法は、カルシウム感知受容体アゴニストに対する試験化合物の効果を比較することを含みうる。例えば、カルシウム感知受容体アゴニストと接触した場合の受容体の活性と比較して、受容体の活性を高める試験化合物は、カルシウム感知受容体調節化合物として（例えば、アゴニストとして）選択されうる。
【０２３９】
ある特定の実施形態では、カルシウム感知受容体調節剤を特定する方法は、受容体がアゴニストと接触した場合に試験化合物が受容体の活性を調節するかどうかを決定すること、あるいは、試験化合物がポジティブアロステリックモジュレータ（ＰＡＭ）の活性を調節することができるかどうかを決定することを含みうる。受容体における上記アゴニスト又はＰＡＭの効果を増加又は低下させる試験化合物は、カルシウム感知受容体調節化合物として（例えば、アロステリックモジュレータとして）選択されうる。
【０２４０】
５．フレーバー組成物
ある特定の実施形態では、本開示のフレーバー組成物は、ネコ用食品などのペットフード製品の嗜好性を高めるために用いられうる。フレーバー組成物は、化合物の組合せを含んでよく、さまざまな送達系でペットフード製品に加えることができる。
【０２４１】
ある特定の実施形態では、本開示は、ａ）少なくとも１つのペットフード製品、又はそれらの前駆体を提供すること、及びｂ）ペットフード製品、又はそれらの前駆体を、例えば、１つ以上の化合物を含む、少なくともコク味調節量の少なくとも１つのフレーバー組成物又はそれらの食用に許容される塩と合わせ、それによって、増強されたペットフード製品を形成することを含む、コク味（例えば、カルシウム感知受容体の活性）及び／又はペットフード製品の嗜好性を調節する方法に関する。
【０２４２】
ある特定の実施形態では、本開示のフレーバー組成物は、例えば、ウェットペットフード製品、ドライペットフード製品、湿潤ペットフード製品、ペット飲料製品、及び／又はスナックペットフード製品を含むペットフード製品など、ペットフード製品のカルシウム感知受容体の活性及び／又は嗜好性を増強することができる。
【０２４３】
ある特定の実施形態では、本開示のフレーバー組成物のうちの１つ以上を、ペットフード製品の味覚又は味覚プロファイルを改変、増強、又は他の方法で変化させるのに有効な量で、ペットフード製品に加えることができる。改変は、例えば、ネコ及び／又はイヌなどの動物によって決定される、若しくは、配合試験の場合には、当技術分野で知られている手順によって、例えば、ネコ及び／又はイヌなどの動物の味覚テスターパネルによって決定される、例えば、ペットフード製品の嗜好性の増加又は増強を含みうる。
【０２４４】
本開示のある特定の実施形態では、例えばコク味などの所望の味覚を有するペットフード製品を製造するために、例えば、化合物を含む、十分な量の少なくとも１つの本明細書に記載されるフレーバー組成物を含むペットフード製品を製造することができる。
【０２４５】
本開示のある特定の実施形態では、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、又はそれ以上の化合物を含む、十分な量のフレーバー組成物を含むペットフード製品を製造することができる。
【０２４６】
ある特定の実施形態では、例えば、ネコ及び／又はイヌなどの動物によって決定して、若しくは、配合試験の場合には、当技術分野で知られている手順によって、動物味覚テスターのパネルによって決定して、フレーバー組成物なしに調製されたペットフード製品と比較して、ペットフード製品が、増加した嗜好性を有するように、カルシウム感知受容体調節量の１つ以上の本開示のフレーバー組成物をペットフード製品に加えることができる。
【０２４７】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、ペットフード製品の嗜好性を高める、増強する及び／又は改変するのに有効な量でペットフード製品に加えられる。
【０２４８】
ペットフード製品の嗜好性を調節及び／又は改善するためにペットフード製品と混合されるフレーバー組成物の濃度は、例えば、ペットフード製品の特定の種類、どの味覚調節化合物がペットフード製品中にすでに存在するか、及びそれらの濃度、並びにこのような味覚調節化合物における特定のフレーバー組成物のエンハンサー効果など、変数に応じて変動しうる。
【０２４９】
広範囲の濃度のフレーバー組成物が、このような嗜好性の改変をもたらすために用いられうる。本出願のある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、ペットフード製品と混ぜ合わされ、ここで、フレーバー組成物は、約０．００１ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍの量で存在する。例えば、限定するものではないが、フレーバー組成物は、約０．００１ｐｐｍ〜約７５０ｐｐｍ、約０．００１ｐｐｍ〜約５００ｐｐｍ、約０．００１ｐｐｍ〜約２５０ｐｐｍ、約０．００１ｐｐｍ〜約１５０ｐｐｍ、約０．００１ｐｐｍ〜約１００ｐｐｍ、約０．００１ｐｐｍ〜約７５ｐｐｍ、約０．００１ｐｐｍ〜約５０ｐｐｍ、約０．００１ｐｐｍ〜約２５ｐｐｍ、約０．００１ｐｐｍ〜約１５ｐｐｍ、約０．００１ｐｐｍ〜約１０ｐｐｍ、約０．００１ｐｐｍ〜約５ｐｐｍ、約０．００１ｐｐｍ〜約４ｐｐｍ、約０．００１ｐｐｍ〜約３ｐｐｍ、約０．００１ｐｐｍ〜約２ｐｐｍ、約０．００１ｐｐｍ〜約１ｐｐｍ、約０．０１ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約０．１ｐｐｍ〜１，０００ｐｐｍ、約１ｐｐｍ〜１，０００ｐｐｍ、約２ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約３ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約４ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約５ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約１５ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約２５ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約５０ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約７５ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約１００ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約１５０ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約２５０ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約２５０ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約５００ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ又は約７５０ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、及びそれらの間の値の量で存在しうる。
【０２５０】
本出願のある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、ペットフード製品と混ぜ合わされ、ここで、フレーバー組成物は、約０．００１ｐｐｍ〜約５００ｐｐｍ、又は約０．０１ｐｐｍ〜約５００ｐｐｍ、約０．１ｐｐｍ〜約５００ｐｐｍ、又は約１ｐｐｍ〜約５００ｐｐｍ、及びそれらの間の値の量で存在する。
【０２５１】
本出願のある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、ペットフード製品と混ぜ合わされ、ここで、フレーバー組成物は、約０．０１ｐｐｍ〜約１００ｐｐｍ、又は約０．１ｐｐｍ〜約１００ｐｐｍ、又は約１ｐｐｍ〜約１００ｐｐｍ、及びそれらの間の値の量で存在する。
【０２５２】
ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、約０．００１ｐｐｍ超、約０．０１ｐｐｍ超、約０．１ｐｐｍ超、約１ｐｐｍ超、約２ｐｐｍ超、約３ｐｐｍ超、約４ｐｐｍ超、約５ｐｐｍ超、約１０ｐｐｍ超、約２５ｐｐｍ超、約５０ｐｐｍ超、約７５ｐｐｍ超、約１００ｐｐｍ超、約２５０ｐｐｍ超、約５００ｐｐｍ超、約７５０ｐｐｍ超、又は約１０００ｐｐｍ超、及びそれらの間の値の量でペットフード製品中に存在する。
【０２５３】
ある特定の実施形態では、本開示の化合物は、カルシウム感知受容体を調節、活性化、及び／又は増強するのに十分な量で食品中に存在する。例えば、限定するものではないが、化合物は、約１ｐＭ〜約１Ｍ、約１ｎＭ〜約１Ｍ、約１μＭ〜約１Ｍ、約１ｍＭ〜約１Ｍ、約１０ｍＭ〜約１Ｍ、約１００ｍＭ〜約１Ｍ、約２５０ｍＭ〜約１Ｍ、約５００ｍＭ〜約１Ｍ、約７５０ｍＭ〜約１Ｍ、約０．００１μＭ〜約１Ｍ、約０．００１μＭ〜約７５０ｍＭ、約０．００１μＭ〜約５００ｍＭ、約０．００１μＭ〜約２５０ｍＭ、約０．００１μＭ〜約１００ｍＭ、約０．００１μＭ〜約５０ｍＭ、約０．００１μＭ〜約２５ｍＭ、約０．００１μＭ〜約１０ｍＭ、約０．００１μＭ〜約１ｍＭ、約０．００１μＭ〜約１００μＭ又は約０．００１μＭ〜約１０μＭ、及びそれらの間の値の量で食品中に存在しうる。
【０２５４】
ある特定の実施形態では、本開示の化合物は、カルシウム感知受容体を調節、活性化、及び／又は増強するのに十分な量で食品中に存在する。例えば、限定するものではないが、化合物は、約１ｐＭ〜約１０Ｍ、約１ｐＭ〜約１Ｍ、約１ｎＭ〜約１Ｍ、約１μＭ〜約１Ｍ、約１ｍＭ〜約１Ｍ、約１０ｍＭ〜約１Ｍ、約１００ｍＭ〜約１Ｍ、約２５０ｍＭ〜約１Ｍ、約５００ｍＭ〜約１Ｍ、約７５０ｍＭ〜約１Ｍ、約１μＭ〜約１Ｍ、約１μＭ〜約７５０ｍＭ、約１μＭ〜約５００ｍＭ、約１μＭ〜約２５０ｍＭ、約１μＭ〜約１００ｍＭ、約１μＭ〜約５０ｍＭ、約１μＭ〜約２５ｍＭ、約１μＭ〜約１０ｍＭ、約１μＭ〜約１ｍＭ、約１μＭ〜約１００μＭ又は約１μＭ〜約１０μＭ、及びそれらの間の値の量で食品中に存在しうる。
【０２５５】
本出願のある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、ペットフード製品と混ぜ合わされ、ここで、フレーバー組成物は、約１０ｐＭ〜約０．５Ｍ、又は約１ｐＭ〜約０．５Ｍ、又は約０．１ｐＭ〜約０．５Ｍ、及びそれらの間の値の量で存在する。
【０２５６】
本出願のある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、ペットフード製品と混ぜ合わされ、ここで、フレーバー組成物は、約１０ｐＭ〜約０．１Ｍ、又は約１ｐＭ〜約０．１Ｍ、又は約０．１ｐＭ〜約０．１Ｍ、及びそれらの間の値の量で存在する。
【０２５７】
本出願のある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、食品と混ぜ合わされ、ここで、フレーバー組成物は、食品に約０．０００１〜約１０％質量／質量（ｗ／ｗ）の量で存在する。例えば、限定するものではないが、フレーバー組成物は、約０．０００１％〜約１０％、約０．０００１％〜約１％、約０．０００１％〜約０．１％、約０．０００１〜約０．０１％、約０．０００１％〜約０．００１％、約０．００１％〜約１０％、約０．００１％〜約１％、約０．０１％〜約１％又は約０．１％〜約１％、及びそれらの間の値の量で存在しうる。
【０２５８】
本出願のある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、食品と混ぜ合わされ、ここで、フレーバー組成物は、約０．０００１％〜約５％、又は約０．００１％〜約５％、約０．０１％〜約５％ｗ／ｗ、又は約０．１％〜約５％ｗ／ｗ、及びそれらの間の値の量で存在する。
【０２５９】
本出願のある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、食品と混ぜ合わされ、ここで、フレーバー組成物は、約０．０００１％〜約１％、又は約０．００１％〜約１％、約０．０１％〜約１％ｗ／ｗ、又は約０．１％〜約１％ｗ／ｗ、及びそれらの間の値の量で存在する。
【０２６０】
本出願のある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、食品と混ぜ合わされ、ここで、フレーバー組成物は、約０．００１％〜約１０％ｗ／ｗの量で存在する。
【０２６１】
ある特定の実施形態では、本出願の化合物は、さまざまな比率でともにブレンドされ、あるいは、例えば、ヌクレオチド、及び／又はフラノン、及び／又はアミノ酸、及び／又は旨味受容体活性化膜貫通化合物、及び／又はヌクレオチド誘導体、及び／又は脂肪酸受容体（ＧＰＲ１２０）活性化化合物などの他の化合物とともにブレンドされて、さまざまなフレーバー組成物を形成する。ヌクレオチド、ヌクレオチド誘導体、フラノン、アミノ酸、脂肪酸受容体（ＧＰＲ１２０）活性化化合物、及び旨味受容体活性化膜貫通化合物の非限定的な例は、その全体がここに参照することによって本明細書に取り込まれる、２０１３年１０月３１日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７２７８８号、２０１３年１０月３１日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７２７８９号、２０１３年１０月３１日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７２７９０号、２０１３年１０月３１日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７２７９４号、２０１５年１２月１０日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ１５／６５０４６号、２０１５年１２月１０日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ１５／６５０３６号、及び２０１５年１２月１０日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ１５／６５１０６号に開示されている。
【０２６２】
５．１  アミノ酸
本開示のある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、本明細書、並びに、その各々の全体がここに参照することにより本明細書に組み込まれる、２０１３年１０月３１日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７２７８８号、２０１３年１０月３１日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７２７８９号、２０１３年１０月３１日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７２７９０号、及び２０１３年１０月３１日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７２７９４号に記載される、少なくとも１つの化合物及び少なくとも１つのアミノ酸を含む。
【０２６３】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、Ｌ−グルタミン酸（又はグルタミン酸ナトリウム（ＭＳＧ））、Ｌ−アスパラギン酸、Ｌ−アルギニン、Ｌ−リシン、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−トリプトファン及びＳｅ−（メチル）セレノシステインからなる群より選択される、少なくとも１つのアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも１つのアミノ酸は、ＰＡＭとしてＣａＳＲを活性化する。ある特定の実施形態では、少なくとも１つのアミノ酸は、アゴニストとしてＣａＳＲを活性化する。
【０２６４】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、少なくとも、第１のアミノ酸、第２のアミノ酸、及び第３のアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、第１のアミノ酸は、Ｔ１Ｒ１／Ｔ１Ｒ３受容体（すなわち、旨味受容体）の活性を高めることができ、表２に記載される第１アミノ酸群から選択されるアミノ酸でありうる。ある特定の実施形態では、第２のアミノ酸は、本明細書に記載されるカルシウム感知受容体の活性を調節することができ、表２に記載される第２アミノ酸群から選択されるアミノ酸でありうる。ある特定の実施形態では、第３のアミノ酸は、１つ以上の他の味覚受容体と相互作用することができ、かつ、第１のアミノ酸又は第２のアミノ酸と同じ受容体には結合しない、若しくは、受容体の結合について第１のアミノ酸又は第２のアミノ酸とは競合しない。ある特定の実施形態では、第３のアミノ酸は、表２に記載される第３アミノ酸群から選択されるアミノ酸でありうる。ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、少なくとも１つの第１アミノ酸群、少なくとも１つの第２アミノ酸群、及び少なくとも１つの第３アミノ酸群を含む。
【０２６５】
【表２】
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【０２６６】
ある特定の実施形態では、少なくとも１つの第１、第２、及び／又は第３のアミノ酸は、ペットフード製品に約１ｍＭ〜約１Ｍ、又は約２５０ｍＭ〜約１Ｍ、又は約５ｍＭ〜約５００ｍＭ、又は約１０ｍＭ〜約１００ｍＭ、又は約１５ｍＭ〜約５０ｍＭ、又は約２０ｍＭ〜約４０ｍＭの量で存在しうる。ある特定の実施形態では、アミノ酸は、ペットフード製品に約１Ｍ未満、約２００ｍＭ未満、約１００ｍＭ未満、約５０ｍＭ未満、約２０ｍＭ未満、又は約１０ｍＭ未満の量で存在しうる。ある特定の実施形態では、第１のアミノ酸、及び／又は第２のアミノ酸、及び／又は第３のアミノ酸は、単独で又は組み合わせて、ペットフード製品に約２５ｍＭの量で存在しうる。
【０２６７】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、本明細書に記載される少なくとも１つのヌクレオチド及び／又はヌクレオチド誘導体をさらに含む。
【０２６８】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、本明細書に記載される少なくとも１つの脂肪酸受容体（ＧＰＲ１２０）活性化化合物をさらに含む。
【０２６９】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、本明細書に記載される少なくとも１つの旨味受容体活性化膜貫通化合物をさらに含む。
【０２７０】
５．２  旨味受容体活性化膜貫通化合物
本開示のある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、本出願に記載される少なくとも１つの化合物、及び、その全体がここに参照することにより本明細書に組み込まれる２０１５年１２月１０日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ１５／６５０３６号に記載される少なくとも１つの旨味受容体活性化膜貫通化合物を含む。
【０２７１】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、少なくとも１つの化合物及び少なくとも２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれ以上の旨味受容体活性化膜貫通化合物を含む。
【０２７２】
ある特定の実施形態では、本開示の旨味受容体活性化膜貫通化合物は、約１ｐＭ〜約１Ｍ、約１ｎＭ〜約１Ｍ、約１μＭ〜約１Ｍ、約１ｍＭ〜約１Ｍ、約１０ｍＭ〜約１Ｍ、約１００ｍＭ〜約１Ｍ、約２５０ｍＭ〜約１Ｍ、約５００ｍＭ〜約１Ｍ、約７５０ｍＭ〜約１Ｍ、約１μＭ〜約１Ｍ、約１μＭ〜約７５０ｍＭ、約１μＭ〜約５００ｍＭ、約１μＭ〜約２５０ｍＭ、約１μＭ〜約１００ｍＭ、約１μＭ〜約５０ｍＭ、約１μＭ〜約２５ｍＭ、約１μＭ〜約１０ｍＭ、約１μＭ〜約１ｍＭ、約１μＭ〜約１００μＭ又は約１μＭ〜約１０μＭ、及びそれらの間の値の量で食品中に存在しうる。
【０２７３】
ある特定の実施形態では、旨味受容体活性化膜貫通化合物は、塩、立体異性体、又は食物の形態の本明細書に記載される膜貫通化合物でありうる。
【０２７４】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、本明細書に記載される少なくとも１つのアミノ酸をさらに含む。
【０２７５】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、本明細書に記載される少なくとも１つのヌクレオチド及び／又はヌクレオチド誘導体をさらに含む。
【０２７６】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、本明細書に記載される少なくとも１つの脂肪酸受容体（ＧＰＲ１２０）活性化化合物をさらに含む。
【０２７７】
５．３  ヌクレオチド及びヌクレオチド誘導体
本開示のある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、本明細書に記載され、かつ、その全体がここに参照することによって本明細書に取り込まれる、２０１５年１２月１０日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ１５／６５０４６号、２０１３年１０月３１日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７２７８８号、２０１３年１０月３１日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７２７８９号、２０１３年１０月３１日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７２７９０号、及び２０１３年１０月３１日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７２７９４号に記載される、少なくとも１つの化合物及び少なくとも１つのヌクレオチド及び／又はヌクレオチド誘導体を含む。
【０２７８】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、少なくとも１つの化合物，並びに、本明細書に記載される少なくとも２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれ以上のヌクレオチド及び／又はヌクレオチド誘導体を含む。ヌクレオチドの非限定的な例としては、グアノシン一リン酸（ＧＭＰ）、イノシン一リン酸（ＩＭＰ）、アデノシン一リン酸（ＡＭＰ）、シチジン一リン酸（ＣＭＰ）、チミジン一リン酸（ＴＭＰ）、キサントシン一リン酸（ＸＭＰ）、ウリジン一リン酸（ＵＭＰ）及びそれらの組合せが挙げられる。
【０２７９】
ある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、食品中に存在するヌクレオチド及び／又はヌクレオチド誘導体を含んでよく、それらは、約１ｐＭ〜約１Ｍ、約１ｎＭ〜約１Ｍ、約１μＭ〜約１Ｍ、約１ｍＭ〜約１Ｍ、約１０ｍＭ〜約１Ｍ、約１００ｍＭ〜約１Ｍ、約２５０ｍＭ〜約１Ｍ、約５００ｍＭ〜約１Ｍ、約７５０ｍＭ〜約１Ｍ、約１μＭ〜約１Ｍ、約１μＭ〜約７５０ｍＭ、約１μＭ〜約５００ｍＭ、約１μＭ〜約２５０ｍＭ、約１μＭ〜約１００ｍＭ、約１μＭ〜約５０ｍＭ、約１μＭ〜約２５ｍＭ、約１μＭ〜約１０ｍＭ、約１μＭ〜約１ｍＭ、約１μＭ〜約１００μＭ又は約１μＭ〜約１０μＭ、及びそれらの間の値の量で存在しうる。
【０２８０】
ある特定の実施形態では、ヌクレオチド及び／又はヌクレオチド誘導体は、ペットフード製品に約１ｍＭ超又は約２．５ｍＭ超の量で存在しうる。ある特定の非限定的な実施形態では、ヌクレオチド及び／又はヌクレオチド誘導体は、ペットフード製品に約１００ｍＭ未満、約５０ｍＭ未満、約２０ｍＭ未満、又は約１０ｍＭ未満の量で存在しうる。ある特定の非限定的な実施形態では、ヌクレオチド及び／又はヌクレオチド誘導体は、ペットフード製品に約５ｍＭの量で存在する。
【０２８１】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、本明細書に記載される少なくとも１つのアミノ酸をさらに含む。
【０２８２】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、本明細書に記載される少なくとも１つの旨味受容体活性化膜貫通化合物をさらに含む。
【０２８３】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、本明細書に記載される少なくとも１つの脂肪酸受容体（ＧＰＲ１２０）活性化化合物をさらに含む。
【０２８４】
５．４  脂肪酸受容体（ＧＰＲ１２０）活性化化合物
本開示のある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、本出願に記載される少なくとも１つの化合物、及び、その全体がここに参照することにより本明細書に組み込まれる、２０１５年１２月１０日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ１５／６５１０６号に記載される少なくとも１つの脂肪酸受容体（ＧＰＲ１２０）活性化化合物を含む。
【０２８５】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、少なくとも１つの化合物及び少なくとも２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれ以上の脂肪酸受容体（ＧＰＲ１２０）活性化化合物を含む。
【０２８６】
ある特定の実施形態では、本開示の脂肪酸受容体（ＧＰＲ１２０）活性化化合物は、約１ｐＭ〜約１Ｍ、約１ｎＭ〜約１Ｍ、約１μＭ〜約１Ｍ、約１ｍＭ〜約１Ｍ、約１０ｍＭ〜約１Ｍ、約１００ｍＭ〜約１Ｍ、約２５０ｍＭ〜約１Ｍ、約５００ｍＭ〜約１Ｍ、約７５０ｍＭ〜約１Ｍ、約１μＭ〜約１Ｍ、約１μＭ〜約７５０ｍＭ、約１μＭ〜約５００ｍＭ、約１μＭ〜約２５０ｍＭ、約１μＭ〜約１００ｍＭ、約１μＭ〜約５０ｍＭ、約１μＭ〜約２５ｍＭ、約１μＭ〜約１０ｍＭ、約１μＭ〜約１ｍＭ、約１μＭ〜約１００μＭ又は約１μＭ〜約１０μＭ、及びそれらの間の値の量で食品中に存在しうる。
【０２８７】
ある特定の実施形態では、脂肪酸受容体（ＧＰＲ１２０）活性化化合物は、本明細書に記載される脂肪酸受容体（ＧＰＲ１２０）活性化化合物の塩、立体異性体、又は食物の形態のものでありうる。
【０２８８】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、本明細書に記載される少なくとも１つのアミノ酸をさらに含む。
【０２８９】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、本明細書に記載される少なくとも１つのヌクレオチド及び／又はヌクレオチド誘導体をさらに含む。
【０２９０】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバー組成物は、本明細書に記載される少なくとも１つの旨味受容体活性化化合物をさらに含む。
【０２９１】
６．送達系
ある特定の実施形態では、本出願のフレーバー組成物は、ペットフード製品にける使用のために送達系に取り込まれうる。送達系は、非水性液体、固体、又はエマルションでありうる。送達系は、概して、フレーバー組成物及び／又は該フレーバー組成物が取り込まれるペットフード製品のニーズに合うように適合される。
【０２９２】
フレーバー組成物は、非水性液体形態、乾燥形態、固体形態で、及び／又はエマルションとして用いられうる。乾燥形態で用いられる場合には、噴霧乾燥などの適切な乾燥手段を用いることができる。代替的に、フレーバー組成物はカプセル化されてもよく、あるいは、水不溶性物質に吸収されてもよい。このような乾燥形態を調製するための実際の手法は、当技術分野でよく知られており、本願で開示される主題に適用することができる。
【０２９３】
本願で開示される主題のフレーバー組成物は、味覚、フレーバー、及び／又はテクスチャの初期バースト；及び／又は、味覚、フレーバー及び／又はテクスチャの長時間の感覚を提供するために、当技術分野でよく知られている多くの異なる物理的形態で使用することができる。これらに限定されはしないが、このような物理的形態としては、噴霧乾燥、粉末化、及びビーズ化形態などの遊離形態、及びカプセル化形態、及びそれらの混合物が挙げられる。
【０２９４】
ある特定の実施形態では、フレーバー組成物の化合物は、例えば、殺菌、レトルト処理、及び／又は押出成形など、ペットフード製品の処理中に、ペットフード製品中に存在する前駆体化合物から生成されうる。
【０２９５】
ある特定の実施形態では、上記のように、カプセル化の手法は、フレーバー系の改変に用いられうる。ある特定の実施形態では、フレーバー化合物、フレーバー成分、又はフレーバー組成物全体が、完全に又は部分的にカプセル化されうる。カプセル化する材料及び／又は手法は、フレーバー系の改変のタイプを決定するように選択されうる。
【０２９６】
ある特定の実施形態では、カプセル化する材料及び／又は手法は、フレーバー化合物、フレーバー成分、又はフレーバー組成物の安定性を改善するように選択される；さらには、他の実施形態では、カプセル化する材料及び／又は手法は、フレーバー組成物の放出プロファイルを改変するように選択される。
【０２９７】
適切なカプセル化用材料としては、限定はしないが、アルギン酸塩、ペクチン、寒天、グアーガム、セルロース及び同様のもの、タンパク質、ポリビニルアセテート、ポリエチレン、架橋ポリビニルピロリドン、ポリメチルメタクリレート、ポリポリ乳酸、ポリヒドロキシアルカノエート、エチルセルロース、ポリビニルアセタートフタレート、ポリエチレングリコールエステル、メタクリル酸／メタクリル酸メチル共重合体、エチレン−ビニルアセテート（ＥＶＡ）共重合体など、及びそれらの組合せなどの親水コロイドが挙げられる。適切なカプセル化手法としては、限定はしないが、噴霧コーティング、噴霧乾燥、噴霧冷却、吸収、吸着、包接体化（例えば、フレーバー／シクロデキストリン複合体の生成）、コアセルベーション、流動床コーティング、又は成分をカプセル化用材料でカプセル化するのに用いられうる他のプロセスが挙げられうる。
【０２９８】
香料又は甘味剤のためのカプセル化送達系は、甘味剤又は香料のコアを取り囲む脂肪又はワックスの疎水性マトリクスを含みうる。脂肪は、脂肪酸、グリセリド又はポリグリセロールエステル、ソルビトールエステル、及びそれらの混合物など、任意の数の従来の材料から選択されうる。脂肪酸の例としては、限定はしないが、パーム油、パーム核油、落花生油、菜種油、米糠油、大豆油、綿実油、ヒマワリ油、ベニバナ油、及びそれらの組合せなど、水素化及び部分的に水素化された植物油が挙げられる。グリセリドの例としては、限定はしないが、モノグリセリド、ジグリセリド、及びトリグリセリドが挙げられる。
【０２９９】
ワックスは、天然及び合成のワックス、並びにそれらの混合物からなる群より選択されうる。非限定的な例としては、パラフィンワックス、ペトロラタム、カーボワックス、マイクロクリスタリンワックス、ミツロウ、ｃカルナバワックス、カンデリラワックス、ラノリン、ベイベリーワックス、サトウキビワックス、鯨ロウ、米ぬかワックス、及びそれらの混合物が挙げられる。
【０３００】
脂肪及びワックスは、カプセル化された系の重量で、約１０〜約７０％のさまざまな量、及び代替的に約３０〜約６０％の量で、個別に、又は組み合わせて使用することができる。組み合わせて用いられる場合、脂肪及びワックスは、それぞれ、約７０：１０〜８５：１５の比で存在しうる。
【０３０１】
典型的なカプセル化フレーバー組成物、香料又は甘味剤送達系は、その開示の全体がここに参照することによって本明細書に取り込まれる、米国特許第４，５９７，９７０号及び同第４，７２２，８４５号の各明細書に開示されている。
【０３０２】
液体送達系は、限定はしないが、炭水化物のシロップ及び／又はエマルションなど、本出願のフレーバー組成物の分散を伴う系を含みうる。液体送達系は、化合物及び／又はフレーバー組成物が溶媒中で可溶化される抽出物も含みうる。固体送達系は、噴霧乾燥、噴霧コーティング、噴霧冷却、流動床乾燥、吸収、吸着、コアセルベーション、錯化、又は任意の他の標準的な手法によって生成されうる。幾つかの実施形態では、送達系は、食用組成物と相容性であるか、又は食用組成物中で機能するように選択されうる。ある特定の実施形態では、送達系は、脂質又は油などの油性物質を含む。ある特定の実施形態では、送達系は、ココアバター、ココアバター代用品、ココアバター置換物、又はココアバター同等物などの製菓用の脂質を含む。
【０３０３】
乾燥形態で用いられる場合には、噴霧乾燥などの適切な乾燥手段を使用することができる。代替的に、フレーバー組成物は、水不溶性物質などの基材上に吸着又は吸収されてよく、カプセル化されてもよい。このような乾燥形態を調製するための実際の手法は、当技術分野でよく知られている。
【０３０４】
７．ペットフード製品
本開示の主題のフレーバー組成物は、多種多様なペットフード製品に用いられうる。適切なペットフード製品の非限定的な例としては、本明細書に記載される湿潤食品、乾燥食品、湿潤食品、ペットフード補助食品（例えばビタミン）、ペット飲料製品、スナック及びおやつが挙げられる。
【０３０５】
本願で開示される主題のフレーバー組成物と、ペットフード製品及び任意選択的な成分との組合せは、望ましい場合には、予期しない味覚を有し、かつ、例えばカルシウム感知受容体の活性の増加を通じて、例えば、コク味感覚経験を与える、香料を提供する。本明細書で開示されるフレーバー組成物は、ペットフード製品の配合処理又はパッケージングの前、間、又は後に加えることができ、フレーバー組成物の成分は、順次又は同時に加えることができる。ある特定の実施形態では、フレーバー組成物の化合物は、ペットフード製品中に存在する前駆体化合物から、例えば、殺菌、レトルト処理、及び／又は押出成形などのペットフード製品の処理中に生成されうる。
【０３０６】
ある特定の実施形態では、ペットフード製品は、栄養学的に完全な乾燥食品である。乾燥又は低含湿の栄養学的に完全なペットフード製品は、約１５％未満の水分を含んでよく、かつ、約１０〜約６０％の脂質、約１０％〜約７０％のタンパク質、及び約３０％〜約８０％の炭水化物（例えば、食物繊維及び灰）を含みうる。
【０３０７】
ある特定の実施形態では、ペットフード製品は、栄養学的に完全な湿潤食品である。湿潤又は高含水の栄養学的に完全なペットフード製品は、約５０％超の水分を含みうる。ある特定の実施形態では、ウェットペットフード製品は、約４０％の脂質、約５０％のタンパク質及び約１０％の炭水化物（例えば食物繊維及び灰）を含む。
【０３０８】
ある特定の実施形態では、ペットフード製品は、栄養学的に完全な湿潤食品である。湿潤、例えば、半湿潤又は半乾燥又はソフトドライ又はソフトモイスト又は中間若しくは中程度の水分を含む、栄養学的に完全なペットフード製品は、約１５〜約５０％の水分を含む。
【０３０９】
ある特定の実施形態では、ペットフード製品は、ペットフードスナック製品である。ペットフードスナック製品の非限定的な例としては、スナックバー、ペット用噛み物、カリカリしたお菓子、シリアルバー、スナック、ビスケット、及び甘味製品が挙げられる。
【０３１０】
ある特定の実施形態では、タンパク質源は、ルパインタンパク質、小麦タンパク質、大豆タンパク質、及びそれらの組合せなどの植物源に由来しうる。代替的に又は追加的に、タンパク質源は、さまざまな動物源に由来しうる。動物タンパク質の非限定的な例としては、例えば、筋肉、食肉副産物、食肉又は魚肉を含めた、ウシ、ブタ、家禽、ラム、又は魚が挙げられる。
【０３１１】
８．味覚属性を測定する方法
本開示のある特定の実施形態では、ペットフード製品の味覚、フレーバー、及び／又は嗜好性の属性は、フレーバー組成物を食品と混合することによって改変することができ、あるいは本明細書に記載される食品調製条件下で生成されうる。ある特定の実施形態では、属性は、食品と混合される又は発生するフレーバー組成物の濃度を増減することによって増強又は低減されうる。ある特定の実施形態では、改変された食品の味覚属性は、本明細書に記載されるように上昇させることができ、食品と混合される又は発生するフレーバー組成物の濃度は、評価結果に基づいて増減することができる。
【０３１２】
本開示のある特定の実施形態では、味覚及び／又は嗜好性の属性は、インビトロアッセイを使用して測定することができ、ここで、インビトロで細胞によって発現されるネコカルシウム感知受容体を活性化する化合物の能力が異なる濃度で測定される。ある特定の実施形態では、受容体の活性化の増加は、化合物の味覚及び／又は嗜好性の属性の増加と相関する。ある特定の実施形態では、組成物は、単独で又は他の化合物と組み合わせて測定される。ある特定の実施形態では、インビトロアッセイは、本出願の実施例のセクションに記載されるインビトロアッセイを含む。
【０３１３】
本開示のある特定の実施形態では、味覚及び／又は嗜好性の属性は、インシリコモデルを使用して測定することができ、カルシウム感知受容体の結合部位におけるアミノ酸残基と相互作用する化合物の能力は、インシリコで決定される。ある特定の実施形態では、ネコカルシウム感知受容体を調節する化合物の能力は、インシリコでの受容体のモデルへの化合物の結合の程度と相関する。ある特定の実施形態では、組成物は、単独で又は他の化合物と組み合わせて測定される。ある特定の実施形態では、インシリコモデルは、本出願の実施例のセクションに記載されるインシリコモデルを含む。
【０３１４】
本開示のある特定の実施形態では、味覚及び／又は嗜好性の属性は、味覚テスターのパネリストを利用して測定することができる。例えば、限定するものではないが、パネルは、ネコパネリストを含みうる。ある特定の実施形態では、パネルは、イヌパネリストを含みうる。ある特定の実施形態では、ペットフード製品の嗜好性は、フレーバー組成物を単独で含むペットフード製品の消費によって決定することができる（例えば、ワンボウル試験、単項順位付け（modinac ranking））。ある特定の実施形態では、ペットフード製品の嗜好性は、フレーバー組成物又は別のフレーバー組成物を含まないペットフード製品に対する、本明細書で開示されるフレーバー組成物を含むペットフード製品の優先的消費によって決定することができる（例えば、嗜好、差異、及び／又は選択性を試験するためのツーボウル試験）。
【０３１５】
ある特定の実施形態では、フレーバー組成物の嗜好性及び／又はコク味は、フレーバー組成物を含まない又は異なるフレーバー組成物を含む水溶液に対する、本明細書で開示されるフレーバー組成物を含む水溶液の優先的消費によって決定することができる（例えば、ツーボウル試験）。例えば、溶液パネルは、単項曝露（monadic exposure）における化合物の濃度の範囲の嗜好性を比較するのに用いられうる。ある特定の実施形態では、溶液には、ベースライン溶液摂取量を増加させる摂取性／陽性の味物質として、例えばＬ−ヒスチジンなどの嗜好性エンハンサーを含めてもよく、それによって、試験化合物の潜在的な悪影響を識別することができる。
【０３１６】
各ペットフード製品又はエマルションの摂取率は、消費された１つの食料（ration）の量を総消費量で割った値を測定することによって決定することができる。次に、消費比率（ＣＲ）を計算して、他の食料に対して１つの食料の消費量を比較し、１つの食品又はエマルションの他に対する優先的消費を決定することができる。代替的に又は追加的に、摂取量の差（ｇ）を使用して、例えば５％の有意水準など、選択された有意水準で、ツーボトル試験での２つのエマルション間の摂取量、又は、ツーボウル試験での２つのペットフード製品間の摂取量の平均差を評価し、９５％の信頼区間で平均摂取量差を決定することができる。しかしながら、例えば、１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、又は５０％有意水準など、任意の有意水準を使用して差し支えない。ある特定の実施形態では、例えば、そのエマルション又は食品を構成する、試験中に摂取されたエマルション又は食品全体のパーセンテージである、動物による１つのエマルション又は食品のパーセンテージ選好性など、パーセンテージによる選好性スコアもまた、計算することができる。
【０３１７】
９．生成方法
ある特定の実施形態では、本開示の化合物は、標準的な化学合成プロセスを使用して生成されうる。ある特定の実施形態では、化学合成プロセスは、少なくとも９９．９９９％、又は少なくとも９９％、又は少なくとも９５％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも８５％、又は少なくとも８０％の純度を有する化合物を提供する。ある特定の実施形態では、化合物は、酸、酵素、又は酸と酵素の組合せを使用するものなど、標準的な加水分解プロセスを使用して調製されうる。
【０３１８】
ある特定の実施形態では、本開示の化合物は、例えば、ペットフード製品の生産中など、食品調製条件下で生成されうる。例えば、限定するものではないが、本開示の化合物は、例えば、殺菌、レトルト処理、及び／又は押出成形などの食品の熱処理中に、ペットフード中に存在する前駆体化合物から生成されうる。ある特定の実施形態では、液体及び／又は粉末の旨味剤（palatant）を、例えばドライペットフード製品に、ペットフードの味覚を増強するために、及びペットフードの嗜好性を高めるために添加することもできる。旨味剤は、肉（例えばレバー）の消化物及び／又は植物の消化物であってよく、任意選択的に、当技術分野で知られている他の旨味剤を含んでいてもよい。ある特定の実施形態では、化合物は、ペットフード製品に添加する前に、液体及び／又は粉末旨味剤と混合されるか、あるいは、液体及び／又は粉末旨味剤中に生成されうる。代替的に、又は加えて、化合物は、ペットフード製品への添加後に、液体及び／又は粉末旨味剤と混合されるか、あるいは、液体及び／又は粉末旨味剤中に生成されうる。
【０３１９】
１０．本開示の方法の非限定的な例
ある特定の非限定的な実施形態では、本開示は、ペットフード製品を本明細書に記載される化合物を含むフレーバー組成物と混合することを含む、ペットフード製品の嗜好性を高める方法を提供し、ここで、該化合物は、混合物中に約１ｐＭ〜約１０Ｍ、又は約１ｐＭ〜約１Ｍの濃度で存在する。
【０３２０】
ある特定の非限定的な実施形態では、本開示は、本明細書に記載される化合物を含むフレーバー組成物を有するペットフード製品を生産することを含む、ペットフード製品の嗜好性を高める方法を提供し、ここで、該化合物は、製品中に、約１ｐＭ〜約１０Ｍ、又は約１ｐＭ〜約１Ｍの濃度で存在する。
【０３２１】
ある特定の非限定的な実施形態では、本開示は、ペットフード製品を本明細書に記載される化合物を含むフレーバー組成物と混合することを含む、例えばカルシウム感知受容体の活性を高めることによって、ペットフード製品のコク味を高める方法を提供し、ここで、該化合物は、混合物中に０．００１ｐｐｍ〜１，０００ｐｐｍの濃度で存在する。
【０３２２】
ある特定の非限定的な実施形態では、本開示は、ペットフード製品を本明細書に記載される化合物を含むフレーバー組成物と混合することを含む、ペットフード製品の嗜好性を高める方法を提供し、ここで、該フレーバー組成物は、混合物中に約０．００１ｐｐｍ〜１，０００ｐｐｍの濃度で存在する。
【０３２３】
ある特定の非限定的な実施形態では、本開示は、ペットフード製品を本明細書に記載される化合物を含むフレーバー組成物と混合することを含む、例えばカルシウム感知受容体の活性を高めることによって、ペットフード製品のコク味を高める方法を提供し、ここで、該フレーバー組成物は、混合物中に約０．０００１％〜約１０％ｗ／ｗ、又は約０．００１％〜約５％ｗ／ｗ、又は約０．０１％〜約１％ｗ／ｗの濃度で存在する。
【０３２４】
ある特定の非限定的な実施形態では、本開示は、ペットフード製品を本明細書に記載される化合物を含むフレーバー組成物と混合することを含む、ペットフード製品の嗜好性を高める方法を提供し、ここで、該フレーバー組成物は、混合物中に約０．０００１％〜約１０％ｗ／ｗ、又は約０．００１％〜約５％ｗ／ｗ、又は約０．０１％〜約１％ｗ／ｗの濃度で存在する。
【実施例】
【０３２５】
本願で開示される主題は、本発明の例示として提供され、限定するものではないが次の実施例を参照することによってより良好に理解されよう。
【０３２６】
実施例１−インシリコでのスクリーニングを使用するＣａＳＲ調節剤の特定
本実施例は、推定上の化合物調節剤を特定するためのネコ及びイヌカルシウム感知受容体（ＣａＳＲ）の計算モデリングについて説明する。
【０３２７】
計算手法を使用して、ＣａＳＲの三次元構造を解析し、受容体を選択的に調節するために利用することができるポリペプチド領域を特定した。ＣａＳＲヴィーナス・フライトラップの構造相同性モデル及びＣａＳＲのシステインリッチドメインを、ヒトＣａＳＲの結晶構造をベースとして生成した（Geng, et al. 2016; Zhang, et al. 2016）。ＣａＳＲの膜貫通ドメインのモデルは、クラスＣのＧＰＣＲの構造に基づいて生成した（その各々の全体がここに参照することによって本明細書に取り込まれる、Binet et al., J. Biol. Chem, 282(16): 12154-63 (2007); Wu et. al., Science, 344(6179):58-64 (2014)；及びDore et al., Nature 511:557-562 (2014)を参照）。アクセルリス社のプログラムであるＤｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｓｔｕｄｉｏ（ＤＳ）ｓｕｉｔｅを用いて相同性モデルを構築した。特に、ＤＳによるＭｏｄｅｌｌｅｒプログラムを使用した（その全体がここに参照することによって本明細書に取り込まれる、Eswar et al., Current Protocols in Bioinformatics, Supplement 15:5.6.1-5.6.30 (2006)を参照）。「インシリコ」スクリーニングを使用して、ＣａＳＲの構造ドメインと相互作用する化合物を特定した。
【０３２８】
タンパク質のＣファミリのＧＰＣＲ群は、Ｔ１Ｒ１、Ｔ１Ｒ２、Ｔ１Ｒ３、ＣａＳＲ、ＧａｂａＢ及びｍＧｌｕタンパク質を含む。Ｃ群のタンパク質は、（１）ヴィーナス・フライトラップ（ＶＦＴ）ドメインと呼ばれる大きい外部ドメイン、（２）７膜貫通（７ＴＭ）ドメイン、及び（３）ＶＦＴと７ＴＭドメインとを接続するシステインリッチドメインを有する。ネコＣａＳＲ受容体のＶＦＴ及びシステインリッチドメインの相同性モデルを、現在、タンパク質データバンク（ＰＤＢ、ｗｗｗ．ｒｃｓｂ．ｏｒｇ）から利用可能な最近のｈＣａＳＲの結晶構造に基づいて生成した（Geng, et al. 2016; Zhang, et al. 2016）。ＢｉｏＰｒｅｄｉｃｔ社のドッキングプログラムであるＢｉｏＤｏｃｋを使用して、化合物Ｌ−アスパラギン酸（図３）、Ｌ−リシン（図４）、及びグルタチオン（図５）を、ＣａＳＲのＶＦＴドメインの活性部位内に、インシリコでドッキングさせた。
【０３２９】
図３は、Ｌ−アスパラギン酸がアゴニストとして作用しているときのネコＣａＳＲのＶＴＦドメインのヒンジ領域へのＬ−アスパラギン酸の結合を示している。Ｌ−アスパラギン酸の両性イオン窒素は、Ｇｌｕ２９７に対する塩橋、並びに、可能性のあるＡｌａ１６８への水素結合を形成することができる。Ｌ−アスパラギン酸の両性イオンカルボン酸基は、Ｓｅｒ１７０、Ｓｅｒ１４７、及びＡｌａ１６８の主鎖カルボニルへの水素結合を形成する。Ｌ−アスパラギン酸の側鎖カルボキシル基は、Ａｒｇ６６との塩橋相互作用を形成することができる。図３Ｃには、本明細書で参照されるｈＣＳＡＲの結晶構造において観察された結合イオンの後にモデル化された、Ｓｒ＋２及びＰＯ−３の結合部位が示されている。
【０３３０】
図４Ａ〜４Ｃは、Ｌ−リシンがポジティブアロステリックモジュレータ（ＰＡＭ）として作用しているときのネコＣａＳＲのＶＴＦドメインのヒンジ領域へのＬ−リシンの結合を示している。両性イオン主鎖は、ヒンジにおける残基、特にＳｅｒ１４７及びＧｌｕ２９７への拡大された相互作用を形成することができると同時に、側鎖窒素は、Ｇｌｕ２９７への塩橋相互作用を形成する。
【０３３１】
図５Ａ〜５Ｃは、ネコＣａＳＲのＶＴＦドメインのヒンジ領域へのＬ−（＋）−２−アミノ−３−ホスホノプロピオン酸の結合を示している。両性イオンカルボキシル基がＳｅｒ１４７への水素結合を形成することができると同時に、両性イオン窒素は、Ｇｌｕ２９７への塩橋及びＡｌａ１６８の主鎖カルボニルへの水素結合を形成する。側鎖ホスホノプロピオン酸基は、Ａｒｇ６６との塩橋相互作用及びＳｅｒ２７２への追加的な水素結合を形成することができる。
【０３３２】
図６Ａ〜６Ｃは、ネコＣａＳＲのＶＴＦドメインのヒンジ領域に対するアゴニストとしてのグルタチオン（γ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ）の結合を示している。ヒンジ領域では、グルタチオンのγ−グルタミル残基の両性イオン窒素がＧｌｕ２９７への塩橋を形成すると同時に、γ−グルタミル残基の両性イオンカルボン酸基は、Ｓｅｒ１７０に対する追加的な水素結合相互作用を形成する。グルタチオンのシステイン残基のＳＨは、Ｇｌｕ２９７への追加的な相互作用を形成することができる。グリシン残基のＮＨは、Ｇｌｕ２９７又はＴｒｐ２９９又はその両方の主鎖カルボニルへの水素結合を形成することができる。グルタチオンのグリシン残基のカルボキシル基は、Ｈｉｓ４１３への塩橋相互作用、並びに、Ｔｈｒ４１２への追加的な水素結合相互作用を形成することができる。これらの相互作用は、上方のローブと下方のローブの両方に対するものであることから、それらは、閉じた形態のＶＴＦドメインを安定化することができる。
【０３３３】
図７Ａ〜７Ｃは、ネコＣａＳＲのＶＴＦドメインに対するアゴニストとしての「コク味ペプチド」（γ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ）の結合を示している。ヒンジ領域では、グルタミン酸の両性イオンカルボン酸基は、ヒンジにおける残基、特にＳｅｒ１４７、Ｓｅｒ１７０、及びＴｈｒ１４５への水素結合を形成することができる。両性イオン窒素は、Ｇｌｕ１９７への可能性のある塩橋相互作用とともに、Ｓｅｒ１７０、及びＡｌａ１６８の主鎖カルボニルとの水素結合相互作用を形成することができる。ペプチドバリン及びグリシンのペプチド窒素は。各々、Ｇｌｕ２９７への相互作用を形成することができる一方、ペプチドグリシンの両性イオンカルボキシル基は、Ａｒｇ６６及びＳｅｒ３０１との塩橋相互作用を形成することができる。
【０３３４】
図８Ａ〜８Ｃは、ネコＣａＳＲのＶＴＦドメインに対するアゴニストとしてのγ−グルタミルジペプチドＨ−γ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−ＯＨの結合を示している。ヒンジ領域では、ペプチドグルタマチル（glutamatyl）基の両性イオンカルボン酸基は、ヒンジにおける残基、特にＳｅｒ１４７及びＳｅｒ１７０への水素結合を形成することができる。ペプチドグルタマチル基の両性イオン窒素は、Ｓｅｒ１７０への及びＳｅｒ１６９の主鎖カルボニルへの水素結合、並びにペプチド内に内部水素結合を形成することができる。
【０３３５】
ペプチドチロシン基は、フライトラップの残りの部分を通じて、特にＧｌｕ２９７、Ｔｈｒ１４５への、並びに、Ｓｅｒ３０１及びＰｈｅ３２０の主鎖への水素結合相互作用を形成することができる。
【０３３６】
図９Ａ〜９Ｃは、ネコＣａＳＲのＶＴＦドメインに対するアゴニストとしてのβ−アスパルチルジペプチドＨ−β−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−ＯＨの結合を示している。ヒンジ領域では、ペプチドグルタミル基の両性イオンカルボン酸基は、ヒンジにおける残基、特にＳｅｒ１４７及びＳｅｒ１７０への水素結合を形成することができる。ペプチドグルタミル基の両性イオン窒素は、Ｓｅｒ１７０への及びＳｅｒ１６９の主鎖カルボニルへの水素結合、並びにＧｌｕ２９７への塩橋相互作用を形成することができる。ペプチドロイシン基のカルボン酸基は、Ａｒｇ６６への塩橋を形成することができる。
【０３３７】
同様に、ネコＣａＳＲの７Ｍドメインの相同性モデルを、ＰＤＢから４ＯＲ２及び４ＯＯ９の結晶構造に基づいて生成した。４ＯＲ２は、ネガティブアロステリックモジュレータ（ＮＡＭ）に結合したＣ群ＧＰＣＲに由来するｍＧｌｕＲ１の膜貫通ドメインの結晶構造である（その全体がここに参照することによって本明細書に取り込まれる、Wu et. al., Science, 344(6179):58-64 (2014)を参照）。４ＯＯ９は、ＮＡＭに結合したＣ群ＧＰＣＲに由来するｍＧｌｕＲ５の膜貫通ドメインの結晶構造である（その全体がここに参照することによって本明細書に取り込まれる、Dore et al., Nature 511:557-562 (2014)を参照）。ＢｉｏＰｒｅｄｉｃｔ社のドッキングプログラムであるＢｉｏＤｏｃｋを使用して、化合物Ｎ−（１−（４−クロロフェニル）エチル）−３−（４−イソプロポキシフェニル）−３−フェニルプロパン−１−アミン（図１０）、Ｎ−（１−（４−クロロフェニル）エチル）−３−（４−メトキシフェニル）−４−メチルペンタン−１−アミン（図１１）、３−（フラン−２−イル）−４−フェニル−Ｎ−（１−フェニルエチル）ブタン−１−アミン（図１２）、３−（２，２−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）−３−フェニル−Ｎ−（１−フェニルエチル）プロパン−１−アミン（図１３）、Ｎ−（（２，３−ジヒドロベンゾフラン−２−イル）メチル）−１−（キノリン−２−イル）エタンアミン（図１４）、２，６−ジクロロ−４−（１−（（（１−メチル−２−（チオフェン−２−イル）ピペリジン−３−イル）メチル）アミノ）エチル）アニリン（図１５）、１−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（２−（２，２−ジメチル−４−（ｐ−トリル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）エタンアミン（図１６）、メチル２−（３−シアノフェニル）−２−（（４−フルオロ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）アミノ）アセテート（図１７）、２−（２−アセチル−１，２−ジヒドロイソキノリン−１−イル）−Ｎ−（１−（３−ブロモフェニル）エチル）アセトアミド（図１８）、１−（ベンゾ［ｄ］チアゾル−２−イル）−１−（２，４−ジメチルフェニル）エタノール（図１９）、及び４−クロロ−Ｎ−［（１Ｓ，２Ｓ）−２−［［（１Ｒ）−１−（１−ナフタレニル）エチル］アミノ］（図２０）を、ＣａＳＲの７ＴＭドメインの活性部位内へと、インシリコでドッキングさせた。
【０３３８】
図１０は、ネコＣａＳＲの７ＴＭドメインにおけるＮ−（１−（４−クロロフェニル）エチル）−３−（４−イソプロポキシフェニル）−３−フェニルプロパン−１−アミンの結合を示している。図１０Ｂは、ネコＣａＳＲの７ＴＭドメインにおける結合の位置を示している。図１０Ｃは、リガンドと７ＴＭドメインとの相互作用の拡大図を提供している。同様に、図１１は、Ｎ−（１−（４−クロロフェニル）エチル）−３−（４−メトキシフェニル）−４−メチルペンタン−１−アミンの結合を示しており、図１２は、ネコＣａＳＲの７ＴＭドメインにおける３−（フラン−２−イル）−４−フェニル−Ｎ−（１−フェニルエチル）ブタン−１−アミンの結合を示している。これらの化合物、及び他のγ−分岐ＰＡＭは、ネコＣａＳＲの７ＴＭドメインに良好に適合し、活性部位における広範な疎水性相互作用を獲得する。これらの化合物ではＧｌｕ８３７への塩橋が存在し、他の高度に活性な膜貫通型ＰＡＭについては、Ｇｌｕ８３７への塩橋又は水素結合が観察される。ほとんどの他の活性な膜貫通型ＰＡＭと共有される相互作用である、環スタッキング相互作用がＰｈｅ８２１（右）に示されている。これらの化合物については、追加的な環スタッキングが可能である（Ｐｈｅ７７５（左））。
【０３３９】
図１３は、３−（２，２−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）−３−フェニル−Ｎ−（１−フェニルエチル）プロパン−１−アミンの結合を示している。図１３Ｂは、７ＴＭドメインにおける結合の位置を示しており、図１３Ｃは、リガンドと７ＴＭドメインとの相互作用の拡大図を提供している。Ｇｌｕ８３７への塩橋は、図１０〜１２にあるように、Ｐｈｅ８２１へのキーとなる環スタッキング相互作用及びＰｈｅ７７５への可能性のある追加的な環スタッキング相互作用のように見える。
【０３４０】
図１４は、Ｎ−（（２，３−ジヒドロベンゾフラン−２−イル）メチル）−１−（キノリン−２−イル）エタンアミンの結合を示している。図１４Ｂは、７ＴＭドメインにおける結合の位置を示しており、図１４Ｃは、リガンドと７ＴＭドメインとの相互作用の拡大図を提供している。化合物の分類は図１０〜１３で強調されているものとは異なっているが、結合モードにおいて同様の観察が当てはまる。化合物は、活性部位をよく満たし、活性部位の全体にわたって広範な疎水性相互作用を示す。Ｇｌｕ８３７への塩橋相互作用が、Ｐｈｅ８２１への環スタッキング相互作用及びＰｈｅ７７５への可能性のある追加的な環スタッキング相互作用のように示されている。
【０３４１】
図１５は、２，６−ジクロロ−４−（１−（（（１−メチル−２−（チオフェン−２−イル）ピペリジン−３−イル）メチル）アミノ）エチル）アニリンの結合を示している。図１５Ｂは、７ＴＭドメインにおける結合の位置を示しており、図１５Ｃは、リガンドと７ＴＭドメインとの相互作用の拡大図を提供している。塩基性窒素を伴って、図１０〜１４のように、Ｇｌｕ８３７への塩橋が見られる。置換フェニルの環スタッキングは、活性部位のわずかな動きに応じて、ＰＨＥ８２１又はＰｈｅ６８８に対するものでありうる。
【０３４２】
図１６は、１−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（２−（２，２−ジメチル−４−（ｐ−トリル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）エタンアミンの結合を示している。図１６Ｂは、７ＴＭドメインにおける結合の位置を示しており、図１６Ｃは、リガンドと７ＴＭドメインとの相互作用の拡大図を提供している。塩基性窒素を伴う図１０〜１５にあるように、Ｇｌｕ８３７への塩橋が見られる。Ｐｈｅ６８８及び／又はＰｈｅ８２１への置換フェニルの環スタッキングが可能である。活性部位のわずかな動きを伴って、Ｐｈｅ７７５への環スタッキングが可能でありうる。テトラヒドロピランは、追加的な疎水性接触を加える。
【０３４３】
図１７は、メチル２−（３−シアノフェニル）−２−（（４−フルオロ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）アミノ）アセテートの結合を示している。図１７Ｂは、７ＴＭドメインにおける結合の位置を示しており、図１７Ｃは、リガンドと７ＴＭドメインとの相互作用の拡大図を提供している。塩基性窒素を伴う図１０〜１６にあるように、Ｇｌｕ８３７への塩橋が見られる。Ｐｈｅ８２１への置換フェニルの環スタッキングが存在する。活性部位のわずかな動きを伴って、Ｐｈｅ７７５への環スタッキングが可能でありうる。エステルは、Ｐｈｅ６８８の上の疎水性ポケットに面している。
【０３４４】
図１８は、２−（２−アセチル−１，２−ジヒドロイソキノリン−１−イル）−Ｎ−（１−（３−ブロモフェニル）エチル）アセトアミドの結合を示している。図１８Ｂは、７ＴＭドメインにおける結合の位置を示しており、図１８Ｃは、リガンドと７ＴＭドメインとの相互作用の拡大図を提供している。Ｇｌｕ８３７への水素結合が、リガンドアミド窒素に対する図１７に示されている。Ｐｈｅ８２１への置換フェニルの環スタッキングが存在する。
【０３４５】
図１９は、１−（ベンゾ［ｄ］チアゾル−２−イル）−１−（２，４−ジメチルフェニル）エタノールの結合を示している。図１９Ｂは、７ＴＭドメインにおける結合の位置を示しており、図１５Ｃは、リガンドと７ＴＭドメインとの相互作用の拡大図を提供している。Ｇｌｕ８３７への水素結合が、リガンドヒドロキシル基に対する図１９Ｃに示されている。Ｐｈｅ８２１及び／又はＰｈｅ６８８への置換フェニルの環スタッキングが可能である。Ｐｈｅ６８８へのベンゾ［ｄ］チアゾールの追加的な環スタッキングが可能である。
【０３４６】
図２０は、アンタゴニストとしての４−クロロ−Ｎ−［（１Ｓ，２Ｓ）−２−［［（１Ｒ）−１−（１−ナフタレニル）エチル］アミノ］（Ｃａｌｈｅｘ２３１）の結合を示している。図２０Ｂは、７ＴＭドメインにおける結合の位置を示しており、図２０Ｃは、リガンドと７ＴＭドメインとの相互作用の拡大図を提供している。塩基性窒素を伴う図１０〜１９のように、Ｇｌｕ８３７への塩橋が見られる。ナフタレンは、図２０Ｃに示されるように芳香族残基への可能な環スタッキング相互作用が得られるように配置されている。残りの化合物は、Ｐｈｅ７７５への可能な環スタッキング相互作用とともに、活性部位全体にわたる広範な疎水性相互作用を生じる。
【０３４７】
参考文献：
1. Binet et al., “Common Structural Requirements for Heptahelical Domain Function in Class A and Class C G Protein-coupled Receptors.” (2007) J. Biol. Chem, 282(16): 12154-63
2. Wu et. al., “Structure of a Class C GPCR Metabotropic Glutamate Receptor 1 Bound to an Allosteric Modulator.” (2014) Science, 344(6179):58-64
3. Dore et al., “Structure of class C GPCR metabotropic glutamate receptor 5 transmembrane domain.” (2014) Nature 511:557-562
4. Eswar et al., Current Protocols in Bioinformatics, Supplement 15:5.6.1-5.6.30 (2006)
実施例２−インビトロでカルシウム感知受容体を活性化する化合物
本実施例は、インビトロでの化合物によるネコＣａＳＲの活性化について記載する。
【０３４８】
ＣａＳＲアゴニスト（ＡＧＯ）、ポジティブアロステリックモジュレータ（ＰＡＭｓ）及び／又はアンタゴニストとして機能することができる化合物を、二重注入プロトコルを使用する、インビトロの機能的特徴付けによって特定した。
【０３４９】
方法：ネコＣａＳＲ（ｆ：ＣａＳＲ）トランスジーン構築物を誘導的に発現するＨＥＫ２９３ＴＲｅｘ／天然クライチン細胞を使用して、１１９の試験化合物をスクリーニングし、ｆ：ＣａＳＲ活性を調節する化合物を特定した。ＣａＳＲを発現しない細胞（すなわち、空のプラスミドベクターでトランスフェクトされた非誘導性トランスジェニック細胞又はｍｏｃｋ対照細胞）を対照として使用した。ＨＥＫ２９３細胞を３８４ＭＴＰに１０，０００細胞／ウェルで播種した。細胞播種の２４時間後に、細胞に、室温で４時間、アッセイバッファ（２０μＬ／ウェル）中１０μｍのセレンテラジンを負荷した。各化合物を、１００ｍＭ（１Ｍ×１０−１）〜０．０１μＭ（１Ｍ×１０−８）の濃度範囲にわたり、ＣａＳＲを活性化する能力についての一次プロファイリングで試験した。ＨＥＫ２９３細胞によって発現されたｆ：ＣａＳＲを活性化する各化合物の能力を、次のプロトコルに従って、アゴニストモード及びＰＡＭモードで細胞を化合物と接触させた後に、ＦＬＩＰＲ（登録商標）Ｔｅｔｒａスクリーニングシステムを使用して発光を測定することによって決定した：
ＡＧＯ／ＰＡＭモード（二重注入）：１０μｌ／ウェルの試験化合物（３倍濃度）及び対照を注入し、発光を測定した（すなわち、ＡＧＯ活性）。５分後、アゴニストのＥＣ２０（３倍濃縮）（１５μｌ／ウェル）に対応する濃度でのＣａＣｌ２を注入し、発光（すなわち、ＰＡＭ活性）を測定した。
【０３５０】
アゴニスト試験のための対照は、１５ｍＭのＣａＣｌ２（ＥＣ１００、陽性対照）及び０ｍＭのＣａＣｌ２（陰性対照）であった。
【０３５１】
ＰＡＭ試験のための対照は、０．９ｍＭのＣａＣｌ２（ＥＣ２０）＋カリンドールエンハンサー（陽性対照）、０．９ｍＭのＣａＣｌ２（ＥＣ２０、陰性対照）、及びカリンドールエンハンサー（陰性対照）であった。
【０３５２】
一次プロファイリングに用いた対照細胞株は、非誘導性のトランスジェニックＨＥＫ細胞であった。
【０３５３】
一次プロファイリング試験におけるアゴニスト、アンタゴニスト、又はＰＡＭとしてＣａＳＲ活性を調節する化合物を、ＥＣ５０又はＩＣ５０を決定するためにさらに試験した。これらの研究では、使用した対照細胞株は、ＣａＳＲトランスジーンでトランスフェクトされていない、ｍｏｃｋ  ＨＥＫ細胞株であった。内因性発現ムスカリン性受容体のアゴニストであるカルバコールを使用して、ＨＥＫ細胞の基準活性レベルを決定した。
【０３５４】
Ｇｅｎｅｄａｔａ  ＳｃｒｅｅｎｅｒソフトウェアのＡｎａｌｙｚｅｒ  Ｍｏｄｕｌｅを使用して、データ解析を行った。
【０３５５】
・動力学的応答値（ＫＲＶ）：［最大（２ｓ：９０ｓ）］−［ベースライン］］。注入後の動力学的トレースの最大ＲＬＵから注入前のポイントのメジアン値を引いた値。
【０３５６】
・刺激対照（すなわち、陽性対照）によって正規化されたＫＲＶから中立対照（すなわち、非誘導性又はｍｏｃｋ基準細胞の活性）を引いた値であり、試験化合物の活性［％］を表す次式：
【０３５７】
【数１】
2019515668.tif 000023
【０３５８】
が適用され、ここで、
Ｘは、ウェルの計算された信号値（ＫＲＶ）であり、
＜  ＞は、プレートごとの基準ウェルについての計算された信号値（ＫＲＶ）のメジアン値を示す。
【０３５９】
正規化により、等価スケール上に化合物の活性値が配置され、それら学校プレート間で同等になる。したがって、化合物の活性値は、一般的な範囲へと（２つの基準に基づいて）スケーリングされる（２点正規化）。
【０３６０】
結果：アゴニスト及びＰＡＭモードの両方の一次プロファイリングの結果を得た（データ示さず）。一次プロファイリングに基づいて、さらなる研究のために５４の化合物を選択し、ＥＣ５０又はＩＣ５０を決定した。ＥＣ５０／ＩＣ５０解析のためのアゴニストモード及びＰＡＭモードのリガンドによるＣａＳＲの活性化／抑制についての用量反応曲線が図２１に示されている。
【０３６１】
図２１に記載されるように、２３のリガンドをアゴニストとしての活性化ＣａＳＲについて試験し、２７のリガンドをＰＡＭとしての活性化ＣａＳＲについて試験し、２つのリガンドをアンタゴニストとしての活性化ＣａＳＲについて試験した。各リガンドについて、ＥＣ５０又はＩＣ５０の値を決定した。用語５０％効果濃度（ＥＣ５０）（又は５０％阻害濃度、ＩＣ５０）とは、ベースラインと特定の曝露時間後の最大値との中間の反応を誘発する、化合物の濃度を指す。表３は、さらなる研究のために選択された５２の化合物の各々についての化学構造及び結果を提供している（一次プロファイリングに由来する５４の活性化合物のうちの残る２つの化合物である、Ｌ−アルギニン及びＬ−リシンのＰＡＭ解析は、実施例３に示されている）。
【０３６２】
【表３−１】
2019515668.tif 000024
【０３６３】
【表３−２】
2019515668.tif 000025
【０３６４】
【表３−３】
2019515668.tif 000026
【０３６５】
【表３−４】
2019515668.tif 000027
【０３６６】
【表３−５】
2019515668.tif 000028
【０３６７】
【表３−６】
2019515668.tif 000029
【０３６８】
【表３−７】
2019515668.tif 000030
【０３６９】
【表３−８】
2019515668.tif 000031
【０３７０】
【表３−９】
2019515668.tif 000032
【０３７１】
【表３−１０】
2019515668.tif 000033
【０３７２】
【表３−１１】
2019515668.tif 000034
【０３７３】
【表３−１２】
2019515668.tif 000035
【０３７４】
実施例３−カルシウム感知受容体をインビトロで活性化するアミノ酸
本実施例は、インビトロにおけるアミノ酸によるネコＣａＳＲの活性化について記載する。
【０３７５】
ＣａＳＲ  ＰＡＭとして機能することができるアミノ酸を、単回注入プロトコルを使用するインビトロでの機能的特徴付けによって特定した。ＣａＳＲの活性化における化合物の有効性を評価した。
【０３７６】
方法：  ネコＣａＳＲ（ｆ：ＣａＳＲ）トランスジーン構築物を誘導的に発現するＨＥＫ２９３ＴＲｅｘ／天然クライチン細胞を使用して、３０のアミノ酸をスクリーニングして、ｆ：ＣａＳＲ活性を調節する化合物を特定した。ＣａＳＲを発現しない細胞（すなわち、空のプラスミドベクターでトランスフェクトされたｍｏｃｋ対照細胞）を対照として使用した。ＨＥＫ２９３細胞を３８４ＭＴＰに１０，０００細胞／ウェルで播種した。細胞播種の２４時間後に、細胞に、室温で４時間、アッセイバッファ（２０μＬ／ウェル）中１０μｍのセレンテラジンを負荷した。ＰＡＭモードにおいて５ｍＭ又は１０ｍＭのいずれかの濃度で、３０のアミノ酸の各々の存在下でカルシウムについての用量反応曲線を決定し、カルシウムについてのＥＣ５０の変化を決定した。ＣａＣｌ２を単独で対照として使用した。
【０３７７】
ＰＡＭモード（単回注入）：試験化合物（６倍濃縮）及びＣａＣｌ２（６倍濃縮）を化合物プレート上で、１：１で直接混合し、各試験化合物及び対照の３倍濃縮の標準溶液を得た。１０μｌ／ウェルの試験化合物又は対照標準混合物（working mixture）を注入し、発光（すなわち、ＰＡＭ活性）を測定した。
【０３７８】
結果：３０のアミノ酸についてのＰＡＭ試験の結果を得た（データ示さず）。４つのアミノ酸を、カルシムについて得られたＥＣ５０値の有意な低下によって、ＰＡＭとして特定した：Ｌ−アルギニン、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−トリプトファン及びＬ−リシン。図１９Ａ〜１９Ｂは、４つのアミノ酸についてのＣａＳＲのインビトロ活性についての用量反応曲線を示している。表４は、単回注入プロトコルを使用してＰＡＭ活性を有していた４つのアミノ酸についての化学構造及び結果を提供している。
【０３７９】
【表４】
2019515668.tif 000036
【０３８０】
実施例４−少なくとも３つのアミノ酸を有する例となるフレーバー組成物
本実施例は、ネコ旨味（Ｔ１Ｒ１／Ｔ１Ｒ３）受容体を活性化する第１のアミノ酸、ネコカルシウム感知受容体を活性化する第２のアミノ酸、及び旨味及びカルシウム感知受容体以外のネコ味覚受容体を活性化する第３のアミノ酸を含む、フレーバー組成物について記載する。
【０３８１】
フレーバー組成物は、ネコ旨味受容体を活性化し、かつ、表４の第１アミノ酸群から選択される第１のアミノ酸を含む。フレーバー組成物は、ネコカルシウム感知受容体を活性化し、かつ、表４の第２アミノ酸群から選択される第２のアミノ酸をさらに含む。フレーバー組成物は、表５の第３アミノ酸群から選択される第３のアミノ酸をさらに含む。第３アミノ酸群は、ネコに対して味覚活性であるが、ネコの旨味受容体又はカルシウム感知受容体を活性化しない。
【０３８２】
【表５】
2019515668.tif 000037
【０３８３】
これらの群の各々に由来するアミノ酸を合わせることは、追加的又は相乗的な関係を有しうると考えられる。このような組み合わせを、ネコの味覚プロファイルを発達させために用いることができる。
【０３８４】
さらには、同様の手法を、イヌ及び／又はヒトの味覚プロファイルを発達させるために適用することができる。ヒトカルシウム感知受容体を活性化する化合物が、ネコカルシウム感知受容体を必ずしも活性するとは限らないことが見いだされた。表６は、このような化合物のリストを提供する。
【０３８５】
【表６】
2019515668.tif 000038
【０３８６】
表６に記載されるように、ネコカルシウム感知受容体に対して活性ではないある特定の化合物は、別の味覚受容体に対しては活性である。例えば、Ｌ−トリプトファン、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−ヒスチジン、及びＬ−アラニンは、ネコカルシウム感知受容体を活性化しないが、ネコに対して旨味活性である。このような情報を使用して、例えば、ネコカルシウム感知受容体に対してヒトカルシウム感知受容体など、活性化する味覚受容体に応じて、異なる味覚プロファイルを開発することができる。
【０３８７】
ヒトＣａＳＲとネコＣａＳＲとの結晶構造の比較では、活性部位における非常にわずかな差しか示されないことは、注目に値する（残基のいずれも、我々がモデル化した４Ａのアミノ酸内において、ヒト及びネコの同一性に差異がない）。したがって、ネコＣａＳＲが、アゴニスト及び／又はＰＡＭとしてのアミノ酸の嗜好性にある特定の差異を有することは、注目に値することであり、本明細書に提示された結果が、ヒトＣａＳＲに関する先行技術の些細な拡張ではないという事実を強調している。
【０３８８】
本願で開示される主題及びその利点が詳細に説明されてきたが、添付の特許請求の範囲に定められる本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、本明細書にさまざまな変更、置換、及び変形がなされうることが理解されるべきである。さらには、本発明の範囲は、本明細書に記載されるプロセス、機械、製造、物質の組成、手段、方法、又はステップの特定の実施形態に限定されることは意図されていない。当業者は、本願で開示される主題の開示から容易に認識するであろうことから、本明細書に記載される対応する実施形態と実質的に同じ機能を行う、又は実質的に同じ結果を達成する、現在存在しているか、又は後に開発されるプロセス、機械、製造、物質の組成、手段、方法、又はステップは、本願で開示される主題に従って利用することができる。したがって、添付の特許請求の範囲は、このようなプロセス、機械、製造、物質の組成、手段、方法、又はステップをそれらの範囲内に含めることが意図されている。
【０３８９】
特許、特許出願、特許公開公報、製品の説明書及びプロトコルは、本出願全体にわたって引用され、その開示全体がすべての目的でここに参照することによって本明細書に取り込まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１３Ｃ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１４Ｃ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１５Ｃ】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１６Ｃ】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【図１７Ｃ】
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【図１８Ａ】
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【図１８Ｂ】
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【図１８Ｃ】
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【図１９Ａ】
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【図１９Ｂ】
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【図１９Ｃ】
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【図２０Ａ】
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【図２０Ｂ】
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【図２０Ｃ】
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【図２１−１】
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【図２１−２】
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【図２１−３】
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【図２１−４】
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【図２１−５】
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【図２１−６】
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【図２１−７】
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【図２１−８】
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【図２１−９】
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【図２１−１０】
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【図２１−１１】
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【図２１−１２】
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【図２１−１３】
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【図２１−１４】
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【図２１−１５】
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【図２１−１６】
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【図２１−１７】
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【図２１−１８】
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【図２１−１９】
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【図２１−２０】
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【図２１−２１】
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【図２１−２２】
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【図２１−２３】
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【図２１−２４】
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【図２１−２５】
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【図２１−２６】
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【図２１−２７】
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【図２１−２８】
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【図２１−２９】
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【図２１−３０】
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【図２１−３１】
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【図２１−３２】
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【図２１−３３】
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【図２１−３４】
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【図２１−３５】
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【図２１−３６】
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【図２１−３７】
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【図２１−３８】
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【図２１−３９】
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【図２１−４０】
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【図２１−４１】
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【図２１−４２】
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【図２１−４３】
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【図２１−４４】
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【図２１−４５】
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【図２１−４６】
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【図２１−４７】
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【図２１−４８】
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【図２１−４９】
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【図２１−５０】
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【図２１−５１】
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【図２１−５２】
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【図２１−５３】
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【図２１−５４】
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【図２１−５５】
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【図２１−５６】
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【図２１−５７】
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【図２１−５８】
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【図２１−５９】
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【図２１−６０】
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【図２１−６１】
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【図２１−６２】
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【図２１−６３】
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【図２１−６４】
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【図２１−６５】
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【図２１−６６】
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【図２１−６７】
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【図２１−６８】
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【図２１−６９】
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【図２１−７０】
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【図２１−７１】
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【図２１−７２】
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【図２１−７３】
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【図２１−７４】
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【図２１−７５】
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【図２１−７６】
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【図２１−７７】
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【図２１−７８】
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【図２１−７９】
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【図２１−８０】
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【図２１−８１】
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【図２１−８２】
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【図２１−８３】
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【図２１−８４】
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【図２１−８５】
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【図２１−８６】
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【図２１−８７】
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【図２１−８８】
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【図２１−８９】
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【図２１−９０】
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【図２１−９１】
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【図２２Ａ】
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【図２２Ｂ】
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【図２３−１】
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【図２３−２】
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【図２３−３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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