(57)【要約】【課題】  急須で入れた茶に近い非重合体カテキン組成を持ち、苦味・渋味が低減され且つ酸味のない高濃度茶ポリフェノール抽出物を提供すること、およびこの抽出物を安価に製造できる方法を提供すること。【解決手段】  （Ａ）非重合体カテキン類を茶ポリフェノール組成物中６０質量％以上含有し、且つ（Ｂ）非重合体カテキン類中のガロカテキンが全非重合体カテキン類中８〜２０質量％である茶ポリフェノール組成物によって達成される。このとき、没食子酸結合型非重合体カテキン（エピガロカテキンガレート＋エピカテキンガレート＋ガロカテキンガレート＋カテキンガレート）／遊離型非重合体カテキン（エピカテキン＋エピガロカテキン＋ガロカテキン＋カテキン）で表される比率が０.１〜１であることが好ましい。【選択図】          図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ａ）非重合体カテキン類を茶ポリフェノール組成物中４０質量％以上含有し、（Ｂ）非重合体カテキン類中のガロカテキンが全非重合体カテキン類中８〜２０質量％であり、且つ（Ｃ）カフェインを全非重合体カテキン類中１.０質量％以下に含有する茶ポリフェノール組成物。
【請求項２】
没食子酸結合型非重合体カテキン（エピガロカテキンガレート＋エピカテキンガレート＋ガロカテキンガレート＋カテキンガレート）／遊離型非重合体カテキン（エピカテキン＋エピガロカテキン＋ガロカテキン＋カテキン）で表される比率が０.１〜１である請求項１記載の茶ポリフェノール組成物。
【請求項３】
没食子酸又はその塩を全非重合体カテキン類中０.１〜８.０質量％含有する請求項１または請求項２に記載の茶ポリフェノール組成物。
【請求項４】
請求項１〜請求項３のいずれか一つに記載の茶ポリフェノール組成物の製造方法であって、
（Ａ）茶葉を水に浸漬して得られた茶抽出物の水溶液である茶の抽出液を活性炭に接触させて、ポリフェノール類を吸着させる吸着工程、
（Ｂ）前記活性炭をアルカリ性水溶液と接触させて、活性炭に吸着されたポリフェノール類を脱離させる溶出工程、及び
（Ｃ）前記アルカリ性水溶液に含まれるアルカリ成分を除去する除去工程を備えたことを特徴とする茶ポリフェノール組成物の製造方法。
【請求項５】
上記（Ｂ）溶出工程においては、アルカリ性水溶液はｐＨ７〜１４であることを特徴とする請求項４に記載の茶ポリフェノール組成物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ガロカテキン含量が高く、ガレート体率が低く、没食子酸含量が低く、カフェインをほとんど含まない茶ポリフェノールであって、急須に入れたお茶に近い非重合体カテキン組成を持つ苦味・渋味の少ない高濃度のもの及びその製造方法に関し、特に有機溶媒を用いることのない製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
水または湯で抽出した茶飲料には、カテキン（タンニン）、テアニン、カフェイン、ビタミンＣなどの有用成分が含まれている。各種成分のうち、カテキンガレート類（エピガロカテキンガレート、ガロカテキンガレート、エピカテキンガレート、カテキンガレート）は、特に苦みが強い。このため、カテキンガレート類を少なくした茶抽出物とすれば、苦みが少なくかつ抗酸化活性のある組成物を提供できる可能性がある。
一方、従来の技術においては、茶葉から非重合体カテキン類を分離する場合には、有機溶媒を用いた分配操作やゲルクロマトグラフィーによるのが一般的である（特許文献１、２）。また、茶ポリフェノールの苦味、渋味の改善手段として、活性炭や合成樹脂などで脱カフェインする技術がある（特許文献３、４）。また、タンナーゼ処理により茶ポリフェノールのガレート体率を低下させる方法も提案されている（特許文献５、６）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開平７−２３８０７８号公報
【特許文献２】特開平１−１７５９７８号公報
【特許文献３】特開平６−１４２４０５号公報
【特許文献４】特開２００４−２２２７１９号公報
【特許文献５】特開２００４−３２１１０５号公報
【特許文献６】特開２００５−１３０８０９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
高濃度の茶ポリフェノールを得る方法としては、有機溶剤による分配抽出法が一般的である。この方法は、有機溶媒を除去するため煩雑な操作が必要で、コスト面および溶媒残留など安全面に種々の問題が残されている。また、従来法で得られた茶ポリフェノールは、没食子酸結合型カテキン（エピガロカテキンガレート、エピカテキンガレート、ガロカテキンガレート、カテキンガレート）の抽出率が高く、遊離型カテキン（カテキン、ガロカテキン、エピカテキン、エピガロカテキン）の抽出率が低いことが知られている。特に、遊離型カテキン中のガロカテキンの抽出率が低く、得られた組成物については、全非重合体カテキン含量が６０質量％以上、且つガロカテキン含量が全非重合体カテキンの８質量％以上のものがないのが現状である。更に、得られた茶ポリフェノール組成物は、ガレート体カテキンの割合が高いため、強い渋味を有し、高濃度のカフェインを含有するため、強い苦味を持ち、食品への応用が限定されるという欠点がある。【０００５】
一方、高濃度の茶ポリフェノール抽出物の渋味および苦味の低減技術としては、カフェインの除去、あるいはタンナーゼ処理によりガレート体率を低下させる方法がある。しかしながら、タンナーゼ処理では、没食子酸含量が増加して酸味が強くなるという欠点がある。また、カフェインの除去方法として、超臨界抽出などの方法があるが、大規模な設備投資を必要とし、抽出コストが高く実用的でないという問題点がある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者は、上記課題を解決するために鋭意検討を重ねた結果、急須で入れた茶に近い非重合体カテキン組成を持ち、苦味・渋味が低減され且つ酸味のない高濃度茶ポリフェノール抽出物を提供すること、およびこの抽出物を安価に製造できる方法であって、特に有機溶媒を用いることのない製造方法の開発に成功した。
こうして、本発明に係る茶ポリフェノール組成物は、（Ａ）非重合体カテキン類を茶ポリフェノール組成物中６０質量％以上含有し、（Ｂ）非重合体カテキン類中のガロカテキンが全非重合体カテキン類中８〜２０質量％であり、且つ（Ｃ）カフェインを全非重合体カテキン類中１.０質量％以下に含有することを特徴とする。【０００７】
本発明においては、没食子酸結合型非重合体カテキン（エピガロカテキンガレート＋エピカテキンガレート＋ガロカテキンガレート＋カテキンガレート）／遊離型非重合体カテキン（エピカテキン＋エピガロカテキン＋ガロカテキン＋カテキン）で表される比率が０.１〜１であることが好ましい。
また、没食子酸又はその塩を全非重合体カテキン類中０.１〜８.０質量％含有することが好ましい。【０００８】
本発明に係る茶ポリフェノール組成物の製造方法は、上記のいずれか一つに記載のものを製造する方法であって、（Ａ）茶葉を水に浸漬して得られた茶抽出物の水溶液である茶の抽出液を活性炭に接触させて、ポリフェノール類を吸着させる吸着工程、（Ｂ）前記活性炭をアルカリ性水溶液と接触させて、活性炭に吸着されたポリフェノール類を脱離させる溶出工程、及び（Ｃ）前記アルカリ性水溶液に含まれるアルカリ成分を除去する除去工程を備えたことを特徴とする。
上記発明においては、アルカリ性水溶液は、ｐＨ７〜１４であることが好ましい。
本発明の茶ポリフェノール組成物の製造方法については特に限定されるものではないが、例えば、茶葉から熱水抽出した抽出溶液を、活性炭カラムに通液しカラムに茶ポリフェノールを吸着させた後、アルカリ水溶液で茶ポリフェノールを含む画分を溶出することにより調製することができる。【０００９】
本発明の対象とされる茶溶液としては、常法による茶の熱水抽出液でも、水抽出したものでもよい、またこれに限定されるものではない。茶の抽出液中の茶ポリフェノール含有量は、２０〜４０％で、非重合体カテキン含量は１５〜３８％、カフェイン含有量は０.１〜９％程度である。
本発明では上記茶の熱水抽出液は活性炭カラムを用いて処理する。活性炭の形状は粉末ないし粒状物の形態で使用されるが特にこれに限定されるものではない。これらの活性炭カラムに充填する方法については一般的な方法で充填したものや、市販の活性炭フィルターなども活用することができる。以上の方法で充填された活性炭カラムに茶の抽出液を通液して処理する。【００１０】
この処理によって、茶ポリフェノールとカフェインは活性炭カラムに吸着され、茶ポリフェノール以外の成分、たとえばアミノ酸、糖類、有機酸、ミネラルなどが洗脱できる。すなわち、該流出液中の茶ポリフェノール及び非重合体カテキン類含有量は、固形分の０.００１〜３.０質量％及び０.００１〜０．１質量％以下程度である。
吸着工程終了後、活性炭カラムにアルカリ性水溶液を、ＳＶ（空間速度）＝０.５〜２０［ｈ−１］の通液速度、活性炭カラムに対する通液倍数として２〜２０［ｖ／ｖ］で、接触させて、活性炭カラムから茶ポリフェノールを溶出させ、樹脂または電気透析などの処理を用いて脱塩するというアルカリ成分の除去工程を実施することが好ましい。脱塩する方法については特に限定されるものではない。一方、脱塩した茶抽出液をｐＨ５以下に調整、濃縮、乾燥することで本発明の茶ポリフェノールを得ることができる。上記処理により抽出物の固形分に対して非重合体カテキン類を６０質量％以上含有し、ガロカテキンが非重合体カテキンの８質量％以上、２０％以下含有し、かつカフェイン含有量は全非重合体カテキン類中の１質量％以下の茶ポリフェノール抽出物が得られる。また、これらをさらに高純度の茶ポリフェノールを製造するための原料として利用することもできる。なお、この処理に用いた活性炭はアルカリ性水溶液により再生することよって繰り返し使用することができる。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によれば、非常に簡便な方法で、ガロカテキン含量が高く、ガレート体率が低く、カフェインをほとんど含まず、急須で入れた茶と近い非重合体カテキン組成を持つ苦味・渋味が低減され且つ酸味のない高濃度茶ポリフェノール抽出物を得ることができる。また、本発明の方法では、有機溶媒を全く用いることなく、特定の活性炭を用い茶葉の水抽出物を吸着脱離処理することにより、茶ポリフェノール抽出物を得られるので、残留溶媒の問題がなくなる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】（Ａ）対照例、（Ｂ）実施例１及び（Ｃ）比較例１の全非重合体カテキン類中、各種類の非重合体カテキンの質量％を示す円グラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
次に、本発明の実施形態について、図表を参照しつつ説明するが、本発明の技術的範囲は、これらの実施形態によって限定されるものではなく、発明の要旨を変更することなく様々な形態で実施することができる。また、本発明の技術的範囲は、均等の範囲にまで及ぶものである。
本発明において、非重合体カテキン類とは、遊離型カテキン（カテキン、ガロカテキン、エピカテキン、エピガロカテキン）及び没食子酸結合型カテキン（カテキンガレート、ガロカテキンガレート、エピカテキンガレート、エピガロカテキンガレート）を合わせた総称である。
【００１４】
本発明で用いる緑茶抽出物としては、Camellia属、例えばC. sinensis、C. assamica、やそれらの雑種から得られる茶葉から製茶された茶葉が挙げられる。製茶された茶葉には、煎茶、焙じ茶、玉露、かぶせ茶、てん茶等（蒸し製茶と総称する緑茶類）の不発酵茶；嬉野茶、青柳茶、各種中国茶等（釜炒り茶と総称する）の不発酵茶がある。水や熱水、抽出助剤を添加した水溶液で攪拌抽出等の方法により得ることができる。抽出の際、水にあらかじめアスコルビン酸ナトリウム等の有機酸又は有機酸塩類を添加しても良い。また、煮沸脱気や窒素ガス等の不活性ガスを通気して溶存酸素を除去しつつ、いわゆる非酸化的雰囲気下で抽出する方法を併用してもよい。
【００１５】
茶葉から抽出するかわりに、茶抽出物の濃縮物を水に溶解あるいは希釈して用いても、茶葉からの抽出液と茶抽出物の濃縮物とを併用しても良い。
具体的には、緑茶抽出物として、市販の三井農林社製「ポリフェノン」、太陽化学社製「カメリアエキス」などの緑茶水抽出粉末を水に溶解した状態で用いることもできる。
本発明で用いる活性炭としては、一般に工業レベルで使用されているものであれば特に制限されず、例えば、太閤ＧＬ２４０Ａ、太閤ＣＷ１３０ＢＲ、太閤ＣＷ１３０ＡＲ（フタムラ化学社製）クラレコールＫＷ、クラレコールＧＬＣ、クラレコールＰＫ-Ｄ（クラレケミカル社製）、白鷲Ｍ、白鷲Ｐ、粒状白鷲Ｇｃ、粒状白鷲Ｇｃ、粒状白鷲ＬＧＫ（武田薬品工業社製）等普通の市販品を用いることができる。また、活性炭は、どのような原料由来の活性炭でも使用できる。例えば、大鋸屑、椰子殻、石炭等があげられる。茶ポリフェノール中の非重合体カテキン類の精製効果、回収率を向上する点から、累積細孔容積が０.４〜２.０ｍＬ／ｇ、半径１０〜５００Åの細孔容積が０.３〜２.０ｍＬであり、比表面積が８００〜１,８００ｍ2／ｇのものが好ましい。なお、これらの物性値は窒素吸着法に基づく値である。
【００１６】
活性炭をカラムに均一的に充填するために、水に活性炭を分散後、攪拌し、活性炭を水和後カラムに充填するのが好ましい。また、充填後、予めＳＶ（空間速度）＝１〜２０［ｈ−１］、活性炭に対する通液倍数として２〜１０［ｖ／ｖ］の通液条件で洗浄を行い、活性炭に含まれた不純物を除去するのが好ましい。
茶の抽出液を活性炭に吸着させる手段としては、茶の抽出液に活性炭を添加、撹拌し吸着後、ろ過操作により活性炭を回収するバッチ方法又は活性炭を充填したカラムを用いて連続処理により吸着処理を行うカラム方法が採用されるが、生産性の点からカラムによる連続処理方法が好ましい。
【００１７】
茶の抽出液を活性炭に吸着させる手段としては、茶の抽出液濃度は０.１〜２０質量％にするのが好ましく、５〜１０質量％にするのがさらに好ましい。茶の抽出液を活性炭の充填したカラムに通液する条件としては、ＳＶ（空間速度）＝０.５〜２０［ｈ−１］の速度で通液するのが好ましい。２０［ｈ−１］以上の通液速度であると非重合体カテキン類の吸着が不充分なる場合がある。また、活性炭の充填したカラムの温度は２０〜８０℃にするのが好ましい。２０℃以下または８０℃以上であると、茶の抽出液中に含有するポリフェノール以外成分の洗脱が不十分、または非重合体カテキンが不安定になる場合がある。
更に、茶の抽出液を活性炭に吸着させた後に水で洗浄する場合は好ましい。ＳＶ（空間速度）＝０.５〜１０［ｈ−１］の通液速度で、活性炭に対する通液倍数として１〜２０［ｖ／ｖ］で、活性炭に付着したアミノ酸、糖類、有機酸、ミネラルなど成分を除去するのが好ましい。更に好ましくはＳＶ＝２〜５［ｈ−１］の通液速度で、通液倍数として３〜１０［ｖ／ｖ］で洗浄することが茶ポリフェノール以外の成分の除去及び非重合体カテキン類の純度の点からもっとも好ましい。
【００１８】
活性炭カラムに吸着されたポリフェノールの溶出に用いるアルカリ性水溶液としては、特に限定されるものではないが、水酸化ナトリウム水溶液および水酸化カリウム水溶液などの水酸化アルカリ性水溶液、並びに炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウムおよび炭酸水素カリウム、炭酸カリウムなどの炭酸アルカリ性水溶液からなる群より選ばれた１種以上を、単独または混合して用いることができる。これらの脱離用液の中で、水酸化ナトリウム水溶液は、活性炭に吸着されたポリフェノール類の脱離効果が高く、ポリフェノール類の回収率を上げることができるため、特に好ましい。また、アルカリ性水溶液のpHは７〜１４の範囲が好ましい。非重合体カテキン類回収率の点から９〜１３.８、特に１０〜１３.５が好ましい。
【００１９】
溶出工程においては、ＳＶ（空間速度）＝１〜１０［ｈ−１］の通液速度で、活性炭に対する通液倍数として５〜３０［ｖ／ｖ］で、茶ポリフェノールを溶出するのが好ましい。更に好ましくはＳＶ＝２〜５［ｈ−１］の通液速度で、通液倍数として５〜１０［ｖ／ｖ］をするのはさらに好ましい。
本発明で使用される活性炭は本発明実施後に再利用できる。再生処理としては、特に限定されるものでなく、一般的な再生処理方法を用いることができる一例をあげると、２〜１０質量％の水酸化ナトリウムのようなアルカリ性水溶液を通液・洗浄し、活性炭上に残存する成分を脱着させてもよい。また、一度カラムより活性炭を取り出し、８００〜９００℃に加熱し、水蒸気または制限された酸素の燃焼ガス等で再賦活して再生することができる。
【００２０】
前記アルカリ性水溶液で溶出された茶ポリフェノールとして、ポリフェノールの中でも非重合体カテキン類は、アルカリ性溶液中で分解する傾向があるため、アルカリ成分を除去する除去工程を実施することが好ましい。除去工程としては、例えば溶出液のｐＨを７以下、更に好ましくは５以下にｐＨ調整して塩を生成させた後、脱塩するという方法を採用できる。本明細書においてｐＨ調整とは、酸による中和、電気透析装置を利用する方法または陽イオン交換樹脂に接触させる方法、等を挙げることができる。
電気透析装置を使用する際には、金属イオンとポリフェノール成分の錯体を解離させるために、液性をｐＨ４以下に調整することで、透析効果を促進させることができる。また、ｐＨ調整用の酸としては、特に限定するものではないが塩酸、硫酸、酢酸、リン酸、クエン酸などの水溶液からなる群より選ばれた１種以上を、単独または混合して用いることができる。これらの酸の中で、塩酸水溶液はアルカリ金属イオンを中和する効果が高く、特に好ましい。
【００２１】
上記陽イオン交換樹脂としては、強酸性又は弱酸性陽イオン交換樹脂を用いることができるが、強酸性陽イオン交換樹脂を用いる方が、アルカリ性金属イオンを除去するのに、より効率的である。そのような強酸性陽イオン交換樹脂としては、ダイヤイオンＳＫ−１１６、ＳＫ−１Ｂ（三菱化学社製）；アンバーライトＩＲ−１２０、ＩＲ−２００（Rohm ＆ Haas 社製）等を挙げることができる。
最後に、ｐＨ調整された緑茶抽出液は、通常の濃縮法で、例えば、減圧蒸留、薄膜蒸留、膜濃縮、凍結濃縮などにより濃縮し、さらに濃縮物を通常の乾燥法で、例えば、真空乾燥法、噴霧乾燥法等、真空ベルト乾燥（ＣＶＤ）によって乾燥粉末とすることもできる。
【００２２】
本発明品の茶ポリフェノールは、その固形分中に、非重合体カテキン類６０質量％以上含有することが、生理効果の有効性上好ましい。より好ましくは７０質量％以上、更に好ましくは８０質量％以上含有する。また、上限値については特に設定されるものではないが、たとえば９９質量％、好ましくは９５質量％含有する。本発明品のガロカテキン含量は、非重合体カテキン類に対してガロカテキン／非重合体カテキン類の比率が８〜２０質量％の範囲に含有するのは好ましい。８質量％以下或いは２０質量％以上であると、全非重合体カテキン類中のガロカテキン含有量は処理前の茶抽出物と本質的に変化するため、風味上には好ましくない。没食子酸結合型カテキン/遊離型カテキンの比率が０.１〜1をするのが本発明品の苦味が少なく風味上には好ましい。前記下限未満であると、全非重合体カテキン類中の各種類カテキン組成のバランスがとれない。一方、上限を超えると、茶ポリフェノールの苦味を強くなり、風味上には好ましくない。
【００２３】
また、得られた茶ポリフェノールは、没食子酸又はその塩を全非重合体カテキン類中の割合は０.１〜８.０質量％、更に０.１〜４.０質量％、カフェインを全非重合体カテキン類中の割合は１.０質量％以下、更に０.１質量％以下、特に０.０１質量％以下にするのが本発明品の渋味改良の点からは好ましい。
本発明品の茶ポリフェノールは各種の飲料、例えば、清涼飲料、果汁飲料、野菜飲料、豆乳飲料、コーヒー飲料、茶飲料、スポーツ飲料、栄養飲料、アルコール飲料等の飲料類及びその容器詰飲料に適用することにより、茶ポリフェノールの機能性をこれらに付与することができる。また、飲料以外の一般食品にも茶ポリフェノールの機能性を付与する目的で添加することができる。
【実施例】
【００２４】
次に、本発明を実施例により詳しく説明する。
＜茶抽出物の調製１＞
緑茶葉１ｋｇに対して６０℃の熱水１５ｋｇを加え、９０℃の水浴中で３０分間抽出し、茶殻を除くためにろ過した後、そのろ液を減圧濃縮、噴霧乾燥を行い、１５０ｇの『緑茶抽出物』（対照例）を得た。対照例の成分分析を行った結果を表１に示した。【００２５】
１２ｇの対照例を、脱イオン水１１０ｇに２５℃で２０分間攪拌溶解し、水溶液を得た。次いで、カラム１（内径１５ｍｍ×高さ３００ｍｍ、容積５０ｍＬ）に充填したクラレコールＧＬＣ活性炭（クラレケミカル社製、累積細孔容積０.７９ｍＬ／ｇ、１０〜５００Åの細孔半径の細孔容積０.４８ｍＬ／ｇ、比表面積１１５０ｍ2／ｇ）を、予めＳＶ＝５［ｈ−１］で５００ｍＬの水で洗浄した。カラム２（内径内径１５ｍｍ×高さ４５０ｍｍ、容積７５ｍＬ）に充填したイオン交換樹脂ＳＫ１Ｂ（三菱化学社製）を、予めＳＶ＝５［ｈ−１］で５００ｍＬの水で洗浄した。その後、対照例の水溶液１２０ｇをＳＶ＝４［ｈ−１］でカラム１に通液し透過液は廃棄した。【００２６】
次いでＳＶ＝４［ｈ−１］で３００ｍＬの水で洗浄した。水洗後、０.２質量％水酸化ナトリウム水溶液（ｐＨ１２.８）をＳＶ＝５［ｈ−１］で１０００ｍＬ通液し非重合体カテキン類溶出液を得た。溶出液は連続でカラム２に通液し、脱イオンを行い、非重合体カテキン類水溶液９６０ｇ（ｐＨ４.２）を得た。この組成物を更に減圧濃縮処理し、凍結乾燥行い、『茶ポリフェノールＡ』（実施例１）を約３.２ｇ得た。このようにして得られた実施例１の成分分析を行った、結果を表１に示した。
また、対照例と実施例１の全非重合体カテキン類中、各種類の非重合体カテキンの質量％を図１（Ａ）と図１（Ｂ）に示した。
図１から明らかなように、実施例１中の各種類の非重合体カテキン類の割合は、対照例中の各種類の非重合体カテキン類の割合とほぼ一致することを確認した。また、表１の結果によると、実施例１中のカフェイン含量が低減され、ＯＲＡＣ値については著しく増加した。且つ官能検査の結果で、実施例１の苦味・渋味が低減されたことが明らかとなった。【００２７】
＜茶抽出物の調製２＞
１２ｇの対照例を、脱イオン水１１０ｇに２５℃で２０分間攪拌溶解し、対照例の水溶液を得た。次いで、カラム１（内径１５ｍｍ×高さ３００ｍｍ、容積５０ｍＬ）に充填したクラレコールＧＬＣ活性炭（クラレケミカル社製、累積細孔容積０.７９ｍＬ／ｇ、１０〜５００Åの細孔半径の細孔容積０.４８ｍＬ／ｇ、比表面積１１５０ｍ2／ｇ）を、予めＳＶ＝５［ｈ−１］で５００ｍＬの水で洗浄した。その後、対照例の水溶液１２０ｇをＳＶ＝４［ｈ−１］でカラム１に通液し、透過液は廃棄した。次いでＳＶ＝４［ｈ−１］で３００ｍＬの水で洗浄した。水洗後、０.２質量％水酸化ナトリウム水溶液（ｐＨ１２.８）をＳＶ＝５［ｈ−１］で１０００ｍＬ通液し非重合体カテキン類溶出液を得た。溶出液は２Ｎの塩酸でｐＨ３.８まで調整し、電気透析装置（旭化成社製：卓上脱塩装置マイクロ・アシライザーＧ３，ＡＣ−１１０−４００膜）を用いて、電流が０.１Ａ以下になるまで電気透析を行った。その後、減圧濃縮処理を行い、凍結乾燥して、『茶ポリフェノールＢ』（実施例２）を約２.８ｇ得た。このようにして得られた実施例２の成分分析を＜茶抽出物の調製１＞に記載の方法と同様にして行った。結果を表１に示した。【００２８】
＜茶抽出物の調製３＞
原料が緑茶粉末製剤カメリアエス３０Ｓ（太陽化学製  非重合体カテキン類濃度＝３０.２質量％、カフェイン＝６.０質量％）１２ｇを、脱イオン水１１０ｇに２５℃で１０分間攪拌溶解し得られた茶抽出物以外は、上記＜茶抽出物の調製１＞と同様の操作を行った。こうして『茶ポリフェノールＣ』（実施例３）３.３ｇを得た。その成分分析を＜茶抽出物の調製１＞に記載の方法と同様にして行った。結果を表１に示した。
＜茶抽出物の調製４＞
原料が緑茶粉末製剤カメリアエス３０Ｓ−ＢＳＫ（太陽化学製  非重合体カテキン類濃度＝２４.５質量％、カフェイン＝０.５質量％）１２ｇを、脱イオン水１１０ｇに２５℃で１０分間攪拌溶解し得られた茶抽出物以外は、上記＜茶抽出物の調製１＞に記載の方法と同様の操作を行った。こうして『茶ポリフェノールＤ』（実施例４）２.６ｇを得た。その成分分析を＜茶抽出物の調製１＞に記載の方法と同様にして行った。結果を表１に示した。【００２９】
＜比較例の調製１＞
緑茶葉を１ｋｇに対して６０℃の熱水１５ｋｇを加え、９０℃の水浴中で３０分間抽出し、茶殻を除くためにろ過した後、そのろ過液１２ｋｇに酢酸エチル１２ｋｇを加えて振とうし、静置、分配した。その酢酸エチル画分を分取、減圧下で脱溶媒の後、凍結乾燥し、比較用茶ポリフェノール（１）（比較例１）を４５ｇ得た。比較例１を＜茶抽出物の調製１＞に記載の方法と同様にして行った。結果を表１に示した。
比較例１の全非重合体カテキン類中、各種類の非重合体カテキンの質量％を図１（Ｃ）に示した。
図１から明らかなように、比較例１のような従来の方法で得られた茶ポリフェノール組成物中に、ＥＧＣｇのようなガレート体カテキンの割合が高く、強い苦味を有するため、お茶本来の味を感じられなくなった。【００３０】
＜比較例の調製２＞
１２ｇの比較例１を原料とし、１２０ｍＬの１０％エタノール水溶液に溶解し、ダイヤイオンＨＰ２０（三菱化学社製）を８０ｍＬ充填したカラム（内径内径１５ｍｍ×高さ４５０ｍｍ、容積７５ｍＬ）に、当該抽出液（全部）を注入した。次に、３００ｍＬの１０％エタノール水溶液を通液することにより未吸着成分を除いた後、４５％含水エタノールを４００ｍＬ流して、茶カテキン画分を溶出させた。溶出液を濃縮及び凍結乾燥させて『茶ポリフェノール２』（比較例２）５.３ｇを得た。このようにして得られた比較例２の成分分析を＜茶抽出物の調製１＞に記載の方法と同様にして行った。結果を表１に示した。【００３１】
＜比較例の調製３＞
１２ｇの比較例２を、２８８ｍＬの水に溶解し、重曹でｐＨ４.５まで調整後、温度２０℃に保持し、タンナーゼ（キッコーマン社製タンナーゼＫＴＦＨ、５００Ｕ／ｇ）を緑茶抽出液に対して４００ｐｐｍとなる濃度で添加し、１８時間保持した後、９０℃に溶液を加熱して、５分間保持し酵素を失活させ、反応を止めた。次いで、濃縮及び凍結乾燥を行い、『茶ポリフェノール３』（比較例３）１１.５ｇを得た。このようにして得られた比較例３の成分分析を＜茶抽出物の調製１＞に記載の方法と同様にして行った。結果を表１に示した。
対照例、実施例１〜実施例４および比較例１〜比較例３に関するデータを表１に示した。【００３２】
【表１】
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【００３３】
表１から明らかなように、実施例１〜実施例４は、比較例１および比較例２に比べて、カフェイン含量が低く、ガロカテキン含量が高く、全体的に非重合体カテキン類中の非ガレート体率が高かった。比較例３はタンナーゼ処理によって、非重合体カテキン類中の非ガレート体率が約１００％となったが、酵素処理によって生じた没食子酸含量は全非重合体カテキン類中に高濃度となった。【００３４】
＜試験例１＞  茶ポリフェノール組成物の苦味・渋味及び酸味に関する官能試験
実施例１〜実施例４及び比較例１〜比較例３の茶ポリフェノール組成物の苦味・渋味及び酸味を以下の試験方法に従って調べた。結果を表１に示した。
試験方法：
ランダムに選んだ男女１０名をパネラーとして官能検査を行った。まず、イオン交換水８００ｇに実施例１〜実施例４、比較例１〜比較例３をカテキン含量として１ｇとなるよう添加し、さらにアスコルビン酸ナトリウム０.３ｇ、５％重曹水溶液を適量加えることによりｐＨを６.２とし、さらにイオン交換水を加え全量を１０００ｇとして、試験液を調製した。実施例１〜比較例４と比較例１〜比較例３とを比べて、苦味・渋味及び酸味が抑制されているかどうか評価した。
苦味・渋味の評価は、以下の５段階評価で行った。酸味の評価は、以下の２段階評価で行った。なお、一つの試験液・比較液を評価した後は、温湯で口中をすすぎ、３０分以上経過してから次の評価を行った。【００３５】
苦味・渋味評価判定基準：
苦味・渋味を非常に強く感じる ・・・・・５点
苦味・渋味を強く感じる ・・・・・・・・４点
苦味・渋味を少し感じる ・・・・・・・・３点
苦味・渋味をあまり感じない ・・・・・・２点
苦味・渋味をまったく感じない ・・・・・１点
酸味評価判定基準：
酸味を感じる ・・・・・・・・・酸味あり
酸味を感じない・・・・・・・・ 酸味なし
表１より、実施例１〜実施例４は、比較例１および比較例２と比較して、苦味・渋味が少ないことが明らかとなった。一方、比較品３は、タンナーゼ処理することによって、苦味・渋味を低減されたが、没食子酸含量はとても高く、酸味を強く感じた。加えて、実施例１〜実施例４は、苦味、渋味が改善され、且つ酸味を全く感じなかった。従って、本実施例は、茶系飲料だけでなく、非茶系飲料としても有用であることが判った。【００３６】
＜試験例２＞  茶ポリフェノール組成物の抗酸化活性に関する分析
実施例１〜実施例４及び比較例１〜比較例３の茶ポリフェノール組成物の抗酸化活性を以下の試験方法に従って調べた。結果を表１に示した。
試験方法：  実施例１〜実施例４及び比較例１〜比較例３の茶ポリフェノール組成物の抗酸化活性をＯＲＡＣ法（Journal of Clinical Biochemistry and Nutrition 43, Suppl.1, 485-489 (2008)参照）によって測定した。ＯＲＡＣ法は、ラジカルによる蛍光物質の消失を、添加した物質がどの程度妨げることができるかを測定する方法である。ラジカル発生剤である2,2'-azobis (2-amidino-propane) dihydrochloride（以下、ＡＡＰＨと記す）を１８.７５ｍＭとなるように、また蛍光物質であるfluorescein sodium salt（以下、ＦＬと記す）を３０ｎＭとなるようにリン酸緩衝液（0.075M, pH7.4）を用いて調製した。ＦＬ溶液１４０μｌと実施例１〜実施例４及び比較例１〜比較例３の茶ポリフェノール組成物の水溶液１０μｌを混合し、これにＡＡＰＨ溶液を２５μｌ加え、直ちに蛍光（測定波長４８５ｎｍ、励起波長５３５ｎｍ）の測定を開始した。蛍光は１分おきに４０分間測定を続けた。縦軸に蛍光強度、横軸に測定時間をとったときに表される面積（ＡＵＣ）を下式（１）によって計算した。【００３７】
ＡＵＣ＝（ｆ０＋ｆ１＋ｆ２＋ｆ３＋・・・・・＋ｆ４０）／ｆ０ （１）
（ＡＵＣ：area under curve、 ｆｉ：ｉ回目に測定した蛍光強度）
得られたＡＵＣよりnetＡＵＣを下式（２）によって計算した。
netＡＵＣTrolox=ＡＵＣTrolox-ＡＵＣblank
netＡＵＣsample=ＡＵＣsample-ＡＵＣblank        （２）
各Trolox溶液のnetＡＵＣをＸ軸に、各Trolox溶液の濃度（μＭ）をＹ軸にとったグラフより、二次回帰式（Y=ax2+bx+c）を算出し、この回帰式より、以下の計算方法（３）からＯＲＡＣ値を算出した。
ＯＲＡＣ(μmol TE/g)＝〔a×(netＡＵＣsample)2+b×(netＡＵＣsample)+C〕×V×d/W      （３）
a、b、c：二次回帰式のa、b、c
V：サンプル原液の溶液量（ｍL）
d：サンプル原液の希釈倍率
W：サンプル重量【００３８】
表１から明らかなように、実施例１〜実施例４は、比較例１〜比較例３と比べて、抗酸化活性がほぼ同等程度であることが明らかとなった。従って、本実施形態の方法によって得られたものは、風味が改良されたと共に、ポリフェノールの抗酸化効果も有効であることが分かった。
このように本実施形態によれば、非常に簡便な方法で、ガロカテキン含量が高く、ガレート体率が低く、カフェインをほとんど含まず、急須で入れた茶と近い非重合体カテキン組成を持つ苦味・渋味が低減され且つ酸味のない高濃度茶ポリフェノール抽出物を得ることができた。また、本実施形態の方法では、有機溶媒を全く用いることなく、特定の活性炭を用い茶葉の水抽出物を吸着脱離処理することにより、茶ポリフェノール抽出物を得られるので、残留溶媒の問題がない。
【図１】
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【国際調査報告】
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