(57)【要約】  本開示は、グロボシリーズ抗原（すなわちグロボＨ、ステージ特異的胚抗原３「ＳＳＥＡ３」及びステージ特異的胚抗原４「ＳＳＥＡ４」）に対するワクチンを投与することを含む、がん患者のための免疫療法の方法を提供する。具体的には、この方法は、転移性乳がんを有する患者にグロボＨ−ＫＬＨ（ＯＢＩ−８２２）を投与することを含む。本開示はまた、免疫療法の治療候補として適切ながん患者を選択することを含む方法を提供する。さらに、本開示は、グロボシリーズ抗原に特異的に結合するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）及びそのような治療レジメン及び診断レジメンに焦点を合わせるのに有用な関連バイオマーカーを含む治療薬を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
乳がんを治療する方法であって、治療有効用量のグロボシリーズ抗原ワクチンを、乳がんの治療を必要とする被験体に投与すること及び／又はグロボシリーズ抗原ワクチンと交差反応させることを含む、方法。
【請求項２】
グロボシリーズ抗原ワクチンが、担体タンパク質と結合したグロボシリーズ抗原を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
グロボシリーズ抗原が、グロボＨ、ステージ特異的胚抗原３（ＳＳＥＡ３）及びステージ特異的胚抗原４（ＳＳＥＡ４）から選択される抗原を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
担体タンパク質が、ＫＬＨ（キーホールリンペットヘモシアニン）、ＤＴ−ＣＲＭ  １９７（ジフテリア毒素交差反応物質１９７）、ジフテリアトキソイド又は破傷風トキソイドを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
グロボシリーズ抗原ワクチンを医薬組成物として投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
医薬組成物が、グロボＨ−ＫＬＨ及びアジュバントを含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
アジュバントが、サポニン、フロイントアジュバント又はα−ガラクトシルセラミド（α−ＧａｌＣｅｒ）アジュバントから選択される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
医薬組成物がＯＢＩ−８２２／ＯＢＩ−８２１を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項９】
前記投与によって生じる免疫学的反応が、グロボシリーズ抗原ワクチン、グロボシリーズ抗原及び／又は担体タンパク質によって誘導される免疫応答を特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
被験体がヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
治療有効用量が１００μｇ未満である、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
投与手順が、筋肉内注射、皮下注射、静脈内注射、腹腔内注射、動脈内注射、滑液包内注射、髄腔内注射、硬膜外注射又は胸腔内注射を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
ワクチンを１週間〜５年以上の時間間隔で間欠的に投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
ワクチンを、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、５週間に１回、６週間に１回、７週間に１回、８週間に１回、９週間に１回、１０週間に１回、１１週間に１回又は１２週間に１回投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
患者における腫瘍の治療方法であって、前記患者に薬学的有効量のグロボシリーズ抗原ワクチンを投与すること及び／又はグロボシリーズ抗原ワクチンと交差反応させることを含む、方法。
【請求項１６】
グロボシリーズ抗原ワクチンが、担体タンパク質と結合したグロボシリーズ抗原を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
グロボシリーズ抗原が、グロボＨ、ステージ特異的胚抗原３（ＳＳＥＡ３）又はステージ特異的胚抗原４（ＳＳＥＡ４）を含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
担体タンパク質が、ＫＬＨ（キーホールリンペットヘモシアニン）、ＤＴ−ＣＲＭ  １９７（ジフテリア毒素交差反応物質１９７）、ジフテリアトキソイド又は破傷風トキソイドを含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
グロボシリーズ抗原ワクチンが、グロボＨ−ＫＬＨ及びアジュバントを含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項２０】
アジュバントが、サポニン、フロイントアジュバント又はα−ガラクトシルセラミド（α−ＧａｌＣｅｒ）アジュバントから選択される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
グロボシリーズ抗原ワクチンがＯＢＩ−８２２／ＯＢＩ−８２１を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項２２】
グロボシリーズ抗原ワクチンが、ＯＢＩ−８２２及び薬学的に許容される賦形剤を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項２３】
前記投与によって生じる免疫学的反応が、グロボシリーズ抗原ワクチン、グロボシリーズ抗原及び／又は担体タンパク質によって誘導される免疫応答を特徴とする、請求項１５に記載の方法。
【請求項２４】
グロボシリーズ抗原ワクチン又はグロボシリーズ抗原ワクチンとの交差反応が、グロボシリーズ抗原に対するモノクローナル抗体の免疫原性産生を誘導する、請求項１５に記載の方法。
【請求項２５】
産生される抗体が、ＩｇＧ、ＩｇＭ又はその両方である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
腫瘍が、乳がん、肺がん、食道がん、直腸がん、胆管がん、肝臓がん、口腔がん、胃がん、腸がん、結腸がん、鼻咽頭がん、腎臓がん、前立腺がん、卵巣がん、子宮頸がん、子宮内膜がん、膵臓がん、精巣がん、膀胱がん、頭頸部がん、口腔がん、神経内分泌がん、副腎がん、甲状腺がん、骨がん、胆嚢がん、口咽頭がん、喉頭がん、皮膚がん、基底細胞癌、扁平上皮癌、黒色腫又は脳腫瘍である、請求項１５に記載の方法。
【請求項２７】
腫瘍が、転移性又は非転移性である、請求項１５に記載の方法。
【請求項２８】
グロボシリーズ抗原ワクチン又はグロボシリーズ抗原ワクチンとの交差反応を、１つ以上の抗増殖剤と組み合わせて患者に投与する、請求項１５〜２３に記載の方法。
【請求項２９】
抗増殖剤が、シクロホスファミド、アヘン製剤、顆粒球−コロニー刺激因子（ＧＣＳＦ）、エストロゲン阻害剤、アロマターゼ阻害剤、下垂体下方調節剤、タモキシフェン選択的エストロゲン受容体調節剤、ラロキシフェン、エストロゲン受容体下方調節剤、抗凝固薬、酵素、造血成長因子、抗腫瘍薬、代謝拮抗物質、その他の細胞傷害性薬剤、ビンカアルカロイド、エピポドフィロトキシン、アルキル化剤、タキサン、抗腫瘍抗生物質、カンプトテシン、ニトロソ尿素、ＨＥＲ１／ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤、ＶＥＧＦタンパク質阻害剤、ＨＥＲ−２／ＥｒｂＢ２阻害剤、インターフェロン、インターロイキン、モノクローナル抗体又はグルココルチコイドステロイドから選択される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
抗増殖剤が、エルロチニブ、ドセタキセル、ゲムシタビン、シスプラチン；カルボプラチン；パクリタキセル、トラスツズマブ、テモゾロミド、タモキシフェン、ドキソルビシン、オキサリプラチン、ボルテゾミブ、スーテント、レトロゾール、イマチニブメシレート、ＭＥＫ阻害剤、フルベストラント、ロイコボリン（フォリン酸）；ラパマイシン、ラパチニブ、ロナファルニブ、ソラフェニブ、ゲフィチニブ、イリノテカン、チピファルニブ、クレモフォール不含、パクリタキセル、バンデタニブ、クロラムムブシル、テムシロリムス、パゾパニブ、カンフォスファミド、チオテパ、シクロホスファミド、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ビノレルビン、ノバントロン、テニポシド、エダトレキセート、ダウノマイシン、アミノプテリン、カペシタビン、イバンドロネート、トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ  ２０００、ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）、タモキシフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、オナプリストン、トレミフェンシトレート、４（５）−イミダゾール、アミノグルテチミド、メゲストロールアセテート、エキセメスタン、フォルメスタニー、ファドロゾール、ボロゾール、レトロゾール、アナストロゾール、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、ゴセレリン、トロキサシタビン（α−１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）、脂質キナーゼ阻害剤、オブリメルセン、アンギオザイム、アロベクチン、ロイベクチン、バクシド、アルデスロイキン、ルートテカン、アバレリクス、ベバシズマブ、アレムツズマブ、ベバシズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、リツキシマブ、ペルツズマブ、トラスツズマブ、トシツモマブ、ゲムツズマブ又はオゾガマイシンから選択される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
免疫療法によってがんに罹患している被験体を治療する方法であって、免疫応答を誘導する又は調節するために有用な治療有効用量の免疫原性物質を、治療を必要とする被験体に投与すること及び／又は前記免疫原性物質と交差反応させることを含む、方法。
【請求項３２】
免疫原性物質が、担体タンパク質と結合したグロボシリーズ抗原を含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
グロボシリーズ抗原が、グロボＨ、ステージ特異的胚抗原３（ＳＳＥＡ３）又はステージ特異的胚抗原４（ＳＳＥＡ４）を含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
担体タンパク質が、ＫＬＨ（キーホールリンペットヘモシアニン）、ＤＴ−ＣＲＭ  １９７（ジフテリア毒素交差反応物質１９７）、ジフテリアトキソイド又は破傷風トキソイドを含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
免疫原性物質がＯＢＩ−８２２及び関連する変異体である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３６】
前記投与によって生じる免疫学的反応が、グロボシリーズ抗原ワクチン、グロボシリーズ抗原及び／又は担体タンパク質によって誘導される免疫応答を特徴とする、請求項３１に記載の方法。
【請求項３７】
被験体がヒトである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３８】
免疫応答が、ＩｇＧ、ＩｇＭ又は細胞媒介応答を含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３９】
細胞がＢ細胞又はＴ細胞である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記方法が、グロボシリーズ抗原の相互作用を調節することによって被験体の生存率を改善することをさらに含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項４１】
生存率が、全生存率及び／又は無増悪生存率を含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
グロボシリーズ抗原相互作用の調節が、以下の１つ以上：
（ａ）腫瘍を死滅させるための抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）の誘導；
（ｂ）抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）媒介腫瘍細胞死滅を誘発するための抗グロボシリーズ抗原ＩｇＭ／ＩｇＧ免疫応答の誘導；
（ｃ）腫瘍細胞からのグロボシリーズ抗原−セラミドシェディングを捕捉し、トランスリン関連因子Ｘ（ＴＲＡＸ）依存性血管新生をブロックするための抗グロボシリーズ抗原抗体の誘導；
（ｄ）グロボシリーズ抗原−セラミド誘導Ｎｏｔｃｈ  １依存性免疫抑制をブロックし、それによってＴ細胞増殖及びサイトカイン産生を増強する抗グロボシリーズ抗原抗体の誘導；
（ｅ）アポトーシスをもたらす抗グロボシリーズ抗原抗体の誘導；
（ｆ）グロボシリーズ抗原誘導性血管新生の阻害；又は
（ｇ）ＯＢＩ−８２２ワクチン接種がアポトーシスを誘導すること
をさらに含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
被験体における免疫応答を誘導／増強する方法であって、前記被験体に免疫原性物質を投与すること及び／又は前記免疫原性物質と交差反応させることを含む、方法。
【請求項４４】
免疫原性物質が、担体タンパク質と結合したグロボシリーズ抗原である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
グロボシリーズ抗原が、グロボＨ、ステージ特異的胚抗原３（ＳＳＥＡ３）又はステージ特異的胚抗原４（ＳＳＥＡ４）を含む、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
担体タンパク質が、ＫＬＨ（キーホールリンペットヘモシアニン）、ＤＴ−ＣＲＭ  １９７（ジフテリア毒素交差反応物質１９７）、ジフテリアトキソイド又は破傷風トキソイドを含む、請求項４４に記載の方法。
【請求項４７】
免疫原性物質がＯＢＩ−８２２及び関連する変異体である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４８】
前記投与によって生じる免疫学的反応が、グロボシリーズ抗原ワクチン、グロボシリーズ抗原及び／又は担体タンパク質によって誘導される免疫応答を特徴とする、請求項４３に記載の方法。
【請求項４９】
被験体がヒトである、請求項４３に記載の方法。
【請求項５０】
免疫応答が、細胞性免疫又は体液性免疫である、請求項４３に記載の方法。
【請求項５１】
ＯＢＩ−８２２ワクチン誘導免疫応答性を、それを必要とする被験体において改善する方法であって、ＯＢＩ−８２２及び以下から選択される１つ以上を含む免疫原性有効量の薬学的に許容される賦形剤を投与することを含む、方法：
（ａ）ワクチンの２回以上（例えば３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１１回又は１２回以上）の投与；
（ｂ）２回の連続する投与の間の時間間隔及び／若しくは投与量の調整；
（ｃ）投与経路の調整及び／若しくは投与の注射部位の変更；又は
（ｄ）各々の投与が抗体免疫応答を増加させる及び／若しくは抗原−抗体結合親和性を増加させる、上記の任意の組み合わせ。
【請求項５２】
注射を、免疫応答ブースター剤の添加によって変更及び／又は補完することができる、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
免疫応答が、細胞性免疫又は体液性免疫である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５４】
免疫応答が、ＩｇＧ、ＩｇＭ又は細胞媒介応答を含む、請求項５１に記載の方法。
【請求項５５】
細胞がＢ細胞又はＴ細胞である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
被験体がヒトである、請求項５１に記載の方法。
【請求項５７】
がん治療に適切な、よってがん治療を必要とする患者を同定するための方法であって、
（ａ）前記患者に有効用量のグロボシリーズ抗原ワクチンを投与すること；
（ｂ）前記患者の免疫応答を評価すること；
（ｃ）各患者におけるグロボシリーズ抗原の発現を測定すること；並びに
（ｄ）免疫応答の指標及びグロボシリーズ抗原の発現に基づいて患者の適合性を分類し、ここで、前記指標が、回復の良好な予後を有する前記患者を示すこと
を含む、方法。
【請求項５８】
グロボシリーズ抗原ワクチンが、担体タンパク質と結合したグロボシリーズ抗原を含む、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
グロボシリーズ抗原が、グロボＨ、ステージ特異的胚抗原３（ＳＳＥＡ３）又はステージ特異的胚抗原４（ＳＳＥＡ４）を含む、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
担体タンパク質が、ＫＬＨ（キーホールリンペットヘモシアニン）、ＤＴ−ＣＲＭ  １９７（ジフテリア毒素交差反応物質１９７）、ジフテリアトキソイド又は破傷風トキソイドを含む、請求項５８に記載の方法。
【請求項６１】
グロボシリーズ抗原ワクチンを医薬組成物として投与する、請求項５７に記載の方法。
【請求項６２】
医薬組成物が、グロボＨ−ＫＬＨ及びアジュバントを含む、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
アジュバントが、サポニン、フロイントアジュバント又はα−ガラクトシルセラミド（α−ＧａｌＣｅｒ）アジュバントから選択される、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
医薬組成物がＯＢＩ−８２２／ＯＢＩ−８２１を含む、請求項６１に記載の方法。
【請求項６５】
がんが、乳がん、肺がん、食道がん、直腸がん、胆管がん、肝臓がん、口腔がん、胃がん、腸がん、結腸がん、鼻咽頭がん、腎臓がん、前立腺がん、卵巣がん、子宮頸がん、子宮内膜がん、膵臓がん、精巣がん、膀胱がん、頭頸部がん、口腔がん、神経内分泌がん、副腎がん、甲状腺がん、骨がん、胆嚢がん、口咽頭がん、喉頭がん、皮膚がん、基底細胞癌、扁平上皮癌、黒色腫又は脳腫瘍である、請求項５７に記載の方法。
【請求項６６】
がんが乳がんである、請求項５７に記載の方法。
【請求項６７】
乳がんが、ステージＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＥＲ（＋）、ＰＲ（＋）、ＨＥＲ２（＋）、トリプルネガティブ、転移性又は非転移性である、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
免疫応答の指標が、ＩｇＧ力価、ＩｇＭ力価、無増悪生存期間（ＰＦＳ）及び／又は全生存期間（ＯＳ）の評価を含む、請求項５７に記載の方法。
【請求項６９】
がん治療の予後及び／又はがん治療を必要とする患者の薬剤応答を決定するための方法であって、
（ａ）がんを有すると診断された患者を同定すること；
（ｂ）請求項１に記載の治療を受けた後の前記患者の適合性を測定することによって免疫応答のレベルを決定すること；
（ｃ）請求項５７で得られたデータを分析すること
を含む、方法。
【請求項７０】
がんが、乳がん、肺がん、食道がん、直腸がん、胆管がん、肝臓がん、口腔がん、胃がん、腸がん、結腸がん、鼻咽頭がん、腎臓がん、前立腺がん、卵巣がん、子宮頸がん、子宮内膜がん、膵臓がん、精巣がん、膀胱がん、頭頸部がん、口腔がん、神経内分泌がん、副腎がん、甲状腺がん、骨がん、胆嚢がん、口咽頭がん、喉頭がん、皮膚がん、基底細胞癌、扁平上皮癌、黒色腫又は脳腫瘍である、請求項６９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、米国仮特許出願第６２／３２６，６２３号（２０１６年４月２２日出願）、同第６２／３４３，５３０号（２０１６年５月３１日出願）、同第６２／３４５，７５５号（２０１６年６月４日出願）及び同第６２／３８１，８７５号２０１６年８月３１日）の優先権を主張するものである。前記出願の全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、グロボシリーズの抗原に対するワクチンを患者に投与することを含む、がん患者の免疫療法のための方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
糖鎖抗原グロボＨ（Ｆｕｃα１→２Ｇａｌβ１→３ＧａｌＮＡｃβ１→３Ｇａｌα１→４Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃ）は、セラミド結合糖脂質として最初に単離され、１９８４年にＨａｋｏｍｏｒｉ  ｅｔ  ａｌ．によって乳がんＭＣＦ−７細胞から同定された（Ｂｒｅｍｅｒ  Ｅ  Ｇ，ｅｔ  ａｌ．（１９８４）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２５９：１４７７３−１４７７７）。抗グロボＨモノクローナル抗体に関するさらなる試験は、グロボＨが、前立腺がん、胃がん、膵臓がん、肺がん、卵巣がん及び結腸がんを含む多くの他のがんに存在し、並びに免疫系が容易にアクセスできない正常分泌組織の内腔表面にごくわずかに発現されることを示した（Ｒａｇｕｐａｔｈｉ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍ  Ｉｎｔ  Ｅｄ  ３６：１２５−１２８）。さらに、乳がん患者の血清は、高レベルの抗グロボＨ抗体を含むことが証明されている（Ｇｉｌｅｗｓｋｉ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９８：３２７０−３２７５；Ｈｕａｎｇ  Ｃ−Ｙ，ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １０３：１５−２０；Ｗａｎｇ  Ｃ−Ｃ，ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １０５（３３）：１１６６１−１１６６６）。グロボＨ陽性腫瘍を有する患者は、グロボＨ陰性腫瘍を有する患者と比較してより短い生存期間を示した（Ｃｈａｎｇ，Ｙ−Ｊ，ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １０４（２５）：１０２９９−１０３０４）。これらの所見により、六糖エピトープであるグロボＨは、魅力的な腫瘍マーカー及びがんワクチン開発のための実現可能な標的となっている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｂｒｅｍｅｒ  Ｅ  Ｇ，ｅｔ  ａｌ．（１９８４）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２５９：１４７７３−１４７７７
【非特許文献２】Ｒａｇｕｐａｔｈｉ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍ  Ｉｎｔ  Ｅｄ  ３６：１２５−１２８
【非特許文献３】Ｇｉｌｅｗｓｋｉ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９８：３２７０−３２７５
【非特許文献４】Ｈｕａｎｇ  Ｃ−Ｙ，ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １０３：１５−２０
【非特許文献５】Ｗａｎｇ  Ｃ−Ｃ，ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １０５（３３）：１１６６１−１１６６６
【非特許文献６】Ｃｈａｎｇ，Ｙ−Ｊ，ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １０４（２５）：１０２９９−１０３０４
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本開示の態様及び実施形態は、免疫応答（ＩｇＧ及び／又はＩｇＭ）を誘導／調節するために有用なグロボシリーズの抗原を標的とする免疫原性物質（例えばＯＢＩ−８２２）を、がんの治療を必要とする被験体に投与することを含む、がんに罹患した被験体を免疫療法によって治療するための方法を提供し、前記方法は、被験体の生存率を改善するように、グロボシリーズ抗原の相互作用を調節することによって生存率（全生存率及び／又は無増悪生存率を含む）を改善することを含む。一態様では、グロボシリーズの抗原を標的とする免疫原性物質は、例えばＯＢＩ−８２２である。本発明者らの以前のＰＣＴ特許出願（公開番号：ＷＯ２０１５１５９１１８Ａ２及びＷＯ２０１６０４４３２６Ａ１）を参照されたい。これらの出願の開示は、グロボＨ−ＫＬＨ複合糖質（ＯＢＩ−８２２）及び／又は治療用アジュバント（ＯＢＩ−８２１／ＯＢＩ−８３４）を含む免疫原性／治療用組成物、並びにこれらを製造し、がんなどの増殖性疾患を治療するために使用する方法を包含する。治療用組成物は、一部には、がん細胞などの損傷細胞又は異常細胞によってもたらされる危険性から、免疫系を介して自らを守る身体の自然の能力を強化するためのがんワクチンとして働くことが想定されている。
【０００６】
一実施形態では、免疫原性物質は、ＯＢＩ−８２２及び関連する変異体を含み得る。
【０００７】
特定の実施形態では、免疫応答は、ＩｇＧ（サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４を含む）、ＩｇＭ、グロボＨシリーズ抗原／腫瘍に対するＣＴＬ（細胞傷害性リンパ球）を含み得る。
【０００８】
特定の実施形態では、臨床的に意味のある利点には、以下における変化が含まれ得る：無増悪生存率；全生存率；（十分に耐容される及び／又は重大な安全性の懸念がない）；客観的な奏功率；進行までの時間；無病生存率；腫瘍応答；生活の質の改善；固形腫瘍のサイズの縮小及び／又は腫瘍関連抗原（主にグロボＨ又はグロボＨを含む）の減少。
【０００９】
特定の態様では、投与レジメンは、２回以上（例えば３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回又は１０回以上）のワクチンの投与；２回の連続する投与の間の時間間隔及び／若しくは投与量レジメンの調整；投与経路の調整及び／若しくは注射部位／投与位置の変更／交互実施又は上記のいずれかの任意の組み合わせを含むことができ、これにより、各々の投与は免疫応答を増加させる［例えば力価−ＩｇＧ及び／若しくはＩｇＭ  Ａｂの量及び／又は親和性／アビディティの増加；グロボＨ抗原複合体のグロボＨ部分の免疫原性がより低い部位へのＡｂの誘導（例えば複合体中のよりアクセスしにくいと考えられるグロボＨ抗原の部分）］。特定の態様では、注射は、免疫応答ブースター剤の添加によって変更及び／又は補完することができる。
【００１０】
特定の態様では、グロボシリーズ抗原の相互作用の調節には、以下のものが含まれ得る：複数回のワクチン接種で親和性が高められた抗グロボＨ抗体の誘導；Ｂ細胞の胚中心のグロボＨシリーズ腫瘍抗原への拡大；高親和性抗グロボＨ抗体を含む胚中心の優先的な拡大；通常、単回（又は少ない回数の抗原への暴露の反復）では意味のある応答を生じさせるのに十分な数で存在しない低頻度のＢ細胞の誘導（例えば、それらはほとんどの抗体が結合しないエピトープに結合し得る）；抗腫瘍応答の長期間の維持にとって重要であり得る抗体分泌形質細胞（「抗体分泌形質細胞」はＢ細胞が分化するものである）及び記憶Ｂ細胞の増殖拡大；Ａｂクラススイッチの速度の増加［良好なＴ細胞ヘルパー機能を必要とするか又はＢ細胞がＩｇＧに切り替わらない］；抗体応答の速度の増加（例えば、連続的なワクチン接種は、ＫＬＨへの結合なしで、シクロホスファミドの同時投与なしで及び／又は反復ワクチン接種なしで得られるよりも迅速な抗体の拡大をもたらし得る）；上記の抗腫瘍応答の発現及び維持を妨げるＴｒｅｇ活性の低下；腫瘍の死滅のための抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）の誘導；ＣＤＣ及びＡＤＣＣ媒介腫瘍細胞死滅を誘発するための抗グロボシリーズ抗原のＩｇＭ／ＩｇＧ免疫応答の誘導；腫瘍細胞からのグロボシリーズ抗原−セラミドシェディングを捕捉し、トランスリン関連因子Ｘ（ＴＲＡＸ）依存性血管新生をブロックする抗グロボシリーズ抗原抗体の誘導；グロボシリーズ抗原−セラミド誘導Ｎｏｔｃｈ  １依存性免疫抑制をブロックし、それによってＴ細胞増殖及びサイトカイン産生を増強する抗グロボシリーズ抗原抗体の誘導；アポトーシスをもたらす抗グロボシリーズ抗原抗体の誘導；グロボシリーズ抗原誘導性血管新生の阻害；ＯＢＩ−８２２ワクチン接種はアポトーシスを誘導する；ＣＴＬ（細胞傷害性リンパ球）の誘導。
【００１１】
［図面の簡単な説明］
Ｅｒｒｏｒ！Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ｓｏｕｒｃｅ  ｎｏｔ  ｆｏｕｎｄ．。ＯＢＩ−８２２：能動的がん免疫療法は、腫瘍の死滅のためにＡＤＣＣ及びＣＤＣを誘導する。ＯＢＩ−８２２によるグロボＨ−セラミド枯渇は、ＴＲＡＸ依存性血管新生を有効に阻止し、腫瘍退縮を達成する。腫瘍分泌可溶性因子は、内皮細胞上のそれぞれの受容体に結合し、ホスホリパーゼＣ（ＰＬＣ）活性化及び細胞内カルシウム放出を誘発し、内皮細胞の増殖、遊走及び管形成を促進する。ＰＬＣは、セカンドメッセンジャーの「初期発生器」としての機能を果たし、血管新生の初期段階を駆動する。ＰＬＣ活性は、ＰＬＣβ１活性をブロックするトランスリン関連因子Ｘ（ＴＲＡＸ）を含むいくつかの結合パートナーによって調節される。この事象の分子機構は、ＴＲＡＸへのグロボ−Ｈセラミドの結合と、結果として生じるＰＬＣβ１の放出及び活性化を含む。
【００１２】
Ｅｒｒｏｒ！Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ｓｏｕｒｃｅ  ｎｏｔ  ｆｏｕｎｄ．。ＯＢＩ−８２２は、グロボＨ−セラミドを枯渇させ、これは次にＮｏｔｃｈ  １分解を増加させ、腫瘍の免疫抑制作用をブロックし、腫瘍退縮をもたらす。Ｎｏｔｃｈシグナル伝達経路は、ほとんどの生物において進化的に保存された細胞シグナル伝達系であり、細胞増殖、分化、アポトーシス及び生存を調節することができる。Ｎｏｔｃｈ  １の調節は、Ｅタンパク質転写因子Ｅ２Ａ及びその天然阻害剤ＩＤ３によって制御される。Ｎｏｔｃｈ  １は、Ｅ３ユビキチンリガーゼ、ＩＴＣＨを介したユビキチン化によって分解される。免疫細胞へのグロボ−Ｈセラミドの添加は、それらの増殖及びサイトカイン又は免疫グロブリン分泌を阻害し得る。グロボ−Ｈセラミドは、ＩＴＣＨ発現を伴うＩＤ３及びＥＧＲ２／３の誘導を介したＮｏｔｃｈ  １シグナル伝達の阻害を含む免疫抑制を誘導することができた。
【００１３】
Ｅｒｒｏｒ！Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ｓｏｕｒｃｅ  ｎｏｔ  ｆｏｕｎｄ．。ＯＢＩ−８２２はアポトーシスをもたらす。アポトーシス（プログラム細胞死）は、多細胞生物の正常な発達及び組織リモデリングに寄与する。焦点接着キナーゼ（ＦＡＫ）は、インテグリン、がん遺伝子及び神経ペプチドからのシグナルの組み込みに関係づけられている。ヒト臍帯静脈内皮細胞における増殖因子欠乏誘発性アポトーシスの間に、カスパーゼ３によるＦＡＫのタンパク質分解切断が報告されており、これはＦＡＫとアポトーシスとの間の関連を示唆する。
【００１４】
Ｅｒｒｏｒ！Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ｓｏｕｒｃｅ  ｎｏｔ  ｆｏｕｎｄ．は、試験薬の９回の注射を受けた後の無増悪生存率（ｍＩＴＴ）を示した（層別ログランク検定、ｐ＝０．０５４２）。
【００１５】
Ｅｒｒｏｒ！Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ｓｏｕｒｃｅ  ｎｏｔ  ｆｏｕｎｄ．は、試験薬の９回の注射を受けた後の無増悪生存率（ｍＩＴＴ）をベースライン時の疾患と共に示した（層別ログランク検定、Ｐ＝０．０３６２）。
【００１６】
Ｅｒｒｏｒ！Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ｓｏｕｒｃｅ  ｎｏｔ  ｆｏｕｎｄ．は、ＩｇＧ免疫応答（ＩｇＧ基準１：６４０）を伴う／伴わない試験薬治療対プラセボの無増悪生存率（ｍＩＴＴ）を示した。
【００１７】
Ｅｒｒｏｒ！Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ｓｏｕｒｃｅ  ｎｏｔ  ｆｏｕｎｄ．は、ＩｇＧ免疫応答（ＩｇＧ基準１：６４０）を伴う／伴わない試験薬治療対プラセボの全生存率（ｍＩＴＴ）を示した。
【００１８】
Ｅｒｒｏｒ！Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ｓｏｕｒｃｅ  ｎｏｔ  ｆｏｕｎｄ．は、初期ＩｇＭ免疫応答（ＩｇＭ基準）を伴う／伴わない、第２週に試験薬の１回の注射を受けた後の無増悪生存率（ｍＩＴＴ）をプラセボと比較して示した。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図９】図９は、患者がＯＢＩ−８２２ワクチンの注射を受けた後、高い抗ＫＬＨ  ＩｇＧ免疫応答があることを示した。
【図１０】図１０は、ＯＢＩ−８２２治療の卵巣がん臨床試験を受けた陰性対照（患者番号：０６５）を示した。
【図１１】図１１は、ＯＢＩ−８２２治療の卵巣がん臨床試験を受けたステージＩＩＩの卵巣がん（患者番号：０３５）を示した。
【図１２】図１２は、ＯＢＩ−８２２治療の卵巣がん臨床試験を受けたステージＩＶファローピウス管がん（患者番号：０４１）を示した。
【図１３】図１３は、ＯＢＩ−８２２治療の卵巣がん臨床試験を受けたステージＩＩＩの卵巣がん（患者番号：０６０）を示した。
【図１４】図１４は、治験薬混合の手順を示した。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本発明は、がん又は感染症などの疾患に罹患した被験体の免疫療法のための方法であって、内因性免疫応答を増強し、内因性応答の活性化を刺激するか又は内在性応答の抑制を阻害する治療有効量の化合物又は薬剤を含む組成物を被験体に投与することを含む方法に関する。より具体的には、本開示は、がんに罹患した被験体における内因性免疫応答を増強し、それによって患者を治療するための方法であって、治療有効量の免疫原性物質を被験体に投与することを含む方法を提供する。
【００２１】
定義：
本明細書で使用される場合の「投与する」、投与レジメンの実施形態は、以下の特徴を含み得る：１）２回以上（例えば３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回又は１０回以上）ワクチンを投与する；２）各々の投与は免疫応答（上記参照）を増加させる［力価−ＩｇＧ及び／若しくはＩｇＭ  Ａｂの量及び／又は親和性／アビディティを増加させる；グロボＨ抗原複合体のグロボＨ部分のより低い免疫原性部位へのＡｂの誘導（例えば複合体中のよりアクセスしにくいと考えられるグロボＨ抗原の部分）］。
【００２２】
本明細書中で使用される場合、「治療」は、治療される個体又は細胞の自然経過を改変しようとする臨床的介入を指し、予防のために又は臨床病理の経過中のいずれかに実施することができる。治療の望ましい効果には、疾患の発症又は再発の予防、症状の軽減、疾患の任意の直接又は間接的な病理学的結果の縮小、炎症及び／又は組織／臓器の損傷の予防又は減少、疾患の進行速度の低下、疾患状態の改善又は緩和、並びに寛解又は予後の改善が含まれる。いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、疾患又は障害の発症を遅らせるために使用される。
【００２３】
「有効量」とは、所望の治療結果又は予防結果を達成するのに必要な用量及び期間で有効な量を指す。
【００２４】
本発明の物質／分子の「治療有効量」は、個体の疾患状態、年齢、性別及び体重、並びに個体における所望の応答を誘発する物質／分子の能力などの因子に応じて異なり得る。治療有効量はまた、物質／分子の治療上の有益な効果が毒性又は有害作用を上回る量である。「予防有効量」は、所望の予防結果を達成するのに必要な用量及び期間で有効な量を指す。必ずしも必要ではないが典型的には、予防用量は疾患の前又は初期段階の被験体において使用されるので、予防有効量は治療有効量より低い。
【００２５】
「有害事象」（ＡＥ）毒性は、国立がん研究所のがん治療評価プログラムによって開発された米国ＮＣＩ共通毒性基準、バージョン４に従って測定される。許容できない毒性の基準には、任意のグレード４以上の毒性が含まれるべきであるが、局所皮膚反応、発熱、悪寒、発汗、蕁麻疹及び／又は掻痒は、抗体／アジュバント投与の一般的な副作用であって、可逆性でありかつ支持的管理によって制御されるものであるので、これらを除くべきである。理論的には、皮膚、関節、腎臓又は他の症状発現によって顕在化するような免疫複合疾患は、起こり得るが、マウスタンパク質への事前暴露がない場合には滅多に起こらないものである。これらは、影響を受けた被験体の治療を中止するための指標となるが、新たな被験体の追加は継続し得る。有害事象は、治験薬の使用に関連するとみなされるか否かに関わらず、無作為化の日から、被験体の無作為化から最大２年間続く追跡期間までの間に、被験体が経験した任意の身体的又は臨床的変化又は疾患である。これには、新たな疾病の発症及び既存の状態の増悪が含まれる。治療期間中に治療を中止した被験体については、試験治療（ＯＢＩ−８２２／ＯＢＩ−８２１又は対照）の最終投与後２８日目まで有害事象を記録すべきである。
【００２６】
「抗体」（Ａｂ）及び「免疫グロブリン」（Ｉｇ）は、同じ構造特性を有する糖タンパク質である。抗体は特定の抗原に対して結合特異性を示すが、免疫グロブリンは、抗体及び一般に抗原特異性を欠く他の抗体様分子の両方を含む。後者の種類のポリペプチドは、例えばリンパ系によって低レベルで産生され、骨髄腫によって高レベルで産生される。「抗体」及び「免疫グロブリン」という用語は、最も広い意味で交換可能に使用され、モノクローナル抗体（例えば完全長又は無傷モノクローナル抗体）、ポリクローナル抗体、一価抗体、多価抗体、多重特異性抗体（例えば、所望の生物学的活性を示す限りは二重特異性抗体）を含み、特定の抗体フラグメント（本明細書中でより詳細に説明される）をも含み得る。抗体は、キメラ、ヒト、ヒト化及び／又は親和性成熟抗体であり得る。
【００２７】
「可変」及び「相補性決定領域」（ＣＤＲ）
「可変」という用語は、可変ドメインの特定の部分が、抗体間で配列が大きく異なり、その特定の抗原に対する各特定の抗体の結合及び特異性において使用されるという事実を指す。しかしながら、可変性は、抗体の可変ドメイン全体に均一に分布しているわけではない。これは、軽鎖及び重鎖可変ドメインの両方における相補性決定領域（ＣＤＲ）又は超可変領域と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク（ＦＲ）と呼ばれる。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、それぞれ、３つのＣＤＲによって連結された、主としてβシート構造をとる４つのＦＲ領域を含み、ＣＤＲは、βシート構造を連結するループを形成し、場合によってはβシート構造の一部を形成する。各鎖中のＣＤＲは、ＦＲ領域によって近接して一緒に保持され、他の鎖由来のＣＤＲと共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）参照）。定常ドメインは、抗原への抗体の結合に直接関与しないが、抗体依存性細胞毒性における抗体の関与などの様々なエフェクター機能を示す。抗体のパパイン消化は、それぞれが単一の抗原結合部位を有する「Ｆａｂ」フラグメントと呼ばれる２つの同一の抗原結合フラグメント、及び残りの、容易に結晶化する能力を反映した名前を有する「Ｆｃ」フラグメントを、生じる。ペプシン処理は、２つの抗原結合部位を有しかつ依然として抗原を架橋することができる、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを生じる。
【００２８】
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識及び抗原結合部位を含む最小限の抗体断片である。二本鎖Ｆｖ種において、この領域は、緊密で非共有結合的に結合した１つの重鎖及び１つの軽鎖可変ドメインの二量体からなる。一本鎖Ｆｖ種では、１つの重鎖及び１つの軽鎖可変ドメインを、軽鎖と重鎖が二本鎖Ｆｖ種のものと類似の「二量体」構造で結合できるように、柔軟なペプチドリンカーによって共有結合させることができる。この構造において、各可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用して、ＶＨ−ＶＬ二量体の表面上の抗原結合部位を規定する。集合的に、６つのＣＤＲは抗体に抗原結合特異性を付与する。しかしながら、単一の可変ドメイン（又は抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）でさえも、結合部位全体よりも低い親和性であるが、抗原を認識して結合する能力を有する。
【００２９】
Ｆａｂフラグメントはまた、軽鎖の定常ドメイン及び重鎖の第１定常ドメイン（ＣＨ１）を含む。Ｆａｂ’フラグメントは、抗体ヒンジ領域由来の１つ以上のシステインを含む重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端における数個の残基の付加によってＦａｂフラグメントと異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（１つ又は複数）が遊離チオール基を担持するＦａｂ’についての本明細書における名称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体フラグメントはもともと、それらの間にヒンジシステインを有するＦａｂ’フラグメントの対として産生された。
【００３０】
任意の脊椎動物種由来の抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２つの明確に異なる型の１つに割り当てることができる。
【００３１】
重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に依存して、抗体（免疫グロブリン）を異なるクラスに割り当てることができる。ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭの５つの主要なクラスの免疫グロブリンがあり、これらのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２にさらに分類し得る。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ及びμと呼ばれる。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造及び三次元立体配置は周知であり、例えば、Ａｂｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ  ｅｄ．（２０００）に一般的に記載されている。抗体は、抗体と１つ以上の他のタンパク質又はペプチドとの共有結合又は非共有結合によって形成される、より大きな融合分子の一部であり得る。
【００３２】
本明細書中で使用される場合、「単離された抗体」は、同定され、その天然環境の成分から分離及び／又は回収されたものである「単離された」抗体を含み得る。その天然環境の夾雑成分は、抗体の研究、診断又は治療的使用を妨げる物質であり、酵素、ホルモン及び他のタンパク質性又は非タンパク質性溶質を含み得る。一実施形態では、抗体は、（１）例えばローリー法によって測定した場合に抗体の９５重量％を超えるまで、いくつかの実施形態では９９重量％を超えるまで、（２）例えばスピニングカップシーケネータを用いてＮ末端若しくは内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度まで、又は（３）例えばクマシーブルー若しくは銀染色を用いる還元若しくは非還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥによって均質になるまで精製される。単離された抗体は、抗体の天然の環境の少なくとも１つの成分が存在しないため、組換え細胞内にインサイチュで抗体を含む。しかしながら、通常、単離された抗体は少なくとも１つの精製工程によって調製される。
【００３３】
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」（ｍＡＢ）という用語は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指し、例えば、集団を構成する個々の抗体は、少量で存在し得る、起こり得る天然の突然変異を除いて同一である。したがって、「モノクローナル」という修飾語は、別個の抗体の混合物ではないという抗体の特徴を示す。そのようなモノクローナル抗体は、典型的には、標的に結合するポリペプチド配列を含む抗体を包含し、ここで、標的結合ポリペプチド配列は、複数のポリペプチド配列から単一の標的結合ポリペプチド配列を選択することを含む工程によって得られた。例えば、選択工程は、ハイブリドーマクローン、ファージクローン又は組換えＤＮＡクローンのプールなどの複数のクローンからユニークなクローンを選択することであり得る。選択された標的結合配列は、例えば標的に対する親和性を改善する、標的結合配列をヒト化する、細胞培養におけるその産生を改善する、インビボでその免疫原性を低減する、多重特異性抗体を作製する等のためにさらに改変することができ、改変された標的結合配列を含む抗体も本発明のモノクローナル抗体であることが理解されるべきである。典型的には異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対するものである。モノクローナル抗体調製物は、それらの特異性に加えて、典型的には他の免疫グロブリンが夾雑していないという点で有利である。「モノクローナル」という修飾語は、抗体の実質的に均質な集団から得られるという抗体の特性を示すものであり、任意の特定の方法による抗体の作製を必要とすると解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ法（例えばＫｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）；Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ  ｅｄ．１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ５６３−６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１））、組換えＤＮＡ法（例えば米国特許第４，８１６，５６７号参照）、ファージディスプレイ技術（例えばＣｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９２）；Ｓｉｄｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９−３１０（２００４）；Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３（２００４）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０１（３４）：１２４６７−１２４７２（２００４）；及びＬｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８４（１−２）：１１９−１３２（２００４）参照）、並びにヒト免疫グロブリン遺伝子座又はヒト免疫グロブリン配列をコードする遺伝子の一部又は全部を有する、動物におけるヒト又はヒト様抗体を作製するための技術（例えばＷＯ９８／２４８９３；ＷＯ９６／３４０９６；ＷＯ９６／３３７３５；ＷＯ９１／１０７４１；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：２５５１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６２：２５５−２５８（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：３３（１９９３）；米国特許第５，５４５，８０７号；同第５，５４５，８０６号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；同第５，６６１，０１６号；  Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ．Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３（１９９２）；Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８５６−８５９（１９９４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８１２−８１３（１９９４）；Ｆｉｓｈｗｉｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８４５−８５１（１９９６）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８２６（１９９６）及びＬｏｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｈｕｓｚａｒ，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３（１９９５）参照）を含む、様々な技術によって作製し得る。
【００３４】
「ヒトモノクローナル抗体」（ＨｕＭＡｂ）
「ヒトモノクローナル抗体」は、ヒトによって産生される抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有しかつ／又は本明細書で開示されるヒト抗体を作製するための技術のいずれかを用いて作製された、ｍＡｂである。ヒト抗体のこの定義は、特に、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を除外する。
【００３５】
「ヒト化抗体」
非ヒト（例えばマウス）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含むキメラ抗体である。一実施形態では、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域由来の残基が、所望の特異性、親和性及び／又は能力を有するマウス、ラット、ウサギ又は非ヒト霊長動物などの非ヒト種（ドナー抗体）の超可変領域由来の残基によって置き換えられているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基が、対応する非ヒト残基によって置き換えられている。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体又はドナー抗体中には見出されない残基を含み得る。これらの改変は、抗体性能をさらに高めるために行われる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、超可変ループの全て又は実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲの全て又は実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体は、任意に、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンの少なくとも一部も含む。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９（１９８８）及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６（１９９２）を参照のこと。また、以下の総説及びその中で引用されている参考文献も参照されたい：Ｖａｓｗａｎｉ  ａｎｄ  Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ａｎｎ．Ａｌｌｅｒｇｙ，Ａｓｔｈｍａ＆Ｉｍｍｕｎｏｌ．１：１０５−１１５（１９９８）；Ｈａｒｒｉｓ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ  ２３：１０３５−１０３８（１９９５）；Ｈｕｒｌｅ  ａｎｄ  Ｇｒｏｓｓ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．５：４２８−４３３（１９９４）。
【００３６】
「キメラ抗体」
本明細書中のモノクローナル抗体は、特に、重鎖及び／又は軽鎖の一部が、特定の種に由来する抗体又は特定の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一又は相同であるが、鎖（１又は複数）の残りの部分は別の種に由来する抗体又は別の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一又は相同である「キメラ」抗体、並びに所望の生物学的活性を示す限り、そのような抗体のフラグメントを含む（米国特許第４，８１６，５６７号；及びＭｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：６８５１−６８５５（１９８４））。
【００３７】
「抗原結合部分」又は「抗体フラグメント」
「抗体フラグメント」は無傷抗体の一部分のみを含み、この部分は、無傷抗体に存在する場合にその部分に通常関連する機能の少なくとも１つ、できるだけ多く又は全部を保持する。一実施形態では、抗体フラグメントは無傷抗体の抗原結合部位を含み、したがって抗原に結合する能力を保持する。
【００３８】
別の実施形態では、抗体フラグメント、例えばＦｃ領域を含むものは、ＦｃＲｎ結合、抗体半減期の調節、ＡＤＣＣ機能及び補体結合などの、無傷抗体に存在する場合にＦｃ領域と通常関連する生物学的機能の少なくとも１つを保持する。一実施形態では、抗体フラグメントは、無傷抗体と実質的に類似したインビボ半減期を有する一価抗体である。例えば、そのような抗体フラグメントは、そのフラグメントにインビボでの安定性を付与することができる、Ｆｃ配列に連結された抗原結合アームを含み得る。
【００３９】
「がん」及び「がん性」という用語は、典型的には調節されない細胞成長／増殖を特徴とする、哺乳動物における生理学的状態を指す又は表す。がんの例には、癌腫、リンパ腫（例えばホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫）、芽腫、肉腫及び白血病が含まれるが、これらに限定されない。そのようながんのより特定の例には、扁平上皮がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺の腺癌、肺の扁平上皮癌、腹膜がん、肝細胞がん、胃腸がん、膵臓がん、神経膠芽腫、子宮頸がん、卵巣がん、肝臓がん、膀胱がん、肝がん、乳がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜癌又は子宮癌、唾液腺癌、腎臓がん、肝臓がん、前立腺がん、外陰がん、甲状腺がん、肝癌、白血病及び他のリンパ増殖性障害及び様々な種類の頭頸部がんが含まれる。「腫瘍」は、本明細書中で使用される場合、悪性又は良性に関わらず、全ての新生物細胞の成長及び増殖、並びに全ての前がん性及びがん性の細胞及び組織を指す。「がん」、「がん性」、「細胞増殖性障害」、「増殖性障害」及び「腫瘍」は、本明細書中で言及される場合、互いに排他的ではない。
【００４０】
「免疫応答」とは、侵入病原体、病原体に感染した細胞若しくは組織、がん性細胞若しくは他の異常細胞、又は、自己免疫若しくは病的炎症の場合は、正常ヒト細胞若しくは組織の選択的標的化、これらへの結合、損傷、破壊及び／又は脊椎動物の身体からの排除をもたらす、免疫系の細胞（例えばＴリンパ球、Ｂリンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好酸球、肥満細胞、樹状細胞及び好中球）並びにこれらの細胞のいずれか又は肝臓によって産生される可溶性高分子（Ａｂ、サイトカイン及び補体を含む）の作用を指す。
【００４１】
「免疫調節剤」は、免疫応答を調節する物質、薬剤、シグナル伝達経路又はその構成要素を指す。免疫応答を「調節する」、「修飾する」又は「調整する」とは、免疫系の細胞又はそのような細胞の活性の任意の改変を指す。そのような調節には、様々な細胞型の数の増加若しくは減少、これらの細胞の活性の増加若しくは減少、又は免疫系内で起こり得る他の何らかの変化として現れ得る、免疫系の刺激又は抑制が含まれる。阻害性及び刺激性免疫調節剤の両方が同定されており、そのいくつかは、がん微小環境において増強された機能を有し得る。
【００４２】
「免疫療法」とは、免疫応答を誘導、増強、抑制又は別の方法で修飾することを含む方法による、疾患に罹患しているか又は疾患に罹患する若しくは疾患の再発をきたす危険性がある、被験体の治療を指す。
【００４３】
被験体の「治療」又は「療法」とは、疾患に関連する症状、合併症、状態又は生化学的徴候の発症、進行、発現、重症度又は再発を逆転させる、緩和する、改善する、阻害する、減速させる又は予防する目的で、被験体に対して実施される任意の種類の介入若しくは工程、又は被験体への活性物質の投与を指す。
【００４４】
「内因性免疫応答を増強する」とは、被験体における既存の免疫応答の有効性又は効力を増加させることを意味する。有効性及び効力のこの増加は、例えば、内因性宿主免疫応答を抑制する機構を克服することによって又は内因性宿主免疫応答を増強する機構を刺激することによって、達成され得る。
【００４５】
「被験体」には、任意のヒト又はヒト以外の動物が含まれる。
【００４６】
本発明のＡｂなどの薬剤又は治療薬の「治療有効量」又は「治療上有効な用量」は、単独で又は別の治療薬と組み合わせて使用される場合に、疾患の発症から被験体を保護する、又は疾患症状の重症度の低下、疾患症状のない期間の頻度及び持続時間の増加又は疾患の苦痛による機能低下若しくは障害の予防によって証明される疾患の退行を促進する、薬剤の量である。疾患の退行を促進する治療薬の能力は、当業者に公知の様々な方法を用いて、例えば臨床試験中のヒト被験体において、ヒトにおける効果を予測する動物モデル系において、又はインビトロアッセイで薬剤の活性を検定することによって評価することができる。
【００４７】
「がん退行を促進する」とは、有効量の薬剤を単独で又は抗腫瘍薬と組み合わせて投与すると、腫瘍増殖若しくは腫瘍サイズの低減、腫瘍の壊死、少なくとも１つの疾患症状の重症度の低下、疾患症状がない期間の頻度及び持続期間の増加、又は疾患の苦痛による機能低下若しくは障害の予防をもたらすことを意味する。さらに、治療に関する「有効な」及び「有効性」という用語には、薬理学的有効性及び生理学的安全性の両方が含まれる。薬理学的有効性は、患者におけるがんの退行を促進する薬剤の能力を指す。生理学的安全性とは、薬剤の投与によって生じる細胞、臓器及び／又は生物レベルでの毒性又は他の有害な生理学的作用（副作用）のレベルを指す。
【００４８】
「免疫関連」応答パターンとは、がん特異的免疫応答を誘導することによって又は先天免疫過程を改変することによって抗腫瘍効果を生じさせる免疫療法剤で治療されたがん患者においてしばしば観察される、臨床応答パターンを指す。この応答パターンは、従来の化学療法剤の評価において疾患進行として分類され、薬剤の失敗と同義である、腫瘍負荷の初期増加又は新たな病変の出現に続く有益な治療効果を特徴とする。したがって、免疫療法剤の適切な評価は、標的疾患に対するこれらの薬剤の作用の長期モニタリングを必要とし得る。
【００４９】
薬剤の治療有効量は、がんを発症する危険性のある被験体（例えば前悪性状態を有する被験体）又はがんの再発をきたす危険性のある被験体に、単独で又は抗腫瘍薬と組み合わせて投与した場合、がんの発症又は再発を阻止する薬剤の任意の量である、「予防有効量」を含む。好ましい実施形態では、予防有効量は、がんの発症又は再発を完全に予防する。がんの発症又は再発を「阻止する」とは、がんの発症若しくは再発の可能性を低減すること、又はがんの発症若しくは再発を完全に予防することのいずれかを意味する。
【００５０】
「腫瘍浸潤性炎症細胞」は、典型的には被験体における炎症応答に関与し、腫瘍組織に浸潤する任意の種類の細胞である。そのような細胞には、腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）、マクロファージ、単球、好酸球、組織球及び樹状細胞が含まれる。
【００５１】
本発明の免疫原性物質及び生成される抗体は、１つのＡｂ又はＡｂの組み合わせ、又はその抗原結合部分、及び薬学的に許容される担体を含む組成物、例えば医薬組成物中で構成され得る。本明細書中で使用される場合、「薬学的に許容される担体」には、生理学的に適合性のありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤等が含まれる。好ましくは、担体は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄又は表皮投与（例えば注射又は注入による）に適する。本発明の医薬組成物は、１つ以上の薬学的に許容される塩、抗酸化剤、水性及び非水性担体、並びに／又は補助剤、例えば防腐剤、湿潤剤、乳化剤及び分散剤を含み得る。
【００５２】
好ましい被験体には、免疫応答の増強を必要とするヒト患者が含まれる。本明細書中に開示される免疫治療方法は、免疫応答を増強することによって治療することができる障害を有するヒト患者の治療に特に適する。特定の実施形態では、本方法は、感染因子によって引き起こされる疾患に罹患した被験体の治療のために用いられる。好ましい実施形態では、この方法は、がんに罹患しているか又はがんに罹患する危険性のある被験体の治療に用いられる。
【００５３】
「がん免疫療法」
本明細書中で使用される場合、がん免疫療法は、転移性がんを有する患者の腫瘍サイズを縮小させることができる、免疫に基づく治療法を含み得るが、これに限定されない。現在、がん免疫療法には３つの主要なアプローチ、すなわち、エフェクター細胞を刺激すること及び／又は調節細胞を阻害することによる免疫反応の非特異的刺激、特異的抗腫瘍反応を増強するための能動的免疫化（がんワクチンとして知られる）、並びに抗腫瘍抗体又は抗腫瘍活性を有する活性化免疫細胞の受身移入（養子免疫療法としても知られる）がある（ＤｅＶｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。
【００５４】
「併用療法」特定の実施形態では、本明細書中で論じる免疫調節剤を、重大な全身毒性を伴わずに腫瘍負荷を低減するのに有効であり、免疫応答の有効性を改善するように作用し得る１つ以上の抗増殖剤／化学療法剤と組み合わせて使用し得る。薬剤は、同時投与併用療法及び／又は共製剤化併用療法として組み合わせることができる。
【００５５】
いくつかの投薬レジメン又は投与形態において２つ以上の薬剤を一緒に使用する併用療法は、典型的には以下の１つ以上の目標を有する：（ｉ）最小の交差耐性を有する薬剤を組み合わせることによって獲得耐性が生じる頻度を低減すること、（ｉｉ）より少ない副作用で効果を達成するために、重複しない毒性及び類似の治療プロフィールを有する薬剤の用量を減少させること、すなわち治療指数を高めること、（ｉｉｉ）別の薬剤の使用を介して１つの薬剤の作用に細胞を感作させること、例えば細胞周期段階又は成長特性を改変すること、並びに（ｉｖ）２つの薬剤の生物学的活性における相加性又は相加性よりも大きな作用を利用することによって効力の増強を達成すること（Ｐｅｇｒａｍ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ（１９９９）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １８：２２４１−２２５１；Ｋｏｎｅｃｎｙ，Ｇ．，ｅｔ  ａｌ（２００１）Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ６７：２２３−２３３；Ｐｅｇｒａｍ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ（２００４）Ｊ．ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．９６（１０）：７３９−７４９；  Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ  ｅｔ  ａｌ（２００６）Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２（９）：４５８−４６６；Ｂｏｒｉｓｙ  ｅｔ  ａｌ（２００３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１００（１３）：７９７７−７９８２）。Ｌｏｅｗｅ相加性（Ｃｈｏｕ，Ｔ．Ｃ．ａｎｄ  Ｔａｌａｌａｙ，Ｐ．（１９７７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６４３８−６４４２；Ｃｈｏｕ，Ｔ．Ｃ．ａｎｄ  Ｔａｌａｌａｙ，Ｐ．（１９８４）Ａｄｖ．Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｇｕｌ．２２：２７−５５；Ｂｅｒｅｎｂａｕｍ，Ｍ．Ｃ．（１９８９）Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｖ．４１：９３−１４１）及びＢｌｉｓｓ独立作用／相乗作用（Ｂｌｉｓｓ，Ｃ．Ｉ．（１９５６）Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．Ｒｅｖ．２０：２４３−２５８；Ｇｒｅｃｏ  ｅｔ  ａｌ（１９９５）Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｖ．４７：３３１−３８５）は、５０％標的阻害を達成するのに必要な薬剤の用量であり、最も単純な場合にはＫｉに等しいＩＣ５０などのパラメータに基づき、単剤療法と比較して併用療法の予想される用量応答関係を計算するために使用される方法である。
【００５６】
「化学療法剤」は、作用機序に関わらず、がんの治療において有用な化合物である。化学療法剤のクラスには、アルキル化剤、代謝拮抗物質、紡錘体阻害剤植物アルカロイド、細胞傷害性／抗腫瘍性抗生物質、トポイソメラーゼ阻害剤、抗体、光増感剤及びキナーゼ阻害剤が含まれるが、これらに限定されない。化学療法剤には、「標的療法」及び従来の化学療法で使用される化合物が含まれる。化学療法剤の例としては、エルロチニブ（ＴＡＲＣＥＶＡ（Ｒ）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／ＯＳＩ  Ｐｈａｒｍ．）、ドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（Ｒ）、Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ）、５−ＦＵ（フルオロウラシル、５−フルオロウラシル、ＣＡＳ番号５１−２１−８）、ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（Ｒ）、Ｌｉｌｌｙ）、ＰＤ−０３２５９０１（ＣＡＳ番号３９１２１０−１０−９、Ｐｆｉｚｅｒ）、シスプラチン（シス−ジアミン、ジクロロ白金（ＩＩ）、ＣＡＳ番号１５６６３−２７−１）、カルボプラチン（ＣＡＳ番号４１５７５−９４−４）、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（Ｒ）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（Ｒ）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、テモゾロミド（４−メチル−５−オキソ−２，３，４，６，８−ペンタアザビシクロ［４．３．０］ノナ−２，７，９−トリエン−９−カルボキサミド、ＣＡＳ番号８５６２２−９３−１、ＴＥＭＯＤＡＲ（Ｒ）、ＴＥＭＯＤＡＬ（Ｒ）、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｐｌｏｕｇｈ）、タモキシフェン（（Ｚ）−２−［４−（１，２−ジフェニルブト−１−エニル）フェノキシ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−エタンアミン、ＮＯＬＶＡＤＥＸ（Ｒ）、ＩＳＴＵＢＡＬ（Ｒ）、ＶＡＬＯＤＥＸ（Ｒ））及びドキソルビシン（ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（Ｒ））、Ａｋｔｉ−１／２、ＨＰＰＤ及びラパマイシンが挙げられる。
【００５７】
化学療法剤のさらなる例には、以下のものが含まれる：オキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（Ｒ）、Ｓａｎｏｆｉ）、ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（Ｒ）、Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ  Ｐｈａｒｍ．）、スーテント（ＳＵＮＩＴＩＮＩＢ（Ｒ）、ＳＵ１１２４８、Ｐｆｉｚｅｒ）、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ（Ｒ）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、イマチニブメシレート（ＧＬＥＥＶＥＣ（Ｒ）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＸＬ−５１８（ＭＥＫ阻害剤、Ｅｘｅｌｉｘｉｓ、ＷＯ２００７／０４４５１５）、ＡＲＲＹ−８８６（Ｍｅｋ阻害剤、ＡＺＤ６２４４、Ａｒｒａｙ  ＢｉｏＰｈａｒｍａ、Ａｓｔｒａ  Ｚｅｎｅｃａ）、ＳＦ−１１２６（ＰＩ３Ｋ阻害剤、Ｓｅｍａｆｏｒｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＢＥＺ−２３５（ＰＩ３Ｋ阻害剤、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＸＬ−１４７（ＰＩ３Ｋ阻害剤、Ｅｘｅｌｉｘｉｓ）、ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２２５８４（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、フルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ（Ｒ）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ロイコボリン（フォリン酸）、ラパマイシン（シロリムス、ＲＡＰＡＭＵＮＥ（Ｒ）、Ｗｙｅｔｈ）、ラパチニブ（ＴＹＫＥＲＢ（Ｒ）、ＧＳＫ５７２０１６、Ｇｌａｘｏ  Ｓｍｉｔｈ  Ｋｌｉｎｅ）、ロナファルニブ（ＳＡＲＡＳＡＲ（商標）、ＳＣＨ  ６６３３６、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｐｌｏｕｇｈ）、ソラフェニブ（ＮＥＸＡＶＡＲ（Ｒ）、ＢＡＹ４３−９００６、Ｂａｙｅｒ  Ｌａｂｓ）、ゲフィチニブ（ＩＲＥＳＳＡ（Ｒ）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、イリノテカン（ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（Ｒ）、Ｐｆｉｚｅｒ）、チピファルニブ（ＺＡＲＮＥＳＴＲＡ（商標）、Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｎｓｏｎ）、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（商標）（クレモフォール不含）、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子製剤（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ，Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ，Ｉｌ）、バンデタニブ（ｒＩＮＮ、ＺＤ６４７４、ＺＡＣＴＩＭＡ（Ｒ）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、クロラムブシル、ＡＧ１４７８、ＡＧ１５７１（ＳＵ  ５２７１；Ｓｕｇｅｎ）、テムシロリムス（ＴＯＲＩＳＥＬ（Ｒ）、Ｗｙｅｔｈ）、パゾパニブ（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、カンフォスファミド（ＴＥＬＣＹＴＡ（Ｒ）、Ｔｅｌｉｋ）、チオテパ及びシクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（Ｒ）、ＮＥＯＳＡＲ（Ｒ））；アルキルスルホネート、例えばブスルファン、イムプロスルファン及びピポスルファン；アジリジン、例えばベンゾドーパ、カルボコン、メツレドパ及びウレドパ；エチレンイミン類及びメチルメラミン類、例えばアルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミド及びトリメチロメラミン；アセトゲニン類（特にブラタシン及びブラタシノン）；カンプトテシン（合成類似体トポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン及びビゼレシン合成類似体を含む）；クリプトフィシン類（特にクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体、ＫＷ−２１８９及びＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチイン；スポンギスタチン；ナイトロジェンマスタード類、例えばクロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドヒドロクロリド、メルファラン、ノボエンビキン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード；ニトロソ尿素、例えばカルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン及びラニムスチン；抗生物質、例えばエンジイン抗生物質（例えばカリケアマイシン、カリケアマイシンγ１Ｉ、カリケアマイシンωＩ１（Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．（１９９４）３３：１８３−１８６）；ジネマイシン、ジネマイシンＡ；ビスホスホネート類、例えばクロドロネート；エスペラマイシン；並びにネオカルジノスタチンクロモフォア及び関連色素タンパク質エンジイン抗生物質クロモフォア）、アクラシノマイシン類、アクチノマイシン、オースラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン類、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン類、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン及びデオキシドキソルビシン）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、例えばマイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン類、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；代謝拮抗物質、例えばメトトレキセート及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）；葉酸類似体、例えばデノプテリン、メトトレキセート、プテロプテリン、トリメトレキセート；プリン類似体、例えばフルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジン類似体、例えばアンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン；アンドロゲン類、例えばカルステロン、ドロモスタノロンプロピオネート、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗副腎剤、例えばアミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸補充剤、例えばフォリン酸；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトレキセート；デフォファミン；デメコルシン；ジアジコン；エフロルニチン；エリプチニウムアセテート；エポチロン；エトグルシド；ガリウムニトレート；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン；メイタンシノイド類、例えばメイタンシン及びアンサミトシン類；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（Ｒ）多糖複合体（ＪＨＳ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，Ｏｒｅｇ．）；ラゾキサ��；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン類（Ｔ−２毒素、ベラキュリンＡ、ロリジンＡ及びアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（Ａｒａ−Ｃ）；シクロホスファミド；チオテパ；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキセート；白金類似体、例えばシスプラチン及びカルボプラチン；ビンブラスチン；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（Ｒ））；ノバントロン；テニポシド；エダトレキセート；ダウノマイシン；アミノプテリン；カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（Ｒ），Ｒｏｃｈｅ）；イバンドロネート；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ  ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド類、例えばレチノイン酸；並びに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸及び誘導体。
【００５８】
「化学療法剤」の定義には、以下のものも含まれる：（ｉ）例えばタモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（Ｒ）；タモキシフェンシトレート）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン及びＦＡＲＥＳＴＯＮ（Ｒ）（トレミフェンシトレート）を含む、抗エストロゲン及び選択的エストロゲン受容体調節剤（ＳＥＲＭ）などの腫瘍に対するホルモン作用を調節又は阻害するように作用する抗ホルモン剤；（ｉｉ）例えば４（５）−イミダゾール、アミノグルテチミド、ＭＥＧＡＳＥ（Ｒ）（メゲストロールアセテート）、ＡＲＯＭＡＳＩＮ（Ｒ）（エキセメスタン；Ｐｆｉｚｅｒ）、フォルメスタニー、ファドロゾール、ＲＩＶＩＳＯＲ（Ｒ）（ボロゾール）、ＦＥＭＡＲＡ（Ｒ）（レトロゾール；Ｎｏｖａｒｔｉｓ）及びＡＲＩＭＩＤＥＸ（Ｒ）（アナストロゾール；ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）などの、副腎におけるエストロゲン産生を調節する酵素、アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤；（ｉｉｉ）フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド及びゴセレリンなどの抗アンドロゲン；並びにトロキサシタビン（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシン類縁体）；（ｉｖ）ＭＥＫ阻害剤（ＷＯ２００７／０４４５１５）などのプロテインキナーゼ阻害剤；（ｖ）脂質キナーゼ阻害剤；（ｖｉ）アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に異常な細胞増殖に関与するシグナル伝達経路における遺伝子、例えばＰＫＣ−α、Ｒａｆ及びＨ−Ｒａｓの発現を阻害するもの、例えばオブリメルセン（ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ（Ｒ）、Ｇｅｎｔａ  Ｉｎｃ．）；（ｖｉｉ）ＶＥＧＦ発現阻害剤（例えばＡＮＧＩＯＺＹＭＥ（Ｒ））及びＨＥＲ２発現阻害剤などのリボザイム；（ｖｉｉｉ）遺伝子治療ワクチンなどのワクチン、例えばＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（Ｒ）、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（Ｒ）及びＶＡＸＩＤ（Ｒ）；ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ（Ｒ）ｒＩＬ−２；ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（Ｒ）などのトポイソメラーゼ１阻害剤；ＡＢＡＲＥＬＩＸ（Ｒ）ｒｍＲＨ；（ｉｘ）ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（Ｒ）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）などの抗血管新生剤；並びに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸及び誘導体。
【００５９】
また、「化学療法剤」の定義には、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ）、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（Ｒ）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）などの治療用抗体；セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（Ｒ）、Ｉｍｃｌｏｎｅ）；パニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（Ｒ）、Ａｍｇｅｎ）、リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（Ｒ）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｂｉｏｇｅｎ  Ｉｄｅｃ）、ペルツズマブ（ＯＭＮＩＴＡＲＧ（商標）、２Ｃ４、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（Ｒ）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ、Ｃｏｒｉｘｉａ）及び抗体−薬剤複合体であるゲムツズマブオゾガマイシン（ＭＹＬＯＴＡＲＧ（Ｒ）、Ｗｙｅｔｈ）も含まれる。
【００６０】
本発明の免疫原性物質／治療薬と組み合わせて化学療法剤としての治療可能性を有するヒト化モノクローナル抗体は、以下のものの１つ以上を含み得るか又は除外し得る：アレムツズマブ、アポリズマブ、アセリズマブ、アトリズマブ、バピネオズマブ、ベバシズマブ、ビバツズマブメルタンシン、カンツズマブメルタンシン、セデリズマブ、セルトリズマブペゴール、シドフシツズマブ、シドツズマブ、ダクリズマブ、エクリズマブ、エファリズマブ、エプラツズマブ、エルリズマブ、フェルビズマブ、フォントリズマブ、ゲムツズマブオゾガマイシン、イノツズマブオゾガマイシン、イピリムマブ、ラベツズマブ、リンツズマブ、マツズマブ、メポリズマブ、モタビズマブ、モトビズマブ、ナタリズマブ、ニモツズマブ、ノロビズマブ、ヌマビズマブ、オクレリズマブ、オマリズマブ、パリビズマブ、パスコリズマブ、ペクフシツズマブ、ペクツズマブ、ペルツズマブ、ペキセリズマブ、ラリビズマブ、ラニビズマブ、レスリビズマブ、レスリズマブ、レシビズマブ、ロベリズマブ、ルプリズマブ、シブロツズマブ、シプリズマブ、ソンツズマブ、タカツズマブテトラキセタン、タドシズマブ、タリズマブ、テフィバズマブ、トシリズマブ、トラリズマブ、トラスツズマブ、ツコツズマブセルモロイキン、ツクシツズマブ、ウマビズマブ、ウルトキサズマブ及びビシリズマブ。
【００６１】
「スタンダードオブケア治療法」は、薬剤又は薬剤の組み合わせ、放射線療法（ＲＴ）、手術又は医師によって適切と認められ、受け入れられ、及び／若しくは特定の種類の患者、疾患若しくは臨床状況のために広く使用されている他の医学的介入を含む治療方法である。種々のタイプのがんに対するスタンダードオブケア治療法が、当業者に周知である。例えば、米国における２１の主要ながんセンターの連合である全米総合がん情報ネットワーク（ＮＣＣＮ）は、多種多様ながんに対するスタンダードオブケア治療についての詳細な最新情報を提供するＮＣＣＮ腫瘍学臨床診療ガイドライン（ＮＣＣＮ  ＧＵＩＤＥＬＩＮＥＳ（Ｒ））を発行している（ＮＣＣＮ  ＧＵＩＤＥＬＩＮＥＳ（Ｒ）、２０１３参照）。
【００６２】
キット：治療用途のための医薬キット及び診断キットを含むキットも、本発明の範囲内である。
【００６３】
本明細書中で使用される場合、本開示のさらなる態様は、用量漸増；患者コホート；安全性；及び薬物動態／薬力学分析に関する態様及び因子を含む。
【００６４】
広義には、免疫系は自然免疫と適応免疫に分けることができる。自然免疫は、２つのうちでより原始的であり、物理的障壁（例えば皮膚）、非特異的防御細胞（例えばマクロファージ）及び種々のサイトカイン（例えばＩＬ−１）などの非特異的防御からなる。一般に、ワクチンは、特定の病原体又は疾患に対する自然免疫系を上方調節することはないが、ワクチンに添加されるアジュバントは、自然免疫を非特異的に活性化することができ、これが適応免疫応答を改善し得る。適応免疫は、体液性（すなわち抗体）及び細胞性（例えば細胞傷害性Ｔ細胞）免疫応答にさらに分けることができる。体液性免疫応答のエフェクター細胞は、適応免疫のみに特化された細胞（例えばＴリンパ球及びＢリンパ球）で構成される；しかし、自然免疫の細胞は必須の機能（例えば抗原提示）を提供する。したがって、例えば、ウイルスに対する抗体産生の誘導は、いくつかの細胞型の一連の複雑な相互作用を必要とする。簡単に言うと、これらには、樹状細胞によるウイルス成分（例えばウイルスのエンベロープタンパク質）の捕捉及びプロセシングが含まれ、これらが次に、提示される抗原に特異的なＴ細胞に提示される。提示された抗原によって活性化されると、Ｔ細胞は、ウイルス特異的Ｂ細胞が侵入病原体に対する抗体を産生するのを「助ける」。
【００６５】
寛容
免疫系は宿主抗原を認識する能力を有するが、通常、そのような応答は観察されない（すなわち免疫系は自己に対する寛容を示す）ことが長い間認められてきた。この自己に対する寛容は、「正常」抗原及び腫瘍抗原の両方を含む。
【００６６】
一態様では、本開示は、腫瘍抗原グロボＨに対する免疫系の寛容を破壊することができるワクチンを特徴とする。
【００６７】
寛容の種類
寛容は、中枢性寛容及び／又は末梢性寛容のいずれかから生じ得る。中枢性寛容は、自己を認識するＴリンパ球及びＢリンパ球の成熟を妨げる。自己寛容は絶対的ではなく、抗自己抗体を産生するいくつかのＢ細胞は正常個体で見出され得る。しかし、Ｂ細胞活性化の必須成分である自己抗原に対する抗自己Ｔ細胞の助けがないため、自己に対する抗体はまれにしか見出されない。末梢性寛容は、自己に対する免疫応答の進行中の能動的抑制であり、主にＴｒｅｇ細胞によって維持されると考えられている。Ｔｒｅｇ細胞は、正常抗原及び腫瘍抗原の両方を含む自己抗原に対するＴ細胞支援の誘導を妨げると考えられている。
【００６８】
自己に対する寛容を打ち破るための方法
一態様では、本開示は、グロボＨシリーズの腫瘍抗原に対する中枢性及び末梢性寛容の両方を克服するための組成物及び方法を特徴とする。例えば、いくつかの態様では、組成物及び方法は、Ｔｒｅｇ抑制を低減し、抗グロボＨ抗体を産生するＢ細胞に対するＴ細胞支援を刺激するのに有用である。
【００６９】
いくつかの態様では、本開示は、末梢性寛容を克服するためのＴｒｅｇ下方調節剤の同時投与を特徴とする。態様において、Ｔｒｅｇ下方調節剤は、シクロホスファミド、抗Ｔｒｅｇ抗体又は（選択的に）Ｔｒｅｇ活性を阻害する（適応免疫系の他の細胞よりも）他の薬剤であり得る。
【００７０】
したがって、いくつかの態様では、シクロホスファミドをグロボＨ−ＫＬＨ複合体と同時に患者に投与することができ、それによって抗グロボＨ抗体産生のＴｒｅｇ抑制を阻止することができる。いくつかの態様では、Ｔｒｅｇ下方調節剤はまた、グロボＨ抗原陽性細胞に対する細胞傷害性Ｔリンパ球の増殖拡大を刺激し、グロボＨを発現する腫瘍細胞の直接死滅を可能にし得る。
【００７１】
Ｂ細胞抗体産生は、抗原を認識するＴ細胞からの助けを必要とすることが認識されている。しかし、中枢性寛容及び／又は抗原提示欠損は、グロボＨ（自己）抗原のＴ細胞認識の欠如をもたらし得る。したがって、いくつかの実施形態では、本開示は、ＫＬＨなどの強い免疫原性物質へのグロボＨシリーズ抗原の結合を介して抗グロボＨ抗体を産生するＢ細胞に対するＴ細胞の支援を刺激するための組成物及び方法を特徴とする。ＫＬＨは、系統発生的に遠い生物で、大きな分子量（３９０，０００を超える）を有しており、どちらも免疫原性を高めることが公知の特性である。グロボＨ複合体を患者に投与する場合、樹状細胞及び／又は他の抗原提示細胞はグロボＨ複合体をプロセシングし、例えばグロボＨ−ＫＬＨ複合体をグロボＨとＫＬＨ成分にプロセシングする。Ｔ細胞はＫＬＨ抗原を認識し、これが次に、Ｂ細胞が所望の抗グロボＨ抗体を産生するのを助ける。
【００７２】
腫瘍ワクチンの他の作用
抗体価の増加：いくつかの実施形態では、本発明の組成物及び方法は、閾値力価を上回る抗体応答を生じさせることによる臨床的利益を特徴とする。閾値力価未満では、抗腫瘍応答は有意な臨床的利益を生じさせるには不十分であり得る。
【００７３】
抗グロボＨ抗体の親和性の増加：いくつかの実施形態では、本開示の方法は、グロボＨ複合体を患者に２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、又はそれ以上投与することを特徴とする。
【００７４】
いくつかの実施形態では、グロボＨに対する最も高い親和性を有する表面抗体を発現するＢ細胞は、より低い親和性の抗体を発現するＢ細胞よりも良好に抗原に結合するため、注入された抗原によって優先的に刺激されるので、反復投与は生じる抗体応答の親和性を高める。いくつかの実施形態では、投与の各サイクルは、抗体応答を高め、抗体の親和性及び／若しくはアビディティを増加させ、並びに／又はグロボＨ複合体のグロボＨ部分の免疫原性がより低い部位に抗体の産生を誘導する。
【００７５】
いくつかの実施形態では、反復投与はさらに、通常、単回（又は抗原への暴露の少ない回数の反復）では意味のある応答を生じさせるのに十分な数で存在しない低頻度のＢ細胞（例えば、それらはほとんどの抗体が結合しないエピトープに結合し得る）を誘導し、抗腫瘍応答の長期間の維持にとって重要であり得る抗体分泌形質細胞（「抗体分泌形質細胞」はＢ細胞が分化するものである）及び記憶Ｂ細胞を増殖拡大させ、並びにＡｂクラススイッチの速度を増加させる。
【００７６】
いくつかの実施形態では、反復投与はまた、グロボＨシリーズ腫瘍抗原に対するＢ細胞の胚中心の拡大及び高親和性抗グロボＨ抗体を含む胚中心の優先的拡大をもたらす。
【００７７】
ＩｇＧサブクラスの拡大：Ｔ細胞の支援は、Ｂ細胞が重鎖クラス及びサブクラスの発現を切り替えるように誘導することができる。ヒトにおいては、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４の４つのＩｇＧサブクラスが存在する。各ＩｇＧサブクラスは、それを他のサブクラスと区別する生物学的エフェクター機能を有する。４つのサブクラスの全ての発現は、抗グロボＨ応答の腫瘍死滅活性を最大にし得る。
【００７８】
抗体応答の速度の増加：いくつかの実施形態では、グロボＨ−ＫＬＨ複合体、シクロホスファミド及びアジュバントの反復接種は、ＫＬＨへの結合、シクロホスファミド又はアジュバントの反復注射なしで得られるよりも迅速な抗体の拡大をもたらす。
【００７９】
特定の実施形態では、ＯＢＩ−８２２は、グロボＨ誘導Ｎｏｔｃｈシグナル伝達を低減することによってがんの免疫抑制をブロックすることができる。
【００８０】
特定の態様では、ＯＢＩ−８２２は、がん治療におけるグロボＨの特定の負の形質に対抗することができる。
【００８１】
特定の実施形態では、ＯＢＩ−８２２はグロボＨを枯渇させ、これは次にＮｏｔｃｈ  １分解を増加させ、腫瘍の免疫抑制作用をブロックし、腫瘍退縮をもたらす。
【００８２】
特定の実施形態では、ＯＢＩ−８２２は、Ｔ細胞増殖及びサイトカイン分泌のグロボＨに関連する減少に対抗することができる。
【００８３】
特定の実施形態では、ＯＢＩ−８２２は、Ｂ細胞分化及びＩｇ分泌のグロボＨに関連する阻害に対抗することができる。
【００８４】
がんの発症におけるグロボシリーズ抗原の役割は重要である。特定の実施形態では、それらは、カスパーゼ３の活性化を阻害することによって腫瘍生存に影響を及ぼすことができる。特定の実施形態では、カスパーゼ３の不活性化を逆転させ、アポトーシスを導く。
【００８５】
特定の実施形態では、グロボシリーズのクラスター化は、カスパーゼ３カスケードを阻害することによって腫瘍生存を増強する。
【実施例】
【００８６】
出願人の本開示並びに肯定的免疫原性応答及び治療効果を裏付ける例示的データ以前に、グロボＨワクチンの前臨床試験；第Ｉ相試験におけるＱＳ−２１とＯＢＩ−８２２；及びがん臨床試験におけるＯＢＩ−８２１とＯＢＩ−８２２を含む、実施例の項で証明されるアジュバントとしてのＯＢＩ−８２１の使用の成功に関連して本明細書で開示される免疫調節剤の有効な使用についての事前の決定的な実証／報告はない。
【００８７】
治験の概要：グロボＨは、乳がんにおいて高発現されることが認められた糖脂質である。ＯＢＩ−８２２、グロボＨ−ＫＬＨ複合体及び２つの第Ｉ相試験におけるアジュバントであるＯＢＩ−８２１を用いた能動免疫療法は、グロボＨを発現する乳がん細胞へのインビトロ結合及び細胞傷害性を媒介することができるグロボＨ特異的抗体を誘導した。
【００８８】
方法：国際的無作為化二重盲検プラセボ対照第ＩＩ／ＩＩＩ相試験（ＮＣＴ０１５１６３０７）において、進行性疾患（ＰＤ）の２以下の事象があり、１回以上の抗がんレジメン後に少なくとも安定した疾患（ＳＤ）を達成した転移性乳がんの患者を、第１、２、３、５、９、１３、１７、２５、３７週に又はＰＤまで、低用量のシクロホスファミド（３００ｍｇ／ｍ２）と組み合わせて皮下ＯＢＩ−８２２（グロボＨ  ３０μｇ）／ＯＢＩ−８２１（１００μｇ）又は対照（ＰＢＳ）を摂取するように２：１に無作為に割り付ける。ホルモン療法は許容される。有効性の主要及び副次評価項目は、体液性抗体応答と相関する、無増悪生存期間（ＰＦＳ）及び全生存期間（ＯＳ）である。
【００８９】
結果：３４９名の患者を無作為に割り付け、３４８名が治験薬（ＩＴＴ）を摂取し、１６８名（４８％）が９回全ての注射を受けた。７０％はホルモン受容体陽性乳がんを有しており、１３％はトリプルネガティブであり、６２％はホルモン療法を受けていた。グロボＨ特異的ＩｇＧ応答を発現した患者及びグロボＨ特異的ＩｇＧ応答を発現しなかった患者を含む全患者において、ＰＦＳ（ＨＲ、０．９６［９５％ＣＩ、０．７４−１．２５］Ｐ＝０．７７）又は中間ＯＳ（ＨＲ、０．７９［９５％ＣＩ、０．５１−１．２２］Ｐ＝０．２９）に差は認められなかった。しかし、ベースライン疾患状態及び／又はホルモン使用について調整すると、治療期間中のいずれかの時点で１：１６０以上の力価でＯＢＩ−８２２／ＯＢＩ−８２１に対するグロボＨ特異的ＩｇＧ応答を発現した患者の５０％において、対照（ＰＦＳについては、ＨＲ、０．７１［９５％ＣＩ、０．５２−０．９７］Ｐ＝０．０２９、ＯＳについては、ＨＲ、０．５７［９５％ＣＩ、０．３３−０．９７］Ｐ＝０．０４）及び非応答者（ＰＦＳについては、ＨＲ、０．５２［９５％ＣＩ、０．３７−０．７１］Ｐ＜０．０００１、ＯＳについては、ＨＲ、０．５２［９５％ＣＩ、０．２９−０．９２］Ｐ＝０．０２５）と比較してＰＦＳ及びＯＳが有意に改善された。時間依存型Ｃｏｘモデルにおいて、対照と比較してＯＢＩの全９回の注射を受けた患者ではＰＦＳが改善された（ＨＲ、０．６６［９５％ＣＩ、０．４２−１．０１］Ｐ＝０．０５７）。ＯＢＩ−８２２／ＯＢＩ−８２１は良好に耐容された；最も一般的な薬剤関連有害事象は、グレード１／２の注射反応であった。
【００９０】
結論：ＯＢＩ−８２２／ＯＢＩ−８２１によるワクチン接種は、ＩＴＴにおけるＰＦＳを改善しなかった。しかし、ＰＦＳ及び中間ＯＳは、ワクチンに対する免疫応答を発現した患者において有意に改善された。これらのサブグループデータを、最終的な第ＩＩＩ相試験を設計するために使用する。
【００９１】
治験デザインの理論的根拠：ＯＢＩ−８２２は、能動免疫療法の新規クラスに属する新しい治験抗がん治療薬である。これは、担体タンパク質であるキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）に共有結合した腫瘍関連炭水化物抗原（ＴＡＣＡ）、グロボＨからなる合成糖タンパク質である。ＯＢＩ−８２１は、サポニンベースのアジュバントである。グロボＨは、乳がん、前立腺がん、胃がん、肺がん、結腸がん、膵臓がん及び卵巣がん等のような多くの上皮がんにおける悪性腫瘍の表面上に高レベルで発現される。抗原の免疫原性は、グロボＨをＫＬＨ担体タンパク質に結合してＯＢＩ−８２２（グロボＨ−ＫＬＨ）を形成し、アジュバントであるＯＢＩ−８２１と同時投与することによって増強される。
【００９２】
試験デザイン：国際的無作為化二重盲検プラセボ対照第ＩＩ／ＩＩＩ相試験（ＮＣＴ０１５１６３０７）は、４１週間の治療期間にＯＢＩ−８２２の９回の注射、無作為化から最大２年までの疾患進行追跡期間及び最大５年までの生存追跡期間からなる。組織学的又は細胞学的に確認された転移性ＢＣを有する合計３４９名の以前に治療された女性を、低用量のシクロホスファミド（３００ｍｇ／ｍ２）と組み合わせた皮下ＯＢＩ−８２２（グロボＨ  ３０μｇ）／ＯＢＩ−８２１（１００μｇ）又は対照（ＰＢＳ）での処置に無作為に割り付ける（２：１）。
【００９３】
適格基準：（選択基準及び除外基準を確立した）
１．選択基準
２．除外基準
【００９４】
試験手順スケジュール：
１．スクリーニング期−無作為化の３週間前（訪問１）
２．治療期間：第１週〜第３週（訪問２〜訪問５）
３．治療期間：第５週〜第４１週（訪問６〜訪問１９）
４．追跡期間（８週間ごと）
５．早期中止基準を確立した
６．生存追跡期間（１２週間ごと）
７．完全性のために他の試験手順を検討した
【００９５】
治療計画：（考慮される項目）
１．無作為化及び盲検化
２．シクロホスファミド投与スケジュール
３．ＯＢＩ−８２２／ＯＢＩ−８２１及びプラセボ投与スケジュール
【００９６】
毒性の管理及び治療の中止：（デザインの一部として考慮された例示的因子）
１．一般的管理
２．薬剤誘発毒性の管理
３．個別被験者試験治療（ＯＢＩ−８２２／ＯＢＩ−８２１、プラセボ）中止のガイドライン
４．シクロホスファミド治療中止のガイドライン
【００９７】
試験期間中に許可される治療及び禁止される治療：（デザインの一部として考慮された例示的な因子）
１．試験期間中許可される治療
２．試験期間中禁止される治療
【００９８】
薬剤情報：（デザインの一部として考慮される例示的な因子）
１．シクロホスファミド
２．ＯＢＩ−８２２（グロボＨ−ＫＬＨ）
３．ＯＢＩ−８２１
４．臨床試験材料（ＣＴＭ）の供給、包装、ラベル付け及び保存
【００９９】
試験評価項目：
１．有効性評価
２．安全性評価
３．安全性変数
【０１００】
応答基準：
１．腫瘍病変の測定可能性の定義
２．腫瘍病変の記録
３．応答の評価
４．プロトコル治療からの除外の基準
５．試験外判定基準
【０１０１】
統計的考察：
１．目的及び仮説
２．標的サンプルサイズ
３．試験評価項目の評価
４．統計方法
５．安全性分析
【０１０２】
有害事象：
１．有害事象の定義：
２．治療との関係の評価
【０１０３】
有効性の実証：特定の実施形態では、シクロホスファミドを伴うＯＢＩ−８２２／ＯＢＩ−８２１は、転移性乳がんを有する非応答者（ＩｇＧ／ＩｇＭ応答なし）と比較して「応答者」（グロボＨ特異的ＩｇＧ／ＩｇＭの増加）を改善した。
【０１０４】
転移性乳がんを有する患者における免疫後の体液性免疫応答（グロボＨ特異的ＩｇＧ／ＩｇＭ）の頻度及び程度並びにＰＦＳ及びＯＳとの相関。
【０１０５】
シクロホスファミドを伴うＰＢＳと比較した、シクロホスファミドを伴うＯＢＩ−８２２／ＯＢＩ−８２１の安全性及び毒性プロフィール。
【０１０６】
特定の例としての臨床試験：転移性乳がんを有する被験者におけるグロボＨ−ＫＬＨ（ＯＢＩ−８２２）及びＯＢＩ−８２１アジュバントを用いた能動免疫療法の二重盲検無作為化第ＩＩ／ＩＩＩ相試験。
【０１０７】
治療計画：これは、転移性乳がんを有する被験者における二重盲検無作為化２アーム第ＩＩ／ＩＩＩ相試験である。
【０１０８】
スクリーニング時の腫瘍評価：全身ＣＴスキャン（胸部、腹部及び骨盤）をスクリーニング時に実施し、ベースラインスキャンとして使用する。全身ＣＴスキャンがスクリーニングスキャンから２週間以内に実施された場合は、この実施されたスキャンをベースラインスキャンとして使用することができる。スクリーニング前の全身ＣＴスキャンが利用できない場合、転移性乳がんの診断後の病変部を含む切片は、腫瘍状態を確認するためにＣＴ又はＭＲＩスキャンからの画像を有さなければならない。
【０１０９】
腫瘍応答の状態（ＳＤ、ＰＲ、ＣＲ）は、ＲＥＣＩＳＴ  １．１基準に基づく。スクリーニング時（ベースライン）の確証的ＣＴスキャンをスクリーニング前の過去の全身ＣＴスキャンと比較した。スクリーニングスキャン前のスキャンの疾患状態は、スクリーニングスキャンと同じ疾患状態でなければならない。ＳＤについては少なくとも６週間の間隔が必要であり、ＰＲ及びＣＲについては少なくとも４週間の間隔が必要である。
【０１１０】
スクリーニング時に新たな病変が検出された場合（すなわち、以前の画像では明らかでない腫瘍及び／又は以前に画像には記録されていない腫瘍）、この症例はＰＤとみなされ、したがって選択に適格ではない。
【０１１１】
層別化のための疾患状態を、疾患の証拠がある（ＰＲ／ＳＤ）又は疾患の証拠がない（ＣＲ）のいずれかに分類する。
【０１１２】
スクリーニング前の転移性病変の切除により疾患の証拠がない（ＣＲ）被験者については、治験責任医師は、外科的切除の前に腫瘍応答状態が画像によって記録されることを確実にする必要がある。
【０１１３】
腫瘍の状態は、登録されている場合、疾患の証拠（ＰＲ／ＳＤ）として記録される。
【０１１４】
画像は施設の放射線科医によって評価され、施設の解釈及び決定に干渉されない独立した検討のために、コピーが中央の放射線検査室に送られる。
【０１１５】
被験者を、ＯＢＩ−８２２／ＯＢＩ−８２１（治療群）又はＰＢＳ（対照群）のいずれかを摂取するように２：１の配分で無作為に割り付ける。
【０１１６】
被験者を、試験中のホルモン療法の使用及び登録時の疾患状態に従って層別化する。
【０１１７】
ホルモン療法の非使用者として登録された場合、患者が試験中にホルモン療法を開始することは認められない。
【０１１８】
ホルモン療法の使用者として登録された場合、患者はホルモン療法を受けなければならない。
【０１１９】
以前のホルモン療法による毒性の不耐性のためにホルモン療法の別のレジメンに変更することは許可される。
【０１２０】
４つの層が存在する：
１．ホルモン療法の使用者−疾患の証拠あり（ＰＲ／ＳＤ）
２．ホルモン療法の使用者−疾患の証拠なし（ＣＲ）
３．ホルモン療法の非使用者−疾患の証拠あり（ＰＲ／ＳＤ）
４．ホルモン療法の非使用者−疾患の証拠なし（ＣＲ）
【０１２１】
被験者の腫瘍生検／組織試料を収集して、腫瘍のグロボＨ発現を試験し、治療応答と相関させる。
【０１２２】
特定の併用療法の実施形態では、治療被験者に、第１、５、９、１３、１７、２５及び３７週（訪問２、６、８、１０、１２、１４及び１７）に又は疾患の進行まで、シクロホスファミド（３００ｍｇ／ｍ２）を静脈内投与する。
【０１２３】
ＯＢＩ−８２２／ＯＢＩ−８２１又は対照（ＰＢＳ）を第１、２、３、５、９、１３、１７、２５及び３７週（訪問３、４、５、７、９、１１、１３、１５及び１８）に皮下投与する。疾患の進行まで又は無作為化から最大２年まで被験者を追跡する。
【０１２４】
治療中及び治療の開始から最大２年まで又は疾患の進行までの追跡期間中、グロボＨ−ＫＬＨに対する免疫応答の評価のために血液試料を採取する。
【０１２５】
試験中の腫瘍評価
１．全身ＣＴスキャン（胸部、腹部及び骨盤）を、試験の終了まで又は疾患の進行まで８週間ごとに実施する。
２．各時点からのＣＴスキャンを、ＲＥＣＩＳＴ  １．１基準に基づき、無増悪生存期間（ＰＦＳ）及び腫瘍応答状態（ＰＤ、ＳＤ、ＰＲ、ＣＲ）に関してベースラインスキャン（スクリーニング時）及び過去の時点と比較する。
【０１２６】
全ての生存被験者を、全生存期間（ＯＳ）に関して無作為化から最大５年まで１２週間の間隔で追跡調査する。
【０１２７】
ＰＤの被験者については、進行の時点で又は被験者が試験から離脱する前に血液及び尿試料を採取する。
【０１２８】
［実施例１］
ＯＢＩ−８２２の修正インテント・トゥ・トリート（Ｍｉｔｔ）集団についての無増悪生存期間（ＰＦＳ）の臨床試験データ
ＯＢＩ−８２２（元の名称ＯＰＴ−８２２）の修正インテント・トゥ・トリート（ｍＩＴＴ）集団についてのカプラン−マイヤープロットの無増悪生存期間（ＰＦＳ）及び全生存期間（ＯＳ）は、患者がＯＢＩ−８２２の９回の注射を完了した後、プラセボと比較してより高いＰＦＳ及びＯＳが存在することを示した。
【０１２９】
ＥＬＩＳＡによるヒト抗グロボＨ  ＩｇＧ力価測定の臨床試験データ
試薬／緩衝液の調製
コーティング抗原：１ｍｇ／ｍＬのグロボＨ−セラミドをエタノール（ＯＢＩ  Ｐｈａｒｍａ  Ｉｎｃ．）に溶解した；ヒト血清の二次抗体：ヤギ抗ヒトＩｇＧ−ＡＰ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、カタログ番号１０９−０５５−００８）；１０×ＰＢＳ、ｐＨ７．４（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号７００１１−０４４）；Ｔｗｅｅｎ−２０（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｐ２２８７）；基質溶液：アルカリホスファターゼイエロー（ｐＮＰＰ）液体基質（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｐ７９９８）；ブロッキング緩衝液（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｂ６４２９）；ＰＢＳＴ：ＰＢＳ中０．０５％ｔｗｅｅｎ−２０；停止溶液：アルカリホスファターゼ停止溶液（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ａ５８５２）。
【０１３０】
アッセイ手順
グロボＨ−セラミドをエタノール中で４μｇ／ｍＬに希釈した。希釈したグロボＨ−セラミド溶液５０μＬを標準反応プレートの各ウェルに添加した。反応混合物を含むプレートを室温で一晩インキュベートした。プレートをデカントし、２００μＬ／ウェルのＰＢＳＴで３回洗浄した。ブロッキング緩衝液１００μＬを各ウェルに添加し、室温で３０分間インキュベートした。プレートをデカントし、ＰＢＳＴ  ２００μＬ／ウェルで３回洗浄した。
【０１３１】
血清試料の希釈：試料を２０、４０、８０、１６０、３２０、６４０、１２８０〜２５６０倍の範囲のブロッキング緩衝液で２倍連続希釈した（２０倍希釈液を作製するには、血清試料４０μＬをブロッキング緩衝液７６０μＬに添加した）。血清試料５０μＬを、コーティングしたプレート及びコーティングしていないプレートの各ウェルに添加し、室温で６０分間インキュベートした。プレートをデカントし、ＰＢＳＴ  ２００μＬ／ウェルで３回洗浄した。０．３ｍｇ／ｍＬの保存抗ヒトＩｇＧ−ＡＰ二次抗体４０μＬを、１：２００希釈のためにブロッキング緩衝液７９６０μＬに添加した。希釈した抗ヒトＩｇＧ−ＡＰ  ５０μＬを、コーティングしたプレート及びコーティングしていないプレートの各ウェルに添加し、室温で４５分間インキュベートした。プレートをデカントし、ＰＢＳＴ  ２００μＬ／ウェルで３回洗浄した。基質溶液１００μＬを、コーティングしたプレート及びコーティングしていないプレートの各ウェルに添加し、３７℃で２０分間インキュベートした。停止溶液５０μＬを各ウェルに添加した。プレートをＥＬＩＳＡリーダーによって吸光度４０５ｎｍで読み取った。
【０１３２】
データ分析
カットオフ値は、コーティングしたプレートからの二次抗体のみの平均ＯＤ値と、コーティングしていないプレートからの二次Ａｂのみの平均ＯＤ値との差プラス０．１によって得た。
【０１３３】
力価は、各希釈におけるコーティングしたプレートのＯＤ値とコーティングしていないプレートのＯＤ値との差として定義した。カットオフ値を上回る最も高い希釈液は、抗グロボＨ  ＩｇＧ力価であった。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６ソフトウェアを用いて統計分析を行った。
【０１３４】
臨床患者の特徴を表１に列挙した。
【０１３５】
【表１】
2019515916.tif 000002
【０１３６】
無増悪生存期間（ＰＦＳ）は、ＯＢＩ−８２２がいくつかの生物学的サブタイプの乳がん（ステージＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＥＲ（＋）、ＰＲ（＋）、ＨＥＲ２（＋）又はトリプルネガティブ）において反応性であることを示した。異なる腫瘍サブタイプ間のグロボＨ発現のプロフィールを表２に列挙した。
【０１３７】
【表２】
2019515916.tif 000003
【０１３８】
【表３】
2019515916.tif 000004
【０１３９】
Ｅｒｒｏｒ！Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ｓｏｕｒｃｅ  ｎｏｔ  ｆｏｕｎｄ．及び５は、試験薬の９回の注射を受けた後の無増悪生存期間（ＰＦＳ）を示した。これは、ＯＢＩ−８２２ワクチンが乳がん患者の生存率をより長期間延長できることを示した。
【０１４０】
Ｅｒｒｏｒ！Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ｓｏｕｒｃｅ  ｎｏｔ  ｆｏｕｎｄ．及び７は、ＩｇＧ免疫応答を伴う／伴わない（ＩｇＧ基準１：６４０）、試験薬の摂取後の無増悪生存期間（ＰＦＳ）／全生存期間（ＯＳ）を示した。これは、ＯＢＩ−８２２ワクチンがＩｇＧ免疫応答を誘導し、乳がん患者の生存率をより長期間延長できることを示した。
【０１４１】
グリカンアレイによるヒト抗グロボＨ  ＩｇＭ力価測定の臨床試験データ
背景
グリカンアレイプラットフォームは、マイクロ流体カートリッジ内でＥＬＩＳＡが実施される自動化Ａｇｎｉｔｉｏ  ＢｉｏＩＣシステムを利用する。マイクロ流体カートリッジは、マイクロ流体ポンプ及びバルブのアレイ、チャネルネットワーク、試薬貯蔵リザーバ、グリカンアレイ反応ゾーン及び廃棄物貯蔵リザーバを含む。自動化Ａｇｎｉｔｉｏ  ＢｉｏＩＣシステムは、それぞれのリザーバからの試薬及び試料を、化学発光を伴う多重ＥＬＩＳＡ反応のための反応ゾーンにポンプで送り込む。収集されたデータを、Ａｇｎｉｔｉｏ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｃ．によって提供されるＬａｂＩＴソフトウェアによって分析する。Ａｇｎｉｔｉｏ  ＢｉｏＩＣシステムの装置の仕様は、以前のＰＣＴ特許出願（ＷＯ２０１７０４１０２７Ａ１）に開示されている。
【０１４２】
試薬／緩衝液の調製
６６μＬの、正常ヒト血清（ＮＨＳ）又は２２０名の乳がん患者試料からの血清及び１２４のプラセボ試料からの血清を、試料希釈緩衝液（ＢｉｏＣｈｅｃｋ  Ｉｎｃ．、カタログ番号ＭＢ１０１７５）５９４μＬに添加して、１０倍希釈液を形成した。二次抗体溶液は、複合体緩衝液（ＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ（ＴＢＳ）ブロッキング緩衝液＋０．２％Ｔｗｅｅｎ２０、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｃ．、カタログ番号３７５３５）９８μＬ中にホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）結合ヤギ抗ヒトＩｇＭ（ＫＰＬ  Ｉｎｃ．、カタログ番号４７４−１００３）２μＬを混合して、５０倍希釈液を形成することによって調製した。希釈した二次抗体溶液４０μＬを複合体緩衝液２３６０μＬにポンプで注入して、二次抗体溶液（３０００倍希釈）を形成した。
【０１４３】
アッセイ手順
洗浄緩衝液（０．２％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ  ２０（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、カタログ番号ＪＴＢ−Ｘ２５１−０７）中のリン酸緩衝生理食塩水（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｃ．、カタログ番号７００１１））６２０μｌを「洗浄」リザーバに添加した。ブロッキング緩衝液（無タンパク質ブロッキング緩衝液、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｃ．、カタログ番号３７５７１）１２０μＬを「ブロッキング」リザーバに添加した。二次抗体溶液１２０μＬを「複合体」リザーバに添加した。血清１００μＬを「血清」リザーバに添加した。基質緩衝液（ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ  ＥＬＩＳＡ  Ｆｅｍｔｏ  Ｍａｘｉｍｕｍ  Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｃ．、カタログ番号３７０７４）１２０μＬを１０分間で「基質」リザーバに添加した。
【０１４４】
データ分析
グリカンアレイをＡｇｎｉｔｉｏ  ＢｉｏＩＣ  Ｐｕｍｐｉｎｇ  Ｍａｃｈｉｎｅによって３０分間加圧した。結合した血清を、Ａｇｎｉｔｉｏ  ＢｉｏＩＣ  Ａｎａｌｙｚｅｒを用いて視覚的にモニターした。アレイの吸光度を抗ヒトグロボＨ  ＩｇＧに関する「Ａｂレベル（μｇ／ｍＬ）」に換算した。内部曲線は、０．０６２５、０．１２５、０．２５、０．５、０．７５及び１μｇ／ｍＬのヒトＩｇＭを用いて作成した。各チップの内部曲線の線形回帰を用いて勾配及び切片を計算した。特定の例では、Ａｂレベル（μｇ／ｍＬ）＝［（生データ−切片）／勾配］×０．１である。
【０１４５】
Ｅｒｒｏｒ！Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ｓｏｕｒｃｅ  ｎｏｔ  ｆｏｕｎｄ．は、初期ＩｇＭ免疫応答を伴う／伴わない、第２週に試験薬の１回の注射を受けた後の無増悪生存期間（ＰＦＳ）を示した。これは、ＯＢＩ−８２２ワクチンが初期ＩｇＭ免疫応答を誘導し、乳がん患者の生存率をより長期間延長できることを示した。
【０１４６】
ヒト抗キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）ＩｇＧ力価アッセイに基づく臨床試験データを用いた有効性の実証
ヒト抗キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）ＩｇＧ力価アッセイを用いて、グロボシリーズ抗原ワクチンの投与によって生じる免疫学的反応が、グロボシリーズ抗原ワクチン、グロボシリーズ抗原及び／又は担体タンパク質によって誘導され得ることを示した。
【０１４７】
試薬／緩衝液の調製
ＫＬＨ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｈ１１５８、海洋収穫物、ストック濃度５ｍｇ／ｍＬ）；コーティング緩衝液：カーボネート−ビカーボネート緩衝液、ｐＨ９．２（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｃ３０４１−５０ＣＡＰ）；二次抗体：ヤギ抗ヒトＩｇＧ−ＨＲＰ（ＫＰＬ、カタログ番号４７４−１００２）；１０×ＰＢＳ、ｐＨ７．４（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号７００１１−０４４）；Ｔｗｅｅｎ−２０（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｐ２２８７）；ＴＭＢ基質溶液（Ｃｌｉｎｉｃａｌ、カタログ番号０１０１６−１−５００）；ブロッキング緩衝液（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｂ６４２９）；ＰＢＳＴ：ＰＢＳ中０．０５％ｔｗｅｅｎ−２０；停止溶液：１Ｎ  Ｈ２ＳＯ４。
【０１４８】
アッセイ手順
ＫＬＨをコーティング緩衝液で４μｇ／ｍＬに希釈した。希釈したＫＬＨ溶液５０μＬを標準ウェルの各ウェルに添加した。プレートを４℃で一晩インキュベートした。プレートをデカントし、２００μＬ／ウェルのＰＢＳＴで３回洗浄した。ブロッキング緩衝液１００μＬを各ウェルに添加し、室温で３０分間インキュベートした。プレートをデカントし、ＰＢＳＴ  ２００μＬ／ウェルで３回洗浄した。
【０１４９】
血清試料の希釈：試料を約１０００、２０００、４０００、８０００、１６０００、３２０００、６４０００〜１２８０００倍の範囲のブロッキング緩衝液で２倍連続希釈した（１０００倍希釈液を作製するには、血清試料１μＬをブロッキング緩衝液９９９μＬに添加した）。試料５０μＬをコーティングしたプレート及びコーティングしていないプレートの各ウェルに添加し、次いで室温で１時間半インキュベートした。プレートをデカントし、ＰＢＳＴ  ２００μＬ／ウェルで３回洗浄した。抗ヒトＩｇＧ−ＨＲＰ二次抗体をブロッキング緩衝液で１：２００００に希釈した。１ｍｇ／ｍＬのストックから１μＬを取り、ブロッキング緩衝液２０ｍＬに添加して１：２００００希釈液を作製した。抗ヒトＩｇＧ−ＨＲＰ  ５０μＬをコーティングしたプレート及びコーティングしていないプレートの各ウェルに添加し、室温で４５分間インキュベートした。プレートをデカントし、ＰＢＳＴ  ２００μＬ／ウェルで３回洗浄した。ＴＭＢ基質溶液１００μＬをコーティングしたプレート及びコーティングしていないプレートの各ウェルに添加し、次いで室温で５分間インキュベートした。停止溶液１００μＬを各ウェルに添加した。プレートをＥＬＩＳＡリーダーによって吸光度４５０ｎｍで読み取った。
【０１５０】
図９は、患者がＯＢＩ−８２２ワクチンの注射を受けた後の高い抗ＫＬＨ  ＩｇＧ免疫応答を示した。合計３０の臨床血清試料を３つの群（応答者：ＯＢＩ−８２２ワクチン注射を受け、抗グロボＨ  ＩｇＧ／ＩｇＭレベルが上昇した；非応答者：ＯＢＩ−８２２ワクチン注射を受け、抗グロボＨ  ＩｇＧ／ＩｇＭレベルが上昇しなかった）に分けた。これは、ＯＢＩ−８２２ワクチンの投与が実際に抗ＫＬＨ免疫応答を誘導できることを実証した。したがって、グロボシリーズ抗原ワクチンの投与によってもたらされる免疫学的反応は、グロボシリーズ抗原ワクチン、グロボシリーズ抗原又は担体タンパク質によって誘導することができる。
【０１５１】
［実施例２］
代表的な卵巣がんモデルを用いた有効性の実証
特定の例としての臨床試験：非進行性上皮卵巣がん又はファローピウス管がんを有する女性におけるグロボＨ−ＫＬＨ（ＯＢＩ−８２２／８２１）を用いた能動免疫療法のオープンラベル第ＩＩ相試験。
【０１５２】
方法：これは、細胞減少手術を受けた後進行していなかったが、その後新たに診断されたステージＩＩ以上の上皮卵巣がん又はファローピウス管がんのために白金ベースの化学療法を受けた女性における、オープンラベル第ＩＩ相試験であった。
【０１５３】
治療を受けるために参加する被験者については、第１、２、３、４、１２、２０、２８、３６、４４及び５２週（訪問１、２、３、４、５、６、７、８、９及び１０）にＯＢＩ−８２２（グロボＨ  ３０μｇ）／ＯＢＩ−８２１（１００μｇ）を皮下投与した。疾患状態は、ＲＥＣＩＳＴ  １．１基準を組み込んだ評価の結果に従って決定した。被験者は、客観的ＲＥＣＩＳＴ  １．１基準に基づいてＰＤを有すると評価された。ＲＥＣＩＳＴ基準のためのＣＴスキャン／ＭＲＩを、スクリーニング時、第２８週及び第５２週に実施した。腹部全体（腹部及び骨盤）のＣＴスキャンを、約２４週間の間隔で治療中の指定された時点に実施した。ＣＴスキャンのウィンドウ期間は、プロトコルスケジュールで予定された訪問から＋／−１４日間であった。予定されていなかった腫瘍評価を治験責任医師の裁量で実施し、これは、評価の時点で、ベースライン時に実施した検査と一致した。ＣＴ禁忌の被験者については、代わりにＭＲＩを実施した。
【０１５４】
病変がない被験者、測定可能な疾患を有する被験者及び測定不能の疾患を有する被験者は、この試験への参加に適格であった。測定可能な疾患は、１つ以上の測定可能な病変（最長直径［ＬＤ］が、螺旋状コンピュータ断層撮影［ＣＴ］スキャンで１０ｍｍ以上又は従来のＣＴ、磁気共鳴イメージング［ＭＲＩ］若しくはＸ線で２０ｍｍ以上）の存在によって定義された。関与する全ての病変を代表する最大５つの測定可能な病変（器官当たり最大２つの病変）を、ベースライン時に標的病変（ＴＬ）として同定した。ＴＬの客観的腫瘍応答を決定するために使用されるＲＥＣＩＳＴ  １．１基準を表３に要約する。
【０１５５】
【表４】
2019515916.tif 000005
【０１５６】
ＴＬとして記録されない他の全ての病変（又は疾患の部位）は、非標的病変（ＮＴＬ）として同定した。ＮＴＬの客観的腫瘍応答を決定するために使用されるＲＥＣＩＳＴ基準を表４に要約する。
【０１５７】
【表５】
2019515916.tif 000006
【０１５８】
新しい病変の詳細も記録した；１つ以上の新たな病変の存在を進行として評価した。全体的応答のＲＥＣＩＳＴ評価を表５に要約する。
【０１５９】
【表６】
2019515916.tif 000007
【０１６０】
【表７】
2019515916.tif 000008
【０１６１】
【表８】
2019515916.tif 000009
【０１６２】
【表９】
2019515916.tif 000010
【０１６３】
試験対象母集団：
患者の内訳：以下の患者データを要約し、募集した全ての被験者について提示した：スクリーニングされた患者、試験薬を摂取した患者、治療期間中に完了した患者及び中止された患者、追跡期間中に完了した患者及び中止された患者の数及び割合。
【０１６４】
全ての募集患者の試験群別の、各解析集団における患者の数及び割合並びに除外理由。
【０１６５】
プロトコル違反は、どのような違反がＥＶＡ集団から患者を不適格とするかを決定するために、データベースをロックする前に試験チームによって検討される。
【０１６６】
臨床結果：陰性対照（患者番号：０６５）（図１０）：評価日は、２０１５年３月１８日又はそれ以前に開始された。これは、ＯＢＩ−８２２治療が２８週間（訪問７）以内にいかなる腫瘍生成ももたらさないことを示した。したがって、ＯＢＩ−８２２の安全性が確認された。
【０１６７】
ステージＩＩＩの卵巣がん（患者番号：０３５）（図１１）：評価日は、２０１４年４月２４日又はそれ以前に開始された。患者の元の症状は、ＣＴスキャンにより「サブセンチメートルの腸間膜リンパ節腫瘍」（病変カテゴリー：非標的腫瘍）であった。これは、ＯＢＩ−８２２治療後、２８週間（訪問７）以内に腫瘍の進行／転移がないこと（ＳＤ）を示した。したがって、ＯＢＩ−８２２の腫瘍阻害能は２８週間以内に確認される。
【０１６８】
ステージＩＶのファローピウス管がん（患者番号：０４１）（図１２）：評価日は、２０１４年５月２２日又はそれ以前に開始された。患者の元の症状は、ＣＴスキャンにより「肺腫瘍」（病変カテゴリー：非標的腫瘍）であった。これは、ＯＢＩ−８２２治療後、２８週間（訪問７）以内に腫瘍の進行／転移がないこと（ＳＤ）を示した。したがって、ＯＢＩ−８２２の腫瘍阻害能は２８週間以内に確認される。
【０１６９】
ステージＩＩＩの卵巣がん（患者番号：０６０）（図１３）：評価日は、２０１５年１月６日又はそれ以前に開始された。患者の元の症状は、ＣＴスキャンにより「腹膜腫瘍」（病変カテゴリー：非標的腫瘍）であった。これは、ＯＢＩ−８２２治療後、２８週間（訪問７）以内に腫瘍の進行／転移がないこと（ＳＤ）を示した。したがって、ＯＢＩ−８２２の腫瘍阻害能は２８週間以内に確認される。
【０１７０】
［実施例３］
ＯＢＩ−８２２とＯＢＩ−８２１の混合の指示
保存条件：ＯＢＩ−８２２及びそのプラセボであるＰＢＳのバイアルは、２〜８℃で保存する。ＯＢＩ−８２１及びそのプラセボであるＰＢＳのバイアルは、−１５〜−２５℃で保存する。
【０１７１】
試験群：
Ａ群：能動的治療群；注射あたりの投薬量：ＯＢＩ−８２２（３０μｇのグロボＨに相当）／１００μｇのＯＢＩ−８２１。総最終注入量：０．８ｍＬ。
【０１７２】
Ｂ群：対照群；注入あたりの投薬量：ＰＢＳ。総最終注入量：０．８ｍＬ。
【０１７３】
治験薬：
バイアル１ａ（ＰＢＳ：ＯＢＩ−８２１対照試験品）充填容量−０．５ｍＬ。含量：１０ｍＭリン酸ナトリウム、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ６．８；
バイアル１ｂ（ＯＢＩ−８２１）充填容量−０．５ｍＬ。含量：１０ｍＭリン酸ナトリウム、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ中２５０μｇ／ｍＬ  ＯＢＩ−８２１、ｐＨ６．８；
バイアル２ａ（ＰＢＳ：ＯＢＩ−８２２対照試験品）充填容量−０．７５ｍＬ。含量：１００ｍＭリン酸ナトリウム、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ７．２；
バイアル２ｂ（ＯＢＩ−８２２）充填容量−０．７５ｍＬ。含量：１００ｍＭリン酸ナトリウム、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ中７５μｇのグロボＨ／ｍＬ  ＯＢＩ−８２２に相当、ｐＨ７．２。
【０１７４】
ＯＢＩ−８２２とＯＢＩ−８２１の混合の指示：
治療の時点で、シリンジを用いてバイアル２ａ（ＰＢＳのみ）０．５ｍＬを取り出し、バイアル１ａ（ＰＢＳのみ）に入れるか、又はバイアル２ｂ（ＰＢＳ中のＯＢＩ−８２２）０．５ｍＬを取り出し、バイアル１ｂ（ＰＢＳ中のＯＢＩ−８２１）に入れる。バイアル（バイアル１ａ又はバイアル１ｂのいずれか）の内容物を、バイアルを穏やかに４〜５回ひっくり返すことによって静かに混合する。バイアルを強く振とうしてはならない。この時点で、このバイアルはプラセボ（ＰＢＳのみ）又は治療薬（ＯＢＩ−８２２＋ＯＢＩ−８２１）のいずれかを含んでおり、注射の準備ができている。次いで、被験者への注射のためにこのバイアルから０．８ｍＬを取り出す。各試験群の最終投与量を表６に要約する。
【０１７５】
【表１０】
2019515916.tif 000011
【０１７６】
組み合わせたＯＢＩ−８２２とＯＢＩ−８２１の安定性は、室温で再構成してから１０時間まで安定である。組み合わせた製品の投与は、潜在的な微生物増殖を最小限に抑えるために再構成から２時間以内に行うべきである。再構成から２時間以内に投与することが不可能な場合は、施設の薬局の標準操作手順に従って混合した製品を破壊し、治験薬管理記録に記録すべきである。図１４は、治験薬の混合手順を示す。
【０１７７】
［実施例４］
許可される併用薬及び禁止される併用薬
許可される併用薬：
【０１７８】
アヘン製剤：痛みの管理のために使用してもよく、便秘の予防的治療も許可される。
【０１７９】
ＧＣＳＦ：医師が必要と考える場合は許可される。
【０１８０】
ビスホスホネート。
【０１８１】
ホルモン療法（ホルモン療法使用者として層別化されている被験者の場合）。
【０１８２】
使用される場合、ホルモン療法の選択される形態、用量又は用法は、毒性の不耐性に起因するのでない限り、一貫している必要があり、すなわち、治療の切り替え、さらなる療法の追加又は用量の増加があってはならない。全ての種類のホルモン療法をこの試験で使用することができ、一般的に使用されるホルモン療法を以下に列挙する。
【０１８３】
エストロゲン阻害剤（例えばタモキシフェン、Ｆａｒｅｓｔｏｎ）。
【０１８４】
アロマターゼ阻害剤（例えばアナストロゾール［Ａｒｉｍｉｄｅｘ］、エキセメスタン［Ａｒｏｍａｓｉｎ］及びレトロゾール［Ｆｅｍａｒａ］）。
【０１８５】
下垂体下方調節剤（例えばゴセレリン［Ｚｏｌａｄｅｘ］、ロイプロリド［Ｌｕｐｒｏｎ］−これらはＬＨＲＨ類似体とも呼ばれる。
【０１８６】
Ｎｏｖａｌｄｅｘ（Ｒ）（タモキシフェン選択的エストロゲン受容体調節剤、ＳＥＲＭ）。
【０１８７】
Ｅｖｉｓｔａ（Ｒ）（ラロキシフェン、別のＳＥＲＭ）。
【０１８８】
Ｆａｓｌｏｄｅｘ（Ｒ）（フルベストラント、エストロゲン受容体下方調節剤）。
【０１８９】
抗凝固薬（レピルジン［Ｒｅｆｌｕｄａｎ］）。
【０１９０】
酵素（ラスブリカーゼ［Ｅｌｉｔｅｋ］）。
【０１９１】
造血成長因子。
【０１９２】
投与方法は、好ましくは、表７に列挙される併用薬の不在下で実施される。
【０１９３】
【表１１】
2019515916.tif 000012
【０１９４】
禁止される併用薬（例えばシクロスポリン、ラパマイシン、タクロリムス、リツキシマブ等）。
【０１９５】
東部腫瘍学共同研究グループ（ＥＣＯＧ）パフォーマンス。
【０１９６】
これらの尺度及び基準は、被験者の疾患がどのように進行しているかを評価し、疾患が被験者の日々の生活能力にどのように影響するかを評価し、適切な治療及び予後を決定するために医師及び研究者によって使用される。それらは、医療従事者がアクセスするために表８に含まれる。
【０１９７】
【表１２】
2019515916.tif 000013
【０１９８】
本発明の特定の態様を説明し、例示したが、そのような態様は、本発明の単なる例示であり、添付の特許請求の範囲に従って解釈される本発明を限定するものではないと考えられるべきである。個々の刊行物又は特許出願が、全ての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれることが具体的及び個別に示されているかのように、本明細書で引用される全ての刊行物及び特許出願は、あらゆる目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。上記発明を、理解の明瞭さのために例示及び実施例によってある程度詳細に説明したが、特定の変更及び修正が添付の特許請求の範囲の精神又は範囲から逸脱することなく行われ得ることは、本発明の教示に照らして当業者には容易に明らかであろう。
【図１】
2019515916.tif 000014
【図２】
2019515916.tif 000015
【図３】
2019515916.tif 000016
【図４】
2019515916.tif 000017
【図５】
2019515916.tif 000018
【図６】
2019515916.tif 000019
【図７】
2019515916.tif 000020
【図８】
2019515916.tif 000021
【図９】
2019515916.tif 000022
【図１０】
2019515916.tif 000023
【図１１】
2019515916.tif 000024
【図１２】
2019515916.tif 000025
【図１３】
2019515916.tif 000026
【図１４】
2019515916.tif 000027
【手続補正書】
【提出日】平成30年12月20日(2018.12.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、米国仮特許出願第６２／３２６，６２３号（２０１６年４月２２日出願）、同第６２／３４３，５３０号（２０１６年５月３１日出願）、同第６２／３４５，７５５号（２０１６年６月４日出願）及び同第６２／３８１，８７５号２０１６年８月３１日）の優先権を主張するものである。前記出願の全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、グロボシリーズの抗原に対するワクチンを患者に投与することを含む、がん患者の免疫療法のための方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
糖鎖抗原グロボＨ（Ｆｕｃα１→２Ｇａｌβ１→３ＧａｌＮＡｃβ１→３Ｇａｌα１→４Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃ）は、セラミド結合糖脂質として最初に単離され、１９８４年にＨａｋｏｍｏｒｉ  ｅｔ  ａｌ．によって乳がんＭＣＦ−７細胞から同定された（Ｂｒｅｍｅｒ  Ｅ  Ｇ，ｅｔ  ａｌ．（１９８４）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２５９：１４７７３−１４７７７）。抗グロボＨモノクローナル抗体に関するさらなる試験は、グロボＨが、前立腺がん、胃がん、膵臓がん、肺がん、卵巣がん及び結腸がんを含む多くの他のがんに存在し、並びに免疫系が容易にアクセスできない正常分泌組織の内腔表面にごくわずかに発現されることを示した（Ｒａｇｕｐａｔｈｉ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍ  Ｉｎｔ  Ｅｄ  ３６：１２５−１２８）。さらに、乳がん患者の血清は、高レベルの抗グロボＨ抗体を含むことが証明されている（Ｇｉｌｅｗｓｋｉ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９８：３２７０−３２７５；Ｈｕａｎｇ  Ｃ−Ｙ，ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １０３：１５−２０；Ｗａｎｇ  Ｃ−Ｃ，ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １０５（３３）：１１６６１−１１６６６）。グロボＨ陽性腫瘍を有する患者は、グロボＨ陰性腫瘍を有する患者と比較してより短い生存期間を示した（Ｃｈａｎｇ，Ｙ−Ｊ，ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １０４（２５）：１０２９９−１０３０４）。これらの所見により、六糖エピトープであるグロボＨは、魅力的な腫瘍マーカー及びがんワクチン開発のための実現可能な標的となっている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｂｒｅｍｅｒ  Ｅ  Ｇ，ｅｔ  ａｌ．（１９８４）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２５９：１４７７３−１４７７７
【非特許文献２】Ｒａｇｕｐａｔｈｉ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍ  Ｉｎｔ  Ｅｄ  ３６：１２５−１２８
【非特許文献３】Ｇｉｌｅｗｓｋｉ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９８：３２７０−３２７５
【非特許文献４】Ｈｕａｎｇ  Ｃ−Ｙ，ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １０３：１５−２０
【非特許文献５】Ｗａｎｇ  Ｃ−Ｃ，ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １０５（３３）：１１６６１−１１６６６
【非特許文献６】Ｃｈａｎｇ，Ｙ−Ｊ，ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １０４（２５）：１０２９９−１０３０４
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本開示の態様及び実施形態は、免疫応答（ＩｇＧ及び／又はＩｇＭ）を誘導／調節するために有用なグロボシリーズの抗原を標的とする免疫原性物質（例えばＯＢＩ−８２２）を、がんの治療を必要とする被験体に投与することを含む、がんに罹患した被験体を免疫療法によって治療するための方法を提供し、前記方法は、被験体の生存率を改善するように、グロボシリーズ抗原の相互作用を調節することによって生存率（全生存率及び／又は無増悪生存率を含む）を改善することを含む。一態様では、グロボシリーズの抗原を標的とする免疫原性物質は、例えばＯＢＩ−８２２である。本発明者らの以前のＰＣＴ特許出願（公開番号：ＷＯ２０１５１５９１１８Ａ２及びＷＯ２０１６０４４３２６Ａ１）を参照されたい。これらの出願の開示は、グロボＨ−ＫＬＨ複合糖質（ＯＢＩ−８２２）及び／又は治療用アジュバント（ＯＢＩ−８２１／ＯＢＩ−８３４）を含む免疫原性／治療用組成物、並びにこれらを製造し、がんなどの増殖性疾患を治療するために使用する方法を包含する。治療用組成物は、一部には、がん細胞などの損傷細胞又は異常細胞によってもたらされる危険性から、免疫系を介して自らを守る身体の自然の能力を強化するためのがんワクチンとして働くことが想定されている。
【０００６】
一実施形態では、免疫原性物質は、ＯＢＩ−８２２及び関連する変異体を含み得る。
【０００７】
特定の実施形態では、免疫応答は、ＩｇＧ（サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４を含む）、ＩｇＭ、グロボＨシリーズ抗原／腫瘍に対するＣＴＬ（細胞傷害性リンパ球）を含み得る。
【０００８】
特定の実施形態では、臨床的に意味のある利点には、以下における変化が含まれ得る：無増悪生存率；全生存率；（十分に耐容される及び／又は重大な安全性の懸念がない）；客観的な奏功率；進行までの時間；無病生存率；腫瘍応答；生活の質の改善；固形腫瘍のサイズの縮小及び／又は腫瘍関連抗原（主にグロボＨ又はグロボＨを含む）の減少。
【０００９】
特定の態様では、投与レジメンは、２回以上（例えば３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回又は１０回以上）のワクチンの投与；２回の連続する投与の間の時間間隔及び／若しくは投与量レジメンの調整；投与経路の調整及び／若しくは注射部位／投与位置の変更／交互実施又は上記のいずれかの任意の組み合わせを含むことができ、これにより、各々の投与は免疫応答を増加させる［例えば力価−ＩｇＧ及び／若しくはＩｇＭ  Ａｂの量及び／又は親和性／アビディティの増加；グロボＨ抗原複合体のグロボＨ部分の免疫原性がより低い部位へのＡｂの誘導（例えば複合体中のよりアクセスしにくいと考えられるグロボＨ抗原の部分）］。特定の態様では、注射は、免疫応答ブースター剤の添加によって変更及び／又は補完することができる。
【００１０】
特定の態様では、グロボシリーズ抗原の相互作用の調節には、以下のものが含まれ得る：複数回のワクチン接種で親和性が高められた抗グロボＨ抗体の誘導；Ｂ細胞の胚中心のグロボＨシリーズ腫瘍抗原への拡大；高親和性抗グロボＨ抗体を含む胚中心の優先的な拡大；通常、単回（又は少ない回数の抗原への暴露の反復）では意味のある応答を生じさせるのに十分な数で存在しない低頻度のＢ細胞の誘導（例えば、それらはほとんどの抗体が結合しないエピトープに結合し得る）；抗腫瘍応答の長期間の維持にとって重要であり得る抗体分泌形質細胞（「抗体分泌形質細胞」はＢ細胞が分化するものである）及び記憶Ｂ細胞の増殖拡大；Ａｂクラススイッチの速度の増加［良好なＴ細胞ヘルパー機能を必要とするか又はＢ細胞がＩｇＧに切り替わらない］；抗体応答の速度の増加（例えば、連続的なワクチン接種は、ＫＬＨへの結合なしで、シクロホスファミドの同時投与なしで及び／又は反復ワクチン接種なしで得られるよりも迅速な抗体の拡大をもたらし得る）；上記の抗腫瘍応答の発現及び維持を妨げるＴｒｅｇ活性の低下；腫瘍の死滅のための抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）の誘導；ＣＤＣ及びＡＤＣＣ媒介腫瘍細胞死滅を誘発するための抗グロボシリーズ抗原のＩｇＭ／ＩｇＧ免疫応答の誘導；腫瘍細胞からのグロボシリーズ抗原−セラミドシェディングを捕捉し、トランスリン関連因子Ｘ（ＴＲＡＸ）依存性血管新生をブロックする抗グロボシリーズ抗原抗体の誘導；グロボシリーズ抗原−セラミド誘導Ｎｏｔｃｈ  １依存性免疫抑制をブロックし、それによってＴ細胞増殖及びサイトカイン産生を増強する抗グロボシリーズ抗原抗体の誘導；アポトーシスをもたらす抗グロボシリーズ抗原抗体の誘導；グロボシリーズ抗原誘導性血管新生の阻害；ＯＢＩ−８２２ワクチン接種はアポトーシスを誘導する；ＣＴＬ（細胞傷害性リンパ球）の誘導。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】ＯＢＩ−８２２：能動的がん免疫療法は、腫瘍の死滅のためにＡＤＣＣ及びＣＤＣを誘導する。ＯＢＩ−８２２によるグロボＨ−セラミド枯渇は、ＴＲＡＸ依存性血管新生を有効に阻止し、腫瘍退縮を達成する。腫瘍分泌可溶性因子は、内皮細胞上のそれぞれの受容体に結合し、ホスホリパーゼＣ（ＰＬＣ）活性化及び細胞内カルシウム放出を誘発し、内皮細胞の増殖、遊走及び管形成を促進する。ＰＬＣは、セカンドメッセンジャーの「初期発生器」としての機能を果たし、血管新生の初期段階を駆動する。ＰＬＣ活性は、ＰＬＣβ１活性をブロックするトランスリン関連因子Ｘ（ＴＲＡＸ）を含むいくつかの結合パートナーによって調節される。この事象の分子機構は、ＴＲＡＸへのグロボ−Ｈセラミドの結合と、結果として生じるＰＬＣβ１の放出及び活性化を含む。
【図２】ＯＢＩ−８２２は、グロボＨ−セラミドを枯渇させ、これは次にＮｏｔｃｈ  １分解を増加させ、腫瘍の免疫抑制作用をブロックし、腫瘍退縮をもたらす。Ｎｏｔｃｈシグナル伝達経路は、ほとんどの生物において進化的に保存された細胞シグナル伝達系であり、細胞増殖、分化、アポトーシス及び生存を調節することができる。Ｎｏｔｃｈ  １の調節は、Ｅタンパク質転写因子Ｅ２Ａ及びその天然阻害剤ＩＤ３によって制御される。Ｎｏｔｃｈ  １は、Ｅ３ユビキチンリガーゼ、ＩＴＣＨを介したユビキチン化によって分解される。免疫細胞へのグロボ−Ｈセラミドの添加は、それらの増殖及びサイトカイン又は免疫グロブリン分泌を阻害し得る。グロボ−Ｈセラミドは、ＩＴＣＨ発現を伴うＩＤ３及びＥＧＲ２／３の誘導を介したＮｏｔｃｈ  １シグナル伝達の阻害を含む免疫抑制を誘導することができた。
【図３】ＯＢＩ−８２２はアポトーシスをもたらす。アポトーシス（プログラム細胞死）は、多細胞生物の正常な発達及び組織リモデリングに寄与する。焦点接着キナーゼ（ＦＡＫ）は、インテグリン、がん遺伝子及び神経ペプチドからのシグナルの組み込みに関係づけられている。ヒト臍帯静脈内皮細胞における増殖因子欠乏誘発性アポトーシスの間に、カスパーゼ３によるＦＡＫのタンパク質分解切断が報告されており、これはＦＡＫとアポトーシスとの間の関連を示唆する。
【図４】図４は、試験薬の９回の注射を受けた後の無増悪生存率（ｍＩＴＴ）を示している（層別ログランク検定、ｐ＝０．０５４２）。
【図５】図５は、試験薬の９回の注射を受けた後の無増悪生存率（ｍＩＴＴ）をベースライン時の疾患と共に示している（層別ログランク検定、Ｐ＝０．０３６２）。
【図６】図６は、ＩｇＧ免疫応答（ＩｇＧ基準１：６４０）を伴う／伴わない試験薬治療対プラセボの無増悪生存率（ｍＩＴＴ）を示している。
【図７】図７は、ＩｇＧ免疫応答（ＩｇＧ基準１：６４０）を伴う／伴わない試験薬治療対プラセボの全生存率（ｍＩＴＴ）を示している。
【図８】図８は、初期ＩｇＭ免疫応答（ＩｇＭ基準）を伴う／伴わない、第２週に試験薬の１回の注射を受けた後の無増悪生存率（ｍＩＴＴ）をプラセボと比較して示している。
【図９】図９は、患者がＯＢＩ−８２２ワクチンの注射を受けた後、高い抗ＫＬＨ  ＩｇＧ免疫応答があることを示している。
【図１０】図１０は、ＯＢＩ−８２２治療の卵巣がん臨床試験を受けた陰性対照（患者番号：０６５）を示している。
【図１１】図１１は、ＯＢＩ−８２２治療の卵巣がん臨床試験を受けたステージＩＩＩの卵巣がん（患者番号：０３５）を示している。
【図１２】図１２は、ＯＢＩ−８２２治療の卵巣がん臨床試験を受けたステージＩＶファローピウス管がん（患者番号：０４１）を示している。
【図１３】図１３は、ＯＢＩ−８２２治療の卵巣がん臨床試験を受けたステージＩＩＩの卵巣がん（患者番号：０６０）を示している。
【図１４】図１４は、治験薬混合の手順を示している。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明は、がん又は感染症などの疾患に罹患した被験体の免疫療法のための方法であって、内因性免疫応答を増強し、内因性応答の活性化を刺激するか又は内在性応答の抑制を阻害する治療有効量の化合物又は薬剤を含む組成物を被験体に投与することを含む方法に関する。より具体的には、本開示は、がんに罹患した被験体における内因性免疫応答を増強し、それによって患者を治療するための方法であって、治療有効量の免疫原性物質を被験体に投与することを含む方法を提供する。
【００１３】
定義：
本明細書で使用される場合の「投与する」、投与レジメンの実施形態は、以下の特徴を含み得る：１）２回以上（例えば３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回又は１０回以上）ワクチンを投与する；２）各々の投与は免疫応答（上記参照）を増加させる［力価−ＩｇＧ及び／若しくはＩｇＭ  Ａｂの量及び／又は親和性／アビディティを増加させる；グロボＨ抗原複合体のグロボＨ部分のより低い免疫原性部位へのＡｂの誘導（例えば複合体中のよりアクセスしにくいと考えられるグロボＨ抗原の部分）］。
【００１４】
本明細書中で使用される場合、「治療」は、治療される個体又は細胞の自然経過を改変しようとする臨床的介入を指し、予防のために又は臨床病理の経過中のいずれかに実施することができる。治療の望ましい効果には、疾患の発症又は再発の予防、症状の軽減、疾患の任意の直接又は間接的な病理学的結果の縮小、炎症及び／又は組織／臓器の損傷の予防又は減少、疾患の進行速度の低下、疾患状態の改善又は緩和、並びに寛解又は予後の改善が含まれる。いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、疾患又は障害の発症を遅らせるために使用される。
【００１５】
「有効量」とは、所望の治療結果又は予防結果を達成するのに必要な用量及び期間で有効な量を指す。
【００１６】
本発明の物質／分子の「治療有効量」は、個体の疾患状態、年齢、性別及び体重、並びに個体における所望の応答を誘発する物質／分子の能力などの因子に応じて異なり得る。治療有効量はまた、物質／分子の治療上の有益な効果が毒性又は有害作用を上回る量である。「予防有効量」は、所望の予防結果を達成するのに必要な用量及び期間で有効な量を指す。必ずしも必要ではないが典型的には、予防用量は疾患の前又は初期段階の被験体において使用されるので、予防有効量は治療有効量より低い。
【００１７】
「有害事象」（ＡＥ）毒性は、国立がん研究所のがん治療評価プログラムによって開発された米国ＮＣＩ共通毒性基準、バージョン４に従って測定される。許容できない毒性の基準には、任意のグレード４以上の毒性が含まれるべきであるが、局所皮膚反応、発熱、悪寒、発汗、蕁麻疹及び／又は掻痒は、抗体／アジュバント投与の一般的な副作用であって、可逆性でありかつ支持的管理によって制御されるものであるので、これらを除くべきである。理論的には、皮膚、関節、腎臓又は他の症状発現によって顕在化するような免疫複合疾患は、起こり得るが、マウスタンパク質への事前暴露がない場合には滅多に起こらないものである。これらは、影響を受けた被験体の治療を中止するための指標となるが、新たな被験体の追加は継続し得る。有害事象は、治験薬の使用に関連するとみなされるか否かに関わらず、無作為化の日から、被験体の無作為化から最大２年間続く追跡期間までの間に、被験体が経験した任意の身体的又は臨床的変化又は疾患である。これには、新たな疾病の発症及び既存の状態の増悪が含まれる。治療期間中に治療を中止した被験体については、試験治療（ＯＢＩ−８２２／ＯＢＩ−８２１又は対照）の最終投与後２８日目まで有害事象を記録すべきである。
【００１８】
「抗体」（Ａｂ）及び「免疫グロブリン」（Ｉｇ）は、同じ構造特性を有する糖タンパク質である。抗体は特定の抗原に対して結合特異性を示すが、免疫グロブリンは、抗体及び一般に抗原特異性を欠く他の抗体様分子の両方を含む。後者の種類のポリペプチドは、例えばリンパ系によって低レベルで産生され、骨髄腫によって高レベルで産生される。「抗体」及び「免疫グロブリン」という用語は、最も広い意味で交換可能に使用され、モノクローナル抗体（例えば完全長又は無傷モノクローナル抗体）、ポリクローナル抗体、一価抗体、多価抗体、多重特異性抗体（例えば、所望の生物学的活性を示す限りは二重特異性抗体）を含み、特定の抗体フラグメント（本明細書中でより詳細に説明される）をも含み得る。抗体は、キメラ、ヒト、ヒト化及び／又は親和性成熟抗体であり得る。
【００１９】
「可変」及び「相補性決定領域」（ＣＤＲ）
「可変」という用語は、可変ドメインの特定の部分が、抗体間で配列が大きく異なり、その特定の抗原に対する各特定の抗体の結合及び特異性において使用されるという事実を指す。しかしながら、可変性は、抗体の可変ドメイン全体に均一に分布しているわけではない。これは、軽鎖及び重鎖可変ドメインの両方における相補性決定領域（ＣＤＲ）又は超可変領域と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク（ＦＲ）と呼ばれる。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、それぞれ、３つのＣＤＲによって連結された、主としてβシート構造をとる４つのＦＲ領域を含み、ＣＤＲは、βシート構造を連結するループを形成し、場合によってはβシート構造の一部を形成する。各鎖中のＣＤＲは、ＦＲ領域によって近接して一緒に保持され、他の鎖由来のＣＤＲと共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）参照）。定常ドメインは、抗原への抗体の結合に直接関与しないが、抗体依存性細胞毒性における抗体の関与などの様々なエフェクター機能を示す。抗体のパパイン消化は、それぞれが単一の抗原結合部位を有する「Ｆａｂ」フラグメントと呼ばれる２つの同一の抗原結合フラグメント、及び残りの、容易に結晶化する能力を反映した名前を有する「Ｆｃ」フラグメントを、生じる。ペプシン処理は、２つの抗原結合部位を有しかつ依然として抗原を架橋することができる、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを生じる。
【００２０】
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識及び抗原結合部位を含む最小限の抗体断片である。二本鎖Ｆｖ種において、この領域は、緊密で非共有結合的に結合した１つの重鎖及び１つの軽鎖可変ドメインの二量体からなる。一本鎖Ｆｖ種では、１つの重鎖及び１つの軽鎖可変ドメインを、軽鎖と重鎖が二本鎖Ｆｖ種のものと類似の「二量体」構造で結合できるように、柔軟なペプチドリンカーによって共有結合させることができる。この構造において、各可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用して、ＶＨ−ＶＬ二量体の表面上の抗原結合部位を規定する。集合的に、６つのＣＤＲは抗体に抗原結合特異性を付与する。しかしながら、単一の可変ドメイン（又は抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）でさえも、結合部位全体よりも低い親和性であるが、抗原を認識して結合する能力を有する。
【００２１】
Ｆａｂフラグメントはまた、軽鎖の定常ドメイン及び重鎖の第１定常ドメイン（ＣＨ１）を含む。Ｆａｂ’フラグメントは、抗体ヒンジ領域由来の１つ以上のシステインを含む重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端における数個の残基の付加によってＦａｂフラグメントと異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（１つ又は複数）が遊離チオール基を担持するＦａｂ’についての本明細書における名称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体フラグメントはもともと、それらの間にヒンジシステインを有するＦａｂ’フラグメントの対として産生された。
【００２２】
任意の脊椎動物種由来の抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２つの明確に異なる型の１つに割り当てることができる。
【００２３】
重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に依存して、抗体（免疫グロブリン）を異なるクラスに割り当てることができる。ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭの５つの主要なクラスの免疫グロブリンがあり、これらのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２にさらに分類し得る。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ及びμと呼ばれる。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造及び三次元立体配置は周知であり、例えば、Ａｂｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ  ｅｄ．（２０００）に一般的に記載されている。抗体は、抗体と１つ以上の他のタンパク質又はペプチドとの共有結合又は非共有結合によって形成される、より大きな融合分子の一部であり得る。
【００２４】
本明細書中で使用される場合、「単離された抗体」は、同定され、その天然環境の成分から分離及び／又は回収されたものである「単離された」抗体を含み得る。その天然環境の夾雑成分は、抗体の研究、診断又は治療的使用を妨げる物質であり、酵素、ホルモン及び他のタンパク質性又は非タンパク質性溶質を含み得る。一実施形態では、抗体は、（１）例えばローリー法によって測定した場合に抗体の９５重量％を超えるまで、いくつかの実施形態では９９重量％を超えるまで、（２）例えばスピニングカップシーケネータを用いてＮ末端若しくは内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度まで、又は（３）例えばクマシーブルー若しくは銀染色を用いる還元若しくは非還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥによって均質になるまで精製される。単離された抗体は、抗体の天然の環境の少なくとも１つの成分が存在しないため、組換え細胞内にインサイチュで抗体を含む。しかしながら、通常、単離された抗体は少なくとも１つの精製工程によって調製される。
【００２５】
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」（ｍＡＢ）という用語は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指し、例えば、集団を構成する個々の抗体は、少量で存在し得る、起こり得る天然の突然変異を除いて同一である。したがって、「モノクローナル」という修飾語は、別個の抗体の混合物ではないという抗体の特徴を示す。そのようなモノクローナル抗体は、典型的には、標的に結合するポリペプチド配列を含む抗体を包含し、ここで、標的結合ポリペプチド配列は、複数のポリペプチド配列から単一の標的結合ポリペプチド配列を選択することを含む工程によって得られた。例えば、選択工程は、ハイブリドーマクローン、ファージクローン又は組換えＤＮＡクローンのプールなどの複数のクローンからユニークなクローンを選択することであり得る。選択された標的結合配列は、例えば標的に対する親和性を改善する、標的結合配列をヒト化する、細胞培養におけるその産生を改善する、インビボでその免疫原性を低減する、多重特異性抗体を作製する等のためにさらに改変することができ、改変された標的結合配列を含む抗体も本発明のモノクローナル抗体であることが理解されるべきである。典型的には異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対するものである。モノクローナル抗体調製物は、それらの特異性に加えて、典型的には他の免疫グロブリンが夾雑していないという点で有利である。「モノクローナル」という修飾語は、抗体の実質的に均質な集団から得られるという抗体の特性を示すものであり、任意の特定の方法による抗体の作製を必要とすると解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ法（例えばＫｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）；Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ  ｅｄ．１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ５６３−６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１））、組換えＤＮＡ法（例えば米国特許第４，８１６，５６７号参照）、ファージディスプレイ技術（例えばＣｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９２）；Ｓｉｄｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９−３１０（２００４）；Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３（２００４）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０１（３４）：１２４６７−１２４７２（２００４）；及びＬｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８４（１−２）：１１９−１３２（２００４）参照）、並びにヒト免疫グロブリン遺伝子座又はヒト免疫グロブリン配列をコードする遺伝子の一部又は全部を有する、動物におけるヒト又はヒト様抗体を作製するための技術（例えばＷＯ９８／２４８９３；ＷＯ９６／３４０９６；ＷＯ９６／３３７３５；ＷＯ９１／１０７４１；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：２５５１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６２：２５５−２５８（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：３３（１９９３）；米国特許第５，５４５，８０７号；同第５，５４５，８０６号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；同第５，６６１，０１６号；  Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ．Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３（１９９２）；Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８５６−８５９（１９９４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８１２−８１３（１９９４）；Ｆｉｓｈｗｉｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８４５−８５１（１９９６）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８２６（１９９６）及びＬｏｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｈｕｓｚａｒ，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３（１９９５）参照）を含む、様々な技術によって作製し得る。
【００２６】
「ヒトモノクローナル抗体」（ＨｕＭＡｂ）
「ヒトモノクローナル抗体」は、ヒトによって産生される抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有しかつ／又は本明細書で開示されるヒト抗体を作製するための技術のいずれかを用いて作製された、ｍＡｂである。ヒト抗体のこの定義は、特に、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を除外する。
【００２７】
「ヒト化抗体」
非ヒト（例えばマウス）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含むキメラ抗体である。一実施形態では、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域由来の残基が、所望の特異性、親和性及び／又は能力を有するマウス、ラット、ウサギ又は非ヒト霊長動物などの非ヒト種（ドナー抗体）の超可変領域由来の残基によって置き換えられているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基が、対応する非ヒト残基によって置き換えられている。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体又はドナー抗体中には見出されない残基を含み得る。これらの改変は、抗体性能をさらに高めるために行われる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、超可変ループの全て又は実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲの全て又は実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体は、任意に、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンの少なくとも一部も含む。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９（１９８８）及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６（１９９２）を参照のこと。また、以下の総説及びその中で引用されている参考文献も参照されたい：Ｖａｓｗａｎｉ  ａｎｄ  Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ａｎｎ．Ａｌｌｅｒｇｙ，Ａｓｔｈｍａ＆Ｉｍｍｕｎｏｌ．１：１０５−１１５（１９９８）；Ｈａｒｒｉｓ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ  ２３：１０３５−１０３８（１９９５）；Ｈｕｒｌｅ  ａｎｄ  Ｇｒｏｓｓ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．５：４２８−４３３（１９９４）。
【００２８】
「キメラ抗体」
本明細書中のモノクローナル抗体は、特に、重鎖及び／又は軽鎖の一部が、特定の種に由来する抗体又は特定の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一又は相同であるが、鎖（１又は複数）の残りの部分は別の種に由来する抗体又は別の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一又は相同である「キメラ」抗体、並びに所望の生物学的活性を示す限り、そのような抗体のフラグメントを含む（米国特許第４，８１６，５６７号；及びＭｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：６８５１−６８５５（１９８４））。
【００２９】
「抗原結合部分」又は「抗体フラグメント」
「抗体フラグメント」は無傷抗体の一部分のみを含み、この部分は、無傷抗体に存在する場合にその部分に通常関連する機能の少なくとも１つ、できるだけ多く又は全部を保持する。一実施形態では、抗体フラグメントは無傷抗体の抗原結合部位を含み、したがって抗原に結合する能力を保持する。
【００３０】
別の実施形態では、抗体フラグメント、例えばＦｃ領域を含むものは、ＦｃＲｎ結合、抗体半減期の調節、ＡＤＣＣ機能及び補体結合などの、無傷抗体に存在する場合にＦｃ領域と通常関連する生物学的機能の少なくとも１つを保持する。一実施形態では、抗体フラグメントは、無傷抗体と実質的に類似したインビボ半減期を有する一価抗体である。例えば、そのような抗体フラグメントは、そのフラグメントにインビボでの安定性を付与することができる、Ｆｃ配列に連結された抗原結合アームを含み得る。
【００３１】
「がん」及び「がん性」という用語は、典型的には調節されない細胞成長／増殖を特徴とする、哺乳動物における生理学的状態を指す又は表す。がんの例には、癌腫、リンパ腫（例えばホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫）、芽腫、肉腫及び白血病が含まれるが、これらに限定されない。そのようながんのより特定の例には、扁平上皮がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺の腺癌、肺の扁平上皮癌、腹膜がん、肝細胞がん、胃腸がん、膵臓がん、神経膠芽腫、子宮頸がん、卵巣がん、肝臓がん、膀胱がん、肝がん、乳がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜癌又は子宮癌、唾液腺癌、腎臓がん、肝臓がん、前立腺がん、外陰がん、甲状腺がん、肝癌、白血病及び他のリンパ増殖性障害及び様々な種類の頭頸部がんが含まれる。「腫瘍」は、本明細書中で使用される場合、悪性又は良性に関わらず、全ての新生物細胞の成長及び増殖、並びに全ての前がん性及びがん性の細胞及び組織を指す。「がん」、「がん性」、「細胞増殖性障害」、「増殖性障害」及び「腫瘍」は、本明細書中で言及される場合、互いに排他的ではない。
【００３２】
「免疫応答」とは、侵入病原体、病原体に感染した細胞若しくは組織、がん性細胞若しくは他の異常細胞、又は、自己免疫若しくは病的炎症の場合は、正常ヒト細胞若しくは組織の選択的標的化、これらへの結合、損傷、破壊及び／又は脊椎動物の身体からの排除をもたらす、免疫系の細胞（例えばＴリンパ球、Ｂリンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好酸球、肥満細胞、樹状細胞及び好中球）並びにこれらの細胞のいずれか又は肝臓によって産生される可溶性高分子（Ａｂ、サイトカイン及び補体を含む）の作用を指す。
【００３３】
「免疫調節剤」は、免疫応答を調節する物質、薬剤、シグナル伝達経路又はその構成要素を指す。免疫応答を「調節する」、「修飾する」又は「調整する」とは、免疫系の細胞又はそのような細胞の活性の任意の改変を指す。そのような調節には、様々な細胞型の数の増加若しくは減少、これらの細胞の活性の増加若しくは減少、又は免疫系内で起こり得る他の何らかの変化として現れ得る、免疫系の刺激又は抑制が含まれる。阻害性及び刺激性免疫調節剤の両方が同定されており、そのいくつかは、がん微小環境において増強された機能を有し得る。
【００３４】
「免疫療法」とは、免疫応答を誘導、増強、抑制又は別の方法で修飾することを含む方法による、疾患に罹患しているか又は疾患に罹患する若しくは疾患の再発をきたす危険性がある、被験体の治療を指す。
【００３５】
被験体の「治療」又は「療法」とは、疾患に関連する症状、合併症、状態又は生化学的徴候の発症、進行、発現、重症度又は再発を逆転させる、緩和する、改善する、阻害する、減速させる又は予防する目的で、被験体に対して実施される任意の種類の介入若しくは工程、又は被験体への活性物質の投与を指す。
【００３６】
「内因性免疫応答を増強する」とは、被験体における既存の免疫応答の有効性又は効力を増加させることを意味する。有効性及び効力のこの増加は、例えば、内因性宿主免疫応答を抑制する機構を克服することによって又は内因性宿主免疫応答を増強する機構を刺激することによって、達成され得る。
【００３７】
「被験体」には、任意のヒト又はヒト以外の動物が含まれる。
【００３８】
本発明のＡｂなどの薬剤又は治療薬の「治療有効量」又は「治療上有効な用量」は、単独で又は別の治療薬と組み合わせて使用される場合に、疾患の発症から被験体を保護する、又は疾患症状の重症度の低下、疾患症状のない期間の頻度及び持続時間の増加又は疾患の苦痛による機能低下若しくは障害の予防によって証明される疾患の退行を促進する、薬剤の量である。疾患の退行を促進する治療薬の能力は、当業者に公知の様々な方法を用いて、例えば臨床試験中のヒト被験体において、ヒトにおける効果を予測する動物モデル系において、又はインビトロアッセイで薬剤の活性を検定することによって評価することができる。
【００３９】
「がん退行を促進する」とは、有効量の薬剤を単独で又は抗腫瘍薬と組み合わせて投与すると、腫瘍増殖若しくは腫瘍サイズの低減、腫瘍の壊死、少なくとも１つの疾患症状の重症度の低下、疾患症状がない期間の頻度及び持続期間の増加、又は疾患の苦痛による機能低下若しくは障害の予防をもたらすことを意味する。さらに、治療に関する「有効な」及び「有効性」という用語には、薬理学的有効性及び生理学的安全性の両方が含まれる。薬理学的有効性は、患者におけるがんの退行を促進する薬剤の能力を指す。生理学的安全性とは、薬剤の投与によって生じる細胞、臓器及び／又は生物レベルでの毒性又は他の有害な生理学的作用（副作用）のレベルを指す。
【００４０】
「免疫関連」応答パターンとは、がん特異的免疫応答を誘導することによって又は先天免疫過程を改変することによって抗腫瘍効果を生じさせる免疫療法剤で治療されたがん患者においてしばしば観察される、臨床応答パターンを指す。この応答パターンは、従来の化学療法剤の評価において疾患進行として分類され、薬剤の失敗と同義である、腫瘍負荷の初期増加又は新たな病変の出現に続く有益な治療効果を特徴とする。したがって、免疫療法剤の適切な評価は、標的疾患に対するこれらの薬剤の作用の長期モニタリングを必要とし得る。
【００４１】
薬剤の治療有効量は、がんを発症する危険性のある被験体（例えば前悪性状態を有する被験体）又はがんの再発をきたす危険性のある被験体に、単独で又は抗腫瘍薬と組み合わせて投与した場合、がんの発症又は再発を阻止する薬剤の任意の量である、「予防有効量」を含む。好ましい実施形態では、予防有効量は、がんの発症又は再発を完全に予防する。がんの発症又は再発を「阻止する」とは、がんの発症若しくは再発の可能性を低減すること、又はがんの発症若しくは再発を完全に予防することのいずれかを意味する。
【００４２】
「腫瘍浸潤性炎症細胞」は、典型的には被験体における炎症応答に関与し、腫瘍組織に浸潤する任意の種類の細胞である。そのような細胞には、腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）、マクロファージ、単球、好酸球、組織球及び樹状細胞が含まれる。
【００４３】
本発明の免疫原性物質及び生成される抗体は、１つのＡｂ又はＡｂの組み合わせ、又はその抗原結合部分、及び薬学的に許容される担体を含む組成物、例えば医薬組成物中で構成され得る。本明細書中で使用される場合、「薬学的に許容される担体」には、生理学的に適合性のありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤等が含まれる。好ましくは、担体は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄又は表皮投与（例えば注射又は注入による）に適する。本発明の医薬組成物は、１つ以上の薬学的に許容される塩、抗酸化剤、水性及び非水性担体、並びに／又は補助剤、例えば防腐剤、湿潤剤、乳化剤及び分散剤を含み得る。
【００４４】
好ましい被験体には、免疫応答の増強を必要とするヒト患者が含まれる。本明細書中に開示される免疫治療方法は、免疫応答を増強することによって治療することができる障害を有するヒト患者の治療に特に適する。特定の実施形態では、本方法は、感染因子によって引き起こされる疾患に罹患した被験体の治療のために用いられる。好ましい実施形態では、この方法は、がんに罹患しているか又はがんに罹患する危険性のある被験体の治療に用いられる。
【００４５】
「がん免疫療法」
本明細書中で使用される場合、がん免疫療法は、転移性がんを有する患者の腫瘍サイズを縮小させることができる、免疫に基づく治療法を含み得るが、これに限定されない。現在、がん免疫療法には３つの主要なアプローチ、すなわち、エフェクター細胞を刺激すること及び／又は調節細胞を阻害することによる免疫反応の非特異的刺激、特異的抗腫瘍反応を増強するための能動的免疫化（がんワクチンとして知られる）、並びに抗腫瘍抗体又は抗腫瘍活性を有する活性化免疫細胞の受身移入（養子免疫療法としても知られる）がある（ＤｅＶｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。
【００４６】
「併用療法」特定の実施形態では、本明細書中で論じる免疫調節剤を、重大な全身毒性を伴わずに腫瘍負荷を低減するのに有効であり、免疫応答の有効性を改善するように作用し得る１つ以上の抗増殖剤／化学療法剤と組み合わせて使用し得る。薬剤は、同時投与併用療法及び／又は共製剤化併用療法として組み合わせることができる。
【００４７】
いくつかの投薬レジメン又は投与形態において２つ以上の薬剤を一緒に使用する併用療法は、典型的には以下の１つ以上の目標を有する：（ｉ）最小の交差耐性を有する薬剤を組み合わせることによって獲得耐性が生じる頻度を低減すること、（ｉｉ）より少ない副作用で効果を達成するために、重複しない毒性及び類似の治療プロフィールを有する薬剤の用量を減少させること、すなわち治療指数を高めること、（ｉｉｉ）別の薬剤の使用を介して１つの薬剤の作用に細胞を感作させること、例えば細胞周期段階又は成長特性を改変すること、並びに（ｉｖ）２つの薬剤の生物学的活性における相加性又は相加性よりも大きな作用を利用することによって効力の増強を達成すること（Ｐｅｇｒａｍ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ（１９９９）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １８：２２４１−２２５１；Ｋｏｎｅｃｎｙ，Ｇ．，ｅｔ  ａｌ（２００１）Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ６７：２２３−２３３；Ｐｅｇｒａｍ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ（２００４）Ｊ．ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．９６（１０）：７３９−７４９；  Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ  ｅｔ  ａｌ（２００６）Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２（９）：４５８−４６６；Ｂｏｒｉｓｙ  ｅｔ  ａｌ（２００３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１００（１３）：７９７７−７９８２）。Ｌｏｅｗｅ相加性（Ｃｈｏｕ，Ｔ．Ｃ．ａｎｄ  Ｔａｌａｌａｙ，Ｐ．（１９７７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６４３８−６４４２；Ｃｈｏｕ，Ｔ．Ｃ．ａｎｄ  Ｔａｌａｌａｙ，Ｐ．（１９８４）Ａｄｖ．Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｇｕｌ．２２：２７−５５；Ｂｅｒｅｎｂａｕｍ，Ｍ．Ｃ．（１９８９）Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｖ．４１：９３−１４１）及びＢｌｉｓｓ独立作用／相乗作用（Ｂｌｉｓｓ，Ｃ．Ｉ．（１９５６）Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．Ｒｅｖ．２０：２４３−２５８；Ｇｒｅｃｏ  ｅｔ  ａｌ（１９９５）Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｖ．４７：３３１−３８５）は、５０％標的阻害を達成するのに必要な薬剤の用量であり、最も単純な場合にはＫｉに等しいＩＣ５０などのパラメータに基づき、単剤療法と比較して併用療法の予想される用量応答関係を計算するために使用される方法である。
【００４８】
「化学療法剤」は、作用機序に関わらず、がんの治療において有用な化合物である。化学療法剤のクラスには、アルキル化剤、代謝拮抗物質、紡錘体阻害剤植物アルカロイド、細胞傷害性／抗腫瘍性抗生物質、トポイソメラーゼ阻害剤、抗体、光増感剤及びキナーゼ阻害剤が含まれるが、これらに限定されない。化学療法剤には、「標的療法」及び従来の化学療法で使用される化合物が含まれる。化学療法剤の例としては、エルロチニブ（ＴＡＲＣＥＶＡ（Ｒ）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／ＯＳＩ  Ｐｈａｒｍ．）、ドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（Ｒ）、Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ）、５−ＦＵ（フルオロウラシル、５−フルオロウラシル、ＣＡＳ番号５１−２１−８）、ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（Ｒ）、Ｌｉｌｌｙ）、ＰＤ−０３２５９０１（ＣＡＳ番号３９１２１０−１０−９、Ｐｆｉｚｅｒ）、シスプラチン（シス−ジアミン、ジクロロ白金（ＩＩ）、ＣＡＳ番号１５６６３−２７−１）、カルボプラチン（ＣＡＳ番号４１５７５−９４−４）、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（Ｒ）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（Ｒ）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、テモゾロミド（４−メチル−５−オキソ−２，３，４，６，８−ペンタアザビシクロ［４．３．０］ノナ−２，７，９−トリエン−９−カルボキサミド、ＣＡＳ番号８５６２２−９３−１、ＴＥＭＯＤＡＲ（Ｒ）、ＴＥＭＯＤＡＬ（Ｒ）、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｐｌｏｕｇｈ）、タモキシフェン（（Ｚ）−２−［４−（１，２−ジフェニルブト−１−エニル）フェノキシ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−エタンアミン、ＮＯＬＶＡＤＥＸ（Ｒ）、ＩＳＴＵＢＡＬ（Ｒ）、ＶＡＬＯＤＥＸ（Ｒ））及びドキソルビシン（ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（Ｒ））、Ａｋｔｉ−１／２、ＨＰＰＤ及びラパマイシンが挙げられる。
【００４９】
化学療法剤のさらなる例には、以下のものが含まれる：オキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（Ｒ）、Ｓａｎｏｆｉ）、ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（Ｒ）、Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ  Ｐｈａｒｍ．）、スーテント（ＳＵＮＩＴＩＮＩＢ（Ｒ）、ＳＵ１１２４８、Ｐｆｉｚｅｒ）、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ（Ｒ）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、イマチニブメシレート（ＧＬＥＥＶＥＣ（Ｒ）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＸＬ−５１８（ＭＥＫ阻害剤、Ｅｘｅｌｉｘｉｓ、ＷＯ２００７／０４４５１５）、ＡＲＲＹ−８８６（Ｍｅｋ阻害剤、ＡＺＤ６２４４、Ａｒｒａｙ  ＢｉｏＰｈａｒｍａ、Ａｓｔｒａ  Ｚｅｎｅｃａ）、ＳＦ−１１２６（ＰＩ３Ｋ阻害剤、Ｓｅｍａｆｏｒｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＢＥＺ−２３５（ＰＩ３Ｋ阻害剤、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＸＬ−１４７（ＰＩ３Ｋ阻害剤、Ｅｘｅｌｉｘｉｓ）、ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２２５８４（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、フルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ（Ｒ）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ロイコボリン（フォリン酸）、ラパマイシン（シロリムス、ＲＡＰＡＭＵＮＥ（Ｒ）、Ｗｙｅｔｈ）、ラパチニブ（ＴＹＫＥＲＢ（Ｒ）、ＧＳＫ５７２０１６、Ｇｌａｘｏ  Ｓｍｉｔｈ  Ｋｌｉｎｅ）、ロナファルニブ（ＳＡＲＡＳＡＲ（商標）、ＳＣＨ  ６６３３６、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｐｌｏｕｇｈ）、ソラフェニブ（ＮＥＸＡＶＡＲ（Ｒ）、ＢＡＹ４３−９００６、Ｂａｙｅｒ  Ｌａｂｓ）、ゲフィチニブ（ＩＲＥＳＳＡ（Ｒ）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、イリノテカン（ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（Ｒ）、Ｐｆｉｚｅｒ）、チピファルニブ（ＺＡＲＮＥＳＴＲＡ（商標）、Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｎｓｏｎ）、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（商標）（クレモフォール不含）、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子製剤（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ，Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ，Ｉｌ）、バンデタニブ（ｒＩＮＮ、ＺＤ６４７４、ＺＡＣＴＩＭＡ（Ｒ）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、クロラムブシル、ＡＧ１４７８、ＡＧ１５７１（ＳＵ  ５２７１；Ｓｕｇｅｎ）、テムシロリムス（ＴＯＲＩＳＥＬ（Ｒ）、Ｗｙｅｔｈ）、パゾパニブ（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、カンフォスファミド（ＴＥＬＣＹＴＡ（Ｒ）、Ｔｅｌｉｋ）、チオテパ及びシクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（Ｒ）、ＮＥＯＳＡＲ（Ｒ））；アルキルスルホネート、例えばブスルファン、イムプロスルファン及びピポスルファン；アジリジン、例えばベンゾドーパ、カルボコン、メツレドパ及びウレドパ；エチレンイミン類及びメチルメラミン類、例えばアルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミド及びトリメチロメラミン；アセトゲニン類（特にブラタシン及びブラタシノン）；カンプトテシン（合成類似体トポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン及びビゼレシン合成類似体を含む）；クリプトフィシン類（特にクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体、ＫＷ−２１８９及びＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチイン；スポンギスタチン；ナイトロジェンマスタード類、例えばクロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドヒドロクロリド、メルファラン、ノボエンビキン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード；ニトロソ尿素、例えばカルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン及びラニムスチン；抗生物質、例えばエンジイン抗生物質（例えばカリケアマイシン、カリケアマイシンγ１Ｉ、カリケアマイシンωＩ１（Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．（１９９４）３３：１８３−１８６）；ジネマイシン、ジネマイシンＡ；ビスホスホネート類、例えばクロドロネート；エスペラマイシン；並びにネオカルジノスタチンクロモフォア及び関連色素タンパク質エンジイン抗生物質クロモフォア）、アクラシノマイシン類、アクチノマイシン、オースラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン類、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン類、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン及びデオキシドキソルビシン）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、例えばマイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン類、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；代謝拮抗物質、例えばメトトレキセート及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）；葉酸類似体、例えばデノプテリン、メトトレキセート、プテロプテリン、トリメトレキセート；プリン類似体、例えばフルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジン類似体、例えばアンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン；アンドロゲン類、例えばカルステロン、ドロモスタノロンプロピオネート、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗副腎剤、例えばアミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸補充剤、例えばフォリン酸；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトレキセート；デフォファミン；デメコルシン；ジアジコン；エフロルニチン；エリプチニウムアセテート；エポチロン；エトグルシド；ガリウムニトレート；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン；メイタンシノイド類、例えばメイタンシン及びアンサミトシン類；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（Ｒ）多糖複合体（ＪＨＳ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，Ｏｒｅｇ．）；ラゾキサ��；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン類（Ｔ−２毒素、ベラキュリンＡ、ロリジンＡ及びアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（Ａｒａ−Ｃ）；シクロホスファミド；チオテパ；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキセート；白金類似体、例えばシスプラチン及びカルボプラチン；ビンブラスチン；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（Ｒ））；ノバントロン；テニポシド；エダトレキセート；ダウノマイシン；アミノプテリン；カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（Ｒ），Ｒｏｃｈｅ）；イバンドロネート；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ  ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド類、例えばレチノイン酸；並びに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸及び誘導体。
【００５０】
「化学療法剤」の定義には、以下のものも含まれる：（ｉ）例えばタモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（Ｒ）；タモキシフェンシトレート）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン及びＦＡＲＥＳＴＯＮ（Ｒ）（トレミフェンシトレート）を含む、抗エストロゲン及び選択的エストロゲン受容体調節剤（ＳＥＲＭ）などの腫瘍に対するホルモン作用を調節又は阻害するように作用する抗ホルモン剤；（ｉｉ）例えば４（５）−イミダゾール、アミノグルテチミド、ＭＥＧＡＳＥ（Ｒ）（メゲストロールアセテート）、ＡＲＯＭＡＳＩＮ（Ｒ）（エキセメスタン；Ｐｆｉｚｅｒ）、フォルメスタニー、ファドロゾール、ＲＩＶＩＳＯＲ（Ｒ）（ボロゾール）、ＦＥＭＡＲＡ（Ｒ）（レトロゾール；Ｎｏｖａｒｔｉｓ）及びＡＲＩＭＩＤＥＸ（Ｒ）（アナストロゾール；ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）などの、副腎におけるエストロゲン産生を調節する酵素、アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤；（ｉｉｉ）フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド及びゴセレリンなどの抗アンドロゲン；並びにトロキサシタビン（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシン類縁体）；（ｉｖ）ＭＥＫ阻害剤（ＷＯ２００７／０４４５１５）などのプロテインキナーゼ阻害剤；（ｖ）脂質キナーゼ阻害剤；（ｖｉ）アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に異常な細胞増殖に関与するシグナル伝達経路における遺伝子、例えばＰＫＣ−α、Ｒａｆ及びＨ−Ｒａｓの発現を阻害するもの、例えばオブリメルセン（ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ（Ｒ）、Ｇｅｎｔａ  Ｉｎｃ．）；（ｖｉｉ）ＶＥＧＦ発現阻害剤（例えばＡＮＧＩＯＺＹＭＥ（Ｒ））及びＨＥＲ２発現阻害剤などのリボザイム；（ｖｉｉｉ）遺伝子治療ワクチンなどのワクチン、例えばＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（Ｒ）、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（Ｒ）及びＶＡＸＩＤ（Ｒ）；ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ（Ｒ）ｒＩＬ−２；ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（Ｒ）などのトポイソメラーゼ１阻害剤；ＡＢＡＲＥＬＩＸ（Ｒ）ｒｍＲＨ；（ｉｘ）ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（Ｒ）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）などの抗血管新生剤；並びに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸及び誘導体。
【００５１】
また、「化学療法剤」の定義には、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ）、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（Ｒ）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）などの治療用抗体；セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（Ｒ）、Ｉｍｃｌｏｎｅ）；パニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（Ｒ）、Ａｍｇｅｎ）、リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（Ｒ）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｂｉｏｇｅｎ  Ｉｄｅｃ）、ペルツズマブ（ＯＭＮＩＴＡＲＧ（商標）、２Ｃ４、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（Ｒ）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ、Ｃｏｒｉｘｉａ）及び抗体−薬剤複合体であるゲムツズマブオゾガマイシン（ＭＹＬＯＴＡＲＧ（Ｒ）、Ｗｙｅｔｈ）も含まれる。
【００５２】
本発明の免疫原性物質／治療薬と組み合わせて化学療法剤としての治療可能性を有するヒト化モノクローナル抗体は、以下のものの１つ以上を含み得るか又は除外し得る：アレムツズマブ、アポリズマブ、アセリズマブ、アトリズマブ、バピネオズマブ、ベバシズマブ、ビバツズマブメルタンシン、カンツズマブメルタンシン、セデリズマブ、セルトリズマブペゴール、シドフシツズマブ、シドツズマブ、ダクリズマブ、エクリズマブ、エファリズマブ、エプラツズマブ、エルリズマブ、フェルビズマブ、フォントリズマブ、ゲムツズマブオゾガマイシン、イノツズマブオゾガマイシン、イピリムマブ、ラベツズマブ、リンツズマブ、マツズマブ、メポリズマブ、モタビズマブ、モトビズマブ、ナタリズマブ、ニモツズマブ、ノロビズマブ、ヌマビズマブ、オクレリズマブ、オマリズマブ、パリビズマブ、パスコリズマブ、ペクフシツズマブ、ペクツズマブ、ペルツズマブ、ペキセリズマブ、ラリビズマブ、ラニビズマブ、レスリビズマブ、レスリズマブ、レシビズマブ、ロベリズマブ、ルプリズマブ、シブロツズマブ、シプリズマブ、ソンツズマブ、タカツズマブテトラキセタン、タドシズマブ、タリズマブ、テフィバズマブ、トシリズマブ、トラリズマブ、トラスツズマブ、ツコツズマブセルモロイキン、ツクシツズマブ、ウマビズマブ、ウルトキサズマブ及びビシリズマブ。
【００５３】
「スタンダードオブケア治療法」は、薬剤又は薬剤の組み合わせ、放射線療法（ＲＴ）、手術又は医師によって適切と認められ、受け入れられ、及び／若しくは特定の種類の患者、疾患若しくは臨床状況のために広く使用されている他の医学的介入を含む治療方法である。種々のタイプのがんに対するスタンダードオブケア治療法が、当業者に周知である。例えば、米国における２１の主要ながんセンターの連合である全米総合がん情報ネットワーク（ＮＣＣＮ）は、多種多様ながんに対するスタンダードオブケア治療についての詳細な最新情報を提供するＮＣＣＮ腫瘍学臨床診療ガイドライン（ＮＣＣＮ  ＧＵＩＤＥＬＩＮＥＳ（Ｒ））を発行している（ＮＣＣＮ  ＧＵＩＤＥＬＩＮＥＳ（Ｒ）、２０１３参照）。
【００５４】
キット：治療用途のための医薬キット及び診断キットを含むキットも、本発明の範囲内である。
【００５５】
本明細書中で使用される場合、本開示のさらなる態様は、用量漸増；患者コホート；安全性；及び薬物動態／薬力学分析に関する態様及び因子を含む。
【００５６】
広義には、免疫系は自然免疫と適応免疫に分けることができる。自然免疫は、２つのうちでより原始的であり、物理的障壁（例えば皮膚）、非特異的防御細胞（例えばマクロファージ）及び種々のサイトカイン（例えばＩＬ−１）などの非特異的防御からなる。一般に、ワクチンは、特定の病原体又は疾患に対する自然免疫系を上方調節することはないが、ワクチンに添加されるアジュバントは、自然免疫を非特異的に活性化することができ、これが適応免疫応答を改善し得る。適応免疫は、体液性（すなわち抗体）及び細胞性（例えば細胞傷害性Ｔ細胞）免疫応答にさらに分けることができる。体液性免疫応答のエフェクター細胞は、適応免疫のみに特化された細胞（例えばＴリンパ球及びＢリンパ球）で構成される；しかし、自然免疫の細胞は必須の機能（例えば抗原提示）を提供する。したがって、例えば、ウイルスに対する抗体産生の誘導は、いくつかの細胞型の一連の複雑な相互作用を必要とする。簡単に言うと、これらには、樹状細胞によるウイルス成分（例えばウイルスのエンベロープタンパク質）の捕捉及びプロセシングが含まれ、これらが次に、提示される抗原に特異的なＴ細胞に提示される。提示された抗原によって活性化されると、Ｔ細胞は、ウイルス特異的Ｂ細胞が侵入病原体に対する抗体を産生するのを「助ける」。
【００５７】
寛容
免疫系は宿主抗原を認識する能力を有するが、通常、そのような応答は観察されない（すなわち免疫系は自己に対する寛容を示す）ことが長い間認められてきた。この自己に対する寛容は、「正常」抗原及び腫瘍抗原の両方を含む。
【００５８】
一態様では、本開示は、腫瘍抗原グロボＨに対する免疫系の寛容を破壊することができるワクチンを特徴とする。
【００５９】
寛容の種類
寛容は、中枢性寛容及び／又は末梢性寛容のいずれかから生じ得る。中枢性寛容は、自己を認識するＴリンパ球及びＢリンパ球の成熟を妨げる。自己寛容は絶対的ではなく、抗自己抗体を産生するいくつかのＢ細胞は正常個体で見出され得る。しかし、Ｂ細胞活性化の必須成分である自己抗原に対する抗自己Ｔ細胞の助けがないため、自己に対する抗体はまれにしか見出されない。末梢性寛容は、自己に対する免疫応答の進行中の能動的抑制であり、主にＴｒｅｇ細胞によって維持されると考えられている。Ｔｒｅｇ細胞は、正常抗原及び腫瘍抗原の両方を含む自己抗原に対するＴ細胞支援の誘導を妨げると考えられている。
【００６０】
自己に対する寛容を打ち破るための方法
一態様では、本開示は、グロボＨシリーズの腫瘍抗原に対する中枢性及び末梢性寛容の両方を克服するための組成物及び方法を特徴とする。例えば、いくつかの態様では、組成物及び方法は、Ｔｒｅｇ抑制を低減し、抗グロボＨ抗体を産生するＢ細胞に対するＴ細胞支援を刺激するのに有用である。
【００６１】
いくつかの態様では、本開示は、末梢性寛容を克服するためのＴｒｅｇ下方調節剤の同時投与を特徴とする。態様において、Ｔｒｅｇ下方調節剤は、シクロホスファミド、抗Ｔｒｅｇ抗体又は（選択的に）Ｔｒｅｇ活性を阻害する（適応免疫系の他の細胞よりも）他の薬剤であり得る。
【００６２】
したがって、いくつかの態様では、シクロホスファミドをグロボＨ−ＫＬＨ複合体と同時に患者に投与することができ、それによって抗グロボＨ抗体産生のＴｒｅｇ抑制を阻止することができる。いくつかの態様では、Ｔｒｅｇ下方調節剤はまた、グロボＨ抗原陽性細胞に対する細胞傷害性Ｔリンパ球の増殖拡大を刺激し、グロボＨを発現する腫瘍細胞の直接死滅を可能にし得る。
【００６３】
Ｂ細胞抗体産生は、抗原を認識するＴ細胞からの助けを必要とすることが認識されている。しかし、中枢性寛容及び／又は抗原提示欠損は、グロボＨ（自己）抗原のＴ細胞認識の欠如をもたらし得る。したがって、いくつかの実施形態では、本開示は、ＫＬＨなどの強い免疫原性物質へのグロボＨシリーズ抗原の結合を介して抗グロボＨ抗体を産生するＢ細胞に対するＴ細胞の支援を刺激するための組成物及び方法を特徴とする。ＫＬＨは、系統発生的に遠い生物で、大きな分子量（３９０，０００を超える）を有しており、どちらも免疫原性を高めることが公知の特性である。グロボＨ複合体を患者に投与する場合、樹状細胞及び／又は他の抗原提示細胞はグロボＨ複合体をプロセシングし、例えばグロボＨ−ＫＬＨ複合体をグロボＨとＫＬＨ成分にプロセシングする。Ｔ細胞はＫＬＨ抗原を認識し、これが次に、Ｂ細胞が所望の抗グロボＨ抗体を産生するのを助ける。
【００６４】
腫瘍ワクチンの他の作用
抗体価の増加：いくつかの実施形態では、本発明の組成物及び方法は、閾値力価を上回る抗体応答を生じさせることによる臨床的利益を特徴とする。閾値力価未満では、抗腫瘍応答は有意な臨床的利益を生じさせるには不十分であり得る。
【００６５】
抗グロボＨ抗体の親和性の増加：いくつかの実施形態では、本開示の方法は、グロボＨ複合体を患者に２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、又はそれ以上投与することを特徴とする。
【００６６】
いくつかの実施形態では、グロボＨに対する最も高い親和性を有する表面抗体を発現するＢ細胞は、より低い親和性の抗体を発現するＢ細胞よりも良好に抗原に結合するため、注入された抗原によって優先的に刺激されるので、反復投与は生じる抗体応答の親和性を高める。いくつかの実施形態では、投与の各サイクルは、抗体応答を高め、抗体の親和性及び／若しくはアビディティを増加させ、並びに／又はグロボＨ複合体のグロボＨ部分の免疫原性がより低い部位に抗体の産生を誘導する。
【００６７】
いくつかの実施形態では、反復投与はさらに、通常、単回（又は抗原への暴露の少ない回数の反復）では意味のある応答を生じさせるのに十分な数で存在しない低頻度のＢ細胞（例えば、それらはほとんどの抗体が結合しないエピトープに結合し得る）を誘導し、抗腫瘍応答の長期間の維持にとって重要であり得る抗体分泌形質細胞（「抗体分泌形質細胞」はＢ細胞が分化するものである）及び記憶Ｂ細胞を増殖拡大させ、並びにＡｂクラススイッチの速度を増加させる。
【００６８】
いくつかの実施形態では、反復投与はまた、グロボＨシリーズ腫瘍抗原に対するＢ細胞の胚中心の拡大及び高親和性抗グロボＨ抗体を含む胚中心の優先的拡大をもたらす。
【００６９】
ＩｇＧサブクラスの拡大：Ｔ細胞の支援は、Ｂ細胞が重鎖クラス及びサブクラスの発現を切り替えるように誘導することができる。ヒトにおいては、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４の４つのＩｇＧサブクラスが存在する。各ＩｇＧサブクラスは、それを他のサブクラスと区別する生物学的エフェクター機能を有する。４つのサブクラスの全ての発現は、抗グロボＨ応答の腫瘍死滅活性を最大にし得る。
【００７０】
抗体応答の速度の増加：いくつかの実施形態では、グロボＨ−ＫＬＨ複合体、シクロホスファミド及びアジュバントの反復接種は、ＫＬＨへの結合、シクロホスファミド又はアジュバントの反復注射なしで得られるよりも迅速な抗体の拡大をもたらす。
【００７１】
特定の実施形態では、ＯＢＩ−８２２は、グロボＨ誘導Ｎｏｔｃｈシグナル伝達を低減することによってがんの免疫抑制をブロックすることができる。
【００７２】
特定の態様では、ＯＢＩ−８２２は、がん治療におけるグロボＨの特定の負の形質に対抗することができる。
【００７３】
特定の実施形態では、ＯＢＩ−８２２はグロボＨを枯渇させ、これは次にＮｏｔｃｈ  １分解を増加させ、腫瘍の免疫抑制作用をブロックし、腫瘍退縮をもたらす。
【００７４】
特定の実施形態では、ＯＢＩ−８２２は、Ｔ細胞増殖及びサイトカイン分泌のグロボＨに関連する減少に対抗することができる。
【００７５】
特定の実施形態では、ＯＢＩ−８２２は、Ｂ細胞分化及びＩｇ分泌のグロボＨに関連する阻害に対抗することができる。
【００７６】
がんの発症におけるグロボシリーズ抗原の役割は重要である。特定の実施形態では、それらは、カスパーゼ３の活性化を阻害することによって腫瘍生存に影響を及ぼすことができる。特定の実施形態では、カスパーゼ３の不活性化を逆転させ、アポトーシスを導く。
【００７７】
特定の実施形態では、グロボシリーズのクラスター化は、カスパーゼ３カスケードを阻害することによって腫瘍生存を増強する。
【実施例】
【００７８】
出願人の本開示並びに肯定的免疫原性応答及び治療効果を裏付ける例示的データ以前に、グロボＨワクチンの前臨床試験；第Ｉ相試験におけるＱＳ−２１とＯＢＩ−８２２；及びがん臨床試験におけるＯＢＩ−８２１とＯＢＩ−８２２を含む、実施例の項で証明されるアジュバントとしてのＯＢＩ−８２１の使用の成功に関連して本明細書で開示される免疫調節剤の有効な使用についての事前の決定的な実証／報告はない。
【００７９】
治験の概要：グロボＨは、乳がんにおいて高発現されることが認められた糖脂質である。ＯＢＩ−８２２、グロボＨ−ＫＬＨ複合体及び２つの第Ｉ相試験におけるアジュバントであるＯＢＩ−８２１を用いた能動免疫療法は、グロボＨを発現する乳がん細胞へのインビトロ結合及び細胞傷害性を媒介することができるグロボＨ特異的抗体を誘導した。
【００８０】
方法：国際的無作為化二重盲検プラセボ対照第ＩＩ／ＩＩＩ相試験（ＮＣＴ０１５１６３０７）において、進行性疾患（ＰＤ）の２以下の事象があり、１回以上の抗がんレジメン後に少なくとも安定した疾患（ＳＤ）を達成した転移性乳がんの患者を、第１、２、３、５、９、１３、１７、２５、３７週に又はＰＤまで、低用量のシクロホスファミド（３００ｍｇ／ｍ２）と組み合わせて皮下ＯＢＩ−８２２（グロボＨ  ３０μｇ）／ＯＢＩ−８２１（１００μｇ）又は対照（ＰＢＳ）を摂取するように２：１に無作為に割り付ける。ホルモン療法は許容される。有効性の主要及び副次評価項目は、体液性抗体応答と相関する、無増悪生存期間（ＰＦＳ）及び全生存期間（ＯＳ）である。
【００８１】
結果：３４９名の患者を無作為に割り付け、３４８名が治験薬（ＩＴＴ）を摂取し、１６８名（４８％）が９回全ての注射を受けた。７０％はホルモン受容体陽性乳がんを有しており、１３％はトリプルネガティブであり、６２％はホルモン療法を受けていた。グロボＨ特異的ＩｇＧ応答を発現した患者及びグロボＨ特異的ＩｇＧ応答を発現しなかった患者を含む全患者において、ＰＦＳ（ＨＲ、０．９６［９５％ＣＩ、０．７４−１．２５］Ｐ＝０．７７）又は中間ＯＳ（ＨＲ、０．７９［９５％ＣＩ、０．５１−１．２２］Ｐ＝０．２９）に差は認められなかった。しかし、ベースライン疾患状態及び／又はホルモン使用について調整すると、治療期間中のいずれかの時点で１：１６０以上の力価でＯＢＩ−８２２／ＯＢＩ−８２１に対するグロボＨ特異的ＩｇＧ応答を発現した患者の５０％において、対照（ＰＦＳについては、ＨＲ、０．７１［９５％ＣＩ、０．５２−０．９７］Ｐ＝０．０２９、ＯＳについては、ＨＲ、０．５７［９５％ＣＩ、０．３３−０．９７］Ｐ＝０．０４）及び非応答者（ＰＦＳについては、ＨＲ、０．５２［９５％ＣＩ、０．３７−０．７１］Ｐ＜０．０００１、ＯＳについては、ＨＲ、０．５２［９５％ＣＩ、０．２９−０．９２］Ｐ＝０．０２５）と比較してＰＦＳ及びＯＳが有意に改善された。時間依存型Ｃｏｘモデルにおいて、対照と比較してＯＢＩの全９回の注射を受けた患者ではＰＦＳが改善された（ＨＲ、０．６６［９５％ＣＩ、０．４２−１．０１］Ｐ＝０．０５７）。ＯＢＩ−８２２／ＯＢＩ−８２１は良好に耐容された；最も一般的な薬剤関連有害事象は、グレード１／２の注射反応であった。
【００８２】
結論：ＯＢＩ−８２２／ＯＢＩ−８２１によるワクチン接種は、ＩＴＴにおけるＰＦＳを改善しなかった。しかし、ＰＦＳ及び中間ＯＳは、ワクチンに対する免疫応答を発現した患者において有意に改善された。これらのサブグループデータを、最終的な第ＩＩＩ相試験を設計するために使用する。
【００８３】
治験デザインの理論的根拠：ＯＢＩ−８２２は、能動免疫療法の新規クラスに属する新しい治験抗がん治療薬である。これは、担体タンパク質であるキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）に共有結合した腫瘍関連炭水化物抗原（ＴＡＣＡ）、グロボＨからなる合成糖タンパク質である。ＯＢＩ−８２１は、サポニンベースのアジュバントである。グロボＨは、乳がん、前立腺がん、胃がん、肺がん、結腸がん、膵臓がん及び卵巣がん等のような多くの上皮がんにおける悪性腫瘍の表面上に高レベルで発現される。抗原の免疫原性は、グロボＨをＫＬＨ担体タンパク質に結合してＯＢＩ−８２２（グロボＨ−ＫＬＨ）を形成し、アジュバントであるＯＢＩ−８２１と同時投与することによって増強される。
【００８４】
試験デザイン：国際的無作為化二重盲検プラセボ対照第ＩＩ／ＩＩＩ相試験（ＮＣＴ０１５１６３０７）は、４１週間の治療期間にＯＢＩ−８２２の９回の注射、無作為化から最大２年までの疾患進行追跡期間及び最大５年までの生存追跡期間からなる。組織学的又は細胞学的に確認された転移性ＢＣを有する合計３４９名の以前に治療された女性を、低用量のシクロホスファミド（３００ｍｇ／ｍ２）と組み合わせた皮下ＯＢＩ−８２２（グロボＨ  ３０μｇ）／ＯＢＩ−８２１（１００μｇ）又は対照（ＰＢＳ）での処置に無作為に割り付ける（２：１）。
【００８５】
適格基準：（選択基準及び除外基準を確立した）
１．選択基準
２．除外基準
【００８６】
試験手順スケジュール：
１．スクリーニング期−無作為化の３週間前（訪問１）
２．治療期間：第１週〜第３週（訪問２〜訪問５）
３．治療期間：第５週〜第４１週（訪問６〜訪問１９）
４．追跡期間（８週間ごと）
５．早期中止基準を確立した
６．生存追跡期間（１２週間ごと）
７．完全性のために他の試験手順を検討した
【００８７】
治療計画：（考慮される項目）
１．無作為化及び盲検化
２．シクロホスファミド投与スケジュール
３．ＯＢＩ−８２２／ＯＢＩ−８２１及びプラセボ投与スケジュール
【００８８】
毒性の管理及び治療の中止：（デザインの一部として考慮された例示的因子）
１．一般的管理
２．薬剤誘発毒性の管理
３．個別被験者試験治療（ＯＢＩ−８２２／ＯＢＩ−８２１、プラセボ）中止のガイドライン
４．シクロホスファミド治療中止のガイドライン
【００８９】
試験期間中に許可される治療及び禁止される治療：（デザインの一部として考慮された例示的な因子）
１．試験期間中許可される治療
２．試験期間中禁止される治療
【００９０】
薬剤情報：（デザインの一部として考慮される例示的な因子）
１．シクロホスファミド
２．ＯＢＩ−８２２（グロボＨ−ＫＬＨ）
３．ＯＢＩ−８２１
４．臨床試験材料（ＣＴＭ）の供給、包装、ラベル付け及び保存
【００９１】
試験評価項目：
１．有効性評価
２．安全性評価
３．安全性変数
【００９２】
応答基準：
１．腫瘍病変の測定可能性の定義
２．腫瘍病変の記録
３．応答の評価
４．プロトコル治療からの除外の基準
５．試験外判定基準
【００９３】
統計的考察：
１．目的及び仮説
２．標的サンプルサイズ
３．試験評価項目の評価
４．統計方法
５．安全性分析
【００９４】
有害事象：
１．有害事象の定義：
２．治療との関係の評価
【００９５】
有効性の実証：特定の実施形態では、シクロホスファミドを伴うＯＢＩ−８２２／ＯＢＩ−８２１は、転移性乳がんを有する非応答者（ＩｇＧ／ＩｇＭ応答なし）と比較して「応答者」（グロボＨ特異的ＩｇＧ／ＩｇＭの増加）を改善した。
【００９６】
転移性乳がんを有する患者における免疫後の体液性免疫応答（グロボＨ特異的ＩｇＧ／ＩｇＭ）の頻度及び程度並びにＰＦＳ及びＯＳとの相関。
【００９７】
シクロホスファミドを伴うＰＢＳと比較した、シクロホスファミドを伴うＯＢＩ−８２２／ＯＢＩ−８２１の安全性及び毒性プロフィール。
【００９８】
特定の例としての臨床試験：転移性乳がんを有する被験者におけるグロボＨ−ＫＬＨ（ＯＢＩ−８２２）及びＯＢＩ−８２１アジュバントを用いた能動免疫療法の二重盲検無作為化第ＩＩ／ＩＩＩ相試験。
【００９９】
治療計画：これは、転移性乳がんを有する被験者における二重盲検無作為化２アーム第ＩＩ／ＩＩＩ相試験である。
【０１００】
スクリーニング時の腫瘍評価：全身ＣＴスキャン（胸部、腹部及び骨盤）をスクリーニング時に実施し、ベースラインスキャンとして使用する。全身ＣＴスキャンがスクリーニングスキャンから２週間以内に実施された場合は、この実施されたスキャンをベースラインスキャンとして使用することができる。スクリーニング前の全身ＣＴスキャンが利用できない場合、転移性乳がんの診断後の病変部を含む切片は、腫瘍状態を確認するためにＣＴ又はＭＲＩスキャンからの画像を有さなければならない。
【０１０１】
腫瘍応答の状態（ＳＤ、ＰＲ、ＣＲ）は、ＲＥＣＩＳＴ  １．１基準に基づく。スクリーニング時（ベースライン）の確証的ＣＴスキャンをスクリーニング前の過去の全身ＣＴスキャンと比較した。スクリーニングスキャン前のスキャンの疾患状態は、スクリーニングスキャンと同じ疾患状態でなければならない。ＳＤについては少なくとも６週間の間隔が必要であり、ＰＲ及びＣＲについては少なくとも４週間の間隔が必要である。
【０１０２】
スクリーニング時に新たな病変が検出された場合（すなわち、以前の画像では明らかでない腫瘍及び／又は以前に画像には記録されていない腫瘍）、この症例はＰＤとみなされ、したがって選択に適格ではない。
【０１０３】
層別化のための疾患状態を、疾患の証拠がある（ＰＲ／ＳＤ）又は疾患の証拠がない（ＣＲ）のいずれかに分類する。
【０１０４】
スクリーニング前の転移性病変の切除により疾患の証拠がない（ＣＲ）被験者については、治験責任医師は、外科的切除の前に腫瘍応答状態が画像によって記録されることを確実にする必要がある。
【０１０５】
腫瘍の状態は、登録されている場合、疾患の証拠（ＰＲ／ＳＤ）として記録される。
【０１０６】
画像は施設の放射線科医によって評価され、施設の解釈及び決定に干渉されない独立した検討のために、コピーが中央の放射線検査室に送られる。
【０１０７】
被験者を、ＯＢＩ−８２２／ＯＢＩ−８２１（治療群）又はＰＢＳ（対照群）のいずれかを摂取するように２：１の配分で無作為に割り付ける。
【０１０８】
被験者を、試験中のホルモン療法の使用及び登録時の疾患状態に従って層別化する。
【０１０９】
ホルモン療法の非使用者として登録された場合、患者が試験中にホルモン療法を開始することは認められない。
【０１１０】
ホルモン療法の使用者として登録された場合、患者はホルモン療法を受けなければならない。
【０１１１】
以前のホルモン療法による毒性の不耐性のためにホルモン療法の別のレジメンに変更することは許可される。
【０１１２】
４つの層が存在する：
１．ホルモン療法の使用者−疾患の証拠あり（ＰＲ／ＳＤ）
２．ホルモン療法の使用者−疾患の証拠なし（ＣＲ）
３．ホルモン療法の非使用者−疾患の証拠あり（ＰＲ／ＳＤ）
４．ホルモン療法の非使用者−疾患の証拠なし（ＣＲ）
【０１１３】
被験者の腫瘍生検／組織試料を収集して、腫瘍のグロボＨ発現を試験し、治療応答と相関させる。
【０１１４】
特定の併用療法の実施形態では、治療被験者に、第１、５、９、１３、１７、２５及び３７週（訪問２、６、８、１０、１２、１４及び１７）に又は疾患の進行まで、シクロホスファミド（３００ｍｇ／ｍ２）を静脈内投与する。
【０１１５】
ＯＢＩ−８２２／ＯＢＩ−８２１又は対照（ＰＢＳ）を第１、２、３、５、９、１３、１７、２５及び３７週（訪問３、４、５、７、９、１１、１３、１５及び１８）に皮下投与する。疾患の進行まで又は無作為化から最大２年まで被験者を追跡する。
【０１１６】
治療中及び治療の開始から最大２年まで又は疾患の進行までの追跡期間中、グロボＨ−ＫＬＨに対する免疫応答の評価のために血液試料を採取する。
【０１１７】
試験中の腫瘍評価
１．全身ＣＴスキャン（胸部、腹部及び骨盤）を、試験の終了まで又は疾患の進行まで８週間ごとに実施する。
２．各時点からのＣＴスキャンを、ＲＥＣＩＳＴ  １．１基準に基づき、無増悪生存期間（ＰＦＳ）及び腫瘍応答状態（ＰＤ、ＳＤ、ＰＲ、ＣＲ）に関してベースラインスキャン（スクリーニング時）及び過去の時点と比較する。
【０１１８】
全ての生存被験者を、全生存期間（ＯＳ）に関して無作為化から最大５年まで１２週間の間隔で追跡調査する。
【０１１９】
ＰＤの被験者については、進行の時点で又は被験者が試験から離脱する前に血液及び尿試料を採取する。
【０１２０】
［実施例１］
ＯＢＩ−８２２の修正インテント・トゥ・トリート（Ｍｉｔｔ）集団についての無増悪生存期間（ＰＦＳ）の臨床試験データ
ＯＢＩ−８２２（元の名称ＯＰＴ−８２２）の修正インテント・トゥ・トリート（ｍＩＴＴ）集団についてのカプラン−マイヤープロットの無増悪生存期間（ＰＦＳ）及び全生存期間（ＯＳ）は、患者がＯＢＩ−８２２の９回の注射を完了した後、プラセボと比較してより高いＰＦＳ及びＯＳが存在することを示した。
【０１２１】
ＥＬＩＳＡによるヒト抗グロボＨ  ＩｇＧ力価測定の臨床試験データ
試薬／緩衝液の調製
コーティング抗原：１ｍｇ／ｍＬのグロボＨ−セラミドをエタノール（ＯＢＩ  Ｐｈａｒｍａ  Ｉｎｃ．）に溶解した；ヒト血清の二次抗体：ヤギ抗ヒトＩｇＧ−ＡＰ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、カタログ番号１０９−０５５−００８）；１０×ＰＢＳ、ｐＨ７．４（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号７００１１−０４４）；Ｔｗｅｅｎ−２０（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｐ２２８７）；基質溶液：アルカリホスファターゼイエロー（ｐＮＰＰ）液体基質（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｐ７９９８）；ブロッキング緩衝液（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｂ６４２９）；ＰＢＳＴ：ＰＢＳ中０．０５％ｔｗｅｅｎ−２０；停止溶液：アルカリホスファターゼ停止溶液（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ａ５８５２）。
【０１２２】
アッセイ手順
グロボＨ−セラミドをエタノール中で４μｇ／ｍＬに希釈した。希釈したグロボＨ−セラミド溶液５０μＬを標準反応プレートの各ウェルに添加した。反応混合物を含むプレートを室温で一晩インキュベートした。プレートをデカントし、２００μＬ／ウェルのＰＢＳＴで３回洗浄した。ブロッキング緩衝液１００μＬを各ウェルに添加し、室温で３０分間インキュベートした。プレートをデカントし、ＰＢＳＴ  ２００μＬ／ウェルで３回洗浄した。
【０１２３】
血清試料の希釈：試料を２０、４０、８０、１６０、３２０、６４０、１２８０〜２５６０倍の範囲のブロッキング緩衝液で２倍連続希釈した（２０倍希釈液を作製するには、血清試料４０μＬをブロッキング緩衝液７６０μＬに添加した）。血清試料５０μＬを、コーティングしたプレート及びコーティングしていないプレートの各ウェルに添加し、室温で６０分間インキュベートした。プレートをデカントし、ＰＢＳＴ  ２００μＬ／ウェルで３回洗浄した。０．３ｍｇ／ｍＬの保存抗ヒトＩｇＧ−ＡＰ二次抗体４０μＬを、１：２００希釈のためにブロッキング緩衝液７９６０μＬに添加した。希釈した抗ヒトＩｇＧ−ＡＰ  ５０μＬを、コーティングしたプレート及びコーティングしていないプレートの各ウェルに添加し、室温で４５分間インキュベートした。プレートをデカントし、ＰＢＳＴ  ２００μＬ／ウェルで３回洗浄した。基質溶液１００μＬを、コーティングしたプレート及びコーティングしていないプレートの各ウェルに添加し、３７℃で２０分間インキュベートした。停止溶液５０μＬを各ウェルに添加した。プレートをＥＬＩＳＡリーダーによって吸光度４０５ｎｍで読み取った。
【０１２４】
データ分析
カットオフ値は、コーティングしたプレートからの二次抗体のみの平均ＯＤ値と、コーティングしていないプレートからの二次Ａｂのみの平均ＯＤ値との差プラス０．１によって得た。
【０１２５】
力価は、各希釈におけるコーティングしたプレートのＯＤ値とコーティングしていないプレートのＯＤ値との差として定義した。カットオフ値を上回る最も高い希釈液は、抗グロボＨ  ＩｇＧ力価であった。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６ソフトウェアを用いて統計分析を行った。
【０１２６】
臨床患者の特徴を表１に列挙した。
【０１２７】
【表１】
2019515916.tif 000028
【０１２８】
無増悪生存期間（ＰＦＳ）は、ＯＢＩ−８２２がいくつかの生物学的サブタイプの乳がん（ステージＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＥＲ（＋）、ＰＲ（＋）、ＨＥＲ２（＋）又はトリプルネガティブ）において反応性であることを示した。異なる腫瘍サブタイプ間のグロボＨ発現のプロフィールを表２に列挙した。
【０１２９】
【表２】
2019515916.tif 000029
【０１３０】
【表３】
2019515916.tif 000030
【０１３１】
図４及び５は、試験薬の９回の注射を受けた後の無増悪生存期間（ＰＦＳ）を示した。これは、ＯＢＩ−８２２ワクチンが乳がん患者の生存率をより長期間延長できることを示した。
【０１３２】
図６及び７は、ＩｇＧ免疫応答を伴う／伴わない（ＩｇＧ基準１：６４０）、試験薬の摂取後の無増悪生存期間（ＰＦＳ）／全生存期間（ＯＳ）を示した。これは、ＯＢＩ−８２２ワクチンがＩｇＧ免疫応答を誘導し、乳がん患者の生存率をより長期間延長できることを示した。
【０１３３】
グリカンアレイによるヒト抗グロボＨ  ＩｇＭ力価測定の臨床試験データ
背景
グリカンアレイプラットフォームは、マイクロ流体カートリッジ内でＥＬＩＳＡが実施される自動化Ａｇｎｉｔｉｏ  ＢｉｏＩＣシステムを利用する。マイクロ流体カートリッジは、マイクロ流体ポンプ及びバルブのアレイ、チャネルネットワーク、試薬貯蔵リザーバ、グリカンアレイ反応ゾーン及び廃棄物貯蔵リザーバを含む。自動化Ａｇｎｉｔｉｏ  ＢｉｏＩＣシステムは、それぞれのリザーバからの試薬及び試料を、化学発光を伴う多重ＥＬＩＳＡ反応のための反応ゾーンにポンプで送り込む。収集されたデータを、Ａｇｎｉｔｉｏ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｃ．によって提供されるＬａｂＩＴソフトウェアによって分析する。Ａｇｎｉｔｉｏ  ＢｉｏＩＣシステムの装置の仕様は、以前のＰＣＴ特許出願（ＷＯ２０１７０４１０２７Ａ１）に開示されている。
【０１３４】
試薬／緩衝液の調製
６６μＬの、正常ヒト血清（ＮＨＳ）又は２２０名の乳がん患者試料からの血清及び１２４のプラセボ試料からの血清を、試料希釈緩衝液（ＢｉｏＣｈｅｃｋ  Ｉｎｃ．、カタログ番号ＭＢ１０１７５）５９４μＬに添加して、１０倍希釈液を形成した。二次抗体溶液は、複合体緩衝液（ＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ（ＴＢＳ）ブロッキング緩衝液＋０．２％Ｔｗｅｅｎ２０、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｃ．、カタログ番号３７５３５）９８μＬ中にホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）結合ヤギ抗ヒトＩｇＭ（ＫＰＬ  Ｉｎｃ．、カタログ番号４７４−１００３）２μＬを混合して、５０倍希釈液を形成することによって調製した。希釈した二次抗体溶液４０μＬを複合体緩衝液２３６０μＬにポンプで注入して、二次抗体溶液（３０００倍希釈）を形成した。
【０１３５】
アッセイ手順
洗浄緩衝液（０．２％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ  ２０（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、カタログ番号ＪＴＢ−Ｘ２５１−０７）中のリン酸緩衝生理食塩水（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｃ．、カタログ番号７００１１））６２０μｌを「洗浄」リザーバに添加した。ブロッキング緩衝液（無タンパク質ブロッキング緩衝液、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｃ．、カタログ番号３７５７１）１２０μＬを「ブロッキング」リザーバに添加した。二次抗体溶液１２０μＬを「複合体」リザーバに添加した。血清１００μＬを「血清」リザーバに添加した。基質緩衝液（ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ  ＥＬＩＳＡ  Ｆｅｍｔｏ  Ｍａｘｉｍｕｍ  Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｃ．、カタログ番号３７０７４）１２０μＬを１０分間で「基質」リザーバに添加した。
【０１３６】
データ分析
グリカンアレイをＡｇｎｉｔｉｏ  ＢｉｏＩＣ  Ｐｕｍｐｉｎｇ  Ｍａｃｈｉｎｅによって３０分間加圧した。結合した血清を、Ａｇｎｉｔｉｏ  ＢｉｏＩＣ  Ａｎａｌｙｚｅｒを用いて視覚的にモニターした。アレイの吸光度を抗ヒトグロボＨ  ＩｇＧに関する「Ａｂレベル（μｇ／ｍＬ）」に換算した。内部曲線は、０．０６２５、０．１２５、０．２５、０．５、０．７５及び１μｇ／ｍＬのヒトＩｇＭを用いて作成した。各チップの内部曲線の線形回帰を用いて勾配及び切片を計算した。特定の例では、Ａｂレベル（μｇ／ｍＬ）＝［（生データ−切片）／勾配］×０．１である。
【０１３７】
図８は、初期ＩｇＭ免疫応答を伴う／伴わない、第２週に試験薬の１回の注射を受けた後の無増悪生存期間（ＰＦＳ）を示した。これは、ＯＢＩ−８２２ワクチンが初期ＩｇＭ免疫応答を誘導し、乳がん患者の生存率をより長期間延長できることを示した。
【０１３８】
ヒト抗キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）ＩｇＧ力価アッセイに基づく臨床試験データを用いた有効性の実証
ヒト抗キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）ＩｇＧ力価アッセイを用いて、グロボシリーズ抗原ワクチンの投与によって生じる免疫学的反応が、グロボシリーズ抗原ワクチン、グロボシリーズ抗原及び／又は担体タンパク質によって誘導され得ることを示した。
【０１３９】
試薬／緩衝液の調製
ＫＬＨ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｈ１１５８、海洋収穫物、ストック濃度５ｍｇ／ｍＬ）；コーティング緩衝液：カーボネート−ビカーボネート緩衝液、ｐＨ９．２（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｃ３０４１−５０ＣＡＰ）；二次抗体：ヤギ抗ヒトＩｇＧ−ＨＲＰ（ＫＰＬ、カタログ番号４７４−１００２）；１０×ＰＢＳ、ｐＨ７．４（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号７００１１−０４４）；Ｔｗｅｅｎ−２０（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｐ２２８７）；ＴＭＢ基質溶液（Ｃｌｉｎｉｃａｌ、カタログ番号０１０１６−１−５００）；ブロッキング緩衝液（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｂ６４２９）；ＰＢＳＴ：ＰＢＳ中０．０５％ｔｗｅｅｎ−２０；停止溶液：１Ｎ  Ｈ２ＳＯ４。
【０１４０】
アッセイ手順
ＫＬＨをコーティング緩衝液で４μｇ／ｍＬに希釈した。希釈したＫＬＨ溶液５０μＬを標準ウェルの各ウェルに添加した。プレートを４℃で一晩インキュベートした。プレートをデカントし、２００μＬ／ウェルのＰＢＳＴで３回洗浄した。ブロッキング緩衝液１００μＬを各ウェルに添加し、室温で３０分間インキュベートした。プレートをデカントし、ＰＢＳＴ  ２００μＬ／ウェルで３回洗浄した。
【０１４１】
血清試料の希釈：試料を約１０００、２０００、４０００、８０００、１６０００、３２０００、６４０００〜１２８０００倍の範囲のブロッキング緩衝液で２倍連続希釈した（１０００倍希釈液を作製するには、血清試料１μＬをブロッキング緩衝液９９９μＬに添加した）。試料５０μＬをコーティングしたプレート及びコーティングしていないプレートの各ウェルに添加し、次いで室温で１時間半インキュベートした。プレートをデカントし、ＰＢＳＴ  ２００μＬ／ウェルで３回洗浄した。抗ヒトＩｇＧ−ＨＲＰ二次抗体をブロッキング緩衝液で１：２００００に希釈した。１ｍｇ／ｍＬのストックから１μＬを取り、ブロッキング緩衝液２０ｍＬに添加して１：２００００希釈液を作製した。抗ヒトＩｇＧ−ＨＲＰ  ５０μＬをコーティングしたプレート及びコーティングしていないプレートの各ウェルに添加し、室温で４５分間インキュベートした。プレートをデカントし、ＰＢＳＴ  ２００μＬ／ウェルで３回洗浄した。ＴＭＢ基質溶液１００μＬをコーティングしたプレート及びコーティングしていないプレートの各ウェルに添加し、次いで室温で５分間インキュベートした。停止溶液１００μＬを各ウェルに添加した。プレートをＥＬＩＳＡリーダーによって吸光度４５０ｎｍで読み取った。
【０１４２】
図９は、患者がＯＢＩ−８２２ワクチンの注射を受けた後の高い抗ＫＬＨ  ＩｇＧ免疫応答を示した。合計３０の臨床血清試料を３つの群（応答者：ＯＢＩ−８２２ワクチン注射を受け、抗グロボＨ  ＩｇＧ／ＩｇＭレベルが上昇した；非応答者：ＯＢＩ−８２２ワクチン注射を受け、抗グロボＨ  ＩｇＧ／ＩｇＭレベルが上昇しなかった）に分けた。これは、ＯＢＩ−８２２ワクチンの投与が実際に抗ＫＬＨ免疫応答を誘導できることを実証した。したがって、グロボシリーズ抗原ワクチンの投与によってもたらされる免疫学的反応は、グロボシリーズ抗原ワクチン、グロボシリーズ抗原又は担体タンパク質によって誘導することができる。
【０１４３】
［実施例２］
代表的な卵巣がんモデルを用いた有効性の実証
特定の例としての臨床試験：非進行性上皮卵巣がん又はファローピウス管がんを有する女性におけるグロボＨ−ＫＬＨ（ＯＢＩ−８２２／８２１）を用いた能動免疫療法のオープンラベル第ＩＩ相試験。
【０１４４】
方法：これは、細胞減少手術を受けた後進行していなかったが、その後新たに診断されたステージＩＩ以上の上皮卵巣がん又はファローピウス管がんのために白金ベースの化学療法を受けた女性における、オープンラベル第ＩＩ相試験であった。
【０１４５】
治療を受けるために参加する被験者については、第１、２、３、４、１２、２０、２８、３６、４４及び５２週（訪問１、２、３、４、５、６、７、８、９及び１０）にＯＢＩ−８２２（グロボＨ  ３０μｇ）／ＯＢＩ−８２１（１００μｇ）を皮下投与した。疾患状態は、ＲＥＣＩＳＴ  １．１基準を組み込んだ評価の結果に従って決定した。被験者は、客観的ＲＥＣＩＳＴ  １．１基準に基づいてＰＤを有すると評価された。ＲＥＣＩＳＴ基準のためのＣＴスキャン／ＭＲＩを、スクリーニング時、第２８週及び第５２週に実施した。腹部全体（腹部及び骨盤）のＣＴスキャンを、約２４週間の間隔で治療中の指定された時点に実施した。ＣＴスキャンのウィンドウ期間は、プロトコルスケジュールで予定された訪問から＋／−１４日間であった。予定されていなかった腫瘍評価を治験責任医師の裁量で実施し、これは、評価の時点で、ベースライン時に実施した検査と一致した。ＣＴ禁忌の被験者については、代わりにＭＲＩを実施した。
【０１４６】
病変がない被験者、測定可能な疾患を有する被験者及び測定不能の疾患を有する被験者は、この試験への参加に適格であった。測定可能な疾患は、１つ以上の測定可能な病変（最長直径［ＬＤ］が、螺旋状コンピュータ断層撮影［ＣＴ］スキャンで１０ｍｍ以上又は従来のＣＴ、磁気共鳴イメージング［ＭＲＩ］若しくはＸ線で２０ｍｍ以上）の存在によって定義された。関与する全ての病変を代表する最大５つの測定可能な病変（器官当たり最大２つの病変）を、ベースライン時に標的病変（ＴＬ）として同定した。ＴＬの客観的腫瘍応答を決定するために使用されるＲＥＣＩＳＴ  １．１基準を表３に要約する。
【０１４７】
【表４】
2019515916.tif 000031
【０１４８】
ＴＬとして記録されない他の全ての病変（又は疾患の部位）は、非標的病変（ＮＴＬ）として同定した。ＮＴＬの客観的腫瘍応答を決定するために使用されるＲＥＣＩＳＴ基準を表４に要約する。
【０１４９】
【表５】
2019515916.tif 000032
【０１５０】
新しい病変の詳細も記録した；１つ以上の新たな病変の存在を進行として評価した。全体的応答のＲＥＣＩＳＴ評価を表５に要約する。
【０１５１】
【表６】
2019515916.tif 000033
【０１５２】
【表７】
2019515916.tif 000034
【０１５３】
【表８】
2019515916.tif 000035
【０１５４】
【表９】
2019515916.tif 000036
【０１５５】
試験対象母集団：
患者の内訳：以下の患者データを要約し、募集した全ての被験者について提示した：スクリーニングされた患者、試験薬を摂取した患者、治療期間中に完了した患者及び中止された患者、追跡期間中に完了した患者及び中止された患者の数及び割合。
【０１５６】
全ての募集患者の試験群別の、各解析集団における患者の数及び割合並びに除外理由。
【０１５７】
プロトコル違反は、どのような違反がＥＶＡ集団から患者を不適格とするかを決定するために、データベースをロックする前に試験チームによって検討される。
【０１５８】
臨床結果：陰性対照（患者番号：０６５）（図１０）：評価日は、２０１５年３月１８日又はそれ以前に開始された。これは、ＯＢＩ−８２２治療が２８週間（訪問７）以内にいかなる腫瘍生成ももたらさないことを示した。したがって、ＯＢＩ−８２２の安全性が確認された。
【０１５９】
ステージＩＩＩの卵巣がん（患者番号：０３５）（図１１）：評価日は、２０１４年４月２４日又はそれ以前に開始された。患者の元の症状は、ＣＴスキャンにより「サブセンチメートルの腸間膜リンパ節腫瘍」（病変カテゴリー：非標的腫瘍）であった。これは、ＯＢＩ−８２２治療後、２８週間（訪問７）以内に腫瘍の進行／転移がないこと（ＳＤ）を示した。したがって、ＯＢＩ−８２２の腫瘍阻害能は２８週間以内に確認される。
【０１６０】
ステージＩＶのファローピウス管がん（患者番号：０４１）（図１２）：評価日は、２０１４年５月２２日又はそれ以前に開始された。患者の元の症状は、ＣＴスキャンにより「肺腫瘍」（病変カテゴリー：非標的腫瘍）であった。これは、ＯＢＩ−８２２治療後、２８週間（訪問７）以内に腫瘍の進行／転移がないこと（ＳＤ）を示した。したがって、ＯＢＩ−８２２の腫瘍阻害能は２８週間以内に確認される。
【０１６１】
ステージＩＩＩの卵巣がん（患者番号：０６０）（図１３）：評価日は、２０１５年１月６日又はそれ以前に開始された。患者の元の症状は、ＣＴスキャンにより「腹膜腫瘍」（病変カテゴリー：非標的腫瘍）であった。これは、ＯＢＩ−８２２治療後、２８週間（訪問７）以内に腫瘍の進行／転移がないこと（ＳＤ）を示した。したがって、ＯＢＩ−８２２の腫瘍阻害能は２８週間以内に確認される。
【０１６２】
［実施例３］
ＯＢＩ−８２２とＯＢＩ−８２１の混合の指示
保存条件：ＯＢＩ−８２２及びそのプラセボであるＰＢＳのバイアルは、２〜８℃で保存する。ＯＢＩ−８２１及びそのプラセボであるＰＢＳのバイアルは、−１５〜−２５℃で保存する。
【０１６３】
試験群：
Ａ群：能動的治療群；注射あたりの投薬量：ＯＢＩ−８２２（３０μｇのグロボＨに相当）／１００μｇのＯＢＩ−８２１。総最終注入量：０．８ｍＬ。
【０１６４】
Ｂ群：対照群；注入あたりの投薬量：ＰＢＳ。総最終注入量：０．８ｍＬ。
【０１６５】
治験薬：
バイアル１ａ（ＰＢＳ：ＯＢＩ−８２１対照試験品）充填容量−０．５ｍＬ。含量：１０ｍＭリン酸ナトリウム、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ６．８；
バイアル１ｂ（ＯＢＩ−８２１）充填容量−０．５ｍＬ。含量：１０ｍＭリン酸ナトリウム、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ中２５０μｇ／ｍＬ  ＯＢＩ−８２１、ｐＨ６．８；
バイアル２ａ（ＰＢＳ：ＯＢＩ−８２２対照試験品）充填容量−０．７５ｍＬ。含量：１００ｍＭリン酸ナトリウム、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ７．２；
バイアル２ｂ（ＯＢＩ−８２２）充填容量−０．７５ｍＬ。含量：１００ｍＭリン酸ナトリウム、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ中７５μｇのグロボＨ／ｍＬ  ＯＢＩ−８２２に相当、ｐＨ７．２。
【０１６６】
ＯＢＩ−８２２とＯＢＩ−８２１の混合の指示：
治療の時点で、シリンジを用いてバイアル２ａ（ＰＢＳのみ）０．５ｍＬを取り出し、バイアル１ａ（ＰＢＳのみ）に入れるか、又はバイアル２ｂ（ＰＢＳ中のＯＢＩ−８２２）０．５ｍＬを取り出し、バイアル１ｂ（ＰＢＳ中のＯＢＩ−８２１）に入れる。バイアル（バイアル１ａ又はバイアル１ｂのいずれか）の内容物を、バイアルを穏やかに４〜５回ひっくり返すことによって静かに混合する。バイアルを強く振とうしてはならない。この時点で、このバイアルはプラセボ（ＰＢＳのみ）又は治療薬（ＯＢＩ−８２２＋ＯＢＩ−８２１）のいずれかを含んでおり、注射の準備ができている。次いで、被験者への注射のためにこのバイアルから０．８ｍＬを取り出す。各試験群の最終投与量を表６に要約する。
【０１６７】
【表１０】
2019515916.tif 000037
【０１６８】
組み合わせたＯＢＩ−８２２とＯＢＩ−８２１の安定性は、室温で再構成してから１０時間まで安定である。組み合わせた製品の投与は、潜在的な微生物増殖を最小限に抑えるために再構成から２時間以内に行うべきである。再構成から２時間以内に投与することが不可能な場合は、施設の薬局の標準操作手順に従って混合した製品を破壊し、治験薬管理記録に記録すべきである。図１４は、治験薬の混合手順を示す。
【０１６９】
［実施例４］
許可される併用薬及び禁止される併用薬
許可される併用薬：
【０１７０】
アヘン製剤：痛みの管理のために使用してもよく、便秘の予防的治療も許可される。
【０１７１】
ＧＣＳＦ：医師が必要と考える場合は許可される。
【０１７２】
ビスホスホネート。
【０１７３】
ホルモン療法（ホルモン療法使用者として層別化されている被験者の場合）。
【０１７４】
使用される場合、ホルモン療法の選択される形態、用量又は用法は、毒性の不耐性に起因するのでない限り、一貫している必要があり、すなわち、治療の切り替え、さらなる療法の追加又は用量の増加があってはならない。全ての種類のホルモン療法をこの試験で使用することができ、一般的に使用されるホルモン療法を以下に列挙する。
【０１７５】
エストロゲン阻害剤（例えばタモキシフェン、Ｆａｒｅｓｔｏｎ）。
【０１７６】
アロマターゼ阻害剤（例えばアナストロゾール［Ａｒｉｍｉｄｅｘ］、エキセメスタン［Ａｒｏｍａｓｉｎ］及びレトロゾール［Ｆｅｍａｒａ］）。
【０１７７】
下垂体下方調節剤（例えばゴセレリン［Ｚｏｌａｄｅｘ］、ロイプロリド［Ｌｕｐｒｏｎ］−これらはＬＨＲＨ類似体とも呼ばれる。
【０１７８】
Ｎｏｖａｌｄｅｘ（Ｒ）（タモキシフェン選択的エストロゲン受容体調節剤、ＳＥＲＭ）。
【０１７９】
Ｅｖｉｓｔａ（Ｒ）（ラロキシフェン、別のＳＥＲＭ）。
【０１８０】
Ｆａｓｌｏｄｅｘ（Ｒ）（フルベストラント、エストロゲン受容体下方調節剤）。
【０１８１】
抗凝固薬（レピルジン［Ｒｅｆｌｕｄａｎ］）。
【０１８２】
酵素（ラスブリカーゼ［Ｅｌｉｔｅｋ］）。
【０１８３】
造血成長因子。
【０１８４】
投与方法は、好ましくは、表７に列挙される併用薬の不在下で実施される。
【０１８５】
【表１１】
2019515916.tif 000038
【０１８６】
禁止される併用薬（例えばシクロスポリン、ラパマイシン、タクロリムス、リツキシマブ等）。
【０１８７】
東部腫瘍学共同研究グループ（ＥＣＯＧ）パフォーマンス。
【０１８８】
これらの尺度及び基準は、被験者の疾患がどのように進行しているかを評価し、疾患が被験者の日々の生活能力にどのように影響するかを評価し、適切な治療及び予後を決定するために医師及び研究者によって使用される。それらは、医療従事者がアクセスするために表８に含まれる。
【０１８９】
【表１２】
2019515916.tif 000039
【０１９０】
本発明の特定の態様を説明し、例示したが、そのような態様は、本発明の単なる例示であり、添付の特許請求の範囲に従って解釈される本発明を限定するものではないと考えられるべきである。個々の刊行物又は特許出願が、全ての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれることが具体的及び個別に示されているかのように、本明細書で引用される全ての刊行物及び特許出願は、あらゆる目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。上記発明を、理解の明瞭さのために例示及び実施例によってある程度詳細に説明したが、特定の変更及び修正が添付の特許請求の範囲の精神又は範囲から逸脱することなく行われ得ることは、本発明の教示に照らして当業者には容易に明らかであろう。